(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
薬学的に適切なキャリアと混合して、または組み合わせて、１Ｒ，２Ｓ−メトキサミンまたは、その生理学的に耐容性の塩を含み、直腸投与に適していることを特徴とする、便失禁の処置のための薬学的組成物。
【請求項２】
４重量％以下の１Ｒ，２Ｓ−メトキサミンを含むことを特徴とする請求項１記載の薬学的組成物。
【請求項３】
３重量％以下の１Ｒ，２Ｓ−メトキサミンを含むことを特徴とする請求項２記載の薬学的組成物。
【請求項４】
２重量％以下の１Ｒ，２Ｓ−メトキサミンを含むことを特徴とする請求項３記載の薬学的組成物。
【請求項５】
１重量％以下の１Ｒ，２Ｓ−メトキサミンを含むことを特徴とする請求項４記載の薬学的組成物。
【請求項６】
０．３〜３重量％の１Ｒ，２Ｓ−メトキサミンを含むことを特徴とする請求項１記載の薬学的組成物。
【請求項７】
単位投薬形態であることを特徴とする請求項１〜６のいずれか１つに記載の薬学的組成物。
【請求項８】
直腸投与による便失禁の処置のための医薬の製造のための１Ｒ，２Ｓ−メトキサミンまたはその生理学的に耐容性の塩の使用。
【請求項９】
医薬は、４重量％以下の１Ｒ，２Ｓ−メトキサミンを含むことを特徴とする請求項８記載の使用。
【請求項１０】
医薬は、３重量％以下の１Ｒ，２Ｓ−メトキサミンを含むことを特徴とする請求項９記載の使用。
【請求項１１】
医薬は、２重量％以下の１Ｒ，２Ｓ−メトキサミンを含むことを特徴とする請求項１０記載の使用。
【請求項１２】
医薬は、１重量％以下の１Ｒ，２Ｓ−メトキサミンを含むことを特徴とする請求項１１記載の使用。
【請求項１３】
医薬は、０．３〜３重量％の１Ｒ，２Ｓ−メトキサミンを含むことを特徴とする請求項８記載の使用。
【請求項１４】
医薬は、単位投薬形態であることを特徴とする請求項１３記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（序文）
本発明は、便失禁および他の状態の処置に関する。
【背景技術】
【０００２】
（発明の背景）
便失禁は、成人の集団のうち約２％に影響する1。便失禁は、高齢者ではさらにより一般的であり、そしてそれらの症状について助けを求める人々はそれほど多くはないようである。便失禁の最も一般的な原因は、分娩の結果としての外陰部神経障害または直接の外傷のいずれかによる、分娩時の肛門括約筋複合体に対する損傷である2。便失禁はまた、構造的傷害がなくても見られる可能性がある；このような状況では、内肛門括約筋（ＩＡＳ）の孤立した変性が、最も一般的な原因である3。
【０００３】
失禁の軽度の症状の保守的な処置としては、パッド（当てもの）4、プラグ（詰め物）5、抗下痢薬6、および食事の変更が挙げられる。しかし、いくつかの症例は、このような処置では管理されない。外肛門括約筋に対する傷害は、重複する外科的修復の影響を適用できる7が、内括約筋修復の結果は期待を裏切っていた8。より甚大な損傷に対して、外科的処置は、大がかりになるが、これには、人工腸括約筋9、仙骨神経刺激10、およびグラシロプラスティ（ｇｒａｃｉｌｏｐｌａｓｔｙ）が挙げられる。これらは、大きな介在物であり、そして多くの患者にとっては不適当であるか、または耐容性に劣るかのいずれかであり得る。
【０００４】
便失禁の処置のための局所的な薬剤の使用は、長年の懸案に対する異なるアプローチである。ＷＯ９８／２７９７１は、便失禁の処置において種々の薬剤の使用を提唱している。それらの薬剤としては、αアドレナリン受容体アゴニスト、一酸化窒素シンターゼ阻害剤、プロスタグランジンＦ2α、ドーパミン、モルヒネ、β遮断薬、および５−ヒドロキシトリプタミンが挙げられる。しかし、実験的データは、フェニレフリン、および一酸化窒素シンターゼ阻害剤であるＮω−ニトロ−Ｌ−アルギニンについてしか得られていない。
【０００５】
便失禁についての局所治療に対する全ての臨床研究は、今日まで、α−１アドレナリン受容体アゴニストであるフェニレフリンに集中してきた。（このような薬剤は以前にはα−１アドレナリン作用性アゴニストと呼ばれた）。局所的フェニレフリンの使用は、正常なヒト被験体の休止期肛門管圧において用量依存性の上昇を生じると断言されている。正常なヒト被験体の肛門に対して塗布された場合、１０重量％のフェニレフリンを含むゲルは、休止期の肛門圧の３３％の上昇を生じ、それは中央値で７時間維持された12（ＷＯ９８／２７９７１も参照のこと）。局所的なフェニレフリンゲルの使用を、超音波検査で肛門括約筋が正常であるが、休止期肛門管圧が低く、失禁の症状を有する患者で繰り返した。しかし、この群では、１０重量％〜２０重量％のフェニレフリンゲルでは休止期肛門圧の有意な上昇は見られなかったが、３０％および４０％のゲルを用いて処置した被験体においては、上昇は統計学的に有意に達した13。このデータによって、失禁の患者の内肛門括約筋は、正常な被験体における括約筋よりもアドレナリン受容体アゴニストに対して感受性が低いということが示唆される。インビトロの研究からもこれを支持するデータが存在する14。
【０００６】
この事実によって、失禁を有し、かつ超音波検査で正常な括約筋である３６例の患者を含む無作為化コントロール試験に対して、フェニレフリンを用いる研究を拡大した場合、失禁のスコア（１０％のフェニレフリンゲルを用いた場合の休止期肛門管圧または肛門管上皮血流）に有意な全体的改善が見られなかった理由を説明することもできる15。対照的に、回腸嚢形成後の糞便漏出を伴う患者の小規模な無作為化コントロール試験においては、１０％のフェニレフリンゲルは、プラセボに比べて自制の有意に大きい主観的な改善を生じることが見出された16。
【０００７】
これらの結果によって、便失禁の処置に有効であるためには、局所フェニレフリン調合物は、３０〜４０重量％程度の高濃度のフェニレフリンを含むことが必要であることが示される。これらのレベルでは、肛門周囲の炎症が報告されている15。この理由のみによって、このような調合物は処置での使用には適切でない。
【０００８】
血管の筋肉組織のαアドレナリン作用性受容体に対して作用するフェニレフリンは、抗低血圧または昇圧効果としても公知である、血圧上昇効果を有しており、そして低血圧状態の処置において全身性に用いられている。便失禁の処置のためのフェニレフリンの局所使用に関する別の懸念は、便失禁を効果的に処置するために必要な高用量では、すなわち、３０〜４０重量％のフェニレフリンを含有する局所調合物を用いては、この局所投与されるαアドレナリン受容体アゴニストは、脈管構造に対して全身性に作用する可能性があり、血圧および／または心拍数に影響するということである。
【０００９】
便失禁における処置に対する高用量のαアドレナリン受容体アゴニストの局所使用に関するこれらの懸念は、フェニレフリンが眼科学において局所適用される場合に心血管系の副作用がみられるという事実17、そして局部的な炎症も観察されるという事実18によって支持される。これらの懸念はまた、脈管構造のαアドレナリン作用性受容体に作用する他のαアドレナリン受容体アゴニストであって、フェニレフリンと同様の血管収縮特性および血圧上昇特性を有し、そしてフェニレフリンと同じ効能のために、すなわち昇圧剤としておよび血管収縮剤として用いることができるアゴニストに対してもあてはまる。メトキサミン（２−アミノ−１−（２，５−ジメトキシフェニル）−１−プロパノール）は、このようなαアドレナリン受容体アゴニストの例である。
【００１０】
メトキサミンは、２つのキラル中心を有し、これによって４つの立体異性体を有する。現在、臨床上、昇圧剤として、そして血管収縮剤として用いられているメトキサミンは、異性体の混合物の形態である。
【００１１】
ＦｕｊｉｔａおよびＨｉｙａｍａ19は、酸性媒体中でヒドロシランによるα置換アルカノンのエリトロ方向還元のための方法であると言われているものを記載した。生成される化合物の１つは、（１Ｒ，２Ｓ）−２−アミノ−１−（２，５−ジメトキシフェニル）−１−プロパノールと言われており、これは、ＦｕｊｉｔａおよびＨｉｙａｍａによってＬ−ｅｒｙｔｈｒｏ−メトキサミンとも呼ばれる。しかし、ＦｕｊｉｔａおよびＨｉｙａｍａは、推定の１Ｒ，２Ｓ−メトキサミン異性体（または彼らが生成した任意の他の異性体）を明確には、すなわち、単結晶Ｘ線回折法によっては同定していないし、彼らは、推定の１Ｒ，２Ｓ−メトキサミン異性体（または彼らが生成した任意の他の異性体）の生物学的活性に関してはいかなる検討も行なっていない。さらに、記載される合成方法は、少量、約１ｇの生成物を生成するのには適切であるが、本発明者らは、この方法では、例えば約１ｇより多い量を生成するように、例えば、例えば、約３０ｇ〜５０ｇの異性体を生成するようにスケールアップした場合、疑わしい１Ｒ，２Ｓ−異性体を選択的に生成できなかったことを見出した。
【００１２】
ＦｕｊｉｔａおよびＨｉｙａｍａの方法は、アルコールへのα−アミノケトンの還元を伴う。著者らは、α−アミノケトンを還元するための以前に記載された方法では、炭化水素への過剰な還元が通常観察されたということを指摘する。著者らは、かれらの方法を用いると、通常の分析的方法によっては炭化水素の形成が検出されなかったということを述べている。彼らは、さらに、高度にエリトロ選択性の還元が認められたことを述べている。９９％を上回る選択性が観察されたと述べられた。
【００１３】
本発明者らは、メトキサミンの疑わしい１Ｒ，２Ｓ−異性体（Ｌ−ｅｒｙｔｈｒｏ−メトキサイン）を約１ｇという小規模で生成する場合、同様の結果を得たが、３０ｇ〜５０ｇのバッチにスケールアップした場合、本発明者らは、ＦｕｊｉｔａおよびＨｉｙａｍａの知見と対照的に、過剰な還元が生じ、ここでは、生成物のうち６０％〜７０％より多くが所望のアルコールではなく炭化水素であったということを見出した。さらに、そのプロセスは、エリトロ選択性ではなかった。かなりの量のトレオ異性体が形成された。
【００１４】
ＦｕｊｉｔａおよびＨｕｉｙａｍａは、彼らの方法および生成された異性体について言及する場合、「Ｒ，Ｓ」命名法および「エリトロ／トレオ（ｅｒｙｔｈｒｏ／ｔｈｒｅｏ）」命名法の両方を用いている。Ｃａｈｎ−Ｉｎｇｏｌｄ−Ｐｒｅｌｏｎｇ「Ｒ，Ｓ」命名法は一般に、異性体を明瞭に規定するとして受け入れられているので、「Ｒ，Ｓ」用語が、「エリトロ／トレオ」用語の代わりに、本明細書においてメトキサミン異性体を規定するために用いられる。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【００１５】
本発明者らは、Ｌ−ｅｒｙｔｈｒｏ−メトキサミンとしても公知である１Ｒ，２Ｓ−メトキサミンを合成して、核磁気共鳴（ＮＭＲ）分光法および単結晶Ｘ線回折法によって、この異性体が以下の構造を有することを確認した。
【００１６】
【化１】
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【００１７】
本発明は、医薬としての使用のための１Ｒ，２Ｓ−メトキサミンを提供する。
【００１８】
本発明は、αアドレナリン受容体アゴニストとしての使用のための１Ｒ，２Ｓメトキサミンを提供する。
【００１９】
本発明は、胃腸管の平滑筋の緊張を増大するのにおける使用のため、および胃腸管の平滑筋の緊張の消失から生じる混乱または障害を処置するのにおける使用のための１Ｒ，２Ｓ−メトキサミンを提供する。
【００２０】
本発明はまた、胃腸管の括約筋の緊張を増大するのにおける使用のため、および胃腸管の括約筋の緊張の消失から生じる混乱または障害を処置するのにおける使用のための１Ｒ，２Ｓ−メトキサミンを提供する。例えば、本発明は、幽門括約筋の緊張を増大するのにおける使用のため、および胃性下痢の処置における使用のため、および胃食道の括約筋の緊張を増大するのにおける使用のため、ならびに食道の逆流およびバレット病を処置するのにおける使用のための１Ｒ，２Ｓ−メトキサミンを提供する。
【００２１】
本発明は、肛門括約筋の緊張を増大するのにおける使用のため、および便失禁を処置するのにおける使用のための１Ｒ，２Ｓメトキサミンを提供する。
【００２２】
本発明はまた、心機能の混乱または障害、例えば心律動の混乱または障害の予防または処置における使用のための１Ｒ，２Ｓ−メトキサミンを提供する。
【００２３】
本発明はまた、血管収縮薬としての使用のための使用のための１Ｒ，２Ｓ−メトキサミンを提供する。本発明はまた、鼻詰まり薬としての使用のための使用のため、および眼科の血管収縮薬として、および眼の瞳孔を拡大するための散瞳薬としての使用のための１Ｒ，２Ｓ−メトキサミンを提供する。
【００２４】
本発明はまた、血圧上昇（昇圧）薬としての使用のための、例えば、低血圧の予防または処置における、例えば、麻酔の間および／または麻酔の後に血圧を維持するための１Ｒ，２Ｓ−メトキサミンを提供する。
【００２５】
本発明はさらに、上記の任意の用途のための医薬の製造のための１Ｒ，２Ｓ−メトキサミンの使用を提供する。
【００２６】
本発明はまた、αアドレナリン受容体アゴニストを用いた処置の必要な哺乳動物を処置する方法を提供する。この方法は、治療上有効な量の１Ｒ，２Ｓ−メトキサミンをこの哺乳動物に対して投与することを含む。
【００２７】
本発明は、哺乳動物の胃腸管の平滑筋の緊張を増大する方法を提供する。この方法は、治療上有効な量の１Ｒ，２Ｓ−メトキサミンをこの哺乳動物に投与することを含む。
【００２８】
本発明は、胃腸管の平滑筋の緊張の消失から生じる混乱または障害を処置する方法を提供する。この方法は、治療上有効な量の１Ｒ，２Ｓ−メトキサミンをこの処置の必要な哺乳動物に投与することを含む。
【００２９】
本発明は、哺乳動物の胃腸管の括約筋、例えば、幽門括約筋または肛門括約筋の緊張を増大する方法を提供する。この方法は、治療上有効な量の１Ｒ，２Ｓ−メトキサミンをこの哺乳動物に投与することを含む。
【００３０】
本発明は、胃腸管の括約筋の緊張の消失から生じる混乱または障害を処置する方法を提供する。この方法は、治療上有効な量の１Ｒ，２Ｓ−メトキサミンをこの処置の必要な哺乳動物に投与することを含む。このような障害としては、胃性下痢および便失禁が挙げられる。
【００３１】
本発明はまた、哺乳動物における心機能の混乱または障害の予防または処置のための方法を提供する。この方法は、治療上有効な量の１Ｒ，２Ｓ−メトキサミンをこの予防または処置の必要な哺乳動物に投与することを含む。このような混乱および障害としては、心律動の混乱または障害が挙げられる。
【００３２】
本発明はまた、血管収縮薬を用いて処置する必要がある哺乳動物を処置する方法を提供する。この方法は、治療上有効な量の１Ｒ，２Ｓ−メトキサミンをこの処置の必要な哺乳動物に投与することを含む。このような処置は、鼻詰まり、もしくは眼の充血の処置であってもよく、または眼の瞳孔を拡大することであってもよい。
【００３３】
本発明はまた、低血圧を処置または予防する方法を提供する。この方法は、例えば、麻酔の間に血圧を維持するために、治療上有効な量の１Ｒ，２Ｓ−メトキサミンをこの処置の必要な哺乳動物に投与することを含む。
【００３４】
この１Ｒ，２Ｓメトキサミンは、遊離の塩基の形態であってもその塩の形態であってもよい。処置における使用のためには、この塩は、生理学的に耐容性の塩でなければならない。
【００３５】
本発明はまた、薬学的に適切なキャリアと混合されるかまたは組み合わされた、１Ｒ，２Ｓ−メトキサミンまたはその生理学的に耐容性の塩を含む薬学的組成物を提供する。
【００３６】
本発明はまた、１Ｒ，２Ｓ−メトキサミンの生成のために適切なプロセスを提供する。このプロセスは、ジメチルフェニルシラン、および（Ｓ）−アミノ−１−（２，５−ジメトキシ−フェニル）−１−プロパノンを含む溶液にトリフルオロ酢酸を滴下する工程であって、この（Ｓ）−アミノ−１−（２，５−ジメトキシ−フェニル）−１−プロパノンのアミノ基が、例えば、アルコキシ基またはアリールオキシカルボニル基、例えばメトキシカルボニル基によって保護されている、工程と、得られたアミノ保護（１Ｒ，２Ｓ）−２−アミノ−１−（２，５−ジメトキシ−フェニル）−１−プロパノールからこの保護基を除去する工程とを含む。シランおよびプロパノンの溶液のための溶媒は、詳細には、塩素化炭化水素、例えば、ジクロロメタンである。ジメチルフェニルシランを用いるプロパノンの還元は、冷却しながら実行されるべきである。この反応は一般に、氷冷を用いて、例えば０℃の領域の温度で実行される。このプロセスによって、１ｇより大規模で、例えば、３０〜５０ｇまたはそれを超える規模で１Ｒ，２Ｓ−メトキサミンの生成が可能になる。
【００３７】
得られた１Ｒ，２Ｓ−メトキサミンは、その塩に、例えば、酸との塩に、例えば、上記のような塩に、例えば、酸との反応によって転化され得る。
【００３８】
本発明はまた、メトキサミン異性体の混合物からメトキサミンの１Ｒ，２Ｓ異性体を単離するための方法を提供する。この方法は、シリカゲルに結合したβ−シクロデキストリンＲ，Ｓ−ヒドロキシプロピルエーテルを含むクロマトグラフィー媒体を用いる高圧液体クロマトグラフィーに、好ましくは続いてビニルアルコールコポリマーの水酸基へのオクタデシル（Ｃ１８）基の導入によって誘導されたビニルアルコールコポリマーベースを含むクロマトグラフィー媒体を用いる逆相クロマトグラフィーに、この異性体の混合物を供することを含む。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３９】
（発明の詳細な説明）
本発明は、１Ｒ，２Ｓ−メトキサミン、および例えば、αアドレナリン受容体アゴニストとしてのその治療用途に関する。
【００４０】
本発明者らは、１Ｒ，２Ｓ−メトキサミンが、インビトロにおいて、そしてインビボで局所的に投与された場合、内肛門括約筋の収縮を誘導するのに低用量で有効であるということ、ならびにインビボにおけるこの効果が血圧の増大を伴わないということを見出した。
【００４１】
本発明者らは、１Ｒ，２Ｓ−メトキサミンがインビトロで内肛門括約筋の収縮を誘導するのにフェニレフリンよりも少なくとも４倍強力であるということを見出した。本発明者らはまた、インビボにおけるブタでの試験において、１重量％の１Ｒ，２Ｓ−メトキサミンを含有する０．５ｍｌのゲルの用量、およびさらに０．３重量％の１Ｒ，２Ｓ−メトキサミンを含有するゲルの０．５ｍｌ程度の少ない用量でさえ、すなわち、それぞれ、５ｍｇおよび１．５ｍｇの１Ｒ，２Ｓ−メトキサミンの用量が、局所的に与えられた場合、血圧に対してなんら影響なしに内肛門括約筋圧を増大するということを見出した。
【００４２】
これらの知見は極めて有意である。なぜなら１Ｒ，２Ｓ−メトキサミンの局所投与によって、結果として肛門筋の緊張および肛門管圧が、局所的に適用されたフェニレフリンで見られたのと量的に同様に、ただし必要なフェニレフリンの濃度および用量のごく一部でのみ増大し、そして血圧の上昇は伴わないからである。
【００４３】
異性体の混合物の形態であるメトキサミンは、血管筋組織のαアドレナリン作用性受容体において、αアドレナリン受容体アゴニストとして作用することが以前に記載されている。以下に限定するのではないが、本発明者らは、インビトロで肛門筋の緊張に対して、およびインビボで肛門括約筋の緊張に対して観察された１Ｒ，２Ｓ−メトキサミンの効果は、１Ｒ，２Ｓ−メトキサミンが筋に供給する血管の血管筋組織を間接的に介して作用するのではなく、括約筋自体におけるαアドレナリン作用性受容体を介して、肛門括約筋に対して直接作用する結果であると考えている。
【００４４】
αアドレナリン作用性受容体は、胃腸管全体にわたって、この管自体の平滑筋組織に、そしてこの管の種々の括約筋（内肛門括約筋、胃食道括約筋、幽門括約筋、オッジ括約筋、および回結腸括約筋を含む）に存在する。胃腸（ＧＩ）管平滑筋または任意のＧＩ管括約筋における緊張低下は、この管の正常な機能における混乱、または臨床的障害をもたらし得る。例えば、肛門括約筋の緊張の低下は、便失禁を生じ得る；幽門括約筋の緊張の低下は、胃性下痢の原因であり得る。
【００４５】
１Ｒ，２Ｓ−メトキサミンは、胃腸管の平滑筋の緊張を増大するために、そして胃腸管の平滑筋の緊張の消失から生じる混乱または障害を処置するために用いることができる。１Ｒ，２Ｓ−メトキサミンはまた、胃腸管の括約筋の緊張を増大するために、そして胃腸管の括約筋の緊張の消失から生じる混乱または障害を処置するために用いることができる。
【００４６】
例えば、１Ｒ，２Ｓ−メトキサミンは、肛門括約筋の緊張を増大するために、そして便失禁を処置するために用いることができる。１Ｒ，２Ｓ−メトキサミンの局所投与によって、有意な全身性副作用なしに、詳細には、例えば、血圧に対する有害な心血管系の影響なしに、かつ局部的な炎症なしに、便失禁の有効な処置を行なうことが可能である。１Ｒ，２Ｓ−メトキサミンは、幽門括約筋の緊張を増大するために、そして胃性下痢を処置するために用いることができる。
【００４７】
αアドレナリン作用性受容体はまた、心筋にも存在する。心機能の混乱、例えば、心律動の混乱は、一般には全身性に投与される１Ｓ，２Ｓ−メトキサミンの使用によって予防または処置され得る。
【００４８】
異性体の混合物の形態であるメトキサミンは現在、昇圧剤として用いられ、また血圧上昇剤または抗低血圧剤としても、そして血管収縮剤としても公知である。この昇圧効果および血管収縮効果は、血管筋肉組織のαアドレナリン受容体受容体に対するメトキサミンの作用によって達成される。１Ｒ，２Ｓ−メトキサミンは、αアドレナリン作用性アゴニストを用いることができる任意の効能（兆候）の処置において、詳細には血管筋肉組織のαアドレナリン作用性受容体に対して作用するαアドレナリン受容体アゴニストとして、例えば、メトキサミンが異性体の混合物の形態であるか、またはフェニレフリンが用いられるかもしくは用いられている任意の効能について、用いることができる。詳細には、１Ｒ，２Ｓ−メトキサミンは、昇圧薬として、または血管収縮薬として用いることができる。
【００４９】
本発明に従って処置されるべき被験体は哺乳動物である。この哺乳動物は一般にヒトであるが、商業的に飼育された動物またはペットであってもよい。
【００５０】
処置での使用について、１Ｒ，２Ｓ−メトキサミンはそれ自体で、すなわち、遊離塩基の形態で、またはその生理学的に耐容性の塩の形態で用いることができる。他に特に限定しない限り、「１Ｒ，２Ｓ−メトキサミン」という用語は、以下に用いる場合、遊離の塩基およびその生理学的に耐容性の塩の両方を包含する。１Ｒ，２Ｓメトキサミンまたはその塩の量または割合を規定する場合、この塩の量または濃度は好ましくは、遊離の塩基である１Ｒ，２Ｓ−メトキサミンに基づいて計算される。
【００５１】
１Ｒ，２Ｓ−メトキサミンの塩は、例えば、酸付加塩を含む、酸との塩である。塩の例は、塩酸、臭化水素酸、硫酸、ホスホン酸、酢酸、トリフルロ酢酸、乳酸、ピルビン酸、マロン酸、コハク酸、グルタル酸、フマル酸、酒石酸、マレイン酸、クエン酸、アスコルビン酸、シュウ酸、メタンスルホン酸  エタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、イセチオン酸、またはショウノウ酸との塩である。
【００５２】
１Ｒ，２Ｓ−メトキサミンは、一般には本発明の薬学的組成物の形態で、全身性に投与されても、非全身性に投与されてもよい。１Ｒ，２Ｓ−メトキサミンの投与経路、適切な薬学的組成物、さらには好ましい用量も、意図される用途に依存する。
【００５３】
本発明はまた、薬学的な用途のために、例えば、約１ｇより多い、例えば、約３０ｇ〜５０ｇまたはそれを超える量で適切である規模での、１Ｒ，２Ｓ−メトキサミンの生成のために適切な方法を提供する。この方法は、上に記載されており、そして下にさらに詳細に記載される。Ｆｕｊｉｔａらによって以前に提唱された方法は、約１ｇまでの小規模でしか役立たない。このような規模は、臨床試験のための物質の生成としてでさえも小さ過ぎる。従って、本明細書で記載される用途は、本発明のプロセスの開発の前には不可能であった。
【００５４】
本発明は、活性成分として１Ｒ，２Ｓ−メトキサミンまたはその生理学的に耐容性の塩を、薬学的に適切なキャリアと混合して、または組み合わせて含む薬学的組成物を提供する。
【００５５】
本発明の薬学的組成物は、全身性または局部的な効果を達成するために適切な形態であり得る。
【００５６】
「全身性（ｓｙｓｔｅｍｉｃ）」という用語を用いて、本明細書においては、「全体として身体に関するかまたは影響する（ｐｅｒｔａｉｎｉｎｇ  ｔｏ  ｏｒ  ａｆｆｅｃｔｉｎｇ  ｔｈｅ  ｂｏｄｙ  ａｓ  ａ  ｗｈｏｌｅ）」ということを意味する。「局部的（ｌｏｃａｌ）」という用語を用いて、「全身ではなく；１つの局所または部分に限定されるかまたは関する（ｒｅｓｔｒｉｃｔｅｄ  ｔｏ  ｏｒ  ｐｅｒｔａｉｎｉｎｇ  ｔｏ  ｏｎｅ  ｓｐｏｔ  ｏｒ  ｐａｒｔ；  ｎｏｔ  ｇｅｎｅｒａｌ）」ことを意味する。「局所的（ｔｏｐｉｃａｌ）」という用語は、「特定の表面領域に関する（ｐｅｒｔａｉｎｓ  ｔｏ  ａ  ｐａｒｔｉｃｕｌａｒ  ｓｕｒｆａｃｅ  ａｒｅａ）」ことを意味する。例えば、皮膚の特定の表面領域に対する局所投与のために適切な薬学的組成物は、一般に全身ではなく局部の効果を提供する。しかし、いくつかの局所的処方物は、活性な成分の主として全身投与のために設計され得る。他に特定しない限り、「局所的（ｔｏｐｉｃａｌ）」という用語は、例えば、局所投与または局所薬学的組成物においてのように、「特定の表面領域に関して局部的効果を有する（ｐｅｒｔａｉｎｉｎｇ  ｔｏ  ａ  ｐａｒｔｉｃｕｌａｒ  ｓｕｒｆａｃｅ  ａｒｅａ  ａｎｄ  ｈａｖｉｎｇ  ａ  ｌｏｃａｌ  ｅｆｆｅｃｔ）」ことを意味するために本明細書において用いられる。
【００５７】
本発明の薬学的組成物は、１Ｒ，２Ｓ−メトキサミンの注射または注入による投与のため；皮下投与のため；経皮投与のため；舌下投与を含む経口投与；直腸投与；および局所投与、例えば、皮膚、眼の表面、または鼻の粘膜への投与のために適切な組成物を含む。
【００５８】
経口投与および舌下投与のための適切な薬学的組成物は公知である。錠剤およびカプセルは、経口投与のために広範に用いられ、他の処方物、例えば、丸剤、顆粒、糖衣錠、およびウエハー（ｗａｆｅｒ）は、それほど一般的ではない。遅延放出性処方物または標的放出処方物が用いられてもよい。例えば、ＧＩ管の予め決定された部分に対する放出を標的する処方物、例えば時間遅延性放出処方物またはｐＨ依存性処方物、例えば、胃、十二指腸、または下部ＧＩ管、例えば結腸への放出を標的する処方物。例えば、結腸の細菌による分解を受けやすいコーティングを含む結腸標的処方物のような、結腸の周囲のｐＨで活性成分を放出するように設計されている処方物を用いてもよい。処方物は、胃腸管の他の部分に対して、例えば、胃または十二指腸に対して標的化されてもよい。液体調合物、例えばシロップ、または増粘液、例えば増粘ゲル、またはスラリーが経口投与のために用いられてもよい。
【００５９】
直腸投与のために適切な薬学的組成物としては、坐剤、ゼラチン直腸カプセル、および浣腸液が挙げられる。
【００６０】
鼻粘膜への投与に適切な薬学的組成物は、例えば、点滴薬、スプレー、およびエアロゾルである。眼の表面に対する投与のための組成物は、例えば、点滴薬、クリーム、および軟膏である。
【００６１】
本発明の薬学的組成物は、例えば、皮膚への局所投与のために適切な形態で、例えば、ゲル、クリーム、軟膏、ペースト、発泡体、または接着性パッチであってもよい。
【００６２】
薬学的組成物は、皮下投与のためであってもよい。いくつかの組成物、例えば、皮下デポ調合物および接着性パッチによって、遅延放出または徐放性放出を得ることができる。
【００６３】
上記のような薬学的組成物はまた、１Ｒ，２Ｓ−メトキサミンに加えて１つまたは複数のさらなる活性成分を含んでもよい。例えば、便失禁の処置のための肛門領域への局所投与のための組成物は、この肛門領域への局所投与のための組成物に代表的に存在する、任意の薬学的に活性な成分、例えば炎症を軽減するように働き得るステロイド、および／または局部麻酔薬を含んでもよい。肛門領域における皮膚への局所投与のための薬学的組成物はまた、皮膚浸透増強剤、皮膚水和剤、および皮膚軟化剤から選択される任意の１つまたは複数の薬剤を含んでもよい。皮膚への投与のための局所組成物は、例えば、チューブ、ポンプ付きの容器、またはエアロゾル缶に入れてもよい。
【００６４】
皮膚への局所投与のための本発明の薬学的調合物、例えば、ゲル、クリームまたは軟膏、特に便失禁の処置における使用を意図する組成物は一般に、１０重量％以下の１Ｒ，２Ｓ−メトキサミン、そして通常は１０％未満、例えば、８％以下、例えば、５％以下、例えば、４％以下、３％以下、２％以下または１％以下の１Ｒ，２Ｓ−メトキサミンを含む。１重量％以下のメトキサミン、例えば、０．８重量％以下、例えば、０．５重量％以下、例えば、０．３重量％以下、例えば、０．１重量％の１Ｒ，２Ｓ−メトキサミンを含む調合物を用いてもよい。組成物は、例えば、０．１重量％〜５重量％、例えば、０．３〜３重量％の１Ｒ，２Ｓ−メトキサミンを含んでもよい。この調合物は、１日あたり１回または複数回、例えば、１日２または３回、さらにそれより高頻度、例えば、１日あたり４または５回投与されてもよい。局所調合物の単位用量は代表的には、約１ｍｌのゲル、軟膏、またはクリームであり、例えば上記のような所定量の１Ｒ，２Ｓ−メトキサミンを含む。１回の適用あたりに投与される１Ｒ，２Ｓ−メトキサミンの用量は、投与された組成物の体積およびこの組成物中の１Ｒ，２Ｓ−メトキサミンの濃度から算出できる。例えば、１ｍｌの１重量％の１Ｒ，２Ｓ−メトキサミンゲルによって、１０ｍｇ用量という１Ｒ，２Ｓ−メトキサミンの用量が提供される。
【００６５】
本発明の薬学的組成物は、単位投薬形態であってもよい。全身性投与のための単位投薬形態の例は上記されている。経口または直腸投与のための単位投薬形態としては、例えば、錠剤、カプセル、および坐剤が挙げられ、注射または注入による投与のための単位投薬形態としては、例えば、水薬瓶およびアンプルが挙げられる。皮膚への局所投与のための単位投薬形態としては、ブリスター包装または子袋（ｓａｃｈｅｔ）が挙げられるが、各々のブリスターまたは子袋は、単位用量の、例えば、上記のようなゲル、クリーム、または軟膏を含有する。計量投薬装置としては、例えば、局所組成物、例えば、クリーム、軟膏、またはゲルの予め決定された体積を投薬するためのポンプ装置を備え得る。眼の瞳孔を拡大するための散瞳薬としての使用のためには、単回滴下単位用量が提供される。調合物は、デポ調合物または接着性パッチのために、徐放性の放出を提供し得る。
【００６６】
上記の種々のタイプの薬学的組成物および上記の投与の経路に適切な他の組成物は、このような組成物のための処方およびそれらの調合のための方法と同様に公知である。当該分野の文献としては、ハンドブック、例えば、ＥＷ  Ｍａｒｔｉｎによるレミントンの薬学（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）が挙げられる。総説および文献論文には、標準的な処方物および装置、ならびにより洗練された処方物および装置の両方、例えば、種々のタイプの接着性パッチが記載されている。
【００６７】
上記のように、１Ｒ，２Ｓ−メトキサミンの投与の経路、適切な薬学的組成物、および好ましい用量は、意図される用途に依存する。臨床的な処置において、所望の効果を達成する最低の用量を使用することが一般に好ましい。１Ｒ，２Ｓ−メトキサミンは、メトキサミンラセミ化合物、すなわち４つの異性体全ての等モル混合物の少なくとも４倍の力価を有する。従って、メトキサミンラセミ化合物が以前に用いられている効能に用いる場合、１Ｒ，２Ｓ−メトキサミンの用量は、一般に、例えば、以前の容量の少なくとも半分まで、例えば、約四分の一まで減少されるべきである。さらに低い用量を用いてもよい。
【００６８】
昇圧剤としての使用のために、高血圧の処置のために、１Ｒ，２Ｓ−メトキサミンは一般に全身性に投与される。例えば、麻酔の間の血圧の維持のために用いられる場合、１Ｒ，２Ｓ−メトキサミンは、注射または注入によって、一般には静脈内注射または静脈内注入によって投与される。
【００６９】
麻酔の間に血圧を維持するための昇圧剤としての使用のための、市販される異性体の混合物の形態で２０ｍｇ／ｍｌのメトキサミンを含有する溶液の推奨される用量は、静脈内に投与される場合０．１５〜０．２５ｍｌであり、筋肉内に投与される場合、１ｍｌであり、すなわち、推奨される用量は、静脈内に投与される場合３〜５ｍｇであり、そして筋肉内に投与される場合、約２０ｍｇである。麻酔の間に血圧を維持する昇圧剤としての使用のための１Ｒ，２Ｓ−メトキサミンの用量は、例えば、その用量の半分以下、例えば、その用量の四分の一以下、例えば、静脈内に投与される場合１ｍｇ以下、そして筋肉内に投与される場合５ｍｇ以下であってもよい。
【００７０】
鼻詰まり薬としての使用のためには、１Ｒ，２Ｓ−メトキサミンは一般に、鼻粘膜に対して、例えば、点滴薬、スプレー、またはエアロゾルの形態で局所的に投与される。
【００７１】
１Ｒ，２Ｓ−メトキサミンは、眼科の血管収縮剤として、例えば、アレルギー反応、乾燥、ほこりもしくは煙たい環境、正しくまばたきできないこと、または疲労によって生じる、例えば、眼の充血の処置のために、用いることができる。１Ｒ，２Ｓ−メトキサミンはまた、散瞳薬として、眼の瞳孔の拡張のために用いることができる。眼科の用途のために、１Ｒ，２Ｓ−メトキサミンは、例えば、点滴薬、クリーム、または軟膏の形態で、眼の表面に局所投与されてもよい。
【００７２】
便失禁の処置のためには、１Ｒ，２Ｓ−メトキサミンは、局所的に、例えば、肛門および臀部の領域に投与され得る。このような局所投与に適切な薬学的組成物としては、ゲル、クリーム、軟膏、ペースト、および発泡体；液体組成物、特に増粘液；皮下デポ調合物；および経皮パッチが挙げられる。
【００７３】
本発明による１Ｒ，２Ｓ−メトキサミンの局所投与、すなわち、局部的な効果を有する局所投与は、メトキサミンの全身性の影響、例えば血圧に対する影響を軽減するという利点を有する。
【００７４】
肛門領域、すなわち、肛門周囲領域と呼ばれる、肛門、肛門管、および肛門周囲の領域の全てまたは一部に対する、例えば、肛門管上皮、肛門管、内肛門括約筋、および臀部のいずれかまたは全てに対する１Ｒ，２Ｓ−メトキサミンの投与は有利であり得る。例えば、クリーム、軟膏、ゲル、または発泡体は、肛門管および／または肛門周囲の皮膚へ塗薬用具または指を用いて塗布されてもよい。
【００７５】
代替法は、肛門括約筋の筋肉へ、または肛門領域の他の組織へ１Ｒ，２Ｓ−メトキサミンを直接注射することである。臀部、詳細には肛門領域付近に適用された全身性の経皮パッチは、全身性の効果に加えて局部的な効果を有する。
【００７６】
局所的調合物が、チューブ中の軟膏、クリーム、ゲル、またはペーストである場合、使用説明書は、例えば、このチューブから約２〜３ｃｍの調合物を絞るように、適切な量を用いることを推奨し得る。局所的な調合物は、正確な投薬を補助するポンプおよび計量投薬装置を備える容器中に入れられてもよい。概して、約０．５〜約３ｍｌ、例えば、約１ｍｌが、局所適用のためのクリーム、ゲル、または軟膏の適切な体積である。しかし、局所調合物を適用する場合、特に指を用いる場合、正確な用量を投与することはしばしば困難である。塗薬用具の使用によって、より正確な投薬を得ることができる。
【００７７】
使用説明書は、適用の推奨される部位、例えば、調合物が肛門の周囲の皮膚に適用されるべきであるか、または調合物が肛門にも挿入されるべきであるかを示すべきである。
【００７８】
便失禁を効果的に処置するために、局所調合物中で３０〜４０重量％の濃度でフェニレフリンを使用する必要がある。例えば、代表的には１ｍｌの体積のゲルは、４００ｍｇの用量のフェニレフリンを与える。フェニレフリンの総用量および高濃度は、全身性および局部的な副作用、詳細には心血管系の副作用、例えば、血圧の上昇および局部的な皮膚の炎症を生じる。対照的に、１Ｒ，２Ｓ−メトキサミンを用いて、１重量％および０．３重量％の１Ｒ，２Ｓ−メトキサミンを含む０．５ｍｌのゲルは、ブタでの試験において血圧に対してなんら影響なしに、内肛門括約筋圧を増大することが見出された。
【００７９】
本発明によれば、便失禁の処置のためには、局所的な投与に適切な薬学的組成物、例えばゲル、クリーム、または軟膏であって、一般に１０重量％以下の１Ｒ，２Ｓ−メトキサミン、そして通常１０％未満、例えば８％以下、例えば、５％以下、例えば、４％、３％、２％、または１％以下の１Ｒ，２Ｓ−メトキサミンを含むものを使用することが好ましい。１重量％以下のメトキサミンを含む調合物は、例えば、０．８％以下、例えば、０．５％以下、例えば０．３％以下、例えば、０．１重量％の１Ｒ，２Ｓ−メトキサミンを用いてもよい。約０．５〜約２ｍｌ、好ましくは約１ｍｌが、局所適用のためのクリーム、ゲル、または軟膏の適切な体積である。
【００８０】
組成物は、１日あたり１回または複数回、例えば、１日あたり２または３回、さらにより高頻度には例えば、１日あたり４または５回投与されてもよい。局所調合物の代表的な単位用量は、ゲル、軟膏、またはクリームの約１ｍｌであり、これは例えば、上記のような所定量の１Ｒ，２Ｓ−メトキサミンを含む。１回の適用あたりに投与される１Ｒ，２Ｓ−メトキサミンの用量は、投与された組成物の体積およびこの組成物中の１Ｒ，２Ｓ−メトキサミンの濃度から算出できる。例えば、１ｍｌの１重量％の１Ｒ，２Ｓ−メトキサミンゲルによって、１０ｍｇ用量という１Ｒ，２Ｓ−メトキサミンの用量が提供される。例えば、０．５ｍｇ〜４０ｍｇの範囲の用量が投与されてもよい。関連する部位に実際に投与される用量は、適用の間の損失のせいで理論的な用量よりも少ないかもしれないことが理解される。
【００８１】
胃腸管の平滑筋の緊張を増大するのにおける使用のため、および胃腸管の平滑筋の緊張の消失から生じる混乱または障害を処置するのにおける使用のため、そしてまた胃腸管の括約筋の緊張を増大するのにおける使用のため、そして胃腸管の括約筋の緊張の消失から生じる混乱または障害を処置するのにおける使用のため、１Ｒ，２Ｓ−メトキサミンは好ましくは、所望されない全身性の副作用を回避するため、例えば、上記の薬学的組成物を用いて局所投与される。適切な遅延または標的化投与のための組成物が用いられてもよい。例えば、胃食道括約筋の緊張を増大するのにおける使用のため、そして逆流、例えば、バーネット病を処置するのにおける使用のため、１Ｒ，２Ｓ−メトキサミンは、増粘液、例えば、粘稠性のゲルまたはスラリーの形態で、投与されてもよい。幽門括約筋の緊張を増大するのにおける使用のため、および胃性下痢の処置における使用のため、１Ｒ，２Ｓ−メトキサミンは、増粘液、例えば粘稠性のゲルもしくはスラリー、または胃における放出を標的した固体の経口組成物の形態で投与されてもよい。
【００８２】
心機能の混乱または障害、例えば、心律動の混乱または障害の予防または処置における使用のため、１Ｒ，２Ｓ−メトキサミンは、特に注射または注入によって、例えば、上記の適切な薬学的組成物の形態で、全身に投与される。
【００８３】
一般的な原理として、局部効果が所望される場合、例えば、鼻詰まりの処置において、眼科の用途において、そして便失禁の処置において、全身性の影響なしに、例えば、血圧に影響することなく、局部効果を達成することが所望される。１Ｒ，２Ｓ異性体は、任意の他の異性体またはラセミ化合物自体よりも大きい活性を有するという事実は、望ましくない副作用のレベルを低下するかなり低用量でも、同じ薬理学的効果を達成することができるということを意味する。
【００８４】
１Ｒ，２Ｓ−メトキサミンを全身性に用いることによって、より低用量を用いて、より高用量のメトキサミンラセミ化合物で得られるのと同じ効果を達成することができる。
【００８５】
上記で説明されたように、本発明者らは、ＦｕｊｉｔａおよびＨｉｙａｍａ20の方法では、極めて少量、例えば、約１ｇまでの１Ｒ，２Ｓ−メトキサミンしか生成できないということを見出したが、このような量は、実用的な目的には少なすぎる。従って、かなり大規模、例えば、少なくとも１バッチあたり３０〜５０ｇの生成が可能である本発明のプロセスによって、異性体を生成することが好ましい。
【００８６】
本発明のプロセスは、ジメチルフェニルシランおよびアミノ基が保護されている（Ｓ）−アミノ−１−（２，５−ジメトキシ−フェニル）−１−プロパノンを含む溶液にトリフルオロ酢酸を滴下して加える工程と、この得られたアミノ保護（１Ｒ，２Ｓ）−２−アミノ−１−（２，５−ジメトキシ−フェニル）−１−プロパノールからこの保護基を除去する工程とを含む。この保護基は、例えば、アルコキシ基またはアリールオキシカルボニル基、例えば、メトキシカルボニル基またはｔ−ブトキシカルボニル基であってもよい。反応の立体特異性に対するこの保護基の影響を最小限にするために、他の保護基に対して小さくかつかさ高くない保護基を使用することが一般に好ましい。メトキシカルボニル保護基が一般に好ましい。シランおよびプロパノンの溶液のための溶媒は、詳細には、塩素化炭化水素、例えばジクロロメタンである。ジクロロメタンは、他の塩素化炭化水素、例えばクロロホルムよりも毒性が少ないという利点を有する。ジメチルフェニルシランを用いるプロパノンの還元は、冷却しながら実行されるべきである。なぜならこの反応では熱が生じるからである。この反応は一般に、氷冷、例えば、０℃の領域の温度で、トリフルオロ酢酸を添加しながら実行される。そして得られた反応混合物は好ましくは、その温度で、例えば約１時間維持される。
【００８７】
この反応は、塩基、例えば、水酸化ナトリウムを添加することによって停止され得る。この生成物は、所望ならば結晶化によって精製することができる。保護基をこの生成物から除去して、それを、好ましくは塩基、例えば、水酸化カリウムを用いて、例えば、還流条件下で、例えば約２０時間の還元によって、１Ｒ，２Ｓ−メトキサミンに転化する。
【００８８】
本発明はまた、好ましくは上記のような、アミノ基が保護されている（１Ｒ，２Ｓ）−２−アミノ−１−（２，５−ジメトキシ−フェニル）−１−プロパノールを生成するためのプロセスを提供する。このプロセスは、好ましくは上記のように、ジメチルフェニルシランおよびアミノ基が保護されている（Ｓ）−アミノ−１−（２，５−ジメトキシ−フェニル）−１−プロパノンを含む溶液にトリフルオロ酢酸を滴下して加える工程を含む。この試薬および反応条件は好ましくは上記のとおりである。
【００８９】
アミノ基が保護されている（Ｓ）−アミノ−１−（２，５−ジメトキシ−フェニル）−１−プロパノンは、ＦｕｊｉｔａおよびＨｉｙａｍａ20に記載の方法によってＬ−アラニンから生成することができる。まとめると、この方法は、Ｌ−アラニンのアミノ基を保護する工程、Ｎ−保護されたアラニンのカルボキシ基をその場で（インサイチュ）酸塩化物に転化し、続いてアミンとの反応によってＮ保護（Ｓ）−アラニンアミドを生成する工程、およびその化合物を、ｎ−ブチルリチウムまたはマグネシウムベースの試薬、例えば、グリニャール試薬またはグリニャール型試薬の存在下で塩素化２，５−ジメトキシベンゼンとカップリングさせてアミノ基が保護されている（Ｓ）−アミノ−１−（２，５−ジメトキシ−フェニル）−１−プロパノンを得る工程を含む。ＦｕｊｉｔａおよびＨｉｙａｍａによって記載された方法では、アミノ保護基はメトキシカルボニル基であり、アミンはジメチルアミンであり、塩素化２，５−ジメトキシベンゼンはブロモ−２，５−ジメトキシベンゼンであり、そしてカップリング反応において用いられた試薬は、ｎ−ブチルリチウムである。この反応スキームを以下に示す。
【００９０】
【化２】
0005486143.tif 000003
【００９１】
ＦｕｊｉｔａおよびＨｉｙａｍａは、上記に示された反応スキームにおける種々の中間体の生成のための詳細なプロトコルを記載している。しかし、ＦｕｊｉｔａおよびＨｉｙａｍａの反応スキームにおける任意の中間体は、異なるプロセスまたは改変プロセスによって生成することができる。例えば、あらゆる詳細までそれらのプロトコルに従う必要はない。この試薬および／または反応条件は変えられてもよい。例えば、ＦｕｊｉｔａおよびＨｉｙａｍａは、このカップリング工程において３当量のブロモ−２，５−ジメトキシベンゼンを用いる。しかし、このプロセスを約１ｇのバッチサイズから３０ｇ〜５０ｇのバッチサイズへスケールアップした場合、得られた（Ｓ）−メトキシカルボニル）アミノ］−１−（２，５−ジメトキシ−フェニル）−１−プロパノンは精製することが困難であるということが見出された。代わりにわずか１．５当量のブロモ−２，５−ジメトキシベンゼンおよびｎ−ブチルリチウムを用いれば、その生成物は精製することがかなり容易であり、驚くべきことに、収率の損失はなく、アラニンの出発物質から算出して、９８％におよぶ収率が得られるということが見出されている。以下の実施例において、さらに詳細が記載される。
【００９２】
この試薬および反応条件は、所望のとおり、例えば、上記のように変えられてもよい。例えば、異なるアミノ保護基、例えば、ｔ−ブトキシカルボニル基を用いることができる。ジメチルアミンの代わりに、メトキシメチルアミンを用いることができる。ヨード−２，５−ジエメトキシベンゼンの代わりに、クロロ−２，５−ジエメトキシベンゼンまたはヨード−２，５−ジエメトキシベンゼンを用いてもよい。しかし、このような改変体は、収率の低下、および／またはこの反応の立体特異性の低下を生じる可能性が高い。従って、推奨される試薬および反応条件を用いることが好ましい。
【００９３】
１Ｒ，２Ｓ−メトキサミンを生成する別の方法は、メトキサミンラセミ化合物、またはメトキサミン異性体の任意の混合物のクロマトグラフィー分離による。しかし、従来のクロマトグラフィーによる分離および単離は、ほとんど不可能である。キラル高圧液体クロマトグラフィー（ｈｐｌｃ）が、唯一の現実的な方法であり、そしてその技術の使用には、特別な改変を使用することが必要である。
【００９４】
キラルクロマトグラフィーは好ましくは、異性体の分離のために設計されたクロマトグラフィー媒体を用いて実行される。例えば、βシクロデキストリンＲ，Ｓ−ヒドロキシプロピルエーテルを含むクロマトグラフィー媒体。このような媒体は包接錯体を形成する特性を有する。例えば、Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，１  Ｂｌａｋｅ  Ｓｔｒｅｅｔ，Ｃｏｎｇｅｌｔｏｎ，Ｃｈｅｓｈｉｒｅ，Ｅｎｇｌａｎｄから入手可能であるサイクロボンド（Ｃｙｃｌｏｂｏｎｄ）１  ２０００  ＲＳＰを用いてもよい。その媒体は、シリカ粒子に対してβシクロデキストリンを共有結合させることによって製造された逆相クロマトグラフィー媒体である。シクロデキストリンの二級水酸基のいくつかは、ラセミ（Ｒ，Ｓ）ヒドロキシプロピル基で誘導体化され、溶質とさらなる水素結合相互作用を行なうことができる。溶質は、逆相中のシクロデキストリンの間隙に含まれるようになり、そしてヒドロキシプロピル側鎖相互作用と一緒に、エナンチオ−選択性が生じる。シクロデキストリンクロマトグラフィー技術の総説については、例えば、Ｗａｒｄ＆Ａｒｍｓｔｒｏｎｇ21を参照のこと。０．１％のトリエチルアミン水溶液を含む移動相をクロマトグラフィーに用いてもよい。０．１％トリエチルアミン水溶液のｐＨを、例えば氷酢酸を用いて、４．１のｐＨに調節してもよい。
【００９５】
サイクロボンド（Ｃｙｃｌｏｂｏｎｄ）１  ＲＳＰの使用によって、２つのメトキサミン異性体をメトキサミンラセミ化合物から高純度で単離することができる。他の２つの異性体を分離するために、例えば、ビニルアルコールコポリマーの水酸基へオクタデシル（Ｃ１８）基を導入することによって誘導体化されたビニルアルコールコポリマーベースを含むクロマトグラフィー媒体を用いて、この２つの異性体を含む溶離液をさらなるクロマトグラフィーに供することが好ましい。このような媒体は、例えば、これもＡｄｖａｎｃｅｄ  Ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，１  Ｂｌａｋｅ  Ｓｔｒｅｅｔ，Ｃｏｎｇｅｌｔｏｎ，Ｃｈｅｓｈｉｒｅ，Ｅｎｇｌａｎｄから入手可能であるＣ１８カラムである。Ｃ１８カラムは、移動相からこのサンプルを濃縮する。水で洗浄することによって、緩衝液を除去することができる。メトアンルを用いてカラムを溶離することによって、精製されたエナンチオマーの回収が可能になる。
【００９６】
サイクロボンド（Ｃｙｃｌｏｂｏｎｄ）１  ＲＳＰ、続いてＣ１８の使用によって、４つの異性体全ての純粋なサンプルを得る。さらなる詳細は、以下の実施例に示される。他の類似のクロマトグラフィー媒体を、サイクロボンド（Ｃｙｃｌｏｂｏｎｄ）１  ＲＳＰおよびＣ１８の一方または両方の代わりに用いることができる。例えば、同じもしくは同様の化学組成、および／または同じもしくは同様の物理化学的クロマトグラフィー特性を有するクロマトグラフィー媒体を用いることができる。
【００９７】
分析目的に適切であるが、クロマトグラフィーは、実際的な目的のため、例えば、臨床用途のために十分大きい規模での１Ｒ，２Ｓ−メトキサミンの生成にとっては実際的ではない。
【００９８】
キラルクロマトグラフィーを用いてさえ、クロマトグラフィー画分を異性体の化学的構造と明解に関連付けることはできない。１Ｒ，２Ｓ−メトキサミンとも呼ばれるメトキサミンの１Ｒ，２Ｓ異性体の最終的な同定を可能にするためには、ｎｍｒ分光法および単結晶Ｘ線回折解析の組み合わせが必要であった。
【００９９】
上記のように、１Ｒ，２Ｓ−メトキサミンが、インビトロにおいてフェニレフリンよりも内肛門括約筋の収縮を誘導するのに少なくとも４倍強力であることがここで見出されている。インビボでのブタに対する試験において、１重量％の１Ｒ，２Ｓ−メトキサミン（Ｌ−ｅｒｙｔｈｒｏ−メトキサミン）および０．１重量％程度ですら少量を含むゲルが、血圧に対してなんら影響することなく、内肛門括約筋圧を増大することが見出された。この知見は極めて重要である。なぜなら、フェニレフリンで見られる増大と量的に同様の肛門管圧の増大が、必要なフェニレフリンの濃度のごく一部で達成されるからである。１Ｒ，２Ｓ−メトキサミンは、括約筋におけるαアドレナリン作用性受容体を介して内肛門括約筋に作用すると考えられる。
【０１００】
以下の非限定的な実施例によって、本発明を例示する。
【０１０１】
（実施例１）
内肛門括約筋に対するメトキサミン異性体のインビトロ研究。
【０１０２】
（方法）
地方の食肉処理場から、雌性大型白色ブタ（Ｌａｒｇｅ  Ｗｈｉｔｅ  Ｐｉｇ）からの組織を得た。内肛門括約筋の小片を切断して、その組織を、４℃のクレブス（Ｋｒｅｂｓ）液（１２０ｍＭ  ＮａＣｌ、５．９ｍＭ  ＫＣｌ、１５．４ｍＭ  Ｎａ2ＨＣＯ3、１．２ｍＭ  ＮａＨ2ＰＯ4、２．５ｍＭ  ＣａＣｌ2、１．２ｍＭ  ＭｇＣｌ2、１１．５ｍＭグルコース、ｐＨを７．４±０．０５に維持するように９７％酸素および３％二酸化炭素で平衡化）に直ちに移した。肛門管の上皮を粘膜下組織とともに切り出した。内肛門括約筋（ＩＡＳ）の細片を切断したが、これは各々が約１×１×７ｍｍの寸法であり、２ｍｇ〜８ｍｇの重さであり、そして平行な筋束を含んでいた。細い５−０の絹の結紮糸を、各々の末端に結び付けて、その細片を等尺性の緊張状態に装着して、図１に示されるように灌流臓器槽（容量０．２ｍｌ）19中で記録した。筋肉の細片１を、糸２によって保持して、パースペックス（Ｐｅｒｓｐｅｘ）ジャケット３内の位置に固定する。この細片を流入４を介して導入されてオーバーフロー５を介して出て行く、１ｍｌ／分の速度のクレブス液（３７℃）を用いて連続的に灌流させた。この装置によって６つの細片を同時に研究することが可能になる。この細片を最初、１ｇの張力で配置して、少なくとも９０分間平衡化させた。張力は、張力変換器６ならびにリング電極７および７ａを備えるＰｉｏｄｅｎダイナモメーター  ＵＦ１変換器（Ｐｉｏｄｅｎ  Ｃｏｎｔｒｏｌｓ，Ｃａｎｔｅｒｂｕｒｙ，ＵＫ）によって測定して、６チャンネルＴｅｋｍａｎ  ９００ペンレコーダー（Ｔｅｋｍａｎ  Ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃｓ，Ｌｅａｍｉｎｇｔｏｎ  Ｓｐａ，ＵＫ）で、そしてＣｈａｒｔ  ｖ３．６およびＭａｃＬａｂ  Ｄａｔａ  Ａｃｑｕｉｓｉｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍ（ＡＤ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ａｕｓｔｒａｌｉａ）を用いて記録した。
【０１０３】
フェニレフリン（Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．，Ｐｏｏｌｅ，ＵＫ）、メトキサミンラセミ化合物、および４つのメトキサミン異性体を、クレブス液中に溶解して、ＩＡＳの緊張状態に対するこれらの影響を試験した。メトキサミンラセミ化合物、すなわち、４つの異性体の等モル混合物を、Ｐｒｏｓｙｔｈ  Ｌｉｍｉｔｅｄ，Ａｃｔｏｎ，Ｓｕｄｂｕｒｙ，Ｓｕｆｆｏｌｋによて生成された。４つの異性体（ピーク１〜４と呼ばれる）を、実施例３に記載のように分離した。ピーク２は、１Ｒ，２Ｓ−メトキサミンである。１Ｒ，２Ｓ異性体はまた、実施例４に記載のように合成した。ピーク２は、１Ｒ，２Ｓ−メトキサミンであることを結晶学によって確認した。
【０１０４】
ＩＡＳ細片は、平衡期間中に、本来の緊張状態を明らかにした。平衡後、各々の試験化合物の漸増する濃度を２０秒間添加したが、このとき、緊張状態がベースラインに戻るまで、少なくとも１０分間のウォッシュアウト期間をはさんだ。
【０１０５】
結果を平均（平均の標準誤差）およびこれらの細片が由来する外科的標本の数として表す。各々の試験化合物について各々のブタから最大で６つの細片を用いた。
【０１０６】
試験化合物が誘導した緊張状態の増大は、試験化合物の適用後のピークの緊張をとること、およびこれを基準の緊張から差し引くことによって算出された。次いで、この数値を、用いた用量範囲［１０-2Ｍ〜１０-8Ｍ］にまたがって見られる緊張の最大上昇の百分率として表した。全ての解析は、Ｃｈａｒｔ  ｖ３．６ソフトウェアを用いて実施した。
【０１０７】
ＥＣ50値は、各々の筋肉細片の濃度応答曲線をプロットすることによって算出した。直線回帰によって、最大収縮の５０％を生じる用量を算出した。不釣合いな分散を想定し、かつｐ＜０．０５を有意とみなして、両側ｔ検定を用いて、異なる薬物のＥＣ50値を比較した。
【０１０８】
（結果）
（メトキサミンラセミ化合物およびフェニレフリン）
メトキサミンラセミ化合物およびフェニレフリンの両方ともが、ＩＡＳ由来の平滑筋細片の用量依存性の収縮を生じた。メトキサミンラセミ化合物およびフェニレフリンのＥＣ50値に有意な差はなかった（５．８×１０-5Ｍ対７．５×１０-5Ｍ；ｐ＝０．４４）。濃度応答曲線を図２に示す。ｎ＝２４（４）。
【０１０９】
（メトキサミン立体異性体）
全ての異性体（ピーク１〜４）が、ＩＡＳ由来の平滑筋の用量依存性収縮を生じた。ＥＣ50値を表１に示す。
【０１１０】
【表１】
0005486143.tif 000004
【０１１１】
ピーク２の１Ｒ，２Ｓ異性体は、ピーク１、３および４よりも有意に強力であった（ｐ＜０．０１）。４つの異性体についての濃度応答曲線を図３に示す。ピーク２の１Ｒ，２Ｓ異性体はまた、図４の濃度応答曲線に示されるように、メトキサミンラセミ化合物およびフェニレフリンよりも有意に強力であった（ｐ＜０．０１）。
【０１１２】
（化学的に合成された１Ｒ，２Ｓメトキサミン（ピーク２））
実施例４に記載されるように化学的な合成によって生成された１Ｒ，２Ｓメトキサミンはまた、内肛門括約筋の細片の用量依存性の収縮を生じた。ＥＣ50は１０．５（±１．９７）μＭであった。ＥＣ50は、ラセミ化合物からのクロマトグラフィー分離によって得られた同じ異性体である、ピーク２のＥＣ50と有意な差はなかった（ｐ＝０．１０）。図５を参照のこと。化学的に合成された１Ｒ，２Ｓ異性体はまた、メトキサミンラセミ化合物（ｐ＜０．０１）、フェニレフリン（ｐ＜０．００１）、ならびにピーク１、３および４よりも有意に強力であった。図３および４を参照のこと。
【０１１３】
（実施例２）
（メトキサミン異性体のクロマトグラフィー分離）
（分析的な精製）
Ｐｒｏｓｙｎｔｈ  Ｌｉｍｉｔｅｄから入手したメトキサミンラセミ化合物のサンプル（実施例２を参照のこと）の４つの個々のエナンチオマーへの分析的な分割を、以下のクロマトグラフィー条件下で実行した。
【０１１４】
サイクロボンド  １  ２０００  ＲＳＰ（Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  Ｌｔｄ（Ａｓｔｅｃ）３７  Ｌｅｓｌｉｅ  Ｃｏｕｒｔ，Ｐ．Ｏ．Ｂｏｘ  ２９７  Ｗｈｉｐｐａｎｙ，ＮＪ  ０７９８１  ＵＳＡ，を、移動相５／９５；ｖ／ｖ；アセトニトリル／０．１％酢酸トリエチルアミン、ｐＨ４．１を用いて、安定なベースラインが達成されるまで調整した。メトキサミンラセミ化合物（１ｍｇ／ｍｌ）のサンプルをメタノール中で調製した。調製したサンプルのうち１０μｌをカラムに注入して、これを０．６ｍｌ／分の流量で操作した。２５４ｎｍに設定した波長を用いるＵＶ検出器でカラム流出液をモニターした。４つのピークが観察された。図６を参照のこと。レーザー偏光計を用いてカラム溶離液をモニターした場合、最初の２つのピークはジアステレオマーであることが観察され、このことは、ピーク１および３、ならびにピーク２および４がエナンチオマー対であることを意味する。
【０１１５】
（調製的精製）
各々のエナンチオマーの１００ｍｇを精製するため、キラル固定相を最初に通液して、ピーク１および２を収集した。ジアステレオマーとして、これらの２つのピークを、Ａｓｔｅｃ  Ｃ１８カラムでさらに精製（洗練）した。ＲＳＰカラムでの同じ通液において、純粋なピーク３および純粋なピーク４を収集した。ピーク１及び２を分割するＣ１８通液と、サイクロボンド１  ２０００  ＲＳＰ通液の両方が、不揮発性緩衝液を含むので、分割したメトキサミンエナンチオマーを、Ｃ１８固定相に吸着させるための方法を開発した。Ｃ１８カラムは、移動相からサンプルを濃縮し、そして水での洗浄によって緩衝液は除去される。最終的に、メタノールを用いたＣ１８カラムの溶離によって、精製されたエナンチオマーの回収が可能になる。
【０１１６】
（調製的精製方法）
１．酢酸トリエチルアミンの調製：ＨＰＬＣ等級のトリエチルアミンの０．１％水溶液を撹拌して、試薬等級の氷酢酸を用いてｐＨを４．１に調整した。
【０１１７】
２．各々のエナンチオマーの１００ｍｇを精製するためには、８０ｍｌの移動相に８００ｍｇのメトキサミンラセミ化合物を溶解する必要があった。５ミクロンのサイクロボンド  １  ２０００  ＲＳＰ（Ａｓｔｅｃカタログ番号＃２０３４４）を充填した２２．１×２５０ｍｍカラムを、分析カラム上に移動相を２０ｍｌ／分で用いて調整した。このカラムを２５４ｎｍ  ＵＶでモニターして、全部で３２０回の注入について２０分ごとに２．５ｍｇの注入を行なった。図７の矢印に従って、分離されたピークを収集するための切断を行なった。ピーク１および２は、各々削り取ってプールしたが、ピーク３および４は個々に回収してプールした。
【０１１８】
（Ｃ１８カラム上での分離されたピークの回収）
１．５ミクロンの固定相で充填した２２．１×２５０ｍｍ  Ｃ１８カラムを水で洗浄した。プールされた溶液のｐＨを、トリエチルアミンを用いて７．０に調整して、ＨＰＬＣ等級の水で体積を二倍にした。
【０１１９】
２．次いで、ｐＨを調整したサンプルをＣ１８カラム上に１０ｍｌ／分で送液した。
【０１２０】
３．フラスコを水でリンスして、そのリンス液もカラムに通した。２５４ｎｍのＵＶ検出下で安定なベースラインに戻すことによって測定されるように、このカラムから全ての酢酸トリエチルアミンを洗い流すまでこのカラムにさらに水を通した。メタノールを送液してカラムを通すことによってサンプルを溶離した。２５４ｎｍでのＵＶモニタリングによって、溶離の終了を観察した。
【０１２１】
４．溶離後、次のサンプルの処理の準備のために水を用いて、このカラムを再度洗浄した。ピーク１、２、３およびピーク４は全てこの方式で個々に処理した。
【０１２２】
５．メタノール中に回収したサンプルを４０℃の水浴条件下で乾燥するまで濃縮した。
【０１２３】
（ピーク３および４の処理）
メタノール／Ｃ１８処理由来の残滓を２０ｍｌのメタノール  ＪＣＬ（０．１％）中に再溶解して、再蒸発させた。この残滓をエーテル（〜１５ｍｌ）を用いて粉砕して、粉末を得た。図８は、ピーク３（１４０ｍｇ）の純度に関するアッセイであり、図９は、ピーク４（１０５ｍｇ）の純度に関するアッセイである。
【０１２４】
（ピーク１および２のさらなる精製）
１．２５０×３０ｍｍ、５ミクロン  Ｃ１８カラムを移動相：２０／８０；０．１％  ＴＥＡＡ、ｐＨ４．１を３５ｍｌ／分の流量で用いて平衡化した。
【０１２５】
２．プールされたピーク１および２の回収されたＣ１８カラムからの残滓を移動相中で溶解して、１ｍｇ積み重ね注入を行なった。
【０１２６】
（ピーク１およびピーク２の回収）
１．２２．１×２５０ｍｍのカラムをＨＰＬＣ等級の水を用いて調整した。
【０１２７】
２．ピーク１およびピーク２の収集され、かつプールされた画分を、トリエチルアミンを用いてｐＨ７．０に調整して、ＨＰＬＣ等級の水を用いて体積を二倍にした。
【０１２８】
３．個々のプールされた画分をＣ１８カラム上に送液して、次いで水を用いてこのカラムを洗浄して、緩衝液を除去し、最終的にメタノールで溶離した。
【０１２９】
４．４０℃の水浴条件でメタノールを乾燥するまで濃縮した。
【０１３０】
５．このメタノール残滓をメタノールＨＣＬに再溶解して、再濃縮した。
【０１３１】
６．この処理に由来する残滓を、エーテルを用いて粉砕して粉末、ピーク１（４４ｍｇ）を得た。そしてピーク１の収量は４４ｍｇ、ピーク２の収量は２９ｍｇであった。
【０１３２】
（ピーク１および２の第二の通液）
提示されたピーク１およびピーク２の第一のサンプルは、低い収率および目標とするよりも低い純度を有し、そして粉末は高度に着色していた（淡緑色）。第一の試行からの繰り返された処理によってある程度の自動酸化がもたらされたかもしれないと考えられた。従って、最初に全てのラセミ化合物に対してＲＳＰカラムを再通液することを決定した。この場合、ピーク１および２は、それらを再度クロマトグラフィーにかける必要がないように厳密に削り取られた。
【０１３３】
上記のように処理されたピーク１およびピーク２の得られた回収物は、実質的により高く、そして色は実質的により明るかった。図１０は、ピーク１（４５ｍｇ）の純度、そして図１１は、ピーク２（３４ｍｇ）の純度を示す。
【０１３４】
（ＮＭＲ分光法による異性体のキャラクタリゼーション）
ジメチルスルホキシド（ｄ6−ＤＭＳＯ）中における４つの画分（ピーク１〜４）のプロトンｎｍｒスペクトルを、Ｂｒｉｋｅｒ  ＤＲＸ  ５００ＭＨｚ  ｎｍｒ分光計）を用いて室温で得た。図１２〜１５を参照のこと。共鳴は、構造中の特定のプロトン環境に割り当てることができたが、関連する立体化学を割り当てる方法はなかった。
【０１３５】
ピーク１（図１２）およびピーク３（図１３）のスペクトルは、詳細には、構造およびｎｍｒスペクトル両方における診断上の、４．８ｐｐｍ（ｂとして同定される）および６．０ｐｐｍ（ｄ）のピークにおいてほとんど同一であり、これらのエナンチオマー対を形成する。同様に、ピーク２（図１４）およびピーク４（図１５）はまた、ｂおよびｄの位置でお互いに全く同様であり、これもそれらのエナンチオマー対を形成するが、これはピーク１および３とは異なる。７．５ｐｐｍ（ｃ）を上回るアミンタンパク質でさえ同様に適合し得る。アミンまたはアルコールの共鳴に起因するような交換可能な環境はしばしば信頼できない。なぜならそれらの化学シフト位置は濃度および温度に依存するからである。アルコールのＯＨ共鳴は、化学交換のせいで３．３ｐｐｍにおける残留する水の共鳴から識別不能である。従って、ピーク１および３は、ピーク２および４のジアステレオマーである。
【０１３６】
（実施例３）
１Ｒ，２Ｓ−メトキサミンの合成。
【０１３７】
（（Ｓ）−Ｎ−メトキシカルボニルアラニン）
氷浴中で０℃のＬ−アラニン（３００ｇ、３．３７モル  水酸化ナトリウム（１Ｎ，１８００ｃｍ3）の撹拌溶液に、クロロギ酸メチル（２７４ｃｍ3、３．５４モル）を２時間にわたって滴下して加えた。水酸化ナトリウム（５Ｎ）の添加によってこの溶液のｐＨを９に維持した。この反応混合物を０℃で３時間撹拌して、これを、リン酸溶液（１５％）の添加によってｐＨ１に酸性化して、ジエチルエーテル（５×１０００ｃｍ3）を用いて抽出した。合わせた有機抽出物を乾燥して（ＭｇＳＯ4）、減圧下で濃縮して粘性の緑色油状物として生成物を得た（３８６ｇ、７８％）。1Ｈ  ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ；Ｃ2ＨＣｌ3）１．４８（３Ｈ，ｄ，Ｊ７．２５，ＣＨ3）、３．７２（３Ｈ，ｓ，ＣＯＣＨ3）、４．４０（１Ｈ，五重線、Ｊ７．２５，ＣＨ）、５．３１（１Ｈ，ｂｓ，ＮＨ）。
【０１３８】
（（Ｓ）−Ｎ−メトキシカルボニルアラニンジメチルアミド）
ＭｅＯＣ−アラニン（２２７ｇ、１．５４モル）およびジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）（２５ｃｍ3）を含有する乾燥ジクロロウレタン（ＤＣＭ）（２０００ｃｍ3）の撹拌溶液に０℃で２時間にわたって、塩化オキサリル（１４６ｃｍ3、１．６２モル）を滴下して加えた。この溶液を、ガスの発生が終わるまで０℃で撹拌して、ここに、ジメチルアミン（６７６ｇ、７．７０モル）を含有するＮａＯＨ（３Ｎ，２０００ｃｍ3）の塩基性溶液を添加した。ジエチルエーテル（２×５００ｃｍ3）を用いて水相を抽出して、合わせた有機相を乾燥させて（ＭｇＳＯ4）、減圧下で濃縮して、さらなる精製を必要としない白色結晶性固体として生成物を得た（２３０ｇ，８６％）。1Ｈ  ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ；Ｃ2ＨＣｌ3）１．３３（３Ｈ，ｄ，Ｊ６．７５，ＣＨ3）、２．９９  ３Ｈ，ｓ，ＯＣＨ3）３．０８、（３Ｈ，ｓ，ＯＣＨ3），３．６６（３Ｈ，ｓ，ＣＯＣＨ3）、４．６６（Ｈ，五重線，Ｊ７．００，ＣＨ）、５．７５（１Ｈ，ｄ，Ｊ５．７５，ＮＨ）。
【０１３９】
（（Ｓ）−２−［（メトキシカルボニル）アミノ］−１−（２，５−ジメトキシフェニル）−１−プロパノン）
ブロモ−２，５−ジメトキシベンゼン（５５ｇ、０．２５モル）のＴＨＦ（１０００ｃｍ3）溶液に、−２０℃窒素下で、ｎ−ブチルリチウム（１００ｃｍ3、２．５Ｍでヘキサンに含有、０．２５モル）を添加した。この混合物を−２０℃で０．７５時間撹拌し、ここにアミド（３０ｇ、０．１７モル）のＴＨＦ溶液（１００ｃｍ3）をカニューレを介して添加した。この溶液を−２０℃で２時間撹拌し、次いで１時間にわたって室温まで暖めて、塩化アンモニウム溶液（７００ｃｍ3）の添加によってクエンチした。この溶液をジエチルエーテル（１０００ｃｍ3）を用いて希釈して、有機相を乾燥させて（ＭｇＳＯ4）、減圧下で濃縮して、黄色油状物を得た。この生成物をシリカ上でドライフラッシュクロマトグラフィーによって精製して（溶離液  ４：１  ヘキサン／酢酸エチル、次いで３：２  ヘキサン／酢酸エチル）、白色結晶性固体として生成物を得た（４５ｇ，９８％）。1Ｈ  ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ；Ｃ2ＨＣｌ3）１．３６（３Ｈ，ｄ，Ｊ７．０，ＣＨ3）、３．７０（３Ｈ，ｓ，ＣＯＣＨ3）、３．８２、（３Ｈ，ｓ，ＯＣＨ3）、３．９２（３Ｈ，ｓ，ＯＣＨ3）、５．４３（１Ｈ，五重線，Ｊ７．３，Ｈ−２）、５．８０（１Ｈ，ｂｓ，ＮＨ）、６．９４（１Ｈ，ｄ，Ｊ９．０、ＡｒＨ）、７．１０（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ９．０，３．３、ＡｒＨ）、７．３２（１Ｈ，ｄ，Ｊ３．３，ＡｒＨ）。
【０１４０】
（（１Ｒ，２Ｓ）−２−［（メトキシカルボニル）アミノ］−１−（２，５−ジメトキシフェニル）−１−プロパノール）
ケトンの撹拌溶液、すなわち、（Ｓ）−２−［（メトキシカルボニル）アミノ］−１−（２，５−ジメトキシフェニル）−１−プロパノン（２０ｇ、７４．９ｍｍｏｌ）およびジメチルフェニルシラン（１０．７ｇ、７８．６ｍｍｏｌ）を含有する乾燥ＤＣＭ（５００ｃｍ3）に、氷浴中で０℃で、トリチオロ酢酸（ｔｒｉｔｈｉｏｒｏａｃｅｔｉｃ  ａｃｉｄ）（ＴＦＡ）（５０ｃｍ3）を滴下して加えた。この溶液を０℃で１時間撹拌し、次いで水酸化ナトリウム（５００ｃｍ3、１Ｎ）の添加によってクエンチした。この有機相を乾燥して、減圧下で濃縮して、黄色油状物を得たが、これは静置すれば固化した。この固体を、エーテル／ヘキサンから結晶化して、白色結晶性固体として生成物を得た（１５．６ｇ、７５％）。1Ｈ  ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ；Ｃ2ＨＣｌ3）１．０３（３Ｈ，ｄ，Ｊ７．０，ＣＨ3）、３．０４（１Ｈ，ｄ，Ｊ４．３，ＯＨ）、３．６８（３Ｈ，ｓ，ＣＯＣＨ3）、３．７８（３Ｈ，ｓ，ＯＣＨ3）、３．８０（３Ｈ，ｓ，ＯＣＨ3）、３．９４−３．９９（１Ｈ，ｍ，Ｈ−２）、５．０５−５．１５（２Ｈ，ｍ，Ｈ−１およびＮＨ）、６．７２−６．８５（２Ｈ，ｍ，ＡｒＨ）６．９７（１Ｈ，ｄ，Ｊ２．０，ＡｒＨ）。
【０１４１】
（（１，Ｒ，２Ｓ）−メトキサミン）
メトキシカルボニル（ＭｅＯＣ）保護アルコールの撹拌溶液、すなわち（１Ｒ，２Ｓ）−２−［（メトキシカルボニル）アミノ］−１−（２，５−ジメトキシフェニル）−１−プロパノール（４．０ｇ，１４．９ｍｍｏｌ）を含有するメタノール（１７５ｃｍ3）に、ＫＯＨの溶液（４．０６ｇ、７２．８ｍｍｏｌを含む水（６０ｃｍ3）を添加した。この溶液を冷却して、リン酸（１５％ｖ／ｖ）で酸性化した。この溶液をＤＣＭ（２×５０ｃｍ3）を用いて抽出して、その水相をＫ2ＣＯ3の添加によって塩基性化した。この水相をジエチルエーテル（５×５０ｃｍ3）を用いて抽出して、この合わせたエーテルの抽出物を乾燥して（ＭｇＳＯ4）、減圧下で濃縮して、透明な黄色油状物として生成物を得た（１．９ｇ，６１％）。1Ｈ  ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ；Ｃ2ＨＣｌ3）０．８４（３Ｈ，ｄ，Ｊ７．０，ＣＨ3）、３．１９−３．２２（１Ｈ，ｍ，Ｈ−２）、３．７１（６Ｈ，ｓ，２×ＯＣＨ3）、４．６７（１Ｈ，ｄ，Ｊ５．０，Ｈ−１）、６．６６−６．７２（２Ｈ，ｍ，ＡｒＨ）、６．９２（１Ｈ，ｄ，Ｊ２．５，ＡｒＨ）。
【０１４２】
（（１Ｒ，２Ｓ）−塩酸メトキサミン）
（１Ｒ，２Ｓ）−メトキサミン（１．９ｇ，９．００ｍｍｏｌ）を含有する無水ジエチルエーテル（３０ｃｍ3）の氷冷溶液に、４５分間、乾燥ＨＣｌガス流を通した。得られた沈殿物を吸引によって濾過して、冷却ジエチルエーテルで洗浄して、窒素下で乾燥して、白色固体として表題の化合物を生成した（１．５ｇ，６８％）。1Ｈ  ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ；［Ｃ2Ｈ3］2ＳＯ）０．８９（３Ｈ，ｄ，Ｊ６．８，ＣＨ3）、３．３７−３．４２（１Ｈ，ｍ，Ｈ−２）、３．７１（３Ｈ，ｓ，ＯＣＨ3）、３．７５（３Ｈ，ｓ，ＯＣＨ3）、５．１２（１Ｈ，ｓ，Ｈ−１）、５．９２（１Ｈ，ｄ，Ｊ４．３，ＯＨ）、６．８４（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ８．８，３．０，ＡｒＨ）、６．９２−７．００（２Ｈ，ｍ，ＡｒＨ）；ＨＰＬＣ。
【０１４３】
（メトキサミンの解析のための分析的方法）
以下の方法を用いて、メトヘサミンサンプルを解析した。
【０１４４】
方法
カラム    ：  サイクロボンド  Ｉ  ＲＳＰ  ２５０×４．６ｍｍ
カラム温度：  ２３℃
移動相    ：  ０．１％テトラエチルアンモニウム  ｐＨ４．１*  ９５％ｖ／ｖ
：  アセトニトリル  ５％ｖ／ｖ
流量      ：  ０．６ｍｌ／分
溶液濃度  ：  ５ｍｇ／ｌ
注入体積  ：  ２．５μｌ〜２０μｌ
検出      ：  ＵＶ  ２３０ｎｍ。
【０１４５】
*酢酸テトラエチルアンモニウムｐＨ４．１は毎日新鮮に調製した。
【０１４６】
（実施例４）
（単結晶Ｘ線解析による１Ｒ，２Ｓ−メトキサミンの立体化学的なキャラクタリゼーション）
単結晶Ｘ線解析は、構造的な割り当ての最終的な手段である。メトキサミンの推定の１Ｒ，２Ｓ異性体（Ｌ−エリトロ異性体とも呼ばれる）の塩酸塩を、実施例３に記載のように合成した。推定の１Ｒ，２Ｒの塩酸塩（Ｄ−トレオ異性体を、ＦｕｊｉｔａおよびＨｙａｍａの方法の変法によって合成したが、ここでは水素化ホウ素ナトリウムを還元剤として用いて、１Ｒ，２Ｒ−（Ｄ−トレオ）および１Ｒ，２Ｓ−（Ｄ−エリトロ）異性体の混合物を生成した。この１Ｒ，２Ｒ−異性体は、シリカカラムにおいてフラッシュクロマトグラフィーを用いて精製した。
【０１４７】
ヘキサン雰囲気においてメタノール／酢酸エチル溶液から２つの化合物を結晶化した。得られた結晶は、極めて微細な板状であり、これによって優れたデータが得られ、これから信頼できる精密化因子で構造が解明された。Ｎｏｎｉｕｓ  ＫａｐｐａＣＣＤを用いて、Ｘ線結晶学を実行した。原子座標および等価等方性変位パラメーターを表２に示す。結晶データおよび構造の精密化を表３に示す。結合の長さおよび角度を表４に示す。異方性変位パラメーターを表５に、そして水素座標および等方性変位パラメーターを表６に示す。
【０１４８】
【表２】
0005486143.tif 000005
【０１４９】
【表３】
0005486143.tif 000006
【０１５０】
【表６】
0005486143.tif 000007
【０１５１】
【表４】
0005486143.tif 000008
【０１５２】
【表５】
0005486143.tif 000009
【０１５３】
これらの結果によって、実施例３において合成され、そして実施例２においてピーク２としてクロマトグラフィーによって単離された異性体を、メトキサミンの１Ｒ，２Ｓ−異性体として明白に同定することができる。異性体の構造を図１７に示す。
【０１５４】
上記の実施例２に記載の分光法に基づく推論およびｎｍｒ結晶学的な結果によって、以下に示されるメトキサミン異性体の完全な割り当てが可能になる。
【０１５５】
【化３】
0005486143.tif 000010
【０１５６】
（実施例５）
麻酔されたブタにおける肛門管上皮への局所投与後の、いくつかの心血管系のパラメーターおよび平均肛門休止期圧（ＭＡＲＰ）に対する、１Ｒ，２Ｓ−メトキサミンの影響の検討。
【０１５７】
（方法）
本研究は、以下のプロトコルに従って実施した。
【０１５８】
（試験物質：）
ａ）４％（ｗ／ｗ）ゲルに含有されるプラセボ
ｂ）４％（ｗ／ｗ）ゲルに含有される０．３重量％の１Ｒ，２Ｓ−メトキサミン
ｃ）４％（ｗ／ｗ）ゲルに含有される１重量％の１Ｒ，２Ｓ−メトキサミン
ｄ）４％（ｗ／ｗ）ゲルに含有される３重量％の１Ｒ，２Ｓ−メトキサミン
４％（ｗ／ｗ）ゲルは、９６ｍｌの０．５Ｍ酢酸緩衝液中に４ｇのヒドロキシプロピルメチルセルロースを含む。１重量％の１Ｒ，２Ｓ−メトキサミンを含有する４％（ｗ／ｗ）ゲルは、１ｇの１Ｒ，２Ｓ−メトキサミンを９９ｇの４％ゲル中に含む。
【０１５９】
（動物／動物の飼育）
Ｅｌｌｅｇａａｒｄ  Ｇｏｅｔｔｉｎｇｅｎ  Ｍｉｎｉｐｉｇｓ  ＡｐＳ，Ｓｏｒｏ  Ｌａｎｄｅｖｅｊ  ３０２，ＤＫ−４２６１  Ｄａｌｍｏｓｅ，Ｄｅｎｍａｒｋから入手したＧｏｅｔｔｉｎｇｅｎ−ミニブタを検討のために用いた。４〜５ヶ月齢の動物は、各々が、検査の開始時点で６．９〜８．７ｋｇの体重を有した。４匹の雄性動物を用いた。２番の動物を４番の動物と入れ換えた。以下を参照のこと。
【０１６０】
（食餌および飲料水）
ミニブタの食餌は、Ｅｌｌｅｇａａｒｄ  Ｇｏｅｔｔｉｎｇｅｎ  Ｍｉｎｉｐｉｇｓ  ＡｐＳから供給された。この食餌のうち２００ｇ／ｋｇ（体重）を、順応期間の間毎日２回、各々のブタに与えた。食欲の劣る動物の場合、この食餌をさらに長期間（８時間まで）供給した。投薬の前の日には、ミニブタには一切食餌を与えなかった。生水（水道水）は自由に与えた。
【０１６１】
（飼育施設）
２２℃±３℃（最大範囲）の温度で、かつ自然な明暗サイクルに維持した、ワラの寝床上に約３ｍ2の床のスペースがある室内の囲いの中で、ブタを一匹ずつ飼育する。
【０１６２】
（麻酔）
ミニブタを、クロラロース−ウレタン混合物（割合１＋５）で麻酔した。必要に応じてさらに麻酔を与えた。ミニブタの安定な一般的条件を確実にするために、右または左の大腿動脈（ａ．  ｆｅｍｏｒａｌｉｓ）からとった血液中で、血液ガス分析器ＡＢＬ  ７０（Ｒａｄｉｏｍｅｔｅｒ，Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ，Ｄｅｎｍａｒｋ）を用いて、実験開始の前に、血液ガスおよびｐＨ値を測定した。リンゲル液（５ｍｌ／体重ｋｇ／ｈ）を連続的に与えて、体液の損失を補償した。外部加熱の実験全体にわたって、動物の体温を３８℃に維持した。
【０１６３】
（試験物質の投与）
試験物質を、動物１匹あたり０．５ｍｌ容積用いて、肛門管上皮に局所投与した。各々の観察期間の間隔は２０分間であった。肛門管に約１ｃｍ挿入した１ｍｌのシリンジを使用して投与を実施した。シリンジを回転させながら、試験物質をゆっくり投与した。準備および循環機能の安定化のための少なくとも１５分間の後、プラセボ、または試験物質の選択された用量レベルを用いて肛門管上皮に投与することによって動物を処置した。
【０１６４】
最初の投与の前、および投与後さらなる適切な時点で、コントロールの目的でイソプロテレノールを静脈内投与した。コントロールの目的で、毒物動態学のための血液サンプルの収集の終了後にのみ、研究の終了時点で、アルテレノール（塩酸ノルエフィネフリン、Ｌ−ノルアドレナリンとしても公知）を投与した。
【０１６５】
（用量レベル）
以下の用量レベルで研究を実行した。
【０１６６】
【表７】
0005486143.tif 000011
【０１６７】
２番のブタは、４番のブタと入れ換えた。なぜなら２番のブタの投薬前の値が、正常な範囲外であったからである。
【０１６８】
（測定したパラメーター）
（準備）
麻酔下で、ミニブタを作業台上に仰臥位に固定した。
【０１６９】
（末梢動脈血圧）
動脈内留置カテーテル（サイズ０．８×１．４ｍｍ、Ｂ．Ｂｒａｕｎ  Ｍｅｌｓｕｎｇｅｎ  ＡＧ、Ｄ−３４２１２  Ｍｅｌｓｕｎｇｅｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を圧力変換器（ＤＴＸ，Ｐｆｒｉｍｍｅｒ−Ｖｉｇｇｏ，Ｅｒｌａｎｇｅｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）に接続して、右または左の大腿動脈において、収縮期動脈圧および拡張期動脈圧を記録する。このシグナルをＨｅｌｌｉｇｅ  Ｓｅｒｖｏｍｅｄ  ＳＭＶ  １７８Ｔ増幅器（Ｈｅｌｌｉｇｅ  ＧｍｂＨ，Ｄ−７９１００  Ｆｒｅｉｂｕｒｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ）によってブースする。Ｈｅｌｌｉｇｅ  Ｃａｒｄｉｏｇｎｏｓｔ  ＥＫ  ５１２  Ｐ（紙速度：２．５ｍｍ／秒）を用いて血圧を記録し、かつモニターした。収縮期血圧および拡張期血圧［ｍｍＨｇ］を決定して、以下の式：に従って、平均圧力を算出した：
平均血圧［ｍｍＨｇ］＝（収縮期圧＋（２×拡張期圧））／３。
【０１７０】
（心拍数および心電図記録）
標準的な四肢のリードＩ、ＩＩおよびＩＩＩ、ならびに増幅四肢リードａＶＲ、ａＶＬおよびａＶＦを用いて、ＥＣＧ記録を行なった。１０ｍｍ／１  ｍＶの標準化を用い、紙速度は５０ｍｍ／秒であった。ＨＥＬＬＩＧＥ  Ｍａｒｑｕｅｔｔｅ  ｍａｃ  ５０００  １２ＳＬを用いて記録を行なった。不整脈および電気的複合の異常のいずれかについて記録を視覚的に検査した。さらに、四肢のリードＩＩについて、以下のパラメーターを評価した：心拍数［拍動数／分］；Ｐセグメント［ｍｓｅｃ］；Ｐ−Ｑ間隔［ｍｓｅｃ］；ＱＲＳ群［ｍｓｅｃ］；Ｑ−Ｔ間隔［ｍｓｅｃ］。ファン・デ・ウォーター式に従ってＱＴｃ値［ｍｓｅｃ］を算出した：ＱＴｃ＝ＱＴ−０．０８７（Ｒ−Ｒ距離−１０００）。
【０１７１】
（平均圧および休止期圧）
直腸への検圧プローブ（Ｕｎｉｓｅｎｓｏｒ  Ｍｉｃｒｏｔｉｐｃａｔｈｅｔｅｒ  ８１０４−００−９４０９−Ｄ；Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  ｂ．ｖ．，Ｃｏｌｌｏｓｓｅｕｍ  ２５，ＮＬ−７５２１  Ｐ．Ｖ．Ｅｎｓｃｈｅｄｅ，Ｔｈｅ  Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）の３回の導入によって、肛門休止期圧を測定した。これら３回の測定の平均（ＭＡＲＰ）としてとった肛門休止期圧を、Ｒｉｋａｄｅｎｋｉ  Ｍｕｌｔｉｐｅｎｒｅｃｏｒｄｅｒを用いて記録した。
【０１７２】
（血液サンプリング）
投与開始の直前、ならびに投与開始の１０、２０、４０、６０、９０、および１２０分間後に血液サンプル（１時点あたり５ｍｌ）をとって、リチウム−ヘパリン容器中に収集した。ＩｓｏＴｈｅｒｍ−Ｒａｃｋシステム（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ−Ｎｅｔｈｅｌｅｒ−Ｈｉｎｚ  ＧｍｂＨ，Ｄ−２２３３１  Ｈａｍｂｕｒｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ）の使用によって、この血液サンプルを＋２℃〜＋８℃に直ちに冷却して、全血液をＥＤＴＡ−血漿に処理した。遠心分離（５分間、４０００ｒｐｍ、＋５℃において）によって血漿を調製して、各々約１ｍｌのアリコートに分けた。両方の血漿アリコートを少なくとも−８０℃で直ちに凍結して、解析のためのドライアイス上での１つのアリコートの処理までこの温度で保管した。
【０１７３】
研究の番号、種、動物の番号、サンプリング時間、サンプルのタイプ、日付けおよび用量レベルについてこのサンプルを標識した。
【０１７４】
このサンプルを、メトキサミンの血漿レベルについて解析した。結果を付表３に提示する。
【０１７５】
（肉眼的な検査）
この実験の間に、肛門管上皮の肉眼的な検査を実行した。試験物質処方物のかなり低いｐＨ値によって生じるなんらかの明白な炎症および／または紅斑が報告された。
【０１７６】
（評価および記録の時間）
各々の測定期について、心拍数、ＥＣＧおよび大腿動脈の血圧を連続的に測定して、約３０秒間の投与開始の直前、ならびに投与開始の５、１０、１５、２０、４０、および６０分後に、次いで、なんらかの影響がおさまるまで２０分間の間隔で記録した。
【０１７７】
（統計学）
各々の動物および投薬について、得られた値を開始値と比較した。プラセボコントロール群の平均値を、スチューデントの対応のあるｔ検定（Ｃｏｌｑｕｈｏｕｎ，Ｌｅｃｔｕｒｅｓ  ｏｎ  Ｂｉｏｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ，§１０．６，１６７−９（１９７１），Ｃｌａｒｅｎｄｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ，Ｅｎｇｌａｎｄ）によって比較した。以下の限界を用いた：ｐ＝０．０１□ｔ＝４．６０４（４度の自由度について）。この表では、開始値からの有意な相違（ｐ≦０．０１）を示す。全ての計算は、できるだけ最高の正確性の程度まで実施し、次いで報告された数の小数位まで端数を丸めた。従って、端数の丸めによって、１％までの偏差が生じ得る。
【０１７８】
（研究の終了）
研究の終了時点で動物を屠殺した。
【０１７９】
（結果）
（末梢動脈血圧）
ＩＲ，２Ｓ−メトキサミンのいずれの試験された用量レベルでも、拡張期、収縮期、または平均の血圧は影響されなかった。
【０１８０】
検査した１Ｒ，２Ｓ−メトキサミンの全ての濃度で、個々の動物において血圧の変化が認められた。これらの変化は、物質に関連性であるとは考えられず、１時点あたり２匹の動物を使用する、長期の麻酔の正常な変動の範囲内である。
【０１８１】
個々の値および平均の値を提示する。図１７〜１９。図１７は、収縮期末梢動脈血圧を示し、図１８は、拡張期末梢動脈血圧を示し、そして図１９は、平均末梢動脈血圧を示す。
【０１８２】
（平均肛門休止期圧（ＭＡＲＰ））
０．３％の濃度でＩＲ，２Ｓ−メトキサミンを用いる処置によって、両方のブタとも投与後５分間で開始して１１０分間の間隔の平均において、５０ｍｍＨｇ（開始値に比べて７３％）へのＭＡＲＰの用量関連性の上昇が生じた。１％のゲルで、適用後２０分間内に平均で６４ｍｍＨｇへのＭＡＲＰのさらなる上昇（２２７％の上昇）が生じた。３％ゲルの投与によって、約７０ｍｍＨｇへのＭＡＲＰの用量関連性の上昇が生じた。両方の動物とも同様の程度まで影響された。個々の値および平均値を図２０に提示する。
【０１８３】
（心拍数およびＥＣＧ）
心拍数およびＥＣＧパラメーターの評価によって、Ｐ−セグメント、Ｐ−Ｑ間隔、Ｑ−Ｔ間隔ＱＴｃ値、およびＱＲＳ群に対して、試験したいずれの用量レベルでも、物質に関連する影響はないことが明らかになった。詳細には、ＱＴ間隔の延長についての証拠は認められなかった。
【０１８４】
ＥＣＧ記録の視覚的評価によって、いかなる心室性早期群も示されなかった。
【０１８５】
１％および３％の１Ｒ，２Ｓ−メトキサミン濃度で、ブタ１および３において適用後２時間の平均で、約１００拍動数／分（２９％増大）の心拍数の増大が観察された。その後、正常化が極めて漸進的に生じた。これらの変化は、物質に関連性であるとは考えられず、１時点あたり２匹の動物を使用する、長期の麻酔の正常な変動の範囲内である。
【０１８６】
同様に、個々の動物においてこの研究で認められた他の全ての変化はまた、物質に関連性であるとは考えられず、１時点あたり２匹の動物を使用する、長期の麻酔の正常な変動の範囲内である。
【０１８７】
心拍数の個々の値および平均値を図２１に示す。
【０１８８】
（循環機能の反応性）
アルテレノールまたはイソプロテレノールに対して予期された反応は、いずれの１Ｒ，２Ｓ−メトキサミンゲルによっても影響されなかった。
【０１８９】
（肉眼的な検査）
０．３％、１％、または３％の１Ｒ，２Ｓ−メトキサミンの適用後に病理学的な変化は観察されなかった。
【０１９０】
（メトキサミン血漿レベル）
サンプルをメトキサミン血漿レベルについて解析した。全ての動物において、メトキサミンの用量関連性の血漿レベルが認められた。
【０１９１】
０．３％ゲルの用量レベルによって、４０分後に４．９０ｎｇ／ｍｌおよび６．９７ｎｇ／ｍｌの平均ピーク血漿レベルが生じた。
【０１９２】
１．０％ゲルの用量レベルによって、２０分〜４０分後に９．８８ｎｇ／ｍｌおよび１１．０ｎｇ／ｍｌの平均ピーク血漿レベルが生じた。
【０１９３】
３．０％ゲルの用量レベルによって、４０〜６０分後に５０．４ｎｇ／ｍｌおよび６１．３ｎｇ／ｍｌの平均ピーク血漿レベルが生じた。
【０１９４】
ブタの間ではほとんど差はなかった。
【０１９５】
（結論）
本実験の目的は、肛門管上皮への局所投与後の麻酔されたミニブタにおける、いくつかの心血管系パラメーター、および平均肛門休止期圧（ＭＡＲＰ）に対する１Ｒ，２Ｓ−メトキサミンの影響を評価することであった。
【０１９６】
肛門管上皮への適用によって、プラセボ、０．３％、１％、または３％の１Ｒ，２Ｓ−メトキサミン（ｗ／ｗ）として、１匹の動物あたり０．５ｍｌの試験物質を投与した。
【０１９７】
各々の適用の間に少なくとも２時間の間隔をあけた。この結果を対応する投薬前の値と比較した。
【０１９８】
この試験条件下で、０．３％、１％、または３％の１Ｒ，２Ｓ−メトキサミン（ｗ／ｗ）を用いた処置によって、心血管系のパラメーターに変化はもたらされなかった。ＭＡＲＰの用量関連性の上昇が、３つ全ての濃度で認められた。
【０１９９】
０．３％濃度の１Ｒ，２Ｓ−メトキサミンによって、開始値に比べて５０ｍｍＨｇへのＭＡＲＰの増大が生じ、１％の濃度によって、６４ｍｍＨｇへのＭＡＲＰの増大が生じ、そして３％の濃度によって、７０ｍｍＨｇへのＭＡＲＰの増大が生じた。両方の動物とも同様の程度まで影響された。
【０２００】
心拍数、ならびにＥＣＧパラメーター  Ｐ−セグメント、Ｐ−Ｑ間隔、Ｑ−Ｔ間隔、ＱＲＳ群、およびＱＴｃ値に対する影響は認められなかった。詳細には、Ｑ−Ｔ間隔の延長についての証拠は認められなかった。アルテレノールまたはイソプロテレノールに対するミニブタの予想される反応は影響されなかった。
【０２０１】
肉眼的な検査の間、病理学的な変化は認められなかった。
【０２０２】
メトキサミンの血漿レベルは、それぞれ、０．３％、１％、および３％の処方物について、血漿１ｍｌあたり６ｎｇ、１０ｎｇおよび５６ｎｇのメトキサミンの最大血漿レベルを伴う用量関連性の曝露を反映した。最大血漿レベルは適用の約４０分後に観察された。ブタの間にはほとんど相違はなかった。
【０２０３】
ブタは、ヒトに特に関連することが公知の動物モデルである。上記で得られた結果は、局部性の副作用も全身性の副作用もない、詳細には局部の炎症がなく、かつ血圧に対する影響もない、低濃度、従って低用量の１Ｒ，２Ｓ−メトキサミンの局所投与に対する休止期の内肛門括約筋圧の増大を実証しているが、これによってヒトにおいても同様の結果が推測され、そして便失禁および同様の状態、詳細には括約筋の緊張の増大が所望される状態の処置における１Ｒ，２Ｓ−メトキサミンの局所投与の有効性が推測される。
【０２０４】
（引用文献）
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20Fujita M Hiyama T, Erythro-Directive Reduction of α-Substituted Alkanones by Means of Hydrosilanes in Acidic Media. J Org Chem 1988; 53: 5415-5421.
21Ward TJ ＆ Armstrong DW, Improved Cyclodextrin Chiral Phases: A Comparison ＆ Review, J of Liq. Chrom. 9 (2＆3), 407-423 (1986)。
【図面の簡単な説明】
【０２０５】
【図１】図１は、灌流臓器槽を示しており、ここでは、ブタの内肛門括約筋の細片を、メトキサミンラセミ化合物および４つの個々の異性体を用いて試験した。
【図２】図２〜５は、インビトロで試験した内肛門括約筋の用量／応答曲線を示す。図２および４においては、コントロールとしてフェニレフリンを用いた。実施例３に示した条件下で液体クロマトグラフィーを用いて４つのメトキサミン異性体を分離した。クロマトグラフィーによって分離されたとおり、それらを、ピーク１〜４として命名する。図２は、メトキサミンラセミ化合物（黒丸）およびフェニレフリン（白抜き四角）を用いた用量応答曲線を示す。
【図３】図３は、実施例３に示した条件下で液体クロマトグラフィーを用いて得た、４つのメトキサミン異性体、ピーク１（黒丸）、ピーク２（白抜き四角）、ピーク３（白抜き三角）およびピーク４（×）を用いる、用量応答曲線を示す。
【図４】図４は、メトキサミンラセミ化合物（黒丸）、ピーク２（白抜き三角）およびフェニレフリン（白抜き四角）を用いた用量応答曲線を示す。
【図５】図５は、実施例４に従って合成された１Ｒ，２Ｓ−メトキサミン（ピーク２（合成）（白抜き四角）に相当する）、および実施例３に従うクロマトグラフィー分離によって得られた１Ｒ，２Ｓ−メトキサミン（ピーク２（分離）（黒丸）に相当する）を用いた用量応答曲線を示す。
【図６】図６〜１１は、実施例３に示した条件下で液体クロマトグラフィーを用いて得られたメトキサミンラセミ化合物および４つの異性体のクロマトグラムを示す。図６は、４つのピークを示すラセミ化合物のクロマトグラムである（ＷＷＤ１  Ａ、波長＝２２５ｎＭ（サンプル＼０１−１６−８．Ｄ）。
【図７】図７は、メトキサミンラセミ化合物のクロマトグラムであって、これは分離されたピーク１〜４を収集するために切断を行なった場所を示している。
【図８】図８は、ピーク３の純度を示すクロマトグラムである（ＷＷＤ１  Ａ、波長＝２２５ｎＭ（サンプル＼０１１６Ｐ３−５．Ｄ）。
【図９】図９は、ピーク４の純度を示すクロマトグラムである（ＷＷＤ１  Ａ、波長＝２２５ｎＭ（サンプル＼０１１６Ｐ４−１．Ｄ）。
【図１０】図１０は、ピーク１の純度を示すクロマトグラムである（ＷＷＤ１  Ａ、波長＝２２５ｎＭ（サンプル＼０１１６Ｐ１−４．Ｄ）。
【図１１】図１１は、ピーク２の純度を示すクロマトグラムである（ＷＷＤ１  Ａ、波長＝２２５ｎＭ（サンプル＼０１１６Ｐ２−４．Ｄ）。
【図１２】図１２はピーク１のｎｍｒスペクトルを示す。
【図１３】図１３はピーク３のｎｍｒスペクトルを示す。
【図１４】図１４はピーク２のｎｍｒスペクトルを示す。
【図１５】図１５はピーク４のｎｍｒスペクトルを示す。
【図１６】図１６は１Ｒ，２Ｓ−メトキサミン（ピーク２）の立体化学構造を示す。
【図１７】図１７は、ブタの末梢収縮期動脈血圧に対する０．５ｍｌ用量のプラセボおよび０．３％、１％、３％（ｗ／ｗ）の１Ｒ，２Ｓ−メトキサミンゲルの効果を示す。
【図１８】図１８は、ブタの末梢拡張期動脈血圧に対する０．５ｍｌ用量のプラセボ、ならびに０．３％、１％、および３％（ｗ／ｗ）の１Ｒ，２Ｓ−メトキサミンゲルの効果を示す。
【図１９】図１９は、ブタの平均末梢動脈血圧に対する０．５ｍｌ用量のプラセボ、ならびに０．３％、１％、および３％（ｗ／ｗ）の１Ｒ，２Ｓ−メトキサミンゲルの効果を示す。
【図２０】図２０は、ブタの平均肛門休止期圧に対する０．５ｍｌ用量のプラセボ、ならびに０．３％、１％、および３％（ｗ／ｗ）の１Ｒ，２Ｓ−メトキサミンゲルの効果を示す。
【図２１】図２１は、ブタの心拍数に対する０．５ｍｌ用量のプラセボ、ならびに０．３％、１％、および３％（ｗ／ｗ）の１Ｒ，２Ｓ−メトキサミンゲルの効果を示す。図１７〜２１の各々の場合、黒丸は平均値、白抜き丸はブタ１の値、白抜き三角はブタ３の値、そして白抜き四角はブタ４の値である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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