(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
山豆根抽出物を有効成分として含有し、前記山豆根抽出物は単一の中心材料としての山豆根をエタノール水溶液又はブチルアルコール水溶液で抽出した後、水飽和ｎ−ブチルアルコールにより精製したことを特徴とする、呼吸器疾患の予防および治療用薬剤。
【請求項２】
前記呼吸器疾患は喘息、急性または慢性気管支炎、アレルギー性鼻炎、急性上気道感染症および急性下気道感染症の中から選択されたものであることを特徴とする、請求項１に記載の薬剤。
【請求項３】
前記呼吸器疾患は気道収縮、気道感染、５−リポキシゲナーゼ、ホスホジエステラーゼ４、気道過敏性または気道リモデリング、ロイコトリエンＤ４、および鎮咳効果により発病されることを特徴とする、請求項１に記載の薬剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は呼吸器疾患の予防および治療に有用な山豆根抽出物に関する。また、気道収縮、気道感染、５−リポキシゲナーゼ、ホスホジエステラーゼ４、気道過敏性または気道リモデリング、ロイコトリエンＤ４の防止効果が優れていると共に鎮咳効果を有し、呼吸器疾患の予防および治療に有用な山豆根抽出物を含有する薬剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
代表的な呼吸器疾患である喘息は呼吸困難、咳、喘鳴の症状が反復的および発作的に表れる病状として、小児喘息患者の約３０％が生後１年以内に、約８０％が４〜５歳で喘息の症状を表し、韓国では約１０％の発病率を示している。
【０００３】
喘息の発生率は国家、人種、年齢などにより差はあるが、１９９１年の英国の報告によると、成人の約７％、小児年齢層の１３．５％が喘息を患っている。韓国でも生活環境の変化、公害、ストレスなどの増加により次第に増加している趨勢である。公害のような環境汚染が深刻となった現代においては発病の年齢層が低くなり、その症状もまた、長期化している。
【０００４】
喘息の特徴の一つである呼吸閉塞は３段階の過程により生じる。即ち、気管支平滑筋の収縮、肺粘膜の肥厚化、そして気管支と細気管支に粘り気のある粘液が蓄積する。この中、気管支平滑筋の収縮のみは容易に回復する。
【０００５】
外因性（アレルギー性）喘息の発病は抗体ＩｇＥが特に重要な役割を果たし、ＩｇＧもまた含まれる。ＩｇＥが肥満細胞を活性化させることで、過敏反応を引き起こす媒介因子（histamine、ＳＲＳ−Ａ、ＥＣＦ−Ａ、ＮＣＦ、ＰＡＦ、Ｋｉｎｉｎ、ＰＧｓなど）を放出する。内因性（非アレルギー性）喘息の発病はまだ知られていないが、一部は自律神経により媒介されて発現する。内因性患者の中には、コリン性刺激が直接肥満細胞からヒスタミンなどの媒介物質を遊離させ、杯細胞の分泌が増加されて肺血管が拡張され、気管、気管支および巨大細気管支が収縮し、気管支痙攣が起こり粘液分泌が増加する。
【０００６】
現在、喘息の治療法がないのが実情である。治療には発作および合併症を予防するために多様な方法と薬物が使われるが満足な治療法ではない。喘息の発病を予防する最も効果的な方法は喘息を引き起こす誘発因子を探し出すことである。喘息の治療に使用される薬剤としては主に、吸入用気管支拡張剤、経口用または注射用気管支拡張剤（交感神経刺激剤およびテオフィリン製剤）、ステロイド剤（吸入用、経口用、注射用など）、ロイコトリエン拮抗剤（モンテルカスト、プランルカスト、ジロートンなど）、抗アレルギー剤（クロモグリク酸ジナトリウム、ケトチフェン）などが活用されている。
【０００７】
気管支炎は急性と慢性とに分けられ、原因別に、アレルギー性、感染性および外傷性があり、病理学的にはカタル性、化膿性、閉塞性、潰瘍性、浸潤性がある。最も多い原因としては細菌、ウィルス、真菌などの感染によるものである。普段前記病原体に感染されなかった人も全身の抵抗力が弱化された時に感染する。アレルギー性気管支炎はアレルゲンを吸入することで生じる直接アレルギー反応と全身のアレルギー反応による部分症状がある。外因性気管支炎は塩素や亜硫酸ガスなどの化学的刺激によるもの、埃などの物理的刺激によるものがある。空気が汚染された大都市に住むヒトは気管支炎に感染し易い。病理学的には、急性気管支炎の場合、発赤、腫脹、乾燥が見られ、粘膜または化膿性の分泌物もまた見られる。通常は合併症を引き起こすことなく回復するが、慢性に移行すると、粘膜の腫脹、肥厚、萎縮をもたらし、長期化すると、繊維の増殖、気管支狭窄または肺気腫が引き起こされたりもする。気管支炎の症状のうち最も特徴的なものは咳と喀痰であり、その原因が感染によるものである時は発熱、胸痛がしばしば見られ、一方、外因性の場合は口、鼻、目などの粘膜にも刺激症状が表れる。治療において、咳は一種の肉体的防御であるため、無理やり抑えようとするのは良くない。必ず原因に応じた治療を並行しなければならない。冬季には室内温度を上げ、少量のコデイン、アトロピン、エフェドリン、抗ヒスタミン剤などを使用する。炎症抑制の目的でステロイド剤やテオフィリン剤を使用するが、効果は期待できない。
【０００８】
アレルギー鼻炎は鼻アレルギーまたはアレルギー性鼻炎とも言い、症状は突然連続的に咳をし、透明な鼻汁が大量に出て鼻が詰まり、頭が重く涙が出たりもする。症状が非常に似ているが、抗原がはっきりないものを血管運動神経性鼻炎と言う。例えば、起床して一時的に体が冷えた時に前述したような症状が起きた後に数時間で良くなり、これらの症状は通常寒い季節に見られる。しばしば鼻風邪と混同されるが、風邪とは異なり、喘息や蕁麻疹を同伴することが多い。
【０００９】
アレルギー性鼻炎のアレルギー反応は一種の抗原−抗体の過敏反応として、肥満細胞と好塩基球の細胞膜からヒスタミンが遊離され、アラキドン酸が遊離されてシクロオキシゲナーゼ（ＣＯＸ）と５−リポキシゲナーゼ（５−ＬＯ）によりプロスタグランジン類とロイコトリエンが生成され、抗原を露出してから２〜９０分の間に表れる初期反応と、４〜８時間後に表れる後期反応を媒介する。初期反応は主に媒介物質により、後期反応は主に細胞の浸潤により表れる。また、アレルギー性および非アレルギー性鼻炎は全て喘息発病の危険因子として作用する。
【００１０】
治療としては、抗原が明らかな時は脱感作療法を行い、その他に薬物療法、手術療法、理学的療法などを行うが、完全に治療することはできない。
【００１１】
気道感染症には、化膿菌、特殊細菌（結核菌、ジフテリア菌、スピロヘータなど）、ウィルスや真菌によるものなど様々であり、それらは急性と慢性にもまた分けられる。鼻腔、咽頭、喉頭が個別的に感染されている時は各々の気管名で呼ばれるが、これらの気管全体が感染状態にある時は上気道感染症と言い、その代表的なものは上気道炎である。また、特殊細菌や真菌の感染による場合は上気道結核、上気道ジフテリア、上気道カンジダ症のように特殊名で呼ぶ場合が多い。
【００１２】
以上のように喘息、アレルギー性鼻炎、急性・慢性気管支炎などの呼吸器疾患はその発病原因と症状において異なるが、下記の側面において共通点を有している。
【００１３】
第１に、全て炎症疾患である点である。これらの呼吸器疾患はアレルギー、感染などにより発病するが、疾患の悪化と治療において炎症が非常に重量な役割を果たす。即ち、アレルギー、感染などにより触発された白血球の呼吸器への流入と活性化、そしてこの時、白血球から遊離される各種サイトカイン、炎症媒介因子などが病気を悪化させて薬剤治療を困難にさせる。
【００１４】
第２に、気道の収縮、弛緩が正常的に行われないため、呼吸が困難であるという点である。即ち、気道が損傷され、一般的な刺激に対して過度反応を起こしたり（喘息）、気道が狭くなり一般的な気管支呼吸が困難になるため、それに対する適切な治療が必要である。
【００１５】
第３に、主な薬物治療法において、抗炎剤、気道収縮抑制および拡張剤、気道分泌抑制剤が重要な役割を果たし、その他の薬物もまた共通に使用される。例えば、抗ヒスタミン剤、抗コリン剤、ベータ２受容体作用薬、ステロイド剤、ロイコトリエンＤ４受容体拮抗剤、テオフィリン類のホスホジエステラーゼ４阻害剤などが多く使用されている。それにも関わらず、抗コリン剤、ベータ２受容体作用剤などの気管支拡張剤は炎症には効果がなく、単純に症状のみ緩和させるため、長期間使用する場合、薬剤耐性の発生および病状悪化の憂慮がある。炎症治療に効果があると知られていたステロイド剤は強い副作用により長期間の使用には問題があり、慢性気管支炎の治療には効果がない。従って、前記二つを併用処方する場合が多いが、ステロイド剤の副作用により経口剤より吸入剤の形態で剤形化されて服用が難しいため、服用順応度が落ちるという問題点がある。従って、前述した現在使用されている薬物治療剤の限界点を克服し、症状を効果的に改善することのできる新規の治療剤の開発が必要である。しかし、前述した通り、呼吸器疾患は様々な白血球とサイトカインおよび炎症媒介因子を含んでおり、単一成分の化学薬品では呼吸器疾患の治療が難しく、多様な活性成分と作用を有する天然物の抽出物が効果的な治療剤となり得る。
【００１６】
また、喘息、気管支炎、アレルギー性鼻炎、急性下気道感染症（気管支炎、細気管支炎など）、急性上気道感染症（扁桃炎、咽喉炎）のような呼吸器疾患はその原因が非常に多様であるだけでなく、姑息的な処置のみが行われている現状であり、治療後も再発するなどその治療に問題点がある。従って、呼吸器疾患の予防と治療は医学界の重要な任務中の一つとして台頭してきており、根本的な呼吸器疾患の予防および治療のための薬剤の開発が切実である。
【００１７】
本発明で使用する生薬である山豆根は潅木で、高さは１〜２ｍである。根は普通２〜５個であり、円柱の形をしており黄褐色である。幹は円柱で表面に窪みがあり、短く柔らかい毛が稠密に覆われており、幹の上部分は通常“之”字に曲がっている。薬材として使用される根は乾燥させた後に使用し、長い円柱の形で若干曲がっており、長さは１０〜２５〜３５ｃｍ、直径が０．３〜１ｃｍである。表面は茶色または黒褐色で、縦にしわがあり、横に長く若干突起した皮目がある。主産地は中国の廣西である。東方医学では、腫瘍、浮腫、疼痛、黄疸、下痢、痔などを治療する目的で使用されてきた。有効成分としては、マトリン、オキシマトリン、アナギリン、メチルシチシンなどのアルカロイド類およびソフォラノン、ソフォラジン、ソフォラノクロメン、ソフォラドクロメンなどのフラボノイド類が知られている（非特許文献１）。しかし、このような山豆根抽出物が呼吸器疾患に及ぼす影響に関しては未だに研究されたところはない。
【非特許文献１】［Chinese Medicine Encyclopedia、Jungdam Publishing、pp．2627-2632、1998］
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１８】
そこで、本発明の発明者は呼吸器疾患を効果的に治療する薬剤を開発するために研究した結果、山豆根抽出物が気道収縮、気道感染、５−リポキシゲナーゼ、ホスホジエステラーゼ４、気道過敏性または気道リモデリングの防止効果が優れていると共に、ロイコトリエンＤ４の拮抗作用および鎮咳効果を有することを発見した。従って、本発明の目的は山豆根抽出物を有効成分として含有する呼吸器疾患の予防および治療用薬剤を提供することである。
【００１９】
本発明は呼吸器疾患の予防および治療に有用である山豆根抽出物に関する。更に、本発明は、気道収縮、気道感染、５−リポキシゲナーゼの活性、ホスホジエステラーゼ４の活性、気道過敏性の防止が優れ、気道リモデリングの活性抑制、ロイコトリエンＤ４に対する拮抗作用、鎮咳作用を有するため、喘息、急性・慢性気管支炎、アレルギー鼻炎、急性下気道感染症（気管支炎、細気管支炎など）、急性上気道感染症（咽頭炎、扁桃炎、喉頭炎）などの呼吸器疾患の予防および治療に有用な山豆根抽出物を有効成分として含有する薬剤に関する。
【課題を解決するための手段】
【００２０】
本発明を更に詳しく説明すると下記の通りである。
【００２１】
本発明による山豆根抽出物の製造過程を簡略に説明すると下記の通りである。
【００２２】
１）山豆根生薬を山豆根の重量の７〜１０倍の水またはアルコール水溶液で還流抽出した後、濾過し、残渣に混合された山豆根の重量の４〜７倍の水またはアルコール水溶液を加えて加熱して抽出した後、濾過して得られた二つの濾液と混合して濾過する。
【００２３】
２）前記１）で得られた濾液を同量の水飽和低級アルコールまたは非極性溶媒で層分離した後、減圧下で５０〜６０℃で濃縮する。
【００２４】
３）前記２）で得られた濃縮物の総量の２５〜５０倍の水を加えて共沸濃縮し、同量の水で均質に懸濁させた後、凍結乾燥する。
【００２５】
更に詳しく説明すると、加工されていない山豆根生薬に水またはアルコール水溶液を加えて２〜５時間還流抽出し、この時、水またはアルコール水溶液の量は前記山豆根生薬の重量の７〜１０倍が好ましい。その後、前記抽出液を濾過し、残渣に山豆根生薬の重量の４〜７倍の水またはアルコール水溶液を加えて加熱した後、２〜５時間再抽出して濾過し、前に得られた濾液と混合することで抽出効率を高める。
【００２６】
ここで水の量が非常に少ないと、効果的に攪拌ができなくなり、抽出物の溶解度もまた低くなるため抽出効率が減少する。一方、過度に多い場合は、下記精製段階で使用される低級アルコールおよび非極性溶媒の使用量が増加するため、非経済的で、取り扱いの面で問題が発生し得る。
【００２７】
本発明では１次および２次抽出とからなるが、生薬抽出物を大量生産する場合、効果的に濾過をしたとしても、生薬自体に水分含量が多いため、１次抽出のみでは抽出効率が落ちる。更に、本発明の発明者により抽出効率を検証した結果、２次抽出により得られた全体抽出量の８０〜９０％程度が抽出されることが分かり、３次以上の多段階抽出は不必要であり、また非経済性であることを示唆している。
【００２８】
前記のように１、２次抽出により得られた抽出液は濾過および濃縮した後、タンパク質、多糖類および脂肪酸などの不必要な不純物を除去して精製する。本発明では、濾液に同量の低級アルコールまたは非極性溶媒を加えて２〜４回、層の分離を実施して溶媒分画を得ることで不純物を精製する。この時、低級アルコールとしては炭素数１〜６のアルコールを使用し、好ましくは、ブチルアルコール、プロピルアルコールまたはイソプロピルアルコールを使用を使用し、非極性溶媒としては酢酸エチル、ジクロロメタン、クロロホルム、四塩化炭素またはメチルエチルケトンを使用する。低級アルコールまたは非極性溶媒の使用量が濾液に比べて少ない場合は、脂肪酸などの不純物により顆粒が生成され、層の分離が効率的に行われにくくなるだけでなく、活性成分の抽出効率が比較的低くなるため効率的でなくなる。層の分離後に得られた低級アルコールまたは非極性溶媒の分画を５０〜６０℃で減圧濃縮し、試料中に残存する溶媒を除去する。このように得られた濃縮物は濃縮物総量の２５〜５０倍の水で２〜３回共沸濃縮した後、同量の水を加えて均質に懸濁させる。共沸濃縮する主な理由は、生薬抽出液を薬剤の原料として使用するために残存する低級アルコールの含量を効果的に調節するためである。
【００２９】
また、本発明の山豆根抽出物は前記方法以外に、水、水飽和低級アルコールまたは非極性溶媒で抽出し精製することでも得られる。前記低級アルコールとしては炭素数１〜６のアルコールを含み、好ましくは、ブチルアルコール、プロピルアルコールまたはイソプロピルアルコールを使用し、非極性溶媒は酢酸エチル、ジクロロメタン、クロロホルム、四塩化炭素またはメチルエチルケトンを使用する。
【００３０】
こうして得られた山豆根抽出物を凍結乾燥させることで粉末状態の最終抽出物が得られる。この最終抽出物は気道収縮、気道感染、５−リポキシゲナーゼの活性、ホスホジエステラーゼ４の活性、気道過敏性、気道リモデリングの抑制に非常に優れていると共に、ロイコトリエンＤ４に対する拮抗作用、鎮咳作用などを有するため、呼吸器疾患の予防および治療に有用であると期待される。
【００３１】
本発明の山豆根抽出物は臨床研究時、経口または非経口などの様々な剤形で投与することができるが、剤形化する時には増量剤、充填剤、結合剤、湿潤剤、崩解剤、界面活性剤などの希釈剤または賦形剤を使用する。
【００３２】
経口投与のための固形製剤には錠剤、丸剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤、トローチ、坐薬などが含まれ、このような固形製剤はリグナンとラクトン化合物またはその誘導体に、澱粉、炭酸カルシウム、スクロースまたはラクトース、ゼラチンとからなる群から選択される少なくとも１種の賦形剤など加えて調剤する。また、単純な賦形剤以外にステアリン酸マグネシウム、タルクのような潤滑剤も使用される。坐薬の基剤としては固形脂肪トリグリセリドエステル、ポリエチレングリコール、ポリソルベート、カカオ脂、ラウリン脂、グリセロール、ゼラチンなどが使用される。
【００３３】
経口投与のための液状製剤としては懸濁剤、液剤（シロップ剤、ドリンク剤など）、乳剤などあり、例えば、湿潤剤、甘味剤、芳香剤、保存剤が使用され、それ以外にも最も使用される水、液体パラフィンなどの希釈剤が使用される。
【００３４】
非経口投与のための製剤には滅菌された溶剤、非水溶性溶剤、懸濁剤、乳剤、凍結乾燥剤が含まれる。非水溶性剤、懸濁剤または乳剤の溶媒としては植物性油、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブオイル、オレイン酸エチルが使用される。
【００３５】
本発明による山豆根抽出物は古くから民間療法として使用されており、毒性実験でも分かるように、安全な物質であることが確認された。山豆根抽出物の投与量は体内吸収率、体重、年齢、性別、健康状態、食餌、投与時間、投与方法、排泄率、疾患の重症度などの様々な要因により異なる。薬理実験で見られるように、一般的に山豆根抽出物は体重１ｋｇ当り１〜１５ｍｇ程度を投与することが好ましい。従って、薬剤の有効成分として使用される本発明の山豆根抽出物は薬剤効能の有効量を考慮して製造するようにし、このように剤形化された単位投与形薬剤は一定間隔で投与したり、専門医の監督下または個人の要求に従って専門化された投与法を使用したりできる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３６】
以下、本発明は下記実施例に依拠して更に詳しく説明するが、本発明がこれに限定されるわけではない。
【００３７】
製造例１：山豆根抽出物の製造
約１．０ｃｍに刻んだ山豆根２５０ｇをよく混ぜた後、２Ｌの水を加えて攪拌しながら５時間加熱抽出した。濾液を取り集め、残渣に１．５Ｌの水を加えて３時間加熱抽出した。前記の二つの濾液を混合した後、１．５Ｌに濃縮した。前記濃縮液に同量の水飽和ｎ−ブチルアルコールを加えて層の分離を３回行った後、ｎ−ブチルアルコール分画のみを集めて５８℃で生薬抽出物が乾燥するまで減圧濃縮した。大部分のｎ−ブチルアルコールと水が蒸発された後、０．１Ｌの水を加えて３回共沸濃縮し、残渣に同量の蒸留水を加えて懸濁させた後、凍結乾燥し、最終的に粉末の山豆根抽出物を得た。
【００３８】
製造例２：山豆根抽出物の製造
山豆根抽出物を水で洗浄して乾燥させる。山豆根２５０ｇに５０％（ｖ／ｖ）エタノール水溶液２Ｌを加え、攪拌しながら６時間還流抽出した。濾液を取り集めて残渣に３０％（ｖ／ｖ）エタノール水溶液１．５Ｌを加え、３時間加熱抽出した。前記の二つの濾液を混合した後、１．５Ｌに濃縮した。前記濃縮液に同量の水飽和ｎ−ブチルアルコールを加えて層の分離を３回行った後、ｎ−ブチルアルコール分画のみを集めて５８℃で生薬抽出物が乾燥するまで減圧濃縮した。大部分のｎ−ブチルアルコールと水が蒸発された後、０．２Ｌの水を加えて３回共沸濃縮し、残渣に同量の蒸留水を加えて懸濁させた後、凍結乾燥し、最終的に粉末の山豆根抽出物を得た。
【００３９】
製造例３：山豆根抽出物の製造
山豆根抽出物を水で洗浄して乾燥させる。山豆根２５０ｇに水飽和ブチルアルコール水溶液２Ｌを加え、攪拌しながら６時間還流抽出した。濾液を取り集めて残渣に水飽和ブチルアルコール水溶液１．５Ｌを加え、３時間加熱抽出した。前記の二つの濾液を混合した後、５８℃で生薬抽出物が乾燥するまで減圧濃縮した。大部分のｎ−ブチルアルコールと水が蒸発された後、０．２Ｌの水を加えて３回共沸濃縮し、残渣に同量の蒸留水を加えて懸濁させた後、凍結乾燥し、最終的に粉末の山豆根抽出物を得た。
【実施例１】
【００４０】
気道収縮抑制試験（in vitro）
前記製造例１〜３により製造された山豆根抽出物の気道収縮抑制効果を評価するために摘出気管支を利用して下記の方法により実験を行い、その結果を下記表１に表した。
【００４１】
［実験方法］
Hartely系オスのモルモット（４００〜４５０ｇ、ＳＬＣ、日本）に抗オボアルブミン抗血清１．５ｍＬ／ｋｇを静脈注射して感作させた。感作４８時間後にモルモットを放血死させた後、気管を摘出した。Krebs-Heseleit溶液で気管支に付着している他組織を除去した後、軟骨２〜３個が含まれるようにリングの形に切開した。損傷されていない気管支の筋肉を保存しながらリングの軟骨部分を切開し、両側に糸を連結した後、臓器浴槽（organ bath）に懸垂した。安定した後、カルバコール１０μｇ／ｍＬを添加して最大収縮を誘発させた。Krebs-Heseleit溶液で気管支を洗浄して安定化させた。１分後に試験物質であるＸを臓器浴槽に入れ、インドメタシン２μｍｏｌを添加した。５分内に、オボアルブミン（ＯＶＡ）１０μｇ／ｍＬを添加して収縮を誘発した。カルバコールとＯＶＡにより誘発された収縮とを比較して気道収縮率を計算した。気道の収縮／弛緩は力変換器（FT4、BioPAC system）と連結された生理活性測定器（MP150、BioPAC system）を利用して測定した。
【表１】
0005384828.tif 000002
【００４２】
前記表１から分かる通り、本発明による山豆根抽出物は気道収縮抑制効果があることを確認することができる。
【実施例２】
【００４３】
気道収縮抑制試験（in vivo）
前記製造例１〜３により製造された山豆根抽出物の気道収縮抑制活性を評価するために感作されたモルモットに抗原を露出させて下記の方法にて実験を行い、その結果を下記表２に表した。
【００４４】
［実験方法］
Hartely系オスのモルモット（４００〜４５０ｇ、ＳＬＣ、日本）に抗オボアルブミン抗血清１．５ｍＬ／ｋｇを静脈注射して感作させた。感作４８時間後に薬物を経口投与し、３０分内にマレイン酸ピリラミン１０ｍｇ／ｋｇ、インドメタシン１０ｍｇ／ｋｇ、およびプロプラノロール０．１ｍｇ／ｋｇを各々注射して前処理を行った。その後、モルモットの各種呼吸指数を測定するために足容積測定装置（plethysmometer）が装着されたダブルチャンバー容積脈波計ボックス（Double Chamber Plethysmograph Box、ＨＳＥ、独）に入れて基本気道抵抗値を測定した。前処理３０分後に１％のＯＶＡを高圧下で圧縮空気を利用してエアゾールを作り２分間噴霧した。気管支痙攣の指標として気道抵抗を３０分間測定した。
【表２】
0005384828.tif 000003
【００４５】
前記表２から分かる通り、本発明による山豆根抽出物は感作されたモルモットの気道収縮抑制効果を持つことを確認することができる。
【実施例３】
【００４６】
気道感染抑制試験
前記製造例１〜３により製造された山豆根抽出物の気道感染抑制活性を評価するために感作されたマウスに抗原を露出させ、肺気管支への好酸球などの白血球の増加反応を利用して下記の方法にて実施し、その結果を下記表３に表した。
【００４７】
［実験方法］
ＢＡＬＢ／ｃ系メスのマウス（６週、ＳＬＣ、日本）に１０μｇのＯＶＡとミョウバン（alum）の混合液０．２ｍＬを０、７および１４日に腹腔内に投与して感作させた。最終感作の８日後と１０日後に、０．７％ＯＶＡを高圧下で圧縮空気を利用してエアゾールを作り、５０分間マウスに噴霧して気道感染を誘発させた。気道感染の誘発２４時間後に気管支肺胞をリン酸緩衝液１．５ｍＬで洗浄して洗浄液を集め、洗浄液中の白血球の数と好酸球の数を各々数えた。また、肺組織に対するヘマトキシリンとエオシン染色を利用して組織中への白血球浸透、組織の機能的損傷などを観察して点数化した。山豆根抽出物は最終感作の７〜１０日後に経口投与した。
【表３】
0005384828.tif 000004
【００４８】
前記表３から分かる通り、本発明による山豆根抽出物は気道感染抑制効果があることを確認することができる。陽性対照群であるモンテルカストの効果は容量依存性なしに低容量で比較的に薬効の飽和が表れるが、本発明の山豆根抽出物は容量依存的に充分な薬効を有していることが分かる。
【実施例４】
【００４９】
５−リポキシゲナーゼ（５−ＬＯ）の活性抑制
前記製造例１〜３により製造された山豆根抽出物の喘息の主要発病作用を行うロイコトリエン生成酵素の抑制効果を評価するために下記の方法にて実験を行い、その結果を下記表４に表した。
【００５０】
［実験方法］
ヒトの末梢血単核白血球（ＰＢＭＬ）をハンクの平衡塩類溶液（ＨＢＳＳ）にて３７℃で安定化させた後、山豆根抽出物を添加して１５分間反応させた。ここに基質としてアラキドン酸を添加し、１５分間ルイコトリエンＢ４（ＬＴＢ４）を生成させた。生成されたＬＴＢ４の量は酵素免疫測定法（ＥＩＳ）キットを利用して測定した。
【表４】
0005384828.tif 000005
【００５１】
前記表４から分かる通り、本発明による山豆根抽出物は５−リポキシゲナーゼの活性抑制効果があることを確認することができる。
【実施例５】
【００５２】
ホスホジエステラーゼ４（ＰＤＥ４）の活性抑制
前記製造例１〜３により製造された山豆根抽出物の喘息の主要発病作用を行うホスホジエステラーゼ４の抑制効果を評価するために下記の方法にて実験を行い、その結果を下記表５に表した。
【００５３】
［実験方法］
ヒトのＵ９３７細胞を５０ｍＭＴｒｉｓ−ＨＣＬと５ｍＭ  ＭｇＣＬ2（ｐＨ７．５）の混合溶液にて２５℃で安定化させた。山豆根抽出物と基質として１．０１μＭの（［３Ｈ］ｃＡＭＰ＋ｃＡＭＰ）を混合し、２０分間反応させてアデノシンを生成した。前記生成されたアデノシンの量を［３Ｈ］アデノシンの量を測定することで定量した。
【表５】
0005384828.tif 000006
【００５４】
前記表５から分かる通り、本発明による山豆根抽出物はホスホジエステラーゼ４の活性抑制効果があることを確認することができる。
【実施例６】
【００５５】
ロイコトリエンＤ４受容体（ＬＴＤ４）に対する拮抗作用
前記製造例１〜３により製造された山豆根抽出物の喘息の主要発病作用を行うＬＴＤ４受容体の抑制効果を評価するために下記の方法にて実験を行い、その結果を下記表６に表した。
【００５６】
［実験方法］
Duncan Hartely系モルモットの肺組織から分離したＬＴＤ４の受容体を５０ｍＭＴｒｉｓ−ＨＣＬ緩衝液（５ｍＭ ＣａＣａＬ2、５ｍＭ ＭｇＣｌ2、１００μｇ／ｍＬバシトラシン、１ｍＭベンズアミジン、０．１ｍＭフェニルメチルスルホニルフッ化物）にて２５℃で安定化させた後、山豆根抽出物と０．２ｎＭ［３Ｈ］ＬＴＤ４を前記混合液に添加して反応させた。放射リガンド結合分析を通して結合率を分析し、非特異的結合は０．１μＭＬＴＤ４を利用して決定した。特異結合率８５％、Ｋｄ ０．２ｎＭ、Ｂｍａｘ ０．２４ｐｍｏｌ／ｍｇタンパク質であった。
【表６】
0005384828.tif 000007
【００５７】
前記表６から分かる通り、本発明による山豆根抽出物はＬＴＤ４受容体の活性抑制効果があることを確認することができる。
【実施例７】
【００５８】
鎮咳効果
実験に使用した方法はＭ．Ｈ．Ｂｏｓｋａｂａｄｙなどの方法（Journal of Entnopharmacology97、2005、79-82）を若干変形させたものである。
【００５９】
Hartley系オスのモルモット（４５０〜５００ｇ、ＳＬＣ、日本）に薬物を経口投与した。１時間後、モルモットを足容積測定装置（plethysmometer）が装着されたダブルチャンバー容積脈波計ボックス（Double Chamber Plethysmograph Box、ＨＳＥ、独）に入れ、５分間適用時間を与えて安定化させた。安定化後、０．６Ｍクエン酸を高圧下で圧縮空気を利用してエアゾールを作り、７分間噴霧した。訓練された観察者が持続的にモルモットを観察し、前記クエン酸エアゾール噴霧により誘発される咳の回数をマイクロホンとスピーカーを利用して測定した。咳には口を開いたまま出す独特で高い音、腹部の動き、瞬間的な空気の流れの変化が表れ、これを根拠にくしゃみと区分した。
【表７】
0005384828.tif 000008
【００６０】
前記表７から分かる通り、本発明による山豆根抽出物は鎮咳効果があることを確認することができる。
【実施例８】
【００６１】
気道過敏性の抑制
ＢＡＬＢ／ｃ系メスのマウス（６週、ＳＬＣ、日本）に１０μｇのＯＶＡとミョウバン（alum）の混合液０．２ｍＬを０、７および１４日に腹腔内に投与して感作させた。最終感作の８日後と１０日後に、０．７％ＯＶＡを高圧下で圧縮空気を利用してエアゾールを作り、５０分間噴霧して気道過敏性を誘発させた。気道過敏性の測定は気圧容積脈波計チャンバー（All Medicus、ソウル、韓国）内で実施し、全てのマウスの動きが自由で意識のある状態を維持しながら行われた。気道過敏性の基底値は３分間の測定値の平均を使用し、その後、メタコリンを２．５ｍｇ／ｍＬから５０ｍｇ／ｍＬの濃度まで次第に高めながら各濃度ごとに３分ずつ吸入させた後、各濃度での気道過敏性のレベルを測定した。Enhanced pause（Penh）は気道抵抗の程度を表す優れた指標として知られており、これを算出する公式は下記数学式１の通りである。
【００６２】
（数１）
Enhanced pause(Penh)= [expiratory time(Te)/relaxation time(RT)-1] X [peak expira
tory flow(PEF)/peak inspiratory flow(PIF)]
【００６３】
気道抵抗を測定する間、１０秒ごとにPenhの平均値が記録され、図面には１分ごとに表示される。
【００６４】
図１から分かる通り、本発明による山豆根抽出物は気道過敏性の活性抑制があることを確認することができる。
【実施例９】
【００６５】
気道リモデリング抑制
無菌処理された８〜１０週目のメスのＢＡＬＢ／ｃ系マウスを使用して第１実験日にＯＶＡ５００μｇと水酸化アルミニウム１．０ｍｇを混合して腹腔内に注射することで感作させ（１次）、超音波煙霧器を利用して第１１実験日には２％ＯＶＡを吸入させ（２次）、第２１、２２、２３実験日には３％ＯＶＡを吸入させた（３次）。その後、３日間隔で８週間、１％ＯＶＡを吸入させることで、気道リモデリングが誘導された喘息モデルを作った。３次ＯＶＡ吸入の２４時間前の晩に製造例２の抽出物（ＳＯＳ）を１回投与し、３次ＯＶＡ吸入日（２１、２２、２３実験日）には吸入１時間前と３次ＯＶＡ吸入日の晩の１日２回投与した後、気道リモデリングのための８週間のＯＶＡ吸入期間には１日２回投与した。また、気道リモデリングの分析法として下記分析法を使用した。
【００６６】
・コラーゲン分析（Collagen assay）：組織の繊維化の程度を定量的に分析するための方法
・ＰＡＳ染色（PAS staining）：肺細胞の過形成を測定するための方法
・気管支周囲のトリクロム染色（PeribronchiaＬ trichrome stain）：マッソンのトリクロムを使用して組織を染色した後、気管支周囲の気管支下部の繊維化の程度を見るための染色技法として、全ての気管支は基底膜の長さを基準としてサイズが類似し、円形である１０個の気管支を選び平均値を得た。内径が１５０〜２００μｍである細気管支を基準に基底膜の厚さをマイクロメーターで表示し、その比率をコンピューター処理画像分析プログラムを利用して測定する。
【００６７】
また、採取した肺組織は１０％ホルムアルデヒド溶液を利用して固定させた後、パラピン切片に埋めた。そしてパラピン切片を１．５μｍの厚さに切り取りスライドを製作した。製作されたスライドはＨ＆Ｅ染色を通して肺の組織変化の観察に利用した。
【００６８】
図２はＯＶＡ−感作され、−試験感染されたマウスの肺組織においての気道粘液発現に対する製造例２の山豆根抽出物（ＳＯＳ）またはモンテルカストの効果を表したものである。肺の典型的なＰＡＳ−染色された切片のサンプリングを、食塩水の投与と共に食塩水−吸入したマウス（Ａ）、食塩水の投与と共にＯＶＡ−吸入したマウス（Ｂ）、モンテルカストの投与と主にＯＶＡ−吸入されたマウス（Ｃ）、ＳＯＳ５０ｍｇ／ｋｇの投与と共にＯＶＡ−吸入したマウス（Ｄ）、ＳＯＳ １００ｍｇ／ｋｇの投与と主にＯＶＡ−吸入したマウス（Ｅ）、およびＳＯＳ ２００ｍｇ／ｋｇの投与と共にＯＶＡ−吸入したマウス（Ｆ）で、最終試験４８時間後に行った。棒は５０μｍの等級を表す。棒は５０μｍの等級を表す。
【００６９】
図３はＯＶＡ−感作され、−試験感染されたマウスの肺組織においての気道粘液発現に対するＳＯＳまたはモンテルカストの効果を表したものである。個別的な細気管支でＰＡＳ−陽性およびＰＡＳ−陰性の上皮細胞の数を、食塩水の投与と共に食塩水−吸入したマウス（ＳＡＬ＋ＳＡＬ）、食塩水の投与と共にＯＶＡ−吸入したマウス（ＯＶＡ＋ＳＡＬ）、モンテルカストの投与と主にＯＶＡ−吸入したマウス（ＤＶＲ＋ＭＯＮＴＥ）、ＳＯＳ５０ｍｇ／ｋｇの投与と共にＯＶＡ−吸入したマウス（ＯＶＡ＋ＳＯＳ５０）、ＳＯＳ １００ｍｇ／ｋｇの投与と共にＯＶＡ−吸入したマウス（ＯＶＡ＋ＳＯＳ１００）、ＳＯＳ ２００ｍｇ／ｋｇの投与と共にＯＶＡ−吸入したマウス（ＯＶＡ＋ＳＯＳ２００）で、試験後４８時間目に計算した。棒は６個の独立した試験からの平均ＳＥＭを表す。＃、ｐ＜０．０５対ＳＡＬ＋ＳＡＬ；＊、ｐ＜０．０５対ＯＶＡ＋ＳＡＬ。
【００７０】
ＰＡＳにより陽性染色された気道上皮の比率は食塩水吸入後の前記比率に比べてＯＶＡ吸入後４８時間目に著しく増加した（図２、３）。前記ＰＡＳにより陽性染色された気道上皮の増加した比率はＳＯＳまたはモンテルカストの投与により著しく減少した。
【００７１】
図４はＯＶＡ−感作され、−試験感染されたマウスの肺組織においてのα−平滑筋発現に対するＳＯＳまたはモンテルカストの効果を表したものである。肺のα−平滑筋アクチンに対する典型的な免疫組織化学的染色切片のサンプリングを、食塩水の投与と共に食塩水−吸入したマウス（Ａ）、食塩水の投与と共にＯＶＡ−吸入したマウス（Ｂ）、モンテルカストの投与と主にＯＶＡ−吸入されたマウス（Ｃ）、ＳＯＳ５０ｍｇ／ｋｇの投与と共にＯＶＡ−吸入したマウス（Ｄ）、ＳＯＳ １００ｍｇ／ｋｇの投与と主にＯＶＡ−吸入したマウス（Ｅ）、およびＳＯＳ ２００ｍｇ／ｋｇの投与と共にＯＶＡ−吸入したマウス（Ｆ）で、最終試験４８時間後に行った。棒は５０μｍの等級を表す。
【００７２】
図５はＯＶＡ−感作され、−試験感染されたマウスの肺組織においてのα−平滑筋発現に対するＳＯＳまたはモンテルカストの効果を表したものである。α−平滑筋アクチンの免疫染色面積を、食塩水の投与と共に食塩水−吸入したマウス（ＳＡＬ＋ＳＡＬ）、食塩水の投与と共にＯＶＡ−吸入したマウス（ＯＶＡ＋ＳＡＬ）、モンテルカストの投与と主にＯＶＡ−吸入したマウス（ＤＶＲ＋ＭＯＮＴＥ）、ＳＯＳ５０ｍｇ／ｋｇの投与と共にＯＶＡ−吸入したマウス（ＯＶＡ＋ＳＯＳ５０）、ＳＯＳ １００ｍｇ／ｋｇの投与と共にＯＶＡ−吸入したマウス（ＯＶＡ＋ＳＯＳ１００）、ＳＯＳ ２００ｍｇ／ｋｇの投与と共にＯＶＡ−吸入したマウス（ＯＶＡ＋ＳＯＳ２００）で、試験後４８時間目に測定した。棒は６個の独立した試験からの平均ＳＥＭを表す。＃、ｐ＜０．０５対ＳＡＬ＋ＳＡＬ；＊、ｐ＜０．０５対ＯＶＡ＋ＳＡＬ。
【００７３】
気管支周囲のα−平滑筋アクチンの免疫染色面積は、食塩水吸入後の面積に比べてＯＶＡ吸入４８時間後に著しく増加した（図４、５）。前記増加した気管支周囲のα−平滑筋アクチン免疫染色の面積はＳＯＳまたはモンテルカストの投与により著しく減少した。
【００７４】
図６はＯＶＡ−感作され、−試験感染されたマウスの肺組織においての気管支周囲の繊維症に対するＳＯＳまたはモンテルカストの効果を表したものである。肺の典型的なマッソン・トリクロム（Masson Trichrome）−染色された切片のサンプリングを、食塩水の投与と共に食塩水−吸入したマウス（Ａ）、食塩水の投与と共にＯＶＡ−吸入したマウス（Ｂ）、モンテルカストの投与と主にＯＶＡ−吸入されたマウス（Ｃ）、ＳＯＳ５０ｍｇ／ｋｇの投与と共にＯＶＡ−吸入したマウス（Ｄ）、ＳＯＳ １００ｍｇ／ｋｇの投与と主にＯＶＡ−吸入したマウス（Ｅ）、およびＳＯＳ ２００ｍｇ／ｋｇの投与と共にＯＶＡ−吸入したマウス（Ｆ）で、最終試験４８時間後に行った。棒は５０μｍの等級を表す。
【００７５】
図７はＯＶＡ−感作され、−試験感染されたマウスの肺組織においての線維症に対するＳＯＳまたはモンテルカストの効果を表したものである。パラピン−埋没された肺において気管支周囲トリクロムの染色面積を、食塩水の投与と共に食塩水−吸入したマウス（ＳＡＬ＋ＳＡＬ）、食塩水の投与と共にＯＶＡ−吸入したマウス（ＯＶＡ＋ＳＡＬ）、モンテルカストの投与と主にＯＶＡ−吸入したマウス（ＤＶＲ＋ＭＯＮＴＥ）、ＳＯＳ５０ｍｇ／ｋｇの投与と共にＯＶＡ−吸入したマウス（ＯＶＡ＋ＳＯＳ５０）、ＳＯＳ １００ｍｇ／ｋｇの投与と共にＯＶＡ−吸入したマウス（ＯＶＡ＋ＳＯＳ１００）、ＳＯＳ ２００ｍｇ／ｋｇの投与と共にＯＶＡ−吸入したマウス（ＯＶＡ＋ＳＯＳ２００）で、試験４８時間後に測定した。棒は６個の独立した試験からの平均ＳＥＭを表す。＃、ｐ＜０．０５対ＳＡＬ＋ＳＡＬ；＊、ｐ＜０．０５対ＯＶＡ＋ＳＡＬ。
【００７６】
気管支周囲トリクロムの染色面積は食塩水吸入後の面積に比べてＯＶＡ吸入４８時間後に著しく増加した（図６、７）。前記増加した気管支周囲トリクロムの染色面積はＳＯＳまたはモンテルカストの投与により著しく減少した。
【００７７】
図８はＯＶＡ−感作され、−試験感染されたマウスの全体の肺コラーゲンの含量に対するＳＯＳまたはモンテルカストの効果を表したものである。肺コラーゲンの量をコラーゲン分析キットを使用して測定し、食塩水の投与と共に食塩水−吸入したマウス（ＳＡＬ＋ＳＡＬ）、食塩水の投与と共にＯＶＡ−吸入したマウス（ＯＶＡ＋ＳＡＬ）、モンテルカストの投与と主にＯＶＡ−吸入したマウス（ＯＶＡ＋ＭＯＮＴＥ）、ＳＯＳ５０ｍｇ／ｋｇの投与と共にＯＶＡ−吸入したマウス（ＯＶＡ＋ＳＯＳ５０）、ＳＯＳ １００ｍｇ／ｋｇの投与と共にＯＶＡ−吸入したマウス（ＯＶＡ＋ＳＯＳ１００）、ＳＯＳ ２００ｍｇ／ｋｇの投与と共にＯＶＡ−吸入したマウス（ＯＶＡ＋ＳＯＳ２００）で、最終試験後４８時間目にサンプリングを行った。棒は６個の独立した試験からの平均ＳＥＭを表す。＃、ｐ＜０．０５対ＳＡＬ＋ＳＡＬ；＊、ｐ＜０．０５対ＯＶＡ＋ＳＡＬ。
【００７８】
肺コラーゲンの水準が塩水吸入後の面積に比べてＯＶＡ吸入４８時間後に著しく増加した（図８）。前記増加した肺コラーゲンの水準はＳＯＳまたはモンテルカストの投与により著しく減少した。
【実施例１０】
【００７９】
ウエスタンブロット分析を利用したサイトカイン（ＩＬ−４、５および１３）ＯＶＡ−特異性ＩｇＥの測定
肺組織の洗浄液内のサイトカイン（ＩＬ−４、５および１３）の濃度と血清内のＯＶＡ−特異性ＩｇＥの濃度はＥＬＩＳＡキット（サイトカイン：R&D systems、Abingdon、UK/OVA-特異性IgE；BD sciences）を利用して測定した。
【００８０】
図９はＯＶＡ−感作され、−試験感染されたマウスの肺組織においてのＩＬ−４、ＩＬ−５およびＩＬ−１３タンパク質の発現に対するＳＯＳまたはモンテルカストの効果を表したものである。ＩＬ−４、ＩＬ−５およびＩＬ−１３タンパク質の発現を、食塩水の投与と共に食塩水−吸入したマウス（ＳＡＬ＋ＳＡＬ）、食塩水の投与と共にＯＶＡ−吸入したマウス（ＯＶＡ＋ＳＡＬ）、モンテルカストの投与と主にＯＶＡ−吸入したマウス（ＤＶＲ＋ＭＯＮＴＥ）、ＳＯＳ５０ｍｇ／ｋｇの投与と共にＯＶＡ−吸入したマウス（ＯＶＡ＋ＳＯＳ５０）、ＳＯＳ １００ｍｇ／ｋｇの投与と共にＯＶＡ−吸入したマウス（ＯＶＡ＋ＳＯＳ１００）、ＳＯＳ ２００ｍｇ／ｋｇの投与と共にＯＶＡ−吸入したマウス（ＯＶＡ＋ＳＯＳ２００）で、最終試験後４８時間目に測定した。結果は８個の独立した試験と類似していた。
【００８１】
ウエスタンブラット分析は肺組織においてのＩＬ−４、ＩＬ−５およびＩＬ−１３タンパク質の水準が食塩水吸入後の水準に比べてＯＶＡ吸入４８時間後に著しく増加したことを明らかにした（図９）。前記増加したサイトカインの水準はＳＯＳまたはモンテルカストの投与により著しく減少した。
【実施例１１】
【００８２】
ラットに対する反復経口投与の毒性実験
６週目の特定病原体未感染（ＳＰＦ）ＳＤ系ラットを使用して反復投与の毒性実験を下記のように実施した。
【００８３】
群当り６匹ずつのラットに製造例１〜３により製造された山豆根抽出物を溶解し、２ｇ／ｋｇの容量で２週間経口投与した。
【００８４】
投与後、動物の斃死可否、臨床症状、体重変化を観察して血液学的検査と血液生化学的検査を実施し、マウスを剖検して肉眼で腹部および胸部臓器の異常を観察した。その結果、全ての動物が生存し、臨床症状に関しても特別な兆候は見られなかった。また、毒性検査、血液検査、血液性化学検査、剖検でも特記な所見は見られなかった。
【００８５】
従って、本発明による山豆根抽出物は、ラットに対して２，０００ｍｇ／ｋｇまで毒性を表さなかったため安全な物質であることを確認した。
【００８６】
製剤例１：錠剤の製造
本発明の山豆根抽出物を利用して下記のような組成で経口投与用錠剤を湿式顆粒法および乾式顆粒法を利用して製造した。
【００８７】
［組成］
山豆根抽出物２５０ｍｇ、軽質無水ケイ酸１０ｍｇ、ステアリン酸マグネシウム２ｍｇ、微細結晶セルロース５０ｍｇ、澱粉グリコール酸ナトリウム２５ｍｇ、トウモロコシ澱粉１１３ｍｇ、無水エタノール適量。
【００８８】
製剤例２：軟膏剤の製造
本発明の山豆根抽出物を利用して下記のような組成で軟膏剤を製造した。
【００８９】
［組成］
山豆根抽出物７ｇ、パルミチン酸セチル２０ｇ、セタノール４０ｇ、ステアリルアルコール４０ｇ、ミリスチン酸イソプロピル８０ｇ、モノステアリン酸ソルビタン２０ｇ、ポリソルベート６０ｇ、パラオキシ安息香酸プロピル１ｇ、パラオキシ安息香酸メチル１ｇ、リン酸および精製水適量。
【００９０】
製剤例３：注射剤の製造
本発明の山豆根抽出物を利用して下記のような組成で注射剤を製造した。
【００９１】
［組成］
山豆根抽出物５０ｍｇ、マンニトール１８０ｍｇ、リン酸水素二ナトリウム２５ｍｇ、注射用蒸留水２，９７０ｍｇ。
【００９２】
製剤例４：局所薬の製造
本発明の山豆根抽出物を利用して下記のような組成で局所薬を製造した。
【００９３】
［組成１］
山豆根抽出物０．３ｇ、ポリアクリル酸ナトリウム１．３ｇ、グリセリン３．６ｇ、水酸化アルミニウム０．０４ｇ、メチルパラベン０．２ｇ、水１４g。
【００９４】
［組成２］
山豆根抽出物０．６ｇ、プロピレングリコール１．６ｇ、流動パラフィン０．８ｇ、ミリスチン酸イソプロピル０．４ｇ、アクリル接着剤１４３０ｇ、水１６．４ｇ。
【００９５】
製剤例５：トローチ剤の製造
本発明の山豆根抽出物を利用して下記のような組成でトローチ剤を製造した。
【００９６】
［組成］
山豆根抽出物１ｇ、白糖５０ｇ、ゼラチン３ｇ、グリセリン１０ｇ、アカシアガム１ｇ、水適量。
【００９７】
製剤例６：シロップ剤の製造
本発明の山豆根抽出物を利用して下記のような組成でシロップ剤を製造した。
【００９８】
［組成］
山豆根抽出物２ｇ、サッカリン０．８ｇ、糖２５．４ｇ、グリセリン８．０ｇ、香味料０．０４ｇ、エタノール４．０ｇ、ソルビン酸０．４ｇ、蒸留水適量。
【産業上の利用可能性】
【００９９】
以上説明した通り、本発明による山豆根抽出物は、既存の合成薬剤が数種制限された呼吸器疾患モデルでのみ効果を見せるのとは異なり、多様な呼吸器疾患モデルで優れた薬効を示す。即ち、本発明の山豆根抽出物は、気道収縮、気道感染、５−リポキシゲナーゼの活性、ホスホジエステラーゼ４の活性、気道過敏性および気道リモデリングの抑制効果が優れていると共に、ロイコトリエンＤ４に対する拮抗作用および鎮咳効果を有し、また、喘息、急性・慢性気管支炎、アレルギー性鼻炎、急性下気道感染症（気管支炎、細気管支炎など）、急性上気道感染症（扁桃炎、咽喉炎）のような呼吸器疾患の予防および治療に有用である。
【図面の簡単な説明】
【０１００】
【図１】気道過敏性に対する影響を表すグラフである［ＳＡＬ：食塩水、ＯＶＡ：オボアルブミン、ＳＯＳ：製造例２の抽出物］。
【図２】図２のＡ−ＦはＯＶＡ−感作され、−試験感染されたマウスの肺組織において気道粘膜の発現に対する製造例２の抽出物（ＳＯＳ）またはモンテルカストの効果を表した写真である。
【図３】ＯＶＡ−感作され、−試験感染されたマウスの肺組織において気道粘膜の発現に対する製造例２の抽出物（ＳＯＳ）またはモンテルカストの効果を表したヒストグラムである。
【図４】図４のＡ−ＦはＯＶＡ−感作され、−試験感染されたマウスの肺組織においてα−平滑筋の発現に対する製造例２の抽出物（ＳＯＳ）またはモンテルカストの効果を表した写真である。
【図５】ＯＶＡ−感作され、−試験感染されたマウスの肺組織においてα−平滑筋の発現に対する製造例２の抽出物（ＳＯＳ）またはモンテルカストの効果を表したヒストグラムである。
【図６】図６のＡ−ＦはＯＶＡ−感作され、−試験感染されたマウスの肺組織において気管支周囲の繊維症に対する製造例２の抽出物（ＳＯＳ）またはモンテルカストの効果を表した写真である。
【図７】ＯＶＡ−感作され、−試験感染されたマウスの肺組織において繊維症に対する製造例２の抽出物（ＳＯＳ）またはモンテルカストの効果を表したヒストグラムである。
【図８】ＯＶＡ−感作され、−試験感染されたマウスの全体の肺コラーゲンの含量に対する製造例２の抽出物（ＳＯＳ）またはモンテルカストの効果を表したヒストグラムである。
【図９】ＯＶＡ−感作され、−試験感染されたマウスの肺組織においてＩＬ−４、ＩＬ−５およびＩＬ−１３タンパク質の発現に対するＳＯＳまたはモンテルカストの効果を表したウエスタンブロットの結果である。
【図１】
0005384828.tif 000009
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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