(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
単離された完全なヒトモノクローナル抗ヒトＲＡＮＴＥＳ抗体またはその抗原結合断片であって、ここで、前記抗体には：
（ａ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ１領域；
配列番号９のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ２領域；
配列番号２０のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ３領域；
配列番号１４のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ１領域；
配列番号１５のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ２領域；および
配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ３領域；
または、
（ｂ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ１領域；
配列番号９のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ２領域；
配列番号１０のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ３領域；
配列番号１４のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ１領域；
配列番号１５のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ２領域；および
配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ３領域；
または、
（ｃ）配列番号２８のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ１領域；
配列番号２９のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ２領域；
配列番号３０のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ３領域；
配列番号３４のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ１領域；
配列番号３５のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ２領域；および
配列番号３６のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ３領域；
が含まれており、ここで、該抗体またはその抗原結合断片はＲＡＮＴＥＳに結合する、単離された完全なヒトモノクローナル抗ヒトＲＡＮＴＥＳ抗体またはその抗原結合断片。
【請求項２】
請求項１に記載の抗体またはその抗原結合断片であって、ここで、
（ａ）前記抗体がＩｇＧアイソタイプであるか、または、
（ｂ）前記抗体がＩｇＧ１アイソタイプである、
抗体またはその抗原結合断片。
【請求項３】
請求項１に記載の抗体またはその抗原結合断片であって、ここで、該抗体が、配列番号８のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ１領域；配列番号９のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ２領域；配列番号２０のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ３領域；配列番号１４のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ１領域；配列番号１５のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ２領域；および、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ３領域を含み、ここで、該抗体が配列番号１８のアミノ酸配列を含む重鎖可変配列および配列番号４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変配列を含む、抗体またはその抗原結合断片。
【請求項４】
請求項１に記載の抗体またはその抗原結合断片であって、ここで、該抗体が、配列番号８のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ１領域；配列番号９のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ２領域；配列番号１０のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ３領域；配列番号１４のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ１領域；配列番号１５のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ２領域；および、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ３領域を含み、ここで、該抗体が配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖可変配列および配列番号４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変配列を含む、抗体またはその抗原結合断片。
【請求項５】
請求項１に記載の抗体またはその抗原結合断片であって、ここで、該抗体が、配列番号２８のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ１領域；配列番号２９のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ２領域；配列番号３０のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ３領域；配列番号３４のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ１領域；配列番号３５のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ２領域；および、配列番号３６のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ３領域を含み、ここで、該抗体が配列番号２２のアミノ酸配列を含む重鎖可変配列および配列番号２４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変配列を含む、抗体またはその抗原結合断片。
【請求項６】
前記抗体が配列番号２３８のアミノ酸配列を含む重鎖配列および配列番号２５４のアミノ酸配列を含む軽鎖配列を含む、請求項３に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項７】
前記抗体が配列番号２６３のアミノ酸配列を含む重鎖配列および配列番号２６４のアミノ酸配列を含む軽鎖配列を含む、請求項４に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項８】
前記抗体が配列番号１８６のアミノ酸配列を含む重鎖配列および配列番号１８７のアミノ酸配列を含む軽鎖配列を含む、請求項５に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項９】
請求項１〜８のいずれか一項に記載の抗原結合断片であって、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、ｓｃＦｖ、単鎖抗体、二重特異的抗体、および、ヘテロ結合体抗体から選択される、抗原結合断片。
【請求項１０】
請求項１〜９のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片、および、担体を含む薬学的組成物。
【請求項１１】
自己免疫疾患または炎症性障害の症状を緩和するために使用するための組成物であって、被験体の自己免疫疾患または炎症性障害の症状を緩和するために十分な量の、請求項１〜８のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片を含む、組成物。
【請求項１２】
前記被験体がヒトである、請求項１１に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連する出願）
本願は、２００７年８月２日に出願された米国仮特許出願第６０／９６３，２７１号の利益を主張する。米国仮特許出願第６０／９６３，２７１号の内容は、その全てが参考として本明細書に援用される。
（発明の分野）
本発明は、一般的には、ＲＡＮＴＥＳ（正常なＴ細胞が発現した活性化に応じて調整され、分泌される（Ｒｅｇｕｌａｔｅｄ  ｕｐｏｎ  Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ，Ｎｏｒｍａｌ  Ｔ−ｃｅｌｌ  Ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ，ａｎｄ  Ｓｅｃｒｅｔｅｄ））に結合する完全なヒトモノクローナル抗体、ならびにそれを使用する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
ＲＡＮＴＥＳ（正常なＴ細胞が発現した活性化に応じて調整され、分泌される（Ｒｅｇｕｌａｔｅｄ  ｕｐｏｎ  Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ，Ｎｏｒｍａｌ  Ｔ−ｃｅｌｌ  Ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ，ａｎｄ  Ｓｅｃｒｅｔｅｄ）、ＣＣＬ５）はケモカインであり、これは、好酸球、単球、およびリンパ球についての化学誘引物質である。
【０００３】
ＲＡＮＴＥＳの高い発現レベルは、様々な疾患および疾病に関係している。したがって、ＲＡＮＴＥＳ活性を標的化する治療薬が求められている。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００４】
本発明により、正常なＴ細胞が発現した活性化に応じて調整され、分泌される（Ｒｅｇｕｌａｔｅｄ  ｕｐｏｎ  Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ，Ｎｏｒｍａｌ  Ｔ−ｃｅｌｌ  Ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ，ａｎｄ  Ｓｅｃｒｅｔｅｄ）（ＲＡＮＴＥＳ、本明細書中ではＣＣＬ５とも言われる）に特異的に結合するモノクローナル抗体（例えば、完全なヒトモノクローナル抗体）が提供される。例示的なモノクローナル抗体としては、１Ｄ９、１Ｅ４、Ｃ８、３Ｅ７、４Ｄ８、５Ｅ１、６Ａ８、７Ｂ５、ＣＧ１１、ＢＧ１１、Ａ９、Ｅ６、Ｈ６、Ｇ２、Ｅ１０、Ｃ１０、２Ｄ１、Ａ５、Ｈ１１、Ｄ１、および／またはＥ７と本明細書中で呼ばれる抗体が挙げられる。あるいは、モノクローナル抗体は、１Ｄ９、１Ｅ４、Ｃ８、３Ｅ７、４Ｄ８、５Ｅ１、６Ａ８、７Ｂ５、ＣＧ１１、ＢＧ１１、Ａ９、Ｅ６、Ｈ６、Ｇ２、Ｅ１０、Ｃ１０、２Ｄ１、Ａ５、Ｈ１１、Ｄ１、および／またはＥ７と同じエピトープに結合する抗体である。これらの抗体はそれぞれ、本明細書中ではｈｕＲＡＮＴＥＳ抗体と呼ばれる。ｈｕＲＡＮＴＥＳ抗体には、完全なヒトモノクローナル抗体、ならびにヒト化モノクローナル抗体およびキメラ抗体が含まれる。
【０００５】
本発明のｈｕＲＡＮＴＥＳ抗体にはまた、配列番号２、１８、２２、３８、４８、５２、５６、６０、６８、８４、１００、１１６、１３２、１４８、１６４、１８０、２００、２１６、２３２、もしくは２４８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上同一である重鎖可変アミノ酸配列、および／あるいは、配列番号４、２４、４０、６２、７０、８６、１０２、１１８、１３４、１５０、１６６、１８２、１９６、２０２、２１８、２３４、または２５０のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上同一である軽鎖可変アミノ酸配列を含む抗体も含まれる。
【０００６】
好ましくは、３つの重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）には、（ｉ）配列番号８、２８、４４、７４、９０、１０６、１２２、１３８、１５４、および２２２より選択されるＶＨ  ＣＤＲ１配列；（ｉｉ）配列番号９、２９、４５、７５、９１、１０７、１２３、１３９、１５５、２０７、２２３、２３９、および２５５より選択されるＶＨ  ＣＤＲ２配列；（ｉｉｉ）配列番号１０、２０、３０、４６、５０、５４、５８、６４、７６、９２、１０８、１２４、１４０、１５６、１６９、１８８、２０８、２２４、および２４０より選択されるＶＨ  ＣＤＲ３配列のそれぞれに対して、少なくとも９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上同一であるアミノ酸配列；ならびに、（ｉｖ）配列番号１４、３４、７７、９６、１１２、１２８、１４４、１６０、１７６、１９０、１９２、２１２、２２８、および２４４より選択されるＶＬ  ＣＤＲ１配列；（ｖ）配列番号１５、３５、８１、９７、１１３、１２９、１４５、１６１、１７７、１９１、１９３、２１３、２２９、および２４５より選択されるＶＬ  ＣＤＲ２配列；および（ｖｉ）配列番号１６、３６、６６、８２、９８、１１４、１３０、１４６、１６２、１７８、１９４、２１４、２３０、２３５および２４６より選択されるＶＬ  ＣＤＲ３配列のそれぞれに対して、少なくとも９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上同一であるアミノ酸配列を含む３つのＣＤＲを持つ軽鎖が含まれる。
【０００７】
好ましくは、ｈｕＲＡＮＴＥＳ抗体はＩｇＧアイソタイプに形式が合わせられる。さらに好ましくは、ｈｕＲＡＮＴＥＳ抗体は、ＩｇＧ１アイソタイプに形式が合わせられる。
【０００８】
例示的なＩｇＧ１に形式が合わせられた抗体は、以下に示される重鎖配列と軽鎖配列を含むＩｇＧ１に形式が合わせられた１Ｄ９、１Ｅ４、およびＣ８抗体であり、ＣＤＲ配列は四角で囲って示される：
【０００９】
【化１】
0005624884.tif 000002
【００１０】
【化２】
0005624884.tif 000003
本明細書中に記載されるｈｕＲＡＮＴＥＳ抗体に最も近い生殖系列細胞が表１に以下に示される：
【００１１】
【表１】
0005624884.tif 000004
本発明によってはまた、ヒトＲＡＮＴＥＳがグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）に結合される（すなわち、ＧＡＧの状況においてはヒトＲＡＮＴＥＳに結合する）と、ヒトＲＡＮＴＥＳに結合する抗体も提供される。好ましい実施形態では、これらの抗体には、（ａ）配列番号８、２８、４４、９０、１０６、１２２、または１５４のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ１領域；（ｂ）配列番号９、２９、４５、９１、１０７、１２３、１５５、または２０７のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ２領域；（ｃ）配列番号１０、２０、３０、６４、９２、１２４、１５６、１８８、または２０８のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ３領域、（ｄ）配列番号１４、３４、９６、１２８、１６０、１７６、１９２、または２１２のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ１領域；（ｅ）配列番号１５、３５、９７、１２９、１６１、１７７、１９３、または２１３のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ２領域；ならびに、（ｆ）配列番号１６、３６、９８、１３０、１６２、１７８、１９４、または２１４のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ３領域が含まれる。
いくつかの実施形態では、抗体は、モノクローナル抗体またはその抗原結合断片である。いくつかの実施形態では、抗体は完全なヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合断片である。いくつかの実施形態では、抗体は、例えば、ＩｇＧ１アイソタイプのようなＩｇＧアイソタイプである。
【００１２】
本発明によってはまた、ヒトＲＡＮＴＥＳのアンタゴニスト分子、具体的には、ヒトＲＡＮＴＥＳの成熟アミノ酸配列（例えば、図６に示される配列番号１７０）の少なくともアミノ酸残基１６〜１８を含む、ヒトＲＡＮＴＥＳタンパク質、ポリペプチド、および／またはペプチドのアンタゴニストも提供される。抗ヒトＲＡＮＴＥＳアンタゴニストは、例えば、ＣＣＲ１、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、および／もしくはＣＣＲ５のような受容体に対するＲＡＮＴＥＳの結合、またはグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）に対するＲＡＮＴＥＳの結合のような、ヒトＲＡＮＴＥＳタンパク質の生物学的機能を調節する（例えば、部分的もしくは完全に、低下させる、阻害する、または別の方法で妨害する）ために、ヒトＲＡＮＴＥＳタンパク質、ポリペプチド、ならびに／あるいはペプチドに結合するか、あるいは別の方法でそれと相互作用する。
【００１３】
好ましい実施形態では、ヒトＲＡＮＴＥＳＥの１つ以上の生物学的機能を調節するためにヒトＲＡＮＴＥＳタンパク質に結合するかまたは別の方法でそれと相互作用する抗ヒトＲＡＮＴＥＳアンタゴニストの能力は、配列番号１７０のような成熟ヒトＲＡＮＴＥＳ配列のアミノ酸残基１６〜１８の存在に依存する。この実施形態では、アンタゴニスト分子は、配列番号１７０のアミノ酸残基１６〜１８を欠いているヒトＲＡＮＴＥＳポリペプチドには結合しない。
【００１４】
本明細書中で提供される抗ＲＡＮＴＥＳアンタゴニスト分子は、ヒトＲＡＮＴＥＳに結合するか、または別の方法でそれと相互作用すると、ＲＡＮＴＥＳの発現または活性を完全にまたは部分的に、低下させるかあるいは別の方法で調節する。ＲＡＮＴＥＳの生物学的機能の低下または調節は、アンタゴニストとヒトＲＡＮＴＥＳタンパク質、ポリペプチド、および／またはペプチドとの間での相互作用に応じて完全なものであるか、あるいは部分的なものである。抗ｈｕＲＡＮＴＥＳアンタゴニストは、抗ｈｕＲＡＮＴＥＳアンタゴニストの存在下でのＲＡＮＴＥＳの発現または活性のレベルが、相互作用（例えば、本明細書中に記載される抗ｈｕＲＡＮＴＥＳアンタゴニストとの結合）していない場合のＲＡＮＴＥＳの発現または活性のレベルと比較して少なくとも９５％、例えば、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％低下する場合には、ＲＡＮＴＥＳの発現あるいは活性を完全に阻害すると見なされる。抗ｈｕＲＡＮＴＥＳアンタゴニストは、抗ｈｕＲＡＮＴＥＳアンタゴニストの存在下でのＲＡＮＴＥＳの発現または活性のレベルが、相互作用（例えば、本明細書中に記載される抗ｈｕＲＡＮＴＥＳアンタゴニストとの結合）していない場合のＲＡＮＴＥＳの発現または活性のレベルと比較して、９５％未満、例えば、１０％、２０％、２５％、３０％、４０％、５０％、６０％、７５％、８０％、８５％、または９０％に低下する場合には、ＲＡＮＴＥＳの発現あるいは活性を部分的に阻害すると見なされる。
【００１５】
いくつかの実施形態では、抗ＲＡＮＴＥＳアンタゴニスト分子は、低分子阻害剤；ポリペプチド、ペプチド、ＲＡＮＴＥＳ由来突然変異体ポリペプチド、ＲＡＮＴＥＳ由来ポリペプチド変異体、ＲＡＮＴＥＳ受容体由来突然変異体ポリペプチド（例えば、突然変異型ＣＣＲ１、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、もしくはＣＣＲ５タンパク質、ポリペプチド、またはペプチド）、ＲＡＮＴＥＳ受容体由来ポリペプチド変異体（例えば、ＣＣＲ１、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、もしくはＣＣＲ５変異体ペプチド、ポリペプチド、またはタンパク質）、ならびに核酸をベースとするアンタゴニストより選択される。
【００１６】
いくつかの実施形態では、抗ＲＡＮＴＥＳアンタゴニスト分子は、単離されたモノクローナル抗ヒトＲＡＮＴＥＳ抗体またはその抗原結合断片である。好ましくは、抗体（またはその抗原結合断片）は、ヒトＲＡＮＴＥＳの成熟アミノ酸配列（例えば、図６に示される配列番号１７０）のアミノ酸残基１６〜１８に結合する。いくつかの実施形態では、抗ＲＡＮＴＥＳ抗体は、完全なヒトモノクローナル抗ヒトＲＡＮＴＥＳ抗体またはその抗原結合断片である。いくつかの実施形態では、抗体は、ＩｇＧ１アイソタイプのようなＩｇＧアイソタイプである。
【００１７】
いくつかの実施形態では、抗ＲＡＮＴＥＳアンタゴニスト分子は、突然変異型ＲＡＮＴＥＳポリペプチドまたはＲＡＮＴＥＳ由来変異体ポリペプチドまたは突然変異型ＲＡＮＴＥＳ受容体（例えば、ＣＣＲ１、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、およびＣＣＲ５より選択される）、またはＲＡＮＴＥＳ受容体ポリペプチド（例えば、ＣＣＲ１、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、もしくはＣＣＲ５）の変異体であり、これは、ＣＣＲ１、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、およびＣＣＲ５より選択される受容体に結合するＲＡＮＴＥＳの能力、グリコサミノグリカンに結合するＲＡＮＴＥＳの能力、およびオリゴマーを形成するＲＡＮＴＥＳの能力より選択される、ＲＡＮＴＥＳの活性を調節する。
【００１８】
いくつかの実施形態では、抗ＲＡＮＴＥＳアンタゴニスト分子は、例えば、タンパク質、ポリペプチド、低分子、炭水化物、ペプチド、もしくはワトソンクリック塩基対合以外の相互作用による任意の他の生物学的分子のような標的と相互作用できるアプタマーまたは他のオリゴヌクレオチドのような核酸をベースとするアンタゴニストである。
【００１９】
本発明によってはまた、被験体の虚血、虚血および／または再潅流損傷に伴う臨床的適応症の症状を処置する、予防する、緩和する、あるいは別の方法で軽くする方法も提供される。本発明は、ＲＡＮＴＥＳの発現または活性の調節、具体的には阻害または他の低減が、虚血および再潅流についての動物モデルにおいて虚血および／または再潅流損傷を阻害することの発見に基づく。したがって、本発明により、被験体の中、体組織中、および／もしくは移植される組織もしくは臓器中の虚血、虚血に伴う臨床的適応症、再潅流損傷を予防するかまたは阻害する方法が提供される。本明細書中で提供される方法においては、処置される被験体には、ＲＡＮＴＥＳのアンタゴニストが投与される。同様に、移植される臓器の処置においては、臓器またはその一部が、ＲＡＮＴＥＳのアンタゴニストと接触させられる。本明細書中で提供される方法は、インビボで、そしてエキソビボで有用である。
【００２０】
ＲＡＮＴＥＳの適切なアンタゴニストとしては、ＲＡＮＴＥＳの発現および／もしくは活性を阻害する、中和する、または別の方法で妨害する任意の抗体あるいはその断片、例えば、本明細書中に提供されるｈｕＲＡＮＴＥＳ抗体；低分子阻害剤；タンパク質、ポリペプチド、ペプチド、；タンパク質をベースとするアンタゴニスト、ポリペプチドをベースとするアンタゴニスト、および／またはペプチドをベースとするアンタゴニスト（例えば、ＲＡＮＴＥ突然変異体および／または他のＲＡＮＴＥＳ変異体）、および／またはＲＡＮＴＥＳ受容体をベースとする突然変異体および／または変異体（例えば、ＣＣＲ１、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、もしくはＣＣＲ５ポリペプチドの突然変異体バージョンまたは変異体バージョン）；核酸をベースとするアンタゴニスト（例えば、ｓｉＲＮＡおよび／またはアンチセンスＲＮＡ、および／またはアプタマー）；ならびに／あるいは、ＲＡＮＴＥＳの発現および／もしくは活性を阻害する、中和する、または別の方法で妨害するそれらの断片が挙げられる。
【００２１】
ＲＡＮＴＥＳのポリペプチドをベースとするアンタゴニストの例としては、ＲＡＮＴＥＳの発現および／もしくは活性を阻害する、中和する、または別の方法で妨害するＲＡＮＴＥＳの改変型変異体が挙げられる。例えば、グリコサミノグリカン（ＧＡＧ）に結合するＲＡＮＴＥＳの能力を低下させることによってＲＡＮＴＥＳをアンタゴナイズすることが公知であるＲＡＮＴＥＳの変異体としては、ＰＣＴ公開番号ＷＯ２００４／０６２６８８；同ＷＯ２００３／０８４４５６２；同ＷＯ２００３／０５１９２１；同ＷＯ２００２／０２８４１９；同ＷＯ２０００／０１６７９６、および同ＷＯ１９９６／０１７９３５（これらはそれぞれ、その全体が引用により本明細書中に組み入れられる）に記載されているＲＡＮＴＥＳ突然変異体および変異体が挙げられる。
【００２２】
ＲＡＮＴＥＳの核酸をベースとするアンタゴニストの例としては、ＲＡＮＴＥＳ遺伝子の発現産物が、５’非翻訳（ＵＴ）領域、ＯＲＦ、または３’ＵＴ領域を含むＲＡＮＴＥＳ遺伝子転写物のセグメント（例えば、少なくとも１９〜２５ヌクレオチド長）に相補的である、特異的二本鎖ＲＡＮＴＥＳ由来ｓｉＲＮＡヌクレオチド配列によって標的化される、低分子緩衝ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）に媒介される遺伝子サイレンシングが挙げられる。例えば、ＰＣＴ出願番号ＷＯ００／４４８９５、同ＷＯ９９／３２６１９、同ＷＯ０１／７５１６４、同ＷＯ０１／９２５１３、同ＷＯ０１／２９０５８、同ＷＯ０１／８９３０４、同ＷＯ０２／１６６２０、および同ＷＯ０２／２９８５８（それぞれ、その全体が引用により本明細書中に組み入れられる）を参照のこと。ＲＡＮＴＥＳの核酸をベースとするアンタゴニストにはまた、アンチセンス核酸も含まれる。アンチセンス核酸には、ＲＡＮＴＥＳタンパク質またはその断片をコードする「センス」核酸に相補的なヌクレオチド配列が含まれる。例えば、アンチセンスＲＡＮＴＥＳアンタゴニストには、ＲＡＮＴＥＳをコードする鎖の少なくとも約１０、２５、５０、１００、２５０、もしくは５００ヌクレオチド、または全体に相補的な配列、あるいはその一部だけが含まれる。
【００２３】
好ましくは、ＲＡＮＴＥＳアンタゴニストは、対応する受容体（例えば、ＣＣＲ１、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、および／またはＣＣＲ５）に結合するＲＡＮＴＥＳの能力、グリコサミノグリカンに結合するＲＡＮＴＥＳの能力、および／またはオリゴマーを形成するＲＡＮＴＥＳの能力より選択されるＲＡＮＴＥＳの機能を部分的あるいは完全に阻害する。適切なＲＡＮＴＥＳアンタゴニストは、例えば、以下の実施例に提供されるアッセイとモデルを使用して同定される。
【００２４】
抗ｈｕＲＡＮＴＥＳアンタゴニストは、抗ｈｕＲＡＮＴＥＳアンタゴニストの存在下でのＲＡＮＴＥＳの発現または活性のレベルが、相互作用（例えば、本明細書中に記載される抗ｈｕＲＡＮＴＥＳアンタゴニストとの結合）していない場合のＲＡＮＴＥＳの発現または活性のレベルと比較して、少なくとも９５％、例えば、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％低下する場合には、ＲＡＮＴＥＳの発現または活性を完全に阻害すると見なされる。抗ｈｕＲＡＮＴＥＳアンタゴニストは、抗ｈｕＲＡＮＴＥＳアンタゴニストの存在下でのＲＡＮＴＥＳの発現または活性のレベルが、相互作用（例えば、本明細書中に記載される抗ｈｕＲＡＮＴＥＳアンタゴニストとの結合）していない場合のＲＡＮＴＥＳの発現または活性のレベルと比較して、９５％未満、例えば、１０％、２０％、２５％、３０％、４０％、５０％、６０％、７５％、８０％、８５％、または９０％低下する場合には、ＲＡＮＴＥＳの発現または活性を部分的に阻害すると見なされる。
【００２５】
１つの態様では、本発明により、ＲＡＮＴＥＳアンタゴニスト（例えば、ｈｕＲＡＮＴＥＳ抗体）をそれが必要な被験体に投与することによるか、またはそれが必要な臓器をＲＡＮＴＥＳアンタゴニスト（例えば、ｈｕＲＡＮＴＥＳ抗体）と接触させることにより、虚血または虚血に伴う臨床的適応症の症状を処置する、予防する、あるいは緩和する方法が提供される。処置される虚血としては、心虚血、脳虚血、腎虚血、および関連する虚血性疾患または事象が挙げられる。虚血および再潅流に伴う臨床的適応症としては、例えば、冠動脈疾患、脳血管疾患、心虚血、心筋虚血、腎虚血、および末梢血管疾患が挙げられる。虚血は、アテローム性動脈硬化症、心筋梗塞、一過性脳虚血発作、脳血管障害、破裂性動静脈奇形（ｒｕｐｔｕｒｅｄ  ａｒｔｅｒｉｏｖｅｎｏｕｓ  ｍａｌｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ）、および末梢動脈閉塞性疾患を含む心臓疾患の特徴である。心臓、腎臓、および脳は、中でも、不適切な血液の供給に最も敏感な臓器である。脳組織中の虚血は、例えば、脳卒中または頭部損傷が原因である。ＲＡＮＴＥＳアンタゴニスト（例えば、ｈｕＲＡＮＴＥＳ抗体）の使用もまた、移植前の臓器および／または組織（例えば、心臓、肺、および腎臓を含む）の体外潅流の間に組織の健康状態を最適化するためのプロトコールの一部であると想定される。本明細書中に提供される方法を使用して処置される臓器は、インビボまたはエキソビボで接触させられる。
【００２６】
本明細書中に提供される抗体と組成物は、虚血もしくは虚血に伴う臨床的適応症によって引き起こされる組織損傷または他の損傷の進行を処置する、予防する、あるいは別の方法で遅らせることにおいて有用である。例えば、本発明のｈｕＲＡＮＴＥＳ抗体または他のＲＡＮＴＥＳアンタゴニストは、虚血事象の前、虚血事象の間、虚血事象の後、またはそれらの任意の組み合わせで、それが必要な被験体に投与される。
【００２７】
本明細書中に提供される抗体、ＲＡＮＴＥＳアンタゴニスト、および組成物はまた、虚血期間後に血液の供給が組織部位に回復させられる際に被験体において生じる、再潅流損傷または他の組織損傷の症状を処置する、予防する、あるいは緩和する方法においても有用である。例えば、本発明のＲＡＮＴＥＳアンタゴニスト（例えば、本発明のｈｕＲＡＮＴＥＳ抗体）は、例えば、虚血事象の間、虚血事象の後、または虚血事象の間と後の両方で、それが必要な被験体に投与される。いくつかの場合には、虚血期間後の血流の回復は、虚血よりも大きな損傷となる可能性がある。酸素の再導入は、損傷しているフリーラジカルのさらに多量の生産を引き起こし、それにより再潅流損傷を生じる。再潅流損傷によっては、組織損傷および／または壊死が大幅に加速される可能性がある。処置されるかまたは予防される再潅流損傷としては、損傷した組織（単数または複数）の中での炎症応答によって引き起こされる損傷が挙げられる。
【００２８】
移植される被験体または臓器は、虚血、虚血関連疾病、および／または再潅流関連組織損傷に罹患しているか、あるいはそれらを発症する素因がある。好ましくは、被験体は哺乳類であり、より好ましくは、被験体はヒトである。
【００２９】
別の態様では、本発明により、ｈｕＲＡＮＴＥＳ抗体を被験体に投与することによる、免疫関連疾病の症状を処置する、予防する、または緩和する方法が提供される。例えば、ｈｕＲＡＮＴＥＳ抗体は、自己免疫疾患または炎症性の疾病に伴う症状を処置する、予防する、または緩和するために使用される。状況に応じて、被験体には、第２の薬剤（例えば、インターロイキン１（ＩＬ−１）、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＬ−２０、ＩＬ−２１、ＩＬ−２２、ＩＬ−２３、ＩＬ−２７、ＩＬ−３１、ＭＩＰ１α、ＭＩＰ１β、ＩＰ−１０、ＭＣＰｌ、ＩＴＡＣ、ＭＩＧ、ＳＤＦ、およびフラクタルカインのようなタンパク質のリガンドもしくは受容体を認識する、抗サイトカイン試薬、抗ケモカイン試薬、抗サイトカイン試薬、または抗ケモカイン受容体であるが、これらに限定されない）が投与される。
【００３０】
被験体は、免疫関連疾病（例えば、自己免疫疾患または炎症性疾患）に罹患しているか、あるいはそれらを発症する素因がある。好ましくは、被験体は哺乳類であり、より好ましくは、被験体はヒトである。
本発明は、例えば以下の項目を提供する。
（項目１）
ヒトＲＡＮＴＥＳの単離されたアンタゴニスト分子であって、ここで、前記アンタゴニスト分子は、配列番号１７０の少なくともアミノ酸残基１６〜１８を含むヒトＲＡＮＴＥＳポリペプチドに結合し、前記アンタゴニストと前記ヒトＲＡＮＴＥＳポリペプチドとの間で相互作用が起こるとＲＡＮＴＥＳ活性の生物学的活性を低下させる、単離されたアンタゴニスト分子。
（項目２）
前記アンタゴニスト分子が、配列番号１７０のアミノ酸残基１６〜１８を欠いているヒトＲＡＮＴＥＳポリペプチドには結合しない、項目１に記載のアンタゴニスト分子。
（項目３）
前記アンタゴニスト分子が、低分子阻害剤；ポリペプチド、ペプチド、および核酸をベースとするアンタゴニストより選択される、項目１に記載のアンタゴニスト分子。
（項目４）
前記アンタゴニストが、単離されたモノクローナル抗ヒトＲＡＮＴＥＳ抗体またはその抗原結合断片であり、ここで、前記抗体またはその抗原結合断片は、成熟ヒトＲＡＮＴＥＳポリペプチド上のエピトープに結合し、前記エピトープには配列番号１７０のアミノ酸残基１６〜１８が含まれている、項目１に記載のアンタゴニスト分子。
（項目５）
前記モノクローナル抗体が完全なヒトモノクローナル抗ヒトＲＡＮＴＥＳ抗体またはその抗原結合断片である、項目４に記載のアンタゴニスト分子。
（項目６）
前記抗体がＩｇＧ１アイソタイプである、項目５に記載のアンタゴニスト分子。
（項目７）
単離された完全なヒトモノクローナル抗ヒトＲＡＮＴＥＳ抗体またはその断片であって、ここで、前記抗体には：
（ａ）配列番号８、２８、４４、７４、９０、１０６、１２２、１３８、１５４、または２２２のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ１領域；
（ｂ）配列番号９、２９、４５、７５、９１、１０７、１２３、１３９、１５５、２０７、２２３、２３９、または２５５のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ２領域；
（ｃ）配列番号１０、２０、３０、４６、５０、５４、５８、６４、７６、９２、１０８、１２４、１４０、１５６、１８８、２０８、２２４、２４０、および２５６のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ３領域；
（ｄ）配列番号１４、３４、８０、９６、１１２、１２８、１４４、１６０、１７６、１９２、２１２、２２８、２４４、または２６０のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ１領域；
（ｅ）配列番号１５、３５、９７、１１３、１２９、１４５、１６１、１７７、１９３、２１３、２２９、２４５、または２６１のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ２領域；および
（ｆ）配列番号１６、３６、６６、８２、９８、１１４、１３０、１４６、１６２、１７８、１９４、１９８、２１４、２３０、２４６、または２６２のアミノ酸配列を含むＶＬ
ＣＤＲ３領域；
が含まれており、ここでは、前記抗体はＲＡＮＴＥＳに結合する、単離された完全なヒトモノクローナル抗ヒトＲＡＮＴＥＳ抗体またはその断片。
（項目８）
前記抗体がＩｇＧアイソタイプである、項目７に記載の抗体。
（項目９）
前記抗体がＩｇＧ１アイソタイプである、項目７に記載の抗体。
（項目１０）
前記抗体に、配列番号２、１８、２２、３８、４８、５２、５６、６０、６８、８４、１００、１１６、１３２、１４８、１６４、１８０、２００、２１６、２３２、または２４８より選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変配列と、配列番号４、２４、４０、６２、７０、８６、１０２、１１８、１３４、１５０、１６６、１８２、１９６、２０２、２１８、２３４、または２５０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変配列が含まれている、項目７に記載の抗体。
（項目１１）
配列番号２、１８、２２、３８、４８、５２、５６、６０、６８、８４、１００、１１６、１３２、１４８、１６４、１８０、２００、２１６、２３２、または２４８のアミノ酸配列を含む重鎖可変配列と、配列番号４、２４、４０、６２、７０、８６、１０２、１１８、１３４、１５０、１６６、１８２、１９６、２０２、２１８、２３４、または２５０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変配列が含まれている、単離された完全なヒトモノクローナル抗体であって、前記抗体はＲＡＮＴＥＳに結合する、単離された完全なヒトモノクローナル抗体。
（項目１２）
前記抗体がＩｇＧアイソタイプである、項目１１に記載の抗体。
（項目１３）
配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖可変配列と、配列番号４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変配列が含まれている、単離された完全なヒトモノクローナル抗体。
（項目１４）
前記抗体がＩｇＧ１アイソタイプである、項目１３に記載の抗体。
（項目１５）
前記抗体に、配列番号２６３のアミノ酸配列を含む重鎖配列と、配列番号２６４のアミノ酸配列を含む軽鎖配列が含まれている、項目１３に記載の抗体。．
（項目１６）
配列番号１８のアミノ酸配列を含む重鎖可変配列と、配列番号４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変配列が含まれている、単離された完全なヒトモノクローナル抗体。
（項目１７）
前記抗体がＩｇＧ１アイソタイプである、項目１６に記載の抗体。
（項目１８）
前記抗体に、配列番号２３８のアミノ酸配列を含む重鎖配列と、配列番号２５４のアミノ酸配列を含む軽鎖配列が含まれている、項目１６に記載の抗体。
（項目１９）
配列番号２２のアミノ酸配列を含む重鎖可変配列と、配列番号２４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変配列が含まれている、単離された完全なヒトモノクローナル抗体。
（項目２０）
前記抗体がＩｇＧ１アイソタイプである、項目１９に記載の抗体。
（項目２１）
前記抗体に、配列番号１８６のアミノ酸配列を含む重鎖配列と、配列番号１８７のアミノ酸配列を含む軽鎖配列が含まれている、項目１９に記載の抗体。
（項目２２）
前記抗体に、配列番号８のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ１領域；配列番号９のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ２領域、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ３領域；配列番号１４のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ１領域；配列番号１５のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ２領域；および配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ３領域が含まれている、項目７に記載の抗体。
（項目２３）
前記抗体に、配列番号８のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ１領域；配列番号９のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ２領域、配列番号２０のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ３領域；配列番号１４のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ１領域；配列番号１５のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ２領域；および配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ３領域が含まれている、項目７に記載の抗体。
（項目２４）
前記抗体に、配列番号２８のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ１領域；配列番号２９のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ２領域、配列番号３０のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ３領域；配列番号３４のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ１領域；配列番号３５のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ２領域；および配列番号３６のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ３領域が含まれている、項目７に記載の抗体。
（項目２５）
項目１に記載の抗体と、担体が含まれている薬学的組成物。
（項目２６）
ヒトＲＡＮＴＥＳがグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）に結合するとヒトＲＡＮＴＥＳに結合する単離された抗体であって、ここで、前記抗体には：
（ａ）配列番号８、２８、４４、９０、１０６、１２２、または１５４のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ１領域；
（ｂ）配列番号９、２９、４５、９１、１０７、１２３、１５５、または２０７のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ２領域；
（ｃ）配列番号１０、２０、３０、６４、９２、１２４、１５６、１８８、または２０８のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ３領域；
（ｄ）配列番号１４、３４、９６、１２８、１６０、１７６、１９２、または２１２のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ１領域；
（ｅ）配列番号１５、３５、９７、１２９、１６１、１７７、１９３、または２１３のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ２領域；および
（ｆ）配列番号１６、３６、９８、１３０、１６２、１７８、１９４、または２１４のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ３領域；
が含まれており、前記抗体はＧＡＧの状況ではＲＡＮＴＥＳに結合する、単離された抗体。
（項目２７）
前記抗体がモノクローナル抗体またはその抗原結合断片である、項目２６に記載の抗体。
（項目２８）
前記抗体が完全なヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合断片である、項目２６に記載の抗体。
（項目２９）
前記抗体がＩｇＧアイソタイプである、項目２６に記載の抗体。
（項目３０）
前記抗体がＩｇＧ１アイソタイプである、項目２６に記載の抗体。
（項目３１）
被験体の虚血または再潅流損傷に伴う臨床的適応症の症状を緩和する方法であって、前記方法には、被験体の虚血または再潅流損傷に伴う臨床的適応症の症状を緩和するために十分な量のＲＡＮＴＥＳのアンタゴニストを、それが必要な被験体に投与する工程が含まれる、方法。
（項目３２）
前記被験体がヒトである、項目３１に記載の方法。
（項目３３）
前記アンタゴニストがモノクローナル抗体またはその抗原結合断片である、項目３１に記載の方法。
（項目３４）
前記モノクローナル抗体が、項目１〜項目２４または項目２６〜項目３０のいずれか１項に記載の抗体、あるいはそれらの断片である、項目３１に記載の方法。
（項目３５）前記アンタゴニストが、ＣＣＲ１、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、およびＣＣＲ５より選択される受容体に結合するＲＡＮＴＥＳの能力、グリコサミノグリカンに結合するＲＡＮＴＥＳの能力、およびオリゴマーを形成するＲＡＮＴＥＳの能力より選択されるＲＡＮＴＥＳの活性を調節する突然変異型ＲＡＮＴＥＳポリペプチドである、項目３１に記載の方法。
（項目３６）
自己免疫疾患または炎症性障害の症状を緩和する方法であって、前記方法には、被験体の自己免疫疾患または炎症性障害の症状を緩和するために十分な量の、項目７〜項目２４または項目２６〜項目３０のいずれか１項に記載の抗体を、それが必要な被験体に投与する工程が含まれる、方法。
（項目３７）
前記被験体がヒトである、項目３６に記載の方法。
【図面の簡単な説明】
【００３１】
【図１Ａ】図１は、ｈＣＣＲ５と１ｎＭまたは０．２ｎＭの組み換えヒトＲＡＮＴＥＳ（それぞれ、図ＩＡおよびＢ）、ならびに天然のヒトＲＡＮＴＥＳ（図１Ｃ）でトランスフェクトしたＬ１．２細胞を使用した化学走査アッセイにおける抗ｈｕＲＡＮＴＥＳ抗体の活性を示している一連のグラフである。
【図１Ｂ】図１は、ｈＣＣＲ５と１ｎＭまたは０．２ｎＭの組み換えヒトＲＡＮＴＥＳ（それぞれ、図ＩＡおよびＢ）、ならびに天然のヒトＲＡＮＴＥＳ（図１Ｃ）でトランスフェクトしたＬ１．２細胞を使用した化学走査アッセイにおける抗ｈｕＲＡＮＴＥＳ抗体の活性を示している一連のグラフである。
【図１Ｃ】図１は、ｈＣＣＲ５と１ｎＭまたは０．２ｎＭの組み換えヒトＲＡＮＴＥＳ（それぞれ、図ＩＡおよびＢ）、ならびに天然のヒトＲＡＮＴＥＳ（図１Ｃ）でトランスフェクトしたＬ１．２細胞を使用した化学走査アッセイにおける抗ｈｕＲＡＮＴＥＳ抗体の活性を示している一連のグラフである。
【図２】図２は、ＥＬＩＳＡアッセイのグリコサミノグリカンの状況でｈｕＲＡＮＴＥＳに結合する抗ｈｕＲＡＮＴＥＳ抗体の能力を示しているグラフである。
【図３Ａ】図３は、以下を使用するカルシウム流入アッセイにおける抗ｈｕＲＡＮＴＥＳ抗体１Ｅ４の活性を示している一連のグラフである：ｈＣＣＲ１を発現しているＬ１．２細胞と２５ｎＭの組み換えヒトＲＡＮＴＥＳ（図３Ａ）；ｈＣＣＲ３を発現しているＬ１．２細胞と２５ｎＭの組み換えヒトＲＡＮＴＥＳ（図３Ｂ）；ｈＣＣＲ５を発現しているＬ１．２細胞と４ｎＭの組み換えヒトＲＡＮＴＥＳ（図３Ｃ）。
【図３Ｂ】図３は、以下を使用するカルシウム流入アッセイにおける抗ｈｕＲＡＮＴＥＳ抗体１Ｅ４の活性を示している一連のグラフである：ｈＣＣＲ１を発現しているＬ１．２細胞と２５ｎＭの組み換えヒトＲＡＮＴＥＳ（図３Ａ）；ｈＣＣＲ３を発現しているＬ１．２細胞と２５ｎＭの組み換えヒトＲＡＮＴＥＳ（図３Ｂ）；ｈＣＣＲ５を発現しているＬ１．２細胞と４ｎＭの組み換えヒトＲＡＮＴＥＳ（図３Ｃ）。
【図３Ｃ】図３は、以下を使用するカルシウム流入アッセイにおける抗ｈｕＲＡＮＴＥＳ抗体１Ｅ４の活性を示している一連のグラフである：ｈＣＣＲ１を発現しているＬ１．２細胞と２５ｎＭの組み換えヒトＲＡＮＴＥＳ（図３Ａ）；ｈＣＣＲ３を発現しているＬ１．２細胞と２５ｎＭの組み換えヒトＲＡＮＴＥＳ（図３Ｂ）；ｈＣＣＲ５を発現しているＬ１．２細胞と４ｎＭの組み換えヒトＲＡＮＴＥＳ（図３Ｃ）。
【図４−１】図４は、以下を使用する化学走査アッセイにおける抗ｈｕＲＡＮＴＥＳ抗体１Ｅ４の活性を示している一連のグラフである：ｈＣＣＲ１を発現しているＬ１．２細胞と２ｎＭの組み換えヒトＲＡＮＴＥＳ（図４Ａ）；ｈＣＣＲ３を発現しているＬ１．２細胞と１０ｎＭの組み換えヒトＲＡＮＴＥＳ（図４Ｂ）。
【図４−２】図４は、以下を使用する化学走査アッセイにおける抗ｈｕＲＡＮＴＥＳ抗体１Ｅ４の活性を示している一連のグラフである：ｈＣＣＲ５を発現しているＬ１．２細胞と１ｎＭの組み換えヒトＲＡＮＴＥＳ（図４Ｃ）；ｈＣＣＲ５を発現しているＬ１．２細胞と約１ｎＭの天然のヒトＲＡＮＴＥＳ（図４Ｄ）。
【図５】図５は、ＥＬＩＳＡにおけるヒト、カニクイザル（ｃｙｎｏｍｏｌｇｕｓ）、マウス、およびラットのケモカインのパネルに対する抗体１Ｅ４の交差反応性プロフィールを示しているグラフである。
【図６】図６は、ヒト由来の成熟ＲＡＮＴＥＳタンパク質（配列番号１７０）、カニクイザル由来の成熟ＲＡＮＴＥＳタンパク質（配列番号１７１）、マウス由来の成熟ＲＡＮＴＥＳタンパク質（配列番号１７２）、およびラット由来の成熟ＲＡＮＴＥＳタンパク質（配列番号２０６）の配列アラインメントである。矢印は、ヒトＲＡＮＴＥＳとカニクイザルＲＡＮＴＥＳの中では保存されているが、マウス配列またはラット配列の中では保存されていない、部位特異的突然変異誘発によって標的化される位置を示す。
【図７】図７は、ヒトＲＡＮＴＥＳ、マウスＲＡＮＴＥＳ、およびマウスＲＡＮＴＥＳの変異体（この中では、示されるマウスアミノ酸は、ヒト配列中で同じ位置に見られるアミノ酸によって置換されている）に対する、抗体１Ｅ４（白棒）またはマウスＲＡＮＴＥＳに対して惹起させられたポリクローナル抗体（網掛けした棒）の結合を示しているグラフである。
【図８】図８は、本明細書中に提供されるマウスの虚血再潅流モデルのプロトコールを示している図である。
【図９】図９は、抗ＲＡＮＴＥＳでの処置により虚血再潅流のマウスモデルにおいて梗塞の大きさが小さくなったことを示している一連のグラフである。データは、１グループあたり２０匹のマウスを示す。
【図１０】図１０は、抗ＲＡＮＴＥＳでの処置により用量依存性様式での虚血再潅流のマウスモデルにおいて梗塞の大きさが小さくなったことを示している一連のグラフである。データは、１グループあたり３匹のマウスを示す。
【図１１】図１１は、本明細書中で提供されるマウスの虚血モデルのプロトコールを示している図である。
【図１２】図１２は、抗ＲＡＮＴＥＳでの処置により虚血のマウスモデルにおいて梗塞の大きさが小さくなったことを示している一連のグラフである。データは、１グループあたり１０匹のマウスを示す。
【図１３】図１３は、抗ＲＡＮＴＥＳでの処置により用量依存性様式での虚血のマウスモデルにおいて梗塞の大きさが小さくなったことを示している一連のグラフである。データは、１グループあたり３匹のマウスを示す。
【発明を実施するための形態】
【００３２】
本発明により、正常なＴ細胞が発現した活性化に応じて調整され、分泌される（Ｒｅｇｕｌａｔｅｄ  ｕｐｏｎ  Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ，Ｎｏｒｍａｌ  Ｔ−ｃｅｌｌ  Ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ，ａｎｄ  Ｓｅｃｒｅｔｅｄ）（ＲＡＮＴＥＳ、ＣＣＬ５）ケモカインに特異的な完全なヒトモノクローナル抗体が提供される。用語「ＲＡＮＴＥＳ」と「ＣＣＬ５」は本明細書中では互換的に使用される。これらの抗体は、本明細書中ではまとめてｈｕＲＡＮＴＥＳ抗体と呼ばれる。ｈｕＲＡＮＴＥＳ抗体はＲＡＮＴＥＳに特異的に結合する。本明細書中で使用される場合は、用語「〜に特異的」、「特異的結合」、「〜に対して特異的」（およびそれらの文法上の全てのバリエーション）は、平衡結合定数（Ｋｄ）が≦１μＭ、例えば、≦１００ｎＭ、好ましくは≦１０ｎＭ、そしてより好ましくは≦１ｎＭ）である場合に、ＲＡＮＴＥＳエピトープを認識し、これに結合する抗体の状況において互換的に使用される。例えば、本明細書中で提供されるｈｕＲＡＮＴＥＳ抗体は、およそ≦１０ｎＭから約１００ｐＭの間の範囲にＫｄを示す。
【００３３】
ｈｕＲＡＮＴＥＳ抗体は、例えば、ＲＡＮＴＥＳの少なくとも１つの生物学的活性を調節するＲＡＮＴＥＳアンタゴニストまたは阻害剤である。ＲＡＮＴＥＳの生物学的活性としては、例えば、ＲＡＮＴＥＳ受容体（例えば、ＣＣＲ１、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、および／またはＣＣＲ５）への結合；好酸球、単球、およびリンパ球への化学接着；グリコサミノグリカンへのＲＡＮＴＥＳの結合、ならびにＲＡＮＴＥＳのオリゴマー形成が挙げられる。例えば、ｈｕＲＡＮＴＥＳ抗体は、ＲＡＮＴＥＳ受容体（例えば、ＣＣＲ１、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、および／またはＣＣＲ５）に対するＲＡＮＴＥＳの結合を部分的または完全にブロックすることにより、ＲＡＮＴＥＳの活性を完全にまたは部分的に阻害する。ＲＡＮＴＥＳ抗体は、ｈｕＲＡＮＴＥＳ抗体の存在下でのＲＡＮＴＥＳ活性のレベルが、本明細書中に記載されるｈｕＲＡＮＴＥＳ抗体と結合していない場合のＲＡＮＴＥＳ活性のレベルと比較して、少なくとも９５％、例えば、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％低下する場合には、ＲＡＮＴＥＳ活性を完全に阻害すると見なされる。ＲＡＮＴＥＳ抗体は、ｈｕＲＡＮＴＥＳ抗体の存在下でのＲＡＮＴＥＳ活性のレベルが、本明細書中に記載されるｈｕＲＡＮＴＥＳ抗体と結合していない場合のＲＡＮＴＥＳ活性のレベルと比較して９５％未満、例えば、１０％、２０％、２５％、３０％、４０％、５０％、６０％、７５％、８０％、８５％、または９０％低下する場合には、ＲＡＮＴＥＳ活性を部分的に阻害すると見なされる。
【００３４】
本発明のｈｕＲＡＮＴＥＳ抗体は、ＲＡＮＴＥＳ（例えば、マウスＲＡＮＴＥＳもしくはヒトＲＡＮＴＥＳ、またはそれらの免疫原性断片、誘導体、もしくは変異体）で動物を免疫化することによって生産される。あるいは、動物は、ＲＡＮＴＥＳをコードする核酸分子を含むベクターでトランスフェクトされた細胞で免疫化され、その結果、ＲＡＮＴＥＳが発現され、トランスフェクトされた細胞の表面と会合させられる。あるいは、抗体は、ＲＡＮＴＥＳへの結合について抗体または抗原結合ドメイン配列を含むライブラリーをスクリーニングすることによって得られる。このライブラリーは、例えば、組み立てられたファージ粒子の表面上に発現されるバクテリオファージ外被タンパク質に対するタンパク質またはペプチド融合体としてバクテリオファージの中に調製され、そしてコードＤＮＡ配列がファージ粒子内に含まれる（すなわち、「ファージディスプレイライブラリー」）。
【００３５】
本発明のｈｕＲＡＮＴＥＳ抗体には、例えば、表２に示される重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）、表３に示される軽鎖ＣＤＲ、およびそれらの組み合わせが含まれる。
【００３６】
【表２−１】
0005624884.tif 000005
【００３７】
【表２−２】
0005624884.tif 000006
【００３８】
【表３−１】
0005624884.tif 000007
【００３９】
【表３−２】
0005624884.tif 000008
例示的なｈｕＲＡＮＴＥＳモノクローナル抗体は本明細書中に記載される１Ｄ９抗体である。以下に示されるように、１Ｄ９抗体には、配列番号１に示される核酸配列によってコードされる重鎖可変領域（配列番号２）と、配列番号３に示される核酸配列によってコードされる軽鎖可変領域（配列番号４）が含まれる。ＣＤＲ配列は四角で囲って示される。
【００４０】
【化３】
0005624884.tif 000009
【００４１】
【化４】
0005624884.tif 000010
相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むアミノ酸は、ＣｈｏｔｈｉａらおよびＥ．Ａ．Ｋａｂａｔらによって定義されているとおりである（Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃ，ら、Ｎａｔｕｒｅ  ３４２：８７７−８８３（１９８９）；Ｋａｂａｔ，ＥＡ，ら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  ｉｎｔｅｒｅｓｔ，第５版，ＵＳ  Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＵＳ  Ｇｏｖｅｒｎｍｅｎｔ  Ｐｒｉｎｔｉｎｇ  Ｏｆｆｉｃｅ（１９９１）を参照のこと）。１Ｄ９抗体の重鎖ＣＤＲは以下の配列を有する：核酸配列ＧＡＧＴＴＣＧＣＣＡＴＧＣＡＣ（配列番号５）によってコードされるＥＦＡＭＨ（配列番号８）；核酸配列ＧＧＴＴＴＴＧＴＴＣＣＴＧＡＡＧＡＴＧＧＴＧＡＧＡＣＡＡＴＣＴＡＣＧＣＧＣＡＧＡＡＧＴＴＣＣＡＧＧＧＣ（配列番号６）によってコードされるＧＦＶＰＥＤＧＥＴＩＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号９）；および核酸配列ＧＡＴＣＣＣＣＴＧＴＡＴＡＣＴＣＣＧＧＧＴＣＴＴＧＡＧＣＣＴ（配列番号７）によってコードされるＤＰＬＹＴＰＧＬＥＰ（配列番号１０）。１Ｄ９抗体の軽鎖ＣＤＲは以下の配列を有する：核酸配列ＧＧＧＧＧＡＡＡＣＡＡＣＡＴＴＧＡＡＡＧＴＡＡＡＡＧＴＧＴＧＣＡＣ（配列番号１１）によってコードされるＧＧＮＮＩＥＳＫＳＶＨ（配列番号１４）；核酸配列ＧＡＴＧＡＴＡＧＣＧＡＣＣＧＧＣＣＣＴＣＡ（配列番号１２）によってコードされるＤＤＳＤＲＰＳ（配列番号１５）；、および核酸配列ＣＡＧＧＴＧＴＧＧＧＡＴＡＧＴＡＡＴＡＣＴＧＡＴＣＡＴＴＧＧＧＴＧ（配列番号１３）によってコードされるＱＶＷＤＳＮＴＤＨＷＶ（配列番号１６）。
【００４２】
例示的なｈｕＲＡＮＴＥＳモノクローナル抗体は本明細書中に記載される１Ｅ４抗体である。以下に示されるように、１Ｅ４抗体には、配列番号１７に示される核酸配列によってコードされる重鎖可変領域（配列番号１８）と、配列番号３に示される核酸配列によってコードされる軽鎖可変領域（配列番号４）が含まれる。ＣＤＲ配列は四角で囲って示される。
【００４３】
【化５】
0005624884.tif 000011
【００４４】
【化６】
0005624884.tif 000012
相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むアミノ酸は、ＣｈｏｔｈｉａらおよびＥ．Ａ．Ｋａｂａｔらによって定義されているとおりである（Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃ，ら、Ｎａｔｕｒｅ  ３４２：８７７−８８３（１９８９）；Ｋａｂａｔ，ＥＡ，ら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  ｉｎｔｅｒｅｓｔ，第５版，ＵＳ  Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＵＳ  Ｇｏｖｅｒｎｍｅｎｔ  Ｐｒｉｎｔｉｎｇ  Ｏｆｆｉｃｅ（１９９１）を参照のこと）。１Ｅ４抗体の重鎖ＣＤＲは以下の配列を有する：核酸配列ＧＡＧＴＴＣＧＣＣＡＴＧＣＡＣ（配列番号５）によってコードされるＥＦＡＭＨ（配列番号８）；核酸配列ＧＧＴＴＴＴＧＴＴＣＣＴＧＡＡＧＡＴＧＧＴＧＡＧＡＣＡＡＴＣＴＡＣＧＣＧＣＡＧＡＡＧＴＴＣＣＡＧＧＧＣ（配列番号６）によってコードされるＧＦＶＰＥＤＧＥＴＩＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号９）；および核酸配列ＧＡＴＣＣＣＣＴＧＴＡＴＧＡＧＧＧＴＣＣＧＴＴＴＴＣＴＧＴＴ（配列番号１９）によってコードされるＤＰＬＹＥＧＳＦＳＶ（配列番号２０）。１Ｅ４抗体の軽鎖ＣＤＲは以下の配列を有する：核酸配列ＧＧＧＧＧＡＡＡＣＡＡＣＡＴＴＧＡＡＡＧＴＡＡＡＡＧＴＧＴＧＣＡＣ（配列番号１１）によってコードされるＧＧＮＮＩＥＳＫＳＶＨ（配列番号１４）；核酸配列ＧＡＴＧＡＴＡＧＣＧＡＣＣＧＧＣＣＣＴＣＡ（配列番号１２）によってコードされるＤＤＳＤＲＰＳ（配列番号１５）；および核酸配列ＣＡＧＧＴＧＴＧＧＧＡＴＡＧＴＡＡＴＡＣＴＧＡＴＣＡＴＴＧＧＧＴＧ（配列番号１３）によってコードされるＱＶＷＤＳＮＴＤＨＷＶ（配列番号１６）。
【００４５】
例示的なｈｕＲＡＮＴＥＳモノクローナル抗体は本明細書中に記載されるＣ８抗体である。以下に示されるように、Ｃ８抗体には、配列番号２１に示される核酸配列によってコードされる重鎖可変領域（配列番号２２）と、配列番号２３に示される核酸配列によってコードされる軽鎖可変領域（配列番号２４）が含まれる。ＣＤＲ配列は四角で囲って示される。
【００４６】
【化７】
0005624884.tif 000013
相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むアミノ酸は、ＣｈｏｔｈｉａらおよびＥ．Ａ．Ｋａｂａｔらによって定義されているとおりである（Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃ，ら、Ｎａｔｕｒｅ  ３４２：８７７−８８３（１９８９）；Ｋａｂａｔ，ＥＡ，ら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  ｉｎｔｅｒｅｓｔ，第５版，ＵＳ  Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＵＳ  Ｇｏｖｅｒｎｍｅｎｔ  Ｐｒｉｎｔｉｎｇ  Ｏｆｆｉｃｅ（１９９１）を参照のこと）。Ｃ８抗体の重鎖ＣＤＲは以下の配列を有する：核酸配列ＡＧＣＴＡＴＧＣＴＡＴＧＣＡＣ（配列番号２５）によってコードされるＳＹＡＭＨ（配列番号２８）；核酸配列ＧＴＴＡＴＡＴＣＡＴＡＴＧＡＴＧＧＡＡＧＴＡＡＴＡＡＡＴＡＣＴＡＣＧＣＡＧＡＣＴＣＣＧＴＧＡＡＧＧＧＣ（配列番号２６）によってコードされるＶＩＳＹＤＧＳＮＫＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号２９）；および核酸配列ＧＡＡＡＣＴＴＴＣＣＣＣＣＡＣＴＡＣＴＡＣＴＡＣＴＡＣＴＡＣＡＴＧＧＡＣＧＴＣ（配列番号２７）によってコードされるＥＴＦＰＨＹＹＹＹＹＭＤＶ（配列番号３０）。Ｃ８抗体の軽鎖ＣＤＲは以下の配列を有する：核酸配列ＧＡＧＧＧＡＧＡＣＧＡＣＡＣＴＧＡＣＡＴＴＧＧＴＡＣＴＧＴＣＡＡＣ（配列番号３１）によってコードされるＥＧＤＤＴＤＩＧＴＶＮ（配列番号３４）；核酸配列ＧＡＧＧＡＴＧＧＣＴＡＣＣＧＧＣＣＣＴＣＡ（配列番号３２）によってコードされるＥＤＧＹＲＰＳ（配列番号３５）；および核酸配列ＣＡＧＴＴＣＴＧＧＧＡＴＧＴＴＧＡＣＡＧＴＧＡＴＣＡＴＣＣＧＧＴＴ（配列番号３３）によってコードされるＱＦＷＤＶＤＳＤＨＰＶ（配列番号３６）。
【００４７】
例示的なｈｕＲＡＮＴＥＳモノクローナル抗体は本明細書中に記載される３Ｅ７抗体である。以下に示されるように、３Ｅ７抗体には、配列番号３７に示される核酸配列によってコードされる重鎖可変領域（配列番号３８）と、配列番号３９に示される核酸配列によってコードされる軽鎖可変領域（配列番号４０）が含まれる。ＣＤＲ配列は四角で囲って示される。
【００４８】
【化８】
0005624884.tif 000014
相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むアミノ酸は、ＣｈｏｔｈｉａらおよびＥ．Ａ．Ｋａｂａｔらによって定義されているとおりである（Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃ，ら、Ｎａｔｕｒｅ  ３４２：８７７−８８３（１９８９）；Ｋａｂａｔ，ＥＡ，ら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  ｉｎｔｅｒｅｓｔ，第５版，ＵＳ  Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＵＳ  Ｇｏｖｅｒｎｍｅｎｔ  Ｐｒｉｎｔｉｎｇ  Ｏｆｆｉｃｅ（１９９１）を参照のこと）。３Ｅ７抗体の重鎖ＣＤＲは以下の配列を有する：核酸配列ＧＡＣＴＴＣＧＣＣＡＴＧＣＡＣ（配列番号４１）によってコードされるＤＦＡＭＨ（配列番号４４）；核酸配列ＧＧＴＴＡＴＧＴＴＣＣＴＧＡＡＧＡＴＧＧＴＧＡＣＡＣＡＡＴＣＴＡＣＧＣＧＣＡＧＡＡＧＴＴＣＣＡＧＧＧＣ（配列番号４２）によってコードされるＧＹＶＰＥＤＧＤＴＩＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号４５）；および核酸配列ＧＡＴＣＣＣＣＴＧＴＡＴＣＣＧＣＣＴＧＧＧＣＴＧＴＣＴＣＣＴ（配列番号４３）によってコードされるＤＰＬＹＰＰＧＬＳＰ（配列番号４６）。３Ｅ７抗体の軽鎖ＣＤＲは以下の配列を有する：核酸配列ＧＧＧＧＧＡＡＡＣＡＡＣＡＴＴＧＡＡＡＧＴＡＡＡＡＧＴＧＴＧＣＡＣ（配列番号１１）によってコードされるＧＧＮＮＩＥＳＫＳＶＨ（配列番号１４）；核酸配列ＧＡＴＧＡＴＡＧＣＧＡＣＣＧＧＣＣＣＴＣＡ（配列番号１２）によってコードされるＤＤＳＤＲＰＳ（配列番号１５）；および核酸配列ＣＡＧＧＴＧＴＧＧＧＡＴＡＧＴＡＡＴＡＣＴＧＡＴＣＡＴＴＧＧＧＴＧ（配列番号１３）によってコードされるＱＶＷＤＳＮＴＤＨＷＶ（配列番号１６）。
【００４９】
例示的なｈｕＲＡＮＴＥＳモノクローナル抗体は本明細書中に記載される４Ｄ８抗体である。以下に示されるように、４Ｄ８抗体には、配列番号４７に示される核酸配列によってコードされる重鎖可変領域（配列番号４８）と、配列番号３９に示される核酸配列によってコードされる軽鎖可変領域（配列番号４０）が含まれる。ＣＤＲ配列は四角で囲って示される。
【００５０】
【化９】
0005624884.tif 000015
【００５１】
【化１０】
0005624884.tif 000016
相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むアミノ酸は、ＣｈｏｔｈｉａらおよびＥ．Ａ．Ｋａｂａｔらによって定義されているとおりである（Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃ，ら、Ｎａｔｕｒｅ  ３４２：８７７−８８３（１９８９）；Ｋａｂａｔ，ＥＡ，ら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  ｉｎｔｅｒｅｓｔ，第５版，ＵＳ  Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＵＳ  Ｇｏｖｅｒｎｍｅｎｔ  Ｐｒｉｎｔｉｎｇ  Ｏｆｆｉｃｅ（１９９１）を参照のこと）。４Ｄ８抗体の重鎖ＣＤＲは以下の配列を有する：核酸配列ＧＡＣＴＴＣＧＣＣＡＴＧＣＡＣ（配列番号４１）によってコードされるＤＦＡＭＨ（配列番号４４）；核酸配列ＧＧＴＴＡＴＧＴＴＣＣＴＧＡＡＧＡＴＧＧＴＧＡＣＡＣＡＡＴＣＴＡＣＧＣＧＣＡＧＡＡＧＴＴＣＣＡＧＧＧＣ（配列番号４２）によってコードされるＧＹＶＰＥＤＧＤＴＩＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号４５）；および核酸配列ＧＡＴＣＣＣＣＴＧＴＡＴＡＣＧＣＣＴＧＧＴＣＴＧＴＡＴＧＴＧ（配列番号４９）によってコードされるＤＰＬＹＴＰＧＬＹＶ（配列番号５０）。４Ｄ８抗体の軽鎖ＣＤＲは以下の配列を有する：核酸配列ＧＧＧＧＧＡＡＡＣＡＡＣＡＴＴＧＡＡＡＧＴＡＡＡＡＧＴＧＴＧＣＡＣ（配列番号１１）によってコードされるＧＧＮＮＩＥＳＫＳＶＨ（配列番号１４）；核酸配列ＧＡＴＧＡＴＡＧＣＧＡＣＣＧＧＣＣＣＴＣＡ（配列番号１２）によってコードされるＤＤＳＤＲＰＳ（配列番号１５）；および核酸配列ＣＡＧＧＴＧＴＧＧＧＡＴＡＧＴＡＡＴＡＣＴＧＡＴＣＡＴＴＧＧＧＴＧ（配列番号１３）によってコードされるＱＶＷＤＳＮＴＤＨＷＶ（配列番号１６）。
【００５２】
例示的なｈｕＲＡＮＴＥＳモノクローナル抗体は本明細書中に記載される５Ｅ１抗体である。以下に示されるように、５Ｅ１抗体には、配列番号５１に示される核酸配列によってコードされる重鎖可変領域（配列番号５２）と、配列番号３９に示される核酸配列によってコードされる軽鎖可変領域（配列番号４０）が含まれる。ＣＤＲ配列は四角で囲って示される。
【００５３】
【化１１】
0005624884.tif 000017
【００５４】
【化１２】
0005624884.tif 000018
相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むアミノ酸は、ＣｈｏｔｈｉａらおよびＥ．Ａ．Ｋａｂａｔらによって定義されているとおりである（Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃ，ら、Ｎａｔｕｒｅ  ３４２：８７７−８８３（１９８９）；Ｋａｂａｔ，ＥＡ，ら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  ｉｎｔｅｒｅｓｔ，第５版，ＵＳ  Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＵＳ  Ｇｏｖｅｒｎｍｅｎｔ  Ｐｒｉｎｔｉｎｇ  Ｏｆｆｉｃｅ（１９９１）を参照のこと）。５Ｅ１抗体の重鎖ＣＤＲは以下の配列を有する：核酸配列ＧＡＣＴＴＣＧＣＣＡＴＧＣＡＣ（配列番号４１）によってコードされるＤＦＡＭＨ（配列番号４４）；核酸配列ＧＧＴＴＡＴＧＴＴＣＣＴＧＡＡＧＡＴＧＧＴＧＡＣＡＣＡＡＴＣＴＡＣＧＣＧＣＡＧＡＡＧＴＴＣＣＡＧＧＧＣ（配列番号４２）によってコードされるＧＹＶＰＥＤＧＤＴＩＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号４５）；および核酸配列ＧＡＴＴＡＴＴＴＧＴＡＴＡＴＴＣＣＴＡＧＣＴＴＡＴＣＣＴＡＣ（配列番号５３）によってコードされるＤＹＬＹＩＰＳＬＳＹ（配列番号５４）。５Ｅ１抗体の軽鎖ＣＤＲは以下の配列を有する：核酸配列ＧＧＧＧＧＡＡＡＣＡＡＣＡＴＴＧＡＡＡＧＴＡＡＡＡＧＴＧＴＧＣＡＣ（配列番号１１）によってコードされるＧＧＮＮＩＥＳＫＳＶＨ（配列番号１４）；核酸配列ＧＡＴＧＡＴＡＧＣＧＡＣＣＧＧＣＣＣＴＣＡ（配列番号１２）によってコードされるＤＤＳＤＲＰＳ（配列番号１５）；および核酸配列ＣＡＧＧＴＧＴＧＧＧＡＴＡＧＴＡＡＴＡＣＴＧＡＴＣＡＴＴＧＧＧＴＧ（配列番号１３）によってコードされるＱＶＷＤＳＮＴＤＨＷＶ（配列番号１６）。
【００５５】
例示的なｈｕＲＡＮＴＥＳモノクローナル抗体は本明細書中に記載される６Ａ８抗体である。以下に示されるように、６Ａ８抗体には、配列番号５５に示される核酸配列によってコードされる重鎖可変領域（配列番号５６）と、配列番号３９に示される核酸配列によってコードされる軽鎖可変領域（配列番号４０）が含まれる。ＣＤＲ配列は四角で囲って示される。
【００５６】
【化１３】
0005624884.tif 000019
相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むアミノ酸は、ＣｈｏｔｈｉａらおよびＥ．Ａ．Ｋａｂａｔらによって定義されているとおりである（Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃ，ら、Ｎａｔｕｒｅ  ３４２：８７７−８８３（１９８９）；Ｋａｂａｔ，ＥＡ，ら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  ｉｎｔｅｒｅｓｔ，第５版，ＵＳ  Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＵＳ  Ｇｏｖｅｒｎｍｅｎｔ  Ｐｒｉｎｔｉｎｇ  Ｏｆｆｉｃｅ（１９９１）を参照のこと）。６Ａ８抗体の重鎖ＣＤＲは以下の配列を有する：核酸配列ＧＡＣＴＴＣＧＣＣＡＴＧＣＡＣ（配列番号４１）によってコードされるＤＦＡＭＨ（配列番号４４）；核酸配列ＧＧＴＴＡＴＧＴＴＣＣＴＧＡＡＧＡＴＧＧＴＧＡＣＡＣＡＡＴＣＴＡＣＧＣＧＣＡＧＡＡＧＴＴＣＣＡＧＧＧＣ（配列番号４２）によってコードされるＧＹＶＰＥＤＧＤＴＩＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号４５）；および核酸配列ＧＡＴＣＣＣＣＴＧＴＡＴＣＣＴＣＣＧＧＧＧＣＴＧＣＡＧＣＣＴ（配列番号５７）によってコードされるＤＰＬＹＰＰＧＬＱＰ（配列番号５８）。６Ａ８抗体の軽鎖ＣＤＲは以下の配列を有する：核酸配列ＧＧＧＧＧＡＡＡＣＡＡＣＡＴＴＧＡＡＡＧＴＡＡＡＡＧＴＧＴＧＣＡＣ（配列番号１１）によってコードされるＧＧＮＮＩＥＳＫＳＶＨ（配列番号１４）；核酸配列ＧＡＴＧＡＴＡＧＣＧＡＣＣＧＧＣＣＣＴＣＡ（配列番号１２）によってコードされるＤＤＳＤＲＰＳ（配列番号１５）；および核酸配列ＣＡＧＧＴＧＴＧＧＧＡＴＡＧＴＡＡＴＡＣＴＧＡＴＣＡＴＴＧＧＧＴＧ（配列番号１３）によってコードされるＱＶＷＤＳＮＴＤＨＷＶ（配列番号１６）。
【００５７】
例示的なｈｕＲＡＮＴＥＳモノクローナル抗体は本明細書中に記載される７Ｂ５抗体である。以下に示されるように、７Ｂ５抗体には、配列番号５９に示される核酸配列によってコードされる重鎖可変領域（配列番号６０）と、配列番号６１に示される核酸配列によってコードされる軽鎖可変領域（配列番号６２）が含まれる。ＣＤＲ配列は四角で囲って示される。
【００５８】
【化１４】
0005624884.tif 000020
相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むアミノ酸は、ＣｈｏｔｈｉａらおよびＥ．Ａ．Ｋａｂａｔらによって定義されているとおりである（Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃ，ら、Ｎａｔｕｒｅ  ３４２：８７７−８８３（１９８９）；Ｋａｂａｔ，ＥＡ，ら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  ｉｎｔｅｒｅｓｔ，第５版，ＵＳ  Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＵＳ  Ｇｏｖｅｒｎｍｅｎｔ  Ｐｒｉｎｔｉｎｇ  Ｏｆｆｉｃｅ（１９９１）を参照のこと）。７Ｂ５抗体の重鎖ＣＤＲは以下の配列を有する：核酸配列ＧＡＣＴＴＣＧＣＣＡＴＧＣＡＣ（配列番号４１）によってコードされるＤＦＡＭＨ（配列番号４４）；核酸配列ＧＧＴＴＡＴＧＴＴＣＣＴＧＡＡＧＡＴＧＧＴＧＡＣＡＣＡＡＴＣＴＡＣＧＣＧＣＡＧＡＡＧＴＴＣＣＡＧＧＧＣ（配列番号４２）によってコードされるＧＹＶＰＥＤＧＤＴＩＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号４５）；および核酸配列ＧＡＴＣＣＣＣＴＧＴＡＴＡＧＴＧＧＧＡＧＣＴＴＡＴＣＣＴＡＣ（配列番号６３）によってコードされるＤＰＬＹＳＧＳＬＳＹ（配列番号６４）。７Ｂ５抗体の軽鎖ＣＤＲは以下の配列を有する：核酸配列ＧＧＧＧＧＡＡＡＣＡＡＣＡＴＴＧＡＡＡＧＴＡＡＡＡＧＴＧＴＧＣＡＣ（配列番号１１）によってコードされるＧＧＮＮＩＥＳＫＳＶＨ（配列番号１４）；核酸配列ＧＡＴＧＡＴＡＧＣＧＡＣＣＧＧＣＣＣＴＣＡ（配列番号１２）によってコードされるＤＤＳＤＲＰＳ（配列番号１５）；および核酸配列ＴＣＡＧＧＴＧＴＧＧＧＡＴＡＧＴＧＧＴＣＣＴＧＴＧＴＧＧＴＧＧＡＴＴ（配列番号６５）によってコードされるＱＶＷＤＳＧＰＶＷＷＩ（配列番号６６）。
【００５９】
例示的なｈｕＲＡＮＴＥＳモノクローナル抗体は本明細書中に記載されるＣＧ１１抗体である。以下に示されるように、ＣＧ１１抗体には、配列番号６７に示される核酸配列によってコードされる重鎖可変領域（配列番号６８）と、配列番号６９に示される核酸配列によってコードされる軽鎖可変領域（配列番号７０）が含まれる。ＣＤＲ配列は四角で囲って示される。
【００６０】
【化１５】
0005624884.tif 000021
【００６１】
【化１６】
0005624884.tif 000022
相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むアミノ酸は、ＣｈｏｔｈｉａらおよびＥ．Ａ．Ｋａｂａｔらによって定義されているとおりである（Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃ，ら、Ｎａｔｕｒｅ  ３４２：８７７−８８３（１９８９）；Ｋａｂａｔ，ＥＡ，ら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  ｉｎｔｅｒｅｓｔ，第５版，ＵＳ  Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＵＳ  Ｇｏｖｅｒｎｍｅｎｔ  Ｐｒｉｎｔｉｎｇ  Ｏｆｆｉｃｅ（１９９１）を参照のこと）。ＣＧ１１抗体の重鎖ＣＤＲは以下の配列を有する：核酸配列ＧＡＣＴＡＣＴＡＣＡＴＡＣＡＣ（配列番号７１）によってコードされるＤＹＹＩＨ（配列番号７４）；核酸配列ＧＧＴＴＡＴＧＴＴＣＣＴＧＡＡＧＡＴＧＧＴＧＡＣＡＣＡＡＴＣＴＡＣＧＣＧＣＡＧＡＡＧＴＴＣＣＡＧＧＧＣ（配列番号７２）によってコードされるＬＩＤＰＫＤＧＥＩＱＹＡＥＫＦＱＡ（配列番号７５）；および核酸配列ＧＡＧＧＴＴＴＴＡＡＧＣＧＧＴＡＴＴＡＧＧＧＴＴＴＴＣＣＣＡＴＴＣＧＡＣＣＣＣ（配列番号７３）によってコードされるＥＶＬＳＧＩＲＶＦＰＦＤＰ（配列番号７６）。ＣＧ１１抗体の軽鎖ＣＤＲは以下の配列を有する：核酸配列ＡＣＴＧＧＧＡＧＣＡＧＣＴＣＣＡＡＣＡＴＣＧＧＧＧＣＡＧＧＴＴＡＴＧＡＴＧＴＡＴＡＴ（配列番号８０）によってコードされるＴＧＳＳＳＮＩＧＡＧＹＤＶＹ（配列番号７７）；核酸配列ＧＡＴＡＣＣＡＡＣＡＡＴＣＧＡＣＣＣＣＣＡ（配列番号７８）によってコードされるＤＴＮＮＲＰＰ（配列番号８１）；および核酸配列ＣＡＧＴＣＴＴＡＴＧＡＣＡＴＣＧＣＣＣＴＧＡＧＴＡＡＣＴＣＧＡＡＴＧＴＧＧＴＴ（配列番号７９）によってコードされるＱＳＹＤＩＡＬＳＮＳＮＶＶ（配列番号８２）。
【００６２】
例示的なｈｕＲＡＮＴＥＳモノクローナル抗体は本明細書中に記載されるＢＧ１１抗体である。以下に示されるように、ＢＧ１１抗体には、配列番号８３に示される核酸配列によってコードされる重鎖可変領域（配列番号８４）と、配列番号８５に示される核酸配列によってコードされる軽鎖可変領域（配列番号８６）が含まれる。ＣＤＲ配列は四角で囲って示される。
【００６３】
【化１７】
0005624884.tif 000023
【００６４】
【化１８】
0005624884.tif 000024
相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むアミノ酸は、ＣｈｏｔｈｉａらおよびＥ．Ａ．Ｋａｂａｔらによって定義されているとおりである（Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃ，ら、Ｎａｔｕｒｅ  ３４２：８７７−８８３（１９８９）；Ｋａｂａｔ，ＥＡ，ら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  ｉｎｔｅｒｅｓｔ，第５版，ＵＳ  Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＵＳ  Ｇｏｖｅｒｎｍｅｎｔ  Ｐｒｉｎｔｉｎｇ  Ｏｆｆｉｃｅ（１９９１）を参照のこと）。ＢＧ１１抗体の重鎖ＣＤＲは以下の配列を有する：核酸配列ＧＡＡＴＴＡＴＣＣＡＴＧＣＡＣ（配列番号８７）によってコードされるＥＬＳＭＨ（配列番号９０）；核酸配列ＧＧＴＴＴＴＧＡＴＣＣＴＧＡＡＧＡＴＧＧＴＧＡＡＡＣＡＡＴＣＴＡＣＧＣＡＣＡＧＡＡＧＴＴＣＣＡＧＧＧＣ（配列番号８８）によってコードされるＧＦＤＰＥＤＧＥＴＩＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号９１）；および核酸配列ＴＡＴＴＣＴＧＧＴＡＧＴＡＧＴＧＧＴＴＧＧＴＧＧＧＣＴＴＴＴＧＡＴＡＴＣ（配列番号８９）によってコードされるＹＳＧＳＳＧＷＷＡＦＤＩ（配列番号９２）。ＢＧ１１抗体の軽鎖ＣＤＲは以下の配列を有する：核酸配列ＣＡＡＧＧＡＧＡＣＡＧＣＣＴＣＡＧＡＡＧＣＴＡＴＴＡＴＧＣＡＡＧＣ（配列番号９３）によってコードされるＱＧＤＳＬＲＳＹＹＡＳ（配列番号９６）；核酸配列ＧＧＴＡＡＡＡＡＣＡＡＣＣＧＧＣＣＣＴＣＡ（配列番号９４）によってコードされるＧＫＮＮＲＰＳ（配列番号９７）；および核酸配列ＣＡＧＡＣＣＴＧＧＧＧＣＡＣＴＧＧＣＡＴＴＴＧＧＧＴＧ（配列番号９５）によってコードされるＱＴＷＧＴＧＩＷＶ（配列番号９８）。
【００６５】
例示的なｈｕＲＡＮＴＥＳモノクローナル抗体は本明細書中に記載されるＡ９抗体である。以下に示されるように、Ａ９抗体には、配列番号９９に示される核酸配列によってコードされる重鎖可変領域（配列番号１００）と、配列番号１０１に示される核酸配列によってコードされる軽鎖可変領域（配列番号１０２）が含まれる。ＣＤＲ配列は四角で囲って示される。
【００６６】
【化１９】
0005624884.tif 000025
相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むアミノ酸は、ＣｈｏｔｈｉａらおよびＥ．Ａ．Ｋａｂａｔらによって定義されているとおりである（Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃ，ら、Ｎａｔｕｒｅ  ３４２：８７７−８８３（１９８９）；Ｋａｂａｔ，ＥＡ，ら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  ｉｎｔｅｒｅｓｔ，第５版，ＵＳ  Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＵＳ  Ｇｏｖｅｒｎｍｅｎｔ  Ｐｒｉｎｔｉｎｇ  Ｏｆｆｉｃｅ（１９９１）を参照のこと）。Ａ９抗体の重鎖ＣＤＲは以下の配列を有する：核酸配列ＡＧＣＴＡＴＧＣＣＡＴＧＡＧＣ（配列番号１０３）によってコードされるＳＹＡＭＳ（配列番号１０６）；核酸配列ＧＣＴＡＴＴＡＧＴＧＧＴＡＧＴＧＧＴＧＧＴＡＧＣＡＣＡＴＡＣＴＡＣＧＣＡＧＡＣＴＣＣＧＴＧＡＡＧＧＧＣ（配列番号１０４）によってコードされるＡＩＳＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号１０７）；および核酸配列ＧＡＴＴＴＡＧＧＡＴＡＴＴＧＴＡＣＴＡＡＴＧＧＴＧＴＡＴＧＣＴＧＧＧＧＴＡＴＴＧＡＣＴＡＣ（配列番号１０５）によってコードされるＤＬＧＹＣＴＮＧＶＣＷＧＩＤＹ（配列番号１０８）。Ａ９抗体の軽鎖ＣＤＲは以下の配列を有する：核酸配列ＡＣＣＣＧＣＡＧＣＡＧＴＧＧＣＡＧＣＡＴＴＧＣＣＧＡＣＡＡＣＴＡＴＧＴＧＣＡＧ（配列番号１０９）によってコードされるＴＲＳＳＧＳＩＡＤＮＹＶＱ（配列番号１１２）；核酸配列ＧＡＣＧＡＴＧＡＣＣＡＡＡＧＡＣＴＣＴＣＴ（配列番号１１０）によってコードされるＤＤＤＱＲＬＳ（配列番号１１３）；および核酸配列ＣＡＧＴＣＴＴＡＴＧＡＴＧＡＣＴＣＣＡＡＴＧＡＴＧＴＧ（配列番号１１１）によってコードされるＱＳＹＤＤＳＮＤＶ（配列番号１１４）。
【００６７】
例示的なｈｕＲＡＮＴＥＳモノクローナル抗体は本明細書中に記載されるＥ６抗体である。以下に示されるように、Ｅ６抗体には、配列番号１１５に示される核酸配列によってコードされる重鎖可変領域（配列番号１１６）と、配列番号１１７に示される核酸配列によってコードされる軽鎖可変領域（配列番号１１８）が含まれる。ＣＤＲ配列は四角で囲って示される。
【００６８】
【化２０】
0005624884.tif 000026
相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むアミノ酸は、ＣｈｏｔｈｉａらおよびＥ．Ａ．Ｋａｂａｔらによって定義されているとおりである（Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃ，ら、Ｎａｔｕｒｅ  ３４２：８７７−８８３（１９８９）；Ｋａｂａｔ，ＥＡ，ら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  ｉｎｔｅｒｅｓｔ，第５版，ＵＳ  Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＵＳ  Ｇｏｖｅｒｎｍｅｎｔ  Ｐｒｉｎｔｉｎｇ  Ｏｆｆｉｃｅ（１９９１）を参照のこと）。Ｅ６抗体の重鎖ＣＤＲは以下の配列を有する：核酸配列ＧＡＡＡＴＡＧＣＣＡＴＡＣＡＣ（配列番号１１９）によってコードされるＥＩＡＩＨ（配列番号１２２）；核酸配列ＡＧＴＴＴＴＧＡＧＣＣＴＧＡＡＧＡＴＧＣＴＧＡＡＧＣＡＡＴＣＴＡＣＧＣＡＣＡＧＡＧＧＴＴＣＣＡＧＧＧＣ（配列番号１２０）によってコードされるＳＦＥＰＥＤＡＥＡＩＹＡＱＲＦＱＧ（配列番号１２３）；および核酸配列ＧＡＴＣＣＣＴＡＣＴＡＴＧＣＴＡＧＣＡＧＴＧＧＴＴＣＴＡＡＣＴＡＣＡＴＧＧＡＧＧＴＣ（配列番号１２１）によってコードされるＤＰＹＹＡＳＳＧＳＮＹＭＥＶ（配列番号１２４）。Ｅ６抗体の軽鎖ＣＤＲは以下の配列を有する：核酸配列ＡＣＣＧＧＣＡＧＣＧＧＣＧＧＣＡＧＣＡＴＴＴＣＣＡＧＣＡＡＣＴＡＴＧＴＣＣＡＧ（配列番号１２５）によってコードされるＴＧＳＧＧＳＩＳＳＮＹＶＱ（配列番号１２８）；核酸配列ＧＡＧＧＡＴＧＡＣＣＡＡＡＧＡＣＣＣＴＣＴ（配列番号１２６）によってコードされるＥＤＤＱＲＰＳ（配列番号１２９）；および核酸配列ＣＡＣＴＣＴＴＡＴＧＡＴＧＧＣＡＡＣＡＡＴＣＧＧＴＧＧＧＴＣ（配列番号１２７）によってコードされるＨＳＹＤＧＮＮＲＷＶ（配列番号１３０）。
【００６９】
例示的なｈｕＲＡＮＴＥＳモノクローナル抗体は本明細書中に記載されるＨ６抗体である。以下に示されるように、Ｈ６抗体には、配列番号１３１に示される核酸配列によってコードされる重鎖可変領域（配列番号１３２）と、配列番号１３２に示される核酸配列によってコードされる軽鎖可変領域（配列番号１３３）が含まれる。ＣＤＲ配列は四角で囲って示される。
【００７０】
【化２１】
0005624884.tif 000027
【００７１】
【化２２】
0005624884.tif 000028
相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むアミノ酸は、ＣｈｏｔｈｉａらおよびＥ．Ａ．Ｋａｂａｔらによって定義されているとおりである（Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃ，ら、Ｎａｔｕｒｅ  ３４２：８７７−８８３（１９８９）；Ｋａｂａｔ，ＥＡ，ら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  ｉｎｔｅｒｅｓｔ，第５版，ＵＳ  Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＵＳ  Ｇｏｖｅｒｎｍｅｎｔ  Ｐｒｉｎｔｉｎｇ  Ｏｆｆｉｃｅ（１９９１）を参照のこと）。Ｈ６抗体の重鎖ＣＤＲは以下の配列を有する：核酸配列ＡＡＡＣＡＡＴＣＣＡＴＧＣＡＣ（配列番号１３５）によってコードされるＫＱＳＭＨ（配列番号１３８）；核酸配列ＡＧＴＴＣＴＡＡＴＣＣＴＧＡＡＧＡＴＧＡＴＧＡＡＡＣＡＣＴＣＴＡＣＧＣＡＡＡＧＡＡＧＴＴＣＣＡＧＧＧＣ（配列番号１３６）によってコードされるＳＳＮＰＥＤＤＥＴＬＹＡＫＫＦＱＧ（配列番号１３９）；および核酸配列ＧＡＣＴＣＣＣＡＧＧＧＴＴＴＴＴＡＣＴＡＴＴＡＣＴＡＣＧＧＴＡＴＧＧＡＣＧＴＣ（配列番号１３７）によってコードされるＤＳＱＧＦＹＹＹＹＧＭＤＶ（配列番号１４０）。Ｈ６抗体の軽鎖ＣＤＲは以下の配列を有する：核酸配列ＡＣＴＧＧＧＡＧＣＡＧＣＴＣＣＡＡＣＡＴＣＧＧＧＧＣＡＧＡＴＴＡＴＧＡＴＧＴＡＣＡＣ（配列番号１４１）によってコードされるＴＧＳＳＳＮＩＧＡＤＹＤＶＨ（配列番号１４４）；核酸配列ＧＡＴＡＡＣＡＴＣＡＡＴＣＧＧＣＣＣＴＣＡ（配列番号１４２）によってコードされるＤＮＩＮＲＰＳ（配列番号１４５）；および核酸配列ＣＡＧＴＣＣＴＡＴＧＡＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＡＧＴＧＧＴＧＴＧＣＴＡ（配列番号１４３）によってコードされるＱＳＹＤＳＳＬＳＧＶＬ（配列番号１４６）。
【００７２】
例示的なｈｕＲＡＮＴＥＳモノクローナル抗体は本明細書中に記載されるＧ２抗体である。以下に示されるように、Ｇ２抗体には、配列番号１４７に示される核酸配列によってコードされる重鎖可変領域（配列番号１４８）と、配列番号１４９に示される核酸配列によってコードされる軽鎖可変領域（配列番号１５０）が含まれる。ＣＤＲ配列は四角で囲って示される。
【００７３】
【化２３】
0005624884.tif 000029
【００７４】
【化２４】
0005624884.tif 000030
相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むアミノ酸は、ＣｈｏｔｈｉａらおよびＥ．Ａ．Ｋａｂａｔらによって定義されているとおりである（Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃ，ら、Ｎａｔｕｒｅ  ３４２：８７７−８８３（１９８９）；Ｋａｂａｔ，ＥＡ，ら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  ｉｎｔｅｒｅｓｔ，第５版，ＵＳ  Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＵＳ  Ｇｏｖｅｒｎｍｅｎｔ  Ｐｒｉｎｔｉｎｇ  Ｏｆｆｉｃｅ（１９９１）を参照のこと）。Ｇ２抗体の重鎖ＣＤＲは以下の配列を有する：核酸配列ＧＡＡＴＴＡＴＣＣＡＴＴＣＡＣ（配列番号１５１）によってコードされるＥＬＳＩＨ（配列番号１５４）；核酸配列ＧＧＴＴＴＴＧＡＴＣＣＴＧＡＡＧＡＴＧＧＴＧＡＡＡＣＡＡＴＣＴＡＣＧＣＡＣＡＧＡＡＴＴＴＣＣＡＧＧＧＣ（配列番号１５２）によってコードされるＧＦＤＰＥＤＧＥＴＩＹＡＱＮＦＱＧ（配列番号１５５）；および核酸配列ＧＡＴＣＴＡＡＣＴＧＧＡＡＧＴＡＧＧＧＡＣＴＣＣ（配列番号１５３）によってコードされるＤＬＴＧＳＲＤＳ（配列番号１５６）。Ｇ２抗体の軽鎖ＣＤＲは以下の配列を有する：核酸配列ＡＣＴＧＧＡＡＧＣＡＧＧＡＧＴＧＡＣＡＴＴＧＧＴＴＡＣＴＡＴＡＡＣＴＡＴＧＴＣＴＣＣ（配列番号１５７）によってコードされるＴＧＳＲＳＤＩＧＹＹＮＹＶＳ（配列番号１６０）；核酸配列ＧＡＴＧＴＣＡＣＴＧＡＧＣＧＡＣＣＣＴＣＡ（配列番号１５８）によってコードされるＤＶＴＥＲＰＳ（配列番号１６１）；および核酸配列ＡＧＣＴＣＡＴＴＴＴＣＡＡＧＴＧＧＣＧＡＣＡＣＣＴＴＣＧＴＧＧＴＴ（配列番号１５９）によってコードされるＳＳＦＳＳＧＤＴＦＶＶ（配列番号１６２）。
【００７５】
例示的なｈｕＲＡＮＴＥＳモノクローナル抗体は本明細書中に記載されるＥ１０抗体である。以下に示されるように、Ｅ１０抗体には、配列番号１６３に示される核酸配列によってコードされる重鎖可変領域（配列番号１６４）と、配列番号１６５に示される核酸配列によってコードされる軽鎖可変領域（配列番号１６６）が含まれる。ＣＤＲ配列は四角で囲って示される。
【００７６】
【化２５】
0005624884.tif 000031
相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むアミノ酸は、ＣｈｏｔｈｉａらおよびＥ．Ａ．Ｋａｂａｔらによって定義されているとおりである（Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃ，ら、Ｎａｔｕｒｅ  ３４２：８７７−８８３（１９８９）；Ｋａｂａｔ，ＥＡ，ら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  ｉｎｔｅｒｅｓｔ，第５版，ＵＳ  Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＵＳ  Ｇｏｖｅｒｎｍｅｎｔ  Ｐｒｉｎｔｉｎｇ  Ｏｆｆｉｃｅ（１９９１）を参照のこと）。Ｅ１０抗体の重鎖ＣＤＲは以下の配列を有する：核酸配列ＡＧＣＴＡＴＧＣＴＡＴＧＣＡＣ（配列番号２５）によってコードされるＳＹＡＭＨ（配列番号２８）；核酸配列ＧＴＴＡＴＡＴＣＡＴＡＴＧＡＴＧＧＡＡＧＴＡＡＴＡＡＡＴＡＣＴＡＣＧＣＡＧＡＣＴＣＣＧＴＧＡＡＧＧＧＣ（配列番号２６）によってコードされるＶＩＳＹＤＧＳＮＫＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号２９）；および核酸配列ＧＡＡＡＣＴＴＴＣＣＣＣＣＡＣＴＡＣＴＡＣＴＡＣＴＡＣＴＡＣＡＴＧＧＡＣＧＴＣ（配列番号２７）によってコードされるＥＴＦＰＨＹＹＹＹＹＭＤＶ（配列番号３０）。Ｅ１０抗体の軽鎖ＣＤＲは以下の配列を有する：核酸配列ＧＧＧＧＧＡＧＧＣＡＡＣＴＴＴＧＡＣＧＡＴＧＡＡＧＧＴＧＴＴＣＡＣ（配列番号１７３）によってコードされるＧＧＧＮＦＤＤＥＧＶＨ（配列番号１７６）；核酸配列ＧＡＴＧＡＴＡＣＣＧＧＣＣＧＧＣＣＣＴＣＡ（配列番号１７４）によってコードされるＤＤＴＧＲＰＳ（配列番号１７７）；および核酸配列ＣＡＧＧＣＧＴＧＧＧＡＴＡＧＴＡＧＴＡＡＴＧＡＴＣＡＴＣＣＣＧＴＧ（配列番号１７５）によってコードされるＱＡＷＤＳＳＮＤＨＰＶ（配列番号１７８）。
【００７７】
例示的なｈｕＲＡＮＴＥＳモノクローナル抗体は本明細書中に記載されるＣ１０抗体である。以下に示されるように、Ｃ１０抗体には、配列番号１７９に示される核酸配列によってコードされる重鎖可変領域（配列番号１８０）と、配列番号１８１に示される核酸配列によってコードされる軽鎖可変領域（配列番号１８２）が含まれる。ＣＤＲ配列は四角で囲って示される。
【００７８】
【化２６】
0005624884.tif 000032
相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むアミノ酸は、ＣｈｏｔｈｉａらおよびＥ．Ａ．Ｋａｂａｔらによって定義されているとおりである（Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃ，ら、Ｎａｔｕｒｅ  ３４２：８７７−８８３（１９８９）；Ｋａｂａｔ，ＥＡ，ら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  ｉｎｔｅｒｅｓｔ，第５版，ＵＳ  Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＵＳ  Ｇｏｖｅｒｎｍｅｎｔ  Ｐｒｉｎｔｉｎｇ  Ｏｆｆｉｃｅ（１９９１）を参照のこと）。Ｃ１０抗体の重鎖ＣＤＲは以下の配列を有する：核酸配列ＡＧＣＴＡＴＧＣＣＡＴＧＡＧＣ（配列番号１０３）によってコードされるＳＹＡＭＳ（配列番号１０６）；核酸配列ＧＣＴＡＴＴＡＧＴＧＧＴＡＧＴＧＧＴＧＧＴＡＧＣＡＣＡＴＡＣＴＡＣＧＣＡＧＡＣＴＣＣＧＴＧＡＡＧＧＧＣ（配列番号１０４）によってコードされるＡＩＳＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号１０７）；および核酸配列ＧＴＡＡＧＧＧＧＧＡＧＴＴＣＣＣＡＧＴＡＣＧＡＴＴＴＴＴＧＧＡＧＴＧＧＧＴＣＣＧＡＧＴＴＴＧＡＣＴＡＣ（配列番号１８５）によってコードされるＶＲＧＳＳＱＹＤＦＷＳＧＳＥＦＤＹ（配列番号１８８）。Ｃ１０抗体の軽鎖ＣＤＲは以下の配列を有する：核酸配列ＧＧＧＧＧＡＧＡＣＡＡＣＡＴＴＧＧＡＧＧＴＣＡＡＡＡＴＧＴＴＣＡＣ（配列番号１８９）によってコードされるＧＧＤＮＩＧＧＱＮＶＨ（配列番号１９２）；核酸配列ＴＡＴＧＡＴＡＣＣＧＡＣＣＧＧＣＣＣＴＣＡ（配列番号１９０）によってコードされるＹＤＴＤＲＰＳ（配列番号１９３）；および核酸配列ＣＡＧＧＴＧＴＧＧＧＡＴＧＴＴＧＡＴＡＧＴＧＡＴＣＡＴＣＣＴＴＧＧＧＴＧ（配列番号１９１）によってコードされるＱＶＷＤＶＤＳＤＨＰＷＶ（配列番号１９４）。
【００７９】
例示的なｈｕＲＡＮＴＥＳモノクローナル抗体は本明細書中に記載される２Ｄ１抗体である。以下に示されるように、２Ｄ１抗体には、配列番号５９に示される核酸配列によってコードされる重鎖可変領域（配列番号６０）と、配列番号１９５に示される核酸配列によってコードされる軽鎖可変領域（配列番号１９６）が含まれる。ＣＤＲ配列は四角で囲って示される。
【００８０】
【化２７】
0005624884.tif 000033
【００８１】
【化２８】
0005624884.tif 000034
相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むアミノ酸は、ＣｈｏｔｈｉａらおよびＥ．Ａ．Ｋａｂａｔらによって定義されているとおりである（Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃ，ら、Ｎａｔｕｒｅ  ３４２：８７７−８８３（１９８９）；Ｋａｂａｔ，ＥＡ，ら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  ｉｎｔｅｒｅｓｔ，第５版，ＵＳ  Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＵＳ  Ｇｏｖｅｒｎｍｅｎｔ  Ｐｒｉｎｔｉｎｇ  Ｏｆｆｉｃｅ（１９９１）を参照のこと）。２Ｄ１抗体の重鎖ＣＤＲは以下の配列を有する：核酸配列ＧＡＣＴＴＣＧＣＣＡＴＧＣＡＣ（配列番号４１）によってコードされるＤＦＡＭＨ（配列番号４４）；核酸配列ＧＧＴＴＡＴＧＴＴＣＣＴＧＡＡＧＡＴＧＧＴＧＡＣＡＣＡＡＴＣＴＡＣＧＣＧＣＡＧＡＡＧＴＴＣＣＡＧＧＧＣ（配列番号４２）によってコードされるＧＹＶＰＥＤＧＤＴＩＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号４５）；および核酸配列ＧＡＴＣＣＣＣＴＧＴＡＴＡＧＴＧＧＧＡＧＣＴＴＡＴＣＣＴＡＣ（配列番号５３）によってコードされるＤＰＬＹＳＧＳＬＳＹ（配列番号６４）。２Ｄ１抗体の軽鎖ＣＤＲは以下の配列を有する：核酸配列ＧＧＧＧＧＡＡＡＣＡＡＣＡＴＴＧＡＡＡＧＴＡＡＡＡＧＴＧＴＧＣＡＣ（配列番号１１）によってコードされるＧＧＮＮＩＥＳＫＳＶＨ（配列番号１４）；核酸配列ＧＡＴＧＡＴＡＧＣＧＡＣＣＧＧＣＣＣＴＣＡ（配列番号１２）によってコードされるＤＤＳＤＲＰＳ（配列番号１５）；および核酸配列ＣＡＧＧＴＧＴＧＧＧＡＴＡＧＴＡＡＴＡＣＴＧＡＴＣＡＴＴＧＧＧＴＧ（配列番号１３）によってコードされるＱＶＷＤＳＮＴＤＨＷＶ（配列番号１６）。
【００８２】
例示的なｈｕＲＡＮＴＥＳモノクローナル抗体は本明細書中に記載されるＡ５抗体である。以下に示されるように、Ａ５抗体には、配列番号１９９に示される核酸配列によってコードされる重鎖可変領域（配列番号２００）と、配列番号２０１に示される核酸配列によってコードされる軽鎖可変領域（配列番号２０２）が含まれる。ＣＤＲ配列は四角で囲って示される。
【００８３】
【化２９】
0005624884.tif 000035
相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むアミノ酸は、ＣｈｏｔｈｉａらおよびＥ．Ａ．Ｋａｂａｔらによって定義されているとおりである（Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃ，ら、Ｎａｔｕｒｅ  ３４２：８７７−８８３（１９８９）；Ｋａｂａｔ，ＥＡ，ら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  ｉｎｔｅｒｅｓｔ，第５版，ＵＳ  Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＵＳ  Ｇｏｖｅｒｎｍｅｎｔ  Ｐｒｉｎｔｉｎｇ  Ｏｆｆｉｃｅ（１９９１）を参照のこと）。Ａ５抗体の重鎖ＣＤＲは以下の配列を有する：核酸配列ＧＡＡＴＴＡＴＣＣＡＴＡＣＡＣ（配列番号２０３）によってコードされるＥＬＳＩＨ（配列番号１５４）；核酸配列ＴＡＴＡＴＴＧＡＴＣＣＴＧＡＡＧＡＴＧＧＴＧＡＡＣＣＡＡＴＴＴＡＣＧＣＡＣＡＧＡＡＧＴＴＣＣＡＧＧＧＣ（配列番号２０４）によってコードされるＹＩＤＰＥＤＧＥＰＩＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号２０７）；および核酸配列ＧＴＣＡＣＴＧＧＡＡＧＴＡＣＴＴＣＧＧＡＴＧＣＣＴＴＴＧＡＴＣＴＣ（配列番号２０５）によってコードされるＶＴＧＳＴＳＤＡＦＤＬ（配列番号２０８）。Ａ５抗体の軽鎖ＣＤＲは以下の配列を有する：核酸配列ＧＧＧＧＧＡＧＣＣＡＡＴＣＴＴＴＧＧＧＧＴＣＴＡＧＧＴＧＴＣＣＡＴ（配列番号２０９）によってコードされるＧＧＡＮＬＷＧＬＧＶＨ（配列番号２１２）；核酸配列ＧＡＴＡＡＴＡＧＣＧＡＣＣＧＧＧＣＣＴＣＡ（配列番号２１０）によってコードされるＤＮＳＤＲＡＳ（配列番号２１３）；および核酸配列ＣＡＧＧＴＧＴＧＧＧＡＴＡＧＴＡＧＴＡＧＴＧＡＴＣＡＣＴＧＧＧＴＧ（配列番号２１１）によってコードされるＱＶＷＤＳＳＳＤＨＷＶ（配列番号２１４）。
【００８４】
例示的なｈｕＲＡＮＴＥＳモノクローナル抗体は本明細書中に記載されるＨ１１抗体である。以下に示されるように、Ｈ１１抗体には、配列番号２１５に示される核酸配列によってコードされる重鎖可変領域（配列番号２１６）と、配列番号２１７に示される核酸配列によってコードされる軽鎖可変領域（配列番号２１８）が含まれる。ＣＤＲ配列は四角で囲って示される。
【００８５】
【化３０】
0005624884.tif 000036
相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むアミノ酸は、ＣｈｏｔｈｉａらおよびＥ．Ａ．Ｋａｂａｔらによって定義されているとおりである（Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃ，ら、Ｎａｔｕｒｅ  ３４２：８７７−８８３（１９８９）；Ｋａｂａｔ，ＥＡ，ら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  ｉｎｔｅｒｅｓｔ，第５版，ＵＳ  Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＵＳ  Ｇｏｖｅｒｎｍｅｎｔ  Ｐｒｉｎｔｉｎｇ  Ｏｆｆｉｃｅ（１９９１）を参照のこと）。Ｈ１１抗体の重鎖ＣＤＲは以下の配列を有する：核酸配列ＡＡＣＴＡＴＧＣＴＣＴＣＡＧＣ（配列番号２１９）によってコードされるＮＹＡＬＳ（配列番号２２２）；核酸配列ＧＧＧＴＴＣＡＴＣＣＣＴＣＴＣＧＴＣＧＡＴＡＣＴＡＣＧＡＡＣＴＡＣＧＣＡＣＡＧＡＧＧＴＴＴＣＡＧＧＧＣ（配列番号２２０）によってコードされるＧＦＩＰＬＶＤＴＴＮＹＡＱＲＦＱＧ（配列番号２２３）；および核酸配列ＧＡＧＣＡＧＧＴＧＧＣＧＧＴＧＧＧＡＣＣＴＧＧＡＣＣＣＡＣＣＴＣＡＧＡＣＣＧＧＧＧＧＣＣＣＧＡＴＧＧＴＣＴＴＧＡＴＧＴＣ（配列番号２２１）によってコードされるＥＱＶＡＶＧＰＧＰＴＳＤＲＧＰＤＧＬＤＶ（配列番号２２４）。Ｈ１１抗体の軽鎖ＣＤＲは以下の配列を有する：核酸配列ＡＣＴＧＧＧＡＧＣＡＡＣＴＣＣＡＡＣＣＴＣＧＧＧＧＣＧＧＡＴＴＡＴＧＡＴＧＴＡＣＡＣ（配列番号２２５）によってコードされるＴＧＳＮＳＮＬＧＡＤＹＤＶＨ（配列番号２２８）；核酸配列ＧＡＴＡＡＣＡＡＣＡＴＴＣＧＴＣＣＣＴＣＡ（配列番号２２６）によってコードされるＤＮＮＩＲＰＳ（配列番号２２９）；および核酸配列ＣＡＧＴＣＧＴＡＴＧＡＣＡＣＣＧＧＣＣＴＧＡＣＴＴＣＴＴＣＧＧＡＴＧＴＧＡＴＡ（配列番号２２７）によってコードされるＱＳＹＤＴＧＬＴＳＳＤＶＩ（配列番号２３０）。
【００８６】
例示的なｈｕＲＡＮＴＥＳモノクローナル抗体は本明細書中に記載されるＤ１抗体である。以下に示されるように、Ｄ１抗体には、配列番号２３１に示される核酸配列によってコードされる重鎖可変領域（配列番号２３２）と、配列番号２３３に示される核酸配列によってコードされる軽鎖可変領域（配列番号２３４）が含まれる。ＣＤＲ配列は四角で囲って示される。
【００８７】
【化３１】
0005624884.tif 000037
【００８８】
【化３２】
0005624884.tif 000038
相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むアミノ酸は、ＣｈｏｔｈｉａらおよびＥ．Ａ．Ｋａｂａｔらによって定義されているとおりである（Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃ，ら、Ｎａｔｕｒｅ  ３４２：８７７−８８３（１９８９）；Ｋａｂａｔ，ＥＡ，ら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  ｉｎｔｅｒｅｓｔ，第５版，ＵＳ  Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＵＳ  Ｇｏｖｅｒｎｍｅｎｔ  Ｐｒｉｎｔｉｎｇ  Ｏｆｆｉｃｅ（１９９１）を参照のこと）。Ｄ１抗体の重鎖ＣＤＲは以下の配列を有する：核酸配列ＧＡＣＴＡＣＴＡＣＡＴＡＣＡＣ（配列番号７１）によってコードされるＤＹＹＩＨ（配列番号７４）；核酸配列ＣＴＴＧＴＴＧＡＴＴＣＴＧＡＡＧＡＡＧＡＴＧＧＴＧＡＡＡＣＡＴＴＡＴＴＣＧＣＡＧＡＧＡＣＴＴＴＣＡＧＧＧＧＣ（配列番号２３６）によってコードされるＬＶＤＳＥＥＤＧＥＴＬＦＡＥＴＦＲＧ（配列番号２３９）；および核酸配列ＧＡＡＴＡＴＧＧＴＧＡＡＴＡＴＧＧＧＴＴＣＴＴＣＣＡＡＴＣＧ（配列番号２３７）によってコードされるＥＹＧＥＹＧＦＦＱＳ（配列番号２４０）。Ｄ１抗体の軽鎖ＣＤＲは以下の配列を有する：核酸配列ＡＣＴＧＧＧＡＧＣＡＧＣＴＣＣＡＡＣＡＴＣＧＧＧＧＣＡＧＡＴＴＡＴＧＡＴＧＴＡＡＡＣ（配列番号２４１）によってコードされるＴＧＳＳＳＮＩＧＡＤＹＤＶＮ（配列番号２４４）；核酸配列ＧＧＴＧＡＣＡＴＣＡＡＴＣＧＧＣＣＣＴＣＡ（配列番号２４２）によってコードされるＧＤＩＮＲＰＳ（配列番号２４５）；および核酸配列ＣＡＧＴＣＧＴＴＴＧＡＣＡＡＣＡＧＣＣＴＧＡＧＴＧＧＧＴＣＴＧＴＧＡＴＴ（配列番号２４３）によってコードされるＱＳＦＤＮＳＬＳＧＳＶＩ（配列番号２４６）。
【００８９】
例示的なｈｕＲＡＮＴＥＳモノクローナル抗体は本明細書中に記載されるＥ７抗体である。以下に示されるように、Ｅ７抗体には、配列番号２４７に示される核酸配列によってコードされる重鎖可変領域（配列番号２４８）と、配列番号２４９に示される核酸配列によってコードされる軽鎖可変領域（配列番号２５０）が含まれる。ＣＤＲ配列は四角で囲って示される。
【００９０】
【化３３】
0005624884.tif 000039
【００９１】
【化３４】
0005624884.tif 000040
相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むアミノ酸は、ＣｈｏｔｈｉａらおよびＥ．Ａ．Ｋａｂａｔらによって定義されているとおりである（Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃ，ら、Ｎａｔｕｒｅ  ３４２：８７７−８８３（１９８９）；Ｋａｂａｔ，ＥＡ，ら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  ｉｎｔｅｒｅｓｔ，第５版，ＵＳ  Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＵＳ  Ｇｏｖｅｒｎｍｅｎｔ  Ｐｒｉｎｔｉｎｇ  Ｏｆｆｉｃｅ（１９９１）を参照のこと）。Ｅ７抗体の重鎖ＣＤＲは以下の配列を有する：核酸配列ＡＡＣＴＡＣＧＣＴＣＴＧＡＧＣ（配列番号２５１）によってコードされるＮＹＡＬＳ（配列番号２２２）；核酸配列ＧＣＧＧＴＣＡＴＣＣＣＴＣＴＣＧＴＣＧＡＧＡＣＴＡＣＧＡＧＣＴＡＣＧＣＡＣＡＧＡＧＧＴＴＣＣＡＧＧＧＣ（配列番号２５２）によってコードされるＡＶＩＰＬＶＥＴＴＳＹＡＱＲＦＱＧ（配列番号２５５）；および核酸配列ＧＡＧＣＡＧＧＴＧＧＣＧＧＴＧＧＧＡＣＣＴＧＧＡＣＣＣＡＣＴＴＣＡＡＡＴＣＧＧＧＧＧＣＣＣＧＡＴＧＧＣＣＴＡＧＡＴＧＴＣ（配列番号２５３）によってコードされるＥＱＶＡＶＧＰＧＰＴＳＮＲＧＰＤＧＬＤＶ（配列番号１６９）。Ｅ７抗体の軽鎖ＣＤＲは以下の配列を有する：核酸配列ＡＣＴＧＧＧＡＧＣＡＧＣＴＣＣＡＡＣＡＴＣＧＧＧＧＡＣＧＧＴＴＡＴＧＡＴＧＴＡＣＡＣ（配列番号１８３）によってコードされるＴＧＳＳＳＮＩＧＤＧＹＤＶＨ（配列番号１９０）；核酸配列ＧＧＴＡＡＣＡＧＴＡＡＴＣＧＧＣＣＣＴＣＡ（配列番号１８４）によってコードされるＧＮＳＮＲＰＳ（配列番号１９１）；および核酸配列ＧＧＡＡＣＡＴＧＧＧＡＴＧＡＣＡＴＣＣＴＧＡＡＴＧＧＴＴＧＧＧＴＧ（配列番号１８９）によってコードされるＧＴＷＤＤＩＬＮＧＷＶ（配列番号２３５）。
【００９２】
本発明のｈｕＲＡＮＴＥＳ抗体にはまた、配列番号２、１８、２２、３８、４８、５２、５６、６０、６８、８４、１００、１１６、１３２、１４８、１６４、１８０、２００、２１６、２３２、もしくは２４８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上同一である重鎖可変アミノ酸配列、ならびに／あるいは、配列番号４、２４、４０、６２、７０、８６、１０２、１１８、１３４、１５０、１６６、１８２、１９６、２０２、２１８、２３４、もしくは２５０のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上同一である軽鎖可変アミノ酸を含む抗体も含まれる。
【００９３】
あるいは、モノクローナル抗体は、１Ｄ９、１Ｅ４、Ｃ８、３Ｅ７、４Ｄ８、５Ｅ１、６Ａ８、７Ｂ５、ＣＧ１１、ＢＧ１１、Ａ９、Ｅ６、Ｈ６、Ｇ２、Ｅ１０、Ｃ１０、２Ｄ１、Ａ５、Ｈ１１、Ｄ１、および／またはＥ７と同じエピトープに結合する抗体である。
【００９４】
他の場所に明確に示されない限りは、本発明に関連して使用される科学的および技術的用語は、当業者に一般的に理解されている意味を有するはずである。さらに、状況により別に必要とされない限りは、単数形の用語には複数形が含まれるはずであり、複数形の用語には単数形が含まれるはずである。一般的には、細胞および組織の培養、分子生物学、ならびにタンパク質およびオリゴ−またはポリヌクレオチド化学、ならびに本明細書中に記載されるハイブリダイゼーションと組み合わせて利用される命名法と、それらの技術は、当該分野で周知であり、一般的に使用されているものである。標準的な技術が、組み換えＤＮＡおよびオリゴヌクレオチド合成、ならびに組織培養および形質転換（例えば、エレクトロポレーション、リポフェクション）に使用される。酵素反応と精製技術は、製造業者の説明書にしたがって、または当該分野で一般的に行われているように、または本明細書中に記載されているように行われる。上記技術と手順は、一般的には、当該分野で周知である従来の方法にしたがい、本明細書中で引用され、本明細書全体を通じて議論されている様々な一般的でありより具体的な参考文献に記載されているように行われる。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（第２版，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．（１９８９））を参照のこと。本明細書中に記載される分析化学、合成有機化学、ならびに、医学的および薬学的化学と組み合わせて利用される命名法、ならびにそれらの研究手順および技術は、当該分野で周知であり、一般的に使用されているものである。標準的な技術が、化学合成、化学分析、薬学的調製、処方、送達、および患者の処置に使用される。
【００９５】
本開示にしたがって利用される場合は、以下の用語は、他の場所に明確に示されない限りは、以下の意味を有すると理解されるはずである：
本明細書中で使用される場合は、用語「抗体」は、免疫グロブリン分子、および免疫グロブリン（Ｉｇ）分子の免疫活性部分、すなわち、抗原に特異的に結合する（抗原と免疫反応する）抗原結合部位を含む分子をいう。
【００９６】
そのような抗体としては、ポリクローナル、モノクローナル、キメラ、単鎖、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、およびＦ（ａｂ’）２断片、ならびにＦａｂ発現ライブラリー中の抗体が挙げられるが、これらに限定されない。「特異的に結合する」または「〜と免疫反応する」は、抗体が所望される抗原の１つ以上の抗原決定基と反応し、他のポリペプチドとは反応（すなわち、結合）しないか、または他のポリペプチドとははるかに低い親和性（Ｋｄ＞１０−６）で結合することを意味する。
【００９７】
基本的な抗体の構造単位には、四量体が含まれることが公知である。個々の四量体は、ポリペプチド鎖の２つの同じ対からなり、それぞれの対は１つの「軽」鎖（約２５ｋＤａ）と１つの「重」鎖（約５０〜７０ｋＤａ）を有している。個々の鎖のアミノ末端部分には、抗原認識を主に担う、約１００個〜１１０個のアミノ酸、またはそれ以上のアミノ酸の可変領域が含まれる。個々の鎖のカルボキシ末端部分は、エフェクター機能を主に担う定常領域を定義する。ヒト軽鎖は、κ軽鎖およびλ軽鎖として分類される。重鎖は、μ、δ、γ、α、またはεとして分類され、それぞれ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＡ、およびＩｇＥとして抗体のアイソタイプを定義する。軽鎖と重鎖の中では、可変領域と定常領域が、約１２個以上のアミノ酸の「Ｊ」領域によって連結されており、重鎖にはまた、約１０個のさらなるアミノ酸の「Ｄ」領域も含まれている。一般的には、Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，第７章（Ｐａｕｌ，Ｗ．，ｅａ．，第２版．Ｒａｖｅｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎ．Ｙ．（１９８９））を参照のこと。個々の軽鎖／重鎖の可変領域の対は抗体結合部位を形成する。
【００９８】
用語「モノクローナル抗体」（ＭＡｂ）または「モノクローナル抗体組成物」は、本明細書中で使用される場合は、特有の軽鎖遺伝子産物と特有の重鎖遺伝子産物からなる抗体分子の１つの分子種だけを含む抗体分子の集団をいう。具体的には、モノクローナル抗体の相補性決定領域（ＣＤＲ）は、その集団の全ての分子において同一である。ＭＡｂには、それに対する固有の結合親和性を特徴とする抗原の特定のエピトープと免疫反応することができる抗原結合部位が含まれる。
【００９９】
一般的には、ヒトから得られた抗体分子は、分子中に存在する重鎖の性質によって互いに異なるクラスＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、およびＩｇＤのいずれかに関係する。特定のクラスにはさらに、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２などのサブクラスがある。さらに、ヒトでは、軽鎖はκ鎖またはλ鎖であり得る。
用語「抗原結合部位」または「結合部分」は、抗原結合に関与している免疫グロブリン分子の一部をいう。抗原結合部位は、重（「Ｈ」）鎖と軽（「Ｌ」）鎖のＮ末端可変（「Ｖ」）領域のアミノ酸残基によって形成される。重鎖と軽鎖のＶ領域の中の３つの大幅に異なるストレッチは「超可変領域」と呼ばれ、「フレームワーク領域」または「ＦＲ」として知られているより保存されている隣接しているストレッチの間に差し込まれている。したがって、用語「ＦＲ」は、免疫グロブリンの超可変領域の間に、そしてそれに隣接して本来見られるアミノ酸配列をいう。抗体分子の中では、軽鎖の３つの超可変領域と重鎖の３つの超可変領域は、抗原結合表面を形成するように三次元空間の中で互い相対的に配置される。抗原結合表面は、結合した抗原の三次元表面に対して相補的であり、重鎖と軽鎖のそれぞれの３つの超可変領域は「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」と呼ばれる。個々のドメインへのアミノ酸の配置は、Ｋａｂａｔ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９８７および１９９１））またはＣｈｏｔｈｉａ  ＆  Ｌｅｓｋ  Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７（１９８７），Ｃｈｏｔｈｉａら、Ｎａｔｕｒｅ  ３４２：８７８−８８３（１９８９）の定義にしたがう。
【０１００】
本明細書中で使用される場合は、用語「エピトープ」には、免疫グロブリンまたはその断片、あるいはＴ細胞受容体に特異的に結合することができる任意のタンパク質決定基が含まれる。用語「エピトープ」には、免疫グロブリンまたはＴ細胞受容体に特異的に結合することができる任意のタンパク質決定基が含まれる。エピトープ決定基は、通常は、アミノ酸または糖側鎖のような分子の化学的活性のある表面配置（ｓｕｒｆａｃｅ  ｇｒｏｕｐｉｎｇ）からなり、そして通常は、特異的な三次元構造特性、ならびに特異的電荷特性を有する。抗体は、解離定数が、≦１μＭ；例えば、≦１００ｎＭ、好ましくは≦１０ｎＭ、より好ましくは≦１ｎＭである場合には、抗原に対して特異的に結合すると言われる。
【０１０１】
本明細書中で使用される場合は、用語「免疫学的結合」および「免疫学的結合特性」は、免疫グロブリン分子と、それに対して免疫グロブリンが特異的である抗原との間で起こるタイプの非共有相互作用をいう。免疫学的結合相互作用の強度または親和性は、相互作用の解離定数（Ｋｄ）で表すことができ、この場合、Ｋｄが小さければ小さいほど、より大きな親和性を示す。選択されたポリペプチドの免疫学的結合特性は、当該分野で周知の方法を使用して定量される。１つのそのような方法には、抗原結合部位／抗原複合体の形成および解離の速度の測定が必然的に伴い、この場合、そのような速度は、複合体パートナーの濃度、相互作用の親和性、および両方向の速度に等しく影響を与える幾何学的パラメーターに依存する。したがって、「結合速度定数」（Ｋｏｎ）と「解離速度定数」（Ｋｏｆｆ）はいずれも、濃度、および会合と解離の実際の速度の計算によって決定することができる（Ｎａｔｕｒｅ  ３６１：１８６−８７（１９９３）を参照のこと）。Ｋｏｆｆ／Ｋｏｎの比により、親和性には関係のない全てのパラメーターの解消（ｃａｎｃｅｌｌａｔｉｏｎ）が可能であり、これは、解離定数Ｋｄと等しい（一般的には、Ｄａｖｉｅｓら（１９９０）Ａｎｎｕａｌ  Ｒｅｖ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  ５９：４３９−４７３を参照のこと）。本発明の抗体は、放射性リガンド結合アッセイまたは表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）あるいは当業者に公知の類似のアッセイのようなアッセイによって測定された平衡結合定数（Ｋｄ）が、≦１μＭ、例えば、≦１００ｎＭ、好ましくは≦１０ｎＭ、より好ましくは≦１ｎＭである場合には、ＲＡＮＴＥＳエピトープに特異的に結合すると言われる。例えば、本明細書中に提供されるｈｕＲＡＮＴＥＳ抗体は、およそ≦１０ｎＭから約１００ｐＭの間の範囲にＫｄを示す。
【０１０２】
当業者は、１つのヒトモノクローナル抗体が本発明のヒトモノクローナル抗体（例えば、モノクローナル抗体Ｄ９、Ｅ４、またはＣ８）と同じ特異性を有するかどうかを、前者が後者のＲＡＮＴＥＳ抗原ポリペプチドに対する結合を妨げるかどうかを確定することによって、過度の実験を行うことなく決定できることを理解するであろう。本発明のヒトモノクローナル抗体の結合の減少によって示されるように、試験されるヒトモノクローナル抗体が本発明のヒトモノクローナル抗体と競合する場合には、これらの２つのモノクローナル抗体は、同じであるかまたは密接に関係しているエピトープに結合する。ヒトモノクローナル抗体が本発明のヒトモノクローナル抗体の特異性を有しているかどうかを決定するための別の方法は、本発明のヒトモノクローナル抗体を、通常はそれと反応するＲＡＮＴＥＳ抗原ポリペプチドとともにインキュベートし、その後、試験されるヒトモノクローナル抗体がＲＡＮＴＥＳ抗原ポリペプチドに結合するその能力が阻害されたかどうかを決定するために試験されるヒトモノクローナル抗体を添加することである。試験されるヒトモノクローナル抗体が阻害されれば、ほぼ確実に、これは、本発明のモノクローナル抗体と同じであるかまたは機能的に等価なエピトープ特異性を有している。
【０１０３】
当該分野で公知の様々な手順が、ＲＡＮＴＥＳタンパク質のようなタンパク質に特異的な、またはその誘導体、断片、アナログ、ホモログ、もしくはオルトログに特異的なモノクローナル抗体の生産に使用される（例えば、引用により本明細書中に組み入れられる、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｈａｒｌｏｗ  Ｅ，ａｎｄ  Ｌａｎｅ  Ｄ，１９８８，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹを参照のこと）。完全なヒト抗体は、ＣＤＲを含む軽鎖と重鎖の両方の配列全体がヒト遺伝子に由来する抗体分子である。そのような抗体は、本明細書中では「ヒト抗体」または「完全なヒト抗体」と呼ばれる。ヒトモノクローナル抗体は、例えば、以下に提供される実施例に記載されている手順を使用して調製される。ヒトモノクローナル抗体はまた、トリオーマ技術；ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術（Ｋｏｚｂｏｒら、１９８３  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｔｏｄａｙ  ４：７２を参照のこと）；およびヒトモノクローナル抗体を産生するためのＥＢＶハイブリドーマ技術（Ｃｏｌｅら、１９８５：ＭＯＮＯＣＬＯＮＡＬ  ＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ  ＡＮＤ  ＣＡＮＣＥＲ  ＴＨＥＲＡＰＹ，Ａｌａｎ  Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．，ｐｐ．７７−９６を参照のこと）を使用することによっても調製され得る。ヒトモノクローナル抗体が利用され得、ヒトハイブリドーマを使用することにより（Ｃｏｔｅら、１９８３．Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ８０：２０２６−２０３０を参照のこと）またはインビトロでヒトＢ細胞をエプスタイン−バーウイルスで形質変換することにより（Ｃｏｌｅら、１９８５：ＭＯＮＯＣＬＯＮＡＬ  ＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ  ＡＮＤ  ＣＡＮＣＥＲ  ＴＨＥＲＡＰＹ，Ａｌａｎ  Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．，ｐｐ．７７−９６を参照のこと）生産され得る。
【０１０４】
抗体は、周知の技術（例えば、プロテインＡまたはプロテインＧを使用するアフィニティクロマトグラフィー）によって精製される。結果的にまたは代替的に、調べられる免疫グロブリンの標的である特異的抗原またはそのエピトープは、免疫アフィニティクロマトグラフィーにより免疫特異的抗体を精製するために、カラム上に固定化され得る。免疫グロブリンの精製は、例えば、Ｄ．Ｗｉｌｋｉｎｓｏｎ（Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｔｉｓｔ，Ｉｎｃ．，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ  ＰＡ，第１４巻，Ｎｏ．８（２０００年４月１７日），ｐｐ．２５−２８により出版された、Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｔｉｓｔ）によって議論されている。
【０１０５】
いくつかの場合には、（例えば、免疫関連疾患を処置することにおける抗体の有効性を）強化するために、エフェクター機能に関して本発明の抗体を改変することが所望され得る。例えば、システイン残基（単数または複数）がＦｃ領域に導入され得、それにより、この領域の中での鎖間ジスルフィド結合の形成が可能となる。そのように作製されたホモ二量体抗体は、改善されたインターナライゼーション能力、および／または高い補体媒介性細胞死滅および抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）を有し得る（Ｃａｒｏｎら、Ｊ．Ｅｘｐ  Ｍｅｄ．，１７６：１１９１−１１９５（１９９２）およびＳｈｏｐｅｓ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４８：２９１８−２９２２（１９９２）を参照のこと）。あるいは、Ｆｃ領域を二重に有し、それにより、強化された補体の溶解とＡＤＣＣの能力を有し得る抗体が操作され得る（Ｓｔｅｖｅｎｓｏｎら、Ａｎｔｉ−Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ，３：２１９−２３０（１９８９）を参照のこと）。好ましい実施形態では、本発明のｈｕＲＡＮＴＥＳ抗体は、エフェクター機能に関しては改変されない。
【０１０６】
本発明にはまた、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、およびＦ（ａｂ’）２  ｈｕＲＡＮＴＥＳ抗体断片、単鎖ｈｕＲＡＮＴＥＳ抗体、二重特異的ｈｕＲＡＮＴＥＳ抗体、ならびにヘテロ結合体ｈｕＲＡＮＴＥＳ抗体も含まれる。
【０１０７】
二重特異的抗体は、少なくとも２つの異なる抗原に対して結合特異性を有している抗体である。本発明の場合には、結合特異性のうちの１つがＲＡＮＴＥＳに対する特異性である。第２の結合標的は任意の他の抗原であり、いくつかの実施形態では、第２の結合標的は、細胞表面タンパク質または受容体または受容体サブユニットのような細胞外標的である。
【０１０８】
二重特異的抗体を作製するための方法は当該分野で公知である。従来は、二重特異的抗体の組み換え生産は、２つの免疫グロブリン重鎖／軽鎖対の同時発現に基づき、この場合、２つの重鎖は異なる特異性を有する（Ｍｉｌｓｔｅｉｎ  ａｎｄ  Ｃｕｅｌｌｏ，Ｎａｔｕｒｅ，３０５：５３７−５３９（１９８３））。免疫グロブリン重鎖と軽鎖の無作為な取り合わせが原因で、これらのハイブリドーマ（クアドローマ）は可能性がある１０種類の異なる抗体分子の混合物を生じ、そのうちの１つだけが正確な二重特異的構造を有する。正確な分子の精製には、通常は、アフィニティクロマトグラフィー工程が伴う。同様の手順は、１９９３年５月１３日に公開されたＷＯ９３／０８８２９、およびＴｒａｕｎｅｃｋｅｒら、ＥＭＢＯ  Ｊ．，１０：３６５５−３６５９（１９９１）に開示されている。
【０１０９】
所望される結合特異性（抗体−抗原結合部位）を有している抗体可変ドメインは、免疫グロブリン定常ドメイン配列に融合させられ得る。融合は、ヒンジ、ＣＨ２、およびＣＨ３領域の少なくとも一部を含む、免疫グロブリン重鎖定常ドメインと行われることが好ましい。融合体の少なくとも１つの中に存在する軽鎖結合に不可欠な部位を含む第１の重鎖定常領域（ＣＨ１）を有することが好ましい。免疫グロブリン重鎖融合体と、所望される場合には免疫グロブリン軽鎖をコードするＤＮＡが、別の発現ベクターに挿入され、適切な宿主生物の中に同時トランスフェクトされる。二重特異的抗体の作製のさらなる詳細については、例えば、Ｓｕｒｅｓｈら、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，１２１：２１０（１９８６）を参照のこと。
【０１１０】
二重特異的抗体を作製するための他のアプローチは、例えば、その全体が引用により本明細書中に組み入れられるＷＯ９６／２７０１１に記載されている。二重特異的抗体は、全長抗体、または抗体断片（例えば、Ｆ（ａｂ’）２二重特異的抗体）として調製され得る。抗体断片から二重特異的抗体を作製するための技術は文献に記載されている。例えば、二重特異的抗体は、化学結合を使用して調製され得る。例えば、その全体が引用により本明細書中に組み入れられる、Ｂｒｅｎｎａｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２９：８１（１９８５）を参照のこと。
【０１１１】
加えて、Ｆａｂ’断片は、Ｅ．ｃｏｌｉから直接回収し、二重特異的抗体が形成されるように化学的に結合させることができる。例えば、その全体が引用により本明細書中に組み入れられるＳｈａｌａｂｙら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７５：２１７−２２５（１９９２）を参照のこと。
【０１１２】
組み換え細胞培養物から二重特異的抗体断片を直接作製し、単離するための様々な技術もまた記載されている。例えば、二重特異的抗体は、ロイシンジッパーを使用して生産されている。例えば、その全体が引用により本明細書中に組み入れられるＫｏｓｔｅｌｎｙら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８（５）：１５４７−１５５３（１９９２）を参照のこと。
【０１１３】
「ダイアボディー」技術は、その全体が引用により本明細書中に組み入れられるＨｏｌｌｉｎｇｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：６４４４−６４４８（１９９３）によって記載されており、二重特異性抗体断片を作製するための代替的機構が提供されている。単鎖Ｆｖ（ｓＦｖ）の使用により二重特異性抗体断片を作製するための別のストラテジーもまた報告されている。その全体が引用により本明細書中に組み入れられる、Ｇｒｕｂｅｒら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５２：５３６８（１９９４）を参照のこと。
【０１１４】
３価以上の抗体が意図される。例えば、三重特異性抗体が調製され得る（Ｔｕｔｔら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：６０（１９９１））。
【０１１５】
例示的な二重特異性抗体は、２つの異なるエピトープに結合することができる。ここでは、上記エピトープの少なくとも１つは本発明のタンパク質抗原を起源とする。あるいは、特定の抗原を発現する細胞に細胞防御機構を集中させる目的で、免疫グロブリン分子の抗抗原性アームが、リンパ球における誘発分子（例えば、Ｔ細胞受容体分子（例えば、ＣＤ２、ＩＦＮγ、ＣＤ２８またはＢ７）またはＩｇＧ（ＦｃγＲ）に対するＦｃ受容体（例えば、ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩ（ＣＤ３２）およびＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６））に結合するアームと組み合わされ得る。二重特異性抗体はまた、特定抗原を発現する細胞に細胞傷害性因子を指向させるために用いられ得る。これらの抗体は、抗原結合アーム、および細胞傷害性因子または放射性核種キレーター（例えば、ＥＯＴＵＢＥ、ＤＰＴＡ、ＤＯＴＡまたはＴＥＴＡ）に結合するアームを有する。目的の別の二重特異性抗体は、本明細書中に記載されるタンパク質抗原に結合し、さらに組織因子（ＴＦ）に結合する。
【０１１６】
ヘテロ結合体抗体も本発明の範囲に含まれる。ヘテロ結合体抗体は、２つの共有結合により結合された抗体から構成される。そのような抗体は、例えば、所望されていない細胞に対して免疫系細胞を標的とするために（米国特許第４，６７６，９８０号）、およびＨＩＶ感染の処置のために（ＷＯ９１／００３６０；ＷＯ９２／２００３７３；欧州特許第０３０８９号）提案されている。抗体が、架橋剤の関与を含む合成タンパク質化学において公知の方法を使用してインビトロで調製され得ることが意図される。例えば、免疫毒素は、ジスルフィド交換反応を用いることにより、またはチオエーテル結合を形成することにより構築され得る。この目的のための適切な試薬の例としては、イミノチオレート（ｉｍｉｎｏｔｈｉｏｌａｔｅ）およびメチル−４−メルカプトブチルイミダート（ｍｅｔｈｙｌ−４−ｍｅｒｃａｐｔｏｂｕｔｙｒｉｍｉｄａｔｅ）および例えば、米国特許第４，６７６，９８０号に開示されているものが挙げられる。
【０１１７】
本発明はまた、細胞傷害性因子（例えば、毒素（例えば、細菌、真菌、植物、もしくは動物起源の酵素活性がある毒素、またはその断片））または放射活性同位体（すなわち、放射性結合物）に結合した抗体を含む免疫結合物に関する。
【０１１８】
使用され得る、酵素活性がある毒素およびその断片としては、ジフテリアＡ鎖、ジフテリア毒素の非結合活性断片、外毒素Ａ（緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）由来）、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデクシン（ｍｏｄｅｃｃｉｎ）Ａ鎖、α−サーシン（ａｌｐｈａ−ｓａｒｃｉｎ）、Ａｌｅｕｒｉｔｅｓ  ｆｏｒｄｉｉタンパク質、ジアンシン（ｄｉａｎｔｈｉｎ）タンパク質、ヨウシュヤマゴボウタンパク質（Ｐｈｙｔｏｌａｃａ  ａｍｅｒｉｃａｎａｐｒｏｔｅｉｎ）（ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩ、およびＰＡＰ−Ｓ）、ニガウリ（ｍｏｍｏｒｄｉｃａ  ｃｈａｒａｎｔｉａ）阻害剤、クルシン（ｃｕｒｃｉｎ）、クロチン（ｃｒｏｔｉｎ）、ｓａｐａｏｎａｒｉａ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ阻害剤、ゲロニン、ミトジェリン（ｍｉｔｏｇｅｌｌｉｎ）、レストリクトシン（ｒｅｓｔｒｉｃｔｏｃｉｎ）、フェノマイシン（ｐｈｅｎｏｍｙｃｉｎ）、エノマイシン（ｅｎｏｍｙｃｉｎ）、およびトリコテセン（ｔｒｉｃｏｔｈｅｃｅｎｅ）が挙げられる。様々な放射性核種を放射性結合型抗体の作製に利用できる。例として、２１２Ｂｉ、１３１Ｉ、１３１Ｉｎ、９０Ｙおよび１８６Ｒｅが挙げられる。
【０１１９】
上記抗体と細胞傷害性因子との結合体は、様々な二官能性タンパク質結合試薬（例えば、Ｎ−スクシンイミジル−３−（２−ピリジルジチオール）プロピオナート（ＳＰＤＰ）、イミノチオラン（ＩＴ）、イミドエステルの二官能性誘導体（例えば、ジメチルアジピミダートＨＣＬ）、活性エステル（例えば、ジスクシンイミジルスベラート）、アルデヒド（例えば、グルタルアルデヒド（ｇｌｕｔａｒｅｌｄｅｈｙｄｅ））、ビスアジド化合物（例えば、ビス（ｐ−アジドベンゾイル）ヘキサンジアミン）、ビスジアゾニウム誘導体（例えば、ビス−（ｐ−ジアゾニウムベンゾイル）−エチレンジアミン）、ジイソシアナート（例えば、トリエン２，６−ジイソシアナート（ｔｏｌｙｅｎｅ  ２，６−ｄｉｉｓｏｃｙａｎａｔｅ））およびビス活性フッ素化合物（例えば、１，５−ジフルオロ−２，４−ジニトロベンゼン））を使用して作製される。例えば、リシン免疫毒素は、Ｖｉｔｅｔｔａら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３８：１０９８（１９８７）に記載されているように調製され得る。炭素−１４−標識１−イソチオシアナトベンジル−３−メチルジエチレントリアミンペンタ酢酸（ＭＸ−ＤＰＴＡ）は、上記抗体に対する放射性核種の結合のための例示的なキレート化剤である（ＷＯ９４／１１０２６を参照のこと）。
【０１２０】
当業者は、多くの種類の可能な部分が、結果として生じる抗体に、または本発明の他の分子に結合され得ることを理解するであろう（例えば、その内容全てが引用により本明細書中に組み入れられる、「Ｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｖａｃｃｉｎｅｓ」，Ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｉｏｎｓ  ｔｏ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｊ．Ｍ．ＣｒｕｓｅおよびＲ．Ｅ．Ｌｅｗｉｓ，Ｊｒ（編集），Ｃａｒｇｅｒ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，（１９８９）を参照のこと）。
【０１２１】
上記抗体および上記他の部分がそれらのそれぞれの活性を維持する限りは、これらの２つの分子を結合させるであろう任意の化学反応によって結合が達成される。この結合は、多くの化学的機構（例えば、共有結合、親和性結合、インターカレーション、配位結合および錯体形成）を含み得る。しかし、好ましい結合は、共有結合である。共有結合は、存在する側鎖の直接の縮合、または外部の架橋分子の取り込みのいずれかにより達成される。多くの二価連結試薬または多価架橋剤は、タンパク質分子（例えば、本発明の抗体）を他の分子に対して結合させることにおいて有用である。例えば、代表的な結合試薬としては、有機化合物（例えば、チオエステル、カルボジイミド、スクシンイミドエステル、ジイソシアネート、グルタルアルデヒド、ジアゾベンゼンおよびヘキサメチレンジアミン）が挙げられ得る。この列挙は、当該分野で公知の結合試薬の様々なクラスを網羅するとは意図されておらず、むしろ、より一般的な結合試薬の例である（Ｋｉｌｌｅｎ  ａｎｄ  Ｌｉｎｄｓｔｒｏｍ，Ｊｏｕｒ．Ｉｍｍｕｎ．１３３：１３３５−２５４９（１９８４）；Ｊａｎｓｅｎら、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  ６２：１８５−２１６（１９８２）；およびＶｉｔｅｔｔａら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３８：１０９８（１９８７）を参照のこと）。好ましいリンカーは、文献に記載されている（例えば、ＭＢＳ（Ｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル）の使用が記載されているＲａｍａｋｒｉｓｈｎａｎ，Ｓ．ら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．４４：２０１−２０８（１９８４）を参照のこと）。オリゴペプチドリンカーによって抗体に結合させられたハロゲン化アセチルヒドラジド誘導体の使用が記載されている米国特許第５，０３０，７１９号もまた参照のこと。特に好ましいリンカーとしては、以下が挙げられる：（ｉ）ＥＤＣ（１−エチル−３−（３−ジメチルアミノ−プロピル）カルボジイミド塩酸塩；（ｉｉ）ＳＭＰＴ（４−スクシンイミジルオキシカルボニル−α−メチル−α−（２−ピリジル−ジチオ）−トルエン（Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍ．Ｃｏ．，カタログ番号（２１５５８Ｇ）；（ｉｉｉ）ＳＰＤＰ（スクシンイミジル−６［３−（２−ピリジルジチオ）プロピオンアミド］ヘキサノエート（Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍ．Ｃｏ．，カタログ番号２１６５１Ｇ）；（ｉｖ）スルホ−ＬＣ−ＳＰＤＰ（スルホスクシンイミジル６［３−（２−ピリジルジチオ）−プロピアンアミド］ヘキサノエート（Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍ．Ｃｏ．，カタログ番号２１６５−Ｇ）；および（ｖ）ＥＤＣに結合させられたスルホ−ＮＨＳ（Ｎ−ヒドロキシスルホ−スクシンイミド：Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍ．Ｃｏ．，カタログ番号２４５１０）。
【０１２２】
用語「単離されたポリヌクレオチド」は、本明細書中で使用される場合は、ゲノム、ｃＤＮＡ、もしくは合成起源のポリヌクレオチド、またはそれらの複数の組み合わせを意味するはずである。その起源に起因して、上記「単離されたポリヌクレオチド」は、（１）この「単離されたポリヌクレオチド」が自然界で見られるポリヌクレオチドの全てまたは一部分と会合しないか、（２）この「単離されたポリヌクレオチド」が自然界では結合しないポリヌクレオチドに対して動作可能であるように連結されているか、または（３）自然界ではより大きな配列の一部分として存在しない。
【０１２３】
本明細書中で言及される用語「単離されたタンパク質」は、ｃＤＮＡ、組換えＲＮＡもしくは合成起源のタンパク質またはそれらの複数の組み合わせを意味する。その起源または誘導の供給源に起因して、上記「単離されたタンパク質」は、（１）自然界で見られるタンパク質と会合しないか、（２）同じ供給源に由来する他のタンパク質を含まない（例えば、マウスのタンパク質を含まない）か、（３）異なる種に由来する細胞により発現されるか、または（４）自然界には存在しない。
【０１２４】
用語「ポリペプチド」は、本明細書中では一般用語として用いられ、天然のタンパク質、断片、またはポリペプチド配列のアナログをいう。それ故、天然のタンパク質断片、、およびアナログは、ポリペプチド類の種である。本発明に従う好ましいポリペプチドには、本明細書中に示されるヒト重鎖免疫グロブリン分子と本明細書中に示されるヒト軽鎖免疫グロブリン分子、ならびに軽鎖免疫グロブリン分子（例えば、κ軽鎖免疫グロブリン分子）とともに重鎖免疫グロブリン分子を含む結合体によって形成された抗体分子、およびその逆、ならびにそれらの断片およびアナログが含まれる。
【０１２５】
本明細書中で使用される場合は、対象に対して適用される用語「自然界に存在する」は、対象が自然界で見られ得るという事実をいう。例えば、自然界の供給源から単離され得、かつ、人間によって実験室でまたは別の方法で意図的に改変されていない、（ウイルスを含む）生物体の中に存在するポリペプチド配列またはポリヌクレオチド配列は、自然界に存在している。
【０１２６】
本明細書中で使用される場合は、用語「作動可能に連結される」は、そのように記載される構成要素の位置が、構成要素がそれらの意図される様式で機能することを可能にする関係であることをいう。コード配列に「作動可能に連結された」制御配列は、上記コード配列の発現が、上記制御配列と適合する条件下で達成されるように連結されている。
【０１２７】
本明細書中で使用される場合は、用語「制御配列」は、それに対して連結されるコード配列の発現とプロセシングに影響を与えるために必要なポリヌクレオチド配列をいう。ここで、そのような制御配列の性質は宿主生物に応じて異なり、原核生物では、そのような制御配列には、一般的に、プロモーター、リボソーム結合部位と転写終結配列が含まれる、真核生物では、一般的に、そのような制御配列には、プロモーターと転写終結配列が含まれる。用語「制御配列」は、少なくとも、その存在が発現とプロセシングに不可欠である全ての構成要素を含むように意図され、また、これには、その存在が有利である付加的な構成要素（例えば、リーダー配列および融合パートナー配列）もまた含まれ得る。本明細書中で言及される用語「ポリヌクレオチド」は、少なくとも１０塩基長のヌクレオチド（リボヌクレオチドもしくはデオキシヌクレオチドのいずれか、またはいずれかのタイプのヌクレオチドのいずれかの型の改変された形態）のポリマー性ボロン（ｂｏｒｏｎ）を意味する。この用語には、ＤＮＡの１本鎖形態と２本鎖形態が含まれる。
【０１２８】
本明細書中で言及される用語「オリゴヌクレオチド」には、自然界に存在するヌクレオチド、ならびに自然界に存在するオリゴヌクレオチド連結および自然界には存在しないオリゴヌクレオチド連結により一緒に連結された改変型ヌクレオチドが含まれる。オリゴヌクレオチドは、一般的には、２００個以下の長さの塩基を含むポリヌクレオチドサブセットである。好ましくは、オリゴヌクレオチドは、１０〜６０塩基の長さであり、最も好ましくは、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０〜４０塩基の長さである。オリゴヌクレオチドは２本鎖（例えば、遺伝子変異体の構築における使用のため）であり得るが、オリゴヌクレオチドは、通常は、（例えば、プローブについては）１本鎖である。本発明のオリゴヌクレオチドは、センスオリゴヌクレオチドまたはアンチセンスオリゴヌクレオチドのいずれかである。
【０１２９】
本明細書中で言及される用語「自然界に存在するヌクレオチド」には、デオキシリボヌクレオチドとリボヌクレオチドが含まれる。本明細書中で言及される、用語「改変型ヌクレオチド」には、改変型または置換型の糖基などを持つヌクレオチドが含まれる。本明細書中で言及される、用語「オリゴヌクレオチド連結物」には、オリゴヌクレオチド連結物（例えば、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホロセレルロエート（ｐｈｏｓｐｈｏｒｏｓｅｌｅｒｌｏａｔｅ）、ホスホロジセレノエート（ｐｈｏｓｐｈｏｒｏｄｉｓｅｌｅｎｏａｔｅ）、ホスホロアニロチオエート（ｐｈｏｓｐｈｏｒｏａｎｉｌｏｔｈｉｏａｔｅ）、ホスホラニラデート（ｐｈｏｓｈｏｒａｎｉｌａｄａｔｅ）、ホスホロンミデート（ｐｈｏｓｐｈｏｒｏｎｍｉｄａｔｅ）などが含まれる。例えば、ＬａＰｌａｎｃｈｅら、Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１４：９０８１（１９８６）；Ｓｔｅｃら、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１０６：６０７７（１９８４），Ｓｔｅｉｎら、Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１６：３２０９（１９８８），Ｚｏｎら、Ａｎｔｉ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ  ６：５３９（１９９１）；Ｚｏｎら、Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  Ａｎａｌｏｇｕｅｓ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，ｐｐ．８７−１０８（Ｆ．Ｅｃｋｓｔｅｉｎ編，Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ  Ｅｎｇｌａｎｄ（１９９１））；Ｓｔｅｃら、米国特許第５，１５１，５１０号；Ｕｈｌｍａｎｎ  ａｎｄ  Ｐｅｙｍａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  ９０：５４３（１９９０）を参照のこと。オリゴヌクレオチドには、所望される場合は、検出のための標識が含まれ得る。
【０１３０】
本明細書中で言及される用語「選択的にハイブリダイズする」は、検出可能かつ特異的に結合することを意味する。本発明のポリヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、およびその断片は、非特異的な核酸に対する検出可能な結合の感知できる量を最小にするハイブリダイゼーション条件および洗浄条件の下で、核酸鎖に選択的にハイブリダイズする。高ストリンジェンシー条件は、当該分野で公知であり、かつ、本明細書中で議論される選択的ハイブリダイゼーション条件を達成するために使用され得る。一般的には、本発明のポリヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、および断片と、目的の核酸配列との間での核酸配列相同性は、少なくとも８０％であり、より典型的には、少なくとも８５％、９０％、９５％、９９％、および１００％の、大きい相同性が好ましい。２つのアミノ酸配列は、それらの配列の間に部分的同一性または完全同一性が存在する場合には、相同である。例えば、８５％の相同性は、２つの配列が最大マッチングのためにアラインメントされた場合に、アミノ酸のうちの８５％が同一であることを意味する。（マッチングされる２つの配列のうちのいずれかの中の）ギャップは、最大で５以下のマッチングギャップ長までが許容され、２以下がより好ましい。あるいはおよび好ましくは、２つのタンパク質配列（または少なくとも３０アミノ酸の長さのそれらに由来するポリペプチド配列）は、この用語が本明細書中で使用される場合は、これらがプログラムＡＬＩＧＮを使用して、突然変異データマトリックスおよび６以上のギャップペナルティを用いて、（標準偏差単位として）５より大きいアライメントスコアを有する場合には、相同である。Ｄａｙｈｏｆｆ，Ｍ．Ｏ．，Ａｔｌａｓ  ｏｒ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，ｐｐ．１０１−１１０（第５巻，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ（１９７２））およびこの巻についての補遺、ｐｐ．１−１０を参照のこと。上記２つの配列またはその一部分は、それらのアミノ酸が上記ＡＬＩＧＮプログラムを使用して最適にアラインメントさせられた際に５０％以上同一であれば、より好ましく相同である。用語「〜に対応する」は、ポリヌクレオチド配列が参照ポリヌクレオチド配列全体またはその一部分に対して相同である（すなわち、同一であり、狭義ではなく進化的に関係している）こと、あるいはポリペプチド配列が参照ポリペプチド配列に対して同一であることを意味するように、本明細書中で使用される。対照的に、用語「〜に相補的である」は、相補配列が参照ポリヌクレオチド配列全体またはその一部分に対して相同であることを意味するように本明細書中で使用される。例えば、ヌクレオチド配列「ＴＡＴＡＣ」は、参照配列「ＴＡＴＡＣ」に対応し、参照配列「ＧＴＡＴＡ」に相補的である。
【０１３１】
以下の用語は、２つ以上のポリヌクレオチド配列またはアミノ酸配列の間での配列の関係性を記述するために使用される：「参照配列」、「比較ウィンドウ」、「配列同一性」、「配列同一性の割合（％）」および「実質的同一性」。「参照配列」は、配列比較の基準として使用される定義された配列である。参照配列は、大きい配列のサブセット（例えば、配列表に提供された全長のｃＤＮＡ配列または遺伝子配列の断片として）である場合があり、また、これには完全なｃＤＮＡ配列または完全な遺伝子配列が含まれる場合もある。一般的に、参照配列は、少なくとも１８ヌクレオチドの長さ、または６アミノ酸の長さであり、少なくとも２４ヌクレオチドの長さ、または８アミノ酸の長さであることが頻繁にあり、そして多くの場合は、少なくとも４８ヌクレオチドの長さ、または１６アミノ酸の長さである。２つのポリヌクレオチド配列またはアミノ酸配列には、それぞれ、（１）その２つの分子の間で類似である配列（すなわち、完全なポリヌクレオチド配列または完全なアミノ酸配列の一部分）が含まれ得、そして（２）さらに、上記２つのポリヌクレオチド配列またはアミノ酸配列の間で異なる配列も含まれ得るので、２つ（または３つ以上の）分子間での配列比較は、典型的には、上記２つの分子の配列を「比較ウィンドウ」全体にわたって比較することによって行われ、配列類似性の局所領域が同定され、比較される。本明細書中で使用される場合は、「比較ウィンドウ」は、少なくとも１８個の連続するヌクレオチド位置、または６個のアミノ酸の概念上のセグメントをいう。ここでは、ポリヌクレオチド配列またはアミノ酸配列は、少なくとも１８個の連続するヌクレオチド、または６個のアミノ酸配列の参照配列に対して比較され得、ここでは、上記比較ウィンドウの中のポリヌクレオチド配列の一部分には、上記の２つの配列の最適なアライメントのために、参照配列（付加も欠失も含まれていない）と比較して、２０パーセント以下の付加、欠失、置換など（すなわち、ギャップ）が含まれ得る。比較ウィンドウをアラインメントさせるための配列の最適なアライメントは、Ｓｍｉｔｈ  ａｎｄ  Ｗａｔｅｒｍａｎ  Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．２：４８２（１９８１）の局所的相同性アルゴリズムによって、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｗｕｎｓｃｈ  Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３（１９７０）の相同性アライメントアルゴリズムによって、Ｐｅａｒｓｏｎ  ａｎｄ  Ｌｉｐｍａｎ  Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（Ｕ．Ｓ．Ａ．）８５：２４４４（１９８８）の類似性の検索方法によって、これらのアルゴリズムのコンピュータ化された実行（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｐａｃｋａｇｅ  Ｒｅｌｅａｓｅ  ７．０，（Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐ，５７５  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｄｒ．，Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓ．），Ｇｅｎｅｗｏｒｋｓ、またはＭａｃ  ＶｅｃｔｏｒソフトウェアパッケージにおけるＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡ、およびＴＦＡＳＴＡ）によって、または検査によって行われ得、そして様々な方法によって作成された最良のアライメント（すなわち、上記比較ウィンドウ全体にわたる最も高い相同性の割合���％）を生じる）が選択される。
【０１３２】
用語「配列同一性」は、２つのポリヌクレオチド配列またはアミノ酸配列が上記比較ウィンドウ全体にわたって同一である（すなわち、１ヌクレオチドごとまたは１残基ごとの基準で）ことを意味する。用語「配列同一性の割合（％）」は、上記比較ウィンドウ全体にわたり２つの最適にアラインメントされた配列を比較し、その同一である核酸塩基（例えば、Ａ、Ｔ、Ｃ、Ｇ、ＵもしくはＩ）または残基が両方の配列中に存在する位置の数を決定して、一致する位置の数を得、一致した位置の数を上記比較ウィンドウの中の位置の総数（すなわち、ウィンドウのサイズ）で割り算し、そして、その結果に１００をかけて配列同一性の割合（％）を得ることによって計算される。本明細書中で使用される、用語「実質的同一性」は、ポリヌクレオチド配列またはアミノ酸配列の特性を示す。ここでは、上記ポリヌクレオチドまたはアミノ酸には、少なくとも１８個のヌクレオチド（６個のアミノ酸）位置の比較ウィンドウ全体にわたって、多くの場合には、少なくとも２４〜４８個のヌクレオチド（８〜１６個のアミノ酸）位置のウィンドウ全体にわたって参照配列と比較して、少なくとも８５パーセントの配列同一性、好ましくは少なくとも９０〜９５パーセントの配列同一性、より通常は少なくとも９９パーセントの配列同一性を有する配列が含まれる。ここで、配列同一性の割合（％）は、上記比較ウィンドウ全体にわたって、上記参照配列を、全部で上記参照配列の２０パーセント以下の欠失または付加を含み得る配列に対して比較することにより計算される。参照配列は、より大きな配列のサブセットであり得る。
【０１３３】
本明細書中で使用される場合は、２０個の通常のアミノ酸およびそれらの略語は、以下の従来の使用法に従う。Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ−Ａ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（第２版，Ｅ．Ｓ．Ｇｏｌｕｂ  ａｎｄ  Ｄ．Ｒ．Ｇｒｅｎ編，Ｓｉｎａｕｅｒ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ，Ｓｕｎｄｅｒｌａｎｄ  Ｍａｓｓ．（１９９１））を参照のこと。上記２０個の通常のアミノ酸の立体異性体（例えば、Ｄ−アミノ酸）、非天然アミノ酸（例えば、α−，α−２置換型アミノ酸、Ｎ−アルキルアミノ酸、乳酸、および他の非従来型アミノ酸）は、本発明のポリペプチドの適切な構成成分であり得る。非従来型アミノ酸の例としては以下が挙げられる：４−ヒドロキシプロリン、γ−カルボキシグルタミン酸、ε−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルリジン、ε−Ｎ−アセチルリジン、Ｏ−ホスホセリン、Ｎ−アセチルセリン、Ｎ−ホルミルメチオニン、３−メチルヒスチジン、５−ヒドロキシリジン、σ−Ｎ−メチルアルギニン、および他の類似のアミノ酸、ならびにイミノ酸（例えば、４−ヒドロキシプロリン）。本明細書中で使用されるポリペプチド表記では、標準的な使用法および慣習にしたがい、その左側方向はアミノ末端方向であり、その右側方向はカルボキシ末端方向である。
【０１３４】
同様に、他の場所に明らかに示されない限りは、１本鎖のポリヌクレオチド配列の左側末端は５’末端であり、２本鎖のポリヌクレオチド配列の左側方向は５’方向と呼ばれる。新生ＲＮＡ転写物の５’から３’の付加の方向は、ＲＮＡと同じ配列を有しているＤＮＡ鎖の転写方向配列領域と呼ばれる。そして、ＲＮＡ転写産物の５’から５’末端は、「上流配列」、ＲＮＡと同じ配列を有しているＤＮＡ鎖の配列領域と呼ばれ、そして、上記ＲＮＡ転写産物の３’から３’末端の方向は、「下流領域」と呼ばれる。
【０１３５】
ポリペプチドに適用される場合は、用語「実質的同一性」は、２つのペプチド配列が、例えば、デフォルトギャップの重みを使用して、プログラムＧＡＰまたはＢＥＳＴＦＩＴによって最適にアラインメントされた場合に、少なくとも８０パーセントの配列同一性、好ましくは少なくとも９０パーセントの配列同一性、より好ましくは少なくとも９５パーセントの配列同一性、そして最も好ましくは９９パーセントの配列同一性を共有することを意味する。
【０１３６】
好ましくは、同一でない残基位置は、保存的アミノ酸置換によって異なる。
【０１３７】
保存的アミノ酸置換は、類似する側鎖を有している残基の互換性をいう。例えば、脂肪族側鎖を有しているアミノ酸のグループは、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、およびイソロイシンであり；脂肪族ヒドロキシル側鎖を有しているアミノ酸のグループは、セリンおよびスレオニンであり；アミド含有側鎖を有しているアミノ酸のグループは、アスパラギンおよびグルタミンであり；芳香族側鎖を有しているアミノ酸のグループは、フェニルアラニン、チロシン、およびトリプトファンであり；塩基性側鎖を有しているアミノ酸のグループは、リジン、アルギニン、およびヒスチジンであり；そして、硫黄含有側鎖を有しているアミノ酸のグループは、システインおよびメチオニンである。好ましい保存的アミノ酸置換のグループは、バリン−ロイシン−イソロイシン、フェニルアラニン−チロシン、リジン−アルギニン、アラニン−バリン、グルタミン酸−アスパラギン酸およびアスパラギン−グルタミンである。
【０１３８】
本明細書中で議論される場合は、抗体または免疫グロブリン分子のアミノ酸配列における小さなバリエーションは、上記アミノ酸配列におけるバリエーションが少なくとも７５％、より好ましくは少なくとも８０％、９０％、９５％、そして最も好ましくは９９％維持される場合において、本発明に含まれるように意図される。特に、保存的アミノ酸置換が意図される。保存的置換は、それらの側鎖に関連性があるアミノ酸のファミー中で行われる置換である。遺伝子にコードされるアミノ酸は、一般的には、以下のファリミーに分類される：（１）酸性アミノ酸は、アスパラギン酸、グルタミン酸である；（２）塩基性アミノ酸は、リジン、アルギニン、ヒスチジンである；（３）非極性アミノ酸は、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファンである、そして（４）電荷を持たない極性アミノ酸は、グリシン、アスパラギン、グルタミン、システイン、セリン、スレオニン、チロシンである。親水性アミノ酸としては、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、グルタミン、グルタミン酸、ヒスチジン、リジン、セリン、およびスレオニンが挙げられる。疎水性アミノ酸としては、アラニン、システイン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、トリプトファン、チロシン、およびバリンが挙げられる。アミノ酸の他のファミリーとしては、以下が挙げられる：（ｉ）脂肪族ヒドロキシファミリーである、セリンおよびスレオニン；（ｉｉ）アミド含有ファミリーである、アスパラギンおよびグルタミン；（ｉｉｉ）脂肪族ファミリーである、アラニン、バリン、ロイシン、およびイソロイシン；ならびに、（ｉｖ）芳香族ファミリーである、フェニルアラニン、トリプトファン、およびチロシン。例えば、特に、置換がフレームワーク部位内にあるアミノ酸とは無関係である場合は、ロイシンのイソロイシンまたはバリンでの単離された置換、アスパラギン酸のグルタミン酸での単離された置換、スレオニンのセリンでの単離された置換、あるいは、構造的に関係があるアミノ酸でのアミノ酸の同様の置換は、得られる分子の結合または性質に大きな影響は与えないであろうと予想することが、合理的である。アミノ酸置換が機能的ペプチドを生じるかどうかは、ポリペプチド誘導体の特異的活性をアッセイすることによって容易に決定され得る。アッセイは本明細書中に詳細に記載される。抗体もしくは免疫グロブリン分子の断片またはアナログは、当業者によって容易に調製され得る。断片またはアナログの好ましいアミノ末端およびカルボキシ末端は、機能的ドメインの境界付近に存在する。構造ドメインおよび機能ドメインは、ヌクレオチド配列データおよび／またはアミノ酸配列データの、公的な配列データベースまたは民間の配列データベースに対する比較によって同定され得る。好ましくは、コンピュータ化された比較方法は、公知の構造および／または機能を有する他のタンパク質の中に存在する配列モチーフまたは予測されるタンパク質の立体構造ドメインを同定するために使用される。公知の三次元構造となるように折り畳まれるタンパク質配列を同定するための方法は公知である（Ｂｏｗｉｅら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５３：１６４（１９９１））。従って、上記の例は、当業者が、本発明に従って構造ドメインおよび機能的ドメインを定義するために使用され得る配列モチーフおよび構造的立体構造を認識できることを示す。
【０１３９】
好ましいアミノ酸置換は、以下である：（１）タンパク質分解に対する感受性を減少させる置換、（２）酸化に対する感受性を低下させる置換、（３）タンパク質複合体を形成するための結合親和性を変化させる置換、（４）結合親和性を変化させる置換、および（４）そのようなアナログの他の生理化学的性質または機能的性質を与えるかまたは改変する置換。アナログには、自然界に存在するペプチド配列以外の配列の突然変異タンパク質が含まれ得る。例えば、単一のアミノ酸置換または複数のアミノ酸置換（好ましくは、保存的アミノ酸置換）が、自然界に存在する配列の中に（好ましくは、分子間接触を形成するドメイン（単数または複数）の外側にあるポリペプチドの部分の中に）作製され得る。保存的アミノ酸置換は、もとの配列の構造的性質を実質的には変化させないはずである（例えば、置換アミノ酸は、もとの配列中に存在するへリックスを断裂させるか、またはもとの配列を特性決定する他の型の二次構造を破壊する傾向はないはずである）。当該分野で理解されているポリペプチドの二次構造と三次構造の例は、Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ（Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ，編，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９８４））；Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｔｏ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ（Ｃ．Ｂｒａｎｄｅｎ  ａｎｄ  Ｊ．Ｔｏｏｚｅ，編，Ｇａｒｌａｎｄ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．（１９９１））；およびＴｈｏｒｎｔｏｎら、Ｎａｔｕｒｅ  ３５４：１０５（１９９１）に記載されている。
【０１４０】
本明細書中で使用される場合は、用語「ポリペプチド断片」は、アミノ末端欠失および／またはカルボキシ末端に欠失を有するポリペプチドをいうが、ここでは、残りのアミノ酸配列は、推定される自然界に存在する配列（例えば、全長ｃＤＮＡ配列由来の）中の対応する位置と同じである。断片は、典型的には、少なくとも５、６、８、または１０アミノ酸の長さ、好ましくは少なくとも１４アミノ酸の長さ、より好ましくは少なくとも２０アミノ酸の長さ、通常は、少なくとも５０アミノ酸の長さであり、そしてなおさらに好ましくは少なくとも７０アミノ酸の長さである。用語「アナログ」は、本明細書中で使用される場合は、推定されるアミノ酸配列の一部分に対して実質的な同一性を有する少なくとも２５個のアミノ酸のセグメントからなり、そして、以下の特性のうちの少なくとも１つを有するポリペプチドをいう：（１）適切な結合条件下でのＲＡＮＴＥＳに対する特異的結合、または（２）適切なＲＡＮＴＥＳ結合をブロックする能力。典型的には、ポリペプチドアナログには、自然界に存在する配列に関して保存的アミノ酸置換（または付加もしくは欠失）が含まれる。アナログは、典型的には、少なくとも２０アミノ酸の長さ、好ましくは少なくとも５０アミノ酸の長さまたはそれ以上のアミノ酸の長さであり、多くの場合には、全長の自然界に存在するポリペプチドと同じ長さであり得る。
【０１４１】
ペプチドアナログは一般的には、製薬産業において、鋳型ペプチドの性質と類似する性質を有している非ペプチド性薬物として使用される。これらのタイプの非ペプチド性化合物は、「ペプチドの模倣物」または「ペプチド模倣物」と呼ばれる（Ｆａｕｃｈｅｒｅ，Ｊ．Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ  Ｒｅｓ．１５：２９（１９８６），Ｖｅｂｅｒ  ａｎｄ  Ｆｒｅｉｄｉｎｇｅｒ  ＴＩＢＳ  ｐ．３９２（１９８５）；およびＥｖａｎｓら，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３０：１２２９（１９８７））。そのような化合物は、多くの場合、コンピュータ化された分子モデリングの助けを借りて開発される。治療上有用なペプチドに対して構造的に類似しているペプチド模倣物は、同等の治療効果または予防効果を得るために使用され得る。一般的には、ペプチド模倣物は、パラダイムポリペプチド（すなわち、生物化学的特性または薬理学的活性を有しているポリペプチド）（例えば、ヒト抗体）に対して構造的に類似するが、当該分野で周知の方法によって、以下からなる群から選択された結合により必要に応じて置換された１つ以上のペプチド結合を有する：−ＣＨ２ＮＨ−、−ＣＨ２Ｓ−、−ＣＨ２−ＣＨ２−、−ＣＨ＝ＣＨ−（シスおよびトランス）、−ＣＯＣＨ２−、ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２−、ならびに−ＣＨ２ＳＯ−。コンセンサス配列の１つ以上のアミノ酸の、同じタイプのＤ−アミノ酸（例えば、Ｌ−リジンの代わりにＤ−リジン）での意図的な置換は、より安定なペプチドを作製するために使用され得る。加えて、コンセンサス配列または実質的に同じコンセンサス配列のバリエーションを含む拘束されたペプチドは、当該分野で公知の方法によって（Ｒｉｚｏ  ａｎｄ  Ｇｉｅｒａｓｃｈ  Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．６１：３８７（１９９２））；例えば、上記ペプチドを環化させる分子内ジスルフィド架橋を形成することができる内部システイン残基を添加することによって、作製され得る。
【０１４２】
用語「薬剤」は、本明細書中では、化合物、化合物の混合物、生物学的高分子、または生物学的材料から作製された抽出物を示すために使用される。
【０１４３】
本明細書中で使用される場合は、用語「標識」または「標識された」は、検出マーカーの取込み（例えば、放射標識されたアミノ酸の取込み、または標識されたアビジン（例えば、光学的方法もしくは熱量測定（ｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｉｃ）方法によって検出され得る蛍光マーカーまたは酵素活性を含むストレプトアビジン）によって検出され得るビオチニル部分のポリペプチドへの結合による）をいう。特定の状況では、上記標識またはマーカーは治療用であり得る。ポリペプチドおよび糖タンパク質を標識する様々な方法は、当該分野で公知であり、使用され得る。ポリペプチドについての標識の例としては、以下が挙げられるがこれらに限定されない：放射性同位体または放射性核種（例えば、３Ｈ、１４Ｃ、１５Ｎ、３５Ｓ、９０Ｙ、９９Ｔｃ、１１１Ｉｎ、１２５Ｉ、１３１Ｉ）、蛍光標識（例えば、ＦＩＴＣ、ローダミン、ランタニド蛍光体）、酵素標識（例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ、ｐ−ガラクトシダーゼ、ルシフェラーゼ、アルカリホスファターゼ）、化学発光体、ビオチニル基、二次レポーターによって認識される予め決定されたポリペプチドエピトープ（例えば、ロイシンジッパー対配列、二次抗体についての結合部位、金属結合ドメイン、エピトープタグ）。いくつかの実施形態では、標識は、起こり得る立体障害を減少させるための様々な長さのスペーサーアームによって結合される。本明細書中で使用される場合は、用語「薬剤または薬物」は、患者に対して適切に投与された場合に所望される治療効果を誘導することができる化合物または組成物をいう。
【０１４４】
本明細書中の他の化学用語は、当該分野での通常の使用法に従って、Ｔｈｅ  ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  ｏｆ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｔｅｒｍｓ（Ｐａｒｋｅｒ，Ｓ．編集，ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ，Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ（１９８５））によって説明されるように使用される。
【０１４５】
本明細書中で使用される場合は、「実質的に純粋」は、目的の種が存在する優勢種であり（すなわち、モル基準で、任意の他の個々の種よりもその組成物中に豊富に存在する）、好ましくは、実質的に精製された画分が１つの組成物であり、ここでは、上記目的の種が、存在する全高分子種のうちの少なくとも約５０パーセント（モル基準で）を占める組成物であることを意味する。
【０１４６】
一般的には、実質的に純粋な組成物は、この組成物中に存在する全高分子種のうちの約８０％より多く、より好ましくは約８５％、９０％、９５％および９９％よりも多く占めるであろう。最も好ましくは、目的の種は、本質的に均質となるまで精製される（混入物質の種は、通常の方法によっては上記組成物中では検出され得ない）。ここでは、上記組成物は、本質的には、単一の高分子種からなる。
【０１４７】
用語「患者」には、ヒト被験体および獣医学の被験体が含まれる。用語「被験体」には、ヒトおよび他の動物が含まれる。
【０１４８】
ヒト抗体および抗体のヒト化
ｈｕＲＡＮＴＥＳ抗体は、例えば、以下に提供される実施例に記載される手順を使用して作製される。
【０１４９】
他の代替的な方法においては、ｈｕＲＡＮＴＥＳ抗体は、例えば、ヒト配列だけを含む抗体を使用して、ファージディスプレイ法を使用して開発される。そのようなアプローチは、当該分野で周知である（例えば、引用により本明細書中に組み入れられるＷＯ９２／０１０４７および米国特許第６，５２１，４０４号）。このアプローチでは、軽鎖と重鎖の無作為の対を有しているファージのコンビナトリアルライブラリーが、ＲＡＮＴＥＳもしくはその断片の天然の供給源または組換え体供給源を使用してスクリーニングされる。別のアプローチでは、ｈｕＲＡＮＴＥＳ抗体は、プロセスの少なくとも１つの工程に、トランスジェニックである非ヒト動物をヒトＲＡＮＴＥＳタンパク質で免疫化する工程が含まれるプロセスによって生産され得る。このアプローチでは、この異種非ヒト動物の内因性の重鎖遺伝子座および／またはκ軽鎖遺伝子座のいくつかは無能力化されており、抗原に応答して免疫グロブリンをコードする遺伝子を生成するために必要な再構成することができない。加えて、少なくとも１つのヒト重鎖遺伝子座と少なくとも１つのヒト軽鎖遺伝子座は、上記動物に安定にトランスフェクトされている。従って、投与された抗原に応答して、上記ヒト遺伝子座が再構成されて、この抗原に免疫学的に免疫特異的であるヒト可変領域をコードする遺伝子が提供される。したがって、免疫化されると、異種マウスは、完全なヒト免疫グロブリンを分泌するＢ細胞を生産する。
【０１５０】
異種非ヒト動物を生産するための様々な技術は当該分野で周知である。例えば、その全体が引用により本明細書中に組み入れられる米国特許第６，０７５，１８１号および米国特許第６，１５０，５８４号を参照のこと。この一般的なストラテジーは、１９９４年に公開された第一のＸｅｎｏＭｏｕｓｅ（商標）株の作製と一緒に明らかにされた。その全体が引用により本明細書中に組み入れられるＧｒｅｅｎら、Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  ７：１３−２１（１９９４）を参照のこと。米国特許第６，１６２，９６３号、同第６，１５０，５８４号、同第６，１１４，５９８号、同第６，０７５，１８１号、および同第５，９３９，５９８号、ならびに、日本国特許第３０６８１８０  Ｂ２、同３０６８５０６  Ｂ２、および同３０６８５０７  Ｂ２、ならびに欧州特許特許ＥＰ０４６３１５１  Ｂ１号、ならびに国際特許出願番号ＷＯ９４／０２６０２、同ＷＯ９６／３４０９６、同ＷＯ９８／２４８９３、同ＷＯ００／７６３１０、ならびに関連するファミリーのメンバーもまた参照のこと。
【０１５１】
代替的なアプローチでは、他の者は、「ミニ遺伝子座」アプローチを利用した。上記ミニ遺伝子座アプローチでは、外因性のＩｇ遺伝子座は、Ｉｇ遺伝子座由来の断片（個々の遺伝子）を含めることにより模倣させられる。従って、１つ以上のＶＨ遺伝子、１つ以上のＤＨ遺伝子、１つ以上のＪＨ遺伝子、μ定常領域、および第２の定常領域（好ましくは、γ定常領域）が、動物への挿入のための構築物となるように形成される。例えば、米国特許第５，５４５，８０６号；同第５，５４５，８０７号；同第５，５９１，６６９号；同第５，６１２，２０５号；同第５，６２５，８２５号；同第５，６２５，１２６号；同第５，６３３，４２５号；同第５，６４３，７６３号；同第５，６６１，０１６号；同第５，７２１，３６７号；同第５，７７０，４２９号；同第５，７８９，２１５号；同第５，７８９，６５０号；同第５，８１４，３１８号；同第５，８７７，３９７号；同第５，８７４，２９９号；同第６，０２３，０１０号；および同第６，２５５，４５８号；ならびに、欧州特許第０５４６０７３  Ｂ１号；ならびに、国際特許出願番号ＷＯ９２／０３９１８、同ＷＯ９２／２２６４５、同ＷＯ９２／２２６４７、同ＷＯ９２／２２６７０、同ＷＯ９３／１２２２７、同ＷＯ９４／００５６９、同ＷＯ９４／２５５８５、同ＷＯ９６／１４４３６、同ＷＯ９７／１３８５２、および同ＷＯ９８／２４８８４、ならびに関連するファミリーのメンバーもまた参照のこと。
【０１５２】
マイクロ細胞融合により、染色体の大きな断片または染色体全体がその中に導入されているヒト抗体の、マウスによる作製もまた明らかにされている。欧州特許出願番号７７３２８８および同８４３９６１号を参照のこと。
【０１５３】
ヒト抗マウス抗体（ＨＡＭＡ）応答によって、本産業界は、キメラ抗体または別の方法でヒト化された抗体を調製するように至った。キメラ抗体はヒト定常領域と免疫可変領域を有するが、特定のヒト抗キメラ抗体（ＨＡＣＡ）応答が、特にこの抗体の長期利用または複数回投与の利用において観察されるであろうと予想される。従って、ＨＡＭＡ応答またはＨＡＣＡ応答の懸念および／または影響を低下させるか、あるいは別の方法で和らげるために、ＲＡＮＴＥＳに対する完全なヒト抗体を提供することが所望される。
【０１５４】
免疫原性が低下した抗体の生産はまた、適切なライブラリーを使用するヒト化技術、キメラ化技術、およびディスプレイ技術により達成される。マウス抗体または他の種由来の抗体を当該分野で周知の技術を使用してヒト化することができ、また、霊長類化することもできることは理解されるであろう。例えば、Ｗｉｎｔｅｒ  ａｎｄ  Ｈａｒｒｉｓ，Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｔｏｄａｙ  １４：４３  ４６（１９９３）およびＷｒｉｇｈｔら，Ｃｒｉｔ，Ｒｅｖｉｅｗｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２１２５−１６８（１９９２）を参照のこと。目的の抗体は、対応するヒト配列でＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、ヒンジドメイン、および／またはフレームワークドメインを置換するように、組換えＤＮＡ技術によって操作され得る（ＷＯ９２１０２１９０ならびに米国特許第５，５３０，１０１号、同第５，５８５，０８９号、同第５，６９３，７６１号、同第５，６９３，７９２号、同第５，７１４，３５０号、および同第５，７７７，０８５号を参照のこと）。また、キメラ免疫グロブリン遺伝子の構築のためのＩｇ  ｃＤＮＡの使用は、当該分野で公知である（Ｌｉｕら，Ｐ．Ｎ．Ａ．Ｓ．８４：３４３９（１９８７）およびＪ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３９：３５２１（１９８７））。ｍＲＮＡは、上記抗体を生産するハイブリドーマまたは他の細胞から単離され、そしてｃＤＮＡを生産するために使用される。目的のｃＤＮＡは、特異的プライマーを使用するポリメラーゼ連鎖反応によって増幅され得る（米国特許第４，６８３，１９５号および同第４，６８３，２０２号）。あるいは、ライブラリーは、目的の配列を単離するために作製され、スクリーニングされる。次いで、上記抗体の可変領域をコードするＤＮＡ配列が、ヒト定常領域配列に融合させられる。ヒト定常領域遺伝子の配列は、Ｋａｂａｔら（１９９１）  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｎ．Ｉ．Ｈ．出版番号９１−３２４２に見ることができる。ヒトＣ領域遺伝子は、公知のクローンから容易に入手することができる。アイソタイプの選択は、所望されるエフェクター機能（例えば、補体固定、または抗体依存的細胞性細胞障害における活性）により導かれるであろう。好ましいアイソタイプは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４である。ヒト軽鎖定常領域であるκまたはλのうちのいずれかが使用され得る。その後、キメラであるヒト化抗体が、従来の方法によって発現させられる。
【０１５５】
抗体断片（例えば、Ｆｖ、Ｆ（ａｂ’）２、およびＦａｂ）は、無傷のタンパク質の切断によって（例えば、プロテアーゼまたは化学的切断によって）調製され得る。あるいは、短縮型遺伝子が設計される。例えば、Ｆ（ａｂ’）２断片の一部をコードするキメラ遺伝子には、短縮型分子を生じるための、Ｈ鎖のＣＨ１ドメインおよびヒンジ領域をコードするＤＮＡ配列、その後ろに、翻訳終止コドンが含まれる。
【０１５６】
Ｈ領域およびＬ  Ｊ領域のコンセンサス配列は、その後のヒトＣ領域セグメントへのＶ領域セグメントの連結のためにＪ領域に有用な制限酵素部位を導入するために、プライマーとして使用されるオリゴヌクレオチドを設計するために使用され得る。Ｃ領域のｃＤＮＡは、ヒト配列中の類似する位置に制限酵素部位を配置するために、部位特異的突然変異誘発によって改変され得る。
【０１５７】
発現ベクターとしては、プラスミド、レトロウイルス、ＹＡＣ、ＥＢＶ由来のエピソームなどが挙げられる。便利なベクターは、任意のＶＨ配列またはＶＬ配列が容易に挿入され得、発現され得るように操作された適切な制限部位を有する、機能的に完全なヒトＣＨ免疫グロブリン配列またはヒトＣＬ免疫グロブリン配列をコードするベクターである。そのようなベクターでは、スプライシングは通常、挿入されたＪ領域中にあるスプライシングドナー部位とヒトＣ領域の前にあるスプライスアクセプター部位との間、そしてヒトＣＨエキソン中に存在するスプライス領域でも起こる。ポリアデニル化および翻訳終結は、コード領域の下流の天然の染色体部位で起こる。得られるキメラ抗体は、任意の強いプロモーター（レトロウイルスＬＴＲ（例えば、ＳＶ−４０初期プロモーター（Ｏｋａｙａｍａら，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏ．３：２８０（１９８３））、ラウス肉腫ウイルスＬＴＲ（Ｇｏｒｍａｎら，Ｐ．Ｎ．Ａ．Ｓ．７９：６７７７（１９８２））、およびモロニーマウス白血病ウイルスＬＴＲ（Ｇｒｏｓｓｃｈｅｄｌら，Ｃｅｌｌ  ４１：８８５（１９８５））を含む）に連結され得る。また、理解されるように、天然のＩｇプロモーターなども使用され得る。
【０１５８】
さらに、ヒト抗体または他の種由来の抗体は、ディスプレイ型技術（ファージディスプレイ、レトロウイルスディスプレイ、リボソームディスプレイを含むが、これらに限定されない）および他の技術によって、当該分野で周知の技術を使用して作製され得、そして、得られる分子は、そのような技術が当該分野で周知であるので、さらなる成熟（例えば、親和性成熟）が行われ得る。Ｗｒｉｇｈｔら、Ｃｒｉｔ，Ｒｅｖｉｅｗｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２１２５−１６８（１９９２），Ｈａｎｅｓ  ａｎｄ  Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ  ＰＮＡＳ  ＵＳＡ  ９４：４９３７−４９４２（１９９７）（ｒｉｂｏｓｏｍａｌ  ｄｉｓｐｌａｙ），Ｐａｒｍｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｍｉｔｈ  Ｇｅｎｅ  ７３：３０５−３１８（１９８８）（ｐｈａｇｅ  ｄｉｓｐｌａｙ），Ｓｃｏｔｔ，ＴＩＢＳ，ｖｏｌ．１７：２４１−２４５（１９９２），Ｃｗｉｒｌａら、ＰＮＡＳ  ＵＳＡ  ８７：６３７８−６３８２（１９９０），Ｒｕｓｓｅｌら、Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ２１：１０８１−１０８５（１９９３），Ｈｏｇａｎｂｏｏｍら、Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖｉｅｗｓ  １３０：４３−６８（１９９２），Ｃｈｉｓｗｅｌｌ  ａｎｄ  ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ  ＴＩＢＴＥＣＨ；１０：８０−８Ａ（１９９２）、および米国特許第５，７３３，７４３号。ディスプレイ技術がヒトではない抗体を生産するために利用される場合は、そのような抗体は、上記のようにヒト化され得る。
【０１５９】
これらの技術を使用して、抗体は、ＲＡＮＴＥＳを発現している細胞、ＲＡＮＴＥＳ自体、ＲＡＮＴＥＳの複数の形態、そのエプトープまたはペプチド、および、それに対する発現ライブラリー（例えば、米国特許第５，７０３，０５７号を参照のこと）に対して作製され得る。上記発現ライブラリーはその後、上記のように、上記の活性についてスクリーニングされ得る。
【０１６０】
他の治療薬の設計と作製
本発明に従い、そしてＲＡＮＴＥＳに関して本明細書中で生産され、特性決定される抗体の活性に基づいて、抗体部分を超えた他の治療手段（ｍｏｄａｌｉｔｙ）の設計が、促進される。そのような手段としては、進歩した抗体治療薬（例えば、二重特異性抗体）、免疫毒素、および放射標識された治療薬、ペプチド治療薬の作製、遺伝子治療（特に、イントラボディ）、アンチセンス治療薬、ならびに低分子が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１６１】
例えば、二重特異性抗体に関して、以下を含む二重特異性抗体が作製され得る：（ｉ）１つはＲＡＮＴＥＳに対して特異性があり、もう１つは一緒に結合される第２の分子に対して特異性がある２つの抗体、（ｉｉ）ＲＡＮＴＥＳに対して特異的な１つの鎖と、第２の分子に対して特異的な第２の鎖を有する単一抗体、または（ｉｉｉ）ＲＡＮＴＥＳと第２の分子に対する特異性を有する単鎖抗体。そのような二重特異性抗体は、周知の技術（例えば、（ｉ）および（ｉｉ）については、例えば、Ｆａｎｇｅｒら，Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ４：７２−８１（１９９４）および前出のＷｒｉｇｈｔら、Ｃｒｉｔ，Ｒｅｖｉｅｗｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２１２５−１６８（１９９２）を参照のこと、そして、（ｉｉｉ）については、例えば、Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒら，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ（補遺）７：５１−５２（１９９２）を参照のこと）を使用して作製される。
【０１６２】
免疫毒素については、抗体は、当該分野で周知の技術を利用して免疫毒素として作用するように改変され得る。例えば、Ｖｉｔｅｔｔａ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｔｏｄａｙ  １４：２５２（１９９３）を参照のこと。米国特許第５，１９４，５９４号も参照のこと。放射標識抗体の調製については、そのような改変された抗体はまた、当該分野で周知の技術を利用して、容易に調製され得る。例えば、Ｊｕｎｇｈａｎｓら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ  ａｎｄ  Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｙ  ６５５−６８６（第２版，Ｃｈａｆｈｅｒ  ａｎｄ  Ｌｏｎｇｏ編，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｒａｖｅｎ（１９９６））を参照のこと。米国特許第４，６８１，５８１号、同第４，７３５，２１０号、同第５，１０１，８２７号、同第５，１０２，９９０号（ＲＥ３５，５００）号、同第５，６４８，４７１号、および同第５，６９７，９０２号もまた参照のこと。免疫毒素および放射標識分子のそれぞれは、ＲＡＮＴＥＳを発現している細胞を死滅させる可能性がある。
【０１６３】
治療用ペプチドの生成については、ＲＡＮＴＥＳおよびそれに対する抗体（例えば、本発明の抗体）に関する構造情報またはペプチドライブラリーのスクリーニングの利用により、ＲＡＮＴＥＳに特異的な治療用ペプチドが作製され得る。ペプチド治療薬の設計およびスクリーニングは、Ｈｏｕｇｈｔｅｎら、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  １３：４１２−４２１（１９９２），Ｈｏｕｇｈｔｅｎ  ＰＮＡＳ  ＵＳＡ  ８２：５１３１−５１３５（１９８５），Ｐｉｎａｌｌａら、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  １３：９０１−９０５（１９９２），Ｂｌａｋｅ  ａｎｄ  Ｌｉｔｚｉ−Ｄａｖｉｓ，ＢｉｏＣｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．３：５１０−５１３（１９９２）で議論されている。免疫毒素および放射標識分子もまた調製され得、抗体について上記で議論されたように、ペプチド部分についてと同様の様式で調製され得る。ＲＡＮＴＥＳ分子（または形態（例えば、スプライス変異体または代替形態））が疾患プロセスにおいて機能的に活性であると想定すると、遺伝子およびそれに対するアンチセンス治療薬を通常の技術によって設計することもまた、可能であろう。そのような手段は、ＲＡＮＴＥＳの機能を調節するために利用され得る。それと共に、本発明の抗体は、それに関する機能的アッセイの設計および使用を容易にする。アンチセンス治療薬の設計およびストラテジーは、国際特許出願ＷＯ９４／２９４４４に詳細に議論されている。遺伝子治療の設計とストラテジーは周知である。しかしながら、特に、遺伝子治療技術（イントラボディを含む）の使用は、特に有利であると証明することができた。例えば、Ｃｈｅｎら、Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ５：５９５−６０１（１９９４）およびＭａｒａｓｃｏ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ４：１１−１５（１９９７）を参照のこと。遺伝子治療薬に関する一般的設計と考察はまた、国際特許出願ＷＯ９７／３８１３７で議論されている。
【０１６４】
ＲＡＮＴＥＳ分子の構造と、本発明に従った他の分子（例えば、本発明の抗体および他のもの）とのその相互作用から収集された知識は、合理的にさらなる治療手段を設計するために利用され得る。この点で、合理的な薬物設計技術（例えば、Ｘ線結晶解析、コンピュータに支援される（または補助される）分子モデリング（ＣＡＭＭ）、定量的構造活性相関または定性的構造活性相関（ＱＳＡＲ）、および類似する技術）は、薬物の発見作業に焦点を当てるために利用され得る。合理的な設計は、ＲＡＮＴＥＳの活性を改変または調節するために使用され得る分子またはその特異的形態と相互作用できる、タンパク質または合成構造物の予測を可能にする。そのような構造物は、化学合成され得るか、または生物学的システムにおいて発現され得る。このアプローチは、Ｃａｐｓｅｙら、Ｇｅｎｅｔｉｃａｌｌｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｄｒｕｇｓ（Ｓｔｏｃｋｔｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ（１９８８））にまとめられている。さらに、コンビナトリアルライブラリーが設計され得、合成され得、スクリーニングプログラム（例えば、ハイスループットスクリーニング作業）において用いられ得る。
【０１６５】
治療上の投与および処方物
本発明に従う治療用物質の投与が、適切な担体、賦形剤、および他の薬剤と共に投与されるであろうことが、認識されであろう。上記他の薬剤は、改良された転移、送達、耐性などを提供するために、処方物に取り込まれる。多数の適切な処方物は、全ての製薬化学者に公知の処方書中に見られ得る：Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（第１５版，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ（１９７５））、特にその中のＢｌａｕｇ，Ｓｅｙｍｏｕｒによる第８７章）。これらの処方物としては、例えば、散剤、ペースト、軟膏剤、ゼリー、ワックス、油、脂質、脂質（陽イオン性または陰イオン性）含有ビヒクル（例えば、Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ（商標））、ＤＮＡ結合体、無水吸収性ペースト、水中油型エマルジョンおよび油中水型エマルジョン、エマルジョンカルボワックス（様々な分子量のポリエチレングリコール）、半固体ゲル、およびカルボワックスを含む半固体混合物が挙げられる。上記処方物中の有効成分が上記処方物によっては不活性化されず、上記処方物が投与経路と生理的に適合性であり、寛容であるという条件で、任意の上記混合物は、本発明に従う処置および治療に適切であり得る。Ｂａｌｄｒｉｃｋ  Ｐ．「Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  ｅｘｃｉｐｉｅｎｔ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ：ｔｈｅ  ｎｅｅｄ  ｆｏｒ  ｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌ  ｇｕｉｄａｎｃｅ．」Ｒｅｇｕｌ．Ｔｏｘｉｃｏｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．３２（２）：２１０−８（２０００），Ｗａｎｇ  Ｗ．「Ｌｙｏｐｈｉｌｉｚａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ｓｏｌｉｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ．」Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．２０３（１−２）：１−６０（２０００），Ｃｈａｒｍａｎ  ＷＮ「Ｌｉｐｉｄｓ，ｌｉｐｏｐｈｉｌｉｃ  ｄｒｕｇｓ，ａｎｄ  ｏｒａｌ  ｄｒｕｇ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ−ｓｏｍｅ  ｅｍｅｒｇｉｎｇ  ｃｏｎｃｅｐｔｓ．」Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｓｃｉ．８９（８）：９６７−  ７８（２０００），Ｐｏｗｅｌｌら、”Ｃｏｍｐｅｎｄｉｕｍ  ｏｆ  ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ  ｆｏｒ  ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ  ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ”  ＰＤＡ  Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｓｃｉ  Ｔｅｃｈｎｏｌ．５２：２３８−３１１（１９９８）、および製薬化学者に周知の処方物、賦形剤および担体に関係するさらなる情報についての本明細書中での引用文献も参照のこと。
【０１６６】
本発明のＲＡＮＴＥＳアンタゴニスト、ｈｕＲＡＮＴＥＳ抗体、および治療用処方物（例えば、本発明のｈｕＲＡＮＴＥＳ抗体のようなＲＡＮＴＥＳアンタゴニストを含む）は、虚血、虚血に伴う臨床的適応症、再潅流損傷、免疫関連障害（例えば、自己免疫疾患または炎症性障害）に付随する症状を処置あるいは緩和するために使用される。
【０１６７】
自己免疫疾患としては、例えば、以下が挙げられる：後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ、自己免疫要素を伴うウイルス性疾患）、円形脱毛症、強直性脊椎炎、抗リン脂質症候群、自己免疫性アジソン病、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性肝炎、自己免疫性内耳疾患（ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ  ｉｎｎｅｒ  ｅａｒ  ｄｉｓｅａｓｅ）（ＡＩＥＤ）、自己免疫性リンパ増殖症候群（ＡＬＰＳ）、自己免疫性血小板減少性紫斑病（ＡＴＰ）、ベーチェット病、心筋症、セリアックスプルー疱疹状皮膚炎；慢性疲労免疫機能不全症候群（ＣＦＩＤＳ）、慢性炎症性脱髄性多発ニューロパシー（ＣＩＰＤ）、瘢痕性類天疱瘡、寒冷血球凝集素病、クレスト（ｃｒｅｓｔ）症候群、クローン病、ドゴー病、若年性皮膚筋炎、円板状ループス、本態性混合クリオグロブリン血症、線維筋痛症−線維筋炎、グレーブス病、ギラン−バレー症候群、橋本甲状腺炎、特発性肺線維症、特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、ＩｇＡニューロパシー、インスリン依存性真性糖尿病、若年性慢性関節炎（スティル病）、若年性関節リウマチ、メニエール病、混合型結合組織病、多発性硬化症、重症筋無力症、悪性貧血、結節性多発性動脈炎、多発性軟骨炎、多発内分泌腺症候群、リウマチ性多筋症、多発性筋炎および皮膚筋炎、原発性無ガンマグロブリン血症、原発性胆汁性肝硬変、乾癬、乾癬性関節炎、レイノー現象、ライター症候群、リウマチ熱、関節リウマチ、サルコイドーシス、強皮症（進行性全身性硬化症（ＰＳＳ）、全身性硬化症（ＳＳ）としても知られている）、シェーグレン症候群、スティッフマン症候群、全身性エリテマトーデス、高安動脈炎、側頭動脈炎／巨細胞性動脈炎、潰瘍性大腸炎、ブドウ膜炎、白斑およびヴェーゲナー肉芽腫症。
【０１６８】
炎症性障害としては、例えば、慢性炎症性障害および急性炎症性障害が挙げられる。炎症性障害の例としては、アルツハイマー病、喘息、アトピー性アレルギー、アレルギー、アテローム硬化症、気管支喘息、湿疹、糸球体腎炎、対宿主性移植片病、溶血性貧血、変形性関節症、敗血症、脳卒中、組織および臓器の移植、脈管炎、糖尿病性網膜症、ならびに人工呼吸器による肺損傷が挙げられる。
【０１６９】
ｈｕＲＡＮＴＥＳ抗体は、被験体（例えば、ヒト被験体）、および移植された臓器の中での免疫応答を調節する。１つの実施形態では、ＲＡＮＴＥＳアンタゴニスト、ｈｕＲＡＮＴＥＳ抗体、その断片、またはそれらの治療用処方物が、虚血、虚血に伴う臨床的適応症、再潅流損傷、および／または別の免疫関連障害を処置するために、所定の障害を処置するために当該分野で使用される外科的処置あるいは他の介入療法と組み合わせて使用される。例えば、虚血、虚血に伴う臨床的適応症、および／または再潅流損傷の処置に使用される介入療法としては、外科的介入または血管形成術が挙げられる。ＲＡＮＴＥＳアンタゴニスト、ｈｕＲＡＮＴＥＳ抗体、その断片、またはそれらの治療用処方物は、介入的治療と同時（すなわち、その間に）投与されるか、あるいは、ＲＡＮＴＥＳアンタゴニスト、ｈｕＲＡＮＴＥＳ抗体、その断片、またはそれらの治療用処方物は、介入的治療とは異なるタイミングで投与される。例えば、ＲＡＮＴＥＳアンタゴニスト、ｈｕＲＡＮＴＥＳ抗体、その断片、またはそれらの治療用処方物は、いくつかの実施形態では、介入的治療の後に投与される。
【０１７０】
１つの実施形態では、虚血、虚血に伴う臨床的適応症、再潅流損傷、および／または別の免疫関連障害を処置するために使用されるＲＡＮＴＥＳアンタゴニスト、ｈｕＲＡＮＴＥＳ抗体、その断片、またはそれらの治療用処方物は、任意の様々な抗サイトカイン薬剤または抗ケモカイン薬剤と組み合わせて投与される。適切な抗サイトカイン試薬または抗ケモカイン試薬は、例えば、サイトカイン（例えば、インターロイキン１（ＩＬ−１）、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＬ−２０、ＩＬ−２１、ＩＬ−２２、ＩＬ−２３、ＩＬ−２７、およびＩＬ−３１）および／またはケモカイン（例えば、ＭＩＰ１α、ＭＩＰ１β、ＲＡＮＴＥＳ、ＭＣＰ１、ＲＡＮＴＥＳ、ＩＴＡＣ、ＭＩＧ、ＳＤＦ、およびフラクタルカイン）を認識する。
【０１７１】
１つの実施形態では、虚血、虚血に伴う臨床的適応症、再潅流損傷、および／または別の免疫関連障害を処置するために使用されるＲＡＮＴＥＳアンタゴニスト、ｈｕＲＡＮＴＥＳ抗体、その断片、またはそれらの治療用処方物は、１つ以上のさらなる薬剤、またはさらなる薬剤の組み合わせと併用して投与される。例えば、ＲＡＮＴＥＳアンタゴニスト（例えば、ｈｕＲＡＮＴＥＳ抗体）とさらなる薬剤は、１つの治療用組成物になるように処方され、ＲＡＮＴＥＳアンタゴニストとさらなる薬剤は同時に投与される。あるいは、ＲＡＮＴＥＳアンタゴニストとさらなる薬剤は互いに別であり、例えば、それぞれが別の治療用組成物になるように処方され、ＲＡＮＴＥＳアンタゴニストとさらなる薬剤が同時に投与されるか、またはＲＡＮＴＥＳアンタゴニストとさらなる薬剤は、処置レジュメの間に異なるタイミングで投与される。例えば、ＲＡＮＴＥＳアンタゴニスト（例えば、ｈｕＲＡＮＴＥＳ抗体）は、さらなる薬剤の投与の前に投与されるか、ＲＡＮＴＥＳアンタゴニストは、さらなる薬剤の投与に続いて投与されるか、または、ＲＡＮＴＥＳアンタゴニストとさらなる薬剤は交互の様式で投与される。本明細書中に記載される場合は、ＲＡＮＴＥＳアンタゴニストとさらなる薬剤は、単回投与、または複数回投与で投与される。
【０１７２】
例えば、冠動脈疾患の処置においては、ＲＡＮＴＥＳアンタゴニスト、ｈｕＲＡＮＴＥＳ抗体、その断片、またはそれらの治療用処方物は、以下のような１つ以上のさらなる薬剤と組み合わせて投与される：コレステロール降下薬（例えば、スタチン）；抗凝固薬（例えば、ヘパリンおよび／または経口抗凝固薬（例えば、ワルファリンおよびジクマロール））；アスピリンおよび他の抗血小板薬；ＡＣＥ（アンギオテンシン変換酵素）阻害剤（例えば、スルフヒドリル含有ＡＣＥ阻害剤（例えば、カプトプリル（Ｃａｐｔｏｐｒｉｌ））、ジカルボン酸塩含有ＡＣＥ阻害剤（例えば、エナラプリル（Ｅｎａｌａｐｒｉｌ）、ラミプリル（Ｒａｍｉｐｒｉｌ）、キナプリル（Ｑｕｉｎａｐｒｉｌ）、ペリンドプリル（Ｐｅｒｉｎｄｏｐｒｉｌ）リシノプリル（Ｌｉｓｉｎｏｐｒｉｌ）、ベナゼプリル（Ｂｅｎａｚｅｐｒｉｌ））；ホスホン酸塩含有ＡＣＥ阻害剤（例えば、フォシノプリル（Ｆｏｓｉｎｏｐｒｉｌ））；βブロッカー；カルシウムチャンネルブロッカー；ニトログリセリン；長時間作用型硝酸塩（ｌｏｎｇ−ａｃｔｉｎｇ  ｎｉｔｒａｔｅｓ）；糖タンパク質ＩＩｂ−ＩＩＩａ阻害剤；および血栓溶解剤。ＲＡＮＴＥＳアンタゴニストとさらなる薬剤は同時に投与されるか、または、ＲＡＮＴＥＳアンタゴニストとさらなる薬剤は、処置レジュメの間に異なるタイミングで投与される。
【０１７３】
例えば、脳血管疾患の処置においては、ＲＡＮＴＥＳアンタゴニスト、ｈｕＲＡＮＴＥＳ抗体、その断片、またはそれらの治療用処方物は、コレステロール降下薬（例えば、スタチン）；アスピリン、および他の抗血小板薬のような１つ以上のさらなる薬剤と組み合わせて投与される。ＲＡＮＴＥＳアンタゴニストとさらなる薬剤は同時に投与されるか、またはＲＡＮＴＥＳアンタゴニストとさらなる薬剤は、処置レジュメの間に異なるタイミングで投与される。
【０１７４】
例えば、心虚血の処置においては、ＲＡＮＴＥＳアンタゴニスト、ｈｕＲＡＮＴＥＳ抗体、その断片、またはそれらの治療用処方物は、以下のような１つ以上のさらなる薬剤と組み合わせて投与される：アスピリンおよび他の抗血小板薬；ＡＣＥ（アンギオテンシン変換酵素）阻害剤（例えば、スルフヒドリル含有ＡＣＥ阻害剤（例えば、カプトプリル）、ジカルボン酸塩含有ＡＣＥ阻害剤（例えば、エナラプリル、ラミプリル、キナプリル、ペリンドプリル、リシノプリル、ベナゼプリル）；リン酸塩含有ＡＣＥ阻害剤（例えば、フォシノプリル）；βブロッカー；カルシウムチャンネルブロッカー；ニトログリセリン；および長時間作用型硝酸塩。ＲＡＮＴＥＳアンタゴニストとさらなる薬剤は同時に投与されるか、またはＲＡＮＴＥＳアンタゴニストとさらなる薬剤は、処置レジュメの間に異なるタイミングで投与される。
【０１７５】
例えば、心筋虚血の処置においては、ＲＡＮＴＥＳアンタゴニスト、ｈｕＲＡＮＴＥＳ抗体、その断片、またはそれらの治療用処方物は、βブロッカー；カルシウムチャンネルブロッカー；ニトログリセリン；および長時間作用型硝酸塩のような１つ以上のさらなる薬剤と組み合わせて投与される。ＲＡＮＴＥＳアンタゴニストとさらなる薬剤は同時に投与されるか、または、ＲＡＮＴＥＳアンタゴニストとさらなる薬剤は、処置レジュメの間に異なるタイミングで投与される。
【０１７６】
例えば、腎虚血の処置においては、ＲＡＮＴＥＳアンタゴニスト、ｈｕＲＡＮＴＥＳ抗体、その断片、またはそれらの治療用処方物は、以下のような１つ以上のさらなる薬剤と組み合わせて投与される：コレステロール降下薬（例えば、アスピリン）および他の抗血小板薬。ＲＡＮＴＥＳアンタゴニストとさらなる薬剤は同時に投与されるか、または、ＲＡＮＴＥＳアンタゴニストとさらなる薬剤は、処置レジュメの間に異なるタイミングで投与される。
【０１７７】
例えば、末梢血管疾患の処置においては、ＲＡＮＴＥＳアンタゴニスト、ｈｕＲＡＮＴＥＳ抗体、その断片、またはそれらの治療用処方物は、以下のような１つ以上のさらなる薬剤と組み合わせて投与される：抗凝固薬（例えば、ヘパリンおよび／または経口抗凝固薬（例えば、ワルファリンおよびジクマロール））；アスピリン、および他の抗血小板薬；ペントキシフィリン；シロスタゾール；ならびに血栓溶解剤。ＲＡＮＴＥＳアンタゴニストとさらなる薬剤は同時に投与されるか、または、ＲＡＮＴＥＳアンタゴニストとさらなる薬剤は、処置レジュメの間に異なるタイミングで投与される。
【０１７８】
例えば、多発性硬化症の処置においては、ｈｕＲＡＮＴＥＳ抗体またはその治療用処方物は、以下のような１つ以上のさらなる薬剤と組み合わせて投与される：インターフェロンβ１ａ、インターフェロンβ１ｂ、酢酸グラチラメル、ナタリツマブ、コパクソン（Ｃｏｐａｘｏｎｅ）、およびそれらの組み合わせ。ｈｕＲＡＮＴＥＳ抗体とさらなる薬剤は同時に投与されるか、またはｈｕＲＡＮＴＥＳ抗体とさらなる薬剤は、処置レジュメの間に異なるタイミングで投与される。
【０１７９】
クローン病の処置においては、ｈｕＲＡＮＴＥＳ抗体またはその治療用処方物は、以下のような１つ以上のさらなる薬剤と組み合わせて投与される：抗生物質、アミノサリチル酸塩、インフリキシマブ（Ｉｎｆｌｉｘｉｍａｂ）、アダリムマブ（Ａｄａｌｉｍｕｍａｂ）、およびそれらの組み合わせ。適切な抗生物質としては、例えば、メトロニダゾールおよび／またはシプロフロキサシンが挙げられる。適切なアミノサリチル酸塩としては、例えば、メサラミンおよび／またはスルファサラジンが挙げられる。ｈｕＲＡＮＴＥＳ抗体とさらなる薬剤は同時に投与されるか、または、ｈｕＲＡＮＴＥＳ抗体とさらなる薬剤は、処置レジュメの間に異なるタイミングで投与される。
【０１８０】
潰瘍性大腸炎の処置においては、ｈｕＲＡＮＴＥＳ抗体またはその治療用処方物は、以下のような１つ以上のさらなる薬剤と組み合わせて投与される：６−メルカプトプリン、アザチオプリン、インフリキシマブ、およびそれらの組み合わせ。ｈｕＲＡＮＴＥＳ抗体とさらなる薬剤は同時に投与されるか、または、ｈｕＲＡＮＴＥＳ抗体とさらなる薬剤は、処置レジュメの間に異なるタイミングで投与される。
【０１８１】
乾癬の処置においては、ｈｕＲＡＮＴＥＳ抗体またはその治療用処方物は、以下のような１つ以上のさらなる薬剤と組み合わせて投与される：アレファセプト、エファリツマブ、アダリムマブ（Ａｄａｌｉｍｕｍａｂ）、インフリキシマブ、シクロスポリン、メトトレキセート（Ｍｅｔｈｏｔｒｅｘａｔｅ）、およびそれらの組み合わせ。ｈｕＲＡＮＴＥＳ抗体とさらなる薬剤は同時に投与されるか、または、ｈｕＲＡＮＴＥＳ抗体とさらなる薬剤は、処置レジュメの間に異なるタイミングで投与される。
【０１８２】
アテローム性動脈硬化症の処置においては、ｈｕＲＡＮＴＥＳ抗体またはその治療用処方物は、以下のような１つ以上のさらなる薬剤と組み合わせて投与される：ワルファリン、コレステロール降下薬、およびそれらの組み合わせ。適切なコレステロール降下薬としては、例えば、スタチン；およびフィブレートが挙げられる。ｈｕＲＡＮＴＥＳ抗体とさらなる薬剤は同時に投与されるか、または、ｈｕＲＡＮＴＥＳ抗体とさらなる薬剤は、処置レジュメの間に異なるタイミングで投与される。
【０１８３】
ｈｕＲＡＮＴＥＳ抗体およびその治療用処方物は、免疫関連障害に伴う症状を処置または緩和する方法において使用される。例えば、本発明の組成物は、本明細書中に記載される任意の自己免疫疾患および炎症性障害の症状を処置または緩和するために使用される。免疫関連障害に伴う症状としては、例えば、炎症、発熱、食欲低下、体重減少、腹部の症状（例えば、腹痛、下痢または便秘）、関節痛または疼痛（関節痛）、疲労、発疹、貧血、寒冷に対する過敏性（レイノー現象）、筋肉脆弱、筋肉疲労、皮膚または組織状態の変化、息切れまたは他の異常な呼吸型、胸痛または胸筋の狭窄、異常な心拍数（例えば、心拍数の上昇または心拍数の低下）、光感受性、ぼやけた視覚または別の異常な視覚、および臓器の機能の低下が挙げられる。
【０１８４】
ＲＡＮＴＥＳアンタゴニスト（例えば、ｈｕＲＡＮＴＥＳ抗体）およびその治療用処方物は、虚血、虚血に伴う臨床的適応症、再潅流損傷、および／または免疫関連障害（例えば、自己免疫疾患または炎症性障害）に罹患している被験体に投与される。虚血、虚血に伴う臨床的適応症、再潅流損傷、自己免疫疾患、または炎症性障害に罹患している被験体あるいは臓器は、当該分野で公知の方法により同定される。例えば、被験体は、任意の様々な臨床的検査および／または検査室検査（例えば、物理的検査、放射線医学的検査、ならびに免疫状態を評価するための血液、尿および便の解析）を用いて同定される。例えば、狼瘡に罹患している患者は、例えば、細胞核に対する自己抗体が血液中に存在するかどうかを決定するための抗核抗体試験（ＡＮＡ）を使用して、同定される。クローン病に罹患している患者は、例えば、小腸および大腸をそれぞれ評価するために、上部胃腸（ＧＩ）経路および／または大腸内視鏡検査を使用して同定される。乾癬に罹患している患者は、例えば、罹患した皮膚のパッチによって得られた組織の顕微鏡検査を使用して同定されるが、関節リウマチに罹患している患者は、例えば、血液検査および／またはＸ線画像化評価または他の画像化評価を使用して同定される。アテローム性動脈硬化症に罹患している患者は、例えば、血液検査、心電図（ＥＣＧ）、ストレス試験、冠動脈造影法、超音波断層法およびコンピュータ断層撮影法（ＣＴ）を使用して同定される。
【０１８５】
ＲＡＮＴＥＳアンタゴニスト（例えば、ｈｕＲＡＮＴＥＳ抗体）の、虚血、虚血に伴う臨床的適応症、再潅流損傷、または免疫関連障害（例えば、自己免疫疾患もしくは炎症性障害）に罹患している患者への投与は、様々な研究室での結果または臨床結果のうちの任意のものが達成された場合には成功とみなされる。例えば、虚血、虚血に伴う臨床的適応症、再潅流損傷、または免疫関連障害（例えば、自己免疫疾患もしくは炎症性障害）に罹患している患者へのｈｕＲＡＮＴＥＳ抗体の投与は、この障害に伴う症状のうちの１つ以上が緩和されるか、軽減するか、阻害されるか、またはさらに（すなわち、悪化した状態へ）進行しない場合には、成功とみなされる。虚血、虚血に伴う臨床的適応症、再潅流損傷、または免疫関連障害（例えば、自己免疫疾患もしくは炎症性障害）に罹患している患者へのｈｕＲＡＮＴＥＳ抗体の投与は、この障害（例えば、自己免疫疾患）が寛解に入るか、またはさらに（すなわち、悪化した状態へ）進行しない場合には、成功とみなされる。
【０１８６】
診断処方物および予防処方物
本発明の完全なヒト抗ＲＡＮＴＥＳ  ＭＡｂは、診断処方物および予防処方物において使用される。１つの実施形態では、ＲＡＮＴＥＳアンタゴニスト（例えば、本発明のｈｕＲＡＮＴＥＳ  ＭＡｂ）は、虚血、虚血に伴う臨床的適応症、再潅流損傷、および／または上記自己免疫疾患の１つを発症するリスクがある患者に投与される。虚血、虚血に伴う臨床的適応症、再潅流損傷、および／または上記自己免疫疾患の１つに対する患者または臓器の素因は、遺伝子型マーカー、血清学的マーカー、または生化学的マーカーを使用して決定され得る。
【０１８７】
本発明の別の実施形態では、ＲＡＮＴＥＳアンタゴニスト（例えば、ｈｕＲＡＮＴＥＳ抗体）は、虚血、再潅流損傷、上記自己免疫疾患の１つ以上に伴う臨床的適応症があると診断されたヒト個体に投与される。診断されると、ＲＡＮＴＥＳアンタゴニスト（例えば、ｈｕＲＡＮＴＥＳ抗体）が、虚血、再潅流損傷、自己免疫に伴う臨床的適応症の影響を和らげるか、または逆転させるために投与される。
【０１８８】
本発明の抗体はまた、患者試料中のＲＡＮＴＥＳの検出に有用であり、従って、診断薬として有用である。例えば、本発明のｈｕＲＡＮＴＥＳ抗体は、患者試料中のＲＡＮＴＥＳレベルを検出するために、インビトロアッセイ（例えば、ＥＬＩＳＡ）において用いられる。
【０１８９】
１つの実施形態では、本発明のｈｕＲＡＮＴＥＳ抗体は、固体支持体（例えば、マイクロタイタープレートのウェル（単数または複数））上に固定化される。上記固定化された抗体は、試験試料中に存在する可能性がある任意のＲＡＮＴＥＳについて捕捉抗体として作用する。上記固定化された抗体を患者試料と接触させる前に、上記固体支持体は洗浄され、分析物の非特異的吸着を防ぐためにブロック試薬（例えば、乳タンパク質またはアルブミン）で処理される。
【０１９０】
続いて、上記ウェルは、上記抗原を含むと疑われる試験試料で、または標準量の上記抗原を含む溶液で処理される。そのような試料は、例えば、病状の診断とみなされる循環抗原レベルを有すると疑われる被験体由来の血清試料である。上記試験試料または標準試料が濯がれた後、上記固体支持体は、検出可能であるように標識される二次抗体で処理される。上記標識二次抗体は、検出抗体として作用する。検出可能な標識のレベルが測定され、上記試験試料中のＲＡＮＴＥＳ抗原の濃度が、上記標準試料から作製された標準曲線との比較によって決定される。
【０１９１】
インビトロの診断アッセイにおいて、本発明のｈｕＲＡＮＴＥＳ抗体を用いて得られた結果に基づくと、被験体における疾患（例えば、虚血、自己免疫障害または炎症性障害に伴う臨床的適応症）をＲＡＮＴＥＳ抗原の発現レベルに基づいて段階づけることが可能であることが理解されるであろう。所定の疾患について、血液試料は、この疾患の進行の様々な段階にあり、そして／またはこの疾患の治療的処置における様々な時点にあると診断された被験体から得られる。進行または治療の各段階について統計学的に有意な結果を提供する試料の集団を用いて、各段階の特徴であるとみなされ得る抗原の濃度範囲が設定される。
【０１９２】
本明細書中に引用される全ての刊行物および特許文書は、個々のそのような刊行物または文書が具体的に、かつ個別に本明細書中に参考として援用されていることが示されているかのように、本明細書中に参考として援用される。刊行物および特許文書の引用は、どれもが直接関係のある先行技術であるという承認としては意図されておらず、これらはその同一の内容または日付に関する何らかの承認を構成するものでもない。本発明は文書での説明により表されているが、当業者は、本発明が様々な実施形態において実行され得、上記の説明および下記の実施例が例示の目的のためのものであり、添付の特許請求を限定するものではないことを認識するであろう。
【実施例】
【０１９３】
以下の実施例（行った実験と得られた結果を含む）は、説明の目的のみのために提供されており、本発明の限定と解釈されるべきではない。
【０１９４】
（実施例１）
ヒトＲＡＮＴＥＳのクローニング、発現、および精製
クローニング
ヒトＲＡＮＴＥＳ（ＧｅｎＢａｎｋアクセス番号Ｍ２１１２１）の成熟タンパク質または他のケモカインをコードする遺伝子を、ＰＣＲ増幅によって発現プラスミドｐＥＴ４３（Ｎｏｖａｇｅｎ  Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）にクローニングした。Ｘ因子プロテアーゼ切断部位の配列を、ＮｕｓＡのＣ末端に導入した。ＡｖｉＴａｇ（Ａｖｉｄｉｔｙ，Ｄｅｎｖｅｒ  ＣＯ）ビオチニル化部位の配列を、ケモカインコード配列のＣ末端に導入した。ｐＥＴ由来プラスミドを、ビオチンリガーゼ遺伝子をコードするｐＡＣＹＣ１８４−ＢｉｒＡプラスミドでの細菌株Ｏｒｉｇａｍｉ  Ｂの同時形質転換に使用した。哺乳動物細胞中での発現のために、関連するケモカインをコードする遺伝子を、ｐＥＡＫ８発現ベクター（Ｅｄｇｅ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ）中にｃＤＮＡからクローニングした。ＡｖｉＴａｇビオチニル化部位をタンパク質のＣ末端に導入し、その後ろには、ビオチンリガーゼをコードするＢｉｒＡ遺伝子の発現を可能にする内部リボソーム侵入部位（ＩＲＥＳ）が続いた。この構築物は、１つの部位でインビボでビオチニル化されたケモカインの分泌型を発現することができる。
【０１９５】
Ｅ．ｃｏｌｉの中でのＮｕｓＡ−ｈｕＲＡＮＴＥＳ融合タンパク質の発現
発現構築物を有している細菌の一晩の培養を、５０μｇ／ｍＬのアンピシリン、１０μｇ／ｍＬのカナマイシン、５μｇ／ｍＬのテトラサイクリン、２０μｇ／ｍＬのクロラムフェニコール、および５０μＭのビオチンを含むＴｅｒｒｉｆｉｃ培養液（ＩｎｖｉｔｒｏＧｅｎ）の中に、１：３０に稀釈した。培養物を、ＯＤ６００＝０．７に到達するまで震盪させながら３７℃でインキュベートした。その後、ＩＰＴＧを、１ｍＭの最終濃度になるように添加し、３７℃で１５分間、そして２５℃で一晩インキュベートした。
【０１９６】
哺乳動物細胞中でのｈｕＲＡＮＴＥＳの発現
ＰＥＡＫ細胞を、１０％のＦＣＳ、２ｍＭのＬ−グルタミン（Ｓｉｇｍａ）、２５μｇ／ｍＬのゲンタマイシン（Ｓｉｇｍａ）を補充したＤＭＥＭ（Ｓｉｇｍａ）中で培養し、３７℃、５％のＣＯ２でインキュベートした。ＰＥＡＫ細胞を、Ｍｉｒｕｓトランスフェクション試薬を使用して、改変型ｐＥＡＫ８ベクターでトランスフェクトした。ピューロマイシン（Ｓｉｇｍａ）を、トランスフェクトされた細胞集団を選択し、維持するために、細胞接着後に１μｇ／ｍＬで添加した。ビオチン（Ｓｉｇｍａ）を生産用バッチ（ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｂａｔｃｈｅｓ）に対して５０μＭで添加した。トランスフェクトされたＰＥＡＫ細胞の上清に由来するビオチニル化ケモカインは、化学走査アッセイにおいて活性があることが示された。
【０１９７】
融合タンパク質の精製と切断
細菌ペレットを、ベンゾナーゼヌクレアーゼ（Ｂｅｎｚｏｎａｓｅ  Ｎｕｃｌｅａｓｅ）とプロテアーゼ阻害剤Ｃｏｍｐｌｅｔｅ  ＥＤＴＡ−ｆｒｅｅ（Ｒｏｃｈｅ）を含むＢｕｇｂｕｓｔｅｒ（Ｎｏｖａｇｅｎ）の中に再懸濁し、４℃で１時間インキュベートした。可溶性画分と不溶性画分を、４℃で１５分間、１０，０００ｇでの遠心分離によって分離させた。可溶性タンパク質画分と不溶性タンパク質画分を、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ（Ｎｏｖｅｘ  ｇｅｌｓ，ＩｎｖｉｔｒｏＧｅｎ）によって分析した。可溶性画分を、緩衝液Ａ（Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ  １００ｍＭ（ｐＨ８．０）、ＮａＣｌ  ６００ｍＭ、ＣａＣｌ２  １０ｍＭ、イミダゾール４０ｍＭ）で１／２に稀釈し、緩衝液Ｂ（Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ  ５０ｍＭ（ｐＨ８．０）、ＮａＣｌ  ３００ｍＭ、ＣａＣｌ２  ５ｍＭ、イミダゾール２０ｍＭ）中に予め平衡化させた５０％（ｖ／ｖ）Ｎｉ−ＮＴＡアガロース（Ｑｉａｇｅｎ）と混合した。上記混合物を、穏やかに震盪させながら室温で３０分間インキュベートした。遠心分離後に得られたビーズを、Ｐｏｌｙ−Ｐｒｅｐクロマトグラフィーカラム（Ｂｉｏｒａｄ）上に充填し、５倍容量の緩衝液Ｂで３回洗浄し、そして緩衝液Ｃ（Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ  ５０ｍＭ（ｐＨ８．０）、ＮａＣｌ  ２００ｍＭ、ＣａＣｌ２  ５ｍＭ、イミダゾール４００ｍＭ）で溶出させた。タンパク質を含む溶出画分をプールし、ＰＤ−１０カラム（Ａｍｅｒｓｈａｍ）を使用して脱塩させた．ＮｕｓＡ−ケモカイン融合タンパク質をＸ因子（Ｎｏｖａｇｅｎ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）によって、１ｍｇのタンパク質を２５ＵのＸ因子とともに３０℃で２４時間まで、切断緩衝液（Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ  ５０ｍＭ（ｐＨ８．０）、ＮａＣｌ  ２００ｍＭ、ＣａＣｌ２  ５ｍＭ）中でインキュベートすることによって切断した。いくつかの融合タンパク質については、最適な切断のためのパラメーターはわずかに異なったが、インキュベーション時間（４時間〜２４時間）および／または温度（２５℃〜３７℃）を変化させることによって容易に決定することができた。切断されたタンパク質をＳＤＳ−ＰＡＧＥによって分析し、活性を化学走査によって試験した。
【０１９８】
（実施例２）
ヒトｓｃＦｖライブラリーのスクリーニング
ヒトｓｃＦｖライブラリーの構築と処理のための一般的な手順は、その全体が引用により本明細書中に組み入れられるＶａｕｇｈａｎら著（Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．，１９９６，１４：３０９−３１４）に記載されている。ヒトｓｃＦｖのライブラリーを、以下の手順に従ってｈｕＲＡＮＴＥＳに対してスクリーニングした。
【０１９９】
液相選択
Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＵＫ）から得たｓｃＦｖファージライブラリー（１０１２Ｐｆｕ）のアリコートを、３％（ｗ／ｖ）のスキムミルクを含むＰＢＳで、室温で１時間、回転式混合機上でブロックした。次いで、ブロックしたファージを、ストレプトアビジン磁気ビーズ（Ｄｙｎａｌ  Ｍ−２８０）上で室温で１時間、回転式混合機上で脱選択化（ｄｅｓｅｌｅｃｔ）した。次いで、脱選択化したファージを、インビボでビオチニル化されたｈｕＲＡＮＴＥＳ（１００ｎＭ）と共に室温で２時間、回転式混合機上でインキュベートした。この選択工程を、ＮｕｓＡ−ｈｕＲＡＮＴＥＳビオチニル化融合タンパク質、またはタンパク質分解的切断によって融合体から切り離されたビオチニル化ｈｕＲＡＴＥＳのいずれかに対して行った。ビーズを磁気スタンドを使用して捕捉し、続いて、ＰＢＳ／０．１％のＴｗｅｅｎ  ２０で４回洗浄し、そしてＰＢＳで３回洗浄した。その後、１０ｍｌの指数関数的に増殖しているＴＧ１細胞に、ビーズを直接的に添加し、３７℃で１時間、ゆっくりと震盪（１００ｒｐｍ）させながらインキュベートした。感染したＴＧ１のアリコートを、選択の出力（ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ  ｏｕｔｐｕｔ）を既定するために段階的に希釈した。残りの感染したＴＧ１を３０００ｒｐｍで１５分間回転させ、０．５ｍｌの２×ＴＹ−ＡＧ（１００μｇ／ｍｌのアンピシリンと２％のグルコースを含む２×ＴＹ培地）中に再懸濁させ、２×ＴＹＡＧ寒天培地バイオアッセイプレート上に拡げた。３０℃で一晩のインキュベーションの後、１０ｍｌの２×ＴＹＡＧを上記プレートに添加し、上記細胞を表面から剥がし取り、そして、５０ｍｌのポリプロピレンチューブに移した。１７％のグリセロールの最終濃度が得られるように、５０％のグリセロールを含む２×ＴＹＡＧを上記細胞懸濁液に対して添加した。上記選択ラウンドのアリコートを−８０℃で維持した。
【０２００】
ファージのレスキュー（ｒｅｓｃｕｅ）
先の選択ラウンドから得られた細胞懸濁液のうちの１００μｌを、２０ｍｌの２×ＴＹＡＧに添加し、０．３〜０．５のＯＤ６００に達するまで３７℃で攪拌（２４０ｒｐｍ）しながら増殖させた。その後、上記培養物を、３．３×１０１０ＭＫ１３Ｋ０７ヘルパーファージで過剰感染（ｓｕｐｒｅ−ｉｎｆｅｃｔ）させ、３７℃で１時間インキュベートした（１５０ｒｐｍ）。次いで、上記細胞を２０００ｒｐｍで１０分間遠心分離し、培地を除去し、ペレットを２０ｍｌの２×ＴＹ−ＡＫ（１００μｇ／ｍｌのアンピシリン；５０μｇ／ｍｌのカナマイシン）中に再懸濁させることによって、培地を交換した。その後、上記培養物を一晩３０℃で増殖させた（２４０ｒｐｍ）。
【０２０１】
ＥＬＩＳＡのためのモノクローナルファージのレスキュー
単一クローンを、１ウェルあたり１５０μｌの２×ＴＹＡＧ培地（２％のグルコース）を含むマイクロタイタープレートに採取し、３７℃で（１００〜２００ｒｐｍ）５〜６時間増殖させた。１０の感染多重度（ＭＯＩ）（すなわち、上記培養物中で個々の細胞について１０個のファージ）が得られるように、Ｍ１３ＫＯ７ヘルパーファージをそれぞれのウェルに添加し、３７℃で（１００ｒｐｍ）１時間インキュベートした。増殖後、プレートを３，２００ｒｐｍで１０分間遠心分離した。上清を注意深く除去し、細胞を１５０μｌの２×ＴＹＡＫ培地中に再懸濁し、３０℃で一晩増殖させた（１２０ｒｐｍ）。ＥＬＩＳＡのために、上記ファージを、５％スキムミルク粉末を含む１５０μｌの２×濃度のＰＢＳを添加し、続いて、室温で１時間インキュベートすることによってブロックした。次いで、上記プレートを３０００ｒｐｍで１０分間遠心分離し、ファージを含む上清をＥＬＩＳＡに使用した。
【０２０２】
ファージＥＬＩＳＡ
ＥＬＩＳＡプレート（Ｍａｘｉｓｏｒｂ，ＮＵＮＣ）を、ＰＢＳ中の２μｇ／ｍｌのＮｕｓＡ−Ｒａｎｔｅｓとともに一晩コーティングした。対照プレートを、２μｇ／ｍｌのＮｕｓＡでコーティングした。その後、プレートを３％スキムミルク／ＰＢＳで、室温で１時間ブロックした。上記予めブロックしたファージの上清を移す前に、プレートをＰＢＳ  ０．０５％  Ｔｗｅｅｎ  ２０で３回洗浄し、室温で１時間インキュベーションした。次いで、プレートをＰＢＳ  ０．０５％  Ｔｗｅｅｎ  ２０で３回洗浄した。それぞれのウェルに対して、（ＨＲＰ）結合型抗Ｍ１３抗体（Ａｍｅｒｓｈａｍ，１：１０，０００に希釈した）を含む、５０μｌの３％スキムミルク／ＰＢＳ。室温で１時間のインキュベーションの後、上記プレートを、ＰＢＳ  ０．０５％  Ｔｗｅｅｎ  ２０で５回洗浄した。次いで、反応を停止させるために５０μｌのＴＭＢ（Ｓｉｇｍａ）と５０μｌの２ＮのＨ２ＳＯ４を添加することによって、ＥＬＩＳＡを明らかにさせた。吸収強度を４５０ｎｍで読み取った。
【０２０３】
ファージクローンの配列決定
単一クローンを、１ウェルあたり１５０μｌの２×ＴＹＡＧ培地（２％のグルコース）を含むマイクロタイタープレートの中に置き、３０℃（１２０ｒｐｍ）で一晩増殖させた。翌日、５μｌの培養物を、４５μｌのｄＨ２Ｏを含む別のプレートに移し、混合した。次いで、上記プレートを−２０℃で凍結させた。解凍後、この懸濁液のうちの１μｌを、標準的なＰＣＲプロトコールを使用し、以下のｐＣＡＮＴＡＢ６に特異的なプライマーを用いるＰＣＲ増幅に使用した。：ｍｙｃｓｅｑ、５’−ＣＴＣＴＴＣＴＧＡＧＡＴＧＡＧＴＴＴＴＴＧ−３’（配列番号１９７）およびｇｅｎｅ３ｌｅａｄｅｒ、５’−ＴＴＡＴＴＡＴＴＣＧＣＡＡＴＴＣＣＴＴＴＡＧＴＴＧＴＴＣＣＴ−３’（配列番号１９８）。
【０２０４】
ＰＣＲ反応物は、９６ウェル形式で、Ｍｏｎｔａｇｅ  ＰＣＲμ９６システム（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を使用して精製した。溶出させたＤＮＡのうちの５μｌを、ｍｙｃｓｅｑプライマーとｇｅｎｅ３ｌｅａｄｅｒプライマーを使用して配列決定した。
【０２０５】
機能性試験のためのＳｃＦｖペリプラズムの調製
個々のクローンを、１ウェルあたり０．９ｍｌの２×ＴＹＡＧ培地（０．１％のグルコース）を含む深型ウェルマイクロタイタープレート（ｄｅｅｐ  ｗｅｌｌ  ｍｉｃｒｏｔｉｔｅｒ  ｐｌａｔｅ）に接種し、３７℃で５〜６時間（２５０ｒｐｍ）増殖させた。次いで、０．０２ｍＭのＩＰＴＧの最終濃度となるように、１ウェルあたり１００μｌの、２×ＴＹ培地中の０．２ｍＭのＩＰＴＧを添加した。その後、プレートを３０℃で一晩、２５０ｐｒｍで震盪させながらインキュベートした。深型ウェルプレートを２，５００ｒｐｍで１０分間遠心分離し、上清を注意深く除去した。ペレットを、１５０μｌのＴＥＳ緩衝液（５０ｍＭのＴｒｉｓ／ＨＣｌ（ｐＨ８）、１ｍＭのＥＤＴＡ（ｐＨ８）、２０％のスクロース、Ｃｏｍｐｌｅｔｅ  ｐｒｏｔｅａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ，Ｒｏｃｈｅを補充した）中に再懸濁させた。１５０μｌの希釈したＴＥＳ緩衝液（１：５のＴＥＳ：水の希釈）を添加し、そして氷上で３０分間インキュベーションすることにより、低張性ショックを生じさせた。その後、プレートを４０００ｒｐｍで１０分間遠心分離し、細胞と破片を除去した。上清を注意深く別のマイクロタイタープレートに移し、機能性アッセイまたはＥＬＩＳＡにおける即時の試験のために氷上で維持した。
【０２０６】
大規模のｓｃＦｖ精製
１ｍｌの２×ＴＹＡＧの出発培地に、新たに画線した２×ＴＹＡＧ寒天プレート由来の単一コロニーを接種し、震盪させながら（２４０ｒｐｍ）３７℃で５時間インキュベートした。この培養物のうちの０．９ｍｌを使用して４００ｍｌの同じ培養液に接種し、３０℃で一晩、激しく震盪させながら（３００ｒｐｍ）増殖させた。
【０２０７】
翌日、この培養物を、４００μｌの１ＭのＩＰＴＧを添加することによって誘導し、インキュベーションをさらに３時間継続した。細胞を、５，０００ｒｐｍで１０分間、４℃での遠心分離によって回収した。ペレットにした細胞を、上記のプロテアーゼ阻害剤を補充した１０ｍｌの氷冷ＴＥＳ緩衝液中に再懸濁させた。浸透圧ショックを、１５ｍｌの１：５に希釈したＴＥＳ緩衝液の添加と、氷上で１時間のインキュベーションによって行った。細胞を１０，０００ｒｐｍで２０分間、４℃で遠心分離して、細胞の破片をペレットにした。上清を注意しながら新しいチューブに移した。イミダゾールを、１０ｍＭの最終濃度になるように添加した。ＰＢＳ中で平衡化させた１ｍｌのＮｉ−ＮＴＡ樹脂（Ｑｉａｇｅｎ）をそれぞれのチューブに添加し、回転式混合機上で４℃で（２０ｒｐｍ）１時間インキュベートした。
【０２０８】
上記チューブを２，０００ｒｐｍで５分間遠心分離し、上清を注意深く除去した。ペレットにした樹脂を１０ｍｌの冷たい（４℃）洗浄緩衝液１（５０ｍＭのＮａＨ２ＰＯ４、３００ｍＭのＮａＣｌ、１０ｍＭのイミダゾール、ｐＨ８．０まで）中に再懸濁した。上記懸濁液をｐｏｌｙｐｒｅｐカラム（Ｂｉｏｒａｄ）に添加した。８ｍｌの冷たい洗浄緩衝液２（５０ｍＭのＮａＨ２ＰＯ４、３００ｍＭのＮａＣｌ、２０ｍＭのイミダゾール、ｐＨ８．０まで）を使用して、上記カラムを重量流によって洗浄した。上記ｓｃＦｖを上記カラムから２ｍｌの溶出緩衝液（５０ｍＭのＮａＨ２ＰＯ４、３００ｍＭのＮａＣｌ、２５０ｍＭのイミダゾール、ｐＨ８．０まで）で溶出させた。画分を２８０ｎｍでの吸収によって分析し、タンパク質を含む画分をプールし、その後、ＰＢＳで平衡化させたＰＤ１０脱塩カラム（Ａｍｅｒｓｈａｍ）上で緩衝液交換した。ＰＢＳ中の上記ｓｃＦｖをＳＤＳ−ＰＡＧＥによって分析し、２８０ｎｍでの吸収によって定量した。これらの精製したｓｃＦｖをアリコートし、−２０℃および４℃で保存した。
【０２０９】
（実施例３）
ｈｕＲＡＮＴＥＳに誘導されるカルシウムの流入の、ｓｃＦｖ抽出物を使用する阻害
様々なｈｕＲＡＮＴＥＳ  ｓｃＦｖのペリプラズム抽出物を上記のように生産した。ｈＣＣＲ５を発現しているＬ１．２細胞を、１０％のＦＣＳを補充したＲＰＭＩ培地中で培養した。ｓｃＦｖを含む抽出物を、２ｎＭ〜１０ｎＭのｈｕＲＡＮＴＥＳ（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ，Ｒｏｃｋｙ  Ｈｉｌｌ  ＮＪ）とともに、室温で３０分間インキュベートした。細胞をＰＢＳ中で洗浄し、２μＭのＦｕｒａ  ２／ＡＭとともに充填した。充填した細胞のうちの１００μｌを、９６ウェルの黒色の透明平底プレート（９６−ｗｅｌｌ  ｂｌａｃｋ，ｔｒａｎｓｐａｒｅｎｔ  ｆｌａｔ−ｂｏｔｔｏｍ  ｐｌａｔｅ）のそれぞれのウェルに添加し、カルシウムの流入速度を、ケモカインｓｃＦｖ混合物を添加した際に、Ｆｌｅｘ  ｓｔａｔｉｏｎ  ＩＩ機器（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ）上で３４０ｎｍまたは３８０ｎｍでの励起させたときの５１４ｎｍの蛍光を測定することによって記録した。個々のｓｃＦｖ抽出物の阻害活性を、無関係なｓｃＦｖを含む抽出物に対する比較によって評価した。
【０２１０】
（実施例４）
ｈｕＲＡＮＴＥＳに誘導される細胞の化学走査のｓｃＦｖによる阻害
野生型Ｌ１．２細胞と、ｈＣＣＲ５を発現しているＬｌ．２細胞を、１０％のＦＣＳを補充したＲＰＭＩ培地中で培養した。実験の前日に、細胞を、０．６ｍｇ／ｍｌの酪酸とともにインキュベートした。様々な濃度の精製したｓｃＦｖを、０．２ｎＭ〜１０ｎＭのｈｕＲＡＮＴＥＳとともにインキュベートし、化学走査用の９６ウェルプレート（ｃｈｅｍｏｔａｘｉｓ  ９６−ｗｅｌｌ  ｐｌａｔｅ）（Ｎｅｕｒｏｐｒｏｂｅ）の底部チャンバーに入れた。フィルタープレートを、化学走査用のプレートの上に置き、それぞれのウェルに、２０μｌの１０６細胞／ｍｌの懸濁液を重層した。プレートを３７℃で２時間インキュベートした。フィルターを通り抜けて移動した細胞をＤＲＡＱ５（Ａｌｅｘｉｓ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）で染色し、ＦＭＡＴ  ８２００リーダー（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ  ＣＡ）上でカウントした。それぞれの候補抗体についてのＩＣ５０（ここでは、ｈｕＲＡＮＴＥＳに誘導される細胞の移動の５０％が阻害される、すなわち、５０％阻害濃度）を決定した（表４）。
【０２１１】
【表４】
0005624884.tif 000041
（実施例５）
ｓｃＦｖのＩｇＧ形式への再フォーマット
選択したｓｃＦｖのＶＨ配列とＶＬ配列を、５’末端にリーダー配列とＨｉｎｄＩＩＩ制限酵素部位を導入する特異的オリゴヌクレオチドを用いて増幅させた。重鎖配列と軽鎖配列の３’末端に、それぞれ、ＡｐａＩ部位またはＡｖｒＩＩ部位を導入した。この増幅させたＶＨ配列をＨｉｎｄＩＩＩ／ＡｐａＩで消化し、ｐＣｏｎ＿ｇａｍｍａ１発現ベクター（ＬＯＮＺＡ，Ｂａｓｅｌ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）にクローニングした。増幅させたＶＬ配列をＨｉｎｄＩＩＩ／ＡｖｒＩＩで消化し、ｐＣｏｎ＿ｌａｍｂｄａ２発現ベクター（ＬＯＮＺＡ）にクローニングした。この構築物を配列決定により確認し、その後、哺乳類細胞にトランスフェクションした。
【０２１２】
それらの適切な発現ベクター中のＶＨ  ｃＤＮＡ配列とＶＬ  ｃＤＮＡ配列を、Ｆｕｇｅｎｅ６トランスフェクション試薬（Ｒｏｃｈｅ，Ｂａｓｅｌ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）を使用して、哺乳類細胞にトランスフェクトした。簡単に説明すると、Ｐｅａｋ細胞を、６ウェルプレートの中で、１ウェル当たり６×１０５個の細胞の濃度で、ウシ胎児血清を含む２ｍｌの培養培地中で培養した。候補のＶＨ配列および上記候補ＶＬ配列をコードする発現ベクターを、Ｆｕｇｅｎｅ６トランスフェクション試薬を使用して、製造業者の説明書に従って、上記細胞に同時トランスフェトした。トランスフェクションの１日後に、上記培養培地を吸引し、新しい血清を含まない培地３ｍｌを細胞に対して添加し、３７℃で３日間培養した。３日間の培養期間の後、上清を、プロテインＧ−セファロース４Ｂファストフローカラム（Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）上で精製したＩｇＧについて、製造業者の説明書にしたがって回収した。簡単に説明すると、トランスフェクトした細胞由来の上清を、４℃で一晩、ＩｍｍｕｎｏＰｕｒｅ（Ｇ）ＩｇＧ結合緩衝液（Ｐｉｅｒｃｅ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ  ＩＬ）とともにインキュベートした。その後、試料をプロテインＧ−セファロース４Ｂファストフローカラムに通し、必然的に、ＩｇＧを溶出緩衝液を用いて精製した。次いで、溶出させたＩｇＧ画分をＰＢＳに対して透析し、ＩｇＧ含量を２８０ｎｍでの吸収により定量した。純度とＩｇＧの完全性をＳＤＳ−ＰＡＧＥによって確認した。
【０２１３】
（実施例６）
天然のヒトｈｕＲＡＮＴＥＳの生産
ＴＨＰ１細胞を、１０μｇ／ｍＬのＬＰＳとともに、１×１０６／ｍｌの濃度で、１０ｍｌの培地中で培養した。３７℃で一晩のインキュベーションの後、細胞を遠心分離し、上清を回収し、そして天然のｈｕＲＡＮＴＥＳの濃度を、実施例４に記載したような化学走査アッセイにおいて概算した。上記に記載したようにＬＰＳで刺激した場合には、天然のｈｕＲＡＮＴＥＳだけではなく、ＣＣＲ５の他のリガンドもまた、ＴＨＰ１細胞によって生産される。したがって、抗ｈｕＲＡＮＴＥＳ抗体の中和能力を決定するための化学走査アッセイにおいてこれらの上清を使用した場合は、ＣＣＲ５の他のリガンドを、それぞれ５μｇ／ｍｌの濃度の、ｈＭＩＰ−１α、ｈＭＩＰ−１β、ｈＭＣＰ−２、ｈＭＩＰ−１δに対する抗体（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）の混合物で中和した。
【０２１４】
（実施例７）
ＩｇＧ１形式に再フォーマットしたｓｃＦｖを使用した、ｈｕＲＡＮＴＥＳに誘導されるカルシウムの流入または細胞の化学走査の阻害
ｓｃＦｖを、実施例５において上記に記載したようにＩｇＧ形式に再フォーマットした。ｈｕＲＡＮＴＥＳに誘導されるカルシウムの流入または細胞の化学走査に対するＩｇＧの中和能力を、実施例３および実施例４に記載した細胞をベースとするアッセイを使用して評価した。図１に例として示すように、ＩｇＧｓ  Ｃ８、１Ｄ９、および１Ｅ４は、用量依存性の様式で組み換えｈｕＲＡＮＴＥＳと天然のｈｕＲＡＮＴＥＳの両方の活性を阻害する。全ての抗体についてのこれらのアッセイにおけるＩＣ５０を、表５および６にまとめる。
【０２１５】
【表５】
0005624884.tif 000042
【０２１６】
【表６】
0005624884.tif 000043
（実施例８）
グリコサミノグリカンに固定化したｈｕＲＮＡＴＥＳに対する抗体の結合
多くのケモカインを用いた場合には、ｈｕＲＡＮＴＥＳは、内皮細胞のような細胞の表面で発現されるグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）に対してオリゴマー化し、結合することができる。この状況で抗体が確実にｈｕＲＡＮＴＥＳに結合できるようにするために、これらを以下のアッセイにおいて試験した。ストレプトアビジンでコーティングした９６ウェルプレート（Ｒｏｃｈｅ，Ｂａｓｅｌ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）を、原型のＧＡＧ（Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）としてのビオチン標識ヘパリンでコーティングした。洗浄後、過剰量のヘパリンｈｕＲＡＮＴＥＳを、ＧＡＧの固定化のためにウェルに添加した。試験される抗体とのインキュベーションの後、ウェルを洗浄し、結合を、ＨＲＰに結合させた抗ヒトＩｇＧ  Ｆｃｇ特異的抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ，Ｗｅｓｔ  Ｇｒｏｖｅ，ＰＡ）によって明らかにした。図２に示すように、いくつかの抗体は、ＧＡＧに結合されている場合には、ｈｕＲＡＮＴＥＳに結合できたが、他のものは、おそらく、ｈｕＲＡＮＴＥＳ上にあるそれらのエピトープがオリゴマー構造の中にありもはや接近できないために結合できなかった。ＧＡＧの状況でｈｕＲＡＮＴＥＳに結合する抗体の能力を表７にまとめる。
【０２１７】
【表７】
0005624884.tif 000044
（実施例９）
抗体２Ｄ１の親和性成熟
選択したリード候補（２Ｄ１）について、ｈｕＲＡＮＴＥＳに対するその親和性と、ｈｕＲＡＮＴＥＳ中和アッセイにおけるその効力を高めるための親和性成熟を行った。重鎖または軽鎖のＣＤＲ３の中の５残基のストレッチを、６つのライブラリー（ライブラリーの大きさは５×１０７から１０９までの範囲である）を作製するために無作為化した。３つの高ストリンジェンシーの選択ラウンドを実施例２に記載したように行った。改良された変異体のスクリーニングを、エピトープ競合アッセイにおいてｓｃＦｖペリプラズム抽出物を使用して行った。簡単に説明すると、もとの抗体（２Ｄ１）をプレート上にコーティングし、希釈したペリプラズムｓｃＦｖ抽出物をそれぞれのウェルに添加した。その後、ビオチニル化ｈｕＲＡＮＴＥＳを添加し、室温で２時間インキュベートした。洗浄後、コーティングしたもとの抗体に結合したままであるｈｕＲＡＮＴＥＳを、ストレプトアビジン結合ＨＲＰ（Ｊａｃｋｓｏｎ，Ｗｅｓｔ  Ｇｒｏｖｅ  ＰＡ）を使用して明らかにした。改良された変異体２Ｄ１を同定するための参照として、ｓｃＦｖを、ＩｇＧ形式のコーティングされた２Ｄ１に競合させるために使用した。
【０２１８】
（実施例１０）
１Ｅ４を発現する安定なＣＨＯＫ１ＳＶ細胞株の作製
ＣＨＯＫ１ＳＶ細胞株（Ｌｏｎｚａ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ，ｐｌｃに所有権がある）を使用して、抗体１Ｅ４の生産のためにの半安定的トランスフェクションによってプールを作製した。簡単に説明すると、６ｍＭのＬ−グルタミンを補充した培地ＣＤ−ＣＨＯ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中の指数関数的に増殖している細胞を、以下の条件下でエレクトロポレーションした：０．４ｃｍのキュベット中、７００μＬの新しいＣＤ−ＣＨＯ中の１．０×１０７個の生存している細胞を、１００μＬのＴｒｉｓ  ＥＤＴＡ緩衝溶液（ｐＨ７．４）中の４０μｇのＤＮＡと穏やかに混合し、続いてすぐに、３００ボルト、９００μＦの１回のパルスを送った。２つのキュベットの内容物を、２００ｍＬの新しい予め温めておいたＣＤ−ＣＨＯ培地中にすぐに移した。続いて、この細胞懸濁液を、４つの組織培養−処理Ｔ７５フラスコに分け、空気中の１０％のＣＯ２および３７℃の温度に設定した加湿したインキュベーターの中に入れて、半安定プールを作製した。トランスフェクションのおよそ２４時間後、選択圧（５０μＭのＭＳＸの補充による）をかけた。その後、個々の安定にトランスフェクトされたクローンをＣｌｏｎｅＰｉｘ技術（Ｇｅｎｅｔｉｘ）を使用して選択し、１Ｅ４の生産性についてスクリーニングした。
【０２１９】
（実施例１１）
ＣＨＯ上清からの１Ｅ４の大規模の精製
このプロセスには、ＭａｂＳｅｌｅｃｔ  ＳｕＲｅアフィニティクロマトグラフィー（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）、低ｐＨ処理によるレトロウイルスの不活化、ＳＰセファロース陽イオン交換クロマトグラフィーのためのｐＨの調整、Ｃａｐｔｏ  Ｑ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）陰イオン交換クロマトグラフィーの前の濃縮／膜分離、および最終的な処方緩衝液への濃縮／膜分離が含まれる。
【０２２０】
簡単に説明すると、クローンの２５Ｌ  Ｗａｖｅ  Ｂａｇ醗酵によって生産された上清を明澄化させ、ＭａｂＳｅｌｅｃｔ  ＳｕＲｅプロテインＡアフィニティーカラム上に捕捉した。最大負荷能力の８０％で９５％の全回収率があった（マトリックス１ｍＬあたり３２ｍｇの抗体）。溶出液は、溶出ｐＨでは４８時間まで安定であることが証明された。１Ｅ４抗体の安定性をまた、ウイルスの不活化のために使用した低いｐＨ（３．７）でも評価し、抗体は４８時間まで安定であった。
【０２２１】
次いで、プロテインＡ溶出物のプールを、ｐＨの調製（ｐＨ５）の後にＳＰセファロース陽イオン交換カラム上に充填した。この工程を、残っている凝集物の効率的な除去のために最適化し、最適な溶出緩衝液が１０７ｍＭの塩化ナトリウム（２５ｍＭの酢酸ナトリウム（ｐＨ５）中）であることを見出した。その後、濃縮／膜分離工程を、Ｃａｐｔｏ  Ｑクロマトグラフィーに適している緩衝液（２５ｍＭの酢酸ナトリウム、４０ｍＭの塩化ナトリウム、ｐＨ５）に１Ｅ４抗体を緩衝液交換するために使用した。約５０ｍｇ／ｍＬの濃度には、分解または凝集のいずれの問題もなく到達した。非結合様式でのＣａｐｔｏ  Ｑクロマトグラフィーを、効率的な混入物質の除去について最適化した（宿主細胞タンパク質、プロテインＡ、およびＤＮＡ）。最後に抗体１Ｅ４を濃縮し、約１０ｍｇ／ｍｌの最終濃度となるように、２５ｍＭのヒスチジン、１２５ｍＭのＮａＣｌ（ｐＨ６）処方緩衝液の中に透析した。
【０２２２】
抗体１Ｅ４は、この精製プロセス全体を通じて凝集する傾向を示さず、この精製プロセス全体を通じて良好な安定性を示した。最終産物は、凝集物のレベルと残留している混入物質に関して、全て必須の指定要件（ｐｒｅｒｅｑｕｉｓｉｔｅ  ｓｐｅｃｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ）に達していた。
【０２２３】
（実施例１２）
ＣＨＯ上清から精製した抗体１Ｅ４の機能的特性
ＲＡＮＴＥＳは、受容体ＣＣＲ１、ＣＣＲ３、およびＣＣＲ５のリガンドである。これらの受容体のうちのそれぞれ１つとの相互作用をブロックする、ＣＨＯ上清から精製した１Ｅ４の能力を、化学走査アッセイおよびカルシウム流入アッセイにおいて評価した。
【０２２４】
カルシウムの流入
ｈＣＣＲ１、ｈＣＣＲ３、またはｈＣＣＲ５のいずれかを発現しているＬ１．２細胞を、１０％のＦＣＳを補充したＲＰＭＩ培地中で培養した。最適な結果のために、ｈＣＣＲ１を発現している細胞を、１％のＦＣＳを含む培地中で一晩飢餓状態にした。実験の前日に、全ての細胞を０．３ｍｇ／ｍｌの酪酸とともにインキュベートした。様々な濃度の１Ｅ４を、４ｎＭ〜２５ｎＭのｈｕＲＡＮＴＥＳ（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ，Ｒｏｃｋｙ  Ｈｉｌｌ  ＮＪ）とともに、室温で３０分間インキュベートした。細胞をＰＢＳ中で洗浄し、２μＭのＦｕｒａ  ２／ＡＭとともに充填した。充填した細胞のうちの１００μｌを、９６ウェルの黒色の透明平底プレートのそれぞれのウェルに添加し、カルシウムの流入速度を、ケモカイン−抗体混合物の添加後に、Ｆｌｅｘ  ｓｔａｔｉｏｎ  ＩＩ機器（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ）上での３４０ｎｍまたは３８０ｎｍで励起させたときの５１４ｎｍの蛍光を測定することによって記録した。図３に示すように、１Ｅ４は、用量依存性の様式で、ｈＣＣＲ１、ｈＣＣＲ３、またはｈＣＣＲ５のいずれかを発現する細胞中へのカルシウムの流入を阻害することができた。ＩＣ５０（（ここでは、ｈｕＲＡＮＴＥＳに誘導されるカルシウムの流入の５０％が阻害される、すなわち、５０％阻害濃度）を決定した（表８）。
【０２２５】
【表８】
0005624884.tif 000045
化学走査
野生型Ｌ１．２細胞と、ｈＣＣＲ１、ｈＣＣＲ３、またはｈＣＣＲ５のいずれかを発現しているＬ１．２細胞を、１０％のＦＣＳを補充したＲＰＭＩ培地中で培養した。最適な結果のために、ｈＣＣＲ１を発現している細胞を、１％のＦＣＳを含む培地中で一晩、飢餓状態にした。実験の前日に、全ての細胞を０．３ｍｇ／ｍｌの酪酸とともにインキュベートした。最適な結果のために、ｈＣＣＲ１を発現している細胞を、１％のＦＣＳを含む培地中で一晩、飢餓状態にした。様々な濃度の１Ｅ４を、１ｎＭ〜１０ｎＭの組み換えｈｕＲＡＮＴＥＳ、または１ｎＭの天然のｈｕＲＡＮＴＥＳ（実施例６に記載したように作製した）とともにインキュベートし、化学走査用９６ウェルプレート（Ｎｅｕｒｏｐｒｏｂｅ）の底部チャンバーの中においた。フィルタープレートを化学走査用のプレートの上に置き、それぞれのウェルに、２０μｌの１０６細胞／ｍｌの懸濁液を重層した。プレートを３７℃で２時間インキュベートした。フィルターを通り抜けて移動した細胞をＤＲＡＱ５（Ａｌｅｘｉｓ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）で染色し、ＦＭＡＴ  ８２００リーダー（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ  ＣＡ）上でカウントした。図４に示すように、１Ｅ４は、用量依存性の様式で、ｈＣＣＲ１、ｈＣＣＲ３、またはｈＣＣＲ５のいずれかを発現する細胞中へのカルシウムの流入を阻害することができた。ＩＣ５０（（ここでは、ｈｕＲＡＮＴＥＳに誘導される細胞の移動の５０％が阻害される、すなわち、５０％阻害濃度）を決定した（表９）。
【０２２６】
【表９】
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（実施例１３）
１Ｅ４抗体の交差反応性
１Ｅ４を、ＥＬＩＳＡにおいて、様々な種に由来するケモカインのパネルに結合するその能力について試験した。このパネルには以下のケモカインを含めた：ヒトＲＡＮＴＥＳ、カニクイザルＲＡＮＴＥＳ、ラットＲＡＮＴＥＳ、マウスＲＡＮＴＥＳ、ヒトＩＴＡＣ、ヒトＩＰ−１０、カニクイザルＩＰ−１０、ヒトＭＩＧ、カニクイザルＭＩＧ、ヒトＭＩＰ１α、ヒトＭＩＰ１β、ヒトＭＣＰ−１、ヒトＭＣＰ−２。簡単に説明すると、ヒト、マウス、ラット、およびカニクイザルから単離したｃＤＮＡからクローニングしたケモカインを融合タンパク質として発現させ、実施例１に記載したように精製した。ケモカインをｍａｘｉｓｏｐｂプレート（Ｎｕｎｃ，Ｄｅｎｍａｒｋ）中に５μｇ／ｍｌでコーティングし、一定の濃度範囲の１Ｅ４とともにインキュベートした。結合のレベルは、西洋ワサビペルオキシダーゼ（Ｊａｃｋｓｏｎ）に結合させた抗ヒトＦｃ−γ特異的抗体と蛍光基質を使用して明らかにした。図５に示すように、抗体１Ｅ４は、ヒトＲＡＮＴＥＳとカニクイザルＲＡＮＴＥＳに対してのみ結合し、他の種由来のＲＡＮＴＥＳにも、試験した他のヒトケモカインのいずれにも結合しなかった。全てのケモカインの適切なコーティングは、個々のケモカインに特異的なモノクローナル抗体を使用して制御し、試験したケモカインは全てこの形式で検出することができた。
【０２２７】
（実施例１４）
１Ｅ４抗体のエピトープマッピング
ＥＬＩＳＡにおいて、抗体１Ｅ４は、ヒトＲＡＮＴＥＳとカニクイザルＲＡＮＴＥＳの両方に対して同等と見られる親和性で結合する（図５）。１Ｅ４に対する結合についてｈｕＲＡＮＴＥＳ上におそらく必要とされる残基を同定するために、いくつかの種に由来するＲＡＮＴＥＳタンパク質配列を図６に示すようにアラインメントした。このアラインメントにおいては、ヒト配列とカニクイザル配列との間で保存されており、それに対して１Ｅ４が結合できないマウスＲＡＮＴＥＳとラットＲＡＮＴＥＳにおいては異なる複数の残基を分析して、以下のアミノ酸を同定した：Ａ１６、Ｒ１７、Ｐ１８、Ｇ３２、Ｐ３７、Ｒ５９、およびＳ６４。マウスＲＡＮＴＥＳの３つの突然変異体を、そのような位置にヒト残基を導入するために、部位特異的突然変異誘発によって作製した：［Ｓ１６Ａ／Ｌ１７Ｒ／Ａ１８Ｐ］；［Ｓ３２Ｇ／Ｌ３７Ｐ］、および［Ｑ５９Ｒ／Ｙ６４Ｓ］。マウスＲＡＮＴＥＳのこれらの突然変異体形態を発現させ、実施例１に記載したようにインビボでビオチニル化させた。マウスＲＡＮＴＥＳのこれらの変異体を、ストレプトアビジンでコーティングしたプレート（Ｓｔｒｅｐｔａｗｅｌｌ，Ｒｏｃｈｅ）の中に捕捉した。ビオチニル化ケモカインのコーティングを、抗マウスＲＡＮＴＥＳポリクローナル抗体（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）を使用して確認した。その後、これらの残基の導入によりマウスＲＡＮＴＥＳに対する１Ｅ４の結合を回復できたかどうかを試験した。簡単に説明すると、マウスＲＡＮＴＥＳ、ヒトＲＡＮＴＥＳ、ならびにマウスＲＡＮＴＥＳの３種類の突然変異体形態と、対照上清を、室温で３０分間、Ｓｔｒｅｐｔａｗｅｌｌプレート（Ｒｏｃｈｅ）中に補捉した。洗浄後、抗体１Ｅ４を１％のＢＳＡ−ＰＢＳ中の１μｇ／ｍｌの濃度で添加し、室温で１時間インキュベートした。プレートを洗浄し、西洋ワサビペルオキシダーゼに結合させられたヤギ抗ヒトＩｇＧ  Ｆｃγ特異的抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ）とともにインキュベートした。洗浄後、シグナルをＴＭＢ（Ｒｏｃｈｅ）を用いて明らかにし、Ｈ２ＳＯ４で停止させた。プレートを４５０ｎｍで読み取った。図７に示すように、［Ｓ１６Ａ／Ｌ１７Ｒ／Ａ１８Ｐ］突然変異体は、マウスＲＡＮＴＥＳに対する１Ｅ４の結合を回復し、このことは、Ａ１６、Ｒ１７、およびＰ１８がヒトＲＡＮＴＥＳの１Ｅ４エピトープの完全性に重要であることを示している。
【０２２８】
（実施例１５）
１Ｅ４の親和性と結合速度
ヒトＲＡＮＴＥＳとカニクイザルＲＡＮＴＥＳに対する１Ｅ４の親和性と結合速度を、Ｂｉａｃｏｒｅ  ２０００機器（Ｂｉａｃｏｒｅ  ＡＢ，Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）上で特性決定した。４３３ＲＵ（反応単位）のロバ抗ヒトＩｇＧポリクローナル抗体を、Ｃ１  Ｂｉａｃｏｒｅチップ上にＥＤＣ／ＮＨＳ化学反応によって固定化した。この表面を、抗体１Ｅ４を捕捉するために使用した。この表面を、１０ｍＭのグリシン（ｐＨ＝２）の３０μＬ／分での注入、その後の、ＨＢＳ−ＥＰ緩衝液中で１分の安定化時間によって、それぞれのサイクルの後に再生させた。
【０２２９】
結合は、ｈｕＲＡＮＴＥＳ（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ，Ｒｏｃｋｙ  Ｈｉｌｌ  ＮＪ）またはヒトＲＡＮＴＥＳのＮｕｓＡ−融合タンパク質（ＮｕｓＡ−ｈｕＲＡＮＴＥＳ）およびカニクイザルＲＡＮＴＥＳのＮｕｓＡ−融合タンパク質（ＮｕｓＡ−ｃｙｎｏＲＡＮＴＥＳ）のいずれかを様々な濃度で通過させることによって測定した。全てのタンパク質を、泳動用緩衝液であるＨＢＳ−ＥＰ緩衝液（Ｂｉａｃｏｒｅ  ＡＢ，Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）中に稀釈した。注入は、７５μｌ／分で３分間かけて行い、その後に１５分間の解離時間が続き、そして温度は２５℃で維持した。データを、１：１  Ｌａｎｇｍｕｉｒモデルにしたがってフィットさせ、Ｋｏｎ、Ｋｏｆｆ、およびＫＤ値を決定した。極めて類似している値が、ｈｕＲＡＮＴＥＳまたはＮｕｓＡ−ｈｕＲＡＮＴＥＳ融合体を使用した場合に得られたが、より良好な応答シグナルは、Ｂｉａｃｏｒｅに対する良好な応答を誘導するそのより大きいサイズの理由から、融合タンパク質を用いた場合に得られた。ｈｕＲＡＮＴＥＳおよびｃｙｎｏＲＡＮＴＥＳに対する抗体１Ｅ４の親和性は、それぞれ、０．４５ｎＭおよび２．２４ｎＭであった。両方の抗体の親和性と速度定数を表１０にまとめる。
【０２３０】
【表１０】
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（実施例１６）
虚血の動物モデル
材料および方法
動物：８週〜１２週齢のＣ５７ＢＬ／６マウスを実験に使用した。全ての動物実験は倫理審査委員会（ｌｏｃａｌ  ｅｔｈｉｃａｌ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ）によって承認された。
【０２３１】
抗体とインビボでの処置：Ｃ５７ＢＬ／６マウスは、腹腔（ｉ．ｐ．）または静脈内（ｉ．ｖ．）のいずれかに注射した。虚血、それに続く再潅流のモデルについては、モノクローナル抗体（ｍＡｂ）を、閉塞期が終わる５分前に注射した。永久結紮モデル（ｔｈｅ  ｐｅｒｍａｎｅｎｔ  ｌｉｇａｔｉｏｎ  ｍｏｄｅｌ）については、ｍＡｂを、長期的な結紮が配置された５分後に注射した。ｍＡｂには、（１）ラット抗マウスＲＡＮＴＥＳ（ｍＲＡＮＴＥＳ）であるｍＡｂ４７８と、（２）ラット抗マウスアイソタイプｍＡｂ対照であるｍＡｂ６４を含めた。ｍＡｂ４７８またはｍＡｂ６４を生産するハイブリドーマは、それぞれ、Ｒ＆Ｄ、またはＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎから入手し、全てのｍＡｂを社内で生産し、精製し、保存した。
【０２３２】
ｉ．ｐ．処置については、１ｍｇ／マウスのＩｇＧ対照または抗ｍＲＡＮＴＥＳ  ｍＡｂを投与した。ｉ．ｖ．処置については、０．１ｍｇ／マウス、０．３ｍｇ／マウス、０．５ｍｇ／マウス、または１ｍｇ／マウスの抗ｍＲＡＮＴＥＳ  ｍＡｂ、あるいは１ｍｇ／マウスのＩｇＧ対照（すなわち、最も高い用量の抗ｍＲＡＮＴＥＳ）を投与した。
【０２３３】
インビボの虚血再潅流または永久結紮モデル
外科手術：マウスを、最初に４％のイソフルオランで麻酔し、その後、挿管した。人工呼吸を、人工呼吸器（ｒｏｄｅｎｔ  ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒ）（モデル６８３；Ｈａｒｖａｒｄ  Ａｐｐａｒａｔｕｓ）を使用して、１分あたり１２０回の呼吸（１２０  ｂｒｅａｔｈｓ）で３００μＬの１回換気量で行った。．麻酔は、酸素吸入器（ｖｅｎｔｉｌａｔｏｒ）によって１００％送達される２％のイソフルランで維持した。開胸術を第４肋間胸骨で行い、その後、心膜を取り除いた。８−０  Ｐｒｏｌｅｎｅでの縫合は、左心房の内縁で左冠動脈の下を通し、閉塞を生じるようにスリップノット（ｓｌｉｐｋｎｏｔ）で結んだ。
【０２３４】
再潅流モデルについては、ポリエチレンチューブの小片を、動脈を傷つけずに確実に結紮するために使用し、虚血の３０分後に、左前下行枝（ＬＡＤ）冠動脈の閉塞を開放し、再潅流を起こさせた。
【０２３５】
永久結紮モデルについては、ＬＡＤ冠動脈を、８−０  Ｐｒｏｌｅｎｅによるダブルノットの縫合を使用することによって不可逆的に閉塞させた。その後、胸部を閉じ、胸腔から空気を抜いた。その後、気管内チューブを取り除き、通常の呼吸を回復させた。
【０２３６】
再潅流の２４時間後、または永久的な閉塞の２４時間後、動物を安楽死させて梗塞の大きさを決定した。
【０２３７】
危険領域と梗塞の大きさの評価：再潅流期間の終わりに、マウスを０．３ｍＬのケタミン−キシラジンで再度麻酔し、ＬＡＤ冠動脈を再度結紮した。３％のＥｖａｎｓ  Ｂｌｕｅ色素（Ｓｉｇｍａ）をｉ．ｖ．注射（後眼窩投与）して、インビボの危険領域（Ｒ）を正確に描写した。心臓を迅速に摘出し、生理食塩水中で濯いだ。右心室と結合組織を取り出した後、心臓を凍らせ、その後、先端から基部に向かって３ｍｍの横断切片となるように断片化した（５枚のスライス／心臓）。解凍後、切片を、リン酸緩衝液（ｐＨ７．４）中の１％の塩化トリフェニルテトラゾリウムとともに、３７℃で１５分間インキュベートし、１０％のホルムアルデヒド溶液中に固定し、２４時間後にデジタルカメラで写真を撮影して、染色されなかった壊死した組織に対して染色された生存している組織の面積を識別した。左心室の梗塞領域（Ｉ）は、コンピューターによる形状測定技術（ｐｌａｎｉｍｅｔｒｉｃ  ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ）（ＭｅｔａＭｏｒｐｈ６ソフトウェア、Ｚｅｉｓｓ）を使用して決定し、危険領域（ＡＡＲ）または心室領域（Ｖ）のいずれかの面積の割合として表した。
【０２３８】
（実施例１７）
虚血再潅流モデルにおける阻害性ＲＡＮＴＥＳの影響
モデル１：虚血再潅流
マウスの虚血再潅流モデルのプロトコールを説明している図を、図８に示す。このプロトコールでは、Ｂ６マウスを３つのグループに分け、媒体対照（ＰＢＳ）、アイソタイプ対照（実施例１０に記載したｍＡｂ  ６４）、またはラット抗ｍＲＡＮＴＥＳモノクローナル抗体を、以下のスケジュールにしたがって投与した：
グループ１：ＰＢＳを、再潅流の５分前に、ｉ．ｐ．またはｉ．ｖ．で投与した；
グループ２：ラットＩｇＧ２ａ（ｍＡｂ  ６４；アイソタイプ対照）を、再潅流の５分前に、ｉ．ｐ．（１ｍｇ／マウス）またはｉ．ｖ．（１．０ｍｇ／マウス）で投与した；
グループ３：ラット抗マウスＲＡＮＴＥＳ（ｍＡｂ  ４７８）を、再潅流の５分前に、ｉ．ｐ．（１ｍｇ／マウス）またはｉ．ｖ．（０．１、０．３、０．５、１．０ｍｇ／マウス）で投与した。
【０２３９】
全ての動物を再潅流の２４時間後に屠殺した。それぞれのグループのマウスを、以下のパラメーターを評価することによって判断した：
・マウスの体重；
・ＡＡＲ／Ｖ＝心臓の全面積で割り算した危険領域の面積（虚血領域）；
・Ｉ／ＡＡＲ＝危険領域の面積で割り算した梗塞領域；および
・Ｉ／Ｖ＝心室の全面積で割り算した梗塞領域。
【０２４０】
Ｉ／ＡＡＲとＩ／Ｖはいずれも、梗塞組織の程度についてのデータを提供する。
【０２４１】
図９に示すように、抗ＲＡＮＴＥＳモノクローナル抗体での処置により、本明細書中に提供される虚血再潅流のマウスモデルにおいては梗塞の大きさが小さくなった。再潅流の５分前のｍＡｂ  ４７８の注射（１ｍｇ／マウス、ｉ．ｐ．）により、アイソタイプ対照またはＰＢＳで処置したマウスと比較して、梗塞の大きさは有意に小さくなった。データは、１つのグループあたり２０匹のマウスを示す。
【０２４２】
図１０は、抗ＲＡＮＴＥＳモノクローナル抗体での処置により、虚血再潅流のマウスモデルにおいては、用量依存性様式で梗塞の大きさが小さくなったことを示す。再潅流の５分前のｍＡｂ  ４７８のｉ．ｖ．注射（０．１、０．３、０．５、１．０ｍｇ／マウスの用量）により、アイソタイプ対照（１ｍｇ／マウス）と比較して、梗塞の大きさはより高い用量で有意に小さくなった。データは、１つのグループあたり３匹のマウスを示す。
【０２４３】
モデル２：永久的な閉塞
マウスの永久閉塞モデルのプロトコールを説明する図を、図１１に示す。このプロトコールでは、Ｂ６マウスを３つのグループにわけ、媒体対照（ＰＢＳ）、アイソタイプ対照（実施例１０に記載したｍＡｂ  ６４）、またはラット抗ｍＲＡＮＴＥＳモノクローナル抗体を、以下のスケジュールにしたがって投与した：
グループ１：ＰＢＳを、ｉ．ｐ．またはｉ．ｖ．で投与した；
グループ２：ラットＩｇＧ２ａ（ｍＡｂ  ６４；アイソタイプ対照）を、ｉ．ｐ．（１ｍｇ／マウス）またはｉ．ｖ．（１．０ｍｇ／マウス）で投与した；
グループ３：ラット抗マウスＲＡＮＴＥＳ（ｍＡｂ  ４７８）を、ｉ．ｐ．（１ｍｇ／マウス）またはｉ．ｖ．（０．１、０．３、０．５、１．０ｍｇ／マウス）で投与した。
【０２４４】
それぞれのグループのマウスを、以下のパラメーターを評価することによって判断した：
・マウスの体重；
・ＡＡＲ／Ｖ＝心臓の全面積で割り算した危険領域の面積（虚血領域）；
・Ｉ／ＡＡＲ＝危険領域の面積で割り算した梗塞領域；および
・Ｉ／Ｖ＝心室の全面積で割り算した梗塞領域。
【０２４５】
全ての動物を閉塞の２４時間後に屠殺した。
【０２４６】
図１２に示すように、抗ＲＡＮＴＥＳモノクローナル抗体での処置により、本明細書中に提供される虚血のマウスモデルにおいては梗塞の大きさが小さくなった。ｍＡｂ  ４７８の注射（１ｍｇ／マウス、ｉ．ｐ．）により、アイソタイプ対照またはＰＢＳで処置したマウスと比較して、梗塞の大きさは有意に小さくなった。データは、１つのグループあたり１０匹のマウスを示す。
【０２４７】
図１３は、抗ＲＡＮＴＥＳモノクローナル抗体での処置により、虚血のマウスモデルにおいては、用量依存性様式で梗塞の大きさが小さくなったことを示す。ｍＡｂ  ４７８のｉ．ｖ．注射（０．１、０．３、０．５、１．０ｍｇ／マウスの用量）により、アイソタイプ対照（１ｍｇ／マウス）と比較して、梗塞の大きさは高用量で有意に小さくなった。データは、１つのグループあたり３匹のマウスを示す。
【０２４８】
他の実施形態
本発明は、その詳細な説明と組み合わせて記載されているが、上記記載は本発明を説明するために意図され、本発明の範囲を限定するようには意図されない。本発明の範囲は、添付の特許請求の範囲によって定義される。他の態様、利点、および改変は以下の特許請求の範囲内にある。
【図１Ａ】
0005624884.tif 000048
【図１Ｂ】
0005624884.tif 000049
【図１Ｃ】
0005624884.tif 000050
【図２】
0005624884.tif 000051
【図３Ａ】
0005624884.tif 000052
【図３Ｂ】
0005624884.tif 000053
【図３Ｃ】
0005624884.tif 000054
【図４−１】
0005624884.tif 000055
【図４−２】
0005624884.tif 000056
【図５】
0005624884.tif 000057
【図６】
0005624884.tif 000058
【図７】
0005624884.tif 000059
【図８】
0005624884.tif 000060
【図９】
0005624884.tif 000061
【図１０】
0005624884.tif 000062
【図１１】
0005624884.tif 000063
【図１２】
0005624884.tif 000064
【図１３】
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【配列表】
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