(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
脳血栓症、脳塞栓症、脳梗塞、一過性脳虚血発作、脳卒中、脳血管性痴呆（脳血管性認知症）、虚血性脳血管障害、狭心症、心房細動による心房内血栓症、肺血栓症、血栓性肺疾患、深部静脈血栓症（DVT）、血栓性静脈炎、バイパス血管移植後血栓、播種性血管内凝固症候群（DIC）、腎血栓症、血栓性腎疾患、血栓性疾患、血栓症、血液凝固、深在性血栓症、加齢黄斑変性、非細菌性血栓性心内膜炎、若しくは血栓形成の予防若しくは改善のための医薬であって、下記の一般式(I)で表される化合物又はその塩を有効成分として含有する医薬。
【化１】
0005470046.tif 000017
（式中、R1は水素原子、アルキルカルボニル基、又は4-(モルホルニル)カルボニル基を表し、
Dは、ベンゼン環、又は、ハロゲン原子、ニトロ基、シアノ基、アルキル基、アルコキシイミノアルキル基、ベンジルオキシイミノアルキル基、フェニルアルケニル基、フェニルアルキニル基、トリメチルシリルアルキニル基、フェニル基、フェニルアルキル基、ハロゲン化アルキル基、ピロリル基、アルキルピロリル基、チエニル基、アルキルチエニル基、アルキルチアゾリル基、ピリジル基、アルキルピリジル基、アルキルカルボニル基、アルコキシカルボニル基、ピロリルスルホニル基、（4-ニトロフェニル）ジアゼニル基、及びヒドロキシル基からなる群から選ばれる1つ以上の基を有するベンゼン環を表し、
Eは、ハロゲン原子、ハロゲン化アルキル基、フェニル基、アルキル基、ハロゲン化アルコキシ基、フェニルアルキル基、アルコキシ基、シクロヘキシル基、フェニルアルコキシ基、シアノ基、ハロゲン化アルキルスルファニル基、ハロゲン化アルキルスルホニル基、エチニル基、ベンゾイル基、アルキルスルファニル基、アルキルスルホニル基、モルホリノ基、アルキルフリル基、アルキルカルボニル基、1-(5-フェニル)-3-(ハロゲン化アルキル)ピラゾリル基、1-(5-アルキル)-3-(ハロゲン化アルキル)ピラゾリル基、及び1-[3,5-ビス(ハロゲン化アルキル)]ピラゾリル基からなる群から選ばれる1つ以上の基で置換されたフェニル基である。）
【請求項２】
前記R1が水素原子、C1-6アルキルカルボニル基、又は4-(モルホルニル)カルボニル基であり、
前記Dが、ベンゼン環、又は、ハロゲン原子、ニトロ基、シアノ基、C1-6アルキル基、C1-6アルコキシイミノC1-6アルキル基、ベンジルオキシイミノC1-6アルキル基、フェニルC2-6アルケニル基、フェニルC2-6アルキニル基、トリメチルシリルC2-6アルキニル基、フェニル基、フェニルC1-6アルキル基、ハロゲン化C1-6アルキル基、ピロリル基、C1-6アルキルピロリル基、チエニル基、C1-6アルキルチエニル基、C1-6アルキルチアゾリル基、ピリジル基、C1-6アルキルピリジル基、C1-6アルキルカルボニル基、C1-6アルコキシカルボニル基、ピロリルスルホニル基、（4-ニトロフェニル）ジアゼニル基、及びヒドロキシル基からなる群から選ばれる1つ以上の基を有するベンゼン環であり、
前記Eが、ハロゲン原子、ハロゲン化C1-6アルキル基、フェニル基、C1-6アルキル基、ハロゲン化C1-6アルコキシ基、フェニルC1-6アルキル基、C1-6アルコキシ基、シクロヘキシル基、フェニルC1-6アルコキシ基、シアノ基、ハロゲン化C1-6アルキルスルファニル基、ハロゲン化C1-6アルキルスルホニル基、エチニル基、ベンゾイル基、C1-6アルキルスルファニル基、C1-6アルキルスルホニル基、モルホリノ基、C1-6アルキルフリル基、C1-6アルキルカルボニル基、1-(5-フェニル)-3-(ハロゲン化C1-6アルキル)ピラゾリル基、1-(5-C1-6アルキル)-3-(ハロゲン化C1-6アルキル)ピラゾリル基、及び1-[3,5-ビス(ハロゲン化C1-6アルキル)]ピラゾリル基からなる群から選ばれる1つ以上の基で置換されたフェニル基である請求項１に記載の医薬。
【請求項３】
前記化合物が、下式(1)〜(3)のいずれかで表される化合物である請求項１に記載の医薬。
【化２】
0005470046.tif 000018
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、PAI-1の産生を抑制する物質の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
プラスミノゲンアクチベータインヒビター-1（PAI-1）の過剰発現は、プラスミノゲンアクチベータ（例えば、組織型プラスミノゲンアクチベータやウロキナーゼ型プラスミノゲンアクチベータなど）の活性化を抑制することにより、フィブリン血栓や組織蛋白を分解するプラスミンの産生を抑制し、血栓の形成をもたらすこと（Nature, Vol.346, No.6279, pp.74-76, 1990）が知られている。
また、PAI-1の過剰発現は、動脈硬化病変にみられ、心筋梗塞や深部静脈血栓症（DVT）、敗血症に伴う播種性血管内凝固症候群（DIC）等の血栓性疾患リスクを高めることが知られている（Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A., Vol.89, No.15, pp.6998-7002, 1992）。
これらのことから、PAI-1の活性又は産生を抑制する化合物は、血栓の形成抑制に有用であり、血栓性疾患などの血栓の形成に起因する疾患、血栓の形成を伴う疾患などに対して有用な薬剤になることが期待されている。【０００３】
さらに、PAI-1は、細胞外マトリックスの沈着、蓄積を促進し、線維化を主体とする組織病変や血管壁硬化病変の進展に深く関与していることが知られており、喘息モデルマウスの気道における細胞外マトリックス蓄積がPAI-1ノックアウトにより軽減されること（Biochem. Biophys. Res. Commun., Vol.294, No.5, pp.1155-1160, 2002）から、PAI-1が線維化に直接的に関与していることが示唆されている。従って、PAI-1の活性又は産生を抑制する化合物は、組織の線維化の抑制に有用であり、組織の線維化に起因する疾患に対して有用な薬剤になることが期待されている。【０００４】
その他、PAI-1は、肥満細胞からも分泌されていること(J. Immunol., Vol.165, No.6, pp.3154-3161, 2000)や、肥満モデルマウスにおいて血中濃度が高く、内皮組織や肝組織だけではなく脂肪組織でも合成されており、特に内臓脂肪においてはその蓄積とともにPAI-1合成量が飛躍的に亢進していることが報告されている（Mol. Med., Vol.2, No.5, pp.568-582, 1996）。また、PAI-1遺伝子をノックアウトした肥満モデルマウスでは、体重の減少、血中グルコース濃度及び血中インスリン濃度の低下が報告されており（FASEB J., Vol.15, No.10, pp.1840-1842, 2001）、PAI-1が脂肪蓄積に起因する様々な病態を増悪する可能性があることを示している。従って、PAI-1の活性又は産生を抑制する化合物は、内臓脂肪蓄積の抑制に有用であり、内臓脂肪蓄積に起因する疾患に対して有用な薬剤になることが期待されている。【０００５】
また、PAI-1が細胞接着分子であるビトロネクチンと結合して、細胞と細胞外マトリックスの接着を阻害すること、癌モデルにおいてPAI-1の抗体が癌転移を抑制すること（Gen. Diagn. Pathol., Vol.141, No.1, pp.41-48, 1995）、及び、PAI-1ノックアウトマウスに悪性ケラチノサイトを移植した場合に癌の浸潤や血管新生が抑制されること（Nat. Med., Vol.4, No.8, pp.923-928, 1998）から、PAI-1の活性又は産生を抑制する化合物は、細胞の移動や転移、血管新生などの抑制に有用であり、細胞の移動や転移、血管新生などに起因する疾患への治療効果も期待されている。【０００６】
さらに、心臓や腎臓移植後の急性拒絶反応や慢性拒絶反応としての動脈病変は、組織線維化、血栓形成、動脈内皮細胞の増殖や再構築が進行することに起因すると考えられているが、マウス(murine)を用いた心臓移植実験において、PAI-1阻害作用を有する化合物を投与した場合、コントロール群に比較して移植片生着が有意に延長されること、重篤な血管内膜肥厚の割合が3分の１程度まで軽減されること（欧州特許出願公開第1666469号明細書）から、PAI-1を阻害する化合物又はPAI-1の産生を抑制する化合物は、心臓や腎臓移植後もしくは他の臓器移植後の急性拒絶反応や移植後動脈病変を抑制する薬剤として期待されている。【０００７】
一方、PAI-1を阻害することで活性化されるプラスミンは、血栓の溶解のみならず、組織の再構築、細胞の移動・転移・浸潤、排卵と着床、細胞増殖抑制サイトカインであるトランスフォーミング成長因子の活性化やコラゲナーゼの活性化などに関与しており、PAI-1の活性又は産生を抑制する化合物は、組織の再構築、細胞の増殖・移動・浸潤・転移、血管新生などの抑制に有用であり、細胞増殖、血管新生、組織の再構築などに起因する疾患への治療効果も期待されている。【０００８】
従来、PAI-1阻害作用を有する物質として、様々な化合物が報告されている（欧州特許出願公開第1666469号明細書；国際公開第95/32190号パンフレット；国際公開第95/21832号パンフレット；英国特許出願公開第2372740号明細書；国際公開第03/000253号パンフレット；国際公開第03/000258号パンフレット；国際公開第03/000649号パンフレット；国際公開第03/000671号パンフレット ; 国際公開第03/000684号パンフレット；国際公開第2004/052856号パンフレット；国際公開第2004/052893号パンフレット；国際公開第2005/030192号パンフレット；国際公開第2005/030204号パンフレット；国際公開第2005/030715号パンフレット；国際公開第2005/030716号パンフレット；国際公開第2005/030756号パンフレット；米国特許出願公開第2005/0124664号明細書；米国特許出願公開第2005/0124667号明細書；米国特許出願公開第2005/0143384号明細書；Biochemistry, Vol.37, No.5, pp.1227-1234, 1998；J. Med Chem., Vol.47, No.14, pp.3491-3494, 2004）。また、PMA (phorbol 12-myristate 13-acetate)によって誘導されるPAI-1の遺伝子発現を抑制する物質として、シクロスポリンやシクロヘキシミドなどが知られている（J. Immunol., Vol.165, pp.3154-3161, 2000）。【０００９】
しかしながら、PMA (phorbol 12-myristate 13-acetate)によって誘導されるPAI-1（Plasminogen activator inhibitor-1）遺伝子発現は、ステロイド薬であるデキサメタゾンによって抑制できないことが報告されている（J. Immunol., Vol.165, pp.3154-3161, 2000）。また、TGF-βおよびTNF-αによって誘導されるPAI-1の産生は、デキサメタゾンによって増加することが報告されている（Comp. Hepatol., 2007 May 2;6:5及びPathobiology, vol.71, pp.295-301, 2004）。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
本発明は、血液の凝固や血栓形成などを抑制するのに有用な新規PAI-1産生抑制物質、及びその利用方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意研究を行った結果、下記の一般式(I)で表される化合物がPAI-1の産生を抑制する作用を有することを見出し、本発明を完成するに至った。
【化１】
0005470046.tif 000002
式(I)中、R1は水素原子、アルキルカルボニル基、又は4-(モルホルニル)カルボニル基を表し；
環Dは、ベンゼン環、又は、ハロゲン原子、ニトロ基、シアノ基、アルキル基、アルコキシイミノアルキル基、ベンジルオキシイミノアルキル基、フェニルアルケニル基、フェニルアルキニル基、トリメチルシリルアルキニル基、フェニル基、フェニルアルキル基、ハロゲン化アルキル基、ピロリル基、アルキルピロリル基、チエニル基、アルキルチエニル基、アルキルチアゾリル基、ピリジル基、アルキルピリジル基、アルキルカルボニル基、アルコキシカルボニル基、ピロリルスルホニル基、（４−ニトロフェニル）ジアゼニル基、及びヒドロキシル基からなる群から選ばれる1つ以上の基を有するベンゼン環を表し；
フェニル基Eは、ハロゲン原子、ハロゲン化アルキル基、フェニル基、アルキル基、ハロゲン化アルコキシ基、フェニルアルキル基、アルコキシ基、シクロヘキシル基、フェニルアルコキシ基、シアノ基、ハロゲン化アルキルスルファニル基、ハロゲン化アルキルスルホニル基、エチニル基、ベンゾイル基、アルキルスルファニル基、アルキルスルホニル基、モルホリノ基、アルキルフリル基、アルキルカルボニル基、1-(5-フェニル)-3-(ハロゲン化アルキル)ピラゾリル基、1-(5-アルキル)-3-(ハロゲン化アルキル)ピラゾリル基、及び1-[3,5-ビス(ハロゲン化アルキル)]ピラゾリル基からなる群から選ばれる1つ以上の基で置換されたフェニル基である。【００１２】
すなわち、本発明は、
(a) 一般式(I)で表される化合物及びその塩、並びにそれらの水和物及びそれらの溶媒和物からなる群から選ばれる物質を有効成分として含有するPAI-1産生抑制剤；
(b) 前記R1が水素原子、C1-6アルキルカルボニル基、又は4-(モルホルニル)カルボニル基であり、前記Dが、ベンゼン環、又は、ハロゲン原子、ニトロ基、シアノ基、C1-10アルキル基、C1-6アルコキシイミノC1-6アルキル基、ベンジルオキシイミノC1-6アルキル基、フェニルC2-6アルケニル基、フェニルC2-6アルキニル基、トリメチルシリルC2-6アルキニル基、フェニル基、フェニルC1-6アルキル基、ハロゲン化C1-6アルキル基、ピロリル基、C1-6アルキルピロリル基、チエニル基、C1-6アルキルチエニル基、C1-6アルキルチアゾリル基、ピリジル基、C1-6アルキルピリジル基、C1-6アルキルカルボニル基、C1-6アルコキシカルボニル基、ピロリルスルホニル基、（4-ニトロフェニル）ジアゼニル基、及びヒドロキシル基からなる群から選ばれる1つ以上の基を有するベンゼン環であり、前記Eが、ハロゲン原子、ハロゲン化C1-6アルキル基、フェニル基、C1-6アルキル基、ハロゲン化C1-6アルコキシ基、フェニルC1-6アルキル基、C1-6アルコキシ基、シクロヘキシル基、フェニルC1-6アルコキシ基、シアノ基、ハロゲン化C1-6アルキルスルファニル基、ハロゲン化C1-6アルキルスルホニル基、エチニル基、ベンゾイル基、C1-6アルキルスルファニル基、C1-6アルキルスルホニル基、モルホリノ基、C1-6アルキルフリル基、C1-6アルキルカルボニル基、1-(5-フェニル)-3-(ハロゲン化C1-6アルキル)ピラゾリル基、1-(5- C1-6アルキル)-3-(ハロゲン化C1-6アルキル)ピラゾリル基、及び1-[3,5-ビス(ハロゲン化C1-6アルキル)]ピラゾリル基からなる群から選ばれる1つ以上の基で置換されたフェニル基である(a)に記載のPAI-1産生抑制剤；
(c) 前記一般式(I)で表される化合物が、下式(1)〜(3)のいずれかに表される化合物（以下それぞれを「化合物(1)」、「化合物(2)」及び「化合物(3)」と称する。）である(a)に記載のPAI-1産生抑制剤；
【化２】
0005470046.tif 000003
(d) PAI-1の過剰産生に起因する疾患の予防又は改善のための医薬であって、(a)〜(c)のいずれかに記載の物質を有効成分として含有する医薬；
(e) PAI-1の産生を抑制する方法であって、(a)〜(c)のいずれかに記載の物質をPAI-1産生細胞に作用させる工程を含む方法；
(f) PAI-1の過剰産生に起因する疾患を予防又は改善する方法であって、(a)〜(c)のいずれかに記載の物質をヒトを含む哺乳類動物に有効量投与する工程を含む方法；
(g) PAI-1産生抑制剤を製造するための(a)〜(c)のいずれかに記載の物質の使用；
(h) PAI-1の過剰産生に起因する疾患の予防又は改善のための医薬を製造するための(a)〜(c)のいずれかに記載の物質の使用などである。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】本発明の一実施例において、化合物(1)がPAI-1の産生を抑制する効果を示す図である。
【図２】本発明の一実施例において、化合物(1)がコラーゲンの蓄積を抑制する効果を示す図である。
【図３】本発明の一実施例において、タバコの煙を曝露したモルモットに対して化合物(1)を投与した際の、総浸潤細胞数に対するPAI-1発現細胞の割合の変化を調べた結果を示す図である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１４】
以下、上記知見に基づき完成した本発明の実施の形態を、実施例を挙げながら詳細に説明する。実施例において特に説明がない場合には、市販の試薬キットや測定装置はそれらに添付のプロトコールを用いる。
なお、本発明の目的、特徴、利点、及びそのアイデアは、本明細書の記載により、当業者には明らかであり、本明細書の記載から、当業者であれば、容易に本発明を再現できる。以下に記載された発明の実施の形態及び具体的な実施例などは、本発明の好ましい実施態様を示すものであり、例示又は説明のために示されているのであって、本発明をそれらに限定するものではない。本明細書で開示されている本発明の意図並びに範囲内で、本明細書の記載に基づき、様々な改変並びに修飾ができることは、当業者にとって明らかである。【００１５】
本発明において使用する物質としては、一般式(I)で表される化合物若しくはその塩、又は前記化合物若しくはその塩の水和物、又は前記化合物若しくはその塩の溶媒和物を挙げることができる。また、一般式(I)で表される化合物としては、例えば、下記の一般式(II)で表される化合物を挙げることができる。
【化３】
0005470046.tif 000004
【００１６】
本発明において、一般式(I)又は(II)のR1は、水素原子、アルキルカルボニル基、4-(モルホルニル)カルボニル基などを表す。一般式(I)又は(II)のR1としては、水素原子、アセチル基、4-(モルホルニル)カルボニル基などが好ましい。また、一般式(I)の環Dは、ベンゼン環、又は、ハロゲン原子、ニトロ基、シアノ基、アルキル基、アルコキシイミノアルキル基、ベンジルオキシイミノアルキル基、フェニルアルケニル基、フェニルアルキニル基、トリメチルシリルアルキニル基、フェニル基、フェニルアルキル基、ハロゲン化アルキル基、ピロリル基、アルキルピロリル基、チエニル基、アルキルチエニル基、アルキルチアゾリル基、ピリジル基、アルキルピリジル基、アルキルカルボニル基、アルコキシカルボニル基、ピロリルスルホニル基、（４−ニトロフェニル）ジアゼニル基、若しくはヒドロキシル基を少なくとも1つ以上有するベンゼン環などを表す。一般式(I)の環Dとしては、ベンゼン環、又はハロゲン原子、ニトロ基、シアノ基、メチル基、ブチル基（例えばtert-ブチル基など）、オクチル基（例えば1,1,3,3-テトラメチルブチル基など）、プロピル基（例えばイソプロピル基など）、メトキシイミノエチル基（例えば1-(メトキシイミノ)エチル基など）、ベンジルオキシイミノエチル基（例えば1-[(ベンジルオキシ)イミノ]エチル基など）、スチリル基、フェニルエチニル基、（トリメチルシリル）エチニル基、フェニル基、フェニルエチル基（例えば2-フェニルエチル基など）、トリフルオロメチル基、ペンタフルオロエチル基、ピロリル基（例えば1-ピロリル基など）、チエニル基（例えば2-チエニル基、3-チエニル基など）、メチルチアゾリル基（例えば2-メチルチアゾール-4-イル基など）、ピリジル基（例えば2-ピリジル基など）、アセチル基、イソブチリル基、メトキシカルボニル基、ピロリルスルホニル基（例えば（ピロール−１−イル）スルホニル基など）、（４−ニトロフェニル）ジアゼニル基、若しくはヒドロキシル基を1つ以上有するベンゼン環であることが好ましい。【００１７】
一般式(I)のフェニル基Eは、ハロゲン原子、ハロゲン化アルキル基、フェニル基、アルキル基、ハロゲン化アルコキシ基、フェニルアルキル基、アルコキシ基、シクロヘキシル基、フェニルアルコキシ基、シアノ基、ハロゲン化アルキルスルファニル基、ハロゲン化アルキルスルホニル基、エチニル基、ベンゾイル基、アルキルスルファニル基、アルキルスルホニル基、モルホリノ基、アルキルフリル基、アルキルカルボニル基、1-(5-フェニル)-3-(ハロゲン化アルキル)ピラゾリル基、1-(5-アルキル)-3-(ハロゲン化アルキル)ピラゾリル基、又は1-[3,5-ビス(ハロゲン化アルキル)]ピラゾリル基を少なくとも1つ以上有する。一般式(I)のフェニル基Eは、ハロゲン原子、トリフルオロメチル基、2-クロロ-1,1,1,3,3,3-ヘキサフルオロプロピル基、フェニル基、メチル基、ブチル基（例えばn-ブチル基、tert-ブチル基、sec-ブチル基など）、ヘキシル基（例えばn-ヘキシル基など）、プロピル基（例えばイソプロピル基など）、2,2,2-トリフルオロエトキシ基、トリフルオロメトキシ基、ジフルオロメトキシ基、ベンジル基、メトキシ基、ヘキシルオキシ基、シクロヘキシル基、ベンジルオキシ基、シアノ基、トリフルオロメチルスルファニル基、トリフルオロメチルスルホニル基、エチニル基、ベンゾイル基、メチルスルファニル基、メチルスルホニル基、モルホリノ基、メチルフリル基（例えば5-メチルフラン-2-イル基など）、ブチルカルボニル（例えばtert-ブチルカルボニル基など）、1-(5-フェニル)-3-(トリフルオロメチル)ピラゾリル基、1-(5-tert-ブチル)-3-(トリフルオロメチル)ピラゾリル基、又は1-[3,5-ビス(トリフルオロメチル)]ピラゾリル基を1つ以上有することが好ましい。【００１８】
一般式(II)のR2、R3、R4及びR5は、それぞれ独立して水素原子、ハロゲン原子、ニトロ基、シアノ基、アルキル基、アルコキシイミノアルキル基、ベンジルオキシイミノアルキル基、フェニルアルケニル基、フェニルアルキニル基、トリメチルシリルアルキニル基、フェニル基、フェニルアルキル基、ハロゲン化アルキル基、ピロリル基、アルキルピロリル基、チエニル基、アルキルチエニル基、アルキルチアゾリル基、ピリジル基、アルキルピリジル基、アルキルカルボニル基、アルコキシカルボニル基、ピロリルスルホニル基、（４−ニトロフェニル）ジアゼニル基、又はヒドロキシル基を表す。一般式(II)のR2、R3、R4及びR5は、それぞれ独立して水素原子、ハロゲン原子、ニトロ基、シアノ基、メチル基、ブチル基（例えばtert-ブチル基など）、オクチル基（例えば1,1,3,3-テトラメチルブチル基など）、プロピル基（例えばイソプロピル基など）、メトキシイミノエチル基（例えば1-(メトキシイミノ)エチル基など）、ベンジルオキシイミノエチル基（例えば1-[(ベンジルオキシ)イミノ]エチル基など）、スチリル基、フェニルエチニル基、（トリメチルシリル）エチニル基、フェニル基、フェニルエチル基（例えば2-フェニルエチル基など）、トリフルオロメチル基、ペンタフルオロエチル基、ピロリル基（例えば1-ピロリル基など）、チエニル基（例えば2-チエニル基、3-チエニル基など）、メチルチアゾリル基（例えば2-メチルチアゾール-4-イル基など）、ピリジル基（例えば2-ピリジル基など）、アセチル基、イソブチリル基、メトキシカルボニル基、ピロリルスルホニル基（例えば（ピロール−１−イル）スルホニル基など）、（４−ニトロフェニル）ジアゼニル基、又はヒドロキシル基であることが好ましい。【００１９】
一般式(II)のR6、R7、R8、R9及びR10は、それぞれ独立して水素原子、ハロゲン原子、ハロゲン化アルキル基、フェニル基、アルキル基、ハロゲン化アルコキシ基、フェニルアルキル基、アルコキシ基、シクロヘキシル基、フェニルアルコキシ基、シアノ基、ハロゲン化アルキルスルファニル基、ハロゲン化アルキルスルホニル基、エチニル基、ベンゾイル基、アルキルスルファニル基、アルキルスルホニル基、モルホリノ基、アルキルフリル基、アルキルカルボニル基、1-(5-フェニル)-3-(ハロゲン化アルキル)ピラゾリル基、1-(5-アルキル)-3-(ハロゲン化アルキル)ピラゾリル基、又は1-[3,5-ビス(ハロゲン化アルキル)]ピラゾリル基を表す。一般式(II)のR6、R7、R8、R9及びR10は、それぞれ独立して水素原子、ハロゲン原子、トリフルオロメチル基、2-クロロ-1,1,1,3,3,3-ヘキサフルオロプロピル基、フェニル基、メチル基、ブチル基（例えばn-ブチル基、tert-ブチル基、sec-ブチル基など）、ヘキシル基（例えばn-ヘキシル基など）、プロピル基（例えばイソプロピル基など）、2,2,2-トリフルオロエトキシ基、トリフルオロメトキシ基、ジフルオロメトキシ基、ベンジル基、メトキシ基、ヘキシルオキシ基、シクロヘキシル基、ベンジルオキシ基、シアノ基、トリフルオロメチルスルファニル基、トリフルオロメチルスルホニル基、エチニル基、ベンゾイル基、メチルスルファニル基、メチルスルホニル基、モルホリノ基、メチルフリル基（例えば5-メチルフラン-2-イル基など）、ブチルカルボニル（例えばtert-ブチルカルボニル基など）、1-(5-フェニル)-3-(トリフルオロメチル)ピラゾリル基、1-(5-tert-ブチル)-3-(トリフルオロメチル)ピラゾリル基、又は1-[3,5-ビス(トリフルオロメチル)]ピラゾリル基であることが好ましい。但し、一般式(II)のR6、R7、R8、R9及びR10の全てが水素原子でないことを条件とする。【００２０】
本明細書において、ハロゲン原子としては、例えば、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子などを挙げることができる。
アルキル基としては、例えば、以下のC1-15の直鎖状又は分岐鎖状のアルキル基を挙げることができるが、C1-10のアルキル基であることが好ましく、C1-6のアルキル基であることが特に好ましい。
【化４】
0005470046.tif 000005
【００２１】
アルコキシ基（アルキルオキシ基）としては、例えば、C1-15の直鎖状又は分岐鎖状のアルキルオキシ基を挙げることができるが、C1-10のアルキルオキシ基であることが好ましく、C1-6アルキルオキシ基であることが特に好ましい。
アルケニル基としては、例えば、以下のC2-15の直鎖状又は分岐鎖状のアルケニル基を挙げることができるが、C2-7のアルケニル基であることが好ましい。
【化５】
0005470046.tif 000006
【００２２】
アルキニル基としては、例えば、以下のC2-15の直鎖状又は分岐鎖状のアルキニル基を挙げることができるが、C2-7のアルキニル基であることが好ましい。
【化６】
0005470046.tif 000007
【００２３】
アルキルカルボニル基は、例えば、C1-6アルキルカルボニル基などである。また、C1-6アルキルカルボニル基は、例えば、アセチル基、イソブチリル基、ブチルカルボニル基などである。
アルキルスルファニル基は、例えば、C1-6アルキルスルファニル基などである。また、C1-6アルキルスルファニル基は、例えば、メチルスルファニル基などである。
アルキルスルホニル基は、例えば、C1-6アルキルスルホニル基などである。また、C1-6アルキルスルホニル基は、例えば、メチルスルホニル基などである。【００２４】
アルキルフリル基は、例えば、C1-6アルキルフリル基などである。また、C1-6アルキルフリル基は、例えば、2-(5-メチル)フリル基などである。
アルキルピロリル基は、例えば、1-, 2-, 又は3-アルキルピロリル基などである。アルキルチエニル基は、例えば、2-又は3-アルキルチエニル基などである。
アルキルチアゾリル基は、例えば、2-, 4-, 又は5-アルキルチアゾリル基などである。2-アルキルチアゾリル基は、例えば、2-C1-6アルキルチアゾリル基などである。また、2-C1-6アルキルチアゾリル基は、例えば、2-メチルチアゾール-4-イル基などである。4-アルキルチアゾリル基は、例えば、4-C1-6アルキルチアゾリル基などである。また、4-C1-6アルキルチアゾリル基は、例えば、4-メチルチアゾール-4-イル基などである。5-アルキルチアゾリル基は、例えば、5-C1-6アルキルチアゾリル基などである。また、5-C1-6アルキルチアゾリル基は、例えば、5-メチルチアゾール-4-イル基などである。
アルキルピリジル基は、例えば、2-, 3-, 又は4-アルキルピリジル基などである。【００２５】
ハロゲン化アルキル基とは、アルキル基における１又は２以上の水素原子がハロゲン原子に置換されたものを意味する。ハロゲン化アルキル基は、例えば、ハロゲン化C1-6アルキル基などである。また、ハロゲン化C1-6アルキル基は、例えば、トリフルオロメチル基、1-クロロエチル基、ペンタフルオロエチル基、2-クロロ-1,1,1,3,3,3-ヘキサフルオロプロピル基などである。
ハロゲン化アルコキシ基とは、アルコキシ基における１又は２以上の水素原子がハロゲン原子に置換されたものを意味する。ハロゲン化アルコキシ基は、例えば、ハロゲン化C1-6アルコキシ基などである。また、ハロゲン化C1-6アルコキシ基は、例えば、トリフルオロメトキシ基、ジフルオロメトキシ基、2,2,2-トリフルオロエトキシ基などである。
ハロゲン化アルキルスルファニル基とは、アルキルスルファニル基における１又は２以上の水素原子がハロゲン原子に置換されたものを意味する。ハロゲン化アルキルスルファニル基は、例えば、ハロゲン化C1-6アルキルスルファニル基などである。また、ハロゲン化C1-6アルキルスルファニル基は、例えば、トリフルオロメチルスルファニル基などである。
ハロゲン化アルキルスルホニル基とは、アルキルスルホニル基における１又は２以上の水素原子がハロゲン原子に置換されたものを意味する。ハロゲン化アルキルスルホニル基は、例えば、ハロゲン化C1-6アルキルスルホニル基などである。また、ハロゲン化C1-6アルキルスルホニル基は、例えば、トリフルオロメチルスルホニル基などである。【００２６】
フェニルアルキル基は、例えば、フェニルC1-6アルキル基などである。また、フェニルC1-6アルキル基は、例えば、ベンジル基、フェニルエチル基などである。
フェニルアルコキシ基は、例えば、フェニルC1-6アルコキシ基などである。また、フェニルC1-6アルコキシ基は、例えば、ベンジルオキシ基などである。
フェニルアルケニル基は、例えば、フェニルC2-7アルケニル基などである。また、フェニルC2-7アルケニル基は、例えば、2-フェニルエテン-1-イル基（スチリル基）などである。
フェニルアルキニル基は、例えば、フェニルC2-7アルキニル基などである。また、フェニルC2-7アルキニル基は、例えば、フェニルエチニル基などである。【００２７】
アルコキシカルボニル基は、例えば、C1-6アルコキシカルボニル基などである。また、C1-6アルコキシカルボニル基は、例えば、メトキシカルボニル基などである。
アルコキシイミノアルキル基は、例えば、C1-6アルコキシイミノC1-6アルキル基などである。また、C1-6アルコキシイミノC1-6アルキル基は、例えば、1-メトキシイミノエチル基などである。
ベンジルオキシイミノアルキル基は、例えば、ベンジルオキシイミノC1-6アルキル基などである。また、ベンジルオキシイミノC1-6アルキル基は、例えば、1-(ベンジルオキシイミノ)エチル基などである。【００２８】
トリメチルシリルアルキニル基は、例えば、トリメチルシリルC2-7アルキニル基などである。また、トリメチルシリルC2-7アルキニル基は、例えば、トリメチルシリルエチニル基などである。
1-(5-フェニル)-3-(ハロゲン化アルキル)ピラゾリル基は、例えば、1-(5-フェニル)-3-(ハロゲン化C1-6アルキル)ピラゾリル基などである。また、1-(5-フェニル)-3-(ハロゲン化C1-6アルキル)ピラゾリル基は、例えば、1-(5-フェニル)-3-(トリフルオロメチル)ピラゾリル基などである。
1-(5-アルキル)-3-(ハロゲン化アルキル)ピラゾリル基は、例えば、1-(5-C1-6アルキル)-3-(ハロゲン化C1-6アルキル)ピラゾリル基などである。また、1-(5-C1-6アルキル)-3-(ハロゲン化C1-6アルキル)ピラゾリル基は、例えば、1-(5-tert-ブチル)-3-(トリフルオロメチル)ピラゾリル基などである。
1-[3,5-ビス(ハロゲン化アルキル)]ピラゾリル基は、例えば、1-[3,5-ビス(ハロゲン化C1-6アルキル)]ピラゾリル基などである。また、1-[3,5-ビス(ハロゲン化C1-6アルキル)]ピラゾリル基は、例えば、1-[3,5-ビス(トリフルオロメチル)]ピラゾリル基などである。【００２９】
上述の一般式(I)で表される化合物及びその塩、並びにそれらの水和物及びそれらの溶媒和物からなる群から選ばれる物質は、PAI-1産生抑制剤、PAI-1の過剰産生に起因する疾患の予防又は改善のための医薬などに有用である。
PAI-1の過剰産生に起因する疾患としては、例えば、血栓形成、線維化、内臓脂肪蓄積、血管新生、細胞外マトリックスの沈着および再構築、細胞（例えば、腫瘍細胞、血管内皮細胞など）の増殖・移動・浸潤・転移、組織の再構築（例えば、心リモデリング、血管リモデリングなど）などに起因する疾患、より具体的には、胆道閉塞による肝障害、脳血栓症、脳塞栓症、脳梗塞、一過性脳虚血発作、脳卒中、脳血管性痴呆（脳血管性認知症）、虚血性脳血管障害、狭心症、心房細動による心房内血栓症、心不全、虚血性心疾患、肺血栓症、肺塞栓症、血栓性肺疾患、深部静脈血栓症（DVT）、血栓性静脈炎、閉塞性静脈疾患、急性動脈閉塞症、慢性動脈閉塞症、閉塞性末梢動脈疾患、バイパス血管移植後血栓、播種性血管内凝固症候群（DIC）、経皮的冠動脈形成術（PTCA）後の急性冠閉塞、遺伝子異常などの先天性血栓傾向に起因する血管障害や血栓症、腎血栓症、腎塞栓症、血栓性腎疾患、血栓性疾患、血栓症、血液凝固、虚血性疾患、心臓発作、深在性血栓症、静脈血栓塞栓症、腎硬化症、メタボリック症候群、アルドステロン性組織障害、臓器不全、間質性膀胱炎、前立腺肥大、筋萎縮症、記憶障害、加齢黄斑変性、嚢胞性繊維症、肝線維症、リンパ浮腫、排尿障害、脳や心臓などの血管イベントなどを挙げることができる。【００３０】
また、上記医薬は、PAI-1の過剰産生を伴う疾患、例えば、播種性血管内凝固症候群（DIC）、抗リン脂質抗体症候群などの免疫異常、動脈硬化症、メタボリック症候群、エコノミークラス症候群、エンドドキシンショック、アレルギー性疾患、血管炎、非細菌性血栓性心内膜炎、敗血症などの重症感染症、関節炎におけるフィブリン依存的な疼痛、網膜症、腎症、神経症、末梢循環障害、糖尿病性合併症、高血圧、糖尿病、高インスリン血症、高コレステロール血症、インスリン抵抗性症、高脂血症、肥満症、腫瘍、腫瘍浸潤、腫瘍転移、喘息、心臓や腎臓などの組織移植後の拒絶反応、組織移植後の動脈病変等の血栓形成、多嚢胞性腎症の予防又は改善にも有用である。さらに、本発明の医薬は、血栓形成の予防や改善を行うことができるので創傷治癒や辱創治癒に効果的である。【００３１】
本発明で用いる一般式(I)で表される化合物は、例えば、国際公開第99/65449号パンフレット、国際公開第02/049632号パンフレット、国際公開第03/103654号パンフレット、国際公開第03/103658号パンフレットなどの文献に記載の方法に基づいて製造することができる。また、一般式(I)で表される化合物の塩、並びにその塩又は一般式(I)で表される化合物の水和物又は溶媒和物は、当業界で汎用されている方法により製造することができる。一般式(I)で表される化合物の塩としては、当該化合物の薬理学的に許容される塩を用いることが好ましい。前記塩としては、例えば、アルカリ金属塩、アルカリ土類金属塩、その他の金属塩、無機塩、有機塩などを挙げることができる。【００３２】
本発明のPAI-1産生抑制剤又は医薬は、一般式(I)で表される化合物若しくはその薬理学的に許容される塩、又はそれらの水和物若しくはそれらの溶媒和物のみからなるものであってもよいが、1又は2以上の薬理学的に許容される製剤用添加物をさらに含む組成物であってもよい。前記製剤用添加物としては、例えば、賦形剤、結合剤、滑沢剤、崩壊剤、矯味矯臭剤、溶剤、安定剤、基剤、湿潤剤、保存剤などの既存の添加物を用いることができる。本発明の医薬品はいかなる剤形であってもよく、例えば、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、液剤、細粒剤、粉末剤、シロップ剤、注射剤、塗布剤、噴霧剤、貼付剤、坐剤などを挙げることができる。また、本発明の医薬品はいかなる方法で投与してもよく、例えば、経口投与、静脈投与などの非経口投与などを挙げることができる。
【実施例】
【００３３】
以下、実施例により本発明をさらに具体的に説明するが、本発明の範囲は下記の実施例に限定されることはない。なお、例５及び例６の被検物質としては、一般式(II)で表される化合物のR1〜R10が下記の表に示す置換基である各化合物を用いた。表中のMeはメチルを、t-Buはtert-ブチルを、n-Hexはn-ヘキシルを、n-Buはn-ブチルを、i-Prはイソプロピルを、sec-Buはsec-ブチルをそれぞれ表す。
【表１−１】
0005470046.tif 000008
【表１−２】
0005470046.tif 000009
【表１−３】
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【表１−４】
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【表１−５】
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【００３４】
例１：化合物(1)によるPAI-1の産生抑制効果
PAI-1の過剰産生が認められた、肥満を伴う2型糖尿病患者10名に対して、1回200mgの化合物(1)を1日2回（朝食後及び夕食後）、12週間経口投与した。化合物(1)の投与直前及び投与2, 4, 8, 12週間後に各患者から採血を行い、血漿中におけるPAI-1の濃度をHuman PAI-1 ELISA Kit（AssayPro）を用いて測定した。その結果を図１に示す。
図１に示すように、化合物(1)を投与することにより血中におけるPAI-1の濃度が低下したことから、化合物(1)は異常昂進したPAI-1の産生を抑制する作用を有することがわかった。このことから、化合物(1)は、抗血液凝固作用や抗血栓作用を有し、血液の血栓傾向を改善できることが示唆された。【００３５】
例２：化合物(1)によるコラーゲンの蓄積抑制効果
喫煙曝露システム（INH06-CIG01A, 株式会社MIPS）を用いて、6週齢のモルモット（Std：Hartley系雄, 日本エスエルシー株式会社）にタバコ（ピース(登録商標), 日本たばこ産業株式会社）の煙を1日40本（20本×2回）、25日間連日曝露した（慢性閉塞性肺疾患(COPD)モデル群:コントロール群:n=10）。このモルモットに対して、タバコの煙を曝露し始めた日から、化合物(1)（30mg/kg/dayあるいは100mg/kg/day）又はプレドニゾロン（10mg/kg/day）を1日1回、25日間連日経口投与した（化合物(1)30mg投与群:n=5, 化合物(1)100mg投与群:n=5, プレドニゾロン投与群:n=5）。また、正常群として空気を曝露し、化合物(1)及びプレドニゾロンを投与していないモルモット（n=5）を準備した。最終曝露の翌日、各モルモットの肺におけるパラフィン切片を作製した後、マッソン・トリクローム法によりコラーゲンを染色し、画像解析により肺胞におけるコラーゲンの蓄積を面積割合により求めた。その結果を図２に示す。
図２に示すように、ステロイドであるプレドニゾロンはコラーゲンの蓄積を抑制できなかったが、化合物(1)はコラーゲンの蓄積を抑制することができた。このことから、化合物(1)はコラーゲンの蓄積を抑制する作用を有し、線維化の抑制に有用であることがわかった。この結果は、抗炎症性ステロイドがPAI-1産生を抑制しない事実と良く一致することから、この作用はPAI-1産生を抑制したことによるものではないかと推定できる。
次に、上記パラフィン切片を、抗PAI-1抗体（PAI-1 H-135；Santa Cruz社；250倍希釈）を用いた免疫染色法により染色し、肺に浸潤した総細胞数に対するPAI-1発現細胞の割合を測定した。免疫染色は、IHC Select HRP/DAB（CHEMICON社）を用いて行った。その結果を図３に示す。
図３に示すように、化合物(1)を投与することにより総浸潤細胞数に対するPAI-1発現細胞の割合が減少することが明らかになった。また、正常群と化合物(1) 100mg投与群との総浸潤細胞数が同程度であったことから、化合物(1)の投与により総浸潤細胞数に対するPAI-1発現細胞の割合が正常群のレベルまで改善することが明らかになった。以上の結果から、化合物(1)によるコラーゲン蓄積の抑制がPAI-1産生の抑制と関係していることが示唆された。【００３６】
例３：化合物(1)による線維化抑制効果
8週齢のラット（SPF: SD系雄,日本エスエルシー株式会社）をペントバルビタールナトリウムで麻酔した後、心臓を露出し、糸付縫合針を用いて左冠動脈前下行枝 (LAD)を結紮した。30分後結紮を取り除き、24時間血液を再灌流した。その後、化合物(1)（10mg/kg/day, 30mg/kg/day, 100mg/kg/day）を1日1回、28日間連日経口投与した。また、コントロールとして、再灌流後に化合物(1)を投与していないラット（心筋梗塞（虚血-再灌流）モデルラット）を準備した。再灌流後29日目に各ラットの左心室における心筋のパラフィン切片を作製した後、Azan-Mallory染色を行い、画像解析により心筋壊死遠隔部位を占める染色面積の割合を求め、線維化の割合とした。その結果を下記の表に示す。
【表２】
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表に示すように、化合物(1)は線維化を効率よく抑制できた。このことから、化合物(1)は心リモデリングの抑制に有用であることがわかった。【００３７】
例４：化合物(1)による線維化抑制効果
7週齢のラット（SPF: Crj系雌, 日本チャールス・リバー株式会社）の尿道にポリエチレンチューブを挿入し、5%マスタードオイル（20%イソチオシアン酸アリルを含む流動パラフィンで希釈）0.4mLを膀胱内に注入した。60分後膀胱内の溶液を吸引除去した後、生理食塩液にて膀胱内を洗浄した。マスタードオイルの注入3日前からマスタードオイルの注入後7日までの10日間、化合物(1)（100mg/kg/day）を1日1回経口投与した（化合物(1)投与ラット：n=6）。また、コントロールとして、化合物(1)を投与していないマスタードオイル注入ラット（膀胱炎ラット：n=6）を準備した。マスタードの注入後8日目に膀胱を摘出してパラフィン切片を作製し、Azan染色を行って線維化の度合いをスコアー化し、評価を行った。スコアー化の指標については、正常組織に対して異常がなかったものを「1」、軽微な線維化がみられたものを「２」、軽度の線維化がみられたものを「３」、中程度の線維化がみられたものを「４」、及び、高度の線維化がみられたものを「５」とした。その結果、コントロール群のスコアーは2.6±0.1であったが、化合物(1)投与群は2.0±0.2であり、有意な差が確認できた（p<0.01: Wilcoxon test）。このことから、化合物(1)は線維化の抑制に有用であることがわかった。【００３８】
例５：被検物質によるTGF-β誘導PAI-1産生抑制効果
HT1080細胞を10％FBS (Fetal Bovine Serum)を含むMEM培地で48時間培養した後、1％FBSを含むMEM培地に交換し、TGF-β1 (最終濃度：10ng/ml)のみ、あるいはTGF-β1 (最終濃度：10ng/ml)及び被検物質を添加して培養した。なお、コントロールとして、TGF-β1も被検物質も加えないで培養した培養液を準備した。6時間のインキュベーション後に培養液を回収し、培養液中のPAI-1量をウエスタンブロッティング法を用いて測定し、TGF-β1のみを添加した場合のPAI-1量を「100%」、コントロールにおけるPAI-1量を「0%」とし、被検物質の各濃度におけるPAI-1量（PAI-1の阻害率）を算出し、PAI-1産生量を50%阻害する化合物の濃度（IC50）を求めた。その結果を下記の表に示す。
【表３】
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【００３９】
例６：被検物質によるTGF-β誘導PAI-1産生抑制効果
HepG2細胞を96ウェル培養プレートに2×104個/ウェルで播種し、1% NEAA（Non-Essential Amino Acids）、1mM ピルビン酸塩及び10％FBSを含むMEM培地で24時間培養した。その後、1% NEAA、1mM ピルビン酸塩及び1％FBSを含むMEM培地に交換し、さらに24時間培養した。続いて、1% NEAA、1mM ピルビン酸塩及び1％FBSを含むMEM培地に交換し、被検物質（最終濃度：1μM又は0.1μM）で1時間処理した後、TGF-β1 (最終濃度：1ng/ml)を加えてさらに24時間培養した。なお、コントロールとして、TGF-β1のみを加えて処理した培養液、及び被検物質もTGF-β1も加えないで培養した培養液を準備した。培養後、Human Serpin E1/PAI-1 DuoSet（R＆D Systems社製）を用いてPAI-1量を測定し、TGF-β1のみで処理した場合のPAI-1量を「100%」、被検物質及びTGF-β1を加えないで処理した場合のPAI-1量を「0％」とし、各被検物質のPAI-1阻害率を算出した。その結果を下記の２つの表に示す。なお、化合物(2)のIC50は、50nM程度であった。
【表４】
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【表５】
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【産業上の利用の可能性】
【００４０】
本発明によって、血液の凝固や血栓形成などを抑制するのに有用な新規PAI-1産生抑制物質、及びその利用方法を提供することが可能になった。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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