(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
対照群のミツバチの幼虫よりも少なくとも体重で１００％大きいミツバチの幼虫を製造する方法であって、若い働きバチにＨＤＡＣ阻害剤またはＨＤＡＣ阻害剤の混合物を与えることと、これらの若い働きバチによって分泌されるローヤルゼリーをミツバチの幼虫に与えることとを含み、一方、該対照群のミツバチの幼虫には該ＨＤＡＣ阻害剤または該ＨＤＡＣ阻害剤の混合物を与えられなかった若い働きバチによって作られたローヤルゼリーを与えることを特徴とする方法。
【請求項２】
前記ＨＤＡＣ阻害剤または前記ＨＤＡＣ阻害剤の混合物を与えられた働きバチによって分泌されたローヤルゼリーを与えられた幼虫の体重が、７２時間後で、該ローヤルゼリーを与えられていない幼虫の７２時間後の体重に比べて１．５倍となることを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記ＨＤＡＣ阻害剤または前記ＨＤＡＣ阻害剤の混合物を与えられた働きバチによって分泌されたローヤルゼリーを与えられた幼虫の体重が、７２時間後で、該ローヤルゼリーを与えられていない幼虫の７２時間後の体重に比べて２〜５倍となることを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記ＨＤＡＣ阻害剤または前記ＨＤＡＣ阻害剤の混合物を与えられた働きバチによって分泌されたローヤルゼリーを与えられた幼虫の体重が、７２時間後で、該ローヤルゼリーを与えられていない幼虫の７２時間後の体重に比べて３〜５倍となることを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記ＨＤＡＣ阻害剤または前記ＨＤＡＣ阻害剤の混合物を与えられた働きバチによって分泌されたローヤルゼリーが、６８ｋＤａタンパク質対６４ｋＤａタンパク質の比が、該６８ｋＤａタンパク質の比率が増加するように変化したＭＲＪＰ３を有することを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記ＭＲＪＰ３の６８ｋＤａタンパク質対６４ｋＤａタンパク質の比が、４：６から８：２であることを特徴とする請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記ＨＤＡＣ阻害剤は、以下の化学式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩、以下の化学式（ＩＩ）の化合物または／及びその薬学的に許容される塩、ＳＡＨＡ、プロポリス及びプロポリンからなる群から選択され、
【化９４】
0005410233.tif 000103
ここで、
Ｒ１及びＲ２はそれぞれ独立してＯＨ，ＯＣ（＝Ｏ）アルキル，Ｏ−アルキル，Ｓ−アルキル，Ｎ−アルキル，Ｏ−アルケニル，Ｓ−アルケニル，Ｎ−アルケニル，Ｏ−アルキニル，Ｓ−アルキニル，Ｎ−アルキニル，Ｏ−Ｃ３−８シクロアルキル，Ｓ−Ｃ３−８シクロアルキル，Ｎ−Ｃ３−８シクロアルキル，Ｏ−不飽和５〜１０員単環または二環式リング，Ｓ−不飽和５〜１０員単環または二環式リング，Ｎ−不飽和５〜１０員単環または二環式リング，アルキル，アルキレニル，アルキニル，Ｃ３−８シクロアルキル，Ｎ，Ｏ，及びＳからなる群から選ばれる少なくとも一つのリングヘテロ原子を含む不飽和５〜１０員単環または二環式リングまたは飽和もしくは不飽和５〜１０員ヘテロ環状リング；またはＲ１及びＲ２は共同してジオキソランを形成しうる；
Ｒ３及びＲ４はそれぞれ独立してＯＨ，ＯＣ（＝Ｏ）アルキル，Ｏ−アルキル，Ｓ−アルキル，Ｎ−アルキル，Ｏ−アルケニル，Ｓ−アルケニル，Ｎ−アルケニル，Ｏ−アルキニル，Ｓ−アルキニル，Ｎ−アルキニル，Ｏ−Ｃ３−８シクロアルキル，Ｓ−Ｃ３−８シクロアルキル，Ｎ−Ｃ３−８シクロアルキル，Ｏ−不飽和５〜１０員単環または二環式リング，Ｓ−不飽和５〜１０員単環または二環式リング，Ｎ−不飽和５〜１０員単環または二環式リング，アルキル，アルキレニル，アルキニル，Ｃ３−８シクロアルキル，Ｎ，Ｏ，及びＳからなる群から選ばれる少なくとも一つのリングヘテロ原子を含む不飽和５〜１０員単環または二環式リングまたは飽和もしくは不飽和５〜１０員ヘテロ環状リング；
Ｒ５はＣ４−１６アルキルまたはＣ４−１６アルケニルであって、ここでアルキルまたはアルケニルは未置換またはＣ１−６アルキル，ＯＨ，ハロゲン，ＣＮ，ＮＯ，Ｎ３，ＮＨ２，ＣＨＯ，ＯＲ９，ＳＲ９，ＮＲ９，またはＣＯＯＲ９の１以上で置換されている；
Ｒ６はＣ２−１２アルキルまたはＣ２−１２アルケニルであって、ここでアルキルまたはアルケニルは未置換またはＣ１−６アルキル，ＯＨ，ハロゲン，ＣＮ，ＮＯ，Ｎ３，ＮＨ２，ＣＨＯ，ＯＲ９，ＳＲ９，またはＮＲ９の１以上で置換されている；またはＲ５及びＲ６の一つは、水素、ハロゲンまたはＯＨであり、その他方は未置換またはＣ１−６アルキル，ＯＨ，ＮＨ２，ハロゲン，ＣＮ，ＮＯまたはＮ３の１以上で置換されているＣ４−１６アルキルまたはＣ４−１６アルキレン；
Ｒ７及びＲ８はそれぞれ独立して水素、ハロゲン，ＯＨ，ＮＨ２，ＣＯＯＨ，ＣＨＯ，ＣＮ，ＮＯ，未置換またはＯＨ，ＮＨ２，ＣＯＯＨ，ハロゲン，ＣＮ，ＮＯもしくはＣＨＯで置換されたＣ１−６アルキル，＝Ｏ，Ｏ−アルキル，Ｓ−アルキル，Ｎ−アルキル，Ｏ−アルケニル，Ｓ−アルケニル，Ｎ−アルケニル，Ｏ−アルキニル，Ｓ−アルキニルもしくはＮ−アルキニル，またはＲ７及びＲ８は共同して二重結合，Ｃ３−６シクロアルキル，もしくはＮ，Ｏ及びＳからなる群から選択されるヘテロ原子を少なくとも含む５〜１０員ヘテロ環状リング；
Ｒ９はフェニル，Ｃ（＝Ｏ）Ｒ１０，Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ１０またはベンジル；及び
Ｒ１０はＯＨ，ＮＨＯＨ，ＮＨ２，Ｃ１−６アルキル，フェニルまたはベンジル；
【化９５】
0005410233.tif 000104
ここで、
Ｒ１は水素，アルキル，アルケニル，Ｃ５−６シクロアルキル，５員もしくは６員の不飽和炭素環または５員もしくは６員のヘテロ環；
ＸはＣ，Ｏ，ＮまたはＳ；
ＹはＯ，ＮＨまたはＯ−Ｃ１−４アルキル；
ｎは０〜１０の整数；
ｍは０〜５の整数；
Ｒ２及びＲ３は独立してＣ１−６アルキル；
Ｒ４はＣ５−６シクロアルキルまたは５員もしくは６員不飽和炭素環もしくはヘテロ環であって、ハロゲン，ＣＦ３，ＯＲ７またはＮＲ７Ｒ８で置換されていてもよい、ここでＲ７及びＲ８は独立して水素またはＣ１−６アルキル；
Ｒ５はＯＨ，ＮＨ２またはＣ５−６シクロアルキル，５員もしくは６員の不飽和炭素環もしくはヘテロ環であって、シクロアルキル、炭素環及びヘテロ環は任意でハロゲン，ＮＨ２，ＮＯ２，Ｃ１−６アルコキシ，Ｃ１−６アルキルチオ，ＯＲ７，ＮＲ７Ｒ８またはＣＦ３で置換されていてもよい；及び
Ｒ６はＨ，ヒドロキシまたはＣ２−１０アルケニルで置換されていてもよいＣ１−１０アルキルであり，またはＲ１と共同して−Ｃ２Ｈ２−を形成することを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記ＨＤＡＣ阻害剤は、台湾グリーンプロポリス、プロポリンＡ，プロポリンＢ，プロポリンＣ，プロポリンＤ，プロポリンＥ，プロポリンＦ，プロポリンＧ、プロポリンＨ，プロポリンＩ，プロポリンＪ、ＳＡＨＡ、または、ＮＢＭ−ＨＤ−１であることを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記ＨＤＡＣ阻害剤が、
【化９６】
0005410233.tif 000105
ＮＢＭ−ＨＤ−１，
【化９７】
0005410233.tif 000106
，
【化９８】
0005410233.tif 000107
，
【化９９】
0005410233.tif 000108
，
【化１００】
0005410233.tif 000109
，
【化１０１】
0005410233.tif 000110
，
【化１０２】
0005410233.tif 000111
，
【化１０３】
0005410233.tif 000112
，
【化１０４】
0005410233.tif 000113
，
【化１０５】
0005410233.tif 000114
，
【化１０６】
0005410233.tif 000115
，
【化１０７】
0005410233.tif 000116
，
【化１０８】
0005410233.tif 000117
，
【化１０９】
0005410233.tif 000118
，
【化１１０】
0005410233.tif 000119
，
【化１１１】
0005410233.tif 000120
，
【化１１２】
0005410233.tif 000121
，
【化１１３】
0005410233.tif 000122
，
【化１１４】
0005410233.tif 000123
【化１１５】
0005410233.tif 000124
プロポリンＡ，
【化１１６】
0005410233.tif 000125
プロポリンＢ，
【化１１７】
0005410233.tif 000126
プロポリンＣ，
【化１１８】
0005410233.tif 000127
プロポリンＤ，
【化１１９】
0005410233.tif 000128
プロポリンＥ，
【化１２０】
0005410233.tif 000129
プロポリンＦ，
【化１２１】
0005410233.tif 000130
プロポリンＧ，
【化１２２】
0005410233.tif 000131
プロポリンＨ，
【化１２３】
0005410233.tif 000132
プロポリンＩ，
【化１２４】
0005410233.tif 000133
プロポリンＪ，
【化１２５】
0005410233.tif 000134
ＮＢＭ−ＨＢ−ＯＳ０１，
【化１２６】
0005410233.tif 000135
ＮＢＭ−Ｃ−ＢＣＡ−ＯＳ０１，
【化１２７】
0005410233.tif 000136
ＮＢＭ−Ｃ−ＢＡ−ＯＳ０１，
【化１２８】
0005410233.tif 000137
ＮＢＭ−Ｃ−ＢＭＡ−ＯＳ０１，
【化１２９】
0005410233.tif 000138
ＮＢＭ−Ｃ−ＢＸ−ＯＳ０１，
【化１３０】
0005410233.tif 000139
ＮＢＭ−Ｃ−ＢＣＸ−ＯＳ０１，
【化１３１】
0005410233.tif 000140
ＮＢＭ−Ｃ−ＢＭＸ−ＯＳ０１，
【化１３２】
0005410233.tif 000141
ＮＢＭ−Ｃ−ＢＦＸ−ＯＳ０１，
【化１３３】
0005410233.tif 000142
ＮＢＭ−Ｃ−ＢＢＸ−ＯＳ０１，
【化１３４】
0005410233.tif 000143
ＮＢＭ−Ｔ−ＢＸ−ＯＳ０１，
【化１３５】
0005410233.tif 000144
ＮＢＭ−Ｔ−ＢＡ−ＯＳ０１，
【化１３６】
0005410233.tif 000145
ＮＢＭ−Ｔ−ＢＣＡ−ＯＳ０１，
【化１３７】
0005410233.tif 000146
ＮＢＭ−Ｔ−ＢＢＡ−ＯＳ０１，
【化１３８】
0005410233.tif 000147
ＮＢＭ−Ｔ−ＢＦＡ−ＯＳ０１，
【化１３９】
0005410233.tif 000148
ＮＢＭ−Ｔ−ＢＭＡ−ＯＳ０１，
【化１４０】
0005410233.tif 000149
ＮＢＭ−Ｔ−ＢＣＸ−ＯＳ０１，
【化１４１】
0005410233.tif 000150
ＮＢＭ−Ｔ−Ｌ−ＢＣＸ−ＯＳ０１，
【化１４２】
0005410233.tif 000151
ＮＢＭ−Ｔ−ＢＭＸ−ＯＳ０１，
【化１４３】
0005410233.tif 000152
ＮＢＭ−Ｔ−Ｋ−ＢＭＸ−ＯＳ０１，
【化１４４】
0005410233.tif 000153
ＮＢＭ−Ｔ−Ｌ−ＢＭＸ−ＯＳ０１，
【化１４５】
0005410233.tif 000154
ＮＢＭ−Ｔ−ＢＴＸ−ＯＳ０１,
【化１４６】
0005410233.tif 000155
ＮＢＭ−Ｔ−Ｌ−ＢＴＸ−ＯＳ０１，
【化１４７】
0005410233.tif 000156
ＮＢＭ−Ｔ−ＢＢＸ−ＯＳ０１，
【化１４８】
0005410233.tif 000157
ＮＢＭ−Ｔ−Ｌ−ＢＢＸ−ＯＳ０１，
【化１４９】
0005410233.tif 000158
ＮＢＭ−Ｔ−ＢＦＸ−ＯＳ０１，
【化１５０】
0005410233.tif 000159
ＮＢＭ−Ｃ−ＢＢＸ−ＯＳ０１，
【化１５１】
0005410233.tif 000160
ＮＢＭ−Ｃ−ＢＦＸ−ＯＳ０１，
【化１５２】
0005410233.tif 000161
ＮＢＭ−Ｔ−ＴＭＸ−ＯＳ０１，
【化１５３】
0005410233.tif 000162
ＮＢＭ−Ｔ−ＢＭＸ−Ｌ−ＯＳ０１，
【化１５４】
0005410233.tif 000163
ＮＢＭ-Ｉ-ＢＣＸ−ＯＳ０１，
【化１５５】
0005410233.tif 000164
ＮＢＭ−Ｔ−Ｉ−ＢＭＸ−ＯＳ０１，
【化１５６】
0005410233.tif 000165
ＮＢＭ−Ｔ−Ｌ−Ｉ−ＢＭＸ−ＯＳ０１，
【化１５７】
0005410233.tif 000166
ＮＢＭ−Ｔ−Ｉ−ＢＢＸ−ＯＳ０１，
【化１５８】
0005410233.tif 000167
ＮＢＭ−Ｔ−Ｌ−Ｉ−ＢＢＸ−ＯＳ０１，
【化１５９】
0005410233.tif 000168
ＮＢＭ−Ｔ−Ｉ−ＢＣＸ−ＯＳ０１，
【化１６０】
0005410233.tif 000169
ＮＢＭ―Ｔ−Ｌ−Ｉ−ＢＣＸ−ＯＳ０１，
【化１６１】
0005410233.tif 000170
ＮＢＭ−Ｔ−Ｉ−ＭＣＸ−ＯＳ０１
からなる群から選ばれることを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
ミツバチの幼虫が働きバチによってそれらが分泌するローヤルゼリーを与えられる、または人間によって働きバチから収集したローヤルゼリーを与えられることを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
対照さなぎよりも少なくとも体重で５０％大きいさなぎを、または、対照女王バチよりも少なくとも体重で５０％大きい女王バチを製造する方法であって、当該方法は、若い働きバチにＨＤＡＣ阻害剤またはＨＤＡＣ阻害剤の混合物を与えることと、これら若い働きバチによって分泌されるローヤルゼリーをミツバチの幼虫に与えることと、当該ミツバチの幼虫から発達させたさなぎまたは女王バチを得ることとを含み、一方、該ＨＤＡＣ阻害剤または該ＨＤＡＣ阻害剤の混合物を与えられなかった若い働きバチによって作られたローヤルゼリーを与えるミツバチの幼虫から該対照さなぎまたは該対照女王バチを発達させることを特徴とする方法。
【請求項１２】
前記ミツバチの幼虫が働きバチによってそれらが分泌するローヤルゼリーを与えられる、または人間によって働きバチから収集したローヤルゼリーを与えられることを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
対照ローヤルゼリーに対して６８ｋＤａタンパク質対６４ｋＤａタンパク質の比が、該６８ｋＤａタンパク質の比率が増加するように変化したＭＲＪＰ３を含むローヤルゼリーを製造する方法であって、若い働きバチにＨＤＡＣ阻害剤を与えることと、若い働きバチによって製造されたローヤルゼリーを収集することとを含むことを特徴とする方法。
【請求項１４】
前記ＭＲＪＰ３の６８ｋＤａタンパク質対６４ｋＤａタンパク質の比が、４：６から８：２であることを特徴とする請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記ＨＤＡＣ阻害剤が、請求項７に記載の化学式（Ｉ）の化合物またはこれらの薬学的に許容される塩であることを特徴とする請求項１３に記載の方法。
【請求項１６】
前記ＨＤＡＣ阻害剤が、請求項８に記載の化合物またはこれらの薬学的に許容される塩であることを特徴とする請求項１３に記載の方法。
【請求項１７】
前記ＨＤＡＣ阻害剤は、台湾グリーンプロポリス、プロポリンＡ，プロポリンＢ，プロポリンＣ，プロポリンＤ，プロポリンＥ，プロポリンＦ，プロポリンＧ、プロポリンＨ，プロポリンＩ，プロポリンＪ、ＳＡＨＡ、または、ＮＢＭ−ＨＤ−１であることを特徴とする請求項１３に記載の方法。
【請求項１８】
前記ＨＤＡＣ阻害剤は、請求項９に記載の化合物からなる群から選ばれることを特徴とする請求項１３に記載の方法。
【請求項１９】
前記対照ローヤルゼリーに対して６８ｋＤａタンパク質対６４ｋＤａタンパク質の比が、該６８ｋＤａタンパク質の比率が増加するように変化したＭＲＪＰ３を含むことを特徴とする、請求項１３に記載の方法で製造されたローヤルゼリー。
【請求項２０】
前記ＭＲＪＰ３の６８ｋＤａタンパク質対６４ｋＤａタンパク質の比が、４：６から８：２であることを特徴とする請求項１９に記載のローヤルゼリー。
【請求項２１】
ローヤルゼリー中のＭＲＪＰ３の６８ｋＤａタンパク質対６４ｋＤａタンパク質の比を変化させる方法であって、若い働きバチにＨＤＡＣ阻害剤またはその混合物を与えることで、対照となるローヤルゼリーに対して、ＭＲＪＰ３の６８ｋＤａタンパク質対６４ｋＤａタンパク質の比が、該６８ｋＤａタンパク質の比率が増加するように変化したローヤルゼリーを製造することを特徴とする方法。
【請求項２２】
働きバチのｍｒｊｐ３遺伝子に対するエピジェネティクスを調整する方法であって、働きバチにＨＤＡＣ阻害剤を与えることで、働きバチのｍｒｊｐ３遺伝子の発現を調整することを含む方法。
【請求項２３】
前記エピジェネティクスは、ＤＮＡメチル化またはＨＤＡＣ活性の阻害であることを特徴とする請求項２２に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、若い働き（保育）バチにヒストン脱アセチル化酵素阻害剤（ＨＤＡＣｉ）またはＨＤＡＣ阻害剤（複数を含む）を含む混合物もしくは処方を与えることでハチの幼虫、さなぎ、女王バチの成長を促進する方法に関する。特にＨＤＡＣｉを与えられた若い働きバチによって分泌されるローヤルゼリーは、６８対６４ｋＤａタンパク質の比が変化したＭＲＪＰ３を有するであろう。
【背景技術】
【０００２】
ミツバチは近代農業においてもっとも有益な生物の一つであり、ローヤルゼリー、ハチミツ、プロポリス、花粉などの様々な製品を提供し、それらは人間に対する栄養源として供される（Ｈｅｌｌｎｅｒ  Ｍ等、２００８年）。したがって、ミツバチの生育、発展、発達には多大な関心が寄せられている。
【０００３】
ミツバチは母系社会であり、ミツバチのコロニーは女王バチによって導かれている。ミツバチのコロニーにおいて、働きバチと女王バチは受精卵から発生し、雄バチは未受精卵から発生する（Ｗｉｎｓｔｏｎ  Ｍ．Ｌ．，１９８７年）。女王は巣の個室内で単独で産卵する。幼虫は３，４日で孵化する。幼虫はそれから若い働きバチによって育仔され、個室内でいくつかの段階を経て発達する。さなぎになると、働きバチによって個室は封鎖される。女王は１６日で、働きバチは２１日で、また雄バチは２４日で個室から現れる。女王は体が大きく、また寿命は通常、働きバチの１０〜１５倍である。受精卵が働きバチに発達するか女王に発達するかはミツバチのコロニーによって調整されている。原則として一つのミツバチのコロニーには一匹の女王のみが存在する。そのうえ、女王バチは同一のコロニーにおいては他のハチとは異なる餌を与えられる。女王バチは生きている間中、ローヤルゼリーを与えられ、働きバチはその発達の初期においてのみローヤルゼリーを与えられる。数人の研究者は働きバチもその発達期に渡ってローヤルゼリーを与えられると信じている一方で、働きバチに与えられるローヤルゼリーは女王に与えられるものとはその化学成分が異なってかもしれない。いずれにしてもミツバチのコロニーを維持するにあたり、ローヤルゼリーは最も重要な物質となっている（Ｒｏｂｉｎｓｏｎ  Ｇ．Ｅ．等、１９８７年）。
【０００４】
ローヤルゼリーは女王バチの幼虫と女王にとって最も重要な食糧であり栄養源である。それは、若い働きバチの下咽頭腺及び大顎腺より分泌され、ローヤルゼリーの成分は幼虫の異なる発展期において変化するであろう。一般的に、その様な変化はローヤルゼリーのタンパク質成分というよりもむしろ糖質に反映されていると考えられる（Ｐｅｉｒｅｎ  Ｎ．等、２００５年）。
【０００５】
ローヤルゼリーには人間の健康を向上しうる多くの物質を含んでおり、様々な薬理的な特性を有することが知られている（Ｔａｋａｋｉ−Ｄｏｉ  Ｓ．等、２００９年；Ｍａｎｎｏｏｒ  Ｍ．Ｋ．等、２００９年；及びＧａｓｉｃ  Ｓ．等、２００７年）。したがって、ローヤルゼリーは人間の健康増進のための健康食に広く用いられている。近年、研究により、ローヤルゼリーは免疫調整を増進することができること（Ｖｕｅｃｖｉｃ  Ｄ．等、２００７年）、抗菌機能を呈すこと（Ｂｏｕｋｒａａ  Ｌ．，２００８年）、脳神経を育成すること（Ｈａｓｈｉｍｏｔｏ  Ｍ．等、２００５年）、また抗ガン及び抗酸化活性を示すこと（Ｇｕｏ  Ｈ．等、２００８年）、が証明された。ローヤルゼリーは、乳白色の濃厚な液体で、約６０〜７０％の水、１２〜１５％のタンパク質、１０〜１２％の糖分、３〜５％の脂質、および微量成分とミネラルを含むことが知られている（Ｓｃａｒｓｅｌｌｉ  Ｒ．等、２００５年）。タンパク質成分の中で、約８９〜９０％が水溶性タンパク質であり、残りが水不溶性タンパク質である。すなわち、ローヤルゼリーに含まれるほとんどのタンパク質は水溶性である。
【０００６】
ＭＲＪＰ（ローヤルゼリー主要タンパク質）ファミリー（ＭＲＪＰ１〜９）は、これらの水溶性タンパク質のなかでも主成分である（Ｓｃｈｍｉｔｚｏｖａ  Ｊ．等、１９９８年）。これらのＭＲＪＰタンパク質のアミノ酸配列は解析されているが、いまだその機能は不明である。
【０００７】
ＭＲＪＰ１はミツバチの脳に見いだされ、ミツバチの挙動を司ると考えられている。それはローヤルゼリー中の水溶性タンパク質の４４％を占め、ＭＲＪＰファミリータンパク質の中でもっとも豊富なアイソフォームである（Ｍａｌｅｃｏｖa  Ｂ．等、２００３年）。今日、ＭＲＪＰ３には非常に高い関心が寄せられており、免疫調整機能を有すると考えられている（Ｋｏｈｎｏ  Ｋ．等、２００４年）。また、ＭＲＪＰ３はローヤルゼリー中の総水溶性タンパク質の内、１２％を占め、すべてのＭＲＪＰタンパク質のなかで、次にもっとも豊富なアイソフォームである（ＭＲＪＰ１〜９）。ＭＲＪＰ３はその抗アレルギー及び抗炎症活性から特異的なものである。６０〜７０ｋＤａのタンパク質はＭＲＪＰ３の変異体であり、高多形型ＭＲＪＰ遺伝子の産物である（Ｓｔｅｆａｎ  Ａｌｂｅｒｔ等、１９９９年）。
【０００８】
ＭＲＪＰは豊富な必須アミノ酸と他の栄養素となる化合物を提供する（Ｆｕｒｕｓａｗａ  Ｔ等、２００８年）。ローヤルゼリーは女王バチにとっての唯一の栄養源でありＭＲＪＰはローヤルゼリーにおける最も重要なタンパク質であるので、ローヤルゼリーを特異的な化合物で発展する必要がある。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】Ｈｅｌｌｎｅｒ  Ｍ，Ｗｉｎｔｅｒ  Ｄ，  ｖｏｎ  Ｇｅｏｒｇｉ  Ｒ，Ｍuｎｓｔｅｄｔ  Ｋ．，アピセラピー：ドイツの養蜂家における使用と経験（Ａｐｉｔｈｅｒａｐｙ：のｕｓａｇｅ  ａｎｄ  ｅｘｐｅｒｉｅｎｃｅ  ｉｎ  ｇｅｒｍａｎ  ｂｅｅｋｅｅｐｅｒｓ．），Ｅｖｉｄ  Ｂａｓｅｄ  Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  Ａｌｔｅｒｎａｔ  Ｍｅｄ．２００８；５（４）：４７５−９．
【非特許文献２】Ｗｉｎｓｔｏｎ  Ｍ  Ｌ．，ミツバチの生物学（Ｔｈｅ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｈｏｎｅｙｂｅｅ．），Ｈａｒｖａｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ：Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ，１９８７．
【非特許文献３】Ｒｏｂｉｎｓｏｎ  Ｇ  Ｅ．，ミツバチの神経生物学と挙動（Ｉｎ  Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｂｅｈａｖｉｏｒ  ｏｆ  Ｈｏｎｅｙｂｅｅ）；Ｍｅｎｚｅｌ  Ｒ，Ｍｅｒｃｅｒ  Ｒ，Ｅｄｓ．；Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ：Ｎｅｗ  Ｙｏｒｌ，１９８７；ｐｐ２６６−２７９．
【非特許文献４】Ｐｅｉｒｅｎ  Ｎ，Ｖａｎｒｏｂａｅｙｓ  Ｆ，ｄｅ  Ｇｒａａｆ  ＤＣ，Ｄｅｖｒｅｅｓｅ  Ｂ，Ｖａｎ  Ｂｅｅｕｍｅｎ  Ｊ，Ｊａｃｏｂｓ  ＦＪ．，プロテオミック手法により再考したミツバチ毒のタンパク質組成（Ｔｈｅ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ｈｏｎｅｙｂｅｅ  ｖｅｎｏｍ  ｒｅｃｏｎｓｉｄｅｒｅｄ  ｂｙ  ａ  ｐｒｏｔｅｏｍｉｃ  ａｐｐｒｏａｃｈ．），Ｂｉｏｃｈｉｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ａｃｔａ．，２００５；１７５２（１）：１−５．
【非特許文献５】Ｔａｋａｋｉ−Ｄｏｉ  Ｓ，Ｈａｓｈｉｍｏｔｏ  Ｋ，Ｙａｍａｍｕｒａ  Ｍ，Ｋａｍｅｉ  Ｃ．，自然発症高血圧ラットにおけるローヤルゼリータンパク質加水分解物及びその断片の降圧活性（Ａｎｔｉｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｖｅ  ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ  ｏｆ  ｒｏｙａｌ  ｊｅｌｌｙ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｈｙｄｒｏｌｙｓａｔｅ  ａｎｄ  ｉｔｓ  ｆｒａｃｔｉｏｎｓ  ｉｎ  ｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓｌｙ  ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｖｅ  ｒａｔｓ．），Ａｃｔａ  Ｍｅｄ  Ｏｋａｙａｍａ．，２００９；６３（１）：５７−６４．
【非特許文献６】Ｍａｎｎｏｏｒ  ＭＫ，Ｓｈｉｍａｂｕｋｕｒｏ  Ｉ，Ｔｓｕｋａｍｏｔｏａ  Ｍ，Ｗａｔａｎａｂｅ  Ｈ，Ｙａｍａｇｕｃｈｉ  Ｋ，Ｓａｔｏ  Ｙ．，ミツバチのローヤルゼリーは、ＳＬＥ自然発症ＮＺＢ×ＮＺＷ  Ｆ１マウスにおける自己免疫を抑制する（Ｈｏｎｅｙｂｅｅ  ｒｏｙａｌ  ｊｅｌｌｙ  ｉｎｈｉｂｉｔｓ  ａｕｔｏｉｍｍｕｎｉｔｙ  ｉｎ  ＳＬＥ−ｐｒｏｎｅ  ＮＺＢ  ｘ  ＮＺＷ  Ｆ１  ｍｉｃｅ．），Ｌｕｐｕｓ．，２００９；１８（１）：４４−５２．
【非特許文献７】Ｇａｓｉｃ  Ｓ，Ｖｕｃｅｖｉｃ  Ｄ，Ｖａｓｉｌｉｊｉｃ  Ｓ，Ａｎｔｕｎｏｖｉｃ  Ｍ，Ｃｈｉｎｏｕ  Ｉ，Ｃｏｌｉｃ  Ｍ．，インビトロでのローヤルゼリー成分の免疫調整活性の評価（Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｉｍｍｕｎｏｍｏｄｕｌａｔｏｒｙ  ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ  ｏｆ  ｒｏｙａｌ  ｊｅｌｌｙ  ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ．），Ｉｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｔｏｘｉｃｏｌ．，２００７；２９（３−４）：５２１−３６．
【非特許文献８】Ｖｕｃｅｖｉｃ  Ｄ，Ｍｅｌｌｉｏｕ  Ｅ，Ｖａｓｉｌｉｊｉｃ  Ｓ，Ｇａｓｉｃ  Ｓ，Ｉｖａｎｏｖｓｋｉ  Ｐ，Ｃｈｉｎｏｕ  Ｉ，Ｃｏｌｉｃ  Ｍ．，ローヤルゼリーから単離される脂肪酸はインビトロで樹状細胞性免疫応答を調整する（Ｆａｔｔｙ  ａｃｉｄｓ  ｉｓｏｌａｔｅｄ  ｆｒｏｍ  ｒｏｙａｌ  ｊｅｌｌｙ  ｍｏｄｕｌａｔｅ  ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ  ｃｅｌｌ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｉｍｍｕｎｅ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ．），Ｉｎｔ  Ｉｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌ．，２００７；７（９）：１２１１−２０．
【非特許文献９】Ｂｏｕｋｒａａ  Ｌ．，緑膿菌に対するローヤルゼリーとハチミツの付加活性（Ａｄｄｉｔｉｖｅ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  ｒｏｙａｌ  ｊｅｌｌｙ  ａｎｄ  ｈｏｎｅｙ  ａｇａｉｎｓｔ  Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ．），Ａｌｔｅｒｎ  Ｍｅｄ  Ｒｅｖ．，２００８；１３（４）：３３０−３．
【非特許文献１０】Ｈａｓｈｉｍｏｔｏ  Ｍ，Ｋａｎｄａ  Ｍ，Ｉｋｅｎｏ  Ｋ，Ｈａｙａｓｈｉ  Ｙ，Ｎａｋａｍｕｒａ  Ｔ，Ｏｇａｗａ  Ｙ，Ｆｕｋｕｍｉｔｓｕ  Ｈ，Ｎｏｍｏｔｏ  Ｈ，Ｆｕｒｕｋａｗａ  Ｓ．，ローヤルゼリーの経口投与により、成熟マウス脳の海馬におけるグリア細胞系列派生神経栄養因子及び神経フィラメントのｍＲＮＡ発現が促進される（Ｏｒａｌ  ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｒｏｙａｌ  ｊｅｌｌｙ  ｆａｃｉｌｉｔａｔｅｓ  ｍＲＮＡ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｇｌｉａｌ  ｃｅｌｌ  ｌｉｎｅ−ｄｅｒｉｖｅｄ  ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃ  ｆａｃｔｏｒ  ａｎｄ  ｎｅｕｒｏｆｉｌａｍｅｎｔ  Ｈ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ａｄｕｌｔ  ｍｏｕｓｅ  ｂｒａｉｎ．），Ｂｉｏｓｃｉ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．，２００５；６９（４）：８００−５．
【非特許文献１１】Ｇｕｏ  Ｈ，Ｅｋｕｓａ  Ａ，Ｉｗａｉ  Ｋ，Ｙｏｎｅｋｕｒａ  Ｍ，Ｔａｋａｈａｔａ  Ｙ，Ｍｏｒｉｍａｔｓｕ  Ｆ．，ローヤルゼリータンパク質はインビトロ及びインビボで脂質過酸化を抑制する（Ｒｏｙａｌ  ｊｅｌｌｙ  ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ｉｎｈｉｂｉｔ  ｌｉｐｉｄ  ｐｅｒｏｘｉｄａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ａｎｄ  ｉｎ  ｖｉｖｏ．), Ｊ  Ｎｕｔｒ  Ｓｃｉ  Ｖｉｔａｍｉｎｏｌ（Ｔｏｋｙｏ）．，２００８；５４（３）：１９１−５．
【非特許文献１２】Ｓｃａｒｓｅｌｌｉ  Ｒ，Ｄｏｎａｄｉｏ  Ｅ，Ｇｉｕｆｆｒｉｄａ  ＭＧ，Ｆｏｒｔｕｎａｔｏ  Ｄ，Ｃｏｎｔｉ  Ａ，Ｂａｌｅｓｔｒｅｒｉ  Ｅ，Ｆｅｌｉｃｉｏｌｉ  Ｒ，Ｐｉｎｚａｕｔｉ  Ｍ，Ｓａｂａｔｉｎｉ  ＡＧ，Ｆｅｌｉｃｉｏｌｉ  Ａ．，ローヤルゼリープロテオーメに向けて（Ｔｏｗａｒｄｓ  ｒｏｙａｌ  ｊｅｌｌｙ  ｐｒｏｔｅｏｍｅ．), Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ．，２００５；５（３）：７６９−７６．
【非特許文献１３】Ｓｃｈｍｉｔｚｏｖａ  Ｊ，Ｋｌａｕｄｉｎｙ  Ｊ，Ａｌｂｅｒｔ  Ｓ，Ｓｃｈｒｏｄｅｒ  Ｗ，Ｓｃｈｒｅｃｋｅｎｇｏｓｔ  Ｗ，Ｈａｎｅｓ  Ｊ，Ｊｕｄｏｖａ  Ｊ，Ｓｉｍｕｔｈ  Ｊ．，セイヨウミツバチの主たるローヤルゼリータンパク質ファミリー（Ａ  ｆａｍｉｌｙ  ｏｆ  ｍａｊｏｒ  ｒｏｙａｌ  ｊｅｌｌｙ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｈｏｎｅｙｂｅｅ  Ａｐｉｓ  ｍｅｌｌｉｆｅｒａ  Ｌ．),Ｃｅｌｌ  Ｍｏｌ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉ．，１９９８；５４（９）：１０２０−３０．
【非特許文献１４】Ｋｏｈｎｏ  Ｋ，Ｏｋａｍｏｔｏ  Ｉ，Ｓａｎｏ  Ｏ，Ａｒａｉ  Ｎ，Ｉｗａｋｉ  Ｋ，Ｉｋｅｄａ  Ｍ，Ｋｕｒｉｍｏｔｏ  Ｍ．，ローヤルゼリーは活性マクロファージによる炎症性サイトカインの生成を抑制する（Ｒｏｙａｌ  ｊｅｌｌｙ  ｉｎｈｉｂｉｔｓ  ｔｈｅ  ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｐｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ  ｂｙ  ａｃｔｉｖａｔｅｄ  ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ．），Ｂｉｏｓｃｉ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．，２００４；６８（１）：１３８−４５．
【非特許文献１５】Ｍａｌｅｃｏｖａ  Ｂ，Ｒａｍｓｅｒ  Ｊ，Ｏ‘Ｂｒｉｅｎ  ＪＫ，Ｊａｎｉｔｚ  Ｍ，Ｊｕｄｏｖａ  Ｊ，Ｌｅｈｒａｃｈ  Ｈ，Ｓｉｍｕｔｈ  Ｊ．，ミツバチ（セイヨウミツバチ）ｍｒｊｐ遺伝子ファミリー：幼虫の食事として最も豊富なタンパク質をコードする遺伝子、ｍｒｊｐの推定プロモータとゲノム構造の計算分析（Ｈｏｎｅｙｂｅｅ  （Ａｐｉｓ  ｍｅｌｌｉｆｅｒａ  Ｌ．）  ｍｒｊｐ  ｇｅｎｅ  ｆａｍｉｌｙ：  ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ｐｕｔａｔｉｖｅ  ｐｒｏｍｏｔｅｒｓ  ａｎｄ  ｇｅｎｏｍｉｃ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ｏｆ  ｍｒｊｐ１，  ｔｈｅ  ｇｅｎｅ  ｃｏｄｉｎｇ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｍｏｓｔ  ａｂｕｎｄａｎｔ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｏｆ  ｌａｒｖａｌ  ｆｏｏｄ．），Ｇｅｎｅ．，２００３；３０３：１６５−７５．
【非特許文献１６】Ｆｕｒｕｓａｗａ  Ｔ，Ｒａｋｗａｌ  Ｒ，Ｎａｍ  ＨＷ，Ｓｈｉｂａｔｏ  Ｊ，Ａｇｒａｗａｌ  ＧＫ，Ｋｉｍ  ＹＳ，Ｏｇａｗａ  Ｙ，Ｙｏｓｈｉｄａ  Ｙ，Ｋｏｕｚｕｍａ  Ｙ，Ｍａｓｕｏ  Ｙ，Ｙｏｎｅｋｕｒａ  Ｍ．，一次元及び二次元プロテオミックプラットフォームを用いた包括的なローヤルゼリー（ＲＪ）プロテオミックスにより新規ＲＪタンパク質と潜在的なホスホ／グリコプロテインを明らかにする（Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  ｒｏｙａｌ  ｊｅｌｌｙ  （ＲＪ）  ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ  ｕｓｉｎｇ  ｏｎｅ−  ａｎｄ  ｔｗｏ−ｄｉｍｅｎｓｉｏｎａｌ  ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ  ｐｌａｔｆｏｒｍｓ  ｒｅｖｅａｌｓ  ｎｏｖｅｌ  ＲＪ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ａｎｄ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  ｐｈｏｓｐｈｏ／ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎｓ．），Ｊ  Ｐｒｏｔｅｏｍｅ  Ｒｅｓ．，２００８；７（８）：３１９４−２２９．
【非特許文献１７】Ｓｔｅｆａｎ  Ａｌｂｅｒｔ，Ｊａｒｏｓｌａｖ  Ｋｌａｕｄｉｎｙ，ａｎｄ  Ｊｏｚｅｆ  Ｓｉｍｕｔｈ．，ミツバチ（セイヨウミツバチ）のローヤルゼリーの高多形型タンパク質であるＭＲＪＰ３の分子的特徴について（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＭＲＪＰ３，  ｈｉｇｈｌｙ  ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｏｆ  ｈｏｎｅｙｂｅｅ（Ａｐｉｓ  ｍｅｌｌｉｆｅｒａ）ｒｏｙａｌ  ｊｅｌｌｙ．），Ｉｎｓｅｃｔ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，２９（１９９９）４２７−４３４．
【非特許文献１８】Ｊｕｌｉｅ  Ｃ．Ｋｉｅｆｅｒ，，発達におけるエピジェネティクス（Ｅｐｉｇｅｎｅｔｉｃｓ  ｉｎ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ．），Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ  Ｄｙｎａｍｉｃｓ，２３６：１１４４−１１５６，２００７．
【非特許文献１９】Ａｈｍａｄ  Ｍｉｒｅｍａｄｉ，Ｍｉｋｋｅｌ  Ｚ．Ｏｅｓｔｅｒｇａａｒｄ，Ｐａｕｌ  Ｄ．Ｐ．Ｐｈａｒｏａｈ，ａｎｄ  Ｃａｒｌｏｓ  Ｃａｌｄａｓ，エピジェネティク遺伝子のガン遺伝学（Ｃａｎｃｅｒ  ｇｅｎｅｔｉｃｓ  ｏｆ  ｅｐｉｇｅｎｅｔｉｃ  ｇｅｎｅｓ．），Ｈｕｍａｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，２００７，ｖｏｌ．１６，Ｒｅｖｉｅｗ  Ｉｓｓｕｅ  １，Ｒ２８−Ｒ４９．
【非特許文献２０】Ｊａｎｅｔ  Ｓ．Ｇｒａｈａｍ，Ｓｔａｎｅｌｙ  Ｂ．Ｋａｙｅ，ａｎｄ  Ｒｏｂｅｒｔ  Ｂｒｏｗｎ．，充実性腫瘍におけるエピジェネティクス療法の展望と落とし穴（Ｔｈｅ  ｐｒｏｍｉｓｅｓ  ａｎｄ  ｐｉｔｆａｌｌｓ  ｏｆ  ｅｐｉｇｅｎｅｔｉｃ  ｔｈｅｒａｐｉｅｓ  ｉｎ  ｓｏｌｉｄ  ｔｕｍｏｒｓ．），Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ，４５（２００９），１１２９−１１３６．
【非特許文献２１】Ｔ．  Ｊ．  Ｗａｌｔｏｎ，Ｇ．Ｌｉ，Ｒ．Ｓｅｔｈ，Ｓ．Ｅ．ＭｃＡｒｄｌｅ，Ｍ．Ｃ．Ｂｉｓｈｏｐ，ａｎｄ  Ｒ．Ｃ．Ｒｅｅｓ，ＤＮＡ脱メチル化及びヒストン脱アセチル化阻害の協働により、エストロゲン受容体βの再発現と前立腺ガン細胞系列におけるアポトーシスが誘導される（ＤＮＡ  ｄｅｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｈｉｓｔｏｎｅ  ｄｅａｃｅｔｙｌａｔｉｏｎ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｃｏ−ｏｐｅｒａｔｅ  ｔｏ  ｒｅ−ｅｘｐｒｅｓｓ  ｅｓｔｒｏｇｅｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｂｅｔａ  ａｎｄ  ｉｎｄｕｃｅ  ａｐｏｐｔｏｓｉｓ  ｉｎ  ｐｒｏｓｔａｔｅ  ｃａｎｃｅｒ  ｃｅｌｌ−ｌｉｎｅｓ．），Ｔｈｅ  Ｐｒｏｓｔａｔｅ，６８：２１０−２２２（２００８）．
【非特許文献２２】Ｏｉ  Ｗａｈ  Ｓｔｅｐｈａｎｉｅ  Ｙａｐ，Ｇａｎａｐａｔｈｙ  Ｂｈａｔ，Ｌｉａｎｇ  Ｌｉｕ，ａｎｄ  Ｔｒｙｇｖｅ  Ｏ．  Ｔｏｌｌｅｆｓｂｏｌ，，卵巣上皮ガン細胞におけるエストロゲン受容体β遺伝子のエピジェネティク修飾（Ｅｐｉｇｅｎｅｔｉｃ  ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｅｓｔｒｏｇｅｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｂｅｔａ  ｇｅｎｅ  ｉｎ  ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ  ｏｖａｒｉａｎ  ｃａｎｃｅｒ  ｃｅｌｌｓ．），Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２９：１３９−１４４（２００９）．
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
本発明は、通常体よりも少なくとも体重で１００％大きく、また通常体よりも数倍体重が大きいであろうミツバチの幼虫、少なくとも体重で５０％大きく、また通常体よりも１から数倍体重で大きいさなぎ、また少なくとも体重で５０％大きく、また通常体よりも１から数倍体重で大きい女王バチを製造する方法を提供する。
【００１１】
本発明は、対照幼虫よりも少なくとも体重で１００％大きいミツバチの幼虫を製造する方法を提供する。当該方法は、若い働きバチにＨＤＡＣ阻害剤またはＨＤＡＣ阻害剤の混合物を与えることと、これらの若い働きバチによって分泌されるローヤルゼリーをミツバチの幼虫に与えることとを含み、一方、対照群のミツバチの幼虫にはＨＤＡＣ阻害剤またはＨＤＡＣ阻害剤の混合物を与えられなかった若い働きバチによって作られたローヤルゼリーを与える。
【００１２】
本発明は、対照さなぎよりも少なくとも体重で５０％大きいさなぎを、または、対照女王バチよりも少なくとも体重で５０％大きい女王バチを製造する方法を提供する。当該方法は、若い働きバチにＨＤＡＣ阻害剤またはＨＤＡＣ阻害剤の混合物を与えることと、これら若い働きバチによって分泌されるローヤルゼリーをミツバチの幼虫に与えることと、当該ミツバチの幼虫から発達させたさなぎまたは女王バチを得ることとを含み、一方、ＨＤＡＣ阻害剤またはＨＤＡＣ阻害剤の混合物を与えられなかった若い働きバチによって作られたローヤルゼリーを与えるミツバチの幼虫から対照さなぎまたは対照女王バチを発達させる。
【００１３】
本発明はさらに、対照ローヤルゼリーに対し、６８対６４ｋＤａタンパク質の比が変化したＭＲＪＰ３を含むローヤルゼリーを提供する。
【００１４】
本発明はさらに、働きバチのｍｒｊｐ３遺伝子に対するエピジェネティクスを調整する方法であって、働きバチにＨＤＡＣ阻害剤を与えることで、働きバチのｍｒｊｐ３遺伝子の発現を調整することを含む方法を提供する。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】図１は台湾グリーンプロポリス抽出物を与えられた若い働きバチが特別なローヤルゼリーを分泌し、それが幼虫の急速成長を誘発することを示す図である。Ｕ−１とＵ−２：対照群；Ａ−１とＡ−２：１．２５ｇ／ｋｇの台湾グリーンプロポリス抽出物で処理；Ｂ−１とＢ−２：２．５０ｇ／ｋｇの台湾グリーンプロポリス抽出物で処理；Ｃ−１とＣ−２：５．０ｇ／ｋｇの台湾グリーンプロポリス抽出物で処理。
【図２】図２はプロポリンＣを与えられた若い働きバチが特別なローヤルゼリーを分泌し、それが幼虫の急速成長を誘発することを証明する図である。Ｕ−２：対照群；５０ｍｇ／ｋｇのＣ１−２：プロポリンＣで処理；Ｃ２−２：１００ｍｇ／ｋｇのプロポリンＣで処理。
【図３】図３はプロポリンＣを与えられた若い働きバチが分泌するローヤルゼリー中で確認された水溶性タンパク質成分を示す。試料は異なる時間点で採取された。Ｕ−１：対照群；Ｔ−１：５．０ｇ／ｋｇの台湾グリーンプロポリス抽出物で処理したポジティブ対照群；Ｇ１−１：１５０ｍｇ／ｋｇのプロポリンＧで処理；Ｇ２−１：３００ｍｇ／ｋｇのプロポリンＧで処理；Ｇ３−１：６００ｍｇ／ｋｇのプロポリンＧで処理。
【図４】図４はＮＢＭ−ＨＤ−１を与えられた若い働きバチが分泌するローヤルゼリー中で確認された水溶性タンパク質成分を示す。試料は異なる時間点で採取された。Ｕ−１：対照群；Ｔ−１：５．０ｇ／ｋｇの台湾グリーンプロポリス抽出物で処理したポジティブ対照群；Ｈ１−１：５０ｍｇ／ｋｇのＮＢＭ−ＨＤ−１で処理；Ｈ２−１：１００ｍｇ／ｋｇのＮＢＭ−ＨＤ−１で処理；Ｈ３−１：２００ｍｇ／ｋｇのＮＢＭ−ＨＤ−１で処理。
【図５】図５はＮＢＭ−ＨＤ−１で処理した群からの７２時間後における幼虫から抽出した水溶性タンパク質の二次元ゲル電気泳動分析を示す。Ｌ−１：ＭＲＪＰ１；Ｌ−２：ＭＲＪＰ３；Ｌ−３：ＭＲＪＰ２；Ｌ−４：ＭＲＪＰ２；Ｌ−５：ＭＲＪＰ３；Ｌ−６：ＭＲＪＰ３；Ｌ−７：ＭＲＪＰ３；Ｌ−８：ＭＲＪＰ２。Ｕ１−１：対照群；Ｈ３−１：２００ｍｇ／ｋｇのＮＢＭ−ＨＤ−１で処理。
【図６】図６はＳＡＨＡを与えられた若い働きバチにより分泌されるローヤルゼリー中で確認された水溶性タンパク質成分を示す。試料は７２時間の時点で採取された。Ｕ−１：対照群；Ｔ−１：５．０ｇ／ｋｇの台湾グリーンプロポリス抽出物で処理したポジティブ対照群；Ｇ−１：１５０ｍｇ／ｋｇのプロポリンＧで処理したポジティブ対照群；Ｓ１−１：５ｍｇ／ｋｇのＳＡＨＡで処理；Ｓ２−１：１５ｍｇ／ｋｇのＳＡＨＡで処理。
【図７】台湾グリーンプロポリス抽出物が若い働きバチが特別なローヤルゼリーを分泌することを誘発することを証明し、当該ローヤルゼリーはヒト神経膠腫Ｈｓ６８３細胞の増殖を抑制することができた。Ｕ１：対照群；Ａ１：１．２５ｇ／ｋｇの台湾グリーンプロポリス抽出物で処理；Ｂ１：２．５０ｇ／ｋｇの台湾グリーンプロポリス抽出物で処理：Ｃ１：５．０ｇ／ｋｇの台湾グリーンプロポリス抽出物で処理。
【図８】台湾グリーンプロポリス抽出物が若い働きバチが特別なローヤルゼリーを分泌することを誘発することを証明し、当該ローヤルゼリーはラット神経幹細胞の分化を誘発することができた。Ｕ１：対照群；Ａ１：１．２５ｇ／ｋｇの台湾グリーンプロポリス抽出物で処理；Ｂ１：２．５０ｇ／ｋｇの台湾グリーンプロポリス抽出物で処理：Ｃ１：５．０ｇ／ｋｇの台湾グリーンプロポリス抽出物で処理；ＥＦＧ：ポジティブ対照群。
【図９（ａ）】図９（ａ）は台湾グリーンプロポリス抽出物が若い働きバチが特別なローヤルゼリーを分泌することを誘発することを証明し、当該ローヤルゼリーはラット神経幹細胞の分化を誘発することができた。Ｕ１：対照群；Ｔ：５．０ｇ／ｋｇの台湾グリーンプロポリス抽出物で処理。
【図９（ｂ）】図９（ｂ）は台湾グリーンプロポリス抽出物が若い働きバチが特別なローヤルゼリーを分泌することを誘発することを証明し、当該ローヤルゼリーはラット神経幹細胞の分化を誘発することができた。Ｕ１：対照群；Ｔ：５．０ｇ／ｋｇの台湾グリーンプロポリス抽出物で処理。
【図９（ｃ）】図９（ｃ）は台湾グリーンプロポリス抽出物が若い働きバチが特別なローヤルゼリーを分泌することを誘発することを証明し、当該ローヤルゼリーはラット神経幹細胞の分化を誘発することができた。Ｕ１：対照群；Ｔ：５．０ｇ／ｋｇの台湾グリーンプロポリス抽出物で処理。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
発明の詳細な説明
本発明は、ＨＤＡＣ阻害剤またはＨＤＡＣ阻害剤の混合物を与えられた働き（保育）バチがミツバチの幼虫の成長速度を早めることが可能であり、その結果、大きな幼虫、さなぎ、及び女王バチを得ることを発見する。結果として得られたミツバチの幼虫は通常体よりも少なくとも体重で１００％大きく、また数倍体重が大きいであろう。またさなぎは通常体よりも少なくとも体重で５０％大きく、また通常体よりも１から数倍体重で大きいであろう。また女王バチは通常体よりも少なくとも体重で５０％大きく、また通常体よりも１から数倍体重で大きいであろう。
【００１７】
本発明はさらに、ＨＤＡＣ阻害剤またはＨＤＡＣ阻害剤の混合物がエピジェネティクスを経てローヤルゼリー中のＭＲＪＰ３において６８対６４ｋＤａタンパク質の比を変化しうることを見いだす。ＨＤＡＣ阻害剤またはＨＤＡＣ阻害剤の混合物を与えられた若い働きバチはエピジェネティクスを経て特異的なローヤルゼリーを生成し、ここで６８対６４ｋＤａタンパク質の比が変化する。本発明は、特異的なローヤルゼリーがそれを与えられた女王バチの幼虫の成長を促進し、そして幼虫、それから得られたさなぎ並びに女王バチの体重が著しく増えることを見いだした。
【００１８】
一局面において、本発明は対照幼虫よりも少なくとも体重で１００％大きいミツバチの幼虫を製造する方法を提供する。当該方法は、若い働きバチにＨＤＡＣ阻害剤またはＨＤＡＣ阻害剤の混合物を与えることと、これらの若い働きバチによって分泌されるローヤルゼリーをミツバチの幼虫に与えることとを含み、一方、対照群のミツバチの幼虫にはＨＤＡＣ阻害剤またはＨＤＡＣ阻害剤の混合物を与えられなかった若い働きバチによって作られたローヤルゼリーを与える。本発明の実施態様によれば、ミツバチの幼虫は働きバチによってそれらが分泌するローヤルゼリーを与える、または人間によって働きバチから収集したローヤルゼリーを与えることができる。本発明の実施態様によれば、上記のローヤルゼリーを与えられた幼虫の７２時間後の体重は、１５０％よりも増加する。好ましくは、体重は約２から５倍で増加する（すなわち、２００％から５００％）。さらに好ましくは、体重は約３から５倍で増加する（すなわち、３００％から５００％）。本発明によれば、上記のローヤルゼリーは、対照のローヤルゼリーに対して、６８対６４ｋＤａタンパク質の比が変化したＭＲＪＰ３を含む。
【００１９】
本発明によれば、本発明のミツバチの幼虫から発達したさなぎ及び女王バチが、それぞれ対照のさなぎ及び女王バチよりも体重が重くなる。したがって、本発明は、対照さなぎよりも少なくとも体重で５０％大きいさなぎを、または、対照女王バチよりも少なくとも体重で５０％大きい女王バチを製造する方法を提供する。当該方法は、若い働きバチにＨＤＡＣ阻害剤またはＨＤＡＣ阻害剤の混合物を与えることと、これら若い働きバチによって分泌されるローヤルゼリーをミツバチの幼虫に与えることと、当該ミツバチの幼虫から発達させたさなぎまたは女王バチを得ることとを含み、一方、ＨＤＡＣ阻害剤またはＨＤＡＣ阻害剤の混合物を与えられなかった若い働きバチによって作られたローヤルゼリーを与えるミツバチの幼虫から対照さなぎまたは対照女王バチを発達させる。本発明の実施態様によれば、ミツバチの幼虫は働きバチによってそれらが分泌するローヤルゼリーを与える、または人間によって働きバチから収集したローヤルゼリーを与えることができる。
【００２０】
ある局面においては、本発明はローヤルゼリー中のＭＲＪＰ３の６８対６４ｋＤａタンパク質の比を変化させる方法であって、若い働きバチにＨＤＡＣ阻害剤またはＨＤＡＣ阻害剤の混合物を与えることで、対照となるローヤルゼリーに対して、ＭＲＪＰ３の６８対６４ｋＤａタンパク質の比が変化したローヤルゼリーを製造する。
【００２１】
他の局面においては、本発明は対照ローヤルゼリーに対して６８対６４ｋＤａタンパク質の比が変化したＭＲＪＰ３を含むローヤルゼリーを製造する方法であって、若い働きバチにＨＤＡＣ阻害剤またはＨＤＡＣ阻害剤の混合物を与えることと、若い働きバチによって製造されたローヤルゼリーを収集することとを含む。
【００２２】
他の局面において、本発明はさらに対照ローヤルゼリーに対して６８対６４ｋＤａタンパク質の比が変化したＭＲＪＰ３を含むローヤルゼリーを提供する。
【００２３】
本発明によれば、ＭＲＪＰ３の６８対６４ｋＤａタンパク質の比は、対照に対して約１．５〜１２倍で、１．５〜５倍で、２〜６倍で、２〜１０倍で、４〜１２倍で、あるいは２〜４倍で増加しうる。より好ましくは、ＭＲＪＰ３の６８対６４ｋＤａタンパク質の比は、対照に対して約２〜４倍で、あるいは４〜１０倍で増加しうる。
【００２４】
他のさらなる局面においては、本発明は働きバチのＭＲＪＰ３遺伝子に対するエピジェネティクスを調整する方法であって、働きバチにＨＤＡＣ阻害剤またはＨＤＡＣ阻害剤の混合物を与えることで、働きバチのＭＲＪＰ３遺伝子の発現を調整することを含む方法を提供する。本発明によれば、エピジェネティクスはＤＮＡのメチル化またはＨＤＡＣを阻害することであってもよい。ＤＮＡのメチル化は、ＤＮＡ配列の変化なしで遺伝子発現における遺伝性の変化であるエピジェネティクス変化である。ＤＮＡのメチル化は、遺伝性遺伝子抑制を引き起こす共有結合修飾である。ＤＮＡのメチル化は二つの方法の内、一つにおいて抑制を引き起こす。第一は、メチル化はＤＮＡの認識部位に結合する転写因子に直接影響しうる。第二は、メチル−ＣｐＧ結合ドメインタンパク質（ＭＢＰｓ）は、ヒストン脱アセチル化酵素またはヒストンメチルトランスフェラーゼをかくまう抑制補体複合体を補充することによって抑制を補強しうる（Ｊｕｉｌｅ  Ｃ．Ｋｉｅｆｅｒ、２００７年）。ＨＤＡＣ阻害剤は若い働きバチにおいてＭＲＪＰ３の６８及び６４ｋＤａタンパク質の発現を変えるので、ＨＤＡＣ阻害剤がヒストンハイパーアセチレーションを調整し、若い働きバチにおける多形型ｍｒｊｐ３遺伝子接合及び翻訳に影響しうることを示唆する。
【００２５】
本明細書の文脈において「アルキル」なる語は、直鎖または分枝鎖の炭化水素鎖を意味する。アルキルは好ましくはＣ１−１０アルキルである。好ましくはアルキルの炭素数は１〜８からなる群から選択される。より好ましいアルキルはＣ１−６アルキルまたはＣ１−４アルキルである。アルキル基の例としては、メチル（−ＣＨ３）、エチル（−ＣＨ２ＣＨ３）、プロピル（−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、イソプロピル（−（ＣＨ３）２ＣＨ）及びブチル（−Ｃ４Ｈ９）が挙げられる。
【００２６】
本明細書の文脈において「アルケニル」なる語は、直鎖及び分枝鎖の不飽和炭化水素基を意味する（不飽和結合は二重結合としてのみ存在する）。本発明においてはアルケニルは１以上の二重結合を含む。アルケニルはＣ２−１６アルケニルであることが好ましい。より好ましくはアルケニルの炭素数は２〜１２からなる群から選択される。アルケニル基の例としては、エテニル（−ＣＨ＝ＣＨ２）、プロペニル（−ＣＨ＝ＣＨＣＨ３または−ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ２）、ブテニル（−ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨＣＨ３、−ＣＨ＝ＣＨＣＨ２ＣＨ３または−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ２）、−ＣＨ２ＣＨ＝Ｃ（ＣＨ３）ＣＨ３、−ＣＨ２−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ３、及び−ＣＨ２−ＣＨ＝Ｃ（ＣＨ３）−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ＝Ｃ（ＣＨ３）−ＣＨ３が挙げられる。
【００２７】
本明細書の文脈において「シクロアルキル」なる語は、脂環式環（飽和炭素環）を意味する。好ましくはシクロアルキルの炭素数は３〜８からなる群から選択される。更に好ましくは、シクロアルキルの炭素数は、５〜６からなる群から選択され、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル及びシクロヘキシルが挙げられる。
【００２８】
本明細書において用語「不飽和炭素環式」とは、炭素原子と水素原子とからなる環状置換基を含み、環状部分は、例えばアリール、シクロアリールなどのような不飽和環である。用語「シクロアルケニル」は一つ以上の二重結合を有するシクロアルキルであるアルケニルを含む。例えば、シクロプロペニル（例えば、１−シクロプロペニル）、シクロブテニル（例えば、１−シクロブテニル）、シクロペンテニル（例えば、１−シクロペンテン−１−イル、２−シクロペンタン−１−イル、及び３−シクロペンテン−１−イル）、シクロヘキセニル（例えば、１−シクロヘキセン−１−イル、２−シクロヘキセン１−イル、及び３−シクロヘキセン−１−イル）、シクロヘプテニル（例えば、１−シクロヘプテニル）、シクロオクテニル（例えば、１−シクロオクテニル）等があげられる。特に好ましくは、１−シクロヘキセン−１−イル、２−シクロヘキセン−１−イル、及び３−シクロヘキセン−１−イル。用語「アリール」は単一または融合リングを含み、ここで、少なくとも一つのリングは芳香族であり、例えばフェニル、ナフチルおよびテトラヒドロナフタレニルである。
【００２９】
本明細書においては、「５または６員の複素環」の句は、５または６原子の環状リングを称し、ここでリングの少なくとも一つの原子はヘテロ原子である。５または６員複素環は飽和または不飽和の芳香族あるいは非芳香族でありうる。好ましくは、ヘテロ原子はＮ，Ｏ，Ｓから選択される原子である。ヘテロ環の例としては、これには限定されないが、フリル（例えば、２−フリル、３−フリル）、チエニル（例えば、２−チエニル、３−チエニル）、ピロリル（例えば、１−ピロリル、２−ピロリル、３−ピロリル）、イミダゾリル（例えば、１−イミダゾリル、２−イミダゾリル、４−イミダゾリル）、ピラゾリル（例えば、１−ピラゾリル、３−ピラゾリル）、トリアゾリル（例えば、１，２，４−トリアゾール−１−イル、１，２，４−トリアゾール−３−イル、１，２，４−トリアゾール−４−イル）、テトラゾリル（例えば、１−テトラゾリル、２−テトラゾリル、５−テトラゾリル）、オキサゾリル（例えば、２−オキサゾリル、４−オキサゾリル、５−オキサゾリル）、イソオキサゾリル（例えば、３−イソオキサゾリル、４−イソオキサゾリル、５−イソオキサゾリル）、チアゾリル（例えば、２−チアゾリル、４−チアゾリル、５−チアゾリル）、チアジアゾリル、イソチアゾリル（例えば、３−イソチアゾリル、４−イソチアゾリル、５−イソチアゾリル）、ピリジル（例えば、２−ピリジル、３−ピリジル、４−ピリジル）、ピリダジニル（例えば、３−ピリダジニル、４−ピリダジニル）、ピリミジニル（例えば、２−ピリミジニル、４−ピリミジニル、５−ピリミジニル）、フラザニル（例えば３−フラザニル）、ピラジニル（例えば、２−ピラジニル）、オキサジアゾリル（例えば、１，３，４−オキサジアゾ−ル−２−イル）、１−ピロリニル、２−ピロリニル、３−ピロリニル、ピロリジン、２−ピロリジニル、３−ピロリジニル、１−イミダゾリニル、２−イミダゾリニル、４−イミダゾリニル、１−イミダゾリジニル、２−イミダゾリジニル、４−イミダゾリジニル、１−ピラゾリニル、３−ピラゾリニル、４−ピラゾリニル、１−ピラゾリジニル、３−ピラゾリジニル、４−ピラゾリジニル、ピペリジノ、２−ピペリジル、３−ピペリジル、４−ピペリジル、ピペラジノ、２−ピペラジニル、２−モルホリニル、３−モルホリニル、モルホリノ、テトラヒドロピラニル、等である。
【００３０】
本明細書の文脈において「ハロゲン」なる語は、フッ素、塩素、臭素及びヨウ素を意味する。
【００３１】
本明細書の文脈における「薬学的に許容される塩」なる語には、有機及び無機の酸及び塩基と形成される塩が含まれる。薬学的に許容される酸付加塩としては、塩酸、臭化水素酸、硫酸及びリン酸などの無機酸、ならびに、クエン酸、酒石酸、乳酸、ピルビン酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、琥珀酸、蓚酸、蟻酸、フマル酸、マレイン酸、オキザロ酢酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸及びイセチオン酸などの有機酸が挙げられる。薬学的に許容される塩基塩としては、アンモニウム塩、ナトリウム塩やカリウム塩などのアルカリ金属塩、カルシウム塩やマグネシウム塩などのアルカリ土類金属塩、及び１級、２級、及び３級アミン塩などの有機塩基との塩が挙げられる。
【００３２】
本明細書の文脈において「プロドラッグ」なる語は、血中で加水分解されることなどによって体内で薬理作用を有する活性型に変換される化合物を意味する。
【００３３】
本明細書の文脈において「溶媒和物」なる語は、本発明の化合物と溶媒とからなる複合体であって、本発明の化合物と溶媒とが反応しているか、これらが沈殿または析出される複合体を意味する。
【００３４】
本明細書の文脈において「立体異性体」なる語は、結合する原子は同じであるが原子の空間的配置が異なる異性体分子を指す。
【００３５】
本明細書の文脈において「エナンチオマー」なる語は、左手と右手が「同じ」であるけれども反対であるように、互いに重ね合わせることのできない鏡像関係にある立体異性体を指す。
【００３６】
本明細書においては、用語「働きバチ」はコロニーの女王バチの完全な生殖能力が欠けているあらゆる雌の真社会性ハチである。ほとんどの場合において、同様に女王に対して確固たる非生殖能力の増加に相互関係している。ハチの卵は働きバチが作成し形成したワックスハニーコムの個室内に一つずつ入っている。幼虫は初期においては働きバチによって製造されたローヤルゼリーを与えられている。例外はローヤルゼリーを単独で与えられる幼虫であり、これは女王バチに発達する。幼虫は個室内で繭を紡ぎ、さなぎになる前に数回脱皮をする。雄バチは未受精卵から孵り、雌（女王及び働きバチ）は受精卵から孵る。女王は実際に横たえつつある卵を受精するよう選択しうるものであり、通常は彼女が横たえつつある個室がどれであるかに依存している。若い働きバチは巣箱をきれいに保ち、幼虫を育成する。それらのローヤルゼリー生成腺が退化し始めると、それらは巣の個室の建築を開始する。それらは年を経るに従い、他のコロニー内の仕事を進める。ここでそのような仕事は、探索者から花の蜜と花粉を受け取ること、また巣箱を守ること等である。後に、また働きバチは彼女の第一のオリエンテーション飛行に立ち、最終的に巣箱を立ち去り、典型的には残りの寿命を食料探索者として過ごす。
【００３７】
本明細書においては、用語「ローヤルゼリー」は幼虫の食物として使用されるハチミツの分泌物である。それは若い働きバチの頭部にある下咽頭腺から分泌され、（他の物質の中でも）コロニーの幼虫に与えるべく用いられる。
【００３８】
本発明によれば、ＨＤＡＣは、コアヒストンタンパク質のアミノ酸末端近傍にあるリジンのε−アミノ基を選択的に脱アセチル化することにより転写に影響を及ぼす酵素である。ＨＤＡＣ阻害剤は、固体処理及び血液性悪性腫瘍の可能性のある抗ガン剤の面白い新しいクラスとして現れている。本発明は、意外なことにＨＤＡＣ阻害剤が若い働きバチによって作られるローヤルゼリー中のＭＲＪＰ３の６８及び６４ｋＤａタンパク質の発現に影響することを発見した。ＨＤＡＣ阻害剤は、これに限定されないが、４つのクラスのＨＤＡＣ阻害剤を含み、短鎖脂肪酸、ヒドロキサム酸、ベンズアミド、及び環状ペプチドであり、これらはＭｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｒｅｖｉｅｗｓ，Ｖｏｌ．２６，Ｎｏ．４，ｐｐ．３９７−４１３，２００６に報告されている；Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｖｏｌ．９２，Ｎｏ．１５，Ａｕｇｕｓｔ  ２，２０００，ｐｐ．１２１０−１２１６に掲載されているヒドロキサム酸系ハイブリッド極性化合物（ＨＰＣｓ）；米国特許第６，１７４，９０５号明細書、欧州特許公報第０８４７９９２号明細書、日本公開公報２５８８６３／９６号明細書、及び日本特許出願番号第１０１３８９５７号明細書にあるベンズアミド誘導体；ＷＯ０１／３８３２２にある化合物；ベンズアミドＭ３４４（Ｈｕｍ  Ｇｅｎｅｔ，２００６，１２０，ｐｐ．１０１−１１０）；酪酸ナトリウム（Ｈｕｍａｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，２００４，Ｖｏｌ．１３，Ｎｏ．１１，ｐｐ．１１８３−１１９２）；トリコスタチンＡ（Ｔｒｉｃｈｏｓｔａｔｉｎ  Ａ）（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃａｎｃｅｒ  ２００６，５：８；本文献は以下より入手可能：ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｍｏｌｅｃｕｌａｒ−ｃａｎｃｅｒ．ｃｏｍ／ｃｏｎｔｅｎｔ／５／１／８）；米国特許第７，１６９，８０１号明細書に開示されているＺ−Ｑ−Ｌ−ＭあるいはＺ−Ｌ−Ｍの式を有する化合物；米国特許第６８８８０２７号明細書にあるＰＸＤ１０１を含むスルホンアミド化合物のファミリー；欧州特許第１３０１１８４号明細書にカバーされているバルプロ酸及びその誘導体；Ｎ，Ｎ'−ヘキサメチレン  ビスアセトアミド（ＨＭＢＡ）；米国特許第６，０８７，３６７号明細書及び再発行第３８５０６号明細書に記載のＨＭＢＡ関連化合物；米国特許第７，３９９，７８７号明細書に開示のＨＭＢＡ関連化合物、例えばスベロイルアニリドヒドロキサム酸（ＳＡＨＡ）；Ｂｌｏｏｄ，１  Ｏｃｔｏｂｅｒ  ２００３，Ｖｏｌ．１０２，Ｎｏ．７，ｐｐ．２６１５−２６２２に報告されたＮＶＰ−ＬＡＱ８２４（ヒドロキサム誘導体）及びＮＶＰ−ＬＡＱ８２４（４−アミノメチルシンナミックヒドロキサム酸誘導体）；ＬＢＨ５８９はアポトーシスを引き金として腫瘍細胞系列において成長阻害と退行を誘発し、またＬＢＨ５８９は抗ガン剤としてフェーズＩの臨床試験が行われている（Ｂｌｏｏｄ  １０５（４）：１７６８−７６  Ｆｅｂｒｕａｒｙ  １５，２００５）；米国特許出願第１１／８５５４１６号及び１２／４１８３７３号明細書に記載の化合物；プロポリス、プロポリン及び米国特許出願公開第２００８０２４２６４８号明細書にある化合物であっ��、以下のものを含む、ピロキサミド、Ｍ−カルボキシ桂皮酸ビスヒドロキシアミド（ＣＢＨＡ）、トリコスタチンＡ（ＴＳＡ），トリコスタチンＣ，サリチルヒドロキサム酸（ＳＢＨＡ），アゼライックビスヒドロキサム酸（ＡＢＨＡ），アゼライック−１−ヒドロキサメート−９−アニリド（ＡＡＨＡ），６−（３−クロロフェニルウレイド）カーポイックヒドロキサム酸（３Ｃ１−ＵＣＨＡ），オキサムフラチン，Ａ−１６１９０６，スクリプタイド，ＰＸＤ−１０１，ペプチドを含有する環状ヒロロキサム酸（ＣＨＡＰ），ＩＴＦ−２３５７，ＭＷ２７９６，ＭＷ２９９６，トラポキシンＡ，ＦＲ９０１２２８（ＦＫ２２８またはデプシペプチド），ＦＲ２２５４９７，アピシジン，ＣＨＡＰ，ＨＣ−トキシン，ＷＦ２７０８２，クラミドシン，酪酸ナトリウム，イソバレレート，４−フェニル酪酸塩（４−ＰＢＡ），４−フェニル酪酸ナトリウム（ＰＢＳ），アルギニンブチレート，プロピオン酸塩，ブチルアミド，イソブチルアミド，フェニルアセテート，３−ブロモプロピオネート，トリブチリン，バルプロ酸，バルプロネート，ＣＩ−９９４，ＭＳ−２７−２７５の３′−アミノ誘導体，ＭＧＣＤ０１０３及びデプデシンである。本明細書で引用されたすべての文献はその内容を援用する。
【００３９】
本発明の一実施態様によれば、ここで使用されるＨＤＡＣ阻害剤は以下の式（Ｉ）で表される化合物である：
【００４０】
【化１】
0005410233.tif 000002
【００４１】
ここで、
Ｒ１及びＲ２はそれぞれ独立してＯＨ，ＯＣ（＝Ｏ）アルキル，Ｏ−アルキル，Ｓ−アルキル，Ｎ−アルキル，Ｏ−アルケニル，Ｓ−アルケニル，Ｎ−アルケニル，Ｏ−アルキニル，Ｓ−アルキニル，Ｎ−アルキニル，Ｏ−Ｃ３−８シクロアルキル，Ｓ−Ｃ３−８シクロアルキル，Ｎ−Ｃ３−８シクロアルキル，Ｏ−不飽和５〜１０員単環または二環式リング，Ｓ−不飽和５〜１０員単環または二環式リング，Ｎ−不飽和５〜１０員単環または二環式リング，アルキル，アルキレニル，アルキニル，Ｃ３−８シクロアルキル，Ｎ，Ｏ，及びＳからなる群から選ばれる少なくとも一つのリングヘテロ原子を含む不飽和５〜１０員単環または二環式リングまたは飽和もしくは不飽和５〜１０員ヘテロ環状リング；またはＲ１及びＲ２は共同してジオキソランを形成しうる；
Ｒ３及びＲ４はそれぞれ独立してＯＨ，ＯＣ（＝Ｏ）アルキル，Ｏ−アルキル，Ｓ−アルキル，Ｎ−アルキル，Ｏ−アルケニル，Ｓ−アルケニル，Ｎ−アルケニル，Ｏ−アルキニル，Ｓ−アルキニル，Ｎ−アルキニル，Ｏ−Ｃ３−８シクロアルキル，Ｓ−Ｃ３−８シクロアルキル，Ｎ−Ｃ３−８シクロアルキル，Ｏ−不飽和５〜１０員単環または二環式リング，Ｓ−不飽和５〜１０員単環または二環式リング，Ｎ−不飽和５〜１０員単環または二環式リング，アルキル，アルキレニル，アルキニル，Ｃ３−８シクロアルキル，Ｎ，Ｏ，及びＳからなる群から選ばれる少なくとも一つのリングヘテロ原子を含む不飽和５〜１０員単環または二環式リングまたは飽和もしくは不飽和５〜１０員ヘテロ環状リング；
Ｒ５はＣ４−１６アルキルまたはＣ４−１６アルケニルであって、ここでアルキルまたはアルケニルは未置換またはＣ１−６アルキル，ＯＨ，ハロゲン，ＣＮ，ＮＯ，Ｎ３，ＮＨ２，ＣＨＯ，ＯＲ９，ＳＲ９，ＮＲ９，ｏｒＣＯＯＲ９の１以上で置換されている；
Ｒ６はＣ２−１２アルキルまたはＣ２−１２アルケニルであって、ここでアルキルまたはアルケニルは未置換またはＣ１−６アルキル，ＯＨ，ハロゲン，ＣＮ，ＮＯ，Ｎ３，ＮＨ２，ＣＨＯ，ＯＲ９，ＳＲ９，またはＮＲ９の１以上で置換されている；またはＲ５及びＲ６の一つは、水素、ハロゲンまたはＯＨであり、その他方は未置換またはＣ１−６アルキル，ＯＨ，ＮＨ２，ハロゲン，ＣＮ，ＮＯまたはＮ３の１以上で置換されているＣ４−１６アルキルまたはＣ４−１６アルキレン；
Ｒ７及びＲ８はそれぞれ独立して水素、ハロゲン，ＯＨ，ＮＨ２，ＣＯＯＨ，ＣＨＯ，ＣＮ，ＮＯ，未置換またはＯＨ，ＮＨ２，ＣＯＯＨ，ハロゲン，ＣＮ，ＮＯもしくはＣＨＯで置換されたＣ１−６アルキル，＝Ｏ，Ｏ−アルキル，Ｓ−アルキル，Ｎ−アルキル，Ｏ−アルケニル，Ｓ−アルケニル，Ｎ−アルケニル，Ｏ−アルキニル，Ｓ−アルキニルもしくはＮ−アルキニル，またはＲ７及びＲ８は共同して二重結合，Ｃ３−６シクロアルキル，もしくはＮ，Ｏ及びＳからなる群から選択されるヘテロ原子を少なくとも含む５〜１０員ヘテロ環状リング；
Ｒ９はフェニル，Ｃ（＝Ｏ）Ｒ１０，Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ１０またはベンジル；及び
Ｒ１０はＯＨ，ＮＨＯＨ，ＮＨ２，Ｃ１−６アルキル，フェニルまたはベンジル；
及びこれらの薬学的に許容される塩、立体異性体、光学異性体、プロドラッグ並びに溶媒和物である。
好ましくは、式（Ｉ）の化合物はこれらの中、Ｒ１及びＲ２はそれぞれ独立してＯＨ，ＯＣ１−６アルキル，ＯＣ（＝Ｏ）Ｃ１−６アルキル，Ｏ−フェニルもしくはＯ−ベンジルまたはＲ１及びＲ２共同してジオキサランを形成し；Ｒ３及びＲ４はそれぞれ独立してＯＨ，ＯＣ１−６アルキル，ＯＣ（＝Ｏ）Ｃ１−６アルキル，Ｏ−フェニルもしくはＯ−ベンジル；Ｒ５は，
【００４２】
【化２】
0005410233.tif 000003
，
【００４３】
【化３】
0005410233.tif 000004
，
【００４４】
【化４】
0005410233.tif 000005
，
【００４５】
【化５】
0005410233.tif 000006
，
【００４６】
【化６】
0005410233.tif 000007
，
【００４７】
【化７】
0005410233.tif 000008
，
【００４８】
【化８】
0005410233.tif 000009
，
【００４９】
【化９】
0005410233.tif 000010
，
【００５０】
【化１０】
0005410233.tif 000011
,
【００５１】
【化１１】
0005410233.tif 000012
,
【００５２】
【化１２】
0005410233.tif 000013
【００５３】
または
【化１３】
0005410233.tif 000014
；
【００５４】
Ｒ６は，
【化１４】
0005410233.tif 000015
，
【００５５】
【化１５】
0005410233.tif 000016
,
【００５６】
【化１６】
0005410233.tif 000017
，
【００５７】
【化１７】
0005410233.tif 000018
，
【００５８】
【化１８】
0005410233.tif 000019
，
【００５９】
【化１９】
0005410233.tif 000020
，
【００６０】
【化２０】
0005410233.tif 000021
，
【００６１】
【化２１】
0005410233.tif 000022
，
【００６２】
【化２２】
0005410233.tif 000023
，
【００６３】
【化２３】
0005410233.tif 000024
，
【００６４】
【化２４】
0005410233.tif 000025
，
【００６５】
【化２５】
0005410233.tif 000026
，
【００６６】
【化２６】
0005410233.tif 000027
，
【００６７】
もしくは
【化２７】
0005410233.tif 000028
。
【００６８】
より好ましくは、式（Ｉ）の化合物は以下からなる群から選択される
【００６９】
【化２８】
0005410233.tif 000029
ＮＢＭ−ＨＤ−１
，
【００７０】
【化２９】
0005410233.tif 000030
，
【００７１】
【化３０】
0005410233.tif 000031
，
【００７２】
【化３１】
0005410233.tif 000032
，
【００７３】
【化３２】
0005410233.tif 000033
，
【００７４】
【化３３】
0005410233.tif 000034
，
【００７５】
【化３４】
0005410233.tif 000035
，
【００７６】
【化３５】
0005410233.tif 000036
，
【００７７】
【化３６】
0005410233.tif 000037
，
【００７８】
【化３７】
0005410233.tif 000038
，
【００７９】
【化３８】
0005410233.tif 000039
，
【００８０】
【化３９】
0005410233.tif 000040
，
【００８１】
【化４０】
0005410233.tif 000041
プロポリンＧ
【００８２】
【化４１】
0005410233.tif 000042
，
【００８３】
【化４２】
0005410233.tif 000043
，
【００８４】
【化４３】
0005410233.tif 000044
，
【００８５】
【化４４】
0005410233.tif 000045
，
【００８６】
及び
【化４５】
0005410233.tif 000046
，
【００８７】
【化４６】
0005410233.tif 000047
プロポリンＡ
【００８８】
【化４７】
0005410233.tif 000048
プロポリンＢ
【００８９】
【化４８】
0005410233.tif 000049
プロポリンＣ
【００９０】
【化４９】
0005410233.tif 000050
プロポリンＤ
【００９１】
【化５０】
0005410233.tif 000051
プロポリンＥ
【００９２】
【化５１】
0005410233.tif 000052
プロポリンＦ
【００９３】
【化５２】
0005410233.tif 000053
プロポリンＧ
【００９４】
【化５３】
0005410233.tif 000054
プロポリンＨ
【００９５】
【化５４】
0005410233.tif 000055
プロポリンＩ
【００９６】
【化５５】
0005410233.tif 000056
プロポリンＪ
【００９７】
本発明の他の実施態様によれば、ここで使用されるＨＤＡＣ阻害剤は以下の式（II）で表される化合物である：
【００９８】
【化５６】
0005410233.tif 000057
【００９９】
ここで、
Ｒ１は水素，アルキル，アルケニル，Ｃ５−６シクロアルキル，５員もしくは６員の不飽和炭素環または５員もしくは６員のヘテロ環；
ＸはＣ，Ｏ，ＮまたはＳ；
ＹはＯ，ＮＨまたはＯ−Ｃ１−４アルキル；
ｎは０〜１０の整数；
ｍは０〜５の整数；
Ｒ２及びＲ３は独立してＣ１−６アルキル；
Ｒ４はＣ５−６シクロアルキルまたは５員もしくは６員不飽和炭素環もしくはヘテロ環であって、ハロゲン，ＣＦ３，ＯＲ７またはＮＲ７Ｒ８で置換されていてもよい、ここでＲ７及びＲ８は独立して水素またはＣ１−６アルキル；
Ｒ５はＯＨ，ＮＨ２またはＣ５−６シクロアルキル，５員もしくは６員の不飽和炭素環もしくはヘテロ環であって、シクロアルキル、炭素環及びヘテロ環は任意でハロゲン，ＮＨ２，ＮＯ２，Ｃ１−６アルコキシ，Ｃ１−６アルキルチオ，ＯＲ７，ＮＲ７Ｒ８またはＣＦ３で置換されていてもよい；及び
Ｒ６はＨ，ヒドロキシまたはＣ２−１０アルケニルで置換されていてもよいＣ１−１０アルキル，またはＲ１と共同して−Ｃ２Ｈ２−を形成する；
及びこれらの薬学的に許容される塩、立体異性体、光学異性体、プロドラッグ並びに溶媒和物である。
【０１００】
好ましくは、式（II）の化合物はこれらの中で、Ｒ１，Ｒ２及びＲ３は独立してＣ１−４アルキル；Ｒ４はフェニルまたはハロゲン置換フェニル，ＣＦ３，ＯＣ１−４アルキル，Ｒ５はＯＨ，フェニルまたはＮＨ２置換フェニル、及びＲ６は水素である。
【０１０１】
さらに好ましくは、式（II）の化合物は以下からなる群から選択される：
【０１０２】
【化５７】
0005410233.tif 000058
ＮＢＭ−ＨＢ−ＯＳ０１
【０１０３】
【化５８】
0005410233.tif 000059
ＮＢＭ−Ｃ−ＢＣＡ−ＯＳ０１
【０１０４】
【化５９】
0005410233.tif 000060
ＮＢＭ−Ｃ−ＢＡ−ＯＳ０１
【０１０５】
【化６０】
0005410233.tif 000061
ＮＢＭ−Ｃ−ＢＭＡ−ＯＳ０１
【０１０６】
【化６１】
0005410233.tif 000062
ＮＢＭ−Ｃ−ＢＸ−ＯＳ０１
【０１０７】
【化６２】
0005410233.tif 000063
ＮＢＭ−Ｃ−ＢＣＸ−ＯＳ０１
【０１０８】
【化６３】
0005410233.tif 000064
ＮＢＭ−Ｃ−ＢＭＸ−ＯＳ０１
【０１０９】
【化６４】
0005410233.tif 000065
ＮＢＭ−Ｃ−ＢＦＸ−ＯＳ０１
【０１１０】
【化６５】
0005410233.tif 000066
ＮＢＭ−Ｃ−ＢＢＸ−ＯＳ０１
【０１１１】
【化６６】
0005410233.tif 000067
ＮＢＭ−Ｔ−ＢＸ−ＯＳ０１
【０１１２】
【化６７】
0005410233.tif 000068
ＮＢＭ−Ｔ−ＢＡ−ＯＳ０１
【０１１３】
【化６８】
0005410233.tif 000069
ＮＢＭ−Ｔ−ＢＣＡ−ＯＳ０１
【０１１４】
【化６９】
0005410233.tif 000070
ＮＢＭ−Ｔ−ＢＢＡ−ＯＳ０１
【０１１５】
【化７０】
0005410233.tif 000071
ＮＢＭ−Ｔ−ＢＦＡ−ＯＳ０１
【０１１６】
【化７１】
0005410233.tif 000072
ＮＢＭ−Ｔ−ＢＭＡ−ＯＳ０１
【０１１７】
【化７２】
0005410233.tif 000073
ＮＢＭ−Ｔ−ＢＣＸ−ＯＳ０１
【０１１８】
【化７３】
0005410233.tif 000074
ＮＢＭ−Ｔ−Ｌ−ＢＣＸ−ＯＳ０１
【０１１９】
【化７４】
0005410233.tif 000075
ＮＢＭ−Ｔ−ＢＭＸ−ＯＳ０１
【０１２０】
【化７５】
0005410233.tif 000076
ＮＢＭ−Ｔ−Ｋ−ＢＭＸ−ＯＳ０１
【０１２１】
【化７６】
0005410233.tif 000077
ＮＢＭ−Ｔ−Ｌ−ＢＭＸ−ＯＳ０１
【０１２２】
【化７７】
0005410233.tif 000078
ＮＢＭ−Ｔ−ＢＴＸ−ＯＳ０１
【０１２３】
【化７８】
0005410233.tif 000079
ＮＢＭ−Ｔ−Ｌ−ＢＴＸ−ＯＳ０１
【０１２４】
【化７９】
0005410233.tif 000080
ＮＢＭ−Ｔ−ＢＢＸ−ＯＳ０１
【０１２５】
【化８０】
0005410233.tif 000081
ＮＢＭ−Ｔ−Ｌ−ＢＢＸ−ＯＳ０１
【０１２６】
【化８１】
0005410233.tif 000082
ＮＢＭ−Ｔ−ＢＦＸ−ＯＳ０１
【０１２７】
【化８２】
0005410233.tif 000083
ＮＢＭ−Ｃ−ＢＢＸ−ＯＳ０１
【０１２８】
【化８３】
0005410233.tif 000084
ＮＢＭ−Ｃ−ＢＦＸ−ＯＳ０１
【０１２９】
【化８４】
0005410233.tif 000085
ＮＢＭ−Ｔ−ＴＭＸ−ＯＳ０１
【０１３０】
【化８５】
0005410233.tif 000086
ＮＢＭ−Ｔ−ＢＭＸ−Ｌ−ＯＳ０１
【０１３１】
【化８６】
0005410233.tif 000087
ＮＢＭ−Ｉ−ＢＣＸ−ＯＳ０１
【０１３２】
【化８７】
0005410233.tif 000088
ＮＢＭ−Ｔ−Ｉ−ＢＭＸ−ＯＳ０１
【０１３３】
【化８８】
0005410233.tif 000089
ＮＢＭ−Ｔ−Ｌ−Ｉ−ＢＭＸ−ＯＳ０１
【０１３４】
【化８９】
0005410233.tif 000090
ＮＢＭ−Ｔ−Ｉ−ＢＢＸ−ＯＳ０１
【０１３５】
【化９０】
0005410233.tif 000091
ＮＢＭ−Ｔ−Ｌ−Ｉ−ＢＢＸ−ＯＳ０１
【０１３６】
【化９１】
0005410233.tif 000092
ＮＢＭ−Ｔ−Ｉ−ＢＣＸ−ＯＳ０１
【０１３７】
【化９２】
0005410233.tif 000093
ＮＢＭ−Ｔ−Ｌ−Ｉ−ＢＣＸ−ＯＳ０１
【０１３８】
【化９３】
0005410233.tif 000094
ＮＢＭ−Ｔ−Ｉ−ＭＣＸ−ＯＳ０１
【０１３９】
本発明の他の実施態様によれば、ここで用いられるＨＤＡＣ阻害剤はＳＡＨＡ，プロポリスまたはプロポリン（例えば、プロポリンＡ〜Ｊ）である。好ましくは、プロポリスは、台湾グリーンプロポリス、プロポリンＡ、プロポリンＢ、プロポリンＣ、プロポリンＤ、プロポリンＥ、プロポリンＦ、プロポリンＧ、プロポリンＨ、プロポリンＩ、プロポリンＪ、ＳＡＨＡ、ＮＢＭ−ＨＤ−１である。
【０１４０】
本発明は、意外なことにＨＤＡＣ阻害剤を与えられた若い働きバチによって分泌されるローヤルゼリー中のＭＲＪＰ３の６８ｋＤａタンパク質対６４ｋＤａタンパク質の比がＨＤＡＣ阻害剤によって変化しうることを発見した。変化はエピジェネティクス修飾によって誘発され、この事実はＪａｎｅｔ  Ｓ．Ｇｒａｈａｍ等，Ｔ．Ｊ．Ｗａｌｔｏｎ等，Ｊｕｌｉｅ  Ｃ．Ｋｉｅｆｅｒ，及びＡｈｍａｄ  Ｍｉｒｅｍａｄｉ等によって支持されている。上記ローヤルゼリーを与えられた幼虫は、通常体よりも体重が増加しまたサイズが大きくなり、その発達期間がより短くなる。当該幼虫が発達したさなぎ及び女王バチもまた、より増加した体重と大きなサイズとなる。そのような女王バチは高い産卵能を有するため、その分ミツバチの数とミツの製造能が高くなる。
【実施例】
【０１４１】
実施例１：台湾グリーンプロポリス抽出物とプロポリンＣ並びにＧの調整
台湾グリーンプロポリス抽出物
５０ｇ台湾グリーンプロポリス（ＴＰ）を９５％エチルアルコール（２５０ｍＬ×３）で抽出し、３時間、超音波処理を行い、２１時間２５℃で静置した。エタノール抽出物は濾過後、減圧下で乾燥して、茶色のゴム状物を得た（３４．５ｇ）。これは使用まで−２０℃で保持した。
【０１４２】
プロポリンＣ
ＴＰ抽出物５ｇをセファデックスＬＨ−２０カラム（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｂｉｏｔｅｃｈ  ＡＢ社製、Ｕｐｐｓａｌａ、Ｓｗｅｄｅｎ）で分画した。溶出用溶媒としてメタノールを使用し、６画分が得られた。次いで行われるクロマトグラフィからの画分を含む全ての溶出液を、シリカゲルカラムで、溶出用グラジエント溶媒系としてｎ−ヘキサン及びＥｔＯＡｃを用いてクロマトグラフにかけた。最も活性の高い画分４（ｎ−ヘキサン：ＥｔＯＡｃ＝７０：３０）の精製を、逆相（ＲＰ）分離用高速液体クロマトグラフィ（ＨＰＬＣ）／ＵＶでおこなった。プロポリンＣに対する４５．０分の保持時間の画分を回収した。用いた条件は以下の通りである：カラム：ルナ・フェノメネックス（Ｃ１８、２５０ｍｍ×１０ｍｍ）；溶媒系：メタノール：水（７：３）；流速：２．５ｍＬ／分；及び検出：ＵＶ２８０ｎｍ。化合物はプロポリンＣと同定され、その純度はピーク面積よりＨＰＬＣ／ＵＶによって９５％以上であると推定された。
【０１４３】
プロポリンＧ
ＴＰ抽出物５ｇをセファデックスＬＨ−２０カラム（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｂｉｏｔｅｃｈ  ＡＢ社製、Ｕｐｐｓａｌａ、Ｓｗｅｄｅｎ）で分画した。溶出用溶媒としてメタノールを使用し、６画分が得られた。次いで行われるクロマトグラフィからの画分を含む全ての溶出液を、シリカゲルカラムで、溶出用グラジエント溶媒系としてｎ−ヘキサン及びＥｔＯＡｃを用いてクロマトグラフにかけた。最も活性の高い画分３（ｎ−ヘキサン：ＥｔＯＡｃ＝７０：３０）の精製を、逆相（ＲＰ）分離用高速液体クロマトグラフィ（ＨＰＬＣ）／ＵＶでおこなった。プロポリンＧに対する２５．０分の保持時間の画分を回収した。用いた条件は以下の通りである：カラム：ルナ・フェノメネックス（Ｃ１８、２５０ｍｍ×１０ｍｍ）；溶媒系：メタノール：水（８．５：１．５）；流速：３．５ｍＬ／分；及び検出：ＵＶ２８０ｎｍ。化合物はプロポリンＧと同定され、その純度はピーク面積よりＨＰＬＣ／ＵＶによって９５％以上であると推定された。
【０１４４】
実施例２：ローヤルゼリーと女王バチの幼虫の収集と分析
同一のＭＲＪＰ３タンパク質の発現レベルの巣箱を選択して用いた。二つの巣箱を対照群と試験群として試験した。第１日目に、巣箱内に当初含まれているミツを振ることで取り除いた。そしてミツバチ（Ａｐｉｓ  ｍｅｌｌｉｆｅｒａ）に二日にわたり二度、砂糖水を与えた（対照群には通常の砂糖水を、試験群には特別の砂糖水）。特別の砂糖水は、組成された砂糖粉末を水に１０倍希釈した。３日目に、１．５日齢の幼虫（同一女王の子供である）を巣箱に移虫し、ミツバチは一度給餌された（対照群には通常の砂糖水を、試験群には特別の砂糖水）。２４，４８及び７２時間後に、２０匹の幼虫と、当該２０匹の幼虫のいた個室のローヤルゼリーを定性分析、定量分析及びプロテオミック分析用に収集した。
【０１４５】
定性分析のために、ローヤルゼリーと殺菌水を１：１０に重量比で混合して抽出した。水相中の特定量のタンパク質を取り除いてブラッドフォード色素結合法（Ｂｉｏ−Ｒａｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ａｓｓａｙ，Ｂｉｏ−Ｒａｄ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．）によってタンパク質濃度を測定した。タンパク質試料の５９５ｎｍにおける吸収をＥｌｉｓａ  Ｒｅａｄｅｒ（Ｂｉｏ−ＴＥＫ）によって測定した。１０μｇのタンパク質を１２．５％ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルに載置し、６０ボルトで３０分間、さらに１２０ボルトで２時間処理し、異なる分子量のタンパク質を分離した。ゲルはクーマシーブルー（Ｃｏｍｍａｓｓｉｅ  Ｂｒｉｌｌｉａｎｔ  Ｂｌｕｅ  Ｒ，Ｓｉｇｍａ，Ｂ−０６３０）で１５分間染色し、ゲルの背景が透明となるよう、脱染色バッファ（メタノール：酢酸：ｄｄＨ２Ｏ、２０：７：７３の比率）で脱染色した。
【０１４６】
幼虫を１×ＰＢＳで洗浄して幼虫の身体から残余のローヤルゼリーを取り除き、その後すり潰した。すり潰した後、殺菌済み水を適量加え、タンパク質抽出を行った。水相中の特定量のタンパク質を取り除き、タンパク質濃度を上記方法により測定し、１０μｇのタンパク質を１２．５％ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルに載置し、６０ボルトで３０分間、さらに１２０ボルトで２時間処理し、異なる分子量のタンパク質を分離した。ゲルはクーマシーブルー（Ｃｏｍｍａｓｓｉｅ  Ｂｒｉｌｌｉａｎｔ  Ｂｌｕｅ  Ｒ，Ｓｉｇｍａ，Ｂ−０６３０）で１５分間染色し、ゲルの背景が透明となるよう、脱染色バッファ（メタノール：酢酸：ｄｄＨ２Ｏ、２０：７：７３の比率）で脱染色した。
【０１４７】
定量分析のために、異なる時間点（２４、４８または７２時間）における対照群あるいは試験群の異なる巣箱の女王バチのローヤルゼリーと幼虫を収集した。それらの体重を測定し、また幼虫は分析と比較のために写真撮影した。
【０１４８】
プロテオミック分析とタンパク質同定のために、女王バチのローヤルゼリーまたは幼虫の上澄からの懸濁液をロータリーエバポレータ（Ｓｐｅｅｄ  Ｖａｃ）で減圧乾燥し、再水和バッファに再溶解した。ブラッドフォード色素結合法によってタンパク質濃度を測定した。その後、女王バチの１０μｇのローヤルゼリーと１００μｇの幼虫を以下のステップにしたがって２次元電気泳動（２−ＤＥ）の試験を行った：試料をまずｐＨ３〜１０のストリップを用いて等電点電気泳動を用いて分離し、ついで平衡化し、それからソジウムドデシルサルフェート−ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）（積層ゲル：３０％アクリルアミド（Ｂｉｏ−Ｒａｄ）、Ｔｒｉｓ  ｐＨ６．８、１０％ＡＰＳ、ｄｄＨ２Ｏ、１％ＳＤＳ、ＴＥＭＥＤ；分離ゲル：３０％アクリルアミド（Ｂｉｏ−Ｒａｄ）、Ｔｒｉｓ  ｐＨ８．８、１０％ＡＰＳ、ｄｄＨ２Ｏ、１％ＳＤＳ、ＴＥＭＥＤ）によって分離した。ゲルを撮像し、イメージマスター２Ｄプラチナ６．０ソフトウェアで分析した。ゲル上の対象のスポットはゲル内トリプシン消化を受け、またマス分光計ＬＣ−ＥＳＩ−Ｑ−ＴＯＦ  ＭＳ／ＭＳで分析した。得られたデータをマスコットソフトウェアによるタンパク質同定用データベースと比較した。
【０１４９】
実施例３：幼虫の成長誘導における台湾グリーンプロポリス抽出物の効果
１０種のプロポリン、すなわちプロポリンＡからＪは台湾グリーンプロポリス抽出物に見いだされ、プロポリンＣ，Ｄ，Ｆ及びＧが主立った種類である。ミツバチは砂糖１ｋｇに対して台湾グリーンプロポリス抽出物を１．２５，２．５及び５．０ｇ含ませた砂糖水を３回与えられ、１．５日齢の幼虫を移虫後、２４，４８及び７２時間後に女王バチの幼虫と働きバチによって作り出されたローヤルゼリーを収集した。表１及び図１に示されるように、台湾グリーンプロポリス抽出物を１．２５から５．０ｇ／ｋｇ与えることで著しく幼虫の成長が促進された。２４から４８時間の期間では、対照群の幼虫は、その体重は約１．５９倍に増え、４．７３ｍｇから１２．２６ｍｇに成長した。一方、高投与量の台湾グリーンプロポリス抽出物（５ｇ／ｋｇ）で処理した群の幼虫は、その体重が約２．９４倍に増え、６．７８ｍｇから２６．７２ｍｇに成長した。４８から７２時間の期間では、対照群の幼虫は、その体重は約１．５８倍に増え、１２．２６ｍｇから３１．７０ｍｇに成長した。一方、高投与量の台湾グリーンプロポリス抽出物（５ｇ／ｋｇ）で処理した群の幼虫は、その体重が約３．０３倍に増え、２６．７２ｍｇから１０７．５５ｍｇに成長した。
【０１５０】
表1：台湾グリーンプロポリス抽出物を与えられた若い働きバチによって分泌される特別なローヤルゼリーは幼虫の急速成長を誘発した。
【表１】
0005410233.tif 000095
【０１５１】
上記データは台湾グリーンプロポリス抽出物を含む砂糖をミツバチに与えることで、働きバチは特別なローヤルゼリーを製造し、さらに当該特別なローヤルゼリーを与えられた幼虫は急速成長がおきたことを示す。
【０１５２】
特別なローヤルゼリーをさらに分析して、通常のローヤルゼリーと量及び質の点での相違点を決定した。我々が得たデータによれば、（処置群から得られた）特別なローヤルゼリーの収量は（対照群から得られた）通常のローヤルゼリーのそれと著しい相違はなかった（表２参照）。若い働きバチは、幼虫の大きさと消費に応じて、幼虫にとって十分なローヤルゼリーを提供した。
【０１５３】
表２：台湾グリーンプロポリス抽出物は若い働きバチによって分泌されるローヤルゼリーの収量に著しくは影響を及ぼさなかった。
【表２】
0005410233.tif 000096
【０１５４】
通常のローヤルゼリーと特別なローヤルゼリー中の水溶性タンパク質の量についても比較したが、大きな差異は認められなかった（表３参照）。上記結果により、台湾グリーンプロポリス抽出物のみが、ＭＲＪＰ３タンパク質の異なるアイソフォームの発現レベルの比に影響を及ぼすが、新たなタンパク質合成は誘発しない。すなわち、総タンパク質量は変化しない。
【０１５５】
表３：台湾グリーンプロポリス抽出物は若い働きバチによって分泌されるローヤルゼリー中の水溶性タンパク質の量に著しくは影響を及ぼさなかった。
【表３】
0005410233.tif 000097
【０１５６】
また、特別なローヤルゼリーを消費することで、女王バチの幼虫の急速成長が誘発されたのみならず、これら幼虫のタンパク質レベルも増加したことがわかった（表４参照）。タンパク質レベルは、これらの幼虫に認められた体重増加に比例して増加していたように見受けられた（表１参照）。
【０１５７】
表４：台湾グリーンプロポリス抽出物は幼虫のタンパク質レベルの増加をもたらした。
【表４】
0005410233.tif 000098
【０１５８】
実施例４：プロポリンＣの幼虫成長に対する影響
プロポリンＣは台湾グリーンプロポリスの主要成分であり、総プロポリン中でも最も豊富な種でもある。上記の実験方法を行うことで、５０から１００ｍｇ／ｋｇのプロポリンＣで処理することで若い働きバチによって分泌されるローヤルゼリーのタンパク質成分に著しく変化があり、また上記ローヤルゼリーを与えられた幼虫の急速成長が誘発された（表５及び図２参照）。幼虫の成長を促進するためには、プロポリンＣの投与量は３００ｍｇ／ｋｇに調整すべきであるように見受けられた。データによれば、４８から７２時間の期間には、対照群の幼虫は、その体重は約３．５８倍に増え、１３．４５ｍｇから６１．６０ｍｇに成長した。一方、高投与量のプロポリンＣ（１００ｍｇ／ｋｇ）で処理した群の幼虫は、その体重が約６．３０倍に増え、１３．４８ｍｇから９８．４８ｍｇに成長した。
【０１５９】
表５：プロポリンＣを与えられた若い働きバチによって分泌される特別なローヤルゼリーは幼虫の急速成長を誘発した。
【表５】
0005410233.tif 000099
【０１６０】
実施例５：プロポリンＤ，Ｆ及びＧのＭＲＪＰ３タンパク質の発現及び幼虫の成長に対する影響
プロポリンＤ，Ｆ及びＧもまた、台湾グリーンプロポリスの主要成分である。我々の研究において、ミツバチは砂糖１ｋｇに対して１５０，３００及び６００ｍｇのプロポリンＧを含む砂糖水を３回与え、１．５日齢の幼虫を移虫後、２４，４８及び７２時間後に女王バチの幼虫と働きバチによって作り出されたローヤルゼリーを収集した。図３に示すように、特別なローヤルゼリー中の水溶性タンパク質ＭＲＪＰ３（試験／処理群から）の発現は、著しく通常のローヤルゼリーのそれ（対照群から）とは異なっていた。７２時間後に、対照群の６８及び６４ｋＤａのＭＲＪＰ３は２：８の比率であったのに対して、中投与量（３００ｍｇ／ｋｇ）のプロポリンＧで処理した群におけるそれは６．５：３．５であった。明らかに、６８ｋＤａのＭＲＪＰ３タンパク質の発現は増加し、６４ｋＤａのＭＲＪＰ３タンパク質は著しく減少した。
【０１６１】
プロポリンＧを与えられた若い働きバチによって分泌される特別なローヤルゼリーが幼虫の成長に与える効果に関しては、２４から４８時間の期間では、対照群の幼虫は、その体重が約１．６０倍に増え、５．２３ｍｇから１３．５７ｍｇに成長した。高投与量の台湾グリーンプロポリス抽出物（５ｇ／ｋｇ）で処理したポジティブ対照群の幼虫は、その体重が約４．４７倍に増え、５．５３ｍｇから３０．２７ｍｇに成長した。一方、３００ｍｇ／ｋｇのプロポリンＧで処理した群の幼虫は、その体重が約５．０５倍に増え、３．９３ｍｇから２３．８０ｍｇに成長した。４８から７２時間の期間では、対照群の幼虫は、その体重が約１．２２倍に増え、１３．５７ｍｇから３０．０７ｍｇに成長した。高投与量の台湾グリーンプロポリス抽出物（５ｇ／ｋｇ）で処理したポジティブ対照群の幼虫は、その体重が約２．４１倍に増え、３０．２７ｍｇから１０３．３０ｍｇに成長した。一方、３００ｍｇ／ｋｇのプロポリンＧで処理した群の幼虫は、その体重が約５．７９倍に増え、２３．８０ｍｇから１６１．７３ｍｇに成長した（表６参照）。
【０１６２】
表６：プロポリンＧを与えられた若い働きバチによって分泌される特別なローヤルゼリーは幼虫の急速成長を誘発した
【表６】
0005410233.tif 000100
【０１６３】
上記データは特別なローヤルゼリーがより滋養分のある組成をなしていること、またそれゆえ、幼虫の急速成長を誘発することができること、を意味している。
【０１６４】
プロポリンＤ及びＦについても同様の効果となった結果が見られた。しかし、効果はあまり顕著ではなかった。
【０１６５】
実施例６：新規ＨＤＡＣ阻害剤ＮＢＭ−ＨＤ−１のＭＲＪＰ３タンパク質の発現及び幼虫の成長への影響
ＮＢＭ−ＨＤ−１はプロポリンＧの合成に由来し、新規なヒストン脱アセチル化酵素（ＨＤＡＣ）阻害剤として知られている。上記の実験方法を行うことで、５０から２００ｍｇ／ｋｇのＮＢＭ−ＨＤ−１で処理を行うと、若い働きバチによって分泌されるローヤルゼリーのタンパク質成分の比率が著しく変化することが見いだされた。例えば、７２時間において、対照群における６８及び６４ｋＤａのＭＲＪＰ３はその比が４：６であり、一方、高投与量（５ｇ／ｋｇ）の台湾グリーンプロポリス抽出物で処理した群（すなわち、ポジティブ対照群）のこれらに対する比は７：３であった。一方、２００ｍｇ／ｋｇのＮＢＭ−ＨＤ−１で処理した群における６８ｋＤａと６４ｋＤａのＭＲＪＰ３はその比が９：１であった（図４参照）。
【０１６６】
さらに、表７に示すように、ＮＢＭ−ＨＤ−１での処理は幼虫の急速成長を誘発する。
【０１６７】
表７：ＮＢＭ−ＨＤ−１を与えられた若い働きバチによって分泌される特別なローヤルゼリーは幼虫の急速成長を誘発する。
【表７】
0005410233.tif 000101
【０１６８】
上記データは、異なるＭＲＪＰ３タンパク質のアイソフォーム間のタンパク質比の変化は、幼虫の体重増加で示されたように、女王バチの幼虫の急速成長に帰着することを証明している。
【０１６９】
二次元ゲル電気泳動と高解像度質量分析法により異なる対照群と試験群とからの幼虫において発現した水溶性タンパク質を分析すると、ＮＢＭ−ＨＤ−１で処理した群からの幼虫においてＭＲＪＰ１，２及び３（特にＭＲＪＰ３）のタンパク質レベルの増加が証明された（図５参照）。
【０１７０】
実施例７：ＨＤＡＣ阻害剤ＳＡＨＡのＭＲＪＰ３タンパク質の発現と幼虫成長への影響
ＳＡＨＡは非常に効果的なＨＤＡＣ阻害剤である。５から１５ｍｇ／ｋｇのＳＡＨＡで処理を行うと、若い働きバチによって分泌されるローヤルゼリーのタンパク質成分の比率が著しく変化した。例えば、７２時間において対照群における６８及び６４ｋＤａのＭＲＪＰ３はその比が２：８であり、一方、高投与量（５ｇ／ｋｇ）の台湾グリーンプロポリス抽出物と１５０ｍｇ／ｋｇのプロポリンＧで処理した群（すなわち、ポジティブ対照群）のこれらに対する比は、それぞれ５．５：４．５及び８：２であった。一方、１５ｍｇ／ｋｇのＳＡＨＡで処理した群における６８ｋＤａと６４ｋＤａのＭＲＪＰ３はその比が４：６であった（図６参照）。
【０１７１】
表８：ＳＡＨＡを与えられた若い働きバチによって分泌される特別なローヤルゼリーは幼虫の急速成長を誘発する。
【表８】
0005410233.tif 000102
【０１７２】
実施例８：特別な女王バチの発達
実験を行い、台湾グリーンプロポリス抽出物を与えられた若い働きバチによって分泌される特別なローヤルゼリーを与えられた幼虫の発達及び変態について検討した。先に証明されたように、台湾グリーンプロポリス抽出物を用いた処理は、幼虫段階における幼虫の成長を著しく促進した。幼虫が発達するにしたがい、さなぎ段階において試験群（５．０ｇ／ｋｇの台湾グリーンプロポリス抽出物で処理）からの第４日目から第８日目におけるさなぎは、あきらかに対照群からのそれよりも大きいサイズであった（図９（ａ）参照）。幼虫とさなぎの体重を測定したところ、試験群からの（幼虫段階における）第３日目の幼虫は対照群のそれよりも１００％の割合で重かった（図９（ｂ）参照）。さなぎ段階において、第４日目と第８日目のさなぎの体重は、対照群で（さなぎ当たり）１９６．０ｍｇから１３６．１０ｍｇに低下していた（約３０％減少）。それに対して試験群においては（さなぎ当たり）２７１．３０ｍｇから２４４．５３ｍｇに低下していた（約９．８％減少）（図９（ｃ）参照）。明らかに、台湾グリーンプロポリス抽出物で処理した試験群からのさなぎは、変態中にエネルギー消費が少なく済んでいる。また試験群からの第８日目のさなぎは対照群のそれと比較して約８０％で重いことが分かった。これは上記のように、幼虫段階における対照群と試験群との間の体重差が１００％有ることによる。
【０１７３】
実施例９：我々の特別なローヤルゼリーの生物学的機能
次に、台湾グリーンプロポリス抽出物を与えられた若い働きバチによって分泌される特別なローヤルゼリーの、抗ガン機能及び神経幹細胞分化における役割について調査した。
【０１７４】
抗ガン研究においては、財団法人食品工業発展研究所（Ｆｏｏｄ  Ｉｎｄｕｓｔｒｙ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ａｎｄ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ）（新竹市、台湾）から購入したＨｓ６８３細胞（ヒト神経膠腫細胞）を、２ｍＭグルタメート及び０．１ｍＭ  ＮＥＡＡ、１００ｍｇ／Ｌピルビン酸ナトリウム、１０％ＦＢＳ，並びに１％希釈ペニシリン及びストレプトマイシンとともに、ＲＰＭＩ１６４０（Ｇｉｂｃｏ）中で培養し、９５％空気、５％ＣＯ２の多湿環境で３７℃に維持した。細胞（３×１０５／ディッシュ）を６ウェルディッシュ中で培養し、一晩インキュベートした後、血清飢餓培地に変更し、異なる濃度の水溶性ローヤルゼリータンパク質で処理し、４日培養した。ポジティブ対照として、５ｎｇ／ｍＬのＥＧＦを用いた。４５μｇ／ｍＬのローヤルゼリータンパク質で４８時間処理することで、Ｂ１及びＣ１群においてＨｓ６８３細胞の成長が著しく抑制された（図７参照）。
【０１７５】
分化についての研究においては、神経幹細胞をＢ２７（Ｇｉｂｃｏ）と共にＮｅｕｒａｌ−ｂａｓａｌ培地（Ｇｉｂｃｏ）中で培養し、９５％空気、５％ＣＯ２の多湿環境で３７℃に維持した。ニューロスフェアを１０μｇ／ｍＬの水溶性ローヤルゼリータンパク質で処理し、３日培養した。ポジティブ対照として、ＥＧＦ（５ｎｇ／ｍＬ）を用いた。図８に示すように、１０μｇ／ｍＬのローヤルゼリータンパク質で７２時間処理することで、Ｂ１及びＣ１群において、神経幹細胞のニューロン細胞、膠細胞、希突起膠細胞及びへの分化が明らかに誘発された。
【０１７６】
上記データにより、ＨＤＡＣ阻害剤は若い働きバチの下咽頭腺及び大顎腺におけるクロマチンリモデリングに影響しうること、それゆえ他のＭＲＪＰタンパク質の発現を変化させることなく、６８及び６４ｋＤａのＭＲＪＰ３タンパク質の発現を変化することを示している。６８及び６４ｋＤａのＭＲＪＰ３タンパク質の間の比の変化は、各体重増加幼虫において認められ、シフトは６８ｋＤａあるいは６４ｋＤａのＭＲＪＰ３アイソフォームいずれでもあり得る。多形型ＭＲＪＰ３の選択的スプライシングはＨＤＡＣ阻害剤によって影響を受ける可能性があり、そしてその結果として６８ｋＤａ及び６４ｋＤａのアイソフォームの発現の変化に帰着する。それゆえ、二種のアイソフォームタンパク質の発現を調整することで、幼虫の成長を決定する。
【図１】
0005410233.tif 000171
【図２】
0005410233.tif 000172
【図３】
0005410233.tif 000173
【図４】
0005410233.tif 000174
【図５】
0005410233.tif 000175
【図６】
0005410233.tif 000176
【図７】
0005410233.tif 000177
【図８】
0005410233.tif 000178
【図９（ａ）】
0005410233.tif 000179
【図９（ｂ）】
0005410233.tif 000180
【図９（ｃ）】
0005410233.tif 000181