(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
試料の蛋白質濃度を評価する方法であって、
前記試料と蛋白質指示薬とを接触させた後の呈色を光学分析すること、
前記試料のｐＨを測定すること、並びに、
前記光学分析の結果及び前記測定されたｐＨと、蛋白質濃度評価用データとに基づいて前記試料の蛋白質濃度を評価することを含み、
前記蛋白質指示薬は、ｐＨ及び蛋白質濃度によって発色が変化する蛋白質指示薬であり、
前記蛋白質濃度評価用データは、前記測定されたｐＨに対応した前記光学分析結果の評価の仕方を示す情報を含む、蛋白質濃度評価方法。
【請求項２】
前記試料のｐＨ測定が、前記蛋白質指示薬と試料との接触時のバッファー条件と同じバッファー条件下で行われる、請求項１記載の蛋白質濃度評価方法。
【請求項３】
前記蛋白質指示薬が、オクタハロスルホフタレイン型色素、オクタハロフェノールフタレイン型色素、又はそれらの組み合わせである、請求項１又は２に記載の蛋白質濃度評価方法。
【請求項４】
前記蛋白質指示薬が、テトラブロモフェノールブルー、テトラクロロフェノールブルー、３′，３″，５，５″−テトラヨード−３，４，５，６−テトラブロモフェノールスルホフタレイン、３，３″−ジヨード−５，５″，３，４，５，６−ヘキサブロモフェノールスルホフタレイン、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項１から３のいずれかに記載の蛋白質濃度評価方法。
【請求項５】
前記試料のｐＨ測定が、ｐＨ指示薬を用いて行われ、前記ｐＨ指示薬が、エチルオレンジである、請求項４記載の蛋白質濃度評価方法。
【請求項６】
前記蛋白質濃度評価用データは、前記光学分析結果から前記試料の蛋白質濃度を算出する際に用いられるデータであって、前記試料のｐＨに応じて設定されたデータを含む、請求項１から５のいずれかに記載の蛋白質濃度評価方法。
【請求項７】
前記蛋白質濃度評価用データは、前記光学分析結果に基づいて評価値を算出する際に基準となるデータであって、前記試料のｐＨに応じて設定されたデータを含む、請求項１から６のいずれかに記載の蛋白質濃度評価方法。
【請求項８】
前記蛋白質濃度評価用データは、前記測定されたｐＨの正常範囲を定義するデータを含む、請求項１から７のいずれかに記載の蛋白質濃度評価方法。
【請求項９】
試料が尿である、請求項１から８のいずれかに記載の蛋白質濃度評価方法。
【請求項１０】
前記蛋白質濃度の評価は、前記試料の蛋白質濃度を決定すること、前記試料の蛋白質濃度を有る範囲内であると決定すること、前記試料の蛋白質濃度が所定の閾値を超えるか否か決定すること、及び、前記試料の蛋白質濃度が所定の基準値に基づき設定された陽性と陰性のいずれかに該当するか決定することからなる群から選択される少なくとも一つを含む、請求項１から９のいずれかに記載の蛋白質濃度評価方法。
【請求項１１】
基板の上に複数の試薬層が形成された分析用具であって、
ｐＨ及び蛋白質濃度によって発色が変化する蛋白質指示薬を含有する試薬層Ａ、及び、ｐＨ指示薬を含有する試薬層Ｂを備え、
前記試薬層Ａ及び前記試薬層Ｂは、同じバッファー条件となるように緩衝剤を含む、請求項１から１０のいずれかに記載の蛋白質濃度評価方法を行うための、分析用具。
【請求項１２】
試料と蛋白質指示薬とを接触させた後の呈色を光学分析する測定部と、
前記試料のｐＨを測定する測定部と、
前記光学分析の結果及び前記測定されたｐＨと蛋白質濃度評価用データとに基づいて前記試料の蛋白質濃度を評価する評価部と、
評価後のデータを出力する出力部とを備え、
前記蛋白質指示薬は、ｐＨ及び蛋白質濃度によって発色が変化する蛋白質指示薬であり、
前記蛋白質濃度評価用データは、前記測定されたｐＨに対応した前記光学分析結果の評価の仕方を示す情報を含む、分析装置。
【請求項１３】
請求項１から１０のいずれかに記載の蛋白質濃度評価方法を行うための、請求項１２記載の分析装置。
【請求項１４】
請求項１１に記載の分析用具を用いて分析を行うための、請求項１２又は１３に記載の分析装置。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本開示は、蛋白質濃度評価方法、分析用具、及び分析装置に関する。
【背景技術】
【０００２】
尿のような蛋白質が溶存する水溶液試料の蛋白質濃度を簡便に測定する方法として、蛋白質が結合することによって色遷移を生じるｐＨ指示色素を蛋白質の指示試薬として利用する方法が知られている（特許文献１）。これらの蛋白質指示薬は、元来ｐＨによっても色が変化するが、ｐＨが一定に維持されれば、色の変化を蛋白質の濃度と関連付けすることができる。このような蛋白質指示薬としては、テトラブロモフェノールブルー（ＴＢＰＢ）や、テトラクロロフェノール−３，４，５，６−テトラブロモスルホフタレインが挙げられる。また、ｐＨが変化すると蛋白質の濃度に依存せずに色が変化するため、これらの蛋白質指示薬を使用する場合にはｐＨを一定にするためにバッファーが適宜併用される（特許文献１及び２）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
【特許文献１】特開平5-249122号公報
【特許文献２】米国特許3,485,587号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
しかしながら、尿などの試料がバッファー効果を超えて所定のｐＨと異なるｐＨを示す場合、前記蛋白質指示薬のみを使用して得られる蛋白質濃度は、前記試料中の実際の蛋白質濃度とは異なることとなり、疾患等の判定において偽陽性や偽陰性をまねくという問題がある。
【０００５】
そこで、本開示は、前記蛋白質指示薬を使用して試料中の蛋白質濃度を評価（assay）する方法であって、精度が高い評価が可能な蛋白質濃度評価方法を提供する。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本開示は、一態様として、試料の蛋白質濃度を評価する方法であって、
前記試料と蛋白質指示薬とを接触させた後の呈色を光学分析すること、
前記試料のｐＨを測定すること、並びに、
前記光学分析の結果及び前記測定されたｐＨと、蛋白質濃度評価用データとに基づいて前記試料の蛋白質濃度を評価することを含み、
前記蛋白質指示薬は、ｐＨ及び蛋白質濃度によって発色が変化する蛋白質指示薬であり、
前記蛋白質濃度評価用データは、前記測定されたｐＨに対応した前記光学分析結果の評価の仕方を示す情報を含む、蛋白質濃度評価方法に関する。
【０００７】
本開示は、その他の態様として、基板の上に複数の試薬層が形成された分析用具であって、ｐＨ及び蛋白質濃度によって発色が変化する蛋白質指示薬を含有する試薬層Ａ、及び、ｐＨ指示薬を含有する試薬層Ｂを備え、前記試薬層Ａ及び前記試薬層Ｂは、同じバッファー条件となるように緩衝剤を含む、分析用具に関する。
【０００８】
本開示は、さらにその他の態様として、前記試料と蛋白質指示薬とを接触させた後の呈色を光学分析する測定部と、前記試料のｐＨを測定する測定部と、前記光学分析の結果及び前記測定されたｐＨと蛋白質濃度評価用データとに基づいて前記試料の蛋白質濃度を評価する評価部と、評価後のデータを出力する出力部とを備え、前記蛋白質指示薬は、ｐＨ及び蛋白質濃度によって発色が変化する蛋白質指示薬であり、前記蛋白質濃度評価用データは、前記測定されたｐＨに対応した前記光学分析結果の評価の仕方を示す情報を含む分析装置に関する。
【発明の効果】
【０００９】
本開示によれば、一又は複数の実施形態において蛋白質指示薬を使用した蛋白質濃度評価の精度を向上でき、さらなる一又は複数の実施形態において、偽陽性や偽陰性の発生を抑制できる。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】図１は、一実施形態における分析用具１０の側面図（Ａ）及び上面図（Ｂ）である。
【図２】図２は、一実施形態における分析装置の構成例を示す機能ブロック図である。
【図３】図３は、一実施形態における分析装置のその他の構成例を示す機能ブロック図である。
【図４】図４は、一実施形態における分析装置の動作の一例を示すフローチャートである。
【図５】図５は、一実施形態における分析装置の動作のその他の例を示すフローチャートである。
【図６】図６は、一実施形態における尿分析装置を採用した全自動尿化学分析装置の外観斜視図である。
【図７】図７は、溶液中の蛋白質濃度に影響を受けにくいｐＨ指示薬を用いて様々な蛋白質濃度下でｐＨを測定した結果の一例を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
尿に含まれる蛋白質は一般に尿タンパクとも呼ばれる。尿タンパクの濃度は、正常個体の場合、平均して約１０〜２０ｍｇ／ｄＬであるが、腎臓、尿管、膀胱等に異常があるとこの濃度が変化する（上昇する）ことが知られている。したがって、尿タンパクの測定はこれらの疾患の指標となる点で重要である。
【００１２】
尿タンパク測定用等の分析用具で使用される蛋白質指示薬は、一般にｐＨ指示薬としても使用できるものでもあって、ｐＨの影響を非常に受けやすい。そのため、従来、このような蛋白質指示薬は使用時にｐＨを一定に維持するためのバッファーと組み合わせて使用されることが多い。しかしながら、測定対象試料によっては、バッファー効果を超えてｐＨが変動してしまう場合もある。想定されるｐＨ値とは異なるｐＨの試料を前記蛋白質指示薬のみで測定すると、測定精度を欠くこととなり、ひいては、疾患の有無等の判断において偽陽性や偽陰性の原因となりうる。
【００１３】
本開示は、前記蛋白質指示薬と測定対象試料との接触時における測定対象試料のｐＨを用いて、前記蛋白質指示薬の光学分析結果を適宜修正すれば、蛋白質濃度評価の精度を向上させることができ、偽陽性や偽陰性の発生をより一層抑制できる、という知見に基づく。
【００１４】
すなわち、本開示は、一態様において、試料の蛋白質濃度を評価する方法であって、前記試料と蛋白質指示薬とを接触させた後の呈色を光学分析すること、前記試料のｐＨを測定すること、並びに、前記光学分析の結果及び前記測定されたｐＨ値と、予め作成された蛋白質濃度評価用データとに基づいて前記試料の蛋白質濃度を評価することを含み、前記蛋白質指示薬は、ｐＨ及び蛋白質濃度によって発色が変化する蛋白質指示薬であり、前記蛋白質濃度評価用データは、前記測定されたｐＨ値に対応した前記光学分析結果の評価方法を含む、蛋白質濃度評価方法（以下、「本開示の評価方法」ともいう。）に関する。
【００１５】
［蛋白質指示薬］
本明細書において「蛋白質指示薬」とは、ｐＨ及び蛋白質濃度によって発色が変化するものをいう。前記蛋白質指示薬は、一又は複数の実施形態において、溶液中の蛋白質と接触すると色遷移を呈し、前記溶液中の蛋白質の存在の検出及び／又は濃度の測定を可能とするものいう。前記蛋白質指示薬としては、ｐＨの変化に応じて色が変化するものが多く知られている。本明細書においても、特に言及がない場合、前記蛋白質指示薬は、ｐＨの変化に応じて色が変化しうるものをいう。前記蛋白質指示薬としては、従来公知の及び／又は今後開発されるものが使用でき、例えば、特許文献１等に開示されるものが使用でき、オクタハロスルホフタレイン型色素、オクタハロフェノールフタレイン型色素、又はそれらの組み合わせが挙げられる。より具体的には、前記蛋白質指示薬としては、テトラブロモフェノールブルー、テトラクロロフェノールブルー、３′，３″，５，５″−テトラヨード−３，４，５，６−テトラブロモフェノールスルホフタレイン、３，３″−ジヨード−５，５″，３，４，５，６−ヘキサブロモフェノールスルホフタレイン、メチルイエロー（４−ジメチルアミノアゾベンゼン）及びそれらの組み合わせからなる群から選択されるものが挙げられる。これらの中でも、感度及び／又は精度の観点から、テトラブロモフェノールブルーが好ましい。
【００１６】
本開示において、「試料と蛋白質指示薬とを接触させ（る）」とは、例えば、液体試料と前記蛋白質指示薬の溶液とを混合すること、乾燥状態の前記蛋白質指示薬を含む試薬パッド（試薬層）を備える試薬片（ストリップ）を液体試料中にディップすること等を含みうるが、接触の形態はこれらに限定されなくてよく、従来公知の及び／又は今後開発される形態をとり得る。
【００１７】
本明細書において「光学分析する」とは、特に制限されず、例えば、分光器等を用いて対象物の透過光又は散乱光から対象物に関する情報を取得することを含む分光分析をすることが挙げられる。光学分析の結果として、例えば、所望の波長における、対象物体の吸光度、透過率、又は反射率等が得られる。一例として、試料と接触させた蛋白質指示薬又はｐＨ指示薬の透過光又は散乱光を検出し、検出した光から、蛋白質指示薬又はｐＨ指示薬の吸光度、透過率又は反射率等の光学的な特徴を示す値を算出することを光学分析とすることができる。なお、光学分析の形態は、これらに限定されない。その他の光学的方法及び／又は分光法を用いた測定も光学分析に含まれる。
【００１８】
本明細書において「試料と蛋白質指示薬とを接触させた後の呈色を光学分析すること」とは、例えば、前記接触が、液体試料と前記蛋白質指示薬溶液との混合であれば、その混合液について光学分析することをいい、前記接触が、液体試料への乾燥状態の前記蛋白質指示薬を含む試薬パッド（試薬層）の浸漬であれば、浸漬後の前記試薬パッドについての光学分析をすることをいうが、これらの形態に限定されなくてよく、従来公知の形態をとり得る。また、本明細書において「呈色」は、無色から発色した色、及び、他の色から色遷移をした色を含みうる。
【００１９】
本明細書において「試料」は、蛋白質を含有しうるものであって、本開示の評価方法によって蛋白質濃度が評価される対象をいい、以下「評価対象試料」とも呼ぶ。本開示の評価方法において評価対象試料は、蛋白質指示薬を使用した蛋白質濃度評価の精度向上の観点から、液体であることが好ましく、より好ましくは水性液体である。評価対象の蛋白質は、同様の観点から、前記液体に溶解していることが好ましい。
【００２０】
本開示の評価方法において、評価対象試料に接触させる前記蛋白質指示薬としては、評価対象試料１ｍＬに対して０．０１ｍｇ〜１ｍｇとすることが一般的であり、蛋白質指示薬を使用した蛋白質濃度評価の精度向上及び経済性の観念から、評価対象試料１ｍＬに対して０．０２ｍｇ〜０．５ｍｇが好ましい。
【００２１】
［緩衝剤］
前記蛋白質指示薬を使用した蛋白質濃度の測定方法では、通常、ｐＨを一定に維持するため、評価対象試料と混合させる際に緩衝剤が使用されることが多い。本開示の評価方法における前記蛋白指示薬と評価対象試料との接触時においても、緩衝剤を使用してもよい。緩衝剤としては、従来と同様のものを使用でき、維持させたいｐＨに応じて適宜選択できる。具体例としては、例えば、クエン酸緩衝剤、フマル酸緩衝剤、酒石酸、グリシン、及びリンゴ酸が挙げられ、これらの中でも、蛋白質指示薬を使用した蛋白質濃度評価の精度向上の観点から、リンゴ酸が好ましい。前記緩衝剤の使用量としては、評価対象試料１ｍＬに対して０．０１ｍｇ〜１ｍｇとすることが一般的であり、蛋白質指示薬を使用した蛋白質濃度評価の精度向上及び経済性の観点から、評価対象試料１ｍＬに対して０．０２ｍｇ〜０．５ｍｇが好ましい。なお、後述するとおり、評価対象試料のｐＨ測定は、蛋白質指示薬を使用した蛋白質濃度評価の精度向上の観点から、前記蛋白指示薬と評価対象試料との接触時におけるバッファー条件と同様のバッファー条件下で行うことが好ましい。
【００２２】
［ｐＨ測定］
本開示の評価方法は、評価対象試料のｐＨを測定すること含む。評価対象試料のｐＨの測定方法は特に制限されず、公知の方法を採用しうる。例えば、ｐＨ指示薬を用いた方法でもよく、或いは、ｐＨメーターを用いた方法でもよい。前記ｐＨ測定は、蛋白質指示薬を使用した蛋白質濃度評価の精度向上の観点から、前記蛋白質指示薬と評価対象試料との接触時のバッファー条件と同じバッファー条件下で行われることが好ましい。例えば、前記蛋白質指示薬と評価対象試料との接触に際して緩衝剤を添加する場合には、ｐＨ測定の際にも評価対象試料に同じ緩衝剤を同じ濃度となるように添加することが好ましい。なお、特に言及しない限り、本明細書におけるｐＨは、２５℃におけるｐＨをいう。
【００２３】
［ｐＨ指示薬］
評価対象試料のｐＨをｐＨ指示薬を用いて行う場合、前記ｐＨ指示薬は、蛋白質指示薬を使用した蛋白質濃度評価の精度向上の観点から、溶液中の蛋白質濃度に影響されにくいｐＨ指示薬であることが好ましい。そのようなｐＨ指示薬としては、これに限定されないが、エチルオレンジ（ethyl orange）が好ましい。
【００２４】
ｐＨ指示薬を用いた評価対象試料のｐＨ測定は、従来と同様に、例えば、評価対象試料と蛋白質指示薬とを接触させた後の呈色を光学分析することにより行うことができる。具体的な態様としては、上述した蛋白質指示薬の光学分析と同様に行うことができる。評価対象試料に接触させる前記ｐＨ指示薬としては、評価対象試料１ｍＬに対して０．０１ｍｇ〜１ｍｇとすることが一般的であり、蛋白質指示薬を使用した蛋白質濃度評価の精度向上及び経済性の観念から、評価対象試料１ｍＬに対して０．０２ｍｇ〜０．５ｍｇが好ましい。
【００２５】
［蛋白質濃度評価］
本明細書において「蛋白質濃度の評価」とは、評価対象試料の蛋白質濃度の評価であって、例えば、評価対象試料の蛋白質濃度を具体的に決定すること（例えば、評価対象試料の蛋白質濃度はｘｘμｇ／ｍＬである、と評価すること）、評価対象試料の蛋白質濃度を有る範囲内であると決定すること（例えば、評価対象試料の蛋白質濃度はｘｘ〜ｙｙμｇ／ｍＬである、と評価すること）、評価対象試料の蛋白質濃度が所定の閾値を超えるか否か決定すること（例えば、評価対象試料の蛋白質濃度は閾値ｘｘμｇ／ｍＬ以上（未満）である、と評価すること）、或いは、評価対象試料の蛋白質濃度が所定の基準値に基づき設定された陽性と陰性のいずれかに該当するか決定すること（例えば、評価対象試料は陽性（陰性）である、と評価すること）を含み、これらに限定されない。
【００２６】
本開示の評価方法における「蛋白質濃度の評価」は、一実施形態において、評価対象試料と蛋白質指示薬とを接触させた後の呈色を光学分析した結果を、評価対象試料のｐＨ測定結果に基づき必要に応じて修正することが挙げられる。前記光学分析の結果の、前記測定されたｐＨ値に基づく修正は、予め前記蛋白質指示薬及びテスト試料を使用して作成された蛋白質濃度評価用データに従ってすることができる。
【００２７】
［蛋白質濃度評価用データ］
本明細書において「蛋白質濃度評価用データ」とは、試料のｐＨに応じた、蛋白質濃度の評価の仕方を示す情報を含むデータである。評価の仕方には、評価方法や評価基準が含まれる。評価方法は、例えば、測定値を光学分析の評価値又は濃度値に変換する式やその係数を示すデータで表すことができる。評価基準は、例えば、評価の基準となる、測定値若しくは濃度値の範囲又は閾値を示すデータにより表すことができる。蛋白質濃度評価用データには、蛋白質指示薬の光学分析結果、又は当該光学分析結果から得られる蛋白質濃度の評価を、測定対象溶液のｐＨに基づいて修正するためのデータが含まれる。すなわち、測定対象試料のｐＨによっては実際の蛋白質濃度とは誤差のある呈色をしてしまう蛋白質指示薬の分析結果をｐＨに基づいて修正するのに、蛋白質濃度評価用データを用いることができる。蛋白質濃度評価用データの一実施形態として、所定のｐＨ範囲ごとに、蛋白質指示薬により得られた光学分析の結果の校正方法や評価基準など設定されているデータが挙げられる。例えば、光学分析の結果として得られた値（例えば、試料と接触した蛋白質指示薬の吸光度等）を前記試料の蛋白質濃度又はその評価値に変換するのに用いられる値（例えば、変換係数等）であって、所定のｐＨ範囲ごとに設定された値を、蛋白質濃度評価用データに含めることができる。このような蛋白質濃度評価用データは、予め作成しておくことができる。
【００２８】
蛋白質濃度評価用データの実施形態として、前記光学分析結果から前記試料の蛋白質濃度を算出する際に用いられるデータであって、前記試料のｐＨに応じて設定されたデータが挙げられる。より詳細には、前記測定されたｐＨ値及び前記光学分析結果からなる２つのパラメータを少なくとも使用して前記試料の蛋白質濃度を算出する方法を定義するデータを、蛋白質濃度評価用データとすることができる。本実施形態の具体例として、所定のｐＨ範囲ごとに、蛋白質指示薬により得られた蛋白質濃度を校正する方法（例えば、校正式）が設定されているデータが挙げられる（下記表１）。本実施形態では、校正後の評価対象試料の蛋白質濃度が評価としてアウトプットされうる。なお、下記表１の数値は、一例であって、本開示を何ら限定するものではない。
【００２９】
【表１】
0005542888.tif 000002
【００３０】
上記表１に示す例では、光学分析結果から得られる蛋白質濃度の値を補正するための係数が、複数のｐＨ範囲それぞれに対応付けられて記録される。このように、ｐＨに応じた補正係数を記録しておくことで、ｐＨの違いを考慮した、より正確な蛋白質濃度の評価が可能になる。上記形態の変形例として、例えば、光学分析結果から蛋白質濃度を計算するために用いる校正データ（例えば、検量線を示すデータ等）を、ｐＨ範囲ごとに記録することもできる。
【００３１】
蛋白質濃度評価用データの他の実施形態として、前記光学分析結果に基づいて評価値を算出する際に基準となるデータであって、前記試料のｐＨに応じて設定されたデータが挙げられる。より詳細には、前記測定されたｐＨ値及び前記光学分析結果からなる２つのパラメータを少なくとも使用して前記試料の蛋白質濃度が所定の濃度範囲か否かを判断する際の基準となるデータを、蛋白質濃度評価用データとすることができる。本実施形態の具体例として、所定のｐＨ範囲ごとに定義された、蛋白質濃度の陽性／陰性の判断基準となる吸光度（蛋白質指示薬）の値を含むデータが挙げられる（下記表２）。本実施形態では、前記定義されたデータに従って、評価対象試料の陽性又は陰性の判定が評価としてアウトプットされうる。また、本実施形態では、蛋白質指示薬から得られる光学分析値（吸光度）を蛋白質濃度に換算しなくても評価対象試料の蛋白質濃度を評価できる。なお、下記表２の数値は、一例であって、本開示を何ら限定するものではない。
【００３２】
【表２】
0005542888.tif 000003
【００３３】
上記表２に示す例では、陽性と判断される光学分析の結果（例えば、吸光度）の範囲を示す情報と、陰性と判断される光学分析の結果（例えば、吸光度）の範囲を示す情報が、複数のｐＨ範囲それぞれに対応付けられて記録される。このように、陽性／陰性を判断するための閾値を、ｐＨの範囲を示すデータと対応づけて記録しておくことで、試料のｐＨに応じて蛋白質濃度を適切に評価することが可能になる。
【００３４】
一実施形態として、蛋白質濃度評価用データは、ｐＨ値の正常範囲を定義するデータを含んでもよい。これにより、測定された試料のｐＨの値が、正確な評価ができる範囲を超えているか否かを判断することが可能になる。より詳細には、蛋白質濃度評価用データは、前記測定されたｐＨ値の所定の低値及び／又は高値を異常なｐＨと定義するデータを含むことができる。具体例として、所定のｐＨ範囲を示す評価対象試料のｐＨが酸性側又はアルカリ側に異常であることを示すデータが挙げられる（下記表３）。このようなデータを用いることにより、評価対象試料の異常性が評価としてアウトプットされうる。このような評価とすることで、例えば、生体試料を扱う場合にｐＨが異常な試料も同時に検出することができる。本実施形態は、上述の２つの実施形態と組み合わせることができる。なお、下記表３の数値は、一例であって、本開示を何ら限定するものではない。
【００３５】
【表３】
0005542888.tif 000004
【００３６】
蛋白質濃度評価用データは、評価目的に応じて作成することができる。なお、蛋白質濃度評価用データに用いるパラメータは、前記測定されたｐＨ値及び前記光学分析結果の少なくとも２つを含めばよい。また、これらのパラメータの他のパラメータも含めて３つ以上のパラメータを蛋白質濃度評価用データとして使用してもよい。
【００３７】
上記のような蛋白質濃度評価用データを予め作成し、分析装置などに記録しておくことで、ｐＨ値に応じた試料の蛋白質濃度評価が可能になる。蛋白質濃度評価用データは、例えば、蛋白質濃度が既に分かっている標準試料を、さまざまなｐＨの条件化で光学分析して得られる値を基に、作成することができる。例えば、複数のｐＨ値又はｐＨ範囲それぞれについて、標準試料を光学分析して得られる結果（例えば吸光度）と標準試料の蛋白質濃度との関連を示す値を算出し、この値を、蛋白質濃度評価用データとすることができる。すなわち、蛋白質指示試薬の光学分析による測定値を蛋白質濃度値又は蛋白質濃度評価値に変換するためのデータを、複数のｐＨ又はｐＨ範囲について生成し、蛋白質濃度評価用データとして記録しておくことができる。なお、蛋白質濃度評価用データは、上記例に限られない。
【００３８】
［評価対象試料］
本開示の評価方法の評価対象試料としては、特に制限されず、生体試料、生化学試料、環境試料等が挙げられる。前記生体試料としては、体液、尿、血液、唾液等があげられる。
【００３９】
［分析用具］
本開示の評価方法において、測定対象試料と蛋白質指示薬との接触と、測定対象試料のｐＨ指示薬を用いたｐＨ測定とは、上述のとおり、ともに、試薬ストリップ上の試薬層にて行うことができる。したがって、本開示は、その他の態様において、基板上に、蛋白質指示薬を含む試薬層及びｐＨ指示薬を含む試薬層を備える分析用具（以下、「本開示の分析用具」ともいう。）に関する。本開示の分析用具を用いて、本開示の評価方法を行うことができる。
【００４０】
本開示の分析用具において、蛋白質指示薬を含む試薬層とｐＨ指示薬を含む試薬層とは、別個の２つの試薬層であってもよい。また、蛋白質指示薬とｐＨ指示薬とを同一の試薬層に配置してもよい。この場合、蛋白質指示薬の呈色とｐＨ指示薬の呈色とを、それぞれ異なる波長において、光学分析により検出することができる。そのため、蛋白質指示薬の呈色とｐＨ指示薬の呈色の波長は異なり、互いに与える影響が小さいことが好ましい。
【００４１】
したがって、本開示の分析用具の第１の実施態様として、基板の上に複数の試薬層が形成された分析用具であって、ｐＨ及び蛋白質濃度によって発色が変化する蛋白質指示薬を含有する試薬層Ａ、及び、ｐＨ指示薬を含有する試薬層Ｂを備え、前記試薬層Ａ及び前記試薬層Ｂは、同じバッファー条件となるように緩衝剤をそれぞれ含む分析用具、が挙げられる。また、本開示の第２の実施態様として、基板の上に、試薬層が形成された分析用具であって、ｐＨ及び蛋白質濃度によって発色が変化する蛋白質指示薬、及び、ｐＨ指示薬を含有する試薬層を備える分析用具、が挙げられる。このように、蛋白質指示薬及びｐＨ指示薬を含有する試薬層を備えることで、試薬層の数を少なくすることができ、分析用具がコンパクトになる。なお、上記第１及び第２の実施形態において、ｐＨ指示薬は、溶液中の蛋白質濃度に影響されにくいものを用いることが好ましい。
【００４２】
第１及び第２の実施形態の分析用具において、「ｐＨ及び蛋白質濃度によって発色が変化する蛋白質指示薬」、「溶液中の蛋白質濃度に影響されにくいｐＨ指示薬」及び「緩衝剤」は、本開示の評価方法で説明したものをそれぞれ使用できる。
【００４３】
本開示の分析用具は、蛋白質指示薬を含む試薬層とｐＨ指示薬を含む試薬層以外の試薬層を備えていてもよい。前記試薬層の数は、特に制限されず、例えば、１〜１５個であり、好ましくは１〜１０個であり、より好ましくは１〜８個である。本開示の分析用具は、従来公知の光学分析装置にて分析でき、また、後述する本開示の分析装置にて本開示の評価方法を行うことができる。
【００４４】
本開示の分析用具の一例を図１に示す。図１Ａは側面図であり、図１Ｂは上面図である。図１Ａ及びＢにおいて、同一部分には同一符号を付している。この検体分析用具１０は、短冊状の基板１の上に、６個の試薬層２が形成されている。前記基板の材質は特に制限されず、例えば、樹脂、金属、ガラスなどがある。基板の色は、特に制限されず、白色、灰色、黒色、有彩色、透明のいずれであってもよい。前記基板の大きさは、特に制限されず、検査項目、使用する分析装置の規格等により適宜決定され、例えば、長さ５０〜１５０ｍｍ、幅２〜１０ｍｍ、厚み０．１〜１．０ｍｍである。各試薬層２は、検査項目に対応した所定の試薬を含浸させたパッドを前記基板１上に貼着することにより形成されている。前記パッドの材質としては、例えば、ろ紙、ガラス繊維ろ紙、編物、織物、不織布、メンブランフィルター、多孔質樹脂シートなどがある。また、各試薬層２（パッド）の形は特に制限されず、正方形、長方形、円形、楕円形などがある。各試薬層２（パッド）の大きさは、特に制限されず、形状が正方形状の場合、例えば、縦と横２〜１０ｍｍ、厚み０．０５〜１．０ｍｍである。前記試薬層２の数は、検査項目に応じ増減可能である。これらの試薬層２は、一定のピッチで６個の試薬層を直列に配置されている。このピッチは、特に制限されないが、例えば、１．０〜１００ｍｍである。この検体分析用具の基板１の一方の端（同図において右側端部）では、試薬層２を設けないことにより、スペースを確保し、この部分（把持部）を指先で摘まんで取り扱えるようにしている。
【００４５】
本開示の分析用具の第１の実施態様の場合、図１において、例えば、試薬層３を蛋白質指示薬を含有する試薬層Ａ、試薬層４をｐＨ指示薬を含有する試薬層Ｂとすることができる。また、本開示の分析用具の第２の実施態様の場合、図１において、例えば、試薬層３又は４を、蛋白質指示薬及びｐＨ指示薬を含有する試薬層とすることができる。但し、試薬層Ａ及びＢ、又は、蛋白質指示薬及びｐＨ指示薬を含有する試薬層の位置は、図１に限定されない。
【００４６】
［分析装置］
本開示は、また、その他の態様において、本開示の評価方法を行い得る分析装置（以下、「本開示の分析装置」ともいう）に関する。本開示の分析装置の一実施態様として、
試料と蛋白質指示薬とを接触させた後の呈色を光学分析する測定部と、
前記試料のｐＨを測定する測定部と、
前記光学分析の結果及び前記測定されたｐＨと、蛋白質濃度評価用データとに基づいて前記試料の蛋白質濃度を評価する評価部と、
評価後のデータを出力する出力部とを備え、
前記蛋白質指示薬は、ｐＨ及び蛋白質濃度によって発色が変化する蛋白質指示薬であり、
前記蛋白質濃度評価用データは、前記測定されたｐＨ値に対応した前記光学分析結果の評価の仕方を示す情報を含む、分析装置が挙げられる。
【００４７】
本実施形態の分析装置において、「ｐＨ及び蛋白質濃度によって発色が変化する蛋白質指示薬」及び「蛋白質濃度評価用データ」は、本開示の評価方法で説明したものをそれぞれ使用できる。
【００４８】
本実施態様の分析装置において、前記ｐＨを測定する測定部は、測定対象試料のｐＨをｐＨメーターで測定する測定部であってもよく、或いは、ｐＨ指示薬の光学分析を行う測定部であってもよい。後者の場合は、蛋白質指示薬を光学分析する測定部とｐＨ指示薬の光学分析を行う測定部とは同一の測定部とすることができる。
【００４９】
本実施態様の分析装置において、蛋白質指示薬を光学分析する測定部とｐＨ指示薬の光学分析を行う測定部とは同一の測定部とすることができる。また、蛋白質指示薬を光学分析する測定部及びｐＨ指示薬の光学分析を行う測定部は、液体の光学分析を行うものであっても、或いは、分析用具の試薬層の光学分析を行うものであってもよい。したがって、本開示の分析装置は、その他の実施形態において、本開示の分析用具を使用して本開示の評価方法を行う分析装置である。
【００５０】
図２は、本開示の分析装置の一実施形態における構成例を示す機能ブロック図である。図２に示す分析装置２０は、蛋白質指示薬及びｐＨの測定と蛋白質濃度の評価を行う装置である。分析装置２０は、測定部２１と評価部２２と出力部２３を備え、さらに、記録部２４を備える。測定部２１は、蛋白質指示薬の測定部２１１とｐＨ測定部２１２とを備える。測定部２１１では、蛋白質指示薬の光学分析を行う。上述したとおり、ｐＨ測定部２１２における測定が光学分析法によるものであれば、測定部２１１と２１２は１つの測定部としてもよい。測定部２１で得られた蛋白質指示薬の光学分析結果及びｐＨ測定値は、記録部２４に保存されてもよい。評価部２２では、測定部２１で得られた蛋白質指示薬の光学分析結果及びｐＨ測定値、及び、記録部２４に記録されている蛋白質濃度評価用データに従って評価が行われる。ここで、蛋白質濃度評価用データは、予め作成し記録部２４に記録しておくことができる。評価の結果は、記録部２４に記録され、及び／又は出力部２３に出力される。出力部２３としては、例えば、表示部、印刷する印刷部、外部に送信する送信部などが挙げられる。
【００５１】
（測定部）
図２に示す例では、蛋白質指示薬の測定部２１１とｐＨの測定部２１２は１つの測定部として構成されている。この場合、測定部２１は、例えば、図１に示すような分析用具の各試薬層２の透過光又は散乱光を検出することで、吸光度、反射率又は透過率等を測定する。例えば、蛋白質指示薬を含む試薬層とｐＨ指示薬を含む試薬層に、それぞれ試料を滴下し、これらの吸光度を測定することにより、試料を接触させた蛋白質指示薬及び、試料のｐＨを測定することができる。また、蛋白質指示薬とｐＨ指示薬が１つの試薬層に含まれている場合、測定部２１は、１つの試薬層の透過光又は散乱光を基に、蛋白質指示薬に対応する波長（又は帯域）及び、ｐＨ指示薬に対応する波長（又は帯域）それぞれについて、吸光度、透過率又は反射率を測定することができる。このように、１つの試薬層について、蛋白指示薬及びｐＨ指示薬それぞれに対応する波長又は帯域の光を光学分析することにより、試料の蛋白質及び試料のｐＨに関する情報を得ることができる。
【００５２】
（評価部）
評価部２２における、蛋白質濃度評価用データを使用した評価の方法は、本開示の評価方法で説明したように行われうる。一実施形態として、前記蛋白質濃度評価用データが、前記光学分析結果から前記試料の蛋白質濃度を算出する際に用いられる算出用データであって、前記試料のｐＨに応じて設定された算出用データを含み（例えば、上記表１参照）、前記評価部が、前記測定されたｐＨ値及び前記光学分析結果を用いて、前記算出用データに基づき試料の蛋白質濃度を算出することができる。評価部は、例えば、前記試料のｐＨがいずれのｐＨ範囲に属するかを判断し、試料のｐＨの属する範囲に対応する補正係数を算出用データとして取得することができる。この場合、評価部は、補正係数又は当該補正係数を含む式を用いて、光学分析結果から得られる蛋白質濃度を修正することができる。これにより、試料のｐＨによる光学分析結果の変動を考慮した、より正確な蛋白質濃度の評価が可能になる。
【００５３】
その他の実施形態として、前記蛋白質濃度評価用データは、前記光学分析結果に基づいて評価値を算出する際に基準となる基準データであって、前記試料のｐＨに応じて設定された基準データを含み（例えば、上記表２参照）、前記評価部が、前記測定されたｐＨ値及び前記光学分析結果に基づき、前記基準データを基準に前記評価値を算出することができる。評価部は、例えば、前記試料のｐＨがいずれのｐＨ範囲に属するかを判断し、試料のｐＨの属する範囲に対応する、陰性／陽性の判断の閾値を基準データとして取得することができる。この場合、評価部は、光学分析結果として得られる吸光度等の値と、陰性／陽性の判断の閾値とを比較することにより、試料の蛋白質濃度が陰性か陽性かを判断する。これにより、試料のｐＨによる光学分析結果の変動を考慮した、より正確な蛋白質濃度の評価が可能になる。
【００５４】
さらに、前記蛋白質濃度評価用データは、前記測定されたｐＨの正常範囲を定義するデータを含み（例えば、上記表３参照）、前記評価部が、前記測定されたｐＨ値に基づき前記定義に従った評価を行うことができる。前記評価部は、例えば、前記試料のｐＨが、蛋白質濃度評価用データが示すｐＨが正常範囲にないと判断した場合、正確な評価ができない旨、又は、評価結果の信頼性が低い旨の応答を出力することができる。これにより、試料のｐＨの異常を検出し出力することができる。但し、評価部２２における評価はこれらに限定されない。
【００５５】
（測定部の変形例）
図３は、図２に示す分析装置２０の変形例の構成を表す機能ブロック図である。図３に示す分析装置２０ａでは、蛋白質指示薬の測定部２１１と、ｐＨ測定部２１２が、それぞれ独立して設けられる。図３に示す例では、測定部２１１は、図２に示す分析装置２０の測定部２１１と同様に光学分析により呈色を測定する測定器とし、測定部２１２は、ｐＨメーターとすることができる。このように、蛋白質指示薬の測定系と試料のｐＨの測定系を別個に設けることにより、ｐＨ測定の信頼性を向上させることができる。測定部２１２のｐＨメーターとしては、例えば、ガラス電極と比較電極を備えたガラス電極法を用いたｐＨ測定器が挙げられるが、ｐＨメーターの構造は、特に限定されない。
【００５６】
図２及び図３における分析装置２０、２０ａにおいて、測定部２１１、測定部２１２、評価部２２、出力部２３、及び記録部２４のそれぞれが独立し接続された構成であってもよく、或いは、これらの全部又は一部が一体となった構成であってもよい。また、評価部２２は、分析装置２０、２０ａが備えるコンピュータにより実現することができる。例えば、分析装置２０、２０ａのプロセッサが所定のプログラムを実行することで、評価部２２の機能を実現することができる。記録部２４は、分析装置２０、２０ａが備えるメモリなどの記録媒体又は分析装置２０、２０ａからアクセス可能なストレージにより実現することができる。
【００５７】
（動作例）
図４は、図２又は図３に示す上記分析装置２０、又は２０ａ（以下、単に分析装置と称する）の動作例を示すフローチャートである。図４に示す例では、まず、分析装置のプロセッサが測定部２１１を制御し、試料と蛋白質指示薬を接触させる（Ｓ０）。測定部２１１は、試料と接触した蛋白質指示薬の呈色を光学分析により測定する（Ｓ１）。例えば、測定部２１１は、図１に示した分析用具の蛋白質指示薬を含む試薬層に試料を滴下することで接触させることができる。この場合測定部２１１は、試薬層の吸光度、反射率又は透過率を測定することで、試料と接触した蛋白質指示薬の呈色を光学分析することができる。測定部２１１による光学分析結果（例えば、吸光度等）は、評価部２２に送信される。
【００５８】
Ｓ２において、分析装置のプロセッサは、測定部２１２を制御し、試料のｐＨを測定する。図２に示す分析装置２０は、測定部２１２が、試料が滴下されたｐＨ指示薬を含む試薬層から光を光学分析することで試料のｐＨを測定することができる。図３に示す分析装置２０ａは、ｐＨ測定部２１２にて、例えば、ガラス電極法を用いた測定により試料のｐＨを得ることができる。測定された試料のｐＨは、評価部２２へ送られる。
【００５９】
評価部２２は、Ｓ１で測定された蛋白質指示薬の光学分析結果と、Ｓ２で測定された試料のｐＨと、記録部２４に記録された蛋白質濃度評価用データを用いて、試料のｐＨに応じた蛋白質濃度の評価処理を実行する（Ｓ３）。具体的には、評価部２２は、Ｓ２で測定された試料のｐＨに対応する蛋白質濃度評価用データを記録部２４から取得し、蛋白質濃度評価用データを用いて、Ｓ１で測定された蛋白質指示薬の光学分析結果又は光学分析結果から得られる蛋白質濃度の情報に対してｐＨに応じた修正を施す。評価部２２は、修正後の光学分析結果又は蛋白質濃度の情報を評価結果としてもよいし、光学分析結果又は蛋白質濃度を基にした評価値（例えば、陽性か陰性かを示す値等）を評価結果として生成することができる。評価部２２は、例えば、試料の蛋白質濃度そのもの、蛋白質濃度が属する範囲、蛋白質濃度と所定の閾値との比較結果、陽性か陰性かを示す情報、等を評価結果として計算する。出力部２３は、評価部２２が生成した評価結果を、出力する。出力は、例えば、分析装置が備えるディスプレイへの表示、プリンタでの印刷、スピーカからの音声出力、又は、ネットワークを介したデータの送信、もしくはこれらの組み合わせの形態で行うことができる。
【００６０】
図５は、図４のＳ３における評価部２２の動作例を示すフローチャートの一例である。評価部２２は、前記蛋白質指示薬の光学分析（吸光度）の測定値及びｐＨ測定値を取得する（Ｓ３０１）。次に、評価部２２において、まず、測定されたｐＨ値に対応する適用すべき評価定義が選択される（Ｓ３１１から３１５）。ここでは、一例として、記録部２４に記録された蛋白質濃度評価用データが定義する評価の仕方（評価方法又は評価基準）から、測定されたｐＨに対応するものを抽出する。下記表４は、蛋白質濃度評価用データが定義する評価の仕方の一例を示す表である。下記表４では、評価の仕方がｐＨ範囲に対応付けて記録される。
【００６１】
【表４】
0005542888.tif 000005
【００６２】
例えば、ｐＨが３．３未満の場合（Ｓ３１１でＹｅｓ）には、評価部２２は、蛋白質濃度評価用データから、評価の仕方を示すデータとして、ｐＨ値異常（酸性）を示すデータを抽出し、これを評価結果として出力する。ｐＨが３．３以上３．８未満の場合（Ｓ３１２でＹｅｓ）、評価部２２は、蛋白質濃度評価用データから基準値Ｘ１を抽出し、蛋白質指示薬の光学分析結果である吸光度とＸ１とを比較する（Ｓ３２１）。評価部２２は、例えば、吸光度がＸ１より大きい場合は陰性、吸光度がＸ１を超えない場合は陽性と判断することができる。同様にして、評価部２２は、ｐＨが３．８以上４．２未満の場合（Ｓ３１３でＹｅｓ）は、Ｘ２を基準に陰性／陽性を判断し（Ｓ３２２）、ｐＨが４．２以上４．６未満の場合（Ｓ３１４でＹｅｓ）は、Ｘ３を基準に陰性／陽性を判断（Ｓ３２３）する。ｐＨが４．６以上である場合、評価部２２は、蛋白質濃度評価用データの「ｐＨ値異常（アルカリ」を示すデータに基づいて、ｐＨが異常値を示す試料として評価し（Ｓ３２４）、出力する（Ｓ３３０）。このように、評価部２２は、Ｓ３１２〜Ｓ３１５で測定されたｐＨがいずれの範囲に属するかを判断し、その判断結果に基づいて、評価基準を決定し、ｐＨの異常の有無（Ｓ３２４）及び、陽性か陰性かを判断する（Ｓ３２１〜Ｓ３２３）。判断結果は、評価結果として、出力される（Ｓ３３０）。
【００６３】
上記動作例によれば、測定された試料のｐＨに応じて適切な評価の仕方が選択されるので、ｐＨに応じて適切に修正された評価結果を得ることができる。なお、本開示に係る分析装置の動作は上記図４、図５に示した例に限られない。例えば、図４において、Ｓ１とＳ２の実行の順序は逆になってもよい。また、図５のＳ３２１〜Ｓ３２３では、吸光度と基準値との比較により陰性又は陽性を判断する処理に代えて、もしくは加えて、蛋白質濃度を測定されたｐＨに応じた計算方法で算出する処理とすることもできる。
【００６４】
なお、評価対象試料の評価の出力を行うコンピュータに処理を実行させる評価プログラムであって、蛋白質指示薬の光学分析結果及び前記評価対象試料のｐＨを取得する処理と、前記蛋白質濃度評価用データを予め記録した記録部にアクセスし、前記蛋白質指示薬の光学分析結果及び前記測定されたｐＨ値に対応する評価方法又は評価基準を選択して評価する処理と、得られた評価を出力する処理とをコンピュータに実行させるプログラムも、本願発明に含まれる。また、該プログラムを記録した非一時的な（non-transitory）記録媒体、該プログラムを実装した分析装置も本願発明に含まれる。
【００６５】
例えば、試料の蛋白質濃度を評価する処理をコンピュータに実行させる蛋白質濃度評価プログラムであって、前記試料と蛋白質指示薬とを接触させた後の呈色を光学分析の結果と、測定された前記試料のｐＨとを入力する処理と、前記光学分析の結果及び前記測定されたｐＨと、蛋白質濃度評価用データとに基づいて前記試料の蛋白質濃度を評価する処理をコンピュータに実行させ、前記蛋白質濃度評価用データは、前記測定されたｐＨに対応した前記光学分析結果の評価の仕方を示す情報を含む、蛋白質濃度評価プログラムも本願発明の実施形態の１つである。
【００６６】
また、分析装置を制御するプログラムであって、分析装置の測定部に、試料と蛋白質指示薬とを接触させた後の呈色を光学分析させる処理と、分析装置の測定部にｐＨを測定させる処理と、前記光学分析の結果及び前記測定されたｐＨと蛋白質濃度評価用データとに基づいて前記試料の蛋白質濃度を評価する評価処理と、評価後のデータを出力する出力処理と分析装置に実行させ、前記蛋白質濃度評価用データは、前記測定されたｐＨに対応した前記光学分析結果の評価の仕方を示す情報を含む、プログラムも本願発明の実施形態の１つである。
【００６７】
（分析装置の具体例）
図６は、分析装置２０の具体例である尿分析装置を採用した全自動尿化学分析装置の外観斜視図である。図６に示す全自動尿化学分析装置は、本体部６１、試験紙供給部６２、試料供給部６３、及びボトルユニット６４を備えている。本体部６１には、表示部６５、操作部６６、及びプリンタ部６７が設けられている。
【００６８】
本体部６１には、移動可能なノズルが配置されており、このノズルは、試料供給部６３に載置された検体（試料）としての尿を収容する容器から尿を吸引し、本体部６１の内部の所定の位置に移送された試験紙（分析用具の一例）に設置された複数の試薬パッド（試薬層の一例）に尿を滴下すなわち点着する。
【００６９】
尿を滴下された試薬パッドは、本体部６１の内部に設置された光学系（測定部に相当）により色などを測定され、その測定結果に基づいて検査結果が判定されて、検査結果はプリンタ部６７により印字出力される。試薬パッドの１つに、蛋白質指示薬及びｐＨ指示薬が含まれている、測定部は、蛋白質指示薬に対応する波長における光学分析及びｐＨ指示薬に対応する波長における光学分析を実行し、蛋白質指示薬及びｐＨ指示薬それぞれについて測定結果を得ることができる。これにより、尿のｐＨに応じて、尿中の蛋白質の測定値又は評価値を適切な値に修正することができる。
【００７０】
図示しないが、全自動尿化学分析装置は、ＣＰＵ、メモリ（例えば、ＲＯＭ（read only memory）、ＲＡＭ（random access memory）、ＨＤ(Hard Disk)等を含む）、モータ駆動部、バルブ駆動部を備えることができる。ＣＰＵはメモリに記録されたプログラムにしたがって動作する。また、メモリには、上記の蛋白質濃度評価用データが記録される。ＣＰＵは、モータ駆動部、バルブ駆動部を制御する。モータ駆動部は、ＣＰＵにより制御されて、ノズルによる吸引や洗浄を行うための複数のポンプを駆動する。バルブ駆動部は、ＣＰＵにより制御されて、ノズルによる吸引や洗浄を行うための複数のバルブを駆動する。
【００７１】
このように、分析装置は、試薬を設置する手段、試料を設置する手段、試薬の一つである蛋白質指示薬に試料を接触させる手段、試料のｐＨを測定する手段、試料と接触させた試薬の色を測定する手段、測定結果を解析する手段、及びこれらを制御する手段を含む構成とすることができる。なお、分析装置は上記例に限られない。例えば、試料である尿のｐＨを測定するｐＨメーターが設けられてもよい。ｐＨメーターは、一例として、ｐＨメーターのガラス電極と比較電極を試料である尿に挿入し、これらの電極間の電圧を測定することで、試料のｐＨを計測する構成とすることができる。
【００７２】
以下、本開示が限定されない実施例を用いて、本開示をさらに説明する。
【実施例】
【００７３】
［ＢＳＡ溶液のタンパク質濃度評価：実施例１及び比較例１］
蛋白質指示薬としてテトラブロモフェノールブルーを用い、下記１２種類のＢＳＡ溶液を作成した。これらのＢＳＡ溶液の吸光度（６２０ｎｍ）を分光光度計（日本分光社製）で測定した。その結果を下記表５に示す。
【００７４】
〔ｐＨの調整と測定〕
ｐＨの調整は、ＮａＯＨ（５規定）を用いて調整した。また、ｐＨは、測定対象が２５℃の状態で、ｐＨメータ（堀場製作所製、商品名：Ｆ２３）を用いて測定した。以下の実施例・比較例でも同様である。
【００７５】
〔ＢＳＡ溶液組成〕
０．１Ｍ  リンゴ酸（ｐＨ３．７／４．１／４．５）
１．５ｍｇ／ｄＬ  テトラブロモフェノールブルー（ナカライテスク社製）
ＢＳＡ（ウシ血清アルブミン、シグマアルドリッチ社製）（０／１０／２５／５０  ｍｇ／ｄＬ）
【００７６】
【表５】
0005542888.tif 000006
【００７７】
〔比較例１〕
表５に示されたテトラブロモフェノールブルーの吸光度のみに基づいた下記の評価用データに従って、表５に示されたＢＳＡ溶液の蛋白質濃度につき、陽性か陰性かを評価した。なお、前記評価が陽性とは、蛋白質濃度が１０ｍｇ／ｄＬ以上であることと設定し、前記評価が陰性とは、蛋白質濃度が１０ｍｇ／ｄＬ未満であることと設定した。その結果を下記表６に示す。
【００７８】
評価用データ：
吸光度が０．５４未満で陰性、０．５４以上で陽性。
（「０．５４」は、ｐＨ３．７、ＢＳＡ  ０ｍｇ／ｄＬの溶液の吸光度と、ｐＨ３．７、ＢＳＡ  １０ｍｇ／ｄＬの溶液の吸光度との中間値である。）
【００７９】
【表６】
0005542888.tif 000007
【００８０】
上記表６に示す通り、ｐＨ４．１及びｐＨ４．５においては、蛋白質濃度が０ｍｇ／ｄＬであっても、蛋白質指示薬の吸光度が高く、ｐＨ３．７での吸光度を基準に評価すると、本来陰性であるはずが、陽性と評価されてしまった（偽陽性が発生した）。
【００８１】
〔実施例１〕
表５に示されたテトラブロモフェノールブルーの吸光度と、ＢＳＡ溶液のｐＨとに基づいた下記の評価用データとに従って、表５に示されたＢＳＡ溶液の蛋白質濃度につき、陽性か陰性かを評価した。なお、比較例１と同様に、前記評価が陽性とは、蛋白質濃度が１０ｍｇ／ｄＬ以上であることと設定し、前記評価が陰性とは、蛋白質濃度が１０ｍｇ／ｄＬ未満であることを設定した。その結果を下記表７に示す。
【００８２】
評価用データ：
ｐＨ３．７では、吸光度が０．５４未満で陰性、０．５４以上で陽性。
（「０．５４」は、ｐＨ３．７、ＢＳＡ  ０ｍｇ／ｄＬの溶液の吸光度と、ｐＨ３．７、ＢＳＡ  １０ｍｇ／ｄＬの溶液の吸光度との中間値である。）
ｐＨ４．１では、吸光度が０．６２未満で陰性、０．６２以上で陽性。
（「０．６２」は、ｐＨ４．１、ＢＳＡ  ０ｍｇ／ｄＬの溶液の吸光度と、ｐＨ４．１、ＢＳＡ  １０ｍｇ／ｄＬの溶液の吸光度との中間値である。）
ｐＨ４．５では、吸光度が０．７０未満で陰性、０．７０以上で陽性。
（「０．７０」は、ｐＨ４．５、ＢＳＡ  ０ｍｇ／ｄＬの溶液の吸光度と、ｐＨ４．５、ＢＳＡ  １０ｍｇ／ｄＬの溶液の吸光度との中間値である。）
【００８３】
【表７】
0005542888.tif 000008
【００８４】
上記表７に示す通り、ｐＨを考慮して評価することで、比較例１で発生したｐＨ４．１及びｐＨ４．５における偽陽性は発生せず、精度が高い蛋白質濃度の評価ができた。
【００８５】
［ＢＳＡ添加尿試料のタンパク質濃度評価：実施例２及び比較例２］
尿にＢＳＡを添加して下記のＢＳＡ添加尿試料を調製した。また、リンゴ酸とテトラブロモフェノールブルーの溶液である下記の蛋白質指示薬溶液を調製した。前記ＢＳＡ添加尿試料と前記蛋白質指示薬溶液とを１：１で混合し、１５種類の混合試料液を調製した。この混合試料液の吸光度（６２０ｎｍ）を分光光度計（日本分光社製）で測定した。その結果を下記表８に示す。
【００８６】
〔ＢＳＡ添加尿試料組成〕
尿試料にＢＳＡ（ウシ血清アルブミン、シグマアルドリッチ社製）（０／５／１０／１５／２０  ｍｇ／ｄＬ）を添加
〔蛋白質指示薬溶液組成〕
０．２Ｍ  リンゴ酸（ｐＨ３．７／４．１／４．５）
３．０ｍｇ／ｄＬ  テトラブロモフェノール（ナカライテスク社製）
【００８７】
【表８】
0005542888.tif 000009
【００８８】
〔比較例２〕
表８に示されたテトラブロモフェノールブルーの吸光度のみに基づいた下記の評価用データに従って、表８に示された混合試料液の蛋白質濃度につき、陽性か陰性かを評価した。なお、前記評価が陽性とは、蛋白質濃度が１０ｍｇ／ｄＬ以上であることと設定し、前記評価が陰性とは、蛋白質濃度が１０ｍｇ／ｄＬ未満であることを設定した。その結果を下記表９に示す。
【００８９】
評価用データ：
吸光度が０．５３未満で陰性、０．５３以上で陽性と定義。
（「０．５３」は、ｐＨ３．７、ＢＳＡ  ７．５ｍｇ／ｄＬの溶液の吸光度と、ｐＨ３．７、ＢＳＡ  １０ｍｇ／ｄＬの溶液の吸光度との中間値である。）
【００９０】
【表９】
0005542888.tif 000010
【００９１】
上記表９に示す通り、ｐＨ４．５においては、蛋白質濃度が７．５ｍｇ／ｄＬの場合に、本来陰性であるはずが、陽性と評価されてしまった（偽陽性が発生した）。
【００９２】
〔実施例２〕
表８に示されたテトラブロモフェノールブルーの吸光度と、混合試料液のｐＨとに基づいた下記の評価用データに従って、表８に示された混合試料液の蛋白質濃度につき、陽性か陰性かを評価した。なお、比較例２と同様に、前記評価が陽性とは、蛋白質濃度が１０ｍｇ／ｄＬ以上であることと設定し、前記評価が陰性とは、蛋白質濃度が１０ｍｇ／ｄＬ未満であることを設定した。その結果を下記表１０に示す。
【００９３】
評価用データ：
ｐＨ３．７では、吸光度が０．５３未満で陰性、０．５３以上で陽性と定義。
（「０．５３」は、ｐＨ３．７、ＢＳＡ  ７．５ｍｇ／ｄＬの溶液の吸光度と、ｐＨ３．７、ＢＳＡ  １０ｍｇ／ｄＬの溶液の吸光度との中間値である。）
ｐＨ４．１では、吸光度が０．５５未満で陰性、０．５５以上で陽性と定義。
（「０．５５」は、ｐＨ４．１、ＢＳＡ  ７．５ｍｇ／ｄＬの溶液の吸光度と、ｐＨ４．１、ＢＳＡ  １０ｍｇ／ｄＬの溶液の吸光度との中間値である。）
ｐＨ４．５では、吸光度が０．５９未満で陰性、０．５９以上で陽性と定義。
（「０．５９」は、ｐＨ４．５、ＢＳＡ  ７．５ｍｇ／ｄＬの溶液の吸光度と、ｐＨ４．５、ＢＳＡ  １０ｍｇ／ｄＬの溶液の吸光度との中間値である。）
【００９４】
【表１０】
0005542888.tif 000011
【００９５】
上記表１０に示す通り、ｐＨを考慮して評価することで、比較例２で発生したｐＨ４．５における偽陽性は発生せず、精度が高い蛋白質濃度の評価ができた。
【００９６】
［溶液中の蛋白質に影響を受けにくいｐＨ指示薬：参考例１］
尿にＢＳＡを添加して下記のＢＳＡ添加尿試料を調製した。また、リンゴ酸とエチルオレンジの溶液である下記のｐＨ指示薬溶液を調製した。前記ＢＳＡ添加尿試料と前記ｐＨ指示薬溶液とを１：１で混合し、１５種類の混合試料液を調製した。この混合試料液の吸光度（４８０ｎｍ）を分光光度計（日本分光社製）で測定した。その結果を図７及び下記表１１に示す。
【００９７】
〔ＢＳＡ添加尿試料組成〕
尿試料にＢＳＡ（ウシ血清アルブミン、シグマアルドリッチ社製）（０／５／１０／１５／２０  ｍｇ／ｄＬ）を添加
〔ｐＨ指示薬溶液組成〕
０．２Ｍ  リンゴ酸（ｐＨ３．７／４．１／４．５）
２．０ｍｇ／ｄＬ  エチルオレンジ（東京化成工業社製）
【００９８】
【表１１】
0005542888.tif 000012
【００９９】
図７及び上記表１１に示す通り、エチルオレンジの吸光度は、蛋白質濃度に影響されず、ｐＨに応じて吸光度が変化した。また、近似直線が、y=0.20x-0.15 あることから、pH=(吸光度+0.15)/0.20 の計算式で吸光度からｐＨを求めることが可能であることが示された。上記表１１の吸光度から、pH=(吸光度+0.15)/0.20 の計算式でｐＨを算出すると下記表１２のようになる。
【０１００】
【表１２】
0005542888.tif 000013
【０１０１】
［ｐＨ指示薬から算出されたｐＨを利用した評価：実施例３］
表８（実施例２及び比較例２）に示されたテトラブロモフェノールブルーの吸光度と、ｐＨ指示薬から算出されたｐＨ（上記表１２）とに基づいた下記の評価用データに従って、表８に示された混合試料液の蛋白質濃度につき、陽性か陰性かを評価した。なお、実施例２及び比較例２と同様に、前記評価が陽性とは、蛋白質濃度が１０ｍｇ／ｄＬ以上であることと設定し、前記評価が陰性とは、蛋白質濃度が１０ｍｇ／ｄＬ未満であることを設定した。その結果を下記表１３に示す。
【０１０２】
評価用データ：
ｐＨ３．６以下は要注意（酸性）と定義。
ｐＨ３．７では、０．５３未満で陰性、０．５３以上で陽性と定義。
ｐＨ３．８、３．９では、０．５４未満で陰性、０．５４以上で陽性と定義。
ｐＨ４．０、４．１では、０．５５未満で陰性、０．５５以上で陽性と定義。
ｐＨ４．２では、０．５６未満で陰性、０．５６以上で陽性と定義。
ｐＨ４．３では、０．５７未満で陰性、０．５７以上で陽性と定義。
ｐＨ４．４では、０．５８未満で陰性、０．５８以上で陽性と定義。
ｐＨ４．５では、０．５９未満で陰性、０．５９以上で陽性と定義。
ｐＨ４．６以上は要注意（アルカリ）と定義。
【０１０３】
【表１３】
0005542888.tif 000014
【０１０４】
上記表１３に示すとおり、ｐＨ指示薬から算出したｐＨ値を用いて評価することで、比較例２で発生した偽陽性を排除できた。また、評価対象試料のｐＨを測定することとなるから、極端な酸性又はアルカリ性に変化した試料を容易に検知することができた。
【産業上の利用可能性】
【０１０５】
本開示は、例えば、医療及び臨床検査等の分野において有用である。
【符号の説明】
【０１０６】
１    基板
２    試薬層
３    試薬層
４    試薬層
１０    分析用具
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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