(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
２−{４−［Ｎ−（５，６−ジフェニルピラジン−２−イル）−Ｎ−イソプロピルアミノ］ブチルオキシ}酢酸若しくは２−{４−［Ｎ−（５，６−ジフェニルピラジン−２−イル）−Ｎ−イソプロピルアミノ］ブチルオキシ}−Ｎ−（メチルスルホニル）アセトアミド、又はその医薬上許容される塩を有効成分として含有する脊柱管狭窄症治療剤。
【請求項２】
脊柱管狭窄症が、頚部脊柱管狭窄症、胸部脊柱管狭窄症、腰部脊柱管狭窄症、広範脊柱管狭窄症又は仙骨狭窄症である、請求項１に記載の脊柱管狭窄症治療剤。
【請求項３】
脊柱管狭窄症が、腰部脊柱管狭窄症である、請求項２に記載の脊柱管狭窄症治療剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、次の一般式（１）で表される複素環誘導体（以下、「本複素環誘導体（１）」という。）又はその医薬上許容される塩を有効成分として含有する脊柱管狭窄症治療剤に関するものである。
【化１】
0005527205.tif 000002
式（１）中、Ｒ１、Ｒ２は、同一又は異なって、ハロゲン原子、アルキル、ハロアルキル、アリールアルキル、アルコキシ、アルキルチオ、アルコキシアルキル、アルキルスルホニル、ヒドロキシ、アミノ、モノアルキルアミノ、ジアルキルアミノ、カルボキシ、シアノ及びニトロからなる群から選ばれる１〜３個の置換基で置換されていてもよいアリールを表し；
Ｒ３、Ｒ４は、同一又は異なって、水素原子又はアルキルを表し；
Ｒ５は水素原子、アルキル又はハロゲン原子を表し；
ＹはＮ又はＮ→Ｏを表し；
ＡはＮＲ６を表し、Ｒ６は水素原子、アルキル、アルケニル又はシクロアルキルを表し；
Ｄはヒドロキシで置換されていてもよいアルキレン又はアルケニレンを表すか、又はＡとＤとが一緒になって、次の式（２）で表される二価の基を表し；
【化２】
0005527205.tif 000003
［式（２）中、ｒは０〜２の整数を表し、ｑは２又は３を表し、ｔは０〜４の整数をそれぞれ表す。］
Ｅは、フェニレン又は単結合を表すか、又はＤとＥとが一緒になって、次の式（３）で表される二価の基を表し；
【化３】
0005527205.tif 000004
［式（３）中、ｕは０〜２の整数を表し、ｖは０又は１を表す。］
Ｇは、Ｏ、Ｓ、ＳＯ又はＳＯ２を表し；
Ｑは、カルボキシ、アルコキシカルボニル、テトラゾリル、カルバモイル、モノアルキルカルバモイル、ジアルキルカルバモイル又は次の式（４）で表される基を表す。
【化４】
0005527205.tif 000005
［式（４）中、Ｒ７は、アミノ、モノアルキルアミノ、ジアルキルアミノ、若しくはヒドロキシ、又はハロゲン原子、アルキル、ハロアルキル、アリールアルキル、アルコキシ、アルキルチオ、アルコキシアルキル、アルキルスルホニル、ヒドロキシ、アミノ、モノアルキルアミノ、ジアルキルアミノ、カルボキシ、シアノ及びニトロからなる群から選ばれる１〜３個の置換基で置換されていてもよい下記１）〜４）のいずれかの基を表す；
１）アルキル、
２）アリール、
３）アリールオキシ、
４）複素環基。］
【背景技術】
【０００２】
脊柱管狭窄症は、脊柱管を構成する脊椎や黄色靭帯の肥大変性や、椎間板の突出等で脊柱管が狭められ、神経根や馬尾等の神経組織が圧迫を受けて各種の症状を呈する疾患である。脊柱管狭窄症は、脊柱管の狭窄部位によって、頚部脊柱管狭窄症、胸部脊柱管狭窄症、腰部脊柱管狭窄症、広範脊柱管狭窄症、仙骨狭窄症等に分類される。その症状としては、神経圧迫による腰痛、下肢の痛み、しびれ等がある。特に馬尾神経が圧迫されると、歩行中に腰痛、下肢の痛み、しびれ、脱力感がひどくなるといった症状が現れる。【０００３】
脊柱管狭窄症の一つである腰部脊柱管狭窄症の治療剤として、プロスタグランジンＥ１の誘導体であるリマプロストが知られており、腰部脊柱管狭窄症に伴う自覚症状（下肢の痛み、しびれ）及び歩行能力の改善に用いられている。【０００４】
一方、本複素環誘導体（１）又はその医薬上許容される塩は、ＰＧＩ２受容体作動剤として、肺高血圧症や閉塞性動脈硬化症の治療に有用であることが既に報告されている（例えば、特許文献１を参照）。【０００５】
【特許文献１】国際公開第０２／０８８０８４号パンフレット
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明の目的は、主として、新規な脊柱管狭窄症治療剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者は、本複素環誘導体（１）が、ラットにおいて、馬尾神経を圧迫することにより生じる歩行障害を改善し得ることを見出し、本発明を完成した。【０００８】
本発明としては、例えば、本複素環誘導体（１）又はその医薬上許容される塩を有効成分として含有する脊柱管狭窄症治療剤を挙げることができる。
【図面の簡単な説明】
【０００９】
【図１】図１は、ラット馬尾神経圧迫歩行障害モデルにおける、２−｛４−［Ｎ−（５，６−ジフェニルピラジン−２−イル）−Ｎ−イソプロピルアミノ］ブチルオキシ｝−Ｎ−（メチルスルホニル）アセトアミド（以下、「化合物Ａ」という。）の歩行障害改善効果を示す。縦軸は歩行距離（ｍ）を、横軸は術後日数（日）をそれぞれ表す。図中、丸印は偽手術群を、四角印は対照群を、三角印は薬物投与群をそれぞれ表す。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
本複素環誘導体（１）において、例えば、
Ｒ１、Ｒ２が、同一又は異なって、ハロゲン原子、アルキル及びアルコキシからなる群から選ばれる１〜３個の置換基で置換されていてもよいフェニルであり、
Ｒ３、Ｒ４が、同一又は異なって、水素原子又はアルキルであり、
Ｒ５が水素原子であり、
ＹがＮであり、
ＡがＮＲ６であり、Ｒ６がアルキルであり、
Ｄがアルキレンであり、
Ｅが単結合であり、
ＧがＯであり、
Ｑが、カルボキシ又は式（４）で表される基であり、Ｒ７が、アミノ、モノアルキルアミノ、ジアルキルアミノ、若しくはヒドロキシ、又はハロゲン原子、アルキル、ハロアルキル、アリールアルキル、アルコキシ、アルキルチオ、アルコキシアルキル、アルキルスルホニル、ヒドロキシ、アミノ、モノアルキルアミノ、ジアルキルアミノ、カルボキシ、シアノ及びニトロからなる群から選ばれる１〜３個の置換基で置換されていてもよい下記１）〜４）のいずれかの基である化合物が好ましい。
１）アルキル、
２）アリール、
３）アリールオキシ、
４）複素環基【００１１】
具体的には、例えば、化合物Ａ及び２−｛４−［Ｎ−（５，６−ジフェニルピラジン−２−イル）−Ｎ−イソプロピルアミノ］ブチルオキシ｝酢酸（以下、「化合物Ｂ」という。）が好ましい。【００１２】
本発明における「アルキル」としては、直鎖状又は分枝鎖状の炭素数１〜６のもの、例えば、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、イソペンチル、ｎ−ヘキシル、イソヘキシルを挙げることができる。とりわけ、炭素数１〜４のものが好ましい。【００１３】
本発明における「ハロアルキル」、「アリールアルキル」、「アルキルチオ」、「アルコキシアルキル」、「アルキルスルホニル」、「モノアルキルアミノ」、「ジアルキルアミノ」、「モノアルキルカルバゾイル」及び「ジアルキルカルバモイル」のアルキル部分としては、前記のアルキルと同じものを挙げることができる。【００１４】
本発明における「アルコキシ」としては、直鎖状又は分枝鎖状の炭素数１〜６もの、例えば、メトキシ、エトキシ、ｎ−プロポキシ、イソプロポキシ、ｎ−ブトキシ、イソブトキシ、ｓｅｃ−ブトキシ、ｔｅｒｔ−ブトキシ、ｎ−ペンチルオキシ、イソペンチルオキシ、ｎ−ヘキシルオキシ、イソヘキシルオキシを挙げることができる。とりわけ、炭素数１〜４のものが好ましい。【００１５】
本発明における「アルコキシカルボニル」及び「アルコキシアルキル」のアルコキシ部分としては、前記のアルコキシと同じものを挙げることができる。【００１６】
本発明における「アルケニル」としては、直鎖状又は分枝鎖状の炭素数２〜６のもの、例えば、ビニル、１−プロペニル、２−プロペニル、１−ブテニル、２−ブテニル、３−ブテニル、１−ペンテニル、２−ペンテニル、３−ペンテニル、４−ペンテニル、４−メチル−３−ペンテニル、１−ヘキセニル、２−ヘキセニル、３−ヘキセニル、４−ヘキセニル、５−ヘキセニルを挙げることができる。とりわけ、炭素数３又は４のものが好ましい。【００１７】
本発明における「シクロアルキル」としては、炭素数３〜８のもの、例えば、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロオクチルを挙げることができる。とりわけ、炭素数５〜７のものが好ましい。【００１８】
本発明における「ハロゲン原子」としては、例えば、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子を挙げることができる。【００１９】
本発明における「アリール」としては、炭素数６〜１０もの、例えば、フェニル、１−ナフチル、２−ナフチルを挙げることができる。とりわけ、フェニルが好ましい。【００２０】
本発明における「アリールアルキル」及び「アリールオキシ」のアリール部分としては、前記のアリールと同じものを挙げることができる。【００２１】
本発明における「アルキレン」としては、直鎖状又は分枝鎖状の炭素数１〜８のもの、例えば、メチレン、エチレン、１−メチルエチレン、２−メチルエチレン、トリメチレン、テトラメチレン、ペンタメチレン、ヘキサメチレン、ヘプタメチレン、オクタメチレンを挙げることができる。とりわけ、炭素数３〜６のものが好ましく、炭素数４のものが特に好ましい。【００２２】
本発明における「アルケニレン」としては、直鎖状又は分枝鎖状の炭素数２〜８のもの、例えば、エテニレン、１−プロペニレン、２−プロペニレン、１−ブテニレン、２−ブテニレン、３−ブテニレン、１−ペンテニレン、２−ペンテニレン、３−ペンテニレン、４−ペンテニレン、４−メチル−３−ペンテニレン、１−ヘキセニレン、２−ヘキセニレン、３−ヘキセニレン、４−ヘキセニレン、５−ヘキセニレン、１−ヘプテニレン、２−ヘプテニレン、３−ヘプテニレン、４−ヘプテニレン、５−ヘプテニレン、６−ヘプテニレン、１−オクテニレン、２−オクテニレン、３−オクテニレン、４−オクテニレン、５−オクテニレン、６−オクテニレン、７−オクテニレンを挙げることができる。とりわけ、炭素数３〜６のものが好ましく、炭素数４のものが特に好ましい。【００２３】
本発明における「複素環基」としては、次の（１）又は（２）を挙げることができる。
（１）窒素原子、酸素原子及び硫黄原子から選択される１〜４個までのヘテロ原子を有する５又は６員の芳香環基、又はそれらのベンゼン縮合環であって、かかる環構成原子が窒素原子又は硫黄原子の場合、かかる窒素原子、硫黄原子はオキシドを形成していてもよい。例えば、１−ピロリル、２−ピロリル、３−ピロリル、３−インドリル、２−フラニル、３−フラニル、３−ベンゾフラニル、２−チエニル、３−チエニル、３−ベンゾチエニル、１，３−オキサゾール−２−イル、４−イソオキサゾリル、２−チアゾリル、５−チアゾリル、２−ベンゾチアゾリル、１−イミダゾリル、２−イミダゾリル、４−イミダゾリル、２−ベンズイミダゾリル、１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル、１Ｈ−テトラゾール−５−イル、２Ｈ−テトラゾール−５−イル、２−ピリジル、３−ピリジル、４−ピリジル、３−ピラゾリル、２−ピリミジニル、４−ピリミジニル、２−ピラジニル、１，３，５−トリアジン−２−イルを挙げることができる。
（２）環構成原子として、窒素原子、酸素原子又は硫黄原子を、同一又は異なって、１〜４個含んでいてもよい、４〜８員環の飽和環基、又はそれらのベンゼン縮合環基であって、環構成原子が窒素原子又は硫黄原子の場合、かかる窒素原子、硫黄原子はオキシドを形成していてもよい。例えば、ピペリジノ、ピペラジニル、３−メチルピペラジン−１−イル、ホモピペラジニル、モノホリノ、チオモノホリノ、１−ピロリジニル、２−ピロリジニル、２−テトラヒドロフラニルを挙げることができる。【００２４】
本複素環誘導体（１）は、前記特許文献１（国際公開第０２／０８８０８４号パンフレット）に記載の方法により合成することができる。【００２５】
本複素環誘導体（１）は、遊離の塩基又は酸のまま医薬として用いることができるが、公知の方法により医学上許容される塩の形にして用いることもできる。
本複素環誘導体（１）が塩基性を示す場合の「塩」としては、例えば、塩酸、硫酸、硝酸、リン酸、フッ化水素酸、若しくは臭化水素酸の無機酸の塩、又は酢酸、酒石酸、乳酸、クエン酸、フマール酸、マレイン酸、コハク酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、ナフタレンスルホン酸、若しくはカンファースルホン酸の有機酸の塩を挙げることができる。
本複素環誘導体（１）が酸性を示す場合の「塩」としては、例えば、ナトリウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属塩、又はカルシウム塩等のアルカリ土類金属塩を挙げることができる。【００２６】
本複素環誘導体（１）には、幾何異性体（Ｚ体及びＥ体）が存在するが、各幾何異性体及びそれらの混合物も本複素環誘導体（１）に含まれる。また、本複素環誘導体（１）には、不斉炭素を有するものも存在するが、各光学異性体及びこれらのラセミ体も本複素環誘導体（１）に含まれる。光学異性体は、上記のようにして得られたラセミ体より、その塩基性を利用して、光学活性な酸（例えば、酒石酸、ジベンゾイル酒石酸、マンデル酸、１０−カンファースルホン酸）を用いて、公知の方法により光学分割するか、或いは予め調製した光学活性な化合物を原料に用いて製造することができる。【００２７】
本発明に係る脊柱管狭窄症治療剤は、例えば、頚部脊柱管狭窄症、胸部脊柱管狭窄症、腰部脊柱管狭窄症、広範脊柱管狭窄症、仙骨狭窄症に伴う症状（例えば、麻痺、知覚鈍麻、疼痛、しびれ、歩行能力の低下）の改善を目的として用いることができる。それらの中で、特に腰部脊柱管狭窄症に伴う症状（例えば、下肢の痛みやしびれ、歩行能力の低下）に対して好ましい。【００２８】
本発明に係る脊柱管狭窄症治療剤は、本複素環誘導体（１）を、そのまま又は医薬上許容される無毒性かつ不活性な担体中に、０．０１〜９９．５％の範囲内で、好ましくは０．５〜９０％の範囲内で含有するものである。【００２９】
上記担体としては、固形、半固形又は液状の希釈剤、充填剤、その他の処方用の助剤を挙げることができる。これらを一種又は二種以上用いることができる。【００３０】
本発明に係る脊柱管狭窄症治療剤は、固形又は液状の用量単位で、末剤、カプセル剤、錠剤、糖衣剤、顆粒剤、散剤、懸濁剤、液剤、シロップ剤、エリキシル剤、トローチ剤等の経口投与製剤、注射剤、坐剤等の非経口投与製剤のいずれの形態をもとることができる。徐放性製剤であってもよい。それらの中で、特に錠剤等の経口投与製剤が好ましい。【００３１】
末剤は、本複素環誘導体（１）を適当な細かさにすることにより製造することができる。【００３２】
散剤は、本複素環誘導体（１）を適当な細かさにし、次いで同様に細かくした医薬用担体、例えば、澱粉、マンニトールのような可食性炭水化物と混合することにより製造することができる。任意に風味剤、保存剤、分散剤、着色剤、香料等を添加することができる。【００３３】
カプセル剤は、まず上述のようにして粉末状となった末剤や散剤あるいは錠剤の項で述べるように顆粒化したものを、例えば、ゼラチンカプセルのようなカプセル外皮の中へ充填することにより製造することができる。滑沢剤や流動化剤、例えば、コロイド状のシリカ、タルク、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、固形のポリエチレングリコールを粉末状となった末剤や散剤と混合し、その後、充填操作を行うことにより製造することもできる。崩壊剤や可溶化剤、例えば、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースカルシウム、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、クロスカルメロースナトリウム、カルボキシメチルスターチナトリウム、炭酸カルシウム、炭酸ナトリウムを添加すれば、カプセル剤が摂取されたときの医薬の有効性を改善することができる。また、本複素環誘導体（１）の微粉末を植物油、ポリエチレングリコール、グリセリン、界面活性剤中に懸濁分散し、これをゼラチンシートで包んで軟カプセル剤とすることもできる。【００３４】
錠剤は、粉末化された本複素環誘導体（１）に賦形剤を加えて粉末混合物を作り、顆粒化もしくはスラグ化し、次いで崩壊剤又は滑沢剤を加えた後、打錠することにより製造することができる。
粉末混合物は、適当に粉末化された本複素環誘導体（１）を希釈剤や基剤と混合することにより製造することができる。必要に応じて、結合剤（例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール）、溶解遅延化剤（例えば、パラフィン）、再吸収剤（例えば、四級塩）、吸着剤（例えばベントナイト、カオリン）等を添加することができる。
粉末混合物は、まず結合剤、例えば、シロップ、澱粉糊、アラビアゴム、セルロース溶液又は高分子物質溶液で湿らせ、攪拌混合し、これを乾燥、粉砕して顆粒とすることができる。このように粉末を顆粒化する代わりに、まず打錠機にかけた後、得られる不完全な形態のスラグを破砕して顆粒にすることも可能である。このようにして作られる顆粒に、滑沢剤としてステアリン酸、ステアリン酸塩、タルク、ミネラルオイル等を添加することにより、互いに付着することを防ぐことができる。
また、錠剤は、上述のように顆粒化やスラグ化の工程を経ることなく、本複素環誘導体（１）を流動性の不活性担体と混合した後に直接打錠することによっても製造することができる。
こうして製造された錠剤にフィルムコーティングや糖衣を施すことができる。シェラックの密閉被膜からなる透明又は半透明の保護被覆、糖や高分子材料の被覆及びワックスよりなる磨上被覆をも用いることができる。【００３５】
他の経口投与製剤、例えば、液剤、シロップ剤、トローチ剤、エリキシル剤もまたその一定量が本複素環誘導体（１）の一定量を含有するように用量単位形態にすることができる。【００３６】
シロップ剤は、本複素環誘導体（１）を適当な香味水溶液に溶解して製造することができる。エリキシル剤は、非毒性のアルコール性担体を用いることにより製造することができる。【００３７】
懸濁剤は、本複素環誘導体（１）を非毒性担体中に分散させることにより製造することができる。必要に応じて、可溶化剤や乳化剤（例えば、エトキシ化されたイソステアリルアルコール類、ポリオキシエチレンソルビトールエステル類）、保存剤、風味付与剤（例えば、ペパーミント油、サッカリン）等を添加することができる。【００３８】
必要であれば、経口投与のための用量単位処方をマイクロカプセル化することができる。当該処方はまた、被覆をしたり、高分子・ワックス等中に埋め込んだりすることにより作用時間の延長や持続放出をもたらすこともできる。【００３９】
非経口投与製剤は、皮下・筋肉又は静脈内注射用とした液状用量単位形態、例えば、溶液や懸濁液の形態をとることができる。当該非経口投与製剤は、本複素環誘導体（１）の一定量を、注射の目的に適合する非毒性の液状担体、例えば、水性や油性の媒体に懸濁し又は溶解し、次いで当該懸濁液又は溶液を滅菌することにより製造することができる。注射液を等張にするために非毒性の塩や塩溶液を添加することができる。また、安定剤、保存剤、乳化剤等を添加することもできる。【００４０】
坐剤は、本複素環誘導体（１）を低融点の水に可溶又は不溶の固体、例えば、ポリエチレングリコール、カカオ脂、半合成の油脂[例えば、ウイテプゾール（登録商標）]、高級エステル類（例えば、パルミチン酸ミリスチルエステル）又はそれらの混合物に溶解又は懸濁させて製造することができる。【００４１】
本発明に係る脊柱管狭窄症治療剤の投与量は、体重、年齢等の患者の状態、投与経路、症状の程度等によって異なるが、一般的には成人に対して、本複素環誘導体（１）の量として、１日当たり０．００１ｍｇ〜１００ｍｇの範囲内が適当であり、０．０１ｍｇ〜１０ｍｇの範囲内がより好ましい。場合によっては、これ以下でも足りるし、また逆にこれ以上の用量を必要とする場合もある。また、１日１回から数回の投与又は１日から数日間の間隔で投与することができる。
【実施例】
【００４２】
以下に、試験例を掲げて、本発明を更に詳しく説明するが、本発明は下記に示される範囲に限定されるものではない。【００４３】
試験例１
（１）試験方法
Ｗｉｓｔａｒ系ラット（雄性、７週齢）（日本チャールス・リバー社製）に対して、トレッドミル（室町機械社製）を用いて、歩行トレーニングを１日１回３或いは４日間連続して行った。歩行トレーニングの最終日に動物の群分けを行い、その翌日に歩行時間を測定した後、偽手術又は下記ｉ）に記載の馬尾神経圧迫手術を行った。手術実施後、３日目、７日目、１４日目及び２１日目に歩行時間をそれぞれ測定した。測定した歩行時間に基づき、歩行距離を算出した。
３日目の歩行時間の測定が終了した後、馬尾神経圧迫手術を行った群について、手術当日及び手術後３日目の歩行距離を指標として、対照群と薬物投与群に群分けを行った。
その後、偽手術群及び対照群には０．５ｗ／ｖ％メチルセルロース水溶液を、薬物投与群には０．２ｍｇ／ｍＬで化合物Ａを含有する懸濁液（媒体：０．５ｗ／ｖ％メチルセルロース水溶液）を、手術後１３日目或いは２０日目まで１日２回経口投与した。
ｉ）馬尾神経圧迫手術の方法
馬尾神経圧迫手術は、竹信らの方法（基礎と臨床、３０巻、第２１３−２１９頁、１９９６年）に準じて行った。
ラットにペントバルビタールナトリウムを用いて麻酔を行い、背部を剃毛後、腰部を切開し、第４腰椎から第６腰椎までを露出させた。第５腰椎棘突起を切除後、第４腰椎と第５腰椎の境界付近及び第５腰椎と第６腰椎の境界付近の２箇所に、ダイヤモンドバーを装着したハンドピース（ミニター社製）を用い、シリコンラバー（高さ×長さ×幅：１×４×１．２５ｍｍ）を挿入するための適当な大きさの穴を空けた。第４腰椎及び第６腰椎脊柱管内にそれぞれシリコンラバーを挿入後、切開部位を縫合した。偽手術群にも同様の手術を実施し、シリコンラバーを挿入せずに切開部位を縫合した。縫合箇所にテラマイシン軟膏（ファイザー社製）を適量塗布し、更に注射用ビクシリンＳ（明治製菓社製）を２．５ｍＬの生理食塩液（大塚製薬社製）に溶解し、このうちの０．５ｍＬを後肢に筋肉内注射した。
ｉｉ）歩行時間の測定方法
３〜５匹のラットを水平状態の走行ベルトに乗せ、走行ベルトを始動させた。トレッドミルをまず１０ｍ／ｍｉｎの速度で始動させ、以降３分毎に５ｍ／ｍｉｎずつ加速して、３０分間の運転が終われば自動的に停止するようにプログラムを設定した。始動時及び速度変化時の加速は１ｍ／ｓｅｃ２で、加速はただちに行われて次の速度に到達したと見なした。ラットが完全に電気刺激装置の上に乗ってしまった時に歩行が不能になったと判定し、トレッドミル始動から歩行不能に至るまでの時間を歩行時間とした。３０分間歩行を続けたラットの歩行時間は３０分とした。
ｉｉｉ）歩行トレーニングの方法
トレッドミルを運転し、個々のラットの歩行時間をタイマーを用いて測定した。歩行時間が２４分より短かった場合、トレーニング効果を上げるために、ラットに歩行を続けさせ２４分以降に再度歩行不能になった時点で、そのラットのトレーニングを終了した。
（２）結果
図１に示すように、化合物Ａを投与することにより、馬尾神経を圧迫することにより生じる歩行障害が有意に改善された。
なお、評価は、対照群については、偽手術群に対して、Ｗｅｌｃｈ  ｔｅｓｔにより評価した（＃＃：ｐ＜０．０１）。また、薬物投与群については、対照群に対して、ｔ−ｔｅｓｔ或いはＷｅｌｃｈ  ｔｅｓｔにより評価した（＊＊：ｐ＜０．０１）。【００４４】
試験例２
文献（Ｐａｉｎ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ２００２；９４：１５３７−４１）に記載の方法に準じて、ラット脊柱管狭窄症モデルを作製する。その後、化合物Ａ又は化合物Ｂを投与し、脊髄神経の血流量の変化を調べることにより、化合物Ａ、化合物Ｂの治療効果を評価する。【００４５】
試験例３
文献（ＳＰＩＮＥ  ２００８；３３：２６０５−１１）に記載の方法に準じて、イヌ馬尾神経圧迫モデルを作製する。その後、化合物Ａ又は化合物Ｂを投与し、神経伝達速度の変化や馬尾神経の血流量の変化を調べることにより、化合物Ａ、化合物Ｂの治療効果を評価する。【００４６】
試験例４
文献（Ｊ  Ｏｒｔｈｏｐａｅｄｉｃ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ２００５；２３：４２０−２４）に記載の方法に準じて、ラットＬ５神経根圧迫モデルを作製する。その後、化合物Ａ又は化合物Ｂを投与し、後根神経節の血流量の変化を調べることにより、化合物Ａ、化合物Ｂの治療効果を評価する。  【００４７】
試験例５
ラットに化合物Ａ又は化合物Ｂを投与し、文献（Ｅｖｉｄｅｎｃｅ−ｂａｓｅｄ  ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｙ  ａｎｄ  ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ  ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ２００８；５：１３３−４３）に記載の方法に準じて、坐骨神経の血流量の変化を調べることにより、化合物Ａ、化合物Ｂの治療効果を評価する。
【図１】
0005527205.tif 000006