(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）
【化１】
0005486591.tif 000077
［式中、
Ｚは、ヒドロキシル、Ｒ1Ｒ2Ｎ−Ｃ（＝Ｏ）−、Ｒ3Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−およびハロから成る群より独立して選択される１個以上の置換基で置換されているＣ1-6アルキルであり、
Ｑは、２，２−ジフルオロベンゾジオキソール−５−イルであり、
Ｌは、各々が場合によりハロ、シアノ、Ｃ1-6アルキル、Ｃ1-6アルキル−Ｏ−、Ｃ1-6アルキル−Ｓ−、ポリハロＣ1-6アルキル、ポリハロＣ1-6アルキル−Ｏ−、モノおよびジ（Ｃ1-6アルキル）アミノ、ピロリジニル、ピペリジニル、モルホリニル、ＣＨ3Ｏ−Ｃ1-6アルキル−ＮＨ−、ＨＯ−Ｃ1-6アルキル−ＮＨ−、Ｃ3-6シクロアルキル、Ｃ3-6シクロアルキル−ＮＨ−、Ｃ3-6シクロアルキル−Ｃ1-6アルキル−ＮＨ−、Ｃ1-6アルキル−Ｏ−Ｃ1-6アルキル−、メトキシカルボニルおよびＣ3-6シクロアルキル−Ｏ−Ｃ1-6アルキル−から成る群より独立して選択される１、２または３個の置換基で置換されていてもよいフェニル、ピリジニルまたはベンゾジオキサニルであり、
Ｒ1およびＲ2は、各々独立して、水素、Ｃ1-6アルキル、Ｃ3-6シクロアルキル、Ｃ1-4アルキル−Ｏ−Ｃ1-6アルキルまたはＣ3-6シクロアルキルＣ1-6アルキルを表すか、或は
Ｒ1とＲ2はこれらが結合している窒素原子と一緒になって各々が場合によりハロ、ヒドロキシおよびＣ1-6アルキルから成る群より各々独立して選択される１、２または３個の置換基で置換されていてもよいピロリジニル、ピペリジニルおよびモルホリニルから成る群より選択される複素環式基を形成しており、
Ｒ3は、水素またはＣ1-3アルキルである］
で表される化合物またはこれの立体化学異性体形態物もしくは製薬学的に許容される付加塩もしくは水和物もしくは溶媒和物。
【請求項２】
ＺがヒドロキシもしくはＲ1Ｒ2Ｎ−Ｃ（＝Ｏ）−で置換されているＣ1-4アルキルであり、
Ｑが２，２−ジフルオロベンゾジオキソール−５−イルであり、
Ｌがハロおよびメトキシから成る群より選択される１または２個の置換基で置換されているフェニル；ハロ、メチル、Ｃ1-2アルキルアミノ、Ｃ1-2アルキルオキシカルボニルおよびＣ1-2アルキルオキシＣ1-2アルキルから成る群より選択される１、２または３個の置換基で置換されているピリジニル；またはベンゾジオキサニルであり、
Ｒ1およびＲ2が各々独立して水素、メチル、エチル、シクロプロピルまたはシクロプロピルメチル；またはＣ3-6シクロアルキルＣ1-3アルキルを表す、
請求項１記載の化合物またはこれの製薬学的に許容される付加塩もしくは水和物もしくは溶媒和物。
【請求項３】
Ｌがハロ、メチル、Ｃ1-2アルキルアミノ、Ｃ1-2アルキルオキシカルボニルおよびＣ1-2アルキルオキシＣ1-2アルキルから成る群より選択される１または２個の置換基で置換されているピリジニル；またはベンゾジオキサニルであり、
Ｒ1およびＲ2が各々独立して水素、メチル、エチル、シクロプロピル、シクロブチルまたはシクロプロピルメチルを表す、
請求項１記載の化合物またはこれの製薬学的に許容される付加塩もしくは水和物もしくは溶媒和物。
【請求項４】
Ｚが（２Ｓ）−２−ヒドロキシプロピル、（２Ｓ）−２−ヒドロキシブチル、（ＣＨ3）2Ｎ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ2−ＣＨ2−、ＣＨ3ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ2−、Ｃ2Ｈ5ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ2−、ｃ．Ｃ3Ｈ5ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ2−、ｃ．Ｃ3Ｈ5−ＣＨ2−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ2−またはｃ．Ｃ4Ｈ7ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ2−であり、
Ｑが２，２−ジフルオロベンゾジオキソール−５−イルであり；
Ｌがクロロ、メチル、メチルアミノ、エチルアミノ、ジメチルアミノ、メトキシカルボニルおよびメトキシメチルから成る群より選択される１または２個の置換基で置換されている４−ピリジニルである、
請求項１記載の化合物またはこれの製薬学的に許容される付加塩もしくは水和物もしくは溶媒和物。
【請求項５】
Ｚが（２Ｓ）−２−ヒドロキシプロピル、（２Ｓ）−２−ヒドロキシブチル、（ＣＨ3）2Ｎ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ2−ＣＨ2−、ＣＨ3ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ2−、Ｃ2Ｈ5ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ2−、ｃ．Ｃ3Ｈ5ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ2−、ｃ．Ｃ3Ｈ5−ＣＨ2−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ2−またはｃ．Ｃ4Ｈ7ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ2−であり、
Ｑが２，２−ジフルオロベンゾジオキソール−５−イルであり、
Ｌが４−メトキシフェニルまたはベンゾジオキサニルである、
請求項１記載の化合物またはこれの製薬学的に許容される付加塩もしくは水和物もしくは溶媒和物。
【請求項６】
精神病性障害、知能障害性疾患または炎症性疾患を治療または予防する薬剤を製造するための化合物の使用であって、前記化合物が請求項１から５のいずれか１項記載の化合物である使用。
【請求項７】
製薬学的に許容される担体および請求項１から５のいずれか１項記載の化合物を有効成分として治療的に有効な量で含有して成る製薬学的組成物。
【請求項８】
請求項７記載の組成物を製造する方法であって、製薬学的に許容される担体を治療的に有効な量の請求項１から５のいずれか１項記載の化合物と密に混合することを特徴とする方法。
【請求項９】
請求項１記載の化合物を有効成分として含んでなる精神病性障害、知能障害性疾患または炎症性疾患を治療または予防するための製薬学的製剤。
【請求項１０】
（ａ）請求項１記載の式（Ｉ）で表される化合物、および
（ｂ）１，４−ジアザビシクロ［３．２．２．］ノナン−４−カルボン酸４−ブロモフェニルエステルの一塩酸塩（ＳＳＲ１８０７１１Ａ）、（−）−スピロ［１−アザビシクロ［２．２．２］オクタン−３，５’−オキサゾリジン］−２’−オン、３−［（２，４−ジメトキシ）ベンジリデン］−アナバセインの二塩酸塩（ＧＴＳ−２１）、［Ｎ−［（３Ｒ）−１−アザビシクロ［２．２．２］オクト−３−イル］−４−クロロベンズアミドの塩酸塩］ＰＮＵ−２８２９８７、ニコチン、バレニクリン、ＭＥＭ３４５４、ＡＺＤ−０３２８およびＭＥＭ６３９０８から選択されるα７ニコチン性受容体作動薬、
をα７ニコチン性受容体のモジュレーションが有益である病気を予防または治療する時に同時、個別または逐次的に用いるための組み合わせ製剤として含有して成る製品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、１−アルキル−３−アニリン−５−アリール−ピラゾール誘導体およびこれらの製薬学的に許容される塩、これらの製造方法、これらを含有させた製薬学的組成物およびこれらを治療で用いることに関する。本発明は、特に、ニコチン性アセチルコリン受容体の正のアロステリックモジュレーター（ｐｏｓｉｔｉｖｅ  ａｌｌｏｓｔｅｒｉｃ  ｍｏｄｕｌａｔｏｒｓ）に関し、そのような正のアロステリックモジュレーターは、ニコチン性受容体の作動薬が示す効力を向上させる能力を有する。
【背景技術】
【０００２】
１−アルキル−３−アニリン−５−アリール−１，２，４−トリアゾールが神経学的、変性および精神病学的疾患の治療で用いるに有用なニコチン性アセチルコリン受容体の積極的モジュレーターとして特許文献１に開示されている。
【０００３】
幅広いスペクトルの抗炎症薬として有用なＮ−［４−メトキシフェニル）−１−メチル−５−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−３−アミンが特許文献２に開示されている。
【０００４】
コリン作動性受容体は、一般に、内因性神経伝達物質であるアセチルコリン（ＡＣｈ）と結合し、それがイオンチャンネルの開放の引き金になる。哺乳動物の中枢神経系におけるＡＣｈ受容体は、ムスカリン（ｍＡＣｈＲ）およびニコチン（ｎＡＣｈＲ）それぞれの作動活性を基にしてムスカリンサブタイプおよびニコチンサブタイプに分類分け可能である。そのようなニコチン性アセチルコリン受容体は５サブユニットを含有するリガンド依存性イオンチャンネルである。ｎＡＣｈＲサブユニット遺伝子ファミリーの員はアミノ酸配列を基にして２グループ、即ちいわゆるβサブユニットを含有する１グループとαサブユニットを含有する２番目のグループに分類分けされる。３種類のαサブユニット、即ちα７、α８およびα９は、単独で発現した時に機能的受容体を形成することが知られており、従って、ホモオリゴマー状の五量体受容体を形成すると思われている。
【０００５】
ｎＡＣｈＲのアロステリック過渡期状態モデルが開発され、それは少なくとも休止状態、活性化状態および「脱感作」密閉チャンネル状態、即ち受容体が作動薬に対して敏感でなくなる過程を伴う。いろいろなｎＡＣｈＲリガンドがこれらが優先的に結合する受容体の立体配座状態を安定にし得る。例えば、作動薬であるＡＣｈおよび（−）−ニコチンはそれぞれその活性状態および脱感作状態を安定にする。
【０００６】
ニコチン性受容体が示す活性の変化がいろいろな病気に関係していると思われている。それらのいくつか、例えば重症筋無力症および常染色体優性夜行性前頭葉てんかん（ＡＤＮＦＬＥ）はニコチン性伝達の活性の低下に関連している、と言うのは、受容体の数が減少するか或は脱感作の度合が高くなるからである。
【０００７】
また、ニコチン性受容体の減少がアルツハイマー病および統合失調症などの如き病気に見られる認知障害を媒介するとも仮定されている。
【０００８】
ニコチン性受容体はまたタバコによるニコチンの影響も媒介し、そしてそのニコチンの影響は脱感作状態の受容体を安定にする効果であることから、ニコチン性受容体の活性が高くなると喫煙の欲望が低下する可能性がある。
【０００９】
ｎＡＣｈＲと結合する化合物はコリン作動性機能の低下を伴うある範囲の障害、例えば学習障害、認知欠損、注意力欠如または記憶喪失などの治療に適することが示唆されてい
る。α７ニコチン性受容体の活性のモジュレーション（ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ）はいろいろな病気に有益であると期待されており、そのような病気には、アルツハイマー病、レヴィー小体認知症、注意欠陥多動性障害、不安、統合失調症、躁病、双極性障害、パーキンソン病、ハンチントン病、トゥレットシンドローム、脳外傷、およびコリン作動性シナプスが欠損している他の神経学的、変性および精神病性障害（時差ボケ、ニコチン中毒および痛みを包含）が含まれる。
【００１０】
しかしながら、ＡＣｈと同じ部位に作用するニコチン性受容体作動薬を用いた治療には問題がある、と言うのは、ＡＣｈが活性化するばかりでなくまた脱感作および非競合的封鎖を包含するプロセスによって受容体の活性が妨害されるからである。その上、活性化が長引くと長期不活性化が誘発されると思われる。従って、ＡＣｈの作動薬は活性を低下させるばかりでなくそれを高めると予測することができる。
【００１１】
一般にニコチン性受容体、特に注目すべきはα７ニコチン性受容体の所に脱感作が起こると投与された作動薬の作用が持続する時間が制限される。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１２】
【特許文献１】ＷＯ−２００７／１１８９０３
【特許文献２】ＥＰ−０，２４８，５２３
【発明の概要】
【００１３】
発明の説明
我々は、新規な特定のピラゾール誘導体がニコチン性アセチルコリン受容体（ｎＡＣｈＲ）の所で作動薬が示す効力を向上させ得ることを見いだした。この種類の作用を示す化合物（本明細書では以降「正のアロステリックモジュレーター」と呼ぶ）はニコチン性伝達の低下に関連した病気の治療に有用である可能性がある。治療環境において、そのような化合物は活性化の一時的プロファイルに影響を与えることなく正常なニューロン間伝達を回復させる可能性がある。加うるに、正のアロステリックモジュレーターは、作動薬を長期間投与した時に起こり得る如き受容体の長期不活性化をもたらすこともないと期待する。
【００１４】
本発明の積極的ｎＡＣｈＲモジュレーターは、α７ニコチン性受容体のモジュレーションが有益である精神病性障害、知能障害性障害および疾患、炎症性疾患および病気の治療または予防で用いるに有用である。
【００１５】
本発明は、正のアロステリックモジュレーター特性を有する、特にα７ニコチン性受容体の所で作動薬が示す効力を向上させる１−アルキル−３−アニリン−５−アリール−ピラゾール誘導体に関する。本発明は、更に、それらの製造方法およびそれらを含有させた製薬学的組成物にも関する。本発明は、また、そのような誘導体をα７ニコチン性受容体のモジュレーションが有益である精神病性障害、知能障害性障害および疾患、炎症性疾患および病気を治療および予防する薬剤を製造する目的で用いることにも関する。
【００１６】
本発明の化合物は、構造的に従来技術の化合物とは異なる。
【００１７】
本発明は、式（Ｉ）
【００１８】
【化１】
0005486591.tif 000002
【００１９】
［式中、
Ｚは、ヒドロキシル、Ｒ１Ｒ２Ｎ−Ｃ（＝Ｏ）−、Ｒ３Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−およびハロから成る群より独立して選択される１個以上の置換基で置換されているＣ１−６アルキルであり、
Ｑは、２，２−ジフルオロベンゾジオキソール−５−イル、非置換フェニル、またはハロ、ヒドロキシル、シアノ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルキル−Ｏ−、ポリハロＣ１−６アルキルおよびポリハロＣ１−６アルキル−Ｏ−から成る群より独立して選択される１、２または３個の置換基で置換されているフェニルであり、
Ｌは、各々が場合によりハロ、シアノ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルキル−Ｏ−、Ｃ１−６アルキル−Ｓ−、ポリハロＣ１−６アルキル、ポリハロＣ１−６アルキル−Ｏ−、モノおよびジ（Ｃ１−６アルキル）アミノ、ピロリジニル、ピペリジニル、モルホリニル、ＣＨ３Ｏ−Ｃ１−６アルキル−ＮＨ−、ＨＯ−Ｃ１−６アルキル−ＮＨ−、Ｃ３−６シクロアルキル、Ｃ３−６シクロアルキル−ＮＨ−、Ｃ３−６シクロアルキル−Ｃ１−６アルキル−ＮＨ−、メトキシカルボニル、Ｃ１−６アルキル−Ｏ−Ｃ１−６アルキル−およびＣ３−６シクロアルキル−Ｏ−Ｃ１−６アルキル−から成る群より独立して選択される１、２またはそれ以上の置換基で置換されていてもよいフェニル、ピリジニルまたはベンゾジオキサニルであり、
Ｒ１およびＲ２は、各々独立して、水素、Ｃ１−６アルキル、Ｃ３−６シクロアルキル、Ｃ１−４アルキル−Ｏ−Ｃ１−６アルキルまたはＣ３−６シクロアルキルＣ１−６アルキルを表すか、或は
Ｒ１とＲ２がこれらが結合している窒素原子と一緒になって各々が場合によりハロ、ヒドロキシおよびＣ１−６アルキルから成る群より各々独立して選択される１、２または３個の置換基で置換されていてもよいピロリジニル、ピペリジニルおよびモルホリニルから成る群より選択される複素環式基を形成しており、
Ｒ３は、水素またはＣ１−３アルキルである］
に従う化合物またはこれの立体化学異性体形態物または製薬学的に許容される付加塩または水和物または溶媒和物に関する。
【００２０】
本発明は、特に、
ＺがヒドロキシルもしくはＲ１Ｒ２Ｎ−Ｃ（＝Ｏ）−で置換されているＣ１−４アルキルであり、
Ｑが２，２−ジフルオロベンゾジオキソール−５−イル；ハロ、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシおよびメトキシから成る群より独立して選択される１、２または３個の置換基で置換されているフェニルであり、
Ｌがハロおよびメトキシから成る群より選択される１または２個の置換基で置換されているフェニル；ハロ、メチル、Ｃ１−２アルキルアミノ、Ｃ１−２アルキルオキシカルボニルおよびＣ１−２アルキルオキシＣ１−２アルキルから成る群より選択される１、２または３個の置換基で置換されているピリジニル；またはベンゾジオキサニルであり、
Ｒ１およびＲ２が各々独立して水素、Ｃ１−４アルキル、Ｃ３−６シクロアルキルまたはＣ３−６シクロアルキルＣ１−３アルキルを表す、
式（Ｉ）に従う化合物またはこれの立体化学異性体形態物または製薬学的に許容される付加塩または水和物または溶媒和物に関する。
【００２１】
より特別には、本発明は、
Ｌがハロ、メチル、Ｃ１−２アルキルアミノ、Ｃ１−２アルキルオキシカルボニルおよびＣ１−２アルキルオキシＣ１−２アルキルから成る群より選択される１または２個の置換基で置換されているピリジニル；またはベンゾジオキサニルであり、
Ｒ１およびＲ２が各々独立して水素、メチル、エチル、シクロプロピル、シクロブチルまたはシクロプロピルメチルを表す、
式（Ｉ）に従う化合物またはこれの立体化学異性体形態物または製薬学的に許容される付加塩または水和物または溶媒和物に関する。
【００２２】
特に、本発明は、
Ｚが（２Ｓ）−２−ヒドロキシプロピル、（２Ｓ）−２−ヒドロキシブチル、（ＣＨ３）２Ｎ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ２−ＣＨ２−、ＣＨ３ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ２−、Ｃ２Ｈ５ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ２−、ｃ．Ｃ３Ｈ５ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ２−、ｃ．Ｃ３Ｈ５−ＣＨ２−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ２−またはｃ．Ｃ４Ｈ７ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ２−であり、
Ｑが２，２−ジフルオロベンゾジオキソール−５−イル；フルオロ、クロロ、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシおよびメトキシから成る群より独立して選択される１、２または３個の置換基で置換されているフェニルであり、
Ｌがクロロ、メチル、メチルアミノ、エチルアミノ、ジメチルアミノ、メトキシカルボニルおよびメトキシメチルから成る群より選択される１または２個の置換基で置換されている４−ピリジニルである、
式（Ｉ）に従う化合物またはこれの立体化学異性体形態物または製薬学的に許容される付加塩または水和物または溶媒和物に関する。
【００２３】
特に、本発明は、
Ｚが（２Ｓ）−２−ヒドロキシプロピル、（２Ｓ）−２−ヒドロキシブチル、（ＣＨ３）２Ｎ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ２−ＣＨ２−、ＣＨ３ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ２−、Ｃ２Ｈ５ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ２−、ｃ．Ｃ３Ｈ５ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ２−、ｃ．Ｃ３Ｈ５−ＣＨ２−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ２−またはｃ．Ｃ４Ｈ７ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ２−であり、
Ｑが２，２−ジフルオロベンゾジオキソール−５−イル；フルオロ、クロロ、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシおよびメトキシから成る群より独立して選択される１、２または３個の置換基で置換されているフェニルであり、
Ｌが４−メトキシフェニルまたはベンゾジオキサニルである、
式（Ｉ）に従う化合物またはこれの立体化学異性体形態物または製薬学的に許容される付加塩または水和物または溶媒和物に関する。
【００２４】
式（Ｉ）に従う化合物およびこれらの付加塩、水和物および溶媒和物の中の数種はキラリティー中心を１個以上含有する可能性があることで立体化学的異性体形態物として存在し得ることは理解されるであろう。
【００２５】
本明細書の上または本明細書の以下で用いる如き用語「立体異性体形態物」は、式（Ｉ）に従う化合物およびこれらの付加塩が持ち得る可能性のある立体異性体形態物の全部を定義するものである。特に記述も指示もしない限り、化合物の化学的表示は、可能なあらゆる立体化学的異性体形態物の混合物を表し、前記混合物は基本的な分子構造を有するあらゆるジアステレオマーおよび鏡像異性体を含有するばかりでなく式（Ｉ）に従う個々の異性体形態およびこれらの塩、溶媒和物の各々を含有し、その他の異性体を実質的に含有
しない、即ち伴う他の異性体の量は１０％未満、好適には５％未満、特に２％未満、最も好適には１％未満である。
【００２６】
治療用途の場合、式（Ｉ）に従う化合物の塩は、対イオンが製薬学的に許容される塩である。しかしながら、薬学的に受け入れられない酸および塩基の塩もまた例えば製薬学的に許容される化合物の調製または精製などでは使用可能である。塩が製薬学的に許容されるか或は受け入れられないかに拘らず、あらゆる塩が本発明の範囲内に含まれる。
【００２７】
本明細書の上または本明細書の以下に挙げる如き製薬学的に許容される酸および塩基付加塩は、これに式（Ｉ）に従う化合物が形成し得る治療的に活性のある無毒の酸および塩基付加塩形態を包含させることを意味する。製薬学的に許容される酸付加塩は便利に塩基形態をそのような適切な酸で処理することで得ることができる。適切な酸には、例えば無機酸、例えばハロゲン化水素酸、例えば塩酸または臭化水素酸など、硫酸、硝酸、燐酸など、または有機酸、例えば酢酸、プロピオン酸、ヒドロキシ酢酸、乳酸、ピルビン酸、しゅう酸（即ちエタン二酸）、マロン酸、こはく酸（即ちブタン二酸）、マレイン酸、フマル酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、シクラミン酸、サリチル酸、ｐ−アミノサリチル酸、パモ酸などが含まれる。逆に、前記塩形態を適切な塩基で処理することで遊離塩基形態に変化させることも可能である。
【００２８】
用語「溶媒和物」は、式（Ｉ）に従う化合物ばかりでなくこれらの塩が形成し得るアルコラートを指す。
【００２９】
式（Ｉ）に従う化合物の数種はまた互変異性体形態としても存在し得る。そのような形態を前記式の中に明らかには示していないが、それらも本発明の範囲内に含めることを意図する。
【００３０】
本化合物の調製
本発明に従う化合物の調製は、一般に、各々が当業者に公知の一連の段階を用いて実施可能である。特に、本特許出願に示す化合物の調製は、以下の製造方法の中の１つ以上に従って実施可能である。以下のスキームでは、特に明記しない限り、あらゆる変項を式（Ｉ）で定義した如く用いる。
【００３１】
【化２】
0005486591.tif 000003
【００３２】
本発明の化合物の調製は、有機化学技術分野の技術者が通常用いるいくつかの標準的合成方法のいずれかを用いて実施可能であり、これらの調製を一般にスキーム１に従って一般式（ＩＩ）で表される３−Ｎ−置換３−（メチルチオ）−１-アリールプロポ−２−エン−１−オン誘導体に適切なヒドラジン（ＩＩＩ）を用いた変換を当該技術分野で公知の条件下で受けさせて式（Ｉ）で表されるピラゾールを生じさせることで実施する。この変換を典型的にはプロトン溶媒、例えばアルコール、特に分枝アルコール、例えばｔ−ブチルアルコールなど中で室温から１８０℃の範囲、特に９０℃から１６０℃の範囲の温度で
実施する。別法として、前記変換を非プロトン溶媒、例えばＴＨＦなど中で室温から１８０℃の範囲、特に１００℃から１６０℃の範囲の温度で場合により加圧管およびオートクレーブ中で成功裏に実施することも可能である。前記反応で通常はアニリン官能基を３位に有する［例えば（Ｉ）に示す如く］か或は５位に有する［例えば（Ｉ’）に示す如く］２種類の位置異性体の混合物が生じる。前記異性体（Ｉ）と（Ｉ’）が生じる比率はいくつかの要因、例えば反応体の濃度および溶媒、特に２−プロペン−１−オン（Ｉ）およびヒドラジン（ＩＩＩ）の性質などに依存する。ルイス酸を添加すると利点、例えば反応温度の低下などが得られる可能性がありかつまた（Ｉ）と（Ｉ’）の異性体比が影響を受ける可能性もある。ルイス酸の使用を成功裏に適用する例は、これらに限定するものでないが、ＺｎＣｌ２をＴＨＦに入れて用いる使用およびランタン（ＩＩＩ）トリフレートをｔ−ブチルアルコールに入れて用いる使用である。ヒドラジン（ＩＩＩ）を塩酸塩として用いる特定のケースでは、第三級アミン塩基、例えばジイソプロピルエチルアミンなどを化学量論的量で用いるのが有利であり得る。
【００３３】
前記一般式（ＩＩ）で表される３−Ｎ−置換３−（メチルチオ）−１-アリールプロポ−２−エン−１−オン誘導体の合成はいろいろな合成ルートを用いて実施可能であり、それの成功率は当該基質、特にアリール基Ｌの性質に依存する。スキーム２に示す如き１番目の態様では、一般式（ＩＶ）で表されるアセチル含有構成ブロックを一般式（Ｖ）で表されるアリールチオイソシアネートと反応させる。前記反応は、アセチル官能基にインシトゥ脱プロトンを強無機塩基、例えば水素化ナトリウムなどを用いて−２０℃から４０℃の範囲の温度、好適には０℃の非プロトン溶媒、例えばＤＭＦなど中で受けさせることを伴う。本明細書の上に記述したようにしてインシトゥで生じさせたエノラートに一般式（Ｖ）で表されるアリールチオイソシアネートを添加する時、これを−２０℃から４０℃の範囲、好適には０℃で実施する。次に、そのようにして得た付加生成物にヨウ化メチルを０℃から４０℃の範囲の温度、好適には室温で添加してそれをインシトゥで捕捉することで前記一般式（ＩＩ）で表される３−Ｎ−置換３−（メチルチオ）−１-アリールプロポ−２−エン−１−オン誘導体を得ることができる。式（ＩＩ）で表される中間体はまた互変異性体形態（ＩＩ−ａ）として存在する可能性もあり、それらは各々ＥまたはＺ配置またはこれらの混合物として存在し得る（スキーム２）。
【００３４】
【化３】
0005486591.tif 000004
【００３５】
スキーム３に示すように、個別の２合成段階を包含する２番目の態様では、一般式（ＩＶ）で表されるアセチル含有構成ブロックを二硫化炭素と反応させる。前記反応は、アセチル官能基に強無機塩基、例えば水素化ナトリウムなどを用いた脱プロトンを−２０℃から４０℃の範囲の温度、好適には０℃の非プロトン溶媒、例えばＤＭＦなど中で前以て受けさせておくことを伴う。本明細書の上に記述したようにしてインシトゥで生じさせたエノラートに二硫化炭素を添加する時、これを−２０℃から４０℃の範囲、好適には０℃で実施する。次に、そのようにして得た付加生成物にヨウ化メチルを０℃から４０℃の範囲の温度で添加してそれをインシトゥで捕捉することで前記一般式（ＶＩ）で表される中間体を得ることができる。２番目の段階として、前記一般式（ＶＩ）で表される中間体にアニリンＨ２Ｎ−Ｑを用いた処理を非プロトン溶媒、例えばトルエンなど中で受けさせるが
、これを最も有利には高温、例えば１１０℃などで実施する。ルイス酸触媒の使用が好適であり、それは、これらに限定するものでないが、三フッ化ホウ素エーテラートであってもよい。
【００３６】
【化４】
0005486591.tif 000005
【００３７】
前記一般式（ＩＶ）で表されるアセチル置換中間体の合成は、芳香族ニトリルＬ−ＣＮを用いて出発することで実施可能である（スキーム３ａ）。前記ニトリルにグリニヤール試薬、例えばＭｅ−ＭｇＢｒなどを用いた処理を非プロトン溶媒、例えばジエチルエーテルなど中で受けさせる。前記変換を起こさせるに好ましい温度範囲は０℃から４０℃の範囲、好適には室温である。当業者は、前記反応によって相当する（ＩＶ）で表されるイミンが生じそして次に水による加水分解を希酸中で行う段階によって前記一般式（ＩＶ）で表されるアセチル置換中間体が生じることを認識するであろう。
【００３８】
【化５】
0005486591.tif 000006
【００３９】
一般式（ＩＩＩ−ａ）で表されるヒドラジンアルコール［本明細書では（ＶＩＩＩ）と呼ぶ］の調製は、Ｒ４がＣ１−４アルキルを表す一般式（ＶＩＩ）で表される一置換オキシランを過剰量の水加ヒドラジン中で加熱することで実施可能である（スキーム４）。好適には、この反応の温度を４０−７０℃にしそして反応時間を２時間にする。そのようなオキシラン（ＶＩＩ）が光学的に高純度の形態で入手可能であるならば、結果として相当する立体化学的同一性および純度を有するヒドラジンアルコール（ＶＩＩＩ）が得られる（例えばＲ４がエチルの場合などに）。
【００４０】
【化６】
0005486591.tif 000007
【００４１】
置換基ＬおよびＺに関する官能基変換によって前記一般式（Ｉ）で表される数種の化合物を得ることができる。スキーム５に、前記一般式（Ｉ）で表される化合物が有する置換基Ｚに関する前記官能基変換の一例を示す。特に、スキーム５に、一般式（Ｉｂ）で表さ
れるカルボン酸アミドをＲ３がＣ１−３アルキルを表す相当するカルボン酸エステル（Ｉａ）から生じさせる調製を示し、これは、第一級もしくは第二級脂肪族アミンＨＮＲ１Ｒ２を用いた処理を伴う。１つの態様では、前記変換をエステル（Ｉａ）を用いて直接行うことができる。好適な溶媒はプロトン溶媒、例えば低級アルキルアルコール、例えばメタノールなどである。好適な反応温度は室温から１２０℃の範囲である。
【００４２】
【化７】
0005486591.tif 000008
【００４３】
別法として、最初にアルキルカルボン酸エステル（Ｉａ）に加水分解を受けさせることで一般式（Ｉｃ）で表される相当するカルボン酸を生じさせる。この変換は金属水酸化物（Ｍ−ＯＨ）、例えば水酸化カリウム、より好適には水酸化リチウムなどを用いて実施可能である。この反応を水性環境下で実施し、最も有利には、水に混和する少なくとも１種、より好適には２種類の有機共溶媒、例えばＴＨＦおよびメタノールなどの存在下で実施する。前記カルボン酸（Ｉｃ）から式（Ｉｂ）で表されるアミドを生じさせるさらなる変換を当該技術分野で公知の手順、例えば本明細書の上で定義した如き第一級もしくは第二級アミンＨＮＲ１Ｒ２を用いた処理を通常のアミド連成剤、例えばＨＢＴＵ（ヘキサフルオロ燐酸Ｏ−ベンゾトリアゾール−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウム）、ＥＤＣＩまたはＥＤＡＣなどを存在させて非プロトン溶媒、例えばＣＨ２Ｃｌ２、より好適には極性非プロトン溶媒、例えばＴＨＦまたはＤＭＦなど中でアミン塩基添加剤、例えばジイソプロピルエチルアミンなどの存在下で行うことなどを利用して実施する。特定の状況下では、ＨＯＢＴを添加剤として使用するのが有利である。
【００４４】
スキーム６−８に、前記一般式（Ｉ）で表される化合物が有する置換基Ｌに関する官能基変換の例を示す。前記置換基Ｌに修飾を受けさせる１番目の例として、スキーム６に示すように、一般式（Ｉｄ）で表される構造物が有する塩素原子の還元的除去をＰｄ／Ｃを触媒として用いて水素雰囲気下で無機塩基、例えば酢酸カリウムなどまたはアミン塩基、例えばトリエチルアミンなどを存在させて触媒的に達成することができる。別法として、置換基ＺおよびＱのいずれかが接触水添条件に適合しない官能基を含有する場合、Ｒ５、Ｒ６およびＲ７が独立して水素またはＣ１−６アルキルを表す一般式（Ｉｄ）で表されるクロロピリジンにカルベノイド触媒、例えばＰｄ触媒［１，３−ビス［２，６−ビス（１−メチルエチル）フェニル］−２−イミダゾリジニリデン］クロロ（η３−２−プロペニル）−パラジウム（［４７８９８０−０１−７］）を用いた処理を強塩基、例えばナトリウムメトキサイドなどを存在させてプロトン溶媒、例えばメタノールまたは２−プロパノールなど中で受けさせることで一般式（Ｉｅ）で表される目標の化合物を得ることができる。前記反応はマイクロ波オーブン内で高温、例えば１００−１２０℃などで実施可能である（スキーム６）。
【００４５】
【化８】
0005486591.tif 000009
【００４６】
置換基Ｌに修飾を受けさせる２番目の例として、スキーム７に示すように、一般式（Ｉｄ）で表される構造物が有する塩素原子の追い出しを一般式（Ｉｄ）で表されるクロロ置換ピリジニルピラゾールにＣ１−６アルキルアミンを用いた処理をアルコール溶媒、例えばエタノールなど中で受けさせそして加圧管またはマイクロ波オーブン中で高温、好適には１００−２００℃に加熱することで達成することができる（スキーム７）。
【００４７】
【化９】
0005486591.tif 000010
【００４８】
置換基Ｌに修飾を受けさせる３番目の例として、スキーム８に示すように、メトキシメチル基の導入を一般式（Ｉｄ）で表されるクロロ置換ピリジニルピラゾールを用いて出発する３合成段階を伴う手順で達成することができる。１番目の段階として、クロロピリジニル前駆体（Ｉｄ）にＣＯ挿入反応を受けさせることで一般式（Ｉｇ）で表されるカルボン酸アルキルを得ることができる。適切な条件は、酢酸パラジウムおよび無機塩基、例えば酢酸カリウムなどを配位子、例えば１，３−ビス（ジフェニルホスフィノプロパン（ＤＰＰＰ）を存在させて圧力が５０気圧のＣＯ雰囲気下で用いる条件である。この反応では更に極性溶媒、例えばＴＨＦなどおよびアルコール共溶媒も必要である。Ｃ１−３アルキルがメチルの場合には共溶媒をメタノールにすべきである。この反応を高温、例えば１２０℃から１５０℃の範囲の温度で最良に実施する。
【００４９】
【化１０】
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【００５０】
２番目の段階として、前記カルボン酸アルキル（Ｉｇ）に還元剤、例えばホウ水素化リチウムまたはホウ水素化ナトリウムなどを用いた処理を塩化カルシウムの存在下で受けさせることで一般式（ＩＸ）で表されるヒドロキシルメチル化合物を得ることができる。この反応は有利に０℃から室温の範囲の温度の非プロトン溶媒、例えばＴＨＦなどとプロトン溶媒、例えばメタノールなどから成る溶媒混合物中で実施可能である。３番目の段階として、前記一般式（ＩＸ）で表される構造物が有する第一ヒドロキシル官能基に官能化をメタンスルホネートとして受けさせてもよく、これは第三級アミン塩基、例えばトリエチルアミンなどおよびメタンスルホニルクロライドを非プロトン溶媒、例えばＴＨＦなどに入れて室温で用いることを伴う。ナトリウムメトキサイドを溶媒としてのメタノールに入れて用いて前記メタンスルホネートをインシトゥで捕捉することで一般式（Ｉｈ）で表される化合物を得る。スキーム８に示した反応手順を実施する時に置換基ＺおよびＱの中のいずれか一方または両方がスキーム８で用いる反応条件に適合しない官能基を含有する場合には保護基が必要であることをある当業者は認識するであろう。例えば、Ｚがヒドロキシル官能基を含有する場合、前記ヒドロキシルにシリル官能基、例えばｔ−ブチルジメチルシリルなどを用いた保護を当該技術分野で公知の条件を用いて受けさせてもよい。前記シリル保護基の除去はスキーム８に示した手順が終了した時点でフッ化テトラブチルアンモニウムの存在下で当該技術分野で公知の条件を用いて実施可能である。
【００５１】
別の態様として、本発明の化合物の調製をスキーム９に概略を示すように一般式（Ｘ）で表される中間体が有するＮ−１原子に官能化を受けさせることを伴う方法を用いて実施することも可能である。前記方策は特に一般式（ＩＩＩ）で表されるヒドラジン反応体を容易には入手することができない時に有用である。
【００５２】
【化１１】
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【００５３】
１番目の段階として、一般式（ＩＩ）で表される３−Ｎ−置換３−（メチルチオ）−１−アリールプロポ−２−エン−１−オン誘導体をヒドラジンと反応させることで一般式（Ｘ）で表される中間体を生じさせる。この変換を典型的にはプロトン溶媒、例えばアルコール、特に分枝アルコール、例えばｔ−ブチルアルコールなど中で室温から１８０℃の範囲、特に９０℃から１２０℃の範囲の温度で実施する。２番目の段階として、アニリンのアミノ官能基に当業者が通常用いる保護基を用いた保護を受けさせる。特に、ｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）基を有利に用いることができる。一般式（ＸＩ）で表される保護されたピラゾールを得ようとする時、一般式（Ｘ）で表されるピラゾールに脱プロトンを強無機塩基、例えば水素化ナトリウムなどを用いて非プロトン溶媒、例えばＤＭＦなど中で受けさせた後にＢｏｃ２Ｏを用いたクエンチングを実施することで前記Ｂｏｃ基を導入することができる。好適な反応温度は０℃から室温の範囲の温度である。スキーム９に示した合成手順の３番目の段階として、前記一般式（ＸＩ）で表される保護されたピラゾールにアルキル化剤Ｚ−Ｘ［ここで、Ｚはこの上で定義した通りでありそしてＸは脱離基、例えばクロロ、ブロモまたはｐ−トルエンスルホネートなどを表す］を用いた処理を無機塩基、例えば炭酸セシウムなどを存在させて温度が０℃から７０℃の範囲の非プロトン溶媒、例えばＤＭＦなど中で受けさせることで保護されたピラゾールを位置異性体（Ｉｊ）と（Ｉｊ’）の混合物として得る。この最終的脱保護段階を当該技術分野で公知の条件下で実施、特にトリフルオロ酢酸を用いた処理を室温のハロゲン化共溶媒、例えばジクロロメタンなど中で実施することで、前記一般式（Ｉ）および（Ｉ’）で表される化合物を得る。
【００５４】
薬理学
本発明の化合物はα７ニコチン性受容体の正のアロステリックモジュレーターであることを見いだした。α７ニコチン性受容体（α７  ｎＡＣｈＲ）は、シス−ループ（ｃｙｓ−ｌｏｏｐ）イオンチャンネル型のリガンド依存性イオンチャンネルのスーパーファミリーに属し、それには５−ＨＴ３、ＧＡＢＡＡおよびグリシン受容体ファミリーが含まれる。それはアセチルコリンおよびこれの分解生成物であるコリンで活性化され、そしてα７
ｎＡＣｈＲの主要な特徴は、作動薬を持続的に存在させると急速に脱感作を起こす点にある。これは脳の中に２番目に最も豊富に存在するニコチン性受容体サブタイプであり、これはいろいろな神経伝達物質の重要な放出調節因子である。それは注意および認知過程に関連して脳のいくつかの構造物、例えば海馬および前頭前皮質などの中に離散的に分布しており、ヒトにおけるいろいろな精神病学的および神経学的障害に関係していると思われている。それはまたコリン作動性免疫経路にも関係していると思われている。
【００５５】
それが統合失調症に関連していることに関する遺伝的証拠は、統合失調症マーカー［感覚ゲーティング欠陥（ｓｅｎｓｏｒｙ  ｇａｔｉｎｇ  ｄｅｆｉｃｉｔ）］と１５ｑ１３
−１４上のα７座の間の関係が強力であることとα７遺伝子の中心プロモーター領域が多型性であることの形態で見られる。
【００５６】
統合失調症の脳の海馬、前頭および帯状皮質、パーキンソン病およびアルツハイマー病および自閉症の場合の視床下部傍室核および結合核の中のα７免疫反応性およびα−Ｂｔｘ結合が損失していることを指摘する病理学的証拠が存在する。
【００５７】
患者がα７ニコチン作動性伝達の欠陥を補充する目的で自分で治療する試みとして、統合失調症患者の方が正常なヒトに比べて顕著に喫煙する習慣があることの如き薬理学的証拠が説明された。動物モデルおよびヒトの両方においてニコチンを投与すると感覚ゲーティング（プレパルス抑制ＰＰＩ）における欠陥が一時的に正常化することと統合失調症患者の前脳コリン作動活性を低くする（例えば段階２の睡眠）と正常な感覚ゲーティングが一時的に回復することの両方ともα７ニコチン性受容体が一時的に活性化した後に脱感作を起こすことの結果であると説明された。
【００５８】
従って、α７  ｎＡＣｈＲを活性化させることができればいろいろなＣＮＳ（精神病学的および神経学的）障害に治療的に有益な効果がもたらされるであろうことを裏付けする良好な理由が存在する。
【００５９】
既に述べたように、天然の伝達物質であるアセチルコリンばかりでなく外因性のリガンド、例えばニコチンなどを持続的に存在させるとα７  ｎＡＣｈＲが急速に脱感作を起こす。その脱感作を起こした状態の時の前記受容体はリガンドと結合したままであるが、機能的には不活性である。このことは天然の伝達物質、例えばアセチルコリンおよびコリンなどにとってはあまり問題ではない、と言うのは、それらは非常に強力な分解（アセチルコリンエステラーゼ）およびクリアランス（コリン輸送）機構の基質であるからである。そのような伝達物質の分解／クリアランス機構によって、活性化し得るα７  ｎＡＣｈＲと脱感作したα７  ｎＡＣｈＲの間の均衡が生理学的に有益な範囲内に維持される可能性がある。しかしながら、天然の分解およびクリアランス機構の基質ではない合成の作動薬は過剰刺激およびまたα７  ｎＡＣｈＲ集団の平衡状態を持続的に脱感作した状態に押しやることの両方が理由で不利になる可能性があると考えており、これはα７  ｎＡＣｈＲ発現もしくは機能の欠陥がある役割を果たす障害にとって望ましいことではない。作動薬は、これの性質から、ＡＣｈ結合ポケット（これはいろいろなニコチン性受容体サブタイプに渡って高度に保存される）を標的にするはずであり、それによって、他のニコチン性受容体サブタイプが非特異的に不活性化されることで副作用がもたらされる可能性がある。従って、そのような潜在的不利益を回避するためのα７作動性に対する代替治療方策は、正のアロステリックモジュレーター（ＰＡＭ）を用いて受容体が天然の作動薬に対して示す反応性を高める方策である。ＰＡＭは、作動薬が結合する部位とは異なる部位と結合する因子であると定義され、従って、作動性も脱感作性も示さないと予測されるが、α７  ｎＡＣｈＲが天然の伝達物質に対して示す反応性を高める。このような方策の価値は、伝達物質の量が決まっている時にＰＡＭを存在させるとそれが存在しない時に起こり得る伝達のレベルに比べてα７  ｎＡＣｈＲ反応の大きさが向上することにある。このように、α７  ｎＡＣｈＲ蛋白質が欠乏している障害の場合、ＰＡＭで誘発させてα７ニコチン作動性伝達を向上させることは有益であり得る。ＰＡＭは天然の伝達物質の存在に頼っていることから、過剰刺激の可能性は、天然の伝達物質が示す分解／クリアランス機構によって制限される。
【００６０】
本発明の化合物は、全細胞電圧クランプ記録で測定した時の定性的力学的特性を基にしてタイプ１−４であると分類分けする。この分類分けは、本明細書の上に記述した如きα７ＰＡＭ化合物が作動薬を用いた時に現れるシグナルに対して示す効果が基になっている。特に、前記作動薬は濃度が１ｍＭのコリンである。好適な実験設定では、前記α７ＰＡ
Ｍ化合物とコリンを本明細書の以下に記述する如き細胞に同時に加える。脱感作は、当該作動薬を加えている間に活性化によって当該受容体が封鎖されるとして定義され、それは、全細胞電圧クランプ電気生理学測定において当該作動薬で最初に活性化させた後に外向き電流が減少するとして観察される。
【００６１】
ＰＡＭタイプ１−４の定義を本明細書の以下に記述する。
【００６２】
タイプ０の化合物は、コリンを１ｍＭ用いた時に現れる電流のエフェクトサイズを向上させる度合が最小限の化合物である。
【００６３】
タイプ１の化合物は、コリンを１ｍＭ用いた時に現れる電流のエフェクトサイズを向上させはするが、当該受容体が示す反応速度を変える度合が最小限である化合物である。特に、当該作動薬を用いた時に現れる脱感作の速度および度合は影響を受けない。従って、この化合物によってモジュレートされて１ｍＭのコリンに対して起こる反応は、α７ＰＡＭ化合物が存在しない時に１ｍＭのコリンに対して起こる線形スケーリングの反応に近い。
【００６４】
タイプ２の化合物は、コリンを１ｍＭ用いた時に現れる電流のエフェクトサイズを向上させると同時に脱感作の速度および度合を低下させる化合物である。
【００６５】
タイプ３の化合物は、コリンを１ｍＭ用いた時に現れる電流のエフェクトサイズを向上させる化合物である［試験を１０μＭに及ぶ高濃度で行うと、それらは脱感作を完全に抑制、特にコリンを１ｍＭ加えた時に２５０ミリ秒で抑制する］。
【００６６】
タイプ４の化合物は、最初に当該受容体の脱感作を起こさせた後に作動薬を加えている時にその受容体の再開放を起こさせる化合物である。α７ＰＡＭ化合物を低効力濃度にすると、当該作動薬によって誘発された活性化の後に脱感作が起こるが、それでもその活性化は初期内向き電流最大値として当該化合物によって誘発される再開放から切り離し可能である。α７ＰＡＭ化合物の効力がより高くなる濃度にすると、脱感作による封鎖よりも再開放の方が速く起こり、その結果として初期の電流最大値が消失する。
【００６７】
ピーク電流の増強度が対照コリン反応（＝１００％）に比べて少なくとも２００％であるならば、そのような化合物は興味の持たれるＰＡＭ様活性を示すと見なす。そのような化合物は実験部分に示す個々のＰＡＭタイプに属すると分類分けする。そのような条件に合致しない化合物は個々のＰＡＭタイプには属さないと分類分けする。
【００６８】
従って、本発明の目的は治療方法を提供することにあり、この方法は、正のアロステリックモジュレーターを単独の活性物質として投与することで内因性のニコチン性受容体作動薬、例えばアセチルコリンまたはコリンなどの活性をモジュレートするか、或は正のアロステリックモジュレーターをニコチン性受容体作動薬と一緒に投与することを包含する。本発明のこの面の特別な形態における治療方法は、本明細書に記述する如きα７ニコチン性受容体の正のアロステリックモジュレーターおよびα７ニコチン性受容体の作動薬または部分的作動薬を用いた治療を包含する。α７ニコチン性受容体作動活性を示す適切な化合物の例には下記が含まれる：
−  １，４−ジアザビシクロ［３．２．２］ノナン−４−カルボン酸４−ブロモフェニルエステルの一塩酸塩（ＳＳＲ１８０７１１Ａ）、
−  （−）−スピロ［１−アザビシクロ［２．２．２．］オクタン−３，５’−オキサゾリジン］−２’−オン、
−  ３−［（２，４−ジメトキシ）ベンジリデン］−アナバセインの二塩酸塩（ＧＴＳ−２１）、
−  ［Ｎ−［（３Ｒ）−１−アザビシクロ［２．２．２］オクト−３−イル］−４−クロロベンズアミドの塩酸塩］ＰＮＵ−２８２９８７、
−  ニコチン、
−  バレニクリン、
−  ＭＥＭ３４５４、
−  ＡＺＤ−０３２８、および
−  ＭＥＭ６３９０８。
【００６９】
本発明の積極的ｎＡＣｈＲモジュレーターは、精神病学的障害、知能障害またはα７ニコチン性受容体の活性のモジュレーションが有益である病気もしくは疾患の治療または予防で用いるに有用である。本発明の方法の特別な面は、学習欠陥、認知欠陥、注意欠陥または記憶喪失を治療する方法であり、いろいろな病気でα７ニコチン性受容体の活性のモジュレーションが有益であると期待され、そのような病気には、アルツハイマー病、レヴィー小体認知症、注意欠陥多動性障害、不安、統合失調症、躁病、躁鬱病、パーキンソン病、ハンチントン病、トゥレットシンドローム、脳外傷、またはコリン作動性シナプシスの損失が存在する他の神経学的、変性または精神病学的障害（時差ボケ、ニコチン中毒、痛みを包含）が含まれる。
【００７０】
また、本化合物を抗炎症薬として治療で用いることも可能である、と言うのは、コリン作動性炎症経路によるサイトカイン合成を阻害するにはニコチン性アセチルコリン受容体α７サブユニットが必須であるからである。本化合物を用いて治療可能な適応症の例は、内毒素血症、内毒素性ショック、敗血症、関節リウマチ、喘息、多発性硬化症、乾癬、蕁麻疹、炎症性腸疾患、炎症性胆疾患、クローン病、潰瘍性大腸炎、術後腸閉塞、膵炎、心不全、急性肺障害および同種移植の拒絶反応である。
【００７１】
本発明の化合物は統合失調症における認知症、アルツハイマー病における認知症、軽度認識障害、パーキンソン病、注意欠陥多動性障害、潰瘍性大腸炎、膵炎、関節炎、敗血症、術後腸閉塞および急性肺障害の如き適応症の治療で使用可能である。
【００７２】
前記式（Ｉ）に従う化合物またはこれのサブグループのいずれか、これらの製薬学的に許容される付加塩、第四級アミンおよび立体化学的異性体形態物は、この上に記述した薬理学的特性を有することを鑑み、薬剤として使用可能である。特に、本化合物は、精神病学的障害、知能障害またはα７ニコチン性受容体のモジュレーションが有益である病気もしくは状態を治療または予防する薬剤の製造で使用可能である。
【００７３】
前記式（Ｉ）に従う化合物の有用性を鑑み、α７ニコチン性受容体のモジュレーションが有益である病気、例えば統合失調症、躁病および躁鬱病、不安、アルツハイマー病、学習欠陥、認知欠陥、注意欠陥、記憶喪失、レヴィー小体認知症、注意欠陥多動性障害、パーキンソン病、ハンチントン病、トゥレットシンドローム、脳外傷、時差ボケ、ニコチン中毒および痛みなどに苦しんでいる温血動物（人を包含）を治療するか、温血動物（人を包含）がそのような病気に苦しまないようにする方法またはそれを予防する方法を提供する。前記方法は、式（Ｉ）に従う化合物（これのあらゆる立体化学異性体形態物、製薬学的に許容される付加塩、溶媒和物または第四級アミンを包含）を温血動物（ヒトを包含）に有効量で投与、即ち全身または局所投与、好適には経口投与することを含んで成る。
【００７４】
当業者は、本発明のＰＡＭの治療的に有効な量はα７ニコチン性受容体の活性をモジュレートするに充分な量であることとそのような量はとりわけ病気の種類、治療用製剤に入れる本化合物の濃度および当該患者の状態に応じて変わることを認識するであろう。一般に、主治医はα７ニコチン性受容体のモジュレーションが有益である病気、例えば統合失調症、躁病および躁鬱病、不安、アルツハイマー病、学習欠陥、認知欠陥、注意欠陥、記
憶喪失、レヴィー小体認知症、注意欠陥多動性障害、パーキンソン病、ハンチントン病、トゥレットシンドローム、脳外傷、時差ボケ、ニコチン中毒および痛みなどを治療するための治療薬として投与すべきＰＡＭの量をケースバイケースで決定するであろう。
【００７５】
適切な投薬量は、一般に、処置部位の所のＰＡＭの濃度が結果として０．５ｎＭから２００μＭ、より一般的には５ｎＭから５０μＭの範囲内になるような量である。そのような処置濃度を得ようとして、そのような処置が必要な患者に投与する量は体重１ｋｇ当たり０．０１ｍｇから２．５０ｍｇ、特に体重１ｋｇ当たり０．１ｍｇから０．５０ｍｇの範囲であろう。治療効果を達成するに必要な本発明に従う化合物（ここではまた有効成分とも呼ぶ）の量は、勿論、ケースバイケースで異なり、個々の化合物、投与経路、受益者の年齢および状態および治療すべき個々の障害または病気に伴って変わるであろう。治療方法に、また、本有効成分を１日当たり１回から４回の範囲の投与計画で投与することを含めることも可能である。そのような治療方法の場合、好適には、本発明に従う化合物を投与に先立って調合しておく。本明細書の以下に記述するように、適切な製薬学的製剤の調製を良く知られていて容易に入手可能な材料を用いて公知手段で実施する。
【００７６】
本発明は、また、α７ニコチン性受容体のモジュレーションが有益である病気、例えば統合失調症、躁病および躁鬱病、不安、アルツハイマー病、学習欠陥、認知欠陥、注意欠陥、記憶喪失、レヴィー小体認知症、注意欠陥多動性障害、パーキンソン病、ハンチントン病、トゥレットシンドローム、脳外傷、時差ボケ、ニコチン中毒および痛みなどを予防または治療するための組成物も提供する。前記組成物は治療的に有効な量の式（Ｉ）に従う化合物および製薬学的に許容される担体または希釈剤を含有して成る。
【００７７】
本有効成分を単独で投与することも可能ではあるが、それを製薬学的組成物として存在させる方が好適である。従って、本発明は、更に、本発明に従う化合物を製薬学的に許容される担体または希釈剤と一緒に含有して成る製薬学的組成物も提供する。そのような担体または希釈剤は本組成物に含める他の材料と適合しかつそれの受益者にとって有害ではない意味で「許容される」べきである。
【００７８】
本発明の製薬学的組成物の調製は薬学的技術で良く知られている方法のいずれか、例えばＧｅｎｎａｒｏ他、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（１８版、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ、１９９０、特にパート８：Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｓ  ａｎｄ  ｔｈｅｉｒ  Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｅを参照）に記述されている方法などを用いて実施可能である。治療的に有効な量の個々の化合物を有効成分として塩基形態または付加塩形態で製薬学的に許容される担体との密な混合物として一緒にするが、前記担体に持たせる形態は投与に望まれる製剤の形態に応じて幅広く多様であり得る。本製薬学的組成物を好ましくは単位投薬形態物、好適には全身投与、例えば経口、経皮または非経口投与など、または局所投与、例えば吸入、鼻スプレー、点眼液など、またはクリーム、ゲル、シャンプーなどの形態にする。例えば、本組成物を経口投薬形態物として調製する時、通常の製薬学的媒体のいずれも使用可能であり、例えば液状の経口用製剤、例えば懸濁液、シロップ、エリキシルおよび溶液などの場合には水、グリコール、油、アルコールなど、または粉末、ピル、カプセルおよび錠剤の場合には固体状担体、例えば澱粉、糖、カオリン、滑剤、結合剤、崩壊剤などを用いてもよい。投与が容易なことから錠剤およびカプセルが最も有利な経口投薬単位形態物に相当し、この場合には明らかに固体状の製薬学的担体を用いる。非経口用組成物の場合の担体は少なくとも大部分が一般に無菌水を含んで成るが、他の材料、例えば溶解性を補助する材料などを含有させることも可能である。例えば、注射可能溶液を調製することも可能であり、その場合の担体は食塩水溶液、グルコース溶液、または食塩水とグルコース溶液の混合物を含んで成る。また、注射可能懸濁液を調製することも可能であり、この場合には適切な液状担体、懸濁剤などを用いてもよい。経皮投与に適
した組成物の場合、その担体に場合により浸透促進剤および／または適切な湿潤剤を含めてもよく、それらを場合によりいずれかの性質を有する適切な添加剤と少しの比率で組み合わせてもよく、そのような添加剤は、皮膚に対して有害な影響を大きな度合では引き起こさない添加剤である。前記添加剤は皮膚への投与を助長しそして／または所望組成物の調製に役立ち得る。そのような組成物はいろいろな様式で投与可能であり、例えば経皮パッチ、スポットオン（ｓｐｏｔ−ｏｎ）、軟膏などとして投与可能である。
【００７９】
上述した製薬学的組成物を投薬単位形態に構築するのが特に有利である、と言うのは、その方が投与が容易でありかつ投薬が均一であるからである。本明細書および本明細書の請求項で用いる如き「投薬単位形態物」は、各単位が要求される製薬学的担体と一緒に所望治療効果をもたらすように計算して前以て決めておいた量の有効成分を含有する単位投薬物として用いるに適した物理的に個々別々の単位を指す。そのような投薬単位形態物の例は錠剤（切り目が入っている錠剤または被覆されている錠剤を包含）、カプセル、ピル、粉末、パケット、ウエハース、注射可能溶液もしくは懸濁液、茶サジ１杯、テーブルスプーン１杯など、そしてそれらを複数に分割したものである。
【００８０】
投与の正確な用量および頻度は、当業者に良く知られているように、使用する前記式（Ｉ）で表される個々の化合物、治療すべき個々の状態、治療すべき状態のひどさ、個々の患者の年齢、体重、性、障害の度合および一般的身体状態ばかりでなく個人が服用している可能性のある他の薬剤にも依存する。その上、１日当たりの有効量をその治療を受けさせる被験体の反応に応じてそして／または本発明の化合物を処方する医者の評価に応じて少なくするか或は多くしてもよいことも明らかである。
【００８１】
本薬剤組成物の有効成分含有量を投与様式に応じて０．０５から９９重量％、好適には０．１から７０重量％、より好適には０．１から５０重量％にしかつ製薬学的に許容される担体の含有量を１から９９．９５重量％、好適には３０から９９．９重量％、より好適には５０から９９．９重量％にする（パーセントは全部当該組成物の総重量を基準）。
【００８２】
本化合物は全身投与、例えば経口、経皮または非経口投与など、または局所投与、例えば吸入、鼻スプレー、点眼液など、またはクリーム、ゲル、シャンプーなどで使用可能である。本化合物を好適には経口投与する。投与の正確な用量および頻度は、当業者に良く知られているように、使用する前記式（Ｉ）に従う個々の化合物、治療すべき個々の状態、治療すべき状態のひどさ、個々の患者の年齢、体重、性、障害の度合および一般的身体状態ばかりでなく個人が服用している可能性のある他の薬剤にも依存する。その上、１日当たりの有効量をその治療を受けさせる被験体の反応に応じてそして／または本発明の化合物を処方する医者の評価に応じて少なくするか或は多くしてもよいことも明らかである。
【００８３】
また、式（Ｉ）に従う化合物を他の通常のα７ニコチン性受容体作動薬、例えば１，４−ジアザビシクロ［３．２．２］ノナン−４−カルボン酸４−ブロモフェニルエステルの一塩酸塩（ＳＳＲ１８０７１１Ａ）、（−）−スピロ［１−アザビシクロ［２．２．２］オクタン−３，５’−オキサゾリジン］−２’−オン、３−［（２，４−ジメトキシ）ベンジリデン］−アナバセインの二塩酸塩（ＧＴＳ−２１）、［Ｎ−［（３Ｒ）−１−アザビシクロ［２．２．２］オクト−３−イル］−４−クロロベンズアミドの塩酸塩］ＰＮＵ−２８２９８７）、ニコチン、バレニクリン、ＭＥＭ３４５４、ＡＺＤ−０３２８およびＭＥＭ６３９０８などと組み合わせて用いることも可能である。従って、本発明は、また、式（Ｉ）に従う化合物とα７ニコチン性受容体作動薬の組み合わせにも関する。前記組み合わせを薬剤として用いることができる。本発明は、また、（ａ）式（Ｉ）に従う化合物と（ｂ）α７ニコチン性受容体作動薬をα７ニコチン性受容体のモジュレーションが有益である病気を治療する時に同時、個別または逐次的に用いるための組み合わせ製剤とし
て含有させた製品にも関する。そのいろいろな薬剤を単一の製剤の中に製薬学的に許容される担体と一緒に組み合わせてもよい。
【００８４】
実験部分
本発明の化合物を生じさせるに適したいくつかの方法を以下の実施例に示す。特に明記しない限り、出発材料の全部を商業的供給業者から入手してさらなる精製無しに用いた。
【００８５】
本明細書の以下または本明細書の上に示す「ＴＨＦ」はテトラヒドロフランを意味し、「ＤＭＦ」はＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドを意味し、「ＥｔＯＡｃ」は酢酸エチルを意味し、「ＤＭＳＯ」はジメチルスルホキサイドを意味し、「ｍｉｎ」は分を意味し、「ＤＭＡＡ」はＮ，Ｎ−ジメチル−２−プロペンアミドを意味し、「ＭｅＯＨ」はメタノールを意味し、「ＥｔＯＨ」はエタノールを意味し、「ＥｔＮＨ２」はエタンアミンを意味し、「Ｅｔ２Ｏ」はジエチルエーテルを意味し、「ｔ−ＢｕＯＨ」はｔ−ブタノールを意味し、「ＴＢＡＦ」はフッ化テトラブチルアンモニウムを意味し、「ＴＦＡ」はトリフルオロ酢酸を意味し、「ＮＨ４ＯＡｃ」は酢酸アンモニウムを意味し、「ＥＤＡＣ」はＮ３−（エチルカルボニミドイル）−Ｎ１，Ｎ１−ジメチル−１，３−プロパンジアミンを意味し、「ＥＤＣＩ」はＮ’−（エチルカルボニミドイル）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−１，３−プロパンジアミンの一塩酸塩を意味し、「ＨＯＢＴ」は１−ヒドロキシ−１Ｈ−ベンゾトリアゾールを意味し、「Ｂｏｃ２Ｏ」はジ−ｔ−ブチルジカーボネートを意味し、そして「Ｐｄ（ＯＡｃ）２」は二酢酸パラジウムを意味する。
【００８６】
マイクロ波補助反応を単様式反応槽：Ｉｎｉｔｉａｔｏｒ（商標）Ｓｉｘｔｙ  ＥＸＰマイクロ波反応槽（Ｂｉｏｔａｇｅ  ＡＢ）または多様式反応槽：Ｍｉｃｒｏ−ＳＹＮＴＨ  Ｌａｂｓｔａｔｉｏｎ（Ｍｉｌｅｓｔｏｎｅ，Ｉｎｃ．）内で実施した。
【００８７】
以下の実施例は例示を意図したものであり、本発明の範囲を限定することを意図するものでない。
【００８８】
Ａ．中間体化合物の製造
記述１
２−クロロ−３−メチル−４−ピリジンカルボニトリル（Ｄ１）
【００８９】
【化１２】
0005486591.tif 000013
【００９０】
２−クロロ−３−メチル−４−ピリジンカルボン酸（３０ｇ、１７４ミリモル）をピリジン（２５０ｍｌ）に溶解させて０℃に冷却した。次に、メタンスルホニルクロライド（１３．６ｍｌ）を滴下した後の反応混合物を０℃で１時間撹拌した。ＮＨ３（気体）を加圧下で加えた後の反応混合物を室温で１時間撹拌した。反応が完了に到達した後に余分なＮＨ３を真空下で除去した。次に、その反応混合物を０℃に冷却し、メタンスルホニルクロライド（１４０ｍｌ）を加えた後、その反応混合物を室温で一晩撹拌した。次に、その混合物を０．１ＭのＨＣｌ（２００ｍｌ）に０℃で注ぎ込（注意しながら）んだ後、１ＭのＮａＯＨを用いてｐＨ＝７に調整した。その反応混合物をＥｔＯＡｃ（２ｘ１００ｍｌ）で抽出し、食塩水で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、濾過した後、溶媒を真空下で蒸発させた。その残留物をシリカゲル使用フラッシュカラムクロマトグラフィー（Ｂｉｏｔａｇｅフラッシュ精製装置、勾配：ＥｔＯＡｃ／ヘプタンを１５／８５から３０／７０）
で精製した。生成物画分を集めた後、溶媒を真空下で蒸発させた。収量：Ｄ１を１２．６ｇ。
【００９１】
記述２
１−（２−クロロ−３−メチル−ピリジン−４−イル）−エタノン（Ｄ２）
【００９２】
【化１３】
0005486591.tif 000014
【００９３】
前以て乾燥させておいたフラスコの中でＤ１（１２．６ｇ、８２．９ミリモル）をＥｔ２Ｏ（無水）（２００ｍｌ）に溶解させた後、Ｎ２（気体）保護下でブロモメチルマグネシウム（１００ｍｌ）をゆっくり加えた。その反応混合物を室温で一晩撹拌した後、氷−Ｈ２Ｏ（６００ｍｌ）と３７％のＨＣｌ水溶液（１００ｍｌ）の混合物の中にゆっくり注ぎ込んだ。その反応混合物を撹拌した後、Ｅｔ２Ｏ（２００ｍｌｘ４）を用いた抽出を実施した。次に、その有機相を一緒にして食塩水で洗浄し、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）させ、濾過した後、溶媒を真空下で蒸発させた。収量：Ｄ２（純度が８８％の生成物）を１１．６ｇ。
【００９４】
また、Ｄ１およびＤ２に記述した手順と同様な手順を用いて以下の中間体の調製も実施した。
【００９５】
【化１４】
0005486591.tif 000015
【００９６】
記述６
１−（２−クロロ−３−メチル−４−ピリジニル）−３−［［３−フルオロ−５−（トリフルオロメチル）フェニル］アミノ］−３−（メチルチオ）−２−プロペン−１−オン（Ｄ６）
【００９７】
【化１５】
0005486591.tif 000016
【００９８】
Ｄ２（５．８ｇ、３４．２ミリモル）をＤＭＦ（４０ｍｌ）に溶解させた０℃の溶液にＮａＨ（６０％）（１．６４ｇ、４１ミリモル）を分割して加えた。次に、Ｄ１９（記述Ｄ１７および１８に従って調製）（７．６ｇ、３４．２ミリモル）をＤＭＦ（２０ｍｌ）に入れることで生じさせた溶液を滴下した。その反応混合物を室温で３０分間撹拌した。ＣＨ３Ｉ（４．８５ｇ、４１ミリモル）をゆっくり加えた後の反応混合物を室温で１時間撹拌した。その溶液を冷水（０−５℃）の中に注ぎ込んだ後、ＣＨ２Ｃｌ２を用いた抽出を実施した。その有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過した後、蒸発させた（２ｘ５０ｍｌのトルエンと一緒に蒸発）。その残留物の結晶化をＥｔ２Ｏを用いて実施した。沈澱物を濾過で取り出した後、乾燥させた。収量：Ｄ６（ＬＣＭＳで純度が１００％の生成物であることが分かった）を８．２８ｇ。
【００９９】
以下の中間体の調製を同様な様式で実施した。
【０１００】
【化１６】
0005486591.tif 000017
【０１０１】
記述１２
（２Ｓ）−１−ヒドラジノ−２−ブタノール（Ｄ１２）
【０１０２】
【化１７】
0005486591.tif 000018
【０１０３】
（２Ｓ）−２−エチルオキシラン（２４．５ｇ、４２１．８ミリモル）をヒドラジンの一水和物（１：１）（８４．５ｇ、１６８７．３ミリモル）に溶解させた。次に、その反応混合物を５０℃で２時間撹拌した。次に、その反応混合物に蒸発を５０℃の水浴中で受けさせ、キシレンを添加（ｘ２）して余分なヒドラジン一水和物（１：１）を一緒に蒸発させた。室温に冷却した後に白色の固体を得た。収量：Ｄ１２を３９．３ｇ（８９．４５％）。
【０１０４】
また、Ｄ１２に記述した手順と同様な手順を用いて以下の中間体の調製も実施した。
【０１０５】
【化１８】
0005486591.tif 000019
【０１０６】
記述１４−１６
ａ）２，３−ジヒドロ−ベータ−オキソ−１，４−ベンゾジオキシン−６−プロパン（ジチオ）酸（Ｄ１４）
【０１０７】
【化１９】
0005486591.tif 000020
【０１０８】
ＮａＨ（６０％）（８．６９ｇ、０．２２４モル）をＤＭＦ（１００ｍｌ）に入れることで生じさせた懸濁液を０℃に冷却した。その懸濁液に１−（２，３−ジヒドロ−１，４−ベンゾジオキシン−６−イル）エタノン（２０ｇ、０．１１２モル）をゆっくり加えた。その混合物を室温に加熱して２時間撹拌した。次に、その混合物を再び０℃に冷却した後、ＣＳ２（８．５２ｇ、０．１１２モル）をゆっくり加えた。その反応混合物を更に２時間撹拌した後、それをさらなる精製無しに次の反応段階で用いた。
ｂ）１−（２，３−ジヒドロ−１，４−ベンゾジオキシン−６−イル）−３，３−ビス（メチルチオ）−２−プロペン−１−オン（Ｄ１５）
【０１０９】
【化２０】
0005486591.tif 000021
【０１１０】
この上に示した反応段階で得た反応混合物Ｄ１４（２８．４８ｇ、０．１１２モル）とＤＭＦ（１００ｍｌ）を再び０℃に冷却した後、ＣＨ３Ｉ（３２ｇ、０．２２４モル）をゆっくり加えた。次に、その混合物を室温に温めて３０分間撹拌した。この期間が終了した後の反応混合物を氷の上に注いだ後、その水相に酢酸エチルを用いた抽出を受けさせた。その有機層を乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）させ、濾過した後、溶媒を真空下で蒸発させた。粗生成物をシリカゲル使用カラムクロマトグラフィー（溶離剤：石油エーテル／酢酸エチルを１０／１）で精製した。所望画分を集めた後、溶媒を真空下で蒸発させた。収量：Ｄ１５を２５ｇ（７９．３％）。
ｃ）（２Ｚ）−３−［（３，４−ジフルオロフェニル）アミノ］−１−（２，３−ジヒドロ−１，４−ベンゾジオキシン−６−イル）−３−（メチルチオ）−２−プロペン−１−オン（Ｄ１６）
【０１１１】
【化２１】
0005486591.tif 000022
【０１１２】
Ｄ１５（３ｇ、０．０１０６モル）と３，４−ジフルオロベンゼンアミン（２．０５ｇ、０．０１５９モル）と三フッ化ホウ素−ジエチルエーテル錯体（０．１７ｇ、０．０１０６モル）を無水トルエン（１００ｍｌ）に入れることで生じさせた溶液を２時間還流させた。次に、その反応混合物を冷却した後、塩酸（１０％）そして水で洗浄した。粗生成物をフラッシュクロマトグラフィー（溶離剤：石油エーテル／酢酸エチルを５／１から１／１）で精製した。所望画分を集めた後、溶媒を真空下で蒸発させた。収量：Ｄ１６を２．２ｇ（収率：５７％）。
【０１１３】
記述１７−１８
ａ）３，４−ジフルオロ−５−メトキシベンゼンアミン（Ｄ１７）
【０１１４】
【化２２】
0005486591.tif 000023
【０１１５】
３，４，５−トリフルオロベンゼンアミン（４０ｇ、２７２ミリモル）をＮａＯＭｅ（ＭｅＯＨ中３０％）（２５０ｍｌ）に入れることで生じさせた混合物を還流に１６時間加熱した。次に、その反応混合物を氷の上に３７％のＨＣｌ水溶液（１５０ｍｌ）と一緒に注いだ。ＣＨ２Ｃｌ２を加えた後の反応混合物のｐＨをＮａ２ＣＯ３水溶液でｐＨ＝７−８に調整した。その有機層を分離して乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、濾過した後、溶媒を真空下で蒸発させた。その残留物をシリカゲル使用カラムクロマトグラフィー（溶離剤：５０：５０のヘプタン／ＣＨ２Ｃｌ２から高純度のＣＨ２Ｃｌ２）で精製した。高純度画分を集めた後、溶媒を真空下で蒸発させた。収量：Ｄ１７を２１．３ｇ。
ｂ）１，２−ジフルオロ−５−イソチオシアナト−３−メトキシ−ベンゼン（Ｄ１８）
【０１１６】
【化２３】
0005486591.tif 000024
【０１１７】
２５０ｍｌのフラスコの中でＤ１７（２．２ｇ、１２．３ミリモル）をＣＨ２Ｃｌ２（６０ｍｌ）に溶解させた。１，１’−カルボノチオイルビス−２（１Ｈ）−ピリジノン（３．４２ｇ、１４．７ミリモル）を加えた後の反応混合物を室温で１５時間撹拌した。その反応混合物を水（ｘ２）そして１０％のＮａ２ＣＯ３水溶液で洗浄した。その有機層を分離して乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、濾過した後、溶媒を真空下で蒸発させた。その残留物をシリカゲル使用カラムクロマトグラフィー（溶離剤：ヘプタン：ＣＨ２Ｃｌ２を７０：３０から５０：５０）で精製した。生成物画分を集めた後、溶媒を真空下で蒸発させた。収量：Ｄ１８を２．０２ｇ（８２％）。
【０１１８】
また、Ｄ１７およびＤ１８に記述した手順と同様な手順を用いて以下の中間体の調製も実施した。
【０１１９】
【化２４】
0005486591.tif 000025
【０１２０】
記述２０
２−［［（３，４−ジフルオロ−５−メトキシフェニル）アミノ］チオキソメチル］−１−［３−（ジメチルアミノ）−３−オキソプロピル］−ヒドラジンカルボン酸１，１−ジメチルエチルエステル（Ｄ２０）
【０１２１】
【化２５】
0005486591.tif 000026
【０１２２】
２５０ｍｌのフラスコの中でＤＭＡＡ（２ｇ、２０．２ミリモル）をＥｔＯＨ（１００ｍｌ）に溶解させた。ヒドラジンの一水和物（６４％）（１：１）（２．４ｇ、３０．３ミリモル）を加えた後の反応混合物を室温で２時間撹拌した。溶媒を蒸発させた後の残留物にキシレンを用いた共蒸発を受けさせた（２ｘ１００ｍｌ）。その残留物をＥｔＯＨ（５０ｍｌ）に溶解させて０℃に冷却した後、Ｂｏｃ２Ｏ（ＥｔＯＨ溶液中）を滴下した。次に、その反応混合物を室温になるまでゆっくり温めて更に２時間撹拌した。その反応混合物にＤ１８（２．０２ｇ、１０ミリモル）を加え、一晩撹拌した後、溶媒を真空下で蒸発させた。その残留物をシリカゲル使用フラッシュカラムクロマトグラフィー（Ｂｉｏｔａｇｅフラッシュ精製装置、勾配：ＥｔＯＡｃ／ヘプタンを３０／７０から７０／３０）で精製した。生成物画分を集めた後、溶媒を真空下で蒸発させた。収量：Ｄ２０を５．８９ｇ。
【０１２３】
記述２１−２３
ａ）５−（２−クロロ−６−メチル−４−ピリジニル）−Ｎ−［４−フルオロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル］−１Ｈ−ピラゾール−３−アミン（Ｄ２１）
【０１２４】
【化２６】
0005486591.tif 000027
【０１２５】
ヒドラジンの一水和物（１：１）６４％（０．２４ｇ、４．６６ミリモル）をｔ−ＢｕＯＨ（４０ｍｌ）に入れることで生じさせた混合物にＤ８（１．４５ｇ、３．５８ミリモル）を加えた後、その反応混合物を還流下で２時間撹拌した。溶媒を真空下で蒸発させ、その残留物にＨ２Ｏ（１０ｍｌ）を加えた後、その混合物にＥｔ２Ｏを用いた抽出を受けさせた。その有機層を乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、濾過した後、溶媒を真空下で蒸発させた。収量：Ｄ２１を１．６１ｇ。
【０１２６】
また、Ｄ２１に記述した手順と同様な手順を用いて以下の中間体の調製も実施した。
【０１２７】
【化２７】
0005486591.tif 000028
【０１２８】
ｂ）［５−（２−クロロ−６−メチル−４−ピリジニル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］［４−フルオロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル］−カルバミン酸１，１−ジメチルエチルエステル（Ｄ２２）
【０１２９】
【化２８】
0005486591.tif 000029
【０１３０】
Ｄ２１（１．６５ｇ、４．４６ミリモル）をＤＭＦ（２０ｍｌ）に入れることで生じさせた溶液を０℃に冷却して、これにＮａＨ（純度が６０％）（０．２１ｇ、５．３５ミリモル）を注意深く加えた。その反応混合物を１５分間撹拌した後、Ｂｏｃ２Ｏ（１．１６ｇ、５．３５ミリモル）を加えた。氷浴を取り外した後、その反応混合物を室温になるまで温めた。次に、その反応混合物を１６時間撹拌し、水を添加して反応を消滅させた後、ＥｔＯＡｃ（３ｘ３０ｍｌ）を用いた抽出を実施した。その有機相を一緒にして食塩水で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、濾過した後、溶媒を真空下で蒸発させた。その残留物をシリカゲル使用カラムクロマトグラフィー（Ｂｉｏｔａｇｅフラッシュ精製装置、勾配：ＣＨ２Ｃｌ２／ＣＨ２Ｃｌ２中１０％のＭｅＯＨを１００／０から０／１００）で精製した。収量：Ｄ２２を０．４９ｇ。
ｃ）［５−（２−クロロ−６−メチル−４−ピリジニル）−１−［（３Ｓ）−３−ヒドロキシブチル］−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］［４−フルオロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル］−カルバミン酸１，１−ジメチルエチルエステル（Ｄ２３）
【０１３１】
【化２９】
0005486591.tif 000030
【０１３２】
Ｄ２２（０．３９ｇ、０．８３ミリモル）とＣｓ２ＣＯ３（０．５ｇ９）をＤＭＦ（２０ｍｌ）に溶解させた後、１−（４−メチルベンゼンスルホネート）−１，３−ブタンジオール（０．３ｇ、１．２３ミリモル）を注意深く加えた。その反応混合物を室温で１６時間撹拌した後、水を用いて反応を消滅させそしてＣＨ２Ｃｌ２を用いた抽出を実施した（２ｘ２０ｍｌ）。その有機相を一緒にして食塩水で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、濾過した後、溶媒を真空下で蒸発させた。その残留物をフラッシュクロマトグラフィー（勾配：ＣＨ２Ｃｌ２／ＣＨ２Ｃｌ２中１０％のＭｅＯＨを１００／０から０／１００）で精製した。収量：Ｄ２３を０．５ｇ。
【０１３３】
記述２４−２６
ａ）４−［３−［（３，４−ジフルオロフェニル）アミノ］−１−［（２Ｓ）−２−［［（１，１−ジメチルエチル）ジメチルシリル］オキシ］ブチル］−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］−２−ピリジンカルボン酸メチルエステル（Ｄ２４）
【０１３４】
【化３０】
0005486591.tif 000031
【０１３５】
クロロ（１，１−ジメチルエチル）ジメチルシラン（０．０７０１ｇ、０．４６５ミリモル）と４Ｈ−イミダゾール（０．０５２８ｇ、０．７７５ミリモル）を無水ＤＭＦ（１５ｍｌ）に溶解させた後、Ｅ５（０．１５６ｇ、０．３８８ミリモル）を加えた。その反応混合物を８０℃で４時間撹拌し、室温に冷却し、Ｈ２Ｏの上に注いだ後、Ｅｔ２Ｏを用いた抽出を実施した。その有機層を乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、濾過した後、溶媒を真空下で蒸発させた。その残留物をシリカゲル使用フラッシュカラムクロマトグラフィー（Ｂｉｏｔａｇｅフラッシュ精製装置、勾配：アセトン／ヘプタンを２０／８０から５０／５０）で精製した。収量：Ｄ２４を１９０ｍｇ。
ｂ）４−［３−［（３，４−ジフルオロフェニル）アミノ］−１−［（２Ｓ）−２−［［（１，１−ジメチルエチル）ジメチルシリル］オキシ］ブチル］−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］−２−ピリジンメタノール（Ｄ２５）
【０１３６】
【化３１】
0005486591.tif 000032
【０１３７】
Ｄ２４（０．１８７ｇ、０．３６２ミリモル）とＮａＢＨ４（０．２ｇ）をＴＨＦ（５
ｍｌ）とＭｅＯＨ（５ｍｌ）に入れることで生じさせた混合物を０℃に冷却した後、ＣａＣｌ２・２Ｈ２Ｏ（０．２ｇ）を加えた。その反応混合物を室温になるまで温めて１時間撹拌した。次に、その混合物の反応を飽和ＮＨ４Ｃｌで消滅させた後、ＥｔＯＡｃ（ｘ２）を用いた抽出を一緒にした。その有機層を乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、濾過した後、溶媒を真空下で蒸発させた。その残留物をさらなる精製無しに次の段階で用いた。
ｃ）Ｎ−（３，４−ジフルオロフェニル）−１−［（２Ｓ）−２−［［（１，１−ジメチルエチル）ジメチルシリル］オキシ］ブチル］−５−［２−メトキシメチル）−４−ピリジニル］−１Ｈ−ピラゾール−３−アミン（Ｄ２６）
【０１３８】
【化３２】
0005486591.tif 000033
【０１３９】
Ｄ２５（０．１５ｇ、０．３０７ミリモル）とＥｔ３Ｎ（０．１ｍｌ）をＴＨＦに入れることで生じさせた室温の懸濁液にメタンスルホニルクロライド（０．０２３８ｍｌ、０．３０７ミリモル、１．４８ｇ／ｍｌ）を加えた。１５分経過した時点で前記懸濁液が溶解し、ＮａＯＭｅ（ＭｅＯＨ中３０％）（１．５ｍｌ）を滴下した後、その反応混合物を室温で２時間撹拌した。その混合物の反応を水で消滅させた後、ＥｔＯＡｃを用いた抽出を実施した（ｘ２）。その有機層を乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、濾過した後、溶媒を真空下で蒸発させた。その残留物（Ｄ２６を含有）を精製無しにさらなる反応で用いた。
【０１４０】
Ｂ．最終的化合物の製造
実施例１
５−（２−クロロ−３−メチル−４−ピリジニル）−３−［［３−フルオロ−５−（トリフルオロメチル）フェニル］アミノ］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−１Ｈ−ピラゾール−１−プロパンアミド（Ｅ１）
【０１４１】
【化３３】
0005486591.tif 000034
【０１４２】
３−ヒドラジニル−Ｎ，Ｎ−ジメチルプロパンアミド（０．６５ｇ、４．９５ミリモル）をｔ−ＢｕＯＨ（２０ｍｌ）に入れることで生じさせた混合物にＤ６（記述６に従って調製）（１．０ｇ、２．４８ミリモル）を加えた後、その反応混合物を１５０℃で１６時間撹拌した。次に、溶媒を真空下で蒸発させた後、その残留物をシリカゲル使用フラッシュクロマトグラフィー（Ｂｉｏｔａｇｅフラッシュ精製装置、勾配：アセトン／ヘプタンを２０／８０から５０／５０）で精製した。次に、溶媒を真空下で蒸発させた後、２種類
の画分を集めた。所望画分からＥ１を０．４０ｇ（３４．３％）得た。
【０１４３】
実施例２
ａ）５−（２−クロロ−４−ピリジニル）−３−［（２，２−ジフルオロ−１，３−ベンゾジオキソール−５−イル）アミノ］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−１Ｈ−ピラゾール−１−プロパンアミド（Ｅ２）
【０１４４】
【化３４】
0005486591.tif 000035
【０１４５】
ＺｎＣｌ２（ＴＨＦ中０．５Ｍ）（５．１ｍｌ、２．６ミリモル）をＴＨＦ（３０ｍｌ）に入れることで生じさせた混合物にＤ１１（記述６に従って調製）（０．９８ｇ、２．６ミリモル）および３−ヒドラジニル−Ｎ，Ｎ−ジメチルプロパンアミド（０．７７ｇ、５．９ミリモル）を加えた後、その反応混合物を１５０℃で３時間撹拌した。溶媒を真空下で蒸発させた後、その残留物をシリカゲル使用フラッシュカラムクロマトグラフィー（Ｂｉｏｔａｇｅフラッシュ精製装置、勾配：アセトン／ヘプタンを２０／８０から５０／５０）で精製した。２種類の画分を集めた。所望画分からＥ２を０．３０ｇ（２．５％）得た。
ｂ）５−（２−クロロ−４−ピリジニル）−３−［（２，２−ジフルオロ−１，３−ベンゾジオキソール−５−イル）アミノ］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−１Ｈ−ピラゾール−１−プロパンアミド（Ｅ２）
【０１４６】
【化３５】
0005486591.tif 000036
【０１４７】
３−ヒドラジニル−Ｎ，Ｎ−ジメチルプロパンアミド（０．５０ｇ、３．８ミリモル）をｔ−ＢｕＯＨ（３０ｍｌ）に入れることで生じさせた混合物にＤ１１（記述Ｄ６に従って調製）（０．８５ｇ、２．２ミリモル）を加えた後、１，１，１−トリフルオロメタンスルホン酸ランタン（３＋）塩（３：１）（０．１０５ｇ、２ミリモル）を加えた。その反応混合物を還流下で４８時間撹拌した後、溶媒を真空下で蒸発させた。その残留物をシリカゲル使用フラッシュカラムクロマトグラフィー（Ｂｉｏｔａｇｅフラッシュ精製装置、勾配：アセトン／ヘプタンを２０／８０から５０／５０）で精製することで２種類の画分を集めた。溶媒を真空下で蒸発させた。所望画分からＥ２を０．２０ｇ（２％）得た。
【０１４８】
実施例３
５−（２−クロロ−４−ピリジニル）−３−［（３，４−ジフルオロフェニル）アミノ］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−１Ｈ−ピラゾール−１−プロパンアミド（Ｅ３）
【０１４９】
【化３６】
0005486591.tif 000037
【０１５０】
Ｄ７（記述Ｄ６に従って調製）（０．７１ｇ、０．００２１モル）をｔ−ＢｕＯＨ（５０ｍｌ）に溶解させた後、３−ヒドラジニル−Ｎ，Ｎ−ジメチルプロパンアミド（０．７１ｇ、０．００５５モル）を加えた。その反応混合物を撹拌しながら一晩還流させた後、溶媒を真空下で蒸発させた。生成物を逆相高性能液クロ［Ｓｈａｎｄｏｎ  Ｈｙｐｅｒｐｒｅｐ（商標）Ｃ１８  ＢＤＳ（塩基不活性化シリカ）８μｍ、２５０ｇ、Ｉ．Ｄ．５ｃｍ］で精製した。３種類の可動相を用いて勾配をかけた。相Ａ：水中０．２５％のＮＨ４ＨＣＯ３溶液、相Ｂ：ＣＨ３ＯＨ、相Ｃ：ＣＨ３ＣＮ。２種類の画分を集めた。所望画分からＥ３を０．１４ｇ（１６．５％）得た。
【０１５１】
実施例４
（アルファＳ）−５−（２−クロロ−６−メチル−４−ピリジニル）−３−［［４−フルオロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル］アミノ］−アルファ−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−プロパノール（Ｅ４）
【０１５２】
【化３７】
0005486591.tif 000038
【０１５３】
Ｄ２３（記述Ｄ２３に従って調製）（０．５ｇ、０．９２ミリモル）をＣＨ２Ｃｌ２（２０ｍｌ）に溶解させた後、ＴＦＡ（１．４ｍｌ、１８．４ミリモル）を加えた。その反応混合物を室温で２時間撹拌した。飽和ＮａＨＣＯ３溶液で反応を消滅させた後、ＣＨ２Ｃｌ２（３ｘ３０ｍｌ）を用いた抽出を実施した。その有機相を一緒にして食塩水で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、濾過した後、溶媒を真空下で蒸発させた。その残留物をシリカゲル使用フラッシュクロマトグラフィー（Ｂｉｏｔａｇｅフラッシュ精製装置、勾配：ＣＨ２Ｃｌ２／ＣＨ２Ｃｌ２中１０％のＭｅＯＨを１００／０から０／１００）で精製した。収量：Ｅ４を０．２６ｇ（６３．８１％）。
【０１５４】
実施例５
４−［３−［（３，４−ジフルオロフェニル）アミノ］−１−［（２Ｓ）−２−ヒドロキシブチル］−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］−２−ピリジンカルボン酸メチルエステル（Ｅ５）
【０１５５】
【化３８】
0005486591.tif 000039
【０１５６】
７５ｍｌのステンレス鋼製オートクレーブにＮ２雰囲気下でＥ４８（実施例１に従って調製）（２ｇ、５．２８ミリモル）、Ｐｄ（ＯＡｃ）２（０．０２３６ｇ、０．１０６ミリモル）、１．３ビス（ジフェニルホスフィノ）プロパン（０．０８７ｇ、０．２１１ミリモル）、酢酸カリウム（１．５５ｇ、１５．８ミリモル）およびメタノール／ＴＨＦ（１：１）（４０ｍｌ）を仕込んだ。そのオートクレーブを密封してＣＯで５０バールに加圧した後、反応を１２５℃の温度で１６時間実施した。その残留物をシリカゲル使用フラッシュカラムクロマトグラフィー（Ｂｉｏｔａｇｅフラッシュ精製装置、勾配：アセトン／ヘプタンを２０／８０から７０／３０）で精製することで２種類の画分を得た。所望画分からＥ５を２６７ｍｇ（１３％）得た。
【０１５７】
実施例６
（アルファＳ）−３−［（３，４−ジフルオロフェニル）アミノ］−アルファ−エチル−５−［２−（メトキシメチル）−４−ピリジニル］−１Ｈ−ピラゾール−１−エタノール（Ｅ６）
【０１５８】
【化３９】
0005486591.tif 000040
【０１５９】
Ｄ２６（記述Ｄ２６に従って調製）（０．１５ｇ、０．２９８ミリモル）をＴＢＡＦ（１０ｍｌ）に溶解させた後、その反応混合物を室温で２時間撹拌した。溶媒を真空下で蒸発させ、その残留物をＣＨ２Ｃｌ２に溶解させた後、Ｈ２Ｏで数回洗浄した。その有機層を分離した後、乾燥（ＭｇＳＯ４）させた。油状で残存する濾液を濾過した後、溶媒を真空下で蒸発させた。生成物を逆相高性能液クロ［Ｓｈａｎｄｏｎ  Ｈｙｐｅｒｐｒｅｐ（商標）Ｃ１８  ＢＤＳ（塩基不活性化シリカ）８μｍ、２５０ｇ、Ｉ．Ｄ．５ｃｍ］で精製した。３種類の可動相を用いて勾配をかけた。相Ａ：水中０．２５％のＮＨ４ＨＣＯ３溶液、相Ｂ（任意）：ＭｅＯＨ、相Ｃ：ＣＨ３ＣＮ。画分を集めた後、処理した。所望画分からＥ６を３４．５ｍｇ（２９．８％）得た。
【０１６０】
実施例７
３−［（３，４−ジフルオロフェニル）アミノ］−５−（２，３−ジヒドロ−１，４−ベンゾジオキシン−６−イル）−Ｎ−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−アセトアミド（Ｅ７
）
【０１６１】
【化４０】
0005486591.tif 000041
【０１６２】
Ｅ１０（記述Ｅ１０に従って調製）（０．５５ｇ、１．３２４ミリモル）とＭｅＮＨ２／ＥｔＯＨ（１５ｍｌ、１．３２４ミリモル）の混合物を密封型容器に入れて９０℃に一晩加熱した。その混合物を濃縮した後、その残留物を調製用ＨＰＬＣ（溶離剤：ＣＨ３ＣＮ中０．１％のＴＦＡ／Ｈ２Ｏ中０．１％のＴＦＡ）で精製した。生成物画分を集めた後、飽和ＮａＨＣＯ３溶液で中和した。所望生成物をＥｔＯＡｃ（２ｘ１００ｍｌ）で抽出した。その有機層を分離し、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）させ、濾過した後、溶媒を真空下で蒸発させた。収量：Ｅ７を０．２３０ｇ（４３．６％）。
【０１６３】
実施例８
（アルファＳ）−３−［（３，５−ジフルオロフェニル）アミノ］−アルファ−エチル−５−［２−（エチルアミノ）−４−ピリジニル］−１Ｈ−ピラゾール−１−エタノール（Ｅ８）
【０１６４】
【化４１】
0005486591.tif 000042
【０１６５】
Ｅ４７（実施例１に従って調製）（０．４７ｇ、１．２４ミリモル）をＭｅＯＨ（２０ｍｌ）に溶解させた後、ＥｔＮＨ２（２ｇ）を加えた。その反応混合物を加圧下１６０℃で２４時間撹拌した後、溶媒を真空下で蒸発させた。その残留物を逆相高性能液クロ［Ｓｈａｎｄｏｎ  Ｈｙｐｅｒｐｒｅｐ（商標）Ｃ１８  ＢＤＳ（塩基不活性化シリカ）８μｍ、２５０ｇ、Ｉ．Ｄ．５ｃｍ］で精製した。３種類の可動相を用いて勾配をかけた。相Ａ：水中０．２５％のＮＨ４ＨＣＯ３溶液、相Ｂ（任意）：ＭｅＯＨ、相Ｃ：ＣＨ３ＣＮ。画分を集めた後、逆相高性能液クロ［Ｓｈａｎｄｏｎ  Ｈｙｐｅｒｐｒｅｐ（商標）Ｃ１８  ＢＤＳ（塩基不活性化シリカ）８μｍ、２５０ｇ、Ｉ．Ｄ．５ｃｍ］で再び精製した。２種類の可動相を用いて勾配をかけた。相Ａ：水中０．５％のＮＨ４ＯＡｃ溶液が９０％＋ＣＨ３ＣＮが１０％、相Ｂ：ＣＨ３ＣＮ。画分を集めた後、処理した。所望画分からＥ８を０．０７８９ｇ（１６％）得た。
【０１６６】
実施例９
３−［［３−フルオロ−５−（トリフルオロメチル）フェニル］アミノ］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−５−（３−メチル−４−ピリジニル）−１Ｈ−ピラゾール−１−プロパンアミド（Ｅ９）
【０１６７】
【化４２】
0005486591.tif 000043
【０１６８】
Ｅ１（０．４０ｇ、０．８５ミリモル）をＴＨＦ（５０ｍｌ）に溶解させた後、Ｅｔ３Ｎ（０．５ｍｌ）、１０％のＲａＮｉ（０．１ｇ）およびチオフェン溶液（０．１ｍｌ）を加えた。その反応混合物をＨ２加圧下で一晩撹拌した。溶媒を真空下で蒸発させた後、Ｈ２Ｏ（１０ｍｌ）を加えた。その水相にＥｔＯＡｃ（３ｘ３０ｍｌ）を用いた抽出を受けさせ、その有機層を一緒にして食塩水で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、濾過した後、溶媒を真空下で蒸発させた。その残留物を逆相高性能液クロ［Ｓｈａｎｄｏｎ  Ｈｙｐｅｒｐｒｅｐ（商標）Ｃ１８  ＢＤＳ（塩基不活性化シリカ）８μｍ、２５０ｇ、Ｉ．Ｄ．５ｃｍ］で精製した。２種類の可動相を用いて勾配をかけた。相Ａ：水中０．２５％のＮＨ４ＨＣＯ３溶液、相Ｂ：ＣＨ３ＣＮ。画分を集めた後、処理した。所望画分からＥ９を０．２５ｇ（６７．５５％）得た。
【０１６９】
実施例１０
３−［（３，４−ジフルオロフェニル）アミノ］−５−（２，３−ジヒドロ−１，４−ベンゾジオキシン−６−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−酢酸エチルエステル（Ｅ１０）
【０１７０】
【化４３】
0005486591.tif 000044
【０１７１】
Ｄ１６（０．００１３８モル）と２−ヒドラジニル−酢酸エチルエステルの一塩酸塩（１：１）（０．００２７６モル）とＫ２ＣＯ３（０．００２０６モル）をｔ−ＢｕＯＨ（１００ｍｌ）に入れることで生じさせた混合物を密封型反応槽に入れて８５℃で一晩撹拌した。その反応混合物を冷却し、濾過した後、その濾過の溶媒を真空下で蒸発させた。収量：Ｅ１０を０．５５ｇ（９６．５％）。
【０１７２】
実施例１８５
（アルファＳ）−３−［（３−クロロフェニル）アミノ］−アルファ−エチル−５−［２−メチル−４−ピリジニル］−１Ｈ−ピラゾール−１−エタノール（Ｅ１８５）
【０１７３】
【化４４】
0005486591.tif 000045
【０１７４】
Ｄ２７（４２０ｍｇ、１．０７３ミリモル）と［１，３−ビス［２，６−ビス（１−メチルエチル）フェニル］−２−イミダゾリジニリデン］クロロ（η３−２−プロペニル）パラジウム（ＣＡＳ［４７８９８０−０１−７］、触媒）（６１．６８ｍｇ、０．１０７ミリモル）とＣＨ３ＯＨ中０．５ＭのＮａＯＭｅ（０．６ｍｌ）とｉ−ＰｒＯＨ（４ｍｌ）をマイクロ波下６０℃で１０分間撹拌した。その反応混合物に蒸発、水を用いた洗浄そしてＣＨ２Ｃｌ２を用いた抽出を受けさせた。その有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過した後、蒸発させた。その残留物を高性能液クロで精製した。収量：Ｅ１８５を３０．９ｍｇ（８．０７％）。
【０１７５】
表１および２に示す如き下記の式（Ｉ）で表される化合物の調製を前記実施例（実施例番号）と同様にして実施した。
【０１７６】
【表１】
0005486591.tif 000046
【０１７７】
【表２】
0005486591.tif 000047
【０１７８】
【表３】
0005486591.tif 000048
【０１７９】
【表４】
0005486591.tif 000049
【０１８０】
【表５】
0005486591.tif 000050
【０１８１】
【表６】
0005486591.tif 000051
【０１８２】
【表７】
0005486591.tif 000052
【０１８３】
【表８】
0005486591.tif 000053
【０１８４】
【表９】
0005486591.tif 000054
【０１８５】
【表１０】
0005486591.tif 000055
【０１８６】
【表１１】
0005486591.tif 000056
【０１８７】
【表１２】
0005486591.tif 000057
【０１８８】
【表１３】
0005486591.tif 000058
【０１８９】
【表１４】
0005486591.tif 000059
【０１９０】
【表１５】
0005486591.tif 000060
【０１９１】
【表１６】
0005486591.tif 000061
【０１９２】
【表１７】
0005486591.tif 000062
【０１９３】
【表１８】
0005486591.tif 000063
【０１９４】
【表１９】
0005486591.tif 000064
【０１９５】
分析部分
ＬＣＭＳ
ＬＣＭＳの一般的手順Ａ
脱気装置が備わっている４式ポンプ、オートサンプラー、カラムオーブン（特に明記し
ない限り４０℃に設定）、ダイオードアレイ検出器（ＤＡＤ）および以下の個々の方法に指定する如きカラムを含有して成るＡｌｌｉａｎｃｅ  ＨＴ  ２７９０（Ｗａｔｅｒｓ）装置を用いてＨＰＬＣ測定を実施した。カラムから出る流れを分割してＭＳ検出器に送った。ＭＳ検出器にはエレクトロスプレーイオン化源が備わっていた。０．１秒のドウェル時間を用いて１秒間に１００から１０００まで走査することで質量スペクトルを取得した。毛細管針の電圧を３ｋＶにしそして源の温度を１４０℃に維持した。窒素をネブライザーガスとして用いた。データの取得をＷａｔｅｒｓ−Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ  ＭａｓｓＬｙｎｘ−Ｏｐｅｎｌｙｎｘデータシステムを用いて実施した。
【０１９６】
ＬＣＭＳの一般的手順Ｂ
ポンプ、ダイオードアレイ検出器（ＤＡＤ）（用いた波長は２２０ｎｍ）、カラムヒーターおよび以下の個々の方法に指定する如きカラムを含有して成るＡｇｉｌｅｎｔ  １１００モジュールを用いてＨＰＬＣ測定を実施した。カラムから出る流れを分割してＡｇｉｌｅｎｔ  ＭＳＤ  Ｓｅｒｉｅｓ  Ｇ１９４６ＣおよびＧ１９５６Ａに送った。ＭＳ検出器にはＡＰＩ−ＥＳ（大気圧エレクトロスプレーイオン化）が備わっていた。１００から１０００まで走査することで質量スペクトルを取得した。毛細管針の電圧を正イオン化モードの場合には２５００Ｖにしそして負イオン化モードの場合には３０００Ｖにした。フラグメンテーション電圧を５０Ｖにした。乾燥用ガスの温度を３５０℃に維持して流量を１０  ｌ／分にした。
【０１９７】
ＬＣＭＳ−方法１
一般的手順Ａに加えて、逆相ＨＰＬＣをＸｔｅｒｒａ  ＭＳ  Ｃ１８カラム（３．５μｍ、４．６ｘ１００ｍｍ）を用いて１．６ｍｌ／分の流量で実施した。３種類の可動相（可動相Ａ：２５ｍＭの酢酸アンモニウムが９５％＋アセトニトリルが５％；可動相Ｂ：アセトニトリル；可動相Ｃ：メタノール）を用いて６．５分間かけてＡが１００％からＡが１％でＢが４９％でＣが５０％に至らせ、１分かけてＡが１％でＢが９９％に至らせてその状態を１分間保持した後、再びＡが１００％の平衡状態に１．５分間置く勾配条件で流した。１０μｌの注入体積を用いた。コーン電圧を正イオン化モードの場合には１０Ｖにしそして負イオン化モードの場合には２０Ｖにした。
【０１９８】
ＬＣＭＳ−方法２
一般的手順Ａに加えて、カラムヒーターを６０℃に設定した。逆相ＨＰＬＣをＸｔｅｒｒａ  ＭＳ  Ｃ１８カラム（３．５μｍ、４．６ｘ１００ｍｍ）を用いて１．６ｍｌ／分の流量で実施した。３種類の可動相（可動相Ａ：２５ｍＭの酢酸アンモニウムが９５％＋アセトニトリルが５％；可動相Ｂ：アセトニトリル；可動相Ｃ：メタノール）を用いて６．５分間かけてＡが１００％からＢが５０％でＣが５０％に至らせ、０．５分かけてＢが１００％に至らせそしてその条件を１分間保持しそして再びＡが１００％の平衡状態に１．５分間置く勾配条件で流した。１０μｌの注入体積を用いた。コーン電圧を正イオン化モードの場合には１０Ｖにしそして負イオン化モードの場合には２０Ｖにした。
【０１９９】
ＬＣＭＳ−方法３
一般的手順Ｂに加えて、逆相ＨＰＬＣをＹＭＣ−Ｐａｃｋ  ＯＤＳ−ＡＱ、５０ｘ２．０ｍｍ  ５μｍカラムを用いて０．８ｍｌ／分の流量で実施した。２種類の可動相（可動相Ａ：ＴＦＡが０．１％の水；可動相Ｂ：ＴＦＡが０．０５％のアセトニトリル）を用いた。最初にＡが１００％を１分間保持した。次に、４分間かけてＡが４０％でＢが６０％に至らせて２．５分間保持する勾配をかけた。２μｌの典型的注入体積を用いた。オーブンの温度を５０℃にした（ＭＳ極性：正）。
【０２００】
ＬＣＭＳ−方法４
一般的手順Ｂに加えて、逆相ＨＰＬＣをＹＭＣ−Ｐａｃｋ  ＯＤＳ−ＡＱ、５０ｘ２．
０ｍｍ  ５μｍカラムを用いて０．８ｍｌ／分の流量で実施した。２種類の可動相（可動相Ａ：ＴＦＡが０．１％の水；可動相Ｂ：ＴＦＡが０．０５％のアセトニトリル）を用いた。最初にＡが９０％でＢが１０％の状態を０．８分間保持した。次に、３．７分間かけてＡが２０％でＢが８０％に至らせて３分間保持する勾配をかけた。２μｌの典型的注入体積を用いた。オーブンの温度を５０℃にした（ＭＳ極性：正）。
【０２０１】
ＬＣＭＳ−方法５
一般的手順Ａに加えて、逆相ＨＰＬＣをＣｈｒｏｍｏｌｉｔｈ（４．６ｘ２５ｍｍ）を用いて３ｍｌ／分の流量で実施した。３種類の可動相（可動相Ａ：２５ｍＭの酢酸アンモニウムが９５％＋アセトニトリルが５％；可動相Ｂ：アセトニトリル；可動相Ｃ：メタノール）を用いて０．９分間かけてＡが９６％からＢが２％でＣが２％からＢが４９％でＣが４９％に至らせ、０．３分かけてＢが１００％に至らせて０．２分間保持する勾配条件で流した。２μｌの注入体積を用いた。コーン電圧を正イオン化モードの場合には１０Ｖにしそして負イオン化モードの場合には２０Ｖにした。
【０２０２】
ＬＣＭＳ−方法６
一般的手順Ｃに加えて、逆相ＵＰＬＣ（超性能液クロ）を橋状エチルシロキサン／シリカハイブリッド（ＢＥＨ）Ｃ１８カラム（１．７μｍ、２．１ｘ５０ｍｍ；Ｗａｔｅｒｓ
Ａｃｑｕｉｔｙ）を用いて０．８ｍｌ／分の流量で実施した。２種類の可動相（可動相Ａ：Ｈ２Ｏ中０．１％の蟻酸／メタノールが９５／５；可動相Ｂ：メタノール）を用いて１．３分間かけてＡが９５％でＢが５％からＡが５％でＢが９５％に至らせて０．２分間保持する勾配条件で流した。０．５μｌの注入体積を用いた。コーン電圧を正イオン化モードの場合には１０Ｖにしそして負イオン化モードの場合には２０Ｖにした。
【０２０３】
ＬＣＭＳ−方法７
一般的手順Ｃに加えて、逆相ＵＰＬＣ（超性能液クロ）を橋状エチルシロキサン／シリカハイブリッド（ＢＥＨ）Ｃ１８カラム（１．７μｍ、２．１ｘ５０ｍｍ；Ｗａｔｅｒｓ
Ａｃｑｕｉｔｙ）を用いて０．８ｍｌ／分の流量で実施した。２種類の可動相（Ｈ２Ｏ中２５ｍＭの酢酸アンモニウム／アセトニトリルが９５／５；可動相Ｂ：アセトニトリル）を用いて１．３分間かけてＡが９５％でＢが５％からＡが５％でＢが９５％に至らせて０．３分間保持する勾配条件で流した。０．５μｌの注入体積を用いた。コーン電圧を正イオン化モードの場合には３０Ｖにしそして負イオン化モードの場合には３０Ｖにした。
【０２０４】
ＬＣＭＳ−方法８
一般的手順Ｃに加えて、逆相ＵＰＬＣ（超性能液クロ）を橋状エチルシロキサン／シリカハイブリッド（ＢＥＨ）Ｃ１８カラム（１．７μｍ、２．１ｘ５０ｍｍ；Ｗａｔｅｒｓ
Ａｃｑｕｉｔｙ）を用いて０．８ｍｌ／分の流量で実施した。２種類の可動相（Ｈ２Ｏ中２５ｍＭの酢酸アンモニウム／アセトニトリルが９５／５；可動相Ｂ：アセトニトリル）を用いて１．３分間かけてＡが９５％でＢが５％からＡが５％でＢが９５％に至らせて０．３分間保持する勾配条件で流した。０．５μｌの注入体積を用いた。コーン電圧を正イオン化モードの場合には１０Ｖにしそして負イオン化モードの場合には２０Ｖにした。
【０２０５】
ＬＣＭＳ−方法９
一般的手順Ａに加えて、逆相ＨＰＬＣをＸｔｅｒｒａ  ＭＳ  Ｃ１８カラム（３．５μｍ、４．６ｘ１００ｍｍ）を用いて１．６ｍｌ／分の流量で実施した。３種類の可動相（可動相Ａ：２５ｍＭの酢酸アンモニウムが９５％＋アセトニトリルが５％；可動相Ｂ：アセトニトリル；可動相Ｃ：メタノール）を用いて６．５分間かけてＡが１００％からＡが１％でＢが４９％でＣが５０％に至らせ、１分かけてＡが１％でＢが９９％に至らせてその状態を１分間保持した後、再びＡが１００％の平衡状態に１．５分間置く勾配条件で流した。１０μｌの注入体積を用いた。コーン電圧を正イオン化モードの場合には１０Ｖに
しそして負イオン化モードの場合には２０Ｖにした。
【０２０６】
融点
いろいろな化合物が示す融点の測定をＭｅｔｔｌｅｒ−ＴｏｌｅｄｏのＤＳＣ８２３ｅ（上付き文字ａで示す）を用いて実施した。融点の測定を３０℃／分の温度勾配で実施した。値はピーク値である。
【０２０７】
いろいろな化合物が示す融点の測定をＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒのＤｉａｍｏｎｄ  ＤＳＣ（上付き文字ｂで示す）を用いて実施した。融点の測定を１０℃／分の温度勾配で実施した。最大温度を３００℃にした。値はピーク値または溶融範囲（ピークの開始点からピークの終点まで）のいずれかである。
【０２０８】
いろいろな化合物が示す融点の測定をＳｈａｎｇｈａｉ  Ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ  ａｎｄ
Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ  Ｃｏ．Ｌｔｄ．から購入したＷＲＳ−２Ａ融点装置（上付き文字ｃで示す）を用いて実施した。融点の測定を０．２−５．０℃／分の線形加熱速度で実施した。報告する範囲は溶融範囲である。最大温度を３００℃にした。
【０２０９】
【表２０】
0005486591.tif 000065
【０２１０】
【表２１】
0005486591.tif 000066
【０２１１】
【表２２】
0005486591.tif 000067
【０２１２】
【表２３】
0005486591.tif 000068
【０２１３】
【表２４】
0005486591.tif 000069
【０２１４】
【表２５】
0005486591.tif 000070
【０２１５】
Ｄ．薬理学的実施例
実施例Ｄ．１：Ｃａ２＋フラックスイメージング（ＦＤＳＳ）（プロトコルＢ）
材料
ａ）検定用緩衝液
ＨＥＰＥＳ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、ベルギー）を１０ｍＭ、ＣａＣｌ２を最終濃度が５ｍＭになる量、ウシ血清アルブミン（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ  ＮＶ、ベルギー）を０．１％補充したハンクス緩衝食塩溶液（ＨＢＳＳ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、ベルギー）。
ｂ）カルシウム感受性色素−Ｆｌｕｏ−４ＡＭ
Ｆｌｕｏ−４ＡＭ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ、米国）をプルロン酸（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ、米国）を１０％含有させておいたＤＭＳＯに溶解させることでストック溶液を生じさせ、これをプロベネシド（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ  ＮＶ、ベルギー）を５ｍＭ補充しておいた検定用緩衝液で最終濃度が２μＭになるように希釈した。
ｃ）３８４穴プレート
ＰＤＬで前以て被覆しておいたＢｌａｃｋ  ３８４穴プレート黒色／透明プレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ，Ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｅｄ、米国）。
ｄ）カルシウムフラックス測定。
【０２１６】
機能的薬剤選別装置（ＦＤＳＳ、Ｈａｍａｍａｔｓｕ）を用いて細胞内遊離カルシウムフラックスシグナルを測定した。
【０２１７】
方法
ｈα７−ｗｔ  ｎＡＣｈＲを発現する細胞の単層を多穴プレート、詳細にはポリ−Ｄ−リシンで被覆しておいた３８４穴プレート（側面が黒色で底が透明）内で２４時間増殖させた後、蛍光カルシウム指示液を充填、特別な態様ではｆｌｕｏ−４  ＡＭを充填して１２０分間置いた。
【０２１８】
ＦＤＳＳ中の細胞蛍光を絶えず監視しながら試験を受けさせるべき化合物を前記充填を受けさせておいた細胞にα７ニコチン性受容体作動薬と一緒に加えることでＰＡＭ活性を実時間で検出した。化合物が示すピーク蛍光反応の方が作動薬単独による反応よりも大きい場合、そのような化合物はα７  ｎＡＣｈＲ  ＰＡＭであると見なした。特別な態様におけるα７ニコチン性受容体作動薬はコリンであり、より特別な態様では、コリンを最大濃度以下の１００μＭの濃度で加えた。本発明のさらなる設定では、試験を受けさせる化合物の添加をα７ニコチン性受容体作動薬を添加する前、特別な態様では前記作動薬を添加する１０分前に実施した。
【０２１９】
コリンまたは検定用緩衝液を単独で加えた穴が示したピーク蛍光における差からコリンに対する対照反応を各プレート毎に計算した。本発明の化合物に試験を０．０１μＭから３０μＭの範囲の濃度で受けさせた。化合物に試験を３０μＭの濃度で受けさせた時にコリンのシグナルを少なくとも５００％高くする場合、そのような化合物は興味の持たれる活性を示すと見なした（ＰＡＭが存在しない時に１００μＭのコリンが示す効力を１００
％として定義した）。上部高原部を伴う明確なＳ字形曲線が得られた時の最大効果の半分に関係した濃度としてＥＣ５０（またはｐＥＣ５０）を測定した。当該化合物が最大濃度の時に示す活性が上部高原部に到達しなかった場合、ＥＣ５０（またはｐＥＣ５０）がその最大濃度より低いとして定義した（表８に「＜５」として示した）。
【０２２０】
本化合物は、また、ヒト野生型α７受容体を安定に過剰発現するＧＨ４Ｃｌ細胞における全細胞パッチクランプ電気生理学で測定した時にコリンに対する反応を増強する効果も有する。
【０２２１】
実施例Ｄ．２：パッチクランプ電流記録
哺乳動物細胞を用いたパッチクランプ記録は、リガンド依存性イオンチャンネルのサブユニットであると考えられる膜結合蛋白質の機能を評価する有力な手段を与えるものである。前記蛋白質を内因性もしくは外因性リガンドで活性化させると受容体に関連した孔が開放されて、その中を通ってイオンが電気化学的勾配を下流に流れる。ｈα７−ｗｔ  ｎＡＣｈＲを発現するＧＨ４Ｃｌ組換え型細胞株の場合にカルシウムが前記受容体を優先的に通り抜けることは、ＡＣｈ、コリンおよび他のニコチン性リガンドによって活性化した時にカルシウムが細胞の中に流れ込むことでカルシウムの流れがもたらされることを意味する。前記受容体は作動薬の存在下で急速に脱感作を起こすことから、作動薬を加えると同時に受容体の反応がある程度または完全に脱感作を起こすことがないように、溶液の切り替えを非常に迅速（＜１００ミリ秒）に行うことを可能にする添加装置を用いることが重要である。従って、ニコチン性効力の増強を評価するに便利な２番目の技術は、ｈα７−ｗｔ  ｎＡＣｈＲ発現ＧＨ４Ｃｌ細胞を用いたパッチクランプ記録を迅速添加装置と一緒に用いる技術である。
【０２２２】
材料
ａ）検定用緩衝液
外部記録用溶液を１５２ｍＭのＮａＣｌ、５ｍＭのＫＣｌ、１ｍＭのＭｇＣｌ２、１ｍＭのカルシウム、１０ｍＭのＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．３で構成させた。内部記録用溶液を１４０ｍＭのＣｓＣｌ、１０ｍＭのＨＥＰＥＳ、１０ｍＭのＥＧＴＡ、１ｍＭのＭｇＣｌ２、ｐＨ７．３で構成させた。
ｂ）パッチクランプ記録をパッチクランプ増幅器（Ｍｕｌｔｉｃｌａｍｐ  ７００Ａ、Ａｘｏｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、ＣＡ、米国）を用いて実施した。ｈα７−ｗｔ  ｎＡＣｈＲ発現ＧＨ４Ｃｌ細胞にパッチクランプを内部記録用溶液を充填した時の先端抵抗が１．５−３ＭΩのホウケイ酸塩ガラス電極を用いて全細胞形態（Ｈａｍｉｌｌ他、１９８１）で受けさせた。膜抵抗が＞５００ＭΩ、より好適には１ＧΩになるようにしそして直列抵抗が＜１５ＭΩになるようにすることに加えて直列抵抗を少なくとも６０％補うことで細胞に関する記録を実施した。膜電位を−７０ｍＶに固定した。
ｃ）作動薬
ＡＣｈ、コリンをＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ  ＮＶ（ベルギー）から購入した。
ｄ）化合物の添加
対照、作動薬およびＰＡＭ化合物をｈα７−ｗｔ  ｎＡＣｈＲ発現ＧＨ４Ｃｌ細胞に加える目的で溶液を迅速に切り替えるに適した（切り替え解像時間が＜１００ミリ秒の）１６チャンネルＤｙｎｆｌｏｗ  ＤＦ−１６マイクロ流体工学装置（Ｃｅｌｌｅｃｔｒｉｃｏｎ、スウェーデン）を用いた。
【０２２３】
方法
ｈα７−ｗｔ  ｎＡＣｈＲ発現ＧＨ４Ｃｌ細胞をＤｙｎａｆｌｏｗ潅流チャンバ内で外部記録用溶液に入れた後、２０分間に及んで沈降させた。個々の細胞に全細胞パッチを受けさせ（ｗｈｏｌｅ−ｃｅｌｌ  ｐａｔｃｈｅｄ）た後、パッチピペットを用いてそれをチャンバの底から穏やかに吸い上げて外部記録用溶液の連続的に流れる潅流（１２μｌ／
分）の中に入れた。試験を受けさせるべき化合物をその充填した細胞に前以て加えておいた後に細胞膜の電流を絶えず監視しながらα７ニコチン性受容体作動薬を加えることでＰＡＭの活性を実時間で検定した。化合物が示す電流反応の方が作動薬単独による反応よりも大きい場合、そのような化合物はα７  ｎＡＣｈＲ  ＰＡＭであると見なした。特別な態様では、α７ニコチン性受容体作動薬を非選択的ニコチン性作動薬で活性化させ、より特別な態様における作動薬はコリンであり、更により特別な態様では、コリンを最大濃度以下の１ｍＭの濃度で加えた。本発明のさらなる設定では、試験を受けさせる化合物の添加をα７ニコチン性受容体作動薬を添加する前、より特別な態様では前記作動薬を添加する３０秒前、更により特別には前記作動薬を添加する５秒前に実施した。コリンを最大量以下の量で加えた時に各細胞の中に誘発された電流の曲線下の面積（２５０ミリ秒間）から対照反応を計算した。その曲線下の面積は経時的な正味の電流の積分値であり、チャンネルを通る全イオンフラックスの一般的代表例である。正のアロステリックモジュレーターによって誘発された作動薬効力向上の計算を作動薬の反応の「曲線下の面積」（ＡＵＣ）の増強パーセントとして実施した。本発明の化合物によってＡＵＣが対照のＡＵＣよりも大きくなるように増強されることは、それらが有用な治療活性を有すると予測されることを示している。ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ，Ｉｎｃ．、サンディエゴ、ＣＡ）を用いてデータをロジスティック方程式に適合させることでＥＣ５０値（効力）、最大効果（効力％）および勾配の傾きを推定した。
【０２２４】
【表２６】
0005486591.tif 000071
【０２２５】
【表２７】
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【０２２６】
【表２８】
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【０２２７】
【表２９】
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【０２２８】
【表３０】
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【０２２９】
【表３１】
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