(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
皮膚の老化の兆候の出現を阻止若しくは抑制し、又はその影響を遅延させるための、少なくとも２種のアルキルグリコシドの混合物を含む化粧用薬剤において、
前記混合物は、一般式：
（Ｓ）−Ｏ−Ｒ１
（式中、（Ｓ）はマルトース又はマルトトリオースであり、Ｒ１は８〜２４個の炭素原子を含むアルキル基である）
で表されるアルキルグリコシド、及び
一般式：
（Ｓ）−Ｏ−Ｒ２
（式中、（Ｓ）は上記で定義されており、Ｒ２は１〜６個の炭素原子を含むアルキル基である）
で表されるアルキルグリコシド
を有することを特徴とする薬剤。
【請求項２】
Ｒ１基が、飽和直鎖状アルキル基であることを特徴とする請求項１に記載の化粧用薬剤。
【請求項３】
Ｒ１基が、８〜１８個の炭素原子を含むアルキル基であることを特徴とする請求項１又は２に記載の化粧用薬剤。
【請求項４】
Ｒ２基が、メチル基であることを特徴とする請求項１〜３のいずれか一項に記載の化粧用薬剤。
【請求項５】
Ｒ１基が、ドデシル基であることを特徴とする請求項１〜４のいずれか一項に記載の化粧用薬剤。
【請求項６】
糖単位が、右旋性糖系列（Ｄ系列）から選択されることを特徴とする請求項１〜５のいずれか一項に記載の化粧用薬剤。
【請求項７】
オリゴ糖が、β−Ｄ−マルトース又はβ−Ｄ−マルトトリオースであることを特徴とする請求項１〜６のいずれか一項に記載の化粧用薬剤。
【請求項８】
アルキルグリコシドの少なくとも１種が、メチルβ−Ｄ−マルトシド、メチルβ−Ｄ−マルトトリオシド、ドデシルβ−Ｄ−マルトシド、ドデシルβ−Ｄ−マルトトリオシドから選択されることを特徴とする請求項１〜７のいずれか一項に記載の化粧用薬剤。
【請求項９】
混合物を構成する２種のアルキルグリコシドが、１／９９〜９９／１の比で存在することを特徴とする請求項１〜８のいずれか一項に記載の化粧用薬剤。
【請求項１０】
混合物を構成する２種のアルキルグリコシドが、７５／２５〜２５／７５の比で存在することを特徴とする請求項１〜９のいずれか一項に記載の化粧用薬剤。
【請求項１１】
混合物が、メチルβ−Ｄ−マルトシド及びマルトトリオースである一連の３個の糖単位で形成されるアルキルグリコシドによって形成されることを特徴とする請求項１〜１０のいずれか一項に記載の化粧用薬剤。
【請求項１２】
前記マルトトリオースで形成されるアルキルグリコシドが、ドデシルβ−Ｄ−マルトトリオシドであることを特徴とする請求項１１に記載の薬剤。
【請求項１３】
混合物が、メチルβ−Ｄ−マルトトリオシド及びマルトースである一連の２個の糖単位で形成されるアルキルグリコシドによって形成されることを特徴とする請求項１〜１０のいずれか一項に記載の化粧用薬剤。
【請求項１４】
前記マルトースで形成されるアルキルグリコシドが、ドデシルβ−Ｄ−マルトシドであることを特徴とする請求項１３に記載の化粧用薬剤。
【請求項１５】
アルキルグリコシドの混合物が、４種のアルキルグリコシドからなることを特徴とする請求項１〜１０のいずれか一項に記載の化粧用薬剤。
【請求項１６】
４種のアルキルグリコシドが、混合物中に実質的に等しい量比で存在することを特徴とする請求項１５に記載の化粧用薬剤。
【請求項１７】
混合物が、メチルβ−Ｄ−マルトシド、メチルβ−Ｄ−マルトトリオシド、ドデシルβ−Ｄ−マルトシド、ドデシルβ−Ｄ−マルトトリオシドによって形成されることを特徴とする請求項１５又は１６に記載の化粧用薬剤。
【請求項１８】
化粧品用活性剤として請求項１〜１７のいずれか一項に記載の少なくとも２種のアルキルグリコシドの混合物を含むことを特徴とする化粧品組成物。
【請求項１９】
少なくとも１種の化粧品として許容される賦形剤をさらに含むことを特徴とする請求項１８に記載の化粧品組成物。
【請求項２０】
化粧品として許容される賦形剤が顔料、染料、ポリマー、界面活性剤、レオロジー促進剤、香料、電解質、ｐＨ調整剤、抗酸化剤、防腐剤及びこれらの混合物を含む群から選択されることを特徴とする請求項１９に記載の化粧品組成物。
【請求項２１】
顔又は体の皮膚の全部若しくは一部に適用されるように意図されていることを特徴とする請求項１８〜２０のいずれか一項に記載の化粧品組成物。
【請求項２２】
前記組成物が、セラム、ローション、エマルジョン、リッチクリーム、ヒドロゲル、マスク又はスティックの形態で提供され得ることを特徴とする請求項１８〜２１のいずれか一項に記載の化粧品組成物。
【請求項２３】
前記混合物の１種を０．００１重量％〜１０重量％含むことを特徴とする請求項１８〜２２のいずれか一項に記載の化粧品組成物。
【請求項２４】
前記混合物の１種を０．０１重量％〜５重量％含むことを特徴とする請求項１８〜２３のいずれか一項に記載の化粧品組成物。
【請求項２５】
前記組成物中において微生物増殖阻止効果をもたらすことを特徴とする請求項１８〜２４のいずれか一項に記載の化粧品組成物。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は、抗老化特性を有するアルキルグリコシドの及びアルキルグリコシドの混合物の新規な使用並びに前記アルキルグリコシドを含む化粧品組成物及び前記組成物を用いる化粧用ケアの方法に関する。
[関連技術]
【０００２】
アルキルグリコシド及びそれらの用途は、特に、米国特許出願公開第２００６／００４６９６９号明細書及び国際公開第２００６／１０７３８６号パンフレットの文書により知られている。
【０００３】
国際公開２００５／０４１９８３号パンフレットの特許出願には、炎症メカニズムを制御することを有利に意図する新規な医薬としての、水酸官能基がアルコキシラジカルで置換された還元性アルキル糖モノマーの使用が開示されている。
【０００４】
上記特許出願には、抗炎症剤としての、糖モノマーで形成された限られた数の化合物の使用が記載されているに過ぎない。
【０００５】
皮膚の老化は、環境的な外的要素及び遺伝的要素を含む生理的プロセスである。外因性の皮膚の老化は、たとえば化学的及び物理的環境刺激（日光及び紫外線への曝露、ストレス、低栄養状態）に起因し、これらは皮膚の正常な機能に障害を与える。内因性の皮膚の老化は、遺伝的にプログラムされた老化に起因する。
【０００６】
本発明は、これらの２種の老化に関する。
【０００７】
皮膚の老化と炎症との間には直接の関連が示されてきた。炎症は、あらゆる攻撃、たとえば化学的（紫外線、タバコ、汚染）、機械的又は感染による攻撃に対する生理的反応であり、これは、プロスタグランジン（ＰＧＥ２）又はサイトカイン（ＩＬ−８）型のメディエーターの放出をもたらす。これらの炎症促進性メディエーターは、特にしわの生成に関わるプロテアーゼ（エラスターゼ）を、また真皮及び表皮の成分、特に細胞外マトリックスを分解する酵素（メタロプロテアーゼ）を活性化することにより、皮膚の老化に直接の役割を果たす（Ｐｉｌｌａｉら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃｏｓｍｅｔ．Ｓｃｉ．，２００５，２７，１７〜３４頁）。
【０００８】
その上、皮膚が徐々に弱化することによって皮膚の老化が現れ、皮膚は次いで外的攻撃に対してもはやバリアとしての役割を有効に果たせなくなる。紫外線にさらされた高齢の被曝者の皮膚細胞は、炎症促進性プロスタグランジン、特にＰＧＥ２及びシクロオキシゲナーゼ−２を、若い被曝者の皮膚細胞に比べて、より大量に発現することも示されてきた。この研究により、高齢の被曝者においてのこれらの炎症マーカーの発現の増加が、光で誘起された皮膚の老化に重要な役割を果たしているであろうということが示唆される（Ｓｅｏら、Ｍｅｃｈ  Ａｇｅｉｎｇ  Ｄｅｖ．２００３（８〜９）：９０３〜９１０頁）。
【０００９】
したがって、ある種の炎症メディエーターに効果的に作用することにより炎症に起因する非病的発現に対処するのに適切であり、且つそれにより皮膚の老化を遅らせることができる活性剤を利用可能にすることが重要である。
[発明の目的]
【００１０】
本発明の主目的は、内因性であれ外因性であれ、皮膚の老化などの炎症に起因する非病的発現に対処することができる新規な活性剤を提供することである。
【００１１】
本発明の目的はまた、特に化粧品組成物における、敏感な皮膚のための新規な抗老化剤を提供することである。
【００１２】
本発明の目的は最後にまた、簡単で費用がかからず、工業用及び化粧品用のスケールで用い得る解決策によって技術的課題を解決することである。
[発明の説明]
【００１３】
本発明の第１の主題は、化粧品組成物における、皮膚の内因的及び／又は外因的老化の兆候の出現を阻止若しくは抑制し、又はその影響を遅延させることを意図した薬剤としての、少なくとも１種のアルキルグリコシド又は少なくとも２種のアルキルグリコシドの混合物の新規な使用に関し、アルキルグリコシド又は前記混合物のアルキルグリコシドは、一般式：
（Ｓ）−Ｏ−Ｒ１、
（式中、（Ｓ）は一連の２〜８個の同一又は異なる糖単位で形成されるオリゴ糖であり、Ｒ１は１〜２４個の炭素原子を含むアルキル基である）
を有することを特徴とする。
【００１４】
したがって、本発明により、少なくとも２種の糖単位を含むオリゴ糖で形成されるアルキルグリコシドが抗老化剤として使用でき、抗老化剤が身体のこれらの部位における老化作用を遅延させるために、アルキルグリコシドを化粧品組成物中に適用可能とできるということを実証することができる。
【００１５】
別の態様によれば、本発明によって、きわめて予期されないことであるが、アルキル鎖が異なる長さを有する及び／又はより長い又はより短い一連の糖単位を有するオリゴ糖で形成されるアルキルグリコシドの混合物が、これらの化合物の混合物の効果と前記混合物を個別に試験して得られる結果とを比較した際に、相乗的な美容効果をもたらすということが実証される。
【００１６】
したがって、この相乗効果により、一定用量で、単一のアルキルグリコシドを含む同じ組成物よりも優れた効果を示す、活性剤としてアルキルグリコシドのこれらの混合物を含む化粧品組成物の調製が可能になる。
【００１７】
また、この相乗効果により、同一の美容効果を得つつ、アルキルグリコシドの総有効量を減少させることができるであろう。
【００１８】
本発明によれば、オリゴ糖（Ｓ）は、一連の２個の糖単位（二糖類）又は３個の糖単位（三糖類）で形成することができる。
【００１９】
好ましい実施形態によれば、糖単位は、ペントース又はヘキソース型の還元糖又はこれらの糖の誘導体、好ましくはウロン酸誘導体、硫酸誘導体又はデオキシ誘導体である。
【００２０】
別の好ましい実施形態によれば、糖単位は、アラビノース、キシロース、リボース、グルコース、ガラクトース、マンノース、ラムノース、フコースから選択される。
【００２１】
本発明によれば、糖単位は、等しく良好に左旋性糖系列（Ｌ系列）又は右旋性糖系列（Ｄ系列）から選択できるが、より特に右旋性糖系列から選択される。
【００２２】
別の特に好ましい実施形態によれば、糖単位はＤ−グルコースである。
【００２３】
オリゴ糖を形成する一連の糖単位は、同一の糖単位の繰り返しから形成されてもよく、異なる糖単位から形成されてもよい。
【００２４】
オリゴ糖を形成する一連の糖単位は、直鎖状でも分枝状でもよい。
【００２５】
糖単位間の結合は、糖のヘミアセタール炭素（アノマー炭素、１番）のアルコール官能基の還元性基（水酸基）と、別の分子の酸基（遊離水素）との共有グリコシド結合によって形成される。
【００２６】
この結合は等しく良好にα又はβ型であってよいが、好ましくはβ型である。
【００２７】
グリコシド結合は１−３型、すなわち第１の糖の１番のアノマー炭素と第２の糖の３番の炭素の水酸基との結合、１−４型又は１−６型であってよい。
【００２８】
結合は好ましくは１−４型である。
【００２９】
本発明によるアルキルグリコシドの合成条件によって、オリゴ糖（Ｓ）とＲ１基との結合がα型又はβ型のいずれか一方である化合物を特に得ることが可能であり、或いは一部分がこのα型結合を有し、生じた部分が同じβ型結合を有する同じ化合物の混合物に到達することも可能である。
【００３０】
本発明によれば、オリゴ糖（Ｓ）とＲ１基との結合は、等しく良好にα型又はβ型であってよいが、好ましくはβ型である。
【００３１】
本発明によれば、Ｒ１基は、飽和アルキル基、好ましくは飽和直鎖状アルキル基である。
【００３２】
好ましくは、Ｒ１基は、１〜１８個の炭素原子を含むアルキル基であり、好ましくはメチル基又はドデシル基である。
【００３３】
本発明によれば、オリゴ糖（Ｓ）は、マルトース、セロビオース、ラクトース及びマルトトリオースから選択できる。
【００３４】
オリゴ糖は、左旋性（Ｌ−）又は右旋性（Ｄ−）であってよく、好ましくは（Ｄ−）系列のオリゴ糖から選択される。
【００３５】
特に、オリゴ糖は、好ましくはβ−Ｄ−マルトース又はβ−Ｄ−マルトトリオースから選択できる。
【００３６】
本発明によれば、アルキルグリコシドの少なくとも１種は、メチルβ−Ｄ−マルトシド、メチルβ−Ｄ−マルトトリオシド、ドデシルβ−Ｄ−マルトシド、ドデシルβ−Ｄ−マルトトリオシドから選択できる。
【００３７】
第１の好ましい変形形態においては、使用は具体的に、特に２種のアルキルグリコシドからなる混合物に関し、混合物は、
−  一般式（Ｓ）−Ｏ−Ｒ２
（式中、（Ｓ）は上記で定義されており、Ｒ２は１〜６個の炭素原子を含むアルキル基である）
のアルキルグリコシド
及び
−  一般式（Ｓ）−Ｏ−Ｒ３
（式中、（Ｓ）は上記で定義されており、Ｒ３は８〜２４個の炭素原子を含むアルキル基である）のアルキルグリコシド
を含み、混合物を形成する化合物の（Ｓ）基は異なっていてもよい。
【００３８】
この変形形態においては、１／９９〜９９／１、好ましくは７５／２５〜２５／７５、より好ましくは約１の比で存在する２種のアルキルグリコシドからなる混合物が好ましく使用される。
【００３９】
この変形形態によれば、Ｒ２基は、飽和アルキル基、好ましくは飽和直鎖状アルキル基であり、特に好ましくはメチル基である。
【００４０】
この変形形態によれば、Ｒ３基は、飽和アルキル基、好ましくは飽和直鎖状アルキル基であり、特に好ましくはドデシル基である。
【００４１】
第１の好ましい混合物は、メチルβ−Ｄ−マルトシドと一連の３個の糖単位で形成されるアルキルグリコシド、好ましくはドデシルβ−Ｄ−マルトトリオシドとによって形成される。
【００４２】
第２の好ましい混合物は、メチルβ−Ｄ−マルトトリオシドと一連の２個の糖単位で形成されるアルキルグリコシド、好ましくはドデシルβ−Ｄ−マルトシドとによって形成される。
【００４３】
特に、好ましい混合物は、ドデシルβ−Ｄ−マルトトリオシドを含むことを特徴とする２種のアルキルグリコシドの組合せによって形成される。
【００４４】
本実施形態によれば、特に好ましい混合物は、ドデシルβ−Ｄ−マルトトリオシドとメチルβ−Ｄ−マルトシドとによって形成される混合物である。
【００４５】
第２の好ましい実施形態においては、アルキルグリコシドの混合物は、４種のアルキルグリコシドからなる。
【００４６】
好ましくは、４種のアルキルグリコシドは、実質的に等しい比率で混合物中に存在する。
【００４７】
特に、好ましい混合物は、メチルβ−Ｄ−マルトシド、メチルβ−Ｄ−マルトトリオシド、ドデシルβ−Ｄ−マルトシド、ドデシルβ−Ｄ−マルトトリオシドによって形成される。
【００４８】
アルキルグリコシドは、皮膚の老化に関して美容的に有効な効果をもたらすために充分な量で用いられる。
【００４９】
上記で定義されるアルキルグリコシド又は少なくとも２種のアルキルグリコシドの混合物は、特に、皮膚の内因的及び／又は外因的老化の兆候の出現を阻止若しくは抑制し、又はその影響を遅延させるために化粧品組成物中において有効な量で活性剤として用いられる。
【００５０】
本発明によれば、活性剤は、活性剤を含む化粧品組成物に対して０．００１重量％〜１０重量％、前記組成物に対して特に０．０１重量％〜５重量％の量で存在する。
【００５１】
本発明の第２の主題は、抗老化効果を有する活性剤として少なくとも２種のアルキルグリコシドの混合物を含むことを特徴とする化粧品組成物に関し、前記混合物のアルキルグリコシドは一般式：
（Ｓ）−Ｏ−Ｒ１、
（（Ｓ）は一連の２〜８個の同一若しくは異なる糖単位で形成されるオリゴ糖であり、Ｒ１は１〜２４個の炭素原子を含むアルキル基である）を有する。
【００５２】
本発明による最後の主題においては、前記混合物は、特に本発明の最初の２つの主題に関連する前述の考察のすべてで定義される通りである。
【００５３】
特に好ましくは、２種のアルキルグリコシドの混合物は、これが特に
−  一般式（Ｓ）−Ｏ−Ｒ２（式中、（Ｓ）は上記で定義されており、Ｒ２は１〜６個の炭素原子を含むアルキル基である）のアルキルグリコシド；及び
−  一般式（Ｓ）−Ｏ−Ｒ３（式中、（Ｓ）は上記で定義されており、Ｒ２は８〜２４個の炭素原子を含むアルキル基である）のアルキルグリコシド
を含むように選択され、混合物を形成する化合物の（Ｓ）基は相互に異なってもよい。
【００５４】
本発明によれば、組成物は、さらに好ましくは、少なくとも１種の化粧品として許容される賦形剤を含む。
【００５５】
特に、化粧品として許容される賦形剤は、顔料、着色剤、ポリマー、界面活性剤、レオロジー促進剤、香料、電解質、ｐＨ調整剤、抗酸化剤、防腐剤及びこれらの混合物を含む群から選択できる。
【００５６】
好ましい実施形態によれば、組成物は、顔又は体の皮膚の全部若しくは一部に適用されるように意図されている。
【００５７】
特に、上記組成物は、セラム、ローション、エマルジョン、好ましくはリッチクリーム又はヒドロゲル、好ましくはマスクであってよく、又はスティックの形態で提供され得る。
【００５８】
本発明によれば、組成物は、好ましくは、上記混合物の１種を０．００１重量％〜１０重量％、特に上記混合物の１種を０．０１重量％〜５重量％含む。
【００５９】
本発明による組成物は、有利には、皮膚の構造の維持を促進すること及び／又は真皮若しくは表皮の表層の細胞外マトリックスの劣化を制限すること及び／又は皮膚の保護、修正又は再構成効果を得ることを目的とする活性によって、皮膚の老化の影響、特にしわの生成を軽減する又は遅延させることを意図した、鎮静化、緩和又は弛緩活性を有する物質から選択することができる１種又は複数の他の化粧品用活性剤を含んでもよい。
【００６０】
組成物はまたさらに、皮膚美白化活性を有する物質、痩身活性を有する物質、湿潤化活性を有する物質、肌色、特に顔の輝きを高めるために皮膚の微小循環を刺激する活性を有する物質、脂性皮膚の手入れのための脂漏調節活性を有する物質、皮膚を浄化又は純化するための物質、抗フリーラジカル活性を有する物質に含まれる１種又は複数の化粧品用活性剤を含んでもよい。
【００６１】
最後に、本発明によれば、組成物は、微生物増殖阻止特性、特に前記組成物中において有効な防腐効果をもたらすのに効果的な濃度で、ある量のアルキルグリコシドを含む。
【００６２】
したがって、他のいかなる防腐剤をも含まず、上記アルキルグリコシド又はアルキルグリコシドの混合物からなり、その細菌、真菌又は酵母などの種々の微生物に対する活性スペクトルが、化粧品組成物の保存及びその微生物学的安定性をもたらすことを可能にする活性剤を含む化粧品組成物を調製することが可能である。
【００６３】
好ましい実施形態においては、そのようなアルキルグリコシドの混合物を含む化粧品組成物は、パラベン族の化合物又はその誘導体を含まない。
【００６４】
本発明の第３の主題は、皮膚の内因的及び／又は外因的老化の兆候の出現を阻止若しくは抑制し、又はその影響を緩和することを目的とする化粧用ケアの方法に関し、前記方法は上記で定義した組成物の体又は顔の少なくとも一部分への適用を含む。
【００６５】
本発明のさらなる目的、特徴及び利点は、以下の説明的記述に照らして明確に分かるであろう。この記述は単に説明の目的で与えられる本発明の種々の典型的な実施形態を参照してなされるもので、したがって決して本発明の範囲を限定するものではない。実施例においては、特記しない限り、すべての百分率は重量基準であり、温度は度（摂氏）であり、圧力は大気圧である。
【実施例】
【００６６】
合成及び試験のための材料及び方法
【００６７】
１．化合物の合成
特記しない限り、種々のアルキルグリコシドは、Ｔａｋｅｏらによって記載された方法に従って合成する（Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、４８（１９７６）１９７〜２０８頁）。
【００６８】
ここで用いる合成方法はグリコシル化ステップ（アルキル鎖のグラフト化）のみにおいてその出版物と異なり、ここではベンゼンをジクロロメタン（ＣＨ２Ｃｌ２）で置き換え、酢酸水銀をＨｇＯ／ＨｇＢＲ２の混合物で置き換える。このステップは下に例示する化合物のそれぞれについて具体的に記載される。
【００６９】
充分な収率をもって反応を完結させるための反応用化合物の選択、触媒の選択及び反応条件の選択は、当技術分野においてよく知られている。
【００７０】
次に試験するために合成する生成物は下記の通りである。
ＤＰ２−１：メチルβ−Ｄ−マルトシド、実施例１に従って調製
ＤＰ２−８：オクチルβ−Ｄ−マルトシド
ＤＰ２−１２：ドデシルβ−Ｄ−マルトシド、ＡＣＲＯＳ  ＯＲＧＡＮＩＣＳ由来
ＤＰ３−１：メチルβ−Ｄ−マルトトリオシド、実施例２に従って調製
ＤＰ３−１２：ドデシルβ−Ｄ−マルトトリオシド、実施例３に従って調製
ＤＰ７−１：メチルβ−Ｄ−マルトヘプタノース
【００７１】
本発明の化合物の抗炎症活性を他の既知の化合物と比較するために、既知の抗炎症作用を有し、国際公開第２００５／０４１９８９３号パンフレットの特許出願に記載されたアルキルグリコシドを合成する。
【００７２】
これらの化合物は下記の通りである。
ＤＰ１−８：ｎ−オクチル−β−Ｄ−グルコピラノシド、ＡＣＲＯＳ  ＯＲＧＡＮＩＣＳ由来
ＤＰ１−１２：ｎ−ドデシル−β−Ｄ−グルコピラノシド、ＡＣＲＯＳ  ＯＲＧＡＮＩＣＳ由来
２．プロスタグランジンＰＧＥ２及びインターロイキンＩＬ−８の放出の定量
【００７３】
角化細胞がインターロイキン−１βの刺激によってＩＬ−８を発現して放出することが示されてきた。
【００７４】
ＰＧＥ２は細胞組織障害に関連する炎症反応の重要なマーカーであり、単球白血球、マクロファージ又は角化細胞を含む多様な細胞によって産生される。
【００７５】
インドメタシン又は植物抽出物などの種々の薬剤は、皮膚の角化細胞によるＰＧＥ２の放出を調節することができる。
【００７６】
ａ）試験の原理
オリゴ糖の存在下で２４時間刺激した不死化角化細胞（ＨａＣａＴ）の細胞株培養上清中へのＩＬ−８及びＰＧＥ２マーカーの放出を定量する。
【００７７】
ＨａＣａＴは８０％コンフルエンスまで培養される。
【００７８】
評価すべき生成物とともに２４時間にわたって、ＩＬ−８単独の場合にはＩＬ−１と並列刺激によって処理を行う。
【００７９】
陽性対照は、それぞれのマーカーの放出を特異的に阻害する試薬によってカラムを処理することにより、用いられる。
【００８０】
マーカーを含む培養上清を集め、分析の日まで−２０℃に保存する。
分析は、それぞれのマーカーに個別のキットを用いて行う。
【００８１】
ｂ）用いるキット及び試薬
キット
ＥＬＩＳＡ  ＡｂＣ２０４／３キット（Ａｂｃｙｓ）によるヒトＩＬ−８の分析
Ｐａｒａｍｅｔｅｒ  ＰＧＥ２キット（Ｒ＆Ｄ  ｓｙｓｔｅｍ）によるＰＧＥ２の分析
試薬
インターロイキン−１β：組換えヒトＩＬ−１β、Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ
コレカルシフェロール（ビタミンＤ３）：Ｓｉｇｍａ
インドメタシン：Ｓｉｇｍａ
【００８２】
ｃ）細胞の調製及び処理
これらのＨａＣａＴを１０，０００細胞／ウェル（補充ＫＳＦＭ培地、Ｇｉｂｃｏ）の割合で９６ウェルマイクロプレートに播種する。
プレートを培養器（３７℃、５％ＣＯ２）に２４時間置く。
当初ＤＭＳＯ中１ｍＭ原液の形態であるオリゴ糖を、培地においての適当な希釈の後に細胞に加える。
並行して、ＩＬ−８については細胞を２５ｎｇ／ｍｌのＩＬ−１βで刺激する。
ＩＬ−８の放出を阻害する陽性対照として、１つのカラムを０．３９μｇ／ｍｌのコレカルシフェロール（ビタミンＤ３）で処理し、ＩＬ−１βで刺激する。
対照カラムは処理及びＩＬ−１βによる刺激を行わない。
ＰＧＥ２の放出を阻害する陽性対照として、１つのカラムをインドメタシンで処理する。
それぞれの濃度の生成物、陽性対照及び処理しない対照を、４又は６ウェルのＨａＣａＴについて評価する。
【００８３】
ｄ）マーカーの分析
２４時間の処理後に、培養上清を集め、−２０℃で保存する。
分析はそれぞれのキットに記載された方法に従い、免疫酵素試験法によって実施される。この方法は、４５０ｎｍにおける分光学的測定によって、上清中に存在するＩＬ−８及びＰＧＥ２の相対的量を分析することを可能にする。
ＩＬ−８標準品及びＰＧＥ２標準品（７濃度、２重測定）について２倍希釈系列で得られる吸光度（ＯＤ）値を対数グラフにプロットする。
直線を得るために、ｐｇ／ｍｌで表したＩＬ−８及びＰＧＥ２の既知濃度をｘ軸に、吸光度値をｙ軸にプロットする。
ｐｇ／ｍｌで表したＩＬ−８及びＰＧＥ２の相対的濃度を決定するために、それぞれの試料について測定した吸光度値を次にグラフにプロットする。
【００８４】
３．総タンパク質の分析
それぞれのウェルの培養マイクロプレートについてタンパク質分析を行う。
【００８５】
ａ）試験の原理
ＨａＣａＴの処理又は非処理の後に細胞ペレット中に存在する総タンパク質を（ｍｇ／ｍｌで）分析することにより、それぞれのウェル中の細胞におけるＩＬ−８及びＰＧＥ２の分析とタンパク質量を、タンパク質１ミリグラム（ｍｇ）当たりのマーカーのピコグラム（ｐｇ）で表して、関連付けることができる。
【００８６】
ｂ）使用するキット及び試薬
キット
比色法により、ＢＣＡ、すなわちＢｉＣｉｎｃｈｏｎｉｎｉｃ  Ａｃｉｄテスト（ＢＣ  Ａｓｓａｙ  ＵＰ４０８４０Ａ  Ｕｐｔｉｍａ、Ｉｎｔｅｒｃｈｉｍ）を用いる。
試薬
分析はビシンコニン酸（試薬Ａ）及び硫酸銅（試薬Ｂ）の２種の溶液から出発して行われる。これらの試薬の混合物はそれぞれ５０：１の比率で、緑色の溶液を形成し、Ｃｕ＋により紫色に還元される。ＵｐｔｉｍａのＢＣＡ分析キットにはこれらの２試薬が存在する。
希釈系列調製のため、キットにはまた、標準タンパク質溶液（０．０５％ＮａＮ３中ＢＳＡ  ２ｍｇ／ｍｌ）が備えられている。
【００８７】
ｃ）タンパク質の分析
２４時間の処理後に、９６ウェルプレートの培養上清を回収する。
ウェルをＰＢＳ（リン酸緩衝生理食塩液）で洗浄した後に、プレートを数時間凍結する。
マイクロプレートを解凍した後に、次いで試薬Ａ＋Ｂの混合物を２００μｌ／ウェルの量で加える。
プレートを遮光下にインキュベーター（３７℃、５％ＣＯ２）に３０分間入れる。次いで５７０ｎｍで吸光度を測定できる。
並行して、ＢＳＡ２ｍｇ／ｍｌの原液から２倍希釈の較正系列を調製する。
【００８８】
結果の表現
６ウェルについての吸光度値を、較正系列（５７０ｎｍで決定される吸光度によって分かるタンパク質量）によって得られる直線を用いて、ＨａＣａＴの１ウェル当たりのタンパク質のｍｇ量に変換する。
最後に、それぞれのウェル及びそれぞれの処理条件について、ＩＬ−８及びＰＧＥ２の放出の定量分析をｐｇ／ｍｌで得る。
この分析は、ｍｇ／ｍｌで表したタンパク質量に関連する。したがってＩＬ−８に関する最終的な定量的結果はｐｇ／ｍｇタンパク質で表される。
ＩＬ−８産生阻害率（％）は、下記で計算される。
【００８９】
【数１】
0005601660.tif 000002
【００９０】
[例示的な実施形態]
実施例１：メチルマルトシドの合成
Ｄ−マルトース５ｇのピリジン２２０ｍｌへの溶液を調製し、無水酢酸８０ｍｌ（８０ｍｌ）を加える。
本方法に特有の中間ステップは、２，２’，３，３’，４’，６，６’−ヘプタ−Ｏ−アセチル−α−Ｄ−マルトシルブロミド（２．０５ｇ）のジクロロメタン（１６．５ｍｌ）溶液にメタノール５．５ｍｌを加えるところにあり、メタノール５．５ｍｌ、微粉末状に粉砕したＣａＳＯ４（２ｇ）、黄色粉末状ＨｇＯ（１ｇ）及びＨｇＢｒ２（４９ｍｇ）を加える。
本合成方法によりメチルβ−Ｄ−マルトシドが得られる。
合成の全体収率は７５．４％である。
【００９１】
実施例２：メチルマルトトリオシドの合成
Ｄ−マルトトリオース５ｇのピリジン１５０ｍｌ（１５０ｍｌ）への溶液を調製し、無水酢酸５０ｍｌを加える。
本方法に特有の中間ステップは、本方法の最初のステップの最後に得られる２，２’，２’’，３，３’，３’’，４’，４’’，６，６’，６’’−デカ−Ｏ−アセチル−α−Ｄ−マルトトリオシルブロミド（２．８７８ｇ）のジクロロメタン（２０ｍｌ）溶液にメタノール６ｍｌを加え、微粉末状に粉砕したＣａＳＯ４（２ｇ）、黄色粉末状ＨｇＯ（１ｇ）及びＨｇＢｒ２（４９ｍｇ）を加えるところにある。
Ｔａｋｅｏらによる合成方法を合成が完了するまで実施し、最終的にメチルβ−Ｄ−マルトトリオシドを得る。
合成方法の全体収率は８５％である。
【００９２】
実施例３：ドデシルマルトトリオシドの合成
Ｄ−マルトトリオース１．５ｇ（２．９７ｍｍｏｌ）のピリジン５０ｍｌへの溶液を調製し、これに無水酢酸１５ｍｌを加える。
本合成方法に特有のステップは、本方法の最初のステップの最後に得られる２，２’，２’’，３，３’，３’’，４’，４’’，６，６’，６’’−デカ−Ｏ−アセチル−α−Ｄ−マルトトリオシルブロミド（２．９３ｇ）のジクロロメタン２０ｍｌ溶液にドデカノール６．７５ｍｌを加え、微粉末状に粉砕したＣａＳＯ４（２．０２ｇ）、黄色粉末状ＨｇＯ（１．０１７ｇ）及びＨｇＢｒ２（５０．６ｍｇ）を加えるところにある。
Ｔａｋｅｏらによる合成方法を合成が完了するまで実施し、最終的にドデシルβ−Ｄ−マルトトリオシドを得る。
合成の全体収率は７７．１％である。
【００９３】
実施例４：単独で試験したアルキルグリコシドの抗炎症活性
ａ）ＩＬ−８の放出の定量
試験はアルキルグリコシドの濃度１μＭで、培地において希釈した後に実施される。陰性対照は純ＤＭＳＯである。
得られた結果を下表１に示す。
【００９４】
【表１】
0005601660.tif 000003
【００９５】
ｂ）ＰＧＥ２の放出の定量
試験はアルキルグリコシドの濃度１μＭで、培地において希釈した後に実施される。
得られた結果を下表２に示す。
【００９６】
【表２】
0005601660.tif 000004
【００９７】
結論
ＤＰ３−１２及びＤＰ７−８の例外はあるが、試験した化合物はすべて従来技術に記載された生成物よりも高い抗ＩＬ−８活性及び従来技術の化合物と同等若しくはこれより大きなＰＥＧ２阻害活性を示す。
それにもかかわらず、ＤＰ３−１２は両方のマーカーに作用し、ＤＰ７−８はＰＧＥ２マーカーに特有に向けられた抗炎症活性を示す。
実施例５：メチルオリゴ糖（ＤＰｘ−１）及びドデシルオリゴ糖（ＤＰｙ−１２）を含む混合物の抗炎症活性（ｘ＝２又は３、ｙ＝２又は３、及びｘ＝ｙ又はｘ≠ｙ）
【００９８】
ａ）ＩＬ−８放出阻害活性
試験はアルキルグリコシドの総濃度１μＭで、培地において希釈した後に実施される。
試験した種々の混合物の阻害率を下表３に示す。
【００９９】
【表３】
0005601660.tif 000005
【０１００】
混合物の抗炎症活性に関する相乗効果の可能性を示すために、それぞれの混合物の存在下に細胞から放出されるＩＬ−８のレベルと、この混合物を形成するそれぞれの化合物の存在下に細胞から放出されるＩＬ−８の同じレベルに関連して、相対的な差を評価する。
混合物の作用下で放出されるＩＬ−８が、単独で試験したそれぞれの化合物の存在下で測定されるＩＬ−８の放出に対して顕著に低下するならば、相乗効果がある。
得られた結果を下表４に示す。
【０１０１】
【表４】
0005601660.tif 000006
【０１０２】
ｂ）ＰＧＥ２放出阻害活性
試験はアルキルグリコシドの濃度１μＭで、培地において希釈した後に実施される。
試験した種々の混合物の阻害率をそれぞれの混合物について表５に示す。
【０１０３】
【表５】
0005601660.tif 000007
【０１０４】
結論
メチルオリゴ糖と長いアルキル鎖を有するオリゴ糖とを含む混合物のＩＬ−８放出阻害による抗炎症活性は、この混合物を形成する２種の化合物それぞれの活性よりも大きい。これらの混合物は、ＩＬ−８の放出阻害の相乗効果をもたらし、その結果としてそれぞれの個別の化合物よりも顕著に高い抗炎症活性をもたらす。
一方、これらの混合物は、中程度の抗ＰＧＥ２活性のみを示し、特に相乗効果はない。
【０１０５】
実施例６：ドデシルマルトトリオシド（ＤＰ３−１２）及びドデシルオリゴ糖（ＤＰｚ−ｎ）を含む混合物の抗炎症活性（ｚ＝２又は３、ｎ＝１又は１２）
ａ）ＩＬ−８放出阻害活性
試験はアルキルグリコシドの濃度１μＭで、培地において希釈した後に実施される。
試験したそれぞれの混合物について阻害率を下表６に示す。
【０１０６】
【表６】
0005601660.tif 000008
【０１０７】
実施例５のように、混合物Ｂ、Ｃ及びＥのそれぞれの活性を、この混合物を形成するそれぞれの化合物の活性と関連して比較することにより、相乗効果の可能性を評価する。
得られた結果を下表７に示す。
【０１０８】
【表７】
0005601660.tif 000009
【０１０９】
混合物の作用下で放出されるＩＬ−８が、単独で試験したそれぞれの化合物について得られる値と比較して顕著に低下するときには、相乗効果がある。
【０１１０】
ｂ）ＰＧＥ２放出阻害活性
試験はアルキルグリコシドの総濃度１μＭで、培地において希釈した後に実施される。
阻害率はそれぞれの混合物について下表８に示す。
【０１１１】
【表８】
0005601660.tif 000010
【０１１２】
結論
ドデシルマルトトリオシドを含む混合物の抗炎症活性は、単独で試験したそれぞれの化合物について得られた活性よりも大きい。
混合物中にドデシルマルトトリオシドが存在することにより、ＩＬ−８放出阻害の相乗効果をもたらし、その結果、個別に試験したそれぞれの化合物よりも顕著に高い抗炎症活性をもたらす。ドデシルマルトトリオシド自体は単独で用いた場合にはＩＬ−８放出に対して非常に小さい効果しかないことに注目されたい（実施例４参照）。
一方、これらの混合物は、中程度の抗ＰＧＥ２活性のみを示し、相乗効果はない。
実施例７：４種のアルキルグリコシド：ＤＰ２−１、ＤＰ２−１２、ＤＰ３−１及びＤＰ３−１２（１：１：１：１：１）の混合物の抗炎症活性
【０１１３】
ａ）ＩＬ−８放出阻害活性
試験はアルキルグリコシドの総濃度１μＭで、培地において希釈した後に実施される。
下表９は、個別に試験したそれぞれの化合物と比較した混合物の阻害率を含む。
【０１１４】
【表９】
0005601660.tif 000011
【０１１５】
実施例５及び６のように、混合物Ｆの活性を、この混合物を形成するそれぞれの化合物の活性と関連して比較することにより、相乗効果の可能性を評価する。
得られた結果を下表１０に示す。
【０１１６】
【表１０】
0005601660.tif 000012
【０１１７】
ｂ）ＰＧＥ２放出阻害活性
試験はアルキルグリコシドの総濃度１μＭで、培地において希釈した後に実施される。
下表１１は、個別に試験したそれぞれの化合物と比較した混合物の阻害率を含む。
【０１１８】
【表１１】
0005601660.tif 000013
【０１１９】
結論
本発明の４種のアルキルグリコシドの混合物は、ＩＬ−８の放出の阻害する相乗効果をもたらし、その結果として個別に取り上げたそれぞれの化合物の活性よりも顕著に高い抗炎症活性をもたらす。同一の濃度で、混合物の抗ＰＧＥ２抗炎症活性は顕著であり、強度において混合物を形成するそれぞれの化合物の活性に匹敵する。
本発明の実施の代表的な例である実施例４のアルキルグリコシド及び実施例５〜７のアルキルグリコシドの混合物は、炎症マーカーであるＩＬ−８及びＰＧＥ２に対して顕著な阻害活性を示す。この特徴的な活性は、抗炎症用途のために意図された皮膚科学的組成物又は抗老化特性若しくは鎮静性化粧用組成物において、これらの物質を活性剤としての使用のために有益なものにする。
【０１２０】
実施例８：本発明による２種のグリコシドの混合物を含む抗老化化粧用エマルジョン
下記の処方の百分率は、最終組成物に対する重量で表している。
−  界面活性剤                            ５
−  脂肪アルコール                        ２
−  ワックス                              １．５
−  オイル                              １１．５
−  シリコーンオイル                      １
−  ポリマー                              ０．３５
−  塩基                                  ０．１５
−  メチルβ−Ｄ−マルトトリオシド        ０．１
−  ドデシルβ−Ｄ−マルトトリオシド      ０．１
−  水                                    １００までの適量
【０１２１】
実施例９：本発明による４種のグリコシドの混合物を含む抗老化セラム
下記の処方の百分率は、最終組成物に対する重量で表している。
−  グリコール                            １６
−  ポリマー                                ９
−  ポリマーゲル                            ８
−  塩基                                    ０．１
−  錯化剤                                  ０．１
−  皮膚軟化剤                              １．８
−  可溶化剤                                ０．３
−  香料                                    ０．１
−  アルコール                              ５
−  メチルβ−Ｄ−マルトシド                ０．０５
−  ドデシルβ−Ｄ−マルトシド              ０．０５
−  メチルβ−Ｄ−マルトトリオシド          ０．０５
−  ドデシルβ−Ｄ−マルトトリオシド        ０．０５
−  水                                    １００までの適量
【０１２２】
実施例１０：本発明による２種のグリコシドを含む抗老化ローション
下記の処方の百分率は、最終組成物に対する重量で表している。
−  グリコール                              ８．５
−  湿潤化剤                                ０．５
−  リン酸緩衝液                            ６
−  錯化剤                                  ０．２
−  塩基                                    ０．５
−  アルコール                              ５
−  可溶化剤                                ０．２
−  香料                                    ０．０５
−  メチルβ−Ｄ−マルトシド                ０．１
−  ドデシルβ−Ｄ−マルトトリオシド        ０．１
−  水                                  １００までの適量
【０１２３】
実施例１１：本発明による４種のアルキルグリコシドの混合物を含む抗老化クリームゲル
下記の処方の百分率は、最終組成物に対する重量で表している。
−  グリコール                            ２１
−  ポリマー                                １．６
−  錯化剤                                  ０．１
−  シリコーン                              １．８
−  皮膚軟化剤                              １．５
−  アルコール                              ２
−  ポリマーゲル                            ０．１
−  塩基                                    ０．０５
−  湿潤化剤                                １．５
−  メチルβ−Ｄ−マルトシド                ０．０５
−  ドデシルβ−Ｄ−マルトシド              ０．０５
−  メチルβ−Ｄ−マルトトリオシド          ０．０５
−  ドデシルβ−Ｄ−マルトトリオシド        ０．０５
−  水                                    １００までの適量