(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式
【化２】
0005382898.tif 000006
で示される化合物を有効成分とする老人性乾皮症治療剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、乾皮症治療剤に関し、さらに詳しくは角質水分量減少、角質間脂質低下などによる皮膚傷害の解消に効果がある薬剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、加齢などにより、皮膚角質間脂質の減少、角質水分量低下により惹起される乾燥肌、乾皮症などの慢性皮膚疾患の患者数が増加している。これらの疾患は原因不明の強い痒み感を伴い、そのために行う掻痒行動（引っ掻き行動）により悪化するものと考えられている。したがって、これら慢性疾患の解消には角質水分量を保持し、掻痒感を解消することが非常に重要である。
【０００３】
従来、これらの慢性皮膚炎に対しては、外用ステロイド剤、抗ヒスタミン剤、抗アレルギー剤および保湿剤などの薬剤が使用されている。しかし、ステロイド剤は強い副作用からその使用が制限されており、抗ヒスタミン剤、抗アレルギー剤、保湿剤などでは、十分満足のいく治療効果が得られていなかった。また、それらの薬剤は、一時的に症状が改善されても再発する事があり治療効果が不十分なものであった。
【０００４】
従来、皮膚の乾燥については、その原因が不明なことから十分な評価ができていなかったのが現状である。
【０００５】
したがって、乾皮症が関与する皮膚からの水分蒸散量もしくは皮膚角質水分量を指標にして薬物を評価し、皮膚からの水分蒸散量を効果的に低減させることができる薬物を見出せば、乾皮症の発症を抑制することができる薬物が得られると考えられる。
【０００６】
従来、プロスタグランジン類が痒み惹起成分であるという報告は多数なされている。一方、プロスタグランジン類を有効成分とする止痒剤としては、プロスタグランジン受容体アゴニストが、アトピー性皮膚炎による痒みに対する外用止痒剤として有用であることが報告されている（特許文献１）。
【０００７】
本願発明の化合物の一部は眼圧降下剤などとして開示されている化合物である（特許文献２〜４）。しかしそれらが乾皮症に有効であるという報告はなされていない。
【０００８】
一般的にプロスタグランジン受容体に作用する成分は、一つの受容体だけでなく複数の受容体に作用することが多い。したがって目的とする薬効を発現する受容体に対する作用だけでなく、他の受容体に対しても作用することから、目的外の生理反応が副作用や作用低減という形で発現するリスクがある。プロスタグランジンＤ2がＤＰ受容体だけでなくＴＰ受容体に対しても作動物質であることは報告されている（非特許文献１、２）。
【０００９】
【特許文献１】ＷＯ０３／０７０２５２
【特許文献２】ＷＯ９５／０１８１０１
【特許文献３】ＷＯ９９／０６１４１９
【特許文献４】ＷＯ０１／０１９７９０
【非特許文献１】The Journal of Pharmacology And Experimental Therapeutics (2003),305,347-352
【非特許文献２】Br. J. Pharmacol.(1989),96,688-692
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
ＴＰ受容体作動物質には強力な血管収縮作用、血小板凝集を引き起こす可能性がある。このため、ＤＰ受容体以外にもＴＰ受容体等にも作動物質として作用するＰＧＤ2においては薬剤としての有用性が制限される。
【００１１】
本発明は、主に加齢により皮膚角質間脂質及び角質水分量が低下することによる原因不明の皮膚過敏、掻痒感及び皮膚乾皮症の発症を予防または治療することができる、高い安全性と有効性を併せ持った薬剤の提供を目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明者らは種々検討した結果、プロスタグランジンＤ受容体選択的作動薬が皮膚乾燥を効果的に抑制でき、角質水分量低下などの症状の治療または予防に有効であることを見出し本発明を完成した。
【００１３】
すなわち本発明は
１．ＤＰ受容体選択的アゴニストを有効成分とする乾皮症治療剤。
２．ＤＰ受容体選択的アゴニストであるプロスタグランジン類を有効成分とする乾皮症治療剤。
３．式
【００１４】
【化１】
0005382898.tif 000002
【００１５】
[式中Ｒ1は
-(CH2)4-S-CH2-CO2H
で示される基、
-(CH2)4-S-CH2-CO2CH3
で示される基、
-(CH2)4-C≡C-CO2H
で示される基、
-CH2-S-(CH2)2-S-CH2-CO2H
で示される基または
-CH2-S-(CH2)4-CO2H
で示される基のいずれかの基を示す。]
で示される化合物を有効成分とする乾皮症治療剤。
４．式
【００１６】
【化２】
0005382898.tif 000003
【００１７】
で示される化合物を有効成分とする乾皮症治療剤。
５．乾皮症が、老人性乾皮症である１〜４のいずれかに記載の乾皮症治療剤。
である。
【００１８】
本発明者らは、本発明の作用機序を検討したところ、皮膚炎を自然発症するＮＣ/Ｎｇaマウスは、皮膚組織中のプロスタグランジンのうち、ＰＧＥ2、ＰＧＦ2α、ＰＧＩ2量については加齢に伴う変化がないにも拘わらず、ＰＧＤ2量のみが加齢により低下することを見出した。この結果より皮膚炎を自然発症するＮＣ/Ｎｇaマウスでは加齢により低下した生体内ＰＧＤ2量が痒み及び皮膚乾燥の引き金になっている可能性を示唆した。即ち、内因性のＰＧＤ2量が生理的に皮膚バリアー機能の保持に作用しており、外因性のＰＧＤ2安定誘導体を補給することにより、乾皮症の発症を予防または治療するものと考えられる。
【００１９】
本願発明で効果がある乾皮症には老人性乾皮症、皮脂欠乏性湿疹などがあげられるが、本発明は老人性乾皮症に対して特に有効である。
【００２０】
本発明において、ＤＰ受容体選択的アゴニストとは、プロスタグランジン受容体のうち、ＤＰ受容体に対して強い作動薬として作用し、ＴＰ受容体に対する作用が弱い物質である。具体的には、ヒト血小板ＡＤＰ凝集抑制作用がIC50値で１０nM未満、ヒトＴＰ拮抗作用がIC50値で１０μM以上の物質を示す物質である。
【００２１】
その様な作用を持つＤＰ受容体選択的アゴニストである化合物としては、具体的には、式１
【００２２】
【化３】
0005382898.tif 000004
【００２３】
[式中Ｒ1は
-(CH2)4-S-CH2-CO2H、
-(CH2)4-S-CH2-CO2CH3、
-(CH2)4-C≡C-CO2H、
-CH2-S-(CH2)2-S-CH2-CO2H、または
-CH2-S-(CH2)4-CO2H
で示されるいずれかの基を示す。]
で示される化合物が好ましく、その中でも特に式
【００２４】
【化４】
0005382898.tif 000005
【００２５】
で示される化合物（以下「化合物１」という）が好ましい。
【００２６】
本願発明の好ましい化合物である、式１の化合物はＷＯ９５／１８１０１号公報、ＷＯ９９／６１４１９号公報およびＷＯ０１／１９７９０号公報に記載された化合物であり、それらの公報に開示された方法で製造することができる。
【００２７】
本発明の乾皮症治療剤は外用剤として患部に塗布して使用することができる。したがって、患部に速やかに投与できるだけでなく、代謝による無効化や副作用などが発生しにくいという特徴を有している。
【００２８】
本発明の乾皮症治療剤の投与量は、年齢、性別、体重等により異なるが、有効成分濃度が０．１〜０．０００１％程度の製剤を患部に適量塗布することにより投与する。
【００２９】
本発明の乾皮症治療剤は、有効成分のほか必要な基剤、ゲル化剤、溶解剤、溶解補助剤、ｐＨ調節剤、他の薬効成分などを配合し、一般的な方法で、軟膏剤、クリーム剤、ゲル剤、液剤、エアゾール剤、貼付剤などの外用剤にすることができる。
【発明の効果】
【００３０】
本発明により、乾皮症を予防または改善することができた。また、本発明により、乾皮症により発生する皮膚炎を予防または改善することが可能になった。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３１】
以下実施例および試験例により、本発明をさらに詳細に説明する。
【実施例１】
【００３２】
化合物１を０．０１ｇ秤量しグリセリン２０ｇに溶解後、白色ワセリン８０ｇに均一に混合し１００ｇの軟膏剤を得た。
化合物１                                  ０．０１ｇ
白色ワセリン                              ８０ｇ
グリセリン                                ２０ｇ
【実施例２】
【００３３】
下記の成分を秤量し均一に混合した後、精製水とエタノールの下記容量を加え１０００ｍｌの液剤を得た。
化合物１                                ０．１ｇ
エタノール                              ２００ｍL
精製水                                  ８００ｍL
【実施例３】
【００３４】
下記の成分をそれぞれ混合し均一に乳化し、更に香料を適量加えクリーム剤
５００ｇを得た。
化合物１                              ０．０５ｇ
マレイン酸カルビノキサミン                  ５ｇ
エラグ酸ナトリウム                          ５ｇ
ヒヤルロン酸ナトリウム                      ３ｇ
メチルパラベン                              ２ｇ
精製水                              ２１８．５ｇ
流動パラフィン（＃７０）                  ５０ｇ
スクワラン                              １００ｇ
セトステアリルアルコール                  ６０ｇ
蜜蝋                                      ２０ｇ
モノステアリン酸グリセリン                １５ｇ
ソルビタンモノラウレート                  ２０ｇ
プロピルパラベン                            １ｇ
【実施例４】
【００３５】
以下の各成分を組成とするエアゾール剤を調製した。
化合物１                            ０．０１（Ｗ／Ｖ％）
アジピン酸ジイソプロピル                  ３
モノラウリン酸ポリエチレングリコール      ８
エタノール                              １０
イソプロパノール                        １０
マクロゴール４００                        ５
ジブチルヒドロキシトルエン                ０．１
ジイソプロパノールアミン                  ０．２
精製水                                  ２５
液化石油ガス                        全１００
【００３６】
参考例１：マウス皮膚組織中のＰＧｓ量の変化
ＮＣ/Ｎｇa系雄性マウス(５、１０、１５、２０週齢)を試験に用いた。内因性のプロスタグランジン（ＰＧ）を正確に測定するため、インドメタシン(１０ｍｇ／ｋｇ)を静脈内注射して新たな内因性のＰＧ産生を抑制し、５分後に鋏を用いて背部皮膚を採取した。皮膚片をチューブに移しＰＢＳ（１００μＭ インドメタシンを含む）1ｍＬを添加した後、ポリトロンホモジェナイザーを用いて組織を粉砕した。アセトンを４ｍＬ添加して５分間静置した後、３０００ｒｐｍで１０分間遠心した。上清を回収後、溶媒を蒸発させてELISA bufferに再溶解し、ELISA kit（Cayman chemical、R&D systems）にて各ＰＧｓ量(ＰＧＤ2、ＰＧＥ2、ＰＧＦ2α、６ketoＰＧＦ1α)を測定し、皮膚１mg中の各ＰＧｓ量を求めた。
【００３７】
結果を図１に示した。
【００３８】
図１から明らかなようにＮＣ／Ｎｇａマウスは加齢により皮膚中のＰＧＤ2量が低下することがわかった。
【００３９】
試験例１
以下の方法で本願発明有効成分である化合物１と対照例としてＰＧＤ2を用いて、各種プロスタグランジン受容体結合選択性を求めた。
【００４０】
１．ヒト血小板凝集抑制作用
ヒト血小板ＡＤＰ凝集抑制作用
試験は購入した多血小板血漿（ＰＲＰ）(６×１０8  platelets／mL)を用い、血小板凝集の測定はＢｏｒｎの方法（Nature，第１９４巻，第９２７頁，１９６２年）に準じて行なった。ＰＲＰ １００μＬに、エタノールに溶解した１nM〜３μMの被検薬物溶液５μＬを加え、３７℃、１０００ｒｐｍ攪拌下、１分間インキュベートした。これに５μＬの凝集惹起剤［ＡＤＰ（３μＭ）］を添加して血小板凝集を惹起し、血小板凝集計（アグリゴメーター）により最大凝集率（血小板の凝集を惹起してから５分以内の光透過度の最大変化）を求めた。被検薬物の凝集抑制率を、被検薬物溶液のかわりにエタノールを用いた場合の最大凝集率に対する被検薬物の最大凝集率から算出し、その用量反応曲線からＩＣ50値を求めた。その結果、化合物１のＩＣ50値は４．２７ｎＭ、ＰＧＤ2のＩＣ50値は１１ｎＭであった。
【００４１】
２．モルモット血小板凝集抑制作用
モルモット血小板ＡＤＰ凝集抑制作用
採血およびplatelet rich plasma（ＰＲＰ）とplatelet poor plasma（ＰＰＰ）の調製
９〜１０週齢ハートレー系雄性モルモットをペントバルビタール(３０mg／kg、腹腔内投与)により麻酔し、腹大動脈より３．８％クエン酸ナトリウム２．０ｍＬ含有注射筒に血液を２０ｍＬ採血した。血液は直ちに２０℃、９００ｒｐｍ、１０分間遠心分離し上清であるＰＲＰを回収した。さらに２０℃、３０００ｒｐｍ、１０分間遠心分離し上清であるＰＰＰを回収した。
【００４２】
血小板凝集能の測定には、血小板凝集能測定装置（ＰＡＭ−８Ｃ）を使用した。ＰＲＰ ２７４μＬにエタノールに溶解した０．２８７〜９５．７nMの被験物質1μＬを添加し、３７℃、１０００ｒｐｍの攪拌下に３分間インキュベートした。インキュベート後、２５μＬのＡＤＰ（３μＭ）にて血小板凝集を惹起し、５分間の最大凝集率を測定した。
【００４３】
その結果、化合物１のＩＣ50値は６．２±２．３ｎＭ、ＰＧＤ2のＩＣ50値は５４．３±２３．０ｎＭであった。
【００４４】
３．ヒトＴＰ拮抗作用
文献（Ｊ.Pharmacol.Exp.Ther．、第２４５巻、第７８６−７９２頁、１９８８年）に記載された方法に準拠して、ヒト洗浄血小板への[3Ｈ]ＳＱ２９５４８結合に対する被検薬の拮抗作用を検討した。
【００４５】
その結果、化合物１は１０μＭで２８％、１μＭで７％の結合阻害率を示した。一方、陽性対照薬として用いたトロンボキサンアゴニストであるＵ４４０６９のＩＣ50値は２．４μＭであった。
【００４６】
参考例２
上記１で示された本願発明有効成分及びＰＧＤ2の血小板凝集抑制作用がプロスタグランジンＤ受容体アゴニスト作用であることを確認するために、化合物１及びＰＧＤ2の血小板凝集抑制作用がプロスタグランジンＤ受容体選択的アンタゴニストによって拮抗されるかを試験した。
【００４７】
被験薬物：
プロスタグランジンＤ受容体選択的アンタゴニストとして、((+/-)-3-ベンジル-5-(6-カルボキシヘキシル)-1-(2-シクロヘキシル-2-ヒドロキシエチルアミノ)-ヒダントイン) (以下「BW A868C」という)（シグマアルドリッチジャパン株）を用いた。
【００４８】
BW A868Cは、エタノールで希釈して、終濃度が０．０３μmol／L、０．１μmol／L、０．３μmol／L、１μmol／L、３μmol／L及び１０μmol／Lとなるようにした。
【００４９】
化合物１及びPGD2は、エタノールで希釈して、287 nmol/L及び300 nmol/Lに調整して用いた。
【００５０】
陰性対照としてエタノールを用いた。
【００５１】
血小板の調製：
ヒト健常男子の肘静脈から採血し、３．１３％クエン酸ナトリウムを入れたチューブに血液を採取した。これを２０℃にて１，０００ｒｐｍにて1０分間遠心分離することで上澄（ＰＲＰ、多血小板血漿）を分取し、残さをさらに２０℃にて、３，０００ｒｐｍにて1０分間遠心分離することで上澄（ＰＰＰ、乏血小板血漿）を得た。ＰＲＰの血小板数を任意にＰＰＰで希釈して30×104  血小板/μLに調整して用いた。
【００５２】
血小板凝集能の測定
血小板凝集能は，血小板凝集能測定装置(PAM-8C：エム・シー・メディカル株式会社)を使用し，Ｂｏｒｎの方法（Ｎａｔｕｒｅ，第１９４巻，第９２７ページ，１９６２年）にて測定した。PRP 273 μL（BW A868C群の場合は各濃度のBW A868Cを１μL添加）を1,000 rpmの攪拌下37 ℃で3分間プレインキュベートした。プレインキュベート後，エタノールまたは試験物質を１μL（化合物１：最終濃度 95.7 nmol/L、PGD2：最終濃度 1000 nmol/L）添加し、1,000 rpmの攪拌下37℃で３分間インキュベートした。インキュベート後、25 μLのADP(最終濃度３ μmol/L)にて血小板凝集を惹起し、５分間の最大凝集率を測定した。
【００５３】
その結果を図２に示した。
【００５４】
化合物１及びPGD2は、それぞれの対照群（エタノール）に対して有意な血小板凝集抑制作用を示した。
【００５５】
化合物１による血小板凝集抑制作用は、BW A868Cの添加濃度の増加に伴って拮抗され、0.1 μmol/L以上により有意に拮抗された。PGD2による血小板凝集抑制作用も、BW A868Cの添加濃度の増加に伴って拮抗され、0.3 μmol/L以上により有意に拮抗された。
【００５６】
以上の結果より、本願発明有効成分はプロスタグランジンＤ受容体選択的アゴニスト作用を有することが明らかとなった。
【００５７】
試験例２
マウス皮膚バリアー機能に対する作用（治療試験）
６週齢のＢＡＬＢ／ｃ系雄性マウス、８匹の吻側背部の４ｃｍ2（２ｃｍ×２ｃｍ）を電気バリカンで剃毛し、アセトン：ジエチルエーテル＝1：1混液を浸した脱脂綿（２ｃｍ×２ｃｍ）で６０秒間被覆した。上記皮膚バリアー機能破壊（バリアー破壊）処理を１日１回、連続して３日間行った。３日目のバリアー破壊処理完了翌日から１日１回、２日間、溶媒（エタノール，１００μＬ）または溶媒に溶解した薬剤（化合物１,ＰＧＤ2，ＰＧＦ2α及びＰＧＥ1，全て０．０１％，１００μＬ）をバリアー破壊部位に塗布した。２回目の溶媒及び薬剤塗布翌日に同部位の経表皮水分蒸散量をTewameter（商品名）により測定し、薬剤の作用を評価した。結果を図３に示した。
【００５８】
図から明らかなように、正常群と比較し、バリアー破壊した対照群は有意に経表皮水分蒸散量が増加した。バリアー破壊した対照群と比較し、化合物１塗布群は、有意に経表皮水分蒸散量が減少した。一方、ＰＧＤ2，ＰＧＦ2α及びＰＧＥ1塗布群は、対照群との間に有意差は認められなかった。
【００５９】
以上の結果より、化合物１は、破壊された皮膚バリアーの治癒促進作用を示すことがわかった。
【００６０】
試験例３
マウス皮膚バリアー機能に対する作用（予防試験）
６週齢のＢＡＬＢ／ｃ系雄性マウス、６匹の吻側背部の４ｃｍ2（２ｃｍ×２ｃｍ）を電気バリカンで剃毛し、皮膚炎を発症したＮＣ／Ｎｇａマウスと同居飼育した。同居飼育開始翌日から１日１回7日間、溶媒（エタノール、１００μＬ）または溶媒に溶解した薬剤（化合物１、ＰＧＤ2、ＰＧＦ2α及びＰＧＥ1、全て０．０１％、１００μＬ）を上記剃毛部位に塗布した。
【００６１】
7回目の溶媒または薬剤塗布翌日に同部位の経表皮水分蒸散量をTewameter（商品名）により測定し、薬剤の作用を評価した。結果を図４に示した。
【００６２】
図から明らかなように、正常群と比較し、対照群は有意に経表皮水分蒸散量が増加していることが認められた。対照群と比較し、化合物１、ＰＧＤ2及びＰＧＥ1塗布群は、有意な経表皮水分蒸散量の減少が認められた。一方、ＰＧＦ2α塗布群は対照群との間に有意な差は認められなかった。
【００６３】
以上の結果は化合物１の皮膚バリアー傷害予防作用を示すものであり、化合物１は乾皮症などの皮膚バリアー傷害に対し、予防作用を示すことがわかった。
【００６４】
試験例４
加齢マウス皮膚バリアー機能に対する作用（治療試験）
50週齢のBALB/c系雄性マウス、８匹の吻側背部の４cm2（２cm×２cm）を電気バリカンで剃毛した。翌日から１日１回３日間、溶媒（エタノール，200μL）または溶媒に溶解した薬剤（化合物１及びPGD2，全て0.0001%，200μL）を上記剃毛部位に塗布した。
【００６５】
３回目の溶媒または薬剤塗布翌日に同部位の経表皮水分蒸散量をTewameter（商品名）により測定し、薬剤の作用を評価した。結果を図５に示した。
【００６６】
図から明らかなように、対照群と比較し、化合物１塗布群は、有意な経表皮水分蒸散量の減少が認められた。一方、PGD2塗布群は対照群との間に有意な差は認められなかった。
【００６７】
以上の結果は化合物１の皮膚バリアー修復促進作用を示すものであり、化合物１は老人性乾皮症などの皮膚バリアー傷害に対し、治療作用を示すことがわかった。
【００６８】
参考例３
加齢による皮膚障害
6，12，24及び50週齢のBALB/c系雄性マウスの経表皮水分蒸散量（皮膚バリアー機能の指標）を試験例４と同様の方法で測定した。結果を図６に示した。
【００６９】
図から明らかなように、加齢に伴い、皮膚バリアーの指標である経表皮水分蒸散量（TEWL）が増加を示し、皮膚機能が加齢とともに破壊されることを確認した。
【産業上の利用可能性】
【００７０】
本願発明により、安全性が高く優れた効果を示す乾皮症治療または予防剤の提供が可能になったので、医薬品などに利用可能である。
【図面の簡単な説明】
【００７１】
【図１】各種プロスタグランジン類のマウス皮膚中の残存量を測定した結果であり、各縦軸に残存量、各横軸にマウス週齢を示した。
【図２】ADP惹起ヒト血小板凝集に対する化合物１及びPGD2の抑制作用とBW A868Cによるその拮抗作用を示す。各値は，６例の平均値±標準誤差を示す。###：  対照群の値に対してｐ＜０．００１で有意差ありを示す（対応のあるｔ検定）。＊＊、＊＊＊：溶媒群の値に対してｐ＜０．０１、ｐ＜０．００１で有意差ありを示す（二元配置Dunnett型検定）。
【図３】各薬物を塗布したマウス経表皮水分蒸散量を示した図であり、縦軸に経表皮水分蒸散量、横軸に薬物種類を示した。
【図４】各薬物を塗布したマウス経表皮水分蒸散量を示した図であり、縦軸に経表皮水分蒸散量、横軸に薬物種類を示した。
【図５】各薬物を塗布したマウス経表皮水分蒸散量を示した図であり、縦軸に経表皮水分蒸散量、横軸に薬物種類を示した。
【図６】各薬物を塗布したマウス経表皮水分蒸散量を示した図であり、縦軸に経表皮水分蒸散量、横軸に被験マウスの週齢を示した。
【図１】
0005382898.tif 000007
【図２】
0005382898.tif 000008
【図３】
0005382898.tif 000009
【図４】
0005382898.tif 000010
【図５】
0005382898.tif 000011
【図６】
0005382898.tif 000012