(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ａ型β溶血性連鎖球菌に対するワクチンであって、単離したポリペプチドを含み：
（ｉ）前記ポリペプチドに含まれる化膿連鎖球菌のエピトープがＴエピトープ及びＢエピトープのみであり；
（ｉｉ）前記ポリペプチドのアミノ酸配列が、Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｇｌｎ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌｎ−Ａｓｎ−Ｌｙｓ−Ｉｌｅ−Ｓｅｒ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｇｌｎ−Ｖａｌ（配列番号１）で表されるアミノ酸配列を含む；
ことを特徴とするワクチン。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願人は、２００５年３月２４日に出願された「Ａ型β溶血性連鎖球菌に対するワクチン及びその取得方法」に係る特許出願ＰＩ０５０１２９０−２を持っている。この特許は、その目的が同じ新規なワクチン及び該新規なワクチンを得る新規な方法に係る。
【背景技術】
【０００２】
前特許出願ＰＩ０５０１２９０−２において、Ａ型β溶血性連鎖球菌のワクチンの技術水準について十分に記述した。本発明の主題は同じであるため、この技術水準を再度記述することにする。
【０００３】
この分野において知られているように、リウマチ熱（ＲＦ）はＡ型β溶血性連鎖球菌や化膿連鎖球菌に感染することで引き起こされる。この病気は、遺伝的に感受性が高く、適切な治療を施されなかった３歳から１８歳の子供に現れる。この病気の初期の臨床的所見は多発性関節炎（大きな関節の痛み）、次の段階ではシドナム舞踏病とリウマチ性心炎の２つの主な所見が現れる。
【０００４】
舞踏病は、リウマチ熱（ＲＦ）を持つ患者の２０から３０％に発症する。影響を受ける器官は中枢神経系（ＣＮＳ）であり、不随意運動と精神障害が認められる。これらの症状は適切な処置により消失する。
【０００５】
リウマチ性心炎は、リウマチ熱（ＲＦ）を持つ患者の約３０から４５％に発症する。初期症状は心筋の急性心炎を特徴とし、重大影響を及ぼすような、進行性の永久的な弁組織の損傷を引き起こす。主に影響を受ける弁は僧帽弁、大動脈弁であり、慢性リウマチ性心疾患（ＲＨＤ）を引き起こす。進行したＲＨＤの治療は、外科的なものになる。７歳から１２歳というこの病気の発症年齢を考慮すると、弁組織の矯正手術は頻繁に行わなければならず、さもなければ人工弁に置き換えなければならない（Ｓｎｉｔｃｏｗｓｋｉ，１９９６）。
【０００６】
ブラジルでは、子供の心臓手術の９０％はリウマチ性弁損傷に起因する。また、大人では心臓手術の３０％に相当する（保健省データ，ＤＡＴＡ−ＳＵＳ）。
【０００７】
疫学的特徴
【０００８】
発展途上国及び低開発国では未だに、リウマチ熱（ＲＦ）と慢性リウマチ性心疾患（ＲＨＤ）は公衆衛生問題として考えられている。ＷＨＯの最近の報告によると、世界ではリウマチ熱（ＲＦ）の患者は５０００万人以上いると推測され、慢性リウマチ性心疾患（ＲＨＤ）患者は１４００万人いるとの記録がある。イラン、タイ、中国、ボリビア、パキスタン、インド、オーストラリア、アルジェリア、エジプト、モロッコでは、慢性リウマチ性心疾患（ＲＨＤ）の罹患率は、リウマチ熱（ＲＦ）をもつ子供１０００人に対し１０人以上である。ブラジルでは、１０００人のリウマチ熱（ＲＦ）患者のうち、慢性リウマチ性心疾患（ＲＨＤ）患者の小児は平均６．５人である。ＷＨＯが２００４年に発表したところによると、年間の連鎖球菌類への感染は１８００万件以上であり、そのうち５０万件以上は死亡が確認されている。
【０００９】
発症原因
【００１０】
リウマチ熱（ＲＦ）は、Ａ型β溶血性連鎖球菌や化膿連鎖球菌への免疫的防御反応によって引き起こされる自己免疫疾患と考えられている。そして、それは、生物学的模倣メカニズムを介して、個体（この病気に対する感受性を有する）内において、その生物の自己タンパク質に対する攻撃反応を引き起こす。
【００１１】
現在では、抗体とＴリンパ球に媒介される免疫は、ヒト組織（心臓、関節、腎臓、脳）のタンパク質との交差反応に関与しているということが知られている（Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍにより改訂、２０００年；Ｇｕｉｌｈｅｒｍｅら，１９９５年）。これらの交差反応は特に連鎖球菌のＭタンパク質に、構造的又はアミノ酸残基的に類似していることに起因している。
【００１２】
Ｍタンパク質の配列は、１９８０年代に解析され公表されている（ＭａｎｊｉｌａとＰｈｉｌｉｐｉｓ，１９８４，及び  Ｍｉｌｌｅｒら，１９９８）。いくつかのグループによって発表された多くの科学的業績により、病気を引き起こす領域の知見が大いに進歩した。
【００１３】
Ｍタンパク質は、アミノ酸残基の反復配列を含んでおり、アミノ末端部分とカルボキシ末端部分に細分化される。アミノ末端部分には連鎖球菌のセロタイプを決めているアミノ酸残基がある。カルボキシ末端部分は異なるセロタイプ間によく保存されており、２回以上の繰り返しを持つアミノ酸グループがある（Ｆｉｓｃｈｅｔｔｉ，１９９１）。
【００１４】
アミノ末端領域のいくつかのセグメントは記載されている。なぜなら、それらは、特に、心臓組織タンパク質との交差反応（Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍにより改訂、２０００年；Ｇｕｉｌｈｅｒｍｅら，２００５年）を介して、該疾病（リウマチ熱及び／又は慢性リウマチ性心疾患）の発症に関与しているからである。
【００１５】
８０年代までは、連鎖球菌とヒト組織のタンパク質の交差反応は、抗体媒介性の免疫反応のみに起因すると考えられてきたことは興味深い。ＣＤ４陽性Ｔ細胞優勢の心組織中では炎症性浸潤を呈するという記述 (Ｒａｉｚａｄａら，１９８３，Ｋｅｍｅｎｙら，１９８９) から、本出願人は、心臓の傷害はこれらの細胞（ＣＤ４陽性Ｔ細胞）に媒介されるということを証明した。その証拠は、傷害を受けた弁を外科的に形成する際に得られたＲＨＤ患者の、傷害を受けた心組織（心筋と弁）の断片に浸潤しているＴ細胞から単離したタンパク質間の交差反応の免疫応答を検出した（Ｇｕｉｌｈｅｒｍｅら，１９９５）ことである。次に、本出願人は、特にリウマチ性心疾患患者の心組織（心筋、僧帽弁及び／又は大動脈弁）中に、炎症性サイトカイン（インターフェロンγ，ＩＦＮｇ、及び腫瘍壊死因子α，ＴＮＦａ）を生産する多くの単核球が存在することを記載した。この研究に関連のある発見は、心筋中に、炎症を調節するサイトカイン（インターロイキン１０及び４、ＩＬ−１０、ＩＬ−４）を産生する多数の細胞が存在し、弁組織中に、ＩＬ−４調節サイトカインを産生する珍しい細胞が存在するという観察である。この発見は、なぜ連鎖球菌感染による心筋炎がおおよそ４週間で治癒し、僧帽弁及び／又は大動脈弁の損傷が緩やかに、進行的、永続的に続くかを示している（Ｇｕｉｌｈｅｒｍｅら，２００４）。
【００１６】
リウマチ熱が自己免疫疾患であることを考慮すれば、その病因を理解することは、予防の基本である。なぜなら、それは自己免疫疾患を発症させないという意味で、その病原、すなわち、Ａ型β溶血性連鎖球菌や化膿連鎖球菌、に対するワクチンを製造することに注力することにつながるからである。
【００１７】
Ａ型β溶血性連鎖球菌に対しては、すでに様々なワクチンがある。
【００１８】
Ｊａｍｅｓ  Ｂ．Ｄａｌｅ博士（テネシー大学研究財団）は連鎖球菌の特異性を与える、Ｍタンパク質のアミノ末端の配列に基づいてワクチンを製造する研究を行っている。彼はいくつかの研究成果を発表している（Ｂｅａｃｈｅｙら，１９８７；Ｄａｌｅら，１９９３；ＤａｌｅとＣｈａｎｇ，１９９５；Ｄａｌｅら，１９９９，ａ，ｂ，ｃ）。そして、彼はすでに２６種類の異なるセロタイプのモデル動物における応答能の分析をしている。彼のために出願されたいくつかの特許があり、その中に１９９８年９月１０日に出願され、２００４年４月６日に特許になった米国特許第６，７１６，４３３号（「Ａ型連鎖球菌ワクチン」）というものがある。
【００１９】
最近では、博士のグループは６つのセロタイプのＮ末端セグメントを含んだ組換えタンパク質の形態にある、６つの異なるセロタイプを含むワクチン製剤を利用した「第１相試験」の研究成果を発表している。交差反応の対照はヒト組織切片で行われ、体液性応答（抗体により媒介）だけを評価した（Ｋｏｔｌｏｆｆ，２００４）。化膿連鎖球菌の２６種類のセロタイプに対する連鎖球菌の感染を予防するために製造された多価ワクチンは、第ＩＩ相の臨床試験が進んでいる。
【００２０】
Ｖｉｎｃｅｎｔ  Ｆｉｓｃｈｅｔｔｉ教授（ロックフェラー大学）は、連鎖球菌特異性を付与する、Ｍタンパク質のカルボキシ末端残基の配列を基にワクチンを製造する研究を行っている。Ｍ６タンパク質（Ｎ末端及びＣ末端部分）をコードしている遺伝子をクローニングすることにより、このグループは、５６種類の異なる連鎖球菌のセロタイプが、カルボキシ末端領域のアミノ酸配列において相同性を有することを見出した（Ｓｃｏｔｔら，１９８５と１９８６）。Ｆｉｓｃｈｅｔｔｉ教授のグループは、ウサギにＭ６タンパク質のカルボキシ末端領域のペプチドを鼻腔内接種することにより、Ａ型連鎖球菌のコロニーが変化する可能性を示した（ＢｅｓｓｅｎとＦｉｓｃｈｅｔｔｉ，１９８８，ａ  ａｎｄ  ｂ）。ＣＴＢコレラ毒素のサブユニットに共有結合で結合された、共通配列を有する合成ペプチドを有するワクチンを用いることで、彼らは、マウスの血清及び唾液中に、防御活性を有する、Ｍタンパク質に特異的なＩｇＡ抗体の形成を誘導した（ＢｅｓｓｅｎとＦｉｓｃｈｅｔｔｉ，１９９０；  Ｆｌｕｃｋｉｇｅｒら，１９９８）。
【００２１】
その後の研究で、これらの著者らは、Ｍ６タンパク質のＣ末端部分の全配列を含んだワクシニアウイルスをベクターに使用することで、組換えワクチン−ＶＶ：Ｍ６、を製造し、１回の鼻腔内投与で、異種の連鎖球菌のコロニーが形成されないことを示した。皮内免疫は無効であった（Ｆｉｓｃｈｅｔｔｉら，１９８５）。結合のコストが高く、ワクシニアウイルスを鼻腔内接種に利用するので、前記モデルでは、これらの抗体を、安全に効果的にそして経済的にも利用しやすいワクチンとして使用することは制限されている。共生細菌をベクターとして用いた実験も行われた（Ｆｉｓｃｈｅｔｔｉら，１９９３；Ｍｅｄａｇｌｉｎｉら，１９９５）。この共生細菌をワクチンのベクターに用いることは、現在分析中である。予備的結果は、１５０人の健康なボランティアに経口投与又は鼻腔内投与でワクチンを投与した場合、そのベクターは安全で十分許容性があるということが示唆されている（Ｋｏｔｌｏｆｆら，２００５）。
【００２２】
彼の名で出願された特許の中で、１９９５年１月６日に出願され、２００３年８月５日に特許された米国特許第６，６０２，５０７号（「連鎖球菌Ｍタンパク質からの合成ペプチド及びそれから調製されたワクチン」）というものがある。ストレプトコッカス・ゴードニ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｇｏｒｄｏｎｉｉ）の表面上の融合タンパク質と同様に発現するＣ末端部分のワクチン製剤は、現在第Ｉ相臨床試験が行われている（ＷＨＯ，２００６）。
【００２３】
Ｍ．Ｇｏｏｄ教授は、オーストラリアにおいて、ワクチンへ利用できそうなものとして、Ｃ末端部分のペプチドを利用するアプローチをしている。オーストラリアは、原住民であるアボリジニへの連鎖球菌の感染率が高く、そのことによりリウマチ熱の発症率が高い地域である。オーストラリアの研究者たちは、免疫されたマウス中において、オプソニン化した抗体を産生することができる、Ｃ末端の９個のアミノ酸からなるペプチドを同定した。この抗体はまた、健常人やリウマチ性疾患の患者の血清中にも存在する（Ｐｒｕｋｓａｋｏｒｎら，１９９４、Ｂｒａｎｄｔら，１９９７）。最近では、そのグループは、オーストラリアでは一般的なセロタイプのアミノ末端部分のセグメントとカルボキシ末端のセグメントの組合せに関して研究している。これは、Ｊ１４とよばれている（Ｄｕｎｎら，２００２、Ｏｌｉｖｅら，２００２）。そのグループの最新の研究成果では、Ｊ１４セグメント（２９のアミノ酸からなる）は、マウスを用いた実験モデル中での食作用を誘発することのできる防御抗体の発現に有利に働くことが示された。この防御抗体は、オーストラリアで流行していた土地から分離した様々な化膿連鎖球菌の株に対するものである。マウスを用いたｉｎ  ｖｉｖｏでのこれらの実験では、いくつかの製剤において、Ｊ１４ペプチドの防御能力が確認された(Ｖｏｈｒａら，２００５、Ｂａｔｚｌｏｆｆら，２００５、Ｏｌｉｖｅら，２００５)。
【発明の概要】
【００２４】
本発明の目的は、Ａ型β溶血性連鎖球菌に対する新規なワクチン及びその新規な製造方法を提供することである。後者は２つの製剤を提供し、前記方法は、先の特許出願ＰＩ０５０１２９０−２において出願人により考えられていた取得方法を修飾したものである。
【図面の簡単な説明】
【００２５】
本発明の、より正しい認識と多くの利点は、以下の詳細な説明と添付の図を組み合わせることで容易に理解できるであろう。
【図１】添付の図１は、第１のモデル（第１の製剤）において選択された残基の配列を示す。
【図２】添付の図２は、第１のモデル（第１の製剤）において選択された残基の配列を示す。
【発明を実施するための形態】
【００２６】
本発明の目的は、Ａ型β溶血性連鎖球菌に対する新規なワクチン及びその新規な製造方法を提供することである。後者は２つの製剤を提供し、前記方法は、先の特許出願ＰＩ０５０１２９０−２において出願人により考えられていた取得方法を修飾したものである。
【００２７】
短く言うと、エピトープＢの配列は、６２０人（健常人とリウマチ熱保有者）の血清中にある１つのアミノ酸残基が異なる７９の合成ペプチドを分析することで同定された。エピトープＴは、次いで、２５８人（健常人とリウマチ熱保有者）の末梢血の単核細胞を用いることで同定された。そして、エピトープＢを同定するために試験された７９のペプチドから選択された、Ｍタンパク質のカルボキシ末端部分の３８の合成されたペプチドに対する試験がされた（Ｇｕｉｌｈｅｒｍｅら，２００６、特許出願ＰＩ０５０１２９０−２)。
【００２８】
この特許では、以下のものを含む、合成ペプチド及び／又は組換えタンパク質の形態にある２つのワクチンモデルの構築が意図される。
【００２９】
１．１５６ｂｐ（５２のアミノ酸に対応）から成り、エピトープＴに対応する２２残基、並びにそれに続く８個の中間残基及びエピトープＢの２２残基のアミノ酸配列を意図する、Ｍタンパク質のカルボキシ末端領域にあるエピトープＴおよびエピトープＢ、並びに、
【００３０】
２．２６１ｂｐ（８７のアミノ酸に対応）から成り、エピトープＴに対応する２２残基、並びにそれに続く８個の中間残基、ハイブリッドＴ−Ｂエピトープの２７残基及びエピトープＢの２２残基のアミノ酸配列を意図する、Ｍタンパク質のカルボキシ末端領域にあるエピトープＴおよびエピトープＢ。
【００３１】
第１のモデルでは、合成ペプチド及び／又は組換えタンパク質としてのワクチンは、Ｍタンパク質のカルボキシ末端領域（エピトープＴ、８個の中間残基及びエピトープＢ）からの５２のアミノ酸残基のセグメントを含む。
【００３２】
添付の図１は、このモデルで選択された残基の配列を示す。
【００３３】
第２のモデルでは、合成ペプチド及び組換えタンパク質としてのワクチンはＭタンパク質のカルボキシ末端領域（エピトープＴ、８個の中間残基、ハイブリッドＴ−Ｂ、８個の中間残基及びエピトープＢ）の８７個のアミノ酸残基のセグメントを含む。
【００３４】
添付の図２はこのモデルで選択された残基の配列を示す。
【００３５】
これらのＭタンパク質のカルボキシ末端領域からのアミノ酸残基は、抗体及びＣＤ４陽性Ｔ細胞に媒介される応答を誘発させることができ、防御的に働いて自己免疫疾患を引き起こさない。
【００３６】
これらの配列は以前に用いられていたワクチンの調製用のものとは異なる。そのことについては、下に示す。
【００３７】
Ｊａｍｅｓ  Ｂ．Ｄａｌｅは様々なセロタイプのアミノ末端領域を使用した（米国特許第６，７１６，４３３号）。
【００３８】
Ｖｉｎｃｅｎｔ  Ａ．ＦｉｓｃｈｅｔｔｉはＭ６タンパク質のカルボキシ末端領域を使用した（米国特許第６，６０２，５０７号）。それは、６つのグループのポリペプチドからなる。グループ４は、本出願人により選択されたエピトープＴとエピトープＢが含まれたセグメント（Ｇｕｉｌｈｅｒｍｅら，２００６）の１９アミノ酸残基の成分と同一性を有する。
【００３９】
Ｍ．Ｇｏｏｄは、オーストラリアのアボリジニに流行した連鎖球菌株のアミノ末端に結合されたカルボキシ末端領域を使用した。彼は、本出願人により選択されたエピトープＴとエピトープＢ（Ｇｕｉｌｈｅｒｍｅら，２００６）を含むセグメントの１８アミノ酸残基成分との同一性を示した。その中の１４のアミノ酸残基は、Ｖ．Ａ．Ｆｉｓｃｈｅｔｔｉにより同定された、Ｍ６タンパク質のグループ４と共通のものであった。
【００４０】
第１段階：組換えタンパク質の生産のために、５２アミノ酸残基８７アミノ酸残基の領域をクローニングする；
第２段階：実験動物、好ましくはマウスでの試験；
第３段階：安全性試験：  動物試験及びそれに続くインビトロ試験であって、心臓にリウマチ性疾患のある患者の心組織から外科的に摘出した組織片の病巣内Ｔリンパ球の系列を用いた、ワクチンエピトープによる自己抗原性の防止についての試験（細胞増殖試験及びサイトカインの測定）、
からなる革新的なワクチンの新規な製造方法を開示する。
【００４１】
今回革新されたワクチンは、下に示すようなモデル系に対して有利な点をもたらすということで、既存のワクチンとは異なっている。
【００４２】
防御性エピトープの選択は、Ｍ５タンパク質（Ｒｏｂｉｎｓｏｎら，１９９１）を変化させた、公表された配列をもとに行われた。Ｍ５タンパク質は、病原性のあるエピトープ（Ｎ末端領域）とＣ末端領域からのエピトープを評価するための合成ペプチドの調製に使用した（Ｇｕｉｌｈｅｒｍｅら １９９５と２００１）ものであって、該疾病に対して防御することができるものであり、多くのサンプルを用いたｉｎ  ｖｉｔｒｏの試験で評価された（６２０人の血清と２５８人のＴリンパ球を使用）（Ｇｕｉｌｈｅｒｍｅら，２００６）。
【００４３】
カルボキシ末端領域（２４０から３５０の残基）を調べることは、わずか１個のアミノ酸残基が異なる２０アミノ酸からなる７９の合成ペプチドを用いることで行われた。この方法は独特であり防御性をもつタンパク質領域を見つけるために用いられる（Ｇｕｉｌｈｅｒｍｅら，２００６；特許出願ＰＩ０５０１２９０−２）。
【００４４】
交差反応試験は、先に記載したように（Ｇｕｉｌｈｅｒｍｅら，１９９５）、２０人のＲＨＤ患者から弁形成術の手術を行う際に得られた心組織中の浸潤性リンパ球の系列をインビトロで増殖させたものを分析することにより行われた。
【００４５】
合成ペプチドを用いて行った研究は、Ｍ５株のタンパク質の公表された配列に基づいて行ったので、組換えタンパク質は、Ｍ５株で生産した（Ｒｏｂｉｎｓｏｎら，１９９１）。  
【先行技術文献】
【特許文献】
【００４６】
【特許文献１】１９９５年１月６日に出願され、２００３年８月５日に特許された米国特許第６，６０２，５０７号
【特許文献２】１９９８年９月１０日に出願され、２００４年４月６日に特許された米国特許第６，７１６，４３３号
【特許文献３】１９９９年１月２８日に出願され、２００２年３月１９日に特許された米国特許第６，３５８，７０４号
【非特許文献】
【００４７】
【非特許文献１】Beachey EH, Seyer JM, Dale JB: "Protective immunogenecity and T lymphocyte specificity of a trivalent hybrid peptide containing NH2- terminal sequences of types 5, 6 and 24 M proteins synthesized in tandem". J. Exp. Med. 1987; 166:647-656.
【非特許文献２】Bessen D, Fischetti VA: "Influence of intranasal immunization with synthetic peptides corresponding to conserved epitopes of M protein on mucosal colonization by group A streptococci". Infect. Immun. 1988; 565: 2666-2672.
【非特許文献３】Bessen D, Fischetti VA: "Passive acquired mucosal immunity to group A streptococci by secretory immunoglobulin". A. J. Exp. Med. 1988; 167: 1945-1949.
【非特許文献４】Bessen D, Fischetti VA: "Synthetic peptide vaccine against mucosal colonization by group A streptococci. I. protection against a heterologous M serotype with shared C repeated region epitopes". J. Immunol. 1990; 145 (4): 1251-12.
【非特許文献５】Brandt ER, Hayman WA, Currie B, Pruksakorn S, Good MF: "Human antibodies to the conserved region of the M protein: opsonization of heterologous strains of group A streptococci". Vaccine 1997; 15: 1805-1812.
【非特許文献６】Cunningham, M.W. (2000): "Pathogenesis of group A streptococcal infections". Clin. Microbiol. Rev. 470-511.
【非特許文献７】DaIe JB, Chang EC: "Intranasal immunization with recombinant group A streptococcal M fragment fused to the B subunit of Eschirichia coli labile toxin protects mice against systemic challenge infections". J. Infect. Dis. 1995; 171 : 1038-1041.
【非特許文献８】DaIe JB, Chang EY, Lederer JW. "Recombinant tetravalent group A streptococcal M protein vaccine". J. Immunol. 1993, 151 (4): 2188-2194.
【非特許文献９】DaIe JB, Simmons M, Chiang EC, Chiang EY: "Recombinant, octavalent group A streptococcal M protein vaccine". Vaccine. 1999, 14 (10): 944-948.
【非特許文献１０】Dale, JB: "Multivalent group A streptococcal vaccine designed to optimize the immunogenecity of six tandem M protein fragments". Vaccine, 1999. 17:193-200.
【非特許文献１１】Dale, JB, Chiang EY., Liu S., Courtney HS., Hasty, DL. "New protective antigen of group A streptococci". J. Clin. Invest. 1999. 103:1261- 1268.
【非特許文献１２】Dunn, LA, McMillan DJ, Batzloff M, Zeng W, Jackson DCJ, Upcroft JA, Upcroft P, Olive C: "Parenteral and mucosal delivery of a novel multi-epitope M protein-based group A streptococcal vaccine construct: investigation of immunogenecity in mice". Vaccine, 2002, 20: 2635-2640.
【非特許文献１３】Fischetti VA, Jones KF, Scott JR.: "Size variation of the M protein in group A streptococci". J. Exp. Med. 1985, 161 : 1384-1401.
【非特許文献１４】Fischetti VA, Medaglini D, Oggioni M, Pozzi G: "Expression of foreign proteins on gram - positive commensal bacteria for mucosal delivery". Curr. Opin Biotech. 1993, 4:503-610.
【非特許文献１５】Fischetti, V.: "Streptococcal M protein". Sci. Am.:1991 264(6): 32-39.
【非特許文献１６】Fluckiger, U.; Jones KF; Fischetti, VA: "Immunoglobulins to group A streptococcal surface molecules decrease adherence to and invasion of human pharyngeal cells". Infect. Immun. 1998. 66: 974-979.
【非特許文献１７】Guilherme L, Cunha-Neto E, Coelho V, Snitcowsky R, Pomerantzeff P. MA, Assis RV, Pedra F, Neumann J, Goldberg A, Patarroyo ME, Pillegi F, KaIiI J: "Human -infiltrating T cell clones from rheumatic heart disease patients recognize both streptococcal and cardiac proteins". Circulation 1995; 92: 415-420.
【非特許文献１８】Guilherme, L., Oshiro, S. E., Fae, K.C., Cunha-Neto, E., Renesto, G et al: "T cell reactivity against streptococcal antigens in the periphery mirrors reactivity of heart infiltrating T lymphocytes in rheumatic heart disease patients". Infect. Immun, 2001 , 69: 5345-5351.
【非特許文献１９】Guilherme L., P. Cury, L.M. Demarchi, V. Coelho, L. Abel, AP. Lopez, S. E. Oshiro, S. Aliotti, E. Cunha-Neto, P.M. Pomerantzeff, A.C. Tanaka and J. KaIiI: Rheumatic heart disease: proinflammatory cytokines play a role in the progression and maintenance of valvular lesions. Am J Pathol, 2004, 165:1583-91.
【非特許文献２０】Guilherme, L Fae, KC, Oshiro, SE, KaIiI, J: Molecular pathogenesis of Rheumatic fever and rheumatic heart disease. Exp. Rev MoI Med, 2005, 7(28): 1-15.
【非特許文献２１】Guilherme, L Fae, KC, Higa F, Chaves, L, Oshiro, SE, Freschi de Barros.S , Puschel.C, Juliano, MA, Tanaka, AC, Spina, G, KaIiI, J: Towards a vaccine against rheumatic fever. Clin Dev Immunol, 2006,XX 1-8.
【非特許文献２２】Kemeny, E., Grieve, T., Marcus, R., Sareli, P., Zabriskie, JB: "Identification of mononuclear cells and T cell subsets in rheumatic valvulitis".Clin. Immunol. Immunopathol. 1989,52:225-237.
【非特許文献２３】Kotloff K1 Correti M, Palmer K, Campbell JD, Reddish MA, Hu MC, Wasserman SS, Dale JB: "Safety and immunogenecity of a recombinant multivalent group A streptococcal vaccine in healthy adults". J. Am. Med. Assoc (JAMA), 2004, 11 : 709-715.
【非特許文献２４】Kotloff KL, Wasserman SS, Jones KF, Livio S1 Hruby DE1 Franke CA, Fischetti VA: Clinical and microbiological responses of volunteers to combined intranasal and oral inoculation with a Streptococcus gordonii carrier strain intended for future use as a group A streptococcus vaccine. Infect Immun, 2005, 73(4):2360-6.
【非特許文献２５】Manjula, B. N., Acharya, A.S., Mische, M.S., Fairwell, T. and Fischetti, V.A.: "The complete amino acid sequence of a biologically active 197 - residue fragment of M protein isolated from type 5 group A streptococci". J. Biol. Chem., 1984,259, 3686-3693.
【非特許文献２６】Medaglini D, Pozzi G, King TP, Fischetti VA: "Mucosal and systemic immune response to a recombinant protein expressed on the surface of the oral commensal bacterium Streptococcus gordoni after oral colonization". Proc. Natl Acad. Sci. USA, 1995, 92: 6868-6872.
【非特許文献２７】McNeil SA, Halperin SA, Langley JM, Smith B, Warren A, Sharratt GP, Baxendale DM, Reddish MA, Hu MC, Stroop SD, Linden J, Fries LF, Vink PE, Dale JB.: Safety and immunogenicity of 26-valent group a streptococcus vaccine in healthy adult volunteers. Clin Infect Dis, 2005, 41 (8):1114-22.
【非特許文献２８】Miller, L.C., Gray, E.D., Beachey, E. H. and Kehoe, M.A.: "Antigenic variation among group A streptococcal M proteins: nucleotide sequence of the serotype 5 M protein gene and its relationship with genes encoding types 6 and 24 M proteins". J. Biol. Chem., 1988, 263, 5668- 5673.
【非特許文献２９】Olive C, Clair T, Yarwood P, Good M: "Protection of mice from group A streptococcal infection by intranasal immmunisation with a peptide vaccine that contains a conserved M protein B cell epitope and lacks a T cell autoepitope". Vaccine, 2002, 20: 2816-2825.
【非特許文献３０】Olive C, Hsien K, Horvath A, Clair T, Yarwood P, Toth I1 Good MF. Protection against group A streptococcal infection by vaccination with self- adjuvanting lipid core M protein peptides. Vaccine, 2005 23(17-18):2298-303.
【非特許文献３１】Pruksakorn S, Currie B, Brandt ER, Martin D1 Galbraith A, Phornphutkul CH, Hunsakunachai S, Manmontri A, Good MF: "Towards a vaccine for rheumatic fever: Identification of a conserved target epitope on M protein of group A streptococci". The Lancet, 1994; 344:639-642.
【非特許文献３２】Raizada, V., Williams, R.C. Jr., Chopra, P., Gopinath, N.,Prakash, K. et al: "Tissue distribution of lymphocytes in rheumatic heart valves as defined by monoclonal anti-T cells antibodies". Am. J. Med., 1983, 74, 90- 96.
【非特許文献３３】Robinson, J. H., Atherton, M. C, Goodacre, J.A., Pinkney, M., Weightman, H. and Kehoe, M.A. (1991): "Mapping T-cell epitopes in group A streptococcal type 5 M protein". Infect. Immun. 59, 4324-4.
【非特許文献３４】Scott, JR.; Hollingshead SK.; Fischetti VA: "Homologous regions within M protein genes in group A streptococci of differents serotypes". Infect. Immun. 1986, 52: 609-613.
【非特許文献３５】Scott, JR.; Pulliam, WN.; Hollingshead SK.: "Fischetti VA.Relationship of M protein genes in group A streptococci". Proc. Natl. Acad. Sci.USA. 1985, 82: 1822- 1827.
【非特許文献３６】Snitcowsky, R.: "Rheumatic fever prevention in industrializing countries: problems and approaches". Pediatrics. 1996, 97(6): 996-998.
【非特許文献３７】Vohra H, Dey N, Gupta S, Sharma AK, Kumar R, McMillan D,Good MF.: M protein conserved region antibodies opsonise multiple strains of Streptococcus pyogenes with sequence variations in C-repeats. Res Microbiol.,2005, 156(4):575-82.
【非特許文献３８】WHO, IVR: New vaccines against infectious diseases: research and development status, April, 2005, updated February 2006.
【図１】
0005410294.tif 000002
【図２】
0005410294.tif 000003