(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式：
【化１】
0005575110.tif 000044
（式中、
Ｒ３Ａはシアノ、アルキル、アルケニル、アミノ（アミノ基の水素原子の１つ以上がアルキル、アミノアルキル、アルキルオキシカルボニルアミノアルキル、フェニルアルキルオキシアルキル、又はヒドロキシアルキルで置換されていてもよい）、テトラゾリル、ヒドロキシ（ヒドロキシ基の水素原子がフェニルアルキル、又はアルキルオキシアルキルで置換されていてもよい）、ヒドロキシアルキル（ヒドロキシ基の水素原子がフェニルアルキル、アルキル、アルキルオキシアルキル、又はアミノアルキルで置換されていてもよい）、炭素環又はヘテロ環アルキル（炭素環はフェニルであり、ヘテロ環はイミダゾリル、テトラゾリル、フェニルアルキルテトラゾリル、モルホリノ、又はジ（アルキルオキシカルボニル）トリアゾリルである）、アジドアルキル、アミノスルホニルアルキル、アミノアルキル（アミノ基の水素原子の１つ以上がアルキル、フェニルアルキルオキシカルボニル、イミダゾリルアルキルカルボニル、アミノカルボニル、アルキルカルボニル、アミノスルホニル、アルキルオキシカルボニル、ピラゾリルカルボニル、モルホリニルカルボニル、ジヒドロキシアルキルカルボニル、アルキルオキシカルボニルアミノシクロアルキルカルボニル、アミノアルキルカルボニル、アミノスルホニル、アミノシクロアルキルカルボニル、イミダゾリル（アミノ）アルキルカルボニル、ヒドロキシ（アミノ）アルキルカルボニル、アミノ（アミノ）アルキルカルボニル、ピラゾリルカルボニル、アルキルオキシアルキルオキシアルキルカルボニル、アルキルオキシアルキルカルボニル、イミダゾリジンジオンアルキルカルボニル、ピロリジニルカルボニル、又はピロリジノニルカルボニルで置換されていてもよい）であり、ここで、アミノ基の水素原子の１つ以上がアルキルで置換されていてもよい、
各Ｒ４Ａは独立して、水素、又はアルキルであり、あるいはＮ（Ｒ４Ａ）２でピロリジンまたはピペリジンを形成する）の化合物、又はその薬学的に許容される塩。
【請求項２】
Ｒ３Ａがアミノメチル、ジメチルアミノメチル、又はジメチルアミノエチルである、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
少なくとも１つのＲ４Ａがメチルである、請求項１又は２に記載の化合物。
【請求項４】
３−（４−（アミノメチル）−１−（５−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）ピペリジン−４−カルボキサミド）フェニルジメチルカルバメート、又はその薬学的に許容される塩。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
１．発明の分野
本発明は、キナーゼ阻害剤、それらを含む組成物、並びに様々な疾患及び障害を治療するためのそれらの使用の方法に関する。
【０００２】
本願は、２００８年４月２１日付けで出願された米国仮特許出願第６１／０４６，６０２号明細書に対する優先権を主張し、該出願の内容の全てが参照により本明細書中に援用される。
【背景技術】
【０００３】
２．背景
タンパク質キナーゼは、ＡＴＰから受容タンパク質へのγ−リン酸基の移動を触媒する酵素群である。ヒトゲノムは、５００種類を超える様々なタンパク質キナーゼをコードすると推測されており、それらのキナーゼのうち多くが癌及び炎症を含む広範な疾患及び障害に関与している。
【０００４】
ＬＩＭキナーゼ（ＬＩＭＫ）は、ｐ５３経路と結び付いている。例えば、特許文献１を参照されたい。ＬＩＭＫは、２つのＮ末端ＬＩＭモチーフと１つのＣ末端タンパク質キナーゼドメインとの特有の組合せを有する小さなサブファミリーのキナーゼに属する。これらのＬＩＭモチーフ及びキナーゼドメインは、幾つかの推定カゼインキナーゼ認識部位及びｍａｐキナーゼ認識部位を含有する高プロリン領域及び高セリン領域により連結されている。ＬＩＭキナーゼ及びそれらの経路タンパク質は、アクチン細胞骨格のＲｈｏ誘導性の再組織化に寄与すると考えられている（同上）。ＬＩＭキナーゼファミリー成員には、ＬＩＭキナーゼ１（ＬＩＭＫ１）及びＬＩＭキナーゼ２（ＬＩＭＫ２）が含まれる。両方がコフィリンをリン酸化し、Ｒｈｏファミリー依存性のアクチン細胞骨格の再構成（rearrangement）を調節する（同上）。
【０００５】
ＬＩＭキナーゼ阻害剤が癌の治療に提唱されている（同上）。ＬＩＭＫ阻害剤が、柱細胞（trabecular cells）におけるアクチン脱重合を促進すること及び眼圧を低下させることによって、緑内障を治療するのに有用であり得ることも示唆されている。特許文献２を参照されたい。現在の緑内障療法は、様々なメカニズムにより効果を発揮する。プロスタグランジンＦ２ａ類似体（例えば、ラタノプロスト）は、眼からの流体流出の眼内圧（ＩＯＰ）非依存性増大をもたらす。炭酸脱水酵素（Carbonic anhydrous）阻害剤（例えば、アセタゾラミド）、β−ブロッカー（例えば、チモロール）、交感神経模倣薬（例えば、ピロカルピン）、及びαアドレナリン受容体アゴニスト（例えば、ブリモニジン）は、房水産生を減少させる。
【０００６】
多種多様のケモタイプを有する非常に多数の化合物がキナーゼ阻害剤として報告されている。例えば、ＬＩＭＫ阻害剤として有用であるという報告があるフェニル置換ピリミジン化合物が開示されている。特許文献３を参照されたい。ピロール［２，３−ｄ］ピリミジン系化合物が様々な異なるキナーゼの阻害剤として開示されている。例えば、特許文献４、特許文献５、特許文献６、特許文献７、特許文献８及び特許文献９を参照されたい。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】国際公開第０２／０９９０４８号パンフレット
【特許文献２】国際公開第０４／０４７８６８号パンフレット
【特許文献３】国際公開第２００６／０８４０１７号パンフレット
【特許文献４】米国特許出願公開第２００４／００５８９２２号明細書
【特許文献５】国際公開第２００７／１２５３２５号パンフレット
【特許文献６】国際公開第２００７／１２５３２１号パンフレット
【特許文献７】国際公開第２００６／０４６０２４号パンフレット
【特許文献８】米国特許出願公開第２００５／０１３０９５４号明細書
【特許文献９】米国特許出願公開第２００６／０１８９６３８号明細書
【発明の概要】
【０００８】
３．発明の概要
本発明は一部には、式：
【０００９】
【化１】
0005575110.tif 000002
【００１０】
の化合物、及びそれらの薬学的に許容される塩を対象とし、その置換基が本明細書で規定される。特定の化合物は、ＬＩＭＫ２の強力な阻害剤である。
【００１１】
本発明の一つの実施の形態は、本明細書で開示の化合物を含む医薬製剤（formations）を包含する。
【００１２】
別の実施の形態は、癌、炎症性の疾患及び障害、並びに緑内障、神経変性及び感染症等の視力に影響を及ぼす疾患及び障害（例えば、眼の疾患及び障害）を含む、ＬＩＭＫ２によって影響される様々な疾患及び障害の治療、管理及び予防のために本明細書に開示の化合物を使用する方法を包含する。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
４．図面の簡単な説明
【図１】以下の実施例に記載の高眼圧症アッセイにおける２つの化合物の効果を示す図である。化合物Ａは、本発明の化合物であり、３μｇ／眼で投与した。他の化合物チモロールは、１５μｇ／眼で投与した。ビヒクル（vehicle）対照に関するデータは、種々のビヒクルを使用する８回の実験の平均値である。化合物Ａに関するデータは、種々のビヒクルを使用する８回の実験の平均値である。チモロールに関するデータは、市販の製剤を使用して得られた２回の実験の平均値である。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
５．詳細な説明
本発明は一部には、ＬＩＭキナーゼ２（ＬＩＭＫ２）の阻害剤である新規化合物の発見に基づいている。ＬＩＭＫ２阻害剤は、緑内障等の様々な眼の疾患及び障害を治療、管理及び／又は予防するのに使用することができる。例えば、２００８年８月８日付けで出願された米国特許出願第１２／１８８，５１５号明細書を参照されたい。本発明の好ましい化合物は、溶液中で安定であり、したがって点眼薬等の液体剤形中に組み込むことができる。加えて、特定の化合物は水溶性である。
【００１５】
５．１．定義
特に明示のない限り、「アルケニル」という用語は、２〜２０（例えば、２〜１０又は２〜６）個の炭素原子を有し、少なくとも１つの炭素−炭素二重結合を含む直鎖、分岐鎖及び／又は環式の炭化水素を意味する。代表的なアルケニル部分としては、ビニル、アリル、１−ブテニル、２−ブテニル、イソブチレニル、１−ペンテニル、２−ペンテニル、３−メチル−１−ブテニル、２−メチル−２−ブテニル、２，３−ジメチル−２−ブテニル、１−ヘキセニル、２−ヘキセニル、３−ヘキセニル、１−ヘプテニル、２−ヘプテニル、３−ヘプテニル、１−オクテニル、２−オクテニル、３−オクテニル、１−ノネニル、２−ノネニル、３−ノネニル、１−デセニル、２−デセニル及び３−デセニルが挙げられる。
【００１６】
特に明示のない限り、「アルコキシ」という用語は、−Ｏ−アルキル基を意味する。アルコキシ基の例としては、−ＯＣＨ３、−ＯＣＨ２ＣＨ３、−Ｏ（ＣＨ２）２ＣＨ３、−Ｏ（ＣＨ２）３ＣＨ３、−Ｏ（ＣＨ２）４ＣＨ３及び−Ｏ（ＣＨ２）５ＣＨ３が挙げられるが、これらに限定されない。
【００１７】
特に明示のない限り、「アルキル」という用語は、１〜２０（例えば、１〜１０又は１〜４）個の炭素原子を有する直鎖、分岐鎖及び／又は環式（「シクロアルキル」）の炭化水素を意味する。１個〜４個の炭素を有するアルキル部分は「低級アルキル」と称される。アルキル基の例としては、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｔ−ブチル、イソブチル、ペンチル、ヘキシル、イソヘキシル、ヘプチル、４，４−ジメチルペンチル、オクチル、２，２，４−トリメチルペンチル、ノニル、デシル、ウンデシル及びドデシルが挙げられるが、これらに限定されない。シクロアルキル部分は単環式又は多環式であってもよく、例としてはシクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル及びアダマンチルが挙げられる。アルキル部分のさらなる例は直鎖部分、分岐鎖部分及び／又は環式部分（例えば、１−エチル−４−メチル−シクロヘキシル）を有する。「アルキル」という用語は飽和炭化水素、並びにアルケニル部分及びアルキニル部分を含む。
【００１８】
特に明示のない限り、「アルキルアリール」又は「アルキル−アリール」という用語は、アリール部分と結合したアルキル部分を意味する。
【００１９】
特に明示のない限り、「アルキルヘテロアリール」又は「アルキル−ヘテロアリール」という用語は、ヘテロアリール部分と結合したアルキル部分を意味する。
【００２０】
特に明示のない限り、「アルキル複素環」又は「アルキル−複素環」という用語は、複素環部分と結合したアルキル部分を意味する。
【００２１】
特に明示のない限り、「アルキニル」という用語は、２〜２０（例えば、２〜２０又は２〜６）個の炭素原子を有し、少なくとも１つの炭素−炭素三重結合を含む直鎖、分岐鎖又は環式の炭化水素を意味する。代表的なアルキニル部分としては、アセチレニル、プロピニル、１−ブチニル、２−ブチニル、１−ペンチニル、２−ペンチニル、３−メチル−１−ブチニル、４−ペンチニル、１−ヘキシニル、２−ヘキシニル、５−ヘキシニル、１−ヘプチニル、２−ヘプチニル、６−ヘプチニル、１−オクチニル、２−オクチニル、７−オクチニル、１−ノニニル、２−ノニニル、８−ノニニル、１−デシニル、２−デシニル及び９−デシニルが挙げられる。
【００２２】
特に明示のない限り、「アリール」という用語は、芳香環、又は炭素原子及び水素原子で構成される芳香族の、若しくは部分的に芳香族の環系を意味する。アリール部分は共に結合又は縮合した複数の環を含んでいてもよい。アリール部分の例としては、アントラセニル、アズレニル、ビフェニル、フルオレニル、インダン、インデニル、ナフチル、フェナントレニル、フェニル、１，２，３，４−テトラヒドロ−ナフタレン及びトリルが挙げられるがこれらに限定されない。
【００２３】
特に明示のない限り、「アリールアルキル」又は「アリール−アルキル」という用語は、アルキル部分と結合したアリール部分を意味する。
【００２４】
特に明示のない限り、「ハロゲン」及び「ハロ」という用語は、フッ素、塩素、臭素及びヨウ素を包含する。
【００２５】
特に明示のない限り、「ヘテロアルキル」という用語は、炭素原子の少なくとも１つがヘテロ原子（例えば、Ｎ、Ｏ又はＳ）で置換されたアルキル部分（例えば、直鎖、分岐鎖又は環式）を表す。
【００２６】
特に明示のない限り、「ヘテロアルキルアリール」又は「ヘテロアルキル−アリール」という用語は、アルキル部分と結合したヘテロアルキル部分を表す。
【００２７】
特に明示のない限り、「ヘテロアルキル複素環」又は「ヘテロアルキル−複素環」という用語は、複素環部分と結合したヘテロアルキル部分を表す。
【００２８】
特に明示のない限り、「ヘテロアリール」という用語は、炭素原子の少なくとも１つがヘテロ原子（例えば、Ｎ、Ｏ又はＳ）で置換されたアリール部分を意味する。例としては、アクリジニル、ベンゾイミダゾリル、ベンゾフラニル、ベンゾイソチアゾリル、ベンゾイソオキサゾリル、ベンゾキナゾリニル、ベンゾチアゾリル、ベンズオキサゾリル、フリル、イミダゾリル、インドリル、イソチアゾリル、イソオキサゾリル、オキサジアゾリル、オキサゾリル、フタラジニル、ピラジニル、ピラゾリル、ピリダジニル、ピリジル、ピリミジニル、ピリミジル、ピロリル、キナゾリニル、キノリニル、テトラゾリル、チアゾリル及びトリアジニルが挙げられるが、これらに限定されない。
【００２９】
特に明示のない限り、「ヘテロアリールアルキル」又は「ヘテロアリール−アルキル」という用語は、アルキル部分と結合したヘテロアリール部分を意味する。
【００３０】
特に明示のない限り、「複素環」という用語は、炭素、水素及び少なくとも１つのヘテロ原子（例えば、Ｎ、Ｏ又はＳ）で構成される芳香族の、部分的に芳香族の、又は非芳香族の単環式又は多環式の環又は環系を表す。複素環には、共に縮合又は結合した複数（すなわち２つ以上）の環を含んでもよい。複素環はヘテロアリールを含む。例としては、ベンゾ［１，３］ジオキソリル、２，３−ジヒドロ−ベンゾ［１，４］ジオキシニル、シンノリニル、フラニル、ヒダントイニル、モルホリニル、オキセタニル、オキシラニル、ピペラジニル、ピペリジニル、ピロリジノニル、ピロリジニル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロピラニル、テトラヒドロピリジニル、テトラヒドロピリミジニル、テトラヒドロチオフェニル、テトラヒドロチオピラニル及びバレロラクタミルが挙げられるがこれらに限定されない。
【００３１】
特に明示のない限り、「複素環アルキル」又は「複素環−アルキル」という用語は、アルキル部分と結合した複素環部分を表す。
【００３２】
特に明示のない限り、「ヘテロシクロアルキル」という用語は、非芳香族の複素環を表す。
【００３３】
特に明示のない限り、「ヘテロシクロアルキルアルキル」又は「ヘテロシクロアルキル−アルキル」という用語は、アルキル部分と結合したヘテロシクロアルキル部分を表す。
【００３４】
特に明示のない限り、「ＬＩＭＫ２  ＩＣ５０」という用語は、以下の実施例に記載のｉｎ  ｖｉｔｒｏヒトＬＩＭキナーゼ２阻害アッセイを使用して確定した化合物のＩＣ５０である。
【００３５】
特に明示のない限り、「管理する（manage）」、「管理すること（managing）」及び「管理（management）」という用語は、特定の疾患若しくは障害に既に罹患した患者において疾患若しくは障害の再発を予防すること、及び／又は疾患若しくは障害に罹患している患者が寛解期にある時間を延長させることを包含する。この用語は、疾患若しくは障害の閾値、発症及び／若しくは継続期間を調節すること、又は患者の疾患若しくは障害に対する応答の仕方を変えることを包含する。
【００３６】
特に明示のない限り、「薬学的に許容される塩」という用語は、薬学的に許容される非毒性の酸又は塩基（無機酸及び無機塩基並びに有機酸及び有機塩基を含む）から調製される塩を表す。好適な薬学的に許容される塩基付加塩としては、アルミニウム、カルシウム、リチウム、マグネシウム、カリウム、ナトリウム及び亜鉛から生成される金属塩、又はリジン、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン、クロロプロカイン、コリン、ジエタノールアミン、エチレンジアミン、メグルミン（Ｎ−メチルグルカミン）及びプロカインから生成される有機塩が挙げられるが、これらに限定されない。好適な非毒性の酸としては、酢酸、アルギン酸、アントラニル酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、カンファースルホン酸、クエン酸、エテンスルホン酸、ギ酸、フマル酸、フロ酸、ガラクツロン酸、グルコン酸、グルクロン酸、グルタミン酸、グリコール酸、臭化水素酸、塩酸、イセチオン酸、乳酸、マレイン酸、リンゴ酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、ムチン酸、硝酸、パモン酸、パントテン酸、フェニル酢酸、リン酸、プロピオン酸、サリチル酸、ステアリン酸、コハク酸、スルファニル酸、硫酸、酒石酸及びｐ−トルエンスルホン酸等の無機酸及び有機酸が挙げられるが、これらに限定されない。具体的な非毒性酸としては、塩酸、臭化水素酸、リン酸、硫酸、及びメタンスルホン酸が挙げられる。したがって、具体的な塩の例としては、塩酸塩及びメシル酸塩が挙げられる。他のものも当該技術分野において既知である。例えば、Remington's Pharmaceutical Sciences（第１８版、Mack Publishing, Easton PA: 1990）、及びRemington: The Science and Practice of Pharmacy（第１９版、Mack Publishing, Easton PA: 1995）を参照されたい。
【００３７】
特に明示のない限り、「強力なＬＩＭＫ２阻害剤」は、ＬＩＭＫ２  ＩＣ５０が約２５０ｎＭ未満である化合物である。
【００３８】
特に明示のない限り、「予防する（prevent）」、「予防すること（preventing）」及び「予防（prevention）」という用語は、患者が特定の疾患又は障害に罹患し始める前に行う処置を意図するものであり、疾患又は障害の重症度を抑制又は低減する。換言すると、この用語は予防法を包含する。
【００３９】
特に明示のない限り、化合物の「予防的有効量」は、疾患若しくは病態、若しくは疾患若しくは病態に関連する１つ若しくは複数の症状を予防するのに、又はその再発を予防するのに十分な量である。化合物の「予防的有効量」は、単独で又は他の薬剤と組み合わせて、疾患の予防において予防的利点をもたらす治療剤の量を意味する。「予防的有効量」という用語は、予防法を全体的に改善する、又は別の予防剤の予防的な有効性を高める量を包含し得る。
【００４０】
特に明示のない限り、「立体異性体混合物」という用語は、ラセミ混合物、及び立体異性体的に濃縮した混合物を包含する（例えば、Ｒ／Ｓ＝３０／７０、３５／６５、４０／６０、４５／５５、５５／４５、６０／４０、６５／３５及び７０／３０）。
【００４１】
特に明示のない限り、「立体異性体的に純粋な」という用語は、或る化合物の１つの立体異性体を含み、その化合物の他の立体異性体を実質的に含まない組成物を意味する。例えば、１つの立体中心を有する或る化合物の立体異性体的に純粋な組成物は、その化合物の反対の立体異性体を実質的に含まない。２つの立体中心を有する或る化合物の立体異性体的に純粋な組成物は、その化合物の他のジアステレオマーを実質的に含まない。典型的な立体異性体的に純粋な化合物は、約８０重量％を超える化合物の１つの立体異性体及び約２０重量％未満の化合物の他の立体異性体、約９０重量％を超える化合物の１つの立体異性体及び約１０重量％未満の化合物の他の立体異性体、約９５重量％を超える化合物の１つの立体異性体及び約５重量％未満の化合物の他の立体異性体、約９７重量％を超える化合物の１つの立体異性体及び約３重量％未満の化合物の他の立体異性体、又は約９９重量％を超える化合物の１つの立体異性体及び約１重量％未満の化合物の他の立体異性体を含む。
【００４２】
特に明示のない限り、「置換された」という用語は、化学構造又は部分を説明するために使用する場合は、その構造又は部分の誘導体であって、水素原子の１つ又は複数が、アルコール、アルデヒド、アルコキシ、アルカノイルオキシ、アルコキシカルボニル、アルケニル、アルキル（例えば、メチル、エチル、プロピル、ｔ−ブチル）、アルキニル、アルキルカルボニルオキシ（−ＯＣ（Ｏ）アルキル）、アミド（例えば、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−アルキル−、−アルキルＮＨＣ（Ｏ）アルキル）、アミジニル（例えば、−Ｃ（ＮＨ）ＮＨ−アルキル−、−Ｃ（ＮＲ）ＮＨ２）、アミン（アルキルアミノ、アリールアミノ、アリールアルキルアミノ等の第１級、第２級及び第３級のアミン）、アロイル、アリール、アリールオキシ、アゾ、カルバモイル（例えば、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｏ−アルキル−、−ＯＣ（Ｏ）ＮＨ−アルキル）、カルバミル（例えば、ＣＯＮＨ２、ＣＯＮＨ−アルキル、ＣＯＮＨ−アリール、ＣＯＮＨ−アリールアルキル）、カルボニル、カルボキシル、カルボン酸、カルボン酸無水物、カルボン酸塩化物、シアノ、エステル、エポキシド、エーテル（例えば、メトキシ、エトキシ）、グアニジノ、ハロ、ハロアルキル（例えば、−ＣＣｌ３、−ＣＦ３、−Ｃ（ＣＦ３）３）、ヘテロアルキル、ヘミアセタール、イミン（第１級及び第２級）、イソシアネート、イソチオシアネート、ケトン、ニトリル、ニトロ、オキソ、ホスホジエステル、スルフィド、スルホンアミド（例えば、ＳＯ２ＮＨ２）、スルホン、スルホニル（アルキルスルホニル、アリールスルホニル及びアリールアルキルスルホニルを含む）、スルホキシド、チオール（例えば、スルフヒドリル、チオエーテル）並びに尿素（例えば、−ＮＨＣＯＮＨ−アルキル−）（これらに限定されない）等の化学的部分又は官能基で置換された、誘導体を表す。
【００４３】
特に明示のない限り、化合物の「治療的有効量」は、疾患若しくは病態の治療若しくは管理において治療的利点をもたらすのに、又は疾患若しくは病態に関連した１つ若しくは複数の症状を遅延化若しくは最小化するのに十分な量である。化合物の「治療的有効量」は、疾患又は病態の治療又は管理に治療的利点をもたらす、単独の又は他の療法と組み合わせた治療剤の量を意味する。「治療的有効量」という用語は、療法全体を改善させるか、疾患若しくは病態の症状若しくは原因を低減若しくは回避するか、又は別の治療剤の治療的有効性を高める量を包含し得る。
【００４４】
特に明示のない限り、「治療する（treat）」、「治療すること（treating）」及び「治療（treatment）」という用語は、患者が特定の疾患又は障害に罹患している間に行う処置を意図し、これによって疾患若しくは障害の重症度が低減するか、又は疾患若しくは障害の進行が遅延若しくは減速する。
【００４５】
特に明示のない限り、「挙げられる（include）」という用語は、「挙げられるが、これらに限定されない」と同じ意味を有し、「挙げられる（includes）」という用語は、「挙げられるが、これらに限定されない」と同じ意味を有する。同様に、「等（such as）」という用語は、「等（限定されない）」と同じ意味を有する。
【００４６】
特に明示のない限り、一連の名詞の直前にくる１つ又は複数の形容詞は、それぞれの名詞を修飾するものとして解釈される。例えば、「必要に応じて置換されたアルキル（alky）、アリール又はヘテロアリール」という語句は、「必要に応じて置換されたアルキル、必要に応じて置換されたアリール、又は必要に応じて置換されたヘテロアリール」と同じ意味を有する。
【００４７】
より大きい化合物の一部分を形成する化学的部分は、単一分子として存在する場合に一般的に指す名称、又はその基を一般的に指す名称を使用して本明細書に記載されることがあることに留意すべきである。例えば、「ピリジン」及び「ピリジル」という用語は、他の化学的部分と結合した部分を記載するのに使用する場合に、同じ意味を表す。したがって、「ＸＯＨ（式中、Ｘはピリジルである）」及び「ＸＯＨ（式中、Ｘはピリジンである）」という２つの語句は同じ意味を表し、化合物ピリジン−２−オール、ピリジン−３−オール及びピリジン−４−オールを包含する。
【００４８】
或る構造の立体化学、又は或る構造の一部分が例えば太線又は破線で示されない場合、その構造又はその構造の一部分はその全ての立体異性体を包含すると解釈されることにも留意すべきである。さらに、満足されない原子価を有することが図で示された任意の原子はこの原子価を満足させるのに十分な水素原子と結合していると推測される。さらに、一本の破線と平行した一本の実線で示された化学結合は、原子価が許容する場合、単結合及び二重（例えば、芳香族）結合の両方を包含する。
【００４９】
５．２．化合物
本発明は、式：
【００５０】
【化２】
0005575110.tif 000003
【００５１】
（式中、Ａは必要に応じて置換されたアリール又は複素環であり、Ｒ１は水素、ハロゲン、シアノ、又は必要に応じて置換されたアルキル、ヘテロアルキル、アリール若しくは複素環であり、Ｒ２は水素、ハロゲン、シアノ、又は必要に応じて置換されたアルキル、ヘテロアルキル、アリール若しくは複素環であり、Ｒ３はＲ３Ａ、ＯＲ３Ｂ、Ｎ（Ｒ３Ｂ）２、ＮＣ（Ｏ）Ｒ３Ｂ、ＮＣ（Ｏ）ＯＲ３Ｂ、ＮＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ３Ｂ）２、ＳＲ３Ｂ、ＳＯＲ３Ｂ又はＳＯ２Ｒ３Ｂであり、各Ｒ３Ａはシアノ、Ｃ（Ｏ）Ｒ３Ｃ、ＣＯ２Ｒ３Ｃ、ＣＯＮ（Ｒ３Ｃ）２、又は必要に応じて置換されたアルキル、アルキルアリール、アルキル複素環、アリール、ヘテロアルキル、ヘテロアルキルアリール、ヘテロアルキル複素環若しくは複素環であり、各Ｒ３Ｂは独立して、水素、Ｃ（Ｏ）Ｒ３Ｃ、ＣＯ２Ｒ３Ｃ、ＣＯＮ（Ｒ３Ｃ）２、又は必要に応じて置換されたアルキル、ヘテロアルキル、アリール若しくは複素環であり、各Ｒ３Ｃは独立して、必要に応じて置換されたアルキル、アリール又は複素環であり、各Ｒ４は独立して、水素、ハロゲン、ＯＲ４Ｂ、ＯＣ（Ｏ）Ｒ４Ｂ、ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ４Ｂ）２、Ｎ（Ｒ４Ｂ）２、ＮＣ（Ｏ）Ｒ４Ａ、ＮＣ（Ｏ）ＯＲ４Ａ、ＮＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ４Ａ）、ＳＲ４Ｂ、ＳＯＲ４Ｂ若しくはＳＯ２Ｒ４Ｂ、又は必要に応じて置換されたアルキル、ヘテロアルキル、アリール若しくは複素環であり、各Ｒ４Ｂは独立して、水素、又は必要に応じて置換されたアルキル、ヘテロアルキル、アリール若しくは複素環であり、ｎは０〜３である）の化合物、及びそれらの薬学的に許容される塩を包含する。
【００５２】
特定の一実施形態では、化合物は、１）各Ｒ４Ａが独立して、水素、又は必要に応じて置換されたアルキル若しくはヘテロアルキルであり、２）Ｒ１及びＲ２が両方とも水素でありＡがフェニルである場合Ｒ４はハロゲンではないようなものである。
【００５３】
一実施形態では、Ａは必要に応じて置換されたフェニルである。別の実施形態では、Ａは必要に応じて置換された複素環である。
【００５４】
一実施形態では、Ｒ１は水素、ハロゲン、シアノ、又は必要に応じて置換された低級アルキルである。特定の一実施形態では、Ｒ１は水素である。別の実施形態では、Ｒ１はハロゲン（例えば、クロロ）である。別の実施形態では、Ｒ１は必要に応じて置換された低級アルキル（例えば、メチル）である。
【００５５】
一実施形態では、Ｒ２は水素、ハロゲン、シアノ、又は必要に応じて置換された低級アルキルである。特定の一実施形態では、Ｒ２は水素である。別の実施形態では、Ｒ２はハロゲン（例えば、クロロ）である。別の実施形態では、Ｒ２は必要に応じて置換された低級アルキル（例えば、メチル）である。
【００５６】
一実施形態では、Ｒ３はＲ３Ａ、ＯＲ３Ｂ又はＮ（Ｒ３Ｂ）２である。特定の一実施形態では、Ｒ３はＲ３Ａであり、Ｒ３Ａは必要に応じて置換されたアルキル、アルキル複素環、ヘテロアルキル又は複素環である。特定の一実施形態では、Ｒ３Ａは必要に応じて置換されたアルキルである。別の実施形態では、Ｒ３Ａは必要に応じて置換されたアルキル複素環である。別の実施形態では、Ｒ３Ａは必要に応じて置換されたヘテロアルキルである。別の実施形態では、Ｒ３Ａは必要に応じて置換された複素環である。特定の一実施形態では、Ｒ３はＯＲ３Ｂ又はＮ（Ｒ３Ｂ）２であり、Ｒ３Ｂは水素、又は必要に応じて置換されたアルキル若しくはアリールである。特定の一実施形態では、Ｒ３Ｂは水素である。別の実施形態では、Ｒ３Ｂは必要に応じて置換されたアルキルである。別の実施形態では、Ｒ３Ｂは必要に応じて置換されたアリールである。
【００５７】
一実施形態では、Ｒ４はハロゲンである。別の実施形態では、Ｒ４はＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ４Ａ）２であり、少なくとも１つのＲ４Ａが例えば、低級アルキル（例えば、メチル）である。
【００５８】
本発明の特定の化合物は、強力なＬＩＭＫ２阻害剤である。或る特定の化合物は、約１００ｎＭ未満、７５ｎＭ未満、５０ｎＭ未満、２５ｎＭ未満又は１０ｎＭ未満のＬＩＭＫ２  ＩＣ５０を有する。
【００５９】
５．３．合成方法
本発明の化合物は、当該技術分野で既知の方法により調製することができる。例えば、特許文献４及び特許文献８を参照されたい。
【００６０】
ピロロピリミジンは、当該技術分野で既知の様々な方法によって調製することができる。例えば、West, J. Org. Chem. 26:4959（1961）、Aono et al.、欧州特許第０７３３６３３号明細書を参照されたい。１つのアプローチは、２００７年１０月２２日付けで出願された米国特許出願第１１／８７６，０５１号明細書に記載されており、以下のスキーム１で示される：
【００６１】
【化３】
0005575110.tif 000004
【００６２】
次に、得られる４−ヒドロキシピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン化合物を、当該技術分野で既知の方法を使用して、対応する４−クロロ化合物（以下のスキーム２における化合物ｆ）に変換する。例えば、West, J. Org. Chem. 26:4959（1961）を参照されたい。次に、この化合物を使用して、以下のスキーム２に示されるように、本発明の化合物を調製する：
【００６３】
【化４】
0005575110.tif 000005
【００６４】
スキーム２に表した方法では、市販の１−ｔｅｒｔ−ブチル４−エチルピペリジン−１，４−ジカルボキシレート（ａ）を好適な塩基（例えば、リチウムジイソプロピルアミド）及びアルキル化剤（例えば、臭化アルキル又は塩化アルキル）によりアルキル化し、化合物ｂを得る。式ｂの他の化合物は市販されている。水溶液中でのＬｉＯＨ又はＮａＯＨ等の塩基による化合物ｂのけん化によりカルボン酸ｃが得られ、これを好適な試薬を使用して式ＮＨ２Ａのアミンと（例えばＨＡＴＵを使用して、酢酸イソプロピル中でジイソプロピルエチルアミンと）カップリングしてアミドｄを得ることができる。化合物ｄを好適な酸（例えば、ＨＣｌのＭｅＯＨ溶液、又はＴＦＡのＣＨ２Ｃｌ２溶液）で処理することにより、Ｂｏｃ基が除去されてアミンｅが得られる。好適な溶媒（例えば、イソプロパノール、イソブタノール）中で好適な塩基（例えば、ジイソプロピルエチルアミン）と共にアミンｅ及び塩化物ｆを加熱することにより、化合物ｈが得られる。必要に応じて、既知の方法を使用して、この化合物を、本発明に包含される様々な他のものに転換することができる。
【００６５】
５．４．使用方法
本発明は、ＬＩＭＫ２を阻害する方法であって、ＬＩＭＫ２を強力なＬＩＭＫ２阻害剤と接触させることを含む、方法を包含する。好ましい強力なＬＩＭＫ２阻害剤は本発明の化合物（すなわち本明細書で開示の化合物）である。
【００６６】
特定の実施形態は、患者において炎症性の疾患又は障害を治療、管理又は予防する方法であって、治療的有効量又は予防的有効量の本発明の化合物をそれを必要とする患者に投与することを含む、方法を包含する。
【００６７】
別の実施形態は、患者において癌を治療、管理又は予防する方法であって、治療的有効量又は予防的有効量の本発明の化合物をそれを必要とする患者に投与することを含む、方法を包含する。
【００６８】
別の実施形態は、患者において眼内圧を低下させる方法であって、それを必要とする患者においてＬＩＭＫ２の活性又は発現を阻害することを含む、方法を包含する。一方法では、ＬＩＭＫ２の活性は、患者の眼を強力なＬＩＭＫ２阻害剤と接触させることによって阻害される。特定の強力なＬＩＭＫ２阻害剤が、本明細書で開示される。別の方法では、ＬＩＭＫ２の発現は、ＬＩＭＫ２の発現を阻害する化合物（例えば、ｓｉＲＮＡ）を患者の眼に投与することによって阻害される。
【００６９】
別の実施形態は、患者において視力に影響を及ぼす疾患又は障害を治療、管理又は予防する方法であって、それを必要とする患者においてＬＩＭＫ２の活性又は発現を阻害することを含む、方法を包含する。一方法では、ＬＩＭＫ２の活性は、患者の眼を強力なＬＩＭＫ２阻害剤と接触させることによって阻害される。特定の強力なＬＩＭＫ２阻害剤が、本明細書で開示される。視力に影響を及ぼす疾患及び障害としては、緑内障、神経変性疾患、及び感染性疾患が挙げられる。
【００７０】
５．５．医薬製剤
本発明は、１つ又は複数の本発明の化合物を含む医薬組成物を包含する。或る特定の医薬組成物は、患者への経口投与、粘膜投与（例えば、鼻、舌下、膣、頬側又は直腸）、非経口投与（例えば、皮下、静脈内、ボーラス注入、筋肉内又は動脈内）、経皮投与、局所投与及び眼（例えば、局所、硝子体内）への投与に好適な単一の単位剤形である。
【００７１】
剤形の例としては、限定されるものではないが、錠剤；キャプレット；軟弾性ゼラチンカプセル等のカプセル剤；カシェ（cachets）；トローチ剤；ロゼンジ；分散液；坐剤；軟膏剤；パップ（湿布）剤；ペースト；散剤；包帯剤；クリーム剤；硬膏剤；液剤；パッチ剤；エアロゾル剤（例えば、経鼻スプレー又は吸入器）；ゲル剤；懸濁液（例えば、水性又は非水性の液体懸濁液、水中油型エマルジョン、又は油中水型液体エマルジョン）、溶液及びエリキシル剤を含む患者への経口投与又は粘膜投与に好適な液体剤形；患者への非経口投与に好適な液体剤形；並びに再構成して患者への非経口投与に好適な液体剤形をもたらすことができる無菌固体（例えば、結晶性又は非結晶性の固体）が挙げられる。
【００７２】
製剤は、投与方式に合わせる必要がある。例えば、経口投与は、本発明の化合物を消化管内での分解から保護するために腸溶性コーティングを必要とする。同様に、製剤は作用部位への活性成分（複数可）の送達を容易にする成分を含有し得る。例えば、化合物は、分解酵素から保護し、循環系における輸送を容易にし、細胞膜を通って細胞内部位へ至る送達を行うために、リポソーム製剤で投与され得る。
【００７３】
剤形の組成、形状及び種類は、その用途に応じて異なる。例えば、疾患の急性期治療に使用する剤形は、１つ又は複数の活性成分を、同じ疾患の慢性期治療に使用する剤形よりも多量に含有していてもよい。同様に、非経口剤形は、１つ又は複数の活性成分を、同じ疾患を治療するために使用する経口剤形よりも少量含有していてもよい。本発明により包含される特定の剤形が互いに変化するこれら及び他の方法は、当業者には容易に明らかである。例えばRemington's Pharmaceutical Sciences、第１８版（Mack Publishing, Easton PA: 1990）を参照されたい。
【００７４】
５．５．１．経口剤形
経口投与に好適な本発明の医薬組成物は、錠剤（例えば、チュアブル錠）、キャプレット、カプセル剤及び液剤（例えば、香味付与したシロップ）（これらに限定されない）等の個別の剤形として提供することができる。このような剤形は所定量の活性成分を含有し、当業者に既知の製薬法によって調製することができる。例えば、Remington's Pharmaceutical Sciences、第１８版、（Mack Publishing, Easton PA: 1990）を参照されたい。
【００７５】
典型的な経口剤形は、従来の薬学的配合技法に従い、密接な混和物中で活性成分（複数可）を少なくとも１つの賦形剤と組み合わせることによって調製する。賦形剤は、投与に望ましい調製物の形態に応じて広範な形態を取ることができる。
【００７６】
投与のしやすさのため、錠剤及びカプセルが最も有益な経口単位剤形である。必要に応じて、錠剤は、標準的な水性又は非水性技法によってコーティングすることができる。このような剤形は、従来の製薬法により調製することができる。一般に、医薬組成物及び剤形は、活性成分を液体担体、微粉固体担体、又は両方と均一且つ密接に混和し、次に生成物を必要に応じて所望の形状に成形することによって調製する。崩壊剤は、固体剤形に組み込み、迅速な溶解を容易にする（facility）ことができる。また、滑沢剤を組み込んで、剤形（例えば、錠剤）の製造を容易にすることができる。
【００７７】
５．５．２．非経口剤形
非経口剤形は、皮下、静脈内（ボーラス注入を含む）、筋肉内及び動脈内を含むがこれらに限定されない様々な経路によって患者に投与することができる。典型的には汚染物質に対する患者の自然の防御を介さずに投与するため、非経口剤形は具体的には無菌であるか、又は患者に投与する前に滅菌可能である。非経口剤形の例としては、すぐに注入できる溶液、薬学的に許容される注入用のビヒクルにすぐに溶解又は懸濁できる乾燥生成物、すぐに注入できる懸濁液、及びエマルジョンが挙げられるが、これらに限定されない。
【００７８】
本発明の非経口剤形を提供するために使用することができる好適なビヒクルは、当業者に既知である。例としては、注射用水（ＵＳＰ）；塩化ナトリウム注射液、リンゲル液、デキストロース注射液、デキストロース及び塩化ナトリウム注射液、及び乳酸加リンゲル液等であるがこれらに限定されない水性ビヒクル；エチルアルコール、ポリエチレングリコール及びポリプロピレングリコール等であるがこれらに限定されない水混和性ビヒクル；並びにトウモロコシ油、綿実油、ラッカセイ油、ゴマ油、オレイン酸エチル、ミリスチン酸イソプロピル及び安息香酸ベンジル等であるがこれらに限定されない非水性ビヒクルが挙げられるが、これらに限定されない。
【００７９】
５．５．３．経皮剤形、局所剤形及び粘膜剤形
経皮剤形、局所剤形及び粘膜剤形としては、点眼溶液、スプレー、エアロゾル、クリーム、ローション、軟膏、ゲル、溶液、エマルジョン、懸濁液、又は当業者に既知の他の形態が挙げられるが、これらに限定されない。例えば、Remington's Pharmaceutical Sciences、第１８版（Mack Publishing, Easton PA: 1990）、及びIntroduction to Pharmaceutical Dosage Forms、第４版（Lea & Febiger, Philadelphia: 1985）を参照されたい。経皮剤形としては、皮膚に貼付し所定時間装用することにより、所望量の活性成分の透過が可能となり得る、「リザーバ型」パッチ又は「マトリクス型」パッチが挙げられる。
【００８０】
経皮剤形、局所剤形及び粘膜剤形を提供するために使用され得る好適な賦形剤（例えば、担体及び希釈剤）並びに他の材料は、薬学の当業者に既知であり、所定の医薬組成物又は剤形を適用する特定の組織に応じて異なる。
【００８１】
治療する特定の組織に応じて、本発明の活性成分による治療前に、治療と同時に、又は治療後に、さらなる構成成分を使用することができる。例えば、透過亢進剤を使用して、組織への活性成分の送達を補助し得る。
【００８２】
また、医薬組成物若しくは剤形のｐＨ、又は医薬組成物若しくは剤形が適用される組織のｐＨを調整して、１つ又は複数の活性成分の送達を改善することができる。同様に、溶媒担体の極性、そのイオン強度、又は張性（tonicity）を調整して、送達を改善することができる。また、送達が改善するように、ステアリン酸塩等の化合物を医薬組成物又は剤形に添加して、１つ又は複数の活性成分の親水性又は親油性を有利に変化させることができる。この点に関して、ステアリン酸塩は、製剤用の脂質ビヒクルとして、乳化剤又は界面活性剤として、及び送達亢進剤又は透過亢進剤として作用し得る。活性成分の種々の塩、水和物又は溶媒和物を使用して、得られた組成物の特性をさらに調整することができる。
【００８３】
５．５．４．点眼剤形
本発明の化合物は、水溶液、水性懸濁液及び軟膏を使用して、眼に（例えば、局所的に）送達することができる。当業者が気付いているように、点眼製品は、眼の微生物汚染を防ぐために最終包装物中で無菌でなければならない。包装物を開けた場合に、無菌性を維持するのに保存料を使用してもよい。点眼製剤は、製剤のｐＨ、緩衝能、粘性及び張性を制御することも必要とする。好ましい製剤は、ｐＨが約６．５〜８．５であり、緩衝能が約０．０１〜０．１である。特定の製剤は等張である。特定の製剤は、粘性が約２５ｃｐｓ〜５０ｃｐｓである。
【００８４】
活性医薬成分（ＡＰＩ）をその作用部位に効果的に送達する安全なビヒクルを提供するのに使用され得る成分は、既知であるが、ＡＰＩの物理的及び化学的な特徴に応じて変わる。
【００８５】
適切に緩衝化した水溶液を水溶性の化合物の送達に使用してもよい。典型的には、溶液組成物において、組成物の粘性を増大させるのに高分子成分を使用する。好適なポリマーの例としては、セルロースポリマー（例えば、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、エチルヒドロキシエチルセルロース）、合成ポリマー（例えば、カルボキシビニルポリマー、ポリビニルアルコール）、多糖類（例えば、キサンタンガム、グアーガム及びデキストラン）及びそれらの混合物が挙げられる。例えば、米国特許第４，１３６，１７３号明細書及び同第７，２４４，４４０号明細書を参照されたい。化合物を送達するのに懸濁液を使用してもよい。高分子成分は典型的には、不溶性成分の懸濁又は容易な再分散性の維持に役立つ物理的安定性助剤として懸濁液組成物中で使用される（同上）。
【００８６】
製剤の無菌性を確保するのに、保存料を使用してもよい。好適な保存料としては、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、クロロブタノール、酢酸フェニル水銀、硝酸フェニル水銀、チメロサール、メチルパラベン及びプロピル−パラベンが挙げられる。また、酸化を受けやすい製剤の安定性を確保するために、抗酸化剤を使用してもよい。好適な抗酸化剤としては、エチレンジアミン四酢酸、重亜硫酸ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム及びチオ尿素が挙げられる。
【実施例】
【００８７】
６．実施例
本発明の態様は、以下の実施例から理解することができるが、その範囲に限定されない。
【００８８】
６．１．実施例１：１−（５−クロロ−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−Ｎ−（３−（４−フルオロフェノキシ）フェニル）−４−メチルピペリジン−４−カルボキサミドの合成
【００８９】
【化５】
0005575110.tif 000006
【００９０】
Ａ．ｔｅｒｔ−ブチル４−（３−（４−フルオロフェノキシ）フェニルカルバモイル）−４−メチルピペリジン−１−カルボキシレートの調製。１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４−メチルピペリジン−４−カルボン酸（２４３ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）、３−（４−フルオロフェノキシ）アニリン（２０３ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）、ＤＣＣ（２０６ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）及びＨＯＡｔ（１３８ｍｇ、１．０１ｍｍｏｌ）を、ＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）及びＤＭＦ（５ｍＬ）中で組み合わせた。反応混合物を８０℃で２０時間加熱した。ほとんどのＥｔＯＡｃを蒸発させると固体の沈殿物が生じ、それを濾過により除去した。濾液をＥｔＯＡｃで希釈し、１Ｎ  ＨＣｌ水溶液、水及び塩水（brine）で洗浄し、乾燥し、真空下で濃縮して表題の化合物を得た。ＭＳ（ＥＳ＋）［Ｍ＋Ｈ］＋＝４２９。
【００９１】
Ｂ．Ｎ−（３−（４−フルオロフェノキシ）フェニル）−４−メチルピペリジン−４−カルボキサミドの調製。工程Ａ由来のｔｅｒｔ−ブチル４−（３−（４−フルオロフェノキシ）フェニルカルバモイル）−４−メチルピペリジン−１−カルボキシレートを、室温で１６時間、ジオキサン中の４Ｎ  ＨＣｌで処理した。生成物を濾過により単離し、エーテルで洗浄して、表題の化合物（２０６ｍｇ、２工程に関して５６％）を塩酸塩として得た。ＭＳ（ＥＳ＋）［Ｍ＋Ｈ］＋＝３２９。
【００９２】
Ｃ．４，５−ジクロロ−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジンの調製。ＣＨ２Ｃｌ２（６ｍＬ）中の４−クロロ−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン（１５４ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）の溶液に、ＮＣＳ（１３４ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を１８時間還流し、濾過し、真空下で濃縮して、表題の化合物を得て、これを未精製のまま（on crude）用いた。ＭＳ（ＥＳ＋）［Ｍ＋Ｈ］＋＝１８９。
【００９３】
Ｄ．１−（５−クロロ−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−Ｎ−（３−（４−フルオロフェノキシ）フェニル）−４−メチルピペリジン−４−カルボキサミドの調製。工程Ｂ由来のＮ−（３−（４−フルオロフェノキシ）フェニル）−４−メチルピペリジン−４−カルボキサミド（５０ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）、工程Ｃ由来の４，５−ジクロロ−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン（１９ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）、及びトリエチルアミン（０．０４ｍＬ、０．３ｍｍｏｌ）を、イソプロパノール（１ｍＬ）中で組み合わせ、１３０℃で３０分間、マイクロ波条件下で加熱した。生成物を分取ＨＰＬＣにより単離して、表題の化合物を得た。
【００９４】
1H NMR (CD3OD): δ 8.22 (s, 1H), 7.30-7.35 (m, 4H), 7.03-7.14 (m, 4H), 6.73-6.76 (m, 1H), 3.96-4.02 (m, 2H), 3.44-3.51 (m, 2H), 2.35-2.38 (m, 2H), 1.74-1.81 (m, 2H), 1.38 (s, 3H); MS (ES+) [M+H]+ = 480.
【００９５】
６．２．実施例２：１−（５−ブロモ−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−Ｎ−（３−（４−フルオロフェノキシ）フェニル）−４−メチルピペリジン−４−カルボキサミドの合成
【００９６】
【化６】
0005575110.tif 000007
【００９７】
Ａ．５−ブロモ−４−クロロ−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジンの調製。ＣＨ２Ｃｌ２（２５ｍＬ）中の４−クロロ−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン（１．２ｇ、７．８ｍｍｏｌ）の溶液に、ＣＨ２Ｃｌ２（２５ｍＬ）中のＮ−ブロモアセトアミド（１．２ｇ、８．７ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を４０分間還流し、その後濃縮し、冷水で洗浄した。粗物質を最小限の量のイソプロパノールから再結晶化し、真空下で乾燥して表題の化合物（８２％）を淡灰色の固体として得た。ＭＳ（ＥＳ＋）［Ｍ＋Ｈ］＋＝２３２。
【００９８】
Ｂ．１−（５−ブロモ−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−Ｎ−（３−（４−フルオロフェノキシ）フェニル）−４−メチルピペリジン−４−カルボキサミドの調製。イソプロパノール（１ｍＬ）中の実施例１、工程Ｂ由来のＮ−（３−（４−フルオロフェノキシ）フェニル）−４−メチルピペリジン−４−カルボキサミド（３６ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）の溶液に、工程Ａ由来の５−ブロモ−４−クロロ−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン（２４ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）、及びトリエチルアミン（０．０４ｍＬ、０．３ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を、１００℃で１０分間、マイクロ波条件下で加熱し、その後真空下で濃縮した。生成物を分取ＨＰＬＣにより単離して、表題の化合物を得た。
【００９９】
1H NMR (CD3OD):δ 8.21 (s, 1H), 7.22-7.35 (m, 4H), 6.98-7.17 (m, 4H), 6.72-6.77 (m, 1H), 3.84-3.95 (m, 2H), 3.32-3.51 (m, 2H), 2.30-2.40 (m, 2H), 1.72-1.85 (m, 2H), 1.38 (s, 3H); MS (ES+) [M+H]+ = 525.
【０１００】
６．３．実施例３：Ｎ−（３−（４−フルオロフェノキシ）フェニル）−４−メチル−１−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）ピペリジン−４−カルボキサミドの合成
【０１０１】
【化７】
0005575110.tif 000008
【０１０２】
イソプロパノール（１ｍＬ）中の実施例１、工程Ｂ由来のＮ−（３−（４−フルオロフェノキシ）フェニル）−４−メチルピペリジン−４−カルボキサミド（２０ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ）の溶液に、４−クロロ−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン（１５ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（０．０４ｍＬ、０．３ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を１８０℃で３０分間、マイクロ波条件下で加熱し、その後真空下で濃縮した。生成物を分取ＨＰＬＣにより単離して、表題の化合物を得た。
【０１０３】
1H NMR (CD3OD):δ 8.01 (s, 1H), 7.18-7.23 (m, 3H), 6.91-7.16 (m, 5H), 6.65-6.68 (d, 1H), 6.51-6.53 (d, 1H), 4.12-4.25 (m, 2H), 3.351-3.62 (m, 2H), 2.13-2.28 (m, 2H), 1.50-1.60 (m, 2H), 1.25 (s, 3H); MS (ES+) [M+H]+ = 447.
【０１０４】
６．４．実施例４：Ｎ−（３−ｔｅｒｔ−ブチルフェニル）−１−（５−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−４−フェニルピペリジン−４−カルボキサミドの合成
【０１０５】
【化８】
0005575110.tif 000009
【０１０６】
Ａ．４−フェニルピペリジン−４−カルボン酸の調製。１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４−フェニルピペリジン−４−カルボン酸（１．０ｇ、３．３ｍｍｏｌ）を、室温で２時間、ジオキサン（２０ｍＬ）中の４Ｎ  ＨＣｌで処理した。生成物を濾過により単離して、表題の化合物（０．７４ｇ、９３％）を白色の固体として得た。ＭＳ（ＥＳ＋）［Ｍ＋Ｈ］＋＝２０６。
【０１０７】
Ｂ．１−（５−メチル−４，７−ジヒドロ−３Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−４−フェニルピペリジン−４−カルボン酸の調製。イソプロパノール（１０ｍＬ）中の工程Ａ由来の４−フェニルピペリジン−４−カルボン酸（０．７４ｇ、３．１ｍｍｏｌ）の溶液に、４−クロロ−５−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン（０．５２ｇ、３．１ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（１．０ｍＬ、９．８ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を、１８０℃で１８０分間、マイクロ波条件下で加熱し、その後真空下で濃縮した。残留物を氷水に溶解し、１Ｎ  ＨＣｌ水溶液の添加によりｐＨ４に中和した。生成物を濾過により単離し、６５℃で３時間、真空下で乾燥して、表題の化合物（６２％）を褐色の固体として得た。ＭＳ（ＥＳ＋）［Ｍ＋Ｈ］＋＝３３６。
【０１０８】
Ｃ．Ｎ−（３−ｔｅｒｔ−ブチルフェニル）−１−（５−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−４−フェニルピペリジン−４−カルボキサミドの調製。ＤＭＦ（２ｍＬ）中の工程Ｂ由来の１−（５−メチル−４，７−ジヒドロ−３Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−４−フェニルピペリジン−４−カルボン酸（３３ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）の溶液に、３−ｔｅｒｔ−ブチルアニリン（１５ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）、ＢＯＰ（５０ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（０．０４ｍＬ、０．３ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で２０時間撹拌して、アミド生成物を分取ＨＰＬＣにより単離して、表題の化合物を得た。
【０１０９】
1H NMR (CD3OD): δ 8.20 (s, 1H), 7.16-7.57 (m, 9H), 7.01 (s, 1H), 3.90-3.94 (d, 2H), 3.45-3.52 (t, 2H), 2.73-2.78 (d, 2H), 2.46 (s, 3H), 2.28-2.35 (t, 2H), 1.30 (s, 9H); MS (ES+) [M+H]+ = 468.
【０１１０】
６．５．実施例５：４−アリル−Ｎ−（３−クロロフェニル）−１−（５−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）ピペリジン−４−カルボキサミドの合成
【０１１１】
【化９】
0005575110.tif 000010
【０１１２】
Ａ．ｔｅｒｔ−ブチル４−アリル−４−（３−クロロフェニルカルバモイル）ピペリジン−１−カルボキシレートの調製。Ｎ２雰囲気下で、４−アリル−１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピペリジン−４−カルボン酸（０．１５８ｇ、０．５８６ｍｍｏｌ）、ピリジン（０．１８９ｍＬ、２．３４ｍｍｏｌ）及びＤＭＦ（３滴）をＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）に溶解し、氷浴中で冷却した。冷却した溶液に、塩化オキサリル（０．０５６ｍＬ、０．６４５ｍｍｏｌ）を滴下した。反応物を４０分間撹拌し、その後３−クロロアニリン（０．０６１ｍＬ、０．５８６ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を氷浴から取り出し、室温で終夜撹拌した。粗反応物を１Ｎ  ＨＣｌ水溶液及び塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、真空下で濃縮した。残留物をシリカゲルクロマトグラフィ（酢酸エチル／ヘキサングラジエント）により精製して、表題の化合物を収率５１％で得た。ＭＳ（ＥＳ＋）［Ｍ＋Ｈ］＋＝３７９。
【０１１３】
Ｂ．４−アリル−Ｎ−（３−クロロフェニル）ピペリジン−４−カルボキサミドの調製。ＭｅＯＨ（１０ｍＬ）中の工程Ａ由来のｔｅｒｔ−ブチル４−アリル−４−（３−クロロフェニルカルバモイル）ピペリジン−１−カルボキシレート（０．１７２ｇ、０．４５３ｍｍｏｌ）の溶液に、ジオキサン中の４Ｍ  ＨＣｌ（０．３４０ｍＬ、１．３６ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を５０℃で３０分間加熱し、その後真空下で濃縮し、ＭｅＯＨに再溶解し、２回再濃縮して、表題の化合物を塩酸塩として得た。ＭＳ（ＥＳ＋）［Ｍ＋Ｈ］＋＝２７９。
【０１１４】
Ｃ．４−アリル−Ｎ−（３−クロロフェニル）−１−（５−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）ピペリジン−４−カルボキサミドの調製。工程Ｂ由来の４−アリル−Ｎ−（３−クロロフェニル）ピペリジン−４−カルボキサミド（０．１４２ｇ、０．４５３ｍｍｏｌ）、４−クロロ−５−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン（０．０７５ｇ、０．４５３ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．２３６ｍＬ、１．３５ｍｍｏｌ）、及びイソプロパノール（５ｍＬ）を組み合わせ、１２０℃で終夜、圧力容器中で加熱した。粗反応物をＣＨ２Ｃｌ２に溶解し、Ｈ２Ｏ及び塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、真空下で濃縮した。 残留物をシリカゲルクロマトグラフィ（ＭｅＯＨ：ＣＨ２Ｃｌ２グラジエント）により精製して、表題の化合物を収率６１％で得た。
【０１１５】
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 8.19 (s, 1H), 7.73 (s, 1H), 7.48 (d, J=8 Hz, 1H), 7.32 (t, J=8, 16 Hz, 1H), 7.14 (d, J=8 Hz, 1H), 7.00 (s, 1H), 5.78-5.88 (m, 1H), 5.11-5.16 (m, 2H), 3.91 (d, J=13.6 Hz, 2H), 3.24-3.30 (m, 2H), 2.50 (d, J=7.6 Hz, 2H), 2.45 (s, 3H), 2.41 (d, J=13.6 Hz, 2H), 1.80-1.86 (m, 2H); MS (ES+) [M+H]+ = 410.
【０１１６】
６．６．実施例６：Ｎ−（３−メトキシフェニル）−４−メチル−１−（５−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）ピペリジン−４−カルボキサミドの合成
【０１１７】
【化１０】
0005575110.tif 000011
【０１１８】
Ａ．４−メチルピペリジン４−カルボン酸の調製。１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４−メチルピペリジン−４−カルボン酸（０．５００ｇ、２．０６ｍｍｏｌ）を、室温で２時間、ジオキサン（１０ｍＬ）中の４Ｍ  ＨＣｌで処理して、表題の化合物（０．２９４ｇ、１００％）を塩酸塩として得た。ＭＳ（ＥＳ＋）［Ｍ＋Ｈ］＋＝１４４．０。
【０１１９】
Ｂ．４−メチル−１−（５−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−ピペリジン−４−カルボン酸の調製。イソプロパノール（１０ｍＬ）中の４−クロロ−５−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン（０．２７４ｇ、１．６４ｍｍｏｌ）の溶液に、工程Ａ由来の４−メチルピペリジン４−カルボン酸塩酸塩（０．２９４ｇ、１．６４ｍｍｏｌ）、及びトリエチルアミン（０．６５４ｍＬ、４．９２ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を、１８０℃まで１時間、マイクロ波条件下で加熱し、濃縮し、氷水を用いて取り出し（taken up）、６Ｎ  ＨＣｌ水溶液でｐＨ３に中和して、生成物を沈殿させた。生成物を濾過により回収し、終夜真空下で乾燥して、表題の化合物（０．４２ｇ、７５％）を灰色の固体として得た。ＭＳ（ＥＳ＋）［Ｍ＋Ｈ］＋＝２７５．２。
【０１２０】
Ｃ．Ｎ−（３−メトキシフェニル）−４−メチル−１−（５−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）ピペリジン−４−カルボキサミドの調製。ＤＭＦ（１ｍＬ）中の工程Ｂ由来の４−メチル−１−（５−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−ピペリジン−４−カルボン酸（０．０２０ｇ、０．０７３ｍｍｏｌ）の溶液に、ＢＯＰ試薬（０．０６５ｇ、０．１５ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（０．０１９ｍＬ、０．１５ｍｍｏｌ）及び３−メトキシアニリン（０．０１２ｍＬ、０．１１ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を終夜撹拌し、その後真空下で濃縮した。残留物を分取ＨＰＬＣにより精製して、表題の化合物（０．０９１ｇ、３３％）を得た。
【０１２１】
1H NMR (CD3OD): δ 8.07 (1H, bs), 7.00-7.17 (3H, m), 6.89 (1H, s), 6.58-6.61 (1H, m), 3.62-3.72 (5H, m), 3.22-3.34 (2H, m), 2.12-2.33 (5H, m), 1.62-1.71 (2H, m), 1.29 (3H, s); MS (ES+) [M+H]+= 380.1.
【０１２２】
６．７．実施例７：４−メチル−１−（５−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−Ｎ−ｐ−トリルピペリジン−４−カルボキサミドの合成
【０１２３】
【化１１】
0005575110.tif 000012
【０１２４】
ＤＭＦ（１ｍＬ）中の実施例６、工程Ｂ由来の４−メチル−１−（５−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−ピペリジン−４−カルボン酸（０．０２０ｇ、０．０７３ｍｍｏｌ）の溶液に、ＢＯＰ試薬（０．０６５ｇ、０．１５ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（０．０１９ｍＬ、０．１５ｍｍｏｌ）及び４−メチルアニリン（０．０１２ｍＬ、０．１１ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を終夜撹拌し、真空下で濃縮した。残留物を分取ＨＰＬＣにより精製して、表題の化合物（０．０１３３ｇ、５０％）を得た。
【０１２５】
1H NMR (CD3OD): δ 8.07 (1H, bs), 7.31 (2H, J = 8.4 Hz, d), 7.04 (2H, J = 8.4 Hz, d), 6.89 (1H, s), 3.68-3.73 (2H, m), 3.21-3.44 (2H, m), 2.21-2.33 (8H, m), 1.62-1.71 (2H, m), 1.29 (3H, s); MS (ES+) [M+H]+= 364.2.
【０１２６】
６．８．実施例８：Ｎ−（３−（イソプロピルカルバモイル）フェニル）−４−メチル−１−（５−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）ピペリジン−４−カルボキサミドの合成
【０１２７】
【化１２】
0005575110.tif 000013
【０１２８】
ＤＭＦ（１ｍＬ）中の実施例６、工程Ｂ由来の４−メチル−１−（５−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−ピペリジン−４−カルボン酸（０．０３０ｇ、０．１１ｍｍｏｌ）の溶液に、ＨＡＴＵ（０．０４２ｇ、０．１１ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（０．０２８ｍＬ、０．２２ｍｍｏｌ）及び３−アミノ−Ｎ−イソプロピル−ベンズアミド（０．０２９ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を５０℃で４８時間撹拌し、真空下で濃縮した。残留物を分取ＨＰＬＣにより精製して、表題の化合物（０．０２３ｇ、４８％）を得た。
【０１２９】
1HNMR (CD3OD): δ 8.19 (1H, s), 7.99 (1H, m), 7.7-7.72 (1H, m), 7.56-7.58 (1H, m), 7.41-7.43 (1H, J= 8 Hz and 15.6 Hz, dd), 7.00 (1H, J = 0.8 Hz, d), 4.20-4.23 (1H, m), 3.79-3.85 (2H, m), 3.36-3.46 (2H, m), 2.38-2.44 (5H, m), 1.76-1.83 (2H, m), 1.42 (3H, s), 1.268 (6H, J = 6.8 Hz, d); MS (ES+) [M+H]+ =  435.
【０１３０】
６．９．実施例９：Ｎ−（３−ｔｅｒｔ−ブチルフェニル）−４−メチル−１−（５−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）ピペリジン−４−カルボキサミドの合成
【０１３１】
【化１３】
0005575110.tif 000014
【０１３２】
Ａ．ｔｅｒｔ−ブチル４−（３−ｔｅｒｔ−ブチルフェニルカルバモイル）−４−メチルピペリジン−１−カルボキシレートの調製。ジクロロエタン（１０ｍＬ）中の１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４−メチルピペリジン−４−カルボン酸（０．３０ｇ、１．２ｍｍｏｌ）、ＤＭＦ（２０滴）及びピリジン（０．３８ｇ、４．８ｍｍｏｌ）の溶液に、塩化オキサリル（０．１５ｇ、１．２ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を４０分間撹拌し、３−ｔｅｒｔ−ブチルアニリンを添加した。混合物を１時間撹拌し、ジクロロメタンで希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液及び１．０Ｎ  ＨＣｌ水溶液で各々２回洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濃縮した。シリカゲルクロマトグラフィ（０％−２％  ＭｅＯＨ：ＣＨ２Ｃｌ２）により、表題の化合物を収率６１％で得た。ＭＳ（ＥＳ＋）［Ｍ＋Ｈ］＋＝３７５。
【０１３３】
Ｂ．Ｎ−（３−ｔｅｒｔ−ブチルフェニル）−４−メチルピペリジン−４−カルボキサミドの調製。工程Ａ由来のｔｅｒｔ−ブチル４−（３−ｔｅｒｔ−ブチルフェニルカルバモイル）−４−メチルピペリジン−１−カルボキシレート（０．４ｇ、１．０７ｍｍｏｌ）を、５０℃で３０分間、メタノール（５．０ｍＬ）中でＨＣｌ（ジオキサン中４．０Ｎ、１．３ｍＬ、５．３４ｍｍｏｌ）で処理した。混合物を濃縮して、表題の化合物を塩酸塩として定量的収率で得た。ＭＳ（ＥＳ＋）［Ｍ＋Ｈ］＋＝２７５。
【０１３４】
Ｃ．Ｎ−（３−ｔｅｒｔ−ブチルフェニル）−４−メチル−１−（５−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）ピペリジン−４−カルボキサミド。工程Ｂ由来のＮ−（３−ｔｅｒｔ−ブチルフェニル）−４−メチルピペリジン−４−カルボキサミド（０．３３ｇ、１．０７ｍｍｏｌ）、４−クロロ−５−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン（０．１８ｇ、１．０７ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．６９ｇ、５．３４ｍｍｏｌ）、及びイソプロパノール（７ｍＬ）を、定圧（pressure rated）封止管中で組み合わせ、１００℃で１８時間加熱した。混合物を濃縮し、ジクロロメタン中で取り出し、そこから沈殿物（０．１８ｇ）を回収した。溶液をクロマトグラフィ（ＳｉＯ２、０％−２％  ＭｅＯＨ：ＣＨ２Ｃｌ２）に供し、カラム処理した（columned）物質（０．１５ｇ）を沈殿物と組み合わせ、６０℃でメタノール（１５ｍＬ）に溶解した。水を添加し（５．０ｍＬ）、混合物を冷却した。得られた沈殿物を濾過し、水で洗浄し、乾燥して、表題の化合物を収率５０％で得た。
【０１３５】
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 11.51 (s, 1H), 9.31 (s, 1H), 8.19 (s, 1H), 7.62 (s, 1H), 7.59 (d, J=8.0 Hz, 1H), 7.22 (t, J=8Hz and 16Hz, 1H), 7.08 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 3.63-3.68 (m, 2H), 3.28-3.33 (m, 2H), 2.36 (s, 3H), 2.25-2.29 (m, 2H), 1.63-1.68 (m, 2H), 1.31 (s, 3H), 1.27 (S, 9H); MS (ES+) [M+H]+ = 406.
【０１３６】
６．１０．実施例１０：４−メチル−１−（５−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−Ｎ−（３−（オキサゾール−５−イル）フェニル）ピペリジン−４−カルボキサミドの合成
【０１３７】
【化１４】
0005575110.tif 000015
【０１３８】
Ａ．ｔｅｒｔ−ブチル４−メチル−４−（３−（オキサゾール−５−イル）フェニルカルバモイル）−ピペリジン−１−カルボキシレートの調製。１，２−ジクロロエタン（２ｍＬ）中の１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４−メチルピペリジン−４−カルボン酸（６１．３ｍｇ、０．２５２ｍｍｏｌ）及びピリジン（７９．７ｍｇ、０．０８ｍＬ、１．０１ｍｍｏｌ）の溶液に、０℃で、ＤＭＦ（１滴〜２滴）を、その後塩化オキサリル（３１．９ｍｇ、０．０２２ｍＬ、０．２５２ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を０．５時間撹拌し、３−（オキサゾール−５−イル）アニリン（４０．４ｍｇ、０．２５２ｍｍｏｌ）を添加した。反応物をさらに１．５時間撹拌した。混合物を酢酸エチル（１０ｍＬ）で希釈し、有機層を０．１Ｎ  ＨＣｌ（２×１０ｍＬ）、塩水（４ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、濃縮して、表題の化合物を得て、さらなる精製を行うことなく次の工程に使用した。ＭＳ（ＥＳ＋）［Ｍ＋Ｈ］＋＝３８６．２。
【０１３９】
Ｂ．４−メチル−Ｎ−（３−（オキサゾール−５−イル）フェニル）ピペリジン−４−カルボキサミドの調製。メタノール（３ｍＬ）中の工程Ａ由来のｔｅｒｔ−ブチル４−メチル−４−（３−（オキサゾール−５−イル）フェニルカルバモイル）ピペリジン−１−カルボキシレート（７７．７ｍｇ、０．２０２ｍｍｏｌ）の溶液に、ＨＣｌ（ジオキサン中４．０Ｎ、０．４ｍＬ、１．６ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を１５時間撹拌し、その後濃縮乾燥して、表題の化合物を塩酸塩として得た。ＭＳ（ＥＳ＋）［Ｍ＋Ｈ］＋＝２８６．２。
【０１４０】
Ｃ．４−メチル−１−（５−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−Ｎ−（３−（オキサゾール−５−イル）フェニル）ピペリジン−４−カルボキサミドの調製。工程Ｂ由来の４−メチル−Ｎ−（３−（オキサゾール−５−イル）フェニル）ピペリジン−４−カルボキサミド塩酸塩（５１．９ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）、及びイソプロパノール（３ｍＬ）の溶液を圧力容器に投入し、この溶液に、４−クロロ−５−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン（５５．０ｍｇ、０．３２９ｍｍｏｌ）及びＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（２９７．９ｍｇ、０．４０ｍＬ、２．３１ｍｍｏｌ）を添加した。容器を封止し、反応物を１０５℃まで１５時間加熱した。反応物を通常の手段により処理し（worked up）、残留物を分取ＨＰＬＣにより精製して、表題の化合物をオフホワイト色の固体として得た。
【０１４１】
1H NMR (400 MHz) δ ppm 8.27 (s, 1H), 8.18 (s, 1H), 8.03 (t, J=1.77 Hz, 1H), 7.58 (ddd, J=8.08, 2.02, 1.01 Hz, 1H), 7.52 (s, 1H), 7.50 (dt, J=8.08, 1.26 Hz, 1H), 7.43 (t, J=7.83 Hz, 1H), 7.00 (app. d, J=0.76 Hz, 1H), 3.78-3.86 (m, 2H), 3.38-3.46 (m, 2H), 2.44 (d, J=0.76 Hz, 3H), 2.36-2.44 (m, 2H), 1.79 (ddd, J=13.39, 9.85, 3.54 Hz, 2H), 1.42 (s, 3H); MS (ES+) [M+H]+ = 417.2.
【０１４２】
６．１１．実施例１１：４−メチル−１−（５−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−Ｎ−（３−スルファモイルフェニル）ピペリジン−４−カルボキサミドの合成
【０１４３】
【化１５】
0005575110.tif 000016
【０１４４】
Ａ．ｔｅｒｔ−ブチル４−メチル−４−（３−スルファモイルフェニルカルバモイル）ピペリジン−１−カルボキシレートの調製。ジクロロエタン（２．０ｍＬ）中の１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４−メチルピペリジン−４−カルボン酸（６０ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＭＦ（２滴）及びピリジン（７８ｍｇ、０．９９ｍｍｏｌ）を、その後塩化オキサリル（３１ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を４０分間撹拌し、３−アミノ−ベンゼンスルホンアミドを添加した。混合物を５０℃で３時間加熱し、混合物を冷却し、ジクロロメタンで希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液及び１．０Ｎ  ＨＣｌ水溶液で各々２回洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濃縮した。シリカゲルクロマトグラフィ（２％−５％  ＭｅＯＨ：ＣＨ２Ｃｌ２）により、表題の化合物を収率４０％で得た。ＭＳ（ＥＳ＋）［Ｍ＋Ｈ］＋＝３９８。
【０１４５】
Ｂ．４−メチル−Ｎ−（３−スルファモイルフェニル）ピペリジン−４−カルボキサミドの調製。工程Ａ由来のｔｅｒｔ−ブチル４−メチル−４−（３−スルファモイルフェニルカルバモイル）ピペリジン−１−カルボキシレート（３９ｍｇ、０．０９８ｍｍｏｌ）を、５０℃で４５分間、メタノール（１．０ｍＬ）中でＨＣｌ（ジオキサン中４．０Ｎ、９８μＬ、０．３９ｍｍｏｌ）で処理した。混合物を濃縮して、表題の化合物を塩酸塩として定量的収率で得た。ＭＳ（ＥＳ＋）［Ｍ＋Ｈ］＋＝２９８。
【０１４６】
Ｃ．４−メチル−１−（５−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−Ｎ−（３−スルファモイルフェニル）ピペリジン−４−カルボキサミドの調製。工程Ｂ由来の４−メチル−Ｎ−（３−スルファモイルフェニル）ピペリジン−４−カルボキサミド（３３ｍｇ、０．０９８ｍｍｏｌ）、４−クロロ−５−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン（１６ｍｇ、０．０９８ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（５１ｍｇ、０．３９ｍｍｏｌ）、及びイソプロパノール（１．０ｍＬ）を、定圧封止管中で組み合わせ、１０５℃で１８時間加熱した。混合物を濃縮し、残留物を分取ＨＰＬＣにより精製して、表題の化合物を収率２１％で得た。
【０１４７】
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 11.52 (s, 1H), 9.72 (s, 1H), 8.24 (s, 1H), 8.19 (s, 1H), 7.87-7.90 (m, 1H), 7.50-7.52 (m, 2H), 7.35 (s, 2H), 7.06 (s, 1H), 4.09-4.13 (m, 1H), 3.66-3.40 (m, 2H), 3.25-3.31 (m, 2H), 3.18 (d, J=4 Hz, 2H), 2.36 (s, 3H), 2.27-2.30 (m, 2H), 1.64-1.70 (m, 2H), 1.32 (s, 3H); MS (ES+) [M+H]+ = 429.
【０１４８】
６．１２．実施例１２：Ｎ−（３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）フェニル）−４−メチル−１−（５−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）ピペリジン−４−カルボキサミドの合成
【０１４９】
【化１６】
0005575110.tif 000017
【０１５０】
Ａ．ｔｅｒｔ−ブチル４−（３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）フェニルカルバモイル）−４−メチルピペリジン−１−カルボキシレートの調製。ジクロロエタン（２．０ｍＬ）中の１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４−メチルピペリジン−４−カルボン酸（１００ｍｇ、０．４１ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＭＦ（２滴）及びピリジン（０．１３ｇ、１．６ｍｍｏｌ）を、その後塩化オキサリル（５７ｍｇ、０．４５ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を４０分間撹拌し、３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−フェニルアミンを添加した。混合物を２時間撹拌すると、ピンク色の沈殿物が形成した。混合物を濾過し、濾液を１．０Ｎ  ＨＣｌ水溶液及び塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濃縮して、表題の化合物を収率７０％で得た。ＭＳ（ＥＳ＋）［Ｍ＋Ｈ］＋＝３８７。
【０１５１】
Ｂ．Ｎ−（３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）フェニル）−４−メチルピペリジン−４−カルボキサミドの調製。工程Ａ由来のｔｅｒｔ−ブチル４−（３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）フェニルカルバモイル）−４−メチルピペリジン−１−カルボキシレート（０．１１ｇ、０．２９ｍｍｏｌ）を、メタノール（２．０ｍＬ）中でＨＣｌ（ジオキサン中４．０Ｎ、０．３６ｍＬ、１．４５ｍｍｏｌ）で処理し、５０℃で３０分間加熱した。混合物を濃縮して、表題の化合物を塩酸塩として定量的収率で得た。ＭＳ（ＥＳ＋）［Ｍ＋Ｈ］＋＝２８７。
【０１５２】
Ｃ．Ｎ−（３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）フェニル）−４−メチル−１−（５−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）ピペリジン−４−カルボキサミドの調製。工程Ｂ由来のＮ−（３−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）フェニル）−４−メチルピペリジン−４−カルボキサミド（９３ｍｇ、０．２９ｍｍｏｌ）、４−クロロ−５−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン（４９ｍｇ、０．２９ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．１９ｇ、１．４５ｍｍｏｌ）、イソプロパノール（４．０ｍＬ）、及びＤＭＳＯ（０．５ｍＬ）を、定圧封止管中で組み合わせ、１０５℃で１８時間加熱した。混合物を濃縮し、残留物を分取ＨＰＬＣにより精製して、表題の化合物を収率４．３％で得た。
【０１５３】
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 11.5 (s, 1H), 9.56 (s, 1H), 8.31 (s, 1H), 8.19 (s, 1H), 7.77 (d, J=8Hz, 1H), 7.69 (d, J=8Hz, 1H), 7.40 (t, J=8 and 16 Hz, 1H), 7.05 (s, 1H), 3.64-3.72 (m, 2H), 2.37 (s, 3H), 2.29-2.33 (m, 2H), 1.91 (s, 2H), 1.64-1.70 (m, 2H), 1.34 (s, 3H); MS (ES+) [M+H]+= 418.
【０１５４】
６．１３．実施例１３：３−（４−メチル−１−（５−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）ピペリジン−４−カルボキサミド）フェニルジメチルカルバメートの合成
【０１５５】
【化１７】
0005575110.tif 000018
【０１５６】
Ａ．ｔｅｒｔ−ブチル４−（３−（ジメチルカルバモイルオキシ）フェニルカルバモイル）−４−メチルピペリジン−１−カルボキシレートの調製。１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４−メチルピペリジン−４−カルボン酸（６７ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ）、ＥＤＣ（６４ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ）、ＨＯＢＴ（４５ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ）及びジクロロエタン（２．０ｍＬ）を、定圧封止管中で組み合わせ、４５分間撹拌した。３−アミノフェニルジメチルカルバメート（５０ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を８５℃で１８時間加熱した。混合物を濃縮し、クロマトグラフィ（ＳｉＯ２、０％−２％  ＭｅＯＨ：ＣＨ２Ｃｌ２）に供し、表題の化合物を収率５０％で得た。ＭＳ（ＥＳ＋）［Ｍ＋Ｈ］＋＝４０６。
【０１５７】
Ｂ．３−（４−メチルピペリジン−４−カルボキサミド）フェニルジメチルカルバメートの調製。工程Ａ由来のｔｅｒｔ−ブチル４−（３−（ジメチルカルバモイルオキシ）フェニルカルバモイル）−４−メチルピペリジン−１−カルボキシレート（５６ｍｇ、０．１３８ｍｍｏｌ）を、４０℃で３時間、メタノール（２．０ｍＬ）中でＨＣｌ（ジオキサン中４．０Ｎ、０．１７ｍＬ、０．６９ｍｍｏｌ）で処理した。混合物を濃縮して表題の化合物を塩酸塩として定量的収率で得た。ＭＳ（ＥＳ＋）［Ｍ＋Ｈ］＋＝３０６。
【０１５８】
Ｃ．３−（４−メチル−１−（５−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）ピペリジン−４−カルボキサミド）フェニルジメチルカルバメートの調製。工程Ｂ由来の３−（４−メチルピペリジン−４−カルボキサミド）フェニルジメチルカルバメート（４７ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）、４−クロロ−５−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン（２３ｍｇ、０．１３８ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（５４ｍｇ、０．４１ｍｍｏｌ）、及びイソプロパノール（１．０ｍＬ）を、定圧封止管中で組み合わせ、１００℃で１８時間加熱した。混合物を濃縮し、残留物を分取ＨＰＬＣにより精製して、表題の化合物を収率５３％で得た。
【０１５９】
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 8.18 (s, 1H), 7.50 (s, 1H), 7.42-7.44 (d, J=8 Hz, 1H), 7.34 (t, J=8 and 16 Hz, 1H), 7.0 (s, 1H), 6.87-6.89 (m, 1H), 3.79-3.85 (m, 2H), 3.37-3.44 (m, 2H), 3.14 (s, 1H), 3.01 (s, 3H), 2.44 (s, 3H), 2.36-2.40 (m, 2H), 1.75-1.81 (m, 2H), 1.40 (s, 3H); MS (ES+) [M+H]+= 437.
【０１６０】
６．１４．実施例１４：３−（４−ベンジル−１−（５−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）ピペリジン−４−カルボキサミド）フェニルジメチルカルバメートの合成
【０１６１】
【化１８】
0005575110.tif 000019
【０１６２】
Ａ．ｔｅｒｔ−ブチル４−ベンジル−４−（３−（ジメチルカルバモイルオキシ）−フェニルカルバモイル）ピペリジン−１−カルボキシレートの調製。Ｎ２雰囲気下で、４−ベンジル−１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピペリジン−４−カルボン酸（０．２ｇ、０．６２６ｍｍｏｌ）、ピリジン（０．２０２ｍＬ、２．５ｍｍｏｌ）及びＤＭＦ（３滴）をＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）に溶解し、氷浴中で冷却した。冷却した溶液に、塩化オキサリル（０．０６ｍＬ、０．６８８ｍｍｏｌ）を滴下した。反応物をその後氷浴から取り出し、室温で３０分間撹拌した。反応物を氷浴中で再冷却し、３−アミノフェニルジメチルカルバメート（０．１１２ｇ、０．６２６ｍｍｏｌ）を一度に添加した。反応物を終夜撹拌し、その後１Ｎ  ＨＣｌ水溶液及び塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、真空下で濃縮した。残留物をシリカゲルクロマトグラフィ（酢酸エチル：ヘキサングラジエント）により精製して、表題の化合物を収率５４％で得た。ＭＳ（ＥＳ＋）［Ｍ＋ＮＨ４］＋＝５００。
【０１６３】
Ｂ．３−（４−ベンジルピペリジン−４−カルボキサミド）フェニルジメチルカルバメートの調製。ＭｅＯＨ（５ｍＬ）中の工程Ａ由来のｔｅｒｔ−ブチル４−ベンジル−４−（３−（ジメチルカルバモイルオキシ）−フェニルカルバモイル）ピペリジン−１−カルボキシレート（０．１６２ｇ、０．３３６ｍｍｏｌ）の溶液に、ジオキサン中の４Ｍ  ＨＣｌ（０．２５０ｍＬ、１．００ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を５０℃で１時間加熱し、その後真空下で濃縮し、ＭｅＯＨに再溶解し、２回再濃縮して表題の化合物を塩酸塩として得た。ＭＳ（ＥＳ＋）［Ｍ＋Ｈ］＋＝３８２。
【０１６４】
Ｃ．３−（４−ベンジル−１−（５−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）ピペリジン−４−カルボキサミド）フェニルジメチルカルバメートの調製。工程Ｂ由来の３−（４−ベンジルピペリジン−４−カルボキサミド）フェニルジメチルカルバメート（０．１４０ｇ、０．３３６ｍｍｏｌ）、４−クロロ−５−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン（０．０５６ｇ、０．３３６ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．１７５ｍＬ、１．００ｍｍｏｌ）、及びイソプロパノール（５ｍＬ）を組み合わせ、１２０℃で終夜、圧力容器中で加熱した。反応物をＣＨ２Ｃｌ２で希釈し、Ｈ２Ｏ及び塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、真空下で濃縮した。残留物を高温のエタノール／Ｈ２Ｏ中で取り出した。冷却により、生成物が溶液から沈殿して、表題の化合物を収率８１％で得た。
【０１６５】
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm  8.18 (s, 1H), 7.15-7.37 (m, 8H), 7.00 (s, 1H), 6.88-6.91 (m, 1H), 3.97 (d, J=13.6 Hz, 2H), 3.25 (t, J=12,24 Hz, 2H), 3.14 (s, 3H), 3.02 (s, 2H), 2.96 (s, 3H), 2.40 (s, 3H), 2.40 (d, J=14.4 Hz, 2H), 1.85-1.92 (m, 2H); MS (ES+) [M+H]+ = 513.
【０１６６】
６．１５．実施例１５：３−（４−（ベンジルオキシメチル）−１−（５−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）ピペリジン−４−カルボキサミド）フェニルジメチルカルバメートの合成
【０１６７】
【化１９】
0005575110.tif 000020
【０１６８】
Ａ．１−ｔｅｒｔ−ブチル４−エチル４−（ベンジルオキシメチル）ピペリジン−１，４−ジカルボキシレートの調製。ＬＤＡ（２．６４ｍＬ、５．８２ｍｍｏｌ）を、−７８℃で、ＴＨＦ（３５ｍＬ）中の１−ｔｅｒｔ−ブチル４−エチルピペリジン−１，４−ジカルボキシレート（１ｇ、３．８８ｍｍｏｌ）の溶液に添加した。反応物を３０分間撹拌し、その後ＢＯＭＣｌ（０．６ｇ、３．８８ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を室温まで加温し、その後反応をＮＨ４Ｃｌ水溶液で停止した。水層をＥｔＯＡｃで抽出し、有機抽出物を塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、真空下で濃縮した。残留物をフラッシュクロマトグラフィ（８０ｇ  ＳｉＯ２、０％−１０％  酢酸エチル：ヘキサン）により精製して、表題の化合物（０．５ｇ、３４％）を得た。ＭＳ（ＥＳ＋）［Ｍ＋Ｈ］＋＝３７８。
【０１６９】
Ｂ．４−（ベンジルオキシメチル）−１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピペリジン−４−カルボン酸の調製。工程Ａ由来の１−ｔｅｒｔ−ブチル４−エチル４−（ベンジルオキシメチル）ピペリジン−１，４−ジカルボキシレート（０．５００ｇ、１．３ｍｍｏｌ）を１Ｎ  ＬｉＯＨ水溶液（１５ｍＬ）及びＴＨＦ（１０ｍＬ）に溶解し、５０℃で２４時間加熱した。反応混合物を１Ｎ  ＨＣｌで酸性化し、Ｅｔ２Ｏで抽出した。有機抽出物を塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、真空下で濃縮して、表題の化合物（０．３ｇ、６５％）を得た。ＭＳ（ＥＳ＋）［Ｍ＋Ｈ］＋＝３４９。
【０１７０】
Ｃ．ｔｅｒｔ−ブチル４−（ベンジルオキシメチル）−４−（３−（ジメチルカルバモイルオキシ）−フェニルカルバモイル）ピペリジン−１−カルボキシレートの調製。酢酸イソプロピル（１０ｍＬ）中の工程Ｂ由来の４−（ベンジルオキシメチル）−１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピペリジン−４−カルボン酸（０．３ｇ、０．８５ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．１６５ｍＬ、０．９４ｍｍｏｌ）及びＨＡＴＵ（０．９４ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を８５℃で３０分間加熱し、３−アミノフェニルジメチルカルバメートを混合物に添加した。反応物を８５℃で２時間加熱し、その後標準的な手順により処理した。生成物をフラッシュクロマトグラフィ（４０ｇ  ＳｉＯ２、０％−３０％  酢酸エチル：ヘキサン）により単離して、表題の化合物（０．２５ｇ、５７％）を得た。ＭＳ（ＥＳ＋）［Ｍ＋Ｈ］＋＝５１２。
【０１７１】
Ｄ．３−（４−（ベンジルオキシメチル）ピペリジン−４−カルボキサミド）フェニルジメチルカルバメートの調製。工程Ｃ由来のｔｅｒｔ−ブチル４−（ベンジルオキシメチル）−４−（３−（ジメチルカルバモイルオキシ）フェニルカルバモイル）ピペリジン−１−カルボキシレート（０．２５ｇ、０．４９ｍｍｏｌ）をイソプロパノールに溶解し、４Ｎ  ＨＣｌで処理し、２時間撹拌した。反応混合物をＮａＨＣＯ３でｐＨ７〜８に調整し、その後Ｅｔ２Ｏで抽出した。有機抽出物を真空下で濃縮して、表題の化合物（０．２ｇ、１００％）を得た。ＭＳ（ＥＳ＋）［Ｍ＋Ｈ］＋＝４１２。
【０１７２】
Ｅ．３−（４−（ベンジルオキシメチル）−１−（５−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）ピペリジン−４−カルボキサミド）フェニルジメチルカルバメートの調製。イソプロパノール（５ｍＬ）中の工程Ｄ由来の３−（４−（ベンジルオキシメチル）ピペリジン−４−カルボキサミド）フェニルジメチルカルバメート（０．２ｇ、０．４９ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．１６７ｍＬ、０．９８ｍｍｏｌ）及び４−クロロ−５−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン（０．０８ｇ、０．４９ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を８５℃で終夜加熱し、ＥｔＯＡｃで希釈し、塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、真空下で濃縮した。残留物をフラッシュクロマトグラフィ（４０ｇ  ＳｉＯ２、０％−８０％  酢酸エチル：ヘキサン）により精製して、表題の化合物（０．１ｇ、３８％）を得た。
【０１７３】
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 10.68 (s, 1H), 8.78 (s, 1H), 8.37 (s, 1H), 7.33-7.44 (m, 6H), 7.25 (t, J=8, 16 Hz, 1H), 7.11 (d, J=8 Hz, 1H), 6.91 (s, 1H), 6.86 (d, J=8 Hz, 1H), 4. 62 (s, 2H), 3.65 (s, 2H), 3.62-3.75 (m, 4 H), 3.09 (s, 3H), 3.01 (s, 3H), 2.40 (s, 3H), 2.27-2.33 (m, 2H), 1.75-1.82 (m, 2H); MS (ES+) [M+H]+ = 543.
【０１７４】
６．１６．実施例１６：３−（４−（ヒドロキシメチル）−１−（５−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）ピペリジン−４−カルボキサミド）フェニルジメチルカルバメートの合成
【０１７５】
【化２０】
0005575110.tif 000021
【０１７６】
ＴＨＦ（２ｍＬ）中の実施例１５、工程Ｅ由来の３−（４−（ベンジルオキシメチル）−１−（５−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）ピペリジン−４−カルボキサミド）フェニルジメチルカルバメート（３０ｍｇ、０．０５５ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｐｄ／Ｃ（１０％）を添加した。反応混合物を、Ｈ２下、６０ｐｓｉで終夜撹拌した。混合物を濾過し、真空下で濃縮した。残留物を分取ＨＰＬＣ（３０×２５０ｍｍ  Ｃ１８カラム、１０％−１００％  ＭｅＣＮ：Ｈ２Ｏ（１０ｍＭ  ＮＨ４ＯＡｃ）、１８分、４５ｍＬ／分）により精製して、表題の化合物（１ｍｇ）を得た。
【０１７７】
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 8.18 (s, 1H), 7.52 (s, 1H), 7.40-7.42 (m, 1H), 7.33 (t, J=8, 16 Hz, 1H), 7.00 (s, 1H), 6.87 (d, J=8 Hz, 1H), 3.84-3.89 (m, 2H), 3.75 (s, 2H), 3.32-3.44 (m, 2H), 3.14 (s, 3H), 3.00 (s, 3H), 2.45 (s, 3H), 2.38 (d, J= 12 Hz, 2H), 1.72-1.81 (m, 2H); MS (ES+) [M+H]+= 453.
【０１７８】
６．１７．実施例１７：３−（４−（メトキシメチル）−１−（５−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）ピペリジン−４−カルボキサミド）フェニルジメチルカルバメートの合成
【０１７９】
【化２１】
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【０１８０】
Ａ．１−ｔｅｒｔ−ブチル４−エチル４−（メトキシメチル）ピペリジン−１，４−ジカルボキシレートの調製。ＴＨＦ（２０ｍＬ）中の１−ｔｅｒｔ−ブチル４−エチルピペリジン−１，４−ジカルボキシレート（１．０ｇ、４．０７ｍｍｏｌ）の溶液に、−７８℃、窒素下で、ＬＤＡ（ＴＨＦ中１．５Ｍ、４．０ｍＬ、６．１０ｍｍｏｌ）を滴下で添加した。この溶液を−７８℃で１時間撹拌し、その後塩化メトキシメチル（０．８ｍＬ、１０．５ｍｍｏｌ）を添加した。系を２時間かけてゆっくりと室温まで加温した。反応をＮＨ４Ｃｌ水溶液で停止し、酢酸エチル（３×５０ｍＬ）で抽出した。有機層をシリカゲルパッドで乾燥し、溶媒を真空下で除去した。表題の化合物を、シリカゲルクロマトグラフィ（５％−１０％  酢酸エチル：ヘキサン）により清澄な油として単離した（８３０ｍｇ、収率６９％）。ＭＳ（ＥＳ＋）［Ｍ＋Ｈ］＋＝３０２．４。
【０１８１】
Ｂ．１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４−（メトキシメチル）−ピペリジン−４−カルボン酸の調製。エタノール／水（１：２）（９ｍＬ）中の工程Ａ由来の１−ｔｅｒｔ−ブチル４−エチル４−（メトキシメチル）ピペリジン−１，４−ジカルボキシレート（７３２ｍｇ、２．６３ｍｍｏｌ）の溶液に、水酸化リチウム一水和物（７００ｍｇ）を添加した。混合物を７５℃まで１時間加熱した。反応物を室温まで冷却し、５０ｍＬの飽和ＮａＨＳＯ４水溶液中に注いだ。水層を酢酸エチル（３×５０ｍＬ）で抽出した。組み合わせた有機層を塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、真空下で濃縮して、表題の化合物を粘稠性の黄色の油として得て、さらなる精製を行うことなく次の工程に用いた。ＭＳ（ＥＳ＋）［Ｍ＋Ｈ］＋＝２７４．２。
【０１８２】
Ｃ．ｔｅｒｔ−ブチル４−（３−（ジメチルカルバモイルオキシ）フェニルカルバモイル）−４−（メトキシメチル）ピペリジン−１−カルボキシレートの調製。ＣＨ２Ｃｌ２（１３ｍＬ）中の工程Ｂ由来の１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４−（メトキシメチル）−ピペリジン−４−カルボン酸（７１８ｍｇ、２．６３ｍｍｏｌ）、ピリジン（０．８４ｍＬ、１０．５２ｍｍｏｌ）、及びＤＭＦ（触媒、３滴）の溶液に、塩化オキサリル（０．２５ｍＬ、２．８９ｍｍｏｌ、注意：発熱性）を滴下した。気体の発生がおさまった後、常温で３０分間、反応物を撹拌した。３−アミノフェニルジメチルカルバメート（４７５ｍｇ、２．６３ｍｍｏｌ）をこの溶液に一度に添加し、さらに３０分間撹拌した。反応を飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液で停止し、水層を酢酸エチル（３×５０ｍＬ）で抽出した。組み合わせた有機層を塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥して、濾過し、真空下で濃縮した。シリカゲルクロマトグラフィ（５０％  酢酸エチル：ヘキサン）により、表題の化合物（１．０３ｇ、２工程に関して収率９０％）を得た。ＭＳ（ＥＳ＋）［Ｍ＋ＮＨ４］＋＝４５３．３。
【０１８３】
Ｄ．３−（４−（メトキシメチル）ピペリジン−４−カルボキサミド）フェニルジメチルカルバメートの調製。メタノール（１０ｍＬ）中の工程Ｃ由来のｔｅｒｔ−ブチル４−（３−（ジメチルカルバモイルオキシ）−フェニルカルバモイル）−４−（メトキシメチル）ピペリジン−１−カルボキシレート（１．０３ｇ、２．３７ｍｍｏｌ）の溶液に、ＨＣｌ（ジオキサン中の４Ｍの溶液、２ｍＬ）を添加した。反応物を５０℃で１時間加熱し、その後真空下で濃縮して、表題の化合物を塩酸塩として得た。ＭＳ（ＥＳ＋）［Ｍ＋Ｈ］＋＝３３６．３。
【０１８４】
Ｅ．３−（４−（メトキシメチル）−１−（５−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）ピペリジン−４−カルボキサミド）フェニルジメチルカルバメートの調製。イソプロパノール（５ｍＬ）中の工程Ｄ由来の３−（４−（メトキシメチル）ピペリジン−４−カルボキサミド）フェニルジメチルカルバメート、及びＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（２ｍＬ、１１．９ｍｍｏｌ）の溶液に、４−クロロ−５−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン（３９７ｍｇ、２．３７ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を、１１０℃まで１７時間封止高圧バイアル中で加熱すると、その間に混合物は均一になった。反応物を真空下で濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィ（３％−５％  メタノール：ＣＨ２Ｃｌ２）により精製した。生成物を冷メタノールで洗浄し、表題の化合物をオフホワイト色の固体として得た（４６２ｍｇ、収率４２％）。
【０１８５】
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 11.50 (br. s., 1H), 9.45 (s, 1H), 8.18 (s, 1H), 7.54-7.57 (m, 1H), 7.47 (d, J=8.84 Hz, 1H), 7.29 (t, J=8.08 Hz, 1H), 7.04 (s, 1H), 6.81 (dd, J=8.08, 2.27 Hz, 1H), 3.68-3.78 (m, 2H), 3.56 (s, 2H), 3.26 (s, 3H), 3.21 (m, 2H), 3.04 (s, 3H), 2.91 (s, 3H), 2.34 (s, 3H), 2.22-2.31 (m, 2H), 1.65-1.78 (m, 2H); MS (ES+) [M+H]+ = 467.3.
【０１８６】
６．１８．実施例１８：３−（４−（（２−メトキシエトキシ）メチル）−１−（５−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）ピペリジン−４−カルボキサミド）フェニルジメチルカルバメートの合成
【０１８７】
【化２２】
0005575110.tif 000023
【０１８８】
Ａ．１−ｔｅｒｔ−ブチル４−エチル４−（（２−メトキシエトキシ）メチル）ピペリジン−１，４−ジカルボキシレートの調製。ＴＨＦ（７０ｍＬ）中の１−ｔｅｒｔ−ブチル４−エチルピペリジン−１，４−ジカルボキシレート（２．０ｇ、７．８ｍｍｏｌ）の溶液に、−７８℃で、ＬＤＡを８分かけて滴下し、温度を−７５℃未満に維持した。混合物を−７８℃で１時間撹拌した。温度を−７５℃未満に維持しながら、１−クロロメトキシ−２−メトキシ−エタン（０．９７ｇ、７．８ｍｍｏｌ）を滴下した。混合物を−７８℃で３時間撹拌し、その後室温まで終夜ゆっくりと加温した。混合物の反応を飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液で停止し、ＥｔＯＡｃで３回抽出した。有機層を組み合わせ、塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濃縮した。シリカゲルクロマトグラフィ（１０％−２０％  酢酸エチル：ヘキサン）により、表題の化合物を収率６７％で得た。ＭＳ（ＥＳ＋）［Ｍ＋Ｈ］＋＝３４６。
【０１８９】
Ｂ．１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４−（２−メトキシエトキシ）ピペリジン−４−カルボン酸の調製。工程Ａ由来の１−ｔｅｒｔ−ブチル４−エチル４−（（２−メトキシエトキシ）メチル）ピペリジン−１，４−ジカルボキシレート（１．７８ｇ、５．１５ｍｍｏｌ）を、８０℃で１８時間、エタノール（１２ｍＬ）及び水（２４ｍＬ）中のＬｉＯＨ（０．６２ｇ、２６ｍｍｏｌ）で処理した。混合物を冷却し、ジクロロメタンで希釈し、飽和ＮａＨＳＯ４水溶液で洗浄した。水相をジクロロメタンで逆抽出し（３×）、有機層を組み合わせ、塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濃縮して、表題の化合物を定量的収率で得た。ＭＳ（ＥＳ＋）［Ｍ＋Ｈ］＋＝３１８。
【０１９０】
Ｃ．ｔｅｒｔ−ブチル４−（３−（ジメチルカルバモイルオキシ）フェニルカルバモイル）−４−（２−メトキシエトキシ）ピペリジン−１−カルボキシレートの調製。ジクロロエタン中の工程Ｂ由来の１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４−（２−メトキシエトキシ）ピペリジン−４−カルボン酸（１．６ｇ、５．１ｍｍｏｌ）の溶液に、ピリジン（１．６ｇ、２０ｍｍｏｌ）及びＤＭＦ（０．０５ｍＬ）を、その後塩化オキサリル（０．６５ｇ、５．１ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を３０分間撹拌し、その後３−アミノフェニルジメチルカルバメート（０．９１ｇ、５．０４ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を１８時間撹拌し、その後ジクロロメタンで希釈し、１Ｎ  ＨＣｌ水溶液で２回及び塩水で１回洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濃縮した。シリカゲルクロマトグラフィ（０％−５％  ＭｅＯＨ：ＣＨ２Ｃｌ２）により、表題の化合物を収率８８％で得た。ＭＳ（ＥＳ＋）［Ｍ＋Ｈ］＋＝４８０。
【０１９１】
Ｄ．３−（４−（２−メトキシエトキシ）ピペリジン−４−カルボキサミド）フェニルジメチルカルバメートの調製。工程Ｃ由来のｔｅｒｔ−ブチル４−（３−（ジメチルカルバモイルオキシ）フェニルカルバモイル）−４−（２−メトキシエトキシ）ピペリジン−１−カルボキシレート（２．１ｇ、４．４ｍｍｏｌ）を、５０℃で３０分間、メタノール（２０ｍＬ）中でＨＣｌ（ジオキサン中４．０Ｎ、５．５ｍＬ、２２ｍｍｏｌ）で処理した。混合物を濃縮して、表題の化合物を塩酸塩として定量的収率で得た。ＭＳ（ＥＳ＋）［Ｍ＋Ｈ］＋＝３８０。
【０１９２】
Ｅ．３−（４−（（２−メトキシエトキシ）メチル）−１−（５−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）ピペリジン−４−カルボキサミド）フェニルジメチルカルバメートの調製。工程Ｄ由来の３−（４−（２−メトキシエトキシ）ピペリジン−４−カルボキサミド）フェニルジメチルカルバメート（１．８２ｇ、４．３８ｍｍｏｌ）、４−クロロ−５−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン（０．７３ｇ、４．４ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（２．８ｇ、２２ｍｍｏｌ）、及びイソプロパノール（５０ｍＬ）を定圧封止管中で組み合わせ、１１５℃で１８時間加熱した。混合物を濃縮し、クロマトグラフィ（ＳｉＯ２、０％−５％  ＭｅＯＨ：ＣＨ２Ｃｌ２）に供して、表題の化合物を収率６１％で得た。
【０１９３】
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 11.48 (s, 1H), 9.43 (s, 1H), 8.18 (s, 1H), 7.52 (s, 1H), 7.44 (d, J=8 Hz, 1H), 7.30 (t, J=8 and 16 Hz, 1H), 7.05 (s, 1H), 6.81 (d, J=8 Hz, 1H), 3.68-3.76 (m, 2H), 3.67 (s, 2H), 3.55-3.58 (m, 2H), 3.44-3.47 (m, 2H), 3.24-3.30 (m, 2H), 3.23 (s, 3H), 3.04 (s, 3H), 2.91 (s, 3H), 2.35 (s, 3H), 2.26 (d, J=16 Hz, 2H), 1.69-1.76 (m, 2H); MS (ES+) [M+H]+= 511.
【０１９４】
６．１９．実施例１９：３−（４−（（ベンジルオキシカルボニルアミノ）メチル）−１−（５−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）ピペリジン−４−カルボキサミド）フェニルジメチルカルバメートの合成
【０１９５】
【化２３】
0005575110.tif 000024
【０１９６】
Ａ．１−ｔｅｒｔ−ブチル４−メチル４−（（ベンジルオキシカルボニルアミノ）−メチル）ピペリジン−１，４−ジカルボキシレートの調製。ＣＨ２Ｃｌ２（５ｍＬ）中の１−ｔｅｒｔ−ブチル４−メチル４−（アミノメチル）ピペリジン−１，４−ジカルボキシレート（０．３００ｇ、１．１ｍｍｏｌ）及びＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．２２９ｍＬ、１．３２ｍｍｏｌ）の溶液に、０℃で、クロロギ酸ベンジルを添加した。反応物を終夜撹拌し、その後ＣＨ２Ｃｌ２で希釈し、Ｈ２Ｏ及び塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、真空下で濃縮した。残留物をシリカゲルクロマトグラフィ（ＥｔＯＡｃ：ヘキサングラジエント）により精製して、表題の化合物を収率８２％で得た。ＭＳ（ＥＳ＋）［Ｍ＋Ｈ］＋＝４０７。
【０１９７】
Ｂ．４−（（ベンジルオキシカルボニルアミノ）メチル）−１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピペリジン−４−カルボン酸の調製。メタノール（５ｍＬ）中の工程Ａ由来の１−ｔｅｒｔ−ブチル４−メチル４−（（ベンジルオキシカルボニルアミノ）メチル）ピペリジン−１，４−ジカルボキシレートの溶液に、１Ｎ  ＮａＯＨ水溶液（０．６１５ｍＬ、０．６１５ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を５０℃で終夜加熱し、１Ｎ  ＨＣｌ水溶液でｐＨ５に酸性化し、ＣＨ２Ｃｌ２で３回抽出した。組み合わせた有機抽出物を塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、真空下で濃縮して、表題の化合物を得て、未精製のまま用いた。ＭＳ（ＥＳ＋）［Ｍ＋Ｈ］＋＝３９３。
【０１９８】
Ｃ．ｔｅｒｔ−ブチル４−（（ベンジルオキシカルボニルアミノ）メチル）−４−（３−（ジメチルカルバモイルオキシ）フェニルカルバモイル）ピペリジン−１−カルボキシレートの調製。Ｎ２雰囲気下で、工程Ｂ由来の４−（（ベンジルオキシカルボニルアミノ）メチル）−１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピペリジン−４−カルボン酸（０．２４０ｇ、０．６１１ｍｍｏｌ）、ピリジン（０．１９７ｍＬ、２．４４ｍｍｏｌ）、及びＤＭＦ（３滴）を、ＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）に溶解し、氷浴中で冷却した。塩化オキサリル（０．０６４ｍＬ、０．７３３ｍｍｏｌ）を溶液に滴下した。その後反応物を氷浴から取り出し、室温で３０分間撹拌した。反応物を氷浴中で再冷却し、３−アミノフェニルジメチルカルバメート（０．１１０ｇ、０．６１１ｍｍｏｌ）を一度に添加した。反応物を終夜撹拌し、その後１Ｎ  ＨＣｌ水溶液及び塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、真空下で濃縮した。残留物をシリカゲルクロマトグラフィ（酢酸エチル：ヘキサングラジエント）により精製して、表題の化合物を収率７２％で得た。ＭＳ（ＥＳ＋）［Ｍ＋ＮＨ４］＋＝５７３。
【０１９９】
Ｄ．３−（４−（（ベンジルオキシカルボニルアミノ）メチル）ピペリジン−４−カルボキサミド）フェニルジメチルカルバメートの調製。ＭｅＯＨ（２ｍＬ）中の工程Ｃ由来のｔｅｒｔ−ブチル４−（（ベンジルオキシカルボニルアミノ）メチル）−４−（３−（ジメチルカルバモイルオキシ）フェニルカルバモイル）−ピペリジン−１−カルボキシレート（０．２４５ｇ、０．４４１ｍｍｏｌ）の溶液に、ジオキサン中の４Ｍ  ＨＣｌ（０．３３１ｍＬ、１．３２ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を５０℃で１時間加熱し、その後真空下で濃縮し、ＭｅＯＨに再溶解し、２回再濃縮して、表題の化合物を塩酸塩として得た。ＭＳ（ＥＳ＋）［Ｍ＋Ｈ］＋＝４５５。
【０２００】
Ｅ．３−（４−（（ベンジルオキシカルボニルアミノ）メチル）−１−（５−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）ピペリジン−４−カルボキサミド）フェニルジメチルカルバメートの調製。工程Ｄ由来の３−（４−（（ベンジルオキシカルボニルアミノ）メチル）ピペリジン−４−カルボキサミド）フェニルジメチルカルバメート（０．２１６ｇ、０．４４１ｍｍｏｌ）、４−クロロ−５−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン（０．０７３ｇ、０．４４１ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．２３０ｍＬ、１．３２ｍｍｏｌ）、及びイソプロパノール（５ｍＬ）を組み合わせ、１２０℃で終夜、圧力容器中で加熱した。粗反応物をＣＨ２Ｃｌ２で希釈し、Ｈ２Ｏ及び塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、真空下で濃縮した。残留物をシリカゲルクロマトグラフィ（ＭｅＯＨ：ＣＨ２Ｃｌ２グラジエント）により精製して、表題の化合物を収率５４％で得た。
【０２０１】
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 8.18 (s, 1H), 7.49 (s, 1H), 7.40 (d, J=8 Hz, 1H), 7.26-7.34 (m, 6H), 7.00 (s, 1H), 6.89 (d, J=8 Hz, 1H), 5.06 (s, 2H), 3.92 (d, J=13.2 Hz, 2H), 3.50 (s, 2H), 3.28-3.37 (m, 2H), 3.1 (s, 3H), 2.99 (s, 3H), 2.43 (s, 3H), 2.40 (d, J=12 Hz, 2H), 1.79 (t, J=10.6, 21.2 Hz, 2H); MS (ES+) [M+H]+ = 586.
【０２０２】
６．２０．実施例２０：３−（４−（アミノメチル）−１−（５−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）ピペリジン−４−カルボキサミド）フェニルジメチルカルバメートの合成
【０２０３】
【化２４】
0005575110.tif 000025
【０２０４】
実施例１９、工程Ｅ由来の３−（４−（（ベンジルオキシカルボニルアミノ）メチル）−１−（５−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）ピペリジン−４−カルボキサミド）フェニルジメチルカルバメート（０．１４０ｇ、０．２３９ｍｍｏｌ）、Ｐｄ／Ｃ（１０％Ｐｄ／Ｃ、パールマン）、及びメタノール（５ｍＬ）を組み合わせ、１気圧で終夜水素化した。反応物をセライトで濾過し、真空下で濃縮し、中性相（neutral phase）分取ＨＰＬＣにより精製して、表題の化合物を酢酸塩として収率５２％で得た。
【０２０５】
1H NMR (400 MHz, D2O) δ ppm 7.90 (s, 1H), 7.30 (t, J=8, 6 Hz, 1H), 7.18-7.19 (m, 2H), 6.84-6.88 (m, 1H), 3.48 (d, J= 13.6 Hz, 2H), 3.20 (s, 2H), 3.08 (t, J=10.8, 21.6 Hz, 2H), 2.96 (s, 3H), 2.83 (s, 3H), 2.27 (d, J=14.4 Hz, 2H), 2.11 (s, 3H), 1.72 (t, J=10, 20 Hz, 2H); MS (ES+) [M+H]+= 452.
【０２０６】
６．２１．実施例２１：３−（４−（（ジメチルアミノ）メチル）−１−（５−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）ピペリジン−４−カルボキサミド）フェニルジメチルカルバメートの合成
【０２０７】
【化２５】
0005575110.tif 000026
【０２０８】
実施例２０由来の３−（４−（アミノメチル）−１−（５−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）ピペリジン−４−カルボキサミド）フェニルジメチルカルバメートの酢酸塩（１４ｍｇ、０．０２７ｍｍｏｌ）、酢酸（６．２μｌ、０．１１ｍｍｏｌ）、及びＮａＢＨ３ＣＮ（２．１ｍｇ、０．０３４ｍｍｏｌ）の溶液に、ホルムアルデヒド（Ｈ２Ｏ中３７％、４８μｌ、０．０６４ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を終夜撹拌し、その後濃縮し、残留物を分取ＨＰＬＣ（３０×１００ｍｍ  Ｃ１８カラム、５％−７０％  ＭｅＣＮ：Ｈ２Ｏ（１０ｍＭ  ＮＨ４ＯＡｃ）、１２分、４５ｍＬ／分）により精製し、凍結乾燥して、表題の化合物（８ｍｇ、０．０１４ｍｍｏｌ、５７％）を酢酸塩として得た。
【０２０９】
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 8.18 (s, 1 H), 7.51 (t, J=2.02 Hz, 1 H), 7.37 - 7.42 (m, 1 H), 7.34 (t, J=8.08 Hz, 1 H), 7.00 (s, 1 H), 6.85 - 6.91 (m, 1 H), 3.89 (d, J=13.64 Hz, 2 H), 3.38 - 3.48 (m, 2 H), 3.14 (s, 3 H), 3.01 (s, 3 H), 2.72 (s, 2 H), 2.36-2.45 (m, 11 H), 1.79 (ddd, J=13.71, 10.42, 3.41 Hz, 2 H); MS (ES+) [M+H]+ = 480.
【０２１０】
６．２２．実施例２２：３−（４−（２−（ジメチルアミノ）エチル）−１−（５−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）ピペリジン−４−カルボキサミド）フェニルジメチルカルバメートの合成
【０２１１】
【化２６】
0005575110.tif 000027
【０２１２】
Ａ．１−ｔｅｒｔ−ブチル４−エチル４−（２−（ジメチルアミノ）エチル）ピペリジン−１，４−ジカルボキシレートの調製。ＴＨＦ（１０ｍＬ）中の１−ｔｅｒｔ−ブチル４−エチルピペリジン−１，４−ジカルボキシレート（５１４ｍｇ、２ｍｍｏｌ）の溶液に、−７８℃で、ＬＤＡ（シクロヘキサン中１．５Ｍ、２ｍＬ、３ｍｍｏｌ）を滴下した。３０分間撹拌した後、ＴＨＦ（３ｍＬ）中の２−ブロモ−Ｎ，Ｎ−ジメチルエタンアミン（３７０ｍｇ、２．４ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を−７８℃で３０分間撹拌し、その後室温まで加温し、２時間撹拌し、その後飽和ＮａＨＣＯ３水溶液で反応停止し、ＥｔＯＡｃで希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液及び塩水（逆抽出により）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、真空下で濃縮した。残留物をフラッシュクロマトグラフィ（４０ｇ  ＳｉＯ２、０％−１５％  ＭｅＯＨ：ＣＨ２Ｃｌ２）により精製して、表題の化合物（３２８ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ、５０％）を黄色の油として得た。ＭＳ（ＥＳ＋）［Ｍ＋Ｈ］＋＝３２９。
【０２１３】
Ｂ．１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４−（２−（ジメチルアミノ）エチル）ピペリジン−４−カルボン酸の調製。工程Ａ由来の１−ｔｅｒｔ−ブチル４−エチル４−（２−（ジメチルアミノ）エチル）ピペリジン−１，４−ジカルボキシレート（３２８ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）を、６０℃で終夜、ＥｔＯＨ：Ｈ２Ｏ（１：１）（５ｍＬ）中の水酸化リチウム（lithium hyrdroxide）一水和物（２１０ｍｇ、５ｍｍｏｌ）で処理した。反応物を室温まで冷却し、１Ｎ  ＨＣｌ水溶液でｐＨ６に中和し、真空下で濃縮した。残留物を分取ＨＰＬＣにより精製し、２回凍結乾燥して、表題の化合物（１９１ｍｇ、６４％）を白色の固体として得た。ＭＳ（ＥＳ＋）［Ｍ＋Ｈ］＋＝３０１。
【０２１４】
Ｃ．ｔｅｒｔ−ブチル４−（２−（ジメチルアミノ）エチル）−４−（３−（ジメチルカルバモイルオキシ）フェニルカルバモイル）ピペリジン−１−カルボキシレートの調製。工程Ｂ由来の１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４−（２−（ジメチルアミノ）エチル）ピペリジン−４−カルボン酸（１００ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（１７５ｍｇ、０．４６ｍｍｏｌ）、及びＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．１１６ｍＬ、０．６７ｍｍｏｌ）を、酢酸イソプロピル中で１０分間撹拌した。３−アミノフェニルジメチルカルバメート（９０ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）を添加し、反応物を８５℃で２時間撹拌し、室温まで冷却し、終夜撹拌し、その後ＥｔＯＡｃで希釈し、飽和Ｎａ２ＣＯ３水溶液及び塩水（逆抽出により）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、真空下で濃縮して、表題の化合物を粘稠性の油として得た。ＭＳ（ＥＳ＋）［Ｍ＋Ｈ］＋＝４６３。
【０２１５】
Ｄ．３−（４−（２−（ジメチルアミノ）エチル）ピペリジン−４−カルボキサミド）フェニルジメチルカルバメートの調製。工程Ｃ由来の粗ｔｅｒｔ−ブチル４−（２−（ジメチルアミノ）エチル）−４−（３−（ジメチルカルバモイルオキシ）フェニルカルバモイル）ピペリジン−１−カルボキシレートを、４５分間、ＴＦＡ：ＣＨ２Ｃｌ２（１：１）（１．５ｍＬ）で処理した。反応物を真空下で濃縮し、残留物を分取ＨＰＬＣ（３０×１００ｍｍ  Ｃ１８カラム、０％−５０％  ＭｅＯＨ：Ｈ２Ｏ（０．１％ＴＦＡ）、１２分、４５ｍＬ／分）により精製し、凍結乾燥して（lyophized）、不純な表題の化合物（１７３ｍｇ）をＴＦＡ塩として得た。ＭＳ（ＥＳ＋）［Ｍ＋Ｈ］＋＝３６３。
【０２１６】
Ｅ．３−（４−（２−（ジメチルアミノ）エチル）−１−（５−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）ピペリジン−４−カルボキサミド）フェニルジメチルカルバメートの調製。工程Ｄ由来の不純な３−（４−（２−（ジメチルアミノ）エチル）ピペリジン−４−カルボキサミド）フェニルジメチルカルバメート（１７３ｍｇ）を、イソブタノール（０．４ｍＬ）中の４−クロロ−５−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン（５０ｍｇ、０．３０ｍｍｏｌ）及びＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．１７４ｍＬ、５ｍｍｏｌ）と組み合わせ、１１０℃で７時間加熱した。反応物を室温まで冷却し、真空下で濃縮した。残留物を分取ＨＰＬＣ（３０×１００ｍｍ  Ｃ１８カラム、１０％−７０％  ＭｅＣＮ：Ｈ２Ｏ（１０ｍＭ  ＮＨ４ＯＡｃ）、１２分、４５ｍＬ／分）により精製し、凍結乾燥して、表題の化合物（６０ｍｇ）を二酢酸塩として得た。
【０２１７】
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 8.19 (s, 1 H), 7.52 (t, J=2.15 Hz, 1 H), 7.44 (d, J=8.08 Hz, 1 H), 7.35 (t, J=8.08 Hz, 1 H), 7.01 (s, 1 H), 6.91 (dd, J=7.58, 1.77 Hz, 1 H), 3.91 (d, J=13.64 Hz, 2 H), 3.37-3.30 (m, 2 H), 3.14 (s, 3 H), 3.01 (s, 3 H), 2.75 - 2.82 (m, 2 H), 2.58 (s, 6 H), 2.43 - 2.47 (m, 5 H), 2.00 - 2.08 (m, 2 H), 1.79 - 1.89 (m, 2 H); MS (ES+) [M+H]+= 494.
【０２１８】
６．２３．実施例２３：３−（４−（（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）メチル）−１−（５−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）ピペリジン−４−カルボキサミド）フェニルジメチルカルバメートの合成
【０２１９】
【化２７】
0005575110.tif 000028
【０２２０】
Ａ．１−ｔｅｒｔ−ブチル４−エチル４−（（１−トリチル−１Ｈ−イミダゾール−４−イル）メチル）ピペリジン−１，４−ジカルボキシレートの調製。無水ＴＨＦ（１０ｍＬ）中の１−ｔｅｒｔ−ブチル４−エチルピペリジン−１，４−ジカルボキシレート（３６０ｍｇ、１．３９ｍｍｏｌ）の溶液に、−７８℃で、ＬＤＡ（ＴＨＦ中１．７Ｍ、１．０７ｍＬ、１．８ｍｍｏｌ）を１０分かけて滴下した。反応混合物を−７８℃で１時間撹拌し、ＴＨＦ（５ｍＬ）中の４−（クロロメチル）−１−トリチル−１Ｈ−イミダゾール（５００ｍｇ、１３．９ｍｍｏｌ）をゆっくりと添加した。反応混合物を、１時間かけて室温まで加温し、飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液（１０ｍＬ）で反応停止し、ＥｔＯＡｃ（３×２０ｍＬ）で抽出した。組み合わせた有機抽出物を塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過し、真空下で濃縮した。シリカゲルクロマトグラフィ（１０％−５０％  ＥｔＯＡｃ：ヘキサン）による精製により、表題の化合物（４０３ｍｇ、５１％）を得た。ＭＳ（ＥＳ＋）［Ｍ＋Ｈ］＋＝５８０．３。
【０２２１】
Ｂ．１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４−（（１−トリチル−１Ｈ−イミダゾール−４−イル）メチル）ピペリジン−４−カルボン酸の調製。ＴＨＦ：ＭｅＯＨ：Ｈ２Ｏ（１：１：２）（１０ｍＬ）中の工程Ａ由来の１−ｔｅｒｔ−ブチル４−エチル４−（（１−トリチル−１Ｈ−イミダゾール−４−イル）メチル）ピペリジン−１，４−ジカルボキシレート（３３０ｍｇ、０．５７ｍｍｏｌ）の溶液に、ＬｉＯＨ（１３６ｍｇ、５．７ｍｍｏｌ）を添加した。ＬＣＭＳにより生成物への完全な変換が示されるまで混合物を還流し、その後真空下で濃縮し、水（３ｍＬ）に溶解し、ＮａＨＳＯ４水溶液でｐＨ５〜６に中和し、酢酸エチル（３×１０ｍＬ）で抽出した。組み合わせた有機相を塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、真空下で濃縮して、表題の化合物（２７３ｍｇ、８６％）を得た。ＭＳ（ＥＳ＋）［Ｍ＋Ｈ］＋＝５５２．２。
【０２２２】
Ｃ．ｔｅｒｔ−ブチル４−（３−（ジメチルカルバモイルオキシ）フェニルカルバモイル）−４−（（１−トリチル−１Ｈ−イミダゾール−４−イル）メチル）ピペリジン−１−カルボキシレートの調製。酢酸イソプロピル（５ｍＬ）中の工程Ｂ由来の１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４−（（１−トリチル−１Ｈ−イミダゾール−４−イル）メチル）ピペリジン−４−カルボン酸（２７０ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）の溶液に、ＨＡＴＵ（２７３ｍｇ、０．７３ｍｍｏｌ）及びＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（２０５μＬ、１．２ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を５分間撹拌し、３−アミノフェニルジメチルカルバメート（１０８ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を９０℃で２時間加熱した。反応混合物をＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ）で希釈し、ＮａＨＣＯ３水溶液及び塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過し、真空下で濃縮した。残留物をシリカゲルクロマトグラフィ（１０％−７０％  ＥｔＯＡｃ：ヘキサン）により精製して、表題の化合物（１８５ｍｇ、４３％）を得た。ＭＳ（ＥＳ＋）［Ｍ＋Ｈ］＋＝７１４．２。
【０２２３】
Ｄ．３−（４−（（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）メチル）ピペリジン−４−カルボキサミド）フェニルジメチルカルバメートの調製。ＭｅＯＨ（５ｍＬ）中の工程Ｃ由来のｔｅｒｔ−ブチル４−（３−（ジメチルカルバモイルオキシ）−フェニルカルバモイル）−４−（（１−トリチル−１Ｈ−イミダゾール−４−イル）メチル）ピペリジン−１−カルボキシレート（１８０ｍｇ）の溶液に、ＨＣｌ（ジオキサン中１Ｎ、１ｍＬ）を添加した。反応物を６０℃で１時間加熱し、その後真空下で濃縮した。残留物をＥｔＯＡｃ（５ｍＬ）に溶解し、ＮａＨＣＯ３水溶液及び塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過し、真空下で濃縮して、表題の化合物を生成した（８４ｍｇ、９３％）。ＭＳ（ＥＳ＋）［Ｍ＋Ｈ］＋＝３７２．２。
【０２２４】
Ｅ．３−（４−（（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）メチル）−１−（５−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）ピペリジン−４−カルボキサミド）フェニルジメチルカルバメートの調製。工程Ｄ由来の３−（４−（（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）メチル）ピペリジン−４−カルボキサミド）フェニルジメチルカルバメート（１０ｍｇ、０．０２７ｍｍｏｌ）、４−クロロ−５−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン（５ｍｇ、０．０３ｍｍｏｌ）、及びＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（２３μＬ、０．１３５ｍｍｏｌ）を、イソプロパノール（０．５ｍＬ）中で組み合わせた。得られた混合物を、１００℃で２４時間、封止圧力管中で加熱した。反応混合物を冷却し、真空下で濃縮した。残留物を分取ＨＰＬＣ（１０％−９５％  ＭｅＯＨ：Ｈ２Ｏ（０．１％  ＨＣＯＯＨを含む））により精製し、その後Ｈ２Ｏ中のＡｃＯＨで処理し、凍結乾燥して、表題の化合物（５．７ｍｇ、４２％）を酢酸塩として得た。
【０２２５】
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 8.17 (s, 1 H), 7.61 (s, 1 H), 7.42 - 7.45 (m, 1 H), 7.31 - 7.39 (m, 2 H), 6.99 - 7.01 (m, 1 H), 6.87 - 6.91 (m, 1 H), 6.79 (s, 1 H), 3.90 - 3.98 (m, 2 H), 3.14 (s, 3 H), 3.02 (br. s., 2 H), 3.01 (s, 3 H), 2.44 (d, J=1.01 Hz, 3 H), 2.36 - 2.43 (m, 2 H), 1.94 (s, 3 H), 1.83 - 1.93 (m, 4 H); MS (ES+) [M+H]+ = 503.3.
【０２２６】
６．２４．実施例２４：３−（４−（ベンジルオキシ）−１−（５−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）ピペリジン−４−カルボキサミド）フェニルジメチルカルバメートの合成
【０２２７】
【化２８】
0005575110.tif 000029
【０２２８】
Ａ．１−ｔｅｒｔ−ブチル４−メチル４−ヒドロキシピペリジン−１，４−ジカルボキシレートの調製。ジクロロメタン（２５ｍＬ）中のメチル４−ヒドロキシピペリジン−４−カルボキシレート（２００５年４月１４日付けで出願されたZheng et al.の米国特許出願公開第２００５／００８００９５号明細書に記載のように調製した）（７９２ｍｇ、４．９８ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（１．０４ｍＬ、７．４７ｍｍｏｌ）の溶液に、ジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカーボネート（１．２６ｍＬ、５．４８ｍｍｏｌ）を添加した。反応の進行は、ＴＬＣ分析／ＥＬＳＤによりモニタリングした。完了時に、揮発性物質を真空下で除去した。シリカゲルクロマトグラフィ（０％−１０％  ＭｅＯＨ：ＣＨ２Ｃｌ２）により、表題の化合物を清澄な油として得た（１．２５ｇ、収率９９％）。ＭＳ（ＥＳ＋）［Ｍ＋Ｈ］＋＝２５０．２。
【０２２９】
Ｂ．１−ｔｅｒｔ−ブチル４−メチル４−（ベンジルオキシ）ピペリジン−１，４−ジカルボキシレートの調製。ＤＭＦ（８．２ｍＬ）中の工程Ａ由来の１−ｔｅｒｔ−ブチル４−メチル４−ヒドロキシピペリジン−１，４−ジカルボキシレート（５３５ｍｇ、２．０６ｍｍｏｌ）の溶液に、水素化ナトリウム（鉱物油中の６０％ディスパージョン、１２４ｍｇ、３．０９ｍｍｏｌ）を慎重に添加した。混合物を３０分間室温で撹拌した。臭化ベンジル（０．２９ｍＬ、２．４７ｍｍｏｌ）を添加し、反応物をさらに３０分間撹拌した。ＴＬＣ分析により完了がモニタリングされた時に、反応を、５０ｍＬの飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液：水（１：１）で停止した。水層を酢酸エチル（３×５０ｍＬ）で抽出した。組み合わせた有機層を塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、真空下で濃縮した。シリカゲルクロマトグラフィ（５％−１０％  酢酸エチル：ヘキサン）により、表題の化合物を清澄な油として得た（３５９ｍｇ、収率５４％）。ＭＳ（ＥＳ＋）［Ｍ＋Ｈ］＋＝３４０．３。
【０２３０】
Ｃ．１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４−（ベンジルオキシ）−ピペリジン−４−カルボン酸の調製。メタノール／水（１：２）（６ｍＬ）中の工程Ｂ由来の１−ｔｅｒｔ−ブチル４−メチル４−（ベンジルオキシ）ピペリジン−１，４−ジカルボキシレート（３５０ｍｇ、１．００ｍｍｏｌ）の溶液に、水酸化リチウム一水和物（２００ｍｇ）を添加した。混合物を６０℃まで３０分間加熱し、その後室温まで冷却し、飽和ＮａＨＳＯ４水溶液（２５ｍＬ）上に注いだ。水層を酢酸エチル（３×２５ｍＬ）で抽出した。組み合わせた有機層を塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、真空下で濃縮して、表題の化合物を粘稠性の油として得て、さらなる精製を行うことなく次の工程に用いた。
【０２３１】
Ｄ．ｔｅｒｔ−ブチル４−（ベンジルオキシ）−４−（３−（ジメチルカルバモイルオキシ）フェニル−カルバモイル）ピペリジン−１−カルボキシレートの調製。ＣＨ２Ｃｌ２（６．８ｍＬ）中の工程Ｃ由来の１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４−（ベンジルオキシ）−ピペリジン−４−カルボン酸（３３５ｍｇ、１．００ｍｍｏｌ）、ピリジン（０．４３ｍＬ、５．４０ｍｍｏｌ）、及びＤＭＦ（触媒、３滴）の溶液に、塩化オキサリル（０．１３ｍＬ、１．４９ｍｍｏｌ、注意：発熱性）を滴下した。気体の発生がおさまった後、常温で３０分間、反応物を撹拌した。３−アミノフェニルジメチルカルバメート（２４４ｍｇ、１．３５ｍｍｏｌ）をこの溶液に一度に添加し、さらに３０分間撹拌した。反応を飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液で停止し、水層を酢酸エチル（３×５０ｍＬ）で抽出した。組み合わせた有機層を塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、真空下で濃縮した。シリカゲルクロマトグラフィ（４０％  酢酸エチル：ヘキサン）により、表題の化合物を白色の固体として得た（４０６ｍｇ、収率８２％）。ＭＳ（ＥＳ＋）［Ｍ＋ＮＨ４］＋＝５１５．４。
【０２３２】
Ｅ．３−（４−（ベンジルオキシ）ピペリジン−４−カルボキサミド）フェニルジメチル−カルバメートの調製。メタノール（４ｍＬ）中の工程Ｄ由来のｔｅｒｔ−ブチル４−（ベンジルオキシ）−４−（３−（ジメチルカルバモイルオキシ）−フェニル−カルバモイル）ピペリジン−１−カルボキシレート（４００ｍｇ、０．８０４ｍｍｏｌ）の溶液に、ＨＣｌ（ジオキサン中の４Ｍの溶液、０．８ｍＬ）を添加した。反応物を５０℃で１時間加熱し、その後真空下で濃縮して、表題の化合物を塩酸塩として得た。ＭＳ（ＥＳ＋）［Ｍ＋Ｈ］＋＝３９８．４。
【０２３３】
Ｆ．３−（４−（ベンジルオキシ）−１−（５−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）ピペリジン−４−カルボキサミド）フェニルジメチルカルバメートの調製。イソプロパノール（１．６ｍＬ）中の工程Ｅ由来の３−（４−（ベンジルオキシ）ピペリジン−４−カルボキサミド）フェニルジメチルカルバメート、及びＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．７ｍＬ、４．０２ｍｍｏｌ）の溶液に、４−クロロ−５−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン（１３５ｍｇ、０．８０４ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を、１１０℃まで１７時間、封止高圧バイアル中で加熱し、その間に混合物は均一になった。反応物を真空下で濃縮し、該物質の半分を分取ＨＰＬＣ（３０×１００ｍｍ  Ｃ１８カラム、２０％−１００％  アセトニトリル：水（１０ｍＭ  酢酸アンモニウム）、１５分、４５ｍＬ／分）により精製して、表題の化合物（３３．４ｍｇ）を白色の固体として得た。
【０２３４】
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 9.71-9.74 (br. s., 1H), 8.22 (s, 1H), 7.51 (app q, J=1.85 Hz, 1H), 7.44-7.49 (m, 2H), 7.29-7.42 (m, 5H), 7.03 (d, J=1.01 Hz, 1H), 6.89 (ddd, J=7.83, 2.27, 1.26 Hz, 1H), 4.54 (s, 2H), 3.91-3.99 (m, 2H), 3.45-3.54 (m, 2H), 3.14 (s, 3H), 3.01 (s, 3H), 2.46 (d, J=1.01 Hz, 3H), 2.22-2.36 (m, 4H);  MS (ES+) [M+H]+ = 529.3.
【０２３５】
６．２５．実施例２５：３−（４−ヒドロキシ−１−（５−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）ピペリジン−４−カルボキサミド）フェニルジメチルカルバメートの合成
【０２３６】
【化２９】
0005575110.tif 000030
【０２３７】
実施例２４、工程Ｆ由来の粗３−（４−（ベンジルオキシ）−１−（５−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）ピペリジン−４−カルボキサミド）フェニルジメチルカルバメート（純度８５％、およそ８０ｍｇ）をメタノール（２ｍＬ）中で取り出し、触媒量のパールマン触媒を添加した。系を６０ｐｓｉで２４時間水素化すると、その後小量の生成物が観察された。トリフルオロ酢酸（０．１ｍＬ）を添加し、水素化を６０ｐｓｉ  Ｈ２で３日間継続すると、その後反応はおよそ３分の１が完了した。反応物を濾過し、生成物を分取ＨＰＬＣ（３０×１００ｍｍ  Ｃ１８カラム、１０％−１００％  アセトニトリル：水（１０ｍＭ  酢酸アンモニウム）、１５分、４５ｍＬ／分）により単離して、表題の化合物（９．６ｍｇ）を白色の固体として得た。
【０２３８】
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm  8.20 (s, 1H), 7.55 (t, J=2.02 Hz, 1H), 7.44 (ddd, J=8.08, 2.02, 1.01 Hz, 1H), 7.33 (t, J=8.08 Hz, 1H), 6.99 (app. d., J=1.01 Hz, 1H), 6.87 (ddd, J=8.08, 2.27, 0.76 Hz, 1H), 3.95-4.03 (m, 2H), 3.73 (s, 3H), 3.41 (dt, J=12.63, 2.27 Hz, 2H), 3.13-3.26 (m, 2H), 3.12 (s, 3H), 2.99 (s, 3H), 2.44 (d, J=0.76 Hz, 3H), 2.36 (dt, J=13.39, 4.29 Hz, 2H), 1.75-1.83 (m, 2H).  MS (ES+) [M+H]+= 439.3.
【０２３９】
６．２６．実施例２６：３−（４−（２−メトキシエトキシ）−１−（５−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）ピペリジン−４−カルボキサミド）フェニルジメチルカルバメートの合成
【０２４０】
【化３０】
0005575110.tif 000031
【０２４１】
Ａ．１−ｔｅｒｔ−ブチル４−メチル４−（２−メトキシエトキシ）ピペリジン−１，４−ジカルボキシレートの調製。ＤＭＦ（５．６ｍＬ）中の１−ｔｅｒｔ−ブチル４−メチル４−ヒドロキシピペリジン−１，４−ジカルボキシレート（３６０ｍｇ、１．３９ｍｍｏｌ）の溶液に、水素化ナトリウム（鉱物油中の６０％ディスパージョン、８４ｍｇ、２．０８ｍｍｏｌ）を慎重に添加した。混合物を室温で３０分間撹拌した。１−クロロ−２−メトキシエタン（０．３８ｍＬ、４．１７ｍｍｏｌ）を添加し、反応物を６０℃で７２時間撹拌した。反応を２５ｍＬの水で停止した。水層を酢酸エチル（３×２５ｍＬ）で抽出した。組み合わせた有機層を塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、真空下で濃縮した。シリカゲルクロマトグラフィ（２０％−３５％  酢酸エチル：ヘキサン）により、次に用いられる混合物（１５０ｍｇ、生成物：開始材料  １：２）としての表題の化合物及び開始材料を得た。
【０２４２】
Ｂ．１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４−（２−メトキシエトキシ）ピペリジン−４−カルボン酸の調製。工程Ａ由来の生成物の混合物（１５０ｍｇ）を、メタノール：水（１：２）（３ｍＬ）中に溶かした。水酸化リチウム一水和物（１５０ｍｇ）を添加し、混合物を６０℃まで２時間加熱した。反応物を室温まで冷却し、飽和ＮａＨＳＯ４水溶液（２５ｍＬ）上に注いだ。水層を酢酸エチル（３×２５ｍＬ）で抽出した。組み合わせた有機層を塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、真空下で濃縮して、１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４−ヒドロキシピペリジン−４−カルボン酸及び１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４−（２−メトキシエトキシ）ピペリジン−４−カルボン酸の２：１混合物をそれぞれ粘稠性の油として得て、さらなる精製を行うことなく次の工程に用いた。ＭＳ（ＥＳ＋）［Ｍ＋Ｈ］＋＝３０４．２。
【０２４３】
Ｃ．ｔｅｒｔ−ブチル４−（３−（ジメチルカルバモイルオキシ）フェニルカルバモイル）−４−（２−メトキシエトキシ）ピペリジン−１−カルボキシレートの調製。ＣＨ２Ｃｌ２（３．１ｍＬ）中の工程Ｂ由来のカルボン酸、ピリジン（０．２ｍＬ、２．４８ｍｍｏｌ）、及びＤＭＦ（触媒、２滴）の溶液に、塩化オキサリル（６０μＬ、０．６８ｍｍｏｌ、注意：発熱性）を滴下した。気体の発生がおさまった後、常温で３０分間、反応物を撹拌した。３−アミノフェニルジメチルカルバメート（１１２ｍｇ、０．６２ｍｍｏｌ）をこの溶液に一度に添加し、さらに３０分間撹拌した。反応を飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液で停止し、水層を酢酸エチル（３×５０ｍＬ）で抽出した。組み合わせた有機層を塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、真空下で濃縮した。シリカゲルクロマトグラフィ（８０％  酢酸エチル：ヘキサン）により、表題の化合物をオフホワイト色の固体として得た（１５０ｍｇ）。ＭＳ（ＥＳ＋）［Ｍ＋ＣＨ３ＣＮ］＋＝５２９．３。
【０２４４】
Ｄ．３−（４−（２−メトキシエトキシ）ピペリジン−４−カルボキサミド）フェニルジメチルカルバメートの調製。メタノール（２ｍＬ）中の工程Ｃ由来のｔｅｒｔ−ブチル４−（３−（ジメチルカルバモイルオキシ）−フェニルカルバモイル）−４−（２−メトキシエトキシ）−ピペリジン−１−カルボキシレート（１５０ｍｇ、０．３２２ｍｍｏｌ）の溶液に、ＨＣｌ（ジオキサン中の４Ｍの溶液、０．３ｍＬ）を添加した。反応物を５０℃で１時間加熱し、その後真空下で濃縮して、表題の化合物を塩酸塩として得た。ＭＳ（ＥＳ＋）［Ｍ＋Ｈ］＋＝３６６．３。
【０２４５】
Ｅ．３−（４−（２−メトキシ（methoxyl）エトキシ）−１−（５−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）ピペリジン−４−カルボキサミド）フェニルジメチルカルバメートの調製。イソプロパノール（１．０ｍＬ）中の工程Ｄ由来の３−（４−（２−メトキシエトキシ）ピペリジン−４−カルボキサミド）フェニルジメチルカルバメート、及びＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．２８ｍＬ、１．６ｍｍｏｌ）の溶液に、４−クロロ−５−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン（５５ｍｇ、０．３２２ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を、１１０℃まで１７時間、封止高圧バイアル中で加熱し、その間に混合物は均一になった。混合物を真空下で濃縮し、分取ＨＰＬＣ（３０×１００ｍｍ  Ｃ１８カラム、５％−１００％  アセトニトリル：水（１０ｍＭ  ＮＨ４ＯＡｃ）、１５分、４５ｍＬ／分）により精製して、表題の化合物（１７．４ｍｇ）を白色の固体として得た。
【０２４６】
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm  8.20 (s, 1H), 7.51 (t, J=2.02 Hz, 1H), 7.40 (ddd, J=8.08, 2.02, 1.01 Hz, 1H), 7.33 (t, J=8.08 Hz, 1H), 6.98-7.02 (m, 1H), 6.89 (ddd, J=7.83, 2.27, 1.01 Hz, 1H), 3.92-4.01 (m, 2H), 3.69 (br. s., 4H),  3.51 (s, 3H), 3.29 - 3.38 (m, 2H), 3.12 (s, 3H), 2.99 (s, 3H), 2.43 (d, J=1.01 Hz, 3H), 2.31 (dt, J=13.64, 4.29 Hz, 2H), 1.97-2.07 (m, 2H).  MS (ES+) [M+H]+ = 497.3.
【０２４７】
６．２７．実施例２７：３−（４−アミノ−１−（５−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）ピペリジン−４−カルボキサミド）フェニルジメチルカルバメートの合成
【０２４８】
【化３１】
0005575110.tif 000032
【０２４９】
Ａ．ｔｅｒｔ−ブチル４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−４−（３−（ジメチルカルバモイルオキシ）フェニルカルバモイル）ピペリジン−１−カルボキシレートの調製。Ｎ−Ｂｏｃ−アミノ−（４−Ｎ−Ｂｏｃ−ピペリジニル）カルボン酸（０．１１４ｇ、０．３３ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（０．１５１ｇ、０．４０ｍｍｏｌ）及びＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１２８ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）を酢酸イソプロピル（２．３ｍＬ）中で組み合わせ、室温で１５分間撹拌した。３−アミノフェニルジメチルカルバメート（０．０７２ｇ、０．４０ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を８０℃で１．５時間加熱した。反応混合物を冷却し、ＥｔＯＡｃで希釈し、２Ｎ  Ｎａ２ＣＯ３、１Ｎ  ＨＣｌ及び塩水で洗浄し、その後ＭｇＳＯ４で乾燥し、濃縮した。シリカゲルクロマトグラフィ（６０％  ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）による精製により、表題の化合物（０．０７５ｇ、４５％）を白色の固体として得た。ＭＳ（ＥＳ＋）［Ｍ＋ＮＨ４］＋＝５２４。
【０２５０】
Ｂ．３−（４−アミノピペリジン−４−カルボキサミド）フェニルジメチルカルバメートの調製。ＭｅＯＨ（２ｍＬ）中の工程Ａ由来のｔｅｒｔ−ブチル４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−４−（３−（ジメチルカルバモイルオキシ）フェニルカルバモイル）ピペリジン−１−カルボキシレート（０．１４１ｇ、０．２８ｍｍｏｌ）の溶液に、ＨＣｌ（ジオキサン中４Ｎ、０．２１ｍＬ、０．８４ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を室温で１４時間撹拌した。この時点で追加の当量のＨＣｌ／ジオキサンを添加し、混合物を室温でさらに２４時間撹拌した。溶媒を真空下で除去して、表題の化合物（０．０８４ｇ、９８％）を得て、未精製のまま用いた。ＭＳ（ＥＳ＋）［Ｍ＋Ｈ］＋＝３０７。
【０２５１】
Ｃ．３−（４−アミノ−１−（５−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）ピペリジン−４−カルボキサミド）フェニルジメチルカルバメートの調製。工程Ｂ由来の３−（４−アミノピペリジン−４−カルボキサミド）フェニルジメチルカルバメート（０．１０９ｇ、０．３６ｍｍｏｌ）、４−クロロ−５−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン（０．０６０ｇ、０．３６ｍｍｏｌ）、及びＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．２７７ｇ、２．１４ｍｍｏｌ）をイソプロパノール（５ｍＬ）中で組み合わせ、１２０℃で１８時間、封止管中で加熱した。混合物を濃縮し、残留物をシリカゲルクロマトグラフィ（０％−１０％  ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２）により精製して（purification）、表題の化合物（０．０８５ｇ、５５％）を白色の固体として得た。
【０２５２】
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 8.25 (s, 1H), 7.61 (m, 1H), 7.47 (m, 1H), 7.38 (m, 1H), 7.05 (d, J = 1.0Hz, 1H), 6.91 (m, 1H), 4.00 (m, 2H), 2.48 (m, 2H), 3.18 (s, 3H), 3.05 (s, 3H), 2.51 (s, 3H), 2.45 (m, 2H), 1.72 (m, 2H); MS (ES+) [M+H]+ = 438.
【０２５３】
６．２８．実施例２８：３−（４−（ジメチルアミノ）−１−（５−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）ピペリジン−４−カルボキサミド）フェニルジメチルカルバメートの合成
【０２５４】
【化３２】
0005575110.tif 000033
【０２５５】
実施例２７、工程Ｃ由来の３−（４−アミノ−１−（５−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）ピペリジン−４−カルボキサミド）フェニルジメチルカルバメート（０．０２８ｇ、０．０６４ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（１ｍＬ）に溶解した。ホルムアルデヒド（Ｈ２Ｏ中の３７ｗｔ％溶液、０．１５ｍｍｏｌ、１２μｌ）を、その後ＡｃＯＨ（０．２６ｍｍｏｌ、１５μｌ）及びＮａＢＨ３ＣＮ（０．００８ｇ、０．１３ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を室温で２時間撹拌した後、真空下で濃縮した。分取ＨＰＬＣによる精製により、表題の化合物（０．０１７ｇ、５７％）を白色の固体として得た。
【０２５６】
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 8.21 (s, 1H), 7.56 (m, 1H), 7.46 (m, 1H), 7.37 (m, 1H), 7.03 (d, J = 1.0Hz, 1H), 6.92 (m, 1H), 4.08 (m, 2H), 3.47 (m, 2H), 3.17 (s, 3H), 3.04 (s, 3H), 2.48 (s, 3H), 2.40 (s, 6H), 2.26 (m, 2H), 2.09 (m, 2H);  MS (ES+) [M+H]+ = 466.
【０２５７】
６．２９．実施例２９：３−（４−（（２−（１Ｈ−イミダゾール−５−イル）アセトアミド）メチル）−１−（５−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）ピペリジン−４−カルボキサミド）フェニルジメチルカルバメートの合成
【０２５８】
【化３３】
0005575110.tif 000034
【０２５９】
ＣＨ２Ｃｌ２（５ｍＬ）中の２−（１Ｈ−イミダゾール−５−イル）酢酸（０．２３８ｇ、１．４７ｍｍｏｌ）及びＨＡＴＵ（０．３７２ｇ、０．９７８ｍｍｏｌ）の懸濁液に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．５１ｍＬ、２．９３ｍｍｏｌ）を添加した。得られた溶液を室温で２０分間撹拌した。この溶液に、３−（４−（アミノメチル）−１−（５−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）ピペリジン−４−カルボキサミド）フェニルジメチルカルバメートの酢酸塩（実施例２０由来、０．５００ｇ、０．９７８ｍｍｏｌ）、及びＣＨ２Ｃｌ２（５ｍＬ）中のＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．１７ｍＬ）を添加した。反応物を室温で６時間撹拌し、その後Ｈ２Ｏ（１０ｍＬ）及びＣＨ２Ｃｌ２（２０ｍＬ）で希釈した。混合物をＣＨ２Ｃｌ２（２×１０ｍＬ）で抽出し、組み合わせた有機層をＮａＨＣＯ３（１０ｍＬ）及び塩水（１０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、真空下で濃縮した。残留物をフラッシュクロマトグラフィ（３％−１０％  ＭｅＯＨ：ＣＨ２Ｃｌ２）により精製して、表題の化合物（０．３９３ｇ、収率７２％）を白色の固体として得た。この固体を水に懸濁し、溶液が清澄になるまで酢酸を添加した。この溶液を凍結し、凍結乾燥して、表題の化合物の二酢酸塩を得た（０．４７７ｇ）。
【０２６０】
1H NMR (400 MHz, MeOD-d6) δ ppm 8.17 (s, 1H), 7.57 (d, J = 0.76 Hz, 1H), 7.47 (t, J = 2.02 Hz, 1H), 7.37 (ddd, J = 1.01, 1.77, 8.08 Hz, 1H), 7.30 (t, J = 8.08 Hz, 1H), 6.98 (d, J = 1.01 Hz, 1H), 6.92 (s, 1H), 6.87 (ddd, J = 1.01, 2.27, 8.08 Hz, 1H), 3.87 (ddd, J = 3.28, 3.28, 14.15 Hz, 2H), 3.58 (s, 2H), 3.52 (s, 2H), 3.32 - 3.38 (m, 2H), 3.12 (s, 3H), 3.00 (s, 3H), 2.42 (d, J = 0.76 Hz, 3H), 2.35 - 2.42 (m, 2H), 1.96 (s, 6H), 1.75 - 1.85 (m, 2H).  MS (ES+) [M+H] = 560.
【０２６１】
６．３０．実施例３０：さらなる化合物
本明細書に記載の手順、及び当該技術分野で既知の方法を使用して、以下の表１に列挙したさらなる化合物を調製した。それらの化合物の幾つかに関して以下に提示するＬＩＭＫ２  ＩＣ５０のデータは、実施例３２に記載のアッセイを使用して確定した。
【０２６２】
【表１】
0005575110.tif 000035
0005575110.tif 000036
0005575110.tif 000037
0005575110.tif 000038
0005575110.tif 000039
0005575110.tif 000040
0005575110.tif 000041
0005575110.tif 000042
【０２６３】
６．３１．ＬＩＭＫ２の発現及び精製
ＬＩＭＫ２を、ＢＡＣ−ｔｏ−ＢＡＣ（登録商標）バキュロウイルス発現系（Invitrogen）を使用して発現させた。取扱説明書に記載の製造業者の指示に従って、組換えバキュロウイルスを作製した。簡潔に述べると、ＬＩＭＫ２インサートを保有するプラスミド（ｐＦａｃｔＢａｃ１又はｐＦａｓｔＢａｃＨＴ）をＭＡＸ効率ＤＨ１０Ｂａｃコンピテント大腸菌中に形質転換して、組換えバクミド（bacmid）を生成した。ＤＨ１０Ｂａｃ大腸菌宿主株は、ミニａｔｔＴｎ７標的部位を有するバキュロウイルスシャトルベクター（バクミド）と、ヘルパープラスミドとを含有し、ｐＦａｓｔＢａｃベクター上のミニＴｎ７因子と、バクミド上のミニ（min-）ａｔｔＴｎ７標的部位との間の転位後に組換えバクミドの生成を可能にする。転位反応が、ヘルパープラスミドによって供給される転位タンパク質の存在下で起こる。細胞をプレート培養し、取扱説明書に記載のように、白色のコロニーを摘み出してバクミドを単離した。
【０２６４】
単離バクミドＤＮＡをＳＦ９細胞中にトランスフェクトし、組換えバキュロウイルスを生成し、トランスフェクションの５日後にウイルスを回収した。ウイルスを０．２の感染多重度（ＭＯＩ）でＴ７５フラスコ内で増幅させた。タンパク質発現のために５のＭＯＩでＳＦ９細胞に感染させるのに、増幅ウイルスを使用した。
【０２６５】
ＬＩＭＫ２構築物の小規模精製のために、組換えバキュロウイルスを感染させたＳｆ９細胞の培養液５０ｍｌを使用した。細胞を５００×ｇで５分間の遠心分離によって採取した。それから、細胞をリシスバッファ（細胞１ｇ当たり５倍量）中で再懸濁した。典型的なリシスバッファは以下のものを含有する：５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ（ｐＨ  ８．０）、３００ｍＭ  ＫＣｌ、１０％  グリセロール、１％  ＮＰ−４０、１５ｍＭ  イミダゾール、１ｍＭ  ベンズアミジン、及びRocheの完全プロテアーゼ阻害剤（細胞溶解液５０ｍｌ当たり１錠）。１４０００ｐｓｉ〜２００００ｐｓｉの液体圧でＭｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃｓ  Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｚｅｒ  Ｍ−１１０Ｙに１回通し、その後４℃で１５分間６００００×ｇで溶解液を遠心分離することにより細胞懸濁液を溶解させた。
【０２６６】
それから、上清を、ニトリロ三酢酸（ＮＴＡ）と共有結合したコバルトイオンを含有するクロマトグラフィマトリクス上に直接装荷した。クロマトグラフィマトリクスは、タンパク質ローディング（loading）溶液と同じバッファ中で平衡化した。イオン荷電樹脂は典型的には、充填（packed）樹脂１ｍｌ当たり５ｍｇ〜１０ｍｇのヒスチジンタグ付きタンパク質と同等の結合能を有する。カラム上に装荷することができる抽出物の量は、抽出物中の可溶性ヒスチジンタグ付きタンパク質の量に応じて変わる。それからこのカラムを、初めに５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ（ｐＨ８．０）、３００ｍＭ  ＫＣｌ、１０％  グリセロール、１％  ＮＰ−４０、１５ｍＭ  イミダゾール、１ｍＭ  ベンズアミジンで；２番目に、２０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ（ｐＨ８．０）、５００ｍＭ  ＫＣｌ、１０％  グリセロール及び２０ｍＭ  イミダゾールで；３番目に、２０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ（ｐＨ８．０）、１００ｍＭ  ＫＣｌ、１０％  グリセロール及び２０ｍＭ  イミダゾールで段階的に洗浄し、その後同じバッファ中の２５０ｍＭ  イミダゾールで溶出した。それから、ＬＩＭＫ２タンパク質溶液を、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、及びタンパク質のカルボキシル末端と内部触媒ドメインとの両方に指向性を有する市販の抗体を使用するウェスタンブロットで解析した。保存の目的で、このタンパク質を、５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ（ｐＨ７．５）、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、０．１％  ＢＭＥ、０．０３％  Ｂｒｉｊ−３５及び５０％  グリセロールに透析した。
【０２６７】
大規模なＬＩＭＫ２の精製を、１０Ｌの培養量でＷａｖｅ  Ｂｉｏｒｅａｃｔｏｒ（Wave Biotech）において行った。１ｍＬ当たり２〜３×１０６個の生存細胞の細胞培養液１０ＬをＭＯＩ＝５ｐｆｕ／細胞で感染させ、感染後４８時間に採取した。
【０２６８】
６．３２．ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ＬＩＭＫ２阻害アッセイ
ＬＩＭＫ２阻害剤を同定するのに使用するｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイを開発した。解析の読み取り値は、ＡＴＰ基質から固定化ミエリン塩基性タンパク質被覆フラッシュプレート（Perkin Elmer Biosciences）中への３３Ｐの取り込みであり、これは、プレートリーダーを備えたシンチレーションカウンタ（TopCount, Packard Bioscience, Meriden, CT）で計測した。３８４ウェルの平底ＭＢＰフラッシュプレートを使用し、総アッセイ量は５０μｌとした。ＨＴＳプログラムは、希釈のためにＢｉｏｍｅｋ  ＦＸを利用するものとした。
【０２６９】
各アッセイに関して、成分及び条件は以下の通りであった：２００ｎｇの酵素をアッセイバッファ（１×アッセイバッファは、３０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ（ｐＨ８．０）、５ｍＭ  ＤＴＴ及び１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２を含有する）、１０μＭ  ＡＴＰ、０．２μＣｉ［γ−３３Ｐ］−ＡＴＰ、及び１０μＭの候補阻害化合物においてインキュベートした。反応物を室温で６０分間インキュベートし、７５μｌの停止／洗浄バッファ（１×停止／洗浄（was）バッファは、５０ｍＭ  ＥＤＴＡ及び２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ（ｐＨ７．４）を含有する）で３回洗浄した後、プレートをシンチレーションカウンタで読み取った。種々の濃度のスタウロスポリン（４００ｎＭ、２００ｎＭ、１００ｎＭ及び５０ｎＭ；BIOMOL（Plymouth Meeting, PA）で購入した）を各プレートの対照として使用した。
【０２７０】
６．３３．デキサメタゾン誘導性高眼圧症モデル
１日当たり約０．１ｍｇのデキサメタゾン（ｄｅｘ）を放出するように、２８日齢のマウスのＡｌｚｅｔ浸透圧ミニポンプ（DURECT Corp., Cupertino, CA）に、水溶性のｄｅｘのＰＢＳ溶液（Sigma, St. Louis, MO）を満たした。ポンプがｄｅｘで満たされると、ポンプは、３７℃で６０時間、ＰＢＳで平衡化することが可能であった。平衡化したポンプは、重量２５ｇ〜３５ｇの野生型Ｃ５７：１２９  Ｆ２ハイブリッドマウスの背中の皮下に外科的に設置した。外科切開部は、５−０編み絹（braided silk）（ROBOZ, Gaithersburg, MD）で縫合し、試験期間全体を通して、抗生物質軟膏で処理した。外科切開部は、ＴｉｓｓｕｅＭｅｎｄ  ＩＩ（Webster Veterinary, Houston, TX）で接着した。鎮痛剤（ブプレノルフィン）を、外科処置の日及び外科処置の２４時間後に、ＩＰ注射により投与した。眼内圧（ＩＯＰ）を、ＴｏｎｏＬａｂ（Colonial Medical Supply Co., Franconia, NH）眼圧計を使用してこれらのマウスについて測定した。マウスを、イソフルランで軽く鎮静化し、０．５％プロパラカイン（Akorn, Buffalo Grove, IL）で局所麻酔を行った後、ＩＯＰ測定を行った。ベースラインのＩＯＰを、ミニポンプ移植の１日前に測定した。ミニポンプ移植後、４週間にわたり１週間に２〜３回、ＩＯＰ測定を行った。眼圧降下候補化合物による薬理学試験を、移植の２１日〜２８日後に行った。
【０２７１】
６．３４．ｉｎ  ｖｉｖｏでの効果
その後、本発明の化合物を、上で説明したマウス高眼圧症モデルにおいて試験した。マウスの眼に局所投与した４種類の本発明の化合物の効果を、以下の表２に記載する：
【０２７２】
【表２】
0005575110.tif 000043
【０２７３】
高眼圧症モデルにおいて、化合物Ａの効果をチモロールの効果と比較した。図１に示すように、３μｇ／眼の化合物Ａの局所投与により、１５μｇ／眼のチモロールの局所投与と実質的に同等の効果がもたらされた。
【０２７４】
上で引用した全ての刊行物（例えば、特許及び特許出願）はその全体が、参照により本明細書中に援用される。
【図１】
0005575110.tif 000045