(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
コロニーを採取する釣菌ツールと、該釣菌ツールを垂直方向及び水平方向へ駆動させる駆動部と、シャーレを載置する台と、コロニーを撮影するカメラと、を備えた釣菌装置であって、
コロニーを球菌か桿菌か、グラム陽性菌か陰性菌か、またはどの属なのかに分類し、
コロニーを球菌か桿菌か、グラム陽性菌か陰性菌か、またはどの属なのかの分類毎に、懸濁液の濁度と、コロニーの総面積との関係を示すデータベースと、
カメラで撮影したコロニーの画像を基にコロニーの面積を求める画像処理を行う制御部を備えており、
上記駆動部による釣菌ツールの動作は、垂直方向または水平方向のいずれかまたは組み合わせであり、
カメラで撮影した画像およびデータベースを基に、所望の濁度の懸濁液の作製に必要な菌量になるコロニー面積を求め、
さらに、このコロニー面積を釣菌ツールの垂直方向の動作により釣菌するための釣菌回数を求め、この釣菌回数が予め設定された閾値以下の場合には、垂直方向の釣菌ツールの動作により釣菌する一方、釣菌回数が予め設定された閾値より大きい場合には、水平方向の釣菌ツールの動作により釣菌することを特徴とする、釣菌装置。
【請求項２】
請求項１において、
釣菌すべきコロニーの個数を表示することを特徴とする、釣菌装置。
【請求項３】
請求項１において、
シャーレ上のコロニーの画像を表示し、釣菌すべきコロニーをマーキングすることを特徴とする、釣菌装置。
【請求項４】
請求項１において、
さらに、懸濁液の濁度を求める濁度計を備えたことを特徴とする、釣菌装置。
【請求項５】
請求項１において、
さらに、ユーザが釣菌するコロニーおよびコロニーのエリアを選択する入力部を備えたことを特徴とする、釣菌装置。
【請求項６】
請求項１において、
水平方向に釣菌ツールを動作する場合、動作距離または動作範囲または動作方向の少なくともひとつを判断し、選択したコロニーおよびエリアのコロニーを釣菌することを特徴とする、釣菌装置。
【請求項７】
コロニーを採取する釣菌ツールと、該釣菌ツールを垂直方向及び水平方向へ駆動させる駆動部と、シャーレを載置する台と、コロニーを撮影するカメラと、を備えた釣菌装置を用いた釣菌方法であって、
上記駆動部による釣菌ツールの動作は、垂直方向または水平方向のいずれかまたは組み合わせであり、
コロニーを球菌か桿菌、グラム陽性菌か陰性菌か、またはどの属なのかに分類し、
カメラで撮影した画像、および、上記の分類毎に、懸濁液の濁度と、コロニーの総面積との関係を示すデータベースを基に、所望の濁度の懸濁液の作製に必要な菌量になるコロニー面積を求め、
さらに、このコロニー面積を釣菌ツールの垂直方向の動作により釣菌するための釣菌回数を求め、この釣菌回数が予め設定された閾値以下の場合には、垂直方向の釣菌ツールの動作により釣菌する一方、釣菌回数が予め設定された閾値より大きい場合には、水平方向の釣菌ツールの動作により釣菌することを特徴とする、釣菌方法。
【請求項８】
請求項７において、
水平方向に釣菌ツールを動作する場合、動作距離または動作範囲または動作方向の少なくともひとつを判断し、選択したコロニーおよびエリアのコロニーを釣菌することを特徴とする、釣菌方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、細菌コロニーを採取（釣菌）する細菌コロニーの釣菌装置および釣菌方法に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
細菌検査は、細菌の種類を同定したり、細菌の抗菌薬に対する感受性を調べたりする検査である。例えば、臨床検査における細菌検査では、患者から採取した糞便などの臨床材料（検体）から病原菌を見つけ、菌種名を同定する同定検査、および、その病原菌に対して、抗菌薬がどれくらい効くか判断する薬剤感受性検査を行う。ここでいう細菌とは、真菌を含む。
【０００３】
臨床検査における細菌検査の工程は、細菌のグループの分類，分離培養，前処理，同定・薬剤感受性検査の工程からなる。始めに細菌のグループの分類工程を説明する。検査担当者は、グラム染色などの塗抹検査（染色検査）や検鏡などを実施したり、検体の性状や患者の容体などの情報を総合的に判断したりすることによって、検体中に含まれる複数の細菌の中から、検査対象となる細菌を判断し、グラム陽性菌か陰性菌か、球菌か桿菌か、どの属なのかなどのおおまかなグループに分類する。このグループ分類は、後の検査工程で使用する検査条件（抗菌薬の種類や検査装置にかける検体の前処理条件など）を決めるのに必要となる。その後、分離培養工程で、検体をシャーレの中に入った培地上に塗布し、それを一昼夜程度培養すると培地上に細菌の集合体であるコロニー（集落）が形成される。
【０００４】
次に、形成されたコロニーを検査試料にするために前処理工程を行う。前処理工程では一つないし複数個の検査対象の細菌のコロニーを採取（釣菌）し、それを食塩水に懸濁して、検査に必要な所定濁度の懸濁液を作製する。この所定濁度は、細菌のグループや検査目的によって異なる。懸濁液は菌液と呼ばれることもある。なお、濁度は、菌液中の菌の個数と比例関係にある。懸濁液の濁度の確認は、濁度計で測ることにより、行っている。
【０００５】
最後に同定・薬剤感受性検査工程では、前処理工程で作製した菌液を検査試料として、例えば、バイテック（ビオメリュー社）、BDフェニックス（ベクトン・ディッキンソン社）、マイクロスキャンWALK AWAY（シーメンス社）などの細菌検査装置にかけ、菌種の同定および薬剤感受性検査を行う。
【０００６】
特許文献１には細菌検査の前処理工程にあるコロニーを釣菌する釣菌装置が開示されている。特許文献１においては、釣菌すべきコロニーの画像情報と位置基準手段から、培地上のコロニーの位置を算出して、コロニーを釣菌する方法が開示されている。特許文献１の記載によれば、特別な画像解析プロトコール処理を行うことなく、目的のコロニーを釣菌できると述べられている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】特開２０００−１７１３６０号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
しかしながら、特許文献１では、シャーレ上のコロニーの画像はコロニーの位置を計測することにより目的のコロニーを釣菌することができるが、これにより作製した菌液は所定の濁度に調整されていない。そのため、懸濁液が所定濁度に満たない場合、コロニーを追加しなければならない。また、懸濁液が所定濁度より濃い場合、所定濁度になるまで、懸濁液を食塩水で希釈しなければならない。細菌検査前処理工程では、菌液の濁度調整を何度も繰り返さなくてはならず、時間がかかってしまう。
【０００９】
本発明は、必要な量のコロニーを短時間で釣菌し、所定濁度の懸濁液を作製する釣菌装置を提供することを目的としている。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明の釣菌装置は、ユーザの入力によってコロニーが属するグループの情報を事前に得ることにより、所定濁度の懸濁液作成に必要なコロニーの面積を予め求めることができる。さらに、予め求めた面積に応じて釣菌ツールの釣菌動作を切り替えることができる。
【発明の効果】
【００１１】
本発明は、コロニーの属するグループの情報に応じて、釣菌動作を切り替える。これにより、濁度調整のための繰り返し作業を省いて短時間で必要な量のコロニーを釣菌し、所定濁度の懸濁液を作製することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】細菌コロニー釣菌装置の概略図。
【図２】細菌コロニー釣菌装置の釣菌動作部の概略図。
【図３】球菌と桿菌のコロニーの面積と濁度の関係を示すグラフ。
【図４】菌液を作製するまでのステップを示すフローチャート。
【図５】釣菌ツールの概略図。
【図６】表示部の表示画面の一例。
【図７】画像処理による１個のコロニーの寸法計測を示す図。
【図８】スタンプ方式による釣菌動作の模式図。
【図９】横スライド方式による釣菌動作の模式図。
【図１０】実施例２の、菌液を作製するまでのステップを示すフローチャート。
【図１１】所定濁度の菌液作製に要するスタンプ方式による釣菌回数の実験結果。
【図１２】培地上のコロニーの配置を示す模式図。
【図１３】実施例４の、菌液を作製するまでのステップを示すフローチャート。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
本発明の第１の実施例を説明する。
【実施例１】
【００１４】
〔細菌コロニー釣菌装置の説明〕
図１は、細菌コロニー釣菌装置の構成図である。細菌コロニー釣菌装置は、入力部１０１，表示部１０２，撮像部１０３，釣菌動作部１０４、および菌液調整部１０５を備えている。ユーザとのインターフェースである入力部１０１および表示部１０２は、一体的に形成されていてもよい。撮像部１０３は、カメラ１０６を備えている。釣菌動作部１０４は、釣菌ツール１０７を備えている。また、撮像部１０３と釣菌動作部１０４の間には、シャーレ１０８を支え、図中の矢印（シャーレの動き）で示すようにシャーレ１０８を搬送するシャーレ台１０９を備えている。菌液調整部１０５は、濁度計１１０および食塩水の分注機構で構成される濁度調整機構１１１を備えている。
【００１５】
釣菌動作の大まかな流れを説明する。カメラ１０６にてシャーレ１０８上のコロニーを撮影し、シャーレ１０８を釣菌動作部１０４へ移動させ、釣菌ツール１０７を用いてコロニーを釣菌する。その後、容器１１２に釣菌したコロニーを投入し、食塩水などの懸濁液作製用の溶媒と混ぜて懸濁液を作製する。さらに、この容器１１２を図中矢印（容器の動き）で示すように菌液調整部１０５へ移動させて、懸濁液の濁度を濁度計１１０により計測し、濁度が濃い場合は濁度調整機構１１１を用いて希釈し、濁度が薄い場合は再び釣菌動作部１０４でコロニーを追加して、懸濁液の濁度を所定の値に調製する。
【００１６】
〔釣菌動作部１０４の説明〕
次に、釣菌動作部１０４について説明する。図２は、釣菌動作部１０４を示す図である。釣菌動作部１０４は、釣菌ツール用ラック２０１，シャーレ１０８を支えるシャーレ台１０９，水平移動軸２０２，Ｘ軸体２０３，Ｙ軸体２０４，Ｚ軸体２０５，先端に釣菌ツール１０７を把持する釣菌ツール把持部２０６，細菌を入れる容器１１２，該容器１１２を搭載する搭載部２０７，シリンジ２０８，流路２０９，食塩水を貯蓄するタンク２１０，三方弁２１１，食塩水を容器１１２に分注する分注ピペッタ２１２を備えている。シリンジ２０８，流路２０９，食塩水を貯蓄するタンク２１０，三方弁２１１，食塩水を容器に分注する分注ピペッタ２１２は図１に示す濁度調整機構１１１と構成は同じであり、同一のものを釣菌動作部１０４と菌液調整部１０５で共用してもよい。
【００１７】
釣菌ツール用ラック２０１には、複数の釣菌ツール１０７が収容されている。水平移動軸２０２は、棒状のＺ軸体２０５の一端と接続されており、Ｚ軸体２０５を、Ｘ軸体２０３，Ｙ軸体２０４，釣菌ツール把持部２０６と共に、図のＸ方向へ移動させる。この水平移動軸２０２によって、釣菌ツール把持部２０６は、釣菌ツール１０７をラック２０１で取り付け、釣菌位置であるシャーレ１０８、懸濁液作製位置である容器１１２の間を移動することが可能となる。また、Ｘ軸体２０３，Ｙ軸体２０４，Ｚ軸体２０５は、それぞれ、釣菌ツール把持部２０６を、図のＸ方向，Ｙ方向，Ｚ方向へ移動させる。
【００１８】
三方弁２１１は、（ｉ）シリンジ２０８とタンク２１０を繋ぐ流路２０９、（ii）シリンジ２０８と容器１１２を繋ぐ流路２０９を切り替える。これらの流路２０９を切り替え、シリンジ２０８を図中矢印のように動作させることにより、タンク２１０内の食塩水を、分注ピペッタ２１２を介して容器１１２へ送り込むことができる。
【００１９】
〔釣菌動作の制御方法〕
本発明は、特に、釣菌動作部１０４の動作の制御方法に特徴を有している。
【００２０】
細菌コロニー釣菌装置は、釣菌動作を制御する制御部（図示せず）およびデータベース（図示せず）を有する。
まず、制御部が有するいくつかの機能を示す。
（１）入力部１０１，表示部１０２，撮像部１０３，釣菌動作部１０４，菌液調整部１０５、データベースと相互に情報を通信する。
（２）データベースを基に所定の濁度達成に要するコロニー量（コロニーの面積，体積，数など）を求める。
（３）カメラ１０６で撮影された画像の画像処理によって、各コロニーの面積を求める。（方法は後に説明する。）
（４）上記（２）で求めたコロニー数や量を達成するためにどのコロニーまたはどのコロニーの範囲を採取すべきか求める。釣菌するコロニーが複数個あり、その組み合わせ方（パターン）が複数ある場合には、それらも求める。
（５）１つ以上のコロニーまたはコロニーの範囲（エリア）が与えられた場合に、釣菌回数や釣菌にかかる時間を求める。
（６）１つ以上のコロニーまたはコロニーの範囲（エリア）が与えられた場合に、データベースを基にそれらを釣菌したときの濁度を求める。ここで、コロニーの範囲（エリア）とは、培地表面のある領域を言い、その領域には少なくとも１つのコロニーが存在しているものを言う。
【００２１】
次に、データベースが保持する内容を説明する。細菌コロニー釣菌装置は、例えば、コロニーの面積と濁度との関係に関するデータベースを有する。データベースに保持する情報としては、懸濁液の所定濁度の値が与えられた場合に、釣菌すべきコロニーの量的条件を算出するのに用いられる情報で、一般的に知られている既知の事実や予め実験によって得られるような情報であればよい。実施例として示す面積と濁度の関係以外に、体積と濁度との関係や、釣菌回数と濁度との関係であってもよい。また、濁度の代わりに、吸光度（濁度に変換できる）を用いてもよい。その一例として、球菌および桿菌のコロニーの面積と濁度の関係について図３に示した。図３の詳細は、後に説明する。
【００２２】
次に、この釣菌動作部１０４を用いた動作について、図４に示すフローチャートを用いて説明する。
（Ｓ１）入力部１０１から、球菌か桿菌かなどの細菌の属するグループ、および所定濁度（目標とする濁度）が入力される。
（Ｓ２）カメラ１０６で撮影したシャーレおよびコロニーの画像が表示部１０２に表示される。画像処理によって、色，形などの画像情報からコロニーを自動識別して、ユーザに図示や文字などでわかりやすく表示してもよい。
（Ｓ３）ユーザが入力部１０１から釣菌したいコロニーを１つ選択すると、制御部はそのコロニーの面積を求める。
（Ｓ４）上記（Ｓ１）で入力した情報および上記データベースの情報から、所定濁度の懸濁液作製に必要なコロニーの総面積を求める。
（Ｓ５）制御部は、上記（Ｓ４）で求めたコロニーの総面積を、上記（Ｓ３）で求めた１つあたりのコロニーの面積で割ることにより、総面積になるコロニーの数を算出できる。一般的に１つのコロニーを１回の釣菌動作で釣菌するため、コロニーの数が分かれば、釣菌ツールを作動させる釣菌回数も分かる。これらを、表示部１０２に表示する（表示方法については後で説明する）。釣菌すべきコロニーのパターン（組み合わせ方）が複数あるときは、それらも表示する。ここで、ユーザは、入力部１０１から釣菌するコロニーやコロニーのエリア（範囲）などを選択してもよく、その場合、釣菌回数やコロニー数などは再計算，再表示される。
（Ｓ６）ユーザが選択したコロニーを所定の回数、釣菌する。
（Ｓ７）容器１１２にシリンジ２０８とタンク２１０と分注ピペッタ２１２を用いて食塩水を満たす。
（Ｓ８）釣菌ツールを容器１１２中の食塩水に浸して、懸濁液を作製する。
【００２３】
ここまでが、釣菌動作部１０４の動作である。この後、容器１１２を菌液調整部１０５へ移動させて、濁度計１１０を用いて懸濁液の濁度を測定し、所定の濁度になるように調整する。例えば、濁度が濃い場合には食塩水で希釈し、薄い場合にはコロニーを追加する。
【００２４】
ここで、上記のデータベースに保持する情報の一例を、図３を用いて説明する。本発明者らは、実験にて、球菌と桿菌を６種類ずつ釣菌したコロニーの面積とそのコロニーを釣菌して作製した懸濁液の濁度の関係を調べた。その結果、菌の濁度は面積に比例すること、また、菌種によって傾きは異なり、球菌と桿菌では同じ面積でも濁度に３倍の違いがあることを見出した。図３は、実験した６菌種の中で、球菌，桿菌それぞれで最も濁度を得にくいもの、つまり釣菌の効率が悪いものについて、面積と濁度との関係を示したグラフである。このグラフから分かるように、球菌と桿菌では、濁度が同じでも、釣菌すべきコロニー総面積が異なる。コロニー総面積が異なるということは、釣菌すべきコロニーの個数や釣菌回数が異なる場合がある。したがって、ある所定濁度の懸濁液を作製するために、球菌か桿菌かによって、釣菌回数を変える必要がある。この点を釣菌前に考慮することにより、効率良く釣菌することができる。つまり、無駄に多く釣菌してしまったり、釣菌量が少なかったりすることを防止することができる。
【００２５】
さらに、ユーザが球菌，桿菌のいずれも選択しなかった場合、その他を選択した場合には、桿菌のデータベースを選択すればよい、これにより、その菌が球菌，桿菌、いずれであっても菌液調整部１０５へ移動させた後に、釣菌量が足りず、再度釣菌するという事態を防ぐことができ、希釈のみで所定濁度の菌液作製に対応できる。
【００２６】
以上のように、球菌か桿菌かによって面積が異なることを利用して、どのコロニーを何回釣菌すればよいかを事前に把握することにより、無駄に多く釣菌してしまったり、釣菌量が少なかったりすることを防止することができ、無駄な菌液調整を省くことができる。
【００２７】
〔釣菌ツール１０７について〕
図５は、釣菌ツール１０７の概略を示す図である。釣菌ツール１０７は、釣菌ツール先端部５０１と、釣菌ツール支持体５０２とを備えている。釣菌ツール先端部５０１として、発泡ウレタンを用いてもよい。また、釣菌ツール１０７は、汚染のない菌液を作製するために、ディスポーザブルなものを用いるか、滅菌処理を実施しながら用いることができる。釣菌ツール先端部５０１の断面積の形状は、三角形，四角形，星型，楕円形、および円形などでもよい。釣菌ツール先端部５０１の断面積の大きさはさまざまであり、ユーザが求めるものを選択することができる。
【００２８】
〔表示部１０２への表示について〕
上記の（Ｓ５）において、表示部１０２に表示する情報について図６を用いて説明する。図６は、表示部１０２を示す図である。表示部１０２には、シャーレ上のコロニーの画像６０１を表示し、所定濁度の懸濁液に必要な採取すべきコロニーを図や文字「必要な菌量に対して、ＡとＢとＣのコロニーを選択してください」などで示すことができる。また、ユーザが任意に釣菌したいコロニーを選択することができ、これらを釣菌したと仮定した場合の釣菌回数やコロニー数、さらに懸濁液の濁度の予測計算値を表示することができる（図では文字情報を省略）。なお、シャーレ上に必要な菌量が存在しなかった場合には、菌量が存在しない旨を表示することができる。
【００２９】
〔画像処理について〕
コロニーの面積の求め方を説明する。図７は、カメラ１０１で撮影したコロニーの輪郭７０１である。画像処理によって、カメラ１０１で撮影したコロニーの重心７０２と重心から一番距離が短い端７０３とを結んで得られるコロニー寸法７０４を計測する。この寸法を半径とする円（破線）の面積をコロニーの面積と仮定してもよい。また、コロニーの面積は、ピクセルの総数をカウントして求めてもよい。
【００３０】
〔入力部１０１への入力情報について〕
上記では、入力部１０１へ最初に入力する情報として、球菌か桿菌かと、濁度としたが、これに限られず、菌種名、どのような釣菌ツールを使うかという情報、どのような培地かという情報を入力してもよい。ここでいう培地は、検査対象の菌種のみを発育させる培地である選択培地も含める。
【００３１】
なお、上記では、球菌と桿菌それぞれについて濁度と面積のデータベースを用いたが、球菌と桿菌の分類に限定されず、予めわかっている菌についての情報があれば、そのグループなどの分類を用いてもよい。
【実施例２】
【００３２】
〔釣菌動作について〕
本発明の釣菌動作には、実施例１で示した釣菌回数や釣菌するコロニー数のほか、釣菌ツールの動作方向も含まれる。本発明は、釣菌ツールを培地面に対して垂直方向に上下動作させる「スタンプ方式」と、培地面に対して水平方向に動作させる「横スライド方式」を切り替えることができる釣菌装置である。
【００３３】
図８は、スタンプ方式による釣菌の動作の模式図である。釣菌ツール先端部５０１と釣菌ツール支持体５０２を有する釣菌ツール、およびコロニー８０１が生育した培地８０２を横方向から見た図である。スタンプ方式は、コロニー８０１を上方向から狙い、釣菌ツールを降下させ（図８（ａ））、釣菌ツール先端部５０１をコロニーに接触して付着させ（図８（ｂ））、再び釣菌ツールを上方向に動かし（図８（ｃ））コロニー８０１を採取する。基本的にこの一連動作で１つのコロニーを採取する方式である。培地上に種類の異なるコロニーが存在する場合、１つのコロニーだけを狙って採取できるスタンプ方式は、１回の釣菌でコンタミネーションする可能性が低いという点で優れている。
【００３４】
図９は、横スライド方式による釣菌の動作の模式図である。横スライド方式は、釣菌ツールを下降させて培地面に近接または接触させ（図９（ａ））、その状態から培地面に対して水平方向に動作させ（図９（ｂ））、コロニー８０１を釣菌ツール先端部５０１に接触付着させた後（図９（ｃ），（ｄ））、釣菌ツールを上方向に動かして（図９（ｅ））、コロニーを採取する。つまり、コロニー８０１が複数あるとき、コロニー一つ一つに対して釣菌ツールを上方向に動かさずに、連続して横方向に動かすという一連動作で、複数のコロニーを横方向から連続してかき取ることができる。さらに、図９（ｆ）に示すようにコロニー同士が隣接している場合にも横スライド方式を用いてこれらの連続したコロニーを採取できる。したがって、短時間でたくさんのコロニーを採取したい場合に、横スライド方式がふさわしい。また、スライドする方向は、培地面に水平であれば、培地上に直線や曲線を描く方向であってもよい。スライドする距離や面積も釣菌するコロニーやエリアの形状に応じて可変である。
【００３５】
したがって、コロニーが属するグループの情報やユーザからの指示を受けて、スタンプ方式と横スライド方式の釣菌動作を切り替えることによって、高精度、短時間に釣菌すること可能である。
【００３６】
〔入力部への入力情報について〕
実施例１で示したもののほかに、入力部１０１へ閾値を入力してもよい。閾値とは所定の濁度の懸濁液を作製するために必要な釣菌回数（釣菌ツールのスタンプ動作の回数），釣菌するコロニーの数，釣菌にかかる時間，釣菌するコロニーの全面積や全体積，個々のコロニーのサイズ（直径，面積，体積など），コロニー間の距離（密度）などの指標であり、スタンプ方式と横スライド方式を切り分ける限界値を定める値である。
【００３７】
閾値の設定は、ユーザが入力部１０１から入力する以外に、臨床検査室での情報通信に用いられる臨床検査情報システム（ＬＩＳ）やホストコンピュータやインターネットなどのネットワークを介して装置に入力される方法でもよい。また、予めデータベースや装置に保存されている情報であってもよく、設定方法は問わない。
【００３８】
さらに、入力部１０１から釣菌の条件を入力することができる。釣菌の条件とは、釣菌するコロニーそのものや釣菌するコロニーのエリア、釣菌ツールを複数種備える場合には釣菌ツールの種類、さらに釣菌ツールを培地やコロニーへ接触させる力や釣菌ツールの下降距離などのことである。
【００３９】
以下に、閾値に釣菌回数を用いた例を示す。ただし、閾値は釣菌回数に限定されず、釣菌するコロニーの数，釣菌動作にかかる時間，釣菌するコロニーの全面積や全体積，個々のコロニーのサイズ（直径，面積，体積など），コロニー間の距離（密度）など、スタンプ方式と横スライド方式の釣菌動作を切り分ける指標となるような値であればよく、特に限定しない。
【００４０】
〔釣菌動作の制御方法〕
細菌コロニー釣菌装置は、釣菌動作を制御する制御部を有し、この制御部は、実施例１に示す（１）〜（６）の他に、さらに、次に示す機能を有してもよい。
（７）スタンプ方式による釣菌動作で所定濁度の懸濁液が作製される釣菌条件と、閾値を比較し、実行する釣菌動作を判断する。
【００４１】
次に、閾値によりスタンプ方式と横スライド方式を切り分け、懸濁液を作製する流れを図１０に示すフローチャートを用いて説明する。
（Ｓ１１）入力部１０１から、球菌か桿菌かいずれか、および濁度および閾値などが入力される。ここでは、例として、閾値にスタンプ方式による釣菌回数の上限である最多釣菌回数Ｎを入力する。
（Ｓ１２）カメラ１０６でコロニーの画像を撮影する。
（Ｓ１３）画像やデータベースを基に、実施例１と同様に総菌量（所定濁度の懸濁液作製に必要な菌量）になるコロニー面積を求め、スタンプ方式による釣菌回数やコロニー数やパターンなどを算出する。
（Ｓ１４）算出した情報を表示部１０２に表示する。ここで、ユーザは、入力部１０１から釣菌を実行するコロニーやエリアを選択してもよく、その場合、釣菌回数やコロニー数などが再計算，再表示される。
（Ｓ１５）制御部は、画像から求めた総菌量になる釣菌回数ｎと閾値Ｎを比較する。[釣菌回数ｎ≦閾値Ｎ]の場合、釣菌ツールの垂直方向の動作（スタンプ方式）を選択すると判断する。[釣菌回数ｎ＞閾値Ｎ]の場合、釣菌ツールの水平方向（横スライド方式）の動作を選択すると判断する。その判断を、表示部１０２に表示してもよく、その場合、ユーザは制御部が選択した動作を判断して、変更してもよい。
（Ｓ１６）判断した釣菌ツール１０７の動作にてコロニーを釣菌する。
（Ｓ１７）容器１１２にシリンジ２０８とタンク２１０と分注ピペッタ２１２を用いて食塩水を満たす。
（Ｓ１８）釣菌ツールを容器１１２中の食塩水に浸して、懸濁液を作製する。
【００４２】
ここまでが、釣菌動作部１０４の動作である。この後、容器１１２を菌液調整部１０５へ移動させて、濁度計１１０を用いて懸濁液の濁度を測定し、所定の濁度になるように調整する。
【００４３】
ここで、上記の釣菌回数について説明する。本発明者らは、所定濁度の懸濁液作製に要するスタンプ方式による釣菌動作の回数を、実験にて調査した。その結果を図１１に示す。ここでは、１回のスタンプ方式による釣菌動作でコロニー１個を採取するとした。また、所定濁度は検査に必要な懸濁液の濁度としてB.PumilusにはMcF2.0、その他の菌種にはMcF0.5を用いた。スタンプ方式による釣菌回数１０回を閾値と仮定すると、B.Pumilus、S.dysgalactiae、S.Salivariusの菌種で、所定濁度を達成するには閾値の回数以上の釣菌回数が必要となる。この原因は、菌種によって、必要とされる所定濁度、コロニーのサイズ、さらに、実施例１で述べたように所定濁度を達成するためのコロニー面積に違いがあるためである。
【００４４】
したがって、高濁度の菌液が必要な場合やコロニーが小さい場合など、スタンプ方式による釣菌回数が多く必要な菌種の場合、横スライド方式で複数のコロニーをかき集めることによって、少ない動作回数で釣菌できる。
【００４５】
以上のように、どのコロニーを何回釣菌すればよいかを事前に把握し、閾値と比較することにより、効率的な釣菌を行うことができる。
【実施例３】
【００４６】
培地上に生育したコロニーは、コロニー同士が密集していたり、離れて存在したり、場合により様々な配置である。ここでは、培地上のコロニーの配置に適した釣菌動作の方式の切り分け例を示す。実施例２では、スタンプ方式または横スライド方式どちらか一方を選択して、１つの培地上のコロニーを釣菌する方法を示したが、ここでは、スタンプ方式および横スライド方式の両方を用いて１つの培地上からコロニーを採取する例も示す。
【００４７】
図１２（ａ）〜（ｄ）のコロニーの模式図を用いて、培地上のコロニーの配置による各方式の使い分けの例を説明する。
【００４８】
図１２（ａ）〜（ｄ）では、それぞれ大，小のコロニーを表しており、大コロニーは、スタンプ方式で採取するコロニー、小コロニーは横スライド方式で採取するコロニーとした。大，小のコロニーの切り分けは、表示部に表示された画像からユーザが判断してもよいが、実施例２で述べたように閾値にコロニーのサイズを設定し、自動判断することも可能である。例えば、撮像部１０３で取得した画像を画像処理して算出した釣菌対象のコロニーのサイズと閾値を比較して、表示部１０２に各コロニーの大，小の切り分けを表示する。図１２（ａ）〜（ｄ）は、培地の上面方向から見た培地８０２と培地上に生育したコロニー８０１の模式図である。また、記号Ａ〜Ｄは、所定濁度の懸濁液に要するコロニーおよびコロニーのエリア（丸で囲んで示した）である。なお、Ａ〜Ｄはいずれも同一の菌種のコロニーを示しているとし、これらを釣菌することによってコンタミはないとする。
【００４９】
図１２（ａ）の場合、大コロニーのＡ〜Ｄをスタンプ方式で採取することによって、所定濁度の懸濁液が作製できる。
【００５０】
また、図１２（ｂ）の場合、Ａのエリアで釣菌ツール１０７をスライドし小コロニーを採取することによって、所定濁度の懸濁液が作製できる。
【００５１】
図１２（ｃ）の場合は、横スライド方式で採取すべきコロニーのエリアが、ＡとＢの２ヶ所あるため、２ヶ所に分けてスライドを行う。判断は、コロニー間の距離（密度）や釣菌動作に要する時間などを閾値として設定することにより、切り分け可能である。このように、採取するコロニーのエリアの配置に応じて、横スライド方式の回数を切り分ける。
【００５２】
さらに、図１２（ｄ）の場合は、１つの培地でスタンプ方式と横スライド方式を組み合わせて行う例である。ＡとＢのコロニーをスタンプ方式で採取し、さらにＣのエリアのコロニーを横スライド方式で採取する。予め、スタンプ方式と横スライド方式のそれぞれに要する釣菌時間の情報を入力しておき、これを閾値に用いることで、切り分けが可能である。
【００５３】
このように、閾値は釣菌回数に限定されず、個々のコロニーのサイズや、釣菌動作にかかる時間，コロニー間の距離（密度）などをはじめ、コロニーの数，コロニーの面積，体積などを設定することができる。これにより、コロニーの配置やエリアに応じてスタンプ方式と横スライド方式のどちらか一方の切り分けだけではなく、両方式を組み合わせたり、横スライド方式の動作を数回に分けたりすることによって、効率的にコロニーを採取することができる。
【実施例４】
【００５４】
地球上には、発見されていないものも含め数万〜数百万種の細菌が存在すると言われている。このような未知の菌やデータベースに情報がない菌など想定外のコロニーを釣菌する場合、作製した懸濁液の濁度が所定濁度を達成しないことが考えられる。作製した懸濁液が所定濁度に満たない場合、さらにコロニーを釣菌して懸濁液に追加する必要がある。想定外のグループの菌であっても、コロニーを効率よく追加できる釣菌装置を実施例４として、以下に示す。
【００５５】
〔釣菌動作の制御方法〕
細菌コロニー釣菌装置は、釣菌動作を制御する制御部と濁度計１１０を有し、この制御部は、さらに、次に示す機能を有してもよい。
（８）釣菌後、作製した懸濁液を濁度計１１０で測定し、その濁度を制御部で受け取る。
（９）制御部にて受け取った濁度と所定の濁度を比較し、所定の濁度が達成されていない場合、不足分の濁度を算出する。
（１０）制御部にて受け取った濁度から、先に釣菌した菌の面積と測定した濁度との関係を算出する。
（１１）上記（１０）の関係を用い、上記（９）で算出した濁度不足分を補う追加コロニーの面積、さらに釣菌回数などを求める。
【００５６】
次に、例としてスタンプ方式にて釣菌し作製した懸濁液の濁度が所定の濁度より薄い場合、追加でコロニーを釣菌し、所定の濁度の懸濁液を作製する流れについて図１３に示すフローチャートを用いて説明する。
（Ｓ２１）入力部１から、球菌か桿菌かいずれか、および濁度および閾値などが入力される。
（Ｓ２２）スタンプ方式にて釣菌し、懸濁液を作製する。ここで実行したスタンプ方式による釣菌回数をｍ回とする。これは、実施例１のＳ５〜Ｓ８と同様のステップである。
（Ｓ２３）作製した懸濁液の濁度ｃを測定する。
（Ｓ２４）上記Ｓ２３で測定した濁度と所定の濁度を比較する。
（Ｓ２５）所定濁度が達成されていない場合、不足分の濁度ｄを算出する。
（Ｓ２６）上記Ｓ２３で測定した濁度ｃと、スタンプ方式にて釣菌した釣菌回数ｍとの関係を求める。例えば、測定濁度を釣菌回数で割ること（ｃ/ｍ）によって、菌液作製効率ｅが算出される。つまり、菌液作製効率とは、１回のスタンプ方式による釣菌動作によって得られる懸濁液の濁度のことである。
（Ｓ２７）上記Ｓ２５で算出した不足分の濁度ｄを補う釣菌回数ｎを、上記Ｓ２６で求めた関係を基に求める。これは、不足分の濁度を菌液作製効率で割ることに（ｎ＝ｄ/ｅ）よって求まる。
（Ｓ２８）実施例２のＳ１４〜Ｓ１６と同様の方法で閾値から動作を決定し、不足分のコロニーを追加釣菌する。
（Ｓ２９）上記Ｓ２２の懸濁液に、釣菌ツールを浸してコロニーを追加し、懸濁液を作製する。
【００５７】
上記Ｓ２６〜Ｓ２７ではスタンプ方式による釣菌回数にて菌液作製効率を求めたが、コロニーの面積や体積などの情報を用いてもよい。例えば、横スライド方式で作製した懸濁液が所定濁度より薄い場合、既に釣菌したコロニーの面積と得られた濁度の関係、つまり釣菌コロニー面積あたりの得られる濁度（釣菌効率）を算出し、そこから不足分の濁度を補うコロニー面積を求め、効率的にコロニーを追加する。
【００５８】
以上のように、予めグループの情報が得られない菌や、初回の懸濁液作製後に所定濁度に満たない場合でも、釣菌および濁度測定を何度も繰り返さずに、不足分を計算してコロニーをもう一度だけ追加することで所定濁度の懸濁液が作製できる。
【符号の説明】
【００５９】
１０１  入力部
１０２  表示部
１０３  撮像部
１０４  釣菌動作部
１０５  菌液調整部
１０６  カメラ
１０７  釣菌ツール
１０８  シャーレ
１０９  シャーレ台
１１０  濁度計
１１１  濁度調整機構
１１２  容器
２０１  釣菌ツール用ラック
２０２  水平移動軸
２０３  Ｘ軸体
２０４  Ｙ軸体
２０５  Ｚ軸体
２０６  釣菌ツール把持部
２０７  容器搭載部
２０８  シリンジ
２０９  流路
２１０  タンク
２１１  三方弁
２１２  分注ピペッタ
５０１  釣菌ツール先端部
５０２  釣菌ツール支持体
６０１  コロニーの画像
７０１  コロニーの輪郭
７０２  コロニーの重心
７０３  重心から一番短い端
７０４  重心と重心から一番短い端を結んで得られる１個のコロニーのコロニー寸法
８０１  コロニー
８０２  培地
【図１】
0005618810.tif 000002
【図２】
0005618810.tif 000003
【図３】
0005618810.tif 000004
【図４】
0005618810.tif 000005
【図５】
0005618810.tif 000006
【図６】
0005618810.tif 000007
【図７】
0005618810.tif 000008
【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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