(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
関節リウマチ（ＲＡ）により対象に生じる内因性代謝物の代謝プロファイルの変動のインビトロ検出方法であって、
（ｉ）対象におけるＮ種類の内因性代謝物（但し、Ｎは１１である）の代謝プロファイルを作成するために、対象から得られた生体試料におけるＮ種類の内因性代謝物の濃度を測定する段階；
（ｉｉ）Ｎ種類の内因性代謝物の濃度測定値を対照から得られた生体試料又は以前に対象から得られた生体試料における内因性代謝物の対応濃度と比較する段階（但し、Ｎ種類の内因性代謝物は
ＥＭ１  フェニルアラニン
ＥＭ２  チロシン
ＥＭ３  イソロイシン
ＥＭ８  グリシン
ＥＭ９  グルタミン
ＥＭ１０  メチオニン
ＥＭ１４  リジン
ＥＭ１５  アスパラギン
ＥＭ１６  セリン
ＥＭ１７  トリプトファン
ＥＭ１８  トレオニン
であり、
代謝プロファイルの変動は対象から得られた生体試料におけるＮ種類の内因性代謝物の各々の濃度測定値が対照から得られた生体試料又は以前に対象から得られた生体試料における内因性代謝物の対応濃度に比較して減少している変動であり、
代謝プロファイルの変動は対象におけるＲＡに起因する）；
を含む前記方法。
【請求項２】
請求項１に記載の関節リウマチ（ＲＡ）により対象に生じる内因性代謝物の代謝プロファイルの変動のインビトロ検出方法であって、
（ｉ）対象におけるＮ種類の内因性代謝物（但し、Ｎは１１である）の代謝プロファイルを作成するために、対象から得られた生体試料におけるＮ種類の内因性代謝物の濃度を測定する段階；
（ｉｉ）Ｎ種類の内因性代謝物の濃度測定値を以前に対象から得られた生体試料における内因性代謝物の対応濃度と比較する段階（但し、Ｎ種類の内因性代謝物は
ＥＭ１  フェニルアラニン
ＥＭ２  チロシン
ＥＭ３  イソロイシン
ＥＭ８  グリシン
ＥＭ９  グルタミン
ＥＭ１０  メチオニン
ＥＭ１４  リジン
ＥＭ１５  アスパラギン
ＥＭ１６  セリン
ＥＭ１７  トリプトファン
ＥＭ１８  トレオニン
から構成される群から選択され、
代謝プロファイルの変動は対象から得られた生体試料におけるＮ種類の内因性代謝物の各々の濃度測定値が以前に対象から得られた生体試料における内因性代謝物の対応濃度に比較して減少している変動であり、
代謝プロファイルの変動は対象におけるＲＡに起因する）；
を含む前記方法。
【請求項３】
対象における健常代謝プロファイルの悪化速度又は改善速度又は回復速度のモニター方法であって、請求項２に記載の方法を含み、
更に、内因性代謝物の減少量を対象からの初回（即ち以前の）試料の採取から２回目の試料の採取までの時間で割る段階を含む前記方法。
【請求項４】
生体試料が生体液である請求項１から３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
対象が温血動物である請求項１から４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
対象が哺乳動物である請求項５に記載の方法。
【請求項７】
Ｎ種類の内因性代謝物の濃度の１以上をクロマトグラフィー又は分光学的手段により測定する請求項１から６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
Ｎ種類の内因性代謝物の濃度の１以上を分光学的手法とケモメトリックス法の併用により測定する請求項１から７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
（ａ）内因性代謝物の１種以上を多波長分光測定により測定するか、又は、
（ｂ）内因性代謝物の１種以上を測定する前に化学変換（即ち誘導体化）する、請求項１から８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
個々の内因性代謝物と個別に結合した後に検出される試薬を使用することにより内因性代謝物の１種以上を測定する請求項１から９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
対象試料と対照試料又は異なる時点で対象から採取した試料間の内因性代謝物の濃度の減少が有意な減少である請求項１から１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
請求項１又は２に記載の方法において以下の全ての内因性代謝物：
ＥＭ１  フェニルアラニン
ＥＭ２  チロシン
ＥＭ３  イソロイシン
ＥＭ８  グリシン
ＥＭ９  グルタミン
ＥＭ１０  メチオニン
ＥＭ１４  リジン
ＥＭ１５  アスパラギン
ＥＭ１６  セリン
ＥＭ１７  トリプトファン、及び
ＥＭ１８  トレオニン
の存在を検出するための試薬を含むキットの使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は対象における障害ないし疾患、例えば自己免疫疾患、特に関節リウマチの代謝プロファイルを作成するための内因性代謝物の使用と、対象における前記プロファイルにおいて前記疾患ないし障害に起因又は相関する変動を検出するための前記代謝プロファイルの分析に関する。このような変動は特定化合物、特にＮ−（２−クロロ−３，４−ジメトキシベンジリデンアミノ）グアニジン又はアミノグアニジンを対象に投与することにより正常化することができる。
【背景技術】
【０００２】
全自己免疫疾患（ＡＤ）は免疫系機能を調節するメカニズムの破綻に起因する。２００５年に、米国人口の５〜８％がＡＤ患者であると推定された（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ（２００５））。８０種類を越える疾患がＡＤに分類されており、自己免疫性であると疑われている疾患も多い（一般的なＡＤと、自己免疫の関与を疑われている疾患の一覧については、表１参照）。
【０００３】
【表１】
0005607719.tif 000002
【０００４】
【表２】
0005607719.tif 000003
【０００５】
ＡＤの原因
原因は不明であるが、全ＡＤは免疫系機能を調節するメカニズムの破綻に起因し、その結果、体内の臓器と組織に対する自己免疫攻撃を生じる。この疾患は分子レベルでも所定の類似点がある（Ｋａｒｏｐｋａ，Ｔ．ｅｔ  ａｌ．，ＢＭＣ  Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ．７：（２００６）；ｖａｎ  ｄｅｒ  Ｐｏｕｗ  Ｋｒａａｎ，Ｔ．Ｃ．Ｔ．Ｍ．ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎ．Ｒｈｅｕｍ．Ｄｉｓ．６６：１００８−１０１４（２００７））。あるＡＤに罹患している患者は１種類以上のＡＤに罹患していることが多い（Ｔｓｕｎｅｙａｍａ，Ｋ．ｅｔ  ａｌ．，Ｄｉｇ．Ｄｉｓ．Ｓｃｉ．４５：３６６−３７２（２０００））。複数の自己免疫疾患をもつ家族では、Ｔ１Ｄ、ＲＡ、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）及び自己免疫性甲状腺疾患（ＡＩＴＤ）（橋本病ないしグレーブス病）の４種類の異なる自己免疫疾患のリスクが高いことが分かった（Ｃｒｉｓｗｅｌｌ，Ｌ．Ａ．ｅｔ  ａｌ．，Ａｍ．Ｊ．Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅｔ．７６：５６１−５７１（２００５））。関節リウマチ（ＲＡ）と統合失調症に関する研究によると、これらの疾患には共通の感染及び／又は免疫原因があると考えられる（Ｔｏｒｒｅｙ，Ｅ．Ｆ．ｅｔ  ａｌ．，Ｂｒａｉｎ  Ｂｅｈａｖ．Ｉｍｍｕｎ．１５：４０１−４１０（２００１）；Ｅａｔｏｎ，Ｗ．Ｗ．ｅｔ  ａｌ．，Ａｍ．Ｊ．Ｐｓｙｃｈｉａｔ．１６３：５２１−５２８（２００６）；Ｅａｔｏｎ，Ｗ．Ｗ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ａｕｔｏｉｍｍｕｎ．２９：１−９（２００７））。
【０００６】
ＡＤの原因、発病及び治療を研究するためには対応する動物モデルが不可欠である（Ｂｕｒｋｈａｒｄｔ，Ｈ．ｅｔ  ａｌ．，Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．Ｉｎｔ．１７：８５−９０（１９９７））が、原因がはっきりしないため、適切な動物モデルを選択するのは困難である（Ｄｒｅｓｃｈｅｒ，Ｋ．Ｍ．ｅｔ  ａｌ．，Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：３７７５−３７８５（２００８））。
【０００７】
糖尿病になり易いＢＢラットはヒトＴ１Ｄと同様にＴ１Ｄを発症する（Ｊａｃｏｂ，Ｈ．Ｊ．ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ｇｅｎｅｔｉｃｓ．２：５６−６０（１９９２）；Ｍｏｒｄｅｓ，Ｊ．Ｐ．ｅｔ  ａｌ．，Ｉｌａｒ  Ｊｏｕｒｎａｌ．４５：２７８−２９１（２００４）；Ｆｕｌｌｅｒ，Ｊ．Ｍ．ｅｔ  ａｌ．，Ｄｉａｂｅｔｅｓ．５５：３３５１−３３５７（２００６））。齧歯類モデルもＲＡの発病研究における重要なツールであり（Ｔｅｒａｔｏ，Ｋ．ｅｔ  ａｌ．，Ｂｒ．Ｊ．Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．３５：８２８−８３８（１９９６）；Ｂｕｒｋｈａｒｄｔ，Ｈ．ｅｔ  ａｌ．，Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．Ｉｎｔ．１７：８５−９０（１９９７）；Ａｎｔｈｏｎｙ，Ｄ．Ｄ．ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．１７：２４０−２４４（１９９９）；Ｈｏｌｍｄａｈｌ，Ｒ．ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．１８４：１８４−２０２（２００１）；Ｎａｎｄａｋｕｍａｒ，Ｋ．Ｓ．ｅｔ  ａｌ．，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｅｓ．Ｔｈｅｒ．８：（２００６））、感受性遺伝子の研究の基礎にもなっている（Ｒｅｍｍｅｒｓ，Ｅ．Ｆ．ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ｇｅｎｅｔｉｃｓ．１４：８２−８５（１９９６）；Ｈｏｌｍｄａｈｌ，Ｒ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１０：７１０−７１７（１９９８））。臓器系がヒトと類似する大型動物モデルは糖尿病と関節炎の両方の研究において重要なツールである（Ｌａｒｓｅｎ，Ｍ．Ｏ．ｅｔ  ａｌ．，Ｉｌａｒ  Ｊｏｕｒｎａｌ．４５：３０３−３１３（２００４）；Ｖｉｅｒｂｏｏｍ，Ｍ．Ｐ．Ｍ．ｅｔ  ａｌ．，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｅｓ．Ｔｈｅｒ．７：１４５−１５４（２００５））。
【０００８】
グループ及びサブグループ
全ＡＤの共通の特徴は細胞と組織に対する自己免疫攻撃を生じ、体内の任意臓器を冒す可能性のある全身衰弱である。
【０００９】
以下の定着又は疑似ＡＤ、即ち１、２、４、９、１０、１２、１６、２０、２１、２２、２３、２５、２７、２８、２９、３５、３７、３８、３９、４５、４６、４８、４９、５２、５３、５５及び５８は科学研究で相互に関連付けられており、原因又は罹患臓器に関して共通の特徴をもつ。より具体的には、このサブグループのＡＤは関節炎病態との関連を報告されており、一般に例えば関節や組織における例えばミエリン又は結合組織の分解を特徴とする。
【００１０】
更に、以下の定着又は疑似ＡＤのサブグループ、即ち４、９、１６、２０、３５、３７、３９、４５、４６、４８、４９、５２、５３及び５８も科学研究で相互に関連付けられており、原因又は罹患臓器に関して共通の特徴をもつ。このサブグループのＡＤは、特に関節、皮膚及び眼球における結合組織の分解を特徴とする関節炎病態との関連を報告されている。
【００１１】
更に、以下の定着又は疑似ＡＤのサブグループ、即ち１、１２、２８、３７及び３８も科学研究で相互に関連付けられており、原因又は罹患臓器に関して共通の特徴をもつ。このサブグループのＡＤはいずれも中枢神経系のミエリンの分解を伴う。
【００１２】
更に、以下の定着又は疑似ＡＤのサブグループ、即ち１３、１９、２０、２４、３２、３６、４０、４５、４６、５１、５７及び６０も科学研究で相互に関連付けられており、原因又は罹患臓器に関して共通の特徴をもつ。このサブグループのＡＤはいずれも例えば結合組織の分解又は皮膚の硬化により皮膚を冒す。乾癬病態は関節炎病態と関連付けられている。
【００１３】
更に、以下の定着又は疑似ＡＤのサブグループ、即ち１４、１８、４１及び５６も科学研究で相互に関連付けられており、原因又は罹患臓器に関して共通の特徴をもつ。このサブグループのＡＤはいずれも例えば腸管組織の分解により消化器系を冒す。このサブグループにおける病態は関節炎病態であるループスと関連付けられている。
【００１４】
、更に、以下の定着又は疑似ＡＤのサブグループ、即ち５、６、１１、３０、３１、３３、４２、５４及び５９も科学研究で相互に関連付けられており、原因又は罹患臓器に関して共通の特徴をもつ。このサブグループのＡＤはいずれも例えば血管の分解により心血管系を冒す。このサブグループにおける病態は関節炎病態と関連付けられている。
【００１５】
更に、以下の定着又は疑似ＡＤのサブグループ、即ち１、７、４７及び５０も科学研究で相互に関連付けられており、原因又は罹患臓器に関して共通の特徴をもつ。このサブグループのＡＤはいずれも例えば脳に炎症性病変を生じることにより神経系を冒す。このサブグループにおける病態は関節炎病態及びＭＳと関連付けられている。
【００１６】
更に、以下の定着又は疑似ＡＤのサブグループ、即ち２１、２５、２６、３４及び６１も科学研究で相互に関連付けられており、原因又は罹患臓器に関して共通の特徴をもつ。このサブグループのＡＤはいずれも例えば腎臓及び／又は肺に炎症性破壊を生じることによりこれらの臓器を冒す。このサブグループにおける病態は関節炎病態、Ｔ１Ｄ及びＭＳと関連付けられている。
【００１７】
１態様において、本発明は上記サブグループの疾患のいずれかの高リスクの検出、診断又は予後診断のための本願に記載する方法に関する。
【００１８】
ＡＤの診断
ＡＤは体内の任意臓器又は組織を冒す可能性があり、殆どの場合には、疾患が進行した段階に入り、不可逆的損傷が生じるまで症状が知覚されない。これまで、ＡＤはほぼ臨床診断に限られているが、初期症状が多様で定まらないため、診断は困難になっている（Ｈｅａｌｔｈ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ：（２００２））。大半のＡＤでは、バイオマーカーが存在するとしても、特異的でないため、診断を助長するための実験室ベースの試験の利用可能性が制限されており、そのため、臨床処置と新規治療剤の開発も阻まれている（Ｌｉｕ，Ｃ．Ｃ．ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．１７：５４３−５４９（２００５））。自己抗体がＳＬＥ及び他のＡＤの臨床対応バイオマーカーとして認められている（Ｒａｍｏｓ，Ｐ．Ｓ．ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅｓ  Ｉｍｍｕｎ．７：４１７−４３２（２００６））。
【００１９】
サイトカインはＡＤに関係があるとされており、ＡＤＥＭ（急性散在性脳脊髄炎）（Ｗｉｎｇｅｒｃｈｕｋ，Ｄ．Ｍ．，Ｎｅｕｒｏｌ．Ｒｅｓ．２８：３４１−３４７（２００６））と、ＭＳ（多発性硬化症）と、健常対照を識別するために使用されている（Ｆｒａｎｃｉｏｔｔａ，Ｄ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｌ．Ｓｃｉ．２４７：２０２−２０７（２００６）；Ｗｉｎｇｅｒｃｈｕｋ，Ｄ．Ｍ．ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｎｅｕｒｏｌ．２０：３４３−３５０（２００７））。サイトカインはＲＡの発病にも関与している（Ｅｈｒｅｎｓｔｅｉｎ，Ｍ．Ｒ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．２００：２７７−２８５（２００４）；ＭｃＩｎｎｅｓ，Ｉ．Ｂ．ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．７：４２９−４４２（２００７））。
【００２０】
ＡＤの治療
現状では、大半のＡＤには利用可能な治癒法がなく、患者は終生疾患と係わり、症状を緩和するための治療を続けなければならないと考えられる。治療アプローチとしては、主に、
・損傷した臓器の交換又は低下した機能の修復、
・破壊的な自己免疫応答の抑制
の２種類が利用可能である。
【００２１】
第１の分類において、１例はＴ１Ｄ患者に対するインスリンであるが、ＡＤは治癒されない。膵島細胞塊を復元するためにＴ１Ｄ患者は膵臓又は膵島移植手術を受けることができ（Ｓｕｔｈｅｒｌａｎｄ，Ｄ．Ｅ．Ｒ．ｅｔ  ａｌ．，Ｄｉａｂｅｔｅｓ．３８：８５−８７（１９８９）；Ｋａｎｄａｓｗａｍｙ，Ｒ．ｅｔ  ａｌ．，Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ．Ｐｒｏｃ．３８：３６５−３６７（２００６）；Ｓｕｔｈｅｒｌａｎｄ，Ｄ．Ｅ．Ｒ．ｅｔ  ａｌ．，Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ．Ｐｒｏｃ．３９：２３２３−２３２５（２００７））、幹細胞及び膵前駆細胞からの再生（Ｊｕｎ，Ｈ．Ｓ．，Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：６１７０−６１８２（２００８））を含む新規アプローチを利用できる。
【００２２】
第２の分類は例えば非ステロイド性抗炎症薬や単純な鎮痛剤による徴候と症状の改善、疾患の自然経過の改変（例えばＲＡ患者に対する疾患修飾性抗リウマチ薬（ＤＭＡＲＤ））、疾患により誘発される臓器損傷に起因する合併症の対処に関する。疾患の段階、活動性及び進行を判定し、治療応答を評価するためにはＡＤのバイオマーカーの開発が極めて重要である。
【００２３】
１型糖尿病
Ｔ１Ｄは年少幼児で最も一般的な慢性疾患の１種であり、発症年齢が低下しつつあり、全世界の推定年間増加率は３〜５％であり、早期の優れた診断ツールが必要であることは明白である（Ｏｎｋａｍｏ，Ｐ．ｅｔ  ａｌ．，Ｄｉａｂｅｔｏｌｏｇｉａ．４２：１３９５−１４０３（１９９９）；Ｇａｌｅ，Ｅ．Ａ．Ｍ．，Ｄｉａｂｅｔｅｓ．５１：３３５３−３３６１（２００２）；Ｇｉｌｌｅｓｐｉｅ，Ｋ．Ｍ．ｅｔ  ａｌ．，Ｌａｎｃｅｔ．３６４：１６９９−１７００（２００４））。Ｔ１ＤはＴ細胞介在性ＡＤであり、多くの場合には臨床症状が出現する３〜５年前に始まっており、診断後に持続し、膵島移植後に再発する可能性がある（Ｅｉｓｅｎｂａｒｔｈ，Ｇ．Ｓ．，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３１４：１３６０−１３６８（１９８６）；Ｔｙｄeｎ，Ｇ．ｅｔ  ａｌ．，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３３５：８６０−８６３（１９９６）；Ａｔｋｉｎｓｏｎ，Ｍ．Ａ．ｅｔ  ａｌ．，Ｌａｎｃｅｔ．３５８：２２１−２２９（２００１））。原因は不明であるが、理論的には遺伝的要因と環境要因、場合により更にＴ１Ｄのウイルス感染が結び付けられている（Ｋｙｖｉｋ，Ｋ．Ｏ．ｅｔ  ａｌ．，Ｂｒ．Ｍｅｄ．Ｊ．３１１：９１３−９１７（１９９５）；Ａｋｅｒｂｌｏｍ，Ｈ．Ｋ．ｅｔ  ａｌ．，Ａｍ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｇｅｎｅｔ．１１５：１８−２９（２００２）；Ｂａｒｂｅａｕ，Ｗ．Ｅ．ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｄ．Ｈｙｐｏｔｈｅｓｅｓ．６８：６０７−６１９（２００７））。
【００２４】
Ｔ１Ｄは自己免疫プロセス（段階１）の誘発の結果として膵島自己免疫後に高血糖症（段階２）の臨床発症へと進行する２段階プロセス（図１）とみなされる（Ｄａｈｌｑｕｉｓｔ，Ｇ．Ｇ．ｅｔ  ａｌ．，Ｄｉａｂｅｔｅｓ．４４：４０８−４１３（１９９５）；Ｈｙoｔｙ，Ｈ．ｅｔ  ａｌ．，Ｄｉａｂｅｔｅｓ．４４：６５２−６５７（１９９５）；Ｌｉｎｄｂｅｒｇ，Ｂ．ｅｔ  ａｌ．，Ｄｉａｂｅｔｏｌｏｇｉａ．４２：１８１−１８７（１９９９）；Ｓｋｙｌｅｒ，Ｊ．Ｓ．ｅｔ  ａｌ．，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４６：１６８５−１６９１Ｂ（２００２）；Ｇａｌｅ，Ｅ．Ａ．Ｍ．ｅｔ  ａｌ．，Ｌａｎｃｅｔ．３６３：９２５−９３１（２００４））。
【００２５】
大半の患者は長期自己免疫の終点に達するまで診断されないが、早期に診断されるならば、血中グルコース濃度を良好に制御し、残存する内因性インスリン産生能を維持すると共に、将来の合併症のリスクを低下できると思われる（Ｌｉｖｉｎｇｓｔｏｎｅ，Ｋ．ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｉｎｔ．２４：１０２−１０６（２００７））。リスク要因を同定するために、数件の研究では新生児をＨＬＡ（ヒト白血球抗原）についてスクリーニングし、Ｔ１Ｄのリスクの高いＨＬＡをもつ乳児を同定及び追跡している（Ｋｒｉｓｃｈｅｒ，Ｊ．，Ｐｅｄｉａｔｒ．Ｄｉａｂｅｔｅｓ．８：２８６−２９８（２００７））。Ｔ１Ｄの第一度近親者をもつ幼児における膵島自己抗体の出現とそれに基づく糖尿病の予測が報告されている（Ａｃｈｅｎｂａｃｈ，Ｐ．ｅｔ  ａｌ．，Ｄｉａｂｅｔｅｓ．５３：３８４−３９２（２００４）；Ｂａｒｋｅｒ，Ｊ．Ｍ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．Ｍｅｔａｂ．８９：３８９６−３９０２（２００４）；Ｒｏｎｋａｉｎｅｎ，Ｍ．Ｓ．ｅｔ  ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．１５５：６３３−６４２（２００６））が、Ｔ１Ｄを発症している全乳児の約８５％はこの疾患の第一度近親者をもたない。膵島自己免疫の出現以外に、増殖を含む代謝変化がＴ１Ｄ疾患プロセスに関係があることを示す報告もある（Ｓｈａｈａｍ，Ｏｄｅｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ  Ｓｙｓｔ  Ｂｉｏｌ．４：（２００８））。
【００２６】
【表３】
0005607719.tif 000004
【００２７】
Ｔ１Ｄの予測とＴ１Ｄリスクのバイオマーカーは多数の発明に報告されている（例えばＷＯ２００８／０３１９１７、ＵＳ２００５０５４００５、ＷＯ２００６０６６２６３、ＷＯ２００７１１０３５８及びＤＥ１０２００６０２６１７３）。対象におけるＴ１Ｄの予測に関する１発明（ＷＯ２００８／０３５２０４）は、各種代謝物を測定する段階と、更に遺伝子型を決定する段階を含む（表２参照）。意外にも、本発明者らは、Ｔ１Ｄを発症するリスクの高い対象からの試料がＴ１Ｄ発症のリスクに従来結び付けられていない新規代謝物とユニークな代謝物組合せを含有しており、これらの代謝物の濃度に認められた経時変化がＴ１Ｄの高リスクの指標であることを見出した。
【００２８】
２型糖尿病（Ｔ２Ｄ）では、生体の細胞はインスリン抵抗性を生じるため、インスリンの存在に対して適切に応答しなくなる。他方、Ｔ１ＤとＴ２Ｄの間には多数の類似点があり、両者疾患の原因と発病には関連性がある（Ｔｕｏｍｉ，Ｔ．ｅｔ  ａｌ．，Ｄｉａｂｅｔｅｓ．４２：３５９−３６２（１９９３）；Ｐｉｃｋｕｐ，Ｊ．Ｃ．ｅｔ  ａｌ．，Ｄｉａｂｅｔｏｌｏｇｉａ．４１：１２４１−１２４８（１９９８）；Ｘｉｎｇ，Ｚ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１０１：３１１−３２０（１９９８）；Ｒａｂｉｎｏｖｉｔｃｈ，Ａ．ｅｔ  ａｌ．，Ｒｅｖ．Ｅｎｄｏｃｒ．Ｍｅｔａｂ．Ｄｉｓｏｒｄ．４：２９１−２９９（２００３）；Ａｌｅｘａｎｄｒａｋｉ，Ｋ．Ｉ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２８：３１４−３２１（２００８））。
【００２９】
関節リウマチ
ＲＡは免疫系が関節を攻撃する結果、関節破壊とそれに伴う疼痛により運動能力の実質的な低下に至る廃疾性・疼痛性の病態を生じる慢性炎症性ＡＤである（Ｓｃｏｔｔ，Ｄ．Ｌ．ｅｔ  ａｌ．，Ｂｅｓｔ  Ｐｒａｃｔ．Ｒｅｓ．Ｃｌｉｎ．Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．２１：９４３−９６７（２００７））。ＲＡの原因は殆ど分かっていない（Ｊｅｆｆｅｒｉｅｓ，Ｗ．Ｍ．，Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｈｙｐｏｔｈｅｓｅｓ．５１：１１１−１１４（１９９８）；Ｋｒｉｓｈｎａｎ，Ｅ．，Ｊｏｉｎｔ  Ｂｏｎｅ  Ｓｐｉｎｅ．７０：４９６−５０２（２００３）；Ｋｌａｒｅｓｋｏｇ，Ｌ．ｅｔ  ａｌ．，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ａｎｄ  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ．５４：３８−４６（２００６））。最初の症状はＲＡよりも未分化炎症性関節炎（ＵＩＡ）であり、ＵＩＡが進行してＲＡになると考えられる（Ｄｉｘｏｎ，Ｗ．Ｇ．ｅｔ  ａｌ．，Ｂｅｓｔ  Ｐｒａｃｔ．Ｒｅｓ．Ｃｌｉｎ．Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．１９：３７−５３（２００５））。炎症性関節炎の進行は４段階に分けることができる（図２）。
【００３０】
不可逆的な関節損傷を防ぐためのより有効な治療には早期診断が不可欠である（Ｅｍｅｒｙ，Ｐ．，Ｂｒ．Ｊ．Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．３３：７６５−７６８（１９９４）；ｖａｎ  Ａｋｅｎ，Ｊ．ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎ．Ｒｈｅｕｍ．Ｄｉｓ．６３：２７４−２７９（２００４）；Ｅｍｅｒｙ，Ｐ．，Ｂｒ．Ｍｅｄ．Ｊ．３３２：１５２−１５５（２００６））。慢性関節炎症を発症する患者を検出できるならば、治療を必要とする患者を絞り易くなり、この疾患を発症する可能性の低い患者に不必要な治療をせずに済む（Ｅｍｅｒｙ，Ｐ．ｅｔ  ａｌ．，Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．Ｉｎｔ．２７：７９３−８０６（２００７）；Ｅｍｅｒｙ，Ｐ．ｅｔ  ａｌ．，Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ．４７：３９２−３９８（２００８））。従って、ＲＡに進行する前にＵＩＡである自己免疫応答を診断する方法が必要である（Ｆｉｒｅｓｔｅｉｎ，Ｇ．Ｓ．，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｅｓ．Ｔｈｅｒ．７：１５７−１５９（２００５））。内因性代謝物濃度の測定はこの疾患を診断するだけでなく、発病に関与するメカニズムの新規ヒントにもなる可能性がある。下記実施例では、血漿のＧＣ−ＭＳ（ガスクロマトグラフ質量分析法）により作成したデータを分析することにより、ＲＡに罹患している対象を関連疾患の対象及び健常ボランティアから分離できることを示す（表３参照）。これはＲＡの発症を遅延させるか又は予防もできるように作用する薬剤の開発に不可欠である。
【００３１】
【表４】
0005607719.tif 000005
【００３２】
変形性関節症
変形性関節症（ＯＡ）は世界中で最も一般的な筋骨格系障害であり、米国だけでも約２７００万人が罹患していると推定される（Ｇｈｏｓｈ，Ｐ．ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｇｅｒｏｎｔｏｌｏｇｙ．３：８５−８８（２００２）；Ｌａｗｒｅｎｃｅ，Ｒ．Ｃ．ｅｔ  ａｌ．，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ａｎｄ  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ．５８：２６−３５（２００８））。ＯＡは先進国世界で疾病率の主要な原因であり、多大な社会的・経済的帰結を伴う（Ｓｔａｒｇａｒｄｔ，Ｔ．，Ｈｅａｌｔｈ  Ｅｃｏｎ．１７：Ｓ９−Ｓ２０（２００８））。
【００３３】
ＯＡは関節軟骨及び軟骨下骨の進行性変性及び損失と、滑液反応を特徴とする多因子疾患である。ＯＡの発病と変動性は十分に解明されていないが、年齢、遺伝、ホルモン及び物理的要因がいずれも発症と進行に寄与すると考えられる。
【００３４】
多数の研究がＯＡにおける自己免疫の関与を立証しており（Ｎｉｓｈｉｏｋａ，Ｋ．，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｅｓ．Ｔｈｅｒ．６：６−７（２００４）；Ｐｕｎｚｉ，Ｌ．ｅｔ  ａｌ．，Ｂｅｓｔ  Ｐｒａｃｔ．Ｒｅｓ．Ｃｌｉｎ．Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．１８：７３９−７５８（２００４）；Ｘｉａｎｇ，Ｙ．ｅｔ  ａｌ．，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ．５０：１５１１−１５２１（２００４）；Ｘｉａｎｇ，Ｙ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７６：３１９６−３２０４（２００６））、特に全身結節性ＡＯのサブグループについて立証している（Ｄｏｈｅｒｔｙ，Ｍ．ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎ  Ｒｈｅｕｍ  Ｄｉｓ．４９：１０１７−１０２０（１９９０））。
【００３５】
ＯＡの診断は殆どの場合、数カ月間の疾患進行の結果である関節損傷のＸ線評価を含む。Ｘ線検査は６５歳までの患者の大部分と７５歳を越える患者の約８０％で行われている（Ａｒｄｅｎ，Ｎ．ｅｔ  ａｌ．，Ｂｅｓｔ  Ｐｒａｃｔ．Ｒｅｓ．Ｃｌｉｎ．Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．２０：３−２５（２００６））。この診断方法は現在の疾患活動性の評価又は予後診断には適していないため、ＯＡとＯＡに伴う自己免疫応答の早期診断を可能にするバイオマーカーが必要とされている。これは、特にＯＡを治療するために有効な薬剤の開発に関連して、発症のリスクの評価を可能にし、疾患進行及び重篤度をモニターするために必要である。内因性代謝物濃度の測定は疾患を診断するだけでなく、発病に関与するメカニズムの新規ヒントにもなる可能性がある。下記実施例では、ＯＡ患者を健常個体から分離できることを示す（表４参照）。これはＯＡの発症を遅延させるか又は予防もできるようにするための治療薬の開発に役立つと思われる。
【００３６】
【表５】
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【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００３７】
ＡＤを発症する危険のある対象を識別する１組の内因性代謝物が今回発見された。従って、対象のこれらの内因性代謝物のプロファイルはＡＤの予後診断、検出及び診断に役立つと思われ、いずれも臨床症状が現れる前に実施することができるため、予防処置ないし予防を早期に開始することが可能になり、長期的な組織損傷を最小限にすることができる。これらの内因性代謝物の正常濃度を回復するように作用することができ、ＡＤの発症を予防又は遅延させ、従って、ＡＤの治療に有効な薬剤及び新規化学物質（ＮＣＥ）のスクリーニング及び同定用ツールとして内因性代謝物のプロファイルを使用することもできる。
るいるにくく、ために
【００３８】
本発明者らは本発明者らの試験で内因性代謝物濃度を回復する能力を示し、従って、疾患ないし障害、特に自己免疫が原因であると考えられる疾患ないし障害の発症を予防、遅延又は抑制するのに有益となる化合物をその形態の多くで同定した。
【００３９】
本願では「バイオマーカー」及び「内因性代謝物」なる用語とその複数形を同義に使用する。
【課題を解決するための手段】
【００４０】
１態様において、本発明は関節リウマチ（ＲＡ）により対象に生じる内因性代謝物の代謝プロファイルの変動の検出方法を提供し、前記方法は、
（ｉ）対象におけるＮ種類の内因性代謝物（但し、Ｎは２〜１１である）の代謝プロファイルを作成するために、対象から得られた生体試料におけるＮ種類の内因性代謝物の濃度を測定する段階と；
（ｉｉ）Ｎ種類の内因性代謝物の濃度測定値を対照から得られた生体試料における内因性代謝物の対応濃度と比較する段階（但し、Ｎ種類の内因性代謝物は
ＥＭ１  フェニルアラニン
ＥＭ２  チロシン
ＥＭ３  イソロイシン
ＥＭ８  グリシン
ＥＭ９  グルタミン
ＥＭ１０  メチオニン
ＥＭ１４  リジン
ＥＭ１５  アスパラギン
ＥＭ１６  セリン
ＥＭ１７  トリプトファン
ＥＭ１８  トレオニン
から構成される群から選択され、
代謝プロファイルの変動は対象から得られた生体試料におけるＮ種類の内因性代謝物の各々の濃度測定値が対照から得られた生体試料における内因性代謝物の対応濃度に比較して各々独立して減少又は増加している変動であり、
代謝プロファイルの変動は対象におけるＲＡに起因する）と；
場合により、代謝プロファイルの変動が検出される場合には、
（ｉｉｉａ）変動した代謝プロファイルを正常化するために有効な量の遊離塩基又は塩形態のＮ−（２−クロロ−３，４−ジメトキシベンジリデンアミノ）グアニジン又はアミノグアニジンを対象に処方もしくは提供するか又はその投与を対象に推奨する段階；
あるいは
（ｉｉｉｂ）変動した代謝プロファイルを正常化するために有効な量の遊離塩基又は塩形態のＮ−（２−クロロ−３，４−ジメトキシベンジリデンアミノ）グアニジン又はアミノグアニジンを前記対象に投与する段階を含む。
【００４１】
本発明は更に関節リウマチ（ＲＡ）により対象に生じる内因性代謝物の代謝プロファイルの変動の検出方法を提供し、前記方法は、
（ｉ）対象におけるＮ種類の内因性代謝物（但し、Ｎは２〜１１である）の代謝プロファイルを作成するために、対象から得られた生体試料におけるＮ種類の内因性代謝物の濃度を測定する段階と；
（ｉｉ）Ｎ種類の内因性代謝物の濃度測定値を以前に対象から得られた生体試料における内因性代謝物の対応濃度と比較する段階（但し、Ｎ種類の内因性代謝物は
ＥＭ１  フェニルアラニン
ＥＭ２  チロシン
ＥＭ３  イソロイシン
ＥＭ８  グリシン
ＥＭ９  グルタミン
ＥＭ１０  メチオニン
ＥＭ１４  リジン
ＥＭ１５  アスパラギン
ＥＭ１６  セリン
ＥＭ１７  トリプトファン
ＥＭ１８  トレオニン
から構成される群から選択され、
代謝プロファイルの変動は対象から得られた生体試料におけるＮ種類の内因性代謝物の各々の濃度測定値が以前に対象から得られた生体試料における内因性代謝物の対応濃度に比較して各々独立して減少又は増加している変動であり、
代謝プロファイルの変動は対象におけるＲＡに起因する）と；
場合により、代謝プロファイルの変動が検出される場合には、
（ｉｉｉａ）変動した代謝プロファイルを正常化するために有効な量の遊離塩基又は塩形態のＮ−（２−クロロ−３，４−ジメトキシベンジリデンアミノ）グアニジン又はアミノグアニジンを対象に処方もしくは提供するか又はその投与を対象に推奨する段階；
あるいは
（ｉｉｉｂ）変動した代謝プロファイルを正常化するために有効な量の遊離塩基又は塩形態のＮ−（２−クロロ−３，４−ジメトキシベンジリデンアミノ）グアニジン又はアミノグアニジンを前記対象に投与する段階を含む。
【００４２】
別の態様において、本発明は対象におけるＲＡの診断又は検出方法を提供し、前記方法は、
（ｉ）対象から得られた生体試料におけるＮ種類のバイオマーカー（但し、Ｎは２〜１１である）の濃度を測定する段階と；
（ｉｉ）Ｎ種類のバイオマーカーの濃度測定値を対照から得られた生体試料におけるバイオマーカーの対応濃度と比較する段階を含み；
Ｎ種類のバイオマーカーは
ＥＭ１  フェニルアラニン
ＥＭ２  チロシン
ＥＭ３  イソロイシン
ＥＭ８  グリシン
ＥＭ９  グルタミン
ＥＭ１０  メチオニン
ＥＭ１４  リジン
ＥＭ１５  アスパラギン
ＥＭ１６  セリン
ＥＭ１７  トリプトファン
ＥＭ１８  トレオニン
から構成される群から選択され、
対象から得られた生体試料におけるＮ種類のバイオマーカーの各々の濃度測定値が対照から得られた生体試料におけるバイオマーカーの対応濃度に比較して減少している場合に、対象にＲＡが存在すると判断する。
【００４３】
本発明の別の側面は、対象におけるＲＡ進行のモニター方法を提供し、前記方法は、
（ｉ）対象から得られた生体試料におけるＮ種類のバイオマーカー（但し、Ｎは２〜１１である）の濃度を測定する段階と；
（ｉｉ）Ｎ種類のバイオマーカーの濃度測定値を以前に対象から得られた生体試料におけるバイオマーカーの対応濃度と比較する段階を含み；
Ｎ種類のバイオマーカーは
ＥＭ１  フェニルアラニン
ＥＭ２  チロシン
ＥＭ３  イソロイシン
ＥＭ８  グリシン
ＥＭ９  グルタミン
ＥＭ１０  メチオニン
ＥＭ１４  リジン
ＥＭ１５  アスパラギン
ＥＭ１６  セリン
ＥＭ１７  トリプトファン
ＥＭ１８  トレオニン
から構成される群から選択され、
対象から得られた生体試料におけるＮ種類のバイオマーカーの濃度測定値が以前に対象から得られた生体試料におけるバイオマーカーの対応濃度に比較して差がある場合に、対象におけるＲＡ予後が変化していると判断する。
【００４４】
特に、Ｎ種類のバイオマーカーの各々の濃度測定値が増加している場合に、対象におけるＲＡ予後が改善していると判断する。
【００４５】
更に、Ｎ種類のバイオマーカーの各々の濃度測定値が減少している場合に、対象におけるＲＡ予後が悪化していると判断する。
【００４６】
本発明は更に対象におけるＲＡの悪化速度又は改善速度のモニター方法であって、本願に記載するＲＡ進行のモニター方法を含み、更に、バイオマーカー濃度の増加量又は減少量を対象からの初回（即ち以前の）試料の採取から２回目の試料の採取までの時間で割る段階を含む方法も提供する。
【００４７】
本発明の別の側面は対象におけるＲＡを治療するために対象に投与された医薬の有効性の測定方法を提供し、前記方法は、
（ｉ）投与後の対象から得られた生体試料におけるＮ種類のバイオマーカー（但し、Ｎは２〜１１である）の濃度を測定する段階と；
（ｉｉ）Ｎ種類のバイオマーカーの濃度測定値を以前に対象から得られた生体試料におけるバイオマーカーの対応濃度と比較する段階を含み；
Ｎ種類のバイオマーカーは
ＥＭ１  フェニルアラニン
ＥＭ２  チロシン
ＥＭ３  イソロイシン
ＥＭ８  グリシン
ＥＭ９  グルタミン
ＥＭ１０  メチオニン
ＥＭ１４  リジン
ＥＭ１５  アスパラギン
ＥＭ１６  セリン
ＥＭ１７  トリプトファン
ＥＭ１８  トレオニン
から構成される群から選択され、
投与後の対象から得られた生体試料におけるＮ種類のバイオマーカーの濃度測定値が以前に対象から得られた生体試料におけるバイオマーカーの対応濃度に比較して差がある場合に、医薬は前記対象において有効であると判断する。
【００４８】
特に、Ｎ種類のバイオマーカーの各々の濃度測定値が増加している場合に、医薬は有効であると判断する。
【００４９】
更に、Ｎ種類のバイオマーカーの各々の濃度測定値が減少している場合に、医薬は無効であると判断する。
【００５０】
本発明の別の側面は対象におけるＲＡを治療するために対象に投与された医薬の有効性の測定方法を提供し、前記方法は、
（ｉ）投与後の対象から得られた生体試料におけるＮ種類のバイオマーカー（但し、Ｎは２〜１１である）の濃度を測定する段階と；
（ｉｉ）Ｎ種類のバイオマーカーの濃度測定値を対照から得られた生体試料におけるバイオマーカーの対応濃度と比較する段階を含み；
Ｎ種類のバイオマーカーは
ＥＭ１  フェニルアラニン
ＥＭ２  チロシン
ＥＭ３  イソロイシン
ＥＭ８  グリシン
ＥＭ９  グルタミン
ＥＭ１０  メチオニン
ＥＭ１４  リジン
ＥＭ１５  アスパラギン
ＥＭ１６  セリン
ＥＭ１７  トリプトファン
ＥＭ１８  トレオニン
から構成される群から選択され、
投与後の対象から得られた生体試料におけるＮ種類のバイオマーカーの濃度測定値が対照から得られた生体試料におけるバイオマーカーの対応濃度に比較して差がある場合に、医薬は前記対象において有効であると判断する。
【００５１】
特に、Ｎ種類のバイオマーカーの各々の濃度測定値が増加している場合に、医薬は有効であると判断する。
【００５２】
更に、Ｎ種類のバイオマーカーの各々の濃度測定値が減少している場合に、医薬は無効であると判断する。
【００５３】
本発明は更に上記のようなＲＡを治療するために対象に投与された医薬の有効性のモニター方法であって、更に、段階（ｉ）の前又は試料の採取間に対象に医薬を投与する段階を含む方法を提供する。
【００５４】
上記医薬の有効性のモニター方法に関して、本発明の所定態様では、２個の生体試料を採取する前に医薬を対象に投与している。他の態様では、２個の試料を採取する間に医薬を対象に投与している。
【００５５】
本発明の所定態様において、「ＲＡの診断又は検出方法」なる用語は対象における推定ＲＡの検出方法又は対象におけるＲＡの尤度増加の判定方法を意味する。
【００５６】
好ましくは、Ｎは３〜１１、４〜１１、５〜１１、６〜１１、７〜１１、８〜１１、９〜１１又は１０〜１１である。他の態様において、Ｎは２〜５、３〜５又は４〜５である。更に他の態様において、Ｎは２、３、４、５、６、７、８、９、１０又は１１である。所定態様において、内因性代謝物はＥＭ１〜３及び／又はＥＭ８〜１０及び／又はＥＭ１４〜１８から選択され、あるいは内因性代謝物はＥＭ２、ＥＭ３、ＥＭ８及びＥＭ１０から選択される。
【００５７】
例えば、本発明の態様がＮ種類の内因性代謝物を選択する必要がある場合には、内因性代謝物はＥＭ１〜Ｎから選択することができる。
【００５８】
Ｎの値が大きい方法を使用すると、方法の高レベルの信頼性を得ることができる。
【００５９】
他の態様において、本発明は自己免疫疾患により対象に生じる内因性代謝物の代謝プロファイルの変動の検出方法を提供し、前記方法は、
（ｉ）対象におけるＮ種類の内因性代謝物（但し、Ｎは２〜１３である）の代謝プロファイルを作成するために、対象から得られた生体試料におけるＮ種類の内因性代謝物の濃度を測定する段階と；
（ｉｉ）Ｎ種類の内因性代謝物の濃度測定値を対照から得られた生体試料における内因性代謝物の対応濃度と比較する段階（但し、Ｎ種類の内因性代謝物は
ＥＭ１  フェニルアラニン（Ｐｈｅ）
ＥＭ２  チロシン（Ｔｙｒ）
ＥＭ３  イソロイシン（Ｉｌｅ）
ＥＭ４  ロイシン（Ｌｅｕ）
ＥＭ５  オルニチン（Ｏｒｎ）
ＥＭ６  プロリン（Ｐｒｏ）
ＥＭ７  グルタミン酸（Ｇｌｕ）
ＥＭ８  グリシン（Ｇｌｙ）
ＥＭ９  グルタミン（Ｇｌｎ）
ＥＭ１０  メチオニン（Ｍｅｔ）
ＥＭ１１  アスパラギン酸（Ａｓｐ）
ＥＭ１２  バリン（Ｖａｌ）
ＥＭ１３  アルギニン（Ａｒｇ）
から構成される群から選択され、
代謝プロファイルの変動は対象から得られた生体試料におけるＮ種類の内因性代謝物の各々の濃度測定値が対照から得られた生体試料における内因性代謝物の対応濃度に比較して各々独立して減少又は増加している変動であり、
代謝プロファイルの変動は
（ａ）自己免疫疾患、好ましくは全自己免疫疾患；
（ｂ）組織分解を特徴とする全自己免疫疾患ないし障害；
（ｃ）結合組織の分解を特徴とする全自己免疫疾患ないし障害；
（ｄ）中枢神経系におけるミエリンの分解を特徴とする全自己免疫疾患ないし障害；
（ｅ）分解により皮膚を冒す全自己免疫疾患ないし障害；
（ｆ）消化器系を冒す全自己免疫疾患ないし障害；
（ｇ）心血管系を冒す全自己免疫疾患ないし障害；
（ｈ）神経系を冒す全自己免疫疾患ないし障害；
（ｉ）腎臓及び／又は肺を冒す全自己免疫疾患ないし障害；
（ｊ）全糖尿病性障害；あるいは
（ｋ）全関節炎性障害
に起因する）と；
場合により、代謝プロファイルの変動が検出される場合には、
（ｉｉｉａ）変動した代謝プロファイルを正常化するために有効な量の遊離塩基又は塩形態のＮ−（２−クロロ−３，４−ジメトキシベンジリデンアミノ）グアニジン又はアミノグアニジンを対象に処方もしくは提供するか又はその投与を対象に推奨する段階；
あるいは
（ｉｉｉｂ）変動した代謝プロファイルを正常化するために有効な量の遊離塩基又は塩形態のＮ−（２−クロロ−３，４−ジメトキシベンジリデンアミノ）グアニジン又はアミノグアニジンを前記対象に投与する段階を含む。
【００６０】
他の態様において、本発明は自己免疫疾患により対象に生じる内因性代謝物の代謝プロファイルの変動の検出方法を提供し、前記方法は、
（ｉ）対象におけるＮ種類の内因性代謝物（但し、Ｎは２〜１３である）の代謝プロファイルを作成するために、対象から得られた生体試料におけるＮ種類の内因性代謝物の濃度を測定する段階と；
（ｉｉ）Ｎ種類の内因性代謝物の濃度測定値を以前に対象から得られた生体試料における内因性代謝物の対応濃度と比較する段階（但し、Ｎ種類の内因性代謝物は
ＥＭ１  フェニルアラニン（Ｐｈｅ）
ＥＭ２  チロシン（Ｔｙｒ）
ＥＭ３  イソロイシン（Ｉｌｅ）
ＥＭ４  ロイシン（Ｌｅｕ）
ＥＭ５  オルニチン（Ｏｒｎ）
ＥＭ６  プロリン（Ｐｒｏ）
ＥＭ７  グルタミン酸（Ｇｌｕ）
ＥＭ８  グリシン（Ｇｌｙ）
ＥＭ９  グルタミン（Ｇｌｎ）
ＥＭ１０  メチオニン（Ｍｅｔ）
ＥＭ１１  アスパラギン酸（Ａｓｐ）
ＥＭ１２  バリン（Ｖａｌ）
ＥＭ１３  アルギニン（Ａｒｇ）
から構成される群から選択され、
代謝プロファイルの変動は対象から得られた生体試料におけるＮ種類の内因性代謝物の各々の濃度測定値が以前に対象から得られた生体試料における内因性代謝物の対応濃度に比較して各々独立して減少又は増加している変動であり、
代謝プロファイルの変動は上記疾患ないし障害の１種以上に起因する）と；
場合により、代謝プロファイルの変動が検出される場合には、
（ｉｉｉａ）変動した代謝プロファイルを正常化するために有効な量の遊離塩基又は塩形態のＮ−（２−クロロ−３，４−ジメトキシベンジリデンアミノ）グアニジン又はアミノグアニジンを対象に処方もしくは提供するか又はその投与を対象に推奨する段階；
あるいは
（ｉｉｉｂ）変動した代謝プロファイルを正常化するために有効な量の遊離塩基又は塩形態のＮ−（２−クロロ−３，４−ジメトキシベンジリデンアミノ）グアニジン又はアミノグアニジンを前記対象に投与する段階を含む。
【００６１】
好ましくは、代謝プロファイルの変動は糖尿病性障害、最も好ましくは２型糖尿病（Ｔ２Ｄ）に起因する。
【００６２】
他の好ましい態様において、変動は炎症、特に関節の炎症を特徴とする自己免疫疾患に起因する。
【００６３】
更に別の態様において、本発明は対象における疾患ないし障害の高リスクの検出、診断又は予後診断方法を提供し、前記方法は、
（ｉ）対象から得られた生体試料におけるＮ種類のバイオマーカー（但し、Ｎは２〜１３である）の濃度を測定する段階と；
（ｉｉ）Ｎ種類のバイオマーカーの濃度測定値を対照から得られた生体試料におけるバイオマーカーの対応濃度と比較する段階を含み；
Ｎ種類のバイオマーカーは
ＥＭ１  フェニルアラニン（Ｐｈｅ）
ＥＭ２  チロシン（Ｔｙｒ）
ＥＭ３  イソロイシン（Ｉｌｅ）
ＥＭ４  ロイシン（Ｌｅｕ）
ＥＭ５  オルニチン（Ｏｒｎ）
ＥＭ６  プロリン（Ｐｒｏ）
ＥＭ７  グルタミン酸（Ｇｌｕ）
ＥＭ８  グリシン（Ｇｌｙ）
ＥＭ９  グルタミン（Ｇｌｎ）
ＥＭ１０  メチオニン（Ｍｅｔ）
ＥＭ１１  アスパラギン酸（Ａｓｐ）
ＥＭ１２  バリン（Ｖａｌ）
ＥＭ１３  アルギニン（Ａｒｇ）
から構成される群から選択され、
対象から得られた生体試料におけるＮ種類のバイオマーカーの各々の濃度測定値が対照から得られた生体試料におけるバイオマーカーの対応濃度に比較して減少している場合に、対象における疾患ないし障害の高リスク、診断又は予後悪化に相当すると判断する。
【００６４】
別の態様において、本発明は対象における疾患ないし障害の高リスクの検出、診断又は予後診断方法を提供し、前記方法は、
（ｉ）対象から得られた生体試料におけるＮ種類のバイオマーカー（但し、Ｎは２〜１３である）の濃度を測定する段階と；
（ｉｉ）Ｎ種類のバイオマーカーの濃度測定値を以前に対象から得られた生体試料におけるバイオマーカーの対応濃度と比較する段階を含み；
Ｎ種類のバイオマーカーは
ＥＭ１  フェニルアラニン（Ｐｈｅ）
ＥＭ２  チロシン（Ｔｙｒ）
ＥＭ３  イソロイシン（Ｉｌｅ）
ＥＭ４  ロイシン（Ｌｅｕ）
ＥＭ５  オルニチン（Ｏｒｎ）
ＥＭ６  プロリン（Ｐｒｏ）
ＥＭ７  グルタミン酸（Ｇｌｕ）
ＥＭ８  グリシン（Ｇｌｙ）
ＥＭ９  グルタミン（Ｇｌｎ）
ＥＭ１０  メチオニン（Ｍｅｔ）
ＥＭ１１  アスパラギン酸（Ａｓｐ）
ＥＭ１２  バリン（Ｖａｌ）
ＥＭ１３  アルギニン（Ａｒｇ）
から構成される群から選択され、
対象から得られた生体試料におけるＮ種類のバイオマーカーの各々の濃度測定値が以前に対象から得られた生体試料におけるバイオマーカーの対応濃度に比較して減少している場合に、対象における疾患ないし障害の高リスク、診断又は予後悪化に相当すると判断する。
【００６５】
本願で使用する「疾患ないし障害」なる用語は、
（ａ）全自己免疫疾患；
（ｂ）組織分解、例えば関節及び皮膚における例えばミエリン又は結合組織の分解を特徴とする全自己免疫疾患ないし障害；
（ｃ）例えば関節、皮膚及び眼球における結合組織の分解を特徴とする全自己免疫疾患ないし障害；
（ｄ）中枢神経系におけるミエリンの分解を特徴とする全自己免疫疾患ないし障害；
（ｅ）例えば結合組織の分解又は皮膚の硬化により皮膚を冒す全自己免疫疾患ないし障害；
（ｆ）例えば腸管組織の分解により消化器系を冒す全自己免疫疾患ないし障害；
（ｇ）例えば血管の分解により心血管系を冒す全自己免疫疾患ないし障害；
（ｈ）例えば脳に炎症性病変を生じることにより神経系を冒す全自己免疫疾患ないし障害；
（ｉ）例えば腎臓及び／又は肺に血管の炎症性破壊を生じることによりこれらの臓器を冒す全自己免疫疾患ないし障害； 
（ｊ）全糖尿病性障害、例えばＴ１Ｄ及びＴ２Ｄ； 
（ｋ）全関節炎性障害、例えばＯＡ及びＲＡ；あるいは
（ｌ）Ｔ１Ｄ、ＲＡ及びＯＡ
を意味する。
【００６６】
本発明の所定態様では、ＥＭ６プロリン（Ｐｒｏ）を４−ヒドロキシプロリンで代用する。他の態様において、ＥＭ６は該当試料におけるプロリンと４−ヒドロキシプロリンの合計濃度である。
【００６７】
（ｂ）〜（ｉ）に記載した疾患ないし障害の例は上記「グループ及びサブグループ」なる表題のセクションと表１に列挙する対応疾患で確認することができる。
【００６８】
所定態様では、Ｎ種類のバイオマーカーの各々の濃度測定値が減少している場合に、対象における疾患ないし障害の診断に相当すると判断する。
【００６９】
所定態様では、Ｎ種類のバイオマーカーの各々の濃度測定値が減少している場合に、対象における疾患ないし障害の予後が悪化していると判断する。
【００７０】
所定態様では、Ｎ種類のバイオマーカーの各々の濃度測定値が増加している場合に、対象における疾患ないし障害の予後が改善されていると判断する。
【００７１】
本発明は更に対象における疾患ないし障害の発症感受性の悪化速度又は改善速度のモニター方法であって、本願に記載する疾患ないし障害の発症前に対象におけるバイオマーカーの濃度をモニターする方法を含み、更に、バイオマーカー濃度の増加量又は減少量を対象からの初回（即ち以前の）試料の採取から２回目の試料の採取までの時間で割る段階を含む方法も提供する。
【００７２】
更に、本発明は対象における疾患ないし障害の予後の悪化速度又は改善速度のモニター方法であって、本願に記載する疾患ないし障害をもつ対象におけるバイオマーカーの濃度をモニターする方法を含み、更に、バイオマーカー濃度の増加量又は減少量を対象からの初回（即ち以前の）試料の採取から２回目の試料の採取までの時間で割る段階を含む方法も提供する。
【００７３】
本発明の別の側面は対象における疾患ないし障害を予防処置又は疾患ないし障害を治療するために対象に投与された医薬の有効性の測定方法を提供し、前記方法は、
（ｉ）医薬を投与後の対象から得られた生体試料におけるＮ種類のバイオマーカー（但し、Ｎは２〜１３である）の濃度を測定する段階と；
（ｉｉ）Ｎ種類のバイオマーカーの濃度測定値を対照から得られた生体試料におけるバイオマーカーの対応濃度と比較する段階を含み；
Ｎ種類のバイオマーカーは
ＥＭ１  フェニルアラニン（Ｐｈｅ）
ＥＭ２  チロシン（Ｔｙｒ）
ＥＭ３  イソロイシン（Ｉｌｅ）
ＥＭ４  ロイシン（Ｌｅｕ）
ＥＭ５  オルニチン（Ｏｒｎ）
ＥＭ６  プロリン（Ｐｒｏ）
ＥＭ７  グルタミン酸（Ｇｌｕ）
ＥＭ８  グリシン（Ｇｌｙ）
ＥＭ９  グルタミン（Ｇｌｎ）
ＥＭ１０  メチオニン（Ｍｅｔ）
ＥＭ１１  アスパラギン酸（Ａｓｐ）
ＥＭ１２  バリン（Ｖａｌ）
ＥＭ１３  アルギニン（Ａｒｇ）
から構成される群から選択され、
投与後の対象から得られた生体試料におけるＮ種類のバイオマーカーの濃度測定値が対照から得られた生体試料におけるバイオマーカーの対応濃度に比較して差がある場合に、医薬は前記対象において有効であると判断する。
【００７４】
本発明の別の側面は対象における疾患ないし障害を予防処置又は疾患ないし障害を治療するために対象に投与された医薬の有効性の測定方法を提供し、前記方法は、
（ｉ）医薬を投与後の対象から得られた生体試料におけるＮ種類のバイオマーカー（但し、Ｎは２〜１３である）の濃度を測定する段階と；
（ｉｉ）Ｎ種類のバイオマーカーの濃度測定値を以前に対象から得られた生体試料におけるバイオマーカーの対応濃度と比較する段階を含み；
Ｎ種類のバイオマーカーは
ＥＭ１  フェニルアラニン（Ｐｈｅ）
ＥＭ２  チロシン（Ｔｙｒ）
ＥＭ３  イソロイシン（Ｉｌｅ）
ＥＭ４  ロイシン（Ｌｅｕ）
ＥＭ５  オルニチン（Ｏｒｎ）
ＥＭ６  プロリン（Ｐｒｏ）
ＥＭ７  グルタミン酸（Ｇｌｕ）
ＥＭ８  グリシン（Ｇｌｙ）
ＥＭ９  グルタミン（Ｇｌｎ）
ＥＭ１０  メチオニン（Ｍｅｔ）
ＥＭ１１  アスパラギン酸（Ａｓｐ）
ＥＭ１２  バリン（Ｖａｌ）
ＥＭ１３  アルギニン（Ａｒｇ）
から構成される群から選択され、
投与後の対象から得られた生体試料におけるＮ種類のバイオマーカーの濃度測定値が以前に対象から得られた生体試料におけるバイオマーカーの対応濃度に比較して差がある場合に、医薬は前記対象において有効であると判断する。
【００７５】
特に、Ｎ種類のバイオマーカーの各々の濃度測定値が増加している場合に、医薬は（予防薬として）有効であると判断する。
【００７６】
更に、Ｎ種類のバイオマーカーの各々の濃度測定値が減少している場合に、医薬は（予防薬として）無効であると判断する。
【００７７】
本発明は更に対象における本願に記載する疾患ないし障害の発症感受性の悪化速度又は改善速度に及ぼす医薬の影響のモニター方法であって、本願に記載する疾患ないし障害の発症前に対象におけるバイオマーカーの濃度をモニターする方法を含み、更に、バイオマーカー濃度の増加量又は減少量を対象からの初回（即ち以前の）試料の採取から２回目の試料の採取までの時間で割る段階を含む方法も提供する。
【００７８】
本発明は更に上記のような疾患ないし障害を治療するために対象に投与された医薬の有効性のモニター方法であって、更に、段階（ｉ）の前又は試料の採取間に対象に医薬を投与する段階を含む方法も提供する。
【００７９】
上記医薬の有効性のモニター方法に関して、本発明の所定態様では、２個の生体試料を採取する前に医薬を対象に投与している。他の態様では、２個の試料を採取する間に医薬を対象に投与している。
【００８０】
所定の好ましい態様において、Ｎは３〜１３、４〜１３、５〜１３、６〜１３、７〜１３、８〜１３、９〜１３、１０〜１３、１１〜１３又は１２〜１３である。他の好ましい態様において、Ｎは２〜５、３〜５又は４〜５である。更に他の好ましい態様において、Ｎは２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２又は１３である。更に他の態様において、内因性代謝物はＥＭ１〜２、１〜３、１〜４、１〜５、１〜６、１〜７、１〜８、１〜９、１〜１０、１〜１１、１〜１２又は１〜１３から選択される。
【００８１】
本発明の別の態様では、対象における変動した代謝プロファイルを従来可能であったよりも早期に発症予防、遅延もしくは抑制、又は治療する方法が提供され、前記方法は、
ａ）（ｉ）対象におけるＮ種類の内因性代謝物（但し、Ｎは２〜１３である）の代謝プロファイルを作成するために、対象から得られた生体試料におけるＮ種類の内因性代謝物の濃度を測定する段階と；
（ｉｉ）Ｎ種類の内因性代謝物の濃度測定値を対照から得られた生体試料における内因性代謝物の対応濃度と比較する段階
を含む方法により、本願に記載する疾患ないし障害に起因する変動した代謝プロファイルを検出する段階（但し、Ｎ種類の内因性代謝物は
ＥＭ１  フェニルアラニン（Ｐｈｅ）
ＥＭ２  チロシン（Ｔｙｒ）
ＥＭ３  イソロイシン（Ｉｌｅ）
ＥＭ４  ロイシン（Ｌｅｕ）
ＥＭ５  オルニチン（Ｏｒｎ）
ＥＭ６  プロリン（Ｐｒｏ）
ＥＭ７  グルタミン酸（Ｇｌｕ）
ＥＭ８  グリシン（Ｇｌｙ）
ＥＭ９  グルタミン（Ｇｌｎ）
ＥＭ１０  メチオニン（Ｍｅｔ）
ＥＭ１１  アスパラギン酸（Ａｓｐ）
ＥＭ１２  バリン（Ｖａｌ）
ＥＭ１３  アルギニン（Ａｒｇ）
から構成される群から選択され、
代謝プロファイルの変動は対象から得られた生体試料におけるＮ種類の内因性代謝物の各々の濃度測定値が対照から得られた生体試料における内因性代謝物の対応濃度に比較して各々独立して減少又は増加している変動であり、
代謝プロファイルの変動は本願に記載する疾患ないし障害の１種以上に起因する）と；
（ｂ１）前記疾患ないし障害を発症予防、遅延、抑制又は治療するために有効な量の遊離塩基又は塩形態のＮ−（２−クロロ−３，４−ジメトキシベンジリデンアミノ）グアニジン又はアミノグアニジンを対象に処方もしくは提供するか又はその投与を対象に推奨する段階、あるいは
（ｂ２）前記疾患ないし障害を発症予防、遅延、抑制又は治療するために有効な量の遊離塩基又は塩形態のＮ−（２−クロロ−３，４−ジメトキシベンジリデンアミノ）グアニジン又はアミノグアニジンを前記対象に投与する段階を含む。
【００８２】
対象における変動した代謝プロファイルを従来可能であったよりも早期に発症予防、遅延もしくは抑制、又は治療する方法であって、
ａ）（ｉ）対象におけるＮ種類の内因性代謝物（但し、Ｎは２〜１３である）の代謝プロファイルを作成するために、対象から得られた生体試料におけるＮ種類の内因性代謝物の濃度を測定する段階と；
（ｉｉ）Ｎ種類の内因性代謝物の濃度測定値を以前に対象から得られた生体試料における内因性代謝物の対応濃度と比較する段階
を含む方法により、本願に記載する疾患ないし障害に起因する変動した代謝プロファイルを検出する段階（但し、Ｎ種類の内因性代謝物は
ＥＭ１  フェニルアラニン（Ｐｈｅ）
ＥＭ２  チロシン（Ｔｙｒ）
ＥＭ３  イソロイシン（Ｉｌｅ）
ＥＭ４  ロイシン（Ｌｅｕ）
ＥＭ５  オルニチン（Ｏｒｎ）
ＥＭ６  プロリン（Ｐｒｏ）
ＥＭ７  グルタミン酸（Ｇｌｕ）
ＥＭ８  グリシン（Ｇｌｙ）
ＥＭ９  グルタミン（Ｇｌｎ）
ＥＭ１０  メチオニン（Ｍｅｔ）
ＥＭ１１  アスパラギン酸（Ａｓｐ）
ＥＭ１２  バリン（Ｖａｌ）
ＥＭ１３  アルギニン（Ａｒｇ）
から構成される群から選択され、
代謝プロファイルの変動は対象から得られた生体試料におけるＮ種類の内因性代謝物の各々の濃度測定値が以前に対象から得られた生体試料における内因性代謝物の対応濃度に比較して各々独立して減少又は増加している変動であり、
代謝プロファイルの変動は上記疾患ないし障害の１種以上に起因する）と；
（ｂ１）前記疾患ないし障害を発症予防、遅延、抑制又は治療するために有効な量の遊離塩基又は塩形態のＮ−（２−クロロ−３，４−ジメトキシベンジリデンアミノ）グアニジン又はアミノグアニジンを対象に処方もしくは提供するか又はその投与を対象に推奨する段階、あるいは
（ｂ２）前記疾患ないし障害を発症予防、遅延、抑制又は治療するために有効な量の遊離塩基又は塩形態のＮ−（２−クロロ−３，４−ジメトキシベンジリデンアミノ）グアニジン又はアミノグアニジンを前記対象に投与する段階を含む方法も提供される。
【００８３】
別の態様において、本発明は対象における（以下に記載するような）疾患ないし障害を従来可能であったよりも早期に発症予防、遅延もしくは抑制、又は治療する方法を提供し、前記方法は、
ａ）（ｉ）対象から得られた生体試料におけるＮ種類のバイオマーカー（但し、Ｎは２〜１３である）の濃度を測定する段階と；
（ｉｉ）Ｎ種類のバイオマーカーの濃度測定値を対照から得られた生体試料におけるバイオマーカーの対応濃度と比較する段階
を含む方法により、対象における疾患ないし障害の高リスク検出、診断及び予後診断を行う段階（但し、Ｎ種類のバイオマーカーは
ＥＭ１  フェニルアラニン（Ｐｈｅ）
ＥＭ２  チロシン（Ｔｙｒ）
ＥＭ３  イソロイシン（Ｉｌｅ）
ＥＭ４  ロイシン（Ｌｅｕ）
ＥＭ５  オルニチン（Ｏｒｎ）
ＥＭ６  プロリン（Ｐｒｏ）
ＥＭ７  グルタミン酸（Ｇｌｕ）
ＥＭ８  グリシン（Ｇｌｙ）
ＥＭ９  グルタミン（Ｇｌｎ）
ＥＭ１０  メチオニン（Ｍｅｔ）
ＥＭ１１  アスパラギン酸（Ａｓｐ）
ＥＭ１２  バリン（Ｖａｌ）
ＥＭ１３  アルギニン（Ａｒｇ）
から構成される群から選択され、
対象から得られた生体試料におけるＮ種類のバイオマーカーの各々の濃度測定値が対照から得られた生体試料におけるバイオマーカーの対応濃度に比較して減少している場合に、対象における疾患ないし障害の高リスク、診断又は予後悪化に相当すると判断する）と；
ｂ）その後、前記疾患ないし障害を発症予防、遅延、抑制又は治療するために有効な量の遊離塩基又は塩形態のＮ−（２−クロロ−３，４−ジメトキシベンジリデンアミノ）グアニジンを前記対象に投与する段階を含む。
【００８４】
別の態様において、本発明は対象における（以下に記載するような）疾患ないし障害を従来可能であったよりも早期に発症予防、遅延もしくは抑制、又は治療する方法であって、
ａ）（ｉ）対象から得られた生体試料におけるＮ種類のバイオマーカー（但し、Ｎは２〜１３である）の濃度を測定する段階と；
（ｉｉ）Ｎ種類のバイオマーカーの濃度測定値を以前に対象から得られた生体試料におけるバイオマーカーの対応濃度と比較する段階
を含む方法により、対象における疾患ないし障害の高リスク検出、診断及び予後診断を行う段階（但し、Ｎ種類のバイオマーカーは
ＥＭ１  フェニルアラニン（Ｐｈｅ）
ＥＭ２  チロシン（Ｔｙｒ）
ＥＭ３  イソロイシン（Ｉｌｅ）
ＥＭ４  ロイシン（Ｌｅｕ）
ＥＭ５  オルニチン（Ｏｒｎ）
ＥＭ６  プロリン（Ｐｒｏ）
ＥＭ７ グルタミン酸（Ｇｌｕ）
ＥＭ８  グリシン（Ｇｌｙ）
ＥＭ９  グルタミン（Ｇｌｎ）
ＥＭ１０  メチオニン（Ｍｅｔ）
ＥＭ１１  アスパラギン酸（Ａｓｐ）
ＥＭ１２  バリン（Ｖａｌ）
ＥＭ１３  アルギニン（Ａｒｇ）
から構成される群から選択され、
対象から得られた生体試料におけるＮ種類のバイオマーカーの各々の濃度測定値が以前に対象から得られた生体試料におけるバイオマーカーの対応濃度に比較して減少している場合に、対象における疾患ないし障害の高リスク、診断又は予後悪化に相当すると判断する）と；
ｂ）その後、前記疾患ないし障害を発症予防、遅延、抑制又は治療するために有効な量の遊離塩基又は塩形態のＮ−（２−クロロ−３，４−ジメトキシベンジリデンアミノ）グアニジンを前記対象に投与する段階を含む方法を提供する。
【００８５】
本発明の所定態様では、ＥＭ６プロリン（Ｐｒｏ）を４−ヒドロキシプロリンで代用する。他の態様において、ＥＭ６は該当試料におけるプロリンと４−ヒドロキシプロリンの合計濃度である。
【００８６】
この関連で使用する「疾患ないし障害」なる用語は、
（ａ）全自己免疫疾患；
（ｂ）組織分解、例えば関節及び皮膚における例えばミエリン又は結合組織の分解を特徴とする全自己免疫疾患ないし障害；
（ｃ）例えば関節、皮膚及び眼球における結合組織の分解を特徴とする全自己免疫疾患ないし障害；
（ｄ）中枢神経系におけるミエリンの分解を特徴とする全自己免疫疾患ないし障害；
（ｅ）例えば結合組織の分解又は皮膚の硬化により皮膚を冒す全自己免疫疾患ないし障害；
（ｆ）例えば腸管組織の分解により消化器系を冒す全自己免疫疾患ないし障害；
（ｇ）例えば血管の分解により心血管系を冒す全自己免疫疾患ないし障害；
（ｈ）例えば脳に炎症性病変を生じることにより神経系を冒す全自己免疫疾患ないし障害；
（ｉ）例えば腎臓及び／又は肺に血管の炎症性破壊を生じることによりこれらの臓器を冒す全自己免疫疾患ないし障害； 
（ｊ）全糖尿病性障害、例えばＴ１Ｄ及びＴ２Ｄ； 
（ｋ）全関節炎性障害、例えばＯＡ及びＲＡ；あるいは
（ｌ）Ｔ１Ｄ、ＲＡ及びＯＡ
を意味する。
【００８７】
（ｂ）〜（ｉ）に記載した疾患ないし障害の例は上記「グループ及びサブグループ」なる表題のセクションと表１に列挙する対応疾患で確認することができる。
【００８８】
所定態様では、Ｎ種類のバイオマーカーの各々の濃度測定値が減少している場合に、対象における疾患ないし障害の診断に相当すると判断する。
【００８９】
所定態様では、Ｎ種類のバイオマーカーの各々の濃度測定値が減少している場合に、対象における疾患ないし障害の予後が悪化していると判断する。
【００９０】
所定態様では、Ｎ種類のバイオマーカーの各々の濃度測定値が増加している場合に、対象における疾患ないし障害の予後が改善されていると判断する。
【００９１】
本発明は更に対象における疾患ないし障害の発症感受性の悪化速度又は改善速度のモニター方法であって、本願に記載する疾患ないし障害の発症前に対象におけるバイオマーカーの濃度をモニターする方法を含み、更に、バイオマーカー濃度の増加量又は減少量を対象からの初回（即ち以前の）試料の採取から２回目の試料の採取までの時間で割る段階を含む方法も提供する。
【００９２】
更に、本発明は対象における疾患ないし障害の予後の悪化速度又は改善速度のモニター方法であって、本願に記載する疾患ないし障害をもつ対象におけるバイオマーカーの濃度をモニターする方法を含み、更に、バイオマーカー濃度の増加量又は減少量を対象からの初回（即ち以前の）試料の採取から２回目の試料の採取までの時間で割る段階を含む方法を提供する。
【００９３】
本発明の別の側面は対象における疾患ないし障害を予防処置又は疾患ないし障害を治療するために対象に投与された医薬の有効性の測定方法を提供し、前記方法は、
（ｉ）対象から得られた生体試料におけるＮ種類のバイオマーカー（但し、Ｎは２〜１３である）の濃度を測定する段階と；
（ｉｉ）Ｎ種類のバイオマーカーの濃度測定値を対照から得られた生体試料におけるバイオマーカーの対応濃度と比較する段階を含み；
Ｎ種類のバイオマーカーは
ＥＭ１  フェニルアラニン（Ｐｈｅ）
ＥＭ２  チロシン（Ｔｙｒ）
ＥＭ３  イソロイシン（Ｉｌｅ）
ＥＭ４  ロイシン（Ｌｅｕ）
ＥＭ５  オルニチン（Ｏｒｎ）
ＥＭ６  プロリン（Ｐｒｏ）
ＥＭ７  グルタミン酸（Ｇｌｕ）
ＥＭ８  グリシン（Ｇｌｙ）
ＥＭ９  グルタミン（Ｇｌｎ）
ＥＭ１０  メチオニン（Ｍｅｔ）
ＥＭ１１  アスパラギン酸（Ａｓｐ）
ＥＭ１２  バリン（Ｖａｌ）
ＥＭ１３  アルギニン（Ａｒｇ）
から構成される群から選択され、
投与後の対象から得られた生体試料におけるＮ種類のバイオマーカーの濃度測定値が対照から得られた生体試料におけるバイオマーカーの対応濃度に比較して差がある場合に、医薬は前記対象において有効であると判断する。
【００９４】
本発明の別の側面は対象における疾患ないし障害を予防処置又は疾患ないし障害を治療するために対象に投与された医薬の有効性の測定方法を提供し、前記方法は、
（ｉ）医薬を投与後の対象から得られた生体試料におけるＮ種類のバイオマーカー（但し、Ｎは２〜１３である）の濃度を測定する段階と；
（ｉｉ）Ｎ種類のバイオマーカーの濃度測定値を以前に対象から得られた生体試料におけるバイオマーカーの対応濃度と比較する段階を含み；
Ｎ種類のバイオマーカーは
ＥＭ１  フェニルアラニン（Ｐｈｅ）
ＥＭ２  チロシン（Ｔｙｒ）
ＥＭ３  イソロイシン（Ｉｌｅ）
ＥＭ４  ロイシン（Ｌｅｕ）
ＥＭ５  オルニチン（Ｏｒｎ）
ＥＭ６  プロリン（Ｐｒｏ）
ＥＭ７  グルタミン酸（Ｇｌｕ）
ＥＭ８  グリシン（Ｇｌｙ）
ＥＭ９  グルタミン（Ｇｌｎ）
ＥＭ１０  メチオニン（Ｍｅｔ）
ＥＭ１１  アスパラギン酸（Ａｓｐ）
ＥＭ１２  バリン（Ｖａｌ）
ＥＭ１３  アルギニン（Ａｒｇ）
から構成される群から選択され、
投与後の対象から得られた生体試料におけるＮ種類のバイオマーカーの濃度測定値が以前に対象から得られた生体試料におけるバイオマーカーの対応濃度に比較して差がある場合に、医薬は前記対象において有効であると判断する。
【００９５】
特に、Ｎ種類のバイオマーカーの各々の濃度測定値が増加している場合に、医薬は（予防薬として）有効であると判断する。
【００９６】
更に、Ｎ種類のバイオマーカーの各々の濃度測定値が減少している場合に、医薬は（予防薬として）無効であると判断する。
【００９７】
所定態様において、Ｎは好ましくは３〜１３、４〜１３、５〜１３、６〜１３、７〜１３、８〜１３、９〜１３、１０〜１３、１１〜１３又は１２〜１３である。他の態様において、Ｎは好ましくは２〜５、３〜５又は４〜５である。更に他の態様において、Ｎは好ましくは２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２又は１３である。更に他の態様において、内因性代謝物はＥＭ１〜２、１〜３、１〜４、１〜５、１〜６、１〜７、１〜８、１〜９、１〜１０、１〜１１、１〜１２又は１〜１３から選択される。
【００９８】
本発明の別の側面では、対象における変動した代謝プロファイルを従来可能であったよりも早期に発症予防、遅延もしくは抑制、又は治療する方法が提供され、前記方法は、
ａ）（ｉ）対象におけるＮ種類の内因性代謝物（但し、Ｎは２〜１１である）の代謝プロファイルを作成するために、対象から得られた生体試料におけるＮ種類の内因性代謝物の濃度を測定する段階と；
（ｉｉ）Ｎ種類の内因性代謝物の濃度測定値を対照から得られた生体試料における内因性代謝物の対応濃度と比較する段階
を含む方法により、関節リウマチに起因する変動した代謝プロファイルを検出する段階（但し、Ｎ種類の内因性代謝物は
ＥＭ１  フェニルアラニン
ＥＭ２  チロシン
ＥＭ３  イソロイシン
ＥＭ８  グリシン
ＥＭ９  グルタミン
ＥＭ１０  メチオニン
ＥＭ１４  リジン
ＥＭ１５  アスパラギン
ＥＭ１６  セリン
ＥＭ１７  トリプトファン
ＥＭ１８  トレオニン
から構成される群から選択され、
代謝プロファイルの変動は対象から得られた生体試料におけるＮ種類の内因性代謝物の各々の濃度測定値が対照から得られた生体試料における内因性代謝物の対応濃度に比較して各々独立して減少又は増加している変動であり、
代謝プロファイルの変動は関節リウマチに起因する）と；
（ｂ１）関節リウマチを発症予防、遅延、抑制又は治療するために有効な量の遊離塩基又は塩形態のＮ−（２−クロロ−３，４−ジメトキシベンジリデンアミノ）グアニジン又はアミノグアニジンを対象に処方もしくは提供するか又はその投与を対象に推奨する段階、あるいは
（ｂ２）関節リウマチを発症予防、遅延、抑制又は治療するために有効な量の遊離塩基又は塩形態のＮ−（２−クロロ−３，４−ジメトキシベンジリデンアミノ）グアニジン又はアミノグアニジンを前記対象に投与する段階を含む。
【００９９】
対象における変動した代謝プロファイルを従来可能であったよりも早期に発症予防、遅延もしくは抑制、又は治療する方法であって、
ａ）（ｉ）対象におけるＮ種類の内因性代謝物（但し、Ｎは２〜１１である）の代謝プロファイルを作成するために、対象から得られた生体試料におけるＮ種類の内因性代謝物の濃度を測定する段階と；
（ｉｉ）Ｎ種類の内因性代謝物の濃度測定値を以前に対象から得られた生体試料における内因性代謝物の対応濃度と比較する段階
を含む方法により、関節リウマチに起因する変動した代謝プロファイルを検出する段階（但し、Ｎ種類の内因性代謝物は
ＥＭ１  フェニルアラニン
ＥＭ２  チロシン
ＥＭ３  イソロイシン
ＥＭ８  グリシン
ＥＭ９  グルタミン
ＥＭ１０  メチオニン
ＥＭ１４  リジン
ＥＭ１５  アスパラギン
ＥＭ１６  セリン
ＥＭ１７  トリプトファン
ＥＭ１８  トレオニン
から構成される群から選択され、
代謝プロファイルの変動は対象から得られた生体試料におけるＮ種類の内因性代謝物の各々の濃度測定値が以前に対象から得られた生体試料における内因性代謝物の対応濃度に比較して各々独立して減少又は増加している変動であり、
代謝プロファイルの変動は関節リウマチに起因する）と；
（ｂ１）関節リウマチを発症予防、遅延、抑制又は治療するために有効な量の遊離塩基又は塩形態のＮ−（２−クロロ−３，４−ジメトキシベンジリデンアミノ）グアニジン又はアミノグアニジンを対象に処方もしくは提供するか又はその投与を対象に推奨する段階、あるいは
（ｂ２）関節リウマチを発症予防、遅延、抑制又は治療するために有効な量の遊離塩基又は塩形態のＮ−（２−クロロ−３，４−ジメトキシベンジリデンアミノ）グアニジン又はアミノグアニジンを前記対象に投与する段階を含む方法も提供される。
【０１００】
所定の好ましい態様において、Ｎは３〜１１、４〜１１、５〜１１、６〜１１、７〜１１、８〜１１、９〜１１又は１０〜１１である。他の好ましい態様において、Ｎは２、３、４、５、６、７、８、９、１０又は１１である。更に他の好ましい態様において、内因性代謝物はＥＭ１〜３及び／又はＥＭ８〜１０及び／又はＥＭ１４〜１８から選択され、あるいは内因性代謝物はＥＭ２、ＥＭ３、ＥＭ８及びＥＭ１０から選択される。
【０１０１】
「測定」なる用語は標的内因性代謝物プロファイル、そのサブユニット又は試薬と標的の結合体等を検定、定量、画像撮影又は他の方法でその有無を判定すること、あるいは本願に記載する疾患ないし障害の１種以上の実際の特徴を検定、画像撮影、確認、判定又は他の方法で決定することを包含する。
【０１０２】
生体試料中のＮ種類の個々の内因性代謝物の濃度は同一又は異なる技術を使用して測定することができる。
【０１０３】
本発明は特に、対象における本願に記載する疾患ないし障害の診断及び／又は検出方法であって、対象に由来する生体試料における内因性代謝物プロファイルを検出する段階を含む方法に関する。内因性代謝物プロファイルは任意の適切な手段を使用して測定することができる。例えば、内因性代謝物プロファイルはクロマトグラフィー及び／又は分光学的手法又はプロファイルにおける内因性代謝物を検出もしくはこれと結合する試薬を使用して測定することができ、プロファイルの個々の内因性代謝物又はその一部に対して特異的に反応性の個々の抗体を使用して測定することが好ましい。
【０１０４】
１態様では、所定疾患ないし障害を発症する危険のある対象を識別する１組の内因性代謝物が今回発見された。従って、対象のこれらの内因性代謝物のプロファイルはこれらの疾患ないし障害の予後診断、検出及び診断に役立つと思われる。これらの内因性代謝物の正常濃度を回復するように作用することができ、これらの疾患ないし障害の発症を予防又は遅延させ、従って、これらの疾患ないし障害の治療に有効な薬剤及び新規化学物質（ＮＣＥ）のスクリーニング及び同定用ツールとして内因性代謝物のプロファイルを使用することもできる。
【０１０５】
本発明は更に対象における所定疾患ないし障害の発症感受性の悪化速度又は改善速度に及ぼす医薬の影響のモニター方法であって、本願に記載する疾患ないし障害の発症前に対象における内因性代謝物の濃度をモニターする方法を含み、更に、内因性代謝物濃度の増加量又は減少量を対象からの初回（即ち以前の）試料の採取から２回目の試料の採取までの時間で割る段階を含む方法も提供する。
【０１０６】
本発明は更に上記のような所定疾患ないし障害を治療するために対象に投与された医薬の有効性のモニター方法であって、更に、段階（ｉ）の前又は試料の採取間に対象に医薬を投与する段階を含む方法も提供する。
【０１０７】
Ｔ１Ｄ及び／又はＴ２Ｄを発症する危険のある対象を識別する１組の内因性代謝物が今回発見された。従って、対象のこれらの内因性代謝物のプロファイルはＴ１Ｄ及び／又はＴ２Ｄの予後診断、検出及び診断に役立つと思われる。これらの内因性代謝物の正常濃度を回復するように作用することができ、Ｔ１Ｄ及び／又はＴ２Ｄの発症を予防又は遅延させ、従って、Ｔ１Ｄ及び／又はＴ２Ｄの治療に有効な薬剤及び新規化学物質（ＮＣＥ）のスクリーニング及び同定用ツールとして内因性代謝物のプロファイルを使用することもできる。
【０１０８】
本願で遊離塩基又は塩形態、例えば酢酸塩（融点１９８〜２００℃）として使用される化合物Ｎ−（２−クロロ−３，４−ジメトキシベンジリデンアミノ）グアニジンは公知化合物である。前記化合物を含有するのに適したその製法及び組成は例えばＷＯ０２／１１７１５に記載されている。本発明はその任意前駆体又はプロドラッグの使用を包含する。本願開示の関連では、この化合物のみを本発明の方法（即ち検出、予防等）と組合せて使用する。
【０１０９】
本発明は更に本願に開示するような内因性代謝物分析法の使用により自己免疫疾患のリスクが高いか又は恐らく既に非常に初期段階にあると判定（試験）された対象における自己免疫疾患の発症を予防、抑制又は遅延させるために使用する遊離塩基もしくは塩形態の化合物Ｎ−（２−クロロ−３，４−ジメトキシベンジリデンアミノ）グアニジン、又はその前駆体もしくはプロドラッグを提供する。このような分析はＡＤのより明白な症状のいずれかが発現される前に実施することができ、既存形式の診断の結果として従来可能であったよりも著しく早期に予防又は治療を開始することが可能になろう。
【０１１０】
クロマトグラフィー及び分光学的手法の例としては、フーリエ変換赤外（ＦＴ−ＩＲ）分光法、核磁気共鳴（ＮＭＲ）分光法、高性能液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、液体クロマトグラフ質量分析法（ＬＣ−ＭＳ）及びガスクロマトグラフ質量分析法（ＧＣ−ＭＳ）が挙げられる。
【０１１１】
１態様において、本発明はクロマトグラフィーに基づく技術による内因性代謝物プロファイルの測定方法に関する。内因性代謝物化合物はそのまま検出することもできるし、検出前に化学変換（誘導体化）することもできる。検出法としては、限定されないが、試料の光吸収、好ましくはＵＶ検出器、又は質量計による質量／電荷比の測定が挙げられる（例えばＦｏｎｔｅｈ，Ａ．Ｎ．ｅｔ  ａｌ．，Ａｍｉｎｏ  Ａｃｉｄｓ．３２：２０３−２１２（２００７））。
【０１１２】
内因性代謝物の他の測定方法としては、ケモメトリックス法（例えば主成分分析法（ＰＣＡ）、部分最小二乗法による潜在構造射影（ＰＬＳ）、直交ＰＬＳ（ＯＰＬＳ）、ＰＬＳ判別分析法（ＰＬＳ−ＤＡ）及び直交ＰＬＳ−ＤＡ（ＯＰＬＳ−ＤＡ））と、分光学的手法の併用が挙げられる。
【０１１３】
内因性代謝物の他の測定方法としては、多波長分光測定を行い、一般には例えば電磁スペクトルの近赤外範囲における試料の透過スペクトルを測定し、このスペクトルを対照被験者からの標準試料スペクトルと比較する方法が挙げられる。次にケモメトリックス法に基づく比較から、試料が本願に記載する疾患ないし障害を示すか否かを判定する。
【０１１４】
本発明の好ましい１態様では、個々の内因性代謝物と個別に結合した後に検出される試薬を使用し、Ｎ種類の内因性代謝物の１種以上の濃度を測定する。
【０１１５】
好ましくは、Ｎ種類の内因性代謝物に特異的な個々の抗体を使用してＮ種類の内因性代謝物の１種以上の濃度を測定する。
【０１１６】
抗体は検出可能なラベルで直接又は間接的に標識することができる。検出可能なラベルの例としては酵素が挙げられる。好ましくは、酵素の基質は基質又は酵素と基質の反応生成物が蛍光複合体を形成するように選択され、蛍光複合体の濃度を測定することにより内因性代謝物の濃度を測定する。
【０１１７】
本発明の方法で使用される内因性代謝物プロファイルに特異的な抗体は科学又は商業ソースから得ることができる。あるいは、抗体、モノクローナル又はポリクローナル抗体、及び免疫学的に活性なフラグメント（例えばＦａｂ又は（Ｆａｂ）２フラグメント）、抗体重鎖、抗体軽鎖、ヒト化抗体、遺伝子組換え１本鎖Ｆｖ分子（Ｌａｄｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ，米国特許第４，９４６，７７８号）を作製するために、内因性代謝物プロファイルの天然単離成分又は内因性代謝物プロファイルの組換え成分を利用してもよい。モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、フラグメント及びキメラを含む抗体は当業者に公知の方法を使用して作製することができる。
【０１１８】
各種生体試料における内因性代謝物プロファイルを検出するために内因性代謝物プロファイルに特異的に反応性の抗体又はその誘導体を使用することができ、例えば蛋白質の抗原決定基と抗体の結合相互作用に依存する任意公知イムノアッセイで使用することができる。このようなアッセイの例はラジオイムノアッセイ、酵素イムノアッセイ（例えばＥＬＩＳＡ）、免疫蛍光法、免疫沈降法、ラテックス凝集法、血液凝集反応及び組織化学試験である。
【０１１９】
試料、又は内因性代謝物プロファイルに特異的な抗体は固定化することができる。適切な担体の例はアガロース、セルロース、デキストラン、Ｓｅｐｈａｄｅｘ、Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ、リポソーム、カルボキシメチルセルロースポリスチレン、濾紙、イオン交換樹脂、プラスチックフィルム、プラスチックチューブ、ガラスビーズ、ポリアミン−メチルビニル−エーテル−マレイン酸コポリマー、アミノ酸コポリマー、エチレン−マレイン酸コポリマー、ナイロン、シルク等である。担体は例えばチューブ、試験プレート、ウェル、ビーズ、ディスク、球体等の形状とすることができる。固定化抗体は公知化学的又は物理的手法（例えば臭化シアンカップリング）を使用して材料を適切な不溶性担体と反応させることにより作製することができる。
【０１２０】
１態様によると、本発明は内因性代謝物プロファイルイムノアッセイを測定することにより試料における内因性代謝物プロファイルを決定するための手段を提供する。内因性代謝物プロファイルを測定するには各種イムノアッセイ法を使用することができる。一般に、内因性代謝物プロファイルの検出用イムノアッセイ法は競合法でも非競合法でもよい。競合法は一般に内因性代謝物プロファイルに対する固定化抗体又は固定化可能な抗体と、内因性代謝物プロファイルの標識形態を利用する。内因性代謝物プロファイルのサンプルと内因性代謝物プロファイルの標識成分は内因性代謝物プロファイルの成分に特異的な抗体との結合に関して競合する。その結果として内因性代謝物プロファイルに特異的な抗体と結合した標識内因性代謝物プロファイル成分（結合フラクション）を未結合のままの成分（未結合フラクション）から分離後、結合フラクション又は未結合フラクション中のラベルの量を測定し、任意の慣用方法、例えば標準曲線との比較により試料中の内因性代謝物プロファイルの量と相関させることができる。
【０１２１】
一般に、当然のことながら、本発明では任意イムノアッセイ法又はフォーマットを使用できるので、上記イムノアッセイ法及びフォーマットは例示を目的とし、限定されない。
【０１２２】
「試料」、「生体試料」等の用語はプロファイル中に内因性代謝物を含有又は発現することが分かっているか又はその疑いのある材料を意味する。試料は資源から採取したまま直接使用することもできるし、試料の特性を変えるように前処理後に使用することもできる。試料は任意生物資源に由来することができ、例えば組織又は抽出液（細胞を含む）、及び生理的液体（例えば全血、血漿、血清、唾液、水晶体液、脳脊髄液、汗、尿、乳汁、腹水、滑液、腹膜液等）が挙げられる。試料は好ましくは哺乳動物、最も好ましくはヒトから得ることができる。試料は例えば血液から血漿の調製、粘稠液の希釈等により、使用前に処理することができる。処理方法としては、濾過、蒸留、抽出、濃縮、干渉成分の不活性化、試薬添加等が挙げられる。好ましい１態様において、生体試料は生体液、より好ましくは血液又は滑液である。
【０１２３】
「対象」なる用語は本願に記載する疾患ないし障害に罹患しているか又は罹患している疑いのある哺乳動物等の温血動物を意味する。好ましくは、対象はヒトである。
【０１２４】
本願で使用する「対照」なる用語は被験対象と同一種の個体又は個体群を意味する。例えば、対象がヒトであるならば、対照もヒトとなる。
【０１２５】
「対照」は一般に本願に記載する疾患ないし障害の症状を発現する徴候を示さない１以上の個体の群となろう。特に、対照は被験対象よりも著しく若年の個体又は個体群（例えば３０歳、４０歳、５０歳又は６０歳未満の個体）でもよいし、対照は罹患していない遺伝学的親族で同年齢としてもよい。
【０１２６】
本発明の所定態様において、対照又は対照群は対象と同一年齢又はほぼ同一年齢である。
【０１２７】
対照における内因性代謝物濃度は例えば公開されているチャート、コンピュータデータベース、ルックアップテーブル等から入手可能である。他の態様において、この用語は以前に測定された濃度を包含する。従って、本発明の方法は対照から得られる内因性代謝物の濃度を物理的に試験する段階を含む方法に限定されない。
【０１２８】
健常被験者に由来する対照試料の濃度は前向き及び／又は後向き統計調査により求めることができる。臨床的に明白な疾患又は異常をもたない健常被験者を統計調査に選択することができる。対照試料又は同一対象で定量された以前の濃度に比較して統計的に異なる濃度の内因性代謝物プロファイルを検出することにより診断を行うことができる。
【０１２９】
好ましくは、（対象試料と対照試料又は異なる時点で対象から採取した試料間の）内因性代謝物の濃度の変化は有意変化である。
【０１３０】
本発明の所定態様において、有意増加とは対象から得られた生体試料における内因性代謝物濃度測定値が対照から得られた生体試料における対応濃度に比較して１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％又は１００％の増加を上回る増加である。本発明の他の態様において、有意増加とは増加が両側検定でｐ＜０．０５の基準を使用して有意であることを意味する。
【０１３１】
本発明の他の態様において、有意減少とは対象から得られた生体試料における内因性代謝物濃度測定値が対照から得られた生体試料における対応濃度に比較して１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％又は１００％の減少を上回る減少である。本発明の他の態様において、有意減少とは減少が両側検定でｐ＜０．０５の基準を使用して有意であることを意味する。
【０１３２】
本願に開示する方法の所定態様において、方法は更に対象から直接及び／又は１以上の対照から直接生体試料を採取する段階を含む。
【０１３３】
本発明の更に他の態様において、方法は更に医薬、好ましくは診断に適した医薬、即ち、本願に記載する疾患ないし障害の治療用医薬を対象に投与する段階を含む。
【０１３４】
本発明の方法は一般にインビトロ又はエクスビボで実施される。特に、対象又は対照「から得られた生体試料」なる用語は方法がヒト又は動物生体で実施されないことを示すものである。特に、「から得られた」なる用語は対象に代行する代行者から試料を入手すること、例えば医師、看護士、病院、医療センター等から直接又は例えばクーリエ便や郵便を介して間接的に試料を入手することを包含し得る。
【０１３５】
生体試料における内因性代謝物の濃度を以前に対象から得られた生体試料における対応濃度に比較する本発明の方法では、試料を採取する間隔は任意期間とすることができ、例えば１〜６０カ月、１〜３６カ月、１〜１２カ月又は１〜６カ月とすることができる。
【０１３６】
本発明の方法は生体試料における内因性代謝物プロファイルを定量するための診断用キットを使用して実施することができる。本発明は更に本発明の方法を実施するためのキットにも関する。
【０１３７】
特に、本発明は本願に記載する方法で使用するためのキットとして、場合により使用説明書と共に、
ＥＭ１  フェニルアラニン（Ｐｈｅ）
ＥＭ２  チロシン（Ｔｙｒ）
ＥＭ３  イソロイシン（Ｉｌｅ）
ＥＭ４  ロイシン（Ｌｅｕ）
ＥＭ５  オルニチン（Ｏｒｎ）
ＥＭ６  プロリン（Ｐｒｏ）
ＥＭ７  グルタミン酸（Ｇｌｕ）
ＥＭ８  グリシン（Ｇｌｙ）
ＥＭ９  グルタミン（Ｇｌｎ）
ＥＭ１０  メチオニン（Ｍｅｔ）
ＥＭ１１  アスパラギン酸（Ａｓｐ）
ＥＭ１２  バリン（Ｖａｌ）
ＥＭ１３  アルギニン（Ａｒｇ）
から構成される群から選択されるＮ種類の内因性代謝物（但し、Ｎは２〜１３である）の存在を検出するための試薬を含むキットを提供する。好ましくは、Ｎは３〜１３、４〜１３、５〜１３、６〜１３、７〜１３、８〜１３、９〜１３、１０〜１３、１１〜１３、１２〜１３又は１３である。
【０１３８】
本発明は更に本願に記載する方法で使用するためのキットとして、場合により使用説明書と共に、
ＥＭ１  フェニルアラニン
ＥＭ２  チロシン
ＥＭ３  イソロイシン
ＥＭ８  グリシン
ＥＭ９  グルタミン
ＥＭ１０  メチオニン
ＥＭ１４  リジン
ＥＭ１５  アスパラギン
ＥＭ１６  セリン
ＥＭ１７  トリプトファン
ＥＭ１８  トレオニン
から構成される群から選択されＮ種類の内因性代謝物（但し、Ｎは２〜１１である）の存在を検出するための試薬を含むキットも提供する。好ましくは、Ｎは３〜１１、４〜１１、５〜１１、６〜１１、７〜１１、８〜１１、９〜１１、１０〜１１又は１１である。
【０１３９】
更に本願に記載する疾患ないし障害の診断又は検出用としての本発明のキットの使用も提供する。
【０１４０】
例えば、キットはＮ種類の内因性代謝物に特異的な抗体と、酵素で標識した抗体に対する抗体と、酵素の基質を含むことができる。キットは更にマイクロタイタープレートウェル、標準、アッセイ希釈剤、洗浄用緩衝液、接着プレートカバー、及び／又はキットを使用して本発明の方法を実施するための説明書の１以上を含むことができる。
【０１４１】
従って、本発明の１態様はＮ種類の内因性代謝物の抽出用溶液と、適切な希釈剤系と、適切な内部又は外部標準と、場合により適切なクロマトグラフィーカラムと、場合により内因性代謝物化合物の誘導体化用試薬を含むキットから構成される。この定量用の市販技術の１例はＵＰＬＣ  Ａｍｉｎｏ  Ａｃｉｄ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ  ｆｒｏｍ  Ｗａｔｅｒｓ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（Ｗａｔｅｒｓ，Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）である。
【図面の簡単な説明】
【０１４２】
【図１】１型糖尿病の自然史。ＴＲＩＧＲは膵島自己免疫の発現の予防を目的とする現在の予防試験である。ＤＰＴ−１及びＥＮＤＩＴは１型糖尿病の予測可能なリスクのある膵島自己免疫陽性対象における過去の臨床試験である。血清のメタボロミクス分析により、膵島自己免疫の出現前のイニシエーター又は高血糖症、即ち臨床糖尿病の発症を誘導するプロモーターによる変化を解明することができる。
【図２】Ｄｉｘｏｎ，Ｗ．Ｇ．ｅｔ  ａｌ．，Ｂｅｓｔ  Ｐｒａｃｔ．Ｒｅｓ．Ｃｌｉｎ．Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．１９：３７−５３（２００５）を参考に炎症性関節炎の進行の４段階を図式化した。症状発症までの第１段階では、遺伝的要因と環境要因が相俟って患者に自己免疫応答と関節炎症の発症を誘導する。この段階は全ＡＤで多くの共通の特徴を共有し得る。第２段階では、炎症性多発性関節炎（ＩＰ）の持続が決定される。ここでも、理由はほぼ不明であるが、患者によって関節炎症が一時的な場合と慢性炎症を発症する場合がある。第３及び第４段階では、関節炎の種類と疾患の重篤度が決定される。急性ＩＰを発症する大多数の患者は数日又は数週間以内に完全に回復し、多くの場合には初期医療施設で診療すら受けない。
【図３Ａ】図３Ａはヒト対照とＲＡ患者のＯＰＬＳ−ＤＡモデルからのスコア散乱プロット（ｔ［１］）を示す。ＲＡに罹患している対象（プロットの上部、三角で示す）は対照（プロットの下部、四角で示す）から良好に分離される。この分離は２つの個体群の内因性代謝物のパターンに完全に準拠する。
【図３Ｂ】図３Ｂはヒト対照とＲＡ患者のＯＰＬＳ−ＤＡモデルからのローディングカラムプロット（ｐ［１］，相関スケール）を示す。このプロットから、対照とＲＡに罹患していると診断された患者の間に認められた分離を表す代謝物プロファイルを同定することができる。負のローディングはＲＡであると診断された対象では内因性代謝物濃度が低いことを意味する。ＲＡ群では全アミノ酸がダウンレギュレートされる。
【図４Ａ】図４Ａはヒト対照とＯＡ患者のＯＰＬＳ−ＤＡモデルからのスコア散乱プロット（ｔ［１］／ｔｏ［１］）を示す。ＯＡに罹患している対象（プロットの右側、三角で示す）は対照（プロットの左側、四角で示す）から良好に分離される。この分離は２つの個体群の内因性代謝物のパターンに完全に準拠する。
【図４Ｂ】図４Ｂはヒト対照とＯＡ患者のＯＰＬＳ−ＤＡモデルからのローディングカラムプロット（ｐ［１］，相関スケール）を示す。このプロットから、対照とＯＡに罹患していると診断された患者の間に認められた分離を表す代謝物プロファイルを同定することができる。負のローディングはＯＡであると診断された対象では内因性代謝物濃度が低いことを意味する。ＯＡ群では全アミノ酸がダウンレギュレートされる。
【図５Ａ】図５ＡはＣＩＡマウスと健常対照のＯＰＬＳ−ＤＡモデルからのスコア散乱プロット（ｔ［１］／ｔｏ［１］）を示す。ＣＩＡに罹患している対象（プロットの右側、三角で示す）は対照（プロットの左側、四角で示す）から良好に分離される。この分離は２つの個体群の内因性代謝物のパターンに完全に準拠する。
【図５Ｂ】図５ＢはＣＩＡマウスと健常対照のＯＰＬＳ−ＤＡモデルからのローディングカラムプロット（ｐ［１］，相関スケール）を示す。このプロットから、対照と疾患群の間に認められた分離を表す代謝物プロファイルを同定することができる。負のローディングはＣＩＡに罹患している対象では内因性代謝物濃度が低いことを意味する。疾患群では全代謝物がダウンレギュレートされる。
【図６Ａ】図６ＡはＡＩＡラットと健常対照のＯＰＬＳ−ＤＡモデルからのスコア散乱プロット（ｔ［１］／ｔｏ［１］）を示す。ＡＩＡラット（プロットの右側、三角で示す）は対照（プロットの左側、四角で示す）から良好に分離される。
【図６Ｂ】図６ＢはＡＩＡラットと健常対照のＯＰＬＳ−ＤＡモデルからのローディングカラムプロット（ｐ［１］，相関スケール）を示す。疾患群では多数の疾患がダウンレギュレートされる。
【図７Ａ】図７Ａは実験物質を投与したＡＩＡラットのＯＰＬＳ−ＤＡモデルからのスコア散乱プロット（ｔ［１］／ｔｏ［１］）を示す。未投与ＡＩＡ動物（プロットの右側、三角で示す）は実験物質を投与したＡＩＡ動物（プロットの左側、四角で示す）から良好に分離される。この分離は２つの個体群の内因性代謝物のパターンに完全に準拠する。
【図７Ｂ】図７Ｂは実験物質を投与したＡＩＡラットのＯＰＬＳ−ＤＡモデルからのローディングカラムプロット（ｐ［１］，相関スケール）を示す。投与した動物ではほぼ全代謝物がアップレギュレートされ、投与した医薬が有効であることが明らかである。
【図８Ａ】図８Ａは対照被験者とＲＡに罹患している対象を比較した１１種類のバイオマーカーのＯＰＬＳ−ＤＡモデルからのスコア散乱プロット（ｔ［１］ｖｓ．ｔｏ［１］）を示す。対照試料を四角で示し、ＲＡ試料を三角で示す。健常対照と診断患者は非常に良好に分離される。この分離は２つの個体群の内因性代謝物のパターンに完全に準拠する。
【図８Ｂ】図８Ｂは対照被験者とＲＡに罹患している対象を比較した１１種類のバイオマーカーのＯＰＬＳ−ＤＡモデルからの相関スケールローディングのプロットを示す。このプロットから、対照とＲＡに罹患していると診断された患者の間に認められた分離を表す代謝物プロファイルを同定することができる。負のローディングはＲＡであると診断された対象ではバイオマーカー濃度が低いことを意味する。
【図９Ａ】図９Ａは対照被験者とＲＡに罹患している対象を比較した１０種類のバイオマーカーのＯＰＬＳ−ＤＡモデルからのスコア散乱プロット（ｔ［１］ｖｓ．ｔｏ［１］）を示す。対照試料を四角で示し、ＲＡ試料を三角で示す。健常対照と診断患者は非常に良好に分離される。この分離は２つの個体群の内因性代謝物のパターンに完全に準拠する。
【図９Ｂ】図９Ｂは対照被験者とＲＡに罹患している対象を比較した１０種類のバイオマーカーのＯＰＬＳ−ＤＡモデルからの相関スケールローディングのプロットを示す。このプロットから、対照とＲＡに罹患していると診断された患者の間に認められた分離を表す代謝物プロファイルを同定することができる。負のローディングはＲＡであると診断された対象ではバイオマーカー濃度が低いことを意味する。
【０１４３】
【図１０Ａ】図１０Ａは対照被験者とＲＡに罹患している対象を比較した９種類のバイオマーカーのＯＰＬＳ−ＤＡモデルからのスコア散乱プロット（ｔ［１］ｖｓ．ｔｏ［１］）を示す。対照試料を四角で示し、ＲＡ試料を三角で示す。健常対照と診断患者は非常に良好に分離される。この分離は２つの個体群の内因性代謝物のパターンに完全に準拠する。
【図１０Ｂ】図１０Ｂは対照被験者とＲＡに罹患している対象を比較した９種類のバイオマーカーのＯＰＬＳ−ＤＡモデルからの相関スケールローディングのプロットを示す。このプロットから、対照とＲＡに罹患していると診断された患者の間に認められた分離を表す代謝物プロファイルを同定することができる。負のローディングはＲＡであると診断された対象ではバイオマーカー濃度が低いことを意味する。
【図１１Ａ】図１１Ａは対照被験者とＲＡに罹患している対象を比較した８種類のバイオマーカーのＯＰＬＳ−ＤＡモデルからのスコア散乱プロット（ｔ［１］ｖｓ．ｔｏ［１］）を示す。対照試料を四角で示し、ＲＡ試料を三角で示す。健常対照と診断患者は非常に良好に分離される。この分離は２つの個体群の内因性代謝物のパターンに完全に準拠する。
【図１１Ｂ】図１１Ｂは対照被験者とＲＡに罹患している対象を比較した８種類のバイオマーカーのＯＰＬＳ−ＤＡモデルからの相関スケールローディングのプロットを示す。このプロットから、対照とＲＡに罹患していると診断された患者の間に認められた分離を表す代謝物プロファイルを同定することができる。負のローディングはＲＡであると診断された対象ではバイオマーカー濃度が低いことを意味する。
【図１２Ａ】図１２Ａは対照被験者とＲＡに罹患している対象を比較した７種類のバイオマーカーのＯＰＬＳ−ＤＡモデルからのスコア散乱プロット（ｔ［１］ｖｓ．ｔｏ［１］）を示す。対照試料を四角で示し、ＲＡ試料を三角で示す。健常対照と診断患者は非常に良好に分離される。この分離は２つの個体群の内因性代謝物のパターンに完全に準拠する。
【図１２Ｂ】図１２Ｂは対照被験者とＲＡに罹患している対象を比較した７種類のバイオマーカーのＯＰＬＳ−ＤＡモデルからの相関スケールローディングのプロットを示す。このプロットから、対照とＲＡに罹患していると診断された患者の間に認められた分離を表す代謝物プロファイルを同定することができる。負のローディングはＲＡであると診断された対象ではバイオマーカー濃度が低いことを意味する。
【図１３Ａ】図１３Ａは対照被験者とＲＡに罹患している対象を比較した６種類のバイオマーカーのＯＰＬＳ−ＤＡモデルからのスコア散乱プロット（ｔ［１］ｖｓ．ｔｏ［１］）を示す。対照試料を四角で示し、ＲＡ試料を三角で示す。健常対照と診断患者は非常に良好に分離される。この分離は２つの個体群の内因性代謝物のパターンに完全に準拠する。
【図１３Ｂ】図１３Ｂは対照被験者とＲＡに罹患している対象を比較した６種類のバイオマーカーのＯＰＬＳ−ＤＡモデルからの相関スケールローディングのプロットを示す。このプロットから、対照とＲＡに罹患していると診断された患者の間に認められた分離を表す代謝物プロファイルを同定することができる。負のローディングはＲＡであると診断された対象ではバイオマーカー濃度が低いことを意味する。
【図１４Ａ】図１４Ａは対照被験者とＲＡに罹患している対象を比較した５種類のバイオマーカーのＯＰＬＳ−ＤＡモデルからのスコア散乱プロット（ｔ［１］ｖｓ．ｔｏ［１］）を示す。対照試料を四角で示し、ＲＡ試料を三角で示す。健常対照と診断患者は非常に良好に分離される。この分離は２つの個体群の内因性代謝物のパターンに完全に準拠する。
【図１４Ｂ】図１４Ｂは対照被験者とＲＡに罹患している対象を比較した５種類のバイオマーカーのＯＰＬＳ−ＤＡモデルからの相関スケールローディングのプロットを示す。このプロットから、対照とＲＡに罹患していると診断された患者の間に認められた分離を表す代謝物プロファイルを同定することができる。負のローディングはＲＡであると診断された対象ではバイオマーカー濃度が低いことを意味する。
【図１５Ａ】図１５Ａは対照被験者とＲＡに罹患している対象を比較した４種類のバイオマーカーのＯＰＬＳ−ＤＡモデルからのスコア散乱プロット（ｔ［１］ｖｓ．ｔｏ［１］）を示す。対照試料を四角で示し、ＲＡ試料を三角で示す。健常対照と診断患者は非常に良好に分離される。この分離は２つの個体群の内因性代謝物のパターンに完全に準拠する。
【図１５Ｂ】図１５Ｂは対照被験者とＲＡに罹患している対象を比較した４種類のバイオマーカーのＯＰＬＳ−ＤＡモデルからの相関スケールローディングのプロットを示す。このプロットから、対照とＲＡに罹患していると診断された患者の間に認められた分離を表す代謝物プロファイルを同定することができる。負のローディングはＲＡであると診断された対象ではバイオマーカー濃度が低いことを意味する。
【図１６Ａ】図１６Ａは対照被験者とＲＡに罹患している対象を比較した３種類のバイオマーカーのＯＰＬＳ−ＤＡモデルからのスコア散乱プロット（ｔ［１］ｖｓ．ｔｏ［１］）を示す。対照試料を四角で示し、ＲＡ試料を三角で示す。健常対照と診断患者は非常に良好に分離される。この分離は２つの個体群の内因性代謝物のパターンに完全に準拠する。
【図１６Ｂ】図１６Ｂは対照被験者とＲＡに罹患している対象を比較した３種類のバイオマーカーのＯＰＬＳ−ＤＡモデルからの相関スケールローディングのプロットを示す。このプロットから、対照とＲＡに罹患していると診断された患者の間に認められた分離を表す代謝物プロファイルを同定することができる。負のローディングはＲＡであると診断された対象ではバイオマーカー濃度が低いことを意味する。
【図１７Ａ】図１７Ａは対照被験者とＲＡに罹患している対象を比較した２種類のバイオマーカーのＯＰＬＳ−ＤＡモデルからのスコア散乱プロット（ｔ［１］ｖｓ．ｔｏ［１］）を示す。対照試料を四角で示し、ＲＡ試料を三角で示す。健常対照と診断患者は非常に良好に分離される。この分離は２つの個体群の内因性代謝物のパターンに完全に準拠する。
【図１７Ｂ】図１７Ｂは対照被験者とＲＡに罹患している対象を比較した２種類のバイオマーカーのＯＰＬＳ−ＤＡモデルからの相関スケールローディングのプロットを示す。このプロットから、対照とＲＡに罹患していると診断された患者の間に認められた分離を表す代謝物プロファイルを同定することができる。負のローディングはＲＡであると診断された対象ではバイオマーカー濃度が低いことを意味する。
【図１８】表５．ヒトＲＡ患者と対応する動物モデルの比較の結果のまとめ。重量は内因性代謝物の相対重要度を表し、平均の加重和に基づく試料の解釈を行うために使用することができる。
【発明を実施するための形態】
【０１４４】
以下、実施例により本発明を更に説明するが、実施例中、特に指定しない限り、部及び百分率は重量に基づき、度は摂氏である。当然のことながら、これらの実施例は本発明の好ましい態様を示すものであって、例証に過ぎない。上記記載とこれらの実施例から、当業者は本発明の本質的な特徴を確認することができ、発明の趣旨と範囲から離れずに、各種用途及び条件に合わせて本発明を種々に変更及び改変することができる。従って、本願に報告及び記載するものに加えて、本発明の各種変形も上記記載から当業者に理解されよう。このような変形も特許請求の範囲に含むものとする。本願に引用する各参考文献の開示はその全体を本願に援用する。
【実施例１】
【０１４５】
ヒトＡＤに対応する動物モデルの検証
【０１４６】
試験デザイン
使用したヒトＲＡ及びＯＡ試料は以下の血液試料から構成した：
−対照患者１９人
−ＲＡ患者２０人
−ＯＡ患者２０人。
５９人から血清試料を採取し、そのうち２０人がＲＡと診断され、２０人がＯＡと診断され、１９人の供血者がまだ診断されていない健常対照とみなされた。
使用したマウスモデル試料は以下の血液試料から構成される：
−対照からの試料７個
−ＣＩＡに罹患している対象からの試料９個。
使用したラットモデル試料は以下の血液試料から構成される：
−対照からの試料６個
−ＡＩＡに罹患している対象からの試料６個。
【０１４７】
血清からの代謝物の抽出
Ａ  ｅｔ  ａｌ．（２００５）により記載されている方法にほぼ従って血清試料から代謝物の抽出を実施した。内部標準を添加したＭｅＯＨ：Ｈ２Ｏ（９：１  Ｖ：Ｖ）６３０μｌを血清７０μｌに加えた。溶液をボルテックスミキサーで１０秒間混合し、氷上に１０分間維持した後、ＭＭ３０１振動ミル（Ｒｅｔｓｃｈ  ＧｍｂＨ  ＆  Ｃｏ．ＫＧ，Ｈａａｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用して周波数３０Ｈｚで３分間激しく抽出した。氷上で１２０分後に試料を１９  ６００ｇで１０分間４℃にて遠心した。上清２００μｌをＧＣバイアルに取り、５０μｌをＬＣ／ＭＳバイアルに取り、蒸発乾涸した。
【０１４８】
ＧＣ／ＴＯＦＭＳ分析
ＧＣ／ＭＳ分析の前に、５℃で１０分間振盪後に、室温で１６時間インキュベートすることにより、試料をピリジン中、メトキシアミン塩酸塩（１５ｍｇ  ｍＬ−１）３０μＬで誘導体化した。次に、１％  ＴＭＣＳを添加したＮ−メチル−Ｎ−トリフルオロアセトアミド（ＭＳＴＦＡ）３０μＬを加え、室温で１時間インキュベートすることにより、試料をトリメチルシリル化した。シリル化後、ヘプタン（内部標準としてステアリン酸メチル０．５μｇを添加）３０μＬを加えた。
０．１８μｍ  ＤＢ５−ＭＳ固定相（Ｊ＆Ｗ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｆｏｌｓｏｍ，ＣＡ，ＵＳＡ）と化学的に結合した１０ｍ×０．１８ｍｍ  ＩＤのフューズドシリカキャピラリーカラムを取付たＡｇｉｌｅｎｔ  ６９８０  ＧＣにＡｇｉｌｅｎｔ  ７６８３  Ｓｅｒｉｅｓ  Ａｕｔｏｓａｍｐｌｅｒ（Ａｇｉｌｅｎｔ，Ａｔｌａｎｔａ；ＧＡ，ＵＳＡ）により誘導体化試料０．１μｌをスプリットレス注入した。インジェクター温度は２７０℃に設定した。キャリヤーガスとしてヘリウムを使用し、１ｍｌ／ｍｉｎの一定流速でカラムに流した。各分析で、２０ｍｌ  ｍｉｎ−１のパージ流速と１分間の平衡化時間でパージ時間を６０秒に設定した。カラム温度は先ず７０℃に２分間維持した後、４０℃／ｍｉｎで７０℃から３２０℃まで上げ、３２０℃に２分間維持した。Ｐｅｇａｓｕｓ  ＩＩＩ  ＴＯＦＭＳ（Ｌｅｃｏ  Ｃｏｒｐ．，Ｓｔ  Ｊｏｓｅｐｈ，ＭＩ，ＵＳＡ）のイオン源にカラム流出液を導入した。トランスファーライン温度は２５０℃に設定し、イオン源温度は２００℃に設定した。電流２．０ｍＡで７０ｅＶ電子ビームによりイオンを発生させた。スペクトル線３０本／秒の速度でｍ／ｚ５０〜８００から質量を獲得し、１７０秒の溶媒遅延後に加速電圧を印加した。
【０１４９】
ＭＳデータのデータプロセシング。抽出プロトコルを評価するために、ＧＣ／ＴＯＦＭＳ及びＵＰＬＣ／ＭＳ分析からの非処理ＭＳファイルをＮｅｔＣＤＦフォーマットでＭＡＴＬＡＢソフトウェア７．０（Ｍａｔｈｗｏｒｋｓ，Ｎａｔｉｃｋ，ＭＡ，ＵＳＡ）にエクスポートし、カスタムスクリプトを使用して基線補正、クロマトグラム整列、時間窓設定及び多変量スペクトル分解（ＭＣＲ）等の全データ前処理プロシージャを実施した（Ｊｏｎｓｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．２００５，２００６）。こうして、試料間相対代謝物濃度を得た。これらのデータをＳＩＭＣＡ−Ｐ＋ソフトウェア（Ｕｍｅｔｒｉｃｓ，ＡＢ：（２００５））で実行されるような部分最小二乗法（ＰＬＳ）（Ｗｏｌｄ，Ｓ．ｅｔ  ａｌ．，ＳＩＡＭ  Ｊ．Ｓｃｉ．Ｓｔａｔｉｓｔ．Ｃｏｍｐｕｔ．５：７３５−７４３（１９８４）；Ｈｏｓｋｕｌｄｓｓｏｎ，Ａ．，Ｊ．Ｃｈｅｍｏｍｅｔｒ．９：９１−１２３（１９９５））と直交ＰＬＳ（ＯＰＬＳ）（Ｔｒｙｇｇ，Ｊ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｈｅｍｏｍｅｔｒｉｃｓ．１６：１１９−１２８（２００２）；Ｔｒｙｇｇ，Ｊ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｈｅｍｏｍｅｔｒｉｃｓ．１７：５３−６４（２００３））で分析し、個体群、即ちヒトＲＡと対照、ＣＩＡマウスと対照、及びＡＩＡラットと対照から得られた試料における内因性代謝物濃度の差を決定した。
【０１５０】
結果
同定された代謝物（表５，図３Ａ及び３Ｂ，４Ａ及び４Ｂ，５Ａ及び５Ｂ，６Ａ及び６Ｂ）はヒトにおけるＲＡとＯＡ、従って、ＡＤにも関連するアミノ酸及び他の代謝物から構成される。本発明者らのＯＰＬＳ分析によると、ヒト患者と２種類の動物モデルの間には顕著なオーバーラップがあり、代謝物は疾患対象において同様のダウンレギュレーションパターンを示すことが明らかである。主要な知見はこの技術を使用して動物モデルをヒト患者と比較できることと、適応症（この場合にはＡＤ）に最も対応するモデルを識別できることであった。このため、ヒト患者に対する動物モデルの対応性の検証が可能になる。
【実施例２】
【０１５１】
材料及び方法
標準プロトコルに従って代謝物を血清から抽出した。
【０１５２】
臨床試料
使用した試料は以下の血液試料から構成した：
−対照患者１９人
−ＲＡ患者２０人。
【０１５３】
手順
３９人から血清試料を採取し、そのうち２０人がＲＡと診断され、１９人の供血者がまだ診断されていない健常対照とみなされた。当分野で周知の方法により内因性代謝物を同定し、試料間相対代謝物濃度を得た。これらのデータをＳＩＭＣＡ−Ｐ＋ソフトウェア（Ｕｍｅｔｒｉｃｓ，ＡＢ：（２００５））で実行されるような部分最小二乗法（ＰＬＳ）（Ｗｏｌｄ，Ｓ．ｅｔ  ａｌ．，ＳＩＡＭ  Ｊ．Ｓｃｉ．Ｓｔａｔｉｓｔ．Ｃｏｍｐｕｔ．５：７３５−７４３（１９８４）；Ｈｏｓｋｕｌｄｓｓｏｎ，Ａ．，Ｊ．Ｃｈｅｍｏｍｅｔｒ．９：９１−１２３（１９９５））と直交ＰＬＳ（ＯＰＬＳ）（Ｔｒｙｇｇ，Ｊ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｈｅｍｏｍｅｔｒｉｃｓ．１６：１１９−１２８（２００２）；Ｔｒｙｇｇ，Ｊ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｈｅｍｏｍｅｔｒｉｃｓ．１７：５３−６４（２００３））で分析し、２つの個体群から得られた試料における内因性代謝物濃度の差を決定した。
【０１５４】
結果
多変量データ分析の結果、ＲＡであると診断された対象を健常群から分離する内因性代謝物のプロファイルが明らかになった（図３Ａ）。結果は２群間の非常に明瞭な分離であった。
モデルパラメータ（例えば荷重又は重量）を使用し、ＲＡの診断に最も有効な代謝物を同定することができる（図３Ｂ）。
試験の結果、内因性代謝物プロファイルの診断特性はヒトにおけるＲＡの診断に高度に感受性で特異的であることが明らかである。以上の結果、当業者にとって疾患状態の診断とモニターは密接な関係があることも明らかである。
【実施例３】
【０１５５】
材料及び方法
標準プロトコルに従って代謝物を血清から抽出した。
【０１５６】
臨床試料
使用した試料は以下の血液試料から構成した：
−対照患者１９人
−ＯＡ患者２０人。
【０１５７】
手順
３９人から血清試料を採取し、そのうち２０人がＯＡと診断され、１９人の供血者がまだ診断されていない健常対照とみなされた。
当分野で周知の方法により内因性代謝物を同定し、試料間相対代謝物濃度を得た。これらのデータをＳＩＭＣＡ−Ｐ＋ソフトウェア（Ｕｍｅｔｒｉｃｓ，ＡＢ：（２００５））で実行されるような部分最小二乗法（ＰＬＳ）（Ｗｏｌｄ，Ｓ．ｅｔ  ａｌ．，ＳＩＡＭ  Ｊ．Ｓｃｉ．Ｓｔａｔｉｓｔ．Ｃｏｍｐｕｔ．５：７３５−７４３（１９８４）；Ｈｏｓｋｕｌｄｓｓｏｎ，Ａ．，Ｊ．Ｃｈｅｍｏｍｅｔｒ．９：９１−１２３（１９９５））と直交ＰＬＳ（ＯＰＬＳ）（Ｔｒｙｇｇ，Ｊ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｈｅｍｏｍｅｔｒｉｃｓ．１６：１１９−１２８（２００２）；Ｔｒｙｇｇ，Ｊ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｈｅｍｏｍｅｔｒｉｃｓ．１７：５３−６４（２００３））で分析し、２つの個体群から得られた試料における内因性代謝物濃度の差を決定した。
【０１５８】
結果
多変量データ分析の結果、ＯＡであると診断された対象を健常群から分離する内因性代謝物のプロファイルが明らかになった（図１）。結果は２群間の非常に明瞭な分離であった。
モデルパラメータ（例えば荷重又は重量）を使用し、ＯＡの診断に最も有効な代謝物を同定した（図２）。
試験の結果、内因性代謝物プロファイルの診断特性はヒトにおけるＯＡの診断に高度に感受性で特異的であることが明らかである。以上の結果、当業者にとって疾患状態の診断とモニターは密接な関係があることも明らかである。
【実施例４】
【０１５９】
ヒトＲＡに対応する動物モデルの検証
試験デザイン
使用したマウスモデル試料は以下の血液試料から構成される：
−対照からの試料７個
−ＣＩＡに罹患している対象からの試料９個。
使用したラットモデル試料は以下の血液試料から構成される：
−対照からの試料６個
−ＡＩＡに罹患している対象からの試料６個。
【０１６０】
血清からの代謝物の抽出
Ａ  ｅｔ  ａｌ．（２００５）により記載されている方法にほぼ従って血清試料から代謝物の抽出を実施した。内部標準を添加したＭｅＯＨ：Ｈ２Ｏ（９：１  Ｖ：Ｖ）６３０μｌを血清７０μｌに加えた。溶液をボルテックスミキサーで１０秒間混合し、氷上に１０分間維持した後、ＭＭ３０１振動ミル（Ｒｅｔｓｃｈ  ＧｍｂＨ  ＆  Ｃｏ．ＫＧ，Ｈａａｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用して周波数３０Ｈｚで３分間激しく抽出した。氷上で１２０分後に試料を１９  ６００ｇで１０分間４℃にて遠心した。上清２００μｌをＧＣバイアルに取り、５０μｌをＬＣ／ＭＳバイアルに取り、蒸発乾涸した。
【０１６１】
ＧＣ／ＴＯＦＭＳ分析
ＧＣ／ＭＳ分析の前に、５℃で１０分間振盪後に、室温で１６時間インキュベートすることにより、試料をピリジン中、メトキシアミン塩酸塩（１５ｍｇ  ｍＬ−１）３０μＬで誘導体化した。次に、１％  ＴＭＣＳを添加したＮ−メチル−Ｎ−トリフルオロアセトアミド（ＭＳＴＦＡ）３０μＬを加え、室温で１時間インキュベートすることにより、試料をトリメチルシリル化した。シリル化後、ヘプタン（内部標準としてステアリン酸メチル０．５μｇを添加）３０μＬを加えた。０．１８μｍ  ＤＢ５−ＭＳ固定相（Ｊ＆Ｗ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｆｏｌｓｏｍ，ＣＡ，ＵＳＡ）と化学的に結合した１０ｍ×０．１８ｍｍ  ＩＤのフューズドシリカキャピラリーカラムを取付たＡｇｉｌｅｎｔ  ６９８０  ＧＣにＡｇｉｌｅｎｔ  ７６８３  Ｓｅｒｉｅｓ  Ａｕｔｏｓａｍｐｌｅｒ（Ａｇｉｌｅｎｔ，Ａｔｌａｎｔａ；ＧＡ，ＵＳＡ）により誘導体化試料０．１μｌをスプリットレス注入した。インジェクター温度は２７０℃に設定した。キャリヤーガスとしてヘリウムを使用し、１ｍｌ／ｍｉｎの一定流速でカラムに流した。各分析で、２０ｍｌ  ｍｉｎ−１のパージ流速と１分間の平衡化時間でパージ時間を６０秒に設定した。カラム温度は先ず７０℃に２分間維持した後、４０℃／ｍｉｎで７０℃から３２０℃まで上げ、３２０℃に２分間維持した。Ｐｅｇａｓｕｓ  ＩＩＩ  ＴＯＦＭＳ（Ｌｅｃｏ  Ｃｏｒｐ．，Ｓｔ  Ｊｏｓｅｐｈ，ＭＩ，ＵＳＡ）のイオン源にカラム流出液を導入した。トランスファーラインは２５０℃に設定し、イオン源温度は２００℃に設定した。電流２．０ｍＡで７０ｅＶ電子ビームによりイオンを発生させた。スペクトル線３０本／秒の速度でｍ／ｚ５０〜８００から質量を獲得し、１７０秒の溶媒遅延後に加速電圧を印加した。
【０１６２】
ＭＳデータのデータプロセシング。抽出プロトコルを評価するために、ＧＣ／ＴＯＦＭＳ及びＵＰＬＣ／ＭＳ分析からの非処理ＭＳファイルをＮｅｔＣＤＦフォーマットでＭＡＴＬＡＢソフトウェア７．０（Ｍａｔｈｗｏｒｋｓ，Ｎａｔｉｃｋ，ＭＡ，ＵＳＡ）にエクスポートし、カスタムスクリプトを使用して基線補正、クロマトグラム整列、時間窓設定及び多変量スペクトル分解（ＭＣＲ）等の全データ前処理プロシージャを実施した（Ｊｏｎｓｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．２００５，２００６）。こうして、試料間相対代謝物濃度を得た。これらのデータをＳＩＭＣＡ−Ｐ＋ソフトウェア（Ｕｍｅｔｒｉｃｓ，ＡＢ：（２００５））で実行されるような部分最小二乗法（ＰＬＳ）（Ｗｏｌｄ，Ｓ．ｅｔ  ａｌ．，ＳＩＡＭ  Ｊ．Ｓｃｉ．Ｓｔａｔｉｓｔ．Ｃｏｍｐｕｔ．５：７３５−７４３（１９８４）；Ｈｏｓｋｕｌｄｓｓｏｎ，Ａ．，Ｊ．Ｃｈｅｍｏｍｅｔｒ．９：９１−１２３（１９９５））と直交ＰＬＳ（ＯＰＬＳ）（Ｔｒｙｇｇ，Ｊ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｈｅｍｏｍｅｔｒｉｃｓ．１６：１１９−１２８（２００２）；Ｔｒｙｇｇ，Ｊ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｈｅｍｏｍｅｔｒｉｃｓ．１７：５３−６４（２００３））で分析し、個体群、即ちヒトＲＡと対照、ＣＩＡマウスと対照、及びＡＩＡラットと対照から得られた試料における内因性代謝物濃度の差を決定した。
【０１６３】
結果
同定された代謝物（表５，図３Ａ及び３Ｂ，４Ａ及び４Ｂ，５Ａ及び５Ｂ，６Ａ及び６Ｂ）はヒトにおけるＲＡとＯＡ、従って、ＡＤにも関連するアミノ酸及び他の代謝物から構成される。本発明者らのＯＰＬＳ分析によると、ヒト患者と２種類の動物モデルの間には顕著なオーバーラップがあり、代謝物は疾患対象において同様のダウンレギュレーションパターンを示すことが明らかである。主要な知見はこの技術を使用して動物モデルをヒト患者と比較できることと、適応症（この場合にはＡＤ）に最も対応するモデルを識別できることであった。このため、ヒト患者に対する動物モデルの対応性の検証が可能になる。
【実施例５】
【０１６４】
実験物質（アルギニン）によるＡＩＡラットモデルにおけるＲＡの治療
試験デザイン
ダークアグーチ（ＤＡ）ラット３匹にＡＩＡを誘導後、ラットに実験物質を投与した。
使用したラットモデル試料は以下の血液試料から構成される：
−ＡＩＡ  ＤＡラットからの試料３個
−実験物質を投与したＡＩＡ  ＤＡラットからの試料４個（ラットのうち、１匹からは２回サンプリングした）。
【０１６５】
血清からの代謝物の抽出
Ａ  ｅｔ  ａｌ．（２００５）により記載されている方法にほぼ従って血清試料から代謝物の抽出を実施した。内部標準を添加したＭｅＯＨ：Ｈ２Ｏ（９：１  Ｖ：Ｖ）６３０μｌを血清７０μｌに加えた。溶液をボルテックスミキサーで１０秒間混合し、氷上に１０分間維持した後、ＭＭ３０１振動ミル（Ｒｅｔｓｃｈ  ＧｍｂＨ  ＆  Ｃｏ．ＫＧ，Ｈａａｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用して周波数３０Ｈｚで３分間激しく抽出した。氷上で１２０分後に試料を１９  ６００ｇで１０分間４℃にて遠心した。上清２００μｌをＧＣバイアルに取り、５０μｌをＬＣ／ＭＳバイアルに取り、蒸発乾涸した。
【０１６６】
ＧＣ／ＴＯＦＭＳ分析
ＧＣ／ＭＳ分析の前に、５℃で１０分間振盪後に、室温で１６時間インキュベートすることにより、試料をピリジン中、メトキシアミン塩酸塩（１５ｍｇ  ｍＬ−１）３０μＬで誘導体化した。次に、１％  ＴＭＣＳを添加したＮ−メチル−Ｎ−トリフルオロアセトアミド（ＭＳＴＦＡ）３０μＬを加え、室温で１時間インキュベートすることにより、試料をトリメチルシリル化した。シリル化後、ヘプタン（内部標準としてステアリン酸メチル０．５μｇを添加）３０μＬを加えた。０．１８μｍ  ＤＢ５−ＭＳ固定相（Ｊ＆Ｗ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｆｏｌｓｏｍ，ＣＡ，ＵＳＡ）と化学的に結合した１０ｍ×０．１８ｍｍ  ＩＤのフューズドシリカキャピラリーカラムを取付たＡｇｉｌｅｎｔ  ６９８０  ＧＣにＡｇｉｌｅｎｔ  ７６８３  Ｓｅｒｉｅｓ  Ａｕｔｏｓａｍｐｌｅｒ（Ａｇｉｌｅｎｔ，Ａｔｌａｎｔａ；ＧＡ，ＵＳＡ）により誘導体化試料０．１μｌをスプリットレス注入した。インジェクター温度は２７０℃に設定した。キャリヤーガスとしてヘリウムを使用し、１ｍｌ／ｍｉｎの一定流速でカラムに流した。各分析で、２０ｍｌ  ｍｉｎ−１のパージ流速と１分間の平衡化時間でパージ時間を６０秒に設定した。カラム温度は先ず７０℃に２分間維持した後、４０℃／ｍｉｎで７０℃から３２０℃まで上げ、３２０℃に２分間維持した。Ｐｅｇａｓｕｓ  ＩＩＩ  ＴＯＦＭＳ（Ｌｅｃｏ  Ｃｏｒｐ．，Ｓｔ  Ｊｏｓｅｐｈ，ＭＩ，ＵＳＡ）のイオン源にカラム流出液を導入した。トランスファーラインは２５０℃に設定し、イオン源温度は２００℃に設定した。電流２．０ｍＡで７０ｅＶ電子ビームによりイオンを発生させた。スペクトル線３０本／秒の速度でｍ／ｚ５０〜８００から質量を獲得し、１７０秒の溶媒遅延後に加速電圧を印加した。
【０１６７】
ＭＳデータのデータプロセシング。抽出プロトコルを評価するために、ＧＣ／ＴＯＦＭＳ及びＵＰＬＣ／ＭＳ分析からの非処理ＭＳファイルをＮｅｔＣＤＦフォーマットでＭＡＴＬＡＢソフトウェア７．０（Ｍａｔｈｗｏｒｋｓ，Ｎａｔｉｃｋ，ＭＡ，ＵＳＡ）にエクスポートし、カスタムスクリプトを使用して基線補正、クロマトグラム整列、時間窓設定及び多変量スペクトル分解（ＭＣＲ）等の全データ前処理プロシージャを実施した（Ｊｏｎｓｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．２００５，２００６）。こうして、試料間相対代謝物濃度を得た。これらのデータをＳＩＭＣＡ−Ｐ＋ソフトウェア（Ｕｍｅｔｒｉｃｓ，ＡＢ：（２００５））で実行されるような部分最小二乗法（ＰＬＳ）（Ｗｏｌｄ，Ｓ．ｅｔ  ａｌ．，ＳＩＡＭ  Ｊ．Ｓｃｉ．Ｓｔａｔｉｓｔ．Ｃｏｍｐｕｔ．５：７３５−７４３（１９８４）；Ｈｏｓｋｕｌｄｓｓｏｎ，Ａ．，Ｊ．Ｃｈｅｍｏｍｅｔｒ．９：９１−１２３（１９９５））と直交ＰＬＳ（ＯＰＬＳ）（Ｔｒｙｇｇ，Ｊ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｈｅｍｏｍｅｔｒｉｃｓ．１６：１１９−１２８（２００２）；Ｔｒｙｇｇ，Ｊ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｈｅｍｏｍｅｔｒｉｃｓ．１７：５３−６４（２００３））で分析し、ＡＩＡ  ＤＡラットと投与個体から得られた試料における内因性代謝物濃度の差を決定した。
【０１６８】
データ分析
試料間相対代謝物濃度を表すデータを得た。これらのデータをＳＩＭＣＡ−Ｐ＋ソフトウェア（Ｕｍｅｔｒｉｃｓ，ＡＢ：（２００５））で実行されるような部分最小二乗法（ＰＬＳ）（Ｗｏｌｄ，Ｓ．ｅｔ  ａｌ．，ＳＩＡＭ  Ｊ．Ｓｃｉ．Ｓｔａｔｉｓｔ．Ｃｏｍｐｕｔ．５：７３５−７４３（１９８４）；Ｈｏｓｋｕｌｄｓｓｏｎ，Ａ．，Ｊ．Ｃｈｅｍｏｍｅｔｒ．９：９１−１２３（１９９５））と直交ＰＬＳ（ＯＰＬＳ）（Ｔｒｙｇｇ，Ｊ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｈｅｍｏｍｅｔｒｉｃｓ．１６：１１９−１２８（２００２）；Ｔｒｙｇｇ，Ｊ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｈｅｍｏｍｅｔｒｉｃｓ．１７：５３−６４（２００３））で分析し、個体群、即ちヒトＲＡと対照、ＣＩＡマウスと対照、及びＡＩＡラットと対照から得られた試料における内因性代謝物濃度の差を決定した。
【０１６９】
結果
同定された代謝物（図７Ａ及び７Ｂ）はヒト及び対応する動物モデルにおいてＡＤに関連するアミノ酸から構成される。本発明者らのＯＰＬＳ分析によると、本願記載する技術は物質の投与後にＡＩＡラットにおける重要な代謝変化の識別を可能にした。物質投与の結果、ヒト及び対応する動物モデルでＡＤに関連する代謝物の多くのアップレギュレーションが生じた。代謝物の血清分析に適用した技術はこのアプローチを使用して適応症ＡＤに対して投与した医薬の効力を測定するために感受性且つ特異的である。
【実施例６】
【０１７０】
本実施例は活性化合物とその治療薬として活性な酸付加塩が精神障害の治療に利用可能であることを例証する。
【０１７１】
試験デザイン
ルイスラット合計２１匹にＡＩＡを誘導し、治療試験に供した。使用した試料は以下の血液試料から構成される：
−ＡＩＡルイスラットからの試料２２個（ラットのうち、１匹からは２回サンプリングした）
−投与後のＡＩＡルイスラットからの試料２６個（ラットのうち、５匹からは２回サンプリングした）。
ＡＩＡ対象には以下のように各種投与を割り当てた：
−対象５匹に活性化合物１ｍｇを投与
−対象５匹に活性化合物３ｍｇを投与
−対象６匹に活性化合物１０ｍｇを投与
−対象５匹に活性化合物１ｍｇを投与。
【０１７２】
血清からの代謝物の抽出
Ａ  ｅｔ  ａｌ．（２００５）により記載されている方法にほぼ従って血清試料から代謝物の抽出を実施した。内部標準を添加したＭｅＯＨ：Ｈ２Ｏ（９：１  Ｖ：Ｖ）６３０μｌを血清７０μｌに加えた。溶液をボルテックスミキサーで１０秒間混合し、氷上に１０分間維持した後、ＭＭ３０１振動ミル（Ｒｅｔｓｃｈ  ＧｍｂＨ  ＆  Ｃｏ．ＫＧ，Ｈａａｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用して周波数３０Ｈｚで３分間激しく抽出した。氷上で１２０分後に試料を１９  ６００ｇで１０分間４℃にて遠心した。上清２００μｌをＧＣバイアルに取り、５０μｌをＬＣ／ＭＳバイアルに取り、蒸発乾涸した。
【０１７３】
ＧＣ／ＴＯＦＭＳ分析とＭＳデータのデータプロセシングは上記実施例１と同様に実施した。
【０１７４】
結果
ヒトにおけるＴ１Ｄ、ＲＡ及びＯＡ、従ってＡＤにも関連するアミノ酸及び他の代謝物から構成され、ＡＤ発症のリスク検出、ＡＤの検出及びＡＤ進行のモニター用として適切な内因性代謝物（表５，図３Ａ及び３Ｂ，４Ａ及び４Ｂ，５Ａ及び５Ｂ，６Ａ及び６Ｂ）として同定された代謝物の濃度は活性化合物投与により著しく影響を受けた。本発明者らのＯＰＬＳ分析によると、代謝物は活性化合物を投与した対象において同様のアップレギュレーションパターンを示すことが明らかである。主要な知見は動物モデルにおいて適応症ＡＤに関連する代謝物の濃度を回復できることであった。このため、動物モデルとヒト患者においてＡＤの予防処置、ＡＤの発症を遅延又は予防するための処置、及びのＡＤの治療用としての活性化合物投与の妥当性の検証が可能になった。
【実施例７】
【０１７５】
材料及び方法
標準プロトコルに従って代謝物を血清から抽出した。
【０１７６】
臨床試料
使用した試料は以下の血液試料から構成される：
−対照患者１９人
−ＲＡ患者２０人。
【０１７７】
手順
３９人から血清試料を採取し、そのうち２０人がＲＡと診断され、１９人の供血者がまだ診断されていない健常対照とみなされた。
当分野で周知の方法により内因性代謝物を同定し、試料間相対代謝物濃度を得た。これらのデータをＳＩＭＣＡ−Ｐ＋ソフトウェア（Ｕｍｅｔｒｉｃｓ，ＡＢ：（２００５））で実行されるような部分最小二乗法（ＰＬＳ）（Ｗｏｌｄ，Ｓ．ｅｔ  ａｌ．，ＳＩＡＭ  Ｊ．Ｓｃｉ．Ｓｔａｔｉｓｔ．Ｃｏｍｐｕｔ．５：７３５−７４３（１９８４）；Ｈｏｓｋｕｌｄｓｓｏｎ，Ａ．，Ｊ．Ｃｈｅｍｏｍｅｔｒ．９：９１−１２３（１９９５））と直交ＰＬＳ（ＯＰＬＳ）（Ｔｒｙｇｇ，Ｊ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｈｅｍｏｍｅｔｒｉｃｓ．１６：１１９−１２８（２００２）；Ｔｒｙｇｇ，Ｊ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｈｅｍｏｍｅｔｒｉｃｓ．１７：５３−６４（２００３））で分析し、２つの個体群から得られた試料における内因性代謝物濃度の差を決定した。
【０１７８】
結果
多変量データ分析の結果、ＲＡであると診断された対象を健常群から分離する内因性代謝物のプロファイルが明らかになった（図８Ａ）。結果は２群間の非常に明瞭な分離であった。
モデルパラメータ（例えば荷重又は重量）を使用し、ＲＡの診断に最も有効な代謝物を同定することができる（図８Ｂ）。
更に、ＲＡと診断された対象を健常群から分離できるようにするために全内因性代謝物を使用する必要はない（図９Ａ）。結果は２群間の非常に明瞭な分離であった。モデルパラメータ（例えば荷重又は重量）を使用し、ＲＡの診断に最も有効な代謝物を同定することができる（図９Ｂ）。
更に、ＲＡと診断された対象を健常群から分離できるようにするために全内因性代謝物を使用する必要はない（図１０Ａ）。結果は２群間の非常に明瞭な分離であった。モデルパラメータ（例えば荷重又は重量）を使用し、ＲＡの診断に最も有効な代謝物を同定することができる（図１０Ｂ）。
更に、ＲＡと診断された対象を健常群から分離できるようにするために全内因性代謝物を使用する必要はない（図１１Ａ）。結果は２群間の非常に明瞭な分離であった。モデルパラメータ（例えば荷重又は重量）を使用し、ＲＡの診断に最も有効な代謝物を同定することができる（図１１Ｂ）。
更に、ＲＡと診断された対象を健常群から分離できるようにするために全内因性代謝物を使用する必要はない（図１２Ａ）。結果は２群間の非常に明瞭な分離であった。モデルパラメータ（例えば荷重又は重量）を使用し、ＲＡの診断に最も有効な代謝物を同定することができる（図１２Ｂ）。
更に、ＲＡと診断された対象を健常群から分離できるようにするために全内因性代謝物を使用する必要はない（図１３Ａ）。結果は２群間の非常に明瞭な分離であった。モデルパラメータ（例えば荷重又は重量）を使用し、ＲＡの診断に最も有効な代謝物を同定することができる（図１３Ｂ）。
更に、ＲＡと診断された対象を健常群から分離できるようにするために全内因性代謝物を使用する必要はない（図１４Ａ）。結果は２群間の非常に明瞭な分離であった。モデルパラメータ（例えば荷重又は重量）を使用し、ＲＡの診断に最も有効な代謝物を同定することができる（図１４Ｂ）。
更に、ＲＡと診断された対象を健常群から分離できるようにするために全内因性代謝物を使用する必要はない（図１５Ａ）。結果は２群間の非常に明瞭な分離であった。モデルパラメータ（例えば荷重又は重量）を使用し、ＲＡの診断に最も有効な代謝物を同定することができる（図１５Ｂ）。
更に、ＲＡと診断された対象を健常群から分離できるようにするために全内因性代謝物を使用する必要はない（図１６Ａ）。結果は２群間の非常に明瞭な分離であった。モデルパラメータ（例えば荷重又は重量）を使用し、ＲＡの診断に最も有効な代謝物を同定することができる（図１６Ｂ）。
更に、ＲＡと診断された対象を健常群から分離できるようにするために全内因性代謝物を使用する必要はない（図１７Ａ）。結果は２群間の非常に明瞭な分離であった。モデルパラメータ（例えば荷重又は重量）を使用し、ＲＡの診断に最も有効な代謝物を同定することができる（図１７Ｂ）。
試験の結果、内因性代謝物プロファイルの診断特性はヒトにおいてＲＡに高度に感受性で特異的であることが明らかである。更に、特定の内因性代謝物を組合せると、診断特性が強化される。
以上の結果、当業者にとって疾患状態の診断とモニターは密接な関係があることも明らかである。
【図１】
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【図２】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図９Ａ】
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【図９Ｂ】
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【図１０Ａ】
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【図１０Ｂ】
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【図１１Ａ】
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【図１１Ｂ】
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【図１２Ａ】
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【図１２Ｂ】
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【図１３Ａ】
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【図１３Ｂ】
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【図１４Ａ】
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【図１４Ｂ】
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【図１５Ａ】
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【図１５Ｂ】
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【図１６Ａ】
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【図１６Ｂ】
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【図１７Ａ】
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【図１７Ｂ】
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【図１８】
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