(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
レツサプルプリンＡの製造方法において、
原料としてのツルサイカチ属を起源植物として作られるプロポリス原塊から抽出溶媒を用いて抽出処理する工程を備えるレツサプルプリンＡの製造方法。
【請求項２】
前記レツサプルプリンＡは、下記一般式（１）〜（５）から選ばれる少なくとも一種である請求項１に記載のレツサプルプリンＡの製造方法。
【化１】
0005478392.tif 000013
【化２】
0005478392.tif 000014
【化３】
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【化４】
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【化５】
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【請求項３】
前記抽出処理する工程の後に、さらにクロマトグラフィを用いて分離処理する工程を備える請求項１又は請求項２に記載のレツサプルプリンＡの製造方法。
【請求項４】
原料としてのツルサイカチ属を起源植物として作られるプロポリス原塊から抽出溶媒を用いて得られたプロポリス抽出物の評価方法において、レツサプルプリンＡを指標とすることを特徴とするプロポリス抽出物の評価方法。
【請求項５】
原料としてのツルサイカチ属を起源植物として作られるプロポリス原塊から抽出溶媒を用いてレツサプルプリンＡを含有するプロポリス抽出物を得る工程、次に該抽出物中の抽出成分について、１又は２以上のクロマトグラフィを用いて分離する工程、次にレツサプルプリンＡを検出する工程からなる請求項４に記載のプロポリス抽出物の評価方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、例えば特定の植物を起源植物として作られた赤色プロポリス原塊から得られるレツサプルプリンＡの製造方法及びレツサプルプリンＡを用いた赤色プロポリス抽出物の評価方法に関する発明である。
【背景技術】
【０００２】
プロポリスは、巣の防御及び補強等を目的として、ミツバチが採取した植物の滲出液、新芽、及び樹脂等にミツロウを混ぜて作られる膠状ないしは蝋状の物質である。このプロポリスは、ミツバチが原料として巣箱周辺の種々の植物を採取して生産されるため、多種多様な成分を含有している。
【０００３】
プロポリスは、抗菌効果や抗炎症効果を有していることが古くから知られている。また、プロポリスの主要な生理活性として、抗酸化作用及び免疫賦活作用が知られている。そのため、プロポリスは、医薬品或いは健康食品の素材として古くから用いられてきた。プロポリス中に含まれる有効成分としては、極性の高い有機酸、フラボノイド類、ポリフェノール類、さらには極性の低いテルペノイド類等の非常に多様な種類の有効成分が確認されている。
【０００４】
ところで、プロポリスの産地としては、例えば中国、ブラジル、アルゼンチン、ウルグアイ等の南米諸国、ハンガリー、ブルガリア等のヨーロッパ、カナダ等の北米、オーストラリア、ニュージーランド等のオセアニアが産地となっている。近年、非特許文献１に開示されるように多くの研究者により産地別プロポリスの含有成分の相違に関する研究が進められている。これらの産地ごとにおける成分の相違は起源植物の種類によって異なってくるものと考えられている。例えば、特許文献１に開示されるように、ブラジル産プロポリスの中でも、例えばＳｔｒｙｐｈｎｏｄｅｎｄｒｏｎ．ａｄｓｔｒｉｎｇｅｎｓ等を主要起源植物として作られるプロポリスは、原塊又は抽出物が赤色であることが知られている。この赤色プロポリスは、ブラジル産の黄色プロポリスと比べて、例えば抗酸化作用や抗菌作用が優れることが確認されている。赤色プロポリスにおけるこれらの優れた生理作用は、赤色色素成分が関係しているものと考えられている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】国際公開第２００６／０３８６９０号
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】田澤茂実ら：生薬学雑誌、５４（６）,３０６−３１３,２０００
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、ブラジル産の赤色プロポリスの中でも、ツルサイカチ属（ダルベルジア（Ｄａｌｂｅｒｇｉａ））を起源植物として作られるプロポリス原塊から赤色色素成分として、これまでプロポリス原塊中に含有されていることが知られていなかったレツサプルプリンＡを得たことに基づくものである。
【０００８】
本発明の目的とするところは、例えば、飲食品及び化粧品等の分野に適用することができるレツサプルプリンＡの製造方法及びプロポリス抽出物の評価方法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
上記目的を達成するために、請求項１に記載の発明のレツサプルプリンＡの製造方法は、原料としてのツルサイカチ属を起源植物として作られるプロポリス原塊から抽出溶媒を用いて抽出処理する工程を備える。
【００１０】
請求項２に記載の発明は、請求項１に記載のレツサプルプリンＡの製造方法において、前記レツサプルプリンＡは、下記一般式（１）〜（５）から選ばれる少なくとも一種である。
【００１１】
【化１】
0005478392.tif 000002
【００１２】
【化２】
0005478392.tif 000003
【００１３】
【化３】
0005478392.tif 000004
【００１４】
【化４】
0005478392.tif 000005
【００１５】
【化５】
0005478392.tif 000006
請求項３に記載の発明は、請求項１又は請求項２に記載のレツサプルプリンＡの製造方法において、前記抽出処理する工程の後に、さらにクロマトグラフィを用いて分離処理する工程を備える。
【００１６】
請求項４に記載の発明は、原料としてのツルサイカチ属を起源植物として作られるプロポリス原塊から抽出溶媒を用いて得られたプロポリス抽出物の評価方法おいて、レツサプルプリンＡを指標とすることを特徴とする。
【００１７】
請求項５に記載の発明は、請求項４に記載のプロポリス抽出物の評価方法において、原料としてのツルサイカチ属を起源植物として作られるプロポリス原塊から抽出溶媒を用いてレツサプルプリンＡを含有するプロポリス抽出物を得る工程、次に該抽出物中の抽出成分について、１又は２以上のクロマトグラフィを用いて分離する工程、次にレツサプルプリンＡを検出する工程からなる。
【発明の効果】
【００１８】
本発明によれば、例えば、飲食品及び化粧品等の分野に適用することができるレツサプルプリンＡの製造方法及びプロポリス抽出物の評価方法を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１９】
【図１】赤色プロポリス原塊中の赤色色素成分について、エレクトロスプレーイオン化質量分析法（ＥＳＩ−ＭＳ）を用いた質量分析の結果を示すデータ。（ａ）Ｐｏｓｉｔｉｖｅモードの場合、（ｂ）Ｎｅｇａｔｉｖｅモードの場合を示す。
【図２】赤色プロポリス原塊中の赤色色素成分について、紫外・可視光スペクトル（ＵＶ／ｖｉｓ）の測定結果を示すデータ。
【図３】赤色プロポリス原塊中の赤色色素成分について、赤外線吸収スペクトル（ＩＲ）の測定結果を示すデータ。
【図４】赤色プロポリス原塊中の赤色色素成分について、１Ｈ−ＮＭＲスペクトルの測定結果を示すデータ。
【図５】赤色プロポリス原塊中の赤色色素成分について、１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルの測定結果を示すデータ。
【発明を実施するための形態】
【００２０】
（第１実施形態）
以下、本発明のレツサプルプリンＡの製造方法を具体化した第１実施形態を説明する。
本実施形態のレツサプルプリンＡの製造方法は、原料としてのツルサイカチ属を起源植物として作られるプロポリス原塊から抽出溶媒を用いて抽出処理する工程を備えてなる。さらに、好ましくは、抽出処理する工程の後に、さらにクロマトグラフィを用いて分離処理する工程を備える。レツサプルプリンＡは、下記一般式（１）〜（５）から選ばれる少なくとも一種の構成を有する化合物である。
【００２１】
【化６】
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一般式（１）に示されるレツサプルプリンＡは、６−（３，４−ジヒドロ−７−メトキシ−２Ｈ−１−ベンゾピラン−３−イル）−４−（４−ヒドロキシフェニル）−２−（４−ヒドロキシ−２−メトキシフェニル）−７Ｈ−１−ベンゾピラン−７−オン（Ｃ32Ｈ26Ｏ7、分子量５２２．５４）である。
【００２２】
【化７】
0005478392.tif 000008
一般式（２）に示されるレツサプルプリンＡは、６−（３，４−ジヒドロ−７−メトキシ−２Ｈ−１−ベンゾピラン−３−イル）−４−（４−ヒドロキシフェニル）−２−（４−ヒドロキシ−２−メトキシフェニル）−７−ヒドロキシ−１−ベンゾピルリウム（Ｃ32Ｈ27Ｏ7+、分子量５２３．５５）である。一般式（２）に示されるレツサプルプリンＡは、一般式（１）に示されるレツサプルプリンＡを酸性条件下（酸性水溶液中）にすると得られる構造である。一般式（１）に示されるレツサプルプリンＡについて、その構造式からｐＨ等の諸条件によっては、下記一般式（３）〜（５）に示される化合物にも変化するものと推認される。
【００２３】
【化８】
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【００２４】
【化９】
0005478392.tif 000010
【００２５】
【化１０】
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上記レツサプルプリンＡは、主にブラジルで生息するマメ科のツルサイカチ属（ダルベルジア（Ｄａｌｂｅｒｇｉａ））を起源植物として作られる赤色プロポリス原塊から得られる。ツルサイカチ属として、より具体的にはダルベルジア．エカストフィラム（Ｄａｌｂｅｒｇｉａ．ｅｃａｓｔｏｐｈｙｌｌｕｍ：現地名ハーボ・デ・ブジオ）が挙げられる。このレツサプルプリンＡは、赤色ポリフェノール化合物であり、赤色プロポリス原塊の赤色色素成分を構成する。例えば、主にブラジルで生息するＳｔｒｙｐｈｎｏｄｅｎｄｒｏｎ．ａｄｓｔｒｉｎｇｅｎｓを主要起源植物として作られる赤色プロポリスは、他のブラジル産の黄色プロポリスと比べて、例えば抗酸化作用や抗菌作用が優れることが確認されている。赤色プロポリスにおけるこれらの優れた生理作用は、赤色色素成分であるレツサプルプリンＡが関係しているものと考えられている。本実施形態の製造対象であるレツサプルプリンＡは、ポリフェノール骨格を有することから優れた抗酸化作用を発揮することが期待される。したがって、本実施形態の製造方法により得られるレツサプルプリンＡは、例えば飲食品及び化粧品の分野において有効利用できるものと期待される。
【００２６】
尚、ツルサイカチ属の植物の枝、樹皮等から、赤色色素としてのレツサプルプリンＡを直接入手することはできない。赤色色素は、主に穿孔虫（幼虫）がツルサイカチ属の植物の心材を捕食、接触することで産生される生体防御物質（ファイトアレキシン）が樹液として滲み出たものを、ミツバチがかじり取り、巣箱に持ち帰って作った赤色プロポリス中に存在する。レツサプルプリンＡは、ツルサイカチ属の植物のカルスから得られることが知られているが、カルスの製造及び入手は困難である。
【００２７】
レツサプルプリンＡは、ツルサイカチ属を起源植物として作られるプロポリス原塊中に存在するため、ツルサイカチ属の植物を起源植物として含有するプロポリス原塊を抽出原料として用い、分離・精製処理することにより、入手することができる。プロポリス原塊中の起源植物にツルサイカチ属を含有させるためは、例えばプロポリス採集用に工夫されたミツバチの巣箱をマングローブ林に程近い場所及び野生の群生地等に配置することにより達成することができる。セイヨウミツバチの蜜及び花粉やプロポリスの原料を採取する範囲は数キロ（半径約２〜５キロ以内）であるためその範囲内をツルサイカチ属で占めることが好ましい。ツルサイカチ属を起源植物として作られるプロポリス原塊は、目視において赤色を呈することが好ましい。赤色ポリフェノール化合物としてのレツサプルプリンＡは、プロポリス原塊中の赤色色素成分を構成するからである。
【００２８】
赤色ポリフェノール化合物としてのレツサプルプリンＡは、抽出溶媒を用いてプロポリス原塊の抽出原料から溶媒抽出物としてのプロポリス抽出物を得る工程、好ましくは、次に該溶媒抽出物を１又は２以上のクロマトグラフィを用いて分離する工程を経ることにより、精製物を入手することができる。
【００２９】
抽出溶媒としては、有機溶媒又は水／有機溶媒の混合液が用いられる。赤色ポリフェノール化合物としてのレツサプルプリンＡは比較的極性が低いため、抽出溶媒として極性の低い有機溶媒を適用することが好ましい。本実施形態において用いられる有機溶媒としては、水に溶解する性質を有するエタノール、メタノール、イソプロパノール等の低級アルコールのほか、アセトンやエーテル類、クロロホルムを適宜選択して使用することができる。これらの有機溶媒を単独で使用してもよく、２種以上を組み合わせて使用してもよい。これらの中でレツサプルプリンＡをより効率よく抽出することができるエタノール又はメタノール、クロロホルム、及びそれらの混合液が好ましく適用される。
【００３０】
前記溶媒を用いて抽出する場合、抽出処理前に採取時に混入するゴミ等の夾雑物を除去し、粗粉砕することが好ましい。抽出溶媒として有機溶媒を適用する場合、有機溶媒の使用容量は、抽出原料の質量に対して好ましくは１〜２０倍量、より好ましくは３〜１０倍量である。有機溶媒の使用容量が１倍量未満の場合には、目的成分の抽出率が悪いので好ましくない。逆に有機溶媒の使用容量が２０倍量を超える場合には、不必要に大きな装置が必要となるばかりでなく、濃縮等の工程に時間を要し、作業性が著しく低下するので好ましくない。抽出温度は抽出溶媒の種類のより適宜設定されるが、５〜４０℃であることが好ましい。抽出温度が５℃未満の場合には、有効成分の抽出率が悪いので好ましくない。逆に抽出温度が４０℃を超える場合には、ロウ成分が抽出されて、抽出後の濾過性が悪くなるおそれがある。また、揮発性の高い抽出溶媒の場合、溶媒が蒸発するため好ましくない。なお、抽出操作は、前記抽出温度で攪拌しながら所定時間、例えば４時間以上行えばよい。そして、上記の抽出条件で有効成分を十分に抽出した後、濾紙濾過、珪藻土濾過などの濾過処理を行なうことにより有機溶媒抽出物を得ることができる。
【００３１】
次に、前記溶媒抽出物から１又は２以上のクロマトグラフィを用いることにより、赤色ポリフェノール化合物としてのレツサプルプリンＡが分離・精製される。クロマトグラフィとしては、公知のクロマトグラフィ、例えばガスクロマトグラフィ、液体クロマトグラフィ、超臨界流体クロマトグラフィ、及び薄層クロマトグラフィを用いることができる。液体クロマトグラフィとしては、例えばカラムクロマトグラフィを用いることができ、より具体的には高速液体クロマトグラフィ（ＨＰＬＣ）及びオープンカラムクロマトグラフィを挙げることができる。クロマトグラフィ担体としては、例えば、イオン交換クロマトグラフィ、分配クロマトグラフィ（順相・逆相クロマトグラフィ）、吸着クロマトグラフィ、及び分子排斥クロマトグラフィが挙げられる。分配クロマトグラフィとして、より具体的にはシリカゲル担体やＯＤＳ担体を用いることが抽出成分の分離効率が優れる観点から好ましい。それらを適宜組み合わせて、公知の使用方法で目的成分を精製することができる。
【００３２】
上記のように得られた赤色ポリフェノール化合物としてのレツサプルプリンＡは、プロポリスに含有されていることがこれまで確認されていなかった新規な赤色色素成分であり、例えば飲食品及び化粧品等の各種分野に好ましく適用することができる。
【００３３】
第１の実施形態の赤色ポリフェノール化合物としてのレツサプルプリンＡの製造方法によれば、以下のような効果を得ることができる。
（１）本実施形態のレツサプルプリンＡの製造方法は、これまでレツサプルプリンＡが含有されていることが知られていなかったプロポリス原塊から得たものである。レツサプルプリンＡは、ツルサイカチ属を起源植物として作られる赤色プロポリス原塊の赤色色素成分であり、優れた生理活性作用を有すると推認される。したがって、プロポリス原塊から得られたレツサプルプリンＡは、例えば飲食品及び化粧品等の各種分野に好適に使用することができる。
【００３４】
（２）また、本実施形態のレツサプルプリンＡの製造方法は、赤色プロポリス原塊から抽出することができる。したがって、容易且つ安定的に原料を入手することができる。また、得られたレツサプルプリンＡは、安全に各種用途に適用することができる。
【００３５】
（３）好ましくは、赤色ポリフェノール化合物としてのレツサプルプリンＡは、ツルサイカチ属を起源植物として作られるプロポリス原塊を抽出原料として、抽出溶媒を用いて得られた抽出物を、さらにクロマトグラフィを用いて分離・精製することにより得ることができる。したがって、安価に精製物を入手することができる。
【００３６】
（４）好ましくは、抽出溶媒として有機溶媒が用いられる。したがって、効率的に赤色ポリフェノール化合物としてのレツサプルプリンＡを抽出することができる。
（５）赤色ポリフェノール化合物としてのレツサプルプリンＡは、プロポリスの赤色色素成分である。したがって、例えば、天然物由来の着色料・顔料として適用することができる。
【００３７】
なお、上記実施形態は以下のように変更してもよい。
・上記実施形態において、抽出原料としてツルサイカチ属以外の起源植物が混合されたプロポリス原塊を使用してもよい。プロポリス原塊中に少なくとも起源植物としてツルサイカチ属が含有されていれば、抽出原料として使用することができる。かかる抽出原料を使用した場合に得られる抽出物においてもレツサプルプリンＡが含有されているものと思料される。
【００３８】
・上記プロポリス抽出物を得た後の抽出残渣に、さらに抽出溶媒を添加して抽出処理してもよい。抽出残渣を再利用することにより、回収率を高めることができる。
・上記実施形態の方法により得られる赤色ポリフェノール化合物としてのレツサプルプリンＡは、ヒトが摂取する飲食品又は化粧品等に対して適用することができるのみならず、家畜等の飼養動物に対する飼料、薬剤等に適用してもよい。また、飲食品又は化粧品のみならず、雑貨、日用品に適用してもよい。
【００３９】
（第２の実施形態）
以下、本発明のプロポリス抽出物の評価方法を具体化した第２の実施形態を説明する。
本実施形態のプロポリス抽出物の評価方法は、原料としてのツルサイカチ属を起源植物として作られるプロポリス原塊から抽出溶媒を用いて得られたプロポリス抽出物の評価方法において、レツサプルプリンＡを指標とすることを特徴とする。レツサプルプリンＡを指標とするとは、例えばプロポリス抽出物中におけるレツサプルプリンＡの存在の有無、含有量、及び特定成分に対する含有比率等を求めることによりプロポリス抽出物の品質を確認することをいう。
【００４０】
より具体的には、まず原料としてのツルサイカチ属を起源植物として作られるプロポリス原塊から抽出溶媒を用いてプロポリス抽出物を得る工程が行われる。次に、抽出物中の抽出成分について、１又は２以上のクロマトグラフィを用いて分離する工程が行われ、最後に、レツサプルプリンＡを検出する工程が行われる。プロポリス原塊から抽出溶媒を用いてプロポリス抽出物を得る工程、及び抽出物中の抽出成分について、クロマトグラフィを用いて分離する工程は、第１の実施形態に記載される方法を適宜採用することができる。
【００４１】
第１の実施形態において示されるレツサプルプリンＡを検出する工程は、各クロマトグラフィにより分離された成分について、公知の方法を用いて定性することにより行われる。例えば、分離された成分は、核磁気共鳴装置等を用いて構造決定を行なうことにより定性することができる。また、予め成分が同定された精製品と比較することにより定性・定量することができる。また、第１の実施形態において示されるレツサプルプリンＡは、紫外・可視光スペクトルにおいて、２８９ｎｍ，３８０ｎｍ，５１１ｎｍに極大吸収を有することから、分光光度計を使用することにより目的成分を検出することができる。また、抽出成分の分離手段として薄層クロマトグラフィを用いる場合、発色試薬として、例えば硫酸、ドラーゲンドルフ、トリテルペン発色試薬、塩化第二鉄、ブロモクレゾールグリーン等を使用することにより、成分パターンを可視化し、Ｒｆ値から定性することもできる。
【００４２】
第２の実施形態のプロポリス抽出物の評価方法によれば、以下のような効果を得ることができる。
（１）本実施形態のプロポリス抽出物の評価方法は、ツルサイカチ属を起源植物として作られるプロポリス原塊を抽出原料として、該抽出原料から抽出溶媒を用いて得られた抽出物の確認作業において、レツサプルプリンＡを指標とするものである。
【００４３】
ところで、プロポリス原塊は、そのままの状態で摂取するのは極めて困難であることから、従来より、例えば親水性有機溶媒を用いた抽出方法、水を用いた抽出方法、及び超臨界抽出法により、プロポリス原塊に含まれる有用成分が抽出され、該抽出物が各種用途に適用されている。従来より、例えば親水性有機溶媒を用いて抽出された抽出物の確認作業は、全ての抽出成分を分離し、定性及び定量することは困難であることから、主要抽出成分であるｐ−クマル酸、ケルセチン、又は桂皮酸誘導体等を指標として、その化合物を検出することにより確認が行なわれていた。また、水を用いて抽出された抽出物は、主要抽出成分であるクロロゲン酸類等を指標として、その化合物を検出することにより確認が行なわれていた。
【００４４】
本発明において、ツルサイカチ属を起源植物として作られる赤色プロポリス原塊から、その特徴成分である赤色色素成分としてのレツサプルプリンＡを精製・同定した。したがって、かかるレツサプルプリンＡを指標成分として、ツルサイカチ属を起源植物として作られる赤色プロポリス原塊から得られた溶媒抽出物の確認作業を行うことができる。
【００４５】
（２）本実施形態のプロポリス抽出物の評価方法は、ツルサイカチ属を起源植物として作られる赤いプロポリス原塊自体、又はそこから抽出されたレツサプルプリンＡを販売する際に、レツサプルプリンＡの含有の有無又は含有量を確認する際に適用することができる。また、ツルサイカチ属を起源植物として作られる赤いプロポリス原塊の製品、又はそこから抽出されたレツサプルプリンＡの製品において、レツサプルプリンＡの含有又は所定含有量を規格・保証する場合、その製品の規格・保証の確認工程において適用することができる。
【００４６】
（３）本実施形態のプロポリス抽出物の評価方法として、プロポリス抽出物中にレツサプルプリンＡが含有していることを確認することにより、赤いプロポリスがツルサイカチ属を起源植物として構成されていることを証明することができる。また、プロポリス抽出物中におけるサプルプリンＡの含有量を測定することにより、プロポリス原料中の赤の色調、及び上記構成起源植物の純度（比率）を推認することができる。また、一般的に、ツルサイカチ属は、マメ科でありブラジル産の赤いプロポリスの有効成分とされるイソフラボン類（イソフラバン）が多く含まれていることが知られている。プロポリス抽出物中におけるレツサプルプリンＡの含有量を求めることにより、イソフラボン類（イソフラバン）の存在の有無を確認したり、イソフラボン類（イソフラバン）のおおよその含有量を推認することができる。
【００４７】
なお、上記実施形態は以下のように変更してもよい。
・上記実施形態において、クロマトグラフィにより分離されたレツサプルプリンＡは、抽出物の主要成分として、例えば定量分析、及び抽出効率の確認作業に適用してもよい。
【実施例】
【００４８】
以下に実施例及び比較例を挙げ、前記実施形態をさらに具体的に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
（試験例１：ブラジル産の赤色プロポリス原塊から赤色色素成分の分離・精製）
プロポリス原塊として、プロポリス採集用に工夫されたミツバチの巣箱を半径数キロ以内の周辺植物としてダルベルジア．エカストフィラムが含まれるマングローブ林又は野生（群生地）に数日設置することにより得られたブラジル産の赤色プロポリス原塊を使用した。そのプロポリス原塊の粉砕物１１７．１８ｇに、抽出溶媒としてのクロロホルム／メタノール＝２：１を１５００ｍＬ加えて室温（約２５℃）で３日間攪拌して抽出した。そして、前記プロポリス粉砕物の攪拌抽出液を濾紙（アドバンテック東洋株式会社製のＮｏ．２）で吸引濾過して残渣を除去し、減圧濃縮することによって、プロポリス抽出物６６．１９ｇ（固形分として；１００質量％）を得た。
【００４９】
次に、上記プロポリス抽出物６６．１９ｇを、オープンカラムクロマトグラフィ（内径１０ｃｍ×長さ６０ｃｍ）に付した。クロマトグラフィ担体としてシリカゲル（シリカゲル６０、メルク社製）を使用した。溶離溶媒としてクロロホルム：メタノール＝９：１を使用し、３３画分を得た。
【００５０】
目的の色素成分を確認するために、これらの画分を薄層クロマトグラフィ（ＴＬＣ；ＴＬＣシリカゲル６０  Ｆ２５４、メルク社製）にて展開した。展開溶媒として、クロロホルム：メタノール：酢酸＝８：１：１を使用した。発色試薬として、硫酸：エタノール＝１：１を使用した。発色試薬を噴霧後、１００℃のホットプレート上で加熱し呈色させ、成分パターンを可視化し、類似した成分パターンを示すものを合わせ、５画分（フラクションＮｏ．１〜５）を得た。その結果、フラクションＮｏ．５（１４００ｍＬ、固形分３．８８ｇ）に色素成分のスポットが顕著に見られた。
【００５１】
次に、上記フラクションＮｏ．５（４５０ｍｇ）について、分取用逆相ＨＰＬＣを用いて、下記条件にてさらに分離処理を行い、５画分（フラクション５−１〜５−５）を得た。その結果、フラクション５−４（固形分５３．９ｍｇ）が最も吸光度が高く、色素成分を最も多く含むことが予想された。そこで、フラクション５−４について、再度同条件にてＨＰＬＣで再精製処理を行った。最終的に、色素成分として３２．９５ｍｇを得た。
【００５２】
カラム：ＳＨＩＳＥＩＤＯ  ＣＡＰＣＥＬＬ  ＰＡＫ  Ｃ１８  ＵＧ１２０Å（内径２０ｍｍ×長さ２５０ｍｍ、資生堂社製）
移動相：水：アセトニトリル＝１：１（０．１％ＴＦＡ）
流速：６．０ｍＬ／ｍｉｎ
検出波長：５００ｎｍ
（試験例２：赤色色素成分の構造解析）
（ａ）質量分析による分子量の測定
精製された赤色色素成分について分子量を測定した。分子量はエレクトロスプレーイオン化質量分析法（ＥＳＩ−ＭＳ）を採用し、ＬＣＱ（サーモフィッシャーサイエンス社製）用いて行った。図１（ａ）にＰｏｓｉｔｉｖｅモードの結果を、図１（ｂ）にＮｅｇａｔｉｖｅモードの結果をそれぞれ示す。
【００５３】
その結果、Ｐｏｓｉｔｉｖｅモードでｍ／ｚ５２３．２７に（Ｍ＋Ｈ）＋、Ｎｅｇａｔｉｖｅモードでｍ／ｚ５２１．１３に（Ｍ−Ｈ）−にピークを示したことにより、分子量５２２を確認した。
【００５４】
（ｂ）紫外・可視光スペクトル（ＵＶ／ｖｉｓ）の測定
精製された赤色色素成分について紫外・可視光スペクトル（ＵＶ／ｖｉｓ）を測定した。紫外・可視光スペクトルは紫外可視近赤外分光光度計（ＪＡＳＣＯ  Ｖ−５６０、日本分光社製）を用い、溶媒をエタノールに溶解した後、吸収スペクトルを測定した。結果を図２に示す。縦軸が吸光度［Ａｂｓ］、横軸が波長（wavelength［nm］）を示す。
【００５５】
図２に示されるように精製された赤色色素成分は、２８９ｎｍ，３８０ｎｍ，５１１ｎｍに極大吸収が確認された。
（ｃ）赤外線吸収スペクトル（ＩＲ）の測定
精製された赤色色素成分について赤外線吸収スペクトル（ＩＲ）を測定した。赤外線吸収スペクトルは赤外分光光度計（ＦＴ／ＩＲ−５５０、日本分光社製）を用いた。結果を図３に示す。縦軸が相対値、横軸が波数（wavenumber［cm-1］）を示す。その結果、カルボニルの存在を確認した。
【００５６】
（ｄ）核磁気共鳴装置（ＮＭＲ）を用いた構造決定
精製された赤色色素成分について、核磁気共鳴装置（ＪＥＯＬ  α-４００、日本電子社製）を用いて構造解析を行った。溶媒として重ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ−ｄ６）を使用した。１Ｈ−ＮＭＲスペクトルの測定結果を示すデータを図４と表１に、１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルの測定結果を示すデータを図５と表１にそれぞれ示す。
【００５７】
【表１】
0005478392.tif 000012
以上の結果より、精製された赤色色素成分は、ポリフェノール骨格を有する分子式がＣ32Ｈ26Ｏ7、分子量５２２．５４のレツサプルプリンＡであることが確認された。
【００５８】
次に、上記実施形態及び別例から把握できる技術的思想について、以下に追記する。
（ａ）レツサプルプリンＡからなる着色剤又は顔料。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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