(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
脂溶性ビタミン、および脂溶性ビタミン吸収を増進させる効果的な量のＬ‐カルニチンまたはその医薬品として許容される塩を含む、閉経後の女性における脂溶性ビタミンの腸吸収を増進させるための経口医薬品であって、該脂溶性ビタミンがビタミンＥであり、該Ｌ‐カルニチンがＬ‐カルニチンＬ酒石酸塩、Ｌ‐カルニチンフマル酸塩、Ｌ‐カルニチンアジピン酸塩またはＬ‐カルニチンクエン酸マグネシウム塩であり、該経口医薬品はそれを必要としている閉経後の女性へ経口投与され、前記女性には脂溶性ビタミンの腸吸収機能の衰退が現れている、上記経口医薬品。
【請求項２】
１日の投与用量当たり、１０ｍｇから２ｇのＬ‐カルニチンまたはその医薬許容塩および８から８００ｍｇのビタミンＥを含む、請求項１記載の経口医薬品。
【請求項３】
１日の投与用量当たり、２５０から７５０ｍｇのＬ‐カルニチンを含む、請求項２記載の経口医薬品。
【請求項４】
１日の投与用量当たり、８から４００ｍｇのビタミンＥを含む、請求項２記載の経口医薬品。
【請求項５】
Ｌ‐カルニチンまたはその医薬許容塩およびビタミンＥと組み合わせて、エストロゲンを更に含む、請求項２記載の経口医薬品。
【請求項６】
閉経後の女性において脂溶性ビタミンの胆汁分泌を増進させる、請求項１記載の経口医薬品。
【請求項７】
閉経後の女性において脂溶性ビタミンの肝臓濃度を増進させる、請求項１記載の経口医薬品。
【請求項８】
冠状動脈性心疾患、加齢性黄斑変性症、骨粗鬆症、ガンおよびアルツハイマー症から選択された１つ以上の病気の危険度を閉経後の女性において減らすために使用される、請求項１乃至請求項７のいずれか１項記載の経口医薬品。
【請求項９】
脂溶性ビタミンを必要とする非ヒト哺乳類への、脂溶性ビタミン、および脂溶性ビタミン吸収を増進させる有効量のＬ‐カルニチンまたはその医薬品として許容される塩の経口投与を含む、非ヒト哺乳類における脂溶性ビタミンの腸吸収を増進させる方法であって、該脂溶性ビタミンがビタミンＥであり、該Ｌ‐カルニチンがＬ‐カルニチンＬ酒石酸塩、Ｌ‐カルニチンフマル酸塩、Ｌ‐カルニチンアジピン酸塩またはＬ‐カルニチンクエン酸マグネシウム塩であり、前記非ヒト哺乳類には脂溶性ビタミンの腸吸収機能の衰退が現れている、前記方法。
【請求項１０】
１日に体重１キログラム当たり１から１００ｍｇのＬ‐カルニチンまたはその医薬品として許容される塩を投与する、請求項９の方法。  
【請求項１１】
１日に規定食の１キログラム当たり２５から５０００ｍｇのＬ‐カルニチンまたはその医薬品として許容される塩を投与する、請求項９の方法。  
【請求項１２】
１日に規定食の１キログラム当たり３０から５，０００ＩＵ．のビタミンＥを投与する、請求項９の方法。
【請求項１３】
服用量単位剤形の形状で脂溶性ビタミンおよびＬ‐カルシニンまたはその医薬品として許容される塩を投与する、請求項９の方法。
【請求項１４】
服用量単位剤形がカプセル、錠剤、粉末または分包である、請求項１３の方法。
【請求項１５】
当該非ヒト哺乳類が家庭用ペットである、請求項９の方法。
【請求項１６】
当該非ヒト哺乳類がネコまたはイヌである、請求項１５の方法。
【請求項１７】
当該非ヒト哺乳類は卵巣除去または中性化されたものである、請求項１５の方法。
【請求項１８】
当該非ヒト哺乳類において心疾患、腎臓疾患、泌尿器疾患およびガンから選択する１つ以上の病気に罹る危険度を減少させるために使用される、請求項９乃至請求項１７のいずれか１項記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】 本発明の分野
本発明は、Ｌ‐カルニチンおよび脂溶性ビタミンを投与することにより閉経後の女性または下等動物における脂溶性ビタミンの腸吸収、細胞濃度、胆汁分泌、肝貯蔵および／または肝臓濃度を増進させる際の方法に関する。
【０００２】 本発明の背景
Ｌ‐カルニチンは長鎖脂肪酸のミトコンドリアマトリックスへの移行およびそれらの続いて起こる酸化を調節し、組織のエネルギー供給において重要な役割を果たす。そのような代謝での役割と共に、Ｌ‐カルニチンは血清中の抗じゅく腫形成性の高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）コレステロールを増進させる一方で、コレステロール、トリグリセリドおよび遊離脂肪酸を低下させるのに効果があることが示された。参照Ｐｏｌａ，Ｐ．ほか、“脂肪血異常症患者の治療におけるカルニチン”Ｃｕｒｒ  Ｔｈｅｒ  Ｒｅｓ２７：２０８から１６（１９８０）；Ｌａｃｏｕｒ，Ｂほか、“カルニチンは血液透析患者における脂質異常を改善する”、Ｌａｎｃｅｔ１２：７６３〜４（１９８０）；Ａｖｏｇａｒｏ，Ｐ．，“ヒトにおけるＦＦＡおよびベータ‐ヒドロキシ‐ブチレートへのＬ‐カルニチンの急性効果”、Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｒｅｓ  Ｃｏｍｍｕｎ  １３：４３３‐５０（１９８１）；およびＶａｃｈａ，Ｇ．Ｍ．ほか“血液透析患者における高トリグリセリド血症に対するＬ‐カルニチン治療の有効な効果：低レベルの高濃度リポタンパク質コレステロールの決定的な役割”、Ａｍ  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｎｕｔｒ  ３８：５３２〜４０（１９８３）。現存する証拠では、Ｌ‐カルニチンおよびそのエステルは、酸化的損傷を受けた膜リン脂質の再アシル化（修復）に参加して赤血球膜の安定性および無傷状態を亢進する。参照Ａｒｄｕｉｎｉ，Ａほか、“糖尿病ラット赤血球における膜リン脂質脂肪酸交替へのプロピオニル‐Ｌ‐カルニチン処置の効果”、Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  １５２：３１〜７（１９９５）；Ａｒｄｕｉｎｉ，Ａ．ほか、“カルニチンパルミトイルトランスフェラーゼおよびアシル‐ＣｏＡ結合タンパク質：ヒト赤血球の膜リン脂質脂肪酸交替におけるもう二つのプレーヤーなのか？”、Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｊ  ３２５：８１１〜４（１９９７）；およびＡｒｄｕｉｎｉ，Ａほか、“４℃で保存した添加溶液‐懸濁赤血球へのＬ‐カルニチンの添加は生物外での溶血作用を減少させ、生物内の生存を改善する”、Ｔｒａｎｄｆｕｓｉｏｎ  ３７：１６６〜７４（１９９７）。ミトコンドリアが存在しない赤血球においてＬ‐カルシニンおよびそのエステルがそのような作用を示すことに気が付いたことは興味深いことである。年老いたラットへのＬ‐カルシニン補充が、Ｌ‐カルニチンの膜安定化効果に関連するミトコンドリア機能での加齢性衰退を逆転させることを示した。参照Ｈａｇｅｎ，Ｔ．Ｍ．ほか、“老年ラットに与えたアセチル‐Ｌ‐カルニチンは部分的にミトコンドリアの機能および歩行活動を回復させる”Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９５：９５６２〜６（１９９８）。この発見は、細胞性代謝および機能の損傷を導く加齢で顕著に増進するミトコンドリアＤＮＡの酸化的損傷において特に重要である。参照Ｈａｇｅｎ，Ｔ．Ｍ．ほか、“年老いたラットから得た肝細胞におけるミトコンドリアの衰弱”：膜電位の衰退、異質性およびオキシダントの増大“、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９４：３０６４〜９（１９９７）。
【０００３】  工業化された国では全人口の１５％より多くを閉経後の女性が占めている。２０３０年には閉経後の女性の比率が全人口の２３％まで増加することが予測されている。参照Ｈｉｌｌ，Ｋ．，“更年期の人口統計研究”、Ｍａｔｕｒｉｔａｓ２３：１１３〜１２７（１９９６）。これに加え、数多くの疫学的研究は、更年期におけるエストロゲンの減少がその後の人生における原因特定な罹患率および死亡率に影響することを示した。栄養的見地からは、更年期は体の栄養を吸収、同化および代謝する能力が衰え始める時である。結局、体の栄養状況が更年期および更年期後では易感染性となり、やがて特定栄養の欠損徴候を示すようになる。
【０００４】  閉経後の女性は冠状動脈性心疾患、加齢性黄斑変性症、骨粗鬆症、ガンおよびアルツハイマー症に実質的に罹りやすいことがよく書かれている。参照Ｈｉｌｌ，Ｋ．，“更年期の人口統計研究”、Ｍａｔｕｒｉｔａｓ２３：１１３〜１２７（１９９６）。これは部分的に加齢の経過および体の機能と免疫系の低下に関係するが、疫学的な証拠では、ある慢性的病気の危険度（発生率）と閉経後の女性における特定の栄養の不足または欠乏の間には有意の関連が存在することを物語っている。最新の証拠は、ビタミンＡ，ＤおよびＥのような脂溶性ビタミンの易感染性体調は当該病気の開始または発生に影響または寄与する重要な因子であることを強く示唆している。例えば、冠状動脈心疾患の危険度は閉経後および卵巣摘出した女性において出産可能年齢の女性と比べて劇的に上昇する。ビタミンＥ補強は血清リポタンパク質の酸化の低減および血管平滑筋細胞の増殖を阻害して冠状動脈性心疾患の危険度を顕著に減少させることを示した。参照Ｃｈａｎ，Ａ．Ｃ．，“ビタミンＥとアテローム性動脈硬化症”、Ｊ  Ｎｕｔｒ  １２８：１５９３〜６（１９９８）；Ｍｏｔｏｙａｍａ，Ｔ．ほか、“ビタミンＥ投与は冠状動脈痙攣性狭心症の患者における内皮依存性血管拡張の悪化を改善する”、Ｊ  Ａｍ  Ｃｏｌｌ  Ｃａｒｄｉｏｌ３２：１６７２〜９（１９９８）；およびＭｅｙｄａｎｉ，Ｍ．ほか、“長期の抗酸化剤入り食物補助物の効果”、Ａｎｎ  ＮＹ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ８５４：３５２〜６０（１９９８）。同様に、骨損失および骨粗鬆症に関し危険度が増大している閉経後の女性におけるビタミンＤ不足が広まっていることが認められている。参照ＷＨＯ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｇｒｏｕｐ，“１９９０年代における更年期についての研究”、ＷＨＯ  Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ  Ｒｅｐｏｒｔ，  Ｓｅｒｉｅｓ  ８６６，１９９６，ＷＨＯ，Ｇｅｎｅｖａ，スイス。同様に、研究では閉経後の女性における加齢性黄斑変性症の発生率はプロビタミンＡ（カロチノイド類）およびビタミンＥの摂取と逆相関することが示された。参照Ｓｅｄｄｏｎ，Ｊ．Ｍ．ほか、“食物のカロチノイド類、ビタミンＡ，ＣとＥおよび進行した加齢性黄斑変性症。眼疾患例‐対照研究群”、ＪＡＭＡ  ２７２：１４１３〜２０（１９９４）；Ｗｅｓｔ，Ｓ．ほか、“抗酸化剤または補助剤は加齢性黄斑変性症に対し防御的か？”、Ａｒｃｈ  Ｏｐｔｈａｌｍｏｌ  １１２：２２２〜７（１９９７）；Ｖａｎ  ｄｅｒ  Ｈａｇｅｎ，Ａ．Ｍ．，ほか、“フリーラジカルおよび抗酸化剤補助：それらの加齢性黄斑変性症における役割の概説”、Ｊ  Ａｍ  Ｏｐｔｏｍ  Ａｓｓｏｃ  ６４：８７１〜８（１９９３）；およびＧｏｌｂｅｒｇ，Ｊ．ほか、“加齢性黄斑変性症に関する因子。最初のＮａｔｉｏｎａｌ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ  Ｅｘａｍｉｎａｔｉｏｎ  Ｓｕｒｖｅｙからのデータの解析”、Ａｍ  Ｊ  Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌ  １２８：７００〜１０（１９８８）。更に、最近の証拠では酸化ストレスがアルツハイマー病の発生に重要な役割を果たし、補助的ビタミンＥは当該病気の危険度を低下させることを示唆している。参照Ｓｉｎｃｌａｉｒ，Ａ．Ｊ．ほか、“アルツハイマー病および血管性痴呆症の患者における変化した血清抗酸化剤の状況”、Ｉｎｔ  Ｊ  Ｇｅｒｉａｔｒ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ  １３：８４０〜５（１９９８）；Ｍｏｒｒｉｓ，Ｍ．Ｃ．ほか、“ビタミンＥとビタミンC補助剤使用およびアルツハイマー病発生の危険度”、Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ  Ｄｉｓ  Ａｓｓｏｃ  Ｄｉｓｏｒｄ  １２：１２１〜６（１９９８）；Ｓｕｂｒａｍａｎｉａｍ，Ｒ．ほか、“フリーラジカル抗酸化剤ビタミンＥは皮質性シナプトソーム膜をアミロイド性ベータ‐ペプチド（２５〜３５）毒性からは防御するが、ヒドロキシノネナール毒性からは防御しない：アルツハイマー病のフリーラジカル仮説に関して”、Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ  Ｒｅｓ  ２３：１４０３〜１０（１９９８）。
【０００５】  イヌの病死の４７％はガンが原因で、次いで心臓病（１２％）および腎臓病（７％）であることが知られている。ネコでは、上位に位置する病気にはガン（３２％）、腎臓／泌尿器疾患（２３％）および心臓病（９％）が含まれる。参照Ｍｏｒｒｉｓ  Ａｎｉｍａｌ  Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ  Ａｎｉｍａｌ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｕｒｖｅｙ  １９９７．動物でのこれらの病気はある種のビタミン類、特にビタミンＥおよびビタミンＣと共にビタミンＡのような抗酸化剤の不適切なレベルと結び付いている。
【０００６】  そこで、特に一般的に加齢による栄養吸収の効率低下および腸吸収機能の衰退を考慮に入れ、閉経後の女性での脂溶性ビタミン類の栄養的状況を改善する必要がある。同様に特に一般的な加齢による腸吸収機能の衰退を考慮に入れ、下等動物における脂溶性ビタミン類の栄養的状況を改善する必要がある。
本発明の要約
出願者らは，Ｌ‐カルニチンが閉経後の女性においてビタミンＡ、DやＥの如き脂溶性ビタミン類の腸（リンパ）吸収を増進させることを発見した。結果として、Ｌ‐カルニチンは抗酸化防御メカニズムを高め、閉経後の女性における冠動脈性心疾患、加齢性黄斑変性症、骨粗鬆症、ガンおよびアルツハイマー症の如きある種の変性疾患の危険度を低下させる。
【０００７】  本発明は、閉経後の女性における脂溶性ビタミン類の腸吸収、細胞濃度、胆汁分泌、肝貯蔵および／または肝臓濃度を増進する際の方法を提供する。当該方法は、脂溶性ビタミンを必要とする閉経後の女性に対して脂溶性ビタミンおよび脂溶性ビタミン吸収を増進するのに効果的な量のＬ‐カルニチンの経口投与を含む。
【０００８】  本発明は同時に閉経後の女性における、冠動脈性心疾患、加齢性黄斑変性症、骨粗鬆症、ガンおよびアルツハイマー症から選択する病気の一つ以上の危険度を低減するまたは防御する方法を提供する。当該方法は、脂溶性ビタミンを必要とする閉経後の女性に脂溶性ビタミンおよび脂溶性ビタミン吸収を増進させるのに効果的な量のＬ‐カルニチンの経口投与を含む。
【０００９】  本発明は動物において脂溶性ビタミンの腸吸収を増進させる方法を提供する。当該方法は、脂溶性ビタミンを必要とする当該動物に脂溶性ビタミンおよび脂溶性ビタミン吸収を増進させる効果的量のＬ‐カルニチンの経口投与を含む。
【００１０】  本発明は同じように動物における冠状動脈性心疾患を含む心臓病；腎臓病；泌尿器疾患およびガンから選択された1つ以上の病気の危険度または防御の方法を提供する。当該方法は脂溶性ビタミンを必要とする動物に、脂溶性ビタミンおよび脂溶性ビタミン吸収を増進させる有効量のＬ‐カルニチンの経口投与を含む。
本発明の詳細な説明
本発明は、閉経後の女性において脂溶性ビタミンの腸の吸収、細胞濃度、胆汁分泌、肝貯蔵および肝臓濃度を増進させる方法を提供する。当該方法は脂溶性ビタミンを必要とする閉経後の女性に、脂溶性ビタミンおよび脂溶性ビタミン吸収を増進させる有効量のＬ‐カルニチンの経口投与を含む。
【００１１】  同じように、脂溶性ビタミンを必要とする下等動物に脂溶性ビタミンおよび脂溶性ビタミン吸収を増進させる有効量のＬ‐カルニチンの経口投与を行い、ネコまたはイヌのような下等動物において脂溶性ビタミンの腸吸収、細胞濃度、胆汁分泌、肝貯蔵および肝臓濃度を増進することができる。
【００１２】  適したＬ‐カルニチンには、これに限らないがＬ‐カルニチン；アセチルＬ‐カルニチン、プロピオニル‐Ｌ‐カルニチン、ブタニル‐Ｌ‐カルニチン、バレニル‐Ｌ‐カルニチンおよびイソバレニル‐Ｌ‐カルニチンなどのアシル‐Ｌ‐カルニチン類；それらの医薬品として許容される塩；および上述のいずれかの組合せが含まれる。Ｌ‐カルニチンの適した医薬品として許容される塩には、これに限らないが酢酸塩、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、亜硫酸塩、臭化物、酪酸塩、クエン酸塩、ショウノウ酸塩、ショウノウスルホン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、塩化物、ジグルコン酸塩、ドデシルスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、フマル酸塩、グルコヘプタン酸塩、グルコースリン酸塩、グリセロリン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、ヨウ化物、２‐ヒドロキシエタンスルホン酸塩、乳酸塩、マレイン酸塩、メタンスルホン酸塩、メタンスルホン酸塩、２‐ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、オロチン酸塩、シュウ酸塩、パルミチン酸塩、ペクチン酸塩、過硫酸塩、３‐フェニルプロピオン酸塩、リン酸塩、ピクリン酸塩、ピバリン酸塩、プロピオン酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、トシラート塩、トリクロロ酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩とウンデカン酸塩およびＬ‐カルニチンの酸添加塩類が含まれる。好ましくは、Ｌ‐カルニチンは低吸湿性である。好ましいＬ‐カルニチン塩には、これに限らないがＬ‐カルニチンＬ‐酒石酸塩、Ｌ‐カルニチンフマル酸塩、Ｌ‐カルニチンアジピン酸塩およびＬ‐カルニチンクエン酸マグネシウム塩が含まれる。
【００１３】  閉経後の女性にとって、脂溶性ビタミン吸収を増進させる有効量とは閉経後の女性において当該脂溶性ビタミンの腸吸収を増進させるＬ‐カルニチンの量である。閉経後の女性では、１日当たり典型的には約１０ｍｇから約２ｇのＬ‐カルニチンまたはその医薬品として許容される塩、好ましくは１日当たり約２５０から約７５０ｍｇのＬ‐カルニチンまたはその医薬品として許容される塩を投与する。より好ましくは、閉経後の女性に１日当たり約４００から約６００ｍｇのＬ‐カルニチンまたはその医薬品として許容される塩を投与する。一般的には、閉経後の女性に規定食１，０００キロカロリー当たり約５０から約８００ｍｇおよび好ましくは約１００から約４００ｍｇのＬ‐カルニチンまたはその医薬品として許容される塩を投与する。閉経後の女性に関して本明細書で使用する用語“規定食”は、１人の女性が１日当たり消費する食物（カロリーで）の量と定義する。
【００１４】  例えば哺乳類などの下等動物については、脂溶性ビタミン吸収増進させる有効量とは、動物にて脂溶性ビタミンの腸吸収を増進させるＬ‐カルニチンの量である。下等動物に投与するＬ‐カルニチンの量は動物の年齢または病気の状態によって変動する。一般的に、下等動物にはＬ‐カルニチンまたはその医薬品として許容される塩を約１から約１００ｍｇ／体重ｋｇ、好ましくは約５から約７５ｍｇ／体重ｋｇ、より好ましくは約５から約２５ｍｇ／体重ｋｇで投与する。一般的に、下等動物にはＬ‐カルニチンまたはその医薬許容塩を約２５から約５０００ｍｇ／規定食ｋｇ、好ましくは約５０から約１０００ｍｇ／規定食ｋｇ、そしてより好ましくは約７５から約５００ｍｇ／規定食ｋｇを投与する。ヒトでない（または下等）動物につき本明細書で使用する用語“規定食”は当該動物が１日当たり消費する食物量（重量で）と定義する。
【００１５】  適切な脂溶性ビタミン類には、これに限らないがビタミンＡ；ビタミンＤ；ビタミンＥ（および特にα‐トコフェロール）；ビタミンＥアセテートのようなそれらの前駆体；ビタミンＥパルミテートおよびビタミンＥアセテートのような１から約２０の炭素原子を有するエステル類；および上述物のいずれかの組合せが含まれる。本発明の１つの態様によれば、当該脂溶性ビタミンはビタミンＥである。本明細書で使用する用語“ビタミンＥ”には、α‐、β‐、δ‐およびγ‐トコフェロールおよびそれらの相当するアシルエステル類が含まれる。閉経後の女性に毎日投与する特定の脂溶性ビタミンの量はＮａｔｉｏｎａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅが発行したＵ．Ｓ．ＲＤＡで推奨している量である。典型的には、毎日約８から約８００ｍｇのビタミンＥを閉経後の女性に投与する。好ましくは、毎日約８から約４００ｍｇのビタミンＥを閉経後の女性に投与する。
【００１６】  下等動物の毎日投与する特定の脂溶性ビタミンの量は、様々の動物組織が推奨している量でよい。投与する脂溶性ビタミンの量は当該動物の年齢および病気の状態および補助する当該ビタミンにより変動する。一般的に、下等動物には約３０から約５，０００国際単位（ＩＵ）／規定食ｋｇおよび好ましくは約１００から約１，０００ＩＵ／規定食ｋｇのビタミンＥを投与する。一般的に、下等動物には約５，０００から約１，０００，０００国際単位（ＩＵ）／規定食ｋｇおよび好ましくは約１０、０００から約５００，０００ＩＵ／規定食ｋｇのビタミンＡを投与する。一般的に、下等動物には約２５０から約１０，０００国際単位（ＩＵ）／規定食ｋｇおよび好ましくは約５００から約３，０００ＩＵ／規定食ｋｇのビタミンDを投与する。
【００１７】  当該下等動物とはネコまたはイヌなどの家庭用ペットである。好ましくは、当該動物は卵巣除去または去勢動物で、特には卵巣除去または去勢したネコまたはイヌである。
【００１８】  好ましくは、当該Ｌ‐カルニチンおよび脂溶性ビタミンは閉経後の女性または下等動物へ同時に、より好ましくは同じ服用量単位剤形で投与する。当該Ｌ‐カルニチンおよび脂溶性ビタミンを好ましくは食事中または食事後に投与する。
【００１９】  エストロゲンは同じように閉経後の女性の抗酸化系を更に増強するために閉経後の女性にＬ‐カルニチンおよび脂溶性ビタミンと共に投与するのがよい。エストロゲンの量は、エストロゲン補充療法の技術で知られている方法で決定する。一般的には、閉経後の女性には約３００から約６００μｇのエストロゲンをＬ‐カルニチンおよび脂溶性ビタミンと共に投与する。
【００２０】  Ｌ‐カルニチンと脂溶性ビタミンの組合せは抗酸化メカニズムを高めるので、閉経後の女性につき冠状動脈性心疾患、加齢性黄斑変性症、骨粗鬆症、ガンおよびアルツハイマー症などの変性疾患の危険度を低下させまたは防ぐためにＬ‐カルニチンおよび脂溶性ビタミンを投与する。本発明の方法は長期治療、即ち数ヶ月、数年または人生の残りの間に使うことができ、前述の病気をもたらす危険度を減少させる。
【００２１】  同じようにして、Ｌ‐カルニチンを下等動物に投与でき、冠状動脈性心疾患を含む心臓病、腎臓病、泌尿器疾患およびガンのような一定の変性疾患の危険度を低減するか防御する。本発明の方法は長期治療、即ち数ヶ月、数年または動物の残りの生涯に亘って使い、前述の病気をもたらす危険度を減少させる。
【００２２】  当該Ｌ‐カルニチン、脂溶性ビタミンおよび場合によりエストロゲンを当技術分野で知られている方法で、例えばこれに限らないがカプセル、錠剤および粉体や分包のような粒子を含む閉経後の女性用の経口服用量単位剤形に処方できる。閉経後の女性用の服用量単位剤形は液体または固体状にすることができるが、好ましくは固体状である。服用量単位剤形は更に添加剤として、これに限らないがｐＨ調整剤、保存剤、風味料、味マスキング剤、香料、湿潤剤、等張化剤、着色剤、界面活性剤、可塑剤、滑沢剤、投薬賦形剤、可溶化剤、医薬品添加物、希釈剤、崩壊剤または上述物のいずれかの組合せを含む。
【００２３】  同様に、下等動物に関してＬ‐カルニチンおよび脂溶性ビタミンは当技術分野で知られている方法で、これに限らないが動物の餌のような食物；カプセル；錠剤および粉末と分包のような粒子を含む経口服用量単位剤形に処方することができる。当該Ｌ‐カルニチンおよび脂溶性ビタミンは食物、水、動物の餌、錠剤またはカプセルにして動物に投与できる。下等動物用の服用量単位剤形は液体または固形状にできる。服用量単位剤形は更に前述の添加剤のいずれを含んでもよい。
好ましい態様の説明
以下の実施例は本発明を例示するが制限するものではない。全ての部およびパーセントは、他に示さなければ重量で表す。
【実施例】
【００２４】実施例１
規定食のカルニチンは卵巣摘出したラットにおけるα‐トコフェロールの肝臓レベルおよび胆汁分泌を増進させる
本試験は卵巣摘出したラットにおいて、規定食のカルニチンがα‐トコフェロールの肝臓濃度および胆汁分泌に影響を与えるかどうかを測定した。
材料および方法
３２匹の１０週齢メスのＳｐｒａｇｕｅ‐Ｄａｗｌｅｙラットで体重２１４±６ｇ（Ｈａｒｌａｎ  Ｓｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙ，Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ）を、約２３℃で調整した温度の窓なしの部屋内のステンレススチール線底のプラスチックケージ中に個別に収容し、明期間午後３：３０から午前３：３０および暗期間午前３：３０から午後３：３０の明暗周期に置いた。当該ラットは脱イオン水を自由摂取およびＤｙｅｔｓ，Ｉｎｃ．（Ｂｅｔｈｌｅｈｅｍ，ＰＡ，ＵＳＡ）が処方した脂肪源として７％大豆油を入れた亜鉛が充分なＡＩＮ‐３Ｇ規定食（Ｒｅｅｖｅｓほか、Ｊ  Ｎｕｔｒ  １９９３；１２３：１９３９〜１９５１）を任意に食べさせて馴致した。望ましい亜鉛レベルを供するのに炭酸亜鉛を加えた。最初の週末、１６時間断食後に平均体重２３０±１２ｇの当該ラットをハロタン麻酔下で卵巣摘出を行った。最初の血液試料（０週）は無作為に選んだ５匹のラットから採取した。【００２５】  １週間の手術回復期間後、体重を調和させながらラットを以下の２実験群に分けた：ラットの一群にはα‐トコフェロールを除いた大豆油；Ｄｅｇｕｓｓａ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｒｉｄｇｅｆｉｅｌｄ，ＮＪから入手できるシリカ水和物Ｓｉｐｅｒｎａｔ登録商標を１５０ｐｐｍ含有し；および１５０ｍｇ／ｋｇのカルニチンを補った、亜鉛が充分なＡＩＮ９３Ｇ食餌を与えた。対照群には、１５０ｍｇ／ｋｇのカルニチンを１５０ｐｐｍのα‐Ｄ‐グルコースで置き換えた他は同じである規定食を与えた。両方の群に対する標準食物摂取は約１５ｇ／日／ラットであった。血液試料は各群において無作為に選んだ５匹のラットから１，３，５，８週の始めに採取した。【００２６】  第８週の終わりに、約３４０±１５ｇの体重を持つ両群のラットにつき胆汁管カニューレ挿入を実施した。以前に記述（Ｎｏｈほか、Ｊ  Ｎｕｔｒ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  １９９９；１０：１１０〜１１７）した如く、１６時間食物遮断に引き続いて当該総胆汁管のカニューレ挿入を行った。簡単に言えば、正中腹腔切開を行った後、ハロタン麻酔（２．０ｌ酸素／分の中に２．０％ハロタン）下で総胆汁管にＰＥ‐１０管（Ｃｌａｙ  Ａｄａｍｓ，Ｓｐａｒｋｓ，ＭＤ）をカニューレした。シリコン製栄養補給カテーテル（Ｓｉｌａｓｔｉｃ  ｍｅｄｉｃａｌ  ｇｒａｄｅ  ｔｕｂｉｎｇ，Ｄｏｗ  Ｃｏｒｎｉｎｇ，Ｍｉｄｌａｎｄ，ＭＩ）を胃基底部領域に挿入した。当該注入カテーテルは右側腹部を通して胆汁カニューレに沿って体外露出させた。カニューレ挿入したラットは個々拘束ケージに入れ、約３０℃に保った暖かい回復室中で少なくとも２０時間回復させた。手術の後、直ちにグルコース‐リン酸塩緩衝食塩水（ＰＢＳ）（ｍモル／ｌ：２７７グルコース，６．７５Ｎａ2ＨＰＯ4，１６．５ＮａＨ2ＰＯ4，１１５ＮａＣｌおよび５ＫＣｌ；ｐＨ６．７）を連続して注射器ポンプ（Ｈａｒｖａｒｄ  Ａｐｐａｒａｔｕｓ，Ｍｏｄｅｌ９３５，Ｓｏｕｔｈ  Ｎａｔｉｃｋ，ＭＡ）を介して３．０ｍｌ／ｈで十二指腸カニューレを通して注入した。【００２７】  手術後回復の後、ラットに２４ｍｌのＰＢＳ中に５６５μモルのトリオレイン（９５％、Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）および３９６μモルのタウロコール酸ナトリウムを含有する脂肪乳化液を注入した。氷で満たしたビーカ中に入れた３０μｇの没食子酸ｎ‐プロピルを含む秤量済みコニカル遠心管に胆汁を１時間ごとに８時間集めた。胆汁を集めた後、当該ラットを頚部脱臼で屠殺し、当該肝臓を切除した。当該試料は分析まで約−７０℃で保存した。【００２８】  脂肪はＦｏｌｃｈの方法（Ｆｏｌｃｈほか、Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ１９５７；２２６：４９７〜５０９）で抽出した。α‐トコフェロールの含量はＺａｓｐｅｌほかが記述した如くに測定した（Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１９８３；１３０：１４０〜１５０）。簡単に言うと、１５０μＬの胆汁および一定量の酢酸α‐トコフェロール（内部標準として）をガラス試験管にピペットで入れた。アセトン抽出後、硫酸ナトリウムで乾燥、そして１０００×ｇで遠心分離し、上層をＰＴＦＥ注射器ろ過器（０．４５μｍ，Ａｌｌｔｅｃｈ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｄｅｅｒｆｉｅｌｄ，ＩＬ）でろ過し、Ｎ2ガス下で乾燥してクロロホルム‐メタノール（１：３，ｖ／ｖ）の規定量に再溶解した。当該抽出物はＳｙｓｔｅｍ  Ｇｏｌｄソフトウエア（Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｉｎｃ．，Ｆｕｌｌｅｒｔｏｎ，ＣＡ）を有し、Ｃ‐１８逆相カラム（Ａｌｌｔｉｍａ  Ｃ１８，５μｍ、４．６×１５０ｍｍ，Ａｌｌｔｅｃｈ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｄｅｅｒｆｉｅｌｄ，ＩＬ）を備えたＢｅｃｋｍａｎ  ＨＰＬＣシステムで分離した。脱ガスしたメタノールを移動相として２ｍｌ／分で使用した。典型的な保持時間はα‐トコフェロールで４．１分、酢酸α‐トコフェロールで５．３分であった。検出は２９２ｎｍ（Ｍｏｄｕｌｅ  １６６  ＵＶ検出器、Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）で観測した。α‐トコフェロール標準曲線範囲は４７．６から１９０．５ｎｇであった。【００２９】  統計的分析はＥｘｃｅｌ９７（Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ  Ｉｎｃ，１９９７）およびＰＣＳＡＳ（ＳＡＳ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，１９９６）を用いて行った。Ｓｔｕｄｅｎｔ’ｓ  ｔ‐ｔｅｓｔおよび一元ＡＮＯＶＡを用いて群平均を比較した。差はＰ＜０．０５にて有意とした。【００３０】  結果
胆汁の流れでは差異は認められなかった（カルニチン群７．９±１．４ｍｌ／８時間に対して対照群８．９±１．８ｍｌ／８時間）しかしながら、α‐トコフェロールの８時間での胆汁分泌はカルニチン群（５３．１±９．３ｎｍｏｌ）が対照群（４１．３±７．３ｎｍｏｌ）より高く有意であった（Ｐ＜０．０５）．図１および２では、α‐トコフェロールの産出速度および積算産出につき其々図で例示している。α‐トコフェロールの肝臓濃度は同じようにカルニチン群（１２９．６±１９．５ｎモル／ｇ）は対照群（１００．７±２０．２ｎモル／ｇ）と比較すると有意に上昇していた。同じように、当該全脂肪１００ｍｇ当たりのα‐トコフェロール濃度はカルニチン補強規定食を与えられたラットでは有意により高かった。肝臓α‐トコフェロール／リン脂質の比は対照群（３．３±０．４ｎモル／μモル）におけるよりカルニチン群（４．８±０．６ｎモル／μモル）の方が有意（Ｐ＝０．００１）により高かった。これらの結果は、規定食のカルニチンが卵巣摘出ラットにおいてα‐トコフェロールの肝臓状況を改善することの証拠を提供する。【００３１】 実施例２
規定食のカルニチンは卵巣摘出したラットにおけるα‐トコフェロールのリンパ吸収を増進する
本実験は、規定食のカルニチンが卵巣摘出したラットにおけるα‐トコフェロールの腸吸収を改善するかどうかを測定するために行った
材料および方法
３２匹の１０週齢メスのＳｐｒａｇｕｅ‐Ｄａｗｌｅｙラットで体重２０８±８ｇ（Ｈａｒｌａｎ  Ｓｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙ，Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ）を収容し実施例１で説明したように飼育した。第２週目の末に、平均体重２４０±９ｇの当該ラットを１６時間の断食後にハロタン麻酔下で卵巣摘出した。最初（０週）の血液試料は無作為に選択した６匹のラットから採取した。【００３２】  手術後直ちにラットを実施例１で説明したように２つの試験群、即ち1群はカルニチン補強の規定食で飼育し、1群は対照である。両群での通常の食物摂取は約１５〜１６ｇ／日／ラットであった。第5週の最後に、平均体重３４０±１５ｇの各群につきリンパ管にカニューレ挿入を行った。以前の記述（Ｎｏｈほか、前述）の如く１６時間の食物遮断に次いで腸間膜リンパ管のカニューレ挿入を行った。簡単に言えば、正中腹腔切開を行った後、ハロタン麻酔（２．０ｌ酸素／分の中に２．０％ハロタン）下でシアノアクリレート系接着剤（Ｋｒａｚｙ  Ｇｌｕｅ，Ｃｏｌｕｍｂｕｓ，ＯＨ）の滴下で安全確保しながら腸管膜リンパ管にポリエチレン管（ＳＶ  ３１  ｔｕｂｉｎｇ，Ｄｕｒａｌ  Ｐｌａｓｔｉｃｓ，Ａｕｂｕｒｎ，オーストラリア）をカニューレ挿入をした。シリコン製栄養補給カテーテル（Ｓｉｌａｓｔｉｃ  ｍｅｄｉｃａｌ  ｇｒａｄｅ  ｔｕｂｉｎｇ，Ｄｏｗ  Ｃｏｒｎｉｎｇ，Ｍｉｄｌａｎｄ，ＭＩ）を胃基底部領域に挿入した。当該注入カテーテルは右側腹部を通してリンパカニューレに沿って体外露出させた。カニューレ挿入したラットを個々拘束ケージに入れ、約３０℃に保った暖かい回復室中で少なくとも２０時間回復させた。外科手術の後、直ちにグルコース‐リン酸塩緩衝食塩水（ＰＢＳ）（ｍモル／ｌ：２７７グルコース，６．７５Ｎａ2ＨＰＯ4，１６．５ＮａＨ2ＰＯ4，１１５ＮａＣｌおよび５ＫＣｌ；ｐＨ６．７）を連続して注射器ポンプ（Ｈａｒｖａｒｄ  Ａｐｐａｒａｔｕｓ，Ｍｏｄｅｌ９３５，Ｓｏｕｔｈ  Ｎａｔｉｃｋ，ＭＡ）を介して３．０ｍｌ／ｈで十二指腸カニューレを通して注入した。【００３３】  手術後の回復後、ラットは２４ｍｌのＰＢＳ中に、１μＣｉの［カルボキシ‐14Ｃ］‐トリオレイン（比活性１１２．０ｍＣｉ／ｍモル，ＤｕｐｏｎｔＮＥＮ，Ｂｏｓｔｏｎ，ＭＡ），５６５μモルのトリオレイン（９５％、Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ），３．５６μモルのα‐トコフェロール（全ｒａｃ‐α‐トコフェロール，９７％，Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ，Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ，ＷＩ）および３９６μモルのタウロコール酸ナトリウムを含有する脂肪乳化液を注入した。氷で満たしたビーカの中に入れた３０μｇの没食子酸ｎ‐プロピルおよび４ｍｇのＮａ2ＥＤＴＡを含む秤量済みコニカル遠心管にリンパ液を１時間ごとに８時間集めた。リンパ液を集めた後、当該ラットを頚部脱臼で屠殺し、当該肝臓を集めた。当該試料は分析まで約−７０℃で保存した。【００３４】  抽出した脂肪から（Ｆｏｌｃｈほか、前述）組織全リン脂質はＲｅｈｅｊａほか（Ｊ  Ｌｉｐｉｄ  Ｒｅｓ  １９７３；１４：６９５〜６９７）の方法の比色法で測定した。組織全コレステロールはＲｕｄｅｌほか（Ｊ  Ｌｉｐｉｄ  Ｒｅｓ１９７３；２１：���６４〜３６６）が記述した如く定量した。α‐トコフェロールはＺａｓｐｅｌほか（前述）および上記実施例１に記述した如く測定した。統計的解析は実施例１に記述した如く実施した。【００３５】 結果
リンパの流れでは差を示さなかった（カルニチン群では２２．６±４．２ｍｌ／８時間：対照群では２４．５±２．５ｍｌ／８時間）。８時間でのα‐トコフェロールのリンパ吸収はカルニチン群（８９９±２００ｎモル／８ｈ）が対照群（５８７±９２ｎモル／８時間）より有意（Ｐ＜０．０５）に高かった。図３および図４ではα‐トコフェロールの時間毎の吸収速度および積算吸収を図で例示する。14Ｃ‐トリオレインの吸収はカルニチン群（５３．５±４．０％服用量）が対照群（４７．６±５．０％服用量）と比較して僅かに増進（Ｐ＜０．０５）した。リンパα‐トコフェロール／リン脂質の比（カルニチン群では４６．９±８．８ｎモル／μモル：対照群３６．３±６．２ｎモル／μモル）およびリンパα‐トコフェロール／コレステロール（カルニチン群では８２．７±１７．１ｎモル／μモル：対照群では６０．８±６．０ｎモル／μモル）では有意な差が認められた。これらの結果は規定食カルニチンがα‐トコフェロールのリンパ吸収を増進させることの初めての証明を提示する。
【発明の効果】
【００３６】  以上に述べた全ての特許、出願、論文、公報および試験法は参照により本明細書中に援用される。
【００３７】  上で詳しく述べた記述に照らせば、本発明の多くの変形は当事者に対しそれらにつき示唆するだろう。そのような明らかな変形は付加した請求項の意図する範囲内である。
【図面の簡単な説明】
【図１】  図１は時間間隔で８時間におけるα‐トコフェロール（αＴＰ）の胆汁分泌の説明図である。当該対照群は−ＣＮ（即ちカルニチンなし）で表している。当該カルニチン含有群は＋ＣＮで表している。全ての値は平均±標準偏差（ＳＤ）で表現している。時間時点当たり５匹のラットで試験を行った（即ちｎ＝５）。
【図２】  図２は１時間間隔で８時間におけるα‐トコフェロール（αＴＰ）の積算胆汁分泌の説明図である。当該対照群は−ＣＮ（即ちカルニチンなし）で表している。当該カルニチン含有群は＋ＣＮで表している。全ての値は平均±標準偏差（ＳＤ）で表現している。時間時点当たり５匹のラットで試験を行った（即ちｎ＝５）。アステリスク（*）はｐ＜０．０５で有意差を意味する。
【図３】  図３は１時間間隔で８時間におけるα‐トコフェロール（αＴＰ）のリンパ吸収の説明図である。当該対照群はＳＮで表している。カルニチン含有群はＣＫで表している。全ての値は平均±標準偏差（ＳＤ）で表現している。時間時点当たり５匹のラットで試験を行った（即ちｎ＝５）。アステリスク（*）はｐ＜０．０５で有意差を意味する。
【図４】  図４は１時間間隔で８時間におけるα‐トコフェロール（αＴＰ）の積算リンパ吸収の説明図である。当該対照群はＳＮで表している。カルニチン含有群はＣＫで表している。全ての値は平均±標準偏差（ＳＤ）で表現している。時間時点当たり５匹のラットで試験を行った（即ちｎ＝５）。アステリスク（*）はｐ＜０．０５で有意差を意味する。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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