(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
デオキシリボ核酸からなり、直径が１ｎｍ乃至１００μｍの細孔が設けられた多孔質体。
【請求項２】
前記デオキシリボ核酸がカルシウムイオン、マグネシウムイオン、アルキル基の炭素数が６乃至１２の第四級アンモニウムイオン又は紫外線照射により架橋されていることを特徴とする請求項１に記載の多孔質体。
【請求項３】
カルシウムイオン、マグネシウムイオン、アルキル基の炭素数が６乃至１２の第四級アンモニウムイオン又は紫外線照射により架橋されたデオキシリボ核酸からなり、直径が１ｎｍ乃至１００μｍの細孔が設けられた多孔質体と、
前記多孔質体の前記細孔内に配置されたコラーゲン
とを備えることを特徴とする細胞培養膜。
【請求項４】
デオキシリボ核酸及びエタノール溶解性高分子を混合し、混合物を製造するステップと、
前記混合物に含まれるエタノール溶解性前記高分子をエタノールで溶解し、前記デオキシリボ核酸からなり、直径が１ｎｍ乃至１００μｍの細孔が設けられた多孔質体を形成するステップ
とを含むことを特徴とする多孔質体の製造方法。
【請求項５】
前記エタノール溶解性高分子がポリ（Ｎ−イソプロピルアクリルアミド）であることを特徴とする請求項４に記載の多孔質体の製造方法。
【請求項６】
前記多孔質体に含まれる前記デオキシリボ核酸を、カルシウムイオンでイオン架橋するステップを更に含むことを特徴とする請求項４又は５に記載の多孔質体の製造方法。
【請求項７】
前記多孔質体に含まれる前記デオキシリボ核酸を、マグネシウムイオンでイオン架橋するステップを更に含むことを特徴とする請求項４又は５に記載の多孔質体の製造方法。
【請求項８】
前記多孔質体に含まれる前記デオキシリボ核酸に紫外線を照射し、前記デオキシリボ核酸を架橋するステップを更に含むことを特徴とする請求項４又は５に記載の多孔質体の製造方法。
【請求項９】
前記多孔質体に含まれる前記デオキシリボ核酸を、アルキル基の炭素数が６乃至１２である第四級アンモニウムイオンでイオン架橋するステップを更に含むことを特徴とする請求項４又は５に記載の多孔質体の製造方法。
【請求項１０】
デオキシリボ核酸及びエタノール溶解性高分子を混合し、混合物を製造するステップと、
前記混合物に含まれる前記エタノール溶解性高分子をエタノールで溶解し、前記デオキシリボ核酸からなり、直径が１ｎｍ乃至１００μｍの細孔が設けられた多孔質体を形成するステップと、
前記多孔質体に含まれる前記デオキシリボ核酸を、カルシウムイオン、マグネシウムイオン、アルキル基の炭素数が６乃至１２の第四級アンモニウムイオン、又は紫外線照射により架橋するステップと、
前記多孔質体にコラーゲンを含浸させるステップ
とを含むことを特徴とする細胞培養膜の製造方法。
【請求項１１】
前記アルコール溶解性高分子がポリ（Ｎ−イソプロピルアクリルアミド）であることを特徴とする請求項１０に記載の細胞培養膜の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明はデオキシリボ核酸を利用する材料に関し、特に多孔質体、細胞培養膜、多孔質体の製造方法及び細胞培養膜の製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
デオキシリボ核酸(DNA)は鮭の白子に約10%含まれている。鮭の白子は食材に用いられないためほとんど廃棄されており、環境問題となっている。したがって天然資源であるDNAを産業資材の材料として活用することが望まれている。DNAは極めて大きな分子量を有するため、溶媒キャスト法等によってフィルム化することが可能である（例えば、特許文献1参照。）。しかし、DNAを材料とする多孔質体を製造するのは困難であった。例えばDNAと発泡性材料を混合し、加熱又は化学処理することによりDNAからなる多孔質体を製造しようとすると、100℃以上の加熱工程や、酸性又はアルカリ性環境下での化学処理工程で、DNAの二重螺旋構造が変性したり、DNAが分解されてしまうという問題があった。
【特許文献１】特開平8-239398号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
本発明は、天然資源であるDNAを利用する多孔質体、細胞培養膜、多孔質体の製造方法及び細胞培養膜の製造方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
本発明の第1の特徴は、デオキシリボ核酸からなり、直径が1nm乃至100μmの細孔が設けられた多孔質体であることを要旨とする。
【０００５】
本発明の第2の特徴は、（イ）架橋されたデオキシリボ核酸からなり、直径が1nm乃至100μmの細孔が設けられた多孔質体と、（ロ）多孔質体の細孔内に配置されたコラーゲンとを備える細胞培養膜であることを要旨とする。
【０００６】
本発明の第3の特徴は、（イ）デオキシリボ核酸及びアルコール溶解性高分子を混合し、混合物を製造するステップと、（ロ）混合物に含まれるアルコール溶解性高分子をアルコールで溶解し、デオキシリボ核酸からなる多孔質体を形成するステップとを含む多孔質体の製造方法であることを要旨とする。
【０００７】
本発明の第4の特徴は、（イ）デオキシリボ核酸及びアルコール溶解性高分子を混合し、混合物を製造するステップと、（ロ）混合物に含まれるアルコール溶解性高分子をアルコールで溶解し、デオキシリボ核酸からなる多孔質体を形成するステップと、（ハ）多孔質体に含まれるデオキシリボ核酸を架橋するステップと、（ニ）多孔質体にコラーゲンを含浸させるステップとを含む細胞培養膜の製造方法であることを要旨とする。
【発明の効果】
【０００８】
本発明によれば、天然資源であるDNAを利用する多孔質体、細胞培養膜、多孔質体の製造方法及び細胞培養膜の製造方法を提供可能である。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００９】
以下に本発明の実施の形態を説明する。以下の図面の記載において、同一又は類似の部分には同一又は類似の符号で表している。但し、図面は模式的なものである。したがって、具体的な寸法等は以下の説明を照らし合わせて判断するべきものである。また、図面相互間においても互いの寸法の関係や比率が異なる部分が含まれていることは勿論である。
【００１０】
（第1の実施の形態）
第1の実施の形態に係る多孔質体は、デオキシリボ核酸(DNA)からなり、直径が1nm乃至100μmの細孔が設けられている。なお細孔の直径は、走査型電子顕微鏡(SEM)で測定された値である。次に図1に示すフローチャートを用いて、第1の実施の形態に係る多孔質体の製造方法について説明する。
【００１１】
(a) ステップS100で鮭の白子又はホタテ貝のウロ等をホモジナイザーで均質化する。次に、均質化された鮭の白子又はホタテ貝のウロをろ過し、第1のろ過液を得る。ステップS101で第1のろ過液にプロテアーゼ等のタンパク質分解酵素を加え、第1のろ過液に含まれるタンパク質を分解する。その後、ステップS102で第1のろ過液のpHを調整し、ステップS103で第1のろ過液に含まれるタンパク質を除去する。
【００１２】
(b) ステップS104で第1のろ過液をカーボン処理する。ステップS105で第1のろ過液をろ過し、第2のろ過液を得る。ステップS106で第2のろ過液にエタノールを添加し、精製されたDNAと1価のカチオンの塩であるDNAのナトリウム塩を析出させる。その後DNAのナトリウム塩を乾燥させる。なおDNAは、1本鎖でも2本鎖でもよい。DNAの分子量は、例えば100kDaから10,000kDaである。以下の実施例においては、平均分子量が6,600kDaで、純度が90%以上の高純度DNAを使用する。なおステップS100乃至ステップS106を省略し、市販のDNA（日本化学飼料株式会社製等）を使用してもよい。
【００１３】
(c) ステップS200で1gのDNAのナトリウム塩を100mlの純水に溶解し、DNA水溶液を調整する。ステップS201で、約20℃のDNA水溶液をかき混ぜながら、DNAと相容するアルコール溶解性の高分子として分子量が200kDaのポリ（N-イソプロピルアクリルアミド）(PNIPAAm: poly(N-isopropyl acryl amide))をDNA水溶液に1g加え、PNIPAAmをDNA水溶液に溶解させ、DNAとPNIPAAmの混合物の水溶液を得る。
【００１４】
(d) ステップS202でDNAとPNIPAAmの混合物の水溶液をフッ素樹脂コートされたガラス製のシャーレの底面等の平面上に流し込む。次に混合物の水溶液を室温で真空乾燥させることにより、DNAとPNIPAAmの混合物からなる透明なフィルムがシャーレの底面に形成される。フィルムにおいて、DNAとPNIPAAmとはミクロ相分離構造を形成する。
【００１５】
(e) ステップS203でDNAとPNIPAAmの混合物からなるフィルムを100mlのエタノール中に配置し、その後エタノールを緩やかに撹拌しながら1日放置する。その間、DNAはエタノールに不溶性であるが、PNIPAAmはエタノールに対して溶解性であるため、非溶媒誘起相分離法(NIPS: Nonsolvent-Induced-Phase-Separation)により混合物中のPNIPAAmが溶解し、白色で不透明なDNAからなる多孔質体が形成される。
【００１６】
図2は、電子顕微鏡で1000倍の倍率で観察されたステップS202で得られたDNAとPNIPAAmの混合物からなるフィルムの画像である。図3は、電子顕微鏡で5000倍の倍率で観察されたDNAとPNIPAAmの混合物からなるフィルムの画像である。図4は、電子顕微鏡で10000倍の倍率で観察されたDNAとPNIPAAmの混合物からなるフィルムの画像である。図2乃至図4に示すように、DNAとPNIPAAmの混合物からなるフィルムの表面には、細孔は観察されなかった。
【００１７】
これに対し図5は、電子顕微鏡で1000倍の倍率で観察されたステップS203で得られたDNAからなる多孔質体の画像である。図6は、電子顕微鏡で5000倍の倍率で観察されたDNAからなる多孔質体の画像である。図7は、電子顕微鏡で10000倍の倍率で観察されたDNAからなる多孔質体の画像である。図5乃至図7に示すように、DNAからなる多孔質体の表面には細孔が観察された。
【００１８】
（第1の実施の形態の変形例）
第1の実施の形態においては、アルコール溶解性の高分子としてPNIPAAmを用いたが、これに限定されない。また高分子は天然高分子でも、合成高分子でもよい。例えば、分子量が150kDaのポリ（N-ビニルピロリドン）をアルコール溶解性の高分子として用いてもよい。
【００１９】
あるいはメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル等のアルキル基、シクロヘキシル、シクロナフチル等の脂環基を有するアクリルアミド誘導体のポリマーであるポリ（N-アルキルアクリルアミド）、あるいはN、N-ジアルキルアクリルアミド誘導体のポリマーであるポリ（N,N-ジアルキルアクリルアミド）もアルコール溶解性の高分子として使用可能である。
【００２０】
あるいはポリ（N-ビニルピロリドン）、ポリ（N-ビニルカプロラクタム）、ポリ（N-ビニルラウロラクタム）等のラクタム環を側鎖に有するポリ（N-ビニルラクタム）、あるいはポリ（メチルビニルエーテル）、ポリ（エチルビニルエーテル）等のポリ（アルキルビニルエーテル）もアルコール溶解性の高分子として使用可能である。
【００２１】
あるいはポリ（ヒドロキシルエチルアクリレート）、ポリ（ヒドロキシルエチルメタクリレート）等のアクリレート誘導体のポリマー、あるいはカルボキシメチルセルロース、カルボキシエチルセルロース、アルギン酸メチル等のセルロース誘導体、あるいはDNAと相溶してミクロ相分離構造を形成するその他のポリマーもアルコール溶解性の高分子として使用可能である。
【００２２】
（第1の実施の形態の第1の実施例）
濃度が9.2m mol/lのDNAと、濃度が20m mol/lのPNIPAAmとを用いて、第1の実施の形態の第1の実施例に係る多孔質体を製造した。以下の記述において、製造中にシャーレの底面に接触した側を多孔質体の裏面、シャーレの底面に接触しなかった側を多孔質体の表面とする。図8は10,000倍の倍率でSEMで観察された多孔質体の表面の画像であり、図9は20,000倍の倍率で観察された多孔質体の表面の画像であり、図10は50,000倍の倍率で観察された多孔質体の表面の画像である。画像解析ソフトウェア(Image-J)で図8乃至図10に示した画像を解析したところ、多孔質体に設けられた細孔の直径は20nm乃至80nmであった。また表面積に対する複数の細孔の開口部の面積の総和の割合である空隙率は1.9%であった。
【００２３】
図11は10,000倍の倍率で観察された多孔質体の裏面の画像であり、図12は20,000倍の倍率で観察された多孔質体の裏面の画像であり、図13は50,000倍の倍率で観察された多孔質体の裏面の画像である。裏面においては、細孔はほとんど観察されなかった。
【００２４】
（第1の実施の形態の第2の実施例）
濃度が8m mol/lのDNAと、濃度が50m mol/lのPNIPAAmとを用いて、第1の実施の形態の第2の実施例に係る多孔質体を製造した。図14は10,000倍の倍率でSEMで観察された多孔質体の表面の画像であり、図15は20,000倍の倍率で観察された多孔質体の表面の画像であり、図16は50,000倍の倍率で観察された多孔質体の表面の画像である。画像解析ソフトウェアで図14乃至図16に示した画像を解析したところ、多孔質体に設けられた細孔の直径は20nm乃至80nmであった。また表面積に対する複数の細孔の開口部の面積の総和の割合である空隙率は8.7%であった。したがって図8乃至図10と比較して、PNIPAAmの濃度を上げることにより、空隙率が上がることが示された。
【００２５】
図17は10,000倍の倍率で観察された多孔質体の裏面の画像であり、図18は20,000倍の倍率で観察された多孔質体の裏面の画像であり、図19は50,000倍の倍率で観察された多孔質体の裏面の画像である。表面よりは少ないものの、裏面においても細孔が観察された。
【００２６】
（第1の実施の形態の第3の実施例）
濃度が10m mol/lのDNAと、濃度が5m mol/lのPNIPAAmを混合し、フィルムを製造した。図20は10,000倍の倍率でSEMで観察されたDNAとPNIPAAmの混合物からなるフィルムの表面の画像であり、図21は20,000倍の倍率で観察された混合物からなるフィルムの表面の画像であり、図22は50,000倍の倍率で観察された混合物からなるフィルムの表面の画像である。また図23は10,000倍の倍率でSEMで観察されたDNAとPNIPAAmの混合物からなるフィルムの裏面の画像であり、図24は20,000倍の倍率で観察された混合物からなるフィルムの裏面の画像であり、図25は50,000倍の倍率で観察された混合物からなるフィルムの裏面の画像である。いずれの倍率においても、表面裏面共に細孔は観察されなかった。
【００２７】
次にDNAとPNIPAAmの混合物からなるフィルムをエタノール中に配置してPNIPAAmを溶解し、第1の実施の形態の第3の実施例に係る多孔質体を製造した。図26は10,000倍の倍率で観察された多孔質体の表面の画像であり、図27は20,000倍の倍率で観察された多孔質体の表面の画像であり、図28は50,000倍の倍率で観察された多孔質体の表面の画像である。エタノール処理により表面が粗くなり、細孔が観察された。図29は10,000倍の倍率で観察された多孔質体の裏面の画像であり、図30は20,000倍の倍率で観察された多孔質体の裏面の画像であり、図31は50,000倍の倍率で観察された多孔質体の裏面の画像である。裏面においては、細孔は観察されなかった。
【００２８】
（第1の実施の形態の第4の実施例）
濃度が10m mol/lのDNAと、濃度が10m mol/lのPNIPAAmを混合し、フィルムを製造した。図32は10,000倍の倍率でSEMで観察されたDNAとPNIPAAmの混合物からなるフィルムの表面の画像であり、図33は20,000倍の倍率で観察された混合物からなるフィルムの表面の画像であり、図34は50,000倍の倍率で観察された混合物からなるフィルムの表面の画像である。また図35は10,000倍の倍率でSEMで観察されたDNAとPNIPAAmの混合物からなるフィルムの裏面の画像であり、図36は20,000倍の倍率で観察された混合物からなるフィルムの裏面の画像であり、図37は50,000倍の倍率で観察された混合物からなるフィルムの裏面の画像である。いずれの倍率においても、表面裏面共に細孔は観察されなかった。
【００２９】
次にDNAとPNIPAAmの混合物からなるフィルムをエタノール中に配置してPNIPAAmを溶解し、第1の実施の形態の第4の実施例に係る多孔質体を製造した。図38は10,000倍の倍率で観察された多孔質体の表面の画像であり、図39は20,000倍の倍率で観察された多孔質体の表面の画像であり、図40は50,000倍の倍率で観察された多孔質体の表面の画像である。エタノール処理により表面が粗くなり、細孔が観察された。図41は10,000倍の倍率で観察された多孔質体の裏面の画像であり、図42は20,000倍の倍率で観察された多孔質体の裏面の画像であり、図43は50,000倍の倍率で観察された多孔質体の裏面の画像である。表面よりは少ないものの、裏面においても細孔が観察された。
【００３０】
（第1の実施の形態の第5の実施例）
濃度が10m mol/lのDNAと、濃度が20m mol/lのPNIPAAmを混合し、フィルムを製造した。図44は10,000倍の倍率でSEMで観察されたDNAとPNIPAAmの混合物からなるフィルムの表面の画像であり、図45は20,000倍の倍率で観察された混合物からなるフィルムの表面の画像であり、図46は50,000倍の倍率で観察された混合物からなるフィルムの表面の画像である。また図47は10,000倍の倍率でSEMで観察されたDNAとPNIPAAmの混合物からなるフィルムの裏面の画像であり、図48は20,000倍の倍率で観察された混合物からなるフィルムの裏面の画像であり、図49は50,000倍の倍率で観察された混合物からなるフィルムの裏面の画像である。いずれの倍率においても、表面裏面共に細孔は観察されなかった。
【００３１】
次にDNAとPNIPAAmの混合物からなるフィルムをエタノール中に配置してPNIPAAmを溶解し、第1の実施の形態の第5の実施例に係る多孔質体を製造した。図50は10,000倍の倍率で観察された多孔質体の表面の画像であり、図51は20,000倍の倍率で観察された多孔質体の表面の画像であり、図52は50,000倍の倍率で観察された多孔質体の表面の画像である。エタノール処理により表面が粗くなり、細孔が観察された。図53は10,000倍の倍率で観察された多孔質体の裏面の画像であり、図54は20,000倍の倍率で観察された多孔質体の裏面の画像であり、図55は50,000倍の倍率で観察された多孔質体の裏面の画像である。裏面においては、細孔は観察されなかった。
【００３２】
（第1の実施の形態の第6の実施例）
濃度が10m mol/lのDNAと、濃度が50m mol/lのPNIPAAmを混合し、フィルムを製造した。図56は10,000倍の倍率でSEMで観察されたDNAとPNIPAAmの混合物からなるフィルムの表面の画像であり、図57は20,000倍の倍率で観察された混合物からなるフィルムの表面の画像であり、図58は50,000倍の倍率で観察された混合物からなるフィルムの表面の画像である。また図59は10,000倍の倍率でSEMで観察されたDNAとPNIPAAmの混合物からなるフィルムの裏面の画像であり、図60は20,000倍の倍率で観察された混合物からなるフィルムの裏面の画像である。いずれの倍率においても、表面裏面共に細孔は観察されなかった。
【００３３】
次にDNAとPNIPAAmの混合物からなるフィルムをエタノール中に配置してPNIPAAmを溶解し、第1の実施の形態の第6の実施例に係る多孔質体を製造した。図61は10,000倍の倍率で観察された多孔質体の表面の画像であり、図62は20,000倍の倍率で観察された多孔質体の表面の画像であり、図63は50,000倍の倍率で観察された多孔質体の表面の画像である。エタノール処理により表面が粗くなり、細孔が観察された。図64は10,000倍の倍率で観察された多孔質体の裏面の画像であり、図65は20,000倍の倍率で観察された多孔質体の裏面の画像であり、図66は50,000倍の倍率で観察された多孔質体の裏面の画像である。裏面においても細孔が観察された。
【００３４】
（第1の実施の形態の第7の実施例）
DNAとポリビニルピロリドン（PVP: Polyvinylpyrrolidone)を2:1の濃度で混合し、フィルムを製造した。図67は10,000倍の倍率でSEMで観察されたDNAとPVPの混合物からなるフィルムの表面の画像であり、図68は20,000倍の倍率で観察された混合物からなるフィルムの表面の画像であり、図69は50,000倍の倍率で観察された混合物からなるフィルムの表面の画像である。いずれの倍率においても、細孔は観察されなかった。
【００３５】
次にDNAとPVPの混合物からなるフィルムをエタノール中に配置してPVPを溶解し、第1の実施の形態の第7の実施例に係る多孔質体を製造した。図70は10,000倍の倍率で観察された多孔質体の表面の画像であり、図71は20,000倍の倍率で観察された多孔質体の表面の画像であり、図72は50,000倍の倍率で観察された多孔質体の表面の画像である。エタノール処理により表面が粗くなり、図71及び図72において細孔が観察された。
【００３６】
（第1の実施の形態の第8の実施例）
DNAとPVPを1:1の濃度で混合し、フィルムを製造した。図73は10,000倍の倍率でSEMで観察されたDNAとPVPの混合物からなるフィルムの表面の画像であり、図74は20,000倍の倍率で観察された混合物からなるフィルムの表面の画像であり、図75は50,000倍の倍率で観察された混合物からなるフィルムの表面の画像である。いずれの倍率においても、細孔は観察されなかった。
【００３７】
次にDNAとPVPの混合物からなるフィルムをエタノール中に配置してPVPを溶解し、第1の実施の形態の第8の実施例に係る多孔質体を製造した。図76は10,000倍の倍率で観察された多孔質体の表面の画像であり、図77は20,000倍の倍率で観察された多孔質体の表面の画像であり、図78は50,000倍の倍率で観察された多孔質体の表面の画像である。エタノール処理により表面が粗くなったことが観察された。
【００３８】
（第1の実施の形態の第9の実施例）
DNAとPVPを1:2の濃度で混合し、フィルムを製造した。図79は10,000倍の倍率でSEMで観察されたDNAとPVPの混合物からなるフィルムの表面の画像であり、図80は20,000倍の倍率で観察された混合物からなるフィルムの表面の画像であり、図81は50,000倍の倍率で観察された混合物からなるフィルムの表面の画像である。いずれの倍率においても、細孔は観察されなかった。
【００３９】
次にDNAとPVPの混合物からなるフィルムをエタノール中に配置してPVPを溶解し、第1の実施の形態の第9の実施例に係る多孔質体を製造した。図82は10,000倍の倍率で観察された多孔質体の表面の画像であり、図83は20,000倍の倍率で観察された多孔質体の表面の画像であり、図84は50,000倍の倍率で観察された多孔質体の表面の画像である。いずれの画像においても、細孔が観察された。
【００４０】
図85は10,000倍の倍率で観察された多孔質体の裏面の画像であり、図86は20,000倍の倍率で観察された多孔質体の裏面の画像であり、図87は50,000倍の倍率で観察された多孔質体の裏面の画像である。表面よりは少ないものの、裏面においても細孔が観察された。
【００４１】
（第2の実施の形態）
第2の実施の形態に係る多孔質体は、カルシウムイオン(Ca2+)又はマグネシウムイオン(Mg2+)でイオン架橋されたDNAからなり、直径が1nm乃至100μmの細孔が設けられている。カルシウムイオンでイオン架橋されたDNAからなる多孔質体及びマグネシウムイオンでイオン架橋されたDNAからなる多孔質体のそれぞれは、生体適合性を有し、細胞に対する親和性が高く、細胞培養膜として有用である。また第2の実施の形態に係る多孔質体は細胞培養液中において2日間以上溶解せず、形態を維持することが可能である。
【００４２】
次に第2の実施の形態に係る多孔質体の製造方法について説明する。まず図1に示した第1の実施の形態に係る多孔質体の製造方法と同様に、DNAからなる多孔質体を形成する。その後、1mol/lの塩化カルシウム(CaCl2)水溶液をシャーレに滴下し、多孔質体をCaCl2水溶液に室温で1日浸す。CaCl2水溶液に浸すことによりナトリウムイオンがカルシウムイオンに交換され、カルシウムイオンでDNAがイオン架橋される。カルシウムイオンでイオン架橋されたゲル状のDNAを第2の実施の形態に係る多孔質体として回収する。なお、CaCl2水溶液の代わりに1mol/lの塩化マグネシウム(MgCl2)水溶液に多孔質体を浸せば、マグネシウムイオンでイオン架橋されたDNAからなる多孔質体を製造可能である。多孔質体を回収した後、多孔質体を超純水で洗浄し、乾燥してもよい。
【００４３】
（第2の実施の形態の実施例）
まず500mlのダルベッコ改変イーグル培地(DMEM: Dulbecco Modified Eagle Medium)に、体積濃度が10%となるようにウシ胎児血清(FBS: Fetal Bovine Serum)を添加し、さらに体積濃度が1%となるようにペニシリン−ストレプトマイシン(Penicillin Streptomycin)を添加して、細胞培養液を調整した。次に図88に示す凍結保存用チューブ61中のマウス軟骨細胞(ATDC5)を含む-80℃で凍結された細胞凍結保存液62を解凍した。解凍された細胞凍結保存液62を図89に示すボトル63に滴下し、さらに細胞培養液をボトル63に滴下した。その後、マウス軟骨細胞を細胞培養液で懸濁し、第1の懸濁液64を得た。
【００４４】
ボトル63を回転速度2000rpmで5分間回転させ、図90に示すように第1の懸濁液64に含まれていたマウス軟骨細胞65を沈殿させた。次に沈殿したマウス軟骨細胞65を細胞培養液で懸濁し、第2の懸濁液を得た。その後、図91に示すように直径100mmのシャーレ66に第2の懸濁液67を滴下し、37℃、5%の二酸化炭素(CO2)濃度でマウス軟骨細胞を培養した。シャーレ66の底面でマウス軟骨細胞がコンフルエントになった後、シャーレ66中の細胞培養液を吸引除去した。次にマウス軟骨細胞をリン酸バッファ(PBS)で洗浄し、洗浄後リン酸バッファを吸引除去した。その後、5mlのトリプシン−EDTAをシャーレ66に滴下し、37℃で5分間インキュベートした。トリプシン−EDTAによってシャーレ66の底面から剥離したマウス軟骨細胞を遠心分離し、細胞培養液で懸濁した。
【００４５】
次に図92に示すように、6個のウェル111A, 111B, 111C, 111D, 111E, 111Fが設けられたシャーレ101を用意した。さらに図93に示すように、ウェル111A, 111B, 111C, 111Dの底面にカルシウムイオンでイオン架橋されたDNAからなる多孔質体10A, 10B, 10C, 10Dをそれぞれ配置した。なお多孔質体10B, 10Cの表面積は等しく、多孔質体10B, 10Cの表面積は多孔質体10Aの表面積よりも小さい。また多孔質体10Dの表面積は多孔質体10B, 10Cの表面積よりも小さい。その後、ウェル111A〜111Fのそれぞれを細胞培養液で満たし、マウス軟骨細胞をまいた。
【００４６】
マウス軟骨細胞は、カルシウムイオンでイオン架橋されたDNAからなる多孔質体10A, 10B, 10C, 10Dに接着した。また図94に示すように、培養開始から5日後には、多孔質体10A, 10B, 10C, 10D上のマウス軟骨細胞は増殖していた。また多孔質体10A, 10B, 10C, 10Dの表面積の差異によるマウス軟骨細胞の定着及び増殖の変化は観察されなかった。以上の結果より、カルシウムイオンでイオン架橋されたDNAからなる多孔質体は生体適合性を有すことが示された。したがってカルシウムイオンでイオン架橋されたDNAからなる多孔質体は、生体内に移植可能であることが示された。
【００４７】
（第2の実施の形態の比較例）
まずDNAのナトリウム塩を超純水に溶解し、濃度が7.5g/lのDNA水溶液を調整した。次にDNA水溶液を直径が100mmのシャーレの底面等の平面上に滴下し、DNA水溶液を乾燥させることにより、シャーレの底面にDNAのナトリウム塩からなる水溶性フィルムを形成した。その後、1mol/lの塩化カルシウム(CaCl2)水溶液をシャーレに滴下し、水溶性フィルムをCaCl2水溶液に3時間以上浸した。CaCl2水溶液に浸すことによりナトリウムイオンがカルシウムイオンに交換され、カルシウムイオンでDNAがイオン架橋された。カルシウムイオンでイオン架橋されたゲル状のDNAを比較例に係る平滑フィルムとして回収した。比較例に係る平滑フィルムは、実施の形態に係る多孔質体と異なり細孔を有しない。
【００４８】
第2の実施の形態の実施例と同様の条件で、比較例に係る平滑フィルム上でマウス軟骨細胞を培養した。培養開始から5日後、図95に示すように平滑フィルム上のマウス軟骨細胞を観察したところ、図94と比較してマウス軟骨細胞の増殖数は少なかった。よって、第2の実施の形態の実施例に係る多孔質体は、表面積が大きいため細胞の接着性がよく、細胞の増殖にもよいことが示された。
【００４９】
（第3の実施の形態）
第3の実施の形態に係る細胞培養膜は、カルシウムイオン(Ca2+)又はマグネシウムイオン(Mg2+)でイオン架橋されたDNAからなり、直径が1nm乃至100μmの細孔が設けられた多孔質体、及び多孔質体の細孔に配置されたコラーゲンを備える。第3の実施の形態に係る細胞培養膜は、多孔質体の細孔にコラーゲンが配置されているため、細胞に対する親和性がより高い。
【００５０】
次に第3の実施の形態に係る細胞培養膜の製造方法について説明する。まず第2の実施の形態と同様に、カルシウムイオン又はマグネシウムイオンでイオン架橋されたDNAからなる多孔質体を製造する。その後、多孔質体を重量濃度が5%の鮭由来I型コラーゲンの水溶液に一晩浸し、多孔質体の細孔に鮭由来I型コラーゲンを含浸させ、第3の実施の形態に係る細胞培養膜を得る。なおDNAは、紫外線(UV)照射によって架橋されてもよい。
【００５１】
（第4の実施の形態）
第4の実施の形態に係る多孔質体は、DNAの光産物からなり、直径が1nm乃至100μmの細孔が設けられている。DNAの光産物とは、紫外線照射によって架橋された、デオキシリボ核酸と１価のカチオンの塩である。DNAの光産物は、水(H2O)に対して不溶性である。第4の実施の形態に係る多孔質体は溶液に対して不溶性であり、かつ多孔質であるため、細胞培養膜、吸着剤、あるいは溶液のフィルタとして有用である。
【００５２】
次に第2の実施の形態に係る多孔質体の製造方法について説明する。まず第1の実施の形態と同様に、DNAからなる多孔質体を形成させる。その後、室温で1×10-2mJ/mm2以上のUVを多孔質体に照射する。UV照射により、例えば多孔質体に含まれるDNAのチミンどうしが架橋し、チミンダイマーが形成される。またUV照射により、チミンの酸素（キノン構造）の部分が、他のチミン又はシトシンと反応して架橋する。あるいはDNAに含まれるリボースの炭素−水素結合(C-H)がUV照射により切断され、ラジカル化した炭素が他の炭素−水素結合と反応する。結果として、光架橋されたDNAと１価のカチオンの塩から細胞培養膜が形成される。
【００５３】
（第4の実施の形態の第1の実施例）
第4の実施の形態に係る多孔質体のフィルタとしての有用性を、ブタパルボウイルス(PPV)を用いて検証した。以下、図96に示すフローチャートを参照して説明する。
【００５４】
(a) ステップS400でブタパルボウイルスを用意した。ブタパルボウイルスは、豚を自然宿主とし、パルボウイルス科、パルボウイルス属に分類される、脂質膜を有さない直鎖一本鎖DNAウイルスであり、物理化学的耐性が非常に高い。ブタパルボウイルスは正二十面体の形状を有し、サイズは18〜24nmである。次に2mlのブタパルボウイルスを20mlの超純水でウイルス感染価が5.54TCID50/mlとなるよう希釈し、ステップS401で、第4の実施の形態に係る多孔質体を用いてブタパルボウイルスを含む5mlの溶液をろ過した。
【００５５】
(b) ステップS402でろ過液を30分間撹拌した後、遠心して得られた上清の1mlを回収して計測されたウイルス感染価は2.31TCID50/mlであった。よってウイルス感染価は3.23CID50/ml減少した。次にステップS403で4mlの上清を第4の実施の形態に係る多孔質体で再びろ過した。その後、ろ過液を30分間撹拌した後、遠心して得られた上清を回収して計測されたウイルス感染価は1.61TCID50/mlであった。よって、多孔質体で2回ろ過することにより、ウイルス感染価は3.93CID50/ml減少した。
【００５６】
なお比較対象としてステップS401でろ過しなかった場合、その後の撹拌及び遠心によって得られた上清のウイルス感染価は5.46TCID50/mlであった。さらにステップS403でのろ過も省略した場合、その後の撹拌及び遠心によって得られた上清のウイルス感染価は5.81TCID50/mlであった。
【００５７】
また比較対象として、UV架橋されたDNAからなる細孔を有しない平滑フィルムを用意した。平滑フィルムは、DNA水溶液をシャーレの底面等の平面上に滴下し、DNA水溶液を乾燥させることにより、DNAのナトリウム塩からなる水溶性フィルムを形成した後、水溶性フィルムにUVを照射して得られた。ステップS401で多孔質体の代わりに平滑フィルムを用いてろ過した場合、その後得られた上清のウイルス感染価は4.58TCID50/mlであった。さらにステップS403で多孔質体の代わりに平滑フィルムを用いてろ過した場合、その後得られた上清のウイルス感染価は3.88TCID50/mlであった。
【００５８】
結果として図97に示すように、第4の実施の形態に係る多孔質体は、ブタパルボウイルスのフィルタとして有用であることが示された。また細孔が設けられてない平滑フィルムと比較して、溶液からのブタパルボウイルスの分離に優れていることも示された。
【００５９】
（第4の実施の形態の第2の実施例）
第4の実施の形態に係る多孔質体のフィルタとしての有用性を、脳心筋炎ウイルス(EMC)を用いて検証した。以下、図98に示すフローチャートを参照して説明する。
【００６０】
(a) ステップS500で脳心筋炎ウイルスを用意した。脳心筋炎ウイルスは、マウスを自然宿主とし、ピコルナウイルス科、カルジオウイルス属に分類される、脂質膜を有さないRNAウイルスであり、物理化学的耐性は中程度である。脳心筋炎ウイルスは正二十面体の形状を有し、サイズは25〜30nmである。次に2mlの脳心筋炎ウイルスを超純水でウイルス感染価が6.85TCID50/mlとなるよう希釈した。
【００６１】
(b) ステップS501で、第4の実施の形態に係る多孔質体を用いて脳心筋炎ウイルスを含む5mlの溶液をろ過した。ステップS502でろ過液を30分間撹拌した後、遠心して得られた上清の1mlを回収して計測されたウイルス感染価は6.24TCID50/mlであった。よってウイルス感染価は0.61CID50/ml減少した。
【００６２】
なお比較対象としてステップS501でろ過しなかった場合、その後の撹拌及び遠心によって得られた上清のウイルス感染価は7.03TCID50/mlであった。また比較対象としてステップS501で多孔質体の代わりに平滑フィルムを用いてろ過した場合、その後得られた上清のウイルス感染価は6.42TCID50/mlであった。
【００６３】
結果として図99に示すように、第4の実施の形態に係る多孔質体は、脳心筋炎ウイルスのフィルタとして有用であることが示された。
【００６４】
（第5の実施の形態）
第5の実施の形態に係る多孔質体は、下記化学式に示す長鎖アルキル基を有する第四級アンモニウムイオンでイオン架橋されたDNAからなり、直径が1nm乃至100μmの細孔が設けられている。なおアルキル基の炭素数が13以上になると、下記化学式に示す第四級アンモニウムイオンは細胞毒性を有する。したがって第5の実施の形態に係る多孔質体を細胞培養膜として使用する場合は、アルキル基の炭素数を6乃至12にすることが好ましい。また細孔にコラーゲンを配置してもよい。
【化１】
0005504558.tif 000002
【００６５】
次に第5の実施の形態に係る多孔質体の製造方法について説明する。まず図1に示した第1の実施の形態に係る多孔質体の製造方法と同様に、DNAからなる多孔質体を形成する。その後、第四級アンモニウムイオンを含む水溶液をシャーレに滴下し、多孔質体を第四級アンモニウムイオンを含む水溶液に室温で1日浸す。第四級アンモニウムイオンを含む水溶液に浸すことによりナトリウムイオンが第四級アンモニウムイオンに交換され、第四級アンモニウムイオンでDNAがイオン架橋される。第四級アンモニウムイオンでイオン架橋されたゲル状のDNAを第5の実施の形態に係る多孔質体として回収する。
【００６６】
（第5の実施の形態の実施例）
第四級アンモニウムイオンでイオン架橋されたDNAからなる多孔質体の細胞毒性試験を行った。細胞毒性試験は、「医療用具の製造（輸入）承認申請に必要な生物学的安全性試験の基本的考え方について」（平成１５年医薬審発第０２１３００１号）の別添「医療機器の生物学的安全性評価の基本的考え方」に従った。具体的には、シャーレの円形の底面の半分を占めるように、半円形のフィルムに成形された多孔質体を配置した。次にV79細胞がシャーレの底面と多孔質体の両方の上で増殖し、コロニーを形成するか否かを検証した。結果として、アルキル基の炭素数が6乃至12である第四級アンモニウムイオンでイオン架橋されたDNAからなる多孔質体上ではV79細胞は増殖し、コロニーを形成した。しかし、アルキル基の炭素数が13以上である第四級アンモニウムイオンでイオン架橋されたDNAからなる多孔質体上では、V79細胞は増殖しなかった。
【００６７】
（その他の実施の形態）
上記のように、本発明は実施の形態によって記載したが、この開示の一部をなす記述及び図面はこの発明を限定するものであると理解するべきではない。この開示から当業者には様々な代替実施の形態、実施例及び運用技術が明らかになるはずである。例えば第1の実施の形態においては、酵素を用いてDNAを精製する方法を示した。これに対し、図1のステップS100で得られた第1のろ過液に、塩化ナトリウム(NaCl)及びドデシル硫酸ナトリウム(SDS: Sodium Dodecyl Sulfate)を加えてもよい。その後、60℃から80℃で第1のろ過液を加熱し、第1のろ過液を遠心分離して上澄み液を得る。上澄み液にエタノールを加えることにより、DNAのナトリウム塩が析出する。この様に、本発明はここでは記載していない様々な実施の形態等を包含するということを理解すべきである。したがって、本発明はこの開示から妥当な特許請求の範囲の発明特定事項によってのみ限定されるものである。  
【図面の簡単な説明】
【００６８】
【図１】本発明の第１の実施の形態に係る多孔質体の製造方法のフローチャートである。
【図２】本発明の第１の実施の形態に係る混合体からなるフィルムを示す第１の写真である。
【図３】本発明の第１の実施の形態に係る混合体からなるフィルムを示す第２の写真である。
【図４】本発明の第１の実施の形態に係る混合体からなるフィルムを示す第３の写真である。
【図５】本発明の第１の実施の形態に係る多孔質体を示す第１の写真である。
【図６】本発明の第１の実施の形態に係る多孔質体を示す第２の写真である。
【図７】本発明の第１の実施の形態に係る多孔質体を示す第３の写真である。
【図８】本発明の第１の実施の形態の第１の実施例に係る多孔質体の表面を示す第１の写真である。
【図９】本発明の第１の実施の形態の第１の実施例に係る多孔質体の表面を示す第２の写真である。
【図１０】本発明の第１の実施の形態の第１の実施例に係る多孔質体の表面を示す第３の写真である。
【図１１】本発明の第１の実施の形態の第１の実施例に係る多孔質体の裏面を示す第１の写真である。
【図１２】本発明の第１の実施の形態の第１の実施例に係る多孔質体の裏面を示す第２の写真である。
【図１３】本発明の第１の実施の形態の第１の実施例に係る多孔質体の裏面を示す第３の写真である。
【図１４】本発明の第１の実施の形態の第２の実施例に係る多孔質体の表面を示す第１の写真である。
【図１５】本発明の第１の実施の形態の第２の実施例に係る多孔質体の表面を示す第２の写真である。
【図１６】本発明の第１の実施の形態の第２の実施例に係る多孔質体の表面を示す第３の写真である。
【図１７】本発明の第１の実施の形態の第２の実施例に係る多孔質体の裏面を示す第１の写真である。
【図１８】本発明の第１の実施の形態の第２の実施例に係る多孔質体の裏面を示す第２の写真である。
【図１９】本発明の第１の実施の形態の第２の実施例に係る多孔質体の裏面を示す第３の写真である。
【図２０】本発明の第１の実施の形態の第３の実施例に係るＤＮＡとＰＮＩＰＡＡｍの混合物からなるフィルムの表面を示す第１の写真である。
【図２１】本発明の第１の実施の形態の第３の実施例に係るＤＮＡとＰＮＩＰＡＡｍの混合物からなるフィルムの表面を示す第２の写真である。
【図２２】本発明の第１の実施の形態の第３の実施例に係るＤＮＡとＰＮＩＰＡＡｍの混合物からなるフィルムの表面を示す第３の写真である。
【図２３】本発明の第１の実施の形態の第３の実施例に係るＤＮＡとＰＮＩＰＡＡｍの混合物からなるフィルムの裏面を示す第１の写真である。
【図２４】本発明の第１の実施の形態の第３の実施例に係るＤＮＡとＰＮＩＰＡＡｍの混合物からなるフィルムの裏面を示す第２の写真である。
【図２５】本発明の第１の実施の形態の第３の実施例に係るＤＮＡとＰＮＩＰＡＡｍの混合物からなるフィルムの裏面を示す第３の写真である。
【図２６】本発明の第１の実施の形態の第３の実施例に係る多孔質体の表面を示す第１の写真である。
【図２７】本発明の第１の実施の形態の第３の実施例に係る多孔質体の表面を示す第２の写真である。
【図２８】本発明の第１の実施の形態の第３の実施例に係る多孔質体の表面を示す第３の写真である。
【図２９】本発明の第１の実施の形態の第３の実施例に係る多孔質体の裏面を示す第１の写真である。
【図３０】本発明の第１の実施の形態の第３の実施例に係る多孔質体の裏面を示す第２の写真である。
【図３１】本発明の第１の実施の形態の第３の実施例に係る多孔質体の裏面を示す第３の写真である。
【図３２】本発明の第１の実施の形態の第４の実施例に係るＤＮＡとＰＮＩＰＡＡｍの混合物からなるフィルムの表面を示す第１の写真である。
【図３３】本発明の第１の実施の形態の第４の実施例に係るＤＮＡとＰＮＩＰＡＡｍの混合物からなるフィルムの表面を示す第２の写真である。
【図３４】本発明の第１の実施の形態の第４の実施例に係るＤＮＡとＰＮＩＰＡＡｍの混合物からなるフィルムの表面を示す第３の写真である。
【図３５】本発明の第１の実施の形態の第４の実施例に係るＤＮＡとＰＮＩＰＡＡｍの混合物からなるフィルムの裏面を示す第１の写真である。
【図３６】本発明の第１の実施の形態の第４の実施例に係るＤＮＡとＰＮＩＰＡＡｍの混合物からなるフィルムの裏面を示す第２の写真である。
【図３７】本発明の第１の実施の形態の第４の実施例に係るＤＮＡとＰＮＩＰＡＡｍの混合物からなるフィルムの裏面を示す第３の写真である。
【図３８】本発明の第１の実施の形態の第４の実施例に係る多孔質体の表面を示す第１の写真である。
【図３９】本発明の第１の実施の形態の第４の実施例に係る多孔質体の表面を示す第２の写真である。
【図４０】本発明の第１の実施の形態の第４の実施例に係る多孔質体の表面を示す第３の写真である。
【図４１】本発明の第１の実施の形態の第４の実施例に係る多孔質体の裏面を示す第１の写真である。
【図４２】本発明の第１の実施の形態の第４の実施例に係る多孔質体の裏面を示す第２の写真である。
【図４３】本発明の第１の実施の形態の第４の実施例に係る多孔質体の裏面を示す第３の写真である。
【図４４】本発明の第１の実施の形態の第５の実施例に係るＤＮＡとＰＮＩＰＡＡｍの混合物からなるフィルムの表面を示す第１の写真である。
【図４５】本発明の第１の実施の形態の第５の実施例に係るＤＮＡとＰＮＩＰＡＡｍの混合物からなるフィルムの表面を示す第２の写真である。
【図４６】本発明の第１の実施の形態の第５の実施例に係るＤＮＡとＰＮＩＰＡＡｍの混合物からなるフィルムの表面を示す第３の写真である。
【図４７】本発明の第１の実施の形態の第５の実施例に係るＤＮＡとＰＮＩＰＡＡｍの混合物からなるフィルムの裏面を示す第１の写真である。
【図４８】本発明の第１の実施の形態の第５の実施例に係るＤＮＡとＰＮＩＰＡＡｍの混合物からなるフィルムの裏面を示す第２の写真である。
【図４９】本発明の第１の実施の形態の第５の実施例に係るＤＮＡとＰＮＩＰＡＡｍの混合物からなるフィルムの裏面を示す第３の写真である。
【図５０】本発明の第１の実施の形態の第５の実施例に係る多孔質体の表面を示す第１の写真である。
【図５１】本発明の第１の実施の形態の第５の実施例に係る多孔質体の表面を示す第２の写真である。
【図５２】本発明の第１の実施の形態の第５の実施例に係る多孔質体の表面を示す第３の写真である。
【図５３】本発明の第１の実施の形態の第５の実施例に係る多孔質体の裏面を示す第１の写真である。
【図５４】本発明の第１の実施の形態の第５の実施例に係る多孔質体の裏面を示す第２の写真である。
【図５５】本発明の第１の実施の形態の第５の実施例に係る多孔質体の裏面を示す第３の写真である。
【図５６】本発明の第１の実施の形態の第６の実施例に係るＤＮＡとＰＮＩＰＡＡｍの混合物からなるフィルムの表面を示す第１の写真である。
【図５７】本発明の第１の実施の形態の第６の実施例に係るＤＮＡとＰＮＩＰＡＡｍの混合物からなるフィルムの表面を示す第２の写真である。
【図５８】本発明の第１の実施の形態の第６の実施例に係るＤＮＡとＰＮＩＰＡＡｍの混合物からなるフィルムの表面を示す第３の写真である。
【図５９】本発明の第１の実施の形態の第６の実施例に係るＤＮＡとＰＮＩＰＡＡｍの混合物からなるフィルムの裏面を示す第１の写真である。
【図６０】本発明の第１の実施の形態の第６の実施例に係るＤＮＡとＰＮＩＰＡＡｍの混合物からなるフィルムの裏面を示す第２の写真である。
【図６１】本発明の第１の実施の形態の第６の実施例に係る多孔質体の表面を示す第１の写真である。
【図６２】本発明の第１の実施の形態の第６の実施例に係る多孔質体の表面を示す第２の写真である。
【図６３】本発明の第１の実施の形態の第６の実施例に係る多孔質体の表面を示す第３の写真である。
【図６４】本発明の第１の実施の形態の第６の実施例に係る多孔質体の裏面を示す第１の写真である。
【図６５】本発明の第１の実施の形態の第６の実施例に係る多孔質体の裏面を示す第２の写真である。
【図６６】本発明の第１の実施の形態の第６の実施例に係る多孔質体の裏面を示す第３の写真である。
【図６７】本発明の第１の実施の形態の第７の実施例に係るＤＮＡとＰＶＰの混合物からなるフィルムの表面を示す第１の写真である。
【図６８】本発明の第１の実施の形態の第７の実施例に係るＤＮＡとＰＶＰの混合物からなるフィルムの表面を示す第２の写真である。
【図６９】本発明の第１の実施の形態の第７の実施例に係るＤＮＡとＰＶＰの混合物からなるフィルムの表面を示す第３の写真である。
【図７０】本発明の第１の実施の形態の第７の実施例に係る多孔質体の表面を示す第１の写真である。
【図７１】本発明の第１の実施の形態の第７の実施例に係る多孔質体の表面を示す第２の写真である。
【図７２】本発明の第１の実施の形態の第７の実施例に係る多孔質体の表面を示す第３の写真である。
【図７３】本発明の第１の実施の形態の第８の実施例に係るＤＮＡとＰＶＰの混合物からなるフィルムの表面を示す第１の写真である。
【図７４】本発明の第１の実施の形態の第８の実施例に係るＤＮＡとＰＶＰの混合物からなるフィルムの表面を示す第２の写真である。
【図７５】本発明の第１の実施の形態の第８の実施例に係るＤＮＡとＰＶＰの混合物からなるフィルムの表面を示す第３の写真である。
【図７６】本発明の第１の実施の形態の第８の実施例に係る多孔質体の表面を示す第１の写真である。
【図７７】本発明の第１の実施の形態の第８の実施例に係る多孔質体の表面を示す第２の写真である。
【図７８】本発明の第１の実施の形態の第８の実施例に係る多孔質体の表面を示す第３の写真である。
【図７９】本発明の第１の実施の形態の第９の実施例に係るＤＮＡとＰＶＰの混合物からなるフィルムの表面を示す第１の写真である。
【図８０】本発明の第１の実施の形態の第９の実施例に係るＤＮＡとＰＶＰの混合物からなるフィルムの表面を示す第２の写真である。
【図８１】本発明の第１の実施の形態の第９の実施例に係るＤＮＡとＰＶＰの混合物からなるフィルムの表面を示す第３の写真である。
【図８２】本発明の第１の実施の形態の第９の実施例に係る多孔質体の表面を示す第１の写真である。
【図８３】本発明の第１の実施の形態の第９の実施例に係る多孔質体の表面を示す第２の写真である。
【図８４】本発明の第１の実施の形態の第９の実施例に係る多孔質体の表面を示す第３の写真である。
【図８５】本発明の第１の実施の形態の第９の実施例に係る多孔質体の裏面を示す第１の写真である。
【図８６】本発明の第１の実施の形態の第９の実施例に係る多孔質体の裏面を示す第２の写真である。
【図８７】本発明の第１の実施の形態の第９の実施例に係る多孔質体の裏面を示す第３の写真である。
【図８８】本発明の第２の実施の形態の実施例に係るチューブの模式図である。
【図８９】本発明の第２の実施の形態の実施例に係るボトルの第１の模式図である。
【図９０】本発明の第２の実施の形態の実施例に係るボトルの第２の模式図である。
【図９１】本発明の第２の実施の形態の実施例に係るシャーレの第１の模式図である。
【図９２】本発明の第２の実施の形態の実施例に係るシャーレの第２の模式図である。
【図９３】本発明の第２の実施の形態の実施例に係るシャーレの第３の模式図である。
【図９４】本発明の第２の実施の形態の実施例に係るＤＮＡのカルシウム塩からなる多孔質体上のマウス軟骨細胞（ＡＴＤＣ５）の写真である。
【図９５】本発明の第２の実施の形態の比較例に係るＤＮＡのカルシウム塩からなる平滑フィルム上のマウス軟骨細胞（ＡＴＤＣ５）の写真である。
【図９６】本発明の第４の実施の形態の第１の実施例に係るフィルタの有用性の検証方法のフローチャートである。
【図９７】本発明の第４の実施の形態の第１の実施例に係るフィルタの有用性の検証結果を示すグラフである。
【図９８】本発明の第４の実施の形態の第２の実施例に係るフィルタの有用性の検証方法のフローチャートである。
【図９９】本発明の第４の実施の形態の第２の実施例に係るフィルタの有用性の検証結果を示すグラフである。
【符号の説明】
【００６９】
10A, 10B, 10C, 10D…多孔質体
61…凍結保存用チューブ
62…細胞凍結保存液
63…ボトル
64…第1の懸濁液
65…マウス軟骨細胞
66…シャーレ
67…第2の懸濁液
101…シャーレ
111A, 111B, 111C, 111D, 111E, 111F…ウェル
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２９】
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【図３１】
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【図３８】
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【図３９】
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【図４０】
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【図４１】
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【図４８】
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【図５０】
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【図５１】
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【図５２】
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【図５３】
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