(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式２：
【化１】
0005474556.tif 000008
［式中、Ｒ4は水素、Ｃ1〜Ｃ4アルキル基及びＣ2〜Ｃ4アルケニル基からなる群から選ばれる］
の短鎖レチニルエステルを、有機溶媒及びリパーゼの存在下に、長鎖酸又は長鎖エステルと反応させて、長鎖レチニルエステルを形成させることを含んでなり、前記リパーゼがホールセル中に存在するものか、単離天然酵素であるか又は担体に固定化されたものであり、そして前記方法を弱塩基性イオン交換樹脂の存在下に実施する長鎖レチニルエステルの製造方法。
【請求項２】
前記Ｃ1〜Ｃ4アルキル基がメチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、ｎ−ブチル、ｉ−ブチル及びｓ−ブチルの少なくとも１つを含む請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記Ｃ2〜Ｃ4アルケニル基がビニル、１−プロペニル、１−イソプロペニル及び１−ブテニルの少なくとも１つを含む請求項１に記載の方法。
【請求項４】
Ｒ4がメチル又はエチルである請求項１に記載の方法。
【請求項５】
短鎖レチニルエステルを、有機溶媒及びリパーゼの存在下に、長鎖酸又は長鎖エステルと反応させて、一般式１：
【化２】
0005474556.tif 000009
［式中、ＲはＣ4〜Ｃ24アルキル、Ｃ4〜Ｃ24アルケニル、Ｃ4〜Ｃ24ジエニル、Ｃ6〜Ｃ24トリエニル、Ｃ8〜Ｃ24テトラエニル、Ｃ3〜Ｃ8シクロアルキル、Ｃ6〜Ｃ20炭素環式アリール及びＣ4〜Ｃ20ヘテロアリール（ここでヘテロアリールは硫黄、窒素及び酸素の少なくとも１つを含む）からなる群から選ばれる少なくとも１つである］
で表される長鎖レチニルエステルを形成させることを含んでなり、前記リパーゼがホールセル中に存在するものか、単離天然酵素であるか又は担体に固定化されたものであり、そして前記方法を弱塩基性イオン交換樹脂の存在下に実施する長鎖レチニルエステルの製造方法。
【請求項６】
前記アルキル、アルケニル、ジエニル、トリエニル、テトラエニル又はシクロアルキルがＣ1〜Ｃ6−アルコキシ、シアノ、Ｃ2〜Ｃ6−アルコキシカルボニル、Ｃ2〜Ｃ6−アルカノイルオキシ、ヒドロキシ、アリール、ヘテロアリール、チオール、チオエーテル、ジスルフィド及びハロゲンから選ばれた１〜３個の基で置換されている請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記炭素環式アリールがフェニル、ナフチル及びアントラセニルの少なくとも１つを含む請求項５に記載の方法。
【請求項８】
前記フェニル、ナフチル又はアントラセニルがＣ1〜Ｃ6−アルキル、置換Ｃ1〜Ｃ6−アルキル、Ｃ6〜Ｃ10アリール、置換Ｃ6〜Ｃ10アリール、Ｃ1〜Ｃ6−アルコキシ、ハロゲン、カルボキシ、シアノ、Ｃ1〜Ｃ6−アルカノイルオキシ、Ｃ1〜Ｃ6−アルキルチオ、Ｃ1〜Ｃ6−アルキルスルホニル、トリフルオロメチル、ヒドロキシ、Ｃ2〜Ｃ6−アルコキシカルボニル、Ｃ2〜Ｃ6−アルカノイルアミノ並びに−Ｏ−Ｒ3、−Ｓ−Ｒ3、−ＳＯ2−Ｒ3、−ＮＨＳＯ2Ｒ3及び−ＮＨＣＯ2Ｒ3（ここでＲ3はフェニル若しくはナフチル、又はＣ1〜Ｃ6−アルキル、Ｃ6〜Ｃ10アリール、Ｃ1〜Ｃ6−アルコキシ及びハロゲンから選ばれた１〜３個の基で置換されたフェニル若しくはナフチルである）から選ばれた１〜３個の置換基で置換されている請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記へテロアリールが酸素、硫黄及び窒素から選ばれた１〜３個のヘテロ原子を含む５又は６員芳香環の少なくとも１つを含む請求項５に記載の方法。
【請求項１０】
前記へテロアリールがチエニル、フリル、ピロリル、イミダゾリル、ピラゾリル、チアゾリル、イソチアゾリル、オキサゾリル、イソキサゾリル、トリアゾリル、チアジアゾリル、オキサジアゾリル、テトラゾリル、ピリジル、ピリミジル、ベンゾオキサゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾイミダゾリル及びインドリルのうち少なくとも１つを含む請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記方法を−１００℃〜前記溶媒の沸点の温度で実施する請求項１又は５に記載の方法。
【請求項１２】
前記長鎖酸又は長鎖エステルが、前記短鎖レチニルエステルの量に基づき、０．８５〜２０当量の量で存在する請求項１又は５に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、酵素の存在下において短鎖レチニルエステル及び適当な長鎖酸又はエステルから化学酵素処理(chemoenzymatic processing)によってレチノールの長鎖エステルを製造することに関する。
【背景技術】
【０００２】
レチノール（ビタミンＡ）及びレチニルエステルは、長い間、局所的な利益をもたらすために化粧組成物に添加されてきた。レチノール自体は不安定であり、過剰に用いると毒性がある。しかし、長鎖レチニルエステルは、より安定であるために好ましい。
【０００３】
長鎖レチニルエステルの古典的な化学的製造は、レチノールと長鎖酸、酸塩化物若しくはエステルとの反応又は長鎖脂肪酸エステルによる短鎖レチニルエステルのエステル交換を含む。これらの方法は、刺激の強い試薬又は高温のいずれかを使用するので、レチノール又はレチニルエステルのこれらの型の反応条件に対する不安定性の故に、問題を引き起こす場合がある。
【０００４】
長鎖レチニルエステルの化学酵素合成についてはこれまでにいくつかの報告がなされている。これらの合成の多くは出発原料として高価で不安定なレチノールを使用する（非特許文献１〜４）。酢酸レチニルのようなレチニルエステルは、レチノールよりもはるかに安定であり、かなり安価である。いくつかの報告は、この材料を長鎖レチニルエステルの生体触媒による製造に出発材料として使用している。特許文献１は、有機溶媒中でビタミンＡ酢酸エステル及び脂肪酸を、Ｏ−メトキシポリエチレングリコールで変性されたリパーゼと共に用いて、長鎖レチニルエステルを製造した。目的生成物が適度な収量で得られるが、この方法は、成功させるためにはリパーゼの別の変性を必要とする。この変性を必要としない方法がより望ましいであろう。特許文献２は、無溶媒条件下におけるレチノール又はレチニルエステル及び動物又は植物由来の脂肪又は油からの長鎖レチニルエステルの生物触媒合成を詳述している。残念ながら、この方法は高温を使用し、目的生成物へは中程度の転化率（１７〜４４％）しかもたらさず、このことが単離を複雑にするおそれがあった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開昭６２−２４８４９５号公報（１９８７年）
【特許文献２】ＷＯ  ２００４／０４４２１２  Ａ１
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Ｏ’Ｃｏｎｎｏｒ  ｅｔ．ａｌ．Ａｕｓｔ．Ｊ．Ｃｈｅｍ．１９９２，４５，６４１
【非特許文献２】Ｍａｕｇａｒｄ，ｅｔ．ａｔ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｃａｔａｌ．Ｂ：Ｅｎｚｙｍａｔｉｃ  ２０００，８，２７５
【非特許文献３】Ｍａｕｇａｒｄ，ｅｔ．ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｐｒｏｇ．２０００，１６，３５８
【非特許文献４】Ｍａｕｇａｒｄ，ｅｔ．ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｐｒｏｇ．２００２，１８，４２４
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
従って、入手が容易な前駆体から長鎖レチニルエステルを製造する穏やかな方法の関心が高い。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明の第１の実施態様は、レチニルエステルの製造方法に関する。この方法は、式２：
【０００９】
【化１】
0005474556.tif 000002
【００１０】
の短鎖レチニルエステルを、有機溶媒及び酵素の存在下で長鎖酸又は長鎖エステルと反応させてレチニルエステルを形成させることを含む。Ｒ4は水素、Ｃ1〜Ｃ4アルキル基及びＣ2〜Ｃ4アルケニル基からなる群から選ばれる。
【００１１】
別の実施態様は、一般式１：
【００１２】
【化２】
0005474556.tif 000003
【００１３】
で表される長鎖レチニルエステル化合物の製造方法に関する。この実施態様に係る方法は、有機溶媒及び酵素の存在下に、そして場合によっては、少なくとも１つのモレキュラーシーブ及び／又は少なくとも１つのイオン交換樹脂の存在下に、短鎖レチニルエステルを長鎖酸又は長鎖エステルと反応させて、レチニルエステルを形成させることを含む。ＲはＣ4〜Ｃ24アルキル、Ｃ4〜Ｃ24アルケニル、Ｃ4〜Ｃ24ジエニル、Ｃ6〜Ｃ24トリエニル、Ｃ8〜Ｃ24テトラエニル、Ｃ3〜Ｃ8シクロアルキル、Ｃ6〜Ｃ20炭素環式アリール、Ｃ4〜Ｃ20ヘテロアリール及びそれらの混合物（ヘテロアリールは硫黄、窒素及び酸素の少なくとも１つを含む）からなる群の少なくとも１つから選ばれる。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
本発明は、一般式１：
【００１５】
【化３】
0005474556.tif 000004
【００１６】
［式中、Ｒは置換及び非置換、分岐鎖及び直鎖、飽和、不飽和及び多価不飽和Ｃ4〜Ｃ20アルキル、置換及び非置換Ｃ3〜Ｃ8シクロアルキル、置換及び非置換Ｃ6〜Ｃ20炭素環式アリール、置換及び非置換Ｃ4〜Ｃ20ヘテロアリール並びにそれらの混合物（ヘテロ原子は硫黄、窒素及び酸素から選ばれる）から選ばれる］
で表される長鎖レチニルエステル化合物の製造方法に関する。
【００１７】
好ましい種は、Ｒが置換及び非置換、分岐鎖及び直鎖の飽和Ｃ4〜Ｃ24アルキル、置換及び非置換、分岐鎖及び直鎖Ｃ4〜Ｃ24アルケニル、置換及び非置換、分岐鎖及び直鎖Ｃ4〜Ｃ24ジエニル、置換及び非置換、分岐鎖及び直鎖Ｃ6〜Ｃ24トリエニル並びに置換及び非置換、分岐鎖及び直鎖Ｃ8〜Ｃ24テトラエニル又はそれらの混合物から選ばれる構造１で表される。
【００１８】
Ｒが表すことができるアルキル、アルケニル、ジエニル、トリエニル及びテトラエニル基は、炭素数約２４以下の直鎖又は分岐鎖脂肪族炭化水素基であることができ、例えば以下：Ｃ1〜Ｃ6−アルコキシ、シアノ、Ｃ2〜Ｃ6−アルコキシカルボニル、Ｃ2〜Ｃ6−アルカノイルオキシ、ヒドロキシ、アリール、ヘテロアリール、チオール、チオエーテル、ジスルフィド及びハロゲンから選ばれた１〜３個の基で置換されることができる。用語「Ｃ1〜Ｃ6−アルコキシ」、「Ｃ2〜Ｃ6−アルコキシカルボニル」及び「Ｃ2〜Ｃ6−アルカノイルオキシ」はそれぞれ、構造−ＯＲ2、−ＣＯ2Ｒ2及び−ＯＣＯＲ2に相当する基を表すのに用い、Ｒ2はＣ1〜Ｃ6−アルキル又は置換Ｃ1〜Ｃ6−アルキルである。用語「Ｃ3〜Ｃ8−シクロアルキル」は、炭素数３〜８の飽和炭素環式炭化水素基を表すのに用いる。
【００１９】
Ｒが表すことができるアリール基としては、フェニル、ナフチル又はアントラセニル、更にＣ1〜Ｃ6−アルキル、置換Ｃ1〜Ｃ6−アルキル、Ｃ6〜Ｃ10−アリール、置換Ｃ6〜Ｃ10−アリール、Ｃ1〜Ｃ6−アルコキシ、ハロゲン、カルボキシ、シアノ、Ｃ1〜Ｃ6−アルカノイルオキシ、Ｃ1〜Ｃ6−アルキルチオ、Ｃ1〜Ｃ6−アルキルスルホニル、トリフルオロメチル、ヒドロキシ、Ｃ2〜Ｃ6−アルコキシカルボニル、Ｃ2〜Ｃ6−アルカノイルアミノ並びに−Ｏ−Ｒ3、Ｓ−Ｒ3、−ＳＯ2−Ｒ3、−ＮＨＳＯ2Ｒ3及び−ＮＨＣＯ2Ｒ3（Ｒ3はフェニル若しくはナフチル、又はＣ1〜Ｃ6−アルキル、Ｃ6〜Ｃ10−アリール、Ｃ1〜Ｃ6−アルコキシ及びハロゲンから選ばれた１〜３個の基で置換されたフェニル若しくはナフチルである）から選ばれた１〜３個の置換基で置換されたフェニル、ナフチル又はアントラセニルが挙げられる。
【００２０】
ヘテロアリール基としては、酸素、硫黄及び窒素から選ばれた１〜３個のヘテロ原子を含む５〜６員芳香環が挙げられる。このようなヘテロアリール基の例は、チエニル、フリル、ピロリル、イミダゾリル、ピラゾリル、チアゾリル、イソチアゾリル、オキサゾリル、イソキサゾリル、トリアゾリル、チアジアゾリル、オキサジアゾリル、テトラゾリル、ピリジル、ピリミジル、ベンゾオキサゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンズイミダゾリル、インドリルなどである。ヘテロアリール基は、例えばＣ1〜Ｃ6−アルキル、Ｃ1〜Ｃ6−アルコキシ、置換Ｃ1〜Ｃ6−アルキル、ハロゲン、Ｃ1〜Ｃ6−アルキルチオ、アリール、アリールチオ、アリールオキシ、Ｃ2〜Ｃ6−アルコキシカルボニル及びＣ2〜Ｃ6−アルカノイルアミノのような３個以下の基で置換されることができる。ヘテロアリール基はまた、縮合環系、例えばベンゾ又はナフト残基（非置換であるか又は例えば、前文に記載された３個以下の基で置換されることができる）で置換されることもできる。用語「ハロゲン」は、フッ素、塩素、臭素及びヨウ素を含めるために使用する。
【００２１】
好ましい本発明の化合物は、Ｒ−ＣＯがリノレオイル、ステアロイル、リノレノイル、共役リノレオイル、パルモイル、オレオイル、アラキドニル、ミリスチル、ラウリル、パルミトレオイル、リポイル、４−フェニルブチリル、シクロヘキシルアセチル、フェニルアセチル、Ｎ−Ｂｏｃ  ３−インドールブチリル及びピメロイル又はそれらの混合物である式１の化合物である。
【００２２】
本発明に係る方法の一実施態様は、有機溶媒及び酵素の存在下における且つ、場合によっては、少なくとも１つのモレキュラーシーブ及び／又は少なくとも１つのイオン交換樹脂の存在下における短鎖レチニルエステル２：
【００２３】
【化４】
0005474556.tif 000005
【００２４】
と長鎖酸又は長鎖エステルとの反応による目的レチニルエステル１の形成を含んでなる。
【００２５】
短鎖レチニルエステルの置換基Ｒ4は、水素、Ｃ1〜Ｃ4置換又は非置換アルキル基及びＣ2〜Ｃ4アルケニル基の中から選ばれる。Ｃ1〜Ｃ4アルキル基の例としては、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、ｎ−ブチル、ｉ−ブチル及びｓ−ブチルなどが挙げられる。Ｃ2〜Ｃ4アルケニル基の例としては、ビニル、１−プロペニル、１−イソプロペニル、１−ブテニルなどが挙げられる。好ましい置換基Ｒ4は、メチル及びエチルであり、メチルが最も好ましい。短鎖レチニルエステルは、純粋な形態で又は植物油のような希釈剤の存在下で使用でき、希釈剤の割合は０〜９０％であることができる。
【００２６】
この方法は、環状若しくは非環式エーテル溶媒、例えばジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテル、ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル若しくはテトラヒドロフラン、芳香族炭化水素、例えばベンゼン、トルエン若しくはキシレン、脂肪族若しくは脂環式飽和若しくは不飽和炭化水素、例えばヘキサン、ヘプタン、シクロヘキサン若しくはリモネン、ハロゲン化炭化水素、例えばジクロロメタン、ジクロロエタン、ジブロモエタン、テトラクロロエチレン若しくはクロロベンゼン、極性非プロトン性溶媒、例えばアセトニトリル、ジメチルホルムアミド若しくはジメチルスルホキシド、又はそれらの混合物から選ばれた不活性溶媒の存在下で実施する。好ましい溶媒はトルエン、リモネン及びアセトニトリルである。この方法は約−１００℃〜溶媒の沸点の温度、好ましくは約０〜６０℃、最も好ましくは２０〜５０℃において実施できる。長鎖酸又は長鎖エステルの量は、短鎖レチニルエステル２に基づき０．８５〜２０当量、好ましくは１〜１０当量であることができる。この方法に使用する酵素は、プロテアーゼ、リパーゼ、ホスホリパーゼ及びエステラーゼから選ばれる。好ましい酵素はリパーゼである。これらのリパーゼはホールセル（全細胞）、単離天然酵素の形態であることもできるし、或いは担体上に固定化された形態であることもできる。これらのリパーゼとしては、Ｌｉｐａｓｅ  ＰＳ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｐに由来）、Ｌｉｐａｓｅ  ＰＳ−Ｃ（セラミック上に固定化されたＰｓｕｅｄｏｍｏｎａｓ  ｓｐに由来）、Ｌｉｐａｓｅ  ＰＳ−Ｄ（珪藻土に固定化されたＰｓｕｅｄｏｍｏｎａｓ  ｓｐに由来）、Ｌｉｐｏｐｒｉｍｅ  ５０Ｔ、Ｌｉｐｏｚｙｍｅ  ＴＬ  ＩＭ又はＮｏｖｏｚｙｍｅ  ４３５（アクリル樹脂上に固定化されたＣａｎｄｉｄａ  ａｎｔａｒｃｔｉｃａに由来）が挙げられるが、これらに限定するものではない。
【００２７】
この方法は場合によっては、モレキュラーシーブ又はイオン交換樹脂から選ばれた種々の付加物の存在下で実施できる。特に好ましいのは弱塩基性イオン交換樹脂である。これは、これらの材料の存在が、このイオン交換樹脂を用いない同一反応に比較して短鎖レチニルエステル２から長鎖レチニルエステル１への転化を予想外に増大させるためである。これらの樹脂の例は、Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ（登録商標）又はＡｍｂｅｒｌｙｓｔ（登録商標）弱塩基性樹脂、例えばＡｍｂｅｒｌｉｔｅ  ＩＲＡ−９５、Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ  ＩＲＡ−９４及びＡｍｂｅｒｌｙｓｔ  Ａ−２１であるが、全ての弱塩基性樹脂が許容できるようである。
【００２８】
この方法の生成物は、当業者に知られた方法、例えば抽出、濾過又は結晶化を用いて単離できる。生成物１は、必要ならば、当業者に知られた方法、例えば抽出、クロマトグラフィー、蒸留又は結晶化を用いて精製できる。
【実施例】
【００２９】
本発明によって提供される新規な方法を更に以下の例によって説明する。
【００３０】
例１
１当量のリノール酸を用いたリノール酸レチニルの製造
酢酸レチニル（３３ｍｇ；０．１０ミリモル）をトルエン５ｍＬ中に溶解させた。リノール酸（２８ｍｇ；１．０当量）、次いでＮｏｖｏｚｙｍｅ  ４３５  １２０ｍｇを加えた。反応混合物を５０℃において１時間撹拌及び加熱し、その時点でサンプルを取り出し、ＨＰＬＣによって分析した。リノール酸レチニルへの転化率は４９．８％であり、酢酸レチニルが３９．８％及びレチノールが１０．４％であることが示された。ＨＰＬＣ（４．６×１５０ｍｍ  Ｚｏｒｂａｘ  ＳＢ−Ｃ８カラム［Ａｇｉｌｅｎｔ］，厚さ３．５μ，溶離剤メタノール，検出３５０ｎｍ）：ｔR  ４．７７分（リノール酸レチニル）；ｔR  ２．３２分（酢酸レチニル）；ｔR  ２．０８分（レチノール）。
【００３１】
例２
有機親和性モレキュラーシーブの存在下において１当量のリノール酸を用いたリノール酸レチニルの製造
酢酸レチニル（３３ｍｇ；０．１０ミリモル）をトルエン５ｍＬ中に溶解させ、有機親和性モレキュラーシーブ１００ｍｇに加えた。リノール酸（２８ｍｇ；１．０当量）、次いでＮｏｖｏｚｙｍｅ  ４３５  １２０ｍｇを加えた。反応混合物を５０℃において１時間撹拌及び加熱し、その時点でサンプルを取り出し、ＨＰＬＣによって分析した。リノール酸レチニルへの転化率は５３．２％であり、酢酸レチニルが１４．４％及びレチノールが３２．４％であることが示された。
【００３２】
例３
Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ  ＩＲＡ−９５の存在下において１当量のリノール酸を用いたリノール酸レチニルの製造
酢酸レチニル（３３ｍｇ；０．１０ミリモル）をトルエン５ｍＬ中に溶解させ、乾燥したＡｍｂｅｒｌｉｔｅ  ＩＲＡ−９５  ５０ｍｇに加えた。リノール酸（２８ｍｇ；１．０当量）、次いでＮｏｖｏｚｙｍｅ  ４３５  １２０ｍｇを加えた。反応混合物を室温において２時間撹拌し、その時点でサンプルを取り出し、ＨＰＬＣによって分析した。リノール酸レチニルへの転化率は７２．３％であり、酢酸レチニルが１６．３％及びレチノールが１１．３％であることが示された。更に２日間の撹拌を行っても更なる変化は得られなかった。
【００３３】
例４
Ａｍｂｅｒｌｙｓｔ  Ａ−２１の存在下において１当量のリノール酸を用いたリノール酸レチニルの製造
酢酸レチニル（３３ｍｇ；０．１０ミリモル）をトルエン５ｍＬ中に溶解させ、乾燥したＡｍｂｅｒｌｙｓｔ  Ａ−２１  ５０ｍｇに加えた。リノール酸（２８ｍｇ；１．０当量）、次いでＮｏｖｏｚｙｍｅ  ４３５  １２０ｍｇを加えた。反応混合物を室温において２時間撹拌し、その時点でサンプルを取り出し、ＨＰＬＣによって分析した。リノール酸レチニルへの転化率は７１．７％であり、酢酸レチニルが１７．７％及びレチノールが１０．６％であることが示された。更に２日間の撹拌を行っても更なる変化は得られなかった。
【００３４】
例５
２当量のリノール酸を用いたリノール酸レチニルの製造
酢酸レチニル（３３ｍｇ；０．１０ミリモル）をトルエン５ｍＬ中に溶解させた。リノール酸（５６ｍｇ；２．０当量）、次いでＮｏｖｏｚｙｍｅ  ４３５  １２０ｍｇを加えた。反応混合物を周囲温度で２時間撹拌し、その時点でサンプルを取り出し、ＨＰＬＣによって分析した。リノール酸レチニルへの転化率は６３．４％であり、酢酸レチニルが３０．５％及びレチノールが４．８％であることが示された。
【００３５】
例６
Ａｍｂｅｒｌｙｓｔ  Ａ−２１の存在下において２当量のリノール酸を用いたリノール酸レチニルの製造
酢酸レチニル（３３ｍｇ；０．１０ミリモル）をトルエン５ｍＬ中に溶解させ、乾燥したＡｍｂｅｒｌｙｓｔ  Ａ−２１  ５０ｍｇに加えた。リノール酸（５６ｍｇ；２．０当量）、次いでＮｏｖｏｚｙｍｅ  ４３５  １２０ｍｇを加えた。反応混合物を室温で２時間撹拌し、その時点でサンプルを取り出し、ＨＰＬＣによって分析した。リノール酸レチニルへの転化率は７９．０％であり、酢酸レチニルが１４．１％及びレチノールが６．９％であることが示された。一晩撹拌しても更なる変化は得られなかった。
【００３６】
例７
２当量のリノール酸を用いた植物油中におけるリノール酸レチニルの製造
酢酸レチニル（植物油中５２％，６３ｍｇ；０．１０ミリモル）をトルエン５ｍＬ中に溶解させた。リノール酸（５６ｍｇ；２．０当量）、次いでＮｏｖｏｚｙｍｅ  ４３５  １２０ｍｇを加えた。反応混合物を５０℃で１時間撹拌及び加熱し、その時点でサンプルを取り出し、ＨＰＬＣによって分析した。リノール酸レチニルへの転化率は７１．７％であり、酢酸レチニルが１８．０％及びレチノールが１０．２％であることが示された。
【００３７】
例８
５当量のリノール酸を用いたリノール酸レチニルの製造
酢酸レチニル（３３ｍｇ；０．１０ミリモル）をトルエン５ｍＬ中に溶解させた。リノール酸（１４０ｍｇ；５．０当量）、次いでＮｏｖｏｚｙｍｅ  ４３５  １２０ｍｇを加えた。反応混合物を周囲温度で２時間撹拌し、その時点でサンプルを取り出し、ＨＰＬＣによって分析した。リノール酸レチニルへの転化率は７８．７％であり、酢酸レチニルが１７．６％及びレチノールが３．７％であることが示された。
【００３８】
例９
Ａｍｂｅｒｌｙｓｔ  Ａ−２１の存在下において５当量のリノール酸を用いたリノール酸レチニルの製造
酢酸レチニル（３３ｍｇ；０．１０ミリモル）をトルエン５ｍＬ中に溶解させ、乾燥したＡｍｂｅｒｌｙｓｔ  Ａ−２１  ５０ｍｇに加えた。リノール酸（１４０ｍｇ；５．０当量）、次いでＮｏｖｏｚｙｍｅ  ４３５  １２０ｍｇを加えた。反応混合物を室温で２時間撹拌し、その時点でサンプルを取り出し、ＨＰＬＣによって分析した。リノール酸レチニルへの転化率は８７．４％であり、酢酸レチニルが９．２％及びレチノールが３．４％であることが示された。一晩撹拌しても更なる変化は得られなかった。
【００３９】
例１０
５当量のリノール酸を用いた植物油中におけるリノール酸レチニルの製造
酢酸レチニル（植物油中５２％，６３ｍｇ；０．１０ミリモル）をトルエン５ｍＬ中に溶解させた。リノール酸（１４０ｍｇ；５．０当量）、次いでＮｏｖｏｚｙｍｅ  ４３５  １２０ｍｇを加えた。反応混合物を５０℃で１時間撹拌及び加熱し、その時点でサンプルを取り出し、ＨＰＬＣによって分析した。リノール酸レチニルへの転化率は８３．０％であり、酢酸レチニルが１０．９％及びレチノールが６．２％であることが示された。
【００４０】
例１１
アセトニトリル中で２当量のリノール酸を用いたリノール酸レチニルの製造
酢酸レチニル（５００ｍｇ；１．５２ミリモル）を、超音波処理しながらアセトニトリル３．５ｍＬ中に溶解させた。リノール酸（８５０ｍｇ；３．０４ミリモル；２．０当量）、次いでＮｏｖｏｚｙｍｅ  ４３５  １２０ｍｇを加えた。反応混合物を室温で１９時間撹拌し、その時点でサンプルを取り出し、ＨＰＬＣによって分析した。リノール酸レチニルへの転化率は２８．７％であり、酢酸レチニルが７０．８％及びレチノールが０．５％であることが示された。
【００４１】
例１２
Ａｍｂｅｒｌｙｓｔ  Ａ−２１と共にアセトニトリル中で２当量のリノール酸を用いたリノール酸レチニルの製造
酢酸レチニル（５００ｍｇ；１．５２ミリモル）を、超音波処理しながらアセトニトリル３．５ｍＬ中に溶解させた。乾燥したＡｍｂｅｒｌｙｓｔ  Ａ−２１（０．２５ｇ）を加えた。リノール酸（８５０ｍｇ；３．０４ミリモル；２．０当量）、次いでＮｏｖｏｚｙｍｅ  ４３５  １２０ｍｇを加えた。反応混合物を室温で１９時間撹拌し、その時点でサンプルを取り出し、ＨＰＬＣによって分析した。リノール酸レチニルへの転化率は５８．５％であり、酢酸レチニルが４０．０％及びレチノールが１．６％であることが示された。
【００４２】
例１３
リモネン中で２当量のリノール酸を用いたリノール酸レチニルの製造
酢酸レチニル（５００ｍｇ；１．５２ミリモル）及びリノール酸（８５０ｍｇ；３．０４ミリモル；２．０当量）をリモネン３．５ｍＬ中に溶解させた。Ｎｏｖｏｚｙｍｅ  ４３５（１２０ｍｇ）を加え、反応混合物を室温で２３時間撹拌し、その時点でサンプルを取り出し、ＨＰＬＣによって分析した。リノール酸レチニルへの転化率は６５．８％であり、酢酸レチニルが３２．３％及びレチノールが１．９％であることが示された。
【００４３】
例１４
Ａｍｂｅｒｌｙｓｔ  Ａ−２１と共にリモネン中で２当量のリノール酸を用いたリノール酸レチニルの製造
酢酸レチニル（５００ｍｇ；１．５２ミリモル）及びリノール酸（８５０ｍｇ；３．０４ミリモル；２．０当量）をリモネン３．５ｍＬ中に溶解させた。乾燥したＡｍｂｅｒｌｙｓｔ  Ａ−２１（０．２５ｇ）及びＮｏｖｏｚｙｍｅ  ４３５（１２０ｍｇ）を加え、反応混合物を室温で２３時間撹拌し、その時点でサンプルを取り出し、ＨＰＬＣによって分析した。リノール酸レチニルへの転化率は９０．３％であり、酢酸レチニルが８．５％及びレチノールが１．２％であることが示された。
【００４４】
例１５
２当量のリノール酸を用いたリノール酸レチニルの製造及び生成物の単離
酢酸レチニル（４．１１ｇ；１２．５ミリモル）及びリノール酸（７．０１ｇ；２５．０ミリモル；２．０当量）をトルエン３５ｍＬ中に溶解させた。Ｎｏｖｏｚｙｍｅ  ４３５（１．０ｇ）及び乾燥したＡｍｂｅｒｌｙｓｔ  Ａ−２１（２．１ｇ）を加えた。反応混合物の排出及び窒素充填を１０回行った。反応混合物を暗所で周囲温度において５．５時間撹拌した。その時点で、ＨＰＬＣ分析は、リノール酸レチニルへの転化率が９０．３％である（酢酸レチニル９．１％及び且つレチノール０．６％）であることを示した。反応混合物を濾過及び濃縮し、次いでヘプタン（各１０ｍＬ）を用いて２回濃縮した。残渣をヘプタン（５０ｍＬ）中に溶解させ、１０％炭酸カリウム水溶液及びメタノールの１：１混合物各８０ｍＬで２回洗浄した。有機層を、飽和炭酸水素ナトリウム（１０ｍＬ）、水（３０ｍＬ）及びメタノール（４０ｍＬ）の混合物で更に洗浄し、乾燥させ（硫酸ナトリウム）、濃縮して、黄色油５．１４ｇ（７５％）を生成した。この物質の一部分（４．００ｇ）をヘプタン４０ｍＬ中に溶解させ、メタノール２０ｍＬで洗浄した。ヘプタン層を濃縮して、リノール酸レチニル３．７７ｇ（全体で７１％）を生成した。この生成物の分析は、リノール酸レチニル９０．９％（ＨＰＬＣ面積パーセント）、リノール酸０．２６重量％及びレチノール０．０６重量％を示した。最初の水性抽出物（１０％炭酸カリウム溶液とメタノールとの１：１混合物を使用）を、３Ｍ  ＨＣｌ  ２５ｍＬでｐＨ１に酸性化した。得られた混合物をヘプタン２０ｍＬで抽出した。有機溶液を硫酸ナトリウムによって乾燥させ、濃縮した。得られた回収リノール酸は３．９１ｇ（最初の装入量の５６％）であり、再利用に適当であった。
【００４５】
例１６
１当量のリノール酸メチルを用いたリノール酸レチニルの製造
酢酸レチニル（３３ｍｇ；０．１０ミリモル）をトルエン５ｍＬ中に溶解させた。リノール酸メチル（３０ｍｇ；１．０当量）、次いでＮｏｖｏｚｙｍｅ  ４３５  １２０ｍｇを加えた。反応混合物を室温で一晩撹拌し、その時点でサンプルを取り出し、ＨＰＬＣによって分析した。リノール酸レチニルへの転化率は４９．３％であり、酢酸レチニルが３６．９％及びレチノールが１３．８％であることが示された。
【００４６】
例１７
Ｌｉｐａｓｅ  ＰＳ及び１当量のリノール酸を用いたリノール酸レチニルの製造
酢酸レチニル（３３ｍｇ；０．１０ミリモル）をトルエン５ｍＬ中に溶解させた。リノール酸（２８ｍｇ；１．０当量）、次いでＬｉｐａｓｅ  ＰＳ（Ａｍａｎｏ）１２０ｍｇを加えた。反応混合物を周囲温度で４５時間撹拌し、その時点でサンプルを取り出し、ＨＰＬＣによって分析した。リノール酸レチニルへの転化率は１．４％であり、酢酸レチニルが９７．５％及びレチノールが１．１％であることが示された。
【００４７】
例１８
Ａｍｂｅｒｌｙｓｔ  Ａ−２１の存在下においてＬｉｐａｓｅ  ＰＳ及び１当量のリノール酸を用いたリノール酸レチニルの製造
酢酸レチニル（３３ｍｇ；０．１０ミリモル）をトルエン５ｍＬ中に溶解させ、乾燥したＡｍｂｅｒｌｙｓｔ  Ａ−２１  ５０ｍｇに加えた。リノール酸（２８ｍｇ；１．０当量）、次いでＬｉｐａｓｅ  ＰＳ（Ａｍａｎｏ）１２０ｍｇを加えた。反応混合物を周囲温度で４５時間撹拌し、その時点でサンプルを取り出し、ＨＰＬＣによって分析した。リノール酸レチニルへの転化率は１０．０％であり、酢酸レチニルが８７．３％及びレチノールが２．７％であることが示された。
【００４８】
例１９
Ｌｉｐａｓｅ  ＰＳ−Ｃ及び１当量のリノール酸を用いたリノール酸レチニルの製造
酢酸レチニル（３３ｍｇ；０．１０ミリモル）をトルエン５ｍＬ中に溶解させた。リノール酸（２８ｍｇ；１．０当量）、次いでＬｉｐａｓｅ  ＰＳ−Ｃ（Ａｍａｎｏ）１２０ｍｇを加えた。反応混合物を周囲温度で４５時間撹拌し、その時点でサンプルを取り出し、ＨＰＬＣによって分析した。リノール酸レチニルへの転化率は４６．１％であり、酢酸レチニルが４８．７％及びレチノールが５．２％であることが示された。
【００４９】
例２０
Ａｍｂｅｒｌｙｓｔ  Ａ−２１の存在下においてＬｉｐａｓｅ  ＰＳ−Ｃ及び１当量のリノール酸を用いたリノール酸レチニルの製造
酢酸レチニル（３３ｍｇ；０．１０ミリモル）をトルエン５ｍＬ中に溶解させ、乾燥したＡｍｂｅｒｌｙｓｔ  Ａ−２１  ５０ｍｇに加えた。リノール酸（２８ｍｇ；１．０当量）、次いでＬｉｐａｓｅ  ＰＳ−Ｃ（Ａｍａｎｏ）１２０ｍｇを加えた。反応混合物を周囲温度で４５時間撹拌し、その時点でサンプルを取り出し、ＨＰＬＣによって分析した。リノール酸レチニルへの転化率は６８．８％であり、酢酸レチニルが２３．６％及びレチノールが７．６％であることが示された。
【００５０】
例２１
Ｌｉｐａｓｅ  ＰＳ−Ｄ及び１当量のリノール酸を用いたリノール酸レチニルの製造
酢酸レチニル（３３ｍｇ；０．１０ミリモル）をトルエン５ｍＬ中に溶解させた。リノール酸（２８ｍｇ；１．０当量）、次いでＬｉｐａｓｅ  ＰＳ−Ｄ（Ａｍａｎｏ）１２０ｍｇを加えた。反応混合物を周囲温度で４５時間撹拌し、その時点でサンプルを取り出し、ＨＰＬＣによって分析した。リノール酸レチニルへの転化率は３５．４％であり、酢酸レチニルが６３．４％及びレチノールが１．２％であることが示された。
【００５１】
例２２
Ａｍｂｅｒｌｙｓｔ  Ａ−２１の存在下においてＬｉｐａｓｅ  ＰＳ−Ｄ及び１当量のリノール酸を用いたリノール酸レチニルの製造
酢酸レチニル（３３ｍｇ；０．１０ミリモル）をトルエン５ｍＬ中に溶解させ、乾燥したＡｍｂｅｒｌｙｓｔ  Ａ−２１  ５０ｍｇに加えた。リノール酸（２８ｍｇ；１．０当量）、次いでＬｉｐａｓｅ  ＰＳ−Ｄ（Ａｍａｎｏ）１２０ｍｇを加えた。反応混合物を周囲温度で４５時間撹拌し、その時点でサンプルを取り出し、ＨＰＬＣによって分析した。リノール酸レチニルへの転化率は６９．２％であり、酢酸レチニルが２５．８％及びレチノールが５．０％であることが示された。
【００５２】
例２３
Ｌｉｐｏｚｙｍｅ  ＴＩ  ＩＭ及び１当量のリノール酸を用いたリノール酸レチニルの製造
酢酸レチニル（３３ｍｇ；０．１０ミリモル）をトルエン５ｍＬ中に溶解させた。リノール酸（２８ｍｇ；１．０当量）、次いでＬｉｐｏｚｙｍｅ  ＴＩ  ＩＭ（Ｎｏｖｏｚｙｍｅ）１２０ｍｇを加えた。反応混合物を周囲温度で４５時間撹拌し、その時点でサンプルを取り出し、ＨＰＬＣによって分析した。リノール酸レチニルへの転化率は２．０％であり、酢酸レチニルが９４．９％及びレチノールが３．２％であることが示された。
【００５３】
例２４
Ａｍｂｅｒｌｙｓｔ  Ａ−２１の存在下においてＬｉｐｏｚｙｍｅ  ＴＩ  ＩＭ及び１当量のリノール酸を用いたリノール酸レチニルの製造
酢酸レチニル（３３ｍｇ；０．１０ミリモル）をトルエン５ｍＬ中に溶解させ、乾燥したＡｍｂｅｒｌｙｓｔ  Ａ−２１  ５０ｍｇに加えた。リノール酸（２８ｍｇ；１．０当量）、次いでＬｉｐｏｚｙｍｅ  ＴＩ  ＩＭ（Ｎｏｖｏｚｙｍｅ）１２０ｍｇを加えた。反応混合物を周囲温度で４５時間撹拌し、その時点でサンプルを取り出し、ＨＰＬＣによって分析した。リノール酸レチニルへの転化率は１４．６％であり、酢酸レチニルが８４．７％及びレチノールが０．７％であることが示された。
【００５４】
例２５
リノール酸レチニルの半回分製造
酢酸レチニル（２２．０ｇ；油中８０％；５３．６ミリモル）及びリノール酸（Ｐａｍｏｌｙｎ  ２００；１５．０ｇ；５３．６ミリモル；１．０当量）を５００ｍＬフラスコ中でトルエン１６０ｍＬに溶解させた。フラスコ中の浸漬管をペリスタポンプを経て、Ｎｏｖｏｚｙｍｅ  ４３５  ６．０ｇを含むカラムに接続し、それを連続して、乾燥したＡｍｂｅｒｌｙｓｔ  Ａ−２１  ６．０ｇを含む第２のカラムに接続した。この第２のカラムからの管は最初のフラスコに戻された。ポンプを始動させて（流速６ｍＬ／分）、反応混合物を２つのカラムを通し、ポットに送り戻した。６時間後、転化率は７１％に達し、ポンプを停止させた。Ａｍｂｅｒｌｙｓｔ樹脂を、カラムを取り外し且つ内容物をトルエン中１０％トリエチルアミン溶液１００ｍＬ（トルエンチェーサー１００ｍL) で洗浄することによって、再生した。装置を組み立て直し、ポンプを再始動させた。更に３時間後、転化は７５％に達し、ポンプを停止させた。ポットの内容物の約５０％（８０ｍＬ）を取り出し、トルエン８０ｍＬ中８０％酢酸レチニル１１．０ｇ及びリノール酸７．５ｇの混合物をポットに加えて、第１反応体補充とした。Ａｍｂｅｒｌｙｓｔ樹脂を前述のようにして再生させ、装置を組み立て直し、ポンプを始動させた。９時間後、７３．６％の転化率が達成され、ポンプを停止させた。ポットの内容物の約５０％（８０ｍＬ）を取り出し、トルエン８０ｍＬ中８０％酢酸レチニル１１．０ｇ及びリノール酸７．５ｇの混合物をポットに加えて、第２補充とした。Ａｍｂｅｒｌｙｓｔ樹脂を前述のようにして再生させ、装置を組み立て直し、ポンプを始動させた。１２時間後、７５．０％の転化率が達成され、反応を停止させた。
【００５５】
例２６
Ａｍｂｅｒｌｙｓｔ  Ａ−２１の存在下においてＰａｍｏｌｙｎ  ３８０共役リノール酸を用いたレチノールの共役リノール酸エステル（レチニル−ＣＬＡ）の製造
酢酸レチニル（１．００ｇ；３．０４ミリモル）をトルエン８．５ｍＬ中に溶解させ、Ｐａｍｏｌｙｎ  ３８０共役リノール酸（１．７１ｇ；６．０９ミリモル；２．０当量）、次いでＮｏｖｏｚｙｍｅ  ４３５  １２０ｍｇ及び乾燥したＡｍｂｅｒｌｙｓｔ  Ａ−２１  ０．５ｇを加えた。反応混合物を室温で１５時間撹拌し、その時点でサンプルを取り出し、ＨＰＬＣによって分析した。レチニル−ＣＬＡへの転化率は８７．２％であり、酢酸レチニルが１０．９％及びレチノールが２．０％であることが示された。反応混合物を濾過及び濃縮し、次いでヘプタン（各１０ｍＬ）で２回濃縮した。残渣をヘプタン（１５ｍＬ）中に溶解させ、１０％炭酸カリウム水溶液とメタノールとの１：１混合物各２０ｍＬで２回洗浄した。有機層を飽和炭酸水素ナトリウム（２．５ｍＬ）、水（７．５ｍＬ）及びメタノール（１０ｍＬ）の混合物で更に洗浄し、乾燥させ（硫酸ナトリウム）、濃縮して、黄色油１．３４ｇ（８０％）を生成した。この生成物の分析は、レチニル−ＣＬＡ  ９０．５％（ＨＰＬＣ面積パーセント）、共役リノール酸０．４重量％及びレチノール０．１３％を示した。
【００５６】
ＨＰＬＣ（４．６×１５０ｍｍ  Ｚｏｒｂａｘ  ＳＢ−Ｃ８カラム［Ａｇｉｌｅｎｔ］，厚さ３．５μ，溶離剤メタノール，検出３５０ｎｍ）：ｔR  ４．３９，４．８８，５．６５，６．０６分（レチニル−ＣＬＡ異性体）；ｔR  ２．３２分（酢酸レチニル）；ｔR  ２．０８分（レチノール）。
【００５７】
例２７
Ａｍｂｅｒｌｙｓｔ  Ａ−２１の存在下においてＴｏｎａｌｉｎ  ＦＦＡ共役リノール酸を用いたレチノールの共役リノール酸エステル（レチニル−ＣＬＡ）の製造
酢酸レチニル（１．００ｇ；３．０４ミリモル）をトルエン８．５ｍＬ中に溶解させ、Ｔｏｎａｌｉｎ  ＦＦＡ共役リノール酸（１．７１ｇ；６．０９ミリモル；２．０当量）、次いでＮｏｖｏｚｙｍｅ  ４３５  １２０ｍｇ及び乾燥したＡｍｂｅｒｌｙｓｔ  Ａ−２１  ０．５ｇを加えた。反応混合物を室温で１５時間撹拌し、その時点でサンプルを取り出し、ＨＰＬＣによって分析した。レチニル−ＣＬＡへの転化率は８８．６％であり、酢酸レチニルが９．７％及びレチノールが１．７％であることが示された。反応混合物を濾過及び濃縮し、次いでヘプタン（各１０ｍＬ）で２回濃縮した。残渣をヘプタン（１５ｍＬ）中に溶解させ、１０％炭酸カリウム水溶液とメタノールとの１：１混合物各２０ｍＬで２回洗浄した。有機層を飽和炭酸水素ナトリウム（２．５ｍＬ）、水（７．５ｍＬ）及びメタノール（１０ｍＬ）の混合物で更に洗浄し、乾燥させ（硫酸ナトリウム）、濃縮して、黄色油１．２９ｇ（７７％）を生成した。この生成物の分析は、レチニル−ＣＬＡ  ９２．８％（ＨＰＬＣ面積パーセント）、共役リノール酸０．８重量％及びレチノール０．１％を示した。
【００５８】
例２８
Ａｍｂｅｒｌｙｓｔ  Ａ−２１の存在下におけるパルミチン酸レチニルの製造
酢酸レチニル（１．００ｇ；３．０４ミリモル）をトルエン８．５ｍＬ中に溶解させ、パルミチン酸（１．５６ｇ；６．０９ミリモル；２．０当量）、次いでＮｏｖｏｚｙｍｅ  ４３５  １２０ｍｇ及び乾燥したＡｍｂｅｒｌｙｓｔ  Ａ−２１  ０．５ｇを加えた。反応混合物を室温において１５時間撹拌し、その時点でサンプルを取り出し、ＨＰＬＣによって分析した。パルミチン酸レチニルへの転化率は８９．２％であり、酢酸レチニルが９．１％であり且つレチノールが１．７％であることが示された。反応混合物を濾過及び濃縮し、次いでヘプタン（各１０ｍＬ）で２回濃縮した。残渣をヘプタン（１５ｍＬ）中に溶解させ、１０％炭酸カリウム水溶液とメタノールとの１：１混合物各２０ｍＬで２回洗浄した。有機層を飽和炭酸水素ナトリウム（２．５ｍＬ）、水（７．５ｍＬ）及びメタノール（１０ｍＬ）の混合物で更に洗浄し、乾燥させ（硫酸ナトリウム）、濃縮して、黄色油１．２５ｇ（７８％）を生成した。この生成物の分析は、パルミチン酸レチニル９１．２％（ＨＰＬＣ面積パーセント）、パルミチン酸０．４重量％及びレチノール０．２％を示した。
【００５９】
ＨＰＬＣ（４．６×１５０ｍｍ  Ｚｏｒｂａｘ  ＳＢ−Ｃ８カラム［Ａｇｉｌｅｎｔ］，厚さ３．５μ，溶離剤メタノール，検出３５０ｎｍ）：ｔR  ５．５２分（パルミチン酸レチニル）；ｔR  ２．３２分（酢酸レチニル）；ｔR  ２．０８分（レチノール）。
【００６０】
例２９
Ａｍｂｅｒｌｙｓｔ  Ａ−２１の存在下におけるオレイン酸レチニルの製造
酢酸レチニル（１．００ｇ；３．０４ミリモル）及び乾燥したＡｍｂｅｒｌｙｓｔ  Ａ−２１（０．５ｇ）をトルエン８．５ｍＬと合した。オレイン酸（１．７２ｇ；６．０９ミリモル；２．０当量）、次いでＮｏｖｏｚｙｍｅ  ４３５  １２０ｍｇを加えた。反応混合物を室温において１５時間撹拌し、その時点でサンプルを取り出し、ＨＰＬＣによって分析した。オレイン酸レチニルへの転化率は８９．２％であり、酢酸レチニルが９．０％及びレチノールが１．９％であることが示された。反応混合物を濾過及び濃縮し、次いでヘプタン（各１０ｍＬ）で２回濃縮した。残渣をヘプタン（１５ｍＬ）中に溶解させ、１０％炭酸カリウム水溶液とメタノールとの１：１混合物各２０ｍＬで２回洗浄した。有機層を飽和炭酸水素ナトリウム（２．５ｍＬ）、水（７．５ｍＬ）及びメタノール（１０ｍＬ）の混合物で更に洗浄し、乾燥させ（硫酸ナトリウム）、濃縮して、黄色油１．１６ｇ（６９％）を生成した。
【００６１】
ＨＰＬＣ（４．６×１５０ｍｍ  Ｚｏｒｂａｘ  ＳＢ−Ｃ８カラム［Ａｇｉｌｅｎｔ］，厚さ３．５μ，溶離剤メタノール，検出３５０ｎｍ）：ｔR  ５．６５分（オレイン酸レチニル）；ｔR  ２．３２分（酢酸レチニル）；ｔR  ２．０８分（レチノール）。
【００６２】
例３０
Ａｍｂｅｒｌｙｓｔ  Ａ−２１の存在下におけるリポ酸レチニルの製造
酢酸レチニル（１．００ｇ；３．０４ミリモル）及びリポ酸（１．２６ｇ；６．０９ミリモル；２．０当量）を乾燥したＡｍｂｅｒｌｙｓｔ  Ａ−２１（０．５ｇ）と合した。トルエン（３．５ｍＬ）を加え、混合物を超音波処理し、Ｎｏｖｏｚｙｍｅ  ４３５  １２０ｍｇを加えた。反応混合物を室温において２１時間撹拌し、その時点でサンプルを取り出し、ＨＰＬＣによって分析した。リポ酸レチニルへの転化率は８５．３％であり、酢酸レチニルが１２．８％及びレチノールが１．９％であることが示された。反応混合物を濾過及び濃縮し、残渣を１：１の酢酸エチル：ヘプタン（２０ｍＬ）中に溶解させた。この溶液を１０％炭酸カリウム水溶液１０ｍＬ、次いで飽和炭酸水素ナトリウム（５ｍＬ）と水（５ｍＬ）との混合物１０ｍＬで洗浄した。有機溶液を乾燥させ（硫酸ナトリウム）、濃縮して、黄色油１．０６ｇ（７１％）を生成した。
【００６３】
ＨＰＬＣ（４．６×１５０ｍｍ  Ｚｏｒｂａｘ  ＳＢ−Ｃ８カラム［Ａｇｉｌｅｎｔ］，厚さ３．５μ，溶離剤メタノール，検出３５０ｎｍ）：ｔR  ２．６８分（リポ酸レチニル）；ｔR  ２．３２分（酢酸レチニル）；ｔR  ２．０８分（レチノール）。
【００６４】
例３１
Ａｍｂｅｒｌｙｓｔ  Ａ−２１の存在下における４−フェニル酪酸レチニルの製造
酢酸レチニル（２５０ｍｇ；０．７６ミリモル）及び４−フェニル酪酸（１２５ｍｇ；０．７６ミリモル；１．０当量）を乾燥したＡｍｂｅｒｌｙｓｔ  Ａ−２１（１２５ｍｇ）と合した。トルエン（２．５ｍＬ）を加え、Ｎｏｖｏｚｙｍｅ  ４３５  １２０ｍｇを加えた。反応混合物を室温において２１時間撹拌し、その時点でサンプルを取り出し、ＨＰＬＣによって分析した。４−フェニル酪酸レチニルへの転化率は６７．８％であり、酢酸レチニルが２４．３％及びレチノールが７．８％であることが示された。Ａｍｂｅｒｌｙｓｔ  Ａ−２１を用いない対応する反応では、転化率が５０．４％であった。
【００６５】
ＨＰＬＣ（４．６×１５０ｍｍ  Ｚｏｒｂａｘ  ＳＢ−Ｃ８カラム［Ａｇｉｌｅｎｔ］，厚さ３．５μ，溶離剤メタノール，検出３５０ｎｍ）：ｔR  ２．５６分（４−フェニル酪酸レチニル）；ｔR  ２．３２分（酢酸レチニル）；ｔR  ２．０８分（レチノール）。
【００６６】
例３２
Ａｍｂｅｒｌｙｓｔ  Ａ−２１の存在下におけるシクロヘキシル酢酸レチニルの製造
酢酸レチニル（５００ｍｇ；１．５２ミリモル）及びシクロヘキシル酢酸（２１６ｍｇ；１．５２ミリモル；１．０当量）を乾燥したＡｍｂｅｒｌｙｓｔ  Ａ−２１（０．２５ｇ）と合した。トルエン（３．５ｍＬ）を加え、Ｎｏｖｏｚｙｍｅ  ４３５  １２０ｍｇを加えた。反応混合物を室温において１８時間撹拌し、その時点でサンプルを取り出し、ＨＰＬＣによって分析した。シクロヘキシル酢酸レチニルへの転化率は６４．６％であり、酢酸レチニルが３３．５％及びレチノールが１．８％であることが示された。Ａｍｂｅｒｌｙｓｔ  Ａ−２１を用いない対応する反応では、転化率が４４．２％であった。
【００６７】
ＨＰＬＣ（４．６×１５０ｍｍ  Ｚｏｒｂａｘ  ＳＢ−Ｃ８カラム［Ａｇｉｌｅｎｔ］，厚さ３．５μ，８０：２０のメタノール：水（０．１％ＴＦＡ）で１５分間溶離，１０分にわたる１００％メタノールまでの勾配，１００％メタノールに５分間保持，３５０ｎｍで検出）：ｔR  ２６．１分（シクロヘキシル酢酸レチニル）；ｔR  ２１．１分（酢酸レチニル）；ｔR  １１．８分（レチノール）。
【００６８】
例３３
Ａｍｂｅｒｌｙｓｔ  Ａ−２１の存在下におけるフェニル酢酸レチニルの製造
酢酸レチニル（５００ｍｇ；１．５２ミリモル）及びフェニル酢酸（２０７ｍｇ；１．５２ミリモル；１．０当量）を乾燥したＡｍｂｅｒｌｙｓｔ  Ａ−２１（０．２５ｇ）と合した。トルエン（３．５ｍＬ）を加え、Ｎｏｖｏｚｙｍｅ  ４３５  １２０ｍｇを加えた。反応混合物を室温において１９時間撹拌し、その時点でサンプルを取り出し、ＨＰＬＣによって分析した。フェニル酢酸レチニルへの転化率は５８．５％であり、酢酸レチニルが４０．０％及びレチノールが１．６％であることが示された。Ａｍｂｅｒｌｙｓｔ  Ａ−２１を用いない対応する反応では、転化率が２８．７％であった。
【００６９】
ＨＰＬＣ（４．６×１５０ｍｍ  Ｚｏｒｂａｘ  ＳＢ−Ｃ８カラム［Ａｇｉｌｅｎｔ］，厚さ３．５μ，溶離剤メタノール，検出３５０ｎｍ）：ｔR  ４．６７分（フェニル酢酸レチニル）；ｔR  ２．３２分（酢酸レチニル）；ｔR  ２．０８分（レチノール）。
【００７０】
例３４
Ｎ−Ｂｏｃ  ３−インドール酪酸レチニルの製造
酢酸レチニル（３３ｍｇ；０．１０ミリモル）及びＮ−Ｂｏｃインドール−３−酪酸（３１ｍｇ；０．１０ミリモル；１．０当量）を合した。トルエン（３．５ｍＬ）を加え、Ｎｏｖｏｚｙｍｅ  ４３５  １２０ｍｇを加えた。反応混合物を５０℃において４日間撹拌し、その時点でサンプルを取り出し、ＨＰＬＣによって分析した。Ｎ−Ｂｏｃ  ３−インドール酪酸レチニルへの転化率は５０．６％であり、酢酸レチニルが４４．８％及びレチノールが４．６％であることが示された。
【００７１】
ＨＰＬＣ（４．６×１５０ｍｍ  Ｚｏｒｂａｘ  ＳＢ−Ｃ８カラム［Ａｇｉｌｅｎｔ］，厚さ３．５μ，８０：２０のメタノール：水（０．１％ＴＦＡ）で１５分間溶離，１０分にわたる１００％メタノールまでの勾配，１００％メタノールに５分間保持，３５０ｎｍで検出）：ｔR  ２６．７分（Ｎ−Ｂｏｃ  ３−インドール酪酸レチニル）；ｔR  ２１．１分（酢酸レチニル）；ｔR  １１．８分（レチノール）。
【００７２】
例３５
ピメリン酸レチニルの製造
酢酸レチニル（５００ｍｇ；１．５２ミリモル）及びピメリン酸（４８８ｍｇ；３．０４ミリモル；２．０当量）を合した。トルエン（５．０ｍＬ）を加え、Ｎｏｖｏｚｙｍｅ  ４３５  １２０ｍｇを加えた。反応混合物を室温において２日間撹拌し、その時点でサンプルを取り出し、ＨＰＬＣによって分析した。ピメリン酸レチニルとピメリン酸ジレチニルとの混合物への転化率は３６．５％であり、酢酸レチニルが６１．８％及びレチノールが１．８％であることが示された。
【００７３】
ＨＰＬＣ（４．６×１５０ｍｍ  Ｚｏｒｂａｘ  ＳＢ−Ｃ８カラム［Ａｇｉｌｅｎｔ］，厚さ３．５μ，８０：２０のメタノール：水（０．１％ＴＦＡ）で１５分間溶離，１０分にわたる１００％メタノールまでの勾配，１００％メタノールに５分間保持，３５０ｎｍで検出）：ｔR  ２０．３，２９．０分（ピメリン酸レチニル及びピメリン酸ジレチニル）；ｔR  ２１．１分（酢酸レチニル）；ｔR  １１．８分（レチノール）。
【００７４】
本発明を特にその好ましい実施態様に関して詳述したが、本発明の精神及び範囲内で変更及び修正が可能なことがわかるであろう。
以下に、本発明の態様を列挙する。
態様１．式２：
【化１】
0005474556.tif 000006
［式中、Ｒ4は水素、Ｃ1〜Ｃ4アルキル基及びＣ2〜Ｃ4アルケニル基からなる群から選ばれる］
の短鎖レチニルエステルを、有機溶媒及び酵素の存在下に、長鎖酸又は長鎖エステルと反応させて、長鎖レチニルエステルを形成させることを含んでなる長鎖レチニルエステルの製造方法。
態様２．前記Ｃ1〜Ｃ4アルキル基がメチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、ｎ−ブチル、ｉ−ブチル及びｓ−ブチルの少なくとも１つを含む態様１に記載の方法。
態様３．前記Ｃ2〜Ｃ4アルケニル基がビニル、１−プロペニル、１−イソプロペニル及び１−ブテニルの少なくとも１つを含む態様１に記載の方法。
態様４．Ｒがメチル又はエチルである態様１に記載の方法。
態様５．Ｒがメチルである態様１に記載の方法。
態様６．前記短鎖レチニルエステルが純粋な形態で又は稀釈剤中に存在する態様１に記載の方法。
態様７．前記希釈剤が植物油であり且つ０〜９０％の量で存在する態様６に記載の方法。
態様８．前記方法を、エーテル溶媒、炭化水素溶媒、極性非プロトン性溶媒及びこれらの混合物からなる群から選ばれる不活性溶媒中で実施する態様１に記載の方法。
態様９．前記エーテル溶媒がジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテル、ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル、テトラヒドロフラン及びこれらの混合物からなる群から選ばれる態様８に記載の方法。
態様１０．前記炭化水素溶媒がベンゼン、トルエン、キシレン、ヘキサン、ヘプタン、シクロヘキサン、リモネン、ジクロロメタン、ジクロロエタン、ジブロモエタン、テトラクロロエチレン、クロロベンゼン及びこれらの混合物からなる群から選ばれる態様８に記載の方法。
態様１１．前記極性非プロトン性溶媒がアセトニトリル、ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド及びこれらの混合物からなる群から選ばれる態様８に記載の方法。
態様１２．前記方法を約−１００℃〜前記溶媒の沸点の間の温度で実施する態様１に記載の方法。
態様１３．前記温度が約０〜６０℃である態様１２に記載の方法。
態様１４．前記温度が約２０〜５０℃である態様１３に記載の方法。
態様１５．前記長鎖酸又は長鎖エステルが、前記短鎖レチニルエステルの量に基づき、約０．８５〜２０当量の量で存在する態様１に記載の方法。
態様１６．前記長鎖酸又は長鎖エステルが、前記短鎖レチニルエステルの量に基づき、約１．０〜１０当量の量で存在する態様１５に記載の方法。
態様１７．前記酵素がプロテアーゼ、リパーゼ、ホスホリパーゼ及びエステラーゼからなる群から選ばれる態様１に記載の方法。
態様１８．前記リパーゼがホールセル中に存在するものか、単離天然酵素であるか又は担体に固定化されたものである態様１７に記載の方法。
態様１９．前記方法をモレキュラーシーブ及びイオン交換樹脂の少なくとも１つの存在下に実施する態様１に記載の方法。
態様２０．前記モレキュラーシーブが有機親和性モレキュラーシーブである態様１９に記載の方法。
態様２１．前記イオン交換樹脂が塩基性イオン交換樹脂である態様１９に記載の方法。
態様２２．前記塩基性イオン交換樹脂が、前記短鎖レチニルエステルの量に基づき、１０〜１０００重量％の量で存在する態様２１に記載の方法。
態様２３．抽出、クロマトグラフィー、蒸留又は結晶化によって前記レチニルエステルを単離することを更に含む態様１に記載の方法。
態様２４．短鎖レチニルエステルを、有機溶媒及び酵素の存在下に、長鎖酸又は長鎖エステルと反応させて、長鎖レチニルエステルを形成させることを含んでなる、一般式１：
【化２】
0005474556.tif 000007
［式中、ＲはＣ4〜Ｃ24アルキル、Ｃ4〜Ｃ24アルケニル、Ｃ4〜Ｃ24ジエニル、Ｃ6〜Ｃ24トリエニル、Ｃ8〜Ｃ24テトラエニル、Ｃ3〜Ｃ8シクロアルキル、Ｃ6〜Ｃ20炭素環式アリール及びＣ4〜Ｃ20ヘテロアリール（ここでヘテロアリールは硫黄、窒素及び酸素の少なくとも１つを含む）からなる群から選ばれる少なくとも１つである］
で表される長鎖レチニルエステルの製造方法。
態様２５．前記アルキル、アルケニル、ジエニル、トリエニル、テトラエニル又はシクロアルキルがＣ1〜Ｃ6−アルコキシ、シアノ、Ｃ2〜Ｃ6−アルコキシカルボニル、Ｃ2〜Ｃ6−アルカノイルオキシ、ヒドロキシ、アリール、ヘテロアリール、チオール、チオエーテル、ジスルフィド及びハロゲンから選ばれた１〜３個の基で置換されている態様２４に記載の方法。
態様２６．前記炭素環式アリールがフェニル、ナフチル及びアントラセニルの少なくとも１つを含む態様２４に記載の方法。
態様２７．前記フェニル、ナフチル又はアントラセニルがＣ1〜Ｃ6−アルキル、置換Ｃ1〜Ｃ6−アルキル、Ｃ6〜Ｃ10アリール、置換Ｃ6〜Ｃ10アリール、Ｃ1〜Ｃ6−アルコキシ、ハロゲン、カルボキシ、シアノ、Ｃ1〜Ｃ6−アルカノイルオキシ、Ｃ1〜Ｃ6−アルキルチオ、Ｃ1〜Ｃ6−アルキルスルホニル、トリフルオロメチル、ヒドロキシ、Ｃ2〜Ｃ6−アルコキシカルボニル、Ｃ2〜Ｃ6−アルカノイルアミノ並びに−Ｏ−Ｒ3、Ｓ−Ｒ3、−ＳＯ2−Ｒ3、−ＮＨＳＯ2Ｒ3及び−ＮＨＣＯ2Ｒ3（ここでＲ3はフェニル若しくはナフチル、又はＣ1〜Ｃ6−アルキル、Ｃ6〜Ｃ10アリール、Ｃ1〜Ｃ6−アルコキシ及びハロゲンから選ばれた１〜３個の基で置換されたフェニル若しくはナフチルである）から選ばれた１〜３個の置換基で置換されている態様２６に記載の方法。
態様２８．前記へテロリールが酸素、硫黄及び窒素から選ばれた１〜３個のヘテロ原子を含む５又は６員芳香環の少なくとも１つを含む態様２４に記載の方法。
態様２９．前記へテロアリールがチエニル、フリル、ピロリル、イミダゾリル、ピラゾリル、チアゾリル、イソチアゾリル、オキサゾリル、イソキサゾリル、トリアゾリル、チアジアゾリル、オキサジアゾリル、テトラゾリル、ピリジル、ピリミジル、ベンゾオキサゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾイミダゾリル及びインドリルのうち少なくとも１つを含む態様２８に記載の方法。
態様３０．前記方法を、エーテル溶媒、炭化水素溶媒、極性非プロトン性溶媒及びこれらの混合物からなる群から選ばれる不活性溶媒中で実施する態様２４に記載の方法。
態様３１．前記エーテル溶媒がジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテル、ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル、テトラヒドロフラン及びこれらの混合物からなる群から選ばれる態様３０に記載の方法。
態様３２．前記炭化水素溶媒がベンゼン、トルエン、キシレン、ヘキサン、ヘプタン、シクロヘキサン、リモネン、ジクロロメタン、ジクロロエタン、ジブロモエタン、テトラクロロエチレン、クロロベンゼン及びこれらの混合物からなる群から選ばれる態様３０に記載の方法。
態様３３．前記極性非プロトン性溶媒がアセトニトリル、ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド及びこれらの混合物からなる群から選ばれる態様３０に記載の方法。
態様３４．前記方法を約−１００℃〜前記溶媒の沸点の温度で実施する態様２４に記載の方法。
態様３５．前記温度が約０〜６０℃である態様３４に記載の方法。
態様３６．前記温度が約２０〜５０℃である態様３５に記載の方法。
態様３７．前記長鎖酸又は長鎖エステルが、前記短鎖レチニルエステルの量に基づき、約０．８５〜２０当量の量で存在する態様２４に記載の方法。
態様３８．前記長鎖酸又は長鎖エステルが、前記短鎖レチニルエステルの量に基づき、約１．０〜１０当量の量で存在する態様３７に記載の方法。
態様３９．前記酵素がプロテアーゼ、リパーゼ、ホスホリパーゼ及びエステラーゼからなる群から選ばれる態様２４に記載の方法。
態様４０．前記リパーゼがホールセル中に存在するものか、単離天然酵素であるか又は担体に固定化されたものである態様３９に記載の方法。
態様４１．前記方法をモレキュラーシーブ及びイオン交換樹脂の少なくとも１つの存在下に実施する態様２４に記載の方法。
態様４２．前記モレキュラーシーブが有機親和性モレキュラーシーブである態様４１に記載の方法。
態様４３．前記イオン交換樹脂が塩基性イオン交換樹脂である態様４１に記載の方法。
態様４４．前記塩基性イオン交換樹脂が、前記短鎖レチニルエステルの量に基づき、１０〜１０００重量％の量で存在する態様４３に記載の方法。
態様４５．抽出、クロマトグラフィー、蒸留又は結晶化によって前記レチニルエステルを単離することを更に含む態様２４に記載の方法。