(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記一般式［１］
0005492084.tif 000078
（式中、Ｒ１及びＲ２は夫々独立して水素原子、炭素数１〜３の直鎖アルキル基又はハロゲン原子を表し、Bzはベンゼン環を表す。）で示される化合物と、
下記一般式［２］
0005492084.tif 000079
（式中、Ｒ９は水素原子、炭素数１〜３の直鎖アルキル基又はハロゲン原子を表し、Ｒ10は直鎖状の炭素数１〜３のアルキレン基を表し、Ｒ11及びＲ12は夫々独立して水素原子又は直鎖状の炭素数１〜６のアルキル基を表す）で示される化合物とを重合して得られる架橋性コポリマーのグリシジル基に、陰イオン交換基を導入して得られるポリマーであって、一般式[１]で示される化合物と一般式[２]で示される化合物のモル比が60〜90：10〜40であり、細孔径が3〜15nmで比表面積が200〜1000m2/gであるポリマーを含んでなる、末端に酸性基を有するパーフルオロ化合物測定用充填剤。
【請求項２】
パーフルオロ化合物の末端の酸性基が、カルボキシル基又はスルホ基である請求項１に記載の充填剤。
【請求項３】
陰イオン交換基が、３級アミノ基である、請求項１又は２に記載の充填剤。
【請求項４】
陰イオン交換基が、モルホリノ基又はジエチルアミノ基である、請求項１又は２に記載の充填剤。
【請求項５】
一般式[1]で示される化合物がジビニルベンゼンである、請求項１〜４の何れかに記載の充填剤。
【請求項６】
一般式[2]で示される化合物が下記一般式[2']
0005492084.tif 000080
で示される化合物である、請求項１〜５の何れかに記載の充填剤。
【請求項７】
請求項１〜６の何れかに記載の充填剤を充填した、末端に酸性基を有するパーフルオロ化合物測定用前処理カラム。
【請求項８】
請求項７記載のカラムを用いることを特徴とする、末端に酸性基を有するパーフルオロ化合物の測定方法。
【請求項９】
末端に酸性基を有するパーフルオロ化合物を含有する試料を請求項７記載のカラムに通液して、当該パーフルオロ化合物を吸着する工程、当該パーフルオロ化合物を溶出液で溶出する工程、得られた当該パーフルオロ化合物を測定する工程からなる、当該パーフルオロ化合物の測定方法。
【請求項１０】
下記一般式［１］
0005492084.tif 000081
（式中、Ｒ１及びＲ２は夫々独立して水素原子、炭素数１〜３の直鎖アルキル基又はハロゲン原子を表し、Bzはベンゼン環を表す。）で示される化合物と、
下記一般式［２］
0005492084.tif 000082
（式中、Ｒ９は水素原子、炭素数１〜３の直鎖アルキル基又はハロゲン原子を表し、Ｒ10は直鎖状の炭素数１〜３のアルキレン基を表し、Ｒ11及びＲ12は夫々独立して水素原子又は直鎖状の炭素数１〜６のアルキル基を表す）で示される化合物とを重合して得られる架橋性コポリマーのグリシジル基に、下記一般式[3]
0005492084.tif 000083
（式中、Ｒ３は、それぞれ独立して炭素数１〜３の直鎖アルキル基を、Ｒ４は、炭素数１〜６の直鎖アルキル基を表す）で示されるアンモニウム基を導入して得られるポリマーであって、一般式[１]で示される化合物と一般式[２]で示される化合物のモル比が60〜90：10〜40であって、細孔径が3〜15nmで比表面積が200〜1000m2/gであるポリマー。
【請求項１１】
一般式[3]のＲ３がメチル基、Ｒ４がエチル基である、請求項１０に記載のポリマー。
【請求項１２】
ポリマーが、一般式[1]で示される化合物と一般式[2]で示される化合物と、更に下記一般式[4]
0005492084.tif 000084
（式中、３個のＲ15は、それぞれ独立して炭素数１〜３の直鎖アルキレン基を表し、３個のＲ16は夫々独立して水素原子、炭素数１〜３の直鎖アルキル基又はハロゲン原子を表す）で示される化合物を含むモノマーを重合して得られるもののグリシジル基に、一般式[3]で示されるアンモニウム基を導入して得られるものでポリマーであって、一般式[１]で示される化合物と一般式[２]で示される化合物と一般式[３]で示される化合物のモル比が60〜85：14〜30：1〜10である、請求項１０又は１１記載のポリマー。
【請求項１３】
一般式[4]のＲ15がメチレン基、Ｒ16が水素原子である、請求項１２に記載のポリマー。
【請求項１４】
一般式[1]で示される化合物が、ジビニルベンゼンである、請求項１０〜１３の何れかに記載のポリマー。
【請求項１５】
一般式[2]で示される化合物が、下記一般式［2'］で示される化合物
0005492084.tif 000085
である、請求項１０〜１４の何れかに記載のポリマー。
【請求項１６】
請求項１０〜１５の何れかに記載のポリマーを含んでなる、薬物測定用充填剤。
【請求項１７】
請求項１６に記載の充填剤を充填した薬物測定用前処理カラム。
【請求項１８】
請求項１７記載のカラムを用いることを特徴とする、薬物の測定方法。
【請求項１９】
薬物を含有する試料を、請求項１７記載のカラムに通液して、当該薬物を吸着する工程、当該薬物を溶出液で溶出する工程、溶出された薬物を測定する工程からなる、当該薬物の測定方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規ポリマー、該ポリマーを含んでなる、末端に酸性基を有するパーフルオロ化合物測定用充填剤、該充填剤が充填されたカラム、及び当該カラムを用いる末端に酸性基を有するパーフルオロ化合物の測定方法、並びに、上記ポリマーを含んでなる薬物測定用充填剤、該充填剤が充填されたカラム、及び当該カラムを用いる薬物の測定方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
パーフルオロ化したフッ素化合物であるパーフルオロオクタンスルホン酸(PFOS)、パーフルオロオクタン酸(PFOA)等の末端に酸性基を有するパーフルオロ化合物は、耐熱性、耐薬品性、耐候性など優れた性質を有するため、家庭用品、建材、半導体等種々の工業製品に広く使用されている。しかし、このような酸性基を有するパーフルオロ化合物は、水溶性で水環境に移行しやすく、且つ化学的に非常に安定で分解しにくいため、河川、湖沼、海水等の水中に残留し、人や生物の体内にも蓄積されていることが近年明らかとなってきている。そのため、地球環境汚染の要監視項目として注目され、末端に酸性基を有するパーフルオロ化合物による環境汚染について全国規模での調査が実施されている。そして、その調査における、環境水中に含まれるパーフルオロ化合物の微量分析法としては、固相抽出カラムを用いて前処理した試料をLC/MS/MS等で分析する方法等でなされている。例えば、Journal of Chromatography A, 19093(2005)89-97（非特許文献）等には、前処理用カラムを用いた固相抽出方法を用いて、末端に酸性基を有するパーフルオロ化合物を測定する方法が記載されている。しかしながら、末端に酸性基を有するパーフルオロ化合物は末端の酸性基やその炭素数の違いにより、10〜20種類存在しており、上記文献中で実施されている測定方法では、末端に酸性基を有するパーフルオロ化合物全てを同時に測定することはできないことを我々は確認した。そのため、これら種々の末端に酸性基を有するパーフルオロ化合物を同時に且つ効率よく測定し得る方法の開発が望まれていた。
一方、近年、生体試料中に含まれる薬剤（薬物）検査のニーズが高まっている。特にスポーツの世界におけるドーピング検査は種々の薬物を検査する必要があり、且つそれが微量であっても検出ミスがないようにする必要がある。通常、このような薬物検査は、前処理カラムを使用して固相抽出し、得られた抽出液をさらに高速液体クロマトグラフィーやガスクロマトグラフィーを用いて分析・検出することによりなされる。しかしながら、上記のように薬物検査は、種々の薬物を対象にして行われるため、塩基性、中性或いは酸性の化合物の何れであっても吸着することができる前処理カラムの開発が望まれていた。一方、特表2002-51574等には、そのような吸着対象の広いカラム（充填剤）として、イオン交換基、疎水性成分及び親水性極性成分を有する多孔質樹脂化合物が記載されている。しかしながら、このような化合物であっても上述したような対象成分全てを効率よく吸着することはできておらず、更なる改良が求められていた。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
【特許文献１】特表2002-51574号公報
【非特許文献】
【０００４】
【非特許文献１】Journal of Chromatography A, 19093(2005)89-97
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本願発明者らは、上記状況に鑑み鋭意研究を重ねた結果、下記一般式［１］
0005492084.tif 000002
【０００６】
（式中、Ｒ１及びＲ２は夫々独立して水素原子、炭素数１〜３の直鎖アルキル基又はハロゲン原子を表し、Bzはベンゼン環を表す。）で示される化合物と、
下記一般式［２］
0005492084.tif 000003
【０００７】
（式中、Ｒ９は水素原子、炭素数１〜３の直鎖アルキル基又はハロゲン原子を表し、Ｒ10は直鎖状の炭素数１〜３のアルキレン基を表し、Ｒ11及びＲ12は夫々独立して水素原子又は直鎖状の炭素数１〜６のアルキル基を表す）で示される化合物とを重合して得られるもののグリシジル基に、陰イオン交換基を導入して得られるポリマーが、上記問題を解決する充填剤となり得ることを見出し、本発明を完成するに至った。即ち、該ポリマーを含んでなる充填剤が、種々の末端に酸性基を有するパーフルオロ化合物（以下、酸性基結合パーフルオロ化合物と略記する場合がある）を効率よく吸着することを見出し、また、上記ポリマーを含んでなる充填剤が、塩基性、中性又は／及び酸性の化合物の何れであっても効率よく吸着し得ることを見出し、本発明を完成するに至った。本発明は、新規なポリマー、種々の酸性基結合パーフルオロ化合物を効率よく吸着し得る充填剤、及び該充填剤を用いた酸性基結合パーフルオロ化合物の測定方法、並びに、塩基性、中性又は／及び酸性の薬物を効率よく吸着し得る充填剤、及び該充填剤を用いた薬物の測定方法の提供を課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明は、(1) 下記一般式［１］
0005492084.tif 000004
（式中、Ｒ１及びＲ２は夫々独立して水素原子、炭素数１〜３の直鎖アルキル基又はハロゲン原子を表し、Bzはベンゼン環を表す。）で示される化合物と、
下記一般式［２］
0005492084.tif 000005
【０００９】
（式中、Ｒ９は水素原子、炭素数１〜３の直鎖アルキル基又はハロゲン原子を表し、Ｒ10は直鎖状の炭素数１〜３のアルキレン基を表し、Ｒ11及びＲ12は夫々独立して水素原子又は直鎖状の炭素数１〜６のアルキル基を表す）で示される化合物
とを重合して得られるポリマーのグリシジル基に、陰イオン交換基を導入して得られるポリマー、(2)該ポリマーを含んでなる、末端に酸性基を有するパーフルオロ化合物測定用充填剤、(3)該充填剤を充填した、末端に酸性基を有するパーフルオロ化合物測定用前処理カラム、(4)該カラムを用いることを特徴とする末端に酸性基を有するパーフルオロ化合物の測定方法、(5)上記ポリマーを含んでなる薬物測定用充填剤、(6)該充填剤を充填した薬物測定用前処理カラム、(7)該カラムを用いることを特徴とする薬物の測定方法に関する。
【発明の効果】
【００１０】
本発明のポリマーを含んでなる充填剤は、種々の酸性基結合パーフルオロ化合物を効率よく吸着し得るものであり、該充填剤を用いた方法、特に該充填剤を用いた固相抽出を行う測定方法によれば、種々の、酸性基結合パーフルオロ化合物を同時に且つ効率よく測定することが可能となる。更に、その分離測定にLC/MS/MSを用いることにより、感度良く測定することも可能となる。
また、一方で本発明のポリマーを含んでなる充填剤は、従来の対象範囲の広い前処理カラム用充填剤と比較して、塩基性、中性又は／及び酸性化合物等の対象物を同等又はそれ以上効率よく吸着することを可能とする。そのため、１回の前処理で複数の対象物を同時に効率よく濃縮分離することが可能となる。特に対象物を薬物とした場合、より効率よく吸着し得るため、薬物測定用の前処理カラムとして非常に有用なものである。更にまた、吸着した塩基性、中性又は／及び酸性化合物については、塩基性・中性化合物と酸性化合物とを別々に溶出することも可能となるため、対象物が多数の場合、分離分析を容易にするという効果も奏する。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
一般式[1]のＲ１及びＲ２における炭素数１〜３の直鎖アルキル基としては、具体的には、例えばメチル基，エチル基，n-プロピル基等が挙げられ、メチル基が好ましい。
【００１２】
一般式[1]のＲ１及びＲ２におけるハロゲン原子としては、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子等が挙げられる。
【００１３】
一般式[1]で示される化合物としては、具体的には例えば、
0005492084.tif 000006
【００１４】
0005492084.tif 000007
【００１５】
0005492084.tif 000008
【００１６】
0005492084.tif 000009
【００１７】
0005492084.tif 000010
【００１８】
0005492084.tif 000011
【００１９】
0005492084.tif 000012
等が挙げられるが、
0005492084.tif 000013
が好ましく、中でも、
0005492084.tif 000014
【００２０】
が特に好ましい。
【００２１】
一般式[2]のＲ９における炭素数１〜３の直鎖アルキル基としては、具体的には、例えばメチル基，エチル基，n-プロピル基等が挙げられ、メチル基が好ましい。
【００２２】
一般式[2]のＲ９におけるハロゲン原子としては、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子等が挙げられる。
【００２３】
一般式[2]のＲ10における直鎖状の炭素数１〜３のアルキレン基としては、例えば、メチレン基，エチレン基，n-プロピレン基等が挙げられ、メチレン基が好ましい。
【００２４】
一般式[2]のＲ11及びＲ12における直鎖状の炭素数１〜６のアルキル基としては、例えば、メチル基，エチル基，n-プロピル基， n-ブチル基，n-ペンチル基， n-ヘキシル基等が挙げられるが、中でもメチル基が好ましい。
【００２５】
一般式[2]の具体例としては、例えば
0005492084.tif 000015
【００２６】
0005492084.tif 000016
【００２７】
0005492084.tif 000017
【００２８】
0005492084.tif 000018
【００２９】
0005492084.tif 000019
【００３０】
0005492084.tif 000020
【００３１】
0005492084.tif 000021
【００３２】
0005492084.tif 000022
【００３３】
0005492084.tif 000023
【００３４】
0005492084.tif 000024
【００３５】
等が挙げられ、
0005492084.tif 000025
【００３６】
0005492084.tif 000026
等が好ましく、中でも
0005492084.tif 000027
が特に好ましい。
【００３７】
本発明に係る陰イオン交換基としては、例えば、１級アミノ基、２級アミノ基、３級アミノ基、４級アンモニウム基等が挙げられ、２級アミノ基としては、例えば-NHR20（R20は鎖中に酸素原子を有していてもよいアルキル基を表す）で示される基が挙げられ、３級アミノ基としては、-NR21R21'（R21、R21'は、それぞれ独立して鎖中に酸素原子を有していてもよいアルキル基を表し、）で示される基又は環状アミノ基が挙げられ、４級アンモニウム基としては、下記一般式[3]
0005492084.tif 000028
（式中、Ｒ３は、それぞれ独立して炭素数１〜３の直鎖アルキル基を、Ｒ４は、炭素数１〜６の直鎖アルキル基を表す）で示される基が挙げられる。該陰イオン交換基は、ポリマーを酸性基結合パーフルオロ化合物測定用充填剤として用いる場合、３級アミノ基が好ましく、ポリマーを薬物測定用充填剤として用いる場合、４級アンモニウム基が好ましい。
【００３８】
上記２級アミノ基におけるR20で表される酸素原子を有していてもよいアルキル基のアルキル基としては、直鎖状、分枝状或いは環状でもよいが、直鎖状が好ましく、通常炭素数が１〜６、好ましくは１〜４、より好ましくは１又は２のものが挙げられ、具体的には、例えばメチル基、エチル基、n-プロピル基、イソプロピル基、n-ブチル基、イソブチル基、sec-ブチル基、tert-ブチル基、n-ペンチル基、イソペンチル基、sec-ペンチル基、tert-ペンチル基、ネオペンチル基、n-ヘキシル基、イソヘキシル基、sec-ヘキシル基、tert-ヘキシル基、n-ヘプチル基、イソヘプチル基、sec-ヘプチル基、tert-ヘプチル基、n-オクチル基、sec-オクチル基、tert-オクチル基、ノニル基、デシル基、ウンデシル基、ドデシル基、シクロプロピル基、シクロペンチル基、シクロヘキシル基、シクロヘプチル基、シクロオクチル基、シクロノニル基、シクロデシル基、シクロウンデシル基、シクロドデシル基等が挙げられるが、メチル基、エチル基が好ましく、エチル基がより好ましい。また、酸素原子を有しているアルキル基としては、炭素数２〜６の上記アルキル基の鎖中に通常１〜５個、好ましくは１〜２個、より好ましくは１個の酸素原子を介しているものが挙げられ、具体例としては、例えば-CH2-O-CH3、-CH2CH2-O-CH3、-CH2-O-CH2CH3、-CH(CH3)-O-CH3、-CH2-CH(CH3)-O-CH3、-CH2CH2-O-CH2CH3、-CH2CH2-O-C(CH3)3、-CH2CH2CH2-O-CH2CH3、-CH2CH2CH2-O-CH(CH3)CH3、-CH2CH(CH3)-O-CH2CH(CH3)CH3、-CH2-O-CH2CH2CH2CH2CH2CH3、-CH2CH2CH2CH2CH2-O-CH3、-CH2CH2-O-CH(CH2CH3)CH2CH3、-CH2CH2CH2CH2CH2-O-CH2CH2CH2CH2CH2CH3、-CH2CH2CH2CH2-O-C(CH3)3、-CH2CH2CH2-O-CH2CH2CH2-O-CH2CH2CH3、-CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2-O-CH3、-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH3、-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2CH3、-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH(CH3)等が挙げられる。
上記２級アミノ基の好ましい具体例としては、例えば、メチルアミノ基、エチルアミノ基、n-プロピルアミノ基等が挙げられる。
【００３９】
上記３級アミノ基におけるR21、R21'で表される酸素原子を有していてもよいアルキル基としては、上記R20で表される酸素原子を有していてもよいアルキル基と同じものが挙げられ、好ましいものとしては、メチル基、エチル基、n-プロピル基が好ましく、中でもエチル基が好ましい。なお、R21及びR21'は、共に同じ基であることがより好ましい。-NR21R21'で示される３級アミノ基の具体例としては、例えば、ジメチルアミノ基、ジエチルアミノ基、メチルエチルアミノ基、ジn-プロピルアミノ基、ジイソプロピルアミノ基、1-フェニルエチルアミノ基等が挙げられ、中でもジエチルアミノ基が好ましい。
【００４０】
３級アミノ基の環状アミノ基としては、環状部分が通常３〜１２員環、好ましくは５〜６員環となっているアミノ基が挙げられ、具体的には、例えばエチレンイミノ基等の３員環由来の基、例えばピロリジノ基、イミダゾリノ基、ピラゾリジノ基等の５員環基、例えばピペリジノ基、モルホリノ基、ピペラジノ基等の６員環基、例えばキヌクリジノ基等のビシクロ環由来の基等が挙げられ、中でもピペリジノ基、モルホリノ基、ピペラジノ基等の６員環基が好ましく、その中でもモルホリノ基が好ましい。
【００４１】
一般式[3]で示される４級アンモニウム基のＲ3における炭素数１〜３の直鎖アルキル基としては、具体的には、例えばメチル基，エチル基，n-プロピル基等が挙げられ、メチル基が好ましい。
【００４２】
一般式[3]で示される４級アンモニウム基のＲ4における直鎖状の炭素数１〜６のアルキル基としては、例えば、メチル基，エチル基，n-プロピル基， n-ブチル基，n-ペンチル基， n-ヘキシル基等が挙げられるが、中でもメチル基が好ましい。
【００４３】
一般式［3］で示されるアンモニウム基としては、具体的には例えば、トリメチルアンモニウム基、エチルジメチルアンモニウム基、ジメチル-n-プロピルアンモニウム基、n-ブチルジメチルアンモニウム基、ジメチル-n-ペンチルアンモニウム基、ジメチル-n-ヘキシルアンモニウム基、ジエチルメチルアンモニウム基、トリエチルアンモニウム基、トリ-n-プロピル基等が挙げられるが、中でもトリメチルアンモニウム基、エチルジメチルアンモニウム基が好ましく、エチルジメチルアンモニウム基が特に好ましい。
【００４４】
一般式[4]のＲ15における、炭素数１〜３の直鎖アルキレン基としては、例えば、メチレン基，エチレン基，n-プロピレン基等が挙げられ、メチレン基が好ましい。
【００４５】
一般式[4]のＲ16における炭素数１〜３の直鎖アルキル基としては、具体的には、例えばメチル基，エチル基，n-プロピル基等が挙げられ、メチル基が好ましい。また、Ｒ16におけるハロゲン原子としては、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子等が挙げられる。
【００４６】
一般式[4]で示される化合物としては、具体的には例えば、
0005492084.tif 000029
【００４７】
0005492084.tif 000030
等が挙げられるが、中でも
【００４８】
0005492084.tif 000031
が好ましい。
【００４９】
一般式[1]で示される化合物と一般式[2]で示される化合物とを重合して得られるポリマー（以下、本発明に係るプレポリマーと略記する場合がある）のグリシジル基に陰イオン交換基を導入して得られるポリマー（以下、本発明のポリマーと略記する場合がある）としては、例えば下記一般式[3] 
0005492084.tif 000032
【００５０】
（式中、R1、R2、R9、R10、R11及びR12は上記の通り。Aは、本発明に係る陰イオン交換基を表す）で示されるもの等が挙げられ、具体的には例えば
0005492084.tif 000033
【００５１】
0005492084.tif 000034
【００５２】
0005492084.tif 000035
【００５３】
0005492084.tif 000036
【００５４】
0005492084.tif 000037
【００５５】
0005492084.tif 000038
【００５６】
0005492084.tif 000039
【００５７】
0005492084.tif 000040
【００５８】
0005492084.tif 000041
【００５９】
0005492084.tif 000042
【００６０】
0005492084.tif 000043
【００６１】
0005492084.tif 000044
【００６２】
0005492084.tif 000045
【００６３】
0005492084.tif 000046
【００６４】
0005492084.tif 000047
【００６５】
0005492084.tif 000048
【００６６】
0005492084.tif 000049
【００６７】
0005492084.tif 000050
等が挙げられるが、ポリマーを酸性基結合パーフルオロ化合物測定用充填剤として用いる場合、
0005492084.tif 000051
【００６８】
0005492084.tif 000052
等が好ましく、ポリマーを薬物測定用充填剤として用いる場合、
【００６９】
0005492084.tif 000053
等が好ましい。
【００７０】
また、本発明のポリマーとしては、一般式[1]で示される化合物と一般式[2]で示される化合物に更に一般式[4]で示される化合物を含むモノマーを重合して得られるもののグリシジル基に、一般式［3］で示されるアンモニウム基を導入して得られるものも含まれ、具体的には例えば下記一般式[6]
0005492084.tif 000054
(式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ９、Ｒ10、Ｒ11、Ｒ12、Ｒ15及びＲ16は上記の通り。)で示される。該ポリマーは、薬物測定用充填剤として好ましい。該一般式[6]の具体例としては例えば、
【００７１】
0005492084.tif 000055
【００７２】
0005492084.tif 000056
【００７３】
0005492084.tif 000057
【００７４】
0005492084.tif 000058
【００７５】
0005492084.tif 000059
【００７６】
0005492084.tif 000060
等が挙げられるが、中でも
【００７７】
0005492084.tif 000061
が好ましい。
【００７８】
本発明のポリマーの平均粒子径は、通常10〜100μm、好ましくは20〜100μm、より好ましくは30〜70μmであり、細孔径は、通常3〜15nmであるが、ポリマーを酸性基結合パーフルオロ化合物測定用充填剤に用いる場合は、10〜15nmが好ましく、薬物測定用充填剤に用いる場合は、3〜5nmが好ましい。比表面積は、通常200〜1000m2/g、好ましくは300〜700m2/gであるが、酸性基結合パーフルオロ化合物測定用充填剤に用いる場合は、600〜700m2/gが特に好ましく、薬物測定用充填剤に用いる場合は、300〜500m2/gが特に好ましい。本発明のポリマーが、一般式[1]で示される化合物及び一般式[2]で示される化合物を含むモノマーから合成される場合、一般式[1]で示される化合物と一般式[2]で示される化合物のモル比は、通常60〜90：10〜40であり、好ましい範囲は70〜85：15〜30である。また、本発明のポリマーが、一般式[1]で示される化合物、一般式[2]で示される化合物及び一般式[4]で示される化合物を含むモノマーから合成される場合、一般式[1]で示される化合物と一般式[2]で示される化合物と一般式[4]で示される化合物のモル比は、通常60〜85：14〜30：1〜10であり、好ましい範囲は70〜80：18〜25：2〜5である。本発明のポリマーは、陰イオン交換基を、該ポリマー1g中に通常0.1〜1.0mmol含み、好ましい範囲としては0.2〜0.6mmol含むものである。
【００７９】
本発明のポリマーの合成方法としては、自体公知の重合方法により一般式[1]で示される化合物と一般式[2]で示される化合物を含むモノマー、或いは、一般式[1]で示される化合物と一般式[2]で示される化合物と一般式[4]で示される化合物を含むモノマー（以下、両モノマーを本発明に係るモノマー群と略記する場合がある）を重合し、得られたポリマー（以下、本発明に係るプレポリマーと略記する場合がある）の末端のグリシジル基に、陰イオン交換基を、自体公知の方法（例えば、アミノ化反応等）により導入することによりなされればよい。
【００８０】
具体的には、例えば本発明に係るモノマー群と重合開始剤を、これらモノマー群や重合開始剤は溶解するが水に不溶な有機溶媒で溶解させた後、該有機溶媒を水に添加して、水中で懸濁重合反応させることにより、本発明に係るプレポリマーを得る。本発明に係るモノマー群として一般式[1]で示される化合物と一般式[2]で示される化合物を含むモノマーを用いる場合、一般式[1]で示される化合物と一般式[2]で示される化合物のモル比は、通常60〜90：10〜40であり、好ましい範囲は70〜85：15〜30である。また、本発明に係るモノマー群として一般式[1]で示される化合物と一般式[2]で示される化合物と一般式[4]で示される化合物を含むモノマーを用いる場合、一般式[1]で示される化合物と一般式[2]で示される化合物と一般式[4]で示される化合物のモル比は、通常60〜85：14〜30：1〜10であり、好ましい範囲は70〜80：18〜25：2〜5である。重合開始剤としては、自体公知のものであれば何れでもよいが、例えばアゾイソブチロニトリル、2、2'-アゾビス(2、4-ジメチルバレロニトリル)、2、2'-アゾビス(2-メチルプロピオン酸メチル)、2、2'-アゾビス(2-メチルブチロニトリル)、過酸化ベンゾイル、過酸化ラウロイル等が挙げられ、その用量は、本発明に係るモノマー群の総重量に対して0.1〜3重量%である。また、ここで用いられる有機溶媒としては、例えばトルエン、エチルベンゼン、酢酸ブチル、酢酸アミル、オクチルアルコール、ドデシルアルコール、オクタン、ドデカン等が挙げられ、その用量は、本発明に係るモノマー群の総重量に対して0.5〜2倍重量である。ここで用いられる水の量は、本発明に係るモノマー群の重量及び上記有機溶媒の重量の和に対して通常1〜10倍重量である。また、該水には分散安定剤として自体公知のポリビニルアルコール、メチルセルロース等の有機水溶性高分子等を溶解しておくのが好ましく、その量は用いられる水中の濃度として通常0.01〜1重量%である。懸濁重合反応は、通常60〜90℃で4〜20時間反応させ、反応後は高分子取得の常法に従って処理することにより本発明に係るプレポリマーが得られる。得られた本発明に係るプレポリマーは、その粒径を充填剤に適した大きさとするため、また、優れた吸着能を奏するように均等な大きさとするため、篩を用いて分級するのが好ましい。分級により得る、本発明に係るプレポリマーの粒径としては、通常10〜100μm、好ましい範囲は20〜100μm、より好ましい範囲は30〜70μmである。なお、該分級操作は、本発明のポリマーを得た後に行っても構わない。
【００８１】
次いで、得られた本発明に係るプレポリマーを、適当な有機溶媒又は該有機溶媒と水との混合水溶液に懸濁又は膨潤させ、該溶液に陰イオン交換基を含有する化合物（陰イオン交換基含有化合物）を添加しアミノ化反応を行うことにより、本発明のポリマーを得ることができる。上記有機溶媒としては、1、4-ジオキサン、テトラヒドロフラン、イソプロパノール、N、N-ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド等が挙げられる。有機溶媒と水との混合水溶液を用いる場合の水の量は、混合水溶液中の量として通常10〜60%、好ましい範囲は20〜50%である。上記有機溶媒、或いは有機溶媒と水との混合水溶液の量は、本発明に係るプレポリマーの重量に対して1〜10倍重量である。陰イオン交換基含有化合物とは、上記陰イオン交換基を含有し、目的のポリマーを得ることができるものであれば特に限定されないが、上記陰イオン交換基の末端に水素原子やメチル基等を付加したもの等が挙げられ、その用量は、本発明に係るプレポリマー1gに対して通常0.001〜0.05モル、好ましい範囲は0.002〜0.025モルである。アミノ化反応は、室温〜60℃で、通常4〜30時間、好ましい時間は10〜20時間、要すれば撹拌しながら反応させる。この反応により本発明のポリマーが得られる。
【００８２】
以下に、一般式[1]で示される化合物としてジビニルベンゼンを、一般式[2]で示される化合物としてグリシジルメタクリレートを、陰イオン交換基含有化合物としてジエチルアミンを用いたときを例に取り、本発明のポリマーの合成方法を説明する。なお、該ポリマーは、酸性基結合パーフルオロ化合物測定用充填剤用として好ましいものである。
【００８３】
即ち、例えばトルエン等の有機溶媒100g中で、ジビニルベンゼン75〜90g（純ジビニルベンゼン量として0.2〜0.6mol）及びグリシジルメタクリレート10〜25g（0.05〜0.2mol）とアゾビスイソブチロニトリル等の重合開始剤1〜3gを混合し、得られた有機溶媒を500〜1000mLの0.01〜1.0重量%メチルセルロース水溶液中で懸濁させ、60〜80℃で5〜10時間反応させる。なお、ジビニルベンゼンを用いる場合、市販のジビニルベンゼンは、エチルビニルベンゼン等の不純物を含むものが存在するが、本発明においては、これを含んだまま合成反応に付して構わない。その場合、ジビニルベンゼンの含量は低下するが、他の化合物とのモル比が上記本発明のポリマーの項で定義された範囲内であればよい。ジビニルベンゼンの使用に関しては、以下同様である。これにより、本発明に係るプレポリマーが得られる。反応後、必要に応じて得られたポリマーを水やメタノールで洗浄する。次いで本発明に係るプレポリマー10gを20〜50v/v%の2-プロパノール水溶液50〜100mL中で分散させ、ジエチルアミン10〜50g（0.1〜0.5mol）を添加し、40〜60℃で10〜20時間撹拌しながら反応を行うことにより、本発明のポリマーを得ることができる。
【００８４】
以下に、一般式[1]で示される化合物としてジビニルベンゼンを、一般式[2]で示される化合物としてグリシジルメタクリレートを、陰イオン交換基含有化合物としてN,N-ジメチルアミノエタンを用いたときを例に取り、本発明のポリマーの合成方法を説明する。なお、該ポリマーは、薬物測定用充填剤用として好ましいものである。
【００８５】
即ち、例えばトルエン等の有機溶媒100g中で、ジビニルベンゼン90〜75g（純ジビニルベンゼン量として0.2〜0.6mol）及びグリシジルメタクリレート10〜25g（0.05〜0.2mol）とアゾビスイソブチロニトリル等の重合開始剤1〜3gを混合し、得られた有機溶媒を500〜1000mLの0.01〜1.0重量%メチルセルロース水溶液中で懸濁させ、60〜80℃で5〜10時間反応させる。これにより、本発明に係るプレポリマーが得られる。反応後、必要に応じて得られた本発明に係るプレポリマーを水やメタノールで洗浄する。次いで本発明に係るプレポリマー10gを20〜50v/v%の2-プロパノール水溶液50〜100mL中で分散させ、N、N-ジメチルアミノエタン10〜50g（0.1〜0.5mol）を添加し、40〜60℃で10〜20時間撹拌しながら反応を行うことにより、本発明のポリマーを得ることができる。
【００８６】
以下に、一般式[1]で示される化合物としてジビニルベンゼンを、一般式[2]で示される化合物としてグリシジルメタクリレートを、一般式[4]で示される化合物としてイソシアヌル酸トリアリルを、陰イオン交換基含有化合物としてN,N-ジメチルアミノエタンを用いたときを例に取り、本発明のポリマーの合成方法を説明する。なお、該ポリマーは、薬物測定用充填剤用として好ましいものである。
【００８７】
即ち、例えばトルエン等の有機溶媒100g中で、ジビニルベンゼン85〜70g（純ジビニルベンゼン量として0.2〜0.6mol）、グリシジルメタクリレート10〜20g（0.05〜0.2mol）、及び、イソシアヌル酸トリアリル5〜10g（0.02〜0.04mol）と、アゾビスイソブチロニトリル等の重合開始剤1〜3gを混合し、得られた有機溶媒を500〜1000mLの0.01〜1.0重量%メチルセルロース水溶液中で懸濁させ、60〜80℃で5〜10時間反応させる。これにより、本発明に係るプレポリマーが得られる。反応後、必要に応じて得られた本発明に係るプレポリマーを水やメタノールで洗浄する。次いで本発明に係るプレポリマー10gを20〜50v/v%の2-プロパノール水溶液50〜100mL中で分散させ、N、N-ジメチルアミノエタン10〜50g（0.1〜0.5mol）を添加し、40〜60℃で10〜20時間撹拌しながら反応を行うことにより、本発明のポリマーを得ることができる。
【００８８】
本発明に係る酸性基結合パーフルオロ化合物の酸性基としては、スルホ基、カルボキシル基、ヒドロキシル基等が挙げられるが、スルホ基、カルボキシル基等が好ましい。末端にスルホ基を有するパーフルオロ化合物としては、炭素数2〜18のもの等が挙げられ、好ましくは4〜10のもの等が挙げられる。末端にカルボキシル基を有するパーフルオロ化合物としては、炭素数2〜18のもの等が挙げられ、好ましくは4〜18のもの、より好ましくは4〜12、更に好ましくは4〜10のもの等が挙げられる。末端にヒドロキシル基を有するパーフルオロ化合物としては、炭素数2〜18のもの等が挙げられ、好ましくは4〜10のもの等が挙げられる。なお、本発明に係る酸性基結合パーフルオロ化合物としては、上記酸性基結合パーフルオロ化合物の末端のスルホ基やカルボン酸基の水素イオンが、ナトリウムイオン、カリウムイオン又はアンモニウムイオンに置換されて塩を形成するものも含まれる。好ましい具体例としては、例えば、パーフルオロブタンスルホン酸（C4F9-SO3H、略号：PFBS）、パーフルオロヘキサンスルホン酸（C6F13-SO3H、略号:PFHxS）、パーフルオロオクタンスルホン酸（C8F17-SO3H、略号: PFOS）、パーフルオロデカンスルホン酸（C10F21-SO3H、略号: PFDS）等のパーフルオロスルホン酸、パーフルオロブタン酸（C4F9-COOH、略号：PFBA）、パーフルオロペンタン酸（C5F11-COOH、略号：PFPeA）、パーフルオロヘキサン酸（C6F13-COOH、略号：PFHxA）、パーフルオロヘプタン酸（C7F15-COOH、略号：PFHpA）、パーフルオロオクタン酸（C8F17-COOH、略号：PFOA）、パーフルオロノナン酸（C9F19-COOH、略号：PFNA）、パーフルオロデカン酸（C10F21-COOH、略号：PFDA）、パーフルオロウンデカン酸（C11F23-COOH、略号：PFUnDA）、パーフルオロドデカン酸（C12F25-COOH、略号：PFDoDA）、パーフルオロテトラデカン酸（C14F29-COOH、略号：PFTeDA）、パーフルオロヘキサデカン酸（C16F33-COOH、略号：PFHexDA）、パーフルオロオクタデカン酸（C18F37-COOH、略号：PFODA）等のパーフルオロカルボン酸等が挙げられる。
【００８９】
本発明の酸性基結合パーフルオロ化合物測定用充填剤は、上記のように得られた本発明のポリマーを含んでなるものである。
【００９０】
本発明の酸性基結合パーフルオロ化合物測定用前処理カラム（以下、本発明のPF用前処理カラムと略記する場合がある）は、上記本発明の酸性基結合パーフルオロ化合物測定用充填剤を充填したものである。充填方法等は特に限定されないが、通常この分野で用いられるカラム容器に、自体公知の方法例えばスラリー法、乾式-タッピング法等の方法に従って充填されればよい。カラム中の充填剤量は、用いられる試料の量に応じて設定されればよく、例えば、河川や湖沼の水、海水等の環境水、水道水、井戸水、湧水、体液等の試料1000mLをカラムに通液して酸性基結合パーフルオロ化合物を吸着させる場合、その量は通常10〜1000mｇ、好ましくは50〜250mｇである。カラムの容量は、充填材料に応じて適宜選択すればよい。
【００９１】
本発明のPF用前処理カラムを用いた酸性基結合パーフルオロ化合物の測定方法としては、(1)酸性基結合パーフルオロ化合物を含有する試料を本発明のPF用前処理カラムに通液して、酸性基結合パーフルオロ化合物を吸着する工程、(2)酸性基結合パーフルオロ化合物を溶出液で溶出する工程、(3)得られた酸性基結合パーフルオロ化合物を測定する工程により行われればよい。また、試料が河川や湖沼の水等不純物を多く含んでいるものの場合、それら不純物を本発明のPF用前処理カラムから取り除くため、酸性基結合パーフルオロ化合物を吸着した後、本発明のPF用前処理カラムを洗浄してもよい。
【００９２】
本発明のPF用前処理カラムを用いた酸性基結合パーフルオロ化合物の測定方法の詳細は、具体的には以下の如くである。即ち、先ず、(1)酸性基結合パーフルオロ化合物を含有する試料を、本発明のPF用前処理カラムに通液して、酸性基結合パーフルオロ化合物をカラム（充填剤）に吸着させる場合の通液方法は、自然落下であっても、加圧や減圧することにより行ってもよいが、加圧や減圧による方法が好ましい。加圧や減圧をする場合、試料の通液速度が早すぎると吸着率が低下するので、通常１〜30mL/分、好ましくは10〜30mL/分、より好ましくは10〜20mL/分となるように設定される。また、酸性基結合パーフルオロ化合物は、本発明の充填剤として用いられているポリマー中の陰イオン交換基のイオン交換能により保持されていると考えられるため、試料がpH8以上等の塩基性の場合、自体公知の中和反応により、pHを7以下となるように調整した後、通液するのが好ましい。(1)の操作の後に洗浄を行う場合、洗浄液をカラムに通液させることによりなされればよく、該洗浄液としては、pHが8以下の、メタノール、エタノール、プロパノール、アセトニトリル、アセトン等の水溶性有機溶媒等が挙げられるが、その液量は、充填剤の量に応じて適宜設定すればよく、充填剤10mgに対して通常0.5〜10mL、好ましくは0.5〜5mLである。pHの調整は、通常この分野で用いられている酸性化合物を用いて行えば特に限定されないが、酸性化合物としては例えば塩酸、硝酸、硫酸等が好ましいものとして挙げられる。通液方法は、自然落下であっても、加圧や減圧により行ってもよいが、洗浄液を完全に排除できるので、加圧や減圧により通液するのが好ましい。次いで、(2) 本発明のPF用前処理カラムに吸着された酸性基結合パーフルオロ化合物を溶出液で溶出する場合、酸性基結合パーフルオロ化合物は、本発明の充填剤として用いられているポリマー中の陰イオン交換基のイオン交換能により保持されていると考えられるため、該溶出液としては、pH8〜14、好ましくは9〜14の緩衝液、塩基性水溶液、又はメタノール、エタノール、プロパノール、アセトニトリル、アセトン等の水溶性有機溶媒、該水溶性有機溶媒と塩基性水溶液又は緩衝液との混合水溶液等が挙げられる。pHの調整は、通常この分野で用いられている塩基性化合物を用いて行えば特に限定されないが、塩基性化合物としては例えばアンモニアが好ましいものとして挙げられ、アンモニアを用いる場合、その濃度は溶出液中の濃度として通常0.1〜2w/w%、好ましくは0.1〜1w/w%である。また、溶出液の用量は、充填剤の量に応じて適宜設定すればよく、充填剤10mgに対して通常0.3〜100mL、好ましくは0.3〜10mL、より好ましくは0.3〜1mL用いればよい。更に、(3)溶出された酸性基結合パーフルオロ化合物含有溶出液を自体公知の分離測定法で測定することにより、試料中の酸性基結合パーフルオロ化合物の量又は濃度が得られるが、分離測定に用いられる酸性基結合パーフルオロ化合物含有溶出液は、必要に応じて、自体公知の方法により濃縮した後、分離測定法に供してもかまわない。分離測定方法としては、例えば液体クロマトグラフィー法や電気泳動法等が挙げられ、測定は、自体公知のUV検出、蛍光検出、MS、MS/MS、蒸発光散乱検出(ELSD)等を用いればよく、条件等も通常この分野でなされているものに準じて設定されればよい。該分離測定方法の中でも、分離及び感度の点から、LC/MS/MSが好ましい。
【００９３】
より具体的には、例えば以下のようになされる。即ち、例えば0.1ng〜1mg/1L、好ましい範囲として0.1ng〜1μg/1L、より好ましい範囲として0.1〜100ng/1Lの薬物を含む試料1000mLを用いる場合、通常10〜1000mg、好ましい範囲は50〜200mgの本発明の酸性基結合パーフルオロ化合物測定用充填剤が充填されたカラムを用い、該カラムに5〜20mL/分で加圧または減圧により通液する。その後、pH6〜8の精製水5〜10mLを5〜10mL/分で加圧または減圧により通液してカラムを洗浄する。次いで0.1〜1%アンモニア含有メタノール2〜6mLを用いて自然落下により溶出する。得られた溶出液を、通常この分野でなされる設定条件でLC/MS/MSで測定することにより、試料中の酸性基結合パーフルオロ化合物を測定することができる。
【００９４】
本発明に係る薬物としては、薬効成分がある物質はすべて含まれるが、2008年禁止表国際基準（世界ドーピング防止規定）、2008年監視プログラム等に掲示されている、利尿薬と他の隠蔽薬、興奮薬、麻薬、β遮断薬、特定物質等のドーピング剤、及び平成１９年日本中央競馬会規約第２号の日本中央競馬会の競馬の施行等に関する規約における別表(2)に記載の馬の競走能力を一時的に高め又は減ずる薬品又は薬剤等であり、中でも馬の競走能力を一時的に高め又は減ずる薬品又は薬剤等が好ましく、具体的には例えば、アトロピン（Atoropine）、アモバルビタール（Amobarbital）、アロバルビタール（Allobarbital）、アンチピリン（Antipyrine）、オキシエチルテオフィリン（Oxyethyltheophylline）、オキシプロピルテオフィリン（Oxypropyltheophylline）、3'-オキソヘキソバルビタール（3'-Oxohexobarbital）、カフェイン（Caffeine）、クロロプロマジン（Chlorpromazine）、コカイン（Cocaine）、シクロバルビタール（Cyclobarbital）、ジヒドロキシジブカイン（β,γ-Dihydroxydibucaine）、ジブカイン（Dibucaine）、シプロヘプタジン（Cyproheptadine）、シプロヘプタジン-N-オキサイド（Cyproheptadine-N-oxide）、ジモルフォラミン（Dimorphoramine）スコポラミン（Scopolamine）、ストリキニーネ（Strychnine）、セコバルビタール（Secobarbital）、テオフィリン（Theophylline）、テトラカイン（Tetracaine）、ニケタミド（Nikethamide）、ニコチン（Nicotine）、ノスカピン（Noscapine）、バルビタール（Barbital）、3'-ヒドロキシアモバルビタール（3'-Hydroxyamobarbital）、ヒドロキシジモルホラミン（γ-Hydroxydimorphoramine）、3'-ヒドロキシセコバルビタール（3'-Hydroxysecobarbital）、3'-ヒドロキシヘキソバルビタール（3'-Hydroxyhexobarbital）、3'-ヒドロキシペントバルビタール（3'-Hydroxypentobarbital）、ピプラドール（Pipradrol）、フェナセチン（Phenacetin）、フェニルエチルマロンジアミド（Phenylethylmalondiamide）、フェニルブタゾン（Phenylbutazone）、フェノバルビタール（Phenobarbital）、プリミドン（Primidone）、ブルカイン（Brucaine）、プロカイン（Procaine）、プロマジン（Promazine）、ヘキソバルビタール（Hexobarbital）、ペンタゾシン（Pentazocine）、ペンテトラゾール（Pentetrazol）、ペントバルビタール（Pentobarbital）、メサピリレン（Methapyrilene）、メタンフェタミン（Methamphetamine）、メタルビタール（Metharbital）、メチルエフェドリン（Methylephedrine）、メチルフェニデート（Methylphenidate）、メトキシフェナミン（Methoxyphenamine）、メトバルビタール（Mephobarbital）、モノエチルグリシンキシリダイド（Monoethylglycinexylidide）、リドカイン（Lidocaine）、硫酸クロロプロマジン（Chlorpromazine sulfoxide）、ノルトリプチリン、サリチル酸、ナプロキセン等が挙げられ、中でも、好ましいものとしては、テオフィリン、スコポラミン、カフェイン、アトロピン、バルビタール、ノルトリプチリン、サリチル酸、ナプロキセン等である。
【００９５】
本発明の薬物測定用充填剤は、上記のように得られた本発明のポリマーを含んでなるものである。
【００９６】
本発明の薬物測定用前処理カラムは、上記本発明の薬物測定用充填剤を充填したものである。充填方法等は特に限定されないが、通常この分野で用いられるカラム容器に、自体公知の方法例えばスラリー法、乾式-タッピング法等の方法に従って充填されればよい。カラム中の充填剤量は、用いられる試料の量に応じて設定されればよく、例えば、0.001〜50μg/mL、好ましい範囲として0.05〜10μg/mLの薬物を含む試料10mLをカラムに通液して薬物を吸着させる場合、その量は通常10〜1000mg、好ましい範囲は50〜200mgであり、より好ましい範囲は50〜100mｇである。カラムの容量は、充填剤の量に応じて適宜選択すればよい。
【００９７】
本発明の薬物測定用前処理カラムを用いた薬物の測定方法としては、(1)薬物を含有する試料を本発明の薬物測定用前処理カラムに通液して、薬物を吸着する工程、(2)薬物を溶出液で溶出する工程、(3)溶出された薬物を測定する工程により行われればよい。また、試料が不純物を多く含んでいるものの場合、それら不純物を本発明の薬物測定用前処理カラムから取り除くため、薬物吸着後、洗浄等の処理に付してもよい。
【００９８】
本発明の薬物測定用前処理カラムを用いた薬物の測定方法の詳細は、具体的には以下の如くである。即ち、先ず、自体公知の方法によりカラムのコンディションを整えた後、(1)薬物を含有する試料を、本発明の薬物測定用前処理カラムに通液して、薬物をカラム（充填剤）に吸着させる。通液方法は、自然落下であっても、加圧や減圧することにより行ってもよいが、加圧や減圧による方法が好ましい。加圧や減圧をする場合、試料の通液速度が早すぎると吸着率が低下するので、通常１〜30mL/分、好ましい速度は10〜30mL/分、より好ましい速度は10〜20mL/分となるように設定される。なお、酸性の薬物を含有する試料のpHが8以上の場合は、自体公知の中和反応により、試料のpHが7以下となるように調整した後に、通液するのが好ましい。即ち、酸性の薬物は、本発明のポリマー中の陰イオン交換基のイオン交換能により保持されると考えられ、吸着率の低下を防ぐため、試料をpH7以下とするのが好ましい。(1)の操作の後に洗浄を行う場合、洗浄液をカラムに通液させることによりなされればよく、該洗浄液としては、pHが6〜8の緩衝液が用いられるが、該緩衝液は、メタノール、エタノール、プロパノール、アセトニトリル、アセトン、ジクロロメタン等の水溶性有機溶媒を5〜10％含むものであってもよい。洗浄液の液量は、充填剤の量に応じて適宜設定すればよく、充填剤10mgに対して通常0.5〜10mL、好ましい範囲は0.5〜5mLである。なお、洗浄液のpH調整は、通常この分野で用いられている方法に準じて行えばよい。通液方法は、自然落下であっても、加圧や減圧により行ってもよいが、洗浄液を完全に排除できるので、加圧や減圧により通液するのが好ましい。
次いで、(2)カラムに吸着された薬物を溶出液で溶出する場合、中性及び塩基性の薬物については、メタノール、エタノール、プロパノール、アセトニトリル、アセトン、ジクロロメタン等の水溶性有機溶媒により溶出し、酸性の薬物については、通常pH1〜3、好ましい範囲はpH1〜2の、酸性水溶液又は酸性に調整した、メタノール、エタノール、プロパノール、アセトニトリル、アセトン、ジクロロメタン等の水溶性有機溶媒等により溶出する。該酸性水溶液又は酸性水溶性有機溶媒のpHの調整は、通常この分野で用いられている酸性化合物を用いた方法により行えば特に限定されないが、該酸性性化合物としては例えば塩酸、硝酸、酢酸、ギ酸等が好ましいものとして挙げられる。具体的な調製方法としては、例えばギ酸を用いてpHを1〜2に調整する場合、溶出液中の濃度として通常1〜5w/w%、好ましい範囲としては1〜2w/w%ギ酸を含むように酸性水溶液又は酸性水溶性有機溶媒を調製すればよい。上記(2)の溶出における溶出液の用量は、充填剤の量に応じて適宜設定すればよく、充填剤10mgに対して通常0.3〜100mL、好ましい範囲は0.3〜10mL、より好ましい範囲は0.3〜1mLである。
更に、(3)溶出された薬物含有溶出液を自体公知の分離測定法で測定することにより、試料中の薬物の量又は濃度が得られるが、分離測定に用いられる薬物含有溶出液は、必要に応じて、自体公知の方法により濃縮した後、分離測定法に供してもかまわない。分離測定方法としては、例えば液体クロマトグラフィー法やガスクロマトグラフィー、電気泳動法等が挙げられ、測定は、自体公知のUV検出、蛍光検出、MS、MS/MS、蒸発光散乱検出(ELSD)等を用いればよく、条件等も通常この分野でなされているものに準じて設定されればよい。
【００９９】
より具体的には、例えば以下のようになされる。即ち、例えば1〜10μg/mLの薬物を含有する試料10mLを用いる場合、50〜100mgの本発明の薬物測定用充填剤が充填されたカラムを用いる。該カラムに、メタノール等の水溶性有機溶媒2〜5mL、精製水2〜5mL、pH6〜8の酢酸ナトリウム緩衝液2〜5mLを順次通液し、カラムのコンディションを整える。次いで、試料10mLをカラムに通液する。その後5〜10％メタノールを含有する0.1〜1mol/L酢酸ナトリウム緩衝液1〜3mLを通液して洗浄する。次いで、メタノール2〜5mLを通液して、中性及び塩基性の対象薬物を溶出する。更に、pH1〜2のメタノール2〜5mLを通液して、酸性の対象薬物を溶出する。得られた溶出液それぞれを、通常この分野でなされる設定条件にてHPLCで分離し、UV、蛍光検出器等で対象薬物測定することにより、試料中の対象薬物量を求めることができる。なお、酸性の薬物と中性及び塩基性の対象薬物は、一つの容器に溶出させて酸性、中性及び塩基性の薬物を同時に分離分析してもかまわない。
【０１００】
次に実施例により本発明を更に詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例によってなんら限定されるものでない。
【０１０１】
実施例1  本発明のポリマー1の合成
疎水性モノマーとしてジビニルベンゼン（新日鐵化学(株)製） (純度80%) 85.0g（純ジビニルベンゼンを0.52mol含有）、極性モノマー（イオン交換基の導入が可能なモノマー）としてグリシジルメタクリレート（和光純薬工業(株)社製）15.0g（0.106mol）を用い、水に不溶な有機溶媒としてトルエン100gを用いた。上記2種のモノマーと水に不溶な有機溶媒との混合溶媒に、重合開始剤としてアゾビスイソブチロニトリル（和光純薬工業(株)社製）1.0gを添加して溶解した後、0.2重量%のメチルセルロース水溶液0.8L中に懸濁させ、高速攪拌を行い油滴の平均粒径が約60μmになるように調整した。その後、攪拌装置の付いた重合装置に移し、80℃で6時間反応させて、架橋性多孔質共重合体粒子を得た。この粒子をろ過した後、水2L、メタノール2Lで洗浄し、酢酸エチルに1晩浸漬した。その後、メタノール2Lで洗浄し、乾燥させた。このようにして得られた架橋性多孔質共重合体粒子は、平均細孔径10.26nm、比表面積636m2/gであった。この粒子を32μm及び63μmの篩を用いて分級した。
分級後の多孔質共重合体10.0gを50% 2-プロパノール水溶液50mL中に分散して均一なスラリーとし、攪拌装置の付いた反応装置に移し、モルホリン（和光純薬工業(株)社製）18.5g（0.21mol）を加えて50℃で20時間アミノ化反応を行った。反応終了後、水、メタノールの順に洗浄し、乾燥し、得られたポリマーを本発明のポリマー1とした。なお、得られた本発明のポリマー1中のモルホリノ基の含量は、0.45mmol/gであった。また、本発明のポリマー1の構造式を以下に示す。
0005492084.tif 000062
【０１０２】
実施例2   本発明のポリマー２の合成
実施例1と同様の方法で、架橋性多孔質共重合体粒子を得た。得られた架橋性多孔質共重合体粒子は、平均細孔径10.56nm、比表面積662.5m2/gであった。この粒子を32μm及び63μmの篩を用いて分級した。モルホリン18.5gの代わりにジエチルアミン（和光純薬工業(株)製）15.5gを用いた以外は実施例1と同様の方法で、多孔質共重合体にジエチルアミノ基を導入し、得られたポリマーを本発明のポリマー２とした。なお、得られた本発明のポリマー２中のジエチルアミノ基の含量は、0.56mmol/gであった。また、本発明のポリマー２の構造式を以下に示す。
0005492084.tif 000063
【０１０３】
実施例３  本発明のポリマー１、本発明のポリマー２を用いた酸性基結合パーフルオロ化合物（PFCs）の添加回収実験
1.カラム及び試料の調製
1-1.カラムの作製
実施例１及び２で調製した本発明のポリマー１又はポリマー２それぞれ60mgをポリプロピレン製3mLシリンジ（(株)プロニクス社製）に細孔径20μmのフィルター（有限会社ヨコー）を上下に充填したものを、固相抽出カラム１及び固相抽出カラム２とした。
1-2.試料の調製
精製水1000mLに13種類の酸性基結合パーフルオロ化合物［パーフルオロスルホン酸：PFBS（和光純薬工業(株)製）, PFHx（Wellington社製）, PFOS（Accustandadard社製）, PFDS（Wellington社製）、 パーフルオロカルボン酸：PFPeA, PFHxA, PFHpA, PFOA, PFNA, PFDA, PFUnDA（和光純薬工業(株)製）, PFDoDA （ヒドラス社製）,PFTeDA（フルオロケム社製）］各20ngを添加したものを試料水とした。
上記精製水はコンディショニングしたPresep-C PFC(Short、和光純薬工業(株)製)に通液した精製水を使用した。なお、本願実施例中の精製水は全て同様の処理を行ったものである。
また、13種類の酸性基結合パーフルオロ化合物（パーフルオロスルホン酸：PFBS, PFHxS, PFOS, PFDS パーフルオロカルボン酸：PFPeA, PFHxA, PFHpA, PFOA, PFNA, PFDA, PFUnDA, PFDoDA,PFTeDA,PFTeDA）をメタノールに溶解して各々20ng/2mLの溶液となるように調製した。得られた13種類の酸性基結合パーフルオロ化合物を含有する各メタノール溶液を、標準試料とした。
【０１０４】
2.カラムによる固相抽出
(1)カラムのコンディショニング
固相抽出カラム１および固相抽出カラム２に0.1%アンモニア含有メタノール溶液 5mL、メタノール(和光純薬工業(株)製LC/MS用メタノール)5mL、精製水10mLを順次自然落下により通液してコンディショニングを行った。
(2)試料水の通液
吸引マニホールド（ＪＴベーカー社製）を使用し、流速10〜20mL/分となるように減圧力を設定して、試料水1000mLを通液した。
(3)洗浄
吸引マニホールド（ＪＴベーカー社製）を使用し、流速１〜２mL/分となるように減圧力を設定して精製水 5mLで固相抽出カラムを洗浄後、更に5分間吸引を続けてカラムから水分を除去した。
(4)溶出
0.1%アンモニア含有メタノール溶液 2mLを自然落下により2回通液して溶出を行い、２回の溶出により得られた溶出液それぞれを2mLの目盛り付きポリプロピレン製（ＰＰ製）ディスポーザブルスピッツ（ファルコン社製）に採取した。
(5)試験液の調製
得られた各溶出液にメタノール溶液（和光純薬工業(株)製LC/MS用メタノール）をそれぞれ添加して2mLに合わせ、これらを試験液とした。なお、使用した器具類は、PFCsの汚染を除去するためにすべてメタノールで洗浄乾燥した後使用した。
【０１０５】
3.LC/MS/MS法による測定結果
上記固相抽出操作により得た２つの試験液（溶出液１回目と溶出液２回目）と標準試料をそれぞれLC/MS/MSにて分析した。標準試料を分析して得た面積値を100%として、試験液の回収率を求めた。その結果を表１に示す。なお、LC/MS/MSの測定条件は以下の通りである。
＜HPLC条件＞
カラム：Wakopak  Navi  C18-5、  2.0×150mm（和光純薬工業(株)）
溶離液： A)10mM 酢酸アンモニウム水溶液、  B)アセトニトリル
タイムプログラム：0-25分.B=35-90%、25-30分.B=90%、30-35分.B=90-35%、35-40分.B=35%
流速：0.2mL/分.  カラム温度 40℃、    注入量：5μL  
＜LC/MS/MS  イオン化条件＞
Curtain Gas(CUR): 10
Collision Gas (CAD):5
IonSpray Voltage (IS): -4500
Temperature (TEM): 400
Ion Source Gas1 (Gas1): 80
Ion Source Gas2 (Gas2): 70
各酸性基結合パーフルオロ化合物の検出イオン（Q1とQ3）は以下に示したとおりである。
【０１０６】
【表１】
0005492084.tif 000064
【０１０７】
上記表１から明らかなように、本発明のカラム１及び２を使用して固相抽出した結果、何れのカラムを用いても各種酸性基結合パーフルオロ化合物について80%以上の高い回収率で抽出できることが判った。更に、本発明のカラム１では、酸性基結合パーフルオロ化合物10種類全てについて90%以上の回収率を示した。本発明のカラム２でもパーフルオロスルホン酸については90%以上の回収率を示した。即ち、何れのカラムにおいても、炭素数10以下の酸性基結合パーフルオロ化合物において特に高い回収率を示すことも判った。溶出に関しては、２回目の溶出（２mL）による溶出効果は弱いことから、本発明の充填剤60mgにおいては、初回の2mLの溶出液により目的物の溶出がほぼ完了することが判った。
【０１０８】
実施例４  本発明のポリマー１を用いた酸性基結合パーフルオロ化合物（PFCs）の添加回収実験
1.カラム及び試料の調製
1-1.カラムの作製
実施例１で調製した本発明のポリマー１ 60mgを3mLシリンジ（(株)プロニクス社製）に細孔径20μmのフィルター（有限会社ヨコー）に充填したものを、固相抽出カラム３とした。
2.カラムによる固相抽出
溶出を１回とした以外は実施例３と同じ方法で行った。
3.LC/MS/MS法による測定結果
固相抽出操作により得た試験液と標準試料をそれぞれLC/MS/MSにて分析した。標準試料を分析して得た面積値を100%として、試験液の回収率を求めた。その結果を表２に示す。なお、LC/MS/MSの測定条件は実施例３と同じである。
【０１０９】
【表２】
0005492084.tif 000065
【０１１０】
表２の結果より、PFPeA（パーフルオロペンタン酸）のみ86%であったが、それ以外は全て90%以上であり、本発明のポリマー１を用いれば酸性基結合パーフルオロ化合物全てについて回収率80％以上で回収することが出来、多部分の化合物については90%以上の回収率を示すことが判った。
【０１１１】
比較例１  Presep-C Agri(Short)カラムを用いたPFCsの添加回収実験
1.カラム及び試料の調製
1-1.カラム
市販のPresep-C Agri(Short)（220mgクローズドタイプカラム、和光純薬工業（株）製）を用いた。なお、Presep-C Agriの構造式を以下に示す。
0005492084.tif 000066
【０１１２】
1-2.試料の調製
精製水1000mLに13種類の酸性基結合パーフルオロ化合物（パーフルオロスルホン酸：PFBS, PFHx, PFOS, PFDS、酸性基結合パーフルオロカルボン酸：PFPeA, PFHxA, PFHpA, PFOA, PFNA, PFDA, PFUnDA, PFDoDA,PFTeDA）各20ngを添加したものを、試料水とした。
また、13種類の酸性基結合パーフルオロ化合物（パーフルオロスルホン酸：PFBS, PFHxS, PFOS, PFDS パーフルオロカルボン酸：PFPeA, PFHxA, PFHpA, PFOA, PFNA, PFDA, PFUnDA, PFDoDA,PFTeDA,PFTeDA）をメタノールに溶解してそれぞれ20ng/2mLの溶液としたものを標準試料とした。
【０１１３】
2.カラムによる固相抽出
(1)カラムのコンディショニング
Presep-C Agriに、メタノール(和光純薬工業(株)製LC/MS用メタノール)10mL、精製水10mLを順次自然落下により通液した。
(2)試料液の通液
吸引マニホールド（ＪＴベーカー社製）を使用し、流速10〜20mL/分となるように減圧力を設定して、試料水1000mLを通液した。
(3)洗浄
吸引マニホールド（ＪＴベーカー社製）を使用し、流速1〜2mL/分となるように減圧力を設定して、精製水 5mLでカラムを洗浄後、更に5分間吸引を続けてカラムから水分を除去した。
(4)溶出
メタノール（和光純薬工業(株)製LC/MS用メタノール）2mLを自然落下により2回通液して溶出を行い、２回の溶出により得られた溶出液それぞれを2mLの目盛り付きＰＰ製ディスポーザブルスピッツに採取した。
(5)試験液の調製
得られた各溶出液にメタノール（和光純薬工業(株)製LC/MS用メタノール）をそれぞれ添加して2mLに合わせ、これらを試験液とした。なお、使用した器具類は、PFCsの汚染を除去するためにすべてメタノールで洗浄乾燥した後使用した。
【０１１４】
3.LC/MS/MS法による測定結果
上記固相抽出操作より得た２つの試験液（溶出液１回目と溶出液２回目）と標準試料それぞれをLC/MS/MSにて分析した。標準試料の面積値を100%として、試験液の回収率を求めた。その結果を表３に示す。なお、LC/MS/MSの測定条件は実施例３と同じである。
【０１１５】
【表３】
0005492084.tif 000067
【０１１６】
表３の結果から明らかなように、親水性逆相ポリマー樹脂を使用したPresep-C Agriカラムでは、パーフルオロスルホン酸では炭素数4以下、パーフルオロカルボン酸では炭素数７以下の回収率が何れも50%以下であった。また、炭素数14のPFTeDA（パーフルオロテトラデカン酸）の回収率も80%未満であった。従って、Presep-C Agriカラムは、特定の酸性基結合パーフルオロ化合物の固相抽出に用いることは可能であるが、酸性基結合パーフルオロ化合物全てを同時に測定するには不適であることが示された。
【０１１７】
比較例2  Oasis  HLBを用いた酸性基結合パーフルオロ化合物（PFCs）の添加回収実験
1.カラム及び試料の調製
1-1.カラム
市販のOasis  HLB（225mgクローズドタイプカラム、ウォーターズ（株）製）を用いた。
1-2.試料の調製
精製水1000mLに13種類の酸性基結合パーフルオロ化合物（パーフルオロスルホン酸：PFBS, PFHx, PFOS, PFDS、 パーフルオロカルボン酸：PFPeA, PFHxA, PFHpA, PFOA, PFNA, PFDA, PFUnDA, PFDoDA,PFTeDA）各20ngを添加したものを、試料水とした。
また、13種類の酸性基結合パーフルオロ化合物（パーフルオロスルホン酸：PFBS, PFHxS, PFOS, PFDS パーフルオロカルボン酸：PFPeA, PFHxA, PFHpA, PFOA, PFNA, PFDA, PFUnDA, PFDoDA、PFTeDA,PFTeDA）をメタノールに溶解して20ng/4mLとしたものを標準試料とした。
【０１１８】
2.カラムによる固相抽出
(1)カラムのコンディショニング
Oasis  HLB に、メタノール(和光純薬工業(株)製LC/MS用メタノール)5mL、精製水5mLを順次自然落下により通液した。なお、Oasis  HLBの充填剤の構造を以下に示す。
0005492084.tif 000068
(2)試料液の通液
吸引マニホールド（ＪＴベーカー社製）を使用し、流速10〜20mL/分となるように減圧力を設定して、試料水1000mLを通液した。
(3)洗浄
吸引マニホールド（ＪＴベーカー社製）を使用し、流速1〜2mL/分となるように減圧力を設定して精製水 5mLでカラムを洗浄後、更に5分間吸引を続けてカラムから水分を除去した。
(4)溶出
メタノール4mLを自然落下により通液して溶出を行い、4mLの目盛り付きＰＰ製ディスポーザブルスピッツに採取した。
(5)試験液の調製
得られた溶出液にメタノール（和光純薬工業(株)製LC/MS用メタノール）を添加して4mLに合わせ試験液とした。なお、使用した器具類は、PFCsの汚染を除去するためにすべてメタノールで洗浄乾燥した後使用した。
【０１１９】
3.LC/MS/MS法による測定結果
上記固相抽出操作より得た試験液と標準試料をそれぞれLC/MS/MSにて分析した。標準試料の面積値を100%として、試験液の回収率を求めた。その結果を表４に示す。なお、LC/MS/MSの測定条件は実施例３と同じである。
【０１２０】
比較例3  Oasis  WAXを用いた酸性基結合パーフルオロ化合物（PFCs）の添加回収実験
1.カラム及び試料の調製
1-1.カラム
市販のOasis  WAX（225mgクローズドタイプカラム、ウォーターズ（株）製）を用いた。
1-2.試料の調製
精製水1000mLに13種類の酸性基結合パーフルオロ化合物（パーフルオロスルホン酸：PFBS, PFHx, PFOS, PFDS、 パーフルオロカルボン酸：PFPeA, PFHxA, PFHpA, PFOA, PFNA, PFDA, PFUnDA, PFDoDA,PFTeDA）各20ngを添加したものを、試料水とした。
また、13種類の酸性基結合パーフルオロ化合物（パーフルオロスルホン酸：PFBS, PFHxS, PFOS, PFDS パーフルオロカルボン酸：PFPeA, PFHxA, PFHpA, PFOA, PFNA, PFDA, PFUnDA, PFDoDA、PFTeDA,PFTeDA）をメタノールに溶解して20ng/4mLとしたものを標準試料とした。
【０１２１】
2.カラムによる固相抽出
(1)カラムのコンディショニング
Oasis WAXに、メタノール(和光純薬工業(株)製LC/MS用メタノール)５mL、精製水５mLを順次自然落下により通液した。なお、Oasis WAXの充填剤の構造を以下に示す。
0005492084.tif 000069
(2)試料液の通液
吸引マニホールド（JTベーカー社製）を使用し、流速10〜20mL/分となるように減圧力を設定して、試料水1000mLを通液した。
(3)洗浄
吸引マニホールド（ＪＴベーカー社製）を使用し、流速1〜2mL/分となるように減圧力を設定してメタノール 2mLでカラムを洗浄後、更に5分間吸引を続けてカラムから水分を除去した。
(4)溶出
1%アンモニア含有メタノール4mLを自然落下により通液して溶出を行い、4mLの目盛り付きＰＰ製ディスポーザブルスピッツに採取した。
(5)試験液の調製
得られた溶出液にメタノール（和光純薬工業(株)製LC/MS用メタノール）を添加して4mLに合わせ試験液とした。なお、使用した器具類は、PFCsの汚染を除去するためにすべてメタノールで洗浄乾燥した後使用した。
【０１２２】
3.LC/MS/MS法による測定結果
上記固相抽出操作より得た試験液と標準試料それぞれをLC/MS/MSにて分析した。標準試料の面積値を100%として、試験液の回収率を求めた。その結果を表4に併せて示す。なお、LC/MS/MSの測定条件は実施例３と同じである。
【０１２３】
【表４】
0005492084.tif 000070
【０１２４】
表４の結果から明らかなように、Oasis HLB、Oasis WAX共に炭素数が12以上のPFDeDA(パーフルオロドデシルカルボン酸)、PFTeDA(パーフルオロテトラデカン酸)の回収率が、80%未満であり、特に炭素数14のPFTeDA(パーフルオロテトラデカン酸)は、何れも70％未満と低い回収率であった。
以上のように、表３、表４の結果によれば、酸性基結合パーフルオロ化合物の回収に関し、親水性逆相ポリマー樹脂を使用したカラムであるPresep-C Agriでは、炭素数が小さいもの（７以下）又は炭素数が大きいもの（14以上）の回収率が低くなり、酸性基結合パーフルオロ化合物の回収用として市販されているOasis HLB、Oasis WAXでは、炭素数が大きいもの（12以上）の回収率が低くなることが判った。一方、表１及び表２の結果から明らかなように、本発明のカラムを用いれば、炭素数の数に関わらず全ての酸性基結合パーフルオロ化合物において、80%以上の回収率を示し、且つ導入する陰イオン交換基の種類によっては、ほとんどの酸性基結合パーフルオロ化合物において90%以上と高い回収率で回収することが出来た。従って、本発明のカラムを用いることにより、炭素数の長さに関わらずパーフルオロスルホン酸、パーフルオロカルボン酸等の末端に酸性基を有するパーフルオロ化合物を効率良く同時に測定し得ることが示された。
【０１２５】
実施例5  本発明のポリマー3の合成
疎水性モノマーとしてジビニルベンゼン（新日鐵化学(株)製、純度57%） 85.0g（純ジビニルベンゼンを0.37mol含有）、極性モノマー（イオン交換基の導入が可能なモノマー）としてグリシジルメタクリレート（和光純薬工業(株)製）15.0g（グリシジルメタクリレートを0.106mol含有）を用い、水に不溶な有機溶媒としてトルエン100gを用いた。これらを混合したものに重合開始剤としてアゾビスイソブチロニトリル（和光純薬工業(株)製）1.0gを溶解した後、0.2重量%のメチルセルロース水溶液0.8L中に懸濁させ、高速攪拌を行い油滴の平均粒径が約40μmになるように調整した。その後、攪拌装置の付いた重合装置に移し、80℃で6時間反応させて、架橋性多孔質共重合体粒子を得た。この粒子をろ過し、更に、水2L、メタノール2Lで洗浄し、酢酸エチルに1晩浸漬した。次いで、メタノール2Lで洗浄し、乾燥した。なお、このようにして得られた架橋性多孔質共重合体粒子は、平均細孔径4.0nm、比表面積429m2/gであった。該粒子を32μm及び63μmの篩を用いて分級し、平均粒子径約40μmの粒子37gを得た。
得られた分級後の多孔質共重合体10.0gを50% 2-プロパノール水溶液50mL中に分散して均一なスラリーとし、攪拌装置の付いた反応装置に移し、N、N-ジメチルアミノエタン（和光純薬工業(株)製）15g（0.17mol）を加えて40℃で20時間アミノ化を行った。反応終了後、水、メタノールの順に洗浄し、乾燥し、本発明のポリマー3を得た。導入されたエチルジメチルアンモニウム基（陰イオン交換基）の量を逆滴定法により求めたところ0.34meq/g gel dry であった。なお、以下に本発明のポリマー3の構造式を示す。
【０１２６】
0005492084.tif 000071
【０１２７】
実施例6  本発明のポリマー4の合成
疎水性モノマーとしてジビニルベンゼン（新日鐵化学(株)製、純度57%） 80.0g（純ジビニルベンゼンを0.37mol含有）、極性モノマー（イオン交換基の導入が可能なモノマー）としてグリシジルメタクリレート（和光純薬工業(株)製）15.0g（グリシジルメタクリレートを0.106mol含有）とイソシアヌル酸トリアリル（東京化成工業(株)製）5g（イソシアヌル酸トリアリルを0.02mol含有）を用いた以外は、実施例5と同じ試薬を用い同様の方法で、架橋性多孔質共重合体粒子を得た。この樹脂粒子を同様に洗浄後、乾燥した。この架橋性多孔質共重合体粒子は、平均細孔径3.9nm、比表面積380m2/gであった。この粒子を、32μm及び63μmの篩を用いて分級後、実施例5と同様の方法でエチルジメチルアンモニウム基を導入し、本発明のポリマー4を得た。導入されたエチルジメチルアンモニウム基（陰イオン交換基）の量を逆滴定法により求めたところ0.30meq/g gel dry であった。なお、以下に本発明のポリマー4の構造式を示す。
【０１２８】
0005492084.tif 000072
【０１２９】
比較例4  比較ポリマー1の合成
疎水性モノマーとしてジビニルベンゼン（新日鐵化学(株)製、純度57%） 65.0g（純ジビニルベンゼンを0.28mol含有）、極性モノマー（イオン交換基の導入が可能なモノマー）としてグリシジルメタクリレート（和光純薬工業(株)製）30.0g（グリシジルメタクリレートを0.21mol含有）とジメチルアクリルアミド（和光純薬工業(株)製）5g（ジメチルアクリルアミドを0.05mol含有）を用いた。水に不溶な有機溶媒としてトルエン60g、ラウリルアルコール40gを用いた以外は、実施例5と同じ試薬を用い同様の方法で、架橋性多孔質共重合体粒子を得た。この樹脂粒子を同様に洗浄後、乾燥した。この架橋性多孔質共重合体粒子は、平均細孔径29.8nm、比表面積260m2/gであった。この粒子を32μm及び63μmの篩を用いて分級後、反応時間を6時間とし、N、N-ジメチルアミノエタンの代わりにトリメチルアミン（和光純薬工業(株)製、30%水溶液）40gを用いた以外は実施例5と同様の方法でトリメチルアミノ基（陰イオン交換基）を導入し、比較ポリマー1を得た。導入された陰イオン交換基の量を逆滴定法により求めたところ0.29meq/g gel dryであった。なお、以下に比較ポリマー1の構造式を示す。
【０１３０】
0005492084.tif 000073
【０１３１】
比較例5  比較ポリマー2の製造
疎水性モノマーとしてジビニルベンゼン（新日鐵化学(株)製、純度57%） 70.0g（ジビニルベンゼンを0.306mol含有）、極性モノマー（イオン交換基の導入が可能なモノマー）としてクロロメチルスチレン（東京化成工業(株)製、純度90%）20.0g（純クロロメチルスチレンを0.146mol含有）と極性モノマーとしてジメチルアクリルアミド（和光純薬工業(株)製）10.0g（ジメチルアクリルアミドを0.1mol含有）を用いた。水に不溶な有機溶媒としてトルエン60g、ラウリルアルコール40gを用いた。これらを混合したものに重合開始剤としてアゾビスイソブチロニトリル（和光純薬工業(株)製）1.0gを溶解した後、0.2重量%のメチルセルロース水溶液0.8L中に懸濁させ、高速攪拌を行い油滴の平均粒径が約40μmになるように調整した。その後、攪拌装置の付いた重合装置に移し、80℃で6時間反応させて、架橋性多孔質共重合体粒子を得た。この粒子をろ過し、更に、水2L、メタノール2Lで洗浄し、酢酸エチルに1晩浸漬した。次いで、メタノール2Lで洗浄し、乾燥した。なお、このようにして得られた架橋性多孔質共重合体粒子は、平均細孔径3.8nm、比表面積96m2/gであった。該粒子を32μm及び63μmの篩を用いて分級し、平均粒子径約40μmの粒子35gを得た。
得られた分級後の多孔質共重合体10.0gを50% 2-プロパノール水溶液50mL中に分散して均一なスラリーとし、攪拌装置の付いた反応装置に移し、N、N-ジメチルアミノエタン（和光純薬工業(株)製）15gを加えて40℃で8時間アミノ化を行った。反応終了後、水、メタノールの順に洗浄し、乾燥し、比較ポリマー2を得た。導入された陰イオン交換基の量を逆滴定法により求めたところ0.34meq/g gel dryであった。なお、以下に比較ポリマー2の構造式を示す。
【０１３２】
0005492084.tif 000074
【０１３３】
実施例7  各種薬物の添加回収実験
pH7に調整した2mol/L酢酸ナトリウム緩衝液6mLに、表1に示す薬物8種全てを添加して、各薬物を表中の量含有する試験液を調製した。尚、酢酸ナトリウム緩衝液に難溶の薬物については、表中の量の薬物をメタノールに一旦溶解した後、該メタノールを緩衝液に添加した。
また、メタノール2mL中に、表1中の薬物8種について右欄に記載の薬物量を添加し、標準液を調製した。
【０１３４】
【表５】
0005492084.tif 000075
【０１３５】
充填剤として、本発明のポリマー３、４、比較ポリマー１、２及びOasis MAXを用い、内容量4mLのシリンジ型カートリッジにそれぞれ60mgずつ充填したものを固相抽出用カートリッジとした。
【０１３６】
添加回収実験は、以下の如く行った。
即ち、先ず、固相抽出カートリッジにメタノール2mL、精製水2mL、pH7に調整した2mol/L酢酸ナトリウム緩衝液1mLを通液した後、上記試験液全量を注入した。次いで、pH7に調整した0.1mol/L酢酸ナトリウム緩衝液95mLとメタノール5mLの混合溶液2mLを同カートリッジに通液して洗浄した。その後、固相抽出カートリッジにメタノール2mLを通液して固相に吸着した吸着物を溶出した。回収した溶液2mLをHPLCで分離し、そのUV吸収を測定し、回収率を求めた。得られた回収率（％）を表２に示す。なお、回収率は、標準液を直接、同条件にてHPLCで分離し測定したUV吸収を基準値（100%）として算出した（以下、同じ）。また、HPLC条件は以下の通りである。
【０１３７】
[HPLC 条件]    
カラム             ： Wakopak Wakosil-II 5C18 HG、4.6x150mm
溶離液             ： A) 0.1%  リン酸  B)アセトニトリル
グラジエント       ： 0-15min.  B 5-85%, 15-25min. B 5%            
流速               ： 1.0mL/min.  at 40℃          
インジェクション量 ： 5μl            
装置               ： HPLC : Prominence system(島津)  
【０１３８】
さらに酸性化合物を溶出させるため、2%ギ酸を含むメタノール溶液4mLを通液した。固相抽出カートリッジから溶出した回収液4mLを上記条件にてHPLCで分離し、そのUV値を測定し、回収率を求めた。得られた回収率（％）を表３に示す。
【０１３９】
【表６】
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【０１４０】
【表７】
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【０１４１】
表6の結果から、本発明のポリマー３及びポリマー４によれば、Oasis MAXでは回収率の低い、テオフィリンや硫酸アトロピン、ノルトリプチリン塩酸塩等でも、ほぼ100%回収できることが判った。
一方、本発明のポリマー３及び４と一部類似構造を有する比較ポリマー１については、中性化合物、塩基性化合物何れも低い回収率を示した。同様に、本発明のポリマー３及び４と一部類似構造を有する比較ポリマー２についても、テオフィリンやスコポラミン臭化水素について低い回収率を示した。中性及び塩基性化合物の保持能力は、ポリマー骨格の構造による影響が大きいと推測される。従って、本発明のポリマー３及び４のような、ジビニルベンゼンとグリシジルメタクリレートからなるポリマー構造やジビニルベンゼン、イソシアヌル酸トリアリル及びグリシジルメタクリレートからなるポリマー構造が、中性及び塩基性化合物の高い保持能力に寄与していると考えられた。
酸性化合物である、サリチル酸及びナプロキセンは、メタノールでは溶出できなかったが、表7の結果から明らかなように、2%ギ酸を含むメタノールで溶出し得、その結果によれば、本発明のポリマー３及び４は、Oasis MAXとほぼ同等の回収率であることが判った。比較ポリマー２は、サリチル酸及びナプロキセン共に70%弱の回収率であり、低い値を示した。酸性化合物の保持能は主に陰イオン交換基により左右されると推測されたが、この結果によれば、同じイオン交換基（エチルジメチルアンモニウム基）を有していても、基本のポリマー骨格が異なると酸性化合物の保持能も変化することが判った。従って、本発明のポリマー３及び４の如きポリマーに陰イオン交換基を導入することにより、中性、塩基性化合物の優れた保持能のみでなく、優れた酸性化合物の保持能も有することが明らかとなった。
【産業上の利用可能性】
【０１４２】
本発明は、新規なポリマー、及び該ポリマーを含んでなる充填剤を提供するものであり、該充填剤は、種々の酸性基結合パーフルオロ化合物を効率よく吸着し得るものである。よって、該充填剤を用いた固相抽出方法によれば、種々の酸性基結合パーフルオロ化合物を同時に且つ効率よく測定することが可能となる。また、上記ポリマーを含んでなる充填剤は、薬物を効率よく吸着し得るものであり、該充填剤を用いた固相抽出方法によれば、酸性、塩基性又は／及び中性の薬物を効率よく測定することが可能となる。