(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
フィルターと、
前記フィルターの表面に保持された黄杞の葉部からの抽出物からの抽出物と
を含むアレルゲン不活性化材。
【請求項２】
前記アレルゲンが、花粉アレルゲン及び／又はダニアレルゲンである請求項１に記載のアレルゲン不活性化材。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アレルゲン不活性化剤及びアレルゲン不活性化材に関し、特にＩ型アレルギー性疾患を引き起こすアレルゲンを不活性化可能なアレルゲン不活性化剤及びアレルゲン不活性化材に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、生活環境の変遷に伴い、アレルギー症状を引き起こす原因物質であるアレルゲンが四季を問わず存在するようになっている。特に、スギ花粉やヒノキ花粉を代表とする花粉による春先の花粉症患者は年々増加の一途を辿り、国民の１０％にも及んでおり、それらのうちの大多数はスギ花粉に対してＩ型アレルギー反応を示している。
【０００３】
花粉症の対策は、花粉との接触を避けることを基本としており、マスクや眼鏡等を使用することにより花粉との接触を避ける方法が主流となっているが、花粉との接触を完全に避けるのは困難である。したがって、花粉アレルゲンを根本的に排除し得る技術が求められている。
【０００４】
花粉アレルゲンを根本的に排除し得る技術として、従来、花粉アレルゲンを不活性化する技術が種々提案されている。例えば、花粉アレルゲン不活性化用スプレー（特許文献１参照）、花粉アレルゲンを吸着し不活性化するフィルター（特許文献２参照）、熱、アルカリ、酸又はプロテアーゼの存在下に花粉アレルゲンを維持することにより花粉アレルゲンを不活性化する方法（特許文献３，４参照）、柿抽出物を含むハウスダスト処理剤（特許文献５参照）等が提案されている。
【０００５】
また、近年、室内環境の快適化と引き換えにダニ類の繁殖が助長されており、屋内でのダニ類の繁殖に伴い、コナヒョウヒダニ（Dermatophagoides farinae）、ヤケヒョウヒダニ（Dermatophagoides pteronyssinus）等のチリダニ科ヒョウヒダニ属に属するダニをアレルゲンとするアレルギー性疾患が問題となっている。これらのダニは、アレルギー性喘息、鼻炎、結膜炎、アトピー性皮膚炎等のＩ型アレルギー性疾患の一因と考えられている。
【０００６】
ダニをアレルゲンとするアレルギー性疾患の対策としては、アレルゲンであるダニを駆除して、ダニを生活環境中から排除することが考えられる。しかしながら、ダニを駆除したとしても、ダニの死骸、ダニの糞からも強力なアレルゲン物質が生活環境中に放出されるため、ダニアレルゲンを根本的に排除することができず、ダニによるアレルギー性疾患を解決することは困難である。したがって、ダニアレルゲン（ダニ、ダニの死骸及び糞等）を根本的に排除する技術が求められている。従来、ダニアレルゲンを根本的に排除する技術として、ローズマリー抽出物を含浸させた多孔性吸着剤を屋内に散布し、数時間経過後に電気掃除機により吸引する技術（特許文献６参照）等が提案されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】特開２００２−１２８６５９号公報
【特許文献２】特開２０００−５５３１号公報
【特許文献３】特開２００３−１８０８６５号公報
【特許文献４】特開２００４−８９６７３号公報
【特許文献５】特開２００２−１２８６８０号公報
【特許文献６】特開平６−２５６１２８号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明は、安全性の高い天然物から、花粉アレルゲン又はダニアレルゲンを不活性化する物質を見出し、それを利用したアレルゲン不活性化剤及びアレルゲン不活性化材を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
上記課題を解決するため、第１に本発明は、イチョウの葉部、黄杞の葉部、茶の葉部、レモンバームの葉部及び茎部、キャベジローズの花部及び蕾部、並びにピーナッツの渋皮からなる群より選ばれた１種又は２種以上の植物からの抽出物を有効成分として含有するアレルゲン不活性化剤を提供する。上記アレルゲン不活性化剤の不活性化対象としてのアレルゲンは、花粉アレルゲン及び／又はダニアレルゲンである。
【００１０】
第２に本発明は、担体と、前記担体に保持されたイチョウの葉部、黄杞の葉部、茶の葉部、レモンバームの葉部及び茎部、キャベジローズの花部及び蕾部、並びにピーナッツの渋皮からなる群より選ばれた１種又は２種以上の植物からの抽出物とを含むアレルゲン不活性化材を提供する。上記アレルゲン不活性化材の不活性化対象としてのアレルゲンは、花粉アレルゲン及び／又はダニアレルゲンである。
【発明の効果】
【００１１】
本発明のアレルゲン不活性化剤及びアレルゲン不活性化材は、花粉アレルゲン及び／又はダニアレルゲンを不活性化することにより、スギ花粉等の花粉アレルゲンにより引き起こされる花粉症、ダニアレルゲンにより引き起こされるアレルギー性喘息、鼻炎、結膜炎、アトピー性皮膚炎等のＩ型アレルギー性疾患を予防、治療又は改善することができる。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
以下、本発明について説明する。
〔アレルゲン不活性化剤〕
本発明のアレルゲン不活性化剤は、イチョウの葉部、黄杞の葉部、茶の葉部、レモンバームの葉部及び茎部、キャベジローズの花部及び蕾部、並びにピーナッツの渋皮からなる群より選ばれた１種又は２種以上の植物からの抽出物を有効成分として含有する。
【００１３】
本発明において「抽出物」には、イチョウの葉部、黄杞の葉部、茶の葉部、レモンバームの葉部及び茎部、キャベジローズの花部及び蕾部、並びにピーナッツの渋皮からなる群より選ばれた１種又は２種以上の植物を抽出原料として得られる抽出液、当該抽出液の希釈液若しくは濃縮液、当該抽出液を乾燥して得られる乾燥物、又はこれらの粗精製物若しくは精製物のいずれもが含まれる。
【００１４】
本発明において使用する抽出原料である植物は、イチョウ（学名：Ginkgo biloba L.）、黄杞（学名：Engelhardtia chrysolepis Hance）、茶（学名：Camellia sinensis）、レモンバーム（学名：Melissa officinalis L.）、キャベジローズ（Rosa centifolia）又はピーナッツ（学名：Arachis hypogaea L.）である。
【００１５】
イチョウ（Ginkgo biloba L.）は、北海道、本州、四国、九州等に自生するイチョウ科に属する落葉高木であり、これらの地域から容易に入手することができる。抽出原料として使用する部位は、葉部である。
【００１６】
黄杞（Engelhardtia chrysolepis Hance）は、中国の南部から台湾にわたる地域に自生するクルミ科に属する常緑高木であり、これらの地域から容易に入手することができる。抽出原料として使用する部位は、葉部である。
【００１７】
茶（Camellia sinensis）は、日本、中国、東南アジア等に分布しているツバキ科に属する常緑低木であり、これらの地域から容易に入手することができる。抽出原料として使用する部位は、葉部である。
【００１８】
レモンバーム（Melissa officinalis L.）は、ヨーロッパ全土、中央アジア、北アメリカ等に分布しているシソ科に属する多年生草本であり、これらの地域から容易に入手することができる。抽出原料として使用する部位は、葉部及び／又は茎部である。
【００１９】
キャベジローズ（Rosa centifolia）は、主に中国、フランス、モロッコ、チュニジア等で栽培されているバラ科に属する常緑低木であり、これらの地域から容易に入手することができる。抽出原料として使用する部位は、花部及び／又は蕾部である。
【００２０】
ピーナッツ（Arachis hypogaea L.）は、マメ科に属する植物であり、ピーナッツの渋皮は薄皮又は甘皮とも呼ばれるものである。ピーナッツの渋皮は、ピーナッツを各種食品に加工する際に必ず廃棄されるものであり、特にピーナッツバターの製造時に膨大な量の渋皮が廃棄物として生じるが、これまでピーナッツの渋皮の有用な用途についてはほとんど知られておらず、廃棄物として処分されていた。ピーナッツの渋皮には、グルコシルトランスフェラーゼ阻害作用を有する成分が含まれていることが知られていたが（特開２０００−１７８１５８号公報参照）、花粉アレルゲン不活性化作用又はダニアレルゲン不活性化作用を有する成分が含まれていることは、これまで知られていなかった。
【００２１】
イチョウ葉部抽出物、黄杞葉部抽出物、茶葉部抽出物、レモンバーム葉部若しくは茎部抽出物、キャベジローズ花部若しくは蕾部抽出物、又はピーナッツ渋皮抽出物に含有される花粉アレルゲン不活性化作用又はダニアレルゲン不活性化作用を有する物質の詳細は不明であるが、植物の抽出に一般に用いられている抽出方法によって、各植物から花粉アレルゲン不活性化作用及びダニアレルゲン不活性化作用を有する抽出物を得ることができる。
【００２２】
例えば、抽出原料である植物を乾燥した後、そのまま又は粉砕機を用いて粉砕し、抽出溶媒による抽出に供することにより、花粉アレルゲン不活性化作用及びダニアレルゲン不活性化作用を有する抽出物を得ることができる。乾燥は天日で行ってもよいし、通常使用される乾燥機を用いて行ってもよい。また、ヘキサン等の非極性溶媒によって脱脂等の前処理を施してから抽出原料として使用してもよい。脱脂等の前処理を行うことにより、極性溶媒による抽出処理を効率よく行うことができる。
【００２３】
抽出溶媒としては、極性溶媒を用いるのが好ましく、例えば、水、親水性有機溶媒等が挙げられ、これらを単独で又は２種以上を組み合わせて、室温又は溶媒の沸点以下の温度で使用することが好ましい。
【００２４】
抽出溶媒として使用し得る水としては、純水、水道水、井戸水、鉱泉水、鉱水、温泉水、湧水、淡水等のほか、これらに各種処理を施したものが含まれる。水に施す処理としては、例えば、精製、加熱、殺菌、濾過、イオン交換、浸透圧調整、緩衝化等が含まれる。したがって、本発明において抽出溶媒として使用し得る水には、精製水、熱水、イオン交換水、生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水等も含まれる。
【００２５】
抽出溶媒として使用し得る親水性有機溶媒としては、メタノール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコール等の炭素数１〜５の低級脂肪族アルコール；アセトン、メチルエチルケトン等の低級脂肪族ケトン；１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等の炭素数２〜５の多価アルコール等が挙げられる。
【００２６】
２種以上の極性溶媒の混合液を抽出溶媒として使用する場合、その混合比は適宜調整することができる。例えば、水と低級脂肪族アルコールとの混合液を使用する場合には、水１０質量部に対して低級脂肪族アルコール１〜９０質量部を混合することが好ましく、水と低級脂肪族ケトンとの混合液を使用する場合には、水１０質量部に対して低級脂肪族ケトン１〜４０質量部を混合することが好ましく、水と多価アルコールとの混合液を使用する場合には、水１０質量部に対して多価アルコール１〜９０質量部を混合することが好ましい。
【００２７】
抽出処理は、抽出原料に含まれる可溶性成分を抽出溶媒に溶出させ得る限り特に限定はされず、常法に従って行うことができる。例えば、抽出原料の５〜１５倍量（質量比）の抽出溶媒に抽出原料を浸漬し、常温又は還流加熱下で可溶性成分を抽出させた後、濾過して抽出残渣を除去することにより抽出液を得ることができる。得られた抽出液は、該抽出液の希釈液若しくは濃縮液、該抽出液の乾燥物、又はこれらの粗精製物若しくは精製物を得るために、常法に従って希釈、濃縮、乾燥、精製等の処理を施してもよい。
【００２８】
精製は、例えば、活性炭処理、吸着樹脂処理、イオン交換樹脂処理等により行うことができる。得られた抽出液はそのままでもアレルゲン不活性化剤の有効成分として使用することができるが、濃縮液又は乾燥物としたものの方が使用しやすい。
【００２９】
以上のようにして得られる植物からの抽出物は、花粉アレルゲン不活性化作用及びダニアレルゲン不活性化作用を有しているため、それらの作用を利用してアレルゲン不活性化剤の有効成分として用いることができる。植物からの抽出物は、Ｉ型アレルギー性疾患を引き起こすアレルゲンの不活性化が可能なアレルゲン不活性化剤の有効成分として用いることが好ましく、特に花粉アレルゲン不活性化剤又はダニアレルゲン不活性化剤の有効成分として用いるのが好ましい。
【００３０】
本発明のアレルゲン不活性化剤は、植物からの抽出物のみからなるものであってもよいし、植物からの抽出物を製剤化したものであってもよい。
【００３１】
植物からの抽出物は、デキストリン、シクロデキストリン等の薬学的に許容し得るキャリアーその他任意の助剤を用いて、常法に従い、粉末状、顆粒状、錠剤状、液状等の任意の剤形に製剤化することができる。この際、助剤としては、例えば、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、安定剤、矯臭剤等を用いることができる。植物からの抽出物は、他の組成物に配合して使用することができるほか、軟膏剤、外用液剤、点眼剤、点鼻剤等として使用することができる。
【００３２】
本発明のアレルゲン不活性化剤は、各植物からの抽出物のいずれか１種を有効成分として含有してもよいし、２種以上を組み合わせて有効成分として含有してもよい。各植物からの抽出物の２種以上を組み合わせて有効成分として含有する場合には、その含有比は特に限定されるものではなく、植物からの抽出物の生理活性の強さ等に応じて適宜調整することができる。
【００３３】
本発明のアレルゲン不活性化剤は、植物からの抽出物が有する花粉アレルゲン不活性化作用を通じて、Ｉ型アレルギー性疾患を引き起こす花粉アレルゲンを不活性化し、スギ花粉等の花粉アレルゲンにより引き起こされる花粉症を予防、治療又は改善することができるとともに、植物からの抽出物が有するダニアレルゲン不活性化作用を通じて、Ｉ型アレルギー性疾患を引き起こすダニアレルゲンを不活性化し、ダニアレルゲンにより引き起こされるアレルギー性喘息、鼻炎、結膜炎、アトピー性皮膚炎等のＩ型アレルギー性疾患を予防、治療又は改善することができる。
【００３４】
花粉アレルゲンは、Ｉ型アレルギー性疾患を引き起こす作用を有する花粉であれば特に限定されるものではなく、例えば、スギ花粉、ヒノキ花粉、ブタクサ花粉、カモガヤ花粉等が挙げられ、本発明の花粉アレルゲン不活性化剤は、特にスギ花粉に対して有効である。また、ダニアレルゲンは、Ｉ型アレルギー性疾患を引き起こす作用を有するダニ等であれば特に限定されるものではなく、例えば、コナヒョウヒダニ（Dermatophagoides farinae）、ヤケヒョウヒダニ（Dermatophagoides pteronyssinus）等のチリダニ科ヒョウヒダニ属に属するダニ、これらのダニの糞及び死骸等が挙げられる。
【００３５】
花粉アレルゲン不活性化とは、花粉アレルゲンからアレルギー症状を引き起こす作用を失わせることを意味する。また、ダニアレルゲン不活性化とは、ダニアレルゲンからアレルギー症状を引き起こす作用を失わせることを意味する。本発明の花粉アレルゲン不活性化剤の適用対象としては、例えば、花粉アレルゲンによりアレルギー症状を引き起こす花粉症であり、また本発明のダニアレルゲン不活性化剤の適用対象としては、例えば、ダニアレルゲンによりアレルギー症状を引き起こすＩ型アレルギー性疾患等であり、当該アレルギー症状としては、例えば、鼻炎、くしゃみ、喘息、結膜炎等が挙げられる。
【００３６】
なお、本発明のアレルゲン不活性化剤は、ヒトに対して好適に適用されるものであるが、その作用効果が奏される限り、ヒト以外の動物に対して適用することもできる。
【００３７】
〔アレルゲン不活性化材〕
本発明のアレルゲン不活性化材は、担体と、担体に保持されたイチョウの葉部、黄杞の葉部、茶の葉部、レモンバームの葉部及び茎部、キャベジローズの花部及び蕾部、並びにピーナッツの渋皮からなる群より選ばれた１種又は２種以上の植物からの抽出物とを含む。なお、本発明のアレルゲン不活性化材において、植物からの抽出物を製剤化したアレルゲン不活性化剤が担体に保持されていてもよい。
【００３８】
担体に保持される植物抽出物としては、前述したアレルゲン不活性化剤に有効成分として含有される植物抽出物と同一のものを用いればよい。
【００３９】
担体は、表面に植物抽出物を保持し得るものであれば特に限定されることはなく、多孔質体であってもよいし、非多孔質体であってもよいが、植物抽出物を保持することのできる表面積の大きい多孔質体であることが好ましい。多孔質体としては、例えば、編物、織物、不織布、紙等の繊維集合体、ウレタンフォーム等の多孔性樹脂成形体、活性炭、多孔質セラミックス材等が挙げられる。非多孔質体としては、例えば、非多孔性の樹脂成形体、金属材、セラミックス材、石材等が挙げられる。また、担体の形状は、特に限定されることなく、例えば、シート状であってもよいし、粒状であってもよい。さらには、エアコン用フィルター、空気清浄機用フィルター、換気装置用フィルター等のフィルター類、マスク、被服、家具、壁、ポスター、シール等を担体とすることもできる。
【００４０】
植物抽出物は、植物抽出物と空気中に飛散している花粉アレルゲン又はダニアレルゲンとが接触し得るように、担体の表面に保持されていればよく、植物抽出物を担体に保持させる方法は、特に限定されない。ここで、担体の表面とは、担体と花粉アレルゲン又はダニアレルゲンとが接触し得る担体の部位を意味し、担体の表面は、担体の外表面に限られず、担体の内部に存在する部位であって花粉アレルゲン又はダニアレルゲンと接触し得る部位をも含む。
【００４１】
植物抽出物を担体に保持させる方法としては、例えば、（１）植物抽出物水溶液等を担体に含浸させた後、担体を乾燥させる方法、（２）担体の表面に植物抽出物が表れるように、担体の製造過程で担体の材料に植物抽出物を配合する方法、（３）担体の表面に植物抽出物水溶液等を噴霧する方法、（４）担体の表面にバインダー等を介して植物抽出物をコーティングする方法等が挙げられる。
【００４２】
植物抽出物水溶液等を担体に含浸させる場合、その含浸時間は、植物抽出物を担体に保持させることができる限り特に限定されるものではなく、通常０．１〜３時間、好ましくは０．５〜２時間である。
【００４３】
担体に保持される植物抽出物の量は、植物抽出物と花粉アレルゲン又はダニアレルゲンとが接触し、花粉アレルゲン又はダニアレルゲンを不活性化させることができる量であれば特に限定されるものではないが、通常０．０１〜１０ｇ／ｍ２、好ましくは０．１〜５ｇ／ｍ２である。
【００４４】
以上説明したアレルゲン不活性化材は、例えば、エアコン用フィルター、空気清浄機用フィルター、換気装置用フィルター等のフィルター類、マスク、被服等として用いることができる。アレルゲン不活性化材をフィルター類として用いれば、花粉アレルゲン又はダニアレルゲンがアレルギー活性を持ったまま再飛散するのを防止することができる。また、アレルゲン不活性化材をマスクとして用いれば、マスクを通過する微細な花粉アレルゲン又はダニアレルゲンを不活性化することができる。さらに、アレルゲン不活性化材を被服として用いれば、被服に付着した花粉アレルゲン又はダニアレルゲンがアレルギー活性を持ったまま室内等に侵入するのを防止することができる。
【００４５】
本発明のアレルゲン不活性化材は、空気中に保持されると、空気中に飛散する花粉アレルゲンと担体に保持された植物抽出物とが接触し、植物抽出物が有する花粉アレルゲン不活性化作用により、花粉アレルゲンを不活性化することができ、また、空気中に飛散するダニアレルゲンと担体に保持された植物抽出物とが接触し、植物抽出物が有するダニアレルゲン不活性化作用により、ダニアレルゲンを不活性化することができる。したがって、本発明のアレルゲン不活性化材によれば、スギ花粉等の花粉アレルゲンにより引き起こされるＩ型アレルギー性疾患である花粉症を予防、治療又は改善することができるとともに、コナヒョウヒダニ（Dermatophagoides farinae）、ヤケヒョウヒダニ（Dermatophagoides pteronyssinus）等のチリダニ科ヒョウヒダニ属に属するダニ、これらのダニの糞及び死骸等のダニアレルゲンにより引き起こされるアレルギー性喘息、鼻炎、結膜炎、アトピー性皮膚炎等のＩ型アレルギー性疾患を予防、治療又は改善することができる。
【実施例】
【００４６】
以下、製造例及び試験例を示し、本発明を具体的に説明するが、本発明は下記の各例に何ら制限されるものではない。
なお、本試験例においては、イチョウの葉部からの抽出物としてはイチョウ葉エキスパウダーＭＦ（試料１，丸善製薬社製）を使用し、黄杞の葉部からの抽出物としては黄杞葉エキスパウダーＭＦ（試料２，丸善製薬社製）を使用し、茶の葉部からの抽出物としては緑茶抽出物ＭＦ（試料３，丸善製薬社製）を使用し、レモンバームの葉部及び茎部からの抽出物としてはレモンバームエキスパウダーＭＦ（試料４，丸善製薬社製）を使用し、キャベジローズの花部及び蕾部からの抽出物としてはローズバッツエキスパウダーＭＦ（試料５，丸善製薬社製）を使用した。
【００４７】
〔製造例１〕ピーナッツ渋皮水抽出物の製造
ピーナッツ渋皮の乾燥物１００ｇに抽出溶媒として１０００ｍＬの水を入れ、沸騰水浴中で２時間加熱し、可溶性成分を抽出した。得られた抽出液を減圧下に濃縮乾固し、固形抽出物１０ｇ（粉末）を得た（試料６）。得られた抽出物の収率は、１０％であった。
【００４８】
〔試験例１〕スギ花粉アレルゲン不活性化試験
（１）スギ花粉アレルゲン不活性化反応
１％ＤＭＳＯを含む０．１％ウシ血清アルブミン含有ＰＢＳ溶液に、試料１〜６をそれぞれ表１に示す濃度で溶解し、各試料溶液を調製した。各試料溶液をそれぞれ１００μＬずつ９６穴マイクロプレートに添加し、０．１％ウシ血清アルブミン含有ＰＢＳ溶液にスギ花粉アレルゲン（製品名：精製スギ花粉抗原Cry j 1，生化学工業社製）を溶解した２ｎｇ／ｍＬのスギ花粉アレルゲン溶液を１穴あたり１００μＬずつ添加し、室温で２時間振とうした。また、対照として、試料を添加していない１％ＤＭＳＯを含む０．１％ウシ血清アルブミン含有ＰＢＳ溶液にスギ花粉アレルゲン溶液を添加した溶液についても同様に振とうした。
【００４９】
振とう後、マイクロプレートの各穴からスギ花粉アレルゲン溶液を１００μＬずつ採取し、当該溶液中に存在するスギ花粉アレルゲン濃度（ｎｇ／ｍＬ）を下記に示すサンドイッチＥＬＩＳＡ法により測定した。
【００５０】
（２）スギ花粉アレルゲン濃度の定量（サンドイッチＥＬＩＳＡ法）
１０μｇ／ｍＬのコーティング溶液（製品名：抗Cry j 1モノクローナル抗体０１３，生化学工業社製）１００μＬをＥＬＩＳＡプレートの各穴に添加し、室温で２時間静置した。その後、コーティング溶液を除去し、０．１％ウシ血清アルブミン含有ＰＢＳ溶液を２５０μＬ添加し、４℃で一晩静置した。その後、０．１％ウシ血清アルブミン含有ＰＢＳ溶液を除去し、２時間振とうさせた上記スギ花粉アレルゲン溶液１００μＬを添加して、室温で２時間振とうした。
【００５１】
また、スタンダードとして、スギ花粉アレルゲン（製品名：精製スギ花粉抗原Cry j 1，生化学工業社製）を０．１％ウシ血清アルブミン含有ＰＢＳ溶液に溶解し、４ｎｇ／ｍＬ、２ｎｇ／ｍＬ、１ｎｇ／ｍＬ、０．５ｎｇ／ｍＬ、０．２５ｎｇ／ｍＬの検量線用標準溶液を調製した。各濃度の検量線用標準溶液１００μＬをＥＬＩＳＡプレートに添加して、室温で２時間振とうした。振とう後、ＥＬＩＳＡプレートを、０．０５％ツイーン２０を含むＰＢＳ溶液３００μＬで３度洗浄後、１０００倍に希釈したスギ花粉アレルゲンモノクローナル抗体（製品名：西洋ワサビペルオキシダーゼ標識抗Cry j 1モノクローナル抗体０５３，生化学工業社製）を１００μＬ添加して、室温で２時間振とうした。そして、ＥＬＩＳＡプレートを、０．０５％ツイーン２０を含むＰＢＳ溶液３００μＬで３度洗浄後、０．３ｍｇ／ｍＬのＡＢＴＳ溶液１２０μＬを添加して室温で発色させ、１０〜２０分間反応させた後にミキシングし、マイクロプレートリーダーにより４０５ｎｍの吸光度を測定した。
【００５２】
検量線用標準溶液の吸光度から得られる検量線を用いて、試料添加スギ花粉アレルゲン溶液中のスギ花粉アレルゲン濃度及び試料無添加スギ花粉アレルゲン溶液中のスギ花粉アレルゲン濃度を定量した。当該定量結果を用いて、下記の式に基づき、スギ花粉アレルゲン不活性化率（％）を算出した。
スギ花粉アレルゲン不活性化率(％)＝(Ｂ−Ａ)／Ｂ×１００
ただし、式中、Ａは「試料添加スギ花粉アレルゲン溶液中のスギ花粉アレルゲン濃度（ｎｇ／ｍＬ）」を表し、Ｂは「試料無添加スギ花粉アレルゲン溶液中のスギ花粉アレルゲン濃度（ｎｇ／ｍＬ）」を表す。
上記試験の結果を表１に示す。
【００５３】
［表１］スギ花粉アレルゲン不活性化率（％）
試  料     試料濃度（質量％）   不活性化率（％）
試料１         ２．５                 ４１．５
試料２         １．０                 ９５．９
試料３         １．０               １００．０
試料４         ２．５                 ３０．６
試料５         １．０               １００．０
試料６         ０．０６３             ６６．４
０．２５             １００．０
【００５４】
表１に示すように、イチョウの葉部からの抽出物、黄杞の葉部からの抽出物、茶の葉部からの抽出物、レモンバームの葉部及び茎部からの抽出物、キャベジローズの花部及び蕾部からの抽出物、並びにピーナッツの渋皮からの抽出物は、優れたスギ花粉アレルゲン不活性化作用を有することが確認された。
【００５５】
〔試験例２〕ダニアレルゲン不活性化試験
２０００ｎｇ／ｍＬのコーティング溶液（製品名：抗Der fIIモノクローナル抗体15E11，生化学工業社製）５０μＬをＥＬＩＳＡプレートの各穴に添加し、４℃で一晩静置した。ＥＬＩＳＡプレートを、０．０５％ツイーン２０を含むＰＢＳ溶液３００μＬで３度洗浄した後、１％ウシ血清アルブミン含有ＰＢＳ溶液２００μＬを添加して室温で１時間静置し、ブロッキングした。ブロッキング終了後、０．０５％ツイーン２０を含むＰＢＳ溶液３００μＬで３度洗浄し、下記に示すようにダニアレルゲン不活性化反応を行った。
【００５６】
（１）ダニアレルゲン不活性化反応
ＰＢＳ溶液に、試料１〜６をそれぞれ表２に示す濃度になるように溶解し、各試料溶液を調製した。ブロッキングが終了し、洗浄した後のＥＬＩＳＡプレートに各試料溶液を１穴あたり２５μＬずつ添加し、ＰＢＳ溶液にダニアレルゲン（製品名：精製ダニ抗原Der fII，生化学工業社製）を溶解した２００ｎｇ／ｍＬのダニアレルゲン溶液を１穴あたり２５μＬずつ添加し、室温で２時間振とうした。また、対照として、ＥＬＩＳＡプレートにＰＢＳ溶液を添加後、ダニアレルゲン溶液を添加して、同様に振とうした。
【００５７】
また、スタンダードとしてダニアレルゲンをＰＢＳ溶液に溶解し、３００ｎｇ／ｍＬ、１５０ｎｇ／ｍＬ、７５ｎｇ／ｍＬ、３７．５ｎｇ／ｍＬ、１８．８ｎｇ／ｍＬ、９．４ｎｇ／ｍＬの検量線用標準溶液を調製した。各濃度の検量線用標準溶液５０μＬをＥＬＩＳＡプレートに添加して、同様に室温で２時間振とうした。
【００５８】
（２）ダニアレルゲン濃度の定量（サンドイッチＥＬＩＳＡ法）
振とう後、０．０５％ツイーン２０を含むＰＢＳ溶液３００μＬでＥＬＩＳＡプレートを３度洗浄した後、２０００倍に希釈したダニアレルゲンモノクローナル抗体（製品名：西洋ワサビペルオキシダーゼ標識抗Der fIIモノクローナル抗体13A4PO，生化学工業社製）を５０μＬ添加して、室温で２時間振とうした。そして、ＥＬＩＳＡプレートを、０．０５％ツイーン２０を含むＰＢＳ溶液３００μＬで３度洗浄した後、０．３ｍｇ／ｍＬのＡＢＴＳ溶液１００μＬを添加して室温で発色させ、１０〜２０分反応後にミキシングさせ、マイクロプレートリーダーにより４０５ｎｍの吸光度を測定した。
【００５９】
検量線用標準溶液の吸光度から得られる検量線を用いて、試料添加ダニアレルゲン溶液中のダニアレルゲン濃度及び試料無添加ダニアレルゲン溶液中のダニアレルゲン濃度を定量した。当該定量結果を用いて、下記の式に基づき、ダニアレルゲン不活性化率（％）を算出した。
ダニアレルゲン不活性化率(％)＝(Ｂ−Ａ)／Ｂ×１００
式中、Ａは「試料添加ダニアレルゲン溶液中のダニアレルゲン濃度（ｎｇ／ｍＬ）」を表し、Ｂは「試料無添加ダニアレルゲン溶液中のダニアレルゲン濃度（ｎｇ／ｍＬ）」を表す。
上記試験の結果を表２に示す。
【００６０】
［表２］ダニアレルゲン不活性化率（％）
試  料     試料濃度（質量％）   不活性化率（％）
試料１          １．０                ７７．３
２．５                ６９．７
試料２          １．０                ６２．７
２．５                ８２．２
試料３          １．０                ９５．９
２．５                ９９．６
試料４          １．０                ４４．７
２．５                ４５．０
試料５          １．０                ９７．１
２．５                ９８．３
試料６          １．０                ９９．６
２．５                ９９．５
【００６１】
表２に示すように、イチョウの葉部からの抽出物、黄杞の葉部からの抽出物、茶の葉部からの抽出物、レモンバームの葉部及び茎部からの抽出物、キャベジローズの花部及び蕾部からの抽出物、並びにピーナッツの渋皮からの抽出物は、優れたダニアレルゲン不活性化作用を有することが確認された。
【００６２】
〔試験例３〕スギ花粉アレルゲン不活性化試験（不織布）
１ｍ２あたり２ｇの試料１を保持した不織布（検体１）、１ｍ２あたり４ｇの試料１を保持した不織布（検体２）及び試料１を保持していない不織布（ブランク１）をそれぞれ８ｍｍ２の大きさに切り、４８穴プレートの底に置いて、０．１％ウシ血清アルブミン含有ＰＢＳ溶液にスギ花粉アレルゲン（製品名：精製スギ花粉抗原Cry j 1，生化学工業社製）を溶解した、２ｎｇ／ｍＬのスギ花粉アレルゲン溶液を１穴あたり３００μＬずつ添加し、室温で２時間振とうした。振とう後、スギ花粉アレルゲン溶液１００μＬを採取し、かかる溶液中に存在するスギ花粉アレルゲン濃度（ｎｇ／ｍＬ）を、試験例１と同様にサンドイッチＥＬＩＳＡ法により定量した。
上記試験の結果を表３に示す。
【００６３】
［表３］スギ花粉アレルゲン濃度（ｎｇ／ｍＬ）
試  料       スギ花粉アレルゲン濃度（ｎｇ／ｍＬ）
ブランク１                  １．９８
検体１                    １．０８
検体２                    ０．９２
【００６４】
表３に示すように、試料１を保持した不織布（検体１及び検体２）は、スギ花粉アレルゲンを不活性化し得ることが確認された。また、イチョウの葉部からの抽出物を保持した不織布は、当該抽出物の保持量に依存してスギ花粉アレルゲンを不活性化し得ることが確認された。
【００６５】
〔試験例４〕スギ花粉アレルゲン不活性化試験（空気清浄機用フィルター）
１ｍ２あたり２ｇの試料５を保持した空気清浄機用フィルター（検体３）、１ｍ２あたり４ｇの試料５を保持した空気清浄機用フィルター（検体４）及び試料５を保持していない空気清浄機用フィルター（ブランク２）を、それぞれ８ｍｍ２の大きさに切り、４８穴プレートの底に置いて、０．１％ウシ血清アルブミン含有ＰＢＳ溶液にスギ花粉アレルゲン（製品名：精製スギ花粉抗原Cry j 1，生化学工業社製）を溶解した、２ｎｇ／ｍＬのスギ花粉アレルゲン溶液を１穴あたり３００μＬずつ添加し、室温で２時間振とうした。振とう後、スギ花粉アレルゲン溶液１００μＬを採取し、かかる溶液中に存在するスギ花粉アレルゲン濃度（ｎｇ／ｍＬ）を、試験例１と同様にサンドイッチＥＬＩＳＡ法により定量した。
上記試験の結果を表４に示す。
【００６６】
［表４］スギ花粉アレルゲン濃度（ｎｇ／ｍＬ）
試  料       スギ花粉アレルゲン濃度（ｎｇ／ｍＬ）
ブランク２                  ２．０１
検体３                    ０．８７
検体４                    ０．５６
【００６７】
表４に示すように、試料５を保持した空気清浄機用フィルター（検体３及び検体４）は、スギ花粉アレルゲンを不活性化し得ることが確認された。また、キャベジローズの花部及び蕾部からの抽出物を保持した空気清浄機用フィルターは、当該抽出物の保持量に依存してスギ花粉アレルゲンを不活性化し得ることが確認された。
【産業上の利用可能性】
【００６８】
本発明のアレルゲン不活性化剤及びアレルゲン不活性化材は、スギ花粉等の花粉アレルゲンによる花粉症、ダニ、ダニの死骸及び糞等のダニアレルゲンによるアレルギー性喘息、鼻炎、結膜炎、アトピー性皮膚炎等のＩ型アレルギー性疾患の予防、治療又は改善に有用である。