(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記化学式（Ｉ）で表わされる金属サレン錯体を含有し、３８０ｎｍ付近に発光波長のピークを有する蛍光色素材料。
0005554408.tif 000009
（Ｉ）
（ＭはＦｅである。）
【請求項２】
前記金属サレン錯体は、個体に投与後、個体外からの磁場によって、目的の領域に誘導されて薬理効果を発揮する、請求項１記載の蛍光色素材料。
【請求項３】
前記金属サレン錯体は、磁性担体が利用されることなく個体に投与された後、個体に外部磁場を適用すると、前記磁場を加えた領域に誘導される磁性を有する、請求項１または２記載の蛍光色素材料。
【請求項４】
前記金属サレン錯体の粒径が２〜６０μｍである、請求項１乃至請求項３のいずれか１項に記載の蛍光色素材料。
【請求項５】
３８０ｎｍ付近に発光波長のピークを有し、蛍光色素として使用される下記化学式（Ｉ）で表わされる金属サレン錯体。
0005554408.tif 000010
（Ｉ）
（ＭはＦｅである。）
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、金属サレン錯体からなる蛍光式材料及びその使用方法に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
一般に薬剤は生体内に投与され患部に到達し、その患部局所において薬理効果を発揮することで治療効果を引き起こすが、薬剤が患部以外の組織（つまり正常組織）に到達しても治療にはならない。【０００３】
したがって、いかにして効率的に患部に薬剤を誘導するかが重要である。薬剤を患部に誘導する技術はドラッグ・デリバリと呼ばれ、近年研究開発が盛んに行われている分野である。このドラッグ・デリバリには少なくとも二つの利点がある。【０００４】
一つは患部組織において十分に高い薬剤濃度が得られることである。薬理効果は患部における薬剤濃度が一定以上でないと生じず、低い濃度では治療効果が期待できない。【０００５】
二つめは薬剤を患部組織のみに誘導して、正常組織への副作用を抑制することができる。【０００６】
このようなドラッグ・デリバリが最も効果を発揮するのが抗がん剤によるがん治療である。抗がん剤は細胞分裂の活発ながん細胞の細胞増殖を抑制するものが大半であるため、正常組織においても細胞分裂の活発な組織、例えば骨髄あるいは毛根、消化管粘膜などの細胞増殖を抑制する。【０００７】
このため、抗がん剤の投与を受けたがん患者には貧血、抜け毛、嘔吐などの副作用が発生する。これらの副作用は患者にとって大きな負担となるため、投薬量を制限しなければならず、抗がん剤の薬理効果を十分に得ることが出来ないという問題がある。【０００８】
この抗悪性腫瘍薬の中で、アルキル系抗悪性腫瘍薬は、核酸蛋白などにアルキル基（-CH2-CH2-）を結合させる能力をもつ抗がん剤の総称である。ＤＮＡをアルキル化してＤＮＡ複製を阻害し、細胞死をもたらす。【０００９】
この作用は、細胞周期に無関係に働きＧ０期の細胞にもおよび、増殖が盛んな細胞に対する作用が強く、骨髄、消化管粘膜、生殖細胞、毛根などに障害を与えやすい。【００１０】
また、代謝拮抗系抗悪性腫瘍薬は、核酸や蛋白合成過程の代謝物と類似の構造をもつ化合物であり、核酸合成を阻害するなどして細胞を障害し、分裂期の細胞に特異的に作用する。【００１１】
また、抗腫瘍性抗生物質は、微生物によって産生される化学物質であり、ＤＮＡ合成抑制、ＤＮＡ鎖切断などの作用を持ち抗腫瘍活性を示す。【００１２】
また、微小管阻害薬は、細胞分裂の際に紡錘体を形成したり、細胞内小器官の配置や物質輸送など、細胞の正常機能の維持に重要な役割を果たしている微小管に直接作用することで抗腫瘍効果を示す。微小管阻害剤は細胞分裂が盛んな細胞や神経細胞などに作用を及ぼす。【００１３】
また、白金製剤は、ＤＮＡ鎖または鎖間結合あるいはＤＮＡ蛋白結合を作ってＤＮＡ合成を阻害する。シスプラチンが代表的薬剤であるが腎障害が強く、多量の補液が必要とされる。【００１４】
また、ホルモン類似薬系抗悪性腫瘍薬は、ホルモン依存性の腫瘍に対して有効である。男性ホルモン依存性の前立腺がんに対して女性ホルモンを投与したり抗男性ホルモン剤を投与したりする。【００１５】
また、分子標的薬は、それぞれの悪性腫瘍に特異的な分子生物学的特徴に対応する分子を標的とした治療法である。【００１６】
また、トポイソメラーゼ阻害薬は、ＤＮＡに一時的に切れ目を入れてＤＮＡ鎖のからまり数を変える酵素である。トポイソメラーゼＩは、環状ＤＮＡの一方の鎖に切れ目を入れ、もう一方の鎖を通過させた後、切れ目を閉じる酵素であり、トポイソメラーゼ阻害薬ＩＩは環状ＤＮＡの２本鎖両方を一時的に切断し、その間を別の２本鎖ＤＮＡを通過させ、再び切れ目をつなぎ直す酵素である。【００１７】
さらに、非特異的免疫賦活薬は、免疫系を活性することによってがん細胞の増殖を抑制する。【００１８】
抗がん剤は、細胞分裂の活発ながん細胞の細胞増殖を抑制するものが大半であるため、正常組織においても細胞分裂の活発な組織、例えば骨髄あるいは毛根、消化管粘膜などの細胞増殖を抑制してしまう。このため、抗がん剤の投与を受けたがん患者には貧血、抜け毛、嘔吐などの副作用が発生する。【００１９】
これら副作用は、患者にとって大きな負担となるため投薬量を制限しなければならず、抗がん剤の薬理効果を十分に得ることが出来ないという問題がある。さらに最悪の場合、副作用によって患者が死亡してしまう恐れがある。【００２０】
そこで、ドラッグ・デリバリによって抗がん剤をがん細胞まで誘導し、がん細胞に集中して薬理効果を発揮させることによって、副作用を抑えつつ効果的にがん治療を行うことができると期待されている。同種の問題が、局所麻酔剤でも存在する。【００２１】
局所麻酔剤は、痔疾患、口内炎、歯周病、虫歯、抜歯、あるいは手術等による粘膜や皮膚等の居所的なかゆみや疼痛を処理ずるために用いられている。代表的な居所麻酔剤として、リドカイン（商品名キシロカイン）が知られているが、リドカインは即効性に優れているものの、抗不整脈作用を有する。【００２２】
また、脊椎麻酔を行う際、脊髄液の中に麻酔薬であるリドカインを注入すると脊髄液中を拡散し、最悪の場合は頸部の脊髄に達することで呼吸機能が停止し重篤副作用をもたらす懸念がある。【００２３】
そこで、ドラッグ・デリバリによって、抗がん剤をがん細胞まで誘導し、がん細胞に集中して薬理効果を発揮させることによって、副作用を抑えつつ効果的にがん治療を行うことができると期待されている。【００２４】
また、ドラッグ・デリバリによって、局所麻酔剤の拡散を防止して、薬効持続と副作用の軽減を達成することが期待されている。【００２５】
ドラッグ・デリバリの具体的な手法としては、例えば、担体（キャリア）を用いたものがある。これは患部に集中しやすい担体に薬剤を載せて、薬剤を患部まで運ばせようというものである。【００２６】
担体として有力視されているのが磁性体であり、薬剤に磁性体である担体を付着させ、磁場によって患部に集積される方法が提案されている（例えば、特許文献１参照）。【００２７】
しかしながら、磁性体担体をキャリアとして使用する場合、経口投与が困難なこと、担体分子が一般に巨大であること、担体と薬剤分子との間の結合強度、親和性に技術的な問題があることがわかり、そもそも実用化が困難であった。【００２８】
そこで、本発明者は、有機化合物の基本骨格に対して、正又は負のスピン電荷密度付与する側鎖が結合され、全体として外部磁場に対して磁気共有誘導される範囲の適性を持ち、人体や動物に適用された際に、体外からの磁場によって局所的に磁場が与えられている領域で保持され、元来保有している医薬効果を前記領域において発揮するようにした、局所治療薬を提案した。同公報には、このような薬剤として、鉄サレン錯体が記載されている。（特許文献２参照）。【００２９】
また、鉄サレン錯体を含有する抗腫瘍薬剤も開示されている。（例えば、特許文献３参照）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００３０】
【特許文献１】特開２００１−１０９７８号公報
【特許文献２】ＷＯ２００８/００１８５１号公報
【特許文献３】特開２００９−１７３６３１号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００３１】
本発明は、鉄サレン錯体の有用性を拡張することを目的とするものである。
【課題を解決するための手段】
【００３２】
この目的を達成するため本発明は、下記化学式（Ｉ）を含有する新規な蛍光色素材料である。【００３３】
Ｎ，Ｎ−ビス(サリチリデン)エチレンジアミン金属
（N,N’-Bis(salicylidene)ethylenediamine metal）
化学式（Ｉ）
0005554408.tif 000002
但し、Ｍは、Ｆｅ（鉄）、Ｃｒ(クロム)、Ｍｎ(マンガン)、Ｃｏ（コバルト）、Ｎｉ（ニッケル）、Ｍｏ（モリブデン）、Ｒｕ（ルテニウム）、Ｒｈ（ロジウム）、Ｐｄ（パラジウム）、Ｗ（タングステン）、Ｒｅ（レニウム）、Ｏｓ（オスミウム）、Ｉｒ（イリジウム）、Ｐｔ（白金）、Ｎｄ（ネオジム）、Ｓｍ（サマリウム）、Ｅｕ（ユウロピウム）、又は、Ｇｄ（ガドリニウム）である。【００３４】
Ｍが、特に、鉄である化合物は、３００ｎｍから５００ｎｍの波長のりん光を発光する。したがって、化合式（Ｉ）の金属サレン錯体化合物を特開２００９−１７３６３１号公報に記載のように、抗腫瘍薬剤として、人体や動物など個体に投与し、目的癌組織に磁気誘導後、患部組織の切除手術の際、レーザ光や蛍光を患部組織に照射することにより、金属サレン錯体化合物を発光させ、患部組織を視覚によって確認することができる。【００３５】
前記金属サレン錯体化合物の平均粒径について、粒径が大きすぎると、血管を化合物が閉塞するおそれがある。一方、粒径が小さいと、化合物の磁性が失われるおそれがある。そこで、化合物の平均粒径は、２〜６０μｍであることが適当であり、５〜２０μｍが好ましく、さらに、８〜１５μｍが好ましく、特に、９〜１２μｍが好ましく、最適には１０μｍである。【００３６】
粒径をこの範囲に調整するのは、再結晶プロセスにおいて実施される。例えば、後述の合成ステップ７において、「得られた化合物はジエチルエーテルとパラフィンの溶液中で再結晶させ」とあり、再結晶の前に一旦８０℃まで温度を上昇させ、その後１２時間かけて室温まで冷却して目的の粒径を得ることができる。【００３７】
本発明者が検討したところ、前記金属サレン錯体化合物の磁化特性は、粒径によって変化する。粒径が必要以上に小さいと、金属サレン錯体化合物磁化特性が十分でなく、人体や動物など個体に投与された際、外部磁場によって目的領域に誘導できない可能性があり、一方、粒径が必要以上に大きくなると、血管内で磁性粒子が凝集するおそれがある。【００３８】
化学式（Ｉ）で示される鉄サレン錯体が、磁性担体を利用することなく、個体に投与された後、個体に外部磁場（例えば、０．３Ｔ）を適用すると、前記分子が前記磁場を加えた領域に誘導される磁性を有する抗腫瘍薬剤として有用なことは、特開２００９−１７３６３１号公報に記載されているとおりである。
【発明の効果】
【００３９】
以上説明したように本発明によれば、前記化学式（Ｉ）に係る新規な蛍光材料を得ることができる。
【図面の簡単な説明】
【００４０】
【図１】金属サレン錯体の発光試験結果を示す特性図である。
【図２】金属サレン錯体の粒径測定結果を示す特性図である。
【発明を実施するための形態】
【００４１】
金属サレン錯体(鉄サレン)の製造
Step 1: 
0005554408.tif 000003
【００４２】
化合物１（compound 1）である４−ニトロフェノール（4-nitrophenol）；２５ｇ、０．１８ｍｏｌに、ヘキサメチレンテトラミン（hexamethylene tetramine）；２５ｇ、０．１８ｍｏｌ、ポリりん酸（polyphosphoric acid）；２００ｍｌを加えて混合し、この混合物を１時間、１００℃で攪拌した。その後、その混合物を５００ｍｌの酢酸エチルと１ｌの水の中に入れ、完全に溶解するまで攪拌した。さらにその溶液に４００ｍｌの酢酸エチルを追加で加えたところ、その溶液は２つの相に分離し、これらの相から水の相を取り除き、残りの化合物を塩性溶剤で２回洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥させた結果、化合物２（compound 2）が１７ｇ（収率５７％）合成できた。
【００４３】
Step 2: 
0005554408.tif 000004
【００４４】
化合物２（compound 2）；１７ｇ、０．１０ｍｏｌに、無水酢酸（acetic anhydride）；２００ｍｌ、硫酸（Ｈ２ＳＯ４）；少々を加え、室温で１時間攪拌させた。次に、得られた溶液を、氷水；２ｌの中で０．５時間混ぜ、加水分解を行った。得られた溶液をフィルターにかけ、大気中で乾燥させたところ、白い粉末状のものが得られた。酢酸エチルを含む溶液を使ってその粉末を再結晶化させたところ、２４ｇ（収率７６％）の化合物３（compound 3）の白い結晶を得ることができた。
【００４５】
Step 3: 
0005554408.tif 000005
【００４６】
化合物３（compound 3）；２４ｇ、７７ｍｍｏｌに、メタノール；５００ｍｌと１０％のパラジウムを担持したカーボン；２．４ｇを混合し、この混合物を１．５気圧の水素還元雰囲気で一晩還元した。終了後、フィルターでろ過したところ、茶色油状の化合物４（compound 4）が２１ｇ合成できた。
【００４７】
Step 4, 5: 
0005554408.tif 000006
【００４８】
無水ジクロメタン（ＤＣＭ）；２００ｍｌに、化合物４（compound 4）；２１ｇ、７５ｍｍｏｌ、二炭酸ジ−テトラ−ブチル（di(tert-butyl) dicarbonate）；１８ｇ、８２ｍｍｏｌを加え、窒素雰囲気で一晩攪拌した。その後、得られた溶液（化合物５（compound 5））を真空中で蒸発させた後、メタノール；１００ｍｌで溶解させた。その後、水酸化ナトリウム；１５ｇ、３７４ｍｍｏｌと水；５０ｍｌを加え、５時間還流させた。その後冷却し、フィルターでろ過し、水で洗浄後、真空中て乾燥させたところ茶色化合物が得られた。得られた化合物は、シリカジェルを使ったフラッシュクロマトグラフィーを２回行うことで、１０ｇ（収率５８％）の化合物６（compound 6）が得られた。
【００４９】
Step 6:
0005554408.tif 000007
【００５０】
化合物６（compound 6）；１０ｇ、４２ｍｍｏｌを無水エタノール４００ｍｌの中に入れ、加熱しながら還流させ、無水エタノール；２０ｍｌにエチレンジアミン；１．３ｇ、２１ｍｍｏｌを０．５時間攪拌しながら数滴加えた。そして、その混合溶液を氷の容器に入れて冷却し、１５分間撹拌した。その後、エタノール；２００ｍｌで洗浄し、フィルターをかけ、真空で乾燥させたところ８．５ｇ（収率８２％）の化合物７（compound 7）が合成できた。
【００５１】
Step 7:
0005554408.tif 000008
【００５２】
無水メタノール；５０ｍｌの中に、化合物７（compound 7）；８．２ｇ、１６ｍｍｏｌ、トリエチルアミン（triethylamine）；２２ｍｌ、１６０ｍｍｏｌを入れ、メタノール；１０ｍｌの中に塩化第二鉄（ＦｅＣｌ３）；２．７ｇ、１６ｍｍｏｌを加えた溶液を、窒素雰囲気下、室温で１時間混合したところ、茶色の化合物が得られた。その後、真空中で乾燥させた。
【００５３】
得られた化合物は、ジクロロメタン；４００ｍｌで希釈し、塩性溶液で２回洗浄し、硫酸ナトリウム（Ｎａ２ＳＯ４）で乾燥させた後、真空中で乾燥させて得られた化合物をジエチルエーテルとパラフィンの溶液中で再結晶させ、高速液化クロマトグラフィーで測定したところ、純度９５％以上の錯体Ａ（complex A：鉄サレン錯体)が５．７ｇ（収率６２％）得られた。
【００５４】
鉄サレン錯体以外の金属錯体を用いる場合には、塩化第二鉄（ＦｅＣｌ３）の代わりに鉄以外の金属の塩化物（ＭＣｌ３：但し、Ｍは金属）を利用すればよい。なお、鉄サレン錯体以外のマンガンサレン錯体、クロムサレン錯体、コバルトサレン錯体に、外部磁場によって誘導できる程度の磁性があることは、本願出願人の特願２００９−１７７１１２号公報において示されたとおりである。そして、金属鉄サレン錯体などが抗腫瘍作用を有することも特開２００９−１７３６３１号公報において明らかである。
【００５５】
＜発光試験＞
化学式（Ｉ）で示される鉄サレン錯体について、フォトルミネセンス測定による発光試験を行った。
【００５６】
測定は、堀場製作所製  高分解分光分析用  PHOTOLUMINOR-Sで行った。測定は鉄サレンをクロロホルムに溶解させた状態で行った。
【００５７】
得られた結果を図１に示す。図１によれば、３８０ｎｍ付近に化学式（Ｉ）で示される鉄サレン錯体の固有のピークが発生したことが確認できた。なお、図１では、２７０ｎｍ、５３０ｎｍ、８００ｎｍ付近にピークが確認されたが、これは励起レーザ（ＲＧＢの数波長を同時に発振して白色光を出すレーザ）の参照ピークである。ピーク波長は、鉄サレン錯体の結晶形によって変動する。
【００５８】
＜粒径測定＞
レーザ回折法を用いて化学式（Ｉ）の鉄サレン錯体の粒径を測定した。測定に使用した装置は、マイクロトラック粒度分析計（日機装株式会社製  MT-3000II）である。試料をヘキサメタリン酸Ｎａ溶液中に入れ、ホモジナイザで１０分間分散した試料にレーザ光線を照射し、その回折（散乱）を測定して粒度を求めた。測定条件と測定結果は以下のとおりである。
【００５９】
＜測定条件＞
測定時間：３０秒
粒子透過性：透過
粒子形状：非球形
粒子屈折率：１．８１
溶媒：水
溶媒屈折率：１．３３３
【００６０】
＜測定結果＞
測定の結果を図２及び以下に示す。
平均粒径：１１.７９μｍ
標準偏差：６．２８９
測定の結果、鉄サレン錯体の粒径は、個体への適用に十分適する、１１．８μｍであることが分かった。
【００６１】
以上説明したとおり、既述の鉄サレン錯体などの、蛍光発色可能な金属サレン錯体を個体に投与し、外部から磁界を個体に適用して目的の領域に金属サレン錯体を誘導した後、外部光を適用すると、金属サレン錯体の発光を確認することができる。
【図１】
0005554408.tif 000011
【図２】
0005554408.tif 000012