(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
体内の酸化ストレス及び酸素欠乏に関連する疾病の治療及び予防用の抗酸化剤であって、
鉄より選択された金属陽イオンと、ルチン及びアスコルビン酸及び／又はデヒドロアスコルビン酸との錯体を含み、
該錯体が下記一般式（Ｉ）：
ＦｅｍＲｕ（ＡＡ）ｒ（ＤＧＡＡ）ｐＸｎ・・・（Ｉ）
式中、
Ｆｅは、鉄の陽イオン、
Ｒｕは、ルチン、
ＡＡは、アスコルビン酸、
ＤＧＡＡは、デヒドロアスコルビン酸、
Ｘは、ＳＯ４−２、ＣＨ３Ｃ（Ｏ）Ｏ−、又は、−ＯＯＣ−ＣＨ２−Ｃ（ＯＨ）（ＣＯＯ−）−ＣＨ２−ＣＯＯ−、
ｍは、１．５〜３、
ｎは、０．７〜９、
ｐ／（ｒ＋ｐ）は、０〜１を示し、ｒ、及びｐは、各々０〜０．５であり、ｐ＝０のときは、ｒは０ではなく、ｒ＝０のときは、ｐは０ではない、
で表されることを特徴とする抗酸化剤。
【請求項２】
請求項１に記載の抗酸化剤の製造方法であって、
前記アスコルビン酸を前記金属陽イオンの金属塩のアルコール溶液と反応させた後、室温から溶媒の沸点までの温度範囲において、その反応生成物をルチン処理することを特徴とする製造方法。
【請求項３】
前記金属塩と前記アスコルビン酸のモル比が２０〜３であることを特徴とする請求項２に記載の製造方法。
【請求項４】
強酸性の金属塩を使用する場合に、前記ルチン処理後、更に弱酸性のアルカリ金属塩を用いた処理が必要であることを特徴とする請求項２又は３に記載の製造方法。
【請求項５】
体内の酸化ストレス及び酸素欠乏に関連する疾病の治療及び予防用の治療薬又は予防薬を作るための顆粒であって、
請求項１に記載の抗酸化剤と、ポリビニルピロリドンと、アクリルポリマーを含み、
その含有割合は、
ポリビニルピロリドンが、５．０ｗｔ％以下、
アクリルポリマーが、１１ｗｔ％以下、
一般式（Ｉ）で表される抗酸化剤が、残部
であることを特徴とする顆粒。
【請求項６】
アクリルポリマーを３ｗｔ％〜１１ｗｔ％含有することを特徴とする請求項５に記載の顆粒。
【請求項７】
体内の酸化ストレス及び酸素欠乏に関連する疾病の治療及び予防用の錠剤又はカプセル剤であって、
請求項５に記載の顆粒を含み、且つ、結晶セルロース、カルシウム又はステアリン酸マグネシウム及びタルクを添加物として合計１５ｗｔ％〜５０ｗｔ％含有することを特徴とする錠剤又はカプセル剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
３５Ｕ．Ｓ．Ｃ．ｓｅｃｔ．３６５に従い、本出願は、２００６年８月３日に出願されたロシア特許出願第２００６１２８１５４号の優先権を主張する２００７年７月２７日に出願された国際特許出願ＰＣＴ／ＲＵ２００７／０００４０４の利益を主張する。これらの先行出願の各々の開示内容は、参照することにより全体が本明細書中に組み込まれる。
【０００２】
本発明は、医薬、特に製薬工業、即ち人体における代謝過程、特に酸化過程に影響を及ぼす化合物の製品に関する。
【背景技術】
【０００３】
神経変性に関連する疾病に共通することは、特定の神経細胞の進行性消失である。それは、蛋白凝集と関連しており、酸化ストレスによって引き起こされる。酸化ストレスは神経細胞の機能不全又は細胞死の原因であり、それらは疾病発症の主要又は重要な因子である。
【０００４】
酸化ストレスは、過酸化水素、スーパーオキシドアニオンラジカル、高活性ヒドロキシルラジカル又は亜硝酸過酸化物などの活性酸素型（ＡＯＦ）又は活性酸素種（ＲＯＳ）が無秩序に形成された結果である。生体組織の再生力不足と共に高酸素吸収状態や低抗酸化状態になると、酸化的損傷に対する感受性レベルが高くなる。
【０００５】
脂質の過酸化は、リノレン酸やアラキドン酸などの不飽和脂肪酸の二重結合へのラジカル型の活性酸素の攻撃の結果である。これは、不飽和脂肪酸のＣ＝Ｃ結合への更なる攻撃を含む連鎖反応的を引き起こす活性化ペルオキシラジカルの生成を誘導する。その結果、４−ヒドロキシ−２，３−ノネナール、アクロレイン及びマロンジアルデヒドなどの分解産物が生じる。
【０００６】
４−ヒドロキシ−２，３−ノネナールのレベルの増加は、パーキンソン病とアルツハイマー患者の脳で認められる。アクロレインとマロンジアルデヒド類縁体のレベルの増加は、アルツハイマー患者の脳で検出されている。パーキンソン患者の脳では、マロンジアルデヒドのレベルが増加している。４つのＤＮＡ塩基はすべてヒドロキシル化、カルボニル基の形成、及びニトロ化（アルツハイマー患者の脳のＤＮＡで認められた変化）を含む酸化的損傷に対して感受性が高い。
【０００７】
（ヒドロキシルラジカルの攻撃の結果である）８−ヒドロキシグアニンと８−ヒドロキシ−２−デオキシグアノジンのレベルの増加はパーキンソン患者の脳に特有なものである。
【０００８】
細胞は酸化ストレスに対して自己防御機能を有し、その活性化に見られる変化は、酸化ストレスの良いマーカーでもある。確認されたアルツハイマー病の患者の脳では、カタラーゼ、スーパオキシドジスムターゼ（ＳＯＤ）、グルタチオンペルオキシダーゼ及びグルタチオンレドクターゼなどの抗酸化蛋白の活性が上昇している。脂肪酸の酸化は主にミトコンドリア内で起こり、また他の細胞小器官もミトコンドリア内で起こっているのと同様の（しかし、同一ではない）経路で脂肪酸をアセチル−ＳＣｏＡに変換できる酵素を含む。
【０００９】
酸化ストレス（即ち、脂質、タンパク質及びＤＮＡの酸化）は、細胞機能の障害と、過酸化物類、アルコール類、アルデヒド類、ケトン類、コレステロール酸化物などの毒性化合物の形成を引き起こす。最終的には、血管内のリンパ球やマクロファージに毒性をもたらす。アクロレインは細胞からのブドウ糖やグルタミン酸のリバースキャプチャー（reverse capture）を遮断し、４−ヒドロキシ−２，３−ノネナールは神経細胞のグルコーストランスポーターのほかに、グルタミン酸及びＮａ＋／Ｋ＋−ＡＴＰアーゼトランスポーターを阻害する。蛋白修飾によりグルタミン酸シンターゼやＳＯＤなどの酵素の障害が起こり、ＤＮＡの酸化により突然変異が起こる。細胞内カルシウムシグナルの混乱やＲＯＳ誘導性のカルシウム放出によりグルタミン酸受容体が活性化され、さらに他の機能の混乱があれば、アポトーシスカスケードが活性化され、最終的にプログラム細胞死につながる。
【００１０】
従来の技術
ＲＯＳの生成は、窒素酸化物やスーパーオキシドラジカルからのペルオキシ亜硝酸塩の形成のような他の経路もあるが、酸化還元活性金属（主にＣｕ＋、Ｆｅ２＋）と酸素分子の反応の結果であることが多い。最近では、アルツハイマー病に対応した酸化ストレス及びフリーラジカル生成の主な原因は、アミロイドβ−ペプチドと遷移金属の錯体であると考えられている。
【００１１】
活性型酸素の存在に確実に関連して組織で起こる異常のすべてが立証されているわけではないが、特に、加齢プロセス、白内障の形成、心筋梗塞などでは多少ともその原因になっていると考えられている。
【００１２】
亜鉛、銅、鉄及びニッケルとキトサンのキレート錯体の使用は周知である（２００１年８月２８日の特許文献１）。１９８９年３月７日の特許文献２ではキレート錯体としてキトサンと鉄の錯体化合物の使用を提案している。
【００１３】
最近では、フラボノイド（ポリフェノール抗酸化物）、特にビタミンＰ類、ルチン及びケルセチンにより多くの関心が向けられている。鉄、亜鉛及び銅とルチンの錯体と、抗酸化状態には関連性がある（非特許文献１）。ルチンのようなビタミンＰ類に抗酸化作用があるのは周知である。一般的に知られている抗酸化物の１つは、ビタミン複合体「アスコルチン」（アスコルビン酸＋ルチン）であり、それはレドックスの過程で機能する能力に基づく膜安定化活性を持っている（非特許文献２）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１４】
【特許文献１】米国特許第６２８０７４２号明細書
【特許文献２】米国特許第４８１０６９５号明細書
【非特許文献】
【００１５】
【非特許文献１】Biol Trance Elem Res. 2002 Sep; 88(3)271-9
【非特許文献２】M.D. Mashkovskii, Lekarstvennye sredstva [Drugs], Moscow, Novaya Volna, 2001, pp. 86-87
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１６】
しかしながら、現在の抗酸化剤の多くは、水への溶解性が乏しく、生体利用性が極端に低い（同文献、ｐ．８６）。
【００１７】
本発明の目的は、抗酸化状態を改善し、組織内の酸素分圧を増加させ、ヒトの生物学的年齢を正常化し、優れた生体利用性を有することのできる、酸化ストレスと酸素不足に関連する疾病を予防及び治療するための新しい抗酸化剤を開発することであり、更にまた、その製造方法と、顆粒剤と効果的な錠剤又はカプセル製剤の製造方法を開発することである。
【課題を解決するための手段】
【００１８】
発明の本質
組織内の酸化ストレスと不十分な酸素量に関連する疾病の予防と治療のための抗酸化剤を提供する。その化合物は、一般式（Ｉ）で表されるルチン及びアスコルビン酸及び／又はデヒドロアスコルビン酸と、金属（鉄、銅、亜鉛又はマンガン）陽イオンとの錯体である。
ＭｅｍＲｕ（ＡＡ）ｒ（ＤＧＡＡ）ｐ−Ｘｎ・・・（Ｉ）
式中、
Ｍｅは、鉄、銅、亜鉛又はマンガンの陽イオン、
Ｒｕは、ルチン、
ＡＡは、アスコルビン酸、
ＤＧＡＡは、デヒドロアスコルビン酸、
Ｘは、ＳＯ４−２、ＣＨ３Ｃ（Ｏ）Ｏ−、又は、−ＯＯＣ−ＣＨ２−Ｃ（ＯＨ）（ＣＯＯ−）−ＣＨ２−ＣＯＯ−、
ｍは、１．０〜３、
ｎは、０．７〜９、
ｐ／（ｒ＋ｐ）は、０〜１
を示す。
【００１９】
さらに、本発明の対象は、一般式（Ｉ）の抗酸化剤の簡便で技術的な製造方法の開発である。アスコルビン酸は金属塩のアルコール溶液と反応させた後、その反応混合物を、室温から溶媒の沸点までの温度でルチン処理する。アスコルビン酸に対する金属塩のモル比を２０〜３として、工程を実施しなければならない。
【００２０】
強酸性の金属塩を使用する場合は、生成物の酸性度を低下させるために、ルチン処理後に、混合物を弱酸性のアルカリ金属塩によって処理する。
【００２１】
また、本発明の対象は、体内の酸化ストレスと酸素不足に関連した病気の予防と治療のための医薬用及び予防薬用化合物の製造に用いられる顆粒である。それは化学式（Ｉ）の抗酸化剤を含み、任意に、ＥＵＤＲＡＧＩＴ（登録商標）とポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）を以下の比率（ｗｔ％）で含有する。
ＰＶＰ：０〜５．０
ＥＵＤＲＡＧＩＴ：０〜１１
化学式（Ｉ）の抗酸化剤：残部
【００２２】
本発明の他の対象は、組織内の酸化ストレスと酸素不足に関連した疾病の治療と予防のための錠剤とカプセル剤であり、一般式（Ｉ）の抗酸化剤と、任意に、ポリビニルピロリドン及びＥＵＤＲＡＧＩＴ、並びに添加物として結晶セルロース、カルシウム又はステアリン酸マグネシウム及びタルクを含む。添加物は、１５〜５０（質量）％以下で含有される。
【発明を実施するための形態】
【００２３】
発明の好ましい実施態様
一般式（Ｉ）で表されるルチン及びアスコルビン酸及び／又はデヒドロアスコルビン酸と、金属（鉄、銅、亜鉛又はマンガン）陽イオンとの錯体である抗酸化剤を説明する。
ＭｅｍＲｕ（ＡＡ）ｒ（ＤＧＡＡ）ｐ−Ｘｎ・・・（Ｉ）
式中、
Ｍｅは、鉄、銅、亜鉛又はマンガンの陽イオン、
Ｒｕは、ルチン、
ＡＡは、アスコルビン酸、
ＤＧＡＡは、デヒドロアスコルビン酸、
Ｘは、ＳＯ４−２、ＣＨ３Ｃ（Ｏ）Ｏ−、又は、−ＯＯＣ−ＣＨ２−Ｃ（ＯＨ）（ＣＯＯ−）−ＣＨ２−ＣＯＯ−、
ｍは、１．０〜３、
ｎは、０．７〜９、
ｐ／（ｒ＋ｐ）は、０〜１
を示す。
【００２４】
ルチン、鉄及びデヒドロアスコルビン酸及び／又はアスコルビン酸を含む錯体が好ましい。
ＦｅｍＲｕ（ＡＡ）ｒ（ＤＧＡＡ）ｐＸｎ
式中、
ｍは、三価の鉄原子の数、
ｍは、１．５〜３の値、
ｎは、０．７〜９、
ｐ／（ｒ＋ｐ）は、０〜１
を示す。
【００２５】
また、以下の一般式で表されるルチン、銅、デヒドロアスコルビン酸及び／又はアスコルビン酸を含む錯体が好ましい。
ＣｕｍＲｕ（ＡＡ）ｒ（ＤＧＡＡ）ｐＸｎ
式中、
ｍは、１．０〜３の値、
ｎは、０．７〜６、
ｐ／（ｒ＋ｐ）は、０〜１
を示す。
【００２６】
別の錯体は、以下の一般式で表されるルチン、亜鉛、デヒドロアスコルビン酸及び／又はアスコルビン酸を含む。
ＺｎｍＲｕ（ＡＡ）ｒ（ＤＧＡＡ）ｐＸｎ
式中、
ｍは、１．０〜３、
ｎは、０．７〜６、
ｐ／（ｒ＋ｐ）は、０〜１
を示す。
【００２７】
ルチン、マンガン、アスコルビン酸及び／又はデヒドロアスコルビン酸を含む錯体は以下の一般式で表される。
ＭｎｍＲｕ（ＡＡ）ｒ（ＤＧＡＡ）ｐＸｎ
式中、
ｍは、１．０〜３、
ｎは、０．７〜６、
ｐ／（ｒ＋ｐ）は、０〜１
を示す。
【００２８】
また、一般式（Ｉ）で表される抗酸化剤の合成方法を説明する。アスコルビン酸を金属塩のアルコール溶液で処理した後、その反応混合物を、室温から溶媒の沸点までの温度でルチン処理する。アスコルビン酸に対する金属塩のモル比を２０〜３として、工程を実施する。
【００２９】
強酸性の金属塩を使用する場合は、生成物の酸性度を低下させるために、ルチン処理後に、更に混合物を弱酸性のアルカリ金属塩によって処理する。
【００３０】
アスコルビン酸と金属塩の反応において、Ｆｅ３＋からＦｅ２＋への鉄の部分還元、及びアスコルビン酸のデヒドロアスコルビン酸への部分酸化が起こる。その結果、抗酸化剤にはＦｅ３＋、Ｆｅ２＋又はＣｕ２＋、Ｃｕ１＋又はＺｎ２＋又はＭｎ２＋、及びアスコルビン酸、デヒドロアスコルビン酸及びルチンが含まれ、それらは、一般式（Ｉ）の電荷移動錯体を形成する。
【００３１】
また、体内の酸化ストレスや酸素不足に関連した病気の治療と予防、及び酸化ストレス減少のための医薬及び予防薬の手段を製造するための顆粒を説明する。それは一般式（Ｉ）の抗酸化剤と、任意に、ＥＵＤＲＡＧＩＴとポリビニルピロリドンを以下の比率（ｗｔ％）で含有する。
ポリビニルピロリドン：０〜５．０
ＥＵＤＲＡＧＩＴ：０〜１１
化学式（Ｉ）の抗酸化剤：残部
【００３２】
また、前記顆粒と、任意に、ポリビニルピロリドン及びＥＵＤＲＡＧＩＴ、並びに補助剤として１５〜５０％の濃度でマイクロクリスタリン・ワックス、ステアリン酸カルシウム又はステアリン酸マグネシウム及びタルクを含む錠剤又はカプセル剤を説明する。
【００３３】
製剤化技術における当業者には周知のように、ＥＵＤＲＡＧＩＴは、様々なアクリレート／メタクリル酸／メタクリル酸重合体及び共重合体である医薬高分子についてのエボニックインダストリーズ社（旧デグサ社）の登録商標であり、以下、例えば放出を制御するコーティングなどのコーティング材及び／又は活性成分の基質材料として有用なアクリルポリマーの総称とする。その基質の構造は、直接圧縮、顆粒化又は溶解技術によって得られたものでも良い。
【実施例】
【００３４】
以下に、本発明の実施例を示す。
【００３５】
実施例１
酢酸鉄（７０５ｇ）の形で３ｇｍｏｌ（ｍ）の鉄（３）を含む三価鉄のアルコール（エタノール）溶液に、０．５ｇｍｏｌ（ｒ＋ｐ）のアスコルビン酸（９０ｇ）を加え、その混合物を５分間攪拌する。絶えず攪拌しながら１ｇｍｏｌのルチン（６５０ｇ）を加える。６０分間攪拌する。均質な粉末になるまで、その溶液を乾燥する。収量は１４４５ｇである。鉄の含有量は１１％である。
ｐ／（ｒ＋ｐ）＝０．３±０．１
ｍ＝３
ｎ＝９
鉄（ｇｍｏｌ）／アスコルビン酸（ｇｍｏｌ）比＝６
鉄（ｇｍｏｌ）／ルチン（ｇｍｏｌ）比＝３
【００３６】
実施例２
硫酸鉄（６０３ｇ）の形で１．５ｇｍｏｌの鉄（３）を含む三価鉄のアルコール（イソプロパノール）溶液に、０．５ｇｍｏｌのアスコルビン酸（９０ｇ）を加え、その混合物を６０分間、加熱還流しながら攪拌する。絶えず攪拌しながら１ｇｍｏｌのルチン（６５０ｇ）を加える。更に６０分間攪拌する。その後、均質な粉末になるまで、その溶液を乾燥する。収量は１３４０ｇである。鉄の含有量は６％である。
ｐ／（ｒ＋ｐ）＝０．１＋０．０５
ｍ＝１．５
ｎ＝２．２５
鉄（ｇｍｏｌ）／アスコルビン酸（ｇｍｏｌ）比＝３
鉄（ｇｍｏｌ）／ルチン（ｇｍｏｌ）比＝１．５
【００３７】
実施例３
クエン酸鉄（４８６ｇ）の形で２ｇｍｏｌの鉄（３）を含む三価鉄のアルコール（メタノール）溶液に、０．５ｇｍｏｌのアスコルビン酸（９０ｇ）を加え、その混合物を３０分間攪拌する。絶えず攪拌しながら１ｇｍｏｌのルチン（６５０ｇ）を加える。６０分間攪拌する。その後、均質な粉末になるまで、その溶液を乾燥する。収量は１２２０ｇである。鉄の含有量は８．９％である。
ｐ／（ｒ＋ｐ）＝０．２±０．０５
ｍ＝２
ｎ＝２
鉄（ｇｍｏｌ）／アスコルビン酸（ｇｍｏｌ）比＝４
鉄（ｇｍｏｌ）／ルチン（ｇｍｏｌ）比＝２
【００３８】
実施例４
塩化鉄（４８３ｇ）の形で３ｇｍｏｌの鉄（３）を含む三価鉄の水溶液に、０．５ｇｍｏｌのアスコルビン酸（９０ｇ）を加え、その混合物を９０分間、加熱還流しながら攪拌する。絶えず攪拌しながら１ｇｍｏｌのルチン（６５０ｇ）を加える。更に１２０分間攪拌する。得られた溶液を酢酸ナトリウム（２４６ｇ）で処理し、塩化ナトリウムをろ過で取り除く。その後、均質な粉末になるまで、その溶液を乾燥する。収量は粉末で１４６０ｇである。鉄の含有量は１１％である。
ｐ／（ｒ＋ｐ）＝０．３±０．１
ｍ＝３
ｎ＝９
鉄（ｇｍｏｌ）／アスコルビン酸（ｇｍｏｌ）比＝６
鉄（ｇｍｏｌ）／ルチン（ｇｍｏｌ）比＝３
【００３９】
実施例５
塩化鉄（３２２ｇ）の形で２ｇｍｏｌの鉄（３）を含む三価鉄溶液に、０．５ｇｍｏｌのアスコルビン酸（９０ｇ）を加え、その混合物を９０分間、攪拌しながら加熱還流する。絶えず攪拌しながら１ｇｍｏｌのルチン（６５０ｇ）を加える。１２０分間攪拌する。その後、溶液を酢酸ナトリウム（６００ｇ）で処理し、生成されるＮａＣｌをろ過で取り除く。均質な粉末になるまで、その溶液を乾燥する。収量は粉末で１６６０ｇである。鉄の含有量は６．５％である。
ｐ／（ｒ＋ｐ）＝０．２±０．０５
ｍ＝２
ｎ＝６
鉄（ｇｍｏｌ）／アスコルビン酸（ｇｍｏｌ）比＝４
鉄（ｇｍｏｌ）／ルチン（ｇｍｏｌ）比＝２
【００４０】
実施例６
塩化鉄（２４０ｇ）の形で１．５ｇｍｏｌの鉄（３）を含む三価鉄溶液に、０．５ｇｍｏｌのアスコルビン酸（９０ｇ）を加え、その混合物を９０分間、攪拌しながら加熱還流する。絶えず攪拌しながら１ｇｍｏｌのルチン（６５０ｇ）を加える。１２０分間攪拌する。その後、溶液を酢酸ナトリウム（３１８ｇ）で処理し、生成されるＮａＣｌをろ過で取り除く。均質な粉末になるまで、その溶液を乾燥する。収量は粉末で１２９０ｇである。鉄の含有量は６．２％である。
ｐ／（ｒ＋ｐ）＝０．１±０．０５
ｍ＝１．５
ｎ＝１．５
鉄（ｇｍｏｌ）／アスコルビン酸（ｇｍｏｌ）比＝４
鉄（ｇｍｏｌ）／ルチン（ｇｍｏｌ）比＝１．５
【００４１】
実施例７
塩化鉄（４８３ｇ）の形で３ｇｍｏｌの鉄（３）を含む三価鉄溶液に、０．５ｇｍｏｌのアスコルビン酸（９０ｇ）を加え、その混合物を９０分間、攪拌しながら加熱還流する。絶えず攪拌しながら１ｇｍｏｌのルチン（６５０ｇ）を加える。１２０分間攪拌する。その後、溶液を酢酸ナトリウム（６３６ｇ）で処理し、生成されるＮａＣｌをろ過で取り除く。均質な粉末になるまで、その溶液を乾燥する。収量は粉末で１８５０ｇである。鉄の含有量は８．７％である。
ｐ／（ｒ＋ｐ）＝０．３±０．１
ｍ＝３
ｎ＝３
鉄（ｇｍｏｌ）／アスコルビン酸（ｇｍｏｌ）比＝６
鉄（ｇｍｏｌ）／ルチン（ｇｍｏｌ）比＝３
【００４２】
実施例８
塩化鉄（７２９ｇ）の形で４．５ｇｍｏｌの鉄（３）を含む三価鉄溶液に、０．５ｇｍｏｌのアスコルビン酸（９０ｇ）を加え、その混合物を９０分間、攪拌しながら加熱還流する。絶えず攪拌しながら１ｇｍｏｌのルチン（６５０ｇ）を加える。１２０分間攪拌する。その後、溶液を酢酸ナトリウム（９５４ｇ）で処理し、生成されるＮａＣｌをろ過で取り除く。均質な粉末になるまで、その溶液を乾燥する。収量は粉末で２４２０ｇである。鉄の含有量は１０％である。
ｐ／（ｒ＋ｐ）＝０．５±０．１
ｍ＝４．５
ｎ＝４．５
鉄（ｇｍｏｌ）／アスコルビン酸（ｇｍｏｌ）比＝９
鉄（ｇｍｏｌ）／ルチン（ｇｍｏｌ）比＝４．５
【００４３】
実施例９
塩化鉄（１６２０ｇ）の形で１０ｇｍｏｌの鉄（３）を含む三価鉄の水溶液に、０．５ｇｍｏｌのアスコルビン酸（９０ｇ）を加え、その混合物を９０分間、加熱還流しながら攪拌する。絶えず攪拌しながら１ｇｍｏｌのルチン（６５０ｇ）を加える。１２０分間攪拌する。その後、得られた溶液を酢酸ナトリウム（２２２０ｇ）で処理し、生成される塩化ナトリウムをろ過で取り除く。均質な粉末になるまで、その溶液を乾燥する。収量は粉末で４５８０ｇである。鉄の含有量は１１．７％である。
ｐ／（ｒ＋ｐ）＝１±０．１
ｍ＝１０
ｎ＝１
鉄（ｇｍｏｌ）／アスコルビン酸（ｇｍｏｌ）比＝２０
鉄（ｇｍｏｌ）／ルチン（ｇｍｏｌ）比＝１０
【００４４】
実施例１０
塩化鉄（２５０ｇ）の形で２ｇｍｏｌの鉄（２）を含む二価鉄のアルコール溶液（９５％エタノール）に、０．５ｇｍｏｌのアスコルビン酸（９０ｇ）を加え、その混合物を９０分間、加熱還流しながら攪拌する。絶えず攪拌しながら１ｇｍｏｌのルチン（６５０ｇ）を加える。更に、１２０分間攪拌した。得られた溶液を酢酸ナトリウム（２９６ｇ）で処理し、生成される塩化ナトリウムをろ過で取り除く。その後、均質な粉末になるまで、その溶液を乾燥する。収量は粉末で１２８６ｇである。鉄の含有量は８．４％である。
ｐ／（ｒ＋ｐ）＝０±０．０５
ｍ＝２
ｎ＝１．３３
鉄（ｇｍｏｌ）／アスコルビン酸（ｇｍｏｌ）比＝４
鉄（ｇｍｏｌ）／ルチン（ｇｍｏｌ）比＝２
【００４５】
実施例１１
塩化銅（２７０ｇ）の形で２ｇｍｏｌの銅（２）を含む二価銅のアルコール溶液（９５％エタノール）に、０．５ｇｍｏｌのアスコルビン酸（９０ｇ）を加え、その混合物を９０分間、加熱還流しながら攪拌する。絶えず攪拌しながら１ｇｍｏｌのルチン（６５０ｇ）を加える。更に、１２０分間攪拌する。得られた溶液を酢酸ナトリウム（２９６ｇ）で処理し、生成される塩化ナトリウムをろ過で取り除く。その後、均質な粉末になるまで、その溶液を乾燥する。収量は粉末で１３０６ｇである。銅の含有量は９．８％である。
ｐ／（ｒ＋ｐ）＝０．３±０．１
ｍ＝２
ｎ＝１．３３
銅（ｇｍｏｌ）／アスコルビン酸（ｇｍｏｌ）比＝４
銅（ｇｍｏｌ）／ルチン（ｇｍｏｌ）比＝２
【００４６】
実施例１２
塩化銅（１３５ｇ）の形で１ｇｍｏｌの銅（２）を含む二価銅のアルコール溶液（９５％エタノール）に、０．５ｇｍｏｌのアスコルビン酸（９０ｇ）を加え、その混合物を９０分間、加熱還流しながら攪拌する。絶えず攪拌しながら１ｇｍｏｌのルチン（６５０ｇ）を加える。更に、１２０分間攪拌する。得られた溶液を酢酸ナトリウム（１４８ｇ）で処理し、生成される塩化ナトリウムをろ過で取り除く。その後、均質な粉末になるまで、その溶液を乾燥する。収量は粉末で１０２３ｇである。銅の含有量は６．３％である。
ｐ／（ｒ＋ｐ）＝０．１５±０．１
ｍ＝１
ｎ＝０．７
銅（ｇｍｏｌ）／アスコルビン酸（ｇｍｏｌ）比＝２
銅（ｇｍｏｌ）／ルチン（ｇｍｏｌ）比＝２
【００４７】
実施例１３
塩化銅（４０５ｇ）の形で３ｇｍｏｌの銅（２）を含む二価銅のアルコール溶液（９５％エタノール）に、０．５ｇｍｏｌのアスコルビン酸（９０ｇ）を加え、その混合物を９０分間、加熱還流しながら攪拌する。絶えず攪拌しながら１ｇｍｏｌのルチン（６５０ｇ）を加える。更に、１２０分間攪拌する。得られた溶液を酢酸ナトリウム（４４４ｇ）で処理し、生成される塩化ナトリウムをろ過で取り除く。その後、均質な粉末になるまで、その溶液を乾燥する。収量は粉末で１５８９ｇである。銅の含有量は１２．１％である。
ｐ／（ｒ＋ｐ）＝０．５±０．１
ｍ＝３
ｎ＝２
銅（ｇｍｏｌ）／アスコルビン酸（ｇｍｏｌ）比＝６
銅（ｇｍｏｌ）／ルチン（ｇｍｏｌ）比＝３
【００４８】
実施例１４
塩化亜鉛（２７２ｇ）の形で２ｇｍｏｌの亜鉛（２）を含む二価亜鉛のアルコール溶液（９５％エタノール）に、０．５ｇｍｏｌのアスコルビン酸（９０ｇ）を加え、その混合物を９０分間、加熱還流しながら攪拌する。絶えず攪拌しながら１ｇｍｏｌのルチン（６５０ｇ）を加える。更に、１２０分間攪拌する。得られた溶液を酢酸ナトリウム（２９６ｇ）で処理し、生成される塩化ナトリウムをろ過で取り除く。その後、均質な粉末になるまで、その溶液を乾燥する。収量は粉末で１３０８ｇである。亜鉛の含有量は９．９％である。
ｐ／（ｒ＋ｐ）＝０±０．０５
ｍ＝２
ｎ＝１．３３
亜鉛（ｇｍｏｌ）／アスコルビン酸（ｇｍｏｌ）比＝４
亜鉛（ｇｍｏｌ）／ルチン（ｇｍｏｌ）比＝２
【００４９】
実施例１５
塩化亜鉛（１３６ｇ）の形で１ｇｍｏｌの亜鉛（２）を含む二価亜鉛のアルコール溶液（９５％エタノール）に、０．５ｇｍｏｌのアスコルビン酸（９０ｇ）を加え、その混合物を９０分間、加熱還流しながら攪拌する。絶えず攪拌しながら１ｇｍｏｌのルチン（６５０ｇ）を加える。更に、１２０分間攪拌する。得られた溶液を酢酸ナトリウム（１４８ｇ）で処理し、生成される塩化ナトリウムをろ過で取り除く。その後、均質な粉末になるまで、その溶液を乾燥する。収量は粉末で１０２４ｇである。亜鉛の含有量は６．３％である。
ｐ／（ｒ＋ｐ）＝０．０±０．０５
ｍ＝１
ｎ＝０．７
亜鉛（ｇｍｏｌ）／アスコルビン酸（ｇｍｏｌ）比＝２
亜鉛（ｇｍｏｌ）／ルチン（ｇｍｏｌ）比＝２
【００５０】
実施例１６
塩化亜鉛（４０８ｇ）の形で３ｇｍｏｌの亜鉛（２）を含む二価亜鉛のアルコール溶液（９５％エタノール）に、０．５ｇｍｏｌのアスコルビン酸（９０ｇ）を加え、その混合物を９０分間、加熱還流しながら攪拌する。絶えず攪拌しながら１ｇｍｏｌのルチン（６５０ｇ）を加える。更に、１２０分間攪拌する。得られた溶液を酢酸ナトリウム（４４４ｇ）で処理し、生成される塩化ナトリウムをろ過で取り除く。その後、均質な粉末になるまで、その溶液を乾燥する。収量は粉末で１５９２ｇである。亜鉛の含有量は１２．１％である。
ｐ／（ｒ＋ｐ）＝０．０±０．０５
ｍ＝３
ｎ＝２
亜鉛（ｇｍｏｌ）／アスコルビン酸（ｇｍｏｌ）比＝６
亜鉛（ｇｍｏｌ）／ルチン（ｇｍｏｌ）比＝３
【００５１】
実施例１７
塩化マンガン（２５２ｇ）の形で２ｇｍｏｌのマンガン（２）を含む二価マンガンのアルコール溶液（９５％エタノール）に、０．５ｇｍｏｌのアスコルビン酸（９０ｇ）を加え、その混合物を９０分間、加熱還流しながら攪拌する。絶えず攪拌しながら１ｇｍｏｌのルチン（６５０ｇ）を加える。更に、１２０分間攪拌する。得られた溶液を酢酸ナトリウム（２９６ｇ）で処理し、生成される塩化ナトリウムをろ過で取り除く。その後、均質な粉末になるまで、その溶液を乾燥する。収量は粉末で１２８８ｇである。マンガンの含有量は８．５％である。
ｐ／（ｒ＋ｐ）＝０±０．０５
ｍ＝２
ｎ＝１．３３
マンガン（ｇｍｏｌ）／アスコルビン酸（ｇｍｏｌ）比＝４
マンガン（ｇｍｏｌ）／ルチン（ｇｍｏｌ）比＝２
【００５２】
実施例１８
塩化マンガン（１２６ｇ）の形で１ｇｍｏｌのマンガン（２）を含む二価マンガンのアルコール溶液（９５％エタノール）に、０．５ｇｍｏｌのアスコルビン酸（９０ｇ）を加え、その混合物を９０分間、加熱還流しながら攪拌する。絶えず攪拌しながら１ｇｍｏｌのルチン（６５０ｇ）を加える。更に、１２０分間攪拌する。得られた溶液を酢酸ナトリウム（１４８ｇ）で処理し、生成される塩化ナトリウムをろ過で取り除く。その後、均質な粉末になるまで、その溶液を乾燥する。収量は粉末で１０１４ｇである。マンガンの含有量は５．４％である。
ｐ／（ｒ＋ｐ）＝０．０±０．０５
ｍ＝１
ｎ＝０．７
マンガン（ｇｍｏｌ）／アスコルビン酸（ｇｍｏｌ）比＝２
マンガン（ｇｍｏｌ）／ルチン（ｇｍｏｌ）比＝２
【００５３】
実施例１９
塩化マンガン（３７８ｇ）の形で３ｇｍｏｌのマンガン（２）を含む二価マンガンのアルコール溶液（９５％エタノール）に、０．５ｇｍｏｌのアスコルビン酸（９０ｇ）を加え、その混合物を９０分間、加熱還流しながら攪拌する。絶えず攪拌しながら１ｇｍｏｌのルチン（６５０ｇ）を加える。更に、１２０分間攪拌する。得られた溶液を酢酸ナトリウム（４４４ｇ）で処理し、生成される塩化ナトリウムをろ過で取り除く。その後、均質な粉末になるまで、その溶液を乾燥する。収量は粉末で１５６２ｇである。マンガンの含有量は１０．６％である。
ｐ／（ｒ＋ｐ）＝０．０±０．０５
ｍ＝３
ｎ＝２
マンガン（ｇｍｏｌ）／アスコルビン酸（ｇｍｏｌ）比＝６
マンガン（ｇｍｏｌ）／ルチン（ｇｍｏｌ）比＝３
【００５４】
顆粒は、補助剤であるポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）及びＥＵＤＲＡＧＩＴ（アクリルポリマー）と一緒に上記の化合物を用いて調製される。その工程は、標準的な顆粒製造設備、即ち、スプレードライヤー、流動層乾燥造粒機、コーティングドラムなどを使用して行われる。
【００５５】
得られた顆粒は、補助剤として結晶セルロース、ステアリン酸カルシウム及びタルクを用いて、錠剤又はカプセル剤の製造に使用する。
【００５６】
水−アルコール溶液もまた記載された錯体を使用して調製される。
【００５７】
実施例２０
実施例１で得られた１００ｇの錯体を、予め温めたコーティングドラム（５０℃）内に入れる。回転を一定にして、５ｗｔ％のＰＶＰ水溶液６０ｍｌを錯体にスプレーする。ドラムからの内容物のエントレインメントが起こらない程度の強さで、６０℃に加熱された空気をドラムに通気する。次に、回転を一定にして、３０ｍｌの３０％  ＥＵＤＲＡＧＩＴ（アクリルポリマー）水懸濁液をドラム内にスプレーする。完全なコーティングに必要な懸濁液の量は、錯体量の３０ｗｔ％に等しい。顆粒を最終的に乾燥した後に、コーティングドラムは除荷される。製造された顆粒の重さは１１２ｇであり、鉄の含有量は１０％である。
【００５８】
以下の表１及び２に、実施例１〜７及び１０〜１９で得られる顆粒の実施例を示す。
【００５９】
【表１】
0005394921.tif 000002
【００６０】
表２は、得られた顆粒の含有量を含む。
【００６１】
【表２】
0005394921.tif 000003
【００６２】
［錠剤又はカプセル剤の調製］
実施例３７
実施例２０で得られた１００ｇの顆粒をプラネタリーミキサーに入れ、２ｇのステアリン酸カルシウム、２ｇのタルク及び９６ｇの結晶セルロースを加える。添加物の総重量は１００ｇである。６０分間混合する。その後、その混合物を圧縮して１００ｍｇの錠剤にするか、又はゼラチンカプセル（５０％添加物）に入れる。錠剤／カプセル中の鉄の含有量は５ｍｇである。
【００６３】
実施例３８
実施例２１で得られた１８７ｇの顆粒をプラネタリーミキサーに入れ、２ｇのステアリン酸カルシウム、２ｇのタルク及び１９ｇの結晶セルロースを加える。添加物の総重量は２３ｇ（添加物１１％）である。６０分間混合後、その混合物を圧縮して１００ｍｇの錠剤にするか、又はハードゼラチンカプセルに入れる。錠剤／カプセル中の鉄の含有量は５ｍｇである。
【００６４】
実施例３９〜４２は類似の方法で行われるので、表３に要約する。
【００６５】
【表３】
0005394921.tif 000004
【００６６】
［水−アルコール溶液の調製］
実施例４３
実施例６で得られた２０ｇの錯体を１０００ｍｌの水−アルコール溶液（３０％エタノール）に溶解し、次いで０．２ミクロンフィルターでろ過する。そして、ろ過した溶液を５ｍｌのアンプルに入れる。アンプル１つの鉄含有量は、６．５ｍｇである。
【００６７】
実施例４４
実施例６で得られた２０ｇの錯体を１０００ｍｌの水−アルコール溶液（３０％エタノール）に溶解し、次いで０．２ミクロンフィルターでろ過する。そして、ろ過した溶液を１５ｍｌのアンプルに入れる。アンプル１つの鉄含有量は、２０ｍｇである。
【００６８】
［動物の健康な筋肉組織内の酸化レベルにおけるカプセル剤又は錠剤中の錯体の効果の評価］
重さ２５〜２７ｇの雄性ハイブリッドマウスＦ１（ＣＢＡｘＣ５７ｂｌ／６ｊ）を用いて試験を行った。実施例３８の混合物を２００ｍｇ／ｋｇの投与量で、シリンジを用いて動物の胃に直接、単回投与した。投与後２時間で、健康なマウス筋肉組織内の酸素分圧が２７±１０ｍｍＨｇから４４±１５ｍｍＨｇに増加した（〜４０％の増加）。健康なマウス筋肉組織内の酸素分圧の測定は、酸素存在下で、パラジウム（II）メソ−テトラフェニル−テトラベンゾポルフィリン（ＰｄＰｈ４ＴＢＰ）センサーのリン光の減少を測定することによって実施した。ＰｄＰｈ４ＴＢＰは、ヘリウムネオン（Ｈｅ−Ｎｅ）レーザ（波長６３３ｎｍ、電圧５０ミリボルト）によるパルス幅２０マイクロ秒のインパルスで励起した。リン光減少のキネティクスはセンサー周囲の生物学的環境の酸素分圧に依存している。データを記録するために、光電子増培管を使用する。
【００６９】
［放射線防護特性］
放射線防護特性は、重さ１８〜２２ｇのハイブリッドマウスＣ５７／Ｂｌａｃｋ６を用いて調べた。１群１０匹のマウス２群にそれぞれ８Ｇｙのガンマ放射線を照射した。実験群のマウスには、放射線照射４時間前に実施例３７の混合物を１０ｍｇ経口投与した。観察期間の終了時に、対照群では５匹が死亡し、実験群では２匹が死亡した。
【００７０】
［ヒトの生物学的年齢の正常化］
上記錯体のヒトの生物学的年齢の低下に対する効果を調べるための試験を実施した。ヒトの生物学的年齢の測定に以下の方法を用いた。一晩休息した後に、ほおの上皮細胞を収集し微量電気泳動を行った。試験した全細胞数に対する陰電性の核の割合を測定した。次に、この割合を事前に準備された生物学的年齢の規準と比較する（ＵＳＳＲ  １１６９６１４，Ａ６１Ｂ  １０／００，１９８１）。ヒトの生物学的年齢は、ＥＮＮ（細胞核の電気陰性度）の規準値の表から決定した。
【００７１】
グループ１：実年齢４０〜５０歳の女性。投与前の平均生物学的年齢は５５歳である。実施例３８の混合物を２日ごとに1カプセル（１００ｍｇ）服用した４０日後の平均生物学的年齢は３８歳であった。
【００７２】
グループ２：実年齢４０〜５０際の女性。投与前の平均生物学的年齢は５８歳である。実施例３８の混合物を毎日１カプセル（１００ｍｇ）服用した４０日後の平均生物学的年齢は４４歳であった。
【００７３】
グループ３：実年齢４４〜５０歳の男性。投与前の平均生物学的年齢は６１歳である。実施例３８の混合物を毎日１カプセル（１００ｍｇ）服用した４０日後の平均生物学的年齢は４２歳であった。
【００７４】
［パーキンソン病］
１グループ１０人のボランティア（疾病の初期段階）を無作為に半分に分けた。
【００７５】
実験群に、実施例３９の混合物を標準治療薬（レボドパ、ブロモクリプチン、ＭＡＯ阻害剤）と共に投与した（毎日１回１００ｍｇ）。
【００７６】
３ヶ月以上観察し、表４に示す症状の進行を、開始時の症状を１００％として評価した。表４に、開始時の症状（実施例３９で調製された混合物を投与する前）と最終投与時の症状を示す。
【００７７】
【表４】
0005394921.tif 000005
【００７８】
データは疾病の症状が減少傾向であること示す。
【００７９】
［アルツハイマー病］
１グループ１０人のボランティア（疾病の初期段階）を無作為に半分に分けた。
【００８０】
実験群に、実施例３９の混合物を標準治療薬（ビンポセチン〈Ｃａｖｉｎｔｏｎ（登録商標）〉、メシル酸ジヒドロエルゴタミン、アマンタジンビフェメラン、アセチル−Ｌ−カルニチン、インドラクソジン（indolaksozin）、パラセタモール）と共に投与した（毎日１回１００ｍｇ）。
【００８１】
３ヶ月以上観察し、表５に示す症状の進行を、開始時の症状を１００％として評価した。表５に、開始時の症状（実施例３９で調製された調製物を投与する前）と最終投与時の症状を示す。
【００８２】
【表５】
0005394921.tif 000006
【００８３】
データは症状の進行が緩やかになる傾向であること示す。