(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ワクチン組成物であって、
ｉ．アミノ酸ＬＭＬＧＥＦＬＫＬ（配列番号５）からなるＨＬＡ−Ａ２拘束サバイビンペプチドと、
ｉｉ．鉱油およびサーファクタントを含む油中水型エマルジョンのために処方されたアジュバントであって、該アジュバントが該サーファクタントを１４．５容積％まで含む、アジュバントと、
を含む、医薬としての使用のための、ワクチン組成物。
【請求項２】
前記アジュバントが前記サーファクタントを５〜１４容積％含む、請求項１に記載のワクチン組成物。
【請求項３】
前記サーファクタントの粘性が２００〜４００ｍＰａＳである、請求項１〜２のいずれかに記載のワクチン組成物。
【請求項４】
前記鉱油はＤｒａｋｅｏｌ  ６ＶＲである、請求項１〜３のいずれか１項に記載のワクチン組成物。
【請求項５】
前記サーファクタントがマンニド・オレエートである、請求項１に記載のワクチン組成物。
【請求項６】
前記アジュバントがＭｏｎｔａｎｉｄｅＴＭ  ＩＳＡアジュバントである、請求項１〜５のいずれかに記載のワクチン組成物。
【請求項７】
前記アジュバントがＭｏｎｔａｎｉｄｅ  ＩＳＡ  ５１またはＭｏｎｔａｎｉｄｅ  ＩＳＡ  ７２０である、請求項１〜６のいずれかに記載のワクチン組成物。
【請求項８】
前記アジュバントがＭｏｎｔａｎｉｄｅ  ＩＳＡ  ５１である、請求項１〜７のいずれかに記載のワクチン組成物。
【請求項９】
ガンの処置のための医薬の製造のための、請求項１〜８のいずれかによって特徴付けられるワクチン組成物の使用。
【請求項１０】
ガンの処置のための、請求項１〜８のいずれかに記載のワクチン組成物。
【請求項１１】
血管形成の阻害のための、請求項１〜８のいずれかに記載のワクチン組成物。
【請求項１２】
前記ガンが、悪性黒色腫、膵臓癌、子宮頸癌または結腸癌である、請求項１０に記載のワクチン組成物。
【請求項１３】
部品キットであって、
ｉ．請求項１〜８のいずれかに記載のワクチン組成物と、
ｉｉ．化学療法剤または血管形成インヒビターである二次医薬と、
を含む、部品キット。
【請求項１４】
疾患を処置または予防するための請求項１〜８のいずれか１項に記載のワクチン組成物であって、該ワクチン組成物が被験体に対して２回以上投与されることを特徴とする、ワクチン組成物。
【請求項１５】
疾患を処置または予防するための請求項１〜８のいずれか１項に記載のワクチン組成物であって、該ワクチン組成物は、被験体に対して２回以上投与され得、そして、該被験体において強力かつ特異的なＴ細胞応答を刺激することを特徴とし、ここで、該強力かつ特異的なＴ細胞応答が、該ワクチン組成物の投与後にＥＬＩＳＰＯＴによって測定された場合、１０４個のＰＢＭＣ細胞あたり５０個を超えるペプチド特異的なスポットである、ワクチン組成物。
【請求項１６】
被験体において腫瘍間質における抗原特異的Ｔ細胞の浸潤を誘導するための、請求項１〜８のいずれか１項に記載のワクチン組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本特許出願に引用される全ての特許および非特許参考文献は、その全体が参照によって本明細書に援用される。
【０００２】
（発明の分野）
本発明は、１つ以上のサバイビン（ｓｕｒｖｉｖｉｎ）ポリペプチドフラグメントを含む治療ワクチンに関する。このワクチンは、例えば、ガン疾患の予防、寛解および／または治療的な処置のために用いられ得る。本発明はさらに、併用処置の方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
（発明の背景）
哺乳動物の免疫系は、外来の物質または異質な物質を認識してこれに反応する。この系の重要な面はＴ細胞応答である。この応答には、ヒト主要組織適合複合体（ＭＨＣ）およびペプチドからなるヒトリンパ球抗原（ＨＬＡ）と呼ばれる細胞表面分子の複合体を、Ｔ細胞が認識して相互作用することを要する。このペプチドは、ＨＬＡ／ＭＨＣ分子を提示もする細胞によって処理される、より大きい分子に由来する。Ｔ細胞およびＨＬＡ／ペプチドの複合体の相互作用は、限定されており、これには、ＨＬＡ分子およびペプチドの特定の組み合わせに特異的であるＴ細胞が必要である。特定のＴ細胞が存在しない場合、Ｔ細胞応答はそのパートナー複合体が存在する場合でさえ存在しない。同様に、特定の複合体が存在しない場合、応答は存在しないが、Ｔ細胞は存在する。
【０００４】
ヒト腫瘍関連抗原（ｔｕｍｏｒ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ａｎｔｉｇｅｎｓ）（ＴＡＡ）由来のペプチドエピトープは、ＭＨＣ分子の状況では細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）によって認識され得るということ、そして全てではないがほとんどの腫瘍がこのような抗原を発現するということが十分に確証されている。結果として、刺激的な臨床的努力は、患者において有効な抗腫瘍ＣＴＬ応答を生成するために、ワクチン接種および養子Ｔ細胞療法のようなストラテジーでこれらのＴＡＡを標的することを継続している。
【０００５】
しかし、抗原損失改変体の免疫選択は、臨床的な腫瘍学における公知のＣＴＬエピトープのほとんどの治癒可能性にとって重篤な障害であり得、そして抗原欠損変異体腫瘍の選択は、ガン増殖において役割を有さない抗原を標的する場合、治療ストラテジーにおける限界として十分認識されている。
【０００６】
この理由は、最も特徴付けられたペプチドは、腫瘍細胞の生存に必須でないポリペプチド由来であるということである。従って、強力なＣＴＬ応答が、ワクチン接種のような治療的な手段によってこれらのペプチド抗原に対して誘導される場合、標的された抗原の発現を欠く腫瘍細胞は、免疫応答の上昇を回避する可能性が極めて高い。
【０００７】
ガン疾患の処置のさらに有効な治療用ワクチンおよび改良された方法が必要である。
【０００８】
Ｔ細胞が細胞異常を認識する機構も、ガンに関与している。特許文献１では、遺伝子のファミリーであって、ペプチドにプロセシングされ、順に、細胞表面で発現されて、特異的なＣＴＬによる腫瘍細胞の溶解をもたらし得る遺伝子のファミリーが開示されている。これらの遺伝子は、ＭＡＧＥファミリーと呼ばれ、そして「腫瘍拒絶抗原前駆体（ｔｕｍｏｒ  ｒｅｊｅｃｔｉｏｎ  ａｎｔｉｇｅｎ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ）」すなわち「ＴＲＡＰ」分子をコードすると言われており、そしてそれらに由来するペプチドは、「腫瘍拒絶抗原（ｔｕｍｏｒ  ｒｅｊｅｃｔｉｏｎ  ａｎｔｉｇｅｎｓ）」すなわち「ＴＲＡ」と呼ばれる。
【０００９】
しかし、全体ではないがほとんどの腫瘍が抗原性であるということが一般に受け入れられているが、腫瘍進行が免疫系によって容易に制御されるという意味で実際に免疫原性なのはわずか２〜３である。
【００１０】
これを克服するために、ＴＡＡ由来ペプチドによるワクチン接種を用いる、いくつかの免疫治療トライアルが開始されている。ＣＴＬ規定ＴＡＡの最大数が特徴付けられている腫瘍である黒色腫については、抗原に対する強力なＣＴＬ応答がワクチン接種によって誘導されており、そして幾例かの患者は、これらの疾患の完全寛解を経験した。しかし、これらのワクチン接種トライアルにおいて用いられるペプチドエピトープのほとんどが、メラニン形成細胞特異的であり、そしてこれらのペプチドは、メラニン形成細胞起源でない腫瘍については適用できない。さらに、これらのＴＡＡの発現は、異なる患者由来の腫瘍の間では異種であり、１患者から得られた転移の間で異なりさえし得る。しかし、ここ２〜３年の間に、多数の異なるガンで発現される多数の腫瘍特異的ペプチド抗原、すなわち、ＨＥＲ−２、Ｍｕｃ−１およびテロメラーゼが同定されている。
【００１１】
適切な操作によって腫瘍に存在する腫瘍抗原が免疫系に曝露され得るということも示されている。免疫応答のＣＤ８＋ＣＴＬアームが、単独で、またはＣＤ４＋Ｔｈ細胞と組み合わせて、適応的免疫応答の主な抗腫瘍エフェクターアームを構成するということが研究によって示されている。現在まで、焦点は主に免疫応答のＣＴＬアームにあった。しかし、ＣＤ４Ｔ細胞応答は、腫瘍拒絶において、特に誘導期において、またはインビボにおけるＣＴＬ応答の拡大において、必須の役割を果たすことが明らかになっている。結果として、有効な腫瘍ワクチン接種プロトコールへのクラス１拘束腫瘍抗原の組み込みは、ワクチンの有効性を増大し得る。
【００１２】
アポトーシスは、細胞の自殺の遺伝的プログラムであり、アポトーシスの阻害は、形質転換変異の蓄積をもたらす細胞の寿命を延長することによってガン形成に関与する重要な機構であることが示唆されている。サバイビンは、アポトーシスタンパク質（ＩＡＰ）のインヒビターのファミリーの近年同定されたメンバーである。約４百万の転写物の全体的な遺伝子発現分析において、サバイビンは、多くのタイプのガンで常に上方制御されるが正常な組織では上方制御されないトップの遺伝子のうちの１つとして特定された。サバイビンを過剰発現する固形悪性腫瘍としては、肺、結腸、乳房、膵臓および前立腺の癌、ならびに造血系の悪性腫瘍が挙げられる。さらに、一連の黒色腫および非黒色腫の皮膚癌は、常にサバイビン陽性であることが報告されている。ほとんどのヒトガンにおけるサバイビンの過剰発現によって、腫瘍進行におけるアポトーシス阻害の一般的な役割が示唆され、これは結腸直腸癌および膀胱癌、ならびに神経芽細胞腫の場合には、サバイビンの発現は、望ましくない予後と関連していたという観察によって実証される概念である。サバイビンは、他のアポトーシスインヒビターとして、腫瘍血管形成の間に内皮細胞で発現され、そして血管形成の間のサバイビンのアンチセンス標的化が内皮細胞のアポトーシスを生じ、これがインビトロにおいて毛細血管様の血管の急速な崩壊を促進する。対照的に、サバイビンは、正常な成体組織では検出不能である。サバイビンはほとんどのヒトのガンで過剰発現され、そしてその機能の阻害は、アポトーシスの増大を生じるので、このタンパク質は、治療的なＣＴＬ応答の標的であり得る。サバイビンタンパク質およびその潜在的な診断および治療の用途は、参照によって本明細書に援用される特許文献２に開示される。サバイビンは、１６．５ｋＤａの細胞質タンパク質であって、単一のＢＩＲおよび高度に荷電されたカルボキシ末端コイル領域を、Ｂ細胞前駆体中に移行された場合、増殖因子（ＩＬ−３）中止によって誘導されたアポトーシスを阻害するＲＩＢＧフィンガーの代わりに含む。サバイビンをコードする遺伝子はエフェクター細胞プロテアーゼレセプター−１（Ｅｆｆｅｃｔｏｒ  Ｃｅｌｌ  Ｐｒｏｔｅａｓｅ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ−１）（ＥＰＲ−１）の配列とほぼ同一であるが、反対向きには配置されておらず、従って、頭を付き合わせた構成で複製された２つの別々の遺伝子の存在が示唆される。従って、サバイビンは、アンチセンスＥＰＲ−１生成物として記載されてもよい。２つの遺伝子の方向が反対であるために、タンパク質にコードされるアミノ酸配列は異なる。
【００１３】
機能的には、サバイビンの天然のアンチセンスＥＰＲ−１転写物を上方制御することによるサバイビンの発現の阻害によって、広範なアポトーシスおよび細胞増殖の減少が生じる。
【００１４】
特許文献２は、精製されたサバイビンの単離を開示しており、そしてそれによってサバイビンタンパク質をコードする核酸分子、ならびにサバイビンに結合する抗体および他の分子が得られる。特許文献２はまた、サバイビンタンパク質の抗アポトーシス的に活性なフラグメント、および開示されたサバイビンの配列のＮ末端もしくはＣ末端にまたはその中にアミノ酸残基が挿入されているその改変体を開示している。このようなペプチドは、アポトーシスに必要な重要な機能的な残基、すなわちＴｒｐを６７位置で、Ｐｒｏを７３位置で、そしてＣｙｓを８４位置で含まなければならないということが特に開示されている。
ＥＬＩＳＰＯＴアッセイによって測定した場合、サバイビンペプチドを負荷された樹状細胞でのワクチン接種を用いて、弱い特異的なＴ細胞応答が惹起され得るということが以前に開示されている（特許文献３およびＯｔｔｏ，Ｋら、Ｊ．Ｖａｃｃｉｎｅ（２００４））。この応答は、１０４個の細胞あたり３０未満であり、臨床的な結果の以下の評価によって進行性の疾患が示された。従って、このワクチンは、極めて限られた用途しかない。従って、疾患の進行が阻害される、極めて強力かつ特異的なＴ細胞応答を誘導し得、そして特に臨床的な応答を誘導し得るワクチンを開発することが大きな目的である。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１５】
【特許文献１】国際公報第９２／２０３５６号パンフレット
【特許文献２】米国特許第６，２４５，５２３号明細書
【特許文献３】国際公報第０４／０６７０２３号パンフレット
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１６】
（発明の要旨）
本発明は、サバイビンタンパク質由来のＭＨＣクラスＩ拘束ペプチドが、ＭＨＣクラスＩ  ＨＬＡ分子に結合し得、それによって広範なガン疾患に罹患している患者においてエキソビボおよびインサイチュの両方のＣＴＬ免疫応答を誘発するという発見に基づく。処置における使用の前に、臨床的な結果と組み合わせて免疫応答を分析して、ガンの処置のためのワクチン組成物の有用性を評価することが必要である。免疫後の特異的なＴ細胞応答は、ワクチンにおいて有用な潜在的な抗原について有用な試験であり得、このワクチン組成物は、１０４個のＰＢＭＣあたり５０個より多いＩＦＮ−γ放出細胞のような極めて強力なＴ細胞応答を誘発し得ることが好ましい。なぜなら、これが、ガンの処置における使用のためのワクチン組成物の成功を増大し得るからである。本発明は、部分的または完全な腫瘍退行を誘導し得る特に有効なワクチン組成物を開示する。明白に、これらの知見によって、サバイビンが腫瘍細胞によって普遍的に発現されると考えられるという事実に起因して、ガン疾患の制御において一般に適用可能である、新規な治療的なアプローチについての方法が明らかになる。
【００１７】
本明細書に記載されるワクチン組成物または免疫原性組成物は、そのペプチドが新生物と戦い得るＣＴＬ応答を生じるので、ワクチン組成物としての資格を得る。従って、このワクチン組成物は、治療用ワクチンまたは治療用もしくは薬学的な組成物として資格を得る。
【００１８】
ある局面では、本発明は、１つ以上のサバイビンペプチドまたはサバイビンペプチド改変体であって、このペプチド改変体の配列が、その全長にわたって、配列番号２３の連続したアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一である、サバイビンペプチドまたはサバイビンペプチド改変体と、鉱油およびサーファクタントを含む油中水型エマルジョンのために処方されたアジュバントであって、このアジュバントがこのサーファクタントの１４．５容積％まで含む、アジュバントとを含む、医薬としての使用のための、ワクチン組成物に関する。
【００１９】
本発明のある局面は、ＡＰＰＡＷＱＰＦＬ（配列番号１３）およびＲＰＰＡＷＱＰＦＬ（配列番号１４）の群より選択されるペプチドを含む、ＨＬＡ−Ｂ７に結合し得る多くとも５０アミノ酸残基のサバイビンペプチド改変体に関する。
【００２０】
さらなる局面は、１つ以上のサバイビンペプチドまたはペプチド改変体を含むワクチン組成物であって、このペプチド改変体の配列がその全長にわたって、配列番号２３の連続的アミノ酸配列と少なくとも８５％同一であり、この組成物が：
ｉ．ＨＬＡ−Ｂ７結合ペプチド、ならびに／または
ＨＬＡ−Ａ１およびＨＬＡ−Ａ２拘束ペプチド、ならびに／または
ＨＬＡ−Ａ１およびＨＬＡ−Ｂ３５拘束ペプチド
ｉｉ．ならびにアジュバント
を含む、ワクチン組成物に関する。
【００２１】
ある局面は、３つ以上のサバイビンペプチドまたはサバイビンペプチド改変体であって、このペプチド改変体の配列が、その全長にわたって、配列番号２３の連続的アミノ酸配列と少なくとも８５％同一であり、
ｉ．少なくとも１つのペプチドまたはペプチド改変体がＨＬＡ−Ａ１結合ペプチドの群から選択され、
ｉｉ．少なくとも１つのペプチドまたはペプチド改変体がＨＬＡ−Ａ２結合ペプチドの群から選択され、
ｉｉｉ．少なくとも１つのペプチドまたはペプチド改変体がＨＬＡ−Ｂ３５結合ペプチドの群から選択される、
サバイビンペプチドまたはサバイビンペプチド改変体と、
アジュバントと、
を含む、ワクチン組成物に関する。
【００２２】
本発明の別の局面は、７つ以上のサバイビンペプチドまたはサバイビンペプチド改変体であって、このペプチド改変体の配列が、その全長にわたって、配列番号２３の連続的アミノ酸配列と少なくとも８５％同一であり、
ｉ．少なくとも１つのペプチドまたはペプチド改変体がＨＬＡ−Ａ１結合ペプチドの群から選択され、
ｉｉ．少なくとも１つのペプチドまたはペプチド改変体がＨＬＡ−Ａ２結合ペプチドの群から選択され、
ｉｉｉ．少なくとも１つのペプチドまたはペプチド改変体がＨＬＡ−Ａ３結合ペプチドの群から選択され、
ｉｖ．少なくとも１つのペプチドまたはペプチド改変体がＨＬＡ−Ａ２４結合ペプチドの群から選択され、
ｖ．少なくとも１つのペプチドまたはペプチド改変体がＨＬＡ−Ａ１１結合ペプチドの群から選択され、
ｖｉ．少なくとも１つのペプチドまたはペプチド改変体がＨＬＡ−Ｂ３５結合ペプチドの群から選択され、
ｖｉｉ．少なくとも１つのペプチドまたはペプチド改変体がＨＬＡ−Ｂ７結合ペプチドの群から選択される、
サバイビンペプチドまたはサバイビンペプチド改変体と
アジュバントと、を含む、ワクチン組成物に関する。
【００２３】
固形腫瘍の発達は、血管形成に依存する。従って、血管形成の阻害は、固体腫瘍の発達を防止し得る。腫瘍血管形成の間の内皮細胞におけるサバイビン、ｂｃｌ−２およびＭｃｌ−１の発現によって、本明細書で記載されるようなペプチドを用いるワクチン接種が、抗血管形成効果を有し得ることが示唆される。
【００２４】
本発明のある局面は、１つ以上のサバイビンペプチドまたはサバイビンペプチド改変体であって、このペプチド改変体の配列が、その全長にわたって、配列番号２３の連続的アミノ酸配列と少なくとも８５％同一である、サバイビンペプチドまたはサバイビンペプチド改変体と、被験体における腫瘍間質において抗原特異的ｔ細胞の浸潤を誘導し得るアジュバントとを含む、医薬としての使用のための、ワクチンに関する。
【００２５】
１つのさらなる局面では、本発明は、ワクチン組成物であって：
ｉ．核酸であって：
ａ）サバイビンポリペプチド（配列番号２３）、
ｂ）サバイビンペプチドまたは
ｃ）サバイビンペプチド改変体であって、このペプチド改変体の配列がその全体にわたって、配列番号２３の連続的アミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一である、サバイビンペプチド改変体、
をコードする核酸と、
ｉｉ．アジュバントと、
を含むワクチン組成物に関する。
【００２６】
本発明のある局面は、１つ以上のサバイビンペプチドまたはサバイビンペプチド改変体およびアジュバントを含むワクチン組成物であって、医薬の製造のための強力かつ特異的な細胞傷害性Ｔ細胞応答を被験体中で惹起し得るワクチン組成物の使用に関する。これは関連性がある。なぜなら極めて強力かつ特異的なＴ細胞応答は、良好な臨床的な応答の率が高いことと相関し得るからである。これに関して、極めて強力かつ特異的なＴ細胞応答とは、このワクチン組成物の投与の前後にＥＬＩＳＰＯＴアッセイによって測定した場合、１０４個のＰＢＭＣ細胞あたり５０個を超えるペプチド特異的なスポットという応答と等しい。
【００２７】
本発明のある局面は、
ｉ．ワクチン組成物であって、
ａ）１つ以上のサバイビンペプチドまたはサバイビンペプチド改変体であって、このペプチド改変体の配列が、その全長にわたって、配列番号２３の連続的アミノ酸配列と少なくとも８５％同一である、サバイビンペプチドまたはサバイビンペプチド改変体および
ｂ）アジュバント、
を含むワクチン組成物と、
ｉｉ）二次医薬と、
を含む、部品キットに関する。
【００２８】
本発明のある局面は、被験体においてサバイビンに対する強力かつ特異的なＴ細胞応答を刺激する方法を記載しており、この方法は：
ａ）本発明に従うワクチン組成物を提供する工程と、
ｂ）このワクチン組成物をこの被験体に対して投与する工程であって、このワクチン組成物が、２回以上投与され得る工程と、
ｃ）これによって強力かつ特異的なＴ細胞応答をこの被験体において刺激する工程であって、この強力かつ特異的なＴ細胞応答が、このワクチン組成物の投与の前後にＥＬＩＳＰＯＴアッセイによって測定された場合、１０４個のＰＢＭＣ細胞あたり５０個を超えるペプチド特異的なスポットである工程と、
ｄ）この被験体において、この強力かつ特異的なＴ細胞応答を得る工程と、
を包含する。
【００２９】
本発明のさらなる局面は、疾患を処置または予防する方法に関しており、この方法は；ａ）本発明に従うワクチン組成物を提供する工程と、
ｂ）このワクチン組成物をこの被験体に対して投与する工程であって、このワクチン組成物が、２回以上投与される工程と、
を包含する。
【００３０】
さらなる局面では、本発明は、疾患を処置または予防する方法に関しており、この方法は；
ａ）本発明に従うワクチン組成物を提供する工程と、
ｂ）このワクチン組成物をこの被験体に対して投与する工程であって、このワクチン組成物が、２回以上投与される工程と、
ｃ）これによって強力かつ特異的なＴ細胞応答をこの被験体において刺激する工程であって、この強力かつ特異的なＴ細胞応答が、このワクチン組成物の投与の前後にＥＬＩＳＰＯＴアッセイによって測定された場合、１０４個のＰＢＭＣ細胞あたり５０個を超えるペプチド特異的なスポットである工程と、
ｄ）この被験体において臨床的な応答を得る工程と、
を包含する。
【００３１】
特定の局面では、本発明は、被験体において腫瘍間質における抗原特異的Ｔ細胞の浸潤を誘導するか、または被験体において血管形成を阻害する方法に関しており、この方法は；
ａ）本発明に従うワクチンを提供する工程と、
ｂ）このワクチン組成物をこの被験体に対して投与する工程と、
ｃ）腫瘍間質における抗原特異的Ｔ細胞の浸潤または血管形成の阻害を得る工程と、を包含する。
【００３２】
併用治療の方法であって、以下：
ａ）本発明に従うワクチン組成物、および
ｂ）二次医薬、
の任意の順序での、同時、連続的または別々の投与を含む、方法。
本発明は例えば、以下の項目を提供する：
（項目１）
ワクチン組成物であって、
ｉ．１つ以上のサバイビンペプチドまたはサバイビンペプチド改変体であって、該ペプチド改変体の配列が、その全長にわたって、配列番号２３の連続したアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一である、サバイビンペプチドまたはサバイビンペプチド改変体と、
ｉｉ．鉱油およびサーファクタントを含む油中水型エマルジョンのために処方されたアジュバントであって、該アジュバントが該サーファクタントを１４．５容積％まで含む、アジュバントと、
を含む、医薬としての使用のための、ワクチン組成物。
（項目２）
前記アジュバントが前記サーファクタントを５〜１４容積％含む、項目１に記載のワクチン組成物。
（項目３）
前記サーファクタントの粘性が２００〜４００ｍＰａＳである、項目１〜２のいずれかに記載のワクチン組成物。
（項目４）
前記アジュバントが、サーファクタントオレイン酸マンニドを含む、項目１〜３のいずれかに記載のワクチン組成物。
（項目５）
前記ワクチンが、ヒト被験体への投与のためである、項目１〜４のいずれかに記載のワクチン組成物。
（項目６）
前記アジュバントがＭｏｎｔａｎｉｄｅ  ＩＳＡアジュバントである、項目１〜５のいずれかに記載のワクチン組成物。
（項目７）
前記アジュバントがＭｏｎｔａｎｉｄｅ  ＩＳＡ  ５１またはＭｏｎｔａｎｉｄｅ  ＩＳＡ  ７２０である、項目１〜６のいずれかに記載のワクチン組成物。
（項目８）
前記アジュバントがＭｏｎｔａｎｉｄｅ  ＩＳＡ５１である、項目１〜７のいずれかに記載のワクチン組成物。
（項目９）
前記１つ以上のサバイビンペプチドまたはサバイビングペプチド改変体が、少なくとも５アミノ酸残基および多くとも２０アミノ酸残基からなる、項目１〜８のいずれかに記載のワクチン組成物。
（項目１０）
前記ワクチン組成物がサバイビンペプチド改変体を含み、該改変体が、配列番号２３の連続的アミノ酸配列に比較して１つまたは２つのアミノ酸置換を含む７〜２０の連続的アミノ酸からなる、項目１〜９のいずれかに記載のワクチン組成物。
（項目１１）
前記ワクチン組成物がサバイビンペプチド改変体を含み、該改変体が、配列番号２３の連続的アミノ酸配列に比較して１つのアミノ酸置換を含む７〜１２の連続的アミノ酸からなる、項目１〜１０のいずれかに記載のワクチン組成物。
（項目１２）
前記１つ以上のサバイビンペプチドまたはサバイビングペプチド改変体が、９または１０個のアミノ酸残基からなる、項目１〜１１のいずれかに記載のワクチン組成物。
（項目１３）
前記サバイビンペプチド改変体の１つ以上のペプチド配列が、少なくとも１つのアミノ酸残基を置換、欠失または付加することによって天然のサバイビン配列から誘導され得、これによって所定のＨＬＡ分子についてのアンカー残基モチーフを有するペプチドが得られる、項目１〜１２のいずれかに記載のワクチン組成物。
（項目１４）
前記１つ以上のサバイビンペプチドまたはサバイビンペプチド改変体が、ＨＬＡクラスＩ分子の以下の群：ＨＬＡ−Ａ１、ＨＬＡ−Ａ２、ＨＬＡ−Ａ３、ＨＬＡ−Ａ１１、およびＨＬＡ−Ａ２４、ＨＬＡ−Ｂ７、ＨＬＡ−Ｂ８、ＨＬＡ−Ｂ１５、ＨＬＡ−Ｂ２７、ＨＬＡ−Ｂ３５、ＨＬＡ−Ｂ４４、ＨＬＡ−Ｂ５１およびＨＬＡ−Ｂ５８、ＨＬＡ−Ｃｗ１、ＨＬＡ−Ｃｗ２、ＨＬＡ−Ｃｗ３、ＨＬＡ−Ｃｗ４、ＨＬＡ−Ｃｗ５、ＨＬＡ−Ｃｗ６、ＨＬＡ−Ｃｗ７およびＨＬＡ−Ｃｗ１６のうちの少なくとも１つに拘束される、項目１〜１２のいずれかに記載のワクチン組成物。
（項目１５）
前記１つ以上のサバイビンペプチドまたはサバイビンペプチド改変体が、ＨＬＡクラスＩ分子の以下の群：ＨＬＡ−Ａ１、ＨＬＡ−Ａ２、ＨＬＡ−Ｂ７、およびＨＬＡ−Ｂ３５のうちの少なくとも１つに拘束される、項目１〜１３のいずれかに記載のワクチン組成物。
（項目１６）
前記１つ以上のサバイビンペプチドまたはサバイビンペプチド改変体がＨＬＡ−Ａ１に拘束される、項目１４に記載のワクチン組成物。
（項目１７）
前記１つ以上のサバイビンペプチドまたはサバイビンペプチド改変体がＨＬＡ−Ａ２に拘束される、項目１４に記載のワクチン組成物。
（項目１８）
前記１つ以上のサバイビンペプチドまたはサバイビンペプチド改変体がＨＬＡ−Ｂ７に拘束される、項目１４に記載のワクチン組成物。
（項目１９）
前記１つ以上のサバイビンペプチドまたはサバイビンペプチド改変体がＨＬＡ−Ｂ３５に拘束される、項目１４に記載のワクチン組成物。
（項目２０）
多くとも５０アミノ酸残基の前記１つ以上のサバイビンペプチド改変体が、ＦＴＥＬＴＬＧＥＦ（配列番号１６）、ＬＭＬＧＥＦＬＫＬ（配列番号５）、ＥＰＤＬＡＱＣＦＹ（配列番号９）、ＡＰＰＡＷＱＰＦＬ（配列番号１３）およびＲＰＰＡＷＱＰＦＬ（配列番号１４）からなる群より選択されるペプチドを含む、項目１〜１９のいずれかに記載のワクチン組成物。
（項目２１）
前記１つ以上のサバイビンペプチド改変体が、ＦＴＥＬＴＬＧＥＦ（配列番号１６）、ＬＭＬＧＥＦＬＫＬ（配列番号５）、ＥＰＤＬＡＱＣＦＹ（配列番号９）、ＡＰＰＡＷＱＰＦＬ（配列番号１３）およびＲＰＰＡＷＱＰＦＬ（配列番号１４）からなる群より選択される、項目１〜２０のいずれかに記載のワクチン組成物。
（項目２２）
ＡＰＰＡＷＱＰＦＬ（配列番号１３）およびＲＰＰＡＷＱＰＦＬ（配列番号１４）の群より選択されるペプチドを含む、ＨＬＡ−Ｂ７に結合し得る多くとも５０アミノ酸残基のサバイビンペプチド改変体。
（項目２３）
前記ペプチドがＡＰＰＡＷＱＰＦＬ（配列番号１３）である、項目２２に記載のサバイビンペプチド改変体。
（項目２４）
前記ペプチドがＲＰＰＡＷＱＰＦＬ（配列番号１４）である、項目２２に記載のサバイビンペプチド改変体。
（項目２５）
１つ以上のサバイビンペプチドまたはペプチド改変体を含むワクチン組成物であって、該ペプチド改変体の配列がその全長にわたって、配列番号２３の連続的アミノ酸配列と少なくとも８５％同一であり、該組成物が：
ｉ．ＨＬＡ−Ｂ７結合ペプチド、ならびに／または
ＨＬＡ−Ａ１およびＨＬＡ−Ａ２拘束ペプチド、ならびに／または
ＨＬＡ−Ａ１およびＨＬＡ−Ｂ３５拘束ペプチド
ｉｉ．ならびにアジュバント
を含む、ワクチン組成物。
（項目２６）
項目２５に記載のワクチン組成物であって、前記サバイビン改変体が、多くとも５０アミノ酸からなり；
ｉ．ペプチドＡＰＰＡＷＱＰＦＬ（配列番号１３）および／または
ペプチドＲＰＰＡＷＱＰＦＬ（配列番号１４）および／または
ペプチドＦＴＥＬＴＬＧＥＦ（配列番号１６）、およびＬＭＬＧＥＦＬＫＬ（配列番号５）、および／または、
ペプチドＦＴＥＬＴＬＧＥＦ（配列番号１６）、およびＥＰＤＬＡＱＣＦＹ（配列番号９）、および／または
ペプチドＬＭＬＧＥＦＬＫＬ（配列番号５）、およびＥＰＤＬＡＱＣＦＹ（配列番号９）と
ｉｉ．アジュバントと、
を含む、ワクチン組成物。
（項目２７）
ワクチン組成物であって、
ａ）３つ以上のサバイビンペプチドまたはサバイビンペプチド改変体であって、該ペプチド改変体の配列が、その全長にわたって、配列番号２３の連続的アミノ酸配列と少なくとも８５％同一であり、
ｉ．少なくとも１つのペプチドまたはペプチド改変体がＨＬＡ−Ａ１結合ペプチドの群から選択され、
ｉｉ．少なくとも１つのペプチドまたはペプチド改変体がＨＬＡ−Ａ２結合ペプチドの群から選択され、
ｉｉｉ．少なくとも１つのペプチドまたはペプチド改変体がＨＬＡ−Ｂ３５結合ペプチドの群から選択される、
サバイビンペプチドまたはサバイビンペプチド改変体と、
ｂ）アジュバントと、
を含む、ワクチン組成物。
（項目２８）
ワクチン組成物であって、
ｉ．１つ以上のサバイビンペプチドまたはサバイビンペプチド改変体であって、該ペプチド改変体の配列が、その全長にわたって、配列番号２３の連続的アミノ酸配列と少なくとも８５％同一である、サバイビンペプチドまたはサバイビンペプチド改変体と、
ｉｉ．アジュバントと、
を含み、被験体における腫瘍間質において抗原特異的Ｔ細胞の浸潤を誘導し得る、医薬としての使用のための、ワクチン組成物。
（項目２９）
血管形成を阻害し得る、項目２８に記載のワクチン組成物。
（項目３０）
前記ＨＬＡ−Ａ１結合ペプチドがＦＴＥＬＴＬＧＥＦ（配列番号１６）である、項目２９に記載のワクチン組成物。
（項目３１）
前記ＨＬＡ−Ａ２結合ペプチドがＬＭＬＧＥＦＬＫＬ（配列番号５）である、項目２９に記載のワクチン組成物。
（項目３２）
前記ＨＬＡ−Ｂ３５結合ペプチドがＥＰＤＬＡＱＣＦＹ（配列番号９）である、項目２９に記載のワクチン組成物。
（項目３３）
ペプチドＦＴＥＬＴＬＧＥＦ（配列番号１６）、ＬＭＬＧＥＦＬＫＬ（配列番号５）およびＥＰＤＬＡＱＣＦＹ（配列番号９）を含む、項目２９に記載のワクチン組成物。
（項目３４）
ワクチン組成物であって、
ｃ）７つ以上のサバイビンペプチドまたはサバイビンペプチド改変体であって、該ペプチド改変体の配列が、その全長にわたって、配列番号２３の連続的アミノ酸配列と少なくとも８５％同一であり、
ｘｖ．少なくとも１つのペプチドまたはペプチド改変体がＨＬＡ−Ａ１結合ペプチドの群から選択され、
ｘｖｉ．少なくとも１つのペプチドまたはペプチド改変体がＨＬＡ−Ａ２結合ペプチドの群から選択され、
ｘｖｉｉ．少なくとも１つのペプチドまたはペプチド改変体がＨＬＡ−Ａ３結合ペプチドの群から選択され、
ｘｖｉｉｉ．少なくとも１つのペプチドまたはペプチド改変体がＨＬＡ−Ａ２４結合ペプチドの群から選択され、
ｘｉｘ．少なくとも１つのペプチドまたはペプチド改変体がＨＬＡ−Ａ１１結合ペプチドの群から選択され、
ｘｘ．少なくとも１つのペプチドまたはペプチド改変体がＨＬＡ−Ｂ３５結合ペプチドの群から選択され、
ｘｘｉ．少なくとも１つのペプチドまたはペプチド改変体がＨＬＡ−Ｂ７結合ペプチドの群から選択される、
サバイビンペプチドまたはサバイビンペプチド改変体と
ｄ）アジュバントと、
を含む、ワクチン組成物。
（項目３５）
前記ＨＬＡ−Ａ１結合ペプチドが、ＦＴＥＬＴＬＧＥＦ（配列番号１６）であり、前記ＨＬＡ−Ａ２結合ペプチドが、ＬＭＬＧＥＦＬＫＬ（配列番号５）であり、前記ＨＬＡ−Ａ３結合ペプチドが、ＲＩＳＴＦＫＮＷＰＫ（配列番号２０）であり、前記ＨＬＡ−Ａ２４結合ペプチドがＳＴＦＫＮＷＰＦＬ（配列番号４１）であり、前記ＨＬＡ−Ａ１１結合ペプチドがＤＬＡＱＣＦＦＣＦＫ（配列番号１９）であり、前記ＨＬＡ−Ｂ３５結合ペプチドがＥＰＤＬＡＱＣＦＹ（配列番号９）であり、そして前記ＨＬＡ−Ｂ７結合ペプチドがＬＰＰＡＷＱＰＦＬ（配列番号１０）である、項目３４に記載のワクチン組成物。
（項目３６）
多くとも７０アミノ酸からなる、項目３４〜３５のいずれかに記載のワクチン組成物。
（項目３７）
項目３４に記載のワクチン組成物であって、
ｉ．ＨＬＡ−Ｂ４４結合ペプチドの群から選択される少なくとも１つのペプチドもしくはペプチド改変体、および／または
ｉｉ．ＨＬＡ−Ｂ２７結合ペプチドの群から選択される少なくとも１つのペプチドもしくはペプチド改変体、および／または
ｉｉｉ．ＨＬＡ−Ｂ５１結合ペプチドの群から選択される少なくとも１つのペプチドもしくはペプチド改変体、
をさらに含む、ワクチン組成物。
（項目３８）
前記ＨＬＡ−Ｂ４４結合ペプチドが、ＫＥＴＮＮＫＫＫＥＹ（配列番号４２）であり、前記ＨＬＡ−Ｂ２７結合ペプチドがＥＲＭＡＥＡＧＦＩ（配列番号４３）であり、そして前記ＨＬＡ−Ｂ５１結合ペプチドがＲＡＩＥＱＬＡＡＭ（配列番号４４）である、項目３７に記載のワクチン組成物。
（項目３９）
多くとも１００アミノ酸からなる、項目３７または３８に記載のワクチン組成物。
（項目４０）
前記ＨＬＡ−Ａ１１結合ペプチドが、ＤＬＡＱＣＦＦＣＦＫ（配列番号１９）、ＤＶＡＱＣＦＦＣＦＫ（配列番号４５）、ＤＦＡＱＣＦＦＣＦＫ（配列番号４６）またはＤＩＡＱＣＦＦＣＦＫ（配列番号４７）からなる群より選択される、項目３４、３７または３８に記載のワクチン組成物。
（項目４１）
ＨＬＡクラス１分子に結合し得る、ＭＬ−ＩＡＰ、ＢＣＬ−２、ＢＣＬ−Ｘ、ＭＣＬ−１またはＴＲＡＧ−３ペプチドまたはそのペプチド改変体の群から選択される１つ以上のペプチドまたはペプチド改変体をさらに含む、項目１〜２２および項目２５〜４０に記載のワクチン組成物。
（項目４２）
ワクチン組成物であって、
ｉ．核酸であって、
ａ）サバイビンポリペプチド（配列番号２３）、
ｂ）配列番号２３の少なくとも５つ連続するアミノ酸からなるサバイビンペプチド、または
ｃ）少なくとも７アミノ酸からなるサバイビンペプチド改変体であって、該ペプチド改変体の配列が、その全長にわたって、配列番号２３の連続的なアミノ酸配列に少なくとも８５％同一であるサバイビンペプチド改変体、をコードする、核酸と、
ｉｉ．アジュバントと、
を含む、ワクチン組成物。
（項目４３）
二次活性成分を含む、項目１〜２１および項目２５〜４２に記載のワクチン組成物。
（項目４４）
前記二次活性成分が抗ガン医薬である、項目４３に記載のワクチン組成物。
（項目４５）
前記二次活性成分が化学療法剤である、項目４３に記載のワクチン組成物。
（項目４６）
前記二次活性成分が血管形成インヒビターである、項目４３に記載のワクチン組成物。
（項目４７）
前記ワクチン組成物が、強力かつ特異的な細胞傷害性Ｔ細胞応答を被験体中で惹起し得、該ワクチン組成物の投与後にＥＬＩＳＰＯＴアッセイによって測定した強力かつ特異的なＴ細胞応答が、１０４個のＰＢＭＣ細胞あたり少なくとも５０個のペプチド特異的なスポットである、項目１〜４６のいずれかに記載のワクチン組成物。
（項目４８）
前記ワクチン組成物が、被験体における腫瘍間質において抗原特異的なＴ細胞の浸潤を誘導し得る、項目１〜４７のいずれかに記載のワクチン組成物。
（項目４９）
前記ワクチン組成物が、被験体において血管形成を阻害し得る、項目１〜４８のいずれかに記載のワクチン組成物。
（項目５０）
前記ワクチン組成物が、被験体において臨床反応を惹起し得、該臨床反応は、安定な疾患、部分的な応答または完全な寛解によって特徴付けられる、項目１〜４９のいずれかに記載のワクチン組成物。
（項目５１）
前記ワクチン組成物が、被験体において臨床反応を惹起し得、該臨床反応は、標的病変の最長の直径の合計の減少によって特徴付けられる、項目１〜５０のいずれかに記載のワクチン組成物。
（項目５２）
前記ワクチン組成物が、被験体における臨床反応を惹起し得、該臨床反応は完全な寛解である、項目１〜５１のいずれかに記載のワクチン組成物。
（項目５３）
ガンの処置のための医薬の製造のための、１つ以上のサバイビンペプチドまたはサバイビンペプチド改変体およびアジュバントを含むワクチン組成物の使用であって、該組成物が、強力かつ特異的な細胞傷害性Ｔ細胞応答を被験体中で惹起し得、該ワクチン組成物の投与後にＥＬＩＳＰＯＴアッセイによって測定した該強力かつ特異的なＴ細胞応答が、１０４個のＰＢＭＣ細胞あたり５０個を超えるペプチド特異的なスポットである、使用。
（項目５４）
ガンの処置のための医薬の製造のための、項目１〜２１および項目２５〜５２のいずれかによって特徴付けられる、ワクチン組成物の使用。
（項目５５）
前記ガンが、悪性黒色腫、膵臓癌、子宮頸癌または結腸癌である、項目５４に記載の使用。
（項目５６）
前記医薬が血管形成の阻害のためである、項目５３〜５５に記載のワクチン組成物の使用。
（項目５７）
部品キットであって、
ａ）ワクチン組成物であって、
ｉ）１つ以上のサバイビンペプチドまたはサバイビンペプチド改変体であって、該ペプチド改変体の配列が、その全長にわたって、配列番号２３の連続的アミノ酸配列と少なくとも８５％同一である、サバイビンペプチドまたはサバイビンペプチド改変体および
ｉｉ）アジュバント、
を含むワクチン組成物と、
ｂ）二次医薬と、
を含む、部品キット。
（項目５８）
前記二次医薬が、化学療法剤を含む、項目５７に記載の部品キット。
（項目５９）
前記二次医薬が、血管形成インヒビターを含む、項目５７に記載の部品キット。
（項目６０）
前記ワクチンおよび医薬が、同時、別々または連続的な投与のためである、項目５７〜５９に記載の部品キット。
（項目６１）
被験体においてサバイビンに対する強力かつ特異的なＴ細胞応答を刺激する方法であって、
ａ）項目１〜２１および項目２５〜５２に記載のワクチン組成物を提供する工程と、
ｂ）該ワクチン組成物を該被験体に対して投与する工程であって、該ワクチン組成物が、２回以上投与され得る工程と、
ｃ）これによって強力かつ特異的なＴ細胞応答を刺激する工程であって、該強力かつ特異的なＴ細胞応答が、該ワクチン組成物の投与後にＥＬＩＳＰＯＴアッセイによって測定された場合、１０４個のＰＢＭＣ細胞あたり５０個を超えるペプチド特異的なスポットである工程と、
ｄ）該被験体において、該強力かつ特異的なＴ細胞応答を得る工程と、
を包含する、方法。
（項目６２）
疾患を処置または予防する方法であって、
ａ）項目１〜２１および項目２５〜５２に記載のワクチン組成物を提供する工程と、
ｂ）該ワクチン組成物を該被験体に対して投与する工程であって、該ワクチン組成物が、２回以上投与され得る工程と、
を包含する、方法。
（項目６３）
疾患を処置または予防する方法であって；
ａ）項目１〜２１および項目２５〜５２に記載のワクチン組成物を提供する工程と、
ｂ）該ワクチン組成物を該被験体に対して投与する工程であって、該ワクチン組成物が、２回以上投与され得る工程と、
ｃ）これによって強力かつ特異的なＴ細胞応答を該被験体において刺激する工程であって、該強力かつ特異的なＴ細胞応答が、該ワクチン組成物の投与後にＥＬＩＳＰＯＴアッセイによって測定された場合、１０４個のＰＢＭＣ細胞あたり５０個を超えるペプチド特異的なスポットである工程と、
ｄ）該被験体において臨床反応を得る工程と、
を包含する、方法。
（項目６４）
前記強力かつ特異的なＴ細胞応答が、前記ワクチン組成物の投与後にＥＬＩＳＰＯＴアッセイによって測定された場合、１０４個のＰＢＭＣ細胞あたり少なくとも２５０個のペプチド特異的なスポットである、項目６１〜６３のいずれかに記載の方法。
（項目６５）
前記疾患がガンである、項目６１〜６４のいずれかに記載の方法。
（項目６６）
前記ガンが、悪性黒色腫、膵臓癌、子宮頸癌および結腸癌の群より選択される、項目６５に記載の方法。
（項目６７）
前記ワクチン組成物の投与が、安定な疾患、部分的応答または完全寛解を生じる、項目６５〜６６のいずれかに記載の方法。
（項目６８）
前記ワクチン組成物の投与が、標的病変の最長の直径の合計の減少を生じる、項目６７に記載の方法。
（項目６９）
被験体において腫瘍間質における抗原特異的Ｔ細胞の浸潤を誘導する方法であって、
ａ）項目１〜２１および項目２５〜５２に記載のワクチン組成物を提供する工程と、
ｂ）該ワクチン組成物を該被験体に対して投与する工程と、
を包含する、方法。
（項目７０）
血管形成を阻害する方法であって、
ａ）項目１〜２１および項目２５〜５２に記載のワクチン組成物を提供する工程と、
ｂ）該ワクチン組成物を被験体に対して投与する工程と、
を包含する、方法。
（項目７１）
併用治療の方法であって、以下：
ａ）項目１〜２１および項目２５〜５２に記載のワクチン組成物、
ｂ）二次医薬、
の任意の順序での、同時、連続的または別々の投与を含む、方法。
（項目７２）
前記二次医薬が抗癌剤である、項目７１に記載の併用治療の方法。
（項目７３）
前記二次医薬が化学療法剤である、項目７１に記載の併用療法の方法。
（項目７４）
前記二次医薬が血管形成インヒビターである、項目７１に記載の併用療法の方法。
（項目７５）
ワクチン組成物を含むガンを処置するための医薬であって、該ワクチン組成物が、１つ以上のサバイビンペプチドまたはサバイビンペプチド改変体およびアジュバントを活性成分として含む、医薬。
【００３３】
定義：
ＡＡ：「アミノ酸（ａｍｉｎｏ  ａｃｉｄ）」を参照のこと。
【００３４】
アジュバント：ワクチンアジュバントとは、抗原に対して特異的な免疫応答を増大する成分である。
【００３５】
アミノ酸：炭素原子を含む中央部分、または少なくとも１つの側鎖もしくは官能基を含む炭素原子の鎖によって隔てられる、アミノ末端部分（ＮＨ２）およびカルボキシ末端部分（ＣＯＯＨ）を含むもの。ＮＨ２とは、アミノ酸またはペプチドのアミノ末端に存在するアミノ基をいい、そしてＣＯＯＨとは、アミノ酸またはペプチドのカルボキシ末端に存在するカルボキシ基をいう。一般的な用語アミノ酸とは、天然および天然でないアミノ酸の両方を含む。Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２４３：３５５２〜５９（１９６９）に列挙され、そして米国特許法施行規則第１．８２２（ｂ）（２）節に採用される標準的な命名法の天然のアミノ酸は、本明細書において下の表１に列挙されるアミノ酸の群に属する。天然ではないアミノ酸は、表１に列挙されないアミノ酸である。天然でないアミノ酸の例は、例えば、参照によってその全てが本明細書に援用される、米国特許法施行規則第１．８２２（ｂ）（４）節に列挙されるアミノ酸である。本明細書に記載されるアミノ酸残基は、「Ｄ」異性体型であってもまたは「Ｌ」異性体型であってもよい。
【００３６】
【表１】
0005631357.tif 000002
アミノ酸残基：「アミノ酸残基（ａｍｉｎｏ  ａｃｉｄ  ｒｅｓｉｄｕｅ）」という用語は、アミノ酸、標準的アミノ酸、標準でないアミノ酸またはニセアミノ酸のいずれかであって、少なくとも１つの他の種、例えば、２つ、例えば３つ、例えば、４つ以上の他の種と反応されているアミノ酸を包含することを意味している。詳細にはアミノ酸残基は、遊離のカルボキシル基の代わりにアシル結合、ならびに／または遊離のアミン基の代わりにアミン結合および／またはアミド結合を含んでもよい。さらに、反応されたアミノ酸残基は、アミド結合の代わりにエステルまたはチオエステル結合を含んでもよい。
【００３７】
抗体：免疫グロブリン分子および免疫グロブリン分子の活性部分。抗体とは、例えば、インタクトな免疫グロブリン分子または免疫学的活性を保持するそのフラグメントである。
【００３８】
抗原：抗体によって認識される分子。通常はペプチド、ポリペプチドまたは多量体ポリペプチド。抗原は好ましくは、免疫応答を惹起し得る。
【００３９】
Ａ．Ｐ．Ｉ．比重：ＡＰＩ（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｅｔｒｏｌｅｕｍ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ）によって決定された値に従って石油の相対的密度を表すための石油産業によって用いられる用語。ＡＰＩ比重は、ＡＰＩの度数で段階的な尺度を有する比重計によって測定される。
【００４０】
ＣＴＬ：細胞傷害性Ｔリンパ球。Ｔ細胞レセプターとともにＣＤ８を発現して、従ってクラスＩ分子によって提示される抗原に応答できるＴ細胞の小集団。
【００４１】
エマルジョン：第二の液体中の１つの液体の小球の懸濁物であって、第一が混合されない、懸濁物。
【００４２】
乳化剤：エマルジョンの形成を促進する界面活性剤。
【００４３】
ＨＬＡ：ＭＨＣとも命名されるヒト白血球抗原。３つの異なるＭＨＣクラスＩ分子であるＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−ＢおよびＨＬＡ−Ｃが、ヒトによって合成される。ヒトＭＨＣクラスＩＩ分子は、ＨＬＡ−Ｄと命名される。
【００４４】
免疫グロブリン：血清抗体であって、これにはＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＥおよびＩｇＤが挙げられる。
【００４５】
単離された（ｉｓｏｌａｔｅｄ）：とは、本明細書に開示される種々の分泌促進物質、ポリペプチドおよびヌクレオチドのいずれかであって、その天然の環境の成分から同定され、そして分離され、そして／または回復されているものを記載するために用いられる。その天然の環境の混入成分とは、ポリペプチドのための診断または治療用途と代表的には干渉する物質であって、そしてこれには酵素、ホルモンおよび他のタンパク質または非タンパク質性の溶質を含んでもよい。好ましい実施形態では、ポリペプチドは精製される。
【００４６】
リガンド：１つ以上の同族のレセプターに特異的に結合し得る、分子、例えば、ペプチド。抗原とは、例えば、その同族の抗体に対するリガンドである。
【００４７】
ＭＨＣ：ＨＬＡとも命名される主要組織適合複合体。ＭＨＣの２つの主なサブクラス、クラスＩおよびクラスＩＩが存在する。
【００４８】
鉱油：植物および動物由来の油とは反対の、鉱物起源の油、例えば石油。組成の異なる炭化水素混合物。
【００４９】
モンタニド（Ｍｏｎｔａｎｉｄｅ）ＩＳＡ（Ｍｏｎｔａｎｉｄｅ  Ｉｎｃｏｍｐｌｅｔｅ  Ｓｅｐｐｉｃ  Ａｄｊｕｖａｎｔ）：油中水型エマルジョンのために処方された油状アジュバント。モンタニドＩＳＡアジュバントは、油／サーファクタントに基づくアジュバントの群であって、代謝不能なおよび／または代謝可能な油が、サーファクタント（Ｓｅｐｐｉｃ，Ｂｅｌｇｉｕｍから入手可能）と組み合わされている。
【００５０】
ＰＢＭＣ：末梢血単核球。
【００５１】
ＰＢＬ：末梢血白血球。
【００５２】
ペプチド：配列を規定している、複数の共有結合されたアミノ酸残基であって、アミド結合によって連結されている。この用語は、オリゴペプチドおよびポリペプチドと同様に用いられる。天然のアミノ酸および／または天然でないアミノ酸は、ペプチド結合によって連結されても、または非ペプチド結合によって連結されてもよい。このペプチドという用語はまた、当該分野で公知のとおり、化学的または酵素触媒された反応によって誘導される翻訳後改変も包含する。
【００５３】
表面張力：表面張力は、表面積を増大するのに必要なエネルギーである。液体分子の間の凝集力は、表面張力を担っており、そして液体表面の分子は、お互いに強力に結合する。サーファクタント：それが溶解される液体の表面張力を減少させ得る界面活性剤。サーファクタントとは、親水性である極性基および疎水性である非極性基を含む化合物であって、しばしば脂肪鎖から構成される。
【００５４】
ＴＡＡ：腫瘍関連抗原。
【図面の簡単な説明】
【００５５】
【図１】ＩＦＮ−γ  ＥＬＩＳＰＯＴによって評価される、サバイビンペプチドＳｕｒ１Ｍ２に対する膵臓癌患者由来のＰＢＬの免疫の動態解析。患者ＯＴＳＣ由来のＰＢＭＣは、初回のｓｕｒ１Ｍ２／Ｍｏｎｔａｎｉｄｅワクチンの前、そしてその１、３および６ヵ月後に得た。Ｔリンパ球を、ペプチドで１回刺激して、その後にペプチドの有無のいずれかのもとで三連で、１ウェルあたり１０５個の細胞にプレートした。ペプチド特異的スポットの平均数（添加したペプチドなしのスポットの差引き後）を、ＩｍｍｕｎｏＳｐｏｔ（登録商標）Ｓｅｒｉｅｓ  ２．０  Ａｎａｌｙｚｅｒ（ＣＴＬ  Ａｎａｌｙｚｅｒｓ，ＬＬＣ，Ｃｌｅｖｅｌａｎｄ，ＵＳ）を用いて各々の患者について算出した。
【図２】ＩＦＮ−γ  ＥＬＩＳＰＯＴによって評価される、サバイビンペプチドＳｕｒ１Ｍ２に対する黒色腫患者由来のＰＢＬの免疫の動態解析。患者ＪＵＳＣ由来のＰＢＭＣは、初回のｓｕｒ１Ｍ２／Ｍｏｎｔａｎｉｄｅワクチンの前、そしてその１、３および６ヵ月後に得た。Ｔリンパ球を、ペプチドで１回刺激して、その後にペプチドの有無のいずれかのもとで三連で、１ウェルあたり１０５個の細胞にプレートした。ペプチド特異的スポットの平均数（添加したペプチドなしのスポットの差引き後）を、ＩｍｍｕｎｏＳｐｏｔ（登録商標）Ｓｅｒｉｅｓ  ２．０  Ａｎａｌｙｚｅｒ（ＣＴＬ  Ａｎａｌｙｚｅｒｓ，ＬＬＣ，Ｃｌｅｖｅｌａｎｄ，ＵＳ）を用いて各々の患者について算出した。
【図３】ＩＦＮ−γ  ＥＬＩＳＰＯＴによって評価される、サバイビンペプチドＳｕｒ１Ｍ２に対する黒色腫患者由来のＰＢＬにおける免疫の動態解析。患者ＳＩＳＴ由来のＰＢＭＣは、初回のｓｕｒ１Ｍ２／Ｍｏｎｔａｎｉｄｅワクチンの前、そしてその１、３および６ヵ月後に得た。Ｔリンパ球を、ペプチドで１回刺激して、その後にペプチドの有無のいずれかのもとで三連で、１ウェルあたり１０５個の細胞でプレートした。ペプチド特異的スポットの平均数（添加したペプチドなしのスポットの差引き後）を、ＩｍｍｕｎｏＳｐｏｔ（登録商標）Ｓｅｒｉｅｓ  ２．０  Ａｎａｌｙｚｅｒ（ＣＴＬ  Ａｎａｌｙｚｅｒｓ，ＬＬＣ，Ｃｌｅｖｅｌａｎｄ，ＵＳ）を用いて各々の患者について算出した。
【発明を実施するための形態】
【００５６】
（発明の詳細な説明）
本発明は、本明細書において下に記載されるようなサバイビンペプチドおよびサバイビンペプチド改変体を含むワクチン組成物に関する。
ワクチン組成物
本発明に従うワクチン組成物は、公知の方法に従って、例えば、好ましくはヒトへの投与のために受容可能な、１つ以上の薬学的に受容可能な賦形剤またはキャリアと、活性因子との混合などによって、処方され得る。このような賦形剤、キャリアおよび処方の方法の例は、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｍａａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ）に見出され得る。有効な投与のために適切な薬学的に受容可能な組成物を処方するには、このような組成物は、本発明の方法に従って、有効な量のサバイビンポリペプチド、サバイビンペプチドまたは本明細書に記載のようなサバイビンペプチド改変体を含む。
【００５７】
本発明に従うワクチン組成物は、個々の治療的に有効な量で投与され得る。有効な量は、個々の条件、重量、性別および年齢のような種々の要因に従って変化し得る。他の要因としては、投与の形態が挙げられる。
【００５８】
以下のワクチン組成物には、このような組成物、特に標的病変に臨床反応を誘導し得るワクチン組成物の投与の際の強力かつ特異的な細胞傷害性Ｔ細胞応答のような、患者において免疫応答を刺激することを含む治療用途のために有用な組成物を包含することを意味する。本発明のワクチン組成物は、いかなる全身性の局所毒性反応もいかなる他の副作用も誘発しないということがさらに考えられる。
【００５９】
ワクチンまたは免疫学的組成物を得るためには、相対的な小さいサバイビンペプチドおよび本明細書に記載のサバイビンペプチド改変体分子と、アジュバント、免疫刺激成分および／またはキャリアのような種々の物質とを組み合わせる必要があるかもしれない。特異的な免疫応答を増強するために、ワクチン組成物にアジュバントが含まれる。従って、抗原と組み合わせた場合に、強力かつ特異的な細胞傷害性Ｔ細胞応答を、そして最も重要なことには標的病変で臨床反応を誘導し得るワクチン組成物を生じるアジュバントを特定することが特に重要である。
【００６０】
アジュバント
多数のアジュバントが、実験室の動物、例えば、マウス、ラットおよびウサギにおける抗体の生成について記載されて、かつ用いられている。このような設定では、主な目的は強力な抗体応答を得ることであるので、副作用の許容度は、かなり高い。
【００６１】
製剤における使用のため、そして特にヒトでの使用のための承認のためには、アジュバントを含むワクチン組成物の成分は十分特徴付けられていることが必要である。この組成物が有する、肉芽腫、膿瘍または熱のような有害反応のリスクは最小限であることがさらに必要である。
【００６２】
好ましい実施形態では、ワクチン組成物は、ヒト被験体への投与に適切であり、したがって、好ましいアジュバントは、ヒト被験体への投与のために適切である。
【００６３】
アジュバントの選択は、所望の免疫応答のタイプ、Ｂ細胞および／またはＴ細胞の活性化を刺激する能力によってさらに選択され得、そしてワクチン組成物は、関連のリンパ組織への分布および提示を最適化するように処方され得る。
【００６４】
近年では、抗原ペプチドを有する適切な抗原提示細胞のロードを含む方法が、ガン疾患に対する免疫応答を増大する高度に有効な方法として提唱されている。この方法は、患者由来のＡＰＣ（ＰＢＬ）またはＡＰＣ前駆体細胞を単離する工程と、これらに抗原性ペプチドをロードする工程とを包含し、あるいは、樹状細胞が、用いられてインビトロでＡＰＣに分化されてもよく、そして患者への注入の前に抗原性ペプチドでロードされてもよい。この方法は極めて複雑であって時間を浪費する。細胞培養の使用によって、極めて融通の利かないワクチン組成物になり、これには特別な調製および貯蔵の施設を要する。本発明は、容易に調製され、そして／または貯蔵されるワクチン組成物を特定することを目的としている。
【００６５】
治療用ワクチンで有用なアジュバントは、無機塩類、例えば、水酸化アルミニウムおよびリン酸アルミニウムまたはリン酸カルシウムゲル、オイルエマルジョンおよびサーファクタントに基づく処方物、例えば、ＭＦ５９（マイクロ流体化界面活性剤安定化水中油型エマルジョン）、Ｑ２１（精製サポニン）、ＡＳ０２（ＳＢＡＳ２、水中油型エマルジョン＋モノホスホリル脂質Ａ（ＭＰＬ）＋ＱＳ２１）、モンタニド（Ｍｏｎｔａｎｉｄｅ）ＩＳＡ５１およびＩＳＡ−７２０（安定化油中水型エマルジョン）、アジュバント６５（ピーナツ油、マンニド・モノオレエートおよびモノステアリン酸アルミニウムを含む）、ＲＩＢＩ  ＩｍｍｕｎｏＣｈｅｍ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｉｎｃ．，Ｈａｍｉｌｔｏｎ，Ｕｔａｈ）、粒子性アジュバント、例えば、ビロゾーム（インフルエンザ赤血球凝集素を組み込んでいる単層リポソームビヒクル）、ＡＳ０４（ＭＰＬとのＡｌ塩）、ＩＳＣＯＭＳ（サポニンおよび脂質（例えば、コレステロール）の構造的な複合体、ポリアクチド・コ−グリコリド（ＰＬＧ）、微生物誘導物（天然および合成）、例えば、モノホスホリル脂質Ａ（ＭＰＬ）、Ｄｅｔｏｘ（ＭＰＬ＋Ｍ．Ｐｈｌｅｉ細胞壁骨格）、ＡＧＰ（ＲＣ−５２９（合成アシル化単糖類））、ＤＣ＿ｃｈｏｌ（リポソームへと自己組織化し得る類脂質性免疫刺激因子）、ＯＭ−１７４（脂質Ａ誘導体）、ＣｐＧモチーフ（免疫刺激因子ＣｐＧモチーフを含有する合成オリゴヌクレオチド）、改変細菌毒素、ＬＴおよびＣＴ（非毒性アジュバント効果を有する）、内因性ヒト免疫刺激因子、例えば、ｈＧＭ−ＣＳＦまたはｈＩＬ−１２またはイムダプチン（Ｉｍｍｕｄａｐｔｉｎ）（Ｃ３ｄタンデムアレイ）、金粒子のような不活性ビヒクルであってもよい。
【００６６】
ＱＳ−２１およびモンタニドＩＳＡ−５１アジュバントは、滅菌の単回使用バイアル中で提供され得る。
【００６７】
１実施形態では、ワクチン組成物は、アジュバントおよびサバイビンペプチドまたは本明細書において下に記載されるようなサバイビンペプチド改変体を含む。好ましい実施形態では、このアジュバントは、Ｍｏｎｔａｎｉｄｅ  Ｉｎｃｏｍｐｌｅｔｅ  Ｓｅｐｐｉｃ  Ａｄｊｕｖａｎｔ（ＩＳＡ）（Ｓｅｐｐｉｃ，Ｂｅｌｇｉｕｍ）であってもよく、これはＭｏｎｔａｎｉｄｅ  ＩＳＡ−５１、Ｍｏｎｔａｎｉｄｅ  ＩＳＡ  ５０、Ｍｏｎｔａｎｉｄｅ  ＩＳＡ７０、Ｍｏｎｔａｎｉｄｅ  ＩＳＡ  ２０６、Ｍｏｎｔａｎｉｄｅ  ＩＳＡ７０８、Ｍｏｎｔａｎｉｄｅ  ＩＳＡ−７２０、Ｍｏｎｔａｎｉｄｅ  ＩＳＡ  ７６３Ａ、Ｍｏｎｔａｎｉｄｅ  ＩＳＡ  ２０７、Ｍｏｎｔａｎｉｄｅ  ＩＳＡ  ２６４、Ｍｏｎｔａｎｉｄｅ  ＩＳＡ  ２７、Ｍｏｎｔａｎｉｄｅ  ＩＳＡ  ３５、Ｍｏｎｔａｎｉｄｅ  ＩＳＡ  ７４０、Ｍｏｎｔａｎｉｄｅ  ＩＳＡ  ７７３、Ｍｏｎｔａｎｉｄｅ  ＩＳＡ  ２６６、Ｍｏｎｔａｎｉｄｅ  ＩＳＡ  ２６７、Ｍｏｎｔａｎｉｄｅ  ＩＳＡ  ２８、Ｍｏｎｔａｎｉｄｅ  ＩＳＡ  ５１Ｆ、Ｍｏｎｔａｎｉｄｅ  ＩＳＡ  ０１６Ｄ、およびＭｏｎｔａｎｉｄｅ  ＩＭＳを含む。言及された最後の３つは、ヒトでの使用についてはまだ承認されていないが、本発明によるワクチン組成物のためには潜在的に有用である。
【００６８】
Ｍｏｎｔａｎｉｄｅ  ＩＳＡ−５１およびＭｏｎｔａｎｉｄｅ  ＩＳＡ−７２０は特にヒトでの使用のためであって、従って好ましくは、エマルジョン（下を参照）として投与されなければならない油に基づくアジュバントである。
【００６９】
ある実施形態では、ワクチン組成物は、１つ以上のさらなる免疫刺激成分をさらに含んでもよい。これらとしては、限定はしないが、ムラミルジペプチド（ＭＤＰ）；例えば、Ｎ−アセチル−ムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミン（ａｌａ−ＭＤＰ）、Ｎ−アセチル−ムラミル−Ｌ−トレオニル−Ｄ−イソグルタミン（ｔｈｒ−ＭＤＰ）、Ｎ−アセチル−ｎｏｒ−ムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミン（ＣＧＰ１１６３７，ｎｏｒ−ＭＤＰ）、およびＮ−アセチル−ムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミニル−Ｌ−アラニン−２−（１’−２’−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ヒドロキシホスホリルオキシ）−エチルアミン（ＣＧＰ１９８３５Ａ、ＭＴＰ−ＰＥ）、ジメチルグリシン、タフトシンおよびトレハロースジミコレート、モノホスホリル脂質Ａ（ＭＰＬ）およびトリペプチド含有ホルミル−メチオニン、例えば、Ｎ−ホルミル−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅが挙げられる。このような化合物は、例えば、Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）およびＲＩＢＩ  ＩｍｍｕｎｏＣｈｅｍ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｉｎｃ．（Ｈａｍｉｌｔｏｎ，ＭＴ）から市販されている。
【００７０】
アジュバントと独立してキャリアが存在してもよい。キャリアの機能は、例えば、特定のサバイビンフラグメントの分子量を増大してその活性または免疫原性を増大すること、安定性を付与すること、生物学的活性を増大すること、または血清半減期を延長することであり得る。キャリアは、当業者に公知の任意の適切なキャリアであってもよい。キャリアタンパク質は、限定はしないが、キーホール・リンペット・ヘモシアニン、血清タンパク質、例えば、トランスフェリン、ウシ血清アルブミン、ヒト血清アルブミン、サイログロブリンまたはオボアルブミン、免疫グロブリンまたはホルモン、例えば、インスリンまたはパルミチン酸であってもよい。ヒトの免疫のためには、キャリアは、ヒトに受容可能な生理学的に受容可能なキャリアであって、かつ安全でなければならない。しかし、破傷風毒素および／またはジフテリア毒素は、本発明の１実施形態において適切なキャリアである。あるいは、このキャリアは、デキストラン、例えば、セファロースであってもよい。
【００７１】
オイルエマルジョンおよびサーファクタントに基づくワクチンは、油中水型、水中油型および水中油中水型の処方物として分類され得る。
【００７２】
水中油型処方物のために用いられるアジュバントは、鉱油または／および非鉱油およびサーファクタント／乳化剤であり得る。アジュバントは、抗原組成物水溶液と混合されて、ワクチン処方物を提供する。
【００７３】
本発明によれば、オイルは、代謝可能であっても、もしくは代謝不能であっても、または代謝可能および代謝不能なオイルの混合物であってもよい。この非鉱物油は、迅速に代謝されて、注射部位から除去され、そのためそれらは、副作用が極めて少ないが、流動的で免疫応答が一様に小さく、一方鉱物油は、部分的にしか代謝されず、良好な免疫応答とともに望ましくない影響を誘導するリスクが高い。
【００７４】
オイルは、乳化剤、例えば、マンニド・モノ−オレエートと、ワクチンの水相の添加の前に事前に混合して、コロイドミル（ｃｏｌｌｏｉｄ  ｍｉｌｌ）または連続的機械的または流量超音波乳化器の使用によって乳化することが好ましい。
【００７５】
より複雑な二重エマルジョン（水／オイル／水）は、少量のＴｗｅｅｎ  ８０を含む水相中でもう一度乳化することによって生成され得る。
【００７６】
大きな進歩が近年では行われており、代替的な「レディー・ツー・ユース（すぐ使える）（ｒｅａｄｙ−ｔｏ−ｕｓｅ）」オイル・エマルジョンの導入がみられている。オクタデカン酸および無水マンニトールのエステルを含むオイルは、例えば、精緻な乳化装置を必要とせずに、容易に、安定かつ低粘度である二重または混合エマルジョン（水／オイル／水）を形成する。
【００７７】
ある実施形態では、好ましいアジュバントは、油中水型ワクチン処方物である。
【００７８】
ある実施形態では、好ましいオイル成分は、非鉱油であってもよい。好ましい実施形態では、このアジュバントは、非鉱油ベースのＭｏｎｔａｎｉｄｅ  ＩＳＡ（不完全なｓｅｐｐｉｃのアジュバント）、例えば、Ｍｏｎｔａｎｉｄｅ  ＩＳＡ  ７０８、Ｍｏｎｔａｎｉｄｅ  ＩＳＡ−７２０、Ｍｏｎｔａｎｉｄｅ  ＩＳＡ  ７６３Ａ、Ｍｏｎｔａｎｉｄｅ  ＩＳＡ  ２０７、Ｍｏｎｔａｎｉｄｅ  ＩＳＡ  ２６４、Ｍｏｎｔａｎｉｄｅ  ＩＳＡ  ２７およびＭｏｎｔａｎｉｄｅ  ＩＳＡ  ３５の群から選択される。
【００７９】
あるいは、アジュバントは、非鉱油を含んでも、および／または鉱油を含んでもよい。従って、好ましい実施形態では、アジュバントは、非鉱油および／または鉱油ベースのＭｏｎｔａｎｉｄｅ  ＩＳＡ（不完全なｓｅｐｐｉｃのアジュバント）、例えば、Ｍｏｎｔａｎｉｄｅ  ＩＳＡ  ７４０、Ｍｏｎｔａｎｉｄｅ  ＩＳＡ−７７３、Ｍｏｎｔａｎｉｄｅ  ＩＳＡ  ２６６、Ｍｏｎｔａｎｉｄｅ  ＩＳＡ  ２６７、Ｍｏｎｔａｎｉｄｅ  ＩＳＡ  ２８、およびＭｏｎｔａｎｉｄｅ  ＩＭＳの群から選択され、この最後のはヒトでの使用にはまだ承認されていない。
【００８０】
最も好ましい実施形態では、このオイル成分は、鉱油である。好ましい実施形態では、このアジュバントは、鉱油ベースのＭｏｎｔａｎｉｄｅ  ＩＳＡ（不完全なｓｅｐｐｉｃのアジュバント（Ｓｅｐｐｉｃ，Ｂｅｌｇｉｕｍ））、例えば、Ｍｏｎｔａｎｉｄｅ  ＩＳＡ  ５０、Ｍｏｎｔａｎｉｄｅ  ＩＳＡ−５１、Ｍｏｎｔａｎｉｄｅ  ＩＳＡ  ７０、Ｍｏｎｔａｎｉｄｅ  ＩＳＡ  ２０６、およびＭｏｎｔａｎｉｄｅ  ＩＳＡ  ５１ＦおよびおよびＭｏｎｔａｎｉｄｅ  ０１６Ｄの群から選択され、この最後のはヒトでの使用にはまだ承認されていない。
【００８１】
鉱油の組成、例えば、炭素鎖の長さは、アジュバントの有効性に影響し、短い鎖は強力な免疫応答を誘導するが、局所的な副作用を生じ、一方、長鎖を用いる応答は、少ないが、知覚可能な副作用はなく、従って鉱油は十分特徴付けられなければならず、そして長い炭素鎖および短い炭素鎖の均衡のとれた組成物を有する。鉱油は、８％未満、または例えば、７％未満、または例えば６％未満、そして最も好ましくは、Ｃ１４未満の鎖の長さを有する、５％未満の炭化水素を有することが好ましい。
【００８２】
この鉱油は不飽和炭化水素も芳香族炭化水素も含まないことが好ましい。オイル成分は、３２〜４０の、または例えば３５〜３７、そして特に、例えば、３６．２〜３６．８というＡ．Ｐ．Ｉ．比重を有することが好ましい。
【００８３】
さらに、鉱油は、０．８２〜０．８４、または例えば、０．８３〜０．８４という比重を有することが好ましい。鉱油は、２５℃で０．８３４〜０．８３８という比重を有することがさらに好ましい。
【００８４】
３７．８℃（１００Ｆ）で５５〜６５ＳＳＵという粘性を有する鉱油が好ましく、より好ましくは、２７〜６１という粘性を有する鉱油が用いられ、そして特に好ましいのは、鉱油が３７．８℃（１００Ｆ）で５９〜６１ＳＳＵという粘性を有することである。
【００８５】
鉱油は、２５℃で１．２〜１．６という屈折率、または例えば、１．３〜１．６、または例えば、１．４〜１．５、そして最も好ましくは１．４５８〜．４６３という屈折率を有することが好ましい。
【００８６】
鉱油は以下の特徴のうち１つ以上を有することがさらに好ましい；
ａ）酸性試験が最小よりも良好、
ｂ）３６０ｎｍで蛍光が陰性、
ｃ）可視の懸濁物が陰性、
ｄ）２９５Ｆという最小ＡＳＴＭフラッシュポイントを有する、
ｅ）軽油および紫外吸収についての全てのＲＮ要件を実施する。
【００８７】
鉱油は、薬学的等級でなければならない。
【００８８】
Ｄｒａｋｅｏｌ  ６  ＶＲ（Ｐｅｎｒｅｃｏ，Ｔｅｘａｓ）は、薬学的等級の鉱油である。Ｄｒａｋｅｏｌ  ６  ＶＲは、不飽和炭化水素も芳香族炭化水素も含まず、３６．２〜３６．８というＡ．Ｐ．Ｉ．比重、２５℃で０．８３４〜０．８３８という比重、３７．８℃（１００Ｆ）で５９〜６１ＳＳＵまたは１０．０〜１０．６センチストークという粘性、２５℃で１．４５８〜．４６３という屈折率、最小よりよい酸性試験を有し、３６０ｎｍでの蛍光が陰性であって、視認できる浮遊物質が陰性であって、０〜１５ＦというＡＳＴＭ流動試験を有し、２９５Ｆという最小ＡＳＴＭフラッシュポイントを有し、軽油および紫外吸収についての全てのＲＮ要件を実施する。鉱油の５％未満が、短鎖の炭化水素によって構成される。
【００８９】
最も好ましい実施形態では、鉱油はＤｒａｋｅｏｌ  ６  ＶＲである。
【００９０】
サーファクタント
アジュバントの表面張力は、サーファクタントによって調節され得、それによってアジュバントおよびワクチン組成物の粘性に影響する。サーファクタントの毒性の影響は、脂肪酸の残留レベルと相関し、従って脂肪酸が低レベルである高品質のサーファクタントが必要である。サーファクタントは、薬学的等級のものでなければならない。
【００９１】
本発明によるアジュバントは、サーファクタントを含み得る。
【００９２】
ある実施形態では、アジュバントは、鉱油およびサーファクタントを含む油中水型エマルジョンに処方され、このアジュバントは、このサーファクタントを最大１４．５容積％まで含む。
【００９３】
本発明のある局面は、ワクチン組成物であって、
ｉ．１つ以上のサバイビンペプチドまたはサバイビンペプチド改変体であって、このペプチド改変体の配列が、その全長にわたって、配列番号２３の連続したアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一である、サバイビンペプチドまたはサバイビンペプチド改変体と、
ｉｉ．鉱油およびサーファクタントを含む油中水型エマルジョンのために処方されたアジュバントであって、このアジュバントがこのサーファクタントを最大１４．５容積％まで含む、アジュバントと、
を含む、医薬としての使用のための、ワクチン組成物に関する。
【００９４】
さらなる実施形態では、このアジュバントは、２〜１４容積％のサーファクタント、例えば、５〜１４容積％のサーファクタント、例えば、６〜１３容積％のサーファクタント、例えば、７〜１２容積％のサーファクタント、例えば、８〜１２容積％のサーファクタントを含む。
【００９５】
このサーファクタントの主な脂肪酸種は、Ｃ１８’であって、この組成物の６５〜８８％を構成することが好ましい。
【００９６】
このサーファクタントはオイル、例えば、１という最大の酸価を有する脂質液であることがさらに好ましい。
【００９７】
このサーファクタントは、１５０〜１９０、または例えば、１６０〜１７０、または例えば、１６２〜１７５というけん化価、そして最も好ましくは、１６４〜１７２というけん化価を有することがさらに好ましい。
【００９８】
このサーファクタントは、７０〜１２０、または、例えば、８０〜１１０、または例えば、８０〜１１０、８５〜１０５というヒドロキシル価、そして最も好ましくは８９〜１００というヒドロキシル価を有することがさらに好ましい。
【００９９】
このサーファクタントは、４０〜１００、または、例えば、５０〜９０、または例えば、６０〜８０、または例えば、６５〜７８というヨウ素価、そして最も好ましくは６７〜７５というヨウ素価を有することがさらに好ましい。
【０１００】
このサーファクタントは、４０ｐｐｍ未満、または、例えば、３０ｐｐｍ、または例えば、２５ｐｐｍ、または例えば、２２ｐｐｍという重金属価、そして最も好ましくは２０ｐｐｍ未満の重金属価を有することがさらに好ましい。
【０１０１】
このサーファクタントは、５０％、または、例えば、４５％、または例えば、４０％、または例えば、３７％という最大水含量、そして最も好ましくは０．３５％という最大水含量を有することがさらに好ましい。
【０１０２】
このサーファクタントは、２５℃で例えば、２００〜４００ｍＰａｓ、または例えば、２２５〜３７５ｍＰａＳ、または例えば、２５０〜３５０ｍＰａＳ、または例えば、２７５〜３２５ｍＰａＳという粘性、そして最も好ましくは２５℃で約３００ｍＰａＳという粘性を有することがさらに好ましい。
【０１０３】
好ましい実施形態では、このサーファクタントは、無水マンニトール・オクタデセノエート（ａｎｈｙｄｒｏ  ｍａｎｎｉｔｏｌ  ｏｃｔａｄｅｃｅｎｏａｔｅ）としても公知のマンニド・オレエート（ｍａｎｎｉｄｅ  ｏｌｅａｔｅ）である。
【０１０４】
Ｍｏｎｔａｎｉｄｅ  ８０は、オレイン酸（種々の脂肪酸の分布）に基づき、この主な脂肪酸種は、Ｃ１８’であり、これは、この組成物の６５〜８８％を構成する。このオイルは、脂質液であり、１という最大酸価、１６４〜１７２というけん化価、８９〜１００というヒドロキシル価、６７〜７５というヨウ素価、２という最大過酸化物価、２０ｐｐｍ未満の重金属価、０．３５％という最大水含量、９という最大明度、および２５℃で約３００ｍＰａｓという粘性を有する。
【０１０５】
最も好ましい実施形態では、このアジュバントは、サーファクタントであるマンニド・オレエート、Ｍｏｎｔａｎｉｄｅ  ８０（Ｓｅｐｐｉｃ，Ｂｅｌｇｉｕｍ）を含む。
【０１０６】
さらに好ましい実施形態では、このアジュバントは、鉱油Ｄｒａｋｅｏｌ  ６ＶＲおよびサーファクタントであるマンニド・オレエート（Ｍｏｎｔａｎｉｄｅ  ８０）を含む。
【０１０７】
好ましい実施形態では、このアジュバントは、鉱油Ｄｒａｋｅｏｌ  ６ＶＲおよびサーファクタントであるマンニド・オレエートを含み、このアジュバントは、サーファクタントである無水マンニトール・オクタデセノエート（Ｍｏｎｔａｎｉｄｅ  ８０）の最大１４．５％を含む。
【０１０８】
さらに好ましい実施形態では、アジュバントは、２〜１４容積％のこのサーファクタント無水マンニトール・オクタデセノエート、例えば、５〜１４容積％のこのサーファクタント無水マンニトール・オクタデセノエート、例えば、６〜１３容積％のこのサーファクタント無水マンニトール・オクタデセノエート、例えば、７〜１２容積％のこのサーファクタント無水マンニトール・オクタデセノエート、または例えば、８〜１２容積％のこのサーファクタント無水マンニトール・オクタデセノエートを含む。
【０１０９】
ある実施形態では、このアジュバントは、透明な黄色の液体であって、２０℃で約０．７〜１．０、または０．８〜０．９、または好ましくは約０．８５という密度を有する。
【０１１０】
ある実施形態では、このアジュバントは、２０℃で５００ｍＰａＳ未満、例えば、２５０ｍＰａＳ未満、または例えば、２５〜１５０ｍＰａＳ、または好ましくは約１５０ｍＰａＳという粘性を有する。
【０１１１】
ある実施形態では、このアジュバントは、０．５という最大酸価を有する。
【０１１２】
ある実施形態では、このアジュバントは、１０〜４０、例えば、１２〜３０、例えば、１４〜２５または好ましくは１６〜２０というけん化価を有する。
【０１１３】
ある実施形態では、このアジュバントは、５〜２０、または例えば、６〜１８、または例えば、７〜１５、または好ましくは９〜１３というヒドロキシル価を有する。
【０１１４】
ある実施形態では、このアジュバントは、５または４または３または好ましくは２という最大過酸化物価を有する。
【０１１５】
ある実施形態では、このアジュバントは、１〜２０、例えば、２〜１５、例えば、３〜１２または好ましくは例えば、５〜９というヨウ素価を有する。
【０１１６】
ある実施形態では、このアジュバントは、２パーセント、例えば、１．５パーセント、例えば、１パーセント、または例えば好ましくは、０．５パーセントという最大水含量を有する。
【０１１７】
ある実施形態では、このアジュバントは、２５℃で１．４５０〜１．４７０、または１．４５５〜１．４６５、または好ましくは１．４６１〜１．４６３の屈折率を有する。
【０１１８】
ある実施形態では、アジュバントおよび生理食塩水の５０：５０の混合物の伝導率は、２０μＳｃｍ−１未満、１５μＳｃｍ−１、１２μＳｃｍ−１、または好ましくは１０μＳｃｍ−１未満である。
【０１１９】
Ｍｏｎｔａｎｉｄｅ  ＩＳＡ  ５１は、鉱油溶液（Ｄｒａｋｅｏｌ  ６  ＶＲ）中にマンニド・オレエート（Ｍｏｎｔａｎｉｄｅ  ８０）を含む。Ｍｏｎｔａｎｉｄｅ  ＩＳＡ  ５１は、約８〜１２パーセントの無水マンニトール・オクタデセノエートおよび約８８〜９２パーセントの鉱油を含む。Ｍｏｎｔａｎｉｄｅ  ＩＳＡ  ５１は、透明な黄色の液体であって、２０℃で約０．８５という密度、および２０℃で約５０ｍＰａＳという粘性を有する。Ｍｏｎｔａｎｉｄｅ  ＩＳＡ  ５１は、０．５という最大酸価、１６〜２０というけん化価、９〜１３というヒドロキシル価、２という最大過酸化物価、５〜９というヨウ素価、０．５パーセントという最大水含量、２５℃で１．４５５〜１．４６５、または好ましくは１．４６１〜１．４６３の屈折率を有することによって特徴付けられる。Ｍｏｎｔａｎｉｄｅ  ＩＳＡ  ５１および生理食塩水の５０：５０の混合物の伝導率は、１０μＳｃｍ−１未満である。
【０１２０】
さらに好ましい実施形態では、アジュバントは、Ｍｏｎｔａｎｉｄｅ不完全ｓｅｐｐｉｃアジュバントである。
【０１２１】
最も好ましい実施形態では、このワクチン組成物は以下を含む：
ｉ．１つ以上のサバイビンペプチドまたはサバイビンペプチド改変体であって、このペプチド改変体の配列が、その全長にわたって、配列番号２３の連続したアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一である、サバイビンペプチドまたはサバイビンペプチド改変体と、
ｉｉ．鉱油およびサーファクタントを含む油中水型エマルジョンのために処方されたアジュバントであって、このアジュバントがこのサーファクタントを最大１４．５容積％まで含み、このアジュバントがＭｏｎｔａｎｉｄｅ  ＩＳＡ５１である、アジュバント。
【０１２２】
サバイビンペプチドまたはペプチド改変体
免疫療法のための理想的な標的は、正常な組織でサイレンシングされ、ガン細胞で過剰発現され、そして腫瘍細胞生存および進行に直接関与する遺伝子産物である。サバイビンは、これらの特徴を潜在的に満たす。なぜなら、サバイビンは、細胞分裂の調節に関与することに加えて、アポトーシスを抑制するからである。従って、サバイビンは、細胞を生理学的な死から妨げ、従って細胞生存を延長する。
【０１２３】
サバイビンは、１６．５ｋＤａの細胞質タンパク質であって、これは、単一のＢＩＲおよび高度に荷電されたカルボキシ末端のコイル領域を、ＲＩＮＧフィンガーの代わりに含んでいる。このコード配列は４２９ヌクレオチド長（配列番号２２）であって、これには終止コドンを含み、そしてコードされたタンパク質サバイビンは、１４２アミノ酸長である（配列番号２３）。
【０１２４】
本発明は、１つ以上のサバイビンペプチドまたはサバイビンペプチド改変体を含むワクチン組成物に関する。
【０１２５】
ある実施形態では、１つ以上のサバイビンペプチドまたはサバイビンペプチド改変体は、１４２のアミノ酸残基からなる全長サバイビンポリペプチド（配列番号２３）を含む。
【０１２６】
好ましくは、１つ以上のサバイビンペプチドまたはサバイビンペプチド改変体は、少なくとも５つのアミノ酸残基を含み、より好ましくは、これは少なくとも７つのアミノ酸残基、少なくとも８つのアミノ酸残基、少なくとも９つのアミノ酸残基、少なくとも１０のアミノ酸残基、少なくとも１１のアミノ酸残基、少なくとも１２のアミノ酸残基、少なくとも１４のアミノ酸残基、少なくとも１６のアミノ酸残基、少なくとも１８のアミノ酸残基または少なくとも２０のアミノ酸残基を含む。
【０１２７】
ある実施形態では、１つ以上のサバイビンペプチドまたはサバイビンペプチド改変体は、多くとも１４２のアミノ酸残基、または例えば多くとも１２０のアミノ酸残基、または例えば、多くとも１００のアミノ酸残基、そして好ましくは、多くとも８０のアミノ酸残基、または例えば、多くとも５０のアミノ酸残基からなることがさらに好ましく、そしてより好ましくは、これは、多くとも２０アミノ酸残基、例えば、多くとも１８、例えば、多くとも１６、例えば、多くとも１４、例えば、多くとも１２、例えば、多くとも１１、例えば、多くとも１０のアミノ酸残基からなる。
【０１２８】
ある実施形態では、このワクチン組成物は、１つ以上のペプチドまたはペプチド改変体を含み、このペプチド改変体は、配列番号２３の少なくとも５アミノ酸残基および多くとも２０の連続的なアミノ酸残基からなる。
【０１２９】
ある実施形態では、１つ以上のサバイビンペプチドまたはサバイビンペプチド改変体は、配列番号２３の多くとも１４２の連続的なアミノ酸残基、または例えば、多くとも１２０の連続的アミノ酸残基、または例えば、多くとも１００の連続的アミノ酸残基、そして好ましくは、多くとも８０の連続的なアミノ酸残基、または例えば、多くとも５０の連続的なアミノ酸残基からなることがさらに好ましく、そしてより好ましくは、これは、配列番号２３の多くとも２０の連続的アミノ酸残基、例えば、多くとも１８の連続的アミノ酸、例えば、多くとも１６の連続的アミノ酸、例えば、多くとも１４の連続的アミノ酸、例えば、多くとも１２の連続的アミノ酸、例えば、多くとも１１の連続的アミノ酸、例えば、多くとも１０の連続的アミノ酸残基からなる。
【０１３０】
特定の実施形態では、このペプチドは、ヘプタペプチド、オクタペプチド、ノナペプチド、デカペプチドまたはウンデカペプチドからなり、これはそれぞれ配列番号２３の７、８、９、１０、１１の連続的なアミノ酸残基からなる。
【０１３１】
本発明はまた、本明細書において開示されるようなサバイビンペプチドの改変体および機能的な等価物を包含する。本発明の文脈で用いられる場合の「機能的等価物（ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ｅｑｕｉｖａｌｅｎｔｓ）」は、該当の配列の事前に決定されたフラグメントの対応する機能に対する参照によって確立される。機能的な等価性は、例えば、ＨＬＡクラスＩ分子に対する類似の結合親和性、またはＥＬＩＳＰＯＴアッセイによって実証される類似の力価によって確立されてもよい。
【０１３２】
本明細書に記載されるサバイビン由来ペプチドの機能的な等価物または改変体は、挿入、欠失、および保存的置換を含む置換の数および範囲につれて、好ましい事前に決定された配列から段階的に異なるアミノ酸配列を示すことが理解される。この相違は、好ましい事前に決定された配列と、サバイビン由来改変体またはサバイビン由来機能的改変体との間での同一性の減少として測定され得る。
【０１３３】
アミノ酸配列の間の同一性は、当該分野で周知のアルゴリズムを用いて算出され得る。連続的なサバイビン由来アミノ酸残基を含むかそれからなるフラグメントと相同性を共有するフラグメントは、それらが好ましくは、その全長にわたって、事前に決定されたサバイビン由来ペプチドと、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一であることを含んで、例えば、少なくとも７５％同一、例えば、少なくとも８０％同一、例えば、少なくとも８５％同一、例えば、少なくとも８８％同一、少なくとも９０％同一、例えば少なくとも９４％同一である場合、本発明の範囲内におさまるとみなされるべきである。
【０１３４】
本発明によるワクチン組成物は、１つ以上のサバイビンペプチドまたはサバイビンペプチド改変体を含み、このペプチド改変体の配列は、その全長にわたって、配列番号２３の連続的なアミノ酸配列に対して少なくとも８５％同一である。
【０１３５】
本発明によるペプチド改変体の例は、ペプチドＬＬＬＧＥＦＬＫＬ（サバイビン９６−１０４Ｌ２）（配列番号４）であり、このペプチド改変体は、サバイビン配列「ＬＴＬＧＥＦＬＫＬ」と８／９＊１００％（８９％）同一である。
【０１３６】
ペプチド改変体を描写するために上記で用いられる呼称は、本出願を通じて用いられる：文字の後ろに続く数、例えばＬ２は、改変体アミノ酸（Ｌ）であって、もともと所定のペプチドの２の位置に存在するアミノ酸が置換されている改変体アミノ酸を示す。所定のペプチドは、１数字によって示されて、この数は、全長サバイビン配列に対するペプチドの最初のアミノ酸の数を示す（サバイビン９６、またはＳｕｒ９６は、サバイビンの残基番号９６で開始する）か、または２つの数字によって示され、この第二の数は、サバイビンに対するペプチドの終わりの残基を示す。
【０１３７】
ペプチド改変体は、サバイビンの公知の配列、例えば、米国特許第６，２４５，５２３号に開示された配列（本明細書では配列番号２３）由来であってもよい。特定のＨＬＡ分子に結合する能力を潜在的に有するペプチドの選択は、所定の特定のＨＬＡ分子に対して結合して、ペプチド中の特定の位置で２〜３の関連のアミノ酸の優勢を示す公知の配列のアラインメントを用いることによって行われてもよい。このような優勢なアミノ酸残基はまた本明細書において、「アンカー残基（ａｎｃｈｏｒ  ｒｅｓｉｄｕｅ）」または「アンカー残基モチーフ（ａｎｃｈｏｒ  ｒｅｓｉｄｕｅ  ｍｏｔｉｅｆ）」と呼ばれる。アクセス可能なデータベースで見出され得る公知の配列データに基く、このような比較的単純な手順に従って、ペプチドは、特定のＨＬＡ分子に結合する可能性の高い、サバイビンタンパク質分子由来であってもよい。ＨＬＡ分子の範囲についてのこのような分析の代表的な例は、下の表２に示される：
【０１３８】
【表２−１】
0005631357.tif 000003
【０１３９】
【表２−２】
0005631357.tif 000004
このように、例えば、ＨＬＡ−Ａ１に結合する能力を潜在的に有するノナペプチドは、以下の配列のうちの１つを有する：Ｘａａ−Ｔ−Ｄ−Ｘａａ−Ｘａａ−Ｘａａ−Ｌ−Ｘａａ−Ｙ、Ｘａａ−Ｔ−Ｅ−Ｘａａ−Ｘａａ−Ｘａａ−Ｌ−Ｘａａ−Ｙ、Ｘａａ−Ｓ−Ｄ−Ｘａａ−Ｘａａ−Ｘａａ−Ｌ−Ｘａａ−ＹまたはＸａａ−Ｓ−Ｅ−Ｘａａ−Ｘａａ−Ｘａａ−Ｌ−Ｘａａ−Ｙ（Ｘａａは任意のアミノ酸残基を示す）。同様の方式で、任意の他のＨＬＡ分子に結合する能力を潜在的に有する配列が設計され得る。
【０１４０】
当業者は、所定のＨＬＡ分子のさらなる「アンカー残基モチーフ（ａｎｃｈｏｒ  ｒｅｓｉｄｕｅ  ｍｏｔｉｆｓ）」を同定可能であることが理解される。
【０１４１】
従って、本発明に従うペプチド改変体としては、特定のＨＬＡの各々について表２に列挙される任意のアミノ酸残基を含む配列を含むペプチドが挙げられる。
【０１４２】
あるいは、この相違は、サバイビンの連続的なアミノ酸配列に比較してペプチド中の置換基の数を比較することによって直接測定され得る。従って、ある実施形態では、このワクチンは、７〜２０の連続的なアミノ酸であって、配列番号２３の連続的なアミノ酸配列に比較して１または２つのアミノ酸置換を含む連続的アミノ酸からなるサバイビンペプチド改変体を含む。より好ましい実施形態では、このワクチン組成物は、配列番号２３の連続的なアミノ酸配列に比較して１つのアミノ酸置換を含む、７〜１２の連続的なアミノ酸からなるサバイビンペプチド改変体を含む。
【０１４３】
ＭＨＣクラス１分子の結合グルーブ（ｇｒｏｏｖｅ）は９または１０アミノ酸のペプチドに完全に適合する。さらに好ましい実施形態では、ワクチン組成物は、９または１０のアミノ酸残基からなる１つ以上のサバイビンペプチドまたはサバイビンペプチド改変体を含む。
【０１４４】
選択されたサバイビンタンパク質の配列に基づいて、１つ以上のサバイビンペプチドまたはサバイビンペプチド改変体は、上記で示されたような適切なサイズのペプチドを生じるサバイビンの出発材料の任意の適切な化学的または酵素的な処置によって誘導されてもよいし、または当業者が周知である任意の従来のペプチド合成手順によって合成されてもよい。
【０１４５】
本発明のペプチドは、それが由来するサバイビンタンパク質の天然の配列である配列を有してもよい。しかし、任意の所定のＨＬＡ分子に高い親和性を有するペプチドは、例えば、上記の手順に基づいて、少なくとも１つのアミノ酸残基を置換、欠失または付加させることにより、配列を改変することによって、このような天然の配列から誘導され得、これによって所定のＨＬＡ分子に関するアンカー残基モチーフが同定される（表２を参照のこと）。
【０１４６】
従って、ある実施形態では、ワクチン組成物は、１つ以上のサバイビンペプチドまたはペプチド改変体を含み、このサバイビンペプチド改変体（単数または複数）の配列は、少なくとも１つのアミノ酸残基を置換、欠失または付加させることによって、天然の配列から誘導され得、これによって所定のＨＬＡ分子についてアンカー残基モチーフを有するペプチドが得られる。
【０１４７】
従って、サバイビン由来ペプチドの免疫原性を増大するためには、アミノ酸置換が、アンカー位置に導入されてもよいが、ＨＬＡクラスＩ分子に結合するペプチドを増大するためには、ＴＣＲ接触残基ではない。これによって、より免疫原性のエピトープが生じ、例えば、これは、ガン反応性のＣＴＬを誘導する能力を増強し、そしてこれは、臨床的に意味のあるＣＴＬ応答の誘導のためにさらに適切であることが実証されている。しかし、重要なことに、標的ガン細胞は、天然のサバイビン由来ペプチドを細胞表面上に発現して提示するだけである、それに関して、改変されたサバイビン由来ペプチドに特異的な治療誘導性ＣＴＬは天然のアナログ（類似体）と交差反応することが決定的に重要なことである。
【０１４８】
ある実施形態では、１つ以上のサバイビンペプチドまたはサバイビンペプチド改変体は、以下：ＨＬＡ−Ａ１、ＨＬＡ−Ａ２、ＨＬＡ−Ａ３、ＨＬＡ−Ａ１１、ＨＬＡ−Ａ２３、ＨＬＡ−Ａ２４、ＨＬＡ−Ａ２５、ＨＬＡ−Ａ２６、ＨＬＡ−Ａ２８、ＨＬＡ−Ａ２９、ＨＬＡ−Ａ３０、ＨＬＡ−Ａ３１、ＨＬＡ−Ａ３２、ＨＬＡ−Ａ３３、ＨＬＡ−Ａ３４、ＨＬＡ−Ａ６６、ＨＬＡ−Ａ６８、ＨＬＡ−Ａ６９、ＨＬＡ−Ａ７４、ＨＬＡ−Ｂ５、ＨＬＡ−Ｂ７、ＨＬＡ−Ｂ８、ＨＬＡ−Ｂ１４、ＨＬＡ−Ｂ１５  Ｂ６２）、ＨＬＡ−Ｂ１７、ＨＬＡ−Ｂ２７、ＨＬＡ−Ｂ３５、ＨＬＡ−Ｂ３７、ＨＬＡ−Ｂ３８、ＨＬＡ−Ｂ３９、ＨＬＡ−Ｂ４０（Ｂ６０，６１）、ＨＬＡ−Ｂ４２、ＨＬＡ−Ｂ４４、ＨＬＡ−Ｂ４６、ＨＬＡ−Ｂ４８、ＨＬＡ−Ｂ５１、ＨＬＡ−Ｂ５２、ＨＬＡ−Ｂ５３、ＨＬＡ−Ｂ５４、ＨＬＡ−Ｂ５５、ＨＬＡ−Ｂ５６、ＨＬＡ−Ｂ５７、ＨＬＡ−Ｂ５８、ＨＬＡ−Ｂ６７、ＨＬＡ−Ｂ７３、ＨＬＡ−Ｃｗ１  ＨＬＡ−Ｃｗ２、ＨＬＡ−Ｃｗ３、ＨＬＡ−Ｃｗ４、ＨＬＡ−Ｃｗ６、ＨＬＡ−Ｃｗ６の群から選択されるＭＨＣクラスＩ分子のうちの少なくとも１つに拘束される。
【０１４９】
従って、なおさらなる実施形態では、１つ以上のペプチド（単数または複数）は、以下：ＨＬＡ−Ａ１、ＨＬＡ−Ａ２、ＨＬＡ−Ａ３、ＨＬＡ−Ａ１１、ＨＬＡ−Ａ２４、ＨＬＡ−Ｂ７、ＨＬＡ−Ｂ３５、ＨＬＡ−Ｂ４４、ＨＬＡ−Ｂ８、ＨＬＡ−Ｂ１５、ＨＬＡ−Ｂ２７およびＨＬＡ−Ｂ５１、ＨＬＡ−Ｃｗ１、ＨＬＡ−Ｃｗ２、ＨＬＡ−Ｃｗ３、ＨＬＡ−Ｃｗ４、ＨＬＡ−Ｃｗ５、ＨＬＡ−Ｃｗ６、ＨＬＡ−Ｃｗ７およびＨＬＡ−Ｃｗ１６の群から選択されるＭＨＣクラスＩ分子のうちの少なくとも１つに拘束される。
【０１５０】
特に好ましい実施形態では、この１つ以上のペプチド（単数または複数）は、以下：ＨＬＡ−Ａ１、ＨＬＡ−Ａ２、ＨＬＡ−Ｂ７およびＨＬＡ−Ｂ３５の群から選択されるＭＨＣクラスＩ分子のうちの少なくとも１つに拘束される。
【０１５１】
本発明によるワクチンは、同じ組織特異性を有する２つ以上のペプチドを含んでもよい。なぜなら、個々のペプチドの有効性は、異なる個体では異なり得るからである。従って、ある実施形態では、２つ以上のサバイビンペプチドまたはサバイビンペプチド改変体は、以下：ＨＬＡ−Ａ１、ＨＬＡ−Ａ２、ＨＬＡ−Ａ３、ＨＬＡ−Ａ１１、ＨＬＡ−Ａ２３、ＨＬＡ−Ａ２４、ＨＬＡ−Ａ２５、ＨＬＡ−Ａ２６、ＨＬＡ−Ａ２８、ＨＬＡ−Ａ２９、ＨＬＡ−Ａ３０、ＨＬＡ−Ａ３１、ＨＬＡ−Ａ３２、ＨＬＡ−Ａ３３、ＨＬＡ−Ａ３４、ＨＬＡ−Ａ６６、ＨＬＡ−Ａ６８、ＨＬＡ−Ａ６９、ＨＬＡ−Ａ７４、ＨＬＡ−Ｂ５、ＨＬＡ−Ｂ７、ＨＬＡ−Ｂ８、ＨＬＡ−Ｂ１４、ＨＬＡ−Ｂ１５  Ｂ６２）、ＨＬＡ−Ｂ１７、ＨＬＡ−Ｂ２７、ＨＬＡ−Ｂ３５、ＨＬＡ−Ｂ３７、ＨＬＡ−Ｂ３８、ＨＬＡ−Ｂ３９、ＨＬＡ−Ｂ４０（Ｂ６０，６１）、ＨＬＡ−Ｂ４２、ＨＬＡ−Ｂ４４、ＨＬＡ−Ｂ４６、ＨＬＡ−Ｂ４８、ＨＬＡ−Ｂ５１、ＨＬＡ−Ｂ５２、ＨＬＡ−Ｂ５３、ＨＬＡ−Ｂ５４、ＨＬＡ−Ｂ５５、ＨＬＡ−Ｂ５６、ＨＬＡ−Ｂ５７、ＨＬＡ−Ｂ５８、ＨＬＡ−Ｂ６７、ＨＬＡ−Ｂ７３、ＨＬＡ−Ｃｗ１  ＨＬＡ−Ｃｗ２、ＨＬＡ−Ｃｗ３、ＨＬＡ−Ｃｗ４、ＨＬＡ−Ｃｗ６、ＨＬＡ−Ｃｗ６の群から選択されるＭＨＣクラスＩのＨＬＡ分子に拘束される。
【０１５２】
さらなる実施形態では、１つ以上のサバイビンペプチドまたはサバイビンペプチド改変体は、以下：ＨＬＡ−Ａ１、ＨＬＡ−Ａ２、ＨＬＡ−Ａ３、ＨＬＡ−Ａ９、ＨＬＡ−Ａ１０、ＨＬＡ−Ａ１１、ＨＬＲ−Ａｗ１９、ＨＬＡ−Ａ２３（９）、ＨＬＡ−Ａ２４（９）、ＨＬＡ−Ａ２５（１０）、ＨＬＡ−Ａ２６（１０）、ＨＬＡ−Ａ２８、ＨＬＡ−Ａ２９（ｗ１９）、ＨＬＡ−Ａ３０（ｗ１９）、ＨＬＡ−Ａ３１（ｗ１９）、ＨＬＡ−Ａ３２（ｗ１９）、ＨＬＡ−Ａｗ３３（ｗ１９）、ＨＬＡ−Ａｗ３４（１０）、ＨＬＡ−Ａｗ３６、ＨＬＡ−Ａｗ４３、ＨＬＡ−Ａｗ６６（１０）、ＨＬＡ−Ｗａ６８（２８）、ＨＬＡ−Ａ６９（２８）の群から選択されるＭＨＣクラスＩのＨＬＡ−Ａ分子のうちの少なくとも１つに拘束される。より簡単な表記もこの文献を通じて用いられており、ここでは、例えば、それぞれＨＬＡ−Ａｗ１９およびＨＬＡ−Ａ２４（９）の代わりに、単なる一次の数的な呼称、ＨＬＡ−Ａ１９またはＨＬＡ−Ａ２４が用いられる。特定の実施形態では、１つ以上のサバイビンペプチドまたはサバイビンペプチド改変体は、以下：ＨＬＡ−Ａ１、ＨＬＡ−Ａ２、ＨＬＡ−Ａ３、ＨＬＡ−Ａ１１およびＨＬＡ−Ａ２４からなる群より選択されるＭＨＣクラスＩのＨＬＡ種に拘束される。
【０１５３】
特定の実施形態では、１つ以上のサバイビンペプチドまたはサバイビンペプチド改変体は、ＨＬＡ−Ａ１に拘束される。
【０１５４】
特定の実施形態では、１つ以上のサバイビンペプチドまたはサバイビンペプチド改変体は、以下の群：ＭＡＥＡＧＦＩＨＹ（配列番号１７）（サバイビン３８〜４６Ｙ９、サバイビン３８〜４６であって、位置９において「Ｃ」を「Ｙ」に置換している）、ＰＴＥＮＥＰＤＬＡＹ（配列番号１８）（サバイビン４７〜５６Ｙ１０、サバイビン４７〜５６であって、位置１０において「Ｑ」を「Ｙ」に置換している）、ＱＦＥＥＬＴＬＧＥＦ（配列番号１５）（サバイビン９２〜１０１）、およびＦＴＥＬＴＬＧＥＦ（配列番号１６）（サバイビン９３〜１０１Ｔ２、サバイビン９３〜１０１であって、位置２において「Ｅ」を「Ｔ」に置換している）の群から選択される配列を有するＨＬＡ−Ａ１拘束ペプチドである。このカッコ内の表記は、米国特許第６，２４５，５２３号に開示されるサバイビンタンパク質中の残基の位置およびペプチドのアミノ酸変化を示す。
【０１５５】
特定の実施形態では、１つ以上のサバイビンペプチドまたはサバイビンペプチド改変体は、ＨＬＡ−Ａ２に拘束される。
【０１５６】
さらなる特定の実施形態では、１つ以上のサバイビンペプチドまたはサバイビンペプチド改変体は、以下：ＦＬＫＬＤＲＥＲＡ（サバイビン１０１〜１０９）（配列番号１）、ＴＬＰＰＡＷＱＰＦＬ（サバイビン５〜１４）（配列番号２）、ＥＬＴＬＧＥＦＬＫＬ（サバイビン９５〜１０４）（配列番号３）、ＬＬＬＧＥＦＬＫＬ（サバイビン９６〜１０４Ｌ２、サバイビン９６〜１０４であって、２位置で「Ｔ」の「Ｌ」での置換を有する）（配列番号４）およびＬＭＬＧＥＦＬＫＬサバイビン９６〜１０４Ｍ２（サバイビン９６〜１０４であって、２位置で「Ｔ」の「Ｍ」での置換を有する）（配列番号５）から選択される配列を有するＨＬＡ−Ａ２拘束サバイビン由来ペプチドである。
【０１５７】
１つ以上のサバイビンペプチドまたはサバイビンペプチド改変体はまた、ＨＬＡ−Ａ３拘束されたペプチド、例えば、ＲＩＳＴＦＫＮＷＰＫ（Ｓｕｒ１８Ｋ１０）１０位置で「Ｆ」が「Ｋ」に変化されたサバイビン１８〜２７（配列番号２０）および／またはＨＬＡ−Ａ１１拘束されたペプチド、例えば、ＤＬＡＱＣＦＦＣＦＫ（サバイビン５３−６２）（配列番号１９）、ＤＶＡＱＣＦＦＣＦＫ（Ｓｕｒ５３／Ｖ２）（配列番号４５）、ＤＦＡＱＣＦＦＣＦＫ（Ｓｕｒ５３／Ｆ２）（配列番号４６）、ＤＩＡＱＣＦＦＣＦＫ（Ｓｕｒ５３／１２）（配列番号４７）、および／またはＨＬＡ−Ａ２拘束されたペプチド、例えば、ＲＩＳＴＦＫＮＷＰＦＬ（サバイビン１８−２８）（配列番号２１）、および／またはＨＬＡ−Ａ２４拘束されたペプチド、例えば、ＳＴＦＫＮＷＰＦＬ（Ｓｕｒ２０−２８）（配列番号４１）、または２位置で「Ｔ」が「Ｙ」に変化された：ＳＹＦＫＮＷＰＦＬ（Ｓｕｒ２０−２８／Ｙ２）（配列番号４８）であってもよい。
【０１５８】
なおさらなる実施形態では、１つ以上のサバイビンペプチドまたはサバイビンペプチド改変体は、以下：ＨＬＡ−Ｂ５、ＨＬＡ−Ｂ７，ＨＬＡ−Ｂ８，ＨＬＡ−Ｂ１２、ＨＬＡ−Ｂ１３、ＨＬＡ−Ｂ１４、ＨＬＡ−Ｂ１５、ＨＬＡ−Ｂ１６、ＨＬＡ−Ｂ１７、ＨＬＡ−Ｂ１１８、ＨＬＡ−Ｂ２１、ＨＬＡ−Ｂｗ２２、ＨＬＡ−Ｂ２７、ＨＬＡ−Ｂ３５、ＨＬＡ−Ｂ３７、ＨＬＡ−Ｂ３８、ＨＬＡ−Ｂ３９，ＨＬＡ−Ｂ４０、ＨＬＡ−Ｂｗ４１、ＨＬＡ−Ｂｗ４２、ＨＬＡ−Ｂ４４、ＨＬＡ−Ｂ４５、ＨＬＡ−Ｂｗ４６およびＨＬＡ−Ｂｗ４７のいずれかを含むＭＨＣクラスＩ  ＨＬＡ−Ｂ分子に拘束される。特定の実施形態では、１つ以上のサバイビンペプチドまたはサバイビンペプチド改変体が結合し得るこのＭＨＣクラスＩ  ＨＬＡ−Ｂ種は、以下：ＨＬＡ−Ｂ７、ＨＬＡ−Ｂ８、ＨＬＡ−Ｂ１５、ＨＬＡ−Ｂ２７、ＨＬＡ−Ｂ３５、ＨＬＡ−Ｂ４４、ＨＬＡ−Ｂ５１およびＨＬＡ−Ｂ５８の群から選択される。
【０１５９】
さらに好ましい実施形態では、１つ以上のサバイビンペプチドまたはサバイビンペプチド改変体は、ＨＬＡ−Ｂ７またはＨＬＡ−Ｂ３５に拘束される。
【０１６０】
特定の実施形態では、この１つ以上のサバイビンペプチドまたはサバイビンペプチド改変体は、ＨＬＡ−Ｂ７に拘束される。
【０１６１】
さらなる特異的な実施形態では、１つ以上のサバイビンペプチドまたはサバイビンペプチド改変体は、以下：ＬＰＰＡＷＱＰＦＬ（サバイビン６−１４）（配列番号１０）、ＱＰＦＬＫＤＨＲＩ（サバイビン１１−１９）（配列番号１１）、ＣＰＴＥＮＥＰＤＬ（サバイビン５１−５９）（配列番号６）、ＴＰＥＲＭＡＥＡＧＦ（サバイビン３４−４３）（配列番号１２）、ＡＰＰＡＷＱＰＦＬ（サバイビン６−１４Ａ１）（配列番号１３）、ＲＰＰＡＷＱＰＦＬ（サバイビン６−１４Ｒ１）（配列番号１４）、  ＲＡＩＥＱＬＡＡＭ（Ｓｕｒ１３３−１４１）（配列番号４４）、ＴＡＫＫＶＲＲＡＩ（Ｓｕｒ１２７−１３５）（配列番号４９）、ＲＰＩＥＱＬＡＡＭ（Ｓｕｒ１３３Ｐ２）（配列番号５０）またはＴＰＫＫＶＲＲＡＩ（Ｓｕｒ１２７Ｐ２）（配列番号５１）から選択される配列を有するＨＬＡ−Ｂ７結合サバイビン由来ペプチドである。ＡＰＰＡＷＱＰＦＬ（配列番号１３）は、サバイビン６−１４から、ペプチドの１位置で「Ａ」で「Ｌ」を置換することによって誘導される配列であり、そしてＲＰＰＡＷＱＰＦＬ（配列番号１４）は、サバイビン６−１４から、ペプチドの１位置で「Ｒ」で「Ｌ」を置換することによって誘導される。
【０１６２】
特定の実施形態では、１つ以上のサバイビンペプチドまたはサバイビンペプチド改変体は、ＨＬＡ−Ｂ３５に拘束される。
【０１６３】
さらなる特定の実施形態では、１つ以上のサバイビンペプチドまたはサバイビンペプチド改変体は、以下：ＣＰＴＥＮＥＰＤＬ（サバイビン４６〜５４）（配列番号６）、ＥＰＤＬＡＱＣＦＦ（サバイビン５１〜５９）（配列番号７）、ＣＰＴＥＮＥＰＤＹ（サバイビン４６〜５４Ｙ９）（配列番号８）およびＥＰＤＬＡＱＣＦＹ（サバイビン５１〜５９Ｙ９）（配列番号９）から選択される配列を有するＨＬＡ−Ｂ３５拘束サバイビン由来ペプチドである。このカッコ内の表記は、米国特許第６，２４５，５２３号に開示されるサバイビンタンパク質中の残基の位置を示す。ＣＰＴＥＮＥＰＤＹ（配列番号８）は、ペプチドのＣ末端の「Ｌ」を「Ｙ」で置換することによって、サバイビン４６〜５４から誘導される配列であり、そしてＥＰＤＬＡＱＣＦＹ（配列番号９）は、Ｃ末端の「Ｆ」残基を「Ｙ」で置換することによって、サバイビン５１〜５９から誘導される。
【０１６４】
特定の実施形態では、１つ以上のサバイビンペプチドまたはサバイビンペプチド改変体は、ＨＬＡ−Ｂ５１に拘束される。詳細には、サバイビンペプチドは、ＨＬＡ−Ｂ５１拘束されたサバイビン由来ペプチドであって、配列ＲＡＩＥＱＬＡＡＭ（Ｓｕｒ１３３〜１４１）（配列番号４４）を有する。このペプチドもＨＬＡ−Ｂ７拘束される。
【０１６５】
特定の実施形態では、１つ以上のサバイビンポリペプチドまたはサバイビンペプチド改変体は、ＨＬＡ−Ｂ２７拘束される。
【０１６６】
さらなる特定の実施形態では、１つ以上のサバイビンペプチドまたはサバイビンペプチド改変体は、ＨＬＡ−Ｂ２７拘束されたサバイビン由来ペプチドであって、以下：ＥＲＭＡＥＡＧＦＩ（Ｓｕｒ３６−４４）（配列番号４３）、ＥＲＡＫＮＫＩＡＫ（Ｓｕｒ１０７−１１５）（配列番号５２）、ＤＲＥＲＡＫＮＫＩ（Ｓｕｒ１０５−１１３）（配列番号５３）、ＫＥＦＥＥＴＡＫＫ（Ｓｕｒ１２２−１３０）（配列番号５４）、ＥＲＭＡＥＡＧＦＬ（Ｓｕｒ３６／Ｌ９）（配列番号５５）、ＥＲＭＡＥＡＧＦＦ（Ｓｕｒ３６／Ｆ９）（配列番号５６）、ＥＲＭＡＥＡＧＦＲ（Ｓｕｒ３６／Ｒ９）（配列番号５７）、ＥＲＭＡＥＡＧＦＫ（Ｓｕｒ３６／Ｋ９）（配列番号５８）またはＫＲＦＥＥＴＡＫＫ（Ｓｕｒ１２２／Ｒ２）（配列番号５９）から選択される配列を有する。
【０１６７】
特定の実施形態では、１つ以上のサバイビンペプチドまたはサバイビンペプチド改変体は、ＨＬＡ−Ｂ４４に拘束される。
【０１６８】
さらなる特定の実施形態では、この１つ以上のサバイビンペプチドまたはサバイビンペプチド改変体は、ＨＬＡ−Ｂ４４拘束されたサバイビン由来ペプチドであって、以下：ＫＥＮＴＮＮＫＫＫＥＹ（Ｓｕｒ１１５Ｙ１０）（配列番号４２）、ＫＥＴＮＮＫＫＫＥＦ（Ｓｕｒ１１５〜１２４）（配列番号６０）、ＥＥＬＴＬＧＥＦＬ（Ｓｕｒ９４〜１０２）（配列番号６１）またはＥＥＬＴＬＧＥＦＹ（ＳＵｒ９４Ｙ９）（配列番号６２）から選択される配列を有する。
【０１６９】
特定の実施形態では、１つ以上のサバイビンペプチドまたはサバイビンペプチド改変体は、ＨＬＡ−Ｂ８拘束される。
【０１７０】
さらなる特定の実施形態では、１つ以上のサバイビンペプチドまたはサバイビンペプチド改変体は、ＨＬＡ−Ｂ８拘束されたサバイビン由来ペプチドであって、以下：ＩＳＴＦＫＮＷＰＦＬ（Ｓｕｒ１９−２８）（配列番号６３）、ＩＳＫＦＫＮＷＰＦＬ（Ｓｕｒ１９／Ｋ３）（配列番号６４）、ＬＳＶＫＫＱＦＥＥＬ（Ｓｕｒ８７−９６）（配列番号６５）、ＬＳＫＫＫＱＦＥＥＬ（Ｓｕｒ８７／Ｋ３）（配列番号６６）、ＲＡＫＮＫＩＡＫＥＴ（Ｓｕｒ１０８−１１７）（配列番号６７）、ＲＡＫＮＫＩＡＫＥＬ（Ｓｕｒ１０８／Ｌ１０）（配列番号６８）、ＮＮＫＫＫＥＦＥＥＴ（Ｓｕｒ１１８）（配列番号６９）、ＮＮＫＫＫＥＦＥＥＬ（Ｓｕｒ１１８／Ｌ１０）（配列番号７０）、ＱＰＫＬＫＤＨＲＩ（Ｓｕｒ１１／Ｋ３）（配列番号７１）、ＦＬＫＤＨＲＩＳＴ（Ｓｕｒ１３）（配列番号７２）、ＦＬＫＤＫＲＩＳＴ（Ｓｕｒ１３／Ｋ５）（配列番号７３）、ＦＬＫＤＨＲＩＳＬ（Ｓｕｒ１３／Ｌ９）（配列番号７４）、ＡＦＬＳＶＫＫＱＦ（Ｓｕｒ８５）（配列番号７５）、ＡＦＬＳＶＫＫＱＦ（Ｓｕｒ８５／Ｋ３）（配列番号７６）、ＡＦＬＳＫＫＫＱＦ（Ｓｕｒ８５／Ｋ５）（配列番号７７）、ＡＦＬＳＶＫＫＱＬ（Ｓｕｒ８５／Ｌ９）（配列番号７８）、ＦＬＳＶＫＫＱＦＥ（Ｓｕｒ８６）（配列番号７９）、ＦＬＳＶＫＫＱＦＬ（Ｓｕｒ８６／Ｌ９）（配列番号８０）、ＦＬＫＶＫＫＱＦＥ（Ｓｕｒ８６／Ｋ３）（配列番号８１）、ＳＶＫＫＱＦＥＥＬ（Ｓｕｒ８８）（配列番号８２）、ＳＶＫＫＫＦＥＥＬ（Ｓｕｒ８８／Ｋ５）（配列番号８３）、ＦＬＫＬＫＲＥＲＡ（Ｓｕｒ１０１／Ｋ５）（配列番号８４）、ＦＬＫＬＤＲＥＲＬ（Ｓｕｒ１０１／Ｌ９）（配列番号８５）、ＴＡＫＫＫＲＲＡＩ（Ｓｕｒ１２７／Ｋ５）（配列番号８６）またはＴＡＫＫＶＲＲＡＬ（Ｓｕｒ１２７／Ｌ９）（配列番号８７）、またはＴＡＫＫＶＲＲＡＩ（Ｓｕｒ１２７）（配列番号４９）、ＦＬＫＬＤＲＥＲＡ（Ｓｕｒ１０１）（配列番号１）またはＱＰＦＬＫＤＨＲＩ（Ｓｕｒ１１）（配列番号１１）から選択される配列を有する。
【０１７１】
特定の実施形態では、１つ以上のサバイビンペプチドまたはサバイビンペプチド改変体は、ＨＬＡ−Ｂ１５に拘束される。
【０１７２】
さらなる特定の実施形態では、１つ以上のサバイビンペプチドまたはサバイビンペプチド改変体は、ＨＬＡ−Ｂ１５拘束されたサバイビン由来ペプチドであって、以下：ＴＬＰＰＡＷＱＰＦ（Ｓｕｒ５）（配列番号８８）、ＴＬＰＰＡＷＱＰＹ（Ｓｕｒ５／Ｙ９）（配列番号８９）、ＷＱＰＦＬＫＤＨＲＩ（Ｓｕｒ１０）（配列番号９０）、ＷＱＰＦＬＫＤＨＲＹ（Ｓｕｒ１０／Ｙ９）（配列番号９１）、ＦＬＫＤＨＲＩＳＴＦ（Ｓｕｒ１３）（配列番号９２）、ＦＬＫＤＨＲＩＳＴＹ（Ｓｕｒ１３／Ｙ９）（配列番号９３）、ＲＩＳＴＦＫＮＷＰＦ（Ｓｕｒ１８）（配列番号９４）、ＲＬＳＴＦＫＮＷＰＦ（Ｓｕｒ１８／Ｌ２）（配列番号９５）、ＤＬＡＱＣＦＦＣＦ（Ｓｕｒ５３）（配列番号９６）、ＤＬＡＱＣＦＦＣＹ（Ｓｕｒ５３／Ｙ９）（配列番号９７）、ＩＳＴＦＫＮＷＰＦ（Ｓｕｒ１９）（配列番号９８）、ＩＱＴＦＫＮＷＰＦ（Ｓｕｒ１９／Ｑ２）（配列番号９９）、ＩＬＴＦＫＮＷＰＦ（Ｓｕｒ１９／Ｌ２）（配列番号１００）、ＲＭＡＥＡＧＦＩＹ（Ｓｕｒ３７／Ｙ９）（配列番号１０１）、ＲＭＡＥＡＧＦＩＦ（Ｓｕｒ３７／Ｆ９）（配列番号１０２）、ＲＬＡＥＡＧＦＩＹ（Ｓｕｒ３７／Ｌ２Ｙ９）（配列番号１０３）、ＫＫＨＳＳＧＣＡＦ（Ｓｕｒ７８）（配列番号１０４）、ＫＱＨＳＳＧＣＡＦ（Ｓｕｒ７８／Ｑ２）（配列番号１０５）、ＫＬＨＳＳＧＣＡＦ（Ｓｕｒ７８／Ｌ２）（配列番号１０６）、ＲＡＩＥＱＬＡＡＹ（Ｓｕｒ１３３／Ｙ９）（配列番号１０７）またはＲＬＩＥＱＬＡＡＭ（Ｓｕｒ１３３／Ｌ２）（配列番号１０８）またはＲＡＩＥＱＬＡＡＭ（Ｓｕｒ１３３）（配列番号４４）から選択される配列を有する。
【０１７３】
特定の実施形態では、１つ以上のサバイビンペプチドまたはサバイビンペプチド改変体は、ＨＬＡ−Ｂ５８拘束される。
【０１７４】
さらなる特定の実施形態では、１つ以上のサバイビンペプチドまたはサバイビンペプチド改変体は、ＨＬＡ−Ｂ５８拘束されたサバイビン由来ペプチドであって、以下：ＰＴＬＰＰＡＷＱＰＦ  Ｓｕｒ５（配列番号１０９）、ＣＴＰＥＲＭＡＥＡＧＦ（Ｓｕｒ３３）（配列番号１１０）、ＥＴＮＮＫＫＫＥＦ（Ｓｕｒ１１６）（配列番号１１１）、ＩＳＴＦＫＮＷＰＦ（Ｓｕｒ１９）（配列番号９８）、ＧＡＰＴＬＰＰＡＷ（Ｓｕｒ２）（配列番号１１２）またはＣＡＦＬＳＶＫＫＱＦ（Ｓｕｒ８４）（配列番号１１３）から選択される配列を有する。
【０１７５】
さらなる有用な実施形態では、１つ以上のサバイビンペプチドまたはサバイビンペプチド改変体は、以下の群：ＨＬＡ−Ｃｗ１、ＨＬＡ−Ｃｗ２、ＨＬＡ−Ｃｗ３、ＨＬＡ−Ｃｗ４、ＨＬＡ−Ｃｗ５、ＨＬＡ−Ｃｗ６、ＨＬＡ−Ｃｗ７、およびＨＬＡ−Ｃｗ１６から選択されるＭＨＣクラスＩ  ＨＬＡ−Ｃ分子に拘束されるペプチドである。
【０１７６】
さらに、本発明のペプチドの翻訳後改変を行うことが有利であり得る。
【０１７７】
従って、ある実施形態では、１つ以上のサバイビンペプチドまたはサバイビンペプチド改変体は、１つ以上の翻訳後改変を含むペプチドである。
【０１７８】
このペプチドは、任意のタイプの改変を含んでもよい。ほぼ２００の構造的に別個の共有結合修飾が今までに同定されており、これは、サイズおよび複雑性が、複数の複雑なオリゴ糖の吸着に対する、カルボン酸へのアミドの変換におよんでいる。このような改変としては、リン酸化、アセチル化、ユビキチン化、脂質化（アセチル化、プレニル化、ファルネシル化、ゲラニル化、パルミトイル化、ミリストイル化）、メチル化、カルボキシル化、硫化およびＯ−グリコシル化またはＮ−グリコシル化が挙げられる。
【０１７９】
アドリアマイシン（Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ）、タキソール（Ｔａｘｏｌ）またはＵＶＢを含む抗癌剤に対する乳癌ＭＣＦ−７または子宮頸癌ＨｅＬａ細胞の曝露は、サバイビン発現の４〜５倍の増大を生じたことが示されている。抗癌処置後のサバイビンレベルの変化は、サバイビンｍＲＮＡ発現の調節には関与せず、そして新規な遺伝子転写とは独立していた。逆に、サイクリン依存性キナーゼインヒビターであるフラボピリドールによるＴｈｒ３４に対するサバイビンリン酸化の阻害によって、サバイビン発現の損失が生じ、そして、リン酸化不能なサバイビンＴｈｒ３４からＡｌａ変異体によって、野性型サバイビンと比較してクリアランスの加速が示された。Ｔｈｒ３４に対するサバイビンリン酸化の連続的なアブレーションによって、抗癌剤によって誘発される腫瘍細胞アポトーシスはｐ５３と独立して増強され、そして腫瘍増殖は、インビボにおける乳癌異種移植片モデルにおいて毒性なしに抑制された。これらのデータによって、Ｔｈｒ３４リン酸化は、腫瘍細胞におけるサバイビンレベルを決定的に調節すること、そしてｐ３４キナーゼ活性の連続的なアブレーションは、サバイビンの存続度のチエックポイントを除去し得、腫瘍細胞におけるアポトーシスを増強し得るということが示唆される。
【０１８０】
従って、本発明のサバイビンおよびサバイビン由来ペプチドは、リン酸化ペプチドを包含することが意図される。天然のサバイビンリンペプチド抗原は、リン酸化部位Ｔｈｒ３４の周囲のＭＨＣペプチド結合モチーフの存在についてスキャンするとによって特定され得る。従って、可能性のあるサバイビン由来リンペプチド配列は、ＴＰＥＲＭＡＥＡＧＦ（配列番号１１４）、推定のＨＬＡ−Ｂ３５−および／またはＨＬＡ−Ｂ７−および／またはＨＬＡ−Ｂ５１拘束ペプチド抗原を含む。本明細書において包含されるさらなる天然のリンペプチドとしては、ＨＬＡ−Ａ２：ＣＡＣＴＰＥＲＭＡ（配列番号１１５）、およびＣＴＰＥＲＭＡＥＡ（配列番号１１６）；ＨＬＡ−Ａ３：ＦＬＥＧＣＡＣＴＰ（配列番号１１７）；ＨＬＡ−Ｂ７／ＨＬＡ−Ｂ３５／ＨＬＡ−Ｂ５１：ＷＰＦＬＥＧＣＡＣＴ（配列番号１１８）（リン酸化されたＴｈｒ残基は太字で記す）が挙げられる。
【０１８１】
異なるＨＬＡ分子は、主なヒト集団において異なる普及率であることが周知である。従って、本発明の方法に従って処置され得る患者コホートを拡大するには、いくつかのＨＬＡクラスＩ分子に拘束されたペプチドエピトープを特定することが必要である。異なるＨＬＡ拘束エレメントを有する複数のサバイビンエピトープの特徴付けによって、この標的抗原の臨床的な能力が２つの重要な方法で広げられる：（ｉ）これは、サバイビン由来ペプチドに基づいて免疫療法に適格な患者の数を増大する。ＨＬＡ−Ａ２抗原は、白人集団およびアジア人集団の約５０％で発現され、ＨＬＡ−Ａ１およびＨＬＡ−Ａ３抗原は両方とも、白人の約２５％およびアジア人の約５％で発現されるが、ＨＬＡ−Ａ１１抗原は白人の約１５％およびアジア人の約３０％で発現される。これらの数は、同時発現のせいでまとめられないにもかかわらず、これらの多重度によって拘束されるペプチドの組み合わせは、ほとんどのガン患者を確実に包含し、（ｉｉ）各々の患者におけるいくつかの拘束エレメントの集団的な標的化は、ＨＬＡ対立遺伝子損失による免疫回避のリスクを減少させる可能性が高い。単一のＨＬＡ対立遺伝子の損失は、ガン細胞について記載されたＭＨＣ変更の大きな成分であるが、クラスＩ発現の総損失は、むしろまれな事象である。従って、異なるＨＬＡ対立遺伝子に拘束されたサバイビンエピトープの同定を考慮すれば、今や、対立遺伝子の重複のある患者において２つ以上のＨＬＡ−分子を同時に標的することが可能である。
【０１８２】
ワクチン組成物における使用のための多くの可能性のあるペプチドが予測され得るが、有用な応答を得ることができるペプチドおよびワクチン組成物の現実的な特定には、複数のパラメーターの試験が必要である。本発明は、特に有効であるワクチン組成物を記載する。本発明によるワクチン組成物としては、サバイビンペプチドおよびサバイビンペプチド改変体が挙げられる。
【０１８３】
現在好ましいマルチエピトープのワクチンの例としては、所定の患者の組織タイプに依存するサバイビン由来ペプチドエピトープの「テイラー・メード（ｔａｉｌｏｒ  ｍａｄｅ）」の組み合わせが挙げられ、例えば、ＨＬＡ−１、ＨＬＡ−Ａ２、ＨＬＡ−Ａ３およびＨＬＡ−Ｂ３５の表現型を担持する被験体は、以下のペプチドを含むワクチンでワクチン接種され得る、ＥＬＴＬＧＥＦＬＫＬ（サバイビン９５〜１０４）（配列番号３）、ＬＭＬＧＥＦＬＫＬ（サバイビン９５〜１０４Ｍ２（（配列番号５）、ＣＰＴＥＮＥＰＤＹ（サバイビン４６〜５４Ｙ９）（配列番号８）およびＥＰＤＬＡＱＣＦＹ（サバイビン５１〜５９Ｙ９）（配列番号９）、および／またはＲＩＳＴＦＫＮＷＰＫ（Ｓｕｒ１８Ｋ１０）（配列番号２０）。
【０１８４】
あるいは、エピトープは、所定の集団における種々のＨＬＡ表現型の普及率に基づいて選択され得る。例として、ＨＬＡ−Ａ２は、白人集団では最も優勢な表現型であり、従って、ＨＬＡ−Ａ２に結合するペプチドは、その集団の大きい割合で活性である。
【０１８５】
しかし、本発明に従うワクチン組成物はまた、標的集団のより大きい割合をカバーするために、各々が異なるＨＬＡ分子と特異的に相互作用する２つ以上のサバイビンペプチドまたはサバイビンペプチド改変体の組み合わせを含んでもよい。従って、例えば、ワクチン組成物は、ＨＬＡ−Ａ分子に拘束されたペプチドおよびＨＬＡ−Ｂ分子に拘束されたペプチドの組み合わせを含んでもよく、例えば、これには、標的集団におけるＨＬＡ表現型の普及率に相当するＨＬＡ−ＡおよびＨＬＡ−Ｂ分子、例えば、ＨＬＡ−Ａ２およびＨＬＡ−Ｂ３５などが挙げられる。さらに、ワクチン組成物は、ＨＬＡ−Ｃ分子に拘束されたペプチドを含んでもよい。本発明に従う他の組み合わせとしては、ＨＬＡ−Ａ１およびＨＬＡ−Ａ２に拘束されたペプチド、またはＨＬＡ−Ａ１およびＨＬＡ−Ｂ３５に拘束されたペプチドが挙げられる。さらに、ＨＬＡ−Ａ１、ＨＬＡ−Ａ２およびＨＬＡ−Ｂ３５に拘束されたペプチドの組み合わせのような、異なる特異性を有する３つのペプチドが用いられてもよい。
【０１８６】
１つのＨＬＡ−Ｂ７拘束ペプチドまたは２つのペプチド、例えば、ＨＬＡ−Ａ１およびＨＬＡ  Ａ２結合ペプチド、または例えば、ＨＬＡ−Ａ１およびＨＬＡ−Ｂ３５結合ペプチドを、ワクチン組成物中に含むことが有利であり得る。
【０１８７】
本発明のある局面は、ＨＬＡ−Ｂ７拘束ペプチド、例えば、ＬＰＰＡＷＱＰＦＬ（サバイビン６〜１４）（配列番号１０）、ＱＰＦＬＫＤＨＲＩ（サバイビン１１〜１９）（配列番号１１）、ＣＰＴＥＮＥＰＤＬ（サバイビン５１〜５９）（配列番号６）、ＴＰＥＲＭＡＥＡＧＦ（サバイビン３４〜４３）（配列番号１２）、ＡＰＰＡＷＱＰＦＬ（サバイビン６〜１４Ａ１）（配列番号１３）、またはＲＰＰＡＷＱＰＦＬ（サバイビン６〜１４Ｒ１）（配列番号１４）に関する。
【０１８８】
１実施形態では、ＨＬＡ−Ｂ７拘束ペプチドは、ＡＰＰＡＷＱＰＦＬ（サバイビン６〜１４Ａ１）（配列番号１３）、またはＲＰＰＡＷＱＰＦＬ（サバイビン６〜１４Ｒ１）（配列番号１４）である。特定の実施形態では、ＨＬＡ−Ｂ７拘束ペプチドは、ＡＰＰＡＷＱＰＦＬ（サバイビン６〜１４Ａ１）（配列番号１３）であり、異なる特定の実施形態では、ＨＬＡ−Ｂ７拘束ペプチドは、ＲＰＰＡＷＱＰＦＬ（サバイビン６〜１４Ｒ１）（配列番号１４）である。
【０１８９】
本発明のある局面は、１つ以上のサバイビンペプチドまたはペプチド改変体を含むワクチン組成物であって、このペプチド改変体の配列がその全長にわたって、配列番号２３の連続的アミノ酸配列と少なくとも８５％同一であり、そしてこの組成物が、
ｉ．ＨＬＡ−Ｂ７結合ペプチド、および／または
ＨＬＡ−Ａ１およびＨＬＡ−Ａ２拘束ペプチド、および／または
ＨＬＡ−Ａ１およびＨＬＡ−Ｂ３５拘束ペプチド
ｉｉ．ならびに上述される任意のアジュバント、例えばＭｏｎｔａｎｉｄｅ  ＩＳＡ５１を含むワクチン組成物に関する。
【０１９０】
特定の好ましい実施形態では、このワクチン組成物は、
ｉ．ＡＰＰＡＷＱＰＦＬ（配列番号１３）を含み、かつ多くとも１５、好ましくは１０アミノ酸からなるペプチド、
ならびに／または
ＲＰＰＡＷＱＰＦＬ（配列番号１４）を含み、かつ多くとも１５、好ましくは１０アミノ酸からなるペプチド、
ならびに／または
ＦＴＥＬＴＬＧＥＦ（配列番号１６）を含み、かつ多くとも１５、好ましくは１０アミノ酸からなるペプチド、およびＬＭＬＧＥＦＬＫＬ（配列番号５）を含むペプチドおよび、かつ多くとも１５、好ましくは１０アミノ酸からなるペプチド、
ならびに／または
ＦＴＥＬＴＬＧＥＦ（配列番号１６）を含み、かつ多くとも１５、好ましくは１０アミノ酸からなるペプチド、およびＥＰＤＬＡＱＣＦＹ（配列番号９）を含み、かつ多くとも１５、好ましくは１０アミノ酸からなるペプチド、
ならびに／または
ＬＭＬＧＥＦＬＫＬ（配列番号５）を含み、かつ多くとも１５、好ましくは１０アミノ酸からなるペプチド、およびＥＰＤＬＡＱＣＦＹ（配列番号９）を含み、かつ多くとも１５、好ましくは１０アミノ酸からなるペプチドと、
ｉｉ．上述の任意のアジュバント、例えば、Ｍｏｎｔａｎｉｄｅ  ＩＳＡ  ５１と、を含む。
【０１９１】
これは、ワクチン組成物が３つ以上のサバイビンペプチドまたはサバイビンペプチド改変体を含む効率を、そして詳細には、このペプチドが異なるＨＬＡ分子に拘束される場合、さらに改善し得る。
【０１９２】
ある実施形態では、このワクチン組成物は、
ａ）３つ以上のサバイビンペプチドまたはサバイビンペプチド改変体であって、このペプチド改変体の配列が、その全長にわたって、配列番号２３の連続的アミノ酸配列と少なくとも８５％同一であり、
ｉ．少なくとも１つのペプチドまたはペプチド改変体がＨＬＡ−Ａ１結合ペプチドの群から選択され、
ｉｉ．少なくとも１つのペプチドまたはペプチド改変体がＨＬＡ−Ａ２結合ペプチドの群から選択され、
ｉｉｉ．少なくとも１つのペプチドまたはペプチド改変体がＨＬＡ−Ｂ３５結合ペプチドの群から選択される、
サバイビンペプチドまたはサバイビンペプチド改変体と、
ｂ）上記の任意のアジュバント、例えば、Ｍｏｎｔａｎｉｄｅ  ＩＳＡ５１と、
を含む。
【０１９３】
ある実施形態では、ＨＬＡ−Ａ１結合ペプチド、ＨＬＡ−Ａ２結合ペプチドおよび／またはＨＬＡ−Ｂ３５結合ペプチドは、好ましくは、多くとも、１５、例えば、多くとも１４、１３、１２、１１そして最も好ましくは多くとも１０のアミノ酸からなる。
【０１９４】
特定の実施形態では、このワクチン組成物は、ＨＬＡ−Ａ１拘束ペプチドＦＴＥＬＴＬＧＥＦ（配列番号１６）を含む。第二の特定の実施形態では、このワクチン組成物は、ＨＬＡ−Ａ２結合ペプチドＬＭＬＧＥＦＬＫＬ（配列番号５）を含み、そして第三の特異的な実施形態では、このワクチン組成物は、ＨＬＡ−Ｂ３５結合ペプチドＥＰＤＬＡＱＣＦＹ（配列番号９）を含む。
【０１９５】
最も特別な実施形態では、このワクチン組成物は、ＨＬＡ−Ａ１拘束ペプチドＦＴＥＬＴＬＧＥＦ（配列番号１６）、ＨＬＡ−Ａ２結合ペプチドＬＭＬＧＥＦＬＫＬ（配列番号５）およびＨＬＡ−Ｂ３５結合ペプチドＥＰＤＬＡＱＣＦＹ（配列番号９）を含む。
【０１９６】
ある実施形態では、本明細書において上述されるようなＨＬＡ−Ａ１結合ペプチド、ＨＬＡ−Ａ２結合ペプチドおよび／またはＨＬＡ−Ｂ３５結合ペプチドは好ましくは、多くとも、１５、例えば、多くとも１４、１３、１２、１１そして最も好ましくは多くとも１０のアミノ酸からなる。
【０１９７】
これは、ワクチン組成物が７つ以上のサバイビンペプチドまたはサバイビンペプチド改変体を含む効率を、そして詳細には、このペプチドが異なるＨＬＡ分子に拘束される場合、さらに改善し得る。
【０１９８】
ある実施形態では、このワクチン組成物は、
ａ）７つ以上のサバイビンペプチドまたはサバイビンペプチド改変体であって、このペプチド改変体の配列が、その全長にわたって、配列番号２３の連続的アミノ酸配列と少なくとも８５％同一であり、
ｖｉｉｉ．少なくとも１つのペプチドまたはペプチド改変体がＨＬＡ−Ａ１結合ペプチドの群から選択され、
ｉｘ．少なくとも１つのペプチドまたはペプチド改変体がＨＬＡ−Ａ２結合ペプチドの群から選択され、
ｘ．少なくとも１つのペプチドまたはペプチド改変体がＨＬＡ−Ａ３結合ペプチドの群から選択され、
ｘｉ．少なくとも１つのペプチドまたはペプチド改変体がＨＬＡ−Ａ２４結合ペプチドの群から選択され、
ｘｉｉ．少なくとも１つのペプチドまたはペプチド改変体がＨＬＡ−Ａ１１結合ペプチドの群から選択され、
ｘｉｉｉ．少なくとも１つのペプチドまたはペプチド改変体がＨＬＡ−Ｂ３５結合ペプチドの群から選択され、
ｘｉｖ．少なくとも１つのペプチドまたはペプチド改変体がＨＬＡ−Ｂ７結合ペプチドの群から選択される、
サバイビンペプチドまたはサバイビンペプチド改変体と
ｂ）上述の任意のアジュバント、例えば、Ｍｏｎｔａｎｉｄｅ  ＩＳＡ  ５１と、
を含む。
【０１９９】
ある実施形態では、本明細書において上述されるようなＨＬＡ−Ａ１、ＨＬＡ−Ａ２、ＨＬＡ−Ａ３、ＨＬＡ−Ａ２４、ＨＬＡ−１１、ＨＬＡ−Ｂ３５および／またはＨＬＡ−Ｂ７結合ペプチドは好ましくは、多くとも、１５、例えば、多くとも１４、１３、１２、１１そして最も好ましくは多くとも１０のアミノ酸からなる。
【０２００】
好ましい実施形態では、このワクチン組成物は、ＨＬＡ−Ａ１結合ペプチドＦＴＥＬＴＬＧＥＦ（配列番号１６）、ＨＬＡ−Ａ２結合ペプチドＬＭＬＧＥＦＬＫＬ（配列番号５）、ＨＬＡ−Ａ３結合ペプチドＲＩＳＴＦＫＮＷＰＫ（配列番号２０）、ＨＬＡ−Ａ２４結合ペプチドＳＴＦＫＮＷＰＦＬ（配列番号４１）、ＨＬＡ−Ａ１１結合ペプチドＤＬＡＱＣＦＦＣＦＫ（配列番号１９）、ＨＬＡ−Ｂ３５結合ペプチドＥＰＤＬＡＱＣＦＹ（配列番号９）、およびＨＬＡ−Ｂ７結合ペプチドＬＰＰＡＷＱＰＦＬ（配列番号１０）およびアジュバント、例えばＭｏｎｔａｎｉｄｅ  ＩＳＡ５１を含む。
【０２０１】
さらなる好ましい実施形態では、このワクチン組成物はさらに、
ｉ．ＨＬＡ−Ｂ４４結合ペプチドの群から選択される少なくとも１つのペプチドまたはペプチド改変体、および／または
ｉｉ．ＨＬＡ−Ｂ２７結合ペプチドの群から選択される少なくとも１つのペプチドまたはペプチド改変体、および／または
ｉｉｉ．ＨＬＡ−Ｂ５１結合ペプチドの群から選択される少なくとも１つのペプチドまたはペプチド改変体、を含む。
【０２０２】
特に好ましい実施形態では、このワクチン組成物は、ＨＬＡ−Ａ１結合ペプチドＦＴＥＬＴＬＧＥＦ（配列番号１６）、ＨＬＡ−Ａ２結合ペプチドＬＭＬＧＥＦＬＫＬ（配列番号５）、ＨＬＡ−Ａ３結合ペプチドＲＩＳＴＦＫＮＷＰＫ（配列番号２０）、ＨＬＡ−Ａ２４結合ペプチドＳＴＦＫＮＷＰＦＬ（配列番号４１）、ＨＬＡ−Ａ１１結合ペプチドＤＬＡＱＣＦＦＣＦＫ（配列番号１９）、ＨＬＡ−Ｂ３５結合ペプチドＥＰＤＬＡＱＣＦＹ（配列番号９）、およびＨＬＡ−Ｂ７結合ペプチドＬＰＰＡＷＱＰＦＬ（配列番号１０）およびＭｏｎｔａｎｉｄｅ  ＩＳＡ５１のようなアジュバントを含み、そして１つ以上のＨＬＡ−Ｂ４４結合ペプチドは、ＫＥＴＮＮＫＫＫＥＹ（配列番号４２）であり、ＨＬＡ−Ｂ２７結合ペプチドがＥＲＭＡＥＡＧＦＩ（配列番号４３）であり、そしてＨＬＡ−Ｂ５１結合ペプチドがＲＡＩＥＱＬＡＡＭ（配列番号４４）である。
【０２０３】
上記の任意の実施形態では、ＨＬＡ−Ａ１１結合ペプチドは、ＤＬＡＱＣＦＦＣＦＫ（配列番号１９）、ＤＶＡＱＣＦＦＣＦＫ（配列番号４５）、ＤＦＡＱＣＦＦＣＦＫ（配列番号４６）またはＤＩＡＱＣＦＦＣＦＫ（配列番号４７）からなる群より選択されてもよい。
【０２０４】
上記の任意の実施形態では、最大１３、例えば、１２、例えば、１１または好ましくは１０または９を掛けたペプチドの数がワクチンを構成するアミノ酸の最大数であることが好ましい。例えば、ワクチンが５つのペプチドを含むならば、ワクチンは多くとも６５、例えば、６０、例えば、５５、例えば５０または４５のアミノ酸から構成されることが好ましい。
【０２０５】
本発明に従うワクチン組成物における使用のためのサバイビンまたはサバイビンペプチド改変体を選択するためには、このサバイビンペプチドおよびペプチド改変体がＨＬＡクラス１分子に結合する能力が上昇され得る。さらに、このサバイビンペプチドおよびペプチド改変体がガン患者のＰＢＬ集団においてＩＦＮ−γ産生細胞を惹起する能力が上昇され得る。
【０２０６】
これらの測定値は、ワクチン組成物における使用のためのサバイビンペプチドまたはサバイビンペプチド改変体の有用性の指標を与え得るが、サバイビンペプチドまたはサバイビンペプチド改変体を含むワクチン組成物は、投与の際に、ガン患者で強力かつ特異的なＴ細胞応答を誘導し得ることが好ましい。ワクチン組成物の投与は、標的病変の評価に関する節で記載されたように特徴付けられる臨床反応を誘導することがさらに好ましい。この臨床反応は、少なくとも安定な疾患（標的病変の最長の直径の合計の多くとも２０％の増大）、より好ましくは、標的病変の最長の直径の合計の減少、例えば、部分的な応答または、最も好ましくは完全寛解として特徴付けられ得る。
【０２０７】
このワクチン組成物は、１つ以上のサバイビンペプチド（単数または複数）またはペプチド改変体（単数または複数）を含み、この１つ以上のサバイビンペプチド（単数または複数）またはペプチド改変体（単数または複数）は、ＨＬＡクラスＩ分子に拘束され、拘束されたペプチドまたはペプチド改変体は、以下の特徴；
（ｉ）ＷＯ２００４／０６７０２３に記載されるようなアセンブリ結合アッセイによって決定した場合多くとも５０μＭである、クラスＩ  ＨＬＡ分子の最大半減回復し得るペプチドの量（Ｃ５０値）によって測定した親和性で、クラスＩのＨＬＡ分子に結合し得る、
（ｉｉ）ＥＬＩＳＰＯＴアッセイによって決定した場合、１０４個のＰＢＬあたり少なくとも１つの頻度でガン患者のＰＢＬ集団中でＩＦＮ−γ産生細胞を惹起し得る、
のうちの少なくとも１つを有することによって特徴付けられる。
【０２０８】
このアセンブリ結合アッセイによって、候補ペプチドが上記の親和性で所定のＨＬＡ対立遺伝子分子に結合する能力についてそれらの候補ペプチドをスクリーニングする簡単な方法が得られる。好ましい実施形態では、１つ以上のサバイビンペプチドまたはサバイビンペプチド改変体は、多くとも３０μＭ、例えば、多くとも２０μＭであって、例えば、多くとも１０μＭ、多くとも５μＭそして多くとも２μＭまたは多くとも１μＭを含む、Ｃ５０値を有する。選択されたペプチドのＣ５０値は、ＷＯ２００４／０６７０２３において表４に示される。
【０２０９】
本発明に従うワクチン組成物における使用のための１つ以上のサバイビンペプチドまたはサバイビンペプチド改変体の特徴は、ＩＦＮ−γ産生応答者Ｔ細胞、すなわち、ガン患者のＰＢＬ集団または腫瘍細胞（標的細胞）において特定のペプチドを特異的に認識する細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）を認識するかまたは惹起する能力である。この活性は、患者由来のＰＢＬまたは腫瘍細胞を、ＷＯ２００４／０６７０２３およびその引用文献に記載されるように、ＥＬＩＳＰＯＴアッセイに供することによって容易に決定される。アッセイの前に、細胞と試験されるべきペプチドとを接触させることによって、アッセイされるべきＰＢＬ集団または腫瘍細胞を刺激することが有利であり得る。好ましくは、このペプチドは、本明細書で用いられるようなＥＬＩＳＰＯＴアッセイによって決定される場合、１０４個のＰＢＬあたり少なくとも１つの頻度でＩＦＮ−γ産生Ｔ細胞を惹起するか認識し得る。より好ましくは、この頻度は、１０４個のＰＢＬあたり少なくとも５つ、最も好ましくは１０４個のＰＢＬあたり少なくとも１０個、例えば、１０４個のＰＢＬあたり少なくとも５０または１００個である。特に好ましい実施形態では、この頻度は、１０４個のＰＢＬあたり少なくとも２００個、または例えば、１０４個のＰＢＬあたり２５０個である。
【０２１０】
ＭＡＲＴ−１およびｇｐ１００ペプチドのような、黒色腫特異的な抗原に対する応答でのＩＦＮ−γ産生は、示されたペプチドを用いるガン患者のワクチン接種に対して実証されている。しかし、臨床反応との有意な関係は実証されなかった（Ｈｅｒｓｅｙ，Ｐら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．２００４，Ｓｅｐ．２１）。
【０２１１】
従って、推定の免疫原の同定後、インビボにおいて機能を評価することが好ましい。１つ以上のサバイビンペプチド（単数または複数）またはペプチド改変体（単数または複数）を含むワクチン組成物は、極めて強力な免疫学的応答、例えば、ワクチン接種の前後に、ＩＦＮ−γについてのＥＬＩＳＰＯＴアッセイによって測定した場合、極めて強力かつ特異的な細胞傷害性Ｔ細胞応答の誘導を惹起し得ることが極めて好ましい。このようなアッセイは、例えば、実施例１に記載のようなＥＬＩＳＰＯＴアッセイによって、ワクチン組成物において用いられる免疫原に対する反応性について、ワクチン組成物の投与の前後に得られたＰＢＭＣを分析することによって、患者での細胞傷害性Ｔ細胞応答を試験する工程を包含する。
【０２１２】
ワクチン組成物中の樹状細胞の使用は、オイルベースのアジュバントに比較して、先行技術では、より高い有効性を生じている（Ｓｃｈｒｅｕｒｓ  ＭＷら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２０００  Ｄｅｃ  １５；６０（２４）：６９９５〜７００１）。従って樹状細胞が現在、好ましいアジュバントである。
【０２１３】
実施例１に記載された臨床的なトライアル手順の驚くべき結果によって、本発明に従うワクチン組成物の投与は、特定のＩＦＮ−γ放出細胞を驚くほど多数誘導し得ることが示された。
【０２１４】
本発明に従うワクチン組成物の投与は、ＩＦＮ−γ放出細胞の数で測定した場合、被験体において強力かつ特異的なＴ細胞応答、すなわち、１０４個のＰＢＭＣ細胞あたり５０個より多い、または例えば、１０４個のＰＢＭＣ細胞あたり１０個より多い、または例えば、１０４個のＰＢＭＣ細胞あたり１５０個より多い、または例えば、１０４個のＰＢＭＣ細胞あたり２００個より多い、Ｔ細胞応答を誘導し得ることが好ましい。ＩＦＮ−γ放出細胞の数によって測定した場合特定のＴ細胞応答は、１０４個のＰＢＭＣ細胞あたり２５０個より多いことが最も好ましい。
【０２１５】
ＥＬＩＳＰＯＴアッセイによって測定した場合の特異的なＴ細胞応答は、使用される投与スキーム、例えば、ワクチン接種の回数およびワクチン組成物の投与のタイミングに依存し得る（処置に関する説明を参照のこと）。ある実施形態では、強力かつ特異的な細胞傷害性Ｔ細胞応答は、１２ヶ月後、または例えば、１０ヵ月後、８ヵ月後などに検出され得る。好ましい実施形態では、この特異的な細胞傷害性Ｔ細胞応答は、６ヵ月後に検出され得る。さらに最も好ましい実施形態では、この特異的な細胞傷害性Ｔ細胞応答は、４ヶ月または３ヶ月後に検出され得る。
【０２１６】
これは、ペプチドの抗血管形成効果を評価することにさらに関連し得る。なぜなら、血管形成の阻害は、固形腫瘍の発症に対して促進性の効果を有するからである。
【０２１７】
潜在的な抗血管形成効果の指標は、抗原特異的なＴ細胞での腫瘍間質の浸潤である。腫瘍間質における抗原特異的Ｔ細胞の存在は、実施例２に記載されるような組織染色の方法を用いて試験され得、これによって抗原特異的なＴ細胞はガン患者の腫瘍病変においてインサイチュで、多量体化されたペプチド／ＨＬＡ複合体を用いて検出される。抗原特異的Ｔ細胞は、本発明によるサバイビンペプチドまたはサバイビンペプチド改変体を、好ましくは、ＨＬＡクラス１分子との複合体で認識し得る。
【０２１８】
本発明に従うワクチン組成物の投与は、腫瘍間質におけるサバイビン特異的なＴ細胞のような、腫瘍間質における抗原特異的Ｔ細胞の浸潤を誘導し得ることが好ましい。
【０２１９】
ワクチン組成物の評価はさらに、投与の際の臨床反応を誘発するのにおいてワクチン組成物の能力を検査する工程を包含する。ガンの処置に関して、臨床反応は、標的病変の評価に関して以下の節に記載されるように、Ｒｅｓｐｏｎｓｅ  Ｅｖａｌｕｔｉｏｎ  Ｃｒｉｔｅｒｉａ  ｉｎ  Ｓｏｌｉｄ  Ｔｕｍｏｒｓ（ＲＥＣＩＳＴ）を用いて測定され得る。
【０２２０】
ある実施形態では、本発明に従うワクチン組成物は、標的病変の最長の直径の合計の多くとも２０％の増大によって特徴付けられる、安定な疾患、部分的な応答または完全な退行（完全寛解）と呼ばれる、臨床反応を惹起し得る。
【０２２１】
従って、本発明に従うワクチン組成物における潜在的な使用のペプチド改変体を同定するための単純なアプローチは、以下の工程：特定のＨＬＡ分子、例えば、所定の集団において高率で存在するものを選択する工程と、サバイビンタンパク質における「アンカー残基モチーフ（ａｎｃｈｏｒ  ｒｅｓｉｄｕｅ  ｍｏｔｉｆｓ）」を特定するために上記のようなアラインメント分析を行う工程と、この特定されたアンカー残基のうちの１つ以上を含む安定なサイズのペプチドを単離するかまたは構築する工程と、（ｉ）本明細書に記載されるようなアセンブリアッセイを用いて特定のＨＬＡ分子に対して結合する能力、および／または（ｉｉ）ＷＯ２００４／０６７０２３において記載されるようにＥＬＩＳＰＯＴアッセイによって決定した場合、１０４個のＰＢＬあたり少なくとも１つの頻度でガン患者由来のＰＢＬ集団中でＩＦＮ−γ産生細胞を惹起するペプチドの能力、についてこの得られたペプチドを試験する工程と、を包含する。
【０２２２】
この特定されたペプチドまたはペプチド改変体が、本発明に従うワクチン組成物において有用であるか否かを確認するために、このペプチドを含むワクチン組成物の能力、免疫学的応答、例えば、強力かつ特異的な細胞傷害性Ｔ細胞応答の誘導を惹起する能力は、ワクチン接種の前後にＩＦＮ−γについてのＥＬＩＳＰＯＴアッセイによって測定され得る（本明細書において実施例１に記載されるように）。
【０２２３】
ＷＯ２００４／０６７０２３では、ＨＬＡ／ペプチド複合体によって単離されたサバイビン反応性細胞は、標的細胞を溶解する機能的能力を保有することが示された。サバイビンペプチドおよびサバイビンペプチド改変体を用いる樹状細胞ワクチンが、ガン細胞株において、およびガン患者由来のＰＢＬ集団において弱い免疫応答を惹起し得るが、ガン患者における臨床反応は、進行性疾患が報告されたようにそれほどでもないことがさらに実証された。
【０２２４】
特異的な免疫応答は、集団中のＰＢＭＣの総数またはＣＤ８＋細胞の数に対して評価され得る。後者の評価の参照は、ＷＯ２００４／０６７０２３におい用いられたが、ここで記載された結果は、ＰＢＭ細胞の総数の参照を使用している。ＷＯ２００４／０６７０２３の図１７で記載された結果が、同じ参照を用いていた場合、反応性細胞の数は、１０４個のＰＢＭＣ細胞あたり８〜３０個である。
【０２２５】
免疫応答の強度は、潜在的な免疫原の評価において重要なパラメーターであるので、この分析は、ワクチン組成物を評価するのにおける強力なツールである。本発明によれば、ガン患者への投与の際の強力かつ特異的なＴ細胞応答を刺激する能力は、重要な特徴である。この応答は、ワクチン組成物での免疫の前後にＰＢＭＣの集団におけるＩＦＮ−γ産生細胞の数によって測定され得る。本発明のある実施形態では、このワクチン組成物は、ガン患者における強力かつ特異的なＴ細胞応答を刺激し得、投与後のＥＬＩＳＰＯＴアッセイによって測定された強力なＴ細胞応答は、１０４個のＰＢＭＣ細胞あたり、５０個より多い、例えば１００より多い、例えば、１５０より多い、例えば、２００より多い、例えば、２２５より多い、または例えば、２５０より多いペプチド特異的なスポットである。
【０２２６】
理論によって拘束はされないが、抗血管形成効果を惹起し得るワクチン組成物は腫瘍増殖の阻害にきわめて有効であると証明されると考えられるので、抗血管形成効果の評価は有用なペプチドの選択のために用いられ得る。サバイビンに対する強力かつ特異的なＴ細胞応答を惹起し得るペプチド（単数または複数）と組み合わせた場合、このようなペプチドを含むワクチン組成物は、良好な臨床反応を誘導する極めて高い確率を有すると期待される。
【０２２７】
本発明の局面は、１つ以上のサバイビンペプチドまたはペプチド改変体（単数または複数）であって、このペプチド改変体の配列が、その全長にわたって、配列番号２３の連続的アミノ酸配列と少なくとも８５％同一である、サバイビンペプチドまたはサバイビンペプチド改変体と、被験体における腫瘍間質において抗原特異的Ｔ細胞の浸潤を誘導し得るアジュバントとを含む、ワクチン組成物に関する。
【０２２８】
好ましい実施形態では、このワクチン組成物は、被験体における血管形成を阻害し得る。
【０２２９】
標的病変に対する効果を評価することはさらに本質的であって、従ってワクチン組成物の投与後の臨床反応は、標的病変の評価に関する節で下に記載されるように評価されなければならない。ワクチン組成物は、実施例１に示されるように、標的病変の最長の直径の合計の多くとも２０％の増大によって特徴付けられるような、安定な疾患、部分的な応答または完全な退行（完全寛解）と呼ばれる、臨床反応を惹起し得る。標的病変の最長の直径の合計の減少は、より好ましく（部分的応答）、そして最も好ましい応答は完全寛解である。
【０２３０】
サバイビンペプチドまたはサバイビンペプチド改変体は、それがＨＬＡ分子に結合する能力に加えて、細胞表面上でＨＬＡおよびペプチドの複合体を形成し得、この複合体が次に、細胞傷害性Ｔ細胞のエピトープまたは標的として作用することが考えられる。サバイビンペプチドまたはサバイビンペプチド改変体は、他のタイプの免疫応答、例えば、Ｂ細胞応答を惹起し得、これが複合体に対する抗体の産生および／または遅延型の過過敏性（ＤＴＨ）反応を生じる可能性がある。
【０２３１】
後者のタイプの免疫応答は、本発明のワクチン組成物の注射部位での発赤および触診可能な硬結として規定される。
【０２３２】
免疫の可能な副作用は、全身性または局所の毒性であり得る。血管の変化、例えば、脈管炎または障害された創傷の治癒は、潜在的な副作用である。ヘモグロビン、白血球、および血小板の変化、ならびに乳酸脱水素酵素、クレアチニンおよびコリンエステラーゼが、他の望ましくない効果である。
【０２３３】
本発明のある実施形態では、ワクチン組成物の投与は、血管の変化を有さない。第二の実施形態では、ワクチン組成物の投与は、創傷治癒の障害を誘導しない。
【０２３４】
従って、本発明の最も好ましい実施形態では、ワクチン組成物の投与は、本質的に副作用を有さない。詳細には、副作用の関与度は、疾患の重篤度に関して評価されるべきである。
【０２３５】
さらに、前に記載されたとおり、腫瘍特異的なヘルパーＴ細胞免疫を惹起することに、すなわち、腫瘍はクラスＩＩＭＨＣを一般に発現しないという事実にかかわらず、クラスＩＩ−ＭＨＣ拘束エピトープでのワクチン接種に対して集中が増している。これは、多くの場合のワクチン誘導性の抗腫瘍応答の誘導および有効性には、腫瘍特異的ＣＤ４陽性Ｔｈ細胞の協力を要するという、近年の知見に基づく。
【０２３６】
従って、より複雑な組成物を有するワクチンの開発を駆動する重要な要因は、注意深く選択されたＣＴＬおよびＴｈ細胞のエピトープのコレクションを含むかまたはコードするワクチンを例えば設計することによって、複数の腫瘍抗原を標的することが望ましい。
【０２３７】
（複数のエピトープのワクチン）
明白に、複数エピトープのワクチンは、腫瘍性タンパク質のような潜在的に危険なタンパク質を誘導する（遺伝子コードする）必要なしに、いくつかの異なる抗原に由来するエピトープに対して免疫を増大する有効な方法を構成する。このようなワクチンによってまた、最優位ではなくかつ潜在性のＴ細胞エピトープに対する免疫の選択的誘導が可能になり、これは、正常な組織において傑出して存在するエピトープに寛容が存在し得る、腫瘍関連自己抗原の場合特に重要であり得る。
【０２３８】
エピトープワクチンに関連するいくつかの問題としては、抗原提示細胞が特定のエピトープを提示できないということが挙げられる。詳細には、腫瘍細胞で発現される抗原は、抗原提示細胞の免疫プロテアソームと、ほとんどの腫瘍細胞に存在する「構成的（ｃｏｎｓｔｉｔｕｔｉｖｅ）」プロテアソームとの間の機能的な相違に起因して異なって提示され得る。
【０２３９】
従って、ワクチン組成物に適合したペプチドの同定は、抗原およびワクチン組成物のアジュバント成分の両方を含む、ワクチン組成物に含まれ得る種々の化合物の有効性を評価するための実験的な研究に基づく試験および選択を包含する。
【０２４０】
従って、さらなる局面では、本発明は、１つ以上のサバイビンペプチドまたはサバイビンペプチド改変体を含むワクチン組成物を、単独で、または他のタンパク質もしくはペプチドフラグメントと組み合わせて、提供する。特定の実施形態では、このような他のタンパク質またはペプチドフラグメントとしては、限定はしないが、細胞のアポトーシスの調節に関与するタンパク質、またはそのペプチドフラグメントが挙げられる。このようなタンパク質の適切な例は、Ｂｃｌ−２タンパク質ファミリー、例えば、Ｂｃｌ−２タンパク質、Ｂｃｌ−ＸＬタンパク質、Ｂｃｌ−ｗタンパク質、Ｍｃｌ−１タンパク質、ＴＲＡＧ−３タンパク質および任意のタンパク質由来のペプチドフラグメントから選択され得る。他の公知のアポトーシスインヒビターとしては、アポトーシスタンパク質（ＩＡＰ）ファミリーのインヒビターのメンバー、例えばＸ−ＩＡＰ、Ｃ−ＩＡＰ１およびＣ−ＩＡＰ２が挙げられ、これたのタンパク質は全てが、比較的偏在性に発現されるが、アポトーシスポリペプチドＭＬ−ＩＡＰのインヒビターは、かなり選択性の発現を有し、そして黒色腫において優先的に検出される。従って、特異的なＴ細胞応答、すなわち、細胞傷害性Ｔ細胞応答またはヘルパーＴ細胞応答を惹起し得るＭＬ−ＩＡＰのフラグメントが、必要に応じて、本発明のワクチン組成物に含まれてもよい。
【０２４１】
ＭＬ−ＩＡＰの有用なペプチドフラグメントとしては、ＭＬ−ＩＡＰ２４５（ＲＬＱＥＥＲＴＣＫＶ）（配列番号２４）、ＭＬ−ＩＡＰ２８０（ＱＬＣＰＩＣＲＡＰＶ）（配列番号２５）、ＭＬ−ＩＡＰ９０（ＲＬＡＳＦＹＤＷＰＬ）（配列番号２６）、ＭＬ−ＩＡＰ１５４（ＬＬＲＳＫＧＲＤＦＶ）（配列番号２７）、ＭＬ−ＩＡＰ２３０（ＶＬＥＰＰＧＡＲＤＶ）（配列番号２８）、ＭＬ−ＩＡＰ９８（ＰＬＴＡＥＶＰＰＥＬ）（配列番号２９）、ＭＬ−ＩＡＰ３４（ＳＬＧＳＰＶＬＧＬ）（配列番号３０）、ＭＬ−ＩＡＰ５４（ＱＩＬＧＱＬＲＰＬ）（配列番号３１）、ＭＬ−ＩＡＰ９９（ＬＴＡＥＶＰＰＥＬ）（配列番号３２）、ＭＬ−ＩＡＰ８３（ＧＭＧＳＥＥＬＲＬ）（配列番号３３）およびＭＬ−ＩＡＰ２００（ＥＬＰＴＰＲＲＥＶ）（配列番号３４）が挙げられる。
【０２４２】
さらに、本発明の薬学的組成物は有利には、サバイビンタンパク質に属さないかまたはサバイビンタンパク質に由来するタンパク質またはペプチドフラグメントから選択される、少なくとも１つのさらなる免疫原性タンパク質またはそのペプチドフラグメントを含んでもよい。特定の実施形態では、この免疫原性タンパク質またはそのペプチドフラグメントは、上記のような、そしてＰＣＴ／ＤＫ２００４／０００７９９に記載されるようなＢｃｌ−２タンパク質由来である。さらなる免疫原性Ｂｃｌ−２由来ペプチドは、以下：Ｂｃｌ１７２（ＮＩＡＬＷＭＴＥＹＬ）（配列番号３５）、Ｂｃｌ１８０（ＹＬＮＲＨＬＨＴＷＩ）（配列番号３６）、Ｂｃｌ２０８（ＰＬＦＤＦＳＷＬＳＬ）（配列番号３７）およびＢｃｌ２１４（ＷＬＳＬＫＴＬＬＳＬ）（配列番号３８）、Ｂｃｌ２１８（ＫＴＬＬＳＬＡＬＶ）（配列番号３９）およびＢｃｌ８０（ＡＡＡＧＰＡＬＳＰＶ）（配列番号４０）から選択される配列を有するＨＬＡ−Ａ２拘束ペプチドである。
【０２４３】
本発明のある実施形態は、本発明によるワクチン組成物であって、ＭＬ−ＩＡＰ、ＢＣＬ−２、ＢＣＬ−Ｘ、ＭＣＬ−１またはＴＲＡＧ−３ペプチド（ＰＣＴ／ＤＫ２００４／０００７９８に記載される）またはＨＬＡクラス１分子に結合し得るそのペプチド改変体の群から選択される１つ以上のペプチドまたはペプチド改変体をさらに含むワクチン組成物に関する。
【０２４４】
さらに、本発明による組成物は、本明細書において前に規定されたようなクラスＩ拘束エピトープおよび／またはクラスＩＩ拘束エピトープを含む複数エピトープのワクチンとして提供され得る。
【０２４５】
用量
本発明の有用なワクチン組成物は、免疫学的に有効な量のサバイビンペプチドまたはサバイビンペプチド改変体を含むと考えられる。
【０２４６】
ワクチン組成物中のサバイビンペプチドまたはサバイビンペプチド改変体の量は、特定の適用に依存して変化し得る。しかし、単回用量の免疫原は好ましくは、約１０μｇ〜約５０００μｇのどれか、より好ましくは約２５μｇ〜約２５００μｇ、または例えば、約５０μｇ〜約１０００μｇ、または例えば、約５０μｇ〜約５００μｇ、または例えば、約５０μｇ〜約２５０μｇ、または例えば、約５０μｇ〜約２００μｇ、または例えば、約７５μｇ〜約１５０μｇである。好ましい実施形態では、免疫原の用量は、約７５μｇ〜約１５０μｇである。最も好ましい実施形態では、用量は約１００μｇである。
【０２４７】
投与
投与の方式としては、皮内、皮下および静脈内の投与、徐放性処方物の形態での移植などが挙げられる。当該分野で公知の任意のかつ全ての投与の形態は、本明細書において包含される。皮下投与が好ましく、詳細には深部皮下投与が好ましい。本発明に従うワクチン組成物は、流入領域リンパ節の近傍で交互に四肢に投与されることがさらに好ましい。
【０２４８】
また、注射可能な免疫原性ペプチド組成物を処方するために適切であることが当該分野で公知の任意のかつ全ての従来の剤形、例えば、凍結乾燥型および溶液、懸濁液またはエマルジョン型も包含され、これは必要に応じて、従来の薬学的に受容可能なキャリア、希釈剤、防腐剤、アジュバント、緩衝成分などを含む。
【０２４９】
本発明の組成物の免疫原性の効果は、当業者に公知のような、そしてＷＯ２００４０６７０２３の実施例に記載のようないくつかのアプローチを用いて決定されてもよい。ワクチン組成物によって誘発されるＣＴＬ応答を決定する方法の例は、ＷＯ９７／２８８１６に提供される。首尾よい免疫応答はまた、免疫後の遅延型過過敏症（Ｄｅｌａｙｅｄ  Ｔｙｐｅ  Ｈｙｐｅｒｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ）（ＤＴＨ）反応の発現、および／またはワクチン組成物のペプチド（単数または複数）を特異的に認識する抗体の検出によって決定されてもよい。
【０２５０】
好ましい実施形態では、本発明の薬学的組成物は、ガン疾患に対する免疫応答を惹起し得る免疫原性組成物またはワクチンである。
【０２５１】
本明細書において用いる場合、「免疫原性組成物またはワクチン（ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃ  ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ  ｏｒ  ｖａｃｃｉｎｅ）」という表現は、ガン細胞に対する少なくとも１つのタイプの免疫応答を惹起する組成物をいう。従って、このような免疫応答は、上述の任意のタイプであってもよい：ＣＴＬ応答であって、ここでは細胞表面に提示されるＨＬＡ／ペプチド複合体を認識し得るＣＴＬが生成されて、細胞溶解を生じる、すなわち、ワクチンは、ガン細胞に対する細胞傷害性効果を有するエフェクターＴ細胞のワクチン接種された被験体での生成を誘発する；抗ガン抗体の生成を生じるＢ細胞応答；および／またはＤＴＨ型の免疫応答。
【０２５２】
核酸ワクチン
本発明のワクチン組成物は、サバイビンポリペプチド（配列番号２３）、そのペプチドフラグメント、またはそのサバイビンペプチド改変体をコードする核酸を含んでもよい。従って、このような核酸は任意の上述のタンパク質またはペプチドフラグメントをコードし得る。この核酸は、例えば、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ＬＮＡ、ＨＮＡ、ＰＮＡであってもよく、好ましくはこの核酸はＤＮＡまたはＲＮＡである。
【０２５３】
ある実施形態では、本発明は、ワクチン組成物であって、
ｉ．ａ）サバイビンポリペプチド（配列番号２３）
ｂ）サバイビンペプチド、または
ｃ）サバイビンペプチド改変体、
をコードする核酸と、
ｉｉ．上述の任意のアジュバントと、
を含むワクチン組成物に関する。
【０２５４】
本発明の核酸は、任意の適切なベクター、例えば発現ベクター内に含まれてもよい。多数のベクターが利用可能であって、当業者は、特定の目的のために有用なベクターを選択できる。このベクターは、例えば、プラスミド、コスミド、ウイルス粒子または人工的染色体の形態であってもよい。適切な核酸配列は、種々の手順によってベクターに挿入されてもよく、例えば、ＤＮＡは、当該分野で周知の技術を用いて適切な制限エンドヌクレアーゼ部位（単数または複数）に挿入されてもよい。本発明に従う核酸配列とは別に、このベクターはさらに、１つ以上のシグナル配列、複製起点、１つ以上のマーカー遺伝子、エンハンサーエレメント、プロモーター、および転写終止配列を含んでもよい。このベクターはまた、さらなる配列を含んでもよい。これらの成分の１つ以上を含む適切なベクターの構築は、当業者に公知である標準的なライゲーション技術を使用する。ベクターは好ましくは、発現ベクターであって、調節性の核酸配列に対して作動可能に連結された核酸であって、適切な細胞中でその発現を指向する核酸を含む。本発明の範囲内で、このような調節性の核酸配列は、一般に、哺乳動物細胞、好ましくはヒト細胞、より好ましくは抗原提示細胞での発現を指向し得るはずである。
【０２５５】
１つの好ましい実施形態では、このベクターはウイルスベクターである。このウイルスベクターは、サバイビンまたはそのペプチドフラグメントをコードする核酸に加えて、Ｔ細胞刺激ポリペプチドをコードする第二の核酸配列を含んでもよい。このＴ細胞刺激ポリペプチドは好ましくは、Ｂ７．１，ＩＣＡＭ−１およびＬＦＡ−３からなる群より選択される。
【０２５６】
このベクターはまた、細菌ベクター、例えば、弱毒化細菌ベクターであってもよい。弱毒化された細菌ベクターは、感染および持続の部位で長期の粘膜の免疫応答を誘導するために用いられ得る。異なる組み換え細菌がベクターとして用いられてもよく、例えば、細菌ベクターは、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ、Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ、およびＬｉｓｔｅｒｉａからなる群より選択されてもよい。一般には、異種の抗原ＨＰＶ１６  Ｌ１またはＥ７に対する免疫の誘導は、マウスにおける強力なＣＴＬ誘導および腫瘍退行で示され得る。
【０２５７】
医薬品
本発明のある局面は、医薬の製造における使用のための本発明によるワクチン組成物に関する。特定の実施形態では、この医薬は、ガン疾患の処置のためである。
【０２５８】
ある実施形態では、本発明による医薬は、皮下投与のためであり、従ってこの医薬は、溶液もしくは懸濁液として処方されても、あるいは投与の前の懸濁のための凍結乾燥生成物として処方されてもよい。
【０２５９】
本発明はさらに、１つ以上のサバイビンペプチドまたはサバイビンペプチド改変体およびアジュバントを活性成分として含むワクチン組成物を含む、ガンを処置するための医薬に関する。
【０２６０】
処置
サバイビン分子は、ガン疾患の大集団において調節解除されることが見出されている。サバイビンペプチドまたはサバイビンペプチド改変体を含むワクチン組成物は、ガン疾患のような臨床的状態の処置のために用いられ得る。本発明による処置には、症状を軽減する工程、および疾患の進行を阻害する工程、これによって本明細書において下に記載されたような臨床反応を得る工程を包含する。
【０２６１】
本発明によるワクチン組成物は、２回以上、例えば、２回、３回、４回、５回、または例えば、５回より多く、例えば、７回より多く、例えば、１０回より多く、例えば、１５回より多く投与されてもよい。本発明のワクチン組成物を用いて処置される疾患は、再発であってもまたは慢性であってもよく、これによって、症状が最小限になり、そして疾患の進行または再発が阻害され、その処置は、長期間にわたって一定の間隔で継続されてもよい。例えば、処置される疾患は、ガン疾患であってもよく、そして処置は、完全寛解または安定な疾患が臨床反応であるまで、または患者の寿命にわたっての間、継続され得る。
【０２６２】
ワクチン組成物は、例えば、１４日ごとに１回、少なくとも１ヶ月、例えば、少なくとも２ヶ月、例えば、少なくとも３ヶ月、例えば、少なくとも５ヶ月、例えば、少なくとも８ヶ月、例えば、少なくとも１２ヶ月、例えば少なくとも２０ヶ月の間投与されてもよい。ワクチン組成物は、被験体の寿命にわたって一定間隔で投与されてもよい。ワクチン組成物は、疾患が再発した場合、または疾患の進行が検出された場合に投与され得る。
【０２６３】
ある実施形態では、本発明は、被験体においてサバイビンに対して強力かつ特異的なＴ細胞応答を刺激する方法であって：
ａ）本発明に従うワクチン組成物を提供する工程と、
ｂ）この被験体に対してこのワクチン組成物を投与する工程であって、このワクチン組成物が２回以上投与され得る工程と、
ｃ）これによって強力かつ特異的なＴ細胞応答をこの被験体において刺激する工程であって、この特異的なＴ細胞応答が、このワクチン組成物の投与の前後にＥＬＩＳＰＯＴアッセイによって測定された場合、１０４個のＰＢＭＣ細胞あたり５０個を超えるペプチド特異的なスポットである工程と、
を包含する方法に関する。
【０２６４】
特定の実施形態では、この強力かつ特異的なＴ細胞応答は、このワクチン組成物の投与の前後にＥＬＩＳＰＯＴアッセイによって測定された場合、１０４個のＰＢＭＣ細胞あたり２００個を超えるペプチド特異的なスポットである。
【０２６５】
さらなる特異的な実施形態では、本発明に従う方法は、１ヶ月ごとに１回このワクチン組成物を投与する工程を包含し得る。
【０２６６】
種々の好ましい実施形態では、このワクチン組成物は、２ヶ月ごとに１回投与される。
【０２６７】
ある実施形態では、本発明は、疾患を処置または予防する方法であって、
ａ）任意の上述のペプチドおよび必要に応じて任意の上述のアジュバントを含むワクチン組成物を提供する工程と、
ｂ）このワクチン組成物をこの被験体に対して投与する工程であって、このワクチン組成物が、２回以上投与され得る工程と、
ｃ）これによって強力かつ特異的なＴ細胞応答をこの被験体において刺激する工程であって、この強力かつ特異的なＴ細胞応答が、このワクチン組成物の投与の前後にＥＬＩＳＰＯＴアッセイによって測定された場合、１０４個のＰＢＭＣ細胞あたり５０個を超えるペプチド特異的なスポットである工程と、
ｄ）この被験体において臨床的な応答を得る工程と、
を包含する、方法に関する。
【０２６８】
この臨床的な応答は、下の標的病変の評価に関する節で記載されたとおり評価する。
【０２６９】
好ましい実施形態では、このワクチン組成物は、臨床状態の処置のためである。
【０２７０】
本発明の好ましい実施形態では、この臨床状態はガンである。「ガン（ｃａｎｃｅｒ）」という用語は、本明細書において用いる場合、任意のガン、新生物および前新生物性疾患を包含することを意味する。このようなガンは、例えば、以下からなる群より選択されてもよい；結腸癌、乳癌、膵臓癌、卵巣癌、前立腺癌、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨原性肉腫、脊索腫、血管肉腫、内皮肉腫（ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｏｓａｒｃｏｍａ）、リンパ管肉腫（ｌｙｍｐｈａｎｇｅｏｓａｒｃｏｍａ）、リンパ管内皮肉腫（ｌｙｍｐｈａｎｇｅｏｅｎｄｏｔｈｅｌｉａ  ｓａｒｃｏｍａ）、滑液腫瘍、中皮腫、ユーイング肉腫、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、扁平上皮細胞癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、脂腺癌、乳頭癌、乳頭腺癌、嚢胞腺癌、髄様癌、気管支癌、腎細胞癌、肝細胞腫、胆管癌、絨毛癌、精上皮腫、胚性癌腫、ウィルムス腫瘍、子宮頸癌、精巣腫瘍、肺癌、小細胞肺癌、膀胱癌、上皮性癌、グリア芽細胞腫、神経腫（ｎｅｕｒｏｎｏｍａｓ）、頭蓋咽頭腫、シュワン細胞腫、神経膠腫、星細胞腫、髄芽腫、頭蓋咽頭腫、上衣細胞腫、松果体腫、血管芽細胞腫、聴神経腫、乏突起細胞腫、髄膜腫、黒色腫、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫、白血病、およびリンパ腫、急性リンパ性白血病および急性骨髄性真性赤血球増加症、多発性骨髄腫、ヴァルデンストレームマクログロブリン血症および重鎖病、急性非リンパ性白血病、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、直腸癌、泌尿器癌、子宮癌、口腔癌、皮膚癌、胃癌、脳腫瘍、肝臓癌、咽頭癌、食道癌、乳腺腫瘍、小児期急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、胸腺ＡＬＬ、Ｂ細胞ＡＬＬ、急性骨髄性白血病、骨髄単球性白血病、急性巨核球性白血病、バーキットリンパ腫、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、およびＴ細胞白血病、小および大の非小細胞肺癌、急性顆粒球性白血病、胚細胞腫瘍、子宮内膜癌、胃癌、頭頸部癌、慢性リンパ性白血病、ヘアリー細胞白血病および甲状腺癌。
【０２７１】
ある実施形態では、本発明に従うワクチン組成物は、悪性黒色腫、膵臓癌、子宮頸癌、または結腸癌の群から選択されるガンの処置のためである。
【０２７２】
好ましい実施形態では、本発明によるワクチン組成物は、悪性黒色腫および膵臓癌の処置のためである。
【０２７３】
本発明のある局面は、血管形成を阻害する方法であって；
ａ）本発明に従うワクチン組成物を提供する工程と、
ｂ）このワクチン組成物を被験体に対して投与する工程と、
を包含する方法に関する。
【０２７４】
処置の必要な個体は、任意の個体、好ましくはヒトであってもよい。ペプチドは一般に、異なるＨＬＡ分子に対して異なる親和性を有する。従って、ワクチン組成物または薬学的組成物がサバイビンペプチドを含む本発明の実施形態では、所定の個体に投与されるワクチン組成物または薬学的組成物は、その特定の個体のＨＬＡ分子と関連し得る少なくとも１つのペプチドを含むことが好ましい。
【０２７５】
併用療法
本発明はさらに、併用療法における使用のための薬学的組成物および部品キット（ｋｉｔ−ｏｆ−ｐａｒｔｓ）に関する。
【０２７６】
併用療法とは本明細書において用いられる場合、２つ以上の異なる医薬を用いる、その必要な被験体の処置を意味する。従って、併用療法は、１局面では、本明細書において上記されるようなワクチン組成物および二次的な医薬を含む薬学的組成物または部品キットの投与を包含し得る。二次医薬は、本明細書において下に記載された任意の医薬、例えば、化学療法剤または血管形成のインヒビターであってもよい。
【０２７７】
詳細には併用療法は、ｉ）本発明に従うサバイビンペプチドまたはサバイビンペプチド改変体、ｉｉ）本発明に従うワクチン組成物、のうちの１つ以上と組み合わせた、化学療法剤および／または免疫療法剤の個体に対する投与を包含し得る。しかし、併用療法はまた、放射線療法、遺伝子治療および／または外科手術を含んでもよい。
【０２７８】
本発明のある局面は、以下：
ｉ）本発明に従うワクチン組成物
ｉｉ）および二次医薬
の任意の順序における、同時、連続的または別々の投与を含む、併用療法の方法に関する。
【０２７９】
好ましい実施形態では、二次医薬は化学療法剤である。
【０２８０】
化学療法剤とは、例えば、メトトレキサート、ビンクリスチン、アドリアマイシン、シスプラチン、非糖含有クロロエチルニトロソウレア、５−フルオロウラシル、マイトマイシンＣ、ブレオマイシン、ドキソルビシン、デカルバジン、タキソール、フラジェリン、メグラミンＧＬＡ、バルルビシン（ｖａｌｒｕｂｉｃｉｎ）、カルムスタチンおよびポリフェプロサン（ｐｏｌｉｆｅｒｐｏｓａｎ）、ＭＭ１２７０、ＢＡＹ１２−９５６６、ＲＡＳファメシルトランスフェラーゼインヒビター、ファメシルトランスフェラーゼインヒビター、ＭＭＰ、ＭＴＡ／ＬＹ２３１５１４、ＬＹ２６４６１８／Ｌｏｍｅｔｅｘｏｌ、Ｇｌａｍｏｌｅｃ、Ｃｌ−９９４、ＴＮＰ−４７０、Ｈｙｃａｍｔｉｎ／Ｔｏｐｏｔｅｃａｎ、ＰＫＣ４１２、Ｖａｌｓｐｏｄａｒ／ＰＳＣ８３３、Ｎｏｖａｎｔｒｏｎｅ／Ｍｉｔｒｏｘａｎｔｒｏｎｅ、Ｍｅｔａｒｅｔ／Ｓｕｒａｍｉｎ、Ｂａｔｉｍａｓｔａｔ、Ｅ７０７０、ＢＣＨ−４５５６、ＣＳ−６８２、９−ＡＣ、ＡＧ３３４０、ＡＧ３４３３、Ｉｎｃｅｌ／ＶＸ−７１０、ＶＸ−８５３、ＺＤ０１０１、ＩＳＩ６４１、ＯＤＮ６９８、ＴＡ２５１６／Ｍａｒｍｉｓｔａｔ、ＢＢ２５１６／Ｍａｒｍｉｓｔａｔ、ＣＤＰ８４５、Ｄ２１６３、ＰＤ１８３８０５、ＤＸ８９５１ｆ、ＬｅｍｏｎａｌＤＰ２２０２、ＦＫ３１７、Ｐｉｃｉｂａｎｉｌ／ＯＫ−４３２、ＡＤ３２／Ｖａｌｒｕｂｉｃｉｎ、Ｍｅｔａｓｔｒｏｎ／ストロンチウム誘導体、Ｔｅｍｏｄａｌ／Ｔｅｍｏｚｏｌｏｍｉｄｅ、Ｅｖａｃｅｔ／リポソームドキソルビシン、Ｙｅｗｔａｘａｎ／Ｐｌａｃｌｉｔａｘｅｌ、Ｔａｘｏｌ／Ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ、Ｘｅｌｏａｄ／Ｃａｐｅｃｉｔａｂｉｎｅ、Ｆｕｒｔｕｌｏｎ／Ｄｏｘｉｆｌｕｒｉｄｉｎｅ、Ｃｙｃｌｏｐａｘ／経口パクリタキセル、経口Ｔａｘｏｉｄ、ＳＰＵ−０７７／Ｃｉｓｐｌａｔｉｎ、ＨＭＲ  １２７５／Ｆｌａｖｏｐｉｒｉｄｏｌ、ＣＰ−３５８（７７４）／ＥＧＦＲ、ＣＰ−６０９（７５４）／ＲＡＳ発癌遺伝子インヒビター、ＢＭＳ−１８２７５１／経口白金、ＵＦＴ（Ｔｅｇａｆｕｒ／Ｕｒａｃｉｌ）、Ｅｒｇａｍｉｓｏｌ／Ｌｅｖａｍｉｓｏｌｅ、Ｅｎｉｌｕｒａｃｉｌ／７７６Ｃ８５／５ＦＵエンハンサー、Ｃａｍｐｔｏ／Ｌｅｖａｍｉｓｏｌｅ、Ｃａｍｐｔｏｓａｒ／ｌｒｉｎｏｔｅｃａｎ、Ｔｕｍｏｄｅｘ／Ｒａｌｉｔｒｅｘｅｄ、Ｌｅｕｓｔａｔｉｎ／Ｃｌａｄｒｉｂｉｎｅ、Ｐａｘｅｘ／Ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ、Ｄｏｘｉｌ／リポソームドキソルビシン、Ｃａｅｌｙｘ／リポソームドキソルビシン、Ｆｌｕｄａｒａ／Ｆｌｕｄａｒａｂｉｎｅ、Ｐｈａｒｍａｒｕｂｉｃｉｎ／Ｅｐｉｒｕｂｉｃｉｎ、ＤｅｐｏＣｙｔ、ＺＤ１８３９、ＬＵ  ７９５５３／Ｂｉｓ−Ｎａｐｈｔａｌｉｍｉｄｅ、ＬＵ  １０３７９３／Ｄｏｌａｓｔａｉｎ、Ｃａｅｔｙｘ／リポソームドキソルビシン、Ｇｅｍｚａｒ／Ｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ、ＺＤ  ０４７３／Ａｎｏｒｍｅｄ、ＹＭ  １１６、Ｉｏｄｉｎｅシード、ＣＤＫ４およびＣＤＫ２のインヒビター、ＰＡＲＰインヒビター、Ｄ４８０９／Ｄｅｘｉｆｏｓａｍｉｄｅ、Ｉｆｅｓ／Ｍｅｓｎｅｘ／ｌｆｏｓａｍｉｄｅ、Ｖｕｍｏｎ／Ｔｅｎｉｐｏｓｉｄｅ、Ｐａｒａｐｌａｔｉｎ／Ｃａｒｂｏｐｌａｔｉｎ、Ｐｌａｎｔ��ｎｏｌ／シスプラチン、Ｖｅｐｅｓｉｄｅ／Ｅｔｏｐｏｓｉｄｅ、ＺＤ  ９３３１、Ｔａｘｏｔｅｒｅ／Ｄｏｃｅｔａｘｅｌ、グアニンアラビノシドのプロドラッグ、Ｔａｘａｎｅ  Ａｎａｌｏｇ、ニトロソウレア、アルキル化剤、例えば、メルフェランおよびシクロホスファミド、Ａｍｉｎｏｇｌｕｔｅｔｈｉｍｉｄｅ、Ａｓｐａｒａｇｉｎａｓｅ、Ｂｕｓｕｌｆａｎ、Ｃａｒｂｏｐｌａｔｉｎ、Ｃｈｌｏｒａｍｂｕｃｉｌ、Ｃｙｔａｒａｂｉｎｅ  ＨＣｌ、Ｄａｃｔｉｎｏｍｙｃｉｎ、Ｄａｕｎｏｒｕｂｉｃｉｎ  ＨＣｌ、Ｅｓｔｒａｍｕｓｔｉｎｅリン酸塩ナトリウム、Ｅｔｏｐｏｓｉｄｅ（ＶＰ１６−２１３）、Ｆｌｏｘｕｒｉｄｉｎｅ、Ｆｌｕｏｒｏｕｒａｃｉｌ（５−ＦＵ）、Ｆｌｕｔａｍｉｄｅ、Ｈｙｄｒｏｘｙｕｒｅａ（ヒドロキシカルバミド）、Ｉｆｏｓｆａｍｉｄｅ、Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ  α−２ａ、α−２ｂ、Ｌｅｕｐｒｏｌｉｄｅ  ａｃｅｔａｔｅ（ＬＨＲＨ−放出因子アナログ）、Ｌｏｍｕｓｔｉｎｅ（ＣＣＮＵ）、Ｍｅｃｈｌｏｒｅｔｈａｍｉｎｅ  ＨＣｌ（ナイトロジェン・マスタード）、Ｍｅｒｃａｐｔｏｐｕｒｉｎｅ、Ｍｅｓｎａ、Ｍｉｔｏｔａｎｅ（ｏ．ｐ’−ＤＤＤ）、Ｍｉｔｏｘａｎｔｒｏｎｅ  ＨＣｌ、Ｏｃｔｒｅｏｔｉｄｅ、Ｐｌｉｃａｍｙｃｉｎ、Ｐｒｏｃａｒｂａｚｉｎｅ  ＨＣｌ、Ｓｔｒｅｐｔｏｚｏｃｉｎ、クエン酸タモキシフェン（Ｔａｍｏｘｉｆｅｎ  ｃｉｔｒａｔｅ）、Ｔｈｉｏｇｕａｎｉｎｅ、Ｔｈｉｏｔｅｐａ、Ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ  ｓｕｌｆａｔｅ、Ａｍｓａｃｒｉｎｅ（ｍ−ＡＭＳＡ）、Ａｚａｃｉｔｉｄｉｎｅ、Ｅｒｔｈｒｏｐｏｉｅｔｉｎ、Ｈｅｘａｍｅｔｈｙｌｍｅｌａｍｉｎｅ（ＨＭＭ）、Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ  ２、Ｍｉｔｏｇｕａｚｏｎｅ（メチル−ＧＡＧ；メチルグリオキサール・ビス−グアニルヒドラゾン；ＭＧＢＧ）、Ｐｅｎｔｏｓｔａｔｉｎ（２’デオキシコホルマイシン（ｄｅｏｘｙｃｏｆｏｒｍｙｃｉｎ））、Ｓｅｍｕｓｔｉｎｅ（メチル−ＣＣＮＵ）、Ｔｅｎｉｐｏｓｉｄｅ（ＶＭ−２６）および硫酸ビンデシン（Ｖｉｎｄｅｓｉｎｅ  ｓｕｌｆａｔｅ）であってもよい。さらに、化学療法剤は、米国特許第６，４８２，８４３の表３の１３〜１８列に挙げられた任意の化学療法剤であってもよい。
【０２８１】
本発明の治療組成物またはワクチン組成物はまた、他の抗ガンストラテジーと組み合わせて用いられてもよく、そしてこのような併用療法は、腫瘍増殖および転移を阻害および／または排除するのに有効である。本発明の方法は、限定はしないが、放射線、外科、遺伝子治療および化学療法を含む、他の処置様式とともに有利に用いられ得る。
【０２８２】
サバイビンは血管形成の間に内皮細胞で高度に発現され、そしてこれは、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）の細胞保護効果で暗示され得、従ってサバイビン発現細胞を標的することは、ガン細胞を直接標識し、さらに血管形成の阻害によって腫瘍増殖を防止し得る。
【０２８３】
抗血管形成効果は、血管形成インヒビターでの処置を用いて本発明に従うワクチンでの処置と組み合わせることによって増強され得る。抗血管形成治療は、腫瘍の脈管構造を標的し、そして特定のサイズを超える腫瘍増殖を防止し、これによって、第二の好ましい実施形態では、二次医薬は、血管形成のインヒビターである。
【０２８４】
血管形成のインヒビターは、限定はしないが、例えば、ＢＭＳ−２７５２９１、Ｄａｌｔｅｐａｒｉｎ（Ｆｒａｇｍｉｎ（登録商標））、Ｓｕｒａｍｉｎ、２−メトキシエストラジオール（２−ＭＥ）、Ｔｈａｌｉｄｏｍｉｄｅ、ＣＣ−５０１３（サリドマイドの類似体）、Ｃｏｍｂｒｅｔａｓｔａｔｉｎ  Ａ４  Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ、ＬＹ３１７６１５（Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｋｉｎａｓｅ  Ｃ  Ｂｅｔａ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ）、Ｓｏｙ  Ｉｓｏｆｌａｖｏｎｅ（Ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ；  Ｓｏｙ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｉｓｏｌａｔｅ）、ＡＥ−９４１（ＮｅｏｖａｓｔａｔＴＭ；ＧＷ７８６０３４）、Ａｎｔｉ−ＶＥＧＦ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ（Ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ；ＡｖａｓｔｉｎＴＭ）、Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ−ａｌｐｈａ、ＰＴＫ７８７／ＺＫ  ２２２５８４、ＶＥＧＦ−Ｔｒａｐ、ＺＤ６４７４、ＥＭＤ  １２１９７４、Ｃａｒｂｏｘｙａｍｉｄｏｔｒｉａｚｏｌｅ（ＣＡＩ）、Ｃｅｌｅｃｏｘｉｂ（Ｃｅｌｅｂｒｅｘ（登録商標））、Ｈａｌｏｆｕｇｉｎｏｎｅ  Ｈｙｄｒｏｂｒｏｍｉｄｅ  （ＴｅｍｐｏｓｔａｔｉｎＴＭ）、ＡｄＰＥＤＦ、Ｍａｃｕｇｅｎ、ｔｒｙｐｔｏｐｈａｎｙｌ−ｔＲＮＡシンテターゼ（ＴｒｐＲＳ）、ｒｈｕｆａｂ  Ｖ２  （アカ・ルセンティス（ａｋａ  ｌｕｃｅｎｔｉｓ））、スクアラミン（ｓｑｕａｌａｍｉｎｅ）、Ｒｅｔａａｎｅ  １５ｍｇ（デポ懸濁物を有する酢酸アネコルタブ（ａｎｅｃｏｒｔａｖｅ  ａｃｅｔａｔｅ））およびインターロイキン−１２であってもよい。
【０２８５】
「併用療法（Ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ  ｔｈｅｒａｐｙ）」とは、遺伝子治療として一般に公知である、適切な細胞への異種核酸の導入を包含してもよい。例えば、遺伝子治療は腫瘍抑制遺伝子またはアポトーシス促進遺伝子の腫瘍細胞への導入を包含してもよい。あるいは、発癌遺伝子またはアポトーシス阻害遺伝子の発現を阻害する核酸配列が、腫瘍細胞に導入されてもよい。さらに、化学療法剤に対する腫瘍細胞の感度を付与し得る酵素をコードする遺伝子が、導入されてもよい。従って、本発明は１実施形態では、プロドラッグ、すなわち、非毒性化合物の毒性化合物への酵素的変換をし得るタンパク質をコードする遺伝子ベクターを導入することによってガンを処置する工程を包含する方法を提供する。本発明のこの方法では、治療的な核酸配列とは、生成物であって、それ自体で、または他の薬物の存在下で、細胞死を生じる生成物をコードする核酸である。このような治療的核酸の代表的な例は、単純疱疹ウイルスのチミジンキナーゼをコードするものである。さらなる例は、５−フルオロシトシンを高度に毒性の化合物５−フルオロウラシルに変換し得る水痘帯状疱疹ウイルスのチミジンキナーゼおよび細菌遺伝子シトシンデアミナーゼである。
【０２８６】
標的病変の評価
処置の応答は、標的病変の最長の直径の測定を考慮する、ガン処置の結果を報告するための、もとのＷＨＯのＨａｎｄｂｏｏｋ（Ｗｏｒｌｄ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ  Ｏｆｆｓｅｔ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ  ４８；１９７９）に記載されるＲＥＣＩＳＴ（Ｒｅｓｐｏｎｓｅ  Ｅｖａｌｕｔｉｏｎ  Ｃｒｉｔｅｒｉａ  ｉｎ  Ｓｏｌｉｄ  Ｔｕｍｏｒｓ）基準を用いて測定される（Ｔｈｅｒａｓｓｅ  Ｐら、Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．２０００  Ｆｅｂ  ２；９２（３）：２０５〜１６）。この応答は、以下に分類される：完全応答、部分的応答、進行性疾患、および安定な疾患。完全応答は、全ての標的病変の消失であるが、部分的応答とは、標的病変の最長の直径の合計の少なくとも３０％の減少をいう。進行性疾患とは、標的病変の最長の直径の合計の少なくとも２０％の増大をいう。安定な疾患とは、上記のどれもあてはまらない状況をいう。完全応答または部分的応答の期間は、測定基準が初めて満たされる時点から再発または進行性疾患が証明される初日まで測定されるべきである。この効果は好ましくは、少なくとも１例の患者で観察される。
【０２８７】
部分的応答とは、標的病変の最長の直径の合計の少なくとも３０％の減少が観察される応答をいう。この応答はさらにサブグループであってもよく、従って４０％の部分的応答、または５０％の部分的応答、または６０％の部分的応答、または７０％の部分的応答、または８０％の部分的応答、または９０％の部分的応答とは、それぞれ少なくとも４０％、５０％、６０％、７０％、８０％または９０％の標的病変の最長の直径の合計の減少が観察されている処置に関する。
【０２８８】
ある実施形態では、本発明に従うワクチン組成物は、ガンの処置であり、これによって少なくとも３０％の部分的応答が得られる。
【０２８９】
ある実施形態では、本発明に従うワクチン組成物を投与する工程を包含する方法は、ガンの処置のためであり、これによって、少なくとも４０％、例えば、少なくとも５０％、例えば、少なくとも６０％、例えば、少なくとも７０％、例えば、少なくとも８０％、または例えば、少なくとも９０％の部分的応答が得られる。
【０２９０】
安定な疾患とは、標的病変の最長の直径の合計が３０％未満まで減少される応答をいい、そしてさらに、標的病変の最長の直径の合計が２０％以下まで増大される応答を包含する。このタイプの応答は、標的病変の最長の直径の合計が、３０％以下、例えば、２５％以下、例えば、２０％以下、例えば、１５％以下、例えば１０％以下、または例えば５％以下まで減少される応答に、そして標的病変の最長の直径の合計が、２０％以下まで、例えば１５％以下、例えば、１０％または例えば５％以下まで増大される小集団に、小分割されてもよい。さらに、標的病変の最長の直径の合計が、多くとも１％、例えば、３％、または例えば、多くとも５％まで減少または増大される小集団が含まれる。
【０２９１】
進行性疾患とは、標的病変の最長の直径の合計の少なくとも２９％の増大である。このタイプの応答は、標的病変の最長の直径の合計が、多くとも２５％、例えば、多くとも３０％、例えば、多くとも３５％、例えば、多くとも４０％、例えば、多くとも４５％、または例えば多くとも５０％まで増大される応答に小分割されてもよい。本発明によれば、標的病変の最長の直径の合計が、多くとも３０％まで増大される進行性疾患応答をもたらす処置は、診断が５０％という増大を予測する場合、正の結果とみなされ得る。従って、特異的な実施形態は、応答が進行性疾患応答として特徴付けられる、そして標的病変の最長の直径の合計が、多くとも２５％、例えば、多くとも３０％、例えば、多くとも３５％、例えば、多くとも４０％、例えば、多くとも４５％、または例えば多くとも５０％まで増大される処置を包含する。
【０２９２】
本発明のある実施形態は、疾患を処置または予防する方法であって；
ａ）本発明に従うワクチン組成物を提供する工程と、
ｂ）このワクチン組成物をこの被験体に対して投与する工程と、を包含し、
ｃ）ガンの処置のためであって、そして
ｄ）このワクチン組成物の投与が、標的病変の最長の直径の合計における多くとも２０％の増大によって特徴付けられる、安定な疾患、部分的応答、または完全寛解を生じる、方法に関する。
【０２９３】
実施例１に記載されるデータによって、かなり進行した疾患を有する重度に事前処置された患者でさえ、過度に強力なサバイビン特異的なＴ細胞応答が、試験された全ての患者において循環するリンパ球のプール内で開始されたことが実証される。実施例１、表３に示されるとおり、２例の被験体、ＪＵＳＣおよびＯＴＳＣは、完全寛解を経験したが、安定な疾患がいくつかの例で観察され、そして部分的応答が、１例の被験体で示された。
【０２９４】
部品キット
併用処置は、１つまたは２つの医薬に処方された、２つ以上の活性成分の別々、連続的または同時の投与を包含する。簡便な使用のために、このような医薬は、単一に合わされた生成物に含まれても、または部品キットに含まれてもよい。
【０２９５】
本発明のある局面は、以下：
ａ）ワクチン組成物であって、
ｉ．１つ以上のサバイビンペプチドまたはサバイビンペプチド改変体であって、このペプチド改変体の配列が、その全長にわたって、配列番号２３の連続的アミノ酸配列と少なくとも８５％同一である、サバイビンペプチドまたはサバイビンペプチド改変体、
ｉｉ、および本明細書に記載されるアジュバント、
を含むワクチン組成物と、
ｂ）二次医薬と、
を含む、部品キットに関する。
【０２９６】
本発明に従う部品キットのガン疾患の処置のために、医薬は、化学療法剤であってもよい。免疫疾患の処置に関して、医薬は、免疫療法剤であってもよい。
【０２９７】
本発明に従う部品キットのある実施形態では、この医薬は、化学療法剤または免疫療法剤を含む、好ましい実施形態では、この医薬は、化学療法剤を含む、本発明によれば、部品キットによって含まれるワクチン組成物および医薬は、別々、連続的または同時の投与のためである。部品キットはさらに、含まれる医薬およびワクチン組成物の適切な用法／投与／投薬量の情報を含み、そしてその情報を含む覚書を備える。
【実施例】
【０２９８】
実施例１
サバイビン由来エピトープおよびモンタニドＩＳＡ５１をアジュバントとして含むワクチン組成物を用いる臨床的な結果。この処置は、本明細書において下に記載された一連の後期段階の癌患者で行った。
【０２９９】
全ての臨床的手順は、ヘルシンキ宣言（Ｄｅｃｌａｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｈｅｌｓｉｎｋｉ）に従い、そして全ての患者に治療前にインフォームドコンセントを与えた。この臨床研究は、ドイツのＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｗｕｅｒｚｂｕｒｇの倫理審査委員会（Ｅｔｈｉｃａｌ  ｒｅｖｉｅｗ  Ｂｏａｒｄｓ）（Ｓｔｕｄｉｅｎ−Ｎｒ．７／０３）およびドイツのＰａｕｌ−Ｅｈｒｌｉｃｈ−ｌｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｌａｎｇｅｎ（Ｖｏｒｌａｇｅｎ−Ｎｒ  ０８９９／０１）によって承認された。
【０３００】
患者
この研究への参加を適格にするためには、患者は以下の基準：
・測定可能な転移性黒色腫、膵臓癌、結腸癌または子宮頸癌、
・進行性疾患の確認、
・少なくとも１つの標準的治療の失敗
・少なくとも３ヶ月の平均余命
・過去４週間内に治療なし
・全体的な器官不全なし
・クラスＩ組織タイプＨＬＡ−Ａ１、−Ａ２または−Ｂ３５
、を満たさなければならなかった。
【０３０１】
ペプチド
この研究に含まれるペプチドは、１つのアミノ酸の置換によるサバイビンペプチドの改変によって得られる全てのサバイビンペプチド改変体であった。それによって、ＭＨＣ分子に対する、より良好なアンカー残基および所定のペプチドの結合親和性の改善が得られた。用いられるペプチドとしては以下：
・ＨＬＡ−Ａ１拘束エピトープＦＴＥＬＴＬＧＥＦ（配列番号１６）（サバイビン９３〜１０１Ｔ２、２位置の天然のグルタミンがトレオニンで置換された）
・ＨＬＡ−Ａ２拘束エピトープＬＭＬＧＥＦＬＫＬ（配列番号５）（サバイビン９６〜１０４２Ｍ、２位置の天然のトレオニンがメチオニンで置換された）
・ＨＬＡ−Ｂ３５拘束エピトープＥＰＤＬＡＱＣＦＹ（配列番号９）（サバイビン５１〜５９９Ｙ、９位置のロイシンがチロシンで置換された）
が挙げられる。
【０３０２】
１００μｇのＨＬＡ−Ａ１、ＨＬＡ−Ａ２またはＨＬＡ−Ｂ３５拘束サバイビンペプチドを、製造業者（Ｓｅｐｐｉｃ，Ｂｒｕｓｓｅｌｓ，Ｂｅｌｇｉｕｍ）の指示に従って１ｍｌのＭｏｎｔａｎｉｄｅ  ＩＳＡ５１と混合した。この混合物を、流入領域リンパ節の近傍で交互に四肢への深部皮下注射によって投与した。患者は、最初の２ワクチン接種の間は７日間隔で、その後、さらなるワクチン接種の間は２８日の間隔でワクチン接種された。
【０３０３】
毒性、臨床有効性および免疫学的応答を評価した。
【０３０４】
毒性は、物理的な試験／既往歴、血液学的試験および血清化学によって評価した。これらの検査は、各々のワクチン接種の前に行った。
臨床的有効性は、物理的試験および適切な画像化研究（例えば、ＣＴスキャン、ＮＭＲスキャン、胸部Ｘ線、超音波または骨シンチグラフィー）によって、治療開始前およびその後３ヶ月ごとに評価した。
免疫学的応答は、サバイビン９６−１０４特異的なＩＦＮ−γ放出を検出するためにＰＢＭＣを用いる、ＥＬＩＳＰＯＴアッセイによってモニターした。ＥＬＩＳＰＯＴアッセイの感度を増すため、ＰＢＭＣは、１０ｍＭのペプチドの存在下で、５％熱不活化ヒト血清および２ｍＭのＬグルタミンを補充したＸ−ｖｉｖｏ培地（Ｂｉｏ  Ｗｈｉｔｔａｋｅｒ，Ｗａｌｋｅｒｓｖｉｌｌｅ，Ｍａｒｙｌａｎｄ）中で２４ウェルプレート（Ｎｕｎｃ，Ｄｅｎｍａｒｋ）中において、１ｍｌあたり１×１０６個の細胞の濃度でインビトロにおいて１回刺激した。２日後、４０ＩＵ／ｍｌの組み換えインターロイキン−２（ＩＬ−２）（Ｃｈｉｒｏｎ，Ｒａｔｉｎｇｅｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を添加した。１０日後、この細胞を反応性について試験した。要するに、ニトロセルロース底の９６ウェルプレート（ＭｕｌｔｉＳｃｒｅｅｎ  ＭＡＩＰ  Ｎ４５，Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ，Ｈｅｄｅｈｕｓｅｎｅ，Ｄｅｎｍａｒｋ）を、抗−ＩＦＮ−γ抗体（１−Ｄ１Ｋ，Ｍａｂｔｅｃｈ，Ｎａｃｋａ，Ｓｗｅｄｅｎ）でコーティングした。このウェルを洗浄して、Ｘ−ｖｉｖｏ培地によってブロックして、その後に、１０４個の刺激Ｔ２細胞（１０μＭペプチドの有無とともに）および種々の濃度のエフェクター細胞を添加した。このプレートを一晩インキュベートした。翌日、培地を廃棄して、そのウェルを洗浄し、その後にビオチン化二次抗体（７−Ｂ６−１−Ｂｉｏｔｉｎ，Ｍａｂｔｅｃｈ）を添加した。このプレートを２時間インキュベートして、洗浄して、アビジン−酵素結合体（ＡＰ−Ａｖｉｄｉｎ，Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ，Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を各々のウェルに添加した。プレートを室温で１時間インキュベートし、そして酵素基質ＮＢＴ／ＢＣＩＰ（Ｇｉｂｃｏ，Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を各々のウェルに添加して、室温で５〜１０分間インキュベートした。その反応を、濃い紫のスポットの出現の際に上水で洗浄することによって終わらせた。このスポットをＩｍｍｕｎｏＳｐｏｔ（登録商標）Ｓｅｒｉｅｓ  ２．０  Ａｎａｌｙｚｅｒ（ＣＴＬ  Ａｎａｌｙｚｅｒｓ，ＬＬＣ，Ｃｌｅｖｅｌａｎｄ，ＵＳ）を用いてカウントして、そのペプチド特異的なＣＴＬ頻度は、スポット形成細胞の数から算出してもよい。全てのアッセイは、各々のペプチド抗原について三連で行った。
【０３０５】
結果
サバイビンペプチドを用いて得られる臨床的結果の概説は以下を含む；患者の略称、ワクチン接種の回数、および臨床反応は、表３にまとめる。
【０３０６】
【表３】
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転移性悪性黒色腫（Ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ  ｍｅｌａｎｏｍａ）（ＭＭ）、膵臓癌（Ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ  ｃａｎｃｅｒ）（ＰＣ）。完全寛解（Ｃｏｍｐｌｅｔｅ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ）（ＣＲ）、部分反応（Ｐａｒｔｉｅｌ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ）（ＰＲ）、安定な疾患（Ｓｔａｂｌｅ  ｄｉｓｅａｓｅ）（ＳＤ）および進行性疾患（Ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅ  ｄｉｓｅａｓｅ）（ＰＤ）。
【０３０７】
毒性：治療誘発性の副作用は観察されなかった。全身的または局所的な毒性の徴候は、注射部位では観察されなかった。脈管の変化、例えば、脈管炎または障害された創傷治癒の徴候に特に注意が向けられた。ヘモグロビン、白血球および血小板、ならびに乳酸脱水素酵素、クレアチニンおよびコリンエステラーゼは、ワクチン接種療法によって影響されなかった（データ示さず）。従って、脈管の変化の臨床的な徴候も組織学的な徴候も検出できなかった。さらに、障害された創傷治癒の徴候、出血性障害、心機能障害、脈管炎、または炎症性腸疾患の徴候もなかった。従って、サバイビンワクチンは、正常な造血機能を保持しているガン患者にとっては耐容性であってかつ安全である。
【０３０８】
臨床的有効性：客観的な臨床反応が、かなり望ましくない予後予測を有するこの群の患者で存在した。この反応には、２〜３の患者での内蔵転移の完全な腫瘍の退行を含んだが、ほとんどは疾患の安定化から構成された。顕著なことに、それぞれ皮膚黒色腫（ＪｕＳｃ）および膵臓の腺癌（ＯｔＳｃ）と診断された２例の患者では、その患者が以前の化学療法（それぞれ、Ｔｅｍｏｄａｌ（登録商標）またはＧｅｍｚａｒ（登録商標））に対して反応できなかったという事実にもかかわらず、完全な腫瘍の退行（完全寛解）が生じた（表３）。このように、この臨床的な結果によって、異常に高い奏功率および臨床的有効性をともなう、極めて首尾よい処置が実証される。
【０３０９】
サバイビン特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞応答
細胞傷害性Ｔ細胞応答の動態を患者で追跡した。ワクチン接種の前後に得たＰＢＭＣを、ＩＦＮ−γについてのＥＬＩＳＰＯＴによって、改変サバイビン９６−１０４エピトープに対する反応性について試験した。試験した全ての患者で、サバイビン反応性Ｔ細胞の誘導が証明された。２例の完全応答患者ＯｔＳｃ（膵臓癌に罹患）およびＪｕＳｃ（黒色腫に罹患）について、ＰＢＬをワクチン接種の前に、そしてワクチン接種の開始の１ヶ月、３ヶ月および６ヶ月後に分析した。患者ＯｔＳｃでは、強力な応答がワクチン接種トライアルの開始の既に１ヵ月後に存在した。この応答は、３ヶ月および６ヵ月後にはさらに強力であった。従って、１０４個あたり６００を超えるサバイビン特異的な細胞が、検出され得る（図１）。患者ＪｕＳｃでは、応答は、６ヵ月後まで検出されなかった（図２）が、この時点で、患者ＯｔＳｃとちょうど同じ程度強力であった。さらに、本発明者らは、ワクチン接種前に、そしてワクチン接種トライアルの開始の１ヶ月および４ヵ月後に黒色腫患者ＳｉＳｔ由来のＰＢＬを分析した。患者ＳｉＳｔでは、強力な応答が、ワクチン接種の４ヵ月後に検出された（図３）。最終的に、２つの極めて後期の段階の黒色腫患者（ＡｌＫａおよびＥｒＥｉ）由来のＰＢＬを分析し、ここでは患者は、疾患で死ぬ前に、４回のワクチン接種を受けることができただけであった。これらの両方の患者とも、サバイビンペプチドに対する応答が導入された（データ示さず）。このデータによって、かなり進行した疾患を有するこれらの強力に事前処置された患者でさえ、極めて強力なサバイビン特異的なＴ細胞反応が、試験された全ての患者の循環リンパ球のプール内で開始されたことが実証される。従って、ワクチン接種された患者から得られたＰＢＬの１回のインビトロ刺激後、２５０を越えるＩＦＮ−γ放出細胞、そして特定の実施例では、１０４個の細胞あたり６００を超えるＩＦＮ−γ放出細胞が検出された。
【０３１０】
実施例２
免疫組織化学的染色
ビオチン化ペプチド／ＨＬＡ複合体を、ストレプトアビジン−ＦＩＴＣ−結合体化デキストラン分子（ＤＡＫＯ，Ｇｌｏｓｔｒｕｐ，Ｄｅｎｍａｒｋ）で多量体化して、免疫組織化学のための多価ＨＬＡ−デキストラン化合物を生成する。組織切片を、一晩乾燥させて、引き続き冷アセトン中で５分間固定した。全てのインキュベーション工程は、暗野において室温で行った：（ａ）一次抗体の４５分（１：１００希釈）（ｂ）Ｃｙ  ３−結合体化ヤギ抗マウス（１：５００希釈；コード１１５−１６５−１００；Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ，Ｄｉａｎｏｖａ，Ｈａｍｂｕｒｇ，Ｇｅｒｍａｎｙから入手）で４５分間；そして最後は（ｃ）多量体で７５分間。各々の工程の間、スライドは、ＰＢＳ／ＢＳＡの０．１％中で１０分間、２回洗浄した。このスライドを、ベクタシールド（ｖｅｃｔａｓｈｉｅｌｄ）中に装填して、共焦点顕微鏡（Ｌｅｉｃａ）での検査まで冷蔵庫に保管する。
【０３１１】
【表４】
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【配列表】
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