(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＩｄｅＳポリペプチド、又はＩｄｅＳポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む、病原性ＩｇＧ抗体によって仲介される疾患又は状態の治療用又は予防用医薬品組成物であって、前記疾患又は状態が、自己免疫疾患、移植拒絶反応、又は後天性血友病である、上記医薬品組成物。
【請求項２】
前記自己免疫疾患が、アジソン病、円形脱毛症、強直性脊椎炎、抗リン脂質症候群、再生不良性貧血、自己免疫性胃炎、自己免疫性難聴、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性肝炎、自己免疫性副甲状腺機能低下症、自己免疫性下垂体炎、自己免疫性内耳疾患、自己免疫性リンパ球増殖性症候群、自己免疫性心筋炎、自己免疫性卵巣炎、自己免疫性精巣炎、自己免疫性多腺性内分泌障害、ベーチェット病、類天疱瘡、心筋症、慢性炎症性脱髄性多発神経障害、チャーグ・ストラウス症候群、セリアック病、クローン病、クレスト症候群、デゴース病、後天性表皮水疱症、本態性混合型クリオグロブリン血症、巨細胞性動脈炎、糸球体腎炎、グッドパスチャー症候群、グレーブス病、ギラン・バレー症候群、橋本甲状腺炎、特発性血小板減少性紫斑病、炎症性腸疾患、川崎病、メニエール症候群、混合性結合組織病、モーレン潰瘍、多発性硬化症、重症筋無力症、落葉状天疱瘡、尋常性天疱瘡、悪性貧血、結節性多発動脈炎、多腺性自己免疫症候群１型（ＰＡＳ−１）、多腺性自己免疫症候群２型（ＰＡＳ−２）、多腺性自己免疫症候群３型（ＰＡＳ−３）、多発筋炎／皮膚筋炎、原発性胆汁性肝硬変症、乾癬、乾癬性関節炎、レイノー症候群、ライター症候群、関節リウマチ、類肉腫症、強皮症、シェーグレン症候群、亜急性甲状腺炎、交感性眼炎、全身性エリテマトーデス、高安動脈炎、１型糖尿病、白斑症、フォークト・小柳・原田病、又はウェゲナー肉芽腫症である、請求項１に記載の医薬品組成物。
【請求項３】
前記ＩｄｅＳポリペプチドが、
（ａ）配列番号１のアミノ酸配列、
（ｂ）配列番号１の前記アミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有し、且つＩｇＧシステインプロテアーゼ活性を有するその変異体、又は
（ｃ）ＩｇＧシステインプロテアーゼ活性を有し、かつ配列番号１の残基（Ｌｙｓ−５５、Ｃｙｓ−６５、Ｈｉｓ−２３３、Ａｓｐ−２５５及びＡｓｐ−２５７）のそれぞれを含む、それらのいずれかの配列の断片
を含む、請求項１又は２に記載の医薬品組成物。
【請求項４】
前記ポリペプチドが配列番号１に示される配列からなる、請求項３に記載の医薬品組成物。
【請求項５】
前記ポリヌクレオチドが、
（ａ）配列番号３のコード配列、
（ｂ）遺伝コードの結果として、（ａ）に定義された前記配列と縮重している配列、
（ｃ）（ａ）又は（ｂ）に定義された配列に少なくとも８０％の同一性を有し、且つＩｇＧシステインプロテアーゼ活性を有するポリペプチドをコードする配列、又は
（ｄ）ＩｇＧシステインプロテアーゼ活性を有するポリペプチドをコードする、（ａ）、（ｂ）、又は（ｃ）に定義された配列の任意の１つの配列の断片であって、配列番号３のコード配列長のうち５、１０又は１５残基までの分で欠失している、上記断片
を含む、請求項１又は２に記載の医薬品組成物。
【請求項６】
前記ポリヌクオチドが配列番号３に示される核酸配列からなる、請求項５に記載の医薬品組成物。
【請求項７】
前記自己免疫疾患が、関節リウマチである、請求項１〜６のいずれか一項に記載の医薬品組成物。
【請求項８】
前記自己免疫疾患が、全身性エリテマトーデスである、請求項１〜６のいずれか一項に記載の医薬品組成物。
【請求項９】
前記移植拒絶反応が、同種移植片拒絶反応又は異種移植片拒絶反応である、請求項１〜６のいずれか一項に記載の医薬品組成物。
【請求項１０】
病原性ＩｇＧ抗体によって仲介される疾患又は状態の患者から採取した血液をｅｘ  ｖｉｖｏで処理するための組成物であって、前記組成物が、ＩｄｅＳポリペプチドを含み、前記疾患又は状態が、自己免疫疾患、移植拒絶反応、又は後天性血友病である、上記組成物。
【請求項１１】
病原性ＩｇＧ抗体によって仲介される疾患又は状態の患者に投与するための血液製剤を製造する方法であって、前記患者から採取した血液をｅｘ  ｖｉｖｏでＩｄｅＳポリペプチドと接触させることを含み、前記疾患又は状態が、自己免疫疾患、移植拒絶反応、又は後天性血友病である、上記方法。
【請求項１２】
前記自己免疫疾患が、アジソン病、円形脱毛症、強直性脊椎炎、抗リン脂質症候群、再生不良性貧血、自己免疫性胃炎、自己免疫性難聴、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性肝炎、自己免疫性副甲状腺機能低下症、自己免疫性下垂体炎、自己免疫性内耳疾患、自己免疫性リンパ球増殖性症候群、自己免疫性心筋炎、自己免疫性卵巣炎、自己免疫性精巣炎、自己免疫性多腺性内分泌障害、ベーチェット病、類天疱瘡、心筋症、慢性炎症性脱髄性多発神経障害、チャーグ・ストラウス症候群、セリアック病、クローン病、クレスト症候群、デゴース病、後天性表皮水疱症、本態性混合型クリオグロブリン血症、巨細胞性動脈炎、糸球体腎炎、グッドパスチャー症候群、グレーブス病、ギラン・バレー症候群、橋本甲状腺炎、特発性血小板減少性紫斑病、炎症性腸疾患、川崎病、メニエール症候群、混合性結合組織病、モーレン潰瘍、多発性硬化症、重症筋無力症、落葉状天疱瘡、尋常性天疱瘡、悪性貧血、結節性多発動脈炎、多腺性自己免疫症候群１型（ＰＡＳ−１）、多腺性自己免疫症候群２型（ＰＡＳ−２）、多腺性自己免疫症候群３型（ＰＡＳ−３）、多発筋炎／皮膚筋炎、原発性胆汁性肝硬変症、乾癬、乾癬性関節炎、レイノー症候群、ライター症候群、関節リウマチ、類肉腫症、強皮症、シェーグレン症候群、亜急性甲状腺炎、交感性眼炎、全身性エリテマトーデス、高安動脈炎、１型糖尿病、白斑症、フォークト・小柳・原田病、又はウェゲナー肉芽腫症である、請求項１１に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、自己免疫疾患、移植拒絶反応、術後治療、及び後天性血友病等のＩｇＧ抗体によって仲介される疾患又は状態の治療又は予防のための方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
ＩｄｅＳ（Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  Ｇ−ｄｅｇｒａｄｉｎｇ  ｅｎｚｙｍｅ  ｏｆ  Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ（化膿連鎖球菌の免疫グロブリンＧ分解酵素））は、ヒト病原体の化膿連鎖球菌（Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ）によって産生される細胞外システインプロテアーゼである。ＩｄｅＳは、最初は血清型Ｍ１のＡ群連鎖球菌株から単離されたが、現在ではｉｄｅｓ遺伝子は試験した全てのＡ群連鎖球菌株で同定されている。ＩｄｅｓＳは、非常に高い基質特異性を有しており、その同定された唯一の基質がＩｇＧである。ＩｄｅＳは、ヒトＩｇＧのヒンジ領域下流で単一のタンパク質分解的切断を触媒する。このタンパク質分解は、オプソニン貪食作用の抑制を促進し、且つＡ群連鎖球菌（Ａ．Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）の死滅を妨害する。ＩｄｅＳはまた種々の動物でＩｇＧの一部のサブクラスを切断し、ＩｇＧをＦｃ及びＦａｂ断片に効率的に転換する。このｉｄｅｓ遺伝子は、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）内でクローン化され、ＧＳＴ融合タンパク質として発現された。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００３】
本発明者らは、ＩｄｅＳがＩｇＧ抗体により仲介される疾患の治療及び予防に有益であることを示した。特に本発明は、ＩｄｅＳが関節リウマチ（ＲＡ）の治療に使用可能であることを示した。リウマチを誘発したマウスへのＩｄｅＳ投与は、観察可能な毒性作用を何ら有さず、且つ関節リウマチの進行を完全に防止した。さらに、本発明者らは、ＩｄｅＳの効果が極めて強力であり、ＩｄｅＳが局所効果を有することを示した。
【０００４】
従って、本発明は、ＩｇＧ抗体により仲介される疾患又は状態の治療又は予防のための薬剤の製造における、ＩｄｅＳポリペプチド、又はＩｄｅＳポリペプチドをコードするポリヌクレオチドの使用を提供する。
【０００５】
また本発明は、以下を提供する：
それを必要とする対象において、ＩｇＧ抗体により仲介される疾患又は状態を治療又は予防する方法であって、該対象に、ＩｄｅＳポリペプチド、又はＩｄｅＳポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを治療有効量で投与することを含む方法；及び、
ＩｇＧ抗体により仲介される疾患又は状態の患者から採取した血液をｅｘ  ｖｉｖｏで処置する方法であって、該血液をＩｄｅＳポリペプチドと接触させることを含む方法。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００６】
本発明は、ＩｇＧ抗体により仲介される疾患又は状態を治療又は予防するための方法を提供し、その方法は、対象にＩｄｅＳポリペプチド又はＩｄｅＳポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを投与することを含む。
【０００７】
（ポリペプチド）
ＩｄｅＳポリペプチドは、好ましくは化膿連鎖球菌、ＩｄｅＳ又はシステインプロテアーゼ活性を保持する化膿連鎖球菌ＩｄｅＳの変異体若しくは断片である。変異体は、別の細菌等、別の生物由来のＩｄｅＳポリペプチドでもよい。細菌は、好ましくは連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）である。連鎖球菌は、好ましくはＡ群連鎖球菌、Ｃ群連鎖球菌、又はＧ群連鎖球菌である。特に変異体は、腺疫菌（Ｓ．ｅｑｕｉ）又は溶血性連鎖球菌（Ｓ．ｚｏｏｅｐｉｄｅｍｉｃｕｓ）等のＣ群連鎖球菌由来のＩｄｅＳポリペプチドでよい。或いは、変異体は、プチダ菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｐｕｔｉｄａ）由来でもよい。
ＩｄｅＳポリペプチドは以下を含むことが可能である。
（ａ）配列番号１のアミノ酸配列、
（ｂ）配列番号１のアミノ酸配列に少なくとも５０％の同一性を有し、且つＩｇＧシステインプロテアーゼ活性を有する、その配列の変異体、又は
（ｃ）ＩｇＧシステインプロテアーゼ活性を有する、それらのいずれかの配列の断片。
好ましくは、ポリペプチドは配列番号１の配列を含む、又は該配列からなる。ポリペプチドはさらに、シグナル配列を含んでもよい。従って、ＩｄｅＳポリペプチドは以下を含むことが可能である。
（ａ）配列番号２のアミノ酸配列、
（ｂ）配列番号２のアミノ酸配列に少なくとも５０％の同一性を有し、且つＩｇＧシステインプロテアーゼ活性を有するその変異体、又は
（ｃ）ＩｇＧシステインプロテアーゼ活性を有する、それらのいずれかの配列の断片。
ＩｄｅＳポリペプチドは、配列番号２に示した配列からなることも可能である。
【０００８】
変異ポリペプチド類は、アミノ酸配列が配列番号１又は配列番号２のアミノ酸配列とは異なるが、ＩｄｅＳとして同様の本質的特性又は基本機能を保持しているポリペプチドである。従って、変異ポリペプチド類は、ＩｇＧシステインプロテアーゼ活性を示すことができる。一般に、配列番号１又は配列番号２のアミノ酸配列と約５０％、５５％、又は６５％を超える同一性、好ましくは少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、及び特に好ましくは少なくとも９５％、少なくとも９７％又は少なくとも９９％の同一性を有するポリペプチドは、そのタンパク質の変異体と考えられる。かかる変異体は、ペプチドがＩｄｅＳの基本機能を維持する限り、そのタンパク質配列内にアレル変異、及び単一アミノ酸又はアミノ酸群の欠失、修飾、又は付加を含んでいてもよい。配列番号１又は配列番号２の変異体の同一性は、配列番号１又は配列番号２に示される配列の少なくとも５０、少なくとも７５、少なくとも１００、少なくとも１５０、少なくとも２００、少なくとも２５０、少なくとも２７５、少なくとも３００以上の隣接するアミノ酸の領域で、又はより好ましくは配列番号１又は配列番号２の全長上で測定することができる。
【０００９】
配列番号１又は配列番号２のアミノ酸配列の変異体は、好ましくは配列番号１のＬｙｓ−５５及び／又はＣｙｓ−６５及び／又はＨｉｓ−２３３及び／又はＡｓｐ−２５５及び／又はＡｓｐ−２５７（各々配列番号２のＬｙｓ−８４、Ｃｙｓ−９４、Ｈｉｓ−２６２、Ａｓｐ−２８４、及びＡｓｐ−２８６に対応する）の残基を含んでいる。最も好ましくは、配列番号１又は配列番号２の変異体は、配列番号１のＬｙｓ−５５、Ｃｙｓ−６５、Ｈｉｓ−２３３、Ａｓｐ−２５５及びＡｓｐ−２５７（各々配列番号２のＬｙｓ−８４、Ｃｙｓ−９４、Ｈｉｓ−２６２、Ａｓｐ−２８４、及びＡｓｐ−２８６に対応する）の各残基を含んでいる。
【００１０】
アミノ酸の同一性は、任意の好適なアルゴリズムを用いて計算することができる。例えば、ＵＷＧＣＧパッケージは、相同性を計算する（例えば、そのデフォルト設定で使用する）（Ｄｅｖｅｒｅｕｘら（１９８４）  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  １２，３８７〜３９５）ために使用することが可能なＢＥＳＴＦＩＴプログラムを提供する。例えばＡｌｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．Ｆ．（１９９３）Ｊ  Ｍｏｌ  Ｅｖｏｌ  ３６：２９０〜３００；Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．Ｆ．ら（１９９０）Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ２１５：４０３〜１０に記載のように、ＰＩＬＥＵＰ及びＢＬＡＳＴアルゴリズムを使用して、相同性を計算し、又は配列を並べる（等しい又は対応する配列を同定する（一般的に、デフォルト設定で）ことが可能である。
【００１１】
ＢＬＡＳＴ解析を実行するソフトウェアは、全米バイオテクノロジー情報センター（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／）を介して公的に入手可能である。このアルゴリズムは、データベース配列中の同じ長さのワードとアライメントしたときに、ある正の値の閾値Ｔと適合するか又はそれを満たすかいずれかの、クエリ配列中の長さＷの短いワードを同定することによって、高スコア配列対（ＨＳＰ）を最初に同定することを含む。Ｔは、近隣ワードスコア閾値と称される（Ａｌｔｓｃｈｕｌら、上記参照）。これらの最初の近隣ワードヒットは、検索を開始するためのシードとして作用し、それらを含むＨＳＰを見つけ出す。このワードヒットは、累積アライメントスコアが増加し得る限り、各々の配列に沿って各方向へ伸長させる。累積アライメントスコアがその最大達成値から量Ｘまで減少する場合、１つ又は複数の負のスコアの残基アライメントの累積により累積スコアがゼロ以下になる場合、又はいずれかの配列の末端に達する場合、各方向でこのワードヒットの伸長は停止させる。ＢＬＡＳＴアルゴリズムのパラメータＷ、Ｔ及びＸが、アライメントの感度及び速度を決定する。ＢＬＡＳＴプログラムは、デフォルトとしてワード長（Ｗ）１１、ＢＬＯＳＵＭ６２スコア決定行列５０（Ｈｅｎｉｋｏｆｆ及びＨｅｎｉｋｏｆｆ（１９９２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８９：１０９１５〜１０９１９を参照）アライメント（Ｂ）５０、期待値（Ｅ）１０、Ｍ＝５、Ｎ＝４、及び両鎖の比較を使用する。
【００１２】
ＢＬＡＳＴアルゴリズムは、２つの配列間での類似性の統計解析を行う（例えば、Ｋａｒｌｉｎ及びＡｌｔｓｃｈｕｌ（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：５８７３〜５７８７を参照）。ＢＬＡＳＴアルゴリズムによって提供される類似性の１つの測定値は、最小合計確率（Ｐ（Ｎ））であり、これはポリヌクレオチド又はアミノ酸の２つの配列間で適合が偶発する確率の指標を示す。例えば、第１の配列と第２の配列の比較において、最小合計確率が約１未満、好ましくは約０．１未満、より好ましくは約０．０１未満、及び最も好ましくは約０．００１未満である場合、第１の配列は第２の配列に類似していると考えられる。
【００１３】
変異配列は一般に、少なくとも１、２、５、１０、２０、３０、５０個以上の変異（これらは、アミノ酸の置換、欠失、又は挿入であってよい）によって異なる。例えば、１から５０個、２から３０個、３から２０個、又は５から１０個のアミノ酸置換、欠失、又は挿入がなされることもある。修飾されたポリペプチドは通常、ＩｇＧ特異的システインプロテアーゼとして活性を保持する。置換は、好ましくは保存的置換、例えば以下の表による置換である。２列目の同じブロック内及び好ましくは３列目の同じ行内のアミノ酸は相互置換が可能である。
【表１】
0005427409.tif 000002
【００１４】
ＩｄｅＳの変異体を提供することは可能であり、ここで、触媒ドメイン内での変異により、タンパク質のシステインプロテアーゼ活性がなくなる。かかる変異体は、配列番号１の部位６５（配列番号２の部位９４）で触媒システイン残基の置換又は欠失を含むことができる。例えば、システインは、グリシンと置換可能である。本発明はまた、かかる変異ＩｄｅＳの断片の変異体に関するが、この変異体は、ＩｇＧシステインプロテアーゼ活性を示す際にＩｄｅＳ機能を維持している。
【００１５】
好ましくはこのポリペプチドは、システインプロテアーゼに一般に見られる間隔でシステイン残基及びヒスチジン残基を含む。例えば、配列番号１ではこれらの残基は、一般にシステインプロテアーゼで見られるように、約１３０のアミノ酸の間隔で見られる。
【００１６】
本発明で使用されるＩｄｅＳポリペプチドの断片は、ＩｄｅＳのＩｇＧシステインプロテアーゼ活性を保持している限り、一般に少なくとも１０、例えば少なくとも１５、２０、２５、３０、４０、５０以上のアミノ酸長で、１００、１５０、２００、２５０、又は３００までのアミノ酸長である。好ましくは、本発明で使用されるＩｄｅＳポリペプチドの断片は、配列番号１の残基Ｌｙｓ−５５及び／又はＣｙｓ−６５及び／又はＨｉｓ−２３３及び／又はＡｓｐ−２５５及び／又はＡｓｐ−２５７（各々、配列番号２のＬｙｓ−８４、Ｃｙｓ−９４、Ｈｉｓ−２６２、Ａｓｐ−２８４、及びＡｓｐ−２８６に対応する）を含む。最も好ましくは、この断片は、配列番号１の各々の残基Ｌｙｓ−５５、Ｃｙｓ−６５、Ｈｉｓ−２３３、Ａｓｐ−２５５、及びＡｓｐ−２５７（各々、配列番号２のＬｙｓ−８４、Ｃｙｓ−９４、Ｈｉｓ−２６２、Ａｓｐ−２８４、及びＡｓｐ−２８６に対応する）を含む。
【００１７】
本発明で使用されるポリペプチドは、例えば翻訳後修飾等、化学的に修飾することが可能である。例えば、これらのポリペプチドは、グリコシル化、リン酸化することも可能であり、又は修飾アミノ酸残基を含むことも可能である。これらのポリペプチドは、その精製を助けるためにヒスチジン残基を付加することによって、又は細胞膜への挿入を促進するためにシグナル配列を付加することによって修飾することも可能である。かかる修飾ポリペプチドは、本明細書で使用される用語「ポリペプチド」の範囲に含まれる。
【００１８】
一般に、本発明に従って使用するポリペプチドは、免疫グロブリンシステインプロテアーゼ活性、及び特にＩｇＧシステインプロテアーゼ活性を示す。好ましくは、このポリペプチドはヒンジ領域で、より詳細には重鎖のヒンジ領域でＩｇＧを切断する。好ましくは、切断はＩｇＧのＦｃ及びＦａｂ断片の生成をもたらす。好ましくは、この活性はＩｇＧに特異的である。システインプロテアーゼ活性は、適切なアッセイによって決定されることができる。例えば、試験ポリペプチドを、３７℃等の適切な温度でＩｇＧと共にインキュベートすることができる。次いで、出発物質及び反応生成物をＳＤＳ  ＰＡＧＥによって分析し、望ましいＩｇＧ切断産物が存在しているかを決定することができる。一般に、この切断産物は、３１ｋＤａ断片である。一般に、この最初の切断後にＩｇＧがさらに分解されることはない。この切断産物を、Ｎ末端配列決定法にかけて、切断がＩｇＧのヒンジ領域で生じたことを確認することもできる。好ましくは、このＮ末端配列は、配列番号８の配列を含む。
【００１９】
ポリペプチドのシステインプロテアーゼ活性は、阻害研究によってさらに特徴付けることができる。好ましくは、この活性を、いずれもプロテアーゼ阻害剤であるペプチド誘導体Ｚ−ＬＶＧ−ＣＨＮ２及び／又はヨード酢酸によって阻害する。しかし、この活性は通常、Ｅ６４では阻害されない。
【００２０】
ポリペプチドのシステインプロテアーゼ活性は通常、次の点においてＩｇＧ特異的である。ポリペプチドは、ＩｇＧを切断できる条件下でＩｇの他のクラス、すなわちＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、及びＩｇＥと共にインキュベートした場合、これらの免疫グロブリンを分解できない。ＩｄｅＳポリペプチドは、治療される対象内に存在するＩｇＧ分子を切断することが可能である。従って、対象がヒトの場合には、ＩｄｅＳポリペプチドはヒトＩｇＧを切断することができる。好適な実施形態では、ポリペプチドはヒト、ウサギ、マウス、又はヤギのＩｇＧを切断することができる。
【００２１】
本発明で使用するポリペプチドは、実質的に単離された形態であってよい。このポリペプチドの意図した目的を妨げない担体又は希釈剤と、このポリペプチドを混合でき、この場合も、依然として実質的に単離された状態として見なされ得ると理解されよう。本発明で使用するポリペプチドは、また実質的に精製された形態であってよく、この場合、通常、調製物中のポリペプチドの重量の５０％を超える、例えば８０％、９０％、９５％、又は９９％を超えるものが、本発明のポリペプチドである。本発明中のポリペプチドである調製物中のポリペプチドを含む。
【００２２】
本発明で使用するポリペプチドは、ＩｄｅＳポリペプチドを発現する適切な任意の生物から単離することが可能である。一般に、ＩｄｅＳポリペプチドは、ＩｄｅＳを発現する適切な化膿連鎖球菌株から単離される。適切な生物及び菌株は、いくつかの方法によって同定することができる。例えば、化膿連鎖球菌株を最初に、ｉｄｅｓ遺伝子の存在について調べることができる。ポリヌクレオチドプライマー又はプローブを、例えば配列番号１、２、又は３に基づいてデザインすることもできる。適切なプライマーの例を、配列番号４、５、６、及び７に示す。次いで、ｉｄｅｓ遺伝子の存在を、それらのプライマーを用いるＰＣＲによって、又は化膿連鎖球菌株のゲノムＤＮＡへのプローブのハイブリダイゼーションによって確認することができる。
【００２３】
活性ＩｄｅＳを発現する化膿連鎖球菌株は、培養上清中のＩｇＧシステインプロテアーゼ活性を定量することによって同定できる。好ましくは、阻害剤Ｅ６４をその上清に加え、ＳｐｅＢシステインプロテアーゼ活性を阻害する。少なくとも５つの菌株、すなわち、ＡＰ１、ＡＰ１２，ＡＰ５５、ＫＴＬ３、及びＳＰ３７０が活性なＩｄｅＳを発現する。好ましくはこの発現菌株を、ＡＰ１、ＡＰ１２、及びＡＰ５５から選択する。
【００２４】
発現化膿連鎖球菌培養物から、又は他のＩｄｅＳ発現細胞の培養物からのＩｄｅＳの単離及び精製は、一般にＩｇＧシステインプロテアーゼ活性に基づいている。好ましくは、この精製方法は、硫酸アンモニウム沈澱ステップ及びイオン交換クロマトグラフィーステップを含む。一つの方法によると、硫酸アンモニウム量を次第に増加させて添加することによって、培養培地と分画する。硫酸アンモニウムの量は、１０〜８０％でよい。好ましくは培養培地を５０％硫酸アンモニウムを用いて分画し、さらに生じる上清を７０％硫酸アンモニウムで沈澱させる。次いで、ペレット状のポリペプチドを、例えばモノＱカラム上のＦＰＬＣによるイオン交換クロマトグラフィーにかけることができる。溶出した画分を、ＩｇＧシステインプロテアーゼ活性について測定し、ピーク活性画分をプールすることができる。画分をＳＤＳ  ＰＡＧＥによって分析することができる。例えば、Ｎ末端配列をＳＤＳ  ＰＡＧＥタンパク質バンドから得ることもできる。画分を−２０℃で保管することができる。
【００２５】
本発明で使用するポリペプチドはまた、そのように単離したポリペプチドの断片として調製することも可能である。さらに、ＩｄｅＳポリペプチドを合成的に、又は組換え手段によって生成することも可能である。例えば、適切なコントロール配列に操作可能に連結されたポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む発現ベクターを用いて培養哺乳類細胞にトランスフェクトし、その細胞を培養し、その細胞によって産生されるＩｄｅＳポリペプチドを抽出及び精製することによって、組換えＩｄｅＳポリペプチドを生成することができる。
【００２６】
本発明で使用するポリペプチドのアミノ酸配列を修飾して、非天然アミノ酸を含める、又はその化合物の安定性を増加させることができる。ポリペプチドを合成手段によって生成する場合、かかるアミノ酸は生成中に導入することが可能である。このポリペプチドはまた、以下の合成又は組換えによる生成のいずれかの後に修飾することができる。
【００２７】
本発明で使用するポリペプチドはまた、Ｄ−アミノ酸を用いて生成することができる。このような場合、アミノ酸はＣからＮ方向に逆順で連結させる。これは、かかるポリペプチドを生成するための当技術分野での慣行である。
【００２８】
いくつかの側鎖修飾は当技術分野で周知であり、ポリペプチドがＩｇＧシステインプロテアーゼ活性を保持することを条件に、ＩｄｅＳポリペプチドの側鎖に実施することができる。
【００２９】
（ポリヌクレオチド）
ＩｄｅＳポリペプチドをコードするポリヌクレオチド又は変異体は、病原性ＩｇＧ抗体によって仲介される疾患又は状態を治療又は予防するために用いることができる。特に、ポリヌクレオチドは以下を含む、又は以下からなることができる。（ａ）配列番号３のコード配列；（ｂ）遺伝コードの結果として（ａ）に定義された配列と縮重している配列；（ｃ）（ａ）又は（ｂ）に定義された配列と少なくとも６０％の同一性を有し、且つＩｇＧシステインプロテアーゼ活性を有するポリペプチドをコードする配列；又は（ｄ）ＩｇＧシステインプロテアーゼ活性を有するポリペプチドをコードする、（ａ）、（ｂ）、又は（ｃ）に定義された配列のいずれか１つの断片。
【００３０】
一般に、ポリヌクレオチドはＤＮＡである。しかし、このポリヌクレオチドは、ＲＮＡポリヌクレオチドでもよい。ポリヌクレオチドは一本鎖又は二本鎖でもよく、その中に合成又は修飾ヌクレオチドが含まれていてもよい。
【００３１】
本発明のポリヌクレオチドは一般に、配列番号３のコード配列に、又はコード配列の相補配列に、バックグラウンドよりかなり上のレベルでハイブリダイズすることができる。バックグラウンドハイブリダイゼーションは、例えば、ＤＮＡライブラリーに存在する他のＤＮＡが原因で起こることもある。本発明のポリヌクレオチドと配列番号３のコード配列又はそのコード配列の相補配列との間の相互作用によって生成されるシグナルレベルは他のポリヌクレオチドと配列番号３のコード配列との間の相互作用の、一般に少なくとも１０倍、好ましくは少なくとも１００倍である。相互作用の強度は、例えば、プローブを例えば３２Ｐで放射標識することによって、測定することができる。選択的ハイブリダイゼーションは、一般に中程度から高いストリンジェンシーの条件を用いて達成することができる。しかし、かかるハイブリダイゼーションは、当技術分野で周知のあらゆる適切な条件（Ｓａｍｂｒｏｏｋら，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，１９８９参照）下で実施することができる。例えば、高い厳密性が求められる場合、適切な条件は、６０℃から６５℃までで０．１〜０．２×ＳＳＣを含む。より低い厳密性が求められる場合、適切な条件は、６０℃で２×ＳＳＣを含む。
【００３２】
配列番号３のコード配列は、ヌクレオチド置換、例えば１、２、又は３から１０、２５、５０、又は１００個の置換によって修飾することができる。配列番号３のポリヌクレオチドは、代わりに又は追加的に、１つ又は複数の挿入及び／又は欠失によって、並びに／或いはいずれかの末端又は両末端での伸長によって修飾することができる。シグナル配列等の付加配列も、含まれることがある。修飾されたポリヌクレオチドは通常、ＩｇＧ特異的システインプロテアーゼ活性を有するポリペプチドをコードする。修飾された配列が、例えば上記の表に示されるように翻訳される場合、縮重置換、及び／又は置換がなされることがあり、それにより保存的アミノ酸置換が生じる。
【００３３】
配列番号３のＤＮＡコード配列の相補配列と選択的にハイブリダイズすることが可能なヌクレオチド配列は、通常、少なくとも２０個、好ましくは少なくとも３０個、例えば少なくとも４０個、少なくとも６０個、より好ましくは少なくとも１００個の隣接ヌクレオチドの領域上で、又は最も好ましくは配列番号３の全長又は配列番号１に示される配列を有するポリペプチドをコードする配列番号３の長さ上で、配列番号３のコード配列と少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有する。配列同一性は、任意の適切な方法、例えば上記記載の方法によって決定することができる。
【００３４】
上記記載の配列同一性の程度と最小サイズとの任意の組み合わせは、本発明のポリヌクレオチドを定義するために、より厳密な組み合わせ（例えば、より長い長さ上でより高い配列同一性）で用いることができる。従って、例えば２０個、好ましくは３０個のヌクレオチド上で少なくとも９０％の配列同一性を有するポリヌクレオチドは、４０個のヌクレオチド上で少なくとも９５％の配列同一性を有するポリヌクレオチドと同様に本発明の１つの態様を形成する。
【００３５】
ポリヌクレオチド断片は、好ましくは少なくとも１０、好ましくは少なくとも１５、又は少なくとも２０、例えば少なくとも２５、少なくとも３０、又は少なくとも４０ヌクレオチド長となるであろう。これらは一般に、４０、５０、６０、７０、１００、又は１５０ヌクレオチド長までとなるであろう。断片は、１５０ヌクレオチド長よりも長くてもよく、例えば２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、又は１０００ヌクレオチド長までであってもよく、又は配列番号３のコード配列のうち、５、１０、又は１５ヌクレオチドといった少数のヌクレオチドまでの分で欠失していてさえもよい。
【００３６】
本発明で使用するポリヌクレオチドは、組換え、合成、又は当業者にとって利用可能な任意の方法で生成することができる。このポリヌクレオチドは、また標準的な方法によってクローン化が可能である。ポリヌクレオチドは一般に単離された及び／又は精製された形態で提供される。
【００３７】
通常、短いポリヌクレオチドは、所望の核酸配列を１ヌクレオチドずつ段階的に製造することを含む、合成方法によって生成される。自動化方法を用いてこれを達成する方法は、当技術分野で容易に利用可能である。
【００３８】
長いポリヌクレオチドは通常、組換え手段、例えばＰＣＲ（ポリメラーゼ連鎖反応）クローニング法を用いて生成される。これは、クローン化したいｉｄｅｓ遺伝子の領域に対してプライマー対（例えば、約１５〜３０のヌクレオチド）を作製することと、そのプライマーを細菌性細胞から採取したＤＮＡと接触させることと、所望の領域の増幅をもたらす条件下でポリメラーゼ鎖反応を実行することと、増幅断片を単離する（例えば、アガロースゲル上で反応混合物を精製することによって）ことと、増幅断片を回収することとを含む。このプライマーを、増幅ＤＮＡを適切なクローニングベクターにクローン化できるよう、適切な制限酵素認識部位を含むように設計することができる。適切なプライマーは、例えば配列番号４、５、６、又は７のプライマーである。
【００３９】
かかる方法は、本明細書に記載されたｉｄｅｓ遺伝子配列の全て又は部分を得るために使用することができる。通常、本明細書に記載された方法は、当技術分野で周知であるが、特にＳａｍｂｒｏｏｋら（１９８９）を参照することができる。
【００４０】
本明細書に記載されたＩｄｅＳポリヌクレオチドは、本発明で使用するポリペプチドの生成において有用性を有しており、それはｉｎ  ｖｉｔｒｏ、ｉｎ  ｖｉｖｏ、又はｅｘ  ｖｉｖｏで起こり得る。このポリヌクレオチドを、それ自体で治療薬として用いることも可能であり、又は組換えタンパク質合成に含めることも可能である。
【００４１】
本発明で使用するポリヌクレオチドは一般に、複製可能な組換えベクターに組み込まれる。このベクターは、適合性の宿主細胞内で核酸を複製するために使用することができる。従って、本発明で使用されるポリヌクレオチドは、ＩｄｅＳポリヌクレオチドを複製可能なベクターに導入し、そのベクターを適合性の宿主細胞に導入し、及びベクターの複製をもたらす条件下でその宿主細胞を生育させることにより作製することができる。
【００４２】
好ましくはこのベクターは、ＩｄｅＳポリペプチドをコードする核酸配列を含む発現ベクターである。かかる発現ベクターは、分子生物の当技術分野で日常的に構築され、且つ例えばプラスミドＤＮＡ及び適切なイニシエーター、プロモーター、エンハンサー、並びに他の要素、例えばタンパク質発現を可能にするために必要なことがあり、正しい方向に位置する、ポリアデニル化シグナル等の使用を含むことがある。他の適切なベクターは、当業者にとって明らかである。これについてはさらなる例で、Ｓａｍｂｒｏｏｋら（１９８９）を参照する。
【００４３】
好ましくは、ベクター内の本発明で使用するポリヌクレオチドは、宿主細胞によってコード配列の発現を提供することが可能なコントロール配列に操作可能に連結され、すなわち、ベクターは発現ベクターである。用語「操作可能に連結された」とは、記載された成分が各意図された方法で機能することを可能にする関係にある近位を呼ぶ。コード配列に「操作可能に連結された」プロモーター等の制御配列は、コード配列の発現が制御配列と適合性をもつ条件下で達成されるように位置させる。
【００４４】
ベクターは、例えば複製起点、任意選択で上記ポリヌクレオチドの発現のためのプロモーター、及び任意選択でそのプロモーターの制御因子を備えるプラスミド、ウイルス又はファージベクターであってよい。このベクターは一般に、ｉｎ  ｖｉｖｏ使用に適している。
【００４５】
プロモーター及び他の発現制御シグナルは、その発現が設計される宿主細胞と適合性をもつように選択することができる。β−アクチンプロモーター等の哺乳類プロモーターを用いることができる。特に組織特異的プロモーターが好ましい。ウイルスプロモーターもまた、例えばモロニー（Ｍｏｌｏｎｅｙ）マウス白血病ウイルスの長い末端反復配列（ＭＭＬＶ  ＬＴＲ）、ラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）ＬＴＲプロモーター、ＳＶ４０プロモーター、ヒトサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）ＩＥプロモーター、アデノウイルス、ＨＳＶプロモーター（ＨＳＶ  ＩＥプロモーター等）、又はＨＰＶプロモーター、特にＨＰＶ上流調節領域（ＵＲＲ）が使用可能である。ウイルスプロモーターは当技術分野で容易に入手可能である。
【００４６】
ベクターは、さらに真核ゲノム配列、好ましくは哺乳類ゲノム配列に相同の配列を含むポリヌクレオチドを生じさせるポリヌクレオチドに隣接する配列を含むことができる。これは、相同組換えにより本発明のポリヌクレオチドを真核細胞のゲノムへ導入することを可能にする。特に、ウイルス配列によって隣接された発現カセットを含むプラスミドベクターを用いて、本発明のポリヌクレオチドを哺乳類細胞に送達するのに適切なウイルスベクターを作製することができる。ウイルスベクターの適切な他の例は、単純ヘルペスウイルスベクター及びレトロウイルスを含み、レンチウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、及びＨＰＶウイルスが含まれる。これらのウイルスを用いる遺伝子移入技術は、当業者には周知のことである。例えばレトロウイルスベクターは、ポリヌクレオチドを宿主ゲノム中に生じさせるポリヌクレオチドを安定に組み込むために用いることができる。一方、複製欠損アデノウイルスベクターは、エピソームのままであり、従って一時的発現が可能である。
【００４７】
（疾患及び状態）
ＩｄｅＳポリペプチド又はポリヌクレオチドは、病原性ＩｇＧ抗体によって仲介される疾患又は状態を治療、又は予防するために使用することができる。病原性ＩｇＧ抗体が多数の異なる疾患及び状態の発病に関与していることは当技術分野で周知のことである。本発明者らは、かかる疾患での病原性ＩｇＧ抗体の役割をＩｄｅＳポリペプチド又はポリヌクレオチドを用いて阻害できることを発見した。
【００４８】
この疾患又は状態は自己免疫疾患であり得る。かかる疾患は、アジソン病、円形脱毛症、強直性脊椎炎、抗リン脂質症候群、再生不良性貧血、自己免疫性胃炎、自己免疫性難聴、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性肝炎、自己免疫性副甲状腺機能低下症、自己免疫性下垂体炎、自己免疫性内耳疾患、自己免疫性リンパ球増殖性症候群、自己免疫性心筋炎、自己免疫性卵巣炎、自己免疫性精巣炎、自己免疫性多腺性内分泌障害、ベーチェット病、類天疱瘡、心筋症、慢性炎症性脱髄性多発神経障害、チャーグ・ストラウス症候群、セリアック病、クローン病、クレスト症候群、デゴース病、後天性表皮水疱症、本態性混合型クリオグロブリン血症、巨細胞性動脈炎、糸球体腎炎、グッドパスチャー症候群、グレーブス病、ギラン・バレー症候群、橋本甲状腺炎、特発性血小板減少性紫斑病、炎症性腸疾患、川崎病、メニエール病、混合性結合組織病、モーレン潰瘍、多発性硬化症、重症筋無力症、落葉状天疱瘡、尋常性天疱瘡、悪性貧血、結節性多発動脈炎、多腺性自己免疫症候群１型（ＰＡＳ−１）、多腺性自己免疫症候群２型（ＰＡＳ−２）、多腺性自己免疫症候群３型（ＰＡＳ−３）、多発筋炎／皮膚筋炎、原発性胆汁性肝硬変症、乾癬、乾癬性関節炎、レイノー症候群、ライター症候群、関節リウマチ、類肉腫症、強皮症、シェーグレン症候群、亜急性甲状腺炎、交感性眼炎、全身性エリテマトーデス、高安動脈炎、１型糖尿病、白斑症、フォークト・小柳・原田病、又はウェゲナー肉芽腫症を含む。好ましくは、自己免疫疾患は関節リウマチ（ＲＡ）である。
【００４９】
疾患又は状態は、喘息であり得る。喘息は、急性又は慢性喘息であり得る。
【００５０】
ＩｇＧは、補体系の古典経路を活性化する。従って、ＩｄｅＳポリペプチド及びポリヌクレオチドは、補体活性が患者にとって有害である疾患及び状態を治療するために使用することが可能である。例えば、ＩｄｅＳポリペプチド及びポリヌクレオチドは、移植由来の障害、例えば移植拒絶反応（同種移植片拒絶反応及び異種移植片拒絶反応等）、及び移植片対宿主病を治療するために用いることができる。移植由来の障害は、患者の組織又は臓器の移植に起因して生じることがある。
【００５１】
ＩｄｅＳポリペプチド及びポリヌクレオチドはまた、術後治療、例えば心臓バイパス手術を受けた患者の治療に有用である。
【００５２】
さらに、ＩｄｅＳポリペプチド及びポリヌクレオチドは、後天性血友病の治療のため、すなわち凝固因子に対する自己抗体が発生した血友病患者のＩｇＧを除去するために用いることも可能である。
【００５３】
対象は一般に、マウス、ラット、又は霊長類（例えば、マーモセット又はサル）等の哺乳類対象である。対象は、ヒト又は非ヒト動物でもあり得る。対象がマウス、ラット、又は霊長類等の実験動物である場合、その動物は病原体ＩｇＧ抗体によって仲介された疾患又は状態を誘発するよう処置することができる。例えば、Ｎａｎｄａｋｕｍａｒら（Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．１６３（５）：１８２７〜１８３７，２００３）によって記述された、マウス抗ＣＩＩ抗体誘導関節炎（ＣＡＩＡ）モデル、又は本実施例に記載したモデルの改変版を使用できる。
【００５４】
（治療法及び予防法）
本発明は、病原体ＩｇＧ抗体によって仲介される疾患又は状態を治療、又は予防するために、ＩｄｅＳポリペプチド及びポリヌクレオチドの使用を提供する。治療法は、治療的又は予防的なものであってよい。
【００５５】
ＩｄｅＳポリペプチド又はポリヌクレオチドは、疾患又は状態の１つ又は複数の症状の発症を予防するために個体に投与することができる。本実施形態では、対象は無症候であり得る。対象は、疾患に対して遺伝的要因を有していることがある。ポリペプチド又はポリヌクレオチドの予防的有効量をかかる個体に投与する。予防的有効量は、疾患又は状態の１つ又は複数の症状の発症を予防する量である。
【００５６】
ＩｄｅＳポリペプチド又はポリヌクレオチドの治療有効量は、疾患又は状態の１つ又は複数の症状を改善するのに効果的な量である。好ましくは治療される個体は、ヒトである。
【００５７】
ＩｄｅＳポリペプチド又はポリヌクレオチドは、任意の適切な手段により対象に投与することができる。ポリペプチド又はポリヌクレオチドは、経腸によって、又は口腔内、頬側、経肛門、経肺、静脈内、動脈内、筋肉内、腹腔内、関節内、局所的又は他の適切な投与経路等の非経口により投与することができる。
【００５８】
ＩｄｅＳポリペプチド又はポリヌクレオチドは、特定部位への標的治療に応じてかかる方法で対象に投与することができる。例えば、ＩｄｅＳポリペプチドを移植臓器の部位に直接投与することも可能である。ＩｄｅＳポリペプチドを、例えば関節内、又は１つ若しくは複数の関節に局所的に注入してもよい。ＩｄｅＳの関節への局所的投与は、特に関節リウマチ（ＲＡ）の予防又は治療にとって好ましい。ＩｄｅＳポリペプチドを、軟骨に特異的に結合する試薬と抱合型にしてもよい。ＩｄｅＳポリヌクレオチドにとって、ＩｄｅＳポリペプチドをコードする発現ベクターを用いて、例えば組織特異的プロモーター又はＲＮＡｉを用いることによってＩｄｅＳの発現を特定組織に指示することが可能である。
【００５９】
本明細書に記述した任意のポリペプチド及びポリヌクレオチドの製剤は、ポリペプチド又はポリヌクレオチドの性質及び治療される状態等の要素に依存する。ポリペプチド又はポリヌクレオチドを様々な製剤で投与することができる。経口的に（例えば錠剤、トローチ剤、ロゼンジ剤、水性又は油性懸濁剤、分散性粉末又は顆粒）、非経口的に、皮下に、静脈内に、筋肉内に、胸骨内に、経皮的に、又は種々の注入方法によって投与してもよい。ポリペプチド又はポリヌクレオチドをまた座薬として投与してもよい。医師は、各々特定の患者に対して所要の投与経路を決定できる。
【００６０】
一般にポリペプチド又はポリヌクレオチドは、医薬的に許容される担体又は希釈剤と共に使用するために製剤化され、これは製薬業界で通例の方法を用いて施行することができる。医薬品担体又は希釈剤は、例えば等張液でもよい。例えば、固形の経口剤型は、活性化合物と共に、例えば乳糖、ブドウ糖、ショ糖、セルロース、トウモロコシデンプン若しくはジャガイモデンプン等の希釈剤；例えばシリカ、タルク、ステアリン酸、マグネシウム若しくはステアリン酸カルシウム、及び／又はポリエチレングリコール等の潤滑剤；例えばデンプン、アラビアゴム、ゼラチン、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、又はポリビニルピロリドン等の結合剤；例えばデンプン、アルギン酸、アルギン酸塩又はデンプングリコール酸ナトリウム等の脱凝集剤；発泡混合物；染料；甘味料；例えばレシチン、ポリソルベート、ラウリル硫酸塩等の湿潤剤；並びに通常、製薬製剤で使用される非毒性で薬理的に不活性な物質を含有することができる。かかる医薬品製剤は、既知の方法で、例えば混合工程、造粒工程、打錠工程、シュガーコーティング、又はフィルムコーティングの工程によって製造することができる。
【００６１】
経口投与のための分散液は、シロップ剤、乳剤、及び懸濁剤であってよい。シロップ剤は、担体として例えば、サッカロース或いは、グリセリン及び／又はマンニトール及び／又はソルビトールと共にサッカロースを含有することができる。
【００６２】
懸濁剤及び乳剤は、担体として例えば、天然ゴム、寒天、アルギン酸ナトリウム、ペクチン、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、又はポリビニルアルコールを含有する。筋肉注射用の懸濁剤又は液剤は、活性化合物と共に、薬学的に許容される担体例えば滅菌水、オリーブオイル、オレイン酸エチル、例えばプロピレングリコール等のグリコール、及び必要に応じて適当量の塩酸リドカインを含有することができる。
【００６３】
静脈内又は注入用の液剤は、担体として例えば滅菌水を含むことができ、又は好ましくは無菌、水溶性の等張食塩溶液の形態であってよい。
【００６４】
坐剤用に、従来の結合剤及び担体は、例えばポリアルキレングリコール又はトリグリセリドを含むことができ、かかる坐剤は０．５％〜１０％の範囲で、好ましくは１％〜２％の範囲で活性成分を含有する混合物から形成することができる。
【００６５】
経口製剤は、通常用いられる賦形剤として、例えば医薬品グレードのマンニトール、乳糖、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、セルロース、炭酸マグネシウム等を含む。これらの組成物は、液剤、懸濁液、錠剤、丸剤、カプセル剤、徐放性製剤、又は粉末剤の形態をとり、且つ１０％〜９５％の、好ましくは２５％〜７０％の活性成分を含有する。医薬品組成物が凍結乾燥されている場合には、その凍結乾燥物質は、投与前に例えば懸濁剤で再構成することができる。再構成は、好ましくは緩衝液中でもたらされる。
【００６６】
患者への経口投与用のカプセル剤、錠剤、及び丸剤は、例えばユードラジット「Ｓ」、ユードラジット「Ｌ」、酢酸セルロース、酢酸フタル酸セルロース、又はヒドロキシプロピルメチルセルロースを含む腸溶コーティングをして提供することができる。
【００６７】
無針注射、例えば経皮的注入による送達に適切な医薬品組成物も使用できる。
【００６８】
ポリペプチド又はポリヌクレオチドは治療有効量で投与する。この投与量は、種々のパラメータ、特に使用されるポリペプチド又はポリヌクレオチド、治療される患者の年齢、体重、及び状態、投与経路、並びに必要な処方に従って決定することができる。この場合もやはり医師は、任意の特定患者に対して所要の投与経路及び用量を決定できる。一般に一日量は、特異的阻害剤の活性化、治療を受ける対象の年齢、体重、及び状態、疾患の種類及び重症度、並びに投与頻度及び投与経路に従って、体重１ｋｇあたり約０．１〜５０ｍｇ、好ましくは約０．１ｍｇ／体重ｋｇ〜１０ｍｇ／体重ｋｇである。好ましくは一日量の標準は５ｍｇ〜２ｇである。
【００６９】
上述したＩｄｅＳヌクレオチド配列及びかかる配列を含む発現ベクターもまた、上記の医薬品製剤として使用できる。好ましくはＲＮＡ又はＤＮＡ等の核酸、特にＤＮＡは、治療される個体の細胞内で発現し得る発現ベクターの形態で提供される。ワクチンは、露出したヌクレオチド配列を含む、又は陽イオン性脂質、ポリマー若しくはターゲティング系と併用することができる。このワクチンは、任意の利用可能な方法で送達することができる。例えば、核酸を針注入によって、好ましくは皮内、皮下、又は筋肉内に導入することができる。代わりに核酸を、粒子媒介遺伝子送達等の核酸送達装置を用いて皮膚を超えて直接送達することも可能である。核酸を局所的に皮膚に、又は例えば経鼻投与、経口投与、若しくは直腸内投与によって粘膜面に投与してもよい。
【００７０】
核酸構築体の取り込みを、例えばトランスフェクション試薬の使用を含む、いくつかの既知のトランスフェクション技術によって増進させることが可能である。これらの試薬の例は、例えばリン酸カルシウム及びＤＥＡＥ−デキストラン等の陽イオン活性剤、並びに例えばリポフェクタミン及びトランスフェクタミン等のリポフェクタミンを含む。投与される核酸の用量を変えることができる。一般に核酸は、１ｐｇ〜１ｍｇの範囲で、好ましくは粒子媒介遺伝子送達に対しては１ｐｇ〜１０μｇの核酸を、及び他の経路に対しては１０μｇ〜１ｍｇが投与される。
【００７１】
本発明はまた、病原体ＩｇＧ抗体によって仲介される疾患又は状態の患者からｅｘ  ｖｉｖｏで採取した血液をＩｄｅＳポリペプチドと接触させることを含む、前記血液の処理法を提供する。従って、ＩｄｅＳは血液の体外治療に使用することができる。ＩｄｅＳは、血漿又は血清等１つ又は複数の血液成分を治療するために使用することができる。本明細書に記載したｅｘ  ｖｉｖｏ方法は、すでに患者の身体から採取した血液で実施することが可能である。血液又は血液生成物を、ＩｄｅＳポリペプチドと接触させた後、任意に患者に戻すことができる。
【００７２】
以下の実施例は本発明を説明する。
【実施例】
【００７３】
（実施例１）関節炎の誘発及び発症に対するＩｄｅＳの効果
関節炎リウマチ（ＲＡ）のユニークに設計された動物モデルを、Ｎａｎｄａｋｕｍａｒら（２００３）から周知の抗ＣＩＩ抗体誘導関節炎（ＣＡＩＡ）モデルの変異体であるＩＩ型コラーゲン（ＣＩＩ）に反応するマウスＩｇＧ２ａ抗体を用いて作製した。複数群の雄Ｂ１０．ＲＩＩＩマウスに、Ｊ１及びＣ１１エピトープにそれぞれ結合するＭ２８７及びＣＩＩＣ１を含有するＣＩＩ特異的ＩｇＧ２ａモノクローナル抗体カクテル９ｍｇをｉ．ｖ．移入した。マウスに、抗ＣＩＩ抗体移入の３時間前（ｎ＝５）又は３時間後（ｎ＝５）のいずれかで、（ＰＢＳ）中のＩｄｅＳ（０．９５０ｍｇ／マウス／ｉ．ｖ．）を注入した。対照マウスには何ら治療を施さなかった（ｎ＝６）。５日目、ＬＰＳ（２５μｇ／マウス／ｉ．ｐ．）を全てのマウスに注入した。マウスを、１５日間毎日関節炎発症についてモニターした。関節炎発症率（ａ）及び重症度（ｂ）を図１に示す。それら動物の生存及び健康状態全般を観察した。
【００７４】
この実験中に死亡した、又はＩｄｅＳを用いた治療後何らかの副作用を示したマウスはなかった。対照群での関節炎発症を除き、マウスは健康を維持していた。従って、この結果は、ＩｄｅＳ治療が何ら観察し得る毒性作用を有さず、関節炎の発症を完全に予防したことを示している。
【００７５】
血清は、抗ＣＩＩ抗体のレベルについて解析を行う。肢は組織像について解析した。この組織像は臨床的スコアリングデータを確認した。図２は、関節部及びその関節周囲の浸潤組織の組織像を示す。対照マウス（ａ及びｃ）では、骨及び軟骨を侵食する活発な炎症性パンヌス組織が存在した。治療されたマウス（ｂ及びｄ）では、関節は正常であった。
【００７６】
（実施例２）ＩｄｅＳの有効量の決定
ＣＡＩＡを誘発するために、９ｍｇの２つのモノクローナル抗体のカクテルを用いた。すなわち、（ｉ）Ｃ１１エピトープ及びそのＩｇＧ２ａイソタイプを検出するＣＩＩＣ１並びに（ｉｉ）Ｊ１エピトープ及びそのＩｇＧ２ｂイソタイプを検出するＭ２１３９である。従って、この実験は、別のＪ１特異的抗体を用いた点において実施例１で行ったものとは異なる。Ｍ２１３９抗体は、実施例１で用いたＭ２８７としてＪ１エピトーブと結合することに対して同様の親和性を有する。この抗体カクテルを４月齢の雄Ｂ１０．ＲＩＩＩマウスに注入してから３時間後、ＩｄｅＳ治療を３種の投与量（１０μｇ、１００μｇ、及び１０００μｇ）で実施した。非治療の対照群には、ＩｄｅＳを投与しなかった（０μｇ）。実施例１と同様、抗体カクテル注入後５日目に関節炎の発生を亢進させるために、ＬＰＳを与えた。
【００７７】
関節炎発症率（ａ）及び重症度（ｂ）を図３に示す。以下の表は、１０日目の関節炎の発症率を示す。
【表２】
0005427409.tif 000003
【００７８】
この実験は１９日目まで実施し、質的に同様の結果が１９日目に観察された（図２参照）。
これらの結果から以下のことが結論づけられる。
ａ）ＩｄｅＳ治療法は、最低用量で明らかな効果が見られるので、極めて強力であると予想される。有効量は１００μｇを下回る。１０μｇで効果があるが、より最適な効果は、１００μｇで得られる。
ｂ）最高用量での効果の欠如は、ＩｄｅＳ調製中のエンドトキシン混入によって説明することが可能である。
【００７９】
（実施例３）ＩｄｅＳを用いての関節炎の局所治療
Ｂ１０．ＲＩＩＩマウスの複数群に、９ｍｇの関節炎誘発性抗ＣＩＩ  ＩｇＧ２ａモノクローナル抗体カクテルをｉ．ｖ．移入した。マウスを、１００μｇのＩｄｅＳを用いて全身的に（ｉ．ｖ．）（ｎ＝４）、又は局所的（左又は右肢）に治療した。局所的に治療したマウスに、抗ＣＩＩ抗体移入から３時間後（ｎ＝６）、又は抗ＣＩＩ抗体移入から３時間後及び２４時間後（ｎ＝６）のいずれかでＩｄｅＳを投与した。関節炎発症率（ａ）及び重症度（ｂ）を図４に示す。
【００８０】
これらの結果から、ＩｄｅＳは局所効果を有し、且つ軟骨にすでに結合した抗体を分解することが予想されると結論づけられる。
【図面の簡単な説明】
【００８１】
【図１】ＩｄｅＳを投与したマウス及び対照マウスでの関節炎の発症率（ａ）及び重症度（ｂ）を表す図である。時間０は、抗ＣＩＩ抗体の注入である。マウスに、抗体移入の３時間前（ｎ＝５）若しくは５時間後（ｎ＝５）のいずれかでのＰＢＳ中ＩｄｅＳ（０．９５０ｍｇ／マウス／ｉ．ｖ．）を注入するか、又は何ら処置を施さなかった（ｎ＝６）。５日目に、ＬＰＳ（２５μｇ／マウス／ｉ．ｐ．）を全てのマウスに注入した。関節炎発症についてマウスを１５日間毎日観察した。計算には全てのマウスを用いた。ｎは、実験で用いたマウスの数を表す。血清と肢を、マウスから採取した。
【図２】コントロールマウス（ａ及びｃ）並びに図１に記載のＩｄｅＳを用いて処置したマウス（ｂ及びｄ）から採取した肢の組織病理学的切片の図である。マウスの肢を実験１５日目に採取した。後肢を、４％リン酸緩衝中パラホルムアルデヒド溶液（ｐＨ７．４）にて４℃で２４時間固定し、ポリビニルピロリドン及び０．１Ｍトリス（ｐＨ６．９５）を含有するエチレンジアミン四酢酸溶液にて４週間脱灰して、脱水後、パラフィンに包埋した。６μｍの切片をヘマトキシリン及びエオシンで染色した。示した結果は、各群で３匹のマウスから得られた結果の代表的なものである。オリジナル倍率はｘ２０であった。
【図３】ＩｄｅＳを種々の用量で投与したマウス及びコントロールマウスでの関節炎の発症率（ａ）及び重症度（ｂ）を表す図である。４ヶ月齢雄Ｂ１０．ＲＩＩＩマウスの複数の群に、０日目の０時間時にＣＩＩ特異的モノクローナル抗体、Ｍ２１３９、及びＣＩＩＣ１を９ｍｇ  ｉ．ｖ．注入した。同日３時間後、ＰＢＳ中のＩｄｅＳを０μｇ（ｎ＝７）、１０μｇ（ｎ＝５）、１００μｇ（ｎ＝５）、及び１０００μｇ（ｎ＝５）をｉ．ｖ．注入した。５日目、全てのマウスにＬＰＳ（２５μｇ／ｉ．ｐ．）を投与した。ｎは、各群のマウスの数を表す。エラーバーは、平均値±ＳＥＭを示す。全てのマウスを計算に入れた。
【図４】ＩｄｅＳを全身的及び局所的に投与したマウス並びにコントロールマウスでの関節炎の発症率（ａ）及び重症度（ｂ）を表す図である。Ｂ１０．ＲＩＩＩマウスの複数の群に関節炎誘発性抗ＣＩＩ  ＩｇＧ２ａモノクローナル抗体カクテル９ｍｇをｉ．ｖ．移入した。マウスを１００μｇのＩｄｅＳで全身的（ｉ．ｖ．）（ｎ＝４）に、又は局所的（左又は右肢）に処置した。局所的に処置したマウスに、抗ＣＩＩ抗体移入から３時間後（ｎ＝３）、又は抗ＣＩＩ抗体移入から３時間後及び２４時間後（ｎ＝６）のいずれかでＩｄｅＳを投与した。
【００８２】
（配列の簡単な説明）
配列番号１は、化膿連鎖球菌ＡＰ１から単離したＩｄｅＳをコードするアミノ酸配列である。
配列番号２は、推定シグナル配列を含む、化膿連鎖球菌ＡＰ１から単離したＩｄｅＳをコードするアミノ酸配列である。
配列番号３は、化膿連鎖球菌ＡＰ１から単離したＩｄｅＳをコードする核酸配列（シグナル配列を含む）である。
配列番号４は、ＰＣＲプライマーＩｄｅ１である。
配列番号５は、ＰＣＲプライマーＩｄｅ２である。
配列番号６は、ＰＣＲプライマーＩｄｅ５ｘである。
配列番号７は、ＰＣＲプライマーＩｄｅ３ｘである。
配列番号８は、ＩｄｅＳヒトＩｇＧ切断産物のＮ末端アミノ酸配列である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【配列表】
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