(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
水溶性であり、且つ温度によりゾル−ゲル相転移を示す感温性を有するポリマーを含有する癒着防止用組成物であって、
前記ポリマーが、ポリエチレンオキシド（ＰＥＯ）−ポリプロピレンオキシド（ＰＰＯ）−ポリエチレンオキシド（ＰＥＯ）ブロックコポリマー及びポリエチレンオキシド（ＰＥＯ）−ポリブチレンオキシド（ＰＢＯ）−ポリエチレンオキシド（ＰＥＯ）ブロックコポリマーから成る群から選択される２個又は３個以上の同一又は異なるブロックコポリマーが生分解性ジカルボキシル基リンカーにより連結されてなる、感温性のマルチブロックコポリマーであり、
前記マルチブロックコポリマーは、その両端に、−ＳＯ３−、−ＰＯ３２−、及び−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−からなる群から選択されるイオン性基の一価又は二価の塩を有し、ここでＲは−（ＣＨ２）ｍ−を表し、ここでｍは０〜２０の整数であり、
前記ポリマーは、組織内にしっかりとコーティングされ、体温によりゾル状態からゲル状態に相転移し、癒着を防止するバリアの役割を果たし、そして経時により界面活性剤と生体分解性の単一分子物質とに分解され、分解生成物が２次的に癒着防止効果を示す、前記組成物。
【請求項２】
前記ブロックコポリマーが、１０００〜２０，０００ダルトンの重量平均分子量を有し、前記マルチブロックコポリマーが、２５，０００〜１，０００，０００ダルトンの総重量平均分子量を有する、請求項１に記載の癒着防止用組成物。
【請求項３】
前記ブロックコポリマーが、１，０００〜２０，０００ダルトンの重量平均分子量を有し、前記マルチブロックコポリマーが、５０，０００〜５００，０００ダルトンの総重量平均分子量を有する、請求項１に記載の癒着防止用組成物。
【請求項４】
前記マルチブロックコポリマーは、０．１〜４０重量％の濃度において、１０〜３５℃の範囲のゾル−ゲル相転移温度を有する、請求項１に記載の癒着防止用組成物。
【請求項５】
前記マルチブロックコポリマーの含有率が、０．１〜４０重量％である、請求項１に記載の癒着防止用組成物。
【請求項６】
前記マルチブロックコポリマーの含有率が、１〜２０重量％である、請求項１に記載の癒着防止用組成物。
【請求項７】
前記組成物が、蒸留水、注射用水、生理食塩水、０．１〜５０体積％のアルコール水溶液、天然腹腔溶液及び天然腹腔溶液の組成を有する人工腹腔液から成る群から選択される１種を含む、請求項１に記載の癒着防止用組成物。
【請求項８】
前記ブロックコポリマーにおいて、
ポリエチレンオキシド（ＰＥＯ）ブロックが、２〜２，０００個のエチレンオキシドを含み、それぞれのブロックコポリマーに含まれる２個のポリエチレンオキシドブロックを構成する各エチレンオキシドの数はお互いに同一又は異なり、ポリプロピレンオキシド（ＰＰＯ）ブロックが、２〜２，０００個のプロピレンオキシドを含み、
ポリブチレンオキシド（ＰＢＯ）ブロックが、２〜２，０００個のブチレンオキシドを含む、請求項１に記載の癒着防止用組成物。
【請求項９】
前記ジカルボキシル基リンカーが、シュウ酸、コハク酸、グルタル酸、アジピン酸、セバシン酸、マロン酸、スベリン酸、ドデカン酸、フマル酸、及びマレイン酸から成る群から選択される１個又は２個以上である、請求項１に記載の癒着防止用組成物。
【請求項１０】
前記マルチブロックコポリマーは、次の式２：
M-X-O-[PEO-Y-PEO-C(=O)-R-C(=O)-O]n-PEO-Y’-PEO-O-X-M          （式２）
（式中、
ＰＥＯは、ポリエチレンオキシドであり；
Ｙ及びＹ’は、それぞれ独立して、ポリプロピレンオキシド（ＰＰＯ）、ポリブチレンオキシド（ＰＢＯ）、又はＰＰＯ及びＰＢＯの組み合わせであり；
Ｘは、−ＳＯ３−、−ＰＯ３２−、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−であり；
ｎは、１〜１００の整数であり；
Ｒは、−（ＣＨ２）ｍ−であり；
ｍは、０〜２０の整数であり；
Ｍは、Ｈ又は１価若しくは２価のカチオン基である）
の構造を有する、請求項１に記載の癒着防止用組成物。
【請求項１１】
抗血栓性薬剤、非ステロイド系抗炎症性薬剤、ホルモンケモスタット因子、鎮痛剤及び麻酔剤から成る群から選択される１個又は２個以上の薬剤をさらに含有する、請求項１に記載の癒着防止用組成物。
【請求項１２】
開腹手術、腹腔鏡手術、腹膜手術、膀胱手術、婦人科手術、脊椎手術、心臓外科手術、直腸手術、口腔外科手術又は成形外科手術の後に適用される、請求項１に記載の癒着防止用組成物。
【請求項１３】
チューブ、クリーム、シリンジ又はスプレーの形態中に配合された、請求項１に記載の癒着防止用組成物。
【請求項１４】
前記マルチブロックコポリマーが体内で分解され、そしてポリエチレンオキシド（ＰＥＯ）−ポリプロピレンオキシド（ＰＰＯ）−ポリエチレンオキシド（ＰＥＯ）ブロックコポリマー又はポリエチレンオキシド（ＰＥＯ）−ポリブチレンオキシド（ＰＢＯ）−ポリエチレンオキシド（ＰＥＯ）ブロックコポリマーを持続放出し、それにより２次的な癒着防止効果を呈する、請求項１に記載の癒着防止用組成物。
【請求項１５】
ポロキサマー４０７が生分解性ジカルボキシル基リンカーによりエステル結合を介して連結されたマルチブロックコポリマーを、１〜２０重量％の量で含む水溶液状態における癒着防止用組成物であって、
前記マルチブロックコポリマーが、５０，０００〜５００，０００ダルトンの重量平均分子量を有し、そして
前記マルチブロックコポリマーは、その両端に、−ＳＯ３−、−ＰＯ３２−、及び−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−の一価又は二価の塩からなる群から選択される基を有し、ここでＲは−（ＣＨ２）ｍ−を表し、ここでｍは０〜２０の整数であり、
１５℃以上においてゲル化される、前記癒着防止用組成物。
【請求項１６】
前記組成物が、手術部位に処置された際にゲル化し、組織の癒着を防止する、請求項１５に記載の組成物。
【請求項１７】
前記組成物中のマルチブロックコポリマーが、蒸留水、注射用水、生理食塩水及び０．１〜５０体積％のアルコール水溶液から成る群から選択される溶媒に溶解されている、請求項１５に記載の組成物。
【請求項１８】
前記アルコールが、エタノール、１，２−プロピレングリコール、グリセロール、ポリエチレングリコール３００及びポリエチレングリコール４００から成る群から選択される、請求項１７に記載の組成物。
【請求項１９】
前記水溶液が、使用時に、マルチブロックコポリマー及び溶媒を混合することにより調製され、前記マルチブロックコポリマー及び溶媒のそれぞれが、別個の容器に含まれている、請求項１５に記載の組成物。
【請求項２０】
前記別個の容器内のマルチブロックコポリマーが、凍結乾燥により調製された、請求項１９に記載の組成物。
【請求項２１】
チューブ、クリーム、シリンジ又はスプレーの形態中に配合された、請求項１５に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願のクロスリファレンス
本出願は、２００６年２月１日に出願された韓国特許出願番号第１０−２００６−０００９８４９号の優先権及び利益を主張する（参照することにより本明細書に組み入れる）。
【０００２】
技術分野
本発明は、水溶性であり、且つ温度に依存してゾル−ゲル相転移を示す感温性ポリマーに関し、当該ポリマーの溶液は、ゾル状態からゲル状態に相転位を受け、そして組織内でしっかりとコーティングされ、それにより上記ポリマーは、癒着を防止するバリアとしてはたらき、そして時間の経過と共に、低分子量の界面活性剤と生体分解性の単一分子の物質とに創傷部位に局所的にされ、それにより創傷部位に局所的に生成物が、２次的な癒着防止効果を呈する。
【背景技術】
【０００３】
癒着とは、炎症、創傷、摩擦、手術等による創傷等の傷の治癒過程において繊維組織が過度に生成されたり、血液が流出して凝固して、互いに分離されているべき周辺臓器又は組織が互いにくっつく等の現象をいう。当該癒着は、特に、手術後に深刻な問題を引き起こす。癒着は、一般に、あらゆる種類の手術後に発生することがあり、このような現象により手術後の回復過程において手術周辺部位の臓器又は組織が互いに付着して深刻な臨床的後遺症を招くことがある。
【０００４】
このような癒着により発生可能な後遺症の種類は極めて多岐に亘る。アメリカの統計資料によれば、手術後癒着により発生する主な症状として、小腸閉塞が４９％〜７４％、不妊が１５％〜２０％、慢性骨盤症が２０％〜５０％、後続手術時の臓穿孔が約１９％に至ることが知られている。
【０００５】
このような癒着を防止する方法として、手術時における損傷を極力抑えるか、手術用の手袋の表面にある澱粉を使用前に洗い落とすか、手を頻繁に洗うか、手術用の器具の使用頻度を最小化するか、手術操作を最小化して異物反応を最小化する等の手術中に注意すべき行動を守ることが挙げられるが、このような努力によっても手術後癒着現象が完全に防止できないのが現状である。
【０００６】
癒着を引き起こすとして公知のメカニズムを基に接近した癒着防止方法として、フィブリンの形成を防ぐために組織プラスミノゲン活性化剤を活性化させる方法が挙げられ、他のメカニズムとして知られているバリアを用いて組織の創傷が治癒される間に界面活性剤とほとんど同様に物理的なバリアを形成して隣り合う組織の間に癒着が形成されることを防ぐ方法もある。このようにバリアを用いる場合、用いられたバリアは一定期間の創傷治癒が終わった後には分解又は吸収されて除去されなければならず、バリア用の材料そのもの又はその分解生成物が人体に無害であることが求められる。併せて、炎症反応の側面から、癒着防止のために、抗炎剤とステロイドを用いて癒着度を極力抑えようとする努力と共に、癒着の形成された表面を剥離する方法も用いられてきている。
【０００７】
癒着防止に効果的なバリアの条件として、創傷が治癒される間に組織又は臓器の物理的な防壁としてはたらき、且つ創傷の治癒に不利な影響なしに隣り合う組織又は臓器間の癒着形成を防止することが求められる。また、一定期間の治療が終わった後には、容易に分解又は吸収されて除去されなければならず、癒着バリア用の材料そのもの又はその分解生成物は人体に無害でなければならない。
【０００８】
このような防壁用として使用可能な癒着バリアは、その形態から、大きく２種類に分類できるが、一方はゲルの形態を含む溶液状防壁であり、他方はフィルム、不織布、スポンジの形態等を含む膜の形態の防壁である。
【０００９】
このような癒着防止剤の材料として使用可能なものとしては、ポロキサマーをはじめとして、ポリエチレングリコール、セルロース、コンドロイチンサルファート及びヒアルロン酸等の多糖類、ポリ乳酸（ＰＬＡ）、コラーゲン、フィブリン等がある。現在、これらを用いて商業化された製品としては、多糖類の一種である酸化再生セルロース、カルボキシルメチルセルロース、デキストラン（サルファート）、ヒアルロン酸等があり、合成ポリマーであるポリエチレングリコール、ポロキサマー等がある。このような癒着防止剤用の材料のうち、セルロース類又はデキストラン類等は、天然ポリマーであるものの、生体を構成する成分ではないため、生体内に挿入時に異物反応を引き起こす恐れがあることが知られている。また、生体内にこれらの材料に対する分解酵素がなくて体内分解が起こらないため、これを酸化若しくは加水分解する等の生体内に吸収可能にするさらなる処置を行うことを余儀なくされることが知られている。
【００１０】
Ｂａｌａｚｓらの米国特許第４，１４１，９７３号明細書には、癒着防止のためにヒアルロン酸を主成分として用いることが開示されている。しかしながら、ヒアルロン酸は生体内において容易に分解され、比較的溶解しやすい他、生体内における半減期が１〜３日と比較的に短いことから、癒着防止に要される時間中に体内に留まることができないため、癒着防止剤として働くのに大きな制約がある。
【００１１】
Ｂｒｏｍｂｅｒｇらは、米国特許第５，９３９，４８５号明細書において、酸度、温度、イオン強度等の環境的な刺激に感応するポリマーネットワークを開発したことを記載している。Ｂｒｏｍｂｅｒｇらは、上記ポリマーネットワークの構造成分として生体内非分解性ポリマーであるビニール系ポリマー、アクリル系ポリマー及びウレタン等を用いており、感応性ポリマーとしてポリオキシアルキレン系ポリマー及びセルロース系ポリマーを用いている。しかしながら、上記のような非分解性ポリマーを構造成分として用いる場合には、生体内において分解されず、生体適合性も低いため、異物反応を引き起こす恐れがあるという問題点がある。
【００１２】
Ｆｌｏｒｅらの米国特許第６，２８０，７４５号明細書には、癒着を防止する目的で用いられる薬剤のデリバリー用の組成物及びこれを用いる手術後癒着防止方法が記載されている。上記薬剤運搬用の組成物は１種以上の構造ポリマーと変性用のポリマー及び補助界面活性剤を含み、ここに抗生剤、抗炎症剤等をはじめとする種々の薬剤から選ばれたものをさらに含んでいてもよい。上記文献において、構造ポリマーとしてポリオキシアルキレンブロックコポリマーが記載されており、変性用のポリマーとしてセルロースエーテル類、ソジウムカルボキシメチルセルロース及びポリアクリレート類が記載されており、界面活性剤としては脂肪酸石けん系のソジウムオレート、ソジウムラウレート、ソジウムカプレート、ソジウムカプリレート等が記載されている。一方、上記変性用のポリマーのうち、ソジウムカルボキシメチルセルロースは生体由来物質ではない植物から得られたセルロースを加工して製造されたものであって、生体内において異物反応を誘起する可能性があるものであると知られており、ポリアクリレート類をはじめとする他の変性用のポリマーも生体由来物質ではないことから生体適合性が低い結果、異物反応を誘起する可能性があるという問題点を有する。
【００１３】
癒着防止剤として用いられる他の物質として、ポロキサマーが挙げられる。ポロキサマーは、ＢＡＳＦ社により生産されるポリマーであって、低温では溶液状態で存在するが、温度が上がるに伴いゲル化される熱感応性材料であることが知られている（米国特許第４，１８８，３７３号明細書、同第４，４７８，８２２号号明細書、同第４，４７４，７５１号明細書参照）。Ｂｒｏｍｂｅｒｇの米国特許第５，９３９，４８５号明細書では、上記ポロキサマーは、酸度、温度、イオンの強度の刺激により可逆的にゲル化可能な材料であることが記載されている。Ｓｔｅｉｎｌｅｉｔｎｅｒらは、ポロキサマーを基本組成とする流動性ゲルの癒着防止性能の評価について発表している［Ｆｅｒｔｉｌｉｔｙ  ａｎｄ  ｓｔｅｒｉｌｉｔｙ  ５７（２）：３０５（１９９２）］。
【００１４】
一般的に知られているポロキサマーは、ポリエチレンオキシド（ＰＥＯ）−ポリプロピレンオキシド（ＰＰＯ）−ポリエチレンオキシド（ＰＥＯ）の構造を有する。例えば、ポロキサマー４０７のゲル化温度は約２５℃であり、ゲル化に影響する因子にはポロキサマー等級、濃度、酸度、添加剤等がある。また、ポロキサマー４０７の融点は５６℃であり、比重は１．０５である。しかしながら、上記ポロキサマーは水溶液においてポリマーゲルを形成するが、溶け易い物性を有するため、癒着防止のために十分な時間１個所に留まることができないという欠点を有する。
【００１５】
Ｒｏｎらの米国特許第６，３１６，０１１号明細書には、末端部に変性用のポリマー又はオリゴマー有する熱可逆性の組成物が記載されている。上記熱可逆性組成物は、ＰＰＧ−ＰＥＧ−ＰＰＧブロックコポリマーを含み、末端の変性用のポリマーとしては生体接着性のあるポリビニールカルボキシル酸が用いられている。ここに癒着防止用として使用可能な種々の薬剤を混合して使用可能である。上記文献において、生体接着性ポリビニールカルボキシル酸はアクリル酸、メタクリル酸等を含むが、これらは生分解性と生体適合性が低い材料であって、生体内において異物反応を誘起する可能性があるという問題点を有する。
【００１６】
これまで種々の材料を用いた癒着防止剤への深い研究が盛んになされてきており、これらの一部は商品化レベルに至っているが、現在通用されている製品としては、フィルムの形態であるＥｔｈｉｃｏｎ社のＩｎｔｅｒｃｅｅｄとＧｅｎｚｙｍｅ社のＳｅｐｒａｆｉｌｍのみしか存在しないのが現状である。しかしながら、このようなフィルムの形態の癒着防止剤は内部臓器に適用時に生体面によく付着できず、付着されるとしても臓器そのものの運動により元の場所に位置できないという問題点と、組織そのものにおいて異物として認識されて互いに固まって臓器癒着防止効果があまり得られないことが報告されているが、未だこれに代えうる代替物質が開発されていないのが現状である。このようなフィルムの形態の製品は、主として、産婦人科又は脊椎手術等制限的にしか用いられていないのが現状である。
【００１７】
このような問題点を克服するために、ゲルの形態のカルボキシメチルセルロース、デキストラン７０、ＰＥＯ−ＰＰＯ−ＰＥＯから構成されるポロキサマー４０７から製造したＦｌｏｗｇｅｌ（Ｍｅｄｉｖｅｎｔｕｒｅｓ）、ポリ乳酸を基本としたＡｄｃｏｎ−Ｌ（Ｇｌｉａｔｅｃｈ）、ヒアルロン酸を基本としたＩｎｔｅｒｇｅｌ（Ｌｉｆｅｃｏｒｅ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ）、天然ポリマーを原料としたＡｄｂＡ（Ａｍｉｔｉｅ）及びスプレーの形態のポリエチレンオキシドを基本としたＳｐｒａｙｇｅｌ（Ｃｏｎｆｌｕｅｎｔ  Ｓｕｒｇｉｃａｌ）等が開発されて一部市販されている。創傷の治癒にかかる期間は創傷の程度によるが、一般に、約７日であると言われている。しかしながら、上記において開発されたゲルの形態の癒着防止剤の場合には、創傷が治癒される前に溶け込んで排出されてしまい、創傷組織に留まる時間が不足して、癒着防止効果が正常に得られない他、組成成分の異物反応等の問題点により商品化し難いのが現状である。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１８】
フィルムの形態の癒着防止剤の欠点を補完し、且つより理想の条件を備えたゲルの形態の癒着防止剤が上市されるならば、現在外科手術分野において極めて制限的に用いられる癒着防止剤の応用分野は、フィルムの形態の癒着防止剤が適用できないところまで拡大されて、これまで癒着防止剤の応用が困難であった外科分野においても使用可能になることが期待される。さらに、感染を最大限に低減する方向への手術方法の変遷の流れからも、フィルムの形態の癒着防止剤を用いた局所的な治癒法よりはゲルの形態の癒着防止剤の方が、手術が容易となり、しかも、感染の危険性を最小限に低減しながらも、癒着防止効果に優れていることが期待される。
【００１９】
このため、これまでは理想の条件を有し、且つ成功的な効果を示す癒着防止剤が開発されていないと言え、このような理想的で且つ効果的な癒着防止剤の開発が切望されているのが現状である。
【課題を解決するための手段】
【００２０】
上述の問題点を解決し、そして要求に応えるために、本発明は、体内で分解され、吸収され、そして排泄されることができ、そして体温によりゲル化することができる、生態的合成を有する感温性ポリマーを含む、ゲルの形態の付着防止剤を提供し、特に、体内の所望の位置に一定期間安全に保持することができるゲルの形態の理想の癒着防止剤に関し、それらの分解生成物は、体内で分解されて容易に吸収され、そして排出され、そこでは分解プロセスにより生成した物質は、癒着防止に相乗効果を与え、且つ長期間癒着防止効果を発揮することができる界面活性剤としてはたらく。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２１】
本発明の完全な理解、及び本発明により得られる付加的な利点は、以下の詳細な説明を参照することによりなお一層明らかになる。
【００２２】
本発明は、水溶性であり、且つ温度に依存してゾル−ゲル相転移を示す感温性ポリマーに関し、当該ポリマーの溶液は、ゾル状態からゲル状態に相転位を受け、そして組織内でしっかりとコーティングされ、それにより上記ポリマーは、癒着を防止するバリアとしてはたらき、そして時間の経過と共に、低分子量の界面活性剤と生体分解性の単一分子の物質とに分解され、それにより分解生成物が、２次的な癒着防止効果を呈する。
【００２３】
上記界面活性剤は、本発明のポリマーを構成する低分子量の単位ポリマーであってもよく、上記単一分子物質は上記低分子量の単位ポリマーを連結させるリンカーであってもよい。上記ポリマーの量は、好ましくは、上記組成物の合計の０．１〜４０重量％であり、そして上記癒着防止用組成物は、好ましくはゲル型である。
【００２４】
理想の癒着防止剤の条件は、次の通りである；
１）理想の癒着防止剤は、創傷の周りの組織又は臓器の癒着防止効果を有するべきである；
２）理想の癒着防止剤は、水溶性であるべきである；
３）理想の癒着防止剤は、人体に無害であり、そして容易に吸収及び排泄されるように、人体内において容易に分解されるべきである；
４）理想の癒着防止剤は、異物反応を生じさせるべきではない；
５）理想の癒着防止剤は、創傷が治癒するための一定の期間内に、組織又は臓器に保持されるべきである：
６）理想の癒着防止剤の適用及び取扱いは、容易であるべきである。
上記のような癒着防止剤の条件を満たすためには、ゲル型が最適である。
【００２５】
本発明のポリマー、感温性のゲル型の癒着防止剤は、体温によりゲル化し、一定期間臓器内に安全に保持され、それにより癒着防止するようにはたらくだけでなく、それらは、体内に吸収又は分解されることができ、そして生体内で分解された後に、その分解生成物がまた体内に容易に吸収され、そして排泄され、分解プロセス中に生成した物質が界面活性剤としてはたらき、長時間持続的に癒着防止効果を示す。さらに、上記ポリマーは、生体内における異物感を最小化することができ、そして手術の際及び／又は手術後に創傷部位に局所的にスプレー又はコーティングされうるので、取扱いが簡便で且つ便利である。
【００２６】
本発明のポリマーは、上記特徴を有する場合であれば、いかなる種類又は組成のポリマーであっても本発明の範囲に含まれ、一例として、ＰＥＯ−ＰＰＯ（又はＰＢＯ）−ＰＥＯブロックコポリマーを基本単位とし、ジカルボキシル基リンカーにより連結されたマルチブロックコポリマーであってもよい。
【００２７】
本発明の癒着防止用組成物に含有されている上記マルチブロックコポリマーは、癒着防止剤の条件をいずれも満たすものであって、これを詳述すると、次の通りである。
【００２８】
本発明で用いられる「ブロックコポリマー」とは、親水性ブロックであるポリエチレンオキシド（ＰＥＯ）ブロックが、疎水性ブロックであるポリプロピレンオキシド（ＰＰＯ）又はポリブチレンオキシド（ＰＢＯ）ブロックと連結し、次いで、さらにポリエチレンオキシド（ＰＥＯ）ブロックと連結した基本単位を意味し、ＰＥＯ−ＰＰＯ−ＰＥＯブロックコポリマー又はＰＥＯ−ＰＢＯ−ＰＥＯブロックコポリマーで表わされる。
【００２９】
本発明で用いられる「マルチブロックコポリマー」とは、親水性ブロックであるポリエチレンオキシド（ＰＥＯ）ブロックが、疎水性ブロックであるポリプロピレンオキシド（ＰＰＯ）又はポリブチレンオキシド（ＰＢＯ）ブロックと連結し、次いで、さらにポリエチレンオキシド（ＰＥＯ）ブロックと連結したブロックコポリマーを基本単位とし、２以上のブロックコポリマーがジカルボキシル基リンカーにより連結されたブロックポリマーを有するポリマーを意味する。
【００３０】
一例として、本発明は、ＰＥＯ−ＰＰＯ−ＰＥＯブロックコポリマー及びＰＥＯ−ＰＢＯ−ＰＥＯブロックコポリマーから成る群から選択される同一又は異なる２又は３以上のブロックコポリマーがジカルボキシル基リンカーにより連結されたマルチブロックコポリマーを含有する癒着防止用組成物に向けられ、ここで上記マルチブロックコポリマーは、感温性ポリマーであり、そして上記マルチブロックコポリマーの相転位温度が体温より低いために体温範囲内においてゲル状態で存在し、上記マルチブロックコポリマーの重量平均分子量が比較的大きいので低濃度のポリマー水溶液環境における保持期間が数日を超え、上記マルチブロックコポリマーは水溶性であり、そして上記マルチブロックコポリマーは生分解性リンカーにより連結されているので吸収及び排出されるように生体内で容易に分解される。本発明は、このような感温性ＰＥＯ−ＰＰＯ（又はＰＢＯ）−ＰＥＯブロックコポリマーを含むマルチブロックコポリマーの新規で且つ有効な癒着防止剤としての用途を提供する。
【００３１】
本発明の癒着防止用組成物に含有されている上記マルチブロックコポリマーは、重量平均分子量が１，０００〜２０，０００ダルトンの範囲であり、上記マルチブロックコポリマーは、上記範囲内において同一又は異なる分子量を有するＰＥＯ−ＰＰＯ−ＰＥＯ及びＰＥＯ−ＰＢＯ−ＰＥＯブロックコポリマーから成る群から選択される同一又は異なる２又は３以上のブロックコポリマーがジカルボキシル基リンカーにより連結されてマルチブロック共重合化された形態であり、総重量平均分子量は、２５，０００〜１，０００，０００ダルトンであり、好ましくは、５０，０００〜５００，０００ダルトンである。このように、本発明のマルチブロックコポリマーは、ジカルボキシル基リンカーによりマルチブロック化されて分子量が増大することによりさらに低濃度のポリマーでもゾル−ゲル相転移を示すことができることから、生体内において十分な期間持続性を示すことができるという利点を有する。
【００３２】
上記マルチブロックコポリマーのＰＥＯ：ＰＰＯ又はＰＢＯの分子量比は、ポリマーが水溶性を維持する限り様々であってもよいが、約０．２：１〜約４０：１であってもよく、好ましくは、１：１〜７．５：１、さらに好ましくは、１：１〜５：１であり、ＰＥＯブロックはＰＥＯ−ＰＰＯ又はＰＢＯ−ＰＥＯ単位の１０〜８５重量％、好ましくは、４０％〜８５重量％の量で含まれてもよい。
【００３３】
上記ブロックコポリマーにおいて、ポリエチレンオキシド（ＰＥＯ）ブロックは約２〜２０００個、好ましくは、約５〜５００個、さらに好ましくは、約８０〜１２０個のエチレンオキシドを含んでいてもよく、それぞれのブロックコポリマーに含まれている２つのＰＥＯブロックを構成するエチレンオキシドの数は互いに同一であっても異なっていてもよい。
【００３４】
ポリプロピレンオキシドブロック又はポリブチレンオキシドブロックは２〜２０００個、好ましくは、約２０〜５００個、さらに好ましくは、約３０〜２５０個のプロピレンオキシド又はブチレンオキシドを含んでいてもよい。
本発明のマルチブロックコポリマーは、ＰＥＯ−ＰＰＯ−ＰＥＯブロックコポリマー及びＰＥＯ−ＰＢＯ−ＰＥＯブロックコポリマーから成る群から任意に選択される２又は３以上を連結させることにより形成され、そして上記２又は３以上のブロックコポリマーはお互いに同一であっても異なっていてもよい。
【００３５】
上記連結に用いられたジカルボキシル基リンカーは薬理学的に許容可能なものであって、シュウ酸、コハク酸、グルタル酸、アジピン酸、セバシン酸（ｓｅｂａｃｏｙｌ  ａｃｉｄ）、マロン酸、スベリン酸、ドデカン酸等のアルキルジカルボキシル酸；フマル酸、マレイン酸等の不飽和ジカルボキシル酸；及びフタル酸、テレフタル酸等のアリルジカルボキシル酸から成る群から選択される１種以上のジカルボキシル酸であってもよく、中でも、シュウ酸、コハク酸、グルタル酸、アジピン酸、セバ酸、フマル酸又はマレイン酸であることが好ましい。
【００３６】
上記の如きジカルボキシル基リンカーがブロックコポリマーの両末端のヒドキロシ基にエステル結合を介して連結されることにより、このエステル結合は水溶液及び生体内において加水分解又は酵素の作用により容易にカルボキシル酸とＰＥＯ−ＰＰＯ（又はＰＢＯ）−ＰＥＯブロックコポリマーとに分解可能になり、マルチブロックコポリマーに水溶性を与えることになる。このとき、分解されたＰＥＯ−ＰＰＯ（又はＰＢＯ）−ＰＥＯブロックコポリマーは界面活性剤としての効果を示し、２次的な癒着防止効果を示すことができるという利点を有する。このため、本発明のマルチブロックコポリマーは体内において加水分解されて分子量の小さな界面活性を有するブロックコポリマーとジカルボキシル酸とに分解されるため、ポリマー量のポリマーが分解されるとしても、ブロックコポリマーを持続放出させるため、持続的な癒着防止効果が得られる。
【００３７】
さらに具体的に、本発明のマルチブロックコポリマーは、次の式１：
M-X-O-[PEO-Y-PEO-C(=O)-R-C(=O)-O]n-PEO-Y'-PEO-O-X-M
（式中、ＰＥＯはポリエチレンオキシドであり；
Ｙ及びＹ’は、それぞれ独立して、ポリプロピレンオキシド（ＰＰＯ）、ポリブチレンオキシド（ＰＢＯ）、又はＰＰＯ及びＰＢＯの組み合わせであり；
Ｘは、−Ｈ、又はアニオン基であり；
ｎは、１〜１００の整数であり；
Ｒは、−（ＣＨ2）m−又はＣm’のアリールであり；
ｍは、０〜２０の整数であり、そしてｍ’は６〜１２の整数であり；
ＸがＨではない場合には、Ｍは、Ｈ又はカチオンであり、好ましくは、Ｌｉ、Ｎａ、Ｋ、Ａｇ、Ａｕ、Ｃａ、Ｍｇ、Ｚｎ、Ｆｅ、Ｃｕ、Ｃｏ、及びＮｉから成る群から選択されるものであり；
ＸがＨの場合には、Ｍは存在しない）
の構造を有するものであってもよい。
【００３８】
好ましくは、本発明のマルチブロックコポリマーは次の式２：
M-X-O-[PEO-Y-PEO-C(=O)-R-C(=O)-O]n-PEO-Y'-PEO-O-X-M
（式中、ＰＥＯは、ポリエチレンオキシドであり、
Ｙ及びＹ’は、それぞれ独立して、ポリプロピレンオキシド（ＰＰＯ）、ポリブチレンオキシド（ＰＢＯ）、又はＰＰＯ及びＰＢＯの組み合わせであり、
Ｘは、−Ｈ、−ＳＯ3−、−ＰＯ32-、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−であり、
ｎは、１〜１００の整数であり、
Ｒは、−（ＣＨ2）m−又はＣm’のアリールであり、
ｍは、０〜２０の整数であり、そしてｍ’は、６〜１２の整数であり、
ＸがＨではない場合には、Ｍは、Ｈ又は１価若しくは２価のカチオン基であり、好ましくは、Ｌｉ、Ｎａ、Ｋ、Ａｇ、Ａｕ、Ｃａ、Ｍｇ、Ｚｎ、Ｆｅ、Ｃｕ、Ｃｏ、及びＮｉから成る群から選択され、
ＸがＨの場合には、Ｍは存在しない）
で表わされる。
【００３９】
本発明のマルチブロックコポリマーの両末端は、それぞれ独立して、ヒドキロシ基、及びアニオン基とカチオン基を含む塩から成る群から選択される。上記アニオン基としては、−ＳＯ3-、−ＰＯ32-、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ-等が好ましく、アニオン基に対応して塩を形成するカチオン基としては、Ｌｉ、Ｎａ、Ｋ、Ａｇ、Ａｕ等の１価カチオン又はＣａ、Ｍｇ、Ｚｎ、Ｆｅ、Ｃｕ、Ｃｏ、Ｎｉ等の２価カチオンが採用可能である。
【００４０】
本発明の一態様において、上記マルチブロックコポリマーの基本単位であるＰＥＯ−ＰＰＯ（又はＰＢＯ）−ＰＥＯは、市販のポロキサマーであってもよい。
上記ポロキサマーは、親水性ブロックであるポリエチレンオキシド（ＰＥＯ）と疎水性ブロックであるポリプロピレンオキシド（ＰＰＯ）が、ＰＥＯ−ＰＰＯ−ＰＥＯの３重ブロックの形態におけるエーテル結合を介して連結された化合物であり、１，０００ダルトン〜２０，０００ダルトンの重量平均分子量を有し、そしてその末端基にヒドキロシ基を有するブロックコポリマーである。具体的には、ポロキサマー１８８（Ｐｌｕｒｏｎｉｃ（商標）Ｆ−６８）、ポロキサマー４０７（Ｐｌｕｒｏｎｉｃ（商標）Ｆ−１２７）等を用いることができる。
【００４１】
具体的には、本発明は、ポロキサマー４０７がジカルボキシル酸によりエステル結合を介して連結されたマルチブロックコポリマーを、１〜２０重量％の量で含む水溶液状態の癒着防止用組成物を提供し、ここで上記マルチブロックコポリマーは、５０，０００〜５００，０００ダルトンの重量平均分子量を有し、そして上記マルチブロックコポリマーは、水溶液中において１５℃以上でゲル化する。
【００４２】
本発明のポリマーを調製するために、精製せず又は精製した後のポロキサマーを用いることができ、精製すると、高分子量のポリマーを調製することが容易である。ポロキサマーの精製は、メチレンクロリドに溶解させた後にヘキサンに沈殿するか、あるいは、米国特許第５，８００，７１１号明細書において開示されるように、ｎ−プロパノール／Ｈ2Ｏ溶媒において層分離による方法により精製することができる。
【００４３】
本発明の一態様において、上記マルチブロックコポリマーは、次の方法により調製することができる。先ず、ＰＥＯ−ＰＰＯ（又はＰＢＯ）−ＰＥＯのブロックコポリマーに、希釈されたジカルボキシル酸ジクロリドを、上記ポリマーの両末端に存在する末端基の種類に応じて好適な量で加えた後、一定時間カップリング反応させて高分子量の生成物を得る。得られた生成物をエーテルに加えてポリマーを析出させ、メタノールに溶解させた後、エーテルを加えてポリマーを析出することにより精製する。上記マルチブロックコポリマーの両末端基を、あらゆる公知の方法により上記析出されたポリマーに導入することができる。
【００４４】
上記ポロキサマーに由来するマルチブロックのブロックコポリマーの合成は、核磁気共鳴法（ＮＭＲ）により同定することができる。反応に用いられたモノマーポロキサマー単体の核磁気共鳴法スペクトルにおいては存在しなかったピーク（上記ポロキサマーの両末端において、カルボキシル酸及びヒドロキシルの結合により発生した末端-ＣＨ2ＣＨ2−のピークである）が、ジカルボキシル酸をリンカーとして合成したマルチブロックコポリマーでは、４．２ｐｐｍ付近に発生する。さらに、ジカルボキシル酸の導入は、合成されたポロキサマーオリゴマーを、トリエチルアミンの存在下においてトリメチルシリルクロリド（ＴＭＳ−Ｃｌ）と反応させた後、核磁気共鳴法によりスペクトルを測定することにより検証することができる。上記末端基がヒドロキシルである場合には、トリメチルシリルプロトンのシグナルが０．１２ｐｐｍにおいて現れ、上記末端基がカルボキシル末端基である場合には、このピークが０．３ｐｐｍにおいて観察される。それらに基づいて、合成されたポロキサマーオリゴマーの合成を確認することができる。
【００４５】
本発明の癒着防止剤組成物内の上記のマルチブロックコポリマーの含有率は、０．１〜４０重量％であってもよく、１〜３０重量％であることが好ましく、１〜２０重量％であることが最も好ましい。マルチブロックコポリマーの含有率が上記範囲よりも少ない場合には、有効な癒着防止効果が得られず、体温範囲においてゲル状態を維持することができない一方で、上記範囲よりも多い場合には取扱いが困難であり、しかも多量のポリマーを使用するため含有率対比効果の上昇の程度いが微々であって経済的ではない。本発明において用いられたマルチブロックコポリマーは、０．１〜４０重量％濃度の水溶液の状態においてゾル−ゲル相転移温度が１０〜３５℃の範囲であるため、体温範囲においてゲル状態を維持することができる。このため、創傷部位に適用された際に、所望の部位に７日以上付着して保持することができるので、それらは、生体内において十分な期間残留するという利点を有する。一般に、各種の手術による臓器及び／又は組織間の癒着が発生する期間が手術後７日以内であることを考えたとき、上記マルチブロックコポリマーが体内において７日以上所望の位置に保持されることができるということは癒着防止に極めて重要な特性である。
【００４６】
既存のポロキサマー（ＰＥＯ−ＰＰＯ−ＰＥＯ）は、水溶液内のポロキサマーの濃度が約２０〜４０重量％になると、２０℃未満でゾル状態となり、そして２０℃以上でゲル状態となり、体温範囲においてゲル状態で存在することが可能になる。これに対し、本発明のマルチブロックコポリマーは、１〜２０重量％の比較的に低濃度の水溶液状態においても２０℃未満でゾル状態となり、そして２０℃以上でゲル状態を維持する性質を有するため、低濃度でも体温範囲でゲル状態を維持することができる。上記特性は、１回の投与により３日以上生体内に保持されるべき癒着防止剤の要求条件に見合うものであると言える。
【００４７】
本発明の癒着防止用組成物に含有される溶媒としては、上記マルチブロックコポリマーを溶解可能な溶媒であって、蒸留水、注射用水、生理食塩水、０．１〜５０体積％のアルコール水溶液、天然腹腔溶液及び天然腹腔溶液の組成を有する人工腹腔液等から成る群から選択される溶媒を用いることができる。上記アルコールは、エタノール、１，２−プロピレングリコール、グリセロール、ポリエチレングリコール３００又はポリエチレングリコール４００である。
【００４８】
本発明において、好ましくは、０．１〜５０体積％のアルコール水溶液を、溶媒として用いる。エタノールを含まない水溶液の場合、優れた癒着防止効果を示すものの、ポリマーの濃度と相転移変化パターンにおいて考慮すべき事項がある。ポリマーの濃度が高ければ、癒着防止効果は高まるものの、粘度が高くて狭い範囲において相転移を示すため、癒着防止溶液の取り扱い時にゲルになり易くなってしまい、取り扱いに難点が発生する恐れがあるのに対し、濃度が低い溶液の場合には相転移範囲が広くて取り扱い易いものの、癒着防止効率は低い場合がある。
【００４９】
一方、エタノールを含まない水溶液は、温度が上がるにつれて溶液の粘度が特定の温度において急激な相転移を示すのに対し、アルコール水溶液を溶媒として用いた場合には、エタノール含有率が高くなるにつれて、溶液の粘度はやや広い温度範囲に亘って相転移を示す。すなわち、エタノールを含まない水溶液は、保管したり室温において長時間かけて処理するときに溶液の粘度が高くなり取り扱うことが困難であるため、氷容器に保管しなければならないという煩雑さがある。特に、相転移温度部位において取り扱いたい場合には、急激な相転移現象により溶液を取り扱うことが困難となる。このため、エタノールとの混合溶媒とした場合には、相転移が広い温度範囲に亘って起こるため、ポリマー溶液を取り扱うことが非常に容易になる。また、エタノール含有水溶液を用いると、粘性が高くて取り扱い難い溶液の欠点を補完することができる。すなわち、エタノールを含むことにより、同一含有率のポリマー溶液である場合でも、溶液の粘度が下がるので取り扱い易い。さらに、体内にコーティングした際に、エタノールの吸収及び蒸発により溶液がゲル化し易いという利点がある。
【００５０】
本発明の癒着防止用組成物に含有されているマルチブロックコポリマーは、それらがＰＥＯ−ＰＰＯ−ＰＥＯ又はＰＥＯ−ＰＢＯ−ＰＥＯブロックコポリマーの単一物質のみを含むことができ、それらが、上記ブロックコポリマー以外の有効成分を含む必要がなく、それらが単一物質のＰＥＯ−ＰＰＯ−ＰＥＯ又はＰＥＯ−ＰＢＯ−ＰＥＯブロックコポリマーとリンカーであるジカルボキシル酸とに分解され、そして上記分解生成物が別の癒着防止メカニズムとして作用することを重要な特徴とする。
【００５１】
上述のように、本発明の癒着防止用組成物は、単一物質としても感温性特性を十分に示すマルチブロックコポリマーのみを含むので、異物感を示す他の天然ポリマー成分を含有することなく、単一物質のマルチブロックコポリマーだけでも体温範囲においてゾル−ゲル相変移が起こる特性を有することを特徴とする。すなわち、本発明の癒着防止用組成物は、当該組成物が、消炎剤及び他の添加物を添加することなくマルチブロックコポリマーを用いて組織及び／又は臓器の癒着防止性能を示し、そして当該組成物が体内で分解された後でさえも、分解生成物が２次的に癒着防止効果を示す界面活性剤としてはたらくことを特徴とする。
【００５２】
本発明のマルチブロックコポリマーを含有する癒着防止用組成物は、独立した薬理学的作用を有する薬剤をさらに含有することができる。上記薬剤は、創傷部位にコーティングされる組成物のゲル化特性を調節するか、又は創傷の治療のための有効成分として作用することができる。有用な薬剤としては、ヘパリン又は組織プラスミノゲン活性因子等の抗血栓性薬剤、アスピリン、イブプロフェン、ケトプロフェン又はその他の非ステロイド系抗炎症性薬剤、ホルモンケモスタット因子、鎮痛剤又は麻酔剤等がある。
【００５３】
本発明の癒着防止用組成物は、開腹手術、腹腔鏡手術時にも適用可能であり、既存の腹膜手術、膀胱又は婦人科手術、脊椎手術分野だけではなく、心臓外科手術、直腸手術、口腔外科手術、各種の成形外科手術等の一般的な外科分野等に適用することができる。
【００５４】
本発明の組成物は、使用用途に応じて、チューブ、クリーム、シリンジ、スプレー等種々の形態で適用可能であり、創傷部位に注入するか、コーティングするか、又はスプレーしてゲル化させることにより組織の癒着を防止することができる。
【００５５】
本発明の水溶液組成物は、生分解性ポリマー物質であって水溶液状態で保管することができない。従って、マルチブロックコポリマーを含む容器と水溶液を含む容器とを別個に包装した後、使用時に混合し、そして分散させてポリマー水溶液となる。上記容器に充填されるマルチブロックコポリマーは、凍結乾燥により調製されたものであることができる。
【００５６】
本発明の癒着防止用組成物の適用量は、ポリマー組成、分子量、濃度、所要の癒着防止期間、体内作用部位、患者状態等によって異なる。
【実施例】
【００５７】
以下、本発明を、具体例を挙げて詳述するが、これらの具体例は単なる本発明を説明するためのものであり、本発明の範囲を制限するものであると解釈すべきではない。
【００５８】
調製例１．サクシニルジクロリドを用いたポロキサマー４０７から構成されるマルチブロックコポリマーの合成
ポロキサマー４０７（Ｐｌｕｒｏｎｉｃ（商標）Ｆ−１２７、ＢＡＳＦ、分子量：１２，５００ダルトン、ＰＥＯ：ＰＰＯ＝１０１：５６）１０ｇを、１００ｍＬの１口丸底フラスコに入れ、１２０℃に加熱した沸騰した油の中で加熱し、減圧しながら上記ポリマーに含まれている水分を２時間かけて除去した。減圧を解除し、窒素を流しながら、反応温度を１００℃に設定した後、アセトニトリル１００ｍＬをフラスコに添加した。反応フラスコにディーン・スターク（Ｄｅａｎ  Ｓｔａｒｋ）装置と冷却器を取り付けた。
【００５９】
ディーン・スターク装置により蒸留されるアセトニトリル２０ｍＬを取り除いて、反応物内の水分を完全に除去した後、ディーン・スターク装置の容器にサクシニルジクロリドを１当量添加し、そして２４時間反応させた。２４時間後、合成されたポロキサマーオリゴマーの末端基をカルボキシル基で置換するために、さらにディーン・スターク装置の容器にサクシニルクロリド９６μＬを添加し、２４時間反応させた。合成されたポロキサマーオリゴマーを、ジエチルエーテル１Ｌに沈殿させ、ろ過して生成物を得た。こうして得られた生成物をさらにメタノール１６ｍＬに溶解させ、ジエチルエーテルに沈殿ろ過して精製する工程を２回行い、真空乾燥させて、分子量分布の狭いポロキサマーオリゴマーを得た。
【００６０】
上記生成された物質がポロキサマーのマルチブロックコポリマーであるかどうかを確認するために、核磁気共鳴法（ＮＭＲ）を用いた。その結果、反応に用いられたモノマーポロキサマー単独のＮＭＲスペクトルでは存在しなかったピーク（上記ポロキサマーの両末端において、カルボキシル酸及びヒドロキシルの結合により発生した末端-ＣＨ2ＣＨ2−のピークである））が、ジカルボキシル酸をリンカーとして合成したマルチブロックコポリマーでは、４．２ｐｐｍ付近に発生した（図１）。さらに、ジカルボキシル酸の導入は、合成されたポロキサマーオリゴマーを、トリエチルアミンの存在下においてトリメチルシリルクロリド（ＴＭＳ−Ｃｌ）と反応させた後、核磁気共鳴法によりスペクトルを測定することにより同定した。上記末端基がヒドロキシルである場合には、トリメチルシリルプロトンのシグナルが０．１２ｐｐｍにおいて現れ、上記末端基がカルボキシル末端基である場合には、このピークが０．３ｐｐｍにおいて観察される。従って、合成されたポロキサマーオリゴマーの合成を同定した（図２〜４）。
【００６１】
こうして得られた生成物を、ＭＢＰ−３６と命名し、平均分子量は２３０，０００ダルトンであった。この実施例をはじめとして本願発明の実施例における全ての平均分子量は、ゲル・パーミエーション・クロマトグラフィー（ＧＰＣ）により測定された。
【００６２】
調製例２．アジポイルジクロリドを用いたポロキサマー１８８から構成されるマルチブロックコポリマーの合成
マルチブロックコポリマーの基本単位としてポロキサマー１８８（Ｐｌｕｒｏｎｉｃ（商標）Ｆ−６８、ＢＡＳＦ、分子量：８，０００ダルトン、ＰＥＯ：ＰＰＯ＝８０：２７）を用い、ジカルボキシル酸リンカーとしてアジポイルジクロリドを用いた以外は、調製例１の方法と同様にして、平均分子量が１６０，０００のマルチブロックコポリマーを合成した。核磁気共鳴法を用いてジカルボキシル酸の導入による４．２ｐｐｍ付近のピーク生成及び末端ピーク分析を行い、上記マルチブロックコポリマーは、ポロキサマーがジカルボキシル酸により連結されたものであることを同定した。
【００６３】
調製例３．サクシニルジクロリドを用いたポロキサマー２３７から構成されるマルチブロックコポリマーの合成
マルチブロックコポリマーの基本単位としてポロキサマー２３７（ＢＡＳＦ、分子量：７，０００ダルトン、ＰＥＯ：ＰＰＯ＝６４：３７）を用いた以外は、調製例１の方法と同様にして、ジカルボキシル酸リンカーとしてサクシニルジクロリドを用いて平均分子量が１５０，０００のマルチブロックコポリマーを合成した。核磁気共鳴法を用いてジカルボキシル酸の導入による４．２ｐｐｍ付近のピーク生成及び末端ピーク分析を行い、上記マルチブロックコポリマーはポロキサマーがジカルボキシル酸により連結されたものであることを同定した。
【００６４】
調製例４．サクシニルジクロリドを用いたポロキサマー４０７から構成されるマルチブロックコポリマーの合成
マルチブロックコポリマーの基本単位としてポロキサマー４０７（分子量：１２，５００ダルトン、ＰＥＯ：ＰＰＯ＝１０１：５６）を用い、ジカルボキシル酸リンカーとしてサクシニルジクロリドを用いて調製例１の方法と同様に行い、平均分子量が１３０，０００のマルチブロックコポリマーを合成してＭＢＰ−５３と命名した。核磁気共鳴法を用いてジカルボキシル酸の導入による４．２ｐｐｍ付近のピーク生成及び末端ピーク分析を行い、上記マルチブロックコポリマーはポロキサマーがジカルボキシル酸により連結されたものであることを同定した。
【００６５】
調製例５．オキサリッククロリドを用いたポロキサマー４０７から構成されるマルチブロックコポリマーの合成
マルチブロックコポリマーの基本単位としてポロキサマー４０７（分子量：１２，５００ダルトン、ＰＥＯ：ＰＰＯ＝１０１：５６）を用い、ジカルボキシル酸リンカーとしてオキサリッククロリドを用いた以外は、調製例１の方法と同様にして平均分子量が９８，０００のマルチブロックコポリマーを合成し、これをＭＢＰ−２９と命名した。核磁気共鳴法を用いてジカルボキシル酸の導入による４．２ｐｐｍ付近のピーク生成及び末端ピーク分析を行い、上記マルチブロックコポリマーはポロキサマーがジカルボキシル酸により連結されたものであることを同定した。
【００６６】
調製例６．セバコイルジクロリドを用いたポロキサマー１８８から構成されるマルチブロックコポリマーの合成
マルチブロックコポリマーの基本単位としてポロキサマー１８８（分子量：８，０００ダルトン、ＰＥＯ：ＰＰＯ＝８０：２７）を用い、ジカルボキシル酸リンカーとしてセバコイルジクロリドを用いた以外は、調製例１の方法と同様にして平均分子量が１２４，０００のマルチブロックコポリマーを合成し、これをＭＢＰ−２２と命名した。核磁気共鳴法を用いてジカルボキシル酸の導入による４．２ｐｐｍ付近のピーク生成及び末端ピーク分析を行い、上記マルチブロックコポリマーはポロキサマーがジカルボキシル酸により連結されたものであることを同定した。
【００６７】
調製例７．ドデカンジクロリドを用いたポロキサマー４０７から構成されるマルチブロックコポリマーの合成
マルチブロックコポリマーの基本単位としてポロキサマー４０７（分子量：１２，５００ダルトン、ＰＥＯ：ＰＰＯ＝１０１：５６）を用い、ジカルボキシル酸リンカーとしてドデカンジオイルクロリドを用いた以外は、調製例１の方法と同様にして平均分子量が１１０，０００のマルチブロックコポリマーを合成し、これをＭＢＰ−４２と命名した。核磁気共鳴法を用いてジカルボキシル酸の導入による４．２ｐｐｍ付近のピーク生成及び末端ピーク分析を行い、上記マルチブロックコポリマーはポロキサマーがジカルボキシル酸により連結されたものであることを同定した。
【００６８】
調製例８．サクシニルジクロリドを用いたポロキサマー４０７から構成されるマルチブロックコポリマーの合成
マルチブロックコポリマーの基本単位としてポロキサマー４０７（分子量：１２，５００ダルトン、ＰＥＯ：ＰＰＯ＝１０１：５６）を用い、ジカルボキシル酸リンカーとしてサクシニルジクロリドを用いて調製例１の方法と同様に行い、平均分子量が１２０，０００のマルチブロックコポリマーを合成し、これをＭＢＰ−７７と命名した。
【００６９】
実施例１：マルチブロックコポリマーの特性の測定
（１）ポリマーの種類によるゲル化温度の測定
上記調製例１〜８において合成したマルチブロックコポリマーを蒸留水に溶解させて、下記表１に示す濃度の溶液を調製した。対照群としては、ポロキサマー４０７（Ｐｌｕｒｏｎｉｃ（商標）Ｆ−１２７）及びポロキサマー１８８（Ｐｌｕｒｏｎｉｃ（商標）Ｆ−６８）溶液を調製した。上記の対照溶液と調製例１〜８において調製されたマルチブロックコポリマー溶液の濃度に従ったゲル化温度を、下記表１に示す。
【００７０】
【表１】
0005479739.tif 000002
【００７１】
上記表１の結果から明らかなように、対照群の場合には、２５％未満の濃度における明確なゲル化点等の相転移温度を示す特性を見出すことは困難であったが、本発明のマルチブロックコポリマー溶液は、２０％未満の濃度で明確な相転移を示すゲル化点を示した。
【００７２】
また、上記対照群溶液のポロキサマー４０７溶液と調製例１及び５〜７において調製されたマルチブロックコポリマー溶液とにおける濃度に従う粘度を、ブルックフィールド粘度計により測定し、その結果をそれぞれ図５〜図９に示す。図５〜図９から明らかなように、ブルックフィールドにおいて得られる粘度測定結果を勾配法を用いて得られたゲル化点と比較したところ、互いに相関関係があることを確認することができた。
【００７３】
（２）溶媒の種類によるゲル化温度の測定
水溶液の溶媒としてエタノール及び蒸留水の混合溶媒を用いた場合のポリマー水溶液の特性を調べるために、下記表２に示す組成の溶媒を調製した。
【００７４】
【表２】
0005479739.tif 000003
【００７５】
以上のようにして調製したエタノール含有水溶液の粘度を測定した結果を、図１０に示す。
エタノールを含まない水溶液は、温度が上がるにつれて、溶液の粘度が特定の温度において急激な相転移を示すのに対し、エタノール含有溶媒の場合にはエタノールの含有率が高くなるにつれて溶液の粘度はやや広い温度範囲に亘ってゲル化点を示す相転移曲線を示すことが観察された。
【００７６】
実施例２：マルチブロックコポリマーから構成される癒着防止剤の癒着度の測定
上記調製されたマルチブロックコポリマー溶液の癒着防止効果を調べるために、動物モデルとしてＳＤラットを用いた動物実験を行い、癒着度を確認した。用いたラットは６週齢以上のものであり、これらを１６〜２２℃の温度と約５０〜７０％の相対湿度が維持された環境において別に飼育した。ラットを麻酔した後、麻酔されたラットの腹部を切開し、メスを用いて腹壁の表皮部分に人為的に１．５ｃｍ×１．５ｃｍの創傷を設け、この創傷に接触している盲腸に表皮が僅かに剥がれる程度に創傷をつけた後、手術用の縫合糸により創傷を設けた個所を縫合した。その縫合部位に上記において調製したマルチブロックコポリマー溶液を濃度によって０．５〜５ｍＬの量でコーティングした後、７日目の組織の癒着度とラットの体重を測定した。いかなる溶液も塗らずに処置したものを対照群として、癒着防止効果の程度を比較した。
【００７７】
組織癒着度は、次の方法を用いて評価した［Ｒｏｄｇｅｒｓら（１９９０）］。
＊＊：腱の癒着度を評価するための半定量的な評価尺度
１：癒着が観察されない
２：分離できる膜状の癒着
３：分離できない僅かな癒着
４：中間程度の癒着（創傷部位の３５〜６０％の癒着）
５：激しい癒着（創傷部位の６０％を超える部位の癒着）
【００７８】
（１）調製例１のマルチブロックコポリマー（ＭＢＰ−３６）を含む溶液
上記調製例１において合成したマルチブロックコポリマーＭＢＰ−３６を、生理食塩水に溶解させ、次の表３に示す濃度の溶液を調製して癒着度を測定し、その結果を表３及び図１２〜１４に示した。ポリマーで処置していない対照群の場合、癒着を引き起こした腹部と盲腸に激しい癒着があることを確認することができた（図１１）のに対し、本発明のマルチブロックコポリマーは、改善された癒着防止結果が得られた（図１２〜１４）。低濃度においては一部癒着防止効果が得られたものの、５％以上の濃度においては癒着が１００％防止された。
【００７９】
【表３】
0005479739.tif 000004
【００８０】
（２）調製例４のマルチブロックコポリマーＭＢＰ−５３を含む溶液
上記調製例４において調製されたマルチブロックコポリマーＭＢＰ−５３を、生理食塩水に溶解させ、次の表４に示す濃度の溶液を調製し、そして癒着度を測定し、その結果を表４及び図１６〜２０に示した（図１６（１％）、図１７（３％）、図１８（５％）、図１９（７％）及び図２０（１０％））。マルチブロックコポリマーＭＢＰ−５３は、１０％以上の濃度で癒着を１００％防止することができ、残余のＭＢＰ−５３は観察されず、適用されたＭＢＰ−５３がいずれも吸収されていることが分かり（図２０）、そして低濃度においても癒着防止効果が観察された。
【００８１】
【表４】
0005479739.tif 000005
【００８２】
（３）調製例８のマルチブロックコポリマーＭＢＰ−７７を含むエタノール含有水溶液
上記調製例８において調製されたマルチブロックコポリマーＭＢＰ−７７を、表５の組成に従ってエタノール及び蒸留水の混合溶媒に溶解させた後、癒着度を測定し、その結果を表５に示した。混合溶媒に溶解されたＭＢＰ−７７は、１００％の癒着防止効果を示し、全般的に癒着を防ぐ可能性を示した。さらに、エタノールの含有率が高くなると、処置の際に溶液を取り扱いが容易となった。
【００８３】
【表５】
0005479739.tif 000006
【００８４】
比較例１：ポロキサマー４０７溶液の調製
ポロキサマー４０７を次の生理食塩水に溶解させ、次の表６に示す濃度の溶液を調製した。
【００８５】
【表６】
0005479739.tif 000007
【００８６】
上記のポロキサマー４０７含有溶液を用いた動物試験から得られた癒着防止評価の結果を図２１に示す。図２１から明らかなように、ポロキサマー４０７溶液を用いて動物を処置した際に、ポロキサマー４０７溶液は、ゲルとは異なる低粘度のために腹壁内で動かないようにすることができず、水のように流れて、そして所定の位置に保持されることができず、そして重要なことには、ポロキサマー４０７溶液は、癒着防止効果を示さなかった。
【００８７】
比較例２：カルボキシルメチルセルロースを添加したマルチブロックコポリマー溶液の調製
上記調製例１において調製されたマルチブロックコポリマーＭＢＰ−３６を、生理食塩水に溶解させ、カルボキシルメチルセルロース（ＣＭＣ）を１重量％添加して、次の表７に示す濃度の溶液を調製した。
【００８８】
【表７】
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【００８９】
実施例２の方法に従って、上記の溶液を用いて、ラット内の癒着度を評価し、そして結果を表８に示す。
【００９０】
【表８】
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【００９１】
調製例１で調製されたマルチブロックコポリマーＭＢＰ−３６と、生体接着性に優れていると報告されているカルボキシメチルセルロースとを生理食塩水に溶解させ、ＭＢＰ−３６の濃度が５及び１０重量％であり、カルボキシルメチルセルロースの濃度が１重量％である溶液を調製した後、実施例２で用いられたのと同一の方法に従って、ラット内の癒着防止効果を評価し、そしてその結果を図１５に示した。少量のカルボキシルメチルセルロースを添加すると、部分的に癒着防止効果が観察されるが、少量のカルボキシルメチルセルロースは、脾臓が非常に肥大化する副作用を有し、そして何匹かの動物が死亡した。このような結果により、カルボキシルメチルセルロースが、いくつかの異物反応を誘起することが提示される。
【００９２】
実施例３．癒着防止溶液で処置した動物の体重変化
本発明の癒着防止用組成物の有効性を検証するための別の試験として、実施例２（１）及び（２）と同一の溶液と方法を用いて処置したラットの体重を１週間観察した結果を図２２（ＭＢＰ−３６）及び図２３（ＭＢＰ−５３）に示す。対照として、溶液で処置していないものを用いた。本発明の癒着防止用組成物で処置した動物の体重が、対照と同様に安定して増加し、そしてこれは、本発明の癒着防止用組成物が生体適合性を有し、且つ生体に安全であることを示唆している。
【００９３】
本発明のポリマーは、体温によりゲル化し、そして一定期間臓器内に安全に保持され、癒着防止剤としてはたらき、そして本発明のポリマーは、体内に吸収又は分解され、そして生体内で分解された後、分解生成物はまた、体内に容易に吸収され、そして同時に排泄され、分解プロセス中に生じた物質が、界面活性剤として癒着を防止するようにはたらく。また、生体内における異物感が最小化され、そして手術の際及び／又は手術後に、スプレー又はコーティングすることにより創傷部位に局所的に適用することができるので、取り扱いが簡便であり、そして便利である。
【図面の簡単な説明】
【００９４】
【図１】図１の（ａ）は、ポロキサマー４０７の1Ｈ−ＮＭＲスペクトルを示すグラフであり、（ｂ）は、調製例１のマルチブロックコポリマーがサクシニル基により連結されていることを1Ｈ−ＮＭＲスペクトルで示すグラフである。
【図２】図２は、ポロキサマー４０７を、ＴＭＳ−Ｃｌ／ピリジンで処理した後の1Ｈ−ＮＭＲスペクトルである。
【図３】図３は、ポロキサマー４０７の末端をコハク酸で置換した後、ＴＭＳ−Ｃｌ／ピリジンで処理した後の1Ｈ−ＮＭＲスペクトルである。
【００９５】
【図４】図４は、調製例１のマルチブロックコポリマーを、ＴＭＳ−Ｃｌ／ピリジンで処理した後の1Ｈ−ＮＭＲスペクトルである。
【図５】図５は、ブルックフィールド粘度計による、ポロキサマー４０７の粘度測定結果を示すグラフである。
【図６】図６は、ブルックフィールド粘度計による、本発明の調製例１で調製されたＭＢＰ−３６の粘度測定結果を示すグラフである。
【００９６】
【図７】図７は、ブルックフィールド粘度計による、本発明の調製例５で調製されたＭＢＰ−２９の粘度測定結果を示すグラフである。
【図８】図８は、ブルックフィールド粘度計による、本発明の調製例６で調製されたＭＢＰ−２２の粘度測定結果を示すグラフである。
【図９】図９は、ブルックフィールド粘度計による、本発明の調製例７で調製されたＭＢＰ−４２の粘度測定結果を示すグラフである。
【００９７】
【図１０】図１０は、ブルックフィールド粘度計による、混合溶媒のエタノール濃度によるＭＢＰ−７７の粘度測定結果を示すグラフである。
【図１１】図１１は、手術後に処置を行わなかった対照群における、手術後７日の癒着を示す写真である。
【図１２】図１２は、３重量％の量において、本発明の調製例１で調製されたＭＢＰ−３６で処置した場合における手術後７日の癒着を示す写真である。
【００９８】
【図１３】図１３は、５重量％の量において、本発明の調製例１で調製されたＭＢＰ−３６で処置した場合における手術後７日の癒着を示す写真である。
【図１４】図１４は、７重量％の量において、本発明の調製例１で調製されたＭＢＰ−３６で処置した場合における手術後７日の癒着を示す写真である。
【図１５】図１５は、カルボキシルメチルセルロースを添加した、本発明の調製例１において調製されたＭＢＰ−３６の溶液で処置した場合における癒着を示す写真である。
【００９９】
【図１６】図１６は、１重量％の量において、本発明の調製例４で調製されたＭＢＰ−５３で処置した場合における癒着を示す写真である。
【図１７】図１７は、３重量％の量において、本発明の調製例４で調製されたＭＢＰ−５３で処置した場合における癒着を示す写真である。
【図１８】図１８は、５重量％の量において、本発明の調製例４で調製されたＭＢＰ−５３で処置した場合における癒着を示す写真である。
【０１００】
【図１９】図１９は、７重量％の量において、本発明の調製例４で調製されたＭＢＰ−５３で処置した場合における癒着を示す写真である。
【図２０】図２０は、１０重量％の量において、本発明の調製例４で調製されたＭＢＰ−５３で処置した場合における癒着状態を示す写真である。
【図２１】図２１は、ポロキサマーＦ−４０７溶液で処置した場合における癒着を示す写真である。
【０１０１】
【図２２】図２２は、本発明の調製例１で調製されたＭＢＰ−３６含有癒着防止剤で処置された動物における、手術後７日の体重変化を示すグラフである。
【図２３】図２３は、本発明の調製例４で調製されたＭＢＰ−５３含有癒着防止剤で処置された動物における、手術後７日の体重変化を示すグラフである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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