(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）の化合物、またはその医薬的に許容できる塩：
X-B1-B2-B3-B4-Z    （Ｉ）
ここで：
Xは細胞毒性または細胞増殖抑制薬剤であり;
B1は rvAsp、rvD-Asp、rvCha、rvD−Cha、またはrvGlyであり;
B2はSucであり;
B3およびB4のそれぞれは、それぞれの出現に関して独立して(Doc)m、(Aepa)nであるか、または欠失しており;そして
Zは次の式のｈＮＰＹの類似体であり：
A1-A2-A3-A4-A5-A6-A7-A8-A9-A10-A11-A12-A13-A14-A15-A16-A17-A18-A19-A20-A21-A22-A23-A24-A25-A26-A27-A28-A29-A30-A31-A32-A33-A34-A35-A36-A37-R1(SEQ ID NO:2)
ここで：
A1はTyrであり;
A2はProであり;
A3はSerまたはAibであり;
A4はLysであり;
A5はProであり;
A6はAspまたはAibであり;
A7はAsnまたはAibであり;
A8はProであり;
A9はGlyまたはAibであり;
A10はGluまたはAibであり;
A11はAspまたはAibであり;
A12はAlaまたはAibであり;
A13はProであり;
A14はAlaまたはAibであり;
A15はGluまたはAibであり; 
A16はAspまたはAibであり;
A17はMet、A6c、Aib、またはNleであり;
A18はAlaまたはAibであり;
A19はArgであり;
A20はTyrであり;
A21はTyrであり;
A22はSerまたはAibであり;
A23はAlaまたはAibであり;
A24はLeuまたはA6cであり;
A25はArgであり;
A26はHisであり;
A27はTyrであり;
A28はIleまたはA6cであり;
A29はAsnまたはAibであり;
A30はLeuまたはA6cであり;
A31はIle、A6c、またはLeuであり;
A32はThrまたはAibであり;
A33はArgであり;
A34は4Hypであり;
A35はArg、Apc、Lys、4NH2Phe、または4NH2CH2Pheであり;
A36はTyrまたはAicであり;
A37は欠失しており;
R1はOH、NH2、(C1-30)アルコキシ、またはNH-X6-CH2-X7であり、ここでX6は(C1-40)アルキルまたは(C2-40)アルケニルであり、X7はH、OH、CO2H、またはC(O)-NH2であり;
mはそれぞれの出現に関して独立して0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、または10であり;そして
nはそれぞれの出現に関して独立して0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、または10である。
【請求項２】
請求項１に記載の化合物、またはその医薬的に許容できる塩、ここで：
Xはアントラサイクリン、カンプトテシンもしくはカンプトテシン誘導体、パクリタキセルもしくパクリタキセル誘導体、またはドキソルビシンもしくドキソルビシン誘導体であり;そして
R1はNH2である。
【請求項３】
Xがアントラサイクリンである、請求項２に記載の化合物、またはその医薬的に許容できる塩。
【請求項４】
Xがカンプトテシンまたはカンプトテシン誘導体であって、前記カンプトテシン誘導体は次のもの：
【化１】
0005584236.tif 000047
；
【化２】
0005584236.tif 000048
；
【化３】
0005584236.tif 000049
；
【化４】
0005584236.tif 000050
；
【化５】
0005584236.tif 000051
；
【化６】
0005584236.tif 000052
；
【化７】
0005584236.tif 000053
；または
【化８】
0005584236.tif 000054
である、請求項２に記載の化合物、またはその医薬的に許容できる塩。
【請求項５】
Xがパクリタキセルまたはパクリタキセル誘導体であって、前記パクリタキセル誘導体が：
【化９】
0005584236.tif 000055
である、請求項２に記載の化合物、またはその医薬的に許容できる塩。
【請求項６】
Xがドキソルビシンまたはドキソルビシン誘導体であって、前記ドキソルビシン誘導体が：
【化１０】
0005584236.tif 000056
である、請求項２に記載の化合物、またはその医薬的に許容できる塩。
【請求項７】
請求項２〜６のいずれか１項に記載の化合物、またはその医薬的に許容できる塩、ここで：
A1はTyrであり;
A3はSerであり;
A4はLysであり;
A6はAspであり;
A7はAsnであり;
A9はGlyであり;
A10はGluであり;
A11はAspであり;
A12はAlaであり;
A14はAlaであり;
A15はGluであり;
A16はAspであり;
A17はAibまたはNleであり;
A18はAlaであり;
A19はArgであり;
A20はTyrであり;
A21はTyrであり;
A22はSerであり;
A23はAlaであり;
A24はLeuであり;
A25はArgであり;
A26はHisであり;
A27はTyrであり;
A28はIleであり;
A29はAsnであり;
A30はLeuであり;
A31はIleまたはA6cであり;
A32はThrであり;
A33はArgであり;
A35はArgであり;
A36はTyr、Aicであり、または欠失しており;そして
A37は欠失している。
【請求項８】
Xがカンプトテシンである、請求項７に記載の化合物、またはその医薬的に許容できる塩。
【請求項９】
[カンプトテシン-rvAsp-Suc-Tyr1, Nle17, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:89)
[カンプトテシン-rvD-Asp-Suc-Tyr1, Nle17, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2;
[カンプトテシン-rvAsp-Suc-Tyr1, Nle17, A6c31, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:90)
[カンプトテシン-rvD-Asp-Suc-Tyr1, Nle17, A6c31, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2;
[カンプトテシン-rvGly-Suc-Tyr1, Nle17, A6c31, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:91)
[カンプトテシン-rvGly-Suc-Tyr1, Nle17, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:94)
[カンプトテシン-rvGly-Suc-(Doc)3-Tyr1, Nle17, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:95)
[カンプトテシン-rvGly-Suc-(Doc)3-Aepa-Tyr1, Nle17, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2;
(SEQ ID NO:96)
[カンプトテシン-rvAsp-Suc-(Doc)3-Tyr1, Nle17, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:97)
[カンプトテシン-rvD-Asp-Suc-(Doc)3-Tyr1, Nle17, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2;
[カンプトテシン-rvGly-Suc-Aepa-(Doc)3-Tyr1, Nle17, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2;
(SEQ ID NO:98)
[カンプトテシン-rvAsp-Suc-(Doc)3-Aepa-Tyr1, Nle17, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2;
(SEQ ID NO:99)
[カンプトテシン-rvD-Asp-Suc-(Doc)3-Aepa-Tyr1, Nle17, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2;
[カンプトテシン-rvAsp-Suc-Aepa-(Doc)3-Tyr1, Nle17, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2;
(SEQ ID NO:100)
[カンプトテシン-rvD-Asp-Suc-Aepa-(Doc)3-Tyr1, Nle17, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2;
[カンプトテシン-rvGly-Suc-Tyr1, Aib17, 4Hyp34, Aic36]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:101)
[カンプトテシン-rvGly-Suc-(Doc)3-Tyr1, Aib17, 4Hyp34, Aic36]hNPY(1-36)-NH2;
(SEQ ID NO:103) もしくは
[カンプトテシン-rvGly-Suc-Aepa-(Doc)3-Tyr1, Aib17, 4Hyp34, Aic36]hNPY(1-36)-NH2;
(SEQ ID NO:104)
である、請求項８に記載の化合物、またはその医薬的に許容できる塩。
【請求項１０】
[カンプトテシン-rvAsp-Suc-Tyr1, Nle17, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2 (SEQ ID NO:89)および[カンプトテシン-rvD-Asp-Suc-Tyr1, Nle17, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2を含む混合物、またはその医薬的に許容できる塩。
【請求項１１】
[カンプトテシン-rvAsp-Suc-Tyr1, Nle17, A6c31, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2 (SEQ ID NO:90)および[カンプトテシン-rvD-Asp-Suc-Tyr1, Nle17, A6c31, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2を含む混合物、またはその医薬的に許容できる塩。
【請求項１２】
２：９８、５：９５、１０：９０、１５：８５、２０：８０、２５：７５、３０：７０、３５：６５、４０：６０、４５：５０、５０：５０、５５：４５、６０：４０、６５：２５、７０：３０、７５：２５、８０：２０、８５：１５、８７：１３、８８：１２、９０：１０、９５：５、９７：３または９８：２の重量／重量比の前記の化合物のペアを含む、請求項１０〜１１のいずれか１項に記載の混合物、またはその医薬的に許容できる塩。
【請求項１３】
請求項１に記載の化合物であって、Zが：
[Aib10, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:3)
[Aib17, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:4)
[Aib11,17, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:5)
[4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:6)
[Aib22, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:7)
[A6c31, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:8)
[A6c30, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:9)
[A6c28, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:10)
[Aib3, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:11)
[A6c24, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:12)
[Aib6, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:13)
[Aib18, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:14)
[Aib29, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:15)
[Aib32, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:16)
[Aib23, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:17)
[A6c17, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:18)
[Aib11, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:19)
[Aib12, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:20)
[Aib14, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:21)
[Aib15, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:22)
[Aib16, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:23)
[Aib7, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:24)
[Aib9, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:25)
[Aib10,17, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:26)
[Aib15,17, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:27)
[Aib11,15, Nle17, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:28)
[Aib10,15, Nle17, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:29)
[Aib11,15,17, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:30)
[Aib12,15,17, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:31)
[Aib10,15,17, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:32) 
[Aib11,16, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:33)
[Aib10,16, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:34)
[Aib17, 4Hyp34, Apc35]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:36)
[Aib17, 4Hyp34, Aic36]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:37)
[Aib17, 4Hyp34, 4NH2Phe35]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:38)、または
[Aib17, 4Hyp34, 4NH2CH2Phe35]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:39) 
に対応する、化合物、またはその医薬的に許容できる塩。
【請求項１４】
A35およびA36の間のペプチド結合が偽ペプチド結合により置き換えられている、請求項１または請求項２に記載の化合物、またはその医薬的に許容できる塩。
【請求項１５】
A35-A36がLys-ψ(CH2-NH)TyrまたはLys-ψ(CH2-N(Ac))Tyrである、請求項１４に記載の化合物、またはその医薬的に許容できる塩。
【請求項１６】
請求項１５に記載の化合物、またはその医薬的に許容できる塩、ここで、Zは：
[Aib11,17, 4Hyp34, Lys35-ψ(CH2-N(Ac))Tyr36]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:35)
[Aib17, 4Hyp34, Lys35-ψ(CH2-NH)Tyr36]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:40)または
[Aib11,17, 4Hyp34, Lys35-ψ(CH2-NH)Tyr36]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:41)
に対応する。
【請求項１７】
有効量の請求項１〜９および１３〜１６のいずれか１項に記載の化合物、請求項１０〜１１のいずれか１項に記載の混合物、またはその医薬的に許容できる塩を含む医薬組成物。
【請求項１８】
さらに医薬的に許容できるキャリヤーを含む、請求項１７に記載の医薬組成物。
【請求項１９】
ＮＰＹ−Ｙ１受容体を発現する細胞の異常な、または望ましくない増殖により特徴付けられる疾患の治療に使用される、請求項１７もしくは請求項１８に記載の医薬組成物。
【請求項２０】
前記の疾患が乳癌、卵巣癌、グリア系腫瘍、腎細胞癌、腎芽細胞腫、および腫瘍内血管からなるグループから選択される、請求項１９に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、標的化部分に結合している細胞毒性部分を含む、標的化された細胞毒性化合物を特徴とする。より詳細には、本発明は神経ペプチドＹ−細胞毒性コンジュゲート、それを含む組成物、および異常な、または望ましくない細胞の増殖、移動および／または生理学的活性と関係する疾患または病気の状態の処置のためのそれらの療法的使用に関する方法を提供する。
【背景技術】
【０００２】
ほとんどの細胞毒性薬物は、それらが療法的作用を必要とする組織または細胞への選択的作用を欠いていることにより、望ましくない毒性の副作用を示す。細胞毒性薬剤の標的細胞型への選択的送達を成し遂げるために様々な取り組みが進められてきた。生物学的受容体リガンドをこれらの薬物を目的の細胞に標的化するための薬物のキャリヤーとして用いることは、毒性の副作用を低減させ、薬物送達の効率を大きく向上させることができる。例えば、特許協力条約（“ＰＣＴ”）公開第ＷＯ９７／１９９５４号は、アントラサイクリン系細胞毒性薬剤、例えばドキソルビシンのペプチドホルモン、例えばＬＨＲＨ、ボンベシンまたはソマトスタチンとのコンジュゲートを開示している。その細胞毒性薬剤はペプチドに構造：-C(O)-(CH2)n-C(O)-を有するリンカーを介して共有結合しており、ここでｎ＝０〜７である。
【０００３】
同様に、欧州特許出願第ＥＰ１，１１８，３３６号は、ソマトスタチン類似体、例えばオクトレオチド(octreotide)、ランレオチド(lanreotide)およびバブレオチド(vapreotide)と細胞毒性薬物、例えばパクリタキセル、ドキソルビシンまたはカンプトテシンのスペーサーを通したコンジュゲートを開示しており、ここでそのスペーサーは構造：-C(O)-(CH2)n-C(O)-を有することも示されており、ここでｎ＝０〜７である。
【０００４】
米国特許出願公開第２００２／０１１５５９６号は細胞毒性薬剤とオリゴペプチドのコンジュゲートを開示しており、ここでそのペプチドのアミノ酸配列は遊離型前立腺特異的抗原により優先的に切断されることが示されている。そのようなコンジュゲートは前立腺癌および良性前立腺肥大症の処置に有用であると言われている。
【０００５】
米国特許出願公開第２００３／００６４９８４号は、ＣＣ−１０６５およびズオカルマイシン類(duocarmycins)の細胞毒性類似体の、切断可能なリンカーアームおよび標的化薬剤、例えば抗体またはペプチドとのコンジュゲートを開示している。その細胞毒性類似体はそのリンカーが切断されると放出されることが示されている。
【０００６】
ＰＣＴ公開第ＷＯ０２／３４２３７号は、ポリペプチドに直接共有結合した有効薬剤のコンジュゲートを開示している。そのポリペプチドは有効薬剤を、例えば胃の中で、立体構造的な保護(conformational protection)により安定化すると言われている。
【０００７】
しかし、標的化の特異性、全身毒性および薬物動態に関して向上した特性を有する標的化された細胞毒性薬物に関する重要な必要性が残っている。
【０００８】
標的化された細胞毒性化合物の適用は多くの癌性の疾患または病気の処置の助けとなると考えられる。例えば、神経ペプチドＹ（“ＮＰＹ”）受容体を過剰発現する腫瘍または癌の処置は、細胞毒性部分と複合体化した天然のヒト神経ペプチドＹ（“ｈＮＰＹ”）、すなわちH-Tyr-Pro-Ser-Lys-Pro-Asp-Asn-Pro-Gly-Glu-Asp-Ala-Pro-Ala-Glu-Asp-Met-Ala-Arg-Tyr-Tyr-Ser-Ala-Leu-Arg-His-Tyr-Ile-Asn-Leu-Ile-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2(SE
Q ID NO:1)、またはその断片もしくは類似体により標的化および処置されると考えられる。
【０００９】
ＮＰＹの作用はＹ１〜Ｙ６と名付けられたいくつかのＮＰＹ受容体亜型により仲介される可能性があり、それからのＹ１、Ｙ２、Ｙ４およびＹ５は広範囲に渡って特性付けられている。ＮＰＹおよびＮＰＹ受容体の総説に関して、例えばC. Wahlestedt and D. Reis,
Annual Review of Pharmacology and Toxicology, 33:309-352 (1993)を参照。
【００１０】
ＰＣＴ公開第ＷＯ０２／４３７７６号において論じられているように、乳房腫瘍および転移の試料におけるＮＰＹ−Ｙ１受容体の高い密度および高い出現頻度に基づき、乳癌はＮＰＹ関連薬物に関する重要な標的である。ＰＣＴ公開第ＷＯ０２／４３７７６号において論じられているように、神経ペプチドＹ１受容体はＹ２受容体との組み合わせまたは単独のどちらかで腫瘍組織において排他的に発現しており、一方で健康な組織はＹ２受容体のみを発現していることも分かった。ＰＣＴ公開第ＷＯ０２／４３７７６号において開示されているＹ１受容体結合化合物は、以下の化合物からなるグループから選択される：
“[Leu31, Pro34]-NPY (SEQ ID NO:81)、[Leu31, Pro34]-PYY (SEQ ID NO:82)、Pro34-NPY (SEQ ID NO:83)、Pro34-PYY (SEQ ID NO:84)、NPY (SEQ ID NO:1)、PYY (SEQ ID NO:80)、Des Asn29[Trp28,32, Nva34]-NPY(27-36) (Balasubramaniam, Peptides 18(3), 445-457 (1997) (SEQ ID NO:85))、[Pro30, Tyr32, Leu34]-NPY(28-36) (Leban et al., J. Med. Chem. 38, 1150-1157 (1995) (SEQ ID NO:86))、２量体であるビス(31/31’){[Cys31, Trp32, Nva34]-NPY(31-36)} (Balasubramaniam、上記、(SEQ ID NO:87))、SR120819A (Serradeil et al., FEBS lett. 225, 209-214 (1987))、BIBP3236 (Rudolf et al., Eur. J. Pharmacol. 271, R11-R13 (1994))、Daniels et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA
92, 9067-9071 (1995)において記述されている３種類の化合物：
次の式の383U91
【００１１】
【化１】
0005584236.tif 000002
【００１２】
次の式の1120W91
【００１３】
【化２】
0005584236.tif 000003
【００１４】
次の式の1229U91
【００１５】
【化３】
0005584236.tif 000004
【００１６】
およびアルギネン(arginene)模倣物(mimics)。”
このように、細胞毒性部分にコンジュゲートしたＹ１選択的ＮＰＹ類似体を用いてＮＰ
Ｙ−Ｙ１受容体を標的化する能力は、癌性の疾患または病気の処置の助けになるであろう。そのような癌には、乳癌、卵巣癌、グリア系腫瘍、腎細胞癌、腎芽細胞腫、および腫瘍内血管が含まれるが、それらに限定されない。
【００１７】
本発明の化合物ならびにＮＰＹ関連薬物に関する重要な標的である腫瘍および癌の処置としてのそれらの使用の個々の利点には、毒性の副作用の減少、処置の有効性の増大、および／または多剤耐性による厄介な問題(complications)の減少が含まれるが、それらに限定されない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１８】
【特許文献１】ＷＯ９７／１９９５４号
【特許文献２】欧州特許出願第ＥＰ１，１１８，３３６号
【特許文献３】米国特許出願公開第２００２／０１１５５９６号
【特許文献４】米国特許出願公開第２００３／００６４９８４号
【特許文献５】ＷＯ０２／３４２３７号
【特許文献６】ＷＯ０２／４３７７６号
【非特許文献】
【００１９】
【非特許文献１】C. Wahlestedt and D. Reis, Annual Review of Pharmacology and Toxicology, 33:309-352 (1993)
【非特許文献２】Balasubramaniam, Peptides 18(3), 445-457 (1997)
【非特許文献３】Leban et al., J. Med. Chem. 38, 1150-1157 (1995)
【非特許文献４】Serradeil et al., FEBS lett. 225, 209-214 (1987)
【非特許文献５】Rudolf et al., Eur. J. Pharmacol. 271, R11-R13 (1994)
【非特許文献６】Daniels et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 92, 9067-9071 (1995)
【発明の概要】
【００２０】
１観点において、本発明は次の式（Ｉ）：
X-B1-B2-B3-B4-Z    （Ｉ）
｛式中：
Xは細胞毒性または細胞増殖抑制薬剤であり;
B1はrv(アミノ酸)であり;
B2、B3、およびB4のそれぞれは、それぞれの出現に関して独立して(Doc)m、(Aepa)n、もしくは-C(O)-W1-W2-W3-W4-W5-C(O)-であり、または欠失しており;そして
Zは１種類以上のＮＰＹ受容体亜型（単数または複数）に結合する部分である｝
の標的化された細胞毒性化合物を提供する。
【００２１】
式（Ｉ）において、Zは好ましくは次の式のｈＮＰＹの類似体であり：
A1-A2-A3-A4-A5-A6-A7-A8-A9-A10-A11-A12-A13-A14-A15-A16-A17-A18-A19-A20-A21-A22-A23-A24-A25-A26-A27-A28-A29-A30-A31-A32-A33-A34-A35-A36-A37-R1(SEQ ID NO:2)
ここで：
A1はTyr、(X1,X2,X3,X4,X5)Phe、またはHN-CH((CH2)q-N(R2R3))-C(O)であり;
A2はPro、3Hyp、シス-3Hyp、4Hyp、またはシス-4Hypであり;
A3はSer、Abu、Aib、Ala、Thr、またはHN-CH((CH2)q-N(R2R3))-C(O)であり;
A4はLys、Arg、hArg、Dab、Dap、Orn、またはHN-CH((CH2)q-N(R2R3))-C(O)であり;
A5はPro、3Hyp、シス-3Hyp、4Hyp、またはシス-4Hypであり;
A6はAsp、Aib、Asn、Gln、Glu、またはHN-CH((CH2)q-N(R2R3))-C(O)であり;
A7はAsn、Aib、Gln、またはHN-CH((CH2)q-N(R2R3))-C(O)であり;
A8はPro、3Hyp、シス-3Hyp、4Hyp、またはシス-4Hypであり;
A9はGly、Aib、またはHN-CH((CH2)q-N(R2R3))-C(O)であり;
A10はGlu、Aib、Asn、Asp、Gln、またはHN-CH((CH2)q-N(R2R3))-C(O)であり;
A11はAsp、Aib、Asn、Gln、Glu、またはHN-CH((CH2)q-N(R2R3))-C(O)であり;
A12はAla、Abu、Aib、Nva、Val、またはHN-CH((CH2)q-N(R2R3))-C(O)であり;
A13はPro、3Hyp、シス-3Hyp、4Hyp、またはシス-4Hypであり;
A14はAla、Abu、Aib、Nva、Val、またはHN-CH((CH2)q-N(R2R3))-C(O)であり;
A15はGlu、Aib、Asn、Asp、Gln、またはHN-CH((CH2)q-N(R2R3))-C(O)であり;
A16はAsp、Aib、Asn、Gln、Glu、またはHN-CH((CH2)q-N(R2R3))-C(O)であり;
A17はMet、Acc、Aib、Cha、Ile、Leu、hLeu、Nle、Nva、Tle、Val、またはHN-CH((CH2)q-N(R2R3))-C(O)であり;
A18はAla、Abu、Aib、Nva、Val、またはHN-CH((CH2)q-N(R2R3))-C(O)であり;
A19はArg、hArg、Apc、Dab、Dap、Lys、Orn、またはHN-CH((CH2)q-N(R2R3))-C(O)であり;
A20はTyr、(X1,X2,X3,X4,X5)Phe、またはHN-CH((CH2)q-N(R2R3))-C(O)であり;
A21はTyr、(X1,X2,X3,X4,X5)Phe、またはHN-CH((CH2)q-N(R2R3))-C(O)であり;
A22はSer、Abu、Aib、Ala、Thr、またはHN-CH((CH2)q-N(R2R3))-C(O)であり;
A23はAla、Abu、Aib、Nva、Val、またはHN-CH((CH2)q-N(R2R3))-C(O)であり;
A24はLeu、Acc、Cha、Ile、hLeu、Nle、Nva、Tle、Val、またはHN-CH((CH2)q-N(R2R3))-C(O)であり;
A25はArg、hArg、Dab、Dap、Lys、Orn、またはHN-CH((CH2)q-N(R2R3))-C(O)であり;
A26はHis、2Pal、3Pal、4Pal、またはHN-CH((CH2)q-N(R2R3))-C(O)であり;
A27はTyr、(X1,X2,X3,X4,X5)Phe、またはHN-CH((CH2)q-N(R2R3))-C(O)であり;
A28はIle、Acc、Cha、Leu、hLeu、Nle、Nva、Tle、Val、またはHN-CH((CH2)q-N(R2R3))C(O)であり;
A29はAsn、Aib、Gln、またはHN-CH((CH2)q-N(R2R3))-C(O)であり;
A30はLeu、Acc、Cha、Ile、hLeu、Nle、Nva、Tle、Val、またはHN-CH((CH2)q-N(R2R3))-C(O)であり;
A31はIle、Acc、Cha、Leu、hLeu、Nle、Nva、Tle、Val、またはHN-CH((CH2)q-N(R2R3))-C(O)であり;
A32はThr、Aib、Ser、またはHN-CH((CH2)q-N(R2R3))-C(O)であり;
A33はArg、hArg、Dab、Dap、Lys、Orn、またはHN-CH((CH2)q-N(R2R3))-C(O)であり;
A34はGln、Asn、Dhp、3Hyp、シス-3Hyp、4Hyp、シス-4Hyp、Inp、Ktp、Nip、Oic、Pro、hPro、Tic、またはHN-CH((CH2)q-N(R2R3))-C(O)であり;
A35はArg、Aic、Apc、hArg、Dab、Dap、Lys、Orn、4NH2Phe、4NH2CH2Phe、またはHN-CH((CH2)q-N(R2R3))-C(O)であり;
A36はTyr、Aic、(X1,X2,X3,X4,X5)Phe、HN-CH((CH2)q-N(R2R3))-C(O)であり、または欠失しており;
A37はHN-CH((CH2)q-N(R2R3))-C(O)であり、または欠失しており;
R1はOH、NH2、(C1-30)アルコキシ、またはNH-X6-CH2-X7であり、ここでX6は(C1-40)アルキルまたは(C2-40)アルケニルであり、ここでX7はH、OH、CO2H、またはC(O)-NH2であり;
W1およびW5のそれぞれは、それぞれの出現に関して独立してCR4R5であり;
R4およびR5のそれぞれは、それぞれの出現に関して独立してH、F、Br、Cl、I、(C1-30)アルキル、(C2-30)アルケニル、置換された(C1-30)アルキル、置換された(C2-30)アルケニル、SR6、S(O)R7、もしくはS(O)2R8であり;またはR4およびR5は一緒に(C3-30)シクロアルキル、(C3-30)ヘテロ環、もしくは(C5-30)アリール環を形成しており;
R6、R7、およびR8のそれぞれは、それぞれの出現に関して独立して(C1-30)アルキル、(C2-30)アルケニル、置換された(C1-30)アルキル、または置換された(C2-30)アルケニルであり;
W2、W3、およびW4のそれぞれは、それぞれの出現に関して独立してCR9R10、O、S、(CH2)tであり、または存在せず;
R9およびR10のそれぞれは、それぞれの出現に関して独立してH、F、Br、Cl、I、(C1-30)アルキル、(C2-30)アルケニル、置換された(C1-30)アルキル、置換された(C2-30)アルケニル、SR6、S(O)R7、もしくはS(O)2R8であり;またはR9およびR10は一緒に環系を形成しており;
mはそれぞれの出現に関して独立して0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、または10であり;
nはそれぞれの出現に関して独立して0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、または10であり;
qはそれぞれの出現に関して独立して0、1、2、3、4または5であり;
tはそれぞれの出現に関して独立して0、1、2、または3であり;
X1、X2、X3、X4、およびX5のそれぞれは、それぞれの出現に関して独立してH、F、Cl、Br、I、(C1-10)アルキル、置換された(C1-10)アルキル、アリール、置換されたアリール、OH、OMe、NH2、NO2、またはCNであり；そして
R2およびR3のそれぞれは、それぞれの出現に関して独立してH、(C1-40)アルキル、(C1-40)ヘテロアルキル、(C1-40)アシル、(C2-40)アルケニル、(C2-40)アルキニル、アリール(C1-40)アルキル、アリール(C1-40)アシル、置換された(C1-40)アルキル、置換された(C1-40)ヘテロアルキル、置換された(C1-40)アシル、置換された(C2-40)アルケニル、置換された(C2-40)アルキニル、置換されたアリール(C1-40)アルキル、置換されたアリール(C1-40)アシル、(C1-40)アルキルスルホニル、またはC(NH)-NH2であり、ここでR2が(C1-40)アシル、アリール(C1-40)アシル、置換された(C1-40)アシル、置換されたアリール(C1-40)アシル、(C1-40)アルキルスルホニル、またはC(NH)-NH2である場合、R3はHまたは(C1-C40)アルキル、(C1-40)ヘテロアルキル、(C2-40)アルケニル、(C2-40)アルキニル、アリール(C1-40)アルキル、置換された(C1-40)アルキル、置換された(C1-40)ヘテロアルキル、置換された(C2-40)アルケニル、置換された(C2-40)アルキニル、または置換されたアリール(C1-40)アルキルである。
【００２２】
上記の式（Ｉ）に含まれる化合物の部分集合（ＩＡ）は下記のものである：
Xは細胞毒性薬剤であり;
B1はrvAsp、rvD-Asp、rvCha、rvD-Cha、またはrvGlyであり;
B2はSucであり;
B3およびB4のそれぞれは、それぞれの出現に関して独立して(Doc)m、(Aepa)nであり、または欠失しており;
A1はTyrまたはHN-CH((CH2)q-N(R2R3))-C(O)であり;
A2はProであり;
A3はSer、Aib、またはHN-CH((CH2)q-N(R2R3))-C(O)であり;
A4はLysまたはHN-CH((CH2)q-N(R2R3))-C(O)であり;
A5はProであり;
A6はAsp、Aib、またはHN-CH((CH2)q-N(R2R3))-C(O)であり;
A7はAsn、Aib、またはHN-CH((CH2)q-N(R2R3))-C(O)であり;
A8はProであり;
A9はGly、Aib、またはHN-CH((CH2)q-N(R2R3))-C(O)であり;
A10はGlu、Aib、またはHN-CH((CH2)q-N(R2R3))-C(O)であり;
A11はAsp、Aib、またはHN-CH((CH2)q-N(R2R3))-C(O)であり;
A12はAla、Aib、またはHN-CH((CH2)q-N(R2R3))-C(O)であり;
A13はProであり;
A14はAla、Aib、またはHN-CH((CH2)q-N(R2R3))-C(O)であり;
A15はGlu、Aib、またはHN-CH((CH2)q-N(R2R3))-C(O)であり;
A16はAsp、Aib、またはHN-CH((CH2)q-N(R2R3))-C(O)であり;
A17はMet、A6c、Aib、Nle、またはHN-CH((CH2)q-N(R2R3))-C(O)であり;
A18はAla、Aib、またはHN-CH((CH2)q-N(R2R3))-C(O)であり;
A19はArgまたはHN-CH((CH2)q-N(R2R3))-C(O)であり;
A20はTyrまたはHN-CH((CH2)q-N(R2R3))-C(O)であり;
A21はTyrまたはHN-CH((CH2)q-N(R2R3))-C(O)であり;
A22はSer、Aib、またはHN-CH((CH2)q-N(R2R3))-C(O)であり;
A23はAla、Aib、またはHN-CH((CH2)q-N(R2R3))-C(O)であり;
A24はLeu、A6c、またはHN-CH((CH2)q-N(R2R3))-C(O)であり;
A25はArgまたはHN-CH((CH2)q-N(R2R3))-C(O)であり;
A26はHisまたはHN-CH((CH2)q-N(R2R3))-C(O)であり;
A27はTyrまたはHN-CH((CH2)q-N(R2R3))-C(O)であり;
A28はIle、A6c、またはHN-CH((CH2)q-N(R2R3))-C(O)であり;
A29はAsn、Aib、またはHN-CH((CH2)q-N(R2R3))-C(O)であり;
A30はLeu、A6c、またはHN-CH((CH2)q-N(R2R3))-C(O)であり;
A31はIle、A6c、Leu、またはHN-CH((CH2)q-N(R2R3))-C(O)であり;
A32はThr、Aib、またはHN-CH((CH2)q-N(R2R3))-C(O)であり;
A33はArgまたはHN-CH((CH2)q-N(R2R3))-C(O)であり;
A34はTic、Dhp、4Hyp、Inp、Nip、Pro、hPro、またはHN-CH((CH2)q-N(R2R3))-C(O)であり;
A35はArg、Aic、Apc、Lys、4NH2Phe、4NH2CH2Phe、またはHN-CH((CH2)q-N(R2R3))-C(O)であり;
A36はTyr、Aic、HN-CH((CH2)q-N(R2R3))-C(O)であり、または欠失しており;
A37はHN-CH((CH2)q-N(R2R3))-C(O)または欠失しており;
R1はNH2であり;
R2およびR3のそれぞれは、それぞれの出現に関して独立してHまたは(C1-30)アシルであり;
ただし、R2が(C1-30)アシルである場合、R3はHであり;
R4およびR5のそれぞれは、それぞれの出現に関して独立してHまたは(C1-40)アシルであり;
qは4であり；そして
X1、X2、X3、X4、およびX5のそれぞれは、それぞれの出現に関して独立してH、CH2NH2、またはNH2である。
【００２３】
式（Ｉ）またはその部分集合（ＩＡ）において、A35およびA36の間のペプチド結合は偽ペプチド結合により置き換えられていてよく、ここでA35-A36はLys-ψ(CH2-NH)TyrまたはLys-ψ(CH2-N(Ac))Tyrであってよい。
【００２４】
式（Ｉ）またはその部分集合（ＩＡ）の好ましい態様において、Zは以下のものに対応する：
実施例１：  [Aib10, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:3)
実施例２：  [Aib17, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:4)
実施例３：  [Aib11,17, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:5)
実施例４：  [4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:6)
実施例５：  [Aib22, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:7)
実施例６：  [A6c31, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:8)
実施例７：  [A6c30, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:9)
実施例８：  [A6c28, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:10)
実施例９：  [Aib3, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:11)
実施例１０：  [A6c24, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:12)
実施例１１：  [Aib6, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:13)
実施例１２：  [Aib18, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:14)
実施例１３：  [Aib29, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:15)
実施例１４：  [Aib32, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:16)
実施例１５：  [Aib23, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:17)
実施例１６：  [A6c17, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:18)
実施例１７：  [Aib11, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:19)
実施例１８：  [Aib12, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:20)
実施例１９：  [Aib14, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:21)
実施例２０：  [Aib15, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:22)
実施例２１：  [Aib16, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:23)
実施例２２：  [Aib7, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:24)
実施例２３：  [Aib9, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:25)
実施例２４：  [Aib10,17, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:26)
実施例２５：  [Aib15,17, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:27)
実施例２６：  [Aib11,15, Nle17, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:28)
実施例２７：  [Aib10,15, Nle17, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:29)
実施例２８：  [Aib11,15,17, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:30)
実施例２９：  [Aib12,15,17, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:31)
実施例３０：  [Aib10,15,17, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:32)
実施例３１：  [Aib11,16, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:33)
実施例３２：  [Aib10,16, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:34)
実施例３３：  [Aib11,17, 4Hyp34, Lys35-ψ(CH2-N(Ac))Tyr36]hNPY(1-36)-NH2; 
(SEQ ID NO:35)
実施例３４：  [Aib17, 4Hyp34, Apc35]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:36)
実施例３５：  [Aib17, 4Hyp34, Aic36]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:37)
実施例３６：  [Aib17, 4Hyp34, 4NH2Phe35]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:38)
実施例３７：  [Aib17, 4Hyp34, 4NH2CH2Phe35]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:39)
実施例３８：  [Aib17, 4Hyp34, Lys35-ψ(CH2-NH)Tyr36]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:40)
実施例３９：  [Aib11,17, 4Hyp34, Lys35-ψ(CH2-NH)Tyr36]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID
NO:41)
実施例４０：  [Leu31, Pro34, Lys36(Nε-C(O)-(CH2)12-CH3)]hNPY(1-36)-NH2; 
(SEQ ID NO:42)
実施例４１：  [Leu31, Pro34, Lys35(Nε-C(O)-(CH2)12-CH3)]hNPY(1-36)-NH2; 
(SEQ ID NO:43)
実施例４２：  [Lys24(Nε-C(O)-(CH2)12-CH3), Leu31, Pro34]hNPY(1-36)-NH2; 
(SEQ ID NO:44)
実施例４３：  [Lys23(Nε-C(O)-(CH2)12-CH3), Leu31, Pro34]hNPY(1-36)-NH2; 
(SEQ ID NO:45)
実施例４４：  [Lys22(Nε-C(O)-(CH2)12-CH3), Leu31, Pro34]hNPY(1-36)-NH2; 
(SEQ ID NO:46)
実施例４５：  [Lys21(Nε-C(O)-(CH2)12-CH3), Leu31, Pro34]hNPY(1-36)-NH2; 
(SEQ ID NO:47)
実施例４６：  [Lys20(Nε-C(O)-(CH2)12-CH3), Leu31, Pro34]hNPY(1-36)-NH2; 
(SEQ ID NO:48)
実施例４７：  [Lys19(Nε-C(O)-(CH2)12-CH3), Leu31, Pro34]hNPY(1-36)-NH2; 
(SEQ ID NO:49)
実施例４８：  [Lys18(Nε-C(O)-(CH2)12-CH3), Leu31, Pro34]hNPY(1-36)-NH2; 
(SEQ ID NO:50)
実施例４９：  [Lys17(Nε-C(O)-(CH2)12-CH3), Leu31, Pro34]hNPY(1-36)-NH2; 
(SEQ ID NO:51)
実施例５０：  [Lys16(Nε-C(O)-(CH2)12-CH3), Leu31, Pro34]hNPY(1-36)-NH2; 
(SEQ ID NO:52)
実施例５１：  [Lys15(Nε-C(O)-(CH2)12-CH3), Leu31, Pro34]hNPY(1-36)-NH2; 
(SEQ ID NO:53)
実施例５２：  [Lys14(Nε-C(O)-(CH2)12-CH3), Leu31, Pro34]hNPY(1-36)-NH2; 
(SEQ ID NO:54)
実施例５３：  [Lys12(Nε-C(O)-(CH2)12-CH3), Leu31, Pro34]hNPY(1-36)-NH2; 
(SEQ ID NO:55)
実施例５４：  [Lys11(Nε-C(O)-(CH2)12-CH3), Leu31, Pro34]hNPY(1-36)-NH2; 
(SEQ ID NO:56)
実施例５５：  [Lys10(Nε-C(O)-(CH2)12-CH3), Leu31, Pro34]hNPY(1-36)-NH2; 
(SEQ ID NO:57)
実施例５６：  [Lys9(Nε-C(O)-(CH2)12-CH3), Leu31, Pro34]hNPY(1-36)-NH2; 
(SEQ ID NO:58)
実施例５７：  [Lys7(Nε-C(O)-(CH2)12-CH3), Leu31, Pro34]hNPY(1-36)-NH2; 
(SEQ ID NO:59)
実施例５８：  [Lys6(Nε-C(O)-(CH2)12-CH3), Leu31, Pro34]hNPY(1-36)-NH2; 
(SEQ ID NO:60)
実施例５９：  [Lys4(Nε-C(O)-(CH2)12-CH3), Leu31, Pro34]hNPY(1-36)-NH2; 
(SEQ ID NO:61)
実施例６０：  [Lys3(Nε-C(O)-(CH2)12-CH3), Leu31, Pro34]hNPY(1-36)-NH2; 
(SEQ ID NO:62)
実施例６１：  [Lys1(Nε-C(O)-(CH2)12-CH3), Leu31, Pro34]hNPY(1-36)-NH2; 
(SEQ ID NO:63)
実施例６２：  [Leu31, Pro34, Lys37(Nε-C(O)-(CH2)12-CH3)]hNPY(1-37)-NH2; 
(SEQ ID NO:64)
実施例６３：  [Leu31, Lys33(Nε-C(O)-(CH2)12-CH3), Pro34]hNPY(1-36)-NH2; 
(SEQ ID NO:65)
実施例６４：  [Leu31, Lys32(Nε-C(O)-(CH2)12-CH3), Pro34]hNPY(1-36)-NH2; 
(SEQ ID NO:66)
実施例６５：  [Lys31(Nε-C(O)-(CH2)12-CH3), Pro34]hNPY(1-36)-NH2;
(SEQ ID NO:67)
実施例６６：  [Lys30(Nε-C(O)-(CH2)12-CH3), Leu31, Pro34]hNPY(1-36)-NH2; 
(SEQ ID NO:68)
実施例６７：  [Lys29(Nε-C(O)-(CH2)12-CH3), Leu31, Pro34]hNPY(1-36)-NH2; 
(SEQ ID NO:69)
実施例６８：  [Lys28(Nε-C(O)-(CH2)12-CH3), Leu31, Pro34]hNPY(1-36)-NH2; 
(SEQ ID NO:70)
実施例６９：  [Lys27(Nε-C(O)-(CH2)12-CH3), Leu31, Pro34]hNPY(1-36)-NH2; 
(SEQ ID NO:71)
実施例７０：  [Lys26(Nε-C(O)-(CH2)12-CH3), Leu31, Pro34]hNPY(1-36)-NH2; 
(SEQ ID NO:72)
実施例７１：  [Lys25(Nε-C(O)-(CH2)12-CH3), Leu31, Pro34]hNPY(1-36)-NH2; 
(SEQ ID NO:73)
実施例７２：  [Nip34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:74)
実施例７３：  [Inp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:75)
実施例７４：  [Dhp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:76)
実施例７５：  [hPro34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:77)
実施例７６：  [Tic34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:78)
実施例７７：  [Leu31, Lys34(Nε-C(O)-(CH2)12-CH3)]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:79)
実施例７８：  NPY-NH2; (SEQ ID NO:1)
実施例７９：  PYY-NH2; (SEQ ID NO:80)
実施例８０：  [Leu31, Pro34]-NPY-NH2; (SEQ ID NO:81)
実施例８１：  [Leu31, Pro34]-PYY-NH2; (SEQ ID NO:82)
実施例８２：  [Pro34]-NPY-NH2; (SEQ ID NO:83)
実施例８２Ａ：  [Pro34]-PYY-NH2; (SEQ ID NO:84)
実施例８３：  Des Asn29[Trp28,32, Nva34]-NPY(27-36)-NH2; (SEQ ID NO:85)
実施例８４：  [Pro30, Tyr32, Leu34]-NPY(28-36)-NH2; (SEQ ID NO:86)
実施例８５：  ２量体であるビス(31/31’){[Cys31, Trp32, Nva34]-NPY(31-36)-NH2};
(SEQ ID NO:87)
実施例８６：  SR120819A;
実施例８７：  BIBP3236;
実施例８８：  次の式の化合物383U91
【００２５】
【化４】
0005584236.tif 000005
【００２６】
;
実施例８９：  次の式の化合物1120W91
【００２７】
【化５】
0005584236.tif 000006
【００２８】
;
実施例９０：  次の式の化合物1229U91
【００２９】
【化６】
0005584236.tif 000007
【００３０】
;または
実施例９０Ａ：  [CH3(CH2)8(CO)-Tyr1, Nle17, Pro34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:105)。
【００３１】
式（Ｉ）または部分集合（ＩＡ）に含まれる化合物の別の部分集合（ＩＢ）は下記のものである：
A1はTyrであり;
A3はSerであり;
A4はLysであり;
A6はAspであり;
A7はAsnであり;
A9はGlyであり;
A10はGluであり;
A11はAspであり;
A12はAlaであり;
A14はAlaであり;
A15はGluであり;
A16はAspであり;
A17はAibまたはNleであり;
A18はAlaであり;
A19はArgであり;
A20はTyrであり;
A21はTyrであり;
A22はSerであり;
A23はAlaであり;
A24はLeuであり;
A25はArgであり;
A26はHisであり;
A27はTyrであり;
A28はIleであり;
A29はAsnであり;
A30はLeuであり;
A31はIleまたはA6cであり;
A32はThrであり;
A33はArgであり;
A34は4HypまたはProであり;
A35はArgまたはAicであり;
A36はTyr、Aicであり、または欠失しており;そして
A37は欠失している。
【００３２】
本発明の好ましい態様は式（Ｉ）、部分集合（ＩＡ）、または部分集合（ＩＢ）による化合物を特徴とし、ここでXはアントラサイクリン(anthracycline)、カンプトテシン(camptothecin)、カンプトテシン誘導体、パクリタキセル(paclitaxel)、パクリタキセル誘導体、ドキソルビシン、またはドキソルビシン誘導体である。
【００３３】
本発明のさらに好ましい態様において、Xはカンプトテシンもしくはカンプトテシン誘導体であり、ここで前記のカンプトテシン誘導体は次のものであり：
【００３４】
【化７】
0005584236.tif 000008
【００３５】
；
【００３６】
【化８】
0005584236.tif 000009
【００３７】
；
【００３８】
【化９】
0005584236.tif 000010
【００３９】
；
【００４０】
【化１０】
0005584236.tif 000011
【００４１】
；
【００４２】
【化１１】
0005584236.tif 000012
【００４３】
；
【００４４】
【化１２】
0005584236.tif 000013
【００４５】
；
【００４６】
【化１３】
0005584236.tif 000014
【００４７】
；もしくは
【００４８】
【化１４】
0005584236.tif 000015
【００４９】
；
またはXはパクリタキセルもしくはパクリタキセル誘導体であり、ここで前記のパクリタキセル誘導体は次のものであり：
【００５０】
【化１５】
0005584236.tif 000016
【００５１】
；
またはXはドキソルビシンもしくはドキソルビシン誘導体であり、ここで前記のドキソルビシン誘導体は次のものである：
【００５２】
【化１６】
0005584236.tif 000017
【００５３】
。
【００５４】
本発明のさらに好ましい態様は、以下の部分集合（ＩＢ）の化合物のいずれか１種類を特徴とする：
実施例９１：  [カンプトテシン-rvGly-Suc-Tyr1, Nle17, Pro34]hNPY(1-36)-NH2; 
(SEQ ID NO:88)
実施例９２：  [カンプトテシン-rvD-Asp-Suc-Tyr1, Nle17, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2;
実施例９２Ａ：  [カンプトテシン-rvAsp-Suc-Tyr1, Nle17, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:89)
実施例９３：  [カンプトテシン-rvD-Asp-Suc-Tyr1, Nle17, A6c31, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2;
実施例９３Ａ：  [カンプトテシン-rvAsp-Suc-Tyr1, Nle17, A6c31, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:90)
実施例９４：  [カンプトテシン-rvGly-Suc-Tyr1, Nle17, A6c31, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:91)
実施例９５：  [カンプトテシン-rvD-Asp-Suc-Tyr1, Nle17, Pro34]hNPY(1-36)-NH2;
実施例９５Ａ：  [カンプトテシン-rvAsp-Suc-Tyr1, Nle17, Pro34]hNPY(1-36)-NH2; 
(SEQ ID NO:92)
実施例９６：  [カンプトテシン-rvCha-Suc-Tyr1, Nle17, Pro34]hNPY(1-36)-NH2; 
(SEQ ID NO:93)
実施例９６Ａ：  [カンプトテシン-rvD-Cha-Suc-Tyr1, Nle17, Pro34]hNPY(1-36)-NH2;
実施例９７：  [カンプトテシン-rvGly-Suc-Tyr1, Nle17, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; 
(SEQ ID NO:94)
実施例９８：  [カンプトテシン-rvGly-Suc-(Doc)3-Tyr1, Nle17, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:95)
実施例９９：  [カンプトテシン-rvGly-Suc-(Doc)3-Aepa-Tyr1, Nle17, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:96)
実施例１００：  [カンプトテシン-rvD-Asp-Suc-(Doc)3-Tyr1, Nle17, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2;
実施例１００Ａ：  [カンプトテシン-rvAsp-Suc-(Doc)3-Tyr1, Nle17, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:97)
実施例１０１：  [カンプトテシン-rvGly-Suc-Aepa-(Doc)3-Tyr1, Nle17, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:98)
実施例１０２：  [カンプトテシン-rvD-Asp-Suc-(Doc)3-Aepa-Tyr1, Nle17, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2;
実施例１０２Ａ：  [カンプトテシン-rvAsp-Suc-(Doc)3-Aepa-Tyr1, Nle17, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:99)
実施例１０３：  [カンプトテシン-rvD-Asp-Suc-Aepa-(Doc)3-Tyr1, Nle17, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2;
実施例１０３Ａ:  [カンプトテシン-rvAsp-Suc-Aepa-(Doc)3-Tyr1, Nle17, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:100)
実施例１０４：  [カンプトテシン-rvGly-Suc-Tyr1, Aib17, 4Hyp34, Aic36]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:101)
実施例１０５：  [カンプトテシン-rvGly-Suc-Tyr1, Aib17, 4Hyp34, Aic35]hNPY(1-35)-NH2; (SEQ ID NO:102)
実施例１０６：  [カンプトテシン-rvGly-Suc-(Doc)3-Tyr1, Aib17, 4Hyp34, Aic36]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:103)および
実施例１０７：  [カンプトテシン-rvGly-Suc-Aepa-(Doc)3-Tyr1, Aib17, 4Hyp34, Aic36]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:104)またはその医薬的に許容できる塩。
【００５５】
さらなる観点において、本発明は式（Ｉ）、部分集合（ＩＡ）、または部分集合（ＩＢ）の化合物の混合物を特徴とし、ここでそのｒｖ（アミノ酸）リンカーは混合物中の一部
の化合物においてＤ型で存在し、混合物中の一部の化合物においてＬ型で存在する。その混合物は混合物中に重量／重量で約２：９８、約５：９５、約１０：９０、約１５：８５、約２０：８０、約２５：７５、約３０：７０、約３５：６５、約４０：６０、約４５：５０、約５０：５０、約５５：４５、約６０：４０、約６５：２５、約７０：３０、約７５：２５、約８０：２０、約８５：１５、約９０：１０、約９５：５、約９７：３またはさらには約９８：２の化合物を含み、ここでそのｒｖ（アミノ酸）リンカーはそれぞれＤ型およびＬ型で存在する。
【図面の簡単な説明】
【００５６】
【図１】図１は実施例９１の化合物に関する腫瘍増殖の中央値の曲線を示し、それは試験Ａにおける３種類の異なる用量での実施例９１の化合物の、腫瘍増殖の中央値へのインビボでの作用を、処置無しおよびカンプトテシン単独と比較して示す。
【図２】図２は実施例９２の化合物に関する腫瘍増殖の中央値の曲線を示し、それは試験Ａにおける３種類の異なる用量での実施例９２の化合物の、腫瘍増殖の中央値へのインビボでの作用を、処置無しおよびカンプトテシン単独と比較して示す。
【図３】図３は実施例９３の化合物に関する腫瘍増殖の中央値の曲線を示し、それは試験Ｂにおける３種類の異なる用量での実施例９３の化合物の、腫瘍増殖の中央値へのインビボでの作用を、処置無しおよびカンプトテシン単独と比較して示す。
【発明を実施するための形態】
【００５７】
本明細書で用いられる用語“アミノ酸”はあらゆる天然の、または非天然のアミノ酸を指し、それはα−アミノ酸、β−アミノ酸、またはγ−アミノ酸を含むがそれらに限定されず、別途示されない限りＤ−またはＬ−アミノ酸のどちらであってもよい。
【００５８】
Ｎ末端のアミノ酸を除いて、この開示における全てのアミノ酸の略語（例えばAla）は-NH-CI(R’)-CO-の構造を有しており、ここでRおよびR’はそれぞれ独立して水素またはアミノ酸の側鎖（例えば、Alaに関してはR = CH3およびR’ = H）であり、またはRおよびR’は繋がれて環系を形成していてよい。
【００５９】
この発明のペプチドは別の形式、例えば[Pro34]hNPY(1-36)-NH2 (SEQ ID NO:83)によっても表され、それはカッコの間に置かれた天然の配列から置換されたアミノ酸、例えばｈＮＰＹ中のGlnの代わりにProを有する。hNPY(1-36)-NH2(SEQ ID NO:1)中の名称“NH2”はそのペプチドのＣ末端がアミド化されていることを示し、一方でhNPY(1-36)-OH (SEQ ID NO:1)は遊離酸型を示す。
【００６０】
下記の本出願において用いられる略語の一部のリストは参照を容易にするために提供するのであって、本明細書で定義されておらず本出願において用いられているあらゆる略語はそれらの認められた意味に反して用いられてはいない。
【００６１】
Abu    α-アミノ酪酸
Acc    1-アミノ-1-シクロ(C3-9)アルキルカルボン酸、ここで
A3cは1-アミノ-1-シクロプロパンカルボン酸を表す；
A4cは1-アミノ-1-シクロブタンカルボン酸を表す；
A5cは1-アミノ-1-シクロペンタンカルボン酸を表す；そして
A6cは1-アミノ-1-シクロヘキサンカルボン酸を表す；
Adc    10-アミノデカン酸
Ado    12-アミノドデカン酸
Aepa    4-(2-アミノエチル)-1-カルボキシメチル-ピペラジン、次の構造により表される:
【００６２】
【化１７】
0005584236.tif 000018
【００６３】
Ahp    7-アミノヘプタン酸
Ahx    6-アミノヘキサン酸
Aib    α-アミノイソ酪酸
Aic    2-アミノインダン-2-カルボン酸
AlaまたはA    アラニン
Anc    9-アミノノナン酸
Aoc    8-アミノオクタン酸
Apc    4-アミノ-4-カルボキシピペリジン、次の構造により表される:
【００６４】
【化１８】
0005584236.tif 000019
【００６５】
ここで、平行な線
【００６６】
【化１９】
0005584236.tif 000020
【００６７】
は、その部分の別の部分または配列への結合の点を示す。
【００６８】
Apn    5-アミノペンタン酸
ArgまたはR    アルギニン
hArg    ホモアルギニン
AsnまたはN    アスパラギン(luorenylme)
AspまたはD    アスパラギン酸
Aun    11-アミノウンデカン酸
Cha    β-シクロヘキシルアラニン
CysまたはC    システイン
Dab    2,4-ジアミノ酪酸
Dap    2,3-ジアミノプロピオン酸
Dhp    3,4-デヒドロプロリン
Dmt    5,5-ジメチルチアゾリジン-4-カルボン酸
Doc    8-アミノ-3,6-ジオキサオクタン酸、次の構造により表される:
【００６９】
【化２０】
0005584236.tif 000021
【００７０】
Gaba    4-アミノ酪酸
GlnまたはQ    グルタミン
GluまたはE    グルタミン酸
GlyまたはG    グリシン
HisまたはH    ヒスチジン
3Hyp    トランス-3-ヒドロキシ-L-プロリン、すなわち、(2S, 3S)-3-ヒドロキシピロリジン-2-カルボン酸
シス-3Hyp    シス-3-ヒドロキシ-L-プロリン、すなわち、(2S, 3R)-3-ヒドロキシピロリジン-2-カルボン酸
4Hyp    4-ヒドロキシプロリン、すなわち、(2S, 4R)-4-ヒドロキシピロリジン-2-カルボン酸
シス-4Hyp    シス-4-ヒドロキシ-L-プロリン、すなわち、(2S, 4S)-4-ヒドロキシピロリジン-2-カルボン酸
IleまたはI    イソロイシン
Inc    インドリン-2-カルボン酸
Inp    イソニペコチン酸
Ktp    4-ケトプロリン
LeuまたはL    ロイシン
hLeu    ホモロイシン
LysまたはK    リシン
MetまたはM    メチオニン
Nip    ニペコチン酸
Nle    ノルロイシン
Nε    括弧内の物がＬｙｓ側鎖のイプシロン−窒素に結合していることを示す
Nva    ノルバリン
Oic    オクタヒドロインドール-2-カルボン酸
Orn    オルニチン
2-Pal    β-(2-ピリジル)アラニン
3-Pal    β-(3-ピリジル)アラニン
4-Pal    β-(4-ピリジル)アラニン
PheまたはF    フェニルアラニン
hPhe    ホモフェニルアラニン
4NH2CH2Phe    4-アミノメチル-フェニルアラニン
4NH2Phe    4-アミノ-フェニルアラニン
ProまたはP    プロリン
hPro    ホモプロリン
Sar    サルコシンまたはN-メチルグリシン
SerまたはS    セリン
Suc    スクシニル、次の構造により表される:
【００７１】
【化２１】
0005584236.tif 000022
【００７２】
ThrまたはT    スレオニン
Tic  1,2,3,4-テトラヒドロイソキノリン-3-カルボン酸
Tle    tert-ロイシン
ValまたはV    バリン
本明細書において用いられる特定の他の略語を次のように定義する：
Ac    アセチル
Aloc    アリルオキシカルボニル
Boc    tert-ブチルオキシカルボニル
Bhoc    ベンズヒドリルオキシカルボニル
BSA    ウシ血清アルブミン
Bzl    ベンジル
CPT    カンプトテシン
DCM    ジクロロメタン
Dde    1-(4,4-ジメチル-2,6-ジオキソシクロヘキサ-1-イリジン)エチル（1-(4,4-dimethyl-2,6-dioxocyclohex-1-ylidine)ethyl）
DIC    N,N-ジイソプロピルカルボジイミド
DIEA    ジイソプロピルエチルアミン
DMA    N,N-ジメチルアセトアミド
Dmab    4-{N-(1-(4,4-ジメチル-2,6-ジオキソシクロヘキシリデン)-3-メチルブチル)-アミノ}ベンジル
DMAP    4-(ジメチルアミノ)ピリジン
DMF    ジメチルホルムアミド
DNP    2,4-ジニトロフェニル
D5W    水中5%デキストロース
EDC    1-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド塩酸塩
et    エチル
EMEM    イーグル最小必須培地
Fmoc    フルオレニルメチルオキシカルボニル
HATU    O-(7-アザベンゾトリアゾール-1-イル)-1,1,3,3-テトラメチルウロニウム  ヘキサフルオロホスフェート
HBTU    2-(1H-ベンゾトリアゾール-1-イル)-1,1,3,3-テトラメチルウロニウム  ヘキサフルオロホスフェート
cHex    シクロヘキシル
HOAT    O-(7-アザベンゾトリアゾール-1-イル)-1,1,3,3-テトラメチルウロニウム  ヘキサフルオロホスフェート
HOBt    1-ヒドロキシ-ベンゾトリアゾール
HPLC    高速液体クロマトグラフィー
ip    腹腔内注射
iv    尾静脈注射
MBHA    4-メチルベンズヒドリルアミン
Mmt    4-メトキシトリチル
NMP    N-メチル-2-ピロリジノン
Pbf    2,2,4,6,7-ペンタメチルジヒドロベンゾフラン-5-スルホニル
qwk x 3    週１回で３回投与(once-weekly for three doeses)
Sc(Otf)3    トリフルオロメタンスルホン酸スカンジウム(III)
tBu    tert-ブチル
TEA    トリエチルアミン
TGD    腫瘍増殖遅延
TGI    腫瘍増殖阻害
TIS    トリイソプロピルシラン
TOS    トシル
Trt    トリチル
TFA    トリフルオロ酢酸
TFFH    テトラメチルフルオロホラミジニウム（tetramethylfluoroforamidinium）  ヘキサフルオロホスフェート
Lys-ψ(CH2-NH)Tyrは次の構造を有する：
【００７３】
【化２２】
0005584236.tif 000023
【００７４】
。
【００７５】
ギリシャ文字プサイ“ψ”は本明細書においてペプチド結合が偽ペプチド結合により置き換えられていることを示すために用いられている。アミノ酸配列の名前において、用語ψの形式はA-ψ(X-X’)-Bであり、ここでAはそのカルボニル基が修飾されてＸになっているアミノアシル基であり、Bはそのα−アミノ基が修飾されてＸ’になっているアミノアシル基である。ＸおよびＸ’は例えばLys-ψ(CH2-NH)-Tyrのように結合により隔てられた一連の元素記号として示される。
【００７６】
rv(アミノ酸)の中に示されたアミノ酸は、その化合物中で“逆”向きに結合している。rv(アミノ酸)の中に示されたアミノ酸は、ＬまたはＤ立体構造のどちらを有していてもよい。例えば、“カンプトテシン-rvAsp-Suc”は次の構造を有し：
【００７７】
【化２３】
0005584236.tif 000024
【００７８】
；“カンプトテシン-rvD-Asp-Suc”部分は次の構造を有する：
【００７９】
【化２４】
0005584236.tif 000025
【００８０】
。
【００８１】
“rvD/Lアミノ酸”または“rv(D-/L-アミノ酸)”は、示されたアミノ酸のＬおよびＤ立
体構造の混合物を指す。例えば、“カンプトテシン-rvD/Lasp-Suc”部分は
【００８２】
【化２５】
0005584236.tif 000026
【００８３】
；および
【００８４】
【化２６】
0005584236.tif 000027
【００８５】
の混合物を含む。
【００８６】
“アルキル”は１個以上の炭素原子を含む炭化水素基を指し、ここで多数の炭素原子は、もし存在するならば、単結合によりつながっており、その例にはメチル、エチル、プロピル、およびブチルが含まれるが、それらに限定されない。アルキル炭化水素基は直鎖であってよく、または１個以上の分枝もしくは環式基を含んでいてよく、その例にはイソプロピルおよびtertブチルが含まれるが、それらに限定されない。
【００８７】
“置換されたアルキル”は、炭化水素基の１個以上の水素原子が、ハロゲン（すなわちフッ素、塩素、臭素およびヨウ素）、OH、CN、SH、NH2、NHCH3、NO2、１〜６個のハロゲンで置換された(C1-2)アルキル、CF3、OCH3、OCF3、および(CH2)0-4-COOHからなるグループから選択される１個以上の置換基で置き換えられているアルキルを指す。異なる態様において、１、２、３または４個の置換基が存在する。(CH2)0-4-COOHの存在は、結果としてアルキル酸の生成をもたらす。(CH2)0-4-COOHを含むアルキル酸の例には、2-ノルボルナン酢酸、tert-酪酸および3-シクロペンチルプロピオン酸が含まれるが、それらに限定されない。
【００８８】
“ヘテロアルキル”は、炭化水素基中の炭素原子の１個以上が次の原子または基：アミノ、アミド、O、S、N、およびカルボニルの内の１個以上で置き換えられているアルキルを指す。異なる態様において、１または２個のヘテロ原子が存在する。
【００８９】
“置換されたヘテロアルキル”は、炭化水素基の１個以上の水素原子が、ハロゲン（すなわちフッ素、塩素、臭素およびヨウ素）、OH、CN、SH、NH2、NHCH3、NO2、１〜６個のハロゲンで置換された(C1-2)アルキル、CF3、OCH3、OCF3、および(CH2)0-4-COOHからなるグループから選択される１個以上の置換基で置き換えられているヘテロアルキルを指す。異なる態様において、１、２、３または４個の置換基が存在する。
【００９０】
“アルケニル”は、２個以上の炭素で構成され、１個以上の炭素−炭素二重結合が存在する炭化水素基を指し、その例にはビニル、アリル、ブテニルおよびプロペニルが含まれ
るが、それらに限定されない。アルケニル炭化水素基は直鎖であってよく、または１個以上の分枝もしくは環式基を含んでいてよく、その例にはｔ−ブテニルに対するｎ−ブテニル、およびシクロペンテニルと比較したｎ−ペンテニルが含まれるが、それらに限定されない。
【００９１】
“置換されたアルケニル”は、１個以上の水素がハロゲン（すなわちフッ素、塩素、臭素およびヨウ素）、OH、CN、SH、NH2、NHCH3、NO2、１〜６個のハロゲンで置換された(C1-2)アルキル、CF3、OCH3、OCF3、および(CH2)0-4-COOHからなるグループから選択される１個以上の置換基で置き換えられているアルケニルを指す。異なる態様において、１、２、３または４個の置換基が存在する。
【００９２】
“アリール”は、共役パイ電子系を有する少なくとも１個の環を有し、２個までの共役した、または縮合した環系を含む、場合により置換された芳香族基を指す。アリールにはカルボキシルアリール(carboxylic aryl)、ヘテロ環式アリールおよびビアリール基が含まれるが、それらに限定されない。好ましくは、アリールは５または６員環である。ヘテロ環式アリールに関して好ましい原子には、硫黄、酸素および窒素の内の１種類以上が含まれるが、それらに限定されない。アリールの例には、フェニル、1-ナフチル、2-ナフチル、インドール、キノリン、2-イミダゾール、および9-アントラセンが含まれるが、それらに限定されない。アリールの置換基は、(C1-4)アルキル、(C1-4)アルコキシ、ハロゲン（すなわちフッ素、塩素、臭素およびヨウ素）、OH、CN、SH、NH2、NO2、１〜５個のハロゲンで置換された(C1-2)アルキル、CF3、OCF3、および(CH2)0-4-COOHからなるグループから選択される。異なる態様において、アリールは０、１、２、３または４個の置換基を含む。
【００９３】
“アルキルアリール”は、上記で定めたような“アリール”に結合した“アルキル”を指す。
【００９４】
用語“シクロアルキル”は、当業者に既知の示された炭素数のモノ−シクロアルキル基またはビ−シクロアルキル基を含むことを意図する。
【００９５】
用語“ヘテロ環”には１個以上のヘテロ原子、例えば酸素、窒素および硫黄を有する単環および二環系が含まれる。その環系は芳香族、例えばピリジン、インドール、キノリン、ピリミジン、チオフェン（チエニルとしても知られている）、フラン、ベンゾチオフェン、テトラゾール、ジヒドロインドール、インダゾール、Ｎ−ホルミルインドール、ベンズイミダゾール、チアゾール、およびチアジアゾールであってよい。その環系は非芳香族、例えばピロリジン、ピペリジン、モルホリン、および同様のものであってもよいが、それらに限定されない。
【００９６】
合成
この発明の化合物は本明細書の実施例で開示されている技法ならびに当技術で周知である技法を用いて製造することができ、それを用いて製造した。例えば、ＮＰＹ類似体のポリペプチド領域は化学的に、または生化学的に合成する、および／または修飾することができる。例えば、Stewart, J. M., et al., Solid Phase Synthesis, Pierce Chemical Co.、第２版(1984)を参照；核酸の細胞中への導入および核酸の発現を含む生化学的合成に関する技法の例に関しては、例えばSambrook et al., Molecular Cloning, A Laboratory
Manual、第２版、Cold Spring Harbor Laboratory Press (1989)を参照。下記の実施例も、本発明の標的化された細胞毒性化合物を合成するための方法を説明する。その実施例は説明のために提供するのであって、本発明の範囲を限定することを意味するものでは決して無い。
【実施例】
【００９７】
実施例１：[Aib10, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2 (SEQ ID NO:3)
表題のペプチドを、Ｆｍｏｃ化学を用いて組み立てた。ペプチドのＣ末端部分(残基18〜36)をＡＢＩ  ４３３Ａペプチド合成機(Applied Biosystems、米国カリフォルニア州フォスターシティ)上で、1.0 mmoleスケールで合成した。1.37 gの0.73 mmol / RinkアミドMBHA樹脂(Novabiochem、米国カリフォルニア州サンディエゴ)を含む反応容器を反応容器の中に置いた。次いでその樹脂を10 mlのNMPで15分間処理して樹脂を膨潤させた。ABI FastMoc 1.0（登録商標）プロトコルを用いてペプチドを生成した。
【００９８】
それぞれのサイクルは、20％ピペリジンを用いたＮ末端Fmocの脱保護(deblocking)およびそれに続く大規模な(extensive)NMP洗浄で構成されていた。次いでそれぞれのアミノ酸の予め包装された1.0 mmoleのカートリッジを0.45M HOBT/HBTU中で溶解させた。アミノ酸の溶解に十分な時間が充てられた後、それを自動的に活性化容器に移した。さらに２個の1.0 mmoleのアミノ酸カートリッジを溶解させて活性化容器に移し、カップリングの工程あたり合計３当量のアミノ酸を用いた。次いで、合計６当量のDIPEAのため、DIPEAの2M溶液3 mlを活性化容器に導入した。
【００９９】
次いでこの混合物全部を樹脂に導入し、１５分間混合させた。反応容器を空にし、NMPで洗浄し、次いで第２カップリング工程を続いて行った。第２カップリング工程の後、樹脂を再度完全に洗浄した。それぞれのアミノ酸を同様の方式で二重カップリングした。最初のTyr残基のカップリング工程の後、次の４つのカップリング工程のそれぞれ、およびそれぞれのArgのカップリング工程のため、樹脂を5 mlのキャッピング溶液(0.5M無水酢酸/ 0.13M DIPEA / 0.01M HOBT)でキャッピングしてあらゆるアセチル化されていない樹脂の部位を保護した。カップリング工程に関して次のアミノ酸カートリッジを用いた：サイクル1) Fmoc-Tyr(tBu)-OH; サイクル2) Fmoc-Arg(Pbf)-OH；サイクル3) Fmoc-4Hyp-OH；サイクル4) Fmoc-Arg(Pbf)-OH；サイクル5) Fmoc-Thr(tBu)-OH；サイクル6) Fmoc-Ile-OH；サイクル7) Fmoc-Leu-OH；サイクル8) Fmoc-Asn(Trt)-OH；サイクル9) Fmoc-Ile-OH；サイクル10) Fmoc-Tyr(tBu)-OH；サイクル11) Fmoc-His(Trt)-OH；サイクル12) Fmoc-Arg(Pbf)-OH；サイクル13) Fmoc-Leu-OH；サイクル14) Fmoc-Ala-OH；サイクル15) Fmoc-Ser(tBu)-OH；サイクル16) Fmoc-Tyr(tBu)-OH；サイクル17) Fmoc-Tyr(tBu)-OH；サイクル18) Fmoc-Arg(Pbf)-OH；およびサイクル19) Fmoc-Ala-OH。
【０１００】
最後のカップリングサイクルの後、樹脂をNMPで洗浄し、続いて標準的なＮ末端Fmocの脱保護を行い、NMPで、続いてDCMで洗浄した。ペプチドバックボーンのＣ末端部分(残基18〜36)の組み立ての後、樹脂の１０分の１(0.1 mmole)を用いてペプチドのＮ末端部分を構築し、残りを保存した。表題のペプチドのＮ末端部分(残基1〜17)を、Liberty Peptide
Synthesizer (CEM、米国ノースキャロライナ州マシューズ)上で、0.1 mmoleスケールで、マイクロ波支援Fmoc化学を用いて構築した。前の合成からの樹脂を50 mlコニカルチューブに15 mlのDMFと共に入れ、合成機上の樹脂の位置上に装填した。次いでその樹脂を、自動化されたプロセスにより定量的に反応容器に移した。0.1 mmoleスケールでの合成のための標準的なLiberty合成プロトコルを用いた。このプロトコルには、DMF中の0.1M HOBTを含む20% ピペリジン7 mlを用いた最初の処理によるＮ末端のFmoc部分の脱保護が含まれている。その最初の脱保護の工程は、マイクロ波電力（４５ワット、最大温度７５℃）および窒素による泡立て（３秒間オン／７秒間オフ）を用いて３０秒間であった。次いで反応容器から液体を排出し(drained)、それが３分間の期間であったこと以外は第１の処理と同じである第２のピペリジン処理を行った。
【０１０１】
次いで樹脂から液体を排出し、DMFで数回、完全に洗浄した。次いで、DMF中0.2Mストック溶液として調製された保護されたアミノ酸、Fmoc-Met-OHを添加し(2.5 ml、5当量)、続いて1.0 mlのDMF中0.45M (4.5当量)HBTUを添加した。これに続き0.5 mlのNMP中2M (10当
量) DIPEAを添加した。カップリングの工程は、２０ワットのマイクロ波電力、７５℃の最大温度、および同程度の窒素による泡立てを用いて５分間行った。最初のカップリングの工程の後、反応容器から液体を排出して廃棄し、カップリングの工程を繰り返した。
【０１０２】
次いでサイクル１と同様のサイクル２を開始した。全てのアミノ酸を同様にして導入し、シークエンス全体を通して二重カップリングの方法を用いた。残基9-10 (Gly-Aib)は、カップリングの工程のすぐ後にキャッピングの手順を含んでいた。キャッピングは、NMP中の0.015M HOBTを含む0.5M無水酢酸7 mlおよび2M DIPEA溶液2 mlの添加により、多段階マイクロ波プロトコルを用いて行った：５０ワットの電力で３０秒間（最大温度６５℃）、続いて３０秒間のマイクロ波電力オフ、続いて第２ラウンドの３０秒間のマイクロ波電力オン（５０ワット）、次いで再び３０秒間のマイクロ波電力無し。次いで樹脂から液体を排出し、DMFで完全に洗浄した。次のアミノ酸(Advanced Chemtech、米国ケンタッキー州ルイスビル)を用いた:サイクル20) Fmoc-Met-OH；サイクル21) Fmoc-Asp(OtBu)-OH；サイクル22) Fmoc-Glu(OtBu)-OH；サイクル23) Fmoc-Ala-OH；サイクル24) Fmoc-Pro-OH；サイクル25) Fmoc-Ala-OH；サイクル26) Fmoc-Asp(OtBu)-OH；サイクル27) Fmoc-Aib-OH；サイクル28) Fmoc-Gly-OH；サイクル29) Fmoc-Pro-OH；サイクル30) Fmoc-Asn(Trt)-OH；サイクル31) Fmoc-Asp(OtBu)-OH；サイクル32) Fmoc-Pro-OH；サイクル33) Fmoc-Lys(Boc)-OH；サイクル34) Fmoc-Ser(tBu)-OH；サイクル35) Fmoc-Pro-OH；サイクル36) Fmoc-Tyr(tBu)-OH。
【０１０３】
一度ペプチドのバックボーンが完成したら、標準的なピペリジン処理を用いて、前に記述した標準的な脱保護の手順を用いてＮ末端のFmoc基を除去した。次いで樹脂をDMFで完全に洗浄し、次いで移動用の溶媒としてDMFを用いて50 mlコニカルチューブに戻した。
【０１０４】
5 mlの次の試薬を用いた処理によりその樹脂を脱保護し、樹脂から切り離した：5% TIS、2%水、5% (w/v) DTT、および88% TFA、ならびに３．５時間混合させた。濾液を45 mlの冷無水エチルエーテルの中に集めた。沈殿物を冷却遠心機において3500 RPMで１０分間遠心分離してペレットにした。エーテルをデカントし、ペプチドを新しいエーテル中で再懸濁した。そのエーテルでの仕上げを合計２回行った。最後のエーテルでの洗浄の後、ペプチドを風乾させて残留したエーテルを除去した。ペプチドのペレットを8 mlのアセトニトリル、続いて8 mlの脱イオン水中で再懸濁し、完全に溶解させた。
【０１０５】
次いでそのペプチド溶液を質量分析により分析した。エレクトロスプレーイオン化を用いた質量分析は4212.1の質量を含む主生成物を同定し、これは望まれる生成物と一致する。250 x 4.6 mm C18カラム(Phenomenex、米国カリフォルニア州トーランス)を用いる、３０分間にわたる2〜60%アセトニトリル(0.1% TFA)の勾配を用いる分析的HPLC分析は、45％の純度を有する主生成物を同定した。次いでその粗製のペプチドを、C18逆相カラムを備えた分取ＨＰＬＣ上で、10〜60%アセトニトリル(0.1% TFA)を用いて10 ml/分の流速で50分間かけて精製した。その精製された生成物を純度に関してＨＰＬＣにより(＞99%)、および質量分析により(4212.8ダルトン)分析し、その実測質量は予想される質量である4212.7と十分に一致していた。続いてそのペプチドを凍結乾燥させると39 mgの精製された生成物が得られ、これは9%の収率を表している。
【０１０６】
実施例９１：[カンプトテシン-rvGly-Suc-Tyr1, Nle17, Pro34]hNPY(1-36)-NH2 (SEQ ID NO:88)
4482.  CPT-rvGly-Boc
【０１０７】
【化２７】
0005584236.tif 000028
【０１０８】
カンプトテシン(“ＣＰＴ”) (6.0 g, 17.2 mmol)、Boc-Gly-OH (10.0 g, 57.0 mmol)、DMAP (6.4 g, 52.2 mmol)、Sc(Otf)3 (5.0 g, 10.2 mmol)およびDIEA (6.0 mL, 34.4 mmol)を、DCM/DMF (300/30 mL)を含む500-mL丸底フラスコの中に添加した。１０分間攪拌した後、EDC (13.0 g, 68.0 mmol)を一度に添加した。その反応混合物を室温で１６時間攪拌した。それは徐々に懸濁液から透明な溶液へと変わった。ロータリーエバポレーター上でDCMを除去し、残ったDMF溶液をMeOH (200 mL)中に取り込んで冷蔵庫に入れた。黄色の結晶(2〜16時間かけて形成された)を濾過し、ヘキサンで洗浄した。空気乾燥後に固体が得られた(5.9 g)。
【０１０９】
2. CPT-rvGly-NH2
【０１１０】
【化２８】
0005584236.tif 000029
【０１１１】
CPT-rvGly-Boc (3.3 g, 6.5 mmol)のDCM (70 mL)中における溶液に、TFA (70 mL)を添加した。反応混合物を室温で２時間攪拌した。次いでエーテル(450 mL)を添加し、濾過の後に黄色固体が得られ、続いてエーテルで洗浄した(3.1 g)。
【０１１２】
3. CPT-rvGly-Suc-OH
【０１１３】
【化２９】
0005584236.tif 000030
【０１１４】
上記で得られたCPT-rvGly-NH2 (6.5 mmol)をDMF (90 mL)中で溶解させた。無水コハク酸(1.2 g, 11.9 mmol)およびTEA (3.2 mL, 22.7 mmol)を添加した。その混合物を室温で４時間攪拌した。次いでその混合物を氷水(1200 mL)を含むビーカーの中に注ぎ、濃HClで処理してpHを約3にした。黄色固体を濾過し、水で洗浄した。高度な真空で乾燥させた後、固体が得られた(3.77 g)。
【０１１５】
4. 保護されたペプチド[Tyr1, Nle17, Pro34]hNPY(1-36)-RinkアミドMBHA樹脂(SEQ ID NO:88)
【０１１６】
【化３０】
0005584236.tif 000031
【０１１７】
RinkアミドMBHA樹脂(0.69 mmol/g装填、0.365 g)およびFmoc化学の延長した(prolonged)二重カップリングを用いて、ABI 433a Peptide Synthesizer上で0.25 mmolスケールで調製し、最後に脱保護してTyr1からFmoc基を除去した。合成が完了した後、樹脂上の保護されたペプチドを空気乾燥し、それにより固体を得た(0.455 g)。
【０１１８】
5. [カンプトテシン-rvGly-Suc-Tyr1, Nle17, Pro34]hNPY(1-36)-NH2 (SEQ ID NO:88)
【０１１９】
【化３１】
0005584236.tif 000032
【０１２０】
樹脂上の保護されたペプチド(0.2 g, 0.11 mmol)およびDMF (5 mL)の混合物に、CPT-rvGly-Suc-OH (190 mg, 0.38 mmol)、HOBt (85 mg, 0.63 mmol)、DIC (0.098 mL, 0.63 mmol)およびDIEA (1.2 mL, 6.9 mmol)を添加した。１６時間振とうした後、その混合物から液体を排出し、DMFで３回、次いでDCMで３回洗浄した。次いでその樹脂をTFA:TIS:水(9.5:0.8:0.85 mL)で３時間処理した。濾過して樹脂を分離してすぐにエーテル(80 mL)を濾液に添加した。黄色い沈殿を遠心分離を用いて集めた。粗生成物を10 mL水/ 5 mLアセトニトリル中で再度溶解させ、分取HPLC (1-in C18カラム)で精製した。望まれる生成物を含む画分(MSおよびHPLCにより確認した)を集めて凍結乾燥させた。黄色固体が得られた(28.4 mg)。ESI-MS分析が示した分子量は4709.9であった(計算された分子量4709.9と一致する)。純度はHPLC分析に基づいて97.5%であった。
【０１２１】
実施例９２／９２Ａ：[カンプトテシン-rvD/Lasp-Suc-Tyr1, Nle17, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2 (SEQ ID NO:89)
4482.  CPT-rvD/Lasp(OtBu)-Boc
【０１２２】
【化３２】
0005584236.tif 000033
【０１２３】
CPT (1.5 g, 4.3 mmol)、Boc-Asp(OtBu)-OH (4.1 g, 14.2 mmol)、DMAP (1.6 g, 13.1 mmol)、Sc(Otf)3(1.25 g, 2.5 mmol)およびDIEA (1.5 mL, 8.6 mmol)を、DCM/DMF (75/20
mL)を含む250-mL丸底フラスコの中に添加した。１０分間攪拌した後、EDC (3.25 g, 17.0 mmol)を一度に添加した。反応混合物を室温で２〜１６時間攪拌した。その混合物は徐々に懸濁液から透明な溶液へと変わった。ロータリーエバポレーター上でDCMを除去し、残ったDMF溶液を氷水で処理した。濾過し、高度な真空で乾燥させた後、黄色固体が得られた(3.4 g)。HPLC分析は２個のピークを示し、それは4:1の比率のD-およびL-異性体両方を示していた。
【０１２４】
2. CPT-rvD/Lasp(OtBu)-NH2
【０１２５】
【化３３】
0005584236.tif 000034
【０１２６】
粗製のCPT-rvD/Lasp(OtBu)-Boc (1.1 g, 1.7 mmol)のt-BuOH (50 mL)中における懸濁液に、ジオキサン中4M HCl(50 mL)を添加した。その反応混合物を室温で２５分間攪拌した。次いでエーテル(900 mL)を添加し、微細な黄色い沈殿を得た。
【０１２７】
3. CPT-rvD/Lasp(OtBu)-Suc-OH
【０１２８】
【化３４】
0005584236.tif 000035
【０１２９】
上記で得られたCPT-rvD/Lasp(OtBu)-NH2 (1.7 mmol)をDMF (20 mL)中で溶解させた。無水コハク酸(0.28 g, 2.8 mmol)およびTEA (0.8 mL, 5.7 mmol)を添加した。その混合物を室温で１６時間攪拌した。次いでその混合物を氷水(200 mL)を含むビーカーの中に注ぎ、濃HClで処理して約３のｐＨを得た。微細な黄色固体が得られた(0.72 g)。HPLC分析は4:1の比率の２個のピークを示した。
【０１３０】
4. 保護されたペプチド[Tyr1, Nle17, 4Hyp34]hNPY(1-36)-RinkアミドMBHA樹脂(SEQ ID
NO:89)
表題ペプチドを、実施例８１に関するものと類似の手順に従って調製した。
【０１３１】
5. [カンプトテシン-rvD/Lasp-Suc-Tyr1, Nle17, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2 (SEQ ID NO:89)
保護された[Tyr1, Nle17, 4Hyp34]hNPY(1-36)-RinkアミドMBHA樹脂(0.125 mmol)およびDMF (5 mL)の混合物中に、CPT-rvD/Lasp(OtBu)-Suc-OH (230 mg, 0.37 mmol)、HOBt (84 mg, 0.63 mmol)、DIC (0.097 mL, 0.63 mmol)およびDIEA (1.3 mL, 7.5 mmol)を添加した。実施例８１に関する手順と類似の手順に従った。得られた精製された物質の量は31.0 mgであった。ESI-MS分析が算出した分子量は4783.8であった(計算された分子量4784.2と一致する)。純度は分析的HPLC分析に基づいて100%であった。
【０１３２】
実施例９３：[カンプトテシン-rvD/L-Asp-Suc-Tyr1, Nle17, A6c31, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:90)
[CPT-rvD/Lasp-Suc-Tyr1, Nle17, A6c31, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2 を、CPT-rvD/Lasp(OtBu)-Suc-OHおよび対応するペプチド[Tyr1, Nle17, A6c31, 4Hyp34]hNPY(1-36)-RinkアミドMBHA樹脂から、実施例８２と同様に調製した。得られた精製された物質の量は、重量23.0 mgであった。ESI-MS分析が示した分子量は4796.0であった(計算された分子量4796.2と一致する)。純度は分析的HPLC分析に基づいて100%であった。
【０１３３】
当業者は、本発明の他の化合物を、上記の実施例で開示された合成手順に類似した合成手順を用いて調製することができる。実施例１〜７７および９１〜１０７の化合物に関する物理的データを表１に示す。
【０１３４】
表１
【０１３５】
【表１−１】
0005584236.tif 000036
【０１３６】
【表１−２】
0005584236.tif 000037
【０１３７】
【表１−３】
0005584236.tif 000038
【０１３８】
インビトロ放射リガンドNPY-Y1およびNPY-Y2受容体結合アッセイ
それぞれ(respectifully)NPY-Y1およびNPY-Y2受容体を発現する、ヒト神経芽細胞腫細胞株SK-N-MCおよびSK-N-BE2 (アメリカ培養細胞系統保存機関、米国メリーランド州ロックビル)を、10%ウシ胎児血清および5%ニワトリ胚抽出物を含むEMEM中で培養し、95%空気および5% CO2の加湿した雰囲気中で37℃で維持した。
【０１３９】
インビトロNPY-Y1およびNPY-Y2放射リガンド結合アッセイのため、適切な細胞(NPY-Y1に関してSK-N-MC; NPY-Y2に関してSK-N-BE2)を収集し、次いで20 mlの氷冷した50 mM Tris-HCl中でBrinkman Polytron (米国ニューヨーク州ウエストベリー)を用いてホモジナイズした(設定６、１５秒)。ホモジネートを遠心分離(39,000 g / 10分間)により２回洗浄し、最終的なペレットを、2.5 mM MgCl2、0.1 mg/mlバシトラシン(Sigma Chemical、米国ミズーリ州セントルイス)、および0.1% BSAを含む50 mM Tris-HCl中で再懸濁した。
【０１４０】
アッセイのため、前記の懸濁液の分割量(aliquots) (0.4 ml)を、0.05 nM [125I]PYY (2200 Ci/mmol, Perkin-Elmer、マサチューセッツ州ボストン)と共に、0.05 mlの未標識の競合する試験ペプチドまたは試験標的化細胞毒性化合物有りおよび無しで保温した。１００分間の保温(25 ℃)の後、結合した[125I]PYYを、予め0.3%ポリエチレンイミンに浸したGF/Cフィルター(Brandel、米国メリーランド州ゲーサーズバーグ)を通す急速濾過により、遊離のものから分離した。次いでそのフィルターを氷冷した50 mM Tris-HClの5 mlの分割量で３回洗浄し、フィルター上に捕えられた結合した放射活性をガンマ分光法(Wallac LKB、米国メリーランド州ゲーサーズバーグ)により計数した。特異的な結合を、結合した全[125I]PYYから1000 nM PYY (Bachem、米国カリフォルニア州トーランス)の存在下で結合した[125I]PYYを引いたものとして定義した。阻害定数(Ki)は、周知であるチェン・プルソフの等式(Cheng-Prusoff equation)および前記のデータを用いて算出し、それをNPY-Y1およびNPY-Y2に関する前記化合物の選択性と一緒に表２に示す。
【０１４１】
実施例１〜３８、４０〜６１、６４〜７７、および９１〜１０３の化合物のそれぞれに対してすぐ前で記述した放射リガンドアッセイを行い、前記化合物のほぼ全てが100 nMより下のKiを有しており、同様に例示した化合物の一部はnMより下の範囲のKiの値を有していることが分かった。前記化合物のほぼ全てがNPY-Y2と比較してNPY-Y1に対して高度に選択的に結合することも分かった。
【０１４２】
表２
【０１４３】
【表２−１】
0005584236.tif 000039
【０１４４】
【表２−２】
0005584236.tif 000040
【０１４５】
【表２−３】
0005584236.tif 000041
【０１４６】
インビボ増殖アッセイ
実施例９１、９２および９３の化合物を、２種類の試験“試験Ａ”および“試験Ｂ”で評価し、それぞれが１グループ(n = 10)の未処置の動物、ビヒクルを与えられる１グループ、およびコンジュゲートしていないカンプトテシンを7.5 mg/kgで与えられる１グループを用いた。週１回の処置を３週間、薬物の溶解性の不足または尾の壊死により腹腔内注射が必要とされた場合を除き、尾静脈注射により施した。試験Ａは、実施例９１を55.65 mg/kg、111.3 mg/kgおよび222.6 mg/kgで、ならびに実施例９２を55.3 mg/kg、110.6 mg/kgおよび221.2 mg/kgで与えられるマウスのグループを評価した。実施例９３は試験Ｂにおいて55.45 mg/kg、110.9 mg/kgおよび221.8 mg/kgで評価された。抗腫瘍活性を、対照グループと比較した処置グループにおけるエンドポイント腫瘍サイズ(endpoint tumor size)までの時間の中央値の差として定義される腫瘍増殖遅延（“ＴＧＤ”）により、ならびに測定可能なグループの応答および大きなグループの大きさの間の釣合いを提供する試験の日における処置および対照グループの腫瘍体積の中央値の間の差として定義される腫瘍増殖阻害（“ＴＧＩ”）により評価した。毒性を、体重測定および臨床観察により評価した。
【０１４７】
メスのヌードマウス(nu/nu, Harlan)は１０〜１１週齢であり、１日目（“１日目”は下記で定義する）に20.2〜31.1 gおよび21.2〜29.8 gの範囲の体重を有していた。その動物は適宜水(逆浸透、1 ppm Cl)ならびに18.0%の粗タンパク質、5.0%の粗脂肪、および5.0%の粗繊維からなるNIH 31 Modified and Irradiated Lab Diet（登録商標）を与えられた。マウスは、21〜22℃(70〜72°F)および湿度40〜60%において12時間の光周期で照射された静的マイクロアイソレーター中のALPHA-dri（登録商標）bed-o’cobs（登録商標）Labo
ratory Animal Beddingに収容された。
【０１４８】
ヒトMCF-7乳癌細胞を、100単位/mLペニシリンＧナトリウム、100 μg/mL硫酸ストレプトマイシン、および25 μg/mLゲンタマイシンを含むRPMI 1640培地中で維持した。培地に10%熱非働化ウシ胎児血清および2 mMグルタミンを補った。10 mM HEPESおよび0.075%炭酸水素ナトリウムで追加の緩衝を提供した。腫瘍細胞を、加湿したインキュベーター中で、95%空気および5% CO2の雰囲気中で37℃で、組織培養フラスコ中で培養した。
【０１４９】
細胞の注入の３〜７日前に、17-β-エストラジオールを含む植込み剤(0.36 mg、60日放出、Innovative Research of America)をそれぞれのマウスの肩甲骨の間の皮下に埋め込んだ。
【０１５０】
移植のために用いられるMCF-7腫瘍細胞を対数増殖期の間に収集し、リン酸緩衝生理食塩水中で5 x 107細胞/mLで再懸濁した。それぞれのマウスに、右脇腹において皮下に1x 107細胞を注入した。腫瘍を週２回、その後それらの体積が80〜120 mm3に近づいたら毎日監視した。試験Ａの“１日目”と称される１８日目に、動物を個々の腫瘍の大きさが63から172 mm3までの範囲でありグループの平均腫瘍体積が123.7〜124.6 mm3である９個のマウスのグループ(n = 10)に振り分けた。腫瘍の生着率(take rate)が乏しかったため、元のプロトコルに含まれている追加の３グループのために十分な動物が入手できなかった。従って、６個の動物のグループ(n = 10)を含む別の試験（“試験Ｂ”）を設定した。この試験において、細胞の移植とグループの割り当ての間に１７日間が経過した。１日目における個々の腫瘍の大きさは63から221 mm3までの範囲であり、グループの平均腫瘍体積は112.7から113.6 mm3までの範囲であった。
【０１５１】
mm3での腫瘍の大きさは次の式で算出され：
【０１５２】
【化３５】
0005584236.tif 000042
【０１５３】
ここで、ｗはMCF-7腫瘍のmmでの幅、ｌは長さである。腫瘍の重量は、1 mgが腫瘍体積の1 mm3に相当するという仮定で概算することができる。
【０１５４】
実施例９１および実施例９２に関する投与溶液は、１日目の投与に関して水中5%デキストロース(“D5W”)中で調製した。溶解性が乏しいため、これらの薬剤の投与溶液は８および１５日目の投与に関して0.1 N酢酸中で調製した。
【０１５５】
実施例９３の投与溶液は、それぞれの処置の日に関して0.1 N酢酸中で新しく調製した。溶解性を増進するため、実施例８３の最も高濃度の溶液(221.8 mg/kg)は半分の濃度で調製し、60℃でバス型ソニケーターで処理し(bath sonicated)、プロトコルに明記された体積の２倍(0.4 mL/20 gマウス)で投与した。
【０１５６】
カンプトテシン(ロット番号034K3648、Sigma)のストック溶液は60% DMAおよび40% Tween 80から作り、試験の間室温で保管した。投与溶液は、それぞれの投与の日にストックを生理食塩水中で1：20で希釈することにより新しく調製した。
【０１５７】
処置計画を、試験Ａに関して表３Ａで、試験Ｂに関して表３Ｂで要約する。
【０１５８】
表３Ａ
【０１５９】
【表３Ａ】
0005584236.tif 000043
【０１６０】
*ビヒクル＝0.1 N酢酸
表３Ｂ
【０１６１】
【表３Ｂ】
0005584236.tif 000044
【０１６２】
**グループ２のマウスは１日目に3% DMA、2% Tween 80、D5Wビヒクルをipで与えられ、８および１５日目に0.1 N酢酸ビヒクルを与えられた。
【０１６３】
全ての処置およびビヒクルは、週１回で３回投与(“qwk x 3”)された。グループ１のマウスは強制栄養も注入も受けず、腫瘍の進行およびエストロゲンの毒性に関する対照の役目を果たした。グループ２の動物はビヒクルを与えられた。
【０１６４】
試験Ａ（表３Ａ）において、グループ３、４および５のマウスは、実施例９１の化合物をそれぞれ55.65 mg/kg、111.3 mg/kgおよび222.6 mg/kgで、１日目に腹腔内注射(“ip”)により、８および１５日目に尾静脈注射(“iv”)により与えられた。グループ６のマウスにはカンプトテシンを7.5 mg/kgで、１日目にipで、８および１５日目にivで投与した。グループ７、８および９のマウスは、実施例９２の化合物をそれぞれ55.3 mg/kg、110.6 mg/kgおよび221.2 mg/kgで、１日目にipで、８および１５日目にivで与えられた。
【０１６５】
試験Ｂ（表３Ｂ）において、グループ３の動物はカンプトテシンを7.5 mg/kgで、１および８日目にivで、１５日目にipで与えられた。グループ４、５および６のマウスは、実施例９３の化合物を55.45 mg/kg、110.9 mg/kgおよび221.8 mg/kgで、１および８日目にivで、１５日目にipで投与された。
【０１６６】
それぞれの処置の用量は体重20 gあたり0.2 mLの体積で投与され、その動物の体重に比例していた。
【０１６７】
図１〜３の腫瘍増殖の中央値の曲線は、腫瘍体積の中央値を時間の関数として示している。動物が腫瘍の大きさにより試験を脱退した場合、その動物に関して記録された最終的な腫瘍体積を、それに続く時点でグループの腫瘍体積の中央値を算出するために用いられたデータに含めた。グループ中の動物の50%が試験を脱退した後、曲線を打ち切った(truncated)。
【０１６８】
図１は実施例９１の化合物に関する腫瘍増殖の中央値の曲線を示し、それは試験Ａにおける３種類の異なる用量での実施例９１の化合物の、腫瘍増殖の中央値へのインビボでの作用を、処置無しおよびカンプトテシン単独と比較して示す。図２は実施例９２の化合物に関する腫瘍増殖の中央値の曲線を示し、それは試験Ａにおける３種類の異なる用量での実施例９２の化合物の、腫瘍増殖の中央値へのインビボでの作用を、処置無しおよびカンプトテシン単独と比較して示す。図３は実施例９３の化合物に関する腫瘍増殖の中央値の曲線を示し、それは３種類の異なる用量での実施例９３の化合物の、腫瘍増殖の中央値へのインビボでの作用を、処置無しおよびカンプトテシン単独と比較して示す。
【０１６９】
試験Ａからの生データを表４Ａに示し、ここで“Ｄ１”〜“Ｄ３９”は上記で定義した“１日目”〜“３９日目”を指し、“Ｇ１”〜“Ｇ９”は表３Ａで定義した“グループ１”〜“グループ９”を指し、表４Ａで示すようにそれぞれの日およびグループに対応する平均腫瘍体積(mm3)が記録されている。
【０１７０】
表４Ａ
【０１７１】
【表４Ａ】
0005584236.tif 000045
【０１７２】
試験Ｂからの生データを表４Ｂに示し、ここで“Ｄ１”〜“Ｄ４０”は上記で定義した“１日目”〜“４０日目”を指し、“Ｇ１”〜“Ｇ６”は表３Ｂで定義した“グループ１”〜“グループ６”を指し、表４Ｂで示すようにそれぞれの日およびグループに対応する平均腫瘍体積(mm3)が記録されている。
【０１７３】
表４Ｂ
【０１７４】
【表４Ｂ】
0005584236.tif 000046
【０１７５】
試験Ａにおいて、実施例９１のコンジュゲートは用量関連ＴＧＤをもたらし、それは最も高い用量レベルである222.6 mg/kgで統計的有意性に達しており、ＴＧＤを評価した試料の4/4で腫瘍が退縮した。１８日目のＴＧＩ分析は、最も高い用量レベルにおいて療法的価値のある可能性のある用量関連抗腫瘍活性を明らかにした。
【０１７６】
試験Ａにおいて、実施例９２のコンジュゲートは用量関連ＴＧＤをもたらし、それは最も高い用量レベルである221.2 mg/kgで統計的有意性に達しており、3/5で腫瘍の退縮をもたらした。１８日目のＴＧＩも用量関連であり、110.6および221.2 mg/kgにおいて有意に用量関連であり、より高い用量レベルにおいて療法的価値がある可能性がある。
【０１７７】
試験Ｂは実施例９３のコンジュゲートを評価した。腫瘍増殖曲線は全ての用量レベルにおいて明らかな腫瘍増殖の低減を示したが、ＴＧＤ分析は実施例９３に対する応答を未処置の対照における腫瘍増殖から区別しなかった。１５日目における分析は、110.9および221.8 mg/kgの用量レベルにおいてそれぞれ71%および77%のＴＧＩを明らかにし、これらは共に療法的価値がある可能性がある。
【０１７８】
要約すると、試験Ａおよび試験Ｂにおいて評価した３種類のコンジュゲートは、ヌードマウスにおいてMCF-7異種移植片に対する療法的作用の可能性を示した。特に、評価した最も高い用量レベルにおいて、そのコンジュゲートは7.5 mg/kgのコンジュゲートしていないカンプトテシンよりも優れた活性を示した。
【０１７９】
投与
この発明のペプチドは、医薬的に許容できる塩類の形で提供することができる。そのような塩類の例には、有機酸（例えば酢酸、乳酸、マレイン酸、クエン酸、リンゴ酸、アスコルビン酸、コハク酸、安息香酸、メタンスルホン酸、トルエンスルホン酸、またはパモ酸(pamoic acid)）、無機酸（例えば塩酸、硫酸、またはリン酸）およびポリマー性の酸（例えばタンニン酸、カルボキシメチルセルロース、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、またはポリ乳酸−ポリグリコール酸のコポリマー類）により形成される塩類が含まれるが、それらに限定されない。本発明のペプチドの塩を作る典型的な方法は当技術では周知であり、標準的な塩交換の方法により成し遂げることができる。従って、本発明のペプチドのTFA塩（TFA塩は分取HPLCを用いてTFAを含む緩衝溶液で溶離することによるペプチドの精製の結果得られる）は別の塩に、例えばそのペプチドを少量の0.25 N酢酸水溶液中で溶解することにより酢酸塩に変換することができる。得られた溶液をセミ分取(semi-prep)HPLCカラム(Zorbax, 300 SB, C-8)に適用する。そのカラムを、（１）0.1N酢酸アンモニウム水溶液で０．５時間、（２）0.25N酢酸水溶液で０．５時間、および（３）4 ml/分の流速における直線勾配(３０分間にわたる20%〜100%の溶液B）（溶液Aは0.25 N酢酸水溶液であり；溶液Bはアセトニトリル/水80：20中0.25 N酢酸である）を用いて溶離する。ペプチド
を含む画分を集め、凍結乾燥させる。
【０１８０】
この発明の組成物中の有効成分の用量は異なっていてよいが、有効成分の量は適切な剤形が得られるようなものである必要がある。選択される用量は、望まれる療法的作用に、投与経路に、および処置の期間に依存する。一般に、この発明の活性に関する有効な用量は1 x 10-7〜200 mg/kg/日、好ましくは1 x 10-4〜100 mg/kg/日の範囲であり、それは１回量として、または多数回の用量に分けて投与することができる。
【０１８１】
この発明の化合物は、経口、非経口（例えば筋内、腹膜内、静脈内または皮下の注射、または埋め込み）、経鼻、膣内、直腸内、舌下、または局所的投与経路により投与することができ、それぞれの投与経路に適した剤形を提供するために医薬的に許容できるキャリヤーと共に配合することができる。
【０１８２】
経口投与のための固体剤形には、カプセル、錠剤、丸剤、粉末および顆粒が含まれる。そのような固体剤形において、有効化合物は少なくとも１種類の不活性な医薬的に許容できるキャリヤー、例えばスクロース、ラクトースまたはデンプンと混合される。そのような剤形はそのような不活性な希釈剤以外の追加の物質、例えば潤滑剤、例えばステアリン酸マグネシウムも含むことができ、それが通常の慣習である。カプセル、錠剤および丸剤の場合、その剤形は緩衝剤も含んでいてよい。錠剤および丸剤はさらに腸溶コーティングを用いて調製することができる。
【０１８３】
経口投与のための液体剤形には、当技術で一般的に用いられる不活性な希釈剤、例えば水を含む、医薬的に許容できる乳濁液、溶液、懸濁液、シロップ、エリキシルおよび同様のものが含まれるが、それらに限定されない。そのような不活性な希釈剤の他に、組成物は補助剤、例えば湿潤剤、乳濁化および懸濁化剤、ならびに甘味料、香味料および香料も含むことができる。
【０１８４】
非経口投与のためのこの発明による製剤には、無菌の水溶液または非水溶液、懸濁液、乳濁液および同様のものが含まれるが、それらに限定されない。非水性溶媒またはビヒクルの例には、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、植物油、例えばオリーブ油およびトウモロコシ油、ゼラチン、ならびに注射可能な有機エステル類、例えばオレイン酸エチルが含まれる。そのような剤形は補助剤、例えば保存、湿潤、乳濁化および分散剤も含んでいてよい。それらは例えば細菌を保持するフィルターを通す濾過により、組成物に滅菌剤を組み込むことにより、組成物を照射することにより、または組成物を加熱することにより滅菌されてよい。それらは、滅菌水または何らかの他の無菌の注射可能な媒体に使用の直前に溶解させることができる無菌の固体組成物の形で製造することもできる。
【０１８５】
直腸内または膣内投与のための組成物は好ましくは坐剤であり、それは有効物質に加えて賦形剤、例えばカカオ脂(coca butter)または坐剤ワックスを含んでいてよい。
【０１８６】
経鼻または舌下投与のための組成物も、当技術で周知の標準的な賦形剤を用いて調製される。
【０１８７】
さらに、この発明の化合物は徐放性組成物、例えば下記の特許および特許出願において記述されている徐放性組成物で投与することができる。米国特許第５，６７２，６５９号は、生理活性薬剤およびポリエステルを含む徐放性組成物を教示する。米国特許第５，５９５，７６０号は、生理活性薬剤をゲル化可能な(gelable)形で含む徐放性組成物を教示する。米国特許第５，８２１，２２１号は、生理活性薬剤およびキトサンを含むポリマー性徐放性組成物を教示する。米国特許第５，９１６，８８３号は、生理活性薬剤およびシ
クロデキストリンを含む徐放性組成物を教示する。ＰＣＴ公開第ＷＯ９９／３８５３６号は、生理活性薬剤の吸収性徐放性組成物を教示する。ＰＣＴ公開第ＷＯ００／０４９１６号は、療法薬、例えばペプチドを含む微粒子を水中油プロセスで作るためのプロセスを教示する。ＰＣＴ公開第ＷＯ００／０９１６６号は、療法薬、例えばペプチドおよびリン酸化ポリマーを含む複合体を教示する。ＰＣＴ公開第ＷＯ００／２５８２６号は、療法薬、例えばペプチドおよび重合可能ではないラクトンを有するポリマーを含む複合体を教示する。
【０１８８】
別途定義しない限り、本明細書で用いられる全ての技術的および科学的な用語はこの発明が属する技術の当業者に一般的に理解されているものと同じ意味を有する。また、本明細書で言及された全ての刊行物、特許出願、特許および他の参考文献をそれぞれそのまま本明細書に援用する。
【図１】
0005584236.tif 000057
【図２】
0005584236.tif 000058
【図３】
0005584236.tif 000059
【配列表】
0005584236000001.app