(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉのａｌｌ−Ｅアスタキサンチンジメチルジスクシネートを製造するための方法であって、
【化１】
0005384753.tif 000016
ａ）ジクロロメタンを含む溶媒中で、アルカリ金属アルコキシド又はアルカリ土類金属アルコキシドであるＭ１ＯＲ１又はＭ２（ＯＲ１）２のアルコールＲ１ＯＨ溶液
（式中、
Ｍ１は、Ｌｉ、Ｎａ、Ｋ、又はＲｂであり、
Ｍ２は、Ｍｇ、Ｃａ、Ｓｒ、又はＢａであり、
Ｒ１は、メチル、エチル、ｎ−プロピル、又はイソプロピルである）を
塩基として添加することによって、
式ＩＩのＣ１０ジアルデヒドを、
【化２】
0005384753.tif 000017
ダブルウィッティヒ反応により、式ＩＩＩのＣ１５ホスホニウム塩
【化３】
0005384753.tif 000018
（式中、Ｘ−は、有機又は無機酸ＨＸのアニオンである）
と反応させて、
式ＩＶのアスタキサンチン
【化４】
0005384753.tif 000019
（式中、形成された二つの新しい二重結合は、Ｚ立体配置だけでなく、Ｅ立体配置でも存在する）
を生成させ、
場合によっては、その後に、塩Ｍ１Ｘ又はＭ２Ｘ２を除去するために、その反応混合物を水系後処理する方法ステップと、
ｂ）その反応混合物を水で繰り返し洗浄することによって、又はジクロロメタン及びアルコールＲ１ＯＨを含む溶媒混合物を留去することによって、方法ステップａ）の反応混合物からアルコールＲ１ＯＨを除去し、
場合によっては、その後に、ジクロロメタンと水の共沸蒸留により水を除去することによって、反応混合物を乾燥させる方法ステップと、
ｃ）ジクロロメタン中で、式Ｖの塩化メチルスクシノイル
【化５】
0005384753.tif 000020
及び有機窒素塩基を添加することによって、方法ステップｂ）において処理した反応混合物に存在する式ＩＶのアスタキサンチンを反応させて、式Ｉａのアスタキサンチンジメチルジスクシネート
【化６】
0005384753.tif 000021
を形成させる方法ステップと、
ｄ）水溶性の塩を除去するために、方法ステップｃ）の反応混合物を水系後処理する方法ステップと、
ｅ）蒸留によって、方法ステップｄ）の反応混合物からジクロロメタンを除去し、アルコールＲ２ＯＨ（式中、Ｒ２は、メチル、エチル、ｎ−プロピル、又はイソプロピルである）を反応混合物に添加することによって、ジクロロメタンをアルコールＲ２ＯＨと溶媒交換する方法ステップと、
ｆ）反応混合物の全体積に対して水１０〜９０体積％という含水率を有する、方法ステップｅ）のＲ２ＯＨ含有反応混合物を、少なくとも５０℃に加熱することによって、方法ステップｃ）で生成した式Ｉａのアスタキサンチンジメチルジスクシネートを熱異性化させ、式Ｉのａｌｌ−Ｅアスタキサンチンジメチルジスクシネートを生成させる方法ステップであって、式Ｉのａｌｌ−Ｅアスタキサンチンジメチルジスクシネートが、結晶形で生じ、場合により、それに続いて単離される方法ステップと
を含む前記方法。
【請求項２】
方法ステップａ）において、塩基が、ナトリウムメトキシドのメタノール溶液である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
方法ステップｂ）において、ミキサー／セトラー装置内で、メタノール含有ジクロロメタンの留出物を水で連続洗浄することによって、メタノールが反応混合物から除去される、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
方法ステップｃ）において、有機窒素塩基が、ピリジン又はピリジン誘導体である、請求項１〜３のいずれかに記載の方法。
【請求項５】
方法ステップｅ）において、アルコールＲ２ＯＨが、メタノールである、請求項１〜４のいずれかに記載の方法。
【請求項６】
方法ステップｆ）において、熱異性化が、密閉装置内で、固有圧力下、８０℃と１２０℃の間で、水性メタノール中で行われる、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
方法ステップｆ）で規定する含水率が、方法ステップｅ）の後に続いて、反応混合物に水を添加することによって設定される、請求項１〜６のいずれかに記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、式Ｉのａｌｌ−Ｅアスタキサンチンジメチルジスクシネートを製造するための、改善された方法に関する。
【化１】
0005384753.tif 000002
【背景技術】
【０００２】
アスタキサンチンそのものは、養殖のサケを着色するための飼料添加物として主に使用される、需要のある色素である。
【化２】
0005384753.tif 000003
【０００３】
アスタキサンチンを製造するのに非常に効率的な方法は、とりわけ（非特許文献１）に記載されている通り、二当量の対応する式ＩＩＩのＣ１５ホスホニウム塩を用いた、式ＩＩの対称Ｃ１０ジアルデヒドのダブルウィッティヒオレフィン化（double Wittig olefination）である。
【化３】
0005384753.tif 000004
【０００４】
この反応は、例えば、ナトリウムメトキシドのメタノール溶液を塩基として使用して、ジクロロメタン中で行う（特許文献１も参照）か、式ＩＩ及び式ＩＩＩの構成成分を１，２−エポキシブタン中で加熱することによって行うことができる。
【０００５】
魚餌におけるアスタキサンチンの貯蔵安定性を改善するために、様々なアスタキサンチンジエステルが、（特許文献２）で提示され、そこでは、とりわけ、式Ｉのアスタキサンチンジメチルジスクシネートが言及されている。
【０００６】
それらのアスタキサンチンジエステルを製造するために、（特許文献２）によれば、結晶性アスタキサンチンを、不活性溶媒中で、有機塩基の存在下で、カルボン酸塩化物又はカルボン酸無水物と反応させる（特許文献２、７ページ、３行〜２０行）。遊離酸を用いたアスタキサンチンのエステル化において、反応は、脱水試薬の存在下で進行する（特許文献２、７ページ、２１行〜２８行）。式Ｉのアスタキサンチンジメチルジスクシネートは、特許文献２の実施例５（１３ページ、１３行〜２５行）に従って、４９．９％の収率及び７９．３％の純度で得られた。それに続く塩化メチレン／メタノールからの再結晶によって、そのジエステルは、９８％の純度（ＨＰＬＣ後）で得ることができた。
【０００７】
この手順の欠点は、エステル化に使用される出発材料が、結晶性アスタキサンチンであるということである。エステル化のための中間体として、結晶性アスタキサンチンを製造することは、結晶化、濾過、洗浄、乾燥、包装、保管、及びそれに続く段階での固体の計量に対して、かなりの製造費がかかることを意味する。加えて、アスタキサンチンの結晶化においては、母液中での価値ある生成物の残留溶解性（residual solubility）のせいで、収率の損失が起こる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】国際公開第２００７／１２８５７４号
【特許文献２】国際公開第２００３／０６６５８３号
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】Helv. Chim. Acta 64, 7, 2445 (1981)
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
式Ｉのアスタキサンチンジメチルジスクシネートの既知の合成の欠点を改善することが、本発明の一つの目的であった。式Ｉのアスタキサンチンジメチルジスクシネートを製造するための方法は、簡略化されるべきであり、式Ｉのアスタキサンチンジメチルジスクシネートの収率及び純度は、改善されるべきである。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
この目的は、式Ｉのａｌｌ−Ｅアスタキサンチンジメチルジスクシネートを製造するための方法であって、
【化４】
0005384753.tif 000005
【００１２】
ａ）ジクロロメタンを含む溶媒中で、アルカリ金属アルコキシド又はアルカリ土類金属アルコキシドであるＭ１ＯＲ１又はＭ２（ＯＲ１）２のアルコールＲ１ＯＨ溶液
（式中、
Ｍ１は、Ｌｉ、Ｎａ、Ｋ、又はＲｂであり、
Ｍ２は、Ｍｇ、Ｃａ、Ｓｒ、又はＢａであり、
Ｒ１は、メチル、エチル、ｎ−プロピル、又はイソプロピルである）を
塩基として添加することによって、
式ＩＩのＣ１０ジアルデヒドを、
【化５】
0005384753.tif 000006
【００１３】
ダブルウィッティヒ反応により、式ＩＩＩのＣ１５ホスホニウム塩
【化６】
0005384753.tif 000007
【００１４】
（式中、Ｘ−は、有機又は無機酸ＨＸのアニオンである）
と反応させて、
式ＩＶのアスタキサンチン
【化７】
0005384753.tif 000008
【００１５】
（式中、形成された二つの新しい二重結合は、Ｚ立体配置だけでなく、Ｅ立体配置でも存在する）
を生成させ、
場合によっては、その後に、塩Ｍ１Ｘ又はＭ２Ｘ２を除去するために、その反応混合物を水系後処理（aqueous workup）する方法ステップと、
ｂ）その反応混合物を水で繰り返し洗浄することによって、又はジクロロメタンとアルコールＲ１ＯＨとを含む溶媒混合物を留去することによって、方法ステップａ）の反応混合物からアルコールＲ１ＯＨを除去し、
場合によっては、その後に、ジクロロメタンと水の共沸蒸留により水を除去することによって、反応混合物を乾燥させる方法ステップと、
ｃ）ジクロロメタン中で、式Ｖの塩化メチルスクシノイル
【化８】
0005384753.tif 000009
【００１６】
及び有機窒素塩基を添加することによって、方法ステップｂ）において処理した反応混合物に存在する式ＩＶのアスタキサンチンを反応させて、式Ｉａのアスタキサンチンジメチルジスクシネート
【化９】
0005384753.tif 000010
【００１７】
を形成させる方法ステップと、
ｄ）水溶性の塩を除去するために、方法ステップｃ）の反応混合物を水系後処理する方法ステップと、
ｅ）蒸留によって、方法ステップｄ）の反応混合物からジクロロメタンを除去し、アルコールＲ２ＯＨ（式中、Ｒ２は、メチル、エチル、ｎ−プロピル、又はイソプロピルである）を、反応混合物に添加することによって、ジクロロメタンをアルコールＲ２ＯＨと溶媒交換する方法ステップと、
ｆ）反応混合物の全体積に対して水１０〜９０体積％という含水率を有する、方法ステップｅ）のＲ２ＯＨ含有反応混合物を、少なくとも５０℃に加熱することによって、方法ステップｃ）で生成した式Ｉａのアスタキサンチンジメチルジスクシネートを熱異性化させ、式Ｉのａｌｌ−Ｅアスタキサンチンジメチルジスクシネートを生成させる方法ステップであって、式Ｉのａｌｌ−Ｅアスタキサンチンジメチルジスクシネートが、結晶形で生じ、場合により、それに続いて単離される方法ステップと
を含む方法によって達成される。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
本発明による方法の方法ステップａ）では、
ジクロロメタンを含む溶媒中で、アルカリ金属アルコキシド又はアルカリ土類金属アルコキシドであるＭ１ＯＲ１又はＭ２（ＯＲ１）２、好ましくはアルカリ金属アルコキシドＭ１ＯＲ１のアルコールＲ１ＯＨ溶液
（式中、
Ｍ１は、Ｌｉ、Ｎａ、Ｋ、又はＲｂ、好ましくはＬｉ又はＮａ、特にＮａであり、
Ｍ２は、Ｍｇ、Ｃａ、Ｓｒ、又はＢａ、好ましくはＭｇであり、
Ｒ１は、メチル、エチル、ｎ−プロピル、又はイソプロピル、好ましくはメチル又はエチル、特にメチルである）を
塩基として添加することによって、
式ＩＩのＣ１０ジアルデヒドを、
【化１０】
0005384753.tif 000011
【００１９】
ダブルウィッティヒ反応により、式ＩＩＩのＣ１５ホスホニウム塩
【化１１】
0005384753.tif 000012
【００２０】
（式中、Ｘ−は、例えば、塩化水素、臭化水素、もしくはヨウ化水素、メタンスルホン酸、ｐ-トルエンスルホン酸、もしくはトリフルオロメタンスルホン酸等のスルホン酸、又はトリフルオロ酢酸もしくはトリクロロ酢酸等のトリハロ酢酸等の、有機又は無機酸ＨＸのアニオンである）
と反応させて、
式ＩＶのアスタキサンチン
【化１２】
0005384753.tif 000013
【００２１】
（式中、形成された二つの新しい二重結合は、Ｚ立体配置だけでなく、Ｅ立体配置でも存在する）
を生成させ、
場合によっては、その後に、塩Ｍ１Ｘ又はＭ２Ｘ２を除去するために、反応混合物を水系後処理する。
【００２２】
好ましくは、アニオンＸ−は、塩化物又は臭化物アニオンである。
【００２３】
方法ステップａ）では、好ましくは、式ＩＩのＣ１０ジアルデヒド及び式ＩＩＩのＣ１５ホスホニウム塩は、最初に、溶媒の全体積に対して、９０体積％超、特に好ましくは、９５体積％超のジクロロメタンを含む溶媒、特に、純粋なジクロロメタン、すなわち、純度が９９体積％より高いジクロロメタンに溶解させる。
【００２４】
その次に、方法ステップａ）では、式ＩＩ及び式ＩＩＩの化合物は、好ましくは、ナトリウムメトキシドのメタノール溶液を塩基として添加することによって縮合されて、式ＩＶのアスタキサンチンを与える。
【００２５】
式ＩＶのアスタキサンチンにおいて、新しく形成された二つの二重結合は、Ｚ立体配置だけでなく、Ｅ立体配置でも存在する。式ＩＶのアスタキサンチンにおいて新しく形成された二つの二重結合は、主として、すなわち、５０％超で、Ｅ，Ｅ立体配置を有する。Ｚ立体配置を有する新しく形成された二重結合の部分は、式ＩＶのアスタキサンチンの混合物の２５％以下である。
【００２６】
好ましくは、方法ステップａ）において、反応混合物は、塩Ｍ１Ｘ又はＭ２Ｘ２を除去するために、水系後処理に付される。
【００２７】
水系後処理後、得られた反応混合物は、式ＩＶのアスタキサンチンのジクロロメタン粗溶液であり、その溶液は、水飽和し、アルコールＲ１ＯＨ、特にメタノールの残留物を含む。
【００２８】
本発明による方法の方法ステップｂ）では、アルコールＲ１ＯＨは、その反応混合物を水で繰り返し洗浄することによって、又はジクロロメタンとアルコールＲ１ＯＨとを含む溶媒混合物を留去することによって、特に、ジクロロメタンとアルコールＲ１ＯＨとを含む溶媒混合物を留去することによって、方法ステップａ）の反応混合物から除去され、場合によっては、その後に、ジクロロメタンと水の共沸蒸留により水を除去することによって、反応混合物を乾燥させる。
【００２９】
好ましくは、方法ステップｂ）において、アルコールＲ１ＯＨ、特にメタノールは、蒸留を繰り返し、留出物を水で洗浄し、洗浄した留出物を粗アスタキサンチン溶液に再循環させることによって除去される。
【００３０】
メタノールの場合には、メタノールは、これまでに記述した通りの反応混合物から、複数の段階で、断続的に除去することができる。工業的方法において、反応混合物からのメタノールの除去は、好ましくは、ミキサー／セトラー装置内で、メタノール含有ジクロロメタンの留出物を水で連続洗浄することにより、反応混合物からメタノールを除去することによって連続的に行われる。この場合には、粗アスタキサンチン溶液がメタノールを含まなくなるまで、下方の有機相を、粗アスタキサンチン溶液に連続的に再循環させる。
【００３１】
好ましくは、メタノールの除去が完了した後に、水飽和粗アスタキサンチン溶液を、当業者に公知の方法によって、好ましくは、共沸蒸留（ジクロロメタン／水の異相共沸混合物）によって乾燥させる。これは、単純な部分蒸発によって、又は適切に組み立てられた水分離器で水を取り除くことによって実施することができる。
【００３２】
すべての蒸留ステップは、好ましくは、大気圧下で行うが、減圧下で行うこともできる。しかし、実際上の理由（ジクロロメタン共沸混合物の凝縮性）で、３００ｍｂａｒを下回る圧力は用いられない。
【００３３】
本発明による方法の方法ステップｃ）では、ジクロロメタン中で、式Ｖの塩化メチルスクシノイル
【化１３】
0005384753.tif 000014
【００３４】
及び有機窒素塩基を添加することによって、方法ステップｂ）において処理した反応混合物に存在する式ＩＶのアスタキサンチンを反応させて、式Ｉａのアスタキサンチンジメチルジスクシネート
【化１４】
0005384753.tif 000015
【００３５】
を形成させる。
【００３６】
Ｒ１ＯＨを含まない、好ましくは水も含まない、特に、メタノール及び水を含まない、方法ステップｂ）において得られた、粗アスタキサンチンのジクロロメタン溶液を、それ自体が既知である方法で、有機塩基の存在下で、式Ｖの塩化メチルスクシノイルと反応させて、式Ｉａのアスタキサンチンジメチルジスクシネートを生成させる。この文脈における、水を含まない、又は、Ｒ１ＯＨを含まないとは、反応混合物の質量に対して、０．２重量％未満、好ましくは０．１重量％未満、特に０．０７５重量％未満の水又はＲ１ＯＨという、反応混合物における含水率又はＲ１ＯＨ含有率を意味する。
【００３７】
有機の窒素塩基としては、例えば、一級、二級、もしくは三級アルキルアミンもしくはアリールアミン等のアミン、又はピリジンもしくはピリジン誘導体等の塩基性の含窒素ヘテロ芳香族化合物を使用することができる。好ましくは、使用される塩基は、例えば、トリエチルアミン等のトリアルキルアミン、ピリジン、又は、例えば、４−ジメチルアミノピリジン等のジアルキルアミノピリジンである。特に好ましくは、方法ステップｃ）において、有機窒素塩基は、ピリジン又はピリジン誘導体である。
【００３８】
アスタキサンチン：塩化メチルスクシノイルのモル比は、１：２．０〜１：３．０、好ましくは、１：２．１〜１：２．５の範囲にある。塩基は、酸塩化物に対して、少なくとも化学量論的に、好ましくは、塩化メチルスクシノイルに対して、１０〜５０ｍｏｌ％過剰で使用される。反応温度は、−１０℃から反応混合物の還流温度までであり得る。好ましくは、反応は、０〜２５℃の温度範囲で行われる。
【００３９】
本発明による方法の方法ステップｄ）では、方法ステップｃ）の反応混合物は、水溶性の塩を除去するために、水系条件下で後処理される。このプロセスでは、有機窒素塩基の塩酸塩は、ジクロロメタン含有反応混合物からほぼ除去され、また、依然として存在する、方法ステップａ）で形成されたいかなる塩Ｍ１Ｘ又はＭ２Ｘ２も同様である。
【００４０】
本発明による方法の方法ステップｅ）では、溶媒ジクロロメタンは、蒸留、及び反応混合物へのアルコールＲ２ＯＨの添加（式中、Ｒ２は、メチル、エチル、ｎ−プロピル、又はイソプロピル、特にメチルである）により、方法ステップｄ）の反応混合物からジクロロメタンを除去することによって、アルコールＲ２ＯＨと交換される。
【００４１】
好ましくは、方法ステップｅ）において、アルコールＲ２ＯＨはメタノールである。
【００４２】
溶媒交換は、ジクロロメタンが、所望の量で、好ましくは、完全に除去されるまで、ある量のジクロロメタンを留去し、それをある量のアルコールＲ２ＯＨと交換し、この手順を繰り返すことによって、段階的に実施することができる。あるいは、蒸留によって除去されるジクロロメタンは、対応する容量のアルコールＲ２ＯＨと連続的に交換することもできる（等容法）。上述の文脈における、ジクロロメタンの完全な除去とは、ジクロロメタンの残留含有率が、反応混合物の質量に対して、０．５重量％未満、好ましくは０．１重量％未満、特に０．０５重量％未満のジクロロメタンであることを意味する。
【００４３】
溶媒交換は、ジクロロメタンに容易に溶ける、式Ｉａのアスタキサンチンジメチルジスクシネート、特に、式Ｉのａｌｌ−Ｅアスタキサンチンジメチルジスクシネートを、アルコールＲ２ＯＨから晶出できるように行われ、そこでは、依然として存在する、方法ステップａ）からのトリフェニルホスフィンオキシドは溶液中に残ったままであり、したがって、結晶性生成物から容易に分離させることができる。
【００４４】
好ましくは、水が、アルコールＲ２ＯＨ、特にメタノールに添加される。そこでは、トリフェニルホスフィンオキシドが、まだ沈殿しないように、水の量が選択される。原理的には、溶媒交換（方法ステップｅ））の前でさえ、水を、少なくともいくらか反応混合物に添加できた可能性がある。所望の含水率に必要とされる水の量を、より簡単に計算し、決定するために、ジクロロメタンとアルコールＲ２ＯＨ、特にメタノールの溶媒交換の後まで、水は、反応混合物に添加されない。好ましくは、反応混合物の全体積に対して、１０〜９０体積％、特に好ましくは３０〜７０体積％、非常に特定すれば、好ましくは４０〜６０体積％、特に４５〜５５体積％という含水率が定まる。
【００４５】
本発明による方法の方法ステップｆ）では、反応混合物の全体積に対して、１０〜９０体積％、特に好ましくは３０〜７０体積％、とりわけ特定すれば、好ましくは４０〜６０体積％、特に４５〜５５体積％の水という含水率を有する、方法ステップｅ）のＲ２ＯＨ含有反応混合物を、少なくとも５０℃に加熱することによって、ステップｃ）で生成した式Ｉａのアスタキサンチンジメチルジスクシネートを熱異性化させて、式Ｉのａｌｌ−Ｅアスタキサンチンジメチルジスクシネートを生成させ、そこでは、式Ｉのａｌｌ−Ｅアスタキサンチンジメチルジスクシネートが、結晶形で生じ、場合により、それに続いて単離される。
【００４６】
方法ステップｅ）からの反応混合物は、８０℃と１２０℃の間、特に好ましくは９０℃と１１０℃の間の温度で、好ましくは異性化される。所望の温度が、大気圧下での、溶媒又は溶媒混合物の沸点を超える場合、反応混合物は、増大する過大圧力に適した密閉系内で加熱される。
【００４７】
好ましくは、方法ステップｆ）において、熱異性化は、密閉装置内で、固有圧力下、８０℃と１２０℃の間、特に好ましくは９０℃と１１０℃の間で、水性メタノール中で行われる。
【００４８】
反応混合物は、通常、８０℃と１２０℃の間で、１〜２０時間熱異性化される。それより低い温度では、この時間は、より長くなる可能性もある。
【００４９】
好ましくは、方法プロセスｆ）で規定される含水率は、方法ステップｅ）の後に続いて、反応混合物に水を添加することによって設定される。
【００５０】
熱異性化の後、混合物は、通常、０〜２５℃、好ましくは０〜１２℃に冷却され、晶出した式Ｉのａｌｌ−Ｅアスタキサンチンジメチルジスクシネートは、濾過によって高い収率及び純度で単離できる。
【００５１】
本発明による上記の方法は、まず、ａｌｌ−Ｅアスタキサンチンが単離され、次いで、この結晶性生成物が、式Ｉのａｌｌ−Ｅアスタキサンチンジメチルジスクシネートに変換される、二段階プロセスの欠点を回避する。驚いたことに、式ＩＩのＣ１０ジアルデヒドと式ＩＩＩのＣ１５ホスホニウム塩から生成される、式ＩＶのアスタキサンチンは、式Ｉａのアスタキサンチンジメチルジスクシネートへの変換のために、溶媒を含まないように単離される必要がないが、トリフェニルホスフィンオキシド、及び合成からの他の不純物の存在下で、粗溶液として、式Ｖの塩化メチルスクシノイル（４−クロロ−４−オキソ酪酸メチル）と直接反応して、式Ｉａのアスタキサンチンジメチルジスクシネートを与えることができ、そこから、熱異性化の後、式Ｉのａｌｌ−Ｅアスタキサンチンジメチルジスクシネートを、高い収率及び純度で結晶形で得ることができることが判明した。
【実施例】
【００５２】
以下の実施例によって、本発明を説明するつもりであるが、本発明は限定されない。
【００５３】
（実施例１）
ジクロロメタン中で、ナトリウムメトキシドのメタノール溶液を使用して、ＩＩをＩＩＩと反応させることによって、粗アスタキサンチン溶液を生成した（Helv. Chim. Acta 64, 7, 2445 (1981)参照）。その溶液は、４．５６重量％のアスタキサンチン（ＨＰＬＣ分析）と０．８重量％のメタノール（ＧＣ分析）、及び０．５５重量％の水（カールフィッシャー滴定）も含んでいた。
【００５４】
この溶液９８２ｇ（アスタキサンチン７５ｍｍｏｌと同等）を装入した。大気圧下で、３５０ｍｌの溶媒をＮｏｒｍａｇカラムヘッドで留去した。留出物の上方の水性相を分離し、下方の層を１７５ｇの水で洗浄した。それらの相を分け、下方の有機相を蒸留ボトムに再循環した。
【００５５】
この手順をさらに二回繰り返した。その次に、３５０ｍｌの溶媒を大気圧下で留去した。残った蒸留残留物は、もはやメタノールを含んでいなかった。その含水率は、０．０５１重量％であった。
【００５６】
２０℃で、２１．３６ｇ（２７０ｍｍｏｌ）のピリジンを蒸留残留物に添加した。その次に、２０℃で、３４．９２ｇ（２２５．０ｍｍｏｌ）の塩化メチルスクシノイル（４−クロロ−４−オキソ酪酸メチル）を、３０分の間に滴下した。さらに、反応混合物を、２０〜２５℃で３時間撹拌した。次いで、１００ｍｌの水を添加することによって、反応混合物を加水分解した。水性相を分離し、有機相を、各回１００ｍｌの水で二回洗浄した。その次に、ジクロロメタンを、Ｎｏｒｍａｇカラムヘッドを介して留去した。転移温度が６５℃に達するまで、留出物をメタノールと同時交換した（等容法）。混合物を３００ｍｌの水と混合し、さらに、固有圧力下で、１００℃で４時間撹拌し、１０℃に冷却し、１０℃で１時間撹拌することにより抽出した。析出生成物を濾過し、各回５０ｍｌの冷えた（１０℃の）メタノールで二回洗浄し、真空乾燥キャビネット内で、１０ｍｂａｒ以下で、５０℃で、一晩中乾燥させた。
【００５７】
サンプルの重量：５２．５ｇのＡｘ−ＤＭＤＳ（粗溶液中のアスタキサンチンに対して８４．９％）
ｍ．ｐ．：１１５〜１１７℃
純度：９４．６％（ＨＰＬＣ面積％）