(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
リウマチ関節炎の急性炎症を阻害し、かつリウマチ関節炎の進行を抑制するための薬物の製造におけるジンセノサイド  コンパウンド−Ｋの使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は製薬中におけるジンセノサイド  コンパウンド‐Ｋの新規使用、特にジンセノサイド  コンパウンド‐Ｋの関節炎の予防または治療薬物の製造中の使用に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
中国特許（公開番号ＣＮ１５７０１３３Ａ）はジンセノサイド  コンパウンド‐Ｋの構造及びその製造方法と抗腫瘍方面におけるいくつかの使用について公開している。ジンセノサイド  コンパウンド‐Ｋは以下のような構造を有する。：
【化１】
0005463142.tif 000002
【０００３】
ただし、関節炎の予防または治療におけるその使用についてはまだ報告されていない。
【発明の概要】
【０００４】
本発明の内容
本発明はその他の領域におけるジンセノサイド  コンパウンド‐Ｋの使用の可能性を探り、それにより製薬中におけるその新用途を提供することを目的とする。
【０００５】
本発明はジンセノサイド  コンパウンド‐Ｋの関節炎の予防または治療薬物の製造における使用を提供する。
【発明を実施するための形態】
【０００６】
具体的な実施方式
実施例１      初回毒素検査
ジンセノサイド  コンパウンド‐Ｋ、３６０ｍｇ／ｋｇの試薬量を静脈注射したところ、マウスの活動は正常で異常は見られなかった。
【０００７】
実施例２    カラゲニンにより誘発されたマウス足裏の腫脹にジンセノサイド  コンパウンド‐Ｋが与える影響
１、実験目的：カラゲニンによる引き起こされたマウスの急性炎症に被検サンプルが与える影響について観察する。
【０００８】
２、材料及び試薬：
１）薬物：ジンセノサイド  コンパウンド‐Ｋ、  試薬量は１０ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、２．５ｍｇ／ｋｇ    
インドメタシン  １．０ｍｇ／ｋｇ
カラゲニン、再蒸留水を用いて１％濃度にする。
【０００９】
２）動物：
昆明種のマウス６０匹
体重：１９−２１ｇ
性別：オス
各グループの動物数：１０匹
実験室温度：２４〜２６℃、相対湿度：６０〜７０％。
【００１０】
３、実験方法：
動物を先に多投薬量グループ：１０ｍｇ／ｋｇ、  ｉｖ；中投薬量グループ：５ｍｇ／ｋｇ、  ｉｖ；少投薬量グループ：２．５ｍｇ／ｋｇ、  ｉｖ；インドメタシングループ：１．０ｍｇ／ｋｇ、  ｐｏ；ブランク対照グループ：生理食塩水１０ｍｇ／ｋｇ、  ｉｖに分ける。上記の方法により３日投薬し、炎症を引き起こす前に１回、プレシスモメータにより各グループにおけるマウスの右側後肢の足裏体積を測る。最終回の投薬から１時間後に、マウスの右側後肢の足裏皮下に１％のカラゲニン０．１ｍｌを注射して炎症を引き起こし、以後１時間ごとに１回、足裏の体積を測る。マウスの炎症発症前と発症後の異
なる時点における右側後肢の足裏の体積差の値が腫脹値である。腫脹率及び抑制率を計算し、グループ間の差異をｔ検定により比較する。
【００１１】
腫脹率％  ＝（Ｅｎ−Ｅｏ）／Ｅｏ×１００％
Ｅｎ  ＝  炎症発症後の異なる時点の腫脹値
Ｅｏ  ＝  炎症発症前の腫脹値
抑制率％  ＝（ｃ−ｔ）／ｃ×１００％
Ｃ  ＝  対照グループの腫脹率
Ｔ  ＝  治療グループの腫脹率。
【００１２】
４、結果
結果を表１に示す。ジンセノサイド  コンパウンド‐Ｋはカラゲニンによる引き起こされたマウス足裏の急性炎症を明らかに抑制することができる。その中で多投薬量グループの作用が最も高く、４時間（４ｈ）での作用が最も良くて、マウス急性炎症への抑制率は６５．６６％にも達し、インドメタシングループと少投薬量グループの作用は同等であった。
【表１】
0005463142.tif 000003
【００１３】
実施例３    カラゲニンにより誘発されたラット足裏の腫脹にジンセノサイド  コンパウンド‐Ｋが与える影響
１、実験目的：カラゲニンによる引き起こされたラット急性炎症に対する被検サンプルの影響を観察する。
【００１４】
２、材料及び試薬：
１）薬物：ジンセノサイド  コンパウンド‐Ｋ、試薬量は１０ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、２．５ｍｇ／ｋｇ
インドメタシン、１ｍｇ／ｋｇ
カラゲニン、再蒸留水を用いて１％濃度にする。
【００１５】
２）動物：
ラット、ＳＤ系
体重：１３０〜１５０ｇ
性別：オス
各グループの動物数：８匹
実験室温度：２４〜２６℃、相対湿度：６０〜７０％。
【００１６】
３、実験方法：
動物を先に多投薬量グループ：１０ｍｇ／ｋｇ、  ｉｖ；中投薬量グループ：５ｍｇ／ｋｇ、  ｉｖ；少投薬量グループ：２．５ｍｇ／ｋｇ、  ｉｖ；インドメタシングループ：１ｍｇ／ｋｇ、  ｐｏ；ブランク対照グループ：生理食塩水１０ｍｇ／ｋｇ、  ｉｖに分ける。動物をまずグループ分けし、上記の方法により３日投薬し、炎症を引き起こす前に1回、プレシスモメータにより各グループにおけるラットの右側後肢の足裏体積を測る。最終回の投薬から１時間後に、ラットの右側後肢の足裏皮下に１％のカラゲニン０．１ｍｌを注射して炎症を引き起こし、以後１時間ごとに１回、足裏の体積を測る。上記の方法で腫脹率及び抑制率を計算し、グループ間の差異をｔ検定により比較する。
【００１７】
４、結果
結果を表２に示す。ジンセノサイド  コンパウンド‐Ｋはカラゲニンによる引き起こされたラットの足裏急性炎症を明らかに抑制することができる。そのうち多投薬量グループの作用が最も高く、ラット急性炎症に対する抑制率は最高で７８．２３％にも達する。インドメタシングループの作用は多投薬量及び少投薬量の間にあった。
【表２】
0005463142.tif 000004
【００１８】
実施例４  アジュバントにより誘発されたラットのアジュバント性関節炎にジンセノサイド  コンパウンド‐Ｋが与える影響
（Ａ）アジュバントに誘発されたラットのアジュバント性関節炎に対するジンセノサイド  コンパウンド‐Ｋの予防作用。
【００１９】
１、材料及び試薬：
１）薬物：ジンセノサイド  コンパウンド‐Ｋ、試薬量は１０ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、２．５ｍｇ／ｋｇ
インドメタシン：１ｍｇ／ｋｇ
トリプテリジウム  ウィルフォルディ  フック  Ｆ（Ｔｒｉｐｔｅｒｙｇｉｕｍ  Ｗｉｌｆｏｒｄｉｉ  Ｈｏｏｋ  Ｆ  （ＴＷＨＦ））：１．５ｍｇ／ｋｇ
フロイント完全アジュバント（Ｆｒｅｕｎｄ‘ｓ    Ｃｏｍｐｌｅｔｅ  Ａｄｊｕｖａｎｔ（ＦＣＡ））：シグマ（Ｓｉｇｍａ）社より購入、各ラットにおける右側後肢の足裏の皮下に０．１ｍｌを注射して炎症を引き起こす。
【００２０】
２）動物：
ラット、ＳＤ系
体重：１３０〜１５０ｇ
性別：オス
各グループの動物数：８匹
実験室温度：２４〜２６℃、相対湿度：６０〜７０％。
【００２１】
２、実験方法：
動物を先に多投薬量グループ：１０ｍｇ／ｋｇ、  ｉｖ；中投薬量グループ：  ５ｍｇ／ｋｇ、  ｉｖ；少投薬量グループ：  ２．５ｍｇ／ｋｇ、  ｉｖ；インドメタシングループ：１ｍｇ／ｋｇ、  ｐｏ；ＴＷＨＦグループ：１．５ｍｇ／ｋｇ、  ｐｏ；ブランク対照グループ：生理食塩水１０ｍｇ／ｋｇ、  ｉｖに分ける。動物に炎症を発症させる前にまずプレシスモメータにより右後ろ足裏の体積を１回測り、その後ラット右側後肢の足裏の皮下に０．１ｍｌのＦＣＡを注射して炎症を発症させる。発症後翌日、上記のとおりにグループ分けして、１５日間の投薬を開始する。一定時間ごとに足裏の体積を測り、上記の方法で腫脹率及び抑制率を計算し、グループ間の差異をｔ検定により比較する。
【００２２】
３、結果
結果を表３に示す。ジンセノサイド  コンパウンド‐Ｋはラットのアジュバント性関節炎を予防することができ、そのうち多投薬量グループの作用はＴＷＨＦグループより若干高く、インドメタシングループと同等であった。
【表３】
0005463142.tif 000005
【００２３】
（Ｂ）アジュバントにより誘発されたラットのアジュバント性関節炎に対するジンセノサイド  コンパウンド‐Ｋの治療作用。
【００２４】
１、材料及び試薬：
１）薬物：ジンセノサイド  コンパウンド‐Ｋ、試薬量は１０ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、２．５ｍｇ／ｋｇ
インドメタシン：１ｍｇ／ｋｇ
トリプテリジウム  ウィルフォルディ  フック  Ｆ（Ｔｒｉｐｔｅｒｙｇｉｕｍ  Ｗｉｌｆｏｒｄｉｉ  Ｈｏｏｋ  Ｆ  （ＴＷＨＦ））：１．５ｍｇ／ｋｇ
フロイント完全アジュバント（Ｆｒｅｕｎｄ‘ｓ  Ｃｏｍｐｌｅｔｅ  Ａｄｊｕｖａｎｔ  （ＦＣＡ））：シグマ（Ｓｉｇｍａ）社より購入、各ラットの右側後肢の足裏の皮下に０．１ｍｌを注射して炎症を引き起こす。
【００２５】
２）動物：
ラット、ＳＤ系
体重：１３０〜１５０ｇ
性別：オス
各グループの動物数：８匹
実験室温度：２４〜２６℃、相対湿度：６０〜７０％。
【００２６】
２、実験方法：
動物を先に多投薬量グループ：１０ｍｇ／ｋｇ、  ｉｖ；中投薬量グループ：  ５ｍｇ／ｋｇ、  ｉｖ；少投薬量グループ：  ２．５ｍｇ／ｋｇ、  ｉｖ；インドメタシングループ：１ｍｇ／ｋｇ、  ｐｏ；ＴＷＨＦグループ：１．５ｍｇ／ｋｇ、  ｐｏ；ブランク対照グループ：生理食塩水１０ｍｇ／ｋｇ、  ｉｖに分ける。動物に炎症を発症させる前、まずプレシスモメータにより１回右側後肢の足裏の体積を測り、その後ラットの右側後肢の足裏の皮下に０．１ｍｌのＦＣＡを注射して炎症を発症させる。発症後２０日たってから上記の通りにグループ分けして、８日間の投薬を開始する。一定時間ごとに足裏の体積を測り、上記の方法で腫脹率及び抑制率を計算して、グループ間の差異をｔ検定により比較する。
【００２７】
３、結果
結果を表４に示す。ジンセノサイド  コンパウンド‐Ｋはラットのアジュバント性関節炎を治療することができた。そのうち多投薬量グループの作用が最も高く、２６日目（２６ｄａｙ）の作用が最良で、抑制率は最高で３６．１５％にも達することができ、インドメタシングループ及びＴＷＨＦグループを明らかに上回った。
【表４】
0005463142.tif 000006
【００２８】
実施例５    ＩＩ型コラーゲン（ＣＩＩ）に誘発されたラットの関節炎にジンセノサイド  コンパウンド‐Ｋが与える影響
１、材料及び試薬：
１）薬物：
薬物：ジンセノサイド  コンパウンド‐Ｋ、試薬量は１０ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、２．５ｍｇ／ｋｇ
エンブレル（Ｅｎｂｒｅｌ）：  ９ｍｇ／ｋｇ、４日に１回、皮下に注射する
トリプテリジウム  ウィルフォルディ  フック  Ｆ（Ｔｒｉｐｔｅｒｙｇｉｕｍ  Ｗｉｌｆｏｒｄｉｉ  Ｈｏｏｋ  Ｆ  （ＴＷＨＦ））：１．５ｍｇ／ｋｇ。
【００２９】
炎症誘発剤：ＩＩ型コラーゲンを０．１ｍｏｌ／Ｌの酢酸中に溶解し、最終的に濃度２ｍｇ／ｍｌのコラーゲン溶液にする。４℃で一晩置いて、翌日ＩＩ型コラーゲン溶液を冷やしたフロイント不完全アジュバント（Ｆｒｅｕｎｄ‘ｓ  Ｉｎｃｏｍｐｌｅｔｅ  Ａｄｊｕｖａｎｔ  （ＦＩＡ)）中に滴下し、充分に乳化（ＩＩ型コラーゲン液：ＦＩＡ＝１：１）させ、ＩＩ型コラーゲンの最終濃度を１ｍｇ／ｍｌにする。ＩＩ型コラーゲン乳剤を４℃の冷蔵庫に保管して使用に備える。
【００３０】
免疫方法：各ラットの背中５箇所に皮下注射をして免疫処理を行う。各点０．１ｍｌ、全量０．５ｍｌ（ＩＩ型コラーゲンの含有量は０．５ｍｇ）とし、７日後に同様の方法で１回免疫を追加する。対照グループには０．１ｍｏｌ／Ｌの酢酸及びＦＩＡ乳化液を注射し、注射前及び免疫後２０日よりプレシスモメータにより右側後肢の足踝部関節の腫脹度を測る。
【００３１】
２）動物：
ラット、ＳＤ系
体重：１４０〜１６０ｇ
性別：オス
各グループの動物数：８匹
実験室温度：２４〜２６℃、相対湿度：６０〜７０％。
【００３２】
２．  ＩＩ型コラーゲン（ＣＩＩ）により誘発された関節炎に対するジンセノサイド  コンパウンド‐Ｋの予防作用
２．１実験方法：
まず０．１ｍｏｌ／Ｌの酢酸に溶解させ、一晩放置したＩＩ型コラーゲンを２ｍｇ／ｍｌの濃度に調整した後、１：１の比率でゆっくりとＦＩＡ中に滴下し、充分に乳化した後、各ラットの背中５箇所において皮膚内に注射をする。各点０．１ｍｌ（ラット１匹につき全量０．５ｍｌ、コラーゲン０．５ｍｇを含む）で最初の免疫処理を行う。その後７日目に同様の方法により２回目の免疫処理を行うと、炎症発症動物となる。これと同様の方法で正常対照グループの動物を処理するが、免疫成分にはコラーゲンは含まれない。
【００３３】
動物を多投薬量グループ：ジンセノサイド  コンパウンド‐Ｋ１０ｍｇ／ｋｇ、  ｉｖ；中投薬量グループ：ジンセノサイド  コンパウンド‐Ｋ５ｍｇ／ｋｇ、  ｉｖ；少投薬量グループ：ジンセノサイド  コンパウンド‐Ｋ２．５ｍｇ／ｋｇ、  ｉｖ；ＴＷＨＦグループ：１．５ｍｇ／ｋｇ、  ｐｏ；Ｅｎｂｒｅｌグループ：９ｍｇ／ｋｇ、  ｓｃ；ブランク対照グループ：生理食塩水１０ｍｇ／ｋｇ、  ｉｖに分ける。投薬グループの動物に対しては初回免疫時より投薬を開始し、第一回の免疫から８日で投薬を停止する。プレシスモメータにより免疫前と初回免疫後２０、２２、２４、２７及び２９日の足踝関節の腫脹値を測り、上記の方法で腫脹率及び抑制率を計算し、グループ間の差異はｔ検定で比較する。実験の後で、足踝関節を取って病理検査を行なう。
【００３４】
２．２  結果
結果は表５の通りである。ジンセノサイド  コンパウンド‐ＫはＩＩ型コラーゲンに誘発された関節炎を明らかに予防することができ、そのうち多投薬量グループの作用は最も高く、その作用は明らかにＴＷＨＦグループを上回り、ｅｎｂｒｅｌグループと同等であった。
【表５】
0005463142.tif 000007
【００３５】
３．  ＩＩ型コラーゲン（ＣＩＩ）により誘発された関節炎に対するジンセノサイド  コンパウンド‐Ｋの治療作用
３．１実験方法：
ＩＩ型コラーゲン(ＣＩＩ)とＦＩＡを研磨して乳剤にし、それぞれ各ラット背中部分の皮膚内に注射して免疫処理を行う。１９日経つとラットの足関節の大部分が腫脹し始めるので、足関節に腫脹が生じた過敏性ラット４０匹を選び、５グループに分ける。各グループ８匹で、それぞれ炎症発症対照グループ：ジンセノサイド  コンパウンド‐Ｋ１０ｍｇ／ｋｇ、  ｉｖ、中投薬量グループ：ジンセノサイド  コンパウンド‐Ｋ５ｍｇ／ｋｇ、  ｉｖ、少投薬量グループ：ジンセノサイド  コンパウンド‐Ｋ２．５ｍｇ／ｋｇ、  ｉｖ、Ｅｎｂｒｅｌグループ：９ｍｇ／ｋｇ、  ｓｃ、ＴＷＨＦグループ１．５ｍｇ／ｋｇ；ブランク対照グループ：生理食塩水１０ｍｇ／ｋｇ、  ｉｖとする。連続８日間投薬する。プレシスモメータにより炎症発症前及び症状開始後（２０日後）の異なる時点で足の腫脹値を測り、腫脹率及び抑制率を計算し、グループ間の差異はｔ検定により比較する。
【００３６】
３．２  結果
結果を表６に示す。ジンセノサイド  コンパウンド‐ＫはＩＩ型コラーゲンが誘発する関節炎を治療することができた。そのうち多投薬量グループの作用が最も高く、３１日目（３１ｄａｙ）の作用が最良で、抑制率は最高で２７．６７％に達し、ＴＷＨＦグループより高く、ｅｎｂｒｅｌグループと同等である。
【表６】
0005463142.tif 000008