(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
クロフェレマーを含み、前記クロフェレマーが、５０ｍｇ／日〜４５０ｍｇ／日の投薬量で投与される、ｄ−ＩＢＳに伴う疼痛、又はｄ−ＩＢＳに伴う腹部不快を治療するための治療剤。
【請求項２】
クロフェレマーが腸溶性コーティングされたクロフェレマーである、請求項１に記載の治療剤。
【請求項３】
クロフェレマーが、５０ｍｇ／日〜４５０ｍｇ／日の量で、経口投与される、請求項２に記載の治療剤。
【請求項４】
クロフェレマーの投与後、疼痛又は不快のない日が少なくとも１０％増加する、請求項１〜３のいずれかに記載の治療剤。
【請求項５】
クロフェレマーが全身吸収されない、請求項１〜４のいずれかに記載の治療剤。
【請求項６】
ｄ−ＩＢＳに伴う疼痛、又は腹部不快を治療するための腸溶性保護クロフェレマー（CAS 148465-45-6）を含む治療剤であって、前記腸溶性保護クロフェレマーが５０ｍｇ／日〜４５０ｍｇ／日の量で経口投与される治療剤。
【請求項７】
腸溶性保護クロフェレマーが、腸溶性コーティングされたクロフェレマーである、請求項６に記載の治療剤。
【請求項８】
ｄ−ＩＢＳに伴う疼痛、又は腹部不快を治療するための薬剤の製造のための、クロトン属の種又はカロフィルム属の種から単離されたクロフェレマーを含む治療剤であって、前記クロフェレマーが、５０ｍｇ／日〜４５０ｍｇ／日の投薬量で経口投与される、治療剤。
【請求項９】
クロフェレマーが、腸溶性コーティングされたクロフェレマーである、請求項８に記載の治療剤。
【請求項１０】
ヒト女性に投与される、請求項１〜９のいずれかに記載の治療剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、２００６年５月１日に出願の米国特許仮出願第６０／７９７，０７４号及び２００６年８月２４日に出願の米国特許非仮出願１１／５１０，１５２号の優先権利を主張し、それぞれの内容は本明細書で参照により組み込まれる。
【背景技術】
【０００２】
過敏性腸症候群（ＩＢＳ、irritable bowel syndrome）は、生活の質に対する明白な影響を有する腸の一般的な機能障害である。ＩＢＳの確定的な特性は、腹部の不快又は疼痛である。ＩＢＳに関するRome II診断基準（症状に基づいて胃腸機能障害を診断するためのシステム）は、以下の通りである。先行する１２カ月間内の、連続する必要はないが少なくとも１２週間以上の、以下の特徴のうちの少なくとも２つを伴う腹部の不快又は疼痛：（１）排便によって軽減され、及び／又は（２）開始が便通の頻度の変化に伴い、及び／又は（３）開始が大便の形状（外観）の変化に伴う。
【０００３】
ＩＢＳの診断を裏づける他の症状には、疼痛；異常な大便通過（力み、切迫又は不完全排便の感覚）；粘液の通過；及び、鼓脹又は腹部膨満感が含まれる。患者は、彼らの根底にある下記の腸習性によって再分割することができる。（ｉ）下痢型ＩＢＳ、（ii）便秘型ＩＢＳ及び（ii）下痢と交代で起こる便秘（交代型ＩＢＳ）。
【０００４】
ＩＢＳの病態生理は、英国の国民の約１／４がその症状を示すという事実、及び約１５パーセントの米国成人がＩＢＳの診断と一貫する症状を報告するという事実にもかかわらず、十分に理解されていない。ＩＢＳ患者の２５パーセントだけが診察を受けると推定される。さらに、ＩＢＳと診断される患者は、他の胃腸以外の機能障害、例えば線維筋痛及び間質性膀胱炎の危険が高い。
【０００５】
ＩＢＳは米国で胃腸病専門医による最も一般的な診断であって、プライマリーケアプロバイダーへの訪問の１２パーセントを占める。直接的な医療費で約８，０００，０００，０００ドル及び間接費で２５，０００，０００，０００ドルが、ＩＢＳの診断及び治療のために毎年米国で費やされる。このように、ＩＢＳは米国で年間のヘルスケア費用の大きな割合を占める。
【０００６】
ＩＢＳの一次治療は、カウンセリング及び食事の変更を含む。個々の症状に向けられる場合、薬物療法は有益であると考えられる。下痢型症例では、下痢を治療するが腹痛を治療しないロペラミドなどの止瀉薬を用いることができる。腹痛はＩＢＳを規定する特性の１つであるので、止瀉薬ではＩＢＳが十分に治療されない（Jailwala et al., 2000, Ann Intern Med. 2000;133:136-147；Cremonini et al., 2004, Minerva Med 95:427-441）。便秘型症例では、食物繊維を増加させるためにしばしばオオバコが用いられる。患者が主症状として疼痛及び膨満を有する場合、抗鎮痙薬が通常用いられる。そのような場合、メベベリン及びハッカ油がしばしば用いられる。ＩＢＳを治療するために試みられた他の剤には、β遮断薬、ナロキソン、オンダンセトロン、カルシウムチャネル遮断薬、シメチコン、ロイプロレリン、オクトレオチド及びコレシストキニンアンタゴニストが含まれ、様々な結果が得られた（Martindale, The Extra Pharmacopoeia, 31st Edition (1996) p. 1197）。
【０００７】
塩酸アロセトロン、Lotronex（登録商標）（GlaxoSmithKline社製、Reserarch Triangle Park、NC）は選択的な５−ヒドロキシトリプタミン３（５−ＨＴ３）アンタゴニストであり、重度の下痢型過敏性腸症候群（ｄ−ＩＢＳ）の女性を治療するために承認された現在唯一の薬剤である。虚血性大腸炎及び重度の生命を脅かす便秘を含む安全性への懸念のために、この１つの薬剤でさえ、重度のｄ−ＩＢＳを有する女性だけでの使用が承認される。下痢の治療のために他の薬剤（例えばロペラミド、ジフェノキシレート）があるが、そのような薬剤は、疼痛及び腹部不快を含むｄ−ＩＢＳの複数の症状に対処せず、したがって長期の選択肢でない（Wood, 2003, AJJ. NEMJ 349: 2136-2146を参照）。疼痛及び腹部の不快を含むｄ−ＩＢＳの複数の症状に対処する、ｄＩＢＳの治療のための改善された治療法の必要がある。
【０００８】
Tempestaへの米国特許第５２１１９４４号及び５４９４６６１号には、ウイルス性感染症の治療のための、クロトン属の種又はカロフィルム属の種から単離されたプロアントシアニジン重合組成物の使用が開示される。Rozhonらは、米国特許出願公開第２００５／００１９３８９号で、分泌性又は旅行者下痢症の治療のための、クロトン属の種又はカロフィルム属の種から単離されたプロアントシアニジン重合組成物の使用を開示する。国際公開第００／４７０６２号として公表されている国際出願ＰＣＴ／ＵＳ００／０２６８７には、クロトン属の種又はカロフィルム属の種から単離されたプロアントシアニジン重合組成物の製造方法が開示される。Di Cesare et al., 2002, Am J Gastroenterol 10:2585-2588には、プラセボと比較した旅行者下痢症の治療薬としてのクロフェレマー（crofelemer）の治験が開示される。この研究で用いられた投薬量は、５００ｍｇ／日（１２５を１日４回）、１０００ｍｇ／日（２５０ｍｇを１日４回）、及び２０００ｍｇ／日（５００ｍｇを１日４回）を２日間であった。研究は、組成物が、旅行者下痢症患者で排便回数及び胃腸症状の改善のために有用であることを示した。
【０００９】
本出願のこのセクション又は他のいかなるセクションでのいかなる参考文献の引用又は特定も、そのような参考文献が本出願の先行技術として利用可能であることを認めるものと解釈されてはならない。
【特許文献１】米国特許第５２１１９４４号明細書
【特許文献２】米国特許第５４９４６６１号明細書
【特許文献３】米国特許出願公開第２００５／００１９３８９号明細書
【特許文献４】国際公開第００／４７０６２号パンフレット
【特許文献５】国際出願ＰＣＴ／ＵＳ００／０２６８７パンフレット
【非特許文献１】Jailwala et al., 2000, Ann Intern Med. 2000;133:136-147
【非特許文献２】Cremonini et al., 2004, Minerva Med 95:427-441
【非特許文献３】Martindale, The Extra Pharmacopoeia, 31st Edition (1996) p. 1197
【非特許文献４】Wood, 2003, AJJ. NEMJ 349: 2136-2146
【非特許文献５】Di Cesareet al., 2002, Am J Gastroenterol 10:2585-2588
【発明の開示】
【００１０】
本発明は、細胞からの塩化物イオンの分泌を阻害する分子（阻害分子）を投与することによって、下痢型過敏性腸症候群（ｄ−ＩＢＳ）の少なくとも１つの症状を治療する方法に関する。例示的な阻害分子は、嚢胞性線維症膜コンダクタンス制御因子塩化物イオンチャネル（ＣＦＴＲ）を通して塩化物イオンの分泌を阻害するものである。他の例示的な阻害分子には、カリウムイオンチャネルオープナーが含まれる。ｄ−ＩＢＳの例示的な症状には、疼痛、腹部不快、下痢、異常な排便回数、異常な大便粘稠度及び切迫の存在が含まれる。したがって、一実施形態では、本発明は、ｄ−ＩＢＳの１つ又は複数の症状を治療する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、細胞からの塩化物イオンの分泌を阻害する分子（阻害分子）の前記ｄ−ＩＢＳの１つ又は複数の症状の治療に有効な量を投与することを含む方法を提供する。好ましい実施形態では、阻害分子の投薬量は、約５０ｍｇ／日〜約７５０ｍｇ／日の投薬量の経口投与腸溶性コーティングクロフェレマーと生物学的に同等である。一実施形態では、生物学的同等性は、特定の投薬量の他の阻害分子、例えば約５０ｍｇ／日〜約７５０ｍｇ／日の投薬量のクロフェレマーで見られるような、類似した治療効果を生じるのに十分な阻害分子用量である。他の実施形態では、生物学的同等性は、米国食品医薬品局によって定義されるもの、又は、米国食品医薬品局によって承認された方法に従って決められるものである。特定の実施形態では、阻害分子はＣＯＸ−２を阻害する化合物、好ましくはＣＯＸ−１以上に選択的にＣＯＸ−２を阻害する化合物であって、好ましくは全身に吸収されない化合物と同時投与される。そのような化合物には、５−ＡＳＡ、スルファサラジン、メサラミン、ＡＰＡＺＡ、並びに他の市販のＣＯＸ−２阻害剤、例えばセレコキシブ及びロフェコキシブが含まれる。
【００１１】
特定の実施形態では、本発明は、ｄ−ＩＢＳに伴う疼痛及び下痢を治療する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、細胞からの塩化物イオンの分泌を阻害する分子（阻害分子）をｄ−ＩＢＳに伴う疼痛及び下痢の治療に有効な量を投与することを含む方法を目的とする。他の実施形態では、本発明は、ｄ−ＩＢＳに伴う腹部不快及び下痢を治療する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、細胞からの塩化物イオンの分泌を阻害する分子（阻害分子）をｄ−ＩＢＳに伴う腹部不快及び下痢の治療に有効な量を投与することを含む方法を目的とする。他の特定の実施形態では、本発明は、ｄ−ＩＢＳに伴う疼痛を治療する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、細胞からの塩化物イオンの分泌を阻害する分子（阻害分子）をｄ−ＩＢＳに伴う疼痛の治療に有効な量を投与することを含む方法を目的とする。他の実施形態では、本発明は、ｄ−ＩＢＳに伴う腹部不快を治療する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、細胞からの塩化物イオンの分泌を阻害する分子（阻害分子）をｄ−ＩＢＳに伴う腹部不快の治療に有効な量を投与することを含む方法を目的とする。鎮痛又は抗炎症剤を、阻害分子と同時投与してもよい。詳細には、そのような剤は全身に吸収されないように製剤化又は修飾される。
【００１２】
他の実施形態では、本発明は、ｄ−ＩＢＳに伴う下痢を治療する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、細胞からの塩化物イオンの分泌を阻害する分子（阻害分子）をｄ−ＩＢＳに伴う下痢の治療に有効な量を投与することを含み、前記阻害分子はクロトン属の種及びカロフィルム属の種から単離される重合プロアントシアニジン組成物ではなく、又は、前記阻害分子はクロフェレマーではない方法を目的とする。他の実施形態では、本発明は、ｄ−ＩＢＳに伴う異常な排便回数、異常な大便粘稠度又は切迫の存在を治療する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、細胞からの塩化物イオンの分泌を阻害する分子（阻害分子）をｄ−ＩＢＳに伴う異常な排便回数、異常な大便粘稠度又は切迫の存在の治療に有効な量を投与することを含み、前記阻害分子はクロトン属の種及びカロフィルム属の種から単離される重合プロアントシアニジン組成物ではなく、又は、前記阻害分子はクロフェレマーではない方法を目的とする。
【００１３】
他の実施形態では、本発明は、ｄ−ＩＢＳに伴う下痢を治療する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、腸溶性保護クロフェレマー（CAS 148465-45-6）をｄ−ＩＢＳに伴う下痢の治療に有効な量を経口投与することを含み、前記量が約５０ｍｇ／日〜約７５０ｍｇ／日である方法を目的とする。他の実施形態では、本発明は、ｄ−ＩＢＳに伴う異常な排便回数、異常な大便粘稠度又は切迫の存在を治療する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、腸溶性保護クロフェレマーをｄ−ＩＢＳに伴う異常な排便回数、異常な大便粘稠度又は切迫の存在の治療に有効な量を経口投与することを含み、前記量は約５０ｍｇ／日〜約７５０ｍｇ／日である方法を目的とする。クロフェレマーが他の方法で、例えば徐放製剤（非腸溶性保護）で製剤化されるある実施形態では、投与されるクロフェレマーの投薬量が、約５０ｍｇ／日〜約７５０ｍｇ／日の投薬量の経口投与腸溶性保護クロフェレマーと生物学的に同等である。
【００１４】
他の実施形態では、本発明は、ｄ−ＩＢＳに伴う下痢を治療する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、クロトン属の種及びカロフィルム属の種から単離される重合プロアントシアニジン組成物のｄ−ＩＢＳに伴う下痢の治療に有効な量を投与することを含み、前記量がクロフェレマーの約５０ｍｇ／日〜約７５０ｍｇ／日の経口投与用量と生物学的に同等である方法を目的とする。他の実施形態では、本発明は、ｄ−ＩＢＳに伴う異常な排便回数、異常な大便粘稠度又は切迫の存在を治療する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、クロトン属の種及びカロフィルム属の種から単離される重合プロアントシアニジン組成物のｄ−ＩＢＳに伴う異常な排便回数、異常な大便粘稠度又は切迫の存在の治療に有効な量を投与することを含み、前記量がクロフェレマーの約５０ｍｇ／日〜約７５０ｍｇ／日の経口投与用量と生物学的に同等である方法を目的とする。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１５】
本発明は、細胞からの塩化物イオンの分泌を阻害する分子（阻害分子）を投与することによって、下痢型過敏性腸症候群（ｄ−ＩＢＳ）の少なくとも１つの症状を治療する方法に関する。例示的な阻害分子は、嚢胞性線維症膜コンダクタンス制御因子塩化物イオンチャネル（ＣＦＴＲ）を通して塩化物イオンの分泌を阻害するものである。他の例示的な阻害分子には、カリウムイオンチャネルオープナーが含まれる。ｄ−ＩＢＳの例示的な症状には、疼痛、腹部不快、下痢、異常な排便回数、異常な大便粘稠度及び切迫の存在が含まれる。したがって、一実施形態では、本発明は、ｄ−ＩＢＳの１つ又は複数の症状を治療する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、細胞からの塩化物イオンの分泌を阻害する分子（阻害分子）の前記ｄ−ＩＢＳの１つ又は複数の症状の治療に有効な量を投与することを含む方法を提供する。
【００１６】
本発明は、クロトン属の種又はカロフィルム属の種から単離される重合プロアントシアニジン組成物、例えばクロフェレマーが、ｄ−ＩＢＳに伴う疼痛及び腹部不快を軽減するという発見に一部基づく。さらに、本発明は、例えば嚢胞性線維症膜コンダクタンス制御因子塩化物イオンチャネル（ＣＦＴＲ）を通した上皮細胞内の塩化物イオンの輸送が、分泌性（急性）下痢だけでなく、予想外にも、下痢型過敏性腸症候群（ｄ−ＩＢＳ）の病因にも関係しているという発見に一部基づく。さらに、本発明は、クロトン属の種又はカロフィルム属の種から単離される重合プロアントシアニジン組成物、例えばクロフェレマーが、分泌性下痢の治療のためにこれまで用いられてきたものよりも有意に低い投薬量でｄ−ＩＢＳの下痢性の症状、例えば異常な排便回数、異常な大便粘稠度又は切迫の存在を軽減するという発見に一部基づく。例えば、これまで分泌性下痢を治療するのに有効であると教示されてきた投薬量は、２日間にわたって経口投与される５，５００ｍｇの腸溶性保護クロフェレマーを含んでいたが、本発明の例示的な投薬量は約５０ｍｇ〜約７５０ｍｇ／日の経口投与腸溶性保護クロフェレマーを含む。
【００１７】
塩化物イオンの輸送は、いくつかのメカニズムで阻害することができる。例えば、塩化物イオンの分泌は、塩化物イオンの輸送が阻害されるように嚢胞性線維症膜コンダクタンス制御因子塩化物イオンチャネル（ＭＲ）の機能に影響を及ぼすことによって阻害することができる。塩化物イオンの分泌は、細胞内のカリウムイオンチャネルを開放することによって阻害することもできる。塩化物イオンの分泌は、ｃＡＭＰの上方調節を遮断することによって阻害することもできる。
【００１８】
嚢胞性線維症膜コンダクタンス制御因子塩化物イオンチャネル（ＣＦＴＲ）は１４８０個のアミノ酸タンパク質であり、様々な真核生物細胞型における塩化物コンダクタンスの発現と関連づけされている。Rommens et al., 1989, Science 245:1059；Riorden et al., 1989, Science 245:1066；Kerem et al., 1989, Science 245:1073；Drumm et al., 1991, Cell 64:681；Kartner et al., 1991, Cell 64:681；Gregory et al., 1990, Nature 347:382；Rich et al., 1990, Nature 347:358及びRommens et al., 1991, Proc. Nat. Acad. Sci. USA 88:7500を参照。ＣＦＴＲの欠陥は、ｃＡＭＰ媒介性のアゴニストに応じて塩化物イオンを分泌する気道、汗腺、膵臓及び他の組織の上皮細胞の能力を無効にするか低減し、ｃＡＭＰ依存性プロテインキナーゼＡ（ＰＫＡ）による頂端膜チャネルの活性化を損なう。Frizell et al., 1987, Trends Neurosci 10:190；Welsh, 1990, FASEB J. 4:2718を参照。
【００１９】
ＣＦＴＲのヌクレオチド配列及びアミノ酸配列はクローニングされており（Riordan et al., 1989, Science 245:1066-1073）、それぞれ、GenBankにおいてアクセッション番号M28668で、SwissProtにおいてアクセッション番号P13569でアクセス可能である。
【００２０】
本発明の方法で有用な阻害分子には、例えばＣＦＴＲの機能を阻害するか、カリウムイオンチャネルを開放するか又はｃＡＭＰの上方調節を阻害し、そのように塩化物イオンチャネルの開放を阻害することによって塩化物イオンの分泌を阻害する任意の分子が含まれる。特定の実施形態では、本発明の阻害分子には、全身への吸収を制限するために高分子上に固定化されるように製剤化される小分子、並びに、単離された天然のＣＦＴＲ阻害剤、カリウムイオンチャネルオープナー、ｃＡＭＰブロッカー／阻害剤及びそれらの合成若しくは半合成の形態が含まれる。本発明の阻害剤のアナログ、誘導体及び修飾形態も企図される。
【００２１】
本発明の方法で有用な多くの分子が当技術分野で公知である。例えば、ＣＦＴＲ機能を阻害する例示的な分子には、スパルテイン（米国特許第５１００６４７号）；チアゾリジノン化合物、例えば、米国特許出願公開第２００４−００６３６９５号及び２００４−０２３５８００号などに記載のもの、例えば２−チオキソ−４−チアゾリジノン化合物及びThiagarjah et al., 2004, Gastroenterology 126:511-519（図７を参照）に記載の３−［（３−トリフルオロメチル）フェニル］−５−［（３カルボキシフェニル）メチレン］−２−チオキソ−４−チアゾリジノン、又は他の、その２−チオキソ−４−チアゾリジノンアナログ及び誘導体；Ｎ−（２−ナフタレニル）−［（３，５−ジブロモ−２，４ジヒドロキシフェニル）メチレン］グリシンヒドラジド又はその、他のグリシンヒドラジドアナログ若しくは誘導体（図７を参照）；マロン酸ジヒドラジド、又はそのアナログ若しくは誘導体（図７を参照）；スルホニル尿素、例えばトルブタミド、グリベンクラミド及び、例えば米国特許第５２３４９２２号に記載の関連アナログ；フルオレセイン又はその誘導体、例えば、米国特許出願公開第２００４００９２５７８号などに記載のもの；並びに、ＣＦＴＲ機能を活性化するよりも阻害するｃＡＭＰ若しくはｃＧＭＰの加水分解抵抗性アナログ、例えば、８−ブロモ−ｃＡＭＰ、８−（４−クロロフェニルチオ）（ＣＰＴ）−ｃＡＭＰ及び８−ブロモｃＧＭＰ、ＣＰＴ−ｃＧＭＰが含まれる。
【００２２】
他の例示的な阻害分子には、それらに限定されないが、ベラパミル；ニフェジピン；ジルチアゼム；ジスルホン酸スチルベン化合物；アリールアミノ安息香酸又はそのアナログ若しくは誘導体、例えば、ジフェニルアミン−２−カルボン酸（ＤＰＣ）又は５−ニトロ−２（３−フェニルプロピルアミノ）ベンゾアート（ＮＰＰＢ）又はアントラセン−９−カルボン酸（９−ＡＣ）；フルフェナム酸（ＦＦＡ）；９−（テトラヒドロ−２−フリル）アデニン（SQ22536）；２’，５’−ジデオキシアデノシン（ＤＤＡ）；ロペラミド；ラセカドトリル；塩酸リダミジン；ロニダミン；バナジン酸塩；ブメタニド；pp2a；PP1；PP2B；次サリチル酸ビスマス；塩酸ジフェノキシラート；及びスパルテインが含まれる。上記の化合物に関するさらなる議論及び情報は、Fedorak et al., 1987, Digestive Disease and Sciences 32(2): 195-205; Farthing, 2004, Expert Opin. Investig. Drugs 13(7): 777-785; Suzuki et al., 2003, J. Physiol. 546(3): 751-763; Sullivan et al., 1996, Kidney International 49:1586-1591; Galietta et al., 2004, Curr. Opin. Pharmacol. 4:497-503で見いだすことができる。塩素チャネル阻害剤のさらなる議論及び例は、Greger, 1990, Methods in Enzymology 191:793-810で開示されている。前述の特許及び非特許文献の全ては、その全体が本明細書で参照により組み込まれる。
【００２３】
本発明の阻害分子には、ジアゾキシド、レマカリム及び硫酸ミノキシジルなどのカリウムイオンチャネルオープナー、並びに、例えば米国特許第５２３４９２２号に記載のものなどの関連アナログも含まれる。
【００２４】
さらなる例示的な阻害分子には、天然のＣＦＴＲ阻害剤及びその合成若しくは半合成の形態、例えば、それらに限定されないが、Schuier et al., 2005, J. Nutr. 135:2320-2325に記載のカカオ豆から単離されるココア関連のフラボノイドを含むフラボノイド；それらに限定されないがアラキドン酸、リノール酸、オレイン酸、エライジン酸、パルミチン酸、ミリスチン酸、リゾホスファチジン酸及びニフルム酸を含む脂肪酸；フラボノール；ポリフェノール；プロアントシアニジン；オリゴメリックプロアントシアニジン（ＯＰＣ）；プロシアニドリックオリゴマー（ＰＣＯ）；タンニン；縮合タンニン；ロイコシナニジン；アントシアニジン；プロシアニジン（例えば、Ｂ１〜Ｂ５及びＣ１〜Ｃ２）；シアニジン；プロデルフィニジン；デルフィニジン；カテキン；エピカテキン；ガロカテキン；エピガロカテキン；没食子酸エピガロカテキン；没食子酸エピカテキン；没食子酸カテキン；没食子酸ガロカテキン；ケルセチン；セスキテルペン；ジテルペン；テルペン及びテルペノイド誘導体；アルカロイド；サポニン；モリン；ルテオリン；バイカレイン；及びアピゲニン；並びに、上のいずれかのオリゴマー、重合体、共重合体及び誘導体が含まれる。
【００２５】
好ましい一実施形態では、阻害分子はプロアントシアニジン重合体組成物である。他の実施形態では、プロアントシアニジン重合体組成物は、水溶性プロアントシアニジン重合体組成物である。他の好ましい実施形態では、本発明の阻害分子は、経口投与される場合、全身に吸収されないか、又は全身に吸収されないように修飾される。
【００２６】
プロアントシアニジンは、一群の縮合タンニンである。タンニンは多種多様な植物で見られ、加水分解型又は縮合型に分類される。下痢の治療法又は予防処置として伝統医学で用いられる多くの植物が、タンニン、特にプロアントシアニジンを含むことが見いだされた（例えば、Yoshida et al., 1993, Phytochemistry32:1033; Yoshida et al., 1992, Chem. Pharm. Bull., 40:1997; Tamaka et al., 1992, Chem. Pharm. Bull. 40:2092を参照）。薬草、例えばPycanthus angolenis及びBaphia nitidaからの粗抽出物は、動物実験で下痢止めの性質を有することが明らかになった（Onwukaeme and Anuforo, 1993, Discovery and Innovation, 5:317；Onwukaeme and Lot, 1991, Phytotherapy Res., 5:254）。タンニンを含有する粗抽出物、特にイナゴマメの莢及びヨーロッパグリの木材からの抽出物が、下痢の治療薬又は予防薬として提案されている（米国特許第５０４３１６０号、欧州特許第４８１３９６号）。
【００２７】
プロアントシアニジンは、同じか異なるモノマー構造であることができる、少なくとも２個以上のモノマー単位を含む。モノマー単位（一般に、「ロイコアントシアニジン」と呼ばれる）は、一般に、カテキン、エピカテキン、ガロカテキン、ガロエピカテキン、フラバノール、フラボノール及びフラバン−３，４−ジオール、ロイコシナニジン及びアントシアニジンを含むモノマーフラボノイドである。したがって、重合鎖は異なる構造単位に基づき、それは多様な重合プロアントシアニジン及び多数の可能な異性体を形成する（Hemingway et al., 1982, J.C.S. Perkin, 1:1217）。フラボノイド３−オール単位のより大きな重合体がほとんどの植物で支配的であり、平均分子量は２，０００ダルトンより上で、６個以上の単位を含む（Newman et al., 1987, Mag. Res. Chem., 25:118）。
【００２８】
プロアントシアニジン重合体は多種多様な植物、特に木のような成長習性を有するもの（例えば、クロトン属の種及びカロフィルム属の種）で見いだされる。南米で見いだされる、クロトン・サクタリス（Croton sakutaris）、クロトン・ゴシピフォリウス（Croton gossypifolius）、クロトン・パラノスティマ（Croton palanostima）、クロトン・レクレリ、クロトン・エリスロキルス（Croton erythrochilus）及びクロトン・ドラコノイデス（Croton draconoides）を含むいくつかの異なるクロトン属樹種は、サングレ・デ・ドラーゴ（Sangre de Drago）又は「キリン血」と呼ばれる赤い粘性ラテックス樹液を産する。この赤い、粘性ラテックスは、その薬理作用が広く知られている。例えば、米国特許第５２１１９４４号には、クロトン属の種からの水溶性プロアントシアニジン重合体組成物の単離及び抗ウイルス薬としての組成物の使用が最初に記載された（Ubillas et al., 1994, Phytomedicine, 1:77も参照のこと）。プロアントシアニジン重合体組成物は、呼吸器合胞体（ＲＳ）、インフルエンザ、パラインフルエンザ及びヘルペスウイルスを含む様々なウイルスに対して、抗ウイルス活性を有することが明らかにされた。米国特許第５２１１９４４号は、カロフィルム・イノフィルム（Calophyllum inophylum）からの水溶性プロアントシアニジン重合体組成物の単離、及びこの組成物の抗ウイルス薬としての使用も開示する。
【００２９】
本発明で有用な例示的なプロアントシアニジン重合体組成物は、好ましくは、当技術分野で公知の任意の方法によってクロトン属の種又はカロフィルム属の種から単離される。例えば、プロアントシアニジン重合体組成物は、下の実施例２で開示される方法又は米国特許第５２１１９４４号若しくはUbillas et al., 1994, Phytomedicine 1: 77-106で開示される方法によって、クロトン属の種又はカロフィルム属の種から単離することができる。
【００３０】
好ましい一実施形態では、本発明のプロアントシアニジン重合体組成物は、クロフェレマーである。クロフェレマー（CAS 148465-45-6）は、トウダイグサ科のクロトン・レクレリロアントシアニジンである。クロフェレマーの平均分子量は、約１９００ダルトン〜約２７００ダルトンである。クロフェレマーを構成するモノマーには、カテキン、エピカテキン、ガロカテキン及びエピガロカテキンが含まれる。クロフェレマーの鎖長は約３〜約３０単位の範囲であり、平均鎖長は約８単位である。クロフェレマーの構造を下に示す。
【００３１】
【化１】
0005384329.tif 000002
平均でｎ＝６である。
【００３２】
クロフェレマーを単離するための他の実例となる方法は、米国特許公開第２００５１００１９３８９号で見られ、その内容は本明細書で明示的に組み込まれる。
【００３３】
本発明の他の実施形態では、特に重合プロアントシアニジン組成物ではないクロトン属の種若しくはカロフィルム属の種から得られる生ラテックス、又はクロトン属の種若しくはカロフィルム属の種から得られる抽出物は、本発明の方法で有用である。例示的な抽出物は、Persinos et al., 1979, J. Pharma. Sci. 68:124及びSethi, 1.977, Canadian J. Pharm. Sci. 12:7に記載されている。
【００３４】
特定の実施形態では、本発明の方法で有用な本発明の阻害分子は、ＣＦＴＲの発現を阻害するＣＦＴＲヌクレオチド配列のアンチセンスオリゴヌクレオチドである。本発明の方法で有用なそのようなアンチセンス核酸は、二本鎖又は一本鎖のＲＮＡ又はＤＮＡ又はその変更形態若しくは誘導体であるオリゴヌクレオチドであり、それらは直接投与することができるか、又は外来性の、導入配列の転写によって細胞内で生産することができる。ＣＦＴＲの発現を阻害することによりＣＦＴＲ機能を阻害するそれらの能力を確認するために、アンチセンス核酸を公知の方法によって試験することができる。
【００３５】
ある実施形態では、ＣＦＴＲアンチセンス核酸は少なくとも６個のヌクレオチドであることができ、好ましくは、オリゴヌクレオチド（６個〜約５０個のオリゴヌクレオチド）であることができる。具体的な態様では、オリゴヌクレオチドは、長さが少なくとも１０個のヌクレオチド、少なくとも１５個のヌクレオチド、少なくとも１００個のヌクレオチド又は少なくとも２００個のヌクレオチドである。オリゴヌクレオチドは、ＤＮＡ又はＲＮＡ又はそのキメラ混合物若しくは誘導体若しくは変更版、一本鎖又は二本鎖であることができる。オリゴヌクレオチドは、当技術分野で公知の技術を用いて、塩基部分、糖残基又はリン酸骨格の部位で修飾することができる。オリゴヌクレオチドは、他の付加基、例えばペプチド、又は、特に経口投与するときの全身吸収を阻害する他の化合物を含むことができる。オリゴヌクレオチドは、その構造上の任意の位置で、当技術分野で一般に公知である置換基で修飾することができる。
【００３６】
ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）分子は、ＣＦＴＲの発現を減少させることによって、ＣＦＴＲ機能の阻害剤として用いることができる。ＲＮＡｉは、それ自身の配列に対応する遺伝子の発現を抑制する、二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）の能力と定義される。ＲＮＡｉは、転写後遺伝子抑制又はＰＴＧＳとも呼ばれる。細胞の細胞質内に通常見いだされる唯一のＲＮＡ分子は一本鎖ｍＲＮＡの分子であるので、細胞は、二本鎖ｄｓＲＮＡを認識して、２１〜２５個の塩基対（約２回転の二重螺旋）を含む断片に切断する酵素を有する。断片のアンチセンス鎖は、それが内因性の細胞内ｍＲＮＡ（例えば、ヒトＣＦＴＲ）の分子上の相補的なセンス配列とハイブリダイズするように、センス鎖から十分離れている。このハイブリダイゼーションは二本鎖領域でｍＲＮＡの切断を起こし、こうしてポリペプチドに翻訳されるその能力を無効にする。したがって、特定の遺伝子に対応するｄｓＲＮＡの導入は、特定の組織での及び／又は選択された時間での、その遺伝子の細胞自身の発現をノックアウトする。
【００３７】
他の実施形態では、ＣＦＴＲの機能又は発現の阻害剤は、ＣＦＴＲのアプタマーであることができる。当技術分野で公知のように、アプタマーは特異的な分子標的（例えば、ＣＦＴＲ）に強く結合する核酸（例えば、ＲＮＡ、ＤＮＡ）で構成される巨大分子である。特定のアプタマーは線状のヌクレオチド配列によって記載することができ、一般的に長さは約１５〜６０個のヌクレオチドである。高い特異性に加えて、アプタマーはそれらの標的に対して非常に高い親和性を有する（例えば、タンパク質に対してピコモルから低いナノモルの範囲の親和性）。ＣＦＴＲ又はその断片と結合することができるアプタマーの選択は、当技術分野で公知の方法を通して達成することができる。例えば、アプタマーは指数関数的な強化によるリガンドの系統進化（ＳＥＬＥＸ、Systematic Evolution of Ligands by Exponential Enrichment）法（Tuerk and Gold, 199.0, Science 249:505-510）を用いて選択することができる。
【００３８】
ある実施形態では、ＣＦＴＲと結合する抗体を、本発明の方法で用いることができる。ＣＦＴＲに対する例示的な抗体は国際公開第９５／０６０６６号に記載され、その開示は本明細書で参照により完全に組み込まれる。好ましい一実施形態では、ＣＦＴＲに対する抗体は、ＣＦＴＲの細胞外部分に結合する。ＣＦＴＲ又はＣＦＴＲの免疫原性断片、好ましくは細胞外断片に対する抗体の作製方法は、当技術分野で公知である。抗体が作製されると、ＣＦＴＲ機能、例えば塩化物イオン輸送を阻害するその効果を判定するために、前掲の公知の方法を用いてそれをスクリーニングすることができる。
【００３９】
本発明に従い、ＣＦＴＲ、その断片又は他の誘導体若しくはアナログを免疫原として用いて、本発明の方法で用いるためのそのような免疫原を認識する抗体を作製することができる。そのような抗体には、それらに限定されないが、ポリクローナル、モノクローナル、キメラ、単一鎖、Ｆａｂフラグメント及びＦａｂ発現ライブラリが含まれる。一実施形態では、細胞の外側に露出する一部のＣＦＴＲに対する抗体が作製される。
【００４０】
ＣＦＴＲのイディオタイプを含む抗体断片は、公知の技術によって作製することができる。例えば、そのような断片には、それらに限定されないが、抗体分子のペプシン消化によって作製することができるＦ（ａｂ’）２フラグメント；Ｆ（ａｂ’）２フラグメントのジスルフィド架橋を還元することによって作製することができるＦａｂ’フラグメント；及び、抗体分子をパパイン及び還元剤で処理することによって作製することができるＦａｂフラグメントが含まれる。抗体作製では、所望の抗体のスクリーニングは、当技術分野で公知の技術、例えば酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ、enzyme-linked immunosorbent assay）によって達成することができる。
【００４１】
候補分子が塩化物イオン輸送を阻害することができるかどうか試験するために、塩化物イオン輸送を測定する当技術分野で公知の任意の方法を用いることができるか又は適切に修正することができる。例えば、塩化物イオン輸送は、候補分子をＣＦＴＲ機能に及ぼすその影響について試験するために用いることができる。候補化合物がＣＦＴＲ機能を阻害するかどうかを試験するための例示的な方法は、米国特許第５２３４９２２号で記載されている。簡潔には、候補分子を、ＣＦＴＲを（内因的に又は組換えで）発現する細胞と、任意選択でｃＡＭＰアゴニスト（例えば、ＣＰＴｃＡＭＰ、ｄｂ−ｃＡＭＰ、フォルスコリン、ＩＢＭＸ、コレラトキシン、大腸菌リポポリサッカライド）などのＣＦＴＲ活性化物質と接触させ、全細胞膜電流を測定する。候補分子と接触させない細胞と比較して候補分子の存在下で電流がより低い場合、その分子はＣＦＴＲ機能を阻害する。塩化物媒介性の電流を測定するためにUssingチャンバーを用いる他の例示的なスクリーニング法は、Schuier et al., 2005, J. Nutr. 135:2320-2325に記載されている。類似した方法が、Fischer et al., 2004, J. Ethnophann. 93:351-357に記載されている。ＣＦＴＲ機能の阻害剤のスクリーニングのための特定のハイスループット方法が、Galietta et al., 2004, Curr. Opin. Pharmacol. 4:497-503に記載されている。
【００４２】
一実施形態では、本方法は、候補化合物及びＣＦＴＲ機能の活性化物質をＣＦＴＲ発現細胞と接触させること、細胞によって生成される塩化物イオン依存性電流を測定すること、及び、接触させた細胞によって生成される電流をＣＦＴＲ機能の活性化物質だけと接触させた第２の細胞によって生成される電流と比較することを含み、第２の細胞によって生成される電流レベルと比較したときの候補分子と接触させた細胞によって生成されるより低いレベルの電流は、候補分子がＣＦＴＲ機能の阻害剤であることを示す。この実施形態の一態様では、ＣＦＴＲ機能の活性化物質は、ｃＡＭＰアゴニストである。他の態様において、ＣＦＴＲは細胞内で組換えにより発現される。
【００４３】
本発明の他の実施形態では、塩化物イオン輸送を阻害する剤、例えばＣＦＴＲ機能を阻害する剤を特定するために、コンビナトリアルケミストリーを用いることができる。コンビナトリアルケミストリーでは、それらの多くは構造的に類似している何十万もの化合物を含むライブラリを作成することが可能である。ハイスループットスクリーニングプログラムは既知の標的との親和性についてこれらの巨大なライブラリをスクリーニングすることが可能であるが、より小さな寸法のライブラリを達成するものの最大の化学的多様性を提供する新しい手法が開発された。（例えば、Matter, 1997, Journal of Medicinal Chemistry 40:1219-1229を参照）。
【００４４】
好ましい実施形態では、本発明の方法で用いる阻害分子は、経口投与される場合、実質的に全身に吸収されない。経口送達されると全身に吸収される小分子及び他の薬剤は、全身への吸収を阻害するために修飾することができる。そのような修飾は、当技術分野で公知である。例えば、小分子阻害剤などの本発明の阻害分子は、消化管で実質的に不活性で阻害分子の機能と干渉しない非全身吸収性化合物に共有結合することができる。そのような非全身吸収性化合物には、様々な重合体が含まれる。本発明の阻害分子と一緒に好ましく用いられる重合体は胃腸系での分解及び吸収に抵抗性であり、すなわち、それらの重合体は、胃及び腸内の生理条件下で、身体組織によって吸収されやすい断片に実質的に分解しない。消化管で遭遇する条件下で実質的に不活性である加水分解抵抗性骨格を有する重合体が好ましい。好ましくはそのような重合体は、胃腸管から体の他の部分への吸収に部分的に、又は完全に抵抗するのに十分に高い分子量を有する。重合体は、約５００ダルトン〜約５００，０００ダルトン、好ましくは約２，０００ダルトン〜約１５０，０００ダルトンの分子量を有することができる。適当な重合体の例には、それらに限定されないが、多糖、ポリエチレングリコール重合体、セルロース重合体、ポリスチレン重合体、ポリアクリラート重合体及びポリアミド重合体が含まれる。
【００４５】
全身吸収性ではなく、トルブタミド、グリベンクラミド、ジアゾキシド、レマカリム、硫酸ミノキシジル、エピカテキン、カテキン、ケルセチン、モリン、ルテオリン、バイカレイン、アピゲニン、フルオレセイン、３［（３−トリフルオロメチル）フェニル］−５−［（３−カルボキシフェニル）メチレン］−２−チオキソ−４−チアゾリジノン、ベラパミル、ニフェジピン、ジルチアゼム、ロペラミド、ジフェニルアミン−２−カルボキシレート（ＤＰＣ）、５−ニトロ−２（３−フェニルプロピルアミノ）ベンゾアート（ＮＰＰＢ）、アントラセン−９−カルボン酸（９−ＡＣ）、フルフェナム酸（ＦＦＡ）、９−（テトラヒドロ−２−フリル）アデニン（SQ22536）、２’，５’−ジデオキシアデノシン、スパルテイン並びに、それらの誘導体、断片及び／又はアナログの１つ又は複数で置換されるクロフェレマー及び他のプロアントシアニジン重合体分子を、ＣＦＴＲ機能の阻害活性についてスクリーニングすることができる。
【００４６】
本発明は、ヒトの男女を含む温血動物で下痢型過敏性腸症候群（ｄＩＢＳ）に伴う１つ又は複数の症状を治療及び／又は予防する方法を包含し、それらの症状には、非限定的ながら、疼痛、腹部の不快、下痢、切迫の存在、異常な排便回数及び異常な大便粘稠度が含まれる。本発明の方法は、ｄ−ＩＢＳ治療が必要な対象に、本発明に従う塩化物イオン輸送の阻害剤を投与することを一般に含む。好ましい一実施形態では、阻害剤は経口投与され、全身に吸収されない。好ましくは、患者はヒトの女性である。
【００４７】
一実施形態では、本発明は、ｄ−ＩＢＳに伴う疼痛及び下痢を治療する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、細胞からの塩化物イオンの分泌を阻害する分子（阻害分子）のｄ−ＩＢＳに伴う疼痛及び下痢の治療に有効な量を投与することを含む方法を提供する。他の実施形態では、本発明は、ｄ−ＩＢＳに伴う腹部不快及び下痢を治療する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、細胞からの塩化物イオンの分泌を阻害する分子（阻害分子）のｄ−ＩＢＳに伴う腹部不快及び下痢の治療に有効な量を投与することを含む方法を提供する。ある実施形態では、阻害分子はＣＯＸ−２を阻害する化合物、好ましくはＣＯＸ−１以上にＣＯＸ−２を阻害する化合物などの、鎮痛性及び／又は抗炎症性の化合物と同時投与される。
【００４８】
一実施形態では、本発明は、ｄ−ＩＢＳに伴う疼痛を治療する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、細胞からの塩化物イオンの分泌を阻害する分子（阻害分子）のｄ−ＩＢＳに伴う疼痛の治療に有効な量を投与することを含む方法を提供する。他の実施形態では、本発明は、ｄ−ＩＢＳに伴う腹部不快を治療する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、細胞からの塩化物イオンの分泌を阻害する分子（阻害分子）のｄ−ＩＢＳに伴う腹部不快の治療に有効な量を投与することを含む方法を提供する。ある実施形態では、阻害分子はＣＯＸ−２を阻害する化合物、好ましくはＣＯＸ−１以上にＣＯＸ−２を阻害する化合物などの、鎮痛性及び／又は抗炎症性の化合物と同時投与される。
【００４９】
本発明の阻害分子は、単回投与又は１日に１回、２回、３回若しくは４回からの分割薬量で投与することができる。特定の実施形態では、阻害分子は１日２回投与される。他の実施形態では、阻害分子は少なくとも２日間連続で１日２回投与される。他の実施形態では、阻害分子は少なくとも２４時間、４８時間、７２時間、９６時間、１週、２週、１カ月、２カ月及び３カ月からなる群から選択される期間投与される。ｄ−ＩＢＳが慢性状態のある実施形態では、阻害分子は無期限に服用される。
【００５０】
疼痛及び不快は、当技術分野で公知の任意の方法で、例えば患者が疼痛又は不快のレベルを、０は疼痛又は不快がなく５は最高レベルの疼痛又は不快が割り当てられる、０〜５のスケールに割り当てる疼痛又は不快のスケールで測定することができる。ある実施形態では、疼痛又は不快の緩和は、疼痛又は不快の平均レベルの低下、疼痛又は不快のない日数の増加で測定される。ある実施形態では、疼痛又は不快がない日数は、治療前と比較して少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％又は少なくとも５０％増加する。他の実施形態では、疼痛又は不快のレベルは、治療前と比較して少なくとも０．１、０．２、０．３、０．４又は少なくとも０．５単位減少した。
【００５１】
他の実施形態では、本発明は、ｄ−ＩＢＳに伴う下痢を治療する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、細胞からの塩化物イオンの分泌を阻害する分子（阻害分子）のｄ−ＩＢＳに伴う下痢の治療に有効な量を投与することを含み、前記阻害分子はクロトン属の種及びカロフィルム属の種から単離される重合プロアントシアニジン組成物ではなく、又は前記阻害分子はクロフェレマーではない方法を提供する。他の実施形態では、本発明は、ｄ−ＩＢＳに伴う異常な排便回数、異常な大便粘稠度又は切迫の存在を治療する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、細胞からの塩化物イオンの分泌を阻害する分子（阻害分子）のｄ−ＩＢＳに伴う異常な排便回数、異常な大便粘稠度又は切迫の存在の治療に有効な量を投与することを含み、前記阻害分子はクロトン属の種及びカロフィルム属の種から単離される重合プロアントシアニジン組成物ではなく、又は、前記阻害分子はクロフェレマーではない方法を提供する。
【００５２】
特定の実施形態では、排便回数は治療前と比較して少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％又は５０％減少する。他の実施形態では、排便回数は治療前と比較して１日につき少なくとも１回減少する。他の実施形態では、大便の粘稠度が増加し、すなわち、治療前と比較して少なくとも１０％、２０％、２５％、３０％、４０％又は５０％、大便中の水量が減少する。他の実施形態では、切迫の存在は治療前と比較して少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％又は少なくとも５０％減少する。
【００５３】
他の実施形態では、本発明は、ｄ−ＩＢＳに伴う下痢を治療する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、腸溶性保護クロフェレマー（CAS 148465-45-6）のｄ−ＩＢＳに伴う下痢の治療に有効な量を経口投与することを含み、前記量は約５０ｍｇ／日〜約７５０ｍｇ／日である方法を提供する。他の実施形態では、本発明は、ｄ−ＩＢＳに伴う異常な排便回数、異常な大便粘稠度又は切迫の存在を治療する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、腸溶性保護クロフェレマーのｄ−ＩＢＳに伴う異常な排便回数、異常な大便粘稠度又は切迫の存在の治療に有効な量を経口投与することを含み、前記量は約５０ｍｇ／日〜約７５０ｍｇ／日である方法を提供する。
【００５４】
他の実施形態では、本発明は、ｄ−ＩＢＳに伴う下痢を治療する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、クロフェレマー（CAS 148465-45-6）をｄ−ＩＢＳに伴う下痢の治療に有効な量を経口投与することを含む方法を提供する。他の実施形態では、本発明は、ｄ−ＩＢＳに伴う異常な排便回数、異常な大便粘稠度又は切迫の存在を治療する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、クロフェレマーをｄ−ＩＢＳに伴う異常な排便回数、異常な大便粘稠度又は切迫の存在の治療に有効な量を経口投与することを含む方法を提供する。クロフェレマーが他の方法（非腸溶性保護）で製剤化されるそのような実施形態では、投与されるクロフェレマーの投薬量は、約５０ｍｇ／日〜約７５０ｍｇ／日の投薬量の経口投与腸溶性保護クロフェレマーと生物学的に同等である。そのような製剤の一例は、徐放性製剤である。
【００５５】
他の実施形態では、本発明は、ｄ−ＩＢＳに伴う下痢を治療する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、クロトン属の種又はカロフィルム属の種から単離される重合プロアントシアニジン組成物をｄ−ＩＢＳに伴う下痢の治療に有効な量を投与することを含み、前記量がクロフェレマーの約５０ｍｇ／日〜約７５０ｍｇ／日の経口投与用量と生物学的に同等である方法を提供する。他の実施形態では、本発明は、ｄ−ＩＢＳに伴う異常な排便回数、異常な大便粘稠度又は切迫の存在を治療する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、クロトン属の種又はカロフィルム属の種から単離される重合プロアントシアニジン組成物をｄ−ＩＢＳに伴う異常な排便回数、異常な大便粘稠度又は切迫の存在の治療に有効な量を投与することを含み、前記量がクロフェレマーの約５０ｍｇ／日〜約７５０ｍｇ／日の経口投与用量と生物学的に同等である方法を提供する。
【００５６】
塩化物イオン輸送の阻害剤を投与する方法には、それらに限定されないが、非経口投与（例えば、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内及び皮下）並びに粘膜投与（例えば、鼻腔及び経口経路）が含まれる。具体的な実施形態では、阻害分子は筋肉内、静脈内又は皮下に投与される。阻害分子を含む組成物は、任意の都合のよい経路、例えば注入若しくはボーラス注射によって、上皮若しくは皮膚粘膜ライニング（例えば口腔粘膜、直腸及び腸の粘膜、その他）を通した吸収によって投与することができ、他の生理活性剤とともに投与することもできる。投与は、全身投与でも局所投与でもよい。好ましくは、阻害分子は経口投与される。
【００５７】
本発明のある好ましい実施形態では、阻害分子はクロフェレマー（CAS 14846545-6）である。他の好ましい実施形態では、阻害分子は経口投与される。他の好ましい実施形態では、阻害分子は、胃の環境から、すなわち胃で見られる酸性環境及び消化タンパク質からその組成物を保護するように製剤化される。好ましい実施形態では、投与は経口経路により、阻害分子は腸溶性保護クロフェレマーである。
【００５８】
ある好ましい実施形態では、クロフェレマーは腸溶性保護剤形（腸溶性コーティング）で、約７５０ｍｇ／日以下の総量で経口投与される。本明細書で用いるように、約は誤差限界内であることを意味する。具体的な実施形態では、腸溶性コーティングクロフェレマーは、約５０ｍｇ／日〜７５０ｍｇ／日の量で対象へ経口投与される。他の実施形態では、腸溶性コーティングクロフェレマーは、約５００ｍｇ／日以下の総量で対象へ経口投与される。具体的な実施形態では、腸溶性コーティングクロフェレマーは、約５０ｍｇ／日〜５００ｍｇ／日の量で対象へ経口投与される。他の実施形態では、腸溶性コーティングクロフェレマーは、腸溶性コーティングクロフェレマーの量が約７００ｍｇ／日、約６５０ｍｇ／日、約６００ｍｇ／日、約５５０ｍｇ／日、約５００ｍｇ／日、約４５０ｍｇ／日、約４００ｍｇ／日、約３５０ｍｇ／日、約３００ｍｇ／日、約２５０ｍｇ／日、約２００ｍｇ／日、約１５０ｍｇ／日又は約１００ｍｇ／日以下で、対象へ経口投与される。他の実施形態では、腸溶性コーティングクロフェレマーは、約１００ｍｇ／日〜７５０ｍｇ／日の量で対象へ経口投与される。他の実施形態では、腸溶性コーティングクロフェレマーは、約１２５ｍｇ／日〜約５００ｍｇ／日、約２５０ｍｇ／日〜約５００ｍｇ／日、約２５０ｍｇ／日〜約４５０ｍｇ／日、約２５０ｍｇ／日〜約４００ｍｇ／日、約２５０ｍｇ／日〜約３５０ｍｇ／日又は約２５０ｍｇ／日〜約３００ｍｇ／日の量で、対象へ経口投与される。他の特定の実施形態では、対象へ経口投与される腸溶性コーティングクロフェレマーの総投薬量は、約５０ｍｇ、約５５ｍｇ、約６０ｍｇ、約６５ｍｇ、約７０ｍｇ、約７５ｍｇ、約８０ｍｇ、約８５ｍｇ、約９０ｍｇ、約９５ｍｇ、約１００ｍｇ、約１０５ｍｇ、約１１０ｍｇ、約１１５ｍｇ、約１２０ｍｇ、約１２５ｍｇ、約１３０ｍｇ、約１３５ｍｇ、約１４０ｍｇ、約１４５ｍｇ、約１５０ｍｇ、約１５５ｍｇ、約１６０ｍｇ、約１６５ｍｇ、約１７０ｍｇ、約１７５ｍｇ、約１８０ｍｇ、約１８５ｍｇ、約１９０ｍｇ、約１９５ｍｇ、約２００ｍｇ、約２０５ｍｇ、約２１０ｍｇ、約２１５ｍｇ、約２２０ｍｇ、約２２５ｍｇ、約２３０ｍｇ、約２３５ｍｇ、約２４０ｍｇ、約２４５ｍｇ、約２５０ｍｇ、約２５５ｍｇ、約２６０ｍｇ、約２６５ｍｇ、約２７０ｍｇ、約２７５ｍｇ、約２８０ｍｇ、約２８５ｍｇ、約２９０ｍｇ、約２９５ｍｇ、約３００ｍｇ、約３０５ｍｇ、約３１０ｍｇ、約３１５ｍｇ、約３２０ｍｇ、約３２５ｍｇ、約３３０ｍｇ、約３３５ｍｇ、約３４０ｍｇ、約３４５ｍｇ、約３５０ｍｇ、約３５５ｍｇ、約３６０ｍｇ、約３６５ｍｇ、約３７０ｍｇ、約３７５ｍｇ、約３８０ｍｇ、約３８５ｍｇ、約３９０ｍｇ、約３９５ｍｇ、約４００ｍｇ、約４０５ｍｇ、約４１０ｍｇ、約４１５ｍｇ、約４２０ｍｇ、約４２５ｍｇ、約４３０ｍｇ、約４３５ｍｇ、約４４０ｍｇ、約４４５ｍｇ、約４５０ｍｇ、約４５５ｍｇ、約４６０ｍｇ、約４６５ｍｇ、約４７０ｍｇ、約４７５ｍｇ、約４８０ｍｇ、約４８５ｍｇ、約４９０ｍｇ、約４９５ｍｇ、又は、約５００ｍｇを１日に１回、２回又は３回である。
【００５９】
本発明の他の実施形態では、阻害分子は、プロアントシアニジン重合体組成物であろうがＣＦＴＲ機能の阻害剤であろうが、好ましくは、約５０ｍｇ／日〜約７５０ｍｇ／日の投薬量又は前掲の用量のいずれかの経口投与腸溶性コーティングクロフェレマーと生物学的に同等である投薬量で投与される。一実施形態では、生物学的同等性は、特定の投薬量の他の阻害分子、例えば約５０ｍｇ／日〜約７５０ｍｇ／日の投薬量のクロフェレマーで見られるような、類似した治療効果を生じるのに十分な阻害分子の用量である。他の実施形態では、生物学的同等性は、米国食品医薬品局によって定義されるもの、又は、米国食品医薬品局によって承認された方法に従って決められるものである。
【００６０】
好ましい実施形態では、クロフェレマーは胃の酸性条件による分解及び／又は胃に存在するペプシンなどのタンパク質との相互作用から保護されるように腸溶性コーティングされている、すなわち、腸溶性保護製剤である。具体的な実施形態では、クロフェレマーは錠剤の形態である。他の具体的な実施形態では、錠剤は腸溶性コーティング、例えばEUDRAGIT（登録商標）である。好ましい実施形態では、クロフェレマーは腸溶性コーティングビーズ又は腸溶性コーティングカプセルシェル内の顆粒剤として製剤化される。他の実施形態では、クロフェレマーは遅延放出組成物、例えばMerck GEM、Alza OROS、ワックスマトリックスに製剤化される（放出は主に、製剤が胃から腸に通過するまで遅延される）。
【００６１】
ある実施形態では、阻害分子は胃酸を中和する１つ又は複数の化合物と製剤化される。代わりに、阻害分子を含む医薬組成物は、胃酸を中和する医薬組成物と同時に、又はその後に、又はその投与の後に投与される。胃酸を中和するために有用である制酸剤などの化合物には、それらに限定されないが、炭酸アルミニウム、水酸化アルミニウム、次硝酸ビスマス、次サリチル酸ビスマス、炭酸カルシウム、ジヒドロキシアルミニウム炭酸ナトリウム、マガルドレート、炭酸マグネシウム、水酸化マグネシウム、酸化マグネシウム及びそれらの混合物が含まれる。胃酸の分泌を低減すること及び／又は胃液の酸性度を低くすることができる化合物は当技術分野で公知であり、例としては、それらに限定されないが、制酸剤（水酸化アルミニウム、炭酸アルミニウム、グリシン酸アルミニウム、酸化マグネシウム、水酸化マグネシウム、炭酸マグネシウム、炭酸カルシウム、重炭酸ナトリウム）、胃酸ブロッカー（シメチジン（Tagamet（商標））、ファモチジン（Mylanta（商標）、Pepcid（商標））、ニザチジン（Axid（商標））、ラニチジン（Zantac（商標））、オメプラゾール（Zegerid（商標）））及び上記のいずれかの組合せがある。一般に、関連する政府機関によって販売が承認され、胃酸の生産を低減すること及び／又は胃液の酸性度を低くすることができる任意の薬剤は、本発明の方法に従ってクロフェレマーなどの阻害分子と一緒に投与することができる。
【００６２】
他の実施形態では、阻害分子は、下痢又は疼痛の治療に有用である他の化合物と投与される。そのような化合物には、それらに限定されないが、５−ＡＳＡ、スルファサラジン、メサラミン、ＡＰＡＺＡなどのＣＯＸ−２阻害剤、並びに他の市販のＣＯＸ−２阻害剤、例えばセレコキシブ及びロフェコキシブが含まれる。好ましくは、そのような化合物は全身吸収性ではなく、又は、全身吸収性でないように修飾される。
【００６３】
クロフェレマーが腸溶性コーティングでない特定の実施形態では、クロフェレマーは、胃酸の分泌を低減すること及び／又は胃液の酸性度を低くすることができる１つ又は複数の化合物と製剤化される。好ましくは、この製剤で投与されるクロフェレマーの投薬量は、約５０ｍｇ／日〜約７５０ｍｇ／日の投薬量の経口投与腸溶性コーティングクロフェレマーと生物学的に同等である投薬量である。例示的な実施形態では、クロフェレマーは徐放（遅延放出）組成物に製剤化される。
【００６４】
他の実施形態では、本発明の阻害分子は、鎮痛性又は抗炎症性の剤と一緒に投与することができる。好ましい実施形態では、鎮痛性又は抗炎症性の剤は、それが実質的に全身吸収性でないように、すなわち、投与薬量のわずか２０％、１５％、１０％、５％、４％、３％、２％、１％又は０．５％が吸収されるように製剤化又は修飾される。
【００６５】
本発明は、薬学的に許容される媒体とともに、ｄ−ＩＢＳに伴う１つ又は複数の症状の処置及び／又は改善に治療上有効な用量の阻害分子を含む本発明の塩化物イオン輸送阻害剤（阻害分子）の医薬製剤も提供する。一実施形態では、任意選択でそれには限定されないが例えばステアリン酸マグネシウムなどの滑剤と一緒に錠剤に圧縮される、直接圧縮可能なプロアントシアニジン重合体組成物（すなわち、賦形剤なしで薬学的に許容される硬度及び破砕性の錠剤に直接圧縮することができるもの）は、腸溶性コーティングである。他の実施形態では、本発明の阻害分子を含む医薬組成物は、代わりに、胃酸及び／若しくは酵素を中和するか又は胃酸の分泌を予防する活性がある１つ又は複数の物質を含む。これらの製剤は当技術分野で公知の方法によって調製することができ、例えば、Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Ed., ed. Alfonso R. Gennaro, Mack Publishing Co., Easton, PA, 1990に記載の方法を参照のこと。
【００６６】
他の好ましい実施形態では、医薬組成物はクロトン属の種から調製されるプロアントシアニジン重合体組成物を含み、その投薬量は７５０ｍｇ／日を超えず、好ましくは２５０ｍｇ／日未満である。好ましい実施形態では、本発明のプロアントシアニジン重合体組成物は、クロフェレマー（CAS 148465-45-6）である。
【００６７】
阻害分子は、任意の治療上許容される薬剤形態で提供することができる。医薬組成物は、経口投与のために、例えば、それらに限定されないが、医薬散剤、結晶、顆粒剤、小粒子（マイクロメートル単位のサイズの粒子、例えばマイクロスフェア及びマイクロカプセルを含む）、粒子（ミリメートル単位のサイズの粒子を含む）、ビーズ、マイクロビーズ、ペレット、ピル、マイクロ錠剤、圧縮錠剤若しくは錠剤粉末、成形錠剤若しくは錠剤粉末、及び、硬質若しくは軟質であって、粉末、粒子、ビーズ、溶液若しくは懸濁液として組成物を含むカプセルとして製剤化することができる。医薬組成物は、経口投与のために、水性液体中の溶液若しくは懸濁液として、ゲルカプセルに取り込まれた液体として、又は、投与のために便利な他の任意の製剤として、或いは、直腸投与のために坐薬、浣腸若しくは他の便利な形態として製剤化することもできる。本発明の阻害分子は、徐放系として提供することもできる（例えば、Langer, 1990, Science 249: 1527-1533を参照）。
【００６８】
医薬製剤は、任意の種類の薬学的に許容される賦形剤、添加剤又は媒体を含むこともできる。例えば、それらに限定されないが、希釈液又は充填剤、例えばデキストラート（dextrate）、リン酸二カルシウム、硫酸カルシウム、ラクトース、セルロース、カオリン、マンニトール、塩化ナトリウム、乾燥デンプン、ソルビトール、ショ糖、イノシトール、粉糖、ベントナイト、微結晶性セルロース又はヒドロキシプロピルメチルセルロースを、組成物の嵩を増加させるために阻害分子へ加えることができる。また、結合剤、例えば、それらに限定されないが、デンプン、ゼラチン、ショ糖、グルコース、ブドウ糖、糖蜜、ラクトース、アカシアゴム、アルギン酸ナトリウム、アイルランドコケの抽出物、パンワー（panwar）ゴム、ガッチ（ghatti）ゴム、イサプゴール（isapgol）殻、カルボキシメチルセルロース、メチルセルロース、ポリビニルピロリドン、ビーガム（Veegum）及びデンプンアラボガラクタン（arabogalactan）、の粘質物、ポリエチレングリコール、エチルセルロース及びワックスを、その粘着性を増加させるために製剤へ加えることができる。さらに、滑剤、例えば、それらに限定されないが、タルク、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸、水素化植物油、ポリエチレングリコール、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウム、ロイシン、カーボワックス、ラウリル硫酸ナトリウム及びラウリル硫酸マグネシウムを、製剤へ加えることができる。また、流動促進剤、例えば、それらに限定されないが、コロイド状二酸化ケイ素又はタルクを、粉末製剤の流動特性を改善するために加えることができる。最後に、崩壊剤、例えば、それらに限定されないが、デンプン、粘土、セルロース、アルギン、ゴム、架橋重合体（例えば、クロスカルメロース（croscarmelose）、クロスポビドン及びデンプングリコール酸ナトリウム）、ビーガム、メチルセルロース、寒天、ベントナイト、セルロース及び木材生成物、天然スポンジ、カチオン交換樹脂、アルギン酸、グアーガム、柑橘類のパルプ、カルボキシメチルセルロース又はデンプンを含むラウリル硫酸ナトリウムを、腸内での製剤の崩壊を促進するために加えることもできる。
【００６９】
この実施形態の一態様では、クロフェレマーは経口投与のために製剤化される。他の態様では、医薬剤形は、阻害分子、例えばクロフェレマーを、胃の酸性条件による分解及び胃に存在するペプシンなどのタンパク質との相互作用から保護されるように製剤化される。したがって、好ましい態様において、製剤は腸溶性コーティングである。例えば、腸溶性コーティング製剤は、腸溶性コーティングの錠剤、ビーズ又は顆粒剤であり、それらは、例えばそれに限定されないが、ステアリン酸マグネシウムなどの滑剤を含んでもよい。腸溶性コーティング製剤には、カプセル内の腸溶性コーティングビーズ、カプセル内の腸溶性コーティングマイクロスフェア、懸濁液で提供されるか若しくは食物と混合される腸溶性コーティングマイクロスフェア及び腸溶性コーティング錠剤が含まれ、懸濁液は特に小児科の投与に便利である。カプセルは、硬質シェルのゼラチンカプセル又はセルロースカプセルであることができる。特に、医薬組成物は腸溶性コーティングカプセルに製剤化される。具体的な一態様では、プロアントシアニジン重合体組成物は錠剤の形態で投与され、錠剤は微結晶性セルロースで埋め戻されてもよい。
【００７０】
一実施形態では、阻害分子は直接圧縮され、すなわち、阻害分子は任意の賦形剤と一緒に又はそれなしに、薬学的に許容される硬度及び破砕性を有する錠剤又は他の医薬製剤に圧縮することができる。好ましくは、直接圧縮可能な医薬組成物は、４ｋｐ（キロポンド）を超える硬度、好ましくは８〜１４ｋｐの硬度、より好ましくは１０〜１３ｋｐの硬度を有する錠剤に圧縮することができる。直接圧縮可能な組成物は、１％以下の重量減、好ましくは０．８％未満の重量減、より好ましくは０．５％未満の重量減の破砕性を有する錠剤に圧縮することができる。
【００７１】
好ましい実施形態では、直接圧縮可能な製剤は、９９．９３％クロフェレマー及び０．０７％ステアリン酸マグネシウムからなり、メタクリル酸共重合体でコーティングされる。他の好ましい実施形態では、医薬製剤は直接圧縮可能な阻害分子を含むが、腸溶性コーティング以外の賦形剤、添加剤及び媒体は含まない。しかし、製剤は、それに限定されないが例えばステアリン酸マグネシウムなどの滑剤を含むことができる。好ましくは、直接圧縮プロアントシアニジン重合組成物製剤は、薬学的に許容される硬度（４ｋｐを超える、好ましくは８〜１４ｋｐ、より好ましくは１０〜１３ｋｐ）及び破砕性（１％以下の重量減、好ましくは０．８％未満の重量減、より好ましくは０．５％未満の重量減）の錠剤として製剤化される。
【００７２】
より好ましい実施形態では、阻害分子は腸溶性コーティングである。腸溶性コーティングは胃の中では元のままであるが、それが小腸に到達すると溶解して、剤形内容物を放出するコーティングである。多数の腸溶性コーティングは酸性基を有する成分で調製され、その結果、胃に存在するかなり低いｐＨ、すなわちｐＨ１．５〜２．５でも酸性基はイオン化されず、コーティングは未解離の不溶性形態のままである。例えば腸の環境中など、より高いｐＨレベルでは、腸溶性コーティングはイオン化形態へ変換され、それは溶解して阻害分子を放出することができる。他の腸溶性コーティングは、それらが小腸内で酵素によって分解されるまで元のままであり、他のものは既定の湿気への曝露の後に分解し、したがって、コーティングは小腸内を通過するまで元のままである。
【００７３】
腸溶性コーティングの調製のために有用である重合体には、それらに限定されないが、シェラック、酢酸フタル酸デンプン及びアミロース、スチレン−マレイン酸共重合体、酢酸コハク酸セルロース、酢酸フタル酸セルロース（ＣＡＰ、cellulose acetate phthalate）、ポリビニルアセテートフタレート（ＰＶＡＰ、polyvinyl acetate phthalate）、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート（グレードHP-50及びHP-55）、エチルセルロース、脂肪、ステアリン酸ブチル、及び酸性イオン性基を有するメタクリル酸−メタクリル酸エステル共重合体（「ACRYLEZE（登録商標）」及び「EUDRAGIT（登録商標）」を含む）、例えば「EUDRAGIT（登録商標）L 30D」、「EUDRAGIT（登録商標）RL 30D」、「EUDRAGIT（登録商標）RS 30D」、「EUDRAGIT（登録商標）L 100-55」及び「EUDRAGIT（登録商標）L 30D-55」が含まれる。好ましい実施形態では、医薬組成物は、塩化物イオン輸送の阻害剤、例えばプロアントシアニジン重合組成物、及び腸溶性コーティング重合体「EUDRAGIT（登録商標）L 30D」、平均分子量が２５０，０００ダルトンのメタクリル酸及びアクリル酸メチルのアニオン性共重合体を含む。他の好ましい実施形態では、腸溶性コーティング重合体は、「EUDRAGIT（登録商標）L 30D-55」である。
【００７４】
腸溶性コーティングの崩壊は、用いるコーティングの種類に従い、腸の酵素による加水分解によって、又は、胆汁酸塩による乳化及び分散によって起こる。例えば、ブタノールが溶解し、ステアリン酸が医薬からはがれるので、エステラーゼはエステルステアリン酸ブチルをブタノール及びステアリン酸へ加水分解する。さらに、胆汁酸塩は、エチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、脂肪及び脂肪誘導体を乳化、分散させる。他の種類のコーティングは湿気との接触時間に従い除去され、例えば、粉末カルナバワックス、ステアリン酸並びに寒天及びニレ樹皮の植物繊維から調製されたコーティングは、植物繊維が湿気を吸収して膨脹した後に破裂する。崩壊のために必要な時間は、コーティングの厚さ及びワックスに対する植物繊維の比に依存する。
【００７５】
本発明の阻害分子への腸溶性コーティングの塗布は、腸溶性コーティングを塗布するための当技術分野で公知の任意の方法によって達成することができる。例えば、それに限定されないが、腸溶性重合体は、スプレー塗布のための重量比５〜１０％の重合体及びパンコーティングのための重量比最高３０％の重合体を含んでいる有機溶媒ベースの溶液を用いて塗布することができる。通常使用される溶媒には、それらに限定されないが、アセトン、アセトン／酢酸エチル混合物、塩化メチレン／メタノール混合物及びこれらの溶媒を含む第三混合物が含まれる。一部の腸溶性重合体、例えば、メタクリル酸−メタクリル酸エステル共重合体は、分散剤として水を用いて塗布することができる。溶媒系の揮発性は、粘着性による粘着を予防するように、及び、溶媒が蒸発するので早すぎるスプレー乾燥又は重合体の沈殿によるコーティングの高い有孔率を予防するように調整されなければならない。
【００７６】
さらに、塗膜のひび割れを予防するために、可塑剤を腸溶性コーティングへ加えることができる。適当な可塑剤には、低分子量のフタル酸エステル、例えばフタル酸ジエチル、アセチル化モノグリセリド、トリエチルシトレート、ポリエチル（polyethyl）グリコールトリブチルシトレート及びトリアセチンが含まれる。通常、可塑剤は、腸溶性コーティング重合体重量の１０重量％の濃度で加えられる。コーティングの強度及び平滑度を改善するために、他の添加剤、例えば乳化剤、例えば界面活性剤及びシメチコン、並びに粉体、例えばタルクをコーティングに加えることができる。さらに、医薬製剤を着色するために、色素をコーティングに加えることができる。
【００７７】
好ましい実施形態では、阻害分子の医薬組成物は、硬質シェルのゼラチンカプセル中の腸溶性コーティングビーズとして提供される。好ましい実施形態では、プロアントシアニジン重合体ビーズは、プロアントシアニジン重合体組成物をヒドロキシプロピルメチルセルロースと混合し、混合物をノンパレイユシード（砂糖粒）上に重層することによって調製される。より好ましい実施形態では、腸溶性コーティング以外の賦形剤、添加剤及び媒体なしで直接圧縮可能であるクロフェレマーを粉にして、ビーズに細分する（すなわち、ノンパレイユ砂糖シードを含まないビーズとして）。ビーズは、Opadry Clear（水と混合）のシールコートで覆ってもよい。ビーズの好ましい腸溶性コーティングは、乳化剤として０．７％ラウリル硫酸ナトリウムＮＦ（ＳＬＳ）及び２．３％ポリソルベート８０ＮＦ（Tween（商標）20）と供給される、重量比２０％〜３０％の乾燥重合物質を含む水性分散液として塗布される「EUDRAGIT（商標）L 30D」又は「EUDRAGIT（商標）L 30D-55」であり、それに対しては、コーティングの弾力性を改善するためにポリエチレングリコール及び／又はクエン酸エステルなどの可塑剤が加えられ、塗布過程で腸溶性コーティング重合体が凝集する傾向を低減し、フィルムコーティングの平滑度を高めるためにタルクを加えてもよい。
【００７８】
好ましい製剤では、ノンパレイユシードを含む腸溶性コーティングプロアントシアニジン重合体組成物ビーズの最終組成は、重量比１７．３％のノンパレイユシード、重量比６４．５％のプロアントシアニジン重合体組成物、重量比１．５％のヒドロキシプロピルメチルセルロース、重量比０．５％のOpadry Clear、重量比１４．５％の「EUDRAGIT（商標）L 30D」、重量比１．４５％のトリエチルシトレート及び重量比０．２５％のモノステアリン酸グリセリンである。この医薬製剤は、当技術分野で公知の任意の方法、又は下の実施例１で記載の方法によって調製することができる。
【００７９】
ノンパレイユシードを含まないプロアントシアニジン重合体組成物ビーズの好ましい製剤は、重量比７８％の直接圧縮可能なプロアントシアニジン重合体組成物（例えば、実施例で記載の方法によって単離されるもの）、重量比０．７６％のOpadry Clear、重量比１９％の「EUDRAGIT（商標）L 30D-55」、１．９％トリエチルシトレート及び重量比０．３４％のモノステアリン酸グリセリンである。この医薬製剤は、当技術分野で公知の任意の方法、又は下の実施例２で記載の方法によって調製することができる。
【００８０】
他の好ましい製剤は、重量比５４．５８％のプロアントシアニジン重合組成物ビーズ（ノンパレイユシードなしで、直接圧縮可能なプロアントシアニジン重合組成物で形成）、重量比１．７８％のOpadry Clear、重量比３９％の「EUDRAGIT（商標）L 30D-55」、３．９％トリエチルシトレート及び重量比０．７４％のモノステアリン酸グリセリンを含む。
【００８１】
他の実施形態では、本発明の阻害分子を含む医薬組成物は、硬質シェルのゼラチンカプセルで提供されるか又は小児科投与のための経口液剤に懸濁される、腸溶性コーティング顆粒剤又は散剤（直径３００〜５００pのマイクロスフェア）として製剤化される。腸溶性コーティング散剤又は顆粒剤は、特に小児科の投与のために、食物と混合することもできる。この製剤は、当技術分野で公知の技術、例えば下の実施例１Ｃで記載の方法を用いて調製することができる。
【００８２】
一般に、顆粒剤及び散剤は、当技術分野で公知である任意の方法、例えばそれらに限定されないが、結晶化、噴霧乾燥又は任意の粉砕方法で、好ましくは高速混合機／造粒機を用いて調製することができる。高速混合機／造粒機の例には、「LITTLEFORD LODIGE（商標）」混合機、「LITTLEFORD LODIGE（商標）」MGT混合機／造粒機及び「GRAL（商標）」混合機／造粒機が含まれる。高剪断粉末混合の間、結合剤と呼ばれる造粒剤の溶液を粉末の上へスプレーして粉末粒子を凝集させ、このようにより大きな粒子又は顆粒を形成する。顆粒剤の調製に有用である造粒剤には、それらに限定されないが、セルロース誘導体（カルボキシメチルセルロース、メチルセルロース及びエチルセルロースを含む）、ゼラチン、グルコース、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）、デンプンのり、ソルビトール、ショ糖、ブドウ糖、糖蜜、ラクトース、アカシアゴム、アルギン酸ナトリウム、アイルランドコケの抽出物、パンワーゴム、ガッチゴム、イサポール殻、ビーガム及びカラマツアラボガラクタンの粘質物、ポリエチレングリコール並びにワックスが含まれる。造粒剤は、粒子又は顆粒の質量の１〜３０％の濃度で加えることができる。
【００８３】
好ましくは、散剤又は顆粒剤は、流動床装置を用いてコーティングされる。次に、顆粒剤又は散剤を、Opadry Clear（水と混合）のシールコートで覆ってもよい。好ましい腸溶性コーティングは、乳化剤として０．７％ラウリル硫酸ナトリウムＮＦ（ＳＬＳ）及び２．３％ポリソルベート８０ＮＦ（Tween（商標）20）と供給される、重量比３０％の乾燥重合物質を含む水性分散液として塗布される「EUDRAGIT（商標）L 30D」であり、それに対しては、コーティングの弾力性を改善するためにポリエチレングリコール及びクエン酸エステルなどの可塑剤が加えられ、塗布過程で腸溶性コーティング重合体が凝集する傾向を低減し、フィルムコーティングの平滑度を高めるためにタルクが加えられる。好ましい実施形態では、腸溶性コーティング散剤の最終組成は、重量比８１．８％のプロアントシアニジン重合体組成物、重量比１．５％のヒドロキシプロピルメチルセルロース、重量比０．５％のOpadry Clear、重量比１４．５％の「EUDRAGIT（商標）L 30D」、重量比１．４５％のトリエチルシトレート及び重量比０．２５％のモノステアリン酸グリセリンである。腸溶性コーティング顆粒剤の最終組成は、重量比８１．８％のプロアントシアニジン重合体組成物、１０％のポリビニルピロリドン、重量比１．５％のヒドロキシプロピルメチルセルロース、重量比０．５％のOpadry Clear、重量比１４．５％の「EUDRAGIT（商標）L 30D」、重量比１．４５％のトリエチルシトレート及び重量比０．２５％のモノステアリン酸グリセリンである。
【００８４】
腸溶性コーティング顆粒又は粉粒子は、特に小児科投与のために、さらに経口投与用溶液に懸濁することができる。懸濁液は、被覆粉粒子又は顆粒の急速な沈降を予防するために溶液の粘度を高くするために、増粘剤及び保護コロイドを加えた水溶液から調製することができる。分子相互作用を通して懸濁粒子のまわりに形成される水和層の強度を増加させ、阻害分子と薬学的に適合する任意の材料、例えばそれらに限定されないが、ゼラチン、天然ゴム（例えば、トラガカンタ、キサンタン、グアー、アカシア、パンワー、ガッチ、など）及びセルロース誘導体（例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ヒドロキシプロピルセルロース及びヒドロキシプロピルメチルセルロース、など）を増粘剤として用いることができる。増粘剤の作用を改善するために、Tween（商標）などの界面活性剤を加えてもよい。好ましい懸濁溶液は、０．２％Tween（商標）を含む水に対して重量比２％のヒドロキシプロピルメチルセルロース溶液である。
【００８５】
阻害分子は、腸溶錠として製剤化することもできる。好ましい一実施形態では、プロアントシアニジン重合体組成物は、顆粒剤を調製するための上記方法によって、任意の薬学的に許容される希釈液（例えば上記のもの）で粒状化される。次に、顆粒は当技術分野で公知の任意の方法、例えばそれらに限定されないが、湿式造粒法、乾式造粒法又は直接圧縮法を用いて錠剤に圧縮される。好ましい希釈液には、それらに限定されないが、微結晶性セルロース（「AVICEL（商標）PH 200/300」）及びデキストレート（「EMDEX（商標）」）が含まれる。さらに、崩壊剤、例えば上記のもの、及び滑剤、例えば上記のものを、錠剤製剤へ加えることもできる。好ましい錠剤製剤は、２５０ｍｇプロアントシアニジン重合体組成物、７ｍｇの崩壊剤「AC-DI-SOL（商標）」（架橋カルボキシメチルセルロースナトリウム）、１．７５ｍｇの滑剤ステアリン酸マグネシウム及び混合物を３５０ｍｇにするのに必要な重量の「AVICEL（商標）PH 200/300」を含む。錠剤は、２５０グラムの「EUDRAGIT（商標）L 30D-55」、７．５グラムのトリエチルシトレート、３７．５グラムのタルク及び２０５グラムの水から調製される腸溶性コーティング混合物でコーティングされる。この製剤は、当技術分野で公知の任意の方法によって調製することができる。
【００８６】
好ましい実施形態では、直接圧縮可能なプロアントシアニジン重合体組成物は、粉砕（例えば、上記のもの）によって顆粒にし、滑剤、好ましくはステアリン酸マグネシウムと混合する。次に、平滑顆粒は当技術分野で公知の任意の方法、例えばそれに限定されないが、直接圧縮法を用いて錠剤に圧縮される。好ましくは、各錠剤は、重量比９９．６％の直接圧縮可能なプロアントシアニジン重合体組成物及び重量比０．４０％のステアリン酸マグネシウムを含む１２５ｍｇである。次に、錠剤は、好ましくは、１００グラムの錠剤につき、「EUDRAGIT（商標）L 30D-55」の３０％懸濁液（２２．２２ｇ中６．６６ｇ）、０．６７ｇのトリエチルシトレート、１．６７ｇのタルク及び２０．４４ｇの精製水の腸溶性コーティング混合物でコーティングされる。錠剤は、当技術分野で公知の任意の方法、又は下の実施例１Ｅで記載の方法によって調製することができる。
【００８７】
より好ましい実施形態では、直接圧縮可能なプロアントシアニジン重合体組成物は、重量比９９．６％の直接圧縮可能なプロアントシアニジン重合体組成物及び重量比０．４０％のステアリン酸マグネシウムを含む、１２５ｍｇ、２５０ｍｇ又は５００ｍｇの核錠に製剤化される。次に錠剤は、好ましくは、腸溶性コーティング混合物でコーティングされる。錠剤の最終組成は、重量比８６．６％の直接圧縮可能なプロアントシアニジン重合体組成物、０．４％ステアリン酸マグネシウム、６．５％「EUDRAGIT（商標）L 30D-55」、０．９％トリエチルシトレート、２．８７％タルク及び２．７４％白色分散である。錠剤は当技術分野で公知の任意の方法、例えばそれに限定されないが、下記方法によって調製することができる。
【００８８】
小粒子（マイクロメートルサイズの粒子、例えばマイクロスフェア及びマイクロカプセルを含む）、粒子（ミリメートルサイズの粒子を含む）、薬剤結晶、ペレット、ピル及びミクロビーズに形成される組成物は、流動床法を用いてコーティングすることができる。この方法は、組成物核が下から導入される気流によって密閉円筒容器内で巻き挙げられ、流動時間の間核の上へそれをスプレー乾燥することによって腸溶性コーティングが形成される流動床装置、例えば「GLATT（商標）」、「AEROMATIC（商標）」、「WURSTER（商標）」又は他によって供給されるものを用いる。錠剤又はカプセルをコーティングするために、Accela-Cotaコーティング装置（「MANESTY（商標）」）を用いることができる。この方法により、錠剤又はカプセルを、有孔ジャケットを有する回転円筒形のコーティングパン内に置き、スプレーユニットをパン内に設置し、回転する錠剤又はカプセルを通して乾燥空気を吸引する。他のいかなる種類のコーティングパンも、例えば「COMPU-LAB（商標）」パン、Hi-coates「GLATT（商標）」immersion sword法、「DRIAM（商標）」Dricoater、「STEINBERG（商標）」装置、「PELLEGRINI（商標）」装置又は「WALTHER（商標）」装置も、用いることができる。
【００８９】
本発明の医薬製剤は、ヒト以外の動物、特に飼育動物で、例えばそれらに限定されないが、ウシ、ブタ、ヒツジ、家禽（例えばニワトリ）及びウマ、及びイヌ及びネコなどの他の家畜動物でｄｌＢＳを治療するために用いることもできる。詳細には、本発明の医薬製剤は、本発明の医薬組成物を動物飼料に組み入れることによって、ヒト以外の動物、特に食用動物、例えばウシ、ヒツジ及びブタでｄ−ＩＢＳ疾患を治療するために用いることができる。
【００９０】
本発明の方法によると、本発明の塩化物イオン輸送阻害剤（阻害分子）を含む医薬組成物は、７５０ｍｇ／日以下の経口投与腸溶性保護クロフェレマーと生物学的に同等の総量で、対象に投与される。具体的な実施形態では、クロフェレマーを含む医薬組成物は、約５０ｍｇ／日〜約２５０ｍｇ／日の量で、対象に投与される。
【００９１】
対象が下痢型ＩＢＳを有するかどうかの判定では、対象を診断するための当技術分野の任意の方法、例えばそれに限定されないが、過敏性腸症候群の診断のためのRome II基準を用いることができる（Thompson et al., 1999, Gut 45 (Suppl II): Ih43-1147）。簡潔には、Rome II診断基準は、先行する１２カ月間内の、連続する必要はないが少なくとも１２週間の、以下の３つの特徴のうちの２つを伴う腹部の不快又は疼痛と述べる。（１）排便による軽減、及び／又は（２）便通頻度の変化に伴う開始、及び／又は（３）大便の形態（外観）の変化に伴う開始。以下の症状は、ＢＩＢＳの診断を累積的に裏づける。（ｉ）異常な、例えば１日３回を超える排便回数、（ii）異常な大便の形態、例えばゆるい／水様の大便、（iii）切迫の存在（排便のために急ぐ必要があること）。
【００９２】
定義
他に定義されていない場合、本明細書で用いる技術用語、記法及び他の科学用語若しくは専門用語は、本発明が関係する当業者によって通常理解される意味を有するものとする。一部の場合、通常理解される意味を有する用語は、明確性及び／又は即時参照のために本明細書で定義されており、そのような定義を本明細書に含めることは、当技術分野で通常理解されるものからの実質的な差を表すものと必ずしも解釈されるべきではない。本発明の実施には、特に明記しない限り、分子生物学（組換え技術を含む）、微生物学、細胞生物学、生化学、核酸化学及び免疫学の従来の技術を使用するが、これらは当分野の技術の範囲内である。そのような技術は、例えば以下の文献で完全に説明される。Current Protocols in Immunology（J. E. Coligan et al., eds., 1999、２００１年までの補遺を含む）；Current Protocols in Molecular Biology（F. M. Ausubel et al., eds., 1987、２００１年までの補遺を含む）；Molecular Cloning: A Laboratory Manual, third edition（Sambrook and Russel, 2001）；PCR: The Polymerase Chain Reaction,（Mullis et al., eds., 1994）；The Immunoassay Handbook（D. Wild, ed., Stockton Press NY, 1994）；Bioconjugate Techniques（Greg T. Hermanson, ed., Academic Press, 1996）；Methods of Immunological Analysis（R. Masseyeff, W. H. Albert, and N. A. Staines, eds., Weinheim: VCH Verlags gesellschaft mbH, 1993）、Harlow and Lane Using Antibodies: A Laboratory Manual Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y., 1999；及び、Beaucage et al. eds., Current Protocols in Nucleic Acid Chemistry John Wiley & Sons, Inc., New York, 2000）。
【００９３】
本明細書で使用するように、ポリペプチド又はタンパク質との関連で用語「誘導体」は、アミノ酸残基の置換、欠失又は付加の導入によって変更されたアミノ酸配列を含むポリペプチド又はタンパク質を指す。本明細書で用いられる用語「誘導体」は、修飾された、すなわちポリペプチド又はタンパク質への任意の種類の分子の共有結合によって修飾されたポリペプチド又はタンパク質も指す。例えば、それに限定するものではないが、抗体は、例えば、グリコシル化、アセチル化、ＰＥＧ化、リン酸化、アミド化、公知の保護基／ブロック基による誘導体化、タンパク分解性切断、細胞リガンド又は他のタンパク質への連結、その他によって修飾することができる。誘導体ポリペプチド又はタンパク質は、それらに限定されないが特異的化学開裂、アセチル化、ホルミル化、ツニカマイシンの代謝合成、その他を含む当分野の技術者に公知の技術を使用した化学修飾によって生成することができる。さらに、誘導体ポリペプチド又はタンパク質誘導体は、それが由来するポリペプチド又はタンパク質と類似又は同一の少なくとも１つの生物学的機能を保有する。
【００９４】
本明細書で使用するように、非タンパク性誘導体との関連で用語「誘導体」は、第１の有機又は無機の分子の構造に基づいて形成される第２の有機又は無機の分子を指す。有機分子の誘導体としては、それらに限定されないが、例えば、ヒドロキシル基、メチル基、エチル基、カルボキシル基、アミン基の付加若しくは削除、エステル化、アルキル化若しくはリン酸化、重合体の固定化若しくは付加によって修飾される分子がある。
【００９５】
本明細書で用いるように、用語「重合体」は、同じであるか異なることができる３つ以上の単量体単位を含む化合物を指す。したがって、「重合体」は、高分子量及び／又は不溶性重合体並びに低分子量及び／又は可溶性オリゴマーを指す。
【００９６】
本明細書で用いるように、用語「断片」は、少なくとも５つの連続したアミノ酸残基のアミノ酸配列を含む、ペプチド又はポリペプチドを指す。一実施形態では、ポリペプチドの断片は、ポリペプチドの少なくとも１つの機能を保持する。
【００９７】
本明細書で用いるように、用語「ＣＦＴＲ機能を阻害する」は、それらに限定されないが、塩化物イオン輸送を阻害すること及びＣＦＴＲ分子の発現を阻害することを含む任意の手段によって、ＣＦＴＲ分子の任意の機能を阻害することを指す。
【００９８】
本明細書で用いるように、用語「核酸」及び「ヌクレオチド配列」には、ＤＮＡ分子（例えば、ｃＤＮＡ若しくはゲノムＤＮＡ）、ＲＮＡ分子（例えば、ｍＲＮＡ）、ＤＮＡ及びＲＮＡ分子の組合せ若しくはハイブリッドＤＮＡ／ＲＮＡ分子、及びＤＮＡ若しくはＲＮＡ分子のアナログが含まれる。
【００９９】
本明細書で用いるように、用語「対象」及び「患者」は互換的に使用される。本明細書で用いるように、用語「対象」及び「複数の対象」は、動物、好ましくは非霊長類（例えば、ウシ、ブタ、ウマ、ネコ、イヌ、ラット及びマウス）並びに霊長類（例えば、カニクイザルなどのサル及びヒト）を含む哺乳動物、より好ましくはヒトを指す。好ましい実施形態では、対象はヒトである。一実施形態では、用語「対象」からは、分泌性（急性）下痢を起こしているか又はそれと診断された対象は排除される。
【０１００】
本明細書で用いるように、用語「治療する」、「治療」及び「治療すること」は、ｄ−ＩＢＳの症状又は合併症の予防、軽減、改善又は消失を指す。本発明との関連で用語「ｄ−ＩＢＳの症状の予防、軽減、改善又は消失」は、以下のうちの少なくとも１つを指す。例えば、過去にｄ−ＩＢＳを起こしたが現在は寛解期間にある患者における、それが起こる前のｄ−ＩＢＳの予防；確立されたｄ−ＩＢＳの消失（例えば、正常な排便回数の復活で判定される）；ｄ−ＩＢＳに伴う疼痛の消失；ｄ−ＩＢＳの既存の状態の重症度の低下によって明らかにされる、疾患の好ましくない症状の軽減；対象の治療で用いる１つ又は複数の医薬品の削除又は減少。好ましくない症状の軽減は、例えば、治療前と比較した場合の排便回数の測定、大便粘稠度の判定、切迫の存在の判定、ｄ−ＩＢＳに伴う疼痛の判定によって判定することができる。一部の症状がより低く、より許容されるレベルに維持される（「管理」）場合でも、症状の重症度のいかなる程度の減少も、本明細書で定義される用語に包含される。そのような改善は、排便回数の減少、大便粘稠度の増加、切迫の存在の減少、疼痛の軽減から明白となろう。
【０１０１】
ｄ−ＩＢＳには他の非下痢関連の症状、例えば腹部の不快、疼痛、鼓脹、疲労、睡眠障害、性的機能不全、頭痛、線維筋痛（筋肉痛）、消化不良（上腹部の不快若しくは疼痛）、胸部痛、泌尿科若しくは婦人科の症状、不安及び抑うつ症が常に伴うので、これらの症状のうちの少なくとも１つの軽減も、用語「ｄ−ＩＢＳの症状又は合併症の予防、軽減、管理又は消失」に包含される。
【０１０２】
本明細書で用いるように、用語「治療的有効量」は、ｄ−ＩＢＳの治療をもたらすこと、ｄ−ＩＢＳの進行を予防すること、ｄ−ＩＢＳの退行をもたらすこと、又はｄ−ＩＢＳを治療又は予防するために投与される他の治療薬の治療効果を強化又は改善することに十分な治療薬の量を指す。
【０１０３】
以下の一連の実施例は例示目的のために提示され、本発明の範囲の制限のためではない。
［実施例］
【実施例１】
【０１０４】
医薬製剤の調製
本発明による、クロトン・レクレリからのプロアントシアニジン重合体組成物の異なる好ましい医薬製剤の製造及び包装のための例示的な方法を、以下に記す。
【０１０５】
１Ａ．カプセル化された腸溶性コーティングビーズ
砂糖粒をベースにした、カプセル化された腸溶性コーティングプロアントシアニジン重合体組成物ビーズ製剤を調製するために用いたバッチ処方及び方法の詳細な説明を、下で提供する。各硬質シェルのゼラチンカプセルは、２５０ｍｇプロアントシアニジン重合体組成物腸溶性コーティングビーズを含有した。カプセルは、それぞれ１６個の２５０ｍｇカプセルを含むＨＤＰＥボトルに梱包した。腸溶性コーティングプロアントシアニジン重合体組成物ビーズの製剤は、１７．３％（ｗ／ｗ）ノンパレイユシード（４０／６０メッシュの砂糖粒、Paulaur社製、ロット#60084060）、６４．５％のクロトン・レクレリからのプロアントシアニジン重合体組成物、１．５％ヒドロキシプロピルメチルセルロース（Methocel E5 Premium、Dow Chemical社製、ロット#MM9410162E）、０．５％Opadry Clear（Colorcon社製、ロット#S83563）、１４．５％「EUDRAGIT（商標）L 30D」（Rohm Tech.社製、ロット#1250514132）、１．４５％トリエチルシトレート（Morflex社製、ロット#N5X291）、モノステアリン酸グリセリン（Imwitor-900、Rohm Tech社製、ロット#502-229）及び精製水（ＵＳＰ）を含んでいた。
【０１０６】
プロアントシアニジン重合体組成物を含む重層コーティング溶液は、ヒドロキシプロピルメチルセルロース及びプロアントシアニジン重合体組成物を精製水（ＵＳＰ）に加え、溶解するまで混合することによって調製した。ノンパレイユシードは、流動床プロセッサー（NiorPrecisionCoater）の生成物ボウルへ加えた。次に、ポリマー溶液は、３０〜３５℃の目標床温で流動化されたノンパレイユシードの上へ溶液をスプレーすることによって、ノンパレイユシードの上に重層した。プロアントシアニジン重合体の重層が完了したならば、Opadry Clear（Opadry Clearを精製水ＵＳＰで混合することによって調製）を用いたシールコートを３０〜３５℃の目標床温で塗布した。シールコートを塗布した後、ペレットを排出して１０００μ及び４２５μのスクリーンを通してふるい分けし、４２５μより大きく１０００μより小さい層形成粒は流動床プロセッサーに戻した。一方、腸溶性コーティング溶液は、トリエチルシトレート及びモノステアリン酸グリセリンを６５℃に加熱した水と混合し、次に、この溶液を「EUDRAGIT（商標）L 30D-55」と混合することによって調製した。次に、得られた腸溶性コーティング溶液を、全ての腸溶性コーティング溶液がビーズ上に重層されるまで、３０〜３５℃の床温の流動床プロセッサー内の層形成粒の上へスプレーした。プロアントシアニジン重合体組成物が５２．９％の濃度で存在したことを示すＨＰＬＣアッセイの結果に基づき、２５０ｍｇ投薬量を提供するために腸溶性コーティングビーズをサイズ＃０の硬質シェルゼラチンカプセルに手で詰め、その後、適当な熱誘導裏打ちキャップを有するＨＤＰＥボトルに詰めた。
【０１０７】
【表１】
0005384329.tif 000003
【０１０８】
１Ｂ．カプセル化された腸溶性コーティングビーズ
ノンパレイユ砂糖粒を含まないカプセル化腸溶性コーティングビーズ製剤を調製するために用いた処方及び方法を、以下に記す。一製剤は、重量比８３．３％のプロアントシアニジン重合体組成物、重量比０．５％のOpadry Clear、重量比１４．５％の「EUDRAGIT（商標）L 30D-55」、重量比１．９％のトリエチルシトレート及び０．３４％のモノステアリン酸グリセリンを含む。
【０１０９】
ビーズは、先ず、５０ｍｍWursterカラムを有する１６リットルのaerornatic MP-1流動床プロセッサー内で、Opadry clearの５％溶液でシールコーティングした。シールコーティングの塗布のコーティングパラメータは、５０℃〜６０℃の入口温度、２５℃〜４０℃の出口温度、３０〜４０ＣＭＨの空気量、毎分６〜１２グラムのスプレー速度及び２．５バールの気圧であった。シールコートを塗布した後、ビーズを排出して、４２５μより大きく１０００μより小さいビーズをふるい分けした。次に、腸溶性コーティングのために、適当な大きさのビーズを流動層工程に戻した。プロアントシアニジン重合体組成物ビーズの各１０００グラムにつき、８１１．９７グラムの「EUDRAGIT（商標）L 30D-55」、２４．３６グラムのトリエチルシトレート、４．３６グラムのモノステアリン酸グリセリン及び２４８．５５グラムの精製水から腸溶性コーティング懸濁液を調製した。この懸濁液は、「EUDRAGIT（商標）L 30D-55」懸濁液を連続的に静かに撹拌し、別の容器の精製水中でトリエチルシトレート及びタルクを懸濁、均質化することによって調製した。次に、トリエチルシトレート／タルク混合物を「EUDRAGIT（商標）L 30D-55」懸濁液へ加え、得られたコーティング分散液は、沈殿を避けるためにスプレー工程の間撹拌した。次に、流動床プロセッサー内で、以下のパラメータでビーズをコーティングした。入口温度は４２℃〜４７℃であり、出口温度は２８℃〜３４℃であり、空気量は３０〜４０ＣＭＨであり、スプレー速度は６１２グラム／分であり、気圧は２．５バールであった。得られた腸溶性コーティングビーズは、次に、サイズ＃０の硬質シェルゼラチンカプセルに詰めた。
【０１１０】
１Ｃ．腸溶性コーティング顆粒剤及び粉粒子
プロアントシアニジン重合体組成物を、硬質シェルのゼラチンカプセル内の又は経口液剤に懸濁させた腸溶性コーティング顆粒剤又は散剤（直径３００５００μのマイクロスフェア）として製剤化する方法を下に記載する。プロアントシアニジン重合体組成物粉粒子は、高速混合機／造粒機内でのプロアントシアニジン重合体組成物及びヒドロキシプロピルメチルセルロースの高剪断粉末混合によって調製する。プロアントシアニジン重合体組成物顆粒剤は、粉粒子が凝集してより大きな顆粒を形成するように、高速混合機／造粒機内でポリビニルピロリドンを粉体にスプレーすることによって調製する。流動床装置を用いて、次に顆粒又は粉体をOpadry Clear（水と混合）のシールコートで覆い、その後、乳化剤として０．７％ラウリル硫酸ナトリウムＮＦ（ＳＬＳ）及び２．３％ポリソルベート８０ＮＦ（Tween（商標）20）と供給される、重量比３０％の乾燥メタクリル酸重合物質を含む水性分散液として塗布される腸溶性コーティング「EUDRAGIT（商標）L 30D」で塗布し、それに対しては、コーティングの弾力性を改善するために可塑剤のトリエチルシトレート及びモノステアリン酸グリセリンを加える。腸溶性コーティング散剤の最終組成は、重量比８１．８％のプロアントシアニジン重合体組成物、重量比１．５％のヒドロキシプロピルメチルセルロース、重量比０．５％のOpadry clear、重量比１４．５％の「EUDRAGIT（商標）L 30D」、重量比１．４５％のトリエチルシトレート及び重量比０．２５％のモノステアリン酸グリセリンである。腸溶性コーティング顆粒剤の最終組成は、重量比８１．８％のプロアントシアニジン重合体組成物、１０％のポリビニルピロリドン、重量比１．５％のヒドロキシプロピルメチルセルロース、重量比０．５％のOpadry clear、重量比１４．５％の「EUDRAGIT（商標）L 30D」、重量比１．４５％のトリエチルシトレート及び重量比０．２５％のモノステアリン酸グリセリンである。
【０１１１】
腸溶性コーティングプロアントシアニジン重合体組成物顆粒又は粒子は、適当な投薬量を提供する量で、硬質シェルゼラチンカプセルに詰めることができる。
【０１１２】
腸溶性コーティングプロアントシアニジン重合体組成物顆粒又は粉粒子は、特に小児科投与のために、経口投与用溶液に懸濁することもできる。懸濁溶液は、９７．８ｍｌ蒸留水及び０．２グラムのTween（商標）80中で２グラムのヒドロキシプロピルメチルセルロースを濡らし、超音波処理し、溶液を４０℃に加熱し、３時間撹拌することによってこの調製物を均一に混合し、その後、腸溶性コーティングプロアントシアニジン重合体組成物粉粒子又は顆粒を均一溶液に加えることによって調製する。
【０１１３】
１Ｄ．腸溶性コーティング圧縮錠剤
腸溶性コーティング錠剤としてプロアントシアニジン重合体組成物を希釈液で製剤化する方法を、以下に記す。各３５０ｍｇ錠剤につき、２５０ｍｇプロアントシアニジン重合体組成物を、７ｍｇの架橋カルボキシメチルセルロースナトリウム（「AC-DI-SOL（商標）」）及び総量を３５０ｍｇにするのに十分な質量の微結晶性セルロース（「AVICEL（商標）PH 200/300」）で粒状化する。これらの成分を、Ｖブレンダーで２０〜３０分間混合する。２０〜３０分間混合した後に、１．７５ｍｇのステアリン酸マグネシウムを加え、混合物をさらに４〜５分間混合する。得られた顆粒を、５／１６インチの標準の凹状パンチを用いて回転タブレット成形機で圧縮する。錠剤は、２５０グラムの「EUDRAGIT（商標）L 30D-55」、７．５グラムのトリエチルシトレート、３７．５グラムのタルク及び２０５グラムの水から調製される腸溶性コーティング混合物でコーティングする。次に、錠剤を有孔のパン塗工機（例えば「ACCELACOTA（商標）」システム）に入れ、４０℃で１５ｒｐｍで回転させる。腸溶性コーティング製剤を、以下の条件を用いてスプレーする。４４℃〜４８℃の吸気温度、２９℃〜３２℃の排気温度、２６℃〜３０℃の生成物温度、１ｍｍのスプレーノズル、３０〜３２ｒｐｍのパン速度、３０〜３２ＣＦＭの空気流量及び２０ＰＳＩのスプレー圧。最終的に、パンが６０℃の吸気温度で１５ｒｐｍで回転するときに、錠剤を３０分間硬化し、次に、熱を遮断した後、錠剤が室温に冷却するまで錠剤を１５ｒｐｍで回転させる。
【０１１４】
１Ｅ．腸溶性コーティング直接圧縮錠剤
腸溶性コーティング錠剤としてプロアントシアニジン重合体組成物を希釈液なしで製剤化する方法を、下記の通りに実施した。直接圧縮可能なプロアントシアニジン重合体組成物を、下の実施例１Ｆに記載の方法によって生成した。１２５ｍｇの錠剤は、重量比９９．６％の直接圧縮可能なプロアントシアニジン重合体組成物を重量比０．４０％のステアリン酸マグネシウムと２分間混ぜ合わせ、次に、直径１／４インチの丸い標準の凹状パンチを用いて、ロータリプレスで材料を直接４〜１０Ｋｐの錠剤硬度へ圧縮して１２５ｍｇ錠剤にすることによって調製した。
【０１１５】
核錠を試験し、平均硬度（ｎ＝１０）が４〜１０Ｋｐ、破砕性（ｎ＝２０）が０．７％未満、平均錠重量（ｎ＝１０）が１２５ｍｇ±７ｍｇ、平均厚さ（ｎ＝１０）が３．９〜４．１ｍｍ、崩壊時間（ｎ＝６）が２０分以下であることが見いだされた。
【０１１６】
コーティング分散液は、１００グラムの錠剤につき、均質になるまで混合した０．６７グラムのトリエチルシトレート、１．６７グラムのタルク及び２０．４４グラムの精製水の混合物と静かに撹拌し続けた、重量比３０％の「EUDRAGIT（商標）L 30D-55」懸濁液の２２．２２グラムを混合することによって調製した。コーティング分散液は、沈殿を避けるために絶えず撹拌した。
【０１１７】
錠剤（１００，０００個のバッチ）は、Compu-Lab２４インチ／３０Ｌのパン内で、コーティング分散液でコーティングした。錠剤はパン内で３〜５ｒｐｍの速度で振とうし、３５℃〜４０℃の温度に予備加温した。次に、錠剤は、以下のパラメータで６％〜８％の重量増加まで、腸溶性コーティング分散液でコーティングした。４５℃〜６５℃の入口温度；２７℃〜３４℃の排気温度；２８℃〜３２℃の生成物温度；８〜１４ｒｐｍのパン速度；１８０〜２４０ＣＨＭの気流量；１０〜２０ｐｓｉ（平方インチあたりのポンド）の空気スプレー圧；３〜４グラム／分／ｋｇの初期スプレー速度；及び、４〜８グラム／分／ｋｇの最終スプレー速度。次に、４５℃〜５０℃の入口温度及び３〜５ｒｐｍのパン速度で、錠剤をパン内で３０分間硬化させた。最後に、３〜５ｒｐｍのパン速度で、パン内で錠剤を室温に放冷させた。次に、１２５ｍｇ錠剤の４個を、サイズ０の不透明なスウェーデンオレンジ色のゼラチンカプセルに詰めた。
【０１１８】
腸溶性コーティングプロアントシアニジン重合体組成物錠剤を、含量均一性、薬物放出、微生物学的試験及び安定性について試験し、一部の分析的製造過程試験も実施した。安定性研究では、プロアントシアニジン重合体組成物は、室温で６カ月間の保管の後、並びに、加速温湿度条件の下でも安定していた。最後に、核錠を試験し、平均硬度（ｎ＝１０）が４〜１０Ｋｐ、破砕性（ｎ＝２０）が０．７％未満、平均錠重量（ｎ＝１０）が１２５ｍｇ±７ｍｇ、平均厚さ（ｎ＝１０）が３．９〜４．１ｍｍ、崩壊時間（ｎ＝６）が２０分以下であることが見いだされた。
【０１１９】
１Ｆ．腸溶性コーティング直接圧縮錠剤
腸溶性コーティング錠剤としてのプロアントシアニジン重合体組成物の希釈液を使用しない製剤化を、下記の通りに実施した。直接圧縮可能なプロアントシアニジン重合体組成物を、下の実施例２に記載の通りに単離した。核錠は、０２４Ｒ（３０メッシュ）のスクリーンを有するQuadro Comil内で１錠につき２５０ｍｇのプロアントシアニジン重合体組成物（合計約１６ｋｇ）を粉にし、次に、粉にした組成物をPatterson Kelleyの２立方フィートツインシェルブレンダーで混合することによって調製した。次に、１錠につき１ｍｇのステアリン酸マグネシウム（Spectrum Quality Products社製、New Brunswick、N.J）をブレンダー内の組成物へ加え、２分間混合した。次に、混合物を回転タブレット成形機で８〜１５Ｋｐの錠剤硬度及び０．５％未満の破砕性に圧縮して、２５１ｍｇ錠剤（２５０ｍｇのプロアントシアニジン重合体組成物を含む）にした。
【０１２０】
コーティング分散液は、先ず第１の容器で、２５ｇ（固体７．５ｇ）の「EUDRAGIT（商標）L 30D-55」（Huls America社製、Somerset、N.J.）（重量は１１５グラムのコーティング錠についてのもの）分散液を混合することによって調製した。色素分散液は、第２の容器で、３９．５９ｇの精製水、３．３０グラムのタルク（Alphafil（商標）500）（Whittaker, Clark & Daniels社製、South Plainfield、N.J.）、６．０６ｇ（固体３．１５ｇ）の白色分散液（色素）（Warner-Jenkinson社製、St. Louis、Mo.）及び１．０５ｇのトリエチルシトレート（Morflex社製、Greensboro、N.C.）を常時撹拌しながら順番に加えることによって調製した。次に、混合物を１５分間、又は均質になるまで均質化した。ゆっくりと撹拌しながら、色素分散液を「EUDRAGIT（商標）L 30D-55」分散液に加え、次に３０分間撹拌した後スプレーした。沈殿を避けるために、スプレー過程でも撹拌を維持した。
【０１２１】
錠剤は、以下の設定により、Compu-Lab２４インチ／３０Ｌのパン内で、５０，０００個のバッチでコーティングした。１０〜２０ｐｓｉの噴霧気圧；３５℃〜６０℃のパン吸気温度；５〜６インチのノズルチップ−錠剤ベッド間距離；及び、４／２バッフル／ノズル。錠剤をパンへ加えた後に、パンを３〜５ｒｐｍの速度で軽く振とうし、４０℃に加熱した。次に、以下のパラメータにより、１１〜１３％の重量増加まで錠剤にスプレーした。２７℃〜３３℃の目標排気温度（１０分間のスプレーの間に達成する）；８〜１２ｒｐｍのパン速度；１８０〜２４０ＣＦＭの気流量；及び、２〜５グラム／分／ｋｇのスプレー速度。所望の重量増加を達成した後に、熱を遮断し、錠剤が３０℃以下に冷やされるまでパンを３〜５ｒｐｍで軽く振とうした。
【０１２２】
錠剤は、サイズＡＡの不透明なスウェーデンオレンジ色のＤＢゼラチンカプセル（Capsugel社製、Greenwood、S.C.）に封入した。
【０１２３】
コーティングが８〜１０％の重量増加まで２５，０００個の錠剤のバッチで実施されたことを除いて、５００ｍｇ錠剤も前記のように作製した。
【実施例２】
【０１２４】
直接圧縮可能なプロアントシアニジン重合体組成物の単離
直接圧縮可能なプロアントシアニジン重合体組成物（上の実施例１Ｅ及び１Ｆで製剤を調製するために用いたもの）を、以下の通りにクロトン・レクレリ（Croton lechleri）植物のラテックスから単離した。
【０１２５】
４６０リットルのクロトン・レクレリラテックスを、９４０リットルの精製水と１０分間混合し、その後４℃で一晩（１２時間）静置した。赤い上清を貯蔵タンクに送り、残りは廃棄した。次に、１０分間混合し、次に相を分離させることによって、上清を２００リットルのｎ−ブタノールで抽出した。ｎ−ブタノール相を廃棄し、水相を各２００リットルのｎ−ブタノールでさらに２回抽出した。抽出後、１ｋＤカットオフ膜（低タンパク結合セルロース膜）を用いて水相を限外濾過によって濃縮し、次に、約３７℃（±２℃）で濃縮水を箱形乾燥器で乾燥させた。
【０１２６】
カラムクロマトグラフィーによる精製のために、乾燥抽出物の６ｋｇを７５リットルの精製水に溶解し、９０分間撹拌した。溶解物質は、直列に接続した３５リットルCM-セファロースカラム（弱い陽イオン交換樹脂）及び７０リットルLH-20カラム（サイズ排除樹脂）からなる２カラムクロマトグラフィーシステムでクロマト分離した。材料をCM-セファロースカラムに加え、１４０リットル精製水で洗浄し、次に、３７５リットルの３０％アセトンでLH-20カラムの上へ溶出させた。この時点で２つのカラムを切り離し、プロアントシアニジン重合体組成物を２５０リットルの４５％アセトンでLH-20カラムから溶出させた。分画を１０リットルボトルに収集し、ＵＶ検出器により４６０ｎｍで観察した。４６０ｎｍで検出可能な吸光度を有する材料を含む分画をプールし、１ｋＤカットオフ膜（低タンパク結合セルロース膜）を用いて限外濾過によって濃縮した。約３７℃（±２℃）の水浴内で回転乾燥機を用いて、濃縮水を乾燥させた。
【０１２７】
プロアントシアニジン重合体組成物を、直接圧縮性について試験した。プロアントシアニジン重合体組成物の２５０ｍｇ部分を結合剤及び賦形剤の非存在下でタブレットマシンに入れ、次に、様々な厚みの錠剤に圧縮した（すなわち、錠剤へ成形するために組成物へ加える圧力がより大きいほど、生じる錠剤は薄い）。次に、従来の硬度試験機で錠剤の硬度を測定した。８〜１５ｋｐの硬度を有する錠剤の破砕性を、ＵＳＰ２３＜１２１６＞で記載される通りに測定した。破砕性は、０．５％未満の重量減少であった。
【実施例３】
【０１２８】
医療品の成分、組成及び製造
３Ａ．医療品
医療品クロフェレマーは、サイズ００の不透明なスウェーデンオレンジゼラチンカプセルに封入され、微結晶性セルロースで埋め戻された、腸溶性コーティング１２５ｍｇ錠剤からなる。各カプセルは、１、２又は４個の腸溶性コーティング錠剤を含む。錠剤核は、９９．９３％のクロフェレマー及び０．０７％のステアリン酸マグネシウムからなり、メタクリル酸共重合体でコーティングされる。
【０１２９】
３Ｂ．医療品の成分
クロフェレマーはNapo Pharmaceuticals社によって供給され、現行の医薬品製造品質管理基準（ｃＧＭＰ）の下で製造される。ステアリン酸マグネシウムはMallinckrodt社（又は、同等体）によって製造され、２７ＵＳＰ／ＮＦに記載のステアリン酸マグネシウムの仕様を満たす。ステアリン酸マグネシウムは、製造業者によって、植物源に由来することが保証される。微結晶性セルロースはFMC社（又は、同等体）によって製造され、２７ＵＳＰ／ＮＦに記載の微結晶性セルロースの仕様を満たす。高密度及び低密度の微結晶性セルロースが使用される。メタクリル酸共重合体はDeGussa社によって製造されるtinder商品名Eudragit（登録商標）（L 30-D55）であり、２７ＵＳＰ／ＮＦに記載のメタクリル酸共重合体タイプＣの仕様を満たす。トリエチルシトレートはMorflex社（又は、同等体）によって製造され、２７ＵＳＰ／ＮＦに記載のトリエチルシトレートの仕様を満たす。タルクはWhittaker, Clark and Daniels社（又は、同等体）によって製造され、２７ＵＳＰ／ＮＦに記載のタルクの仕様を満たす。精製水は医療品製造業者によって供給され、２７ＵＳＰ／ＮＦに記載の精製水の仕様を満たす。スウェーデンオレンジ色の不透明なサイズ００の硬質ゼラチンカプセル本体及びキャップは、Capsugel社（Greenwood、SC）によって供給される。製造業者は、カプセルが、ｃＧＭＰの下で現行の国民医薬品集（ＮＦ）のゼラチンの要件を満たすゼラチンから作製されることを保証する。
【０１３０】
３Ｃ．医療品の組成
錠剤核及び腸溶性コーティング錠剤の組成を、それぞれ表２及び表３に記載する。クロフェレマー及びステアリン酸マグネシウムの量は、クロフェレマーの含水量について補正する薬剤物質の無水力価に基づいて調節される。コーティング後の重量増加量は、約１０％である。臨床用のバッチサイズは、腸溶性コーティング錠剤１００，０００〜１５０，０００個である。その後、１、２又は４個の腸溶性コーティング錠剤をサイズ００カプセルに入れ、各カプセル力価及びプラセボの重量を一致させるために、微結晶性セルロースで埋め戻す。
【０１３１】
【表２】
0005384329.tif 000004
【０１３２】
【表３】
0005384329.tif 000005
【０１３３】
３Ｄ．医療品の製造方法
Ｉ．錠剤核の製造
水分を調整する無水ベースでのクロフェレマーの力価に基づき、十分な量のクロフェレマー及びステアリン酸マグネシウムを、製造前に秤量する。クロフェレマーをブレンダーへ加え、ステアリン酸マグネシウムをふるい分けしてクロフェレマーに加える。クロフェレマー及びステアリン酸マグネシウムを混合し、代表的な混合試料を採取して収率を判定する。収率は、１００±３％でなければならない。混合物は９９．９％活性であるので、混合均一性は必要な場合を除いて判定しない。混合物を、１／ａインチの丸い凹状パンチを用いて回転タブレット成形機で直接圧縮する。完成した錠剤核を除塵し、コーティングまで容器に入れておく。生産運転の開始前に、目標の錠剤核重量、厚み及び硬度を満たすために、本番前運転を実施して圧縮の速度及び与圧を調節する。さらに、破砕性及び崩壊を測定する。生産運転の間、錠剤核試料を定期間隔で採取し、錠剤が目標の錠剤重量、厚み及び硬度を満たしていることを確認する。硬度、厚み、重量、破砕性及び崩壊のさらなる試験のために、本番運転の初期、中間及び終期に代表的な錠剤核を採取する。平均錠剤核重量は、目標とする錠剤核重量の±５％内でなければならない。錠剤核、試料錠剤核、廃棄錠剤核及び混合廃棄物の数を照合して、アカウンタビリティ率を計算する。アカウンタビリティ率は、９５％未満であってはならず、１０３％を超えてはならない。錠剤核製造工程の概略図を、下に示す。
【０１３４】
【表４】
0005384329.tif 000006
【０１３５】
II．錠剤核のコーティング
１０％の名目錠剤核重量増加に基づいて、Eudragit（登録商標）、トリエチルシトレート、タルク及び精製水の量を計算し、秤量する。高剪断混合機を備えた適当な容器に精製水を加える。トリエチルシトレート及びタルクを容器に加え、均質になるまで混合する。プロペラミキサーを備えた別の容器に、Eudragit（著作権）分散液を加えて混合する。トリエチルシトレート及びタルク分散液をEudragit（登録商標）分散液に加え、スプレー工程を通して連続的に撹拌する。パン塗工機械パラメータを適宜調節し、ラインにコーティング分散液を加える。錠剤核をコーティングパンに加え、コーティングパンを軽く振とうしながら３５〜４０℃に暖める。温度に達すると、錠剤核の平均重量を記録し、目的のコーティング錠重量を計算する。その後、目標とする重量増加が満たされるまで、錠剤核にスプレーし、重量を定期的に検査する。目標とするスプレー速度（４〜８グラム／分／ｋｇ錠剤核）、目標とする排気温度（３５〜４０℃）及び入口温度を、頻繁に監視する。錠剤を４５〜５０℃で３０分間硬化し、次に冷ます。代表的な腸溶性コーティング試料を、試験のために採取する。平均腸溶性コーティング錠剤重量は、目標とする腸溶性コーティング錠剤重量の±５％内でなければならない。
【０１３６】
腸溶性コーティング錠剤、腸溶性コーティング錠剤試料の重量及び腸溶性コーティング錠剤の理論量を判定し、説明可能な収率を計算する。説明可能な収率は、９５％未満であってはならず、１０３％を超えてはならない。錠剤核スプレーコーティング工程を、下に図示する。
【０１３７】
【表５】
0005384329.tif 000007
【０１３８】
III．カプセル化腸溶性コーティング錠剤の製造
各カプセル力価のカプセル封入のために、腸溶性コーティング錠剤及び微結晶性セルロースを別々に秤量する。正確な剤形（１２５ｍｇ、２５０ｍｇ又は５００ｍｇ）に従い、名目で６００〜８００ｍｇのカプセル重量を達成するために、カプセル化する微結晶性セルロースの量を計算する。１００個のカプセルの平均に基づくカプセルの平均重量を計算する。カプセルは、サイズ００の交換部品を備え、適当な量の錠剤及び微結晶性セルロースを送達するように調節された、半自動のカプセル封入機械を用いて充填する。目標の総カプセル重量（カプセルシェルと錠剤及び微結晶性セルロースとの合計）を満たすために、本番前運転を実施してトレイ充填重量、タンパー上の回転数及び突き固め回数を調節する。各トレイは、カプセルトレイにカプセル本体を置くことによって調製する。各カプセル本体に、目標の量の錠剤及び微晶質セルロースを詰めて、目標とする充填を達成する。キャップを本体上に置き、密閉する。カプセルをトレイから取り出し、除塵する。各トレイからのカプセル複合体を収集し、工程内試験及び出荷試験のために秤量する。平均カプセル重量は、目標とするカプセル重量の±５％内である。次に、所望の数のカプセルを充填するまで、工程を繰り返す。損傷を受けたカプセル、腸溶性コーティング錠剤廃棄物及び微結晶性セルロース廃棄物を、最終製品照合のために収集する。完成したカプセルの混合体を、出荷試験に送る。完成したカプセル、サンプルカプセル、損傷カプセル及び薬剤物質廃棄物の数を照合し、アカウンタビリティ率を計算する。アカウンタビリティ率は、９５％未満であってはならず、１０３％を超えてはならない。腸溶性コーティング錠剤のカプセル封入の概略図を、下に示す。
【０１３９】
【表６】
0005384329.tif 000008
【実施例４】
【０１４０】
下痢型過敏性腸症候群を起こしている患者に及ぼす腸溶性コーティングプロアントシアニジン重合体組成物の影響
４Ａ．治療
試験は、下痢型過敏性腸症候群（ｄＩＢＳ）の対象における、１６週多施設第２相無作為化二重盲検プラセボ比較試験であった。ＩＢＳの診断のためのRome II基準によって支持されるｄ−ＩＢＳの定義を満たす２４６名の対象を、４群に無作為化した。プラセボ、１２５ｍｇ１日２回、２５０ｍｇ１日２回及び５００ｍｇ１日２回。試験は、２週間の無治療スクリーニング期間、１２週間の盲目治療期間、続いて２週間の無治療経過観察期間からなった。
【０１４１】
２週間のスクリーニング期間中、対象は彼らのｄ−ＩＢＳ症状の状態についての情報を、タッチトーン電話日記により毎日自己申告した。これには、腹痛及び不快、排便回数、粘稠度及び切迫に関する情報が含まれた。対象がスクリーニング期間の終わりに試験対象患者基準を満たし、スクリーニング期間中の日記で掴んだ情報が、彼らが活性ｄ−ＩＢＳ［平均日排便回数≧２；疼痛スコア≧１；大便粘稠度≧３（疼痛及び粘稠度のための５ポイントLickertスケール）］を有することを示した場合は、コンピュータ生成中央ランダム化スキーマーに従って対象を４群の１つに無作為化した。
【０１４２】
１２週二重盲検治療期間中、対象は指示された通りに、タッチトーン電話日記システムによって毎日及び毎週の評価を記録し続けた。対象は試験評価検査訪問のために治療期間中４週ごとに現れ、その時にさらなる試験医薬品を受け取った。
【０１４３】
２週無治療経過観察期間中、対象は毎日及び毎週の評価を記録し続けた。
【０１４４】
結果：
薬剤関連の重大な有害事象はなかった。有害事象発生率は、表４に示すように全ての用量群にわたって同程度であった。便秘において、薬剤及び用量に関連した差はなかった。
【０１４５】
【表７】
0005384329.tif 000009
【０１４６】
一般に、１日２回のクロフェレマー１２５ｍｇは、表５で示すように女性のほとんどの評価項目で一貫した応答を示した。男性では、ほとんど効力がないようであった。しかし、群の大きさは、別々に分析するにはあまりに小さかった（１３〜１６名／群）。クロフェレマーは便秘を起こさなかったので、大便粘稠度スコアは正常に近く、プラセボと差はなかった。他の全ての評価項目（頻度、切迫、十分な軽減及び疼痛）では、各連続した月で活性の向上が見られ、２週無治療経過観察期間の間に、症状は予想通りにベースラインレベルに近づき始めた。１日２回のクロフェレマー５００ｍｇは、疼痛に対しても統計学的に有意な効果を示した（疼痛スコアの０．４８の低下；無疼痛日の２２．４４％の増加）。この試験で用いたｄ−ＩＢＳ集団を代表しない、５名の女性の疾患外れ値（彼女らはベースライン時に＞９回の排便／日があり、全ての無作為化女性対象の平均排便回数から＞３の標準偏差であった）があり、それらはこの概要で示す全ての分析から除外した。
【０１４７】
表６で示すように、２５０ｍｇ及び５００ｍｇを１日２回のクロフェレマーは、プラセボ群よりも頻度及び粘稠度に対する影響は少なかった。１日２回クロフェレマー５００ｍｇで治療した対象は、プラセボと比較して排便回数の日排便平均増加の半分より大きい増加を示した。平均大便粘稠度は、プラセボと比較して０．２２ポイント高かった（軟便により近い）。
【０１４８】
【表８】
0005384329.tif 000010
【０１４９】
【表９】
0005384329.tif 000011
【０１５０】
図４で見られるように、１日２回クロフェレマー１２５ｍｇで治療した女性対象は、排便回数の臨床的に有意な減少を示した。クロフェレマーの使用は、１日につき１回より多い排便回数の減少をもたらした。排便回数の月から月への改善は、２カ月目に減少し、値がベースラインに近づき始めたプラセボ効果と対照的であった。無治療期間が３カ月目の終わりから始まったとき、対象はクロフェレマーの服用を停止し、効果は予想通りに消え始めた。
【０１５１】
図５で見られるように、クロフェレマーは無切迫日の増加をもたらした。３カ月目、プラセボ群で無切迫日の２３．９％の増加が観察されたのに対して、クロフェレマー群では無切迫日の３５．１％の増加があった。通常見られるように、月から月への改善があった。プラセボ効果は２カ月目にピークに達してから急減し、値はベースラインへ近づき始めた。無治療期間が３カ月目の終わりから始まったとき、対象はクロフェレマーの服用を停止し、効果は予想通りに消え始めた。
【０１５２】
図６で見られるように、クロフェレマーの投与は、ｄ−ＩＢＳ症状の十分な軽減を報告する対象の割合の増加をもたらした。ｄ−ＩＢＳは一群の症状を含むので、十分な軽減の評価項目は、治療が彼らのｄ−ＩＢＳ症状にどのくらい効果的に対処しているかということについての、患者による全体的な評価である。クロフェレマー１２５ｍｇの１日２回投与は、プラセボ群と比較して、ｄ−ＩＢＳ症状の十分な軽減の１６％増をもたらした。観察された分析によると、クロフェレマー活性の月から月への改善があり、すなわち、患者がより長くクロフェレマーを服用するほど症状の軽減は大きかった。前に他の評価項目で見られたように、プラセボ効果は２カ月目にピークに達し、その後減少した。
【０１５３】
下痢型ＩＢＳは、疼痛と腸習性の変化との密接な関連性によって、多くの機能的腸疾患と区別される。ＩＢＳの診断のRome II基準によって定義されるように、疼痛は異常な腸習性に伴っていなければならず、腸習性の改善は疼痛の改善に伴うはずである。この試験では、０が無で５が重度である５ポイントスケールで疼痛スコアを測定し、及び、無疼痛日の存在を測定した。図４及び図５で示すように、クロフェレマー（１２５及び５００ｍｇ１日２回）で治療した女性対象は、疼痛スコア及び無疼痛日の臨床的及び統計学的に有意な（ｐ＜０．０５）減少を示した。図６に示す毎週の疼痛スコア結果で観察されるように、効果は全く一貫している。疼痛寛解に対するこの効果は、予想外で驚きであった。
【０１５４】
結論として、クロフェレマー１２５ｍｇの１日２回投与は安全であり、その投与は、女性対象で疼痛、十分な軽減、頻度及び切迫の効力評価項目で改善をもたらした。クロフェレマー２５０及び５００ｍｇの１日２回投与は安全であり、プラセボと比較して、粘稠度及び頻度の下痢症状を悪化させるようであった。クロフェレマー１２５及び５００ｍｇの１日２回投与は、ｄ−ＩＢＳの女性対象で、疼痛スコア及び無疼痛日の統計学的に有意な減少をもたらした。
【実施例５】
【０１５５】
クロフェレマー作用機構の調査
クロフェレマーの作用機構をさらに調査するために、選択した一群の細胞性サイトカイン放出アッセイ（ＩＬ１α；ＴＮＦ−α誘導及びＩＬ−１誘導のＰＧＥ２放出；ＩＦＮ−γ；ＩＬ−２、ＩＬ−４；ＩＬ−５；ＩＬ−６；ＩＬ−８；ＩＬ１０及びＴＮＦ−α）及び分子アッセイ（ＣＯＸ−１及びＣＯＸ−２酵素アッセイ、並びにグルココルチコイド、セロトニン５ＨＴ３、δ−オピオイド、κ−オピオイド、μ−オピオイド及び非選択的オピオイド受容体結合アッセイで、１０及び１００μｇ／ｍＬのクロフェレマーを評価した。クロフェレマーは、ＣｏｎＡ−及びＬＰＳ誘導サイトカイン放出アッセイに対応する細胞傷害アッセイ、並びに、ＴＮＦ−α及びＩＬ−１誘導ＰＧＥ放出アッセイに対応するアッセイでも試験した。
【０１５６】
クロフェレマーは、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１０及びＴＮＦ−αサイトカイン放出アッセイ、並びにＴＮＦ−α誘導及びＩＬ−１誘導のＰＧＥ２放出アッセイにおいて、１０及び１００μｇ／ｍＬで有意な（＞５０％）阻害を示した（すなわち、ＩＬ−５を除く全てのサイトカイン放出アッセイ）。クロフェレマーはＣｏｎＡ及びＩＬ−１誘導性のＰＧＥ２細胞傷害性アッセイでも有意な細胞傷害活性を示し、ＣｏｎＡ媒介性のサイトカイン放出アッセイ（ＩＦＮ−γ、ＩＬ−２、ＩＬ−４及びＩＬ−１０）及びＩＬ−１誘導ＰＧＥ２放出アッセイは、一般の細胞傷害性による可能性が示唆された。
【０１５７】
さらに、１０及び１００μｇ／ｍＬで、クロフェレマーはＣＯＸ１及びＣＯＸ２酵素アッセイでそれぞれ７３％及び１００％の阻害を引き起こした。
【０１５８】
本発明には、その精神及び範囲から逸脱することなく、多くの修正及び変更を加えることができることは、当業者には明らかになろう。本明細書で記載されている具体的な実施形態は例示として提供されているにすぎず、本発明は添付の請求項の各条項とそのような請求項が権利を有する等価物の全範囲によってのみ限定されるものとする。そのような修正は、添付の請求項の適用範囲に入るものとする。
【０１５９】
本明細書で引用した特許及び非特許の全ての参考文献は、個々の出版物又は特許若しくは特許出願が具体的、及び個々に全ての目的のために完全に参照により組み込まれることが示されるがごとく、参照により完全に、全ての目的のために本明細書に組み込まれる。
【図面の簡単な説明】
【０１６０】
【図１】女性での排便回数に及ぼす１日２回のクロフェレマー１２５ｍｇの影響を図示するグラフである。
【図２】女性での切迫に及ぼす１日２回のクロフェレマー１２５ｍｇの影響を図示するグラフである。
【図３】女性でのＩＢＳ症状の十分な軽減に及ぼすクロフェレマーの影響を図示するグラフである。
【図４】女性での疼痛スコアに及ぼすクロフェレマーの影響を図示するグラフである。
【図５】女性での無疼痛日の割合に及ぼすクロフェレマーの影響を図示するグラフである。
【図６】女性での疼痛スコアに及ぼすクロフェレマーの影響を図示するグラフである。
【図７Ａ】本発明の方法で有用な例示的なＣＦＴＲ阻害分子を示す図である。図７Ａは、３−［（３−トリフルオロメチル）フェニル］−５−［（３カルボキシフェニル）メチレン］−２−チオキソ−４−チアゾリジノンであり、図７Ｂ及び７Ｆはグリシンヒドラジドであり、図７Ｃ、７Ｄ、７Ｅ、７Ｇ及び７Ｈはマロン酸ヒドラジドである。下で議論されるように、これらの分子は、腸で吸収されないようにするためにＰＥＧ化してもよい。
【図７Ｂ】本発明の方法で有用な例示的なＣＦＴＲ阻害分子を示す図である。図７Ａは、３−［（３−トリフルオロメチル）フェニル］−５−［（３カルボキシフェニル）メチレン］−２−チオキソ−４−チアゾリジノンであり、図７Ｂ及び７Ｆはグリシンヒドラジドであり、図７Ｃ、７Ｄ、７Ｅ、７Ｇ及び７Ｈはマロン酸ヒドラジドである。下で議論されるように、これらの分子は、腸で吸収されないようにするためにＰＥＧ化してもよい。
【図７Ｃ】本発明の方法で有用な例示的なＣＦＴＲ阻害分子を示す図である。図７Ａは、３−［（３−トリフルオロメチル）フェニル］−５−［（３カルボキシフェニル）メチレン］−２−チオキソ−４−チアゾリジノンであり、図７Ｂ及び７Ｆはグリシンヒドラジドであり、図７Ｃ、７Ｄ、７Ｅ、７Ｇ及び７Ｈはマロン酸ヒドラジドである。下で議論されるように、これらの分子は、腸で吸収されないようにするためにＰＥＧ化してもよい。
【図７Ｄ】本発明の方法で有用な例示的なＣＦＴＲ阻害分子を示す図である。図７Ａは、３−［（３−トリフルオロメチル）フェニル］−５−［（３カルボキシフェニル）メチレン］−２−チオキソ−４−チアゾリジノンであり、図７Ｂ及び７Ｆはグリシンヒドラジドであり、図７Ｃ、７Ｄ、７Ｅ、７Ｇ及び７Ｈはマロン酸ヒドラジドである。下で議論されるように、これらの分子は、腸で吸収されないようにするためにＰＥＧ化してもよい。
【図７Ｅ】本発明の方法で有用な例示的なＣＦＴＲ阻害分子を示す図である。図７Ａは、３−［（３−トリフルオロメチル）フェニル］−５−［（３カルボキシフェニル）メチレン］−２−チオキソ−４−チアゾリジノンであり、図７Ｂ及び７Ｆはグリシンヒドラジドであり、図７Ｃ、７Ｄ、７Ｅ、７Ｇ及び７Ｈはマロン酸ヒドラジドである。下で議論されるように、これらの分子は、腸で吸収されないようにするためにＰＥＧ化してもよい。
【図７Ｆ】本発明の方法で有用な例示的なＣＦＴＲ阻害分子を示す図である。図７Ａは、３−［（３−トリフルオロメチル）フェニル］−５−［（３カルボキシフェニル）メチレン］−２−チオキソ−４−チアゾリジノンであり、図７Ｂ及び７Ｆはグリシンヒドラジドであり、図７Ｃ、７Ｄ、７Ｅ、７Ｇ及び７Ｈはマロン酸ヒドラジドである。下で議論されるように、これらの分子は、腸で吸収されないようにするためにＰＥＧ化してもよい。
【図７Ｇ】本発明の方法で有用な例示的なＣＦＴＲ阻害分子を示す図である。図７Ａは、３−［（３−トリフルオロメチル）フェニル］−５−［（３カルボキシフェニル）メチレン］−２−チオキソ−４−チアゾリジノンであり、図７Ｂ及び７Ｆはグリシンヒドラジドであり、図７Ｃ、７Ｄ、７Ｅ、７Ｇ及び７Ｈはマロン酸ヒドラジドである。下で議論されるように、これらの分子は、腸で吸収されないようにするためにＰＥＧ化してもよい。
【図７Ｈ】本発明の方法で有用な例示的なＣＦＴＲ阻害分子を示す図である。図７Ａは、３−［（３−トリフルオロメチル）フェニル］−５−［（３カルボキシフェニル）メチレン］−２−チオキソ−４−チアゾリジノンであり、図７Ｂ及び７Ｆはグリシンヒドラジドであり、図７Ｃ、７Ｄ、７Ｅ、７Ｇ及び７Ｈはマロン酸ヒドラジドである。下で議論されるように、これらの分子は、腸で吸収されないようにするためにＰＥＧ化してもよい。
【図１】
0005384329.tif 000012
【図２】
0005384329.tif 000013
【図３】
0005384329.tif 000014
【図４】
0005384329.tif 000015
【図５】
0005384329.tif 000016
【図６】
0005384329.tif 000017
【図７Ａ】
0005384329.tif 000018
【図７Ｂ】
0005384329.tif 000019
【図７Ｃ】
0005384329.tif 000020
【図７Ｄ】
0005384329.tif 000021
【図７Ｅ】
0005384329.tif 000022
【図７Ｆ】
0005384329.tif 000023
【図７Ｇ】
0005384329.tif 000024
【図７Ｈ】
0005384329.tif 000025