(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
メトトレキセート（MTX）活性物質の有効量を、該MTX活性物質の毒性を低減するのに有効な量のMTX毒性低減アジュバントと併せて、宿主に投与する段階
を含む、MTX活性物質の有効量をそれを必要としている宿主に投与する方法に用いるための、MTX活性物質およびMTX毒性低減アジュバントを含む薬学的組成物であって、該MTX毒性低減アジュバントが、下記式（I）の2,2'-アンヒドロピリミジンもしくはその薬学的に許容される塩、またはその立体異性体である、薬学的組成物：
0005504179.tif 000026
式中、
R1およびR2は、水素、ヒドロキシル、スルフヒドリル、アミノ、アルキルアミノ、ヒドロキシメチル、メトキシ、ハロゲン、擬ハロゲン、および1〜20個の炭素を含む置換または無置換低級炭化水素からなる群より独立に選択され；かつ
R3およびR4は、ヒドロキシル、ハロゲンおよびベンゾイルオキシからなる群より独立に選択される。
【請求項２】
R1およびR2が、モノアルキルアミノ、モノアラルキルアミノ、およびアルコキシ；アリール置換アルコキシ；イミデート；アリルチオおよびアルキル置換アリールチオから選択される基で置換されていてもよい1〜20個の炭素を含む低級アルキルからなる群より独立に選択され、
かつ
R3およびR4が、ヒドロキシルおよびベンゾイルオキシからなる群より独立に選択される、請求項1記載の薬学的組成物。
【請求項３】
R1が、H、F、CF3、CH3、CH3CH2、CH3CH2CH2、(CH3)2CH、(CH3)2CH2CH2、CH3(O)CCH2、CH3(O)CCH2CH2、Br-CH=CH、フェニル、ベンジル、ベンゾイル、ベンジルオキシベンジル、ベンジル-NH-、CH3CH2OCH2、ベンジル-O-CH2、CH3OCH2、CH3C(NH)-O-CH2、またはCH3-フェニル-O-CH2であり；R2が、水素であり；かつR3およびR4が、ヒドロキシルである、請求項1記載の薬学的組成物。
【請求項４】
2,2'-アンヒドロピリミジンが、下記構造のいずれかひとつによって表される化合物、またはその薬学的に許容される塩である、請求項1記載の薬学的組成物
0005504179.tif 000027
。
【請求項５】
R1が水素、メチル、エチル、プロピル、またはベンジルであり； R2が水素であり；かつR3およびR4がヒドロキシルである、請求項1記載の薬学的組成物。
【請求項６】
R1が水素またはメチルであり；R2が水素であり；かつR3およびR4がそれぞれ、ヒドロキシルおよびベンゾイルオキシからなる群より独立に選択される、請求項1記載の薬学的組成物。
【請求項７】
前記2,2'-アンヒドロピリミジンが2,2'-アンヒドロ-5-メチルウリジンである、請求項1記載の薬学的組成物。
【請求項８】
前記MTX活性物質の前記毒性が粘膜炎である、請求項1〜7のいずれか一項記載の薬学的組成物。
【請求項９】
前記粘膜炎が口内炎である、請求項8記載の薬学的組成物。
【請求項１０】
薬学的に許容される媒体中にMTX活性物質およびMTX毒性低減アジュバントの両方の有効量を含む薬学的組成物であって、該MTX毒性低減アジュバントが、下記式（I）の2,2'-アンヒドロピリミジンもしくはその薬学的に許容される塩、またはその立体異性体である、薬学的組成物：
0005504179.tif 000028
式中、
R1およびR2は、水素、ヒドロキシル、スルフヒドリル、アミノ、アルキルアミノ、ヒドロキシメチル、メトキシ、ハロゲン、擬ハロゲン、および1〜20個の炭素を含む置換または無置換低級炭化水素からなる群より独立に選択され；かつ
R3およびR4は、ヒドロキシル、ハロゲンおよびベンゾイルオキシからなる群より独立に選択される。
【請求項１１】
R1およびR2が、モノアルキルアミノ、モノアラルキルアミノ、およびアルコキシ；アリール置換アルコキシ；イミデート；アリルチオおよびアルキル置換アリールチオから選択される基で置換されていてもよい1〜20個の炭素を含む低級アルキルからなる群より独立に選択され、
かつ
R3およびR4が、ヒドロキシルおよびベンゾイルオキシからなる群より独立に選択される、請求項10記載の薬学的組成物。
【請求項１２】
R1が、H、F、CF3、CH3、CH3CH2、CH3CH2CH2、(CH3)2CH、(CH3)2CH2CH2、CH3(O)CCH2、CH3(O)CCH2CH2、Br-CH=CH、フェニル、ベンジル、ベンゾイル、ベンジルオキシベンジル、ベンジル-NH-、CH3CH2OCH2、ベンジル-O-CH2、CH3OCH2、CH3C(NH)-O-CH2、またはCH3-フェニル-O-CH2であり；R2が、水素であり；かつR3およびR4が、ヒドロキシルである、請求項10記載の薬学的組成物。
【請求項１３】
2,2'-アンヒドロピリミジンが、下記構造のいずれかひとつによって表される化合物、またはその薬学的に許容される塩である、請求項10記載の薬学的組成物
0005504179.tif 000029
。
【請求項１４】
R1が水素、メチル、エチル、プロピル、またはベンジルであり；R2が水素であり；かつR3およびR4がヒドロキシルである、請求項10記載の薬学的組成物。
【請求項１５】
R1が水素またはメチルであり；R2が水素であり；かつR3およびR4がそれぞれ、ヒドロキシルおよびベンゾイルオキシからなる群より独立に選択される、請求項10記載の薬学的組成物。
【請求項１６】
前記2,2'-アンヒドロピリミジンが2,2'-アンヒドロ-5-メチルウリジンである、請求項10記載の薬学的組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
35 U.S.C. § 119 (e)に従い、本出願は2008年3月3日提出の米国特許仮出願第61/033,333号の提出日に対する優先権を主張し；この出願の開示は参照により本明細書に組み入れられる。
【背景技術】
【０００２】
序論
細胞におけるテトラヒドロ葉酸塩（THF）の存在は、DNAおよびRNAの生合成、複製および修復などの、重要な生命維持プロセスを提供する。THFは、これらのプロセスを促進する生化学反応を完了するために必要な基質を提供することにより、この機能を行う。THFは、酵素であるジヒドロ葉酸レダクターゼ（DHFR）による葉酸の還元または他のジヒドロ葉酸中間体を通じて、細胞内で生合成される。プテリジン化合物のメトトレキセート（MTX；N-[4-[[(2,4-ジアミノ-6-プテリジニル)メチル]メチルアミノ]ベンゾイル]-L-グルタミン酸）は、葉酸に構造が類似している（以下の葉酸およびMTXの構造参照）。
0005504179.tif 000002
【０００３】
結果として、MTXはDHFRの活性部位に結合し、DNA合成に必要とされる、ヌクレオシドチミジンの新規合成に必要なTHFの生成を、競合的阻害により阻止することができる。また、葉酸塩はプリン塩基合成に必要で、したがってすべてのプリン合成が阻害されることになる。したがって、メトトレキセートは、DNA、RNA、チミジル酸、およびタンパク質の合成を阻害し、MTXの核酸合成を阻害する能力は異所性細胞増殖の治療において50年以上もの間利用されてきた（(Jolivet et al., N Engl J Med; 309:1094-1104(1983)；Gangjee, Anti-Cancer Agents in Medicinal Chemistry; 7: 524-542 (2007)；Assaraf, Metastasis Review; 26: 153-181 (2007)；Huennekens; Advanced Enzyme Regulation; 34: 397-419 (1994)；Walling, Investigational New Drugs; 24: 37-77 (2006)；Gangjee, Jain, Hiteshkumar, Current Medicinal Chemistry; 4: 405-410 (2004)）。特に、悪性細胞は典型的に、正常細胞よりも急速に増殖するためTHFの必要性がより高く、したがってMTXの効果に対し感受性がより高い。多くの場合、MTXは正常細胞の増殖を損傷することなく、癌性細胞の増殖を選択的に損なうために用いることができる。急速に増殖する細胞に対するその有効性の結果、MTXは固形および血液両方の癌の治療のために指示される、最も広く用いられる抗癌剤の1つである。例えば、MTXは妊娠性絨毛癌、侵入胞状奇胎、胞状奇胎、白血病（例えば、急性リンパ性白血病）、乳癌、頭頸部の類表皮癌、進行性菌状息肉症（皮膚T細胞リンパ腫）、肺癌、非ホジキンリンパ腫や、絨毛癌、侵入胞状奇胎、胞状奇胎などの絨毛性腫瘍などの新生物疾患の治療において単独または他の治療様式と共に用いられる（Physicians Desk Reference, 60th ed., Thomson Healthcare, Stamford, CT (2006)；Goodman & Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics, 11th ed., McGraw-Hill Columbus, OH (2005)；The Merck Manual of Diagnosis and Therapy 18th ed., John Wiley, Hoboken, NJ, (2006)）。
【０００４】
さらに、MTXは組織移植によって起こる移植片対宿主病の予防のため、ならびに乾癬、乾癬性関節炎、関節リウマチおよびクローン病（Kokuryo）などの炎症性疾患の治療のために用いることができる、有効な免疫抑制剤である。MTXは乾癬および関節リウマチの重度および無能化症例の治療のためにしばしば用いられる（Warren et al., Br. J. Dermatology, 153(5), 869-873 (2005)；Cronstein, Pharmacol. Rev., 57(2), 163-172 (2005)）。
【０００５】
MTXおよびMTX類縁体、MTXまたはその類縁体の合成法、ならびにMTXの使用を開示している、既発行の多くの特許は、異所性細胞増殖の治療におけるMTXの重要性を証明している。例えば、米国特許第2,512,572号は活性物質MTXを対象とし、米国特許第3,892,801号、第3,989,703号、第4,057,548号、第4,067,867号、第4,079,056号、第4,080,325号、第4,136,101号、第4,224,446号、第4,306,064号、第4,374,987号、第4,421,913号、および第4,767,859号は、MTXの調製法またはMTXの合成における可能な中間体を特許請求している。米国特許第3,981,983号、第4,043,759号、第4,093,607号、第4,279,992号、第4,376,767号、第4,401,592号、第4,489,065号、第4,622,218号、第4,625,014号、第4,638,045号、第4,671,958号、第4,699,784号、第4,785,080号、第4,816,395号、第4,886,780号、第4,918,165号、第4,925,662号、第4,939,240号、第4,983,586号、第4,997,913号、第5,024,998号、第5,028,697号、第5,030,719号、第5,057,313号、第5,059,413号、第5,082,928号、第5,106,950号、および第5,108,987号などの他の特許はMTXの標識類縁体を開示し、ここでMTXは、MTXの検定において、持効性MTXにおいて、癌細胞に選択的な毒素として、または膜もしくはインビボ障壁を通過してのMTXの輸送を促進するために用いるための、放射性ヌクレオチドもしくは蛍光標識、アミノ酸、ポリペプチド、トランスフェリンもしくはセルロプラスミン、コンドロイチンもしくは硫酸コンドロイチン、抗体、または標的細胞の特異的細胞表面受容体の結合相手に結合されている。
【０００６】
MTXの使用法を開示している、既発行の多くの特許の中で、米国特許第4,106,488号、第4,558,690号、および第4,662,359号などの様々な特許は癌を治療するためのMTXの使用法を開示している。
【０００７】
残念なことに、MTX療法の有効性および広範な適用を考慮しても、この薬剤による治療は患者に対する著しいリスクを伴う重篤な副作用を含む。MTXは細胞の複製および分裂を妨害するため、腸粘膜および骨髄などの活発に増殖している非悪性組織はMTXへの感受性が高く、MTX治療による増殖損傷を示すこともある。MTXおよびメトトレキセートの代謝物、7-OH-MTXも、最大の効率のために典型的に必要とされる「高用量治療法」において適用する場合、腎および肝毒性に関連している（Barak et al., J. American Coll. Nutr., 3, 93-96 (1984)；Yazici et al., J. Rheumatol. 29(8), 1586-1589 (2002)）。
【０００８】
胃腸粘膜への損傷は、MTXの副作用の最も衰弱性のものである。粘膜炎として知られるこの合併症は、口腔または消化管のいかなる他の部分にも出現しうる（(Sonis et al., Cancer, 100:1995-2025 (2004)）。患者にとって特に厄介な粘膜炎の型は口内炎、すなわち口内の粘膜の潰瘍で、摂食および嚥下に疼痛が伴い、困難になる状態である。
【０００９】
粘膜炎は、化学療法を受けている癌患者の生活の質を低下させる一方で、入院のリスクを高める（Naidu et al. Neoplasia, 6:423-31 (2004)）。粘膜炎はまた重篤な細菌感染を引き起こすことがあり（Pico et al., Oncologist 3: 446-451 (1998)、およびMcGuire, Support Care Cancer, 11: 435-41 (2003)）、しばしば栄養管を用いる必要を生じる（Treister and Sonis, Curr Opin Otolaryngol Head Neck Surg.;15:123-9 (2007)）。これらの合併症は化学療法の用量の低減、または完全な停止につながることが多く、それにより化学療法の有効性を低減する（Sonis et al., Cancer. 100:1995-2025 (2004)）。粘膜炎による医療ケアの必要性の高まりは、費用の増加も引き起こす（Scully, Sonis, Diz, Oral Dis.；12: 229-41 (2006)）。粘膜炎に対して有効な予防または治療はない（Sonis et al., Rev Cancer. 4: 277-284 (2004)。したがって、化学療法誘発性粘膜炎を改善するアジュバントは、患者の生活の質および予後を改善しうる一方で、癌療法の財政的負荷を低減する。
【発明の概要】
【００１０】
概要
宿主においてメトトレキセート（MTX）の毒性を低減するためのアジュバントの使用法が提供される。本発明の方法において、MTX活性物質の有効量を宿主に、本発明のMTX毒性低減アジュバントの投与と併せて投与し、ここでMTX活性物質およびMTX毒性低減アジュバントは、MTX物質もしくは毒性低減アジュバントのいずれかで開始して逐次、同時、またはその組み合わせで投与してもよい。特定の態様において、MTX毒性低減アジュバントは2,2'-アンヒドロピリミジン、その誘導体またはウリジンホスホリラーゼ（UPase）阻害剤である。同様に提供されるのは、本発明の方法を実施する際に用いるための組成物、例えば、毒性が低減されたMTX薬学的組成物およびこれを含むキットである。本発明の方法および組成物は、様々な異なる疾患状態の治療を含む、様々な異なる適用において用いられる。本発明の方法および組成物の顕著な利点を示す例示的適用は、MTX誘発性粘膜炎の低減である。
[請求項1001]
メトトレキセート（MTX）活性物質の有効量を、該MTX活性物質の毒性を低減するのに有効な量のMTX毒性低減アジュバントと併せて、宿主に投与する段階
を含む、MTX活性物質の有効量をそれを必要としている宿主に投与する方法であって、該MTX毒性低減アジュバントが2,2'-アンヒドロピリミジンまたはその誘導体の少なくとも1つであり、かつウリジンホスホリラーゼ阻害剤である、方法。
[請求項1002]
前記2,2'-アンヒドロピリミジンまたはその誘導体が式（I）の化合物、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物、およびプロドラッグ型、ならびにそれらの立体異性体である、請求項1001記載の方法：
0005504179.tif 000003
式中、
R1、R2、R3およびR4はそれぞれ、水素、置換または無置換ヘテロ原子、置換または無置換アルキル、置換または無置換シクロアルキル、置換または無置換ヘテロシクロアルキル、置換または無置換アリール、置換または無置換ヘテロアリール、置換または無置換アラルキル、炭水化物、核酸、アミノ酸、ペプチド、色素、蛍光体およびポリペプチドからなる群より独立に選択される。
[請求項1003]
R1、R2、R3およびR4がそれぞれ、水素、ヒドロキシル、スルフヒドリル、アミノ、ヒドロキシメチル、メトキシ、ハロゲン、擬ハロゲン、および、1〜20個の炭素を含む置換または無置換低級炭化水素からなる群より独立に選択される、請求項1002記載の方法。
[請求項1004]
前記低級炭化水素がアルキル、アルケニル、アルカノイル、アリール、アロイル、アラルキルおよびアルキルアミノ、ならびにそれらのエステルからなる群より選択される、請求項1003記載の方法。
[請求項1005]
R1が水素、フッ素、メチル、エチル、プロピル、ベンジル、または2-ブロモビニルであり；R2が水素、ヒドロキシル、フッ素、メチル、エチル、プロピル、ベンジル、ベンゾイル、ベンゾイルオキシ、または2-ブロモビニルであり；かつR3およびR4がそれぞれ、ヒドロキシルおよびベンゾイルオキシからなる群より独立に選択される、請求項1002記載の方法。
[請求項1006]
R1が水素またはメチルであり；R2が水素であり；かつR3およびR4がそれぞれ、ヒドロキシルおよびベンゾイルオキシからなる群より独立に選択される、請求項1005記載の方法。
[請求項1007]
R1がCH3CH2OCH2-であり；R2が水素であり；かつR3およびR4がそれぞれ、ヒドロキシルである、請求項1002記載の方法。
[請求項1008]
R1がCH3OCH2-であり；R2が水素であり；かつR3およびR4がそれぞれ、ヒドロキシルである、請求項1002記載の方法。
[請求項1009]
前記2,2'-アンヒドロピリミジンまたはその誘導体が2,2'-アンヒドロ-5-メチルウリジンである、請求項1001記載の方法。
[請求項1010]
前記MTX活性物質の前記毒性が粘膜炎である、請求項1001記載の方法。
[請求項1011]
前記粘膜炎が口内炎である、請求項1010記載の方法。
[請求項1012]
薬学的に許容される媒体中にMTX活性物質およびMTX毒性低減アジュバントの両方の有効量を含む薬学的組成物であって、該MTX毒性低減アジュバントが2,2'-アンヒドロピリミジンもしくはその誘導体であり、かつ/またはウリジンホスホリラーゼ阻害剤である、薬学的組成物。
[請求項1013]
前記2,2'-アンヒドロピリミジンまたはその誘導体が式（I）の化合物、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物、およびプロドラッグ型、ならびにそれらの立体異性体である、請求項1012記載の薬学的組成物：
0005504179.tif 000004
式中、
R1、R2、R3、およびR4はそれぞれ、水素、置換または無置換ヘテロ原子、置換または無置換アルキル、置換または無置換シクロアルキル、置換または無置換ヘテロシクロアルキル、置換または無置換アリール、置換または無置換ヘテロアリール、置換または無置換アラルキル、炭水化物、核酸、アミノ酸、ペプチド、色素、蛍光体およびポリペプチドからなる群より独立に選択される。
[請求項1014]
R1、R2、R3、およびR4がそれぞれ、水素、ヒドロキシル、スルフヒドリル、アミノ、ヒドロキシメチル、メトキシ、ハロゲン、擬ハロゲン、および、1〜20個の炭素を含む置換または無置換低級炭化水素からなる群より独立に選択される、請求項1013記載の薬学的組成物。
[請求項1015]
前記低級炭化水素がアルキル、アルケニル、アルカノイル、アリール、アロイル、アラルキルおよびアルキルアミノ、ならびにそれらのエステルからなる群より選択される、請求項1014記載の薬学的組成物。
[請求項1016]
R1が水素、フッ素、メチル、エチル、プロピル、ベンジル、または2-ブロモビニルであり；R2が水素、ヒドロキシル、フッ素、メチル、エチル、プロピル、ベンジル、ベンゾイル、ベンゾイルオキシ、または2-ブロモビニルであり；かつR3およびR4がそれぞれ、ヒドロキシルおよびベンゾイルオキシからなる群より独立に選択される、請求項1014記載の薬学的組成物。
[請求項1017]
R1が水素またはメチルであり；R2が水素であり；かつR3およびR4がそれぞれ、ヒドロキシルおよびベンゾイルオキシからなる群より独立に選択される、請求項1014記載の薬学的組成物。
[請求項1018]
R1がCH3CH2OCH2-であり；R2が水素であり；かつR3およびR4がそれぞれヒドロキシルである、請求項1012記載の薬学的組成物。
[請求項1019]
R1がCH3OCH2-であり；R2が水素であり；かつR3およびR4がそれぞれヒドロキシルである、請求項1001記載の薬学的組成物。
[請求項1020]
前記2,2'-アンヒドロピリミジンまたはその誘導体が2,2'-アンヒドロ-5-メチルウリジンである、請求項1012記載の薬学的組成物。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】本発明の一態様の2,2'-アンヒドロピリミジンMTX毒性低減アジュバントであるTK-112690の、ハエにおけるMTX毒性を低減する能力（生存度）を示す1組の結果を示す。この試験において、キイロショウジョウバエ（Drosophila melanogaster）の卵（バイアル1本につき卵50個）を0.005mg TK-112690＋0.4mg MTX（第1群）、0.01mg TK-112690＋0.4mg MTX（第2群）、0.04mg TK-112690＋0.4mg MTX（第3群）、0.1mg TK-112690＋0.4mg MTX（第4群）、0.4mg MTX単独（第5群）または食塩水ブランク（第6群）で処理した。各用量群について卵のバイアル2本で生存度（生存可能なハエおよび蛹）を評価した。
【図２】本発明の一態様の2,2'-アンヒドロピリミジンMTX毒性低減アジュバントであるTK-112690の、哺乳動物におけるMTX誘発性の体重減少を緩和する能力を示す1組のデータを示す。C57BL/6マウス（10匹/処置群）に、第1日にLPS（5μg、i.p.）を投与した。第2日に、動物を200mg/kg MTX＋MTX処置の3時間前および3時間後に10または30mg/kg TK-112690で処置した。第3日に、動物にMTX 100mg/kg＋±3時間に10または30mg/kg TKを投与した。第8日に、第8日−第1日の体重をもとめ、結果をANOVAにかけた。第1群＝食塩水単独、第2群＝MTX単独、第3群＝LPS単独、第4群＝MTX＋LPS、第5群＝10mg/kg TK-112690＋MTX＋LPSまたは第6群＝30mg/kg TK-112690＋MTX＋LPS。
【図３】本発明の一態様の2,2'-アンヒドロピリミジンMTX毒性低減アジュバントであるTK-112690の、哺乳動物におけるMTX誘発性の粘膜透過性減少を緩和する能力を示す1組のデータを示す。C57Bl/6雌マウス（n＝7）に、第2、3および4日に100mg/kg MTXの腹腔内（ip）処置を、MTX注射の3時間前および3時間後に60mg/kg TK-112690（ip）と共に、および伴わずに行った。第7日に、粘膜障壁損傷を、経口投与したイオジキサノールの血漿濃度をUV検出を用いたHPLCにより定量して評価した（最小値および最大値（黒線）を伴うボックスプロット）。経口投与したイオジキサノールは粘膜透過性の増大がなければ吸収されない。第1群＝食塩水対照、第2群＝MTXおよび第3群＝MTX＋TK-112690。
【図４】本発明の一態様の2,2'-アンヒドロピリミジンMTX毒性低減アジュバントであるTK-112690の、哺乳動物におけるWBC濃度上昇として評価されるMTX誘発性の感染を緩和する能力を示す1組のデータを示す。C57BL/6マウス（n＝10/用量群）に、第1、2、3、4、6および8日に50mg/kg MTXのi.p.処置を、MTXの±3時間に60mg/kg TK-112690のi.p.処置と共に行い、続いてMTX処置しない日にはTK-112690を1日1回投与した。第11日に、動物を屠殺し、得られた血液で血液検査を実施した。第1群＝食塩水対照、第2群＝MTX対照および第3群＝MTX＋TK-112690。
【図５】本発明の一態様の2,2'-アンヒドロピリミジンMTX毒性低減アジュバントであるTK-112690が、ヒト急性T細胞リンパ芽球性白血病細胞（インビトロでの増殖）におけるMTXの細胞毒性を妨害しないことを示す1組のデータを示す。この試験において、ATCCから購入したCCRF-CEM細胞を培養し、次いで約106細胞を含む12のチューブをそれぞれ培地（第1群）、MTX 0.03μM（第2群）、MTX＋ロイコボリン1μM（第3群）、MTX＋ロイコボリン10μM（第4群）、MTX＋ロイコボリン100μM（第5群）、MTX＋TK-112690 1μM（第6群）、MTX＋TK-112690 10μM（第7群）およびMTX＋TK-112690 100μM（第8群）で72時間処理した。ロイコボリンおよびTK-112690単独による試験は対照（第1群）と統計学的に差がなかった。生存度をalamarBlue吸光度の低下パーセントとして測定した。
【図６】本発明の一態様の2,2'-アンヒドロピリミジンMTX毒性低減アジュバントであるTK-112690が、哺乳動物に移植したヒトリンパ腫細胞（インビボでの増殖）におけるMTXの細胞毒性を妨害しないことを示す1組のデータを示す。この試験において、用量群ごとにn＝10のSCIDマウスをCCRF-CEMヒト腫瘍で処理し、腫瘍を約100mgのサイズまで増殖させた。次いで、動物を対照の20％DMSO/80％PBS（1×/日）×5日間（第1群）、MTX 7.5mg/kg/注射（1×/日）×5日間（第2群）またはMTX 7.5mg/kg/注射（1×/日）×5日間＋±3時間にTK-112690 30mg/kg/注射（第3群）のいずれかによる腹腔内（ip）注射により処置した。図は試験第27日の3群それぞれの腫瘍サイズを示している。
【図７】本発明の一態様の2,2'-アンヒドロピリミジンMTX毒性低減アジュバントであるTK-112690が、ヒトリンパ腫細胞（インビトロでの増殖）におけるMTXの細胞毒性を妨害しないことを示す1組のデータを示す。この試験において、AS283細胞を、L-グルタミンジペプチド、ピルビン酸ナトリウム、HEPES、および10％FBSを補足したRPMI-1640中で培養した。AS283細胞を用いて3つの96穴プレートに全量50μL中、10,000細胞/ウェルで播種した。培地単独のウェルには100μLの培地を加えた。プレートを終夜インキュベートした。翌日、25μLのTK-112690およびMTX保存溶液を適当なウェルに加えた。すべてのウェルにTK-112690をまず加え、続いてMTXを加えた。TK-112690単独のウェルには25μLの媒体を加えた。媒体対照のウェルには25μLの媒体および25μLの培地を加え、細胞対照のウェルには50μLの培地を加えた。細胞生存度をCellTiter-Gloを用いて測定し、DOX（10μM）を標準として用いた。プレートを37℃、5％CO2で72時間インキュベートし、次いでインキュベーターから取り出し、室温のベンチ上に30分間放置した。プレートは重ねず、振盪もしなかった。100μLのCellTiter-Glo試薬を加え、2分間混合し、続いて室温でさらに10分間インキュベートした。発光をTriLuxで記録した。この試験において、MTXはAS283癌細胞に対して細胞毒性であったが、TK-112690（1、10、100μM）はMTX（0.01、0.03、0.1、0.3、1.0、3.0、10、100μM）の細胞毒性を減少させなかった。図7において、上図はMTXまたはMTX＋100および10μMの濃度のTK-112690のいずれかで72時間処理したAS283ヒトリンパ腫細胞のIC50曲線を示し（上図）、一方、下図はMTXおよびMTX＋TK-112690 1.0μMのIC50曲線を示す。
【図８】本発明の一態様の2,2'-アンヒドロピリミジンMTX毒性低減アジュバントであるTK-112690が、哺乳動物に移植したヒトリンパ腫細胞（インビボでの増殖）におけるMTXの細胞毒性を妨害しないことを示す1組のデータを示す。6週齢の雄SCIDマウスにAS283ヒトリンパ腫腫瘍の断片を移植した。腫瘍を75〜198mgの重量（75〜198mm3のサイズ）に到達させた後、処置を開始した。実験は、2つの処置群および1つの媒体処置対照群で構成され、処置第1日には各群10匹で、全30匹であった。TK-112690を30mg/kg/注射の用量でip注射［2日ごとに6時間の間隔で2回を5回注射（q6h×2、q2d×5）］により投与した。MTXをTK-112690注射の3時間後に5.0mg/kg/注射の用量でq2d×5のip注射により投与した。対照群は両方の媒体で処置し、対応する化合物のスケジュールで投与した。初回の処置の日に開始して、週に3回、皮下（sc）腫瘍を測定し、動物を秤量した。試験を腫瘍移植の21日後に停止した。媒体処置対照群の腫瘍は10匹のマウスすべてで評価点まで増殖した。中央の腫瘍は21日で4,387mgに達した。MTX処置はAS283リンパ腫異種移植片の増殖を遅らせ、腫瘍重量中央値は第21日の対照の2.8％、処置開始時の腫瘍重量中央値（162mg）よりも小さく24.7％（40.0mg）であった。TK-112690およびMTXの組み合わせの投与は増殖を遅らせ、腫瘍重量中央値は第21日の対照の3.5％、処置開始時の腫瘍重量中央値（162mg）よりも小さく5.6％（9.0mg）であった。MTX（第2群）およびMTX＋TK-112690（第3群）の腫瘍体積の間に統計学的な差はなかった（p＝1.0）が、いずれの群も食塩水で処置した動物（第1群）の腫瘍体積とは統計学的に大きい差があった（p＜0.01）。MTX投与を受けた群はいずれもボンフェローニの一元配置ANOVAを用いて統計学的に同じであった。ボックスプロットは群中央値（黒線）、四分位数間範囲（ボックス）およびアウトライアーを示す。
【図９】本発明の一態様の2,2'-アンヒドロピリミジンMTX毒性低減アジュバントであるTK-112690が、マウスおよびヒト両方のウリジンホスホリラーゼ（UPase）を阻害することを示す1組のデータを示す。一連のTK-112690用量を、マウスおよびヒト小腸UPase酵素のインビトロでの阻害を通じてウリジンの代謝的分解を防止する能力について試験した。UPase活性を、ウラシル濃度のUV検出を用いたHPLC分析により評価した（UPaseはウリジンをウラシルおよびリボース-1-リン酸に異化する）。UPase酵素材料をホモジナイズしたマウスおよびヒト小腸組織から調製した。TK-112690を水に溶解し（50mg/ml）、5mMウリジン、0.01Mトリス、0.01Mリン酸塩、1mM EDTA、および1mM DTTを含む水溶液中でのUPase阻害について分析した。反応を37℃、pH7.3で行った。マウスおよびヒトUPaseのTK-11260阻害を、UV検出を用いた逆相HPLCによりホモジネート中で定量したウラシルの測定から評価した。結果は、TK-112690がマウス小腸UPase酵素をIC50値12.5μMで阻害することを示している。TK-112690はヒト小腸UPase酵素をIC50値20.0μMで阻害する。
【図１０】本発明の一態様の2,2'-アンヒドロピリミジンMTX毒性低減アジュバントであるTK-112690が、ウリジンホスホリラーゼ（UPase）阻害剤であることをさらに示す1組のデータを示す。UPaseノックアウト（19519）キイロショウジョウバエの幼虫を、飼料添加物中の一連のMTX用量に経口曝露した。野生型（オレゴンR）の幼虫を、0.04mg TK-112690存在下および非存在下で、同じ用量範囲のMTXに経口曝露した。得点はMTX曝露開始の15日後の生存または死亡に基づいていた。UPaseノックアウトキイロショウジョウバエ（19519）は、経口投与したMTXの用量範囲（0.001、0.01、0.05、0.1、0.2、0.4mg）の致死効果に対して抵抗性であることがわかった。野生型キイロショウジョウバエは≧0.1mgのMTXの致死効果に感受性である。野生型キイロショウジョウバエは0.04mg TK-112690存在下で経口投与したMTXの用量範囲（0.001、0.01、0.05、0.1、0.2、0.4mg）の致死効果に対して抵抗性である。図10で見られるとおり、≧0.1mgのメトトレキセート用量は、MTX曝露開始の15日後の野生型のハエに対して致死的である。0.04mg TK-112690を加えることによるUPaseの阻害は、メトトレキセートの0.4mgという高用量による致死性からの保護を提供する。一連の用量範囲のメトトレキセートを投与したUPase突然変異体のハエは、メトトレキセートとTK-112690の組み合わせを投与した野生型のハエで見られたのと同様のメトトレキセートによる致死性からの保護を示した。さらに、一連の用量範囲のメトトレキセートで処理したUPase突然変異体のハエにTK-112690を追加しても、メトトレキセート毒性からの追加の保護を提供することはない。
【図１１】本発明の一態様の2,2'-アンヒドロピリミジンMTX毒性低減アジュバントであるTK-112690が、マウスに投与した場合にウリジンの濃度を高めることを示す1組のデータを示す。この試験において、CD-1雌マウスに120mg/kg TK-112690をip注射し、動物からの血漿をTK-112690およびウリジンについてUV検出を用いたHPLCにより分析した。TK-112690注射の0.08、0.50、1、2、4または12時間後に採取した血漿試料中のウリジンおよびTK-112690の濃度を、UV検出を用いたHPLCによりもとめた。TK-112690の血漿濃度はip投与したTK-112690の用量が上がると共に上昇した。血漿ウリジンの増加はTK-112690の投与のほぼ直後に認められた。TK-112690投与後0.5時間の時点で、TK-112690の血漿濃度は100μg/mLで、ウリジンの血漿濃度は約2μg/mLである（基準線のウリジン濃度は約0.5μg/mL）。予想通り、TK-112690によるUPaseの阻害は血漿ウリジンの上昇をもたらす。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
定義
化合物、そのような化合物を含む薬学的組成物、ならびにそのような化合物および組成物の使用法を記載する場合、下記の用語は特に記載がないかぎり下記の意味を有する。また、以下に定義する任意の部分は様々な置換基で置換されていてもよく、それぞれの定義はそれらの範囲内にそのような置換部分を含むことが意図されることも理解されるべきである。
【００１３】
「アシル」とは、-C(O)Rなる基であって、Rが本明細書において定義される水素、アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、アリールアルキル、ヘテロアルキル、またはヘテロアリールである基を意味する。代表例には、ホルミル、アセチル、シクロヘキシルカルボニル、シクロヘキシルメチルカルボニル、ベンゾイル、ベンジルカルボニルなどが含まれるが、それらに限定されるわけではない。
【００１４】
「アシルアミノ」とは、-NR'C(O)Rなる基であって、R'が本明細書において定義される水素、アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、アリールアルキル、ヘテロアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキルであり、Rが水素、アルキル、アルコキシ、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、アリールアルキル、ヘテロアルキル、ヘテロアリールまたはヘテロアリールアルキルである基を意味する。代表例には、ホルミルアミノ、アセチルアミノ、シクロヘキシルカルボニルアミノ、シクロヘキシルメチル-カルボニルアミノ、ベンゾイルアミノ、ベンジルカルボニルアミノなどが含まれるが、それらに限定されるわけではない。
【００１５】
「アシルオキシ」とは、-OC(O)H、-OC(O)-アルキル、-OC(O)-アリールまたは-OC(O)-シクロアルキルなる基を意味する。
【００１６】
「脂肪族」とは、構成成分である炭素原子の直鎖、分枝または環式配置および芳香族不飽和の欠如によって特徴づけられる、ヒドロカルビル有機化合物または基を意味する。脂肪族には、アルキル、アルキレン、アルケニル、アルケニレン、アルキニルおよびアルキニレンが含まれるが、それらに限定されるわけではない。脂肪族基は典型的には1または2個から6または12個までの炭素原子を有する。
【００１７】
「アルケニル」とは、直鎖または分枝でありえ、少なくとも1つ、特に1つ〜2つのオレフィン不飽和部位を有する、最大約11個の炭素原子、特に2〜8個の炭素原子、特に2〜6個の炭素原子を有する一価オレフィン不飽和ヒドロカルビル基を意味する。特定のアルケニル基には、エテニル（-CH=CH2）、n-プロペニル（-CH2CH=CH2）、イソプロペニル（-C(CH3)=CH2）、ビニルおよび置換ビニルなどが含まれる。
【００１８】
「アルコキシ」とは、-O-アルキルなる基を意味する。特定のアルコキシ基には、例として、メトキシ、エトキシ、n-プロポキシ、イソプロポキシ、n-ブトキシ、tert-ブトキシ、sec-ブトキシ、n-ペントキシ、n-ヘキソキシ、1,2-ジメチルブトキシなどが含まれる。
【００１９】
「アルコキシカルボニル」とは、-C(O)-アルコキシなる基であって、アルコキシが本明細書において定義されるとおりである基を意味する。
【００２０】
「アルコキシカルボニルアミノ」とは、-NRC(O)OR'なる基であって、Rが水素、アルキル、アリールまたはシクロアルキルであり、R'がアルキルまたはシクロアルキルである基を意味する。
【００２１】
「アルキル」とは、特に最大約12または18個の炭素原子、特に低級アルキルとして1〜8個の炭素原子、特に1〜6個の炭素原子を有する一価飽和脂肪族ヒドロカルビル基を意味する。炭化水素鎖は直鎖または分枝のいずれであってもよい。この用語は、メチル、エチル、n-プロピル、イソプロピル、n-ブチル、イソ-ブチル、tert-ブチル、n-ヘキシル、n-オクチル、tert-オクチルなどの基によって例示される。「アルキル」なる用語は、本明細書において定義される「シクロアルキル」も含む。
【００２２】
「アルキレン」とは、直鎖または分枝でありうる、特に最大約12または18個の炭素原子、特に1〜6個の炭素原子を有する二価飽和脂肪族ヒドロカルビル基を意味する。この用語は、メチレン（-CH2-）、エチレン（-CH2CH2-）、プロピレン異性体（例えば、-CH2CH2CH2-および-CH(CH3)CH2-）などの基によって例示される。
【００２３】
「アルキニル」とは、直鎖または分枝でありえ、少なくとも1つ、特に1つ〜2つのアルキニル不飽和部位を有する、特に最大約12または18個の炭素原子、特に2〜6個の炭素原子を有するアセチレン不飽和ヒドロカルビル基を意味する。アルキニル基の特定の非限定例には、アセチレン型、エチニル（-C≡CH）、プロパルギル（-CH2C≡CH）などが含まれる。
【００２４】
「アミノ」とは、-NH2なる基を意味する。
【００２５】
「アミノ酸」とは、D、L、またはDL型の任意の天然アミノ酸（例えば、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Glu、Gln、Gly、His、Hyl、Hyp、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、およびVal）を意味する。天然アミノ酸の側鎖は当技術分野において周知で、例えば、水素（例えば、グリシンのような）、アルキル（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリンのような）、置換アルキル（例えば、トレオニン、セリン、メチオニン、システイン、アスパラギン酸、アスパラギン、グルタミン酸、グルタミン、アルギニン、およびリジンのような）、アルカリール（例えば、フェアラニンおよびトリプトファンのような）、置換アリールアルキル（例えば、チロシンのような）、およびヘテロアリールアルキル（例えば、ヒスチジンのような）が含まれる。
【００２６】
「アミノカルボニル」とは、-C(O)NRRなる基であって、Rがそれぞれ独立に水素、アルキル、アリールもしくはシクロアルキルであるか、またはR基が一緒になってアルキレン基を形成している基を意味する。
【００２７】
「アミノカルボニルアミノ」とは、-NRC(O)NRRなる基であって、Rがそれぞれ独立に水素、アルキル、アリールもしくはシクロアルキルであるか、または2つのR基が一緒になってアルキレン基を形成している基を意味する。
【００２８】
「アミノカルボニルオキシ」とは、-OC(O)NRRなる基であって、Rがそれぞれ独立に水素、アルキル、アリールもしくはシクロアルキであるか、またはR基が一緒になってアルキレン基を形成している基を意味する。
【００２９】
「アミノ含有糖質基」とは、アミノ置換基を有する糖質基を意味する。代表的なアミノ含有糖質にはL-バンコサミン、3-デスメチル-バンコサミン、3-エピ-バンコサミン、4-エピ-バンコサミン、アコサミン、アクチノサミン、ダウノサミン、3-エピ-ダウノサミン、リストサミン、N-メチル-D-グルカミンなどが含まれる。
【００３０】
「アラルキル」または「アリールアルキル」とは、上で定義された1つまたは複数のアリール基で置換されている、上で定義されたアルキル基を意味する。
【００３１】
「アリール」とは、親芳香環系の1個の炭素原子から1個の水素原子を除去することによって誘導される一価芳香族炭化水素基を意味する。典型的なアリール基には、アセアントリレン、アセナフチレン、アセフェナントリレン、アントラセン、アズレン、ベンゼン、クリセン、コロネン、フルオランテン、フルオレン、ヘキサセン、ヘキサフェン、ヘキサレン、as-インダセン、s-インダセン、インダン、インデン、ナフタレン、オクタセン、オクタフェン、オクタレン、オバレン、ペンタ-2,4-ジエン、ペンタセン、ペンタレン、ペンタフェン、ペリレン、フェナレン、フェナントレン、ピセン、プレイアデン、ピレン、ピラントレン、ルビセン、トリフェニレン、トリナフタレンなどから誘導される基が含まれるが、それらに限定されるわけではない。特に、アリール基は6〜14個の炭素原子を含む。
【００３２】
「アリールオキシ」とは、-O-アリール基であって、「アリール」が本明細書において定義されるとおりである基を意味する。
【００３３】
「自己免疫疾患」または「自己免疫状態」とは、体組織がそれ自体の免疫系によって攻撃される場合に起こる病気を意味する。自己免疫疾患または状態の例には、多発性硬化症、強直性脊椎炎、クローン病、関節炎、乾癬、ベーチェット病および乾癬性関節炎が含まれる。
【００３４】
「アジド」とは、-N3なる基を意味する。
【００３５】
「炭水化物」とは、単糖、二糖、三糖、または多糖を意味し、ここで多糖は最大約20,000の分子量を有しえ、例えば、ヒドロキシプロピル-メチルセルロースまたはキトサンが挙げられる。「炭水化物」は、アンヒドロピリミジン（例えば、アンヒドロチミジンまたはアンヒドロウリジン）、またはその誘導体に、糖質部分の任意の原子、例えば、アグリコン炭素原子を介して共有結合されている、酸化、還元または置換糖質モノラジカルも含む。「単糖、二糖、三糖、または多糖」は、アミノ含有糖質基も含みうる。代表的な「炭水化物」には、例として、D-グルコース、D-マンノース、D-キシロース、D-ガラクトース、バンコサミン、3-デスメチル-バンコサミン、3-エピ-バンコサミン、4-エピ-バンコサミン、アコサミン、アクチノサミン、ダウノサミン、3-エピ-ダウノサミン、リストサミン、D-グルカミン、N-メチル-D-グルカミン、D-グルクロン酸、N-アセチル-D-グルコサミン、N-アセチル-D-ガラクトサミン、シアル酸（sialyic acid）、イズロン酸、L-フコースなどの六炭糖；D-リボースまたはD-アラビノースなどの五炭糖；D-リブロースまたはD-フルクトースなどのケトース；2-O-(α-L-バンコサミニル)-β-D-グルコピラノース-、2-O-(3-デスメチル-α-L-バンコサミニル)-β-D-グルコピラノース、スクロース、ラクトース、またはマルトースなどの二糖；アセタール、アミン、アシル化、硫酸化およびリン酸化糖などの誘導体；2〜10の糖質単位を有するオリゴ糖が含まれる。糖質はその開環、rピラノースまたはフラノース型のいずれかでありうる。
【００３６】
「カルボキシル」とは、-C(O)OHなる基を意味する。
【００３７】
「シアノ」とは、-CNなる基を意味する。
【００３８】
「シクロアルケニル」とは、3〜10個の炭素原子を有し、1つの環または縮合および架橋環系を含む複数の縮合環を有し、少なくとも1つ、特に1つ〜2つのオレフィン不飽和部位を有する、環式ヒドロカルビル基を意味する。そのようなシクロアルケニル基には、例として、シクロヘキセニル、シクロペンテニル、シクロプロペニルなどの単環構造が含まれる。
【００３９】
「シクロアルキル」とは、3〜約10個の炭素原子を有し、1つの環または縮合および架橋環系を含む複数の縮合環を有する、環式ヒドロカルビル基であって、1つ〜3つのアルキル基で置換されていてもよい基を意味する。そのようなシクロアルキル基には、例として、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロオクチル、1-メチルシクロプロピル、2-メチルシクロペンチル、2-メチルシクロオクチルなどの単環構造、およびアダマンチルなどの多環構造が含まれる。「ヘテロシクロアルキル」とは、N、OおよびSから独立に選択される1つまたは複数のヘテロ原子を含む、安定な複素環式非芳香環および縮合環を意味する。縮合複素環系は炭素環を含んでいてもよく、1つの複素環を含むことだけが必要である。複素環の例には、ピペラジニル、ホモピペラジニル、ピペリジニルおよびモルホリニルが含まれるが、それらに限定されるわけではない。
【００４０】
「ハロ」または「ハロゲン」とは、フルオロ、クロロ、ブロモおよびヨードを意味する。ハロ基はフルオロまたはクロロのいずれかでありうる。
【００４１】
化合物または化合物上にある基を記載するために用いる場合の「ヘテロ」とは、化合物または基の1つまたは複数の炭素原子が窒素、酸素、または硫黄ヘテロ原子で置き換えられていることを意味する。ヘテロは、1〜5個、特に1〜3個のヘテロ原子を有する、アルキル、例えばヘテロアルキル、シクロアルキル、例えばへテロシクロアルキル、アリール、例えばヘテロアリール、シクロアルケニル、例えば、ヘテロシクロアルケニル、シクロヘテロアルケニル、例えば、ヘテロシクロヘテロアルケニルなどの、前述の任意のヒドロカルビル基に適用してもよい。ヘテロ原子は炭素または水素以外の任意の原子であり、典型的には、窒素、酸素、硫黄、リン、ホウ素、塩素、臭素、またはヨウ素であるが、それだけではない。非置換ヘテロ原子とは、アミン、ヒドロキシルおよびチオールなどの側鎖ヘテロ原子を意味する。置換ヘテロ原子とは、側鎖ヘテロ原子以外のヘテロ原子を意味する。
【００４２】
「ヘテロアリール」とは、親芳香族複素環系の1個の原子から1個の水素原子を除去することによって誘導される一価芳香族複素環基を意味する。典型的なヘテロアリール基には、アクリジン、アルシンドール、カルバゾール、β-カルボリン、クロマン、クロメン、シンノリン、フラン、イミダゾール、インダゾール、インドール、インドリン、インドリジン、イソベンゾフラン、イソクロメン、イソインドール、イソインドリン、イソキノリン、イソチアゾール、イソキサゾール、ナフチリジン、オキサジアゾール、オキサゾール、ペリミジン、フェナントリジン、フェナントロリン、フェナジン、フタラジン、プテリジン、プリン、ピラン、ピラジン、ピラゾール、ピリダジン、ピリジン、ピリミジン、ピロール、ピロリジン、キナゾリン、キノリン、キノリジン、キノキサリン、テトラゾール、チアジアゾール、チアゾール、チオフェン、トリアゾール、キサンテンなどから誘導される基が含まれるが、それらに限定されるわけではない。ヘテロアリール基は5〜20員ヘテロアリール、または5〜10員ヘテロアリールである。特定のヘテロアリール基は、チオフェン、ピロール、ベンゾチオフェン、ベンゾフラン、インドール、ピリジン、キノリン、イミダゾール、オキサゾールおよびピラジンから誘導されるものである。
【００４３】
「ヒドロキシル」とは、-OHなる基を意味する。
【００４４】
「ニトロ」とは、-NO2なる基を意味する。
【００４５】
「ペプチド」とは、最大2、5、10、または約100アミノ酸残基を含むポリアミノ酸を意味する。
【００４６】
「ポリペプチド」とは、約100アミノ酸単位から約1,000アミノ酸単位、約100アミノ酸単位から約750アミノ酸単位、または約100アミノ酸単位から約500アミノ酸単位を含むポリアミノ酸を意味する。
【００４７】
「増殖性疾患」または「増殖性状態」とは、根源的病態として病的な増殖を特徴とする疾患または状態を意味する。例には癌、関節炎および乾癬が含まれる。
【００４８】
「副作用」とは、メトトレキセートの投与に関連する粘膜炎などの、薬物投与の望ましくない有害な結果を意味する。
【００４９】
所与の化合物に関する「立体異性体」は当技術分野において十分に理解されており、同じ分子式を有するもう一つの化合物であって、他方の化合物を構成している原子が空間での配向様式において異なるが、他方の化合物の原子はどの原子が他のどの原子に連結するかに関して所与の化合物の原子と同様である化合物（例えば、鏡像異性体、ジアステレオマー、または幾何異性体）を意味する。例えば、Morrison and Boyd, Organic Chemistry, 1983, 4th ed., Allyn and Bacon, Inc., Boston, MA, p. 123参照。
【００５０】
「置換（されている）」とは、1つまたは複数の水素がそれぞれ独立に同じまたは異なる置換基で置き換えられている基を意味する。「置換されている」基は特に、アシル、アシルアミノ、アシルオキシ、アルコキシ、置換アルコキシ、アルコキシカルボニル、アルコキシカルボニルアミノ、アミノ、置換アミノ、アミノカルボニル、アミノカルボニルアミノ、アミノカルボニルオキシ、アリール、アリールオキシ、アラルキル、アジド、カルボキシル、シアノ、シクロアルキル、置換シクロアルキル、ハロゲン、ヒドロキシル、イミデート、ケト、ニトロ、チオアルコキシ、置換チオアルコキシ、チオアリールオキシ、チオケト、チオール、アルキルチオ、(置換アルキル)チオ、アリールチオ、(置換アリール)チオ、アルキル-S(O)-、アリール-S(O)-、アルキル-S(O)2-およびアリール-S(O)2からなる群より選択される、1つまたは複数の置換基、例えば1つ〜5つの置換基、特に1つ〜3つの置換基を有する基を意味する。典型的な置換基には、-X、-R8（ただしR8は水素ではない）、-O-、=O、-OR8、-SR8、-S-、=S、-NR8R9、=NR8、-CX3、-CF3、-CN、-OCN、-SCN、-NO、-NO2、=N2、-N3、-S(O)2O-、-S(O)2OH、-S(O)2R8、-OS(O2)O-、-OS(O)2R8、-P(O)(O-)2、-P(O)(OR8)(O-)、-OP(O)(OR8)(OR9)、-C(O)R8、-C(S)R8、-C(O)OR8、-C(O)NR8R9、-C(O)O-、-C(S)OR8、-NR10C(O)NR8R9、-NR10C(S)NR8R9、-NR11C(NR10)NR8R9および-C(NR10)NR8R9が含まれるが、それらに限定されるわけではなく、ここでXはそれぞれ独立にハロゲンである。
【００５１】
「置換アミノ」には、本明細書の「置換（されている）」の定義において挙げられる基が含まれ、特に、-N(R)2なる基であって、Rがそれぞれ水素、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アリール、シクロアルキル、置換シクロアルキルからなる群より独立に選択される基、および両方のR基が一緒になってアルキレン基を形成する基を意味する。
【００５２】
「チオアルコキシ」とは、-S-アルキルなる基を意味する。
【００５３】
「チオアリールオキシ」とは、-S-アリールなる基を意味する。
【００５４】
「チオケト」とは、=Sなる基を意味する。
【００５５】
「チオール」とは、-SHなる基を意味する。
【００５６】
「ウリジンホスホリラーゼ」とは、酵素学において、化学反応：ウリジン＋リン酸→ウラシル＋アルファ-D-リボース1-リン酸を触媒するホスホリラーゼ（EC 2.4.2.3）を意味する。この酵素の2つの基質はウリジンおよびリン酸塩であるが、その2つの生成物はウラシルおよびアルファ-D-リボース1-リン酸である。この酵素はグリコシルトランスフェラーゼ、具体的にはペントシルトランスフェラーゼのファミリーに属している。この酵素クラスの系統名はウリジン：リン酸アルファ-D-リボシルトランスフェラーゼである。一般に用いられる他の名称には、ピリミジンホスホリラーゼ、UrdPase、UPH、およびUPaseが含まれる。この酵素はピリミジン代謝に関与している。
【００５７】
当業者であれば、それが芳香族であるか、または非芳香族であるかにかかわらず、安定で、化学的に実現可能な複素環におけるヘテロ原子の最大数は、環のサイズ、不飽和度、およびヘテロ原子の原子価によって決まることを理解するであろう。一般に、複素環は、芳香族複素環が化学的に実現可能かつ安定であるかぎり、1〜4個のヘテロ原子を有していてもよい。
【００５８】
詳細な説明
宿主におけるメトトレキセート（MTX）の毒性を低減するためのアジュバントの使用法が提供される。本発明の方法において、MTX活性物質の有効量を宿主に、本発明のMTX毒性低減アジュバントの投与と併せて投与し、ここでMTX活性物質およびMTX毒性低減アジュバントは任意の順で逐次、同時、またはその任意の組み合わせのいずれかで投与してもよい。同様に提供されるのは、本発明の方法を実施する際に用いるための組成物、例えば、毒性が低減されたMTX薬学的組成物およびこれを含むキットである。本発明の方法および組成物は、様々な異なる疾患状態の治療を含む、様々な異なる適用において用いられる。
【００５９】
特に関心対象であるのは、MTXの毒性副作用を改善するためのアジュバントとしてのアンヒドロヌクレオシドの使用、ならびに本発明の方法および他の適用を実施するための組成物である。アンヒドロヌクレオシドは天然ヌクレオシドの類縁体で、ヌクレオシド誘導体の合成における中間体として用いられることが多い。これらは、N-グリコシド結合に加えて、糖の2'、3'、または5'炭素と塩基の炭素、酸素または窒素原子（グリコシド結合の窒素以外）との間の直接または架橋原子を介してのいずれかの共有結合を有することによって特徴づけられる。アンヒドロピリミジンは、糖の2'、3'、または5'炭素とピリミジン塩基の炭素、酸素または窒素原子（グリコシド結合の窒素以外）との間の直接または架橋原子を介してのいずれかで共有結合されているピリミジン塩基によって特徴づけられる。MTX毒性低減アジュバントの2,2'-アンヒドロピリミジンおよびその誘導体は特に関心対象である。
【００６０】
本発明を詳細に記載する前に、記載する特定の態様は当然のことながら変動しうるため、本発明はそのような記載する特定の態様に限定されないことが理解されるべきである。また、本発明の範囲は添付の特許請求の範囲によってのみ限定されるため、本明細書において用いられる用語は特定の態様を記載するためのものにすぎず、限定的である意図はないことも理解されるべきである。
【００６１】
値の範囲が提供される場合、その範囲の上限と下限との間にはさまれる、文脈からそうでないことが明示されないかぎり下限の単位の10分の1までのそれぞれの値、および規定の範囲における任意の他の規定の値、または間にはさまれる値は、本発明に含まれることが理解される。規定の範囲において任意の具体的に除外される限界値があると仮定して、これらのより小さい範囲の上限および下限は独立にそのより小さい範囲に含まれてもよく、本発明にも含まれる。規定の範囲が限界値の一方または両方を含む場合、それらの含まれる限界値のいずれかまたは両方を除外する範囲も本発明に含まれる。
【００６２】
特定の範囲は本明細書において前に「約」なる用語のついた数値で示される。「約」なる用語は本明細書において、その後にくる正確な数、ならびにその用語の後にくる数に近い数または近似の数についての文字による支持を提供するために用いられる。数が具体的に挙げられた数に近いか、または近似であるかどうかを判定する際に、近い、または近似の挙げられていない数は、それが示されている文脈において、具体的に挙げられた数の実質的等価物を提供する数でありうる。
【００６３】
特に記載がないかぎり、本明細書において用いられるすべての技術および科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者であれば一般に理解するものと同じ意味を有する。本明細書に記載のものと類似または等価の任意の方法および材料も本発明の実施または試験において用いることができるが、代表的な例示的方法および材料をここで記載する。
【００６４】
本出願において引用するすべての出版物および特許は、それぞれ個々の出版物または特許が参照により本明細書に組み入れられると具体的かつ個別に示されたかのごとく、参照により本明細書に組み入れられ、かつそれらに関して出版物が引用される方法および/または材料を開示および記載するために、参照により本明細書に組み入れられる。いかなる出版物の引用も、提出日よりも前にそれが開示されているためであって、本発明が先行発明のためにそのような出版物に先行する権利がないとの自認であると解釈されるべきではない。さらに、提供される出版物の日付は実際の出版日とは異なることがあり、これらは個別に確認する必要がありうる。
【００６５】
本明細書および添付の特許請求の範囲において用いられる、単数形「a」、「an」、および「the」は、文脈からそうでないことが明示されないかぎり、複数の指示物を含むことに注目される。特許請求の範囲はいかなる任意の要素も除外するよう立案されうることにもさらに注目される。したがって、この言明は、特許請求の範囲の要素の列挙に関する「単独で」、「〜だけ」などの排他的な用語の使用、または「負」の限定の使用のための、先行基準として役立つことが意図される。
【００６６】
本開示を読めば当業者には明らかになるであろうとおり、本明細書において記載および例示される個々の態様はそれぞれ、本発明の範囲または精神から逸脱することなく、任意の他のいくつかの態様の特徴から容易に分離しうる、またはそれらと容易に組み合わせうる、別々の成分および特徴を有する。任意の挙げられた方法は、挙げられた事象の順で、または論理的に可能な任意の他の順で実施することができる。
【００６７】
本発明をさらに詳細に記載する際に、本発明の方法をまず詳細に記載し、続いて本発明の方法において用いうる様々な組成物、例えば、製剤およびキットの概説、ならびに本発明の方法および組成物を用いる様々な代表的適用の議論を記載する。
【００６８】
方法
上で概要を記載したとおり、本発明は、例えば、MTX活性物質によって治療可能な疾患または状態（以下に詳細に記載する）を患っている宿主を治療するために、MTX活性物質をそれを必要としている被験者に投与する方法を提供する。本発明の方法の1つの局面は、MTX活性物質を被験者に、MTX毒性低減アジュバントとの組み合わせで投与する方法である。特定の態様において、MTX毒性低減アジュバントは2,2'-アンヒドロウリジンまたはその類縁体/誘導体などの、2,2'-アンヒドロピリミジンである。「組み合わせで」とは、MTX毒性低減アジュバントの一定量を、MTX活性物質と同時から最大5時間以上、例えば、10時間、15時間、20時間またはそれ以上前または後のどこかで投与することを意味する。特定の態様において、MTX活性物質およびMTX毒性低減アジュバントを逐次投与し、例えば、ここでMTX活性物質をMTX毒性低減アジュバントの前または後に投与する。さらに他の態様において、MTX活性物質およびMTX毒性低減アジュバントを同時に投与し、例えば、ここでMTX活性物質およびMTX毒性低減アジュバントを2つの別々の製剤として、または被験者に投与する1つの組成物中に合わせて同時に投与する。MTX活性物質およびMTX毒性低減アジュバントを、上で例示したとおり、逐次もしくは同時、またはその任意の有効な変形のいずれで投与するかにかかわらず、物質は本発明の目的のために一緒に、または組み合わせで投与すると考えられる。2つの物質の投与経路は変動しえ、代表的な投与経路を以下に詳細に記載する。
【００６９】
本発明の方法において、MTX活性物質の有効量をそれを必要としている宿主にMTX毒性低減アジュバントの有効量との組み合わせで投与する。「MTX活性物質」とは、メトトレキセートまたはその類縁体/誘導体を意味する。本発明の組成物中に存在しうるMTXおよびその類縁体/誘導体には、米国特許第2,512,572号；第3,892,801号；第3,989,703号；第4,057,548号；第4,067,867号；第4,079,056号；第4,080,325号；第4,136,101号；第4,224,446号；第4,306,064号；第4,374,987号；第4,421,913号；第4,767,859号；第3,981,983号；第4,043,759号；第4,093,607号；第4,279,992号；第4,376,767号；第4,401,592号；第4,489,065号；第4,622,218号；第4,625,014号；第4,638,045号；第4,671,958号；第4,699,784号；第4,785,080号；第4,816,395号；第4,886,780号；第4,918,165号；第4,925,662号；第4,939,240号；第4,983,586号；第4,997,913号；第5,024,998号；第5,028,697号；第5,030,719号；第5,057,313号；第5,059,413号；第5,082,928号；第5,106,950号；第5,108,987号；第4,106,488号；第4,558,690号；第4,662,359号；第4,396,601号；第4,497,796号；第5,043,270号；第5,166,149号；第5,292,731号；第5,354,753号；第5,382,582号；第5,698,556号；第5,728,692号；および第5,958,928号に記載の化合物が含まれるが、それらに限定されるわけではなく、その開示は参照により本明細書に組み入れられる。
【００７０】
本発明のMTX活性物質には、MTX、および本発明の毒性低減アジュバントと併せて投与した場合にその毒性が低減される、その任意の類縁体/誘導体が含まれる。所与のMTX活性物質が本発明による使用に適しているか否かは、以下の実験項において使用する検定を用いて容易に判定することができる。一般に、MTX活性物質は、以下の実験項において記載するキイロショウジョウバエ検定を用いて判定されるとおり、MTX毒性低減アジュバントによってその毒性が50分の1以下、時には100分の1以下などの、2分の1から10分の1以下に低減されている場合、本発明の方法における使用に適している。特定の態様において、MTX活性物質は、以下の実験項において記載するマウス検定で観察されるとおり、その観察可能な毒性副作用の発生率および/または強度がMTX毒性低減アジュバントによって低減されるものである。
【００７１】
「MTX毒性低減アジュバント」なる語句は、MTX活性物質の毒性を低減する物質を意味する。関心対象のMTX毒性低減アジュバントは、以下の実験項において記載するキイロショウジョウバエ検定を用いて判定されるとおり、MTX活性物質の毒性を、100分の1以下を含む50分の1以下などの、2分の1から10分の1以下に低減する物質である。特定の態様において、関心対象のMTX毒性低減アジュバントは、以下の実験項において記載するマウス検定で観察されるとおり、所与のMTX活性物質の観察可能な毒性副作用の発生率および/または強度を低減するものである。本発明の特定の態様の毒性低減アジュバントの局面は、例えば、以下の実験項において記載するプロトコルを用いて判定されるとおり、アジュバントがMTX活性物質の細胞毒性を実質的に低減せず、特定の態様において、まったく影響を持たないものである。
【００７２】
関心対象のMTX毒性低減アジュバントは2,2'-アンヒドロピリミジンおよびその誘導体である。いくつかの態様において、2,2'-アンヒドロピリミジンまたはその誘導体は式（I）の化合物、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物、およびプロドラッグ型、ならびにそれらの立体異性体である：
0005504179.tif 000005
式中、
R1、R2、R3およびR4はそれぞれ水素、置換または無置換ヘテロ原子、置換または無置換アルキル、置換または無置換シクロアルキル、置換または無置換ヘテロシクロアルキル、置換または無置換アリール、置換または無置換ヘテロアリール、置換または無置換アラルキル、ヒドロキシル、ハロゲン、アジド、アミノ、置換アミノ、炭水化物、核酸、アミノ酸、ペプチド、色素、蛍光体およびポリペプチドからなる群より独立に選択される。
【００７３】
特定の態様において、化合物は式（I）のものであり、R1、R2、R3およびR4は独立に水素、ヒドロキシル、ヘテロ原子、C1-C18アルキル、C1-C18置換アルキル、C1-C18アルケニル、C1-C18アシル、アミノ、置換アミノであり、ここでアルキル、アルケニルまたはアシルは直鎖または分枝であり、ヒドロキシル、エステルおよびその誘導体、カルボキシルおよびその誘導体、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アラルキル、ヘテロ原子で置換されていてもよく、鎖または架橋において窒素、酸素および硫黄などのヘテロ原子を含むこともある。
【００７４】
関心対象のR1成分の例には下記が含まれるが、それらに限定されるわけではない：水素；ヒドロキシル；スルフヒドリル；フッ素、塩素、臭素またはヨウ素などのハロゲン、ならびにメチル-、エチル-、プロピル-、イソプロピル-、ブチル-、イソブチル-、tert-ブチル-、およびペンタスルホニルなどの1〜5個の炭素の低級アルキルスルホニル基またはベンゼン、p-トルエン、p-ニトロベンゼンスルホニル基などのアリールスルホニルなどの擬ハロゲン；アミノメチル、ヒドロキシメチル、メトキシ、エチルオキシ、プロピルオキシ、ベンジルオキシ、イミデート、アルキルチオ、(置換アルキル)チオ、アリールチオ、(置換アリール)チオなどの置換低級アルキルを含む、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、tert-ブチル、ペンチルなどの1〜20個の炭素を含む低級アルキル；ビニルおよび置換ビニル、エチニルおよび置換エチニルなどの1〜20個の炭素を含む低級アルケニル、ここで置換ビニルまたは置換エチニルはビニルまたはエチニルのβ位の臭素、塩素、フッ素もしくはヨウ素などのハロゲンによる置換、またはメチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチルなどの1〜5個の炭素原子のアルキル、もしくはベンジル、p-クロロベンジル、p-ニトロベンジルなどのアラルキル、もしくはフェニル、p-ニトロフェニル、p-トリル、p-アニシル、ナフチルなどのアリールによる置換を示し；ホルミル、アセチル、プロピオニル、イソプロピオニル、ブチリル、イソブチリル、tert-ブチリル、バレリル、ピバロイル、カプロイル、カプリル、ラウリル、ミリスチル、パルミチル、ステアリル、アラキジル、スティリギル、パルミトイル、オレイル、リノレニル、アラキドニルなどの1〜20個の炭素を含む低級アルカノイル（アシル基）；フェニル、p-トリル、p-クロロフェニル、p-アミノフェニル、p-ニトロフェニル、p-アニシルなどの1〜20個の炭素を含む低級アリール；ベンゾイルおよびナフトイルなどの1〜20個の炭素を含む低級アロイル、ここで芳香族基はp-トルノイル、p-アニソイル、p-クロロベンゾイル、p-ニトロベンゾイルもしくは2,4-ジニトロベンゾイル、ペンタフルオロベンゾイルなどのアルキル、アルコキシ、ハロ、もしくはニトロ部分でさらに置換されていてもよく、またはベンジルオキシベンゾイルなどの別のアロイル；ベンジル、ベンズヒドリル、p-クロロベンジル、m-クロロベンジル、p-ニトロベンジル、ベンジルオキシベンジル、ペンタフルオロベンジルなどの1〜20個の炭素を含む低級アラルキル；アミノまたはメチルアミノ、エチルアミノ、プロピルアミノもしくはベンジルアミノなどのモノアルキルもしくはモノアラルキルアミノ基、ジメチルアミノ、ジエチルアミノ、ジベンジルアミノ、ピロリジノ、ピペリジノもしくはモルホリノなどのジアルキルアミノなどの1〜20個の炭素を含むアルキルアミノ。
【００７５】
したがって、特定の態様において、R1は水素、ヒドロキシル、スルフヒドリル、アミノ、置換アミノ、ヒドロキシメチル、モノメトキシ、ハロゲン、擬ハロゲン、または1〜20個の原子を含む低級炭化水素（この炭化水素は置換されているか、または無置換でありうる）である。特定の態様において、R1はアルキル、置換アルキル、アルケニル、アルカノイル、アリール、アロイル、アラルキル、またはアルキルアミノから選択される低級炭化水素である。特定の態様において、R1はアルコキシ、置換アルコキシ、イミデート、アリールチオ、または(置換アリール)チオで置換されている低級炭化水素である。他の態様において、R1はメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、tert-ブチルおよびペンチルから選択される低級アルキルである。他の態様において、R1はビニル、置換ビニル、エチニル、または置換エチニルから選択される低級アルケニルである。他の態様において、R1はホルミル、アセチル、プロピオニル、イソプロピオニル、ブチリル、イソブチリル、tert-ブチリル、バレリル、ピバロイル、カプロイル、カプリル、ラウリル、ミリスチル、パルミチル、ステアリル、アラキジル、スティリギル、パルミトイル、オレイル、リノレニル、およびアラキドニルから選択される低級アルカノイルである。他の態様において、R1はフェニル、p-トリル、p-クロロフェニル、p-アミノフェニル、p-ニトロフェニル、p-アニシルから選択される低級アリールである。さらに他の態様において、R1はベンゾイルおよびナフトイルから選択される低級アロイルである。他の態様において、R1はベンジル、ベンズヒドリル、p-クロロベンジル、m-クロロベンジル、p-ニトロベンジル、ベンジルオキシベンジル、またはペンタフルオロベンジルから選択される低級アラルキルである。特定の他の態様において、R1はモノアルキルアミノ、モノアラルキルアミノ、ジアルキルアミノ、ジアラルキルアミノ、およびベンジルアミノから選択される低級アルキルアミノである。
【００７６】
関心対象の化合物には、R1が水素、フッ素、トリフルオロメチル、メチル、エチル、プロピル、ブチル、イソプロピル、イソブチル、アセチル、プロピオニル、ブチリル、2-ブロモビニル、フェニル、ベンジル、ベンゾイル、ベンジルオキシベンジル、ベンジルアミノ、アルキルオキシアルキル、ベンジルオキシアルキル、イミデートアルキル、アリールチオ、および(置換アリール)チオから選択される、式（I）のものが含まれるが、それらに限定されるわけではない。したがって、特定の態様において、化合物は式（I）のものであり、R1はH、F、CF3、CH3、CH3CH2、CH3CH2CH2、(CH3)2CH、(CH3)2CH2CH2、CH3(O)CCH2、CH3(O)CCH2CH2、Br-CH=CH、フェニル、ベンジル、ベンゾイル、ベンジルオキシベンジル、ベンジル-NH-、CH3CH2OCH2、ベンジル-O-CH2、CH3OCH2、CH3C(NH)-O-CH2、またはCH3-フェニル-O-CH2である。
【００７７】
関心対象のR2成分の例には下記が含まれるが、それらに限定されるわけではない：水素；ヒドロキシル；スルフヒドリル；フッ素、塩素、臭素またはヨウ素などのハロゲン、ならびにメチル-、エチル-、プロピル-、イソプロピル-、ブチル-、イソブチル-、tert-ブチル-、およびペンタスルホニルなどの1〜5個の炭素の低級アルキルスルホニル基またはベンゼン、p-トルエン、p-ニトロベンゼンスルホニル基などのアリールスルホニルなどの擬ハロゲン；アミノメチル、ヒドロキシメチル、メトキシ、エチルオキシ、プロピルオキシなどの置換低級アルキルを含む、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、tert-ブチル、ペンチルなどの1〜20個の炭素を含む低級アルキル；ビニルおよび置換ビニル、エチニルおよび置換エチニルなどの1〜20個の炭素を含む低級アルケニル、ここで置換ビニルまたは置換エチニルはビニルまたはエチニルのβ位の臭素、塩素、フッ素もしくはヨウ素などのハロゲンによる置換、またはメチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチルなどの1〜5個の炭素原子のアルキル、もしくはベンジル、p-クロロベンジル、p-ニトロベンジルなどのアラルキル、もしくはフェニル、p-ニトロフェニル、p-トリル、p-アニシル、ナフチルなどのアリールによる置換を示し；ホルミル、アセチル、プロピオニル、イソプロピオニル、ブチリル、イソブチリル、tert-ブチリル、バレリル、ピバロイル、カプロイル、カプリル、ラウリル、ミリスチル、パルミチル、ステアリル、アラキジル、スティリギル、パルミトイル、オレイル、リノレニル、アラキドニルなどの1〜20個の炭素を含む主鎖の低級アルカノイル（アシル基）およびそのエステル；フェニル、p-トリル、p-クロロフェニル、p-アミノフェニル、p-ニトロフェニル、p-アニシルなどの1〜20個の炭素を含む低級アリール；ベンゾイルおよびナフトイルなどの1〜20個の炭素を含む低級アロイル、ここで芳香族基はp-トルノイル、p-アニソイル、p-クロロベンゾイル、p-ニトロベンゾイルもしくは2,4-ジニトロベンゾイル、ペンタフルオロベンゾイルなどのアルキル、アルコキシ、ハロ、もしくはニトロ部分でさらに置換されていてもよく、またはベンジルオキシベンゾイルなどの別のアロイル；ベンジル、ベンズヒドリル、p-クロロベンジル、m-クロロベンジル、p-ニトロベンジル、ベンジルオキシベンジル、ペンタフルオロベンジルなどの1〜20個の炭素を含む低級アラルキル；フェニルオキシ（すなわち、O-フェニル）、ベンジルオキシ（すなわち、O-ベンジル）、ベンズヒドリルオキシ（すなわち、O-ベンジルヒドリル）、p-クロロベンジルオキシ（すなわち、O-(p-クロロベンジル)）、m-クロロベンジルオキシ（すなわち、O-(m-クロロベンジル)）、p-ニトロベンジルオキシ（すなわち、O-(p-ニトロベンジル)）、(4-ベンジルオキシベンジル)-オキシ（すなわち、O-ベンジルオキシベンジル）、またはペンタフルオロベンジルオキシ（すなわち、O-ペンタフルオロベンジル）などの1〜20個の炭素を含む低級アリールオキシ；ベンゾイルオキシ（すなわち、O-ベンゾイル）、ジフェニルアセチルオキシ（すなわち、O-ジフェニルアセチル）、p-クロロベンゾイルオキシ（すなわち、O-(p-クロロベンゾイル)）、m-クロロベンゾイルオキシ（すなわち、O-(m-クロロベンゾイル)）、p-ニ��ロベンゾイルオキシ（すなわち、O-(p-ニトロベンゾイル)）、(4-ベンジルオキシベンゾイル)-オキシ（すなわち、O-ベンジルオキシベンゾイル）、またはペンタフルオロベンゾイルオキシ（すなわち、O-ペンタフルオロベンゾイル）などの1〜20個の炭素を含む低級アロイルオキシ（すなわち、O-アロイル）などの、アリールオキシのエステル；アミノまたはメチルアミノ、エチルアミノ、プロピルアミノもしくはベンジルアミノなどのモノアルキルもしくはモノアラルキルアミノ基、ジメチルアミノ、ジエチルアミノ、ジベンジルアミノ、ピロリジノ、ピペリジノもしくはモルホリノなどのジアルキルアミノなどの1〜20個の炭素を含むアルキルアミノ。
【００７８】
したがって、特定の態様において、R2は水素、ヒドロキシル、スルフヒドリル、アミノ、ヒドロキシメチル、モノメトキシ、ハロゲン、擬ハロゲン、または1〜20個の原子を含む低級炭化水素（この炭化水素は置換されているか、または無置換でありうる）、およびそれらのエステルである。特定の態様において、R2はアルキル、アルケニル、アルカノイル、アリール、アロイル、アリールオキシ、アロイルオキシ、アラルキル、またはアルキルアミノから選択される低級炭化水素である。他の態様において、R2はメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、tert-ブチルおよびペンチルから選択される低級アルキルである。他の態様において、R2はビニル、置換ビニル、エチニル、または置換エチニルから選択される低級アルケニルである。他の態様において、R2はホルミル、アセチル、プロピオニル、イソプロピオニル、ブチリル、イソブチリル、tert-ブチリル、バレリル、ピバロイル、カプロイル、カプリル、ラウリル、ミリスチル、パルミチル、ステアリル、アラキジル、スティリギル、パルミトイル、オレイル、リノレニル、およびアラキドニルから選択される低級アルカノイルである。他の態様において、R2はフェニル、p-トリル、p-クロロフェニル、p-アミノフェニル、p-ニトロフェニル、p-アニシルから選択される低級アリールである。さらに他の態様において、R2はベンゾイルおよびナフトイルから選択される低級アロイルである。他の態様において、R2はベンジル、ベンズヒドリル、p-クロロベンジル、m-クロロベンジル、p-ニトロベンジル、ベンジルオキシベンジル、またはペンタフルオロベンジルから選択される低級アラルキルである。他の態様において、R2はフェニルオキシ、ベンジルオキシ、ベンズヒドリルオキシ、p-クロロベンジルオキシ、m-クロロベンジルオキシ、p-ニトロベンジルオキシ、(4-ベンジルオキシベンジル)-オキシ、またはペンタフルオロベンジルオキシから選択される低級アリールオキシである。他の態様において、R2はベンゾイルオキシ、ジフェニルアセチルオキシ、p-クロロベンゾイルオキシ、m-クロロベンゾイルオキシ、p-ニトロベンゾイルオキシ、(4-ベンジルオキシベンゾイル)-オキシ、またはペンタフルオロベンゾイルオキシから選択される低級アロイルオキシである。特定の他の態様において、R2はモノアルキルアミノ、モノアラルキルアミノ、ジアルキルアミノ、およびジアラルキルアミノから選択される低級アルキルアミノである。したがって、特定の態様において、R2は水素またはヒドロキシルでありうるだけでなく、O-アシル、アルコキシ、アルコキシカルボニル、アルコキシカルボニルアミノ、O-アルキル、O-アルキレン、O-アルキニル、O-アラルキル、O-アリール、O-アリールオキシ、O-炭水化物、O-シクロアルケニル、O-シクロアルキル、O-ヘテロシクロアルキル、O-ヘテロアリールでもありうる。加えて、SがOに置き換わることもある。
【００７９】
関心対象の化合物には、R2が水素、フッ素、トリフルオロメチル、メチル、エチル、プロピル、ブチル、イソプロピル、イソブチル、アセチル、プロピオニル、ブチリル、2-ブロモビニル、フェニル、フェニルオキシ、ベンジル、ベンゾイル、ベンゾイルオキシおよびベンジルオキシベンジルから選択される、式（I）のものが含まれるが、それらに限定されるわけではない。したがって、特定の態様において、化合物は式（I）のものであり、R2はH、F、CF3、CH3、CH3CH2、CH3CH2CH2、(CH3)2CH、(CH3)2CH2CH2、CH3(O)CCH2、CH3(O)CCH2CH2、Br-CH=CH、フェニル、フェニルオキシ、ベンジル、ベンゾイル、ベンゾイルオキシ、またはベンジルオキシベンジルである。
【００８０】
関心対象の具体的態様において、化合物は式（I）のものであり、R2は水素、ヒドロキシル、またはO-連結置換基である。これにはR2がH、OHまたはC6H5C(O)Oである式（I）の化合物が含まれる。
【００８１】
関心対象のR3の例には下記が含まれるが、それらに限定されるわけではない：水素；ヒドロキシル；アジド；スルフヒドリル；ハロゲン；擬ハロゲン；アミノメチル、ヒドロキシメチル、メトキシ、エチルオキシ、プロピルオキシなどの置換低級アルキルを含む、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、tert-ブチル、ペンチルなどの1〜20個の炭素を含む低級アルキル；ホルミル、アセチル、プロピオニル、イソプロピオニル、ブチリル、イソブチリル、tert-ブチリル、バレリル、ピバロイル、カプロイル、カプリル、ラウリル、ミリスチル、パルミチル、ステアリル、アラキジル、スティリギル、パルミトイル、オレイル、リノレニル、アラキドニルなどの1〜20個の炭素原子の主鎖の、そのエステルを含む低級アルカノイル（アシル）；フェニル、p-ニトロフェニル、p-トリル、p-アニシル、ナフチルなどの低級アリール；ベンゾイルおよびナフトイルなどの1〜20個の炭素の低級アロイル（芳香族の酸のアシル基）、ここで芳香族基はp-トルノイル、p-アニソイル、p-クロロベンゾイル、p-ニトロベンゾイルまたは2,4-ジニトロベンゾイル、ペンタフルオロベンゾイルなどのアルキル、アルコキシ、ハロ、またはニトロ部分でさらに置換されていてもよい；フェニルオキシ、ベンジルオキシ、ベンズヒドリルオキシ、p-クロロベンジルオキシ、m-クロロベンジルオキシ、p-ニトロベンジルオキシ、(4-ベンジルオキシベンジル)-オキシ、またはペンタフルオロベンジルオキシなどの1〜20個の炭素の低級アリールオキシ；ならびにベンゾイルオキシ、ジフェニルアセチルオキシ、p-クロロベンゾイルオキシ、m-クロロベンゾイルオキシ、p-ニトロベンゾイルオキシ、(4-ベンジルオキシベンゾイル)-オキシ、またはペンタフルオロベンゾイルオキシなどの1〜20個の炭素の低級アロイルオキシ（O-アロイル）などの、アリールオキシのエステル。R3はアダマントイル、または置換アダマントイルであってもよい。
【００８２】
したがって、特定の態様において、R3は水素、ヒドロキシル、アジド、スルフヒドリル、ヒドロキシメチル、ハロゲン、または擬ハロゲンである。他の態様において、R3はアルキル、アルカノイル、アリール、アロイル、アリールオキシ、アロイルオキシ、またはアラルキルから選択される低級炭化水素である。他の態様において、R3はメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、tert-ブチルおよびペンチルから選択される低級アルキルである。他の態様において、R3はホルミル、アセチル、プロピオニル、イソプロピオニル、ブチリル、イソブチリル、tert-ブチリル、バレリル、ピバロイル、カプロイル、カプリル、ラウリル、ミリスチル、パルミチル、ステアリル、アラキジル、スティリギル、パルミトイル、オレイル、リノレニル、およびアラキドニルから選択される低級アルカノイルである。他の態様において、R3はフェニル、p-トリル、p-クロロフェニル、p-アミノフェニル、p-ニトロフェニル、p-アニシルなどから選択される低級アリールである。他の態様において、R3はベンゾイルおよびナフトイルから選択される低級アロイルである。さらに他の特定の態様において、R3はベンジル、ベンズヒドリル、p-クロロベンジル、m-クロロベンジル、p-ニトロベンジル、ベンジルオキシベンジル、またはペンタフルオロベンジルから選択される低級アラルキルである。他の態様において、R3はフェニルオキシ、ベンジルオキシ、ベンズヒドリルオキシ、p-クロロベンジルオキシ、m-クロロベンジルオキシ、p-ニトロベンジルオキシ、(4-ベンジルオキシベンジル)-オキシ、またはペンタフルオロベンジルオキシから選択される低級アリールオキシである。他の態様において、R3はベンゾイルオキシ、ジフェニルアセチルオキシ、p-クロロベンゾイルオキシ、m-クロロベンゾイルオキシ、p-ニトロベンゾイルオキシ、(4-ベンジルオキシベンゾイル)-オキシ、またはペンタフルオロベンゾイルオキシから選択される低級アロイルオキシである。したがって、特定の態様において、R3は水素またはヒドロキシルでありうるだけでなく、O-アシル、アルコキシ、アルコキシカルボニル、アルコキシカルボニルアミノ、O-アルキル、O-アルキレン、O-アルキニル、O-アラルキル、O-アリール、O-アリールオキシ、O-炭水化物、O-シクロアルケニル、O-シクロアルキル、O-ヘテロシクロアルキル、O-ヘテロアリールでもありうる。加えて、SがOに置き換わることもある。
【００８３】
関心対象の化合物は、R3が水素、ヒドロキシル、ハロゲン、アジド、またはO-連結置換基である、式（I）のものである。これには、R3が水素、ヒドロキシル、n-ブトキシ、イソブチルオキシ、t-ブチルオキシ、フェニルオキシ、ベンジルオキシ、ベンゾイルオキシ、およびペンタフルオロベンゾイルオキシから選択される、式（I）の化合物が含まれる。したがって、特定の態様において、化合物は式（I）のものであり、R3はH、OH、CH3CH2CH2CH2O、(CH3)2CH2CH2O、(CH3)3CO、C6H5O、ベンゾイルオキシ、およびペンタフルオロベンゾイルオキシから選択される。
【００８４】
関心対象の具体的態様において、化合物は式（I）のものであり、R3はH、OH、F、Cl、Br、I、N3、またはC6H5C(O)Oである。特に関心対象であるのは、R3がOH、またはO-アシル（例えば、C6H5C(O)Oなどのエステル）である、式（I）の化合物である。
【００８５】
R4の例には下記が含まれるが、それらに限定されるわけではない：水素；ヒドロキシル；スルフヒドリル；フッ素、塩素、臭素もしくはヨウ素などのハロゲン；アミノまたは低級アルキルアミノ。R4はホルミル、アセチル、プロピオニル、イソプロピオニル、ブチリル、イソブチリル、tert-ブチリルなどの1〜7個の炭素原子の低級アルカノイル基でありうるアシル基、およびそのエステルを伴う低級アルキル基でも例示される。したがって、R4はベンゾイルおよびナフトイルなどのアロイル（およびO-連結アロイルなどのそのエステル、すなわち、O-アロイルまたはアロイルオキシ）でもありえ、ここで芳香族基はp-トルノイル、p-アニソイル、p-クロロベンゾイル、p-ニトロベンゾイルまたは2,4-ジニトロベンゾイルなどのアルキル、アルコキシ、ハロ、またはニトロ部分でさらに置換されていてもよい。したがって、特定の態様において、R4は水素またはヒドロキシルでありうるだけでなく、O-アシル、アルコキシ、アルコキシカルボニル、アルコキシカルボニルアミノ、O-アルキル、O-アルキレン、O-アルキニル、O-アラルキル、O-アリール、O-アリールオキシ、O-炭水化物、O-シクロアルケニル、O-シクロアルキル、O-ヘテロシクロアルキル、O-ヘテロアリールでもありうる。加えて、SがOに置き換わることもある。
【００８６】
したがって、特定の態様において、R4は水素；ヒドロキシル；スルフヒドリル；ハロゲン、アミノ アミノメチル、またはアミノジメチルである。他の態様において、R4は低級アルキル、アシル、アロイル、またはアロイルオキシである。これは、式（I）の化合物が、R4が水素、フッ素、ヒドロキシル、アミノ、アミノメチル、アミノジメチル、t-ブチルオキシ、フェニルオキシまたはベンゾイルオキシであるもの（例えば、R4がH、F、OH、NH2、NHCH3、N(CH3)2、(CH3)3CO、C6H5OまたはC6H5C(O)Oである、式（I）の化合物）である、具体的態様を含む。
【００８７】
特に関心対象の化合物は、R4が水素、ヒドロキシル、またはO-連結置換基である、式（I）のものである。具体的態様において、化合物は、R4がH、OHまたはC6H5C(O)Oである、式（I）のものである。特に関心対象であるのは、R4がOH、またはO-アシル（例えば、C6H5C(O)Oなどのエステル）である、式（I）の化合物である。
【００８８】
関心対象であるのは、R1がH、F、CF3、CH3、CH3CH2、CH3CH2CH2、(CH3)2CH、(CH3)2CH2CH2、CH3(O)CCH2、CH3(O)CCH2CH2、Br-CH=CH、フェニル、ベンジル、ベンゾイル、またはベンジルオキシベンジルであり、R2がH、OH、F、CF3、CH3、CH3CH2、CH3CH2CH2、(CH3)2CH、(CH3)2CH2CH2、CH3(O)CCH2、CH3(O)CCH2CH2、Br-CH=CH、フェニル、フェニルオキシ、ベンジル、ベンゾイル、ベンゾイルオキシ、またはベンジルオキシベンジルであり、かつR3およびR4がそれぞれヒドロキシルである、式（I）の化合物である。これらには以下の化合物が含まれる：2,2'-アンヒドロウリジン；2,2'-アンヒドロ-5-フルオロウリジン；2,2'-アンヒドロ-5-トリフルオロメチルウリジン；2,2'-アンヒドロ-5-メチルウリジン；2,2'-アンヒドロ-5-エチルウリジン；2,2'-アンヒドロ-5-プロピルウリジン；2,2'-アンヒドロ-5-イソプロピルウリジン；2,2'-アンヒドロ-5-イソブチルウリジン；2,2'-アンヒドロ-5-メチルアシルウリジン；2,2'-アンヒドロ-5-プロピルアシルウリジン；2,2'-アンヒドロ-5-(2-ブロモビニル)-ウリジン；2,2'-アンヒドロ-5-フェニルウリジン；2,2'-アンヒドロ-5-ベンジルウリジン；2,2'-アンヒドロ-5-ベンジオルウリジン；および2,2'-アンヒドロ-5-(ベンジルオキシベンジル)-ウリジン。特に関心対象であるのは、2,2'-アンヒドロ-5-メチルウリジン、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物、およびプロドラッグ型、ならびにそれらの立体異性体である。
【００８９】
関心対象のさらなる化合物は、R1がH、F、CF3、CH3、CH3CH2、CH3CH2CH2、(CH3)2CH、(CH3)2CH2CH2、CH3(O)CCH2、CH3(O)CCH2CH2、Br-CH=CH、フェニル、ベンジル、ベンゾイル、またはベンジルオキシベンジルであり、R2がH、OH、F、CF3、CH3、CH3CH2、CH3CH2CH2、(CH3)2CH、(CH3)2CH2CH2、CH3(O)CCH2、CH3(O)CCH2CH2、Br-CH=CH、フェニル、フェニルオキシ、ベンジル、ベンジルオキシ、ベンゾイル、ベンゾイルオキシ、またはベンジルオキシベンジルであり、かつR3がヒドロキシルであり、R4がベンゾイルオキシである、式（I）の化合物である。これらには以下の化合物が含まれる：3'-O-ベンゾイル-2,2'-アンヒドロウリジン；3'-O-ベンゾイル-2,2'-アンヒドロ-5-フルオロウリジン；3'-O-ベンゾイル-2,2'-アンヒドロ-5-トリフルオロメチルウリジン；3'-O-ベンゾイル-2,2'-アンヒドロ-5-メチルウリジン；3'-O-ベンゾイル-2,2'-アンヒドロ-5-エチルウリジン；3'-O-ベンゾイル-2,2'-アンヒドロ-5-プロピルウリジン；3'-O-ベンゾイル-2,2'-アンヒドロ-5-イソプロピルウリジン；3'-O-ベンゾイル-2,2'-O-アンヒドロ-5-イソブチルウリジン；3'-O-ベンゾイル-2,2'-アンヒドロ-5-メチルアシルウリジン；3'-O-ベンゾイル-2,2'-アンヒドロ-5-プロピルアシルウリジン；3'-O-ベンゾイル-2,2'-アンヒドロ-5-(2-ブロモビニル)-ウリジン；3'-O-ベンゾイル-2,2'-アンヒドロ-5-フェニルルリジン；3'-O-ベンゾイル-2,2'-アンヒドロ-5-ベンジルウリジン；3'-O-ベンゾイル-2,2'-アンヒドロ-5-ベンジオルウリジン；および3'-O-ベンゾイル-2,2'-アンヒドロ-5-(ベンジルオキシベンジル)-ウリジン。特に関心対象であるのは、3'-O-ベンゾイル-2,2'-アンヒドロ-5-メチルウリジン、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物、およびプロドラッグ型、ならびにそれらの立体異性体である。
【００９０】
同様に関心対象であるのは、R1がH、F、CF3、CH3、CH3CH2、CH3CH2CH2、(CH3)2CH、(CH3)2CH2CH2、CH3(O)CCH2、CH3(O)CCH2CH2、Br-CH=CH、フェニル、ベンジル、ベンゾイル、またはベンジルオキシベンジルであり、R2がH、OH、F、CF3、CH3、CH3CH2、CH3CH2CH2、(CH3)2CH、(CH3)2CH2CH2、CH3(O)CCH2、CH3(O)CCH2CH2、Br-CH=CH、フェニル、フェニルオキシ、ベンジル、ベンジルオキシ、ベンゾイル、ベンゾイルオキシ、またはベンジルオキシベンジルであり、かつR3がベンゾイルオキシであり、R4がヒドロキシルである、式（I）の化合物である。これらには以下の化合物が含まれる：5'-O-ベンゾイル-2,2'-アンヒドロウリジン；5'-O-ベンゾイル-2,2'-アンヒドロ-5-フルオロウリジン；5'-O-ベンゾイル-2,2'-アンヒドロ-5-トリフルオロメチルウリジン；5'-O-ベンゾイル-2,2'-アンヒドロ-5-メチルウリジン；5'-O-ベンゾイル-2,2'-アンヒドロ-5-エチルウリジン；5'-O-ベンゾイル-2,2'-アンヒドロ-5-プロピルウリジン；5'-O-ベンゾイル-2,2'-アンヒドロ-5-イソプロピルウリジン；5'-O-ベンゾイル-2,2'-O-アンヒドロ-5-イソブチルウリジン；5'-O-ベンゾイル-2,2'-アンヒドロ-5-メチルアシルウリジン；5'-O-ベンゾイル-2,2'-アンヒドロ-5-プロピルアシルウリジン；5'-O-ベンゾイル-2,2'-アンヒドロ-5-(2-ブロモビニル)-ウリジン；5'-O-ベンゾイル-2,2'-アンヒドロ-5-フェニルルリジン；5'-O-ベンゾイル-2,2'-アンヒドロ-5-ベンジルウリジン；5'-O-ベンゾイル-2,2'-アンヒドロ-5-ベンジオルウリジン；および5'-O-ベンゾイル-2,2'-アンヒドロ-5-(ベンジルオキシベンジル)-ウリジン。特に関心対象であるのは、5'-O-ベンゾイル-2,2'-アンヒドロ-5-メチルウリジン、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物、およびプロドラッグ型、ならびにそれらの立体異性体である。
【００９１】
本発明の2,2'-アンヒドロピリミジン化合物は、単一の立体異性体、立体異性体の混合物、ならびに互変異性体の平衡混合物として生じうるその様々な誘導体を含む組成物であってもよい。例えば、式（I）の2,2'-アンヒドロピリミジンは、αおよびβアノマーと、LまたはD鏡像配置を含む、フラノ環に関して4つの立体中心を含む。本発明の2,2'-アンヒドロピリミジン化合物の立体異性体の例はβ-D-異性体、β-L-異性体、α-D-異性体、およびα-L-異性体、ならびに互変異性体とα,β-D-異性体、α,β-L-異性体、α-DL-異性体、およびβ-DL-異性体を含む混合物である。したがって、一つの態様において、β-D-異性体、β-L-異性体、α-D-異性体、またはα-L-異性体である2,2'-アンヒドロピリミジンの立体異性体で基本的に構成される組成物が提供される。モル濃度に基づく活性の改善またはMTXの有効性妨害に関する特異性の改善を示す立体異性体が特に関心対象である。
【００９２】
特に関心対象の立体異性体には下記が含まれる：2,2'-アンヒドロ-1-(β-D-アラビノフラノシル)ウラシル；2,2'-アンヒドロ-1-(β-D-アラビノフラノシル)-5-フルオロウラシル；2,2'-アンヒドロ-1-(β-D-アラビノフラノシル)-5-トリフルオロメチルウラシル；2,2'-アンヒドロ-1-(β-D-アラビノフラノシル)-5-メチルウラシル；2,2'-アンヒドロ-1-(β-D-アラビノフラノシル)-5-エチルウラシル；2,2'-アンヒドロ-1-(β-D-アラビノフラノシル)-5-n-プロピルウラシル；2,2'-アンヒドロ-1-(β-D-アラビノフラノシル)-5-イソプロピルウラシル；2,2'-アンヒドロ-1-(β-D-アラビノフラノシル)-5-イソブチルウラシル；2,2'-アンヒドロ-1-(β-D-アラビノフラノシル)-5-メチアシルウラシル；2,2'-アンヒドロ-1-(β-D-アラビノフラノシル)-5-プロピルアシルウラシル；2,2'-アンヒドロ-1-(β-D-アラビノフラノシル)-5-(2-ブロモビニル)ウラシル；2,2'-アンヒドロ-1-(β-D-アラビノフラノシル)-5-フェニルウラシル；2,2'-アンヒドロ-1-(β-D-アラビノフラノシル)-5-ベンジルウラシル；2,2'-アンヒドロ-1-(β-D-アラビノフラノシル)-5-ベンジオルウラシル；および2,2'-アンヒドロ-1-(β-D-アラビノフラノシル)-5-(3-ベンジオキシベンジル)ウラシル。関心対象のさらなる立体異性体には下記が含まれる：3'-O-ベンゾイル-2,2'-アンヒドロ-1-(β-D-アラビノフラノシル)ウラシル；3'-O-ベンゾイル-2,2'-アンヒドロ-1-(β-D-アラビノフラノシル)-5-フルオロウラシル；3'-O-ベンゾイル-2,2'-アンヒドロ-1-(β-D-アラビノフラノシル)-5-トリフルオロメチルウラシル；3'-O-ベンゾイル-2,2'-アンヒドロ-1-(β-D-アラビノフラノシル)-5-メチルウラシル；3'-O-ベンゾイル-2,2'-アンヒドロ-1-(β-D-アラビノフラノシル)-5-エチルウラシル；3'-O-ベンゾイル-2,2'-アンヒドロ-1-(β-D-アラビノフラノシル)-5-n-プロピルウラシル；3'-O-ベンゾイル-2,2'-アンヒドロ-1-(β-D-アラビノフラノシル)-5-イソプロピルウラシル；3'-O-ベンゾイル-2,2'-アンヒドロ-1-(β-D-アラビノフラノシル)-5-イソブチルウラシル；3'-O-ベンゾイル-2,2'-アンヒドロ-1-(β-D-アラビノフラノシル)-5-メチアシルウラシル；3'-O-ベンゾイル-2,2'-アンヒドロ-1-(β-D-アラビノフラノシル)-5-プロピルアシルウラシル；3'-O-ベンゾイル-2,2'-アンヒドロ-1-(β-D-アラビノフラノシル)-5-(2-ブロモビニル)ウラシル；3'-O-ベンゾイル-2,2'-アンヒドロ-1-(β-D-アラビノフラノシル)-5-フェニルウラシル；3'-O-ベンゾイル-2,2'-アンヒドロ-1-(β-D-アラビノフラノシル)-5-ベンジルウラシル；3'-O-ベンゾイル-2,2'-アンヒドロ-1-(β-D-アラビノフラノシル)-5-ベンジオルウラシル；および3'-O-ベンゾイル-2,2'-アンヒドロ-1-(β-D-アラビノフラノシル)-5-(3-ベンジオキシベンジル)ウラシル。関心対象のさらなる立体異性体には下記が含まれる：5'-O-ベンゾイル-2,2'-アンヒドロ-1-(β-D-アラビノフラノシル)ウラシル；5'-O-ベンゾイル-2,2'-アンヒドロ-1-(β-D-アラビノフラノシル)-5-フルオロウラシル；5'-O-ベンゾイル-2,2'-アンヒドロ-1-(β-D-アラビノフラノシル)-5-トリフルオロメチルウラシル；5'-O-ベンゾイル-2,2'-アンヒドロ-1-(β-D-アラビノフラノシル)-5-メチルウラシル；5'-O-ベンゾイル-2,2'-アンヒドロ-1-(β-D-アラビノフラノシル)-5-エチルウラシル；5'-O-ベンゾイル-2,2'-アンヒドロ-1-(β-D-アラビノフラノシル)-5-n-プロピルウラシル；5'-O-ベンゾイル-2,2'-アンヒドロ-1-(β-D-アラビノフラノシル)-5-イソプロピルウラシル；5'-O-ベンゾイル-2,2'-アンヒドロ-1-(β-D-アラビノフラノシル)-5-イソブチルウラシル；5'-O-ベンゾイル-2,2'-アンヒドロ-1-(β-D-アラビノフラノシル)-5-メチアシルウラシル；5'-O-ベンゾイル-2,2'-アンヒドロ-1-(β-D-アラビノフラノシル)-5-プロピルアシルウラシル；5'-O-ベンゾイル-2,2'-アンヒドロ-1-(β-D-アラビノフラノシル)-5-(2-ブロモビニル)ウラシル；5'-O-ベンゾイル-2,2'-アンヒドロ-1-(β-D-アラビノフラノシル)-5-フェニルウラシル；5'-O-ベンゾイル-2,2'-アンヒドロ-1-(β-D-アラビノフラノシル)-5-ベンジルウラシル；5'-O-ベンゾイル-2,2'-アンヒドロ-1-(β-D-アラビノフラノシル)-5-ベンジオルウラシル；および5'-O-ベンゾイル-2,2'-アンヒドロ-1-(β-D-アラビノフラノシル)-5-(3-ベンジオキシベンジル)ウラシル。
【００９３】
本発明の2,2'-アンヒドロピリミジンの他の類縁体または誘導体、およびその立体異性体の例には：3'-O-アセチル-2,2'-アンヒドロ-5-プロピルウリジン（3'-O-アセチル-2,2'-アンヒドロ-1-(β-D-アラビノフラノシル)-5-プロピルウラシル）；および3'-O-アセチル-2,2'-アンヒドロ-5-イソプロピルウリジン（3'-O-アセチル-2,2'-アンヒドロ-1-(β-D-アラビノフラノシル)-5-イソプロピルウラシル）；ならびに2,2'-アンヒドロシチジンと、その類縁体および誘導体が含まれ、その立体異性体2,2'-アンヒドロ-1-(β-D-アラビノフラノシル)シトシンは一例である。
【００９４】
前述のとおり、特に関心対象の立体異性体および様々な2,2'-アンヒドロピリミジンは、モル濃度に基づく活性の改善、またはMTXの有効性妨害に関する特異性の改善を示すものである。そのような化合物は、表1に例示するもの（ここで化合物は式（I）のものである）などの、特に関心対象の化合物の行列に対して比較することにより、この目的のために容易に選択することができる。
【００９５】
（表１）式（I）の化合物
0005504179.tif 000006
0005504179.tif 000007
0005504179.tif 000008
【００９６】
前述のとおり、表Iの化合物は例示的であるが、限定的ではない。例えば、R4はヒドロキシルでありうるだけでなく、O-アシル、アルコキシ、アルコキシカルボニル、アルコキシカルボニルアミノ、O-アルキル、O-アルキレン、O-アルキニル、O-アラルキル、O-アリール、O-アリールオキシ、O-炭水化物、O-シクロアルケニル、O-シクロアルキル、O-ヘテロシクロアルキル、O-ヘテロアリールでもありうる。加えて、SがOに置き換わることもあり、また本明細書において記載するものなどの構造要素の他の組み合わせ、ならびに他の立体化学的配向も可能である。
【００９７】
特定の態様において、式（I）の2,2'-アンヒドロピリミジンのアシル誘導体が関心対象である。したがって、式（I）の化合物には、R1、R2、R3およびR4が上で定義したとおりであり、R2、R3およびR4の少なくとも1つがアシル誘導体であるものが含まれる。「アシル誘導体」とは、R2、R3およびR4の少なくとも1つが、式（I）のリボースまたはピリミジン環上のヒドロキシル基にエステル結合を通じて結合されているカルボン酸から得ることができる、実質的に非毒性の有機アシル置換基である、式（I）の2,2'-アンヒドロピリミジンの誘導体が意図される。
【００９８】
式（I）の2,2'-アンヒドロピリミジン化合物のアシル誘導体には、R1が上で定義したとおりであり、R2、R3およびR4がそれぞれ独立に水素、ヒドロキシルまたはアシル基であり、ただしR2、R3およびR4の少なくとも1つは水素ではないものが含まれる。もう一つの態様において、2,2'-アンヒドロピリミジンのアシル誘導体は、R1およびR2が上で定義したとおりであり、ただしR2は水素以外であり、R3およびR4がそれぞれ独立にヒドロキシルまたはアシル基である、式（I）の化合物である。一つの態様において、2,2'-アンヒドロピリミジンのアシル誘導体は、R1が上で定義したとおりであり、R2が水素であり、R3およびR4がそれぞれ独立にヒドロキシルまたはアシル基である、式（I）の化合物である。特に関心対象であるのは、R1がメチルであり、R2が水素であり、R3およびR4がそれぞれ独立にヒドロキシルまたはアシル基である、式（I）の2,2'-アンヒドロピリミジン化合物のアシル誘導体である。同様に関心対象であるのは、R1がメチルであり、R2が水素であり、R3およびR4がそれぞれアシル基である、式（I）の2,2'-アンヒドロピリミジン化合物のアシル誘導体である。
【００９９】
一般に、式（I）のアシル誘導体のエステル結合は、細胞に基づく系などのインビトロ、および/または体内での代謝を通じてなどのインビボのいずれかの、生理的条件下で切断可能である。したがって、特定の態様において、アシル基は代謝産物の基である。そのようなアシル置換基には、酢酸、脂肪酸、アミノ酸、リポ酸、グリコール酸、乳酸、エノールピルビン酸、ピルビン酸、オロト酸、アセト酢酸、ベータ-ヒドロキシ酪酸、クレアチニン酸、コハク酸、フマル酸、アジピン酸、安息香酸およびp-アミノ安息香酸から誘導されるものが含まれるが、それらに限定されるわけではない。関心対象の特定のアシル置換基は、食事成分として、または中間代謝物としてのいずれかで体内に通常存在し、インビボで関心対象の2,2'-アンヒドロピリミジン化合物から切断された場合に基本的に非毒性である、化合物である。
【０１００】
特に関心対象であるのは、3'-O-アシル-2,2'-アンヒドロピリミジンまたはその誘導体を含む組成物である。例えば、関心対象のアシル誘導体は、R1、R2およびR3がそれぞれ水素、ヒドロキシル、スルフヒドリル、アミノ、ヒドロキシメチル、メトキシ、ハロゲン、擬ハロゲン、ならびにアルキル、アルケニル、アルカノイル、アリール、アロイル、アラルキルおよびアルキルアミノと、それらのエステルから選択される低級炭化水素などの、1〜20個の炭素を含む置換または無置換低級炭化水素から独立に選択され、R4がO-アシル基である、式（I）の2,2'-アンヒドロピリミジン化合物を含むものである。
【０１０１】
特定の態様において、アシル誘導体には、R4がアロイルオキシ、アラルコイルオキシ、ヘテロアロイルオキシ、およびシクロアルコイルオキシから選択されるO-アシル基などの、1〜10個の炭素原子を含むO-アシル基である、式（I）の2,2'-アンヒドロピリミジン化合物が含まれる。
【０１０２】
したがって、式（I）の2,2'-アンヒドロピリミジン化合物のアシル誘導体には、3'-O-アシル-2,2'-アンヒドロピリミジン、5'-O-アシル-2,2'-アンヒドロピリミジン、3',5'-O-アシル-2,2'-アンヒドロピリミジン、およびその誘導体が含まれる。例えば、3'-O-アシル-2,2'-アンヒドロピリミジンまたはその誘導体には、3'-O-アロイル-2,2'-アンヒドロウリジンまたはその誘導体などの3'-O-アロイル-2,2'-アンヒドロピリミジンが含まれる。特に関心対象の一例は3'-O-ベンゾイル-2,2'-アンヒドロウリジンまたは3'-O-ベンゾイル-2,2'-アンヒドロ-5-メチルウリジンなどのその誘導体である。同様に関心対象であるのは、3'-O-ベンゾイル-2,2'-アンヒドロ-5-メチルウリジンが立体異性体3'-O-ベンゾイル-2,2'-アンヒドロ-1-(β-D-アラビノフラノシル)-5-メチルウラシルである化合物である。
【０１０３】
いくつかの態様において、式（I）の2,2'-アンヒドロピリミジン化合物のアシル誘導体には、下記であるものが含まれる：R1がH、F、CF3、CH3、CH3CH2、CH3CH2CH2、(CH3)2CH、(CH3)2CH2CH2、CH3(O)CCH2、CH3(O)CCH2CH2、Br-CH=CH、フェニル、ベンジル、ベンゾイル、またはベンジルオキシベンジルであり、R2がH、OH、F、CF3、CH3、CH3CH2、CH3CH2CH2、(CH3)2CH、(CH3)2CH2CH2、CH3(O)CCH2、CH3(O)CCH2CH2、Br-CH=CH、フェニル、フェニルオキシ、ベンジル、ベンジルオキシ、ベンゾイル、ベンジルオキシベンジル、またはアシル基であり、R3およびR4がそれぞれ独立にヒドロキシルまたはアシル基である。これらには以下の化合物が含まれる：3'-O-ベンゾイル-2,2'-アンヒドロウリジン；3'-O-ベンゾイル-2,2'-アンヒドロ-5-フルオロウリジン；3'-O-ベンゾイル-2,2'-アンヒドロ-5-トリフルオロメチルウリジン；3'-O-ベンゾイル-2,2'-アンヒドロ-5-メチルウリジン；3'-O-ベンゾイル-2,2'-アンヒドロ-5-エチルウリジン；3'-O-ベンゾイル-2,2'-アンヒドロ-5-プロピルウリジン；3'-O-ベンゾイル-2,2'-アンヒドロ-5-イソプロピルウリジン；3'-O-ベンゾイル-2,2'-O-アンヒドロ-5-イソブチルウリジン；3'-O-ベンゾイル-2,2'-アンヒドロ-5-メチルアシルウリジン；3'-O-ベンゾイル-2,2'-アンヒドロ-5-プロピルアシルウリジン；3'-O-ベンゾイル-2,2'-アンヒドロ-5-(2-ブロモビニル)-ウリジン；3'-O-ベンゾイル-2,2'-アンヒドロ-5-フェニルルリジン；3'-O-ベンゾイル-2,2'-アンヒドロ-5-ベンジルウリジン；3'-O-ベンゾイル-2,2'-アンヒドロ-5-ベンジオルウリジン；および3'-O-ベンゾイル-2,2'-アンヒドロ-5-(ベンジルオキシベンジル)-ウリジン；5'-O-ベンゾイル-2,2'-アンヒドロウリジン；5'-O-ベンゾイル-2,2'-アンヒドロ-5-フルオロウリジン；5'-O-ベンゾイル-2,2'-アンヒドロ-5-トリフルオロメチルウリジン；5'-O-ベンゾイル-2,2'-アンヒドロ-5-メチルウリジン；5'-O-ベンゾイル-2,2'-アンヒドロ-5-エチルウリジン；5'-O-ベンゾイル-2,2'-アンヒドロ-5-プロピルウリジン；5'-O-ベンゾイル-2,2'-アンヒドロ-5-イソプロピルウリジン；5'-O-ベンゾイル-2,2'-O-アンヒドロ-5-イソブチルウリジン；5'-O-ベンゾイル-2,2'-アンヒドロ-5-メチルアシルウリジン；5'-O-ベンゾイル-2,2'-アンヒドロ-5-プロピルアシルウリジン；5'-O-ベンゾイル-2,2'-アンヒドロ-5-(2-ブロモビニル)-ウリジン；5'-O-ベンゾイル-2,2'-アンヒドロ-5-フェニルルリジン；5'-O-ベンゾイル-2,2'-アンヒドロ-5-ベンジルウリジン；5'-O-ベンゾイル-2,2'-アンヒドロ-5-ベンジオルウリジン；および5'-O-ベンゾイル-2,2'-アンヒドロ-5-(ベンジルオキシベンジル)-ウリジン；3',5'-O-ベンゾイル-2,2'-アンヒドロウリジン；3',5'-O-ベンゾイル-2,2'-アンヒドロ-5-フルオロウリジン；3',5'-O-ベンゾイル-2,2'-アンヒドロ-5-トリフルオロメチルウリジン；3',5'-O-ベンゾイル-2,2'-アンヒドロ-5-メチルウリジン；3',5'-O-ベンゾイル-2,2'-アンヒドロ-5-エチルウリジン；3',5'-O-ベンゾイル-2,2'-アンヒドロ-5-プロピルウリジン；3',5'-O-ベンゾイル-2,2'-アンヒドロ-5-イソプロピルウリジン；3',5'-O-ベンゾイル-2,2'-O-アンヒドロ-5-イソブチルウリジン；3',5'-O-ベンゾイル-2,2'-アンヒドロ-5-メチルアシルウリジン；3',5'-O-ベンゾイル-2,2'-アンヒドロ-5-プロピルアシルウリジン；3',5'-O-ベンゾイル-2,2'-アンヒドロ-5-(2-ブロモビニル)-ウリジン；3',5'-O-ベンゾイル-2,2'-アンヒドロ-5-フェニルルリジン；3',5'-O-ベンゾイル-2,2'-アンヒドロ-5-ベンジルウリジン；3',5'-O-ベンゾイル-2,2'-アンヒドロ-5-ベンジオルウリジン；および3',5'-O-ベンゾイル-2,2'-アンヒドロ-5-(ベンジルオキシベンジル)-ウリジン；またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物、およびプロドラッグ型、ならびにそれらの立体異性体。
【０１０４】
特に関心対象であるのは、3'-O-ベンゾイル-2,2'-アンヒドロ-5-メチルウリジン、5'-O-ベンゾイル-2,2'-アンヒドロ-5-メチルウリジン、および3',5'-O-ベンゾイル-2,2'-アンヒドロ-5-メチルウリジン、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物、およびプロドラッグ型、ならびにそれらの立体異性体である。特に関心対象であるのは、これらの化合物のβ-D-アラビノフラノシル異性体、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物、およびプロドラッグ型である。
【０１０５】
もう一つの態様において、特に関心対象の式（I）の化合物は、R1およびR4が上で定義したとおりであり、R2および/またはR3が環式ヒドロカルビルであるものである。「環式ヒドロカルビル」とは、3〜約10個の炭素原子を有し、置換されていてもよい単一の環または複数の縮合環を有する、炭化水素に基づく環構造が意図される。関心対象の環式ヒドロカルビルは、アリール、アラルキル、アリールオキシ、アロイル、アロイルオキシ、ヘテロアリール、ヘテロアリールオキシ、ヘテロアロイルオキシ、シクロアルキル、シクロアルキルオキシおよびシクロアルコイルオキシから選択される。したがって、特に関心対象の環式ヒドロカルビルは式（I）のリボースまたはピリミジン環にO-連結されている。R2および/またはR3が環式ヒドロカルビルである化合物は、モル濃度に基づく活性の改善、またはMTXの有効性妨害に関する特異性の改善を示す。
【０１０６】
したがって、本発明の特定の化合物は5'-O-(環式ヒドロカルビル)-2,2'-アンヒドロピリミジンまたはその誘導体を含む。この態様は、R5がR1である（例えば、「5(R5)」が式（I）のR1を意味し、これと同じであるR5＝R1）、5'-O-(環式ヒドロカルビル)-2,2'-アンヒドロ-5(R5)-ウリジンまたはその誘導体を含む。
【０１０７】
関心対象の化合物は5'-O-アリール-2,2'-アンヒドロピリミジンまたはその誘導体であり、その様々な2,2'-アンヒドロウリジン誘導体が含まれる。これには5'-O-アリール-2,2'-アンヒドロピリミジンが5'-O-ベンゾイル-2,2'-アンヒドロピリミジン；5'-O-クロロベンジル-2,2'-アンヒドロピリミジン；5'-O-ニトロベンジル-2,2'-アンヒドロピリミジン；5'-O-ヒドロキシベンジル-2,2'-アンヒドロピリミジンなどの5'-O-アロイル-2,2'-アンヒドロピリミジンである化合物が含まれる。
【０１０８】
一つの態様において、モル濃度に基づく活性の改善またはMTXの有効性妨害に関する特異性の改善を示す化合物は、5'-O-アリール-2,2'-アンヒドロ-5(R4)-ウリジン、5'-O-アロイル-2,2'-アンヒドロ-5(R4)-ウリジン、およびそれらの誘導体などの、5'-O-アリール-2,2'-アンヒドロウリジン、5'-O-アロイル-2,2'-アンヒドロウリジン、およびその誘導体である。例には、5'-O-アリール-2,2'-アンヒドロ-5-メチル-ウリジン；5'-O-アリール-2,2'-アンヒドロ-5-エチル-ウリジン；5'-O-アリール-2,2'-アンヒドロ-5-プロピル-ウリジン；5'-O-アリール-2,2'-アンヒドロ-5-ベンジル-ウリジン；および5'-O-アリール-2,2'-アンヒドロ-5-(2-ブロモビニル)-ウリジン；ならびにその誘導体が含まれる。例には、5'-O-アロイル-2,2'-アンヒドロ-5-メチル-ウリジン；5'-O-アロイル-2,2'-アンヒドロ-5-エチル-ウリジン；5'-O-アロイル-2,2'-アンヒドロ-5-プロピル-ウリジン；5'-O-アロイル-2,2'-アンヒドロ-5-ベンジル-ウリジン；および5'-O-アロイル-2,2'-アンヒドロ-5-(2-ブロモビニル)-ウリジン；ならびにその誘導体も含まれる。特に関心対象の化合物には、5'-O-ベンゾイル-2,2'-アンヒドロ-5-メチル-ウリジン；5'-O-ベンゾイル-2,2'-アンヒドロ-5-エチル-ウリジン；5'-O-ベンゾイル-2,2'-アンヒドロ-5-プロピル-ウリジン；5'-O-ベンゾイル-2,2'-アンヒドロ-5-ベンジル-ウリジン；および5'-O-ベンゾイル-2,2'-アンヒドロ-5-(2-ブロモビニル)-ウリジンなどの5'-O-ベンゾイル-2,2'-アンヒドロ-5(R4)-ウリジンが含まれる。
【０１０９】
関心対象の立体異性体には、β-D-異性体である、5'-O-(環式ヒドロカルビル)-2,2'-アンヒドロピリミジンが含まれる。例には下記が含まれるが、それらに限定されるわけではない：5'-O-ベンゾイル-2,2'-アンヒドロ-1-(β-D-アラビノフラノシル)ウラシル；5'-O-ベンゾイル-2,2'-アンヒドロ-1-(β-D-アラビノフラノシル)-5-フルオロウラシル；5'-O-ベンゾイル-2,2'-アンヒドロ-1-(β-D-アラビノフラノシル)-5-トリフルオロメチルウラシル；5'-O-ベンゾイル-2,2'-アンヒドロ-1-(β-D-アラビノフラノシル)-5-メチルウラシル；5'-O-ベンゾイル-2,2'-アンヒドロ-1-(β-D-アラビノフラノシル)-5-エチルウラシル；5'-O-ベンゾイル-2,2'-アンヒドロ-1-(β-D-アラビノフラノシル)-5-n-プロピルウラシル；5'-O-ベンゾイル-2,2'-アンヒドロ-1-(β-D-アラビノフラノシル)-5-イソプロピルウラシル；5'-O-ベンゾイル-2,2'-アンヒドロ-1-(β-D-アラビノフラノシル)-5-イソブチルウラシル；5'-O-ベンゾイル-2,2'-アンヒドロ-1-(β-D-アラビノフラノシル)-5-メチアシルウラシル；5'-O-ベンゾイル-2,2'-アンヒドロ-1-(β-D-アラビノフラノシル)-5-プロピルアシルウラシル；5'-O-ベンゾイル-2,2'-アンヒドロ-1-(β-D-アラビノフラノシル)-5-(2-ブロモビニル)ウラシル；5'-O-ベンゾイル-2,2'-アンヒドロ-1-(β-D-アラビノフラノシル)-5-フェニルウラシル；5'-O-ベンゾイル-2,2'-アンヒドロ-1-(β-D-アラビノフラノシル)-5-ベンジルウラシル；5'-O-ベンゾイル-2,2'-アンヒドロ-1-(β-D-アラビノフラノシル)-5-ベンジオルウラシル；および5'-O-ベンゾイル-2,2'-アンヒドロ-1-(β-D-アラビノフラノシル)-5-(3-ベンジオキシベンジル)ウラシル。
【０１１０】
前述のとおり、同様に関心対象であるのは、前述の化合物の類縁体/誘導体であって、化合物を本発明のMTXと併せて投与した場合にMTX毒性が低減されるような、MTX毒性を低減する類縁体/誘導体である。同様に上で示したとおり、本発明の方法において  MTX毒性低減アジュバントの有効量を用いる。
【０１１１】
特定の態様において、用いるMTX毒性低減アジュバントの量は用いるMTX活性物質の量よりも多い。特定の態様において、MTX毒性低減アジュバントの量は投与するMTX活性物質の量の等モル未満の量である。典型的に、投与する毒性低減アジュバントの量はMTX活性物質の量の約75％未満、約50％未満、約25％未満ならびに多くの態様は約15％未満、約10％未満およびさらには約5％または1％未満である。一つの態様において、有効量はMTX活性物質の量の約5％から30％を含む、約3％から40％などの、MTX活性物質の量の約1％から50％である。他の態様において、有効量は活性物質の量と同じであり、特定の態様において、有効量はMTX活性物質の量よりも多い量である。有効量は以下の実験項に提供するデータを用い、経験的に容易に決定することができる。
【０１１２】
前述の2,2'-アンヒドロピリミジンおよびその誘導体は市販されているか、または当業者には公知の技術によって通常どおり調製することができる。例えば、様々な2,2'-アンヒドロピリミジンや中間体および前駆体を含む誘導体、分析、ならびにその合成/調製を記載している代表的な特許には、米国特許第3,975,367号；第4,145,531号；第4,230,698号；第4,247,544号；第4,544,740号；第4,604,382号；第4,613,604号；第4,681,933号；第4,841,039号；第4,916,122号；第4,987,224号；第5,008,384号；第5,077,280号；第5,084,445号；第5,141,943号；第5,190,926号；第5,212,293号；第5,278,167号；第5,384,396号；第5,455,339号；第5,476,855号；第5,596,093号；第5,610,292号；第5,721,241号；第5,723,449号；第5,739,314号；第5,760,202号；第5,889,013号；第5,861,493号；第6,060,592号；第6,090,932号；第6,222,025号；第6,369,040号；第6,642,367号；第6,670,461号；第6,867,290号；および第7,176,295号が含まれ；その開示は参照により本明細書に組み入れられる。同様に以下の参照文献も参照されたい：Veres et al., Biochem Pharmacol. 34(10):1737 (1985)；Veres et al., Drugs Exp Clin Res. 13(10):615 (1987)；el Konui et al, Mol. Pharmacology 34:104 (1988)；Cienfuegos et al. Org. Lett. 7(11):2161 (2005)；Choi et al., Nucleosides Nucleotides Nucleic Acids 22(5-8):547 (2003)；Rodriquez et al., J Med Chem 37(20):3389 (1994)；McGee, D.P.C. et al., ''Novel Nucleosides via Intramolecular Functionalization of 2,2' Anahydrouridine Derivatives'', Tetr. Lett., 37(12):1995 (1996)；Machulla et al. J. Nucl. Med. 42(5):257 (2001)；Czernecki S. et al. Nucleosides & Nucleotides 14:1227 (1995)；Heterocyclic Chemistry (3rd Edition), Thomas. L. Gilchrist, Prentice Hall (1997)；Movassaghi, M. and M.D. Hill, J. Am. Chem. Soc. 128(44):14254 (2006)；Brown, D.J. Heterocyclic Compounds: The Pyrimidines. Vol 52. New York: Interscience, 1994；Eaton, (1995) Annu. Rev. Biochem. 64, 837；Usman and Cedergreen TIBS 17:334 (1992)；Greene and Wuts (1991) Protective Groups in Organic Synthesis, 2nd Ed., Wiley Interscience)；Moffatt, (1979) Nucleoside Analogues, Ed. Walker, NY, Plenum.；Townsend, (1988) Chemistry of Nucleosides and Nucleotides, NY, Plenum；およびSproat, et al., (1991) Oligonucleotides and Analogues: A Practical Approach, ed. F. Eckstein, NY. Oxford Univ. Press))。
【０１１３】
特に関心対象であるのは、ウリジンホスホリラーゼの阻害剤である2,2'-アンヒドロピリミジンおよびその誘導体である。ウリジンホスホリラーゼ（UPh；EC 2.4.2.3）は、ウリジンのC-Nグリコシド結合の加リン酸分解による切断を触媒して、リボース1-リン酸およびウラシルを生成する、酵素のピリミジンヌクレオシドホスホリラーゼファミリーの一員である（Timofeev et al., Acta Crystallogr Sect F Struct Biol Cryst Commun., 63: 852-854 (2007)）。
【０１１４】
本発明の範囲は、MTX活性物質およびMTX毒性低減アジュバントのプロドラッグを含む。そのようなプロドラッグは、一般に、必要とされる化合物にインビボで容易に変換可能な、化合物の機能的誘導体である。したがって、本発明の方法において、「投与すること」なる用語は、具体的に開示された化合物または具体的に開示されていないかも知れないが、それを必要としている被験者に投与後、インビボで指定の化合物に変換される化合物を投与することを含む。適当なプロドラッグ誘導体を選択および調製するための通常の方法は、例えば、Wermuth, ''Designing Prodrugs and Bioprecursors'' in Wermuth, ed. The Practice of Medicinal Chemistry, 2d Ed., pp. 561-586 (Academic Press 2003)に記載されている。プロドラッグにはインビボ（例えば、ヒトの体内）で加水分解して、本発明に適した本明細書に記載の化合物を生成するエステルが含まれる。適当なエステル基には、薬学的に許容される脂肪族カルボン酸、特にアルキルまたはアルケニル部分がそれぞれ6個以下の炭素原子を有する、アルカン酸、アルケン酸、シクロアルカン酸およびアルカン二酸が含まれるが、それらに限定されるわけではない。例示的エステルには、ギ酸エステル、酢酸エステル、プロピオン酸エステル、酪酸エステル、アクリル酸エステル、クエン酸エステル、コハク酸エステル、およびエチルコハク酸エステルが含まれる。
【０１１５】
製剤
同様に提供されるのは、本発明の方法において用いるMTX活性物質および/またはMTX毒性低減アジュバントを含む薬学的組成物である。したがって、薬学的組成物中の、例えば、薬学的に許容される塩の形の、MTX活性物質および/またはMTX毒性低減アジュバントを、前述の本発明の方法において用いるための経口、局所または非経口投与用に製剤することができる。特定の態様において、例えば、化合物を別々の製剤として（化合物を逐次投与する態様においてなど）投与する場合、それぞれ異なる活性物質を含む、別々の、または別個の薬学的組成物が提供される。さらに他の態様において、MTX活性物質およびMTX毒性低減アジュバントの両方を含む単一の製剤（すなわち、両方の活性物質を含む1つの組成物）が提供される。
【０１１６】
例示のために、MTX活性物質および/またはMTX毒性低減アジュバントを通常の薬学的に許容される担体および賦形剤（すなわち、媒体）と混加し、水性液剤、錠剤、カプセル剤、エリキシル剤、懸濁剤、シロップ剤、カシェ剤などの形で用いることができる。そのような薬学的組成物は、特定の態様において、約0.1重量％から約90重量％の活性化合物、より一般的には約1重量％から約30重量％の活性化合物を含む。薬学的組成物は、トウモロコシデンプンまたはゼラチン、ラクトース、デキストロース、スクロース、微結晶セルロース、カオリン、マンニトール、リン酸2カルシウム、塩化ナトリウム、およびアルギン酸などの、一般的な担体および賦形剤を含んでいてもよい。本発明の製剤において一般的に用いる崩壊剤には、クロスカルメロース、微結晶セルロース、トウモロコシデンプン、デンプングリコール酸ナトリウムおよびアルギン酸が含まれる。
【０１１７】
液体組成物は一般に、適当な液体担体、例えば、エタノール、グリセリン、ソルビトール、ポリエチレングリコールなどの非水性溶媒、油または水中の、化合物または薬学的に許容される塩と、懸濁化剤、保存剤、界面活性剤、湿潤剤、着香または着色剤の懸濁液または溶液からなる。または、液体製剤は再構成可能な粉末から調製することもできる。
【０１１８】
例えば、活性化合物、懸濁化剤、スクロースおよび甘味料を含む粉末を水で再構成して、懸濁剤を生成することができ；シロップ剤を活性成分、スクロースおよび甘味料を含む粉末から調製することもできる。
【０１１９】
錠剤の形の組成物は、固体組成物を調製するために日常的に用いられる任意の適当な薬学的担体を用いて調製することができる。そのような担体の例には、ステアリン酸マグネシウム、デンプン、ラクトース、スクロース、微結晶セルロースおよび結合剤、例えば、ポリビニルピロリドンが含まれる。錠剤はカラーフィルムコーティングを施して、または担体の一部として含まれる色素と共に提供することもできる。加えて、活性化合物を、親水性または疎水性基質を含む錠剤として制御放出剤形に製剤することもできる。
【０１２０】
カプセル剤の形の組成物は、日常的カプセル化手順を用いて、例えば、活性化合物および賦形剤のゼラチン硬カプセルへの取り込みによって調製することができる。または、活性化合物および高分子量ポリエチレングリコールの半固体基質を調製し、ゼラチン硬カプセルに充填することもでき；あるいはポリエチレングリコール中の活性化合物の溶液または食用油、例えば、流動パラフィンもしくはヤシ油中の懸濁液を調製し、ゼラチン軟カプセルに充填することもできる。
【０１２１】
含まれうる錠剤結合剤は、アカシア、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリビニルピロリドン（ポビドン）、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、スクロース、デンプンおよびエチルセルロースである。用いることができる滑沢剤には、ステアリン酸マグネシウムまたは他のステアリン酸金属塩、ステアリン酸、シリコーン液、タルク、ワックス、油およびコロイド状シリカが含まれる。
【０１２２】
ペパーミント、冬緑油、サクランボ着香剤などの着香剤を用いることもできる。加えて、剤形の外観をより魅力的にする、または生成物の特定を助けるために、着色剤を加えることが望ましい場合もある。
【０１２３】
非経口投与した場合に活性である、本発明の化合物およびそれらの薬学的に許容される塩を筋肉内、くも膜下腔内、または静脈内投与のために製剤することができる。
【０１２４】
筋肉内またはくも膜下腔内投与のための典型的な組成物は、油、例えば、落花生油またはゴマ油中の活性成分の懸濁液または溶液のものである。静脈内またはくも膜下腔内投与のための典型的な組成物は、例えば、活性成分ならびにデキストロースもしくは塩化ナトリウム、またはデキストロースおよび塩化ナトリウムの混合物を含む無菌等張水溶液である。他の例は乳酸加リンゲル液、乳酸加リンゲル液＋デキストロース注射液、Normosol-Mおよびデキストロース、Isolyte E、アシル化リンゲル液などである。任意に、共溶媒、例えば、ポリエチレングリコール、キレート剤、例えば、エチレンジアミン四酢酸、および抗酸化剤、例えば、メタ重亜硫酸ナトリウムが製剤中に含まれていてもよい。または、溶液を凍結乾燥し、次いで投与直前に適当な溶媒で再構成することもできる。
【０１２５】
直腸投与後に活性である、本発明の化合物およびそれらの薬学的に許容される塩を坐剤として製剤することができる。典型的な坐剤製剤は一般に、活性成分と、ゼラチンもしくはカカオ脂または他の低融点植物性もしくは合成ワックスもしくは脂肪などの結合および/または滑沢剤から構成されることになる。
【０１２６】
局所投与後に活性である、 本発明の化合物およびそれらの薬学的に許容される塩を経皮組成物または経皮送達装置（「パッチ」）として製剤することができる。そのような組成物には、例えば、裏打ち、活性化合物貯蔵所、制御膜、ライナーおよび接触接着剤が含まれる。そのような経皮パッチを用いて、制御された量の本発明の化合物の持続的または断続的注入を提供してもよい。薬剤送達のための経皮パッチの構築および使用は当技術分野において周知である。例えば、米国特許第5,023,252号を参照されたく、その全体が参照により本明細書に組み入れられる。そのようなパッチは薬剤の持続的、拍動性、または応需型送達のために構築しうる。
【０１２７】
関心対象の特定の態様において、MTX活性物質およびMTX毒性低減アジュバントを、活性物質および毒性低減アジュバントの有効量を含むことに加えて、他の適当な化合物および担体を含む、単一の薬学的製剤として投与し、また他の活性物質との組み合わせで用いてもよい。したがって、本発明は、薬学的に許容される賦形剤を含む薬学的組成物も含む。薬学的に許容される賦形剤には、例えば、任意の適当な媒体、アジュバント、担体または希釈剤が含まれ、一般に容易に入手可能である。本発明の薬学的組成物は、当技術分野において周知の他の活性物質をさらに含んでいてもよい。
【０１２８】
当業者であれば、本発明の製剤を被験者または宿主、例えば、それを必要としている患者に投与する様々な適当な方法が利用可能で、特定の製剤を投与するために複数の経路を用いることができるが、特定の経路は別の経路よりも即時で効果的な反応を提供しうることを理解するであろう。薬学的に許容される賦形剤も当業者には周知で、容易に入手可能である。賦形剤の選択は部分的には、特定の化合物によって、ならびに組成物を投与するために用いる特定の方法によって決定することになる。したがって、本発明の薬学的組成物の様々な適当な製剤がある。以下の方法および賦形剤は単なる例示であって、決して限定的なものではない。
【０１２９】
経口投与に適した製剤は、（a）化合物の有効量を水、食塩水、またはオレンジジュースなどの希釈剤に溶解したものなどの液剤；（b）それぞれあらかじめ決められた量の活性成分を、固体または顆粒で含む、カプセル剤、サシェ剤または錠剤；（c）適当な液体中の懸濁剤；および（d）適当な乳剤で構成されうる。錠剤はラクトース、マンニトール、トウモロコシデンプン、ジャガイモデンプン、微結晶セルロース、アカシア、ゼラチン、コロイド状二酸化ケイ素、クロスカルメロースナトリウム、タルク、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、ならびに他の賦形剤、着色剤、希釈剤、緩衝剤、加湿剤、保存剤、着香剤、および薬理学的に適合する賦形剤の1つまたは複数を含みうる。ロゼンジ剤形は活性成分を着香剤、通常はスクロースおよびアカシアまたはトラガカント中に含むことができ、同様に香錠はゼラチンおよびグリセリン、またはスクロースおよびアカシアなどの不活性基剤中に活性成分を含み、乳剤、ゲル剤などは活性成分に加えて、当技術分野において公知のような賦形剤を含みうる。
【０１３０】
本発明の製剤は、吸入により投与するエアロゾル製剤に作成することができる。これらのエアロゾル製剤は、ジクロロジフルオロメタン、プロパン、窒素などの許容される加圧噴射剤中に加えることができる。これらはネブライザーまたはアトマイザー用などの非加圧調製物用の薬剤として製剤してもよい。
【０１３１】
非経口投与に適した製剤には、抗酸化剤、緩衝剤、抗菌剤、および製剤を意図する受容者の血液と等張にする溶質を含みうる、水性および非水性の等張無菌注射液剤、ならびに懸濁化剤、可溶化剤、増粘剤、安定化剤、および保存剤を含みうる、水性および非水性の無菌懸濁剤が含まれる。製剤は、アンプルおよびバイアルなどの、単位用量または複数用量の密封容器に入れて提供することができ、使用の直前に、注射用の無菌液体賦形剤、例えば、水の添加だけを必要とする、凍結乾燥（freeze-dried）（凍結乾燥（lyophilized））状態で保存することができる。即時調合用注射液剤および懸濁剤を前述の種類の無菌散剤、顆粒剤、および錠剤から調製することができる。
【０１３２】
局所投与に適した製剤を、活性成分に加えて、適宜当技術分野において公知の他のそのような担体を含む、クリーム剤、ゲル剤、ペースト剤、またはフォーム剤として提供してもよい。
【０１３３】
坐剤製剤も、乳化基剤または水溶性基剤などの様々な基剤と混合することによって提供される。膣投与に適した製剤を、ペッサリー、タンポン、クリーム剤、ゲル剤、ペースト剤、フォーム剤として提供してもよい。
【０１３４】
シロップ剤、エリキシル剤、および懸濁剤などの経口または直腸投与用の単位剤形を提供してもよく、ここで各用量単位、例えば、茶匙1杯、大さじ1杯、錠剤または坐剤は、1つまたは複数の阻害剤を含む組成物のあらかじめ決められた量を含む。同様に、注射または静脈内投与用の単位剤形は、阻害剤を組成物中に、無菌水、生理食塩水または別の薬学的に許容される担体中の溶液として含んでいてもよい。
【０１３５】
本明細書において用いられる「単位剤形」なる用語は、ヒトおよび動物被験者用の単位用量として適当な物理的に個別の単位を意味し、各単位は所望の効果を生じるのに十分な量で計算された本発明の化合物のあらかじめ決められた量を、薬学的に許容される希釈剤、担体または媒体と共に含む。本発明の新規の単位剤形の明細は、用いる特定の化合物および達成すべき効果、ならびに宿主における各化合物に関連する薬力学に依存する。
【０１３６】
当業者であれば、用量レベルは特定の化合物、送達媒体の性質などの関数として変動しうることを容易に理解するであろう。所与の化合物に適した用量は当業者であれば様々な手段によって容易に決定可能である。
【０１３７】
本発明の状況において、動物、特にヒトに投与する用量は、妥当な時間枠で動物において予防または治療反応を引き起こすのに十分であるべきである。当業者であれば、用量は用いる特定の化合物の強度、動物の状態、および動物の体重、ならびに病気の重症度および病期を含む様々な因子に依存することを理解するであろう。用量のサイズは、特定の化合物の投与に付随しうる任意の有害副作用の存在、性質、および程度によっても決定されることになる。適当な用量および投薬法は、所望の増殖阻害または免疫抑制反応を引き起こすことが公知の抗癌剤または免疫抑制剤との比較によって決定することができる。
【０１３８】
任意に、薬学的組成物は、緩衝剤、界面活性剤、抗酸化剤、粘性改変剤、保存剤などの他の薬学的に許容される成分を含んでいてもよい。これらの成分はそれぞれ当技術分野において周知である。例えば、米国特許第5,985,310号を参照されたく、その開示は参照により本明細書に組み入れられる。
【０１３９】
本発明の製剤において用いるのに適した他の成分は、Remington's Pharmaceutical Sciences, Mace Publishing Company, Philadelphia, Pa., 17th ed. (1985)において見いだすことができる。一つの態様において、水性シクロデキストリン溶液はデキストロース、例えば、約5％デキストロースも含む。
【０１４０】
有用性
本発明の方法は様々な適用において用いられる。特定の適用において、方法はDNA合成および/または修復のDHFR仲介などの、少なくとも1つの細胞機能を調節する方法である。これに関して、本発明の方法および組成物は、MTXを用いて治療しうる疾患または障害の治療などの、MTXの公知の適用において用いられる。本発明の組成物の使用は、例えば、癌、乾癬、関節リウマチ、クローン病および組織移植片拒絶を含むが、それらに限定されるわけではない、疾患および障害の治療において、ならびに免疫抑制剤を必要とする状態において、特に有用である。これらの可能性において、本発明の組成物の使用は、所望のMTX活性を保持する一方で、毒性低減をきたすことになる。
【０１４１】
したがって、本発明の方法および組成物は、MTX投与が指示される治療的適用において用いられる。代表的な治療的適用は、細胞増殖疾患状態、例えば、異常な細胞増殖によって特徴づけられる癌および関連状態の治療である。そのような疾患状態には、癌および新生物疾患ならびに望まれない細胞増殖、例えば、過形成などの存在によって特徴づけられる他の疾患が含まれる。多発性硬化症などの自己免疫疾患も、免疫細胞の不適当な増殖を特徴とする。
【０１４２】
治療とは、宿主を苦しめている状態に関連する症状の少なくとも改善が達成されることを意味し、ここで改善は広い意味で用いられ、少なくともパラメーター、例えば、治療中の状態に関連する症状または薬物の投与によって起こる副作用の大きさの低減を意味する。したがって、治療は、宿主がその状態、または少なくとも状態を特徴づける症状をもはや患うことがないように、病的状態、または少なくともそれに関連する症状が完全に阻害される、例えば、発生が防止される、または止められる、例えば、停止される状況も含む。
【０１４３】
関心対象の具体的適用は、MTX誘発性粘膜炎を改善するための、アンヒドロヌクレオシド、特に2,2'-アンヒドロピリミジンおよびその誘導体の使用である。したがって、特定の態様において、MTX活性物質の有効量を、MTX毒性低減アジュバントの宿主のMTX誘発性粘膜炎を低減するのに有効な量と併せての、それを必要としている宿主の治療法が提供され、ここでMTX毒性低減アジュバントは2,2'-アンヒドロピリミジンまたはその誘導体である。関連する態様において、MTX誘発性粘膜炎は口内炎である。もう一つの関連する態様において、MTX誘発性粘膜炎は、骨髄抑制、体重減少、炎症、および感染から選択される1つまたは複数の特徴によって特徴づけられる。特に関心対象であるのは、宿主のMTX誘発性粘膜炎を低減するためのMTX毒性低減アジュバントとしての、2,2'-アンヒドロ-5-メチルウリジンおよびそのアシル誘導体の使用である。
【０１４４】
MTX誘発性粘膜炎の低減は、MTX活性物質による宿主の治療に起因する粘膜炎の発症の可能性の防止、軽減、または低減によって特徴づけられる。これには、MTX活性物質の有効量を、MTX毒性低減アジュバントの宿主のMTX誘発性粘膜炎を低減するのに有効な量と併せての、それを必要としている宿主の治療が含まれ、ここでMTX毒性低減アジュバントは、（i）防止、すなわち、臨床症状を発生しないようにすること、例えば、骨髄抑制、体重減少、炎症、および/もしくは感染を防止すること、ならびに/またはこれらの特徴の1つまたは複数の有害な段階への進行を防止すること；（ii）阻害、すなわち、臨床症状の発生またはさらなる発展を停止すること、例えば、粘膜炎の活動性（進行中）の特徴を軽減または完全に阻害して、特徴がもはや重篤に有害ではない程度にまで減少し、この減少は宿主からの粘膜炎の完全な除去を含みうること；および/または（iii）解放、すなわち、臨床症状の緩解を引き起こすこと、例えば、骨髄抑制、体重減少、炎症、感染、および/またはMTX活性物質による宿主の治療によって起こる他の症状からの解放を引き起こすことを含む、粘膜炎の1つまたは複数の特徴が起こった場合にそれをうまく防止または除去する可能性を改善する。
【０１４５】
例えば、口腔粘膜炎（口内炎）を含む粘膜炎の重症度は、口、喉および/もしくは状態に関連する肛門の病変の目視検査、被験者もしくは患者の質問（口または喉に痛みがあるか？）または以下の任意の、もしくはすべての3つの十分に認められた疾患尺度を用いて容易に評価することができる：5等級の世界保健機構（WHO）口腔毒性尺度（Miller AB et al., Cancer 1981;47:207-214）、粘膜についての5等級の腫瘍放射線治療グループ（Radiation Therapy Oncology Group (RTOG)）急性放射線罹患率採点基準、米国立がん研究所の一般的毒性基準、第2.0.版、1999年、4月30日、および口腔粘膜炎についての4等級のWestern Consortium for Cancer Nursing Research (WCCNR)改訂等級付けシステム。口内炎の評価：Western Consortium for Cancer Nursing Research (WCCNR)口内炎等級付けシステムの改良（Can Oncol Nurs J 1998;8:160-165）。したがって、MTX毒性低減アジュバントによる治療の効果を、これらの試験システムのいずれか、またはすべてを用いて容易に判定することができる。
【０１４６】
様々な被験者が本発明の方法に従って治療可能である。一般に、そのような宿主は「哺乳動物」または「哺乳綱の動物」であり、ここでこれらの用語は、食肉目（例えば、イヌおよびネコ）、齧歯目（例えば、マウス、モルモット、およびラット）、および霊長目（例えば、ヒト、チンパンジー、およびサル）を含む、哺乳綱の範囲内である生物を記載するために広く用いられる。多くの態様において、被験者はヒトである。
【０１４７】
特定の態様において、被験者は診断され、したがって活性物質の投与を必要としている被験者である。特定の態様において、方法は、活性物質の投与によって治療すべき疾患状態の存在について被験者を診断することを含みうる。
【０１４８】
本発明の方法は、適用の中でも特に、新生物疾患状態、例えば癌、および自己免疫疾患を含む、細胞増殖疾患状態の治療において用いられる。そのような適用において、MTX活性物質の有効量およびMTX毒性低減アジュバントをそれを必要としている被験者に投与する。治療は、上で定義したとおり、少なくとも疾患の症状の1つまたは複数における改善、ならびにその完全な休止、ならびに疾患状態の逆転および/または完全な除去、すなわち治癒を含むように、広く用いられる。
【０１４９】
細胞増殖の調節不全に関連する多くの障害、すなわち、細胞過剰増殖障害がある。関心対象の状態には、以下に記載する状態が含まれるが、それらに限定されるわけではない。
【０１５０】
本発明の方法は、平滑筋細胞、および/または炎症細胞の血管内膜層への増殖および/または移動があって、その血管を通過する血流の制限、例えば新生内膜閉塞傷害を引き起こす様々な状態の治療において用いてもよい。関心対象の閉塞性血管状態には、アテローム性動脈硬化症、移植後の移植冠血管疾患、移植静脈狭窄、吻合周囲人工血管狭窄、血管形成術またはステント設置後の再狭窄などが含まれる。
【０１５１】
過剰増殖および組織リモデリングまたは生殖組織の修復がある疾患、例えば、子宮、精巣および卵巣癌、子宮内膜症、子宮頸の扁平上皮および腺上皮癌などは、本発明の化合物の投与によって細胞数が低減する。
【０１５２】
治療のための関心対象の腫瘍には、癌腫、例えば、結腸癌、十二指腸癌、前立腺癌、乳癌、黒色腫、腺管癌、肝臓癌、膵臓癌、腎臓癌、子宮内膜癌、胃癌、異形成口腔粘膜、ポリープ症、侵襲性口腔癌、非小細胞肺癌、尿路移行上皮および扁平上皮癌など；神経系悪性病変、例えば、神経芽腫、神経膠腫など；血液悪性病変、例えば、小児急性白血病、急性骨髄性白血病、急性リンパ性白血病、非ホジキンリンパ腫、慢性リンパ性白血病、悪性皮膚T細胞、菌状息肉腫、非MF皮膚T細胞リンパ腫、リンパ腫様丘疹症、T細胞を多く含む皮膚リンパ様過形成、水疱性類天疱瘡、円板状紅斑性狼瘡、扁平苔癬、妊娠性絨毛癌、侵入胞状奇胎、胞状奇胎、頭頸部の類表皮癌、および絨毛癌、侵入胞状奇胎、胞状奇胎などの絨毛性腫瘍などが含まれる。
【０１５３】
特に関心対象のいくつかの癌には、原発時には腺癌亜型である乳癌が含まれる。管内癌（DCIS）は非侵襲性乳癌の最も一般的な型である。DCISでは、悪性細胞は管壁を通じて乳房の脂肪組織に転移していない。浸潤性（すなわち侵襲性）腺管癌（IDC）は管壁を通じて転移し、乳房の脂肪組織に侵襲している。浸潤性（すなわち侵襲性）小葉癌（ILC）は、体内の他所に転移する可能性を有するという点で、IDCと同様である。侵襲性乳癌の約10％〜15％は侵襲性小葉癌である。
【０１５４】
同じく関心対象であるのは、非小細胞肺癌である。非小細胞肺癌（NSCLC）は肺癌の3つの一般的亜型からなる。類表皮癌（扁平上皮癌とも呼ばれる）は通常、大きい気管支の1つで発生し、比較的ゆっくり増殖する。これらの腫瘍のサイズは非常に小さいものからかなり大きいものまでの範囲でありうる。腺癌は肺の外側表面の付近で増殖し始め、サイズおよび増殖速度のいずれも変動しうる。いくつかのゆっくり増殖する腺癌は肺胞細胞癌として記載される。大細胞癌は肺の表面付近で発生し、急速に増殖し、診断時には増殖は通常かなり大きい。他の一般性が低い肺癌の形はカルチノイド、円柱腫、粘膜表皮、および悪性中皮腫である。
【０１５５】
黒色腫はメラニン細胞の悪性腫瘍である。ほとんどの黒色腫は皮膚で発生するが、粘膜表面から、または神経冠細胞がそれに向かって移動する他の部位で生じるものもある。黒色腫は主に成人に発生し、症例の半数以上は皮膚の見かけ上正常な領域に生じる。予後は臨床および組織学的因子、ならびに病変の解剖学的位置によって影響を受ける。黒色腫の厚さおよび/または侵襲のレベル、分裂指数、腫瘍浸潤性リンパ球、ならびに原発部位の潰瘍化または出血が予後に影響をおよぼす。臨床病期は、腫瘍が局所リンパ節または遠隔部位に伝播しているかどうかに基づいている。臨床上、原発部位に限定されている疾患について、黒色腫の局所侵襲が厚くて深いほど、リンパ節転移の可能性は高く、予後は悪い。黒色腫は局所拡張（リンパ管を通じて）および/または血行性経路によって遠隔部位へと伝播することができる。いかなる臓器も転移が波及しうるが、肺および肝臓が一般的部位である。
【０１５６】
関心対象の他の過剰増殖疾患は、表皮過剰増殖、組織リモデリングおよび修復に関係する。例えば、乾癬の慢性皮膚炎症は、過形成表皮ケラチン生成細胞ならびにCD4+記憶T細胞、好中球およびマクロファージを含む、浸潤性単核細胞に関連している。
【０１５７】
本発明の方法は、皮膚、結合組織、脂肪、乳房、肺、胃、膵臓、卵巣、子宮頸、子宮、腎臓、膀胱、結腸、前立腺、中枢神経系（CNS）、網膜および血液などから選択される細胞由来の腫瘍を含む、ほとんどではないとしても多くの悪性病変を治療する方法を提供することができる。関心対象の代表的な癌には下記が含まれるが、それらに限定されるわけではない：頭頸部および肺組織（例えば、頭頸部扁平上皮癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌）、胃腸管および膵臓（例えば、胃癌、結腸直腸腺腫、結腸直腸癌、膵臓癌）；肝組織（例えば、肝細胞癌）、腎臓および尿路（例えば、異形成尿路上皮、膀胱癌、腎臓癌、ウィルムス腫瘍）、乳房（例えば、乳癌）；神経組織（例えば、網膜芽細胞腫、乏突起神経膠腫、神経芽腫、および悪性髄膜腫；皮膚（例えば、正常表皮、扁平上皮癌、基底細胞癌、黒色腫など）。
【０１５８】
本発明の方法は、血液組織（例えば、リンパ腫、慢性骨髄性白血病（CML）、急性前骨髄球性白血病（APL）、急性リンパ芽球性白血病（ALL）、急性骨髄性白血病（AML）などを治療する方法も提供することができる。
【０１５９】
本発明の状況において、動物、特にヒトに投与する用量は、妥当な時間枠で動物において予防または治療反応に影響をおよぼすのに十分であるべきである。当業者であれば、用量は用いる特定の化合物の強度、メトトレキセートの用量、メトトレキセートに対して用いる投薬法、動物の状態、および動物の体重、ならびに病気の重症度および疾患の病期を含む様々な因子に依存することを理解するであろう。
【０１６０】
用量のサイズは、特定の化合物の投与に付随しうる任意の有害副作用の存在、性質、および程度によっても決定されることになる。
【０１６１】
本発明の化合物による個人の治療において、高用量投薬法を非悪性細胞に対する救援剤と併せて用いることが望ましい場合もある。そのような治療において、アジュバントに加えて、シトロボラム因子、葉酸誘導体、またはロイコボリンなどの、非悪性細胞の救援が可能な任意の物質を用いることもできる。そのような救援剤は当業者には周知である。
【０１６２】
本発明の方法および組成物が用いられる特定の適用には、米国特許第2,512,572号；第3,892,801号；第3,989,703号；第4,057,548号；第4,067,867号；第4,079,056号；第4,080,325号；第4,136,101号；第4,224,446号；第4,306,064号；第4,374,987号；第4,421,913号；第4,767,859号；第3,981,983号；第4,043,759号；第4,093,607号；第4,279,992号；第4,376,767号；第4,401,592号；第4,489,065号；第4,622,218号；第4,625,014号；第4,638,045号；第4,671,958号；第4,699,784号；第4,785,080号；第4,816,395号；第4,886,780号；第4,918,165号；第4,925,662号；第4,939,240号；第4,983,586号；第4,997,913号；第5,024,998号；第5,028,697号；第5,030,719号；第5,057,313号；第5,059,413号；第5,082,928号；第5,106,950号；第5,108,987号；第4,106,488号；第4,558,690号；第4,662,359号；第4,396,601号；第4,497,796号；第5,043,270号；第5,166,149号；第5,292,731号；第5,354,753号；第5,382,582号；第5,698,556号；第5,728,692号；および第5,958,928号に記載のものが含まれ；これらの開示は参照により本明細書に組み入れられる。
【０１６３】
キットおよびシステム
同様に提供されるのは、前述の本発明の方法を実施する際に用いられるキットおよびシステムである。例えば、本発明の方法を実施するためのキットおよびシステムは、MTX活性物質およびMTX毒性低減アジュバントの一方または両方を含む、1つまたは複数の薬学的製剤を含んでいてもよい。したがって、特定の態様において、キットは、1つまたは複数の単位用量で存在する単一の薬学的組成物を含んでいてもよく、ここで組成物はMTX活性物質およびMTX毒性低減アジュバントの両方を含む。さらに他の態様において、キットは、それぞれMTX活性物質またはMTX毒性低減アジュバントのいずれかを含む、複数の別の薬学的組成物を含んでいてもよい。
【０１６４】
前述の成分に加えて、本発明のキットは本発明の方法を実施するための説明書をさらに含んでいてもよい。これらの説明書は本発明のキットにおいて様々な形で含まれてもよく、その1つまたは複数がキットに含まれてもよい。これらの説明書が含まれうる1つの形は、適当な媒体または基体に印刷された情報、例えば、情報が印刷された1枚または複数枚の紙、キットの包装、添付文書などである。さらにもう一つの手段は、情報が記録されている、コンピューターで判読可能な媒体、例えば、ディスク、CDなどであろう。含まれうるさらにもう一つの手段は、インターネットを介して遠隔場所の情報を利用するために用いうる、ウェブサイトアドレスである。いずれかの便利な手段がキットに含まれうる。例えば、一つの態様に従ってのキットは、第一の成分として（a）MTX毒性低減アジュバントを用いるための説明書、および第二の成分として（b）MTX毒性低減アジュバント、MTX活性物質、またはその組み合わせを含む薬学的組成物を含む。
【０１６５】
具体的関心対象のキットは、本発明の2,2'-アンヒドロピリミジン薬学的組成物を含むものであり、口内炎を含むMTX活性物質誘発性粘膜炎を低減するため、および細胞増殖性障害の治療のためなどの、本発明の方法を実施するために適している。
【０１６６】
本明細書において用いられる「システム」なる用語は、本発明の方法を実施するためにまとめられる、単一または異なる組成物で存在する、MTX活性物質およびMTX毒性低減アジュバントの集まりを意味する。例えば、本発明に従い、まとめて被験者に同時投与する、別々に得たMTX活性物質およびMTX毒性低減アジュバント剤形は、本発明のシステムである。
【実施例】
【０１６７】
以下の実施例は、本発明をさらに詳細に例示するもので、いかなる様式でもその範囲を限定すると解釈されるべきではない。
【０１６８】
実験
I.  ハエ試験I（致死性からの保護）
細胞毒性物質による治療に関連する有害事象を低減にする物質が利用可能であれば、癌化学療法の有効性を改善することができる。このために、キイロショウジョウバエ（一般にショウジョウバエ（fruit fly）として公知）は、そのような副作用低減物質について化学化合物をスクリーニングするために理想的な生物である。本試験は、昆虫におけるMTX誘発性の致死性に対して保護する2,2'-アンヒドロピリミジン試験品の用量を見いだすことを目的とする。
【０１６９】
漸増量の2,2'-アンヒドロピリミジン試験品（典型的には0.03から0.1mg）を0.3（または0.4)mg MTXを含む水溶液と混合する。4ミリリットル（mL）の2,2'-アンヒドロピリミジン試験品＋MTX溶液を適当な量のインスタントのハエ培地に加える。ショウジョウバエの卵を2,2'-アンヒドロピリミジン試験品＋MTX処理した培地に加え、最大31日間インキュベートする。31日間のインキュベーション後、各検定物をバイアルごとの成虫のハエおよび蛹の数で採点する。
【０１７０】
検定物をApplied Scientific (Hampton, NH)からの径の小さい澄明無菌ポリスチレン性バイアル内で準備する。バイアルをトレイ内で保存し、暗くした25℃のインキュベーター内でインキュベートする。
【０１７１】
用いる試薬および材料は下記のとおりである：H2O中50mg/mL MTX（pH8）、H2O中20mg/mLの2,2'-アンヒドロピリミジン試験品、水、Applied Scientificからの小径の無菌ポリスチレンバイアル、Instant Drosophila Food Medium、オレゴンRキイロショウジョウバエ、25℃インキュベーター、および15mLポリスチレンコニカルチューブ。
【０１７２】
各検定を別々のハエバイアル内で実施する。漸増量の2,2'-アンヒドロピリミジン（0.005から1.0mg）を、ハエ卵に対するMTX副作用低減について試験する。2,2'-アンヒドロピリミジン試験品の量を水に溶解した20mg/mL保存溶液から取り出す。9mLの2,2'-アンヒドロピリミジン＋0.3（または0.4）mg MTX溶液を15mLコニカルチューブ内で水とあらかじめ混合する。二つ組の検定物に4mLの2,2'-アンヒドロピリミジン試験品＋0.3（または0.4）mg MTX溶液を加える。あらかじめ測定した量のインスタントのハエ培地を各検定物に加え、最適な含水レベルとする。対照は（1）4mLの水単独、および（2）0.3（または0.4)mg MTX単独である。正確に50個の約18時間齢のハエ卵を各検定物に加える。検定物を形にあった栓で蓋をし、暗所、25℃のインキュベーター内で30日間インキュベートする。検定物をバイアルごとの死んだ蛹または成虫のハエの数で採点する。
【０１７３】
ハエモデルにおけるMTXの毒性曲線の典型的な1組の結果を図1に提供しており、これはハエモデルの致死性における代表的な2,2'-アンヒドロピリミジン試験品（2,2'-アンヒドロ-5-メチルウリジン、TK-112690とも呼ぶ）の保護効果を示す。第6群は食塩水処理したハエに対応する。第5群はMTX処理したハエに対応する。第1〜4群はMTX＋TK-112690で処理したハエに対応する。MTXの用量は0.4mgで、TK-112690の用量は0.005から0.1mgの範囲であった。
【０１７４】
図1に例示するデータは、ハエの致死性におけるMTXの効果は有意性が高かった（第5群と第6群との間の有意性p＜0.01）が、TK-112690による保護は有意性が高かった（第1〜4群と第5群または第6群のいずれかとの間の有意性p＜0.01）ことを示す。これらのデータは、TK-112690などの2,2'-アンヒドロピリミジンはMTX毒性を低減することを示している。
【０１７５】
II.  マウス試験I（体重減少からの保護）
細胞毒性物質による治療に関連する有害事象を最小限にする物質が利用可能であれば、癌化学療法の有効性を改善することができる。このために、マウスは、ハエモデルで最初に同定された保護物質をさらに分析するために理想的な生物である。本試験の目的は、マウスにおいて粘膜炎の主要な特徴であるMTX誘発性体重減少に対して保護する代表的な2,2'-アンヒドロピリミジン試験品の用量を見いだすことである。
【０１７６】
このマウスモデルは公表された方法（de Koning et al., Int Immunol 18: 941 (2006)）から改変している。マウスを第1日にリポ多糖（LPS）の1回腹腔内（ip）投与と、続いて連続2日間のそれぞれ200および100mg/kgのipメトトレキセートで処置する。対照には第1、2、および3日に食塩水単独、第1日に食塩水プラス第2および3日にMTX、ならびに第1日にLPSと第2および3日に食塩水注射が含まれる。実験群には第1日にLPSを投与し、第2および3日にメトトレキセート注射の3時間前、および3時間後に、代表的2,2'-アンヒドロピリミジン試験品であるTK-112690 10または30mg/kgをip投与する。動物の体重を毎日最初の注射後に測定し、第2回のメトトレキセート注射（第8日）の5日後に実験を停止する。体重減少はMTX誘発性毒性の代表的なもので、MTX誘発性粘膜炎の一局面である。
【０１７７】
TK-112690についての典型的な結果を図2に示す。このプロットにおいて、第1群は食塩水処置したマウスに対応する。第2群はリポ多糖（LPS）処置したマウスに対応する。第3群はMTX処置したマウスに対応する。第4群はLPS＋MTX処置したマウスに対応する。第5群はLPS＋MTX＋TK-112690（10mg/kg）処置したマウスに対応する。第6群はLPS＋メトトレキセート＋TK-112690（30mg/kg）処置したマウスに対応する。図の縦座標は第1日と第8日の試験間の体重差の平均である。
【０１７８】
本試験においてTK-112690により得られた保護は有意性が高かった（第5群平均体重変化と第4群（p＜0.004）および第6群と第4群（p＜0.0005）。30mg/kg用量の効果は10mg/kg用量の効果よりも大きい。第5群と第6群は第1群（食塩水）から統計学的に差はない。
【０１７９】
これらの結果は、哺乳動物宿主において2,2'-アンヒドロピリミジン試験品による処置がMTX誘発性毒性を低減すること、および2,2'-アンヒドロピリミジンの保護効果は用量依存的であることを示している。
【０１８０】
III.  マウス試験II（粘膜透過性減少からの保護）
本試験の目的は、代表的な2,2'-アンヒドロピリミジン試験品のMTX誘発性の粘膜透過性減少を緩和する能力を評価することであった。C57Bl/6雌マウス（n＝7）に、第2、3および4日に100mg/kg MTXによる処置（ip）を、MTX注射の3時間前および3時間後に60mg/kg TK-112690（ip）と共に、および伴わずに行った。第7日に、粘膜障壁損傷を、経口投与したイオジキサノールの血漿濃度をUV検出を用いたHPLCにより測定して推定した。経口投与したイオジキサノールは粘膜透過性の増大がなければ吸収されない。
【０１８１】
試験からのデータを図3に示す。この図において、第1群は食塩水処置した対照動物であり、第2群はメトトレキセート単独で処置した動物であり、第3群はメトトレキセートおよびTK-112690で処置した動物である。第2、3および4日に100mg/kg MTXで処置したマウスは、経口投与したイオジキサノールの血漿濃度上昇によって示される粘膜障壁損傷を経験した。MTXの3時間前および3時間後に60mg/kg TK-112690を同時投与することで、経口投与したイオジキサノールの血漿濃度低下によって示されるとおり、MTX誘発性粘膜障壁損傷からマウスを保護した。結果は統計学的に有意であった（p＜0.05）。
【０１８２】
要約すると、マウスにip投与したMTXは、経口投与したイオジキサノールの血漿濃度上昇によって示される小腸粘膜障壁損傷を引き起こし、TK-112690をMTXと同時投与すると、経口投与したイオジキサノールの血漿濃度低下によって示されるとおり、MTX誘発性粘膜障壁損傷に対して保護した。
【０１８３】
IV.  マウス試験III（感染試験）
本試験の目的は、代表的な2,2'-アンヒドロピリミジン試験品の哺乳動物において白血球数で評価されるMTX誘発性感染を緩和する能力を試験することである。感染はMTX誘発性毒性の代表的なもので、MTX誘発性粘膜炎の一局面である。
【０１８４】
LPS/MTX検定で観察される粘膜炎からの保護を確認するモデルを開発する試みにおいて、いくつかのパラメーターを試験した。全血球計算（CBC）の検査により、マウスをMTXで処置した場合に白血球数（WBC）の一貫して高いレベルが観察される（図4）。この上昇は同時にTK-112690で処置した動物では観察されない（図4）。これらの結果は、MTXが粘膜表面を損傷し、腸の内層の完全性に裂け目を生じ、その下にある組織を細菌に曝露することを想起すれば、良く理解することができる。LPSはグラム陰性菌の外膜上の大分子である。LPSに曝露された組織はTNF-αおよびIL-10などの炎症誘発性サイトカインを発現する。組織のLPSへの曝露によるこれらのサイトカインの増加は免疫応答を引き起こし、これは次いでWBCを増加させる。
【０１８５】
図4にデータを示す試験について、C57BL/6マウス（n＝10/用量群）に、第1、2、3、4、6および8日に50mg/kg MTXのi.p.処置を、MTXの±3時間に60mg/kg TK-112690のi.p.処置と共に行い、続いてMTX処置しない日にはTK-112690を1日1回投与した。第11日に、動物から採血し、得られた血液試料で血液検査を実施した。血液検査後、動物を屠殺した。
【０１８６】
図4に示すデータは、MTX処置が全身WBCを高めることを示唆している（メトトレキセート処置した動物のWBCレベルは食塩水またはMTX＋TK-112690いずれかで処置した動物のレベルよりも統計学的に高く（p＜0.02）、食塩水とMTX＋TK-112690では互いに統計学的差はない）。要約すると、TK-112690はMTX誘発性粘膜炎から保護し、この効果はMTX処置マウスのWBC数の増加防止によって評価することができる。
【０１８７】
V.  細胞培養試験I（CCRF-CEMヒト白血病細胞）
本試験の目的は、代表的な2,2'-アンヒドロピリミジン試験品のインビトロでMTXの所望の活性を妨害しない能力を試験することである。
【０１８８】
下記はヒト癌細胞株CCRF-CEMにおけるスクリーニングからの典型的データであり、これは代表的な2,2'-アンヒドロピリミジン試験品のTK112690がこのヒト白血病細胞株においてメトトレキセートの細胞毒性を妨害しないことを示している。腫瘍細胞株CCR-CEM（ヒトT細胞急性リンパ芽球性白血病）は米国の細胞バンク（American Type Culture Collection）から入手し（CRL-1593.2）、製品情報シートに従って培養するが、75cm2培養フラスコの代わりに55.3cm2ペトリ皿を用い、1％ペニシリン-ストレプトマイシン溶液（HyClone SV30010）および1％GlutaMAX(商標)（Gibco 35050）を培地に加える。
【０１８９】
代表的な2,2'-アンヒドロピリミジン試験品のTK-112690を40％DMSOに溶解し、滅菌ろ過し、次いで滅菌蒸留水で希釈して10、100および1000μMの初期希釈標準溶液を得る。試験において、培地中の100倍希釈液を作成して、0.1、1.0および10.0μMの最終検定濃度を得る。MTX（SAFC Biosciences M8407）を滅菌蒸留水および5N NaOHに溶解し、次いで滅菌ろ過する。保存溶液の最終pHは7.8で、最終検定濃度30、3.0、0.3、0.03および0.003μMのために滅菌蒸留水で希釈標準溶液を作成する。ロイコボリン（Sigma F-7878）を滅菌蒸留水に溶解し、滅菌ろ過し、最終検定濃度0.1、1.0および10.0μMのために滅菌蒸留水で希釈する。
【０１９０】
細胞懸濁液100μLの一定量を96穴マイクロタイタープレート（Corning costar 3595）に播種し、5％CO2、37℃の雰囲気（Fisher Scientific Isotemp 3500 CO2 Incubator）に置いた。24時間後、ウェルごとにそれぞれ100μLの増殖培地［ピルビン酸ナトリウム（HyClone SH30239.01）、ウシ胎仔血清（SAFC Biosciences 12107C）およびHEPES緩衝液（Gibco 15630）で強化したRPMI-1640 w/L-グルタミン（Cambrex 12-702Q）］および2μLの試験溶液または媒体を加え、プレートをさらに72時間インキュベートする。MTXを0.003、0.03、0.30および3.0μMの濃度で単独または0.1、1.0、10.0μMの濃度の2,2'-アンヒドロピリミジン試験品もしくはロイコボリンのいずれかとの組み合わせで評価する。インキュベーション終了時に、抗細胞増殖の有効性をλ＝570および600nmの吸光度［Spectramax 250（Molecular Devices）］により、標準のalamarBlue(商標)（Biosource）プロトコルに従って判定する。
【０１９１】
図5は、試験品がMTXの細胞毒性を妨害しないことを示す典型的な1組のデータを示す。第1群は細胞対照（培地処理）である。第2群は0.03μM MTXで処理した細胞に対応する。第3群は1.0μMロイコボリンで処理した細胞である。第4群は0.1μMロイコボリンで処理した細胞である。第5群は10μM TK-112690で処理した細胞である。第6群はMTX＋10μM TK-112690で処理した細胞である。第7群はMTX＋1.0μM TK-112690で処理した細胞である。第8群MTX＋0.1μM TK-112690。
【０１９２】
第2群（メトトレキセート単独）は第1、3、4、5、6および7群と統計学的有意に異なる（それぞれp＜0.000、0.000、0.000、0.000、0.000、0.000）が、MTX＋TK-112690群（第6、7および8群とは異ならない（それぞれp＜0.844、0.918および1.000）。ロイコボリン＋MTX群（第3および4群）は第2群と統計学的に異なり（それぞれp＜0.000および0.002）、陽性対照による保護を示している。
【０１９３】
このヒト細胞培養試験は、TK-112690のような2,2'-アンヒドロピリミジンはヒトリンパ腫細胞培養モデルにおいてメトトレキセートの細胞毒性を妨害しないことを例示している。
【０１９４】
VI.  マウス試験IV（CCRF-CEM移植片による異種移植）
本試験の目的は、代表的な2,2'-アンヒドロピリミジン試験品のインビボでMTXの所望の活性を妨害しない能力を試験することである。
【０１９５】
ヒト癌に対するMTXのインビボでの有効性におけるTK-112690投与の効果を解析するために、異種移植試験を実施した。ヒトCCRF-CEM（T-ALL）細胞をSCIDマウスに皮下移植した。腫瘍体積を定期的に記録し、いったん腫瘍が樹立すれば、処置を行った。この実験の第27日からの腫瘍体積を図6に示す。この図における第1群は、食塩水単独を投与した動物を示す。第2群はMTXで処置した動物を示し、第3群はMTXおよび30mg/kg TK-112690の両方を投与した動物からのデータを含む。すべての処置はip投与し、TK-112690はMTX投与の3時間前および3時間後に投与した。図6に示す結果は、食塩水処置群は両方の処置群と有意に異なる（p＜0.01）が、両方の処置群には有意差はなかった（p＝1）ことを示している。
【０１９６】
VII.  細胞培養試験II（AS283ヒトリンパ腫細胞）
本試験の目的は、代表的な2,2'-アンヒドロピリミジン試験品のインビトロでMTXの所望の活性を妨害しない能力を試験することである。
【０１９７】
下記はヒト癌細胞株AS283におけるスクリーニングからの典型的データであり、これは代表的な2,2'-アンヒドロピリミジン試験品のTK112690がこのヒトリンパ腫細胞株においてメトトレキセートの細胞毒性を妨害しないことを示している。
【０１９８】
AS283細胞を、L-グルタミンジペプチド、ピルビン酸ナトリウム、HEPES、および10％FBSを捕捉したRPMI-1640中で培養した。AS283細胞を培養して、3つの96穴プレートに全量50μL中、10,000細胞/ウェルで播種した。培地単独のウェルには100μLの培地を加えた。プレートを終夜インキュベートした。翌日、25μLのMTXおよびTK-112690保存溶液を適当なウェルに加えた。すべてのウェルにTK-112690をまず加え、続いてMTXを加えた。TK-112690単独のウェルには25μLの媒体を加えた。媒体対照のウェルには25μLの媒体および25μLの培地を加え、細胞対照のウェルには50μLの培地を加えた。陽性対照として10μMドキソルビシンを加えた。TK-112690濃度は1、10および100μMであった。MTX濃度は0.01、0.03、0.1、0.3、1.0、3.0、10、100μMであった。細胞生存度をCellTiter-Gloを用いて測定し、DOX（10μM）を標準として用いた。
【０１９９】
プレートを37℃、5％CO2で72時間インキュベートし、次いでインキュベーターから取り出し、室温のベンチ上に30分間放置した。プレートは重ねず、振盪もしなかった。100μLのCellTiter-Glo試薬を加え、2分間混合し、続いて室温でさらに10分間インキュベートした。発光をTriLuxで記録した。
【０２００】
MTXとMTX＋100および10μMのTK-112690、ならびにMTXおよびMTX＋TK-112690 1.0μMのIC50曲線を図7に示す。MTX試験ウェルとMTX＋TK-112690（1、10、100μM）の試験ウェルの細胞生存度に統計学的差はない。したがって、MTXの抗増殖活性はTK-112690を加えても変化しない。このヒト細胞培養試験は、TK-112690のような2,2'-アンヒドロピリミジンはヒトリンパ腫細胞培養モデルにおいてメトトレキセートの細胞毒性を妨害しないことを例示している。
【０２０１】
VIII.  マウス試験V（AS283移植片による異種移植）
本試験の目的は、雄C.B.-17 SCIDマウスにおいて皮下（sc）移植したAS283ヒトリンパ腫異種移植片に対するMTXの抗腫瘍効果にTK-112690が影響をおよぼすかどうかを調べることであった。単独で投与したMTXを対照として用いた。
【０２０２】
6週齢の雄C.B.-17 SCIDマウスを研究室内で実験前に7日間馴化した。30から40mgのAS283ヒトリンパ腫腫瘍の断片をマウスの右側腹部付近に12ゲージの套管針を用いてsc移植し、増殖させた。腫瘍を75〜198mgの重量（75〜198mm3のサイズ）に到達させた後、処置を開始した。処置開始日（腫瘍移植後8日目）の試験のためにできるだけ狭い重量範囲の腫瘍を選択するよう、十分な数のマウスに移植した。適当なサイズ範囲の腫瘍で選択した動物を、処置第1日の腫瘍重量中央値が互いにできるだけ近くなるように（すべての群で162mg）、様々な処置群に割り付けた。実験は、2つの処置群および1つの媒体処置対照群で構成され、処置第1日には各群10匹で、全30匹であった。
【０２０３】
TK-112690の15mg/mL溶液を、化合物を100％DMSOに溶解（必要に応じてボルテックス処理することにより）して毎日調製し、次いで3mg/mLの投与溶液とするためにPBSを加えた。媒体の最終組成は20％DMSO/80％PBSであった。注射用のMTXの25mg/mL保存溶液を、各注射日に食塩水で希釈して0.75mg/mLの投与溶液とした。両方の化合物を、正確な体重により、体重10gあたり0.1mLの注射量を用いてip投与した。
【０２０４】
TK-112690を30mg/kg/注射の用量で腹腔内（ip）注射［2日ごとに6時間の間隔で2回を5回注射（q6h×2、q2d×5）］により投与した。MTXをTK-112690注射の3時間後に5.0mg/kg/注射の用量でq2d×5の腹腔内（ip）注射により投与した。対照群は両方の媒体で処置し、対応する化合物のスケジュールで投与した。
【０２０５】
初回の処置の日に開始して、週に3回、sc腫瘍を測定し、動物を秤量した。腫瘍体積を、ノギス測定（mm）し、以下の楕円球のための式を用いてもとめた：L×W2/2＝mm3、式中LおよびWは各測定で得た大きい方および小さい方の直交寸法を意味する。この式は単位密度を仮定しての（1mm3＝1mg）腫瘍重量を計算するためにも用いる。
【０２０６】
試験を腫瘍移植の21日後に停止した。瀕死であると判明した任意の動物または腫瘍が4,000mgに達した、潰瘍化した、もしくは脱落した任意の動物は試験停止前に安楽死させた。
【０２０７】
第21日の腫瘍体積を図8に示す。この図において、第1群は、食塩水対照で処置した動物であり、第2群はMTXで処置した動物であり、第3群はMTX＋TK-112690で処置した動物である。媒体処置対照群の腫瘍は10匹のマウスすべてで評価点まで増殖した。中央の腫瘍は21日で4,387mgに達した。MTX処置はAS283リンパ腫異種移植片の増殖を遅らせ、腫瘍重量中央値は第21日の対照の2.8％、処置開始時の腫瘍重量中央値（162mg）よりも小さく24.7％（40.0mg）であった。TK-112690およびMTXの組み合わせの投与は増殖を遅らせ、腫瘍重量中央値は第21日の対照の3.5％、処置開始時の腫瘍重量中央値（162mg）よりも小さく5.6％（9.0mg）であった。MTX（第2群）およびMTX＋TK-112690（第3群）の腫瘍体積の間に統計学的な差はなかった（p＝1.0）が、いずれの群も食塩水で処置した動物（第1群）の腫瘍体積とは統計学的に大きい差があった（p＜0.01）。
【０２０８】
IX.  マウスおよびヒト腸組織ホモジネートによる試験
本試験の目的は、ウリジンホスホリラーゼ（UPase）酵素活性の阻害剤としてのTK-112690をインビボで評価することであった。マウスおよびヒト小腸UPase酵素のインビトロでの阻害を通じてウリジンの代謝的分解を防止する能力について試験した、一連のTK-112690用量は0、0.1、0.5、1、5、10、50、100、500、1000、5000および10000μMであった。UPase活性の検出を、ウラシル濃度のUV検出を用いたHPLC分析により評価した（UPaseはウリジンをウラシルおよびリボース-1-リン酸に異化する）。
【０２０９】
UPase酵素材料をホモジナイズしたマウスおよびヒト小腸組織から調製した。TK-112690を水に溶解し（50mg/ml）、5mMウリジン、0.01Mトリス、0.01Mリン酸塩、1mM EDTA、および1mM DTTを含む水溶液中でのUPase阻害について分析した。反応を37℃、pH7.3で行った。
【０２１０】
マウスおよびヒトUPaseのTK-11260阻害を、UV検出を用いた逆相HPLCにより分析した。HPLC分析はC18 ECONOSIL 5U ALLtechカラムを備えたWater 2695 Allianceシステムにより周囲温度で実施した。20μlのUPase反応試料をカラムに自動注入した。移動相は、最初の2.5mlの水溶出と、12.5mlで100％までのアセトニトリル勾配で構成された（流速0.5ml/分）。流出変量を240〜320nmの範囲のUV吸収によりモニターした。UPase酵素活性はウラシルピークのAUCに基づいていた。
【０２１１】
典型的な結果を図9に示す。TK-112690はマウス小腸UPase酵素をIC50値12.5μMで阻害することがわかる。TK-112690はヒト小腸UPase酵素をIC50値20.0μMで阻害する。
【０２１２】
X.  ハエ試験II（UPaseノックアウトハエ）
本試験の目的は、野生型（Ore-R）およびUPase突然変異体キイロショウジョウバエにおいて経口投与したMTXの一連の用量（0.001、0.01、0.05、0.1、0.2、0.4mg）の致死効果を評価することであった。UPaseノックアウト（19519）キイロショウジョウバエの幼虫を、飼料添加物中の一連のMTX用量（0.001、0.01、0.05、0.1、0.2、0.4mg）に経口曝露した。野生型（オレゴンR）の幼虫を、0.04mg TK-112690存在下および非存在下で、同じ用量範囲のMTXに経口曝露した。得点はMTX曝露開始の15日後の生存または死亡に基づいていた。
【０２１３】
典型的な結果を図10に示す。UPaseノックアウトキイロショウジョウバエ（19519）は、経口投与したMTXの用量範囲（0.001、0.01、0.05、0.1、0.2、0.4mg）の致死効果に対して抵抗性であることがわかる。野生型キイロショウジョウバエは≧0.1mgのMTXの致死効果に感受性である。しかし、野生型キイロショウジョウバエは0.04mg TK-112690存在下であれば、経口投与したMTXの広い用量範囲（0.001、0.01、0.05、0.1、0.2、0.4mg）の致死効果に対して抵抗性である。
【０２１４】
要約すると、UPaseノックアウトキイロショウジョウバエは経口投与したMTXの致死効果に対して抵抗性である一方、野生型キイロショウジョウバエはMTXに感受性であるが、TK-112690のようなUPase阻害剤存在下で経口投与したMTXには抵抗性である。
【０２１５】
XI.  マウス試験VI（TK-112690処置後の血漿ウリジン）
本試験の目的は、TK-112690のUPase阻害を通じて血漿ウリジン濃度を高める能力を評価するための、CD-1マウスに投与した一連のTK-112690用量を評価することであった。
【０２１６】
動物をTK-112690で以下のとおりに処置した後、血漿ウリジン濃度をUV検出を用いたHPLCによりもとめた。TK-112690をPBSに溶解して、500mg/mLの濃度とした。CD-1雌マウスに一連のTK-112690用量（0、15、30、60および120mg/kg）をip注射し、動物からの血漿を、TK-112690によるUPase阻害を通じて上昇することが予想される、TK-112690、ウリジン濃度について分析した。TK-112690注射の0.08、0.50、1、2、4または12時間後に採取した血漿試料から、血漿ウリジン濃度をもとめた。
【０２１７】
HPLC分析は脱気装置、ポンプ、オートサンプラーおよびUV検出器を備えたThermoFinnigan Spectra Systemを用いて室温で行った。クロマトグラムはペン付きのチャート記録器から作成される。分析物をPhenomenex C18 Reverse-Phaseカラム（250×4.6mm）を用いて分離した。表2は、HPLC分析中に用いた2つの別々の移動相の勾配条件を示している：（1）0.1％ギ酸を含むナノ水中の5％メタノール（2）0.1％ギ酸を含むアセトニトリル中の5％メタノール（流速＝0.5mL/分）。
【０２１８】
（表２）血漿ウリジンおよびTK-112690のための勾配条件HPLC法
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【０２１９】
10μLの試料をカラムに自動注入した。ウリジン、TK-112690および5-FUを262nmのUV吸収により同定した。HPLC針およびインジェクターを、各試料の実行前にナノ水で洗浄した。
【０２２０】
ウリジン、TK-112690および5-FUの保持時間は、それぞれ9.3、8.9および7.7分である。
【０２２１】
血漿ウリジンのマイクロモル濃度を、ウリジンおよび5-FU較正曲線から生成した一次式（y＝mx＋b）によりもとめた。y値はウリジンおよび5-FUのピーク高（mm）の比を取ることにより計算する。HPLCクロマトグラムからのすべてのピーク高は定規を用いてミリメートルで測定した。
【０２２２】
試料中のTK-112690を定量するために、TK-112690に対する応答を同じ量のTK-112690およびウリジンのHPLCへの注入からもとめた応答因子で減衰させる以外は、同じアプローチを用いた。
【０２２３】
試験からの典型的な知見を図11に示す。TK-112690の血漿濃度はip投与したTK-112690の用量が上がると共に上昇した。血漿ウリジンの増加はTK-112690の投与のほぼ直後に認められる。TK-112690投与後0.5時間の時点で、TK-112690の血漿濃度は100μg/mLで、ウリジンの血漿濃度は約2μg/mLである（基準線のウリジン濃度は約0.5μg/mL）。
【０２２４】
XII.  新しいUPase阻害剤の合成
A.  核酸塩基のリボース四酢酸エステルへのカップリング法：
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核酸塩基1A〜D（2.0当量）を無水アセトニトリル（2mL/mmol）に溶解した。N,O-ビス-トリメチルシリルアミド（4.0当量）を加え、混合物を室温で澄明になるまで（1〜24時間）撹拌した。溶液を0℃に冷却した。無水CH3CN（5mL/mmol）中のリボース四酢酸エステル（2）（1.0当量）の溶液をゆっくり加え、続いてSnCl4（1.2当量）を加えた。溶液を室温で終夜撹拌した。飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を注意深く加えて反応を停止した。次いで1M HCl水溶液を注意深く加え、混合物を1時間撹拌した。溶液を酢酸エチルで3回抽出した。合わせた有機物を1M HCl、水、飽和炭酸水素ナトリウムおよび食塩水で洗浄した。次いで、有機分画をNa2SO4で乾燥し、ろ過し、減圧下で濃縮して粗製残渣を得、これをフラッシュカラムクロマトグラフィ（クロロホルム：メタノール99：1から90：10の勾配）で精製して、トリアセチル化リボヌクレオシド3A〜Dを得た。
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【０２２５】
B.  酢酸エステル加水分解反応の代表的方法：
リボヌクレオシド四酢酸エステル3A〜Dをメタノール中アンモニアの7N溶液に溶解した。溶液を室温で終夜撹拌した。次いで、溶液を減圧下で濃縮した。得られた残渣をエーテルで粉砕し、遊離リボヌクレオシドを白色固体で得、これをろ過により単離し、高減圧下で乾燥した後、次の段階に進んだ。
【０２２６】
C.  閉環反応の代表的方法：
方法A：リボヌクレオシド（1.0当量）を無水ジメチルアセトアミド（100μL/mmol）に溶解した。炭酸ジフェニル（1.0当量）および炭酸水素ナトリウム（0.05当量）を加え、混合物を150℃で1時間撹拌した。エーテルを加えて生成物をガムとして沈澱させた。溶媒をデカンテーションし、粗製残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィまたは調製用HPLCのいずれかで精製した。
【０２２７】
方法B：リボヌクレオシド（1.0当量）を無水ジメチルホルムアミド（100μL/mmol）に溶解した。炭酸ジフェニル（1.0当量）および炭酸水素ナトリウム（0.05当量）を加え、混合物を100℃で8〜12時間撹拌した。エーテルを加えて生成物をガムとして沈澱させた。溶媒をデカンテーションし、粗製残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィまたは調製用HPLCのいずれかで精製した。
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【０２２８】
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D.  2,2'-アンヒドロ-5'-フルオロ-5-メチルウリジン
5-メチルウリジン-2',3''-アセトニド6（5.6g、18.8mmol、1.0当量）を無水ジクロロメタン（80mL）に溶解し、0℃に冷却した。イミダゾール（2.6g、37.6mmol、2.0当量）およびtert-ブチルクロロジフェニルシラン（2.8g、18.8mmol、1.0当量）を加え、混合物を室温に戻し、1時間撹拌した。ジクロロメタンをロータリーエバポレーションにより除去し、残渣を200mLの酢酸エチルに溶解し、水と、続いて食塩水で洗浄し、Na2SO4で乾燥した。ろ過し、溶媒を除去した後、化合物をフラッシュカラムクロマトグラフィで精製して、7を得た（6.8g、88％）。
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【０２２９】
化合物7（4.8g、1.0当量）をピリジンおよびCH2Cl2の4：1混合物（75mL）に溶解した。Boc無水物（5.2g、4.0当量）と、続いてDMAP (200mg、触媒量）を加え、溶液を室温で終夜撹拌した。溶媒をロータリーエバポレーションにより除去し、残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィで精製して、8を得た（4.8g、80％）。
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【０２３０】
化合物8（4.8g、1.0当量）を無水THF（333mL）に溶解した。TBAF（14mL、THF中1M、1.5当量）を一度に加え、溶液を室温で2時間撹拌した。溶媒をロータリーエバポレーションにより除去し、得られた残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィで精製して、9を得た（2.7g、72％）。
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【０２３１】
化合物9（2.2g、1.0当量）を窒素雰囲気下で無水THFに溶解した。フッ化トシル（1.92g、2.0当量）と、続いてTHF中1MのTBAF溶液（16.5mL、3.0当量）を加えた。混合物を60℃に加熱し、この温度で12時間撹拌した。冷却後、溶媒を除去し、残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィで精製して、化合物10を得た（1.76g、80％）。
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【０２３２】
化合物10（1.6g、1.0当量）を50％TFA水溶液16mLに溶解し、2時間撹拌した。溶媒をロータリーエバポレーションにより除去し、トルエンで3回と、続いてCH2Cl2で2回共沸させて、完全に脱保護された化合物11（1.09g、定量的）を白色泡状物で得た。
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【０２３３】
前述の方法Bにより環化を行って、化合物12をオフホワイトの固体で得た（130mg、エタノール/エーテルからの再結晶により精製）。
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【０２３４】
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E.  2,2'-アンヒドロ-5'-アジド-5-メチルウリジン
DMF（16mL）中の化合物13（2.52g、1.0当量）の溶液にアジ化ナトリウム（1.74g、4.0当量）を加えた。溶液を室温で終夜撹拌し、溶媒をロータリーエバポレーションにより除去した。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィで精製して14を得た（2.16g、定量的収率）。
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【０２３５】
化合物14（0.9g、1.0当量）を化合物10と同じ様式で脱保護した。溶媒を共沸除去した後、粗製油状物をジエチルエーテルで粉砕し、得られた固体をろ過し、乾燥して、15を得た（0.42g、54％）。
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【０２３６】
方法Bにより15（0.4g、1.4mmol、1.0当量）の環化を行い、シリカゲルカラムクロマトグラフィで精製して、16を得た（83mg、22％）。
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【０２３７】
XIII.  合成した化合物の検定結果
実験XIIに記載のアプローチに従って合成したいくつかの化合物を、実験I（ハエ試験I、致死性からの保護）および実験IX（マウスおよびヒト腸組織ホモジネートによるマウス試験）からの試験法を用いて評価した。評価の結果を表3に示す。
【０２３８】
（表３）合成した化合物についてのハエ致死性からの保護およびUPase阻害の比較
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【０２３９】
いくつかの化合物（TK-000006、TK-000007 TK-000008、TK-000009およびTK-100616）はマウスUPaseの活性阻害剤である（UPase IC50＜100μM）。一つの化合物、TK000009は、MTX誘発性の致死性に対する保護のハエモデルにおいても活性であった。これまでに、ハエモデルにおいて活性の化合物はすべてUPase阻害剤としても活性である。しかし、活性UPase阻害剤はすべてがハエモデルにおける保護物質というわけではない。
【０２４０】
前述の結果より、本発明はMTX活性物質の毒性を低減する一方で、それらの所望の活性は保持する方法を提供することが明らかである。したがって、本発明は、様々な異なる適用において用いられ、当技術分野に多大な貢献をするものである。
【０２４１】
前述の発明を例示のため、および理解を明らかにするために記載してきたが、当業者であれば、本発明の教示に照らして、添付の特許請求の範囲の精神または範囲から逸脱することなく、特定の変更および改変をそれに行いうることが容易に明らかになる。
【０２４２】
したがって、前述の記載は本発明の原理を単に例示するものである。当業者であれば、本明細書において明確に記載または表示していないが、本発明の原理を具体化し、その精神および範囲内に含まれる、様々な取り合わせを考案しうることが理解されるであろう。さらに、本明細書において引用するすべての例および条件についての用語は基本的に、本発明の原理および技術を推進するために本発明者らが貢献する概念を理解する際に読者を助けることを意図しており、そのような具体的に挙げた例および条件に限定されることはないと解釈されるべきである。さらに、本発明の原理、局面、および態様ならびにその具体例を列挙するすべての言明は、その構造的および機能的等価物の両方を含むことが意図される。加えて、そのような等価物は現在公知の等価物および将来開発される等価物の両方、すなわち、構造に関係なく同じ機能を行う、開発される任意の要素を含むことが意図される。したがって、本発明の範囲は、本明細書において表示および記載する例示的態様に限定すると意図されることはない。それよりも、本発明の範囲および精神は添付の特許請求の範囲によって具体化される。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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