(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
アミノ酸構造フラグメント−ＩＬＧＧＳＤＰＫＨＹＴＧ−を備えるオリゴペプチドを含み、相対分子量範囲が１４００〜５８００である、イカ内臓抽出物であって、
（１）スルメイカ（Ｔｏｄａｒｏｄｅｓ  ｐａｃｉｆｉｃｕｓ）の内臓を撹拌し、破砕し、水を加えて均一に撹拌し、石油エーテルかｎ−ヘキサン、もしくは石油エーテルとｎ−ヘキサンの混合溶剤で脱脂し、有機溶剤層を除去し、水層を室温下に１〜３時間放置し、５０〜６０℃で１〜３時間加熱し、温度５０〜６０℃の水を加え、ｐＨ８．０〜８．５に調節し、その後５０〜６０℃に保温した状態において、原料１ｇ当たり２０００〜３０００ユニットの比率によりアルカラーゼ（登録商標）で１〜３時間酵素分解させた後、原料１ｇ当たり２０００〜３０００ユニットの比率によりトリプシンで１〜３時間酵素分解させ、不溶性物質を除去して酵素分解液を得る工程、および
（２）手順（１）で得られた酵素分解液を、分画分子量１８０００Ｄａ限外ろ過膜でろ過し、次にＳｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ−２５ゲルクロマトグラフィーで精製して、オリゴペプチドを得る工程により調製して得られることを特徴とするイカ内臓抽出物。
【請求項２】
手順（２）で得られたオリゴペプチド１０００ｇにつきソルビン酸カリウム０．０２５〜０．０５０ｇを加え、均一に撹拌して乾燥させることを特徴とする請求項１に記載のイカ内臓抽出物。
【請求項３】
アミノ酸構造フラグメント−ＩＬＧＧＳＤＰＫＨＹＴＧ−を備えるオリゴペプチドを含み、相対分子量範囲が１４００〜５８００である、イカ内臓抽出物の調製方法であって、
（１）スルメイカ（Ｔｏｄａｒｏｄｅｓ  ｐａｃｉｆｉｃｕｓ）の内臓を撹拌し、破砕し、水を加えて均一に撹拌し、石油エーテルかｎ−ヘキサン、もしくは石油エーテルとｎ−ヘキサンの混合溶剤で脱脂し、有機溶剤層を除去し、水層を室温下に１〜３時間放置し、５０〜６０℃で１〜３時間加熱し、温度５０〜６０℃の水を加え、ｐＨ８．０〜８．５に調節した後、５０〜６０℃に保温した状態において、原料１ｇ当たり２０００〜３０００ユニットの比率によりアルカラーゼ（登録商標）で１〜３時間酵素分解させた後、原料１ｇ当たり２０００〜３０００ユニットの比率により、トリプシンで１〜３時酵素分解し、不溶性物質を除去して酵素分解液を得る工程、および
（２）手順（１）で得られた酵素分解液を、分画分子量１８０００Ｄａ限外ろ過膜でろ過し、次にＳｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ−２５ゲルクロマトグラフィーで精製して、オリゴペプチドを得る工程を含むことを特徴とするイカ内臓抽出物の調製方法。
【請求項４】
手順（２）で得られたオリゴペプチド１０００ｇにつきソルビン酸カリウム０．０２５〜０．０５０ｇを加え、均一に撹拌して乾燥させることを特徴とする請求項３に記載のイカ内臓抽出物の調製方法。
【請求項５】
全質量分率１００％として計算すると、請求項２に記載のイカ内臓抽出物６％〜８％、大豆粕粉末５０％〜６０％、魚粉３％〜６％、コーンミール２７％〜３３％及び造粒用でん粉２％〜５％を含むことを特徴とする請求項１に記載のイカ内臓抽出物を含有する混合物。
【請求項６】
請求項５に記載の混合物の海洋水産飼料としての応用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は新規オリゴペプチドに関し、具体的には、イカ内臓から抽出したオリゴペプチド及びその調製方法、さらに、この物質の混合物及び該混合物の海洋水産養殖における飼料タンパク源としての使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
我が国の遠洋漁業の迅速な発展に伴い、イカの漁獲量は年々増加し、２００９年のイカ漁獲量は３０万トンを超え、我が国の主要な水産加工原料になっている。しかし我が国のイカ加工の技術水準は低く、加工処理で松かさイカ、干物、イカ塩辛、缶詰及び調味料などの製品を得た後、一般に２０％〜３０％の廃棄物（内臓、頭、足、表皮、イカスミなど）が生じるが、これら廃棄物はタンパク質、脂肪、多糖などの栄養物質を豊富に含んでおり、珠海市出入国検験検疫局の呉莉敏の研究（非特許文献１）によると、イカ内臓１００ｇ当たりには、脂肪２１．１５ｇ、タンパク質２１．２４ｇ、カルシウム５１．４６ｍｇ、鉄６０９．０７μｇ、リン９５．８８μｇなどが含まれている。ただしこれらの物質は極めて腐乱変質しやすい上に人体に有害な重金属カドミウムを含んでいる。通常はこれら廃棄物の処理方法は埋めてしまうことであるが、これは漁業資源の大きな浪費であるだけでなく、環境汚染の問題もはらんでいる。従って、イカ廃棄物を如何に効果的に処理しその価値を高め総合的に利用するかが、国民と社会にますます重視されるようになってきている。
【０００３】
中国水産科学院黄海水産研究所の王彩理ら（非特許文献２）は、バナメイエビに対するイカ内臓液化タンパクの摂餌誘引性について研究し、イカ内臓スラリーの摂餌誘引効果が最も高く、ベタイン、タウリン、アリシンより強いことを発見した。上海水産品加工技術開発センターの王建中ら（非特許文献３）は、イカ内臓の総合利用研究において、イカ内臓とその他の廃棄物を利用し自己酵素による加水分解を行うことで、イカ油や内臓加水分解液を開発すると共に、加水分解液からカドミウムを除去するという難題も解決した。中国海洋大学水生生物製品安全性実験室の劉春娥ら（非特許文献４）は、イカ内臓タンパク質の酵素分解技術の研究において、アミノ酸収率を主な指標とし、様々なプロテアーゼを用いてイカ内臓タンパク質の加水分解技術研究を行い、中性プロテアーゼ、アルカリプロテアーゼ、トリプシン、パパインには良好な分解効果があり、アミノ酸転換率は５０％以上に達することを示した。浙江工商大学の励建栄らの特許であるアメリカオオアカイカ内臓の一種の総合利用技術（中国特許出願第２００６１００５３３７２．６号）では、イカ内臓を蒸煮、酵素液化、加熱、遠心分離するなどの手順により得られた下層イカポリペプチドから、水産動物飼料タンパク源に用いるイカペーストを作製し、クルマエビへの食餌試験を行うことにより、イカペーストを添加すると摂餌量が明らかに増加し、幼エビの生存率と体重とが高まることが示されている。福建融▲しん▼海生物技術有限公司の蘇祖鳳の特許であるイカ内臓を用いた水産飼料摂餌誘引物質の生産方法（中国特許出願第２００８１００７１０７３．４号）では、イカ内臓を蒸煮、静置、自然酵素分解発酵することにより、油分を分離した後の沈殿に８０〜９０℃と６０〜６５℃との二回、低温真空濃縮を行っている。
【０００４】
既存の飼料タンパク源の製造技術は主に、酵素分解後に高温蒸煮、濃縮する方法が取られているが、こうした工程では、タンパク質が変性しやすく、コラーゲンが生成され、栄養成分が低下するばかりか、水産動物に対する製品の摂餌誘引性が大きく損なわれてしまう。蘇祖鳳らの方法を採用し、ＳＪＮ２−２０００複効蒸発器を利用して酵素分解液に二次濃縮を行い、蒸発温度を９０℃以下に制御し、濃縮温度を大きく下げたとしても、やはりこの難題を根本から解決することはできない。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】呉莉敏、『農産品加工』、（中国）、２００７年、（８）：  ９４−９６
【非特許文献２】王彩理ら、『水産養殖』、（中国）、２００３年、第２４巻、第５号、ｐ．４０−４１
【非特許文献３】王建中ら、『中国海洋薬物』、（中国）、１９９９年、第１巻、ｐ．５５−５８
【非特許文献４】劉春娥ら、『食品工業科技』、（中国）、２００４年、第９巻、第２５号、ｐ．８３−８６
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明の目的は、高温蒸煮方法を放棄し、限外ろ過膜（ＵＦ膜）を利用してイカ内臓から新規オリゴペプチドを抽出することであり、もう一つの目的は、このオリゴペプチドの調製方法を開発すること、さらにこのオリゴペプチドを含む混合物とその使用法を開発することである。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
我々は、スルメイカ（Ｔｏｄａｒｏｄｅｓ  ｐａｃｉｆｉｃｕｓ）内臓を有機溶剤で脱脂した後、アルカラーゼ（登録商標）とトリプシンで酵素分解し、その後、限外ろ過膜を用いて脱脂済み酵素分解液をろ過し、さらにゲルクロマトグラフィーで精製し、アミノ酸構造フラグメント−ＩＬＧＧＳＤＰＫＨＹＴＧ−を含むオリゴペプチドを得た後、これに、ソルビン酸カリウムを加えて均一に撹拌し、乾燥させた。本発明のオリゴペプチド、大豆粕粉末、コーンミール、でん粉、魚粉などを配合比率に従い造粒して得られた混合物は海洋水産養殖飼料のタンパク源として使用でき、魚・エビ・貝類などに大変良い摂餌誘引作用がある。これにより本発明の目的を実現した。
【０００８】
本発明のイカ内臓から抽出したオリゴペプチドは、アミノ酸構造フラグメント−ＩＬＧＧＳＤＰＫＨＹＴＧ−を含み、相対分子量範囲は１４００〜５８００であり、下記に述べる方法により調製して得られることを特徴とする。（１）スルメイカ内臓を破砕し、水を加えて均一に混ぜ、石油エーテルかｎ−ヘキサン、もしくは石油エーテルとｎ−ヘキサンの混合溶剤で脱脂し、有機溶剤層を除去し、水層を室温下に１〜３時間放置し、５０〜６０℃で１〜３時間加熱し、温度５０〜６０℃の水を加え、ｐＨを８．０〜８．５に調節し、その後５０〜６０℃の温度保持状態において、原料１ｇ当たり２０００〜３０００ユニットの比率によりアルカラーゼ（登録商標）で１〜３時間酵素分解させた後、原料１ｇ当たり２０００〜３０００ユニットの比率によりトリプシンで１〜３時間酵素分解させ、不溶性物質を除去し、酵素分解液を得る。（２）手順（１）で得られた酵素分解液を分画分子量１８０００Ｄａの限外ろ過膜でろ過し、次にゲルクロマトグラフィーで分離・精製して、アミノ酸構造フラグメント−ＩＬＧＧＳＤＰＫＨＹＴＧ−を含むオリゴペプチドを得る。
【０００９】
本発明のイカ内臓から抽出したオリゴペプチドは、ソルビン酸カリウムなどの防腐剤を加えることもでき、手順（２）で得られたオリゴペプチド１０００ｇ当たりソルビン酸カリウム０．０２５〜０．０５０ｇを加え、均一に混ぜて乾燥させることが好ましい。試験調製においては、オリゴペプチドの純度が５１％〜６３％の時が、コスト制御に有利である。
【００１０】
本発明のイカ内臓から抽出したオリゴペプチドの調製方法は、以下の手順を含むことを特徴とする。
（１）スルメイカの内臓を破砕し、水を加えて均一に混ぜ、石油エーテルかｎ−ヘキサン、もしくは石油エーテルとｎ−ヘキサンの混合溶剤で脱脂し、有機溶剤層を除去し、水層を室温下に１〜３時間放置し、５０〜６０℃で１〜３時間加熱し、温度５０〜６０℃の水を加え、ｐＨを８．０〜８．５に調節し、その後５０〜６０℃の温度保持状態において、原料１ｇ当たり２０００〜３０００ユニットの比率によりアルカラーゼ（登録商標）で１〜３時間酵素分解させた後、原料１ｇ当たり２０００〜３０００ユニットの比率によりトリプシンで１〜３時間酵素分解させ、不溶性物質を除去し、酵素分解液を得る。
（２）手順（１）で得られた酵素分解液を分画分子量１８０００Ｄａの限外ろ過膜でろ過し、次にゲルクロマトグラフィーで分離・精製して、アミノ酸構造フラグメント−ＩＬＧＧＳＤＰＫＨＹＴＧ−を含むオリゴペプチドを得る。
【００１１】
本発明のイカ内臓から抽出したオリゴペプチドの調製方法は、手順（２）で得られたオリゴペプチドに、ソルビン酸カリウムなどの防腐剤を加えることもでき、オリゴペプチド１０００ｇ当たりソルビン酸カリウム０．０２５〜０．０５０ｇを加え、均一に混ぜて乾燥させることが好ましい。
【００１２】
イカ内臓から抽出したオリゴペプチドの分子質量計算方法： 
ｌｏｇＭｗ＝−ｂＫａｖ＋ｃ
ここで、実効分配係数Ｋａｖは排除された程度を示し、Ｍｗは物質の分子質量を示し、ｂ、ｃは定数でゲルカラム自身の性質に関係し、標準タンパク質試料によりｂ、ｃを計算することができる。
【００１３】
ゲルクロマトグラフィーの分離・精製及び分子質量測定の操作は以下の通りである。
（１）中・大型のゲルクロマトグラフ・カラムを用いて分離・精製を行う。スルメイカの内臓を上記の本発明方法に従い脱脂処理した後、酵素分解を行い、分画分子量１８０００Ｄａの限外ろ過膜で、イカ内臓の酵素分解液をろ過する。中・大型のゲルクロマトグラフを用いて分離し、このとき、ゲルクロマトグラフ型番号：Ｓｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ−２５、カラム型番号：２００×１０ｃｍ、緩衝液は０．０５ｍｏｌ／Ｌリン酸塩緩衝液（０．１６ｍｏｌ／Ｌ  ＮａＣｌを含む）、ｐＨ＝７．０、溶媒流速は１０ｍＬ／ｍｉｎ、ベッドボリュームは約１２０００ｍＬであり、試料を濃度５０〜１００ｍｇ／ｍＬの溶液に調合し、０．４５μｍの精密ろ過膜でろ過し、５００〜１０００ｍＬを取って試料注入し分離・精製し、下記に述べる手順の方法で分析測定する。
（２）小型ゲルクロマトグラフを用いて分子質量の測定を行う。分析条件選択：ゲルクロマトグラフ型番号: Ｓｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ−２５、カラム型番号：１００×１ｃｍ、緩衝液は０．０５ｍｏｌ／Ｌリン酸塩緩衝液(０．１６  ｍｏｌ／ＬＮａＣｌを含む)、ｐＨ＝７．０、溶媒流速０．２０ｍＬ／ｍｉｎ、測定波長２８０ｎｍ、ベッドボリューム約６０ｍＬ。
（３）標準タンパク質試料を濃度５ｍｇ／ｍＬの溶液に調合し、０．３０μｍの精密ろ過膜でろ過し、０．５ｍＬを取って試料注入し、（Ｋａｖ、ｌｏｇＭｗ）の対応点3つ（２８．５，  ４．１６）、（５３．７，３．１３）、（７４．９，２．２６）を得、計算により公式：ｌｏｇＭｗ＝−０．０４１Ｋａｖ  ＋５．３３（Ｒ２＝０．９９９８）を得た。
（４）手順（１）で分離・精製したスルメイカ内臓の酵素加水分解液を、０．３０μｍの精密ろ過膜でろ過した後、濃度を１０ｍｇ／ｍＬに調整する。小型ゲルクロマトグラフを用いて、０．５ｍＬを取り試料注入し、イカ内臓から抽出したオリゴペプチドの直線状の（Ｋａｖ、ｌｏｇＭｗ）点、それぞれ（５３．３，３．１５）、（３８．２，３．７６）を得、対応する分子質量を計算すると１４００及び５８００であった。 
【００１４】
本発明のイカ内臓から抽出したオリゴペプチドを含む混合物は、全質量分率１００％で計算すると、イカ内臓から抽出したオリゴペプチド６％〜８％、大豆粕粉末５０％〜６０％、魚粉３％〜６％、コーンミール２７％〜３３％、及び造粒用でん粉２％〜５％からなることを特徴とする。使用する大豆粕粉末、魚粉、コーンミール及び造粒用でん粉は水産飼料用であり、市販されている。
【００１５】
本発明の混合物の調製方法では、上記の比率により、イカ内臓から抽出したオリゴペプチド、大豆粕粉末、魚粉、コーンミールを均一に混ぜ、配合材料：水＝１：４（質量比）の比率で適量の水を加え、均一に混ぜ、噴霧乾燥し、乾燥エキス粉末を得、配合比率により乾燥エキス粉末に造粒用でん粉を加えて造粒し、乾かして混合物を得る。
【発明の効果】
【００１６】
本発明の混合物は、海洋水産養殖（海洋魚類、エビ、貝類などを含む）飼料のタンパク源として使用でき、特に水産海洋魚類の飼料タンパク源に適している。
【００１７】
本発明のイカ内臓から抽出したオリゴペプチドの調製過程における温度は６０℃を超えず、乾燥時には噴霧乾燥装置を用いて乾燥し、短時間で効果がよいため、この物質が加水分解又は変性しないことを保証している。本発明の混合物は魚類に強い食餌誘引性があり、その主な成分であるイカ内臓から抽出したオリゴペプチドには、強力な魚臭があり、水産養殖飼料のタンパク源に最適である。本発明が提供する混合物を利用して海洋魚類を養殖すると、魚類の摂餌量を大幅に高め、魚類個体の単位重量を増やすことができる。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
具体的な実施方法：
以下の実施例は本発明についてのさらなる説明であり、本発明に対する制限ではない。実施例中の主な原材料、主な計器設備、主な生物学的及び化学的試薬などは以下の通りである。
【００１９】
主な原材料：
広州市黄沙海産品市場からスルメイカ（Ｔｏｄａｒｏｄｅｓ  ｐａｃｉｆｉｃｕｓ）内臓を収集し、−１５℃で保存し、使用の１２時間前に室温で解凍した。「大江牌」通常魚用配合飼料は上海大江（集団）股▲ふん▼有限公司より購入した。使用した大豆粕粉末、コーンミールは済寧双華工貿有限公司より購入、使用した魚粉は栄成新希望魚粉有限公司より購入した。
【００２０】
主な計器設備：
発酵槽：ＬＡＢＦＯＲＳ実験室卓上式小型発酵槽、生産地；スイス
均質装置：予華Ａ８Ｇ型、生産地；河南省鞏義市
据置型遠心分離機：Ｂｅｃｈｍａｎ  Ｊ２−Ｈｓ高速冷凍遠心分離機、生産地；米国
中・大型ゲルクロマトグラフ型番号：Ｓｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ−２５、カラム型番号：２００×１０  ｃｍ、緩衝液は０．０５ｍｏｌ／Ｌリン酸塩緩衝液（０．１６  ｍｏｌ／Ｌ  ＮａＣｌを含む）、ｐＨ＝７．０、溶媒流速５０ｍＬ／ｍｉｎ、ベッドボリューム約１２０００ｍＬ
８３５−５０アミノ酸自動分析計（日本日立社）
クロマトグラフＷａｔｅｒｓ  ２６９０、質量分析装置Ｗａｔｅｒｓ  Ｐｌａｔｆｏｒｍ  ＺＭＤ  ４０００
【００２１】
主な生物学的及び化学的試薬：
トリプシン：１００万ユニット（酵素活性）／ｇ、大連保税区聯合博泰生物技術有限公司、製品番号：ＲＭ００１０２
アルカラーゼ（登録商標）（Ａｌｃａｌａｓｅ）：５０万ユニット（酵素活性）／ｇ、Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓ社
有機試薬：有機試薬は広州試剤公司から購入（分析用試薬）
無機試薬：無機試薬は広州試剤公司から購入（分析用試薬）
純水：実施例で用いた水は全て純水であり、ＭｉｎｉＱ純水調製システムで調整した。
【実施例１】
【００２２】
スルメイカ内臓２０ｋｇを収集し、予華Ａ８Ｇ型均質装置で撹拌・破砕し、水２Ｌを加え、さらに沸点範囲６０〜９０℃の石油エーテル（２０Ｌ）を加えて撹拌・脱脂し、石油エーテル層を除去し、水層を室温に３時間放置し、５０℃のオーブンで３時間加熱した。温度５０℃の水８Ｌを加え、均一に混ぜ、飽和ＮａＯＨ溶液でｐＨを８．５近くに調節し、さらに５ｍｏｌ／Ｌ濃度のＮａＯＨ溶液でｐＨを８．５に調節し、５０℃の温度保持状態において、イカ内臓を発酵槽に入れ、原料３０００ユニット／ｇで６×１０７ユニットのアルカラーゼ（登録商標）を加えて３時間酵素分解させた後、さらに原料３０００ユニット／ｇＫで６×１０７ユニットのトリプシンを加えて３時間酵素分解させた。Ｂｅｃｈｍａｎ  Ｊ２−Ｈｓ高速冷凍遠心分離機を用いて５０００回転／分で遠心分離し、不溶性物質を除去した。分画分子量１８０００Ｄａの限外ろ過膜で、脱脂した酵素分解液をろ過すると、オリゴペプチドを豊富に含む成分が得られ、次に中・大型Ｓｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ−２５ゲルクロマトグラフで分離・精製すると、アミノ酸構造フラグメント−ＩＬＧＧＳＤＰＫＨＹＴＧ−を含むオリゴペプチドが得られた。オリゴペプチド１０００ｇ当たりソルビン酸カリウム０．０２５ｇの割合で、ソルビン酸カリウム０．００５９ｇを加え、乾燥後、イカ内臓から抽出したオリゴペプチドを得た。
【００２３】
イカ内臓から抽出したオリゴペプチド８０ｇ、大豆粕粉末６００ｇ、魚粉３０ｇ、コーンミール２７０ｇを量って取り、水４Ｌを加え、均一に混ぜた後、噴霧乾燥し、乾燥エキス粉末を得、造粒用でん粉２０ｇを量って取り、造粒し、乾かして混合物を得た。
【実施例２】
【００２４】
スルメイカ内臓２０ｋｇを収集し、予華Ａ８Ｇ型均質装置で撹拌・破砕し、水１２  Ｌを加え、さらに石油エーテルとｎ−ヘキサン混合溶剤（１：１）２０Ｌを加えて撹拌・脱脂し、石油エーテル層を除去し、水層を室温に１時間放置し、６０℃のオーブンで１時間加熱した。温度６０℃の水８Ｌを加え、均一に混ぜ、飽和ＮａＯＨ溶液でｐＨを８．０近くに調節し、さらに希薄濃度のＮａＯＨ溶液でｐＨを８．０に調節した。６０℃の温度保持状態において、イカ内臓を発酵槽に入れ、４×１０７ユニットのアルカラーゼ（登録商標）を加えて１時間酵素分解させた後、さらに４×１０７ユニットのトリプシンを加えて１時間酵素分解させた。Ｂｅｃｈｍａｎ  Ｊ２−Ｈｓ高速冷凍遠心分離機を用いて５０００回転／分で遠心分離し、不溶性物質を除去した。分画分子量１８０００Ｄａの限外ろ過膜で、脱脂した酵素分解液をろ過すると、オリゴペプチドを豊富に含む成分が得られ、次に中・大型Ｓｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ−２５ゲルクロマトグラフで分離・精製すると、アミノ酸構造フラグメント−ＩＬＧＧＳＤＰＫＨＹＴＧ−を含むオリゴペプチドが得られた。オリゴペプチド１０００ｇ当たりソルビン酸カリウム０．０５０ｇの割合で、ソルビン酸カリウム０．００７８ｇを加え、乾燥後、イカ内臓から抽出したオリゴペプチドを得た。
【００２５】
イカ内臓から抽出したオリゴペプチド６０ｇ、大豆粕粉末５００ｇ、魚粉６０ｇ、コーンミール３３０ｇを量って取り、水４Ｌを加え、均一に混ぜた後、噴霧乾燥し、乾燥エキス粉末を得、造粒用でん粉５０ｇを量って取り、造粒し、乾かして混合物を得た。
【実施例３】
【００２６】
実施例１のイカ内臓から抽出したオリゴペプチド６５ｇ、大豆粕粉末５３５ｇ、魚粉３０ｇ、コーンミール３３０ｇを量って取り、水４Ｌを加え、均一に混ぜた後、噴霧乾燥し、乾燥エキス粉末を得、造粒用でん粉４０ｇを量って取り、造粒し、乾かして混合物を得た。  
【実施例４】
【００２７】
実施例２のイカ内臓から抽出したオリゴペプチド７５ｇ、大豆粕粉末５７５ｇ、魚粉５０ｇ、コーンミール２８０ｇを量って取り、水４Ｌを加え、均一に混ぜた後、噴霧乾燥し、乾燥エキス粉末を得、造粒用でん粉を２０ｇ量って取り、造粒し、乾かして混合物を得た。
【実施例５】
【００２８】
アミノ酸組成分析：
実施例１と２で得られた、イカ内臓から抽出したオリゴペプチドをそれぞれ加水分解管に入れ、６ｍｏｌ／Ｌの塩酸溶液を加え、真空密封した。１１０℃で２４ｈ加水分解させ、冷ましてから定容・ろ過・蒸気乾燥し、０．０２  ｍｏｌ／Ｌの塩酸溶液を加えて空気中に３０  ｍｉｎ置き、８３５−５０アミノ酸自動分析計（日本日立社）を用いて、トリプトファン以外のアミノ酸含有量を測定し、次の結果を得た。
Ｉ：Ｌ：Ｇ：Ｓ：Ｄ：Ｐ：Ｋ：Ｈ：Ｙ：Ｔ＝１．０５：１．０２：３．０１：０．９６：０．９８：１．００：０．９７：０．９８：０．９５：１．００
【００２９】
液体クロマトグラフィー／質量分析計（ＬＣ―ＭＳ）を用いた分子質量の測定：
液体クロマトグラフフィー条件：クロマトグラフＷａｔｅｒｓ  ２６９０、検出器：Ｗａｔｅｒｓ  ９９６、分析カラムＬｉｃｈｒｏｓｐｈｅｒ  Ｃ−１８  （２．６×２５０ｍｍ）、移動相：メタノール−水−０．５％酢酸勾配溶出、測定波長２２０ｎｍ、カラム温度３０℃、試料注入量、１０μＬ、流速０．３ｍＬ／ｍｉｎ。質量分析条件：質量分析装置Ｗａｔｅｒｓ  Ｐｌａｔｆｏｒｍ  ＺＭＤ  ４０００、イオン化法ＥＳＩ＋、キャピラリー電圧４．８０ｋＶ、コーン電圧３２  Ｖ、Ｇａｓ  Ｆｌｏｗ：４．２Ｌ／ｈ、イオン源温度１２０℃、溶媒脱気温度２５０℃、質量範囲：１０００〜８０００ｍ／ｚ、光電子増倍管（ＰＭＴ）電圧６７０Ｖ、Ａｎａｌｙｓｅｒ  Ｖａｃｕｕｍ２．６ｅ〜５ｍＢａｒ。
【００３０】
液体クロマトグラフィー／質量分析計（ＬＣ―ＭＳ）を用いてオリゴペプチドの分子質量を測定する際、分子イオンピークは現れず、一部の基を除去した後のフラグメントピークのみ得られた。
【００３１】
アミノ酸配列測定：エドマン（Ｅｄｍａｎ）分解法でイカオリゴペプチドのアミノ酸配列を測定した。配列解析によりオリゴペプチドは−ＩＬＧＧＳＤＰＫＨＹＴＧ−の順序の連結構造を持つことが示された。
【００３２】
イカ内臓から抽出したオリゴペプチドのアミノ酸について、アミノ酸組成分析、ゲルクロマトグラフィー分析、オリゴペプチド分子質量測定及びアミノ酸配列測定を行ったことにより、その中に−ＩＬＧＧＳＤＰＫＨＹＴＧ−オリゴペプチド構造フラグメントが含まれ、相対分子質量は１４００から５８００の間であるという結果が得られた。
【実施例６】
【００３３】
ボラの食餌実験
２００９年４月、１齢のボラ５０尾を、本発明の飼料タンパク源を添加しない対照群（１０尾）、実施例１〜３の混合物を１０％添加した実験群（各１０尾）、及び新鮮なイカ内臓液を１０％添加した実験群（１０尾）に分け、かつ同一の一般飼料（「大江牌」通常魚用配合飼料）を給餌した。１．５立方メートル程度の池５つに魚を入れ、最初の一ヶ月は毎日水を１／５換え、後の半月は毎日水を１／３換え、７日、１５日、３０日及び４５日後の総体重と相応の時間間隔内の飼料の総消費量を記録し、これらの重量の変化状況と飼料の消費状況を分析した。このうち１７日目に対照群のボラが１尾死亡したため、データは１０尾に換算した後のデータである。結果は表１の通りである。新鮮なイカ内臓液は、イカ内臓を３時間自己酵素により分解させて得られた、未加工の物質である。表１から明確に見て取れるように、本発明の飼料タンパク源を添加しない対照群及び一般の新鮮なイカ内臓酵素分解液を添加した実験群と比べ、イカ内臓から抽出したオリゴペプチドを含む本発明の混合物は、飼料タンパク源としてボラの摂餌量を大幅に高め、ボラ個体の単位重量を増やすことができた。
【００３４】
【表１】
0005410612.tif 000002
【実施例７】
【００３５】
バスの食餌実験
２００９年８月、生後４５日のオオクチバス５０尾を、本発明の飼料タンパク源を添加しない対照群（１０尾）、実施例１〜３の混合物を１０％添加した実験群（各１０尾）、及び新鮮なイカ内臓液１０％を添加した実験群（１０尾）に分け、かつ同一の一般飼料（「大江牌」通常魚用配合飼料）を給餌した。１．５立方メートル程度の池５つに魚を入れ、最初の一ヶ月は毎日水を１５％換え、後の一ヶ月は毎日水を２０％換え、７日、１５日、３０日及び６０日後の総体重と相応の時間間隔内の飼料の総消費量を記録し、これらの重量の変化状況と飼料の消費状況を分析した。このうち５日目に対照群のバスが１尾死亡したため、データは１０尾に換算した後のデータである。結果は表２の通りである。新鮮なイカ内臓液は、イカ内臓を３時間自己酵素により分解させて得られた、未加工の物質である。表２から明確に見て取れるように、本発明の飼料タンパク源を添加しない対照群及び一般の新鮮なイカ内臓酵素分解液を添加した実験群と比べ、イカ内臓から抽出したオリゴペプチドを含む本発明の混合物は、飼料タンパク源としてバスの摂餌量を大幅に高め、バス個体の単位重量を増やすことができた。
【００３６】
【表２】
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