(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の一般式を有する化合物またはその塩であり、
Ａ−Ｙ−Ｘ（化学式Ｉ）
式中、Ａはアトルバスタチン、フルバスタチン、ロバスタチン、メバスタチン、プラバスタチン・ナトリウム、シンバスタチンから成る群から選択される抗高脂血症薬であり、Ｙは
0005529534.tif 000021
から成る群から選択されるものであり、Ｘは
0005529534.tif 000022
から成る群から選択されるものである、化合物またはその塩。
【請求項２】
請求項１記載の化合物において、Ｙは
0005529534.tif 000023
であり、Ｘは
0005529534.tif 000024
である、化合物。
【請求項３】
請求項１または２記載の化合物において、前記抗高脂血症薬はロバスタチン、メバスタチン、プラバスタチン・ナトリウム、シンバスタチンから成る群から選択されるものである、化合物。
【請求項４】
請求項３記載の化合物において、前記化合物はコハク酸２−｛２−［８−（２，２−ジメチル−ブチリルオキシ）−２，６−ジメチル−１，２，６，７，８，８ａ−ヘキサヒドロ−ナフタレン−１−イル］−エチル｝−６−オキソ−テトラヒドロ−ピラン−４−イル  エステル  ４−チオカルバモイルーフェニルエステルである、化合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、２００５年５月２７日付けで出願された国際出願第ＰＣＴ／ＣＡ２００５／０００８１９号に対して優先権を主張した２００６年３月３１日付けで出願された国際出願第ＰＣＴ／ＣＡ２００６／０００４８４号の一部継続出願である。本出願はさらに、２００６年６月６日付で出願された米国仮特許出願第６０／８０４，０６７号に対して優先権を主張した国際出願第ＰＣＴ／ＣＡ２００６／０００４８４号の一部継続出願である米国特許出願第１１／７５９，１５４号の一部継続出願である。本出願はさらに２００６年７月１８日付けで出願された米国仮特許出願第６０／８０７，６３９号および２００７年１月３０日付けで出願された米国仮特許出願第６０／８８７，１８８号に対して優先権を主張するものである。
【０００２】
本発明は、活性の亢進および／または副作用の軽減を伴う薬剤の硫化水素（Ｈ２Ｓ）放出誘導体に関連する。特に、本発明は、薬剤と共有結合するか或いは薬剤とともに塩を形成するＨ２Ｓ放出部分である４−ヒドロキシチオベンズアミドを有する薬剤誘導体に関連するものである。
【背景技術】
【０００３】
ＮＯ合成酵素によりＬ−アルギニンから合成される一酸化窒素（ＮＯ）およびヘム・オキシゲナーゼによりヘムから合成される一酸化炭素（ＣＯ）はいずれも周知の神経伝達物質であり、また血管緊張の調節にも関与する。最近の研究から、硫化水素（Ｈ２Ｓ）が哺乳類における第三の気体メディエーターであることが示唆されている。Ｈ２Ｓはシスタチオニンベータ−シンターゼ（ｃｙｓｔａｔｈｉｏｎｉｎｅ  ｂｅｔａ−ｓｙｎｔｈａｓｅ：ＣＢＳ）またはシスタチオニン・ガンマ−リアーゼ（ｃｙｓｔａｔｈｉｏｎｉｎｅ  ｇａｍｍａ−ｌｙａｓｅ：ＣＳＥ）により、いずれもピリドキサル５’−リン酸（ビタミンＢ６）を補助因子に用いてＬ−システインから合成される。
【０００４】
Ｈ２Ｓは血管平滑筋細胞、神経細胞、心筋細胞、及びすい臓ベータ細胞におけるＡＴＰ感受性カリウムチャンネル（ＫＡＴＰ）を刺激すると考えられている。さらにＨ２Ｓは、活性酸素および／または窒素種と反応してそれらの毒性作用を制限するが、一酸化窒素の場合のようにそれらの生理作用についても減弱させる可能性がある。
【０００５】
最近の研究により、Ｈ２Ｓが血管緊張、心筋収縮性、神経伝達、インスリン分泌の調節に関与することが示されている。Ｈ２Ｓ欠損が、動脈および肺高血圧症、アルツハイマー病、胃粘膜障害、および肝硬変の各種動物モデルにおいて観察された。外因性Ｈ２Ｓにより虚血／再灌流障害に関連した心筋機能障害を改善し、抗炎症薬誘発性の胃粘膜障害が軽減されると考えられている。
【０００６】
より具体的には、Ｈ２Ｓが抗炎症作用および鎮痛作用を示すことが観察されている。Ｈ２Ｓは内因性物質であり、多くの組織で産生され、多くの機能に作用を及ぼすものである（Ｗａｎｇ，Ｔｗｏ’ｓ  ｃｏｍｐａｎｙ，ｔｈｒｅｅ’ｓ  ａ  ｃｒｏｗｄ：ｃａｎ  Ｈ２Ｓ  ｂｅ  ｔｈｅ  ｔｈｉｒｄ  ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ  ｇａｓｅｏｕｓ  ｔｒａｎｓｍｉｔｔｅｒ？ＦＡＳＥＢ  Ｊ  ２００２；１６：１７９２〜１７９８）。また、血管拡張剤であり、血管内皮への白血球粘着を抑制可能であることも示されている（Ｗａｎｇ，２００２；Ｆｉｏｒｕｃｃｉら、Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ｈｙｄｒｏｇｅｎ  ｓｕｌｆｉｄｅ  ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅｓ  ｔｏ  ｇａｓｔｒｉｃ  ｉｎｊｕｒｙ  ｃａｕｓｅｄ  ｂｙ  ａｎｔｉ−ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｎｏｎｓｔｅｒｏｉｄａｌ  ｄｒｕｇｓ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ．２００５；１２９；１２１０〜１２２４）。さらに、Ｆｉｏｒｕｃｃｉら（２００５）は、ラットにおいて、Ｈ２Ｓ供与体による前処置によりＮＳＡＩＤ誘発性胃損傷の重症度減弱が可能であることが示している。
【０００７】
内因性Ｈ２Ｓの産生が多くの疾患で変化すると考えられている。さらに、Ｈ２Ｓ濃度は現在使用中の薬剤によって影響を受ける可能性がある。例えば、アセチルサリチル酸および非ステロイド性抗炎症薬（ａｎｔｉ−ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｄｒｕｇｓ：ＮＳＡＩＤｓ）は胃腸粘膜のＣＳＥ−Ｈ２Ｓ経路に阻害作用を及ぼすことが示されている（Ｆｉｏｒｕｃｃｉ，Ｓ．ら）。この作用はこれらの薬剤によって誘発される胃粘膜障害の一因となる可能性がある。従って、Ｈ２Ｓ濃度を薬理学的に調節することが、治療的価値を有する可能性がある。
【０００８】
またＨ２Ｓは心臓血管系の病理に関与している可能性があり、動脈性高血圧症、高脂血症、糖尿病など様々なアテローム性動脈硬化症リスク因子を有する患者において、その濃度を検査する必要があるとも考えられいる。Ｈ２Ｓが活性酸素種（ｒｅａｃｔｉｖｅ  ｏｘｙｇｅｎ  ｓｐｅｃｉｅｓ：ＲＯＳ）によって抑制されること（Ｗｈｉｔｅｍａｎ，Ｍ．ら、Ｔｈｅ  ｎｏｖｅｌ  ｎｅｕｒｏｍｏｄｕｌａｔｏｒ  ｈｙｄｒｏｇｅｎ  ｓｕｌｆｉｄｅ：ａｎ  ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ  ｐｅｒｏｘｙｎｉｔｒａｔｅ  ‘ｓｃａｖｅｎｇｅｒ’？，Ｊ  Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．２００４；９０：７６５〜７６８）、及びアテローム性動脈硬化症、動脈性高血圧症、アルツハイマー病など多くの疾患における酸化ストレスの重要な役割を考慮すると、過剰なＲＯＳ産生はＨ２Ｓ欠損を生じさせる可能性があると考えられる。
【０００９】
狭心症、高血圧症、および不整脈の治療に用いられるベータ遮断薬は、呼吸困難、気管支収縮などの呼吸器系副作用が認められ、そのため喘息、気管支炎などを有する患者では問題となる可能性がある。従って、ベータ遮断薬は喘息などの呼吸器疾患をさらに悪化させる。従って、喘息患者において呼吸器機能をさらに悪化させないためには前記薬剤の使用用量を減らす必要がある。従って、ベータ遮断薬の効果は低下する。
【００１０】
血栓現象の予防に用いられるジピリダモール、アスピリンなどの抗血栓薬には腹痛、嘔気、及びその他の消化器系合併症など、多くの副作用が認められる。酸化ストレスに関連した病状を有する患者において、これら薬剤の治療効果または忍容性はアスピリンの場合のように非常に低下する。
【００１１】
喘息や気管支炎の治療においてはサルブタモールなどの気管支拡張薬が用いられ、尿失禁などの病態においてはコリン作動系に作用する薬剤が用いられる。これらの薬剤の投与は、患者の心臓血管系に影響を及ぼし、心臓病患者および高血圧症患者の両方に問題をもたらす副作用を生じる可能性がある。
【００１２】
呼吸器の炎症病態の治療に用いられる去痰薬および粘液溶解薬は、特に高齢者において、胸焼けや胃の刺激症状をもたらす可能性がある。
【００１３】
ジホスホン酸塩（例えばアレンドロネート）などの骨吸収阻害薬は高い胃腸毒性を示す。
【００１４】
心臓血管系疾患および呼吸器系疾患の治療に用いられるシルデナフィル、ザプリナストなどのホスホジエステラーゼ阻害薬は、特に酸化ストレスの病態において、忍容性および／または効果に関し同様の問題で特徴付けられる。
【００１５】
セチリジン、モンテルカストなどの抗アレルギー薬は、特に効果に関し、前記病態において同様の問題を示す。
【００１６】
ＡＣＥ阻害薬（例えばエナラプリル、カプトプリルなど）などの抗アンジオテンシン薬および受容体拮抗薬（例えばロサルタンなど）は心臓血管疾患の治療に用いられる。これらの薬剤は、特に酸化ストレスの病態においては呼吸器系の副作用（咳など）を生じる可能性がある。
【００１７】
スルホニル尿素、トルブタミド、グリピリド、グリクラジド、グリブリド、ニコチンアミドなどの抗糖尿病薬（インスリン感受性増強薬および血糖降下薬の両方）は糖尿病合併症の予防には無効である。それらの投与により胃病変などの副作用を生じる可能性がある。これらの現象は酸化ストレスの病態ではさらに激しいものとなる。
【００１８】
アンピシリン、クラリスロマイシンなどの抗生物質およびアシクロビルなどの抗ウイルス薬は、胃腸刺激性を生じるなど、忍容性に関する問題を引起こす。
【００１９】
ドキソルビシン、ダウノルビシン、シスプラチナムなどの抗腫瘍薬は、胃や腸など多くの臓器において高い毒性を示す。前記毒性は上記酸化ストレスの病態においてはさらに悪化する。
【００２０】
ニコチン、コリン様作用薬などの抗痴呆薬は、特に酸化ストレスの病態においては低い忍容性で特徴付けられる。
従って、先行技術の薬剤における欠点を示すことなく、酸化ストレスおよび／または内皮機能障害の病的状態にある患者に投与可能な、毒性が低くおよび／または高い効能を有する改善された治療効果を示す有効な薬剤が必要とされる。
驚くべきことに、本発明者らは、４−ヒドロキシチオベンズアミド（本願明細書において４−ＨＴＢ若しくはＴＢＺとも称する）が組織中の有効なＨ２Ｓ放出成分であり、薬剤と共有結合するか薬剤とともに塩を形成した場合、副作用が軽減された薬剤誘導体が形成されることを発見した。例えば、本発明の薬剤誘導体による胃腸系および／または心臓血管系副作用は有意に軽度である。
この出願の発明に関連する先行技術文献情報としては、以下のものがある（国際出願日以降国際段階で引用された文献及び他国に国内移行した際に引用された文献を含む）。
【先行技術文献】  
【特許文献】
【００２１】
【特許文献０１】  米国特許出願公開第２００２／０１６５２７６号明細書
【特許文献０２】  米国特許出願公開第２００３／０１１９９０３号明細書
【特許文献０３】  米国特許出願公開第２００６／０２７０６３５号明細書
【特許文献０４】  米国特許出願公開第２００７／０１９７４７９号明細書
【特許文献０５】  米国特許第４，３０１，１６３号明細書
【特許文献０６】  米国特許第４，４１２，９９２号明細書
【特許文献０７】  米国特許第４，４４０，７６３号明細書
【特許文献０８】  米国特許第４，７５１，２２１号明細書
【特許文献０９】  米国特許第５，０１３，７２７号明細書
【特許文献１０】  米国特許第５，２４５，０８０号明細書
【特許文献１１】  米国特許第５，５４１，１７０号明細書
【特許文献１２】  米国特許第５，８１１，５４７号明細書
【特許文献１３】  米国特許第６，１９７，３４１号明細書
【特許文献１４】  米国特許第６，３５３，０２４号明細書
【特許文献１５】  米国特許第６，４５８，７７６号明細書
【特許文献１６】  米国特許第６，６０２，９１５号明細書
【特許文献１７】  米国特許第６，９８６，９０１号明細書
【特許文献１８】  米国特許第７，０４１，７０４号明細書
【特許文献１９】  国際公開第９８／４８８２６号
【特許文献２０】  国際公開第０４／００６９０２号
【特許文献２１】  国際公開第０６／１２５２９３号
【特許文献２２】  国際公開第０６／１２５２９５号
【特許文献２３】  カナダ特許第２，２０４，７４７号明細書
【特許文献２４】  欧州特許第１，６４５，２８８号明細書
【非特許文献】
【００２２】
【非特許文献１】Ａｂｅ，Ｋ．ａｎｄ  Ｋｉｍｕｒａ，Ｈ．Ｔｈｅ  ｐｏｓｓｉｂｌｅ  ｒｏｌｅ  ｏｆ  ｈｙｄｒｏｇｅｎ  ｓｕｌｆｉｄｅ  ａｓ  ａｎ  ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ  ｎｅｕｒｏｍｏｄｕｌａｔｏｒ．１９９６．Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ．Ｖｏｌ．１６（３），ｐｐ．１０６６−７１．
【非特許文献２】Ａｊｕｅｂｏｒ，Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．Ｔｈｅ  ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ  ＲＡＮＴＥＳ  ｉｓ  ａ  ｃｒｕｃｉａｌ  ｍｅｄｉａｔｏｒ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ  ｆｒｏｍ  ａｃｕｔｅ  ｔｏ  ｃｈｒｏｎｉｃ  ｃｏｌｉｔｉｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｒａｔ．２００１．Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｖｏｌ．１６６，ｐｐ．５５２−８．
【非特許文献３】Ａｌ−Ｃｈａｅｒ，Ｅ．Ｄ．，ｅｔ  ａｌ．Ａ  ｎｅｗ  ｍｏｄｅｌ  ｏｆ  ｃｈｒｏｎｉｃ  ｖｉｓｃｅｒａｌ  ｈｙｐｅｒｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ  ｉｎ  ａｄｕｌｔ  ｒａｔｓ  ｉｎｄｕｃｅｄ  ｂｙ  ｃｏｌｏｎ  ｉｒｒｉｔａｔｉｏｎ  ｄｕｒｉｎｇ  ｐｏｓｔｎａｔａｌ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ．２０００．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ．Ｖｏｌ．１１９（５），ｐ．１２７６−８５．
【非特許文献４】Ｂｅｒｇｅ，Ｓ．，ｅｔ ａｌ．，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ．１９７７．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ．Ｖｏｌ．６６（１），ｐｐ．１−１９．
【非特許文献５】Ｂｕｃｃｉ，Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．Ｄｉａｂｅｔｉｃ  ｍｏｕｓｅ  ａｎｇｉｏｐａｔｈｙ  ｉｓ  ｌｉｎｋｅｄ  ｔｏ  ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅ  ｓｙｍｐａｔｈｅｔｉｃ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｄｅｌｅｔｉｏｎ  ｃｏｕｐｌｅｄ  ｔｏ  ａｎ  ｅｎｈａｎｃｅｄ  ｃａｖｅｏｌｉｎ−１  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ．２００４．Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ  Ｔｈｒｏｍｂ  Ｖａｓｃ  Ｂｉｏｌ．Ｖｏｌ．２４，ｐｐ．７２１−６．
【非特許文献６】Ｃａｒｃｅｌｌｅｒ，Ｅ．ｅｔ  ａｌ．Ｎｏｖｅｌ  ａｚｏ  ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ  ａｓ  ｐｒｏｄｒｕｇｓ  ｏｆ  ５−ａｍｉｎｏｓａｌｉｃｙｌｉｃ  ａｃｉｄ  ａｎｄ  ａｍｉｎｏ  ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ  ｗｉｔｈ  ｐｏｔｅｎｔ  ｐｌａｔｅｌｅｔ  ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ  ｆａｃｔｏｒ  ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ  ａｃｔｉｖｉｔｙ．２００１．Ｊ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ．Ｖｏｌ．４４（１８），ｐｐ．３００１−１３．
【非特許文献７】Ｃａｒｍｉｃｈａｅｌ，Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍ−ｂａｓｅｄ  ｓｅｍｉａｕｔｏｍａｔｅｄ  ｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｉｃ  ａｓｓａｙ：ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ  ｏｆ  ｃｈｅｍｏｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ  ｔｅｓｔｉｎｇ．１９８７．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．Ｖｏｌ．４７，ｐｐ．９３６−４２．
【非特許文献８】Ｄｉｓｔｒｕｔｔｉ，Ｅ．ｅｔ  ａｌ．Ｅｖｉｄｅｎｃｅ  ｔｈａｔ  ｈｙｄｒｏｇｅｎ  ｓｕｌｆｉｄｅ  ｅｘｅｒｔｓ  ａｎｔｉｎｏｃｉｃｅｐｔｉｖｅ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  ｔｒａｃｔ  ｂｙ  ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ  ＫＡＴＰ  ｃｈａｎｎｅｌｓ．２００５．Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｅｘｐ  Ｔｈｅｒ．Ｖｏｌ．３１６（１），ｐｐ．３２５−３５．
【非特許文献９】Ｄｚｉｅｒｚｅｗｉｃｚ，Ｚ．，ｅｔ  ａｌ．  Ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ  ｏｆ  ｄｅｓｕｌｆｏｖｉｂｒｉｏ  ｄｅｓｕｌｆｕｒｉｃａｎｓ  ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  ｓｔｒａｉｎｓ  ｔｏ  ｓｕｌｆａｓａｌａｚｉｎｅ  ａｎｄ  ｉｔｓ  ｂｉｏｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ｐｒｏｄｕｃｔｓ．２００４．Ｍｅｄ  Ｓｃｉ  Ｍｏｎｉｔ．Ｖｏｌ．１０（６），ｐｐ．ＢＲ１８５−９０．
【非特許文献１０】Ｅｄｍｏｎｄ，Ｌ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｔｈｅ  ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ５−ａｍｉｎｏｓａｌｉｃｙｌｉｃ  ａｃｉｄ−ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  ｄｒｕｇｓ  ｏｎ  ｓｕｌｆｉｄｅ  ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｂｙ  ｓｕｌｆａｔｅ−ｒｅｄｕｃｉｎｇ  ｂａｃｔｅｒｉａ  ａｎｄ  ａｍｉｎｏ  ａｃｉｄ−ｆｅｒｍｅｎｔｉｎｇ  ｂａｃｔｅｒｉａ．２００３．Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  Ｂｏｗｅｌ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ．Ｖｏｌ．９（１），ｐｐ．１０−７．
【非特許文献１１】Ｅｌｌｉｏｔ，Ｓ．，ｅｔ  ａｌ．Ａ  ｎｉｔｒｉｃ  ｏｘｉｄｅ−ｒｅｌｅａｓｉｎｇ  ｎｏｎｓｔｅｒｏｉｄａｌ  ａｎｔｉ−ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｄｒｕｇ  ａｃｃｅｌｅｒａｔｅｓ  ｇａｓｔｒｉｃ  ｕｌｃｅｒ  ｈｅａｌｉｎｇ  ｉｎ  ｒａｔｓ．１９９５．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ．Ｖｏｌ．１０９，ｐｐ．５２４−３０．
【非特許文献１２】Ｆａｉｒｆｕｌｌ，Ｅ．Ｓ．，ｅｔ  ａｌ．１９５２．Ｊ  Ｃｈｅｍ  Ｓｏｃ．，ｐ．７４２．
【非特許文献１３】Ｆｕｊｉｉ，Ｋ．，ｅｔ  ａｌ．Ｈｙｄｒｏｇｅｎ  ｓｕｌｆｉｄｅ  ａｓ  ａｎ  ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ  ｍｏｄｕｌａｔｏｒ  ｏｆ  ｂｉｌｉａｒｙ  ｂｉｃａｒｂｏｎａｔｅ  ｅｘｃｒｅｔｉｏｎ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｒａｔ  ｌｉｖｅｒ．２００５．Ａｎｔｉｏｘｉｄ  Ｒｅｄｏｘ  Ｓｉｇｎａｌ．Ｖｏｌ．７，ｐｐ．７８８−９４．
【非特許文献１４】Ｆｉｏｒｕｃｃｉ，Ｓ．，ｅｔ  ａｌ．Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ｈｙｄｒｏｇｅｎ  ｓｕｌｆｉｄｅ  ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅｓ  ｔｏ  ｇａｓｔｒｉｃ  ｉｎｊｕｒｙ  ｃａｕｓｅｄ  ｂｙ  ａｎｔｉ−ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｎｏｎｓｔｅｒｏｉｄａｌ  ｄｒｕｇｓ．２００５．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ．Ｖｏｌ．１２９（４），ｐｐ．１２１０−２４．
【非特許文献１５】Ｆｏｒｎａｉ，Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ  ｒｏｌｅ  ｏｆ  ｃｙｃｌｏｏｘｙｇｅｎａｓｅ  １  ａｎｄ  ２  ｉｓｏｆｏｒｍｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｃｏｌｏｎｉｃ  ｎｅｕｒｏｍｕｓｃｕｌａｒ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ．２００６．Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｅｘｐ  Ｔｈｅｒ．Ｖｏｌ．３１７（３），ｐｐ．９３８−４５．
【非特許文献１６】Ｇａｕｔｈｉｅｒ，Ｔ．，ｅｔ  ａｌ．Ｎｉｔｒｉｃ  ｏｘｉｄｅ  ａｔｔｅｎｕａｔｅｓ  ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ−ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ  ｖｉａ  Ｐ−ｓｅｌｅｃｔｉｎ  ｉｎ  ｓｐｌａｎｃｈｎｉｃ  ｉｓｃｈｅｍｉａ−ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ．１９９４．Ａｍ  Ｊ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｖｏｌ．２６７，ｐｐ．Ｇ５６２−８．
【非特許文献１７】Ｇｈｉｄｉｎｉ，ｅｔ  ａｌ．Ｓｉｎｇｌｅ  ｄｒｕｇ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｆｏｒ  ｉｒｒｉｔａｂｌｅ  ｃｏｌｏｎ：ｒｏｃｉｖｅｒｉｎｅ  ｖｅｒｓｕｓ  ｔｒｉｍｅｂｕｔｉｎｅ  ｍａｌｅａｔｅ．１９８６．Ｃｕｒｒ  Ｔｈｅｒ  Ｒｅｓ．Ｖｏｌ．３９，ｐｐ．５４１−８．
【非特許文献１８】Ｇｒｉｓｈａｍ，Ｍ．ａｎｄ  Ｇｒａｎｇｅｒ，Ｄ．５−Ａｍｉｎｏｓａｌｉｃｙｌｉｃ  ａｃｉｄ  ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｍｕｃｏｓａｌ  ｉｎｔｅｒｓｔｉｔｉｕｍ  ｏｆ  ｃａｔ  ｓｍａｌｌ  ａｎｄ  ｌａｒｇｅ  ｉｎｔｅｓｔｉｎｅ．１９８９．Ｄｉｇ  Ｄｉｓ  Ｓｃｉ．Ｖｏｌ．３４，ｐ．５７３−８．
【非特許文献１９】Ｇｒｏｓｓｅｒ，Ｔ．，ｅｔ  ａｌ．Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｂａｓｉｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ  ｃｏｎｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ＣＯＸ−２  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ：ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｅ  ｃｈａｌｌｅｎｇｅｓ  ａｎｄ  ｏｐｐｏｒｔｕｎｉｔｉｅｓ．２００６．Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ．Ｖｏｌ．１１６，ｐ．４−１５．
【非特許文献２０】Ｋａｙｓｅｒ，Ｖ．，ｅｔ  ａｌ．Ａｎｔｉｎｏｃｉｃｅｐｔｉｖｅ  ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  （Ｓ）−Ｎ−ｄｅｓｍｅｔｈｙｌ  ｔｒｉｍｅｂｕｔｉｎｅ  ａｇａｉｎｓｔ  ａ  ｍｅｃｈａｎｉｃａｌ  ｓｔｉｍｕｌｕｓ  ｉｎ  ａ  ｒａｔ  ｍｏｄｅｌ  ｏｆ  ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ  ｎｅｕｒｏｐａｔｈｙ．２０００．Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉ．Ｖｏｌ．６６（５），ｐｐ．４３３−９．
【非特許文献２１】Ｋｈａｎ，Ｓ．，ｅｔ  ａｌ．Ｒａｐｉｄ  ｅｓｔｉｍａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｓｕｌｆｉｄｅ  ｉｎ  ｒｕｍｅｎ  ａｎｄ  ｂｌｏｏｄ  ｗｉｔｈ  ａ  ｓｕｌｆｉｄｅ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｉｏｎ  ｅｌｅｃｔｒｏｄｅ．１９８０．Ｍｉｃｒｏｃｈｅｍ  Ｊ．Ｖｏｌ．２５，ｐｐ．３８８−９５．
【非特許文献２２】Ｌｅｆｆｌｅｒ，Ｍ．，ａｎｄ  Ｍａｔｓｏｎ，Ｅ．Ｃａｒｂａｍａｔｅ  ａｎｔｉｍａｌａｒｉａｌｓ．１９４８．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ．Ｖｏｌ．７０（１０），ｐｐ．３４３９−４２．
【非特許文献２３】Ｍａ，Ｌ．，ｅｔ  ａｌ．Ｐｌａｔｅｌｅｔｓ  ｍｏｄｕｌａｔｅ  ｇａｓｔｒｉｃ  ｕｌｃｅｒ  ｈｅａｌｉｎｇ  ｔｈｒｏｕｇｈ  ｒｅｌｅａｓｅ  ｏｆ  ｅｎｄｏｓｔａｔｉｎ  ａｎｄ  ＶＥＧＦ．２００１．Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ．Ｖｏｌ．９８，ｐｐ．６４７０−５．
【非特許文献２４】Ｍａｒｔｉｎ，Ａ．，ｅｔ  ａｌ．Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  ｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏ−２−ｐｈｅｎｙｌ−２−ｂｕｔｙｌ−３，４，５−ｔｒｉｍｅｔｈｏｘｙｂｅｎｚｏａｔｅ，ｔｈｅ  ｍａｉｎ  ｂｉｏａｃｔｉｖｅ  ｍｅｔａｂｏｌｉｔｅ  ｏｆ  ｔｒｉｍｅｂｕｔｉｎｅ  ｍａｌｅａｔｅ．２０００．Ａｒｚｎｅｌｍ−Ｆｏｒｓｃｈ／Ｄｒｕｇ  Ｒｅｓ．Ｖｏｌ．５０，ｐ．５４４−９．
【非特許文献２５】Ｎｅｓｓ，Ｔ．Ｊ．ａｎｄ  Ｇｅｂｈａｒｔ，Ｇ．Ｆ．Ｖｉｓｃｅｒａｌ  ｐａｉｎ：ａ  ｒｅｖｉｅｗ  ｏｆ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ｓｔｕｄｉｅｓ．１９９０．Ｐａｉｎ．Ｖｏｌ．４１（２），ｐ．１６７−２３４．
【非特許文献２６】Ｎｅｕｒａｔｈ，Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．Ｌｏｃａｌ  ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  ｐｈｏｓｐｈｏｒｏｔｈｉｏａｔｅ  ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ  ｔｏ  ｔｈｅ  ｐ６５  ｓｕｂｕｎｉｔ  ｏｆ  ＮＦ−ｋａｐｐａ  Ｂ  ａｂｒｏｇａｔｅｓ  ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ｃｏｌｉｔｉｓ  ｉｎ  ｍｉｃｅ．１９９６．Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄ．Ｖｏｌ．２，ｐｐ．９９８−１００４．
【非特許文献２７】Ｐｅｌｌｉｃｃｉａｒｉ，Ｒ．，ｅｔ  ａｌ．Ｂｒｕｓｈ−ｂｏｒｄｅｒ−ｅｎｚｙｍｅ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｉｎｔｅｓｔｉｎｅ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｄｒｕｇ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ．Ａｍｉｎｏ  ａｃｉｄ  ｐｒｏｄｒｕｇｓ  ｏｆ  ５−ａｍｉｎｏｓａｌｉｃｙｌｉｃ  ａｃｉｄ．１９９３．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．Ｖｏｌ．３６，ｐｐ．４２０１−７．
【非特許文献２８】Ｒｉｂｅｉｒｏ，Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．Ｃｈｒｏｎｉｃ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ｎｉｔｒｉｃ  ｏｘｉｄｅ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ：Ａ  ｎｅｗ  ｍｏｄｅｌ  ｆｏｒ  ａｒｔｅｒｉａｌ  ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ．１９９２．Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ．Ｖｏｌ．２０，ｐｐ．２９８−３０３．
【非特許文献２９】Ｒｏｍａｎ，Ｆ．ｅｔ  ａｌ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ  ｏｆ  ｔｒｉｍｅｂｕｔｉｎｅ  ａｎｄ  Ｎ−ｍｏｎｏｄｅｓｍｅｔｈｙｌｔｒｉｍｅｂｕｔｉｎｅ．１９９９．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ．Ｖｏｌ．２８９（３），ｐｐ．１３９１−７．
【非特許文献３０】Ｓａｌｖｅｍｉｎｉ，Ｄ．，ｅｔ  ａｌ．Ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ  ｎｉｔｒｉｃ  ｏｘｉｄｅ  ｅｎｈａｎｃｅｓ  ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎ  ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ａ  ｍｏｄｅｌ  ｏｆ  ｒｅｎａｌ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ．１９９４．Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ．Ｖｏｌ．９３，ｐｐ．１９４０−７．
【非特許文献３１】Ｓａｎｔｕｃｃｉ，Ｌ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｇａｌｅｃｔｉｎ−１  ｓｕｐｐｒｅｓｓｅｓ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ｃｏｌｉｔｉｓ  ｉｎ  ｍｉｃｅ．２００３．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ．Ｖｏｌ．１２４，ｐｐ．１３８１−９４．
【非特許文献３２】Ｓｉｄｈｕ，Ｒ．，ｅｔ  ａｌ．Ｌ−ｃｙｓｔｅｉｎｅ  ａｎｄ  ｓｏｄｉｕｍ  ｈｙｄｒｏｇｅｎｓｕｌｆｉｄｅ  ｉｎｈｉｂｉｔ  ｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓ  ｃｏｎｔｒａｃｔｉｂｉｌｉｔｙ  ｉｎ  ｉｓｏｌａｔｅｄ  ｐｒｅｇｎａｎｔ  ｒａｔ  ｕｔｅｒｉｎｅ  ｓｔｒｉｐｓ  ｉｎ  ｖｉｖｏ．２００１．Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  &  Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ．Ｖｏｌ．８８，ｐｐ．１９８−２０３．
【非特許文献３３】Ｓｔａｄｌｅｒ，Ｐ．，ｅｔ  ａｌ．Ｄｉｃｌｏｆｅｎａｃ  ｄｅｌａｙｓ  ｈｅａｌｉｎｇ  ｏｆ  ｇａｓｔｒｏｄｕｏｄｅｎａｌ  ｍｕｃｏｓａｌ  ｌｅｓｉｏｎｓ．Ｄｏｕｂｌｅ−ｂｌｉｎｄ，ｐｌａｃｅｂｏ−ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  ｅｎｄｏｓｃｏｐｉｃ  ｓｔｕｄｙ  ｉｎ  ｈｅａｌｔｈｙ  ｖｏｌｕｎｔｅｅｒｓ．１９９１．Ｄｉｇｅｓｔｉｖｅ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ  ａｎｄ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ．Ｖｏｌ．３６，ｐｐ．５９４−６００．
【非特許文献３４】Ｔｅａｇｕｅ，Ｂ．，ｅｔ  ａｌ．Ｔｈｅ  ｓｍｏｏｔｈ  ｍｕｓｃｌｅ  ｒｅｌａｘａｎｔ  ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ｈｙｄｒｏｇｅｎ  ｓｕｌｆｉｄｅ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ：ｅｖｉｄｅｎｃｅ  ｆｏｒ  ａ  ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｒｏｌｅ  ｔｏ  ｃｏｎｔｒｏｌ  ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  ｃｏｎｔｒａｃｔｉｌｉｔｙ．２００２．Ｂｒ  Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｖｏｌ．１３７，ｐｐ．１３９−４５．
【非特許文献３５】Ｕｂｕｋａ，Ｔ．Ａｓｓａｙ  ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｒｏｌｅｓ  ｏｆ  ｌａｂｉｌｅ  ｓｕｌｆｕｒ  ｉｎ  ａｎｉｍａｌ  ｔｉｓｓｕｅｓ．２００２．Ｊ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ  Ｂ  Ａｎａｌｙｓｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌ  Ｂｉｏｍｅｄ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉ．Ｖｏｌ．７８１，ｐｐ．２２７−４９．
【非特許文献３６】Ｕｃｈｉｙａｍａ，Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．Ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｔｒｉｍｅｂｕｔｉｎｅ  ｏｎ  ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  ｍｏｔｉｌｉｔｙ  ａｆｔｅｒ  ｍａｓｓｉｖｅ  ｓｍａｌｌ  ｂｏｗｅｌ  ｒｅｓｅｃｔｉｏｎ．２０００．Ｊ．Ｓｍｏｏｔｈ  Ｍｕｓｃｌｅ  Ｒｅｓ．Ｖｏｌ．３６，ｐｐ．１１７−２６．
【非特許文献３７】Ｗａｌｆｏｒｄ，Ｇ．ａｎｄ  Ｌｏｓｃａｌｚｏ，Ｊ．Ｎｉｔｒｉｃ  ｏｘｉｄｅ  ｉｎ  ｖａｓｃｕｌａｒ  ｂｉｏｌｏｇｙ．２００３．Ｊ  Ｔｈｒｏｍｂ  Ｈａｅｍｏｓｔ．Ｖｏｌ．１，ｐｐ．２１１２−８．
【非特許文献３８】Ｗａｌｌａｃｅ，Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．Ｒｏｌｅ  ｏｆ  ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  ａｄｈｅｓｉｏｎ  ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ  ｉｎ  ＮＳＡＩＤ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｇａｓｔｒｉｃ  ｍｕｃｏｓａｌ  ｉｎｊｕｒｙ．１９９３．Ａｍ  Ｊ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｖｏｌ．２６５，ｐｐ．９９３−８．
【非特許文献３９】Ｗａｌｌａｃｅ，Ｊ．Ｎｏｎｓｔｅｒｏｉｄａｌ  ａｎｔｉ−ｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｄｒｕｇｓ  ａｎｄ  ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｅｏｐａｔｈｙ：ｔｈｅ  ｓｅｃｏｎｄ  ｈｕｎｄｒｅｄ  ｙｅａｒｓ．１９９７．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｅｏｌｏｇｙ．Ｖｏｌ．１１２，ｐｐ．１０００−１６．
【非特許文献４０】Ｗａｌｌａｃｅ，Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．Ｃｙｃｌｏｏｘｙｇｅｎａｓｅ  １  ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅｓ  ｔｏ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｒｅｓｐｏｓｎｓｅｓ  ｉｎ  ｒａｔｓ  ａｎｄ  ｍｉｃｅ：ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｆｏｒ  ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  ｔｏｘｉｃｉｔｙ．１９９８．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ．Ｖｏｌ．１１５，ｐｐ．１０１−９．
【非特許文献４１】Ｗａｌｌａｃｅ，Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．Ｅｎｈａｎｃｅｄ  ａｎｔｉ−ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ａ  ｎｉｔｒｉｃ−ｏｘｉｄｅ  ｒｅｌｅａｓｉｎｇ  ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅ  ｏｆ  ｍｅｓａｌａｍｉｎｅ  ｉｎ  ｒａｔｓ．１９９９．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ．Ｖｏｌ．１１７，ｐｐ．５５７−６６．
【非特許文献４２】Ｗａｌｌａｃｅ，Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．Ｌｉｍｉｔｅｄ  ａｎｔｉ−ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｅｆｆｉｃａｃｙ  ｏｆ  ｃｙｃｌｏｏｘｙｇｅｎａｓｅ−２  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｉｎ  ｃａｒｒａｇｅｅｎａｎ  ａｉｒｐｕｃｈ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ．１９９９．Ｂｒ  Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｖｏｌ．１２６，ｐｐ．１２００−４．
【非特許文献４３】Ｗａｎｇ，Ｒ．Ｔｗｏ'ｓ  ｃｏｍｐａｎｙ，ｔｈｒｅｅ'ｓ  ａ  ｃｒｏｗｄ：ｃａｎ  Ｈ２Ｓ  ｂｅ  ｔｈｅ  ｔｈｉｒｄ  ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ  ｇａｓｅｏｕｓ  ｔｒａｎｓｍｉｔｔｅｒ？  ２００２．ＦＡＳＥＢ  Ｊ．Ｖｏｌ．１６，ｐｐ．１７９２−８．
【非特許文献４４】Ｗａｎｇ，Ｒ．Ｔｈｅ  ｇａｓｏｔｒａｎｓｍｉｔｔｅｒ  ｒｏｌｅ  ｏｆ  ｈｙｄｒｏｇｅｎ  ｓｕｌｆｉｄｅ．２００３．Ａｎｔｉｏｘｉｄ  Ｒｅｄｏｘ  Ｓｉｇｎａｌ．Ｖｏｌ．５，ｐｐ．４９３−５０１．
【非特許文献４５】Ｗｈｅｌｔｏｎ，Ａ．Ｎｅｐｈｒｏｔｏｘｉｃｉｔｙ  ｏｆ  ｎｏｎｓｔｅｒｏｉｄａｌ  ａｎｔｉ−ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｄｒｕｇｓ：ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃ  ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎｓ  ａｎｄ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ．１９９９．Ａｍ  Ｊ  Ｍｅｄ．Ｖｏｌ．１０５（５Ｂ），ｐｐ．１３Ｓ−２４Ｓ．
【非特許文献４６】Ｗｈｉｔｅｍａｎ，Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．Ｔｈｅ  ｎｏｖｅｌ  ｎｅｕｒｏｍｏｄｕｌａｔｏｒ  ｈｙｄｒｏｇｅｎ  ｓｕｌｆｉｄｅ：ａｎ  ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ  ｐｅｒｏｘｙｎｉｔｒａｔｅ  'ｓｃａｖｅｎｇｅｒ'？  ２００４．Ｊ  Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．Ｖｏｌ．９０，ｐｐ．７６５−８．
【非特許文献４７】Ｚａｎａｒｄｏ，Ｒ．，ｅｔ  ａｌ．Ｈｙｄｒｏｇｅｎ  ｓｕｌｐｈｉｄｅ  ｉｓ  ａｎ  ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ  ｍｏｄｕｌａｔｏｒ  ｏｆ  ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ．２００６．ＦＡＳＥＢ  Ｊ．Ｖｏｌ．２０，ｐｐ．２１１８−２０．
【非特許文献４８】Ｚｈａｏ，Ｗ．，ｅｔ  ａｌ．Ｔｈｅ  ｖａｓｏｒｅｌａｘａｎｔ  ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  Ｈ２Ｓ  ａｓ  ａ  ｎｏｖｅｌ  ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ  ｇａｓｅｏｕｓ  ＫＡＴＰ  ｃｈａｎｎｅｌ  ｏｐｅｎｅｒ．２００１．ＥＭＢＯ  Ｊｏｕｒｎａｌ．Ｖｏｌ．２０（２１），ｐｐ．６００８−１６．
【非特許文献４９】Ｚｈａｏ，Ｗ．，ｅｔ  ａｌ．Ｈ２Ｓ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｖａｓｏｒｅｌａｘａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｕｎｄｅｒｌｙｉｎｇ  ｃｅｌｌｕｌａｒ  ａｎｄ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ．２００２．Ａｍ  Ｊ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  Ｈｅａｒｔ  Ｃｉｒｃ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｖｏｌ．２８３，ｐｐ．Ｈ４７４−８０．
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００２３】
本発明の一態様において、薬剤誘導体が提供され、前記誘導体は、薬剤と共有結合するか薬剤とともに塩を形成するＨ２Ｓ放出性４−ヒドロキシチオベンズアミド（本願明細書において４−ＨＴＢまたはＴＢＺとも称する）を含む。驚いたことに、薬剤単独、４−ヒドロキシチオベンズアミド単独、及び薬剤と４−ヒドロキシチオベンズアミドとの組合せを別々であるが併用投与した場合と比較すると、本発明の化合物は、活性の亢進または副作用の軽減またはそれら両方を示す。
【００２４】
本発明の化合物は、血漿Ｈ２Ｓ濃度を一時的にわずかに上昇させる。理論に束縛されるものではないが、血漿Ｈ２Ｓ濃度の一時的な上昇は、生理学的範囲内であるが、薬剤の活性亢進、胃腸障害の減少、および／または心臓血管毒性の減少に寄与する可能性がある。
【００２５】
さらに、本発明の化合物を高血圧ラットに投与したところ、薬剤そのものを投与した場合に比べて、誘発された収縮期血圧の上昇は意外にも有意に小幅であった。血圧上昇傾向が少ないことから、前記薬剤の長期使用において頻繁に見られる心臓血管系副作用が軽減される可能性がある。
【００２６】
本発明によると、以下の一般式を有する化合物が提供され、
Ａ−Ｙ−Ｘ          （化学式Ｉ）
式中、Ａは薬剤遊離基であり、Ｙは−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−、−Ｃ（Ｏ）ＯＣ（Ｏ）、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＣＨ２Ｃ（Ｏ）−、Ｏ、Ｓ、Ｎ、
【００２７】
【化１】
0005529534.tif 000002
【００２８】
またはゼロから成る群から選択されるものであり、更に、Ｘは、
【００２９】
【化２】
0005529534.tif 000003
【００３０】
である化合物、及び薬学的に許容される化合物の塩であり、ただしＹがゼロの時、前記薬剤誘導体はＡ及びＸの塩である場合がある。好ましい実施形態において、Ａ及びＸはエステル結合、無水結合、チオエステル結合、アミド結合、またはアゾ結合の手段により結合している。一実施形態において、４−ヒドロキシチオベンズアミドの代わりに、チオカルバモイル安息香酸塩を用いて前記薬剤遊離基と共に塩が形成される。
【００３１】
前記薬剤は様々な既知の薬剤分類から選択可能である。例えば、その薬剤分類とは、タンパク質、ペプチド、ヌクレオチド、抗肥満薬、栄養補助食品、副腎皮質ステロイド、エラスターゼ阻害剤、鎮痛薬、抗真菌剤、腫瘍治療薬、抗嘔吐薬、鎮痛薬、心血管作動薬、抗炎症薬、駆虫剤、抗不整脈薬、抗生剤（ペニシリンを含む）、抗凝固薬、抗うつ薬、抗糖尿病薬、抗痙攣薬、抗ヒスタミン薬、降圧薬、抗ムスカリン剤、抗抗酸菌薬、抗腫瘍薬、免疫抑制剤、抗甲状腺薬、抗ウイルス薬、抗不安鎮静薬（睡眠薬および神経安定薬）、利尿薬、ドーパミン作動薬（抗パーキンソン薬）、止血薬、免疫薬、脂質調節薬、筋肉弛緩剤、副交感神経興奮薬、副甲状腺カルシトニンおよびビスホスホネート、プロスタグランジン、性ホルモン（ステロイドを含む）、抗アレルギー剤、覚醒剤および食欲減退薬、交感神経様作用薬、甲状腺薬、血管拡張剤、キサンチンなどである。
【００３２】
本発明において以下の薬剤が特に有用である。
【００３３】
非ステロイド性抗炎症薬（ｎｏｎｓｔｅｒｏｉｄａｌ  ａｎｔｉ−ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｄｒｕｇｓ：ＮＳＡＩＤｓ）：アセチルサリチル酸（ａｃｅｔｙｌｓａｌｉｃｙｌｉｃ  ａｃｉｄ：ＡＳＡ）、ジクロフェナク、ナプロキセン、インドメタシン、フルルビプロフェン、スリンダク、イブプロフェン、アセクロフェナク、アセメタシン、ベノキサプロフェン、ベンゾフェナク、ブロムフェナク、ブクロキシン酸、ブチブフェン、カルプロフェン、セレコキシブ、シクロプロフェン、シンメタシン、クリダナク、クロピラク、ジフルシナル、エトドラック、エトリコキシブ、フェンブフェン、フェンクロフェナク、フェンクロラク、フェノプロフェン、フェンチアザク、フルノキサプロフェン、フラプロフェン、フロブフェン、フラフェナク、イブフェナク、インドプロフェン、イソキセパク、ケトプロフェン、ケトロラック、ロキソプロフェン、ロナゾラク、ルミラコキシブ、メチアジニク、メフェナム酸、メクロフェナム酸、メロキシカム、ナブメトン、ピロミド酸、サルサレート、ミロプロフェン、オキサプロジン、オキセピナク、パラコキシブ、フェニルブタゾン、ピルプロフェン、ピロキシカム、ピロゾラク、プロチジン酸、ロフェコキシブ、サリチル酸ナトリウム、スプロフェン、チアプロフェン酸、トルメチン、バルデコキシブ、ゾメピラク、など。
【００３４】
鎮痛薬：アセトアミノフェン、アセトアミノサロール、アミノクロルテノキサジン、アセチルサリチル２−アミノー４−ピコリン酸、アセチルサリチルサリチル酸、アニレニジン、ベノキサプロフェン、ベンジルモルフィン、５−ブロモサリチルアセテート酸、ブセチン、ブプレノルフィン、ブトルファノール、カプサイシン、シンコフェン、シラマドール、クロメタシン、クロニキシン、コデイン、デスモルフィン、デゾシン、ジヒドロコデイン、ジヒドロモルフィン、ジメフェプタノール、ジピロセチル、エプタゾシン、エトキサゼン、エチルモルフィン、オイゲノール、フロクタフェニン、フォスフォザール、グラフェニン、ヒドロコドン、ヒドロモルフォン、ヒドロキシペプチジン、イブフェナック、ｐ−ラクトフェネチド、レボルファノール、メプタジノール、メタゾシン、メトポン、モルヒネ、ナルブフィン、ニコモルフィン、ノルレボルファノール、ノルモルヒネ、オキシコドン、オキシモルフォン、ペンタゾシン、フェナゾシン、フェノコール、フェノペリジン、フェニルブタゾン、フェニルサリチル酸、フェニルレミドール、サリシン、サリチルアミド、チオルファン、トラマドール、ジアセレイン、アクタリット、など。
【００３５】
抗大腸炎薬：４−または５−アミノサリチル酸、トリメブチン、など。
【００３６】
呼吸器および泌尿生殖器薬（気管支拡張薬およびコリン作動系に作用を及ぼす薬、去痰薬／粘液溶解薬、抗喘息／抗アレルギー  抗ヒスタミン薬）：気管支拡張薬およびコリン作動系に作用を及ぼす薬：イソプロテネロール、マブテロール、メタプロテレノール、オキシブチニン、オキシトロピウム、臭化物、ピルブテロール、プロカテロール、プロトキロール、プロキシフィリン、レプロテロール、リミテロール、サルメテロール、ソテレノール、テルブタリン、１−テオブロミンアセト酢酸、臭化チオトロピウム、トレトキノール、ツロブテロール、ザプリナスト、シクロドリン（ｃｙｃｌｏｄｒｉｎｅ）、ＮＳ−２１、２−ヒドロキシー２，２−ジフェニル―Ｎ−（１，２，３，６−テトラ  ヒドローピリジンー４−イルメチル）アセトアミド、など。
【００３７】
去痰薬／粘液溶解薬：アンブロキソール、ブロムヘキシン、ドミオドール、エルドステイン、グアヤコール、グアイフェネシン、ヨウ化グリセロール、レトステイン、メスナ、ソブレロール、ステプロニン、テルピン、チオプロニン、など。
【００３８】
抗喘息／抗アレルギー  抗ヒスタミン薬：アクリバスチン、アロクラミド、アムレキサノックス、セチリジン、クロベンゼパム、クロモグリク酸、クロモリン、エピナスチン、フェキソフェナジン、ホルモテロール、ヒスタミン、ヒドロキシジン、レボカバスチン、ロドキサミド、マブテロール、モンテルカスト、ネドクロミル、レピリナスト、セラトロダスト、スプラタスト、トシラート、テルフェナジン、チアラミド、ウルシオール、ブロムヘキシン、など。
【００３９】
ＡＣＥ−阻害薬：アラセプリル、ベナゼプリル、カプトプリル、セロナプリル、シラザプリル、デラプリル、エナラプリル、エナラプリラート、ホシノプリル、イミダプリル、リシノプリル、ロサルタン、モベルチプリル、ナフトピジル、ペリンドプリル、キナプリル、ラミプリル、スピラプリル、テモカプリル、トランドラプリル、ウラピジル、など。
【００４０】
ベータ遮断薬：アセブトロール、アルプレノロール、アモスラロール、アロチノロール、アテノロール、ベタキソロール、ベバントロール、ブクモロール、ブフェトロール、ブフラロール、ブニトロロール、ブプラノロール、ブトルフィロール、カラゾロール、カルテオロール、カルベジロール、セリプロロール、セタモロール、ジレバロール、エパノロール、エスモロール、インデノロール、ラベタロール、メピンドロール、メチプラノロール、メトプロロール、モプロロール、ナドロール、ナドキソロール、ネビボロール、ニフェナロール、ニプリダロール、オクスプレノロール、ペンブトロール、ピンドロール、プラクトロール、プロネタロール、プロプラノロール、ソタロール、スルフィナロール、タリノロール、テルタトロール、チリソロール、チモロール、トリプロロール、キシベノロール、など。
【００４１】
抗血栓薬および血管拡張薬：アセトルファン、アセチルサリチル酸、アルガトロバン、バメタン、ベンフロジルヘミスクシナート、ベンジオダロン、ベタヒスチン、ブロモビンカミン、ブフェニオード、シチコリン、クロベンフロール、クロピドグレル、シクランデラート、ダルテパリン、ジピリダモール、ドロペニラミン（ｄｒｏｐｅｎｉｌａｍｉｎｅ）、エノキサパリン、フェンジリン、イフェンプロジル、イロプロスト、インドブフェン、イスボグレル、イソクスプリン、ヘパリン、ラミフィバン、ミドロジン、ナドロパリン、ニコチノイル、アルコール、ナイリドリン、オザグレル、ペルヘキシリン、フェニルプロパノールアミン、プレニラミン、パプベロリン、レビパリン、ナトリウム塩、リドグレル、スロクチジル、チノフェドリン、チンザパリン、トリフルサル、ニコチン酸キサンチノール、など。
【００４２】
抗糖尿病薬：アカルボース、カルブタミド、グリボルヌリド、グリブチアゾール、ミグリトール、レパグリニド、トログリタゾン、１−ブチルーメタニルー尿素、トルレスタット、ニコチンアミド、など。
【００４３】
抗腫瘍薬：アンシタビン、アンスラマイシン、アザシチジン、アザセリン、６−アザウリジン、ビカルタミド、カルビシン、カルジノフィリン、クロラムブシル、クロロゾトシン、シタラビン、ダウノルビシン、デホスファミド、デメコルチン、デノプテリン、６−ジアゾ−５−オキソーＬ−ノルロイシン、ドセタキセル、ドキシフルリジン、ドキソルビシン、ドロロキシフェン、エダトレキセート、エフロールニチン、エノシタビン、エピルビシン、エピチオスタノール、エタニダゾール、エトポシド、フェンレチニド、フルダラビン、フルオロウラシル、ゲムシタビン、ヘキセストロール、イダルビシン、ロニダミン、マンノムスチン、メルファラン、メノガリル、６−メルカプトプリン、メトトレキセート、ミトブロニトール、ミトラクトール、ミトマイシン、ミトキサントロン、モピダモール、ミコフェノール酸、ニノプテリン、ノガラマイシン、パクリタキセル、ペントスタチン、ピラルビシン、ピリトレキシム、ピリカマイシン、ポドフィリン酸、ポルフィマーナトリウム、ポルフィロマイシン、プロパゲルマニウム、ピューロマイシン、ラニムスチン、レチノイン酸、ロキニメクス、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、テニポシド、テヌアゾン酸、チアミプリン、チオグアニン、トムデックス、トポテカン、トリメトレキセート、ツベルシジン、ウベニメクス、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、ビノレルビン、ゾルビシン、など。
【００４４】
抗潰瘍薬：εーアセトアミドカプロン酸、アルバプロスチル、セトラキセート、シメチジン、エカベト、エンプロスチル、エサプラゾール、イルソグラジン、ミソプロストール、オメプラゾール、オルノプロスチル、パントプラゾール、プラウノトール、リオプロスチル、ロサプロストール、ロトラキセート、ソファルコン、トリモプロスチル、など。
【００４５】
抗高脂血症薬（スタチン類）：アトルバスタチン、シラスタチン、デルモスタチン、フルバスタチン、ロバスタチン、メバスタチン、ナイスタチン、ペントスタチン、ペプスタチン、プラバスタチンナトリウム、シンバスタチン、など。
【００４６】
抗生剤：アムジノシリン、アモキシシリン、アンピシリン、アパルシリン、アピサイクリン、アスポキシシリン、アジダムフェニコール、アジドシリン、アズロシリン、アズトレオナム、ベンゾイルパス（ｂｅｎｚｏｙｌｐａｓ）、ベンジルペニシリン酸、ビアペネム、ビコザマイシン、カプレオマイシン、カルベニシリン、カリンダシリン、カルモナン、セファクロール、セファドロキシル、セファマンドール、セチリジン、セファゼドン、セファゾリン、セフブペラゾン、セフクリジン、セフジニール、セフジトレン、セフェピム、セフェタメット、セフィキシム、セフメノキシム、セフメタゾール、セフミノクス、セフォジジム、セフォニシド、セフォペラゾン、セフォラニド、セフォタキシム、セフォテルタン、セフォキシチン、セフォゾプラン、セフピミゾール、セフピラミド、セフピロム、セフプロジル、セフロキサジン、セフスロジン、セフタジジム、セフテラム、セフテゾール、セフチブテン、セフチオフル、セフチゾキシム、セフトリアキソン、セフロキシム、セフゾナム、セファセトリルナトリウム、セファレキシン、セファログリシン、セファロリジン、セファロスポリンＣ、セファロチン、セファピリンナトリウム、セフラジン、クロラムフェニコール、クロルテトラサイクリン、シノキサシン、クラブラン酸、クロメトシリン、クロキサシリン、シクラシリン、シクロセリン、デメクロサイクリン、ジクロキサシリン、エピシリン、フェンベシリン、フロモキセフ、フロキサシリン、エタシリン、イミペネム、レナムピシリン、ロラカルベフ、リメサイクリン、マフェニド、メクロサイクリン、メロペネム、メタムピシリン、メタサイクリン、メチシリンナトリウム、メズロシリン、ミノサイクリン、モキサラクタム、ムピロシン、ミキシン、ネガマイシン、ノボビオシン、オキサシリン、パニペネム、ペニシリンＧカリウム塩、ペニシリンＮ、ペニシリンＯ、ペニシリンＶ、フェネチシリンカリウム塩、ピパサイクリン、ピペラシリン、ピルリマイシン、ポルフィロマイシン、プロピシリン、キナシリン、リチペネム、ロリテトラサイクリン、サンサイクリン、セデカマイシン、スペクチノマイシン、スルバクタム、スルベニシリン、テモシリン、テトラサイクリン、チカルシリン、チゲモナム、ツベルシジン、アジスロマイシン、クラリスロマイシン、ジルスロマイシン、エンビオマイシン、エリスロマイシン、ジョサマイシン、ミデカマイシン、ミオカマイシン、オレアンドマイシン、リファブチン、リファミド、フィアマイシン、リファキシミン、ロキタマイシン、スピラマイシン、トロレアンドロマイシン、ビオマイシン、バージニアマイシン；アミカシン、アプラマイシン、アルベカシン、ジベカシン、ジヒドロストレプトマイシン、フォーチミシン、ゲンタマイシン、ミクロノマイシン、ネオマイシン、ネチルマイシン、パロモマイシン、リボスタマイシン、シソマイシン、スペクチノマイシン、ストレプトマイシン、トブラマイシン、トロスペクトロマイシン；バカンピシリン、セフカペンピボキシル、セフポドキシム・プロキセチル、パニペネム、ピバンピシリン、ピブセファレキシン、スルタミシリン、タランピシリン、カルボマイシン、クリンダマイシン、リンコマイシン、ミカマイシン、ロサラマイシン、シプロフロキサシン、クリナフロキサシン、ジフロキサシン、エノキサシン、エンロフロキサシン、フレロキサシン、フルメキン、グレパフロキサシン、ロメフロキサシン、ナジフロキサシン、ナリジクス酸、ノルフロキサシン、オフロキサシン、パズフロキサシン、ペフロキサシン、ピペミド酸、ピロミド酸、ルフロキサシン、サルフロキサシン、トスルフロキサシン、トロバフロキサシン、クロモサイクリン、グアメサイクリン、オキシテトラサイクリン、ニフルピリノール、ニフルプラジン；ｐ−アミノサリチル酸、ｐ−アミノサリチル酸ヒドラジド、クロファジミン、デオキシジヒドロストレプトマイシン、エタンブトール、グリコニアジド、イソニアジド、オピニアジド、フェニルアミノサリチル酸、リファンピン、リファペンチン、サリナジド、４−４’−スルホニルジアニリン、アセジアスルホン、ダプソン、スクシスルホン、ｐ−スルファニルベンジルアミン、チアゾールスルホン、アセチル・スルファメトキシピラジン、マフェニド、４’−（メチルスルファモイル）スルファニルアニリド、サラゾスルファジミミン、スルファベンズアミド、スルファセタミド、スルファクロールピリダジン、スルファクリソイジン、スルファシチン、スルファジアジン、スルファジクラミド、スルファジメトキシン、スルファドキシン、スルファエチドール、スルファグアニジン、スルファグアノール、スルファレン、スルファメラジン、スルファメータ、スルファメサジン、スルファメチゾール、スルファメトミジン、スルファメトキサゾール、スルファメトキシピリダジン、スルファメチルチアゾール、スルファメトロール、スルファミドクリソイジン、スルファモクソール、スルファニルアミド、２−ｐ−スルファニルアニリノエタノール、Ｎ，４−スルファニルスルファニルアミド、スルファニリル尿素、Ｎ−スルファニリルー３，４−キシラミド、スルファペリン、スルファフェナゾール、スルファプロキシリン、スルファピラジン、スルファピリジン、スルファソミゾール、スルファシマジン、スルファチアゾール、スルファチオ尿素、スルフィソミジン、スルフィソキサゾール、４−スルファニルアミド・サリチル酸；ネガマイシン、カルモナン、クロキシキン、ニトロキソリン、アルギニン、メトロニタゾール、など。
【００４７】
抗ウイルス薬：アシクロビル、アマンタジン、シドフォビル、シタラビン、ジダノシン、ジデオキシアデノシン、エドクスジン、ファムシクロビル、フロクスウリジン、ガンシクロビル、イドクスリジン、インダナビル、ケトキサル、ラミブジン、ＭＡＤＵ、ペンシクロビル、ポドフィロトキシン、リバビリン、リマンタジン、サキナビル、ソリブジン、スタブジン、トリフルリジン、バラシクロビル、ビダラビン、キセナゾ酸、ザルシタビン、ジドブジン、など。
【００４８】
骨吸収阻害薬（ビスホスホネート類）：アレンドロン酸、ブテドロン酸、エチドロン酸、オキシドロン酸、パミドロン酸、リセドロン酸、など。
【００４９】
抗痴呆薬：アミリジン、ラザベミド、モフェギリン、サルベルゾル、オキシラセタム、イピダクリン、ネブラセタム、タクリン、ベルナクリン、など。
【００５０】
上記前駆体薬剤は従来技術にて周知の方法に従って作成する。例えば、この参照により本願明細書に組み込まれる、Ｍｅｒｃｋ  Ｉｎｄｅｘ（第１３版（２００１年）、メルク社、ニュージャージー州Ｗｈｉｔｅｈｏｕｓｅ  Ｓｔａｔｉｏｎ）を参照。入手可能な場合は、光学異性体を含む対応異性体が使用可能である。
【００５１】
アルカリ金属塩、アルカリ土類金属塩、非毒性アミン、非毒性アミノ酸など、本発明の化合物の薬学的に許容できる塩もまた本発明の一部である。本発明の化合物の望ましい塩はアルギニンおよびアグマチンとの塩である。薬学的に許容できる酸付加塩も含まれる。
【００５２】
本発明に従った誘導体は前記前駆体薬剤の治療適応において使用可能であり、これらの薬剤に対し以下に例示される利点を得ることが可能となる。
【００５３】
本発明のＮＳＡＩＤ誘導体は、生体が衰弱し酸化ストレスの状態にある時でさえも極めて忍容性に優れており且つ効果的である。前記ＮＳＡＩＤ誘導体は、例えば癌、喘息、心筋梗塞など、これらに限定されるものではないが、炎症が重要な発因的役割を果たすような病態で使用可能である。
【００５４】
より具体的に、本発明のＮＳＡＩＤ誘導体は、これらに限定されるものではないが、患者の炎症治療、および例えば痛みや頭痛の治療における鎮痛剤として、若しくは発熱治療のための解熱剤として、他の炎症関連障害の治療に有用である。例えば、本発明の化合物は、関節リウマチ、脊椎関節症、痛風性関節炎、変形性関節症、全身性エリテマトーデス、および若年性関節炎など（これらに限定されるものではないが）の関節炎の治療に有用である。このような本発明の化合物は、喘息、気管支炎、月経痙攣、腱炎、滑液包炎、皮膚関連の病態（乾癬、湿疹、熱傷、皮膚炎など）、術後炎症（白内障手術、屈折矯正手術などの眼科手術を含む）の治療において有用である。本発明の化合物は、炎症性腸疾患、クローン病、胃炎、過敏性腸症候群、潰瘍性大腸炎などの胃腸病の治療、および結腸直腸癌などの癌の予防若しくは治療にも有用である。本発明の化合物は、血管障害、片頭痛、結節性動脈周囲炎、甲状腺炎、再生不良性貧血、ホジキン病、強皮症、リウマチ熱、１型糖尿病、神経筋接合部疾患（重症筋無力症など）、白質疾患（多発性硬化症）、サルコイドーシス、ネフローゼ症候群、ベーチェット症候群、多発性筋炎、歯肉炎、腎炎、過敏症、損傷後の腫脹、心筋虚血などの疾患における炎症の治療に有用である。前記化合物は、網膜炎、網膜症、ブドウ膜炎、眼球羞明症などの眼科疾患の治療、および眼組織への急性損傷の治療においても有用である。前記化合物はウイルス感染および嚢胞性線維症に関連するような肺炎症の治療にも有用である。前記化合物はアルツハイマー病を含む皮質認知症など特定の中枢神経系疾患の治療にも有用である。本発明の化合物は関節炎の治療などに対し抗炎症薬として有用であり、副作用が顕著に少ないという更なる利点がある。これらの化合物は、アレルギー性鼻炎、呼吸窮迫症候群、内毒素性ショック症候群、アテローム性動脈硬化症、および脳卒中、虚血、外傷による中枢神経系損傷の治療にも有用と考えられる。前記化合物は、歯痛、筋肉痛、癌性疼痛など（これらに限定されない）の治療にも有用である。これらの化合物はヒトの治療に有用である他、ウマ、イヌ、ネコ、ラット、マウス、ヒツジ、ブタなどの哺乳類の治療にも有用である。
【００５５】
例えば４−若しくは５−アミノサリチル酸誘導体、トリメブチン誘導体など、本発明の抗大腸炎薬誘導体は各種疾患、特に以下のような消化管の炎症病態の予防若しくは治療に利用可能である。それらの病態とは（これらに限定されるものではないが）、粘膜炎、感染症（ウイルス性、細菌性、真菌性疾患など）、クローン病などの口腔炎症病態；食道炎、化学損傷による病態（苛性アルカリ溶液の摂取など）、胃食道逆流性疾患、胆汁酸逆流、バレット食道、クローン病、食道狭窄症などの食道炎症病態；クローン病、潰瘍性大腸炎、過敏性腸症候群、感染性腸炎（クロストリジウム・ディフィシレ大腸炎などの偽膜性大腸炎、サルモネラ腸炎、赤痢菌感染症、エルシニア症、クリプトスポリジウム症、ミクロスポリジア感染、ウイルス感染、など）、放射線性大腸炎、免疫不全宿主における大腸炎（虫垂炎など）、大腸の前癌病態（異形成、腸管炎症、大腸ポリープなど）、直腸炎、痔疾関連の炎症一過性直腸神経痛、直腸亀裂などの大腸の炎症病態；胆管炎、硬化性胆管炎、原発性胆汁性肝硬変、胆嚢炎などの肝臓、胆嚢、および／または胆道疾患；および腸膿瘍である。
【００５６】
スタチンは、アテローム性動脈硬化症の病態にあるか若しくはそのリスクのある個人に胸痛、心臓発作、脳卒中、間欠性跛行を引起すアテローム性動脈硬化の予防および治療に用いられる。アテローム性動脈硬化症のリスク因子には、コレステロールの異常高値、心臓発作の家族歴（特に若年における）、加齢、糖尿病などがある。ほとんどの人はコレステロール高値を理由にスタチンが投与される。コレステロール低下は重要であるが、心臓疾患は複雑であり、炎症など他の因子が関与している可能性がある。また一方、スタチンは肝障害、発癌可能性、筋肉の副作用、筋疾患などの有害作用を示す。
【００５７】
本発明のスタチン誘導体はスタチン関連の副作用を軽減し、および／または薬理活性を改善する可能性がある。驚くべきことに、シンバスタチン誘導体であるコハク酸  ２−｛２−［８−（２，２−ジメチル−ブチリルオキシ）−２，６−ジメチル−１，２，６，７，８，８ａ−ヘキサヒドロ−ナフタレン−１−イル］−エチル｝−６−オキソーテトラヒドロ−ピラン−４−イルエステル  ４−チオカルバモイル−フェニルエステルは、対応するスタチン単独に比べ、３、１０、３０μＭの濃度で血小板凝集を有意に低下させた。さらに、本発明のシンバスタチン誘導体は、同じ濃度でのシンバスタチン単独に比べて血小板ｃＡＭＰを有意に上昇させた。
【００５８】
本発明のアドレナリン遮断薬（α遮断薬、β遮断薬のいずれにしろ）誘導体は、高血圧、狭心症、僧帽弁逸脱、うっ血性心不全、心筋梗塞、緑内障、片頭痛、頻脈、振戦の予防若しくは治療に利用可能であり、副作用も少ない。
【００５９】
本発明の抗血栓剤誘導体（アスピリン誘導体など）は抗血小板活性を強化し、胃の忍容性を改善する。抗血栓剤の主な適応は、静脈血栓塞栓症（ｖｅｎｏｕｓ  ｔｈｒｏｍｂｏｅｍｂｏｌｉｓｍ：ＶＴＥ）の予防と治療、心房細動患者における脳卒中の予防、急性冠症候群（ａｃｕｔｅ  ｃｏｒｏｎａｒｙ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ：ＡＣＳ）の予防と治療である。
【００６０】
気管支拡張薬誘導体およびコリン作動系に作用する薬剤の誘導体は、気道周囲を締め付ける筋肉バンドを緩めることによって喘息症状を緩和する上で有用である。短時間作用型において、気管支拡張薬誘導体は喘息症状を緩和または抑制し、喘息発作において極めて有益である。長時間作用型において、気管支拡張薬誘導体は喘息症状の抑制を助け、喘息発作を予防する。本誘導体は頻脈、高血圧など心臓血管系に作用する副作用を軽減する。
【００６１】
本発明の去痰薬誘導体および粘液溶解薬誘導体は、気道から粘液および痰を遊離させ洗浄する上で有用である。去痰薬および粘液溶解薬の胃腸忍容性は、本発明で開示されたように４−ヒドロキシチオベンズアミドで誘導体化することによって改善する可能性がある。
【００６２】
本発明のビスホスホネート誘導体は、骨粗鬆症、ベヒテレフ病、骨転移、尿路結石、異所性骨化症、、関節リウマチ、変形性関節症、変性関節症などカルシウム代謝障害若しくは疾患の治療若しくは予防に有用である。消化管関連の毒性は本発明の誘導体において軽減する可能性がある。
【００６３】
本発明のホスホジエステラーゼ（ｐｈｏｓｐｈｏｄｉｅｓｔｅｒａｓｅ：ＰＤＥ）阻害薬（気管支拡張薬）誘導体の治療効果は向上しており、副作用は軽減する。ＰＤＥ阻害薬は、特に気道疾患において抗炎症薬として可能性があることが判明している。同薬はサイトカインなどの炎症シグナルの放出を抑制し、活性酸素種の産生を阻害する。ＰＤＥ阻害薬は喘息、ＣＯＰＤ、鼻炎などの炎症性気道疾患において非ステロイド系疾病抑制薬として高い治療的および商業的効能を示す。
【００６４】
抗ロイコトリエン薬、ＡＣＥ阻害薬、抗糖尿病薬、抗生剤、抗ウイルス薬、抗腫瘍薬の誘導体についても、より高い効果および／または低い副作用が認められる可能性がある。
【００６５】
本発明の化合物は以下のように作成可能である。
【００６６】
スキーム１
ＮＳＡＩＤ誘導体［２−（２，６−ジクロロ−フェニルアミノ）−フェニル］−酢酸  ４−チオカルバモイル−フェニルエステルの合成を例に用いてスキーム１を以下に示す。このスキームでは、ＮＳＡＩＤに共有結合した硫化水素放出部分にローソン試薬を用いて硫黄基を加える。
【００６７】
【化３】
0005529534.tif 000004
【００６８】
遊離型のカルボキシル基を有するジクロフェナク（１）を最初にジメチルホルムアミドに溶解させて、次にヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）および１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）を加える。本発明の化合物の前駆物質（４−カルバモイルフェニル  ２−（２−（２，６−ジクロロフェニルアミノ）フェニル）アセテート（２）など）の形成に適した条件下、この混合液に４−ヒドロキシベンズアミドを加える。前駆物質では硫黄が不足している。硫黄基を加えることが可能なローソン試薬などの適切な化合物を加え、本発明の化合物（［２−（２，６−ジクロロフェニルアミノ）−フェニル］−酢酸  ４−チオカルバモイル−フェニルエステル（３）など）を形成する。
【００６９】
治療対象の具体的な病態若しくは病状に応じて、患者には本発明の化合物を、当業者に容易に判断される、治療的有効且つ安全な任意の用量において投与することが可能である。これらの化合物は一日あたり約１〜２０００ｍｇの範囲内で単回投与若しくは分割投与するのが最も望ましいが、治療対象の体重、病態、および投与経路によって必然的に異なってくる。用量が本発明の化合物の形成に用いられる特定の薬剤に影響されるのは当然のことである。しかしながら、約０．１〜１００ｍｇ／ｋｇ、できれば約５〜９０ｍｇ／ｋｇの用量水準が望ましく、約５〜５０ｍｇ／ｋｇであればさらに望ましい。それでもなお治療対象患者の体重、病態、および前記薬剤への個々の反応次第で望ましい用量は異なってくることが考えられ、さらに選択された剤形の種類、そのような投与を行う期間や間隔にも影響される。ある場合には前記範囲の下限以下の用量レベルで十分以上のこともあり、また別の場合にはさらに多量な用量でも何ら有害な副作用を生じることなく使用可能である。ただし、そのような多量な用量の場合は、最初に少量ずつに分けて投与する。
【００７０】
本発明の化合物はいかなる製剤処方でも投与可能であり、この製剤処方は投与経路によって決定される。これらの薬剤組成物は、相性の良い薬学的に許容される賦形剤を用いて従来の方法で調製可能である。そのような組成物の例としては、即時溶液、注射可能調製物、直腸内、点鼻、眼内、膣内用としてカプセル、錠剤、経皮パッチ、トローチ、スプレー、シロップ、粉末、顆粒、ゲル、エリキシル、座剤などがあげられる。好ましい投与経路は経口および経直腸である。
【００７１】
経口投与用として、微結晶セルロース、クエン酸ナトリウム、炭酸カルシウム、第二リン酸カルシウム、グリシンなど各種賦形剤に加え、でんぷん（好ましくはコーン、ジャガイモ、またはタピオカ粉）、アルギン酸、特定の複合ケイ酸塩などの各種崩壊剤および、ポリビニルピロリドン、蔗糖、ゼラチン、アカシアなどの造粒結合剤を含有する錠剤を使用することも可能である。さらに錠剤化のためにステアリン酸マグネシウム、ラウリル硫酸ナトリウム、タルクなどの平滑剤を使用することも可能である。ゼラチンカプセルにも同様の種類の固形組成物を充填剤として使用することが可能であり、この場合の材料には高分子量のポリエチレングリコールに加えラクトースまたは乳糖も使用することが望ましい。経口投与用として水性懸濁液および／またはエリキシル剤が望ましい場合、活性成分に甘味剤または香味剤、着色物質、および必要に応じ乳化剤および／または懸濁化剤に加え水、エタノール、プロピレングリコール、グリセリン、およびそれらの各種組合せを組み合わせることも可能である。
【００７２】
即時放出、制御放出、持続放出、遅延放出、または標的遅延放出用として剤形を設計することが可能である。これらの用語の定義は当業者に周知である。また、前記剤形の放出特性は、重合体の混合組成、被覆基質組成、多粒子組成、被覆多粒子組成、イオン交換樹脂ベースの組成、浸透圧ベースの組成、または生分解性重合体組成によって影響を受ける可能性がある。理論に束縛されるものではないが、放出は拡散（ｆａｖｏｒａｂｌｅ  ｄｉｆｆｕｓｉｏｎ）、分解、浸食、イオン交換、浸透、またはそれらの組合せを通して影響を受ける可能性がある。
【００７３】
非経口的投与用として、ごま油またはピーナッツ油のいずれか、または含水プロピレングリコールに入った活性化合物の溶液を使用することが可能である。水溶液は必要に応じ適切に中和する必要があり（８より高いｐＨが望ましい）、液体希釈剤を最初に等張にする必要がある。前記水溶液は静脈内注射に適している。無菌状態下におけるこれらの溶液の調製は、いずれも当業者に周知の標準的製薬技術により容易に達成される。
【００７４】
以下の実施例では、当業者が本発明を作成、使用出来るようにさらに詳しく説明する。しかし当然のことながら、これらの実施形態は本発明を図示するためのものであり、請求項によって定義される本発明の範囲を限定するものとして解釈されるべきものではない。
【図面の簡単な説明】
【００７５】
【図１】図１は、５−アミノ−２−（４−チオカルバモイル−フェノキシカルボニルオキシ）−安息香酸（化合物ＸＸＶＩＩ）、メサラミン単独、４−ヒドロキシチオベンズアミド（４−ＨＴＢ）単独、メサラミンと４−ＨＴＢの混合物による治療後、ＴＮＢＳ誘発性大腸炎を有するマウスの疾患活動性スコアを示したものである。
【図２】図２は、５−アミノ−２−（４−チオカルバモイル−フェノキシカルボニルオキシ）−安息香酸（化合物ＸＸＶＩＩ）、メサラミン単独、４−ＨＴＢ単独、メサラミンと４−ヒドロキシチオベンズアミド（４−ＨＴＢ）の混合液を投与後にＴＮＢＳ誘発性大腸炎を有するマウスのミエロペロキシダーゼ（ｍｙｅｌｏｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ：ＭＰＯ）活性を示したものである。
【図３】図３は、グリベンクラミドを加えた場合と加えない場合におけるメサラミンおよび５−アミノ−２−（４−チオカルバモイル−フェノキシカルボニルオキシ）−安息香酸（化合物ＸＸＶＩＩ）の疼痛知覚スコア（ｐａｉｎ  ｐｅｒｃｅｐｔｉｏｎ  ｓｃｏｒｅ）を示したものである。
【図４】図４は５−アミノ−２−（４−チオカルバモイル−フェノキシカルボニルオキシ）−安息香酸（化合物ＸＸＶＩＩ）、メサラミン、及び４−ヒドロキシチオベンズアミド（４−ＨＢＴ）の疼痛知覚スコアを示したものである。
【図５】図５は、アスピリンまたはアスピリン＋グリベンクラミドの存在下における５アミノー２−（４−チオカルバモイル−フェノキシカルボニルオキシ）−安息香酸（化合物ＸＸＶＩＩ）による６０〜６５分の時点での白血球粘着を示す棒グラフである。
【図６】図６は、システイン、５−アミノー２−（４−チオカルバモイルーフェノキシカルボニルオキシ）−安息香酸（化合物ＸＸＶＩＩ）、４−ヒドロキシチオベンズアミド（４−ＨＢＴ）によるＨ２Ｓ生成を示す棒グラフである。
【図７ａ】図７ａは、賦形剤、マレイン酸トリメブチン、安息香酸チオカルバモイル・トリメブチン（化合物ＩＩＩ）を用いた内臓痛知覚のラットモデルにおける知覚スコア（ＡＷＲスコア）を示したものである。
【図７ｂ】図７ｂは、賦形剤およびチオカルバモイル安息香酸単独を用いた内臓痛知覚のラットモデルにおける知覚スコア（ＡＷＲスコア）を示したものである。
【図８】図８は、賦形剤、ジクロフェナク、４−ヒドロキシチオベンズアミド（ＴＢＺ）、［２−（２，６−ジクロロ−フェニルアミノ）−フェニル］−酢酸  ４−チオカルバモイルーフェニルエステル（化合物ＸＶＩＩ）を投与したラットで測定した胃損傷スコアを示したものである。
【図９】図９は、賦形剤、ジクロフェナク、４−ヒドロキシチオベンズアミド（ＴＢＺ）、［２−（２，６−ジクロロ−フェニルアミノ）−フェニル］−酢酸  ４−チオカルバモイル−フェニルエステル（化合物ＸＶＩＩ）を投与したラットで生成された胃プロスタグランジンＥ２（ＰＧＥ２）量を示したものである。
【図１０】図１０は、賦形剤、ナプロキセン、２−（６−メトキシ−ナフタレンー２−イル）−プロピオン酸  ４−チオカルバミル−フェニルエステル（化合物ＸＸ）を投与したラットで測定した胃損傷スコアを示す。
【図１１】図１１は、図１０のラットの血液におけるトロンボキサンＢ２合成量を示したものである。
【図１２】図１２は、賦形剤、ジクロフェナク、［２−（２，６−ジクロロ−フェニルアミノ）−フェニル］−酢酸  ４−チオカルバモイルーフェニルエステル（化合物ＸＶＩＩ）を投与しラット空気嚢アッセイを用いて測定したラットの皮下嚢における浸出ＰＧＥ２量を示したものである。
【図１３】図１３は、図１２のラットにおける全血トロンボキサンＢ２（ＴＸＢ２）量を示す。
【図１４】図１４は、賦形剤、ジクロフェナク、［２−（２，６−ジクロロ−フェニルアミノ）−フェニル］−酢酸  ４−チオカルバモイルーフェニルエステル（化合物ＸＶＩＩ）を投与したラットにおける足容積増加阻止を示したものである。
【図１５】図１５は、賦形剤、ナプロキセン、２−（６−メトキシーナフタレンー２−イル）−プロピオン酸  ４−チオカルバミル−フェニルエステル（化合物ＸＸ）を投与しラット空気嚢アッセイを用いて測定したラット皮下嚢における浸出ＰＧＥ２量を示したものである。
【図１６】図１６は、インドメタシンおよび［１−（４−クロロ−ベンゾイル）−５−メトキシー２−メチル−１−Ｈ−インドール−３−イル］−酢酸  ４−チオカルバモイルーフェニルエステル（化合物ＸＩＸ）の濃度関数としてのヒト血液によるトロンボキサン合成（ｎｇ／ｍＬ）（生体外）を示したものである。
【図１７】図１７は、賦形剤、ジクロフェナク、［２−（２，６−ジクロロ−フェニルアミノ）−フェニル］−酢酸  ４−チオカルバモイルーフェニルエステル（化合物ＸＶＩＩ）、ナプロキセン、４−ヒドロキシチオベンズアミド（ＴＢＺ）、２−（６−メトキシーナフタレンー２−イル）−プロピオン酸  ４−チオカルバミル−フェニルエステル（化合物ＸＸ）を毎日一週間投与後のラットにおける胃潰瘍の表面積（ｍｍ２）を示したものである。
【図１８】図１８は、賦形剤、ナプロキセン、２−（６−メトキシ−ナフタレン−２−イル）−プロピオン酸  ４−チオカルバミル−フェニルエステル（化合物ＸＸ）を投与したラットにおける収縮期血圧の上昇（ｍｍＨｇ）を示したものである。
【図１９】図１９は、緩衝液中および肝臓ホモジネート中での培養により４−ヒドロキシチオベンズアミド（ＴＢＺ）および［２−（２，６−ジクロロ−フェニルアミノ）−フェニル］―酢酸  ４−チオカルバモイルーフェニルエステル（化合物ＸＶＩＩ）から生成された硫化水素の量を示したものである。
【図２０】図２０は、シンバスタチンおよびコハク酸  ２−｛２−［８−（２，２−ジメチルーブチリルオキシ）−２，６−ジメチルー１，２，６，７，８，８ａ−ヘキサヒドローナフタレン−１−イル］−エチル｝−６−オキソ−テトラヒドロ−ピラン−４−イル  エステル  ４−チオカルバモイル−フェニルエステル（化合物Ｉ）がヒト血小板のＡＤＰ誘発性凝集に及ぼす作用を示したものである。
【図２１】図２１は、シンバスタチンおよびコハク酸  ２−｛２−［８−（２，２−ジメチルーブチリルオキシ）−２，６−ジメチル−１，２，６，７，８，８ａ−ヘキサヒドローナフタレンー１−イル］−エチル｝−６−オキソ−テトラヒドロ−ピラン−４−イル  エステル  ４−チオカルバモイル−フェニルエステル（化合物Ｉ）がヒト血小板ｃＡＭＰ濃度に及ぼす作用を示したものである。
【発明を実施するための形態】
【００７６】
化合物の作成
蛍光指示薬を加えたＭａｃｈｅｒｅｙ−Ｎａｇｅｌシリカゲル５０プレート上で薄層クロマトグラフィを行い、プレートを紫外線（２５４ｎｍ）で視覚化した。カラムクロマトグラフィにはＫｉｅｓｅｌｇｅｌ  ６０を用いた。合成試薬はいずれもＡｌｄｒｉｃｈ−Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙから購入し、精製せずに用いた。溶剤の純度は分析用試薬以上であり、供給されたままの状態で使用した。真空内での溶剤除去にはＢｕｃｈｉ  Ｒ−１１４  Ｒｏｔａｖａｐｏｒを用いた。構造をプロトン１Ｈ−ＮＭＲおよび１３Ｃ−ＮＭＲにより分光学的に検証した。スペクトルはＶａｒｉａｎ  Ｍｅｒｃｕｒｙ  Ｐｌｕｓ  ４００装置に記録した。化学シフトは内部基準としてＭｅ４Ｓｉを参照した。Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍ  ＡＰＩ  ２０００  質量分析により前記合成産物の質量スペクトルを計測した。Ｂｕｃｈｉ  Ｂ−５４０で融点を測定した。最終化合物の純度をＲＰ−ＨＰＬＣで測定した。カラムをＲｈｅｏｄｙｎｅモデル７７２５インジェクタ、Ｗａｔｅｒｓ  ６００  ＨＰＬＣ  システム、Ｗａｔｅｒｓ  ４８６調節可能吸光度検出器（２１５若しくは２３５ｎｍに設定）、Ｗａｔｅｒ  ７４６チャート式記録計に接続した。合成された化合物の元素分析の結果は満足すべきものであった。分析は元素記号のみによって示され、結果は理論値±０．４％以内である。
【実施例１】
【００７７】
［２−（２，６−ジクロロ−フェニルアミノ）−フェニル］―酢酸  ４−チオカルバモイルーフェニル  エステル（別名化合物ＸＶＩＩ）の合成
【００７８】
【化４】
0005529534.tif 000005
【００７９】
４−カルバモイルフェニル  ２−［２−（２，６−ジクロロフェニルアミノ）−フェニル］酢酸（５）の合成
Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド５０ｍＬ中に１（ジクロフェナク、８９０ｍｇ、３．０ｍｍｏｌ）を加えた溶液中に、ヒドロキシベンゾトリアゾール（４４５ｍｇ、３．３ｍｍｏｌ）およびＤＣＣ（６８０ｍｇ、３．３ｍｍｏｌ）を加え、０℃で１時間撹拌した。前記反応混合液に４−ヒドロキシベンズアミド（４、６１６ｍｇ、４．５ｍｍｏｌ）を加え、０℃で１時間、室温で３時間撹拌した。濾過後、濾液を減圧下に蒸発させ、得られた油性残留物をクロロホルムに溶解した。有機層を塩水で洗浄し、無水ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、溶剤を蒸発させた。粗生成物５をシリカゲル・オープンカラムに加え、ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（９／１）で溶出し、そこから４−カルバモイルフェニル  ２−（２−（２，６−ジクロロフェニルアミノ）フェニル）アセテート（５）を得た（２１２ｍｇ、収率１７％）。
【００８０】
［２−（２，６−ジクロロ−フェニルアミノ）−フェニル］―酢酸  ４−チオカルバモイルーフェニルエステル（６）の合成
４−カルバモイルフェニル  ２−（２−（２，６−ジクロロフェニルアミノ）フェニル）アセテート（５，４８０ｍｇ、１１．４ｍｍｏｌ）およびローソン試薬（４６０ｍｇ、１．１４ｍｍｏｌ）を無水ベンゼン２０ｍＬに溶解した。反応液を５０℃まで温め、６時間にわたって撹拌した。減圧下に前記溶剤を除去し、粗残留物をシリカゲル・カラム（ジクロロメタン／メチルアルコール  ９．５／０．５）で精製し、当該純粋化合物６（４４６ｍｇ、収率９１％）を得た。
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ４．０７（ｓ、２Ｈ）、６．５９（ｄ、１Ｈ）、６．６７（ｓ、１Ｈ）、６．９８（ｔ、１Ｈ）、７．１４（ｔ、１Ｈ）、７．１９（ｄ、１Ｈ）、７．２８（ｔ、１Ｈ）、７．３３（ｄ、２Ｈ）、７．６３（ｓ、１Ｈ）、７．９７（ｄ、２Ｈ）；
１３Ｃ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ３８．８、１１８．８、１２１．８、１２２．６、１２３．７、１２４．４、１２８．７、１２９．１、１３１．２、１３７．２、１３７．８、１４２．９、１５３．５、１７０．５、１９３．２、２０１．７
ＭＳ（Ｅｌ）、ｍ／ｅ  ４３１（Ｍ＋）；
ｍ．ｐ．：１７０〜１７２℃。
【実施例２】
【００８１】
４−チオカルバモイルフェニル  ２−（２−（２−クロロ−６−フルオロフェニルアミノ）−５−メチルフェニル）アセテート（別名化合物ＸＶＩＩＩ）の合成
【００８２】
【化５】
0005529534.tif 000006
【００８３】
４−カルバモイルフェニル−２−（２−（２−クロロ−６−フルオロフェニルアミノ）−５−メチルフェニル）アセテート（５）の合成
ジメチルホルムアミド１５ｍＬに１（ルミラコキシブ、２２３ｍｇ、０．７５ｍｍｏｌ）を加えた溶液中に、ヒドロキシベンゾトリアゾール（１１１ｍｇ、０．８２５ｍｍｏｌ）およびＤＣＣ（１７０ｍｇ、０．８２５ｍｍｏｌ）を加え、０℃で１時間撹拌した。前記反応混合液に４−ヒドロキシベンズアミド（４、１５４ｍｇ、１．１２５ｍｍｏｌ）を加え、０℃で１時間、室温で３時間撹拌した。濾過後、濾液を減圧下に蒸発させ溶剤を除去した。こうして得られた油性残留物をクロロホルムに溶解し、有機層を塩水で洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、溶剤を蒸発させた。得られた粗生成物５をシリカゲル・オープンカラムに加え、ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（９／１）で溶出し、そこから４−カルバモイルフェニル−２−（２−（２−クロロー６−フルオロフェニルアミノ）−５−メチルフェニル）アセテート（５）を得た（１１１ｍｇ、収率３５％）。
【００８４】
４−チオカルバモイルフェニル−２−（２−（２−クロロー６−フルオロフェニルアミノ）−５−メチルフェニル）アセテート（６）の合成
４−カルバモイルフェニル−２−（２−（２−クロロ−６−フルオロフェニルアミノ）−５−メチルフェニル）アセテート、５（１１０ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ）、およびローソン試薬（１０９ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ）を無水ベンゼン１５ｍＬに溶解した。反応液を６０℃まで温め、３時間にわたって撹拌した。減圧下に前記溶剤を除去し、得られた粗残留物をシリカゲル・カラム（ジクロロメタン／メチルアルコール  ９．５／０．５）で精製し、純粋化合物６を得た（５９ｍｇ、収率５１％）。
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ２．３２（ｓ、３Ｈ）、４．０１（ｓ、２Ｈ）、６．４６（ｓ、１Ｈ）、６．７０（ｄ、１Ｈ）、６．９２（ｔ、１Ｈ）、７．０１（ｄ、２Ｈ）、７．１１（ｄ、２Ｈ）、７．１９（ｄ、１Ｈ）、７．６２（ｓ、ＮＨ）、７．８４（ｄ、２Ｈ）；
１３Ｃ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ２０．８、３０．７、１１５．１、１１９．２，１２２．０、１２２．３、１２４．１、１２４．９、１２６．１、１２８．２、１２９．２，１３２．３、１３４．８、１３８．６、１４０．９、１５３．７、１５４．６、１５６．２、１７０．４、２０１．７
ＭＳ（Ｅｌ）、ｍ／ｅ  ４２９（Ｍ＋）；
ｍ．ｐ．：１２０〜１２２℃。
【実施例３】
【００８５】
２−アセトキシー安息香酸  ４−チオカルバモイルーフェニルエステル（別名化合物ＸＶＩ）の合成
【００８６】
【化６】
0005529534.tif 000007
【００８７】
４−カルバモイルフェニル  ２−アセトキシ安息香酸（５）の合成
ジメチルホルムアミド１５ｍＬに１（アセチルサリチル酸、５００ｍｇ、２．７７ｍｍｏｌ）を加えた溶液中に、ヒドロキシベンゾトリアゾール（４１２ｍｇ、３．０５ｍｍｏｌ）およびＤＣＣ（６２８ｍｇ、３．０５ｍｍｏｌ）を加え、０℃で１時間撹拌した。前記反応混合液に４−ヒドロキシベンズアミド（４、４１８ｍｇ、３．０５ｍｍｏｌ）を加え、０℃で１時間、室温で３時間撹拌した。濾過後、濾液を減圧下に蒸発させ溶剤を除去した。こうして得られた油性残留物をクロロホルムに溶解し、有機層を塩水で洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、溶剤を蒸発させた。粗生成物５をシリカゲル・オープンカラムに加え、ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（９／１）で溶出し、そこから４−カルバモイルフェニル  ２−アセトキシ安息香酸（５）を得た（４１０ｍｇ、収率４７％）。
【００８８】
４−チオカルバモイルフェニル−２−（２−（２−クロロー６−フルオロフェニルアミノ）−５−メチルフェニル）アセテート（６）の合成
４−カルバモイルフェニル  ２−アセトキシ安息香酸、５（４１０ｍｇ、１．３７ｍｍｏｌ）およびローソン試薬（５５４ｍｇ、１．３７ｍｍｏｌ）を無水ベンゼン３５ｍＬに溶解した。反応液を６０℃まで温め、３時間にわたって撹拌した。減圧下に溶剤を除去し、得られた粗残留物をシリカゲル・カラム（ジクロロメタン／メチルアルコール  ９．５／０．５）で精製し、純粋化合物６  ４７０ｍｇを得た。得られた化合物を２溶剤システムによる分取ＲＰ−ＨＰＬＣで精製した：Ａ：０．１％ＴＦＡ中に１００％アセトニトリル、Ｂ：０．１％ＴＦＡ（３５分間に１０％Ａから６０％Ａの直線勾配、２５４ｎｍでＵＶ検出、流速３０ｍＬ／分）に１００％Ｈ２Ｏを加えることにより前記純粋化合物６（３２４ｍｇ、収率７１％）が得られる。
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ２．３０（ｓ、３Ｈ）、７．１７（ｄ、１Ｈ）、７．２１（ｄ、２Ｈ）、７．４０（ｔ、１Ｈ）、７．６６（ｔ、１Ｈ）、７．９４（ｄ、２Ｈ）、８．２（ｄ、１Ｈ）。
１３Ｃ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ２１．２、１２１．９、１２２．４、１２４．３、１２６．４、１２８．７、１３２．４、１３５．１、１３７．３、１５１．５、１５３．７、１６２．７、１６９．８、２０１．８
ＭＳ（Ｅｌ）、ｍ／ｅ  ３１６（Ｍ＋）；
ｍ．ｐ．：１５４〜１５６℃。
【実施例４】
【００８９】
［１−（４−クロローベンゾイル）−５−メトキシー２−メチル−１−Ｈ−インドール−３−イル］−酢酸４−チオカルバモイル−フェニルエステル（別名化合物ＸＩＸ）の合成
【００９０】
【化７】
0005529534.tif 000008
【００９１】
４−カルバモイルフェニル−２−［１−（４−クロロベンゾイル）−５−メトキシー２−メチルーインドールー３−イル］−酢酸（５）の合成
ジメチルホルムアミド６０ｍＬに１（インドメタシン、３ｇ、８．３８ｍｍｏｌ）を加えた溶液中に、ヒドロキシベンゾトリアゾール（１．２５ｇ、９．２２ｍｍｏｌ）およびＤＣＣ（１．９ｇ、９．２２ｍｍｏｌ）を加え、０℃で１時間撹拌した。前記反応混合液に４−ヒドロキシベンズアミド（４、１．７２ｇ、１２．６ｍｍｏｌ）を加え、０℃で１時間、室温で２時間撹拌した。濾過後、濾液を減圧下に蒸発させ溶剤を除去した。こうして得られた油性残留物を酢酸エチルに溶解し、有機層を塩水、５％ＮａＨＣＯ３、１０％クエン酸で洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、溶剤を蒸発させた。得られた粗生成物５をシリカゲル・オープンカラムに加え、ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（９．５／０．５）で溶出し、そこから４−カルバモイルフェニル−２−［１−（４−クロロベンゾイル）−５−メトキシー２−メチル−インドール−３−イル］―酢酸（５）を得た（４７９ｍｇ、収率１２％）。
【００９２】
４−チオカルバモイルフェニルー２−［１−（４−クロロベンゾイル）−５−メトキシー２−メチル−インドール−３−イル］−酢酸（６）の合成
４−カルバモイルフェニル−２−［１−（４−クロロベンゾイル）−５−メトキシー２−メチルーインドール−３−イル］−アセテート、５（３４０ｍｇ、０．７１ｍｍｏｌ）、ローソン試薬（２８７ｍｇ、０．７１ｍｍｏｌ）を無水ベンゼン１５ｍＬに溶解した。反応物を６０℃まで温め、４時間にわたって撹拌した。減圧下に溶剤を除去し、得られた粗残留物をシリカゲル・カラム（ジクロロメタン／メチルアルコール  ９．５／０．５）で精製し、粗化合物６  １７８ｍｇを得た。得られた化合物を２溶剤システムによる分取ＲＰ−ＨＰＬＣで精製した：Ａ：０．１％ＴＦＡ中に１００％アセトニトリル、Ｂ：０．１％ＴＦＡ（３０分間に１０％Ａから８０％Ａの直線勾配、２５４ｎｍでＵＶ検出、流速３０ｍＬ／分）中に１００％Ｈ２Ｏを加えることにより純粋化合物６（５６ｍｇ、収率１６％）が得られる。
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ２．４５（ｓ、３Ｈ）、３．８３（ｓ、３Ｈ、ＯＣＨ３）、３．９１（ｓ、２Ｈ）、６．７０（ｄ、１Ｈ）、６．８８（ｄ、１Ｈ）、７．０４（ｓ、１Ｈ）、７．１１（ｄ、２Ｈ）、７．４７（ｄ、２Ｈ）、７．６７（ｄ、２Ｈ）、７．８８（ｄ、２Ｈ）。
１３Ｃ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ１３．６、３０．８、５６．０、１０１．５、１１１．９、１１２．０、１１５．３、１２１．７、１２８．６、１２９．４、１３０．８、１３１．２、１３１．４、１３４．０、１３６．８、１３７．１、１３９．７、１５６．２、１５７．９、１６７．６、１６９．８、２０１．８
ＭＳ（Ｅｌ）、ｍ／ｅ  ４９３（Ｍ＋）；
ｍ．ｐ．：２２４〜２２６℃。
【実施例５】
【００９３】
２−（６−メトキシーナフタレンー２−イル）−プロピオン酸  ４−チオカルバモイル−フェニルエステル（別名化合物ＸＸ）の合成
【００９４】
【化８】
0005529534.tif 000009
【００９５】
４−カルバモイルフェニル  ２−（２−メトキシナフタレン−６−イル）プロパン酸（５）の合成
ジメチルホルムアミド８０ｍＬに１（ナプロキセン、４ｇ、１７．４ｍｍｏｌ）を加えた溶液中に、ヒドロキシベンゾトリアゾール（２．５９ｇ、１９．１４ｍｍｏｌ）およびＤＣＣ（２．５９ｇ、１９．１４ｍｍｏｌ）を加え、０℃で１時間撹拌した。前記反応混合液に４−ヒドロキシベンズアミド（４、３．５８ｇ、２６．１ｍｍｏｌ）を加え、０℃で１時間、室温で２時間撹拌した。濾過後、濾液を減圧下に蒸発させ溶剤を除去した。こうして得られた油性残留物を酢酸エチルに溶解し、有機層を塩水、５％ＮａＨＣＯ３、１０％クエン酸で洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、溶剤を蒸発させた。粗生成物５をシリカゲル・オープンカラムに加え、ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（９．５／０．５）で溶出し、そこから４−カルバモイルフェニル  ２−（２−メトキシナフタレンー６−イル）−プロパン酸（５）を得た（１．９１ｇ、収率３２％）。
【００９６】
４−チオカルバモイルフェニル  ２−（２−メトキシナフタレンー６−イル）プロパン酸（６）の合成
４−カルバモイルフェニル  ２−（２−メトキシナフタレンー６−イル）−プロパン酸、５（１．８０ｇ、４．３４ｍｍｏｌ）およびローソン試薬（１．７５ｇ、４．３４ｍｍｏｌ）を無水ベンゼン１３０ｍＬに溶解した。反応物を６０℃まで温め、４時間にわたって撹拌した。減圧下に溶剤を除去し、得られた粗残留物をシリカゲル・カラム（ジクロロメタン／メチルアルコール  ９．７５：０．２５）で精製し、純粋化合物６  ２．９ｇを得た。得られた化合物をシリカゲル・オープンカラムで精製し、ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（９．５／０．５）で溶出し、純粋化合物６を得た（９７０ｍｇ、収率６１％）。
１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ１．５９（ｄ、３Ｈ）、３．８６（ｓ、３Ｈ、ＯＣＨ３）、４．２４（ｄｄ、１Ｈ）、７．０６（ｄ、２Ｈ）、７．１８（ｄ、１Ｈ）、７．３１（ｓ、１Ｈ）、７．５０（ｄ、１Ｈ）、７．８４（ｓ、１Ｈ）、７．８５（ｄ、１Ｈ）、７．８６（ｓ、１Ｈ）、７．８９（ｄ、２Ｈ）、９．４７および９．８４（ｓ、２Ｈ、ＮＨ２）。
１３Ｃ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ１９．１、４５．２、５５．９、１０６．５、１１９．６、１２１．６、１２６．６、１２６．９、１２８．０、１２９．４、１２９．９、１３４．２、１３５．６、１３７．８、１５３．４、１５８．１、１７３．３、１９９．７。
ＭＳ（Ｅｌ）、ｍ／ｅ  ３６６（Ｍ＋）；
ｍ．ｐ．：１９６〜１９８℃。
【実施例６】
【００９７】
４−チオカルバモイルフェニル  ２−（４−イソブチルフェニル）プロパン酸の合成
【００９８】
【化９】
0005529534.tif 000010
【００９９】
ジメチルホルムアミド８０ｍＬに１（イブプロフェン、３．８７ｇ、１８．８ｍｍｏｌ）を加えた溶液中に、ヒドロキシベンゾトリアゾール（２．８ｇ、２０．７ｍｍｏｌ）およびＤＣＣ（４．２７ｇ、２０．７ｍｍｏｌ）を加え、０℃で１時間撹拌した。前記反応混合液に４−ヒドロキシベンズアミド（２、３．９ｇ、２８ｍｍｏｌ）を加え、０℃で１時間、室温で２時間撹拌した。濾過後、濾液を減圧下に蒸発させ溶剤を除去した。こうして得られた油性残留物を酢酸エチルに溶解し、有機層を塩水、５％ＮａＨＣＯ３、１０％クエン酸で洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、溶剤を蒸発させた。粗生成物３をシリカゲル・オープンカラムに加え、ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（９．５／０．５）で溶出し、そこから４−カルバモイルフェニル  ２−（４−イソブチルフェニル）プロパン酸（３）を得た（２．４８ｇ、収率４０％）。
【０１００】
４−チオカルバモイルフェニル  ２−（４−イソブチルフェニル）プロパン酸（４）の合成
４−カルバモイルフェニル  ２−（４−イソブチルフェニル）プロパン酸、３（２．４８ｇ、７．６２ｍｍｏｌ）およびローソン試薬（３．１ｇ、７．６２ｍｍｏｌ）を無水ベンゼン１３０ｍＬに溶解した。反応液を６０℃まで温め、４時間にわたって撹拌した。減圧下に溶剤を除去した。得られた化合物をシリカゲル・オープンカラムで精製し、ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（９．５／０．５）で溶出し、純粋化合物４を得た（１．４５ｇ、収率５５％）。
１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ０．８４（ｄ、６Ｈ）、１．４８（ｄ、３Ｈ）、１．７９〜１．８２（ｍ、１Ｈ）、２．４２（ｄ、２Ｈ）、４．０５（ｄｄ、１Ｈ）、７．０５（ｄ、２Ｈ）、７．１５（ｄ、２Ｈ）、７．２８（ｄ、２Ｈ）、７．８８（ｄ、２Ｈ）、９．４９および９．８７（ｓ、２Ｈ、ＮＨ２）。
１３Ｃ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ１９．２、２２．９、３０．３、４４．９、１２１．６、１２７．９、１２９．５、１３０．０、１３７．８、１３８．０、１４０．８、１５３．３、１７３．３、１９９．６。
ＭＳ（Ｅｌ）、ｍ／ｅ  ３４１（Ｍ＋）；
ｍ．ｐ．：１２１〜１２３℃。
【実施例７】
【０１０１】
４−チオカルバモイルフェニル  ２−（４−オキソフェニル）―プロパン酸フェニルの合成
【０１０２】
【化１０】
0005529534.tif 000011
【０１０３】
４−カルバモイルフェニル  ２−（４−オキソフェニル）−プロパン酸フェニル（３）の合成
ジメチルホルムアミド８０ｍＬに１（ケトプロフェン、３ｇ、１１．８ｍｍｏｌ）を加えた溶液中に、ヒドロキシベンゾトリアゾール（１．７６ｇ、１９．１３ｍｍｏｌ）およびＤＣＣ（２．６８ｇ、１１３ｍｍｏｌ）を加え、０℃で１時間撹拌した。前記反応混合液に４−ヒドロキシベンズアミド（２、２．４３ｇ、１７．７ｍｍｏｌ）を加え、０℃で１時間、室温で２時間撹拌した。濾過後、濾液を減圧下に蒸発させ溶剤を除去した。こうして得られた油性残留物を酢酸エチルに溶解し、有機層を塩水、５％ＮａＨＣＯ３、１０％クエン酸で洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、溶剤を蒸発させた。粗生成物３をシリカゲル・オープンカラムに加え、ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（９．５／０．５）で溶出し、そこから４−カルバモイルフェニル  ２−（４−オキソフェニル）−プロパン酸フェニル（３）を得た（１．８４ｇ、収率４２％）。
【０１０４】
４−チオカルバモイルフェニル  ２−（４−オキソフェニル）―プロパン酸フェニル（４）の合成
４−カルバモイルフェニル  ２−（４−オキソフェニル）−プロパン酸フェニル（３）（１．８４ｇ、４．９３ｍｍｏｌ）およびローソン試薬（２ｇ、４．９３ｍｍｏｌ）を無水ベンゼン１００ｍＬに溶解した。反応液を６０℃まで温め、４時間にわたって撹拌した。減圧下に溶剤を除去した。得られた化合物をシリカゲル・オープンカラムで精製し、ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（９．５／０．５）で溶出し、純粋化合物４を得た（０．４５ｇ、収率２３％）。
１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ１．５３（ｄ、３Ｈ）、４．２５（ｄｄ、１Ｈ）、７．０８（ｄ、２Ｈ）、７．５４〜７．７３（ｍ、９Ｈ）、７．９０（ｄ、２Ｈ）、９．５１および９．８８（ｓ、２Ｈ、ＮＨ２）。
１３Ｃ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ１９．２、４４．９、１２１．６、１２９．３、１２９．５、１２９．８、１３０．３、１３２．６、１３３．５、１３７．６、１３７．９、１３８．１、１４１．２、１５３．３、１５４．５、１５６．１、１６３．８、１７２．９、１９９．６。
ＭＳ（Ｅｌ）、ｍ／ｅ  ３９０（Ｍ＋）；
ｍ．ｐ．：１１４〜１１６℃。
【実施例８】
【０１０５】
４−チオカルバモイルフェニル  ２−（３−フルオロ，４−フェニル）プロパン酸フェニルの合成
【０１０６】
【化１１】
0005529534.tif 000012
【０１０７】
４−カルバモイルフェニル  ２−（３−フルオロ，４−フェニル）プロパン酸フェニル（３）の合成
ジメチルホルムアミド８０ｍＬに１（フルルビプロフェン、２ｇ、８．２ｍｍｏｌ）を加えた溶液中に、ヒドロキシベンゾトリアゾール（１．２２ｇ、９．０２ｍｍｏｌ）およびＤＣＣ（１．８６ｇ、９．０２ｍｍｏｌ）を加え、０℃で１時間撹拌した。前記反応混合液に４−ヒドロキシベンズアミド（２、１．７ｇ、１２．２ｍｍｏｌ）を加え、０℃で１時間、室温で２時間撹拌した。濾過後、濾液を減圧下に蒸発させ溶剤を除去した。こうして得られた油性残留物を酢酸エチルに溶解し、有機層を塩水、５％ＮａＨＣＯ３、１０％クエン酸で洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、溶剤を蒸発させた。粗生成物３をシリカゲル・オープンカラムに加え、ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（９．５／０．５）で溶出し、そこから４−カルバモイルフェニル  ２−（３−フルオロ、４−フェニル）プロパン酸フェニル（３）を得た（１．０９ｇ、収率３７％）。
【０１０８】
４−チオカルバモイルフェニル  ２−（３−フルオロ，４−フェニル）プロパン酸フェニル（４）の合成
４−カルバモイルフェニル  ２−（３−フルオロ，４−フェニル）プロパン酸フェニル、３（１．０９ｇ、３ｍｍｏｌ）およびローソン試薬（１．２１ｇ、１．３ｍｍｏｌ）を無水ベンゼン７０ｍＬに溶解した。反応液を６０℃まで温め、４時間にわたって撹拌した。減圧下に溶剤を除去した。得られた化合物をシリカゲル・オープンカラムで精製し、ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（９．５／０．５）で溶出し、純粋化合物４を得た（０．３５ｇ、収率３１％）。  
１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ１．５５（ｄ、３Ｈ）、４．２１（ｄｄ、１Ｈ）、７．３２〜７．５５（ｍ、８Ｈ）、７．９０（ｄ、２Ｈ）、９．５１および９．８８（ｓ、２Ｈ、ＮＨ２）。
１３Ｃ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ１９．１、４４．７、１１５．９、１１６．２、１２１．７、１２４．８、１２８．６、１２９．３、１２９．４、１２９．５、１３１．７、１３５．８、１３７．７、１４２．６、１５３．７、１５８．３、１６３．５、１７３．１、１９９．６。
ＭＳ（Ｅｌ）、ｍ／ｅ  ３８０（Ｍ＋）；
ｍ．ｐ．：１４２〜１４４℃。
【実施例９】
【０１０９】
４−または５−アミノー２−ヒドロキシー安息香酸  ４−チオカルバモイル−フェニルエステル（８）（別名化合物ＸＸＶＩＩ）の一般的合成法
【０１１０】
【化１２】
0005529534.tif 000013
【０１１１】
４−または５−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−２−ヒドロキシ−安息香酸（１）の合成
ジオキサン２５ｍＬおよび水１２．５ｍＬに４−または５−アミノサリチル酸（１０．０ｍｍｏｌ）を加えた溶液中に、トリエチルアミン（１５．０ｍｍｏｌ）およびジ−ｔｅｒｔ−ブチルージカルボネート（１５．０ｍｍｏｌ）を加え、０℃で１／２時間撹拌した。反応混合液を室温で２４時間、機械的に撹拌した。前記溶剤の蒸発後、３Ｍ  ＨＣＬ（１５ｍＬ）を前記残留物に滴下した。得られた沈殿物を濾過し、水で洗浄し、乾燥した。得られた残留物をシリカゲル・オープンカラムに加え、ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（９／１）で溶出し、そこから４−または５−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノー２−ヒドロキシ安息香酸（１）を得た（収率８０％）。
【０１１２】
４−または５−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−２−ｔｅｒｔ−ブトキシ−安息香酸（２）の合成
化合物（１）（１２．０ｍｍｏｌ）、Ｈ２ＳＯ４濃縮物（６．０ｍｍｏｌ）、およびＤＣＭ（１００ｍＬ）をイソブチレン・ガス（５ｐｓｉ）の存在下に室温で６時間にわたって撹拌した。得られた溶液を冷たい１０％ＮａＨＣＯ３（２ｘ１００ｍＬ）および塩水（１００ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、蒸発させた。得られた残留物をＭｅＯＨ／ＣＣｌ４（１：１、４００ｍＬ）に溶解し、水（３００ｍＬ）で洗浄し、ＭｅＯＨ／水（１：１、２  ｘ  ２００ｍＬ）で抽出した。前記抽出物を乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、白色固体（２）になるまで蒸発させ、白色固体をＤＣＭ／ヘキサンにより再結晶させた（収率８３％）。
【０１１３】
４−または５−アミノ−２−ヒドロキシ−安息香酸  ４−チオカルバモイルーフェニルエステル（８）の合成
ジメチルホルムアミド５０ｍＬに４−または５−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノー２−ヒドロキシー安息香酸（２）（３．０ｍｍｏｌ）を加えた溶液中に、ヒドロキシベンゾトリアゾール（３．３ｍｍｏｌ）およびＤＣＣ（３．３ｍｍｏｌ）を加え、０℃で１時間撹拌した。前記反応混合液に４−ヒドロキシ−チオベンズアミド（３．０ｍｍｏｌ）を加え、０℃で３時間、室温で７２時間にわたり機械的に撹拌した。濾過後、濾液を減圧下に蒸発させ溶剤を除去した。こうして得られた油性残留物を酢酸エチルに溶解し、有機層を塩水で洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、溶剤を蒸発させた。得られた粗中間物（７）にＴＦＡの４０％ＣＨ２Ｃｌ２溶液による処理を加えた。２時間後、前記溶剤を除去し、粗残留物として化合物（８）を得た。得られた残留物をシリカゲル・オープンカラムに加え、ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（８／２）で溶出し、そこから化学式ＸＸＶＩＩの化合物である４−または５−アミノー２−ヒドロキシ−安息香酸  ４−チオカルバモイルーフェニルエステル（８）を得た（収率４８％）。
【実施例１０】
【０１１４】
トリメブチン・チオカルバモイル安息香酸
３，４，５−トリメトキシ安息香酸２−（ジメチルアミノ）−２−フェニルブチルエステル  ４−チオカルバモイル安息香酸（トリメブチン・チオカルバモイル安息香酸）の作成
【０１１５】
【化１３】
0005529534.tif 000014
【０１１６】
４−（チオカルバモイル）安息香酸（０．１モル）とトリメブチン（０．１モル）の混合液に、水（２００ｍＬ）およびエチルアルコール（２０ｍＬ）を加え、得られた懸濁液が透明になるまで室温で撹拌した。続いて前記溶液を冷凍し、凍結乾燥させて目的とする塩を得た（定量的収率）。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ０．６０（ｔ、３Ｈ）、１．４５〜１．７５（ｍ、４Ｈ）、１．８０〜１．９０（ｍ、２Ｈ）、２．２８（ｓ、６Ｈ）、２．９０〜３．４０（ｍ、２Ｈ）、３．６９（ｓ、９Ｈ）、３．９５（ｍ、１Ｈ）、４．７３（ｄｄ、２Ｈ）、７．０１（ｓ、２Ｈ）、７．２２（ｔ、１Ｈ）、７．３５（ｔ、２Ｈ）、７．４６（ｄ、２Ｈ）、７．９３（ｄｄ、４Ｈ）、９．６５（ｂｓ、１Ｈ、ＮＨ）、１０．０５（ｂｓ、１Ｈ、ＮＨ）。  
１３Ｃ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ９．０７、２８．９、５６．５、６０．８、６４．５、６５．７、１０７．１、１２５．３、１２７．４、１２８．１、１２８．６、１２９．５、１２９．７、１３２．３、１４１．８、１４２．５、１４８．５、１５３．４、１５４．８、１６５．９、１６９．４、１７２．５、１８８．６．
ｍｐ  ６６〜６８℃（ｄｅｃ）。
【０１１７】
４−（チオカルバモイル）安息香酸の合成
前記化合物を、ここに掲げた参考文献（Ｆａｉｒｆｕｌｌ、Ｅ．Ｓ．，Ｌｏｗｅ  Ｊ．Ｌ．，Ｐｅａｋ  Ｄ．Ａ．Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１９５２，７４２）で既に報告されている方法に従って合成した。
【０１１８】
【化１４】
0005529534.tif 000015
【０１１９】
４−（チオカルバモイル）安息香酸（２）
４−シアノ安息香酸１（２０．４ｍｍｏｌ）３ｇをピリジン４０ｍＬに溶解し、トリエチルアミン（２０．４ｍｍｏｌ）２．１ｍＬを加えた。乾燥硫化水素を前記溶液に４時間絶え間なく通した。次に前記混合液を水中に注ぎ、濾過により固形物を得た。石油エーテルからの再結晶により純粋化合物２  ２．５１ｇを得た（収率６８％）。  
ＭＳ（ＥＳｌ）、ｍ／ｅ１８２．２（Ｍ＋）。
１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ７．９２（ｄｄ、４Ｈ）、９．６８（ｓ、１Ｈ、ＮＨ）、１０．１２（ｓ、１Ｈ、ＮＨ）、１３．２５（ｓ、１Ｈ、ＯＨ）。
１３Ｃ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ１２７．３、１２９．６、１３２．０、１４８．５、１６９．４、１８８．６
ｍ．ｐ．２９６〜２９８℃（ｄｅｃ．）。
【実施例１１】
【０１２０】
コハク酸  ２−｛２−［８−（２，２−ジメチルーブチリルオキシ）−２，６−ジメチルー１，２，６，７，８，８ａ−ヘキサヒドロ−ナフタレン−１−イル］−エチル｝−６−オキソ−テトラヒドロ−ピラン−４−イル  エステル  ４−チオカルバモイルーフェニルエステル（３）（別名化合物  Ｉ）の合成
【０１２１】
【化１５】
0005529534.tif 000016
【０１２２】
コハク酸  ４−カルバモイル−フェニルエステル  ２−｛２−［８−（２，２−ジメチルーブチリルオキシ）−２，６−ジメチルー１，２，６，７，８，８ａ−ヘキサヒドローナフタレン−１−イル］−エチル｝−６−オキソ−テトラヒドロ−ピラン−４−イル  エステル（２）の合成
【０１２３】
【化１６】
0005529534.tif 000017
【０１２４】
ジクロロメタン３ｍＬ中にシンバスタチン（１）４２０ｍｇ（０．００１モル）を加えた溶液を無水コハク酸１１０ｍｇおよびＤＭＡＰ  １０ｍｇで処理した。３６時間後、ＥＤＣＩ  ２１０ｍｇ（０．００１モル）および４−ヒドロキシーベンズアミド１７０ｍｇ（０．００１２モル）を撹拌しながら加えた。
【０１２５】
１時間後、減圧下に前記溶剤を除去し、得られた粗残留物をシリカゲルカラムで精製し、ジクロロメタン／メチルアルコール（９．５／０．５）で溶出し、白色固体として化合物２を得た（３５０ｍｇ；収率５５％）。
ＭＳ（Ｅｌ）、ｍ／ｅ  ６３８（Ｍ＋）；
１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ）δ０．８３１（ｍ、６Ｈ、２−Ｍｅ）、１．０７５（ｍ、９Ｈ、３−Ｍｅ）、１．５３（ｍ、６Ｈ）、１．９７（ｍ、２Ｈ）、２．２７（ｍ、５Ｈ）、２．５２（ｄ、２Ｈ）、２．６２（ｄ、２Ｈ）、３．６８（ｍ、１Ｈ）、４．０７（ｍ、１Ｈ）、５．５２（ｍ、１Ｈ）、５．５０（ｂｔ、１Ｈ）、５．７７（ｄｄ、１Ｈ）、５．９６（ｄ、１Ｈ）、７．０８（ｄ、２Ｈ）、７．８７（ｄ、２Ｈ）、７．９４（ｂｓ、２Ｈ）。
【０１２６】
コハク酸  ２−｛２−［８−（２，２−ジメチルーブチリルオキシ）−２，６−ジメチルー１，２，６，７，８，８ａ−ヘキサヒドローナフタレンー１−イル］−エチル｝−６−オキソ−テトラヒドロ−ピラン−４−イル  エステル  ４−チオカルバモイルーフェニルエステル（３）の合成
【０１２７】
【化１７】
0005529534.tif 000018
【０１２８】
コハク酸  ４−カルバモイル−フェニルエステル  ２−｛２−［８−（２，２−ジメチルーブチリルオキシ）−２，６−ジメチルー１，２，６，７，８，８ａ−ヘキサヒドローナフタレン−１−イル］−エチル｝−６−オキソーテトラヒドロ−ピランー４−イル  エステル（２）（０．３５ｇ、０．０００５４８モル）およびローソン試薬（０．２２１ｇ、０．０００５４８モル）を無水ベンゼン３０ｍＬに溶解した。反応液を５０℃まで温め、６時間にわたって撹拌した。
ＭＳ（Ｅｌ）、ｍ／ｅ  ６５４（Ｍ＋）；
１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ）δ０．８３１（ｍ、６Ｈ、２−Ｍｅ）、１．０７５（ｍ、９Ｈ、３−Ｍｅ）、１．５３（ｍ、６Ｈ）、１．９７（ｍ、２Ｈ）、２．２７（ｍ、５Ｈ）、２．５２（ｄ、２Ｈ）、２．６２（ｄ、２Ｈ）、３．６８（ｍ、１Ｈ）、４．０７（ｍ、１Ｈ）、５．５２（ｍ、１Ｈ）、５．５０（ｂｔ、１Ｈ）、５．７７（ｄｄ、１Ｈ）、５．９６（ｄ、１Ｈ）、７．１１（ｄ、２Ｈ）、７．９（ｄ、２Ｈ）、９．４８（ｓ、１Ｈ）、９．８６（ｓ、１Ｈ）。
化合物の検査
【実施例１２】
【０１２９】
５−アミノ−２−（４−チオカルバモイル−フェノキシカルボニルオキシ）−安息香酸の疾患活動性とＭＰＯ活性の比較
以下の例では、マウスへの２，４，６−トリニトロベンゼン・スルホン酸（ＴＮＢＳ）大腸内投与により誘発された大腸炎の標準的実験動物モデルを用いた。このモデルの詳細な説明が発表されており（Ｓａｎｔｕｃｃｉら（２００３）Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ  １２４：１３８１〜９４）、「参考文献」を参照のこと。つまり、６〜８週齢のＢａｌｂ／ｃマウスの腸内に、ＴＮＢＳ１．５ｍｇを３０％エタノール０．１ｍＬに溶いたものを投与した。前記マウスを様々な治療群に無作為化した（群当たりｎ＝６）。１時間後から開始しその後１２時間ごとに５日間、賦形剤（１％カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ））、５−ＡＳＡ（メサラミン）単独（１００ｍｇ／ｋｇ）、４−ヒドロキシチオベンズアミド（図では４−ＨＴＢと呼称）（１００ｍｇ／ｋｇ）、５−アミノ−２−（４−チオカルバモイル−フェノキシカルボニルオキシ）−安息香酸（１００ｍｇ／ｋｇ）（以後、化合物ＸＸＶＩＩと呼称）、メサラミンと４−ＨＴＢを等量ずつ（それぞれ５０ｍｇ／ｋｇ）の内いずれかをマウスに経口投与した。＊賦形剤投与群に対し、ｐ<０．０５。各群は少なくともラット５匹で構成された。
【０１３０】
試験最終日に下痢および便潜血の存在についてマウスを評価し（盲検）、体重を測定した。これらのデータに基づき、「疾患活動性スコア」を計算した（前掲論文に概略が示されたごとく、０〜４の尺度で）。屠殺後、顆粒球浸潤のマーカーとしてミエロペルオキシダーゼ（ｍｙｅｌｏｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ：ＭＰＯ）活性を測定するため、大腸の標本を摘出した。結果はすべて健康なマウスで得られた測定値とも比較した。
【０１３１】
図１は、化合物ＸＸＶＩＩが疾患症状の軽減において、メサラミン単独、４−ＨＴＢ単独、メサラミンと４−ＨＴＢの混合物のいずれよりも約３倍効果的であることを示している。さらに図２は、化合物ＸＸＶＩＩが顆粒球浸潤の低下（ＭＰＯ活性の低下）で示されるように炎症を有意に軽減したことを示している。
【実施例１３】
【０１３２】
内臓痛知覚に関するラットモデルにおける５−アミノ−２−（４−チオカルバモイルーフェノキシカルボニルオキシ）−安息香酸とメサラミンの効果の比較
次の例では、過敏性腸症候群の前臨床モデルである内臓痛知覚に関するラットモデルを用いた。ラット（雄性、Ｗｉｓｔａｒ系、２００〜２５０ｇ、イタリア、モンツァのＣｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ社から購入）をプラスチックケージ内に入れ、１２時間ごとの明暗サイクル（午前７時に点灯）を維持した。水道水および標準飼料を自由に得られるようにした。実験前の２〜３日間にわたり、１日当たり２〜３時間をプレキシガラス製ケージ内で過ごさせることによりラットを個々に訓練した。そうすることによってラットは移動制限環境に適応することができた。結腸直腸拡張（ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ  ｄｉｓｔｅｎｓｉｏｎ：ＣＲＤ）の記録前１２時間は食餌を与えないでおいた。実験は覚醒ラットを対象とし、各ラットに投与される薬剤内容が観察者に分からないようにして行った。
【０１３３】
試験当日、エーテルを吸入させてラットを鎮静化し、肛門縁から２ｃｍの直腸内に２ｃｍの長さのラテックス製バルーンを挿入し、しっぽの基部に固定した。バルーンは二連銃型のカニューレを介して圧力トランスデューサーに接続されコンピュータ（ＰｏｗｅｒＬａｂ  ＰＣ，Ａ．Ｄ．  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、米国マサチューセッツ州Ｍｉｌｆｏｒｄ）による直腸圧の持続モニターを、シリンジに接続されバルーンの膨張／収縮をそれぞれ司った。次にラットをＰｌｅｘｉｇｌａｓ（商標）プラットホーム上の小ケージ（２０ｘ８ｘ８ｃｍ）に入れ、覚醒、順応のため１時間の猶予を与えた。鎮静状態から回復後、ラットにＣＲＤ処置を施し行動反応の試験を行った。実験前夜にバルーンを膨らませて一晩置き、ラテックスが伸びてバルーンが柔軟になるようにしておいた。
【０１３４】
ＣＲＤを２０秒間、５分間隔で行い、水０．４ｍＬから開始し０．４ｍＬずつ１．６ｍＬまで増量した。結腸パラメータおよび知覚を正確に測定するため、各強度につき拡張を２度繰り返し、各ラットのデータを平均化して分析した。各ラットに一連のＣＲＤを２度行った。最初の一連のＣＲＤ（水０．４〜１．６ｍＬ）から２０分後、薬剤を腹腔内（ｉ．ｐ．）に投与し２回目の一連のＣＲＤを行った。初回と２回目の一連のＣＲＤ中の行動反応を評価、比較した。
【０１３５】
半定量的スコアを用いて腹部逃避反射（ａｂｄｏｍｉｎａｌ  ｗｉｔｈｄｒａｗａｌ  ｒｅｆｌｅｘ：ＡＷＲ）を行い、ＣＲＤに対する行動反応を評価した（１）。ＡＷＲは内臓運動反射と同様の不随意運動反射であるが、後者とは対照的に、腹筋壁にさらなる感作を生じかねない（記録電極やワイヤーを埋め込むための）腹部手術を必要としないという大きな利点を有する（「参考文献」に掲げたＮｅｓｓ，Ｔ．Ｊ．およびＧｅｂｈａｒｔ，Ｇ．Ｆ．による（１９９０）Ｐａｉｎ  ４１：１６７〜２３４を参照のこと）。
【０１３６】
本書参考文献（Ａｌ−Ｃｈａｅｒ，Ｅ．Ｄ．ら（２０００）Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ  １９：１２７６〜８５）で既述されているように、ＡＷＲの測定は、段階的ＣＲＤに対する動物反応に関する盲検化された観察者による目視観察と行動スケールに基づくＡＷＲスコアの付与で構成される。つまり、グレード０ではＣＲＤへの行動反応がまったく示されず、グレード１では刺激開始時に短時間の頭の動きが認められその後は不動、グレード２では腹筋の軽度収縮が認められるが、ラットの腹部はプラットホームから持ち上がらない、グレード３では腹筋が大きく収縮し、腹部がプラットホームから持ち上がる、グレード４では腹筋が激しく収縮し、体が弓なりになり、腹部、骨盤部分、陰嚢が持ち上がる。
【０１３７】
上述したような内臓痛知覚のラットモデルを用い、５−アミノー２−（４−チオカルバモイルーフェノキシカルボニルオキシ）−安息香酸（化合物ＸＸＶＩＩ）に対する疼痛知覚スコアを、ＡＴＰ感受性Ｋ＋（ＫＡＴＰ）チャンネル阻害剤グリベンクラミドを加えた場合と加えなかった場合とで比較した。
【０１３８】
図３は、賦形剤、メサラミン（１００ｍｇ／ｋｇ）、および化合物ＸＸＶＩＩ（１００ｍｇ／ｋｇ）投与のラット群（少なくともｎ＝５／群）における結腸直腸拡張０．８ｍＬに対する疼痛知覚スコアを示す。化合物ＸＸＶＩＩにより疼痛知覚は有意に低下したが（＊賦形剤投与群に対し、ｐ<０．０５）、メサラミンによる有意な作用は認められなかった。化合物ＸＸＶＩＩによる疼痛知覚の低下はグリベンクラミド（１０ｍｇ／ｋｇ  ｉ．ｐ．３０分前）の前投与によって抑制されたが、グリベンクラミドの前投与は賦形剤またはメサラミン投与群では疼痛知覚に影響を及ぼさず、このことは化合物ＸＸＶＩＩの抗侵害受容作用がＡＴＰ感受性Ｋ＋（ＫＡＴＰ）チャンネルによって媒介される可能性を示唆する。図４は、４−ヒドロキシチオベンズアミド（４−ＨＴＢ）単独（１００ｍｇ／ｋｇ）が疼痛知覚に有意な作用を及ぼさなかったことを示している。
【実施例１４】
【０１３９】
生体内において５−アミノー２−（４−チオカルバモイル−フェノキシカルボニルオキシ）−安息香酸が白血球の血管内皮への粘着に及ぼす作用
既に詳述されているように（Ｗａｌｌａｃｅら、（１９９３）Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．２６５：９９３〜９９８、「参考文献」を参照のこと）、白血球粘着が生体顕微鏡を用いて研究された。ラットをペントバルビタールナトリウム（６０ｍｇ／ｋｇ  ｉ．ｐ．）で麻酔し、電気メスにより腹部を切開した。呼吸を容易にするため気管切開を行った。ラットを仰臥位とし、腹部切開口を通して腸間膜の一部を体外に露出させた。前記腸間膜を、２ｃｍ２の組織片の透光を可能にする光学的に透明な観察台上に慎重にセットした。脱水を最小限とするため、露出組織ははすべて生理食塩水に浸したガーゼで覆った。観察台の温度を３７℃に保ち、温めた重炭酸緩衝生理食塩水（ｐＨ７．４）で腸間膜を灌流した。生体顕微鏡（ニコン  Ｌ２５／０．３５）およびアイピース（ａ  ｘ１０）を用いて腸間膜の微小循環を観察した。直径が２０〜４０μｍの後毛細血管細静脈を研究対象とした。顕微鏡に取付けられたビデオカメラ（パナソニック（商標）  デジタル５０００）が画像をモニター上に映し出し、画像は再生分析のためビデオカセットレコーダーにより記録された。腸間膜微小循環の画像を、アスピリン投与５分前（ベースライン）、アスピリン投与時（時間０〜５）、およびその後１５分ごとに６０分間記録した。  ５分間にわたる血管のビデオ画像に基づき、白血球粘着を、血管壁に沿って３０秒間以上静止したままの白血球の数（細静脈の長さ１００μｍ当たり）として盲検的に計測した。アスピリン（または賦形剤）投与６０分前に、各群（少なくともｎ＝５）のラットに５−アミノー２−（４−チオカルバモイルーフェノキシカルボニルオキシ）−安息香酸（化合物ＸＸＶＩＩ）（１００ｍｇ／ｋｇ）、メサラミン（５０ｍｇ／ｋｇ）、賦形剤のいずれかを前投与した。これらの薬剤は胃内に投与した。一部の実験では、これら化合物の投与３０分前に、ラットにグリベンクラミド（１０ｍｇ／ｋｇ  ｉ．ｐ．）または賦形剤を投与した。
【０１４０】
図５は実験の最終期間（６０〜６５分）における白血球粘着を示す。本図は化合物ＸＸＶＩＩがアスピリン誘発による白血球粘着を抑制する能力およびグリベンクラミド前投与が化合物ＸＸＶＩＩの白血球粘着抑制作用に拮抗する能力を示している。
【実施例１５】
【０１４１】
５−アミノー２−（４−チオカルバモイル−フェノキシカルボニルオキシ）−安息香酸によるＨ２Ｓの生成
３つの異なった条件の下に、Ｈ２Ｓ生成に関する５−アミノ−２−（４−チオカルバモイル−フェノキシカルボニルオキシ）−安息香酸（化合物ＸＸＶＩＩ）の試験を行った。１ｍＭ濃度のＬ−システイン、４−ＨＢＴ（４−ヒドロキシチオベンズアミド）、および５−アミノ−２−（４−チオカルバモイルーフェノキシカルボニルオキシ）−安息香酸から１時間以内に生成されるＨ２Ｓの濃度を測定した。３つの条件下にＨ２Ｓ放出の試験を行った：（ｉ）当該化合物が緩衝液中にある場合、（ｉｉ）当該化合物が肝臓ホモジネート中にある場合、および（ｉｉｉ）当該化合物がシスタチオニンγ−リアーゼ阻害剤（ＰＡＧ＝ＤＬ−プロパルギルグリシン；２ｍＭ）とともに肝臓ホモジネート内にある場合。結果を図６に示す。＊賦形剤群からの放出に比べ、ｐ<０．０５。対応する「ホモジネート」群に対し、ｐ>０．０５。Ｈ２Ｓ産生に対する酵素容量を、既述（Ｋｈａｎら（１９８０）Ｍｉｃｒｏｃｈｅｍ  Ｊ．２５：３８８〜３９５、「参考文献」参照）のものと同じリアクターを用いて測定した。分析用反応混合液２ｍＬをリアクター中に加えた。混合液には１ｍＭ  Ｌ−システイン（または化合物）、２ｍＭピリドキサル  ５’−リン酸、１００ｍＭリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ＝７．４）が含まれていた。混合液中を窒素がガス吹込管経由で絶え間なく通過するようにした。管を氷浴から３７℃の温浴に移すことにより反応を開始させた。（ｐＨ  １２．８で２Ｍ  ＫＯＨ、１Ｍサリチル酸、０．２２Ｍアスコルビン酸から成る）硫化物抗酸化緩衝（ｓｕｌｆｉｄｅ  ａｎｔｉ−ｏｘｉｄａｎｔ  ｂｕｆｆｅｒ：ＳＡＯＢ）液４ｍＬが入った２番目のリアクターでは、窒素流に硫酸が含まれていた［５］。３７℃で９０分間培養後、１０％トリクロロ酢酸液１ｍＬを混合液に加え反応を停止させた。混合液中の残留Ｈ２Ｓは、さらに６０分間３７℃で培養することにより、窒素流によって除去された。ＳＡＯＢ液中の硫化物濃度を硫化物に感受性のある電極（モデル９６１６Ｓ２−／Ａｇ＋、Ｏｒｉｏｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、米国マサチューセッツ州Ｂｅｖｅｒｌｙ）を用いて測定した。前記試験化合物の肝臓ホモジネート中での培養試験のため、切離したラットの肝臓１００〜１５０ｍｇを氷冷したＴ−ＰＥＲタンパク・エキストラクター１ｍＬ中でホモジナイズした。ホモジネートされたものを前記反応混合液に加え、濃度１０％（ｗｔ／ｖｏｌ）とした。前記酵素反応の前に２ｍＭ  ＤＬ−プロパギルグリシンを肝臓ホモジネートとともに３７℃で５分間培養した。Ｋｈａｎ  Ｓ．Ｕ．，Ｍｏｒｒｉｓ  Ｇ．Ｆ．、およびＨｉｄｉｒｏｇｌｏｕ  Ｍ．（１９８０）Ｒａｐｉｄ  ｅｓｔｉｍａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｓｕｌｆｉｄｅ  ｉｎ  ｒｕｍｅｎ  ａｎｄ  ｂｌｏｏｄ  ｗｉｔｈ  ａ  ｓｕｌｆｉｄｅ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｉｏｎ  ｅｌｅｃｔｒｏｄｅ．Ｍｉｃｒｏｃｈｅｍ  Ｊ．２５：３８８〜３９５、「参考文献」参照のこと。
【０１４２】
図６に示した結果は、化合物ＸＸＶＩＩが以下の明白な特徴を有することを示唆している：
１．化合物ＸＸＶＩＩはＨ２Ｓを任意に放出し（緩衝液中）、そのことは腸での局所効果にとって望ましい。４−ＨＴＢおよびＬ−システインを緩衝液だけで培養した場合のＨ２Ｓ放出は有意でなかった。
２．Ｈ２Ｓの放出は組織の存在下における方が多い；
３．化合物ＸＸＶＩＩからのＨ２Ｓの放出はＨ２Ｓの内因性合成に用いられる２つの主要酵素（シスタチオニンβ―シンターゼおよびシスタチオニンγ―リアーゼ）の活性とは独立に生じる。このことは、それら酵素の阻害薬（ＰＡＧ；ＤＬ−プロパギルグリシン）が化合物ＸＸＶＩＩからのＨ２Ｓ生成に及ぼす作用の欠如によって立証される。その一方、Ｌ−システインからのＨ２Ｓ放出はＰＡＧにより顕著に阻害される；
４．化合物ＸＸＶＩＩから産生されるＨ２Ｓの濃度は化合物１ｍＭが使用された場合１０〜２０μＭである。患者が本薬剤の通常量を服用後、大腸腔内で最高５ｍＭの濃度のメサラミンが測定可能である（Ｄｉｇ．Ｄｉｓ．Ｓｃｉ．１９８９；３４：５７３〜５７８）。Ｈ２Ｓの内因性濃度（ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ  ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ）は最高１６０μＭである（Ａｎｔｉｏｘｉｄ．Ｒｅｄｏｘ  Ｓｉｇｎａｌ．２００３；５，４９３〜５０１）。化合物ＸＸＶＩＩは生理学的範囲内の濃度でＨ２Ｓを放出し、Ｈ２Ｓ関連毒性の危険性を最小限とする。
【実施例１６】
【０１４３】
内臓痛知覚に関するラットモデルにおけるトリメブチン・チオカルバモイル安息香酸対トリメブチン単独およびチオカルバモイル安息香酸単独の作用の比較
実施例１３で説明のごとくに実験を行ったが、但しラット５匹からなる各群には賦形剤、マレイン酸トリメブチン（１０ｍｇ／ｋｇ）、等モルのトリメブチン・チオカルバモイル安息香酸（化合物ＩＩＩ）またはチオカルバモイル安息香酸単独のいずれかを投与した。
【０１４４】
図７（ａ）および７（ｂ）は、結腸直腸拡張に対する内臓痛を軽減する上で、トリメブチン・チオカルバモイル安息香酸はマレイン酸トリメブチンまたはチオカルバモイル安息香酸のいずれよりも効果的であることを示している。
【０１４５】
このように、トリメブチン・チオカルバモイル安息香酸は、消化管の様々な炎症病態に関連した腹痛、および内臓痛覚の増大を特徴とする過敏性腸症候群や消化不良などの機能的胃腸障害（炎症合併の有無に関わらず）を治療する上で有用である。
【実施例１７】
【０１４６】
本発明のＮＳＡＩＤ化合物の胃腸安全性
本発明のジクロフェナク誘導体である［２−（２，６−ジクロロ−フェニルアミノ）−フェニル］−酢酸  ４−チオカルバモイル−フェニルエステル（ここでは別名化合物ＸＶＩＩ）を、ラットにおける胃腸安全性について評価した。特に、胃損傷、胃ＰＧＥ２合成、小腸潰瘍、およびヘマトクリットについて評価した。
【０１４７】
雄性Ｗｉｓｔａｒ系ラット（体重１７５〜２００ｇ）を、１％カルボキシメチルセルロース（賦形剤；０．２ｍＬ）単独若しくは次のいずれかをこの賦形剤に溶解したものを経口投与する前１８時間にわたって絶食させた。ジクロフェナク（２０ｍｇ／ｋｇ）、［２−（２，６−ジクロロ−フェニルアミノ）−フェニル］−酢酸  ４−チオカルバモイル−フェニルエステル（化合物ＸＶＩＩ）（２７．３ｍｇ／ｋｇ）、４−ヒドロキシチオベンズアミド（ＴＢＺ）（７．３ｍｇ／ｋｇ）、ジクロフェナク＋ＴＢＺ。化合物ＸＶＩＩの用量はジクロフェナク２０ｍｇ／ｋｇの用量と等モルである。同様に、ＴＢＺの用量は化合物ＸＶＩＩの用量と等モルである。
【０１４８】
各群ともラット５匹で構成した。前記試験化合物の投与から３時間後にラットを安楽死させ、胃の出血性損傷の範囲を盲検的に測定した（ｍｍで）。胃の病変すべての長さを合計することにより「胃損傷スコア」を計算した。まず図８に関連し、「賦形剤」群若しくは「化合物ＸＶＩＩ」群では胃損傷は認められなかった。化合物ＸＶＩＩによる胃損傷はジクロフェナクによる胃損傷よりも有意に軽度であった。また、ＮＳＡＩＤ成分（ジクロフェナク）およびＴＢＺを別々に（但し同時に）投与した場合、胃温存作用は認められなかった。
【０１４９】
これらの所見は、続いて行った盲検による組織学的評価によって確認した。前述したように（Ｗａｌｌａｃｅら、Ｃｙｃｌｏｏｘｙｇｅｎａｓｅ  １  ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅｓ  ｔｏ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ  ｉｎ  ｒａｔｓ  ａｎｄ  ｍｉｃｅ：ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｆｏｒ  ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  ｔｏｘｉｃｉｔｙ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ  １９９８；１１５：１０１〜１０９、「参考文献」を参照のこと）、胃組織標本（１００〜２００）を切り出し、プロスタグランジンＥ２（ＰＧＥ２）合成について評価した。つまり、前記組織標本を３０分間剪刀で刻み、それらをリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．４）１ｍＬ中に入れ、それを振盪する温浴（３７℃）中に２０分間置いた。その後直ちに標本を９，０００ｇで１分間遠心分離にかけ、その後の特異的ＥＬＩＳＡ法を用いたＰＧＥ２濃度測定のため、上澄を−８０℃で直ちに冷凍した（Ｗａｌｌａｃｅら、１９９８）。
【０１５０】
図９からは、ジクロフェナク（ＴＢＺの併用の有無に関わらず）および化合物ＸＶＩＩが胃ＰＧＥ２合成量を有意に低下させたことがみられ、ＣＯＸ−１および／またはＣＯＸ−２の阻害を示している。賦形剤に比べ、ＴＢＺ単独では胃ＰＧＥ２合成は低下しなかった。従って、図１に示したような化合物ＸＶＩＩを投与したラットにおける胃損傷の欠如は、これらの薬剤による胃プロスタグランジン合成抑制能の変化に起因するものではなかった。胃ＰＧＥ２合成はこれらの薬剤および同モルのジクロフェナクによりほぼ完全に抑制された。
【０１５１】
図１０は、本発明のナプロキセン誘導体である２―（６−メトキシ−ナフタレン−２−イル）−プロピオン酸  ４−チオカルバモイル−フェニルエステル（化合物ＸＸ）による障害がナプロキセン自体による障害よりも有意に小さかったことを示している。これらの実験は図８に示したものと全く同じ方法で行われた。ナプロキセンおよび化合物ＸＸをそれぞれ６０μＭ／ｋｇで経口投与し、３時間後に胃損傷を盲検的に評価した。化合物ＸＸを投与したラットでは胃損傷は認められなかった。各群はラット５匹で構成されていた。これらの所見は、続いて行った盲検による組織学的評価によって確認された。
【０１５２】
ＣＯＸ−１の阻害についても同じラットを用いて評価した。既述のごとく（Ｗａｌｌａｃｅら、Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ  １９９８）、嚢から滲出液を収集後直ちに各ラットの下大静脈から血液１ｍＬを採取し、ガラス管に入れ、４５分間凝固させた。次に前記試料を９，０００ｇで３分間遠心分離にかけ、特異的ＥＬＩＳＡ法を用いたその後のトロンボキサンＢ２濃度の測定のため、上澄液を−８０℃で冷凍した。図１１に示したように、ナプロキセンおよび化合物ＸＸは賦形剤投与群に比べいずれもＣＯＸ−１活性を有意に（＊ｐ<０．０５）阻害した。
【実施例１８】
【０１５３】
［２−（２，６−ジクロロ−フェニルアミノ）−フェニル］―酢酸  ４−チオカルバモイルーフェニルエステルによるシクロオキシゲナーゼ−２（ＣＯＸ−２）およびシクロオキシゲナーゼ−１（ＣＯＸ−１）の阻害
生体内におけるＣＯＸ−２の阻害を、既述モデル（Ｗａｌｌａｃｅら、Ｌｉｍｉｔｅｄ  ａｎｔｉ−ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｅｆｆｉｃａｃｙ  ｏｆ  ｃｙｃｌｏ−ｏｘｙｇｅｎａｓｅ−２  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｉｎ  ｃａｒｒａｇｅｅｎａｎ−ａｉｒｐｏｕｃｈ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ．  Ｂｒ  Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  １９９９：１２６：１２００〜１２０４、「参考文献」参照）の修正版を用いて測定した。つまり、数日間にわたって繰り返し空気を注入することにより皮下「嚢」を作成した。作成後、１％ザイモサン１ｍＬを注入することにより嚢の炎症を誘発できる。これにより嚢内のプロスタグランジンＥ２（ＰＧＥ２）が顕著に増加し、これはほぼ例外なくＣＯＸ−２に由来することが示されている。カラギーナン注入の３０分前に各群（それぞれラット５匹からなる）に賦形剤（１％カルボキシメチルセルロース）、ジクロフェナク（３ｍｇ／ｋｇ）、［２−（２，６−ジクロローフェニルアミノ）−フェニル］−酢酸  ４−チオカルバモイルーフェニルエステル（化合物ＸＶＩＩ）（４．１ｍｇ／ｋｇ）のいずれかを経口投与した。ラット５匹からなるもう一つの群には賦形剤を投与したが、ザイモサンではなく０．９％滅菌生理食塩水を嚢に注入した。
【０１５４】
図１２に見られるように、ジクロフェナクまたは化合物ＸＶＩＩの前投与により、ザイモサン注入への反応として産生される嚢内のＰＧＥ２濃度が顕著に低下した。＊賦形剤＋ザイモサン投与群に対し、ｐ<０．０５これらの結果から、いずれの化合物もＣＯＸ−２を有意に阻害したことが示される。一方、ＴＢＺ単独ではＣＯＸ−２活性に有意な影響を及ぼさなかった。
【０１５５】
さらに、図１１に関し記載されたものと同じ方法により、同じラットを用いてＣＯＸ−１阻害を評価した。図１３に示したように、ジクロフェナクおよび化合物ＸＶＩＩはＣＯＸ−１を通じた全血トロンボキサン合成を、いずれも８０％以上阻害した。一方、ＴＢＺはＣＯＸ−１活性に有意な影響を及ぼさなかった。
【実施例１９】
【０１５６】
生体内においてＮＳＡＩＤ誘導体が胃損傷、ＣＯＸ−１活性、ＣＯＸ−２活性に及ぼす作用
多くの化合物の抗炎症作用（ＣＯＸ−２およびＣＯＸ−１阻害）および胃安全性を、上記アッセイを用いて比較した。結果の概要を表１に示す。いずれの親ＮＳＡＩＤも顕著な胃損傷を引起した。しかし、本発明のＴＢＺ誘導体の場合、前記親化合物に比べ胃安全性は改善されていた。さらに表１から、ＴＢＺ誘導体は前記親化合物に比べ、ＣＯＸ−１および／またはＣＯＸ−２阻害能を維持するか実質的に上昇させたことが認められる。
【０１５７】
【表１】
0005529534.tif 000019
【実施例２０】
【０１５８】
ＮＳＡＩＤ誘導体が炎症に及ぼす作用
既述のように（Ｗａｌｌａｃｅら、Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ  １９９８）、カラギーナン後足浮腫モデルを用いて［１−（２，６−ジクロロ−フェニルアミノ）−フェニル］−酢酸  ４−チオカルバモイル−フェニルエステル（化合物ＸＶＩＩ）およびジクロフェナクの抗炎症作用を評価した。雄性Ｗｉｓｔａｒ系ラット（１７５〜２００ｇ）に、１％ラムダカラギーナン１００μＬを足底部に注射する３０分前に前記試験化合物を経口投与した。足容積を、Ｕｇｏ  Ｂａｓｉｌｅ社のｈｙｄｒｏｐｌｅｔｈｙｓｍｏｍｅｔｅｒを用い、カラギーナン注射前および注射後１時間ごと５時間にわたって測定した。それぞれラット５匹からなる各群にジクロフェナク１、３、１０ｍｇ／ｋｇのいずれか、または化合物ＸＶＩＩをジクロフェナク３ｍｇ／ｋｇと等モルの用量で投与した。
【０１５９】
図１４に示すように、ジクロフェナクはカラギーナンの足底注射で誘発された足の浮腫を用量依存性に改善した。ジクロフェナク３ｍｇ／ｋｇと等モル量の化合物ＸＶＩＩにより、足の浮腫は大いに改善した。実際のところ、化合物ＸＶＩＩが足の浮腫に及ぼす作用はジクロフェナク１０ｍｇ／ｋｇの作用に匹敵した。
【０１６０】
化合物ＸＶＩＩはジクロフェナクと同程度にプロスタグランジン合成を抑制することから、前記足浮腫モデルにおける本発明の新化合物の活性亢進は同化合物の別の特性に関連している可能性が高い。硫化水素供与体がカラギーナン誘発によるラット足浮腫を有意に改善できることが以前に証明されており（Ｚａｎａｒｄｏら、Ｈｙｄｒｏｇｅｎ  ｓｕｌｐｈｉｄｅ  ｉｓ  ａｎ  ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ  ｍｏｄｕｌａｔｏｒ  ｏｆ  ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ．  ＦＡＳＥＢ  Ｊ  ２００６；２０：２１１８〜２１２０、「参考文献」参照）、理論に束縛されるものではないが化合物ＸＶＩＩからのＨ２Ｓ放出がジクロフェナクに比べた抗炎症作用亢進の説明になるものと思われる。
【０１６１】
理論に束縛されるものではないが、炎症モデルにおける本発明の化合物の付加的活性の中にはＣＯＸ−２活性の阻害亢進が原因であるものがある可能性もある。ラット空気嚢モデル（図１２に関し説明のごとく）において、賦形剤、ナプロキセン、および２−（６−メトキシ−ナフタレン−２−イル）−プロピオン酸  ４−チオカルバミル−フェニルエステル（化合物ＸＸ）の作用を比較した。各群はラット５匹で構成されていた。ナプロキセンおよび化合物ＸＸをいずれも６０μモル／ｋｇの用量で投与した。図１５に示したように、ナプロキセンおよび化合物ＸＸは、賦形剤投与群に比べいずれもＣＯＸ−２活性を有意に（＊ｐ<０．０５、＊＊ｐ<０．０１）抑制した。
【０１６２】
理論に束縛されるものではないが、炎症モデルにおける本発明のＮＳＡＩＤ誘導体の付加的活性の中にはＣＯＸ−１活性の阻害亢進が原因であるものがある可能性もある。生体外におけるヒト全血トロンボキサンＢ２合成に及ぼす作用に関し、賦形剤、インドメタシン、および［１−（４−クロローベンゾイル）−５−メトキシー２−メチル−１−Ｈ−インドール−３−イル］−酢酸  ４−チオカルバモイルーフェニルエステル（化合物ＸＩＸ）を比較した。健康なボランティアの血液（０．５ｍＬ）を、メタノール単独１０μＬ、若しくは最終濃度が０．１、０．３、１、または３μＭになるように作成した前記試験薬剤が入ったガラス管に加えた。前記ガラス管をゆっくりと振盪する温浴（３７℃）中に４５分間置き、その後１０分間遠心分離（１，０００ｘｇ）にかけた。図１１で示した試験におけるごとく、各試料中のトロンボキサンＢ２濃度を特異的ＥＬＩＳＡ法を用いて測定した。図１６に示すように、賦形剤投与群に比べインドメタシンと化合物ＸＩＸのいずれもが、ＣＯＸ−１活性を濃度依存性に阻害した。しかし、１μＭおよび３μＭの濃度において、化合物ＸＩＸはインドメタシンよりもＣＯＸ−１活性を有意に（＊ｐ<０．０５）大幅に阻害した。
【実施例２１】
【０１６３】
本発明のＮＳＡＩＤ誘導体における血管内皮への白血球粘着
血管内皮への白血球粘着は炎症反応における早期イベントであり、血栓形成に寄与する。硫化水素供与体はアスピリンまたは炎症促進性トリペプチドｆＭＬＰによって誘発された白血球粘着を低下させることが示されている（Ｚａｎａｒｄｏら、ＦＡＳＥＢ  Ｊ  ２００６；２０：２１１８〜２１２０）。本発明による数種のＮＳＡＩＤ誘導体が白血球粘着に及ぼす作用につき、Ｚａｎａｒｄｏらが詳しく説明したように（ＦＡＳＥＢ  Ｊ  ２００６；２０：２１１８〜２１２０）、ラットを対象に生体顕微鏡を用いて評価した。
【０１６４】
つまり、麻酔されたラットにおいて後毛細血管腸間膜細静脈を光学顕微鏡で観察した。５分間の基本記録時間後、下の表２に掲げた前記試験化合物の一つを３０μＭ／ｋｇの用量で胃内投与した。ただし、ナプロキセンおよび２−（６−メトキシ−ナフタレン−２−イル）−プロピオン酸  ４−チオカルバミル−フェニルエステル（化合物ＸＸ）は６０μ／ｋｇの用量で投与した。試験化合物はすべて１％カルボキシメチルセルロースの賦形剤に入れて作成した。細静脈内での白血球粘着の変化を顕微鏡に取付けられたビデオカメラで録画し、録画された画像により粘着白血球の数を盲検的に数えた。各群とも５匹の雄性Ｗｉｓｔａｒ系ラット（体重１５０〜１７５ｋｇ）で構成された。白血球は、３０秒間以上静止状態にあれば「粘着」と見なした（以下の結果は平均±ＳＥＭで示す）。実験の最後に胃を開き、解剖顕微鏡により胃損傷の有無を調べた。
【０１６５】
【表２】
0005529534.tif 000020
【０１６６】
表２から、本発明によるアスピリンのＴＢＺ誘導体である化合物ＸＶＩがアスピリン単独に比べ血管長１００μｍ当たりの粘着白血球数を有意に低下させたことが認められる。また、化合物ＸＶＩはアスピリン単独に比べ胃損傷発生率を有意に低下させた。同様に、表２は、本発明によるジクロフェナクのＴＢＺ誘導体である化合物ＸＶＩＩがジクロフェナク単独に比べ、血管長１００μｍ当たり粘着白血球数および胃損傷発生率をいずれも有意に低下させたことを示している。同じく、表２は、本発明によるナプロキセンのＴＢＺ誘導体である化合物ＸＸがナプロキセン単独に比べ、血管長１００μｍ当たり粘着白血球数および胃損傷発生率をいずれも有意に低下させたことを示している。
【０１６７】
興味深いことに、胃への副作用が軽い選択的ＣＯＸ−２阻害薬であるルミラコキシブのＴＢＺ誘導体である化合物ＸＶＩＩＩでは、胃損傷の発生はやはり認められなかったが、血管長１００μｍ当たりの粘着白血球数はルミラコキシブ単独に比べ有意に少なかった。従って、ＴＢＺをＣＯＸ−２選択的ＮＳＡＩＤに共有結合させることにより、これらＣＯＸ−２阻害薬の心臓血管系副作用も軽減される可能性がある。
【０１６８】
このように、本発明のＮＳＡＩＤ誘導体は、白血球粘着を低下させることによりＮＳＡＩＤの心臓血管系副作用を軽減する可能性がある。
【実施例２２】
【０１６９】
本発明のＮＳＡＩＤ誘導体が胃潰瘍治癒に及ぼす作用
ＣＯＸ−２に選択的に作用するものを含めＮＳＡＩＤｓは前から存在する胃潰瘍の治癒を阻害することが多い（Ｓｔａｄｌｅｒら、Ｄｉｃｌｏｆｅｎａｃ  ｄｅｌａｙｓ  ｈｅａｌｉｎｇ  ｏｆ  ｇａｓｔｒｏｄｕｏｄｅｎａｌ  ｍｕｃｏｓａｌ  ｌｅｓｉｏｎｓ．Ｄｏｕｂｌｅ−ｂｌｉｎｇ，ｐｌａｃｅｂｏ−ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  ｅｎｄｏｓｃｏｐｉｃ  ｓｔｕｄｙ  ｉｎ  ｈｅａｌｔｈｙ  ｖｏｌｕｎｔｅｅｒｓ．Ｄｉｇｅｓｔｉｖｅ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ  ａｎｄ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  １９９１；３６：５９４〜６００）。本発明の２つの化合物（化合物ＸＶＩＩおよび化合物ＸＸ）が潰瘍治癒に及ぼす作用をそれぞれジクロフェナクおよびナプロキセンと比較するため、胃への潰瘍誘発後、ラットにこれらの薬剤を投与した。Ｅｌｌｉｏｔらが説明したように、漿膜に酢酸を塗布することによって胃潰瘍を誘発した（Ａ  ｎｉｔｒｉｃ  ｏｘｉｄｅ−ｒｅｌｅａｓｉｎｇ  ｎｏｎｓｔｅｒｏｉｄａｌ  ａｎｔｉ−ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｄｒｕｇ  ａｃｃｅｌｅｒａｔｅｓ  ｇａｓｔｒｉｃ  ｕｌｃｅｒ  ｈｅａｌｉｎｇ  ｉｎ  ｒａｔｓ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ  １９９５；１０９：５２４〜５３０）。３日後から、それぞれラット５匹からなる各群に、賦形剤、ジクロフェナク（３０μＭ／ｋｇ）、化合物ＸＶＩＩ（３０μＭ／ｋｇ）、ナプロキセン（６０μＭ／ｋｇ）、化合物ＸＸ（６０μＭ／ｋｇ）のいずれかを１日２回経口投与した。４日間そのような治療を行った後、ラットを安楽死させ、胃を切除し、写真に撮った。ラットに施された治療内容を知らない者が潰瘍面積（ｍｍ２）を測定した。胃潰瘍誘発から３日後（すなわち薬剤投与開始前）に安楽死させたラット５匹のサブグループにおいて、潰瘍の平均表面積は２４±２ｍｍ２であった。図１７に示したように、賦形剤、ジクロフェナク、ナプロキセンを投与したラットはいずれも同程度の治癒を示した。しかし、化合物ＸＶＩＩまたは化合物ＸＸを投与したラットの治癒状況は有意に良好であった（＊それぞれジクロフェナクおよびナプロキセンに比べ、ｐ<０．０５）。賦形剤群に比べＴＢＺ単独投与では胃潰瘍の治癒は有意に影響されなかった。
【実施例２３】
【０１７０】
本発明のＮＳＡＩＤ誘導体が血圧に及ぼす作用
ＣＯＸ−２に選択性を示すものを含めたＮＳＡＩＤｓは、前から存在する高血圧を悪化させ、一部の降圧剤の有効性を妨げる可能性がある（Ｗｈｅｌｔｏｎ，Ａ．Ｎｅｐｈｒｏｔｏｘｉｃｉｔｙ  ｏｆ  ｎｏｎｓｔｅｒｏｉｄａｌ  ａｎｔｉ−ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｄｒｕｇｓ：ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃ  ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎｓ  ａｎｄ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ．  Ａｍ．Ｊ．Ｍｅｄ．１９９９；１０６（５Ｂ）：１３Ｓ−２４Ｓ）。本発明のナプロキセン誘導体である化合物ＸＸが血圧に及ぼす作用をナプロキセン単独と比較するため、最初に高血圧を誘発した上でラットにこれらの薬剤を腹腔内投与した。Ｒｉｂｅｉｒｏら（Ｃｈｒｏｎｉｃ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ｎｉｔｒｉｃ  ｏｘｉｄｅ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ：Ａ  ｎｅｗ  ｍｏｄｅｌ  ｏｒ  ａｒｔｅｒｉａｌ  ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ．Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ  １９９２；２０：２９８〜３０３）が以前に説明したように、前記実験の７日前にラットにＮω−ニトロ−Ｌ−アルギニン・メチルエステル（４００ｍｇ／Ｌ）を加えた飲用水を与えた。ラット（群当たり５〜８匹）をハロタンで麻酔し、血圧測定のため頸動脈にカニューレを挿入した。血圧はチャート式記録計で連続的に記録した。安定血圧を最低１５分間測定後、ナプロキセンまたは化合物ＸＸのいずれか６０μＭ／ｋｇを腹腔内にボーラス投与した。投与後６０分間にわたって血圧変化を記録した。平均基礎血圧は１５０±６ｍｍ  Ｈｇであった。図１８は、ナプロキセンが収縮期血圧を大幅に上昇させたことを示している。一方、化合物ＸＸは賦形剤投与群と比較し収縮期血圧を上昇させず、血圧変化はジクロフェナクおよびナプロキセン誘発によるものに比べて有意に少なかった。
【実施例２４】
【０１７１】
［２−（２，６−ジクロロ−フェニルアミノ）−フェニル］―酢酸  ４−チオカルバモイルーフェニルエステルで生成されたＨ２Ｓの測定
［２−（２，６−ジクロロ−フェニルアミノ）−フェニル］―酢酸  ４−チオカルバモイルーフェニルエステル（化合物ＸＶＩＩ）およびＴＢＺ誘発による生体外Ｈ２Ｓ放出を比較するため、単離した肝臓１００〜１５０ｍｇを氷冷したＴ−ＰＥＲタンパク質抽出試薬１ｍＬ中でホモジナイズした。分析反応混合液２ｍＬをシールされた３−ネック・リアクター中の氷冷した０．１Ｎ  ＮａＯＨ  ２５０μＬに加えた。混合液には１００ｍＭリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ＝７．４）にＰＥＧを加えた中に１ｍＭの化合物ＸＶＩＩまたは１ｍＭのＴＢＺが溶解されていた。培養は１０％（ｗ／ｖ）肝臓ホモジネートおよび２ｍＭピリドキサル５‘−リン酸を加えた場合とそうでない場合にわけて行った。窒素が混合液をガス吹込管経由で絶え間なく通過した。リアクターを３７℃に保ち、１０％トリクロロ酢酸溶液１ｍＬを加えることによってＨ２Ｓ抽出を開始した。 （ｐＨ  １２．８で２Ｍ  ＫＯＨ、１Ｍサリチル酸、０．２２Ｍアスコルビン酸から成る）硫化物抗酸化緩衝（ｓｕｌｆｉｄｅ  ａｎｔｉ−ｏｘｉｄａｎｔ  ｂｕｆｆｅｒ：ＳＡＯＢ）液２ｍＬ中の冷却コネクタおよび泡立てによる別のリアクターでは、窒素流に硫酸が含まれていた。３０分後にＳＡＯＢ溶液を除去し、硫化物濃度を硫化物感受性の電極（モデル９６１６Ｓ２−／Ａｇ＋電極、Ｏｒｉｏｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、米国マサチューセッツ州Ｂｅｖｅｒｌｙ）で測定し、Ｈ２Ｓとして示した（Ｕｂｕｋａ、２００２；Ｋｈａｎら、１９８０）。ガラス管を氷浴から３７℃の温浴に移すことにより反応を開始させた。既述のように、窒素流がＳＡＯＢ  ２ｍＬを含んだ２番目のリアクター中の硫酸を運んだ。３７℃で９０分間培養後、５０％トリクロロ酢酸液１ｍＬを混合液に加え反応を停止させた。混合液中の残留Ｈ２Ｓは、さらに３０分間３７℃で培養することにより、窒素流によって除去された。ＳＡＯＢ溶液中の塩化物濃度を既述の硫化物感受性電極によって測定した（Ｕｂｕｋａ、２００２；Ｋｈａｎら、１９８０）。
【０１７２】
図１９に示すように、化合物ＸＶＩＩを緩衝液中で培養することにより、同等量のＴＢＺに比べ有意に多くのＨ２Ｓが放出された。同様に、肝臓ホモジネートで培養した場合、化合物ＸＶＩＩの方がＴＢＺよりも多くのＨ２Ｓを放出した。
【実施例２５】
【０１７３】
コハク酸  ２−｛２−［８−（２，２−ジメチル−ブチリルオキシ）−２，６−ジメチルー１，２，６，７，８，８ａ−ヘキサヒドローナフタレン−１−イル］−エチル｝−６−オキソ−テトラヒドロ−ピラン−４−イル  エステル  ４−チオカルバモイルーフェニルエステル（化合物  Ｉ）およびシンバスタチンがヒト血小板凝集に及ぼす作用（生体外）
既に詳述されているように（Ｍａ  Ｌ、Ｅｌｌｉｏｔｔ  ＳＮ、Ｃｉｒｉｎｏ  Ｇ、Ｂｕｒｅｔ  Ａ、Ｉｇｎａｒｒｏ  ＬＪ、Ｗａｌｌａｃｅ  ＪＬ．Ｐｌａｔｅｌｅｔｓ  ｍｏｄｕｌａｔｅ  ｇａｓｔｒｉｃ  ｕｌｃｅｒ  ｈｅａｌｉｎｇ  ｔｈｒｏｕｇｈ  ｒｅｌｅａｓｅ  ｏｆ  ｅｎｄｏｓｔａｔｉｎ  ａｎｄ  ＶＥＧＦ．Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９８：６４７０〜６４７５、「参考文献」参照）、多血小板血漿（ＰＲＰ）を作成した。ＰＲＰ中の血小板濃度をＴｙｒｏｄｅ緩衝液（ｐＨ７．４）で希釈し１ｘ  １０８／ｍＬに調整した。血小板４００μＬをガラスキュベットに入れ、Ｃｈｒｏｎｏｌｏｇ社血小板測定装置に挿入した。キュベットにアデノシン２リン酸（ＡＤＰ）を加えた時の凝集反応を５分間にわたってモニターした。まずＡＤＰに対する濃度反応曲線を作成し、次に最大凝集の７０〜８０％を生じるＡＤＰ濃度を用いてその後の試験を行った。ＰＲＰの懸濁液を、様々な濃度（３〜３０μＭ）のシンバスタチンまたは化合物  Ｉ、または賦形剤（メタノール）とともに３７℃で１０分間前培養を行った。次にＡＤＰに対する凝集反応を評価した。各薬剤の各濃度に対し、実験を４〜６回繰り返した。
【０１７４】
図２０は、シンバスタチンおよび化合物Ｉがヒト血小板のＡＤＰ誘発性凝集に及ぼす作用を示す。シンバスタチンは３０μＭの濃度でのみ血小板凝集を低下させ、一方化合物Ｉは３、１０、３０μＭの濃度で血小板凝集を有意に低下させた（星印は対応する賦形剤投与群に比べた血小板凝集の有意な低下を示す）。
【実施例２６】
【０１７５】
化合物Ｉおよびシンバスタチンがヒト血小板ｃＡＭＰに及ぼす作用（生体外）
前記のように、多血小板血漿（ＰＲＰ）を作成した。非選択的ホスホジエステラーゼ阻害剤ＩＢＭＸ（イソブチル−１−メチルキサンチン；０．５ｍＭ）が入ったガラス管にＰＲＰ  ４００μＬを加えた。２分後、賦形剤（メタノール）または各種濃度（３〜１００μＭ）のシンバスタチンまたは化合物Ｉをガラス管に加えた。陽性対照として、血小板の一部に既知のアデニル酸シクラーゼ刺激薬であるフォルスコリン（１０μＭ）を加えた。１０分後、ＰＲＰサンプルを９，０００ｇで２分間遠心分離にかけ、上澄液を廃棄した。得られた沈殿物を緩衝液中に再懸濁し、超音波で２分間分解し、特異的酵素免疫測定法を用いてｃＡＭＰ濃度を測定した（Ｃａｙｍａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．，米国ミシガン州Ａｎｎ  Ａｒｂｏｒ）。各薬剤の各濃度に対し、実験を４〜６回繰り返した。
【０１７６】
図２１は、シンバスタチンおよび化合物Ｉがヒト血小板ｃＡＭＰ濃度に及ぼす作用を示してる。点線はフォルスコリン（１０μＭ）を投与した血小板におけるｃＡＭＰ濃度を示す。シンバスタチンは最大濃度（１００μＭ）においてのみ血小板ｃＡＭＰを有意に上昇させたが、化合物Ｉは１０、３０、１００μＭの濃度で血小板ｃＡＭＰ濃度を有意に上昇させた。（星印は対応する賦形剤投与群との比較における血小板凝集の有意な低下を示している；ｐ<０．０５）。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７ａ】
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【図７ｂ】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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