(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
（１）図３（配列番号：７）の１５から１９３のアミノ酸残基のアミノ酸配列を含んでなるｈＩＬ-１Ｒａ１ポリペプチドをコードするＤＮＡ分子；（２）図１５（配列番号：１９）の２６から２０７のアミノ酸残基のアミノ酸配列を含んでなるｈＩＬ-１Ｒａ１ＬポリペプチドをコードするＤＮＡ分子；及び（３）（１）−（２）のＤＮＡ分子の何れかの相補鎖からなる群から選択される単離されたＤＮＡ分子。
【請求項２】
（１）図３（配列番号：７）の１５から１９３のアミノ酸残基のアミノ酸配列を含んでなるｈＩＬ-１Ｒａ１ポリペプチドをコードするＤＮＡ分子；及び（２）（１）のＤＮＡ分子の相補鎖からなる群から選択される請求項１に記載の単離されたＤＮＡ分子。
【請求項３】
（１）図１５（配列番号：１９）の２６から２０７のアミノ酸残基のアミノ酸配列を含んでなるｈＩＬ-１Ｒａ１ＬポリペプチドをコードするＤＮＡ分子；及び（２）（１）のＤＮＡ分子の相補鎖からなる群から選択される請求項１に記載の単離されたＤＮＡ分子。
【請求項４】
（１）図１５（配列番号：１９）の１から２０７のアミノ酸残基のアミノ酸配列を含んでなるｈＩＬ-１Ｒａ１ＬポリペプチドをコードするＤＮＡ分子；及び（２）（１）のＤＮＡ分子の相補鎖からなる群から選択される請求項３に記載の単離されたＤＮＡ分子。
【請求項５】
（１）ｈＩＬ-１Ｒａ１ポリペプチドをコードし、図３（配列番号：６）のセンス鎖の１４５から６８１のヌクレオチド位置の核酸配列を含んでなるＤＮＡ分子；（２）ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌポリペプチドをコードし、図１５（配列番号：１８）のセンス鎖の７９から６２４のヌクレオチド位置の核酸配列を含んでなるＤＮＡ分子；及び（３）（１）−（２）のＤＮＡ分子の何れかの相補鎖からなる群から選択される請求項１に記載の単離されたＤＮＡ分子。
【請求項６】
（１）ｈＩＬ-１Ｒａ１ポリペプチドをコードし、図３（配列番号：６）のセンス鎖の１４５から６８１のヌクレオチド位置の核酸配列を含んでなるＤＮＡ分子；及び（２）（１）のＤＮＡ分子の相補鎖からなる群から選択される請求項５に記載の単離されたＤＮＡ分子。
【請求項７】
（１）ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌポリペプチドをコードし、図１５（配列番号：１８）のセンス鎖の７９から６２４のヌクレオチド位置の核酸配列を含んでなるＤＮＡ分子；及び（２）（１）のＤＮＡ分子の相補鎖からなる群から選択される請求項５に記載の単離されたＤＮＡ分子。
【請求項８】
（１）ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌポリペプチドをコードし、図１５（配列番号：１８）のセンス鎖の４から６２４のヌクレオチド位置の核酸配列を含んでなるＤＮＡ分子；及び（２）（１）のＤＮＡ分子の相補鎖からなる群から選択される請求項７に記載の単離されたＤＮＡ分子。
【請求項９】
（１）図３（配列番号：６）のセンス鎖の１０３から６８１のヌクレオチド位置の核酸配列を含んでなるＤＮＡ分子；及び（２）（１）のＤＮＡ分子の相補鎖からなる群から選択される請求項６に記載の単離されたＤＮＡ分子。
【請求項１０】
（ａ）図３（配列番号：６）のセンス鎖の完全ＤＮＡ配列；又は（ｂ）（ａ）の相補鎖を含んでなる請求項６に記載の単離されたＤＮＡ分子。
【請求項１１】
（ａ）（１）ＡＴＣＣ寄託番号２０３５８８として寄託された微生物に含まれるベクターのｃＤＮＡ挿入物の最長のオープンリーディングフレームによりコードされる全体アミノ酸配列を含んでなるポリペプチド；及び（２）ＡＴＣＣ寄託番号２０３８４６として寄託された微生物に含まれるベクターのｃＤＮＡ挿入物の最長のオープンリーディングフレームによりコードされる全体アミノ酸配列、又は該配列の３４のＮ末端アミノ酸残基を除く全体アミノ酸配列を含んでなるポリペプチドからなる群から選択されるポリペプチドをコードするＤＮＡ分子；又は（ｂ）（ａ）のＤＮＡ分子の相補鎖を含んでなる単離された核酸分子。
【請求項１２】
請求項１に記載のＤＮＡ分子を含んでなるベクター。
【請求項１３】
ベクターを形質移入した宿主細胞に認識されるコントロール配列に作用可能に連結された請求項１２に記載のベクター。
【請求項１４】
請求項１２に記載のベクターを含んでなる宿主細胞。
【請求項１５】
（１）請求項１に記載のＤＮＡ分子を含んでなる宿主細胞を、該ＤＮＡ分子によりコードされるＩＬ-１ｌｐポリペプチドの発現に適した条件下で培養し、及び（２）細胞培養物から上記ＩＬ-１ｌｐポリペプチドを回収する工程を含んでなるＩＬ-１ｌｐポリペプチドを製造する方法。
【請求項１６】
請求項１に記載のＤＮＡ分子によりコードされる単離されたＩＬ-１ｌｐポリペプチド。
【請求項１７】
（１）図３（配列番号：７）の１５から１９３のアミノ酸残基を含んでなるｈＩＬ-１Ｒａ１ポリペプチド；及び（２）図１５（配列番号：１９）の２６から２０７のアミノ酸残基を含んでなるｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌポリペプチドからなる群から選択される単離されたＩＬ-１ｌｐポリペプチド。
【請求項１８】
図１５（配列番号：１９）の１から２０７のアミノ酸残基を含んでなるｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌポリペプチドである請求項１７に記載の単離されたＩＬ-１ｌｐポリペプチド。
【請求項１９】
請求項１１に記載の（ａ）のＤＮＡ分子によりコードされるポリペプチド。
【請求項２０】
異種アミノ酸配列にＣ末端又はＮ末端で融合したＩＬ-１ｌｐの天然アミノ酸配列を含んでなる請求項１７に記載のＩＬ-１ｌｐポリペプチド。
【請求項２１】
上記異種アミノ酸配列がエピトープタグ配列である請求項２０に記載のＩＬ-１ｌｐポリペプチド。
【請求項２２】
上記異種アミノ酸配列が免疫グロブリンのＦｃ領域である請求項２０に記載のＩＬ-１ｌｐポリペプチド。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
(発明の分野)
本発明は一般にインターロイキン−１（ＩＬ-１）又はインターロイキン−１レセプターアンタゴニスト（ＩＬ-１Ｒａ）と相同性を有する新規なＤＮＡの同定と単離、及びここでインターロイキン−１様ポリペプチド（「ＩＬ-１ｌｐ」）と命名した新規なポリペプチドの組換え生産に関する。
【０００２】
(発明の背景)
インターロイキン−１は炎症反応の初期に重要な役割を果たす二つのタンパク質（ＩＬ-１αとＩＬ-１β）を意味する（レビューのためには、Dinarello, Blood, 87: 2095-2147 (1996)とそこに含まれる参考文献を参照されたい）。そのタンパク質は双方とも、分泌時に切断されて生物活性な成熟カルボキシ末端１７ｋＤａ断片を生じる細胞内前駆体タンパク質として生成される。ＩＬ-１βの場合、この切断には、不活性な前駆体から活性な断片を放出するのに必要とされるＩＣＥとして知られた細胞内システインプロテアーゼが関与する。ＩＬ-１αの前駆体は活性である。
これら二種のタンパク質は、殆ど全ての細胞型に見出される細胞表面レセプターへ結合し、ある範囲の反応を単独もしくは他の分泌因子と協力して引き起こすことにより作用する。これらは、増殖（例えば繊維芽細胞、Ｔ細胞）アポトーシス（例えばＡ３７５メラノーマ細胞）への効果、サイトカイン誘導（例えばＴＮＦ、ＩＬ-１、ＩＬ-８）、レセプター活性化（例えばＥセレクチン）、エイコサノイド産生（例えばＰＧＥ２）及び分解系酵素の分泌（例えばコラゲナーゼ）に及んでいる。これらの効果を達成するために、ＩＬ-１はＮＦ−ＫＢ及びＡＰ−１のような転写制御因子を活性化させる。標的細胞に対するＩＬ-１作用の活性の幾つかは、例えばストレス活性化ＭＡＰキナーゼＪＮＫ／ＳＡＰＫ及びｐ３８のような細胞性ストレスも伴うキナーゼカスケードの活性化を介して媒介されると考えられる。
細胞内シグナル又は生物学的応答を伝達しないがＩＬ-１レセプターに結合することによってＩＬ-１αとＩＬ-１βの自然のアンタゴニストとして作用するＩＬ-１ファミリーの第３のメンバーが引き続いて発見された。該タンパク質はＩＬ-１Ｒａ（ＩＬ-１レセプターアンタゴニスト）又はＩＲＡＰ（ＩＬ-１レセプターアンタゴニストタンパク質）と呼ばれている。ＩＬ-１Ｒａの少なくとも３つの選択的スプライス型が存在する：一つは、分泌性ＩＬ-１Ｒａ（「ｓＩＬ-１Ｒａ」）としても知られる分泌タンパク質をコードし（Eisenberg等, Nature, 343: 341-346 (1990)に記載されている）、他の二つは細胞内タンパク質をコードする。ＩＬ-１α、ＩＬ-１β及びＩＬ-１Ｒａは互いにおよそ２５−３０％の配列同一性を示し、内部の３重反復構造モチーフを持つ、βバレルに折り畳まれた１２のβストランドからなる類似の三次元構造を共有している。
【０００３】
３つの既知のＩＬ-１レセプターサブユニットが存在する。活性なレセプター複合体はＩ型レセプターとＩＬ-１アクセサリータンパク質（ＩＬ-１ＲＡｃＰ）からなる。Ｉ型レセプターは、ＩＬ-１α、ＩＬ-１β及びＩＬ-１Ｒａリガンドの結合性の原因であり、ＩＬ-１ＲＡｃＰが存在しない場合でも結合できる。しかし、シグナル伝達にはＩＬ-１α又はＩＬ-１βのＩＬ-１ＲＡｃＰとの相互作用が必要となる。ＩＬ-１ＲａはＩＬ-１ＲＡｃＰとは相互作用せず、よってシグナル伝達を誘導できない。第３のレセプターサブユニットであるＩＩ型レセプターは、ＩＬ-１αとＩＬ-１βに結合するが、細胞内ドメインの欠落のためにシグナルを伝達できない。その代わりに、ＩＩ型レセプターはその膜結合型でデコイとして、もしくはプロセシングを受けた分泌型でＩＬ-１アンタゴニストとして作用し、よってＩＬ-１活性を阻害する。ＩＩ型レセプターはＩＬ-１Ｒａに弱く結合する。
ＩＬ-１Ｒａ、Ｉ型ＩＬ-１レセプター細胞外ドメインに由来する可溶型ＩＬ-１Ｒ、ＩＬ-１α又はＩＬ-１βに対する抗体、及びこれらの遺伝子についてのトランスジェニックノックアウトマウスを使用した多くの研究が、ＩＬ-１が多くの病態生理学において役割を担っていることを示している（レビューのためには、Dinarello, Blood, 87: 2095-2147 (1996)を参照されたい）。例えば、ＩＬ-１Ｒａは、敗血症ショック、関節リウマチ、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、脳卒中、心臓性虚血、乾癬、炎症性腸疾患、及び喘息の動物モデルにおいて有効であると示されている。また、ＩＬ-１Ｒａは関節リウマチとＧＶＨＤのための臨床実験において効能が実証されており、炎症性腸疾患、喘息及び乾癬に対する臨床実験においても同様である。
更に最近では、インターロイキン−１８（ＩＬ-１８）がＩＬ-１ファミリーに入れられた（レビューのためには、Dinarello等, J. Leukocyte Biol., 63: 658-664 (1998)を参照されたい）。ＩＬ-１８はＩＬ-１α及びＩＬ-１βのβプリーツバレル様型を共有している。また、ＩＬ-１８はＩＬ-１Ｒ関連タンパク質（ＩＬ-１Ｒｒｐ）としてかつては知られていた（今はＩＬ-１８レセプター（ＩＬ-１８Ｒ）として知られている）ＩＬ-１レセプターファミリーメンバーの天然のリガンドである。ＩＬ-１８は、リンパ球とＮＫ細胞上に構成型ＩＬ-１８レセプターをトリガーし、活性化された細胞においてＴＮＦ産生を誘発することにより末梢血単核球（ＰＢＭＣｓ）の混合集団において炎症性サイトカインカスケードを開始することが知られている。ＴＮＦは続いてＣＤ１４＋細胞においてＩＬ-１及びＩＬ-８の産生を刺激する。ＴＮＦ、ＩＬ-１、及びＣ−ＣとＣ−Ｘ−Ｃの双方のケモカインを誘発するその能力のため、またＩＬ-１８がＦａｓリガンド並びに核因子κＢ（ＮＦ−κＢ）の核転移を誘発するので、ＩＬ-１８は全身性及び局所性炎症に対する可能な貢献者として他の炎症誘発性サイトカインと同格である。
【０００４】
(発明の概要)
新規なポリペプチドをコードするインターロイキン−１と相同性を持つｃＤＮＡクローンのファミリー（ＤＮＡ８５０６６、ＤＮＡ９６７８６、ＤＮＡ９４６１８、ＤＮＡ１０２０４３、ＤＮＡ１１４８７６、ＤＮＡ１０２０４４、ＤＮＡ９２９２９、ＤＮＡ９６７８７、及びＤＮＡ９２５０５）が同定された。新規なポリペプチドとその変異体は本出願では集合的に「インターロイキン−１様ポリペプチド」又は「ＩＬ-１ｌｐ」と命名し、ここで更に定義される。従って、本発明の一側面は単離されたＩＬ-１ｌｐポリペプチドである。
他の実施態様では、本発明はＩＬ-１ｌｐポリペプチドをコードする単離された核酸分子を提供する。
他の実施態様では、本発明は、ＩＬ-１ｌｐポリペプチドをコードする異種核酸配列を含んでなる宿主細胞を、ＩＬ-１ｌｐポリペプチドが発現される条件下で培養し、宿主細胞からＩＬ-１ｌｐポリペプチドを回収することを含んでなるＩＬ-１ｌｐを生産する方法を提供する。
他の実施態様では、本発明は抗ＩＬ-１ｌｐ抗体を提供する。
他の実施態様では、本発明は、異種ポリペプチド又はアミノ酸配列に融合したＩＬ-１ｌｐポリペプチドを含んでなるキメラ分子を提供する。このようなキメラ分子の例は、エピトープタグ配列又は免疫グロブリンのＦｃ領域に融合したＩＬ-１ｌｐポリペプチドを含む。
他の実施態様では、本発明はＩＬ-１ｌｐポリペプチドに特異的に結合する抗体を提供する。場合によっては、抗体はモノクローナル抗体である。
更に他の実施態様では、本発明は天然ＩＬ-１ｌｐポリペプチドのアゴニストとアンタゴニストに関する。特定の実施態様では、アゴニスト又はアンタゴニストは抗ＩＬ-１ｌｐ抗体である。
更なる実施態様では、本発明は、天然のＩＬ-１ｌｐポリペプチドを候補分子に接触させ、上記ポリペプチドにより仲介される生物活性を監視することによって、天然のＩＬ-１ｌｐポリペプチドのアゴニスト又はアンタゴニストを同定する方法に関する。
また更なる実施態様では、本発明は、製薬的に許容可能な担体と組み合わせて、ＩＬ-１ｌｐポリペプチド、又は上で定義したアゴニスト又はアンタゴニストを含有してなる組成物に関する。
【０００５】
（好適な実施態様の詳細な説明）
Ｉ．定義：
「インターロイキン-１-様ポリペプチド」、「インターロイキン-１-様タンパク質」、「ＩＬ-１１ｐ」、「ＩＬ-１１ｐポリペプチド」、及び「ＩＬ-１１ｐタンパク質」という用語は、任意の天然配列ＩＬ-１１ｐを包含し、及びさらにＩＬ-１１ｐ変異体（ここでさらに定義される）を含む。ＩＬ-１１ｐは例えばヒト組織型又はその他の供給源等様々な供給源から単離してもよく、組換え及び／又は合成の方法から用意してもよい。
「天然配列ＩＬ-１１ｐ」は天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ１、ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌ、ｈＩＬ-１Ｒａ２、ｈＩＬ-１Ｒａ３，又はｍＩＬ-１Ｒａ３，の様な同じアミノ酸配列を有するポリペプチド含む（ここでさらに定義される）。該天然配列ＩＬ-１１ｐは天然由来のものから単離することができるし、組換え及び／又は合成の方法によっても生産されうる。「天然配列ＩＬ-１１ｐ」という用語は、特に自然に生じる切断又は分泌形態（例えば加工した、成熟した配列）及び自然に生じるＩＬ-１１ｐの対立遺伝子変異体を含む。
「自然に生じるアミノ酸配列」及び「天然アミノ酸配列」という用語は自然に存在するポリペプチドに見られる、つまり自然に発生するポリペプチド中に存在する任意のアミノ酸配列を意味する。
「非自然に生じるアミノ酸配列」及び「非天然アミノ酸配列」という用語は自然に存在するポリペプチドに見ることのない、つまり自然に発生するポリペプチド中には存在しない任意のアミノ酸配列を意味する。
「ＩＬ-１１ｐ変異体」はｈＩＬ-１Ｒａ１、ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌ、ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖ、ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｓ、ｈＩＬ-１Ｒａ２、ＨＩＬ-１Ｒａ３，又はｍＩＬ-１Ｒａ３の変異体を含む任意のポリペプチドと定義される（ここでさらに定義される）。
【０００６】
ヒトインターロイキン-１レセプターアンタゴニスト類似体１（「ｈＩＬ-１Ｒａ１」）、ｈＩＬ-１Ｒａ１ポリペプチド、及びｈＩＬ-１Ｒａ１タンパク質は任意の天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ１又は変異体ｈＩＬ-１Ｒａ１と定義される。
「天然配列ｈＩＬ-Ｒａ１」は：（１）図２（配列番号：５）のアミノ酸残基３７又は約３７から６３又は約６３のアミノ酸配列；（２）図２（配列番号：５）のアミノ酸残基３７又は約３７から２０３又は約２０３のアミノ酸配列；（３）図３（配列番号：７）のアミノ酸残基１５又は約１５から５３又は約５３のアミノ酸配列；（４）図３（配列番号：７）のアミノ酸残基１５又は約１５から１９３又は約１９３のアミノ酸配列；（５）（１）又は（２）又は（３）又は（４）のアミノ酸配列を含むポリペプチドの任意の自然に生じる切断又は分泌型又は任意の自然に生じる対立遺伝子変異体のアミノ酸配列よりなる群より選ばれる自然に生じるアミノ酸配列を含むポリペプチドを意味する。本発明の一実施形態では、天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ１は図２（配列番号：５）のアミノ酸３７又は約３７から２０３又は約２０３、又は図３（配列番号：７）のアミノ酸１５又は約１５から１９３又は約１９３を含んでなる。
「ｈＩＬ-１Ｒａ１変異体」は任意のｈＩＬ-１Ｒａ１ Ｎ−末端変異体又はｈＩＬ-１Ｒａ１全配列変異体と定義される（ここでさらに定義される）。
【０００７】
「ｈＩＬ-１Ｒａ１ Ｎ−末端変異体」は天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ１以外の任意のｈＩＬ-１Ｒａ１を意味し、その変異体は、上で定義されたように：（１）図２（配列番号：５）のアミノ酸残基３７又は約３７から６３又は約６３のアミノ酸配列；及び（２）図３（配列番号：７）のアミノ酸残基１５又は約１５から５３又は約５３のアミノ酸配列：よりなる群から選択されたアミノ酸配列と少なくとも約８０％のアミノ酸配列同一性を有する活性ｈＩＬ-１Ｒａ１である。そのようなｈＩＬ-１Ｒａ１ Ｎ−末端変異体は、例えば、図２（配列番号：５）のアミノ酸残基３７又は約３７から６３又は約６３の配列、又は図３（配列番号：７）のアミノ酸残基１５又は約１５から５３又は約５３の配列に、１又は複数のアミノ酸残基が内部で又はＮ−又はＣ−末端で加えられ、又は減らされているｈＩＬ-１Ｒａ１ポリペプチドを含む。通常は、あるｈＩＬ-１Ｒａ１ Ｎ−末端変異体は、（１）図２（配列番号：５）のアミノ酸残基３７又は約３７から６３又は約６３のアミノ酸配列；及び（２）図３（配列番号：７）のアミノ酸残基１５又は約１５から５３又は約５３のアミノ酸配列からなる群より選ばれたアミノ酸配列と少なくとも約８０％のアミノ酸配列同一性、又は少なくとも８５％のアミノ酸配列同一性、又は少なくとも９０％のアミノ酸配列同一性、又は少なくとも９５％のアミノ酸配列同一性を有しうる。
「ｈＩＬ-１Ｒａ１全配列変異体」は天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ１以外の任意のｈＩＬ-１Ｒａ１を意味し、その変異体は、例えばＩＬ-１８Ｒ結合能力のような天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ１の少なくとも１つの生物的活性を保持し、そしてその変異体は、（１）図２（配列番号：５）のアミノ酸残基３７又は約３７から２０３又は約２０３のアミノ酸配列；及び（２）図３（配列番号：７）のアミノ酸残基１５又は約１５から１９３又は約１９３のアミノ酸配列からなる群より選ばれたアミノ酸配列と少なくとも約８０％のアミノ酸配列同一性、又は少なくとも約８５％のアミノ酸配列同一性、又は少なくとも約９０％のアミノ酸配同一性、又は少なくとも約９５％のアミノ酸配列同一性を持つ。該ｈＩＬ-１Ｒａ１全配列変異は、例えば、図２（配列番号：５）のアミノ酸残基３７又は約３７から２０３又は約２０３の配列、又は図３（配列番号：７）のアミノ酸残基１５又は約１５から１９３又は約１９３の配列で、１又は複数のアミノ酸残基が内部に又はＮ−又はＣ−末端に加えられ、又は減らされているｈＩＬ-１Ｒａ１ポリペプチドを含む。
【０００８】
ヒトインターロイキン-１レセプターアンタゴニスト類似体１ロング（「ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌ」）、ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌポリペプチド、及びｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌタンパク質は任意の天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌ又はｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌ変異体と定義される（ここでさらに定義される）。
「天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌ」は：（１）図１５（配列番号：１９）のアミノ酸残基２６又は約２６から４４又は約４４のアミノ酸配列；（２）図１５（配列番号：１９）のアミノ酸残基２６又は約２６から２０７又は約２０７のアミノ酸配列；及び（３）（１）又は（２）のアミノ酸配列を含むポリペプチドの任意の自然発生切断又は分泌型又は任意の自然発生対立遺伝子変異体のアミノ酸配列よりなる群より選ばれる自然に生じるアミノ酸配列を含むポリペプチドを意味する。本発明の一実施形態では、天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌは図１５（配列番号：１９）のアミノ酸２６又は約２６から２０７又は約２０７を含んでなる。
「ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌ変異体」は任意のｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌ Ｎ−末端変異体又はｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌ全配列変異体又はｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌ融合変異体と定義される（ここでさらに定義される）。
「ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌ Ｎ−末端変異体」は天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌ以外の任意のｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌを意味し、その変異体は、下に定義されるように、図１５（配列番号：１９）のアミノ酸残基２６又は約２６から４４又は約４４のアミノ酸配列と少なくとも約８０％のアミノ酸配列同一性を有する活性ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌである。そのようなｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌ Ｎ−末端変異体は、例えば、図１５（配列番号：１９）のアミノ酸残基２６又は約２６から４４又は約４４の配列に、１又は複数のアミノ酸残基が内部に又はＮ−又はＣ−末端で加えられ、又は減らされているｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌポリペプチドを含む。通常は、あるｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌ Ｎ−末端変異体は、図１５（配列番号：１９）のアミノ酸残基２６又は約２６から４４又は約４４のアミノ酸配列と少なくとも約８０％のアミノ酸配列同一性、又は少なくとも８５％のアミノ酸配列同一性、又は少なくとも９０％のアミノ酸配列同一性、又は少なくとも９５％のアミノ酸配列同一性を有しうる。
【０００９】
「ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌ全配列変異体」は天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌ以外の任意のｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌを意味し、その変異体は、例えばＩＬ-１８Ｒ結合能力のような天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌの少なくとも１つの生物的活性を保持し、そしてその変異体は、図１５（配列番号：１９）のアミノ酸残基２６又は約２６から２０７又は約２０７のアミノ酸配列と少なくとも約８０％のアミノ酸配列同一性、又は少なくとも約８５％のアミノ酸配列同一性、又は少なくとも約９０％のアミノ酸配同一性、又は少なくとも約９５％のアミノ酸配列同一性を持つ。そのようなｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌ全配列変異は、例えば、図１５（配列番号：１９）のアミノ酸残基２６又は約２６から２０７又は約２０７の配列で、１又は複数のアミノ酸残基が内部に又はＮ−又はＣ−末端に加えられ、又は減らされているｈＩＬ-Ｒａ１Ｌポリペプチドを含む。
「ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌ融合変異体」は天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ１ＬがそのＮ−又はＣ−末端でヘテロアミノ酸又はアミノ酸配列を融合している構成を持つキメラｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌを意味する。一実施様態ではｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌ融合変異体ポリペプチドはそのＮ−末端又はＣ−末端でヘテロアミノ酸又はアミノ酸配列と融合した天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌから成り、そのヘテロアミノ酸又はアミノ酸配列は天然配列と異種であり、つまりその結果物キメラ配列は非天然に存在している。他の実施様態では、ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌ融合変異体は、図１５（配列番号：１９）のアミノ酸２６又は約２６から２０７又は約２０７のアミノ酸配列、又は図１５（配列番号：１９）のアミノ酸残基１又は約１から２０７又は約２０７のアミノ酸配列からなり、Ｎ−末端又はＣ−末端で非天然に発生する融合タンパク質を形成するヘテロアミノ酸又はアミノ酸配列と融合されている。そのようなｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌ融合変異体は、例えばヘテロ分泌リーダー配列が図１５（配列番号：１９）のアミノ酸残基２６又は約２６から２０７又は約２０７、又は図１５（配列番号：１９）のアミノ酸残基１又は約１から２０７又は約２０７の配列のＮ−末端に融合されるｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌポリペプチドを含む。
【００１０】
ヒトインターロイキン-１レセプターアンタゴニスト類似体１ロング対立遺伝子変異体（「ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖ」）、ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖポリペプチド、及びｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖタンパク質は任意の天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖ又はｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖ変異体と定義される（ここでさらに定義される）。
「天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖ」は：（１）図１９（配列番号：２５）のアミノ酸残基４６又は約４６から５５又は約５５のアミノ酸配列；（２）図１９（配列番号：２５）のアミノ酸残基４６又は約４６から２１８又は約２１８のアミノ酸配列；（３）図１９（配列番号：２５）のアミノ酸残基３７又は約３７から２１８又は約２１８のアミノ酸配列；（４）図１９（配列番号：２５）のアミノ酸残基１２又は約１２から２１８又は約２１８のアミノ酸配列；（５）（１）又は（２）又は（３）又は（４）のアミノ酸配列を含むポリペプチドの任意の自然に生じる切断又は分泌型又は任意の自然に生じる対立遺伝子変異体のアミノ酸配列よりなる群より選ばれる自然に生じるアミノ酸配列を含むポリペプチドを意味する。本発明の一実施形態では、天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖは図１９（配列番号：２５）のアミノ酸４６又は約４６から２１８又は約２１８、又は図１９（配列番号：２５）のアミノ酸３７又は約３７から２１８又は約２１８、又は図１９（配列番号：２５）のアミノ酸１２又は約１２から２１８又は約２１８、又は図１９（配列番号：２５）のアミノ酸１又は約１から２１８又は約２１８を含んでなる。
【００１１】
「ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖ変異体」は任意のｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖ Ｎ−末端変異体又はｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖ全配列変異体又はｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖ融合変異体と定義される（ここでさらに定義される）。
「ｈＩＬ-Ｒａ１Ｖ Ｎ−末端変異体」は天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖ以外の任意のｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖを意味し、その変異体は、下で定義されるように、図１９（配列番号：２５）のアミノ酸残基４６又は約４６から８９又は約８９のアミノ酸配列と少なくとも約８０％のアミノ酸配列同一性を有する活性ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖである。該ｈＩＬ-Ｒａ１Ｖ Ｎ−末端変異体は、例えば、図１９（配列番号：２５）のアミノ酸残基４６又は約４６から８９又は約８９の配列に、１又は複数のアミノ酸残基が内部に又はＮ−又はＣ−末端で加えられ、又は減らされているｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖポリペプチドを含む。通常は、あるｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖ Ｎ−末端変異体は、図１９（配列番号：２５）のアミノ酸残基４６又は約４６から８９又は約８９の配列と少なくとも約８０％のアミノ酸配列同一性、又は少なくとも８５％のアミノ酸配列同一性、又は少なくとも９０％のアミノ酸配列同一性、又は少なくとも９５％のアミノ酸配列同一性を有しうる。
「ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖ全配列変異体」は天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖ以外の任意のｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖを意味し、その変異体は、例えばＩＬ-１８Ｒ結合能力のような天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖの少なくとも１つの生物的活性を保持し、そしてその変異体は、図１９（配列番号：２５）のアミノ酸残基４６又は約４６から２１８又は約２１８の配列と少なくとも約８０％のアミノ酸配列同一性、又は少なくとも約８５％のアミノ酸配列同一性、又は少なくとも約９０％のアミノ酸配同一性、又は少なくとも約９５％のアミノ酸配列同一性を持つ。
【００１２】
「ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖ融合変異体」は天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ１ＶがそのＮ−又はＣ−末端でヘテロアミノ酸又はアミノ酸配列を融合している構成を持つキメラｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖを意味する。一実施様態ではｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖ融合変異体ポリペプチドはそのＮ−末端又はＣ−末端でヘテロアミノ酸又はアミノ酸配列と融合した天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖから成り、そのヘテロアミノ酸又はアミノ酸配列は天然配列と異種であり、つまりその結果物キメラ配列は非天然に存在している。他の実施様態では、ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖ融合変異体は、図１９（配列番号：２５）のアミノ酸４６又は約４６から２１８又は約２１８のアミノ酸配列、又は図１９（配列番号：２５）のアミノ酸３７又は約３７から２１８又は約２１８のアミノ酸配列、又は図１９（配列番号：２５）のアミノ酸残基１２又は約１２から２１８又は約２１８のアミノ酸配列、又は図１９（配列番号：２５）のアミノ酸残基１又は約１から２１８又は約２１８のアミノ酸配列からなり、Ｎ−末端又はＣ−末端で非天然で発生する融合タンパク質を形成するヘテロアミノ酸配列と融合されている。該ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖ融合変異体は、例えば、ヘテロ分泌リーダー配列が図１９（配列番号：２５）のアミノ酸残基４６又は約４６から２１８又は約２１８、又は図１９（配列番号：２５）のアミノ酸残基３７又は約３７から２１８又は約２１８、又は図１９（配列番号：２５）のアミノ酸残基１２又は約１２から２１８又は約２１８、又は図１９（配列番号：２５）のアミノ酸残基１又は約１から２１８又は約２１８の配列のＮ−末端に融合されるｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖポリペプチドを含む。
【００１３】
ヒトインターロイキン-１レセプターアンタゴニスト類似体１ショート（「ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｓ」）、ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｓポリペプチド、及びｈＩＬ-１Ｒａ１Ｓタンパク質は任意の天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｓ又はｈＩＬ-１Ｒａ１Ｓ変異体と定義される（ここでさらに定義される）。
「天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｓ」は：（１）図１６（配列番号：２１）のアミノ酸残基１又は約１から３８又は約３８のアミノ酸配列；（２）図１６（配列番号：２１）のアミノ酸残基２６又は約２６から１６７又は約１６７のアミノ酸配列；（３）図１６（配列番号：２１）のアミノ酸残基３９又は約３９から１６７又は約１６７のアミノ酸配列；（４）図１６（配列番号：２１）のアミノ酸残基４７又は約４７から１６７又は約１６７のアミノ酸配列；（５）（１）又は（２）又は（３）又は（４）のアミノ酸配列を含むポリペプチドの任意の自然に生じる切断又は分泌型又は任意の自然に生じる対立遺伝子変異体のアミノ酸配列よりなる群より選ばれる自然に生じるアミノ酸配列を含むポリペプチドを意味する。本発明の一実施形態では、天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｓは図１６（配列番号：２１）のアミノ酸２６又は約２６から１６７又は約１６７、又は図１６（配列番号：２１）のアミノ酸１又は約１から１６７又は約１６７を含んでなる。他の実施様態では、天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｓは図１６（配列番号：２１）のアミノ酸４７又は約４７から１６７又は約１６７、又は図１６（配列番号：２１）のアミノ酸３９又は約３９から１６７又は約１６７よりなる。
【００１４】
「ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｓ融合変異体」及び「ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｓ変異体」は天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ１ＳがそのＮ−末端又はＣ−末端でヘテロアミノ酸又はアミノ酸配列を融合している構成を持つキメラｈＩＬ-１Ｒａ１Ｓを意味する。一実施様態ではｈＩＬ-１Ｒａ１Ｓ融合変異体ポリペプチドはそのＮ−末端又はＣ−末端でヘテロアミノ酸又はアミノ酸配列と融合した天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｓから成り、そのヘテロアミノ酸又はアミノ酸配列は天然配列と異種であり、つまりその結果物キメラ配列は非天然に存在している。他の実施様態では、ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｓ融合変異体は、図１６（配列番号：２１）のアミノ酸４７又は約４７から１６７又は約１６７のアミノ酸配列、又は図１６（配列番号：２１）のアミノ酸残基３９又は約３９から１６７又は約１６７のアミノ酸配列からなり、Ｎ−末端又はＣ−末端で非天然で発生する融合タンパク質を形成するヘテロアミノ酸又はアミノ酸配列と融合されている。該ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｓ融合変異体は、例えば、ヘテロ分泌リーダー配列が図１６（配列番号：２１）のアミノ酸残基４７又は約４７から１６７又は約１６７、又は図１６（配列番号：２１）のアミノ酸残基３９又は約３９から１６７又は約１６７の配列のＮ−末端に融合されるｈＩＬ-１Ｒａ１Ｓポリペプチドを含む。
【００１５】
ヒトインターロイキン-１レセプターアンタゴニスト類似体２（「ｈＩＬ-１Ｒａ２」）、ｈＩＬ-１Ｒａ２ポリペプチド、及びｈＩＬ-１Ｒａ２タンパク質は任意の天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ２又はｈＩＬ-１Ｒａ２融合変異体と定義される（ここでさらに定義される）。
「天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ２」は（１）図５（配列番号：１０）のアミノ酸残基１又は約１から１３４又は約１３４のアミノ酸配列又は（２）（１）のポリペプチドの自然に生じる切断又は分泌型よりなるポリペプチドを意味する。本発明の一実施形態では、天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ２は図５（配列番号：１０）のアミノ酸２７又は約２７から１３４又は約１３４、又は図５（配列番号：１０）のアミノ酸１又は約１から１３４又は約１３４からなる。
「ｈＩＬ-１Ｒａ２融合変異体」及び「ｈＩＬ-１Ｒａ２変異体」は天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ２がそのＮ−末端又はＣ−末端でヘテロアミノ酸又はアミノ酸配列を融合している構成を持つキメラｈＩＬ-１Ｒａ２を意味する。一実施様態ではｈＩＬ-１Ｒａ２融合変異体ポリペプチドはそのＮ−末端又はＣ−末端でヘテロアミノ酸又はアミノ酸配列と融合した天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ２から成り、そのヘテロアミノ酸又はアミノ酸配列は天然配列と異種であり、つまりその結果物キメラ配列は非天然に存在している。他の実施様態では、ｈＩＬ-１Ｒａ２変異体は、図５（配列番号：１０）のアミノ酸２７又は約２７から１３４又は約１３４のアミノ酸配列、又は図５（配列番号：１０）のアミノ酸残基１又は約１から１３４又は約１３４のアミノ酸配列からなり、Ｎ−末端又はＣ−末端で非天然で発生する融合タンパク質を形成するヘテロアミノ酸又はアミノ酸配列と融合されている。該ｈＩＬ-１Ｒａ２融合変異体は、例えば、ヘテロ分泌リーダー配列が図５（配列番号：１０）のアミノ酸残基２７又は約２７から１３４又は約１３４、又は図５（配列番号：１０）のアミノ酸残基１又は約１から１３４又は約１３４の配列のＮ−末端に融合されるｈＩＬ-１Ｒａ２ポリペプチドを含む。
【００１６】
ヒトインターロイキン-１レセプターアンタゴニスト類似体３（「ｈＩＬ-１Ｒａ３」）、ｈＩＬ-１Ｒａ３ポリペプチド、及びｈＩＬ-１Ｒａ３タンパク質は任意の天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ３又は変異体ｈＩＬ-１Ｒａ３と定義される（ここでさらに定義される）。
「天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ３」は：（１）図７（配列番号：１３）のアミノ酸残基９５又は約９５から１３４又は約１３４のアミノ酸配列；（２）図７（配列番号：１３）のアミノ酸残基３４又は約３４から１５５又は約１５５のアミノ酸配列；及び（３）（１）又は（２）のアミノ酸配列を含むポリペプチドの任意の自然発生切断又は分泌型又は任意の自然発生対立遺伝子変異体のアミノ酸配列よりなる群より選ばれる自然に生じるアミノ酸配列を含むポリペプチドを意味する。本発明の一実施形態では、天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ３は図７（配列番号：１３）のアミノ酸２又は約２から１５５又は約１５５を含んでなる。
「ｈＩＬ-１Ｒａ３変異体」は任意のｈＩＬ-１Ｒａ３ Ｃ−末端変異体又はｈＩＬ-１Ｒａ３全配列変異体と定義される（ここでさらに定義される）。
「ｈＩＬ-１Ｒａ３ Ｃ−末端変異体」は天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ３以外の任意のｈＩＬ-１Ｒａ３を意味し、その変異体は、上で定義されたように、図７（配列番号：１３）のアミノ酸残基９５又は約９５から１３４又は約１３４のアミノ酸配列と少なくとも約８０％のアミノ酸配列同一性を有する活性ｈＩＬ-１Ｒａ３である。該ｈＩＬ-１Ｒａ３ Ｃ−末端変異体は、例えば、図７（配列番号：１３）のアミノ酸残基９５又は約９５から１３４又は約１３４の配列又は図７（配列番号：１３）のアミノ酸残基８０又は約８０から１５５又は約１５５の配列に、１又は複数のアミノ酸残基が内部に又はＮ−又はＣ−末端で加えられ、又は減らされているｈＩＬ-１Ｒａ３ポリペプチドを含む。通常は、あるｈＩＬ-１Ｒａ３ Ｃ−末端変異体は、図７（配列番号：１３）のアミノ酸残基９５又は約９５から１３４又は約１３４のアミノ酸配列又は図７（配列番号：１３）のアミノ酸残基８０又は約８０から１５５又は約１５５のアミノ酸配列と少なくとも約８０％のアミノ酸配列同一性、又は少なくとも８５％のアミノ酸配列同一性、又は少なくとも９０％のアミノ酸配列同一性、又は少なくとも９５％のアミノ酸配列同一性を有しうる。
【００１７】
「ｈＩＬ-１Ｒａ３全配列変異体」は天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ３以外の任意のｈＩＬ-１Ｒａ３を意味し、その変異体は、例えばＩＬ-１８Ｒ結合能力のような天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ３の少なくとも１つの生物的活性を保持し、そしてその変異体は、図７（配列番号：１３）のアミノ酸残基３４又は約３４から１５５又は約１５５のアミノ酸配列又は図７（配列番号：１３）のアミノ酸残基２又は約２から１５５又は約１５５のアミノ酸配列と少なくとも約８０％のアミノ酸配列同一性、又は少なくとも約８５％のアミノ酸配列同一性、又は少なくとも約９０％のアミノ酸配同一性、又は少なくとも約９５％のアミノ酸配列同一性を持つ。該ｈＩＬ-１Ｒａ３全配列変異は、例えば、図７（配列番号：１３）のアミノ酸残基３４又は約３４から１５５又は約１５５の配列又は図７（配列番号：１３）のアミノ酸残基２又は約２から１５５又は約１５５のアミノ酸配列に、１又は複数のアミノ酸残基が内部に又はＮ−又はＣ−末端で加えられ、又は減らされているｈＩＬ-Ｒａ１Ｌポリペプチドを含む。
【００１８】
マウスインターロイキン-１レセプターアンタゴニスト類似体３（「ｍＩＬ-１Ｒａ３」）、ｍＩＬ-１Ｒａ３ポリペプチド、及びｍＩＬ-１Ｒａ３タンパク質は任意の天然配列ｍＩＬ-１Ｒａ３又は変異体ｍＩＬ-１Ｒａ３と定義される。
「天然配列ｍＩＬ-１Ｒａ３」は：（１）図９（配列番号：１６）のアミノ酸残基９５又は約９５から１３４又は約１３４のアミノ酸配列；（２）図９（配列番号：１６）のアミノ酸残基３４又は約３４から１５５又は約１５５のアミノ酸配列；及び（３）（１）又は（２）のアミノ酸配列を含むポリペプチドの任意の自然発生切断又は分泌型又は任意の自然発生対立遺伝子変異体のアミノ酸配列よりなる群より選ばれる自然に生じるアミノ酸配列を含むポリペプチドを意味する。本発明の一実施形態では、天然配列ｍＩＬ-１Ｒａ３は図９（配列番号：１６）のアミノ酸３４又は約３４から１５５又は約１５５を含んでなる。
「ｍＩＬ-１Ｒａ３変異体」は任意のｍＩＬ-１Ｒａ３ Ｃ−末端変異体又はｍＩＬ-１Ｒａ３全配列変異体と定義される（ここでさらに定義される）。
「ｍＩＬ-１Ｒａ３ Ｃ−末端変異体」は天然配列ｍＩＬ-１Ｒａ３以外の任意のｍＩＬ-１Ｒａ３を意味し、その変異体は、上で定義されたように、図９（配列番号：１６）のアミノ酸残基９５又は約９５から１３４又は約１３４のアミノ酸配列と少なくとも約８０％のアミノ酸配列同一性を有する活性ｍＩＬ-１Ｒａ３である。該ｍＩＬ-１Ｒａ３ Ｃ−末端変異体は、例えば、図９（配列番号：１６）のアミノ酸残基９５又は約９５から１３４又は約１３４の配列に、１又は複数のアミノ酸残基が内部に又はＮ−又はＣ−末端で加えられ、又は減らされているｍＩＬ-１Ｒａ３ポリペプチドを含む。通常は、あるｍＩＬ-１Ｒａ３ Ｃ−末端変異体は、図９（配列番号：１６）のアミノ酸９５から１３４のアミノ酸配列と少なくとも約８０％のアミノ酸配列同一性、又は少なくとも８５％のアミノ酸配列同一性、又は少なくとも９０％のアミノ酸配列同一性、又は少なくとも９５％のアミノ酸配列同一性を有しうる。
【００１９】
「ｍＩＬ-１Ｒａ３全配列変異体」は天然配列ｍＩＬ-１Ｒａ３以外の任意のｍＩＬ-１Ｒａ３を意味し、その変異体は、例えばＩＬ-１Ｒ結合能力のような天然配列ｍＩＬ-１Ｒａ３の少なくとも１つの生物的活性を保持し、そしてその変異体は、図９（配列番号：１６）のアミノ酸残基３４又は約３４から１５５又は約１５５のアミノ酸配列又は図９（配列番号：１６）のアミノ酸残基２又は約２から１５５又は約１５５のアミノ酸配列と少なくとも約８０％のアミノ酸配列同一性、又は少なくとも約８５％のアミノ酸配列同一性、又は少なくとも約９０％のアミノ酸配同一性、又は少なくとも約９５％のアミノ酸配列同一性を持つ。該ｍＩＬ-１Ｒａ３全配列変異は、例えば、図９（配列番号：１６）のアミノ酸残基３４又は約３４から１５５又は約１５５の配列又は図９（配列番号：１６）のアミノ酸残基２又は約２から１５５又は約１５５のアミノ酸配列に、１又は複数のアミノ酸残基が内部に又はＮ−又はＣ−末端で加えられ、又は減らされているｍＩＬ-Ｒａ１Ｌポリペプチドを含む。
【００２０】
「ヒトインターロイキン-１-様ポリペプチド」、「ｈＩＬ-１１ｐ」、「ｈＩＬ-１１ｐポリペプチド」、「ｈＩＬ-１１ｐタンパク質」、「ヒトインターロイキン-１-様レセプターアンタゴニスト類似体」、「ｈＩＬ-１Ｒａａ」、「ｈＩＬ-１Ｒａａポリペプチド」、及び「ｈＩＬ-１Ｒａａタンパク質」は、任意のｈＩＬ-１Ｒａ１、ｈＩＬ-１Ｒａ２，ｈＩＬ-１Ｒａ３ポリペプチドと定義される。
「天然配列ｈＩＬ-１１ｐ」及び「天然配列は天然配列ｈＩＬ-１Ｒａａ」は、天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ１、ｈＩＬ-１Ｒａ２、又はｈＩＬ-１Ｒａ３を含んでなる任意のポリペプチドと定義される。
「ＩＬ-１１ｐ変異体」はｈＩＬ-１Ｒａ１、ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌ、ｈＩＬ-１Ｒａ２、又はＨＩＬ-１Ｒａ３の変異体を含んでなる任意のポリペプチドと定義される。
「インターロイキン-１レセプター」、「インターロイキン-１レセプターポリペプチド」、「インターロイキン-１レセプタータンパク質」、「ＩＬ-１レセプター」、「ＩＬ-１Ｒ」、「ＩＬ-１ポリペプチド」、及び「ＩＬ-１Ｒタンパク質」、はたとえばヒトやマウスのような種におけるインターロイキン-１（ＩＬ-１）との結合及び／又はＩＬ-１-誘発シグナル形質導入で機能する細胞表面タンパク質のファミリーと定義される。ＩＬ-１ＲはSims等、Proc. Natl. Acad. Sci. (USA), 86: 9846-8950(1989)で明らかにされているヒトＴ細胞-発現ＩＬ-１レセプターを含む。
「インターロイキン-１８レセプター」、「インターロイキン-１８レセプターポリペプチド」、「インターロイキン-１８レセプタータンパク質」、「ＩＬ-１８レセプター」、「ＩＬ-１８Ｒ」、「ＩＬ-１８ポリペプチド」、及び「ＩＬ-１８Ｒタンパク質」、はたとえばヒトやマウスのような種におけるインターロイキン-１８（ＩＬ-１８）との結合及び／又はＩＬ-１８-誘発シグナル形質導入で機能する細胞表面タンパク質のファミリーと定義される。ＩＬ-１８ＲはTorigoe等、J. Biol. Chem., 272: 25737-25742(1997)に記載されたＩＬ-１レセプター関連タンパク質（ＩＬ-１Ｒｒｐ）とBorn等、J. Biol. Chem., 273: 29445-29450(1998)に記載されたＩＬ-１８レセプターアクセサリータンパク-様分子（ＩＬ-１８ＲＡｃＰＬ）を含む。
「インターロイキン-１様ファミリー」及び「ＩＬ-１-様ファミリー」はＩＬ-１Ｒ又はＩＬ-１８Ｒのリガンドに関するポリペプチドのファミリーを表すのに使用される。ＩＬ-１-様ファミリーはＩＬ-１α（Bazan等、Nature, 379: 591 (1996)に記載）、ＩＬ-１β(Bazan等)、ＩＬ-１８(インターフェロンγ誘発因子)(IGIF)(Bazan等)、例えばＩＬ-１Ｒａ(ｓＩＬ-Ｒａ)(Eisenberg等、Nature, 343: 341-346(1990)に記載)、及び細胞内ＩＬ-１Ｒａ(ｉｃＩＬ-１Ｒａ)(Haskill等、Proc. Natl. Acad. Sci. (USA), 88: 3681-3685(1991)に記載)のようなＩＬ-１レセプターアンタゴニストポリペプチド、及び本発明のＩＬ-１ｌｐポリペプチドのようなＩＬ-レセプターアゴニスト及びアンタゴニスト及び関連ポリペプチドを含む。
【００２１】
ここで特定されるＩＬ-１ｌｐ配列に対する「パーセント(％)アミノ酸配列同一性」は、配列を整列させ、最大のパーセント配列同一性を得るために必要ならば間隙を導入し、如何なる保存的置換も配列同一性の一部と考えないとした、ＩＬ-１ｌｐ配列のアミノ酸残基と同一である候補配列中のアミノ酸残基のパーセントとして定義される。パーセントアミノ酸配列同一性を決定する目的のためのアラインメントは、当業者の技量の範囲にある様々な方法、例えばBLAST、BLAST-2、ALIGN、ALIGN-2又はMegalign(DNASTAR)ソフトウエアのような公に入手可能なコンピュータソフトウエアを使用することにより達成可能である。当業者であれば、比較される配列の全長に対して最大のアラインメントを達成するために必要な任意のアルゴリズムを含む、アラインメントを測定するための適切なパラメータを決定することができる。しかし、ここでの目的のためには、％アミノ酸配列同一性値は、配列比較コンピュータプログラムALIGN-2を用いて以下に記載されたようにして得られ、ここでALIGN-2プログラムのための完全なソースコードは表３Ａ−３Ｑに与えられている。ALIGN-2配列比較コンピュータプログラムはジェネンテク社によって作成され、以下の表３Ａ−３Ｑに示したソースコードは米国著作権庁, Washington D.C., 20559に使用者用書類と共に提出され、米国著作権登録番号TXU510087の下で登録されている。ALIGN-2はジェネンテク社、South San Francisco, Californiaから公的に入手可能であり、また以下の表３Ａ−３Ｑに与えたソースコードからコンパイルしてもよい。ALIGN-2プログラムは、UNIXオペレーティングシステム、好ましくはデジタルUNIX V4.0Dでの使用のためにコンパイルされる。全ての配列比較パラメータは、ALIGN-2プログラムによって設定され変動しない。
【００２２】
ここでの目的のためには、与えられたアミノ酸配列Ａの、与えられたアミノ酸配列Ｂに対する、それとの又はそれと対照した％アミノ酸配列同一性（あるいは、与えられたアミノ酸配列Ｂに対する、それとの、又はそれと対照した或る程度の％アミノ酸配列同一性を持つ又は含む与えられたアミノ酸配列Ａと言うこともできる）は次のように計算される：
分率Ｘ／Ｙの１００倍
ここで、Ｘは配列アラインメントプログラムALIGN-2によってそのプログラムのＡ及びＢのアラインメントにおいて等しく一致していると評価されたアミノ酸残基の数であり、ＹはＢの全アミノ酸残基数である。アミノ酸配列Ａの長さがアミノ酸配列Ｂの長さと異なる場合、ＡのＢに対する％アミノ酸配列同一性は、ＢのＡに対する％アミノ酸配列同一性とは異なることは理解されるであろう。％アミノ酸配列同一性の計算の例として、表２Ａ−２Ｂは、「比較タンパク質」と命名したアミノ酸配列の「ＰＲＯ」と命名したアミノ酸配列に対する％アミノ酸配列同一性の計算方法を示している。
特に断らない限り、ここで使用される全ての％アミノ酸配列同一性の値はALIGN-2コンピュータプログラムを用いて上記のようにして得られる。しかし、％アミノ酸配列同一性の値は、配列比較プログラムNCBI-BLAST2（Altschul等, Nucleic Acids Res. 25:3389-3402 (1997))を用いて決定してもよい。NCBI-BLAST2配列比較プログラムは、http://ww.ncbi.nlm.nih.govからダウンロードできる。NCBI-BLAST2は幾つかの検索パラメータを使用し、それら検索パラメータの全てはデフォルト値に設定され、例えば、unmask＝可、鎖＝全て、予測される発生＝１０、最小低複合長＝１５／５、マルチパスｅ-値＝０．０１、マルチパスの定数＝２５、最終ギャップアラインメントのドロップオフ＝２５、及びスコアリングマトリクス＝BLOSUM62を含む。
アミノ酸配列比較にNCBI-BLAST2が用いれれる状況では、与えられたアミノ酸配列Ａの、与えられたアミノ酸配列Ｂに対する、それとの、又はそれと対照した％アミノ酸配列同一性（与えられたアミノ酸配列Ｂに対する、それとの又はそれと対照して或る程度の％アミノ酸配列同一性を持つ又は含む与えられたアミノ酸配列Ａと言うこともできる）は次のように計算される：
分率Ｘ／Ｙの１００倍
ここで、Ｘは配列アラインメントプログラムNCBI-BLAST2によって該プログラムのＡ及びＢのアラインメントにおいて等しく一致すると評価されたアミノ酸残基の数であり、ＹはＢの全アミノ酸残基数である。アミノ酸配列Ａの長さがアミノ酸配列Ｂの長さと異なる場合、ＡのＢに対する％アミノ酸配列同一性は、ＢのＡに対する％アミノ酸配列同一性とは異なることは理解されるであろう。
【００２３】
ここで同定されるＩＬ-１ｌｐポリペプチドコード化核酸配列に対する「パーセント(％)核酸配列同一性」は、配列を整列させ、最大のパーセント配列同一性を得るために必要ならば間隙を導入し、ＩＬ-１ｌｐポリペプチドコード化核酸配列中のヌクレオチドと同一である候補配列中のヌクレオチドのパーセントとして定義される。パーセント核酸配列同一性を決定する目的のためのアラインメントは、当業者の知る範囲にある様々な方法、例えばBLAST、BLAST-2、ALIGN、ALIGN-2又はMegalign(DNASTAR)ソフトウエアのような公に入手可能なコンピュータソフトウエアを使用することにより達成可能である。しかし、ここでの目的のためには、％核酸配列同一性値は、配列比較コンピュータプログラムALIGN-2を使用して計算され、ALIGN-2プログラム用の完全なソースコードは以下の表３Ａ−３Ｑに与えられている。ALIGN-2配列比較コンピュータプログラムはジェネンテク社によって作成され、表３Ａ−３Ｑに示したソースコードは米国著作権庁, Washington D.C., 20559に使用者用書類とともに提出され、米国著作権登録番号TXU510087の下で登録されている。ALIGN-2プログラムはジェネンテク社、South San Francisco, Californiaから公的に入手可能であり、あるいは表３Ａ−３Ｑに与えたソースコードからコンパイルしてもよい。ALIGN-2プログラムは、UNIXオペレーティングシステム、好ましくはデジタルUNIX V4.0Dでの使用のためにコンパイルされる。全ての配列比較パラメータは、ALIGN-2プログラムによって設定され変動しない。
ここでの目的に対して、与えられた核酸配列Ｃの、与えられた核酸配列Ｄに対する、それとの又はそれと対照した％核酸配列同一性（与えられた核酸配列Ｄに対する、それとの又はそれと対照した或る程度の％核酸配列同一性を持つ又は含む与えられた核酸配列Ｃと言うこともできる）は次のように計算される：
分率Ｗ／Ｚの１００倍
ここで、Ｗは配列アラインメントプログラムALIGN-2によって該プログラムのＣ及びＤのアラインメントにおいて等しく一致すると評価されたヌクレオチドの数であり、ＺはＤの全ヌクレオチド数である。核酸配列Ｃの長さが核酸配列Ｄの長さと異なる場合、ＣのＤに対する％核酸配列同一性は、ＤのＣに対する％核酸配列同一性とは異なることは理解されるであろう。％核酸配列同一性の計算の例として、表２Ｃ−２Ｄは、「比較ＤＮＡ」と命名した核酸配列の「ＰＲＯ-ＤＮＡ」と命名した核酸配列に対する％核酸配列同一性の計算方法を実証している。
【００２４】
特に断らない限り、ここで用いられる全ての％核酸配列同一性値は、直上のパラグラフに記載したようにしてALIGN-2コンピュータプログラムを用いて得られる。しかしながら、％核酸配列同一性値は、配列比較プログラムNCBI-BLAST2（Altschul等, Nucleic Acids Res. 25: 3389-3402 (1997)）を用いて決定してもよい。NCBI-BLAST2配列比較プログラムは、http://www.ncbi.nlm.nih.govからダウンロードできる。NCBI-BLAST2は幾つかの検索パラメータを使用し、それら検索パラメータの全てはデフォルト値に設定され、例えば、unmask＝可、鎖＝全て、予測される発生＝１０、最小低複合長＝１５／５、マルチパスｅ-値＝０．０１、マルチパスの定数＝２５、最終ギャップアラインメントのドロップオフ＝２５、及びスコアリングマトリクス＝BLOSUM62を含む。
核酸配列比較にNCBI-BLAST2が用いれれる状況では、与えられた核酸配列Ｃの、与えられた核酸配列Ｄに対する、それとの、又はそれと対照した％核酸配列同一性（与えられた核酸配列Ｄに対する、それとの、又はそれと対照した或る程度の％核酸配列同一性を持つ又は含む与えられた核酸配列Ｃと言うこともできる）は次のように計算される：
分率Ｗ／Ｚの１００倍
ここで、Ｗは配列アラインメントプログラムNCBI-BLAST2によっってそのプログラムのＣ及びＤのアラインメントにおいて等しく一致すると評価された核酸残基の数であり、ＺはＤの全核酸残基数である。核酸配列Ｃの長さが核酸配列Ｄの長さと異なる場合、ＣのＤに対する％核酸配列同一性は、ＤのＣに対する％核酸配列同一性とは異なることは理解されるであろう。
【００２５】
「陽性（ポジティブ）」という用語は、上記のようにして実施されるアミノ酸配列同一性の比較において、比較された配列において同一ではないが類似の特性を有しているアミノ酸残基を含む。対象とするアミノ酸残基に対して陽性とされたアミノ酸残基は、対象とするアミノ酸残基と同一であるか、又は対象とするアミノ酸残基の好ましい置換（下記の表１に定義）であるものである。
ここでの目的に対して、与えられたアミノ酸配列Ａの、与えられたアミノ酸配列Ｂに対する、それとの、又はそれと対照した陽性の％値（与えられたアミノ酸配列Ｂに対する、それとの、又はそれと対照した或る程度の％アミノ酸配列同一性を持つ又は含む与えられたアミノ酸配列Ａと言うこともできる）は次のように計算される：
分率Ｘ／Ｙの１００倍
ここで、Ｘは配列アラインメントプログラムALIGN-2によりそのプログラムののＡ及びＢのアラインメントにおいて陽性値と評価されたアミノ酸残基の数であり、ＹはＢの全アミノ酸残基数である。アミノ酸配列Ａの長さがアミノ酸配列Ｂの長さと等しくない場合、ＡのＢに対する％陽性は、ＢのＡに対する％陽性とは異なることが理解されるであろう。
【００２６】
「単離された」とは、ここで開示された種々のポリペプチドを記述するために使用するときは、その自然環境の成分から同定され分離され及び／又は回収されたポリペプチドを意味する。その自然環境の汚染成分とは、そのポリペプチドの診断又は治療への使用を典型的には妨害する物質であり、酵素、ホルモン、及び他のタンパク質様又は非タンパク質様溶質が含まれる。好ましい実施態様において、ポリペプチドは、(１)スピニングカップシークエネーターを使用することにより、少なくとも１５残基のＮ末端あるいは内部アミノ酸配列を得るのに充分なほど、あるいは、(２)クーマシーブルーあるいは好ましくは銀染色を用いた非還元あるいは還元条件下でのＳＤＳ-ＰＡＧＥによる均一性まで精製される。単離されたポリペプチドには、ＩＬ-１ｌｐの自然環境の少なくとも１つの成分が存在しないため、組換え細胞内のインサイツのポリペプチドが含まれる。しかしながら、通常は、単離されたポリペプチドは少なくとも１つの精製工程により調製される。
ＩＬ-１ｌｐポリペプチドをコードする「単離された」核酸は、同定され、ＩＬ-１ｌｐをコードする核酸の天然源に通常付随している少なくとも１つの汚染核酸分子から分離された核酸分子である。単離されたＩＬ-１ｌｐコード化核酸分子は、天然に見出される形態あるいは設定以外のものである。ゆえに、単離された核酸分子は、天然の細胞中に存在するＩＬ-１ｌｐコード化核酸分子とは区別される。しかし、ＩＬ-１ｌｐポリペプチドをコードする単離された核酸分子は、例えば、核酸分子が天然細胞のものとは異なった染色体位置にあるＩＬ-１ｌｐを通常発現する細胞に含まれるＩＬ-１ｌｐコード核酸分子を含む。
「コントロール配列」という表現は、特定の宿主生物において作用可能に関連したコード配列を発現するために必要なＤＮＡ配列を指す。例えば原核生物に好適なコントロール配列は、プロモーター、場合によってはオペレータ配列、及びリボソーム結合部位を含む。真核生物の細胞は、プロモーター、ポリアデニル化シグナル及びエンハンサーを利用することが知られている。
核酸は、他の核酸配列と機能的な関係にあるときに「作用可能に関連し」ている。例えば、プレ配列あるいは分泌リーダーのＤＮＡは、ポリペプチドの分泌に参画するプレタンパク質として発現されているなら、そのポリペプチドのＤＮＡに作用可能に関連している；プロモーター又はエンハンサーは、配列の転写に影響を及ぼすならば、コード配列に作用可能に関連している；又はリボソーム結合部位は、もしそれが翻訳を容易にするような位置にあるなら、コード配列と作用可能に関連している。一般的に、「作用可能に関連している」とは、関連したＤＮＡ配列が近接しており、分泌リーダーの場合には近接していて読みフェーズにあることを意味する。しかし、エンハンサーは必ずしも近接している必要はない。関連は簡便な制限部位でのライゲーションにより達成される。そのような部位が存在しない場合は、従来の手法に従って、合成オリゴヌクレオチドアダプターあるいはリンカーが使用される。
【００２７】
「抗体」という用語は最も広い意味において使用され、例えば、単一の抗ＩＬ-１ｌｐモノクローナル抗体(アゴニスト、アンタゴニスト、及び中和抗体を含む)、多エピトープ特異性を持つ抗ＩＬ-１ｌｐ抗体組成物を包含している。ここで使用される「モノクローナル抗体」という用語は、実質的に均一な抗体の集団、すなわち、構成する個々の抗体が、少量存在しうる自然に生じる可能性のある突然変異を除いて同一である集団から得られる抗体を称する。
ハイブリッド形成反応の「緊縮性」は、当業者によって容易に決定され、一般的にプローブ長、洗浄温度、及び塩濃度に依存する経験的な計算である。一般に、プローブが長くなると適切なアニーリングのための温度が高くなり、プローブが短くなると温度は低くなる。ハイブリッド形成は、一般的に、相補的鎖がその融点に近いがそれより低い環境に存在する場合における変性ＤＮＡの再アニールする能力に依存する。プローブとハイブリッド形成可能な配列との間の所望の相同性の程度が高くなると、使用できる相対温度が高くなる。その結果、より高い相対温度は、反応条件をより緊縮性にするが、低い温度は緊縮性を低下させる。ハイブリッド形成反応の緊縮性の更なる詳細及び説明は、Ausubel等, Current Protocols in Molecular Biology, Wiley Interscience Publishers, (1995)を参照のこと。
ここで定義される「緊縮性条件」又は「高度の緊縮性条件」は、（１）洗浄のために低イオン強度及び高温度、例えば、５０℃において０．０１５Ｍの塩化ナトリウム／０．００１５Ｍのクエン酸ナトリウム／０．１％のドデシル硫酸ナトリウムを用いるもの；（２）ハイブリッド形成中にホルムアミド等の変性剤、例えば、４２℃において５０％（v/v）ホルムアミドと０．１％ウシ血清アルブミン／０．１％フィコール／０．１％のポリビニルピロリドン／５０ｍＭのｐＨ６．５のリン酸ナトリウムバッファー、及び７５０ｍＭの塩化ナトリウム、７５ｍＭクエン酸ナトリウムを用いるもの；又は（３）４２℃における５０％ホルムアミド、５ｘＳＳＣ（０．７５ＭのＮａＣｌ、０．０７５Ｍのクエン酸ナトリウム）、５０ｍＭのリン酸ナトリウム（ｐＨ６．８）、０．１％のピロリン酸ナトリウム、５ｘデンハート液、超音波処理サケ精子ＤＮＡ（５０μｇ／ｍｌ）、０．１％ＳＤＳ、及び１０％のデキストラン硫酸と、４２℃における０．２ｘＳＳＣ（塩化ナトリウム／クエン酸ナトリウム）中の洗浄及び５５℃での５０％ホルムアミド、次いで５５℃におけるＥＤＴＡを含む０．１ｘＳＳＣからなる高緊縮性洗浄を用いるものによって特定される。
「中程度の緊縮性条件」は、Sambrook等, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, New York: Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989に記載されているように特定され、上記の緊縮性より低い洗浄溶液及びハイブリッド形成条件（例えば、温度、イオン強度及び％ＳＤＳ）の使用を含む。中程度の緊縮性条件は、２０％ホルムアミド、５ｘＳＳＣ（１５０ｍＭのＮａＣｌ、１５ｍＭのクエン酸三ナトリウム）、５０ｍＭリン酸ナトリウム（ｐＨ７．６）、５ｘデンハート液、１０％デキストラン硫酸、及び２０ｍｇ／ｍＬの変性剪断サケ精子ＤＮＡを含む溶液中の３７℃での終夜インキュベーション、次いで１ｘＳＳＣ中３７−５０℃でのフィルターの洗浄といった条件である。当業者であれば、プローブ長などの因子に適合させる必要に応じて、どのようにして温度、イオン強度等を調節するかを認識するであろう。
【００２８】
「エピトープタグ」なる用語は、ここで用いられるときは、「タグポリペプチド」に融合したＩＬ-１ｌｐポリペプチドを含んでなるキメラポリペプチドを指す。タグポリペプチドは、その抗体が産生され得るエピトープを提供するに十分な数の残基を有しているが、その長さはそれが融合するポリペプチドの活性を阻害しないよう充分に短い。また、タグポリペプチドは、好ましくは、抗体が他のエピトープと実質的に交差反応をしないようにかなり独特である。適切なタグポリペプチドは、一般に、少なくとも６のアミノ酸残基、通常は約８〜約５０のアミノ酸残基(好ましくは約１０〜約２０のアミノ酸残基)を有する。
ここで用いられる「イムノアドヘシン」なる用語は、異種タンパク質（「アドヘシン」）の結合特異性と免疫グロブリン定常ドメインとを結合した抗体様分子を指す。構造的には、イムノアドヘシンは、所望の結合特異性を持ち、抗体の抗原認識及び結合部位以外である（即ち「異種の」）アミノ酸配列と、免疫グロブリン定常ドメイン配列との融合物を含む。イムノアドヘシン分子のアドへシン部分は、典型的には少なくともレセプター又はリガンドの結合部位を含む隣接アミノ酸配列である。イムノアドヘシンの免疫グロブリン定常ドメイン配列は、ＩｇＧ-１、ＩｇＧ-２、ＩｇＧ-３又はＩｇＧ-４サブタイプ、ＩｇＡ（ＩｇＡ-１及びＩｇＡ-２を含む）、ＩｇＥ、ＩｇＤ又はＩｇＭなどの任意の免疫グロブリンから得ることができる。
ここで意図している「活性な」及び「活性」とは、天然又は天然に生じるＩＬ-１ｌｐの一又は複数の生物学的活性を保持するか、天然又は天然に生じるＩＬ-１ｌｐと免疫学的交差反応性を示すＩＬ-１ｌｐの形態を意味する。
ここで用いるところの「生物活性」又は「生物学的活性」とは、ＩＬ-１ｌｐの免疫原生又は抗原性機能を除く、哺乳動物の生理機能又は病態生理においてＩＬ-１ｌｐによって示される任意のエフェクター機能を意味する。ＩＬ-１ｌｐの免疫原生及び抗原性機能とはＩＬ-１ｌｐに特異的な体液性又は細胞性免疫応答を生じるＩＬ-１ｌｐの能力、及び哺乳動物において抗ＩＬ-１ｌｐ抗体、Ｂ細胞又はＴ細胞を特異的に認識しこれと相互作用をなす能力を意味する。
ここで用いるところの、ＩＬ-１ｌｐとの「免疫学的交差反応性」とは、候補ポリペプチドがＩＬ-１ｌｐに対して産生されたポリクローナル又はモノクローナル抗体へのＩＬ-１ｌｐの結合を競合的に阻害することができることを意味する。
一実施態様では、ＩＬ-１ｌｐ活性は、任意のＩＬ-１様ファミリーメンバーの一又は複数の生物学的活性を作動又は拮抗する能力、例えばＩＬ-１媒介又はＩＬ-１８媒介炎症反応に拮抗するＩＬ-１ｌｐ活性を含む。他の実施態様では、ＩＬ-１ｌｐ活性はＩＬ-１８レセプター及び／又はＩＬ-１レセプターに結合する能力を含む。
「アンタゴニスト」なる用語は最も広い意味で用いられ、ここに開示した天然ＩＬ-１ｌｐポリペプチドの生物学的活性を部分的もしくは完全に阻止、阻害、又は中和する任意の分子を指す。同様に「アゴニスト」なる用語は最も広い意味で用いられ、ここに開示した天然ＩＬ-１ｌｐポリペプチドの生物学的活性を模倣する任意の分子を指す。好適なアゴニスト又はアンタゴニスト分子は特に、アゴニスト又はアンタゴニスト抗体又は抗体断片、天然ＩＬ-１ｌｐポリペプチドの断片又はアミノ酸配列変異体、ペプチド、有機小分子などを含む。
【００２９】
ここで使用される「治療」とは、治癒的又は予防的療法及び防止的療法の両方を意味し、目的は標的とする病理学的状態又は疾患を防止又は低下（減少）させることにある。治療が必要なものとは、既に疾患に罹っているもの、並びに疾患に罹りやすいもの又は疾患が防止されるべきものを含む。
「慢性」投与とは、急性様式とは異なり連続的な様式での薬剤を投与し、初期の治療効果（活性）を長時間に渡って維持することを意味する。「間欠」投与とは、中断無く連続的になされるのではなく、むしろ周期的になされる性質の治療である。
治療の対象のための「哺乳動物」は、ヒト、家庭及び農業用動物、動物園、スポーツ、又はペット動物、例えばイヌ、ネコ、ウシ、ウマ、ヒツジ、ブタ、ウサギなどを含む哺乳類に分類される任意の動物を意味する。好ましくは、哺乳動物はヒトである。
一又は複数の治療薬と「組み合わせた」投与とは、同時（同時期）及び任意の順序での連続した投与を含む。
「炎症性障害」及び「炎症性疾患」なる用語は、ここでは置き換え可能に使用され、炎症を生じる病理的状態を指す。このような障害の例には、乾癬とアトピー性皮膚炎のような炎症性皮膚病；炎症性強皮症と硬化症；炎症性腸疾患関連応答(クローン病と潰瘍性大腸炎など)；外科組織再灌流損傷、心筋虚血症状を含む虚血性再灌流疾患、例えば心筋梗塞、心停止、心臓手術後の再灌流及び経皮経管冠動脈形成、脳卒中、及び腹部大動脈瘤；脳卒中に続いて起こる脳浮腫；頭蓋外傷；血液量減少性ショック；呼吸停止；成人呼吸窮迫症候群；急性肺障害；ベーチェット病；皮膚筋炎；多発性筋炎；多発性硬化症；皮膚炎；髄膜炎；脳炎；ブドウ膜炎；変形性関節症；自己免疫疾患、たとえば関節リウマチ、シェーゲン症候群、血管炎、及びインスリン依存性糖尿病（ＩＤＤＭ）；白血球血管外遊出に関連する疾患；中枢神経系(ＣＮＳ)炎症性障害；敗血症又は外傷に続いて起こる多発性臓器傷害症候群；アルコール性肝炎及び肝線維症を含む肝臓の炎症性疾患；肉芽腫症、肝炎、及び細菌性肺炎における病的炎症を含む感染に対する病的宿主反応；糸球体腎炎を含む抗原抗体複合体媒介性疾患；敗血症；多臓器肉芽腫性疾患；移植片対宿主疾患（ＧＶＨＤ）を含む組織／器官移植に対する免疫病理反応；肋膜炎、肺胞炎、血管炎、肺炎、慢性気管支炎、気管支拡張症、びまん性汎細気管支炎、過敏性肺臓炎、特発性肺線維症（ＩＰＦ）、及び嚢胞性線維症を含む肺の炎症；ループス腎炎のような急性又は慢性の腎炎性症状を含む腎臓病における炎症；膵炎等々が含まれる。好適な適応症には、関節リウマチ、骨関節炎、敗血症、急性肺障害、成人呼吸窮迫症候群、特発性肺線維症、（外科組織再灌流損傷、脳卒中、心筋虚血症状及び急性心筋梗塞を含む）虚血性再灌流疾患、喘息、乾癬、移植片対宿主疾患（ＧＶＨＤ）、及び潰瘍性大腸炎のような炎症性腸疾患が含まれる。
ここで使用されるところの「喘息」、「喘息性障害」、「喘息疾患」、及び「気管支喘息」という用語は下気道の広範囲の狭窄がある肺の症状を意味する。「アトピー性喘息」及び「アレルギー喘息」は、例えば喘息の症状を調節するために吸入又は全身性ステロイドの頻繁な又は定常的な使用を必要とする症状のような中程度又は重症の慢性喘息を含む、下気道におけるＩｇＥを介した超過敏反応の症状である喘息を意味する。好適な適応症はアレルギー喘息である。
【００３０】
ＩＩ．発明の詳細な記述
本発明は、本出願でＩＬ-１ｌｐと称されるポリペプチドをコードする新規に同定され単離されたヌクレオチド配列を提供する。特に下記の実施例で更に詳細に開示するように、ＩＬ-１ｌｐポリペプチドをコードするｃＤＮＡが同定され単離された。
NCBI-BLAST2配列アラインメントコンピュータプログラムを使用して、全長天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ１（図３と配列番号：７に示す）がヒトＩＬ-１レセプターアンタゴニストβ（ｈＩＬ-１Ｒａβ）及びＴＡＮＧＯ−７７タンパク質と幾らかのアミノ酸配列同一性を有し、全長天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌ（図１５と配列番号：１９に示す）がヒトＩＬ-１レセプターアンタゴニストβ（ｈＩＬ-１Ｒａβ）及びＴＡＮＧＯ−７７タンパク質と幾らかのアミノ酸配列同一性を有し、全長天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖ（図１９と配列番号：２５に示す）がヒトＩＬ-１レセプターアンタゴニストβ（ｈＩＬ-１Ｒａβ）及びＴＡＮＧＯ−７７タンパク質と幾らかのアミノ酸配列同一性を有し、全長天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｓ（図１６と配列番号：２１に示す）がＴＡＮＧＯ−７７の対立遺伝子変異体であると思われ、ヒトＩＬ-１レセプターアンタゴニストβ（ｈＩＬ-１Ｒａβ）と幾らかのアミノ酸配列同一性を有し、全長天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ２（図５と配列番号：１０に示す）がｈＩＬ-１Ｒａβと幾らかのアミノ酸配列同一性を有し、全長天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ３（図７と配列番号：１３に示す）がヒト細胞内ＩＬ-１レセプターアンタゴニスト（ｈｉｃＩＬ-１Ｒａ）と幾らかのアミノ酸配列同一性を有し、全長天然配列ｍＩＬ-１Ｒａ３（図９と配列番号：１６に示す）がマウスＩＬ-１レセプターアンタゴニスト（ｍＩＬ-１Ｒａ）と幾らかのアミノ酸配列同一性を有しｈｉｃＩＬ-１Ｒａと幾らかのアミノ酸配列同一性を有することが見出された。ｈＩＬ-１Ｒａβは１９９８年７月２９日に公開されたＥＰ０８５５４０４に記載されている。ＴＡＮＧＯ−７７は１９９９年２月１１日に公開されたＷＯ９９／０６４２６に記載されている。ｈｉｃＩＬ-１Ｒａは１９９５年４月２０日に公開されたＷＯ９５／１０２９８及びHaskill等, Proc. Natl. Acad. Sci. (USA), 88:3681-3685 (1991)に記載されている。ｍＩＬ-１ＲａはZahedi等, J. Immunol., 146:4228-4233 (1991)、Matsushime等, Blood, 78:616-623 (1991)、Zahedi等, Cytokine, 6:1-9 (1994)、Eisenber等, Proc. Natl. Acad. Sci. (USA), 88:5232-5236 (1991)及びShuck等, Eur. J. Immunol., 21: 2775-2780 (1991)に記載されている。従って、本願に開示されたＩＬ-１ｌｐポリペプチドはインターロイキン−１様ファミリーの新規に同定されたメンバーであり、ＩＬ-１様ファミリーに典型的な炎症性又は抗炎症性活性、あるいは他の細胞性応答活性化もしくは阻害活性を保有していると現在考えられる。
【００３１】
ここに記載した全長天然配列ＩＬ-１ｌｐポリペプチドに加えて、ＩＬ-１ｌｐ変異体も調製できると考えられる。本発明のこのような実施態様は、例えば、ｈＩＬ-１Ｒａ１変異体、ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌ変異体、ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｓ変異体、ＩＬ-１Ｒａ２変異体、ｈＩＬ-１Ｒａ３変異体、及びｍＩＬ-１Ｒａ３変異体のような、ここに定義されたようなＩＬ-１ｌｐ変異体である全てのＩＬ-１ｌｐポリペプチドを含む。
ＩＬ-１ｌｐ変異体は、ＩＬ-１ｌｐＤＮＡに適当なヌクレオチド変化を導入することにより、及び／又は所望のＩＬ-１ｌｐポリペプチドを合成することにより調製できる。当業者であれば、グリコシル化部位の数又は位置の変化あるいは膜固着特性の変化などのアミノ酸変化がＩＬ-１ｌｐの翻訳後プロセスを変えうることは理解できるであろう。
天然全長配列ＩＬ-１ｌｐ又はここに記載したＩＬ-１ｌｐの種々のドメインにおける変異は、例えば、米国特許第５３６４９３４号に記載されている保存的及び非保存的変異についての技術と指針の任意のものを用いてなすことができる。変異は、天然配列ＩＬ-１ｌｐと比較したときＩＬ-１ｌｐのアミノ酸配列の変化を生じるＩＬ-１ｌｐをコードする一又は複数のコドンの置換、欠失又は挿入でありうる。場合によっては、変異は少なくとも１つのアミノ酸の、ＩＬ-１ｌｐの一又は複数のドメインの任意の他のアミノ酸による置換である。何れのアミノ酸残基が所望の活性に悪影響を与えることなく挿入、置換又は欠失されるかの指針は、ＩＬ-１ｌｐの配列を相同的な既知のタンパク質分子の配列と比較し、相同性の高い領域内でなされるアミノ酸配列変化の数を最小にすることによって見出される。アミノ酸置換は、一のアミノ酸の、類似した構造及び／又は化学的性質を持つ他のアミノ酸での置換、例えばロイシンのセリンでの置換、すなわち保存的アミノ酸置換の結果とすることができる。挿入又は欠失は、場合によっては１から５のアミノ酸の範囲内とすることができる。許容される変異は、配列においてアミノ酸の挿入、欠失又は置換を系統的になし、得られた変異体について以下の実施例に記載されたインビトロアッセイで活性を試験することにより決定される。
【００３２】
以下の表１は天然配列ＩＬ-１ｌｐの変異体を産生するのに有用である保存的アミノ酸置換を（「好適な置換」と題して）列挙している。このような置換が生物学的活性の変化をもたらす場合、表１に例示的置換と名付けたようなより実質的な変化あるいは以下にアミノ酸分類に基づいて記載するようなより実質的な変化を導入することが有用である。
【００３３】
0005456222.tif 000002
【００３４】
ＩＬ-１ｌｐポリペプチドの機能又は免疫学的同一性の実質的修飾は、（ａ）置換領域のポリペプチド骨格の構造、例えばシート又は螺旋配置、（ｂ）標的部位の分子の電荷又は疎水性、又は（ｃ）側鎖の嵩を維持しながら、それらの効果において有意に異なる置換を選択することにより達成される。天然に生じる残基は共通の側鎖特性に基づいてグループに分けることができる：
（１）疎水性：ノルロイシン, met, ala, val, leu, ile;
（２）中性の親水性：cys, ser, thr;
（３）酸性：asp, glu;
（４）塩基性：asn, gln, his, lys, arg;
（５）鎖配向に影響する残基：gly, pro; 及び
（６）芳香族：trp, tyr, phe。
非保存的置換は、これらの分類の一つのメンバーを他の分類と交換することを必要とするであろう。また、そのように置換された残基は、保存的置換部位、より好ましくは残された（非保存）部位に導入されうる。
変異は、オリゴヌクレオチド媒介（部位特異的）突然変異誘発、アラニンスキャンニング、及びＰＣＲ突然変異誘発のようなこの分野で知られた方法を用いてなすことができる。部位特異的突然変異誘発（Carter等, Nucl. Acids Res., 13: 4331 (1986); Zoller等, Nucl. Acids Res., 10: 6487 (1987)）、カセット突然変異誘発（Wells等, Gene, 34: 315 (1985)）、制限的選択突然変異誘発［Wells等, Philos. Trans. R. Soc. London SerA, 317: 415 (1986)］もしくは他の方法をクローニングしたＤＮＡに実施してＩＬ-１ｌｐ変異体ＤＮＡを作成することもできる。
また、スキャンニングアミノ酸分析は、隣接配列に沿って一又は複数のアミノ酸を同定するのに用いることができる。好ましいスキャンニングアミノ酸は比較的小さく、中性のアミノ酸である。そのようなアミノ酸は、アラニン、グリシン、セリン、及びシステインを含む。アラニンは、ベータ炭素を越える側鎖を排除し変異体の主鎖構造を変化させにくいので、この群の中で典型的に好ましいスキャンニングアミノ酸である［Cuningham及びWells, Science, 244: 1081-1085 (1989)］。また、アラニンは最もありふれたアミノ酸であるため典型的に好ましい。更に、それは埋もれた位置と露出した位置の両方に見られることが多い［Creighton, The Proteins, (W.H. Freeman & Co., N.Y.); Chothia, J. Mol. Biol., 150: 1 (1976)］。アラニン置換が十分な量の変異体を生じない場合は、アイソテリック(isoteric)アミノ酸を用いることができる。
【００３５】
ＩＬ-１ｌｐの共有結合的修飾はこの発明の範囲内に含まれる。共有結合的修飾の一型は、ＩＬ-１ｌｐポリペプチドの標的とするアミノ酸残基を、ＩＬ-１ｌｐの選択された側鎖又はＮ末端残基又はＣ末端残基と反応できる有機誘導体化試薬と反応させることである。二官能性試薬での誘導体化が、例えばＩＬ-１ｌｐを水不溶性支持体マトリクスあるいは抗ＩＬ-１ｌｐ抗体の精製方法又はその逆で用いるための表面に架橋させるのに有用である。よく用いられる架橋剤は、例えば、１，１-ビス（ジアゾアセチル）-２-フェニルエタン、グルタルアルデヒド、Ｎ-ヒドロキシスクシンイミドエステル、例えば４-アジドサリチル酸、３，３’-ジチオビス（スクシンイミジルプロピオネート）等のジスクシンイミジルエステルを含むホモ二官能性イミドエステル、ビス-Ｎ-マレイミド-１，８-オクタン等の二官能性マレイミド、及びメチル-３-[(ｐ-アジドフェニル)-ジチオ］プロピオイミデート等の試薬を含む。
他の修飾は、グルタミニル及びアスパラギニル残基の各々対応するグルタミル及びアスパルチルへの脱アミノ化、プロリン及びリシンのヒドロキシル化、セリル又はトレオニル残基のヒドロキシル基のリン酸化、リシン、アルギニン、及びヒスチジン側鎖のα-アミノ基のメチル化[T.E. Creighton, Proteins: Structure and Molecular Properties, W.H. Freeman & Co., San Francisco, pp.79-86 (1983)]、Ｎ末端アミンのアセチル化、及び任意のＣ末端カルボキシル基のアミド化を含む。
【００３６】
この発明の範囲内に含まれるＩＬ-１ｌｐポリペプチドの共有結合的修飾の他の型は、ポリペプチドの天然グリコシル化パターンの変更を含む。「天然グリコシル化パターンの変更」とは、ここで意図されるのは、天然配列ＩＬ-１ｌｐに見られる一又は複数の炭水化物部分の欠失（根底にあるグリコシル化部位の除去又は化学的及び／又は酵素的手段によるグリコシル化の削除の何れかによる）、及び／又は天然配列ＩＬ-１ｌｐに存在しない一又は複数のグリコシル化部位の付加を意味する。また、この語句は、存在する種々の炭水化物部分の性質及び特性の変化を含む、天然タンパク質のグリコシル化における定性的変化を含む。
ＩＬ-１ｌｐポリペプチドへのグリコシル化部位の付加はアミノ酸配列の変更を伴ってもよい。この変更は、例えば、一又は複数のセリン又はスレオニン残基の天然配列ＩＬ-１ｌｐ（Ｏ-結合グリコシル化部位）への付加、又は置換によってなされてもよい。ＩＬ-１ｌｐアミノ酸配列は、場合によっては、ＤＮＡレベルでの変化、特に、ＩＬ-１ｌｐポリペプチドをコードするＤＮＡを予め選択された塩基において変異させ、所望のアミノ酸に翻訳されるコドンを生成させることを通して変更されてもよい。
【００３７】
ＩＬ-１ｌｐポリペプチド上に炭水化物部分の数を増加させる他の手段は、グリコシドのポリペプチドへの化学的又は酵素的結合による。このような方法は、この技術分野において、例えば、１９８７年９月１１日に公開されたＷＯ８７／０５３３０、及びAplin及びWriston, CRC Crit. Rev. Biochem., pp. 259-306 (1981)に記載されている。
ＩＬ-１ｌｐポリペプチド上に存在する炭水化物部分の除去は、化学的又は酵素的に、あるいはグルコシル化の標的となるアミノ酸残基をコードするコドンの変異的置換によってなすことができる。化学的脱グリコシル化技術は、この分野で知られており、例えば、Hakimuddin等, Arch. Biochem. Biophys., 259:52 (1987)により、及びEdge等, Anal. Biochem., 118: 131 (1981)により記載されている。ポリペプチド上の炭水化物部分の酵素的切断は、Thotakura等, Meth. Enzymol. 138:350 (1987)に記載されているように、種々のエンド及びエキソグリコシダーゼを用いることにより達成できる。
ＩＬ-１ｌｐの共有結合的修飾の他の型は、ＩＬ-１ｌｐポリぺプチドの、種々の非タンパク質様ポリマー、例えばポリエチレングリコール（PEG）、ポリプロピレングリコール、又はポリオキシアルキレンの一つへの、米国特許第４６４０８３５号；第４４９６６８９号；第４３０１１４４号；第４６７０４１７号；第４７９１１９２号又は第４１７９３３７号に記載された方法での結合を含む。
【００３８】
また、本発明のＩＬ-１ｌｐは、他の異種ポリペプチド又はアミノ酸配列に融合したＩＬ-１ｌｐを含むキメラ分子を形成する方法で修飾してもよい。
一実施態様では、このようなキメラ分子は、抗タグ抗体が選択的に結合できるエピトープを提供するタグポリペプチドとＩＬ-１ｌｐとの融合を含む。エピトープタグは、一般的にはＩＬ-１ｌｐのアミノ又はカルボキシル末端に位置する。ＩＬ-１ｌｐのこのようなエピトープタグ形態の存在は、タグポリペプチドに対する抗体を用いて検出することができる。また、エピトープタグの提供は、抗タグ抗体又はエピトープタグに結合する他の型の親和性マトリクスを用いたアフィニティ精製によってＩＬ-１ｌｐを容易に精製できるようにする。様々なタグポリペプチドとそれら各々の抗体はこの分野で良く知られている。例としては、ポリ-ヒスチジン（poly-his）又はポリ-ヒスチジン−グリシン（poly-his-gly）タグ；flu HAタグポリペプチド及びその抗体１２ＣＡ５［Field等, Mol. Cell. Biol., 8:2159-2165 (1988)］；c-mycタグ及びそれに対する８Ｆ９、３Ｃ７、６Ｅ１０、Ｇ４、Ｂ７及び９Ｅ１０抗体［Evan等, Molecular and Cellular Biology, 5:3610-3616 (1985)］；及び単純ヘルペスウイルス糖タンパク質Ｄ（gD）タグとその抗体［Paborsky等, Protein Engineering, 3(6):547-553 (1990)］を含む。他のタグポリペプチドは、フラッグペプチド［Hopp等, BioTechnology, 6:1204-1210 (1988)］；ＫＴ３エピトープペプチド［Martin等, Science, 255:192-194 (1992)］；αチューブリンエピトープペプチド［Skinner等, J. Biol. Chem., 266:15163-15166 (1991)］；及びＴ７遺伝子１０タンパク質ペプチドタグ［Lutz-Freyermuth等, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 87:6393-6397 (1990)］を含む。
別の実施態様では、キメラ分子はＩＬ-１ｌｐの免疫グロブリン又は免疫グロブリンの特定の領域との融合体を含んでもよい。キメラ分子の二価形態（「イムノアドヘシン」とも呼ばれる）については、そのような融合体はＩｇＧ分子のＦｃ領域であり得る。Ｉｇ融合体は、好ましくはＩｇ分子内の少なくとも１つの可変領域に換えてのＩＬ-１ｌｐポリペプチドの可溶型の置換を含む。特に好ましい実施態様では、免疫グロブリン融合体は、ＩｇＧ１分子のヒンジ、ＣＨ２及びＣＨ３、又はヒンジ、ＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３領域を含む。免疫グロブリン融合体の製造については、１９９５年６月２７日発行の米国特許第５４２８１３０号を参照のこと。
【００３９】
一側面では、本発明は、天然配列ＩＬ-１ｌｐの少なくとも一の生物活性、例えば天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ３又はｍＩＬ-１Ｒａ３のＩＬ-１Ｒ結合活性、又は天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ１、ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌ、又はｈＩＬ-１Ｒａ１ＶのＩＬ-１８Ｒ結合活性を保持するＩＬ-１ｌｐポリペプチドをコードするＤＮＡを含んでなり、ＤＮＡが、（ａ）（１）図２（配列番号：５）の約３７から約２０３のアミノ酸残基を含んでなるＩＬ-１ｌｐポリペプチドをコードするＤＮＡ分子、（２）図３（配列番号：７）の約１５から約１９３のアミノ酸残基を含んでなるＩＬ-１ｌｐポリペプチドをコードするＤＮＡ分子、（３）図７（配列番号：１３）の３４又は約３４から１５５又は約１５５のアミノ酸残基を含んでなるＩＬ-１ｌｐポリペプチドをコードするＤＮＡ分子、（４）図９（配列番号：１６）の３４又は約３４から１５５又は約１５５のアミノ酸残基を含んでなるＩＬ-１ｌｐポリペプチドをコードするＤＮＡ分子；（５）図１５（配列番号：１９）の２６又は約２６から２０７又は約２０７のアミノ酸残基を含んでなるＩＬ-１ｌｐポリペプチドをコードするＤＮＡ分子；（６）図１９（配列番号：２５）の４６又は約４６から２１８又は約２１８のアミノ酸残基を含んでなるＩＬ-１ｌｐポリペプチドをコードするＤＮＡ分子からなる群から選択されるＤＮＡ分子；又は（ｂ）（ａ）のＤＮＡ分子の相補鎖に対して少なくとも８０又は約８０％の配列同一性、少なくとも８５又は約８５％の配列同一性、少なくとも９０又は約９０％の配列同一性、又は少なくとも９５又は約９５％の配列同一性を有する単離された核酸を提供する。
他の側面では、本発明は、天然配列ＩＬ-１ｌｐの少なくとも一の生物活性、例えば天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ１、ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌ、又はｈＩＬ-１Ｒａ１ＶのＩＬ-１８Ｒ結合活性を保持するＩＬ-１ｌｐポリペプチドをコードするＤＮＡを含んでなり、ＤＮＡが、（ａ）（１）図１５（配列番号：１９）の１又は約１から２０７又は約２０７のアミノ酸残基を含んでなるＩＬ-１ｌｐポリペプチドをコードするＤＮＡ分子、及び（２）図１９（配列番号：２５）の１又は約１から２１８又は約２１８のアミノ酸残基を含んでなるＩＬ-１ｌｐポリペプチドをコードするＤＮＡ分子からなる群から選択されるＤＮＡ分子；又は（ｂ）（ａ）のＤＮＡ分子の相補鎖に対して少なくとも８０又は約８０％の配列同一性、少なくとも８５又は約８５％の配列同一性、少なくとも９０又は約９０％の配列同一性、又は少なくとも９５又は約９５％の配列同一性を有する単離された核酸を提供する。
【００４０】
他の側面では、本発明は、天然配列ＩＬ-１ｌｐの少なくとも一の生物活性、例えば天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ１のＩＬ-１８Ｒ結合活性、又は天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ３又はｍＩＬ-１Ｒａ３のＩＬ-１Ｒ結合活性を保持するＩＬ-１ｌｐポリペプチドをコードするＤＮＡを含んでなり、ＤＮＡが、（ａ）（１）図７（配列番号：１３）の９５又は約９５から１３４又は約１３４のアミノ酸残基を含んでなるＩＬ-１ｌｐポリペプチドをコードするＤＮＡ分子、及び（２）図９（配列番号：１６）の９５又は約９５から１３４又は約１３４のアミノ酸残基を含んでなるＩＬ-１ｌｐポリペプチドをコードするＤＮＡ分子からなる群から選択されるＤＮＡ分子、又は（ｂ）（ａ）のＤＮＡ分子の相補鎖に対して少なくとも８０又は約８０％の配列同一性、少なくとも８５又は約８５％の配列同一性、少なくとも９０又は約９０％の配列同一性、又は少なくとも９５又は約９５％の配列同一性を有する単離された核酸を提供する。
他の側面では、本発明は、天然配列ＩＬ-１ｌｐの少なくとも一の生物活性、例えば天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ１のＩＬ-１８Ｒ結合活性、又は天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ３又はｍＩＬ-１Ｒａ３のＩＬ-１Ｒ結合活性を保持するＩＬ-１ｌｐポリペプチドをコードするＤＮＡを含んでなり、ＤＮＡが、（ａ）図７（配列番号：１３）の８０又は約８０から１５５又は約１５５のアミノ酸残基を含んでなるＩＬ-１ｌｐポリペプチドをコードするＤＮＡ分子、又は（ｂ）（ａ）のＤＮＡ分子の相補鎖に対して少なくとも８０又は約８０％の配列同一性、少なくとも８５又は約８５％の配列同一性、少なくとも９０又は約９０％の配列同一性、又は少なくとも９５又は約９５％の配列同一性を有する単離された核酸を提供する。
他の側面では、本発明は、天然配列ＩＬ-１ｌｐの少なくとも一の生物活性、例えば天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ１のＩＬ-１８Ｒ結合活性、又は天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ３又はｍＩＬ-１Ｒａ３のＩＬ-１Ｒ結合活性を保持するＩＬ-１ｌｐポリペプチドをコードするＤＮＡを含んでなり、ＤＮＡが、（ａ）（１）図７（配列番号：１３）の２又は約２から１５５又は約１５５のアミノ酸残基を含んでなるＩＬ-１ｌｐポリペプチドをコードするＤＮＡ分子、及び（２）図９（配列番号：１６）の２又は約２から１５５又は約１５５のアミノ酸残基を含んでなるＩＬ-１ｌｐポリペプチドをコードするＤＮＡ分子からなる群から選択されるＤＮＡ分子、又は（ｂ）（ａ）のＤＮＡ分子の相補鎖に対して少なくとも８０又は約８０％の配列同一性、少なくとも８５又は約８５％の配列同一性、少なくとも９０又は約９０％の配列同一性、又は少なくとも９５又は約９５％の配列同一性を有する単離された核酸を提供する。
【００４１】
他の側面では、本発明は、（ａ）（１）図７（配列番号：１３）の９５又は約９５から１３４又は約１３４のアミノ酸残基を含んでなるＩＬ-１ｌｐポリペプチドをコードするＤＮＡ分子、及び（２）図９（配列番号：１６）の９５又は約９５から１３４又は約１３４のアミノ酸残基を含んでなるＩＬ-１ｌｐポリペプチドをコードするＤＮＡ分子からなる群から選択されるＤＮＡ分子、又は（ｂ）（ａ）のＤＮＡ分子の相補鎖に対して少なくとも８０又は約８０％の配列同一性、少なくとも８５又は約８５％の配列同一性、少なくとも９０又は約９０％の配列同一性、又は少なくとも９５又は約９５％の配列同一性を有するＤＮＡを含んでなる単離された核酸を提供する。
他の側面では、本発明は、（ａ）図７（配列番号：１３）の８０又は約８０から１５５又は約１５５のアミノ酸残基を含んでなるＩＬ-１ｌｐポリペプチドをコードするＤＮＡ分子、又は（ｂ）（ａ）のＤＮＡ分子の相補鎖に対して少なくとも８０又は約８０％の配列同一性、少なくとも８５又は約８５％の配列同一性、少なくとも９０又は約９０％の配列同一性、又は少なくとも９５又は約９５％の配列同一性を有するＤＮＡを含んでなる単離された核酸を提供する。
他の側面では、本発明は、（ａ）（１）図７（配列番号：１３）の２又は約２から１５５又は約１５５のアミノ酸残基を含んでなるＩＬ-１ｌｐポリペプチドをコードするＤＮＡ分子、及び（２）図９（配列番号：１６）の２又は約２から１５５又は約１５５のアミノ酸残基を含んでなるＩＬ-１ｌｐポリペプチドをコードするＤＮＡ分子からなる群から選択されるＤＮＡ分子、又は（ｂ）（ａ）のＤＮＡ分子の相補鎖に対して少なくとも８０又は約８０％の配列同一性、少なくとも８５又は約８５％の配列同一性、少なくとも９０又は約９０％の配列同一性、又は少なくとも９５又は約９５％の配列同一性を有するＤＮＡを含んでなる単離された核酸を提供する。
【００４２】
他の側面では、本発明は、（１）図７（配列番号：１２）のセンス鎖の２３８又は約２３８から４６５又は約４６５のヌクレオチド位置からなる核酸配列；（２）図９（配列番号：１５）のセンス鎖の４２７又は約４２７から６０９又は約６０９のヌクレオチド位置からなる核酸配列；及び（３）図１５（配列番号：１８）のセンス鎖の７９又は約７９から１３５又は約１３５のヌクレオチド位置からなる核酸配列からなる群から選択される核酸配列の相補鎖にハイブリッド形成するＤＮＡを含んでなる、ＩＬ-１ｌｐポリペプチドをコードする単離された核酸分子に関する。好ましくは、ハイブリッド形成は緊縮性ハイブリッド形成及び洗浄条件下で生じる。
他の側面では、本発明は、少なくとも９０のヌクレオチド長であり、（１）図７（配列番号：１２）のセンス鎖の２３８又は約２３８から４６５又は約４６５のヌクレオチド位置からなる核酸配列；（２）図９（配列番号：１５）のセンス鎖の４２７又は約４２７から６０９又は約６０９のヌクレオチド位置からなる核酸配列；及び（３）図１５（配列番号：１８）のセンス鎖の１１５は約１１５ら１３５又は約１３５のヌクレオチド位置からなる核酸配列からなる群から選択される核酸配列の相補鎖にハイブリッド形成するＤＮＡを含んでなる単離された核酸分子に関する。好ましくは、ハイブリッド形成は緊縮性ハイブリッド形成及び洗浄条件下で生じる。
他の側面では、本発明は、天然配列ＩＬ-１ｌｐの少なくとも一の生物活性、例えば天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ３又はｍＩＬ-１Ｒａ３のＩＬ-１Ｒ結合活性、又は天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ１、ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌ、又はｈＩＬ-１Ｒａ１ＶのＩＬ-１８Ｒ結合活性を保持するＩＬ-１ｌｐポリペプチドをコードするＤＮＡを含んでなり、ＤＮＡが、（１）図２（配列番号：４）のセンス鎖の１１８又は約１１８から２３１又は約２３１のヌクレオチド位置からなる核酸配列；（２）図７（配列番号：１２）のセンス鎖の１００又は約１００から４６５又は約４６５のヌクレオチド位置からなる核酸配列；（３）図９（配列番号：１５）のセンス鎖の２４４又は約２４４から６０９又は約６０９のヌクレオチド位置からなる核酸配列；及び（４）図１９（配列番号：２４）のセンス鎖の２０８又は約２０８から３３９又は約３３９のヌクレオチド位置からなる核酸配列からなる群から選択される核酸配列の相補鎖にハイブリッド形成する単離された核酸分子に関する。好ましくは、ハイブリッド形成は緊縮性ハイブリッド形成及び洗浄条件下で生じる。
他の側面では、本発明は、天然配列ＩＬ-１ｌｐの少なくとも一の生物活性、例えば天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ３又はｍＩＬ-１Ｒａ３のＩＬ-１Ｒ結合活性を保持するＩＬ-１ｌｐポリペプチドをコードするＤＮＡを含んでなり、ＤＮＡが、（１）図７（配列番号：１２）のセンス鎖の４又は約４から４６５又は約４６５のヌクレオチド位置からなる核酸配列；及び（２）図９（配列番号：１５）のセンス鎖の１４８又は約１４８から６０９又は約６０９のヌクレオチド位置からなる核酸配列からなる群から選択される核酸配列の相補鎖にハイブリッド形成する単離された核酸分子に関する。好ましくは、ハイブリッド形成は緊縮性ハイブリッド形成及び洗浄条件下で生じる。
【００４３】
更なる側面では、本発明は、天然配列ＩＬ-１ｌｐの少なくとも一の生物活性、例えば天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ３又はｍＩＬ-１Ｒａ３のＩＬ-１Ｒ結合活性、又は天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ１、ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌ、又はｈＩＬ-１Ｒａ１ＶのＩＬ-１８Ｒ結合活性を保持するＩＬ-１ｌｐポリペプチドをコードするＤＮＡを含んでなり、ＤＮＡが、（ａ）ＡＴＣＣ寄託番号２０３５８８（ＤＮＡ８５０６６−２５３４）、ＡＴＣＣ寄託番号２０３５８７（ＤＮＡ９６７８６−２５３４）、ＡＴＣＣ寄託番号２０３５８９（ＤＮＡ９６７８７−２５３４）、ＡＴＣＣ寄託番号２０３５９０（ＤＮＡ９２５０５−２５３４）、ＡＴＣＣ寄託番号２０３８４６（ＤＮＡ１０２０４３−２５３４）、又はＡＴＣＣ寄託番号２０３９７３（ＤＮＡ１１４８７６−２５３４）として寄託されたベクターのｃＤＮＡ挿入断片によりコードされる、成熟ＩＬ-１ｌｐポリペプチドのようなＩＬ-１ｌｐをコードするＤＮＡ、又は（ｂ）（ａ）のＤＮＡ分子の相補鎖に対して少なくとも８０又は約８０％の配列同一性、少なくとも８５又は約８５％の配列同一性、少なくとも９０又は約９０％の配列同一性、又は少なくとも９５又は約９５％の配列同一性を有する単離された核酸を提供する。好適な実施態様では、核酸は、ＡＴＣＣ寄託番号２０３５８８（ＤＮＡ８５０６６−２５３４）、ＡＴＣＣ寄託番号２０３５８７（ＤＮＡ９６７８６−２５３４）、ＡＴＣＣ寄託番号２０３５８６（ＤＮＡ９２９２９−２５３４）、ＡＴＣＣ寄託番号２０３５８９（ＤＮＡ９６７８７−２５３４）、ＡＴＣＣ寄託番号２０３５９０（ＤＮＡ９２５０５−２５３４）、ＡＴＣＣ寄託番号２０３８４６（ＤＮＡ１０２０４３−２５３４）、ＡＴＣＣ寄託番号２０３９７３（ＤＮＡ１１４８７６−２５３４）又はＡＴＣＣ寄託番号２０３８５５（ＤＮＡ１０２０４４−２５３４）として寄託されたベクターのｃＤＮＡ挿入断片によりコードされる、成熟ＩＬ-１ｌｐポリペプチドのようなＩＬ-１ｌｐをコードするＤＮＡを含んでなる。
更なる側面では、本発明は、天然配列ＩＬ-１ｌｐの少なくとも一の生物活性、例えば天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ３又はｍＩＬ-１Ｒａ３のＩＬ-１Ｒ結合活性、又は天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ１、ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌ、又はｈＩＬ-１Ｒａ１ＶのＩＬ-１８Ｒ結合活性を保持するＩＬ-１ｌｐポリペプチドをコードするＤＮＡを含んでなり、ＤＮＡが、（ａ）ＡＴＣＣ寄託番号２０３５８８（ＤＮＡ８５０６６−２５３４）、ＡＴＣＣ寄託番号２０３５８７（ＤＮＡ９６７８６−２５３４）、ＡＴＣＣ寄託番号２０３５８９（ＤＮＡ９６７８７−２５３４）、ＡＴＣＣ寄託番号２０３５９０（ＤＮＡ９２５０５−２５３４）、ＡＴＣＣ寄託番号２０３８４６（ＤＮＡ１０２０４３−２５３４）、及びＡＴＣＣ寄託番号２０３９７３（ＤＮＡ１１４８７６−２５３４）として寄託されたベクターからなる群から選択されるベクターのｃＤＮＡ挿入断片の最長のオープンリーディングフレームによりコードされる全体アミノ酸配列をコードするＤＮＡ、又は（ｂ）（ａ）のＤＮＡ分子の相補鎖に対して少なくとも８０又は約８０％の配列同一性、少なくとも８５又は約８５％の配列同一性、少なくとも９０又は約９０％の配列同一性、又は少なくとも９５又は約９５％の配列同一性を有する単離された核酸を提供する。好適な実施態様では、核酸は、（ａ）ＡＴＣＣ寄託番号２０３５８８（ＤＮＡ８５０６６−２５３４）、ＡＴＣＣ寄託番号２０３５８７（ＤＮＡ９６７８６−２５３４）、ＡＴＣＣ寄託番号２０３５８６（ＤＮＡ９２９２９−２５３４）、ＡＴＣＣ寄託番号２０３５８９（ＤＮＡ９６７８７−２５３４）、及びＡＴＣＣ寄託番号２０３５９０（ＤＮＡ９２５０５−２５３４）として寄託されたベクターからなる群から選択されたベクターのｃＤＮＡ挿入断片の最長のオープンリーディングフレームによりコードされる全体アミノ酸配列をコードするＤＮＡ、又は（ａ）のＤＮＡの相補鎖を含んでなる。他の好適な実施態様では、核酸は、（ａ）ＡＴＣＣ寄託番号２０３８４６（ＤＮＡ１０２０４３−２５３４）、ＡＴＣＣ寄託番号２０３８５５（ＤＮＡ１０２０４４−２５３４）、及びＡＴＣＣ寄託番号２０３９７３（ＤＮＡ１１４８７６−２５３４）として寄託されたベクターからなる群から選択されたベクターのｃＤＮＡ挿入断片の最長のオープンリーディングフレームによりコードされる全体アミノ酸配列をコードするＤＮＡ、又は（ａ）のＤＮＡの相補鎖を含んでなる。
【００４４】
他の側面では、本発明は、天然配列ＩＬ-１ｌｐの少なくとも一の生物活性、例えば天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ３又はｍＩＬ-１Ｒａ３のＩＬ-１Ｒ結合活性、又は天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ１、ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌ、又はｈＩＬ-１Ｒａ１ＶのＩＬ-１８Ｒ結合活性を保持するＩＬ-１ｌｐポリペプチドをコードするＤＮＡを含んでなり、（１）ＡＴＣＣ寄託番号２０３５８８として寄託されたベクターのｃＤＮＡ挿入断片の最長のオープンリーディングフレームによりコードされる全体アミノ酸配列、（２）ＡＴＣＣ寄託番号２０３５８７として寄託されたベクターのｃＤＮＡ挿入断片の最長のオープンリーディングフレームによりコードされる全体アミノ酸配列、又は該配列の３６のＮ末端アミノ酸残基を除く全体アミノ酸配列、（３）ＡＴＣＣ寄託番号２０３５８９として寄託されたベクターのｃＤＮＡ挿入断片の最長のオープンリーディングフレームによりコードされる全体アミノ酸配列、又は該配列のＮ末端アミノ酸残基を除く全体アミノ酸配列、（４）ＡＴＣＣ寄託番号２０３５９０として寄託されたベクターのｃＤＮＡ挿入断片によりコードされる全体アミノ酸配列、又は該配列のＮ末端アミノ酸残基を除く全体アミノ酸配列、（５）ＡＴＣＣ寄託番号２０３８４６として寄託されたベクターのｃＤＮＡ挿入断片の最長のオープンリーディングフレームによりコードされる全体アミノ酸配列、又は該配列の３４のＮ末端アミノ酸残基を除く全体アミノ酸配列、及び（６）ＡＴＣＣ寄託番号２０３９７３として寄託されたベクターのｃＤＮＡ挿入断片の最長のオープンリーディングフレームによりコードされる全体アミノ酸配列、又は該配列の４５のＮ末端アミノ酸残基を除く全体アミノ酸配列からなる群から選択されるアミノ酸配列をコードするＤＮＡ、又は（ｂ）（ａ）のＤＮＡ分子の相補鎖に対して少なくとも８０又は約８０％の配列同一性、少なくとも８５又は約８５％の配列同一性、少なくとも９０又は約９０％の配列同一性、又は少なくとも９５又は約９５％の配列同一性を有する単離された核酸に関する。
【００４５】
好ましい実施態様では、核酸は（ａ）：（１）ＡＴＣＣ寄託番号２０３５８８として寄託されたベクターのｃＤＮＡ挿入断片の最長のオープンリーディングフレームによりコードされる全体アミノ酸配列、（２）ＡＴＣＣ寄託番号２０３５８７として寄託されたベクターのｃＤＮＡ挿入断片の最長のオープンリーディングフレームによりコードされる全体アミノ酸配列、又は該配列の３６のＮ末端アミノ酸残基を除く全体アミノ酸配列、（３）ＡＴＣＣ寄託番号２０３５８９として寄託されたベクターのｃＤＮＡ挿入断片の最長のオープンリーディングフレームによりコードされる全体アミノ酸配列、又は該配列のＮ末端アミノ酸残基を除く全体アミノ酸配列、（４）ＡＴＣＣ寄託番号２０３５９０として寄託されたベクターのｃＤＮＡ挿入断片の最長のオープンリーディングフレームによりコードされる全体アミノ酸配列、又は該配列のＮ末端アミノ酸残基を除く全体アミノ酸配列、（５）ＡＴＣＣ寄託番号２０３８４６として寄託されたベクターのｃＤＮＡ挿入断片の最長のオープンリーディングフレームによりコードされる全体アミノ酸配列、又は該配列のＮ末端アミノ酸残基を除く全体アミノ酸配列、又は該配列の３４のＮ末端アミノ酸残基を除く全体アミノ酸配列、及び（６）ＡＴＣＣ寄託番号２０３９７３として寄託されたベクターのｃＤＮＡ挿入断片の最長のオープンリーディングフレームによりコードされる全体アミノ酸配列、又は該配列のＮ末端アミノ酸残基を除く全体アミノ酸配列、又は該配列の４５のＮ末端アミノ酸残基を除く全体アミノ酸配列からなる群から選択されるアミノ酸配列をコードするＤＮＡ、又は（ｂ）（ａ）のＤＮＡの相補鎖を構成する。
【００４６】
他の側面では、本発明は、（ａ）天然配列ＩＬ-１ｌｐの少なくとも一の生物活性、例えばｈＩＬ-１Ｒａ１のＩＬ-１８Ｒ結合活性、又は天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ３又はｍＩＬ-１Ｒａ３のＩＬ-１Ｒ結合活性を保持するＩＬ-１ｌｐポリペプチドで、そしてそれが（１）図２（配列番号：５）のアミノ酸残基３７又は約３７から２０３又は約２０３、（２）図３（配列番号：７）のアミノ酸残基１５又は約１５から１９３又は約１９３、（３）図７（配列番号：１３）のアミノ酸残基３４又は約３４から１５５又は約１５５、（４）図９（配列番号：１６）のアミノ酸残基３４又は約３４から１５５又は約１５５、（５）図１５（配列番号：１９）のアミノ酸残基２６又は約２６から２０７又は約２０７、（６）図１９（配列番号：２５）のアミノ酸残基４６又は約４６から２１８又は約２１８からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも８０又は約８０％の配列同一性、少なくとも８５又は約８５％の配列同一性、少なくとも９０又は約９０％の配列同一性、又は少なくとも９５又は約９５％の配列同一性を有するＩＬ-１ｌｐポリペプチドをコードするＤＮＡ、又は（ｂ）（ａ）のＤＮＡの相補鎖を含んでなる単離された核酸分子に関する。
またさらなる側面では、本発明は、（ａ）天然配列ＩＬ-１ｌｐの少なくとも一の生物活性、例えばｈＩＬ-１Ｒａ１のＩＬ-１８Ｒ結合活性、又は天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ３又はｍＩＬ-１Ｒａ３のＩＬ-１Ｒ結合活性を保持するＩＬ-１ｌｐポリペプチドで、そしてそれが（１）図７（配列番号：１３）のアミノ酸残基９５又は約９５から１３４又は約１３４、及び（２）図９（配列番号：１６）のアミノ酸残基９５又は約９５から１３４又は約１３４からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも８０又は約８０％の配列同一性、少なくとも８５又は約８５％の配列同一性、少なくとも９０又は約９０％の配列同一性、又は少なくとも９５又は約９５％の配列同一性を有するＩＬ-１１ｐポリペプチドをコードするＤＮＡ、又は（ｂ）（ａ）のＤＮＡの相補鎖を含んでなる単離された核酸分子に関する。
【００４７】
またさらなる側面では、本発明は、（ａ）天然配列ＩＬ-１ｌｐの少なくとも一の生物活性、例えばｈＩＬ-１Ｒａ１のＩＬ-１８Ｒ結合活性、又は天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ３又はｍＩＬ-１Ｒａ３のＩＬ-１Ｒ結合活性を保持するＩＬ-１ｌｐポリペプチドで、そしてそれが図７（配列番号：１３）のアミノ酸残基８０又は約８０から１５５又は約１５５、からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも８０又は約８０％の配列同一性、少なくとも８５又は約８５％の配列同一性、少なくとも９０又は約９０％の配列同一性、又は少なくとも９５又は約９５％の配列同一性を有するＩＬ-１１ｐポリペプチドをコードするＤＮＡ、又は（ｂ）（ａ）のＤＮＡの相補鎖を含んでなる単離された核酸分子に関する。
またさらなる側面では、本発明は、（ａ）天然配列ＩＬ-１ｌｐの少なくとも一の生物活性、例えばｈＩＬ-１Ｒａ１のＩＬ-１８Ｒ結合活性、又は天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ３又はｍＩＬ-１Ｒａ３のＩＬ-１Ｒ結合活性を保持するＩＬ-１ｌｐポリペプチドで、そしてそれが（１）図７（配列番号：１３）のアミノ酸残基２又は約２から１５５又は約１５５、及び（２）図９（配列番号：１６）のアミノ酸残基２又は約２から１５５又は約１５５からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも８０又は約８０％の配列同一性、少なくとも８５又は約８５％の配列同一性、少なくとも９０又は約９０％の配列同一性、又は少なくとも９５又は約９５％の配列同一性を有するＩＬ-１１ｐポリペプチドをコードするＤＮＡ、又は（ｂ）（ａ）のＤＮＡの相補鎖を含んでなる単離された核酸分子に関する。
またさらなる側面では、本発明は、（ａ）（１）図７（配列番号：１３）のアミノ酸残基９５又は約９５から１３４又は約１３４、及び（２）図９（配列番号：１６）のアミノ酸残基９５又は約９５から１３４又は約１３４からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも８０又は約８０％の配列同一性、少なくとも８５又は約８５％の配列同一性、少なくとも９０又は約９０％の配列同一性、又は少なくとも９５又は約９５％の配列同一性を有するＩＬ-１１ｐポリペプチドをコードするＤＮＡ、又は（ｂ）（ａ）のＤＮＡの相補鎖を含んでなる単離された核酸分子に関する。
またさらなる側面では、本発明は、（ａ）図７（配列番号：１３）のアミノ酸残基８０又は約８０から１５５又は約１５５のアミノ酸配列に対して少なくとも８０又は約８０％の配列同一性、少なくとも８５又は約８５％の配列同一性、少なくとも９０又は約９０％の配列同一性、又は少なくとも９５又は約９５％の配列同一性を有するＩＬ-１１ｐポリペプチドをコードするＤＮＡ、又は（ｂ）（ａ）のＤＮＡの相補鎖を含んでなる単離された核酸分子に関する。
【００４８】
またさらなる側面では、本発明は、（ａ）（１）図７（配列番号：１３）のアミノ酸残基２又は約２から１５５又は約１５５、及び（２）図９（配列番号：１６）のアミノ酸残基２又は約２から１５５又は約１５５からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも８０又は約８０％の配列同一性、少なくとも８５又は約８５％の配列同一性、少なくとも９０又は約９０％の配列同一性、又は少なくとも９５又は約９５％の配列同一性を有するＩＬ-１１ｐポリペプチドをコードするＤＮＡ、又は（ｂ）（ａ）のＤＮＡの相補鎖を含んでなる単離された核酸分子に関する。
またさらなる側面では、本発明は、（ａ）天然配列ＩＬ-１ｌｐの少なくとも一の生物活性、例えばｈＩＬ-１Ｒａ１、ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌ、又は天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ１ＶのＩＬ-１８Ｒ結合活性を保持するＩＬ-１ｌｐポリペプチドで、そしてそれが（１）図１５（配列番号：１９）のアミノ酸残基１又は約１から２０７又は約２０７、及び（２）図１９（配列番号：２５）のアミノ酸残基１又は約１から２１８又は約２１８からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも８０又は約８０％の配列同一性、少なくとも８５又は約８５％の配列同一性、少なくとも９０又は約９０％の配列同一性、又は少なくとも９５又は約９５％の配列同一性を有するＩＬ-１１ｐポリペプチドをコードするＤＮＡ、又は（ｂ）（ａ）のＤＮＡの相補鎖を含んでなる単離された核酸分子に関する。
またさらなる側面では、本発明は、天然配列ＩＬ-１ｌｐの少なくとも一の生物活性、例えば天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ３又はｍＩＬ-１Ｒａ３のＩＬ-１Ｒ結合活性、又は天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ１、ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌ、ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｓ、又はｈＩＬ-１Ｒａ１ＶのＩＬ-１８Ｒ結合活性を有するＩＬ-１ｌｐをコードするＤＮＡを含んでなる単離された核酸分子に関し、そのＤＮＡは緊縮条件下で（ａ）（１）図２（配列番号：５）のアミノ酸残基３７又は約３７から２０３又は約２０３の配列をを含んでなるＩＬ-１ｌｐポリペプチド、（２）図３（配列番号：７）のアミノ酸残基１５又は約１５から１９３又は約１９３の配列をを含んでなるＩＬ-１ｌｐポリペプチド、（３）図７（配列番号：１３）のアミノ酸残基３４又は約３４から１５５又は約１５５の配列をを含んでなるＩＬ-１ｌｐポリペプチド、（４）図９（配列番号：１６）のアミノ酸残基３４又は約３４から１５５又は約１５５の配列をを含んでなるＩＬ-１ｌｐポリペプチド、（５）図１５（配列番号：１９）のアミノ酸残基２６又は約２６から２０７又は約２０７の配列をを含んでなるＩＬ-１ｌｐポリペプチド、及び（６）図１９（配列番号：２５）のアミノ酸残基４６又は約４６から２１８又は約２１８の配列をを含んでなるＩＬ-１ｌｐポリペプチドからなる群から選択されるＩＬ-１ｌｐポリペプチドをコードするＤＮＡ分子、又は（ｂ）（ａ）のＤＮＡ分子の相補鎖を用いて試験ＤＮＡをハイブリッド形成することによって、及び試験ＤＮＡ分子が天然配列ＩＬ-１ｌｐの少なくとも一の生物活性、例えば天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ３又はｍＩＬ-１Ｒａ３のＩＬ-１Ｒ結合活性、又は天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ１、ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌ、又はｈＩＬ-１Ｒａ１ＶのＩＬ-１８Ｒ結合活性を有するＩＬ-１ｌｐをコードする場合、及び試験ＤＮＡ分子が（ａ）又は（ｂ）のＤＮＡ分子と少なくとも約８０％の配列同一性、又は少なくとも約８５％の配列同一性、又は少なくとも９０％の配列同一性、又は少なくとも約９５％の配列同一性を有する場合には、試験ＤＮＡ分子を単離することにより、生成される。
【００４９】
他の側面では、本発明は（ａ）（１）図２（配列番号：５）のアミノ酸残基３７又は約３７から６３又は約６３を含んでなる、例えばｈＩＬ-１Ｒａ１ポリペプチドのようなポリペプチド；（２）図３（配列番号：７）のアミノ酸残基１５又は約１５から５３又は約５３を含んでなる、例えばｈＩＬ-１Ｒａ１ポリペプチドのようなポリペプチド；（３）図５（配列番号：１０）のアミノ酸残基１又は約１から１３４又は約１３４を含んでなる、例えばｈＩＬ-１Ｒａ２ポリペプチドのようなポリペプチド；（４）図５（配列番号：１０）のアミノ酸残基１０又は約１０から１３４又は約１３４を含んでなるポリペプチド；（５）図５（配列番号：１０）のアミノ酸残基２７又は約２７から１３４又は約１３４を含んでなる、例えばｈＩＬ-１Ｒａ２ポリペプチドのようなポリペプチド；（６）図５（配列番号：１０）のアミノ酸残基２７又は約２７から１３４又は約１３４を含むｈＩＬ-１Ｒａ２の天然アミノ酸配列を含んでなる、例えばｈＩＬ-１Ｒａ２融合変異体ポリペプチドのようなポリペプチド；（７）図７（配列番号：１３）のアミノ酸残基９５又は約９５から１３４又は約１３４を含んでなる、例えばｈＩＬ-１Ｒａ３ポリペプチドのようなポリペプチド；及び（８）図９（配列番号：１６）のアミノ酸残基９５又は約９５から１３４又は約１３４を含んでなる、例えばｈＩＬ-１Ｒａ３ポリペプチドのようなポリペプチドからなる群より選択された、例えばＩＬ-１ｌｐポリペプチドのようなポリペプチドをコードするＤＮＡ；又は（ｂ）（ａ）のＤＮＡの相補鎖を構成する単離された核酸分子を提供する。
他の側面では、本発明は（ａ）（１）図１５（配列番号：１９）のアミノ酸残基２６又は約２６から４４又は約４４を含んでなる、例えばｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌポリペプチドのようなポリペプチド；（２）図１５（配列番号：１９）のアミノ酸残基１又は約１から４４又は約４４を含んでなる、例えばｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌポリペプチドのようなポリペプチド；（３）図１５（配列番号：１９）のアミノ酸残基２６又は約２６から７８又は約７８を含んでなる、例えばｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌポリペプチドのようなポリペプチド；（４）図１５（配列番号：１９）のアミノ酸残基１又は約１から７８又は約７８を含んでなる、例えばｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌポリペプチドのようなポリペプチド；（５）図１６（配列番号：２１）のアミノ酸残基１又は約１から３８又は約３８を含んでなる、例えばｈＩＬ-１Ｒａ１Ｓポリペプチドのようなポリペプチド；（６）図１９（配列番号：２５）のアミノ酸残基３７又は約３７から５５又は約５５を含むｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖの天然アミノ酸配列を含んでなる、例えばｈＩＬ-１Ｒａ２融合変異体ポリペプチドのようなポリペプチド；（７）図１９（配列番号：２５）のアミノ酸残基１２又は約１２から５５又は約５５を含んでなる、例えばｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖポリペプチドのようなポリペプチド；（８）図１９（配列番号：２５）のアミノ酸残基１又は約１から５５又は約５５を含んでなる、例えばｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖポリペプチドのようなポリペプチド；（９）図１９（配列番号：２５）のアミノ酸残基４６又は約４６から５５又は約５５を含んでなる、例えばｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖポリペプチドのようなポリペプチド；（１０）図１９（配列番号：２５）のアミノ酸残基４６又は約４６から８９又は約８９を含んでなる、例えばｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖポリペプチドのようなポリペプチド；（１１）図１９（配列番号：２５）のアミノ酸残基３７又は約３７から８９又は約８９を含んでなる、例えばｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖポリペプチドのようなポリペプチド；（１２）図１９（配列番号：２５）のアミノ酸残基１２又は約１２から８９又は約８９を含んでなる、例えばｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖポリペプチドのようなポリペプチド；及び（１３）図１９（配列番号：２５）のアミノ酸残基１又は約１から８９又は約８９を含んでなる、例えばｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖポリペプチドのようなポリペプチドからなる群より選択された、例えばＩＬ-１ｌｐポリペプチドのようなポリペプチドをコードするＤＮＡ；又は（ｂ）（ａ）のＤＮＡの相補鎖を構成する単離された核酸分子を提供する。
【００５０】
他の側面では、本発明は（ａ）（１）そのＮ−末端又はＣ−末端でヘテロアミノ酸又はアミノ酸配列と融合した、図１５（配列番号：１９）のアミノ酸残基２６又は約２６から２０７又は約２０７よりなるｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌの天然アミノ酸配列を含んでなる、例えばｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌポリペプチドのようなポリペプチド；（２）そのＮ−末端又はＣ−末端でヘテロアミノ酸又はアミノ酸配列と融合した、図１５（配列番号：１９）のアミノ酸残基１又は約１から２０７又は約２０７よりなるｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌの天然アミノ酸配列を含んでなる、例えばｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌポリペプチドのようなポリペプチド；（３）図１５（配列番号：１９）のアミノ酸残基２６又は約２６から２０７又は約２０７を含んでなる、例えばｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌポリペプチドのようなポリペプチド；（４）図１５（配列番号：１９）のアミノ酸残基１又は約１から２０７又は約２０７を含んでなる、例えばｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌポリペプチドのようなポリペプチド；（５）そのＮ−末端又はＣ−末端でヘテロアミノ酸又はアミノ酸配列と融合した、図１６（配列番号：２１）のアミノ酸残基２６又は約２６から１６７又は約１６７よりなるｈＩＬ-１Ｒａ１Ｓの天然アミノ酸配列を含んでなる、例えばｈＩＬ-１Ｒａ１Ｓ融合変異体ポリペプチドのようなポリペプチド；（６）図１６（配列番号：２１）のアミノ酸残基２６又は約２６から１６７又は約１６７を含んでなる、例えばｈＩＬ-１Ｒａ１Ｓポリペプチドのようなポリペプチド；（７）そのＮ−末端又はＣ−末端でヘテロアミノ酸又はアミノ酸配列と融合した、図１６（配列番号：２１）のアミノ酸残基１又は約１から１６７又は約１６７よりなるｈＩＬ-１Ｒａ１Ｓの天然アミノ酸配列を含んでなる、例えばｈＩＬ-１Ｒａ１Ｓ融合変異体ポリペプチドのようなポリペプチド；（８）図１６（配列番号：２１）のアミノ酸残基１又は約１から１６７又は約１６７を含んでなる、例えばｈＩＬ-１Ｒａ１Ｓポリペプチドのようなポリペプチド；（９）そのＮ−末端又はＣ−末端でヘテロアミノ酸又はアミノ酸配列と融合した、図１６（配列番号：２１）のアミノ酸残基３９又は約３９から１６７又は約１６７よりなるｈＩＬ-１Ｒａ１Ｓの天然アミノ酸配列を含んでなる、例えばｈＩＬ-１Ｒａ１Ｓ融合変異体ポリペプチドのようなポリペプチド；（１０）そのＮ−末端又はＣ−末端でヘテロアミノ酸又はアミノ酸配列と融合した、図１６（配列番号：２１）のアミノ酸残基４７又は約４７から１６７又は約１６７よりなるｈＩＬ-１Ｒａ１Ｓの天然アミノ酸配列を含んでなる、例えばｈＩＬ-１Ｒａ１Ｓ融合変異体ポリペプチドのようなポリペプチド；（１１）図１６（配列番号：２１）のアミノ酸残基３９又は約３９から１６７又は約１６７を含んでなる、例えばｈＩＬ-１Ｒａ１Ｓポリペプチドのようなポリペプチド；（１２）図１６（配列番号：２１）のアミノ酸残基４７又は約４７から１６７又は約１６７を含んでなる、例えばｈＩＬ-１Ｒａ１Ｓポリペプチドのようなポリペプチド；（１３）そのＮ−末端又はＣ−末端でヘテロアミノ酸又はアミノ酸配列と融合した、図１９（配列番号：２５）のアミノ酸残基１又は約１から２１８又は約２１８よりなるｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖの天然アミノ酸配列を含んでな��、例えばｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖポリペプチドのようなポリペプチド；（１４）図１９（配列番号：２５）のアミノ酸残基１又は約１から２１８又は約２１８を含んでなる、例えばｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖポリペプチドのようなポリペプチド；（１５）そのＮ−末端又はＣ−末端でヘテロアミノ酸又はアミノ酸配列と融合した、図１９（配列番号：２５）のアミノ酸残基１２又は約１２から２１８又は約２１８よりなるｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖの天然アミノ酸配列を含んでなる、例えばｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖポリペプチドのようなポリペプチド；（１６）図１９（配列番号：２５）のアミノ酸残基１２又は約１２から２１８又は約２１８を含んでなる、例えばｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖポリペプチドのようなポリペプチド；（１７）そのＮ−末端又はＣ−末端でヘテロアミノ酸又はアミノ酸配列と融合した、図１９（配列番号：２５）のアミノ酸残基３７又は約３７から２１８又は約２１８よりなるｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖの天然アミノ酸配列を含んでなる、例えばｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖポリペプチドのようなポリペプチド；（１８）そのＮ−末端又はＣ−末端でヘテロアミノ酸又はアミノ酸配列と融合した、図１９（配列番号：２５）のアミノ酸残基４６又は約４６から２１８又は約２１８よりなるｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖの天然アミノ酸配列を含んでなる、例えばｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖポリペプチドのようなポリペプチド；（１９）図１９（配列番号：２５）のアミノ酸残基３７又は約３７から２１８又は約２１８を含んでなる、例えばｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖポリペプチドのようなポリペプチド；及び（２０）図１９（配列番号：２５）のアミノ酸残基４６又は約４６から２１８又は約２１８を含んでなる、例えばｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖポリペプチドのようなポリペプチドからなる群より選択された、例えばＩＬ-１ｌｐポリペプチドのようなポリペプチドをコードするＤＮＡ；又は（ｂ）（ａ）のＤＮＡの相補鎖を構成する単離された核酸分子を提供する。
【００５１】
他の側面では、本発明は（１）図２（配列番号：５）のアミノ酸残基３７又は約３７から２０３又は約２０３のアミノ酸配列を含んでなる、例えばｈＩＬ-１Ｒａ１ポリペプチドのようなポリペプチドをコードするＤＮＡ分子；（２）図３（配列番号：７）のアミノ酸残基１５又は約１５から１９３又は約１９３のアミノ酸配列を含んでなる、例えばｈＩＬ-１Ｒａ１ポリペプチドのようなポリペプチドをコードするＤＮＡ分子；（３）図５（配列番号：１０）のアミノ酸残基１又は約１から１３４又は約１３４のアミノ酸配列を含んでなる、例えばｈＩＬ-１Ｒａ２ポリペプチドのようなポリペプチドをコードするＤＮＡ分子；（４）図５（配列番号：１０）のアミノ酸残基１０又は約１０から１３４又は約１３４のアミノ酸配列を含んでなるポリペプチドをコードするＤＮＡ分子；（５）そのＮ−末端又はＣ−末端でヘテロアミノ酸又はアミノ酸配列と融合した、図５（配列番号：１０）のアミノ酸残基２７又は約２７から１３４又は約１３４よりなるｈＩＬ-１Ｒａ２の天然アミノ酸配列を含んでなる、例えばｈＩＬ-１Ｒａ２融合変異体ポリペプチドのようなポリペプチドをコードするＤＮＡ分子；（６）図５（配列番号：１０）のアミノ酸残基２７又は約２７から１３４又は約１３４のアミノ酸配列を含んでなる、例えばｈＩＬ-１Ｒａ２ポリペプチドのようなポリペプチドをコードするＤＮＡ分子；（７）図７（配列番号：１３）のアミノ酸残基９５又は約９５から１３４又は約１３４のアミノ酸配列を含んでなる、例えばｈＩＬ-１Ｒａ３ポリペプチドのようなポリペプチドをコードするＤＮＡ分子；（８）図９（配列番号：１６）のアミノ酸残基９５又は約９５から１３４又は約１３４のアミノ酸配列を含んでなる、例えばｈＩＬ-１Ｒａ３ポリペプチドのようなポリペプチドをコードするＤＮＡ分子；（９）（１）−（８）のＤＮＡ分子のいずれかの相補鎖からなる群より選択された単離されたＤＮＡ分子を提供する。
他の側面では、本発明は（１）図１５（配列番号：１９）のアミノ酸残基２６又は約２６から２０７又は約２０７のアミノ酸配列を含んでなる、例えばｈＩＬ-１Ｒａ１ＬポリペプチドのようなポリペプチドをコードするＤＮＡ分子；（２）図１６（配列番号：２１）のアミノ酸残基２６又は約２６から１６７又は約１６７のアミノ酸配列を含んでなる、例えばｈＩＬ-１Ｒａ１ＳポリペプチドのようなポリペプチドをコードするＤＮＡ分子；（３）図１９（配列番号：２５）のアミノ酸残基３７又は約３７から２１８又は約２１８のアミノ酸配列を含んでなる、例えばｈＩＬ-１Ｒａ１ＶポリペプチドのようなポリペプチドをコードするＤＮＡ分子；（４）図１９（配列番号：２５）のアミノ酸残基４６又は約４６から２１８又は約２１８のアミノ酸配列を含んでなる、例えばｈＩＬ-１Ｒａ１ＶポリペプチドのようなポリペプチドをコードするＤＮＡ分子；及び（５）（１）−（４）のＤＮＡ分子のいずれかの相補鎖からなる群より選択された単離されたＤＮＡ分子を提供する。
【００５２】
他の側面では、本発明は（１）図１５（配列番号：１９）のアミノ酸残基１又は約１から２０７又は約２０７のアミノ酸配列を含んでなる、例えばｈＩＬ-１Ｒａ１ＬポリペプチドのようなポリペプチドをコードするＤＮＡ分子；（２）図１６（配列番号：２１）のアミノ酸残基１又は約１から１６７又は約１６７のアミノ酸配列を含んでなる、例えばｈＩＬ-１Ｒａ１ＳポリペプチドのようなポリペプチドをコードするＤＮＡ分子；（３）図１９（配列番号：２５）のアミノ酸残基１２又は約１２から２１８又は約２１８のアミノ酸配列を含んでなる、例えばｈＩＬ-１Ｒａ１ＶポリペプチドのようなポリペプチドをコードするＤＮＡ分子；（４）図１９（配列番号：２５）のアミノ酸残基１又は約１から２１８又は約２１８のアミノ酸配列を含んでなる、例えばｈＩＬ-１Ｒａ１ＶポリペプチドのようなポリペプチドをコードするＤＮＡ分子；及び（５）（１）−（４）のＤＮＡ分子のいずれかの相補鎖からなる群より選択された単離されたＤＮＡ分子を提供する。
他の側面では、本発明は（１）図２（配列番号：５）のアミノ酸残基８０又は約８０から１５５又は約１５５のアミノ酸配列を含んでなる、例えばｈＩＬ-１Ｒａ３ポリペプチドのようなポリペプチドをコードするＤＮＡ分子；及び（２）（１）のＤＮＡ分子の相補鎖からなる群より選択された単離されたＤＮＡ分子を提供する。
他の側面では、本発明は（１）図２（配列番号：５）のアミノ酸残基１又は約１から２０３又は約２０３のアミノ酸配列を含んでなる、例えばｈＩＬ-１Ｒａ１ポリペプチドのようなポリペプチドをコードするＤＮＡ分子；（２）図３（配列番号：７）のアミノ酸残基１又は約１から１９３又は約１９３のアミノ酸配列を含んでなる、例えばｈＩＬ-１Ｒａ１ポリペプチドのようなポリペプチドをコードするＤＮＡ分子；（３）図７（配列番号：１３）のアミノ酸残基３４又は約３４から１５５又は約１５５のアミノ酸配列を含んでなる、例えばｈＩＬ-１Ｒａ３ポリペプチドのようなポリペプチドをコードするＤＮＡ分子；（４）図９（配列番号：１６）のアミノ酸残基３４又は約３４から１５５又は約１５５のアミノ酸配列を含んでなる、例えばｈＩＬ-１Ｒａ３ポリペプチドのようなポリペプチドをコードするＤＮＡ分子；及び（５）（１）−（４）のＤＮＡ分子のいずれかの相補鎖からなる群より選択された単離されたＤＮＡ分子を提供する。
【００５３】
他の側面では、本発明は（１）図７（配列番号：１３）のアミノ酸残基１又は約１から１５５又は約１５５のアミノ酸配列を含んでなる、例えばｈＩＬ-１Ｒａ３ポリペプチドのようなポリペプチドをコードするＤＮＡ分子；（２）図９（配列番号：１６）のアミノ酸残基１又は約１から１５５又は約１５５のアミノ酸配列を含んでなる、例えばｈＩＬ-１Ｒａ３ポリペプチドのようなポリペプチドをコードするＤＮＡ分子；及び（３）（１）−（２）のＤＮＡ分子のいずれかの相補鎖からなる群より選択された単離されたＤＮＡ分子を提供する。
他の側面では、本発明は（１）図７（配列番号：１３）のアミノ酸残基２又は約２から１５５又は約１５５のアミノ酸配列を含んでなる、例えばｈＩＬ-１Ｒａ３ポリペプチドのようなポリペプチドをコードするＤＮＡ分子；（２）図９（配列番号：１６）のアミノ酸残基２又は約２から１５５又は約１５５のアミノ酸配列を含んでなる、例えばｈＩＬ-１Ｒａ３ポリペプチドのようなポリペプチドをコードするＤＮＡ分子；及び（３）（１）−（２）のＤＮＡ分子のいずれかの相補鎖からなる群より選択された単離されたＤＮＡ分子を提供する。
他の側面では本発明は、（ａ）：（１）ＡＴＣＣ寄託番号２０３５８８として寄託されたベクターのｃＤＮＡ挿入断片によってコードされる、例えば成熟ｈＩＬ-１Ｒａ１ポリペプチドのようなｈＩＬ-１Ｒａ１ポリペプチドを含んでなるポリペプチド；（２）ＡＴＣＣ寄託番号２０３５８７として寄託されたベクターのｃＤＮＡ挿入断片によってコードされる、例えば成熟ｈＩＬ-１Ｒａ１ポリペプチドのようなｈＩＬ-１Ｒａ１ポリペプチドを含んでなるポリペプチド；（３）ＡＴＣＣ寄託番号２０３５８６として寄託されたベクターのｃＤＮＡ挿入断片によってコードされる、例えば成熟ｈＩＬ-１Ｒａ２ポリペプチドのようなｈＩＬ-１Ｒａ２ポリペプチドで、それがそのＮ−末端又はＣ−末端でヘテロアミノ酸又はアミノ酸配列と融合されたｈＩＬ-１Ｒａ２ポリペプチドを含んでなるポリペプチド；（４）ＡＴＣＣ寄託番号２０３５８６として寄託されたベクターのｃＤＮＡ挿入断片によってコードされる、例えば成熟ｈＩＬ-１Ｒａ２ポリペプチドのようなｈＩＬ-１Ｒａ２ポリペプチドを含んでなるポリペプチド；（５）ＡＴＣＣ寄託番号２０３５８９として寄託されたベクターのｃＤＮＡ挿入断片によってコードされる、例えば成熟ｈＩＬ-１Ｒａ３ポリペプチドのようなｈＩＬ-１Ｒａ３ポリペプチドを含んでなるポリペプチド；（６）ＡＴＣＣ寄託番号２０３５９０として寄託されたベクターのｃＤＮＡ挿入断片によってコードされる、例えば成熟ｈＩＬ-１Ｒａ３ポリペプチドのようなｈＩＬ-１Ｒａ３ポリペプチドを含んでなるポリペプチドからなる群より選ばれるポリペプチドをコードするＤＮＡ分子；又は（ｂ）（ａ）のＤＮＡ分子の相補鎖を構成する単離された核酸分子を提供する。
【００５４】
他の側面では、本発明は、（ａ）：（１）ＡＴＣＣ寄託番号２０３８４６として寄託されたベクターのｃＤＮＡ挿入断片によってコードされる、例えば成熟ｈＩＬ-１Ｒａ１ＬポリペプチドのようなｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌポリペプチドを含んでなるポリペプチド；（２）ＡＴＣＣ寄託番号２０３８５５として寄託されたベクターのｃＤＮＡ挿入断片によってコードされる、例えば成熟ｈＩＬ-１Ｒａ１ＳポリペプチドのようなｈＩＬ-１Ｒａ１Ｓポリペプチドで、それがそのＮ−末端又はＣ−末端でヘテロアミノ酸又はアミノ酸配列と融合されたｈＩＬ-１Ｒａ１Ｓポリペプチドを含んでなるポリペプチド；（３）ＡＴＣＣ寄託番号２０３８５５として寄託されたベクターのｃＤＮＡ挿入断片によってコードされる、例えば成熟ｈＩＬ-１Ｒａ１ＳポリペプチドのようなｈＩＬ-１Ｒａ１Ｓポリペプチドを含んでなるポリペプチド；（４）ＡＴＣＣ寄託番号２０３９７３として寄託されたベクターのｃＤＮＡ挿入断片によってコードされる、例えば成熟ｈＩＬ-１Ｒａ１ＶポリペプチドのようなｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖポリペプチドを含んでなるポリペプチドからなる群より選ばれるポリペプチドをコードするＤＮＡ分子；又は（ｂ）（ａ）のＤＮＡ分子の相補鎖を構成する単離された核酸分子を提供する。
他の側面では、本発明は、（ａ）ＡＴＣＣ寄託番号２０３８５５として寄託されたベクターのｃＤＮＡ挿入断片によってコードされる、例えば成熟ｈＩＬ-１Ｒａ１ＳポリペプチドのようなｈＩＬ-１Ｒａ１Ｓポリペプチドを含んでなるポリペプチドをコードするＤＮＡ；又は（ｂ）（ａ）のＤＮＡ分子の相補鎖を含んでなる単離された核酸分子を提供する。
【００５５】
他の側面では、本発明は（ａ）：（１）ＡＴＣＣ寄託番号２０３５８８として寄託されたベクターのｃＤＮＡ挿入断片の最長のオープンリーディングフレームによりコードされる全体アミノ酸配列を構成するポリペプチド；（２）ＡＴＣＣ寄託番号２０３５８７として寄託されたベクターのｃＤＮＡ挿入断片の最長のオープンリーディングフレームによりコードされる全体アミノ酸配列、又は該配列の３６のＮ末端アミノ酸残基を除く全体アミノ酸配列を構成するポリペプチド；（３）ＡＴＣＣ寄託番号２０３５８６として寄託されたベクターのｃＤＮＡ挿入断片の最長のオープンリーディングフレームによりコードされる全体アミノ酸配列、又は該配列の９のＮ末端アミノ酸残基を除く全体アミノ酸配列を構成するポリペプチド；（４）ＡＴＣＣ寄託番号２０３５８９として寄託されたベクターのｃＤＮＡ挿入断片の最長のオープンリーディングフレームによりコードされる全体アミノ酸配列、又は該配列のＮ末端アミノ酸残基を除く全体アミノ酸配列構成するポリペプチド；（５）ＡＴＣＣ寄託番号２０３５９０として寄託されたベクターのｃＤＮＡ挿入断片の最長のオープンリーディングフレームによりコードされる全体アミノ酸配列、又は該配列のＮ末端アミノ酸残基を除く全体アミノ酸配列を構成するポリペプチドからなる群から選択されるポリペプチドをコードするＤＮＡ、又は（ｂ）（ａ）のＤＮＡの相補鎖を構成する単離された核酸分子を提供する。
他の側面では、本発明は、（ａ）ＡＴＣＣ寄託番号２０３５８８、２０３５８６、２０３５８９、２９３５９０、及び２０３９７３として寄託されたベクターよりなる群より選ばれるベクターのｃＤＮＡ挿入断片の最長のオープンリーディングフレームによってコードされる全アミノ酸配列を含んでなるポリペプチドをコードするＤＮＡ；又は（ｂ）（ａ）のＤＮＡ分子の相補鎖を含んでなる単離された核酸分子を提供する。
【００５６】
他の側面では、本発明は（ａ）：（１）ＡＴＣＣ寄託番号２０３８４６として寄託されたベクターのｃＤＮＡ挿入断片の最長のオープンリーディングフレームによりコードされる全体アミノ酸配列、又は該配列のＮ末端アミノ酸残基を除く全体アミノ酸配列、又は該配列の３４のＮ末端アミノ酸残基を除く全体アミノ酸配列を構成するポリペプチド；（２）ＡＴＣＣ寄託番号２０４８５５として寄託されたベクターのｃＤＮＡ挿入断片の最長のオープンリーディングフレームによりコードされる全体アミノ酸配列、又は該配列のＮ末端アミノ酸残基を除く全体アミノ酸配列、又は該配列の２５のＮ末端アミノ酸残基を除く全体アミノ酸配列を構成するポリペプチド；（３）ＡＴＣＣ寄託番号２０３９７３として寄託されたベクターのｃＤＮＡ挿入断片の最長のオープンリーディングフレームによりコードされる全体アミノ酸配列、又は該配列のＮ末端アミノ酸残基を除く全体アミノ酸配列、又は該配列の１１のＮ末端アミノ酸残基を除く全体アミノ酸配列を構成するポリペプチド、又は該配列の３６のＮ末端アミノ酸残基を除く全体アミノ酸配列を構成するポリペプチド、又は該配列の４５のＮ末端アミノ酸残基を除く全体アミノ酸配列を構成するポリペプチドからなる群から選択されるポリペプチドをコードするＤＮＡ、又は（ｂ）（ａ）のＤＮＡの相補鎖を構成する単離された核酸分子を提供する。
他の側面では、本発明は、（ａ）ＡＴＣＣ寄託番号２０３８５５として寄託されたベクターのｃＤＮＡ挿入断片の最長のオープンリーディングフレームによりコードされる、該配列の３８のＮ末端アミノ酸残基を除く全体アミノ酸配列、又は該配列の４６のＮ末端アミノ酸残基を除く全体アミノ酸配列が、そのＮ−末端又はＣ−末端でヘテロアミノ酸又はアミノ酸配列と融合することにより形成された非天然に生じるキメラポリペプチドをコードするＤＮＡ；又は（ｂ）（ａ）のＤＮＡの相補鎖を構成する単離された核酸分子を提供する。
【００５７】
他の側面では、本発明は（ａ）ＡＴＣＣ寄託番号２０３８５５として寄託されたベクターのｃＤＮＡ挿入断片の最長のオープンリーディングフレームによりコードされる該配列の３８のＮ末端アミノ酸残基を除く全体アミノ酸配列、又は該配列の４６のＮ末端アミノ酸残基を除く全体アミノ酸配列からなるポリペプチドをコードするＤＮＡ；（ｂ）（ａ）のＤＮＡの相補鎖を構成する単離された核酸分子を提供する。
他の側面では、本発明は（ａ）ＡＴＣＣ寄託番号２０３８４６、２０３８５５及び２０３９７３として寄託されたベクターからなる群より選ばれたベクターのｃＤＮＡ挿入断片の最長のオープンリーディングフレームによりコードされる全体アミノ酸配列を構成するポリペプチドをコードするＤＮＡ分子、又は（ｂ）（ａ）のＤＮＡの相補鎖を構成する単離された核酸分子を提供する。
他の側面では、本発明は（１）そのＮ−末端又はＣ−末端でヘテロアミノ酸又はアミノ酸配列と融合され、図１９（配列番号：２５）のアミノ酸残基３７又は約３７から２１８又は約２１８からなるｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖの天然アミノ酸配列からなる、例えばｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖ融合変異体ポリペプチドのようなポリペプチドをコードし、そのＤＮＡ分子が図１９（配列番号：２４）のセンス鎖で天然アミノ酸配列をコードするアミノ酸配列を構成する、ＤＮＡ分子；（２）そのＮ−末端又はＣ−末端でヘテロアミノ酸又はアミノ酸配列と融合され、図１９（配列番号：２５）のアミノ酸残基４６又は約４６から２１８又は約２１８からなるｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖの天然アミノ酸配列からなる、例えばｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖ融合変異体ポリペプチドのようなポリペプチドをコードし、そのＤＮＡ分子が図１９（配列番号：２４）のセンス鎖で天然アミノ酸配列をコードするアミノ酸配列を構成する、ＤＮＡ分子；（３）図１９（配列番号：２５）のアミノ酸残基３７又は約３７から２１８又は約２１８からなるｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖの天然アミノ酸配列からなる、例えばｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖポリペプチドのようなポリペプチドをコードし、そのＤＮＡ分子が図１９（配列番号：２４）のセンス鎖で天然アミノ酸配列をコードするアミノ酸配列を構成する、ＤＮＡ分子；（４）図１９（配列番号：２５）のアミノ酸残基４６又は約４６から２１８又は約２１８からなるｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖの天然アミノ酸配列からなる、例えばｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖポリペプチドのようなポリペプチドをコードし、そのＤＮＡ分子が図１９（配列番号：２４）のセンス鎖で天然アミノ酸配列をコードするアミノ酸配列を構成する、ＤＮＡ分子；及び（５）（１）−（４）のＤＮＡ分子のいずれかの相補鎖からなる群より選ばれる単離されたＤＮＡ分子を提供する。
【００５８】
他の側面では、本発明は（１）例えばｈＩＬ-１Ｒａ１ポリペプチドのようなポリペプチドをコードし、そのＤＮＡ分子が図２（配列番号：４）のセンス鎖のヌクレオチド位置１１８又は約１１８から６１８又は約６１８の核酸配列を構成するＤＮＡ分子；（２）例えばｈＩＬ-１Ｒａ１ポリペプチドのようなポリペプチドをコードし、そのＤＮＡ分子が図３（配列番号：６）のセンス鎖のヌクレオチド位置１４５又は約１４５から６８１又は約６８１の核酸配列を構成するＤＮＡ分子；（３）例えばｈＩＬ-１Ｒａ２ポリペプチドのようなポリペプチドをコードし、そのＤＮＡ分子が図５（配列番号：９）のセンス鎖のヌクレオチド位置９６又は約９６から４９７又は約４９７の核酸配列を構成するＤＮＡ分子；（４）例えばｈＩＬ-１Ｒａ２ポリペプチドのようなポリペプチドをコードし、そのＤＮＡ分子が図５（配列番号：９）のセンス鎖のヌクレオチド位置１２３又は約１２３から４９７又は約４９７の核酸配列を構成するＤＮＡ分子；（５）そのＮ−末端又はＣ−末端でヘテロアミノ酸又はアミノ酸配列と融合され、図５（配列番号：１０）のアミノ酸残基２７又は約２７から１３４又は約１３４からなるｈＩＬ-１Ｒａ２の天然アミノ酸配列からなる、例えばｈＩＬ-１Ｒａ２融合変異体ポリペプチドのようなポリペプチドをコードし、そのＤＮＡ分子が図５（配列番号：９）のセンス鎖で天然アミノ酸配列をコードするアミノ酸配列を構成する、ＤＮＡ分子；（６）図５（配列番号：１０）のアミノ酸残基２７又は約２７から１３４又は約１３４からなるｈＩＬ-１Ｒａ２の天然アミノ酸配列からなる、例えばｈＩＬ-１Ｒａ２ポリペプチドのようなポリペプチドをコードし、そのＤＮＡ分子が図５（配列番号：９）のセンス鎖で天然アミノ酸配列をコードする核酸配列を構成するＤＮＡ分子；（７）例えばｈＩＬ-１Ｒａ３ポリペプチドのようなポリペプチドをコードし、そのＤＮＡ分子が図７（配列番号：１２）のセンス鎖のヌクレオチド位置２８３又は約２８３から４０２又は約４０２の核酸配列を構成する、ＤＮＡ分子；（８）例えばｈＩＬ-１Ｒａ３ポリペプチドのようなポリペプチドをコードし、そのＤＮＡ分子が図９（配列番号：１５）のセンス鎖のヌクレオチド位置４２７又は約４２７から５４６又は約５４６の核酸配列を構成する、ＤＮＡ分子；及び（９）（１）−（８）のＤＮＡ分子のいずれかの相補鎖からなる群より選択される単離されたＤＮＡ分子を提供する。
【００５９】
他の側面では、本発明は（１）例えばｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌポリペプチドのようなポリペプチドをコードし、そのＤＮＡ分子が図１５（配列番号：１８）のセンス鎖のヌクレオチド位置７９又は約７９から６２４又は約６２４の核酸配列を構成するＤＮＡ分子；（２）例えばｈＩＬ-１Ｒａ１Ｓポリペプチドのようなポリペプチドをコードし、そのＤＮＡ分子が図１６（配列番号：２０）のセンス鎖のヌクレオチド位置７９又は約７９から５０４又は約５０４の核酸配列を構成するＤＮＡ分子；（３）そのＮ−末端又はＣ−末端でヘテロアミノ酸又はアミノ酸配列と融合され、図１６（配列番号：２１）のアミノ酸残基３９又は約３９から１６７又は約１６７からなるｈＩＬ-１Ｒａ１Ｓの天然アミノ酸配列からなる、例えばｈＩＬ-１Ｒａ１Ｓ融合変異体ポリペプチドのようなポリペプチドをコードし、そのＤＮＡ分子が図１６（配列番号：２０）のセンス鎖で天然アミノ酸配列をコードするアミノ酸配列を構成する、ＤＮＡ分子；（４）そのＮ−末端又はＣ−末端でヘテロアミノ酸又はアミノ酸配列と融合され、図１６（配列番号：２１）のアミノ酸残基４７又は約４７から１６７又は約１６７からなるｈＩＬ-１Ｒａ１Ｓの天然アミノ酸配列からなる、例えばｈＩＬ-１Ｒａ１Ｓ融合変異体ポリペプチドのようなポリペプチドをコードし、そのＤＮＡ分子が図１６（配列番号：２０）のセンス鎖で天然アミノ酸配列をコードするアミノ酸配列を構成する、ＤＮＡ分子；（５）図１６（配列番号：２１）のアミノ酸残基３９又は約３９から１６７又は約１６７からなるｈＩＬ-１Ｒａ１Ｓの天然アミノ酸配列からなる、例えばｈＩＬ-１Ｒａ１Ｓポリペプチドのようなポリペプチドをコードし、そのＤＮＡ分子が図１６（配列番号：２０）のセンス鎖で天然アミノ酸配列をコードするアミノ酸配列を構成する、ＤＮＡ分子；（６）図１６（配列番号：２１）のアミノ酸残基４７又は約４７から１６７又は約１６７からなるｈＩＬ-１Ｒａ１Ｓの天然アミノ酸配列からなる、例えばｈＩＬ-１Ｒａ１Ｓポリペプチドのようなポリペプチドをコードし、そのＤＮＡ分子が図１６（配列番号：２０）のセンス鎖で天然アミノ酸配列をコードするアミノ酸配列を構成する、ＤＮＡ分子；（７）例えばｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖポリペプチドのようなポリペプチドをコードし、そのＤＮＡ分子が図１９（配列番号：２４）のセンス鎖のヌクレオチド位置１８１又は約１８１から７２９又は約７２９の核酸配列を構成する、ＤＮＡ分子；（８）例えばｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖポリペプチドのようなポリペプチドをコードし、そのＤＮＡ分子が図１９（配列番号：２４）のセンス鎖のヌクレオチド位置２０８又は約２０８から７２９又は約７２９の核酸配列を構成するＤＮＡ分子；及び（９）（１）−（８）のＤＮＡ分子のいずれかの相補鎖からなる群より選択される単離されたＤＮＡ分子を提供する。
【００６０】
他の側面では、本発明は（１）例えばｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌポリペプチドのようなポリペプチドをコードし、そのＤＮＡ分子が図１５（配列番号：１８）のセンス鎖のヌクレオチド位置４又は約４から６２４又は約６２４の核酸配列を構成するＤＮＡ分子；（２）例えばｈＩＬ-１Ｒａ１Ｓポリペプチドのようなポリペプチドをコードし、そのＤＮＡ分子が図１６（配列番号：２０）のセンス鎖のヌクレオチド位置４又は約４から５０４又は約５０４の核酸配列を構成するＤＮＡ分子；（３）例えばｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖポリペプチドのようなポリペプチドをコードし、そのＤＮＡ分子が図１９（配列番号：２４）のセンス鎖のヌクレオチド位置１０６又は約１０６から７２９又は約７２９の核酸配列を構成する、ＤＮＡ分子；（４）例えばｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖポリペプチドのようなポリペプチドをコードし、そのＤＮＡ分子が図１９（配列番号：２４）のセンス鎖のヌクレオチド位置７３又は約７３から７２９又は約７２９の核酸配列を構成するＤＮＡ分子；及び（５）（１）−（４）のＤＮＡ分子のいずれかの相補鎖からなる群より選択される単離されたＤＮＡ分子を提供する。
他の側面では、本発明は（１）図３（配列番号：６）のセンス鎖のヌクレオチド位置１０３又は約１０３から６８１又は約６８１の核酸配列を構成するＤＮＡ分子；（２）図７（配列番号：１２）のセンス鎖のヌクレオチド位置１００又は約１００から４６５又は約４６５の核酸配列を構成するＤＮＡ分子；（３）；図９（配列番号：１５）のセンス鎖のヌクレオチド位置２４４又は約２４４から６０９又は約６０９の核酸配列を構成するＤＮＡ分子（４）（１）−（３）のＤＮＡ分子のいずれかの相補鎖からなる群より選択される単離されたＤＮＡ分子を提供する。
他の側面では、本発明は（ａ）図２（配列番号：４）、図３（配列番号：６）、図５（配列番号：９）、図７（配列番号：１２）、図９（配列番号：１５）のセンス鎖の完全ＤＮＡ配列、又は（ｂ）（ａ）の相補配列を構成する単離されたＤＮＡ分子を提供する。
他の側面では、本発明は（ａ）図１５（配列番号：１８）、図１６（配列番号：２０）、図１９（配列番号：２４）のセンス鎖の完全ＤＮＡ配列、又は（ｂ）（ａ）の相補配列を構成する単離されたＤＮＡ分子を提供する。
【００６１】
他の側面では、本発明はＮ−末端シグナル配列及び／又は開始メチオニンを持っているか持っていない、もしくは核酸分子をコードするそのようなＩＬ-１ｌｐに相補的であるＩＬ-１ｌｐポリペプチドをコードするＤＮＡを構成する単離された核酸分子を提供する。シグナルペプチドは図３（配列番号：７）のＩＬ-１ｌｐ配列のアミノ酸位置１からアミノ酸位置１４又は約１４まで、図５（配列番号：１０）のＩＬ-１ｌｐ配列のアミノ酸位置１からアミノ酸位置２６又は約２６まで、図７（配列番号：１３）のＩＬ-１ｌｐ配列のアミノ酸位置１からアミノ酸位置３３又は約３３まで、及び図９（配列番号：１６）のＩＬ-１ｌｐ配列のアミノ酸位置１からアミノ酸位置２６又は約２６まで伸びると仮に同定されている。
図１５（配列番号：１９）のアミノ酸１又は約１から２０７又は約２０７のＩＬ-１ｌｐ配列は、ある動物細胞では成熟配列（翻訳後のプロセッシングで取り除かれるプレ配列を持たない）ように振る舞うと考えられる。
図１６（配列番号：２１）のアミノ酸１又は約１から１６７又は約１６７のＩＬ-１ｌｐ配列は、ある動物細胞では成熟配列（翻訳後のプロセッシングで取り除かれるプレ配列を持たない）ように振る舞うと考えられる。さらに他の動物細胞では翻訳後のプロセッシングにおいて図１６（配列番号：２１）のＩＬ-１ｌｐ配列のアミノ酸位置１から約４６の配列に含まれる１又は複数のシグナルペプチドが認識され、取り除かれると考えられている。
図１９（配列番号：２５）のアミノ酸１又は約１から２１８又は約２１８のＩＬ-１ｌｐ配列は、ある動物細胞では成熟配列（翻訳後のプロセッシングで取り除かれるプレ配列を持たない）ように振る舞うと考えられる。またヌクレオチド位置１０６−１０８で生じる開始コドンで翻訳の開始の結果生じる図１９（配列番号：２５）のアミノ酸１２又は約１２型２１８又は約２１８のＩＬ-１ｌｐの配列はある動物細胞では成熟配列として振る舞うと考えられている。さらに他の動物細胞では翻訳後のプロセッシングにおいて図１９（配列番号：２５）のアミノ酸位置１から２１８のＩＬ-１ｌｐポリペプチドのアミノ酸位置１から４５の配列に含まれるか、又は図１９（配列番号：２５）のアミノ酸位置１２から２１８のＩＬ-１ｌｐポリペプチドのアミノ酸位置１２から４５の配列に含まれる１又は複数のシグナルペプチドが認識され、取り除かれると考えられている。
【００６２】
また更なる側面では本発明は（ａ）天然配列ＩＬ-１ｌｐの少なくとも１の生物活性、例えば天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ１のＩＬ-１８Ｒ結合活性、又は天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ３又はｍＩＬ-１Ｒａ３のＩＬ-１Ｒ結合活性を保持し、そのＩＬ-１ｌｐポリペプチドが：（１）図２（配列番号：５）のアミノ酸残基３７又は約３７から２０３又は約２０３、（２）図３（配列番号：７）のアミノ酸残基１５又は約１５から１９３又は約１９３、（３）図７（配列番号：１３）のアミノ酸残基３４又は約３４から１５５又は約１５５、（４）図９（配列番号：１６）のアミノ酸残基３４又は約３４から１５５又は約１５５、（５）図１５（配列番号：１９）のアミノ酸残基２６又は約２６から２０７又は約２０７、及び（６）図１９（配列番号：２５）のアミノ酸残基４６又は約４６から２１８又は約２１８からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％又は約８０％ポジティブ、又は少なくとも８５％又は約８５％ポジティブ、又は少なくとも９０％又は約９０％ポジティブ、又は少なくとも９５％又は約９５％ポジティブを有するＩＬ-１ｌｐポリペプチドをコードするＤＮＡ、（ｂ）（ａ）のＤＮＡの相補鎖を構成する単離された核酸分子に関する。
また更なる側面では本発明は（ａ）天然配列ＩＬ-１ｌｐの少なくとも１の生物活性、例えば天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ１のＩＬ-１８Ｒ結合活性、又は天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ３又はｍＩＬ-１Ｒａ３のＩＬ-１Ｒ結合活性を保持し、そのＩＬ-１ｌｐポリペプチドが：（１）図７（配列番号：１３）のアミノ酸残基９５又は約９５から１３４又は約１３４、及び（２）図９（配列番号：１６）のアミノ酸残基９５又は約９５から１３４又は約１３４からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％又は約８０％ポジティブ、又は少なくとも８５％又は約８５％ポジティブ、又は少なくとも９０％又は約９０％ポジティブ、又は少なくとも９５％又は約９５％ポジティブを有するＩＬ-１ｌｐポリペプチドをコードするＤＮＡ、（ｂ）（ａ）のＤＮＡの相補鎖を構成する単離された核酸分子に関する。
【００６３】
また更なる側面では本発明は（ａ）天然配列ＩＬ-１ｌｐの少なくとも１の生物活性、例えば天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ１のＩＬ-１８Ｒ結合活性、又は天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ３又はｍＩＬ-１Ｒａ３のＩＬ-１Ｒ結合活性を保持し、そのＩＬ-１ｌｐポリペプチドが：図７（配列番号：１３）のアミノ酸残基８０又は約８０から１５５又は約１５５のアミノ酸配列と少なくとも８０％又は約８０％ポジティブ、又は少なくとも８５％又は約８５％ポジティブ、又は少なくとも９０％又は約９０％ポジティブ、又は少なくとも９５％又は約９５％ポジティブを有するＩＬ-１ｌｐポリペプチドをコードするＤＮＡ、（ｂ）（ａ）のＤＮＡの相補鎖を構成する単離された核酸分子に関する。
また更なる側面では本発明は（ａ）天然配列ＩＬ-１ｌｐの少なくとも１の生物活性、例えば天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ１のＩＬ-１８Ｒ結合活性、又は天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ３又はｍＩＬ-１Ｒａ３のＩＬ-１Ｒ結合活性を保持し、そのＩＬ-１ｌｐポリペプチドが：（１）図７（配列番号：１３）のアミノ酸残基２又は約２から１５５又は約１５５、及び（２）図９（配列番号：１６）のアミノ酸残基２又は約２から１５５又は約１５５からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％又は約８０％ポジティブ、又は少なくとも８５％又は約８５％ポジティブ、又は少なくとも９０％又は約９０％ポジティブ、又は少なくとも９５％又は約９５％ポジティブを有するＩＬ-１ｌｐポリペプチドをコードするＤＮＡ、（ｂ）（ａ）のＤＮＡの相補鎖を構成する単離された核酸分子に関する。
また更なる側面では本発明は（ａ）（１）図７（配列番号：１３）のアミノ酸残基９５又は約９５から１３４又は約１３４、及び（２）図９（配列番号：１６）のアミノ酸残基９５又は約９５から１３４又は約１３４からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％又は約８０％ポジティブ、又は少なくとも８５％又は約８５％ポジティブ、又は少なくとも９０％又は約９０％ポジティブ、又は少なくとも９５％又は約９５％ポジティブを有するＩＬ-１ｌｐポリペプチドをコードするＤＮＡ、（ｂ）（ａ）のＤＮＡの相補鎖を構成する単離された核酸分子に関する。
【００６４】
また更なる側面では本発明は（ａ）図７（配列番号：１３）のアミノ酸残基８０又は約８０から１５５又は約１５５のアミノ酸配列と少なくとも８０％又は約８０％ポジティブ、又は少なくとも８５％又は約８５％ポジティブ、又は少なくとも９０％又は約９０％ポジティブ、又は少なくとも９５％又は約９５％ポジティブを有するＩＬ-１ｌｐポリペプチドをコードするＤＮＡ、（ｂ）（ａ）のＤＮＡの相補鎖を構成する単離された核酸分子に関する。
また更なる側面では本発明は（ａ）（１）図７（配列番号：１３）のアミノ酸残基２又は約２から１５５又は約１５５、及び（２）図９（配列番号：１６）のアミノ酸残基２又は約２から１５５又は約１５５からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％又は約８０％ポジティブ、又は少なくとも８５％又は約８５％ポジティブ、又は少なくとも９０％又は約９０％ポジティブ、又は少なくとも９５％又は約９５％ポジティブを有するＩＬ-１ｌｐポリペプチドをコードするＤＮＡ、（ｂ）（ａ）のＤＮＡの相補鎖を構成する単離された核酸分子に関する。
また更なる側面では本発明は（ａ）天然配列ＩＬ-１ｌｐの少なくとも１の生物活性、例えば天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ１、ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌ、又はｈＩＬ-１Ｒａ１ＶのＩＬ-１８Ｒ結合活性を保持し、そのＩＬ-１ｌｐポリペプチドが：（１）図１５（配列番号：１９）のアミノ酸残基１又は約１から２０７又は約２０７、及び（２）図１９（配列番号：２５）のアミノ酸残基１又は約１から２１８又は約２１８からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％又は約８０％ポジティブ、又は少なくとも８５％又は約８５％ポジティブ、又は少なくとも９０％又は約９０％ポジティブ、又は少なくとも９５％又は約９５％ポジティブを有するＩＬ-１ｌｐポリペプチドをコードするＤＮＡ、（ｂ）（ａ）のＤＮＡの相補鎖を構成する単離された核酸分子に関する。
【００６５】
他の実施態様では、本発明はＩＬ-１ｌｐをコードするＤＮＡを含んでなるベクター又はその変異体を提供する。ベクターは上に定義された単離されたどの核酸分子でも含んでなりうる。
また、例えばベクターを含んでなる宿主細胞も提供する。一例として、宿主細胞は、ＣＨＯ細胞、大腸菌、又は酵母であり得る。さらにＩＬ-１ｌｐポリペプチドを生成する過程が提供され、ＩＬ-１ｌｐの発現に適した条件下での宿主細胞の培養及び細胞培地からのＩＬ-１ｌｐの取り出しを構成する。
他の実施態様では、本発明は上で定義されたどの単離された核酸配列によってでもコードされる単離されたＩＬ-１ｌｐポリペプチドを提供する。
他の側面では、本発明は単離された天然配列ＩＬ-１ｌｐポリペプチドを提供し、その一実施態様では、：（１）図２（配列番号：５）の残基３７又は約３７から２０３又は約２０３のアミノ酸配列、（２）図３（配列番号：７）の残基１５又は約１５から１９３又は約１９３のアミノ酸配列、（３）図７（配列番号：１３）の残基３４又は約３４から１５５又は約１５５のアミノ酸配列、及び（４）図９（配列番号：１６）の残基３４又は約３４から１５５又は約１５５のアミノ酸配列からなる群より選択されるアミノ酸配列を含んでなる。
他の側面では、本発明は単離された天然配列ＩＬ-１ｌｐポリペプチドを提供し、その一実施態様では、：（１）図１５（配列番号：１９）の残基１又は約１から２０７又は約２０７のアミノ酸配列、（２）図１５（配列番号：１９）の残基２６又は約２６から２０７又は約２０７のアミノ酸配列、（３）図１６（配列番号：２１）の残基１又は約１から１６７又は約１６７のアミノ酸配列、及び（４）図１６（配列番号：２１）の残基２６又は約２６から１６７又は約１６７のアミノ酸配列（５）図１９（配列番号：２５）の残基１又は約１から２１８又は約２１８のアミノ酸配列、（６）図１９（配列番号：２５）の残基１２又は約１２から２１８又は約２１８のアミノ酸配列（７）図１９（配列番号：２５）の残基３７又は約３７から２１８又は約２１８のアミノ酸配列、及び（８）図１９（配列番号：２５）の残基４６又は約４６から２１８又は約２１８のアミノ酸配列、からなる群より選択されるアミノ酸配列を含んでなる。
【００６６】
他の側面では、本発明は天然配列ＩＬ-１ｌｐの少なくとも１の生物活性、例えば天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ３又はｍＩＬ-１Ｒａ３のＩＬ-１Ｒ結合活性、または天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ１、ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌ、ｈＩＬ-１Ｒａ１ＶのＩＬ-１８Ｒ結合活性を保持し、さらに図２（配列番号：５）のアミノ酸残基３７又は約３７から２０３又は約２０３の配列、図７（配列番号：１３）のアミノ酸残基１５又は約１５から１９３又は約１９３の配列、図７（配列番号：１３）のアミノ酸残基３４又は約３４から１５５又は約１５５の配列、図９（配列番号：１６）のアミノ酸残基３４又は約３４から１５５又は約１５５の配列、図１５（配列番号：１９）のアミノ酸残基２６又は約２６から２０７又は約２０７の配列、又は図１９（配列番号：２５）のアミノ酸残基４６又は約４６から２１８又は約２１８の配列に対して少なくとも８０又は約８０％の配列同一性、少なくとも８５又は約８５％の配列同一性、少なくとも９０又は約９０％の配列同一性、又は少なくとも９５又は約９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列からなる、単離されたＩＬ-１ｌｐポリペプチドに関する。
他の側面では、本発明は天然配列ＩＬ-１ｌｐの少なくとも１の生物活性、例えば天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ３又はｍＩＬ-１Ｒａ３のＩＬ-１Ｒ結合活性、または天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ１、ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌ、又はｈＩＬ-１Ｒａ１ＶのＩＬ-１８Ｒ結合活性を保持し、さらに図１５（配列番号：１９）のアミノ酸残基１又は約１から２０７又は約２０７の配列、又は図１９（配列番号：２５）のアミノ酸残基１又は約１から２１８又は約２１８の配列に対して少なくとも８０又は約８０％の配列同一性、少なくとも８５又は約８５％の配列同一性、少なくとも９０又は約９０％の配列同一性、又は少なくとも９５又は約９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列からなる、単離されたＩＬ-１ｌｐポリペプチドに関する。
【００６７】 
他の側面では、本発明は（１）図２（配列番号：５）のアミノ酸残基３７又は約３７から６３又は約６３の配列に対して、少なくとも８０％又は約８０％、又は少なくとも８５％又は約８５％、又は少なくとも９０％又は約９０％、又は少なくとも９５％又は約９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列からなる、例えばｈＩＬ-１Ｒａ１ポリペプチドのようなポリぺプチド；（２）図３（配列番号：７）のアミノ酸残基１５又は約１５から５３又は約５３の配列に対して、少なくとも８０％又は約８０％、又は少なくとも８５％又は約８５％、又は少なくとも９０％又は約９０％、又は少なくとも９５％又は約９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列からなる、例えばｈＩＬ-１Ｒａ１ポリペプチドのようなポリぺプチド；（３）図５（配列番号：１０）のアミノ酸残基１又は約１から１３４又は約１３４のアミノ酸配列からなる、例えばｈＩＬ-１Ｒａ２ポリペプチドのようなポリぺプチド；（４）図５（配列番号：１０）のアミノ酸残基１０又は約１０から１３４又は約１３４のアミノ酸配列からなるポリぺプチド；（５）図５（配列番号：１０）のアミノ酸残基２７又は約２７から１３４又は約１３４のアミノ酸配列からなる、例えばｈＩＬ-１Ｒａ２ポリペプチドのようなポリぺプチド；（６）そのＮ−末端又はＣ−末端でヘテロアミノ酸又はアミノ酸配列と融合された、図５（配列番号：１０）のアミノ酸残基２７又は約２７から１３４又は約１３４からなるｈＩＬ-１Ｒａ２の天然アミノ酸配列からなる、例えばｈＩＬ-１Ｒａ２融合変異体ポリペプチドのようなポリペプチド；（７）図７（配列番号：１３）のアミノ酸残基９５又は約９５から１３４又は約１３４の配列に対して、少なくとも８０％又は約８０％、又は少なくとも８５％又は約８５％、又は少なくとも９０％又は約９０％、又は少なくとも９５％又は約９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列からなる、例えばｈＩＬ-１Ｒａ３ポリペプチドのようなポリぺプチド；（８）図９（配列番号：１６）のアミノ酸残基９５又は約９５から１３４又は約１３４の配列に対して、少なくとも８０％又は約８０％、又は少なくとも８５％又は約８５％、又は少なくとも９０％又は約９０％、又は少なくとも９５％又は約９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列からなる、例えばｍＩＬ-１Ｒａ３ポリペプチドのようなポリぺプチドからなる群より選択された単離されたＩＬ-１ｌｐを提供する。
【００６８】
他の側面では、本発明は（１）図１５（配列番号：１９）のアミノ酸残基２７又は約２７から４４又は約４４の配列に対して、少なくとも８０％又は約８０％、又は少なくとも８５％又は約８５％、又は少なくとも９０％又は約９０％、又は少なくとも９５％又は約９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列からなる、例えばｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌポリペプチドのようなポリぺプチド；（２）そのＮ−末端又はＣ−末端でヘテロアミノ酸又はアミノ酸配列と融合された、図１６（配列番号：２１）のアミノ酸残基３９又は約３９から１６７又は約１６７からなるｈＩＬ-１Ｒａ１Ｓの天然アミノ酸配列からなる、例えばｈＩＬ-１Ｒａ１Ｓ融合変異体ポリペプチドのようなポリペプチド；（３）そのＮ−末端又はＣ−末端でヘテロアミノ酸又はアミノ酸配列と融合された、図１６（配列番号：２１）のアミノ酸残基４７又は約４７から１６７又は約１６７からなるｈＩＬ-１Ｒａ１Ｓの天然アミノ酸配列からなる、例えばｈＩＬ-１Ｒａ１Ｓ融合変異体ポリペプチドのようなポリペプチド；（４）図１６（配列番号：２１）のアミノ酸残基３９又は約３９から１６７又は約１６７からなる、例えばｈＩＬ-１Ｒａ１Ｓポリペプチドのようなポリぺプチド；（５）図１６（配列番号：２１）のアミノ酸残基４７又は約４７から１６７又は約１６７からなる、例えばｈＩＬ-１Ｒａ１Ｓポリペプチドのようなポリぺプチド；（６）図１９（配列番号：２５）のアミノ酸残基３７又は約３７から５５又は約５５の配列に対して、少なくとも８０％又は約８０％、又は少なくとも８５％又は約８５％、又は少なくとも９０％又は約９０％、又は少なくとも９５％又は約９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列からなる、例えばｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖポリペプチドのようなポリぺプチドからなる群より選択された単離されたＩＬ-１ｌｐを提供する。
他の側面では、本発明は図２（配列番号：５）のアミノ酸残基３７又は約３７から２０３又は約２０３の配列、図３（配列番号：７）のアミノ酸残基１５又は約１５から１９３又は約１９３の配列、図７（配列番号：１３）のアミノ酸残基３４又は約３４から１５５又は約１５５の配列、図９（配列番号：１６）のアミノ酸残基３４又は約３４から１５５又は約１５５の配列、図１５（配列番号：１９）のアミノ酸残基２６又は約２６から２０７又は約２０７の配列、又は図１９（配列番号：２５）のアミノ酸残基４６又は約４６から２１８又は約２１８の配列に対して、少なくとも８０％又は約８０％、又は少なくとも８５％又は約８５％、又は少なくとも９０％又は約９０％、又は少なくとも９５％又は約９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列からなる単離されたＩＬ-１ｌｐポリペプチドに関する。
【００６９】
他の側面では、本発明は図１５（配列番号：１９）のアミノ酸残基１又は約１から２０７又は約２０７の配列、又は図１９（配列番号：２５）のアミノ酸残基１又は約１から２１８又は約２１８の配列に対して、少なくとも８０％又は約８０％、又は少なくとも８５％又は約８５％、又は少なくとも９０％又は約９０％、又は少なくとも９５％又は約９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列からなる単離されたＩＬ-１ｌｐポリペプチドに関する。
他の側面では、本発明は図７（配列番号：１３）のアミノ酸残基８０又は約８０から１５５又は約１５５の配列に対して、少なくとも８０％又は約８０％、又は少なくとも８５％又は約８５％、又は少なくとも９０％又は約９０％、又は少なくとも９５％又は約９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列からなる、例えばｈＩＬ-１Ｒａ３ポリペプチドのような単離されたポリペプチドに関する。
更なる側面では、本発明は天然配列ＩＬ-１ｌｐの少なくとも１の生物活性、例えば天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ３又はｍＩＬ-１Ｒａ３のＩＬ-１Ｒ結合活性、または天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ１、ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌ、又はｈＩＬ-１Ｒａ１ＶのＩＬ-１８Ｒ結合活性を保持し、さらにＡＴＣＣ寄託番号２０３５８８（ＤＮＡ８５０６６−２５３４）、ＡＴＣＣ寄託番号２０３５８７（ＤＮＡ９６７８６−２５３４）、ＡＴＣＣ寄託番号２０３５８９（ＤＮＡ９６７８７−２５３４）、ＡＴＣＣ寄託番号２０３５９０（ＤＮＡ９２５０５−２５３４）、ＡＴＣＣ寄託番号２０３８４６（ＤＮＡ１０２０４３−２５３４）、又はＡＴＣＣ寄託番号２０３９７３（ＤＮＡ１１４８７６−２５３４）として寄託されたベクターのｃＤＮＡ挿入断片によってコードされる、例えば成熟ＩＬ-１ｌｐポリペプチドのようなＩＬ-１ｌｐのアミノ酸配列に対して少なくとも８０又は約８０％の配列同一性、少なくとも８５又は約８５％の配列同一性、少なくとも９０又は約９０％の配列同一性、又は少なくとも９５又は約９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列からなる、単離されたＩＬ-１ｌｐポリペプチドに関する。好ましい実施態様では、ＩＬ-１ｌｐポリペプチドは、ＡＴＣＣ寄託番号２０３５８８（ＤＮＡ８５０６６−２５３４）、ＡＴＣＣ寄託番号２０３５８７（ＤＮＡ９６７８６−２５３４）、ＡＴＣＣ寄託番号２０３５８６（ＤＮＡ９２９２９−２５３４）、ＡＴＣＣ寄託番号２０３５８９（ＤＮＡ９６７８７−２５３４）、ＡＴＣＣ寄託番号２０３５９０（ＤＮＡ９２５０５−２５３４）、ＡＴＣＣ寄託番号２０３８４６（ＤＮＡ１０２０４３−２５３４）、ＡＴＣＣ寄託番号２０３９７３（ＤＮＡ１１４８７６−２５３４）、又はＡＴＣＣ寄託番号２０３８５５（ＤＮＡ１０２０４４−２５３４）として寄託されたベクターのｃＤＮＡ挿入断片によってコードされる、例えば成熟ＩＬ-１ｌｐポリペプチドのようなＩＬ-１ｌｐのアミノ酸配列を構成する。
【００７０】
更なる側面では、本発明は天然配列ＩＬ-１ｌｐの少なくとも１の生物活性、例えば天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ３又はｍＩＬ-１Ｒａ３のＩＬ-１Ｒ結合活性、または天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ１、ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌ、又はｈＩＬ-１Ｒａ１ＶのＩＬ-１８Ｒ結合活性を保持し、さらにＡＴＣＣ寄託番号２０３５８８（ＤＮＡ８５０６６−２５３４）、ＡＴＣＣ寄託番号２０３５８７（ＤＮＡ９６７８６−２５３４）、ＡＴＣＣ寄託番号２０３５８９（ＤＮＡ９６７８７−２５３４）、ＡＴＣＣ寄託番号２０３５９０（ＤＮＡ９２５０５−２５３４）、ＡＴＣＣ寄託番号２０３８４６（ＤＮＡ１０２０４３−２５３４）、及びＡＴＣＣ寄託番号２０３９７３（ＤＮＡ１１４８７６−２５３４）として寄託されたベクターからなる群より選択されたベクターのｃＤＮＡ挿入断片にある最長オープンリーディングフレームによってコードされる、全体アミノ酸配列に対して少なくとも８０又は約８０％の配列同一性、少なくとも８５又は約８５％の配列同一性、少なくとも９０又は約９０％の配列同一性、又は少なくとも９５又は約９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列からなる、単離されたＩＬ-１ｌｐポリペプチドに関する。好ましい実施態様では、ＩＬ-１ｌｐポリペプチドは、ＡＴＣＣ寄託番号２０３５８８（ＤＮＡ８５０６６−２５３４）、ＡＴＣＣ寄託番号２０３５８７（ＤＮＡ９６７８６−２５３４）、ＡＴＣＣ寄託番号２０３５８６（ＤＮＡ９２９２９−２５３４）、ＡＴＣＣ寄託番号２０３５８９（ＤＮＡ９６７８７−２５３４）、及びＡＴＣＣ寄託番号２０３５９０（ＤＮＡ９２５０５−２５３４）として寄託されたベクターからなる群から選択されるベクターのｃＤＮＡ挿入断片にある最長オープンリーディングフレームによってコードされる全体アミノ酸配列を構成する。他の好ましい実施態様では、ＩＬ-１ｌｐポリペプチドは、ＡＴＣＣ寄託番号２０３８４６（ＤＮＡ１０２０４３−２５３４）、ＡＴＣＣ寄託番号２０３８５５（ＤＮＡ１０２０４４−２５３４）、及びＡＴＣＣ寄託番号２０３９７３（ＤＮＡ１１４８７６−２５３４）として寄託されたベクターからなる群から選択されるベクターのｃＤＮＡ挿入断片にある最長オープンリーディングフレームによってコードされる全体アミノ酸配列を構成する。
【００７１】
他の側面では、本発明は天然配列ＩＬ-１ｌｐの少なくとも１の生物活性、例えば天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ３又はｍＩＬ-１Ｒａ３のＩＬ-１Ｒ結合活性、または天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ１、ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌ、又はｈＩＬ-１Ｒａ１ＶのＩＬ-１８Ｒ結合活性を保持し、さらに（１）ＡＴＣＣ寄託番号２０３５８８として寄託されたベクターのｃＤＮＡ挿入断片にある最長オープンリーディングフレームによってコードされる全体アミノ酸配列、（２）ＡＴＣＣ寄託番号２０３５８７として寄託されたベクターのｃＤＮＡ挿入断片にある最長オープンリーディングフレームによってコードされる全体アミノ酸配列、又は該配列の３６のＮ−末端アミノ酸残基以外の全体アミノ酸配列、（３）ＡＴＣＣ寄託番号２０３５８９として寄託されたベクターのｃＤＮＡ挿入断片にある最長オープンリーディングフレームによってコードされる全体アミノ酸配列、又は該配列のＮ−末端アミノ酸残基以外の全体アミノ酸配列、（４）ＡＴＣＣ寄託番号２０３５９０として寄託されたベクターのｃＤＮＡ挿入断片にある最長オープンリーディングフレームによってコードされる全体アミノ酸配列、又は該配列のＮ−末端アミノ酸残基以外の全体アミノ酸配列、（５）ＡＴＣＣ寄託番号２０３８４６として寄託されたベクターのｃＤＮＡ挿入断片にある最長オープンリーディングフレームによってコードされる全体アミノ酸配列、又は該配列の３４のＮ−末端アミノ酸残基以外の全体アミノ酸配列、及び（６）ＡＴＣＣ寄託番号２０３９７３として寄託されたベクターのｃＤＮＡ挿入断片にある最長オープンリーディングフレームによってコードされる全体アミノ酸配列、又は該配列の４５のＮ−末端アミノ酸残基以外の全体アミノ酸配列からなる群より選択されたアミノ酸配列に対して少なくとも８０又は約８０％の配列同一性、少なくとも８５又は約８５％の配列同一性、少なくとも９０又は約９０％の配列同一性、又は少なくとも９５又は約９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列からなる、単離されたＩＬ-１ｌｐポリペプチドに関する。
【００７２】
更なる側面では、本発明はＡＴＣＣ寄託番号２０３５８８（ＤＮＡ８５０６６−２５３４）、ＡＴＣＣ寄託番号２０３５８７（ＤＮＡ９６７８６−２５３４）、ＡＴＣＣ寄託番号２０３５８９（ＤＮＡ９６７８７−２５３４）、ＡＴＣＣ寄託番号２０３５９０（ＤＮＡ９２５０５−２５３４）、ＡＴＣＣ寄託番号２０３８４６（ＤＮＡ１０２０４３−２５３４）、及びＡＴＣＣ寄託番号２０３９７３（ＤＮＡ１１４８７６−２５３４）として寄託されたベクターからなる群より選択されたベクターのｃＤＮＡ挿入断片によってコードされる、例えば成熟ＩＬ-１ｌｐポリペプチドのようなＩＬ-１ｌｐのアミノ酸配列に対して少なくとも８０又は約８０％の配列同一性、少なくとも８５又は約８５％の配列同一性、少なくとも９０又は約９０％の配列同一性、又は少なくとも９５又は約９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列からなる、単離されたＩＬ-１ｌｐポリペプチドに関する。
更なる側面では、本発明はＡＴＣＣ寄託番号２０３５８８（ＤＮＡ８５０６６−２５３４）、ＡＴＣＣ寄託番号２０３５８７（ＤＮＡ９６７８６−２５３４）、ＡＴＣＣ寄託番号２０３５８９（ＤＮＡ９６７８７−２５３４）、ＡＴＣＣ寄託番号２０３５９０（ＤＮＡ９２５０５−２５３４）、ＡＴＣＣ寄託番号２０３８４６（ＤＮＡ１０２０４３−２５３４）、及びＡＴＣＣ寄託番号２０３９７３（ＤＮＡ１１４８７６−２５３４）として寄託されたベクターからなる群より選択されたベクターのｃＤＮＡ挿入断片にある最長オープンリーディングフレームによってコードされる全体アミノ酸配列に対して少なくとも８０又は約８０％の配列同一性、少なくとも８５又は約８５％の配列同一性、少なくとも９０又は約９０％の配列同一性、又は少なくとも９５又は約９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列からなる、単離されたＩＬ-１ｌｐポリペプチドに関する。
【００７３】
他の側面では、本発明は：（１）ＡＴＣＣ寄託番号２０３５８８として寄託されたベクターのｃＤＮＡ挿入断片にある最長オープンリーディングフレームによってコードされる全体アミノ酸配列、（２）ＡＴＣＣ寄託番号２０３５８７として寄託されたベクターのｃＤＮＡ挿入断片にある最長オープンリーディングフレームによってコードされる全体アミノ酸配列、又は該配列の３６のＮ−末端アミノ酸残基以外の全体アミノ酸配列、（３）ＡＴＣＣ寄託番号２０３５８９として寄託されたベクターのｃＤＮＡ挿入断片にある最長オープンリーディングフレームによってコードされる全体アミノ酸配列、又は該配列のＮ−末端アミノ酸残基以外の全体アミノ酸配列、（４）ＡＴＣＣ寄託番号２０３５９０として寄託されたベクターのｃＤＮＡ挿入断片にある最長オープンリーディングフレームによってコードされる全体アミノ酸配列、又は該配列のＮ−末端アミノ酸残基以外の全体アミノ酸配列、（５）ＡＴＣＣ寄託番号２０３８４６として寄託されたベクターのｃＤＮＡ挿入断片にある最長オープンリーディングフレームによってコードされる全体アミノ酸配列、又は該配列の３４のＮ−末端アミノ酸残基以外の全体アミノ酸配列、及び（６）ＡＴＣＣ寄託番号２０３９７３として寄託されたベクターのｃＤＮＡ挿入断片にある最長オープンリーディングフレームによってコードされる全体アミノ酸配列、又は該配列の４５のＮ−末端アミノ酸残基以外の全体アミノ酸配列からなる群より選択されたアミノ酸配列に対して少なくとも８０又は約８０％の配列同一性、少なくとも８５又は約８５％の配列同一性、少なくとも９０又は約９０％の配列同一性、又は少なくとも９５又は約９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列からなる、単離されたＩＬ-１ｌｐポリペプチドに関する。
好ましい実施態様では、ＩＬ-１ｌｐポリペプチドは：（１）ＡＴＣＣ寄託番号２０３５８８として寄託されたベクターのｃＤＮＡ挿入断片にある最長オープンリーディングフレームによってコードされる全体アミノ酸配列、（２）ＡＴＣＣ寄託番号２０３５８７として寄託されたベクターのｃＤＮＡ挿入断片にある最長オープンリーディングフレームによってコードされる全体アミノ酸配列、又は該配列の３６のＮ−末端アミノ酸残基以外の全体アミノ酸配列、（３）ＡＴＣＣ寄託番号２０３５８９として寄託されたベクターのｃＤＮＡ挿入断片にある最長オープンリーディングフレームによってコードされる全体アミノ酸配列、又は該配列のＮ−末端アミノ酸残基以外の全体アミノ酸配列、（４）ＡＴＣＣ寄託番号２０３５９０として寄託されたベクターのｃＤＮＡ挿入断片にある最長オープンリーディングフレームによってコードされる全体アミノ酸配列、又は該配列のＮ−末端アミノ酸残基以外の全体アミノ酸配列、（５）ＡＴＣＣ寄託番号２０３８４６として寄託されたベクターのｃＤＮＡ挿入断片にある最長オープンリーディングフレームによってコードされる全体アミノ酸配列、又は該配列の３４のＮ−末端アミノ酸残基以外の全体アミノ酸配列、及び（６）ＡＴＣＣ寄託番号２０３９７３として寄託されたベクターのｃＤＮＡ挿入断片にある最長オープンリーディングフレームによってコードされる全体アミノ酸配列、又は該配列の４５のＮ−末端アミノ酸残基以外の全体アミノ酸配列からなる群より選択されたアミノ酸配列を構成する。
【００７４】
他の側面では、本発明は天然配列ＩＬ-１ｌｐの少なくとも１の生物活性、例えば天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ３又はｍＩＬ-１Ｒａ３のＩＬ-１Ｒ結合活性、または天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ１、ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌ、又はｈＩＬ-１Ｒａ１ＶのＩＬ-１８Ｒ結合活性を保持し、図２（配列番号：５）のアミノ酸残基３７又は約３７から２０３又は約２０３の配列、図３（配列番号：７）のアミノ酸残基１５又は約１５から１９３又は約１９３の配列、図７（配列番号：１３）のアミノ酸残基３４又は約３４から１５５又は約１５５の配列、図９（配列番号：１６）のアミノ酸残基３４又は約３４から１５５又は約１５５の配列、又は図１９（配列番号：２５）のアミノ酸残基４６又は約４６から２１８又は約２１８の配列に対して、少なくとも８０％又は約８０％ポジティブ、又は少なくとも８５％又は約８５％ポジティブ、又は少なくとも９０％又は約９０％ポジティブ、又は少なくとも９５％又は約９５％ポジティブを有するアミノ酸配列からなる単離されたＩＬ-１ｌｐポリペプチドに関する。
他の側面では、本発明は天然配列ＩＬ-１ｌｐの少なくとも１の生物活性、例えば天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ１、ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌ、又はｈＩＬ-１Ｒａ１ＶのＩＬ-１８Ｒ結合活性を保持し、図１５（配列番号：１９）のアミノ酸残基１又は約１から２０７又は約２０７の配列、又は図１９（配列番号：２５）のアミノ酸残基１又は約１から２１８又は約２１８の配列に対して、少なくとも８０％又は約８０％ポジティブ、又は少なくとも８５％又は約８５％ポジティブ、又は少なくとも９０％又は約９０％ポジティブ、又は少なくとも９５％又は約９５％ポジティブを有するアミノ酸配列からなる単離されたＩＬ-１ｌｐポリペプチドに関する。
【００７５】
他の側面では、本発明は（１）図２（配列番号：５）のアミノ酸残基３７又は約３７から６３又は約６３の配列に対して、少なくとも８０％又は約８０％、又は少なくとも８５％又は約８５％、又は少なくとも９０％又は約９０％、又は少なくとも９５％又は約９５％の％ポジティブ値を有するアミノ酸配列からなる、例えばｈＩＬ-１Ｒａ１ポリペプチドのようなポリペプチド；（２）図３（配列番号：７）のアミノ酸残基１５又は約１５から５３又は約５３の配列に対して、少なくとも８０％又は約８０％、又は少なくとも８５％又は約８５％、又は少なくとも９０％又は約９０％、又は少なくとも９５％又は約９５％の％ポジティブ値を有するアミノ酸配列からなる、例えばｈＩＬ-１Ｒａ１ポリペプチドのようなポリペプチド；（３）図５（配列番号：１０）のアミノ酸残基１又は約１から１３４又は約１３４のアミノ酸配列からなる、例えばｈＩＬ-１Ｒａ２ポリペプチドのようなポリペプチド；（４）図５（配列番号：１０）のアミノ酸残基１０又は約１０から１３４又は約１３４のアミノ酸配列からなるポリペプチド；（５）図５（配列番号：１０）のアミノ酸残基２７又は約２７から１３４又は約１３４のアミノ酸配列からなる、例えばｈＩＬ-１Ｒａ２ポリペプチドのようなポリペプチド；（６）そのＮ−末端又はＣ−末端でヘテロアミノ酸又はアミノ酸配列と融合した図５（配列番号：１０）等のアミノ酸残基２７又は約２７から１３４又は約１３４からなるｈＩＬ-１Ｒａ２の天然アミノ酸配列からなる、例えばｈＩＬ-１Ｒａ２融合変異体ポリペプチドのようなポリペプチド；（７）図７（配列番号：１３）のアミノ酸残基９５又は約９５から１３４又は約１３４の配列に対して、少なくとも８０％又は約８０％、又は少なくとも８５％又は約８５％、又は少なくとも９０％又は約９０％、又は少なくとも９５％又は約９５％の％ポジティブ値を有するアミノ酸配列からなる、例えばｈＩＬ-１Ｒａ３ポリペプチドのようなポリペプチド；及び（８）図９（配列番号：１６）のアミノ酸残基９５又は約９５から１３４又は約１３４の配列に対して、少なくとも８０％又は約８０％、又は少なくとも８５％又は約８５％、又は少なくとも９０％又は約９０％、又は少なくとも９５％又は約９５％の％ポジティブ値を有するアミノ酸配列からなる、例えばｍＩＬ-１Ｒａ３ポリペプチドのようなポリペプチドからなる群より選択される単離されたＩＬ-１ｌｐを提供する。
【００７６】
他の側面では、本発明は（１）図１５（配列番号：１９）のアミノ酸残基２７又は約２７から４４又は約４４の配列に対して、少なくとも８０％又は約８０％、又は少なくとも８５％又は約８５％、又は少なくとも９０％又は約９０％、又は少なくとも９５％又は約９５％の％ポジティブ値を有するアミノ酸配列からなる、例えばｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌポリペプチドのようなポリペプチド；（２）そのＮ−末端又はＣ−末端でヘテロアミノ酸又はアミノ酸配列と融合した図１６（配列番号：２１）等のアミノ酸残基３９又は約３９から１６７又は約１６７からなるｈＩＬ-１Ｒａ１Ｓの天然アミノ酸配列からなる、例えばｈＩＬ-１Ｒａ１Ｓ融合変異体ポリペプチドのようなポリペプチド；（３）そのＮ−末端又はＣ−末端でヘテロアミノ酸又はアミノ酸配列と融合した図１６（配列番号：２１）等のアミノ酸残基４７又は約４７から１６７又は約１６７からなるｈＩＬ-１Ｒａ１Ｓの天然アミノ酸配列からなる、例えばｈＩＬ-１Ｒａ１Ｓ融合変異体ポリペプチドのようなポリペプチド；（４）図１６（配列番号：２１）のアミノ酸残基３９又は約３９から１６７又は約１６７からなる、例えばｈＩＬ-１Ｒａ１Ｓポリペプチドのようなポリペプチド；（５）図１６（配列番号：２１）のアミノ酸残基４７又は約４７から１６７又は約１６７からなる、例えばｈＩＬ-１Ｒａ１Ｓポリペプチドのようなポリペプチド；（６）図１９（配列番号：２５）のアミノ酸残基３７又は約３７から５５又は約５５の配列に対して、少なくとも８０％又は約８０％、又は少なくとも８５％又は約８５％、又は少なくとも９０％又は約９０％、又は少なくとも９５％又は約９５％の％ポジティブ値を有するアミノ酸配列からなる、例えばｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖポリペプチドのようなポリペプチドからなる群より選択される単離されたＩＬ-１ｌｐを提供する。
他の側面では、本発明は図２（配列番号：５）のアミノ酸残基３７又は約３７から２０３又は約２０３の配列、図３（配列番号：７）のアミノ酸残基１５又は約１５から１９３又は約１９３の配列、図７（配列番号：１３）のアミノ酸残基３４又は約３４から１５５又は約１５５の配列、図９（配列番号：１６）のアミノ酸残基３４又は約３４から１５５又は約１５５の配列、又は図１９（配列番号：２５）のアミノ酸残基４６又は約４６から２１８又は約２１８の配列に対して、少なくとも８０％又は約８０％ポジティブ、又は少なくとも８５％又は約８５％ポジティブ、又は少なくとも９０％又は約９０％ポジティブ、又は少なくとも９５％又は約９５％ポジティブを有するアミノ酸配列からなる単離されたＩＬ-１ｌｐに関する。
他の側面では、本発明は図１５（配列番号：１９）のアミノ酸残基１又は約１から２０７又は約２０７の配列、又は図１９（配列番号：２５）のアミノ酸残基１又は約１から２１８又は約２１８の配列に対して、少なくとも８０％又は約８０％ポジティブ、又は少なくとも８５％又は約８５％ポジティブ、又は少なくとも９０％又は約９０％ポジティブ、又は少なくとも９５％又は約９５％ポジティブを有するアミノ酸配列からなる単離されたＩＬ-１ｌｐに関する。
【００７７】
更なる側面では、本発明は天然配列ＩＬ-１ｌｐの少なくとも１の生物活性、例えば天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ３又はｍＩＬ-１Ｒａ３のＩＬ-１Ｒ結合活性、または天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ１、ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌ、又はｈＩＬ-１Ｒａ１ＶのＩＬ-１８Ｒ結合活性を保持し、ＡＴＣＣ寄託番号２０３５８８（ＤＮＡ８５０６６−２５３４）、ＡＴＣＣ寄託番号２０３５８７（ＤＮＡ９６７８６−２５３４）、ＡＴＣＣ寄託番号２０３５８９（ＤＮＡ９６７８７−２５３４）、ＡＴＣＣ寄託番号２０３５９０（ＤＮＡ９２５０５−２５３４）、ＡＴＣＣ寄託番号２０３８４６（ＤＮＡ１０２０４３−２５３４）、及びＡＴＣＣ寄託番号２０３９７３（ＤＮＡ１１４８７６−２５３４）として寄託されたベクターのｃＤＮＡ挿入断片によってコードされる、例えば成熟ＩＬ-１ｌｐポリペプチドのようなＩＬ-１ｌｐのアミノ酸配列に対して少なくとも８０又は約８０％ポジティブ、少なくとも８５又は約８５％ポジティブ、少なくとも９０又は約９０％ポジティブ、又は少なくとも９５又は約９５％ポジティブを有するアミノ酸配列からなる、単離されたＩＬ-１ｌｐポリペプチドに関する。
更なる側面では、本発明は天然配列ＩＬ-１ｌｐの少なくとも１の生物活性、例えば天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ３又はｍＩＬ-１Ｒａ３のＩＬ-１Ｒ結合活性、または天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ１、ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌ、又はｈＩＬ-１Ｒａ１ＶのＩＬ-１８Ｒ結合活性を保持し、ＡＴＣＣ寄託番号２０３５８８（ＤＮＡ８５０６６−２５３４）、ＡＴＣＣ寄託番号２０３５８７（ＤＮＡ９６７８６−２５３４）、ＡＴＣＣ寄託番号２０３５８９（ＤＮＡ９６７８７−２５３４）、ＡＴＣＣ寄託番号２０３５９０（ＤＮＡ９２５０５−２５３４）、ＡＴＣＣ寄託番号２０３８４６（ＤＮＡ１０２０４３−２５３４）、及びＡＴＣＣ寄託番号２０３９７３（ＤＮＡ１１４８７６−２５３４）として寄託されたベクターからなる群から選択されるベクターのｃＤＮＡ挿入断片にある最長オープンリーディングフレームによってコードされる、全体アミノ酸配列に対して少なくとも８０又は約８０％ポジティブ、少なくとも８５又は約８５％ポジティブ、少なくとも９０又は約９０％ポジティブ、又は少なくとも９５又は約９５％ポジティブを有するアミノ酸配列からなる、単離されたＩＬ-１ｌｐポリペプチドに関する。
【００７８】
他の側面では、本発明は天然配列ＩＬ-１ｌｐの少なくとも１の生物活性、例えば天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ３又はｍＩＬ-１Ｒａ３のＩＬ-１Ｒ結合活性、または天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ１、ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌ、又はｈＩＬ-１Ｒａ１ＶのＩＬ-１８Ｒ結合活性を保持し、（１）ＡＴＣＣ寄託番号２０３５８８として寄託されたベクターのｃＤＮＡ挿入断片にある最長オープンリーディングフレームによってコードされる全体アミノ酸配列、（２）ＡＴＣＣ寄託番号２０３５８７として寄託されたベクターのｃＤＮＡ挿入断片にある最長オープンリーディングフレームによってコードされる全体アミノ酸配列、又は該配列の３６のＮ−末端アミノ酸残基を除く全体アミノ酸配列、（３）ＡＴＣＣ寄託番号２０３５８９として寄託されたベクターのｃＤＮＡ挿入断片にある最長オープンリーディングフレームによってコードされる全体アミノ酸配列、又は該配列のＮ−末端アミノ酸残基を除く全体アミノ酸配列、（４）ＡＴＣＣ寄託番号２０３５９０として寄託されたベクターのｃＤＮＡ挿入断片にある最長オープンリーディングフレームによってコードされる全体アミノ酸配列、又は該配列のＮ−末端アミノ酸残基を除く全体アミノ酸配列、（５）ＡＴＣＣ寄託番号２０３８４６として寄託されたベクターのｃＤＮＡ挿入断片にある最長オープンリーディングフレームによってコードされる全体アミノ酸配列、又は該配列のＮ−末端アミノ酸残基を除く全体アミノ酸配列、又は該配列の３４のＮ−末端アミノ酸残基を除く全体アミノ酸配列、及び（６）ＡＴＣＣ寄託番号２０３９７３として寄託されたベクターのｃＤＮＡ挿入断片にある最長オープンリーディングフレームによってコードされる全体アミノ酸配列、又は該配列のＮ−末端アミノ酸残基を除く全体アミノ酸配列、又は該配列の４５のＮ−末端アミノ酸残基を除く全体アミノ酸配列からなる群より選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも８０又は約８０％ポジティブ、少なくとも８５又は約８５％ポジティブ、少なくとも９０又は約９０％ポジティブ、又は少なくとも９５又は約９５％ポジティブを有するアミノ酸配列からなる、単離されたＩＬ-１ｌｐポリペプチドに関する。
更なる側面では、本発明は、ＡＴＣＣ寄託番号２０３５８８（ＤＮＡ８５０６６−２５３４）、ＡＴＣＣ寄託番号２０３５８７（ＤＮＡ９６７８６−２５３４）、ＡＴＣＣ寄託番号２０３５８９（ＤＮＡ９６７８７−２５３４）、ＡＴＣＣ寄託番号２０３５９０（ＤＮＡ９２５０５−２５３４）、ＡＴＣＣ寄託番号２０３８４６（ＤＮＡ１０２０４３−２５３４）、又はＡＴＣＣ寄託番号２０３９７３（ＤＮＡ１１４８７６−２５３４）として寄託されたベクターのｃＤＮＡ挿入断片によってコードされる、例えば成熟ＩＬ-１ｌｐのようなＩＬーｌｐのアミノ酸配列に対して少なくとも８０又は約８０％ポジティブ、少なくとも８５又は約８５％ポジティブ、少なくとも９０又は約９０％ポジティブ、又は少なくとも９５又は約９５％ポジティブを有するアミノ酸配列からなる、単離されたＩＬ-１ｌｐポリペプチドに関する。
【００７９】
更なる側面では、本発明は、ＡＴＣＣ寄託番号２０３５８８（ＤＮＡ８５０６６−２５３４）、ＡＴＣＣ寄託番号２０３５８７（ＤＮＡ９６７８６−２５３４）、ＡＴＣＣ寄託番号２０３５８９（ＤＮＡ９６７８７−２５３４）、ＡＴＣＣ寄託番号２０３５９０（ＤＮＡ９２５０５−２５３４）、ＡＴＣＣ寄託番号２０３８４６（ＤＮＡ１０２０４３−２５３４）、及びＡＴＣＣ寄託番号２０３９７３（ＤＮＡ１１４８７６−２５３４）として寄託されたベクターからなる群より選択されたベクターのｃＤＮＡ挿入断片のにある最長オープンリーディングフレームによってコードされる、全体アミノ酸配列に対して少なくとも８０又は約８０％ポジティブ、少なくとも８５又は約８５％ポジティブ、少なくとも９０又は約９０％ポジティブ、又は少なくとも９５又は約９５％ポジティブを有するアミノ酸配列からなる、単離されたＩＬ-１ｌｐポリペプチドに関する。
他の側面では、本発明は（１）ＡＴＣＣ寄託番号２０３５８８として寄託されたベクターのｃＤＮＡ挿入断片にある最長オープンリーディングフレームによってコードされる全体アミノ酸配列、（２）ＡＴＣＣ寄託番号２０３５８７として寄託されたベクターのｃＤＮＡ挿入断片にある最長オープンリーディングフレームによってコードされる全体アミノ酸配列、又は該配列の３６のＮ−末端アミノ酸残基を除く全体アミノ酸配列、（３）ＡＴＣＣ寄託番号２０３５８９として寄託されたベクターのｃＤＮＡ挿入断片にある最長オープンリーディングフレームによってコードされる全体アミノ酸配列、又は該配列のＮ−末端アミノ酸残基を除く全体アミノ酸配列、（４）ＡＴＣＣ寄託番号２０３５９０として寄託されたベクターのｃＤＮＡ挿入断片にある最長オープンリーディングフレームによってコードされる全体アミノ酸配列、又は該配列のＮ−末端アミノ酸残基を除く全体アミノ酸配列、（５）ＡＴＣＣ寄託番号２０３８４６として寄託されたベクターのｃＤＮＡ挿入断片にある最長オープンリーディングフレームによってコードされる全体アミノ酸配列、又は該配列のＮ−末端アミノ酸残基を除く全体アミノ酸配列、又は該配列の３４のＮ−末端アミノ酸残基を除く全体アミノ酸配列、及び（６）ＡＴＣＣ寄託番号２０３９７３として寄託されたベクターのｃＤＮＡ挿入断片にある最長オープンリーディングフレームによってコードされる全体アミノ酸配列、又は該配列のＮ−末端アミノ酸残基を除く全体アミノ酸配列、又は該配列の４５のＮ−末端アミノ酸残基を除く全体アミノ酸配列からなる群より選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも８０又は約８０％ポジティブ、少なくとも８５又は約８５％ポジティブ、少なくとも９０又は約９０％ポジティブ、又は少なくとも９５又は約９５％ポジティブを有するアミノ酸配列からなる、単離されたＩＬ-１ｌｐポリペプチドに関する。
他の側面では、本発明は、図７（配列番号：１３）のアミノ酸残基８０又は約８０から１５５又は約１５５の配列に対して、少なくとも８０％又は約８０％、又は少なくとも８５％又は約８５％、又は少なくとも９０％又は約９０％、又は少なくとも９５％又は約９５％の％ポジティブ値を有するアミノ酸配列からなる、例えばｈＩＬ-１Ｒａ３ポリペプチドのような単離されたポリペプチドを提供する。
【００８０】
また他の側面では、本発明は（１）図２（配列番号：５）のアミノ酸残基３７又は約３７から６３又は約６３；（２）図３（配列番号：７）のアミノ酸残基１５又は約１５から５３又は約５３；（３）図７（配列番号：１３）のアミノ酸残基８０又は約８０から１５５又は約１５５；（４）図９（配列番号：１６）のアミノ酸残基９５又は約９５から１５５又は約１５５からなる群から選択されたアミノ酸配列を構成する単離されたＩＬ-１ｌｐポリペプチド、又は該アミノ酸配列の少なくとも１０近接アミノ酸の伸長と一致する該ＩＬ-１ｌｐポリペプチドの断片に関し、そのＩＬ-１ｌｐポリペプチド又はその断片が抗−ＩＬ-１ｌｐ抗体との結合部位を提供するのに十分なものである。好ましくは、ＩＬ-１ｌｐ断片は、天然配列ＩＬ-１ｌｐポリペプチドの少なくとも１の生物活性を有する。
また他の側面では、本発明は（１）図１５（配列番号：１９）のアミノ酸残基２６又は約２６から４４又は約４４；（２）図１９（配列番号：２５）のアミノ酸残基２６又は約２６から７８又は約７８；及び（３）図１９（配列番号：２５）のアミノ酸残基４６又は約４６から８９又は約８９からなる群から選択されたアミノ酸配列を構成する単離されたＩＬ-１ｌｐポリペプチド、又は該アミノ酸配列の少なくとも１０近接アミノ酸の伸長と一致する該ＩＬ-１ｌｐポリペプチドの断片に関し、そのＩＬ-１ｌｐポリペプチド又はその断片が抗−ＩＬ-１ｌｐ抗体との結合部位を提供するのに十分なものである。好ましくは、ＩＬ-１ｌｐ断片は、天然配列ＩＬ-１ｌｐポリペプチドの少なくとも１の生物活性を有する。
更なる側面では、本発明は（１）図２（配列番号：５）のアミノ酸残基３７又は約３７から６３又は約６３を構成する、例えばｈＩＬ-１Ｒａ１ポリペプチドのようなポリペプチド；（２）図３（配列番号：７）のアミノ酸残基１５又は約１５から５３又は約５３を構成する、例えばｈＩＬ-１Ｒａ１ポリペプチドのようなポリペプチド；（３）図７（配列番号：１３）のアミノ酸残基９５又は約９５から１３４又は約１３４を構成する、例えばｈＩＬ-１Ｒａ３ポリペプチドのようなポリペプチド；及び（４）図９（配列番号：１６）のアミノ酸残基９５又は約９５から１３４又は約１３４を構成する、例えばｍＩＬ-１Ｒａ３ポリペプチドのようなポリペプチドからなる群から選択された単離されたＩＬ-１ｌｐポリペプチドを提供する。
更なる側面では、本発明は（１）図２（配列番号：５）のアミノ酸残基３７又は約３７から２０３又は約２０３を構成する、例えばｈＩＬ-１Ｒａ１ポリペプチドのようなポリペプチド；（２）図３（配列番号：７）のアミノ酸残基１５又は約１５から１９３又は約１９３を構成する、例えばｈＩＬ-１Ｒａ１ポリペプチドのようなポリペプチド；（３）図７（配列番号：１３）のアミノ酸残基３４又は約３４から１５５又は約１５５を構成する、例えばｈＩＬ-１Ｒａ３ポリペプチドのようなポリペプチド；及び（３）図９（配列番号：１６）のアミノ酸残基３４又は約３４から１５５又は約１５５を構成する、例えばｍＩＬ-１Ｒａ３ポリペプチドのようなポリペプチドからなる群から選択された単離されたＩＬ-１ｌｐポリペプチドを提供する。
【００８１】
更なる側面では、本発明は、図７（配列番号：１３）のアミノ酸残基８０又は約８０から１５５又は約１５５を構成する、例えばｈＩＬ-１Ｒａ３ポリペプチドのような単離されたポリペプチドを提供する。
更なる側面では、本発明は（１）図１５（配列番号：１９）のアミノ酸残基２６又は約２６から４４又は約４４を構成する、例えばｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌポリペプチドのようなポリペプチド；（２）図１５（配列番号：１９）のアミノ酸残基１又は約１から４４又は約４４を構成する、例えばｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌポリペプチドのようなポリペプチド；（３）図１６（配列番号：２１）のアミノ酸残基１又は約１から３８又は約３８を構成する、例えばｈＩＬ-１Ｒａ１Ｓポリペプチドのようなポリペプチド；（４）図１９（配列番号：２５）のアミノ酸残基３７又は約３７から５５又は約５５を構成する、例えばｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖポリペプチドのようなポリペプチド；（５）図１９（配列番号：２５）のアミノ酸残基１２又は約１２から５５又は約５５を構成する、例えばｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖポリペプチドのようなポリペプチド；及び（６）図１９（配列番号：２５）のアミノ酸残基１又は約１から５５又は約５５を構成する、例えばｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖポリペプチドのようなポリペプチドからなる群から選択された単離されたポリペプチドを提供する。
【００８２】
更なる側面では、本発明は（１）そのＮ−末端又はＣ−末端でヘテロアミノ酸又はアミノ酸配列と融合した、図１５（配列番号：１９）のアミノ酸残基１又は約１から２０７又は約２０７からなるｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌの天然アミノ酸配列からなる、例えばｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌ融合変異体ポリペプチドのようなポリペプチド；（２）そのＮ−末端又はＣ−末端でヘテロアミノ酸又はアミノ酸配列と融合した図１５（配列番号：１９）等のアミノ酸残基２６又は約２６から２０７又は約２０７からなるｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌの天然アミノ酸配列からなる、例えばｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌ融合変異体ポリペプチドのようなポリペプチド；（３）図１５（配列番号：１９）のアミノ酸残基１又は約１から２０７又は約２０７からなる、例えばｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌポリペプチドのようなポリペプチド；（４）図１５（配列番号：１９）のアミノ酸残基２６又は約２６から２０７又は約２０７からなる、例えばｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌポリペプチドのようなポリペプチド；（５）そのＮ−末端又はＣ−末端でヘテロアミノ酸又はアミノ酸配列と融合した図１９（配列番号：２５）等のアミノ酸残基１又は約１から２１８又は約２１８からなるｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖの天然アミノ酸配列からなる、例えばｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖ融合変異体ポリペプチドのようなポリペプチド；（６）そのＮ−末端又はＣ−末端でヘテロアミノ酸又はアミノ酸配列と融合した図１９（配列番号：２５）等のアミノ酸残基１２又は約１２から２１８又は約２１８からなるｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖの天然アミノ酸配列からなる、例えばｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖ融合変異体ポリペプチドのようなポリペプチド；（７）そのＮ−末端又はＣ−末端でヘテロアミノ酸又はアミノ酸配列と融合した図１９（配列番号：２５）等のアミノ酸残基３７又は約３７から２１８又は約２１８からなるｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖの天然アミノ酸配列からなる、例えばｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖ融合変異体ポリペプチドのようなポリペプチド；（８）そのＮ−末端又はＣ−末端でヘテロアミノ酸又はアミノ酸配列と融合した図１９（配列番号：２５）等のアミノ酸残基４６又は約４６から２１８又は約２１８からなるｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖの天然アミノ酸配列からなる、例えばｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖ融合変異体ポリペプチドのようなポリペプチド；（９）図１９（配列番号：２５）のアミノ酸残基１又は約１から２１８又は約２１８のアミノ酸配列からなる、例えばｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖポリペプチドのようなポリペプチド；（１０）図１９（配列番号：２５）のアミノ酸残基１２又は約１２から２１８又は約２１８のアミノ酸配列からなる、例えばｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖポリペプチドのようなポリペプチド；（１１）図１９（配列番号：２５）のアミノ酸残基３７又は約３７から２１８又は約２１８のアミノ酸配列からなる、例えばｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖポリペプチドのようなポリペプチド；（１２）図１９（配列番号：２５）のアミノ酸残基４６又は約４６から２１８又は約２１８のアミノ酸配列からなる、例えばｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖポリペプチドのようなポリペプチドからなる群から選択された単離されたＩＬ-１ｌｐポリペプチドを提供する。
【００８３】
更なる側面では、本発明は（１）図１５（配列番号：１９）のアミノ酸残基１又は約１から２０７又は約２０７を含んでなる、例えばｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌポリペプチドのようなポリペプチド；（２）図１５（配列番号：１９）のアミノ酸残基２６又は約２６から２０７又は約２０７を含んでなる、例えばｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌポリペプチドのようなポリペプチド；（３）図１６（配列番号：２１）のアミノ酸残基１又は約１から１６７又は約１６７を含んでなる、例えばｈＩＬ-１Ｒａ１Ｓポリペプチドのようなポリペプチド；（４）図１６（配列番号：２１）のアミノ酸残基２６又は約２６から１６７又は約１６７を含んでなる、例えばｈＩＬ-１Ｒａ１Ｓポリペプチドのようなポリペプチド；（５）図１９（配列番号：２５）のアミノ酸残基１又は約１から２１８又は約２１８を含んでなる、例えばｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖポリペプチドのようなポリペプチド；及び（６）図１９（配列番号：２５）のアミノ酸残基１２又は約１２から２１８又は約２１８を含んでなる、例えばｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖポリペプチドのようなポリペプチドからなる群から選択された単離されたＩＬ-１ｌｐポリペプチドを提供する。
更なる側面では、本発明は：（１）図１９（配列番号：２５）のアミノ酸残基３７又は約３７から２１８又は約２１８を含んでなる、例えばｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖポリペプチドのようなポリペプチド；及び（２）図１９（配列番号：２５）のアミノ酸残基４６又は約４６から２１８又は約２１８を含んでなる、例えばｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖポリペプチドのようなポリペプチドからなる群から選択された単離されたＩＬ-１ｌｐポリペプチドを提供する。
更なる側面では、本発明は：（１）そのＮ−末端又はＣ−末端でヘテロアミノ酸又はアミノ酸配列と融合した図５（配列番号：１０）等のアミノ酸残基１０から１３４のアミノ酸配列からなるポリペプチド；（２）図５（配列番号：１０）のアミノ酸残基１０から１３４のアミノ酸配列からなるポリペプチド；（３）そのＮ−末端又はＣ−末端でヘテロアミノ酸又はアミノ酸配列と融合した図７（配列番号：１３）等のアミノ酸残基２から１５５からなるｈＩＬ-１Ｒａ３の天然アミノ酸配列からなる、例えばｈＩＬ-１Ｒａ３ポリペプチドのようなポリペプチド；（４）図７（配列番号：１３）のアミノ酸残基２から１５５のアミノ酸配列からなる、例えばｈＩＬ-１Ｒａ３ポリペプチドのようなポリペプチド；（５）そのＮ−末端又はＣ−末端でヘテロアミノ酸又はアミノ酸配列と融合した図９（配列番号：１６）等のアミノ酸残基２から１５５からなるｍＩＬ-１Ｒａ３の天然アミノ酸配列からなる、例えばｍＩＬ-１Ｒａ３ポリペプチドのようなポリペプチド；（６）図９（配列番号：１６）のアミノ酸残基２から１５５のアミノ酸配列からなる、例えばｍＩＬ-１Ｒａ３ポリペプチドのようなポリペプチドからなる群から選択された単離されたＩＬ-１ｌｐポリペプチドを提供する。
【００８４】
更なる側面では、本発明は：（１）図５（配列番号：１０）のアミノ酸残基１０から１３４のアミノ酸配列を含んでなるポリペプチド；（２）図７（配列番号：１３）のアミノ酸残基２から１５５のアミノ酸配列含んでなる、例えばｈＩＬ-１Ｒａ３ポリペプチドのようなポリペプチド；及び（３）図９（配列番号：１６）のアミノ酸残基２から１５５のアミノ酸配列を含んでなる、例えばｍＩＬ-１Ｒａ３ポリペプチドのようなポリペプチドからなる群から選択された単離されたＩＬ-１ｌｐポリペプチドを提供する。
また更なる側面では、本発明は、ＡＴＣＣ寄託番号２０３５８８、２０３５８７、２０３５８６、２０３５８９、及び２０３５９０として寄託されたベクターからなる群より選択されたベクターのｃＤＮＡ挿入断片によってコードされる成熟ポリペプチドと同様である単離されたＩＬ-１ｌｐポリペプチドを提供する。
また更なる側面では、本発明は、ＡＴＣＣ寄託番号２０３８４６、２０３８５５及び２０３９７３として寄託されたベクターからなる群より選択されたベクターのｃＤＮＡ挿入断片によってコードされる成熟ポリペプチドと同様である単離されたＩＬ-１ｌｐポリペプチドを提供する。
また更なる側面では、本発明は、ＡＴＣＣ寄託番号２０３５８８、２０３５８６、２０３５８９、及び２０３５９０として寄託されたベクターからなる群より選択されたベクターのｃＤＮＡ挿入断片にある最長オープンリーディングフレームによってコードされる全体アミノ酸配列を含んでなる単離されたポリペプチドを提供する。
また更なる側面では、本発明は、ＡＴＣＣ寄託番号２０３８４６、２０３８５５及び２０３９７３として寄託されたベクターからなる群より選択されたベクターのｃＤＮＡ挿入断片にある最長オープンリーディングフレームによってコードされる全体アミノ酸配列を含んでなる単離されたポリペプチドを提供する。
【００８５】
更なる側面では、本発明は（i）試験ＤＮＡ分子を緊縮条件下で（ａ）：（１）図２（配列番号：５）のアミノ酸残基３７又は約３７から２０３又は約２０３；（２）図３（配列番号：７）のアミノ酸残基１５又は約１５から１９３又は約１９３；（３）図７（配列番号：１３）のアミノ酸残基２又は約２から１５５又は約１５５；及び（４）図９（配列番号：１６）のアミノ酸残基２又は約２から１５５又は約１５５からなる群から選択されるアミノ酸配列をコードするＤＮＡ分子、又は（ｂ）（ａ）のＤＮＡ分子の相補鎖とハイブリッド化し、そして試験ＤＮＡ分子が、天然配列ＩＬ-１ｌｐの少なくとも１の生物活性、例えば天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ３又はｍＩＬ-１Ｒａ３のＩＬ-１Ｒ結合活性、または天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ１、ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌ、又はｈＩＬ-１Ｒａ１ＶのＩＬ-１８Ｒ結合活性を有するＩＬ-１ｌｐポリペプチドをコードする場合には、さらに試験ＤＮＡ分子が（ａ）又は（ｂ）のＤＮＡ分子に対して少なくとも８０又は約８０％配列同一性、少なくとも８５又は約８５％配列同一性、少なくとも９０又は約９０％配列同一性、又は少なくとも９５又は約９５％配列同一性を有する場合には、（ii）ＩＬ-１ｌｐポリペプチドの発現に適した条件下で試験ＤＮＡ分子を含んでなる宿主細胞を培養し、さらに（iii）細胞培地からIL-１ｌｐポリペプチドを回収することによって、生成されるポリペプチドを提供する。
更なる側面では、本発明は（i）試験ＤＮＡ分子を緊縮条件下で（ａ）：（１）図１５（配列番号：１９）のアミノ酸残基２６又は約２６から２０７又は約２０７；（２）図１９（配列番号：２５）のアミノ酸残基１又は約１から２１８又は約２１８；（３）図１９（配列番号：２５）のアミノ酸残基１２又は約１２から２１８又は約２１８；（４）図１９（配列番号：２５）のアミノ酸残基３７又は約３７から２１８又は約２１８；及び（５）図１９（配列番号：２５）のアミノ酸残基４６又は約４６から２１８又は約２１８からなる群から選択されるアミノ酸配列をコードするＤＮＡ分子、又は（ｂ）（ａ）のＤＮＡ分子の相補鎖とハイブリッド化し、そして試験ＤＮＡ分子が、天然配列ＩＬ-１ｌｐの少なくとも１の生物活性、例えば天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ１、ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌ、又はｈＩＬ-１Ｒａ１ＶのＩＬ-１８Ｒ結合活性を有するＩＬ-１ｌｐポリペプチドをコードする場合には、さらに試験ＤＮＡ分子が（ａ）又は（ｂ）のＤＮＡ分子に対して少なくとも８０又は約８０％配列同一性、少なくとも８５又は約８５％配列同一性、少なくとも９０又は約９０％配列同一性、又は少なくとも９５又は約９５％配列同一性を有する場合には、（ii）ＩＬ-１ｌｐポリペプチドの発現に適した条件下で試験ＤＮＡ分子を含んでなる宿主細胞を培養し、さらに（iii）細胞培地からIL-１ｌｐポリペプチドを回収することによって、生成されるポリペプチドを提供する。
【００８６】
Ａ．ＩＬ-１ｌｐの調製
以下の説明は、主として、ＩＬ-１ｌｐ核酸を含むベクターで形質転換又は形質移入された細胞を培養することによりＩＬ-１ｌｐを生産する方法に関する。もちろん、当該分野においてよく知られている他の方法を用いてＩＬ-１ｌｐを調製することができると考えられる。例えば、ＩＬ-１ｌｐ配列、又はその一部は、固相技術を用いた直接ペプチド合成によって生産してもよい［例えば、Stewart等, Solid-Phase Peptide Synthesis, W.H. Freeman Co., San Francisco, CA (1969)；Merrifield, J. Am. Chem. Soc., 85:2149-2154 (1963)参照］。手動技術又は自動によるインビトロタンパク質合成を行ってもよい。自動合成は、例えば、アプライド・バイオシステムズ・ペプチド合成機（Foster City, CA）を用いて、製造者の指示により実施してもよい。ＩＬ-１ｌｐの種々の部分は、別々に化学的に合成され、化学的又は酵素的方法を用いて結合させて全長ＩＬ-１ｌｐを生産してもよい。
１．ＩＬ-１ｌｐをコードするＤＮＡの単離
ＩＬ-１ｌｐをコードするＤＮＡは、ＩＬ-１ｌｐｍＲＮＡを保有していてそれを検出可能なレベルで発現すると考えられる組織から調製されたｃＤＮＡライブラリから得ることができる。従って、ヒトＩＬ-１ｌｐＤＮＡは、実施例に記載されるように、ヒトの組織から調製されたｃＤＮＡライブラリから簡便に得ることができる。またＩＬ-１ｌｐ-コード化遺伝子は、ゲノムライブラリから又はオリゴヌクレオチド合成により得ることもできる。
ライブラリは、対象となる遺伝子あるいはその遺伝子によりコードされるタンパク質を同定するために設計されたプローブ(ＩＬ-１ｌｐに対する抗体又は少なくとも約２０−８０塩基のオリゴヌクレオチド等)によってスクリーニングできる。選択されたプローブによるｃＤＮＡ又はゲノムライブラリのスクリーニングは、例えばSambrook等, Molecular Cloning: A Laboratory Manual(New York: Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989)に記載されている標準的な手順を使用して実施することができる。ＩＬ-１ｌｐポリペプチドをコードする遺伝子を単離する他の方法はＰＣＲ法を使用するものである［Sambrook等,上掲；Dieffenbach等, PCR Primer：A Laboratory Manual(Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1995)］。
【００８７】
下記の実施例には、ｃＤＮＡライブラリのスクリーニング技術を記載している。プローブとして選択されたオリゴヌクレオチド配列は、充分な長さで、疑陽性が最小化されるよう充分に明瞭でなければならない。オリゴヌクレオチドは、スクリーニングされるライブラリ内のＤＮＡとのハイブリッド形成時に検出可能であるように標識されていることが好ましい。標識化の方法は当該分野において良く知られており、３２Ｐ標識されたＡＴＰのような放射線標識、ビオチン化あるいは酵素標識の使用が含まれる。中程度の厳密性及び高度の厳密性を含むハイブリッド形成条件は、上掲のSambrook等に与えられている。
このようなライブラリースクリーニング法において同定された配列は、Genbank等の公共データベース又は個人の配列データベースに寄託され公衆に利用可能とされている周知の配列と比較及びアラインメントすることができる。分子の決定された領域内又は全長に渡っての（アミノ酸又はヌクレオチドレベルのいずれかでの）配列同一性は、この分野で知られた、そしてここに記載した方法を用いて決定することができる。
タンパク質コード配列を有する核酸は、初めてここで開示された推定アミノ酸配列を使用し、また必要ならば、ｃＤＮＡに逆転写されなかったｍＲＮＡの生成中間体及び先駆物質を検出する上掲のSambrook等に記述されているような従来のプライマー伸展法を使用し、選択されたｃＤＮＡ又はゲノムライブラリをスクリーニングすることにより得られる。
【００８８】
２．宿主細胞の選択及び形質転換
宿主細胞を、ここに記載したＩＬ-１ｌｐ生産のための発現又はクローニングベクターで形質移入又は形質転換し、プロモーターを誘導し、形質転換体を選択し、又は所望の配列をコードする遺伝子を増幅するために適当に変性された常套的栄養培地で培養する。培養条件、例えば培地、温度、ｐＨ等々は、過度の実験をすることなく当業者が選ぶことができる。一般に、細胞培養の生産性を最大にするための原理、プロトコール、及び実用技術は、Mammalian Cell Biotechnology: a Practical Approach, M.Butler編 (IRL Press, 1991)及びSambrook等, 上掲に見出すことができる。
原核生物細胞形質移入及び真核生物細胞形質移入の方法、例えば、ＣａＣｌ２、ＣａＰＯ４、リポソーム媒介及びエレクトロポレーションは当業者に知られている。用いられる宿主細胞に応じて、その細胞に対して適した標準的な方法を用いて形質転換はなされる。前掲のSambrook等に記載された塩化カルシウムを用いるカルシウム処理又はエレクトロポレーションが、一般的に原核生物に対して用いられる。アグロバクテリウム・トゥメファシエンスによる感染が、Shaw等, Gene, 23:315 (1983)及び1989年6月29日公開のWO 89/05859に記載されているように、或る種の植物細胞の形質転換に用いられる。このような細胞壁のない哺乳動物の細胞に対しては、Graham及びvan der Eb, Virology, 52:456-457 (1978)のリン酸カルシウム沈降法が好ましい。哺乳動物細胞の宿主系形質転換の一般的な態様は米国特許第4,399,216号に記載されている。酵母菌中への形質転換は、典型的には、Van solingen等, J. Bact., 130:946 (1977)及びHsiao等, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 76:3829 (1979)の方法に従って実施される。しかしながら、ＤＮＡを細胞中に導入する他の方法、例えば、核マイクロインジェクション、エレクトロポレーション、無傷の細胞、又はポリカチオン、例えばポリブレン、ポリオルニチン等を用いる細菌プロトプラスト融合もまた用いることもできる。哺乳動物細胞を形質転換するための種々の技術については、Keown等, Methods in Enzymology, 185:527-537 (1990)及び Mansour等, Nature, 336:348-352 (1988)を参照のこと。
【００８９】
ここに記載のベクターにＤＮＡをクローニングあるいは発現するために適切な宿主細胞は、原核生物、酵母菌、又は高等真核生物細胞である。適切な原核生物は、限定するものではないが、真正細菌、例えばグラム陰性又はグラム陽性生物体、例えば大腸菌のような腸内細菌科を含む。種々の大腸菌株が公衆に利用可能であり、例えば、大腸菌Ｋ１２株ＭＭ２９４（ATCC31,446）；大腸菌Ｘ１７７６（ATCC31,537）；大腸菌株Ｗ３１１０（ATCC27,325）及びＫ５７７２（ATCC53,635）である。
原核生物に加えて、糸状菌又は酵母菌のような真核微生物は、ＩＬ-１ｌｐポリペプチドコード化ベクターのための適切なクローニング又は発現宿主である。サッカロミセス・セレヴィシアは、通常用いられる下等真核生物宿主微生物である。
グリコシル化ＩＬ-１ｌｐの発現に適切な宿主細胞は、多細胞生物から誘導される。無脊椎動物細胞の例としては、ショウジョウバエＳ２及びスポドスペラＳｆ９等の昆虫細胞並びに植物細胞が含まれる。有用な哺乳動物宿主株化細胞の例は、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）及びＣＯＳ細胞を含む。より詳細な例は、ＳＶ４０によって形質転換されたサル腎臓ＣＶ１株 (COS-7, ATCC CRL 1651);ヒト胚腎臓株（293又は懸濁培養での増殖のためにサブクローン化された293細胞、Graham等, J. Gen Virol., 36:59 (1977)）;チャイニーズハムスター卵巣細胞／-ＤＨＦＲ(CHO, Urlaub及びChasin, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 77:4216 (1980));マウスのセルトリ細胞（TM4, Mather, Biol. Reprod., 23:243-251 (1980)）ヒト肺細胞 (W138, ATCC CCL 75); ヒト肝細胞 (Hep G2, HB 8065); 及びマウス乳房腫瘍細胞 (MMT 060562, ATCC CCL51)を含む。適切な宿主細胞の選択は、この分野の技術常識内にある。
【００９０】
３．複製可能なベクターの選択及び使用
ＩＬ-１ｌｐをコードする核酸(例えば、ｃＤＮＡ又はゲノムＤＮＡ)は、クローニング(ＤＮＡの増幅)又は発現のために複製可能なベクター内に挿入される。様々なベクターが公的に入手可能である。ベクターは、例えば、プラスミド、コスミド、ウイルス粒子、又はファージの形態とすることができる。適切な核酸配列が、種々の手法によってベクターに挿入される。一般に、ＤＮＡはこの分野で周知の技術を用いて適当な制限エンドヌクレアーゼ部位に挿入される。ベクター成分としては、一般に、これらに制限されるものではないが、一又は複数のシグナル配列、複製開始点、一又は複数のマーカー遺伝子、エンハンサーエレメント、プロモーター、及び転写終結配列を含む。これらの成分の一又は複数を含む適当なベクターの作成には、当業者に知られた標準的なライゲーション技術を用いる。
ＩＬ-１ｌｐは直接的に組換え手法によって生産されるだけではなく、シグナル配列あるいは成熟タンパク質あるいはポリペプチドのＮ-末端に特異的切断部位を有する他のポリペプチドである異種ポリペプチドとの融合ペプチドとしても生産される。一般に、シグナル配列はベクターの成分であるか、ベクターに挿入されるＩＬ-１ｌｐ-コード化ＤＮＡの一部である。シグナル配列は、例えばアルカリホスファターゼ、ペニシリナーゼ、ｌｐｐあるいは熱安定性エンテロトキシンIIリーダーの群から選択される原核生物シグナル配列であってよい。酵母の分泌に関しては、シグナル配列は、酵母インベルターゼリーダー、α因子リーダー(酵母菌属(Saccharomyces)及びクルイベロマイシス(Kluyveromyces)α因子リーダーを含み、後者は米国特許第5,010,182号に記載されている)、又は酸ホスフォターゼリーダー、白体(C.albicans)グルコアミラーゼリーダー(1990年4月4日発行のEP362179)、又は1990年11月15日に公開されたWO 90/13646に記載されているシグナルであり得る。哺乳動物細胞の発現においては、哺乳動物シグナル配列は、同一あるいは関連ある種の分泌ポリペプチド由来のシグナル配列並びにウイルス分泌リーダーのようなタンパク質の直接分泌に使用してもよい。
【００９１】
発現及びクローニングベクターは共に一又は複数の選択された宿主細胞においてベクターの複製を可能にする核酸配列を含む。そのような配列は多くの細菌、酵母及びウイルスに対してよく知られている。プラスミドｐＢＲ３２２に由来する複製開始点は大部分のグラム陰性細菌に好適であり、２μプラスミド開始点は酵母に適しており、様々なウイルス開始点(ＳＶ４０、ポリオーマ、アデノウイルス、ＶＳＶ又はＢＰＶ)は哺乳動物細胞におけるクローニングベクターに有用である。
発現及びクローニングベクターは、典型的には、選択性マーカーとも称される選択遺伝子を含む。典型的な選択遺伝子は、(a)アンピシリン、ネオマイシン、メトトレキセートあるいはテトラサイクリンのような抗生物質あるいは他の毒素に耐性を与え、(b)栄養要求性欠陥を補い、又は(c)例えば桿菌のＤ-アラニンラセマーゼコード化遺伝子のような、複合培地から得られない重要な栄養素を供給するタンパク質をコードする。
哺乳動物細胞に適切な選べるマーカーの例は、ＤＨＦＲあるいはチミジンキナーゼのように、ＩＬ-１ｌｐ-コード化核酸を取り込むことのできる細胞成分を同定することのできるものである。野生型ＤＨＦＲを用いた場合の好適な宿主細胞は、Urlaub 等により, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 77:4216 (1980)に記載されているようにして調製され増殖されたＤＨＦＲ活性に欠陥のあるＣＨＯ株化細胞である。酵母菌中での使用に好適な選択遺伝子は酵母プラスミドＹＲｐ７に存在するｔｒｐ１遺伝子である［Stinchcomb等, Nature, 282：39(1979)；Kingsman等, Gene, 7：141(1979)；Tschemper等, Gene, 10：157(1980)］。ｔｒｐ１遺伝子は、例えば、ＡＴＣＣ番号４４０７６あるいはＰＥＰ４-１のようなトリプトファン内で成長する能力を欠く酵母菌の突然変異株に対する選択マーカーを提供する［Jones, Genetics, 85:12 (1977)］。
【００９２】
発現及びクローニングベクターは、通常、ＩＬ-１ｌｐ-コード化核酸配列に作用可能に結合し、ｍＲＮＡ合成を制御するプロモーターを含む。種々の可能な宿主細胞により認識される好適なプロモーターが知られている。原核生物宿主での使用に好適なプロモーターはβ-ラクタマーゼ及びラクトースプロモーター系［Chang等, Nature, 275:615 (1978)； Goeddel等, Nature, 281:544 (1979)］、アルカリホスファターゼ、トリプトファン(trp)プロモーター系［Goeddel, Nucleic Acids Res., 8:4057 (1980); EP 36,776］、及びハイブリッドプロモーター、例えばｔａｃプロモーター［deBoer 等, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 80:21-25 (1983)］を含む。細菌系で使用するプロモータもまたＩＬ-１ｌｐをコードするＤＮＡと作用可能に結合したシャイン・ダルガーノ(S.D.)配列を有する。
酵母宿主と共に用いて好適なプロモーター配列の例としては、３-ホスホグリセラートキナーゼ［Hitzeman 等, J. Biol. Chem., 255:2073 (1980)］又は他の糖分解酵素［Hess 等, J. Adv. Enzyme Reg., 7:149 (1968)；Holland, Biochemistry, 17：4900(1987)］、例えばエノラーゼ、グリセルアルデヒド-３-リン酸デヒドロゲナーゼ、ヘキソキナーゼ、ピルビン酸デカルボキシラーゼ、ホスホフルクトキナーゼ、グルコース-６-リン酸イソメラーゼ、３-ホスホグリセレートムターゼ、ピルビン酸キナーゼ、トリオセリン酸イソメラーゼ、ホスホグルコースイソメラーゼ、及びグルコキナーゼが含まれる。
他の酵母プロモーターとしては、成長条件によって転写が制御される付加的効果を有する誘発的プロモーターであり、アルコールデヒドロゲナーゼ２、イソチトクロムＣ、酸ホスファターゼ、窒素代謝と関連する分解性酵素、メタロチオネイン、グリセルアルデヒド-３-リン酸デヒドロゲナーゼ、及びマルトース及びガラクトースの利用を支配する酵素のプロモーター領域がある。酵母菌での発現に好適に用いられるベクターとプロモータはEP 73,657に更に記載されている。
哺乳動物の宿主細胞におけるベクターからのＩＬ-１ｌｐ転写は、例えば、ポリオーマウィルス、伝染性上皮腫ウィルス(1989年7月5日公開のUK 2,211,504)、アデノウィルス(例えばアデノウィルス２)、ウシ乳頭腫ウィルス、トリ肉腫ウィルス、サイトメガロウィルス、レトロウィルス、Ｂ型肝炎ウィルス及びサルウィルス４０(SV40)のようなウィルスのゲノムから得られるプロモーター、異種哺乳動物プロモーター、例えばアクチンプロモーター又は免疫グロブリンプロモーター、及び熱衝撃プロモーターから得られるプロモーターによって、このようなプロモーターが宿主細胞系に適合し得る限り制御される。
【００９３】
より高等の真核生物による所望のＩＬ-１ｌｐをコードするＤＮＡの転写は、ベクター中にエンハンサー配列を挿入することによって増強され得る。エンハンサーは、通常は約１０から３００塩基対で、プロモーターに作用してその転写を増強するＤＮＡのシス作動要素である。哺乳動物遺伝子由来の多くのエンハンサー配列が現在知られている(グロビン、エラスターゼ、アルブミン、α-フェトプロテイン及びインスリン)。しかしながら、典型的には、真核細胞ウィルス由来のエンハンサーが用いられるであろう。例としては、複製起点の後期側のＳＶ４０エンハンサー(１００−２７０塩基対)、サイトメガロウィルス初期プロモーターエンハンサー、複製起点の後期側のポリオーマエンハンサー及びアデノウィルスエンハンサーが含まれる。エンハンサーは、ＩＬ-１ｌｐコード配列の５’又は３’位でベクター中にスプライシングされ得るが、好ましくはプロモーターから５’位に位置している。
また真核生物宿主細胞(酵母、真菌、昆虫、植物、動物、ヒト、又は他の多細胞生物由来の有核細胞)に用いられる発現ベクターは、転写の終結及びｍＲＮＡの安定化に必要な配列も含む。このような配列は、真核生物又はウィルスのＤＮＡ又はｃＤＮＡの通常は５’、時には３’の非翻訳領域から取得できる。これらの領域は、ＩＬ-１ｌｐをコードするｍＲＮＡの非翻訳部分にポリアデニル化断片として転写されるヌクレオチドセグメントを含む。
組換え脊椎動物細胞培養でのＩＬ-１ｌｐの合成に適応化するのに適切な他の方法、ベクター及び宿主細胞は、Gething等, Nature, 293:620-625 (1981); Mantei等, Nature, 281:40-46 (1979); EP 117,060; 及びEP 117,058に記載されている。
【００９４】
４．遺伝子増幅／発現の検出
遺伝子の増幅及び／又は発現は、ここで提供された配列に基づき、適切に標識されたプローブを用い、例えば、従来よりのサザンブロット法、ｍＲＮＡの転写を定量化するノーザンブロット法［Thomas, Proc. Natl. Acad. Sci. USA,77:5201-5205 (1980)］、ドットブロット法(ＤＮＡ分析)、又はインサイツハイブリッド形成法によって、直接的に試料中で測定することができる。あるいは、ＤＮＡ二本鎖、ＲＮＡ二本鎖及びＤＮＡ−ＲＮＡハイブリッド二本鎖又はＤＮＡ-タンパク二本鎖を含む、特異的二本鎖を認識することができる抗体を用いることもできる。次いで、抗体を標識し、アッセイを実施することができ、ここで二本鎖は表面に結合しており、その結果二本鎖の表面での形成の時点でその二本鎖に結合した抗体の存在を検出することができる。
あるいは、遺伝子の発現は、遺伝子産物の発現を直接的に定量する免疫学的な方法、例えば細胞又は組織切片の免疫組織化学的染色及び細胞培養又は体液のアッセイによって、測定することもできる。試料液の免疫組織化学的染色及び／又はアッセイに有用な抗体は、モノクローナルでもポリクローナルでもよく、任意の哺乳動物で調製することができる。簡便には、抗体は、天然配列ＩＬ-１ｌｐポリペプチドに対して、又はここで提供されるＤＮＡ配列をベースとした合成ペプチドに対して、又はＩＬ-１ｌｐＤＮＡに融合し特異的抗体エピトープをコードする外因性配列に対して調製され得る。
【００９５】
５．ポリペプチドの精製
ＩＬ-１ｌｐの形態は、培地又は宿主細胞の溶菌液から回収することができる。膜結合性であるならば、適切な洗浄液(例えばトリトン-Ｘ１００)又は酵素的切断を用いて膜から引き離すことができる。ＩＬ-１ｌｐの発現に用いられる細胞は、凍結融解サイクル、超音波処理、機械的破壊、又は細胞溶解剤などの種々の化学的又は物理的手段によって破壊することができる。ＩＬ-１ｌｐを、組換え細胞タンパク又はポリペプチドから精製することが望ましい。適切な精製手順の例である次の手順により精製される：すなわち、イオン交換カラムでの分画；エタノール沈殿；逆相ＨＰＬＣ；シリカ又はカチオン交換樹脂、例えばＤＥＡＥによるクロマトグラフィー；クロマトフォーカシング；ＳＤＳ-ＰＡＧＥ；硫酸アンモニウム沈殿；例えばセファデックスＧ-７５を用いるゲル濾過；ＩｇＧのような汚染物を除くプロテインＡセファロースカラム；及びＩＬ-１ｌｐポリペプチドのエピトープタグ形態を結合させる金属キレート化カラムである。この分野で知られ、例えば、Deutscher, Methodes in Enzymology, 182 (1990)；Scopes, Protein Purification: Principles and Practice, Springer-Verlag, New York (1982)に記載された多くのタンパク質精製方法を用いることができる。選ばれる精製過程は、例えば、用いられる生産方法及び特に生産される特定のＩＬ-１ｌｐの性質に依存する。
【００９６】
Ｂ．ＩＬ-１ｌｐ変異体の活性アッセイ
特定のＩＬ-１ｌｐ変異体ポリペプチドの生物活性又は活性は当該技術で既知の様々なｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイを使用することで特徴づけることができる。例えば、ｈＩＬ-１Ｒａ３変異体ポリペプチド又はｍＩＬ-１ＲＡ３変異体ポリペプチドのＩＬ-１Ｒ結合の能力は、ヒト免疫グロブリンＧのＦｃ領域と融合されたＩＬ-１Ｒ細胞外ドメイン（ＥＣＤ）（ＩＬ-１Ｒ ＥＣＤ-Ｆｃ）（それは、例えば以下の実施例９及び１０のように準備されうる）が放射性標識されたｈＩＬ-１Ｒａ３変異体ポリペプチド又はｍＩＬ-１Ｒａ３変異体ポリペプチドの入った溶液で、標識された複合体を形成するためにインキュベートされ、その後ヤギ抗−ヒトＩｇＧ Ｆｃとの標識された複合体の免疫沈降、及び沈殿中の放射能の定量をする、放射性免疫沈降法アッセイを用いて検定されることができる。他の例では、ｈＩＬ-１Ｒａ３変異体ポリペプチド-ＦＬＡＧタグ融合タンパク質コード化ＤＮＡ及びＩＬ-１Ｒ ＥＣＤ-Ｆｃコード化ＤＮＡは宿主細胞で共発現され、さらに細胞培養培地に分泌され、その後タンパク質Ｇセファロースを用いた培地の上澄みの免疫沈降、及び抗-ＦＬＡＧモノクローナル抗体を用いた免疫ブロット法による結合ｈＩＬ-１Ｒａ３変異体ポリペプチド-ＦＬＡＧタグ融合タンパク質の同定をし、原則として以下の実施例９に記載されている。
他の実施態様では、ｈＩＬ-１Ｒａ３変異体ポリペプチド又はｍＩＬ-１Ｒａ３変異体ポリペプチドのＩＬ-１とＩＬ-１Ｒの結合抑制の能力は、結合蛋白競合測定法を用いて検定されうる。たとえば、放射性免疫沈降法アッセイが用いられ、それはＩＬ-１Ｒ ＥＣＤ-Ｆｃが標識されていないｈＩＬ-１Ｒａ３変異体ポリペプチド又は標識されていないｍＩＬ-１Ｒａ３変異体ポリペプチドを有する又は有しない放射性標識されたＩＬ-１の溶液中で標識された又は標識されていない複合体を形成するためにインキュベートされ、続いて抗-ヒト Ｆｃを有する複合体の免疫沈降、及び沈殿物中の放射能の定量をする。もし、インキュベーション液中のｈＩＬ-１Ｒａ３変異体ポリペプチド又はｍＩＬ-１Ｒａ３変異体ポリペプチドの存在が免疫沈降の結果測定された放射能を減少させている場合には、当該ｈＩＬ-１Ｒａ３変異体ポリペプチド又はｍＩＬ-１Ｒａ３変異体ポリペプチドはＩＬ-１とＩＬ-１Ｒとの結合を抑制剤とみなす。また他の実施様態では、ＩＬ-１Ｒ ＥＣＤ-Ｆｃ及びｈＩＬ-１Ｒａ３変異体-ＦＬＡＧタグ融合タンパク質又はｍＩＬ-１Ｒａ３変異体-ＦＬＡＧタグ融合タンパク質は、個々の細胞培地中で組換え発現によって観察され（原則的に以下の実施例１０に記載されているように）、ＩＬ-１及びＩＬ-１Ｒ ＥＣＤ-Ｆｃは、ｈＩＬ-１Ｒａ３変異体-ＦＬＡＧタグ融合タンパク質又はｍＩＬ-１Ｒａ３変異体-ＦＬＡＧタグ融合タンパク質と一緒に又は別々に混ぜられ、さらに溶液中でインキュベートされ、インキュベーション液はタンパク質Ｇセファロースで免疫沈降され、さらに結合したｈＩＬ-１Ｒａ３変異体-ＦＬＡＧタグ融合タンパク質又はｍＩＬ-１Ｒａ３変異体-ＦＬＡＧタグ融合タンパク質は、抗-ＦＬＡＧモノクローナル抗体を用いて免疫ブロット法により同定される。インキュベーション液中のＩＬ-１の存在が抗-ＦＬＡＧ免疫ブロット法により検出されたシグナルを減少させる場合には、当該ｈＩＬ-１Ｒａ３変異体ポリペプチド又はｍＩＬ-１Ｒａ３変異体ポリペプチドはＩＬ-１のＩＬ-１Ｒ結合の抑制剤とみなす。
【００９７】
同様に、特定のｈＩＬ-１Ｒａ１変異体ポリペプチドの生物活性又は活性は当該技術で既知の様々なｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイで決定されうる。たとえば、ｈＩＬ-１Ｒａ１変異体ポリペプチドのＩＬ-１８Ｒ結合の能力は放射性免疫沈降法を用いて、検定されることが可能であり、それはヒト免疫グロブリンＧのＦｃ領域と融合されたＩＬ-１８Ｒ細胞外ドメイン（ＥＣＤ）（ＩＬ-１８Ｒ ＥＣＤ-Ｆｃ）（たとえば以下の実施例９又は１０のように、準備することができる）が放射性標識されたｈＩＬ-１Ｒａ１変異体ポリペプチドの入った溶液で、標識された複合体を形成するためにインキュベートされ、その後ヤギ抗−ヒトＩｇＧ Ｆｃとの標識された複合体の免疫沈降、及び沈殿物中の放射性活性の定量をする、放射性免疫沈降法アッセイを用いて検定されることができる。他の例では、ｈＩＬ-１Ｒａ１変異体ポリペプチド-ＦＬＡＧタグ融合タンパク質コード化ＤＮＡ及びＩＬ-１８Ｒ ＥＣＤ-Ｆｃコード化ＤＮＡは宿主細胞で共発現され、さらに細胞培養培地に分泌され、その後タンパク質Ｇセファロースを用いた培地の上澄みの免疫沈降、及び抗-ＦＬＡＧモノクローナル抗体を用いた免疫ブロット法による結合ｈＩＬ-１Ｒａ１変異体ポリペプチド-ＦＬＡＧタグ融合タンパク質の同定をし、原則として以下の実施例９に記載されている。
他の実施態様では、ｈＩＬ-１Ｒａ１変異体ポリペプチドのＩＬ-１８とＩＬ-１８Ｒの結合抑制の能力は、結合蛋白競合測定法を用いて検定されうる。たとえば、放射性免疫沈降法アッセイが用いられ、それはＩＬ-１８Ｒ ＥＣＤ-Ｆｃが標識されていないｈＩＬ-１Ｒａ１変異体ポリペプチドを有する又は有しない放射性標識されたＩＬ-１８の溶液中で標識された又は標識されていない複合体を形成するためにインキュベートされ、続いて抗-ヒト Ｆｃを有する複合体の免疫沈降、及び沈殿中の放射能の定量をする。もし、インキュベーション液中のｈＩＬ-１Ｒａ１変異体ポリペプチドの存在が免疫沈降の結果測定された放射能を減少させている場合には、当該ｈＩＬ-１Ｒａ１変異体ポリペプチドはＩＬ-１８のＩＬ-１８Ｒとの結合の抑制剤とみなす。また他の実施様態では、ＩＬ-１８Ｒ ＥＣＤ-Ｆｃ及びｈＩＬ-１Ｒａ１変異体-ＦＬＡＧタグ融合タンパク質は、個々の細胞培地中で組換え発現によって観察され（原則的に以下の実施例１０に記載されているように）、ＩＬ-１８及びＩＬ-１８Ｒ ＥＣＤ-Ｆｃは、ｈＩＬ-１Ｒａ１変異体-ＦＬＡＧタグ融合タンパク質と一緒に又は別々に混ぜられ、さらに溶液中でインキュベートされ、インキュベーション液はタンパク質Ｇセファロースで免疫沈降され、さらに結合したｈＩＬ-１Ｒａ１変異体-ＦＬＡＧタグ融合タンパク質は抗-ＦＬＡＧモノクローナル抗体を用いて免疫ブロット法により同定される。インキュベーション液中のＩＬ-１８の存在が抗-ＦＬＡＧ免疫ブロット法により検出されたシグナルを減少させる場合には、当該ｈＩＬ-１Ｒａ１変異体ポリペプチドはＩＬ-１８のＩＬ-１８Ｒ結合の抑制剤とみなす。
【００９８】
Ｃ．ＩＬ-１ｌｐの用途
ＩＬ-１ｌｐをコードするヌクレオチド配列（又はそれらの相補配列）は、ハイブリッド形成プローブとしての使用を含む分子生物学の分野において、染色体及び遺伝子マッピングにおいて、及びアンチセンスＲＮＡ及びＤＮＡの生成において種々の用途を有している。また、ＩＬ-１ｌｐ核酸も、ここに記載される組換え技術によるＩＬ-１ｌｐポリペプチドの調製に有用であろう。
図１（配列番号：１）、図２（配列番号：４）、図３（配列番号：６）、図５（配列番号：９）、図７（配列番号：１２）図９（配列番号：１５、図１５（配列番号：１８）、及び図１６（配列番号：２０）、及び図１９（配列番号：２４）の全長天然配列ＩＬ-１ｌｐ遺伝子又はその一部は、全長ＩＬ-１ｌｐ遺伝子の単離又は図１（配列番号：１）、図２（配列番号：４）、図３（配列番号：６）、図５（配列番号：９）、図７（配列番号：１２）図９（配列番号：１５）、図１５（配列番号：１８）、図１６（配列番号：２０）、又は図１９（配列番号：２４）に開示したＩＬ-１ｌｐ配列に対して所望の配列同一性を持つ更に他の遺伝子（例えば、ＩＬ-１ｌｐの天然発生変異体又は他の種からのＩＬ-１ｌｐをコードするもの）の単離のためのｃＤＮＡライブラリ用のハイブリッド形成プローブとして使用できる。場合によっては、プローブの長さは約２０〜約５０塩基である。ハイブリッド形成プローブは、図１（配列番号：１）、図２（配列番号：４）、図３（配列番号：６）、図５（配列番号：９）、図７（配列番号：１２）図９（配列番号：１５）、図１５（配列番号：１８）、図１６（配列番号：２０）、又は図１９（配列番号：２４）のヌクレオチド配列から、又は天然配列ＩＬ-１ｌｐのプロモーター、エンハンサー成分及びイントロンを含むゲノム配列から誘導され得る。例えば、スクリーニング法は、ＩＬ-１ｌｐポリペプチド遺伝子のコード化領域を周知のＤＮＡ配列を用いて単離して約４０塩基の選択されたプローブを合成することを含む。ハイブリッド形成プローブは、３２Ｐ又は３５Ｓ等の放射性ヌクレオチド、又はアビディン／ビオチン結合系を介してプローブに結合したアルカリホスファターゼ等の酵素標識を含む種々の標識で標識されうる。本発明のＩＬ-１ｌｐポリペプチド遺伝子に相補的な配列を有する標識されたプローブは、ヒトｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ又はｍＲＮＡのライブラリーをスクリーニングし、そのライブラリーの何れのメンバーがプローブにハイブッド形成するかを決定するのに使用できる。ハイブリッド形成技術は、以下の実施例において更に詳細に記載する。
【００９９】
また、プローブは、ＰＣＲ技術に用いて、密接に関連したＩＬ-１ｌｐコード配列の同定のための配列のプールを作成することができる。
また、ＩＬ-１ｌｐをコードするヌクレオチド配列は、そのＩＬ-１ｌｐをコードする遺伝子のマッピングのため、及び遺伝子疾患を持つ個体の遺伝子分析のためのハイブリッド形成プローブの作成にも用いることができる。ここに提供される核酸配列は、インサイツハイブリッド形成、既知の染色体マーカーに対する結合分析、及びライブラリーでのハイブリッド形成スクリーニング等の周知の技術を用いて、染色体及び染色体の特定領域にマッピングすることができる。
ＩＬ-１ｌｐのコード配列が他のタンパク質に結合するタンパク質をコードする場合（例えば、ＩＬ-１ｌｐがＩＬ-１レセプター又はＩＬ-１８レセプターと結合する場合）、ＩＬ-１ｌｐは、そのリガンドを同定するアッセイに用いることができる。このような方法により、レセプター／リガンド結合作用のインヒビターを同定することができる。このような結合性相互作用に含まれるタンパク質も、ペプチド又は小分子阻害剤又は結合性相互作用のアゴニストのスクリーニングに用いることができる。また、レセプターＩＬ-１ｌｐは関連するリガンドの単離にも使用できる。スクリーニングアッセイは、天然ＩＬ-１ｌｐ又はＩＬ-１ｌｐのレセプターの生物学的活性に似たリード化合物の発見のために設計される。このようなスクリーニングアッセイは、化学的ライブラリーの高スループットスクリーニングにも用いられ、小分子候補薬剤の同定に特に適したものとする。考慮される小分子は、合成有機又は無機化合物を含む。アッセイは、この分野で良く知られ特徴付けられているタンパク質−タンパク質結合アッセイ、生物学的スクリーニングアッセイ、免疫検定及び細胞ベースのアッセイを含む種々の型式で実施される。
【０１００】
また、ＩＬ-１ｌｐ又はその任意の修飾型をコードする核酸は、トランスジェニック動物又は「ノックアウト」動物を産生するのにも使用でき、これらは治療的に有用な試薬の開発やスクリーニングに有用である。トランスジェニック動物(例えばマウス又はラット)とは、出生前、例えば胚段階で、その動物又はその動物の祖先に導入された導入遺伝子を含む細胞を有する動物である。導入遺伝子とは、トランスジェニック動物が発生する細胞のゲノムに組み込まれたＤＮＡである。一実施形態では、ＩＬ-１ｌｐをコードするｃＤＮＡは、確立された技術によりＩＬ-１ｌｐをコードするゲノムＤＮＡをクローン化するために使用することができ、ゲノム配列を、ＩＬ-１ｌｐをコードするＤＮＡを発現する細胞を有するトランスジェニック動物を産生するために使用することができる。トランスジェニック動物、特にマウス又はラット等の特定の動物を産生する方法は当該分野において常套的になっており、例えば米国特許第4,736,866号や第4,870,009号に記述されている。典型的には、特定の細胞を組織特異的エンハンサーでのＩＬ-１ｌｐ導入遺伝子の導入の標的にする。胚段階で動物の生殖系列に導入されたＩＬ-１ｌｐコード化導入遺伝子のコピーを含むトランスジェニック動物はＩＬ-１ｌｐをコードするＤＮＡの増大した発現の影響を調べるために使用できる。このような動物は、例えばその過剰発現を伴う病理学的状態に対して保護をもたらすと思われる試薬のテスター動物として使用できる。本発明のこの態様においては、動物を試薬で治療し、導入遺伝子を有する未治療の動物に比べ病理学的状態の発症率が低ければ、病理学的状態に対する治療的処置の可能性が示される。
あるいは、ＩＬ-１ｌｐの非ヒト相同体は、動物の胚性細胞に導入されたＩＬ-１ｌｐをコードする変更ゲノムＤＮＡと、ＩＬ-１ｌｐをコードする内在性遺伝子との間の相同的組換えによって、ＩＬ-１ｌｐをコードする欠陥又は変更遺伝子を有するＩＬ-１ｌｐ「ノックアウト」動物を作成するために使用できる。例えば、ＩＬ-１ｌｐをコードするｃＤＮＡは、確立された技術に従い、ＩＬ-１ｌｐをコードするゲノムＤＮＡのクローニングに使用できる。ＩＬ-１ｌｐをコードするゲノムＤＮＡの一部を欠失したり、組み込みを監視するために使用する選択可能なマーカーをコードする遺伝子等の他の遺伝子で置換することができる。典型的には、ベクターは無変化のフランキングＤＮＡ(５’と３’末端の両方)を数キロベース含む［例えば、相同的組換えベクターについてはThomas及びCapecchi, Cell, 51:503(1987)を参照のこと］。ベクターは胚性幹細胞に(例えばエレクトロポレーションによって)導入し、導入されたＤＮＡが内在性ＤＮＡと相同的に組換えられた細胞が選択される［例えば、Li等, Cell, 69:915(1992)参照］。選択された細胞は次に動物(例えばマウス又はラット)の胚盤胞内に注入されて集合キメラを形成する［例えば、Bradley, Teratocarcinomas and Embryonic Stem Cells: A Practical Approach, E. J. Robertson, ed. (IRL, Oxford, 1987), pp. 113-152参照］。その後、キメラ性胚を適切な偽妊娠の雌性乳母に移植し、期間をおいて「ノックアウト」動物をつくり出す。胚細胞に相同的に組換えられたＤＮＡを有する子孫は標準的な技術により同定され、それらを利用して動物の全細胞が相同的に組換えられたＤＮＡを含む動物を繁殖させることができる。ノックアウト動物は、ＩＬ-１ｌｐポリペプチドが不在であることによるある種の病理的状態及びその病理的状態の進行に対する防御能力によって特徴付けられる。
【０１０１】
また、ＩＬ-１ｌｐポリペプチドをコードする核酸は遺伝子治療にも使用できる。遺伝子治療用途においては、例えば欠陥遺伝子を置換するため、治療的有効量の遺伝子産物のインビボ合成を達成するために遺伝子が導入される。「遺伝子治療」とは、１回の処理により継続的効果が達成される従来の遺伝子治療と、治療的に有効なＤＮＡ又はｍＲＮＡの１回又は繰り返し投与を含む遺伝子治療薬の投与の両方を含む。アンチセンスＲＮＡ及びＤＮＡは、ある種の遺伝子のインビボ発現を阻止する治療薬として用いることができる。短いアンチセンスオリゴヌクレオチドを、細胞膜による制限された取り込みに起因する低い細胞内濃度にもかかわらず、それが阻害剤として作用する細胞中に移入できることは既に示されている（Zamecnik等, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 83: 4143-4146 [1986]）。オリゴヌクレオチドは、それらの負に荷電したリン酸ジエステル基を非荷電基で置換することによって取り込みを促進するように修飾してもよい。
生存可能な細胞に核酸を導入するための種々の技術が存在する。これらの技術は、核酸が培養細胞にインビトロで、あるいは意図する宿主の細胞においてインビボで移入されるかに応じて変わる。核酸を哺乳動物細胞にインビトロで移入するのに適した方法は、リポソーム、エレクトロポレーション、マイクロインジェクション、細胞融合、ＤＥＡＥ-デキストラン、リン酸カルシウム沈殿法などを含む。現在好ましいインビボ遺伝子移入技術は、ウイルス（典型的にはレトロウイルス）ベクターでの形質移入及びウイルス被覆タンパク質-リポソーム媒介形質移入である（Dzau等, Trends, in Biotechnology 11, 205-210(1993)）。幾つかの状況では、核酸供給源を、細胞表面膜タンパク質又は標的細胞に特異的な抗体、標的細胞上のレセプターに対するリガンド等の標的細胞を標的化する薬剤とともに提供するのが望ましい。リポソームを用いる場合、エンドサイトーシスを伴って細胞表面膜タンパク質に結合するタンパク質、例えば、特定の細胞型向性のカプシドタンパク質又はその断片、サイクルにおいて内部移行を受けるタンパク質に対する抗体、細胞内局在化を標的とし細胞内半減期を向上させるタンパク質が、標的化及び／又は取り込みの促進のために用いられる。レセプター媒介エンドサイトーシスの技術は、例えば、Wu等, J. Biol. Chem. 262, 4429-4432 (1987); 及びWagner等, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87, 3410-3414 (1990)によって記述されている。遺伝子作成及び遺伝子治療のプロトコールの概説については、Anderson等, Science 256, 808-813 (1992)を参照のこと。
【０１０２】
本発明のＩＬ-１ｌｐポリペプチドは、製薬的に有用な組成物を調製するのに知られた方法に従って製剤され、それにより、このＩＬ-１ｌｐ生成物は製薬的に許容される担体媒体と混合される。治療用製剤は、凍結乾燥された製剤又は水性溶液の形態で、任意的な製薬上許容可能なキャリア、賦形剤又は安定剤と、所望の精製度を有する活性成分とを混合することにより(Remington's Pharmaceutical Sciences, 16th edition, A. Osol, Ed., (1980))、調製され保管される。許容される担体、賦形剤又は安定剤は、用いる投与量及び濃度ではレシピエントに対して無毒性であり、リン酸、クエン酸及び他の有機酸等の緩衝液；アスコルビン酸を含む抗酸化剤；低分子量(残基数１０個未満)ポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン又は免疫グロブリン等のタンパク質；ポリビニルピロリドン等の親水性重合体；グリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニン又はリシン等のアミノ酸；グルコース、マンノース又はデキストリン等の単糖類、二糖類又は他の炭水化物、ＥＤＴＡ等のキレート剤、マンニトール又はソルビトール等の糖類、ナトリウム等の塩形成対イオン；及び／又はＴＷＥＥＮ(商品名)、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ(商品名)又はＰＥＧ等の非イオン性界面活性剤を含む。
【０１０３】
インビボ投与に使用される製剤は滅菌されていなくてはならない。これは、凍結乾燥及び再構成の前又は後に、滅菌フィルター膜を通す濾過により容易に達成される。
ここで、本発明の製薬組成物は一般に、無菌のアクセスポートを具備する容器、例えば、皮下注射針で貫通可能なストッパーを持つ静脈内バッグ又はバイアル内に配される。
投与経路は周知の方法、例えば、静脈内、腹膜内、脳内、筋肉内、眼内、動脈内又は病巣内経路での注射又は注入、局所投与、又は徐放系による。
本発明の製薬組成物の用量及び望ましい薬物濃度は、意図する特定の用途に応じて変化する。適切な用量又は投与経路の決定は、通常の内科医の技量の範囲内である。動物実験は、ヒト治療のための有効量の決定についての信頼できるガイダンスを提供する。有効量の種間スケーリングは、Toxicokinetics and New Drug Development, Yacobi等, 編, Pergamon Press, New York 1989, pp. 42-96のMordenti, J. 及びChappell, W. 「The use of interspecies scaling in toxicokinetics」に記載された原理に従って実施できる。
ＩＬ-１ｌｐの治療に用いられるのに「有効な量」は、たとえば治療の目的、投与の経路、患者の状態による。従って、療法士には、投与量を定め、最良の治療効果が得られるのに必要とされるような投与の経路を考えることが必要とされる。典型的に、臨床医は投与量が要求する効果が成されるように達成されるまで、ＩＬ-１ｌｐを投与する。この治療のプロセスは従来のアッセイによって容易に監視される。
【０１０４】
一実施態様では、本発明は、ＩＬ-１-媒介疾患の治療のための、そのような治療を必要とする哺乳動物、たとえばヒトに、天然配列ＩＬ-１ｌｐのようなＩＬ-１ｌｐを有効量投与することを含んでなる方法を提供する。
他の実施態様では、本発明は、ＩＬ-１-媒介疾患の治療のための、そのような治療を必要とする哺乳動物、たとえばヒトに、ｈＩＬ-１Ｒａ１、ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌ、ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖ、ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｓ、ｈＩＬ-１Ｒａ２、ｈＩＬ-１Ｒａ３、及びｍＩＬ-１Ｒａ３からなる群より選択されるＩＬ-１ｌｐを有効量投与することを含んでなる方法を提供する。
他の実施態様では、本発明は、ＩＬ-１-媒介疾患の治療のための、そのような治療を必要とする哺乳動物、たとえばヒトに、天然配列ｈＩＬ-１ｌｐのようなｈＩＬ-１ｌｐ、たとえば天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ３を有効量投与することを含んでなる方法を提供する。
他の実施態様では、本発明は、ＩＬ-１８-媒介疾患の治療のための、そのような治療を必要とする哺乳動物、たとえばヒトに、天然配列ＩＬ-１ｌｐのようなＩＬ-１ｌｐを有効量投与することを含んでなる方法を提供する。
他の実施態様では、本発明は、ＩＬ-１８-媒介疾患の治療のための、そのような治療を必要とする哺乳動物、たとえばヒトに、ｈＩＬ-１Ｒａ１、ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌ、ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖ、ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｓ、ｈＩＬ-１Ｒａ２、ｈＩＬ-１Ｒａ３、及びｍＩＬ-１Ｒａ３からなる群より選択されるＩＬ-１ｌｐを有効量投与することを含んでなる方法を提供する。
他の実施態様では、本発明は、ＩＬ-１８-媒介疾患の治療のための、そのような治療を必要とする哺乳動物、たとえばヒトに、天然配列ｈＩＬ-１ｌｐのようなｈＩＬ-１ｌｐ、たとえば天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ１を有効量投与することを含んでなる方法を提供する。
他の実施態様では、本発明は、ＩＬ-１８-媒介疾患の治療のための、そのような治療を必要とする哺乳動物、たとえばヒトに、天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ１ＬのようなｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌの有効量、または天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ１ＶのようなｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖの有効量、または天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ１ＳのようなｈＩＬ-１Ｒａ１Ｓの有効量を投与することを含んでなる方法を提供する。
【０１０５】
一実施態様では、本発明は、炎症疾患の治療のための、そのような治療を必要とする哺乳動物、たとえばヒトに、天然配列ＩＬ-１ｌｐのようなＩＬ-１ｌｐを有効量投与することを含んでなる方法を提供する。
他の実施態様では、本発明は、炎症疾患の治療のための、そのような治療を必要とする哺乳動物、たとえばヒトに、ｈＩＬ-１Ｒａ１、ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌ、ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖ、ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｓ、ｈＩＬ-１Ｒａ２、ｈＩＬ-１Ｒａ３、及びｍＩＬ-１Ｒａ３からなる群より選択されるＩＬ-１ｌｐを有効量投与することを含んでなる方法を提供する。
他の実施態様では、本発明は、炎症疾患の治療のための、そのような治療を必要とする哺乳動物、たとえばヒトに、天然配列ｈＩＬ-１ｌｐのようなｈＩＬ-１ｌｐ、たとえば天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ１、またはｈＩＬ-１Ｒａ３を有効量投与することを含んでなる方法を提供する。
他の実施態様では、本発明は、炎症疾患の治療のための、そのような治療を必要とする哺乳動物、たとえばヒトに、天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ１ＬのようなｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌの有効量、または天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ１ＶのようなｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖの有効量、または天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ１ＳのようなｈＩＬ-１Ｒａ１Ｓの有効量を投与することを含んでなる方法を提供する。
他の実施態様では、本発明は、喘息を治療するための、そのような治療を必要とする哺乳動物、たとえばヒトに、天然配列ＩＬ-１ｌｐのようなＩＬ-１ｌｐを有効量投与することを含んでなる方法を提供する。
他の実施態様では、本発明は、喘息を治療するための、そのような治療を必要とする哺乳動物、たとえばヒトに、ｈＩＬ-１Ｒａ１、ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌ、ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖ、ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｓ、ｈＩＬ-１Ｒａ２、ｈＩＬ-１Ｒａ３、及びｍＩＬ-１Ｒａ３からなる群より選択されるＩＬ-１ｌｐを有効量投与することを含んでなる方法を提供する。
他の実施態様では、本発明は、喘息を治療するための、そのような治療を必要とする哺乳動物、たとえばヒトに、天然配列ｈＩＬ-１ｌｐのようなｈＩＬ-１ｌｐ、たとえば天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ１、またはｈＩＬ-１Ｒａ３を有効量投与することを含んでなる方法を提供する。
他の実施態様では、本発明は、喘息を治療するための、そのような治療を必要とする哺乳動物、たとえばヒトに、天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ１ＬのようなｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌの有効量、または天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ１ＶのようなｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖの有効量、または天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ１ＳのようなｈＩＬ-１Ｒａ１Ｓの有効量を投与することを含んでなる方法を提供する。
【０１０６】
他の実施態様では、本発明は、リウマチ様関節炎を治療するための、そのような治療を必要とする哺乳動物、たとえばヒトに、天然配列ＩＬ-１ｌｐのようなＩＬ-１ｌｐを有効量投与することを含んでなる方法を提供する。
他の実施態様では、本発明は、リウマチ様関節炎を治療するための、そのような治療を必要とする哺乳動物、たとえばヒトに、ｈＩＬ-１Ｒａ１、ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌ、ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖ、ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｓ、ｈＩＬ-１Ｒａ２、ｈＩＬ-１Ｒａ３、及びｍＩＬ-１Ｒａ３からなる群より選択されるＩＬ-１ｌｐを有効量投与することを含んでなる方法を提供する。
他の実施態様では、本発明は、リウマチ様関節炎を治療するための、そのような治療を必要とする哺乳動物、たとえばヒトに、天然配列ｈＩＬ-１ｌｐのようなｈＩＬ-１ｌｐ、たとえば天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ１、またはｈＩＬ-１Ｒａ３を有効量投与することを含んでなる方法を提供する。
他の実施態様では、本発明は、リウマチ様関節炎を治療するための、そのような治療を必要とする哺乳動物、たとえばヒトに、天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ１ＬのようなｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌの有効量、または天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ１ＶのようなｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖの有効量、または天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ１ＳのようなｈＩＬ-１Ｒａ１Ｓの有効量を投与することを含んでなる方法を提供する。
他の実施態様では、本発明は、変形性関節症を治療するための、そのような治療を必要とする哺乳動物、たとえばヒトに、天然配列ＩＬ-１ｌｐのようなＩＬ-１ｌｐを有効量投与することを含んでなる方法を提供する。
他の実施態様では、本発明は、変形性関節症を治療するための、そのような治療を必要とする哺乳動物、たとえばヒトに、ｈＩＬ-１Ｒａ１、ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌ、ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖ、ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｓ、ｈＩＬ-１Ｒａ２、ｈＩＬ-１Ｒａ３、及びｍＩＬ-１Ｒａ３からなる群より選択されるＩＬ-１ｌｐを有効量投与することを含んでなる方法を提供する。
他の実施態様では、本発明は、変形性関節症を治療するための、そのような治療を必要とする哺乳動物、たとえばヒトに、天然配列ｈＩＬ-１ｌｐのようなｈＩＬ-１ｌｐ、たとえば天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ１、またはｈＩＬ-１Ｒａ３を有効量投与することを含んでなる方法を提供する。
他の実施態様では、本発明は、変形性関節症を治療するための、そのような治療を必要とする哺乳動物、たとえばヒトに、天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ１ＬのようなｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌの有効量、または天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ１ＶのようなｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖの有効量、または天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ１ＳのようなｈＩＬ-１Ｒａ１Ｓの有効量を投与することを含んでなる方法を提供する。
【０１０７】
他の実施態様では、本発明は、敗血症を治療するための、そのような治療を必要とする哺乳動物、たとえばヒトに、天然配列ＩＬ-１ｌｐのようなＩＬ-１ｌｐを有効量投与することを含んでなる方法を提供する。
他の実施態様では、本発明は、敗血症を治療するための、そのような治療を必要とする哺乳動物、たとえばヒトに、ｈＩＬ-１Ｒａ１、ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌ、ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖ、ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｓ、ｈＩＬ-１Ｒａ２、ｈＩＬ-１Ｒａ３、及びｍＩＬ-１Ｒａ３からなる群より選択されるＩＬ-１ｌｐを有効量投与することを含んでなる方法を提供する。
他の実施態様では、本発明は、敗血症を治療するための、そのような治療を必要とする哺乳動物、たとえばヒトに、天然配列ｈＩＬ-１ｌｐのようなｈＩＬ-１ｌｐ、たとえば天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ１、またはｈＩＬ-１Ｒａ３を有効量投与することを含んでなる方法を提供する。
他の実施態様では、本発明は、敗血症を治療するための、そのような治療を必要とする哺乳動物、たとえばヒトに、天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ１ＬのようなｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌの有効量、または天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ１ＶのようなｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖの有効量、または天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ１ＳのようなｈＩＬ-１Ｒａ１Ｓの有効量を投与することを含んでなる方法を提供する。
他の実施態様では、本発明は、急性リンパ性白血病を治療するための、そのような治療を必要とする哺乳動物、たとえばヒトに、天然配列ＩＬ-１ｌｐのようなＩＬ-１ｌｐを有効量投与することを含んでなる方法を提供する。
他の実施態様では、本発明は、急性リンパ性白血病を治療するための、そのような治療を必要とする哺乳動物、たとえばヒトに、ｈＩＬ-１Ｒａ１、ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌ、ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖ、ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｓ、ｈＩＬ-１Ｒａ２、ｈＩＬ-１Ｒａ３、及びｍＩＬ-１Ｒａ３からなる群より選択されるＩＬ-１ｌｐを有効量投与することを含んでなる方法を提供する。
他の実施態様では、本発明は、急性リンパ性白血病を治療するための、そのような治療を必要とする哺乳動物、たとえばヒトに、天然配列ｈＩＬ-１ｌｐのようなｈＩＬ-１ｌｐ、たとえば天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ１、またはｈＩＬ-１Ｒａ３を有効量投与することを含んでなる方法を提供する。
他の実施態様では、本発明は、急性リンパ性白血病を治療するための、そのような治療を必要とする哺乳動物、たとえばヒトに、天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ１ＬのようなｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌの有効量、または天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ１ＶのようなｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖの有効量、または天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ１ＳのようなｈＩＬ-１Ｒａ１Ｓの有効量を投与することを含んでなる方法を提供する。
【０１０８】
他の実施態様では、本発明は、成人呼吸窮迫症候群を治療するための、そのような治療を必要とする哺乳動物、たとえばヒトに、天然配列ＩＬ-１ｌｐのようなＩＬ-１ｌｐを有効量投与することを含んでなる方法を提供する。
他の実施態様では、本発明は、成人呼吸窮迫症候群を治療するための、そのような治療を必要とする哺乳動物、たとえばヒトに、ｈＩＬ-１Ｒａ１、ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌ、ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖ、ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｓ、ｈＩＬ-１Ｒａ２、ｈＩＬ-１Ｒａ３、及びｍＩＬ-１Ｒａ３からなる群より選択されるＩＬ-１ｌｐを有効量投与することを含んでなる方法を提供する。
他の実施態様では、本発明は、成人呼吸窮迫症候群を治療するための、そのような治療を必要とする哺乳動物、たとえばヒトに、天然配列ｈＩＬ-１ｌｐのようなｈＩＬ-１ｌｐ、たとえば天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ１、またはｈＩＬ-１Ｒａ３を有効量投与することを含んでなる方法を提供する。
他の実施態様では、本発明は、成人呼吸窮迫症候群を治療するための、そのような治療を必要とする哺乳動物、たとえばヒトに、天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ１ＬのようなｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌの有効量、または天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ１ＶのようなｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖの有効量、または天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ１ＳのようなｈＩＬ-１Ｒａ１Ｓの有効量を投与することを含んでなる方法を提供する。
他の実施態様では、本発明は、特発性肺線維症を治療するための、そのような治療を必要とする哺乳動物、たとえばヒトに、天然配列ＩＬ-１ｌｐのようなＩＬ-１ｌｐを有効量投与することを含んでなる方法を提供する。
他の実施態様では、本発明は、特発性肺線維症を治療するための、そのような治療を必要とする哺乳動物、たとえばヒトに、ｈＩＬ-１Ｒａ１、ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌ、ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖ、ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｓ、ｈＩＬ-１Ｒａ２、ｈＩＬ-１Ｒａ３、及びｍＩＬ-１Ｒａ３からなる群より選択されるＩＬ-１ｌｐを有効量投与することを含んでなる方法を提供する。
他の実施態様では、本発明は、特発性肺線維症を治療するための、そのような治療を必要とする哺乳動物、たとえばヒトに、天然配列ｈＩＬ-１ｌｐのようなｈＩＬ-１ｌｐ、たとえば天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ１、またはｈＩＬ-１Ｒａ３を有効量投与することを含んでなる方法を提供する。
他の実施態様では、本発明は、特発性肺線維症を治療するための、そのような治療を必要とする哺乳動物、たとえばヒトに、天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ１ＬのようなｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌの有効量、または天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ１ＶのようなｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖの有効量、または天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ１ＳのようなｈＩＬ-１Ｒａ１Ｓの有効量を投与することを含んでなる方法を提供する。
【０１０９】
他の実施態様では、本発明は、虚血性再潅流疾患、たとえば外科的組織再潅流傷害を脳梗塞、心筋虚血、又は心筋梗塞を治療するための、そのような治療を必要とする哺乳動物、たとえばヒトに、天然配列ＩＬ-１ｌｐのようなＩＬ-１ｌｐを有効量投与することを含んでなる方法を提供する。
他の実施態様では、本発明は、虚血性再潅流疾患、たとえば外科的組織再潅流傷害を脳梗塞、心筋虚血、又は心筋梗塞を治療するための、そのような治療を必要とする哺乳動物、たとえばヒトに、ｈＩＬ-１Ｒａ１、ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌ、ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖ、ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｓ、ｈＩＬ-１Ｒａ２、ｈＩＬ-１Ｒａ３、及びｍＩＬ-１Ｒａ３からなる群より選択されるＩＬ-１ｌｐを有効量投与することを含んでなる方法を提供する。
他の実施態様では、本発明は、虚血性再潅流疾患、たとえば外科的組織再潅流傷害を脳梗塞、心筋虚血、又は心筋梗塞を治療するための、そのような治療を必要とする哺乳動物、たとえばヒトに、天然配列ｈＩＬ-１ｌｐのようなｈＩＬ-１ｌｐ、たとえば天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ１、またはｈＩＬ-１Ｒａ３を有効量投与することを含んでなる方法を提供する。
他の実施態様では、本発明は、虚血性再潅流疾患、たとえば外科的組織再潅流傷害を脳梗塞、心筋虚血、又は心筋梗塞を治療するための、そのような治療を必要とする哺乳動物、たとえばヒトに、天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ１ＬのようなｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌの有効量、または天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ１ＶのようなｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖの有効量、または天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ１ＳのようなｈＩＬ-１Ｒａ１Ｓの有効量を投与することを含んでなる方法を提供する。
他の実施態様では、本発明は、乾癬を治療するための、そのような治療を必要とする哺乳動物、たとえばヒトに、天然配列ＩＬ-１ｌｐのようなＩＬ-１ｌｐを有効量投与することを含んでなる方法を提供する。
他の実施態様では、本発明は、乾癬を治療するための、そのような治療を必要とする哺乳動物、たとえばヒトに、ｈＩＬ-１Ｒａ１、ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌ、ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖ、ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｓ、ｈＩＬ-１Ｒａ２、ｈＩＬ-１Ｒａ３、及びｍＩＬ-１Ｒａ３からなる群より選択されるＩＬ-１ｌｐを有効量投与することを含んでなる方法を提供する。
他の実施態様では、本発明は、乾癬を治療するための、そのような治療を必要とする哺乳動物、たとえばヒトに、天然配列ｈＩＬ-１ｌｐのようなｈＩＬ-１ｌｐ、たとえば天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ１、またはｈＩＬ-１Ｒａ３を有効量投与することを含んでなる方法を提供する。
他の実施態様では、本発明は、乾癬を治療するための、そのような治療を必要とする哺乳動物、たとえばヒトに、天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ１ＬのようなｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌの有効量、または天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ１ＶのようなｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖの有効量、または天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ１ＳのようなｈＩＬ-１Ｒａ１Ｓの有効量を投与することを含んでなる方法を提供する。
【０１１０】
他の実施態様では、本発明は、移植片対宿主疾患（ＧＶＨＤ）を治療するための、そのような治療を必要とする哺乳動物、たとえばヒトに、天然配列ＩＬ-１ｌｐのようなＩＬ-１ｌｐを有効量投与することを含んでなる方法を提供する。
他の実施態様では、本発明は、移植片対宿主疾患（ＧＶＨＤ）を治療するための、そのような治療を必要とする哺乳動物、たとえばヒトに、ｈＩＬ-１Ｒａ１、ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌ、ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖ、ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｓ、ｈＩＬ-１Ｒａ２、ｈＩＬ-１Ｒａ３、及びｍＩＬ-１Ｒａ３からなる群より選択されるＩＬ-１ｌｐを有効量投与することを含んでなる方法を提供する。
他の実施態様では、本発明は、移植片対宿主疾患（ＧＶＨＤ）を治療するための、そのような治療を必要とする哺乳動物、たとえばヒトに、天然配列ｈＩＬ-１ｌｐのようなｈＩＬ-１ｌｐ、たとえば天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ１、またはｈＩＬ-１Ｒａ３を有効量投与することを含んでなる方法を提供する。
他の実施態様では、本発明は、移植片対宿主疾患（ＧＶＨＤ）を治療するための、そのような治療を必要とする哺乳動物、たとえばヒトに、天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ１ＬのようなｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌの有効量、または天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ１ＶのようなｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖの有効量、または天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ１ＳのようなｈＩＬ-１Ｒａ１Ｓの有効量を投与することを含んでなる方法を提供する。
他の実施態様では、本発明は、潰瘍性大腸炎のような炎症性腸疾患を治療するための、そのような治療を必要とする哺乳動物、たとえばヒトに、天然配列ＩＬ-１ｌｐのようなＩＬ-１ｌｐを有効量投与することを含んでなる方法を提供する。
他の実施態様では、本発明は、潰瘍性大腸炎のような炎症性腸疾患を治療するための、そのような治療を必要とする哺乳動物、たとえばヒトに、ｈＩＬ-１Ｒａ１、ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌ、ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖ、ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｓ、ｈＩＬ-１Ｒａ２、ｈＩＬ-１Ｒａ３、及びｍＩＬ-１Ｒａ３からなる群より選択されるＩＬ-１ｌｐを有効量投与することを含んでなる方法を提供する。
他の実施態様では、本発明は、潰瘍性大腸炎のような炎症性腸疾患を治療するための、そのような治療を必要とする哺乳動物、たとえばヒトに、天然配列ｈＩＬ-１ｌｐのようなｈＩＬ-１ｌｐ、たとえば天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ１、またはｈＩＬ-１Ｒａ３を有効量投与することを含んでなる方法を提供する。
他の実施態様では、本発明は、潰瘍性大腸炎のような炎症性腸疾患を治療するための、そのような治療を必要とする哺乳動物、たとえばヒトに、天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ１ＬのようなｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌの有効量、または天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ１ＶのようなｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖの有効量、または天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ１ＳのようなｈＩＬ-１Ｒａ１Ｓの有効量を投与することを含んでなる方法を提供する。
【０１１１】
Ｄ．抗ＩＬ-１ｌｐ抗体
本発明は抗ＩＬ-１ｌｐ抗体を更に提供する。抗体の例としては、ポリクローナル、モノクローナル、ヒト化、二重特異性及びヘテロ抱合体抗体が含まれる。
１．ポリクローナル抗体
抗ＩＬ-１ｌｐ抗体はポリクローナル抗体を含む。ポリクローナル抗体の調製方法は当業者に知られている。哺乳動物においてポリクローナル抗体は、例えば免疫化剤、及び所望するのであればアジュバントを、一又は複数回注射することで発生させることができる。典型的には、免疫化剤及び／又はアジュバントを複数回皮下又は腹腔内注射により、哺乳動物に注射する。免疫化剤は、ＩＬ-１ｌｐポリペプチド又はその融合タンパク質を含みうる。免疫化剤を免疫化された哺乳動物において免疫原性が知られているタンパク質に抱合させるのが有用である。このような免疫原タンパク質の例は、これらに限られないが、キーホールリンペットヘモシアニン、血清アルブミン、ウシサイログロブリン及び大豆トリプシンインヒビターが含まれる。使用され得るアジュバントの例には、フロイント完全アジュバント及びＭＰＬ-ＴＤＭアジュバント(モノホスホリル脂質Ａ、合成トレハロースジコリノミコラート)が含まれる。免疫化プロトコールは、過度の実験なく当業者により選択されるであろう。
【０１１２】
２．モノクローナル抗体
あるいは、抗ＩＬ-１ｌｐ抗体はモノクローナル抗体であってもよい。モノクローナル抗体は、Kohler及びMilstein, Nature, 256:495 (1975)に記載されているようなハイブリドーマ法を使用することで調製することができる。ハイブリドーマ法では、マウス、ハムスター又は他の適切な宿主動物を典型的には免疫化剤により免疫化することで、免疫化剤に特異的に結合する抗体を生成するかあるいは生成可能なリンパ球を誘発する。また、リンパ球をインビトロで免疫化することもできる。
免疫化剤は、典型的には対象とするＩＬ-１ｌｐポリペプチド又はその融合タンパク質を含む。一般にヒト由来の細胞が望まれる場合には末梢血リンパ球(「ＰＢＬ」)が使用され、あるいは非ヒト哺乳動物源が望まれている場合は、脾臓細胞又はリンパ節細胞が使用される。次いで、ポリエチレングリコール等の適当な融合剤を用いてリンパ球を不死化株化細胞と融合させ、ハイブリドーマ細胞を形成する［Goding, Monoclonal Antibodies: Principles and Practice, Academic Press, (1986) pp. 59-103］。不死化株化細胞は、通常は、形質転換した哺乳動物細胞、特に齧歯動物、ウシ、及びヒト由来の骨髄腫細胞である。通常、ラット又はマウスの骨髄腫株化細胞が使用される。ハイブリドーマ細胞は、好ましくは、未融合の不死化細胞の生存又は成長を阻害する一又は複数の物質を含有する適切な培地で培養される。例えば、親細胞が、酵素のヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ(HGPRT又はHPRT)を欠いていると、ハイブリドーマの培地は、典型的には、ヒポキサチン、アミノプチリン及びチミジンを含み(「ＨＡＴ培地」)、この物質がＨＧＰＲＴ欠乏性細胞の増殖を阻止する。
好ましい不死化株化細胞は、効率的に融合し、選択された抗体生成細胞による安定した高レベルの抗体発現を支援し、ＨＡＴ培地のような培地に対して感受性である。より好ましい不死化株化細胞はマウス骨髄腫株であり、これは例えばカリフォルニア州サンディエゴのSalk Institute Cell Distribution Centerやバージニア州マナッサスのアメリカン・タイプ・カルチャー・コレクションより入手可能である。ヒトモノクローナル抗体を生成するためのヒト骨髄腫及びマウス-ヒト異種骨髄腫株化細胞も開示されている［Kozbor, J. Immunol., 133:3001 (1984)、Brodeur等, Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications, Marcel Dekker, Inc., New York, (1987) pp. 51-63］。
【０１１３】
次いでハイブリドーマ細胞が培養される培養培地を、ＩＬ-１ｌｐに対するモノクローナル抗体の存在について検定する。好ましくは、ハイブリドーマ細胞によって生成されたモノクローナル抗体の結合特異性は免疫沈降又はラジオイムノアッセイ(ＲＩＡ)や酵素結合免疫測定法(ＥＬＩＳＡ)等のインビトロ結合検定法によって測定する。このような技術及びアッセイは、当該分野において公知である。モノクローナル抗体の結合親和性は、例えばMunson及びPollard, Anal. Biochem., 107:220 (1980)によるスキャッチャード分析法によって測定することができる。
所望のハイブリドーマ細胞が同定された後、クローンを制限希釈工程によりサブクローニングし、標準的な方法で成長させることができる［Goding, 上掲］。この目的のための適当な培地には、例えば、ダルベッコの改変イーグル培地及びＲＰＭＩ-１６４０倍地が含まれる。あるいは、ハイブリドーマ細胞は哺乳動物においてインビボで腹水として成長させることもできる。
サブクローンによって分泌されたモノクローナル抗体は、例えばプロテインＡ−セファロース法、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー法、ゲル電気泳動法、透析法又はアフィニティークロマトグラフィー等の従来の免疫グロブリン精製方法によって培養培地又は腹水液から単離又は精製される。
【０１１４】
また、モノクローナル抗体は、組換えＤＮＡ法、例えば米国特許第4,816,567号に記載された方法により作成することができる。本発明のモノクローナル抗体をコードするＤＮＡは、常套的な方法を用いて(例えば、マウス抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合可能なオリゴヌクレオチドプローブを使用して)、容易に単離し配列決定することができる。本発明のハイブリドーマ細胞はそのようなＤＮＡの好ましい供給源となる。ひとたび単離されたら、ＤＮＡは発現ベクター内に配することができ、これが宿主細胞、例えばサルＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣(ＣＨＯ)細胞、あるいは免疫グロブリンタンパク質を生成等しない骨髄腫細胞内に形質移入され、組換え宿主細胞内でモノクローナル抗体の合成をすることができる。また、ＤＮＡは、例えば相同マウス配列に換えてヒト重鎖及び軽鎖定常ドメインのコード配列を置換することにより［米国特許第4,816,567号；上掲のMorrison等］、又は免疫グロブリンコード配列に非免疫グロブリンポリペプチドのコード配列の一部又は全部を共有結合することにより修飾することができる。このような非免疫グロブリンポリペプチドは、本発明の抗体の定常ドメインに置換でき、あるいは本発明の抗体の１つの抗原結合部位の可変ドメインに置換でき、キメラ性二価抗体を生成する。
抗体は一価抗体であってもよい。一価抗体の調製方法は当該分野においてよく知られてる。例えば、一つの方法は免疫グロブリン軽鎖と修飾重鎖の組換え発現を含む。重鎖は一般的に、重鎖の架橋を防止するようにＦｃ領域の任意の点で切断される。あるいは、関連するシステイン残基を他のアミノ酸残基で置換するか欠失させて架橋を防止する。
一価抗体の調製にはインビトロ法がまた適している。抗体の消化による、その断片、特にＦａｂ断片の生成は、当該分野において知られている慣用的技術を使用して達成できる。
【０１１５】
３．ヒト及びヒト化抗体
本発明の抗ＩＬ-１ｌｐ抗体は、さらにヒト化抗体又はヒト抗体を含む。非ヒト(例えばマウス)抗体のヒト化形とは、キメラ免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖あるいはその断片(例えばＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ'、Ｆ(ａｂ')２あるいは抗体の他の抗原結合サブ配列)であって、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小配列を含むものである。ヒト化抗体はレシピエントの相補性決定領域(ＣＤＲ)の残基が、マウス、ラット又はウサギのような所望の特異性、親和性及び能力を有する非ヒト種(ドナー抗体)のＣＤＲの残基によって置換されたヒト免疫グロブリン(レシピエント抗体)を含む。幾つかの例では、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク残基は、対応する非ヒト残基によって置換されている。また、ヒト化抗体は、レシピエント抗体にも、移入されたＣＤＲもしくはフレームワーク配列にも見出されない残基を含んでいてもよい。一般に、ヒト化抗体は、全てあるいはほとんど全てのＣＤＲ領域が非ヒト免疫グロブリンのものに対応し、全てあるいはほとんど全てのＦＲ領域がヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のものである、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含む。ヒト化抗体は、最適には免疫グロブリン定常領域(Ｆｃ)、典型的にはヒトの免疫グロブリンの定常領域の少なくとも一部を含んでなる［Jones等, Nature, 321:522-525 (1986); Riechmann等, Nature, 332:323-329 (1988); 及びPresta, Curr. Op Struct. Biol., 2:593-596 (1992)］。
非ヒト抗体をヒト化する方法はこの分野でよく知られている。一般的に、ヒト化抗体には非ヒト由来の一又は複数のアミノ酸残基が導入される。これら非ヒトアミノ酸残基は、しばしば、典型的には「移入」可変ドメインから得られる「移入」残基と称される。ヒト化は基本的に齧歯動物のＣＤＲ又はＣＤＲ配列でヒト抗体の該当する配列を置換することによりウィンター(winter)及び共同研究者［Jones等, Nature, 321:522-525 (1986)；Riechmann等, Nature, 332:323-327 (1988)；Verhoeyen等, Science, 239:1534-1536 (1988)］の方法に従って、齧歯類ＣＤＲ又はＣＤＲ配列をヒト抗体の対応する配列に置換することにより実施される。よって、このような「ヒト化」抗体は、無傷のヒト可変ドメインより実質的に少ない分が非ヒト種由来の対応する配列で置換されたキメラ抗体(米国特許第4,816,567号)である。実際には、ヒト化抗体は典型的には幾つかのＣＤＲ残基及び場合によっては幾つかのＦＲ残基が齧歯類抗体の類似する部位からの残基によって置換されたヒト抗体である。
【０１１６】
また、ヒト抗体は、ファージディスプレイライブラリ［Hoogenboom及びWinter, J. Mol. Biol., 227:381 (1991)；Marks等, J. Mol. Biol., 222:581 (1991)］を含むこの分野で知られた種々の方法を用いて作成することもできる。また、Cole等及びBoerner等の方法も、ヒトモノクローナル抗体の調製に利用することができる［Cole等, Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss. p.77(1985)及びBoerner等, J. Immunol., 147(1)：86-95(1991) ］。同様に、ヒト抗体はヒト免疫グロブリン座位をトランスジェニック動物、例えば内在性免疫グロブリン遺伝子は部分的又は完全に不活性化されたマウスに導入することにより産生することができる。投与の際に、遺伝子再配列、組立、及び抗体レパートリーを含むあらゆる観点においてヒトに見られるものに非常に類似しているヒト抗体の生産が観察される。このアプローチは、例えば米国特許第5,545,807号；同第5,545,806号；同第5,569,825号；同第5,625,126号；同第5,633,425号；同第5,661,016号、及び次の科学文献：Marks等, Bio/Technology 10, 779-783 (1992); Lonberg等, Nature 368 856-859 (1994); Morrison, Nature 368, 812-13 (1994); Fishwild等, Nature Biotechnology 14, 845-51 (1996); Neuberger, Nature Biotechnology 14, 826 (1996); Lonberg及びHuszar, Intern. Rev. Immunol. 13 65-93 (1995)に記載されている。
【０１１７】
４．二重特異性抗体
二重特異性抗体は、少なくとも２つの異なる抗原に対して結合特異性を有するモノクローナル抗体、好ましくはヒトもしくはヒト化抗体である。本発明の場合において、結合特異性の一方はＩＬ-１ｌｐに対してであり、他方は任意の他の抗原、好ましくは細胞表面タンパク質又はレセプター又はレセプターサブユニットに対してである。
二重特異性抗体を作成する方法は当該技術分野において周知である。伝統的には、二重特異性抗体の組換え生産は、二つの重鎖が異なる特異性を持つ二つの免疫グロブリン重鎖／軽鎖対の同時発現に基づく［Milstein及びCuello, Nature, 305:537-539 (1983)］。免疫グロブリンの重鎖と軽鎖を無作為に取り揃えるため、これらハイブリドーマ(クアドローマ)は１０種の異なる抗体分子の潜在的混合物を生成し、その内一種のみが正しい二重特異性構造を有する。正しい分子の精製は、アフィニティークロマトグラフィー工程によって通常達成される。同様の手順が1993年5月13日公開のWO93/08829、及びTraunecker等, EMBO J.,10:3655-3659 (1991)に開示されている。
所望の結合特異性(抗体-抗原結合部位)を有する抗体可変ドメインを免疫グロブリン定常ドメイン配列に融合できる。融合は、好ましくは少なくともヒンジ部、ＣＨ２及びＣＨ３領域の一部を含む免疫グロブリン重鎖定常ドメインとのものである。少なくとも一つの融合には軽鎖結合に必要な部位を含む第一の重鎖定常領域(ＣＨ１)が存在することが望ましい。免疫グロブリン重鎖融合をコードするＤＮＡ、及び望むのであれば免疫グロブリン軽鎖を、別々の発現ベクターに挿入し、適当な宿主生物に同時形質移入する。二重特異性抗体を作成するための更なる詳細については、例えばSuresh等, Methods in Enzymology, 121:210(1986)を参照されたい。
【０１１８】
５．ヘテロ抱合体抗体
ヘテロ抱合抗体もまた本発明の範囲に入る。ヘテロ抱合抗体は、２つの共有結合した抗体からなる。このような抗体は、例えば、免疫系細胞を不要な細胞に対してターゲティングさせるため［米国特許第4,676,980号］及びＨＩＶ感染の治療のために［WO 91/00360; WO 92/200373; EP 03089］提案されている。この抗体は、架橋剤に関連したものを含む合成タンパク化学における既知の方法を使用して、インビトロで調製することができると考えられる。例えば、ジスルフィド交換反応を使用するか又はチオエーテル結合を形成することにより、免疫毒素を作成することができる。この目的に対して好適な試薬の例には、イミノチオレート及びメチル-４-メルカプトブチリミデート、及び例えば米国特許第4,6767,980号に開示されているものが含まれる。
【０１１９】
Ｅ．抗ＩＬ-１ｌｐ抗体の用途
本発明の抗ＩＬ-１ｌｐ抗体は様々な有用性を有している。例えば、抗ＩＬ-１ｌｐ抗体は、ＩＬ-１ｌｐの診断アッセイ、例えばその特定細胞、組織、又は血清での発現の検出に用いられる。競合的結合アッセイ、直接又は間接サンドウィッチアッセイ及び不均一又は均一相で行われる免疫沈降アッセイ［Zola, Monoclonal Antibodies: A Manual of Techniques, CRC Press, Inc. (1987) pp. 147-158］等のこの分野で知られた種々の診断アッセイ技術が使用される。診断アッセイで用いられる抗体は、検出可能な部位で標識される。検出可能な部位は、直接又は間接に、検出可能なシグナルを発生しなければならない。例えば、検出可能な部位は、３Ｈ、１４Ｃ、３２Ｐ、３５Ｓ又は１２５Ｉ等の放射性同位体、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン又はルシフェリン等の蛍光又は化学発光化合物、あるいはアルカリホスファターゼ、ベータ-ガラクトシダーゼ又はセイヨウワサビペルオキシダーゼ等の酵素であってよい。抗体に検出可能な部位を抱合させるためにこの分野で知られた任意の方法が用いられ、それにはHunter等 Nature, 144:945 (1962)；David等, Biochemistry, 13: 1014 (1974)；Pain等, J. Immunol. Meth., 40:219 (1981) ;及びNygren, J. Histochem. and Cytochem., 30:407 (1982)に記載された方法が含まれる。
また、抗ＩＬ-１ｌｐ抗体は組換え細胞培養又は天然供給源からのＩＬ-１ｌｐのアフィニティー精製にも有用である。この方法においては、ＩＬ-１ｌｐに対する抗体を、当該分野でよく知られている方法を使用して、セファデックス樹脂や濾紙のような適当な支持体に固定化する。次に、固定化された抗体を、精製するＩＬ-１ｌｐを含む試料と接触させた後、固定化された抗体に結合したＩＬ-１ｌｐ以外の試料中の物質を実質的に全て除去する適当な溶媒で支持体を洗浄する。最後に、ＩＬ-１ｌｐを抗体から脱離させる他の適当な溶媒で支持体を洗浄する。
【０１２０】
さらに、抗-ＩＬ-１ｌｐ抗体は、ＩＬ-１ｌｐ-媒介疾患の状況、たとえば病的なＩＬ-１又はＩＬ-１８アゴニスト又は天然ＩＬ-１ｌｐのアゴニスト-様活性によって特徴づけられる疾患状態において天然ＩＬ-１ｌｐを標的とする治療薬として利用することができる。本発明の抗-ＩＬ-１ｌｐ抗体を用いた天然ＩＬ-１ｌｐ-媒介疾患の治療や抑制において、抗体組成物は適した医療行為からなる方法で処方、服用、及び投与される。これに関連する考慮すべき要因は、治療している特定の疾患、治療している特定の哺乳動物、個々の患者の臨床症状、疾患の原因、抗体の投与部位、抗体の特定の型、投与の方法、投与スケジュール、及び医師に知られる他の要因を含む。抗体の投与される「有効量」または「治療上の有効量」はそのような考慮によって支配され、炎症疾患の治療及び炎症反応の減少を含む、天然ＩＬ-１ｌｐ-媒介疾患の予防、改善、又は治療に必要な最少量である。その量は、ホストに毒となる、又はホストに有意な感染に対するより高い感受性を与える量より少ないことが望ましい。
基本的な計画としては、一投与当たりの非経口投与される抗体又は抗体断片の初回の薬剤的有効量は、０．３から２０ｍｇ／ｋｇ／日、より好ましくは２から５ｍｇ／ｋｇ／日とされている抗体の標準的な初回範囲を有する、一日当たり約０．１から５０ｍｇ／患者体重ｋｇの範囲である。
一実施様態では、全身投与に用いる場合、初回薬剤的有効量は約２から５ｍｇ／ｋｇ／日である。
吸入による投与を用いた本発明の方法では、初回薬剤的有効量は約１マイクログラム（μｇ）／ｋｇ／日から１００ｍｇ／ｋｇ／日の範囲である。
【０１２１】
一実施態様では、本発明は、ＩＬ-１ｌｐ-媒介炎症疾患の治療のための、そのような治療を必要とする哺乳動物、たとえばヒトに、抗-ＩＬ-１ｌｐ抗体を有効量投与することを含んでなる方法を提供する。
他の実施態様では、本発明は、ｈＩＬ-１ｌｐ-媒介喘息疾患の治療のための、そのような治療を必要とするヒトに、抗-ｈＩＬ-１ｌｐ抗体を有効量投与することを含んでなる方法を提供する。
他の実施態様では、本発明は、ｈＩＬ-１Ｒａ１-媒介喘息疾患の治療のための、そのような治療を必要とするヒトに、抗-ｈＩＬ-１Ｒａ１抗体を有効量投与することを含んでなる方法を提供する。
他の実施態様では、本発明は、ｈＩＬ-１ｌｐ-媒介リウマチ様関節炎疾患の治療のための、そのような治療を必要とする哺乳動物、たとえばヒトに、抗-ｈＩＬ-１ｌｐ抗体を有効量投与することを含んでなる方法を提供する。
他の実施態様では、本発明は、ｈＩＬ-１ｌｐ-媒介リウマチ様関節炎疾患の治療のための、そのような治療を必要とするヒトに、抗-ｈＩＬ-１ｌｐ抗体を有効量投与することを含んでなる方法を提供する。
他の実施態様では、本発明は、ｈＩＬ-１Ｒａ１-媒介リウマチ様関節炎疾患の治療のための、そのような治療を必要とするヒトに、抗-ｈＩＬ-１Ｒａ１抗体を有効量投与することを含んでなる方法を提供する。
他の実施態様では、本発明は、ｈＩＬ-１ｌｐ-媒介変形性関節症疾患の治療のための、そのような治療を必要とする哺乳動物、たとえばヒトに、抗-ｈＩＬ-１ｌｐ抗体を有効量投与することを含んでなる方法を提供する。
他の実施態様では、本発明は、ｈＩＬ-１ｌｐ-媒介変形性関節症疾患の治療のための、そのような治療を必要とするヒトに、抗-ｈＩＬ-１ｌｐ抗体を有効量投与することを含んでなる方法を提供する。
他の実施態様では、本発明は、ｈＩＬ-１Ｒａ１-媒介変形性関節症疾患の治療のための、そのような治療を必要とするヒトに、抗-ｈＩＬ-１Ｒａ１抗体を有効量投与することを含んでなる方法を提供する。
【０１２２】
他の実施態様では、本発明は、ｈＩＬ-１ｌｐ-媒介感染性疾患の治療のための、そのような治療を必要とする哺乳動物、たとえばヒトに、抗-ｈＩＬ-１ｌｐ抗体を有効量投与することを含んでなる方法を提供する。
他の実施態様では、本発明は、ｈＩＬ-１ｌｐ-媒介感染性疾患の治療のための、そのような治療を必要とするヒトに、抗-ｈＩＬ-１ｌｐ抗体を有効量投与することを含んでなる方法を提供する。
他の実施態様では、本発明は、ｈＩＬ-１Ｒａ１-媒介感染性疾患の治療のための、そのような治療を必要とするヒトに、抗-ｈＩＬ-１Ｒａ１抗体を有効量投与することを含んでなる方法を提供する。
他の実施態様では、本発明は、ｈＩＬ-１ｌｐ-媒介急性肺障害の治療のための、そのような治療を必要とする哺乳動物、たとえばヒトに、抗-ｈＩＬ-１ｌｐ抗体を有効量投与することを含んでなる方法を提供する。
他の実施態様では、本発明は、ｈＩＬ-１ｌｐ-媒介急性肺障害の治療のための、そのような治療を必要とするヒトに、抗-ｈＩＬ-１ｌｐ抗体を有効量投与することを含んでなる方法を提供する。
他の実施態様では、本発明は、ｈＩＬ-１Ｒａ１-媒介急性肺障害の治療のための、そのような治療を必要とするヒトに、抗-ｈＩＬ-１Ｒａ１抗体を有効量投与することを含んでなる方法を提供する。
他の実施態様では、本発明は、ｈＩＬ-１ｌｐ-媒介成人呼吸窮迫症候群の治療のための、そのような治療を必要とする哺乳動物、たとえばヒトに、抗-ｈＩＬ-１ｌｐ抗体を有効量投与することを含んでなる方法を提供する。
他の実施態様では、本発明は、ｈＩＬ-１ｌｐ-媒介成人呼吸窮迫症候群の治療のための、そのような治療を必要とするヒトに、抗-ｈＩＬ-１ｌｐ抗体を有効量投与することを含んでなる方法を提供する。
他の実施態様では、本発明は、ｈＩＬ-１Ｒａ１-媒介成人呼吸窮迫症候群の治療のための、そのような治療を必要とするヒトに、抗-ｈＩＬ-１Ｒａ１抗体を有効量投与することを含んでなる方法を提供する。
【０１２３】
他の実施態様では、本発明は、ｈＩＬ-１ｌｐ-媒介特発性肺線維症の治療のための、そのような治療を必要とする哺乳動物、たとえばヒトに、抗-ｈＩＬ-１ｌｐ抗体を有効量投与することを含んでなる方法を提供する。
他の実施態様では、本発明は、ｈＩＬ-１ｌｐ-媒介特発性肺線維症の治療のための、そのような治療を必要とするヒトに、抗-ｈＩＬ-１ｌｐ抗体を有効量投与することを含んでなる方法を提供する。
他の実施態様では、本発明は、ｈＩＬ-１Ｒａ１-媒介特発性肺線維症の治療のための、そのような治療を必要とするヒトに、抗-ｈＩＬ-１Ｒａ１抗体を有効量投与することを含んでなる方法を提供する。
他の実施態様では、本発明は、ｈＩＬ-１ｌｐ-媒介虚血性再潅流疾患、たとえば外科的組織再潅流傷害を脳梗塞、心筋虚血、又は心筋梗塞の治療のための、そのような治療を必要とする哺乳動物、たとえばヒトに、抗-ｈＩＬ-１ｌｐ抗体を有効量投与することを含んでなる方法を提供する。
他の実施態様では、本発明は、ｈＩＬ-１ｌｐ-媒介虚血性再潅流疾患、たとえば外科的組織再潅流傷害を脳梗塞、心筋虚血、又は心筋梗塞の治療のための、そのような治療を必要とするヒトに、抗-ｈＩＬ-１ｌｐ抗体を有効量投与することを含んでなる方法を提供する。
他の実施態様では、本発明は、ｈＩＬ-１Ｒａ１-媒介虚血性再潅流疾患、たとえば外科的組織再潅流傷害を脳梗塞、心筋虚血、又は心筋梗塞の治療のための、そのような治療を必要とするヒトに、抗-ｈＩＬ-１Ｒａ１抗体を有効量投与することを含んでなる方法を提供する。
他の実施態様では、本発明は、ｈＩＬ-１ｌｐ-媒介乾癬疾患の治療のための、そのような治療を必要とする哺乳動物、たとえばヒトに、抗-ｈＩＬ-１ｌｐ抗体を有効量投与することを含んでなる方法を提供する。
他の実施態様では、本発明は、ｈＩＬ-１ｌｐ-媒介乾癬疾患の治療のための、そのような治療を必要とするヒトに、抗-ｈＩＬ-１ｌｐ抗体を有効量投与することを含んでなる方法を提供する。
他の実施態様では、本発明は、ｈＩＬ-１Ｒａ１-媒介乾癬疾患の治療のための、そのような治療を必要とするヒトに、抗-ｈＩＬ-１Ｒａ１抗体を有効量投与することを含んでなる方法を提供する。
【０１２４】
他の実施態様では、本発明は、ｈＩＬ-１ｌｐ-媒介移植片対宿主疾患（ＧＶＨＤ）の治療のための、そのような治療を必要とする哺乳動物、たとえばヒトに、抗-ｈＩＬ-１ｌｐ抗体を有効量投与することを含んでなる方法を提供する。
他の実施態様では、本発明は、ｈＩＬ-１ｌｐ-媒介移植片対宿主疾患（ＧＶＨＤ）の治療のための、そのような治療を必要とするヒトに、抗-ｈＩＬ-１ｌｐ抗体を有効量投与することを含んでなる方法を提供する。
他の実施態様では、本発明は、ｈＩＬ-１Ｒａ１-媒介移植片対宿主疾患（ＧＶＨＤ）の治療のための、そのような治療を必要とするヒトに、抗-ｈＩＬ-１Ｒａ１抗体を有効量投与することを含んでなる方法を提供する。
他の実施態様では、本発明は、ｈＩＬ-１ｌｐ-媒介潰瘍性大腸炎のような炎症性腸疾患の治療のための、そのような治療を必要とする哺乳動物、たとえばヒトに、抗-ｈＩＬ-１ｌｐ抗体を有効量投与することを含んでなる方法を提供する。
他の実施態様では、本発明は、ｈＩＬ-１ｌｐ-媒介潰瘍性大腸炎のような炎症性腸疾患の治療のための、そのような治療を必要とするヒトに、抗-ｈＩＬ-１ｌｐ抗体を有効量投与することを含んでなる方法を提供する。
他の実施態様では、本発明は、ｈＩＬ-１Ｒａ１-媒介潰瘍性大腸炎のような炎症性腸疾患の治療のための、そのような治療を必要とするヒトに、抗-ｈＩＬ-１Ｒａ１抗体を有効量投与することを含んでなる方法を提供する。
以下の実施例は例示するためにのみ提供されるものであって、本発明の範囲を決して限定することを意図するものではない。
本明細書で引用した全ての特許及び参考文献の全体を、出典明示によりここに取り込む。
【０１２５】
（実施例）
実施例で言及されている全ての市販試薬は、特に示さない限りは製造者の使用説明に従い使用した。ＡＴＣＣ登録番号により以下の実施例及び明細書全体を通して特定されている細胞の供給源はアメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション、マナッサス、ＶＡである。
実施例１：ｈＩＬ-１Ｒａ１及びｍＩＬ-１Ｒａ３をコードするＤＮＡの単離
公的な発現配列タグ（ＥＳＴ）ＤＮＡデータベース（Genbank）を、ヒトインターロイキン-１レセプターアンタゴニスト（ｈＩＬ-１Ｒａ）配列（分泌ヒトインターロイキン-１レセプターアンタゴニスト（「ｓＩＬ-１Ｒａ」）配列としても知られる）で検索し、ＡＩ０１４５４８と命名されるヒトＥＳＴ（図４、配列番号：８のヌクレオチド１４５−６２９に対応する）とＷ０８２０５と命名されるマウスＥＳＴ（図１０，配列番号：１７）を同定し、それは既知のタンパク質ｈＩＬ-１Ｒａ（ｓＩＬ-１Ｒａ）と相同性を示した。
ＥＳＴクローンＡＩ０１４５４８及びＷ０８２０５はResearch Genetics（ハンツビル、アラバマ州）から購入し、ｃＤＮＡ挿入断片を取得し、その全体を配列決定した。
ＤＮＡ８５０６６と命名される、クローンＡＩ０１４５４８の完全ヌクレオチド配列は図１（配列番号：１）に示される。クローンＤＮＡ８５０６６は、見かけのイントロン配列によって中断される単鎖オープンリーディングフレームを含む。イントロンはヌクレオチド位置１８１から１８６（スプライス供与部位）及びヌクレオチド位置４３０から４３２（スプライス受容位置）（図１；配列番号：１）でスプライス部位によって結合される。
事実上処理されたヌクレオチド配列（図３；配列番号：６）はＤＮＡ９４６１８と命名され、クローンＤＮＡ８５０６６から見かけのイントロン配列が取り除かれることにより導かれた。クローンＤＮＡ９４６１８はヌクレオチド位置１０３−１０５に見かけの翻訳開始部位、及びヌクレオチド位置６８２−６８４に終止コドンを有する単鎖オープンリーディングフレームを含む（図３；配列番号：６）。予測されるポリペプチド前駆体（ｈＩＬ-１Ｒａ１）（図３；配列番号：７）は１９３アミノ酸長である。推定のシグナル配列はアミノ酸位置１から１４まで達する。推定のｃＡＭＰ-及びｃＧＭＰ-依存プロテインキナーゼリン酸化部位はアミノ酸位置３３−３６に位置する。推定のＮ−ミリストイル化部位はアミノ酸位置５０−５５及びアミノ酸位置８７−９２に位置する。
【０１２６】
クローンＤＮＡ８５０６６（ＤＮＡ８５０６６−２５３４と命名される）はＡＴＣＣに寄託され、ＡＴＣＣ寄託番号２０３５８８が付与された。図３（配列番号：７）に示される全長ｈＩＬ-１Ｒａ１タンパク質は約２１，８２２ダルトンの推定分子量及び約８．９のｐＩを持つ。
全長配列（配列番号：７）の配列構造分析に基づいて、ｈＩＬ-１Ｒａ１はｈＩＬ-１Ｒａ（ｓＩＬ-１Ｒａ）及びｈＩＬ-１Ｒａβタンパク質と有意な配列同一性があることが示された。
クローンＷ０８２０５の完全ヌクレオチド配列は、ＤＮＡ９２５０５と命名され、図９（配列番号：１５）に示される。クローンＤＮＡ９２５０５は、ヌクレオチド位置１４５−１４７に見かけの翻訳開始部位、及びヌクレオチド位置６１０−６１２に終止コドンを有する単鎖オープンリーディングフレームを含む（図９；配列番号１５）。予測されるポリペプチド前駆体（ｍＩＬ-１Ｒａ３）（図９；配列番号：１６）は１５５アミノ酸長である。推定のシグナル配列はアミノ酸位置１−３３まで達する。推定のＮ−ミリストイル化部位はアミノ酸位置２９−３４、６０−６５、６３−６８、９１−９６及び１０６−１１１に位置する。インターロイキン-１-様配列はアミノ酸位置１１１−１３１に位置する。
クローンＤＮＡ９２５０５（ＤＮＡ９２５０５−２５３４と命名される）はＡＴＣＣに寄託され、ＡＴＣＣ寄託番号２０３５９０が付与された。図９（配列番号：１６）に示される全長ｍＩＬ-１Ｒａ３タンパク質は約１７，１３４ダルトンの推定分子量及び約４．８のｐＩを持つ。
全長配列（配列番号：１６）の配列構造分析に基づいて、ｍＩＬ-１Ｒａ３はｍＩＬ-１Ｒａ、ｈｉｃＩＬ-１Ｒａ、ｈＩＬ-１Ｒａ（ｓＩＬ-１Ｒａ）及びｈＩＬ-１Ｒａβタンパク質と有意な配列同一性があることが示された。
【０１２７】
実施例２：ｈＩＬ-１Ｒａ２及びｈＩｌ-１Ｒａ３をコードするＤＮＡの単離
発現配列タグ（ＥＳＴ）ＤＮＡデータベース（LIFESEQ(商品名)、Incyte Pharmaceuticals、Palo Alto, CA）を、ヒトインターロイキン-１レセプターアンタゴニスト（ｈＩＬ-１Ｒａ）配列（分泌ヒトインターロイキン-１レセプターアンタゴニスト（「ｓＩＬ-１Ｒａ」）配列としても知られる）で検索し、１４３３１５６（図５、配列番号：１１）と５１２００２８（図８、配列番号：１４）と命名されるＥＳＴを同定し、それは既知のタンパク質ｈＩＬ-１Ｒａと相同性を示した。
ＥＳＴクローン１４３３１５６及び５１２００２８をPharmaceuticals（Palo Alto, CA）から購入し、ｃＤＮＡ挿入断片を取得し、その全体を配列決定した。
ＤＮＡ９２９２９と命名される、クローン１４３３１５６の完全ヌクレオチド配列は図５（配列番号：９）に示される。クローンＤＮＡ９２９２９は、ヌクレオチド位置９６−９８に見かけの翻訳開始部位、及びヌクレオチド位置４９８−５００に終止コドンを有する単鎖オープンリーディングフレームを含む（図５；配列番号：９）。予測されるポリペプチド前駆体（ｈＩＬ-１Ｒａ２）（図５；配列番号：１０）は１３４アミノ酸長である。推定のシグナル配列はアミノ酸位置１−２６まで達する。
クローンＤＮＡ９２９２９（ＤＮＡ９２９２９−２５３４と命名される）はＡＴＣＣに寄託され、ＡＴＣＣ寄託番号２０３５８６が付与された。図５（配列番号：１０）に示される全長ｈＩＬ-１Ｒａ２タンパク質は約１４，９２７ダルトンの推定分子量及び約４．８のｐＩを持つ。
【０１２８】
全長配列（配列番号：１０）の配列構造分析に基づいて、ｈＩＬ-１Ｒａ２はｈＩＬ-１Ｒａβタンパク質と有意な配列同一性があることが示された。ｈＩＬ-１Ｒａ２はｈＩＬ-１Ｒａβのスプライス変異体であると考えられる。
クローン５１２００２８の完全ヌクレオチド配列は、ＤＮＡ９６７８７と命名され、図７（配列番号：１２）に示される。クローンＤＮＡ９６７８７は、ヌクレオチド位置１−３に見かけの翻訳開始部位、及びヌクレオチド位置４６６−４６８に終止コドンを有する単鎖オープンリーディングフレームを含む（図７；配列番号１２）。予測されるポリペプチド前駆体（ｈＩＬ-１Ｒａ３）（図７；配列番号：１３）は１５５アミノ酸長である。推定のシグナル配列はアミノ酸位置１−３３まで達する。推定のＮ−ミリストイル化部位はアミノ酸位置２９−３４、６０−６５、６３−６８、７３−７８、９１−９６及び１０６−１１１に位置する。インターロイキン-１-様配列はアミノ酸位置１１１−１３１に位置する。
ｈＩＬ-１Ｒａ３の予測される１５５アミノ酸ポリペプチドは特定の動物細胞では成熟配列（翻訳後プロセッシングで取り除かれたプレ配列を持たない）として振る舞うと考えられる。また、他の動物細胞はアミノ酸位置１から約３３まで伸びる一又は複数のシグナルペプチドを認知し、取り除くと考えられる。以下の実施例１４に示されるように、一過性に形質移入されたＣＨＯ宿主細胞は図７（配列番号：１３）の配列で単にＮ−末端メチオニンが欠失したｈＩＬ-１Ｒａ３の型を分泌する。
クローンＤＮＡ９６７８７（ＤＮＡ９６７８７−２５３４と命名される）はＡＴＣＣに寄託され、ＡＴＣＣ寄託番号２０３５８９が付与された。図７（配列番号：１３）に示される全長ｈＩＬ-１Ｒａ３タンパク質は約１９，９６１ダルトンの推定分子量及び約４．９のｐＩを持つ。
全長配列（配列番号：１３）の配列構造分析に基づいて、ｈＩＬ-１Ｒａ３はｈｉｃＩＬ-１Ｒａ及びｈＩＬ-１Ｒａ（ｓＩＬ-１Ｒａ）タンパク質と有意な配列同一性があることが示された。
【０１２９】
実施例３：ノーザンブロット分析
ヒト組織におけるｈＩＬ-１Ｒａ３ ｍＲＮＡの発現及びマウス組織におけるｍＩＬ-１Ｒａ３ ｍＲＮＡの発現を、ノーザンブロット分析によって検査した。ヒト及びマウス多組織ノーザン（ＲＮＡ）ブロット及びマウス胚ブロットはClontechから購入され、製造メーカーの指示による対応ｃＤＮＡを用いてプローブした。
図．１１に示すように、ｈＩＬ-１Ｒａ３ ｍＲＮＡ（２．７ｋｂ）はヒト胎盤にだけ検出され、ｍＩＬ-１Ｒａ３ ｍＲＮＡ転写物（１．４ｋｂ及び２．５ｋｂ）は１７日目マウス胚にだけ検出された。
【０１３０】
実施例４：ハイブリッド形成プローブとしてのＩＬ-１ｌｐポリペプチドコード核酸の使用
以下の方法は、ＩＬ-１ｌｐをコードするヌクレオチド配列のハイブリッド形成プローブとしての使用を記載する。
全長ＩＬ-１ｌｐのコード配列（図３，５，７，９，１５，１６及び１９；配列番号：６，９，１２，１５，１８，２０，及び２４）を含むＤＮＡは、ヒト組織ｃＤＮＡライブラリ又はヒト組織ゲノムライブラリにおける相同性ＤＮＡ（ＩＬ-１ｌｐの天然に生じる変異体をコードするものなど）のスクリーニングのためのプローブとして用いられる。
いずれかのライブラリＤＮＡを含むフィルターのハイブリッド形成及び洗浄は、以下の高緊縮条件で実施した。放射標識ＩＬ-１ｌｐ誘導プローブのフィルターへのハイブリッド形成は、50%ホルムアミド、5xＳＳＣ、0.1%ＳＤＳ、0.1%ピロリン酸ナトリウム、50mMリン酸ナトリウム、pH6.8、2xデンハート液、及び10%デキストラン硫酸の溶液中で、42℃において20時間行った。フィルターの洗浄は、0.1xＳＳＣ及び0.1%ＳＤＳの水溶液中、42℃で行った。
次いで、全長天然配列ＩＬ-１ｌｐをコードするＤＮＡと所望の配列同一性を有するＤＮＡは、この分野で知られた標準的な方法を用いて同定できる。
【０１３１】
実施例５：大腸菌におけるＩＬ-１ｌｐポリペプチドの発現
この実施例は、大腸菌における組み換え発現による所望のＩＬ-１ｌｐの非グリコシル化形態の調製を例示する。
ＩＬ-１ｌｐをコードするＤＮＡ配列は、選択されたＰＣＲプライマーを用いて最初に増幅した。プライマーは、選択された発現ベクターの制限酵素部位に対応する制限酵素部位を持たなければならない。種々の発現ベクターを用いることができる。好適なベクターの例は、ｐＢＲ３２２（大腸菌から誘導されたもの；Bolivar等, Gene, 2:95 (1977)を参照）であり、アンピシリン及びテトラサイクリン耐性についての遺伝子を含む。ベクターは、制限酵素で消化され、脱リン酸化される。ＰＣＲ増幅した配列は、次いで、ベクターに結合させる。ベクターは、好ましくは抗生物質耐性遺伝子、ｔｒｐプロモーター、ｐｏｌｙｈｉｓリーダー（最初の６つのＳＴＩＩコドン、ｐｏｌｙｈｉｓ配列、及びエンテロキナーゼ切断部位を含む）、ＩＬ-１ｌｐコード化領域、ラムダ転写終結区、及びａｒｇＵ遺伝子を含む。
ライゲーション混合物は、次いで、上掲のSambrook等に記載された方法を用いた選択した大腸菌株の形質転換に使用される。形質転換体は、それらのＬＢプレートで成長する能力により同定され、次いで抗生物質耐性クローンが選択される。プラスミドＤＮＡが単離され、制限分析及びＤＮＡ配列分析で確認される。
選択されたクローンは、抗生物質を添加したＬＢブロスなどの液体培地で終夜成長させることができる。終夜培養は、続いて大規模培養の播種に用いられる。次に細胞を最適光学密度まで成長させ、その間に発現プロモーターが作動する。
更に数時間の培養の後、細胞を採集して遠心分離できる。遠心分離で得られた細胞ペレットは、この分野で知られた種々の試薬を用いて可溶化され、次いで可溶化ＩＬ-１ｌｐタンパク質を金属キレート化カラムを用いてタンパク質を緊密に結合させる条件下で精製することができる。
【０１３２】
実施例６：哺乳動物細胞でのＩＬ-１ｌｐポリペプチドの発現
この実施例は、哺乳動物細胞における組み換え発現による潜在的にグリコシル化した形態のＩＬ-１ｌｐの調製を例示する。
発現ベクターとしてベクターｐＲＫ５（1989年3月15日公開のEP 307,247参照）を用いた。場合によっては、ＩＬ-１ｌｐ ＤＮＡを選択した制限酵素を持つｐＲＫ５に結合させ、上掲のSambrook等に記載されたようなライゲーション方法を用いてＩＬ-１ｌｐＤＮＡを挿入させる。得られたベクターは、ｐＲＫ５−ＩＬ-１ｌｐと呼ばれる。
一実施態様では、選択された宿主細胞は２９３細胞とすることができる。ヒト２９３細胞（ATCC CCL 1573）は、ウシ胎児血清及び場合によっては滋養成分及び／又は抗生物質を添加したＤＭＥＭなどの培地中で組織培養プレートにおいて成長させて集密化した。約10μｇのｐＲＫ５−ＩＬ-１ｌｐポリペプチドＤＮＡを約1μgのＶＡ  ＲＮＡ遺伝子コード化ＤＮＡ［Thimmappaya等, Cell, 31:543 (1982))］と混合し、500μlの1mMトリス-ＨＣｌ、0.1mMＥＤＴＡ、0.227MＣａＣｌ２に溶解させた。この混合物に、滴状の、500μlの50mMＨＥＰＥＳ（pH7.35）、280mMのＮａＣｌ、1.5mMのＮａＰＯ４を添加し、25℃で10分間析出物を形成させた。析出物を懸濁し、２９３細胞に加えて37℃で約4時間定着させた。培地を吸引し、2mlのＰＢＳ中20%グリセロールを30秒間添加した。２９３細胞は、次いで無血清培地で洗浄し、新鮮な培地を添加し、細胞を約5日間インキュベートした。
形質移入の約24時間後、培地を除去し、培地（のみ）又は200μCi/ml３５Ｓ−システイン及び200μCi/ml３５Ｓ−メチオニンを含む培地で置換した。12時間のインキュベーションの後、条件培地を回収し、スピンフィルターで濃縮し、15%ＳＤＳゲルに添加した。処理したゲルを乾燥させ、ＩＬ-１ｌｐポリペプチドの存在を現す選択された時間にわたってフィルムにさらした。形質転換した細胞を含む培地に、更なるインキュベーションを施し（無血清培地で）、培地を選択されたバイオアッセイで試験した。
【０１３３】
これに換わる技術において、ＩＬ-１ｌｐは、Somparyac等, Proc. Natl. Acad. Sci., 12:7575 (1981)に記載されたデキストラン硫酸法を用いて２９３細胞に一過的に導入される。２９３細胞は、スピナーフラスコ内で最大密度まで成長させ、700μｇのｐＲＫ５−ＩＬ-１ｌｐＤＮＡを添加する。細胞は、まずスピナーフラスコから遠心分離によって濃縮し、ＰＢＳで洗浄した。ＤＮＡ−デキストラン沈殿物を細胞ペレット上で4時間インキュベートした。細胞を20%グリセロールで90秒間処理し、組織培地で洗浄し、組織培地、5μg/mlウシインシュリン及び0.1μg/mlウシトランスフェリンを含むスピナーフラスコに再度導入した。約4日後に、条件培地を遠心分離して濾過し、細胞及び細胞片を除去した。次いで発現されたＩＬ-１ｌｐを含む試料を濃縮し、透析及び／又はカラムクロマトグラフィー等の選択した方法によって精製した。
他の実施態様では、ＩＬ-１ｌｐをＣＨＯ細胞で発現させることができる。ｐＲＫ５−ＩＬ-１ｌｐは、ＣａＰＯ４又はＤＥＡＥ−デキストランなどの公知の試薬を用いてＣＨＯ細胞に形質移入することができる。上記したように、細胞培地をインキュベートし、培地を培養培地（のみ）又は３５Ｓ-メチオニン等の放射性標識を含む培地に置換することができる。ＩＬ-１ｌｐポリペプチドの存在を同定した後、培地を無血清培地に置換してもよい。好ましくは、培地を約６日間インキュベートし、次いで条件培地を回収する。次いで、発現されたＩＬ-１ｌｐを含む培地を濃縮して、任意の選択した方法によって精製することができる。
また、エピトープタグＩＬ-１ｌｐは、宿主ＣＨＯ細胞において発現させてもよい。ＩＬ-１ｌｐはｐＲＫ５ベクターからサブクローニングしてもよい。サブクローン挿入物は、ＰＣＲを施してバキュロウイルス発現ベクター中のポリ-ｈｉｓタグ等の選択されたエピトープタグを持つ枠に融合できる。ポリ-ヒスタグＩＬ-１ｌｐ挿入物は、次いで、安定なクローンの選択のためのＤＨＦＲ等の選択マーカーを含むＳＶ４０誘導ベクターにサブクローニングできる。最後に、ＣＨＯ細胞をＳＶ４０誘導ベクターで（上記のように）形質移入した。発現を確認するために、上記のように標識化を行ってもよい。発現されたポリ-ヒスタグＩＬ-１ｌｐを含む培地は、次いで濃縮し、Ｎｉ２＋−キレートアフィニティクロマトグラフィー等の選択された方法により精製できる。
【０１３４】
実施例７：酵母菌でのＩＬ-１ｌｐの発現
以下の方法は、酵母菌中でのＩＬ-１ｌｐの組換え発現を記載する。
第１に、ＡＤＨ２／ＧＡＰＤＨプロモーターからのＩＬ-１ｌｐの細胞内生産又は分泌のための酵母菌発現ベクターを作成する。ＩＬ-１ｌｐをコードするＤＮＡ及びプロモーターを選択したプラスミドの適当な制限酵素部位に挿入してＩＬ-１ｌｐの細胞内発現を指示する。分泌のために、ＩＬ-１ｌｐをコードするＤＮＡを選択したプラスミドに、ＡＤＨ２／ＧＡＰＤＨプロモーターをコードするＤＮＡ、天然ＩＬ-１ｌｐシグナルペプチド又は他の哺乳動物シグナルペプチド、又は、例えば酵母菌α因子又はインベルターゼ分泌シグナル／リーダー配列、及び（必要ならば）ＩＬ-１ｌｐの発現のためのリンカー配列とともにクローニングすることができる。
酵母菌株ＡＢ１１０等の酵母菌は、次いで上記の発現プラスミドで形質転換し、選択された発酵培地中で培養できる。形質転換した酵母菌上清は、10%トリクロロ酢酸での沈降及びＳＤＳ−ＰＡＧＥによる分離で分析し、次いでクマシーブルー染色でゲルの染色をすることができる。
続いて組換えＩＬ-１ｌｐは、発酵培地から遠心分離により酵母菌細胞を除去し、次いで選択されたカートリッジフィルターを用いて培地を濃縮することによって単離及び精製できる。ＩＬ-１ｌｐを含む濃縮物は、選択されたカラムクロマトグラフィー樹脂を用いてさらに精製してもよい。
【０１３５】
実施例８：バキュロウイルス感染昆虫細胞でのＩＬ-１ｌｐの発現
以下の方法は、バキュロウイルス感染昆虫細胞中におけるＩＬ-１ｌｐの組換え発現を記載する。
ＩＬ-１ｌｐコードする配列を、バキュロウイルス発現ベクターに含まれるエピトープタグの上流に融合させた。このようなエピトープタグは、ポリ-ｈｉｓタグ及び免疫グロブリンタグ（ＩｇＧのＦｃ領域など）を含む。ｐＶＬ１３９３（Navogen）などの市販されているプラスミドから誘導されるプラスミドを含む種々のプラスミドを用いることができる。簡単には、ＩＬ-１ｌｐ又はＩＬ-１ｌｐコード配列の所定部分、例えば膜貫通タンパク質の細胞外ドメインをコードする配列又はタンパク質が細胞外である場合の成熟タンパク質をコードする配列などが、５’及び３’領域に相補的なプライマーでのＰＣＲにより増幅される。５’プライマーは、隣接する（選択された）制限酵素部位を包含していてもよい。生産物は、次いで、選択された制限酵素で消化され、発現ベクターにサブクローニングされる。
組換えバキュロウイルスは、上記のプラスミド及びBaculoGold(商品名)ウイルスＤＮＡ（Pharmingen）を、Spodoptera frugiperda（「Ｓｆ９」）細胞（ATCC CRL 1711）中にリポフェクチン（GIBCO-BRLから市販）を用いて同時形質移入することにより作成される。28℃で4-5日インキュベートした後、放出されたウイルスを回収し、更なる増幅に用いた。ウイルス感染及びタンパク質発現は、O'Reilley等, Baculovirus expression vectors: A laboratory Manual, Oxford: Oxford University Press (1994)に記載されているように実施した。
次に、発現されたポリ-ヒスタグＩＬ-１ｌｐは、例えばＮｉ２＋−キレートアフィニティクロマトグラフィーにより次のように精製される。抽出は、Rupert等, Nature, 362:175-179 (1993)に記載されているように、ウイルス感染した組み換えＳｆ９細胞から調製した。簡単には、Ｓｆ９細胞を洗浄し、超音波処理用バッファー（25mMのＨｅｐｅｓ、pH7.9；12.5mMのＭｇＣｌ２；0.1mM  ＥＤＴＡ；10%グリセロール；0.1%のＮＰ−４０；0.4MのＫＣｌ）中に再懸濁し、氷上で2回20秒間超音波処理した。超音波処理物を遠心分離で透明化し、上清を負荷バッファー（50mMリン酸塩、300mMのＮａＣｌ、10%グリセロール、pH7.8）で50倍希釈し、0.45μmフィルターで濾過した。Ｎｉ２＋−ＮＴＡアガロースカラム（Qiagenから市販）を5mLの総容積で調製し、25mLの水で洗浄し、25mLの負荷バッファーで平衡させた。濾過した細胞抽出物は、毎分0.5mLでカラムに負荷した。カラムを、分画回収が始まる点であるＡ２８０のベースラインまで負荷バッファーで洗浄した。次に、カラムを、結合タンパク質を非特異的に溶離する二次洗浄バッファー（50mMリン酸塩；300mMのＮａＣｌ、10%グリセロール、pH6.0）で洗浄した。Ａ２８０のベースラインに再度到達した後、カラムを二次洗浄バッファー中で0から500mMイミダゾール勾配で展開した。1mLの分画を回収し、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ及び銀染色又はアルカリホスファターゼ（Qiagen）に複合したＮｉ２＋−ＮＴＡでのウェスタンブロットで分析した。溶離したＨｉｓ１０−タグＩＬ-１ｌｐを含む画分をプールして負荷バッファーで透析した。
あるいは、ＩｇＧタグ（又はＦｃタグ）ＩＬ-１ｌｐの精製は、例えば、プロテインＡ又はプロテインＧカラムクロマトグラフィーを含む公知のクロマトグラフィー技術を用いて実施できる。
【０１３６】
実施例９：ｈＩＬ-１Ｒａ１のＩＬ-１８レセプター及びＩＬ-１レセプター結合
ｈＩＬ-１Ｒａ１の特徴付けを容易にするために、クローンＤＮＡ８５０６６（図１；配列番号３）の不完全ＯＲＦを含むＰＣＲ断片が、ベクターによってコードされるＮＨ２-末端プレプロトリプシン及びＦＬＡＧタグとのフレーム内融合としてｐＣＭＶ１ＦＬＡＧ（IBI Kodak, Pan等,Science, 276: 111-113に記載）中に複製された。組換えｐＣＭＶ１ＦＬＡＧベクタークローン完全ｃＤＮＡ挿入断片（クローンＤＮＡ９６７８６と命名された）が配列決定された（図２；配列番号：４）。ｈＩＬ１Ｒ及びｈＩＬ１８Ｒ（以前はｈＩＬ１Ｒｒｐとして知られていた）の細胞外ドメインをコードするｃＤＮＡがポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によって取得され、ヒト免疫グロブリンＧのＦｃ部位を用いたフレーム内融合が許容される変異ｐＣＭＶ１ＦＬＡＧベクター中に複製された。
ヒト胎児腎臓２９３細胞が高グルコースＤＭＥＭ（ジェネンテック社）中に生育された。細胞はプレート（１００ｍｍ）当たり３−４Ｘ１０６で蒔かれ、リン酸カルシウム沈殿の手段によってｐＣＭＶ１ＦＬＡＧ-ｈＩＬ-１Ｒａ１及びｐＣＭＶ１ＦＬＡＧ-ＩＬ１Ｒ-ＥＣＤ-Ｆｃ又はｐＣＭＶ１ＦＬＡＧ-ＩＬ１８Ｒ-ＥＣＤ-Ｆｃを用いて共トランスフェクションされた。培地はトランスフェクション後１２時間で取り替えられた。結果として生じた条件培地（それぞれ１０ｍｌ）はさらに７０−７４時間のインキュベーションの後回収され、遠心分離によって不純物除去され、分量され、−７０℃で保存された。１．５ｍｌの条件培地からのレセプター-Ｆｃ及びリガンド混合物がタンパク質Ｇ-セファロースで免疫沈降され、５０ｍＭ Hepes、ｐＨ７．０、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、１ｍＭ ＥＤＴＡ、１％ＮＰ-４０、及びプロテアーゼ阻害物質カクテル（ＢＭＢ）を含む緩衝液で３回洗浄され、１０−２０％ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル上で分離された。結合したリガンドは抗-ＦＬＡＧモノクローナル抗体（ＢＭＢ）を用いた免疫ブロット法によって同定された。
図１３Ａに示されるように、分泌ＦＬＡＧｈＩＬ-１Ｒａ１融合タンパク質はＩＬ-１８Ｒと結合し、ＩＬ-１Ｒ ＥＣＤとは結合しなかった。そしてそれはＩＬ-１８Ｒのアゴニスト又はアンタゴニストであり得るということを示唆される。
【０１３７】
実施例１０：ｍＩＬ-１Ｒａ３及びｈＩＬ-１Ｒａ３のＩＬ-１レセプター及びＩＬ-１８レセプター結合
ｍＩＬ-１Ｒａ３をコードするｃＤＮＡ（図９；配列番号１５に示されるＤＮＡ９２５０５）を、カルボキシ末端ＦＬＡＧタグを有するｐＲＫ７中にクローニングした。得られた発現構築物を、リン酸カルシウム沈殿法によってヒト胎児腎臓２９３細胞中にトランスフェクションした。トランスフェクション後８４−９０時間で、分泌されたＦＬＡＧｍＩＬ-１Ｒａ３融合タンパク質を含む条件培地を回収した。分泌されたＩＬ-１８Ｒ-Ｆｃ及びＩＬ-１Ｒ-Ｆｃタンパク質を含有する条件培地は、２９３細胞をｐＣＭＶ１ＦＬＡＧ-ＩＬ１Ｒ-ＥＣＤ-ＦｃかｐＣＭＶ１ＦＬＡＧ-ＩＬ１８Ｒ-ＥＣＤ-Ｆｃの何れか（ｐＣＭＶ１ＦＬＡＧ-ＩＬ-１Ｒａ１の同時トランスフェクションなし）を用いてトランスフェクションされた点以外は上記の実施例９に記載されているようにして調製した。
インビトロ結合アッセイでは、０．５ｍｌの条件培地由来のＩＬ-１Ｒ-Ｆｃ又はＩＬ-１８Ｒ-ＦｃをプロテインＧ-アガロースに固定し、次いで１．２ｍｌのＦＲＡＧｍＩＬ-１Ｒａ３含有条件培地と混合した。レセプター-リガンド複合体を１０−２０％のＳＤＳ-ＰＡＧＥゲルで洗浄し、分離し、結合リガンドを、抗ＦＬＡＧモノクローナル抗体（Boehringer Mannheim）を用いた免疫ブロット法を用いて検出した。
図１４に示されるように、ＦＬＡＧｍＩＬ-１Ｒａ３融合タンパク質はＩＬ-１Ｒ ＥＣＤに結合したが、ＩＬ-１８Ｒ ＥＣＤには結合しなかった。ｍＩＬ-１Ｒａ３のアミノ酸配列が既知のインターロイキン-１レセプターアンタゴニストタンパク質（ＩＬ-１Ｒａ）のアミノ酸配列に関連しているので、ｍＩＬ-３Ｒａ３は新規なＩＬ-１レセプターアンタゴニストであると考えられる。
【０１３８】
ｈＩＬ-１Ｒａ３をコードするｃＤＮＡ（図７；配列番号１２に示されるＤＮＡ９６７８７）を、カルボキシ末端ＦＬＡＧタグを有するｐＲＫ７中にクローニングしてｐＲＫ７ｈＩＬ-１Ｒａ３-ＦＬＡＧを生成した。ｐＣＭＶ１ＦＬＡＧ-ＩＬ１Ｒ-ＥＣＤ-ＦｃとｐＣＭＶ１ＦＬＡＧ-ＩＬ１８Ｒ-ＥＣＤ-Ｆｃは上記の実施例９に記載されているようにして取得した。同様に、ＤＲ６をコードするｃＤＮＡを実施例９の改変されたｐＣＭＶ１ＦＬＡＧベクター中にクローニングし、ヒト免疫グロブリンＧのＦｃ部分に融合したＤＲ６をコードするｐｃＭＶ１ＦＬＡＧ-ＤＲ６-Ｆｃを生成した。（１）分泌されたＦＬＡＧｈＩＬ-１Ｒａ３とＦＬＡＧ-ＤＲ６-Ｆｃの組み合わせ、（２）分泌されたＦＬＡＧｈＩＬ-１Ｒａ３とＦＬＡＧ-ＩＬ１Ｒ-ＥＣＤ-Ｆｃの組み合わせ又は（３）分泌されたＦＬＡＧｈＩＬ-１Ｒａ３とＦＬＡＧ-ＩＬ１８Ｒ-ＥＣＤ-Ｆｃの組み合わせを含む条件培地を、本質的に上記の実施例９に記載されているようにして、（１）ｐＲＫ７ｈＩＬ-１Ｒａ３-ＦＬＡＧ及びｐＣＭＶ１ＦＬＡＧ-ＤＲ６-Ｆｃ、（２）ｐＲＫ７ｈＩＬ-１Ｒａ３-ＦＬＡＧ及びｐＣＭＶ１ＦＬＡＧ-ＩＬ１Ｒ-ＥＣＤ-Ｆｃ又はｐＲＫ７ｈＩＬ-１Ｒａ３-ＦＬＡＧ及びｐＣＭＶ１ＦＬＡＧ-ＩＬ１８Ｒ-ＥＣＤ-Ｆｃでヒト２９３細胞を同時トランスフェクションし、トランスフェクションした細胞を培養し、培地を収集することにより、調製した。各条件培地からのレセプター-Ｆｃとリガンドの複合体を、本質的に上記の実施例９に記載されているようにして、プロテインＧ-セファロース又は抗ＦＬＡＧモノクローナル抗体で免疫沈降させ、免疫沈降物をゲル電気泳動法と抗ＦＬＡＧモノクローナル抗体での免疫ブロット法により分離した。
図１３Ｂに示されるように、ＦＬＡＧｈＩＬ-１Ｒａ３融合タンパク質はＩＬ-１Ｒ ＥＣＤ-Ｆｃに結合したが、ＩＬ-１８Ｒ-ＥＣＤ-Ｆｃ又はＤＲ６-Ｆｃには結合しなかった。ｈＩＬ-１Ｒａ３のアミノ酸配列が既知のインターロイキン-１レセプターアンタゴニストタンパク質（ＩＬ-１Ｒａ）のアミノ酸配列に関連しているので、ｈＩＬ-３Ｒａ３は新規なＩＬ-１レセプターアンタゴニストであると考えられる。
【０１３９】
実施例１１：ＩＬ-１ｌｐに結合する抗体の調製
この実施例は、ＩＬ-１ｌｐに特異的に結合できるモノクローナル抗体の調製を例示する。
モノクローナル抗体の産生のための技術は当該分野で知られており、例えば、上掲のGodingに記載されている。用いられ得る免疫原には、精製ＩＬ-１ｌｐ、ＩＬ-１ｌｐを含む融合タンパク質、細胞表面に組換えＩＬ-１ｌｐを発現する細胞が含まれれる。免疫原の選択は、当業者が過度の実験をすることなく、選択することができる。
Ｂａｌｂ／ｃ等のマウスを、完全フロイントアジュバントに乳化して皮下又は腹腔内に１−１００マイクログラムの量で注入したＩＬ-１ｌｐ免疫原で免疫化する。あるいは、免疫原をＭＰＬ−ＴＤＭアジュバント（Ribi Immunochemical Researh, Hamilton, MT）に乳化し、動物の後足蹠に注入する。免疫化したマウスを、次いで１０から１２日後に、選択したアジュバント中に乳化した付加的な免疫源で追加免疫する。その後、数週間の間に、マウスを更なる免疫化注射で追加免疫する。ＥＬＩＳＡアッセイで試験して抗ＩＬ-１ｌｐ抗体を検出するために、後眼窩(retro-orbital)出血により血清試料をマウスから周期的に採取してもよい。
適当な抗体力価が検出された後、抗体に「ポジティブ（陽性）」な動物に、ＩＬ-１ｌｐの最後の静脈内注射の注入をすることができる。３から４日後、マウスを屠殺し、脾臓細胞を取り出す。次いで脾臓細胞を（３５％ポリエチレングリコールを用いて）、ＡＴＣＣから番号ＣＲＬ１５９７で入手可能なＰ３Ｘ６３ＡｇＵ．１等の選択されたマウス骨髄腫株化細胞に融合させる。融合によりハイブリドーマ細胞が生成され、次いで、ＨＡＴ（ヒポキサンチン、アミノプテリン、及びチミジン）培地を含む９６ウェル組織培養プレートに蒔き、非融合細胞、骨髄腫ハイブリッド、及び脾臓細胞ハイブリッドの増殖を阻害する。
ハイブリドーマ細胞は、ＩＬ-１ｌｐに対する反応性についてＥＬＩＳＡでスクリーニングされる。ＩＬ-１ｌｐに対する所望のモノクローナル抗体を分泌する「ポジティブ（陽性）」ハイブリドーマ細胞の決定は、当業者の技量の範囲内である。
陽性ハイブリドーマ細胞を同系のＢａｌｂ／ｃマウスに腹腔内注入し、抗ＩＬ-１ｌｐモノクローナル抗体を含む腹水を生成させる。あるいは、ハイブリドーマ細胞を、組織培養フラスコ又はローラーボトル中で成長させることもできる。腹水中に生成されたモノクローナル抗体の精製は、硫酸アンモニウム沈降、それに続くゲル排除クロマトグラフィ−を用いて行うことができる。あるいは、抗体のプロテインＡ又はプロテインＧへの結合性に基づくアフィニティクロマトグラフィーを用いることもできる。
【０１４０】
実施例１２
ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌ、ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖ及びｈＩＬ-１Ｒａ１ＳをコードするＤＮＡの単離
ｈＩＬ-１Ｒａ１イントロン含有クローンＤＮＡ８５０６６（図２）（配列番号：４）に関連した幾つかのイントロン含有ｃＤＮＡクローンをヒト精巣ｃＤＮＡライブラリーから単離し、完全に配列決定した。イントロン含有ｃＤＮＡ配列をＧＥＮＥＳＣＡＮプログラム（http：//CCR-081.mitedu/GENESCAN.html）を用いて全長オープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を決定するために用いた。ＯＲＦ-コード配列を用いて二種のＤＮＡプライマー、ggc gga tcc aaa atg ggc tct gag gac tgg g（配列番号：２９）（１Ｒａ１０１６）及びgcg gaa ttc taa tcg ctg acc tca ctg ggg（配列番号：３０）（１Ｒａ１０１７）を設計した。１Ｒａ１０１６及び１Ｒａ１０１７プライマーを合成し、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）を使用してヒト胎児皮膚及びＳＫ-ｌｕ-１細胞ｃＤＮＡライブラリーからｃＤＮＡをクローニングするために使用した。幾つかのＰＣＲ産物を単離し配列決定した。ＰＣＲ産物から二つの全長ｃＤＮＡクローン（ＤＮＡ１０２０４３及びＤＮＡ１０２０４４と命名）がｈＩＬ-１Ｒａ１イソ型をコードしていることが分かった。
クローンＤＮＡ１０２０４３の全ヌクレオチド配列は図１５（配列番号：１８）に示される。クローンＤＮＡ１０２０４３は、ヌクレオチド位置４−６に見かけの翻訳開始部位を、ヌクレオチド位置６２５−６２７に停止コドンを持つ単一のオープンリーディングフレームを含む（図１５；配列番号：１８）。予想されるポリペプチド前駆体（ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌと命名）（図１５；配列番号：１９）は２０７アミノ酸長である。推定シグナル配列はアミノ酸位置１−３４にわたる。
クローンＤＮＡ１０２０４３（ＤＮＡ１０２０４３−２５３４と命名）はＡＴＣＣに寄託され、ＡＴＣＣ寄託番号２０３８４６が付与された。図１５（配列番号：１９）に示された全長ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌタンパク質は約２３０００ダルトンの推定分子量と約６．０８のｐＩを有している。
【０１４１】
全長配列（配列番号：１９）の配列アラインメント分析に基づき、ｈＩＬ-１Ｒａ１ＬはｈＩＬ-１Ｒａβ及びＴＡＮＧＯ-７７タンパク質と有意なアミノ酸配列同一性を示す。また、クローンＤＮＡ１０２０４３（図１５）（配列番号：１８）のＤＮＡ配列の一部はＥＳＴ ＡＩ０１４５４８のＤＮＡ配列（図４）（配列番号：８）及びＥＳＴ ＡＩ３４３２５８のＤＮＡ配列の相補配列（図１７）（配列番号：２３）と一致することが見出された。
クローンＤＮＡ１０２０４４の全ヌクレオチド配列は図１６（配列番号：２０）に示される。クローンＤＮＡ１０２０４４は、ヌクレオチド位置４−６に見かけの翻訳開始部位を、ヌクレオチド位置５０５−５０７に停止コドンを持つ単一のオープンリーディングフレームを含む（図１６；配列番号：２０）。予想されるポリペプチド前駆体（ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｓと命名）（図１６；配列番号：２１）は１６７アミノ酸長であり、ある種の動物細胞においては成熟配列（翻訳後プロセシングにおいて除かれるシグナル配列を持たないもの）として挙動すると考えられている。また、他の動物細胞は、アミノ酸位置１から約４６にわたる配列に含まれる一又は複数のシグナルペプチドを認識し翻訳後プロセシングにおいて除去すると考えられている。
クローンＤＮＡ１０２０４４（ＤＮＡ１０２０４４−２５３４と命名）はＡＴＣＣに寄託され、ＡＴＣＣ寄託番号２０３８５５が付与された。図１６（配列番号：２１）に示された全長ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｓタンパク質は約１８４７８ダルトンの推定分子量と約５．５のｐＩを有している。
全長配列（配列番号：２１）の配列アラインメント分析に基づき、ｈＩＬ-１Ｒａ１ＳはＴＡＮＧＯ-７７タンパク質の対立遺伝子変異体であると思われ、またｈＩＬ-１Ｒａβと有意なアミノ酸配列同一性を示す。また、クローンＤＮＡ１０２０４４（図１６）（配列番号：２０）のＤＮＡ配列の一部はＥＳＴ ＡＩ０１４５４８のＤＮＡ配列（図４）（配列番号：８）及びＥＳＴ ＡＩ３２３２５８のＤＮＡ配列の相補配列（図１７）（配列番号：２３）と一致することが見出された。
【０１４２】
ＥＳＴクローンＡＩ３２３２５８をResearch Genetics (Huntsville, AL)から購入し、ｃＤＮＡ挿入断片を取得し、その全体を配列決定した。ＤＮＡ１１４８７６と命名されたクローンＡＩ３４３２５８の全配列は図１９（配列番号：２４）に示される。クローンＤＮＡ１１４８７６は、ヌクレオチド位置７３−７５に見かけの翻訳開始部位を、ヌクレオチド位置７２６−７２８に停止コドンを持つ単一のオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を含み（図１９；配列番号：２４）、２１８アミノ酸長である予想ポリペプチド前駆体（ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖ）（図１９；配列番号：２５）をコードしている。また、ＯＲＦはヌクレオチド位置１０６−１０８に代わりの翻訳開始部位を含む。代わりの開始コドンで開始される翻訳に対する予想ポリペプチド（またｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖと命名）は（２１８アミノ酸ポリペプチドのＮ末端の最初の１１の残基を欠く）２０７アミノ酸長である。予想される２１８アミノ酸及び２０７アミノ酸ポリペプチドは、ある種の動物細胞においては成熟配列（翻訳後プロセシングにおいて除かれるシグナル配列を持たないもの）として挙動すると考えられている。また、他の動物細胞は、図１９（配列番号：２５）のアミノ酸配列のアミノ酸位置１から約４８にわたるか（２１８アミノ酸ポリペプチドの推定リーダー配列）、あるいはアミノ酸位置１２から３６にわたる（２０７アミノ酸ポリペプチドの推定リーダー配列）一又は複数のシグナルペプチドを認識し除去すると考えられている。以下の実施例１４に示されているように、一過性にトランスフェクトされたＣＨＯ宿主細胞はｈＩＬ-１Ｒａ１ＶとＩＬ-１Ｒａ１Ｌの非プロセシング型と、図１９（配列番号：２５）のアミノ酸位置１から４５にわたるシグナルペプチドの除去もしくは図１５（配列番号：１９）のアミノ酸位置１から３４にわたるシグナルペプチドの除去から得られる一回プロセシングされた型を分泌する。一過性にトランスフェクトされたＣＨＯ宿主細胞により分泌されるｈＩＬ-１Ｒａ１ＶとｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌのプロセシング型は図１５（配列番号：１９）のアミノ酸残基３５から２０７のアミノ酸配列と図１９（配列番号：２５）のアミノ酸残基４６から２１８のアミノ酸配列を有する。
クローンＤＮＡ１１４８７６（ＤＮＡ１１４８７６−２５３４と命名）はＡＴＣＣに寄託され、ＡＴＣＣ寄託番号２０３９７３が付与された。図１９（配列番号：２５）に示された全長ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖタンパク質は約２４１２４の推定分子量と約６．１のｐＩを有している。
全長配列（配列番号：２５）の配列アラインメント分析に基づき、ｈＩＬ-１Ｒａ１ＶはｈＩＬ-１Ｒａβと有意なアミノ酸配列同一性を示す。ｈＩＬ-１Ｒａ１ＶはｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌの対立遺伝子変異体であると考えられる。
【０１４３】
実施例１３
ｈＩＬ-１Ｒａ１ＳのＩＬ-１８レセプター及びＩＬ-１レセプター結合
ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｓの特徴付けを容易にするために、クローンＤＮＡ１０２０４４（図１６；配列番号：２１）のＯＲＦのアミノ酸残基３９−１６７をコードするＰＣＲ断片を、ベクターによりコードされるＮＨ２-末端プレプロトリプシンリーダー配列及びＦＬＡＧタグとのインフレーム融合体としてｐＣＭＶ１ＦＬＡＧ（Pan等, Science, 276: 111-113に記載のIBI Kodak）中にクローニングしてプラスミドｐＣＭＶ１ＦＬＡＧ-ＩＬ-１Ｒａ１Ｓを生成した。プラスミドｐＣＭＶ１ＦＬＡＧ-ＩＬ１８Ｒ-ＥＣＤ-Ｆｃを上記の実施例９に記載されているようにして取得した。
ヒト胎児腎臓２９３細胞を高グルコースＤＭＥＭ（ジェネンテク社）中で増殖させた。細胞をプレート（１００ｍｍ）当たり３−４ｘ１０６で蒔き、リン酸カルシウム沈降法によってｐＣＭＶ１ＦＬＡＧ-ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｓ及びｐＣＭＶ１ＦＬＡＧ-ＩＬ１８Ｒ-ＥＣＤ-Ｆｃで同時トランスフェクトした。トランスフェクション後１２時間で培地を変えた。得られた培地（それぞれ１０ｍｌ）を更に７０−７４時間のインキュベーション後に回収し、遠心分離によって清涼化し、等分し、−７０℃で保存した。１．５ｍｌの条件培地からのレセプター-Ｆｃとリガンドの複合体をプロテインＧ-セファロースで免疫沈降させ、５０ｍＭのＨｅｐｅｓ、ｐＨ７．０と１５０ｍＭのＮａＣｌと１ｍＭのＥＤＴＡと１％のＮＰ-４０とプロテアーゼインヒビターカクテル（ＢＭＢ）を含むバッファーで３回洗浄し、１０−２０％のＳＤＳ-ＰＡＧＥゲルで分離した。結合したリガンドを抗ＦＬＡＧモノクローナル抗体（ＲＭＢ）を使用して免疫ブロット法により同定した。
免疫ブロットの結果は、分泌されたＦＬＡＧｈＩＬ-１Ｒａ１Ｓ融合タンパク質がＩＬ-１８Ｒ ＥＣＤに結合したことを示している。これらのデータは、ｈＩＬ-１Ｒａ１ＳがＩＬ-１８Ｒのアゴニスト又はアンタゴニストでありうることを示している。
【０１４４】
実施例１４
ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖ、ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌ及びｈＩＬ-１Ｒａ３プロセシング
全長ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖ（図１９（配列番号：２５）に示したクローンＤＮＡ１１４８７６のＯＲＦのアミノ酸１−２１８）、全長ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌ（図１５（配列番号：１９）に示したクローンＤＮＡ１０２０４３のＯＲＦのアミノ酸１−２０７）、及び全長ｈＩＬ-１Ｒａ３（図７（配列番号：１３）に示したクローンＤＮＡ９６７８７のＯＲＦのアミノ酸１−１５５）をコードするｃＤＮＡをそれぞれカルボキシ末端ＦＬＡＧ-タグ配列と共にインフレーム融合体としてｐＲＫ７発現ベクター中にクローニングした。哺乳類細胞の一過性トランスフェクションのための調製において、ＣＨＯ ＤＰ１２細胞をトランスフェクションの前日に成長培地（ＰＳ２０、５％ＦＢＳ、１ｘ ＧＨＴ、１Ｘpen／strep、１XのＬ-グルタミン）中にプレート（１００ｍｍペトリ皿）当たり４ｘ１０６細胞で蒔いた。トランスフェクションの日に細胞をＰＢＳで洗浄し、１０ｍｌの無血清トランスフェクション培地（ＰＳ２０、１Ｘ ＧＨＴ）に供給した。ＤＮＡ-脂質トランスフェクション混合物を、エッペンドルフ型チューブ中に（１）４００μｌのトランスフェクション培地（ＰＳ２０，１Ｘ ＧＨＴ）；（２）１２μｇのＤＮＡ；（３）１０μｇのポリ-リシン；及び（４）５０μｌのドスパーリポソームトランスフェクション試薬（Boehringer Mannheim）を徐々に加えることによって調製した。ＤＮＡ-脂質混合物を室温で１５分間インキュベートし、細胞培養皿に滴下して加えた。細胞を３７℃で一晩インキュベートした。トランスフェクション後の日に、細胞をＰＢＳで洗浄し、１０ｍｌの無血清生産培地（ＰＳ２４、１０ｍｇ／Ｌインスリン、１Ｘ微量元素、１．４ｍｇ／Ｌ脂質ＥｔＯＨ）を供給し、３２℃のインキュベーターに配した。５日後に、発現したタンパク質を含む培地を回収し、遠心分離により清澄化した。各発現タンパク質のペプチド配列の決定のために、発現タンパク質を含む５−１０ｍｌの条件培地を、アガロースビードと結合されたモノクローナル抗ＦＬＡＧ抗体（Boehringer Mannheim）と共にインキュベートした。免疫沈降したＦＬＡＧタグタンパク質を１％のＮＰ-４０バッファー（１２５ｍＭのＮａＣｌ、１ｍＭのＥＤＴＡ及び５０ｍＭのトリス-ＨＣｌ、ｐＨ７．４）で十分に洗浄した。免疫沈殿物をＳＤＳポリアクリルアミドゲルにかけ、ゲル上に分離したポリペプチドをＰＶＤＦ膜に移し、ＰＶＤＦ膜をクーマシーブルーで染色し、対応するタンパク質バンドを膜から切り取った。アミノ末端タンパク質配列を常法により取得した。
【０１４５】
ｈＩＬ-１ＲａＩＬ及びｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖポリペプチドの双方のプロセシングを受けたＮ末端配列はVHTSPKVKN（配列番号：３１）であると決定された。条件培地から回収されたｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌ及びｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖ材料のおよそ５０％がプロセシングを受けたＮ末端配列を示しており、ＣＨＯ宿主細胞が図１５（配列番号：１９）のアミノ酸配列のアミノ酸残基３５から２０７と図１９（配列番号：２５）のアミノ酸配列のアミノ酸残基４６から２１８に対応するプロセシング型を分泌したことを示している。条件培地から回収されたＩＬ-１Ｒａ１Ｌ及びｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖ材料の残りの５０％はプロセシングを受けていないＮ末端を示し、ＣＨＯ宿主細胞がまた図１５（配列番号：１９）のアミノ酸配列のアミノ酸残基１から２０７と図１９（配列番号：２５）のアミノ酸配列のアミノ酸残基１から２１８にそれぞれ対応するｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌ及びｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖ材料の未プロセシング型を分泌したことを示している。
ｈＩＬ-１Ｒａ３及びｍＩＬ-１Ｒａ３ポリペプチドの両方のプロセシングを受けたＮ末端配列はVLSGALCFRM（配列番号：３２）であると決定された。条件培地から回収されたｈＩＬ-１Ｒａ３及びｍＩＬ-１Ｒａ３材料のおよそ１００％がプロセシングを受けたＮ末端配列を示しており、ＣＨＯ宿主細胞が、Ｎ末端メチオニンを欠き、図７（配列番号：１３）のアミノ酸配列のアミノ酸残基２から１５５と図９（配列番号：１６）のアミノ酸配列のアミノ酸残基２から１５５に対応するプロセシングを受けたＮ末端配列を示した。
【０１４６】
材料の寄託
次の材料をアメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション, 10801 ユニバーシティ  ブルバード，マナッサス，ヴァージニア20110-2209，米国(ATCC)に寄託した：
材料                     ATCC寄託番号     寄託日
pSPORT1系プラスミド         203586          1999年1月12日
DNA92929-2534
pCMV-1Flag-pcmv5プラスミド  203587          1999年1月12日
DNA96786-2534
pT7T3D-Pacプラスミド         203588          1999年1月12日
DNA85066-2534
pINCY系プラスミド            203589          1999年1月12日
DNA96787-2534
pT7T3D-Pacプラスミド         203590          1999年1月12日
DNA92505-2534
pRK7系プラスミド             203846          1999年3月16日
DNA102043-2534
pRK7系プラスミド             203855          1999年3月16日
DNA102044-2534
pRK7系プラスミド             203973          1999年4月27日
DNA114876-2534
【０１４７】
これらの寄託は、特許手続き上の微生物の寄託の国際的承認に関するブダペスト条約及びその規則(ブダペスト条約)の規定に従って行われた。これは、寄託の日付から３０年間、寄託の生存可能な培養が維持されることを保証するものである。寄託物はブダペスト条約の条項に従い、またジェネンテク社とＡＴＣＣとの間の合意に従い、ＡＴＣＣから入手することができ、これは、どれが最初であろうとも、関連した米国特許の発行時又は任意の米国又は外国特許出願の公開時に、寄託培養物の後代を永久かつ非制限的に入手可能とすることを保証し、米国特許法第１２２条及びそれに従う特許庁長官規則(特に参照番号８８６ＯＧ６３８の３７ＣＦＲ第１．１４条を含む)に従って権利を有すると米国特許庁長官が決定した者に子孫を入手可能とすることを保証するものである。
本出願の譲受人は、寄託した培養物が、適切な条件下で培養されていた場合に死亡もしくは損失又は破壊されたならば、材料は通知時に同一の他のものと即座に取り替えることに同意する。寄託物質の入手可能性は、特許法に従いあらゆる政府の権限下で認められた権利に違反して、本発明を実施するライセンスであるとみなされるものではない。
上記の文書による明細書は、当業者に本発明を実施できるようにするために十分であると考えられる。寄託した態様は、本発明のある側面の一つの説明として意図されており、機能的に等価なあらゆる作成物がこの発明の範囲内にあるため、寄託された作成物により、本発明の範囲が限定されるものではない。ここでの物質の寄託は、ここに含まれる文書による説明が、そのベストモードを含む、本発明の任意の側面の実施を可能にするために不十分であることを認めるものではないし、それが表す特定の例証に対して請求の範囲を制限するものと解釈されるものでもない。実際、ここに示し記載したものに加えて、本発明を様々に改変することは、前記の記載から当業者にとっては明らかなものであり、添付の請求の範囲内に入るものである。
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【図面の簡単な説明】
【図１Ａ】  天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ１に関連したヌクレオチド配列（配列番号：１）と誘導したアミノ酸配列（配列番号：２−３）を示す。ヌクレオチド配列（配列番号：１）はヌクレオチド位置１８１から４３２にわたると考えられるイントロンを含み、ヌクレオチド位置１８１から１８６にスプライス供与部位を持ち、ヌクレオチド位置４３０から４３２にスプライス受容部位を持つ。アミノ酸配列（配列番号：２及び３）は、プロセシングを受けた（イントロンのない）コード配列を構成すると考えられるエキソン配列から導かれる。
【図１Ｂ】  図１Ａの続きの図である。
【図２】  Ｎ末端が異種シグナルペプチド（アミノ酸位置１−１５）、フラッグペプチドアフィニティハンドル（アミノ酸位置１６−２３）及びペプチドリンカー（アミノ酸位置２４−３６）に融合した天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ１ポリペプチドのヌクレオチド配列（配列番号：４）と誘導したアミノ酸配列（配列番号：５）を示す。
【図３】  天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ１ポリペプチドのヌクレオチド配列（配列番号：６）と誘導したアミノ酸配列（配列番号：７）を示す。ヌクレオチド配列（配列番号：６）及び誘導したアミノ酸配列（配列番号：７）は、それぞれ図１のヌクレオチド配列（配列番号：１）とアミノ酸配列（配列番号：２−３）のプロセシングを受けた（イントロンのない）型及び無傷のｈＩＬ-１Ｒａ１ポリペプチドを表すと考えられる。コード配列の開始及び停止コドンはそれぞれヌクレオチド位置１０３−１０５及び６８２−６８４に位置している。推定上のシグナル配列はアミノ酸位置１から１４にわたる。推定上のｃＡＭＰ及びｃＧＭＰ依存性プロテインキナーゼリン酸化部位はアミノ酸位置３３−３６に位置している。推定上のＮ−ミリストイル化部位はアミノ酸位置５０−５５及び８７−９２に位置している。
【図４】  ＥＳＴ ＡＩ０１４５４８に対応するヌクレオチド１４５−６２９のヌクレオチド配列（配列番号：８）を示す。
【図５Ａ】  天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ２ポリペプチドのヌクレオチド配列（配列番号：９）と誘導したアミノ酸配列（配列番号：１０）を示す。コード配列の開始及び停止コドンはそれぞれヌクレオチド位置９６−９８及び４９８−５００に位置している。推定上のシグナル配列はアミノ酸位置１−２６にわたる。
【図５Ｂ】  図５Ａの続きの図である。
【図６】  ＥＳＴ１４３３１５６のヌクレオチド配列（配列番号：１１）を示す。
【図７】  天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ３ポリペプチドのヌクレオチド配列（配列番号：１２）と誘導したアミノ酸配列（配列番号：１３）を示す。コード配列の開始及び停止コドンはそれぞれヌクレオチド位置１−３及び４６６−４６８に位置している。推定上のシグナル配列はアミノ酸位置１−３３にわたる。推定上のＮ−ミリストイル化部位はアミノ酸位置２９−３４、３０−３５、６０−６５、６３−６８、７３−７８、９１−９６及び１０６−１１１に位置している。インターロイキン−１様配列はアミノ酸位置１１１−１３１に位置している。
【図８】  ＥＳＴ５１２００２８のヌクレオチド配列（配列番号：１４）を示す。
【図９Ａ】  天然配列ｍＩＬ-１Ｒａ３ポリペプチドのヌクレオチド配列（配列番号：１５）と誘導したアミノ酸配列（配列番号：１６）を示す。コード配列の開始及び停止コドンはそれぞれヌクレオチド位置１４５−１４７及び６１０−６１２に位置している。推定上のシグナル配列はアミノ酸位置１−３３にわたる。推定上のＮ−ミリストイル化部位はアミノ酸位置２９−３４、６０−６５、６３−６８、９１−９６及び１０６−１１１に位置している。インターロイキン−１様配列はアミノ酸位置１１１−１３１に位置している。
【図９Ｂ】  図９Ａの続きの図である。
【図１０】  ＥＳＴ Ｗ０８２０５のヌクレオチド配列（配列番号：１７）を示す。
【図１１】  胎盤組織中でのｈＩＬ-１Ｒａ３ｍＲＮＡの発現と１７日齢のマウス胚組織中でのｍＩＬ-１Ｒａ３の発現を示すノーザンブロットのオートラジオグラフである。
【図１２】  天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌ（配列番号：１９）、ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖ（配列番号：２５）、ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｓ（配列番号：２１）、天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ２（配列番号：１０）、ｈＩＬ-１Ｒａ３（配列番号：１３）及びｍＩＬ-１Ｒａ３（配列番号：１６）ポリペプチドの、分泌性ｈＩＬ-１Ｒａ（「ｓＩＬ-１Ｒａ」及び「ｈＩＬ-１Ｒａ」とも称される）（配列番号：２６）、ｈＩＬ-１Ｒａβ（配列番号：２７）及びＴＡＮＧＯ−７７（配列番号：２８）とのアミノ酸配列アラインメントである。
【図１３Ａ】  ｈＩＬ-１Ｒａ１のインターロイキン−１８レセプター（ＩＬ-１８Ｒ）結合活性を示すウェスタンブロットである。（およそ２２ｋＤのタンパク質バンドを示す）上部パネルでは、ＦＬＡＧｈＩＬ-１Ｒａ１及びＦＬＡＧＩＬ-１Ｒ−ＥＣＤ−Ｆｃを含む条件培地（左側レーンに示す）とＦＬＡＧｈＩＬ-１Ｒａ１及びＦＬＡＧＩＬ-１８Ｒ−ＥＣＤ−Ｆｃを含む条件培地（右側レーンに示す）がそれぞれプロテインＧ−セファロースで免疫沈降され、得られた沈殿物がゲル電気泳動法及び抗ＦＬＡＧモノクローナル抗体でのウェスタンブロット法により分離された。（およそ２２ｋＤと８５ｋＤのタンパク質バンドを示す）中央及び底部パネルでは、上部パネルで使用されたＦＬＡＧｈＩＬ-１Ｒａ１及びＦＬＡＧＩＬ-１Ｒ−ＥＣＤ−Ｆｃ条件培地からの第２のアリコート（左側レーンに示す）と上部パネルで使用されたＦＬＡＧｈＩＬ-１Ｒａ１及びＦＬＡＧＩＬ-１８Ｒ−ＥＣＤ−Ｆｃ条件培地からの第２のアリコート（右側レーンに示す）がそれぞれ抗ＦＬＡＧモノクローナル抗体で免疫沈降され、得られた沈殿物がゲル電気泳動法及び抗ＦＬＡＧモノクローナル抗体でのウェスタンブロット法により分離された。
【図１３Ｂ】  ｈＩＬ-１Ｒａ３のＩＬ-１Ｒ結合活性を示すウェスタンブロットである。（およそ２０ｋＤのタンパク質バンドを示す）上部パネルでは、ｈＩＬ-１Ｒａ３−ＦＬＡＧ及びＦＬＡＧＤＲ６−Ｆｃを含む条件培地（左側レーンに示す）、ｈＩＬ-１Ｒａ３−ＦＬＡＧ及びＦＬＡＧＩＬ-１Ｒ−ＥＣＤ−Ｆｃを含む条件培地（中央レーンに示す）、及びｈＩＬ-１Ｒａ３−ＦＬＡＧ及びＦＬＡＧＩＬ-１８Ｒ−ＥＣＤ−Ｆｃを含む条件培地（右側レーンに示す）がそれぞれプロテインＧ−セファロースで免疫沈降され、得られた沈殿物がゲル電気泳動法及び抗ＦＬＡＧモノクローナル抗体でのウェスタンブロット法により分離された。（およそ２０ｋＤと８５ｋＤのタンパク質バンドを示す）中央及び底部パネルでは、上部パネルで使用されたｈＩＬ-１Ｒａ３−ＦＬＡＧ及びＦＬＡＧＤＲ６−Ｆｃ条件培地からの第２のアリコート（左側レーンに示す）、上部パネルで使用されたｈＩＬ-１Ｒａ３−ＦＬＡＧ及びＦＬＡＧＩＬ-１Ｒ−ＥＣＤ−Ｆｃ条件培地からの第２のアリコート（中央レーンに示す）及び上部パネルで使用されたｈＩＬ-１Ｒａ３−ＦＬＡＧ及びＦＬＡＧＩＬ-１８Ｒ−ＥＣＤ−Ｆｃ条件培地からの第２のアリコート（右側レーンに示す）がそれぞれ抗ＦＬＡＧモノクローナル抗体で免疫沈降され、得られた沈殿物がゲル電気泳動法及び抗ＦＬＡＧモノクローナル抗体でのウェスタンブロット法により分離された。
【図１４】  ｍＩＬ-１Ｒａ３のインターロイキン−１レセプター（ＩＬ-１Ｒ）結合活性を示すウェスタンブロットである。（およそ２１ｋＤのタンパク質バンドを示す）上部パネルと（およそ８５ｋＤのタンパク質バンドを示す）底部パネルでは、条件培地中のＦＬＡＧＩＬ-１Ｒ−ＥＣＤ−Ｆｃ（左側レーンに示す）と条件培地中のＦＬＡＧＩＬ-１８Ｒ−ＥＣＤ−Ｆｃ（右側レーンに示す）がプロテインＧ−アガロースで固定され、得られた固相がＦＬＡＧｍＩＬ-１Ｒａ３を含む条件培地に接触させられ、得られた結合複合体がゲル電気泳動法及び抗ＦＬＡＧモノクローナル抗体でのウェスタンブロット法により分離された。
【図１５】  天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌポリペプチドのヌクレオチド配列（配列番号：１８）と誘導したアミノ酸配列（配列番号：１９）を示す。コード配列の開始及び停止コドンはそれぞれヌクレオチド位置４−６及び６２５−６２７に位置している。推定上のシグナル配列はアミノ酸位置１から３４にわたる。推定上のｃＡＭＰ及びｃＧＭＰ依存性プロテインキナーゼリン酸化部位はアミノ酸位置４７−５０に位置している。推定上のＮ−ミリストイル化部位はアミノ酸位置６４−６９及び１０１−１０６に位置している。
【図１６】  天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｓポリペプチドのヌクレオチド配列（配列番号：２０）と誘導したアミノ酸配列（配列番号：２１）を示す。コード配列の開始及び停止コドンはそれぞれヌクレオチド位置４−６及び５０５−５０７に位置している。推定上のシグナル配列はアミノ酸位置１から４６にわたる。推定上のＮ−ミリストイル化部位はアミノ酸位置６１−６６に位置している。
【図１７】  相補ヌクレオチド配列（配列番号：２２）（上方のストランド）に沿った、ＥＳＴ ＡＩ３４３２５８（下方のストランド）の一本鎖ヌクレオチド配列（配列番号：２３）を示す。
【図１８】  天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ１（配列番号：３）、ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌ（配列番号：１９）、ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖ（配列番号：２５）及びｈＩＬ-１Ｒａ１Ｓ（配列番号：２１）ポリペプチドのアミノ酸配列アラインメントである。
【図１９】  天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖポリペプチドのヌクレオチド配列（配列番号：２４）と誘導したアミノ酸配列（配列番号：２５）を示す。コード配列の開始及び停止コドンはそれぞれヌクレオチド位置７３−７５及び７２７−７２９に位置している。別の開始コドンはヌクレオチド位置１０６−１０８に位置している。推定上のシグナル配列はアミノ酸位置１から４８にわたる。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９Ａ】
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【図９Ｂ】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３Ａ】
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【図１３Ｂ】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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