(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
マラチオンを調製する方法であって、以下の工程、
(a)有機溶媒中で硫化リンをメタノールと反応させて、O,O-ジメチルジチオリン酸の溶液を調製する工程、
(b)O,O-ジメチルジチオリン酸を水に抽出してO,O-ジメチルジチオリン酸の水溶液を生成する工程、
(c)O,O-ジメチルジチオリン酸の水溶液をジエチルマレエートと反応させてマラチオンを形成する工程、及び
(d)工程(c)から得られたマラチオンを、７．０未満のpHを有する硫黄試薬で処理する工程、
を含むことを特徴とする方法。
【請求項２】
前記有機溶剤が、トルエン、キシレン及びベンゼンからなる群から選択される請求項１記載の方法。
【請求項３】
前記有機溶剤が、トルエンである請求項１記載の方法。
【請求項４】
前記工程(a)におけるO,O-ジメチルジチオリン酸が、以下の工程、
(i)五硫化リン(P2S5)をトルエンに添加して懸濁液を形成する工程、
(ii)前記懸濁液を６０℃に加熱する工程、
(iii)メタノールを前記懸濁液に添加する工程、
(iv)メタノールの添加後少なくとも１時間、懸濁液の温度を５５乃至６０℃に保持しながら懸濁液を撹拌する工程、
(v)工程(iv)から得られた懸濁液を１８乃至２５℃に冷却した後に濾過する工程、及び
(vi)工程(v)から得られた懸濁液を減圧蒸留する工程、
を含む工程により調製される請求項１記載の方法。
【請求項５】
硫黄試薬で処理した後に工程(d)から得られたマラチオンを単離する工程を更に含む請求項１記載の方法。
【請求項６】
工程(b)における水のO,O-ジメチルジチオリン酸に対する比が、１：１乃至１０：１(w/w)である請求項１記載の方法。
【請求項７】
前記水のO,O-ジメチルジチオリン酸に対する比が、３：１(w/w)である請求項１記載の方法。
【請求項８】
工程(a)におけるO,O-ジメチルジチオリン酸の溶液を、工程(b)において水に抽出する前に濾過する請求項１記載の方法。
【請求項９】
工程(a)におけるO,O-ジメチルジチオリン酸の溶液を、工程(b)において水に抽出する前に蒸留する請求項１記載の方法。
【請求項１０】
工程(c)におけるジエチルマレエートのO,O-ジメチルジチオリン酸に対するモル比が、１：１乃至２：１である請求項１記載の方法。
【請求項１１】
工程(c)におけるジエチルマレエートのO,O-ジメチルジチオリン酸に対するモル比が、１：１である請求項１０記載の方法。
【請求項１２】
O,O-ジメチルジチオリン酸の水溶液と、ジエチルマレエートの溶液との反応の間、工程(c)に重合防止剤を添加する請求項１記載の方法。
【請求項１３】
ジエチルマレエート対重合防止剤のモル比が、５０：１乃至５００：１である請求項１２記載の方法。
【請求項１４】
ジエチルマレエート対重合防止剤のモル比が、３００：１である請求項１３記載の方法。
【請求項１５】
前記重合防止剤が、ヒドロキノンである請求項１２記載の方法
【請求項１６】
以下の工程、
(e)前記マラチオンに水を添加し、混合物を形成する工程、
(f)前記混合物から水を蒸留する工程、
を更に含む請求項１記載の方法。
【請求項１７】
工程(e)における水対マラチオンの比が３：１(w/w)である請求項１６記載の方法。
【請求項１８】
前記ｐＨが６．０乃至７．０である請求項１記載の方法。
【請求項１９】
前記硫黄試薬が亜硫酸水素塩、亜硫酸塩及び硫化物からなる群から選択される請求項１記載の方法。
【請求項２０】
前記硫黄試薬が、アルカリ金属の亜硫酸水素塩及びアルカリ土類金属の亜硫酸水素塩からなる群から選択される請求項１記載の方法。
【請求項２１】
前記硫黄試薬が、亜硫酸水素ナトリウムである請求項２０記載の方法。
【請求項２２】
前記硫黄試薬が、６．１乃至６．３のpHを有する亜硫酸水素ナトリウムの２０％溶液を含む請求項２０記載の方法。
【請求項２３】
工程(d)におけるマラチオンを２時間亜硫酸水素ナトリウムの２０％溶液で処理する請求項２２記載の方法。
【請求項２４】
以下の工程、
(e)工程(d)におけるマラチオンを亜硫酸水素ナトリウムの２０％溶液で処理した後に水で洗浄する工程、
(f)工程(e)におけるマラチオンをNaOH溶液で洗浄する工程、及び
(g)工程(f)におけるマラチオンを水で２回以上洗浄する工程、
を更に含む請求項２３記載の方法。
【請求項２５】
以下の工程、
(h)工程(g)から得られたマラチオンを、MeOOSPS、マラオクソン、ジエチルフマレート、ジメチルマラチオン、メチルマラチオン、イソマラチオン及びO,O-メチル,エチル S-(1,2-ジカルボエトキシ)エチル ホスホロジチオエート、及びそれらの組合せからなる群から
選択される１種以上の不純物の存在について分析する工程、
(i)マラチオンを純度に関して分析する工程、及び
(j)工程(g)におけるマラチオンが５．０％(w/w)より多いジエチルフマレートを含む場合には、工程(e)乃至(i)を繰り返す工程、
を更に含む請求項２４記載の方法。
【請求項２６】
以下の工程、
(l)水をマラチオンに添加する工程、
(m)マラチオンを共沸蒸留する工程、及び
(n)工程(l)乃至(m)を１回以上繰り返す工程、
を更に含む請求項２５記載の方法。
【請求項２７】
工程(l)における水対マラチオンの比が、２：１乃至１０：１(w/w)である請求項２６記載の方法。
【請求項２８】
工程(l)における水対マラチオンの比が、３：１(w/w)である請求項２７記載の方法。
【請求項２９】
以下の工程、
(o)マラチオンを単離する工程、
(p)マラチオンを、MeOOSPO、MeOSSPO、マラオクソン、MeOOSPS、ジエチルフマレート、ジメチルマラチオン、メチルマラチオン、O,O-メチル,エチル S-(1,2-ジカルボエトキシ)エチル ホスホロジチオエート、テトラエチルジチオスクシネート、イソマラチオン、マラチオンカルボン酸、メルカプトスクシネート、テトラエチルチオジスクシネート及びそれらの組合せからなる群から選択される１種以上の不純物の存在について分析する工程、
(q)マラチオンを純度に関して分析する工程、及び
(r)工程(o)の後のマラチオンが、０．２％(w/w)より多いMeOOSPS、０．１％(w/w)より多いマラオクソン、０．２％(w/w)より多いジエチルフマレート、０．２％(w/w)より多いジメチルマラチオン、０．３％(w/w)より多いメチルマラチオン、０．１％(w/w)より多いイソマラチオンを含むか、又は９８．５％(w/w)未満しかマラチオンが存在しない場合には、工程(l)乃至(o)を繰り返す工程、
を更に含む請求項２６記載の方法。
【請求項３０】
マラチオンが９８．５％(w/w)より高い純度を有し、０．１％(w/w)未満のMeOOSPO、０．１％(w/w)未満のMeOSSPO、０．２％(w/w)未満のMeOOSPS、０．１％(w/w)未満のマラオクソン、０．１％(w/w)未満のイソマラチオン、及び０．１％(w/w)未満のいずれかのその他の検出しうる不純物を含む、請求項１記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、製薬学的使用のためのマラチオンの調製方法及び貯蔵中安定である高度に精製されたマラチオンを含む組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
マラチオン([(ジメトキシホスフィノチオイル)チオ]ブタン二酸ジエチルエステル；CAS#121-75-5)は、生体内でコリンエステラーゼ活性を阻害する有機リン殺虫剤である。マラチオンは以下の化学構造を有する。
【０００３】
【化１】
0005474347.tif 000002
【０００４】
マラチオンは、O,O-ジメチルジチオリン酸(DMDP)をジエチルマレエートと反応させることにより調製されうる(米国特許第2,578,652号、同第2,879,284号、同第3,403,201号、同第3,463,841号、同第3,470,272号、同第4,367,180号及び同第4,681,964号)。
【０００５】
【化２】
0005474347.tif 000003
【０００６】
マラチオン製剤には多くの不純物が見出される。これらの不純物には、O,O,S-トリメチルホスホロジチオエート(MeOOSPS)、O,O,S-トリメチルホスホロチオエート(MeOOSPO)、O,S,S-トリメチルホスホロジチオエート(MeOSSPO)、マラオクソン(malaoxon)、イソマラチオン、ジエチルフマレート、メチルマラチオン、ジメチルマラチオン、O,O-メチル,エチル-S-(1,2-ジカルボエトキシ)エチル-ホスホロジチオエート、及びテトラエチルジチオジスクシネート(WHO Specifications and Evaluations for Public Health Pesticides:  Malathion, World Health Organization, 2003を参照されたい)が含まれる。これらの不純物のうちいくつかは貯蔵中に分解生成物として形成されるが、これらの不純物の多くは合成中に意図的ではない副生成物として生成する(Health Risk Assessment of Malathion Coproducts in Malthion-Bait Used for Agricultural Pest Eradication in Urban Areas, Report of the California Environmental Protection Agency, 1997)。例えば、貯蔵中に、マラチオンは二量化によりイソマラチオンに変換しうるし、異性化の程度は貯蔵条件に依存する(Health Risk Assessment of Malathion Coproducts in Malthion-Bait Used for Agricultural Pest Eradication in Urban Areas, Report of the California Environmental Protection Agency, 1997)。
【０００７】
高温、例えば４０℃におけるマラチオンの貯蔵は、マラチオン製剤の毒性を有意に増大させる(Umetsu et al., J. Agric. Food Chem., 25:946-953 (1977))。一つには、この増大は貯蔵後のイソマラチオンの増大による。例えば、４０℃における６ヶ月の貯蔵後には、イソマラチオン含量は０．２％から０．４５％に増大し、それに伴いマウスのLD50により測定される毒性は３５％増大する(Umetsu et al., J. Agric. Food Chem., 25:946-953 (1977))。少量又は微量のイソマラチオンのようなマラチオン不純物でさえ高度に毒性を示すので、マラチオン製剤中のこれらの不純物の存在は、特に製薬学的使用のために開発される場合には、できるだけ低下させるべきである。更に、貯蔵中にマラチオンが毒性副生成物に分解する場合には、貯蔵安定性であるマラチオンを調製することが望ましい。
これらのマラチオン不純物の多くは、毒性であることが見出された。MeOOSPO及びMeOSSPOは、肝臓の損傷(Keadtisuke et al., Toxicology Letters 52:35-46 (1990))、又は免疫抑制(Rodgers et al., Immunopharmacology 17:131-140 (1989))を引き起こしうる。イソマラチオンは、虫の絶滅計画中の噴霧後の人々に死を引き起こすことが示された(Aldridge et al., Archives Toxicology 42:95-106 (1979))。イソマラチオンの毒性は、アセチルコリンエステラーゼを阻害する能力のためである。実際に、イソマラチオンは、マラチオンと比較してアセチルコリンエステラーゼに対する活性が約１，０００倍である(Berkman et al.  Synthesis of Chiral Malathion and Malathion, Terahedron Letters 33(11):1415-1418 (1992))。O,O-メチル,エチル-S-(1,2-ジカルボエトキシ)エチル-ホスホロジチオエート、イソマラチオン及びMeOOSPOはすべて肺毒性を示し、低酸素症から死を引き起こしうる(Imamura et al., Pharmacology and Therapeutics 38(3):419-427 (1988))。マラオクソンはコリンエステラーゼ酵素を阻害する(Umetsu et al., J. Agric. Food Chem., 25:946-953 (1977))。ジエチルフマレートは接触蕁麻疹を引き起こしうる(Maibach, Contact Dermatitis 12(3):139-140 (1985))。マラチオンの物理的性質が従来の方法による不純物の除去を困難にしている。例えば、マラチオンは周囲温度において液体であるため(融点＝２．９℃)、結晶化が困難である。マラチオンはまた高沸点(１５６〜１５７℃)を有し、特にマラチオンは高温で不安定であるために蒸留も問題がある。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本出願人らは、製薬学的使用のためのマラチオンを合成及び精製する方法を開発した。本発明の方法により調製されたマラチオンは、薬品の目的で現在使用されている他の市販のマラチオン製剤と比較した場合に、イソマラチオンのような毒性不純物の含量が有意に低い。更に、マラチオンは不安定であることが知られているために、例えばイソマラチオンのような毒性不純物の含量は時間の経過とともに増大することが知られており、安定な形のマラチオンを開発する必要がある。本発明のマラチオンは貯蔵安定性である、すなわち高温高湿度における貯蔵後でさえ、毒性不純物の量は有意には増大しない。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明の方法は、マラチオンを調製する方法であって、以下の工程、すなわち、(a)トルエン、キシレン及びベンゼンからなる群から選択される有機溶剤で、O,O-ジメチルジチオリン酸の溶液を調製する工程、(b)O,O-ジメチルジチオリン酸を水に抽出してO,O-ジメチルジチオリン酸の水溶液を生成する工程、(c)O,O-ジメチルジチオリン酸の水溶液をジエチルマレエートと反応させてマラチオンを形成する工程、及び(d)工程(c)から得られたマラチオンを、約７．０未満のpHを有する硫黄試薬で処理する工程、を含む方法である。一実施態様においては、有機溶剤はトルエンである。
工程(a)におけるO,O-ジメチルジチオリン酸は、以下の工程、すなわち、(i)五硫化リン(P2S5)をトルエンに添加して懸濁液を形成する工程、(ii)懸濁液を約６０℃に加熱する工程、(iii)メタノールを懸濁液に添加する工程、(iv)メタノールの添加後少なくとも約１時間、懸濁液の温度を約５５乃至約６０℃に保持しながら懸濁液を撹拌する工程、(v)工程(iv)から得られた懸濁液を約１８乃至約２５℃に冷却した後に濾過する工程、及び(vi)工程(v)から得られた懸濁液を減圧蒸留する工程、を含む工程により調製されうる。
工程(d)から得られたマラチオンは、硫黄試薬を用いた処理後に単離されうる。工程(b)における水対O,O-ジメチルジチオリン酸の比は、約１：１乃至約１０：１(w/w)でもよい。一実施態様においては、水対O,O-ジメチルジチオリン酸の比は約３：１(w/w)である。
【００１０】
工程(a)におけるO,O-ジメチルジチオリン酸の溶液は、工程(b)において水に抽出する前に濾過しうる。あるいは、工程(a)におけるO,O-ジメチルジチオリン酸の溶液は、工程(b)において水に抽出する前に蒸留される。
一実施態様においては、工程(c)におけるジエチルマレエート対O,O-ジメチルジチオリン酸のモル比は、約１：１乃至約２：１である。別の実施態様においては、工程(c)におけるジエチルマレエート対O,O-ジメチルジチオリン酸のモル比は約１：１である。
重合防止剤は、O,O-ジメチルジチオリン酸の水溶液とジエチルマレエートの溶液との反応中に工程(c)に添加されうる。ジエチルマレエート対重合防止剤のモル比は、約５０：１乃至約５００：１である。一実施態様においては、ジエチルマレエート対重合防止剤のモル比は約３００：１である。重合防止剤はヒドロキノンでもよい。
硫黄試薬は、アルカリ金属亜硫酸水素塩及びアルカリ土類金属亜硫酸水素塩からなる群から選択される。一実施態様においては、硫黄試薬は亜硫酸水素ナトリウムである。別の実施態様においては、硫黄試薬は、約６．１乃至約６．３のpH値を有する亜硫酸水素ナトリウムの２０％溶液からなる。工程(d)におけるマラチオンは、亜硫酸水素ナトリウムの２０％溶液で約２時間処理されうる。
【００１１】
亜硫酸水素ナトリウムの２０％溶液で処理した後、マラチオンを、水、NaOHの５％溶液及び更に２回以上の水で洗浄しうる。これらの溶液で洗浄した後、マラチオンを、MeOOSPS、マラオクソン、ジエチルフマレート、ジメチルマラチオン、メチルマラチオン、イソマラチオン、及びO,O-メチル,エチル S-(1,2-ジカルボエトキシ)エチル ホスホロジチオエート、及びそれらの組合せからなる群から選択される１種以上の不純物の存在について分析しうる。更に、マラチオンは純度に関して分析される。この工程におけるマラチオンが約５．０％(w/w)より多いジエチルフマレートを含む場合には、前述のようにマラチオンを単離する前に、水、NaOH及び再び水を用いた洗浄工程を繰り返しうる。
前述のようにして調製したマラチオンは、以下の工程、すなわち、(l)マラチオンに水を添加する工程、(m)工程(k)から得られたマラチオンを共沸蒸留する工程、(n)工程(l)乃至工程(m)を１回以上繰り返す工程、及び(o)マラチオンを単離する工程、により更に精製しうる。工程(l)における水対マラチオンの比は約２：１(w/w)乃至約１０：１(w/w)である。一実施態様においては、工程(l)における水対マラチオンの比は約３：１(w/w)である。共沸蒸留後、マラチオンは、MeOOSPO、MeOSSPO、マラオクソン、MeOOSPS、ジエチルフマレート、ジメチルマラチオン、メチルマラチオン、O,O-メチル,エチル S-(1,2-ジカルボエトキシ)エチル ホスホロジチオエート、テトラエチルジチオジスクシネート、イソマラチオン、マラチオンカルボン酸、メルカプトスクシネート、テトラエチルチオジスクシネート及びそれらの組合せからなる群から選択される１種以上の不純物の存在について分析される。更に、マラチオンは、純度に関して分析される。マラチオンが約０．２％(w/w)より多いMeOOSPS、約０．１％(w/w)より多いマラオクソン、約０．２％(w/w)より多いジエチルフマレート、約０．２％(w/w)より多いジメチルマラチオン、約０．３％(w/w)より多いメチルマラチオン、約０．１％(w/w)より多いイソマラチオンを含むか、マラチオンが約９８．５％(w/w)未満の場合には、工程(l)乃至(o)が繰り返される。
【００１２】
本発明の方法により調製されるマラチオンは、以下の実施態様を含む。(i) 約９８．５％(w/w)より多いマラチオン、約０．１％(w/w)未満のMeOOSPO、約０．１％(w/w)未満のMeOSSPO、約０．２％(w/w)未満のMeOOSPS、約０．３％(w/w)未満のマラチオンカルボン酸及び約０．１％(w/w)未満のイソマラチオン；(ii) 約９８．５％(w/w)より多いマラチオン、約０．１％(w/w)未満のMeOOSPO、約０．１％(w/w)未満のMeOSSPO、約０．２％(w/w)未満のMeOOSPS、約０．３％(w/w)未満のマラチオンカルボン酸及び約０．０２％(w/w)未満のイソマラチオン；(iii) 約９９．０％(w/w)より多いマラチオン、約０．１％(w/w)未満のMeOOSPO、約０．１％(w/w)未満のMeOSSPO、約０．１％(w/w)未満のMeOOSPS、約０．０３％(w/w)未満のマラチオンカルボン酸及び約０．０２％(w/w)未満のイソマラチオン；及び(iv) 約９９．０％(w/w)より多いマラチオン、約０．０４％(w/w)未満のMeOOSPO、約０．０２％(w/w)未満のMeOSSPO、約０．１％(w/w)未満のMeOOSPS、約０．０３％(w/w)未満のマラチオンカルボン酸及び約０．０２％(w/w)未満のイソマラチオン。
本発明の方法により調製されたマラチオンは貯蔵後に安定である。特に、５℃における３ヶ月の貯蔵後、イソマラチオンの量は約０．１％(w/w)以下である。２５℃及び６０％の相対湿度における３ヶ月の貯蔵後、イソマラチオンの量は約０．１％(w/w)以下である。３０℃及び６０％の相対湿度における３ヶ月の貯蔵後、イソマラチオンの量は約０．１％(w/w)以下である。
【００１３】
本発明は、医薬品配合物に使用されうる高度に精製されたマラチオンを調製する方法を提供する。マラチオンは、(a)O,O-ジメチルジチオリン酸の有機溶剤溶液を調製する工程、(b)O,O-ジメチルジチオリン酸を水に抽出してO,O-ジメチルジチオリン酸の水溶液を生成する工程、(c)O,O-ジメチルジチオリン酸の水溶液をジエチルマレエートと反応させてマラチオンを形成する工程、及び(d)工程(c)から得られたマラチオンを、約７．０未満のpHを有する硫黄試薬で処理する工程、により合成される。
工程(a)におけるO,O-ジメチルジチオリン酸は、(i)硫化リンを有機溶剤に懸濁させる工程、(ii)メタノールを硫化リンの懸濁液に滴下する工程、及び(iii)硫化リンの懸濁液を混合する工程により製造されうる。硫化リンは、式PxSy(式中、x及びyは整数である)の化合物である。硫化リンの例には、五硫化リン(P2S5)、七硫化四リン(P4S7)のような化合物並びにこれらの化合物の混合物が含まれる。五硫化リンは通常、二量体である十硫化四リン(P4S10)として見出される(五硫化リンという用語には二量体である十硫化四リンが含まれる)。一実施態様においては、硫化リンは五硫化リンである。硫化リンの懸濁にはいずれかの適する有機溶剤が使用されうる。トルエン、キシレン及びベンゼンのような適する有機溶剤並びに混合物が使用されうる。好ましい実施態様においては、硫化リンを懸濁する有機溶剤としてトルエンが使用される。
【００１４】
温度が高くなるとO,O-ジメチルジチオリン酸の分解並びに望ましくない副生成物の形成を引き起こすので、硫化リンの懸濁液が混合される工程(前述の工程(iii))の温度は制御される。混合は、窒素(N2)の泡立ちを用い、反応容器の温度を約５５乃至約６５℃に保持しながら、約１時間継続しうる。混合後、反応混合物を約１８乃至約２５℃の温度に冷却する。
水への抽出の前に、O,O-ジメチルジチオリン酸の有機溶剤溶液は、濾過、蒸留又は蒸発により更に精製しうる。濾過は、いずれかの未反応固体(例えば、P2S5)のような不溶性不純物を除去する。不溶性不純物を除去するその他の適する方法には、デカンテーション及び遠心分離が含まれる。
O,O-ジメチルジチオリン酸の有機溶剤溶液は、蒸留により濃縮又は精製されうる。好ましくは、O,O-ジメチルジチオリン酸の有機溶剤溶液は共沸蒸留により蒸留される。蒸留(例えば、共沸蒸留)の利点は、マラチオンの異性化生成物及びイソマラチオンを生成することなくMeOOSPSを効果的に除去するということである。蒸留は減圧下で実施してもよい。蒸留は、硫化水素(H2S)並びに未反応メタノール又はその他の有機溶剤(例えば、トルエン)のような揮発性不純物を除去する。硫化水素がO,O-ジメチルジチオリン酸中に存在する場合には、ジエチルマレエート又はジエチルフマレートと反応してジエチル2-メルカプトスクシネートを形成しうる。ジエチル2-メルカプトスクシネートは酸化されると、マラチオン製剤から除去するのが非常に困難な二量体不純物であるテトラエチルジチオジスクシネートを形成しうる。
【００１５】
蒸留(例えば、共沸蒸留)の別の利点は、未反応メタノールを効果的に除去しうることである。未反応メタノールが不純物としてO,O-ジメチルジチオリン酸中に存在する場合には、マラチオンと反応してメタノール分解及びエステル交換の両方の不純物を形成しうる。メタノール分解不純物には、O,O,O-トリメチルチオリン酸(MeOOOPS)及びO,O,S-トリメチルチオリン酸(MeOOSPO)が含まれる。エステル交換不純物には、[(ジメトキシホスフィノチオニル)チオ]ブタン二酸ジメチルエステル(ジメチルマラチオン)、1-カルボエトキシ-2-カルボメトキシ-1-[(ジメトキシホスフィノチオニル)チオ]エタン、及び2-カルボエトキシ-1-カルボメトキシ-1-[(ジメトキシホスフィノチオニル)チオ]エタンが含まれ、1-カルボエトキシ-2-カルボメトキシ-1-[(ジメトキシホスフィノチオニル)チオ]エタン、及び2-カルボエトキシ-1-カルボメトキシ-1-[(ジメトキシホスフィノチオニル)チオ]エタンはまとめてメチルマラチオンと呼ばれる。これらの不純物はマラチオン製剤から除去するのは困難である。
蒸留工程の別の利点は、溶解されたH2Sを除去することである。H2Sが存在する場合には、ジエチルマレエートと反応してジエチル2-メルカプトスクシネートを提供し、二量化してテトラエチルジチオジスクシネートを形成する。
典型的には、蒸留工程は、例えば、トルエン、キシレン又はベンゼンのような有機溶剤の一部をメタノールのような他の揮発性不純物とともに除去する。蒸留後、O,O-ジメチルジチオリン酸溶液の濃度は約３０乃至約７０％(w/w)である。更に好ましくは、O,O-ジメチルジチオリン酸溶液の濃度は約５０％(w/w)でもよい。好ましくは、蒸留は約１．０１bar(１気圧＝７６０mmHg)未満のような減圧下で実施されうる。別の実施態様においては、蒸留は約０．５０７bar(０．５気圧)の圧力下で実施されうるし、第三の実施態様においては約０．２０３bar(０．２気圧)の圧力下で実施されうる。
【００１６】
蒸留、蒸発又は濾過工程後、有機溶剤中のO,O-ジメチルジチオリン酸は水に抽出されてO,O-ジメチルジチオリン酸の水溶液をもたらす。本発明の利点は、O,O-ジメチルジチオリン酸の水への抽出が有意にMeOOSPSを除去するということである。水への抽出前の有機溶剤中のO,O-ジメチルジチオリン酸のガスクロマトグラフィーによる分析によれば、O,O-ジメチルジチオリン酸は約２５〜３０％(w/w)のO,O,S-トリメチルホスホロジチオエート(MeOOSPS)並びにO,O,S-トリメチルホスホロチオエート(MeOOSPO)のようなその他の不純物で汚染されている。水での抽出後、ガスクロマトグラフィーは、O,O-ジメチルジチオリン酸の水溶液中のO,O,S-トリメチルホスホロジチオエート(MeOOSPS)の量が約５〜６％(w/w)以下に低下することを示す。
抽出にはいずれかの適量の水を使用しうる。水対O,O-ジメチルジチオリン酸の有機溶液の比は、約１：１乃至約１０：１(w/w)でもよく、好ましくは、比は約３：１(w/w)である。更に好ましくは、O,O-ジメチルジチオリン酸の有機溶剤溶液の水に対する比は約１：１でもよい。水及びO,O-ジメチルジチオリン酸の有機溶剤溶液の混合は、有機及び水性層の２層を含む反応混合物を生ずる。有機層及び水性層の分離後、O,O-ジメチルジチオリン酸を含む水性層をトルエンで洗浄しうる。次いでO,O-ジメチルジチオリン酸の水溶液はジエチルマレエートと反応してマラチオンを形成する。ジエチルフマレートもまたマラチオンを形成するためのO,O-ジメチルジチオリン酸の水溶液との反応に使用されうる。ジエチルマレエートは水のような水性溶剤と混和しないので、反応は、水性層(O,O-ジメチルジチオリン酸の水溶液)及び有機層(ジエチルマレエート又はジエチルフマレート)を含む不均質２層混合物として実施される。２層混合物は機械的に混合する。マラチオンは下のほうの有機層に回収される。前記の反応は、ジエチルマレエートのO,O-ジメチルジチオリン酸の水溶液への直接添加により実施される。本発明の利点は、濃縮した形でO,O-ジメチルジチオリン酸を単離する必要がないということである。O,O-ジメチルジチオリン酸は有毒であるため、直接の添加は、マラチオンの形成中にいずれかの毒性化合物を単離する必要性を回避する。
【００１７】
マラチオンの収量及び純度を最大にするために、O,O-ジメチルジチオリン酸の水溶液とジエチルマレエートを反応させる条件、例えば、反応温度、反応時間、試薬の割合は当業者により最適化されうる。一実施態様においては、ジエチルマレエート対O,O-ジメチルジチオリン酸のモル比は約１：１乃至約２：１でもよい。反応温度は約２５乃至約７０℃の範囲でもよく、更に好ましくは、反応温度は約４０乃至約６５℃である。更に一層好ましくは、反応温度は約５３℃である。反応時間は変化させてもよく、例えば、(i)約２乃至約１２時間、(ii)約５乃至約１０時間、又は(iii)約８時間である。反応はN2雰囲気下で実施されうる。反応の完了後、O,O-ジメチルジチオリン酸の水溶液及びジエチルマレエートの２つの溶液を約１８乃至２５℃の温度に冷却し、溶液を分離してマラチオンを含むジエチルマレエートを２回以上水で洗浄する。
ジエチルフマレートはO,O-ジメチルジチオリン酸の水溶液のジエチルマレエートとの反応中に形成されうる。ジエチルマレエート及びジエチルフマレートの重合を減少させるためには、重合防止剤の存在下で反応を実施しうる。適する重合防止剤にはヒドロキノンが含まれる。ジエチルマレエート対重合防止剤のモル比は約５０：１乃至約５００：１である。例えば、一実施態様においては、ジエチルマレエート対重合防止剤のモル比は約３００：１である。
【００１８】
マラチオンを更に精製するために、マラチオンを含むジエチルマレエートは硫黄溶液で処理しうる。本発明の発明者は、驚くべきことに、約７未満のpHを有する硫黄溶液が二量体不純物の形成を排除するのに効果的であることを見出した。硫黄溶液のpHは、約６．０乃至約７．０である。硫黄溶液は、例えば、(i)亜硫酸水素ナトリウム、メタ亜硫酸水素ナトリウム、亜硫酸水素マグネシウム又は亜硫酸水素アンモニウムのような亜硫酸水素塩、(ii)亜硫酸ナトリウム、亜硫酸カリウム、亜硫酸マグネシウム又は亜硫酸アンモニウムのような亜流酸塩、又は(iii)硫化ナトリウム、硫化カリウム、硫化カルシウム、硫化アンモニウム又は二硫化アンモニウムのような硫化物でもよい。酸性の水性硫黄溶液はいずれかの適する方法で調製しうる(亜硫酸水素塩の水溶液はもともと酸性であることに注目されたい)。亜硫酸水素塩の酸性水溶液を調製するのに適する方法は、亜硫酸水素塩を水に溶解させることを含む。亜硫酸塩又は硫化物の水溶液はもともと塩基性である。したがって、亜硫酸塩又は硫化物の酸性水溶液は、亜硫酸塩を水に溶解させた後、塩酸又は硫酸のような酸を添加してpHを７．０未満に低下させることにより調製しうる。酸性硫黄溶液の利点は、マラチオンの純度を効果的に増大させるということである。マラチオンを更に精製するのに酸性硫黄溶液を使用することの重要性は、マラチオンが亜硫酸塩又は硫化物の塩基性溶液(すなわち、pH＞７．０)で処理された場合には、得られるマラチオンが０．２％(w/w)より多いテトラエチルジチオジスクシネートで汚染されていることが見出されたという事実により明らかにされた。これに対し、水性硫黄溶液が酸性で、pHが７．０未満であった場合には、形成されるマラチオンは０．２％(w/w)未満のテトラエチルジチオジスクシネートを含有した。pH７〜１２において硫黄溶液でマラチオンを処理しても、テトラエチルジチオジスクシネート不純物の形成を引き起こしうる。酸性硫黄溶液を用いる追加の利点は、塩基性のpH(すなわち、pH＞７．０)において一層起こりやすいことが知られているマラチオンの分解を回避することである。(例えば、Cotham WE Jr., et al.  Food Chem. 37:  824-828 (1989)を参照されたい)。
【００１９】
一実施態様においては、マラチオンを含むジエチルマレエートは亜硫酸水素ナトリウムの２０％(w/w)溶液(約６．１乃至約６．３のpH)で処理される。ジエチルマレエートを約６０℃において約２時間亜硫酸水素ナトリウムの２０％(w/w)溶液と混合した後、２種の溶液、すなわちジエチルマレエート及び亜硫酸水素ナトリウムの２０％(w/w)溶液を含む混合物を約１８乃至約２５℃に冷却して、２種の溶液を分離する。次いで、ジエチルマレエートを水で洗浄し、２種の溶液、すなわちジエチルマレエート及び水を分離する。次いでジエチルマレエートを５％(w/w)NaOHで洗浄して溶液を分離する。NaOHを用いた洗浄の後、ジエチルマレエートは前述のように更に２回以上水で洗浄しうる。
この精製工程においては、マラチオンの純度は高圧液体クロマトグラフィー(HPLC)により分析されうる。マラチオンの純度を分析し、不純物の存在を測定するその他の技術には、ガスクロマトグラフィー(GC)、及び核磁気共鳴(NMR)スペクトルが含まれる(WHO Specifications and Evaluations for Public Health Pesticides:  Malathion, World Health Organization, 2003)。これらの分析技術を用い、以下の不純物、すなわち、MeOOSPS、マラオクソン、ジエチルフマレート、ジメチルマラチオン、メチルマラチオン、イソマラチオン、O,O-メチル,エチル S-(1,2-ジカルボエトキシ)エチル ホスホロジチオエートの存在を測定しうる。更に、いずれかのその他の検出しうる不純物の存在もこの方法論を用いて測定されうる。
【００２０】
マラチオンが５％(w/w)より多いジエチルフマレートを含む場合には、マラチオンを再び、前述のように硫黄溶液(pH６．０〜７．０)、５％(w/w)のNaOH及び水で順次処理することにより再処理する。再処理後、得られるマラチオンをマラチオンの純度及び前述の不純物のいずれかの存在の両方についてHPLCにより分析する。
精製のこの工程時に、マラチオンは以下の純度/不純物の特徴を示しうる。すなわち、(i)約９８．５％(w/w)より多いマラチオン、(ii)約５．０％(w/w)未満のジエチルフマレート、及び(iii)約０．１％(w/w)未満のイソマラチオン。好ましい実施態様においては、マラチオンは以下の純度/不純物の特徴を示しうる。すなわち、(i)約９８．５％(w/w)より多いマラチオン、(ii)約０．２％(w/w)未満のMeOOSPS、(iii)約０．１％(w/w)未満のマラオクソン、(iv)約０．２％(w/w)未満のジエチルフマレート、(v)約０．３％(w/w)未満のメチルマラチオン、(vi)約０．１％(w/w)未満のイソマラチオン、及び(vii)約０．３％(w/w)未満のO,O-メチル,エチル S-(1,2-ジカルボエトキシ)エチル ホスホロジチオエート。更に、精製のこの工程時には、マラチオンには約０．１％(w/w)より多いその他の検出しうる不純物は存在しない。
【００２１】
不純物の量を更に低下させるためには、前述の方法により調製されるマラチオン又は別の合成法から得られるマラチオンを、水を用いた蒸留により更に精製しうる。水をマラチオンに添加し、混合物を共沸蒸留する。この共沸蒸留工程の利点は、マラチオンの異性化生成物(すなわち、イソマラチオン)を生成せずにMeOOSPSを効果的に除去するということである。更に、共沸蒸留は、空気ストリッピング又はフラッシュ蒸留より単純な方法である。それはまた、MeOOSPSの除去においてずっと効果的である。一実施態様においては、水のマラチオンに対する比は３：１(w/w)である。第一の蒸留が完了した後、水を添加し、共沸蒸留を更に１回以上繰り返す。再び、精製中のこの工程における水対マラチオンの比は約３：１(w/w)でもよい。かなり過剰の水が存在する限り、水対マラチオンの比は約２：１乃至約１０：１(w/w)でもよい。これらの追加の精製工程、水の添加、その後の共沸蒸留の後、マラチオンの純度をHPLCにより測定する。分析される不純物には、MeOOSPS、マラオクソン、ジエチルフマレート、ジメチルマラチオン、メチルマラチオン、イソマラチオン、マラチオンカルボン酸並びにいずれかのその他の検出しうる不純物が含まれる。(i)MeOOSPSが約０．２％(w/w)より多い、(ii)マラオクソンが約０．１％(w/w)より多い、(iii)ジエチルフマレートが約０．２％(w/w)より多い、(iv)ジメチルマラチオンが約０．２％(w/w)より多い、(v)メチルマラチオンが約０．３％(w/w)より多い、(vi)イソマラチオンが約０．１％(w/w)より多い、(vii)いずれかの他の個々の検出しうる不純物が約０．１％(w/w)より多い、又は(viii)マラチオンが約９８．５％(w/w)未満である場合には、前述のように追加の水をマラチオンに添加して共沸蒸留を繰り返す。次いで、マラチオンの純度/不純物の特徴について２度目の分析をする。水を添加しての共沸蒸留は、湿ったマラチオンの純度/不純物の特徴がマラチオンの純度及び種々の不純物の％(w/w)に関して前述した基準に適合するまで繰り返しうる。
【００２２】
精製のこの工程において、マラチオンは以下の純度/不純物の特徴を有するかもしれない。
(i)約９８．５％(w/w)より多いマラチオン、
(ii)約０．２％(w/w)未満のMeOOSPS、
(iii)約０．１％(w/w)未満のマラオクソン、
(iv)約０．２％(w/w)未満のジエチルフマレート、
(v)約０．２％(w/w)未満のジメチルマラチオン、
(vi)約０．３％(w/w)未満のメチルマラチオン、又は
(vii)約０．１％(w/w)未満のイソマラチオン。
水を含まないマラチオンは、水の添加、その後の共沸蒸留の後に約３５乃至約４５℃の温度において湿った塊への空気バブリングとともにマラチオンを加熱することにより得られる。含水率は、カール・フィッシャー法により追跡しうる。米国薬局方＜９２１＞。含水率が０．１％(w/w)以下に低下したときに、マラチオンを冷却し、異物を除去するために濾過する。濾過はガラスペーパーによる。
【００２３】
乾燥後、マラチオンの純度並びに、MeOOSPO、MeOSSPO、マラオクソン、MeOOSPS、ジエチルフマレート、ジメチルマラチオン、メチルマラチオン、O,O-メチル,エチル S-(1,2-ジカルボエトキシ)エチル ホスホロジチオエート、テトラエチルジチオスクシネート、イソマラチオン、O,O-ジメチル-S-(1-カルボキシ-2-カルボキシエトキシ)エチル ホスホロジチオエート又はO,O-ジメチル-S-(1-カルボキシ-2-カルボキシ)エチル ホスホロジチオエートのようなマラチオンカルボン酸、メルカプトスクシネート及びテトラエチルチオスクシネートを含む種々の不純物の存在についてHPLCよりマラチオンを分析する。不純物のHPLC分析には、前述の不純物の羅列から選択されるすべて又は一部のみの不純物が含まれうる。更に、マラチオンはまたいずれかのその他の検出しうる不純物の存在について分析されうる。
以下の特徴を含むマラチオンの種々の実施態様は本発明に含まれる。
(i)約９８．５％(w/w)より多いマラチオン、約０．１％(w/w)未満のMeOOSPO、約０．１％(w/w)未満のMeOSSPO、約０．２％(w/w)未満のMeOOSPS、約０．３％(w/w)未満のマラチオンカルボン酸及び/又は約０．１％(w/w)未満のイソマラチオン；
(ii)約９８．５％(w/w)より多いマラチオン、約０．１％(w/w)未満のMeOOSPO、約０．１％(w/w)未満のMeOSSPO、約０．２％(w/w)未満のMeOOSPS、約０．３％(w/w)未満のマラチオンカルボン酸及び/又は約０．０２％(w/w)未満のイソマラチオン；
(iii)約９９．０％(w/w)より多いマラチオン、約０．１％(w/w)未満のMeOOSPO、約０．１％(w/w)未満のMeOSSPO及び/又は約０．１％(w/w)未満のMeOSSPS、約０．０３％(w/w)未満のマラチオンカルボン酸及び約０．０２％(w/w)未満のイソマラチオン；及び、
(iv)約９９％．０(w/w)より多いマラチオン、約０．０４％(w/w)未満のMeOOSPO、約０．０２％(w/w)未満のMeOSSPO及び/又は約０．１％(w/w)未満のMeOSSPS、約０．０３％(w/w)未満のマラチオンカルボン酸及び約０．０２％(w/w)未満のイソマラチオン。
【００２４】
本発明の方法により調製されたマラチオンを貯蔵安定性について試験した。本発明の方法により調製されたマラチオンを、種々の異なる温度及び湿度条件下で３ヶ月まで貯蔵した。貯蔵条件は、(i)５℃、(ii)２５℃、６０％の相対湿度及び(iii)３０℃及び６０％の相対湿度、であった。試料の純度は、HPLCを用い貯蔵後に測定した。貯蔵後、本発明の方法により調製されたマラチオンは、イソマラチオン及びマラチオンに関して以下の結果を示した。
(i)５℃における３ヶ月の貯蔵後、約０．１％(w/w)未満のイソマラチオン及び約９８．５％(w/w)より多いマラチオン；
(ii)２５℃及び６０％の相対湿度における３ヶ月の貯蔵後、約０．１％(w/w)未満のイソマラチオン及び約９８．５％(w/w)より多いマラチオン；及び
(iii)３０℃及び６０％の相対湿度における３ヶ月の貯蔵後、約０．１％(w/w)未満のイソマラチオン及び約９８．５％(w/w)より多いマラチオン。
本発明の方法により調製されたマラチオンは、Ovide(登録商標)ローション及びゲル(米国特許出願PCT/US05/24643号明細書及び同24558号明細書を参照されたい)、ローション、クリーム又は溶液のようなマラチオン配合物の調製に使用されうる。
本発明を以下の実施例により限定することなく更に説明する。
【実施例１】
【００２５】
ジメチルジチオリン酸の調製
五硫化リン(１．４kg)及びトルエン(１．４L)を窒素雰囲気下において機械的撹拌器を具備する５Lのジャケット付きガラス反応器中で混合し、得られる懸濁液を撹拌しながら約６０℃に加熱した。反応混合物の温度を６７℃以下に保持しながら、メタノール(１．１L)を４時間１５分にわたって滴下した。得られる気体状のH2Sは、次亜塩素酸ナトリウム/水酸化ナトリウムの水溶液を用いて捕捉した。メタノールの添加の完了後に混合物を更に１時間５５〜６５℃で撹拌した。
混合物を２２〜３０℃の温度に冷却し、濾過して未反応五硫化リンを除去した。追加のトルエン(０．３L)を得られる濾液に添加した。混合物を減圧(≦２００mbar)下約５０〜６０℃の温度で蒸留して約６００mLのトルエンを除去した。得られる濃縮物を２２〜３０℃の温度に冷却し、水(３kg)を添加した。２相を２０分間混合し、次いで相を分離した。水性相をトルエン(０．３L)で洗浄し、水性相を再び分離して、ジメチルジチオリン酸の水溶液(約１．２２kgのジメチルジチオリン酸を含む約４．２２kg)を生成した。
【実施例２】
【００２６】
マラチオンの調製
ジメチルジチオリン酸の溶液をジエチルマレエートに添加した(ジメチルジチオリン酸のジエチルマレエートに対する比は約１〜１．２５kg：１．２kgであった)。ヒドロキノン(約３g)を混合物に添加した。２種の別々の溶液、すなわちジエチルマレエートの有機溶液及びジメチルジチオリン酸の水溶液を含む反応混合物を、窒素雰囲気下５３℃において約８時間混合した。混合後、反応混合物を室温に冷却し、有機及び水溶液を分離した。マラチオンを含む有機すなわちジエチルマレエート溶液を水(１回ごとに約１L)で２回洗浄した。有機及び水溶液を分離し、マラチオンはジエチルマレエートの溶液中に保持された。この反応は約１．５〜１．９kgのマラチオンを産出した。
【実施例３】
【００２７】
マラチオンの精製
マラチオン(約１．５〜１．９kg)を含むジエチルマレエートの溶液(有機)を、６０℃において２時間約４．６kgの亜硫酸水素ナトリウムの２０％溶液(水性)(pH６．１〜６．３)で処理した。混合物を周囲温度に冷却し、有機及び水性層を分離した。有機層を水(約１．５kg)で洗浄した。有機及び水性層を分離した。次いで有機層をNaOHの０．５％溶液で洗浄した。２層の分離後、マラチオンを含む有機層を水で２回(各洗浄に約１Lの水を使用した)洗浄すると、約０．７５〜０．９５kgのマラチオンが得られた。この工程におけるマラチオンの純度をHPLCにより測定した。マラチオン中に５％(w/w)より多いジエチルフマレートが存在する場合には、物質を亜硫酸水素ナトリウム用液及び水を用いた処理により再処理した。再処理後、マラチオンを純度に関して２度目の分析を実施した。この再処理工程は、マラチオンの純度の特徴が前述のようなジエチルフマレートの除去基準に適合するまで繰り返しうる。
【実施例４】
【００２８】
精製後のマラチオンの分析
マラチオンの純度及び存在する不純物の百分率を、種々の波長の検出器を用いHPLC機器により測定した。移動相組成物及び/又は流速を、クロマトグラフィーパラメータにあうように調整した。マラチオンの２種の異なる試料のバッチに関するHPLC分析の結果を以下の表１に示す。
【００２９】
【表１】
0005474347.tif 000004
【実施例５】
【００３０】
マラチオンの共沸蒸留
実施例４に記載したようにして形成したマラチオンに水(２．８kg)を添加し、得られる２相混合物を、約３５〜５０℃の温度及び約３０〜６０mbarの圧力下で４日間共沸蒸留した。水を約１時間間隔で混合物に添加し、その期間に共沸蒸留により除去される量を置換した(各回約０．２〜０．７L)。全部で約３４．２Lの水がこの工程中に蒸留された。２相混合物を２〜３０℃に冷却し、相を分離すると、マラチオン(０．８４kg)(マラチオンは湿っていて水を含むことに注目されたい)が得られた。
得られたマラチオンの純度はHPLCを用いて決定し、結果を表２に示す。
【００３１】
【表２】
0005474347.tif 000005
【００３２】
これらのデータは、実施例３のマラチオンから９７％(w/w)以上のMeOOSPSが除去されたことを示す。これらのデータは更に、精製されたマラチオンが０．０７％(w/w)しかイソマラチオンを含まないことを示す。
【実施例６】
【００３３】
本発明の方法により調製されたマラチオンの試料バッチの分析
以下に示す表３においては、本発明の方法により調製したマラチオンの３種の異なるバッチ(これらのバッチは、表中ではA、B及びCと示されている)を乾燥後前述のようにマラチオン純度及び不純物の存在に関してHPLCにより分析した。比較として、マラチオンの以下の試料を分析した。米国薬局方から製薬学的使用に認可されたマラチオン(“USP”)及びCheminovaから得られる医薬品に使用されるマラチオン(本明細書においては、Cheminova A/S, Thyborenvej 78 DK-7673 Harboere, Denmarkと言及される)。これらの試料、すなわちUSP及びCheminovaの純度を、本発明の方法により調製したマラチオンの純度と比較した。分析の結果を表３に示す。
【００３４】
【表３】
0005474347.tif 000006
【００３５】
USPマラチオンと比較すると、本発明の方法により調製されたマラチオンは、USPマラチオンの０．２７％(w/w)に対して、より少ない＜０．０２％(w/w)のイソマラチオンを含む。更に、(i)本発明の方法により調製されたマラチオンには、USPマラチオンの０．０４％(w/w)に対してより少ない＜０．０２％(w/w)のMeOSSPOが存在し、(ii)本発明の方法により調製されたマラチオンには、USPマラチオンの０．０５％(w/w)に対してより少ない＜０．０１％(w/w)のジエチルフマレートが存在し、(iii)本発明の方法により調製されたマラチオンには、USPマラチオンの０．１７％(w/w)に対してより少ない０．０６〜０．０７％(w/w)のメチルマラチオンが存在し、(iv)本発明の方法により調製されたマラチオンには、USPマラチオンの０．７７％(w/w)に対してより少ない＜０．０３％(w/w)のマラチオンカルボン酸が存在し、かつ本発明の方法により調製されたマラチオンには、USPマラチオンの０．０４％(w/w)に対してより少ない＜０．０１％(w/w)のメルカプトスクシネートが存在する。
Cheminovaからのマラチオンと比較すると、本発明の方法により調製されたマラチオンは、Cheminovaからのマラチオンの０．２％(w/w)に対して、より少ない＜０．０２％(w/w)のイソマラチオンを含む。更に、(i)本発明の方法により調製されたマラチオンには、USPマラチオンの０．０５％(w/w)に対してより少ない＜０．０２％(w/w)のMeOOSPOが存在し、(ii)本発明の方法により調製されたマラチオンには、Cheminovaからのマラチオンの０．０２％(w/w)に対してより少ない＜０．０１％(w/w)のジエチルフマレートが存在し、かつ(iii)本発明の方法により調製されたマラチオンには、Cheminovaからのマラチオンの０．１〜０．２％(w/w)に対してより少ない０．０６〜０．０７％(w/w)のメチルマラチオンが存在する。
【００３６】
精製のこの工程におけるマラチオンの実施態様には、以下のものが含まれる。
(i)約９８．５％(w/w)より多いマラチオン、約０．１％(w/w)未満のMeOOSPO、約０．１％(w/w)未満のMeOSSPO、約０．１％(w/w)未満のマラオクソン、約０．２％(w/w)未満のMeOOSPS、約０．２％(w/w)未満のジエチルフマレート、約０．３％(w/w)未満のメチルマラチオン、及び/又は約０．１％(w/w)未満のイソマラチオン；
(ii)約９８．５％(w/w)より多いマラチオン、約０．１％(w/w)未満のMeOOSPO、約０．１％(w/w)未満のMeOSSPO、約０．１％(w/w)未満のマラオクソン、約０．２％(w/w)未満のMeOOSPS、約０．２％(w/w)未満のジエチルフマレート、約０．３％(w/w)未満のメチルマラチオン、約０．３％(w/w)未満のO,O-メチル,エチル S-(1,2-ジカルボエトキシ)エチル ホスホロジチオエート、約０．０３％(w/w)未満のマラチオンカルボン酸及び/又は約０．１％(w/w)未満のイソマラチオン；
(iii)約９９．０％(w/w)より多いマラチオン、約０．１％(w/w)未満のMeOOSPO、約０．１％(w/w)未満のMeOSSPO、約０．１％(w/w)未満のマラオクソン、約０．２％(w/w)未満のMeOOSPS、約０．２％(w/w)未満のジエチルフマレート、約０．３％(w/w)未満のメチルマラチオン、及び/又は約０．１％(w/w)未満のイソマラチオン；
(iv)約９９．０％(w/w)より多いマラチオン、約０．１％(w/w)未満のMeOOSPO、約０．１％(w/w)未満のMeOSSPO、約０．１％(w/w)未満のマラオクソン、約０．２％(w/w)未満のMeOOSPS、約０．２％(w/w)未満のジエチルフマレート、約０．３％(w/w)未満のメチルマラチオン、約０．３％(w/w)未満のO,O-メチル,エチル S-(1,2-ジカルボエトキシ)エチル ホスホロジチオエート、約０．３％(w/w)未満のマラチオン、約０．３％(w/w)未満のマラチオンカルボン酸(O,O-ジメチル-S-(1-カルボキシ-2-カルボキシエトキシ)エチル ホスホロジチオエート及び/又はO,O-ジメチル-S-(1-カルボキシ-2-カルボキシ)エチル ホスホロジチオエート)、約０．１％(w/w)未満のイソマラチオン；
(v)約９９．０％(w/w)より多いマラチオン、約０．１％(w/w)未満のイソマラチオン及び/又は約０．３％(w/w)未満のマラチオンカルボン酸；
(vi)約９９．０％(w/w)より多いマラチオン、約０．０２％(w/w)未満のイソマラチオン及び/又は約０．０３％(w/w)未満のマラチオンカルボン酸；
(vii)約９９．０％(w/w)より多いマラチオン、約０．０２％(w/w)未満のイソマラチオン、約０．０３％(w/w)未満のマラチオンカルボン酸、約０．１％(w/w)未満のMeOOSPO、約０．１％(w/w)未満のMeOSSPO及び/又は約０．２％(w/w)未満のMeOSSPS；及び
(viii)約９９．０％(w/w)より多いマラチオン、約０．０２％(w/w)未満のイソマラチオン、約０．０３％(w/w)未満のマラチオンカルボン酸、約０．０４％(w/w)未満のMeOOSPO、約０．０２％(w/w)未満のMeOSSPO及び/又は約０．１％(w/w)未満のMeOSSPS。
更に、前述の実施態様のいずれかにおいては、精製のこの工程におけるマラチオンに０．１％(w/w)未満のいずれかのその他の検出しうる不純物が存在しうる。
【実施例７】
【００３７】
マラチオンの貯蔵安定性
表４は、種々の異なる条件下における貯蔵後の２種の異なるマラチオンの分析データを示す。
【００３８】
【表４】
0005474347.tif 000007
【００３９】
表４は、本発明の方法により調製されたマラチオンの２種の異なるバッチについての、これらの試験条件下における３ヶ月の貯蔵後のHPLC分析の結果を示す。
本発明は、種々の異なる条件下における貯蔵後に安定であるということを特徴とするマラチオンを提供する。安定性は、イソマラチオン、MeOOSPO、MeOSSPO及びMeOOSPSの量が貯蔵後に０．２%(w/w)以下であることを特徴とする。
５℃における３ヶ月の貯蔵後、マラチオンは、約９８．５％(w/w)より多いマラチオン、約０．１％(w/w)未満のMeOOSPO、約０．１％(w/w)未満のMeOSSPO、約０．１％(w/w)未満のマラオクソン、約０．２％(w/w)未満のMeOOSPS、約０．２％(w/w)未満のジエチルフマレート、約０．２％(w/w)未満のジメチルマラチオン、約０．３％(w/w)未満のメチルマラチオン及び/又は約０．１％(w/w)未満のイソマラチオンの純度/不純物の特徴を有するかもしれない。別の実施態様においては、５℃における３ヶ月の貯蔵後のマラチオンの特徴は、約９９．７％(w/w)より多いマラチオン、約０．０４％(w/w)未満のMeOOSPO、約０．０２％(w/w)未満のMeOSSPO、約０．０５％(w/w)未満のマラオクソン、約０．１％(w/w)未満のMeOOSPS、約０．０１％(w/w)未満のジエチルフマレート、約０．０２％(w/w)未満のジメチルマラチオン、約０．０６％(w/w)未満のメチルマラチオン及び/又は約０．０５％(w/w)未満のイソマラチオンである。
【００４０】
２５℃、６０％の相対湿度における３ヶ月の貯蔵後、マラチオンは、約９８．５％(w/w)より多いマラチオン、約０．１％(w/w)未満のMeOOSPO、約０．１％(w/w)未満のMeOSSPO、約０．１％(w/w)未満のマラオクソン、約０．２％(w/w)未満のMeOOSPS、約０．２％(w/w)未満のジエチルフマレート、約０．２％(w/w)未満のジメチルマラチオン、約０．３％(w/w)未満のメチルマラチオン及び/又は約０．１％(w/w)未満のイソマラチオンの純度/不純物の特徴を有するかもしれない。第二の実施態様においては、マラチオンは、２５℃、６０％の相対湿度における３ヶ月の貯蔵後に、約９９．０％(w/w)より多いマラチオン、約０．０４％(w/w)未満のMeOOSPO、約０．０２％(w/w)未満のMeOSSPO、約０．０５％(w/w)未満のマラオクソン、約０．１％(w/w)未満のMeOOSPS、約０．０１％(w/w)未満のジエチルフマレート、約０．０２％(w/w)未満のジメチルマラチオン、約０．０６％(w/w)未満のメチルマラチオン及び/又は約０．０４％(w/w)未満のイソマラチオンの特徴を有する。
３０℃及び６０％の相対湿度における３ヶ月の貯蔵後、マラチオンは、約９８．５％(w/w)より多いマラチオン、約０．１％(w/w)未満のMeOOSPO、約０．１％(w/w)未満のMeOSSPO、約０．１％(w/w)未満のマラオクソン、約０．２％(w/w)未満のMeOOSPS、約０．２％(w/w)未満のジエチルフマレート、約０．２％(w/w)未満のジメチルマラチオン、約０．３％(w/w)未満のメチルマラチオン及び/又は約０．１％(w/w)未満のイソマラチオンの純度/不純物の特徴を有するかもしれない。第二の実施態様においては、マラチオンは、３０℃、６０％の相対湿度における３ヶ月の貯蔵後に、約９９．０％(w/w)より多いマラチオン、約０．０４％(w/w)未満のMeOOSPO、約０．０２％(w/w)未満のMeOSSPO、約０．０５％(w/w)未満のマラオクソン、約０．１％(w/w)未満のMeOOSPS、約０．０１％(w/w)未満のジエチルフマレート、約０．０２％(w/w)未満のジメチルマラチオン、約０．０６％(w/w)未満のメチルマラチオン及び/又は約０．０４％(w/w)未満のイソマラチオンの特徴を有する。
【００４１】
４０℃及び７５％の相対湿度における３ヶ月の貯蔵後、マラチオンは、約９７．０％(w/w)より多いマラチオン、約０．１％(w/w)未満のMeOOSPO、約０．１％(w/w)未満のMeOSSPO、約０．１％(w/w)未満のマラオクソン、約０．２％(w/w)未満のMeOOSPS、約０．２％(w/w)未満のジエチルフマレート、約０．２％(w/w)未満のジメチルマラチオン、約０．３％(w/w)未満のメチルマラチオン及び/又は約０．１％(w/w)未満のイソマラチオンの純度/不純物の特徴を有するかもしれない。第二の実施態様においては、マラチオンは、４０℃、７５％の相対湿度における３ヶ月の貯蔵後に、約９７．５％(w/w)より多いマラチオン、約０．０５％(w/w)未満のMeOOSPO、約０．０２％(w/w)未満のMeOSSPO、約０．０５％(w/w)未満のマラオクソン、約０．２％(w/w)未満のMeOOSPS、約０．０２％(w/w)未満のジエチルフマレート、約０．０２％(w/w)未満のジメチルマラチオン、約０．０６％(w/w)未満のメチルマラチオン及び/又は約０．１％(w/w)未満のイソマラチオンの特徴を有する。
【実施例８】
【００４２】
本発明の方法により調製されたマラチオンを用いて調製したローション配合物の試料は以下の成分を含む。
【００４３】
【表５】
0005474347.tif 000008
【００４４】
マラチオンローション配合物(表５)中の本発明の方法により調製されたマラチオンの安定性を、種々の異なる貯蔵条件下で試験した。各貯蔵条件下における不純物の百分率を分析した。結果を表６に示す。一実施態様においては、ローション中のマラチオンは、５℃における３ヶ月の貯蔵後に、約０．５％(w/w)未満のジエチルフマレート、約０．５％(w/w)未満のメチルマラチオン、約０．１％(w/w)未満のイソマラチオン、約０．１％(w/w)未満のマラオクソン、及び/又は約０．５％(w/w)未満のジメチルマラチオンの純度/不純物の特徴を有する。更に、この実施態様においては、約０．５％(w/w)未満のいずれかのその他の検出しうる不純物が存在する。別の実施態様においては、ローション中のマラチオンは、５℃における３ヶ月の貯蔵後に、約０．０２％(w/w)未満のジエチルフマレート、約０．２％(w/w)未満のメチルマラチオン、約０．０５％(w/w)未満のイソマラチオン、約０．０３％(w/w)未満のマラオクソン、及び/又は約０．０３％(w/w)未満のジメチルマラチオンの純度/不純物の特徴を有する。
２５℃、６０％の相対湿度における３ヶ月の貯蔵後に、ローション中のマラチオンは、約０．５％(w/w)未満のジエチルフマレート、約０．５％(w/w)未満のメチルマラチオン、約０．１％(w/w)未満のイソマラチオン、約０．０３％(w/w)未満のマラオクソン、及び/又は約０．０３％(w/w)未満のジメチルマラチオンの純度/不純物の特徴を有する。更に、この実施態様においては、約０．５％(w/w)未満のいずれかのその他の検出しうる不純物が存在する。別の実施態様においては、ローション中のマラチオンは、２５℃、６０%の相対湿度における３ヶ月の貯蔵後に、約０．０１％(w/w)未満のジエチルフマレート、約０．１％(w/w)未満のメチルマラチオン、約０．０５％(w/w)未満のイソマラチオン、約０．０３％(w/w)未満のマラオクソン、及び/又は約０．０３％(w/w)未満のジメチルマラチオンの純度/不純物の特徴を有する。
【００４５】
３０℃及び６０％の相対湿度における３ヶ月の貯蔵後に、ローション中のマラチオンは、約０．５％(w/w)未満のジエチルフマレート、約０．５％(w/w)未満のメチルマラチオン、約０．１％(w/w)未満のイソマラチオン、約０．０３％(w/w)未満のマラオクソン、及び/又は約０．０３％(w/w)未満のジメチルマラチオンの純度/不純物の特徴を有する。この実施態様においては、約０．５％(w/w)未満のいずれかのその他の検出しうる不純物が存在する。これらの貯蔵条件(３０℃及び６０％の相対湿度)下の第二の実施態様においては、ローション中のマラチオンは、約０．０２％(w/w)未満のジエチルフマレート、約０．０２％(w/w)未満のメチルマラチオン、約０．０５％(w/w)未満のイソマラチオン、約０．０３％(w/w)未満のマラオクソン、及び/又は約０．０３％(w/w)未満のジメチルマラチオンの純度/不純物の特徴を有する。
４０℃及び７５％の相対湿度における３ヶ月の貯蔵後に、ローション中のマラチオンは、約０．５％(w/w)未満のジエチルフマレート、約０．５％(w/w)未満のメチルマラチオン、約０．１％(w/w)未満のイソマラチオン、約０．０３％(w/w)未満のマラオクソン、及び/又は約０．０３％(w/w)未満のジメチルマラチオンの純度/不純物の特徴を有する。この実施態様においては、約０．５％(w/w)未満のいずれかのその他の検出しうる不純物が存在する。これらの貯蔵条件下の第二の実施態様においては、ローション中のマラチオンは、約０．０１％(w/w)未満のジエチルフマレート、約０．０４％(w/w)未満のメチルマラチオン、約０．０７％(w/w)未満のイソマラチオン、約０．０３％(w/w)未満のマラオクソン、及び/又は約０．２２％(w/w)未満のジメチルマラチオンの特徴を有する。
【００４６】
【表６】
0005474347.tif 000009
【実施例９】
【００４７】
分析方法
MeOOSPO、MeOSSPO、マラオクソン、MeOOSPS、ジエチルフマレート、ジメチルマラチオン、メチルマラチオン、O,O-メチル,エチル S-(1,2-ジカルボエトキシ)エチル ホスホロジチオエート、テトラエチルジチオスクシネート、イソマラチオン、マラチオンカルボン酸、メルカプトスクシネート及びテトラエチルチオジスクシネートについてHPLCにより分析した。移動相は、水、アセトニトリル及びメタノール(４８０：３７０：１５０)の混合物及び移動相１０００mlにつき８５％のリン酸１滴であった。方法の検証が実施され、系の再現性、直線性、反復性、中間の精度、関連化合物の回収及び感度は標準的な方法(U.S. Pharmacopeia, 2004, U.S. Pharmacopeial Convention, Inc., 12601 Twinbrook Parkway, Rockville, MD 20852)にしたがって評価した。必要であれば、移動相の組成及び/又は流速はクロマトグラフィーパラメータに適合するように調整した。種々の不純物及びマラチオンの分析パラメータを以下の表７に示す。
【００４８】
【表７】
0005474347.tif 000010
【００４９】
検出限界は、検体が確実に検出されうる最低の濃度(%w/w)である。定量限界は、検体が確実に定量されうる最低の濃度(%w/w)である。検出及び定量の限界は、既知の低濃度の検体を有する試料からの測定された信号をブランク試料からの測定された信号と比較することにより決定した。相対感度因子は、検体及び対応する内部基準(又は代理及び対応する内部基準)に関する検量線により提供される勾配の比である。分解能は、２つのピークの基準における平均ピーク幅に対する分離の比である(tR2＞tR1)。
分解能＝(tR2−tR1)/[(wb1−wb2)/2]＝2(tR2−tR1)/(wb1−wb2)
２つの隣接するピークが、wb1＝wb2であると仮定される場合には、第二のピークの幅が平均値に代わり、分解能＝(tR2−tR1)/wb2となる。
(a)マラチオン分析の算出
％(w/w)分析値(そのまま)＝(Wst×Ssm×Ast)/(Sst×Wsm)
Wst＝マラチオン標準の質量(単位mg)
Wsm＝マラチオン試料の質量(単位mg)
Ssm＝マラチオン試料溶液から得られるマラチオンのピーク面積
Sst＝マラチオン標準溶液から得られるマラチオンの平均ピーク面積
Ast＝マラチオン標準の分析値(単位％)
【００５０】
(b)不純物含量の算出
％(w/w)既知又は未知の不純物(未知の不純物とは、検出しうるが化学的には特性決定されていないそれである)＝(Wst×Ssm×Ast)/(Sst×Wsm×RRF×200)
Wst＝マラチオン標準の質量(単位mg)
Wsm＝マラチオン試料の質量(単位mg)
Ssm＝試料溶液から得られる不純物のピーク面積
Sst＝公知の不純物標準溶液から得られるマラチオンの平均ピーク面積
Ast＝マラチオン標準の分析値(単位％)
RRF＝相対感度因子(未知の不純物に関しては１．０)
注：未知の不純物に関しては、マラチオンに関する検出限界及び定量限界の値を使用し、相対感度因子RRF＝１であった。
(c)マラチオン純度の算出
％(w/w)マラチオン純度＝100−[％(w/w)既知の不純物＋％(w/w)未知の不純物]
(d)試料は、不純物の存在に関して、FID検出器を具備するガスクロマトグラフィー(GC)機器により分析した。使用したクロマトグラフィー条件は、(i)カラム−HP-5、５％フェニルメチルシロキサン又は等価物；(ii)試料注入口−分割；(iii)入口温度−２３０℃；(iv)分割比−１０：１；(v)キャリヤーガス−He、３．５mL/分の一定流速；(vi)注入容量−１μL；(vii)検出−FID；(viii)検出温度−２５０℃；(ix)一定流速＋補給流速−３０．０mL/分；(x)オーブンの開始温度−１００℃；(xi)開始時間−８分；(xii)速度−２５℃；(xiii)最終温度−２２０℃；(xiv)最終時間−７分；(xv)実行時間−１９．８分；及び(xvi)希釈剤−アセトニトリルであった。
【実施例１０】
【００５１】
分析試験用の不純物の調製
(a)O,O,S-トリメチルホスホロジチオエート(MeOOSPS)
【００５２】
【化３】
0005474347.tif 000011
【００５３】
ジメチルジチオリン酸のトルエン溶液を周囲温度において炭酸ナトリウムの存在下でヨウ化メチルと反応させ、トルエンを濾過により除去した。液体残留物を１３０℃で蒸留すると、無色の液体が得られた。
(b)O,S,S-トリメチルホスホロジチオエート(MeOSSPO)
【００５４】
【化４】
0005474347.tif 000012
【００５５】
ジメチルジチオリン酸のトルエン/アセトニトリル混合物溶液をKOHの存在下で２０時間還流した。S,S-ジメチルホスホロジチオエートのカリウム塩が氷/水浴中に沈殿した。塩を濾過により回収した。濾過後、塩をアセトニトリル中に懸濁させ、還流温度において６時間硫酸ジメチルで処理した。次いで水を添加し、過剰のメチル化剤を分解するために混合物を１時間還流した。反応混合物を濾過し、溶剤を蒸発させた。残留物をクロロホルムに抽出させ、クロロホルム層を水で洗浄した。クロロホルム層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、残留物を減圧蒸留すると、MeOSSPOが得られた。
(c)トリメチルホスホロチオエート(MeOOSPO)
【００５６】
【化５】
0005474347.tif 000013
【００５７】
予め冷却したジメチルジチオリン酸のトルエン溶液を、５〜１０℃の反応温度に保持しながらCl2で処理した。次いで、混合物を還流温度に１．５時間加熱した。室温に冷却した後、塩基性(pH＞７．０)になるまでKOHの水溶液を反応混合物に滴下した。有機及び水性層を分離し、水性層は蒸発させて乾燥させた。アクリロニトリルを固体残留物に添加し、混合物を濾過してアセトニトリルを蒸発させた。残留物をアクリロニトリルに再び懸濁させ、周囲温度において１０時間ヨウ化メチルで処理した。溶剤を蒸発させ、残留物を酢酸エチルで抽出した。抽出後、酢酸エチルを蒸発させて乾燥させた。残留液体を減圧蒸留するとMeOOSPOが得られた。
(d)イソマラチオン
【００５８】
【化６】
0005474347.tif 000014
【００５９】
この生成物は、米国薬局方基準ゲージ (B.No. F 1 B 107) (www.usp.org) から市販されている。
(e)マラオクソン
【００６０】
【化７】
0005474347.tif 000015
【００６１】
この生成物は、ヨーロッパ薬局方化学的基準物質 (Ph. Eur. CRS) マラオクソン CRS (マラオクソン不純物 B), B.No. 2.(www.pheur.org) から市販されている。
(f)ジメチルマラチオン
【００６２】
【化８】
0005474347.tif 000016
【００６３】
マラチオン、メタノール及び触媒量の濃硫酸の混合物を７時間還流した。周囲温度に冷却した後、溶液を炭酸水素ナトリウムの水溶液で処理した。溶液を蒸発させ、クロロホルムに抽出させた。次いでクロロホルム層を濾過した。クロロホルム層は、マラチオン、モノメチルマラチオン及びジメチルマラチオンの混合物を含有した。ジメチルマラチオンを分取HPLCにより単離した。
(g)メチルマラチオン
【００６４】
【化９】
0005474347.tif 000017
【００６５】
モノメチルマラチオンは、(f)に記載した反応混合物から分取HPLCにより単離した。
(h)ジエチルフマレート
【００６６】
【化１０】
0005474347.tif 000018
【００６７】
ジエチルフマレートB.No. DEF M-354は、SigmaAldrich (www.sigmaaldrich.com)から購入した。
(i)O,O-ジメチル-S-(1-カルボキシ-2-カルボエトキシ)エチル ホスホロジチオエート及び対応するエチル類似物(マラチオンカルボン酸)
【００６８】
【化１１】
0005474347.tif 000019
【００６９】
マラチオン一塩基酸は、N.LeeWolfeらにより記載されているようにして調製した( J. Agric. Food Chem.  23(6):121-1215 (1976))
(j)O,O-メチルエチル S-(1,2-ジカルボエトキシ)エチル ホスホロジチオエート
【００７０】
【化１２】
0005474347.tif 000020
【００７１】
前記化学物質は２つの化学工程及び１つの精製工程により調製した。
(i)工程I：ジチオロ酸の調製
２０gのP2S5をトルエンに懸濁させた。温度を７０℃未満に保持しながら、メタノール：エタノールの１：１(v/v)混合物を滴下した。メタノール：エタノールの添加後、反応混合物に空気をバブリングさせ、溶解しているH2Sを除去した。次いで混合物を周囲温度に冷却し、濾過により未反応P2S5を除去した。トルエン溶液を水で抽出した。
(ii)工程II：粗マラチオン誘導体の調製
ジチオロ酸を含む水性層を５５℃においてヒドロキノンとともにジエチルマレエートで処理した。５時間後、反応混合物を周囲温度に冷却して層を分離した。低い方の有機層を水で２回洗浄し、反応混合物をガスクロマトグラフィー及びHPLCにより分析した。３種の主要な生成物：(i)マラチオン(１９．３％)；(ii)O,O-メチルエチル S-(1,2-ジカルボエトキシ)エチル ホスホロジチオエート(３８．８２％)；及び(iii)O,O-ジエチル S-(1,2-ジカルボエトキシ)エチル ホスホロジチオエート(８．８７％)が存在した(データは％面積として示される)。
(iii)工程III：O,O-メチルエチル S-(1,2-ジカルボエトキシ)エチル ホスホロジチオエートの精製
生成物は分取HPLCにより単離された。
【００７２】
(k)ジエチル2-メルカプトスクシネート-対応するメルカプト二酸(１０g)を、１gの９８％硫酸の存在下還流温度で３時間、１００mlの無水エタノールでエステル化した。次いで反応混合物を周囲温度に冷却し、大部分のエタノールを減圧下で除去した。水及び酢酸エチルを残留物に添加した。層を分離し、有機溶剤を除去すると、ガスクロマトグラフィーによる純度が９６％(w/w)の無色の生成物が得られた。
(l)テトラエチルジチオスクシネート-ジエチル2-メルカプトスクシネートを、触媒量のHCl(３２％)の存在下周囲温度で１６時間３０％(v/v)の過酸化水素で処理した。反応混合物を酢酸エチルで抽出し、有機層を水酸化ナトリウムの２％水溶液で洗浄すると、未反応出発物質が除去された。溶剤を除去すると、９５％の純度(GC)の無色の生成物が得られた。
(m)テトラエチルチオスクシネート-ジエチル2-メルカプトスクシネートのナトリウム塩を、周囲温度において２層(トルエン/水)系でジエチルマレエートと反応させると、所望の生成物が得られた。
【００７３】
本発明の記載においては、特許及び種々の出版物を含む多くの参考文献を引用して論述した。そのような参考文献の引用及び論述は、本発明の記載を明らかにするためにのみ提供するのであって、いずれかの参考文献が本明細書に記載されている本発明より前の技術であるという告白ではない。本明細書において引用及び論述された参考文献はすべて参考として本明細書に導入されている。本明細書において説明及び論述された実施態様は当業者に本発明を発明して使用するための本発明者に公知の最良の方法を教示することのみを意図する。本明細書における記載はいずれも本発明の範囲の限定とみなされるべきではない。前述の教示から当業者により認められるように、前述の本発明の実施態様の改良及び変更は、本発明から逸脱することなく可能である。したがって、特許請求の範囲及びそれらの等価物の範囲内で本発明は、明細書に記載されている以外に実施されうることは理解されよう。