(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）：
【化１】
0005551070.tif 000065
の化合物、または薬学的に許容される塩、水和物もしくは水和塩、前記化合物の多形結晶構造体、または光学異性体、ラセミ化合物、ジアステレオマーもしくはエナンチオマー
［式中、
Ｒ１およびＲ２、ならびにＲ１’およびＲ２’は、＝Ｂおよび＝Ｂ’基をそれぞれ含有する二重結合を一緒になって形成しており、；
ＢおよびＢ’は、同一でありまたは異なり、および１個以上のＨａｌ、ＣＮ、ＮＲＲ’、ＣＦ３、ＯＲ、ＳＲ、ＳＯＲ、ＳＯ２Ｒ、アリール、Ｈｅｔで置換されていてもよいアルケニルから独立して選択され、またはＢおよびＢ’は酸素原子を表し；
Ａ、Ａ’は、同一でありまたは異なり、アルキルから独立して選択され；
Ｙ、Ｙ’は、同一でありまたは異なり、Ｏアルキルから独立して選択され；
Ｔは、１個以上の非開裂性リンカーで置換されており、Ｈａｌ、ＣＮ、ＮＲＲ’、ＣＦ３、Ｒ、ＯＲ、ＳＯＲまたはＳＯ２Ｒの１個以上で置換されていてもよいフェニルまたはピリジルであり；
ｎ、ｎ’は、等しくまたは異なり、０または１であり；
ｑは、０、１または２であり；
Ｒ、Ｒ’は、等しくまたは異なり、およびＨ、アルキル、アリール（それぞれ、Ｈａｌ、ＣＮ、ＣＯＯＨ、ＣＯＯＲ、ＣＯＮＨＲ、ＣＯＮＲＲ’、ＮＲＲ’、ＣＦ３、Ｒ、ＯＲ、ＳＯＲ、ＳＯ２Ｒ、アリール、Ｈｅｔで置換されていてもよい。）から独立して選択され、
前記リンカーは、
式−Ｇ−Ｄ−（Ｚ）ｐＣ（＝Ｏ）−Ｚ’Ｒ” 
（式中、Ｇは、単結合、二重結合または三重結合、−Ｏ−、−Ｓ−または−ＮＲ−であり；
Ｄは、単結合または−Ｅ−、−Ｅ−ＮＲ−、−Ｅ−ＮＲ−Ｆ−、−Ｅ−Ｏ−、−Ｅ−Ｏ−Ｆ−、−Ｅ−ＮＲ−ＣＯ−、−Ｅ−ＣＯＮＲ−、−Ｅ−ＮＲ−ＣＯ−Ｆ−、−Ｅ−ＣＯ−ＮＲ−Ｆ−、−Ｅ−ＣＯ−、−ＣＯ−Ｅ−、−Ｅ−ＣＯ−Ｆ−、−Ｅ−Ｓ−、−Ｅ−Ｓ−Ｆ−、−Ｅ−ＮＲ−ＣＳ−、−Ｅ−ＣＳ−ＮＲ−、−Ｅ−ＮＲ−ＣＳ−Ｆ−、−Ｅ−ＣＳ−ＮＲ−Ｆ−であり；
ＥおよびＦは、同一でありまたは異なり、および直鎖または分枝鎖の−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｉアルキル（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｊ−、−アルキル（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｉ−アルキル−、−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｊ−、−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｉシクロアルキル（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｊ−、−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｉヘテロ環（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｊ−、−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｉアリール（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｊ−、−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｉヘテロアリール（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｊ−、−アルキル−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｉアルキル（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｊ−、−アルキル−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｉ−、−アルキル−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｉシクロアルキル（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｊ−、−アルキル（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｉヘテロ環（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｊ−、−アルキル−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｉアリール（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｊ−、−アルキル（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｉヘテロアリール（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｊ−、−シクロアルキル−アルキル−、−アルキル−シクロアルキル−、−ヘテロ環−アルキル−、−アルキル−ヘテロ環−、−アルキル−アリール−、−アリール−アルキル−、−アルキル−ヘテロアリール−、−ヘテロアリール−アルキル−から独立して選択され；
ｉおよびｊは、同一でありまたは異なり、整数であり、および０、１から２０００から独立して選択され；
Ｚは、可溶化官能基で置換されていてもよい直鎖または分枝鎖のアルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、アラルキル、シクロアルキル、ヘテロアラルキルまたはヘテロシクリルアルキルであり；
ｐは０または１である。）
のリンカーであるか；あるいは
前記リンカーは、
−（ＣＲ１３Ｒ１４）ｔ（ＣＲ１５Ｒ１６）ｕ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｙＣＯＺ’Ｒ”、
−（ＣＲ１３Ｒ１４）ｔ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｙＯ（ＣＲ１５Ｒ１６）ｕＣＯＺ’Ｒ”、
−（ＣＲ１３Ｒ１４）ｔ（ＣＲ１７＝ＣＲ１８）（ＣＲ１５Ｒ１６）ｕ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｙＣＯＺ’Ｒ”、
−（ＣＲ１３Ｒ１４）ｔ（ＮＲ１９ＣＯ）（ＣＲ１５Ｒ１６）ｕ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｙＣＯＺ’Ｒ”、
−（ＣＲ１３Ｒ１４）ｔ（ＯＣＯ）（ＣＲ１５Ｒ１６）ｕ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｙＣＯＺ’Ｒ”、
−（ＣＲ１３Ｒ１４）ｔ（ＣＯ）（ＣＲ１５Ｒ１６）ｕ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｙＣＯＺ’Ｒ”、
−（ＣＲ１３Ｒ１４）ｔ（ＣＯＮＲ１９）（ＣＲ１５Ｒ１６）ｕ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｙＣＯＺ’Ｒ”、
−（ＣＲ１３Ｒ１４）ｔ−フェニル−ＣＯ（ＣＲ１５Ｒ１６）ｕＣＯＺ’Ｒ”、−（ＣＲ１３Ｒ１４）ｔ−フリル−ＣＯ（ＣＲ１５Ｒ１６）ｕＣＯＺ’Ｒ”、
−（ＣＲ１３Ｒ１４）ｔ−オキサゾリル−ＣＯ（ＣＲ１５Ｒ１６）ｕＣＯＺ’Ｒ”、
−（ＣＲ１３Ｒ１４）ｔ−チアゾリル−ＣＯ（ＣＲ１５Ｒ１６）ｕＣＯＺ’Ｒ”、
−（ＣＲ１３Ｒ１４）ｔ−チエニル−ＣＯ（ＣＲ１５Ｒ１６）ｕＣＯＺ’Ｒ”、
−（ＣＲ１３Ｒ１４）ｔ−イミダゾリル−ＣＯ（ＣＲ１５Ｒ１６）ｕＣＯＺ’Ｒ”、
−（ＣＲ１３Ｒ１４）ｔピペラジノ−ＣＯ（ＣＲ１５Ｒ１６）ｕＣＯＺ’Ｒ”、
−（ＣＲ１３Ｒ１４）ｔ−フェニル−ＱＣＯＺ’Ｒ”、
−（ＣＲ１３Ｒ１４）ｔ−フリル−ＱＣＯＺ’Ｒ”、−（ＣＲ１３Ｒ１４）ｔ−オキサゾリル−ＱＣＯＺ’Ｒ”、
−（ＣＲ１３Ｒ１４）ｔ−チアゾリル−ＱＣＯＺ’Ｒ”、−（ＣＲ１３Ｒ１４）ｔ−チエニル−ＱＣＯＺ’Ｒ”、
−（ＣＲ１３Ｒ１４）ｔ−イミダゾリル−ＱＣＯＺ’Ｒ”、−（ＣＲ１３Ｒ１４）ｔ−ピペラジノ−ＱＣＯＺ’Ｒ”、
−（Ｃ≡Ｃ）−（ＣＲ１３Ｒ１４）ｔ（ＣＲ１５Ｒ１６）ｕ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｙＣＯＺ’Ｒ”、
−Ｏ（ＣＲ１３Ｒ１４）ｔ（ＣＲ１５Ｒ１６）ｕ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｙＣＯＺ’Ｒ”、
−Ｏ（ＣＲ１３Ｒ１４）ｔ（ＮＲ１９ＣＯ）（ＣＲ１５Ｒ１６）ｕ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｙＣＯＺ’Ｒ”、
−Ｏ（ＣＲ１３Ｒ１４）ｔ（ＣＲ１７＝ＣＲ１８）（ＣＲ１５Ｒ１６）ｕ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｙＣＯＺ’Ｒ”、
−Ｏ−フェニル−ＱＣＯＺ’Ｒ”、−Ｏ−フリル−ＱＣＯＺ’Ｒ”、−Ｏ−オキサゾリル−ＱＣＯＺ’Ｒ”、
−Ｏ−チアゾリル−ＱＣＯＺ’Ｒ”、−Ｏ−チエニル−ＱＣＯＺ’Ｒ”、−Ｏ−イミダゾリル−ＱＳＣＯＺ’Ｒ”、
−Ｏ−モルホリノ−ＱＣＯＺ’Ｒ”、−Ｏ−ピペラジノ−ＱＣＯＺ’Ｒ”、
−ＯＣＯ（ＣＲ１３Ｒ１４）ｔ（ＮＲ１９ＣＯ）（ＣＲ１５Ｒ１６）ｕ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｙＣＯＺ’Ｒ”、
−ＯＣＯ−（ＣＲ１３Ｒ１４）ｔ（ＣＲ１７＝ＣＲ１８）（ＣＲ１５Ｒ１６）ｕ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｙＣＯＺ’Ｒ”、
−ＯＣＯＮＲ１２（ＣＲ１３Ｒ１４）ｔ（ＣＲ１５Ｒ１６）ｕ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｙＣＯＺ’Ｒ”、
−ＯＣＯ−フェニル−ＱＣＯＺ’Ｒ”、−ＯＣＯ−フリル−ＱＣＯＺ’Ｒ”、−ＯＣＯ−オキサゾリル−ＱＣＯＺ’Ｒ”、
−ＯＣＯ−チアゾリル−ＱＣＯＺ’Ｒ”、−ＯＣＯ−チエニル−ＱＣＯＺ’Ｒ”、−ＯＣＯ−イミダゾリル−ＱＣＯＺ’Ｒ”、
−ＯＣＯ−ピペラジノ−ＱＣＯＺ’Ｒ”、または
−ＣＯ（ＣＲ１３Ｒ１４）ｔ（ＣＲ１５Ｒ１６）ｕ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｙＣＯＺ’Ｒ”、
−ＣＯ−（ＣＲ１３Ｒ１４）ｔ（ＣＲ１７＝ＣＲ１８）（ＣＲ１５Ｒ１６）ｕ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｙＣＯＺ’Ｒ”、
−ＣＯＮＲ１２（ＣＲ１３Ｒ１４）ｔ（ＣＲ１５Ｒ１６）ｕ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｙＣＯＺ’Ｒ”、
−ＣＯ−フェニル−ＱＣＯＺ’Ｒ”、−ＣＯ−フリル−ＱＣＯＺ’Ｒ”  −ＣＯ−オキサゾリル−ＱＣＯＺ’Ｒ”、
−ＣＯ−チアゾリル−ＱＣＯＺ’Ｒ”、−ＣＯ−チエニル−ＱＣＯＺ’Ｒ”、−ＣＯ−イミダゾリル−ＱＣＯＺ’Ｒ”、
−ＣＯ−ピペラジノ−ＱＣＯＺ’Ｒ”、−ＣＯ−ピペリジノ−ＱＣＯＺ’Ｒ”、
−ＮＲ１９（ＣＲ１３Ｒ１４）ｔ（ＣＲ１５Ｒ１６）ｕ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｙＣＯＺ’Ｒ”、
−ＮＲ１９ＣＯ（ＣＲ１３Ｒ１４）ｔ（ＣＲ１５Ｒ１６）ｕ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｙＣＯＺ’Ｒ”、
−ＮＲ１９（ＣＲ１３Ｒ１４）ｔ（ＣＲ１７＝ＣＲ１８）（ＣＲ１５Ｒ１６）ｕ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｙＣＯＺ’Ｒ”、
−ＮＲ１９ＣＯ（ＣＲ１３Ｒ１４）ｔ（ＣＲ１７＝ＣＲ１８）（ＣＲ１５Ｒ１６）ｕ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｙＣＯＺ’Ｒ”、
−ＮＲ１９ＣＯＮＲ１２（ＣＲ１３Ｒ１４）ｔ（ＣＲ１５Ｒ１６）ｕ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｙＣＯＺ’Ｒ”、
−ＮＲ１９ＣＯＮＲ１２（ＣＲ１３Ｒ１４）ｔ（ＣＲ１７＝ＣＲ１８）（ＣＲ１５Ｒ１６）ｕ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｙＣＯＺ’Ｒ”、
−ＮＲ１９ＣＯ−フェニル−ＱＣＯＺ’Ｒ”、−ＮＲ１９ＣＯ−フリル−ＱＣＯＺ’Ｒ”、−ＮＲ１９ＣＯ−オキサゾリル−ＱＣＯＺ’Ｒ”、
−ＮＲ１９ＣＯ−チアゾリル−ＱＣＯＺ’Ｒ”、−ＮＲ１９ＣＯ−チエニル−ＱＣＯＺ’Ｒ”、
−ＮＲ１９ＣＯ−イミダゾリル−ＱＣＯＺ’Ｒ”、−ＮＲ１９ＣＯ−モルホリノ−ＱＣＯＺ’Ｒ”、
−ＮＲ１９ＣＯ−ピペラジノ−ＱＣＯＺ’Ｒ”、−ＮＲ１９ＣＯ−ピペリジノ−ＱＣＯＺ’Ｒ”、
−ＮＲ１９−フェニル−ＱＣＯＺ’Ｒ”、−ＮＲ１９−フリル−ＱＣＯＺ’Ｒ”、−ＮＲ１９−オキサゾリル−ＱＣＯＺ’Ｒ”、
−ＮＲ１９−チアゾリル−ＱＣＯＺ’Ｒ”、−ＮＲ１９−チエニル−ＱＣＯＺ’Ｒ”、−ＮＲ１９−イミダゾリル−ＱＣＯＺ’Ｒ”、
−ＮＲ１９−ピペラジノ−ＱＣＯＺ’Ｒ”、−ＮＲ１９−ピペリジノ−ＱＣＯＺ’Ｒ”、
−ＮＲ１９ＣＯ−ＮＲ１２−フェニル−ＱＣＯＺ’Ｒ”、−ＮＲ１９ＣＯ−ＮＲ１２−オキサゾリル−ＱＣＯＺ’Ｒ”、
−ＮＲ１９ＣＯ−ＮＲ１２−チアゾリル−ＱＣＯＺ’Ｒ”、−ＮＲ１９ＣＯ−ＮＲ１２−チエニル−ＱＣＯＺ’Ｒ”、
−ＮＲ１９ＣＯ−ＮＲ１２−ピペリジノ−ＱＣＯＺ’Ｒ”、
−Ｓ（Ｏ）ｑ（ＣＲ１３Ｒ１４）ｔ（ＣＲ１５Ｒ１６）ｕ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｙＣＯＺ’Ｒ”、
−Ｓ（Ｏ）ｑ（ＣＲ１３Ｒ１４）ｔ（ＣＲ１７＝ＣＲ１８）（ＣＲ１５Ｒ１６）ｕ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｙＣＯＺ’Ｒ”、
−ＳＣＯＮＲ１２（ＣＲ１３Ｒ１４）ｔ（ＣＲ１５Ｒ１６）ｕ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｙＣＯＺ’Ｒ”、−ＳＣＯ−ピペラジノ−ＱＣＯＺ’Ｒ”、
および−ＳＣＯ−ピペリジノ−ＱＣＯＺ’Ｒ”
（式中、
Ｑは、直接結合、または１から１０個の炭素原子を有する直鎖アルキルもしくは分枝鎖アルキル、または２個から２０個の繰り返しエチレンオキシ単位を有するポリエチレングリコールスペーサーであり；
Ｒ１９およびＲ１２は、同一でありまたは異なり、および１個から１０個の炭素原子を有する直鎖アルキル、分枝鎖アルキルもしくは環式アルキル、または単なるもしくは置換アリールもしくはヘテロ環であり、およびＲ１２は、さらにＨであってよく；
Ｒ１３、Ｒ１４、Ｒ１５およびＲ１６は、同一でありまたは異なり、およびＨまたは１個から４個の炭素原子を有する直鎖もしくは分枝鎖のアルキルであり；
Ｒ１７およびＲ１８は、Ｈまたはアルキルであり；
ｑは、０、１または２であり；
ｕは、１から１０の整数であり、０であってもよく；
ｔは、１から１０の整数であり、０であってもよく；
ｙは、１から２０の整数であり、０であってもよい。）
から選択され；
−Ｃ（＝Ｏ）−Ｚ’Ｒ”は、官能基を含有するカルボニルであり、ここで、
−Ｚ’は、単結合または−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＲ−を表し、ならびに
−Ｒ”は、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリールまたはヘテロ環（それぞれ、１個以上のＨａｌ、ＣＮ、ＮＲＲ’、ＣＦ３、Ｒ、ＯＲ、ＳＯＲ、ＳＯ２Ｒ、アリール、Ｈｅｔで置換されていてもよい。）を表す］。
【請求項２】
式：
【化２】
0005551070.tif 000066
の請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ａ＝Ａ’である、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項４】
Ａ＝Ａ’＝直鎖非置換アルキルである、請求項１から３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項５】
Ｙ＝Ｙ’である、請求項１から４のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項６】
Ｙ＝Ｙ’＝Ｏアルキルである、請求項１から５のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項７】
Ｙ＝Ｙ’＝ＯＭｅである、請求項１から６のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項８】
ｎ＝ｎ’＝１である、請求項１から７のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項９】
Ｂ＝Ｂ’＝  ＝ＣＨ２又は＝ＣＨ−ＣＨ３である、請求項１から８のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１０】
リンカーが、請求項１に定義の式−Ｇ−Ｄ−（Ｚ）ｐ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｚ’Ｒ”のリンカーである請求項１から９のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１１】
Ｇが、単結合、二重結合もしくは三重結合であり、または−Ｏ−、−Ｓ−もしくは−ＮＲ−である、請求項１０に記載の化合物。
【請求項１２】
Ｇが、単結合または−Ｏ−である、請求項１０または１１に記載の化合物。
【請求項１３】
Ｄが、単結合であり、または−Ｅ−もしくは−Ｅ−Ｏ−である、請求項１０、１１または１２に記載の化合物。
【請求項１４】
Ｄが−Ｅ−である、請求項１０から１３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１５】
Ｅが、直鎖または分枝鎖の−アルキル−または−Ａｌｋ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｉ−である、請求項１０から１４のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１６】
Ｚが、直鎖または分枝鎖の−アルキル−である、請求項１０から１５のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１７】
ｐが０である、請求項１０から１６のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１８】
Ｚ’が、単結合またはＯである、請求項１０から１７のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１９】
Ｚ’がＯである、請求項１０から１８のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項２０】
Ｒ”がＨまたは直鎖もしくは分枝鎖の−アルキル−、または置換されていてもよいヘテロ環である、請求項１０から１９のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項２１】
Ｒ”がＨまたはアルキルもしくはスクシンイミド基
【化３】
0005551070.tif 000067
である、請求項１０から２０のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項２２】
−Ｚ’Ｒ”が、−ＯＨ、−Ｏアルキルまたは
【化４】
0005551070.tif 000068
である、請求項１０から２１のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項２３】
前記リンカーが、
−（ＣＲ１３Ｒ１４）ｔ（ＣＲ１５Ｒ１６）ｕ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｙＣＯＺ’Ｒ”；
−（ＣＲ１３Ｒ１４）ｔ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｙＯ（ＣＲ１５Ｒ１６）ｕＣＯＺ’Ｒ”；
−Ｏ（ＣＲ１３Ｒ１４）ｔ（ＣＲ１５Ｒ１６）ｕ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｙＣＯＺ’Ｒ”；
−Ｏ（ＣＲ１３Ｒ１４）ｔ（ＮＲ１９ＣＯ）（ＣＲ１５Ｒ１６）ｕ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｙＣＯＺ’Ｒ”；
−（Ｃ≡Ｃ）−（ＣＲ１３Ｒ１４）ｔ（ＣＲ１５Ｒ１６）ｕ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｙＣＯＺ’Ｒ”；
−Ｏ（ＣＲ１３Ｒ１４）ｔＣＯＺ’Ｒ”；
−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｙＣＯＺ’Ｒ”；
−（Ｃ≡Ｃ）−（ＣＲ１３Ｒ１４）ｔＣＯＺ’Ｒ”；
−Ｏ（ＣＲ１３Ｒ１４）ｔ（ＮＲ１９ＣＯ）（ＣＲ１５Ｒ１６）ｕＣＯＺ’Ｒ”；
−（ＣＲ１３Ｒ１４）ｔ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｙＣＯＺ’Ｒ”
から選択される、請求項１から２２のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項２４】
式：
【化５】
0005551070.tif 000069
の化合物
［式中、
−Ｇ−Ｄ−（Ｚ）ｐ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｚ’Ｒ”は、請求項１から２３に定義の通りであり；
Ｍは、ＣＨまたはＮを表す。］。
【請求項２５】
４−（３，５−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−フェノキシ）−酪酸；
４−（３，５−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−フェノキシ）−酢酸；
３−（２−｛２−［２−（３，５−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−フェノキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−プロピオン酸；
６−（３，５−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−フェニル）−ヘクサ−５−イン酸；
３−（２−｛２−［２−（２，６−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−ピリジン−４−イルオキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−プロピオン酸；
４−（２，６−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−ピリジン−４−イルオキシ）−酪酸；
Ｎ−［２−（３，５−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−フェノキシ）−エチル］−Ｎ−メチル−スクシンアミド酸；
４（３，５−ビス−［（Ｓ）−２−メチリデン−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−フェニル）−プロパン酸；
（２−｛２−［２−（２−｛３−［３，５−ビス−（７−メトキシ−２−メチレン−５−オキソ−２，３，５，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−８−イルオキシメチル）−フェニル］−プロポキシ｝−エトキシ）エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−酢酸；
（３−｛２−［２−（２−｛３−［３，５−ビス−（７−メトキシ−２−メチレン−５−オキソ−２，３，５，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−８−イルオキシメチル）−フェニル］−プロポキシ｝−エトキシ）エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−プロパン酸；
からなる群において選択される化合物、ならびに対応するＮ−ヒドロキシスクシンイミジルエステル、またはこれらの薬学的に許容される塩、水和物もしくは水和塩、またはこれらの化合物の多形結晶構造体、またはこれらの光学異性体、ラセミ化合物、ジアステレオマーもしくはエナンチオマー。
【請求項２６】
リンカーを介して変性されていてもよい細胞結合剤に化学結合している、請求項１から２５のいずれか一項に記載の１種以上のトマイマイシン誘導体を含むコンジュゲート分子。
【請求項２７】
トマイマイシン誘導体のリンカーの結合基を介して細胞結合剤に共有結合している、請求項１から２５のいずれか一項に記載の１種以上のトマイマイシン誘導体を含むコンジュゲート分子。
【請求項２８】
前記細胞結合剤が、抗体もしくは少なくとも１つの結合部位を含有する抗体のフラグメント、リンホカイン、ホルモン、成長因子、栄養輸送分子、または任意の他の細胞結合分子もしくは物質から選択される、請求項２６または２７に記載のコンジュゲート分子。
【請求項２９】
前記細胞結合剤が、モノクローナル抗体；キメラ抗体；ヒト化抗体；完全ヒト抗体；単鎖抗体；抗体のフラグメント、インターフェロン；ペプチド；リンホカイン；ホルモン；成長因子およびコロニー刺激因子；ビタミンから選択される、請求項２６から２８のいずれか一項に記載のコンジュゲート分子。
【請求項３０】
細胞結合剤および前記誘導体がアミド基を介して結合している、請求項２６から２９のいずれか一項に記載のコンジュゲート分子。
【請求項３１】
リンカーが末端カルボキシ基を含み、前記カルボキシ基がアミド基またはこの前駆体として必要に応じて活性化されている、請求項１から２５のいずれか一項に記載の化合物を、細胞結合剤と、該化合物および該細胞結合剤がアミド結合を介して一緒に結合するように反応させる段階を含む、コンジュゲート分子を調製する方法。
【請求項３２】
前記細胞結合剤が抗体又はモノクローナル抗体である請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
前記コンジュゲートが、サイズ排除クロマトグラフィー、吸着クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、アフィニティクロマトグラフィー、ＨＰＬＣ、ヒドロキシアパタイト上でのクロマトグラフィー、透析または膜分離によって精製される、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
請求項２６から３０のいずれか一項に記載のコンジュゲート分子または請求項１から２５のいずれか一項に記載の化合物を薬学的に許容される担体と一緒に含む医薬組成物。
【請求項３５】
癌を治療する医薬品の調製のための、請求項２６から３０のいずれか一項に記載のコンジュゲート分子または請求項１から２５のいずれか一項に記載の化合物の有効量の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規トマイマイシン誘導体および細胞毒性剤としてのこれらの治療的使用に関する。治療的使用は、トマイマイシン誘導体を細胞結合剤に化学結合させることにより標的化方式において特定の細胞集団にトマイマイシン誘導体を送達する結果である。本発明はまた、変性されていてもよい細胞結合剤に化学結合している１種以上の前記トマイマイシン誘導体を含むコンジュゲート分子に関する。
【背景技術】
【０００２】
モノクローナル抗体−薬物コンジュゲートによる腫瘍細胞の意図的な特異的標的化についての多くの報告がなされている（Ｓｅｌａら、Ｉｍｍｕｎｏ−ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ、１８９−２１６頁（Ｃ．Ｖｏｇｅｌ編  １９８７）；Ｇｈｏｓｅら、Ｔａｒｇｅｔｅｄ  Ｄｒｕｇｓ  １−２２頁（Ｅ．Ｇｏｌｄｂｅｒｇ編  １９８３）；Ｄｉｅｎｅｒら、Ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｓｙｓｔｅｍｓ、１−２３頁（Ｊ．Ｒｏｄｗｅｌｌ編  １９８８）；Ｐｉｅｔｅｒｓｚら、Ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｓｙｓｔｅｍｓ、２５−５３頁（Ｊ．Ｒｏｄｗｅｌｌ編  １９８８）；Ｂｕｍｏｌら、Ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｓｙｓｔｅｍｓ、５５−７９頁（Ｊ．Ｒｏｄｗｅｌｌ編  １９８８）；Ｇ．Ａ．Ｐｉｅｔｅｒｓｚ  ＆  Ｋ．Ｋｒａｕｅｒ、２、Ｊ．Ｄｒｕｇ  Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ、１８３−２１５頁（１９９４）；Ｒ．Ｖ．Ｊ．Ｃｈａｒｉ、３１  Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｒｅｖｓ．、８９−１０４頁（１９９８）；Ｗ．Ａ．Ｂｌａｔｔｌｅｒ  ＆  Ｒ．Ｖ．Ｊ．Ｃｈａｒｉ、Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ａｇｅｎｔｓ、Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ  ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ、３１７−３３８頁、ＡＣＳ  Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ  Ｓｅｒｉｅｓ  ７９６；Ｏｊｉｍａら編、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ２００１；Ｊ．Ｍ．Ｌａｍｂｅｒｔ、５  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ、５４３−５４９頁（２００５）；Ｐ．Ｒ．Ｈａｍａｎｎ、１５  Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｏｎ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  Ｐａｔｅｎｔｓ、１０８７−１１０３頁（２００５）において）。本発明に引用されている全ての参考文献および特許は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０００３】
細胞毒性薬物、例えばメトトレキセート、ダウノルビシン、ドキソルビシン、ビンクリスチン、ビンブラスチン、メルファラン、マイトマイシンＣおよびクロラムブシルが、種々のマウスモノクローナル抗体にコンジュゲートされてきた。場合によっては、この薬物分子は、中間担体分子、例えば血清アルブミン（Ｇａｒｎｅｔｔら、４６、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２４０７−２４１２頁（１９８６）；Ｏｈｋａｗａら  ２３、Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．８１−８６頁（１９８６）；Ｅｎｄｏら、４７  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．１０７６−１０８０頁（１９８０））、デキストラン（Ｈｕｒｗｉｔｚら、２  Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２５−３５頁（１９８０）；Ｍａｎａｂｉら、３４  Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２８９−２９１頁（１９８５）；Ｄｉｌｌｍａｎら、４６  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．、４８８６−４８９１頁（１９８６）；Ｓｈｏｖａｌら、８５、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．、８２７６−８２８０頁（１９８８））またはポリグルタミン酸（Ｔｓｕｋａｄａら、７３、Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃ．Ｉｎｓｔ．、７２１−７２９頁（１９８４）；Ｋａｔｏら  ２７  Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．、１６０２−１６０７頁（１９８４）；Ｔｓｕｋａｄａら、５２、Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ、１１１−１１６頁（１９８５））を介して抗体分子に結合された。
【０００４】
広範囲のリンカー技術がこのようなイムノコンジュゲートの調製のために使用されており、開裂性リンカーおよび非開裂性リンカーの両方が研究されてきた。しかしながら、ほとんどの場合、薬物分子が開裂性リンカーを使用して標的部位において非変性形態でコンジュゲートから放出され得る場合、薬物の高い細胞毒性能を観察することができるにすぎない。
【０００５】
しかしながら、インビトロ細胞毒性試験により、抗体−薬物コンジュゲートは抗原陽性細胞だけでなく、近傍の他の細胞をも、これらの表面上での抗原発現にかかわらず殺傷することが明らかになった。この現象は、バイスタンダー効果と称されている。この効果は、抗ＣａｎＡｇ抗体ｈｕＣ２４２のメイタンシノイドおよびＣＣ１０６５類似体とのコンジュゲートにおいて観察された（Ｅｒｉｃｋｓｏｎら、６６  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．、４４２６−４４３３頁（２００６）；Ｋｏｖｔｕｎら、６６  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．、３２１４−３２２１頁（２００６））。これまで、開裂性結合、例えば還元性ジスルフィド結合を介して結合しているコンジュゲートのみバイスタンダー細胞毒性を示す一方、非還元性チオエーテル結合を介して結合しているコンジュゲートはバイスタンダー効果を示さなかった。
【０００６】
標的化剤、例えば抗体に結合している高度に強力な細胞毒性エフェクター分子は、コンジュゲートの細胞内プロセッシング後に強力な薬物誘導体を生成することができた。このことは、生成された細胞代謝物が不所望なまたは容易に管理することができない副作用を示す場合に問題になり得た。抗体−薬物コンジュゲートの毒性を制御するため、非開裂性リンカーを使用することが極めて有益であり得た。
【０００７】
ほとんどの抗体−薬物コンジュゲートの別の主な欠点は、標的抗原の数が限定されていること、ならびにメトトレキセート、ダウノルビシンおよびビンクリスチンのような制癌性（ｃａｎｃｅｒｏｓｔａｔｉｃ）薬物の比較的穏和な細胞毒性のため、十分な濃度の薬物を標的部位に送達することができないことである。顕著な細胞毒性を達成するため、抗体への直接的なまたはポリマー性担体分子を介した多数の薬物分子の結合が必要になる。しかしながら、このような大幅に変性されている抗体は、標的抗原への結合の減少および血流からの速いインビボクリアランスを示すことが多い。したがって、代替手段は、よりいっそう強力な薬物分子、例えば下記に開示の薬物分子を使用することである。
【０００８】
非開裂性リンカーもコンジュゲーションにおいて使用されている。非開裂性リンカーは特に放射免疫療法の用途において関心を持たれている。非開裂性リンカーは、ヘテロ二官能性マレイミドスクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート（ＳＭＣＣ）を使用して、ＭＡｂ９．２．２７を有するシュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）外毒素に関して毒素のモノクローナル抗体への結合においても利用されている（ＥＰ３０６９４３）。ＭＡｂ毒素コンジュゲートは、対応するジスルフィド結合コンジュゲートより陽性細胞系に対してインビトロでより特異的になり、こうしてマウスモデルにおいて毒性が低くなった。非特異的毒性は、非開裂性リンカーが使用される場合に顕著に減少する。この非開裂性リンカーは、ＨＥＲ２（ＥｒｂＢ）を標的とするトラスツズマブ（ハーセプチン）の場合に使用されている。ＨＥＲＲ２は重要な標的であり、ＭＡｂを使用してこの受容体を阻害する効果を最大化する方法が研究されている。１つのアプローチは、ＭＡｂを化学療法剤とカップリングさせ、こうして細胞レベルにおける細胞毒性療法の送達を可能にすることによりトラスツズマブ（ハーセプチン）の効能を増大させることを目的としている（ＲａｎｓｏｎおよびＳｌｉｗｋｏｗｓｋｉ、６３（増補１）Ｏｎｃｏｌｏｇｙ、１７−２４（２００２））。
【０００９】
ＳＭＣＣ試薬の他の型が存在し、例えば水溶性スルホスクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート（スルホ−ＳＭＣＣ）もコンジュゲーション反応において使用されている。他の非開裂性リンカーは、特にＮ−スクシンイミジル−Ｓ−アセチルチオアセテート（ＳＡＴＡ）、ＳＡＴＡ−ＳＭＣＣ、２−イミノチアゾール（２ＩＴ）および２ＩＴ−ＳＭＣＣ（Ｆｏｕｌｏｎら、１０、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．、８６７−８７６頁（１９９９））を含む。ハロアセチルベース部分を含む架橋試薬も使用されており、Ｎ−スクシンイミジル−４−（ヨードアセチル）−アミノベンゾエート（ＳＩＡＢ）、Ｎ−スクシンイミジルヨードアセテート（ＳＩＡ）、Ｎ−スクシンイミジルブロモアセテート（ＳＢＡ）およびＮ−スクシンイミジル３−（ブロモ−アセトアミド）プロピオネート（ＳＢＡＰ）を含む。これらの架橋試薬は、ハロアセチルベース部分から誘導される非開裂性リンカーを形成する。
【００１０】
薬物分子に起因する上記の困難性にもかかわらず、細胞結合部分を含む有用な細胞毒性剤およびメイタンシノイドとして知られている細胞毒性薬物の群が報告された（ＵＳＰ５，２０８，０２０、ＵＳＰ５，４１６，０６４およびＲ．Ｖ．Ｊ．Ｃｈａｒｉ、３１  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  ８９−１０４頁（１９９８））。同様に、細胞結合部分を含む有用な細胞毒性剤、ならびに強力な抗腫瘍抗生物質ＣＣ−１０６５の類似体および誘導体も報告された（ＵＳＰ５，４７５，０９２、ＵＳＰ５，５８５，４９９およびＵＳＰ６，７５６，３９７）。
【００１１】
トマイマイシン誘導体は、ＤＮＡの副溝内でグアニンのＮ２に共有結合することによりこれらの生物学的特性を発揮する化合物の公知のクラスであるピロロ［１，４］ベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）である。ＰＢＤは、多数の副溝バインダー、例えばアントラマイシン、ネオトラマイシンおよびＤＣ−８１を含む。しかしながら、トマイマイシン抗腫瘍活性は、正常細胞へのこの非特異的毒性のために制限される。したがって、トマイマイシン化合物の治療的活性を増加させ、非特異的毒性効果を減少させることが必要とされている。本発明者らは、この必要性を、トマイマイシン化合物を細胞結合剤に結合させることによるトマイマイシン化合物の標的化送達により満たすことができることを示した。さらに、水溶液中で可溶性を示し、安定性を示すトマイマイシン誘導体を開発することが必要とされている。さらに、トマイマイシンは、細胞結合剤のコンジュゲートに使用されるほど十分強力ではない。
【００１２】
近年、数種の新規ＰＢＤ誘導体および前臨床モデルにおけるこれらの抗腫瘍活性が開示された（ＷＯ００／１２５０８およびＷＯ２００５／０８５２６０）。しかしながら、ヒトにおける初期臨床試験により、このクラスの化合物がヒトに投与することができる非常に低い用量に基づいて顕著な毒性を示すことが示されている（Ｉ．Ｐｕｚａｎｏｖ、Ｐｒｏｃ．ＡＡＣＲ−ＮＣＩ−ＥＯＲＴＣ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ、Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ、ＵＳＡ  ２００５、Ａｂｓｔｒａｃｔ  ＃Ｂ１１７）。したがって、細胞毒性活性を弱めることなく、副作用がより少ない代替的な誘導体を提供することが望まれている。
【００１３】
（先行技術）
国際出願ＷＯ２００７／０８５９３０およびＷＯ２００８／０１０１０１は、リンカーを介して細胞結合剤に結合させることができるトマイマイシン誘導体を記載しているが、このリンカーは本発明の化合物に定義のリンカーではない。
【００１４】
論文「Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔｅｒｓ、２９巻、４０号、５１０５−５１０８頁」は、いかなるリンカーをも有しないトマイマイシン誘導体（参考文献（１３）−（１５））を記載している。
【００１５】
国際出願ＷＯ２００５／０８５２５０は、一般式ＰＢＤ−Ａ―Ｙ−Ｘ−（Ｈｅｔ）ｎａ−Ｌ−（Ｈｅｔ）ｎｂ−Ｌ−（Ｈｅｔ）ｎｃ−Ｔ−（Ｈｅｔ’）ｎｄ−Ｌ−（Ｈｅｔ’）ｎｅ−Ｌ−（Ｈｅｔ’）ｎｆ−Ｘ’−Ｙ’−Ａ’−ＰＢＤ’のＰＢＤの二量体（式中、ＨｅｔおよびＨｅｔ’は、式−Ｊ−Ｇ−Ｊ’またはＪ’−Ｇ−Ｊのアミノ−ヘテロアリーレン基であり、ここで、Ｇは、ヘテロアリーレンで置換されていてもよく、ｎａ−ｎｆは、０から５の整数であり、Ｌは、β−アラニン、グリシン、４−アミノ酪酸または単結合であってよい。）を記載している。ＸおよびＸ’は、両方とも、−ＮＨ−または−Ｃ（＝Ｏ）−であり、ＹおよびＹ’は、ＨＹがアルキル、ヘテロ環もしくはアリール基であるような二価の基、または単結合である。ＡおよびＡ’は、Ｏ、Ｓ、ＮＨまたは単結合から選択される。Ｔは、−ＮＨ−Ｑ−ＮＨ−または−Ｃ（＝Ｏ）−Ｑ−Ｃ（＝Ｏ）−の形の二価のリンカーであり、ここで、Ｑは、ＱＨがアルキル、ヘテロ環またはアリール基（置換されていてもよい）であるような二価の基である。この一般式による化合物は全て、−ＮＨ−または−Ｃ（＝Ｏ）をＸおよびＸ’として、−ＮＨ−Ｑ−ＮＨ−または−Ｃ（＝Ｏ）−Ｑ−Ｃ（＝Ｏ）−を含み、これらは本発明の化合物についての実例ではない。
【００１６】
国際出願ＷＯ２００５／０２３８１４は、橋−Ｘ−Ｒ”−Ｘ−を含む、窒素原子Ｎ１０上でＲ１０−ＣＯＯ−により保護されているＰＢＤの二量体（式中、Ｒ”は、１個以上のヘテロ原子ＮＨ、ＯまたはＳで中断されていてもよいアルキレン基および／または芳香族環であり、Ｘは、Ｏ、ＳまたはＮＨである。）を記載している。橋−Ｘ−Ｒ”−Ｘ−上のリンカーは言及されていない。さらに、本発明の化合物はＮ１０上で保護されていない。
【００１７】
論文「Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ４０巻、７号、６４１−６５４頁」は、ＰＢＤの二量体（参考文献（３８）−（４０））を記載しており、これらの二量体は本発明の化合物に関するいかなるリンカーをも含まない。
【００１８】
論文「Ｅｘｐｅｒｔ  ｏｐｉｎｉｏｎ；Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｄｒｕｇ  ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ」、Ａｓｈｌｅｙ出版、１５巻、９号、２００５、１０８７−１１０３頁、ＩＳＳＮ：１３５４−３７７４は本発明の化合物を記載しておらず、論文「Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２００６、６６（８）、４４２６−４４３３頁」は細胞結合剤に結合しているメイタンシノイドを記載している。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１９】
【特許文献１】欧州特許第３０６９４３号明細書
【特許文献２】米国特許第５，２０８，０２０号明細書
【特許文献３】米国特許第５，４１６，０６４号明細書
【特許文献４】米国特許第５，４７５，０９２号明細書
【特許文献５】米国特許第５，５８５，４９９号明細書
【特許文献６】米国特許第６，７５６，３９７号明細書
【特許文献７】国際公開第００／１２５０８号
【特許文献８】国際公開第２００５／０８５２６０号
【特許文献９】国際公開第２００７／０８５９３０号
【特許文献１０】国際公開第２００８／０１０１０１号
【特許文献１１】国際公開第２００５／０８５２５０号
【特許文献１２】国際公開第２００５／０２３８１４号
【非特許文献】
【００２０】
【非特許文献１】Ｓｅｌａら、Ｉｍｍｕｎｏ−ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ、１８９−２１６頁（Ｃ．Ｖｏｇｅｌ編  １９８７）
【非特許文献２】Ｇｈｏｓｅら、Ｔａｒｇｅｔｅｄ  Ｄｒｕｇｓ  １−２２頁（Ｅ．Ｇｏｌｄｂｅｒｇ編  １９８３）
【非特許文献３】Ｄｉｅｎｅｒら、Ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｓｙｓｔｅｍｓ、１−２３頁（Ｊ．Ｒｏｄｗｅｌｌ編  １９８８）
【非特許文献４】Ｐｉｅｔｅｒｓｚら、Ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｓｙｓｔｅｍｓ、２５−５３頁（Ｊ．Ｒｏｄｗｅｌｌ編  １９８８）
【非特許文献５】Ｂｕｍｏｌら、Ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｓｙｓｔｅｍｓ、５５−７９頁（Ｊ．Ｒｏｄｗｅｌｌ編  １９８８）
【非特許文献６】Ｇ．Ａ．Ｐｉｅｔｅｒｓｚ  ＆  Ｋ．Ｋｒａｕｅｒ、２、Ｊ．Ｄｒｕｇ  Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ、１８３−２１５頁（１９９４）
【非特許文献７】Ｒ．Ｖ．Ｊ．Ｃｈａｒｉ、３１  Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｒｅｖｓ．、８９−１０４頁（１９９８）
【非特許文献８】Ｗ．Ａ．Ｂｌａｔｔｌｅｒ  ＆  Ｒ．Ｖ．Ｊ．Ｃｈａｒｉ、Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ａｇｅｎｔｓ、Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ  ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ、３１７−３３８頁、ＡＣＳ  Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ  Ｓｅｒｉｅｓ  ７９６
【非特許文献９】Ｏｊｉｍａら編、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ２００１
【非特許文献１０】Ｊ．Ｍ．Ｌａｍｂｅｒｔ、５  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ、５４３−５４９頁（２００５）
【非特許文献１１】Ｐ．Ｒ．Ｈａｍａｎｎ、１５  Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｏｎ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  Ｐａｔｅｎｔｓ、１０８７−１１０３頁（２００５）
【非特許文献１２】Ｇａｒｎｅｔｔら、４６、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２４０７−２４１２頁（１９８６）
【非特許文献１３】Ｏｈｋａｗａら  ２３、Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．８１−８６頁（１９８６）
【非特許文献１４】Ｅｎｄｏら、４７  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．１０７６−１０８０頁（１９８０）
【非特許文献１５】Ｈｕｒｗｉｔｚら、２  Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２５−３５頁（１９８０）
【非特許文献１６】Ｍａｎａｂｉら、３４  Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２８９−２９１頁（１９８５）
【非特許文献１７】Ｄｉｌｌｍａｎら、４６  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．、４８８６−４８９１頁（１９８６）
【非特許文献１８】Ｓｈｏｖａｌら、８５、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．、８２７６−８２８０頁（１９８８）
【非特許文献１９】Ｔｓｕｋａｄａら、７３、Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃ．Ｉｎｓｔ．、７２１−７２９頁（１９８４）
【非特許文献２０】Ｋａｔｏら  ２７  Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．、１６０２−１６０７頁（１９８４）
【非特許文献２１】Ｔｓｕｋａｄａら、５２、Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ、１１１−１１６頁（１９８５）
【非特許文献２２】Ｅｒｉｃｋｓｏｎら、６６  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．、４４２６−４４３３頁（２００６）
【非特許文献２３】Ｋｏｖｔｕｎら、６６  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．、３２１４−３２２１頁（２００６）
【非特許文献２４】ＲａｎｓｏｎおよびＳｌｉｗｋｏｗｓｋｉ、６３（増補１）Ｏｎｃｏｌｏｇｙ、１７−２４（２００２）
【非特許文献２５】Ｆｏｕｌｏｎら、１０、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．、８６７−８７６頁（１９９９）
【非特許文献２６】Ｒ．Ｖ．Ｊ．Ｃｈａｒｉ、３１  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  ８９−１０４頁（１９９８）
【非特許文献２７】Ｉ．Ｐｕｚａｎｏｖ、Ｐｒｏｃ．ＡＡＣＲ−ＮＣＩ−ＥＯＲＴＣ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ、Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ、ＵＳＡ  ２００５、Ａｂｓｔｒａｃｔ  ＃Ｂ１１７
【非特許文献２８】Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔｅｒｓ、２９巻、４０号、５１０５−５１０８頁
【非特許文献２９】Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ４０巻、７号、６４１−６５４頁
【非特許文献３０】Ｅｘｐｅｒｔ  ｏｐｉｎｉｏｎ；Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｄｒｕｇ  ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ、Ａｓｈｌｅｙ出版、１５巻、９号、２００５、１０８７−１１０３頁、ＩＳＳＮ：１３５４−３７７４
【非特許文献３１】Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２００６、６６（８）、４４２６−４４３３頁
【発明の概要】
【００２１】
（発明の要旨）
本発明は、リンカーを含む、請求項１から３０に記載の新規トマイマイシン誘導体に関する。本発明はまた、トマイマイシン誘導体のリンカー上に存在している結合基を介して細胞結合剤に共有結合している１種以上の前記トマイマイシン誘導体を含むコンジュゲート分子に関する。本発明はまた、トマイマイシン誘導体およびコンジュゲート分子の調製に関する。
【図面の簡単な説明】
【００２２】
【図１】実施例１の４−（３，５−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−フェノキシ）−酪酸メチルエステルのインビトロ細胞毒性を示すグラフである。
【図２】実施例２の４−（３，５−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−フェノキシ）−酢酸メチルエステルのインビトロ細胞毒性を示すグラフである。
【図３】実施例８の化合物８（ＩＧＰ０８）および９（ＩＧＰ０８−ＯＭｅ）のインビトロ細胞毒性効力を示すグラフである。
【図４】実施例１１の脱グリコシル化ｈｕＭｙ９−６−４−（３，５−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−フェノキシ）−ブチリルコンジュゲート（ＵＶによる２．１Ｄｒｕｇ／Ａｂ、すなわちＵＶにより測定された１抗体当たり２．１個のトマイマイシン誘導体を有する。）の質量スペクトル分析を示すグラフである。
【図５】実施例１２の脱グリコシル化ｈｕＢ４−４−（３，５−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−フェノキシ）−ブチリルコンジュゲート（ＵＶによる４．４８Ｄｒｕｇ／Ａｂ）の質量スペクトル分析を示すグラフである。
【図６】実施例１３の脱グリコシル化ｈｕ２Ｈ１１−４−（３，５−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−フェノキシ）−ブチリルコンジュゲート（ＵＶによる３．７４Ｄｒｕｇ／Ａｂ）のＭＳ分析を示すグラフである。
【図７】実施例１４のｈｕＭｙ９−６−３−（２−｛２−［２−（３，５−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−フェノキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−プロピオニルコンジュゲート（ＵＶによる４．８Ｄｒｕｇ／Ａｂ）のＭＳ分析を示すグラフである。
【図８】実施例１５のｈｕ２Ｈ１１−３−（２−｛２−［２−（３，５−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−フェノキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−プロピオニルコンジュゲート（ＵＶによる４．０８Ｄｒｕｇ／Ａｂ）のＭＳ分析を示すグラフである。
【図９】脱グリコシル化ｈｕＢ４−ＩＧＰ０８（実施例１８の化合物）のＭＳ分析を示すグラフである。
【図１０】抗原ＣＤ３３へのネイキッドｈｕＭｙ９−６およびｈｕＭｙ９−６−ＩＧＰ０８（実施例１８の化合物）の比較結合特性を示すグラフである。
【図１１】Ｒａｍｏｓ（Ａｇ−）およびＨＬ６０／ＱＣ（Ａｇ＋）細胞に対するｈｕＢ４−ＩＧＰ０８（実施例１８の化合物）のインビトロ細胞毒性効力を示すグラフである。
【図１２】実施例１９の脱グリコシル化ｈｕＢ４−ＩＧＰ０８（ＵＶによる３．１Ｄｒｕｇ／Ａｂ）のＭＳ分析を示すグラフである）。
【図１３】ＢＪＡＢ（Ａｇ＋）、Ｒａｍｏｓ（Ａｇ＋）およびＭＯＬＴ−４（Ａｇ−）細胞に対するｈｕＢ４−ＩＧＰ０８（実施例１９の化合物）の細胞毒特性を示すグラフである。
【図１４】ネイキッドｈｕＢ４およびｈｕＢ４−ＩＧＰ０８（実施例１９の化合物）の比較結合特性を示すグラフである。
【図１５】実施例２１の脱グリコシル化ｈｕ２Ｈ１１−ＩＧＰ１３（ＵＶによる４．７Ｄｒｕｇ／Ａｂ）のＭＳ分析を示すグラフである。
【図１６】ＰＣ３（Ａｇ＋）、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１（Ａｇ＋）およびＳＫ−ＭＥＬ−２８（Ａｇ−）細胞に対するｈｕ２Ｈ１１−ＩＧＰ１３（実施例２１の化合物）の細胞毒特性を示すグラフである。
【図１７】実施例５の３−（２−｛２−［２−（２，６−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−ピリジン−４−イルオキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−プロピオン酸メチルエステルの細胞毒特性を示すグラフである。
【図１８】実施例６の４−（２，６−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−ピリジン−４−イルオキシ）−酪酸メチルエステルの細胞毒特性を示すグラフである。
【図１９】実施例７のＮ−［２−（３，５−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−フェノキシ）−エチル］−Ｎ−メチルスクシンアミド酸メチルエステルの細胞毒特性を示すグラフである。
【図２０】実施例１１からのｈｕＭｙ９−６−４−（３，５−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−フェノキシ）−ブチリルコンジュゲートについてのインビトロ細胞毒性データを示すグラフである。
【図２１】実施例１２からのｈｕＢ４−４−（３，５−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−フェノキシ）−ブチリルコンジュゲートについてのインビトロ細胞毒性データを示すグラフである。
【図２２】実施例１３からのｈｕ２Ｈ１１−４−（３，５−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−フェノキシ）−ブチリルコンジュゲートについてのインビトロ細胞毒性データを示すグラフである。
【図２３】実施例１４からのｈｕＭｙ９−６−３−（２−｛２−［２−（３，５−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−フェノキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−プロピオニルコンジュゲートについてのインビトロ細胞毒性データを示すグラフである。
【図２４】実施例１５からのｈｕ２Ｈ１１−３−（２−｛２−［２−（３，５−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−フェノキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−プロピオニルコンジュゲートについてのインビトロ細胞毒性データを示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００２３】
定義
Ａｌｋは、アルキル、アルケンまたはアルキンを表す；
「アルキル」は、１個から２０個の炭素原子を鎖中に有する直鎖もしくは分枝鎖、または３個から１０個の炭素原子を有する環式であってよい脂肪族炭化水素基を意味する。好ましいアルキル基は、１個から１２個の炭素原子を鎖中に有する。「分枝鎖」は、１個以上の低級アルキル基、例えばメチル、エチルまたはプロピルが、直鎖アルキル鎖に結合していることを意味する。代表的なアルキル基は、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、ｎ−ブチル、ｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、３−ペンチル、オクチル、ノニル、デシル、シクロペンチルおよびシクロヘキシルを含む；
「アルケン」は、炭素−炭素二重結合を含有し、２個から１５個の炭素原子を鎖中に有する直鎖または分枝鎖であってよい脂肪族炭化水素基を意味する。好ましいアルケニル基は、２個から１２個の炭素原子を鎖中に有し；より好ましくは、約２個から４個の炭素原子を鎖中に有する。代表的なアルケニル基は、エテニル、プロペニル、ｎ−ブテニル、ｉ−ブテニル、３−メチルブタ−２−エニル、ｎ−ペンテニル、ヘプテニル、オクテニル、ノネニル、デセニルを含む；
「アルキン」は、炭素−炭素三重結合を含有し、２個から１５個の炭素原子を鎖中に有する直鎖または分枝鎖であってよい脂肪族炭化水素基を意味する。好ましいアルキニル基は、２個から１２個の炭素原子を鎖中に有し；より好ましくは、２個から４個の炭素原子を鎖中に有する。代表的なアルキニル基は、エチニル、プロピニル、ｎ−ブチニル、２−ブチニル、３−メチルブチニル、ｎ−ペンチニル、ヘプチニル、オクチニルおよびデシニルを含む；
「ハロゲン原子」は、フッ素、塩素、臭素またはヨウ素原子を意味し；好ましくはフッ素および塩素原子を意味する；
「アリール」は、６個から１４個の炭素原子、好ましくは６個から１０個の炭素原子の芳香族単環式または多環式の炭化水素環系を意味する。代表的なアリール基は、フェニルまたはナフチルを含む；
「Ｈｅｔ」は、複素環またはヘテロアリールを意味する；
用語「複素環」または「ヘテロ環」は、飽和、部分不飽和または不飽和の非芳香族の安定な３員から１４員、好ましくは５員から１０員の単環、二環または多環（環の少なくとも１個の員はヘテロ原子である。）を意味する。典型的に、ヘテロ原子は、限定されるものではないが、酸素、窒素、硫黄、セレンおよびリン原子を含む。好ましいヘテロ原子は、酸素、窒素および硫黄である。好適な複素環は、Ｔｈｅ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｐｈｙｓｉｃｓ、７６版、ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ、Ｉｎｃ．、１９９５−１９９６、２−２５から２−２６頁（この開示は、参照により本明細書に組み込まれる。）にも開示されている。
【００２４】
好ましい非芳香族ヘテロ環は、限定されるものではないが、ピロリジニル、ピラゾリジニル、イミダゾリジニル、オキシラニル、テトラヒドロフラニル、ジオキソラニル、テトラヒドロ−ピラニル、ジオキサニル、ジオキソラニル、ピペリジル、ピペラジニル、モルホリニル、ピラニル、イミダゾリニル、ピロリニル、ピラゾリニル、チアゾリジニル、テトラヒドロチオピラニル、ジチアニル、チオモルホリニル、ジヒドロ−ピラニル、テトラヒドロピラニル、ジヒドロピラニル、テトラヒドロ−ピリジル、ジヒドロピリジル、テトラヒドロピリニジニル、ジヒドロチオピラニル、アゼパニルおよびフェニル基との縮合から得られる縮合系を含む；
用語「ヘテロアリール」または芳香族複素環は、５員から１４員、好ましくは５員から１０員の芳香族ヘテロ環、単環、二環または多環を意味する。例は、ピロリル、ピリジル、ピラゾリル、チエニル、ピリミジニル、ピラジニル、テトラゾリル、インドリル、キノリニル、プリニル、イミダゾリル、チエニル、チアゾリル、ベンゾチアゾリル、フラニル、ベンゾフラニル、１，２，４−チアジアゾリル、イソチアゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、イソキノリル、ベンゾチエニル、イソベンゾフリル、ピラゾリル、カルバゾリル、ベンズイミダゾリル、イソオキサゾリル、ピリジル−Ｎ−オキシドおよびフェニル基との縮合から得られる縮合系を含む；
「アルキル」、「シクロアルキル」、「アルケニル」、「アルキニル」、「アリール」、「ヘテロアリール」、「複素環」などは、２個の水素原子の除去により形成される、対応する「アルキレン」、「シクロアルキレン」、「アルケニレン」、「アルキニレン」、「アリーレン」、「ヘテロアリーレン」、「ヘテロシクレン」などをも意味する；
「非開裂性リンカー」は、前記トマイマイシン誘導体を細胞結合剤に共有結合させるのに好適な任意の基を意味し、ここで、前記基は、ジスルフィド基、酸不安定基、光不安定基、ペプチダーゼ不安定基およびエステラーゼ不安定基を含有しない。好ましくは、前記「非開裂性リンカー」は、末端カルボキシもしくはアミド基、またはこれらの前駆体を含む。このリンカーは、コンジュゲート分子の細胞内部での内在化および細胞結合剤の潜在的なタンパク質分解の後、細胞内プロセシング時に開裂されない；
表現「細胞結合剤に結合可能」は、前記誘導体を細胞結合剤に結合させるのに好適な結合基またはこの前駆体を順次含む少なくとも１個のリンカーを含むトマイマイシン誘導体またはこれらの前駆体を意味し；好ましい結合基は、カルボキシ、アミド結合またはこれらの前駆体である；
表現「細胞結合剤に結合している」は、好適な結合基またはこの前駆体を介して細胞結合剤に結合している少なくとも１種のトマイマイシン誘導体を含むコンジュゲート分子またはこの前駆体を意味し；好ましくは、結合基は非開裂性結合またはこれらの前駆体である；
所与の基の「前駆体」は、任意の脱保護、化学的変性またはカップリング反応によりその基を導くことができる任意の基を意味する；
「患者」は、本明細書に記載の１種もしくは複数の疾患もしくは病態を罹患しているまたは罹患する可能性を有する動物、例えば繁殖、愛玩もしくは保護の目的に有用な動物、好ましくはヒトもしくはヒト小児を意味する；
「治療有効量」は、本明細書に記載の疾患および病態の症状の防止、軽減、排除、治療または制御において有効である本発明の化合物の量を意味する。用語「制御」は、本明細書に記載の疾患および病態の進行の遅延、中断、抑制または停止が存在し得る全てのプロセスを意味するものであるが、必ずしも全ての疾患および病態の症状の完全な排除を示すものではなく、予防処置を含むものとする；
「薬学的に許容される」は、適切な医学的判断の範囲内で、過度の毒性、刺激、アレルギー反応または他の扱いにくい合併症を示すことなくヒトおよび動物の組織と接触させるのに好適であり、妥当なベネフィット／リスク比に相応する化合物、材料、賦形剤、組成物または剤形を意味する；
「薬学的に許容される塩」は、親化合物がこれらの酸塩または塩基塩を作製することにより変性されている開示化合物の誘導体を意味する。薬学的に許容される塩は、例えば非毒性の無機酸または有機酸から形成される親化合物の慣用の非毒性塩または第四級アンモニウム塩を含む。例えば、このような慣用の非毒性塩は、無機酸、例えば塩酸、臭化水素酸、硫酸、スルファミン酸、リン酸、硝酸などから誘導されるもの；および有機酸、例えば酢酸、プロピオン酸、コハク酸、酒石酸、クエン酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、グルコロン酸、グルタミン酸、安息香酸、サリチル酸、トルエンスルホン酸、シュウ酸、フマル酸、マレイン酸、乳酸などから調製される塩を含む。さらなる付加塩は、アンモニウム塩、例えばトロメタミン、メグルミン、エポラミンなど、金属塩、例えばナトリウム、カリウム、カルシウム、亜鉛またはマグネシウムを含む。本発明の薬学的に許容される塩は、慣用の化学的方法により塩基性または酸性部分を含有する親化合物から合成することができる。一般に、このような塩は、水中もしくは有機溶媒中、またはこの２種の混合物中でこれらの化合物の遊離酸または塩基形態を適切な塩基または酸の化学量論的量と反応させることにより調製することができる。一般に、非水性媒体、例えばエーテル、酢酸エチル、エタノール、イソプロパノールまたはアセトニトリルが好ましい。好適な塩のリストは、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、１７版、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｅａｓｔｏｎ、ＰＡ、１９８５、１４１８頁（この開示は、参照により本明細書に組み込まれる。）に見出される。
【００２５】
「治療する」または「治療」は、このような用語が当てはまる障害もしくは病態、またはこのような障害もしくは病態の１種もしくは複数の症状の逆転、緩和、進行の阻害または予防を意味する。
【００２６】
「治療有効量」は、本明細書に言及の病理学的状態の予防または治療において有効な本発明による化合物／医薬品の量を意味する；
「薬学的に」または「薬学的に許容される」は、動物またはヒトに必要に応じて投与した場合に副作用、アレルギー性反応のまたは他の不利な反応をもたらさない分子実体および組成物を意味する；
「薬学的に許容される賦形剤」は、任意の担体、希釈剤、補助剤またはビヒクル、例えば保存剤または酸化防止剤、充填剤、崩壊剤、湿潤剤、乳化剤、懸濁化剤、溶媒、分散媒体、コーティング剤、抗菌剤および抗真菌剤、等張剤および吸収遅延剤などを含む。薬学的に有効な物質のためのこのような媒体および薬剤の使用は、当該分野において十分公知である。任意の慣用の媒体または薬剤が有効成分と非相溶性を示す場合を除き、治療組成物中のこの使用が企図される。補助的有効成分を好適な治療組合せとして組成物中に取り込ませてもよい。
【００２７】
トマイマイシン誘導体
本発明は、高度な細胞毒性を保有し、非開裂性リンカーにより細胞結合剤に有効に結合させることができる新規トマイマイシン誘導体の合成に基づいており、このようなコンジュゲートは腫瘍細胞の殺傷において高度な効力を示す。高度に細胞毒性を示す薬物が開裂性結合、例えばジスルフィド結合を使用して抗体に結合することにより、細胞内部での十分有効な薬物の放出が確保され、このようなコンジュゲートが抗原特異的に細胞毒性を示すことが既に示されている（ＵＳ６，３４０，７０１；ＵＳ６，３７２，７３８；ＵＳ６，４３６，９３１）。しかしながら、当該分野により、現存する薬物を、これらの細胞毒性能を減少させることなく変性させることは極めて困難であることが明らかになっている。開示の本発明は、開示のトマイマイシン誘導体を化学部分により変性させることによりこの問題を解決する。結果として、開示の新規トマイマイシン誘導体はトマイマイシン誘導体の細胞毒性効力を保存し、場合によっては向上させることさえできる。細胞結合剤−トマイマイシン誘導体複合体により、不所望な細胞のみに対して標的化方式で適用すべきトマイマイシン誘導体の十分な細胞毒性作用が許容されるので、非標的化健常細胞への損傷に起因する副作用が回避される。したがって、本発明は、殺傷または溶解すべき疾患細胞または異常細胞、例えば腫瘍細胞（特に固形腫瘍細胞）の排除に有用な薬剤を提供する。
【００２８】
【化１】
0005551070.tif 000002
【００２９】
本発明による細胞毒性剤は、非開裂性結合基を介して細胞結合剤に任意に結合可能であり、または結合している１種以上のトマイマイシン誘導体を含む。この結合基は、慣用の方法を介してトマイマイシン誘導体に共有結合している化学部分の一部である。
【００３０】
一態様によれば、本発明は、式（Ｉ）：
【００３１】
【化２】
0005551070.tif 000003
のトマイマイシン誘導体に関連し；
式中、
−−−−は、任意の単結合を表し；
【００３２】
【化３】
0005551070.tif 000004
は、単結合または二重結合を表し；
ただし、
【００３３】
【化４】
0005551070.tif 000005
が単結合を表す場合、ＵおよびＵ’は、同一でありまたは異なり、独立してＨを表し、ＷおよびＷ’は、同一でありまたは異なり、ＯＨ、エーテル、例えば−ＯＲ、エステル（例えば、アセテート）、例えば−ＯＣＯＲまたは−ＣＯＯＲ、カルボネート、例えば−ＯＣＯＯＲ、カルバメート、例えば−ＯＣＯＮＲＲ’、Ｎ１０およびＣ１１が環の一部であるような環式カルバメート、尿素、例えば−ＮＲＣＯＮＲＲ’、チオカルバメート、例えば−ＯＣＳＮＨＲ、Ｎ１０およびＣ１１が環の一部であるような環式チオカルバメート、−ＳＨ、スルフィド、例えば−ＳＲ、スルホキシド、例えば−ＳＯＲ、スルホン、例えば−ＳＯＯＲ、スルホネート、例えば−ＳＯ３−、スルホンアミド、例えば−ＮＲＳＯＯＲ’、アミン、例えば−ＮＲＲ’、Ｎ１０およびＣ１１が環の一部であるような環式であってもよいアミン、ヒドロキシルアミン誘導体、例えば−ＮＲＯＲ’、アミド、例えば−ＮＲＣＯＲ’、アジド、例えば−Ｎ３、シアノ−ＣＮ、ハライド（Ｈａｌ）、トリアルキルまたはトリアリールホスホニウムからなる群から独立して選択され；好ましくは、ＷおよびＷ’は、同一でありまたは異なり、−ＯＨ、−ＯＭｅ、−ＯＥｔ、−ＮＨＣＯＮＨ２、−ＳＭｅであり；
【００３４】
【化５】
0005551070.tif 000006
が二重結合を表す場合、ＵおよびＵ’は存在せず、ＷおよびＷ’はＨを表す。
・Ｒ１、Ｒ２、Ｒ１’、Ｒ２’は、同一でありまたは異なり、Ｈ、ハライドまたはアルキル（１個以上のＨａｌ、ＣＮ、ＮＲＲ’、ＣＦ３、ＯＲ、アリール、Ｈｅｔ、Ｓ（Ｏ）ｑＲで置換されていてもよい。）から独立して選択され、またはＲ１およびＲ２、ならびにＲ１’およびＲ２’は、＝Ｂおよび＝Ｂ’基をそれぞれ含有する二重結合を一緒になって形成する。
好ましくは、Ｒ１およびＲ２、ならびにＲ１’およびＲ２’は、それぞれ＝Ｂおよび＝Ｂ’基を含有する二重結合を一緒になって形成する。
・ＢおよびＢ’は、同一でありまたは異なり、１個以上のＨａｌ、ＣＮ、ＮＲＲ’、ＣＦ３、ＯＲ、ＳＲ、ＳＯＲ、ＳＯ２Ｒ、アリール、Ｈｅｔで置換されていてもよいアルケニルから独立して選択され、またはＢおよびＢ’は酸素原子を表す。
好ましくはＢ＝Ｂ’である。
より好ましくはＢ＝Ｂ’＝＝ＣＨ２または＝ＣＨ−ＣＨ３であり、
・Ｘ、Ｘ’は、同一でありまたは異なり、１個以上の−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＲ−、−（Ｃ＝Ｏ）−、−ＳＯ−、−ＳＯ２−から独立して選択され；
好ましくは、Ｘ＝Ｘ’である。
より好ましくは、Ｘ＝Ｘ’＝Ｏである。
・Ａ、Ａ’は、同一でありまたは異なり、それぞれが１個以上のＨａｌ、ＣＮ、ＮＲＲ’、ＣＦ３、ＯＲ、ＳＲ、ＳＯＲ、ＳＯ２Ｒ、アリール、Ｈｅｔ、アルキル、アルケニルで置換されていてもよいアルキルまたはアルケニルから独立して選択される。
好ましくはＡ＝Ａ’である。
より好ましくはＡ＝Ａ’＝直鎖非置換アルキルである。
・Ｙ、Ｙ’は、同一でありまたは異なり、Ｈ、ＯＲから独立して選択され；
好ましくはＹ＝Ｙ’である。
より好ましくはＹ＝Ｙ’＝Ｏアルキルであり、より好ましくはＯメチルである。
・Ｔは、−ＮＲ−、または４員から１０員のアリール、シクロアルキル、ヘテロ環、ヘテロアリール、または直鎖もしくは分枝鎖のアルキルであり、それぞれ、１個以上の非開裂性リンカーで置換されており、Ｈａｌ、ＣＮ、ＮＲＲ’、ＣＦ３、Ｒ、ＯＲ、ＳＯＲまたはＳＯ２Ｒの１個以上で置換されていてもよい。
・ｎ、ｎ’は、等しくまたは異なり、０または１であり；
・ｑは、０、１または２である。
【００３５】
変形態様によれば、トマイマイシン誘導体は、式（Ｉ’）：
【００３６】
【化６】
0005551070.tif 000007
［式中、Ｒ１、Ｒ１’、Ｒ２、Ｒ２’、Ｗ、Ｗ’、Ｕ、Ｕ’、Ｙ、Ｙ’、Ｘ、Ｘ’、Ａ、Ａ’、ｎ、ｎ’は、上述の通りであり、Ｔは、−ＮＲ−、または４員から１０員のアリール、シクロアルキル、ヘテロ環、ヘテロアリール、または直鎖もしくは分枝鎖のアルキルであり、それぞれ、式−Ｇ−Ｄ−（Ｚ）ｐ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｚ’Ｒ”の１個以上のリンカーで置換されており、Ｈａｌ、ＣＮ、ＮＲＲ’、ＣＦ３、Ｒ、ＯＲ、ＳＯＲ、ＳＯ２Ｒの１個以上で置換されていてもよい。］を有する。
【００３７】
架橋基−Ｘ−Ａｎ−Ｔ−Ａ’ｎ’−Ｘ’−は、いかなる−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−結合をも含有しない。
【００３８】
リンカーは、式：
−Ｇ−Ｄ−（Ｚ）ｐ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｚ’Ｒ”
［式中、
・Ｇは、単結合、二重結合または三重結合、−Ｏ−、−Ｓ−または−ＮＲ−であり；
・Ｄは、単結合または−Ｅ−、−Ｅ−ＮＲ−、−Ｅ−ＮＲ−Ｆ−、−Ｅ−Ｏ−、−Ｅ−Ｏ−Ｆ−、−Ｅ−ＮＲ−ＣＯ−、−Ｅ−ＣＯ−ＮＲ−、−Ｅ−ＮＲ−ＣＯ−Ｆ−、−Ｅ−ＣＯ−ＮＲ−Ｆ−、−Ｅ−ＣＯ−、−ＣＯ−Ｅ−、−Ｅ−ＣＯ−Ｆ−、−Ｅ−Ｓ−、−Ｅ−Ｓ−Ｆ−、−Ｅ−ＮＲ−ＣＳ−、−Ｅ−ＣＳ−ＮＲ−、−Ｅ−ＮＲ−ＣＳ−Ｆ−、−Ｅ−ＣＳ−ＮＲ−Ｆ−であり；
・ＥおよびＦは、同一でありまたは異なり、直鎖または分枝鎖の−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｉアルキル（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｊ−、−アルキル（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｉ−アルキル−、−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｊ−、−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｉシクロアルキル（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｊ−、−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｉヘテロ環（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｊ−、−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｉアリール（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｊ−、−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｉヘテロアリール（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｊ−、−アルキル−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｉアルキル（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｊ−、−アルキル−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｉ−、−アルキル−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｉシクロアルキル（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｊ−、−アルキル（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｉヘテロ環（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｊ−、−アルキル−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｉアリール（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｊ−、−アルキル（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｉヘテロアリール（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｊ−、−シクロアルキル−アルキル−、−アルキル−シクロアルキル−、−ヘテロ環−アルキル−、−アルキル−ヘテロ環−、−アルキル−アリール−、−アリール−アルキル−、−アルキル−ヘテロアリール−、−ヘテロアリール−アルキル−から独立して選択され；
・ｉおよびｊは、同一でありまたは異なり、整数であり、０、１から２０００から独立して選択され；
・Ｚは、可溶化官能基、例えばアミノ、エーテル、スルホンおよびカルボキシル基で置換されていてもよい直鎖または分枝鎖のアルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、アラルキル、シクロアルキル、ヘテロアラルキルまたはヘテロシクリルアルキルであり；
・ｐは０または１であり；
・−Ｃ（＝Ｏ）−Ｚ’Ｒ”は、官能基を含有するカルボニルであり、ここで、
−Ｚ’は、単結合または−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＲ−を表し、
−Ｒ”は、Ｈ、（それぞれ、１個以上のＨａｌ、ＣＮ、ＮＲＲ’、ＣＦ３、Ｒ、ＯＲ、ＳＯＲ、ＳＯ２Ｒ、アリール、Ｈｅｔで置換されていてもよい）アルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリールまたはヘテロ環を表し；
Ｒ、Ｒ’は、等しくまたは異なり、Ｈ、（それぞれ、Ｈａｌ、ＣＮ、ＣＯＯＨ、ＣＯＯＲ、ＣＯＮＨＲ、ＣＯＮＲＲ’、ＮＲＲ’、ＣＦ３、Ｒ、ＯＲ、ＳＯＲ、ＳＯ２Ｒ、アリール、Ｈｅｔで置換されていてもよい）アルキル、アリールから独立して選択される。］を有する。
【００３９】
リンカーは、いかなる開裂性基、例えばジスルフィド基、酸不安定基、光不安定基、ペプチダーゼ不安定基およびエステラーゼ不安定基をも含有しない結合基により末端をなす鎖を含む。末端結合基は、−Ｓ−Ｖ基（式中、Ｖは、Ｈ、チオール保護基（例えばＣＯＲ）、Ｒ２０またはＳＲ２０であり、Ｒ２０は、Ｈ、メチル、アルキル、置換されていてもよいシクロアルキル、アリール、ヘテロアリールまたはヘテロ環基である。）を含有しない。リンカーは、ＷＯ２００７／０８５９３０またはＷＯ２００８／０１０１０１に開示のいかなるリンカーでもない。本発明のトマイマイシン誘導体の末端結合基は、好ましくは、側鎖の末端部におけるカルボキシまたはアミド基である。側鎖は直鎖もしくは分枝鎖、芳香族またはヘテロ環であってよい。当業者は、好適な側鎖を容易に識別することができる。好ましいリンカーは、可溶化官能基、例えばアミノ、ヒドロキシ、エーテル、スルホンおよびカルボキシル基を含有する直鎖から構成されている。
【００４０】
Ｔは、好ましくは４員から１０員のアリールまたはヘテロアリールであり、より好ましくはフェニルまたはピリジル基であり、これらは前記リンカーの１個以上で置換されており、Ｈａｌ、ＣＮ、ＮＲＲ’、ＣＦ３、Ｒ、ＯＲ、ＳＯＲまたはＳＯ２Ｒの１個以上で置換されていてもよい。ピリジル基は、フェニル基より水溶液中でのトマイマイシン誘導体の高い溶解度を提供する。溶解度がより高ければ、コンジュゲート分子の収量増大を促進し得る凝集体減少の傾向が見られるので、疎水性抗体とのコンジュゲート分子の調製を促進することができる。
【００４１】
本化合物の薬学的に許容される塩、水和物もしくは水和塩、または多形結晶構造体も、光学異性体、ラセミ化合物、ジアステレオマーまたはエナンチオマーとともに本発明の一部を形成する。本化合物がイオン（例えば、スルホン酸塩）の形態である場合、対イオンが存在してよい（例えば、Ｎａ＋またはＫ＋）。
【００４２】
本発明は、以下の好ましい実施形態またはこれらのいずれかの任意の組合せを言及する：
・Ｇは、単結合または−Ｏ−であり；
・Ｄは、単結合であり、または−Ｅ−もしくは−Ｅ−Ｏ−であり；
・Ｄは、−Ｅ−であり；
・Ｅは、直鎖または分枝鎖の−アルキルまたは−Ａｌｋ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｉ−であり；
・Ｚは、直鎖または分枝鎖の−アルキルであり；
・ｐは、０であり；
・Ｚ’は、単結合またはＯであり；
・Ｚ’は、Ｏであり；
・Ｒ”は、Ｈであり、または直鎖もしくは分枝鎖の−アルキル−、または置換されていてもよいヘテロ環であり；
・Ｒ”は、Ｈであり、またはアルキルもしくはスクシンイミド基
【００４３】
【化７】
0005551070.tif 000008
である。
【００４４】
リンカーの具体例は、以下のもの：
−（ＣＲ１３Ｒ１４）ｔ（ＣＲ１５Ｒ１６）ｕ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｙＣＯＺ’Ｒ”、−（ＣＲ１３Ｒ１４）ｔ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｙＯ（ＣＲ１５Ｒ１６）ｕＣＯＺ’Ｒ”、
−（ＣＲ１３Ｒ１４）ｔ（ＣＲ１７＝ＣＲ１８）（ＣＲ１５Ｒ１６）ｕ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｙＣＯＺ’Ｒ”、
−（ＣＲ１３Ｒ１４）ｔ（ＮＲ１９ＣＯ）（ＣＲ１５Ｒ１６）ｕ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｙＣＯＺ’Ｒ”、
−（ＣＲ１３Ｒ１４）ｔ（ＯＣＯ）（ＣＲ１５Ｒ１６）ｕ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｙＣＯＺ’Ｒ”、
−（ＣＲ１３Ｒ１４）ｔ（ＣＯ）（ＣＲ１５Ｒ１６）ｕ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｙＣＯＺ’Ｒ”、
−（ＣＲ１３Ｒ１４）ｔ（ＣＯＮＲ１９）（ＣＲ１５Ｒ１６）ｕ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｙＣＯＺ’Ｒ”、
−（ＣＲ１３Ｒ１４）ｔ−フェニル−ＣＯ（ＣＲ１５Ｒ１６）ｕＣＯＺ’Ｒ”、−（ＣＲ１３Ｒ１４）ｔ−フリル−ＣＯ（ＣＲ１５Ｒ１６）ｕＣＯＺ’Ｒ”、
−（ＣＲ１３Ｒ１４）ｔ−オキサゾリル−ＣＯ（ＣＲ１５Ｒ１６）ｕＣＯＺ’Ｒ”、−（ＣＲ１３Ｒ１４）ｔ−チアゾリル−ＣＯ（ＣＲ１５Ｒ１６）ｕＣＯＺ’Ｒ”、
−（ＣＲ１３Ｒ１４）ｔ−チエニル−ＣＯ（ＣＲ１５Ｒ１６）ｕＣＯＺ’Ｒ”、−（ＣＲ１３Ｒ１４）ｔ−イミダゾリル−ＣＯ（ＣＲ１５Ｒ１６）ｕＣＯＺ’Ｒ”、
−（ＣＲ１３Ｒ１４）ｔ−ピペラジノ−ＣＯ（ＣＲ１５Ｒ１６）ｕＣＯＺ’Ｒ”、
−（ＣＲ１３Ｒ１４）ｔ−フェニル−ＱＣＯＺ’Ｒ”、−（ＣＲ１３Ｒ１４）ｔ−フリル−ＱＣＯＺ’Ｒ”、−（ＣＲ１３Ｒ１４）ｔ−オキサゾリル−ＱＣＯＺ’Ｒ”、
−（ＣＲ１３Ｒ１４）ｔ−チアゾリル−ＱＣＯＺ’Ｒ”、−（ＣＲ１３Ｒ１４）ｔ−チエニル−ＱＣＯＺ’Ｒ”、−（ＣＲ１３Ｒ１４）ｔ−イミダゾリル−ＱＣＯＺ’Ｒ”、
−（ＣＲ１３Ｒ１４）ｔ−ピペラジノ−ＱＣＯＺ’Ｒ”、
−（Ｃ≡Ｃ）−（ＣＲ１３Ｒ１４）ｔ（ＣＲ１５Ｒ１６）ｕ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｙＣＯＺ’Ｒ”、
−Ｏ（ＣＲ１３Ｒ１４）ｔ（ＣＲ１５Ｒ１６）ｕ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｙＣＯＺ’Ｒ”、
−Ｏ（ＣＲ１３Ｒ１４）ｔ（ＮＲ１９ＣＯ）（ＣＲ１５Ｒ１６）ｕ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｙＣＯＺ’Ｒ”、
−Ｏ（ＣＲ１３Ｒ１４）ｔ（ＣＲ１７＝ＣＲ１８）（ＣＲ１５Ｒ１６）ｕ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｙＣＯＺ’Ｒ”、
−Ｏ−フェニル−ＱＣＯＺ’Ｒ”、−Ｏ−フリル−ＱＣＯＺ’Ｒ”、−Ｏ−オキサゾリル−ＱＣＯＺ’Ｒ”、−Ｏ−チアゾリル−ＱＣＯＺ’Ｒ”、
−Ｏ−チエニル−ＱＣＯＺ’Ｒ”、−Ｏ−イミダゾリル−ＱＳＣＯＺ’Ｒ”、−Ｏ−モルホリノ−ＱＣＯＺ’Ｒ”、−Ｏ−ピペラジノ−ＱＣＯＺ’Ｒ”、
−ＯＣＯ（ＣＲ１３Ｒ１４）ｔ（ＮＲ１９ＣＯ）（ＣＲ１５Ｒ１６）ｕ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｙＣＯＺ’Ｒ”、
−ＯＣＯ−（ＣＲ１３Ｒ１４）ｔ（ＣＲ１７＝ＣＲ１８）（ＣＲ１５Ｒ１６）ｕ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｙＣＯＺ’Ｒ”、
−ＯＣＯＮＲ１２（ＣＲ１３Ｒ１４）ｔ（ＣＲ１５Ｒ１６）ｕ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｙＣＯＺ’Ｒ”、
−ＯＣＯ−フェニル−ＱＣＯＺ’Ｒ”、−ＯＣＯ−フリル−ＱＣＯＺ’Ｒ”、−ＯＣＯ−オキサゾリル−ＱＣＯＺ’Ｒ”、−ＯＣＯ−チアゾリル−ＱＣＯＺ’Ｒ”、−ＯＣＯ−チエニル−ＱＣＯＺ’Ｒ”、−ＯＣＯ−イミダゾリル−ＱＣＯＺ’Ｒ”、−ＯＣＯ−ピペラジノ−ＱＣＯＺ’Ｒ”、または
−ＣＯ（ＣＲ１３Ｒ１４）ｔ（ＣＲ１５Ｒ１６）ｕ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｙＣＯＺ’Ｒ”、
−ＣＯ−（ＣＲ１３Ｒ１４）ｔ（ＣＲ１７＝ＣＲ１８）（ＣＲ１５Ｒ１６）ｕ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｙＣＯＺ’Ｒ”、
−ＣＯＮＲ１２（ＣＲ１３Ｒ１４）ｔ（ＣＲ１５Ｒ１６）ｕ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｙＣＯＺ’Ｒ”、
−ＣＯ−フェニル−ＱＣＯＺ’Ｒ”、−ＣＯ−フリル−ＱＣＯＺ’Ｒ”−ＣＯ−オキサゾリル−ＱＣＯＺ’Ｒ”、−ＣＯ−チアゾリル−ＱＣＯＺ’Ｒ”、
−ＣＯ−チエニル−ＱＣＯＺ’Ｒ”、−ＣＯ−イミダゾリル−ＱＣＯＺ’Ｒ”、−ＣＯ−ピペラジノ−ＱＣＯＺ’Ｒ”、
−ＣＯ−ピペリジノ−ＱＣＯＺ’Ｒ”、
−ＮＲ１９（ＣＲ１３Ｒ１４）ｔ（ＣＲ１５Ｒ１６）ｕ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｙＣＯＺ’Ｒ”、
−ＮＲ１９ＣＯ（ＣＲ１３Ｒ１４）ｔ（ＣＲ１５Ｒ１６）ｕ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｙＣＯＺ’Ｒ”、
−ＮＲ１９（ＣＲ１３Ｒ１４）ｔ（ＣＲ１７＝ＣＲ１８）（ＣＲ１５Ｒ１６）ｕ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｙＣＯＺ’Ｒ”、
−ＮＲ１９ＣＯ（ＣＲ１３Ｒ１４）ｔ（ＣＲ１７＝ＣＲ１８）（ＣＲ１５Ｒ１６）ｕ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｙＣＯＺ’Ｒ”、
−ＮＲ１９ＣＯＮＲ１２（ＣＲ１３Ｒ１４）ｔ（ＣＲ１５Ｒ１６）ｕ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｙＣＯＺ’Ｒ”、
−ＮＲ１９ＣＯＮＲ１２（ＣＲ１３Ｒ１４）ｔ（ＣＲ１７＝ＣＲ１８）（ＣＲ１５Ｒ１６）ｕ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｙＣＯＺ’Ｒ”、
−ＮＲ１９ＣＯ−フェニル−ＱＣＯＺ’Ｒ”、−ＮＲ１９ＣＯ−フリル−ＱＣＯＺ’Ｒ”、−ＮＲ１９ＣＯ−オキサゾリル−ＱＣＯＺ’Ｒ”、
−ＮＲ１９ＣＯ−チアゾリル−ＱＣＯＺ’Ｒ”、−ＮＲ１９ＣＯ−チエニル−ＱＣＯＺ’Ｒ”、−ＮＲ１９ＣＯ−イミダゾリル−ＱＣＯＺ’Ｒ”、
−ＮＲ１９ＣＯ−モルホリノ−ＱＣＯＺ’Ｒ”、−ＮＲ１９ＣＯ−ピペラジノ−ＱＣＯＺ’Ｒ”、−ＮＲ１９ＣＯ−ピペリジノ−ＱＣＯＺ’Ｒ”、−ＮＲ１９−フェニル−ＱＣＯＺ’Ｒ”、−ＮＲ１９−フリル−ＱＣＯＺ’Ｒ”、−ＮＲ１９−オキサゾリル−ＱＣＯＺ’Ｒ”、−ＮＲ１９−チアゾリル−ＱＣＯＺ’Ｒ”、−ＮＲ１９−チエニル−ＱＣＯＺ’Ｒ”、−ＮＲ１９−イミダゾリル−ＱＣＯＺ’Ｒ”、−ＮＲ１９−ピペラジノ−ＱＣＯＺ’Ｒ”、
−ＮＲ１９−ピペリジノ−ＱＣＯＺ’Ｒ”、
−ＮＲ１９ＣＯ−ＮＲ１２−フェニル−ＱＣＯＺ’Ｒ”、−ＮＲ１９ＣＯ−ＮＲ１２−オキサゾリル−ＱＣＯＺ’Ｒ”、−ＮＲ１９ＣＯ−ＮＲ１２
−チアゾリル−ＱＣＯＺ’Ｒ”、−ＮＲ１９ＣＯ−ＮＲ１２−チエニル−ＱＣＯＺ’Ｒ”、−ＮＲ１９ＣＯ−ＮＲ１２−ピペリジノ−ＱＣＯＺ’Ｒ”、
−Ｓ（Ｏ）ｑ（ＣＲ１３Ｒ１４）ｔ（ＣＲ１５Ｒ１６）ｕ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｙＣＯＺ’Ｒ”、
−Ｓ（Ｏ）ｑ（ＣＲ１３Ｒ１４）ｔ（ＣＲ１７＝ＣＲ１８）（ＣＲ１５Ｒ１６）ｕ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｙＣＯＺ’Ｒ”、
−ＳＣＯＮＲ１２（ＣＲ１３Ｒ１４）ｔ（ＣＲ１５Ｒ１６）ｕ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｙＣＯＺ’Ｒ”、−ＳＣＯ−ピペラジノ−ＱＣＯＺ’Ｒ”、および
−ＳＣＯ−ピペリジノ−ＱＣＯＺ’Ｒ”
［ここで、
・Ｑは、直接結合、または１−１０個の炭素原子を有する直鎖アルキルもしくは分枝鎖アルキル、または２個から２０個の繰り返しエチレンオキシ単位を有するポリエチレングリコールスペーサーであり；
・Ｒ１９およびＲ１２は、同一でありまたは異なり、１個から１０個の炭素原子を有する直鎖アルキル、分枝鎖アルキルもしくは環式アルキル、または単なるもしくは置換アリールもしくはヘテロ環であり、Ｒ１２は、さらにＨであってよく；
・Ｒ１３、Ｒ１４、Ｒ１５およびＲ１６は、同一でありまたは異なり、Ｈであり、または１個から４個の炭素原子を有する直鎖もしくは分枝鎖のアルキルであり；
・Ｒ１７およびＲ１８は、Ｈまたはアルキルであり；
・ｕは、１から１０の整数であり、０であってもよく；
・ｔは、１から１０の整数であり、０であってもよく；
・ｙは、１から２０の整数であり、０であってもよい。］を含む。
【００４５】
リンカーは、さらに特定すると：
−（ＣＲ１３Ｒ１４）ｔ（ＣＲ１５Ｒ１６）ｕ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｙＣＯＺ’Ｒ”；
−（ＣＲ１３Ｒ１４）ｔ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｙＯ（ＣＲ１５Ｒ１６）ｕＣＯＺ’Ｒ”；
−Ｏ（ＣＲ１３Ｒ１４）ｔ（ＣＲ１５Ｒ１６）ｕ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｙＣＯＺ’Ｒ”；
−Ｏ（ＣＲ１３Ｒ１４）ｔ（ＮＲ１９ＣＯ）（ＣＲ１５Ｒ１６）ｕ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｙＣＯＺ’Ｒ”；
−（Ｃ≡Ｃ）−（ＣＲ１３Ｒ１４）ｔ（ＣＲ１５Ｒ１６）ｕ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｙＣＯＺ’Ｒ”
であってよく、
または以下のもの：
−Ｏ（ＣＲ１３Ｒ１４）ｔＣＯＺ’Ｒ”；
−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｙＣＯＺ’Ｒ”；
−（Ｃ≡Ｃ）−（ＣＲ１３Ｒ１４）ｔＣＯＺ’Ｒ”；
−Ｏ（ＣＲ１３Ｒ１４）ｔ（ＮＲ１９ＣＯ）（ＣＲ１５Ｒ１６）ｕＣＯＺ’Ｒ”；
−（ＣＲ１３Ｒ１４）ｔ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｙＣＯＺ’Ｒ”
の１種であってよい。
【００４６】
−Ｚ’Ｒ”は、さらに特定すると、−ＯＨ、−Ｏアルキルまたは
【００４７】
【化８】
0005551070.tif 000009
である。好適なリンカーおよび−Ｚ’Ｒ”は、本明細書に含まれる実施例に見出すことができる。特定の
【００４８】
【化９】
0005551070.tif 000010
基は、エステル官能基の反応性を増大させる傾向がある。
【００４９】
本化合物の下位群は、以下の化合物：
【００５０】
【化１０】
0005551070.tif 000011
［式中、Ｘ、Ｘ’、Ａ、Ａ’、Ｙ、Ｙ’、Ｔ、ｎ、ｎ’は、上記定義の通りである。］を含む。
【００５１】
別の下位群は、以下の化合物：
【００５２】
【化１１】
0005551070.tif 000012
［式中、Ｙ、Ｙ’、Ｇ、Ｄ、Ｚ、ｐ、Ｚ’およびＲ”は、上記定義の通りであり、Ｍは、ＣＨまたはＮを表す。］を含む。上述の通り、トマイマイシン誘導体の溶解度は、ＭがＮである場合に水溶液中で改善される。
【００５３】
別の好ましい態様によれば、本発明の化合物は、
４−（３，５−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−フェノキシ）−酪酸；
４−（３，５−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−フェノキシ）−酢酸；
３−（２−｛２−［２−（３，５−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−フェノキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−プロピオン酸；
６−（３，５−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−フェニル）−ヘクサ−５−イン酸；
３−（２−｛２−［２−（２，６−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−ピリジン−４−イルオキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−プロピオン酸；
４−（２，６−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−ピリジン−４−イルオキシ）−酪酸；
Ｎ−［２−（３，５−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−フェノキシ）−エチル］−Ｎ−メチル−スクシンアミド酸；
４−（３，５−ビス−［（Ｓ）−２−メチリデン−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−フェニル）−プロパン酸；
（２−｛２−［２−（２−｛３−［３，５−ビス−（７−メトキシ−２−メチレン−５−オキソ−２，３，５，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−８−イルオキシメチル）−フェニル］−プロポキシ｝−エトキシ）エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−酢酸；
（３−｛２−［２−（２−｛３−［３，５−ビス−（７−メトキシ−２−メチレン−５−オキソ−２，３，５，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−８−イルオキシメチル）−フェニル］−プロポキシ｝−エトキシ）エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−プロパン酸；
および対応するエステルもしくはＮ−ヒドロキシスクシンイミジルエステル、またはこれらの薬学的に許容される塩、水和物もしくは水和塩、またはこれらの化合物の多形結晶構造体、またはこれらの光学異性体、ラセミ化合物、ジアステレオマーもしくはエナンチオマーからなる群から選択される。
【００５４】
一般式（Ｉ）または（Ｉ’）の化合物の幾何異性体および立体異性体も本発明の一部である。
【００５５】
トマイマイシン誘導体のＮ１０、Ｃ１１二重結合は、水、アルコール、チオール、第一級または第二級アミン、尿素および他の求核試薬の存在下で対応するイミン付加物に可逆的に容易に転換可能であることが知られている。このプロセスは可逆的であり、脱水剤の存在下で、非プロトン性有機溶媒中で、真空中または高温で対応するトマイマイシン誘導体を容易に再生することができる（Ｚ．Ｔｏｚｕｋａ、３６、Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ、２７６（１９８３））。したがって、本発明はまた、一般式（ＩＩ）：
【００５６】
【化１２】
0005551070.tif 000013
のトマイマイシン誘導体の可逆性誘導体
［式中、Ａ、Ｘ、Ｙ、ｎ、Ｔ、Ａ’、Ｘ’、Ｙ’、ｎ’、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ１’、Ｒ２’は、式（Ｉ）または（Ｉ’）に定義の通りであり、Ｗ、Ｗ’は、同一でありまたは異なり、ＯＨ、エーテル、例えば−ＯＲ、エステル（例えば、アセテート）、例えば−ＯＣＯＲ、−ＣＯＯＲ、カルボネート、例えば−ＯＣＯＯＲ、カルバメート、例えば−ＯＣＯＮＲＲ’、Ｎ１０およびＣ１１が環の一部であるような環式カルバメート、尿素、例えば−ＮＲＣＯＮＲＲ’、チオカルバメート、例えば−ＯＣＳＮＨＲ、Ｎ１０およびＣ１１が環の一部であるような環式チオカルバメート、−ＳＨ、スルフィド、例えば−ＳＲ、スルホキシド、例えば−ＳＯＲ、スルホン、例えば−ＳＯＯＲ、スルホネート、例えば−ＳＯ３−、スルホンアミド、例えば−ＮＲＳＯＯＲ’、アミン、例えば−ＮＲＲ’、Ｎ１０およびＣ１１が環の一部であるような環式であってもよいアミン、ヒドロキシルアミン誘導体、例えば−ＮＲＯＲ’、アミド、例えば−ＮＲＣＯＲ’、−ＮＲＣＯＮＲＲ’、アジド、例えば−Ｎ３、シアノ、ハロ、トリアルキルまたはトリアリールホスホニウム、アミノ酸誘導基からなる群から選択される。］を提供する。好ましくは、ＷおよびＷ’は、同一でありまたは異なり、ＯＨ、ＯＭｅ、ＯＥｔ、ＮＨＣＯＮＨ２、ＳＭｅである。したがって、式（ＩＩ）の化合物は、溶媒が水である場合、水を含む溶媒和物と考えることができ；これらの溶媒和物は特に有用であり得る。
【００５７】
本化合物の調製について
本化合物は、下記の方法または当業者により認識されるこれらについての変法の適用または適合により合成することができる。適切な変性および置換は、当業者にとって容易に明らかであり、十分公知であり、または科学文献から容易に得ることができる。特に、このような方法はＲ．Ｃ．Ｌａｒｏｃｋ、Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ、Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、１９９９に見出すことができる。
【００５８】
本発明の化合物は、１個以上の非対称的に置換されている炭素原子を含有してよく、光学活性体またはラセミ体で単離することができると認識される。したがって、特定の立体化学または異性体の形態が特に示されていない限り、全てのキラル体、ジアステレオマー体、ラセミ体および構造の全ての幾何異性体の形態が意図される。このような光学活性体の調製および単離の仕方は、当該分野において十分公知である。例えば、立体異性体の混合物を、限定されるものではないが、ラセミ体の分割、順相、逆相およびキラルクロマトグラフィー、優先的塩形成、再結晶などを含む標準的技術により、またはキラル出発材料からのキラル合成もしくは標的キラル中心の計画的合成により分離することができる。
【００５９】
下記の反応において、最終生成物において反応における不所望な関与を回避することが望まれる反応性官能基、例えばヒドロキシ、アミノ、イミノ、チオまたはカルボキシ基を保護することが必要であり得る。慣用の保護基を標準的実務に従って使用することができ、例えばＴ．Ｗ．ＧｒｅｅｎｅおよびＰ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ、Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、３版、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ、１９９９；Ｊ．Ｆ．Ｗ．ＭｃＯｍｉｅ、Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、Ｐｌｅｎｕｍ  Ｐｒｅｓｓ、１９７３を参照のこと。
【００６０】
反応によっては、塩基の存在下で実施することができる。この反応において使用すべき塩基の性質については特に制限されず、このタイプの反応において慣用的に使用されるいずれの塩基も、これが分子の他の部分に対して悪影響を示さない限り、ここで等しく使用することができる。好適な塩基の例は：水酸化ナトリウム、炭酸カリウム、トリエチルアミン、アルカリ金属水素化物、例えば、水素化ナトリウムおよび水素化カリウム；アルキルリチウム化合物、例えばメチルリチウムおよびブチルリチウム；ならびにアルカリ金属アルコキシド、例えばナトリウムメトキシドおよびナトリウムエトキシドを含む。
【００６１】
通常、反応は好適な溶媒中で実施される。反応または含まれる試薬に対して悪影響を示さない限り、種々の溶媒を使用することができる。好適な溶媒の例は：芳香族、脂肪族または脂環式炭化水素であってよい炭化水素、例えばヘキサン、シクロヘキサン、ベンゼン、トルエンおよびキシレン；アミド、例えばジメチルホルムアミド；アルコール、例えばエタノールおよびメタノール、ならびにエーテル、例えばジエチルエーテルおよびテトラヒドロフランを含む。
【００６２】
反応は、広範囲の温度にわたり行うことができる。一般に、反応は−２０℃から１５０℃（より好ましくは、約室温から１００℃）の温度で実施することができる。反応に必要な時間も、多くの要因、特に反応温度および試薬の性質に応じて広範囲で変動してよい。しかしながら、反応が上記略述の好ましい条件下で行われる限り、３時間から２０時間の期間で通常十分である。
【００６３】
こうして調製された化合物は、慣用の手段により反応混合物から回収することができる。例えば、本化合物は、反応混合物から溶媒を留去することにより、または必要に応じて、反応混合物から溶媒を留去した後、残留物を水中に注ぎ、次いで水−非混和性有機溶媒により抽出し、抽出物から溶媒を留去することにより回収することができる。さらに、所望により、生成物を種々の十分公知の技術、例えば再結晶、再沈殿または種々のクロマトグラフィー技術、特にカラムクロマトグラフィーもしくは分取薄層クロマトグラフィーによりさらに精製することができる。
【００６４】
第１の経路
第１の経路によれば、Ｔが末端カルボキシ基を含む本化合物を調製する方法は、式：
【００６５】
【化１３】
0005551070.tif 000014
の化合物
［式中、Ｙ、Ｙ’、Ｘ、Ａ、Ａ’、Ｘ’、ｎ、ｎ’、Ｗ、Ｗ’、Ｕ、Ｕ’、−−−−、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ１’、Ｒ２’、
【００６６】
【化１４】
0005551070.tif 000015
は、上記定義の通りであり、Ｔ’は、末端カルボキシ基がＮ−スクシンイミド基により保護されており、またはエステル化されているＴに対応する。］を脱保護する段階を含む。
【００６７】
脱保護の代表的な反応は、Ｔ’が、末端カルボキシ基がエステル形態であるＴに対応する式（Ｉ）の化合物の加水分解である。前記加水分解反応は、一般に、塩基性条件下で、有機塩基または無機塩基、例えばＬｉＯＨの存在下で実施され、次いで有機酸または鉱酸、例えば塩酸が添加される。
【００６８】
これらの化合物は、式（ＩＶ）、（ＩＶ’）および（Ｖ）：
【００６９】
【化１５】
0005551070.tif 000016
の対応する化合物
［式中、Ｌｇは、脱離基、例えばハロゲン、−ＯＭｓ（メシレート）、−ＯＴｓ（トシレート）または−ＯＰＰｈ３＋である。］（Ｍｉｔｓｕｎｏｂｕ反応において形成される中間体）のカップリングにより得ることができる。
【００７０】
式（ＩＶ）および（ＩＶ’）の化合物は、例えばＷＯ００／１２５０８、ＷＯ００／１２５０７、ＷＯ２００５／０４０１７０、ＷＯ２００５／０８５２６０に開示されている通り一般に公知であり、または市販されており、および／または全合成（Ｍ．Ｍｏｒｉら、４２  Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ、３７９３−３８０６頁、１９８６）により入手可能であり、または、特にＦＲ１，５１６，７４３の手順に従ってストレプトマイセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）種により産生され、または実施例に挙げられている例示手順の適用もしくは適合により調製することができる。
【００７１】
式（Ｖ）の化合物は、式ＨＯ−Ａｎ−Ｔ’−Ａ’ｎ’−ＯＨ（ＶＩ）の対応する化合物から得ることができる。反応は一般に、ＰＰｈ３およびＣＨａｌ４の存在下で、または塩基、例えばトリエチルアミンまたは水酸化カリウム、好ましくはトリエチルアミンの存在下で塩化スルホニル（塩化メタンスルホニルまたは塩化メシル）との反応により実施される。
【００７２】
式（ＶＩ）の化合物は、式ＨＯ−Ａｎ−Ｔ”−Ａ’ｎ’−ＯＨ（ＶＩＩ）（式中、Ｔ”は、Ｔの前駆体基である。）の対応する化合物から得ることができる。Ｔの前駆体基は、任意の脱保護、化学的変性またはカップリングによりＴを導くことができる任意の基を意味する。好ましくは、Ｔは、Ｔ’を相補的部分とカップリングさせることにより得られ、ここで、Ｔ’および相補的部分は、互いに対して反応性を示す官能基を含み、例えばＴ’はヒドロキシル官能基を含み、相補的部分は臭化物官能基を含む。この反応の代表例を以下に記載する：
【００７３】
【化１６】
0005551070.tif 000017
【００７４】
一般に、この反応は炭酸カリウムの存在下で実施される。
【００７５】
式（ＶＩＩ）の化合物は市販されており、または公知の方法の適合もしくは適用により、または実施例により作製することができる。
【００７６】
この経路についての例示的な限定されないスキームを以下に挙げる：
【００７７】
【化１７】
0005551070.tif 000018
【００７８】
第２の経路
第２の経路によれば、本化合物は、式（ＩＩＩ）：
【００７９】
【化１８】
0005551070.tif 000019
の対応する化合物
［式中、Ｙ、Ｙ’、Ｘ、Ａ、Ａ’、Ｘ’、ｎ、ｎ’、Ｗ、Ｗ’、Ｕ、Ｕ’、−−−−、
【００８０】
【化１９】
0005551070.tif 000020
、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ１’、Ｒ２’は、上記定義の通りであり、Ｔ”は、任意に保護されているＴの前駆体基である。］から得ることができる。Ｔの前駆体基は、化学的変性またはカップリングによりＴを導くことができる任意の基を意味する。好ましくは、Ｔは、Ｔ’を対応する相補的部分とカップリングさせることにより得られ、ここで、Ｔ’および相補的部分は、互いに対して反応性を示す官能基を含み、例えばＴ’はアミン官能基を含み、相補的部分は酸官能基を含む。一般に、この反応はＮ−ヒドロキシスクシンイミドおよびＨＯＢＴ（Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾール）の存在下で実施される。
【００８１】
式（ＩＩＩ）の化合物は、式（ＩＶ）、（ＩＶ’）および（Ｖ’）：
【００８２】
【化２０】
0005551070.tif 000021
対応する化合物
［式中、Ｌｇは、脱離基、例えばハロゲン、または−ＯＭｓ、−ＯＴｓもしくは−ＯＰＰｈ３＋である。］（Ｍｉｔｓｕｎｏｂｕ反応において形成される中間体）のカップリングから得ることができる。
【００８３】
式（Ｖ’）の化合物は、式ＨＯ−Ａｎ−Ｔ”−Ａ’ｎ’−ＯＨ（ＶＩＩ）（式中、Ｔ”は、任意に保護されているＴ’の前駆体基である。）の対応する化合物から得ることができる。この反応は一般に、ＰＰｈ３およびＣＨａｌ４の存在下で、またはヒドロキシ官能基のメシル化により実施される。式（ＶＩＩ）の化合物は市販されており、または公知の方法の適合もしくは適用により、または実施例により作製することができる。
【００８４】
第３の経路：
第３の経路によれば、対称構造を有する化合物（Ｒ１＝Ｒ１’であり、Ｒ２＝Ｒ’２であり、Ｙ＝Ｙ’である。）を、式（ＶＩＩＩ）：
【００８５】
【化２１】
0005551070.tif 000022
の対応する化合物
［式中、Ｙ、Ｘ、Ｘ’、Ａ、Ａ’、ｎ、ｎ’、Ｒ１、Ｒ２、Ｔは、上記定義の通りである。］の環化により調製することができる。一般に、この反応はヒドロ亜硫酸ナトリウム（Ｎａ２Ｓ２Ｏ４）のような試薬の存在下で、適切な溶媒、例えばＴＨＦ／水の混合物中で実施され、次いでＭｅＯＨおよびＡｃＣｌが添加される。
【００８６】
式（ＶＩＩＩ）の化合物は、式（ＩＸ）：
【００８７】
【化２２】
0005551070.tif 000023
の対応する化合物から得ることができる。
【００８８】
この反応は、水素化ジイソブチルアルミニウム（ＤＩＢＡＬ−Ｈ）のような試薬の存在下で適切な溶媒、例えばトルエン中で実施される。式（ＩＸ）の化合物は、式（Ｘ）および式（ＸＩ）：
【００８９】
【化２３】
0005551070.tif 000024
の対応する化合物のカップリングから得ることができる。
【００９０】
一般に、この反応は、（Ｘ）に塩化オキサリルのような試薬を適切な溶媒、例えばＤＭＦ中で添加し、次いで適切な溶媒、例えばＴＨＦ中で（ＸＩ）を添加することにより実施される。
【００９１】
この経路についての例示的な限定されない経路を以下に挙げる：
【００９２】
【化２４】
0005551070.tif 000025
【００９３】
上述の反応は、以下の実施例に例示の方法を適用または適合させることにより当業者により実施することができる。さらに、本明細書に記載の方法はまた、任意の最終生成物または中間生成物を単離する（１つ以上の）追加の段階を含んでよい。この段階は、公知の慣用手段、例えば上述の回収方法の何れかにより当業者により行うことができる。出発生成物は市販されており、または任意の公知の方法もしくは実施例に記載のものの適用もしくは適合により得ることができる。合成は、多成分反応としてワンポットで実施することもできる。
【００９４】
コンジュゲート分子について
本発明はまた、リンカーの結合基を介して細胞結合剤に化学結合している少なくとも１種のトマイマイシン誘導体を含むコンジュゲート分子に関する。化学結合は、好ましくは共有結合である。前記コンジュゲートは、トマイマイシン誘導体のリンカーの結合基を介して細胞結合剤に共有結合している本発明による１種以上のトマイマイシン誘導体を含む。代表例として、前記コンジュゲートは、リンカーの末端−ＣＯ−Ｚ’Ｒ”基を介して細胞結合剤に共有結合している本発明のトマイマイシン誘導体を含む。前記結合基は、細胞結合剤をトマイマイシン誘導体のリンカーにより共有結合させている。
【００９５】
好ましくは、リンカーは、還元ジスルフィド結合およびリジン残基にそれぞれ由来する細胞結合剤の例えばチオールおよびアミノ官能基に反応性を示す官能基を介して細胞結合剤に結合している。さらに特定すると、前記誘導体は、−ＣＯ−基を介して前記細胞結合剤のリジン残基のアミノ官能基に結合してアミド結合を形成している。
【００９６】
細胞結合剤は、任意の種類のものであってよく、ペプチドおよび非ペプチドを含む。一般に、細胞結合剤は抗体（特に、モノクローナル抗体）もしくは少なくとも１個の結合部位を含有する抗体のフラグメント、リンホカイン、ホルモン、成長因子、栄養輸送分子（例えば、トランスフェリン）、または任意の他の細胞結合分子もしくは物質であってよい。使用することができる細胞結合剤のより具体的な例は：モノクローナル抗体；キメラ抗体；ヒト化抗体；完全ヒト抗体；単鎖抗体；抗体のフラグメント、例えばＦａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２およびＦｖ｛Ｐａｒｈａｍ、１３１  Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２８９５−２９０２頁（１９８３）；Ｓｐｒｉｎｇら、１１３  Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４７０−４７８頁（１９７４）；Ｎｉｓｏｎｏｆｆら、８９  Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．２３０−２４４頁（１９６０）｝；インターフェロン；ペプチド；リンホカイン、例えばＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−６；ホルモン、例えばインスリン、ＴＲＨ（チロトロピン放出ホルモン）、ＭＳＨ（メラノサイト刺激ホルモン）、ステロイドホルモン、例えばアンドロゲンおよびエストロゲン；成長因子およびコロニー刺激因子、例えばＥＧＦ、ＴＧＦα、インスリン様成長因子（ＩＧＦ−Ｉ、ＩＧＦ−ＩＩ）、Ｇ−ＣＳＦ、Ｍ−ＣＳＦおよびＧＭ−ＣＳＦ｛Ｂｕｒｇｅｓｓ、５  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｔｏｄａｙ  １５５−１５８頁（１９８４）｝；ビタミン、例えば葉酸およびトランスフェリン｛Ｏ’Ｋｅｅｆｅら、２６０  Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．９３２−９３７頁（１９８５）｝を含む。
【００９７】
表現「細胞結合剤」は、変性されている細胞結合剤をも含み、ここで、前記細胞結合剤は、トマイマイシン誘導体のリンカーの結合基への前記細胞結合剤の反応性を改善するために変性剤により変性されている。
【００９８】
モノクローナル抗体技術により、極めて選択的な細胞結合剤を特異的モノクローナル抗体の形態で製造することができる。特に、マウス、ラット、ハムスターまたは任意の他の哺乳動物を、対象の抗原、例えばインタクトな標的細胞、標的細胞から単離された抗原、全ウイルス、弱毒全ウイルスおよびウイルスタンパク質、例えばウイルスコートタンパク質により免疫化することにより製造されるモノクローナル抗体を作出する技術は、当該分野において十分公知である。
【００９９】
適切な細胞結合剤の選択は、標的化すべき特別の細胞集団に依存する選択の問題であるが、一般に、適切なモノクローナル抗体が入手可能である場合、モノクローナル抗体が好ましい。例えば、モノクローナル抗体ＭＹ９は、ＣＤ３３抗原に特異的に結合するマウスＩｇＧ１抗体であり｛Ｊ．Ｄ．Ｇｒｉｆｆｉｎら  ８  Ｌｅｕｋｅｍｉａ  Ｒｅｓ．、５２１頁（１９８４）｝、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）の疾患におけるように、標的細胞がＣＤ３３を発現する場合に使用することができる。同様に、モノクローナル抗体抗Ｂ４は、Ｂ細胞上のＣＤ１９抗原に結合するマウスＩｇＧ１であり｛Ｎａｄｌｅｒら、１３１  Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４４−２５０頁（１９８３）｝、標的細胞がＢ細胞またはこの抗原を発現する疾患細胞である場合、例えば非ホジキンリンパ腫または慢性リンパ芽球性白血病において使用することができる。上述の通り、ＭＹ９および抗Ｂ４抗体は、マウス、キメラ、ヒト化または完全ヒトの抗体であってよい。
【０１００】
さらに、骨髄細胞に結合するＧＭ−ＣＳＦは、急性骨髄性白血病からの疾患細胞に対する細胞結合剤として使用することができる。活性化Ｔ細胞に結合するＩＬ−２は、移植片拒絶の予防、移植片対宿主病の治療および予防、ならびに急性Ｔ細胞白血病の治療に使用することができる。メラノサイトに結合するＭＳＨは、メラノーマの治療に使用することができる。
【０１０１】
コンジュゲート分子を調製するために使用することができる好適なモノクローナル抗体の例は、ｈｕ２Ｈ１１（ＡＴＣＣによりＰＴＡ−７６６２で登録）、ＷＯ２００４／０４３３４４に記載のｈｕＭｙ９−６の１種、ＷＯ２００５／００９３６９に記載のｈｕＤＳ６、またはＷＯ２００８／０４７２４２、ＷＯ２００５／０６１５４１もしくはＷＯ０２／１６１０１に記載のモノクローナル抗体であってよい。
【０１０２】
トマイマイシン誘導体は、アミドタイプの官能基を介して抗体または他の細胞結合剤に結合していてよい。好ましくは、誘導体はカルボキシル官能基を含有するように合成され、この場合、１種以上のカルボキシル酸含有誘導体はアミド結合を介して細胞結合剤にそれぞれ共有結合している。
【０１０３】
本発明の代表的なコンジュゲートは、抗体−トマイマイシン誘導体、抗体フラグメント−トマイマイシン誘導体、表皮成長因子（ＥＧＦ）−トマイマイシン誘導体、メラノサイト刺激ホルモン（ＭＳＨ）−トマイマイシン誘導体、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）−トマイマイシン誘導体、エストロゲン−トマイマイシン誘導体、エストロゲン類似体−トマイマイシン誘導体、アンドロゲン−トマイマイシン誘導体、アンドロゲン類似体−トマイマイシン誘導体および葉酸−トマイマイシン誘導体である。コンジュゲートは、ＨＰＬＣまたはゲル濾過により精製することができる。
【０１０４】
好ましくは、モノクローナル抗体−トマイマイシン誘導体または細胞結合剤−トマイマイシン誘導体コンジュゲートは、トマイマイシン誘導体を送達することができる、上述のアミド結合を介して結合しているコンジュゲートである。コンジュゲートは、トマイマイシン二量体リンカーの末端におけるカルボキシル官能基のＮ−ヒドロキシスクシンイミド誘導体を使用して調製することができる。アミド結合を介して結合している１個から１０個のトマイマイシン誘導体薬物を含有するコンジュゲートは、この方法により容易に調製される。
【０１０５】
さらに特定すると、０．０５Ｍのリン酸カリウム、０．０５Ｍの塩化ナトリウムおよび２ｍＭのエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）を含有するｐＨ８の水性緩衝液中の濃度８ｍｇ／ｍｌの抗体溶液を、５倍モル過剰のトマイマイシン二量体のＮ−ヒドロキシスクシンイミド誘導体のジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）中溶液により、緩衝液中のＤＭＡ最終濃度が２０％になるように処理する。反応混合物を室温（ｒｔ）で７０分間撹拌する。抗体−トマイマイシン誘導体コンジュゲートを精製し、未反応薬物および他の低分子量材料をＳｅｐｈａｄｅｘＧ−２５またはＳｅｐｈａｃｒｙｌ  Ｓ３００またはＳｕｐｅｒｄｅｘ２００のカラムに通すゲル濾過により除去する。試料は、ｐＨ６．５の緩衝液中で一晩透析して生成物をさらに精製することもできる。抗体１分子当たりに結合しているトマイマイシン誘導体部分の数は、３２０ｎｍにおける吸収と２８０ｎｍにおける吸収との比を計測することにより測定することができる。平均１−１０個のトマイマイシン誘導体分子／抗体分子をこの方法によりアミド結合を介して結合させることができる。
【０１０６】
抗原発現細胞への結合親和性に対するコンジュゲーションの効果は、Ｌｉｕら、９３  Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８６１８−８６２３頁（１９９６）により既報の方法を使用して測定することができる。トマイマイシン誘導体およびこれらの抗体コンジュゲートの細胞系に対する細胞毒性は、Ｇｏｌｄｍａｃｈｅｒら、１３５  Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３６４８−３６５１頁（１９８５）に記載の細胞増殖曲線の逆外挿により計測することができる。これらの化合物の付着細胞系に対する細胞毒性は、Ｇｏｌｄｍａｃｈｅｒら、１０２  Ｊ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．１３１２−１３１９頁（１９８６）に記載のクローン原性アッセイにより測定することができる。
【０１０７】
本発明の代表的なコンジュゲートは、抗体、抗体フラグメント、表皮成長因子（ＥＧＦ）、メラノサイト刺激ホルモン（ＭＳＨ）、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）、エストロゲン、エストロゲン類似体、アンドロゲンおよびアンドロゲン類似体とのトマイマイシン誘導体のコンジュゲートである。
【０１０８】
誘導体および細胞結合剤の種々のコンジュゲートの調製の代表例を以下に記載する。
【０１０９】
アミドリンカー：例えば、モノクローナル抗体ＭＹ９はＣＤ３３抗原に特異的に結合するマウスＩｇＧ１抗体であり｛Ｊ．Ｄ．Ｇｒｉｆｆｉｎら  ８  Ｌｅｕｋｅｍｉａ  Ｒｅｓ．、５２１頁（１９８４）｝、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）の疾患におけるように、標的細胞がＣＤ３３を発現する場合に使用することができる。同様に、モノクローナル抗体抗Ｂ４は、Ｂ細胞上のＣＤ１９抗原に結合するマウスＩｇＧ１であり｛Ｎａｄｌｅｒら、１３１  Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４４−２５０頁（１９８３）｝、標的細胞がＢ細胞またはこの抗原を発現する疾患細胞である場合、例えば非ホジキンリンパ腫または慢性リンパ芽球性白血病において使用することができる。
【０１１０】
さらに、骨髄細胞に結合するＧＭ−ＣＳＦは、急性骨髄性白血病からの疾患細胞に対する細胞結合剤として使用することができる。活性化Ｔ細胞に結合するＩＬ−２は、移植片拒絶の予防、移植片対宿主病の治療および予防、ならびに急性Ｔ細胞白血病の治療に使用することができる。メラノサイトに結合するＭＳＨは、メラノーマの治療に使用することができる。
【０１１１】
抗体または他の細胞結合剤は、Ｎ−ヒドロキシ−スクシンイミド酸誘導体と反応させてアミド結合コンジュゲートを製造する。
【０１１２】
上述の方法により作製されたコンジュゲートは、標準的なクロマトグラフィー技術、例えばサイズ排除クロマトグラフィー、限定されるものではないが、イオン交換、疎水性相互作用クロマトグラフィー、アフィニティクロマトグラフィー、セラミックヒドロキシアパタイトもしくはＰｏｒａｐａｋ上でのクロマトグラフィーを含む吸着クロマトグラフィー、またはＨＰＬＣにより精製することができる。透析または膜分離による精製を使用することもできる。
【０１１３】
好ましくは、モノクローナル抗体または細胞結合剤と本発明の誘導体とのコンジュゲートは、上述の通りアミド結合を介して結合しているコンジュゲートである。このような細胞結合コンジュゲートは、公知の方法、例えば、カルボキシル基を有する結合性薬物分子を変性させてＮ−ヒドロキシ−スクシンイミド酸誘導体を得ることにより調製される。次いで、得られた活性化カルボキシル基が抗体の含有リジン残基をアシル化してアミド結合コンジュゲートを製造する。アミド橋を介して結合している１個から１０個の誘導体を含有するコンジュゲートがこの方法により容易に調製される。
【０１１４】
好ましい態様によれば、細胞結合剤は抗体、特にモノクローナル抗体である。他の好ましい態様によれば、細胞結合剤は抗原特異的抗体フラグメント、例えばｓＦＶ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、またはＦ（ａｂ’）２である。
【０１１５】
コンジュゲート分子の使用について
本発明はまた、本発明のコンジュゲート分子または上記定義のトマイマイシン誘導体を薬学的に許容される担体と一緒に含む医薬組成物に関する。
【０１１６】
本発明はまた、標的細胞または標的細胞を含有する組織を本医薬組成物の有効量と接触させることを含む、細胞、好ましくは選択された細胞集団を殺傷し、またはこれらの増殖を阻害する方法に関する。選択される細胞集団は、これらの癌性および／または増殖性細胞である。本発明はまた、本医薬組成物の有効量を癌治療が必要とされている患者に投与することを含む、癌を治療する、好ましくは選択的に治療する方法に関する。「癌を選択的に治療する」は、正常および／または非増殖性の細胞を実質的に殺傷することなく、癌性および／または増殖性細胞を殺傷することを意味する。
【０１１７】
本発明はまた、癌を治療する医薬品の調製のための、上記定義のコンジュゲート分子またはトマイマイシン誘導体の使用に関する。
【０１１８】
選択された細胞集団の増殖を阻害する方法は、インビトロ、インビボまたはエクスビボで実施することができる。インビトロ使用の例は、標的抗原を発現しない所望の変種を除く全ての細胞を殺傷するための；または不所望な抗原を発現する変種を殺傷するための細胞培養の処理を含む。非臨床的インビトロ使用の条件は、当業者により容易に決定される。エクスビボ使用の例は、疾患細胞または悪性細胞を殺傷するための同一患者への自己骨髄の移植前の自己骨髄の処理：コンピテントＴ細胞を殺傷し、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）を予防するための骨髄の移植前の骨髄の処理を含む。癌治療もしくは自己免疫疾患の治療における自己移植前の骨髄から腫瘍細胞もしくはリンパ球様細胞を除去するための、またはＧＶＨＤを予防するために移植前に同種異系骨髄もしくは組織からＴ細胞および他のリンパ球様細胞を除去するための臨床的エクスビボ治療は、以下の通り実施することができる。骨髄を患者または他の個体から採取し、次いで本発明の細胞毒性剤が約１０μＭから１ｐＭの濃度範囲で添加された血清を含有する培地中で、約３７℃で約３０分間から約４８時間温置する。濃度および温置の時間（＝用量）の正確な条件は、当業者により容易に決定される。温置した後、骨髄細胞を、血清を含有する培地により洗浄し、公知の方法により静脈内注入により患者に戻す。患者が、他の治療、例えば、骨髄の採取時と処理細胞の再注入時との間に除去的化学療法または全身照射のコースを受ける状況において、処理された骨髄細胞を、標準的な医学的装置を使用して液体窒素中で凍結保存する。臨床的インビボ使用のため、本発明の細胞毒性剤は、無菌性およびエンドトキシンレベルについて試験される溶液として、または注射のために滅菌水中に再溶解させることができる凍結乾燥固体として供給される。コンジュゲート投与の好適なプロトコールの例は、以下の通りである。コンジュゲートは、週１回で６週間、静脈内濃縮ボーラスとして与えられる。ボーラス用量は、ヒト血清アルブミン（例えば、０．５ｍＬから１ｍＬのヒト血清アルブミンの濃縮溶液（１００ｍｇ／ｍＬ））を添加することができる生理食塩水５０ｍｌから４００ｍｌ中で与えられる。投与量は、静脈内で１週当たり約５０μｇから１０ｍｇ／ｋｇ体重（１回の注射当たり１０μｇから１００ｍｇ／ｋｇの範囲）である。治療６週間後、患者は治療の第２のコースを受けることができる。投与経路、賦形剤、希釈剤、投与量、時間などに関する具体的な臨床プロトコールは、臨床状況を根拠として当業者により決定することができる。
【０１１９】
選択された細胞集団を殺傷するインビボまたはエクスビボ方法により治療することができる医学的病態の例は、例えば肺、乳房、結腸、前立腺、腎臓、膵臓、卵巣およびリンパ器官の癌を含む任意のタイプの悪性腫瘍；メラノーマ；自己免疫疾患、例えば全身性ループス、関節リウマチおよび多発性硬化症；移植片拒絶、例えば腎蔵移植拒絶、肝蔵移植拒絶、肺移植拒絶、心臓移植拒絶および骨髄移植拒絶；移植片対宿主病；ウイルス感染、例えばＣＭＶ感染、ＨＩＶ感染、ＡＩＤＳなど；細菌感染；および寄生虫感染、例えばジアルジア症、アメーバ症、住血吸虫症、ならびに当業者により決定される他のものを含む。
【０１２０】
治療有効量は、当業者としての担当診断医により、慣用の技術の使用により、および類似の状況下で得られる結果の観察により容易に決定することができる。治療有効量の決定において、限定されるものではないが：対象の種；対象のサイズ、年齢および一般的健康状態；関与する具体的な疾患；疾患の関与の程度または重症度；個々の対象の応答；投与される特定の化合物；投与様式；投与される製剤のバイオアベイラビリティ特性；選択される用量投与計画；併用薬の使用；および他の関連する状況を含む多数の要因が担当診断医により考慮される。
【０１２１】
所望の生物学的効果を達成するのに要求される量は、使用される化合物の化学的特性（例えば、疎水性）、化合物の効力、疾患のタイプ、患者が属する種、患者の疾患状態、投与経路、選択経路による化合物のバイオアベイラビリティ、要求投与量、施すべき送達および投与計画を指定する全ての要因を含む多数の要因に応じて変動する。
【０１２２】
一般に、本発明の化合物は非経口投与のため０．１％ｗ／ｖから１０％ｗ／ｖの化合物を含有する生理学的緩衝水溶液中で提供することができる。典型的な用量範囲は、１日当たり１μｇ／体重ｋｇから０．１ｇ／体重ｋｇであり；好ましい用量範囲は、１日当たり０．０１ｍｇ／体重ｋｇから１０ｍｇ／体重ｋｇであり、またはヒト小児における等価用量である。投与すべき薬物の好ましい投与量は、疾患または障害のタイプおよび進行の程度、特定の患者の全身健康状態、選択化合物の相対生物学的効能、化合物の配合、投与経路（静脈内、筋肉内、腹腔内、皮下またはその他）、選択送達経路による化合物の薬物動力学的特性、ならびに投与の速度（ボーラスまたは連続注入）およびスケジュール（所与の時間内の繰り返し数）のような可変項に依存すると考えられる。
【０１２３】
本組成物は、単位剤形で便利に投与することができ、医薬分野において十分公知の方法、例えばＲｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ、２０版；Ｇｅｎｎａｒｏ、Ａ．Ｒ．、編；Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ：Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ、ＰＡ、２０００に記載の方法の何れかにより調製することができる。
【０１２４】
非経口投与用の液体製剤は、無菌水性または非水性の液剤、懸濁剤および乳剤を含む。液体組成物は、バインダー、緩衝剤、保存剤、キレート化剤、甘味剤、香味剤および着色剤などを含んでもよい。非水性溶媒は、アルコール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、植物油、例えばオリーブ油および有機エステル、例えばオレイン酸エチルを含む。水性担体は、アルコールおよび水の混合物、緩衝媒体、ならびに食塩水を含む。特に、生体適合性、生分解性のラクチドポリマー、ラクチド／グリコリドコポリマーまたはポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンコポリマーが有効化合物の放出を制御するのに有用な賦形剤であり得る。静脈内ビヒクルは、流体および栄養補給剤、電解質補給剤、例えばＲｉｎｇｅｒデキストロースをベースにするものなどを含むことができる。これらの有効化合物のための他の潜在的に有用な非経口送達系は、エチレン−酢酸ビニルコポリマー粒子、浸透圧ポンプ、埋め込み型注入系およびリポソームを含む。
【０１２５】
実験部
方法Ａ１：高圧液体クロマトグラフィー−質量分析法（ＬＣＭＳ）
Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ  ＭａｓｓＬｙｎｘソフトウエアを使用し、分析をＷａｔｅｒｓ  Ａｌｌｉａｎｃｅ  ＨＰＬＣ上で、（Ａ）メタノールおよび（Ｂ）水／０．１％ギ酸の混合物による勾配溶出（勾配：５％Ａ：９５％Ｂを１０分間にわたり９５％Ａ：５％Ｂまで上昇させ、９５％Ａ：５％Ｂを１分間にわたり５％Ａ：９５％Ｂまで下降させ、５％Ａ：９５％Ｂを２分間）を１．１ｍＬ／分の流速で使用するＷＡＴＥＲＳ  ＸＢｒｉｄｇｅ  Ｃ１８  ３．５μｍカラム（１００×３ｍｍ）；Ｅｌｅｃｔｒｏｓｐｒａｙ（ポジティブおよびネガティブイオン化）型Ｗａｔｅｒｓ−Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ  Ｐｌａｔｆｏｒｍ  ＩＩ分光計；インラインＤｉｏｄｅ  Ａｒｒａｙ（１９０−５００ｎｍ）；補助検出器Ｓｅｄｅｒｅ（仏国）モデルＳＥＤＥＸ８５蒸発光散乱（ＥＬＳ）検出器により実施する。
【０１２６】
方法Ａ２：高圧液体クロマトグラフィー−質量分析法（ＬＣＭＳ）
Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ  ＭａｓｓＬｙｎｘソフトウエアを使用し、分析をＡｇｉｌｅｎｔ１１００シリーズＨＰＬＣ上で、（Ａ）アセトニトリルおよび（Ｂ）水／０．１％ギ酸の混合物による勾配溶出（勾配：５％Ａ：９５％Ｂを５分間にわたり１００％Ａまで上昇させ、１００％Ａを０．５分間、１００％Ａを１分間にわたり５％Ａ：９５％Ｂまで下降させ、５％Ａ：９５％Ｂを０．５分間）を１．１ｍＬ／分の流速で使用するＸＢｒｉｄｇｅ  Ｃ１８  ２．５μｍカラム（５０×３ｍｍ）；Ｅｌｅｃｔｒｏｓｐｒａｙ（ポジティブおよびネガティブイオン化）型Ｗａｔｅｒｓ−Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ  ＺＱ分光計；インラインＤｉｏｄｅ  Ａｒｒａｙ（２１０−２５４ｎｍ）により実施する。
【０１２７】
方法Ａ３：高圧液体クロマトグラフィー−質量分析法（ＬＣＭＳ）
分析をＷａｔｅｒｓ  ＵＰＬＣ−ＳＱＤ上で、（Ａ）Ｈ２Ｏ／０．１％ギ酸および（Ｂ）ＣＨ３ＣＮ／０．１％ギ酸の混合物による勾配溶出（勾配：９５％Ａ：５％Ｂを０．８分間にわたり５０％Ａ：５０％Ｂまで上昇させ、１．２分間にわたり５０％Ａ：５０％Ｂを１００％Ｂまで下降させ、１００％Ｂを１．８５分間、１００％Ｂを１．９５分間にわたり９５％Ａ：５％Ｂまで上昇させる。）を１ｍＬ／分の流速で使用する５０℃のＡＣＱＵＩＴＹ  ＢＥＨ  Ｃ１８  １．７μｍ−２．１×５０ｍｍカラム；Ｅｌｅｃｔｒｏｓｐｒａｙ（ポジティブおよび／またはネガティブイオン化）により実施する。
【０１２８】
方法Ａ４：高圧液体クロマトグラフィー−質量分析法（ＬＣＭＳ）
分析をＷａｔｅｒｓ  ＺＱ分光計上で、（Ａ）アセトニトリルおよび（Ｂ）水／０．１％ギ酸の混合物による勾配溶出（勾配：５％Ａ：９５％Ｂを５．３分間にわたり１００％Ａまで上昇させ、１００％Ａを５．５分間、５％Ａ：９５％Ｂを６．３分間）を０．９ｍＬ／分の流速で使用する７０℃のＸＢｒｉｄｇｅ  Ｃ１８  ２．５μｍカラム（５０×３ｍｍ）；Ｅｌｅｃｔｒｏｓｐｒａｙ（ポジティブおよび／またはネガティブイオン化）により実施する。
【０１２９】
方法Ｂ：１Ｈ  核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトル
１Ｈ  ＮＭＲスペクトルは、ＢＲＵＫＥＲ  ＡＶＡＮＣＥ  ＤＲＸ−５００、ＢＲＵＫＥＲ  ＡＶＡＮＣＥ  ＤＲＸ−４００分光計またはＢＲＵＫＥＲ  ＡＶＡＮＣＥ  ＤＲＸ−３００分光計上で記録した。報告された１３Ｃ  ＮＭＲスペクトルは、ＢＲＵＫＥＲ  ＡＶＡＮＣＥ  ＤＲＸ−３００分光計上で記録した。
【０１３０】
方法Ｃ：化学イオン化（ＣＩ）質量スペクトル
ＣＩ質量スペクトルは、質量分析計のＷＡＴＥＲＳ  ＧＣＴ（アンモニア）を使用して記録した。
【０１３１】
方法Ｄ：化学イオン化（ＣＩ）質量スペクトル；ＣＩ質量スペクトルは、ＦＩＮＮＩＧＡＮ  ＳＳＱ  ７０００質量分析計（アンモニア）を使用して記録した。
【実施例１】
【０１３２】
４−（３，５−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−フェノキシ）−酪酸Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジルエステルは、以下の通り調製することができる：
【０１３３】
【化２５】
0005551070.tif 000026
４−（３，５−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−フェノキシ）−酪酸（１１．３ｍｇ）のテトラヒドロフラン（０．４ｍＬ）中懸濁液に、Ｎ，Ｎ’−ジスクシンイミジルカルボネート（７．７ｍｇ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１５．８μＬ）を添加した。室温で２．５時間後、酢酸エチル（６ｍＬ）を反応混合物に添加し、有機溶液を水（４ｍＬ）により２回洗浄し、次いで飽和塩化ナトリウム水溶液（５ｍＬ）により洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥させ、真空中で残留物に濃縮した。残留物を、シリカゲルクロマトグラフィー（Ｍｅｒｃｋ  ＭｉｎｉＶａｒｉｏＦｌａｓｈ  ２．５ｇカラム、Ｓｉ６０  １５−４０μｍ）により、ＭｅＯＨ（メタノール）（Ａ）／ＤＣＭ（ジクロロメタン）（Ｂ）の混合物による勾配溶出（勾配：２％Ａ：９８％Ｂから４％Ａ：９６％Ｂまで上昇させる。）を使用して精製して４−（３，５−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−フェノキシ）−酪酸Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジルエステル（１７．６ｍｇ）を生じさせた：ＬＣ／ＭＳ（方法Ａ４）：ＥＳ：ｍ／ｚ  ８４６（Ｍ＋Ｈ）＋；保持時間（ＲＴ）＝３．８９分；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３−ｄ１，δｐｐｍ）：δ＝１．７５（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，６Ｈ）；２．２３（ｍ，２Ｈ）；２．７３−２．８７（ｍ，６Ｈ）；２．９７（ｍ，４Ｈ）；３．８４−３．９５（ｍ，２Ｈ）；３．９７（ｓ，６Ｈ）；４．０６（ｍ，２Ｈ）；４．２６（ｍ，４Ｈ）；５．１４（ｄ，Ｊ＝１２．４Ｈｚ，２Ｈ）；５．２１（ｄ，Ｊ＝１２．４Ｈｚ，２Ｈ）；５．６２（ｍ，２Ｈ）；６．８４（ｓ，２Ｈ）；６．９６（ｓ，２Ｈ）；７．０９（ｓ，１Ｈ）；７．５３（ｓ，２Ｈ）；７．６３（ｍ，２Ｈ）。
【０１３４】
４−（３，５−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−フェノキシ）−酪酸は、以下の通り調製することができる
【０１３５】
【化２６】
0005551070.tif 000027
４−（３，５−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−フェノキシ）−酪酸メチルエステル（６０ｍｇ）のテトラヒドロフラン（０．９ｍＬ）中溶液に、ＭｅＯＨ（０．３ｍＬ）、水（０．３ｍＬ）および水酸化リチウム水溶液（１Ｍ、８７μＬ）を添加した。３時間後、反応混合物を水（１０ｍＬ）により希釈し、塩化水素酸１Ｎ水溶液の添加によりｐＨを２に調節した。水相をＤＣＭ（１０ｍＬ）により３回抽出し、合わせた有機溶液を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、真空中で残留物に濃縮した。残留物をシリカゲルクロマトグラフィー（Ｍｅｒｃｋ  ＳｕｐｅｒＶａｒｉｏＦｌａｓｈ  １０ｇカラム、ＳｉＯＨ  １５−４０μｍ）により、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ／酢酸（１００：４：０．５）の混合物により溶出させて精製して４−（３，５−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−フェノキシ）−酪酸を生じさせた：ＬＣ／ＭＳ（方法Ａ２）：ＥＳ：ｍ／ｚ＝７４９  ＭＨ＋；ｍ／ｚ＝３７５（Ｍ＋２Ｈ）２＋／２；ＲＴ＝３．７分；１Ｈ  Ｎ．Ｍ．Ｒ．（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，δ（ｐｐｍ）：δ＝１．６９（ｄ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，６Ｈ）；１．９５（ｍ，２Ｈ）；２．３９（ｔ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，２Ｈ）；２．９１（ｍ，２Ｈ）；３．０５（ｍ，２Ｈ）；３．８３（ｓ，６Ｈ）；３．９８（ｍ，２Ｈ）；４．０１（ｔ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，２Ｈ）；４．１０（ｍ，４Ｈ）；５．１１（ｄ，Ｊ＝１２．５Ｈｚ，２Ｈ）；５．２０（ｄ，Ｊ＝１２．５Ｈｚ，２Ｈ）；５．５５（ｍ，２Ｈ）；６．９０から７．１５（ｍ，５Ｈ）；７．３４（ｓ，２Ｈ）；７．７７（ｍ，２Ｈ）；１２．１（ｍ  広幅，１Ｈ）。
【０１３６】
４−（３，５−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−フェノキシ）−酪酸メチルエステルは、以下の通り調製することができる：
【０１３７】
【化２７】
0005551070.tif 000028
４−（３，５−ビス−ヒドロキシメチル−フェノキシ）−酪酸メチルエステル（５０ｍｇ）およびトリエチルアミン（１１０μＬ）のＴＨＦ（テトラヒドロフラン）（１．４ｍＬ）中冷却（０℃）溶液に、塩化メタンスルホニル（４６μＬ）を添加した。１時間後、反応混合物をＤＣＭ（１０ｍＬ）により希釈し、水（５ｍＬ）により２回洗浄した。有機溶液を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、真空中で残留物に濃縮した。残留物を、シリカゲルクロマトグラフィー（Ｍｅｒｃｋ  ＳｕｐｅｒＶａｒｉｏＦｌａｓｈ  １０ｇカラム、ＳｉＯＨ  １５−４０μｍ）により、ＭｅＯＨ（Ａ）／ＤＣＭ（Ｂ）の混合物による勾配溶出（勾配：１００％Ｂを５％Ａ：９５％Ｂまで下降させる。）を使用して精製して７１．８ｍｇのジ−メシレート化合物を生じさせた。トマイマイシン（８０ｍｇ）、ヨウ化カリウム（４９ｍｇ）、炭酸カリウム（１２２ｍｇ）のＤＭＦ（ジメチルホルムアミド）（１ｍＬ）中混合物に、ジ−メシレート化合物（７１．８ｍｇ）のＤＭＦ（１．６ｍＬ）中溶液を添加した。反応混合物を３０℃で１６時間撹拌した。水（１２ｍＬ）を添加し、得られた固体を濾過し、水により洗浄し、真空中で乾燥させて残留物を生じさせた。残留物を、シリカゲルクロマトグラフィー（Ｍｅｒｃｋ  ＳｕｐｅｒＶａｒｉｏＦｌａｓｈ  ３０ｇカラム、ＳｉＯＨ  １５−４０μｍ）により、ＭｅＯＨ（Ａ）／ＤＣＭ（Ｂ）の混合物による勾配溶出（勾配：１００％Ｂを５％Ａ：９５％Ｂまで下降させる。）を使用して精製して４−（３，５−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−フェノキシ）−酪酸メチルエステル（６５．４ｍｇ）を生じさせた：ＬＣ／ＭＳ（方法Ａ２）：ＥＳ：ｍ／ｚ＝７６３  ＭＨ＋；ｍ／ｚ＝３８２（Ｍ＋２Ｈ）２＋／２；ＲＴ＝４．０分；１Ｈ  Ｎ．Ｍ．Ｒ．（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３−ｄ１，δ（ｐｐｍ）：１．７５（ｄ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，６Ｈ）；２．１１（ｍ，２Ｈ）；２．５３（ｔ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，２Ｈ）；２．９８（ｍ，４Ｈ）；３．６９（ｓ，３Ｈ）；３．８９（ｍ，２Ｈ）；３．９７（ｓ，６Ｈ）；４．００（ｔ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，２Ｈ）；４．２８（ｓ  広幅，４Ｈ）；５．１２（ｄ，Ｊ＝１２．５Ｈｚ，２Ｈ）；５．１９（ｄ，Ｊ＝１２．５Ｈｚ，２Ｈ）；５．６１（ｍ，２Ｈ）；６．８２（ｓ，２Ｈ）；６．９２（ｓ，２Ｈ）；７．０６（ｓ，１Ｈ）；７．５２（ｓ，２Ｈ）；７．６４（ｄ，Ｊ＝４，５Ｈｚ，２Ｈ）。
【０１３８】
４−（３，５−ビス−ヒドロキシメチル−フェノキシ）−酪酸メチルエステルは、以下の通り調製することができる：
【０１３９】
【化２８】
0005551070.tif 000029
３，５−ビス−ヒドロキシメチルフェノール（Ｆｅｌｄｅｒ、Ｄ．；Ｇｕｔｉｅｒｒｅｚ  Ｎａｖａ、Ｍ．；ｄｅｌ  Ｐｉｌａｒ  Ｃａｒｒｅｏｎ、Ｍ．；Ｅｃｋｅｒｔ、Ｊ．Ｆ．；Ｌｕｃｃｉｓａｎｏ、Ｍ．；Ｓｃｈａｌｌ、Ｃ．；Ｍａｓｓｏｎ、Ｐ．；Ｇａｌｌａｎｉ、Ｊ．Ｌ．；Ｈｅｉｎｒｉｃｈ、Ｂ．；Ｇｕｉｌｌｏｎ、Ｄ．；Ｎｉｅｒｅｎｇａｒｔｅｎ、Ｊ．Ｆ．Ｈｅｌｖ．Ｃｈｉｍｉｃａ  Ａｃｔａ  ２００２、８５、２８８頁）（２００ｍｇ）、ヨウ化カリウム（５０ｍｇ）および炭酸カリウム（５４０ｍｇ）のＴＨＦ（２．５ｍＬ）中溶液に、４−ブロモ−酪酸メチルエステル（４００μＬ）を添加した。反応混合物を室温で２０時間撹拌し、次いで不溶性部分を濾別した。濾液を真空中で濃縮し、残留物をシリカゲルクロマトグラフィー（Ｍｅｒｃｋ  ＳｕｐｅｒＶａｒｉｏＦｌａｓｈ  ３０ｇカラム、Ｓｉ６０  １５−４０μｍ）により、ＭｅＯＨ（Ａ）／ＤＭＣ（Ｂ）の混合物による勾配溶出（勾配：１００％Ｂを５％Ａ：９５％Ｂまで下降させる。）を使用して精製して４−（３，５−ビス−ヒドロキシメチル−フェノキシ）−酪酸メチルエステル（５３．５ｍｇ）を生じさせた：ＬＣ／ＭＳ（方法Ａ２）：ＥＳ：ｍ／ｚ＝２５５  ＭＨ＋；ｍ／ｚ＝２３７（Ｍ＋Ｈ−Ｈ２Ｏ）＋；ＲＴ＝２．５分；１Ｈ  Ｎ．Ｍ．Ｒ．（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，δ（ｐｐｍ）：δ＝１．９６（ｍ，２Ｈ）；２，４７（ｔ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，２Ｈ）；３．６１（ｓ，３Ｈ）；３．９６（ｔ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，２Ｈ）；４．４３（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，４Ｈ）；５．１１（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ）；６．７１（ｓ，２Ｈ）；６．８２（ｓ，１Ｈ）。
【実施例２】
【０１４０】
４−（３，５−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−フェノキシ）酢酸：
【０１４１】
【化２９】
0005551070.tif 000030
４−（３，５−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−フェノキシ）酢酸は、４−（３，５−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−フェノキシ）−酪酸の調製手順に従って、４−（３，５−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−フェノキシ）−酢酸メチルエステルにより出発して調製することができる：ＬＣ／ＭＳ（方法Ａ２）：ＥＳ：ｍ／ｚ＝７２１ＭＨ＋；ｍ／ｚ＝３６１（Ｍ＋２Ｈ）２＋／２；ＲＴ＝３．５分
４−（３，５−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−フェノキシ）−酢酸メチルエステル
【０１４２】
【化３０】
0005551070.tif 000031
４−（３，５−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−フェノキシ）−酢酸メチルエステルは、４−（３，５−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−フェノキシ）−酪酸メチルエステルの調製手順に従って、４−（３，５−ビス−ヒドロキシメチル−フェノキシ）−酢酸メチルエステルにより出発して調製することができる：ＬＣ／ＭＳ（方法Ａ２）：ＥＳ：ｍ／ｚ＝７３５  ＭＨ＋；ｍ／ｚ＝３６８（Ｍ＋２Ｈ）２＋／２；ＲＴ＝３．８分；１Ｈ  Ｎ．Ｍ．Ｒ．（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３−ｄ１，δ（ｐｐｍ）：δ＝１．７６（ｄ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，６Ｈ）；２．９６（ｍ，４Ｈ）；３．７８（ｓ，３Ｈ）；３．８８（ｍ，２Ｈ）；３．９７（ｓ，６Ｈ）；４．２７（ｓ  広幅，４Ｈ）；４．６４（ｓ，２Ｈ）；５．１３（ｄ，Ｊ＝１２．５Ｈｚ，２Ｈ）；５．１９（ｄ，Ｊ＝１２．５Ｈｚ，２Ｈ）；５．６０（ｍ，２Ｈ）；６．８０（ｓ，２Ｈ）；６．９６（ｓ，２Ｈ）；７．１１（ｓ，１Ｈ）；７．５３（ｓ，２Ｈ）；７．６３（ｄ，Ｊ＝４．５Ｈｚ，２Ｈ）。
【０１４３】
４−（３，５−ビス−ヒドロキシメチル−フェノキシ）−酢酸メチルエステル：
【０１４４】
【化３１】
0005551070.tif 000032
４−（３，５−ビス−ヒドロキシメチル−フェノキシ）−酢酸メチルエステルは、４−（３，５−ビス−ヒドロキシメチル−フェノキシ）−酪酸メチルエステルの調製手順に従って、４−ブロモ−酢酸メチルエステルにより出発して調製することができる：ＬＣ／ＭＳ（方法Ａ２）：ＥＳ：ｍ／ｚ＝２２７  ＭＨ＋；ｍ／ｚ＝２０９（Ｍ＋Ｈ−Ｈ２Ｏ）＋；ＲＴ＝１．９分；１Ｈ  Ｎ．Ｍ．Ｒ．（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，δ（ｐｐｍ）：δ＝３．７０（ｓ，３Ｈ）；４．４３（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，４Ｈ）；４．７４（ｓ，２Ｈ）；５．１４（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ）；６．７２（ｓ，２Ｈ）；６．８８（ｓ，１Ｈ）。
【実施例３】
【０１４５】
３−（２−｛２−［２−（３，５−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−フェノキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−プロピオン酸Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジルエステル：
【０１４６】
【化３２】
0005551070.tif 000033
３−（２−｛２−［２−（３，５−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−フェノキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−プロピオン酸Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジルエステルは、４−（３，５−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−フェノキシ）−酪酸Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジルエステルの調製手順に従って、３−（２−｛２−［２−（３，５−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−フェノキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−プロピオン酸により出発して調製することができる：ＬＣ／ＭＳ（方法Ａ３）：ＥＳ：ｍ／ｚ  ９６４（Ｍ＋Ｈ）＋；ＲＴ＝０．９０分；１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３−ｄ１，δｐｐｍ）：δ＝１．７５（ｄｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，６Ｈ）；２．８２（ｍ，４Ｈ）；２．８９（ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，２Ｈ）；２．９７（ｍ，４Ｈ）；３．５７−４．２３（ｍ，１６Ｈ）；３．９７（ｓ，６Ｈ）；４．２７（ｍ，４Ｈ）；５．１３（ｄ，Ｊ＝１２．７Ｈｚ，２Ｈ）；５．２０（ｄ，Ｊ＝１２．２Ｈｚ，２Ｈ）；５．６１（ｍ，２Ｈ）；６．８２（ｓ，２Ｈ）；６．９６（ｓ，２Ｈ）；７．０７（ｓ，１Ｈ）；７．５３（ｓ，２Ｈ）；７．６４（ｄ，Ｊ＝４．４Ｈｚ，２Ｈ）。
【０１４７】
３−（２−｛２−［２−（３，５−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−フェノキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−プロピオン酸：
【０１４８】
【化３３】
0005551070.tif 000034
３−（２−｛２−［２−（３，５−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−フェノキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−プロピオン酸は、４−（３，５−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−フェノキシ）−酪酸の調製手順に従って、３−（２−｛２−［２−（３，５−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−フェノキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−プロピオン酸メチルエステルにより出発して調製することができる：ＬＣ／ＭＳ（方法Ａ３）：ＥＳ：ｍ／ｚ  ８６７（Ｍ＋Ｈ）＋；ｍ／ｚ  ４３４（Ｍ＋２Ｈ）２＋／２；ＲＴ＝０．８４分；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３−ｄ１，δｐｐｍ）：δ＝１．７６（ｄｄ，Ｊ＝８．６，１．５Ｈｚ，６Ｈ）；２．６１（ｔ，２Ｈ）；２．９４−３．００（ｍ，４Ｈ）；３．６３−３．７５（ｍ，８Ｈ）；３．８０（ｔ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，２Ｈ）；３．８５−３．９５（ｍ，４Ｈ）；３．９８（ｓ，６Ｈ）；４．１７（ｔ，Ｊ＝４．９Ｈｚ，２Ｈ）；４．２７（ｂｒ．ｓ．，４Ｈ）；５．１４−５．２１（ｍ，２Ｈ）；５．１８（ｄ，Ｊ＝１２．７Ｈｚ，２Ｈ）；５．２３（ｄ，２Ｈ）；５．２３（ｄ，Ｊ＝１２．７Ｈｚ，２Ｈ）５．６２（ｔｄ，Ｊ＝４．５，２．２Ｈｚ，２Ｈ）；６．８８（ｄ，Ｊ＝０．５Ｈｚ，２Ｈ）；６．９７−７．０２（ｍ，２Ｈ）；７．０９（ｓ，１Ｈ）；７．５４（ｓ，２Ｈ）；７．６８（ｄ，Ｊ＝４．９Ｈｚ，２Ｈ）
３−（２−｛２−［２−（３，５−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−フェノキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−プロピオン酸メチルエステル：
【０１４９】
【化３４】
0005551070.tif 000035
３−（２−｛２−［２−（３，５−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−フェノキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−プロピオン酸メチルエステルは、４−（３，５−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−フェノキシ）−酪酸メチルエステルの調製手順に従って、３−（２−｛２−［２−（３，５−ビス−ヒドロキシメチル］−フェノキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−プロピオン酸メチルエステルにより出発して調製することができる：ＬＣ／ＭＳ（方法Ａ３）：ＥＳ：ｒｎ／ｚ  ８８１（Ｍ＋Ｈ）＋；ｍ／ｚ  ４４１（Ｍ＋２Ｈ）２＋／２；ＲＴ＝０．９１分；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３−ｄ１，δｐｐｍ）：δ＝１．７５（ｄ  広幅，Ｊ＝６．７Ｈｚ，６Ｈ）；２．６０（ｔ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，２Ｈ）；２．９７（ｍ，４Ｈ）；３．５４−４．２１（ｍ，１６Ｈ）；３．６８（ｓ，３Ｈ）；３．９７（ｓ，６Ｈ）；４．２７（ｍ，４Ｈ）；５．１３（ｄ，Ｊ＝１２．２Ｈｚ，２Ｈ）；５．２１（ｄ，Ｊ＝１２．２Ｈｚ，２Ｈ）；５．６１（ｍ，２Ｈ）；６．８３（ｓ，２Ｈ）；６．９６（ｓ，２Ｈ）；７．０８（ｓ，１Ｈ）；７．５３（ｓ，２Ｈ）；７．６４（ｄ，Ｊ＝４．２Ｈｚ，２Ｈ）
３−（２−｛２−［２−（３，５−ビス−ヒドロキシメチル］−フェノキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−プロピオン酸メチルエステルは、以下の通り調製することができる：
【０１５０】
【化３５】
0005551070.tif 000036
３−（２−｛２−［２−（３，５−ビス−ヒドロキシメチル］−フェノキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−プロピオン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（６０７ｍｇ）のＤＣＭ（８．７ｍＬ）中溶液に、トリフルオロ酢酸（２．２ｍＬ）を添加した。反応混合物を室温で３日間撹拌し、次いで真空中で濃縮し、得られた残留物をメタノール（５ｍＬ）中で溶解させた。冷却（０℃）メタノール性溶液に、ヘキサン中２Ｍの（トリメチルシリル）ジアゾメタン（３．６ｍＬ）を、黄色が残存するまで添加した。次いで、酢酸（１０μＬ）を添加し、得られた溶液を真空中で残留物に濃縮した。残留物をシリカゲルクロマトグラフィー（Ａｎａｌｏｇｉｘ  Ｓｕｐｅｒ  Ｆｌａｓｈ  ＳｉＯ２、ＳＦ２５−４０ｇ）により、ＤＣＭ（Ａ）およびＭｅＯＨ（Ｂ）の混合物による勾配溶出（勾配：９９％Ａ：１％Ｂを９０％Ａ：１０％Ｂまで下降させる。）を使用して精製して３−（２−｛２−［２−（３，５−ビス−ヒドロキシメチル］−フェノキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−プロピオン酸メチルエステル（２３２ｍｇ）を生じさせた。ＬＣ／ＭＳ（方法Ａ３）：ＥＳ：ｍ／ｚ３７３（Ｍ＋Ｈ）＋；ｍ／ｚ３９５（Ｍ＋Ｎａ）＋；ＲＴ＝０．５０分
３−（２−｛２−［２−（３，５−ビス−ヒドロキシメチル］−フェノキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−プロピオン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル：
【０１５１】
【化３６】
0005551070.tif 000037
３−（２−｛２−［２−（３，５−ビス−ヒドロキシメチル］−フェノキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−プロピオン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルは、４−（３，５−ビス−ヒドロキシメチル−フェノキシ）−酪酸メチルエステルの調製手順に従って、３−｛２−［２−（２−ブロモ−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−プロピオン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（ＷＯ２００４／０９１５４２）により出発して調製することができる：ＬＣ／ＭＳ（方法Ａ３）ＥＳ：ｍ／ｚ４１５（Ｍ＋Ｈ）＋；ｍ／ｚ４３２（Ｍ＋ＮＨ４）＋；ＲＴ＝０．７５分
【実施例４】
【０１５２】
６−（３，５−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−フェニル）−ヘクサ−５−イン酸Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジルエステル
【０１５３】
【化３７】
0005551070.tif 000038
６−（３，５−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−フェニル）−ヘクサ−５−イン酸Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジルエステルは、４−（３，５−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−フェノキシ）−酪酸Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジルエステルの調製手順に従って、６−（３，５−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−フェニル）−ヘクサ−５−イン酸により出発して調製することができる：ＬＣ／ＭＳ（方法Ａ３）：ＥＳ：ｍ／ｚ８５４（Ｍ＋Ｈ）＋；ＲＴ＝１．２５分
６−（３，５−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−フェニル）−ヘクサ−５−イン酸
【０１５４】
【化３８】
0005551070.tif 000039
６−（３，５−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−フェニル）−ヘクサ−５−イン酸は、４−（３，５−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−フェノキシ）−酪酸の調製手順に従って、６−（３，５−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−フェニル）−ヘクサ−５−イン酸メチルエステルにより出発して調製することができる：ＬＣ／ＭＳ（方法Ａ３）：ＥＳ：ｍ／ｚ  ７５７（Ｍ＋Ｈ）＋；ＲＴ＝０．８９分；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３−ｄ１，δｐｐｍ）：δ＝１．７６（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，６Ｈ）；１．９８（ｍ，２Ｈ）；２．５５（ｍ，４Ｈ）；２．９７（ｍ，４Ｈ）；３．９１（ｍ，２Ｈ）；３．９７（ｓ，６Ｈ）；４．２７（ｍ，４Ｈ）；５．１５（ｄ，Ｊ＝１２．８Ｈｚ，２Ｈ）；５．２１（ｄ，Ｊ＝１２．８Ｈｚ，２Ｈ）；５．６１（ｍ，２Ｈ）；６．８８（ｓ，２Ｈ）；７．４８（ｓ，３Ｈ）；７．５３（ｓ，２Ｈ）；７．６７（ｍ，２Ｈ）
６−（３，５−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−フェニル）−ヘクサ−５−イン酸メチルエステル
【０１５５】
【化３９】
0005551070.tif 000040
６−（３，５−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−フェニル）−ヘクサ−５−イン酸メチルエステルは、４−（３，５−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−フェノキシ）−酪酸メチルエステルの調製手順に従って、６−（３，５−ビス−ヒドロキシメチル−フェニル）−ヘクサ−５−イン酸メチルエステルにより出発して調製することができる：ＬＣ／ＭＳ（方法Ａ３）：ＥＳ：ｍ／ｚ  ７７１（Ｍ＋Ｈ）＋；ＲＴ＝１．００分；１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３−ｄ１，δｐｐｍ）：δ＝１．７５（ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，６Ｈ）；１．９３（ｍ，２Ｈ）；２．５０（ｍ，４Ｈ）；２．９６（ｍ，４Ｈ）；３．６９（ｓ，３Ｈ）；３．９０（ｍ，２Ｈ）；３．９７（ｓ，６Ｈ）；４．２７（ｍ，４Ｈ）；５．１２（ｄ，Ｊ＝１２．３Ｈｚ，２Ｈ）；５．１９（ｄ，Ｊ＝１２．３Ｈｚ，２Ｈ）；５．６１（ｍ，２Ｈ）；６．８１（ｓ，２Ｈ）；７．４３（ｓ，３Ｈ）；７．５４（ｓ，２Ｈ）；７．６４（ｄ，Ｊ＝４．４Ｈｚ，２Ｈ）
６−（３，５−ビス−ヒドロキシメチル−フェニル）−ヘクサ−５−イン酸メチルエステルは、以下の通り調製することができる：
【０１５６】
【化４０】
0005551070.tif 000041
６−［３，５−ビス−（ｔｅｒｔ−ブチル−ジメチル−シリルオキシメチル）−フェニル］−ヘクサ−５−イン酸メチルエステル（１４０ｍｇ）の無水テトラヒドロフラン（０．３ｍＬ）中冷却（０℃）溶液に、ＴＨＦ中１Ｍのフッ化テトラブチルアンモニウム（７１６μＬ）の溶液をわずかに添加した。室温で７５分後、酢酸エチル（２０ｍＬ）を添加し、有機相を水（５ｍＬ）により３回洗浄し、塩化ナトリウムの飽和水溶液（５ｍＬ）により１回洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、真空中で残留物に濃縮した。残留物をシリカゲルクロマトグラフィー（Ｍｅｒｃｋ  ＳｕｐｅｒＶａｒｉｏＦｌａｓｈ  １５ｇカラム、Ｓｉ６０  １５−４０μｍ）により、ヘプタン（Ａ）／酢酸エチル（Ｂ）の混合物による勾配溶出（勾配：５０％Ａ：５０％Ｂを１０％Ａ：９０％Ｂまで下降させる。）を使用して精製して６−（３，５−ビス−ヒドロキシメチル−フェニル）−ヘクサ−５−イン酸メチルエステル（６４．３ｍｇ）を薄黄色油状物として生じさせた。ＬＣ／ＭＳ（方法Ａ３）：ＥＳ：ｍ／ｚ２６３（Ｍ＋Ｈ）＋；ＲＴ＝０．６２分
６−［３，５−ビス−（ｔｅｒｔ−ブチル−ジメチル−シリルオキシメチル）−フェニル］−ヘクサ−５−イン酸メチルエステルは、以下の通り調製することができる
【０１５７】
【化４１】
0005551070.tif 000042
１，３−ビス−ヒドロキシメチル−５−ヨードベンゼン（Ｚｅｎｇ、Ｆ．；Ｚｉｍｍｅｒｍａｎ、Ｓ．Ｃ．Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１９９６、１１８（２２）、５３２６−５３２７頁）（１．７ｇ）のジクロロメタン（１０ｍＬ）中溶液に、トリエチルアミン（３．５９ｍＬ）、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルクロリド（２．９１ｇ）およびＤＭＦ（２ｍＬ）を添加した。１時間後、酢酸エチル（２００ｍＬ）を添加し、有機相を水（５０ｍＬ）により３回洗浄し、塩化ナトリウムの飽和水溶液（５０ｍＬ）により１回洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥させ、真空中で残留物（３．６５ｇ）に濃縮した。前述の残留物（２００ｍｇ）のＤＭＦ（０．９０ｍＬ）中溶液に、ヨウ化銅（Ｉ）（７．７ｍｇ）、ジクロロビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（ＩＩ）（２８．５ｍｇ）、５−ヘキシン酸メチルエステル（１０２．４ｍｇ）およびトリエチルアミン（１１３μＬ）を添加した。４５分後、酢酸エチル（４０ｍＬ）を添加し、有機相を水（１０ｍＬ）により３回洗浄し、塩化ナトリウムの飽和水溶液（１０ｍＬ）により１回洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥させ、真空中で残留物に濃縮した。残留物をシリカゲルクロマトグラフィー（Ｍｅｒｃｋ  ＳｕｐｅｒＶａｒｉｏＦｌａｓｈ  ３０ｇカラム、Ｓｉ６０  １５−４０μｍ）により、ヘプタン（Ａ）／酢酸エチル（Ｂ）の混合物による勾配溶出（勾配：１００％Ａを９０％Ａ：１０％Ｂまで下降させる。）を使用して精製して６−［３，５−ビス−（ｔｅｒｔ−ブチル−ジメチル−シリルオキシメチル）−フェニル］−ヘクサ−５−イン酸メチルエステル（１４５．３ｍｇ）を黄色油状物として生じさせた。ＭＳ（方法Ｃ）：Ｃｌ：ｍ／ｚ  ４９４（Ｍ＋ＮＨ４）＋；１Ｈ  Ｎ．Ｍ．Ｒ．（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，δ（ｐｐｍ）：δ＝０．０７（ｓ，１２Ｈ）；０．８９（ｓ，１８Ｈ）；２．５５−２．６９（ｍ，２Ｈ）；３．６３（ｓ，３Ｈ）；４．６７（ｓ，４Ｈ）；７．１５（ｓ  大，２Ｈ）；７．２８（ｓ  広幅，１Ｈ）
【実施例５】
【０１５８】
３−（２−｛２−［２−（２，６−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−ピリジン−４−イルオキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−プロピオン酸メチルエステル：
【０１５９】
【化４２】
0005551070.tif 000043
３−（２−｛２−［２−（２，６−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−ピリジン−４−イルオキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−プロピオン酸メチルエステルは、４−（３，５−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−フェノキシ）−酪酸メチルエステルの調製手順に従って、３−（２−｛２−［２−（２，６−ビス−ヒドロキシメチル−ピリジン−４−イルオキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−プロピオン酸メチルエステルにより出発して調製することができる：ＬＣ／ＭＳ（方法Ａ３）：ＥＳ：ｍ／ｚ  ８８２（Ｍ＋Ｈ）＋；ｍ／ｚ  ４４１．５（Ｍ＋２Ｈ）２＋／２；ＲＴ＝０．８２分；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３−ｄ１，δｐｐｍ）：δ＝１．７６（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，６Ｈ）；２．５９（ｔ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，２Ｈ）；２．９７（ｍ，４Ｈ）；３．５８−３．７２（ｍ，９Ｈ）；３．７５（ｔ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，２Ｈ）；３．８０−３．９７（ｍ，４Ｈ）；４．００（ｓ，６Ｈ）；４．２０（ｍ  広幅，２Ｈ）；４．２７（ｍ，４Ｈ）；５．３１−５．４２（ｍ，４Ｈ）；５．６１（ｍ  広幅，２Ｈ）；６．８７（ｓ，２Ｈ）；７．０２−７．１５（ｍ  広幅，２Ｈ）；７．５６（ｓ，２Ｈ）；７．６５（ｄ，Ｊ＝４．４Ｈｚ，２Ｈ）。
【０１６０】
３−（２−｛２−［２−（２，６−ビス−ヒドロキシメチル−ピリジン−４−イルオキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−プロピオン酸メチルエステル：
【０１６１】
【化４３】
0005551070.tif 000044
３−（２−｛２−［２−（２，６−ビス−ヒドロキシメチル−ピリジン−４−イルオキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−プロピオン酸メチルエステルは、３−（２−｛２−［２−（３，５−ビス−ヒドロキシメチル］−フェノキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−プロピオン酸メチルエステルの調製手順に従って、３−（２−｛２−［２−（２，６−ビス−ヒドロキシメチル−ピリジン−４−イルオキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−プロピオン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルにより出発して調製することができる：ＬＣ／ＭＳ（方法Ａ３）：ＥＳ：ｍ／ｚ３７４（Ｍ＋Ｈ）＋；ｍ／ｚ４１８（Ｍ＋ＨＣＯ２Ｈ−Ｈ）−；ＲＴ＝０．３１分
３−（２−｛２−［２−（２，６−ビス−ヒドロキシメチル−ピリジン−４−イルオキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−プロピオン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル：
【０１６２】
【化４４】
0005551070.tif 000045
４−（２−｛２−［２−（２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−ピリジン−２，６−ジカルボン酸ジエチルエステル（１．３６ｇ）の絶対エタノール（７２ｍＬ）中溶液に、水素化ホウ素ナトリウム（３０９ｍｇ）および塩化カルシウム（９２１ｍｇ）を添加した。３０分間撹拌した後、水素発生は停止し、反応物を水によりクエンチした。減圧下で濃縮した後、塩化アンモニウムを添加し、水相を酢酸エチルにより３回抽出した。合わせた有機溶液を硫酸マグネシウム上で乾燥させ、真空中で残留物に濃縮した。残留物をシリカゲルクロマトグラフィー（Ａｎａｌｏｇｉｘ  Ｓｕｐｅｒ  Ｆｌａｓｈ  ＳｉＯ２、ＳＦ２５−８０ｇ）により、ＤＣＭ（Ａ）およびＭｅＯＨ（Ｂ）の混合物による勾配溶出（勾配：１００％Ａを９０％Ａ：１０％Ｂまで下降させる。）を使用して精製して３−（２−｛２−［２−（２，６−ビス−ヒドロキシメチル−ピリジン−４−イルオキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−プロピオン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（７２０ｍｇ）を生じさせた：ＬＣ／ＭＳ（方法Ａ３）：ＥＳ：ｍ／ｚ４１６（Ｍ＋Ｈ）＋；ＲＴ＝０．５２分
４−（２−｛２−［２−（２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−ピリジン−２，６−ジカルボン酸ジエチルエステル：
【０１６３】
【化４５】
0005551070.tif 000046
１２−ヒドロキシ−４，７，１０−トリオキサデカン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（１．９１ｍＬ）のＤＣＭ（１２．９ｍＬ）中冷却（０℃）溶液に、トリエチルアミン（１．１３ｍＬ）を添加し、塩化メタンスルホニル（６２２μＬ）を添加した。３時間後、反応混合物を真空中で残留物に濃縮し、次いで酢酸エチル（１３ｍＬ）中で溶解させた。不溶性部分を濾別し、酢酸エチル（７ｍＬ）により２回洗浄し、合わせた有機溶液を真空中で残留物（２．７７ｇ）に濃縮した。１．６４ｇの残留物の乾燥アセトニトリル（１０ｍＬ）中溶液に、ケリダム酸のジエチルエステル（Ｓｃｒｉｍｉｎ、Ｐ．；Ｔｅｃｉｌｌａ、Ｐ．；Ｔｏｎｅｌｌａｔｏ、Ｕ．；Ｖｅｎｄｒａｍｅ、Ｔ．Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．１９８９、５４、５９８８頁）（１ｇ）および炭酸カリウム（２．８８ｇ）を添加した。２４時間還流させた後、不溶性部分を濾別し、酢酸エチルにより洗浄した。次いで、有機相を真空中で残留物に濃縮した。残留物をシリカゲルクロマトグラフィー（Ｍｅｒｃｋ  ＳｕｐｅｒＶａｒｉｏＰｒｅｐ  ２００ｇカラム、Ｓｉ６０  １５−４０μｍ）により、ＤＣＭ（Ａ）およびＭｅＯＨ（Ｂ）の混合物による勾配溶出（勾配：１００％Ａを９７％Ａ：３％Ｂまで下降させる。）を使用して精製して４−（２−｛２−［２−（２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−ピリジン−２，６−ジカルボン酸ジエチルエステル（１．３６ｇ）を生じさせた：ＬＣ／ＭＳ（方法Ａ４）：ＥＳ：ｍ／ｚ５００（Ｍ＋Ｈ）＋；ｍ／ｚ５２２（Ｍ＋Ｎａ）＋；ｍ／ｚ４４４（Ｍ−Ｃ４Ｈ８＋Ｈ）＋；ＲＴ＝４．３２分
【実施例６】
【０１６４】
４−（２，６−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−ピリジン−４−イルオキシ）−酪酸Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジルエステル：
【０１６５】
【化４６】
0005551070.tif 000047
４−（２，６−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−ピリジン−４−イルオキシ）−酪酸Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジルエステルは、４−（３，５−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−フェノキシ）−酪酸Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジルエステルの調製手順に従って、４−（２，６−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−ピリジン−４−イルオキシ）−酪酸により出発して調製することができる：ＬＣ／ＭＳ（方法Ａ３）：ＥＳ：ｍ／ｚ  ８４７（Ｍ＋Ｈ）＋；ｍ／ｚ  ４２４（Ｍ＋２Ｈ）２＋／２；ＲＴ＝０．８０分；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３−ｄ１，δｐｐｍ）：１．７５（ｄ  広幅，Ｊ＝６．６Ｈｚ，６Ｈ）；２．２３（ｍ  広幅，２Ｈ）；２．７６−２．８９（ｍ  広幅，６Ｈ）；２．９７（ｍ  広幅，４Ｈ）；３．９１（ｍ  広幅，２Ｈ）；４．００（ｓ  広幅，６Ｈ）；４．１４（ｍ  広幅，２Ｈ）；４．２７（ｍ  広幅，４Ｈ）；５．２８（ｍ  広幅，４Ｈ）；５．６１（ｍ  広幅，２Ｈ）；６．８７（ｓ  広幅，２Ｈ）；７．０３（ｓ  広幅，２Ｈ）；７．５６（ｓ  広幅，２Ｈ）；７．６５（ｍ  広幅，２Ｈ）
４−（２，６−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−ピリジン−４−イルオキシ）−酪酸塩酸塩：
【０１６６】
【化４７】
0005551070.tif 000048
４−（２，６−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−ピリジン−４−イルオキシ）−酪酸塩酸塩は、４−（３，５−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−フェノキシ）−酪酸の調製手順に従って、４−（２，６−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−ピリジン−４−イルオキシ）−酪酸メチルエステルにより出発して調製することができる：ＬＣ／ＭＳ（方法Ａ３）：ＥＳ：ｍ／ｚ  ７５０（Ｍ＋Ｈ）＋；ｍ／ｚ  ３７５，５（Ｍ＋２Ｈ）２＋／２  ｍ／ｚ  ３３２，５（Ｍ−Ｃ４Ｈ６Ｏ２＋２Ｈ）２＋／２；ＲＴ＝０．７３分；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３−ｄ１，δｐｐｍ）：δ＝１．７５（ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，６Ｈ）；２．０２（ｍ，２Ｈ）；２．４２（ｍ，２Ｈ）；２．９７（ｍ，４Ｈ）；３．８３−４．１４（ｍ，４Ｈ）；４．００（ｓ，６Ｈ）；４．２７（ｍ，４Ｈ）；５．２０−５．４２（ｍ，４Ｈ）；５．６１（ｍ，２Ｈ）；６．８５（ｓ，２Ｈ）；６．９４（ｓ，２Ｈ）；７．５６（ｓ，２Ｈ）；７．６３（ｍ，２Ｈ）
４−（２，６−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−ピリジン−４−イルオキシ）−酪酸メチルエステル：
【０１６７】
【化４８】
0005551070.tif 000049
４−（２，６−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−ピリジン−４−イルオキシ）−酪酸メチルエステルは、４−（３，５−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−フェノキシ）−酪酸メチルエステルの調製手順に従って、４−（２，６−ビス−ヒドロキシメチル−ピリジン−４−イルオキシ）−酪酸メチルエステルにより出発して調製することができる：ＬＣ／ＭＳ（方法Ａ４）：ＥＳ：ｍ／ｚ  ７６４（Ｍ＋Ｈ）＋  ｍ／ｚ  ６６４（Ｍ−Ｃ５Ｈ８Ｏ２＋Ｈ）＋  ｍ／ｚ  ７６２（Ｍ−Ｈ）−  ＲＴ＝３．６４分；１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３−ｄ１，δｐｐｍ）：δ＝１．７６（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，６Ｈ）；２．１２（ｍ，２Ｈ）；２．５０（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，２Ｈ）；２．９７（ｍ，４Ｈ）；３．６８（ｓ，３Ｈ）；３．９０（ｍ，２Ｈ）；４．００（ｓ，６Ｈ）；４．０７（ｍ  広幅，２Ｈ）；４．２７（ｍ，４Ｈ）；５．２９（ｍ  広幅，４Ｈ）；５．６１（ｍ，２Ｈ）；６．８６（ｓ，２Ｈ）；６．９９（ｓ  広幅，２Ｈ）；７．５６（ｓ，２Ｈ）；７．６５（ｄ，Ｊ＝４．４Ｈｚ，２Ｈ）
４−（２，６−ビス−ヒドロキシメチル−ピリジン−４−イルオキシ）−酪酸メチルエステル：
【０１６８】
【化４９】
0005551070.tif 000050
４−（２，６−ビス−ヒドロキシメチル−ピリジン−４−イルオキシ）−酪酸メチルエステルは、３−（２−｛２−［２−（３，５−ビス−ヒドロキシメチル−フェノキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−プロピオン酸メチルエステルの調製手順に従って、４−（２，６−ビス−ヒドロキシメチル−ピリジン−４−イルオキシ）−酪酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルにより出発して調製することができる：ＬＣ／ＭＳ（方法Ａ３）：ＥＳ：ｍ／ｚ２５６（Ｍ＋Ｈ）＋ＲＴ＝０．２５分
４−（２，６−ビス−ヒドロキシメチル−ピリジン−４−イルオキシ）−酪酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル：
【０１６９】
【化５０】
0005551070.tif 000051
４−（２，６−ビス−ヒドロキシメチル−ピリジン−４−イルオキシ）−酪酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルは、３−（２−｛２−［２−（２，６−ビス−ヒドロキシメチル−ピリジン−４−イルオキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−プロピオン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルの調製手順に従って４−（３−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−プロポキシ）−ピリジン−２，６−ジカルボン酸ジエチルエステルにより出発して調製することができる：ＬＣ／ＭＳ（方法Ａ４）：ＥＳ：ｍ／ｚ２９８（Ｍ＋Ｈ）＋；ｍ／ｚ１５６（Ｍ−Ｃ８Ｈ１４Ｏ２＋Ｈ）＋；ＲＴ＝２．４５分
４−（３−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−プロポキシ）−ピリジン−２，６−ジカルボン酸ジエチルエステル：
【０１７０】
【化５１】
0005551070.tif 000052
４−（３−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−プロポキシ）−ピリジン−２，６−ジカルボン酸ジエチルエステルは、４−（２−｛２−［２−（２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−ピリジン−２，６−ジカルボン酸ジエチルエステルの調製手順に従って、４−ブロモ−酪酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルにより出発して調製することができる：ＬＣ／ＭＳ（方法Ａ４）：ＥＳ：ｍ／ｚ３８２（Ｍ＋Ｈ）＋ｍ／ｚ４０４（Ｍ＋Ｎａ）＋ｍ／ｚ７８５（２Ｍ＋Ｎａ）＋ｍ／ｚ２４０（Ｍ−Ｃ８Ｈ１４Ｏ２＋Ｈ）＋ＲＴ＝４．６５分
【実施例７】
【０１７１】
Ｎ−［２−（３，５−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−フェノキシ）−エチル］−Ｎ−メチル−スクシンアミド酸メチルエステル：
【０１７２】
【化５２】
0005551070.tif 000053
Ｎ−［２−（３，５−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−フェノキシ）−エチル］−Ｎ−メチル−スクシンアミド酸メチルエステルは、４−（３，５−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−フェノキシ）−酪酸メチルエステルの調製手順に従って、Ｎ−［２−（３，５−ビス−ヒドロキシメチル−フェノキシ）−エチル］−Ｎ−メチル−スクシンアミド酸メチルエステルにより出発して調製することができる：ＬＣ／ＭＳ（方法Ａ３）：ＥＳ：ｍ／ｚ  ８３４（Ｍ＋Ｈ）＋  ＲＴ＝０．８７分；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３−ｄ１，δｐｐｍ）：δ＝１．７５（ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，６Ｈ）；２．５４−３．２１（ｍ，１１Ｈ）；３．６１−４．１７（ｍ，６Ｈ）；３．６９（ｓ，３Ｈ）；３．９７（ｓ，６Ｈ）；４．２７（ｍ，４Ｈ）；５．１０−５．２１（ｍ，４Ｈ）；５．６１（ｍ，２Ｈ）；６．８２（ｓ，２Ｈ）；６．９１−６．９５（ｍ，２Ｈ）；７．０６−７．１２（ｍ，１Ｈ）；７．５３（ｓ，２Ｈ）；７．６３（ｄ，Ｊ＝４．４Ｈｚ，２Ｈ）
Ｎ−［２−（３，５−ビス−ヒドロキシメチル−フェノキシ）−エチル］−Ｎ−メチル−スクシンアミド酸メチルエステルは、以下の通り調製することができる：
【０１７３】
【化５３】
0005551070.tif 000054
Ｎ−［２−（３，５−ビス−ヒドロキシメチル−フェノキシ）−エチル］−Ｎ−メチル−スクシンアミド酸（２２５ｍｇ）のメタノール（１ｍＬ）中冷却（０℃）溶液に、ヘキサン中２Ｍの（トリメチルシリル）ジアゾメタン（８４０μＬ）を黄色が残存するまで添加した。４０分後、酢酸エチル（５ｍＬ）および酢酸（５０μＬ）を添加し、次いで１分後、炭酸水素ナトリウムの飽和水溶液をｐＨ＝７になるまで添加した。水相を酢酸エチルにより抽出した。合わせた有機層を塩化ナトリウムの飽和水溶液により洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥させ、真空中で残留物に濃縮した。残留物をシリカゲルクロマトグラフィー（Ｍｅｒｃｋ  ＳｕｐｅｒＶａｒｉｏＦｌａｓｈ  ２５ｇカラム、Ｓｉ６０  １５−４０μｍ）により、ＤＣＭ（Ａ）／ＭｅＯＨ（Ｂ）の混合物による勾配溶出（勾配：９８％Ａ：２％Ｂを９０％Ａ：１０％Ｂまで下降させる。）を使用して精製してＮ−［２−（３，５−ビス−ヒドロキシメチル−フェノキシ）−エチル］−Ｎ−メチル−スクシンアミド酸メチルエステル（１０３ｍｇ）を生じさせた。ＬＣ／ＭＳ（方法Ａ３）：ＥＳ：ｍ／ｚ３４８（Ｍ＋Ｎａ）＋；ｍ／ｚ３２６（Ｍ＋Ｈ）＋；ｍ／ｚ３０８（Ｍ−Ｈ２Ｏ＋Ｈ）＋；ＲＴ＝０．４３分
Ｎ−［２−（３，５−ビス−ヒドロキシメチル−フェノキシ）−エチル］−Ｎ−メチル−スクシンアミド酸は、以下の通り調製することができる：
【０１７４】
【化５４】
0005551070.tif 000055
Ｎ−［２−（３，５−ビス−ヒドロキシメチル−フェノキシ）−エチル］−Ｎ−メチル−スクシンアミド酸は、Ｎ−［２−（３，５−ビス−ヒドロキシメチル−フェノキシ）−エチル］−スクシンアミド酸の調製手順に従って、３，５−ビス−ヒドロキシメチル−（２−メチルアミノ−エトキシ）−ベンゼンにより出発して調製することができる：ＬＣ／ＭＳ（方法Ａ３）：ＥＳ：ｍ／ｚ３１２（Ｍ＋Ｈ）＋；ｍ／ｚ２９４（Ｍ−Ｈ２Ｏ＋Ｈ）＋；ｍ／ｚ３１０（Ｍ−Ｈ）−；ＲＴ＝０．３５分
３，５−ビス−ヒドロキシメチル−（２−メチルアミノ−エトキシ）−ベンゼン塩酸塩
【０１７５】
【化５５】
0005551070.tif 000056
１−（２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−メチルアミノ−エトキシ）−３，５−ビス−（ｔｅｒｔ−ブチル−ジメチル−シリルオキシメチル）−ベンゼン（５９０ｍｇ）のジオキサン（４ｍＬ）中溶液に、４Ｎの塩酸のジオキサン（３．３ｍＬ）中溶液を添加した。室温で１５時間後、得られた固体を濾過し、ジオキサンにより洗浄し、真空中で乾燥させて３，５−ビス−ヒドロキシメチル−（２−メチルアミノ−エトキシ）−ベンゼン塩酸塩（２４０ｍｇ）を白色粉末として生じさせた。ＬＣ／ＭＳ（方法Ａ２）：ＥＳ：ｍ／ｚ２１２（Ｍ＋Ｈ）＋；ＲＴ＝０．１４分
１−（２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−メチルアミノ−エトキシ）−３，５−ビス−（ｔｅｒｔ−ブチル−ジメチル−シリルオキシメチル）−ベンゼンは、以下の通り調製することができる：
【０１７６】
【化５６】
0005551070.tif 000057
１−（２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−エトキシ）−３，５−ビス（ｔｅｒｔ−ブチル−ジメチル−シリルオキシメチル）−ベンゼン（２７０ｍｇ）のテトラヒドロフラン（５ｍＬ）中溶液に、ヨードメタン（７０μＬ）を添加し、反応混合物を冷却した（０℃）。冷却溶液に、水素化ナトリウムを添加した（６８ｍｇ）。
【０１７７】
１時間後、温度を室温まで加温しておいた。１６時間後、ＴＨＦおよび水の１：１混合物（２ｍＬ）をわずかに添加し、次いでクエン酸をｐＨ＝２になるまで添加した。水相を酢酸エチルにより３回抽出した。合わせた有機層を塩化ナトリウムの飽和水溶液により洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥させ、真空中で残留物に濃縮した。残留物をシリカゲルクロマトグラフィー（Ｍｅｒｃｋ  ＳｕｐｅｒＶａｒｉｏＦｌａｓｈ  ２５ｇカラム、Ｓｉ６０  １５−４０μｍ）により、ヘプタン（Ａ）／酢酸エチル（Ｂ）の混合物による勾配溶出（勾配：１００％Ａを８５％Ａ：１５％Ｂまで下降させる。）を使用して精製して１−（２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−メチルアミノ−エトキシ）−３，５−ビス（ｔｅｒｔ−ブチル−ジメチル−シリルオキシメチル）−ベンゼン（２２０ｍｇ）を生じさせた：ＬＣ／ＭＳ（方法Ａ２）：ＥＳ：ｍ／ｚ５６２（Ｍ＋Ｎａ）＋；ｍ／ｚ３０８（Ｍ＋Ｈ−Ｃ５Ｈ８Ｏ２−ＯＳｉＣ６Ｈ１６）＋；ＲＴ＝１．５０分
１−（２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−エトキシ）−３，５−ビス（ｔｅｒｔ−ブチル−ジメチル−シリルオキシメチル）−ベンゼンは、以下の通り調製することができる：
【０１７８】
【化５７】
0005551070.tif 000058
１−（２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−エトキシ）−３，５−ビス−（ヒドロキシメチル）−ベンゼン（６００ｍｇ）のＤＭＦ（８ｍＬ）中冷却（０℃）溶液に、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルクロロシラン（９１３ｍｇ）およびトリエチルアミン（９３６μＬ）を添加した。１８時間後、水を添加し、水相を酢酸エチルにより２回抽出した。合わせた有機層を塩化ナトリウムの飽和水溶液により洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥させ、真空中で濃縮して１−（２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−エトキシ）−３，５−ビス（ｔｅｒｔ−ブチル−ジメチル−シリルオキシメチル）−ベンゼン（１ｇ）を生じさせた：ＬＣ／ＭＳ（方法Ａ２）：ＥＳ：ｍ／ｚ５４８（Ｍ＋Ｎａ）＋；ｍ／ｚ２９４（Ｍ＋Ｈ−Ｃ６Ｈ８Ｏ２−ＯＳｉＣ６Ｈ１６）＋；ＲＴ＝１．４５分
【実施例８】
【０１７９】
４−（３，５−ビス−［（Ｓ）−２−メチリデン−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−フェニル）プロパン酸Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジルエステル（化合物１０）
【０１８０】
【化５８】
0005551070.tif 000059
【０１８１】
【化５９】
0005551070.tif 000060
【０１８２】
化合物２：水素化アルミニウムリチウム２．１９ｇ、５４．８ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（５０ｍＬ）中懸濁液に、５−ブロモイソフタル酸ジメチル（９．９８ｇ、３６．５ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１００ｍＬ）中溶液を０℃で１時間かけて添加した。添加完了後、混合物を室温で２時間撹拌した。このとき、１５０ｍＬのＴＨＦを添加した。混合物を０℃に再冷却し、飽和水性ＮａＣｌによりクエンチした。白色沈殿物を濾別し、固体を追加のＴＨＦ（１００ｍＬ）によりさらに洗浄した。合わせたＴＨＦ溶液をＮａ２ＳＯ４により乾燥させ、濾過し、濃縮した。シリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（９５：５のＣＨ２Ｃｌ２／ＣＨ３ＯＨ）によりさらに精製することにより、２を白色固体（７．４２ｇ、９５％）として提供した。
【０１８３】
化合物３：化合物２（３．３６ｇ、１５．５ｍｍｏｌ）を、無水ＣＨ２Ｃｌ２（３１ｍＬ）中で懸濁した。ＴＢＳＣｌ（５．１４ｇ、３４．１ｍｍｏｌ）を添加し、次いでイミダゾール（３．１６ｇ、４６．５ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を室温で１時間撹拌した。白色沈殿物を濾別し、濾液をロータベイパー（ｒｏｔａｖａｐｏｒ）により濃縮した。得られた残留物をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、９７：３のヘキサン／ＥｔＯＡｃ）により精製して３を無色油状物（６．１５ｇ、８９％）として生じさせた：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ＝０．０８１（ｓ，１２Ｈ）、０．９２（ｓ，１８Ｈ）、４．６７（ｓ，４Ｈ）、７．１８（ｓ，１Ｈ）、７．３１（ｓ，２Ｈ）。
【０１８４】
化合物４：化合物３（４．１６ｇ、９．３６ｍｍｏｌ）、アクリル酸メチル（１．３ｍＬ、１４．０ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ＯＡｃ）２（１０５ｍｇ、０．４７ｍｍｏｌ）、Ｐ（ｏ−トリル）３（２８５ｍｇ、０．９４ｍｍｏｌ）およびＥｔ３Ｎ（９ｍＬ）を１９ｍＬのＣＨ３ＣＮ中で含有するフラスコを、アルゴン雰囲気下で１６時間加熱還流した。室温に冷却した後、氷Ｈ２Ｏ（２０ｍＬ）を添加した。混合物をＥｔＯＡｃ（３×４０ｍＬ）により抽出した。合わせた有機層を１ＮのＨＣｌ、ブラインにより洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濃縮した。残留物をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、９７：３のヘキサン／ＥｔＯＡｃ）によりさらに精製して４を無色油状物（３．９１ｇ、９３％）として生じさせた：１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ０．０８９（ｓ，１２Ｈ）、０．９３（ｓ，１８Ｈ）、３．７９（ｓ，３Ｈ）、４．７２（ｓ，４Ｈ）、６．４１（ｄ，Ｊ＝１６Ｈｚ，１Ｈ）、７．２９（ｓ，１Ｈ）、７．３４（ｓ，２Ｈ）、７．６８（ｄ，Ｊ＝１６Ｈｚ，１Ｈ）。ＥＩＭＳ  ｍ／ｚ  ４７３（［Ｍ］＋＋Ｎａ）。
【０１８５】
化合物５：４（２．５４ｇ、５．６３ｍｍｏｌ）およびＰｄ／Ｃ（５６３ｍｇ）の５５ｍＬのＥｔＯＡｃ中混合物を、大気圧下で３０分間水素化した。次いで、溶液をセライトに導通させ、固体を追加のＥｔＯＡｃ（２５ｍＬ）により洗浄した。合わせたＥｔＯＡｃ溶液を濃縮して５を無色油状物（２．５５ｇ、９９＋％）として提供し、この無色油状物は次の段階にとって十分純粋であった。１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ＝０．０６７（ｓ，１２Ｈ）、０．９１（ｓ，１８Ｈ）、２．６０（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ）、２．９２（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ）、３．６５（ｓ，３Ｈ）、４．６８（ｓ，４Ｈ）、７．００（ｓ，２Ｈ）、７．１２（ｓ，１Ｈ）。ＥＩＭＳ  ｍ／ｚ  ４７５（［Ｍ］＋＋Ｎａ）。
【０１８６】
化合物６：５（１．４８ｇ、３．２８ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（３３ｍＬ）中溶液に、８．２ｍＬのＴＢＡＦのＴＨＦ中１Ｍ溶液を０℃で添加した。この温度で１時間撹拌した後、飽和水性ＮＨ４Ｃｌ（３０ｍＬ）を混合物に添加した。混合物をＥｔＯＡｃ（３×４０ｍＬ）により抽出した。合わせた有機層をブラインにより洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濃縮した。残留物をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、９５：５のＤＣＭ／ＣＨ３ＯＨ）によりさらに精製することにより、６を無色油状物（６２５ｍｇ、８５％）として生じさせ、この無色油状物は冷凍庫内で静置させた後に凝固した。１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ＝２．５９（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ）、２．９１（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ）、３．６３（ｓ，３Ｈ）、４．６１（ｓ，４Ｈ）、７．０８（ｓ，２Ｈ）、７．１６（ｓ，１Ｈ）。
【０１８７】
化合物７：ジオール６（５９ｍｇ、０．２６ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭ（２．６ｍＬ）中で溶解させた。この溶液を０℃に冷却し、Ｅｔ３Ｎ（８２μＬ、０．５８ｍｍｏｌ）およびＭｓＣｌ（４６μＬ、０．５８ｍｍｏｌ）により処理した。混合物を０℃で３０分間撹拌し、氷Ｈ２Ｏ（２ｍＬ）によりクエンチした。層を分離し、水層をＤＣＭ（３×２ｍＬ）によりさらに抽出した。合わせたＤＣＭ層をブラインにより洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４により乾燥させ、濃縮した。高真空ポンプ下でさらに乾燥させることにより７を薄黄色油状物として提供し、この薄黄色油状物をさらに精製することなく次の段階に直接使用した。
【０１８８】
化合物８：ＰＢＤモノマー（１６５ｍｇ、０．６４ｍｍｏｌ）および７（０．２６ｍｍｏｌと想定）のＤＭＦ（２．７ｍＬ）中混合物に、Ｋ２ＣＯ３（１４７ｍｇ、１．０６ｍｍｏｌ）、ＫＩ（２２ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）およびＢｕ４ＮＩ（４９ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）を連続的に添加した。混合物をアルゴン下で室温で７時間撹拌した。次いで、ＤＭＦを高真空により除去した。残留物をＤＣＭおよび水に配し、層を分離した。水層をＤＣＭ（３×３ｍＬ）によりさらに抽出した。合わせたＤＣＭ層をブラインにより洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濃縮した。残留物をシリカゲルクロマトグラフィー（２５：１、ＣＨ２Ｃｌ２／ＣＨ３ＯＨ）を精製することにより、８を薄黄色ガラス様固体（１０１ｍｇ、５４％）として提供した。ＥＩＭＳ  ｍ／ｚ７６３（［Ｍ］＋＋Ｎａ＋２Ｈ２Ｏ）、７４５（［Ｍ］＋＋Ｎａ＋Ｈ２Ｏ）、７２７（［Ｍ］＋＋Ｎａ）。
【０１８９】
化合物９：メチルエステル８（１６ｍｇ、０．０２３ｍｍｏｌ）のＴＨＦ−ＭｅＯＨ−Ｈ２Ｏ（３：１：１、０．４５ｍＬ）中撹拌溶液に、１Ｍ水性ＬｉＯＨ（０．０２５ｍＬ、１．１当量）を室温で添加し、反応をＴＬＣにより追跡した。３．５時間後、混合物をＨ２Ｏ（５ｍＬ）により希釈し、１ＮのＨＣｌによりｐＨを２に調節した。次いで、混合物をＤＣＭ（３×５ｍＬ）により抽出した。合わせたＤＣＭ層をブラインにより洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濃縮した。シリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィー（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ：ＡｃＯＨ＝１００：４：０．５）によりさらに精製することにより、所望の酸９（８．２ｍｇ、６０％ｂｒｓｍ）（ＥＩＭＳ  ｍ／ｚ７４９（［Ｍ］＋＋Ｎａ＋２Ｈ２Ｏ）、７３１（［Ｍ］＋＋Ｎａ＋Ｈ２Ｏ）、７１３（［Ｍ］＋＋Ｎａ））；と少量（約２ｍｇ）のメチルエステル８を提供した。
【０１９０】
化合物１０：酸９（８．２ｍｇ、０．０１１ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（１ｍＬ）中溶液に、ポリ−ＤＣＣ（３８ｍｇ、０．０５９ｍｍｏｌ）およびＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）（２．７ｍｇ、０．０２４ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を室温で２時間撹拌し、次いでセライトの小ベッドに通して濾過し、ＤＣＭにより洗浄し、濃縮した。得られた残留物をフラッシュクロマトグラフィー（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ／１００：３）により精製して所望生成物１０（７ｍｇ、８１％）を得た。ＥＩＭＳ  ｍ／ｚ８７４（［Ｍ］＋＋Ｎａ＋２ＭｅＯＨ）、８４２（［Ｍ］＋＋Ｎａ＋ＭｅＯＨ）、８１０（［Ｍ］＋＋Ｎａ）。
【実施例９】
【０１９１】
（２−｛２−［２−（２−｛３−［３，５−ビス−（７−メトキシ−２−メチレン−５−オキソ−２，３，５，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−８−イルオキシメチル）−フェニル］−プロポキシ｝−エトキシ）エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−酢酸Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジルエステル（化合物２０）
【０１９２】
【化６０】
0005551070.tif 000061
【０１９３】
化合物１２：水性ＮａＯＨ（５０％、６．９ｍＬ）をテトラエチレングリコール（６８．０８ｇ、３５０ｍｍｏｌ）に添加した。混合物を室温で２時間撹拌し、次いでヨウ化アリル（８ｍＬ、８７．６ｍｍｏｌ）を添加した。さらに２４時間撹拌した後、混合物をＨ２ＯおよびＥｔＯＡｃ（５０／５０ｍＬ）に配した。水層をＥｔＯＡｃ（５×３０ｍＬ）によりさらに抽出した。合わせたＥｔＯＡｃ層をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濃縮した。残留物のフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、ヘキサン：ＥｔＯＡｃ  ４：６から０：１）により、１２を無色油状物として提供した：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ＝２．４４（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、３．６３−３．７１（ｍ，１６Ｈ）、３．９９−４．０１（ｍ，２Ｈ）、５．１３−５．１７（ｍ，１Ｈ）、５．２２−５．２７（ｍ，１Ｈ）、５．８４−５．９２（ｍ，１Ｈ）；１３ＣＮＭＲδ６１．８、６９．４、７０．４、７０．５９、７０．６１、７０．６３、７２．２、７２．５、１１７．０、１３４．８。ＥＩＭＳ  ｍ／ｚ  ２５７（［Ｍ］＋＋Ｎａ）。
【０１９４】
化合物１３：ＮａＨ（８９ｍｇ、２．２ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（２．５ｍＬ）中懸濁液に、１２（３７０ｍｇ、１．５８ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（５ｍＬ）中溶液をアルゴン下で０℃で添加した。混合物をこの温度で３０分間撹拌し、次いで室温でさらに３０分間撹拌した。混合物を０℃に再冷却し、ブロモ酢酸メチル（０．２９ｍＬ、３．１６ｍｍｏｌ）を滴加した。０℃で１時間撹拌した後、氷浴を除去し、撹拌を室温でさらに２４時間継続した。反応物をセライトに通して濾過し、濾液を濃縮した。残留物をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、１：１のヘキサン／ＥｔＯＡｃ）によりさらに精製することにより１３を淡黄色油状物（２２０ｍｇ）として生じさせた：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ＝３．５７−３．７４（ｍ，１９Ｈ）、３．９８−４．０（ｍ，２Ｈ）、４．２６（ｓ，２Ｈ）、５．１５（ｄ，Ｊ＝１０．４Ｈｚ，１Ｈ）、５．２４（ｄｄ，Ｊ＝１６，１．６Ｈｚ，１Ｈ）、５．８４−５．９３（ｍ，１Ｈ）；１３Ｃ  ＮＭＲ  δ＝５１．７、６８．６、６９．４、７０．５６、７０．６０、７０．６２、７０．９、７２．２、１１７．０、１３４．８、１７０．９。ＥＩＭＳ  ｍ／ｚ  ３２９（［Ｍ］＋＋Ｎａ）。
【０１９５】
化合物１４：化合物３（１．３０ｇ、２．９２ｍｍｏｌ）、１３（０．９８６ｇ、３．２２０ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ＯＡｃ）２（３３ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）、Ｐ（ｏ−トリル）３（８９ｍｇ、０．２９ｍｍｏｌ）およびＥｔ３Ｎ（２ｍＬ）を３０ｍＬのＣＨ３ＣＮ中で含有するフラスコを、アルゴン雰囲気下で１２時間加熱還流した。室温に冷却した後、アセトニトリルを蒸発により除去し、酢酸エチルを添加し（４０ｍｌ）、混合物をセライトに導通させ、酢酸エチルによりリンスし、濃縮した。残留物をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、６：４のヘキサン／ＥｔＯＡｃ）によりさらに精製して１４を無色油状物（１．０２ｇ）として生じさせた：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ＝０．０７６（ｓ，１２Ｈ）、０．９２（ｓ，１８Ｈ）、３．６１−３．７２（ｍ，１９Ｈ）、４．１４（ｓ，２Ｈ）、４．１５−４．１７（ｍ，２Ｈ）、４．６９（ｓ，４Ｈ）、６．２３−６．２８（ｍ，１Ｈ）、６．５７（ｄ，Ｊ＝１６．０Ｈｚ，１Ｈ）、７．１６（ｓ，１Ｈ）、７．１９（ｓ，２Ｈ）；１３Ｃ  ＮＭＲδ＝−５．２、１４．２、１８．４、２６．０、５１．７、６４．９、６８．６、６９．４、７０．５７、７０．６１、７０．６４、７０．７、７０．９、７１．９、１２２．８、１２３．２、１２５．９、１３２．８、１３６．５、１４１．７、１７０．９。ＥＩＭＳ  ｍ／ｚ  ６９３（［Ｍ］＋＋Ｎａ）。
【０１９６】
化合物１５：１４（０．０６２ｇ、０．０９２ｍｍｏｌ）およびＰｄ／Ｃ（９ｍｇ）の２．５ｍＬのＥｔＯＡｃ中混合物を、大気圧下で３０分間水素化した。次いで、溶液をセライトに導通させ、固体を追加のＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ）により洗浄した。合わせたＥｔＯＡｃ溶液を濃縮して１５を無色油状物として提供し、この無色油状物をさらに精製することなく使用した。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ＝０．０７２（ｓ，１２Ｈ）、０．９２（ｓ，１８Ｈ）、１．８７−１．８９（ｍ，２Ｈ）、２．６４（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ）、３．４３−３．７０（ｍ，２１Ｈ）、４．１４（ｓ，２Ｈ）、４．６８（ｓ，４Ｈ）、６．９８（ｓ，２Ｈ）、７．１０（ｓ，１Ｈ）。ＥＩＭＳ  ｍ／ｚ  ６９５（［Ｍ］＋＋Ｎａ）。
【０１９７】
化合物１６：前段階からの１５の無水ＴＨＦ（１．８ｍＬ）中溶液に、０．２３ｍＬのＴＢＡＦのＴＨＦ中１Ｍ溶液を０℃で添加した。この温度で１時間撹拌した後、飽和水性ＮＨ４Ｃｌ（２ｍＬ）を混合物に添加した。混合物をＥｔＯＡｃ（３×５ｍＬ）により抽出した。合わせた有機層をブラインにより洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濃縮した。残留物をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、９５：５のＣＨ２Ｃｌ２／ＣＨ３ＯＨ）をさらに精製することにより、１６を無色油状物（２７ｍｇ、８５％）として生じさせた。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ＝１．８６−１．８９（ｍ，２Ｈ）、２．６６（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ）、３．４０（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ）、３．５０−３．７０（ｍ，１９Ｈ）、４．１０（ｓ，２Ｈ）、４．６１（ｓ，４Ｈ）、７．０９（ｓ，２Ｈ）、７．１３（ｓ，１Ｈ）。ＥＩＭＳ  ｍ／ｚ  ４６７（［Ｍ］＋＋Ｎａ）。
【０１９８】
化合物１７：ジオール１６（２６．８ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（１．２ｍＬ）中で溶解させた。溶液を０℃に冷却し、Ｅｔ３Ｎ（１８．５μＬ、０．１３ｍｍｏｌ）およびＭｓＣｌ（１０．３μＬ、０．１３ｍｍｏｌ）により処理した。混合物を０℃で３０分間撹拌し、氷Ｈ２Ｏ（２ｍＬ）によりクエンチした。層を分離し、水層をＤＣＭ（３×２ｍＬ）によりさらに抽出した。合わせたＤＣＭ層をブラインにより洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４により乾燥させ、濃縮した。高真空ポンプ下でさらに乾燥させることにより、１７を薄黄色油状物として提供し、この薄黄色油状物をさらに精製することなく次の段階に直接使用した。ＥＩＭＳ  ｍ／ｚ６２３．１（［Ｍ］＋＋Ｎａ）。
【０１９９】
化合物１８：ＰＢＤモノマー（４０ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）および前段階からの１７のＤＭＦ（１．５７ｍＬ）中混合物に、Ｋ２ＣＯ３（２５ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）およびＫＩ（１０ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ）を連続的に添加した。混合物をアルゴン下で室温で２０時間撹拌した。次いで、ＤＭＦを高真空により除去した。残留物をＤＣＭおよび水に配し、層を分離した。水層をＤＣＭ（３×３ｍＬ）によりさらに抽出した。合わせたＤＣＭ層をブラインにより洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濃縮した。残留物をシリカゲルクロマトグラフィー（２５：１、ＤＣＭ／ＣＨ３ＯＨ）を精製することにより、１８を薄黄色ガラス様固体として提供した。ＥＩＭＳ  ｍ／ｚ１０１１．５（［Ｍ］＋＋Ｎａ＋２ＣＨ３ＯＨ）、９７９．５（［Ｍ］＋＋Ｎａ＋ＣＨ３ＯＨ）、９４７．５（［Ｍ］＋＋Ｎａ）。
【０２００】
化合物１９：メチルエステル１８（１６ｍｇ、０．０１７ｍｍｏｌ）のＴＨＦ−ＭｅＯＨ−Ｈ２Ｏ（３：１：１、０．７ｍＬ）中撹拌溶液に、１Ｍの水性ＬｉＯＨ（０．０１９ｍＬ、１．１当量）を室温で添加し、反応をＴＬＣ（薄層クロマトグラフィー）により追跡した。５時間後、混合物をＨ２Ｏ（５ｍＬ）により希釈し、１ＮのＨＣｌによりｐＨを２に調節した。次いで、混合物をＤＣＭ（３×５ｍＬ）により抽出した。合わせたＤＣＭ層をブラインにより洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濃縮した。シリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィー（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ：ＡｃＯＨ＝１００：４：０．５）によりさらに精製することにより、所望の酸１９を提供した。ＥＩＭＳ  ｍ／ｚ９３３．４（［Ｍ］＋＋Ｎａ）
化合物２０：酸１９（５．９ｍｇ、０．００６ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（１．０ｍＬ）中溶液に、ＥＤＣ（２ｍｇ、０．００９７ｍｍｏｌ）およびＮＨＳ（１．０ｍｇ、０．００８４ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を室温で３時間撹拌し、次いでセライトの小ベッドに通して濾過し、ＤＣＭにより洗浄し、濃縮して所望生成物１０を得、この生成物をさらに精製することなく材料として使用し、この生成物はシリカ精製時に分解することを見出した。ＥＩＭＳ  ｍ／ｚ１０３０．４（［Ｍ］＋＋Ｎａ）。
【実施例１０】
【０２０１】
（３−｛２−［２−（２−｛３−［３，５−ビス−（７−メトキシ−２−メチレン−５−オキソ−２，３，５，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−８−イルオキシメチル）−フェニル］−プロポキシ｝−エトキシ）エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−プロピオン酸Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジルエステル（化合物３１）
【０２０２】
【化６１】
0005551070.tif 000062
【０２０３】
化合物２１：テトラエチレングリコール（１６２ｍＬ、９４０ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（５００ｍＬ）中溶液に、ナトリウム（２１５ｍｇ、９．４ｍｍｏｌ）を添加した。ナトリウムを溶解させるとき、アクリル酸ｔｅｒｔ−ブチル（４５ｍＬ、３１０ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を室温で２０時間撹拌し、８ｍＬの１ＮのＨＣｌにより中和した。溶媒を除去した後、残留物をブラインおよびＥｔＯＡｃに配した。水層をＥｔＯＡｃによりさらに抽出した。合わせた有機層をブラインにより洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濃縮した。得られた残留物をシリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝４：６）により精製して所望のエステル２１を提供した。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ＝１．４１（ｓ，９Ｈ）、２．３４（ｂｒ．Ｓ，１Ｈ）、２．４７（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ）、３．５６−３．７１（ｍ，１８Ｈ）。ＥＩＭＳ  ｍ／ｚ  ３４５（［Ｍ］＋＋Ｎａ）。
【０２０４】
化合物２２：硫酸水素テトラブチルアンモニウム（１．２７ｇ、３．７５ｍｍｏｌ）およびＮａＯＨ（２２５ｍｇ、５．６３ｍｍｏｌ）のＨ２Ｏ（７ｍＬ）中溶液を、２１（１．２０ｇ、３．７５ｍｍｏｌ）および臭化アリル（０．４８ｍＬ、５．６３ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１４ｍＬ）中混合物に添加した。この２相系を４５分間激しく撹拌した。水層を分離し、ＤＣＭにより３回抽出した。合わせたＤＣＭ層を濃縮した。Ｅｔ２Ｏ（１５ｍＬ）を添加することにより沈澱する臭化テトラブチルアンモニウムを得、この沈澱する臭化テトラブチルアンモニウムを濾過により分離した。濾液をブリアンにより洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濃縮した。残留物をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、１：１のヘキサン／ＥｔＯＡｃ）によりさらに精製することにより、２２を無色油状物として生じさせた。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ＝１．４２（ｓ，９Ｈ）、２．４７（ｔ，Ｊ  ６．４Ｈｚ，２Ｈ）、３．５６−３．７０（ｍ，１８Ｈ）、４．００（ｍ，２Ｈ）、５．１５（ｄｑ，Ｊ＝６．０，１．２Ｈｚ，１Ｈ）、５．２５（ｄｑ，Ｊ＝１６，１．６Ｈｚ，１Ｈ）、５．８４−５．９４（ｍ，１Ｈ）。ＥＩＭＳ  ｍ／ｚ  ３８５．２（［Ｍ］＋＋Ｎａ）。
【０２０５】
化合物２３：化合物２２（４７８ｍｇ、１．３２ｍｍｏｌ）のトリフルオロ酢酸（９ｍＬ）中溶液を、室温で１．５時間撹拌し、このとき全ての出発材料が消費された。ＴＦＡを真空下で除去し、残留物をトルエンを用いてさらに乾燥させた。粗製生成物を次の段階に直接使用した。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ＝２．６０（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ）、３．５６−３．７０（ｍ，１８Ｈ）、４．０１（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ）、５．１６（ｄｄ，Ｊ＝６．４，１．２Ｈｚ，１Ｈ）、５．２５（ｄｄ，Ｊ＝１６，１．６Ｈｚ，１Ｈ）、５．８４−５．９４（ｍ，１Ｈ）、ＥＩＭＳ  ｍ／ｚ  ３２９．２（［Ｍ］＋＋Ｎａ）。
【０２０６】
化合物２４：酸２３のＤＭＦ（６．６ｍＬ）中溶液を、Ｃｓ２ＣＯ３（４５１ｍｇ、１．３８ｍｍｏｌ）およびＭｅＩ（９０μＬ、１．４５ｍｍｏｌ）により処理した。混合物を室温で２時間撹拌した。次いで、ＤＭＦを高真空下で蒸発させた。残留物をＥｔＯＡｃ中で懸濁させ、固体を濾別した。濾液を濃縮した。残留物をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、９７：３のヘキサン／ＥｔＯＡｃ）によりさらに精製することにより２４を無色油状物として生じさせた。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ＝２．５８（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ）、３．５６−３．７０（ｍ，１８Ｈ）、４．００（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ）、５．１４（ｄｄ，Ｊ＝６．４，１．２Ｈｚ，１Ｈ）、５．２４（ｄｄ，Ｊ＝１６，１．６Ｈｚ，１Ｈ）、５．８４−５．９４（ｍ，１Ｈ）。ＥＩＭＳ  ｍ／ｚ  ３４３．２（［Ｍ］＋＋Ｎａ）。
【０２０７】
化合物２５：化合物３（０．０６６ｇ、０．１５ｍｍｏｌ）、２４（０．０５ｇ、０．１６ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ＯＡｃ）２（１．７ｍｇ、０．００７４ｍｍｏｌ）、Ｐ（ｏ−トリル）３（４．５ｍｇ、０．０１５ｍｍｏｌ）およびＥｔ３Ｎ（０．１ｍＬ）を３ｍＬのＣＨ３ＣＮ中で含有するフラスコを、アルゴン雰囲気下で８時間加熱還流した。室温に冷却した後、アセトニトリルを蒸発により除去し、酢酸エチルを添加し（４０ｍｌ）、混合物をセライトに導通させ、酢酸エチルによりリンスした。合わせた有機層をブラインにより洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濃縮した。残留物をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、６：４のヘキサン／ＥｔＯＡｃ）によりさらに精製して２５を無色油状物として生じさせた：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ＝０．０７６（ｓ，１２Ｈ）、０．９２（ｓ，１８Ｈ）、２．５７（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ）、３．５７−３．６８（ｍ，２０Ｈ）、３．７３（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ）、４．１４（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ）、４．６９（ｓ，４Ｈ）、６．２３−６．２９（ｍ，１Ｈ）、６．５６（ｄ，Ｊ＝１６．０Ｈｚ，１Ｈ）、７．１６（ｓ，２Ｈ）、７．１９（ｓ，１Ｈ）。ＥＩＭＳ  ｍ／ｚ  ７０７．４（［Ｍ］＋＋Ｎａ）。
【０２０８】
化合物２６：２５（０．２１６ｇ、０．３１ｍｍｏｌ）およびＰｄ／Ｃ（３２ｍｇ）の６．３ｍＬのＥｔＯＡｃ中混合物を、大気圧下で３０分間水素化した。次いで、溶液をセライトに導通させ、固体を追加のＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ）により洗浄した。合わせたＥｔＯＡｃ溶液を濃縮して２６を無色油状物として提供し、この無色油状物をさらに精製することなく使用した。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ＝０．０７１（ｓ，１２Ｈ）、０．９１（ｓ，１８Ｈ）、１．８７（ｍ，２Ｈ）、２．５８（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ）、２．６４（ｔ，２Ｈ）、３．４４（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ）、３．５４−３．６７（ｍ，２０Ｈ）、３．７２（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ）、４．６８（ｓ，４Ｈ）、６．９８（ｓ，２Ｈ）、７．１０（ｓ，１Ｈ）ＥＩＭＳ  ｍ／ｚ  ７０９．４（［Ｍ］＋＋Ｎａ）。
【０２０９】
化合物２７：前段階からの２６の無水ＴＨＦ（３ｍＬ）中溶液に、０．３８ｍＬのＴＢＡＦのＴＨＦ中１Ｍ溶液を０℃で添加した。この温度で１時間撹拌した後、飽和水性ＮＨ４Ｃｌ（２ｍＬ）を混合物に添加した。混合物をＥｔＯＡｃ（３×５ｍＬ）により抽出した。合わせた有機層をブラインにより洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濃縮した。残留物をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、９５：５のＣＨ２Ｃｌ２／ＣＨ３ＯＨ）によりさらに精製することにより２７を無色油状物として生じさせた。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ＝１．８７（ｍ，２Ｈ）、２．５６（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ）、２．６９（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ）、３．４２（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ）、３．５４−３．６７（ｍ，２０Ｈ）、３．７０（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ）、４．６４（ｓ，４Ｈ）、７．１２（ｓ，２Ｈ）、７．１６（ｓ，１Ｈ）。ＥＩＭＳ  ｍ／ｚ  ４８１．３（［Ｍ］＋＋Ｎａ）。
【０２１０】
化合物２８：ジオール２７（５４ｍｇ、０．１２６ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（２．４ｍＬ）中で溶解させた。溶液を０℃に冷却し、Ｅｔ３Ｎ（４１μＬ、０．２９ｍｍｏｌ）およびＭｓＣｌ（２３μＬ、０．２９ｍｍｏｌ）により処理した。混合物を０℃で３０分間撹拌し、氷Ｈ２Ｏ（２ｍＬ）によりクエンチした。層を分離し、水層をＣＨ２Ｃｌ２（３×２ｍＬ）によりさらに抽出した。合わせたＤＣＭ層をブラインにより洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４により乾燥させ、濃縮した。高真空ポンプ下でさらに乾燥させることにより、２８を薄黄色油状物として提供し、この薄黄色油状物をさらに精製することなく次の段階に直接使用した。ＥＩＭＳ  ｍ／ｚ６３７．２（［Ｍ］＋＋Ｎａ）。
【０２１１】
化合物２９：ＰＢＤモノマー（７６ｍｇ、０．２９ｍｍｏｌ）および前段階からの２８のＤＭＦ（２．９ｍＬ）中混合物に、Ｋ２ＣＯ３（４９ｍｇ、０．３５ｍｍｏｌ）およびＫＩ（２０ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）を連続的に添加した。混合物をアルゴン下で室温で２０時間撹拌した。次いで、ＤＭＦを高真空により除去した。残留物をＤＣＭおよび水に配し、層を分離した。水層をＤＣＭ（３×３ｍＬ）によりさらに抽出した。合わせたＤＣＭ層をブラインにより洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濃縮した。残留物をシリカゲルクロマトグラフィー（１００：３、ＤＣＭ／ＣＨ３ＯＨ）により精製することにより、２９を薄黄色ガラス様固体として提供した。ＥＩＭＳ  ｍ／ｚ１０２５．６（［Ｍ］＋＋Ｎａ＋２ＣＨ３ＯＨ）、９９３．５（［Ｍ］＋＋Ｎａ＋ＣＨ３ＯＨ）、９６１．５（［Ｍ］＋＋Ｎａ）。
【０２１２】
化合物３０：メチルエステル２９（１１．８ｍｇ、０．０１２ｍｍｏｌ）のＴＨＦ−ＭｅＯＨ−Ｈ２Ｏ（３：１：１、０．５ｍＬ）中撹拌溶液に、１Ｍの水性ＬｉＯＨ（０．０１４ｍＬ、１．１当量）を室温で添加し、反応をＴＬＣにより追跡した。５時間後、混合物をＡｃＯＨ（０．０１４ｍｍｏｌ）によりクエンチし、揮発物を蒸発させた。シリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィー（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝９５：５）によりさらに精製することにより、所望の酸３０を提供した。ＥＩＭＳ  ｍ／ｚ９４７．５（［Ｍ］＋＋Ｎａ）。
【０２１３】
化合物３１：酸３０（４．６ｍｇ、０．００５ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１．０ｍＬ）中溶液に、カップリング剤としてのＥＤＣ（１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド）（１．４ｍｇ、０．００７５ｍｍｏｌ）およびＮＨＳ（０．７４ｍｇ、０．００６５ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を室温で一晩撹拌し、次いでセライトの小ベッドに通して濾過し、ＤＣＭにより洗浄し、濃縮して所望生成物３１を得た。シリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィー（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝１００：３）によりさらに精製することにより、所望のＮＨＳエステル３１を提供した。ＥＩＭＳ  ｍ／ｚ１０２２．５（［Ｍ］＋＋Ｎａ）。
【実施例１１】
【０２１４】
ｈｕＭｙ９−６−４−（３，５−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−フェノキシ）−ブチリルコンジュゲート
０．０５Ｍのリン酸カリウムおよび０．０５Ｍの塩化ナトリウムを含有する水性緩衝液（ｐＨ８）中の濃度６．４ｍｇ／ｍＬのｈｕＭｙ９−６抗体の１．４５ｍＬ溶液を、７．５倍モル過剰の９．５ｍＭの実施例１からの４−（３，５−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−フェノキシ）酪酸Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジルエステルのジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）中溶液により、ｈｕＭｙ９−６の最終濃度が５ｍｇ／ｍＬになり、緩衝液中のＤＭＡの濃度が２０％になるように処理する。反応混合物を室温で１９５分間撹拌し、Ｍｉｌｌｅｘ（登録商標）−ＨＶ  ０．４５μＭ（ＰＶＤＦ  Ｄｕｒａｐｏｒｅ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ＃ＳＬＨＶ０１３ＳＬ）上で濾過し、次いで、０．０１０Ｍのリン酸塩、０．１４０Ｍの塩化ナトリウムを含有する水性緩衝液（ｐＨ６．５）中に事前に平衡化されたＳｕｐｅｒｄｅｘ（商標）２００プレップグレードゲル濾過カラム（Ｈｉｌｏａｄ（商標）１６／６０Ｃｏｌｕｍｎ  ＧＥ＃１７−１０６９−０１）にロードする。コンジュゲートされた抗体を含有するフラクションを回収し、プールし、Ｖｉｖａｓｐｉｎ２（１００００ＭＷＣＯ  ＨＹ  Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ  ＃ＶＳ０２Ｈ０２）上で濃縮して生成物（１．８ｍＬ）を得る。最終コンジュゲートを、４−（３，５−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−フェノキシ）酪酸メチルエステルについて測定された吸光係数（ε３１９ｎｍ＝９０８７Ｍ−１ｃｍ−１およびε２８０ｎｍ＝１２１６６Ｍ−１ｃｍ−１）およびｈｕＭｙ９−６抗体について測定された吸光係数（ε２８０ｎｍ＝２０６５３９Ｍ−１ｃｍ−１）を使用して分光光度的にアッセイする。抗体（１．６ｍｇ／ｍＬ）１分子当たり平均２．１個の４−（３，５−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−フェノキシ）−ブチリル部分が結合した。
【実施例１２】
【０２１５】
ｈｕＢ４−４−（３，５−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−フェノキシ）−ブチリルコンジュゲート
０．０５Ｍのリン酸カリウムおよび０．０５Ｍの塩化ナトリウムを含有する水性緩衝液（ｐＨ８）中の濃度８ｍｇ／ｍＬのｈｕＢ４抗体の３．４ｍＬ溶液を、８倍モル過剰の１１．５ｍＭの実施例１からの４−（３，５−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−フェノキシ）酪酸Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジルエステルのＤＭＡ中溶液により、ｈｕＢ４の最終濃度が５．６ｍｇ／ｍＬになり、緩衝液中のＤＭＡの濃度が２０％になるように処理する。反応混合物を室温で３時間撹拌し、Ｍｉｌｌｅｘ（登録商標）−ＨＶ  ０．４５μＭ（ＰＶＤＦ  Ｄｕｒａｐｏｒｅ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ＃ＳＬＨＶ０１３ＳＬ）上で濾過し、次いで、０．０１０Ｍのリン酸塩、０．１４０Ｍの塩化ナトリウムを含有する水性緩衝液（ｐＨ６．５）中に事前に平衡化されたＳｕｐｅｒｄｅｘ（商標）２００プレップグレードゲル濾過カラム（Ｈｉｌｏａｄ（商標）１６／６０Ｃｏｌｕｍｎ  ＧＥ＃１７−１０６９−０１）にロードする。コンジュゲートされた抗体を含有するフラクションを回収し、プールし、Ｖｉｖａｓｐｉｎ１５Ｒ（１００００ＭＷＣＯ  ＨＹ  Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ  ＃ＶＳ０２Ｈ０２）上で濃縮して生成物（５ｍＬ）を得る。最終コンジュゲートを、４−（３，５−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−フェノキシ）酪酸メチルエステルについて測定された吸光係数（ε３１９ｎｍ＝９０８７Ｍ−１ｃｍ−１およびε２８０ｎｍ＝１２１６６Ｍ−１ｃｍ−１）およびｈｕＢ４抗体について測定された吸光係数（ε２８０ｎｍ＝２２２９６０Ｍ−１ｃｍ−１）を使用して分光光度的にアッセイする。抗体（１．４９ｍｇ／ｍＬ）１分子当たり平均４．４８個の４−（３，５−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−フェノキシ）−ブチリル部分が結合した。
【実施例１３】
【０２１６】
ｈｕ２Ｈ１１−４−（３，５−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−フェノキシ）−ブチリルコンジュゲート
０．０５Ｍのリン酸カリウムおよび０．０５Ｍの塩化ナトリウムを含有する水性緩衝液（ｐＨ８）中の濃度５．１ｍｇ／ｍＬのｈｕ２Ｈ１１（ＷＯ２００８／０１０１０１を参照のこと；ＡＴＣＣによりアクセッション番号ＰＴＡ−７６６２で登録）抗体の３．４５ｍＬ溶液を、８倍モル過剰の１０．５ｍＭの実施例１からの４−（３，５−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−フェノキシ）酪酸Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジルエステルのＤＭＡ中溶液により、ｈｕ２Ｈ１１の最終濃度が４．３ｍｇ／ｍＬになり、緩衝液中のＤＭＡの濃度が２０％になるように処理する。反応混合物を室温で３時間撹拌し、Ｍｉｌｌｅｘ（登録商標）−ＨＶ０．４５μＭ（ＰＶＤＦ  Ｄｕｒａｐｏｒｅ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ＃ＳＬＨＶ０１３ＳＬ）上で濾過し、次いで、０．０１０Ｍのリン酸塩、０．１４０Ｍの塩化ナトリウムを含有する水性緩衝液（ｐＨ６．５）中に事前に平衡化されたＳｕｐｅｒｄｅｘ（商標）２００プレップグレードゲル濾過カラム（Ｈｉｌｏａｄ（商標）１６／６０Ｃｏｌｕｍｎ  ＧＥ＃１７−１０６９−０１）にロードする。コンジュゲートされた抗体を含有するフラクションを回収し、プールし、Ｖｉｖａｓｐｉｎ１５Ｒ（１００００ＭＷＣＯ  ＨＹ  Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ  ＃ＶＳ０２Ｈ０２）上で濃縮して生成物（２．２ｍＬ）を得る。最終コンジュゲートを、４−（３，５−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−フェノキシ）酪酸メチルエステルについて測定された吸光係数（ε３１９ｎｍ＝９０８７Ｍ−１ｃｍ−１およびε２８０ｎｍ＝１２１６６Ｍ−１ｃｍ−１）およびｈｕ２Ｈ１１抗体について測定された吸光係数（ε２８０ｎｍ＝２０８３８０Ｍ−１ｃｍ−１）を使用して分光光度的にアッセイする。抗体（１．５５ｍｇ／ｍＬ）１分子当たり平均３．７４個の４−（３，５−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−フェノキシ）−ブチリル部分が結合した。
【実施例１４】
【０２１７】
ｈｕＭｙ９−６−３−（２−｛２−［２−（３，５−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−フェノキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−プロピオニルコンジュゲート
０．０５ＭのＮ−（２−ヒドロキシエチル）−ピペラジン−Ｎ’−２−エタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）、０．０５Ｍの塩化ナトリウムおよび２ｍＭのエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）を含有する水性緩衝液（ｐＨ８）中の濃度７．２ｍｇ／ｍＬのｈｕＭｙ９−６抗体の８．２ｍＬ溶液を、１０倍モル過剰の１０．４ｍＭの実施例３からの３−（２−｛２−［２−（３，５−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−フェノキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−プロピオン酸Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジルエステルのＤＭＡ中溶液により、ｈｕＭｙ９−６の最終濃度が３ｍｇ／ｍＬになり、緩衝液中のＤＭＡの濃度が２０％になるように処理する。反応混合物を室温で３時間撹拌し、Ｍｉｌｌｅｘ（登録商標）−ＳＶ５μＭ（ＰＶＤＦ  Ｄｕｒａｐｏｒｅ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ＃ＳＬＳＶ０２５ＳＬ）上で濾過し、次いで、０．０１０Ｍのリン酸塩、０．１４０Ｍの塩化ナトリウムを含有する水性緩衝液（ｐＨ６．５）中に事前に平衡化されたＳｕｐｅｒｄｅｘ（商標）２００プレップグレードゲル濾過カラム（Ｈｉｌｏａｄ（商標）２６／６０Ｃｏｌｕｍｎ  ＧＥ＃１７−１０７１−０１）にロードする。コンジュゲートされた抗体を含有するフラクションを回収し、プールし、Ａｍｉｃｏｎ  Ｕｌｔｒａ−１５（Ｕｌｔｒａｃｅｌ  １０ｋ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  ＃ＵＦＣ９０１０２４）上で濃縮して生成物（７ｍＬ）を得る。最終コンジュゲートを、３−（２−｛２−［２−（３，５−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−フェノキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−プロピオン酸メチルエステルについて測定された吸光係数（ε３１９ｎｍ＝７５６６Ｍ−１ｃｍ−１およびε２８０ｎｍ＝７０７８Ｍ−１ｃｍ−１）およびｈｕＭｙ９−６抗体について測定された吸光係数（ε２８０ｎｍ＝２０６５３９Ｍ−１ｃｍ−１）を使用して分光光度的にアッセイする。抗体（３．４４ｍｇ／ｍＬ）１分子当たり平均４．８０個の３−（２−｛２−［２−（３，５−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−フェノキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−プロピオニル部分が結合した。
【実施例１５】
【０２１８】
ｈｕ２Ｈ１１−３−（２−｛２−［２−（３，５−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−フェノキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−プロピオニルコンジュゲート
０．０５ＭのＮ−（２−ヒドロキシエチル）−ピペラジン−Ｎ’−２−エタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）、０．０５Ｍの塩化ナトリウムおよび２ｍＭのエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）を含有する水性緩衝液（ｐＨ８）中の濃度４．７ｍｇ／ｍＬのｈｕ２Ｈ１１抗体の１３．２ｍＬ溶液を、グリコフロールおよび１０倍モル過剰の１０．６ｍＭの実施例３からの３−（２−｛２−［２−（３，５−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−フェノキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−プロピオン酸Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジルエステルのＤＭＡ中溶液により、ｈｕ２Ｈ１１の最終濃度が３ｍｇ／ｍＬになり、緩衝液中のグリコフロールの濃度が１０％になり、緩衝液中のＤＭＡの濃度が２０％になるように処理する。反応混合物を室温で３時間撹拌し、Ｍｉｌｌｅｘ（登録商標）−ＳＶ５μＭ（ＰＶＤＦ  Ｄｕｒａｐｏｒｅ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ＃ＳＬＳＶ０２５ＳＬ）上で濾過し、次いで、０．０１０Ｍのリン酸塩、０．１４０Ｍの塩化ナトリウムを含有する水性緩衝液（ｐＨ６．５）中に事前に平衡化されたＳｕｐｅｒｄｅｘ（商標）２００プレップグレードゲル濾過カラム（Ｈｉｌｏａｄ（商標）２６／６０Ｃｏｌｕｍｎ  ＧＥ＃１７−１０７１−０１）にロードする。コンジュゲートされた抗体を含有するフラクションを回収し、プールし、Ａｍｉｃｏｎ  Ｕｌｔｒａ−１５（Ｕｌｔｒａｃｅｌ  １０ｋ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  ＃ＵＦＣ９０１０２４）上で濃縮して生成物（３．６ｍＬ）を得る。最終コンジュゲートを、３−（２−｛２−［２−（３，５−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−フェノキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−プロピオン酸メチルエステルについて測定された吸光係数（ε３１９ｎｍ＝７５６６Ｍ−１ｃｍ−１およびε２８０ｎｍ＝７０７８Ｍ−１ｃｍ−１）およびｈｕ２Ｈ１１抗体について測定された吸光係数（ε２８０ｎｍ＝２０８３８０Ｍ−１ｃｍ−１）を使用して分光光度的にアッセイする。抗体（１．３３ｍｇ／ｍＬ）１分子当たり平均４．０８個の３−（２−｛２−［２−（３，５−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−フェノキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−プロピオニル部分が結合した。
【実施例１６】
【０２１９】
ｈｕ２Ｈ１１−６−（３，５−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−フェニル）−ヘクサ−５−イノイルコンジュゲート
０．０５Ｍのリン酸カリウムおよび０．０５Ｍの塩化ナトリウムを含有する水性緩衝液（ｐＨ８）中の濃度３．２ｍｇ／ｍＬのｈｕ２Ｈ１１抗体の０．９５ｍＬ溶液を、８倍モル過剰の１０．５ｍＭの実施例４からの６−（３，５−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−フェニル）−ヘクサ−５−イン酸Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジルエステルのＤＭＡ中溶液により、ｈｕ２Ｈ１１の最終濃度が２．５ｍｇ／ｍＬになり、緩衝液中のＤＭＡの濃度が２０％になるように処理する。反応混合物を室温で４時間撹拌し、Ｍｉｌｌｅｘ（登録商標）−ＨＶ０．４５μＭ（ＰＶＤＦ  Ｄｕｒａｐｏｒｅ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ＃ＳＬＨＶ０１３ＳＬ）上で濾過し、次いで、０．０１０Ｍのリン酸塩、０．１４０Ｍの塩化ナトリウムを含有する水性緩衝液（ｐＨ６．５）中に事前に平衡化されたＳｕｐｅｒｄｅｘ（商標）２００プレップグレードゲル濾過カラム（Ｈｉｌｏａｄ（商標）１６／６０Ｃｏｌｕｍｎ  ＧＥ＃１７−１０６９−０１）にロードする。コンジュゲートされた抗体を含有するフラクションを回収し、プールし、Ａｍｉｃｏｎ  Ｕｌｔｒａ−４（Ｕｌｔｒａｃｅｌ  １０ｋ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ＃ＵＦＣ８０１０９６）上で濃縮して生成物（２７５μＬ）を得る。最終コンジュゲートを、６−（３，５−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−フェニル）−ヘクサ−５−イン酸メチルエステルについて測定された吸光係数（ε３１９＝１３５９４Ｍ−１ｃｍ−１およびε２８０＝１９４１６Ｍ−１ｃｍ−１）およびｈｕ２Ｈ１１抗体について測定された吸光係数（ε２８０ｎｍ＝２０８３８０Ｍ−１ｃｍ−１）を使用して分光光度的にアッセイする。抗体（０．４８ｍｇ／ｍＬ）１分子当たり平均１．７５個の６−（３，５−ビス−［（Ｓ）−２−エタ−（Ｅ）−イリデン−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−ピロロ［２，１ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン−８−イルオキシメチル］−フェニル）−ヘクサ−５−イノイル部分が結合した。
【実施例１７】
【０２２０】
ＩＧＰ−０８−ＮＨＳ−原液の調製
ＩＧＰ−０８−ＮＨＳ（実施例８の化合物１０）の溶液を、分子量７８７．８１に基づく０．００５ＭのＤＭＡ中原液に合わせて新たに作製する。原液を、３２０ｎｍにおいて測定された基準吸光係数（ε３２０＝９１３７Ｍ−１ｃｍ−１）を使用して分光光度的にアッセイする。
【実施例１８】
【０２２１】
ｈｕＭｙ９−６−ＩＧＰ−０８
ＣＤ３３抗原に結合するｈｕＭｙ９−６抗体をＰＢＤ誘導体のコンジュゲーションのために選択する。０．０５ＭのＮ−（２−ヒドロキシエチル）−ピペラジン−Ｎ’−２−エタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）および２ｍＭのエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）を含有する水性緩衝液（ｐＨ８）中の濃度５ｍｇ／ｍＬのｈｕＭｙ９−６抗体の溶液を、６倍モル過剰のＩＧＰ−０８−ＮＨＳ（実施例８の化合物１０）のＤＭＡ中溶液により、緩衝液中のＤＭＡの最終濃度が２０％になるように処理する。反応混合物を室温で１２０分間撹拌し、次いで、０．０１Ｍのクエン酸ナトリウム、０．１３５Ｍの塩化ナトリウムを含有する水性緩衝液（ｐＨ５．５）中に事前に平衡化されたＳｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ２５ゲル濾過カラム（ＨｉＰｒｅｐ（商標）２６／１０  Ｄｅｓａｌｔｉｎｇ  Ｃｏｌｕｍｎ  ＧＥ＃１７−５０８７−０１）にロードする。コンジュゲートされた抗体を含有するフラクションを回収し、プールして生成物を得る。プールされた試料を同一の溶出緩衝液（０．０１Ｍのクエン酸ナトリウム、０．１３５Ｍの塩化ナトリウム、ｐＨ５．５）に対して一晩透析して生成物をさらに精製する。最終コンジュゲートを、実施例８の化合物８について測定された吸光係数（ε３２０＝９１３７Ｍ−１ｃｍ−１およびε２８０＝７７４３Ｍ−１ｃｍ−１）およびｈｕＭｙ９−６抗体について測定された吸光係数（ε２８０ｎｍ＝２０６４６０Ｍ−１ｃｍ−１）を使用して分光光度的にアッセイする。抗体１分子当たり平均４．５個のＰＢＤ分子（実施例８の化合物９）が結合した。
【実施例１９】
【０２２２】
ｈｕＢ４−ＩＧＰ−０８
ヒトリンパ腫細胞表面上で優先的に発現されるＣＤ１９抗原に結合するｈｕ抗Ｂ４抗体をＰＢＤ誘導体のコンジュゲーションのために選択する。０．０５Ｍのリン酸カリウム、０．０５Ｍの塩化ナトリウムおよび２ｍＭのエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）を含有する水性緩衝液（ｐＨ７．１）中の濃度８ｍｇ／ｍＬのｈｕＢ４抗体の溶液を、５倍モル過剰のＩＧＰ−０８−ＮＨＳ（実施例８の化合物１０）のジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）中溶液により、緩衝液中のＤＭＡの最終濃度が２０％になるように処理する。反応混合物を室温で７０分間撹拌し、次いで、０．０１０Ｍのリン酸塩、０．１４０Ｍの塩化ナトリウムを含有する水性緩衝液（ｐＨ６．５）中に事前に平衡化されたＳｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ２５ゲル濾過カラム（ＮＡＰ（商標）Ｃｏｌｕｍｎｓ、ＧＥ＃１７−０８５２−０２）にロードする。コンジュゲートされた抗体を含有するフラクションを回収し、プールして生成物を得る。プールされた試料を同一の溶出緩衝液（０．０１０Ｍのリン酸塩、０．１４０Ｍの塩化ナトリウム、ｐＨ６．５）に対して一晩透析して生成物をさらに精製する。最終コンジュゲートを、実施例８の化合物８について測定された吸光係数（ε３２０＝９１３７Ｍ−１ｃｍ−１およびε２８０＝７７４３Ｍ−１ｃｍ−１）およびｈｕＢ４抗体について測定された吸光係数（ε２８０ｎｍ＝２２２９６０Ｍ−１ｃｍ−１）を使用して分光光度的にアッセイする。抗体１分子当たり平均３．１個のＰＢＤ分子（実施例８の化合物９）が結合した。
【実施例２０】
【０２２３】
ＩＧＰ−１３−ＮＨＳ原液の調製
ＩＧＰ−１３−ＮＨＳ（実施例１０の化合物３１）の溶液を、分子量１０２２．１に基づく０．００６２ＭのＤＭＡ中原液に合わせて新たに作製する。原液を、３２０ｎｍにおいて測定された基準吸光係数（ε３２０＝９１３７Ｍ−１ｃｍ−１）を使用して分光光度的にアッセイする。
【実施例２１】
【０２２４】
ｈｕ２Ｈ１１−ＩＧＰ−１３
ＥｐＣＡＭ抗原に結合するｈｕ２Ｈ１１抗体をＰＢＤ誘導体のコンジュゲーションのために選択する。０．０５ＭのＮ−（２−ヒドロキシエチル）−ピペラジン−Ｎ’−２−エタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）および２ｍＭのエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）を含有する水性緩衝液（ｐＨ８）中の濃度５ｍｇ／ｍＬのｈｕ２Ｈ１１抗体の溶液を、８倍モル過剰のＩＧＰ−１３−ＮＨＳ（実施例１０の化合物３１）のＤＭＡ中溶液により、緩衝液中のＤＭＡの最終濃度が１５％になるように処理する。反応混合物を室温で１２０分間撹拌し、次いで、０．０１Ｍのクエン酸ナトリウム、０．１３５Ｍの塩化ナトリウムを含有する水性緩衝液（ｐＨ５．５）中に事前に平衡化されたＳｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ２５ゲル濾過カラム（ＨｉＰｒｅｐ（商標）２６／１０  Ｄｅｓａｌｔｉｎｇ  Ｃｏｌｕｍｎ  ＧＥ＃１７−５０８７−０１）にロードする。コンジュゲートされた抗体を含有するフラクションを回収し、プールして生成物を得る。プールされた試料を同一の溶出緩衝液（０．０１Ｍのクエン酸ナトリウム、０．１３５Ｍの塩化ナトリウム、ｐＨ５．５）に対して一晩透析して生成物をさらに精製する。最終コンジュゲートを、実施例１０の化合物２９について測定された吸光係数（ε３２０＝９１３７Ｍ−１ｃｍ−１およびε２８０＝７７４３Ｍ−１ｃｍ−１）およびｈｕ２Ｈ１１抗体について測定された吸光係数（ε２８０ｎｍ＝２１５５２５Ｍ−１ｃｍ−１）を使用して分光光度的にアッセイする。抗体１分子当たり平均４．７個のＰＢＤ分子（実施例１０の化合物３１）が結合した。
【実施例２２】
【０２２５】
結合アッセイ
抗原を発現するＲａｍｏｓ細胞上での抗Ｂ４抗体およびこのトマイマイシンコンジュゲートの相対的結合親和性を、蛍光ベースアッセイを使用して測定する。出発濃度１ａ１０−７Ｍの抗体−トマイマイシンコンジュゲートおよびネイキッド抗体を９６ウェル丸底プレートに添加し、各濃度について２連で存在するように３倍段階希釈を使用して漸増させる。Ｒａｍｏｓ細胞は、ウェル当たり５００００個の細胞で、種々の濃度の抗体またはコンジュゲートを含有する各ウェルおよび対照ウェルに添加する。プレートを氷上で３時間温置する。温置期間の後、プレート内の細胞を洗浄し、抗Ｂ４のようなヒト化ＩｇＧに結合する蛍光標識二次抗体を添加し、プレートを氷上で１時間温置する。温置期間の後、プレートを再度洗浄し、細胞を１％ホルムアルデヒド／ＰＢＳ溶液により固定する。プレートの各ウェル内の蛍光を、Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ  ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒ蛍光分析器を使用して読み取る。データを、最高濃度の抗体またはコンジュゲートにおいて得られる最大蛍光のパーセントとしてプロットする。
【実施例２３】
【０２２６】
トマイマイシン誘導体またはトマイマイシン誘導体コンジュゲートのインビトロ効力および特異性（生存アッセイ）
使用すべき一般的プロトコール
遊離トマイマイシン誘導体またはトマイマイシン誘導体コンジュゲートの試料を９６ウェル平底組織培養プレートに添加し、１×１０−１２Ｍから３×１０−７Ｍに及ぶ段階希釈を使用して漸増させる。抗原陽性腫瘍細胞または抗原陰性腫瘍細胞を、各細胞系につき各薬物濃度について３連の試料が存在するようにウェルに添加する。プレートを５％ＣＯ２の雰囲気内で３７℃で４日間温置する。
【０２２７】
温置期間の終盤に、２０μｌのテトラゾリウム試薬ＷＳＴ−８（２−（２−メトキシ−ニトロフェニル）−３−（４−ニトロフェニル）−５−（２，４−ジスルホフェニル）−２−テトラゾリウム一ナトリウム塩）を各ウェルに添加し、プレートを２時間インキュベーターに戻す。次いで、プレートの各ウェル内の吸光度を、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓプレートリーダーを使用して４５０ｎｍで計測する。各濃度のトマイマイシン誘導体またはコンジュゲートにおける細胞の生存率をプロットする。
【０２２８】
ＭＯＬＴ−４、ＢＪＡＢ、ＨＬ６０／ＱＣ、ＨＬ６０／ＡＴＣＣおよびＲａｍｏｓ細胞系に対する本発明のコンジュゲートと対比した本化合物の細胞毒性およびこれらの特異性を試験した。結果を図１、２、３、６および８に示す。
【実施例２４】
【０２２９】
クローン原性アッセイ
使用すべき一般的手順
ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞を２個の別個の６ウェルプレート中でウェル当たり３０００個の細胞でプレートし；ＰＣ−３およびＳＫ−ＭＥＬ−２８細胞を２個の別個のプレート中でウェル当たり２０００個の細胞でプレートした。１種以上の試験品を添加して各プレートにウェル当たり０、５×１０−１３、５×１０−１２、５×１０−１１、５×１０−１０および５×１０−９Ｍ（または同様の投与量範囲）の最終濃度を与える。例えば、細胞を１ｍｌでプレートする場合、１ｍｌの２×濃度の試験化合物またはコンジュゲートを適切なウェルに添加して所望の最終濃度を２ｍｌで与える。試験品の最終溶液を細胞系と同一の媒体中で作製し；したがってコンジュゲートの異なる希釈をそれぞれの異なる細胞系について行わなければならなかった。プレートを３７℃で５％ＣＯ２のインキュベーター内に配置する。細胞増殖を追跡し、「０」（対照）ウェル内の細胞がコロニーを形成するがコンフルエントでないとき（これらの細胞系について通常７日間）、上澄みを吸引により除去した。細胞をＰＢＳ（リン酸緩衝溶液）により１回洗浄し、上澄みを吸引した。各ウェルに、ウェル当たり０．５ｍｌの０．１％クリスタルバイオレット／１０％ホルマリン／ＰＢＳを添加した。プレートを室温で１０−１５分間温置した。上澄みを吸引し、ウェルを蒸留Ｈ２Ｏにより３回洗浄し、次いで空気乾燥させた。各ウェル内のコロニーをカウントし、それぞれの投与されたウェル内のコロニー数を「０」ウェル内のコロニー数で割って生存率を得た。次いで、ＩＣ５０値をデータから算出した。
【０２３０】
実施例に開示の化合物およびコンジュゲート分子は、＜１から１００００ｐＭのＩＣ５０を示した（種々の細胞系についての具体値については付属の図面および表Ｉを参照のこと。）。
【０２３１】
【表１】
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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