(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記一般式（ＩＩ）で表される化合物である、ユビキリン結合性小分子：
【化１】
0005479105.tif 000076
{式（ＩＩ）中、
Ｒ１’は、複素環基、若しくはＣ１−Ｃ６アルキルアミノ基、ジ（Ｃ１−Ｃ６）アルキルアミノ基、Ｃ６−Ｃ１４アリールアミノ基、ジ（Ｃ６−Ｃ１４）アリールアミノ基、フェニルアミノカルボニル、ブテニルカルボニル、ベンゾジオキソリルカルボニルからなる群から選択される置換基を有するアミノ基、複素環カルボニル基、シクロアルキルカルボニル基、シクロアルケニルカルボニル基又は一般式（１’）：
【化２】
0005479105.tif 000077
［式（１’）中、
Ｒ１６’及びＲ１８’は同一又は異なって水素、アルキル基又はハロゲン、シアノ基、ニトロ基、ヒドロキシ基、アミノカルボニル基、アセチル基、カルボキシル基、アルコキシカルボニル基、アミノ基、アルコキシ基、アルキル基からなる群から選択される置換基を有していてもよいアリール基を意味し、Ｒ１７’は、ハロゲン、シアノ基、ニトロ基、ヒドロキシ基、アミノカルボニル基、アセチル基、カルボキシル基、アルコキシカルボニル基、アミノ基からなる群から選択される置換基を有していてもよいアリール基を意味する］
で表される構造を意味し；
Ｒ２’は、アルコキシ基を意味し；
Ｒ３’は、水素又はアルキル基を意味し；
Ｒ４’は、ＯＲ４ａ’（式中、Ｒ４ａ’はアルキル基を意味する）を意味し、
式：
【化３】
0005479105.tif 000078
で表される基が、
式（ａ’）：
【化４】
0005479105.tif 000079
（式中、Ｒ５ａ’及びＲ５ｂ’は同一又は異なって、水素又はカルボキシル基、ジアルキルアミノカルボニル基、アルキルオキシカルボニル基、アルケニルカルボニルオキシ基からなる群から選択される置換基を有していてもよいアルキル基を意味する）で表される基を意味する。
【請求項２】
８−（３，４−ジヒドロキノリン−１（２Ｈ）−イルカルボニル）−５，７−ジメトキシ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン、
５，７−ジメトキシ−８−［（２Ｅ）−３−フェニルプロぺ−２−ノイル］−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン、
８−（１−シクロヘキセ−１−ニルカルボニル）−５，７−ジメトキシ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン、
８−（１−シクロペンテ−１−ニルカルボニル）−５，７−ジメトキシ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン、
７−メトキシ−８−［（２Ｅ）−２−メチルブテ−２−ノイル］−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン、
８−（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）−５，７−ジメトキシ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン、
３−（５，７−ジメトキシ−２−オキソ−２Ｈ−クロメン−４−イルプロピル）−（２Ｅ）−２−メチルブテ−２−ノエート、
３−｛５，７−ジメトキシ−８−［（２Ｅ）−２−メチルブテ−２−ノイル］−２−オキソ−２Ｈ−クロメン−４−イル｝プロピル−（２Ｅ）−２−メチルブテ−２−ノエート、
８−（２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インド−１−イルカルボニル）−５，７−ジメトキシ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン、
Ｎ−（５，７−ジメトキシ−２−オキソ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−８−イル）−２，６−ジメトキシベンズアミド、
Ｎ−（５，７−ジメトキシ−２−オキソ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−８−イル）−２，２−ジフェニルアセトアミド、
３−［８−（３，４−ジヒドロ−２Ｈ−キノリン−１−イルカルボニル）−５，７−ジメトキシ−２−オキソ−２Ｈ−クロメン−４−イル］プロピオン酸エチル、
５，７−ジイソプロポキシ−８−［（２Ｅ）−３−フェニルプロぺ−２−ノイル］−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン、
８−［（２Ｅ）−３−（２，６−ジメトキシフェニル）プロぺ−２−ノイル］−５，７−ジメトキシ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン、又は
３−［８−（３，４−ジヒドロ−２Ｈ−キノリン−１−イルカルボニル）−５，７−ジメトキシ−２−オキソ−２Ｈ−クロメン−４−イル］プロピオン酸メチル
である、ユビキリン結合性小分子。
【請求項３】
一般式（ＩＩ）で表される化合物が、
８−（３，４−ジヒドロキノリン−１（２Ｈ）−イルカルボニル）−５，７−ジメトキシ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン、
５，７−ジメトキシ−８−［（２Ｅ）−３−フェニルプロぺ−２−ノイル］−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン、
８−（１−シクロペンテ−１−ニルカルボニル）−５，７−ジメトキシ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン、
３−［８−（３，４−ジヒドロ−２Ｈ−キノリン−１−イルカルボニル）−５，７−ジメトキシ−２−オキソ−２Ｈ−クロメン−４−イル］プロピオン酸エチル、又は
３−［８−（３，４−ジヒドロ−２Ｈ−キノリン−１−イルカルボニル）−５，７−ジメトキシ−２−オキソ−２Ｈ−クロメン−４−イル］プロピオン酸メチル
である、請求項１記載のユビキリン結合性小分子。
【請求項４】
一般式（ＩＩ）で表される化合物が、下記構造式を有する、８−（３，４−ジヒドロキノリン−１（２Ｈ）−イルカルボニル）−５，７−ジメトキシ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オンである、請求項１記載のユビキリン結合性小分子。
【化５】
0005479105.tif 000080
【請求項５】
癌、神経変性疾患、自己免疫疾患及び感染症からなる群から選択される少なくとも１種の疾患の予防又は治療に用いられる、請求項１記載のユビキリン結合性小分子。
【請求項６】
下記一般式（ＩＩ）で表される化合物である、トポイソメラーゼＩＩ阻害剤：    
【化６】
0005479105.tif 000081
{式（ＩＩ）中、
Ｒ１’は、複素環基、若しくはＣ１−Ｃ６アルキルアミノ基、ジ（Ｃ１−Ｃ６）アルキルアミノ基、Ｃ６−Ｃ１４アリールアミノ基、ジ（Ｃ６−Ｃ１４）アリールアミノ基、フェニルアミノカルボニル、ブテニルカルボニル、ベンゾジオキソリルカルボニルからなる群から選択される置換基を有するアミノ基、複素環カルボニル基、シクロアルキルカルボニル基、シクロアルケニルカルボニル基又は一般式（１’）：
【化７】
0005479105.tif 000082
［式（１’）中、
Ｒ１６’及びＲ１８’は同一又は異なって水素、アルキル基又はハロゲン、シアノ基、ニトロ基、ヒドロキシ基、アミノカルボニル基、アセチル基、カルボキシル基、アルコキシカルボニル基、アミノ基、アルコキシ基、アルキル基からなる群から選択される置換基を有していてもよいアリール基を意味し、Ｒ１７’は、ハロゲン、シアノ基、ニトロ基、ヒドロキシ基、アミノカルボニル基、アセチル基、カルボキシル基、アルコキシカルボニル基、アミノ基からなる群から選択される置換基を有していてもよいアリール基を意味する］
で表される構造を意味し；
Ｒ２’は、アルコキシ基を意味し；
Ｒ３’は、水素又はアルキル基を意味し；
Ｒ４’は、ＯＲ４ａ’（式中、Ｒ４ａ’はアルキル基を意味する）を意味し、
式：
【化８】
0005479105.tif 000083
で表される基が、
式（ａ’）：
【化９】
0005479105.tif 000084
（式中、Ｒ５ａ’及びＲ５ｂ’は同一又は異なって、水素又はカルボキシル基、ジアルキルアミノカルボニル基、アルキルオキシカルボニル基、アルケニルカルボニルオキシ基からなる群から選択される置換基を有していてもよいアルキル基を意味する）で表される基を意味する。
【請求項７】
８−（３，４−ジヒドロキノリン−１（２Ｈ）−イルカルボニル）−５，７−ジメトキシ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン、
５，７−ジメトキシ−８−［（２Ｅ）−３−フェニルプロぺ−２−ノイル］−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン、
８−（１−シクロヘキセ−１−ニルカルボニル）−５，７−ジメトキシ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン、
８−（１−シクロペンテ−１−ニルカルボニル）−５，７−ジメトキシ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン、
７−メトキシ−８−［（２Ｅ）−２−メチルブテ−２−ノイル］−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン、
８−（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）−５，７−ジメトキシ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン、
３−（５，７−ジメトキシ−２−オキソ−２Ｈ−クロメン−４−イルプロピル）−（２Ｅ）−２−メチルブテ−２−ノエート、
３−｛５，７−ジメトキシ−８−［（２Ｅ）−２−メチルブテ−２−ノイル］−２−オキソ−２Ｈ−クロメン−４−イル｝プロピル−（２Ｅ）−２−メチルブテ−２−ノエート、
８−（２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インド−１−イルカルボニル）−５，７−ジメトキシ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン、
Ｎ−（５，７−ジメトキシ−２−オキソ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−８−イル）−２，６−ジメトキシベンズアミド、
Ｎ−（５，７−ジメトキシ−２−オキソ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−８−イル）−２，２−ジフェニルアセトアミド、
３−［８−（３，４−ジヒドロ−２Ｈ−キノリン−１−イルカルボニル）−５，７−ジメトキシ−２−オキソ−２Ｈ−クロメン−４−イル］プロピオン酸エチル、
５，７−ジイソプロポキシ−８−［（２Ｅ）−３−フェニルプロぺ−２−ノイル］−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン、
８−［（２Ｅ）−３−（２，６−ジメトキシフェニル）プロぺ−２−ノイル］−５，７−ジメトキシ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン、又は
３−［８−（３，４−ジヒドロ−２Ｈ−キノリン−１−イルカルボニル）−５，７−ジメトキシ−２−オキソ−２Ｈ−クロメン−４−イル］プロピオン酸メチル
である、トポイソメラーゼＩＩ阻害剤。
【請求項８】
一般式（ＩＩ）で表される化合物が、
８−（３，４−ジヒドロキノリン−１（２Ｈ）−イルカルボニル）−５，７−ジメトキシ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン、
５，７−ジメトキシ−８−［（２Ｅ）−３−フェニルプロぺ−２−ノイル］−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン、
８−（１−シクロペンテ−１−ニルカルボニル）−５，７−ジメトキシ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン、
３−［８−（３，４−ジヒドロ−２Ｈ−キノリン−１−イルカルボニル）−５，７−ジメトキシ−２−オキソ−２Ｈ−クロメン−４−イル］プロピオン酸エチル、又は
３−［８−（３，４−ジヒドロ−２Ｈ−キノリン−１−イルカルボニル）−５，７−ジメトキシ−２−オキソ−２Ｈ−クロメン−４−イル］プロピオン酸メチル
である、請求項６記載のトポイソメラーゼＩＩ阻害剤。
【請求項９】
一般式（ＩＩ）で表される化合物が、下記構造式を有する、８−（３，４−ジヒドロキノリン−１（２Ｈ）−イルカルボニル）−５，７−ジメトキシ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オンである、請求項６記載のトポイソメラーゼＩＩ阻害剤。
【化１０】
0005479105.tif 000085
【請求項１０】
癌、神経変性疾患、自己免疫疾患及び感染症からなる群から選択される少なくとも１種の疾患の予防又は治療に用いられる、請求項６記載のトポイソメラーゼＩＩ阻害剤。
【請求項１１】
下記一般式（ＩＩ）で表される化合物である、抗癌剤：
【化１１】
0005479105.tif 000086
{式（ＩＩ）中、
Ｒ１’は、複素環基、若しくはＣ１−Ｃ６アルキルアミノ基、ジ（Ｃ１−Ｃ６）アルキルアミノ基、Ｃ６−Ｃ１４アリールアミノ基、ジ（Ｃ６−Ｃ１４）アリールアミノ基、フェニルアミノカルボニル、ブテニルカルボニル、ベンゾジオキソリルカルボニルからなる群から選択される置換基を有するアミノ基、複素環カルボニル基、シクロアルキルカルボニル基、シクロアルケニルカルボニル基又は一般式（１’）：
【化１２】
0005479105.tif 000087
［式（１’）中、
Ｒ１６’及びＲ１８’は同一又は異なって水素、アルキル基又はハロゲン、シアノ基、ニトロ基、ヒドロキシ基、アミノカルボニル基、アセチル基、カルボキシル基、アルコキシカルボニル基、アミノ基、アルコキシ基、アルキル基からなる群から選択される置換基を有していてもよいアリール基を意味し、Ｒ１７’は、ハロゲン、シアノ基、ニトロ基、ヒドロキシ基、アミノカルボニル基、アセチル基、カルボキシル基、アルコキシカルボニル基、アミノ基からなる群から選択される置換基を有していてもよいアリール基を意味する］
で表される構造を意味し；
Ｒ２’は、アルコキシ基を意味し；
Ｒ３’は、水素又はアルキル基を意味し；
Ｒ４’は、ＯＲ４ａ’（式中、Ｒ４ａ’はアルキル基を意味する）を意味し、
式：
【化１３】
0005479105.tif 000088
で表される基が、
式（ａ’）：
【化１４】
0005479105.tif 000089
（式中、Ｒ５ａ’及びＲ５ｂ’は同一又は異なって、水素又はカルボキシル基、ジアルキルアミノカルボニル基、アルキルオキシカルボニル基、アルケニルカルボニルオキシ基からなる群から選択される置換基を有していてもよいアルキル基を意味する）で表される基を意味する。
【請求項１２】
８−（３，４−ジヒドロキノリン−１（２Ｈ）−イルカルボニル）−５，７−ジメトキシ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン、
５，７−ジメトキシ−８−［（２Ｅ）−３−フェニルプロぺ−２−ノイル］−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン、
８−（１−シクロヘキセ−１−ニルカルボニル）−５，７−ジメトキシ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン、
８−（１−シクロペンテ−１−ニルカルボニル）−５，７−ジメトキシ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン、
７−メトキシ−８−［（２Ｅ）−２−メチルブテ−２−ノイル］−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン、
８−（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）−５，７−ジメトキシ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン、
３−（５，７−ジメトキシ−２−オキソ−２Ｈ−クロメン−４−イルプロピル）−（２Ｅ）−２−メチルブテ−２−ノエート、
３−｛５，７−ジメトキシ−８−［（２Ｅ）−２−メチルブテ−２−ノイル］−２−オキソ−２Ｈ−クロメン−４−イル｝プロピル−（２Ｅ）−２−メチルブテ−２−ノエート、
８−（２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インド−１−イルカルボニル）−５，７−ジメトキシ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン、
Ｎ−（５，７−ジメトキシ−２−オキソ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−８−イル）−２，６−ジメトキシベンズアミド、
Ｎ−（５，７−ジメトキシ−２−オキソ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−８−イル）−２，２−ジフェニルアセトアミド、
３−［８−（３，４−ジヒドロ−２Ｈ−キノリン−１−イルカルボニル）−５，７−ジメトキシ−２−オキソ−２Ｈ−クロメン−４−イル］プロピオン酸エチル、
５，７−ジイソプロポキシ−８−［（２Ｅ）−３−フェニルプロぺ−２−ノイル］−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン、
８−［（２Ｅ）−３−（２，６−ジメトキシフェニル）プロぺ−２−ノイル］−５，７−ジメトキシ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン、又は
３−［８−（３，４−ジヒドロ−２Ｈ−キノリン−１−イルカルボニル）−５，７−ジメトキシ−２−オキソ−２Ｈ−クロメン−４−イル］プロピオン酸メチル
である、抗癌剤。
【請求項１３】
一般式（ＩＩ）で表される化合物が、
８−（３，４−ジヒドロキノリン−１（２Ｈ）−イルカルボニル）−５，７−ジメトキシ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン、
５，７−ジメトキシ−８−［（２Ｅ）−３−フェニルプロぺ−２−ノイル］−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン、
８−（１−シクロペンテ−１−ニルカルボニル）−５，７−ジメトキシ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン、
３−［８−（３，４−ジヒドロ−２Ｈ−キノリン−１−イルカルボニル）−５，７−ジメトキシ−２−オキソ−２Ｈ−クロメン−４−イル］プロピオン酸エチル、又は
３−［８−（３，４−ジヒドロ−２Ｈ−キノリン−１−イルカルボニル）−５，７−ジメトキシ−２−オキソ−２Ｈ−クロメン−４−イル］プロピオン酸メチル
である、請求項１１記載の抗癌剤。
【請求項１４】
一般式（ＩＩ）で表される化合物が、下記構造式を有する、８−（３，４−ジヒドロキノリン−１（２Ｈ）−イルカルボニル）−５，７−ジメトキシ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オンである、請求項１１記載の抗癌剤。
【化１５】
0005479105.tif 000090
【請求項１５】
ユビキリンとの結合活性を有し抗癌作用を示す、請求項１１〜１４のいずれか１項に記載の抗癌剤。
【請求項１６】
癌が、急性骨髄性白血病、急性リンパ性白血病、悪性リンパ腫、絨毛癌、多発性骨髄腫、軟部腫瘍、小細胞肺ガン、慢性骨髄性白血病、甲状腺髄様癌、骨肉腫、頭頸部癌、食道癌、非小細胞肺ガン、大腸癌、胃癌、胆道癌、脳腫瘍、悪性黒色腫、腎臓癌、膵臓癌、肝臓癌からなる群より選択される、請求項１１〜１５のいずれか１項に記載の抗癌剤。
【請求項１７】
下記一般式（ＩＩ）で表される化合物である、化合物又はその薬学的に許容される塩：
【化１６】
0005479105.tif 000091
{式（ＩＩ）中、
Ｒ１’は、複素環基、若しくはＣ１−Ｃ６アルキルアミノ基、ジ（Ｃ１−Ｃ６）アルキルアミノ基、Ｃ６−Ｃ１４アリールアミノ基、ジ（Ｃ６−Ｃ１４）アリールアミノ基、フェニルアミノカルボニル、ブテニルカルボニル、ベンゾジオキソリルカルボニルからなる群から選択される置換基を有するアミノ基、複素環カルボニル基、シクロアルキルカルボニル基、シクロアルケニルカルボニル基又は一般式（１’）：
【化１７】
0005479105.tif 000092
［式（１’）中、
Ｒ１６’及びＲ１８’は同一又は異なって水素、アルキル基又はハロゲン、シアノ基、ニトロ基、ヒドロキシ基、アミノカルボニル基、アセチル基、カルボキシル基、アルコキシカルボニル基、アミノ基、アルコキシ基、アルキル基からなる群から選択される置換基を有していてもよいアリール基を意味し、Ｒ１７’は、ハロゲン、シアノ基、ニトロ基、ヒドロキシ基、アミノカルボニル基、アセチル基、カルボキシル基、アルコキシカルボニル基、アミノ基からなる群から選択される置換基を有していてもよいアリール基を意味する］
で表される構造を意味し；
Ｒ２’は、アルコキシ基を意味し；
Ｒ３’は、水素又はアルキル基を意味し；
Ｒ４’は、ＯＲ４ａ’（式中、Ｒ４ａ’はアルキル基を意味する）を意味し、
式：
【化１８】
0005479105.tif 000093
で表される基が、
式（ａ’）：
【化１９】
0005479105.tif 000094
（式中、Ｒ５ａ’及びＲ５ｂ’は同一又は異なって、水素又はカルボキシル基、ジアルキルアミノカルボニル基、アルキルオキシカルボニル基、アルケニルカルボニルオキシ基からなる群から選択される置換基を有していてもよいアルキル基を意味する）で表される基を意味する。
【請求項１８】
８−（３，４−ジヒドロキノリン−１（２Ｈ）−イルカルボニル）−５，７−ジメトキシ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン、
５，７−ジメトキシ−８−［（２Ｅ）−３−フェニルプロぺ−２−ノイル］−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン、
８−（１−シクロヘキセ−１−ニルカルボニル）−５，７−ジメトキシ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン、
８−（１−シクロペンテ−１−ニルカルボニル）−５，７−ジメトキシ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン、
７−メトキシ−８−［（２Ｅ）−２−メチルブテ−２−ノイル］−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン、
８−（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）−５，７−ジメトキシ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン、
３−（５，７−ジメトキシ−２−オキソ−２Ｈ−クロメン−４−イルプロピル）−（２Ｅ）−２−メチルブテ−２−ノエート、
３−｛５，７−ジメトキシ−８−［（２Ｅ）−２−メチルブテ−２−ノイル］−２−オキソ−２Ｈ−クロメン−４−イル｝プロピル−（２Ｅ）−２−メチルブテ−２−ノエート、
８−（２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インド−１−イルカルボニル）−５，７−ジメトキシ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン、
Ｎ−（５，７−ジメトキシ−２−オキソ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−８−イル）−２，６−ジメトキシベンズアミド、
Ｎ−（５，７−ジメトキシ−２−オキソ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−８−イル）−２，２−ジフェニルアセトアミド、
３−［８−（３，４−ジヒドロ−２Ｈ−キノリン−１−イルカルボニル）−５，７−ジメトキシ−２−オキソ−２Ｈ−クロメン−４−イル］プロピオン酸エチル、
５，７−ジイソプロポキシ−８−［（２Ｅ）−３−フェニルプロぺ−２−ノイル］−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン、
８−［（２Ｅ）−３−（２，６−ジメトキシフェニル）プロぺ−２−ノイル］−５，７−ジメトキシ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン、又は
３−［８−（３，４−ジヒドロ−２Ｈ−キノリン−１−イルカルボニル）−５，７−ジメトキシ−２−オキソ−２Ｈ−クロメン−４−イル］プロピオン酸メチル
である、化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項１９】
一般式（ＩＩ）で表される化合物が、
８−（３，４−ジヒドロキノリン−１（２Ｈ）−イルカルボニル）−５，７−ジメトキシ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン、
５，７−ジメトキシ−８−［（２Ｅ）−３−フェニルプロぺ−２−ノイル］−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン、
８−（１−シクロペンテ−１−ニルカルボニル）−５，７−ジメトキシ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン、
３−［８−（３，４−ジヒドロ−２Ｈ−キノリン−１−イルカルボニル）−５，７−ジメトキシ−２−オキソ−２Ｈ−クロメン−４−イル］プロピオン酸エチル、又は
３−［８−（３，４−ジヒドロ−２Ｈ−キノリン−１−イルカルボニル）−５，７−ジメトキシ−２−オキソ−２Ｈ−クロメン−４−イル］プロピオン酸メチル
である、請求項１７記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項２０】
一般式（ＩＩ）で表される化合物が、下記構造式を有する、８−（３，４−ジヒドロキノリン−１（２Ｈ）−イルカルボニル）−５，７−ジメトキシ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オンである、請求項１７記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【化２０】
0005479105.tif 000095
【請求項２１】
請求項１７〜２０のいずれか１項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩を有効成分として含有する、医薬。
【請求項２２】
抗癌剤である、請求項２１記載の医薬。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ユビキリン結合活性を有する新規化合物及び当該化合物を有効成分として含有する抗癌剤等の医薬、新規ユビキリン結合性小分子等に関する。
【背景技術】
【０００２】
ユビキチンは、真核細胞に普遍的に見出される７６アミノ酸からなる分子量８，５００の蛋白質である。ユビキチン活性化酵素（Ｅ１）、ユビキチン結合酵素（Ｅ２）、ユビキチンリガーゼ（Ｅ３）の３種の酵素群の働きで、他の蛋白質を修飾することにより、それら蛋白質の機能を制御することで細胞周期、ＤＮＡ修復、シグナル伝達等の様々な生命活動に関わる。多くの場合は他の蛋白質を修飾したユビキチンにユビキチンが付加され、ポリユビキチン鎖が形成され、そのポリユビキチン鎖はプロテアソームの認識シグナルとして機能し、ユビキチンが付加された蛋白質が分解される。
プロテアソームは、標的タンパク質を分解するための目印となるユビキチンと連携して選択的にタンパク質を分解することにより、生命活動に必須な役割を果たしている。近年、癌、神経疾患、免疫疾患をはじめとする様々な難治疾患はプロテアソームとユビキチンから構成されるタンパク質分解装置の破綻が原因であると考えられている。特に、プロテアソーム機能阻害の癌治療に対する有用性が最近クローズアップされており、新たな抗癌剤の標的となることが期待されている。【０００３】
このような観点から、癌細胞内のプロテアソームの働きを阻害することにより異常タンパク質を蓄積させ、癌細胞を死滅させる抗癌剤の開発が行われている。例えば、１）ボルテゾミブ（Ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ）、ラクタシスチン（Ｌａｃｔａｃｙｓｔｉｎ）、エポキソミシン（Ｅｐｏｘｏｍｉｃｉｎ）等のプロテアソーム阻害剤、２）パンエポフェナントリン（Ｐａｎｅｐｏｐｈｅｎａｎｔｈｒｉｎ）等のユビキチン活性化酵素Ｅ１阻害物質、３）クロロフシン（Ｃｈｌｏｒｏｆｕｓｉｎ）、カルコンＣ（Ｃａｌｃｏｎｅ  Ｃ）等のユビキチンリガーゼＥ３阻害物質及び４）プロスタグランジンＪ２（Ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎ  Ｊ２）等のユビキチン化酵素阻害物質等が知られている。ボルテゾミブは既に医薬品としてＦＤＡに承認されているが、比較的副作用が強く問題となっている。従ってユビキチン−プロテアソーム系に作用し、且つボルテゾミブ等とは作用点の異なる、副作用の少ない化合物の開発が望まれている。【０００４】
ユビキリン１は、ユビキチンで修飾された、すなわちユビキチン化されたタンパク質に結合し、ユビキチン化タンパク質をプロテアソームへ運搬する働きを有することが知られているが、従来ユビキリン阻害作用を有する化合物は見つかっておらず、ユビキチン−プロテアソーム系におけるユビキリンの機能について不明な部分が多い。【０００５】
一方、ブラジルオトギリ草より抗癌作用を有する４環系クマリン化合物が報告されている（特許文献１、非特許文献１）が、ユビキチン−プロテアソーム系との関連性については開示も示唆もされていない。又、かかるクマリン化合物に類似した化合物の抗菌作用、抗真菌作用、抗ウイルス作用、免疫増強作用、免疫調節作用等が知られているが、ユビキチン−プロテアソーム系との関連性については開示も示唆もされていない（特許文献２）。
【特許文献１】再公表ＷＯ２００４／０６６９９４号公報
【特許文献２】特表２００５−５０８２８３号公報
【非特許文献１】Kimura et al., Int J Cancer. 2005 Jan 1;113(1):158-65
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、ユビキチン−プロテアソーム系に作用する化合物、特にユビキリン結合作用を有し、好ましくはさらに抗癌作用を有する化合物を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、ブラジルオトギリ草より抗癌作用を有する４環系クマリン化合物（ＧＵＴ−７０）を発見している（非特許文献１）。ＧＵＴ−７０をリード化合物として化学修飾を加え、種々の誘導体を合成しそれらの薬理作用、特に癌細胞の増殖抑制活性を解析したところ、下記一般式（Ｉ）で表される化合物にユビキリン結合活性及びユビキチン−プロテアソーム阻害活性を認めた。本発明者らは、この知見に基づき、鋭意研究を行った結果、本発明を完成するに至った。【０００８】
すなわち、本発明は、以下の通りである。
[１]下記一般式（Ｉ）：【０００９】
【化１】
0005479105.tif 000002
【００１０】
{式（Ｉ）中、
Ｒ１は、水素、アルキル基、シクロアルキル基、置換基を有していてもよいアルケニル基、置換基を有していてもよいアルキニル基、置換基を有していてもよいアリール基、置換基を有していてもよい複素環基、置換基を有していてもよいアミノ基、アルコキシ基、アルキルカルボニル基、置換基を有していてもよいアリールカルボニル基、置換基を有していてもよい複素環カルボニル基、シクロアルキルカルボニル基、シクロアルケニルカルボニル基、アルコキシカルボニル基、置換基を有していてもよいカルボキシル基、置換基を有していてもよいアミノカルボニル基又は一般式（１）：【００１１】
【化２】
0005479105.tif 000003
【００１２】
［式（１）中、
Ｒ１６、Ｒ１７及びＲ１８は同一又は異なって水素、アルキル基、シクロアルキル基、置換基を有していてもよいアリール基、置換基を有していてもよい複素環基、ジアルキルアミノ基、置換基を有していてもよいアルケニル基を意味する］
で表される構造を意味し；
Ｒ２は、水素、アルキル基、置換基を有していてもよいアリール基、ハロゲン原子、シアノ基、シクロアルキル基、アルキルカルボニル基、置換基を有していてもよいアリールカルボニル基、カルボキシル基、アルコキシカルボニル基、チオール基、アルキルチオ基、置換基を有していてもよいアリールチオ基、アルキルスルホニル基、置換基を有していてもよいアリールスルホニル基、置換基を有していてもよいアミノカルボニル基、置換基を有していてもよいアミノスルホニル基、置換基を有していてもよいアリールオキシカルボニル基、アミノ基、アルキルアミノ基、ジアルキルアミノ基、アシルアミノ基、アルキルスルホニルアミノ基又は置換基を有していてもよいアリールスルホニルアミノ基、或いはＯＲ２ａ（式中、Ｒ２ａは、水素、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基又は置換基を有していてもよいアリール基を意味する）を意味し、ＯＲ２ａはＲ１とともに一般式（２）：【００１３】
【化３】
0005479105.tif 000004
【００１４】
（式中、Ｒ１９及びＲ２０は、同一又は異なって、水素、アルキル基、シクロアルキル基又は置換基を有していてもよいアリール基を意味し、或いは、Ｃ−Ｒ１９Ｒ２０はＣ＝Ｏを意味し、Ｒ２１及びＲ２２は、同一又は異なって、水素、ハロゲン原子、シアノ基、ヒドロキシ基、アルキル基、シクロアルキル基、置換基を有していてもよいアリール基、アルコキシ基、アルキルカルボニル基、置換基を有していてもよいアリールカルボニル基、カルボキシル基、アルコキシカルボニル基、アミノ基、アルキルアミノ基、ジアルキルアミノ基又はアシルアミノ基を意味し、破線は、ベンゼン環との縮合部分を示す）
で表される環を形成することができ；
Ｒ３は、水素、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アルコキシ基、又はアリール基を意味し；
Ｒ４は、水素又はＯＲ４ａ（式中、Ｒ４ａは、水素、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基又はアリール基を意味する）を意味し、ＯＲ４ａはＲ３とともに一般式（２）で表される環を形成することができ；
式：【００１５】
【化４】
0005479105.tif 000005
【００１６】
で表される基は、
式（ａ）：【００１７】
【化５】
0005479105.tif 000006
【００１８】
（式中、Ｘ１はＯ、ＮＨ又はＮＲ１５（式中、Ｒ１５は、アルキル基、シクロアルキル基又は置換基を有していてもよいアリール基を意味する）を意味し、Ｒ５ａ及びＲ５ｂは同一又は異なって、水素、置換基を有していてもよいアルキル基、置換基を有していてもよいアリール基、ハロゲン原子、シアノ基、ヒドロキシ基、シクロアルキル基、アルコキシ基、アルキルカルボニル基、置換基を有していてもよいアリールカルボニル基、カルボキシル基、アルコキシカルボニル基、置換基を有していてもよいアリールオキシ基、チオール基、アルキルチオ基、置換基を有していてもよいアリールチオ基、アルキルスルホニル基、置換基を有していてもよいアリールスルホニル基、置換基を有していてもよいアミノカルボニル基、置換基を有していてもよいアミノスルホニル基、置換基を有していてもよいアリールオキシカルボニル基、アミノ基、アルキルアミノ基、ジアルキルアミノ基、アシルアミノ基、アルキルスルホニルアミノ基又は置換基を有していてもよいアリールスルホニルアミノ基を意味する）で表される基を意味するか、
式（ｂ）：【００１９】
【化６】
0005479105.tif 000007
【００２０】
（式中、Ｒ６及びＲ７は、同一又は異なって水素又は置換基を有していてもよいアルキル基を意味するか、Ｃ−Ｒ６Ｒ７はＣ＝Ｏを意味し、Ｒ８はオキソ基又はアルキル基を意味し、【００２１】
【化７】
0005479105.tif 000008
【００２２】
で表される結合は単結合又は二重結合を意味する）で表される基を意味するか、
式（ｃ）：【００２３】
【化８】
0005479105.tif 000009
【００２４】
（式中、Ｒ９は、水素又はアルキル基を意味し、Ｒ１０は、水素又はアルキル基を意味し、Ｒ１１は置換基を有していてもよいアリールカルボニル基を意味する）で表される基を意味するか、
式（ｄ）：【００２５】
【化９】
0005479105.tif 000010
【００２６】
（式中、Ｘ２はＮ又はＣＨを意味し、Ｒ１２は、水素又は置換基を有していてもよいアミノ基を意味する）で表される基を意味するか、又は
式（ｅ）：【００２７】
【化１０】
0005479105.tif 000011
【００２８】
（式中、Ｒ１３は、水素又は置換基を有していてもよいアリール基を意味し、Ｒ１４は、水素又は置換基を有していてもよいアルキル基を意味する）で表される基を意味する｝で表される化合物、又は
その薬学的に許容される塩を有効成分として含有するユビキリン結合性小分子。
[２]一般式（Ｉ）で表される化合物が、下記一般式（ＩＩ）で表される化合物である、上記[１]記載のユビキリン結合性小分子：【００２９】
【化１１】
0005479105.tif 000012
【００３０】
{式（ＩＩ）中、
Ｒ１’は、水素、複素環基、置換基を有していてもよいアミノ基、複素環カルボニル基、シクロアルキルカルボニル基、シクロアルケニルカルボニル基又は一般式（１’）：【００３１】
【化１２】
0005479105.tif 000013
【００３２】
［式（１’）中、
Ｒ１６’、Ｒ１７’及びＲ１８’は同一又は異なって水素、アルキル基又は置換基を有していてもよいアリール基を意味する］
で表される構造を意味し；
Ｒ２’は、アルコキシ基を意味し；
Ｒ３’は、水素又はアルキル基を意味し；
Ｒ４’は、水素又はＯＲ４ａ’（式中、Ｒ４ａ’はアルキル基を意味する）を意味し、ＯＲ４ａ’はＲ３’とともに一般式（２’）：【００３３】
【化１３】
0005479105.tif 000014
【００３４】
［式中、Ｒ１９’及びＲ２０’は、同一又は異なってアルキル基を意味し、破線は、ベンゼン環との縮合部分を示す］
で表される環を形成することができ；
式：【００３５】
【化１４】
0005479105.tif 000015
【００３６】
で表される基が、
式（ａ’）：【００３７】
【化１５】
0005479105.tif 000016
【００３８】
（式中、Ｒ５ａ’及びＲ５ｂ’は同一又は異なって、水素又は置換基を有していてもよいアルキル基を意味する）で表される基を意味するか、又は
式（ｂ’）：【００３９】
【化１６】
0005479105.tif 000017
【００４０】
（式中、Ｒ８’はアルキル基を意味する）で表される基を意味する｝。
[３]一般式（Ｉ）で表される化合物が、
５−メトキシ−２，２−ジメチル−６−［（２Ｅ）−２−メチルブテ−２−ノイル］−１０−プロピル−２Ｈ，８Ｈ−ピラノ［２，３−ｆ］クロメン−８−オン（ＧＵＴ−７０）、
８−（３，４−ジヒドロキノリン−１（２Ｈ）−イルカルボニル）−５，７−ジメトキシ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン（ＢＮＳ−２２）、
５，７−ジメトキシ−８−［（２Ｅ）−３−フェニルプロぺ−２−ノイル］−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン（ＢＮＳ−２５）、
６−シクロブチルカルボニル−２，２−ジメチル−５−メトキシ−１０−プロピル−２Ｈ，８Ｈ−ピラノ［２，３−ｆ］クロメン−８−オン（ＢＮＳ−２６）、
６−シクロヘキシルカルボニル−２，２−ジメチル−５−メトキシ−１０−プロピル−２Ｈ，８Ｈ−ピラノ［２，３−ｆ］クロメン−８−オン（ＢＮＳ−２７）、
８−（１−シクロヘキセ−１−ニルカルボニル）−５，７−ジメトキシ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン（ＢＮＳ−２８）、
８−（１−シクロペンテ−１−ニルカルボニル）−５，７−ジメトキシ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン（ＢＮＳ−３５）、
７−メトキシ−８−［（２Ｅ）−２−メチルブテ−２−ノイル］−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン（ＢＮＳ−３６）、
８−（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）−５，７−ジメトキシ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン（ＢＮＳ−３８）、
３−（５，７−ジメトキシ−２−オキソ−２Ｈ−クロメン−４−イルプロピル）−（２Ｅ）−２−メチルブテ−２−ノエート（ＢＮＳ−４４）、
３−｛５，７−ジメトキシ−８−［（２Ｅ）−２−メチルブテ−２−ノイル］−２−オキソ−２Ｈ−クロメン−４−イル｝プロピル−（２Ｅ）−２−メチルブテ−２−ノエート（ＢＮＳ−４５）、
５，７−ジメトキシ−８−［（２Ｅ）−２−メチルブテ−２−ノイル］−２−プロピル−４Ｈ−クロメン−４−オン（ＢＮＳ−４６）、
８−（２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インド−１−イルカルボニル）−５，７−ジメトキシ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン（ＢＮＳ−５１）、
Ｎ−（５，７−ジメトキシ−２−オキソ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−８−イル）−２，６−ジメトキシベンズアミド（ＢＮＳ−５５）、
Ｎ−（５，７−ジメトキシ−２−オキソ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−８−イル）−２，２−ジフェニルアセトアミド（ＢＮＳ−５６）、
３−［８−（３，４−ジヒドロ−２Ｈ−キノリン−１−イルカルボニル）−５，７−ジメトキシ−２−オキソ−２Ｈ−クロメン−４−イル］プロピオン酸エチル（ＢＮＳ−６１）、
５，７−ジイソプロポキシ−８−［（２Ｅ）−３−フェニルプロぺ−２−ノイル］−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン（ＢＮＳ−６２）、
８−［（２Ｅ）−３−（２，６−ジメトキシフェニル）プロぺ−２−ノイル］−５，７−ジメトキシ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン（ＢＮＳ−６４）、又は
３−［８−（３，４−ジヒドロ−２Ｈ−キノリン−１−イルカルボニル）−５，７−ジメトキシ−２−オキソ−２Ｈ−クロメン−４−イル］プロピオン酸メチル（ＢＮＳ−６５）
である、上記[１]記載のユビキリン結合性小分子。
[４]一般式（Ｉ）で表される化合物が、
５−メトキシ−２，２−ジメチル−６−［（２Ｅ）−２−メチルブテ−２−ノイル］−１０−プロピル−２Ｈ，８Ｈ−ピラノ［２，３−ｆ］クロメン−８−オン（ＧＵＴ−７０）、
８−（３，４−ジヒドロキノリン−１（２Ｈ）−イルカルボニル）−５，７−ジメトキシ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン（ＢＮＳ−２２）、
５，７−ジメトキシ−８−［（２Ｅ）−３−フェニルプロぺ−２−ノイル］−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン（ＢＮＳ−２５）、
８−（１−シクロペンテ−１−ニルカルボニル）−５，７−ジメトキシ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン（ＢＮＳ−３５）、
３−［８−（３，４−ジヒドロ−２Ｈ−キノリン−１−イルカルボニル）−５，７−ジメトキシ−２−オキソ−２Ｈ−クロメン−４−イル］プロピオン酸エチル（ＢＮＳ−６１）、又は
３−［８−（３，４−ジヒドロ−２Ｈ−キノリン−１−イルカルボニル）−５，７−ジメトキシ−２−オキソ−２Ｈ−クロメン−４−イル］プロピオン酸メチル（ＢＮＳ−６５）
である、上記[１]記載のユビキリン結合性小分子。
[５]一般式（Ｉ）で表される化合物が、下記構造式を有する、８−（３，４−ジヒドロキノリン−１（２Ｈ）−イルカルボニル）−５，７−ジメトキシ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オンである、上記[１]記載のユビキリン結合性小分子。【００４１】
【化１７】
0005479105.tif 000018
【００４２】
[６]癌、神経変性疾患、自己免疫疾患及び感染症からなる群から選択される少なくとも１種の疾患の予防又は治療に用いられる、上記[１]記載のユビキリン結合性小分子。
[６−１]上記[１]記載のユビキリン結合性小分子を有効成分として含有する、癌、神経変性疾患、自己免疫疾患及び感染症からなる群から選択される少なくとも１種の疾患の予防又は治療剤。
[６−２]上記[１]記載のユビキリン結合性小分子の治療上有効な量を、該小分子の投与が必要な患者に投与することを含む、癌、神経変性疾患、自己免疫疾患及び感染症からなる群から選択される少なくとも１種の疾患の予防又は治療方法。
[７]一般式（Ｉ）（前記と同義）で表される化合物、又はその薬学的に許容される塩を有効成分として含有するトポイソメラーゼＩＩ阻害剤。
[８]一般式（Ｉ）で表される化合物が、一般式（ＩＩ）（前記と同義）で表される化合物である、上記[７]記載のトポイソメラーゼＩＩ阻害剤。
[９]一般式（Ｉ）で表される化合物が、
５−メトキシ−２，２−ジメチル−６−［（２Ｅ）−２−メチルブテ−２−ノイル］−１０−プロピル−２Ｈ，８Ｈ−ピラノ［２，３−ｆ］クロメン−８−オン（ＧＵＴ−７０）、
８−（３，４−ジヒドロキノリン−１（２Ｈ）−イルカルボニル）−５，７−ジメトキシ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン（ＢＮＳ−２２）、
５，７−ジメトキシ−８−［（２Ｅ）−３−フェニルプロぺ−２−ノイル］−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン（ＢＮＳ−２５）、
６−シクロブチルカルボニル−２，２−ジメチル−５−メトキシ−１０−プロピル−２Ｈ，８Ｈ−ピラノ［２，３−ｆ］クロメン−８−オン（ＢＮＳ−２６）、
６−シクロヘキシルカルボニル−２，２−ジメチル−５−メトキシ−１０−プロピル−２Ｈ，８Ｈ−ピラノ［２，３−ｆ］クロメン−８−オン（ＢＮＳ−２７）、
８−（１−シクロヘキセ−１−ニルカルボニル）−５，７−ジメトキシ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン（ＢＮＳ−２８）、
８−（１−シクロペンテ−１−ニルカルボニル）−５，７−ジメトキシ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン（ＢＮＳ−３５）、
７−メトキシ−８−［（２Ｅ）−２−メチルブテ−２−ノイル］−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン（ＢＮＳ−３６）、
８−（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）−５，７−ジメトキシ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン（ＢＮＳ−３８）、
３−（５，７−ジメトキシ−２−オキソ−２Ｈ−クロメン−４−イルプロピル）−（２Ｅ）−２−メチルブテ−２−ノエート（ＢＮＳ−４４）、
３−｛５，７−ジメトキシ−８−［（２Ｅ）−２−メチルブテ−２−ノイル］−２−オキソ−２Ｈ−クロメン−４−イル｝プロピル−（２Ｅ）−２−メチルブテ−２−ノエート（ＢＮＳ−４５）、
５，７−ジメトキシ−８−［（２Ｅ）−２−メチルブテ−２−ノイル］−２−プロピル−４Ｈ−クロメン−４−オン（ＢＮＳ−４６）、
８−（２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インド−１−イルカルボニル）−５，７−ジメトキシ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン（ＢＮＳ−５１）、
Ｎ−（５，７−ジメトキシ−２−オキソ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−８−イル）−２，６−ジメトキシベンズアミド（ＢＮＳ−５５）、
Ｎ−（５，７−ジメトキシ−２−オキソ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−８−イル）−２，２−ジフェニルアセトアミド（ＢＮＳ−５６）、
３−［８−（３，４−ジヒドロ−２Ｈ−キノリン−１−イルカルボニル）−５，７−ジメトキシ−２−オキソ−２Ｈ−クロメン−４−イル］プロピオン酸エチル（ＢＮＳ−６１）、
５，７−ジイソプロポキシ−８−［（２Ｅ）−３−フェニルプロぺ−２−ノイル］−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン（ＢＮＳ−６２）、
８−［（２Ｅ）−３−（２，６−ジメトキシフェニル）プロぺ−２−ノイル］−５，７−ジメトキシ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン（ＢＮＳ−６４）、又は
３−［８−（３，４−ジヒドロ−２Ｈ−キノリン−１−イルカルボニル）−５，７−ジメトキシ−２−オキソ−２Ｈ−クロメン−４−イル］プロピオン酸メチル（ＢＮＳ−６５）
である、上記[７]記載のトポイソメラーゼＩＩ阻害剤。
[１０]一般式（Ｉ）で表される化合物が、
５−メトキシ−２，２−ジメチル−６−［（２Ｅ）−２−メチルブテ−２−ノイル］−１０−プロピル−２Ｈ，８Ｈ−ピラノ［２，３−ｆ］クロメン−８−オン（ＧＵＴ−７０）、
８−（３，４−ジヒドロキノリン−１（２Ｈ）−イルカルボニル）−５，７−ジメトキシ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン（ＢＮＳ−２２）、
５，７−ジメトキシ−８−［（２Ｅ）−３−フェニルプロぺ−２−ノイル］−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン（ＢＮＳ−２５）、
８−（１−シクロペンテ−１−ニルカルボニル）−５，７−ジメトキシ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン（ＢＮＳ−３５）、
３−［８−（３，４−ジヒドロ−２Ｈ−キノリン−１−イルカルボニル）−５，７−ジメトキシ−２−オキソ−２Ｈ−クロメン−４−イル］プロピオン酸エチル（ＢＮＳ−６１）、又は
３−［８−（３，４−ジヒドロ−２Ｈ−キノリン−１−イルカルボニル）−５，７−ジメトキシ−２−オキソ−２Ｈ−クロメン−４−イル］プロピオン酸メチル（ＢＮＳ−６５）
である、上記[７]記載のトポイソメラーゼＩＩ阻害剤。
[１１]一般式（Ｉ）で表される化合物が、下記構造式を有する、８−（３，４−ジヒドロキノリン−１（２Ｈ）−イルカルボニル）−５，７−ジメトキシ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オンである、上記[７]記載のトポイソメラーゼＩＩ阻害剤。【００４３】
【化１８】
0005479105.tif 000019
【００４４】
[１２]癌、神経変性疾患、自己免疫疾患及び感染症からなる群から選択される少なくとも1種の疾患の予防又は治療に用いられる、上記[７]記載のトポイソメラーゼＩＩ阻害剤。
[１２−１]上記[７]記載のトポイソメラーゼＩＩ阻害剤を有効成分として含有する、癌、神経変性疾患、自己免疫疾患及び感染症からなる群から選択される少なくとも1種の疾患の予防又は治療剤。
[１２−２]上記[７]記載のトポイソメラーゼＩＩ阻害剤の治療上有効な量を、該阻害剤の投与が必要な患者に投与することを含む、癌、神経変性疾患、自己免疫疾患及び感染症からなる群から選択される少なくとも1種の疾患の予防又は治療方法。
[１３]一般式（Ｉ）で表される化合物、
但し、下記一般式（Ｉａ）：【００４５】
【化１９】
0005479105.tif 000020
【００４６】
{式（Ｉａ）中、
Ｒ１’’は、アルキル基、シクロアルキル基、置換基を有していてもよいアリール基、アルコキシ基、アルキルカルボニル基、置換基を有していてもよいアリールカルボニル基、アルコキシカルボニル基、カルボキシル基又は一般式（１ａ）：【００４７】
【化２０】
0005479105.tif 000021
【００４８】
［式（１ａ）中、
Ｒ１６’’、Ｒ１７’’及びＲ１８’’は同一又は異なって水素、アルキル基、シクロアルキル基又は置換基を有していてもよいアリール基を意味する］
で表される構造を意味し；
Ｒ２’’は、水素、ハロゲン原子、シアノ基、アルキル基、シクロアルキル基、置換基を有していてもよいアリール基、アルキルカルボニル基、置換基を有していてもよいアリールカルボニル基、カルボキシル基、アルコキシカルボニル基、チオール基、アルキルチオ基、置換基を有していてもよいアリールチオ基、アルキルスルホニル基、置換基を有していてもよいアリールスルホニル基、置換基を有していてもよいアミノカルボニル基、置換基を有していてもよいアミノスルホニル基、置換基を有していてもよいアリールオキシカルボニル基、アミノ基、アルキルアミノ基、ジアルキルアミノ基、アシルアミノ基、アルキルスルホニルアミノ基又は置換基を有していてもよいアリールスルホニルアミノ基、或いはＯＲ２ａ’’（式中、Ｒ２ａ’’は、水素、アルキル基又は置換基を有していてもよいアリール基を意味する）を意味し；
Ｒ１９及びＲ２０は、同一又は異なって、水素、アルキル基、シクロアルキル基又は置換基を有していてもよいアリール基を意味し、或いは、Ｃ−Ｒ１９Ｒ２０はＣ＝Ｏを意味し、Ｒ２１及びＲ２２は、同一又は異なって、水素、ハロゲン原子、シアノ基、ヒドロキシ基、アルキル基、シクロアルキル基、置換基を有していてもよいアリール基、アルコキシ基、アルキルカルボニル基、置換基を有していてもよいアリールカルボニル基、カルボキシル基、アルコキシカルボニル基、アミノ基、アルキルアミノ基、ジアルキルアミノ基又はアシルアミノ基を意味し；
Ｘ１はＯ、ＮＨ又はＮＲ１５（式中、Ｒ１５は、アルキル基、シクロアルキル基又は置換基を有していてもよいアリール基を意味する）を意味し；
Ｒ５ａ’’及びＲ５ｂ’’は同一又は異なって、水素、アルキル基、置換基を有していてもよいアリール基、ハロゲン原子、シアノ基、ヒドロキシ基、シクロアルキル基、アルコキシ基、アルキルカルボニル基、置換基を有していてもよいアリールカルボニル基、カルボキシル基、アルコキシカルボニル基、置換基を有していてもよいアリールオキシ基、チオール基、アルキルチオ基、置換基を有していてもよいアリールチオ基、アルキルスルホニル基、置換基を有していてもよいアリールスルホニル基、置換基を有していてもよいアミノカルボニル基、置換基を有していてもよいアミノスルホニル基、置換基を有していてもよいアリールオキシカルボニル基、アミノ基、アルキルアミノ基、ジアルキルアミノ基、アシルアミノ基、アルキルスルホニルアミノ基又は置換基を有していてもよいアリールスルホニルアミノ基を意味する}
で表される化合物を除く、又は、
その薬学的に許容される塩を有効成分として含有する抗癌剤。
[１３−１]一般式（Ｉ）で表される化合物（但し、一般式（Ｉａ）で表される化合物を除く）又はその薬学的に許容される塩の治療上有効な量を、該化合物の投与が必要な患者に投与することを含む、癌の予防又は治療方法。
[１４]一般式（Ｉ）で表される化合物が、一般式（ＩＩ）で表される化合物である、上記[１３]記載の抗癌剤。
[１４−１]一般式（Ｉ）で表される化合物が、一般式（ＩＩ）で表される化合物である、上記[１３−１]記載の方法。
[１５]一般式（Ｉ）で表される化合物が、
８−（３，４−ジヒドロキノリン−１（２Ｈ）−イルカルボニル）−５，７−ジメトキシ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン（ＢＮＳ−２２）、
５，７−ジメトキシ−８−［（２Ｅ）−３−フェニルプロぺ−２−ノイル］−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン（ＢＮＳ−２５）、
６−シクロブチルカルボニル−２，２−ジメチル−５−メトキシ−１０−プロピル−２Ｈ，８Ｈ−ピラノ［２，３−ｆ］クロメン−８−オン（ＢＮＳ−２６）、
６−シクロヘキシルカルボニル−２，２−ジメチル−５−メトキシ−１０−プロピル−２Ｈ，８Ｈ−ピラノ［２，３−ｆ］クロメン−８−オン（ＢＮＳ−２７）、
８−（１−シクロヘキセ−１−ニルカルボニル）−５，７−ジメトキシ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン（ＢＮＳ−２８）、
８−（１−シクロペンテ−１−ニルカルボニル）−５，７−ジメトキシ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン（ＢＮＳ−３５）、
７−メトキシ−８−［（２Ｅ）−２−メチルブテ−２−ノイル］−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン（ＢＮＳ−３６）、
８−（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）−５，７−ジメトキシ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン（ＢＮＳ−３８）、
３−（５，７−ジメトキシ−２−オキソ−２Ｈ−クロメン−４−イルプロピル）−（２Ｅ）−２−メチルブテ−２−ノエート（ＢＮＳ−４４）、
３−｛５，７−ジメトキシ−８−［（２Ｅ）−２−メチルブテ−２−ノイル］−２−オキソ−２Ｈ−クロメン−４−イル｝プロピル−（２Ｅ）−２−メチルブテ−２−ノエート（ＢＮＳ−４５）、
５，７−ジメトキシ−８−［（２Ｅ）−２−メチルブテ−２−ノイル］−２−プロピル−４Ｈ−クロメン−４−オン（ＢＮＳ−４６）、
８−（２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インド−１−イルカルボニル）−５，７−ジメトキシ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン（ＢＮＳ−５１）、
Ｎ−（５，７−ジメトキシ−２−オキソ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−８−イル）−２，６−ジメトキシベンズアミド（ＢＮＳ−５５）、
Ｎ−（５，７−ジメトキシ−２−オキソ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−８−イル）−２，２−ジフェニルアセトアミド（ＢＮＳ−５６）、
３−［８−（３，４−ジヒドロ−２Ｈ−キノリン−１−イルカルボニル）−５，７−ジメトキシ−２−オキソ−２Ｈ−クロメン−４−イル］プロピオン酸エチル（ＢＮＳ−６１）、
５，７−ジイソプロポキシ−８−［（２Ｅ）−３−フェニルプロぺ−２−ノイル］−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン（ＢＮＳ−６２）、
８−［（２Ｅ）−３−（２，６−ジメトキシフェニル）プロぺ−２−ノイル］−５，７−ジメトキシ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン（ＢＮＳ−６４）、又は
３−［８−（３，４−ジヒドロ−２Ｈ−キノリン−１−イルカルボニル）−５，７−ジメトキシ−２−オキソ−２Ｈ−クロメン−４−イル］プロピオン酸メチル（ＢＮＳ−６５）
である、上記[１３]記載の抗癌剤。
[１５−１]一般式（Ｉ）で表される化合物が、
８−（３，４−ジヒドロキノリン−１（２Ｈ）−イルカルボニル）−５，７−ジメトキシ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン（ＢＮＳ−２２）、
５，７−ジメトキシ−８−［（２Ｅ）−３−フェニルプロぺ−２−ノイル］−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン（ＢＮＳ−２５）、
６−シクロブチルカルボニル−２，２−ジメチル−５−メトキシ−１０−プロピル−２Ｈ，８Ｈ−ピラノ［２，３−ｆ］クロメン−８−オン（ＢＮＳ−２６）、
６−シクロヘキシルカルボニル−２，２−ジメチル−５−メトキシ−１０−プロピル−２Ｈ，８Ｈ−ピラノ［２，３−ｆ］クロメン−８−オン（ＢＮＳ−２７）、
８−（１−シクロヘキセ−１−ニルカルボニル）−５，７−ジメトキシ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン（ＢＮＳ−２８）、
８−（１−シクロペンテ−１−ニルカルボニル）−５，７−ジメトキシ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン（ＢＮＳ−３５）、
７−メトキシ−８−［（２Ｅ）−２−メチルブテ−２−ノイル］−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン（ＢＮＳ−３６）、
８−（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）−５，７−ジメトキシ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン（ＢＮＳ−３８）、
３−（５，７−ジメトキシ−２−オキソ−２Ｈ−クロメン−４−イルプロピル）−（２Ｅ）−２−メチルブテ−２−ノエート（ＢＮＳ−４４）、
３−｛５，７−ジメトキシ−８−［（２Ｅ）−２−メチルブテ−２−ノイル］−２−オキソ−２Ｈ−クロメン−４−イル｝プロピル−（２Ｅ）−２−メチルブテ−２−ノエート（ＢＮＳ−４５）、
５，７−ジメトキシ−８−［（２Ｅ）−２−メチルブテ−２−ノイル］−２−プロピル−４Ｈ−クロメン−４−オン（ＢＮＳ−４６）、
８−（２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インド−１−イルカルボニル）−５，７−ジメトキシ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン（ＢＮＳ−５１）、
Ｎ−（５，７−ジメトキシ−２−オキソ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−８−イル）−２，６−ジメトキシベンズアミド（ＢＮＳ−５５）、
Ｎ−（５，７−ジメトキシ−２−オキソ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−８−イル）−２，２−ジフェニルアセトアミド（ＢＮＳ−５６）、
３−［８−（３，４−ジヒドロ−２Ｈ−キノリン−１−イルカルボニル）−５，７−ジメトキシ−２−オキソ−２Ｈ−クロメン−４−イル］プロピオン酸エチル（ＢＮＳ−６１）、
５，７−ジイソプロポキシ−８−［（２Ｅ）−３−フェニルプロぺ−２−ノイル］−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン（ＢＮＳ−６２）、
８−［（２Ｅ）−３−（２，６−ジメトキシフェニル）プロぺ−２−ノイル］−５，７−ジメトキシ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン（ＢＮＳ−６４）、又は
３−［８−（３，４−ジヒドロ−２Ｈ−キノリン−１−イルカルボニル）−５，７−ジメトキシ−２−オキソ−２Ｈ−クロメン−４−イル］プロピオン酸メチル（ＢＮＳ−６５）
である、上記[１３−１]記載の方法。
[１６]一般式（Ｉ）で表される化合物が、
８−（３，４−ジヒドロキノリン−１（２Ｈ）−イルカルボニル）−５，７−ジメトキシ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン（ＢＮＳ−２２）、
５，７−ジメトキシ−８−［（２Ｅ）−３−フェニルプロぺ−２−ノイル］−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン（ＢＮＳ−２５）、
８−（１−シクロペンテ−１−ニルカルボニル）−５，７−ジメトキシ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン（ＢＮＳ−３５）、
３−［８−（３，４−ジヒドロ−２Ｈ−キノリン−１−イルカルボニル）−５，７−ジメトキシ−２−オキソ−２Ｈ−クロメン−４−イル］プロピオン酸エチル（ＢＮＳ−６１）、又は
３−［８−（３，４−ジヒドロ−２Ｈ−キノリン−１−イルカルボニル）−５，７−ジメトキシ−２−オキソ−２Ｈ−クロメン−４−イル］プロピオン酸メチル（ＢＮＳ−６５）
である、上記[１３]記載の抗癌剤。
[１６−１]一般式（Ｉ）で表される化合物が、
８−（３，４−ジヒドロキノリン−１（２Ｈ）−イルカルボニル）−５，７−ジメトキシ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン（ＢＮＳ−２２）、
５，７−ジメトキシ−８−［（２Ｅ）−３−フェニルプロぺ−２−ノイル］−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン（ＢＮＳ−２５）、
８−（１−シクロペンテ−１−ニルカルボニル）−５，７−ジメトキシ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン（ＢＮＳ−３５）、
３−［８−（３，４−ジヒドロ−２Ｈ−キノリン−１−イルカルボニル）−５，７−ジメトキシ−２−オキソ−２Ｈ−クロメン−４−イル］プロピオン酸エチル（ＢＮＳ−６１）、又は
３−［８−（３，４−ジヒドロ−２Ｈ−キノリン−１−イルカルボニル）−５，７−ジメトキシ−２−オキソ−２Ｈ−クロメン−４−イル］プロピオン酸メチル（ＢＮＳ−６５）
である、上記[１３−１]記載の方法。
[１７]一般式（Ｉ）で表される化合物が、下記構造式を有する、８−（３，４−ジヒドロキノリン−１（２Ｈ）−イルカルボニル）−５，７−ジメトキシ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オンである、上記[１３]記載の抗癌剤。【００４９】
【化２１】
0005479105.tif 000022
【００５０】
[１７−１]一般式（Ｉ）で表される化合物が、下記構造式を有する、８−（３，４−ジヒドロキノリン−１（２Ｈ）−イルカルボニル）−５，７−ジメトキシ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オンである、上記[１３−１]記載の方法。【００５１】
【化２２】
0005479105.tif 000023
【００５２】
[１８]ユビキリンとの結合活性を有し抗癌作用を示す、上記[１３]、[１４]、[１５]、[１６]及び[１７]のいずれか１項に記載の抗癌剤。
[１８−１]一般式（Ｉ）で表される化合物が、ユビキリンとの結合活性を有し抗癌作用を示す、上記[１３−１]、[１４−１]、[１５−１]、[１６−１]及び[１７−１]のいずれか１項に記載の方法。
[１９]癌が、急性骨髄性白血病、急性リンパ性白血病、悪性リンパ腫、絨毛癌、多発性骨髄腫、軟部腫瘍、小細胞肺ガン、慢性骨髄性白血病、甲状腺髄様癌、骨肉腫、頭頸部癌、食道癌、非小細胞肺ガン、大腸癌、胃癌、胆道癌、脳腫瘍、悪性黒色腫、腎臓癌、膵臓癌、肝臓癌からなる群より選択される上記[１３]、[１４]、[１５]、[１６]、[１７]及び[１８]のいずれか１項に記載の抗癌剤。
[１９−１]癌が、急性骨髄性白血病、急性リンパ性白血病、悪性リンパ腫、絨毛癌、多発性骨髄腫、軟部腫瘍、小細胞肺ガン、慢性骨髄性白血病、甲状腺髄様癌、骨肉腫、頭頸部癌、食道癌、非小細胞肺ガン、大腸癌、胃癌、胆道癌、脳腫瘍、悪性黒色腫、腎臓癌、膵臓癌、肝臓癌からなる群より選択される上記[１３−１]、[１４−１]、[１５−１]、[１６−１]、[１７−１]及び[１８−１]のいずれか１項に記載の方法。
[２０]一般式（Ｉ）で表される化合物、
但し、一般式（Ｉａ）で表される化合物及び下記一般式（Ｉｂ）：【００５３】
【化２３】
0005479105.tif 000024
【００５４】
{式（Ｉｂ）中、
Ｒ１’’’は、アルキル基又はアリール基を意味し；
Ｒ２ａ’’’は、水素、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基又はアリール基を意味し；
Ｒ３’’’は、水素、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アルコキシ基又はアリール基を意味し；
Ｒ４ａ’’’は、水素、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基又はアリール基を意味し［ここで、ＯＲ４ａ’’’はＲ３’’’とともに一般式（２）で表される環を形成することができる］；
Ｒ５ａ’’’は、アルキル基、アリール基又はヒドロキシ基を意味する}
で表される化合物を除く、又は
その薬学的に許容される塩。
[２１]一般式（Ｉ）で表される化合物が、一般式（ＩＩ）で表される化合物である、上記[２０]記載の化合物又はその薬学的に許容される塩（但し、Ｒ１’が一般式（１’）で表される構造を意味する場合は、ＯＲ４ａ’はＲ３’とともに一般式（２’）で表される環を形成することがない。）。
[２２]一般式（Ｉ）で表される化合物が、
８−（３，４−ジヒドロキノリン−１（２Ｈ）−イルカルボニル）−５，７−ジメトキシ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン（ＢＮＳ−２２）、
５，７−ジメトキシ−８−［（２Ｅ）−３−フェニルプロぺ−２−ノイル］−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン（ＢＮＳ−２５）、
６−シクロブチルカルボニル−２、２−ジメチル−５−メトキシ−１０−プロピル−２Ｈ，８Ｈ−ピラノ［２，３−ｆ］クロメン−８−オン（ＢＮＳ−２６）、
６−シクロヘキシルカルボニル−２，２−ジメチル−５−メトキシ−１０−プロピル−２Ｈ，８Ｈ−ピラノ［２，３−ｆ］クロメン−８−オン（ＢＮＳ−２７）、
８−（１−シクロヘキセ−１−ニルカルボニル）−５，７−ジメトキシ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン（ＢＮＳ−２８）、
８−（１−シクロペンテ−１−ニルカルボニル）−５，７−ジメトキシ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン（ＢＮＳ−３５）、
７−メトキシ−８−［（２Ｅ）−２−メチルブテ−２−ノイル］−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン（ＢＮＳ−３６）、
８−（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）−５，７−ジメトキシ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン（ＢＮＳ−３８）、
３−（５，７−ジメトキシ−２−オキソ−２Ｈ−クロメン−４−イルプロピル）−（２Ｅ）−２−メチルブテ−２−ノエート（ＢＮＳ−４４）、
３−｛５，７−ジメトキシ−８−［（２Ｅ）−２−メチルブテ−２−ノイル］−２−オキソ−２Ｈ−クロメン−４−イル｝プロピル−（２Ｅ）−２−メチルブテ−２−ノエート（ＢＮＳ−４５）、
５，７−ジメトキシ−８−［（２Ｅ）−２−メチルブテ−２−ノイル］−２−プロピル−４Ｈ−クロメン−４−オン（ＢＮＳ−４６）、
８−（２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インド−１−イルカルボニル）−５，７−ジメトキシ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン（ＢＮＳ−５１）、
Ｎ−（５，７−ジメトキシ−２−オキソ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−８−イル）−２，６−ジメトキシベンズアミド（ＢＮＳ−５５）、
Ｎ−（５，７−ジメトキシ−２−オキソ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−８−イル）−２，２−ジフェニルアセトアミド（ＢＮＳ−５６）、
３−［８−（３，４−ジヒドロ−２Ｈ−キノリン−１−イルカルボニル）−５，７−ジメトキシ−２−オキソ−２Ｈ−クロメン−４−イル］プロピオン酸エチル（ＢＮＳ−６１）、
５，７−ジイソプロポキシ−８−［（２Ｅ）−３−フェニルプロぺ−２−ノイル］−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン（ＢＮＳ−６２）、
８−［（２Ｅ）−３−（２，６−ジメトキシフェニル）プロぺ−２−ノイル］−５，７−ジメトキシ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン（ＢＮＳ−６４）、又は
３−［８−（３，４−ジヒドロ−２Ｈ−キノリン−１−イルカルボニル）−５，７−ジメトキシ−２−オキソ−２Ｈ−クロメン−４−イル］プロピオン酸メチル（ＢＮＳ−６５）
である、上記[２０]記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
[２３] 一般式（Ｉ）で表される化合物が、
８−（３，４−ジヒドロキノリン−１（２Ｈ）−イルカルボニル）−５，７−ジメトキシ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン（ＢＮＳ−２２）、
５，７−ジメトキシ−８−［（２Ｅ）−３−フェニルプロぺ−２−ノイル］−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン（ＢＮＳ−２５）、
８−（１−シクロペンテ−１−ニルカルボニル）−５，７−ジメトキシ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン（ＢＮＳ−３５）、
３−［８−（３，４−ジヒドロ−２Ｈ−キノリン−１−イルカルボニル）−５，７−ジメトキシ−２−オキソ−２Ｈ−クロメン−４−イル］プロピオン酸エチル（ＢＮＳ−６１）、又は
３−［８−（３，４−ジヒドロ−２Ｈ−キノリン−１−イルカルボニル）−５，７−ジメトキシ−２−オキソ−２Ｈ−クロメン−４−イル］プロピオン酸メチル（ＢＮＳ−６５）
である、上記[２０]記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
[２４]一般式（Ｉ）で表される化合物が、下記構造式を有する、８−（３，４−ジヒドロキノリン−１（２Ｈ）−イルカルボニル）−５，７−ジメトキシ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オンである、上記[２０]記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。【００５５】
【化２４】
0005479105.tif 000025
【００５６】
[２５]上記[２０]〜[２４]のいずれか１項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩を有効成分として含有する、医薬。
[２６]抗癌剤である、上記[２５]記載の医薬。
[２７]癌、神経変性疾患、自己免疫疾患及び感染症からなる群から選択される少なくとも１種の疾患の予防又は治療剤の製造の為の、上記ユビキリン結合性小分子又はトポイソメラーゼＩＩ阻害剤の使用。
[２８]上記ユビキリン結合性小分子又はトポイソメラーゼＩＩ阻害剤、及び当該小分子又は阻害剤を癌、神経変性疾患、自己免疫疾患及び感染症からなる群から選択される少なくとも１種の疾患の予防又は治療に使用しうるかまたは使用すべきであることを記載した商業的パッケージ。
[２９]癌、神経変性疾患、自己免疫疾患及び感染症からなる群から選択される少なくとも１種の疾患の予防又は治療剤の製造の為の、一般式（Ｉ）で表される化合物の使用。
[３０]一般式（Ｉ）で表される化合物、及び当該化合物を癌、神経変性疾患、自己免疫疾患及び感染症からなる群から選択される少なくとも１種の疾患の予防又は治療に使用しうるかまたは使用すべきであることを記載した商業的パッケージ。
【発明の効果】
【００５７】
本発明は、ユビキリン結合活性を有する新規化合物及び当該化合物を有効成分として含有する医薬を提供する。さらに、当該化合物は、トポイソメラーゼＩＩ阻害作用を有する。これらの作用により本発明化合物は、ユビキチン−プロテオソーム系に関連する各種疾患、トポイソメラーゼＩＩ活性に関連する各種疾患の予防・治療薬として有用であり、特に抗癌剤として有用である。
【図面の簡単な説明】
【００５８】
【図１】ＢＮＳ−２２の有糸分裂に及ぼす影響を示した図（蛍光顕微鏡像）である。
【図２】ＢＮＳ−２２処理した細胞をＰＩでＤＮＡ染色しＦＡＣＳで細胞周期を解析した結果を示した図である。２Ｎは２倍体の細胞であることを４Ｎは４倍体の細胞であることを、それぞれ示す。
【図３】ＢＮＳ−２２の細胞増殖抑制作用を示した図である（ＷＳＴ−８法）。縦軸は、生細胞の割合を細胞増殖（％）として、横軸はＢＮＳ−２２の濃度（μＭ）をそれぞれ示す。
【図４】ＢＮＳ−２２のインビトロでのトポイソメラーゼＩＩの阻害活性を測定した結果を示す図（電気泳動像）である。トポイソメラーゼＩＩによる連環状キネトプラストＤＮＡの脱連環に及ぼすＢＮＳ−２２の作用を示している。
【図５】ＢＮＳ−２２特異的に結合するタンパク質を解析した結果を示す図（電気泳動像）である。ＢＮＳ−２２結合ビーズに特異的に結合し共沈するタンパク質としてユビキリン１が確認された。
【図６】ＢＮＳ−２２処理による細胞内ユビキチン化タンパク質の蓄積誘導を示す図（電気泳動〜イムノブロット像）である。
【図７】（Ａ）ＧＵＴ−７０結合ビーズを用いたプルダウンアッセイの手順を模式的に示した図である。（Ｂ）ＧＵＴ−７０に特異的に結合するタンパク質を解析した結果を示す図（電気泳動像）である。
【図８】（Ａ）固定化されたＧＵＴ−７０とユビキリン１との相互作用及び当該相互作用に及ぼす遊離ＧＵＴ−７０の競合作用を模式的に表した図である。（Ｂ）精製リコンビナントユビキリン１のクマシーブリリアントブルー（ＣＢＢ）染色像である。（Ｃ）ＧＵＴ−７０特異的に結合するタンパク質を解析した結果を示す図（電気泳動〜イムノブロット像）である。ＧＵＴ−７０結合ビーズに特異的に結合し共沈するタンパク質としてユビキリン１が確認された。また、遊離のＧＵＴ−７０存在下では、ＧＵＴ結合ビーズとユビキリン１との相互作用が阻害された。
【図９】（Ａ）ＧＵＴ−７０及びＭＧ１３２の、ユビキチン・プロテアソームシステムに及ぼす影響を考察した模式図である。（Ｂ）ＧＵＴ−７０処理による細胞内ユビキチン化タンパク質の蓄積誘導を示す図（電気泳動〜イムノブロット像）である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００５９】
以下、本明細書で用いられる各記号の定義について詳述する。
本明細書中の「ハロゲン」としては、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素が挙げられる。【００６０】
本明細書中の「アルキル基」は、直鎖状或いは分岐状のアルキル基を意味し、例えば、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、イソペンチル、ネオペンチル、ｔｅｒｔ−ペンチル、ヘキシル、２，２−ジメチルブチル、３，３−ジメチルブチル、２−エチルブチル、ヘプチル、オクチル等が挙げられ、なかでもＣ１−Ｃ６アルキル基が好ましい。
本明細書中の「置換基を有していてもよいアルキル基」とは、置換可能な位置に１から５個、好ましくは１から３個の置換基を有していてもよいアルキル基を意味する。このような置換基としては、例えばカルボキシル基、ジアルキルアミノカルボニル基（例、ジメチルアミノカルボニル）、置換基を有していてもよい複素環カルボニル基（後述）、置換基を有していてもよいアリール基（後述）、アルキルオキシカルボニル基（例、メトキシカルボニル、エトキシカルボニル）、アルケニルカルボニルオキシ基（例、イソブテニルカルボニルオキシ）等が挙げられる。【００６１】
本明細書中の「アルケニル基」としては、直鎖状或いは分岐状のアルケニル基であり、例えば、ビニル、アリル、プロペニル、イソプロペニル、ブテニル、イソブテニル、ブタ−３−エン−１−イル、ペンタ−４−エン−１−イル、へキサ−５−エン−１−イル等が挙げられ、なかでもＣ２−Ｃ６アルケニル基が好ましい。
本明細書中の「置換基を有していてもよいアルケニル基」としては、置換可能な位置に１から５個、好ましくは１から３個の置換基を有していてもよいアルケニル基を意味する。このような置換基としては、例えばヒドロキシ基、ジアルキルアミノ基（後述）、置換基を有していてもよいアリール基（後述）等が挙げられる。【００６２】
本明細書中の「アルキニル基」は、直鎖状或いは分岐状のアルキニル基であり、例えば、エチニル、プロパ−２−イン−１−イル、ブタ−３−イン−１−イル、ペンタ−４−イン−１−イル、へキサ−５−イン−１−イル等が挙げられ、なかでもＣ２−Ｃ６アルキニル基が好ましい。
本明細書中の「置換基を有していてもよいアルキニル基」とは、置換可能な位置に１から５個、好ましくは１から３個の置換基を有していてもよいアルキニル基を意味する。このような置換基としては、例えばヒドロキシ基等が挙げられる。【００６３】
本明細書中の「シクロアルキル基」としては、例えば、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロオクチル等が挙げられ、なかでもＣ３−Ｃ６シクロアルキル基が好ましい。【００６４】
本明細書中の「アリール基」としては、例えば、フェニル、ナフチル（例、１−ナフチル、２−ナフチル）、ビフェニリル、アントリル、フェナントリル等が挙げられ、なかでもＣ６−Ｃ１４アリール基が好ましく、Ｃ６−１０アリール基がより好ましく、例えば、フェニル基等が汎用される。
本明細書中の「置換基を有していてもよいアリール基」とは、置換可能な位置に１から５個、好ましくは１から３個の置換基を有していてもよいアリール基を意味する。このような置換基としては、例えばハロゲン（例、臭素、塩素）、シアノ基、ニトロ基、ヒドロキシ基、アミノカルボニル基、アセチル基、カルボキシル基、アルコキシカルボニル基（後述）、置換基を有していてもよいアミノ基（後述）、アルコキシ基（後述）、置換基を有していてもよいアルキル基（前述）等が挙げられる。【００６５】
本明細書中の「アルコキシ基」としては、例えば、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、ブトキシ、イソブトキシ、ｓｅｃ−ブトキシ、ｔｅｒｔ−ブトキシ、ペンチルオキシ、イソペンチルオキシ、ネオペンチルオキシ、ｔｅｒｔ−ペンチルオキシ、ヘキシルオキシ、２−エチルブトキシ等が挙げられ、なかでもＣ１−Ｃ６アルコキシ基が好ましい。【００６６】
本明細書中の「複素環基」としては、特に断りのない限り、芳香族複素環基および非芳香族複素環基が挙げられる。【００６７】
ここで、芳香族複素環基としては、例えば、環構成原子として炭素原子以外に酸素原子、硫黄原子および窒素原子から選ばれるヘテロ原子を１から４個含有する４から７員（好ましくは５又は６員）の単環式芳香族複素環基および縮合芳香族複素環基が挙げられる。該縮合芳香族複素環基としては、例えば、これら４から７員の単環式芳香族複素環基に対応する環と、１又は２個の窒素原子を含む５又は６員の芳香族複素環（例、ピロール、イミダゾール、ピラゾール、ピラジン、ピリジン、ピリミジン）、１個の硫黄原子を含む５員の芳香族複素環（例、チオフェン）およびベンゼン環から選ばれる１又は２個が縮合した環から誘導される基等が挙げられる。
「芳香族複素環基」としては、例えば、
フリル、チエニル、ピロリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、チアゾリル、イソチアゾリル、イミダゾリル、ピラゾリル、１，２，３−オキサジアゾリル、１，２，４−オキサジアゾリル、１，３，４−オキサジアゾリル、フラザニル、１，２，３−チアジアゾリル、１，２，４−チアジアゾリル、１，３，４−チアジアゾリル、１，２，３−トリアゾリル、１，２，４−トリアゾリル、テトラゾリル、ピリジル、ピリダジニル、ピリミジニル、ピラジニル、トリアジニル等の単環式芳香族複素環基；および
ベンゾフラニル、イソベンゾフラニル、ベンゾ［ｂ］チエニル、インドリル、イソインドリル、１Ｈ−インダゾリル、ベンゾイミダゾリル、ベンゾオキサゾリル、ベンゾ［ｄ］イソオキサゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾ［ｄ］イソチアゾリル、１Ｈ−ベンゾトリアゾリル、キノリル、イソキノリル、シンノリニル、キナゾリニル、キノキサリニル、フタラジニル、ナフチリジニル、プリニル、プテリジニル、カルバゾリル、α−カルボリニル、β−カルボリニル、γ−カルボリニル、アクリジニル、フェノキサジニル、フェノチアジニル、フェナジニル、フェノキサチイニル、チアントレニル、フェナトリジニル、フェナトリジニル、フェナントロリニル、インドリジニル、ピロロ［１，２−ｂ］ピリダジニル、ピラゾロ［１，５−ａ］ピリジル、イミダゾ［１，２−ａ］ピリジル、イミダゾ［１，５−ａ］ピリジル、イミダゾ［１，２−ａ］ピリダジニル、イミダゾ［１，２−ａ］ピリミジニル、１，２，４−トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジル、１，２，４−トリアゾロ［４，３−ｂ］ピリダジニル等の縮合芳香族複素環基；
が挙げられる。【００６８】
非芳香族複素環基としては、例えば、環構成原子として炭素原子以外に酸素原子、硫黄原子および窒素原子から選ばれるヘテロ原子を１から４個含有する４から７員（好ましくは５又は６員）の単環式非芳香族複素環基および縮合非芳香族複素環基が挙げられる。該縮合非芳香族複素環基としては、例えば、これら４から７員の単環式非芳香族複素環基に対応する環と、１又は２個の窒素原子を含む５又は６員の芳香族複素環（例、ピロール、イミダゾール、ピラゾール、ピラジン、ピリジン、ピリミジン）、１個の硫黄原子を含む５員の芳香族複素環（例、チオフェン）およびベンゼン環から選ばれる１又は２個の環が縮合した環から誘導される基、ならびに該基の部分飽和により得られる基等が挙げられる。
「非芳香族複素環基」としては、例えば、
アゼチジニル、オキセタニル、チエタニル、ピロリジニル、テトラヒドロフリル、チオラニル、イミダゾリジニル、ピラゾリジニル、オキサゾリジニル、チアゾリジニル、ピペリジル、テトラヒドロピラニル、モルホリニル、チオモルホリニル、ピペラジニル等の単環式非芳香族複素環基；および
イソクロマニル、ジヒドロベンゾピラニル、ジヒドロキノリル、イソクロメニル、クロメニル（２Ｈ−クロメニル、４Ｈ−クロメニル）、１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリル、１，２，３，４−テトラヒドロキノリル、２，３−ジヒドロベンゾフラニル、ベンゾ［１，３］ジオキソリル等の縮合非芳香族複素環基；
が挙げられる。【００６９】
本明細書中の「置換基を有していてもよい複素環基」とは、置換可能な位置に１から５個、好ましくは１から３個の置換基を有していてもよい複素環基を意味する。このような置換基としては、例えばハロゲン（上述）、アルキル基（上述）、アラルキル基（例、ベンジル）、複素環基（上述）、アルコキシ基（後述）等が挙げられる。【００７０】
本明細書中の「置換基を有していてもよいアミノ基」としては、アルキル基（好ましくはＣ１−Ｃ６アルキル基）でモノ置換されたアミノ基（モノアルキルアミノ基、単にアルキルアミノ基ともいう）あるいはジ置換されたアミノ基（ジアルキルアミノ基）、置換基（例、ハロゲン化されたアルキル基）を有していてよいアリール基（好ましくはＣ６−Ｃ１４アリール基）でモノ置換されたアミノ基（モノアリールアミノ基）あるいはジ置換されたアミノ基（ジアリールアミノ基）、置換基を有していてもよいアミノカルボニル基（後述）で置換されたアミノ基、アルケニルカルボニル基（後述）で置換されたアミノ基、複素環カルボニル基（後述）で置換されたアミノ基等が例示される。ハロゲン化されたアルキル基としてはトリフルオロメチル基等が例示される。
「置換基を有していてもよいアミノ基」の具体例としては、メチルアミノ、エチルアミノ、プロピルアミノ、イソプロピルアミノ、ブチルアミノ、イソブチルアミノ、ｓｅｃ−ブチルアミノ、ｔｅｒｔ−ブチルアミノ、ペンチルアミノ、イソペンチルアミノ、ネオペンチルアミノ、ｔｅｒｔ−ペンチルアミノ、ヘキシルアミノ等のＣ１−Ｃ６アルキルアミノ基、ジメチルアミノ、ジエチルアミノ、Ｎ−エチル−Ｎ−メチルアミノ等のジ（Ｃ１−Ｃ６）アルキルアミノ基、フェニルアミノ、１−ナフチルアミノ、２−ナフチルアミノ、トリフルオロフェニルアミノ等のＣ６−Ｃ１４アリールアミノ基、ジフェニルアミノ、ジナフチルアミノ等のジ（Ｃ６−Ｃ１４）アリールアミノ基、フェニルアミノカルボニル、ブテニルカルボニル、ベンゾジオキソリルカルボニル等が挙げられる。【００７１】
本明細書中の「アルキルアミノ基」及び「ジアルキルアミノ基」は、それぞれ上記した「置換基を有していてもよいアミノ基」として例示されたものと同義である。【００７２】
本明細書中の「アルキルカルボニル基」、「アルケニルカルボニル基」、「アルコキシカルボニル基」、「置換基を有していてもよいアリールカルボニル基」、「シクロアルキルカルボニル基」及び「置換基を有していてもよいアミノカルボニル基」は、それぞれ前記した「アルキル基」、「アルケニル基」、「アルコキシ基」、「置換基を有していてもよいアリール基」、「シクロアルキル基」及び「置換基を有していてもよいアミノ基」で置換されたカルボニル基を意味する。【００７３】
「アルキルカルボニル基」は、好ましくは、Ｃ１−Ｃ６アルキル−カルボニル基であり、具体的には、アセチル、プロパノイル、ブタノイル、２−メチルプロパノイル、ペンタノイル、３−メチルブタノイル、２，２−ジメチルプロパノイル等が挙げられる。
「アルケニルカルボニル基」は、好ましくはＣ２−Ｃ６アルケニル−カルボニル基であり、具体的には、ビニルカルボニル、１−プロペニルカルボニル、２−プロペニルカルボニル、２−ブテニルカルボニル、３−ブテニルカルボニル等が挙げられる。
「アルコキシカルボニル基」は、好ましくはＣ１−Ｃ６アルコキシ−カルボニル基であり、具体的には、メトキシカルボニル、エトキシカルボニル、ｎ−プロポキシカルボニル、イソプロポキシカルボニル、ｎ−ブトキシカルボニル、イソブトキシカルボニル、ｓｅｃ−ブトキシカルボニル、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル等が挙げられる。
「シクロアルキルカルボニル基」は、好ましくはＣ３−Ｃ６シクロアルキル−カルボニル基であり、具体的には、シクロプロピルカルボニル、シクロブチルカルボニル、シクロペンチルカルボニル、シクロヘキシルカルボニル、シクロヘプチルカルボニル、シクロオクチルカルボニル等が挙げられる。
「置換基を有していてもよいアリールカルボニル基」は、好ましくは、Ｃ６−Ｃ１４アリール−カルボニル基であり、具体的には、ベンゾイル、１−ナフトイル、２−ナフトイル等が挙げられる。
本明細書中において、「置換基を有していてもよいアミノカルボニル基」とは、例えばアルキルアミノ基（好ましくはＣ１−Ｃ６アルキルでモノ又はジ置換されたアミノ基）あるいはアリールアミノ基（好ましくはＣ６−Ｃ１４アリール基でモノ又はジ置換されたアミノ基）で置換されたカルボニル基を意味し、具体的には、メチルアミノカルボニル、エチルアミノカルボニル、ｎ−プロピルアミノカルボニル、イソプロピルアミノカルボニル、ｎ−ブチルアミノカルボニル、イソブチルアミノカルボニル、ｔｅｒｔ−ブチルアミノカルボニル、ｎ−ペンチルアミノカルボニル、イソペンチルアミノカルボニル、ヘキシルアミノカルボニル、ジメチルアミノカルボニル、ジエチルアミノカルボニル、ジｎ−プロピルアミノカルボニル、ジイソプロピルアミノカルボニル、ジｎ−ブチルアミノカルボニル、ジイソブチルアミノカルボニル、ジｔｅｒｔ−ブチルアミノカルボニル、ジｎ−ペンチルアミノカルボニル、ジイソペンチルアミノカルボニル、ジヘキシルアミノカルボニル、フェニルアミノカルボニル、ナフチルアミノカルボニル等が挙げられる。【００７４】
本明細書中において「シクロアルケニルカルボニル基」とは、例えば、シクロプロペニル、シクロブテニル、シクロペンテニル、シクロヘキセニル等のＣ３−Ｃ６シクロアルケニル基で置換されたカルボニル基を意味する。【００７５】
本明細書中の「複素環カルボニル基」とは、前記した「複素環基」で置換されたカルボニル基を意味する。「複素環カルボニル基」の「複素環基」としては、例えば、前記複素環基として例示した芳香族又は非芳香族複素環基に対応する環が挙げられる。「複素環カルボニル基」の具体例としては、ベンゾフラニルカルボニル、チエニルカルボニル、ベンゾイミダゾリルカルボニル、ピリミジニルカルボニル、１−ピロリジニルカルボニル、ピペリジノカルボニル、１−ピペラジニルカルボニル、モルホリノカルボニル、チオモルホリノカルボニル等が挙げられる。
本明細書中の「置換基を有していてもよい複素環カルボニル基」とは、カルボニル基の他に、置換可能な位置に１〜３個の置換基を有していてもよい複素環カルボニル基を意味する。そのような置換基としては、ハロゲン（上述）、アルキル基（上述）、アラルキル基（例、ベンジル）、複素環基（上述）、アルコキシ基（後述）等が挙げられる。【００７６】
本明細書中の「置換基を有していてもよいカルボキシル基」における「置換基」としては、例えばアルキル基（上述）、アリール基（上述）、アラルキル基（例、ベンジル、フェネチル）等が挙げられる。【００７７】
本明細書中の「アルキルチオ基」及び「置換基を有していてもよいアリールチオ基」は、それぞれ前記した「アルキル基」及び「置換基を有していてもよいアリール基」で置換されたチオ基を意味する。
「アルキルチオ基」は、好ましくは、Ｃ１−Ｃ６アルキルチオ基であり、具体的には、メチルチオ、エチルチオ、ｎ−プロピルチオ、イソプロピルチオ、ｎ−ブチルチオ、イソブチルチオ、ｔｅｒｔ−ブチルチオ等が挙げられる。
「置換基を有していてもよいアリールチオ基」は、好ましくは、置換基を有していてもよいＣ６−Ｃ１４アリールチオ基であり、具体的には、フェニルチオ、ナフチルチオ等が挙げられる。【００７８】
本明細書中の「アルキルスルホニル基」及び「置換基を有していてもよいアリールスルホニル基」は、それぞれ前記した「アルキル基」及び「置換基を有していてもよいアリール基」で置換されたスルホニル基を意味する。
「アルキルスルホニル基」は、好ましくは、Ｃ１−Ｃ６アルキルスルホニル基であり、具体的には、メチルスルホニル、エチルスルホニル、ｎ−プロピルスルホニル、イソプロピルスルホニル、ｎ−ブチルスルホニル、イソブチルスルホニル、ｔｅｒｔ−ブチルスルホニル等が挙げられる。
「置換基を有していてもよいアリールスルホニル基」は、好ましくは、置換基を有していてもよいＣ６−Ｃ１４アリールスルホニル基であり、具体的には、フェニルスルホニル、ナフチルスルホニル等が挙げられる。【００７９】
「置換基を有していてもよいアミノスルホニル基」としては、（Ｃ１−Ｃ６）アルキルアミノ−スルホニル基、ジ（Ｃ１−Ｃ６）アルキルアミノ−スルホニル基、（Ｃ６−Ｃ１４）アリールアミノ−スルホニル基、ジ（Ｃ６−Ｃ１４）アリールアミノ−スルホニル基等が挙げられ、具体的には、メチルアミノスルホニル、エチルアミノスルホニル、ｎ−プロピルアミノスルホニル、イソプロピルアミノスルホニル、ｎ−ブチルアミノスルホニル、イソブチルアミノスルホニル、ｔｅｒｔ−ブチルアミノスルホニル、ｎ−ペンチルアミノスルホニル、イソペンチルアミノスルホニル、ヘキシルアミノスルホニル、ジメチルアミノスルホニル、ジエチルアミノスルホニル、ジｎ−プロピルアミノスルホニル、ジイソプロピルアミノスルホニル、ジｎ−ブチルアミノスルホニル、ジイソブチルアミノスルホニル、ジｔｅｒｔ−ブチルアミノスルホニル、ジｎ−ペンチルアミノスルホニル、ジイソペンチルアミノスルホニル、ジヘキシルアミノスルホニル、フェニルアミノスルホニル、ナフチルアミノスルホニル等が挙げられる。【００８０】
本明細書中の「置換基を有していてもよいアリールオキシ基」としては、例えばフェノキシ、１−ナフチルオキシ、２−ナフチルオキシ等が挙げられる。【００８１】
本明細書中の「置換基を有していてもよいアリールオキシカルボニル基」としては、例えば、フェノキシカルボニル、１−ナフチルオキシカルボニル、２−ナフチルオキシカルボニル等が挙げられる。【００８２】
本明細書中の「アシルアミノ基」としては、−ＮＨＣＯＲ’’’（式中、Ｒ’’’は、前記「アルキル基」、又は前記「置換基を有していてもよいアリール基」を意味する）で表される基が挙げられ、例えばアセチルアミノ、プロピオニルアミノ、ブチリルアミノ、ベンゾイルアミノ等が挙げられる。【００８３】
本明細書中の「アルキルスルホニルアミノ基」は、前記「アルキル基」で置換されたスルホニルアミノ基を意味し、具体的には、例えばメチルスルホニルアミノ、エチルスルホニルアミノ、ｎ−プロピルスルホニルアミノ、イソプロピルスルホニルアミノ、ｎ−ブチルスルホニルアミノ、イソブチルスルホニルアミノ、ｔｅｒｔ−ブチルスルホニルアミノ、ｎ−ペンチルスルホニルアミノ、イソペンチルスルホニルアミノ、ヘキシルスルホニルアミノ等が挙げられる。【００８４】
本明細書中の「置換基を有していてもよいアリールスルホニルアミノ基」は、前記「置換基を有していてもよいアリール基」で置換されたスルホニルアミノ基を意味し、具体的にはフェニルスルホニルアミノ、ナフチルスルホニルアミノ等が挙げられる。【００８５】
式（Ｉ）中、Ｒ１として好ましくは、(i)水素、(ii)置換基を有していてもよいアルケニル基、(iii)置換基を有していてもよいアルキニル基、(iv)置換基を有していてもよい複素環基、(v)置換基を有していてもよいアミノ基、(vi)アルコキシ基、(vii)アルキルカルボニル基、(viii)置換基を有していてもよい複素環カルボニル基、(ix)シクロアルキルカルボニル基、(x)シクロアルケニルカルボニル基、(xi)置換基を有していてもよいアミノカルボニル基、及び(xii)一般式（１）で表される構造が例示される。【００８６】
【化２５】
0005479105.tif 000026
【００８７】
（式中、各記号の定義は上述と同義）
式（１）中、Ｒ１６は好ましくは、水素又はアルキル基であり、Ｒ１７及びＲ１８は、好ましくは、同一又は異なって、水素、アルキル基、置換基を有していてもよいアリール基、置換基を有していてもよい複素環基、ジアルキルアミノ基又は置換基を有していてもよいアルケニル基である。【００８８】
式（Ｉ）中、Ｒ２は、好ましくは、水素、ヒドロキシ基又はアルコキシ基である。さらにＲ２としてのＯＲ２ａ（式中、Ｒ２ａは上述と同義）は、Ｒ１とともに置換基を有していてもよい一般式（２）で表される環を形成する場合も又好ましい。【００８９】
【化２６】
0005479105.tif 000027
【００９０】
（式中、各記号の定義は上述と同義）
式（２）中、Ｒ１９及びＲ２０はアルキル基であることが好ましく、Ｒ２１及びＲ２２は水素であることが好ましい。
ＯＲ２ａがＲ１とともに置換基を有していてもよい一般式（２）で表される環を形成する場合には式（Ｉ）で表される化合物は下記一般式で表される化合物である。【００９１】
【化２７】
0005479105.tif 000028
【００９２】
（式中、各記号の定義は上述と同義）
式（Ｉ）中、Ｒ３は、好ましくは、水素、アルキル基又はアルコキシ基である。
式（Ｉ）中、Ｒ４は、好ましくは、水素、ヒドロキシ基又はアルコキシ基である。
さらにＲ４としてのＯＲ４ａ（式中、Ｒ４ａは上述と同義）は、Ｒ３とともに置換基を有していてもよい一般式（２）で表される環を形成する場合も又好ましい。【００９３】
【化２８】
0005479105.tif 000029
【００９４】
（式中、各記号の定義は上述と同義）
式（２）中、Ｒ１９及びＲ２０はアルキル基であることが好ましく、Ｒ２１及びＲ２２は水素であることが好ましい。
ＯＲ４ａがＲ３とともに置換基を有していてもよい一般式（２）で表される環を形成する場合には式（Ｉ）で表される化合物は下記一般式で表される化合物である。【００９５】
【化２９】
0005479105.tif 000030
【００９６】
（式中、各記号の定義は上述と同義）【００９７】
式（Ｉ）中、【００９８】
【化３０】
0005479105.tif 000031
【００９９】
で表される基は、下記一般式（ａ）〜（ｅ）で表される基を意味する。【０１００】
【化３１】
0005479105.tif 000032
【０１０１】
（式中、各記号の定義は上述と同義）
式（ａ）において、Ｘ１は好ましくはＯ又はＮＨであり、Ｒ５ａ及びＲ５ｂは好ましくは、同一又は異なって水素、置換基を有していてもよいアルキル基、置換基を有していてもよいアリール基である。
式（ｂ）において、Ｒ６及びＲ７は好ましくは、同一又は異なってアルキル基を意味する。Ｃ−Ｒ６Ｒ７がＣ＝Ｏを形成することも又好ましい。Ｒ８は好ましくはオキソ基又はアルキル基であり、【０１０２】
【化３２】
0005479105.tif 000033
【０１０３】
で表される結合は単結合又は二重結合である。
式（ｃ）において、Ｒ９は好ましくは水素であり、Ｒ１０は好ましくは水素であり、Ｒ１１は好ましくは置換基を有していてもよいアリールカルボニル基である。
式（ｄ）において、Ｘ２は、好ましくはＮであり、Ｒ１２は好ましくは置換基を有していてもよいアミノ基である。
式（ｅ）において、Ｒ１３は好ましくはアリール基であり、Ｒ１４は好ましくはアルキル基である。【０１０４】
式（Ｉ）で表される化合物のうち、特に好ましくは下記一般式（ＩＩ）で表される化合物である。【０１０５】
【化３３】
0005479105.tif 000034
【０１０６】
{式（ＩＩ）中、
Ｒ１’は、水素、複素環基、置換基を有していてもよいアミノ基、複素環カルボニル基、シクロアルキルカルボニル基、シクロアルケニルカルボニル基又は一般式（１’）：【０１０７】
【化３４】
0005479105.tif 000035
【０１０８】
［式（１’）中、
Ｒ１６’、Ｒ１７’及びＲ１８’は同一又は異なって水素、アルキル基又は置換基を有していてもよいアリール基を意味する］
で表される構造を意味し；
Ｒ２’は、アルコキシ基を意味し；
Ｒ３’は、水素又はアルキル基を意味し；
Ｒ４’は、水素又はＯＲ４ａ’（式中、Ｒ４ａ’はアルキル基を意味する）を意味し、ＯＲ４ａ’はＲ３’とともに一般式（２’）：【０１０９】
【化３５】
0005479105.tif 000036
【０１１０】
［式中、Ｒ１９’及びＲ２０’は、同一又は異なってアルキル基を意味し、破線は、ベンゼン環との縮合部分を示す］
で表される環を形成することができ；
式：【０１１１】
【化３６】
0005479105.tif 000037
【０１１２】
で表される基が、
式（ａ’）：【０１１３】
【化３７】
0005479105.tif 000038
【０１１４】
（式中、Ｒ５ａ’及びＲ５ｂ’は同一又は異なって、水素又は置換基を有していてもよいアルキル基を意味する）で表される基を意味するか、又は
式（ｂ’）：【０１１５】
【化３８】
0005479105.tif 000039
【０１１６】
（式中、Ｒ８’はアルキル基を意味する）で表される基を意味する。｝【０１１７】
このような化合物としては、例えば、
５−メトキシ−２，２−ジメチル−６−［（２Ｅ）−２−メチルブテ−２−ノイル］−１０−プロピル−２Ｈ，８Ｈ−ピラノ［２，３−ｆ］クロメン−８−オン（ＧＵＴ−７０）、
８−（３，４−ジヒドロキノリン−１（２Ｈ）−イルカルボニル）−５，７−ジメトキシ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン（ＢＮＳ−２２）、
５，７−ジメトキシ−８−［（２Ｅ）−３−フェニルプロぺ−２−ノイル］−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン（ＢＮＳ−２５）、
６−シクロブチルカルボニル−２，２−ジメチル−５−メトキシ−１０−プロピル−２Ｈ，８Ｈ−ピラノ［２，３−ｆ］クロメン−８−オン（ＢＮＳ−２６）、
６−シクロヘキシルカルボニル−２，２−ジメチル−５−メトキシ−１０−プロピル−２Ｈ，８Ｈ−ピラノ［２，３−ｆ］クロメン−８−オン（ＢＮＳ−２７）、
８−（１−シクロヘキセ−１−ニルカルボニル）−５，７−ジメトキシ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン（ＢＮＳ−２８）、
８−（１−シクロペンテ−１−ニルカルボニル）−５，７−ジメトキシ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン（ＢＮＳ−３５）、
７−メトキシ−８−［（２Ｅ）−２−メチルブテ−２−ノイル］−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン（ＢＮＳ−３６）、
８−（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）−５，７−ジメトキシ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン（ＢＮＳ−３８）、
３−（５，７−ジメトキシ−２−オキソ−２Ｈ−クロメン−４−イルプロピル）−（２Ｅ）−２−メチルブテ−２−ノエート（ＢＮＳ−４４）、
３−｛５，７−ジメトキシ−８−［（２Ｅ）−２−メチルブテ−２−ノイル］−２−オキソ−２Ｈ−クロメン−４−イル｝プロピル−（２Ｅ）−２−メチルブテ−２−ノエート（ＢＮＳ−４５）、
５，７−ジメトキシ−８−［（２Ｅ）−２−メチルブテ−２−ノイル］−２−プロピル−４Ｈ−クロメン−４−オン（ＢＮＳ−４６）、
８−（２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インド−１−イルカルボニル）−５，７−ジメトキシ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン（ＢＮＳ−５１）、
Ｎ−（５，７−ジメトキシ−２−オキソ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−８−イル）−２，６−ジメトキシベンズアミド（ＢＮＳ−５５）、
Ｎ−（５，７−ジメトキシ−２−オキソ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−８−イル）−２，２−ジフェニルアセトアミド（ＢＮＳ−５６）、
３−［８−（３，４−ジヒドロ−２Ｈ−キノリン−１−イルカルボニル）−５，７−ジメトキシ−２−オキソ−２Ｈ−クロメン−４−イル］プロピオン酸エチル（ＢＮＳ−６１）、
５，７−ジイソプロポキシ−８−［（２Ｅ）−３−フェニルプロぺ−２−ノイル］−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン（ＢＮＳ−６２）、
８−［（２Ｅ）−３−（２，６−ジメトキシフェニル）プロぺ−２−ノイル］−５，７−ジメトキシ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン（ＢＮＳ−６４）、及び
３−［８−（３，４−ジヒドロ−２Ｈ−キノリン−１−イルカルボニル）−５，７−ジメトキシ−２−オキソ−２Ｈ−クロメン−４−イル］プロピオン酸メチル（ＢＮＳ−６５）
等が挙げられ、好ましくは
５−メトキシ−２，２−ジメチル−６−［（２Ｅ）−２−メチルブテ−２−ノイル］−１０−プロピル−２Ｈ，８Ｈ−ピラノ［２，３−ｆ］クロメン−８−オン（ＧＵＴ−７０）、
８−（３，４−ジヒドロキノリン−１（２Ｈ）−イルカルボニル）−５，７−ジメトキシ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン（ＢＮＳ−２２）、
５，７−ジメトキシ−８−［（２Ｅ）−３−フェニルプロぺ−２−ノイル］−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン（ＢＮＳ−２５）、
８−（１−シクロペンテ−１−ニルカルボニル）−５，７−ジメトキシ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン（ＢＮＳ−３５）、
３−［８−（３，４−ジヒドロ−２Ｈ−キノリン−１−イルカルボニル）−５，７−ジメトキシ−２−オキソ−２Ｈ−クロメン−４−イル］プロピオン酸エチル（ＢＮＳ−６１）、及び
３−［８−（３，４−ジヒドロ−２Ｈ−キノリン−１−イルカルボニル）−５，７−ジメトキシ−２−オキソ−２Ｈ−クロメン−４−イル］プロピオン酸メチル（ＢＮＳ−６５）
であり、特に好ましくは下記構造式を有する化合物（８−（３，４−ジヒドロキノリン−１（２Ｈ）−イルカルボニル）−５，７−ジメトキシ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン）である。【０１１８】
【化３９】
0005479105.tif 000040
【０１１９】
又、一般式（Ｉ）で表される化合物の中でも特に、特許文献１及び特許文献２に開示されていない化合物は新規な化合物である。すなわち、一般式（Ｉ）で表される化合物のうち、一般式（Ｉａ）：【０１２０】
【化４０】
0005479105.tif 000041
【０１２１】
（式中、各記号の定義は上述と同義）
で表される化合物、及び一般式（Ｉｂ）：【０１２２】
【化４１】
0005479105.tif 000042
【０１２３】
（式中の各記号の定義は上述と同義）
で表される化合物以外の化合物は新規な化合物である。【０１２４】
本明細書中では、新規化合物及び公知化合物を含め、一般式（Ｉ）で表される化合物を化合物（Ｉ）あるいは本発明化合物とも称する場合がある。又、好ましい化合物である一般式（ＩＩ）で表される化合物（化合物（ＩＩ））も、一般式（Ｉ）で表される化合物の範囲内にある。【０１２５】
式（Ｉ）で表される化合物の塩としては、薬学的に許容しうる塩等が挙げられ、例えば、トリフルオロ酢酸、酢酸、乳酸、コハク酸、マレイン酸、酒石酸、クエン酸、グルコン酸、アスコルビン酸、安息香酸、メタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、ケイ皮酸、フマル酸、ホスホン酸、塩酸、硝酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、スルファミン酸、硫酸等の酸との酸付加塩；例えば、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウム等の金属塩；例えば、トリメチルアミン、トリエチルアミン、ピリジン、ピコリン、Ｎ−メチルピロリジン、Ｎ−メチルピペリジン、Ｎ−メチルモルホリン等の有機塩基との塩等が挙げられる。【０１２６】
化合物（Ｉ）が、光学異性体、立体異性体、位置異性体、回転異性体等の異性体を有する場合には、いずれか一方の異性体も、異性体の混合物も化合物（Ｉ）に包含される。例えば、化合物（Ｉ）に光学異性体が存在する場合には、ラセミ体から分割された光学異性体も化合物（Ｉ）に包含される。これらの異性体は、自体公知の合成手法、分離手法（濃縮、溶媒抽出、カラムクロマトグラフィー、再結晶等）によりそれぞれを単品として得ることができる。【０１２７】
化合物（Ｉ）は、結晶であっても無晶形であってもよい。化合物（Ｉ）が結晶である場合、結晶形が単一であっても結晶形混合物であっても化合物（Ｉ）に包含される。結晶は、自体公知の結晶化法を適用して、結晶化することによって製造することができる。【０１２８】
化合物（Ｉ）は、溶媒和物（例えば、水和物等）であっても、無溶媒和物であってもよく、いずれも化合物（Ｉ）に包含される。【０１２９】
化合物（Ｉ）は、同位元素（例、３Ｈ，１４Ｃ，３５Ｓ，１２５Ｉ等）等で標識されていてもよい。【０１３０】
本発明化合物は、ユビキリン結合活性（ユビキチン・プロテアソームシステムの機能を阻害する）及びトポイソメラーゼＩＩ阻害作用を有する。これらの作用から、本発明化合物は、哺乳動物（例、ヒト、サル、ネコ、ブタ、ウマ、ウシ、マウス、ラット、モルモット、イヌ、ウサギ等）に対し、トポイソメラーゼＩＩやユビキチン・プロテアソーム系がその発症や進行に関与する疾患（発症又は進行が促進される疾患）の予防又は治療薬として有用である。
このような疾患としては、例えば、癌（例、急性骨髄性白血病、急性リンパ性白血病、悪性リンパ腫、絨毛癌、多発性骨髄腫、軟部腫瘍、小細胞肺ガン、慢性骨髄性白血病、甲状腺髄様癌、骨肉腫、頭頸部癌、食道癌、非小細胞肺ガン、大腸癌、胃癌、胆道癌、脳腫瘍、悪性黒色腫、腎臓癌、膵臓癌、肝臓癌）、神経変性疾患（例、アルツハイマー、パーキンソン）、自己免疫疾患（例、慢性関節リュウマチ、全身性エリテマトーデス）、感染症（例、細菌感染、エイズなどのウイルス感染）等が挙げられる。【０１３１】
本発明化合物を有効成分として含有する医薬（例えば抗癌剤等）中における本発明化合物の含有量は製剤全体に対して通常、約０．０１〜約９９．９重量％、好ましくは約０．１〜約５０重量％である。【０１３２】
本発明化合物の投与量は、年令、体重、一般的健康状態、性別、食事、投与時間、投与方法、排泄速度、薬物の組み合わせ、患者のその時に治療を行なっている病状の程度に応じ、それらあるいはその他の要因を考慮して決められる。
投与量は対象疾患、症状、投与対象、投与方法等によって異なるが、例えば、本発明化合物を１日量約０．１〜１００ｍｇ／ｋｇ（体重）程度、好ましくは約１〜１０ｍｇ／ｋｇ（体重）程度、更に好ましくは約１〜３ｍｇ／ｋｇ（体重）程度を１回又は２ないし３回に分けて投与するのが好ましい。【０１３３】
本発明化合物は、所望の効果を得るために、単独で投与することもでき、又他の抗癌剤、抗炎症剤又は免疫療法剤等と適宜組み合わせて用いることができる。
他の抗癌剤としては、例えば、代謝拮抗剤（例、メソトレキセート、５−フルオロウラシル等）、アルキル化剤（例、サイクロフォスファミド、イフォスファミド等）、白金系抗癌剤（例、シスプラチン、カルボプラチン等）、トポイソメラーゼ阻害剤（例、エトポシド等）、抗癌性抗生物質（例、マイトマイシン、アドリアマイシン等）、植物由来抗癌剤（例、ビンクリスチン、ビンデシン、タキソール等）、チロシンキナーゼ阻害剤（例、ゲフィニチブ、イマニチブ等）、ヒト化抗体（例、ハーセプチン等）等が挙げられる。【０１３４】
抗炎症剤としては、アセトアミノフェン、フェナセチン、エテンザミド、スルピリン、アンチピリン、ミグレニン、アスピリン、メフェナム酸、フルフェナム酸、ジクロフェナックナトリウム、ロキソプロフェンナトリウム、フェニルブタゾン、インドメタシン、イブプロフェン、ケトプロフェン、ナプロキセン、オキサプロジン、フルルビプロフェン、フェンブフェン、プラノプロフェン、フロクタフェニン、エピリゾール、塩酸チアラミド、ザルトプロフェン、メシル酸ガベキサート、メシル酸カモスタット、ウリナスタチン、コルヒチン、プロベネジド、スルフィンピラゾン、ベンズブロマロン、アロプリノール、金チオリンゴ酸ナトリウム、ヒアルロン酸ナトリウム、サリチル酸ナトリウム、塩酸モルヒネ、サリチル酸、アトロピン、スコポラミン、モルヒネ、ペチジン、レボルファイノール、ケトプロフェン、ナプロキセン、オキシモルフォン又はその塩等の非ステロイド性抗炎症剤等が挙げられる。【０１３５】
免疫療法剤としては、例えば、微生物又は細菌成分（例、ムラミルジペプチド誘導体、ピシバニール等）、免疫増強活性のある多糖類（例、レンチナン、シゾフィラン、クレスチン等）、遺伝子工学的手法で得られるサイトカイン（例、インターフェロン、インターロイキン（ＩＬ）等）、コロニー刺激因子（例、顆粒球コロニー刺激因子、エリスロポエチン等）等が挙げられ、中でもＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−１２等が好ましい。【０１３６】
一般式（Ｉ）の化合物又はその塩は、薬学的に許容される担体と配合し、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤等の固形製剤；シロップ剤、注射剤等の液状製剤；貼付剤、軟膏剤、硬膏剤等の経皮吸収剤；吸入剤；坐剤として、適宜製剤化することができる。
本発明化合物を含有する医薬は、経口又は非経口投与され、上記した化合物を１種単独で用いてもよく、又は２種以上を併用して用いてもよい。【０１３７】
薬学的に許容される担体としては、製剤素材として慣用されている各種有機あるいは無機担体物質を用いることができる。具体的には、固形製剤における賦形剤、滑沢剤、結合剤、崩壊剤、液状製剤における溶剤、溶解補助剤、懸濁化剤、等張化剤、緩衝剤、無痛化剤等を配合することができる。又、必要に応じて、防腐剤、抗酸化剤、着色剤、甘味剤等の製剤添加物を用いることもできる。【０１３８】
賦形剤の例としては、乳糖、白糖、ブドウ糖、でんぷん、蔗糖、微結晶セルロース、カンゾウ末、マンニトール、炭酸水素ナトリウム、リン酸カルシウム、硫酸カルシウム等が挙げられる。【０１３９】
滑沢剤の例としては、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、ステアリン酸カルシウム、精製タルク、コロイドシリカ等が挙げられる。【０１４０】
結合剤の例としては、結晶セルロース、白糖、マンニトール、デキストリン、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニルピロリドン等が挙げられる。【０１４１】
崩壊剤の例としては、でんぷん、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースカルシウム、クロスカルメロースナトリウム、カルボキシメチルスターチナトリウム等が挙げられる。【０１４２】
溶剤の好適な例としては、例えば注射用水、アルコール、プロピレングリコール、マクロゴール、ゴマ油、トウモロコシ油等が挙げられる。【０１４３】
溶解補助剤の好適な例としては、例えばポリエチレングリコール、プロピレングリコール、Ｄ−マンニトール、安息香酸ベンジル、エタノール、トリスアミノメタン、コレステロール、トリエタノールアミン、炭酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム等が挙げられる。【０１４４】
懸濁化剤の例としては、例えばステアリルトリエタノールアミン、ラウリル硫酸ナトリウム、ラウリルアミノプロピオン酸、レシチン、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、モノステアリン酸グリセリン等の界面活性剤；ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース等が挙げられる。【０１４５】
等張化剤の好適な例として、例えば塩化ナトリウム、グリセリン、Ｄ−マンニトール等が挙げられる。【０１４６】
緩衝剤の好適な例として、例えばリン酸塩、酢酸塩、炭酸塩及びクエン酸塩等の緩衝液等が挙げられる。
無痛化剤の好適な例として、例えばベンジルアルコール等が挙げられる。【０１４７】
防腐剤の好適な例として、例えばパラオキシ安息香酸エステル類、クロロブタノール、ベンジルアルコール、フェネチルアルコール、デヒドロ酢酸、ソルビン酸等が挙げられる。
抗酸化剤の好適な例として、例えば亜硫酸塩、アスコルビン酸等が挙げられる。
着色剤の好適な例として、例えばタール色素、カラメル、三二酸化鉄、酸化チタン、リボフラビン類等が挙げられる。
甘味剤の好適な例として、ブドウ糖、果糖、転化糖、ソルビトール、キシリトール、グリセリン、単シロップ等が挙げられる。【０１４８】
製造法
以下、本発明化合物の製造法について説明する。
本発明化合物は、種々の方法で適宜調製することができ、化学的に合成してもよく、又適当な植物から抽出等により分離した後、必要に応じて適宜修飾することによって得ることができる。
本発明化合物には、適当な植物から抽出して得ることができるか、それから誘導体化することによって得ることができるものが含まれる。植物としては、オトギリ草科（Ｇｕｔｔｉｆｅｒａｅ）の植物が例示され、当該植物から５−メトキシ−２，２−ジメチル−６−［（２Ｅ）−２−メチルブテ−２−ノイル］−１０−プロピル−２Ｈ，８Ｈ−ピラノ［２，３−ｆ］クロメン−８−オン（ＧＵＴ−７０）を得ることができる。詳細な抽出方法については特許文献１に開示されている。又、式（Ｉ）で表される化合物の中でも特に式（Ｉａ）で表される化合物は特許文献１に、式（Ｉｂ）で表される化合物は特許文献２にそれぞれ開示されており、それらの文献に従って合成することができる。
又、本発明化合物は以下に示す方法又はこれに準ずる方法等によって製造することができる。
なお、以下の合成法において、原料化合物は塩として用いてもよい。このような塩としては、前述の式（Ｉ）で表される化合物の塩として例示したものが用いられる。
原料化合物は、特に述べない限り、市販されているものを容易に入手できるか、あるいは、自体公知の方法又はこれらに準ずる方法に従って製造することができる。
各反応において保護基を用いる場合があるが、保護基の除去方法としては、それ自体公知又はそれに準じた方法が用いられる。具体的には酸、塩基、還元、紫外光、ヒドラジン、フェニルヒドラジン、Ｎ−メチルジチオカルバミン酸ナトリウム、テトラブチルアンモニウムフルオリド、酢酸パラジウム等で処理する方法が用いられる。保護基の化学的特性、その導入の手法、及びその除去は例えばT. Greene and P. Wuts “Protective Groups in Organic Synthesis” (3rded.), John Wiley & Sons NY (1999)に詳述されている。【０１４９】
又、各反応および原料化合物合成の各反応において、反応中に一般的に知られる溶媒を用いる場合がある。
一般的に知られる溶媒としては、例えば、テトラヒドロフラン、ジエチルエーテル、１，２−ジメトキエタン、１，４−ジオキサン等のエーテル類、酢酸エチル、酢酸ブチル等のエステル類、ベンゼン、トルエン等の芳香族炭化水素、ピリジン、ルチジン等の芳香族へテロ環化合物、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ−メチルピロリドン等のアミド類、クロロホルム、塩化メチレン等のハロゲン化物、メタノール、エタノール、２−プロパノール、２，２−ジメチルエタノール等のアルコール類、ヘキサン、ヘプタン、石油エーテル等の炭化水素化合物、ギ酸、酢酸等のカルボン酸類、あるいは、水等が挙げられる。
又、反応において用いられる溶媒は、単一の溶媒を用いる場合も、２種類から６種類の溶媒を混合して用いる場合もある。
又、反応において、例えば、トリエチルアミン、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミン、ピリジン、Ｎ−メチルモルホリン等のアミン類や水酸化ナトリウムや炭酸カリウム等の塩基を共存させて行なう場合がある。
又、反応において、例えば、塩酸、硫酸、酢酸等の酸を共存させて行なう場合がある。【０１５０】
（１）クロマン、クロメン誘導体の合成
式（Ｉ）中、【０１５１】
【化４２】
0005479105.tif 000043
【０１５２】
で表される基が、
式（ａ’）【０１５３】
【化４３】
0005479105.tif 000044
【０１５４】
（式中、各記号の定義は上述と同義）、又は式（ｂ）【０１５５】
【化４４】
0005479105.tif 000045
【０１５６】
（式中、各記号の定義は上述と同義）
である化合物の合成スキームを以下に示す（詳細な反応は実施例に準じる）。尚、スキーム中、具体的な基で記載されている場合があるが、代替可能な基が用いられ得ることは当業者には明らかである。
工程１〜３【０１５７】
【化４５】
0005479105.tif 000046
【０１５８】
式中、Ｐはヒドロキシの保護基、Ｒ、Ｒ１００及びＲ５００は所望される化合物に応じて適宜設定される基である。
ヒドロキシの保護基としては、例えば、Ｃ１−Ｃ６アルキル基（例、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル）、フェニル基、トリチル基、Ｃ７−Ｃ１０アラルキル基（例、ベンジル）、ホルミル基、Ｃ１−Ｃ６アルキル−カルボニル基（例、アセチル、プロピオニル）、ベンゾイル基、Ｃ７−Ｃ１０アラルキル−カルボニル基（例、ベンジルカルボニル）、２−テトラヒドロピラニル基、２−テトラヒドロフラニル基、シリル基（例、トリメチルシリル、トリエチルシリル、ジメチルフェニルシリル、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル、ｔｅｒｔ−ブチルジエチルシリル）、Ｃ２−Ｃ６アルケニル基（例、１−アリル）等が挙げられる。これらの基は、ハロゲン原子（例、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素）、Ｃ１−Ｃ６アルキル基（例、メチル、エチル、プロピル）、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ基（例、メトキシ、エトキシ、プロポキシ）、ニトロ基等から選ばれる１ないし３個の置換基で置換されていてもよい。
工程１は、置換基（Ｒ及びＲ１００）の導入、及びヒドロキシの保護基の脱保護を行なう工程である。置換基を導入する反応は、導入する置換基の種類に応じて適宜選択される。
工程２は、環化反応を経てクロメン骨格を形成する工程である。
工程３は、置換基（Ｒ１００）の導入を行なう工程である。置換基を導入する反応は、導入する置換基の種類に応じて適宜選択される。
いずれも当分野で通常実施される方法及びそれらを適宜組み合わせて実施される。
工程４〜５【０１５９】
【化４６】
0005479105.tif 000047
【０１６０】
式中、Ｐはヒドロキシの保護基（上述と同義）、Ｒ１００、Ｒ３００、Ｒ４００及びＲ５００は所望される化合物に応じて適宜設定される基である。
工程４はヒドロキシの保護基を導入し、置換基（Ｒ３００）を導入する工程であり、工程５はヒドロキシの保護基を脱保護し、置換基（Ｒ３００）を脱離する工程である。いずれも当分野で通常実施される方法及びそれらを適宜組み合わせて実施される。
工程６【０１６１】
【化４７】
0005479105.tif 000048
【０１６２】
式中、Ｍｅはメチル基を示し、Ｒ、Ｒ１００、Ｒ１０１及びＲ５００は所望される化合物に応じて適宜設定される基である。
工程６は、官能基の置換反応である。所望する官能基への置換が可能な反応が適宜選択される。
工程７【０１６３】
【化４８】
0005479105.tif 000049
【０１６４】
Ｒ及びＲ’は所望される化合物に応じて適宜設定される基である。工程７はカルボキシル構造をカルボニル構造へと変換する工程であり、当分野で通常実施される方法及びそれらを適宜組み合わせて実施される。
工程８〜１１【０１６５】
【化４９】
0005479105.tif 000050
【０１６６】
Ｍｅはメチル基を示し、Ｒ１００及びＲ１０１、ならびにＲ’’は所望される化合物に応じて適宜設定される基である。工程８〜１０はいずれも環化反応であり、所望する置換基が導入されたクロメンあるいはクロマン誘導体が得られる。工程１１は工程８〜１０で得られた化合物をさらに官能基の置換反応や、置換基を導入する反応に付す工程である。いずれの反応も所望する化合物に応じて適宜設定され、当分野で通常実施される方法及びそれらを適宜組み合わせて実施される。【０１６７】
（２）キノリン、イソキノリン、キナゾリン誘導体の合成
式（Ｉ）中、【０１６８】
【化５０】
0005479105.tif 000051
【０１６９】
で表される基が、式（ａ’’）：【０１７０】
【化５１】
0005479105.tif 000052
【０１７１】
（式中、Ｘ１’’はＮＨ又はＮＲ１５（式中、Ｒ１５は、アルキル基、シクロアルキル基又は置換基を有していてもよいアリール基を意味する）を意味し、その他の記号は上述と同義）で表される基を意味するか、式（ｄ）：【０１７２】
【化５２】
0005479105.tif 000053
【０１７３】
（式中、各記号は上述と同義）で表される基を意味するか、又は式（ｅ）：【０１７４】
【化５３】
0005479105.tif 000054
【０１７５】
（式中、各記号は上述と同義）で表される基
である化合物の合成スキームを以下に示す（詳細な反応は実施例に準じる）。尚、スキーム中、具体的な基で記載されている場合があるが、代替可能な基が用いられる場合もあることは当業者には明らかである。
工程１〜４【０１７６】
【化５４】
0005479105.tif 000055
【０１７７】
式中、Ｐ及びＰ’は同一又は異なってヒドロキシ基の保護基であり、Ｒ１は上述と同義である。本工程で用いられるヒドロキシ基の保護基としては上述と同様なものが挙げられる。
工程１は、環化反応によりキノリン骨格を形成する工程である。工程２は保護基の脱離反応（脱保護）である。工程３は置換基（Ｒ１）の導入反応である。工程４は環化反応によりキノリン骨格を有する三環構造を形成する工程である。いずれの反応も当分野で通常実施されている反応、あるいはそれらを適宜組み合わせて実施することができる。
工程５【０１７８】
【化５５】
0005479105.tif 000056
【０１７９】
式中、各記号の定義は上述と同義である。
工程５は、キノリン構造上のカルボキシル基をアミドに変換する反応（アミド化反応）である。本反応も又、当分野で通常実施される方法及びそれらを適宜組み合わせて実施される。
工程６【０１８０】
【化５６】
0005479105.tif 000057
【０１８１】
式中、各記号の定義は上述と同義である。
工程６は、環化反応によりイソキノリン骨格を形成する工程である。本反応も又、当分野で通常実施される方法及びそれらを適宜組み合わせて実施される。
【実施例】
【０１８２】
以下に実施例及び試験例を挙げて本発明を詳しく説明するが、本発明はこれらに限定されるものではなく、本発明の範囲を逸脱しない範囲で変化させてもよい。【０１８３】
なお、実施例及び試験例中の各記号は次の意味を表す。
ＡｃＯＥｔ：酢酸エチル
ＤＭＦ：ジメチルホルムアミド
ＤＭＡＰ：ジメチルアミノピリジン
ＥｔＯＨ：エタノール
Ｈｅｘ：ヘキサン
ＴＨＦ：テトラヒドロフラン
Ｍｅ：メチル基
ＷＳＣＤ：水溶性カルボジイミド（１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド）
ＭＱ：ミリＱ水（超純水）
本実施例において、物性値の測定は以下の装置を用いて行なった。
融点測定：ＢＵＣＨＩ  Ｌａｂｏｒｔｅｃｈｎｉｋ  ＡＧ社のＢ−５４５
元素分析：柳本製作所  ＭＴ−５型（デュマ法）
質量分析：日本電子  ＳＸ−１０２型  （ＦＡＢ：Ｆａｓｔ  Ａｔｏｍ  Ｂｏｍｂａｒｄｍｅｎｔ法）【０１８４】
実施例１【０１８５】
【化５７】
0005479105.tif 000058
【０１８６】
式中の各記号の定義は上述と同義である。
（工程１−１）
ピリジン−４−イル−（２，４，６−トリメトキシフェニル）メタノン２２３ｍｇ、塩化アルミニウム４３６ｍｇをニトロベンゼン２ｍＬに溶解し、ブチロイルクロリド０．１７ｍＬを加え室温で攪拌した。１１時間後氷を加えた後２Ｎ塩酸と飽和食塩水を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウム上で乾燥後、乾燥剤を濾別し濃縮した。残渣をカラムクロマト精製（ワコーゲルＣ−２００  ５０ｇ、ノルマルヘキサン：酢酸エチル＝４：１〜１：１で展開）する事で１−［２−ヒドロキシ−４，６−ジメトキシ−３−（ピリジン−４−カルボニル）フェニル］−ブタン−１−オンを淡黄色粉末として１００ｍｇ得た。【０１８７】
（工程１−２）
２，４，６−トリメトキシニトロベンゼン１．００ｇをジクロロメタン１０ｍＬに溶かし、アルゴン雰囲気下、ドライアイスアセトンバス上冷却下に１Ｍ三臭化ホウ素／ジクロロメタン溶液４．７ｍＬを滴下した。同温で３０分攪拌後２Ｎ塩酸を加え室温に昇温し、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄後無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、乾燥剤を濾別し濃縮する事で、３，５−ジメトキシ−６−ニトロフェノールを黄色粉末として９３１ｍｇ得た。同様に２−ブチロイル−６−メトキシフェノールを得た。【０１８８】
（工程１−３）
４，６−ジメトキシ−サリチル酸５００ｍｇ、１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン５０３ｍｇ、ＷＳＣＤ塩酸塩９７０ｍｇをＴＨＦ１０ｍＬに溶かし、ＤＭＦを１滴加え室温で２時間攪拌した。反応液を氷に注ぎ込み酢酸エチルで抽出、飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、乾燥剤を濾別後濃縮する事で、（３，４−ジヒドロ−２Ｈ−キノリン−１−イル）−（２−ヒドロキシ−４，６−ジメトキシフェニル）メタノンを淡黄色アモルファスとして５４１ｍｇ得た。
同様の方法で目的化合物である３，４−ジヒドロ−２Ｈ−キノリン−１−イル）−（２，４，６−トリメトキシフェニル）メタノン（ＢＮＳ-５８）を得た。
さらに同様の方法で、（２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インド−１−イル）−（２−ヒドロキシ−４，６−ジメトキシフェニル）メタノン、（３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル）−（２−ヒドロキシ−４，６−ジメトキシフェニル）メタノン、（４−ベンジルピペリジン−１−イル）−（２−ヒドロキシ−４，６−ジメトキシフェニル）メタノン、８−［（１Ｈ−１，２，３−ベンゾトリアゾール−１−イロキシ）カルボニル］−７−ヒドロキシ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン、（１−ピペリジル）−（２−ヒドロキシ−４，６−ジメトキシフェニル）メタノンを得た。これらはこれ以上精製することなく工程２−２に用いた。【０１８９】
（工程２−１）
フロログルシノール（東京化成製）２０．０ｇ、３−ケトヘキサン酸エチル（東京化成製）２５．３ｇにメタンスルホン酸（ナカライテスク製）１００ｍＬを加え、室温で１２時間攪拌した。反応液を氷水１００ｍＬに注ぎ込み、酢酸エチル１５０ｍＬを用いて抽出し、有機層を飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸ナトリウム上で１０分間乾燥した。乾燥剤を濾別した後、ロータリーエバポレーターを用いて溶媒を減圧留去した。氷冷下、残渣にノルマルヘキサンを加え攪拌した後、析出物を濾集し乾燥させることで５，７−ジヒドロ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オンを白色粉末として３５．３ｇ得た。同様の方法で、４−（５，７−ジヒドロキシ−２−オキソ−２Ｈ−クロメン−４−イル）ブタン酸エチル、４−（３−ブロモフェニル）−５，７−ジヒドロキシクロメン−２−オン、３−（５，７−ジヒドロキシ−２−オキソ−２Ｈ−クロメン−４−イル）プロパン酸エチル、７−ヒドロキシ−２−オキソ−２Ｈ−クロメン−８−カルボン酸、及び７−ヒドロキシ−２−オキソ−２Ｈ−クロメン−８−カルボン酸メチルを得た。【０１９０】
（工程２−２）
２−ヒドロキシ−４，６−ジメトキシ安息香酸２．００ｇ、３−ケトヘキサン酸エチル１．６８ｇにメタンスルホン酸１５ｍＬを加え室温で攪拌した。１時間後オイルバス上で加熱攪拌し、１６時間後室温に放冷した。氷に注ぎ込み酢酸エチルで抽出後、有機層を飽和食塩水で洗浄し無水硫酸ナトリウム上で乾燥後、乾燥剤を濾別し濃縮する事で５，７−ジメトキシ−４−プロピルクマリン１．４５ｇを得た。
同様の方法で５，７−ジメトキシ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン、４−（４−クロロフェニル）−５，７−ジメトキシ−２Ｈ−クロメン−２−オン、５，７−ジメトキシ−８−ニトロ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン、７−ヒドロキシ−８−ニトロ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン、並びに目的化合物である、
８−（３，４−ジヒドロキノリン−１（２Ｈ）−イルカルボニル）−５，７−ジメトキシ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン（ＢＮＳ−２２）、
５，７−ジメトキシ−８−（１−メチルピペリジン−４−イル）−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン（ＢＮＳ−３２）、
８−（２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インド−１−イルカルボニル）−５，７−ジメトキシ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン（ＢＮＳ−５１）、
８−（３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イルカルボニル）−５，７−ジメトキシ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン（ＢＮＳ−５２）、
８−［（４−ベンジルピペリジン−１−イル）カルボニル］−５，７−ジメトキシ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン（ＢＮＳ−５３）、
５，７−ジメトキシ−８−（ピペリジン−１−イルカルボニル）−４−プロピル−２Ｈ−クロメン２−オン（ＢＮＳ−５４）、
３−［８−（３，４−ジヒドロ−２Ｈ−キノリン−１−イルカルボニル）−５，７−ジメトキシ−２−オキソ−２Ｈ−クロメン−４−イル］プロピオン酸エチル（ＢＮＳ−６１）、
３−［８−（３，４−ジヒドロ−２Ｈ−キノリン−１−イルカルボニル）−５，７−ジメトキシ−２−オキソ−２Ｈ−クロメン−４−イル］プロピオン酸メチル（ＢＮＳ−６５）を得た。【０１９１】
（工程２−３）
２−ブチロイル−６−メトキシフェノール６４０ｍｇ、［（エトキシカルボニル）メチレン］トリフェニルホスホラン１．４９ｇ、Ｎ，Ｎ−ジエチルアニリン５ｍＬをアルゴン雰囲気下１７０℃オイルバス上で加熱攪拌した。２時間後室温で放冷し、酢酸エチルを加えて有機層を２Ｎ塩酸、水、飽和食塩水の順に洗浄した。無水硫酸ナトリウムを加え乾燥し、乾燥剤を濾別濃縮後、得られた残渣をカラムクロマト精製（ワコーゲルＣ−２００：３０ｇ、ノルマルヘキサン：酢酸エチル＝４：１〜１：１で展開）し、目的化合物である８−メトキシ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン（ＢＮＳ−１７）を淡黄色粗粉末として５９５ｍｇ得た。一部をベンゼン−ノルマルヘキサンから再結晶した（融点：１０１℃）。
同様の方法で目的化合物である８−イソニコチノイル−５，７−ジメトキシ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン（ＢＮＳ−２３）を得た。【０１９２】
（工程３−１）
５，７−ジヒドロキシ−４−プロピルクマリン２０ｇ、塩化アルミニウム４８．４ｇにニトロベンゼン１２２ｍＬを加え、均一溶液になるまで室温で１０分間攪拌後氷冷した。２−メチルブタン酸塩化物（関東化学製）１６．４ｇを４０ｍＬの二硫化炭素に溶かした溶液を内温が１０℃を超えないように注意しながら滴下した。滴下終了後予め７５℃に予熱しておいたオイルバス上で加熱攪拌し、１．５時間後反応液を氷５００ｇ上に注ぎ、攪拌しつつ２Ｎ塩酸１Ｌを加えた。酢酸エチルで抽出（１Ｌ×３回）し、有機層を飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸ナトリウム上で乾燥した。乾燥剤を濾別後ロータリーエバポレーターで濃縮した。析出物が現れ始めた所で濃縮を止め、残渣にノルマルヘキサンを加えて攪拌した。不溶物を濾集し、ノルマルヘキサンで洗浄後乾燥することで５，７−ジヒドロキシ−８−（２−メチルブチリル）−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オンを淡黄色粉末として１３．２ｇ得た。同様の方法で８−アセチル−５，７−ジヒドロキシ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン、５，７−ジヒドロキシ−８−ペンタノイル−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン、５，７−ジヒドロキシ−８−プロピオニル−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン、５，７−ジヒドロキシ−８−イソブチリル−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン、８−シクロブチルカルボニル−５，７−ジヒドロキシ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン、８−シクロヘキシルカルボニル−５，７−ジヒドロキシ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン、８−シクロペンチルカルボニル−５，７−ジヒドロキシ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン、５，７−ジヒドロキシ−［（２Ｅ）−２−メチルブテ−２−ノイル］−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オンを得た。【０１９３】
【化５８】
0005479105.tif 000059
【０１９４】
式中の各記号の定義は上述と同義である。
（工程４−１）
５，７−ジヒドロキシ−８−（２−メチルブチリル）−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン８．７ｇ、４，４−ジメトキシ−２−メチル−２−ブタノール１２．８ｇ、ピリジン１７ｍＬを混ぜ、アルゴン雰囲気下１６０℃オイルバス上１４時間加熱攪拌した。室温で放冷後ロータリーエバポレーターでＳｍ−２（４，４−ジメトキシ−２−メチル−２−ブタノール）、ピリジンを留去後酢酸エチル１００ｍＬに溶かし、有機層を２Ｎ塩酸（５０ｍＬ×２回）、飽和食塩水（５０ｍＬ×１回）で洗浄後、無水硫酸ナトリウム上で乾燥した。乾燥剤を濾別後濃縮し、残渣をカラムクロマト精製し（ワコーゲル  Ｃ−２００（和光純薬製）３５０ｇ、ノルマルヘキサン：酢酸エチル＝１０：１溶液で展開）、淡黄色固体として７．７４ｇ得た。３００ｍｇを石油エーテル（ナカライテスク製、ノルマルヘキサン６０〜７０％含有）から再結晶し、五塩化二リン上で減圧乾燥することによって、目的化合物である５−ヒドロキシ−２，２−ジメチル−６−（２−メチルブタノイル）−１０−プロピル−２Ｈ，８Ｈ−ピラノ［２，３−ｆ］クロメン−８−オン（ＢＮＳ−２）を淡黄色結晶として２４９ｍｇ得た（融点：９７−９８℃）。
同様の方法で目的化合物である、
５−ヒドロキシ−２，２−ジメチル−６−プロピオニル−１０−プロピル−２Ｈ，８Ｈ−ピラノ［２，３−ｆ］クロメン−８−オン（ＢＮＳ−４）、
６−アセチル−５−ヒドロキシ−２，２−ジメチル−１０−プロピル−２Ｈ，８Ｈ−ピラノ［２，３−ｆ］クロメン−８−オン（ＢＮＳ−１２）、
５−ヒドロキシ−２，２−ジメチル−６−ペンタノイル−１０−プロピル−２Ｈ，８Ｈ−ピラノ［２，３−ｆ］クロメン−８−オン（ＢＮＳ−１３）、
５−ヒドロキシ−２，２−ジメチル−６−イソブチリル−１０−プロピル−２Ｈ，８Ｈ−ピラノ［２，３−ｆ］クロメン−８−オン（ＢＮＳ−１４）、
１０−（３−ブロモフェニル）−５−ヒドロキシ−２，２−ジメチル−６−プロピオニル−２Ｈ，８Ｈ−ピラノ［２，３−ｆ］クロメン−８−オン（ＢＮＳ−１５）、
３−（５−ヒドロキシ−２，２−ジメチル−８−オキソ−６−プロピオニル−２Ｈ，８Ｈ−ピラノ［２，３−ｆ］クロメン−１０−イル）プロピオン酸エチルエステル（ＢＮＳ−１６）、
５−ヒドロキシ−８，８−ジメチル−４−プロピル−２Ｈ，８Ｈ−ピラノ［２，３−ｆ］クロメン−２−オン（ＢＮＳ−１９）、
５−ヒドロキシ−２，２−ジメチル−１０−プロピル−２Ｈ，８Ｈ−ピラノ［２，３−ｆ］クロメン−８−オン（ＢＮＳ−２０）を得た。
又、同様にして、６−シクロブチルカルボニル−５−ヒドロキシ−２，２−ジメチル−１０−プロピル−２Ｈ，８Ｈ−ピラノ［２，３−ｆ］クロメン−８−オン、６−シクロヘキシルカルボニル−５−ヒドロキシ−２，２−ジメチル−１０−プロピル−２Ｈ，８Ｈ−ピラノ［２，３−ｆ］クロメン−８−オン、６−シクロペンチルカルボニル−５−ヒドロキシ−２，２−ジメチル−１０−プロピル−２Ｈ，８Ｈ−ピラノ［２，３−ｆ］クロメン−８−オンを得た。【０１９５】
（工程４−２）
５−ヒドロキシ−２，２−ジメチル−６−（２−メチルブタノイル）−１０−プロピル−２Ｈ，８Ｈ−ピラノ［２，３−ｆ］クロメン−８−オン７．７４ｇ、炭酸カリウム１７．３ｇをアセトン１００ｍＬに懸濁させ、ヨードメタン４．６０ｇを加えてオイルバス上で２時間加熱環流した。室温に放冷後、セライト（和光純薬製  Ｎｏ５４５）を用いて濾過し、有機層を濃縮する事で淡黄色固体として７．５０ｇ得た。３００ｍｇをカラムクロマト精製（ワコーゲル２００  ４５ｇ、ノルマルヘキサン：酢酸エチル＝４：１〜１：１で展開）し、得られた粗結晶を石油エーテルから再結晶し五塩化二リン上で減圧乾燥し、目的化合物である５−メトキシ−２，２−ジメチル−６−（２−メチルブタノイル）−１０−プロピル−２Ｈ，８Ｈ−ピラノ［２，３−ｆ］クロメン−８−オン（ＢＮＳ−１）を淡黄色結晶として１６４ｍｇ得た（融点：８９−９０℃）。
同様の方法で５，７−ジメトキシ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン、８−アセチル−５，７−ジメトキシ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン、８−アセチル−５，７−ジイソプロポキシ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン、７−メトキシ−８−ニトロ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン、並びに、目的化合物である、
５，７−ジメトキシ−８−プロピオニル−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン（ＢＮＳ−５）、
５−メトキシ−２，２−ジメチル−１０−（３−オキソ−３−ピロリジン−１−イルプロピル）−６−プロピオニル−２Ｈ，８Ｈ−ピラノ［２，３−ｆ］クロメン−８−オン（ＢＮＳ−２４）、
６−シクロブチルカルボニル−２，２−ジメチル−５−メトキシ−１０−プロピル−２Ｈ，８Ｈ−ピラノ［２，３−ｆ］クロメン−８−オン（ＢＮＳ−２６）、
６−シクロヘキシルカルボニル−２，２−ジメチル−５−メトキシ−１０−プロピル−２Ｈ，８Ｈ−ピラノ［２，３−ｆ］クロメン−８−オン（ＢＮＳ−２７）、
８−（１−シクロヘキセ−１−ニルカルボニル）−５，７−ジメトキシ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン（ＢＮＳ−２８）、
６−シクロペンチルカルボニル−２，２−ジメチル−５−メトキシ−１０−プロピル−２Ｈ，８Ｈ−ピラノ［２，３−ｆ］クロメン−８−オン（ＢＮＳ−２９）、
８−（１−シクロペンテ−１−ニルカルボニル）−５，７−ジメトキシ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン（ＢＮＳ−３５）、
７−メトキシ−８−［（２Ｅ）−２−メチルブテ−２−ノイル］−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン（ＢＮＳ−３６）、
８−アセチル−５，７−ジメトキシ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン（ＢＮＳ−５９）、
８−［（１Ｈ−１，２，３−ベンゾトリアゾール−１−イロキシ）カルボニル］−７−メトキシ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン（ＢＮＳ−６０）を得た。【０１９６】
（工程５）
マグネシウム０．４０ｇ、ヨウ素２ｇ、脱水ジエチルエーテル（関東化学製）５ｍＬ、脱水ベンゼン（関東化学製）１０ｍＬを混ぜ、アルゴン雰囲気下４５分間加熱環流した。得られたヨウ化マグネシウム溶液を、５−メトキシ−２，２−ジメチル−６−［（２Ｅ）−２−メチルブテ−２−ノイル］−１０−プロピル−２Ｈ，８Ｈ−ピラノ［２，３−ｆ］クロメン−８−オン（ＧＵＴ−７０）３０９ｍｇをベンゼン１０ｍＬに溶かした溶液に滴下し加熱還流させた。３０分後室温まで放冷した後、２Ｎ塩酸を加えて沈殿物を溶解させジエチルエーテルで抽出（×２回）した。飽和食塩水で洗浄後無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、乾燥剤を濾別後濃縮した。得られた残渣をカラムクロマト（ワコーゲルＣ−２００  ５０ｇ、ノルマルヘキサン：酢酸エチル＝１０：１〜４：１で展開）精製し、得られた粗結晶を石油エーテルから再結晶し、目的化合物である５−ヒドロキシ−２，２−ジメチル−６−［（２Ｅ）−２−メチルブテ−２−ノイル］−１０−プロピル−２Ｈ，８Ｈ−ピラノ［２，３−ｆ］クロメン−８−オン（ＢＮＳ−３）を淡黄色結晶として１２５ｍｇ得た（融点１４３−１４５℃）。【０１９７】
【化５９】
0005479105.tif 000060
【０１９８】
式中の各記号の定義は上述と同義である。
（工程６−１）
７−メトキシ−８−ニトロ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン  ０．９５ｇを酢酸３ｍＬと濃塩酸３．５ｍＬの混合液に懸濁し、攪拌しながら塩化スズ（ＩＩ）２水和物２．５０ｇを加えた。室温で終夜攪拌後、２Ｎ水酸化ナトリウム水溶液に反応液を注ぎ込み、酢酸エチルで抽出し、有機層を飽和食塩水で洗浄した後、無水硫酸ナトリウム上で乾燥した。乾燥剤を濾別後濃縮し、残渣をジイソプロピルエーテルから再結晶する事で淡黄色結晶として８−アミノ−７−メトキシ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オンを５９２ｍｇ得た。同様の方法で８−アミノ−５，７−ジメトキシ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オンを得た。【０１９９】
（工程６−２）
８−アミノ−７−メトキシ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン２００ｍｇをオルトギ酸エチル２０ｍＬに溶かし、濃硫酸を１滴添加した後オイルバス上で加熱還流した。原料の消失を確認後、溶媒を留去し、濃塩酸５ｍＬを加え室温で１時間攪拌後慎重に中和した。弱塩基性（ｐＨ８付近）を確認し酢酸エチルで抽出後飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥した。乾燥剤を濾別し濃縮する事で８−（Ｎ−メチルアミノ）−７−メトキシ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オンを薄茶色粉末として１８５ｍｇ得た。【０２００】
（工程６−３）
８−（Ｎ−メチルアミノ）−７−メトキシ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン１００ｍｇ、塩化ベンゾイル６３ｍｇをジクロロメタンに溶かし、氷冷下にＤＭＡＰ、ついでトリエチルアミンを加え３０分攪拌した。室温で更に３０分攪拌した後水を加えた。酢酸エチルで抽出し、飽和食塩水で洗浄、無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、乾燥剤を濾別後濃縮し、残渣をカラムクロマト精製（ＲｅｄｉＳｅｐカラム１２ｇ、コンビフラッシュを使用し、ノルマルヘキサンのみ〜５０％酢酸エチル−ノルマルヘキサンまでグラジエントをかけた）する事で白色アモルファスを９４ｍｇ得た。ジイソプロピルエーテルから再結晶する事で、目的化合物である、Ｎ−（７−メトキシ−２−オキソ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−８−イル）−Ｎ−メチルベンズアミド（ＢＮＳ−４１）を白色結晶として５０ｍｇ得た（融点：１２９．５℃）。
同様の方法で、目的化合物である、
（２Ｅ）−Ｎ−（７−メトキシ−２−オキソ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−８−イル）−Ｎ，２−ジメチルブテ−２−ナミド（ＢＮＳ−４２）、
Ｎ−（５，７−ジメトキシ−２−オキソ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−８−イル）−２，６−ジメトキシベンズアミド（ＢＮＳ−５５）、
Ｎ−（５，７−ジメトキシ−２−オキソ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−８−イル）−２，２−ジフェニルアセトアミド（ＢＮＳ−５６）、
Ｎ−（５，７−ジメトキシ−２−オキソ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−８−イル）−Ｎ−メチル−１，３−ベンゾジオキソール−５−カルボキサミド（ＢＮＳ−５７）を得た。【０２０１】
（工程６−４）
８−アミノ−７−メトキシ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン１００ｍｇを、アルゴン雰囲気下、水素化ナトリウム（オイルサスペンジョン２１ｍｇを直前にノルマルヘキサンで三回洗浄後減圧乾燥）テトラヒドロフラン懸濁溶液に氷冷下加え１時間攪拌した。イソシアン酸フェニル５６ｍｇを加え３０分攪拌後、室温に昇温し１時間攪拌した。反応液に１Ｎ塩酸を加えた後、酢酸エチルで抽出し有機層を飽和食塩水で洗浄した。無水硫酸ナトリウムで乾燥し、乾燥剤を濾別後濃縮した。残渣をカラムクロマト精製（ＲｅｄｉＳｅｐカラム１２ｇ、コンビフラッシュを使用し、酢酸エチル−ノルマルヘキサンを２５％〜５０％までグラジエントをかけた）し、得られた粗粉末をエタノールから再結晶した。得られた粗結晶をベンゼン−石油エーテルから再結晶する事で目的化合物である、Ｎ−（７−メトキシ−２−オキソ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−８−イル）−Ｎ’−フェニル尿素（ＢＮＳ−４３）を淡黄色粉末として２４ｍｇ得た（融点：１２４℃）。【０２０２】
（工程６−５）
８−アセチル−５，７−ジメトキシ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン０．１８ｇをＥｔＯＨ５ｍＬに溶解しベンズアルデヒド０．０６６ｇ、水酸化カリウム０．４０ｇを加え、室温で２．５日攪拌後、溶液を濃縮した。酢酸エチルを加え飽和重曹水で洗浄した。水層にＨＣｌを加え酸性とした後、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し無水硫酸マグネシウム上で乾燥、濃縮し山吹色粉末０．２２ｇを得た。得られた粉末、無水酢酸０．９２ｇ、及び酢酸ナトリウム０．４３ｇをベンゼン（２０ｍＬ）に溶解し１．５時間加熱還流した後に反応液を水に注ぎ混み、室温で３時間撹拌した後酢酸エチルで抽出した。飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウム上で乾燥後、濃縮した。残渣をカラムクロマト精製（ＡｃＯＥｔ／Ｈｅｘ＝１／１）する事で目的化合物である、５，７−ジメトキシ−８−［（２Ｅ）−３−フェニルプロぺ−２−ノイル］−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン（ＢＮＳ−２５）を淡黄色粉末として０．１９ｇ得た。
同様の方法で目的化合物である、
５，７−ジメトキシ−８−［（２Ｅ）−２−メチル−３−フェニルプロぺ−２−ノイル］−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン（ＢＮＳ−３０）、
５，７−ジメトキシ−８−［（２Ｅ）−３−（１−メチル−１Ｈ−ピロール−２−イル）プロペ−２−ノイル］−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン（ＢＮＳ−３１）、
５，７−ジメトキシ−８−［（２Ｅ，４Ｅ）−５−（２−メトキシフェニル）ペンタ−２，４−ジエノイル］−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン（ＢＮＳ−３９）、
５，７−ジイソプロポキシ−８−［（２Ｅ）−３−フェニルプロぺ−２−ノイル］−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン（ＢＮＳ−６２）、
８−［（２Ｅ）−３−（２，６−ジメトキシフェニル）プロぺ−２−ノイル］−５，７−ジメトキシ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン（ＢＮＳ−６４）、
８−［（２Ｅ）−３−（２，３−ジヒドロ−１，４−ベンゾジオキシン−６−イル）プロぺ−２−ノイル］−５，７−ジメトキシ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン（ＢＮＳ−６６）、及び
８−［（２Ｅ）−３−（９−エチル−９Ｈ−カルバゾール−３−イル）プロぺ−２−ノイル］−５，７−ジメトキシ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン（ＢＮＳ−６７）を得た。【０２０３】
（工程６−６）
８−アセチル−５，７−ジメトキシ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン０．３０ｇをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドジメチルアセタール０．７４ｇを加え８５℃で終夜加熱撹拌した。溶媒を減圧留去し、カラムクロマト精製（ＮＨシリカ、ＡｃＯＥｔ）し目的化合物である、８−［（２Ｅ）−３−（ジメチルアミノ）プロぺ−２−ノイル］−５，７−ジメトキシ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン（ＢＮＳ−３７）を黄色粉末として０．１７ｇ得た（融点：２０７℃）。【０２０４】
（工程６−７）
８−［（２Ｅ）−３−（ジメチルアミノ）プロぺ−２−ノイル］−５，７−ジメトキシ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン２００ｍｇ、アセトアミジン塩酸塩１１０ｍｇ、炭酸カリウム１６０ｍｇをＤＭＦ３ｍＬに加え１２０℃で１時間加熱撹拌した。室温に放冷後、水を加え酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し無水硫酸マグネシウム上で乾燥後、減圧濃縮した。残渣をカラムクロマト精製（ＮＨシリカ，ＡｃＯＥｔ）する事で、目的化合物である、５，７−ジメトキシ−８−（２−メチルピリミジン−４−イル）−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン（ＢＮＳ−４０）を淡黄色粉末として５０ｍｇ得た（融点：２１６℃）。同様の方法で８−［２−（ジエチルアミノ）ピリミジン−４−イル］−５，７−ジメトキシ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オンを得た。【０２０５】
（工程６−８）
８−アセチル−５，７−ジメトキシ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン０．５８ｇを酢酸エチル１５ｍＬに溶かし、臭化銅（ＩＩ）０．８９ｇを加え２時間加熱還流した。反応液をセライト濾過し、濾液を濃縮しジイソプロピルエーテルで洗浄後得られた粉末をクロロホルムに懸濁し濾過した。濾液を濃縮する事で白色粉末を０．５８ｇ得た。得られた粉末をホルムアミド２ｍＬに加え、１８５℃オイルバス上で４５分間加熱攪拌し、室温に放冷後飽和重曹水を加えた。酢酸エチルで抽出し、水、ついで飽和食塩水で洗浄した。有機層を無水硫酸マグネシウム上で乾燥後濃縮し、得られた残渣をカラムクロマト精製（ＮＨシリカ、５％メタノール−クロロホルムで展開）する事で、目的化合物である、８−（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）−５，７−ジメトキシ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン（ＢＮＳ−３８）を黄土色粉末として２０ｍｇ得た。【０２０６】
（工程６−９）
５，７−ジメトキシ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン４ｇをジクロロメタン４０ｍＬに溶解し、一塩化ヨウ素３．９３ｇ・ジクロロメタン溶液を滴下し室温で２時間撹拌した。チオ硫酸ナトリウム水溶液を加えたのち酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し無水硫酸マグネシウム上で乾燥後、濃縮した。残渣をカラムクロマト精製（ＡｃＯＥｔ／Ｈｅｘ＝１／２）する事で淡黄色粉末、２．６８ｇを得た。得られた粉末０．２９ｇ、２−メチル−３−ブテン−２−オール０．５０ｇ、テトラ−ノルマルブチルアンモニウム  ブロミド０．８５ｍＬ、炭酸ナトリウム０．２８ｇ、酢酸パラジウム１８ｍｇをＤＭＦ４ｍＬに溶かし、アルゴン雰囲気下９０℃で４０時間加熱撹拌した。反応液をセライト濾過し、濾液に水を加えて酢酸エチルで抽出、有機層を飽和食塩水で洗浄、無水硫酸マグネシウム上で乾燥後、濃縮し残渣をカラムクロマト精製（ＡｃＯＥｔ／Ｈｅｘ＝３／２）する事で目的化合物８−［（１Ｅ）−３−ヒドロキシ−３−メチル−１−ブテン−１−イル］−５，７−ジメトキシ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン（ＢＮＳ−４９）を褐色粉末として０．１１ｇ得た（融点：１６８℃）。【０２０７】
（工程６−１０）
８−ヨード−５，７−ジメトキシ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン０．５ｇ、２−メチル−３−ブチン−２−オール０．１４ｇをＤＭＦ４ｍＬに溶解し、ジクロロビストリフェニルフォスフィンパラジウム（ＩＩ）３８ｍｇ、ヨウ化銅５ｍｇ、トリエチルアミン１ｍＬを加え、アルゴン雰囲気下、５５℃オイルバス上で終夜攪拌した。室温に放冷後１Ｎ塩酸を加え、酢酸エチルで抽出し、有機層を飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸マグネシウム上で乾燥した。乾燥剤を濾別後濃縮し、カラムクロマト精製（ワコーゲル  Ｃ−２００、酢酸エチル：ノルマルヘキサン＝１：１）し、目的化合物である、８−（３−ヒドロキシ−３−メチル−１−ブチン−１−イル）−５，７−ジメトキシ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン（ＢＮＳ−５０）を褐色粉末として０．２０ｇ得た（融点：１７９℃）。【０２０８】
（工程６−１１）
８−［２−（ジエチルアミノ）ピリミジン−４−イル］−５，７−ジメトキシ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン０．０７４ｇをエタノール５ｍＬに懸濁し、攪拌下１Ｎ塩酸エタノール１９６μＬを加えた。室温で１時間攪拌後濃縮し、残渣をメタノールに溶かした後、氷冷下ジイソプロピルエーテルを用いて再沈殿した。析出物を濾集し減圧乾燥することで目的化合物である、８−［２−（ジエチルアミノ）ピリミジン−４−イル］−５，７−ジメトキシ−４−プロピル−２Ｈ−クロメン−２−オン  塩酸塩（ＢＮＳ−６３）を淡黄色結晶として０．０５４ｇ得た。【０２０９】
【化６０】
0005479105.tif 000061
【０２１０】
各記号の定義は上述と同義である。
（工程７−１）
４−（５−ヒドロキシ−２，２−ジメチル−８−オキソ−６−プロピオニル−２Ｈ，８Ｈ−ピラノ［２，３−ｆ］クロメン−１０−イル）ブタン酸メチルエステル２６０ｍｇをメタノール２０ｍＬに溶解し、１０％水酸化ナトリウム水溶液２ｍＬを加え、室温で２．５時間撹拌した。反応液に氷水を加え１０％塩酸水溶液で酸性とし、酢酸エチルにて抽出した。有機層を水洗、乾燥（ＭｇＳＯ４）し、減圧濃縮した。得られた粗結晶を酢酸エチルより再結晶して、目的化合物である、４−（５−ヒドロキシ−２，２−ジメチル−８−オキソ−６−プロピオニル−２Ｈ，８Ｈ−ピラノ［２，３−ｆ］クロメン−１０−イル）ブタン酸（ＢＮＳ−６）を淡黄色結晶として１３１ｍｇ得た（融点：１９０〜１９２℃）。同様の方法で目的化合物である、３−（５−ヒドロキシ−２，２−ジメチル−８−オキソ−６−プロピオニル−２Ｈ，８Ｈ−ピラノ［２，３−ｆ］クロメン−１０−イル）プロピオン酸（ＢＮＳ−１８）を得た。【０２１１】
（工程７−２）
４−（５−ヒドロキシ−２，２−ジメチル−８−オキソ−６−プロピオニル−２Ｈ，８Ｈ−ピラノ［２，３−ｆ］クロメン−１０−イル）ブタン酸３００ｍｇをジメチルホルムアミド１０ｍＬに溶解し、ＷＳＣＤ塩酸塩１６５ｍｇと１−ヒドロキシベンゾトリアゾール１４３ｍｇを加え１５分間撹拌した。ジメチルアミン塩酸塩７６ｍｇとトリエチルアミン２３６ｍｇを加え、室温で終夜撹拌した。反応液に氷水を加え、１０％塩酸水溶液で酸性とし、酢酸エチルにて抽出した。有機層を水洗、乾燥（ＭｇＳＯ４）し、減圧下濃縮乾固した。得られた粗結晶をエーテルで洗浄し、乾燥した。目的化合物である、４−（５−ヒドロキシ−２，２−ジメチル−８−オキソ−６−プロピオニル−２Ｈ，８Ｈ−ピラノ［２，３−ｆ］クロメン−１０−イル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルブタンアミド（ＢＮＳ−８）を淡黄色結晶として１８７ｍｇ得た（融点：１６２〜１６３℃）。同様の方法で、目的化合物である、５−ヒドロキシ−２，２−ジメチル−１０−［４−オキソ−４−（４−ピリジン−２−イルピペラジン−１−イル）ブチル］−６−プロピオニル−２Ｈ，８Ｈ−ピラノ［２，３−ｆ］クロメン−８−オン（ＢＮＳ−９）、３−（５−ヒドロキシ−２，２−ジメチル−８−オキソ−６−プロピオニル−２Ｈ，８Ｈ−ピラノ［２，３−ｆ］クロメン−１０−イル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルプロパンアミド（ＢＮＳ−２１）を得た。
又、同様の方法で５−ヒドロキシ−２，２−ジメチル−１０−（３−オキソ−３−ピロリジン−１−イルプロピル）−６−プロピオニル−２Ｈ−ピラノ［２，３−ｆ］クロメン−８−オンを得た。【０２１２】
【化６１】
0005479105.tif 000062
【０２１３】
各記号の定義は上述と同義である。
（工程８）
２−アセチル−３，５−ジメトキシフェノール１．４３ｇのブタン酸メチル４．７７ｍＬ溶液に水素化ナトリウム０．９２ｇ（７０％、オイルサスペンジョン）を注意深く加えていき、室温で攪拌した。原料が消失するのを確認した後氷水を加えて過剰の水素化ナトリウムを潰し、酢酸エチルで水層を洗浄後、酢酸を加えて中和した。水層からジクロロメタンで抽出し、無水硫酸マグネシウム上で乾燥した。乾燥剤を濾別後ジクロロメタン層を濃縮し、得られた粗粉末をノルマルヘキサンで洗浄し、不溶物を乾燥する事で１−（２−ヒドロキシ−４，６−ジメトキシフェニル）−ヘキサン−１，３−ジオンを黄色粉末として０．７１ｇ得た。得られた粉末６５０ｍｇを濃塩酸５ｍＬに懸濁させ、７０℃で５分間加熱した後、室温に放冷後氷水３０ｍＬに注ぎ込み暫く攪拌した。２Ｎ水酸化ナトリウム水溶液で中和し、ジクロロメタンで抽出、有機層を水で洗浄後無水硫酸マグネシウム上で乾燥した。乾燥剤を濾別後濃縮し、得られた黄色粗粉末をノルマルヘキサンで洗浄し、不溶物を乾燥することで、５，７−ジメトキシ−２−プロピルクロメン−４−オンを黄色粉末として５５０ｍｇ得た。【０２１４】
（工程９）
３，５−ジメトキシフェノール８．００ｇ、３−メチルクロトン酸メチル７．４０ｇを７０℃に予熱しておいたメタンスルホン酸６０ｍＬに加え２．５時間攪拌した。室温に放冷後氷水に反応液を注ぎ込み、暫く攪拌後酢酸エチルで４回抽出した。有機層を飽和重曹水、飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸マグネシウム上で乾燥し濃縮した。残渣をカラムクロマト精製（ワコーゲルＣ−２００、１５０ｇ、ノルマルヘキサン：酢酸エチル＝１：１で展開）する事で、５，７−ジメトキシ−４，４−ジメチル−クロマン−２−オンを黄色油状物として４．５５ｇ得た。【０２１５】
（工程１０）
３，５−ジメトキシフェノール３．５０ｇ、３−シクロプロピル−３−オキソプロピオン酸メチル３．７５ｇを７０℃に予熱したメタンスルホン酸に加え２．５時間攪拌した。室温に放冷後氷水に反応液を注ぎ込み、暫く攪拌後ジクロロメタンで３回抽出した。飽和重曹水、飽和食塩水で有機層を洗浄し、無水硫酸マグネシウム上乾燥後濃縮した。得られた粗結晶をノルマルヘキサンで洗浄することで、５，７−ジメトキシ−４−（３−ヒドロキシプロピル）−２Ｈ−クロメン−２−オンを淡黄色結晶として２．３０ｇ得た。【０２１６】
（工程１１）
５，７−ジメトキシ−４−（３−ヒドロキシプロピル）−２Ｈ−クロメン−２−オン３９４ｍｇをジクロロメタン８ｍＬに懸濁させ、氷冷下チグロイルクロリド０．２６ｍＬ、四塩化スズ１．２５ｍＬの順で滴下し、５℃で１５時間攪拌した。反応液を氷水に注ぎこみ暫く攪拌し、酢酸エチルで抽出し飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水の順で有機層を洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥した。乾燥剤を濾別し、有機層を濃縮して得られた残渣をカラムクロマト精製（ワコーゲルＣ−２００  ２０ｇ、ノルマルヘキサン：酢酸エチル＝４：１〜１：１で展開）する事で、目的化合物である、３−（５，７−ジメトキシ−２−オキソ−２Ｈ−クロメン−４−イルプロピル）−（２Ｅ）−２−メチルブテ−２−ノエート（ＢＮＳ−４４）を無色粉末として０．２５ｇ（融点：８７℃）、及び目的化合物である、３−｛５，７−ジメトキシ−８−［（２Ｅ）−２−メチルブテ−２−ノイル］−２−オキソ−２Ｈ−クロメン−４−イル｝プロピル−（２Ｅ）−２−メチルブテ−２−ノエート（ＢＮＳ−４５）０．５０ｇ（融点：８８℃）を無色粉末として得た。同様の方法を用いて、目的化合物である、
５，７−ジメトキシ−８−［（２Ｅ）−２−メチルブテ−２−ノイル］−２−プロピル−４Ｈ−クロメン−４−オン（ＢＮＳ−４６）、
５，７−ジメトキシ−４，４−ジメチル−８−［（２Ｅ）−２−メチルブテ−２−ノイル］クロマン−２−オン（ＢＮＳ−４７）、及び
４−（４−クロロフェニル）−５，７−ジメトキシ−８−［（２Ｅ）−２−メチルブテ−２−ノイル］−２Ｈ−クロメン−２−オン（ＢＮＳ−４８）を得た。【０２１７】
実施例２【０２１８】
【化６２】
0005479105.tif 000063
【０２１９】
（工程１）
５，７−ジメトキシ−４−プロピルキノリン−２（１Ｈ）−オンの調製
３，５−ジメトキシアニリン１．００ｇとブチリル酢酸エチル１．０３ｇをトルエン２０ｍＬに溶解し、メシル酸１０滴を加え、終夜加熱還流した。反応液に氷水を加え、析出結晶をろ取、水及びメタノールで洗浄後、減圧乾燥した。目的物を白色結晶として１．０５ｇ得た。
（工程２）
５，７−ジヒドロキシ−４−プロピルキノリン−２（１Ｈ）−オンの調製
５，７−ジメトキシ−４−プロピルキノリン−２（１Ｈ）−オン０．５ｇを塩化メチレン１０ｍＬに溶解し、氷冷下、三臭化ホウ素０．４５ｍＬを滴下した。０℃で１時間、室温に戻し３０分間撹拌した。反応液を氷水に注ぎ、析出結晶をろ取、水洗後乾燥した。この粗結晶を酢酸エチルで洗浄し、目的物３４７ｍｇを得た。
（工程３）
５，７−ジヒドロキシ−８−プロピオニル−４−プロピルキノリン−２（１Ｈ）−オンの調製
５，７−ジヒドロキシ−４−プロピルキノリン−２（１Ｈ）−オン０．５２ｇと塩化アルミニウム１．２８ｇの１，２−ジクロロエタン（２０ｍＬ）の懸濁液を６０℃で３０分間加熱撹拌した。この懸濁液にプロピオン酸無水物０．３７ｇと塩化アルミニウム０．６４ｇの１，２−ジクロロエタン溶液（８ｍＬ）を滴下した。６０℃で１時間、７５℃で２時間加熱撹拌した。反応液に氷水を加え１０％塩酸で酸性とし、一夜放置した。析出結晶をろ取、水洗し乾燥した。得られた粗結晶をメタノールで洗浄し目的物２６６ｇ得た。
（工程４）
５−ヒドロキシ−２，２−ジメチル−６−プロピオニル−１０−プロピル−２，７−ジヒドロ−８Ｈ−ピラノ［２，３−ｆ］キノリン−８−オンの調製
５，７−ジヒドロキシ−８−プロピオニル−４−プロピルキノリン−２（１Ｈ）−オン２５４ｍｇ、４，４−ジメトキシ−２−メチル−２−ブタノール４１３ｍｇにピリジン０．５ｍＬを加え、１６０℃で終夜加熱撹拌した。反応液に氷水を加え、１０％塩酸で酸性とし、酢酸エチルで抽出した。有機層を水洗後、乾燥（ＭｇＳＯ４）、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝２／１→１／２）で精製した。得られた粗結晶を酢酸エチルで洗浄、乾燥し目的化合物である、５−ヒドロキシ−２，２−ジメチル−６−プロピオニル−１０−プロピル−２，７−ジヒドロ−２Ｈ，８Ｈ−ピラノ［２，３−ｆ］キノリン−８−オン（ＢＮＳ−１０）を黄色結晶として１８９ｍｇ得た（融点：２４０〜２４２℃）。【０２２０】
【化６３】
0005479105.tif 000064
【０２２１】
各記号の定義は上述と同義である。
（工程５）
８−キノリンカルボン酸２００ｍｇ、４−トリフルオロメチルアニリン２４２ｍｇ、ヨウ化２−クロロ−Ｎ−メチルピリジニウム４４１ｍｇをＤＭＩ（Ｎ，Ｎ’−ジメチルイミダゾリドン）３ｍＬに溶かし、エチルジイソプロピルアミン２９７ｍｇを加え室温で１６時間攪拌後、反応液に水を加え酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥後、乾燥剤を濾別し濃縮した。残渣をカラムクロマト精製（ワコーゲルＣ−２００  ５０ｇ、ノルマルヘキサン：酢酸エチル＝４：１〜１：１で展開）し、得られた粗結晶を酢酸エチル／石油エーテルに溶解後室温で静置し再結晶した。析出物を濾集し、冷石油エーテルで洗浄後減圧乾燥することで、目的化合物である、Ｎ−［４−（トリフルオロメチル）フェニル］キノリン−８−カルボキサミド（ＢＮＳ−７）を２０２ｍｇ得た（融点：１１４．７℃）。同様の方法で、目的化合物である、４−（エチルアミノ）−６−メチル−Ｎ−［４−（トリフルオロメチル）フェニル］キナゾリン−８−カルボキサミド（ＢＮＳ−１１）２５ｍｇを得た（融点２１６．５−２１７．５℃）。【０２２２】
【化６４】
0005479105.tif 000065
【０２２３】
各記号の定義は上述と同義である。
（工程６）
３，５−ジメトキシフェニル酢酸１．９０ｇ、Ｎ−メチルベンズアミド１．３１ｇにオキシ塩化リン１０ｍＬを加え１１０℃オイルバス上５時間加熱攪拌した。室温で放冷後反応液を氷水に注ぎ込み、暫く攪拌後酢酸エチルで抽出した。有機層を水、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄後、硫酸マグネシウムで乾燥、乾燥剤を濾別し濃縮した。残渣をカラムクロマト精製（ワコーゲルＣ−２００  ８０ｇ、０．１〜１％メタノール含有ジクロロメタンで溶出）し、得られた粗粉末をノルマルヘキサンで洗浄することで、目的化合物である、６，８−ジメトキシ−２−メチル−１−フェニルイソキノリン−３（２Ｈ）−オン（ＢＮＳ−３３）を黄色粉末として０．９０ｇ得た（融点：１９５−１９７℃）。
同様の方法を用いて３，４，５−トリメトキシフェニル酢酸４．５０ｇから対応する目的化合物である、６，７，８−トリメトキシ−２−メチル−１−フェニルイソキノリン−３（２Ｈ）−オン（ＢＮＳ−３４）を黄色粉末として０．７８ｇ得た（融点：１５６−１５９℃）。【０２２４】
下記表１〜９に目的化合物の物性値を示す。【０２２５】
【表１】
0005479105.tif 000066
【０２２６】
【表２】
0005479105.tif 000067
【０２２７】
【表３】
0005479105.tif 000068
【０２２８】
【表４】
0005479105.tif 000069
【０２２９】
【表５】
0005479105.tif 000070
【０２３０】
【表６】
0005479105.tif 000071
【０２３１】
【表７】
0005479105.tif 000072
【０２３２】
【表８】
0005479105.tif 000073
【０２３３】
【表９】
0005479105.tif 000074
【０２３４】
試験例１  細胞増殖抑制作用（１）
（方法）
ヒト白血病細胞株ＢＶ１７３（ＡＴＣＣより入手）を用いて本発明化合物の細胞増殖抑制作用を評価した。ＢＶ１７３は、非働化した１０％ＦＣＳ（Ｈｙｃｌｏｎｅ）を添加したＲＰＭＩ−１６４０培養液（ＧｉｂｃｏＢＲＬ）中、３７℃、５％ＣＯ２の湿気中培養下で維持した。
細胞増殖は、トリパンブルー排除法を使用した細胞数のカウントとＳＦ試薬（ナカライテスク）を用いた改変ＭＴＴアッセイを使用して決定した。
ＢＶ１７３を平底９６ウェルプレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ  ｌａｂｏｒｔｅｃｈｎｉｋ）で１００μｌ媒体中１ウェルあたり２×１０４細胞として培養し、種々の濃度の化合物とともに７２時間培養した。培養後の細胞に対して改変ＭＴＴアッセイを適用し、各化合物の細胞増殖抑制作用を測定した。
（結果）
結果を表１０に示す。【０２３５】
【表１０】
0005479105.tif 000075
【０２３６】
又、ＢＮＳ−２２は多くの癌細胞株の増殖をＩＣ５０＝１〜５μＭ程度で阻害した。
さらに、優れた癌細胞増殖抑制作用が認められたＢＮＳ−２２について、ヒト癌細胞パネルを用いてその増殖抑制作用を評価した。ヒト癌細胞パネルとしては、ヒトの様々な臓器由来の癌細胞３９種類を用いた〔乳癌（ＨＢＣ−４、ＢＳＹ−１、ＨＢＣ−５、ＭＣＦ−７、ＭＤＡ−ＭＢ−２３）、中枢神経癌（Ｕ２５１、ＳＦ−２６８、ＳＦ−２９５、ＳＦ−５３９、ＳＮＢ−７５、ＳＮＢ−７８）、大腸癌（ＨＣＣ２９９８、ＫＭ−１２、ＨＴ−２９、ＨＣＴ−１５、ＨＣＴ−１１６）、肺癌（ＮＣＩ−Ｈ２３、ＮＣＩ−Ｈ２２６、ＮＣＩ−Ｈ５２２、ＮＣＩ−Ｈ４６０、Ａ５４９、ＤＭＳ２７３、ＤＭＳ１１４）、メラノーマ（ＬＯＸ−ＩＭＶＩ）、卵巣癌（ＯＶＣＡＲ−３、ＯＶＣＡＲ−４、ＯＶＣＡＲ−５、ＯＶＣＡＲ−８、ＳＫ−ＯＶ−３）、腎臓癌（ＲＸＦ−６３１Ｌ、ＡＣＨＮ）、胃癌（Ｓｔ−４、ＭＫＮ１、ＭＫＮ７、ＭＫＮ２８、ＭＫＮ４５、ＭＫＮ７４）、前立腺癌（ＤＵ−１４５、ＰＣ−３）〕。いずれもヒト培養癌細胞パネルとして収集されているもので公知であり、商業的に入手可能か、あるいは細胞バンク等から入手することができる。
ＢＮＳ−２２が有する殺癌細胞活性は下記の方法により確認することができる。全ての細胞株にＢＮＳ−２２を添加し、細胞増殖抑制効果及び細胞致死効果を検定するｉｎ  ｖｉｔｒｏ薬剤感受性試験を行う。増殖率の測定は、ＢＮＳ−２２を添加した後、例えば、４８時間後の生存細胞数を蛋白質結合性色素スルホローダミンＢによる染色により蛋白量として比色測定する。全てのヒト培養細胞のＢＮＳ−２２感受性測定データをコンピューターに入力し、細胞増殖を５０％阻害する濃度（ＧＩ５０）、見かけ上細胞増殖を完全に抑える濃度（ＴＧＩ）及び細胞数を播き込み時の５０％に減少させる濃度（ＬＣ５０）を計算し、情報処理を行うことによって薬剤への感受性を評価する。上記方法を用いて本発明化合物の殺癌細胞活性を調べることができる。尚、原法は［「癌と化学療法」２４（２）：１２９−１３５，  １９９７］等に記載される公知の方法である。
ＢＮＳ−２２は、３９種類のヒト癌細胞の全ての増殖を阻害し、又、その阻害プロファイルは既存の抗癌剤との相同性が低く、新規の作用機序を有する可能性が示唆された。一方、ＢＮＳ−２２の正常線維芽細胞ＮＨＦに対する阻害作用はＩＣ５０＝５１．５μＭであった。【０２３７】
試験例２  細胞周期への影響
ＨｅＬａ細胞において、その細胞周期にＢＮＳ−２２がどのような影響を及ぼすかを調べた。ＨｅＬａ細胞（RIKEN Cell Bank）は、１％ペニシリン・ストレプトマイシン溶液(SIGMA製)、１０％ウシ胎児血清(JRH Biosciences製）、１％ピルビン酸ナトリウム(Gibco製)を含有するＤＭＥＭ(dulbeco’s modified eagle’s medium；D5796 SIGMA製)中、３７℃、５％ＣＯ２の湿気中培養下で維持した。
（方法）
（１）免疫染色
ＨｅＬａ細胞をＢＮＳ−２２（１０μＭ）で１２時間処理した。ＢＮＳ−２２はＤＭＳＯに溶解して用いた。処理後細胞をメタノールで固定し、ＤＡＰＩ（SIGMA製）、抗βチューブリン抗体（SIGMA製）、及び抗γチューブリン抗体（SIGMA製）で免疫染色を行なった。ＤＡＰＩは核の存在を示す。抗βチューブリン抗体は、微小管の構成タンパク質のチューブリンに対する抗体であり、抗γチューブリン抗体は、中心体の構成タンパク質のγチューブリンに対する抗体である。これらの抗体で免疫染色することによって有糸分裂時の微小管の状態を知ることができる。
（２）ＦＡＣＳ解析
ＨｅＬａ細胞にＢＮＳ−２２を処理し、細胞を回収しＰＢＳで濯いだ後、２μｇ／ｍＬのプロジウムヨウ化物（ＰＩ）で３０分間ＤＮＡ染色を行なった。染色後、フローサイトメトリー（ＦＡＣＳｃａｎ；Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，ＮＪ）で解析を行なった。ＢＮＳ−２２の濃度を変えて２４時間処理した場合（図２ａ）、ＢＮＳ−２２（３μＭ）で処理時間を変えて処理した場合（図２ｂ）で測定した。
（結果）
ＢＮＳ−２２は、ＨｅＬａ細胞においてＭ期細胞特異的に有糸分裂異常を引き起こすことが示された（図１）。
又、ＢＮＳ−２２は、Ｇ２／Ｍ期の停止、多倍体化を誘導することが示された（図２）。【０２３８】
試験例３  細胞増殖抑制作用（２）
ＢＮＳ−２２について、ＨｅＬａ細胞を用いて、その細胞増殖抑制作用を調べた。
（方法）
細胞増殖は、ＷＳＴ−８法を用いて測定した。ＷＳＴ−８法は、生細胞では、電子伝達体（１−ｍｅｔｈｏｘｙ−ＰＭＳ）存在下で、テトラゾリウム塩ＷＳＴ−８が還元されて黄色のホルマザンが生成されることを利用した生細胞数の測定方法である。
ＨｅＬａ細胞を平底９６ウェルプレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ  ｌａｂｏｒｔｅｃｈｎｉｋ）で２００μｌ媒体中１ウェルあたり１×１０４細胞として培養し、種々の濃度のＢＮＳ−２２とともに２４時間培養した。
培養後の細胞に対してＷＳＴ−８法を適用して、ＢＮＳ−２２の細胞増殖抑制作用について調べた。
（結果）
結果を図３に示す。ＢＮＳ−２２によりＩＣ５０＝２μＭの細胞増殖抑制作用が認められた。【０２３９】
試験例４  トポイソメラーゼＩＩ活性の阻害作用
トポイソメラーゼＩＩは、２本鎖ＤＮＡの切断と通過を必要とする連環ＤＮＡの単環化や結び目を解消する酵素である。代表的な阻害剤としてはエトポシド（ＶＰ−１６）やアムルビシンが知られている。トポイソメラーゼ阻害剤の作用機序としては、ＤＮＡを切断した後、トポイソメラーゼＩＩと複合体を形成し、ＤＮＡの再結合を阻害、ＤＮＡの複製を阻害し、Ｇ２／Ｍ期の進行を阻害することが知られている。
本発明化合物のトポイソメラーゼＩＩ活性への影響を調べた。本発明化合物としてＢＮＳ−２２を用いた。
（方法）
Topoisomerase II assay kit(TopoGEN, Inc.)とhuman topoisomerase II(TopoGEN Inc.)を用いてインビトロ  トポイソメラーゼＩＩ阻害活性を測定した。所定の濃度のＢＮＳ−２２を用いて３７℃で３０分間反応させた。その他の詳細な手順はキットに添付の説明書に従って実施した。
（結果）
結果を図４に示す。トポイソメラーゼＩＩの代表的な阻害剤として知られているエトポシドに比べ、より強いトポイソメラーゼＩＩ阻害活性がＢＮＳ−２２に認められた。【０２４０】
試験例５  ＢＮＳ−２２アフィニティービーズを用いた結合タンパク質の探索
（方法）
ＢＮＳ−２２アフィニティービーズの作製
ビーズはNHS-activated sepharoseTM4 Fast Flow (GE-Healthcare製)を用いた。まず、１ｍｌエッペン２本に２００μｌずつビーズを測り入れ、１ｍＭ塩酸水溶液でビーズを５回洗浄した。次に、反応バッファー（０．１Ｍ  ＮａＨＣＯ３  ａｑ−ジオキサン（１：１  ｖ／ｖ）で洗浄した。１１．１ｍｇの光親和性リンカー（Photo affinity linker；N-(2-(2-(2-(2-(2-(2-aminoethoxy)ethoxy)ethoxy)ethoxy)ethoxy)ethyl)-4-(3-(trifluoromethyl)-3H-diazirin-3-yl)benzamide）を含む反応バッファー４００μｌを、２００μｌずつビーズに添加し、遮光条件下で、室温で２時間、ローテーターを用いてビーズと混合させ、ビーズに光親和性リンカーを導入した。反応終了後、反応バッファーで５回ビーズを洗浄した後、ビーズに１Ｍエタノールアミン溶液を加え、遮光条件下で、室温で１時間、ローテーターを用いて混合させ、ブロッキングを行った。ビーズをＭＱで数回洗浄後、ＭＱでビーズを懸濁させスピンカラム（エーエム技研製  Scan & Mightly Columns for DNA GEL Filtration）に移し、遠心操作でＭＱを除いた後、スピンカラムにメタノールを加え、遠心操作でメタノールを除いた。この操作を数回繰り返し、ビーズをメタノールで洗浄した。１０ｍｌサンプル瓶（日電理化硝子製）を２本用意し、一方に、１．３ｍｇのＢＮＳ−２２を含むメタノール溶液を添加し、片方はメタノールのみ添加し、それぞれに乾燥させたビーズを添加し混合させた。エバポレータで減圧濃縮後、２−プロパノールを加え、共沸させ、減圧乾燥を０．５時間行った。乾燥したビーズに３６５ｎｍ  ４Ｊｃｍ−２のＵＶをCL-1000L ultraviolet cross-linker (UVP-Inc.,CA,USA)を用いて照射した。メタノール、ＭＱ、５０％メタノール水溶液で、ビーズをそれぞれスピンカラムに移し、メタノール、ジメチルスルホキシド、メタノール、ＰＢＳの順に数回ずつ洗浄し、２００μｌの１ｍＭ  ＮａＮ３を含むＰＢＳ溶液を添加し、４℃で保存した。
細胞抽出液の調製
ＨＬ−６０細胞（RIKEN Cell Bank）を用いて細胞抽出液を調製した。
ＨＬ−６０細胞はＲＰＭＩ１６４０培地にウシ胎児血清を１０％添加した培地中３７℃、５％ＣＯ２の湿気中培養下で維持した。培養したＨＬ−６０細胞を回収後、遠心で沈殿させ、上清を除去した。プロテアーゼインヒビター(ＰＩカクテル(Roches製)、ＰＭＳＦ(SIGMA製))を加えた結合バッファー（１０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ，５０ｍＭ  ＫＣｌ，５ｍＭ  ＭｇＣｌ２，１ｍＭ  ＥＤＴＡ，ＰＨ７．６）を添加し、注射針付きシリンジ(Terumo製)を用いて懸濁させた。懸濁後、超音波で細胞を破砕し、遠心（１５００ｒｐｍ  ３０分  ４℃）で不溶画分を沈殿させた。得られた上清の細胞抽出液のタンパク濃度は、プロテインアッセイキット(BIO RAD)を用いて決定した。
共沈タンパク質の探索
上記で調製したＨＬ−６０細胞の抽出液とＢＮＳ−２２アフィニティービーズあるいは対照としてＢＮＳ−２２を固定化していないビーズとを混合し、ＢＮＳ−２２アフィニティービーズに特異的に結合したタンパク質を共沈させ、その同定を行なった。ビーズに結合したタンパク質を可溶化し、還元した後、電気泳動で分離した。クマシーブリリアントブルーで染色することによってタンパク質の存在を調べた。
（結果）
結果を図５に示す。
ＢＮＳ−２２アフィニティービーズに特異的に結合し共沈するタンパク質として、ＵＢＡ−ＵＢＬ型ユビキチンレセプターであるユビキリン１を同定した。【０２４１】
試験例６  細胞内ユビキチン化タンパク質の蓄積（１）
ＢＮＳ−２２の細胞内ユビキチン化タンパク質に及ぼす影響を調べた。
（方法）
ＨｅＬａ細胞をＢＮＳ−２２（３μＭ）の存在下で、０、３、６、９、１２、１８及び２４時間それぞれ培養した。ＨＬ−６０細胞をＢＮＳ−２２（１μＭ）の存在下で、０、１２、２４及び４８時間それぞれ培養した。
又、ユビキチン化タンパク質の蓄積誘導が知られている(Trends Cell Biol., 8 : 397-403, 1998)ＭＧ−１３２（１０μＭ、Calbiochem製）存在下で２時間それぞれの細胞を培養した。
培養後の細胞から細胞抽出液を調製し、抗ユビキチン抗体(Santa Cruz Biotechnology 製)でイムノブロッティングを行なった。
薬剤処理を行った細胞を回収後、プロテアーゼインヒビター(ＰＩカクテル(Roches製)、ＰＭＳＦ(SIGMA製))を加えたＲＩＰＡバッファー（２５ｍＭ  Ｈｅｐｅｓ，１．５％ＴＸ−１００，１．０％デオキシコール酸ナトリウム，０．１％ＳＤＳ，０．５Ｍ  ＮａＣｌ，５ｍＭ  ＥＤＴＡ，ｐＨ  ７．８）を添加して超音波で細胞を破砕し、遠心（１４００ｒｐｍ  ２０ｍｉｎ）で不溶画分を沈殿させた。得られた上清の細胞抽出液のタンパク濃度を、プロテインアッセイキット(BIO RAD製)を用いて揃え、総量の１／４のサンプルバッファー（２８０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ，４４．８％グリセロール，１２％ＳＤＳ，２０％２−メルカプトエタノール，０．４ｍｇ／ｍｌブロモフェノールブルー，ｐＨ６．８）を加えて、ヒートブロック中、１００℃で３分間加熱を行ったものをサンプルとした。７．５％ポリアクリルアミドゲルを用い、泳動バッファー（２５ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ，１９２ｍＭ  グリシン，０．１％ＳＤＳ，ｐＨ８．３）中での電気泳動によりタンパク質を分離し、ゲル中に含まれるタンパク質を転写バッファー（２５ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ，１９２ｍＭグリシン，０．１％ＳＤＳ，２０％メタノール，ｐＨ８．３）中、ＰＶＤＦ膜（Ｍｉｌｉｐｏｒｅ製）に転写した。転写後、ＰＶＤＦ膜は、５％スキムミルクを含むＴＢＳ−Ｔバッファー（２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ，１３７ｍＭ  ＮａＣｌ，０．１％Ｔｗｅｅｎ−２０，ｐＨ７．６）に浸し、室温で０．５時間ブロッキングを行った。ＴＢＳ−Ｔバッファーで１時間洗浄し、５％スキムミルクを含むＴＢＳ−Ｔバッファー中に総量の１／２０００の抗ユビキチン抗体(Santa Cruz Biotechnology製)を添加し、室温で１時間反応させ、再度ＴＢＳ−Ｔバッファーで洗浄し、５％スキムミルクを含むＴＢＳ−Ｔバッファー中に総量の１／２０００のＨＲＰ標識された抗マウス抗体(Vector製)を添加し、室温で１時間反応させた。ＴＢＳ−Ｔバッファーで、室温で１時間洗浄したＰＶＤＦ膜を、化学発光試薬Supersignal west pico Chemiluminescence substrate (Pierce製)を用いてフィルムを感光させることで、目的タンパク質を検出した。
（結果）
結果を図６に示す。いずれの細胞においても、ＢＮＳ−２２はユビキチン化タンパク質の蓄積を誘導することが示された。【０２４２】
試験例７  ＧＵＴ−７０アフィニティービーズを用いた結合タンパク質の探索
（方法）
ビーズに結合させる化合物にＧＵＴ−７０を用いること以外は、試験例５と同様にしてＧＵＴ−７０アフィニティービーズを作製した。
試験例５と同様にして調製したＨＬ−６０細胞の抽出液とＧＵＴ−７０アフィニティービーズあるいは対照としてＧＵＴ−７０を固定化していないビーズとを混合し、ＧＵＴ−７０アフィニティービーズに特異的に結合したタンパク質を共沈させ、その同定を行なった。ビーズに結合したタンパク質を可溶化し、還元した後、電気泳動で分離した。クマシーブリリアントブルーで染色することによってタンパク質の存在を調べた（プルダウンアッセイ）。
（結果）
プルダウンアッセイの模式図と結果を図７に示す。
ＧＵＴ−７０アフィニティービーズに特異的に結合し共沈するタンパク質としてユビキリン１を同定した。【０２４３】
試験例８  ＧＵＴ−７０のユビキリン１に対する結合親和性
試験例７で、細胞抽出液からＧＵＴ−７０アフィニティービーズに特異的に共沈してくるタンパク質としてユビキリン１が同定されたことから、ＧＵＴ−７０とユビキリン１との相互作用を、精製リコンビナントユビキリン１を用いて調べた。
精製リコンビナントユビキリン１は、以下のようにして調製した（Ｈｉｓ−ユビキリン１）。
ヒトユビキリン１遺伝子は、ＨＬ−６０細胞のｃＤＮＡライブラリーからクローニングし、ｐＲＳＥＴ  Ｃベクター(Invitrogen製)に組み込んだ。それを大腸菌ＢＬ２１（ＤＥ３）株にトランスフォーメーションし、１ｍＭ  ｉｓｏｐｒｏｐｙｌ−Ｂ−Ｄ−ｔｈｉｏｇａｌａｃｔｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｅ（ＩＰＴＧ）を含むＬＢ培地（５ｇ／ｌ  Ｙｅａｓｔ  Ｅｘｔｒａｃｔ、５ｇ／ｌ  ＮａＣｌ、１０ｇ／ｌ  Ｔｒｙｐｔｏｎ）で３７℃、２時間培養することでＨｉｓ−ユビキリン１タンパク質を発現誘導させ、ＡＫＴＡｐｕｒｉｆｉｅｒ(GE Healthcare製)で精製リコンビナントＨｉｓ−ユビキリン１を調製した。図８（ｃ）は、１μｇの精製リコンビナントＨｉｓ−ユビキリン１をＳＤＳ−ＰＡＧＥし、ＣＢＢ染色したものである。
ＨＬ−６０細胞の抽出液に代えて、Ｈｉｓ−ユビキリン１含有溶液を用いる以外は試験例７と同様にして、ＧＵＴ−７０アフィニティービーズに特異的に結合したタンパク質を共沈させた。また、遊離のＧＵＴ−７０（１２５μｇ／ｍｌ）を添加した場合についても同様にして、ＧＵＴ−７０アフィニティービーズに特異的に結合したタンパク質を共沈させた。各ビーズに結合したタンパク質を可溶化し、還元した後、７．５％ポリアクリルアミドゲルを用い、泳動バッファー（２５ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ，１９２ｍＭ  グリシン，０．１％ＳＤＳ，ｐＨ８．３）中での電気泳動によりタンパク質を分離し、ゲル中に含まれるタンパク質を転写バッファー（２５ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、１９２ｍＭグリシン、０．１％ＳＤＳ、２０％メタノール、ｐＨ８．３）中、ＰＶＤＦ膜(Milipore製)に転写した。転写後、ＰＶＤＦ膜は、５％スキムミルクを含むＴＢＳ−Ｔバッファー（２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、１３７ｍＭ  ＮａＣｌ、０．１％Ｔｗｅｅｎ−２０、ｐＨ７．６）に浸し、室温で０．５時間ブロッキングを行った。ＴＢＳ−Ｔバッファーで１時間洗浄し、５％スキムミルクを含むＴＢＳ−Ｔバッファー中に総量の１／５０００の抗Ｘｐｒｅｓｓ抗体(Invitrogen製)を添加し、室温で１時間反応させ、再度ＴＢＳ−Ｔバッファーで洗浄し、５％スキムミルクを含むＴＢＳ−Ｔバッファー中に総量の１／５０００のＨＲＰ標識された抗マウス抗体(Vector製)を添加し、室温で１時間反応させた。ＴＢＳ−Ｔバッファーで、室温で１時間洗浄したＰＶＤＦ膜を、化学発光試薬Ｓｕｐｅｒｓｉｇｎａｌ  ｗｅｓｔ  ｐｉｃｏ  Ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ  ｓｕｂｓｔｒａｔｅ  (Pierce製)を用いてフィルムを感光させることで、目的タンパク質を検出した。
（結果）
結果を図８に示す。ＧＵＴ−７０アフィニティービーズに特異的に精製リコンビナントユビキリン１が共沈すること、及びその結合が遊離のＧＵＴ−７０の反応系への添加により阻害されることから、ＧＵＴ−７０はユビキリン１に直接結合していることがわかった。【０２４４】
試験例９  細胞内ユビキチン化タンパク質の蓄積（２）
ＧＵＴ−７０の細胞内ユビキチン化タンパク質に及ぼす影響を調べた。
（方法）
ＨｅＬａ細胞をＧＵＴ−７０（５０μＭ）の存在下で、０、０．５、１、３、６、１２、２４及び４８時間それぞれ培養した。
又、ユビキチン化タンパク質の蓄積誘導が知られているＭＧ−１３２（１μＭ、Calbiochem製）存在下でＨｅＬａ細胞を０、０．５、１、３、６、１２、２４及び４８時間それぞれ培養した。
さらに、対照として、溶媒（ＤＭＳＯ）のみで、ＨｅＬａ細胞を０、０．５、１、３、６、１２、２４及び４８時間それぞれ培養した。
試験例６と同様にして、培養後の細胞から細胞抽出液を調製し、抗ユビキチン抗体でイムノブロッティングを行なった。
（結果）
結果を図９に示す。ＧＵＴ−７０はユビキチン化タンパク質の蓄積を誘導することが示された。
試験例５、７及び８で示されたユビキリン結合特性、及び試験例６及び９で示されたユビキチン化タンパク質の蓄積誘導作用から、本発明化合物はユビキリン１結合作用及びユビキチン・プロテアソームシステム阻害作用を有することが示された。【０２４５】
以上、本発明の具体的な態様のいくつかを詳細に説明したが、当業者であれば、示された特定の態様に、本発明の教示と利点から実質的に逸脱しない範囲で様々な修正と変更をなすことが可能である。従って、そのような修正及び変更も、すべて請求の範囲で請求される本発明の精神と範囲内に含まれるものである。
本出願は、日本で出願された特願２００７−２８７５７０及び特願２００８−１２０５７５を基礎としており、その内容は本出願にすべて包含されるものである。
【図１】
0005479105.tif 000096
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
0005479105.tif 000101
【図７】
0005479105.tif 000102
【図８】
0005479105.tif 000103
【図９】
0005479105.tif 000104