(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
クスノキ科（Lauraceae科）のハマビア（Litsea）属に属する植物の葉抽出物の脂溶性画分を有効成分とする皮膚保湿剤。
【請求項２】
上記植物がLitsea polyanthaである、請求項１に記載する皮膚保湿剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、皮膚保湿剤および外用の血行促進剤に関する。さらに本発明は、当該皮膚保湿剤および血行促進剤を含有することにより高い保湿作用および血行促進作用を有する皮膚外用剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
皮膚角質層の水分量は、肌の状態と密接に関連し、健康な素肌を保つためには、角質層に適度な水分が保持されていることが必要である。角質層の水分保持には、天然保湿因子（NMF：Natural Moisturizing Factor）の寄与が大きいことが知られており（非特許文献１）、特にＮＭＦの主成分であるアミノ酸が角質層の水分保持に深く関わっているとされている。しかし、角質層内のアミノ酸量は、加齢や外部環境によって減少し、これに伴って角質層の水分保持機能が低下することが報告されている（非特許文献２および３参照）。加齢に伴って肌の潤いや柔軟性が低下して、シワが形成されるのも、この角質層の水分保持機能の低下が一因となっている。
【０００３】
従来から、かかる水分保持機能を改善し、皮膚の保湿を高めるために、各種の保湿剤（例えば、グリセリン、プロピレングリコール、ソルビット、トレハロース、1,3-ブチレングリコール、ヒアルロン酸やそのナトリウム塩など）が開発され、提供されている。これらの保湿剤は、皮膚に塗布することにより経皮的散逸水分量（TEWL）を抑制し、結果として皮膚の水分を維持して肌に潤いをもたらす効果を奏している。また尿素も、ＮＭＦの構成成分の一つであり、保湿剤として汎用されている成分である。尿素の角質層内での保湿機構としては「水素結合」が挙げられ、水素結合によって角質層内で水分が保持され、皮膚の乾燥が防止されると考えられている。
【０００４】
また保湿剤として、植物抽出物や菌体抽出物などの天然物に由来する成分を使用することも種々提案されている（例えば、特許文献１〜６など参照）。これらの文献には、具体的には、カジュマル、クノニア科植物、ウェルウィッチア科植物、ハゼリソウ科植物、ならびにフォウクィエリア科植物の抽出物が保湿剤として、また細胞賦活剤として有効であることが記載されている。
【０００５】
また、特許文献７には、シダ目シシガシラ科ヒリュウシダ属に属する植物およびオシダ科イノデ属に属する植物の抽出物に細胞賦活作用があり老化防止剤として有効であることが記載されている。
【非特許文献１】平尾哲二「ＮＭＦの最新研究」、Fragrance J., 17 (2000)
【非特許文献２】河野義行「保湿・肌荒れ防止用化粧品の有用性と製品開発」、J. Soc. Cosmet. Chem. Japan36(4) (2002)
【非特許文献３】正木仁ら「角質水分と老化」、Fragrance J., 8 (1993)
【特許文献１】特開平８―２０８４２７号公報
【特許文献２】特開２００７−２３８４５５号公報
【特許文献３】特開２００７−２４６４８９号公報
【特許文献４】特開２００７−２４６４９０号公報
【特許文献５】特開２００７−２４６４９１号公報
【特許文献６】特開２００７−２４６４９２号公報
【特許文献７】特開２００３−３２１３７７号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
このように、植物抽出物を保湿剤または細胞賦活剤として利用しようとする試みは多く存在するものの、これらの保湿剤や細胞賦活剤といえども機能が十分でなく、未だ完全に満足できるものであるとは言い難い面がある。そこで本発明が解決すべき課題は、保湿機能に優れている天然由来成分ならびに血流を促進して細胞を賦活する効果を発揮し得る天然由来成分を見出し、この優れた成分を利用した皮膚保湿剤ならびに血行促進剤を提供すること、さらに当該皮膚保湿剤の保湿作用および血行促進剤の血行促進作用（血流改善作用）を活かした皮膚外用剤を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
上記課題を解決するために、本発明者らが鋭意検討を重ねたところ、クスノキ科（Lauraceae科）のハマビア（Litsea）属に属する植物に優れた皮膚保湿作用および血行促進作用があることを見出し、当該植物の加工物が、保湿作用および血行促進作用を効果とする皮膚外用剤の有効成分として有効に利用できることを確認して、本発明を完成するにいたった。
【０００８】
すなわち、本発明は下記の態様を有するものである。
【０００９】
（Ｉ）皮膚保湿剤
（I-1）クスノキ科（Lauraceae科）のハマビア（Litsea）属に属する植物の加工物を有効成分とする皮膚保湿剤。
（I-2）クスノキ科（Lauraceae科）のハマビア（Litsea）属に属する植物の加工物を、皮膚動脈の交感神経活動を低下させる有効量含有する皮膚保湿剤。
（I-3）上記植物が、Litsea polyanthaである（I-1）または（I-2）に記載する皮膚保湿剤。
（I-4）上記植物の加工物が上記植物の葉の加工物である、（I-1）乃至（I-3）のいずれかに記載する皮膚保湿剤。
（I-5）上記植物の加工物が上記植物の葉の粉砕物または葉抽出物の脂溶性画分である、（I-1）乃至（I-4）のいずれかに記載する皮膚保湿剤。
【００１０】
（II）外用の血行促進剤
（II-1）クスノキ科（Lauraceae科）のハマビア（Litsea）属に属する植物の加工物を有効成分とする外用の血行促進剤。
（II-2）クスノキ科（Lauraceae科）のハマビア（Litsea）属に属する植物の加工物を、皮膚動脈の交感神経活動を低下させる有効量含有する血行促進剤。
（II-3）上記植物が、Litsea polyanthaである（II-1）または（II-2）に記載する血行促進剤。
（II-4）上記植物の加工物が上記植物の葉の加工物である、（II-1）乃至（II-3）のいずれかに記載する血行促進剤。
（II-5）上記植物の加工物が上記植物の葉の粉砕物または葉抽出物の脂溶性画分である、（II-1）乃至（II-4）のいずれかに記載する血行促進剤。
【００１１】
（III）皮膚外用剤
（III-1）クスノキ科（Lauraceae科）のハマビア（Litsea）属に属する植物の加工物を有効成分とする皮膚外用剤。
（III-2）クスノキ科（Lauraceae科）のハマビア（Litsea）属に属する植物の加工物を、皮膚動脈の交感神経活動を低下させる有効量含有する皮膚外用剤。
（III-3）上記植物が、Litsea polyanthaである（III-1）または（III-2）に記載する皮膚外用剤。
（III-4）上記植物の加工物が上記植物の葉の加工物である、（III-1）乃至（III-3）のいずれかに記載する皮膚外用剤。
（III-5）上記植物の加工物が上記植物の葉の粉砕物または葉抽出物の脂溶性画分である、（III-1）乃至（III-4）のいずれかに記載する皮膚外用剤。
（III-6）（I-1）〜（I-5）のいずれかに記載する皮膚保湿剤または（II-1）〜（II-5）のいずれかに記載する血行促進剤を、皮膚動脈の交感神経活動を低下させる有効量含有する皮膚外用剤。
【発明の効果】
【００１２】
本発明によれば、優れた保湿効果を発揮する皮膚保湿剤、ならびに血流促進作用を有する血行促進剤を提供することができる。また、当該皮膚保湿剤は、保湿を効果・効能とする皮膚外用剤（化粧料や外用医薬品を含む）、特に化粧料の保湿成分として有効に使用することができる。また当該血行促進剤は、血流促進を効果・効能とする皮膚外用剤（外用医薬品や化粧料を含む）の血行促進成分として有効に使用することができる。
【００１３】
また本発明によれば、上記の皮膚保湿剤を皮膚外用剤の有効成分として配合することにより、優れた保湿作用を有する皮膚外用剤（化粧料や外用医薬品を含む）を提供することができる。さらに本発明によれば、上記の血行促進剤を皮膚外用剤の有効成分として配合することにより、顔面、頭部、四肢または全身の血流を促進して、血行障害によって生じる障害（新陳代謝の低下によるくすみ、シミやしわの発生、脱毛や薄毛）や病態（冷え症、冷え症による肩こり、鬱血、じょくそう、レイノー病、エコノミー症候群など）を予防または改善する効果を発揮する皮膚外用剤（化粧料や外用医薬品を含む）を提供することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１４】
（Ｉ）クスノキ科ハマビア属に属する植物の加工物
本発明が対象とする植物は、クスノキ科ハマビア属に属する植物であれば特に制限されない。具体的には、バリバリノキ（Litseaacuminata）、カゴノキ（Litsea lancifolia(Sieb. et Zucc.) F. Vills）、ハマビア（Litsea japonica）、Litsea calicaris、Litsea cubeba、Litsea ichangensis、Litsea citrata、およびLitsea polyanthaなどを挙げることができる。好ましくは、Litsea polyanthaである。
【００１５】
本発明において当該植物の使用部位は特に制限されず、樹木全体を使用しても、またその一部（例えば、葉、花、種子、根、茎、芽など）を使用してもよい。簡便に利用できる観点からは、葉、根、茎、樹皮および種子を好適に挙げることができるが、有効性の点からは葉または種子、特に葉を用いることが好ましい。
【００１６】
本発明が対象とする加工物としては、上記植物の樹木全体またはその一部の破砕物、粉砕物、搾汁、および抽出物を挙げることができる。なお、破砕物または粉砕物は、生の状態であってもまた乾燥した状態であってもよい。
【００１７】
溶媒抽出は、上記植物の樹木全体またはその一部を、生または乾燥した状態で行うことができる。抽出効率を考えると、細切や粉砕等の処理を行った後に抽出を行うことが好ましい。抽出は、抽出溶媒に浸漬するか、超臨界流体や亜臨界流体を用いた抽出方法でも行うことができる。抽出効率を上げるため、撹拌や抽出溶媒中でホモジナイズしてもよい。抽出温度としては、制限されないが、５℃程度から抽出溶媒の沸点以下の温度を挙げることができる。また抽出時間は、抽出溶媒の種類や抽出温度によっても異なるが、通常１時間〜１４日間程度を挙げることができる。
【００１８】
抽出溶媒としては、水；メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール等の低級アルコール；１、３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、ジプロピレングリコール、グリセリン等の多価アルコール；エチルエーテル、プロピルエーテル等のエーテル類；酢酸ブチル、酢酸エチル等のエステル類；アセトン、エチルメチルケトン等のケトン類；クロロホルム、ジクロロメタンなどの有機溶媒を挙げることができる。好ましくは上記植物から脂溶性画分を抽出することができる有機溶媒である。なお、上記溶媒は、１種単独で使用しても、また２種以上を任意に組み合わせて使用することもできる。かかる混合溶媒としてはクロロホルムとメタノール若しくはエタノールとの混合物を例示することができる。さらに、二酸化炭素、エチレン、プロピレン、エタノール、メタノール、アンモニアなどの１種又は２種以上の超臨界流体や亜臨界流体を用いてもよい。
【００１９】
斯くして得られるハマビア属植物の溶媒抽出物は、そのままでも本発明の加工物として使用することができるが、必要に応じて、濃縮または乾固したものを、再度非極性溶媒に再度溶解して使用してもよい。また、本発明の効果を損なわない範囲で、さらに脱色、脱臭、脱塩等の精製処理やカラムクロマトグラフィー等による分画処理を行って得られる分画を本発明の加工物として用いることもできる。ハマビア属植物の前記抽出物やその処理物及び分画物は、各処理及び分画後に凍結乾燥し、用時に溶解して用いることもできる。
【００２０】
（II）皮膚保湿剤
前述するハマビア属植物の加工物は、後述する実験例１に示すように優れた保湿作用を有するため、皮膚保湿を効果・効能とする皮膚保湿剤、特に経皮投与形態を有する皮膚保湿剤の有効成分として使用することができる。すなわち、本発明によれば、前述するハマビア属植物の加工物を有効成分とする、経皮投与形態の皮膚保湿剤を提供することができる。
【００２１】
本発明の皮膚保湿剤に含まれるハマビア属植物の加工物の配合割合としては、保湿作用を有するかぎり特に制限されず、総量として0.1〜100重量％の範囲から適宜選択することができる。好ましくは1〜100重量％、より好ましくは2.5〜100重量％を例示することができる。
【００２２】
当該保湿剤の形態は、経皮投与形態であれば特に制限されず、例えば、液剤形態、乳液形態、クリーム形態、軟膏形態、ゲル形態、エアゾール形態、およびパックなどを含む貼付剤形態などを挙げることができる。
【００２３】
なお、本発明の皮膚保湿剤は、保湿を作用効果とする皮膚外用剤（保湿用皮膚外用剤）の有効成分としても使用することができる。かかる皮膚外用剤には、必須成分である上記皮膚保湿剤に加えて、通常皮膚外用剤（例えば、医薬品、医薬部外品、皮膚化粧料、毛髪化粧料、および洗浄料を含む）に配合される成分、例えば界面活性剤（乳化剤を含む）、油性成分、アルコール類、可溶化剤、増粘剤、酸化防止剤、キレート剤、ｐＨ調整剤、香料、色素、紫外線吸収または散乱剤、ビタミン類、アミノ酸類、および防腐剤を、必要に応じて配合することができる。
【００２４】
また、本発明の効果を損なわない範囲において、他の保湿剤を配合してもよい。保湿剤としては、制限されないが、例えばグリセリン、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、ソルビトール、ポリグリセリン、ポリエチレングリコール、ジプロピレングリコール等の多価アルコール類；アミノ酸、乳酸ナトリウム、ピロリドンカルボン酸ナトリウムなどのＮＭＦ成分；ヒアルロン酸、コラーゲン、ムコ多糖類、コンドロイチン硫酸等の水溶性高分子物質を挙げることができる。
【００２５】
皮膚外用剤に配合される本発明の皮膚保湿剤の割合としては、皮膚外用剤が本発明の皮膚保湿剤に起因して保湿作用を有する割合であればよく、特に制限されないが、ハマビア属植物の乾燥物の量に換算して、通常0.1〜100重量％の範囲から適宜選択することができる。好ましくは1〜100重量％、より好ましくは2.5〜100重量％を例示することができる。
【００２６】
皮膚外用剤の形態は、特に制限されず、例えばローション（液剤、分散液）形態、乳液形態、クリーム形態、軟膏形態、エアゾール形態、フォーム形態、またはパップやパックを含む貼付剤形態を有する、外用医薬品、皮膚化粧料、頭皮化粧料、毛髪化粧料（養毛剤やトリートメント剤を含む）、および洗浄剤（ボディー洗浄剤、毛髪洗浄剤、洗顔料を含む）を挙げることができる。
【００２７】
（III）血行促進剤
前述するハマビア属植物の加工物は、後述する実験例２に示すように優れた血行促進作用を有するため、血流促進を効果・効能とする血行促進剤、特に経皮投与形態を有する血行促進剤の有効成分として使用することができる。すなわち、本発明によれば、前述するハマビア属植物の加工物を有効成分とする、経皮投与形態の血行促進剤を提供することができる。
【００２８】
本発明の血行促進剤に含まれるハマビア属植物の加工物の配合割合としては、血流促進作用を有するかぎり特に制限されず、総量として0.1〜100重量％の範囲から適宜選択することができる。好ましくは1〜100重量％、より好ましくは2.5〜100重量％を例示することができる。
【００２９】
当該血行促進剤の形態は、経皮投与形態であれば特に制限されず、例えば、液剤形態、乳液形態、クリーム形態、軟膏形態、ゲル形態、エアゾール形態、およびパックなどを含む貼付剤形態などを挙げることができる。
【００３０】
なお、本発明の血行促進剤は、血流促進を作用効果とする皮膚外用剤（血行促進用皮膚外用剤）の有成分としても使用することができる。かかる皮膚外用剤には、必須成分である上記血行促進剤に加えて、通常皮膚外用剤（例えば、医薬品、医薬部外品、皮膚化粧料、頭皮化粧料、および洗浄料を含む）に配合される成分、例えば界面活性剤（乳化剤を含む）、油性成分、アルコール類、可溶化剤、増粘剤、酸化防止剤、キレート剤、ｐＨ調整剤、香料、色素、紫外線吸収または散乱剤、ビタミン類、アミノ酸類、および防腐剤を、必要に応じて配合することができる。
【００３１】
また、本発明の効果を損なわない範囲において、他の血行促進剤を配合してもよい。血行促進剤としては、制限されないが、例えばトウガラシチンキやγ−オリザノールなどを挙げることができる。
【００３２】
皮膚外用剤に配合される本発明の血行促進剤の割合としては、皮膚外用剤が本発明の血行促進剤に起因して血行促進作用を有する割合であればよく、特に制限されないが、ハマビア属植物の乾燥物の量に換算して、通常0.1〜100重量％の範囲から適宜選択することができる。好ましくは1〜100重量％、より好ましくは2.5〜100重量％を例示することができる。
【００３３】
当該皮膚外用剤の形態は、特に制限されず、例えばローション（液剤、分散液）形態、乳液形態、クリーム形態、軟膏形態、エアゾール形態、フォーム形態、またはパップやパックを含む貼付剤形態を有する、外用医薬品、皮膚化粧料、頭皮化粧料、毛髪化粧料（養毛剤やトリートメント剤を含む）、および洗浄剤（ボディー洗浄剤、毛髪洗浄剤、洗顔料を含む）を挙げることができる。当該皮膚外用剤は、前述する本発明の血行促進剤を有効成分として含有することにより、顔面、頭部、四肢または全身の血流を促進して、血行障害によって生じる障害（新陳代謝の低下によるくすみ、シミやしわの発生、脱毛や薄毛）や病態（冷え症、冷え症による肩こり、鬱血、じょくそう、レイノー病、エコノミー症候群など）を予防または改善する効果を発揮することができる。
【実施例】
【００３４】
以下、本発明を実験例によって更に詳細に説明する。但し、これらの実験例は本発明を何ら限定するものではない。なお、下記の実験例において、特に言及しない限り、％は重量％を意味するものとする。
【００３５】
参考実験例
（Ｉ）皮膚動脈交感神経（遠心枝）の電気活動の測定 
（１）実験方法
（1-1）被験試料の調製
尿素を同量の水に溶解し、これを基材クリーム（組成：ジプロピレングリコール、セタノール、1，3-ブチレングリコール、ステアリルアルコール、ステアリン酸グリセリル、ステアリン酸、ポリエチレングルコール-75、ステアレス-20、セテス-20、ホホバ油、水添ポリイソブテン、ベヘン酸エトキシジグリコール、フェノキシエタノール、エチルパラベン、およびメチルパラベン）に混合して、１０重量％の尿素を含むクリーム（尿素含有クリーム）を調製した。
【００３６】
（1-2）被験動物
予め１週間、24±1℃、12時間周期の明期（照明80lx、7:00-19:00）及び暗期（19:00-7:00）の環境下で飼育したラット（雄、Wistar rat、250〜300g）を被験動物（非ヒト動物）として用いた。なお、実験前、ラットには飼料（MF type; Oriental Yeast）と水を自由に摂取させた。
【００３７】
匂い刺激による交感神経に対する影響が生じないように、実験開始の5日前から毎日ペントバルビタール（30mg／kg）麻酔下で、被験動物の鼻粘膜に、１％の硫酸亜鉛水溶液を塗布して10分間放置する処置を行うことによって、無臭症処理を行った（Kolunie JM. Stern JM: Horm Behav 1995, 29:492-518）。
【００３８】
上記ラットを６時間絶食させた後、ウレタン麻酔下（1g/kgのウレタン水溶液を腹腔内投与内）で、上記で調製した尿素含有クリーム、またはコントロールとして基材クリームのみを、それぞれ２ｇずつ尻尾に塗布して、塗布直後から60分間、皮膚動脈交感神経の遠心枝の神経活動（電気活動）の変化を測定した。
【００３９】
皮膚動脈交感神経（遠心枝）の電気活動の測定は、具体的には、ラットの皮膚動脈交感神経の遠心枝を、実体顕微鏡下で、銀電極に釣り上げて行った。乾燥を防ぐ為に電極は予め液体パラフィンとワセリンの混合物に十分浸しておいた。得られた神経の電気活動は、差動増幅器にて増幅し、オシロスコープにてモニターした。皮膚動脈交感神経の神経活動を検出するために、ノイズ信号をウィンドウ・ディスクリミネーターにより分離し、スパイク信号に変換した。得られたスパイク信号はレイトメーターにより５秒間のスパイク数としてカウントし、A／D(アナログ／デジタル)変換後、パソコンに記録した（図１参照）。電気活動の記録は60分間行った（図２Ｂ参照）。
【００４０】
（２）実験結果
結果を図２に示す。なお、図２の（Ａ）は実測データであり、（Ｂ）はこの実測データを、塗布前の実測データを100%として、グラフ化したものである。なお、図２（Ａ）の上段は基材クリーム（コントロール）を塗布したラットの実測データ〔図（Ｂ）では、―■―で示す〕、下段は尿素含有クリームを塗布したラットの実測データ〔図（Ｂ）では、―●―で示す〕を示す。
【００４１】
図２（Ａ）および（Ｂ）からわかるように、基材クリーム（コントロール）を尻尾に塗布したラットの皮膚動脈交感神経の活動（電気活動）は、基材クリーム塗布前と殆ど変わらなかったのに対して、尿素含有クリームを尻尾に塗布したラットの皮膚動脈交感神経の活動は有意に低下した。
【００４２】
この結果からわかるように、10％尿素含有クリームを皮膚に塗布することによって、皮膚の動脈を支配する交感神経の活動が低下した。一方、基材クリームを尻尾に塗布したラット（比較群）の皮膚交感神経の神経活動（電気活動）は、クリーム塗布前と変わらず、実験群のような低下は認められなかった。
【００４３】
（II）皮膚水分蒸散量の測定 
無麻酔下で、体重約250gのヘアレスHWY雄ラットの背中の皮膚の左側2×6cm（12cm２）に、参考実験例（I）で調製した10％尿素含有クリーム160mgを、また背中の皮膚の右側2×6cm（12cm２）に、コントロールとして基材クリーム160mgを塗布した。塗布から18時間後および24時間後に、上記処置した各皮膚にポータブル水分蒸散計（VapoMter Delfin Technologies Ltd製）を押しつけて、皮膚水分蒸散量（Transepideremal water loss, TEWL）を測定した。
【００４４】
結果を図３に示す。なお、結果は、塗布前の皮膚水分蒸散量を100％として、塗布から18時間後および24時間後の皮膚水分蒸散量の相対量（％）を示す。
【００４５】
＜考察＞
上記の実験結果から、保湿剤として周知の尿素を10％含有するクリーム（尿素含有クリーム）を皮膚に塗布することによって、皮膚水分蒸散量が低下し（実験（II））、また同時に皮膚動脈交感神経の活動（電気活動）が低下することが確認された。このことから、皮膚に対する保湿作用と皮膚動脈交感神経の活動（電気活動）との間には相関関係があり、皮膚動脈交感神経の活動（電気活動）を測定しその低下を指標とすることによって、被験物質の皮膚に対する保湿作用を評価することができることが判明した。
【００４６】
実験例１  ハマビア属植物抽出物の保湿作用の評価
クスノキ科ハマビア属に属する植物として、Litsea polyantha（以下、単に「リトセア」という）の葉の粉砕物および溶媒抽出物を被験試料として用いて、参考実験例の（Ｉ）および（II）に記載する方法に従って、皮膚動脈交感神経（遠心枝）の電気活動および皮膚水分蒸散量を測定した。
【００４７】
（１）被験試料の調製
上記リトセアの葉の粉砕物および溶媒抽出物に、基材クリーム（組成：ジプロピレングリコール、セタノール、1，3-ブチレングリコール、ステアリルアルコール、ステアリン酸グリセリル、ステアリン酸、ポリエチレングルコール-75、ステアレス-20、セテス-20、ホホバ油、水添ポリイソブテン、ベヘン酸エトキシジグリコール、フェノキシエタノール、エチルパラベン、およびメチルパラベン）２ｇを混合して、被験試料としてリトセアを含むクリーム（リトセア含有クリーム）を調製した。
【００４８】
なお、溶媒抽出物として、下記の方法で調製した脂溶性画分と水溶性画分を用いた。
【００４９】
＜溶媒抽出物の調製＞
(a)脂溶性画分：リトセアの葉50mgに、水１ml、メタノール2.5mlおよびクロロホルム1.25mlを加え、室温下に10分間放置した後、更にクロロホルム1.25mlを加えてボルテックスにて、十分に撹拌する。これに、更に水を1.25ml加えて（最終的に水：メタノール：クロロホルムの比率は0.9：1：1とした）遠心した後、下層のクロロホルム層を採取し、シャーレで風乾する。このシャーレの内容物を0.5mlのクロロホルムに溶解し、これを脂溶性画分とする。
【００５０】
(b)水溶性画分：上記遠心によって得られた上層の水層（約３ml）を、遠心濃縮器（Centrifugal concenrator,CC-101型、トミー精工社製）により乾固し、これを0.5mlの水に溶解して水溶性画分とする。
【００５１】
なお、これらの脂溶性画分および水溶性画分をそれぞれ基材クリーム２ｇと混合して、被験試料（脂溶性分画試料、水溶性分画試料）として使用した。
【００５２】
（２）実験結果
（2-1）リトセアの葉粉砕物を配合したリトセア含有クリーム（20〜50mg/2g）に関する皮膚動脈交感神経の電気活動の測定結果を図４に、またそのうち、リトセア含有クリーム（50mg/2g、リトセアの葉粉砕物2.5％含有）を皮膚に塗布した時の皮膚水分蒸散量を測定した結果を図５に示す。なお、図４の（Ａ）は実測データであり、（Ｂ）はこの実測データを、塗布前の実測値を100％として、グラフ化したものである。なお、図５において、実線（―●―）は基材クリーム（コントロール）を使用した場合の結果を、また破線（--△--）はリトセア含有クリームを使用した場合の結果を示す。
【００５３】
これらの結果からわかるように、基材クリーム（コントロール）を尻尾に塗布したラットの皮膚動脈交感神経の活動（電気活動）は、基材クリーム塗布前と殆ど変わらなかったのに対して（結果示さず）、リトセア含有クリームを尻尾に塗布したラットの皮膚動脈交感神経の活動は著しく低下した。また、リトセア含有クリームを皮膚に塗布することによって、皮膚の動脈を支配する交感神経の活動の低下（図４）に連動して皮膚水分蒸散量も低下した（図５）。一方、基材クリームを塗布したラット（比較群）の皮膚水分蒸散量は抑制されなかった。
【００５４】
この結果から、クスノキ科ハマビア属に属する植物であるリトセアに、皮膚からの水分蒸散を抑制して皮膚の保湿性を維持向上する作用（保湿作用）があることが判明した。
【００５５】
（2-2）上記被験試料の調製の項で述べた方法で作成したリトセアの葉の抽出物（水溶性画分、脂溶性画分）を配合したリトセア含有クリーム（水溶性分画試料、脂溶性分画試料）に関する皮膚動脈交感神経の電気活動の測定結果を図６に示す。図中、実線（―●―）はリトセアの葉の水溶性画分の結果であり、破線（---●---）はリトセアの葉の脂溶性画分の結果である。なお、図の（Ａ）は実測データであり、（Ｂ）はこの実測データを、塗布前の実測値を100％として、グラフ化したものである。
【００５６】
この結果からわかるように、リトセアの脂溶性画分を含有するクリームを尻尾に塗布したラットの皮膚動脈交感神経の活動は低下したのに対して、リトセアの水溶性画分は、皮膚動脈交感神経の活動（電気活動）を低下させなかった。このことから、リトセアの脂溶性画分が保湿の有効画分であり、当該画分に保湿作用を発揮する有効成分が含まれていると考えられる。
【００５７】
実験例２  ハマビア属植物抽出物の血流促進作用の評価
Wistar系雄ラット（体重約350g）の尻尾と両足の毛のない部分（足裏）に、リトセアの葉粉砕物を配合したリトセア含有クリーム（50mg/2g）（実験例１参照）、または基材クリーム2g（コントロール）をそれぞれ塗布した。尻尾の基部の定点に、レーザー血流計(ADVANCE LASER FLOWMETER ALF21, Advance社製)のレーザー先端を手術用テープ（サージカルテープ）にて固定し、血流を測定した。測定値はml/min/組織重量100gで得られたものを、最初の測定値を100％として百分率にて表した。実際の０分の測定値の絶対値は、３〜５ml/min/組織重量100gの間であった。
【００５８】
結果を図７に示す。図中、実線（―□―）はリトセア含有クリームを塗布した時の結果であり、破線（---●---）は基材クリームを塗布した時の結果である。この結果から、リトセアを含有するクリームを経皮投与することによって、皮膚の血流が促進されることが判明した。
【００５９】
＜考察＞
皮膚の動脈は交感神経による支配を受けており、交感神経終末から放出されるノルアドレナリンはα1およびα2アドレナリン受容体を介して皮膚の血管を収縮させる（W.F. Ganon, Reviw of Medical Physiology, Lange Medical Books, pp227, 2005）。一方、皮膚の動脈が副交感神経の神経支配を受けているという報告はない。従って，皮膚の動脈を神経支配する交感神経活動が低下すれば皮膚の血管が拡張し、その結果血流が増加することになる。前述する本発明の実験例１と実験例２の結果は、この生体反応をまさに反映したものであり、リトセアに、皮膚の交感神経活動を低下させて血流増加（血行促進）作用があることを示すものである。なお、実験例１で示したリトセアの保湿作用は、血流が増加して皮膚細胞への酸素や栄養素の供給が増加することによって得られる効果であると考えられる。
【００６０】
製剤処方例
本発明の皮膚外用剤の一態様を下記に示す。なお、ここで「ハナビア属植物の加工物」として、実験例２で調製したリトセア葉の脂溶性画分を使用した
処方例１  乳液
1.スクワラン                                                 １０．０（重量％）
2.メチルフェニルポリシロキサン                                 ４．０
3.水素添加パーム核油                                           ０．５
4.水素添加大豆リン脂質                                         ０．１
5.モノステアリン酸ポリオキシエチレンソルビタン（２０Ｅ．Ｏ．） １．３
6.モノステアリン酸ソルビタン                                   １．０
7.グリセリン                                                   ４．０
8.パラオキシ安息香酸メチル                                     ０．１
9.カルボキシビニルポリマー                                     ０．１５
10.精製水                                                    ５６．３５
11.アルギニン（１重量％水溶液）                              ２０．０
12.ハナビア属植物の加工物                                      ２．５
【００６１】
製法：１〜６の油相成分を８０℃にて加熱溶解する。一方７〜10の水相成分を８０℃にて加熱溶解する。これに前記油相成分を攪拌しながら加え、ホモジナイザーにより均一に乳化する。乳化終了後、冷却を開始し、11と12を順次加え、均一に混合する。
【００６２】
処方例２  化粧水
１．エタノール                                            １５．００（重量％）
２．ポリオキシエチレン（４０Ｅ．Ｏ．）硬化ヒマシ油          ０．３０
３．香料                                                    ０．１０
４．精製水                                                ８０．８８
５．クエン酸                                                ０．０２
６．クエン酸ナトリウム                                      ０．１０
７．グリセリン                                              １．００
８．ヒドロキシエチルセルロース                              ０．１０
９．ハナビア属植物の加工物                                  ２．５０
【００６３】
製法：１に２及び３を溶解する。溶解後、４〜８を順次添加した後、十分に攪拌し、９を加え、均一に混合する。
【００６４】
処方例３ クリーム
１．スクワラン                                     １０．０（重量％）
２．ステアリン酸                                     ２．０
３．水素添加パーム核油                               ０．５
４．水素添加大豆リン脂質                             ０．１
５．セタノール                                       ３．６
６．親油型モノステアリン酸グリセリン                 ２．０
７．グリセリン                                     １０．０
８．パラオキシ安息香酸メチル                         ０．１
９．アルギニン（２０重量％水溶液）                 １５．０
10．精製水                                         ３９．２
11．カルボキシビニルポリマー（１重量％水溶液）     １５．０
12．ハナビア属植物の加工物                           ２．５
【００６５】
製法：１〜６の油相成分を８０℃にて加熱溶解する。一方７〜10の水相成分を８０℃にて加熱溶解する。これに前記油相成分を攪拌しながら加え、ホモジナイザーにより均一に乳化する。乳化終了後、11を加え、冷却を開始し、４０℃にて12を加え、均一に混合する。
【００６６】
処方例４    美容液
１．精製水                                       ２５．９５(重量％)
２．グリセリン                                   １０．０
３．ショ糖脂肪酸エステル                           １．３
４．カルボキシビニルポリマー（１重量％水溶液）   １７．５
５．アルギン酸ナトリウム(１重量％水溶液)         １５．０
６．モノラウリン酸ポリグリセリル                   １．０
７．マカデミアナッツ油脂肪酸フィトステリル         ３．０
８．N-ラウロイル-L-グルタミン酸
ジ（フィトステリル−２−オクチルドデシル）         ２．０
９．硬化パーム油                                   ２．０
10．スクワラン（オリーブ由来）                     １．０
11．ベヘニルアルコール                             ０．７５
12．ミツロウ                                       １．０
13．ホホバ油                                       １．０
14．１、３−ブチレングリコール                   １４．０
15．Ｌ−アルギニン（１０重量％水溶液）             ２．０
16．ハナビア属植物の加工物                         ２．５
【００６７】
製法：１〜６の水相成分を混合し、７５℃にて加熱溶解する。一方、７〜14の油相成分を混合し、７５℃にて加熱溶解する。次いで、上記水相成分に油相成分を添加して予備乳化を行った後、ホモミキサーにて均一に乳化する。乳化終了後に冷却を開始し、５０℃にて15を加える。さらに４０℃まで冷却し、16を加え、均一に混合する。
【００６８】
処方例５  水性ジェル
１．カルボキシビニルポリマー                         ０．５（重量％）
２．精製水                                         ８６．７
３．水酸化ナトリウム（１０重量％水溶液）             ０．５
４．エタノール                                     １０．０
５．パラオキシ安息香酸メチル                         ０．１
６．香料                                             ０．１
７．ハナビア属植物の加工物                           ２．０
８）ポリオキシエチレン（６０Ｅ．Ｏ．）硬化ヒマシ油   ０．１
【００６９】
製法：１を２に加え、均一に攪拌した後、３を加える。均一に攪拌した後、４に予め溶解した５を加える。均一に攪拌した後、予め混合しておいた６〜８を加え、均一に攪拌混合する。
【００７０】
処方例６  クレンジング料
１．スクワラン                                     ８１．０（重量％）
２．イソステアリン酸ポリオキシエチレングリセリル   １５．０
３．精製水                                           ３．０
４．ハナビア属植物の加工物                           １．０
製法：１と２を均一に溶解する。これに、３と４を順次加え、均一に混合する。
【００７１】
処方例７    洗顔フォーム
１．ステアリン酸                             １６．０（重量％）
２．ミリスチン酸                             １６．０
３．親油型モノステアリン酸グリセリン           ２．０
４．グリセリン                               ２０．０
５．水酸化ナトリウム                           ７．５
６．ヤシ油脂肪酸アミドプロピルベタイン         １．０
７．精製水                                   ３６．５
８．ハナビア属植物の加工物                     １．０
【００７２】
製法：１〜４の油相成分を８０℃にて加熱溶解する。一方５〜７の水相成分を８０℃にて加熱溶解し、油相成分と均一に混合撹拌する。冷却を開始し、４０℃にて８を加え、均一に混合する。
【００７３】
処方例８  油中水型エモリエントクリーム
１．流動パラフィン                         ３０．０(重量％)
２．マイクロクリスタリンワックス             ２．０
３．ワセリン                                 ５．０
４．ジグリセリンオレイン酸エステル           ５．０
５．塩化ナトリウム                           １．３
６．塩化カリウム                             ０．１
７．プロピレングリコール                     ３．０
８．１、３−ブチレングリコール               ５．０
９．パラオキシ安息香酸メチル                 ０．１
10．ハナビア属植物の加工物                   ２．５
11．精製水                                 ４５．９
12．香料                                     ０．１
【００７４】
製法：５と６を11の一部に溶解して５０℃とし、５０℃に加熱した４に撹拌しながら徐々に加える。これを混合した後、７０℃にて加熱溶解した１〜３に均一に分散する。これに７〜10を11の残部に７０℃にて加熱溶解したものを撹拌しながら加え、ホモミキサーにて乳化する。乳化終了後に冷却を開始し、４０℃にて12を加え、均一に混合する。
【００７５】
処方例９    パック
１．精製水                                         ６３．９(重量％)
２．ポリビニルアルコール                           １２．０
３．エタノール                                     １７．０
４．グリセリン                                       ５．０
５．ポリエチレングリコール（平均分子量１０００）     ２．０
６．ハナビア属植物の加工物                           ０．１
【００７６】
製法：２と３を混合し、８０℃に加温した後、８０℃に加温した１に溶解する。均一に溶解した後、４と５を加え、攪拌しながら冷却を開始する。４０℃まで冷却し、６と７を加え、均一に混合する。
【００７７】
処方例１０  入浴剤
１．香料                                 ０．３(重量％)
２．ハナビア属植物の加工物               １．０
３．炭酸水素ナトリウム                 ５０．０
４．硫酸ナトリウム                     ４８．７
製法：１〜４を均一に混合する。
【００７８】
処方例１１    ヘアーワックス
１．ステアリン酸                                   ３．０(重量％)
２．マイクロクリスタリンワックス                   ２．０
３．セチルアルコール                               ３．０
４．高重合メチルポリシロキサン                     ２．０
５．メチルポリシロキサン                           ５．０
６．ポリ（オキシエチレン・オキシプロピレン）
メチルポリシロキサン共重合体                       １．０
７．パラオキシ安息香酸メチル                       ０．１
８．１、３−ブチレングリコール                     ７．５
９．アルギニン                                     ０．７
10．精製水                                       ７４．６
11．ハナビア属植物の加工物                         １．０
12．香料                                           ０．１
【００７９】
製法：１〜６の油相成分を混合し、７５℃にて加熱溶解後する。一方、７〜10の水相成分を７５℃にて加熱溶解し、前記油相成分を加え、ホモミキサーにて乳化する。乳化終了後に冷却を開始し、４０℃にて11と12の成分を加え、均一に混合する。
【００８０】
処方例１２    ヘアートニック
１．エタノール                           ５０．０(重量％)
２．精製水                               ４８．９
３．ハナビア属植物の加工物                 １．０
４．香料                                   ０．１
製法：１〜４の成分を混合、均一化する。
【図面の簡単な説明】
【００８１】
【図１】本発明で使用する皮膚動脈交感神経の電気活動の測定方法を示す概略図である。ここでは、投与方法として尻尾への経皮投与を例とし、また電気活動の測定部位として、当該尻尾の皮膚動脈交感神経の遠心枝を例として記載する。
【図２】（Ａ）は基材クリーム（上欄）または尿素含有クリーム（下欄）を皮膚に塗布した場合の皮膚動脈交感神経の遠心枝の活動（電気活動）の経時的変化（実測データ）を示す図である。（Ｂ）はそれをグラフ化したものである（実験例１）。なお、（Ｂ）の縦軸は皮膚動脈交感神経の電気活動を意味し、各クリームを塗布するまえの電気活動を100％としてグラフ化した。
【図３】ヘアレスラットの背中に、基材クリーム（―○―）または尿素含有クリーム（―▲―）を塗布した場合の、各水分蒸散量（％）を示す。なお、水分蒸散量（％）は、各クリームを塗布する前の水分蒸散量を１００％とした百分率で表した（以下、同じ）。
【図４】リトセア葉粉砕物を含有するクリーム（20mg〜50mg/2g）塗布の際の皮膚動脈交感神経の電気活動の測定結果を示す。（Ａ）は実測データを示し、（Ｂ）はそれをグラフ化したものである。（Ｂ）の縦軸は皮膚動脈交感神経の電気活動を意味し、各クリームを塗布するまえの電気活動を100％としてグラフ化した（実験例１）。
【図５】ヘアレスラットの背中に、基材クリーム（―●―）またはリトセア葉粉砕物を含有するクリーム（50mg/2g）（---△---）を塗布した場合の、各水分蒸散量（％）を示す（実験例１）。
【図６】リトセア葉の水溶性画分を含有するクリーム、およびリトセア葉の脂溶性画分を含有するクリーム塗布の際の皮膚動脈交感神経の電気活動の測定結果示す。（Ａ）は実測データを示し、（Ｂ）はそれをグラフ化したものである。（Ｂ）の縦軸は皮膚動脈交感神経の電気活動を意味し、各クリームを塗布するまえの電気活動を100％としてグラフ化した（実験例１）。
【図７】リトセア葉粉砕物を含有するクリーム（50mg/2g）および基材クリーム（コントロール）を各々２g皮膚に塗布したときの、皮膚血流の変化を示す。縦軸は、血流（ml/min/組織重量100g）を、最初の測定値を100％として百分率に換算した値を示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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