(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
化学式（１）で表されるＳ−ラクトイルグルタチオン及び／又はその塩を含有することを特徴とするＶＥＧＦＲ３発現低下改善剤。
【化１】
0005384285.tif 000007
【請求項２】
請求項１に記載のＶＥＧＦＲ３発現低下改善剤を含有することを特徴とするむくみ改善剤（炎症が関与するものを除く）。
【請求項３】
むくみによって引き起こされるセルライトの蓄積の症状を予防、改善するための、請求項２に記載のむくみ改善剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、Ｓ−ラクトイルグルタチオン及び／又はその塩を含有することを特徴とするむくみ改善剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
むくみとは、体内の組織液が適切に排出されないことが原因となり、組織間隙に余分な水分やタンパク質が蓄積して膨張するために生じるものであり、長時間の座位及び立位等により日常的に自然発生しやすいものである。むくみを長時間放置しておくと、美容上好ましくないだけではなく、関節等に痛みを感じたり、肥満につながるセルライトが蓄積する等、人体に様々な悪影響をもたらすと考えられる。
【０００３】
皮膚の真皮内に存在する毛細リンパ管は、末梢組織に漏出した組織液やタンパク質、小腸より吸収された脂肪を回収し、又、老廃物の排出を行うことにより、体内の組織液の循環を維持している。このような組織液の循環は、体液の恒常性維持や組織の生理活性に必要不可欠といえる。
【０００４】
毛細リンパ管は、一層のリンパ管内皮細胞から成る。リンパ管内皮細胞には、特異的に発現する膜貫通型受容体チロシンキナーゼであるＶＥＧＦＲ３があり、ＶＥＧＦＲ３を活性化する因子として血管内皮増殖因子−Ｃ（ＶＥＧＦ−Ｃ）が同定されている。このＶＥＧＦ−Ｃ／ＶＥＧＦＲ３を介したシグナル伝達の結果、リンパ管内皮細胞が増殖・遊走後に新たなリンパ管の形成が促進される（リンパ管新生）。
【０００５】
ＶＥＧＦ−Ｃを含むＶＥＧＦファミリーは複数の因子で構成される。ＶＥＧＦ−Ａは、血管形成促進に働く一方で、リンパ管に対してはその機能を悪化させる働きを持ち、ＶＥＧＦ−Ｂは血管特異的に働くとされている。ＶＥＧＦ−Ｃはリンパ管特異的に作用し、リンパ管新生を促進する主要な因子であることが知られている。
【０００６】
従来、むくみを解消する方法としては、薬剤の塗布又はマッサージ等の体外からの物理的力によりリンパ液の流れを促進し、体内の組織液の循環を活発化させることがよく知られている。むくみ改善効果を持つ薬剤には、植物抽出物等を含む化粧料や食品があり、例えば、茯苓を有効成分とするむくみ改善剤（特許文献１）、α−グリコシル化ルチンを有効成分とするむくみ改善用食品（特許文献２）等の技術が報告されている。
【０００７】
又、ＶＥＧＦ−Ｃが減少した皮膚においては浮腫が発生すること（非特許文献１）や、ＶＥＧＦＲ３中和抗体を用いてＶＥＧＦ−ＣのＶＥＧＦＲ３への結合を阻害するとリンパ管の数が顕著に減少し、浮腫が発生すること（非特許文献２）が報告されている。このように、様々な刺激によりＶＥＧＦ−Ｃ／ＶＥＧＦＲ３シグナル伝達が低下するとむくみが発生し、そのようなシグナル伝達低下を改善することがむくみ改善につながると考えられている。
【０００８】
ＶＥＧＦ−Ｃ／ＶＥＧＦＲ３シグナル伝達低下を改善する技術として、キョウニンエキス、ニンジンエキス、カノコソウエキス、サンザシエキス、メリロートエキス、オドリコソウエキス、及びイリス根エキスから成る群から選定される１又は複数種の薬剤を含有することを特徴とするＶＥＧＦ−Ｃ産生促進剤（特許文献３）の報告がある。
【０００９】
一方、Ｓ−ラクトイルグルタチオン及び／又はその塩は、美白剤（特許文献４）、抗炎症剤（特許文献５）としての技術が開示されているが、むくみ改善効果については報告がなされていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１０】
【特許文献１】特許第４０５２７５０号
【特許文献２】特開２００７−１３００２０号
【特許文献３】特開２００８−１８９６０９号
【特許文献４】特許第２８７６２４４号
【特許文献５】特許第２５２２９４０号
【非特許文献】
【００１１】
【非特許文献１】Ｊ  Ｉｎｖｅｓｔ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ．１２９，１２９２−８（２００９）
【非特許文献２】Ｊ  Ｉｎｖｅｓｔ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ．１２６，９１９−２１（２００６）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
日常生活においては、皮膚は常に紫外線や乾燥、温度変化等の外界からの刺激にさらされた状態にある。そのような刺激によりリンパ管がダメージを受け、ＶＥＧＦ−Ｃ／ＶＥＧＦＲ３シグナル伝達が阻害されてリンパ管の機能が低下すると、体内での組織液回収が滞り、新たなむくみ症状を引き起こすことが予想される。
【００１３】
しかし、マッサージやむくみ改善剤、むくみ改善用食品等は、水分循環を活性化してむくみを解消するため、むくみ発生の原因となるリンパ管の機能低下に直接働きかけるものではなく、一時的なむくみ改善効果しか得られないという問題点があった。
【００１４】
又、リンパ管機能低下の改善にはＶＥＧＦ−Ｃ／ＶＥＧＦＲ３シグナル伝達の正常化が重要であり、ＶＥＧＦ−Ｃ産生促進によりむくみを改善する技術が報告されているが、外界からの様々な刺激によりＶＥＧＦＲ３発現が低下した状態では、その効果は十分に発揮されないという問題点があった。
【００１５】
本発明は、ＶＥＧＦＲ３発現低下を改善することによりリンパ管機能を活性化することで、むくみを改善する優れた効果を有する組成物を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【００１６】
本発明者らは、この問題点を解決すべく、鋭意研究を重ねた結果、Ｓ−ラクトイルグルタチオン及び／又はその塩に優れたむくみ改善効果を発見し、本発明を完成するに至った。
【００１７】
本発明は、化学式（１）で表されるＳ−ラクトイルグルタチオン及び／又はその塩を含有することを特徴とするむくみ改善剤を提供する。
【化１】
0005384285.tif 000002
【００１８】
本発明は、むくみ及び、むくみによって引き起こされる関節の痛みやセルライトの蓄積等の症状を予防、改善するためのむくみ改善剤を提供する。
【００１９】
本発明は、Ｓ−ラクトイルグルタチオン及び／又はその塩を含有することを特徴とするＶＥＧＦＲ３発現低下抑制剤を提供する。
【発明の効果】
【００２０】
本発明のＳ−ラクトイルグルタチオン及び／又はその塩は、外界からの刺激によってダメージを受けたリンパ管内皮細胞膜上でのＶＥＧＦＲ３の発現低下を改善することで、優れたむくみ改善効果を示し、更に、むくみにより引き起こされる関節の痛みやセルライトの蓄積等を予防、改善することができる。
【発明を実施するための形態】
【００２１】
本発明で使用されるＳ−ラクトイルグルタチオンの化学式（１）を以下に示す。
【化１】
0005384285.tif 000003
【００２２】
Ｓ−ラクトイルグルタチオンは、細胞増殖制御機構の過程において、メチルグリオキサールがグルタチオンと非酵素的に反応して中間体ヘミメルカプタールを与え、このヘミメルカプタールがグリオキサラーゼＩによって代謝されて生成される。
【００２３】
Ｓ−ラクトイルグルタチオンは市販品を用いても良いが、上述のようにグリオキサラーゼＩによって酵素的にメチルグリオキサールとグルタチオンから製造することもできる（特開平１−９８４８７号）。
【００２４】
Ｓ−ラクトイルグルタチオンの塩としては、ナトリウム、カリウム、リチウム等のアルカリ金属塩、カルシウム、マグネシウム等のアルカリ土類金属塩、アンモニウム及びモノエタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、トリエチルアミン、ピペラジン、アルギニン等のアミン類との塩、そして塩酸塩等が挙げられるが、これらは常法によりＳ−ラクトイルグルタチオンから製造することができる。
【００２５】
本発明におけるＳ−ラクトイルグルタチオン及び／又はその塩の配合量は、通常０．００１〜１０重量％の範囲が好ましく、より好ましくは０．０１〜５重量％である。
【００２６】
本発明のむくみ改善剤は、皮膚外用剤としての適用が有効である。
【００２７】
皮膚外用剤の形態の場合には、本発明の効果を損なわない範囲で上記成分の他、通常の化粧料及び薬剤に配合されている水性成分、粉体、油剤、保湿剤、アルコール類、ｐＨ調整剤、防腐剤、色素、増粘剤、香料等を適宜配合することができると共に、常法に従って製造することができる。皮膚外用剤の形態の具体例としては、化粧水、乳液、クリーム、ジェル、軟膏、浴用剤、ゲル剤、ペースト剤、エッセンス、パック等があげられる。
【００２８】
本発明のＳ−ラクトイルグルタチオン及び／又はその塩は、外界からの刺激によりダメージを受けたリンパ管内皮細胞膜上でのＶＥＧＦＲ３の発現低下を改善することで、優れたむくみ改善効果を示し、更に、むくみにより引き起こされる関節の痛みやセルライトの蓄積等を予防、改善することができる。
【００２９】
本発明を詳細に説明するため、実施例１として本発明の処方例を挙げるが、本発明はこれに限定されるものではない。
【実施例１】
【００３０】
本発明の化学式（１）で表されるＳ−ラクトイルグルタチオン及び／又はその塩は、処方例として下記の製剤化を行うことができる。
【００３１】
処方例１  クリーム１                                
処方                                                配合量（重量％）
１．Ｓ−ラクトイルグルタチオン                        ０．１
２．スクワラン                                        ５．５
３．オリーブ油                                        ３．０
４．ステアリン酸                                      ２．０
５．ミツロウ                                          ２．０
６．ミリスチン酸オクチルドデシル                      ３．５
７．ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ．）  ３．０
８．ベヘニルアルコール                                １．５
９．モノステアリン酸グリセリン                        ２．５
１０．香料                                              ０．１
１１．１，３−ブチレングリコール                        ８．５
１２．パラオキシ安息香酸エチル                          ０．０５
１３．パラオキシ安息香酸メチル                          ０．２
１４．精製水                                          ６８．０５
［製造方法］成分２〜９を加熱して混合し、７０℃に保ち油相とする。成分１１〜１４を加熱溶解して混合し、７５℃に保ち水相とする。油相に水相を加えて乳化して、かき混ぜながら冷却し、４５℃で成分１０を加え、更に３０℃まで冷却して成分１を加え、製品とする。
【００３２】
比較例１  クリーム２
処方例１において、Ｓ−ラクトイルグルタチオンを精製水に置き換えたものを従来のクリームとした。
【００３３】
処方例２  化粧水
処方                                                配合量（重量％）
１．Ｓ−ラクトイルグルタチオン                        ０．０１
２．１，３−ブチレングリコール                        ８．０
３．グリセリン                                        ２．０
４．キサンタンガム                                    ０．０２
５．クエン酸                                          ０．０１
６．クエン酸ナトリウム                                ０．１
７．エタノール                                        ５．０
８．パラオキシ安息香酸メチル                          ０．１
９．ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（４０Ｅ．Ｏ．）    ０．１
１０．香料                                              ０．１
１１．精製水                                          ８４．５６
［製造方法］成分１〜６及び１１と、成分７〜１０をそれぞれ均一に溶解し、両者を混合し濾過して製品とする。
【００３４】
処方例３  乳液
処方                                                配合量（重量％）
１．Ｓ−ラクトイルグルタチオンナトリウム塩            ０．０５
２．スクワラン                                        ５．０
３．オリーブ油                                        ５．０
４．ホホバ油                                          ５．０
５．セタノール                                        １．５
６．モノステアリン酸グリセリン                        ２．０
７．ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ．）  
３．０
８．ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート        ２．０
９．香料                                              ０．１
１０．プロピレングリコール                              １．０
１１．グリセリン                                        ２．０
１２．パラオキシ安息香酸メチル                          ０．２
１３．精製水                                          ７３．１５
［製造方法］成分２〜８を加熱溶解して混合し、７０℃に保ち油相とする。成分１０〜１３を加熱溶解して混合し、７５℃に保ち水相とする。油相に水相を加えて乳化して、かき混ぜながら冷却し、４５℃で成分９を加え、更に３０℃まで冷却して成分１を加え、製品とする。
【００３５】
処方例４  軟膏
処方                                                配合量（重量％）
１．Ｓ−ラクトイルグルタチオン                        １．０
２．ポリオキシエチレンセチルエーテル（３０Ｅ．Ｏ．）  ２．０
３．モノステアリン酸グリセリン                      １０．０
４．流動パラフィン                                    ５．０
５．セタノール                                        ６．０
６．パラオキシ安息香酸メチル                          ０．１
７．プロピレングリコール                            １０．０
８．精製水                                          ６５．９
［製造方法］成分２〜５を加熱溶解して混合し、７０℃に保ち油相とする。成分１及び６〜８を加熱溶解して混合し、７５℃に保ち水相とする。油相に水相を加えて乳化して、かき混ぜながら３０℃まで冷却して製品とする。
【００３６】
処方例５  浴用剤
処方                                                配合量（重量％）
１．Ｓ−ラクトイルグルタチオンカリウム塩              ５．０
２．炭酸水素ナトリウム                              ５０．０
３．黄色２０２号（１）                                ０．０５
４．香料                                              ０．２５
５．無水硫酸ナトリウム                              ４４．７
［製造方法］成分１〜５を均一に混合し製品とする。
【００３７】
以下、本発明を効果的に説明するために、実施例２として本発明の実験例を挙げるが、本発明はこれに限定されるものではない。
【実施例２】
【００３８】
実験例１  ＬＹＶＥ−１及びＰｒｏｘ１陽性の内皮細胞（ＨＤＭＥＣ）における、ＶＥＧＦＲ３遺伝子の発現変化
本研究では、外部からの刺激の一例として、炎症性サイトカインＩＬ−１αがリンパ管の特異的マーカーであるＬＹＶＥ−１及びＰｒｏｘ１を発現している内皮細胞でのＶＥＧＦＲ３  ｍＲＮＡ発現に与える影響について検討した。
ＨＤＭＥＣを６０ｍｍ  ｄｉｓｈに１×１０５個播種し、コンフルエントになった時点で１０ｎｇ／ｍｌのＩＬ−１αを添加し、同時に、１０μＭのＳ−ラクトイルグルタチオン、比較対象として１０μＭのグルタチオン（いずれもＷＡＫＯ）を添加した。培養後、総ＲＮＡの抽出を行った。細胞からの総ＲＮＡの抽出はＴＲＩＺＯＬ  Ｒｅａｇｅｎｔ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いて行い、総ＲＮＡ量は分光光度計（ＮａｎｏＤｒｏｐ）を用いて２６０ｎｍにおける吸光度により求めた。ｍＲＮＡ発現量の測定は、細胞から抽出した総ＲＮＡを基にしてリアルタイムＲＴ−ＰＣＲ法により行った。リアルタイムＲＴ−ＰＣＲ法には、ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ３  Ｐｌａｔｉｎｕｍ  Ｔｗｏ−Ｓｔｅｐ
ｑＲＴ−ＰＣＲ  Ｋｉｔ  ｗｉｔｈ  ＳＹＢＲ  Ｇｒｅｅｎ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いた。すなわち、５００ｎｇの総ＲＮＡを逆転写反応後、ＰＣＲ反応（９５℃：１５秒間、６０℃：３０秒間、４０ｃｙｃｌｅｓ）を行った。その他の操作は定められた方法に従い、ｍＲＮＡの発現量を内部標準であるＧＡＰＤＨ  ｍＲＮＡの発現量に対する割合として求めた。尚、各遺伝子の発現量の測定に使用したプライマーは次の通りである。
【００３９】
ＶＥＧＦＲ３用のプライマーセット
ＧＣＧＴＣＡＴＣＧＣＴＧＴＣＴＴＣＴＴＣＴ（配列番号１）
ＣＡＧＧＴＡＧＣＣＣＧＴＣＴＴＧＡＴＧＴＣ（配列番号２）
ＧＡＰＤＨ用のプライマーセット
ＴＧＡＡＣＧＧＧＡＡＧＣＴＣＡＣＴＧＧ（配列番号３）
ＴＣＣＡＣＣＡＣＣＣＴＧＴＴＧＣＴＧＴＡ（配列番号４）
【００４０】
その結果を表１に示す。ＨＤＭＥＣにＩＬ−１αを添加すると、ＶＥＧＦＲ３  ｍＲＮＡの発現量は減少したが、Ｓ−ラクトイルグルタチオンはこの変化を回復させた。一方、グルタチオンではわずかな効果しか認められなかった。従って、Ｓ−ラクトイルグルタチオンは、リンパ管機能低下によるむくみの原因となるＶＥＧＦＲ３の減少を改善する作用があることが示された。
【００４１】
【表１】
0005384285.tif 000004
【００４２】
実験例２  使用試験
処方例１及び比較例１のクリームを調製し、実際に使用した場合の効果について検討した。普段からむくみで悩んでいる女性被験者１０名（２０−５０代）を対象に、右ふくらはぎに処方例１のクリームを、又左ふくらはぎには比較例１のクリームを塗布してもらい、１日朝夕２回、１ヶ月間の使用試験を行った。評価方法は、使用１ヶ月後に左右ふくらはぎの最大周囲長を朝夕の２回測定し、朝夕のふくらはぎ最大周囲長の差をむくみ量とした。その平均値を求め、比較例１と処方例１を１ヶ月間使用した後の、むくみ量を比較した。また、同時に使用感アンケートを行い、むくみや関節の痛み、セルライト等への影響について評価した。
【００４３】
その結果を表２及び表３に示す。比較例１を使用した場合に比べて、処方例１を使用した場合の方がむくみ量が顕著に小さく、使用感アンケートからも、処方例１塗布によるむくみ改善効果の実感も高いことがわかる。又、処方例１の使用により、むくみ改善に加え、関節の痛みやセルライト等が軽減されたという評価もあり、本発明のＳ−ラクトイルグルタチオンを含有するむくみ改善剤は、ヒトにおける使用試験において優れたむくみ改善効果に加え、むくみにより二次的に発生する関節の痛みやセルライトの蓄積を軽減する効果を示すことが明らかとなった。
【００４４】
【表２】
0005384285.tif 000005
【００４５】
【表３】
0005384285.tif 000006
【産業上の利用可能性】
【００４６】
本発明のＳ−ラクトイルグルタチオン及び／又はその塩を含有することを特徴とする組成物は、優れたむくみ改善効果を示す。又、このむくみ改善剤は、リンパ管機能低下によるむくみの原因となるＶＥＧＦＲ３発現低下を改善することで、むくみ及び、むくみにより二次的に発生すると考えられる関節の痛みやセルライトの蓄積等を予防、改善することができる。
【配列表】
0005384285000001.app