(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉの化合物：
【化４５】
0005526020.tif 000093
またはその薬学的に受容可能な塩であって、ここで、
Ｔは−ＮＨＣ（Ｏ）−または−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−であり、
ＷはＣＨまたはＮであり、
Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、およびＲｄは、それぞれ独立して、Ｒ、ＯＲ、またはハロゲンから選択され、
各Ｒは、独立して、水素、Ｃ１〜４直鎖もしくは分岐アルキル、またはＣ１〜４直鎖もしくは分岐ハロアルキルであり、
Ｒ１は−Ｌ−Ｙであり、
Ｌは二価のＣ２〜８直鎖もしくは分岐炭化水素鎖であり、Ｌは少なくとも１つの二重結合を有し、Ｌの少なくとも１つのメチレン単位は、シクロプロピレン、−ＮＲＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ−、−Ｎ（Ｒ）ＳＯ２−、−ＳＯ２Ｎ（Ｒ）−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、−ＳＯ２−、−Ｃ（＝Ｓ）−、−Ｃ（＝ＮＲ）−、または−Ｃ（＝Ｎ２）−により置き換えられ、Ｌのさらに１つまたは２つのメチレン単位は、随意に、かつ独立して、シクロプロピレン、−Ｏ−、−Ｎ（Ｒ）−、または−Ｃ（Ｏ）−により置き換えられ、あるいは
Ｌは二価のＣ２〜８直鎖もしくは分岐炭化水素鎖であり、Ｌは少なくとも１つの三重結合を有し、Ｌのさらに１つまたは２つのメチレン単位は、随意に、かつ独立して、−ＮＲＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、−ＳＯ２−、−Ｃ（＝Ｓ）−、−Ｃ（＝ＮＲ）−、−Ｏ−、−Ｎ（Ｒ）−、または−Ｃ（Ｏ）−により置き換えられ、あるいは
Ｌは二価のＣ２〜８直鎖もしくは分岐炭化水素鎖であり、Ｌの１つのメチレン単位は、シクロプロピレンにより置き換えられ、Ｌのさらに１つまたは２つのメチレン単位は、独立して、−Ｃ（Ｏ）−、−ＮＲＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ−、−Ｎ（Ｒ）ＳＯ２−、または−ＳＯ２Ｎ（Ｒ）−により置き換えられ、あるいは
Ｌは二価のＣ１〜８直鎖もしくは分岐アルキレン鎖であり、Ｌの少なくとも１つのメチレン単位は、−Ｃ（＝Ｎ２）−により置き換えられ、Ｌのさらに１つまたは２つのメチレン単位は、随意に、かつ独立して、−ＮＲＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、−ＳＯ２−、−Ｃ（＝Ｓ）−、−Ｃ（＝ＮＲ）−、−Ｏ−、−Ｎ（Ｒ）−、または−Ｃ（Ｏ）−により置き換えられ、
Ｙは、水素、随意に、オキソ、ハロゲン、もしくはＣＮで置換されたＣ１〜６脂肪族、または窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される０〜３個のヘテロ原子を有する３〜１０員の単環もしくは二環の、飽和環、部分不飽和環、もしくはアリール環であり、該環は、−Ｑ−Ｚ、オキソ、ハロゲン、ＣＮ、またはＣ１〜６脂肪族から独立して選択される１〜４個の基で置換され、
Ｑは、共有結合または二価のＣ１〜６飽和もしくは不飽和の、直鎖もしくは分岐炭化水素鎖であり、Ｑの１つまたは２つのメチレン単位は、随意に、かつ独立して、−ＮＲ−、−ＮＲＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ−、−Ｓ−、−Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）−、−ＳＯ−、または−ＳＯ２−により置き換えられ、
Ｚは、水素、または、随意に、オキソ、ハロゲン、もしくはＣＮで置換されたＣ１〜６脂肪族であり、
Ｒ２はＲ、ハロゲン、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）ＯＲ、またはＲで置換された１−イミダゾイルから選択されるか、または
Ｒ１およびＲ２は、それらの介在原子と組み合わされ、窒素、酸素、または硫黄から独立して選択される０〜３個のヘテロ原子を有する５〜７員の飽和環、部分不飽和環、もしくはアリール環であって、該環は、−Ｌ−Ｙ、およびオキソ、ハロゲン、ＣＮ、またはＣ１〜６脂肪族から独立して選択される０〜３個の基で置換される、環を形成し、
Ｒ３は水素、Ｃ１〜４直鎖もしくは分岐アルキル、またはハロゲンから選択される、化合物。
【請求項２】
前記化合物は式ＩＩ−ａもしくはＩＩＩ−ａの化合物：
【化４６】
0005526020.tif 000094
またはそれらの薬学的に受容可能な塩であって、ここで、
Ｌは二価のＣ２〜８直鎖もしくは分岐炭化水素鎖であり、Ｌは少なくとも１つの二重結合を有し、Ｌの少なくとも１つのメチレン単位は、シクロプロピレン、−ＮＲＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ−、−Ｎ（Ｒ）ＳＯ２−、−ＳＯ２Ｎ（Ｒ）−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、−ＳＯ２−、−Ｃ（＝Ｓ）−、−Ｃ（＝ＮＲ）−、−Ｎ＝Ｎ−、または−Ｃ（＝Ｎ２）−により置き換えられ、Ｌのさらに１つまたは２つのメチレン単位は、随意に、かつ独立して、−Ｏ−、−Ｎ（Ｒ）−、または−Ｃ（Ｏ）−により置き換えられ、
Ｒ２は、Ｒ、ハロゲン、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）ＯＲ、またはＲで置換された１−イミダゾイルから選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｙは、水素、または、随意に、オキソ、ハロゲン、もしくはＣＮで置換されたＣ１〜６脂肪族であり、
Ｒ３はＣ１〜４直鎖もしくは分岐アルキルである、請求項２に記載の化合物。
【請求項４】
Ｌは、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ＝ＣＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ＝ＣＨＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ＝ＣＨＣＨ２Ｏ−、−ＣＨ２ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ＝ＣＨ−、−ＮＨＳＯ２ＣＨ＝ＣＨ−、−ＮＨＳＯ２ＣＨ＝ＣＨＣＨ２−、−ＮＨＣ（Ｏ）（Ｃ＝Ｎ２）−、−ＮＨＣ（Ｏ）（Ｃ＝Ｎ２）Ｃ（Ｏ）−、または−ＮＨＣ（Ｏ）Ｃ（＝ＣＨ２）ＣＨ２−である、請求項２または３のいずれかに記載の化合物。
【請求項５】
Ｌは少なくとも１つのアルキリデニル二重結合を有する、請求項２に記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ２は、水素、−ＣＦ３、またはＲで置換された１−イミダゾイルである、請求項２、３、４、または５に記載の化合物。
【請求項７】
Ｌは二価のＣ２〜８直鎖もしくは分岐炭化水素鎖であり、Ｌは少なくとも１つの三重結合を有し、Ｌのさらに１つまたは２つのメチレン単位は、随意に、かつ独立して、−ＮＲＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、−ＳＯ２−、−Ｃ（＝Ｓ）−、−Ｃ（＝ＮＲ）−、−Ｏ−、−Ｎ（Ｒ）−、または−Ｃ（Ｏ）−により置き換えられる、請求項１に記載の化合物。
【請求項８】
Ｌは、−Ｃ≡Ｃ−、−Ｃ≡ＣＣＨ２Ｎ（イソプロピル）−、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｃ≡ＣＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２−Ｃ≡Ｃ−ＣＨ２−、または−Ｃ≡ＣＣＨ２Ｏ−であり、
Ｙは、水素、随意に、オキソ、ハロゲン、もしくはＣＮで置換されたＣ１〜６脂肪族、フェニル、ピリジル、または窒素、酸素、または硫黄から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を有する随意に置換された飽和３〜６員の単環であり、該環は、−Ｑ−Ｚ、オキソ、ハロゲン、ＣＮ、またはＣ１〜６脂肪族から独立して選択される１〜４基で置換される、請求項７に記載の化合物。
【請求項９】
Ｌは二価のＣ２〜８直鎖もしくは分岐炭化水素鎖であり、Ｌの１つのメチレン単位は、シクロプロピレンにより置き換えられ、Ｌのさらに１つまたは２つのメチレン単位は、独立して、−Ｃ（Ｏ）−、−ＮＲＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ−、−Ｎ（Ｒ）ＳＯ２−、または−ＳＯ２Ｎ（Ｒ）−により置き換えられる、請求項１に記載の化合物。
【請求項１０】
Ｌは、−ＮＨＣ（Ｏ）−シクロプロピレン−ＳＯ２−および−ＮＨＣ（Ｏ）−シクロプロピレン−であり、
Ｙは、水素、ＣＮ、または、随意に、オキソ、ハロゲン、もしくはＣＮで置換されたＣ１〜６脂肪族である、請求項９に記載の化合物。
【請求項１１】
式Ｉの化合物：
【化４５Ａ】
0005526020.tif 000095
またはその薬学的に受容可能な塩であって、ここで、
Ｔは−ＮＨＣ（Ｏ）−または−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−であり、
ＷはＣＨまたはＮであり、
Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、およびＲｄは、それぞれ独立して、Ｒ、ＯＲ、またはハロゲンから選択され、
各Ｒは、独立して、水素、Ｃ１〜４直鎖もしくは分岐アルキル、またはＣ１〜４直鎖もしくは分岐ハロアルキルであり、
Ｒ１は−Ｌ−Ｙであり、
Ｌは、共有結合または二価のＣ１〜８飽和もしくは不飽和の、直鎖もしくは分岐炭化水素鎖であり、Ｌの１つ、２つ、または３つのメチレン単位は、随意に、かつ独立して、−ＮＲ−、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）−、−Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ−、−ＳＯ−、−ＳＯ２−、または−Ｃ（＝Ｓ）−により置き換えられ、
Ｙは、以下：
【化４７】
0005526020.tif 000096
【化４８】
0005526020.tif 000097
【化４９】
0005526020.tif 000098
【化５０】
0005526020.tif 000099
から選択され、
Ｒ２はＲ、ハロゲン、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）ＯＲ、またはＲで置換された１−イミダゾイルから選択されるか、または
Ｒ１およびＲ２は、それらの介在原子と組み合わされ、窒素、酸素、または硫黄から独立して選択される０〜３個のヘテロ原子を有する５〜７員の飽和環、部分不飽和環、もしくはアリール環であって、該環は、−Ｌ−Ｙ、およびオキソ、ハロゲン、ＣＮ、またはＣ１〜６脂肪族から独立して選択される０〜３個の基で置換される、環を形成し、
Ｒ３は水素、Ｃ１〜４直鎖もしくは分岐アルキル、またはハロゲンから選択される、化合物。
【請求項１２】
Ｌは、共有結合、−ＣＨ２−、−ＮＨ−、−ＣＨ２ＮＨ−、−ＮＨＣＨ２−、−ＮＨＣ（Ｏ）−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＯＣ（Ｏ）−、−ＣＨ２ＮＨＣ（Ｏ）−、−ＮＨＳＯ２−、−ＮＨＳＯ２ＣＨ２−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＯＣ（Ｏ）−、または−ＳＯ２ＮＨ−である、請求項１１に記載の化合物。
【請求項１３】
Ｌは二価のＣ１〜８直鎖もしくは分岐アルキレン鎖であり、Ｌの少なくとも１つのメチレン単位は、−Ｃ（＝Ｎ２）−により置き換えられ、Ｌのさらに１つまたは２つのメチレン単位は、随意に、かつ独立して、−ＮＲＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、−ＳＯ２−、−Ｃ（＝Ｓ）−、−Ｃ（＝ＮＲ）−、−Ｏ−、−Ｎ（Ｒ）−、または−Ｃ（Ｏ）−により置き換えられる、請求項１に記載の化合物。
【請求項１４】
Ｌは、−ＮＨＣ（Ｏ）（Ｃ＝Ｎ２）−または−ＮＨＣ（Ｏ）（Ｃ＝Ｎ２）Ｃ（Ｏ）−であり、
Ｙは、水素、または随意に、オキソ、ハロゲン、もしくはＣＮで置換されたＣ１〜６脂肪族、または窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を有する随意に置換された飽和３〜６員の単環、フェニルまたはピリジルである、請求項１３に記載の化合物。
【請求項１５】
前記化合物は式ＩＩ−ａもしくはＩＩＩ−ａの化合物：
【化５１】
0005526020.tif 000100
またはそれらの薬学的に受容可能な塩であり、ここで、
Ｒ１およびＲ２は、それらの介在原子と組み合わされ、窒素、酸素、または硫黄から独立して選択される０〜３個のヘテロ原子を有し、−Ｌ−Ｙで置換される５〜７員の飽和環、部分不飽和環、もしくはアリール環であって、該環は、オキソ、ハロゲン、ＣＮ、またはＣ１〜６脂肪族から独立して選択される０〜３個の基でさらに置換される、環を形成する、請求項１に記載の化合物。
【請求項１６】
Ｒ１およびＲ２は、それらの介在原子と組み合わされ、それらと縮合したフェニル環とともに、ナフチル、テトラヒドロキノリン、インドリン、イソインドリン、１Ｈ−インドール、またはテトラヒドロイソキノリン環を形成する、請求項１５に記載の化合物。
【請求項１７】
−Ｌ−Ｙは、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ＝ＣＨ２または−Ｃ（Ｏ）ＣＨ＝ＣＨ２である、請求項１５または１６のいずれかに記載の化合物。
【請求項１８】
下記：
【化５２】
0005526020.tif 000101
【化５３】
0005526020.tif 000102
【化５３Ａ】
0005526020.tif 000103
【化５３Ｂ】
0005526020.tif 000104
【化５４】
0005526020.tif 000105
【化５５】
0005526020.tif 000106
【化５６】
0005526020.tif 000107
【化５７】
0005526020.tif 000108
からなる群から選択される、化合物。
【請求項１９】
下記：
【化５８】
0005526020.tif 000109
【化５９】
0005526020.tif 000110
【化６０】
0005526020.tif 000111
からなる群から選択される、化合物。
【請求項２０】
下記の構造：
【化６１】
0005526020.tif 000112
の化合物。
【請求項２１】
下記の構造：
【化６２】
0005526020.tif 000113
の化合物。
【請求項２２】
下記の構造：
【化６３】
0005526020.tif 000114
の化合物。
【請求項２３】
下記の構造：
【化６４】
0005526020.tif 000115
の化合物。
【請求項２４】
下記の構造：
【化６５】
0005526020.tif 000116
の化合物。
【請求項２５】
下記の構造：
【化６６】
0005526020.tif 000117
の化合物。
【請求項２６】
請求項１に記載の化合物、および薬学的に受容可能なアジュバント、担体、もしくは賦形剤を含む組成物。
【請求項２７】
さらなる治療薬と組み合わせた請求項２６に記載の組成物。
【請求項２８】
前記さらなる治療薬は化学療法薬である、請求項２７に記載の組成物。
【請求項２９】
生物学的サンプル中のＰＤＧＦＲ、ｃＫｉｔ、ＫＤＲ、またはｃＦＭＳ活性を阻害する方法であって、該生物学的サンプルを請求項１に記載の化合物またはその組成物と接触させる工程を包含する、方法。
【請求項３０】
患者のＰＤＧＦＲ、ｃ−ＫＩＴ、ＫＤＲ、またはｃＦＭＳ活性を阻害するための組成物であって、請求項１に記載の化合物を含む、組成物。
【請求項３１】
患者のＰＤＧＦＲ、ｃ−ＫＩＴ、ＫＤＲ、またはｃＦＭＳ活性を阻害するための組成物であって、請求項１に記載の化合物を含み、該ＰＤＧＦＲ、ｃ−ＫＩＴ、ＫＤＲ、またはｃＦＭＳ活性は不可逆的に阻害される、組成物。
【請求項３２】
前記ＰＤＧＦＲ、ｃ−ＫＩＴ、ＫＤＲ、またはｃＦＭＳ活性は、ＰＤＧＦＲ−αのＣｙｓ８１４、ＰＤＧＦＲ−βのＣｙｓ８２２、ＫＤＲのＣｙｓ１０２４、ｃ−ＫＩＴのＣｙｓ７８８、またはｃＦＭＳのＣｙｓ７７４を共有結合的に修飾することにより不可逆的に阻害される、請求項３１に記載の組成物。
【請求項３３】
処置を必要とする患者におけるＰＤＧＦＲ、ｃ−ＫＩＴ、ＫＤＲ、またはｃＦＭＳの媒介による疾患を処置するための組成物であって、請求項１に記載の化合物を含む、組成物。
【請求項３４】
処置を必要とする患者におけるＰＤＧＦＲ、ｃ−ＫＩＴ、ＫＤＲ、またはｃＦＭＳの媒介による疾患を処置するための薬剤であって、該薬剤は、請求項３３に記載の組成物を含み、ＰＤＧＦＲ−αのＣｙｓ８１４、ＰＤＧＦＲ−βのＣｙｓ８２２、ＫＤＲのＣｙｓ１０２４、ｃ−ＫＩＴのＣｙｓ７８８、またはｃＦＭＳのＣｙｓ７７４を共有結合的に修飾することによりＰＤＧＦＲ、ｃ−ＫＩＴ、ＫＤＲ、またはｃＦＭＳを不可逆的に阻害することを特徴とする、薬剤。
【請求項３５】
下記のいずれかの式の結合体であって：
【化６７】
0005526020.tif 000118
前記Ｃｙｓ８１４はＰＤＧＦＲ−αのＣｙｓ８１４であり、前記Ｃｙｓ８２２はＰＤＧＦＲ−βのＣｙｓ８２２であり、前記Ｃｙｓ７８８はｃ−ＫＩＴのＣｙｓ７８８であり、前記Ｃｙｓ７７４はｃＦＭＳのＣｙｓ７７４であり、前記Ｃｙｓ１０２４はＫＤＲのＣｙｓ１０２４であり、
各Ｔは−ＮＨＣ（Ｏ）−または−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−であり、
各ＷはＣＨまたはＮであり、
Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、およびＲｄの各々は、独立して、Ｒ、ＯＲ、またはハロゲンから選択され、
各Ｒは、独立して、水素、Ｃ１〜４直鎖もしくは分岐アルキル、またはＣ１〜４直鎖もしくは分岐ハロアルキルであり、
各リンカーは、Ｃｙｓ８１４、Ｃｙｓ８２２、Ｃｙｓ７８８、Ｃｙｓ７７４およびＣｙｓ１０２４のいずれかと結合する前は、構造−Ｌ−Ｙを有する二価の基であり、
Ｌは二価のＣ２〜８飽和もしくは不飽和の、直鎖もしくは分岐炭化水素鎖であり、Ｌの少なくとも１つのメチレン単位は、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、−ＳＯ２−、−Ｃ（＝Ｓ）−、−Ｃ（＝ＮＲ）−、または−Ｃ（＝Ｎ２）−により置き換えられ、Ｌのさらに１つまたは２つのメチレン単位は、随意に、かつ独立して、−Ｏ−、−Ｎ（Ｒ）−、または−Ｃ（Ｏ）−により置き換えられ、あるいは
Ｌは二価のＣ２〜８直鎖もしくは分岐炭化水素鎖であり、Ｌは少なくとも１つの二重結合を有し、Ｌの少なくとも１つのメチレン単位は、シクロプロピレン、−ＮＲＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ−、−Ｎ（Ｒ）ＳＯ２−、−ＳＯ２Ｎ（Ｒ）−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、−ＳＯ２−、−Ｃ（＝Ｓ）−、−Ｃ（＝ＮＲ）−、または−Ｃ（＝Ｎ２）−により置き換えられ、Ｌのさらに１つまたは２つのメチレン単位は、随意に、かつ独立して、シクロプロピレン、−Ｏ−、−Ｎ（Ｒ）−、または−Ｃ（Ｏ）−により置き換えられ、あるいは
Ｌは二価のＣ２〜８直鎖もしくは分岐炭化水素鎖であり、Ｌは少なくとも１つの三重結合を有し、Ｌのさらに１つまたは２つのメチレン単位は、随意に、かつ独立して、−ＮＲＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、−ＳＯ２−、−Ｃ（＝Ｓ）−、−Ｃ（＝ＮＲ）−、−Ｏ−、−Ｎ（Ｒ）−、または−Ｃ（Ｏ）−により置き換えられ、あるいは
Ｌは二価のＣ２〜８直鎖もしくは分岐炭化水素鎖であり、Ｌの１つのメチレン単位は、シクロプロピレンにより置き換えられ、Ｌのさらに１つまたは２つのメチレン単位は、独立して、−Ｃ（Ｏ）−、−ＮＲＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ−、−Ｎ（Ｒ）ＳＯ２−、または−ＳＯ２Ｎ（Ｒ）−により置き換えられ、あるいは
Ｌは二価のＣ１〜８直鎖もしくは分岐アルキレン鎖であり、Ｌの少なくとも１つのメチレン単位は、−Ｃ（＝Ｎ２）−により置き換えられ、Ｌのさらに１つまたは２つのメチレン単位は、随意に、かつ独立して、−ＮＲＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、−ＳＯ２−、−Ｃ（＝Ｓ）−、−Ｃ（＝ＮＲ）−、−Ｏ−、−Ｎ（Ｒ）−、または−Ｃ（Ｏ）−により置き換えられ、あるいは
Ｙは、水素、随意に、オキソ、ハロゲン、もしくはＣＮで置換されたＣ１〜６脂肪族、または窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される０〜３個のヘテロ原子を有する３〜１０員の単環もしくは二環の、飽和環、部分不飽和環、もしくはアリール環であり、該環は、−Ｑ−Ｚ、オキソ、ハロゲン、ＣＮ、またはＣ１〜６脂肪族から独立して選択される１〜４個の基で置換され、
Ｑは、共有結合または二価のＣ１〜６飽和もしくは不飽和の、直鎖もしくは分岐炭化水素鎖であり、Ｑの１つまたは２つのメチレン単位は、随意に、かつ独立して、−ＮＲ−、−Ｓ−、−Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）−、−ＳＯ−、または−ＳＯ２−により置き換えられ、
Ｚは、水素、または、随意に、オキソ、ハロゲン、もしくはＣＮで置換されたＣ１〜６脂肪族であり、
各Ｒ２は、Ｒ、ハロゲン、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）ＯＲ、またはＲで置換された１−イミダゾイルから選択されるか、または
該各リンカーおよびＲ２は、それらの介在原子と組み合わされ、窒素、酸素、または硫黄から独立して選択される０〜３個のヘテロ原子を有する５〜７員の飽和環、部分不飽和環、もしくはアリール環であって、該環は−Ｌ−Ｙ、およびオキソ、ハロゲン、ＣＮ、またはＣ１〜６脂肪族から独立して選択される０〜３個の基で置換される、環を形成し、
各Ｒ３は水素、Ｃ１〜４直鎖もしくは分岐アルキル、またはハロゲンから選択される、結合体。
【請求項３６】
以下の式：
【化６７Ａ】
0005526020.tif 000119
を有する、請求項３５に記載の結合体。
【請求項３７】
以下の式：
【化６７Ｂ】
0005526020.tif 000120
を有する、請求項３５に記載の結合体。
【請求項３８】
以下の式：
【化６７Ｃ】
0005526020.tif 000121
を有する、請求項３５に記載の結合体。
【請求項３９】
以下の式：
【化６７Ｄ】
0005526020.tif 000122
を有する、請求項３５に記載の結合体。
【請求項４０】
以下の式：
【化６７Ｅ】
0005526020.tif 000123
を有する、請求項３５に記載の結合体。
【請求項４１】
前記疾患は、扁平上皮細胞癌、多発性骨髄腫、黒色腫、神経膠腫、グリア芽腫、白血病、肉腫、平滑筋腫、中皮腫、ＧＩＳＴ、肺癌、乳癌、卵巣癌、頸癌、肝臓癌、胆道癌、消化管癌、膵臓癌、前立腺、および頭頸部癌から選択される癌腫である、請求項３３に記載の組成物。
【請求項４２】
前記疾患は、過剰な細胞外基質の蓄積、繊維性疾患、悪液質、高血圧症、強直性脊椎炎、多発性硬化症における脱髄、脳血管障害、およびアルツハイマー病を含む病状である、請求項４１に記載の組成物。
【請求項４３】
前記疾患は、ＡＭＬ、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、肥満細胞症、未分化大細胞リンパ腫、ＡＬＬ、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、Ｔ細胞リンパ腫、腺様嚢胞癌、血管肉腫、子宮内膜癌、小細胞肺癌、前立腺癌、卵巣癌、乳癌、甲状腺癌、悪性黒色腫、または結腸癌である、請求項３３に記載の組成物。
【請求項４４】
前記疾患は、癌、子宮内膜症、良性前立腺過形成、血管疾患、自己免疫疾患、眼病、変形性関節炎、または炎症性疾患である、請求項３３に記載の組成物。
【請求項４５】
前記疾患は、変形性関節炎、骨粗しょう症、リウマチ性関節炎、炎症性腸疾患、糸球体腎炎、同種移植片拒絶反応、または動脈硬化症である、請求項３３に記載の組成物。
【請求項４６】
前記疾患はＧＩＳＴである、請求項３３に記載の組成物。
【請求項４７】
前記繊維性疾患が、強皮症、ループス腎炎、結合組織病、創傷治癒、外科的瘢痕、脊髄損傷、ＣＮＳ瘢痕、急性肺損傷、肺繊維症、慢性閉塞性肺疾患、成人呼吸窮迫症候群、急性肺損傷、薬物誘発肺損傷、糸球体腎炎、糖尿病性腎症、高血圧性腎症、消化管もしくは胃腸繊維症、腎繊維症、肝もしくは胆管繊維症、肝硬変、原発性胆汁性肝硬変、脂肪肝疾患（アルコール性および非アルコール性脂肪変性）による肝硬変、原発性硬化性胆管炎、再狭窄、心筋繊維症、眼の瘢痕、繊維性硬化症、繊維性癌、類繊維腫、繊維腫、繊維腺腫、繊維肉腫、移植動脈疾患、およびケロイドからなる群より選択される、請求項４２に記載の組成物。
【請求項４８】
前記肺繊維症が、突発性肺繊維症および放射線誘発肺繊維症からなる群より選択される、請求項４７に記載の組成物。
【請求項４９】
前記癌が、脳癌、尿生殖器癌、リンパ系癌、胃癌、喉頭癌、肺癌、膵臓癌、乳癌、カポジ肉腫、および白血病からなる群より選択される、請求項４４に記載の組成物。
【請求項５０】
前記自己免疫疾患が、リウマチ性関節炎および乾癬からなる群より選択される、請求項４４に記載の組成物。
【請求項５１】
前記血管疾患が、再狭窄およびアテローム性動脈硬化症から選択される、請求項４４に記載の組成物。
【請求項５２】
前記眼病が、増殖性または血管新生網膜症および黄斑変性症から選択される、請求項４４に記載の組成物。
【請求項５３】
前記炎症性疾患が、接触性皮膚炎、ぜんそく、および遅延型過敏反応から選択される、請求項４４に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願への相互参照）
本発明は、２００７年６月４日に出願された米国仮特許出願第６０／９４１，８７３号および２００７年９月１３日に出願された米国仮特許出願第６０／９７２，０４８号に対する優先権を主張し、この各々の全体は本明細書中に参考として援用される。
【０００２】
（発明の技術分野）
本発明は、タンパク質キナーゼ阻害剤として有用な化合物に関する。本発明はまた、本発明の化合物を含む、薬学的に受容可能な組成物、および各種疾患の処置における当該組成物の使用法を提供する。
【背景技術】
【０００３】
（発明の背景）
近年、酵素の構造、および病気に関連する他の生体分子に関する理解の深まりが新規な治療薬の調査に大いに役立っている。広範囲な研究の対象とされてきた重要な酵素類の１つにタンパク質キナーゼがある。
【０００４】
タンパク質キナーゼは、細胞内の各種のシグナル伝達過程の制御に関与する構造的に関係がある酵素の大ファミリーを構成する。タンパク質キナーゼは、共通の先祖遺伝子から、それらの構造および触媒機能の保存により進化したと考えられている。ほぼ全てのキナーゼには、類似のアミノ酸触媒ドメインが２５０〜３００個含まれている。これらのキナーゼ類は、それらがリン酸化する基質によりいくつかのファミリーに区分することができる（例えば、タンパク質チロシン、タンパク質セリン／トレオニン、脂質等）。
【０００５】
一般に、タンパク質キナーゼは、ヌクレオシド三リン酸から、シグナル伝達経路に関わるタンパク質受容体へのリン酸転移を行うことにより細胞内信号伝達を媒介する。これらのリン酸化事象は、標的タンパク質の生物学的機能を調整または調節し得る分子オン／オフスイッチとして作用する。これらのリン酸化事象は、最終的に、各種の細胞外刺激および他の刺激に応答して引き起こされる。そのような刺激の例としては、環境的および化学的ストレス信号（例えば、浸透圧衝撃、熱ショック、紫外線放射、細菌内毒素、およびＨ２Ｏ２）、サイトカイン類（例えば、インターロイキン−１（ＩＬ−１）、ならびに腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ−α））および成長因子（例えば、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、および繊維芽細胞成長因子（ＦＧＦ））が挙げられる。細胞外刺激は、細胞成長、移動、分化、ホルモン分泌、転写因子の活性化、筋収縮、グルコース代謝、タンパク質合成の制御、および細胞周期の調節に関連する１つ以上の細胞性応答に影響を及ぼし得る。
【０００６】
上記のようなタンパク質キナーゼの媒介による事象により引き起こされる異常細胞性応答に関連する病気が多数存在する。それらの病気は、自己免疫疾患、炎症性疾患、骨疾患、代謝性疾患、神経および神経変性疾患、癌、心臓血管疾患、アレルギーおよびぜんそく、アルツハイマー病、ならびにホルモン関連疾患を含むがこれらに限定されない。従って、依然として、治療薬として有用なタンパク質キナーゼ阻害剤を見つける必要がある。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００７】
（発明の要旨）
現在、本発明の化合物、およびその薬学的に受容可能な組成物が、１つ以上のタンパク質キナーゼの阻害剤として有効であることが分かっている。そのような化合物は一般式Ｉ：
【０００８】
【化１】
0005526020.tif 000002
またはその薬学的に受容可能な塩を有し、式中、Ｔ、Ｗ、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３は本明細書で定義するとおりである。
【０００９】
本発明の化合物、およびその薬学的に受容可能な組成物は、タンパク質キナーゼの媒介による事象により引き起こされる異常細胞性応答に関連する各種病気、疾患、または病状の処置に有用である。そのような病気、疾患、または病状は、本明細書中に記載のものを含む。
【００１０】
本発明により提供される化合物はまた、生物学的および病理学的現象におけるキナーゼ類の研究、そのようなキナーゼ類によって媒介される細胞内シグナル伝達経路の研究、および新規なキナーゼ阻害剤の比較評価にも有用である。
例えば、本発明は以下を提供する。
（項目１）
式Ｉの化合物：
【化４５】
0005526020.tif 000003
またはその薬学的に受容可能な塩であって、ここで、
Ｔは−ＮＨＣ（Ｏ）−または−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−であり、
ＷはＣＨまたはＮであり、
Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、およびＲｄは、それぞれ独立して、Ｒ、ＯＲ、またはハロゲンから選択され、
各Ｒは、独立して、水素、低級アルキル、または低級ハロアルキルであり、
Ｒ１は弾頭基であり、
Ｒ２はＲ、ハロゲン、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）ＯＲ、またはＲで置換された１−イミダゾイルから選択されるか、または
Ｒ１およびＲ２は、それらの介在原子と組み合わされ、窒素、酸素、または硫黄から独立して選択される０〜３個のヘテロ原子を有する５〜７員の飽和環、部分不飽和環、もしくはアリール環であって、該環は、弾頭基、およびオキソ、ハロゲン、ＣＮ、またはＣ１〜６脂肪族から独立して選択される０〜３個の基で置換される、環を形成し、
Ｒ３は水素、低級アルキル、またはハロゲンから選択される、化合物。
（項目２）
前記化合物は式ＩＩ−ａもしくはＩＩＩ−ａの化合物：
【化４６】
0005526020.tif 000004
またはそれらの薬学的に受容可能な塩であって、ここで、
Ｒ１は−Ｌ−Ｙであり、
Ｌは二価のＣ２〜８直鎖もしくは分岐炭化水素鎖であり、Ｌは少なくとも１つの二重結合を有し、Ｌの少なくとも１つのメチレン単位は、シクロプロピレン、−ＮＲＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、−ＳＯ２−、−Ｃ（＝Ｓ）−、−Ｃ（＝ＮＲ）−、−Ｎ＝Ｎ−、または−Ｃ（＝Ｎ２）−により置き換えられ、Ｌのさらに１つまたは２つのメチレン単位は、随意に、かつ独立して、−Ｏ−、−Ｎ（Ｒ）−、または−Ｃ（Ｏ）−により置き換えられ、
Ｙは、水素、随意に、オキソ、ハロゲン、もしくはＣＮで置換されたＣ１〜６脂肪族、または窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される０〜３個のヘテロ原子を有する３〜１０員の単環もしくは二環の、飽和環、部分不飽和環、もしくはアリール環であり、該環は、−Ｑ−Ｚ、オキソ、ハロゲン、ＣＮ、またはＣ１〜６脂肪族から独立して選択される１〜４個の基で置換され、
Ｑは、共有結合または二価のＣ１〜６飽和もしくは不飽和の、直鎖もしくは分岐炭化水素鎖であり、Ｑの１つまたは２つのメチレン単位は、随意に、かつ独立して、−ＮＲ−、−ＮＲＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ−、−Ｓ−、−Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）−、−ＳＯ−、または−ＳＯ２−により置き換えられ、
Ｚは、水素、または、随意に、オキソ、ハロゲン、もしくはＣＮで置換されたＣ１〜６脂肪族であり、
Ｒ２は、Ｒ、ハロゲン、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）ＯＲ、またはＲで置換された１−イミダゾイルから選択される、項目１に記載の化合物。
（項目３）
Ｙは、水素、または、随意に、オキソ、ハロゲン、もしくはＣＮで置換されたＣ１〜６脂肪族であり、
Ｒ３は低級アルキルである、項目２に記載の化合物。
（項目４）
Ｌは、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ＝ＣＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ＝ＣＨＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ＝ＣＨＣＨ２Ｏ−、−ＣＨ２ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ＝ＣＨ−、−ＮＨＳＯ２ＣＨ＝ＣＨ−、−ＮＨＳＯ２ＣＨ＝ＣＨＣＨ２−、−ＮＨＣ（Ｏ）（Ｃ＝Ｎ２）−、−ＮＨＣ（Ｏ）（Ｃ＝Ｎ２）Ｃ（Ｏ）−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ＝ＣＨＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）−、−ＮＨＳＯ２ＣＨ＝ＣＨ−、−ＮＨＳＯ２ＣＨ＝ＣＨＣＨ２−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ＝ＣＨＣＨ２Ｏ−、または−ＮＨＣ（Ｏ）Ｃ（＝ＣＨ２）ＣＨ２−である、項目２または３のいずれかに記載の化合物。
（項目５）
Ｌは少なくとも１つのアルキリデニル二重結合を有する、項目２に記載の化合物。
（項目６）
Ｒ２は、水素、−ＣＦ３、またはＲで置換された１−イミダゾイルである、項目２、３、４、または５に記載の化合物。
（項目７）
Ｒ１は−Ｌ−Ｙであり、
Ｌは二価のＣ２〜８直鎖もしくは分岐炭化水素鎖であり、Ｌは少なくとも１つの三重結合を有し、Ｌのさらに１つまたは２つのメチレン単位は、随意に、かつ独立して、−ＮＲＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、−ＳＯ２−、−Ｃ（＝Ｓ）−、−Ｃ（＝ＮＲ）−、−Ｏ−、−Ｎ（Ｒ）−、または−Ｃ（Ｏ）−により置き換えられ、
Ｙは、水素、随意に、オキソ、ハロゲン、もしくはＣＮで置換されたＣ１〜６脂肪族、または窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される０〜３個のヘテロ原子を有する３〜１０員の単環もしくは二環の、飽和環、部分不飽和環、もしくはアリール環であり、該環は、−Ｑ−Ｚ、オキソ、ハロゲン、ＣＮ、またはＣ１〜６脂肪族から独立して選択される１〜４個の基で置換され、
Ｑは、共有結合または二価のＣ１〜６飽和もしくは不飽和の、直鎖もしくは分岐炭化水素鎖であり、Ｑの１つまたは２つのメチレン単位は、随意に、かつ独立して、−ＮＲ−、−ＮＲＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ−、−Ｓ−、−Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）−、−ＳＯ−、または−ＳＯ２−により置き換えられ、
Ｚは、水素、または、随意に、オキソ、ハロゲン、もしくはＣＮで置換されたＣ１〜６脂肪族である、項目１に記載の化合物。
（項目８）
Ｌは、−Ｃ≡Ｃ−、−Ｃ≡ＣＣＨ２Ｎ（イソプロピル）−、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｃ≡ＣＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２−Ｃ≡Ｃ−ＣＨ２−、または−Ｃ≡ＣＣＨ２Ｏ−であり、
Ｙは、水素、随意に、オキソ、ハロゲン、もしくはＣＮで置換されたＣ１〜６脂肪族、フェニル、ピリジル、または窒素、酸素、または硫黄から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を有する随意に置換された飽和３〜６員の単環であり、該環は、−Ｑ−Ｚ、オキソ、ハロゲン、ＣＮ、またはＣ１〜６脂肪族から独立して選択される１〜４基で置換される、項目７に記載の化合物。
（項目９）
Ｒ１は−Ｌ−Ｙであり、
Ｌは二価のＣ２〜８直鎖もしくは分岐炭化水素鎖であり、Ｌの１つのメチレン単位は、シクロプロピレンにより置き換えられ、Ｌのさらに１つまたは２つのメチレン単位は、独立して、−Ｃ（Ｏ）−、−ＮＲＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ−、−Ｎ（Ｒ）ＳＯ２−、または−ＳＯ２Ｎ（Ｒ）−により置き換えられ、
Ｙは、水素、随意に、オキソ、ハロゲン、もしくはＣＮで置換されたＣ１〜６脂肪族、または窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される０〜３個のヘテロ原子を有する３〜１０員の単環もしくは二環の、飽和環、部分不飽和環、もしくはアリール環であり、該環は、−Ｑ−Ｚ、オキソ、ハロゲン、ＣＮ、またはＣ１〜６脂肪族から独立して選択される１〜４個の基で置換され、
Ｑは、共有結合または二価のＣ１〜６飽和もしくは不飽和の、直鎖もしくは分岐炭化水素鎖であり、Ｑの１つまたは２つのメチレン単位は、随意に、かつ独立して、−ＮＲ−、−ＮＲＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ−、−Ｓ−、−Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）−、−ＳＯ−、または−ＳＯ２−により置き換えられ、
Ｚは、水素、または、随意に、オキソ、ハロゲン、もしくはＣＮで置換されたＣ１〜６脂肪族である、項目１に記載の化合物。
（項目１０）
Ｌは、−ＮＨＣ（Ｏ）−シクロプロピレン−ＳＯ２−および−ＮＨＣ（Ｏ）−シクロプロピレン−であり、
Ｙは、水素、ＣＮ、または、随意に、オキソ、ハロゲン、もしくはＣＮで置換されたＣ１〜６脂肪族である、項目９に記載の化合物。
（項目１１）
Ｒ１は−Ｌ−Ｙであり、
Ｌは、共有結合または二価のＣ１〜８飽和もしくは不飽和の、直鎖もしくは分岐炭化水素鎖であり、Ｌの１つ、２つ、または３つのメチレン単位は、随意に、かつ独立して、−ＮＲ−、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）−、−Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ−、−ＳＯ−、−ＳＯ２−、または−Ｃ（＝Ｓ）−により置き換えられ、
Ｙは、以下：
【化４７】
0005526020.tif 000005
【化４８】
0005526020.tif 000006
【化４９】
0005526020.tif 000007
【化５０】
0005526020.tif 000008
から選択される、項目１に記載の化合物。
（項目１２）
Ｌは、共有結合、−ＣＨ２−、−ＮＨ−、−ＣＨ２ＮＨ−、−ＮＨＣＨ２−、−ＮＨＣ（Ｏ）−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＯＣ（Ｏ）−、−ＣＨ２ＮＨＣ（Ｏ）−、−ＮＨＳＯ２−、−ＮＨＳＯ２ＣＨ２−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＯＣ（Ｏ）−、または−ＳＯ２ＮＨ−である、項目１１に記載の化合物。
（項目１３）
Ｒ１は−Ｌ−Ｙであり、
Ｌは二価のＣ１〜８直鎖もしくは分岐アルキレン鎖であり、Ｌの少なくとも１つのメチレン単位は、−Ｃ（＝Ｎ２）−により置き換えられ、Ｌのさらに１つまたは２つのメチレン単位は、随意に、かつ独立して、−ＮＲＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、−ＳＯ２−、−Ｃ（＝Ｓ）−、−Ｃ（＝ＮＲ）−、−Ｏ−、−Ｎ（Ｒ）−、または−Ｃ（Ｏ）−により置き換えられ、
Ｙは、水素、随意に、オキソ、ハロゲン、もしくはＣＮで置換されたＣ１〜６脂肪族、または窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される０〜３個のヘテロ原子を有する３〜１０員の単環もしくは二環の、飽和環、部分不飽和環、もしくはアリール環であり、該環は、−Ｑ−Ｚ、オキソ、ハロゲン、ＣＮ、またはＣ１〜６脂肪族から独立して選択される１〜４個の基で置換され、
Ｑは、共有結合または二価のＣ１〜６飽和もしくは不飽和の、直鎖もしくは分岐炭化水素鎖であり、Ｑの１つまたは２つのメチレン単位は、随意に、かつ独立して、−ＮＲ−、−Ｓ−、−Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）−、−ＳＯ−、または−ＳＯ２−により置き換えられ、
Ｚは、水素、または、随意に、オキソ、ハロゲン、もしくはＣＮで置換されたＣ１〜６脂肪族である、項目１に記載の化合物。
（項目１４）
Ｌは、−ＮＨＣ（Ｏ）（Ｃ＝Ｎ２）−または−ＮＨＣ（Ｏ）（Ｃ＝Ｎ２）Ｃ（Ｏ）−であり、
Ｙは、水素、または随意に、オキソ、ハロゲン、もしくはＣＮで置換されたＣ１〜６脂肪族、または窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を有する随意に置換された飽和３〜６員の単環、フェニルまたはピリジルである、項目１３に記載の化合物。
（項目１５）
前記化合物は式ＩＩ−ａもしくはＩＩＩ−ａの化合物：
【化５１】
0005526020.tif 000009
またはそれらの薬学的に受容可能な塩であり、ここで、
Ｒ１およびＲ２は、それらの介在原子と組み合わされ、窒素、酸素、または硫黄から独立して選択される０〜３個のヘテロ原子を有し、弾頭基で置換される５〜７員の飽和環、部分不飽和環、もしくはアリール環であって、該弾頭基は−Ｑ−Ｚであり、該環は、オキソ、ハロゲン、ＣＮ、またはＣ１〜６脂肪族から独立して選択される０〜３個の基でさらに置換される、環を形成し、
Ｑは、少なくとも１つの二重結合を有する二価のＣ２〜６直鎖もしくは分岐炭化水素鎖であり、Ｑの１つまたは２つのメチレン単位は、独立して、−ＮＲ−、−ＮＲＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ−、−Ｓ−、−Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）−、−ＳＯ−、または−ＳＯ２−
により置き換えられ、
Ｚは、水素、または、随意に、オキソ、ハロゲン、もしくはＣＮで置換されたＣ１〜６脂肪族である、項目１に記載の化合物。
（項目１６）
Ｒ１およびＲ２は、それらの介在原子と組み合わされ、それらと縮合したフェニル環とともに、ナフチル、テトラヒドロキノリン、インドリン、イソインドリン、１Ｈ−インドール、またはテトラヒドロイソキノリン環を形成する、項目１５に記載の化合物。
（項目１７）
−Ｑ−Ｚは、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ＝ＣＨ２または−Ｃ（Ｏ）ＣＨ＝ＣＨ２である、項目１５または１６のいずれかに記載の化合物。
（項目１８）
下記：
【化５２】
0005526020.tif 000010
【化５３】
0005526020.tif 000011
【化５４】
0005526020.tif 000012
【化５５】
0005526020.tif 000013
【化５６】
0005526020.tif 000014
【化５７】
0005526020.tif 000015
からなる群から選択される、化合物。
（項目１９）
下記：
【化５８】
0005526020.tif 000016
【化５９】
0005526020.tif 000017
【化６０】
0005526020.tif 000018
からなる群から選択される、化合物。
（項目２０）
下記の構造：
【化６１】
0005526020.tif 000019
の化合物。
（項目２１）
下記の構造：
【化６２】
0005526020.tif 000020
の化合物。
（項目２２）
下記の構造：
【化６３】
0005526020.tif 000021
の化合物。
（項目２３）
下記の構造：
【化６４】
0005526020.tif 000022
の化合物。
（項目２４）
下記の構造：
【化６５】
0005526020.tif 000023
の化合物。
（項目２５）
下記の構造：
【化６６】
0005526020.tif 000024
の化合物。
（項目２６）
項目１に記載の化合物、および薬学的に受容可能なアジュバント、担体、もしくは賦形剤を含む組成物。
（項目２７）
さらなる治療薬と組み合わせた項目２６に記載の組成物。
（項目２８）
前記さらなる治療薬は化学療法薬である、項目２７に記載の組成物。
（項目２９）
生物学的サンプル中のＰＤＧＦＲ、ｃＫｉｔ、ＫＤＲ、またはｃＦＭＳ活性を阻害する方法であって、該生物学的サンプルを項目１に記載の化合物またはその組成物と接触させる工程を包含する、方法。
（項目３０）
患者のＰＤＧＦＲ、ｃ−ＫＩＴ、ＫＤＲ、またはｃＦＭＳ活性を阻害する方法であって、該患者に項目１に記載の化合物またはその組成物を投与する工程を包含する、方法。
（項目３１）
患者のＰＤＧＦＲ、ｃ−ＫＩＴ、ＫＤＲ、またはｃＦＭＳ活性を阻害する方法であって、該患者に項目１に記載の化合物またはその組成物を投与する工程を包含し、該ＰＤＧＦＲ、ｃ−ＫＩＴ、ＫＤＲ、またはｃＦＭＳ活性は不可逆的に阻害される、方法。
（項目３２）
前記ＰＤＧＦＲ、ｃ−ＫＩＴ、ＫＤＲ、またはｃＦＭＳ活性は、ＰＤＧＦＲ−αのＣｙｓ８１４、ＰＤＧＦＲ−βのＣｙｓ８２２、ＫＤＲのＣｙｓ１０２４、ｃ−ＫＩＴのＣｙｓ７８８、またはｃＦＭＳのＣｙｓ７７４を共有結合的に修飾することにより不可逆的に阻害される、項目３１に記載の方法。
（項目３３）
処置を必要とする患者におけるＰＤＧＦＲ、ｃ−ＫＩＴ、ＫＤＲ、またはｃＦＭＳの媒介による疾患を処置する方法であって、該患者に項目１に記載の化合物、またはその組成物を投与する工程を包含する、方法。
（項目３４）
処置を必要とする患者におけるＰＤＧＦＲ、ｃ−ＫＩＴ、ＫＤＲ、またはｃＦＭＳの媒介による疾患を処置する方法であって、ＰＤＧＦＲ−αのＣｙｓ８１４、ＰＤＧＦＲ−βのＣｙｓ８２２、ＫＤＲのＣｙｓ１０２４、ｃ−ＫＩＴのＣｙｓ７８８、またはｃＦＭＳのＣｙｓ７７４を共有結合的に修飾することによりＰＤＧＦＲ、ｃ−ＫＩＴ、ＫＤＲ、またはｃＦＭＳを不可逆的に阻害する工程を包含する、方法。
（項目３５）
式Ｃｙｓ８１４−リンカー−阻害剤部分の結合体であって、該Ｃｙｓ８１４はＰＤＧＦＲ−αのＣｙｓ８１４である、結合体。
（項目３６）
式Ｃｙｓ８２２−リンカー−阻害剤部分の結合体であって、該Ｃｙｓ８２２はＰＤＧＦＲ−βのＣｙｓ８２２である、結合体。
（項目３７）
式Ｃｙｓ７８８−リンカー−阻害剤部分の結合体であって、該Ｃｙｓ７８８はｃ−ＫＩＴのＣｙｓ７８８である、結合体。
（項目３８）
式Ｃｙｓ７７４−リンカー−阻害剤部分の結合体であって、該Ｃｙｓ７７４はｃＦＭＳのＣｙｓ７７４である、結合体。
（項目３９）
式Ｃｙｓ１０２４−リンカー−阻害剤部分の結合体であって、該Ｃｙｓ１０２４はＫＤＲのＣｙｓ１０２４である、結合体。
（項目４０）
下記のいずれかの式の結合体であって：
【化６７】
0005526020.tif 000025
前記Ｃｙｓ８１４はＰＤＧＦＲ−αのＣｙｓ８１４であり、前記Ｃｙｓ８２２はＰＤＧＦＲ−βのＣｙｓ８２２であり、前記Ｃｙｓ７８８はｃ−ＫＩＴのＣｙｓ７８８であり、前記Ｃｙｓ７７４はｃＦＭＳのＣｙｓ７７４であり、前記Ｃｙｓ１０２４はＫＤＲのＣｙｓ１０２４であり、
各Ｔは−ＮＨＣ（Ｏ）−または−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−であり、
各ＷはＣＨまたはＮであり、
Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、およびＲｄの各々は、独立して、Ｒ、ＯＲ、またはハロゲンから選択され、
各Ｒは、独立して、水素、低級アルキル、または低級ハロアルキルであり、
各Ｒ２は、Ｒ、ハロゲン、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）ＯＲ、またはＲで置換された１−イミダゾイルから選択されるか、または
Ｒ１およびＲ２は、それらの介在原子と組み合わされ、窒素、酸素、または硫黄から独立して選択される０〜３個のヘテロ原子を有する５〜７員の飽和環、部分不飽和環、もしくはアリール環であって、該環は弾頭基、およびオキソ、ハロゲン、ＣＮ、またはＣ１〜６脂肪族から独立して選択される０〜３個の基で置換される、環を形成し、
各Ｒ３は水素、低級アルキル、またはハロゲンから選択される、結合体。
（項目４１）
前記疾患は、扁平上皮細胞癌、多発性骨髄腫、黒色腫、神経膠腫、グリア芽腫、白血病、肉腫、平滑筋腫、中皮腫、ＧＩＳＴ、肺癌、乳癌、卵巣癌、頸癌、肝臓癌、胆道癌、消化管癌、膵臓癌、前立腺、および頭頸部癌から選択される癌腫である、項目３３に記載の方法。
（項目４２）
前記疾患は、過剰な細胞外基質の蓄積、繊維性疾患（例えば、強皮症、ループス腎炎、結合組織病、創傷治癒、外科的瘢痕、脊髄損傷、ＣＮＳ瘢痕、急性肺損傷、肺繊維症（突発性肺繊維症および放射線誘発肺繊維症等）、慢性閉塞性肺疾患、成人呼吸窮迫症候群、急性肺損傷、薬物誘発肺損傷、糸球体腎炎、糖尿病性腎症、高血圧性腎症、消化管もしくは胃腸繊維症、腎繊維症、肝もしくは胆管繊維症、肝硬変、原発性胆汁性肝硬変、脂肪肝疾患（アルコール性および非アルコール性脂肪変性）による肝硬変、原発性硬化性胆管炎、再狭窄、心筋繊維症、眼の瘢痕、繊維性硬化症、繊維性癌、類繊維腫、繊維腫、繊維腺腫、繊維肉腫、移植動脈疾患、およびケロイド）、ならびに悪液質、高血圧症、強直性脊椎炎、多発性硬化症における脱髄、脳血管障害、およびアルツハイマー病等の他の病状を含む病状である、項目４１に記載の方法。
（項目４３）
前記疾患は、ＡＭＬ、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、肥満細胞症、未分化大細胞リンパ腫、ＡＬＬ、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、Ｔ細胞リンパ腫、腺様嚢胞癌、血管肉腫、子宮内膜癌、小細胞肺癌、前立腺癌、卵巣癌、乳癌、甲状腺癌、悪性黒色腫、または結腸癌である、項目３３に記載の方法。
（項目４４）
前記疾患は、脳癌、尿生殖器癌、リンパ系癌、胃癌、喉頭癌、肺癌、膵臓癌、乳癌、カポジ肉腫、および白血病等の癌、子宮内膜症、良性前立腺過形成、再狭窄およびアテローム性動脈硬化症等の血管疾患、リウマチ性関節炎および乾癬等の自己免疫疾患、増殖性または血管新生網膜症および黄斑変性症等の眼病、変形性関節炎、または接触性皮膚炎、ぜんそく、および遅延型過敏反応等の炎症性疾患である、項目３３に記載の方法。
（項目４５）
前記疾患は、変形性関節炎、骨粗しょう症、リウマチ性関節炎、炎症性腸疾患、糸球体腎炎、同種移植片拒絶反応、または動脈硬化症である、項目３３に記載の方法。
（項目４６）
前記疾患はＧＩＳＴである、項目３３に記載の方法。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】対照化合物および化合物ＩＩ−２を用いたＥＯＬ−１細胞の細胞増殖の線量応答阻害を示す。
【図２】ＥＯＬ−１細胞を用いた「ウォッシュアウト」実験における対照化合物および化合物ＩＩ−２を用いたＰＤＧＦＲの阻害を示す。
【図３】ＧＩＳＴ４３０細胞を用いた「ウォッシュアウト」実験における化合物ＩＩＩ−１４を用いたｃ−ＫＩＴの阻害を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
（いくつかの実施形態の詳細な説明）
１．本発明の化合物の概要：
特定の実施形態では、本発明は、式Ｉの化合物：
【００１３】
【化２】
0005526020.tif 000026
またはその薬学的に受容可能な塩を提供し、ここで、
Ｔは−ＮＨＣ（Ｏ）−または−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−であり、
ＷはＣＨまたはＮであり、
Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、およびＲｄは、それぞれ独立して、Ｒ、ＯＲ、またはハロゲンから選択され、
各Ｒは、独立して、水素、低級アルキル、または低級ハロアルキルであり、
Ｒ１は弾頭基（ｗａｒｈｅａｄ  ｇｒｏｕｐ）であり、
Ｒ２はＲ、ハロゲン、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）ＯＲ、またはＲで置換された１−イミダゾイルから選択されるか、または
Ｒ１およびＲ２は、それらの介在原子と組み合わされ、窒素、酸素、または硫黄から独立して選択される０〜３個のヘテロ原子を有する５〜７員の飽和環、部分不飽和環、もしくはアリール環であって、当該環は、弾頭基、およびオキソ、ハロゲン、ＣＮ、またはＣ１〜６脂肪族から独立して選択される０〜３個の基で置換される、環を形成し、
Ｒ３は水素、低級アルキル、またはハロゲンから選択される。
【００１４】
特定の実施形態では、本発明は、式ＩＩまたはＩＩＩの化合物：
【００１５】
【化３】
0005526020.tif 000027
またはその薬学的に受容可能な塩を提供し、ここで、
各Ｗは、独立して、ＣＨまたはＮであり、
Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、およびＲｄは、それぞれ独立して、Ｒ、ＯＲ、またはハロゲンから選択され、
各Ｒは、独立して、水素、低級アルキル、または低級ハロアルキルであり、
各Ｒ１は、独立して、弾頭基であり、
各Ｒ２は、独立して、Ｒ、ハロゲン、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）ＯＲ、またはＲで置換された１−イミダゾイルから選択されるか、または
Ｒ１およびＲ２は、それらの介在原子と組み合わされ、窒素、酸素、または硫黄から独立して選択される０〜３個のヘテロ原子を有する５〜７員の飽和環、部分不飽和環、もしくはアリール環であって、当該環は、弾頭基、およびオキソ、ハロゲン、ＣＮ、またはＣ１〜６脂肪族から独立して選択される０〜３個の基で置換される、環を形成し、
Ｒ３は水素、低級アルキル、またはハロゲンから選択される。
【００１６】
２．  化合物および定義：
本発明の化合物は上記において一般的に記載したものを含んでおり、本明細書中に開示するクラス、サブクラス、および種によってさらに例示される。本明細書で用いる以下の定義は、特に明示しない限り適用されるものとする。本発明の目的のために、化学元素は、Ｐｅｒｉｏｄｉｃ  Ｔａｂｌｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｅｌｅｍｅｎｔｓ，ＣＡＳ  ｖｅｒｓｉｏｎ，Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｐｈｙｓｉｃｓ，７５ｔｈ  Ｅｄに従って特定される。さらに、有機化学の一般原則は、”Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ”，Ｔｈｏｍａｓ  Ｓｏｒｒｅｌｌ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｂｏｏｋｓ，Ｓａｕｓａｌｉｔｏ：１９９９、および”Ｍａｒｃｈ’ｓ  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ”，５ｔｈ  Ｅｄ．，Ｅｄ．：Ｓｍｉｔｈ，Ｍ．Ｂ．  ａｎｄ  Ｍａｒｃｈ，Ｊ．，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ：２００１に記載されており、これらの内容の全てを本明細書において参考として援用する。
【００１７】
本明細書に記載するように、本発明の化合物は、上記で一般的に記載したように、または本発明の特定のクラス、サブクラス、および種によって例示したように、１つ以上の置換基で随意に置換してもよい。「随意に置換」という文言は、「置換または非置換」という文言と相互互換的に用いられることは言うまでもない。一般に、「置換」という用語は、前に「随意に」という用語があるなしに関わらず、所与の構造における水素ラジカルと特定した置換基のラジカルの置換えを指す。特に明示しない限り、随意に置換した基は、当該基の各置換可能な位置に置換基を有することができ、いずれかの所与の構造における複数の位置が特定した群から選択される複数の置換基と置換可能な場合、当該置換基は、全ての位置で同じであっても異なっていてもよい。本発明で想定する置換基の組み合わせは、好ましくは、安定したまたは化学的に実現可能な化合物を形成するものである。本明細書で用いる「安定した」という用語は、本明細書に開示する１つ以上の目的のために産生、検出、ならびに、好ましくは、復元、精製、および使用を可能にする条件に置かれた際に実質的に変化しない化合物を指す。いくつかの実施形態では、安定した化合物または化学的に実現可能な化合物は、湿気または他の化学反応条件がない場合に、少なくとも１週間、４０度以下の温度に維持されても実質的に変化しないものである。
【００１８】
本明細書で用いる「脂肪族」または「脂肪族基」という用語は、完全に飽和しているかもしくは１つ以上の不飽和単位を含む直鎖（すなわち、非分岐鎖）もしくは分岐鎖の置換または非置換炭化水素鎖、または完全に飽和しているかもしくは１つ以上の不飽和単位を含むが芳香族ではなく（本明細書では「炭素環」、「脂環式」、または「シクロアルキル」とも呼ぶ）、当該分子の残りに対して１つの付着点を有する単環式炭化水素もしくは二環式炭化水素を意味する。特に明示しない限り、脂肪族基は、１〜６個の脂肪族炭素原子を含む。いくつかの実施形態では、脂肪族基は、１〜５個の脂肪族炭素原子を含む。他の実施形態では、脂肪族基は、１〜４個の脂肪族炭素原子を含む。さらに他の実施形態では、脂肪族基は、１〜３個の脂肪族炭素原子を含み、またさらに他の実施形態では、脂肪族基は、１〜２個の脂肪族炭素原子を含む。いくつかの実施形態では、「脂環式」（または「炭素環」もしくは「シクロアルキル」）は、完全に飽和しているかもしくは１つ以上の不飽和単位を含むが芳香族ではなく、当該分子の残りに対して１つの付着点を有する単環式Ｃ３〜Ｃ８炭化水素または二環式Ｃ８〜Ｃ１０炭化水素であって、当該二重の環系における単一の環のいずれもが３〜７員であるものを指す。適切な脂肪族基は、直鎖もしくは分岐鎖の置換もしくは非置換アルキル、アルケニル、アルキニル基、および（シクロアルキル）アルキル、（シクロアルケニル）アルキル、または（シクロアルキル）アルケニル等、それらの混成物を含むがそれらに限定されない。
【００１９】
「低級アルキル」という用語は、Ｃ１〜４直鎖もしくは分岐鎖アルキル基を指す。低級アルキル基の例として、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、およびｔｅｒｔ−ブチルがある。
【００２０】
「低級ハロアルキル」という用語は、１つ以上のハロゲン原子で置換されるＣ１〜４直鎖もしくは分岐鎖アルキル基を指す。
【００２１】
「ヘテロ原子」という用語は、酸素、硫黄、窒素、リン、またはケイ素（酸化型の窒素、硫黄、リン、もしくはケイ素、いずれの塩基性窒素の四級化型、または、複素環の置換可能な窒素（例えば、（３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピロリルにおける）Ｎ、（ピロリルジニルにおける）ＮＨ、または（Ｎ置換ピロリルジニルにおける）ＮＲ＋のいずれも含む）の１つ以上を意味する。
【００２２】
本明細書で用いる「不飽和」という用語は、一部分が１つ以上の不飽和単位を有することを意味する。
【００２３】
本明細書で用いる「二価のＣ１〜８［またはＣ１〜６］飽和もしくは不飽和の、直鎖もしくは分岐炭化水素鎖」という用語は、本明細書中で定義する直鎖もしくは分岐鎖である二価アルキレン、アルケニレン、およびアルキニレン鎖を指す。
【００２４】
「アルキレン」という用語は、二価アルキル基を指す。「アルキレン鎖」は、ポリメチレン基、すなわち、−（ＣＨ２）ｎ−（ここで、ｎは正の整数であり、好ましくは、１〜６、１〜４、１〜３、１〜２、または２〜３）である。置換アルキレン鎖は、１つ以上のメチレン水素原子が置換基と置き換えられたポリメチレン基である。適切な置換基は、置換脂肪族基について後述するものを含む。
【００２５】
「アルケニレン」という用語は、二価アルケニル基を指す。置換アルケニレン鎖は、１つ以上の水素原子が置換基と置き換えられた少なくとも１つの二重結合を含むポリメチレン基である。適切な置換基は、置換脂肪族基について後述するものを含む。
【００２６】
本明細書で用いる、「シクロプロピレニル」という用語は、下記の構造の二価シクロプロピル基を指す：
【００２７】
【化４】
0005526020.tif 000028
「ハロゲン」という用語は、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、またはＩを意味する。
【００２８】
「アリール」という用語は、単独で、または「アラルキル」、「アラルコキシ」、または「アリールオキシアルキル」のようにより大きな部分の一部として用いた場合、合計で５〜１４環員を有する単環または二環系であって、当該系の少なくとも１つの環は芳香族であり、当該系の各環は３〜７環員を含むものを指す。「アリール」という用語は、「アリール環」という用語と相互互換的に用いられ得る。
【００２９】
特に明示しない限り、本明細書中に示す構造は、当該構造の全ての異性体（例えば、エナンチオマー、ジアステレオマー、および幾何学的形状（または立体配座））、例えば、各不斉中心ごとのＲおよびＳ配置、ＺおよびＥ二重結合異性体、ならびにＺおよびＥ配座異性体を含むものとする。それゆえ、単一の立体化学異性体、ならびに本化合物のエナンチオマー、ジアステレオマー、および幾何学的形状（または立体配座）の混合物は本発明の範囲内である。特に明示しない限り、本発明の化合物の全ての互変異性型は、本発明の範囲内である。さらに、特に明示しない限り、本明細書中で示す構造は、１つ以上の同位体濃縮原子が存在することだけが異なる化合物も含むものとする。例えば、本構造において水素が重水素もしくは三重水素により置き換えられるか、または炭素が１３Ｃまたは１４Ｃ濃縮炭素で置き換えられる化合物は、本発明の範囲内である。そのような化合物は、例えば、解析ツール、生物学的アッセイにおけるプローブ、または本発明に係る治療薬として有用である。いくつかの実施形態では、式ＩのＲ１基は１つ以上の重水素原子を含む。
【００３０】
本明細書で用いる「不可逆」または「不可逆阻害剤」という用語は、実質的に元に戻せない様式で標的タンパク質キナーゼと共有結合可能な阻害剤（すなわち、化合物）を指す。すなわち、可逆的阻害剤は、標的タンパク質キナーゼと結合可能であり（一般には共有結合を形成できない）、それゆえ、標的タンパク質キナーゼから解離可能であるが、不可逆阻害剤は、一旦、共有結合が形成されると、実質的には、標的タンパク質キナーゼと結合したままとなる。不可逆阻害剤は、通常、時間依存性を示し、それにより、阻害剤が酵素と接触する時間とともに阻害度が増大する。化合物が不可逆阻害剤として作用しているかどうかを特定する方法は、当業者には公知である。そのような方法は、化合物のタンパク質キナーゼ標的との阻害プロファイルの酵素反応速度解析、阻害剤化合物の存在下で修飾したタンパク薬物標的の質量分析法の使用、断続的暴露（「ウォッシュアウト」実験としても知られる）、および放射性標識阻害剤等の標識の使用により酵素の共有結合修飾を示すこと、ならびに当業者に公知の他の方法を含むがそれらに限定されない。
【００３１】
当業者は、特定の反応性官能基が「弾頭」として作用可能であることを認識する。本明細書で用いる「弾頭」または「弾頭基」という用語は、本発明の化合物上に存在する官能基であって、この官能基は、特定のタンパク質キナーゼの結合ポケット内に存在するアミノ酸残留物（システイン、リジン、ヒスチジン、または共有結合的に修飾可能な他の残留物）と共有結合することにより、タンパク質キナーゼを不可逆的に阻害することが可能であるものを指す。弾頭として有用な反応性化学官能基の例は、アクリルアミド、α、β、およびＮ置換アクリルアミド、ビニルスルホンアミド、ビニルスルホン、エポキシスルホン、アリルスルホン、エポキシド、アザペプチドエポキシド、α，β不飽和カルボニル誘導体、α，β不飽和アルコール、アシルラクタム、アシルオキサゾリジノン、およびアシル尿素官能性を有するマイケル受容体、置換アルコール基を有するエステル由来マイケル受容体、α位が置換されたｃｉｓ−α，β−不飽和エステルまたはｔｒａｎｓ−α，β−不飽和エステル、アミド含有マイケル受容体、クマリン、シンナマート、およびカルコンを含むがそれらに限定されない。
【００３２】
本明細書で用いる、「阻害剤」という用語は、適度な親和性で標的タンパク質キナーゼと結合および／またはそれを阻害する化合物として定義される。特定の実施形態では、阻害剤は、約５０μＭ、約１μＭ未満、約５００ｎＭ未満、約１００ｎＭ未満、または約１０ｎＭ未満のＩＣ５０および／または結合定数を有する。
【００３３】
本明細書で用いる「適度な親和性」および「適度に阻害する」という用語は、本発明の化合物またはその組成物およびＰＤＧＦＲ（αまたはβ）、ｃＫｉｔ、ＫＤＲ、またはｃＦＭＳを含むサンプルと本発明の化合物またはその組成物を含まずにＰＤＧＦＲ（αまたはβ）、ｃＫｉｔ、ＫＤＲ、またはｃＦＭＳを含む等価サンプル間のＰＤＧＦＲ（αまたはβ）、ｃＫｉｔ、ＫＤＲ、またはｃＦＭＳ活性の変化が測定可能であることを意味する。
【００３４】
３．  例示的な化合物の説明：
１つの局面では、本発明は、式ＩＩ−ａの化合物：
【００３５】
【化５】
0005526020.tif 000029
またはその薬学的に受容可能な塩を提供し、ここで、
ＷはＣＨまたはＮであり、
Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、およびＲｄの各々は、独立して、Ｒ、ＯＲ、またはハロゲンから選択され、
各Ｒは、独立して、水素、低級アルキル、または低級ハロアルキルであり、
Ｒ１は−Ｌ−Ｙであり、
Ｌは、共有結合または二価のＣ１〜８飽和もしくは不飽和の、直鎖もしくは分岐炭化水素鎖であり、Ｌの１つ、２つ、または３つのメチレン単位は、随意に、かつ独立して、−ＮＲ−、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）−、−Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ−、−ＳＯ−、−ＳＯ２−、−Ｃ（＝Ｓ）−、−Ｃ（＝ＮＲ）−、または−Ｃ（＝Ｎ２）−により置き換えられ、
Ｙは、水素、随意に、オキソ、ハロゲン、もしくはＣＮで置換されたＣ１〜６脂肪族
、または窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される０〜３個のヘテロ原子を有する３〜１０員の単環もしくは二環の、飽和環、部分不飽和環、もしくはアリール環であり、当該環は、−Ｑ−Ｚ、オキソ、ハロゲン、ＣＮ、またはＣ１〜６脂肪族から独立して選択される１〜４個の基で置換され、
Ｑは、共有結合または二価のＣ１〜６飽和もしくは不飽和の、直鎖もしくは分岐炭化水素鎖であり、Ｑの１つまたは２つのメチレン単位は、随意に、かつ独立して、−ＮＲ−、−Ｓ−、−Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）−、−ＳＯ−、または−ＳＯ２−により置き換えられ、
Ｚは、水素、または、随意に、オキソ、ハロゲン、もしくはＣＮで置換されたＣ１〜６脂肪族であり、
Ｒ２は、Ｒ、ハロゲン、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）ＯＲ、またはＲで置換された１−イミダゾイルから選択されるか、または
Ｒ１およびＲ２は、それらの介在原子と組み合わされ、窒素、酸素、または硫黄から独立して選択される０〜３個のヘテロ原子を有し、弾頭基で置換される５〜７員の飽和環、部分不飽和環、もしくはアリール環であって、当該弾頭基は−Ｑ−Ｚであり、当該環は、オキソ、ハロゲン、ＣＮ、またはＣ１〜６脂肪族から独立して選択される０〜３個の基でさらに置換される、環を形成し、
Ｒ３は水素、低級アルキル、またはハロゲンから選択される。
【００３６】
特定の実施形態では、上記Ｗ基はＣＨである。他の実施形態では、ＷはＮである。よって、本発明の他の実施形態では、式ＩＩ−ｂまたはＩＩ−ｃのいずれかの化合物：
【００３７】
【化６】
0005526020.tif 000030
またはその薬学的に受容可能な塩を提供し、ここで、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３の各々は上記で定義し、本明細書中においてクラスおよびサブクラスで説明したとおりである。
【００３８】
特定の実施形態では、上記Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、およびＲｄ基の各々は水素である。
【００３９】
上記で一般的に定義したように、Ｒ１は−Ｌ−Ｙであり、Ｌは、共有結合または二価のＣ１〜８飽和もしくは不飽和の、直鎖もしくは分岐炭化水素鎖であり、Ｌの１つ、２つ、または３つのメチレン単位は、随意に、かつ独立して、−ＮＲ−、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）−、−Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ−、−ＳＯ−、−ＳＯ２−、−Ｃ（＝Ｓ）−、−Ｃ（＝ＮＲ）−、−Ｎ＝Ｎ−、または−Ｃ（＝Ｎ２）−により置き換えられ、Ｙは、窒素、酸素、または硫黄から独立して選択される０〜３個のヘテロ原子を有する水素、Ｃ１〜６脂肪族、または３〜７員飽和環、部分不飽和環、もしくはアリール環であり、当該環は、独立してオキソ、ハロゲン、ＣＮ、Ｃ１〜６脂肪族、または−Ｑ−Ｚから選択される１〜４個の基で置換される。
【００４０】
特定の実施形態では、Ｌは共有結合である。
【００４１】
他の実施形態では、Ｌは、二価のＣ１〜８飽和もしくは不飽和の、直鎖もしくは分岐炭化水素鎖であり、Ｌの少なくとも１つのメチレン単位は、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、−ＳＯ２−、−Ｃ（＝Ｓ）−、−Ｃ（＝ＮＲ）−、または−Ｃ（＝Ｎ２）−により置き換えられ、Ｌのさらに１つまたは２つのメチレン単位は、随意に、かつ独立して、−Ｏ−、−Ｎ（Ｒ）−、または−Ｃ（Ｏ）−により置き換えられる。いくつかの実施形態では、Ｌは、二価のＣ２〜８直鎖もしくは分岐炭化水素鎖であり、Ｌは少なくとも１つの二重結合を有し、Ｌの少なくとも１つのメチレン単位は、−ＮＲＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ−、−Ｎ（Ｒ）ＳＯ２−、−ＳＯ２Ｎ（Ｒ）−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、−ＳＯ２−、−Ｃ（＝Ｓ）−、−Ｃ（＝ＮＲ）−、または−Ｃ（＝Ｎ２）−により置き換えられ、Ｌのさらに１つのまたは２つのメチレン単位は、随意に、かつ独立して、シクロプロピレン、−Ｏ−、−Ｎ（Ｒ）−、または−Ｃ（Ｏ）−により置き換えられる。さらに他の実施形態では、Ｌは、二価のＣ１〜８直鎖もしくは分岐アルキレン鎖であり、Ｌの少なくとも１つのメチレン単位は、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、−ＳＯ２−、−Ｃ（＝Ｓ）−、−Ｃ（＝ＮＲ）−、または−Ｃ（＝Ｎ２）−により置き換えられ、Ｌのさらに１つまたは２つのメチレン単位は、随意に、かつ独立して、−Ｏ−、−Ｎ（Ｒ）−、または−Ｃ（Ｏ）−により置き換えられる。いくつかの実施形態では、Ｌは、二価のＣ１〜８直鎖もしくは分岐アルキレン鎖であり、Ｌの少なくとも１つのメチレン単位は、−Ｃ（＝Ｎ２）−により置き換えられ、Ｌのさらに１つまたは２つのメチレン単位は、随意に、かつ独立して、−ＮＲＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、−ＳＯ２−、−Ｃ（＝Ｓ）−、−Ｃ（＝ＮＲ）−、−Ｏ−、−Ｎ（Ｒ）−、または−Ｃ（Ｏ）−により置き換えられる。
【００４２】
特定の実施形態では、Ｌは、二価のＣ１〜８飽和もしくは不飽和の、直鎖もしくは分岐炭化水素鎖である。特定の実施形態では、Ｌは−ＣＨ２−である。
【００４３】
いくつかの実施形態では、Ｌは、二価のＣ２〜８直鎖もしくは分岐炭化水素鎖であり、Ｌは、少なくとも１つの三重結合を有する。特定の実施形態では、Ｌは二価のＣ２〜８直鎖もしくは分岐炭化水素鎖であり、Ｌは、少なくとも１つの三重結合を有し、Ｌのさらに１つまたは２つのメチレン単位は、随意に、かつ独立して、−ＮＲＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、−ＳＯ２−、−Ｃ（＝Ｓ）−、−Ｃ（＝ＮＲ）−、−Ｏ−、−Ｎ（Ｒ）−、または−Ｃ（Ｏ）−により置き換えられる。いくつかの実施形態では、Ｌは、少なくとも１つの三重結合を有し、Ｌの少なくとも１つのメチレン単位は、−Ｎ（Ｒ）−、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）−、または−Ｏ−により置き換えられる。
【００４４】
Ｌ基の例には、−Ｃ≡Ｃ−、−Ｃ≡ＣＣＨ２Ｎ（イソプロピル）−、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｃ≡ＣＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２−Ｃ≡Ｃ−ＣＨ２−、および−Ｃ≡ＣＣＨ２Ｏ−が含まれる。
【００４５】
特定の実施形態では、Ｌは、二価のＣ２〜８直鎖もしくは分岐炭化水素鎖であり、Ｌは、少なくとも１つの二重結合を有し、Ｌの少なくとも１つのメチレン単位は、シクロプロピレン、−ＮＲＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ−、−Ｎ（Ｒ）ＳＯ２−、−ＳＯ２Ｎ（Ｒ）−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、−ＳＯ２−、−Ｃ（＝Ｓ）−、−Ｃ（＝ＮＲ）−、または−Ｃ（＝Ｎ２）−により置き換えられ、Ｌのさらに１つまたは２つのメチレン単位は、随意に、かつ独立して、−Ｏ−、−Ｎ（Ｒ）−、または−Ｃ（Ｏ）−により置き換えられる。
【００４６】
Ｌ基の例には、−ＣＨ２−、−ＮＨ−、−ＣＨ２ＮＨ−、−ＮＨＣＨ２−、−ＮＨＣ（Ｏ）−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＯＣ（Ｏ）−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ＝ＣＨ−、−ＣＨ２ＮＨＣ（Ｏ）−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ＝ＣＨＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ＝ＣＨＣＨ２Ｏ−、−ＣＨ２ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ＝ＣＨ−、−ＮＨＳＯ２−、−ＮＨＳＯ２ＣＨ２−、−ＮＨＳＯ２ＣＨ＝ＣＨ−、−ＮＨＳＯ２ＣＨ＝ＣＨＣＨ２−、−ＮＨＣ（Ｏ）（Ｃ＝Ｎ２）−、−ＮＨＣ（Ｏ）（Ｃ＝Ｎ２）Ｃ（Ｏ）−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＯＣ（Ｏ）−、−ＳＯ２ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ＝ＣＨＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）−、および−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ＝ＣＨＣＨ２Ｏ−が含まれる。
【００４７】
上述したように、特定の実施形態では、Ｌは、二価のＣ２〜８直鎖もしくは分岐炭化水素鎖であり、Ｌは、少なくとも１つの二重結合を有する。当業者は、そのような二重結合が炭化水素主鎖内に存在し得ること、または主鎖の「ｅｘｏ」であるため、アルキリデン基を形成し得ることを認識する。例えば、そのようなアルキリデン分岐鎖を有するＬ基は、−ＣＨ２Ｃ（＝ＣＨ２）ＣＨ２−を含む。よって、いくつかの実施形態では、Ｌは、二価のＣ２〜８直鎖もしくは分岐炭化水素鎖であり、Ｌは、少なくとも１つのアルキリデニル二重結合を有する。Ｌ基の例には、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｃ（＝ＣＨ２）ＣＨ２−が含まれる。
【００４８】
特定の実施形態では、Ｌは、二価のＣ２〜８直鎖もしくは分岐炭化水素鎖であり、Ｌの１つのメチレン単位は、シクロプロピレンにより置き換えられ、Ｌのさらに１つまたは２つのメチレン単位は、独立して、−Ｃ（Ｏ）−、−ＮＲＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ−、−Ｎ（Ｒ）ＳＯ２−、または−ＳＯ２Ｎ（Ｒ）−により置き換えられる。Ｌ基の例には、−ＮＨＣ（Ｏ）−シクロプロピレン−ＳＯ２−および−ＮＨＣ（Ｏ）−シクロプロピレン−が含まれる。
【００４９】
特定の実施形態では、Ｙは水素である。
【００５０】
特定の実施形態では、Ｙは、随意に、オキソ、ハロゲン、またはＣＮで置換されたＣ１〜６脂肪族である。他の実施形態では、Ｙは、Ｃ１〜６アルキルである。いくつかの実施形態では、ＹはＣ２〜６アルケニルである。他の実施形態では、ＹはＣ２〜４アルキニルである。特定の実施形態では、Ｙは、随意に、−ＣＮまたは−ＮＯ２で置換されたシクロプロピルである。いくつかの実施形態では、Ｙは、シクロプロペニルまたはシクロブテニルである。
【００５１】
特定の実施形態では、Ｙは、窒素、酸素、または硫黄から独立して選択される０〜３個のヘテロ原子を有する３〜１０員の単環もしくは二環の、飽和環、部分不飽和環、もしくはアリール環であり、当該環は、−Ｑ−Ｚ、オキソ、ハロゲン、ＣＮ、またはＣ１〜６脂肪族から独立して選択される１〜４個の基で置換される。
【００５２】
いくつかの実施形態では、Ｙは、フェニルまたはピリジルである。
【００５３】
特定の実施形態では、Ｙは、窒素、酸素、または硫黄から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を有する飽和３〜６員の単環であり、Ｙは上記で定義したように置換される。いくつかの実施形態では、Ｙは、酸素または窒素から選択される１個のヘテロ原子を有する飽和した３〜４員の単環である。環の例としては、エポキシドおよびオキセタン環がある。他の実施形態では、Ｙは、酸素または窒素から選択される１〜２個のヘテロ原子を有する飽和した５〜６員の単環である。そのような環は、ピペリジンおよびピロリジンを含む。
【００５４】
他の実施形態では、Ｙは、窒素、酸素、または硫黄から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を有する５員の部分不飽和もしくはアリール環であり、Ｙは、上記で定義したように置換される。いくつかの実施形態では、Ｙは、窒素、酸素、および硫黄から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を有する５員の部分不飽和もしくはアリール環である。環の例としては、チアジアゾール、オキサゾール、オキサジアゾール、および２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロールがある。
【００５５】
特定の実施形態では、Ｙは、窒素、酸素、または硫黄から独立して選択される０〜３個のヘテロ原子を有する８〜１０員の二環の、飽和環、部分不飽和環、もしくはアリール環であり、Ｙは上記で定義したように置換される。他の局面では、Ｙは、窒素、酸素、または硫黄から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を有する９〜１０員の二環、部分不飽和、もしくはアリール環である。二環式環の例としては、２，３−ジヒドロベンゾ［ｄ］イソチアゾールがある。
【００５６】
一般に上記に定義するように、Ｙが環であるとき、当該環は、−Ｑ−Ｚ、オキソ、ＮＯ２、ハロゲン、ＣＮ、またはＣ１〜６脂肪族から独立して選択される１〜４個の基で置換される。特定の実施形態では、Ｑは、二価のＣ１〜６飽和もしくは不飽和の、直鎖もしくは分岐炭化水素鎖であり、Ｑの１つまたは２つのメチレン単位は、随意に、かつ独立して、−ＮＲ−、−ＮＲＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ−、−Ｓ−、−Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）−、−ＳＯ−、または−ＳＯ２−により置き換えられる。他の実施形態では、Ｑは、少なくとも１つの二重結合を有する二価のＣ２〜６直鎖もしくは分岐炭化水素鎖であり、Ｑの１つまたは２つのメチレン単位は、随意に、かつ独立して、−ＮＲ−、−ＮＲＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ−、−Ｓ−、−Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）−、−ＳＯ−、または−ＳＯ２−により置き換えられる。いくつかの実施形態では、−Ｑ−Ｚは、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ＝ＣＨ２または−Ｃ（Ｏ）ＣＨ＝ＣＨ２である。特定の実施形態では、上記Ｙ環は、オキソ、フルオロ、クロロ、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ＝ＣＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ＝ＣＨ２、ＮＯ２、−Ｃ（Ｏ）ＯＥｔ、またはＣＮから選択される少なくとも１つの基で置換される。
【００５７】
特定の実施形態では、Ｙは、下記表１に記載のものから選択され、各破線は、分子の残りの部分に対する付着点を示す。
【００５８】
【表１−１】
0005526020.tif 000031
【００５９】
【表１−２】
0005526020.tif 000032
【００６０】
【表１−３】
0005526020.tif 000033
特定の実施形態では、Ｙは、Ｌが−ＣＨ２−である場合、マレイミド以外である。他の実施形態では、Ｙは、Ｌが−ＣＨ２−である場合、エポキシド以外である。
【００６１】
特定の実施形態では、Ｒ１は、下記表２に記載されるものから選択され、各破線は、分子の残りの部分に対する付着点を示す。
【００６２】
【表２−１】
0005526020.tif 000034
【００６３】
【表２−２】
0005526020.tif 000035
【００６４】
【表２−３】
0005526020.tif 000036
【００６５】
【表２−４】
0005526020.tif 000037
特定の実施形態では、Ｒ１は、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ＝ＣＨ２または−ＣＨ２ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ＝ＣＨ２から選択される。
【００６６】
上記において一般的に定義するように、Ｒ１は弾頭基であるか、またはＲ１およびＲ２が環を形成する場合、−Ｑ−Ｚが弾頭基である。いずれの特定の理論にも拘束されることを望むものではないが、そのようなＲ１基、すなわち、弾頭基は、特定のタンパク質キナーゼの結合ドメインにおける重要なシステイン残基との共有結合に特に適していると考えられる。結合ドメイン内にシステイン残基を有するタンパク質キナーゼは、当業者には公知であり、ＰＤＧＦＲ（αおよびβ）、ｃＫｉｔ、ＫＤＲ、およびｃＦＭＳを含む。特定の実施形態では、本発明の化合物は、発明化合物が下記のシステイン残基の１つ以上を標的とすることを特徴とする弾頭基を有する：
【００６７】
【化７】
0005526020.tif 000038
よって、いくつかの実施形態では、Ｒ１は、−Ｌ−Ｙ部分は、システイン残基と共有結合することにより、酵素を不可逆的に阻害可能であることを特徴とする。当業者は、本明細書中に定義する各種の弾頭基がそのような共有結合に適していることを認識する。そのようなＲ１基は、本明細書中に記載するとともに上記表２に示すものを含むがそれらに限定されない。
【００６８】
他の局面では、本発明は、それぞれ、Ｃｙｓ８１４、Ｃｙｓ８２２、Ｃｙｓ７８８、Ｃｙｓ７７４、またはＣｙｓ１０２４で阻害剤と共有結合したＰＤＧＦＲ−α、ＰＤＧＦＲ−β、ｃ−ＫＩＴ、ｃＦＭＳ、またはＫＤＲ、またはそれらの突然変異体のいずれかを含む結合体を提供する。いくつかの実施形態では、上記阻害剤は、リンカー部分を介して共有結合する。
【００６９】
特定の実施形態では、本発明は、式Ｃｙｓ８１４−リンカー−阻害剤部分、Ｃｙｓ８２２−リンカー−阻害剤部分、Ｃｙｓ７８８−リンカー−阻害剤部分、Ｃｙｓ７７４−リンカー−阻害剤部分、またはＣｙｓ１０２４−リンカー−阻害剤部分の結合体を提供し、上記Ｃｙｓ８１４は、ＰＤＧＦＲ−αのものであり、上記Ｃｙｓ８２２は、ＰＤＧＦＲ−βのものであり、上記Ｃｙｓ７８８は、ｃ−ＫＩＴのものであり、上記Ｃｙｓ７７４は、ｃＦＭＳのものであり、上記Ｃｙｓ１０２４は、ＫＤＲのものである。当業者は、上記「リンカー」基が本明細書中に記載する−Ｌ−Ｙ弾頭基と対応することを認識する。従って、特定の実施形態では、上記リンカー基は、上記で定義し、本明細書のクラスおよびサブクラスで説明した−Ｌ−Ｙについて定義したとおりである。しかしながら、上記リンカー基は二価であるため、対応する−Ｌ−Ｙ基も弾頭と標的システインの反応により生じる二価であることは言うまでもない。
【００７０】
特定の実施形態では、上記阻害剤部分は、式Ａの化合物：
【００７１】
【化８】
0005526020.tif 000039
であり、式ＡのＲ２、Ｒ３、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、およびＷ基の各々は、上記式Ｉについて定義し、本明細書のクラスおよびサブクラスにおいて説明したとおりである。よって、特定の実施形態では、本発明は、下記のいずれかの式の結合体：
【００７２】
【化９】
0005526020.tif 000040
を提供し、式ＡのＲ２、Ｒ３、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、およびＷ基の各々は、上記式Ｉについて定義し、本明細書のクラスおよびサブクラスにおいて説明したとおりであり、上記Ｃｙｓ８１４は、ＰＤＧＦＲ−αのものであり、上記Ｃｙｓ８２２は、ＰＤＧＦＲ−βのものであり、上記Ｃｙｓ７８８は、ｃ−ＫＩＴのものであり、上記Ｃｙｓ７７４は、ｃＦＭＳｌのものであり、上記Ｃｙｓ１０２４は、ＫＤＲのものである。
【００７３】
上記において一般的に定義するように、Ｒ２は、Ｒ、ハロゲン、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）ＯＲ、またはＲで置換された１−イミダゾイルから選択されるか、またはＲ１およびＲ２は、それらの介在原子と組み合わされ、窒素、酸素、または硫黄から独立して選択される０〜３個のヘテロ原子を有する５〜７員の飽和環、部分不飽和環、もしくはアリール環であって、当該環は、オキソ、ハロゲン、ＣＮ、Ｃ１〜６脂肪族、または−Ｑ−Ｚから独立して選択される１〜３個の基で置換される、環を形成する。
【００７４】
特定の実施形態では、Ｒ２は、Ｒ、ハロゲン、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）ＯＲ、またはＲで置換された１−イミダゾイルから選択される。いくつかの実施形態では、Ｒ２は、ハロゲンである。他の実施形態では、Ｒ２はＲであり、ここで、Ｒは水素である。さらに他の実施形態では、Ｒ２はＲであり、ここで、Ｒは低級アルキルまたは低級ハロアルキルである。例示的なＲ２基は、メチル、エチル、トリフルオロメチル、クロロ、ブロモ、フルオロ、およびヨードである。特定の実施形態では、Ｒ２はトリフルオロメチルである。
【００７５】
いくつかの局面では、Ｒ１およびＲ２は、それらの介在原子と組み合わされ、窒素、酸素、または硫黄から独立して選択される０〜３個のヘテロ原子を有する５〜７員の飽和環、部分不飽和環、もしくはアリール環であって、当該環は、オキソ、ハロゲン、ＣＮ、Ｃ１〜６脂肪族、または−Ｑ−Ｚから独立して選択される１〜３個の基で置換される、環を形成する。特定の実施形態では、Ｒ１およびＲ２は、それらの介在原子と組み合わされ、それらと縮合したフェニル環とともに、ナフチル、テトラヒドロキノリン、インドリン、イソインドリン、１Ｈ−インドール、またはテトラヒドロイソキノリン環を形成する。特定の実施形態では、Ｒ１およびＲ２は、それらの介在原子と組み合わされ、−Ｑ−Ｚで置換されたナフチル環を形成する。
【００７６】
特定の実施形態では、Ｒ１およびＲ２によって形成された環は、−Ｑ−Ｚで置換される。特定の実施形態では、Ｒ１およびＲ２によって形成された環は、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ＝ＣＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ＝ＣＨ２、または−ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２で置換される。いくつかの実施形態では、Ｒ１およびＲ２は、それらの介在原子と組み合わされ、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ＝ＣＨ２で置換されたナフチル環を形成する。
【００７７】
上記において一般的に定義するように、Ｒ３は、水素、低級アルキル、またはハロゲンから選択される。特定の実施形態では、Ｒ３は低級アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ３はメチルである。
【００７８】
他の局面では、本発明は、式ＩＩＩ−ａの化合物：
【００７９】
【化１０】
0005526020.tif 000041
またはその薬学的に受容可能な塩を提供し、ここで、
ＷはＣＨまたはＮであり、
Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、およびＲｄの各々は、独立して、Ｒ、ＯＲ、またはハロゲンから選択され、
各Ｒは、独立して、水素、低級アルキル、または低級ハロアルキルであり、
Ｒ１は−Ｌ−Ｙであり、ここで、
Ｌは、共有結合または二価のＣ１〜８飽和もしくは不飽和の、直鎖もしくは分岐炭化水素鎖であり、Ｌの１つ、２つ、または３つのメチレン単位は、随意に、かつ独立して、−ＮＲ−、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）−、−Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ−、−ＳＯ−、−ＳＯ２−、−Ｃ（＝Ｓ）−、−Ｃ（＝ＮＲ）−、または−Ｃ（＝Ｎ２）−により置き換えられ、
Ｙは、水素、随意に、オキソ、ハロゲン、もしくはＣＮで置換されたＣ１〜６脂肪族、または窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される０〜３個のヘテロ原子を有する３〜１０員の単環もしくは二環の、飽和環、部分不飽和環、もしくはアリール環であり、当該環は、独立して、−Ｑ−Ｚ、オキソ、ハロゲン、ＣＮ、またはＣ１〜６脂肪族から選択される１〜４個の基で置換され、
Ｑは、共有結合または二価のＣ１〜６飽和もしくは不飽和の、直鎖もしくは分岐炭化水素鎖であり、Ｑの１つまたは２つのメチレン単位は、随意に、かつ独立して、−ＮＲ−、−Ｓ−、−Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）−、−ＳＯ−、または−ＳＯ２−により置き換えられ、
Ｚは、水素または随意に、オキソ、ハロゲン、もしくはＣＮで置換されたＣ１〜６脂肪族であり、
Ｒ２は、Ｒ、ハロゲン、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）ＯＲ、またはＲで置換された１−イミダゾイルから選択されるか、または
Ｒ１およびＲ２は、それらの介在原子と組み合わされ、窒素、酸素、または硫黄から独立して選択される０〜３個のヘテロ原子を有し、弾頭基で置換される５〜７員の飽和環、部分不飽和環、もしくはアリール環を形成し、当該弾頭基は−Ｑ−Ｚであり、当該環は、独立してオキソ、ハロゲン、ＣＮ、またはＣ１〜６脂肪族から選択される０〜３個の基でさらに置換され、
Ｒ３は、水素、低級アルキル、またはハロゲンから選択される。
【００８０】
特定の実施形態では、式ＩＩＩ−ａのＷ、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３基の各々は、上記で定義し、本明細書のクラスおよびサブクラスで説明したとおりである。
【００８１】
特定の実施形態では、式ＩＩＩ−ａのＲ３基は低級アルキルである。
【００８２】
本明細書に記載するように、特定の実施形態では、式ＩＩＩ−ａのＷ基はＣＨであり、他の実施形態では、ＷはＮである。よって、本発明の他の実施形態では、式ＩＩＩ−ｂまたはＩＩＩ−ｃのいずれかの化合物：
【００８３】
【化１１】
0005526020.tif 000042
またはその薬学的に受容可能な塩を提供し、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３の各々は、上記で定義し、本明細書のクラスおよびサブクラスで説明したとおりである。
【００８４】
式ＩＩの化合物の例を下記表３に示す。
【００８５】
【表３−１】
0005526020.tif 000043
【００８６】
【表３−２】
0005526020.tif 000044
【００８７】
【表３−３】
0005526020.tif 000045
【００８８】
【表３−４】
0005526020.tif 000046
【００８９】
【表３−５】
0005526020.tif 000047
【００９０】
【表３−６】
0005526020.tif 000048
【００９１】
【表３−７】
0005526020.tif 000049
【００９２】
【表３−８】
0005526020.tif 000050
特定の実施形態では、本発明は、上記表３に示すいずれかの化合物またはその薬学的に受容可能な塩を提供する。
【００９３】
式ＩＩＩの化合物の例を下記表４に示す。
【００９４】
【表４−１】
0005526020.tif 000051
【００９５】
【表４−２】
0005526020.tif 000052
【００９６】
【表４−３】
0005526020.tif 000053
【００９７】
【表４−４】
0005526020.tif 000054
特定の実施形態では、本発明は、上記表４に示すいずれかの化合物またはその薬学的に受容可能な塩を提供する。
【００９８】
４．用途、調合、および投与
薬学的に受容可能な組成物
他の実施形態では、本発明は、本発明の化合物またはその薬学的に受容可能な誘導体を含む組成物および薬学的に受容可能な担体、アジュバント、または賦形剤を提供する。本発明の組成物中の化合物の量は、生物学的サンプル中または患者内のタンパク質キナーゼ、特に、ＰＤＧＦＲ（αおよびβ）、ｃＫｉｔ、ＫＤＲ、またはｃＦＭＳを適度に阻害するために有効な量である。特定の実施形態では、本発明の組成物中の化合物の量は、生物学的サンプル中または患者内のタンパク質キナーゼ、特に、ＰＤＧＦＲ（αおよびβ）および／またはｃＫｉｔを適度に阻害するために有効な量である。好ましくは、本発明の組成物は、そのような組成物が必要な患者への投与のために調合される。最も好ましくは、本発明の組成物は、患者に対する経口投与用に調合される。
【００９９】
本明細書で用いる「患者」という用語は、動物、好ましくは、哺乳動物、および最も好ましくは、ヒトを意味する。
【０１００】
「薬学的に受容可能な担体、アジュバント、または賦形剤」という用語は、調合に用いる化合物の薬理学的活性を損なわない非毒性担体、アジュバント、または賦形剤を指す。本発明の組成物に用いることが可能な薬学的に受容可能な担体、アジュバント、または賦形剤は、イオン交換体、アルミナ、ステアリン酸アルミニウム、レシチン、ヒト血清アルブミン等の血清タンパク質、リン酸塩等の緩衝物質、グリシン、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、飽和植物脂肪酸の部分グリセリド混合物、水、塩もしくは電解質（硫酸プロタミン等）、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素カリウム、塩化ナトリウム、亜鉛塩、コロイドシリカ、三ケイ酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン、セルロース系物質、ポリエチレングリコール、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリアクリル酸塩、蝋、ポリエチレン−ポリオキシプロピレンブロック重合体、ポリエチレングリコール、および羊毛脂を含むがそれらに限定されない。
【０１０１】
「薬学的に受容可能な誘導体」は、レシピエントへの投与時に、本発明の化合物または阻害活性を有する代謝産物もしくはその残留物を直接または間接的に与えることが可能な任意の非毒性塩、エステル、エステル塩または本発明の化合物の他の誘導体を意味する。
【０１０２】
本明細書で用いる「阻害活性を有する代謝産物もしくはその残留物」という用語は、代謝産物またはその残留物もＰＤＧＦＲ（αおよびβ）、ｃＫｉｔ、ＫＤＲ、またはｃＦＭＳの阻害剤であることを意味する。
【０１０３】
本発明の化合物の薬学的に受容可能な塩は、薬学的に受容可能な無機および有機酸および塩基から由来するものを含む。適切な酸性塩の例としては、酢酸塩、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、重硫酸塩、酪酸塩、クエン酸塩、カンホラート、カンファースルホネート、シクロペンタンプロピオナート、ジグルコネート、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、ギ酸塩、フマル酸塩、グルコヘプタン酸塩、グリセロリン酸塩、グリコール酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、２−ヒドロキシエタンスルホン酸塩、乳酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、メタンスルホン酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、硝酸塩、シュウ酸塩、パルモエート、ペクチン酸塩、過硫酸塩、３−フェニルプロピオン酸塩、リン酸塩、ピクリン酸塩、ピバリン酸塩、プロピオン酸塩、サリチル酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、トシレート、およびウンデカン酸塩が挙げられる。それ自体は薬学的に受容可能なものではないシュウ酸等の他の酸を、本発明の化合物およびそれらの薬学的に受容可能な酸付加塩を得る際の中間体として有用な塩の調製に用いてもよい。
【０１０４】
適切な塩基由来の塩としては、アルカリ金属（例えば、ナトリウムおよびカリウム）、アルカリ土類金属（例えば、マグネシウム）、アンモニウム、およびＮ＋（Ｃ１〜４アルキル）４塩が含まれる。本発明はまた、本明細書に開示する化合物のあらゆる塩基性窒素含有基の四級化も想定している。そのような四級化により水溶性もしくは油溶性または分散性生成物を得るようにしてもよい。
【０１０５】
本発明の組成物は、経口、非経口、吸入噴霧、局所、経直腸、経鼻、口腔、経膣、または埋込リザーバーで投与してもよい。本明細書で用いる「非経口」という用語は、皮下、静脈内、筋肉内、関節内、滑液嚢内、胸骨内、くも膜下、肝内、病巣内および頭蓋内注射または注入技術を含む。好ましくは、上記組成物は、経口、腹腔内、または静脈内投与される。無菌注射用形態の本発明の組成物は、水性または油性懸濁液としてもよい。これらの懸濁液は、適切な分散または湿潤剤および懸濁化剤を用いて当該分野で公知の技術により調合してもよい。上記無菌注射用製剤はまた、非毒性の非経口で受容可能な希釈剤または溶剤に入れた無菌注射用溶液または懸濁液（例えば、１，３−ブタンジオール溶液）としてもよい。水、リンゲル液、および生理食塩水も使用可能な許容可能な賦形剤および溶剤に含まれる。さらに、従来、無菌の不揮発油が溶剤または懸濁化剤として用いられている。
【０１０６】
この目的のため、合成モノグリセリドまたはジグリセリドを含む任意の無菌性不揮発油を用いてもよい。オレイン酸等の脂肪酸およびそのグリセリド誘導体は、オリーブ油またはヒマシ油の特にポリオキシエチル化したもの等、薬剤として許容可能な天然油と同様に、注射物質の調製に有用である。これらの油溶液または懸濁液はまた、エマルジョンおよび懸濁液を含む薬学的に受容可能な投薬形態の調合に一般に用いられるカルボキシメチルセルロースまたは類似の分散剤等の長鎖アルコール希釈剤または分散剤を含有するようにしてもよい。Ｔｗｅｅｎｓ、Ｓｐａｎｓ等の他の一般に用いられる界面活性剤および薬学的に受容可能な固体、液体、または他の投薬形態の製造に一般に用いられる他の乳化剤またはバイオアベイラビリティーエンハンサーを調合の目的で用いてもよい。
【０１０７】
本発明の薬学的に受容可能な組成物は、カプセル、錠剤、水性懸濁液、または水溶液を含むがそれらに限定されない任意の経口的に許容可能な投薬形態で経口投与してもよい。経口用錠剤の場合、一般に用いられる担体としては、ラクトースおよびコーンスターチが含まれる。典型的には、ステアリン酸マグネシウム等の潤滑剤も添加される。カプセル形態での経口投与に有用な希釈剤としては、ラクトースおよび乾燥コーンスターチが含まれる。経口用水性懸濁液が必要な場合、その活性成分は乳化剤および懸濁化剤と組み合わせられる。所望であれば、特定の甘味料、香料、または着色料も添加してもよい。
【０１０８】
代替的には、本発明の薬学的に受容可能な組成物を直腸投与用坐剤の形態で投与してもよい。これらは、その薬剤と、室温では固体であるが直腸温では液体となり、直腸内で溶解して薬物を放出する適切な非刺激性賦形剤とを混合することにより調製可能である。そのような材料には、ココアバター、蜜蝋、およびポリエチレングリコールが含まれる。
【０１０９】
本発明の薬学的に受容可能な組成物はまた、特に、目、皮膚、または下部消化管の病気を含む処置標的が局所適用により容易に接近可能な領域または臓器含む場合には、局所投与してもよい。適切な局所製剤は、これらの領域または臓器ごとに容易に調製される。
【０１１０】
下部消化管への局所適用は、肛門坐剤の投薬形態（上記参照）または適切な浣腸製剤で行うことができる。局所−経皮貼布を用いてもよい。
【０１１１】
局所適用のために提供される薬学的に受容可能な組成物を、１つ以上の担体中で懸濁または溶解した活性成分を含有する適切な軟膏で調合してもよい。本発明の化合物の局所投与用担体は、鉱油、流動ワセリン、白色ワセリン、プロピレングリコール、ポリオキシエチレン、ポリオキシプロピレン化合物、乳化蝋、および水を含むがそれらに限定されない。代替的には、提供される薬学的に受容可能な組成物は、１つ以上の薬学的に受容可能な担体中に懸濁または溶解した活性成分を含有する適切なローションまたはクリームで調合することができる。適切な担体は、鉱油、モノステアリン酸ソルビタン、ポリソルベート６０、セチルエステル蝋、セテアリルアルコール、２−オクチルドデカノール、ベンジルアルコール、および水を含むがそれらに限定されない。
【０１１２】
眼科用に提供される薬学的に受容可能な組成物は、等張ｐＨ調節無菌食塩水中の微粉化懸濁液として、または、好ましくは、塩化ベンジルアルコニウム等の防腐剤の有無に関わらず等張ｐＨ調節無菌食塩水溶液として調合してもよい。代替的には、眼科用途については、薬学的に受容可能な組成物は、ワセリン等の軟膏で調合してもよい。
【０１１３】
本発明の薬学的に受容可能な組成物はまた、鼻内噴霧または鼻孔吸引により投与してもよい。そのような組成物は、製剤調合の分野で周知の技術に従って調製され、ベンジルアルコールまたは他の適切な防腐剤、バイオアベイラビリティーを促進する吸収促進剤、フッ化炭素、および／または他の従来の可溶化もしくは分散剤を用いて食塩水溶液として調製してもよい。
【０１１４】
最も好ましくは、本発明の薬学的に受容可能な組成物は、経口投与用に調合される。
【０１１５】
単回投薬形態の組成物を製造するために担体材料と組み合わせ可能な本発明の化合物の量は、処置する宿主、特定の投与方式に応じて変化する。好ましくは、提供する組成物は、それらの組成物を受容する患者に対して阻害剤の投薬量が１日あたり体重１ｋｇにつき０．０１〜１００ｍｇで投与可能に調合するべきである。
【０１１６】
任意の特定の患者に対する具体的な投薬量および処置計画は、使用する具体的な化合物の活性、年齢、体重、一般的健康状態、性別、食事、投与時間、排出速度、薬物の併用、および処置を担当する医師の判断、ならびに処置している特定の病気の重篤度を含む各種の要因に依存することも理解されるべきである。上記組成物中における本発明の化合物量は、当該組成物中の特定の化合物にも依存する。
【０１１７】
化合物および薬学的に受容可能な組成物の用途
本明細書に記載の化合物および組成物は、一般に、１つ以上の酵素のタンパク質キナーゼ活性の阻害に有用である。キナーゼの構造、機能、および病気または病徴におけるそれらの役割に関するさらなる情報については、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｋｉｎａｓｅ  Ｒｅｓｏｕｒｃｅのウェブサイト（ｈｔｔｐ：／／ｋｉｎａｓｅｓ．ｓｄｓｃ．ｅｄｕ／ｈｔｍｌ／ｉｎｄｅｘ．ｓｈｔｍｌ）で入手可能である。
【０１１８】
薬物耐性は、標的療法の重要な課題として現れつつある。例えば、Ｇｌｅｅｖｅｃ（登録商標）およびＩｒｅｓｓａ（登録商標）、ならびに開発中の他のキナーゼ阻害剤のいくつかについて薬物耐性が報告されている。さらに、ｃＫｉｔおよびＰＤＧＦＲ受容体について薬物耐性が報告されている。不可逆阻害剤が薬物耐性型のタンパク質キナーゼに有効であり得ることが報告されている（Ｋｗａｋ，Ｅ．Ｌ．，Ｒ．Ｓｏｒｄｅｌｌａら（２００５）。“Ｉｒｒｅｖｅｒｓｉｂｌｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＥＧＦ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｍａｙ  ｃｉｒｃｕｍｖｅｎｔ  ａｃｑｕｉｒｅｄ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ｔｏ  ｇｅｆｉｔｉｎｉｂ”ＰＮＡＳ１０２（２１）：７６６５−７６７０）。いずれの特定の理論にも拘束されることを望むものではないが、本発明の化合物は薬物耐性型のタンパク質キナーゼの有効な阻害剤であり得ると考えられる。
【０１１９】
本明細書で用いる「臨床的薬物耐性」という用語は、薬物標的における突然変異の結果による薬物処置に対する薬物標的の感受性の喪失を指す。
【０１２０】
本明細書で用いる「耐性」という用語は、標的タンパク質をコードする野生型核酸配列および／または当該標的のタンパク質配列の変化を指し、この変化により、阻害剤の標的タンパク質に対する阻害効果が減少または消失する。
【０１２１】
本明細書に記載の化合物および組成物により阻害されるとともに、本明細書に記載の方法が有用なキナーゼの例としては、ＰＤＧＦＲ（αおよびβ）、ｃＫｉｔ、ＫＤＲ、およびｃＦＭＳが挙げられる。
【０１２２】
本発明においてＰＤＧＦＲ（αおよびβ）、ｃＫｉｔ、ＫＤＲ、またはｃＦＭＳの阻害剤として利用される化合物の活性は、インビトロ、インビボ、または細胞株で測定してもよい。インビトロアッセイは、リン酸化活性および／もしくはその後の機能的結果、または活性ＰＤＧＦＲ（αおよびβ）、ｃＫｉｔ、ＫＤＲ、もしくはｃＦＭＳのＡＴＰアーゼ活性のいずれかの阻害を判定するアッセイを含む。代替的なインビトロアッセイでは、ＰＤＧＦＲ（αおよびβ）、ｃＫｉｔ、ＫＤＲ、またはｃＦＭＳに対する阻害剤の結合能力を定量化する。結合前に阻害剤に放射性標識を行い、阻害剤／ＰＤＧＦＲ、阻害剤／ｃＫｉｔ、阻害剤／ＫＤＲ、または阻害剤／ｃＦＭＳ結合体を単離し、結合した放射性標識の量を判定して阻害剤結合を測定してもよい。代替的には、阻害剤結合は、公知の放射性リガンドと結合したＰＤＧＦＲ（αおよびβ）、ｃＫｉｔ、ＫＤＲ、またはｃＦＭＳを用いて新たな阻害剤をインキュベートする競合実験を行って判定してもよい。本発明においてＰＤＧＦＲ（αおよびβ）、ｃＫｉｔ、ＫＤＲ、またはｃＦＭＳの阻害剤として利用する化合物のアッセイの詳細条件は下記実施例に記載する。
【０１２３】
チロシンキナーゼは、細胞内シグナル伝達経路を媒介する酵素の一種である。これらキナーゼの異常活性は、細胞増殖、発癌、および細胞分化に寄与することが示されている。よって、チロシンキナーゼの活性を調整する薬剤は、これらの酵素に関連する増殖性疾患の予防および処置に有用である。
【０１２４】
血小板由来成長因子受容体（ＰＤＧＦＲ）は、腫瘍細胞増殖、細胞移動、および血管形成における重要な標的であり、腫瘍の高間質液圧（ＩＦＰ）を媒介し得る。ＰＤＧＦＲシグナル伝達経路は、固形腫瘍の発生および成長に関連付けられてきた。ＰＤＧＦＲ受容体の遮断は、血管形成、腫瘍血管成熟および維持、ならびに腫瘍退縮に繋がる腫瘍細胞増殖を阻害することが示されている。
【０１２５】
さらに、ＰＤＧＦＲシグナルは、内皮細胞における（ＶＥＧＦを含む）血管新生促進シグナルの発現を誘発し、さらに腫瘍血管形成を刺激する。ＰＤＧＦＲは、血管形成における周皮細胞の増殖および腫瘍血管への移動の調節に不可欠である。周皮細胞は、内皮細胞の力を借りて、周囲に新たな血管が形成され得る構造を設ける平滑な血管筋細胞である。周皮細胞上におけるＰＤＧＦＲの発現は、腫瘍血管系の成熟および生存に関与する重要事象である。さらに、新たなデータでは、ＰＤＧＦ受容体は、化学療法薬の効率的な摂取に対する障害であることが示されている腫瘍の高ＩＦＰを媒介することが示唆されている。
【０１２６】
ＰＤＧＦ受容体（ＰＤＧＦＲ）には、リガンド結合時にホモまたはヘテロ二量体を形成可能な２つのサブユニット（ＰＤＧＦＲ−αおよびＰＤＧＲＲ−β）がある。いくつかのＰＤＧＦリガンドが存在する：ＡＢ、ＢＢ、ＣＣおよびＤＤ。ＰＤＧＦＲは、初期幹細胞、肥満細胞、骨髄性細胞、間葉細胞、および平滑筋細胞上で発現する。ＰＤＧＦＲ−βのみが、通常、Ｔｅｌ、ハンチンチン相互作用タンパク質（ＨＩＰ１）、またはＲａｂａｐｔｉｎとの転座相手として、骨髄性白血病と関係している。最近、ＰＤＧＦＲ−αキナーゼドメインにおける活性化突然変異が消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）において重要な役割を果たすことが示された。
【０１２７】
他の実施形態では、本発明は、ＰＤＧＦＲの媒介による患者の病気または病状を処置するかまたはその重篤度を軽減する方法であって、上記患者に本発明に係る組成物を投与する工程を含む方法を提供する。
【０１２８】
本明細書で用いる「処置」、「処置する」、および「処置を行う」という用語は、本明細書に記載する病気もしくは疾患、またはその１つ以上の症状を回復させる、緩和する、もしくは発現を遅延させるか、またはその進行を阻害することを指す。いくつかの実施形態では、処置は、１つ以上の症状が現れてから行ってもよい。他の実施形態では、症状が無い場合に処置を行ってもよい。例えば、病気にかかりやすい個人に対して症状の発現前に（例えば、病歴に照らし合わせておよび／または遺伝因子または他の感受性因子に照らし合わせて）処置を行ってもよい。処置はまた、症状がなくなった後も、例えば、その再発予防または遅延のために継続してもよい。
【０１２９】
本明細書で用いる「ＰＤＧＦＲの媒介による病気」または「病状」という用語は、ＰＤＧＦＲが関与することが知られているあらゆる病気または他の有害な病状を意味する。従って、本発明の他の実施形態は、ＰＤＧＦＲが関与することが知られている１つ以上の病気の処置またはその重篤度の軽減に関する。具体的には、本発明は、増殖性疾患から選択される病気または病状を処置するかまたはその重篤度を軽減する方法であって、本発明に係る組成物をそれを必要とする患者に投与する工程を含む方法に関する。
【０１３０】
特定の実施形態では、本発明は、血管の形成を阻害する方法を提供する。このような方法は、糖尿病性網膜症または加齢に関連した黄斑変異等の網膜症を含む眼の新血管形成、乾癬、血管腫等の芽腫、慢性または急性腎疾患等のメサンギウム細胞増殖性疾患、例えば、糖尿病性腎症、悪性腎硬化症、血栓性微小血管症症候群、または移植片拒絶反応によって生じる病気等の無秩序な血管形成に関連する疾患の処置に有用である。そのような疾患には、糸球体腎炎、メサンギウム増殖性糸球体腎炎、溶血性−尿毒症性症候群、糖尿病性腎症、高血圧性腎硬化症等の炎症性腎疾患、アテローム、動脈再狭窄、自己免疫疾患、糖尿病、子宮内膜症、慢性ぜんそく、および乳癌、結腸癌、肺癌（例えば、小細胞肺癌）、前立腺癌、またはカポジ肉腫等の腫瘍性疾患（固形腫瘍だけでなく、白血病および他の「液性腫瘍」も含む）も含まれる。いくつかの実施形態では、本発明は、腫瘍の転移拡散および微小転移巣の成長を予防する工程を含む腫瘍の増殖を阻害する方法を提供する。特定の実施形態では、本発明は、白血病を処置する方法を提供する。
【０１３１】
他の実施形態では、本発明は、腫瘍／癌細胞、および癌腫（例えば、扁平上皮細胞癌、多発性骨髄腫、黒色腫、神経膠腫、グリア芽腫、白血病、肉腫、平滑筋腫、中皮腫、ＧＩＳＴ、肺癌、乳癌、卵巣癌、頸癌、肝臓癌、胆道癌、消化管癌、膵臓癌、前立腺、および頭頸部癌の増殖または転移を処置する方法であって、本発明の化合物、またはその薬学的に受容可能な組成物をそれを必要とする患者に投与する工程を含む方法に関する。
【０１３２】
特定の実施形態では、本発明は、過剰な細胞外基質の蓄積、（薬物または放射線によって誘発され得る）繊維性疾患（例えば、強皮症、ループス腎炎、結合組織病、創傷治癒、外科的瘢痕、脊髄損傷、ＣＮＳ瘢痕、急性肺損傷、肺繊維症（突発性肺繊維症および放射線誘発肺繊維症等）、慢性閉塞性肺疾患、成人呼吸窮迫症候群、急性肺損傷、薬物誘発肺損傷、糸球体腎炎、糖尿病性腎症、高血圧性腎症、消化管もしくは胃腸繊維症、腎繊維症、肝もしくは胆管繊維症、肝硬変、原発性胆汁性肝硬変、脂肪肝疾患（アルコール性および非アルコール性脂肪変性）による肝硬変、原発性硬化性胆管炎、再狭窄、心筋繊維症、眼の瘢痕、繊維性硬化症、繊維性癌、類繊維腫、繊維腫、繊維腺腫、繊維肉腫、移植動脈疾患、およびケロイド）、ならびに悪液質、高血圧症、強直性脊椎炎、多発性硬化症における脱髄、脳血管障害、およびアルツハイマー病等の他の病状を含む病状の処置のための方法であって、本発明の化合物、またはその薬学的に受容可能な組成物をそれを必要とする患者に投与する工程を含む方法を提供する。
【０１３３】
他の実施形態では、処置を必要とする患者の造血器または非造血器悪性腫瘍を処置する方法であって、本発明の化合物、またはその薬学的に受容可能な組成物をそれを必要とする患者に投与する工程を含む方法を提供する。特定の実施形態では、本発明は、ＡＭＬ、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、肥満細胞症、未分化大細胞リンパ腫、ＡＬＬ、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、Ｔ細胞リンパ腫、腺様嚢胞癌（ａｄｅｎｏｉｄ  ｃｙｔｓｉｃ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、血管肉腫、子宮内膜癌、小細胞肺癌、前立腺癌、卵巣癌、乳癌、甲状腺癌、悪性黒色腫、または結腸癌を処置する方法であって、本発明の化合物、またはその薬学的に受容可能な組成物をそれを必要とする患者に投与する工程を含む方法を提供する。
【０１３４】
他の局面では、本発明は、脳癌、尿生殖器癌、リンパ系癌、胃癌、喉頭癌、肺癌、膵臓癌、乳癌、カポジ肉腫、および白血病等の癌、子宮内膜症、良性前立腺過形成、再狭窄およびアテローム性動脈硬化症等の血管疾患、リウマチ性関節炎および乾癬等の自己免疫疾患、増殖性または血管新生網膜症および黄斑変性症等の眼病、ならびに接触性皮膚炎、ぜんそく、および遅延型過敏反応等の炎症性疾患から選択される病気または病状を処置する方法であって、本発明の化合物、またはその薬学的に受容可能な組成物をそれを必要とする患者に投与する工程を含む方法を提供する。
【０１３５】
特定の実施形態では、本発明は、骨粗しょう症、リウマチ性関節炎患者、炎症性腸疾患、糸球体腎炎、同種移植片拒絶反応、および動脈硬化症、および癌から選択される病気または病状を処置する方法であって、本発明の化合物、またはその薬学的に受容可能な組成物をそれを必要とする患者に投与する工程を含む方法を提供する。
【０１３６】
ｃ−Ｋｉｔを含む３型受容体チロシンキナーゼファミリーは、造血および非造血細胞の維持、成長、および発生において重要な役割を果たす。ｃ−Ｋｉｔは、幹細胞／初期前駆細胞プールの維持、ならびに成熟リンパ系および骨髄性細胞の発生を調節する。活性化すると、キナーゼドメインは、受容体の自己リン酸化、ならびに活性化シグナルの伝播に役立つ各種細胞質タンパク質のリン酸化反応を誘発し、成長、分化および生存を導く。ｃ−Ｋｉｔ受容体シグナリングの下流調節因子のいくつかには、ＰＬＣγ、ＰＩ３−キナーゼ、Ｇｒｂ−２、ＳＨＩＰおよびＳｒｃ関連キナーゼが含まれる。両方の受容体チロシンキナーゼは、各種の造血器および非造血器悪性腫瘍に関与することが示されている。ｃ−Ｋｉｔのリガンド非依存性活性化を誘発する突然変異は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、肥満細胞症および消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）に関連する。これらの突然変異は、キナーゼドメイン内の単一アミノ酸変化、または遺伝子内縦列重複、受容体の膜近傍領域の点変異もしくはインフレーム欠失を含む。活性化突然変異の他に、過剰発現した野生型ｃ−Ｋｉｔのリガンド依存性（自己分泌または傍分泌）刺激が、悪性表現型に寄与し得る。
【０１３７】
他の実施形態では、本発明は、ｃＫｉｔの媒介による患者の病気または病状を処置またはその重篤度を軽減する方法であって、当該患者に本発明に係る組成物投与する工程を含む方法を提供する。
【０１３８】
本明細書で用いる「ｃＫｉｔの媒介による病気」または「病状」という用語は、ｃＫｉｔが関与することが知られているあらゆる病気または他の有害な病状を意味する。従って、本発明の他の実施形態は、ｃＫｉｔが関与することが知られている１つ以上の病気を処置するかまたはその重篤度を軽減することに関する。具体的には、本発明は、増殖性疾患から選択される病気または病状を処置するかまたはその重篤度を軽減する方法であって、本発明に係る組成物をそれを必要とする患者に投与する工程を含む方法に関する。
【０１３９】
本明細書で用いる「ｃ−ＫＩＴの媒介による病気」という用語は、ｃ−ＫＩＴファミリーキナーゼが関与することが知られているあらゆる病気または他の有害な病状を意味する。そのような病状には、ＡＭＬ、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、肥満細胞症、未分化大細胞リンパ腫、ＡＬＬ、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、Ｔ細胞リンパ腫、腺様嚢胞癌、血管肉腫、子宮内膜癌、小細胞肺癌、前立腺癌、卵巣癌、乳癌、甲状腺癌、悪性黒色腫および結腸癌が含まれるがこれらに限定されない。
【０１４０】
ＫＤＲは、ＶＥＧＦ（血管内皮増殖因子）も結合するチロシンキナーゼ受容体である。ＶＥＧＦとＫＤＲ受容体の結合により、既存の血管からの毛細血管の出芽である血管形成が生じる。各種癌には高レベルのＶＥＧＦが見られ、腫瘍血管形成を生じるとともに、癌性細胞を急速に増殖させる。それゆえ、ＶＥＧＦ活性を抑制することが、腫瘍成長を阻害する１つの方法であり、これは、ＫＤＲ受容体チロシンキナーゼを阻害することにより可能であることが示されている。例えば、チロシンキナーゼの阻害剤は、腫瘍血管新生および多発性腫瘍の成長も抑制することが報告されている。
【０１４１】
そのような阻害剤により処置可能な癌の例としては、脳癌、尿生殖器癌、リンパ系癌、胃癌、喉頭癌、肺癌、膵臓癌、乳癌、カポジ肉腫、および白血病が挙げられる。異常チロシンキナーゼ活性に関連する他の病気および病状には、血管疾患、自己免疫疾患、眼病、および炎症性疾患が含まれる。
【０１４２】
他の実施形態では、本発明は、ＫＤＲの媒介による患者の病気または病状を処置するかまたはその重篤度を軽減する方法であって、本発明に係る組成物を当該患者に投与する工程を含む方法を提供する。
【０１４３】
本明細書で用いる「ＫＤＲの媒介による病気」という用語は、ＫＤＲファミリーキナーゼが関与することが知られているあらゆる病気または他の有害な病状を意味する。従って、本発明の他の実施形態は、ＫＤＲが関与することが知られている１つ以上の病気を処置するかまたはその重篤度を軽減することに関する。具体的には、本発明は、脳癌、尿生殖器癌、リンパ系癌、胃癌、喉頭癌、肺癌、膵臓癌、乳癌、カポジ肉腫、および白血病等の癌、子宮内膜症、良性前立腺過形成、再狭窄およびアテローム性動脈硬化症等の血管疾患、リウマチ性関節炎および乾癬等の自己免疫疾患、増殖性または血管新生網膜症および黄斑変性症等の眼病、ならびに接触性皮膚炎、ぜんそく、および遅延型過敏反応等の炎症性疾患から選択される病気または病状を処置するかまたはその重篤度を軽減する方法に関する。
【０１４４】
ｃＦＭＳは、単核性食細胞系統の生存、増殖、および分化を促進するコロニー刺激因子１（ＣＳＦ−１）の受容体である。ＣＳＦ−１は、細胞表面ｃＦＭＳ受容体と結合し、受容体ｃＦＭＳキナーゼによる自己リン酸化、およびその後の一連の細胞内シグナルを生じることによりその作用を発揮する。マクロファージ系統における受容体発現は、リポ多糖（ＬＰＳ）チャレンジ後のマウスにおけるサイトカイン産生の増加、マウスにおける単球およびマクロファージの産生の増加、およびマウスおよびラットにおける関節炎の悪化を引き起こす外因性ＣＳＦ−１の能力と一致する。非機能性ＣＳＦ−１リガンドまたは受容体を有するマウスは骨硬化症であり、いくつかのマクロファージ集団が欠け、炎症攻撃に対する反応が低下する。
【０１４５】
ＣＳＦ−１−ｃＦＭＳ受容体経路は、組織マクロファージ集団の慢性的活性化を伴う多数のヒトの病変において上方に調節されため、薬物療法の標的とすることができる。ＣＳＦ−１は、インビトロでの破骨細胞発生および骨分解を促進するため、骨粗しょう症および整形外科移植片の着床不全部位における過剰な破骨細胞活性に寄与し得る。ＣＳＦ−１は、リウマチ性関節炎患者の滑液中で上昇し、リウマチ性関節炎患者の滑膜繊維芽細胞は高レベルのＣＳＦ−１を産生するが、これは、ＣＳＦ−１が関節破壊に関与していることを示唆している。ＣＳＦ−１産生の増加も炎症性腸疾患、糸球体腎炎、同種移植片拒絶反応、および動脈硬化症に見られる組織マクロファージの蓄積に関連する。さらに、いくつかの腫瘍型の成長は、癌細胞および／または腫瘍間質におけるＣＳＦ−１およびｃＦＭＳ受容体の過剰発現に関連する。
【０１４６】
本発明の方法に係る化合物および組成物は、癌、自己免疫疾患、神経変性もしくは神経疾患、統合失調症、骨関連疾患、肝疾患、または心疾患の処置またはその重篤度の軽減に有効な任意の量および任意の投与ルートを用いて投与してもよい。必要とされる正確な量は、対象の種、年齢、および全身状態、感染の重篤度、特定の薬剤、その投与方法等に応じて対象ごとに異なる。本発明の化合物は、投与の容易さおよび投薬量の均一性のために、投薬量単位形態で調合することが好ましい。本明細書で用いる「投薬量単位形態」という表現は、処置する患者に適した薬剤の物理的に個別の単位を指す。しかしながら、本発明の化合物および組成物の総日用量は担当医により正しい医学的判断の範囲内で決められることは言うまでもない。任意の特定患者または生物に対する具体的な有効量レベルは、処置している疾患およびその疾患の重篤度、用いる具体的な化合物の活性、用いる具体的な組成物、患者の年齢、体重、全体的な健康、性別、および食事、用いる具体的な化合物の投与時間、投与ルート、および排出速度、処置時間、用いる具体的な化合物と組み合わせてまたは同時にに用いる薬物、および医療分野で周知の同様の要因を含む各種の要因に依存する。本明細書で用いる「患者」という用語は、動物、好ましくは、哺乳動物、および最も好ましくは、ヒトを意味する。
【０１４７】
本発明の薬学的に受容可能な組成物は、ヒトおよび他の動物に対して、処置している感染の重篤度に応じて、経口、経直腸、非経口、大槽内（ｉｎｔｒａｃｉｓｔｅｒｎａｌｌｙ）、膣内、腹腔内、局所（散剤、軟膏、または滴下による）、経口または鼻内噴霧として口腔内等により投与することができる。特定の実施形態では、本発明の化合物は、１日あたり対象の体重１ｋｇにつき約０．０１ｍｇ〜約５０ｍｇ、好ましくは、約１ｍｇ〜約２５ｍｇの投薬量レベルで、１日１回以上、経口または非経口投与することにより所望の治療効果を得るようにしてもよい。
【０１４８】
経口投与用の液体投薬形態は、薬学的に受容可能なエマルジョン、マイクロエマルジョン、溶液、懸濁液、シロップおよびエリキシル剤を含むがそれらに限定されない。活性化合物の他に、液体投薬形態は、例えば、水もしくは他の溶剤等の当該分野において一般に用いられる不活性希釈剤、エチルアルコール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、ジメチルホルムアミド、油類（特に、綿実、ラッカセイ、コーン、胚芽、オリーブ、ヒマシ、およびゴマ油）、グリセロール、テトラヒドロフルフリルアルコール、ポリエチレングリコールおよびソルビタン脂肪酸エステル等の可溶化剤および乳化剤、ならびにそれらの混合物を含有してもよい。不活性希釈剤以外に、経口組成物は、湿潤剤、乳化および懸濁化剤、甘味料、香料、ならびに芳香剤等のアジュバントも含むようにすることができる。
【０１４９】
注射用製剤、例えば、無菌注射用水性または油性懸濁液は、適切な分散または湿潤剤および懸濁化剤を用いて公知の技術により調合してもよい。無菌注射用調製はまた、非毒性非経口により許容可能な希釈剤または溶剤中の無菌注射用溶液、懸濁液またはエマルジョンであってもよく、例えば、１，３−ブタンジオール溶液であってもよい。使用可能な許容可能な賦形剤および溶剤には、水、リンゲル液、ＵＳＰ、および生理食塩水がある。さらに、従来、無菌不揮発油が溶剤または懸濁化剤として用いられている。この目的のために、合成モノグリセリドまたはジグリセリドを含む任意の無菌性不揮発油を用いることができる。さらに、オレイン酸等の脂肪酸が注射物質の調製に用いられる。
【０１５０】
上記注射製剤は、例えば、細菌保持フィルターを介したろ過によって、または使用前に無菌水または他の無菌注射用媒体中に溶解または分散可能な滅菌剤を無菌固形組成物の形態で組み込むことにより滅菌することができる。
【０１５１】
本発明の化合物の効果を持続させるために、皮下または筋肉内注射から化合物の吸収を遅らせることが望ましい場合が多い。これは、水溶性が低い結晶質または非晶質の液体懸濁液の使用によって行うことができる。そして、化合物の吸収率はその溶解率に依存し、溶解率は結晶の大きさおよび結晶形態に依存し得る。代替的には、非経口投与化合物形態の吸収は、化合物を油賦形剤中に溶解または懸濁することにより遅延される。注射用デポー形態（ｉｎｊｅｃｔａｂｌｅ  ｄｅｐｏｔ  ｆｏｒｍ）は、ポリラクチド−ポリグリコリド等の生分解性高分子中に化合物のマイクロカプセル基質を形成することにより作製される。化合物と高分子の割合、および使用する特定の高分子の性質に応じて、化合物放出速度を制御することができる。他の生分解性高分子の例としては、ポリ（オルトエステル）およびポリ（無水物）が挙げられる。デポー注射製剤はまた、化合物を生体組織に適合するリポソームまたはマイクロエマルジョン中に封入することにより調製される。
【０１５２】
直腸または膣内投与用組成物は、本発明の化合物と、周囲温度では固体であるが体温では液体となるため直腸または膣腔内で溶解して活性化合物を放出するココアバター、ポリエチレングリコール、または坐剤蝋等の適切な非刺激性賦形剤または担体とを混合することにより調製可能な坐剤であることが好ましい。
【０１５３】
経口投与用固形投薬形態には、カプセル、錠剤、丸薬、散剤、および顆粒が含まれる。そのような固形投薬形態では、上記活性化合物は、少なくとも１つの不活性な薬学的に受容可能な賦形剤または担体ならびにクエン酸ナトリウムまたは第二リン酸カルシウムおよび／またはａ）でんぷん、ラクトース、スクロース、グルコース、マン二トール、およびケイ酸等の充填剤もしくは増量剤、ｂ）例えば、カルボキシメチルセルロース、アルギン酸塩、ゼラチン、ポリビニルピロリジノン、スクロース、およびアラビアゴム等の結合剤、ｃ）グリセロール等の保湿剤、ｄ）寒天、炭酸カルシウム、ジャガイモもしくはタピオカでんぷん、アルギン酸、特定のケイ酸塩、および炭酸ナトリウム等の崩壊剤、ｅ）パラフィン等の溶解遅延剤、ｆ）第四級アンモニウム化合物等の吸収促進剤、ｇ）例えば、セチルアルコールおよびグリセロールモノステアレート等の湿潤剤、ｈ）カオリンおよびベントナイト粘土等の吸収剤、およびｉ）タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウム、およびそれらの混合物等の潤滑剤と混合される。カプセル、錠剤、および丸薬の場合、投薬形態には、緩衝液も含まれ得る。
【０１５４】
類似のタイプの固形組成物をそのような賦形剤をラクトースまたは乳糖および高分子量ポリエチレングリコール等として用いた軟および硬ゼラチンカプセルの充填剤として用いてもよい。固形投薬形態の錠剤、糖衣錠、カプセル、丸薬、および顆粒は、腸溶コーティングおよび製剤調合分野で周知の他のコーティング等のコーティングおよびシェルを用いて調製することができる。これらは、随意に、乳白剤を含有するとともに、活性成分（単数または複数）のみを放出するか、または活性成分を腸管の特定の部分において優先的に放出し、随意に、遅延して放出する組成となるようにしてもよい。使用可能な包埋組成物の例としては、高分子物質および蝋が挙げられる。類似のタイプの固形組成物はまた、そのような賦形剤をラクトースまたは乳糖および高分子量ポリエチレングリコール（ｈｉｇｈ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｗｅｉｇｈｔ  ｐｏｌｅｔｈｙｌｅｎｅ  ｇｌｙｃｏｌｓ）等として用いた軟および硬ゼラチンカプセルの充填剤として用いてもよい。
【０１５５】
上記活性化合物はまた、上記の１つ以上の賦形剤を含むマイクロカプセル化した形態とすることもできる。固形投薬形態の錠剤、糖衣錠、カプセル、丸薬、および顆粒は、腸溶コーティング、放出制御コーティング、および製剤調合分野で周知の他のコーティング等のコーティングおよびシェルを用いて調製することができる。そのような固形投薬形態では、上記活性化合物は、スクロース、ラクトース、またはでんぷん等、少なくとも１つの不活性希釈剤と混合してもよい。そのような投薬形態はまた、通常の慣行どおり、不活性希釈剤以外のさらなる物質、例えば、ステアリン酸マグネシウムおよび微結晶性セルロース等の錠剤化滑剤および他の錠剤化補助剤を含んでもよい。カプセル、錠剤、および丸薬の場合、投薬形態は、緩衝液を含んでもよい。これらは、随意に、乳白剤を含有するとともに、活性成分（単数または複数）のみを放出するか、または活性成分を腸管の特定の部分において優先的に放出し、随意に、遅延して放出する組成となるようにしてもよい。使用可能な包埋組成物の例としては、高分子物質および蝋が挙げられる。
【０１５６】
本発明の化合物の局所または経皮投与用投薬形態には、軟膏、ペースト、クリーム、ローション、ゲル、散剤、溶液、スプレー、吸入剤、またはパッチが含まれる。活性成分は、薬学的に受容可能な担体および必要とされ得る任意の必要な防腐剤または緩衝液と無菌状態で混合される。眼科用調合剤、点耳薬、および点眼薬も本発明の範囲内において企図される。さらに、本発明は、体に対して化合物を制御して送達するというさらなる利点を有する経皮貼布の使用を企図する。そのような投薬形態は、上記化合物を適切な媒体で溶解または調剤することにより作製することができる。吸収促進薬を用いて化合物の皮膚上での流量を増すこともできる。その速度は、速度制御膜を設けるか、または化合物を高分子基質またはゲル中に分散させることにより制御することができる。
【０１５７】
１つの実施形態では、本発明は、生物学的サンプル中のタンパク質キナーゼ活性を阻害する方法であって、上記生物学的サンプルを本発明の化合物または上記化合物を含む組成物と接触させる工程を含む方法に関する。
【０１５８】
他の実施形態では、本発明は、生物学的サンプル中のＰＤＧＦＲ（αおよびβ）、ｃＫｉｔ、ＫＤＲ、またはｃＦＭＳ活性を阻害する方法であって、上記生物学的サンプルを本発明の化合物または上記化合物を含む組成物と接触させる工程を含む方法に関する。特定の実施形態では、本発明は、生物学的サンプル中のＰＤＧＦＲ（αおよびβ）、ｃＫｉｔ、ＫＤＲ、またはｃＦＭＳ活性を不可逆的に阻害する方法であって、上記生物学的サンプルを本発明の化合物または上記化合物を含む組成物と接触させる工程を含む方法に関する。
【０１５９】
本明細書で用いる「生物学的サンプル」という用語は、細胞培養液もしくはその抽出液、哺乳動物から得られた生検材料もしくはその抽出液、ならびに血液、唾液、尿、排泄物、精液、涙液、または他の体液もしくはその抽出液を含むがこれらに限定されない。
【０１６０】
タンパク質キナーゼ、または生物学的サンプル中のＰＤＧＦＲ（αおよびβ）、ｃＫｉｔ、ＫＤＲ、またはｃＦＭＳから選択されるタンパク質キナーゼ活性の阻害は、当業者に公知の各種目的に有用である。そのような目的の例は、輸血、臓器移植、生物試料の保管、および生物学的アッセイを含むがそれらに限定されない。
【０１６１】
本発明の他の実施形態は、患者のタンパク質キナーゼ活性を阻害する方法であって、上記患者に本発明の化合物または上記化合物を含む組成物を投与する工程を含む方法に関する。
【０１６２】
他の実施形態では、本発明は、患者のＰＤＧＦＲ（αおよびβ）、ｃＫｉｔ、ＫＤＲ、またはｃＦＭＳ活性の１つ以上を阻害する方法であって、上記患者に本発明の化合物または上記化合物を含む組成物を投与する工程を含む方法に関する。特定の実施形態では、本発明は、患者のＰＤＧＦＲ（αおよびβ）、ｃＫｉｔ、ＫＤＲ、またはｃＦＭＳ活性の１つ以上を不可逆的に阻害する方法であって、上記患者に本発明の化合物または上記化合物を含む組成物を投与する工程を含む方法に関する。他の実施形態では、本発明は、処置を必要とする患者におけるＰＤＧＦＲ（αおよびβ）、ｃＫｉｔ、ＫＤＲ、またはｃＦＭＳの１つ以上の媒介による疾患を処置する方法であって、上記患者に本発明に係る化合物またはその薬学的に受容可能な組成物を投与する工程を含む方法を提供する。そのような疾患については本明細書で詳述する。
【０１６３】
処置する特定の病状または病気に応じて、その病状を処置するために通常投与されるさらなる治療薬も本発明の組成物に存在するようにしてもよい。本明細書で用いるように、特定の病気または病状を処置するために通常投与されるさらなる治療薬は、「処置する病気または病状に適切である」ものとして公知である。
【０１６４】
例えば、本発明の化合物またはその薬学的に受容可能な組成物は、増殖性疾患および癌を処置するための化学療法薬と組み合わせて投与される。公知の化学療法薬の例は、特に、アドリアマイシン、デキサメタゾン、ビンクリスチン、シクロフォスファミド、フルオロウラシル、トポテカン、タキソール、インターフェロン、白金誘導体、タキサン（例えば、パクリタキセル）、ビンカアルカロイド（例えば、ビンブラスチン）、アントラサイクリン（例えば、ドキソルビシン）、エピポドフィロトキシン（例えば、エトポシド）、シスプラチン、メトトレキサート、アクチノマイシンＤ、アクチノマイシンＤ、ドラスタチン１０、コルヒチン、エメチン、トリメトレキサート、メトプリン、シクロスポリン、ダウノルビシン、テニポシド、アンフォテリシン、アルキル化剤（例えば、クロラムブシル）、５−フルオロウラシル、カンプトテシン、シスプラチン、メトロニダゾール、およびＧｌｅｅｖｅｃ（登録商標）を含むがそれらに限定されない。他の実施形態では、本発明の化合物は、ＡｖａｓｔｉｎまたはＶＥＣＴＩＢＩＸ等の生物的薬剤と組み合わせて投与される。
【０１６５】
特定の実施形態では、本発明の化合物またはその薬学的に受容可能な組成物は、アバレリックス、アルデスロイキン、アルデスロイキン、アレムツズマブ、アリトレチノイン、アロプリノール、アルトレタミン、アミホスチン、アナストロゾール、三酸化ヒ素、アスパラギナーゼ、アザシチジン、ＢＣＧ  Ｌｉｖｅ、ベバキュズマブ（Ｂｅｖａｃｕｚｉｍａｂ）、アバスチン、フルオロウラシル、ベキサロテン、ブレオマイシン、ボルテゾミブ、ブスルファン、カルステロン、カペシタビン、カンプトセシン、カルボプラチン、カルムスチン、セレコキシブ、セツキシマブ、クロラムブシル、シスプラチン、クラドリビン、クロファラビン、シクロフォスファミド、シタラビン、ダクチノマイシン、ダルベポエチンアルファ、ダウノルビシン、デニロイキン、デクスラゾキサン、ドセタキセル、ドキソルビシン（中性）、ドキソルビシン塩酸塩、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピルビシン、エポエチンアルファ、エルロチニブ、エストラムスチン、リン酸エトポシド、エトポシド、エキセメスタン、フィルグラスチム、フロクスウリジンフルダラビン（ｆｌｏｘｕｒｉｄｉｎｅ  ｆｌｕｄａｒａｂｉｎｅ）、フルベストラント、ゲフィチニブ、ゲムシタビン、ゲムツズマブ、酢酸ゴセレリン、酢酸ヒストレリン、ヒドロキシウレア、イブリツモマブ、イダルビシン、イホスファミド、メシル酸イマチニブ、インターフェロンアルファ−２ａ、インターフェロンアルファ−２ｂ、イリノテカン、レナリドミド、レトロゾール、ロイコボリン、酢酸ロイプロリド、レバミゾール、ロムスチン、酢酸メゲストロール、メルファラン、メルカプトプリン、６−ＭＰ、メスナ、メトトレキサート、メトキサレン、マイトマイシンＣ、ミトタン、ミトキサントロン、ナンドロロン、ネララビン、ノフェツモマブ（Ｎｏｆｅｔｕｍｏｍａｂ）、オプレルベキン、オキサリプラチン、パクリタキセル、パリフェルミン、パミドロネート、ペガデマーゼ、ペガスパルガーゼ、ペグフィルグラスチム、ペメトレキセド二ナトリウム、ペントスタチン、ピポブロマン、プリカマイシン、ポルフィマーナトリウム、プロカルバジン、キナクリン、ラスブリカーゼ、リツキシマブ、サルグラモスチム、ソラフェニブ、ストレプトゾシン、マレイン酸スニチニブ（Ｓｕｎｉｔｉｎｉｂ  Ｍａｌｅａｔｅ）、タルク、タモキシフェン、テモゾロミド、テニポシド、ＶＭ−２６、テストラクトン、チオグアニン、６−ＴＧ、チオテパ、トポテカン、トレミフェン、トシツモマブ、トラスツズマブ、トレチノイン、ＡＴＲＡ、ウラシルマスタード、バルルビシン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビノレルビン、ゾレドロネート、またはゾレドロン酸のいずれか１つ以上から選択される抗増殖または化学療法薬と組み合わせて投与される。
【０１６６】
本発明の阻害剤と組み合わせ可能な薬剤の他の例は、Ａｒｉｃｅｐｔ（登録商標）およびＥｘｃｅｌｏｎ（登録商標）等のアルツハイマー病の処置薬、Ｌ−ドーパ／カルビドパ、エンタカポン、ロピンロール（ｒｏｐｉｎｒｏｌｅ）、プラミペキソール、ブロモクリプチン、ペルゴリド、トリヘキセフェンジル（ｔｒｉｈｅｘｅｐｈｅｎｄｙｌ）、およびアマンタジン等のパーキンソン病の処置薬、βインターフェロン（例えば、Ａｖｏｎｅｘ（登録商標）およびＲｅｂｉｆ（登録商標））、Ｃｏｐａｘｏｎｅ（登録商標）、およびミトキサントロン等の多発性硬化症（ＭＳ）の処置薬、アルブテロールおよびＳｉｎｇｕｌａｉｒ（登録商標）等のぜんそくの処置薬、ジブレキサ、リスパダール、セロクエル、およびハロペリドール等の統合失調症の処置薬、コルチコステロイド、ＴＮＦ遮断薬、ＩＬ−１ＲＡ、アザチオプリン、シクロフォスファミド、およびスルファサラジン等の抗炎症剤、シクロスポリン、タクロリムス、ラパマイシン、ミコフェノール酸モフェチル、インターフェロン、コルチコステロイド、シクロホファミド（ｃｙｃｌｏｐｈｏｐｈａｍｉｄｅ）、アザチオプリン、およびスルファサラジン等の免疫調節および免疫抑制薬、アセチルコリンエステラーゼ阻害剤、ＭＡＯ阻害剤、インターフェロン、抗けいれん薬、イオンチャンネル遮断薬、リルゾール、および抗パーキンソン病薬等の神経栄養因子、β遮断薬、ＡＣＥ阻害剤、利尿薬、硝酸塩、カルシウムチャンネル遮断薬、およびスタチン等の心臓血管疾患の処置薬、コルチコステロイド、コレスチラミン、インターフェロン、および抗ウイルス薬等の肝疾患の処置薬、コルチコステロイド、抗白血病薬、および成長因子等の血液疾患の処置薬、ならびにγグロブリン等の免疫不全疾患の処置薬を含むがこれらに限定されない。
【０１６７】
これらのさらなる薬剤は、発明化合物含有組成物とは別に複数投与計画の一部として投与してもよい。代替的には、それらの薬剤は、本発明の化合物と混合して単一組成物とし、単回投薬形態の一部としてもよい。複数投与計画（ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｄｏｓａｇｅ  ｒｅｇｉｍｅ）の一部として投与する場合、それら２つの活性薬剤は、同時に、連続して供されるか、または一方の投与から一定期間内に、通常、一方の投与から５時間以内に供されるようにしてもよい。
【０１６８】
本明細書で用いる「組み合わせ」、「組み合わせた」という用語、および関連する用語は、本発明に従った治療薬の同時または連続投与を指す。例えば、本発明の化合物は、他の治療薬と個別の単位投薬形態で同時にまたは連続して投与するか、または単一の単位投薬形態で一緒に投与してもよい。従って、本発明は、式Ｉの化合物、さらなる治療薬、ならびに薬学的に受容可能な担体、アジュバント、または賦形剤を含む単一の単位投薬形態を提供する。
【０１６９】
上記担体材料と組み合わせて単回投薬形態を産生可能な（上述したようにさらなる治療薬を含む組成物中における）発明化合物およびさらなる治療薬の両方の量は、処置する宿主および特定の投与方法に応じて変化する。好ましくは、本発明の組成物は、１日あたりの投薬量が体重１ｋｇにつき０．０１〜１００ｍｇで投与できるように調合される。
【０１７０】
さらなる治療薬を含むこれらの組成物では、当該さらなる治療薬および本発明の化合物が相乗的に作用し得る。それゆえ、そのような組成物中におけるさらなる治療薬の量は、その治療薬のみを利用する単剤療法において必要とされるよりも少ない。そのような組成物では、さらなる治療薬は、１日あたりの投薬量が体重１ｋｇにつき０．０１〜１００μｇで投与できる。
【０１７１】
本発明の組成物中に存在するさらなる治療薬の量は、上記治療薬を唯一の活性薬剤として含む組成物中において通常投与される量、と同程度である。好ましくは、本開示の組成物中におけるさらなる治療薬の量は、当該薬剤を治療効果のある唯一の活性薬剤として含む組成物中に通常存在するの量の約５０％〜１００％の範囲である。
【０１７２】
本発明の化合物またはその医薬組成物を、人工器官、人工弁、血管グラフト、ステント、およびカテーテル等の埋め込み型医療機器をコーティングする組成物に組み込んでもよい。例えば、血管ステントは、再狭窄（損傷後に血管壁が再び狭くなること）を克服するために用いられている。しかしながら、ステントまたは他の埋め込み型機器を用いる患者は、血栓形成または血小板活性化の危険がある。これらの望ましくない効果は、キナーゼ阻害剤を含む薬学的に受容可能な組成物で予め機器をコーティングすることにより予防または軽減可能である。本発明の化合物でコーティングした埋め込み型機器は本発明の他の実施形態である。
【実施例】
【０１７３】
下記の実施例に示すように、特定の例示的な実施形態では、化合物は、下記の基本手順に従って調製される。一般的な方法は本発明の特定の化合物の合成を示すが、本明細書に記載するように、下記の一般的方法およびに当業者に公知の他の方法が全ての化合物およびそれら化合物の各々のサブクラスおよび種に適用可能であることは言うまでもない。
【０１７４】
【化１２】
0005526020.tif 000055
（実施例１）
中間体Ａの合成：
工程１：３−ジメチルアミノ−１−ピリジン−３−イル−プロペノン：３−アセチルピリジン（２．５ｇ、２０．６４ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジメチル−ホルムアミドジメチルアセタール（３．２０ｍＬ、２４ｍｍｏｌ）をエタノール（１０ｍＬ）中において一晩環流した。この反応混合液を室温まで冷却し、減圧下で蒸発させた。その残留物にジエチルエーテル（２０ｍＬ）を加え、その混合液を０℃まで冷却した。その混合液をろ過して３−ジメチルアミノ−１−ピリジン−３−イル−プロペノン（１．９ｇ、１０．７８ｍｍｏｌ）を黄色結晶として得た。（収率：５２％）この材料をさらに精製することなく次の工程で用いた。
【０１７５】
工程２：Ｎ−（２−メチル−５−ニトロ−フェニル）−硝酸グアニジン：２−メチル−５−ニトロアニリン（１０ｇ、６５ｍｍｏｌ）をエタノール（２５ｍＬ）中に溶解し、その溶液に濃縮ＨＮＯ３（４．６ｍＬ）を滴下して加えた後、シアナミド（９９ｍｍｏｌ）の５０％水溶液を加えた。この反応混合液を一晩環流した後、０℃まで冷却した。その混合液をろ過し、その残留物を酢酸エチルおよびジエチルエーテルで洗浄し、乾燥させてＮ−（２−メチル−５−ニトロ−フェニル）−硝酸グアニジン（４．２５ｇ、収率：３４％）を得た。
【０１７６】
工程３：２−メチル−５−ニトロフェニル−（４−ピリジン−３−イル−ピリミジン−２−イル）−アミン：３−ジメチルアミノ−１−ピリジン−３−イル−プロペノン（１．７０ｇ、９．６ｍｍｏｌ）およびＮ−（２−メチル−５−ニトロ−フェニル）−硝酸グアニジン（２．４７ｇ、９．６ｍｍｏｌ）の２−プロパノール懸濁液（２０ｍＬ）に、ＮａＯＨ（４３０ｍｇ、１０．７５ｍｍｏｌ）を加え、その結果得られた混合液を２４時間環流した。その反応混合液を０℃まで冷却し、その結果得られた沈殿物をろ過した。その固体残留物を水中で懸濁し、ろ過した後、２−プロパノールおよびジエチルエーテルで洗浄し、乾燥させた。０．８７ｇ（２．８３ｍｍｏｌ）の２−メチル−５−ニトロフェニル−（４−ピリジン−３−イル−ピリミジン−２−イル）−アミンを単離した。（収率：３０％）
工程４：４−メチル−Ｎ−３−（４−ピリジン−３−イル−ピリミジン−２−イル）−ベンゼン−１，３−ジアミン（中間体Ａ）：ＳｎＣｌ２．２Ｈ２Ｏ（２．１４ｇ、９．４８ｍｍｏｌ）の濃塩酸溶液（８ｍＬ）を２−メチル−５−ニトロ−フェニル−（４−ピリジン−３−イル−ピリミジン−２−イル）−アミン（０．６１ｇ、１．９８ｍｍｏｌ）に激しく撹拌しながら加えた。３０分間撹拌した後、その混合液を砕いた氷の上に注ぎ、Ｋ２ＣＯ３でアルカリ性にし、酢酸エチル（５０ｍＬ）で３回抽出した。有機相を組み合わせ、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、蒸発乾固させた。ジクロロメタンからの再結晶により、２５２．６ｍｇ（０．９１ｍｍｏｌ）の４−メチル−Ｎ−３−（４−ピリジン−３−イル−ピリミジン−２−イル）−ベンゼン−１，３−ジアミン（収率：４６％）がオフホワイトの固体として生じた。
【０１７７】
（実施例１）
【０１７８】
【化１３】
0005526020.tif 000056
工程１：４−（アクリルアミド）安息香酸  ４−アミノ安息香酸（１．４０ｇ、１０ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１０ｍＬ）およびピリジン（０．５ｍＬ）溶液を０℃まで冷却した。この溶液に塩化アクリロイル（０．９４ｇ、１０ｍｍｏｌ）を加え、その結果得られた混合液を３時間撹拌した。その混合液を水２００ｍｌに注ぎ、それによって得られた白色固体をろ過し、水およびエーテルで洗浄した。高真空下で乾燥させて１．８ｇの所望生成物を得て、精製することなく次工程で用いた。
【０１７９】
工程２：４−（アクリルアミド）安息香酸（８２ｍｇ、０．４３ｍｍｏｌ）および中間体Ａ（１００ｍｇ、０．３６ｍｍｏｌ）を窒素雰囲気下においてピリジン（４ｍＬ）中で溶解し、撹拌した。この溶液に１−プロパンホスホン酸環状無水物（０．２８ｇ、０．４３ｍｍｏｌ）を加え、その結果得られた溶液を一晩室温で撹拌した。その溶剤を少量になるまで蒸発させた後、冷水５０ｍｌに注いだ。それにより形成された固体をろ過し、黄色の粉末を得た。カラムクロマトグラフィ（ＣＨＣｌ３：ＭｅＯＨ＝９５：５）による粗生成物の精製により、３０ｍｇの４−アクリルアミド−Ｎ−（４−メチル−３−（４−（ピリジン−３−イル）ピリミジン−２−イルアミノ）フェニル）ベンズアミド（ＩＩ−１）を白色粉末として得た。ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：２５１．２；１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−Ｄ６，３００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：１０．４２（ｓ，１Ｈ），１０．１１（ｓ，１Ｈ），９．２６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．２Ｈｚ），８．９９（ｓ，１Ｈ），８．６８（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．０および１．７Ｈｚ），８．５１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝５．２Ｈｚ），８．４８（ｍ，１Ｈ），８．０７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．７Ｈｚ），７．９５（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．８Ｈｚ），７．７９（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．８Ｈｚ），７．４５（ｍ，３Ｈ），７．１９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．５Ｈｚ），６．４７（ｄｄ．１Ｈ，Ｊ＝１６．７および９．６Ｈｚ），６．３０（ｄｄ，Ｈ，Ｊ＝１６．７および１．９Ｈｚ），５．８１（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝９．９および２．２Ｈｚ），２．２２（ｓ，３Ｈ）。
【０１８０】
（実施例２）
【０１８１】
【化１４】
0005526020.tif 000057
化合物ＩＩ−１０は、４−（２，５−ジオキソ−２Ｈ−ピロール−１（５Ｈ）−イル）安息香酸および中間体Ａから、実施例１に記載する方法と実質的に同じ方法で合成可能である。４−マレイミド安息香酸は、多数の業者より販売されている。
【０１８２】
（実施例３）
【０１８３】
【化１５】
0005526020.tif 000058
スキーム２
【０１８４】
【化１６】
0005526020.tif 000059
ａ）塩化アクリロイル、ピリジン、ＤＭＦ  ｂ）ＢＯＰ試薬、ＤＩＥＡ、ＣＨ３ＣＮ、１６時間
工程１：４−（アクリロイルアミノメチル）−安息香酸  ４−アミノメチル安息香酸（５ｇ、３３．０ｍｍｏｌ）およびピリジン（１．５ｍＬ）のＤＭＦ（３５ｍＬ）撹拌溶液に、塩化アクリロイル（２．９７ｇ、３３．０ｍｍｏｌ）を０℃で滴下して加えた。この反応混合液を室温にし、さらに４日間撹拌した。その後、水（１００ｍＬ）に注ぎ、１５分間撹拌した後、ＥｔＯＡｃ（３×１５０ｍＬ）で抽出した。この混合有機抽出液を塩水（５０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮して粗生成物を得た。カラムクロマトグラフィ（シリカ、２３０〜４００、ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨの混合物）により、所望生成物（０．７ｇ、９．９５％）を白色固体として得て、これを次工程で用いた。
【０１８５】
工程２：４−（アクリロイルアミノメチル）−Ｎ−［４−メチル−３−（４−ピリジン−３−イルピリミジン−２−イルアミノ）フェニル］ベンズアミド（ＩＩ−６）  ４−（アクリロイルアミノメチル）−安息香酸（７５ｍｇ、０．３７ｍｍｏｌ）のＣＨ３ＣＮ（４ｍＬ）溶液に、ＢＯＰ試薬（２４５ｍｇ、０．５５ｍｍｏｌ）を加えた後、ＤＩＥＡ（１５０ｍｇ、１．１ｍｍｏｌ）および中間体Ａ（１００ｍｇ、０．３７ｍｍｏｌ）を加えた。この反応混合液を室温で１６時間撹拌した後、水（１０ｍＬ）で急冷し、酢酸エチル（３×５ｍＬ）で抽出した。この混合有機抽出液を水（２ｍＬ）、塩水（２ｍＬ）で洗浄した。Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた後、減圧下で濃縮して粗生成物を得て、これをカラムクロマトグラフィ（シリカ、２３０〜４００、クロロホルム／メタノールの混合物）で精製してＩＩ−６（７０ｍｇ、４１％）を白色固体として得た。ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：４６４．５、１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６、４００  ＭＨＺ）δ（ｐｐｍ）：２．２０（ｓ，３Ｈ）、４．４０−４．４２（ｍ，２Ｈ），５．６２（ｄｄ，Ｊ＝２．２＆１０Ｈｚ，１Ｈ），６．１２（ｄｄ，Ｊ＝２．２＆１７Ｈｚ，１Ｈ），６．２６（ｄｄ，Ｊ＝１０＆１７Ｈｚ，１Ｈ），７．１９（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ），７．３７−７．５４（ｍ，５Ｈ），７．９０（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，２Ｈ），８．０６（ｓ，１Ｈ），８．４７−８．５０（ｍ，２Ｈ），８．６７−８．６８（ｍ，２Ｈ），９．０（ｓ，１Ｈ），９．２６（ｓ，１Ｈ），１０．１５（ｓ，１Ｈ）。
【０１８６】
（実施例４）
【０１８７】
【化１７】
0005526020.tif 000060
スキーム３
【０１８８】
【化１８】
0005526020.tif 000061
ａ）ＡｃＯＨ、室温、１８時間；ｂ）Ｐ２Ｏ５、ジオキサン、１００℃、１８時間；ｃ）ＢＯＰ試薬、ＤＩＥＡ、ＤＭＦ、室温、１６時間
工程１：４−［（３−カルボキシアクリロイルアミノ）メチル］安息香酸  ４−アミノ安息香酸（１．５４ｇ、１０．１８ｍｍｏｌ）の酢酸（２０ｍＬ）溶液に、無水マレイン酸（１ｇ、１０．１０ｍｍｏｌ）を加え、その反応液を室温で１８時間撹拌した。白色固体が沈殿し、それをろ過し、水（３×５ｍＬ）で洗浄し、乾燥させて所望生成物（２．３ｇ、９０％）を白色無定形固体として生じ、これをそのまま次工程で用いた。
【０１８９】
工程２：４−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロピロール−１−メチル）安息香酸  ４−［（３−カルボキシアクリロイルアミノ）メチル］安息香酸（１ｇ、４．０ｍｍｏｌ）のジオキサン（２０ｍＬ）撹拌溶液に、Ｐ２Ｏ５（０．８４ｇ、６．０ｍｍｏｌ）を加え、その反応混合液を１８時間環流した。次いで、その反応混合液を冷却し、溶剤を減圧下において回転蒸発器で除去した。その残留物を氷水（５ｍＬ）に入れ、その溶液をＥｔＯＡｃ（３×５０ｍＬ）で抽出した。その混合ＥｔＯＡｃ抽出液を塩水（２５ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮して４−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロピロール−１−メチル）安息香酸（０．１ｇ、１０％）を淡いクリーム色の固体として生じ、これをさらに精製することなく用いた。
【０１９０】
工程３：４−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロピロール−１−イルメチル）−Ｎ−［４−メチル−３−（４−ピリジン−３−イル−ピリミジン−２−イルアミノ）−フェニル］ベンズアミド（ＩＩ−８）  ４−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロピロール−１−メチル）安息香酸（８４ｍｇ、０．３７ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２ｍＬ）溶液に、ＢＯＰ試薬（２４０ｍｇ、０．５４ｍｍｏｌ）を加え、その反応液を１０分間撹拌した。これに、ＤＩＥＡ（１４０ｍｇ、１．０８ｍｍｏｌ）を加え、その反応液を１０分間さらに撹拌した。最後に、これに中間体Ａ（１００ｍｇ、０．３７ｍｍｏｌ）を加え、その反応液を室温で１６時間撹拌した。次いで、この反応混合液を水（１５ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（３×１５ｍＬ）で抽出した。この混合ＥｔＯＡｃ抽出液を塩水（５ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、減圧下で濃縮して１００ｍｇの表題化合物を粗固体として得た。これを分取ＨＰＬＣによりさらに精製し、純粋なＩＩ−８（３０ｍｇ、１６．６％）を淡褐色の固体として得た。ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：４９０．１，１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６，４００ＭＨＺ）δ（ｐｐｍ）：２．２０（ｓ，３Ｈ），４．６６（ｓ，２Ｈ），７．１０（ｓ，２Ｈ），７．１９（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），７．３５（ｄ，Ｊ＝８．３４Ｈｚ，２Ｈ），７．４１−７．５２（ｍ，３Ｈ），７．８８（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，２Ｈ），８．０５（ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，１Ｈ），８．４５−８．５０（ｍ，２Ｈ），８．６６（ｄｄ，Ｊ＝１．５＆４．７Ｈｚ，１Ｈ），８．９７（ｓ，１Ｈ），９．２５（ｓ，１Ｈ），１０．１６（ｓ，１Ｈ）。
【０１９１】
（実施例５）
【０１９２】
【化１９】
0005526020.tif 000062
化合物ＩＩ−１５は、Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ＆Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ１０（２００２）３５５−３６０に記載のものと同様のプロトコルを用いて、アセトン中において（実施例１にしたがって調製した）化合物ＩＩ−１をジメチルジオキシランで処理することにより合成することができる。
【０１９３】
（実施例６）
【０１９４】
【化２０】
0005526020.tif 000063
工程１：４−（アリルスルホンアミド）安息香酸は、実施例１のプロトコルを用いて、ＤＭＦとピリジンの混合液において４−アミノ安息香酸を市販のプロパ−２−エン−１−スルホニルクロリドで処理することにより調製することができる。
【０１９５】
工程２：４−（アリルスルホンアミド）−Ｎ−（４−メチル−３−（４−（ピリジン−３−イル）ピリミジン−２−イルアミノ）フェニル）ベンズアミドは、実施例１に記載のものと実質的に類似の方法で中間体Ａおよび４−（アリルスルホンアミド）安息香酸を処理することにより調製することができる。
【０１９６】
工程３：化合物ＩＩ−２２は、Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ＆Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ１０（２００２）３５５−３６０に記載のものと同様のプロトコルを用いて、アセトン中において４−（アリルスルホンアミド）−Ｎ−（４−メチル−３−（４−（ピリジン−３−イル）ピリミジン−２−イルアミノ）フェニル）ベンズアミドをジメチルジオキシランで処理することにより合成することができる。
【０１９７】
（実施例７）
【０１９８】
【化２１】
0005526020.tif 000064
工程１：エテンスルホニルクロリドは、Ｃａｎａｄｉａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（１９８４），６２（１０），１９７７−９５に記載のものと実質的に類似のプロトコルを用いて、トリエチルアミンの存在下で市販の２−クロロエタンスルホニルクロリドから調製することができる。
【０１９９】
工程２：４−（ビニルスルホンアミド）安息香酸は、実施例１に記載のものと実質的に類似の方法で、ＤＭＦとピリジンの混合液において４−（アミノメチル）安息香酸をエテンスルホニルクロリドで処理することにより合成することができる。
【０２００】
工程３：化合物ＩＩ−２３は、実施例１と同じ反応条件を用いて、４−（ビニルスルホンアミド）安息香酸および中間体Ａから合成することができる。
【０２０１】
（実施例８）
【０２０２】
【化２２】
0005526020.tif 000065
工程１：２−（２−トシルヒドラゾノ）酢酸は、Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｅｓ，４９，２２−７；１９６９に記載のプロトコルを用いて、ＨＣｌと水の混合液においてグリオキサル酸を４−メチルベンゼンスルホノヒドラジドで処理することにより調製することができる。
【０２０３】
工程２：ＴＨＦ中においてＤＣＣの存在下で市販のｔｅｒｔ−ブチル４−アミノ安息香酸塩を２−（２−トシルヒドラゾノ）酢酸で処理した後、トリフルオロ酢酸でカルボン酸の脱保護を行うことにより、４−［［［（４−メチルフェニル）スルホニル］ヒドラゾノ］アセチルアミノ］安息香酸を得ることができる（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔｅｒｓ，３３（３８），５５０９−１０；１９９２に記載のものと同様のプロトコル）。
【０２０４】
工程３：ＴＨＦ中においてＤＣＣの存在下で４−［［［（４−メチルフェニル）スルホニル］ヒドラゾノ］アセチルアミノ］安息香酸と中間体Ａを結合した後、トリエチルアミンで処理することにより、化合物ＩＩ−２４を得ることができる（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔｅｒｓ，３３（３８），５５０９−１０；１９９２に記載のものと同様のプロトコル）。
【０２０５】
（実施例９）
【０２０６】
【化２３】
0005526020.tif 000066
スキーム４
【０２０７】
【化２４】
0005526020.tif 000067
ａ）Ｋ２ＣＯ３、アセトン、室温、１６時間；ｂ）ＴＦＡ／ＤＣＭ、０℃〜室温、１６時間；ｃ）ＳＯＣｌ２、ＤＭＦ触媒、ＣＨ２Ｃｌ２、４５℃、３時間；ｄ）Ｅｔ３Ｎ、ＣＨ２Ｃｌ２、０〜１０℃、１．５時間。
【０２０８】
工程１：２，６−ジクロロ安息香酸（０．２０ｇ、１．０５ｍｍｏｌ）のアセトン（１０ｍＬ）撹拌溶液に、ブロモエステル（０．２５ｇ、１．２５ｍｍｏｌ）を加え、その反応液を室温で１６時間撹拌した。次いで、これをろ過し、ろ液を濃縮して得た残留物を粉砕し、石油エーテルを加えて対応するジエステルを白色結晶固体として得た。ろ過の後、乾燥させることにより、ジエステル（０．２９ｇ、９１％）を白色固体として得て、これを次工程に用いた。
【０２０９】
工程２：ジエステル（０．２６ｇ、０．８５ｍｍｏｌ）をＣＨ２Ｃｌ２（５．０ｍＬ）中で溶解し、これに、トリフルオロ酢酸（０．３９ｇ、３．３８ｍｍｏｌ）を０℃で加えた。この反応混合液を室温にし、さらに１２時間室温で撹拌した。次いで、これを濃縮して対応する酸（０．２ｇ、９５．３％）を白色固体として得た。
【０２１０】
工程３：酸（０．１５ｇ、０．８０ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（３．０ｍＬ）撹拌懸濁液に、ＤＭＦ（１滴）を加えた後、ＳＯＣｌ２（０．１４ｇ、１．２ｍｍｏｌ）を加えた。この反応混合液を４５℃で３時間熱し、冷却して、減圧下で濃縮して酸塩化物を得て、これをさらに精製することなくそのまま次工程に用いた。
【０２１１】
工程４：酸塩化物（ＨＣｌ塩、０．１ｇ、０．２ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（３．０ｍＬ）撹拌懸濁液に、Ｅｔ３Ｎ（０．１２ｇ、１．１ｍｍｏｌ）を０℃で加えた。これに、新たに調製した中間体Ｂ（０．３３ｇ、１．３ｍｍｏｌ、粗）を加え、その反応混合液を０℃〜１０℃で１．５時間撹拌した。反応（ＴＬＣ）が終了した後、その反応液を水（１ｍＬ）で急冷し、ＣＨ２Ｃｌ２（３×５ｍＬ）で抽出した。この混合ＣＨ２Ｃｌ２抽出液を水（２ｍＬ）、塩水（２ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、減圧下で濃縮して粗ＩＩ−２６を得て、これを分取ＨＰＬＣによりさらに精製して、純粋なＩＩ−２６（０．０７ｇ、４８％）を黄色固体として得た。ＬＣ／ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：６２７，１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，４００ＭＨＺ）δ（ｐｐｍ）：２．２１（ｓ，３Ｈ），５．０１（ｓ，２Ｈ），７．１９（ｄ，Ｊ＝８．４８Ｈｚ，１Ｈ），７．４２−７．６４（ｍ，６Ｈ），７．７３（ｄ，Ｊ＝８．７６Ｈｚ，２Ｈ），７．９５（ｄ，Ｊ＝８．７６Ｈｚ，２Ｈ），８．０６（ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，１Ｈ），８．４６−８．５１（ｍ，２Ｈ），８．６７（ｄｄ，Ｊ＝１．２＆４．６８Ｈｚ，１Ｈ），９．０（ｓ，１Ｈ），９．２８（ｓ，１Ｈ），１０．１（ｓ，１Ｈ），１０．５２（ｓ，１Ｈ）。
【０２１２】
中間体Ｂの合成
スキーム５
【０２１３】
【化２５】
0005526020.tif 000068
ａ）（ＢＯＣ）２Ｏ、ジオキサン／１０％ＮａＨＣＯ３溶液；ｂ）ＥＤＣＩ／ＨＯＢＴ、ＤＩＰＥＡ、ＣＨ２Ｃｌ２；ｃ）ジオキサン／ＨＣｌ、室温、１６時間。
【０２１４】
工程１：４−アミノ安息香酸（５．０ｇ、３６．４４ｍｍｏｌ）の１，４−ジオキサン／１０％ＮａＨＣＯ３水溶液（１：１、２０ｍＬ）に、触媒量のＴＢＡＢ（０．５８ｇ、１．８２ｍｍｏｌ）を加え、その反応混合液を０℃で撹拌した。これに、ＢＯＣ無水物（１１．９１ｇ、５４．６ｍｍｏｌ）を加え、その反応液を室温で２２時間撹拌した。次いで、４Ｎ−Ｂｏｃ−アミノ安息香酸が白色固体として沈殿した際に、その反応混合液を１０％クエン酸水溶液で酸性化した。これをろ過し、水（１００ｍＬ）で洗浄し、乾燥させて、４Ｎ−Ｂｏｃ−アミノ安息香酸（６．８ｇ、７９％）を白色固体として得て、これを次工程に用いた。
【０２１５】
工程２：４Ｎ−Ｂｏｃ−アミノ安息香酸（０．８５ｇ、３．６ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（２０ｍＬ）溶液に、ＥＤＣＩ（０．７６ｇ、３．９７ｍｍｏｌ）およびＨＯＢＴ（０．５４ｇ、３．９７ｍｍｏｌ）を加えた。この反応液を１５分間撹拌し、それに、ＤＩＰＥＡ（０．５１ｇ、３．９７ｍｍｏｌ）および中間体Ａ（１．０ｇ、３．６ｍｍｏｌ）を加えた。この反応液を室温で２４時間さらに撹拌した後、ＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）で希釈し、水（２×２５ｍＬ）、塩水（１０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。減圧下で濃縮して対応するアミドを粗固体として得て、これを結晶化（ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ）して当該アミド（０．４ｇ、２２％）を白色固体として得た。
【０２１６】
工程３：上記アミド（０．４ｇ、０．８ｍｍｏｌ）のジオキサン（１０ｍＬ）溶液を０℃まで冷却し、乾燥ＨＣｌで１０分間パージし（反応混合液が酸性化）、１６時間撹拌した。その後、この溶剤を減圧下で除去し、中間体Ｂを得て、これをエーテル（１０ｍＬ）で洗浄して中間体Ｂ（０．２８ｇ、８７％）をオレンジ色の固体として得た。
【０２１７】
（実施例１０）
【０２１８】
【化２６】
0005526020.tif 000069
工程１：２−（クロロカルボニル）フェニル次亜塩素酸（２−Ｃｈｌｏｒｏｃａｒｂｏｎｙｌ）ｐｈｅｎｙｌ  ｈｙｐｏｃｈｌｏｒｏｔｈｉｏｉｔｅ）は、Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ  Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ，１３（１２），９７７−８３；１９８３に記載されるような塩化チオニルで処理することにより２，２’−ジチオジ安息香酸から調製することができる。
【０２１９】
工程２：ピリジンの存在下でグリシンを２−（クロロカルボニル）フェニル次亜塩素酸で処理することにより、Ｆａｒｍａｃｏ，４４（９），７９５−８０７；１９８９に記載されるような２−（３−オキソベンゾ［ｄ］イソチアゾール−２（３Ｈ）−イル）酢酸を得ることができる。
【０２２０】
工程３：ＤＭＦ／ＣＨ２Ｃｌ２において、ＤＣＣおよびＮ−ヒドロキシスクシンイムデ（Ｎ−ｈｙｄｒｏｘｙｓｕｃｃｉｎｉｍｄｅ）の存在下で２−（３−オキソベンゾ［ｄ］イソチアゾール−２（３Ｈ）−イル）酢酸と中間体Ａを結合することにより、化合物ＩＩ−３０を得ることができる（Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，（１７），２６４７−２６５４；２００３に記載のものと同様のプロトコル）。
【０２２１】
（実施例１１）
【０２２２】
【化２７】
0005526020.tif 000070
スキーム６
【０２２３】
【化２８】
0005526020.tif 000071
中間体Ｂ（０．４ｇ、１．０１ｍｍｏｌ）とピリジニルスルホニルクロリド（０．２３ｇ、１．１１ｍｍｏｌ）のＮＭＰ（５ｍＬ）撹拌混合液に、乾燥Ｋ２ＣＯ３（０．３５ｇ、２．５２ｍｍｏｌ）を加え、その反応液を８５℃で１８時間熱した。次いで、この反応混合液を冷却し、ＣＨ２Ｃｌ２（５ｍＬ）で希釈し、小型のＣｅｌｉｔｅ（登録商標）ベッドに通した。このろ液を濃縮し、クロマトグラフィ（アルミナ、ＣＨＣｌ３とＭｅＯＨの混合物）により精製し、粗ＩＩ−４０を得て、これを分取ＨＰＬＣによりさらに精製してＩＩ−４０（０．０１５ｇ、２．６％）を淡黄色固体として得た。ＬＣ／ＭＳ（Ｍ−Ｈ＋）：５６９．８，１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６，４００ＭＨＺ）δ（ｐｐｍ）：２．１９（ｓ，３Ｈ），７．１６（ｄ，Ｊ＝８．２８Ｈｚ，１Ｈ），７．２２（ｄ，Ｊ＝８．６８Ｈｚ，２Ｈ），７．３８−７．４１（ｍ，２Ｈ），７．４９−７．５２（ｍ，１Ｈ），７．７７−７．８２（ｍ，３Ｈ），８．０（ｓ，１Ｈ），８．４４−８．４９（ｍ，２Ｈ），８．６７（ｄｄ，Ｊ＝１．３６＆４．６８Ｈｚ，１Ｈ），８．７４（ｄ，Ｊ＝５．２８Ｈｚ，１Ｈ），８．９６（ｓ，１Ｈ），９．１４（ｓ，１Ｈ），９．２５（ｄ，Ｊ＝１．３６Ｈｚ，１Ｈ），１０．０６（ｓ，１Ｈ），１１．３２（ｓ，１Ｈ）。
【０２２４】
（実施例１２）
【０２２５】
【化２９】
0005526020.tif 000072
スキーム７
【０２２６】
【化３０】
0005526020.tif 000073
中間体Ｂ（０．４０ｇ、１．０１ｍｍｏｌ）とピリジニルスルホニルクロリド（０．３２ｇ、１．５ｍｍｏｌ）のＮＭＰ撹拌溶液に、乾燥Ｋ２ＣＯ３（０．５６ｇ、４．０４ｍｍｏｌ）を加え、その反応液を８５℃で１８時間熱した。次いで、この反応液を冷却し、ＣＨ２Ｃｌ２（５ｍＬ）で希釈し、Ｃｅｌｉｔｅ（登録商標）パッドに通した。このろ液を濃縮し、クロマトグラフィ（中性アルミナ、ＣＨＣｌ３とＭｅＯＨの混合物）により精製してＩＩ−４１を得て、これを分取ＨＰＬＣによりさらに精製してＩＩ−４１（０．０２８ｇ、４．８％）をオフホワイトの固体として得た。ＬＣ／ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：５７２．１，１Ｈ  ＮＭＲ（ＭｅＯＤ，４００ＭＨＺ）δ（ｐｐｍ）：２．３１（ｓ，３Ｈ），７．２４−７．２８（ｍ，３Ｈ），７．３５〜７．３８（ｍ，２Ｈ），７．５３−７．５６（ｍ，１Ｈ），７．５９（ｄ，Ｊ＝８．４４Ｈｚ，１Ｈ），７．８６（ｄ，Ｊ＝８．７２Ｈｚ，２Ｈ），８．１４−８．１８（ｍ，２Ｈ），８．４６（ｄ，Ｊ＝５．２４Ｈｚ，１Ｈ），８．５７−８．６１（ｍ，２Ｈ），８．６３（ｄ，Ｊ＝１．５６Ｈｚ，１Ｈ），９．３０（ｓ，１Ｈ）。
【０２２７】
（実施例１３）
【０２２８】
【化３１】
0005526020.tif 000074
スキーム８
【０２２９】
【化３２】
0005526020.tif 000075
ａ）塩化アクリロイル、ピリジン、ＤＭＦ；ｂ）ＨＡＴＵ、ＤＩＥＡ、ＤＭＦ、室温、１６時間
工程１：６−アクリロイルアミノナフタレン−２−カルボン酸
２−アミノ−６−ナフトエ酸（０．３ｇ、１．６ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２ｍＬ）およびピリジン（０．３ｍＬ）撹拌溶液に、０℃で塩化アクリロイル（０．１５ｇ、１．６ｍｍｏｌ）を加えた。その結果得られた混合液を室温にし、さらに２時間撹拌した。その後、これを水（５ｍＬ）に注ぎ、その分離した固体をろ過し、減圧下で乾燥させて所望生成物（１６０ｍｇ、４１．５％）を薄茶色の固体として得た。この固体をさらに精製することなく次工程で用いた。
【０２３０】
工程２：６−アクリロイルアミノナフタレン−２−カルボン酸［４−メチル−３−（４−ピリジン−３−イルピリミジン−２−イルアミノ）フェニル］アミド（ＩＩ−４４）  ６−アクリロイルアミノナフタレン−２−カルボン酸（７４ｍｇ、０．３１ｍｍｏｌ）と中間体Ａ（８５ｍｇ、０．３１ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２ｍＬ）撹拌溶液に、ＤＩＥＡ（０．０８ｍＬ）を加えた。これに、ＨＡＴＵ（０．１７６ｇ、０．４７ｍｍｏｌ）を加え、その反応混合液を室温で１６時間撹拌した。次いで、その反応混合液を水（５ｍＬ）およびＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ）で希釈し、小型のｃｅｌｉｔｅ（登録商標）パッドに通して無機物を除去した。その有機相および水相を分離し、水相をＥｔＯＡｃ（２×１０ｍＬ）で再抽出した。その混合有機物を塩水（１０ｍＬ）で洗浄し、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）させた後、フラッシュクロマトグラフィ（シリカ、２３０−４００、ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨの混合物）により精製してＩＩ−４４（３３ｍｇ、２１％）を淡黄色固体として得た。ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：５００．５，１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６，４００ＭＨＺ）δ（ｐｐｍ）：２．２３（ｓ，３Ｈ），５．８２（ｄ，Ｊ＝１０Ｈｚ，１Ｈ），６．３２（ｄ，Ｊ＝１６Ｈｚ，１Ｈ），６．５１（ｄｄ，Ｊ＝１０＆１６Ｈｚ，１Ｈ），７．２２（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ），７．４３（ｄｄ，Ｊ＝０．８＆５．２Ｈｚ，１Ｈ），７．５０−７．５４（ｍ，２Ｈ），７．７３（ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，１Ｈ），７．９３−８．０（ｍ，２Ｈ），８．０４（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），８，１２（ｓ，１Ｈ），８．４８−８．６８（ｍ，４Ｈ），８．６７（ｄ，Ｊ＝４．７Ｈｚ，１Ｈ），９．０（ｓ，１Ｈ），９．２８（ｄ，Ｊ＝１Ｈｚ，１Ｈ），１０．３４（ｓ，１Ｈ），１０．４９（ｓ，１Ｈ）。
【０２３１】
（実施例１４）
【０２３２】
【化３３】
0005526020.tif 000076
工程１：ｔｅｒｔ−ブチル６−（（４−メチル−３−（４−（ピリジン−３−イル）ピリミジン−２−イルアミノ）フェニル）カルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−カルボキシレートは、実施例１と同じ反応条件を用いて、市販の２−［［（１，１−ジメチルエチル）オキシ］カルボニル］−１，２，３，４−テトラヒドロ−６−イソキノリンカルボン酸および中間体Ａを処理することにより合成することができる。
【０２３３】
工程２：ＨＣｌ／ジオキサンでｔｅｒｔ−ブチル６−（（４−メチル−３−（４−（ピリジン−３−イル）ピリミジン−２−イルアミノ）フェニル）カルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−カルボキシレートを脱保護した後、実施例１の工程２のプロトコルを用いて、ＤＭＦとピリジンの混合液中において塩化アクリロイルで処理することにより、化合物ＩＩ−４６を得ることができる。
【０２３４】
スキーム９
【０２３５】
【化３４】
0005526020.tif 000077
ａ）ＮＨ２ＣＮ、ＥｔＯＨ／ＨＣｌ、９０℃、１５時間、ｂ）ＤＭＦ−ＤＭＡ、エタノール、環流、１６時間、ｃ）ＮａＯＨ／ＥｔＯＨ、環流、１６時間
工程１：アニリンエステル（５ｇ、３０．２７ｍｍｏｌ）のエタノール（１２．５ｍＬ）撹拌溶液に、濃縮ＨＮＯ３（３ｍＬ）を加えた後、５０％シアナミド（１．９ｇ、４６．０ｍｍｏｌ）水溶液を室温で加えた。この反応混合液を９０℃で１６時間熱した後、０℃まで冷却した。沈殿した固体をろ過し、酢酸エチル（１０ｍＬ）、ジエチルエーテル（１０ｍＬ）で洗浄し、乾燥させて対応するグアニジン（４．８ｇ、７６．５％）を紅梅色の固体を得て、これをさらに精製することなく用いた。
【０２３６】
工程２：３−アセチルピリジン（１０．０ｇ、８２．５６ｍｍｏｌ）とＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドジメチルアセタール（１２．８ｇ、９６．００ｍｍｏｌ）のエタノール（４０ｍＬ）撹拌溶液を１６時間環流した。次いで、それを室温まで冷却し、減圧下で濃縮して粗塊を得た。この残留物をエーテル（１０ｍＬ）に入れ、０℃まで冷却し、ろ過して対応するエナミド（７．４ｇ、５０．８％）を黄色結晶固体として得た。
【０２３７】
工程３：上記グアニジン誘導体（２ｇ、９．６ｍｍｏｌ）、エナミド誘導体（１．８８ｇ、１０．７ｍｍｏｌ）、およびＮａＯＨ（０．４４ｇ、１１．０ｍｍｏｌ）のエタノール（２７ｍＬ）撹拌混合液を９０℃で４８時間環流した。次いで、この反応混合液を冷却し、減圧下で濃縮して残留物を得た。この残留物を酢酸エチル（２０ｍＬ）に入れ、水（５ｍＬ）で洗浄した。その有機層および水層を分離し、個別に処理して、それぞれ、対応するエステルおよび中間体Ｃを得た。この水層を冷却し、白色固体が沈殿した際に１．５ＮのＨＣｌ（ｐＨ約３〜４）で酸性化した。この沈殿物をろ過し、乾燥させ、トルエン（２×１０ｍＬ）との共沸蒸留により余分な水分を除去して中間体Ｃ（０．５ｇ）を淡黄色固体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６，４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：２．３２（ｓ，３Ｈ），７．３６（ｄ，Ｊ＝１０．４４Ｈｚ，１Ｈ），７．５３（ｄ，Ｊ＝６．８４Ｈｚ，１Ｈ），７６０−７．７２（ｍ，２Ｈ），８．２６（ｓ，１Ｈ），８．５７（ｄ，Ｊ＝６．８４Ｈｚ，１Ｈ），８．６４（ｄ，Ｊ＝１０．２８Ｈｚ，１Ｈ），８．７０−８．７８（ｂｓ，１Ｈ），９．１５（ｓ，１Ｈ），９．３５（ｓ，１Ｈ）。この有機抽出液を塩水（３ｍＬ）で洗浄し、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）させ、減圧下で濃縮して中間体Ｃのエステルを粗固体として得た。これをカラムクロマトグラフィ（ＳｉＯ２、６０〜１２０メッシュ、ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ３：１０／９０）によりさらに精製して中間体Ｃ（０．５４ｇ）のエステルを黄色固体として得た。
【０２３８】
スキーム１０
【０２３９】
【化３５】
0005526020.tif 000078
ａ）（ＢＯＣ）２Ｏ、ＤＭＡＰ、Ｅｔ３Ｎ、ＴＨＦ、ｂ）Ｈ２、Ｐｄ／Ｃ、ＣＨ３ＯＨ
工程１：上記ニトロアニリン（０．１５ｇ、０．７ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（０．３ｍＬ）撹拌溶液に、Ｅｔ３Ｎ（０．１１ｍｌ、０．７３ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（０．０５ｇ、０．４４ｍｍｏｌ）を加えた。これに、ＢＯＣ無水物（０．３３ｍｌ、１．５２ｍｍｏｌ）を加え、その反応液を５時間環流した。次いで、その反応混合液を冷却し、ＴＨＦ（１５ｍＬ）で希釈し、塩水（５ｍＬ）で洗浄した。この有機相を分離し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮して粗塊を得た。この粗生成物をカラムクロマトグラフィ（ＳｉＯ２、２３０〜４００メッシュ、ヘキサン／ＥｔＯＡｃ：８／２）によりさらに精製して対応するジＢＯＣ保護アニリン（０．２５ｇ、８８％）を白色結晶固体として得て、これをさらに精製することなく次工程に供した。
【０２４０】
工程２：ＢＯＣ保護アニリン（０．２５ｇ、０．６２ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（５ｍＬ）溶液を１０％Ｐｄ／Ｃ（０．１４ｇ、０．１３ｍｍｏｌ）により２０℃で１２時間かけて水素化（Ｈ２、３Ｋｇ）した。この反応混合液をＣｅｌｉｔｅ（登録商標）のショートパッドに通し、減圧下で濃縮して対応するアニリンをオフホワイトの固体（０．１８ｇ、７７．６％）として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：１．３６（ｓ，１８Ｈ），６．８４−６．８７（ｍ，１Ｈ），６．９５〜６．９７（ｍ，２Ｈ）。
【０２４１】
（実施例１５）
【０２４２】
【化３６】
0005526020.tif 000079
スキーム１１
【０２４３】
【化３７】
0005526020.tif 000080
ａ）ＨＡＴＵ、ＤＩＥＡ、ＣＨ３ＣＮ、８５℃、１６時間、ｂ）ＴＦＡ／ＣＨ２Ｃｌ２、０℃〜室温、３時間、ｃ）塩化アクリロイル、ピリジン、ＤＭＦ、室温
工程１：アセトニトリル中において、ＨＡＴＵ、ＤＩＥＡの存在下で中間体ＣとジＢＯＣ保護アニリンを結合することにより、対応するアミドを得ることができる。
【０２４４】
工程２：塩化メチレンにおいて上記アミドをＴＦＡにより０℃で処理した後、室温まで暖めることにより、上記Ｂｏｃ基を脱保護して中間体Ｄを得ることができる。
【０２４５】
工程３：ピリジンとＤＭＦの混合液中において、中間体Ｄを塩化アクリロイルでアシル化することにより、実施例１で用いたものと類似の手順でＩＩＩ−１を得ることができる。
【０２４６】
（実施例１６）
【０２４７】
【化３８】
0005526020.tif 000081
化合物ＩＩＩ−５は、実施例７と同様のプロトコルを用いて、ピリジンとＤＭＦの混合液中において、中間体Ｄをエテンスルホニルクロリドで処理することにより調製することができる。
【０２４８】
（実施例１７）
【０２４９】
【化３９】
0005526020.tif 000082
化合物ＩＩＩ−７は、実施例９と同様のプロトコルを用いて、トリエチルアミンと塩化メチレンの混合液中において、中間体Ｄを実施例９の工程３で調製した酸塩化物で処理することにより調製することができる。
【０２５０】
（実施例１８）
【０２５１】
【化４０】
0005526020.tif 000083
化合物ＩＩＩ−８は、Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ＆Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ１０（２００２）３５５−３６０に記載のものと同様のプロトコルを用いて、アセトン中において、（実施例１５に従って調製した）化合物ＩＩＩ−１をジメチルジオキシランで処理することにより合成することができる。
【０２５２】
（実施例１９）
【０２５３】
【化４１】
0005526020.tif 000084
化合物ＩＩＩ−１０は、実施例１１に記載のものと同様のプロトコルを用いて、中間体Ｄをクロロピリジニルスルホニルクロリドで処理することにより合成することができる。
【０２５４】
（実施例２０）
【０２５５】
【化４２】
0005526020.tif 000085
化合物ＩＩＩ−１１は、実施例１２に記載のものと同様のプロトコルを用いて、中間体Ｄをクロロピリジニルスルホニルクロリドで処理することにより合成することができる。
【０２５６】
（実施例２１）
【０２５７】
【化４３】
0005526020.tif 000086
トランス−４−ジメチルアミノ−２−ブテン酸（０．１３ｇ、０．８０ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（１．０ｍＬ）撹拌溶液に、塩化オキサリル（０．１５３ｇ、１．２ｍｍｏｌ）を０℃で加えた。その反応混合液を０℃で３０分間撹拌した後、室温で２時間撹拌した。最後に、これを４５℃で５分間熱し、室温に冷却した。この混合液を中間体Ｄ（０．０７５ｇ、０．１６ｍｍｏｌ）のＮ−メチルピロリドン（１．０ｍＬ）溶液に０℃で加えた。その反応混合液を０℃〜１０℃で２時間撹拌し、冷水（１ｍＬ）で急冷し、ＣＨＣｌ３（３×５ｍＬ）で抽出した。その混合有機抽出液を連続して水（１ｍＬ）と塩水（１ｍＬ）で洗浄し、次いで、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮した後、カラムクロマトグラフィ（ＳｉＯ２、２３０〜４００メッシュ、ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ、９５／５）により精製してＩＩＩ−６（０．０２ｇ、２２％）を淡黄色固体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ：２．１８（ｓ，６Ｈ），２．３４（ｓ，３Ｈ），３．０６（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ），６．２５〜６．４５（ｍ，１Ｈ），６．６５〜６．８５（ｍ，１Ｈ），７．４３（ｄ，Ｊ＝８．１２Ｈｚ，１Ｈ），７．４７−７．５２（ｍ，３Ｈ），７．７４（ｄｄ，Ｊ＝１．７６＆８．０Ｈｚ，１Ｈ），８．０６（ｄｄ，Ｊ＝２＆８．７６Ｈｚ，１Ｈ），８．２２（ｄ，Ｊ＝２．６８Ｈｚ，１Ｈ），８．２９（ｓ，１Ｈ），８．４３−８．４５（ｍ，１Ｈ），８．５４（ｄ，Ｊ＝５．１６Ｈｚ，１Ｈ），８．６８（ｄｄ，Ｊ＝１．６４＆４．８Ｈｚ，１Ｈ），９．１６（ｓ，１Ｈ），９．２７（ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，１Ｈ），９．６２（ｓ，１Ｈ），１０．４８（ｓ，１Ｈ）；ＬＣＭＳ  ｍ／ｅ：５７６．３（Ｍ＋１）。
【０２５８】
（実施例２２）
【０２５９】
【化４４】
0005526020.tif 000087
０℃の中間体Ｄ（０．１ｇ、０．２２ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１０ｍＬ）撹拌溶液に、Ｎ２雰囲気下でＥｔ３Ｎ（０．０３３ｇ、０．３２ｍｍｏｌ）を加えた。塩化クロロアセチル（０．０２９ｇ、０．２６ｍｍｏｌ）を撹拌しながら滴下して加え、その反応混合液を室温にし、１２時間撹拌した。その反応混合液を減圧下で濃縮して残留物を得て、これをＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ）に入れた。この溶液を水（２ｍＬ）で洗浄し、その水層をＥｔＯＡｃ（２×１０ｍＬ）で再抽出した。そのＥｔＯＡｃ画分を混合し、塩水（２ｍＬ）で洗浄した。Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、ろ過した後、そのＥｔＯＡｃ溶液を減圧下で濃縮して粗残留物を得た後、これをカラムクロマトグラフィ（ＳｉＯ２、６０〜１２０メッシュ、ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ：９／１）により精製してＩＩＩ−１４（５０ｍｇ、４３％）を淡黄色固体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ：２．３４（ｓ，３Ｈ），４．３０（ｓ，２Ｈ），７．４２−７．４８（ｍ，４Ｈ），７．７３−７．７５（ｍ，１Ｈ），８．０５〜８．１０（ｍ，１Ｈ），８．２４（ｄ，Ｊ＝２．２Ｈｚ，１Ｈ），８．２９（ｓ，１Ｈ），８．４３（ｄ，Ｊ＝８．０４Ｈｚ，１Ｈ），８．５４（ｄ，Ｊ＝５．１６Ｈｚ，１Ｈ），８．６７（ｄｄ，Ｊ＝１．６＆４．７６Ｈｚ，１Ｈ），９．１６（ｓ，１Ｈ），９．２６（ｄ，Ｊ＝２．２  Ｈｚ，１Ｈ），９．８９（ｓ，１Ｈ），１０．５０（ｓ，１Ｈ）；ＬＣＭＳ：ｍ／ｅ  ５４１．２（Ｍ＋１）。
【０２６０】
（実施例２３）
ＰＤＧＦＲ阻害アッセイ
方法Ａ：
Ｒｏｂｅｒｔｓら、“Ａｎｔｉａｎｇｉｏｇｅｎｉｃ  ａｎｄ  Ａｎｔｉｔｕｍｏｒ  Ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  ａ  Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ＰＤＧＦＲ  Ｔｙｒｏｓｉｎｅ  Ｋｉｎａｓｅ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ，ＣＰ−６７３，４５１”Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ６５，９５７−９６６，２００５年２月１日に記載の方法と実質的に類似の方法で化合物をＰＤＧＦＲの阻害剤としてアッセイしてもよい。このアッセイでは、ＰＤＧＦＲ−β（アミノ酸６９３−１，４０１、アクセッション番号Ｊ０３２７８）の細胞内部分のグルタチオンＳ−トランスファーゼ標識キナーゼドメイン構造体は、Ｓｆ−９細胞（バキュロウィルス発現系、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）において発現される。酵素反応速度は、リン酸化反応緩衝液［予めＰＢＳ１００μＬで希釈した１００μｇ／ｍＬのＰｏｌｙ−Ｇｌｕ−Ｔｙｒ（比率４：１）でコーティングした９６ウェルＮｕｎｃ  Ｉｍｍｕｎｏ  ＭａｘｉＳｏｒｐプレート中のＨＥＰＥＳ５０ｍｍｏｌ／Ｌ（ｐＨ７．３）、ＮａＣｌ１２５ｍｍｏｌ／Ｌ、ＭｇＣｌ２２４ｍｍｏｌ／ＬのＡＴＰ濃度を上げながら酵素をインキュベートすることにより決定される。１０分後、これらのプレートを洗浄し（ＰＢＳ、０．１％Ｔｗｅｅｎ２０）、抗ホスホチロシン−ホースラディッシュペルオキシターゼ抗体を用いてインキュベートし、３０分かけて室温でＰＢＳ、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０、３％ＢＳＡで希釈する。これらのプレートを上記のように洗浄し、３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジンを用いてインキュベートする。同量の０．０９ＮのＨ２ＳＯ４を加えることにより、この反応を停止する。次いで、ホスホチロシン依存性シグナルをプレートリーダーにより４５０ｎｍで測定する。通常の酵素アッセイについては、上記のように６．２５μｇ／ｍＬのｐｏｌｙ−Ｇｌｕ−Ｔｙｒ１００μＬで予めコーティングしたプレートにおいて３０分間室温でＤＭＳＯ（最終的な１．６％ｖ／ｖのＤＭＳＯアッセイ）で希釈した化合物の存在下で（最終）ＡＴＰ１０μｍｏｌ／Ｌで上記酵素をインキュベートする。残りのアッセイを上記のように実施し、ＩＣ５０値を制御阻害パーセント（ｐｅｒｃｅｎｔ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ｃｏｎｔｒｏｌ）として算出する。（上記のように生成した）精製組み換え酵素および各酵素につきＫｍの３倍以上のＡＴＰ濃度を用いて選択性アッセイを上記のとおりに行う。
【０２６１】
方法Ｂ：
Ｚ’−ＬＹＴＥ（商標）生化学アッセイ手順または類似の生化学アッセイを用いて、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｃｏｒｐ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，１６００  Ｆａｒａｄａｙ  Ａｖｅｎｕｅ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ，ＣＡ；ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ．ｃｏｍ／ｄｏｗｎｌｏａｄｓ／Ｚ−ＬＹＴＥ＿Ｂｒｏｃｈｕｒｅ＿１２０５．ｐｄｆ）に記載のものと実質的に類似の方法で化合物をＰＤＧＦＲの阻害剤としてアッセイした。Ｚ’−ＬＹＴＥ（商標）生化学アッセイは蛍光ベースの共役酵素形態を採用し、タンパク質分解切断に対するリン酸化および非リン酸化ペプチドの感受性差に基づくものである。
【０２６２】
化合物Ｉ−１を０．１μＭおよび１μＭで２回テストした。化合物Ｉ−１が示したＰＤＧＦＲ−αの阻害の平均値は、１μＭが７６％、０．１μＭが２９％であった。
【０２６３】
方法Ｃ
化合物はまた、Ｕｐｓｔａｔｅ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｕｐｓｔａｔｅ．ｃｏｍ／ｉｍｇ／ｐｄｆ／ＫＰ＿Ｐｒｏｔｏｃｏｌ＿１２１５０６．ｐｄｆ）に記載のものと実質的に類似の方法でＰＤＧＦＲα（ｈ）の阻害剤としてアッセイしてもよい。タンパク質は、Ｎ末端にＨｉｓ６−ｔａｇを含む組み換えヒトＰＤＧＦＲα、残基５５０端（５５０−ｅｎｄ）である。Ｓｆ２１昆虫細胞においてバキュロウィルスにより発現する。Ｎｉ２＋／ＮＴＡアガロースを用いて精製する。最終反応容積２５μＬにおいて、８ｍＭのＭＯＰＳ、ｐＨ７．０、０．２ｍＭのＥＤＴＡ、１０ｍＭのＭｎＣｌ２、０．１ｍｇ／ｍＬのｐｏｌｙ（Ｇｌｕ、Ｔｙｒ）４：１、１０ｍＭのＭｇＡｃｅｔａｔｅ、および［（ｃ）−３３Ｐ−ＡＴＰ］（比活性度約５００ｃｐｍ／ｐｍｏｌ、必要に応じて濃縮）を用いてＰＤＧＦＲα（野生型）（５〜１０ｍＵ）をインキュベートする。ＭｇＡＴＰ混合液を加えて反応を開始する。４０分間かけて室温でインキュベートした後、３％リン酸溶液５μＬを加えて反応を停止する。次いで、反応液１０μＬをろ過マットＡ上にスボッティングし、７５ｍＭリン酸中において５分間かけて３回洗浄し、乾燥およびシンチレーション計数の前にメタノール中において１回洗浄する。この化合物を１００％ＤＭＳＯ中において５０倍の最終アッセイ濃度まで溶解し、上記のように最終反応容積２５μｌにおいてこの化合物の０．５μＬ溶液を用いてアッセイを行う。ＤＭＳＯのみ（０．５μｌ）を対照として並行してテストする。
【０２６４】
方法Ｄ
簡単に説明すると、２０ｍＭトリス、ｐＨ７．５、５ｍＭのＭｇＣｌ２、１ｍＭのＥＧＴＡ、５ｍＭのβ−グリセロリン酸塩、５％グリセロール（１０倍量、ＫＢ００２Ａ）、および０．２ｍＭのＤＴＴ（ＤＳ００１Ａ）からなる１倍キナーゼ反応緩衝液中において、１０倍量のＰＤＧＦＲα（ＰＶ３８１１）酵素、１．１３倍のＡＴＰ（ＡＳ００１Ａ）、およびＹ１２−Ｓｏｘペプチド基質（ＫＣＺ１００１）を調製した。酵素５μＬを、０．５μＬの容量の５０％ＤＭＳＯを用いてＣｏｒｎｉｎｇ（＃３５７４）３８４ウェル（白色非結合表面マイクロタイタープレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ，ＮＹ））で、３０分間、２７℃でプレインキュベートし、５０％ＤＭＳＯで連続して希釈した化合物を調製した。ＡＴＰ／Ｙ９またはＹ１２−Ｓｏｘペプチド基質混合液４５μＬを加えてキナーゼ反応を開始し、ＢｉｏＴｅｋ（Ｗｉｎｏｏｓｋｉ，ＶＴ）のＳｙｎｅｒｇｙ４プレートリーダーで、６０分間の間、λｅｘ３６０／λｅｍ４８５で３０〜９秒毎に観察した。各アッセイの最後に、各ウェルからの進行曲線を線形反応速度および適合度統計量（ｆｉｔ  ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ）（Ｒ２、９５％信頼区間、絶対平方和）について調べた。各反応からの初期速度（０分〜２０分以上）を相対蛍光単位対時間（分）のプロットの勾配から判断した後、阻害剤濃度に対するプロットを作成し、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）のＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍにおいてｌｏｇ［阻害剤］対応答の可変勾配モデルからＩＣ５０を予測した。
【０２６５】
［ＰＤＧＦＲα］＝２−５ｎＭ、［ＡＴＰ］＝６０μＭ、および［Ｙ９−Ｓｏｘペプチド］＝１０μＭ（ＡＴＰ  ＫＭａｐｐ＝６１μＭ）
本発明の特定の化合物に関するＰＤＧＦＲ阻害データを下記表５に示す。
【０２６６】
【表５】
0005526020.tif 000088
（実施例２４）
化合物Ｉ−１のＰＤＧＦＲ質量スペクトル解析
試験化合物Ｉ−１の存在下でのＰＤＧＦＲ−αの質量スペクトル解析を行なった。ＰＤＧＦＲ−αタンパク質（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎより販売：ＰＶ３８１１）を、１μＭ、１０μＭ、および１００μＭの試験化合物を用いて６０分間インキュベートした。具体的には、０．４μｇ／μＬＰＤＧＦＲ−α（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  ＰＶ３８１１）ストック溶液１μＬ（５０ｍＭトリスＨＣｌ、ｐｈ７．５、１５０ｍＭのＮａＣｌ、０．５ｍＭのＥＤＴＡ、０．０２％Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００、２ｍＭのＤＴＴ、５０％グリセロール）を１０％ＤＭＳＯ（１μＭ、１０μＭ、および１００μＭの最終濃度）において試験化合物９μＬに加えた。６０分後、５０ｍＭ重炭酸アンモニウム９μＬ、６ｍＭヨードアセトアミドを含む５０ｍＭ重炭酸アンモニウム溶液３．３μＬ、および３５ｎｇ／μＬトリプシン１μＬを加えて反応を停止した。
【０２６７】
このトリプシン消化物を質量分析計（ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ）により１０μＭで解析した。ＰＤＧＦＲ−αタンパク質中に見られる５つのシステイン残基のうち、４つのシステイン残基は、ヨードアセトアミドにより修飾されていることが同定されたが、５番目のシステイン残基は、試験化合物により修飾されていた。トリプシン消化物の質量スペクトル解析は、ＰＤＧＦＲ−αタンパク質とＣｙｓ８１４で共有結合している試験化合物と一致した。トリプシン消化物のＭＳ／ＭＳ解析により、Ｃｙｓ８１４に試験化合物が存在することが確認された。
【０２６８】
（実施例２５）
化合物ＩＩＩ−１４のＰＤＧＦＲ質量スペクトル解析
試薬ＩＩＩ−１４の存在下でＰＤＧＦＲ−αの質量スペクトル解析を行った。ＰＤＧＦＲ−α（４３ｐｍｏｌ）を、化合物ＩＩＩ−１４（４３４ｐｍｏｌ）を用いてトリプシン消化の前に３時間かけて１０倍のアクセス速度でインキュベートした。化合物のインキュベーション後に、ヨードアセトアミドをアルキル化剤として用いた。トリプシン消化物については、ＭＡＬＤＩ標的上に直接マイクロＣ１８によるＺｉｐ  Ｔｉｐ処理を行う前に、αシアノ−４−ヒドロキシ桂皮酸を基質（５ｍｇ／ｍｌ、０．１％ＴＦＡ：アセトニトリル、５０：５０）を用いて５μＬアリコート（７ｐｍｏｌ）を０．１％ＴＦＡ１０μＬで希釈した。
【０２６９】
このトリプシン消化物を質量分析計（ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ）により解析した。トリプシン消化物の質量スペクトル解析は、ＰＤＧＦＲ−αタンパク質とＣｙｓ８１４で共有結合している試験化合物と一致した。トリプシン消化物のＭＳ／ＭＳ解析により、試験化合物がＣｙｓ８１４に存在することが確認された。
【０２７０】
（実施例２６）
ＥＯＬ−１細胞増殖アッセイ
ＤＳＭＺ（ＡＣＣ３８６）から購入したＥＯＬ−１細胞をＲＰＭＩ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ＃２１８７０）＋１０％ＦＢＳ＋１％ペニシリン／ストレプトマイシン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ＃１５１４０−１２２）中で維持した。細胞増殖アッセイについては、完全培地中の細胞を２×１０４細胞／ウェルの密度で９６ウェルプレートに播種し、５００ｎＭ〜１０ｐＭの範囲の化合物で７２時間かけて２回インキュベートした。Ａｌａｍａｒ  Ｂｌｕｅ試薬（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎカタログ番号ＤＡＬ１１００）で代謝活性を測定して細胞増殖をアッセイした。Ａｌａｍａｒ  Ｂｌｕｅを用いて３７℃で８時間かけてインキュベーションした後、５９０ｎｍの吸光度を読み取り、ＧｒａｐｈＰａｄを用いて細胞増殖のＩＣ５０を算出した。対照化合物および化合物ＩＩ−２を有するＥＯＬ−１細胞の細胞増殖の線量応答阻害を図１に示す。
【０２７１】
（実施例２７）
ＥＯＬ−１細胞ウォッシュアウトアッセイ
完全培地の懸濁液中でＥＯＬ−１細胞を増殖させ、１時間かけて１つのサンプルにつき２×１０６の細胞数で化合物を加えた。１時間後、その細胞をペレット化し、培地を除去し、化合物を含まない培地と取り替えた。細胞を２時間毎に洗浄し、化合物を含まない新鮮な培地で再懸濁した。細胞を特定の時点で採取し、細胞抽出緩衝液中に溶解させ、１５μｇの総タンパク質溶解物を各レーンに充填した。Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ社の抗体ｓｃ−１２９１０を用いたウェスタンブロットによりＰＤＧＦＲリン酸化反応をアッセイした。図２にこの実験の結果を示しており、ＤＭＳＯ対照および可逆的対照化合物と比較して、化合物ＩＩ−２が「ウォッシュアウト」の０時間後および４時間後にＥＯＬ−１細胞においてＰＤＧＦＲの酵素を阻害し続けることが分かる。
【０２７２】
（実施例２８）
ｃＫｉｔ阻害アッセイ
方法Ａ
Ｕｐｓｔａｔｅ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｕｐｓｔａｔｅ．ｃｏｍ／ｉｍｇ／ｐｄｆ／ＫＰ＿Ｐｒｏｔｏｃｏｌ＿１２１５０６．ｐｄｆ）に記載のものと実質的に類似の方法でｃＫｉｔの阻害剤として化合物をアッセイしてもよい。このアッセイでは、Ｓｆ２１昆虫細胞においてバキュロウィルスにより発現され、グルタチオンアガロースにより精製されるＮ末端ＧＳＴ標識組み換えヒトキットアミノ酸５４４末端を用いる。最終反応容積２５μＬにおいて、ｃ−ｋｉｔ（野生型）（５〜１０ｍＵ）を、８ｍＭのＭＯＰＳ、ｐＨ７．０、０．２ｍＭのＥＤＴＡ、１０ｍＭのＭｎＣｌ２、０．１ｍｇ／ｍＬのｐｏｌｙ（Ｇｌｕ，Ｔｙｒ）４：１、１０ｍＭのＭｇＡｃｅｔａｔｅ、および［（ｃ）−３３Ｐ−ＡＴＰ］（比活性度約５００ｃｐｍ／ｐｍｏｌ、必要に応じて濃縮）を用いてインキュベートする。ＭｇＡＴＰ混合液を加えて反応を開始する。４０分間かけて室温でインキュベートした後、３％リン酸溶液５μＬを加えて反応を停止する。次いで、反応液１０μＬをろ過マットＡ上にスボッティングし、７５ｍＭリン酸中において５分間かけて３回洗浄し、乾燥およびシンチレーション計数の前にメタノール中において１回洗浄する。この化合物を１００％ＤＭＳＯ中において５０倍の最終アッセイ濃度まで溶解し、上記のように最終反応容積２５μｌにおいてこの化合物の０．５μｌ溶液を用いてアッセイを行う。ＤＭＳＯのみ（０．５μｌ）を対照として並行してテストする。
【０２７３】
方法Ｂ
ＣｅｌｌＳｉｇｎａｌ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｅｌｌｓｉｇｎａｌ．ｃｏｍ／ｐｄｆ／７７５５．ｐｄｆ）に記載のものと実質的に類似の方法でｃＫｉｔの阻害剤として化合物をアッセイしてもよい。アミノ末端ＧＳＴ標識を有するヒトｃ−Ｋｉｔ（Ｔｈｒ５４４−Ｖａｌ９７６）のフラグメントを発現する構造体を有するバキュロウィルス発現系を用いてＧＳＴ−ｃ−Ｋｉｔ融合タンパク質を産生する。グルタチオンアガロースを用いて、一段階親和性クロマトグラフィによりこのタンパク質を精製する。このアッセイでは、１０ｍＭのＡＴＰ１０μＬを６μＭのＫＤＲ（Ｔｙｒ９９６）ビオチン化ペプチド基質ペプチド１．２５ｍｌに加える。その混合液をｄＨ２０で２．５ｍｌまで希釈して２×ＡＴＰ／基質混合液（［ＡＴＰ］＝４０μＭ、［基質］＝３μｍ）を作成する。このｃ−ＫＩＴ酵素をすぐに−８０℃から氷に変換する。この酵素を解凍する。このバイアルを４℃で短時間微小遠心分離機にかけ、バイアルの底に液体を生じさせた後、すぐに氷に戻す。１０μＬのＤＴＴ（１．２５Ｍ）を４倍ＨＴＳｃａｎ（商標）チロシンキナーゼ緩衝液（Ｃｅｌｌｓｉｇｎａｌ；２４０ｍＭのＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．５、２０ｍＭのＭｇＣｌ２、２０ｍＭのＭｎＣｌ２、１２μＭのＮａ３ＶＯ４）２．５ｍｌに加えてＤＴＴ／キナーゼ緩衝液を作成する。ＤＴＴ／キナーゼ緩衝液１．２５ｍｌを酵素チューブに移し、４倍反応混合液を作成する（４倍反応混合液中、［酵素］＝４ｎｇ／μＬ）。４倍反応混合液１２．５μＬを予め希釈した化合物１２．５μｌ／ウェルを用いて５分間かけて室温でインキュベートする。２倍ＡＴＰ／基質混合液２５μＬをプレインキュベートした２５μＬ／ウェルの反応混合液／化合物に加える。この反応プレートを室温で３０分間インキュベートし、５０μＬ／ウェルの停止緩衝液（５０ｍＭ  ＥＤＴＡ、ｐＨ８）を加えて反応を停止する。各反応液２５μＬおよびｄＨ２Ｏ／ウェル７５μＬを９６ウェルストレプトアビジン被覆プレートに移し、室温で６０分間インキュベートする。これを２００μＬ／ウェルのＰＢＳ／Ｔで３回洗浄する。一次抗体（ホスホチロシンｍＡｂ（Ｐ−Ｔｙｒ−１００））を、１％ＢＳＡを含むＰＢＳ／Ｔで１：１０００に希釈する。１００μＬ／ウェルの一次抗体を加え、室温で６０分間インキュベートする。これを２００μＬ／ウェルのＰＢＳ／Ｔで３回洗浄する。ユーロピウム標識抗マウスＩｇＧを含む１：５００のＰＢＳ／Ｔを１％ＢＳＡで希釈する。次いで、１００μＬ／ウェルの希釈抗体を加える。次いで、これを室温で３０分間インキュベートし、２００μＬ／ウェルのＰＢＳ／Ｔで５回洗浄する。１００μＬ／ウェルのＤＥＬＦＩＡ（登録商標）増強溶液を加えた後、室温で５分間インキュベートする。時間分解プレートリーダーを用いて６１５ｎｍ蛍光放射を検出する。アッセイ混合液および試験化合物を有さないＤＭＳＯを含む標準的なウェルに対して５０％より高い阻害を示す化合物を滴定してＩＣ５０値を判定する。
【０２７４】
方法Ｃ
ヒト組み換えｃ−ＫＩＴ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅから入手、カタログ番号１４−５５９）を用いて、フルオレセイン標識ペプチド基質（１．５μＭ）のリン酸化反応を観察して本発明の化合物をｃ−ＫＩＴの阻害剤としてアッセイした。１００ｍＭのＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．５）、１０ｍＭのＭｎＣｌ２、１ｍＭのＤＤＴ、０．０１５％Ｂｒｉｊ−３５、および３００μＭのＡＴＰにおいて、試験化合物を含む場合と含まない場合について反応を行った。反応はＡＴＰを加えて、１時間、室温でインキュベートすることにより開始した。１００ｍＭのＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．５）、３０ｍのＭＥＤＴＡ、０．０１５％Ｂｒｉｊ−３５、および５％ＤＭＳＯを含有する停止緩衝液を加えて反応を終了した。リン酸化および非リン酸化基質を電気泳動移動度シフトにより電荷分離した。形成した生成物を対照ウェルと比較して酵素活性の阻害または増強を判定した。
【０２７５】
本発明の特定の化合物に関するｃ−ＫＩＴ阻害データを下記表６に示す。
【０２７６】
【表６】
0005526020.tif 000089
方法Ｄ
事前活性酵素（Ｐｒｅ−Ａｃｔｉｖａｔｅｄ  Ｅｎｚｙｍｅ）を用いた効力評価のためのｃ−Ｋｉｔ（Ｖ６５４ＡおよびＴ６７０Ｉ）Ｏｍｎｉａアッセイ
事前活性ｃ−ＫＩＴ（Ｖ６５４Ａ）およびｃ−ＫＩＴ（Ｔ６７０Ｉ）酵素に対する化合物の固有の効力を測定する連続読取キナーゼアッセイを記載する下記のプロトコルを用いて、化合物を突然変異体ｃ−ＫＩＴの阻害剤としてテストした。
【０２７７】
簡単に説明すると、２０ｍＭトリス、ｐＨ７．５、５ｍＭのＭｇＣｌ２、１ｍＭのＥＧＴＡ、５ｍＭのβ−グリセロリン酸塩、５％グリセロール（１０倍ストック溶液、ＫＢ００２Ａ）、および０．２ｍＭのＤＴＴ（ＤＳ００１Ａ）からなる１倍キナーゼ反応緩衝液中において、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ（１４−７３３）のｃ−ＫＩＴ（Ｖ６５４Ａ）またはＣｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ（７９２２）のｃ−Ｋｉｔ（Ｔ６７０Ｉ）を１０倍ストック溶液と、１ｍＭのＡＴＰ（ＡＳ００１Ａ）および１．１３倍のＹ９−ＳｏｘもしくはＹ１２−Ｓｏｘペプチド基質（ＫＣＺ１００１）を調製した。１０倍酵素／ＡＴＰストック溶液を３０分間、室温でプレインキュベートし、各酵素を化合物に曝露する前に予め活性化した。次いで、容積０．５μＬの５０％ＤＭＳＯを用いてＣｏｒｎｉｎｇ（＃３５７４）３８４ウェル（白色非結合表面マイクロタイタープレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ，ＮＹ））で各酵素５μＬを３０分間、２７℃でプレインキュベートし、５０％ＤＭＳＯ中において、連続して希釈した化合物を調製した。Ｙ９またはＹ１２−Ｓｏｘペプチド基質４５μＬを加えてキナーゼ反応を開始し、ＢｉｏＴｅｋ（Ｗｉｎｏｏｓｋｉ，ＶＴ）のＳｙｎｅｒｇｙ４プレートリーダーで、６０分間の間に、λｅｘ３６０／λｅｍ４８５で３０〜９０秒毎に観察した。各アッセイの最後に、各ウェルからの進行曲線を線形反応速度および適合度統計量（Ｒ２、９５％信頼区間、絶対平方和）について調べた。各反応からの初期速度（０分〜２０分以上）を相対蛍光単位対時間（分）のプロットの勾配から判断した後、阻害剤濃度に対するプロットを作成し、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）のＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍにおいてｌｏｇ［阻害剤］対応答の可変勾配モデルからＩＣ５０を予測した。
【０２７８】
［ｃ−Ｋｉｔ  Ｖ６５４Ａ］＝５ｎＭ、［ＡＴＰ］＝１００μＭ、および［Ｙ９−Ｓｏｘ］＝１０μＭ（ＡＴＰ  ＫＭａｐｐ＝２４０μＭ）
［ｃ−Ｋｉｔ  Ｔ６７０Ｉ］＝５ｎＭ、［ＡＴＰ］＝１００μＭ、および［Ｙ１２−Ｓｏｘ］＝１０μＭ（ＡＴＰ  ＫＭａｐｐ＝２２０μＭ）。
【０２７９】
方法Ｅ
効力評価のためのｃ−Ｋｉｔ（Ｖ６５４ＡおよびＴ６７０Ｉ）Ｏｍｎｉａアッセイ
簡単に説明すると、２０ｍＭトリス、ｐＨ７．５、５ｍＭのＭｇＣｌ２、１ｍＭのＥＧＴＡ、５ｍＭのβ−グリセロリン酸塩、５％グリセロール（１０倍ストック溶液、ＫＢ００２Ａ）、および０．２ｍＭのＤＴＴ（ＤＳ００１Ａ）からなる１倍キナーゼ反応緩衝液中において、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ（１４−７３３）のｃ−ＫＩＴ（Ｖ６５４Ａ）またはＣｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ（７９２２）のｃ−Ｋｉｔ（Ｔ６７０Ｉ）を１０倍ストック溶液と、１．１３倍の（ＡＳ００１Ａ）およびＹ９−ＳｏｘもしくはＹ１２−Ｓｏｘペプチド基質（ＫＣＺ１００１）を調製した。容積０．５μＬの５０％ＤＭＳＯを用いて、Ｃｏｒｎｉｎｇ（＃３５７４）３８４ウェル（白色非結合表面マイクロタイタープレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ，ＮＹ））で各酵素５μＬを３０分間、２７℃でプレインキュベートし、５０％ＤＭＳＯ中において、連続して希釈した化合物を調製した。Ｙ９またはＹ１２−Ｓｏｘペプチド基質４５μＬを加えてキナーゼ反応を開始し、ＢｉｏＴｅｋ（Ｗｉｎｏｏｓｋｉ，ＶＴ）のＳｙｎｅｒｇｙ４プレートリーダーで、６０分間の間に、λｅｘ３６０／λｅｍ４８５で３０〜９０秒毎に観察した。各アッセイの最後に、各ウェルからの進行曲線を線形反応速度および適合度統計量（Ｒ２、９５％信頼区間、絶対平方和）について調べた。各反応からの初期速度（０分〜２０分以上）を相対蛍光単位対時間（分）のプロットの勾配から判断した後、阻害剤濃度に対するプロットを作成し、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）のＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍにおいてｌｏｇ［阻害剤］対応答の可変勾配モデルからＩＣ５０を予測した。
【０２８０】
［ｃ−Ｋｉｔ  Ｖ６５４Ａ］＝５ｎＭ、［ＡＴＰ］＝２２０μＭ、および［Ｙ９−Ｓｏｘ］＝１０μＭ（ＡＴＰ  ＫＭａｐｐ＝２４０μＭ）
［ｃ−Ｋｉｔ  Ｔ６７０Ｉ］＝５ｎＭ、［ＡＴＰ］＝２２０μＭ、および［Ｙ１２−Ｓｏｘ］＝１０μＭ（ＡＴＰ  ＫＭａｐｐ＝２２０μＭ）。
【０２８１】
上記アッセイプロトコルの方法Ｄを用いてＩＣ５０値を得た場合、および上記アッセイプロトコルの方法Ｅを用いて見かけのＩＣ５０値を得た場合の例示的な化合物に関する突然変異体ｃ−ＫＩＴ（Ｖ６５４Ａ）阻害データを下記表７に要約する。
【０２８２】
【表７】
0005526020.tif 000090
例示的な化合物に関する突然変異体ｃ−ＫＩＴ（Ｔ６７０１）阻害データを下記表８に要約する。
【０２８３】
【表８】
0005526020.tif 000091
（実施例２９）
化合物ＩＩＩ−１４のｃ−ＫＩＴ質量スペクトル解析
試験化合物ＩＩＩ−１４の存在下でｃ−ＫＩＴの質量スペクトル解析を行った。具体的には、ｃ−ＫＩＴキナーゼ（８６ｐｍｏｌ）を、化合物ＩＩＩ−１４（８６３ｐｍｏｌ）を用いてトリプシン消化の前に３時間かけて１０倍のアクセス速度でインキュベートした。化合物のインキュベーション後に、ヨードアセトアミドをアルキル化剤として用いた。キモトリプシン活性を取り除いた高級トリプシンを用いた新たなサンプルも調製した。トリプシン消化物については、ＭＡＬＤＩ標的上に直接マイクロＣ１８によるＺｉｐ  Ｔｉｐ処理を行う前に、αシアノ−４−ヒドロキシ桂皮酸を基質（５ｍｇ／ｍｌ、０．１％ＴＦＡ：アセトニトリル、５０：５０）を用いて５μＬアリコート（１４ｐｍｏｌ）を０．１％ＴＦＡ１０μｌで希釈した。
【０２８４】
このトリプシン消化物を質量分析計（ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ）により解析した。トリプシン消化物の質量スペクトル解析は、ｃ−ＫＩＴタンパク質と２つの標的システイン残基：Ｃｙｓ８０８（副）およびＣｙｓ７８８（主）で共有結合している試験化合物と一致した。
【０２８５】
（実施例３０）
ｃＫｉｔウォッシュアウトアッセイ
ＧＩＳＴ４３０細胞を８×１０５細胞／ウェルの密度で６ウェルプレートに播種し、翌日に、完全培地で希釈した化合物１μＭで９０分間処理した。９０分後、その培地を除去し、化合物を含まない培地で細胞を洗浄した。細胞を２時間毎に洗浄し、化合物を含まない新鮮な培地で再懸濁した。細胞を特定の時点で採取し、Ｒｏｃｈｅ社のｃｏｍｐｌｅｔｅ  ｐｒｏｔｅａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｔａｂｌｅｔｓ（Ｒｏｃｈｅ１１６９７４９８００１）およびｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ（Ｒｏｃｈｅ  ０４  ９０６  ８３７  ００１）を添加した細胞抽出緩衝液中（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  ＦＮＮ００１１）に溶解させ、１０μｇの総タンパク質溶解物を各レーンに充填した。Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙのｐＴｙｒ（４Ｇ１０）抗体およびｔｏｔａｌ  ｋｉｔ抗体を用いたウェスタンブロットによりｃ−ＫＩＴリン酸化反応をアッセイした。図３にこの実験の結果を示しており、化合物ＩＩＩ−１４が「ウォッシュアウト」の０時間後および６時間後にＧＩＳＴ４３０細胞においてｃ−ＫＩＴ酵素を阻害し続けることが分かる。
【０２８６】
（実施例３１）
ｃＦＭＳ阻害アッセイ
Ｕｐｓｔａｔｅ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｕｐｓｔａｔｅ．ｃｏｍ／ｉｍｇ／ｐｄｆ／ＫＰ＿Ｐｒｏｔｏｃｏｌ＿１２１５０６．ｐｄｆ）に記載のものと実質的に類似の方法で化合物をｃＦＭＳ（ｈ）の阻害剤としてアッセイしてもよい。このタンパク質は、Ｓｆ２１昆虫細胞のバキュロウィルスにおいて、Ｎ末端Ｈｉｓ標識、組み換え、ヒトｃＦｍｓ、アミノ酸５３８末端として発現され、Ｎｉ２＋／ＮＴＡアガロースを用いて精製される。最終反応容積２５μＬにおいて、Ｆｍｓ（ｈ）（５〜１０ｍＵ）を、８ｍＭのＭＯＰＳ、ｐＨ７．０、０．２ｍＭのＥＤＴＡ、２５０μＭのＫＫＫＳＰＧＥＹＶＮＩＥＦＧ、１０ｍＭのＭｇＡｃｅｔａｔｅ、および［γ−３３Ｐ−ＡＴＰ］（比活性度約５００ｃｐｍ／ｐｍｏｌ、必要に応じて濃縮）を用いてインキュベートする。ＭｇＡＴＰ混合液を加えて反応を開始する。４０分間かけて室温でインキュベートした後、３％リン酸溶液５μＬを加えて反応を停止する。次いで、反応液１０μＬをＰ３０ろ過マット上にスボッティングし、７５ｍＭリン酸中において５分間かけて３回洗浄し、乾燥およびシンチレーション計数の前にメタノール中において１回洗浄する。この化合物を１００％ＤＭＳＯ中において５０倍の最終アッセイ濃度まで溶解し、上記のように最終反応容積２５μｌにおいてこの化合物の０．５μＬ溶液を用いてアッセイを行う。ＤＭＳＯのみ（０．５μＬ）を対照として並行してテストする。
【０２８７】
（実施例３２）
ＫＤＲ阻害アッセイ
方法Ａ
標準的な共役酵素アッセイ（Ｆｏｘら、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉ．，（１９９８）７，２２４９）を用いてＫＤＲを阻害する能力について化合物をスクリーニングしてもよい。
２００ｍＭのＨＥＰＥＳ  ７．５、１０ｍＭのＭｇＣｌ２、２５ｍＭのＮａＣｌ、１ｍＭのＤＴＴ、および１．５％ＤＭＳＯの混合液中でアッセイを行う。アッセイにおける最終基質濃度は、ＡＴＰ（Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ）３００μＭ、ポリＥ４Ｙ（Ｓｉｇｍａ）１０μＭである。３７℃、３０ｎＭ  ＫＤＲでアッセイを行う。共役酵素系の成分の最終濃度は、ホスホエノールピルベート２．５ｍＭ、ＮＡＤＨ２００μＭ、ピルベートキナーゼ３０μｇ／ＭＬ、および乳酸デヒドロゲナーゼ１０μｇ／ｍｌである。
【０２８８】
ＡＴＰおよび対象試験化合物を除く、上記の全ての試薬を含むアッセイのストック緩衝溶液を調製する。１７７μＬのストック溶液を９６ウェルプレートに載せた後、試験化合物（最終化合物濃度３０μＭ）を含む３μＬの２ｍＭ  ＤＭＳＯストックを加える。このプレートを約１０分間、３７℃でプレインキュベートし、２０μＬのＡＴＰ（最終濃度３００μＭ）を加えて反応を開始する。Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓプレートリーダー（Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ，ＣＡ）を用いて、５分間の読み取り時間、３７℃で反応速度を求める。アッセイ混合液および試験化合物を有さないＤＭＳＯを含む標準的なウェルに対して５０％より高い阻害を示す化合物を滴定してＩＣ５０値を判定する。
【０２８９】
方法Ｂ
Ｕｐｓｔａｔｅ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｕｐｓｔａｔｅ．ｃｏｍ／ｉｍｇ／ｐｄｆ／ＫＰ＿Ｐｒｏｔｏｃｏｌ＿１２１５０６．ｐｄｆ）に記載のものと実質的に類似の方法でＫＤＲ（ｈ）の阻害剤として化合物をアッセイしてもよい。このタンパク質は、Ｓｆ２１昆虫細胞のバキュロウィルスによりＮ末端６Ｈｉｓ標識、組み換え、ヒトＫＤＲ、アミノ酸７９０末端として発現され、Ｎｉ２＋／ＮＴＡアガロースを用いて精製される。最終反応容積２５μＬにおいて、ＫＤＲ（ｈ）（５〜１０ｍＵ）を、８ｍＭのＭＯＰＳ、ｐＨ７．０、０．２ｍＭのＥＤＴＡ、２５０μＭのＫＫＫＳＰＧＥＹＶＮＩＥＦＧ、１０ｍＭのＭｇＡｃｅｔａｔｅ、および［γ−３３Ｐ−ＡＴＰ］（比活性度約５００ｃｐｍ／ｐｍｏｌ、必要に応じて濃縮）を用いてインキュベートする。ＭｇＡＴＰ混合液を加えて反応を開始する。４０分間かけて室温でインキュベートした後、３％リン酸溶液５μＬを加えて反応を停止する。次いで、反応液１０μＬをＰ３０ろ過マット上にスボッティングし、７５ｍＭリン酸中において５分間かけて３回洗浄し、乾燥およびシンチレーション計数の前にメタノール中において１回洗浄する。この化合物を１００％ＤＭＳＯ中において５０倍の最終アッセイ濃度まで溶解し、上記のように最終反応容積２５μｌにおいてこの化合物の０．５μＬ溶液を用いてアッセイを行う。ＤＭＳＯのみ（０．５μｌ）を対照として並行してテストする。
【０２９０】
方法Ｃ
Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎに記載のものと実質的に類似の方法で化合物をＫＤＲの阻害剤としてアッセイした。４ｍｌの５倍ストック溶液を１６ｍｌのＨ２Ｏに加えて５倍キナーゼ緩衝ストック溶液（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎより市販される、商品番号ＰＶ３１８９）を希釈し、２０ｍｌの１倍キナーゼ反応緩衝液を作成してキナーゼ反応緩衝液を調製した。
【０２９１】
低容積の３８４ウェルプレートにおいて容積１０μＬでキナーゼ反応を行った。典型的には、Ｃｏｒｎｉｎｇモデル３６７６（黒）または３６７３（白）プレートを用いる。アッセイにおける基質（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎより市販されるフルオレセイン−ポリＧＡＴまたはフルオレセイン−ポリＧＴ）の濃度は２００ｎＭであり、１倍キナーゼ反応緩衝液は、５０ｍＭのＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．５、０．０１％ＢＲＩＪ−３５、１０ｍＭのＭｇＣｌ２、および１ｍＭのＥＧＴＡからなる。５０ｍＭのＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．５、０．０１％ＢＲＩＪ−３５、１０ｍＭのＭｇＣｌ２、１ｍＭのＥＧＴＡにおいて２倍ＫＤＲ（ＶＥＧＦＲ２）／Ｔｙｒ０１ペプチド混合液を調製した。最終的な１０μＬキナーゼ反応液は、５０ｍＭのＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．５、０．０１％ＢＲＩＪ−３５、１０ｍＭのＭｇＣｌ２、１ｍＭのＥＧＴＡにおける０．５〜１１．７ｎｇのＫＤＲ（ＶＥＧＦＲ２）および２μＭのＴｙｒ０１ペプチドから構成された。このキナーゼ反応を１時間、室温で続けてから、Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  Ｒｅａｇｅｎｔ  Ｂの１：１２８希釈液５μＬを加えた。
【０２９２】
上記アッセイプロトコル（方法Ｃ）を用いて化合物ＩＩ−２をＫＤＲの阻害剤としてテストし、試験化合物の濃度が１０μＭの場合にＫＤＲ酵素が７％阻害されることが分かった。
【０２９３】
方法Ｄ
簡単に説明すると、２０ｍＭトリス、ｐＨ７．５、５ｍＭのＭｇＣｌ２、１ｍＭのＥＧＴＡ、５ｍＭのβ−グリセロリン酸塩、５％グリセロール（１０倍ストック溶液、ＫＢ００２Ａ）、および０．２ｍＭのＤＴＴ（ＤＳ００１Ａ）からなる１倍キナーゼ反応緩衝液中において、ＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎもしくはＢＰＳ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ（ＰＶ３６６０または４０３０１）のＫＤＲの１０倍ストック溶液、１．１３倍ＡＴＰ（ＡＳ００１Ａ）、およびＹ９−Ｓｏｘペプチド基質（ＫＣＺ１００１）を調製した。容積０．５μＬの５０％ＤＭＳＯを用いてＣｏｒｎｉｎｇ（＃３５７４）３８４ウェル（白色非結合表面マイクロタイタープレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ，ＮＹ））で各酵素５μＬを３０分間、２７℃でプレインキュベートし、５０％ＤＭＳＯ中において、連続して希釈した化合物を調製した。ＡＴＰ／Ｙ９またはＹ１２−Ｓｏｘペプチド基質混合液４５μＬを加えてキナーゼ反応を開始し、ＢｉｏＴｅｋ（Ｗｉｎｏｏｓｋｉ，ＶＴ）のＳｙｎｅｒｇｙ４プレートリーダーで、６０分間の間に、λｅｘ３６０／λｅｍ４８５で３０〜９０秒毎に観察した。各アッセイの最後に、各ウェルからの進行曲線を線形反応速度および適合度統計量（Ｒ２、９５％信頼区間、絶対平方和）について調べた。各反応からの初期速度（０分〜２０分以上）を相対蛍光単位対時間（分）のプロットの勾配から判断した後、阻害剤濃度に対するプロットを作成し、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）のＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍにおいてｌｏｇ［阻害剤］対応答の可変勾配モデルからＩＣ５０を予測した。
【０２９４】
［ＫＤＲ］＝２．５ｎＭ、［ＡＴＰ］＝７５μＭ、および［Ｙ１２−Ｓｏｘペプチド］＝５μＭ（ＡＴＰ  ＫＭａｐｐ＝７５μＭ）
上記アッセイプロトコルの方法Ｄを用いて得た例示的な化合物に関するＫＤＲ阻害データを下記表９に要約する。
【０２９５】
【表９】
0005526020.tif 000092
本発明の実施形態を多数説明したが、我々の基本例を改変して本発明の化合物および方法を利用する他の実施形態とすることが可能であるのは明白である。それゆえ、本発明の範囲は、例示した具体的な実施形態ではなく、添付の請求の範囲により規定されることは言うまでもない。
【図１】
0005526020.tif 000124
【図２】
0005526020.tif 000125
【図３】
0005526020.tif 000126