(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）：
【化１】
0005486602.tif 000047
（式中、Ｒ５、Ｒ６またはＲ７のうちの１つが式（ａ）：
【化２】
0005486602.tif 000048
の基であり、かつ、Ｒ５が（ａ）である場合、Ｒ６およびＲ７は双方ともＨであり、Ｒ６
が（ａ）である場合、Ｒ５およびＲ７は双方ともＨであり、Ｒ７が（ａ）である場合、Ｒ
５およびＲ６は双方ともＨであり、
ｉおよびｊは同一であって、かつ０、１、２、３または４であり、
Ｒ１およびＲ４は同一であって、かつＨ、ＣＨ３およびＣＨ２ＣＨ３からなる群から選
択され、
Ｒ２はＣＨ３であり、Ｒ３は（ＣＨ２）ｈＮ（ＣＨ３）２（式中、ｈが２、３または４
である）および（ＣＨ２）２Ｏ（ＣＨ２）２Ｏ（ＣＨ２）２Ｎ（ＣＨ３）２からなる群か
ら選択されるか、若しくは、
Ｒ２およびＲ３は同一であって、かつ
（ＣＨ２）ｋＣＨ３（式中、ｋは０、１または２である）、
（ＣＨ２）ｍＮ（ＣＨ２ＣＨ３）２（式中、ｍは２または３である）、
（ＣＨ２）ｎＮ（ＣＨ３）２（式中、ｎは２、３または４である）、
（ＣＨ２）ｐＯ（ＣＨ２）ｑＮ（ＣＨ３）２（式中、ｐおよびｑは同一であって、かつ
２または３である）、
式（ｂ）：
【化３】
0005486602.tif 000049
（式中、ｕは０または１である）の基、および
式（ｃ）：
【化４】
0005486602.tif 000050
（式中、ｖは０または１であり、ＺはＮまたはＣＨであり、かつＸはＯまたはＮＣＨ３で
ある）の基からなる群から選択されるか、又は、
Ｒ１−Ｎ−Ｒ２およびＲ３−Ｎ−Ｒ４は同一であって、かつ
式（ｄ）：
【化５】
0005486602.tif 000051
の基および
式（ｅ）：
【化６】
0005486602.tif 000052
（式中、ｒは１、２または３であり、
ＹはＣＨまたはＮであり、
Ｒ８はＨ、ＣＨ３、ＣＨ（ＣＨ３）２、Ｎ（ＣＨ３）２、ＣＨ２ＯＣＨ３または式（ｆ
）：
【化７】
0005486602.tif 000053
（式中、ｔは、０または１である）の基であり、
Ｒ９はＨ、ＣＨ２ＯＣＨ３、または式（ｆ）の基である）
の基からなる群から選択される）
の化合物またはその医薬上許容される塩。
【請求項２】
ｉおよびｊが双方とも１である請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ２およびＲ３が同一であって、かつ
（ＣＨ２）ｋＣＨ３（式中、ｋは０、１または２である）、
（ＣＨ２）ｍＮ（ＣＨ２ＣＨ３）２（式中、ｍは２または３である）、
式（ｂ）の基、および
式（ｃ）の基からなる群から選択される請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ１−Ｎ−Ｒ２およびＲ３−Ｎ−Ｒ４が同一であって、かつ
式（ｇ）：
【化８】
0005486602.tif 000054
の基、式（ｈ）：
【化９】
0005486602.tif 000055
の基、式（ｉ）：
【化１０】
0005486602.tif 000056
の基、式（ｊ）：
【化１１】
0005486602.tif 000057
の基、式（ｋ）：
【化１２】
0005486602.tif 000058
の基および式（ｍ）：
【化１３】
0005486602.tif 000059
の基からなる群から選択される請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
ｉおよびｊが双方とも１であり、
Ｒ１およびＲ４が同一であって、かつＨおよびＣＨ３からなる群から選択され、
Ｒ２がＣＨ３であり、Ｒ３が（ＣＨ２）２Ｎ（ＣＨ３）２および（ＣＨ２）２Ｏ（ＣＨ
２）２Ｏ（ＣＨ２）２Ｎ（ＣＨ３）２からなる群から選択されるか、若しくは
Ｒ２およびＲ３が、
ａ）（ＣＨ２）ｋＣＨ３（式中、ｋは０、１または２である）、
ｂ）（ＣＨ２）ｍＮ（ＣＨ２ＣＨ３）２（式中、ｍは２または３である）、
ｃ）式（ｂ）の基、および
ｄ）式（ｃ）の基からなる群から選択されるか、または
Ｒ１−Ｎ−Ｒ２およびＲ３−Ｎ−Ｒ４が同一であって、かつ式（ｇ）の基、式（ｈ）の
基、式（ｉ）の基、式（ｊ）の基、式（ｋ）の基および式（ｍ）の基からなる群から選択
される請求項１に記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ５が式（ａ）の基であり、Ｒ６およびＲ７が各々Ｈである請求項１に記載の化合物。
【請求項７】
本化合物が、
【化１４】
0005486602.tif 000060
（化合物１）、
【化１５】
0005486602.tif 000061
（化合物２）、
【化１６】
0005486602.tif 000062
（化合物３）、
【化１７】
0005486602.tif 000063
（化合物４）、
【化１８】
0005486602.tif 000064
（化合物５）、
【化１９】
0005486602.tif 000065
（化合物６）、
【化２０】
0005486602.tif 000066
（化合物７）、
【化２１】
0005486602.tif 000067
（化合物８）、
【化２２】
0005486602.tif 000068
（化合物９）、
【化２３】
0005486602.tif 000069
（化合物１０）、
【化２４】
0005486602.tif 000070
（化合物１１）、
【化２５】
0005486602.tif 000071
（化合物１２）、
【化２６】
0005486602.tif 000072
（化合物１３）、
【化２７】
0005486602.tif 000073
（化合物１４）、
【化２８】
0005486602.tif 000074
（化合物１５）、
【化２９】
0005486602.tif 000075
（化合物１６）、
【化３０】
0005486602.tif 000076
（化合物１７）、
【化３１】
0005486602.tif 000077
（化合物１８）、
【化３２】
0005486602.tif 000078
（化合物１９）、
【化３３】
0005486602.tif 000079
（化合物２０）、
【化３４】
0005486602.tif 000080
（化合物２１）、
【化３５】
0005486602.tif 000081
（化合物２２）、
【化３６】
0005486602.tif 000082
（化合物２３）、
【化３７】
0005486602.tif 000083
（化合物２４）、
【化３８】
0005486602.tif 000084
（化合物２５）、
【化３９】
0005486602.tif 000085
（化合物２６）、
【化４０】
0005486602.tif 000086
（化合物２７）、
【化４１】
0005486602.tif 000087
（化合物２８）、
【化４２】
0005486602.tif 000088
（化合物２９）、
【化４３】
0005486602.tif 000089
（化合物３０）、
【化４４】
0005486602.tif 000090
（化合物３１）、
【化４５】
0005486602.tif 000091
（化合物３２）、
【化４６】
0005486602.tif 000092
（化合物３３）、
【化４７】
0005486602.tif 000093
（化合物３４）、
【化４８】
0005486602.tif 000094
（化合物３５）、
【化４９】
0005486602.tif 000095
（化合物３６）、
【化５０】
0005486602.tif 000096
（化合物３７）、および
【化５１】
0005486602.tif 000097
（化合物３８）
またはその医薬上許容される塩からなる群から選択される請求項１に記載の化合物。
【請求項８】
本化合物が、
【化５２】
0005486602.tif 000098
（化合物１３）、
【化５３】
0005486602.tif 000099
（化合物１６）、
【化５４】
0005486602.tif 000100
（化合物２２）、
【化５５】
0005486602.tif 000101
（化合物２６）、
【化５６】
0005486602.tif 000102
（化合物２７）、
【化５７】
0005486602.tif 000103
（化合物３０）、
【化５８】
0005486602.tif 000104
（化合物２３）、
【化５９】
0005486602.tif 000105
（化合物３４）、および
【化６０】
0005486602.tif 000106
（化合物３５）
またはその医薬上許容される塩からなる群から選択される請求項１に記載の化合物。
【請求項９】
式：
【化６１】
0005486602.tif 000107
（化合物２３）
を有する化合物またはその医薬上許容される塩。
【請求項１０】
式（Ｉ）：
【化６２】
0005486602.tif 000108
（式中、Ｒ５、Ｒ６またはＲ７のうちの１つが、式（ａ）：
【化６３】
0005486602.tif 000109
の基であり、かつ、Ｒ５が（ａ）である場合、Ｒ６およびＲ７は双方ともＨであり、Ｒ６
が（ａ）である場合、Ｒ５およびＲ７は双方ともＨであり、Ｒ７が（ａ）である場合、Ｒ
５およびＲ６は双方ともＨであり、
ｉおよびｊは同一であって、かつ０、１、２、３または４であり、
Ｒ１およびＲ４は同一であって、かつＨ、ＣＨ３およびＣＨ２ＣＨ３からなる群から選
択され、
Ｒ２はＣＨ３であり、Ｒ３は（ＣＨ２）ｈＮ（ＣＨ３）２（ｈが２、３、または４であ
る）および（ＣＨ２）２Ｏ（ＣＨ２）２Ｏ（ＣＨ２）２Ｎ（ＣＨ３）２からなる群から選
択されるか、若しくは
Ｒ２およびＲ３は同一であって、かつ
（ＣＨ２）ｋＣＨ３（式中、ｋは０、１または２である）、
（ＣＨ２）ｍＮ（ＣＨ２ＣＨ３）２（式中、ｍは２または３である）、
（ＣＨ２）ｎＮ（ＣＨ３）２（式中、ｎは２、３または４である）、
（ＣＨ２）ｐＯ（ＣＨ２）ｑＮ（ＣＨ３）２（式中、ｐおよびｑは同一であって、かつ
２または３である）、
式（ｂ）：
【化６４】
0005486602.tif 000110
（式中、ｕは０または１である）の基、および
式（ｃ）：
【化６５】
0005486602.tif 000111
（式中、ｖは０または１であり、ＺはＮまたはＣＨであり、ＸはＯまたはＮＣＨ３である
）の基からなる群から選択されるか、又は
Ｒ１−Ｎ−Ｒ２およびＲ３−Ｎ−Ｒ４は同一であって、かつ
式（ｄ）：
【化６６】
0005486602.tif 000112
の基および
式（ｅ）：
【化６７】
0005486602.tif 000113
（式中、ｒは１、２または３であり、
ＹはＣＨまたはＮであり、
Ｒ８はＨ、ＣＨ３、ＣＨ（ＣＨ３）２、Ｎ（ＣＨ３）２、ＣＨ２ＯＣＨ３または式（ｆ
）：
【化６８】
0005486602.tif 000114
（式中、ｔは０または１である）の基であり、
Ｒ９はＨ、ＣＨ２ＯＣＨ３または式（ｆ）の基である）
の基からなる群から選択される）
の化合物またはその医薬上許容される塩を含む医薬組成物。
【請求項１１】
前記化合物が、
【化６９】
0005486602.tif 000115
（化合物１）、
【化７０】
0005486602.tif 000116
（化合物２）、
【化７１】
0005486602.tif 000117
（化合物３）、
【化７２】
0005486602.tif 000118
（化合物４）、
【化７３】
0005486602.tif 000119
（化合物５）、
【化７４】
0005486602.tif 000120
（化合物６）、
【化７５】
0005486602.tif 000121
（化合物７）、
【化７６】
0005486602.tif 000122
（化合物８）、
【化７７】
0005486602.tif 000123
（化合物９）、
【化７８】
0005486602.tif 000124
（化合物１０）、
【化７９】
0005486602.tif 000125
（化合物１１）、
【化８０】
0005486602.tif 000126
（化合物１２）、
【化８１】
0005486602.tif 000127
（化合物１３）、
【化８２】
0005486602.tif 000128
（化合物１４）、
【化８３】
0005486602.tif 000129
（化合物１５）、
【化８４】
0005486602.tif 000130
（化合物１６）、
【化８５】
0005486602.tif 000131
（化合物１７）、
【化８６】
0005486602.tif 000132
（化合物１８）、
【化８７】
0005486602.tif 000133
（化合物１９）、
【化８８】
0005486602.tif 000134
（化合物２０）、
【化８９】
0005486602.tif 000135
（化合物２１）、
【化９０】
0005486602.tif 000136
（化合物２２）、
【化９１】
0005486602.tif 000137
（化合物２３）、
【化９２】
0005486602.tif 000138
（化合物２４）、
【化９３】
0005486602.tif 000139
（化合物２５）、
【化９４】
0005486602.tif 000140
（化合物２６）、
【化９５】
0005486602.tif 000141
（化合物２７）、
【化９６】
0005486602.tif 000142
（化合物２８）、
【化９７】
0005486602.tif 000143
（化合物２９）、
【化９８】
0005486602.tif 000144
（化合物３０）、
【化９９】
0005486602.tif 000145
（化合物３１）、
【化１００】
0005486602.tif 000146
（化合物３２）、
【化１０１】
0005486602.tif 000147
（化合物３３）、
【化１０２】
0005486602.tif 000148
（化合物３４）、
【化１０３】
0005486602.tif 000149
（化合物３５）、
【化１０４】
0005486602.tif 000150
（化合物３６）、
【化１０５】
0005486602.tif 000151
（化合物３７）、および
【化１０６】
0005486602.tif 000152
（化合物３８）
からなる群から選択される化合物またはその医薬上許容される塩である請求項１０に記載
の医薬組成物。
【請求項１２】
前記化合物が、
【化１０７】
0005486602.tif 000153
（化合物１３）、
【化１０８】
0005486602.tif 000154
（化合物１６）、
【化１０９】
0005486602.tif 000155
（化合物２２）、
【化１１０】
0005486602.tif 000156
（化合物２６）、
【化１１１】
0005486602.tif 000157
（化合物２７）、
【化１１２】
0005486602.tif 000158
（化合物３０）、
【化１１３】
0005486602.tif 000159
（化合物２３）、
【化１１４】
0005486602.tif 000160
（化合物３４）、および
【化１１５】
0005486602.tif 000161
（化合物３５）
なる群から選択される化合物またはその医薬上許容される塩である請求項１０に記載の医
薬組成物。
【請求項１３】
前記化合物が、式：
【化１１６】
0005486602.tif 000162
（化合物２３）
を有する化合物またはその医薬上許容される塩である請求項１０に記載の医薬組成物。
【請求項１４】
被験体において、敗血症、狼瘡、関節リウマチおよび多発性硬化症からなる群から選択される免疫障害を予防または治療する薬物であって、
【化１１７】
0005486602.tif 000163
（化合物１３）、
【化１１８】
0005486602.tif 000164
（化合物１６）、
【化１１９】
0005486602.tif 000165
（化合物２２）、
【化１２０】
0005486602.tif 000166
（化合物２３）、
【化１２１】
0005486602.tif 000167
（化合物２６）、
【化１２２】
0005486602.tif 000168
（化合物２７）、
【化１２３】
0005486602.tif 000169
（化合物３０）、
【化１２４】
0005486602.tif 000170
（化合物３４）、および
【化１２５】
0005486602.tif 000171
（化合物３５）
からなる群から選択される化合物またはその医薬上許容される塩を有効量で含む薬物。
【請求項１５】
前記被験体がヒトである請求項１４に記載の薬物。
【請求項１６】
前記化合物が、
【化１２６】
0005486602.tif 000172
（化合物３０）、
【化１２７】
0005486602.tif 000173
（化合物２３）、および
【化１２８】
0005486602.tif 000174
（化合物２６）
からなる群から選択される化合物またはその医薬上許容される塩である請求項１４に記載の薬物。
【請求項１７】
前記化合物が、
【化１２９】
0005486602.tif 000175
（化合物２３）
の化合物またはその医薬上許容される塩である請求項１４に記載の薬物。
【請求項１８】
前記免疫障害が敗血症である請求項１４に記載の薬物。
【請求項１９】
前記免疫障害が、狼瘡、関節リウマチおよび多発性硬化症からなる群から選択される請求項１４に記載の薬物。
【請求項２０】
被験体において狼瘡を予防または治療する薬物であって、
【化１３０】
0005486602.tif 000176
（化合物１３）、
【化１３１】
0005486602.tif 000177
（化合物１６）、
【化１３２】
0005486602.tif 000178
（化合物２２）、
【化１３３】
0005486602.tif 000179
（化合物２３）、
【化１３４】
0005486602.tif 000180
（化合物２６）、
【化１３５】
0005486602.tif 000181
（化合物２７）、
【化１３６】
0005486602.tif 000182
（化合物３０）、
【化１３７】
0005486602.tif 000183
（化合物３４）、および
【化１３８】
0005486602.tif 000184
（化合物３５）
からなる群から選択される化合物またはその医薬上許容される塩を有効量で含む薬物。
【請求項２１】
前記化合物が、
【化１３９】
0005486602.tif 000185
（化合物２３）
の化合物またはその医薬上許容される塩である請求項２０に記載の薬物。
【請求項２２】
請求項８に記載の化合物を使用して、敗血症、狼瘡、関節リウマチおよび多発性硬化症からなる群から選択される免疫障害を治療するための薬物を製造する方法。
【請求項２３】
前記免疫障害が敗血症である請求項２２に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
損傷または感染に対する多くの初期の免疫応答は、自然免疫Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）のファミリーによって開始される。ＴＬＲファミリーは、幅広い特異性を有し、病原生物の間で高度に保存された分子構造または異なる種類の物理的損傷を認識する。特異的ＴＬＲのリガンドとしては、エンドトキシン、一本鎖もしくは二本鎖ＲＮＡ、ペプチドグリカン、フラジェリン、熱ショックタンパク質が挙げられ、ＴＬＲ９の場合には、ＤＮＡ中の非メチル化ＣｐＧ配列が挙げられる（Ｂｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｒｅｎｄｓ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２４：５２８−５３３（２００３）およびＷａｇｎｅｒ，Ｔｒｅｎｄｓ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２５：３８１−６（２００４））。この疾患または損傷の初期のセンシングは、続いて起こる免疫応答に絶対不可欠であるが、同時にそれは不適切な応答または損傷性の応答の原因でもあり得る。例えば、ＴＬＲ９は、狼瘡を含む自己免疫障害に結び付けられているが、それは長い間抗ＤＮＡ抗体反応性、および多発性硬化症に関連付けられている（Ｐｒｉｎｚ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ  １１６：４５６−４６４（２００６））。また、ＴＬＲ９は、敗血性ショックによる死に関連する、制御されない炎症応答の根底にあると思われる（Ｐｌｉｔａｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  ２０５：１２７７−８３（２００８））。
【０００２】
ＴＬＲ９は、非メチル化ＣｐＧ配列に結合し、細胞活性化およびサイトカイン分泌をもたらす、ヒトＢ細胞および形質細胞様樹状細胞（ＰＤＣ）に発現される自然免疫受容体として最初に同定された（Ｈｅｍｍｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ４０８：７４０−７４５（２０００））。これらの配列は、真核生物のＤＮＡと比較して、細菌のＤＮＡで過剰に発現され、そのため、細菌感染の指標としての機能を果たすことができる。しかし、真核生物のＤＮＡは、いくらかの非メチル化ＣｐＧを含み、同様にＴＬＲ９を刺激する能力がある（Ｖａｌｌｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６３：６３０６−１３（１９９９）およびＬｅａｄｂｅｔｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（２００２））。瀕死の細胞のＤＮＡは、一般に摂取され系から隔離されるが、狼瘡は、過剰な細胞片のクリアランス不良および蓄積を引き起こす遺伝的欠損に関連し（Ｋｒｉｓｈｎａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｍｉｎａｒｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １８：２４０−２４３（２００６））、免疫系を異常に高レベルのリガンドに曝露する。この状態は、Ｂ細胞上の複合体特異的免疫グロブリンか、または樹状細胞もしくは抗原提示細胞上のＦｃ受容体のいずれかによるＤＮＡ含有複合体の標的化取り込みと相まって、該刺激複合体にＴＬＲ９リガンドが存在することにより後押しされた応答である自己抗原の提示および反応をもたらし得る。この知見は、ＰＤＣが、全身性紅斑性狼瘡（ＳＬＥ）血清中に見出される複合体にα−インターフェロンを分泌することにより応答し、これがＦｃ受容体であってＤＮＡ依存性であり、ＴＬＲ９に媒介されるという事実により例証される（Ｌｅａｄｂｅｔｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，（２００２）およびＭｅａｎｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ  １１５２：４０７−１７（２００５））。得られるα−インターフェロンは、樹状細胞およびＢ細胞の成熟をさらに駆動することができる。それに対応して、アレイデータにより、重篤な疾患の患者におけるα−インターフェロン誘導性遺伝子の活性化が示される（Ｂｅｎｎｅｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ．１９７：７１１−２３（２００３））。ＰＤＣは、身体においてα−インターフェロンの主な供給源であるので、この知見は疾患をもつこの細胞集団にさらに関連する。
【０００３】
Ｂ細胞も狼瘡自己免疫の中心であり、合成オリゴヌクレオチドを用いるＴＬＲ９刺激によりＩＬ−６および抗体を増殖および産生するように駆動される。自己反応性細胞表面免疫グロブリンを発現しているＢ細胞との選択的結合のために、自己抗原特異的細胞は、この応答において優勢となる。従って、ＤＮＡまたはＲＮＡを含有する細胞片がＴＬＲ９により刺激された自己抗原特異的Ｂ細胞からの抗体と結合して、Ｆｃ受容体を介して形質細胞様樹状細胞を刺激する、自己強化サイクルが働いている。
【発明の概要】
【０００４】
本発明の第１の実施形態は、式（Ｉ）：
【化１】
0005486602.tif 000002
の化合物またはその医薬上許容される塩を提供し、
式中、Ｒ５、Ｒ６、またはＲ７のうちの１つが、式（ａ）：
【化２】
0005486602.tif 000003
の基であり、かつ、Ｒ５が（ａ）である場合、Ｒ６およびＲ７は双方ともＨであり、Ｒ６が（ａ）である場合、Ｒ５およびＲ７は双方ともＨであり、Ｒ７が（ａ）である場合、Ｒ５およびＲ６は双方ともＨであり、
ｉおよびｊは同一であって、かつ０、１、２、３または４であり、
Ｒ１およびＲ４は同一であって、かつＨ、ＣＨ３およびＣＨ２ＣＨ３からなる群から選択され、
Ｒ２はＣＨ３であり、Ｒ３は（ＣＨ２）ｈＮ（ＣＨ３）２（ｈが２、３または４である）および（ＣＨ２）２Ｏ（ＣＨ２）２Ｏ（ＣＨ２）２Ｎ（ＣＨ３）２からなる群から選択されるか、若しくは、
Ｒ２およびＲ３は同一であって、かつ
（ＣＨ２）ｋＣＨ３（式中、ｋは０、１または２である）、
（ＣＨ２）ｍＮ（ＣＨ２ＣＨ３）２（式中、ｍは２または３である）、
（ＣＨ２）ｎＮ（ＣＨ３）２（式中、ｎは２、３または４である）、
（ＣＨ２）ｐＯ（ＣＨ２）ｑＮ（ＣＨ３）２（式中、ｐおよびｑは同一であって、かつ２または３である）、
式（ｂ）：
【化３】
0005486602.tif 000004
（式中、ｕは０または１である）の基、または
式（ｃ）：
【化４】
0005486602.tif 000005
（式中、ｖは０または１であり、ＺはＮまたはＣＨであり、ＸはＯまたはＮＣＨ３である）の基からなる群から選択されるか、又は
Ｒ１−Ｎ−Ｒ２およびＲ３−Ｎ−Ｒ４は同一であって、かつ
式（ｄ）：
【化５】
0005486602.tif 000006
の基、および
式（ｅ）：
【化６】
0005486602.tif 000007
（式中、ｒは１、２または３であり、
ＹはＣＨまたはＮであり、
Ｒ８はＨ、ＣＨ３、ＣＨ（ＣＨ３）２、Ｎ（ＣＨ３）２、ＣＨ２ＯＣＨ３または式（ｆ）：
【化７】
0005486602.tif 000008
（式中、ｔは、０または１である）の基であり、
Ｒ９はＨ、ＣＨ２ＯＣＨ３または式（ｆ）の基である）
の基からなる群から選択される。
【０００５】
本発明の第２の実施形態は、本明細書に記載される化合物を含む医薬組成物を提供する。
【０００６】
本発明の第３の実施形態は、被験体において免疫学的障害、例えば、敗血症、狼瘡、関節リウマチ、または多発性硬化症などを治療する方法を提供し、この方法は、本明細書に記載される化合物を被験体に有効量で投与することを含む。
【０００７】
本発明の第４の実施形態は、被験体において狼瘡を治療する方法を提供し、この方法は、本明細書に記載される化合物を被験体に有効量で投与することを含む。
【０００８】
本発明の第５の実施形態は、免疫学的障害、例えば、敗血症、狼瘡、関節リウマチ、または多発性硬化症などを治療するための薬物の製造のために、本明細書に記載される化合物を使用することを提供する。
【０００９】
本発明のその他の実施形態は、本明細書において開示され、以下でさらに詳細に考察される。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】実施例１１に記載されるように、インビボで２０ｍｇ／ｋｇまたは６０ｍｇ／ｋｇの化合物２、化合物２３、またはヒドロキシクロロキン（ＨＣＱ）の２週間の投与、そしてエキソビボでオリゴＣｐＧ１６６８を用いるリンパ節の刺激後の、マウスから取り出したリンパ節において検出されたインターロイキン６（ＩＬ−６）の濃度を示す棒グラフである。
【図２】実施例１２Ａに記載されるように、ＭＲＬ／ＭｐＪ−ｆａｓｌｐｒ／Ｊ（「ＭＲＬ／ｌｐｒ」）マウスの２０ｍｇ／ｋｇまたは６０ｍｇ／ｋｇの化合物２３を用いる投薬の前後７週間の、マウス抗ｄｓＤＮＡのＥＬＩＳＡアッセイにおける、４５０ナノメートル（ＯＤ４５０）での光学濃度測定の結果を示すプロット図である。
【図３】実施例１２Ａに記載されるように、投薬の４、１０または１２週間後に、２０ｍｇ／ｋｇまたは６０ｍｇ／ｋｇの化合物２３を投与されたマウスのＭＲＬ／ｌｐｒ自発的狼瘡モデルにおける抗核抗体（ＡＮＡ）試験の結果を示す一連の棒グラフを示す図である。結果は、ＡＮＡ結果の５つの考えられるカテゴリー（−、−／＋、０、＋、または＋＋）の各々にスコアされたマウスの数として示す。
【図４】実施例１２Ｂに記載されるように、化合物２３（２０ｍｇ／ｋｇまたは６０ｍｇ／ｋｇ）、ＨＣＱ、またはシクロホスファミドを用いる１２週間の投薬前および投薬後の、ＭＲＬ／ｌｐｒマウス抗ｄｓＤＮＡのＯＤ４５０でのＥＬＩＳＡアッセイの結果を示すグラフである。
【図５】実施例１３に記載されるように、２０ｍｇ／ｋｇまたは６０ｍｇ／ｋｇの化合物２３または化合物３０を用いる１６週間のＮＺＢ／ＷＦ１／Ｊマウスの投薬前および投薬後の、マウス抗ｄｓＤＮＡのＯＤ４５０でのＥＬＩＳＡアッセイの結果を示すプロット図である。
【図６】実施例１３に記載されるように、２０ｍｇ／ｋｇまたは６０ｍｇ／ｋｇの化合物２３または化合物３０を用いる投薬の１６週間後の、５つの考えられるＡＮＡスコアの各々のＮＺＢ／ＷＦ１／Ｊマウスの数を示す一連の棒グラフを示す図である。
【図７】実施例１４に記載されるように、合成ペプチドＭＯＧｐ３５−５５で免疫化して、多発性硬化症に似た症状の実験的自己免疫性脳炎（ＥＡＥ）を誘導したＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスに、２０ｍｇ／ｋｇまたは６０ｍｇ／ｋｇの化合物２３を投与した結果を示すグラフである。
【図８】実施例１５に記載されるように、完全フロイントアジュバントで乳化したウシＩＩ型コラーゲンで免疫化して、関節炎を誘導した雄ＤＢＡ／１Ｊマウスに、６ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇまたは６０ｍｇ／ｋｇの化合物２を投与した結果を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
（Ａ．定義）
「治療」、「治療する」、および「治療すること」とは、本明細書に記載される障害または疾患の進行を後退させること、軽減すること、または阻止することをさす。さらに、本明細書において用いられるように、被験体の「治療」とは、免疫学的障害を有するか、かかる免疫学的障害の症状を有するか、あるいはかかる免疫学的障害の危険性がある（または免疫学的障害に罹患しやすい）被験体への、前記障害、前記障害の症状、あるいは前記障害の危険性（または前記障害に対する易罹患性）を治す、癒す、軽減する、緩和する、変化させる、除去する、改善する、好転させる、または作用する目的での、本明細書に記載される本発明の化合物の被験体への適用または投与、あるいは被験体の細胞または組織への前記化合物の適用または投与が含まれる。用語「治療すること」とは、損傷、病変または状態の治療または改善の成功のいずれかの徴候をさし、それには、任意の客観的または主観的パラメーター、例えば、軽減、緩解、症状の減少あるいは損傷、病変または状態を被験体にとってより許容できるものにすること、変性または減退の速度を遅らせること、変性の最終状態の衰弱を抑えること、被験体の身体的または精神的健康を向上させること、あるいは、場合によっては、前記障害のより重症な型または症状の発症を予防することなど、が含まれる。症状の治療または改善は、身体検査、精神鑑定、または当分野で公知の診断検査の結果を含む客観的または主観的パラメーターに基づくことができる。
【００１２】
一実施形態において、用語「治療すること」には、免疫学的障害によって引き起こされるかまたは免疫学的障害に関連する炎症、感染、発熱、異常な精神状態、臓器機能不全、貧血、関節痛、疲労、認知的困難、痙攣および／または振戦からの好転またはその除去などの免疫学的障害の症状を好転させることが含まれる。
【００１３】
「予防」、「予防する」、および「予防すること」とは、本明細書に記載される障害または疾患の発生または発症を、処置を取らない場合に起こると思われるその発生または発症と比べてなくすまたは低減させることをさす。
【００１４】
「有効な量」とは、臨床検査および評価、患者の観察、および／または同類のものによって示される障害または疾患の症状の除去をもたらす量をさす。「有効な量」は、生物学的または化学的活性において検出可能な変化をもたらす用量をさらに表すことができる。検出可能な変化は、当該機構またはプロセスについて当業者によって検出し、かつ／またはさらに定量することができる。さらに、「有効な量」は、所望の生理学的状態を維持する、すなわち、目的の状態の著しい減退を低減もしくは予防し、かつ／または好転を促す量を表すことができる。「有効な量」は、治療上有効な量をさらにさすことができる。
【００１５】
本明細書において用いられる「被験体」とは、哺乳類被験体（例えば、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、ヒツジ、ヤギ、サルなど）、特にヒト被験体（男性および女性の両方の被験体を含み、新生児、乳児、小児、青年期、成人および高齢者の被験体を含み、様々な人種および民族（限定されるものではないが、白人、黒人、アジア系、アメリカインディアンおよびヒスパニック系を含む）をさらに含む）を意味する。
【００１６】
本明細書において用いられるように、用語「医薬上許容される塩」とは、本発明の化合物の比較的毒性のない無機酸塩および有機酸塩をさす。これらの塩は、前記化合物の最終的な単離および精製中にインサイチューで調製することができ、あるいは生成した化合物をその遊離形態で適した有機酸または無機酸と別々に反応させ、そのようにして形成された塩を単離することにより調製することもできる。代表的な酸性塩としては、酢酸塩、アジピン酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベシル酸塩、重炭酸塩／炭酸塩、重硫酸塩／硫酸塩、ホウ酸塩、カンシル酸塩、クエン酸塩、シクラミン酸塩、エジシル酸塩、エシレート、ギ酸塩、フマル酸塩、グルセプト酸塩、グルコン酸塩、グルクロン酸塩、ヘキサフルオロリン酸塩、ヒベンズ酸塩、塩酸塩／塩化物、臭化水素酸塩／臭化物、ヨウ化水素酸塩／ヨウ化物、イセチオン酸塩、乳酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、メシル酸塩、メチル硫酸塩、ナフチル酸塩、２−ナプシル酸塩、ニコチン酸塩、硝酸塩、オロチン酸塩、シュウ酸塩、パルミチン酸塩、パモ酸塩、リン酸塩／リン酸水素／リン酸二水素、ピログルタミン酸塩、サッカリン酸塩、ステアリン酸塩、コハク酸塩、タンニン酸塩、酒石酸塩、トシル酸塩、トリフルオロ酢酸塩およびキシナホ酸塩が挙げられる。一実施形態において、医薬上許容される塩は塩酸塩／塩化物塩である。
【００１７】
（Ｂ．化合物）
本明細書に記載される一部の化合物は、１以上の不斉中心を含んでよく、従ってそれらの化合物は、様々な異性体形、例えば立体異性体および／またはジアステレオマーとして存在することができる。キラル中心の周囲の結合の配向が式に明記されていない場合には、その式は、本発明の化合物の構造において起こり得る、不斉炭素に基づく幾何異性体、光学異性体、立体異性体および互変異性体などの考え得るあらゆる異性体を包含すると理解すべきである。
【００１８】
上に述べたように、本発明は、式（Ｉ）：
【化８】
0005486602.tif 000009
の化合物またはその医薬上許容される塩（式中、ｉ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ５、Ｒ６、およびＲ７は、本明細書において上述した記載の通りに定義される）を提供する。
【００１９】
式（Ｉ）の化合物のいくつかの実施形態では、ｉおよびｊは、双方とも１である。
【００２０】
さらなる実施形態では、Ｒ２およびＲ３は同一であって、以下の：
（ＣＨ２）ｋＣＨ３（式中、ｋは０、１または２である）、
（ＣＨ２）ｍＮ（ＣＨ２ＣＨ３）２（式中、ｍは２または３である）、
本明細書で上述した式（ｂ）の基、および
本明細書で上述した式（ｃ）の基
からなる群から選択される。
【００２１】
他の実施形態によれば、Ｒ１−Ｎ−Ｒ２およびＲ３−Ｎ−Ｒ４は同一であって、かつ
式（ｇ）：
【化９】
0005486602.tif 000010
の基、式（ｈ）：
【化１０】
0005486602.tif 000011
の基、  式（ｉ）：
【化１１】
0005486602.tif 000012
の基、  式（ｊ）：
【化１２】
0005486602.tif 000013
の基、  式（ｋ）：
【化１３】
0005486602.tif 000014
の基または式（ｍ）：
【化１４】
0005486602.tif 000015
の基から選択される。
【００２２】
式（Ｉ）の化合物のいくつかの実施形態では、
ｉおよびｊは双方とも１であり、
Ｒ１およびＲ４は同一であって、かつＨおよびＣＨ３からなる群から選択され、
Ｒ２はＣＨ３であり、Ｒ３は（ＣＨ２）２Ｎ（ＣＨ３）２および（ＣＨ２）２Ｏ（ＣＨ２）２Ｏ（ＣＨ２）２Ｎ（ＣＨ３）２からなる群から選択されるか、若しくは
Ｒ２およびＲ３は同一であって、かつ
ａ）（ＣＨ２）ｋＣＨ３（式中、ｋは０、１または２である）、
ｂ）（ＣＨ２）ｍＮ（ＣＨ２ＣＨ３）２（式中、ｍは２または３である）、
ｃ）本明細書で上述した式（ｂ）の基、および
ｄ）本明細書で上述した式（ｃ）の基
からなる群から選択されるか、又は、
Ｒ１−Ｎ−Ｒ２およびＲ３−Ｎ−Ｒ４は同一であって、かつ
式（ｇ）の基、式（ｈ）の基、式（ｉ）の基、式（ｊ）の基、式（ｋ）の基、および式（ｍ）の基からなる群から選択される（全ては本明細書で上述した記載の通りである）。
【００２３】
さらなる実施形態では、Ｒ５は、本明細書で上述した式（ａ）の基であり、Ｒ６およびＲ７は各々Ｈである。
【００２４】
式（Ｉ）の化合物の特定の実施形態では、この化合物は以下から選択される構造を有する。
【００２５】
【表１Ａ】
0005486602.tif 000016
【表１Ｂ】
0005486602.tif 000017
【表１Ｃ】
0005486602.tif 000018
【表１Ｄ】
0005486602.tif 000019
【表１Ｅ】
0005486602.tif 000020
【表１Ｆ】
0005486602.tif 000021
【表１Ｇ】
0005486602.tif 000022
【００２６】
もう１つの実施形態では、式Ｉの化合物は、化合物１、化合物２、化合物１０、化合物１１、化合物１２、化合物１３、化合物１４、化合物１６、化合物１７、化合物２６、化合物２９、化合物３０、化合物３１、化合物３２、化合物３４、および化合物３５またはその医薬上許容される塩からなる群から選択される。もう１つの実施形態では、前記化合物は、化合物１３、化合物１６、化合物２２、化合物２３、化合物２６、化合物２７、化合物３０、化合物３４、および化合物３５またはその医薬上許容される塩からなる群から選択される。もう１つの実施形態では、前記化合物は、化合物２３、化合物２６、および化合物３０、またはその医薬上許容される塩からなる群から選択される。さらにもう１つの実施形態では、前記化合物は、化合物２３またはその医薬上許容される塩である。
【００２７】
（Ｃ．化合物の合成）
本明細書に記載される化合物は、一連の反応によって調製することができる。本発明の化合物を調製するための一般的方法を下に示す。実施例を記載するセクションにおいて下にさらに述べるように、ある特定の場合において例として特定の化合物を記載する。下に記述されている場合を除き、以下の方法では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、ｉ、およびｊは、上の式Ｉにおいて定義されるものと同一である。
【００２８】
方法１−アルキル化、アミノ化またはアルキル化、アミノ化およびＮ−メチル化
【化１５】
0005486602.tif 000023
（Ｒ１ａおよびＲ４ａがＨである場合、またはＲ２ａおよびＲ３ａがＨである場合、Ｎ−メチル化）
上に示した方法１の反応スキームにおいて、
ｎ、ｉ、およびｊは同一であって、かつ０、１、２、３または４であり、
Ｒ１ａおよびＲ４ａは双方ともＲｘと同一であり、
Ｒ２ａおよびＲ３ａは双方ともＲｙと同一であり、
Ｒ１ｂおよびＲ４ｂは同一であり、
Ｒ２ｂおよびＲ３ｂは同一であり、
Ｒ１ａおよびＲ４ａが双方ともＨである場合には、Ｒ１ｂおよびＲ４ｂは双方ともメチルであり、
Ｒ２ａおよびＲ３ａが双方ともＨである場合には、Ｒ２ｂおよびＲ３ｂは双方ともメチルである。
【００２９】
本発明の実施形態による対称の化合物を合成する一方法では、例えば、２−（４−ヒドロキシフェニル）ベンゾオキサゾール−６−オール（１Ａ）を、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）中炭酸カリウムの存在下、ブロモクロロアルカン（１Ｂ）と反応させてジクロロエーテル誘導体（１Ｃ）を形成することができる。また、化合物１Ａの代わりに２−（３−ヒドロキシフェニル）ベンゾオキサゾール−６−オールおよび２−（２−ヒドロキシフェニル）ベンゾオキサゾール−６−オールを用いてもよい。次に、ジクロロエーテル誘導体（１Ｃ）をアミン（ＨＮＲｘＲｙ）と反応させてジアミン（１Ｄ）を形成することができる。方法１の合成スキームにおいて、単一アミン反応物を用いてジアミン（１Ｄ）中にアミン基−ＮＲ１ａＲ２ａおよび−ＮＲ３ａＲ４ａを形成することができることを示すために、前記アミンはＨＮＲｘＲｙと総称的に表現される。そのようなものとして、ＲｘはＲ１ａおよびＲ４ａと同一であり、ＲｙはＲ２ａおよびＲ３ａと同じである。その上、Ｒ１ａおよびＲ４ａが水素である場合、またはＲ２ａおよびＲ３ａが水素である場合には、前記化合物は、所望によりＮ−メチル化を経てＮ−メチル誘導体（１Ｅ）を形成することができる。化合物１Ｄおよび１Ｅは、双方とも本発明の実施形態に従う化合物であり得る。
【００３０】
方法２−光延反応または光延反応およびＮ−メチル化
【化１６】
0005486602.tif 000024
（光延）（Ｒ１ａおよびＲ４ａがＨである場合、またはＲ２ａおよび／もしくはＲ３ａがＨである場合、Ｎ−メチル化）
上に示した方法２の反応スキームにおいて、
ｎ、ｉ、およびｊは同一であって、かつ０、１、２、３または４であり、
Ｒ１ａおよびＲ４ａは双方ともＲｘと同一であり、
Ｒ２ａおよびＲ３ａは双方ともＲｙと同一であり、
Ｒ１ｂおよびＲ４ｂは同一であり、
Ｒ２ｂおよびＲ３ｂは同一であり、
Ｒ１ａおよびＲ４ａが双方ともＨである場合には、Ｒ１ｂおよびＲ４ｂは双方ともメチルであり、
Ｒ２ａおよびＲ３ａが双方ともＨである場合には、Ｒ２ｂおよびＲ３ｂは双方ともメチルである。
【００３１】
本発明の実施形態による対称の化合物を合成するもう１つの方法では、光延反応によって、２−（４−ヒドロキシフェニル）ベンゾオキサゾール−６−オール（２Ａ）をヒドロキシアルキルアミン（２Ｂ）と反応させてジアミン（２Ｃ）を作出することができる。また、化合物２Ａの代わりに２−（３−ヒドロキシフェニル）ベンゾオキサゾール−６−オールおよび２−（２−ヒドロキシフェニル）ベンゾオキサゾール−６−オールを用いてもよい。その上、Ｒ１ａおよびＲ４ａが水素である場合、またはＲ２ａおよびＲ３ａが水素である場合には、前記化合物は、所望によりＮ−メチル化を経てＮ−メチル誘導体（２Ｄ）を形成することができる。化合物２Ｃおよび２Ｄは、双方とも本発明の実施形態による化合物であり得る。
【００３２】
方法３−不斉側鎖類似体について
【化１７】
0005486602.tif 000025
（方法１または方法２）（方法１または方法２）
方法３の反応スキームにおいて、
Ｒ１およびＲ４は同一であって、かつＨおよびＣＨ３からなる群から選択され、
Ｒ２はＣＨ３であり、Ｒ３は（ＣＨ２）２Ｎ（ＣＨｓ）２および（ＣＨ２）２Ｏ（ＣＨ２）２Ｏ（ＣＨ２）２Ｎ（ＣＨ３）２からなる群から選択される。
【００３３】
本発明のいくつかの実施形態による不斉化合物は方法３によって合成することができる。かかる場合では、４−アミノベンゼン−１，３−ジオール（３Ａ）を、ヘキサフルオロリン酸ベンゾトリアゾール−１−イル−オキシ−トリス−（ジメチルアミノ）−ホスホニウム（ＰｙＢｏｐ）の存在下、保護されたヒドロキシル基を有する安息香酸、例えば、４−（ベンジルオキシ）安息香酸（３Ｂ）、３−（ベンジルオキシ）安息香酸または２−（ベンジルオキシ）安息香酸などと反応させてベンズアミド誘導体（３Ｃ）を形成することができる。次いで、そのベンズアミドを環化してベンゾオキサゾール環（３Ｄ）を形成することができる。この時点において、上に記載される、方法１または方法２のいずれかを用いてヒドロキシ官能性ベンゾオキサゾール（３Ｄ）をアミン（３Ｅ）へと変換してよい。方法１および２に関し、Ｒ１はＲ１ａまたはＲ１ｂであってよく、Ｒ２はＲ２ａまたはＲ２ｂであってよい。その後、例えば、パラジウムを用いる水素化によって、ベンジルエーテル基を脱保護してヒドロキシ官能性アミン（３Ｆ）を形成することができる。その後、方法１または方法２のいずれかを用いてヒドロキシル官能性アミンをジアミン（３Ｇ）へと変えてよい。方法１および２に関し、Ｒ４はＲ４ａまたはＲ４ｂであってよく、Ｒ３はＲ３ａまたはＲ３ｂであってよい。
【００３４】
（Ｄ．医薬組成物）
一実施形態では、本発明は、化合物を含む医薬組成物である。もう１つの実施形態では、前記医薬組成物は医薬上許容される担体をさらに含む。本明細書において用いられる用語「医薬上許容される担体」とは、被験体への治療薬の送達のためのビヒクルとして用いられる、それ自体は治療薬でない、任意の物質をさす。
【００３５】
本発明の組成物は、経口投与、非経口投与、吸入スプレー投与、局所投与、直腸投与、鼻腔投与、舌下投与、口内投与、膣投与または植え込み型リザーバー投与などに用いる処方物に適し得る。好ましくは、前記組成物は、経口的に、局所に、腹膜内にまたは静脈内に投与される。本発明の組成物の滅菌注射剤型は水性懸濁液であっても油性懸濁液であってもよい。これらの懸濁液は、適した分散剤または湿潤剤および懸濁化剤を用いて当分野で公知の技術によって処方され得る。滅菌注射用調製物は、毒性のない非経口的に許容される希釈剤または溶媒中の滅菌注射用溶液または懸濁液（例えば、１，３−ブタンジオールの溶液として）であってよい。使用することのできる許容されるビヒクルおよび溶媒には、水、リンゲル液および等張塩化ナトリウム溶液がある。その上、滅菌固定油が溶媒または懸濁媒として通常使用される。
【００３６】
医薬上許容される油は、本発明の組成物中の溶媒または懸濁媒として使用され得る。脂肪酸、例えば、オレイン酸およびそのグリセリド誘導体などは、天然の医薬上許容される油、例えば、オリーブ油またはヒマシ油、特にそれらのポリオキシエチル化型などと同様に、注射用処方物中に含められることが適している。本発明の油含有組成物はまた、長鎖アルコール希釈剤または分散剤、例えば、カルボキシメチルセルロースまたはエマルジョンおよび懸濁液を含む医薬上許容される投与形の処方物において一般的に用いられる類似の分散剤なども含有することができる。前記組成物は、界面活性剤（Ｔｗｅｅｎ（登録商標）またはＳｐａｎ（登録商標）を含む非イオン性洗剤など）その他の乳化剤、またはバイオアベイラビリティー向上剤をさらに含むことが適している。
【００３７】
本発明の組成物は、限定されるものではないが、カプセル剤、錠剤、懸濁液または溶液を含む経口的に許容される投与形の形であってよい。経口投与形は、少なくとも１種類の賦形剤を含むことができる。本経口処方物に用いられる賦形剤には、希釈剤、不快な味または臭いを遮断するまたは中和するために加えられる物質、香味料、色素、香料、および前記組成物の外観を良くするために加えられる物質を含めることができる。本発明の一部の経口投与形は、前記組成物の用量単位を、追加的経口投与に適したカプセル剤または錠剤などの個別物品の形にすることを可能にするまたは容易にする賦形剤、例えば、崩壊剤、結合剤、接着剤、湿潤剤、ポリマー、滑沢剤、または磨砕剤などを含むことが適している。本発明の賦形剤含有錠剤組成物は、溶解型、懸濁型、ナノ粒子型、マイクロ粒子型またはその制御放出型、遅延放出型、プログラム放出型、時限放出型、パルス放出型、徐放出型もしくは長期放出型の組合せで１種類以上の賦形剤を本発明の化合物と混合する段階を含む任意の適した調剤方法によって調製することができる。
【００３８】
あるいは、本発明の医薬上許容される組成物は直腸投与用の坐剤の形であってよい。それらの坐剤は、室温では固体であるが直腸温では液体であるために直腸内で溶けて薬物を放出する好適な非刺激性賦形剤と前記薬剤を混合することによって調製することができる。かかる材料には、ココア乳脂、蜜蝋およびポリエチレングリコールが含まれる。
【００３９】
本発明の医薬上許容される組成物は、活性成分が１種類以上の担体中に懸濁されているまたは溶解されている局所用溶液、軟膏、またはクリームの形であってよい。本発明の化合物の局所投与に用いる担体としては、限定されるものではないが、鉱油、流動ワセリン、白色ワセリン、プロピレングリコール、ポリオキシエチレン、ポリオキシプロピレン化合物、乳化蝋および水が挙げられる。局所処方物が軟膏またはクリームの形である場合には、適した担体としては、限定されるものではないが、鉱油、モノステアリン酸ソルビタン、ポリソルベート６０、セチルエステルワックス、セテアリルアルコール、２  オクチルドデカノール、ベンジルアルコールおよび水が挙げられる。
【００４０】
医薬上許容される組成物が眼用処方物である場合には、その組成物は、塩化ベンジルアルコニウムなどの防腐剤を含むまたは含まない、等張のｐＨ調整された滅菌水溶液中の微粒子懸濁液であってよく、または等張のｐＨ調整された滅菌生理食塩水中の溶液としてであってもよい。あるいは、眼に用いるために、医薬上許容される組成物は軟膏の形で処方してもよい。
【００４１】
本発明の医薬上許容される組成物はまた、鼻腔エアゾールによっても吸入投与経路によっても投与することができる。かかる組成物は、医薬処方技術分野で周知の技術によって調製され、ベンジルアルコールまたは他の適した防腐剤、バイオアベイラビリティーを高めるための吸収促進剤、フッ化炭素、および／または他の通常の可溶化剤または分散剤を使用して、生理食塩水中の溶液として調製することができる。
【００４２】
その上、本発明の化合物を含む医薬処方物は非経口処方物の形でもあり得る。
【００４３】
ある特定の実施形態では、本発明の医薬上許容される組成物は経口投与用に処方されることが好ましい。
【００４４】
（Ｅ．使用方法）
もう１つの実施形態では、本発明は、被験体において免疫学的障害を予防または治療する方法であり、その方法は、本発明の化合物の治療上有効な量を被験体に投与することを含む。特定の実施形態では、本発明の方法による、免疫学的障害を予防または治療するために用いられる本発明の化合物は、化合物１３、化合物１６、化合物２２、化合物２３、化合物２６、化合物２７、化合物３０、化合物３４、および化合物３５またはその医薬上許容される塩、からなる群から選択される式Ｉの化合物である。もう１つの実施形態では、前記化合物は、化合物２３、化合物２６、および化合物３０またはその医薬上許容される塩からなる群から選択される。もう１つの実施形態では、前記化合物は、化合物２３またはその医薬上許容される塩である。
【００４５】
一実施形態では、本発明の方法を用いて予防または治療される免疫学的障害は、自己免疫疾患である。本明細書において用いられるように、用語「自己免疫疾患」とは、自己成分と非自己成分とを識別する免疫系の障害によって一般的に引き起こされる疾患をさす。本発明の化合物により予防または治療することのできる自己免疫疾患には、限定されるものではないが、狼瘡（ＳＬＥなど）、尋常性天疱瘡、重症筋無力症、溶血性貧血、血小板減少性紫斑病、グレーブス病、シェーグレン病、皮膚筋炎、橋本病、多発性筋炎、炎症性腸疾患、多発性硬化症、真性糖尿病、潰瘍性大腸炎、関節リウマチ、強皮症および乾癬が含まれる。本発明の特定の実施形態では、前記自己免疫疾患は狼瘡または多発性硬化症である。一部の実施形態では、前記自己免疫疾患はＳＬＥである。本明細書において用いられるように、狼瘡とは、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ヒストン、およびヌクレオソームを含む自己細胞成分に対する抗体を特徴とする自己免疫疾患をさす。身体症状には、自己抗体または糸球体での免疫複合体の沈着によって生じる腎臓疾患、皮膚疹、光感受性、関節炎ならびに痙攣および精神病を含む神経学的障害が含まれる。この疾患は主に女性が罹患し、通常若年成人を襲う。直接命にかかわることはまれであるが、この疾患は死亡率の増加と関連し、生活の質に深刻な影響をもたらし、疲労の継続、体重減少、アテローム性動脈硬化の危険性、および発熱を伴う。
【００４６】
もう１つの実施形態では、前記免疫学的障害は敗血症である。本明細書において用いられるように、敗血症とは、感染によって引き起こされる全身性炎症応答をさす。本発明の化合物は、敗血症によって生じる可能性がある、重症敗血症および敗血性ショックを治療するために投与することができる。特定の実施形態では、本発明の化合物は、重症敗血症を治療するために投与することができる。他の実施形態では、本発明の化合物は、敗血性ショックを治療するために用いることができる。
【００４７】
本発明のさらなる実施形態によれば、本明細書に記載される化合物は、疾患の症状が強度および／または種類において増加するように疾患が再発した場合に、比較的短期間に、狼瘡、多発性硬化症および／または関節リウマチの治療のために用いることができる。一部の実施形態では、本明細書に記載される化合物は、長期治療、例えば、数日、数ヶ月または数年続く治療として用いることができる。
【００４８】
本発明の一部の実施形態では、本明細書に記載される化合物は、狼瘡の治療に有用な追加の薬剤と共投与することができる（すなわち、併用療法）。狼瘡の治療に有用な追加の薬剤は以下の種類の薬物の１種類以上であり得る、ステロイド（例えば、グルココルチコイドおよびコルチコステロイド）、免疫抑制薬、非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、抗体療法、インターフェロン、細胞毒性薬および抗マラリア薬。一部の実施形態では、狼瘡の治療に有用な追加の薬剤は以下の少なくとも１種類である、デヒドロエピアンドロステロン（ＤＨＥＡ）、プレドニゾン、プレドニゾロン、メチルプレドニゾロン、ヒドロコルチゾン、フルドロコルチゾン、クロベタゾール、ハロベタゾール、トリアムシノロン、ベタメタゾン、フルオシノロン、フルオシノニド、レフルノミド、アザチオプリン、メトトレキサート、ミトキサントロン、クラドリビン、クロラムブシル、シクロホスファミド、シクロスポリン、ミコフェノレート（ミコフェノール酸、ミコフェノール酸モフェチルおよびミコフェノール酸ナトリウムを含む）、セレコキシブ、ジクロフェナク、フェノプロフェン、フルルビプロフェン、イブプロフェン、ケトプロフェン、フェンブフェン、インドメタシン、メクロファメート（meclofamate）、メロキシカム、ナブメトン、ナプロキセン、オキサプロジン、ロフェコキシブ、サリチレート、アセチルサリチル酸、アセトアミノフェン、スリンダク、トルメチン、リツキシマブ、ベリムマブ、インフリキシマブ、アダリムマブ、エプラツズマブ、ナタリズマブ、α−インターフェロンならびに／またはキニーネおよびヒドロキシクロロキン、クロロキン、キニジンおよびキナクリンなどのキニーネ誘導体。
【００４９】
一部の実施形態では、本明細書に記載される化合物は、多発性硬化症の治療に有用な追加の薬剤と共投与することができる（すなわち、併用療法）。多発性硬化症の治療に有用な追加の薬剤は以下の種類の薬物の１種類以上であり得る、ステロイド（例えば、グルココルチコイドおよびコルチコステロイド）、免疫抑制薬、抗体療法およびインターフェロン。一部の実施形態では、多発性硬化症の治療に有用な追加の薬剤は以下の少なくとも１種類である、デヒドロエピアンドロステロン、プレドニゾン、プレドニゾロン、メチルプレドニゾロン、ヒドロコルチゾン、フルドロコルチゾン、クロベタゾール、ハロベタゾール、トリアムシノロン、ベタメタゾン、フルオシノロン、フルオシノニド、アザチオプリン、メトトレキサート、ノバントロン、コパクソン、クラドリビン、クロラムブシル、シクロホスファミド、シクロスポリン、ミコフェノレート（ミコフェノール酸、ミコフェノール酸モフェチルおよびミコフェノール酸ナトリウムを含む）、リツキシマブ、ベリムマブ、エプラツズマブ、ナタリズマブおよび／またはβ−インターフェロン。
【００５０】
さらに他の実施形態では、本明細書に記載される化合物は、関節リウマチの治療に有用な追加の薬剤と共投与することができる（すなわち、併用療法）。関節リウマチの治療に有用な追加の薬剤は以下の種類の薬物の１種類以上であり得る、シクロオキシゲナーゼ−２（ＣＯＸ−２）阻害薬、ＮＳＡＩＤ、疾患修飾性抗リウマチ薬（ＤＭＡＲＤ）、ステロイド、免疫抑制薬および抗体療法。一部の実施形態では、関節リウマチの治療に有用な追加の薬剤は以下の少なくとも１種類である、セレコキシブ、ジクロフェナク、フェノプロフェン、フルルビプロフェン、イブプロフェン、ケトプロフェン、フェンブフェン、インドメタシン、メクロファメート、メロキシカム、ナブメトン、ナプロキセン、オキサプロジン、ロフェコキシブ、アセチルサリチル酸、アセトアミノフェン、スリンダク、トルメチン、デヒドロエピアンドロステロン、プレドニゾン、プレドニゾロン、メチルプレドニゾロン、ヒドロコルチゾン、フルドロコルチゾン、クロベタゾール、ハロベタゾール、トリアムシノロン、ベタメタゾン、フルオシノロン、フルオシノニド、レフルノミド、アザチオプリン、メトトレキサート、ミトキサントロン、クラドリビン、クロラムブシル、シクロホスファミド、シクロスポリン、ミコフェノール酸モフェチル、リツキシマブ、ベリムマブ、インフリキシマブ、アダリムマブ、エプラツズマブ、ナタリズマブ、アナキンラ、アバタセプト、アウラノフィン、オーロチオグルコース、オーロチオマレート、スルファサラジン、ミノサイクリンならびに／またはキニーネおよびヒドロキシクロロキン、クロロキン、キニジンおよびキナクリンなどのキニーネ誘導体。
【００５１】
一部の実施形態では、本明細書に記載される化合物は、敗血症の治療に有用な追加の薬剤と共投与することができる（すなわち、併用療法）。敗血症の治療に有用な追加の薬剤は以下の種類の薬物の１種類以上であり得る、抗生物質、アミノグリコシド、コロイド溶液または晶質液（すなわち、輸液療法）、昇圧薬、変力薬、ステロイドおよび抗凝固薬。一部の実施形態では、敗血症の治療に有用な追加の薬剤は以下の少なくとも１種類である、アルブミン、デンプン、ノルエピネフリン、ドーパミン、バソプレシン、ドブタミン、プレドニゾン、プレドニゾロン、メチルプレドニゾロン、ヒドロコルチゾン、フルドロコルチゾン、および、限定されるものではないが、ヒト組換え活性化プロテインＣ（ｒｈＡＰＣ）を含む活性化プロテインＣ。
【００５２】
さらなる実施形態では、前記化合物は、本明細書に記載される障害を治療するために併用する他の治療の用量を減らすために用いることができる（例えば、ステロイド節約型レジメンにおいて）。
【００５３】
一部の実施形態では、本明細書に記載される化合物は、狼瘡、多発性硬化症、関節リウマチおよび／または敗血症の治療に有用な追加の薬剤の投与前に、その投与と同時にまたはその投与の後に投与される。
【００５４】
追加の薬剤の投与「前の」本明細書に記載される化合物の投与とは、追加の薬剤による初期治療の前に、すなわち、狼瘡、多発性硬化症、関節リウマチおよび／または敗血症の危険性があるまたは患っている被験体集団に本明細書に記載される化合物と追加の薬剤とを投与することを含む治療プロトコール中の追加薬剤の投与の前に、本明細書に記載される化合物を被験体に投与することをさす。
【００５５】
同時投与では、本明細書に記載される化合物と追加の薬剤は、同一時点にまたは一方の直後に投与される。一般的には、本明細書に記載される化合物と追加の薬剤は、観察される結果が、それらが同一時点において投与されたときに得られる結果と比較的変わらない十分近い時点において投与される。
【００５６】
化合物は、経口的に（口腔を介する投与を含み、経口経管栄養チューブを介する投与をさらに含む）、非経口的に、吸入スプレーにより、局所に、経皮的に、直腸に、鼻腔に（経鼻経管栄養チューブを含む）、舌下に、口内に、膣にまたは埋め込み型リザーバーを介してなど、任意の適した経路によって被験体に投与してよい。本明細書において用いられる用語「非経口の」には、皮下、静脈内、筋肉内、関節内、滑液嚢内、胸骨内、くも膜下腔内、肝内、病巣内および頭蓋内の注射または注入技法が含まれる。前記組成物は、経口的に、非経口的に、経皮的にまたは吸入スプレーにより投与されることが好ましい。
【００５７】
化合物は有効な量で被験体に投与される。有効な量は、一般的に１日あたり体重１ｋｇあたり０．０１ｍｇ〜５００ｍｇである。一部の実施形態では、医薬上許容される組成物は、１日あたり体重１ｋｇあたり前記化合物０．０１ｍｇ〜１００ｍｇの間の投薬量を、これらの組成物を受ける患者に投与することができるように処方され得る。ある特定の実施形態では、本発明の組成物は、０．０１ｍｇ〜７０ｍｇの間の投薬量を与えるように処方される。その他の実施形態では、本発明の組成物は、０．１ｍｇ〜２５ｍｇの間または５ｍｇ〜６０ｍｇの間の投薬量を与えるように処方される。
【００５８】
一部の実施形態では、有効な用量は、約５〜２５０ｍｇ／ｋｇの間、約１０〜２００ｍｇ／ｋｇの間、または約２０〜１２０ｍｇ／ｋｇの間である。一部の実施形態では、有効な用量には、５ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ、２５ｍｇ／ｋｇ、４０ｍｇ／ｋｇ、５０ｍｇ／ｋｇ、６０ｍｇ／ｋｇ、７５ｍｇ／ｋｇ、１００ｍｇ／ｋｇ、１２０ｍｇ／ｋｇおよび１５０ｍｇ／ｋｇが含まれる。投与形は、例えば、錠剤またはカプセル剤の形であってよく、有効な用量は１以上の錠剤、カプセル剤または同類のもので与えることができ、１日１回または１日を通して、例えば、４時間、８時間または１２時間の間隔で与えることができる。例えば、錠剤またはカプセル剤は、例えば、１０ｍｇ、２５ｍｇ、５０ｍｇ、７５ｍｇ、１００ｍｇ、１５０ｍｇ、２００ｍｇの化合物を含有することができる。あらゆる用量が容易にかつ便宜に分配され得るように、液体処方物も調製されてよい。
【００５９】
一部の実施形態では、単一投与形で組成物を作製するために賦形剤材料と組み合わせることのできる本発明の化合物の量は、治療する宿主、および特定の投与経路によって変動することになる。
【００６０】
また、特定患者についての具体的な投薬量および治療計画が、使用される具体的な化合物の活性、年齢、体重、全般的健康、性別、食生活、投与時期、排出速度、薬物組合せ、および治療する医師の判断および治療される特定の疾患の重篤度を含む、様々な因子によって決まることは当然理解される。組成物中の本発明の化合物の量もまた、組成物中の特定の化合物によって決まる。
【００６１】
本明細書に記載される本発明がさらに十分に理解されるように、以下の実施例を示す。これらの実施例は例示を目的としたものでしかなく、本発明を限定するものと解釈してはならないことは当然理解される。比較化合物が下のいくつかの実施例で使用される。比較化合物の式は以下の通りである。
【化１８】
0005486602.tif 000026
【００６２】
本発明の例となる化合物は、下に記載されるスキームおよび実験計画に従って調製された。
【実施例】
【００６３】
（実施例１）
（化合物４０の合成）
【化１９】
0005486602.tif 000027
化合物４０。上に表されるように、１−ブロモ−３−クロロプロパン（７．３ｍＬ、０．０７４モル）を、化合物３９（５．６２ｇ、０．０２４７モル）および炭酸カリウム（１０ｇ、０．０７４モル）のＤＭＳＯ（５０ｍＬ）中の攪拌混合物に室温にて添加し、得られる混合物を４時間攪拌し、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）により反応が完了したことが示された。次に、混合物を水（２００ｍＬ）に注入し、１５０ｍＬ酢酸エチル（ＥｔＯＡｃ）で３回抽出し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮させた。残渣の真空クロマトグラフィー（１０％〜３０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）により、白色の固体生成物である化合物４０を得た（８．１０ｇ、８６％）。ヘキサン／ＥｔＯＡｃ中で結晶化させて白色の純粋な固体生成物（６．４０ｇ）を得、母液は少量の不純物（１．６０ｇ）を含んだ。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ  ８．１１（ｄ，Ｊ＝９．１Ｈｚ，２Ｈ）、７．５５（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ）、７．２７（ｄ，Ｊ＝２．３Ｈｚ，１Ｈ）、７．１１（ｄ，Ｊ＝９．１Ｈｚ，２Ｈ）、７．００（ｄｄ，Ｊ＝２．３，８．８Ｈｚ，１Ｈ）、４．２２（ｔ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，２Ｈ）、４．１９（ｔ，Ｊ＝６．１５，２Ｈ）、３．７８（ｔｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，４Ｈ）、２．３０（ｄｔ，Ｊ＝１．７６，１．７６Ｈｚ，４Ｈ）。出発化合物の化合物３９の調製については、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２００４，４７，５０２１−５０４０を参照されたい。
【００６４】
同じ反応を化合物３９の異性体を用いて行った。異性体化合物４７および化合物４８を、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２００４，４７，５０２１−５０４０に記載される合成手順によって調製した。
【化２０】
0005486602.tif 000028
【００６５】
（実施例２）
（化合物４９の合成）
【化２１】
0005486602.tif 000029
化合物４９。実施例１の１−ブロモ−３−クロロプロパンを１−ブロモ−２−クロロエタンに置き換えて、化合物４９を得た。
【００６６】
（実施例３）
（化合物５０の合成）
【化２２】
0005486602.tif 000030
（化合物３９）（化合物５０）
化合物５０。実施例１の１−ブロモ−３−クロロプロパンを１−ブロモ−５−クロロペンタンで置き換えて、化合物５０を得た。
【００６７】
（実施例４）
（化合物２３の合成）
【化２３】
0005486602.tif 000031
化合物２３。上のスキームを参照して、実施例１に記載される通り製造された化合物４０（８．４０ｇ、０．０２２１モル）とピロリジン（７．４ｍＬ、０．０８８モル）のエタノール（５０ｍＬ）中の混合物を、封管下、１００℃にて１２時間加熱した。ＴＬＣ（メタノール（Ｅｔ３Ｎ／ＭｅＯＨ）中２０％トリエチルアミン）により、単一の新しいスポットが示され、質量分析により、４５０（Ｍ＋Ｈ）の単一の所望のピークが示された。混合物を室温まで冷却し、濃縮させ、トルエンとの共沸濃縮により過剰なピロリジンを除去した（５０ｍＬ中３回）。残渣をエタノール（ＥｔＯＨ）に溶解させ、濾過し、濃縮させた。残留固体をＭｅＯＨ／ＥｔＯＡｃ中で結晶化させて、純粋な生成物である化合物２３（７．８８ｇ、６８％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ  ８．１２（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，２Ｈ）、７．５７（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ）、７．２８（ｄ，Ｊ＝２．２Ｈｚ，１Ｈ）、７．１２（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，２Ｈ）、７．０１（ｄｄ，Ｊ＝２．２．８．８Ｈｚ，１Ｈ）、４．１８（ｔ，Ｊ＝５．８６Ｈｚ，２Ｈ）、４．１５（ｔ，Ｊ＝６．１５Ｈｚ，２Ｈ）、３．０７−２．９４（ｍ，１２Ｈ）、２．１５（ｍ，４Ｈ）、１．９６（ｍ，８Ｈ）：ＭＳ（ＥＳ＋）ｍ／ｚ  ４５０．４。
【００６８】
（実施例５）
（化合物３０の合成）
【化２４】
0005486602.tif 000032
化合物３０。上のスキームを参照して、実施例１に記載される通り製造された化合物４０（１３．４ｇ、０．０３５２モル）とピペリジン（１４ｍＬ、０．１４モル）のエタノール（１００ｍＬ、２モル）中の混合物を、封管下、１００℃にて１８時間加熱した。ＴＬＣ（１０％Ｅｔ３Ｎ／ＭｅＯＨ）により、単一のスポットが示され、ＭＳにより、４７８（Ｍ＋Ｈ）の１つの単一の所望のピークが示された。混合物を、濃縮させ、トルエンとの共沸濃縮により過剰なピペリジンを除去した（５０ｍＬ中３回）。残渣を、ＭｅＯＨを添加した水に溶解させ、次いで１ＮのＮａＯＨを、適度に攪拌しながら、さらなる沈殿が形成されなくなるまで添加した。混合物を濃縮して残留ＭｅＯＨを除去し、濾過し、水で洗浄した。収集した遊離形態の固体（真空乾燥後１６．５５ｇ、３４．７ミリモル）を、暖かいＭｅＯＨ（１００ｍＬ）に溶解させ、７０ｍＬの１ＮのＨＣｌ（７０ミリモル）で処理して二塩酸塩を生じ、混合物を濃縮乾固した。残留固体をＭｅＯＨ／ＥｔＯＡｃ中で結晶化させて、純粋な生成物である化合物３０（１６．０ｇ、８２％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ  ８．１３（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ）、７．５８（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ）、７．２９（ｄ，Ｊ＝２．３Ｈｚ，１Ｈ）、７．１４（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ）、７．０２（ｄｄ，Ｊ＝２．３，８．８Ｈｚ，１Ｈ）、４．２１（ｔ，Ｊ＝５．５７Ｈｚ，２Ｈ）、４．１９（ｔ，Ｊ＝５．５７Ｈｚ，２Ｈ）、３．５９（ｍ，４Ｈ）、３．３４（ｍ，４）、２．９９（ｍ，４ｈ）、２．２８（ｔｔ，Ｊ＝２．３、５．６Ｈｚ，４Ｈ）、２．００−１．５０（ｍ，１２Ｈ）：ＭＳ（ＥＳ＋）ｍ／ｚ  ４７８．５。
【００６９】
（実施例６）
（化合物５１の合成）
【化２５】
0005486602.tif 000033
化合物５１。化合物５１などの類似体は、次の手順を用いて半自動化合成（ＳＡＳ）を用いて調製することができる。化合物４０（２７．０ｍｇ、０．０７１ミリモル）とシクロペンチルアミン（９８．６ｍｇ、１．１６ミリモル）のＮ−メチルピロリジノン（０．５ｍＬ）中の混合物を、１８０℃にて３００秒間マイクロ波により加熱した。粗反応混合物を、酸性条件下、ＬＣ／ＭＳにより精製した。回収した、目的生成物を含有する画分を、分析的ＬＣ／ＭＳにより純度についてチェックした。この化合物の全体的な純度は、＞９５％であり、ｍ／ｚ＝４７８．５であった。純粋な生成物を含有する２種類の画分を合し、蒸発させて生成物である化合物５１（２２．５ｍｇ、６６．４％）を得た。
【００７０】
（実施例７）
（例となる化合物）
下の表１中の以下の類似体が調製された。これらの化合物は、表中に特定される対応するジクロロアルカンおよび側鎖アミンを用いて、化合物２３（実施例４）および／または化合物３０（実施例５）の調製のための手順に従って調製することができる。これらの化合物は、化合物５１（実施例６）の調製のための手順に従っても調製することができる。
【００７１】
表１．例となる化合物
【表２Ａ】
0005486602.tif 000034
【表２Ｂ】
0005486602.tif 000035
【表２Ｃ】
0005486602.tif 000036
【表２Ｄ】
0005486602.tif 000037
【表２Ｅ】
0005486602.tif 000038
【表２Ｆ】
0005486602.tif 000039
【表２Ｇ】
0005486602.tif 000040
【００７２】
（上の表の化合物選択のためのＮＭＲデータ）
化合物１：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ  ８．１４（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ）、７．５８（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ）、７．３３（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ）、７．１６（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ）、７．０６（ｄｄ，Ｊ＝２．２，８．８Ｈｚ，１Ｈ）、４．２８（ｍ，４Ｈ）、３．１０（ｍ，４Ｈ）、２．６８（ｓ，６Ｈ）、２．５７（ｓ，６Ｈ）。
【００７３】
化合物２：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ  ８．１４（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ）、７．５９（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ）、７．３０（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ）、７．１５（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ）、７．０４（ｄｄ，Ｊ＝２．４，８．８Ｈｚ，１Ｈ）、４．２１（ｍ，４Ｈ）、３．３４（ｍ，４Ｈ）、２．９３（ｓ，６Ｈ）、２．９２（ｓ，６Ｈ）、２．６８（ｓ，６Ｈ）、２．２６（ｍ，４Ｈ）。
【００７４】
化合物３：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ  ８．１５（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ）、７．５５（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ）、７．２４（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ）、７．１０（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ）、６．９８（ｄｄ，Ｊ＝２．４，８．８Ｈｚ，１Ｈ）、４．１０（ｍ，４Ｈ）、３．２５（ｍ，４Ｈ）、１．９０（ｍ，４Ｈ）、１．７８（ｍ，４Ｈ）、１．５９（ｍ，４Ｈ）。
【００７５】
化合物４：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ  ８．１８（ｄｄ，Ｊ＝１．６，８．０Ｈｚ，１Ｈ）、７．７２（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，１Ｈ）、７．６０（ｍ，１Ｈ）、７．３７（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ）、７．３０（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ）、７．２１（ｄｄ，Ｊ＝７．２，８．０Ｈｚ，１Ｈ）、７．０９（ｄｄ，Ｊ＝２．６，９．０Ｈｚ，１Ｈ）４．３９（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ）、４．２０（ｔ，Ｊ＝５．８，２Ｈ）、３．２２（ｄｄ，Ｊ＝７．６，８．４Ｈｚ，２Ｈ）、３．０５（ｓ，６Ｈ）、２．８２（ｓ，６Ｈ）、２．３８（ｍ，２Ｈ）、２．２３（ｍ，２Ｈ）。
【００７６】
化合物５：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ  ７．７９（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ）、７．７５（ｄｄ，Ｊ＝１．６，２．４Ｈｚ，１Ｈ）、７．６３（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ）、７．５０（ｄｄ，Ｊ＝８．０，８．０Ｈｚ，１Ｈ）、７．３２（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ）、７．１８（ｄｄ，Ｊ＝２．６，８．６Ｈｚ，１Ｈ）、７．０６（ｄｄ，Ｊ＝２．４，８．８Ｈｚ，１Ｈ）４．２１（ｍ，４Ｈ）、３．３２（ｍ，４Ｈ）、２．９１（ｓ，６Ｈ）、２．９０（ｓ，６Ｈ）、２．２５（ｍ，４Ｈ）。
【００７７】
化合物２０：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ  ８．１０（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ）、７．５５（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ）、７．２５（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ）、７．１０（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ）、６．９９（ｄｄ，Ｊ＝２．４、８．８Ｈｚ，１Ｈ）、４．１２（ｍ，４Ｈ）、３．０４（ｂｄ，Ｊ＝１０．８Ｈｚ，４Ｈ）、２．６６（ｂｓ，８Ｈ）、２．５７（ｍ，４Ｈ）、２．１５−１．９０（ｍ，１４Ｈ）、１．８２（ｍ，８Ｈ）、１．６０（ｍ，４Ｈ）。
【００７８】
化合物２７：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ  ８．１３（ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，２Ｈ）、７．５８（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ）、７．２９（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ）、７．１３（ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，２Ｈ）、７．０３（ｄｄ，Ｊ＝２．２，８．６Ｈｚ，１Ｈ）、４．２０（ｍ，４Ｈ）、３．６０−３．１０（ｍ，１２Ｈ）、２．９８（ｓ，６Ｈ）、２．９３（ｓ，１２Ｈ）、２．２５（ｍ，８Ｈ）。
【００７９】
化合物３５：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ  ８．１０（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ）、７．５５（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ）、７．２５（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ）、７．１０（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ）、６．９９（ｄｄ，Ｊ＝２．４，８．８Ｈｚ，１Ｈ）、４．１０（ｍ，４Ｈ）、３．６０（ｍ，８Ｈ）、２．６５（ｍ，８Ｈ）、２．３５（ｍ，１８Ｈ）、２．０２（ｍ，４Ｈ）。
【００８０】
化合物３６：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ  ８．１４（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ）、７．５５（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ）、７．３０（ｄ、Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ）、７．１３（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ）、７．０３（ｄｄ，Ｊ＝２．４，８．８Ｈｚ，１Ｈ）、４．２２（ｍ，４Ｈ）、３．９２（ｂｓ，４Ｈ）、３．８７（ｍ，４Ｈ）、３．６０−３．２０（ｍ，１２Ｈ）、３．００（ｓ，６Ｈ）、２．９２（ｓ，１２Ｈ）、２．３０（ｍ，４Ｈ）。
【００８１】
化合物３７：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ  ８．１４（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ）、７．５９（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ）、７．３１（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ）、７．１５（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ）、７．０４（ｄｄ，Ｊ＝２．４，８．８Ｈｚ，１Ｈ）、４．２３（ｍ，４Ｈ）、３．５８（ｍ，８Ｈ）、３．５５−３．３５（ｍ，６Ｈ）、ｍ  ３．２３（ｍ，６Ｈ）、２．９６（ｓ，６Ｈ）、２．９０（ｍ，１２Ｈ）、２．３０（ｍ，４Ｈ）、２．０５（ｍ，８Ｈ）。
【００８２】
化合物３８：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ  ８．１３（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ）、７．５８（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ）、７．２９（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ）、７．１３（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ）、７．０２（ｄｄ，Ｊ＝２．４，８．８Ｈｚ，１Ｈ）、４．２０（ｍ，４Ｈ）、３．３０−３．５０（ｍ，４Ｈ）、３．１８（ｍ，６Ｈ）、２．８５−２．９６（ｍ，１８Ｈ）、２．２８（ｍ，４Ｈ）、１．８２（ｍ，６Ｈ）。
【００８３】
（実施例８）
（化合物３４の合成）
【化２６】
0005486602.tif 000041
化合物３４。上のスキームを参照して、４−アミノレソルシノールヒドロクロリド（５．３ｇ、３３ミリモル）、４−ベンジルオキシ安息香酸（５．０ｇ、２２ミリモル）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（５．９ｇ、４４ミリモル）、ベンゾトリアゾール−１−イル−オキシトリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（２３ｇ、４４ミリモル）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１９ｍＬ，１１０ミリモル）のジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）（５０ｍＬ）中の混合物を、０℃で室温まで一晩攪拌した。濃縮によってＤＭＦを除去した後、反応混合物をシリカゲルクロマトグラフィー（２０％〜８０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン、ＥｔＯＡｃおよび３０％ＭｅＯＨ／ＥｔＯＡｃ）により精製して、所望のアミド化合物４１（または／およびエステル、７．３ｇ、９５％）を得た。
【００８４】
化合物４１（７．３ｇ、２２ミリモル）の酢酸（９０ｍＬ）中溶液を、１２０℃にて３時間加熱した。反応混合物を室温まで冷却し、濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（１０％〜３０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）により精製して、目的生成物である化合物４２（２．０ｇ、２９％）を淡黄色の固体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ  ８．０９（ｄ，Ｊ＝９．１Ｈｚ，２Ｈ）、７．４７−７．４（ｍ，６Ｈ）、７．１６（ｄ，Ｊ＝９．１Ｈｚ，２Ｈ）、７．０２（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ）、７．０２（ｄｄ，Ｊ＝２．４，８．５Ｈｚ，１Ｈ）、５．１８（ｓ，２Ｈ）：ＭＳ（ＥＳ−）ｍ／ｚ  ３１６．４。
【００８５】
化合物４２（１．７７ｇ、５．５８ミリモル）、１−ブロモ−３−クロロプロパン（１．６ｍＬ、１７ミリモル）および炭酸カリウム（２．７ｇ、２０ミリモル）の混合物を１０ｍＬのＤＭＳＯ中で室温にて２．５時間、ＴＬＣにより反応が完了するまで攪拌した。反応を水の添加によってクエンチし、次いでＥｔＯＡｃで５、３回（five three times）抽出した。合した有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮させた。残渣を酢酸エチル−へキサンから結晶化させて、化合物４３を淡色の固体（１．９３ｇ、８８％）として得た。
【００８６】
化合物４３（１．１０ｇ、２．８ミリモル）の４０ｍＬのエタノール中の懸濁液に、５ｍＬのジメチルアミンを−７８℃で添加した。混合物を封管に入れて封をし、１００℃にて１０時間加熱した。混合物を濃縮して化合物４４（１．１ｇ、９８％）を得た。生成物を次の段階の反応に進めた。
【００８７】
化合物４４（１．１ｇ、２．７ミリモル）およびパラジウムヒドロキシド（７ｍｇ）の３２ｍＬのメタノールおよび５ｍＬのジクロロメタン中の混合物を、水素バルーン下、室温にて一晩攪拌した。混合物をセライトを通じて濾過し、濾液を濃縮して粗生成物である化合物４５を得た。理論収率を０．８５ｇと仮定し、生成物をさらなる精製をせずに次の段階に直接進めた。
【００８８】
化合物４５（２００ｍｇ、０．６４ミリモル）、１−ブロモ−３−クロロプロパン（０．３２ｍＬ、３．２ミリモル）および炭酸カリウム（４７０ｍｇ、３．４ミリモル）の混合物を４ｍＬのＤＭＳＯ中で室温にて２時間、ＴＬＣにより反応が完了するまで攪拌した。反応を水の添加によってクエンチし、次いでＥｔＯＡｃで４回抽出した。合した有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮させた。残渣を分取ＴＬＣ（５％ＭｅＯＨ／ＴＨＦ中、４％Ｅｔ３Ｎ）により精製して、化合物４６（１７０ｍｇ、６８％）を得た。
【００８９】
化合物４６（３０ｍｇ、０．０８ミリモル）、Ｎ，Ｎ，Ｎ’−トリメチル−１，３−プロパン−ジアミン（５０ｍｇ、０．４３ミリモル）の混合物を２ｍＬのエタノール中で、封管下、１００℃にて１０時間加熱した。混合物を濃縮させ、残渣をＨＰＬＣにより精製して、８ｍｇの化合物３４を白色固体（８ｍｇ、２０％）として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ  ８．１０（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ）、７．５５（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ  １Ｈ）、７．２５（ｄ，Ｊ＝２．３Ｈｚ，１Ｈ）、７．１０（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ）、７．００（ｄｄ，Ｊ＝２．３，８．８Ｈｚ，１Ｈ）、４．１４（ｔ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，２Ｈ）、４．１０（ｔ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，２Ｈ）、２．６９（ｍ，４Ｈ）、２．５６（ｍ，４Ｈ）、２．３９（ｓ，１２Ｈ）、２．３６（ｓ，３Ｈ）、２．０４（ｍ，４Ｈ）、１．７７（ｍ，２Ｈ）、ＭＳ（ＥＳ−）ｍ／ｚ＋Ｈ  ４６９．５５。
【００９０】
（実施例９）
（インビトロ生物活性）
（Ａ．一次アッセイ）
一次アッセイは、ヒト胚腎臓上皮（ＨＥＫ）細胞にＴＬＲ９をトランスフェクトすることを伴う。より具体的には、ｐＧＬ３−エンハンサーベクター（Ｐｒｏｍｅｇａ  Ｃｏｒｐ．Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）にクローニングされた、Ｅ−セレクチン−１プロモーターに含められた３つのＮＦ−ｋＢ結合部位の制御下、ＨＥＫ２９３線維芽細胞（ＡＴＣＣ番号  ＣＲＰ−１５７３、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）を、ヒトＴＬＲ９をコードするｐｃＤＮＡ３．１Ｄ／Ｖ５−Ｈｉｓ−ＴＯＰＯ（登録商標）プラスミド（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）およびホタルルシフェラーゼを用いてトランスフェクトした（Ｔａｑポリメラーゼ増幅ＰＣＲ産物として直接挿入した）。このアッセイで試験された化合物を下の表１に記載する。各々の化合物は、３０分細胞に添加された後、ヌクレオチド配列５’−ＴＣＧ  ＴＣＧ  ＴＴＴ  ＴＧＴ  ＣＧＴ  ＴＴＴ  ＧＴＣ  ＧＴＴ−３’（配列番号１）とともに、合成ホスホロチオエートオリゴヌクレオチドであるオリゴＣｐＧ２００６（Ｈａｒｔｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １６４：１６１７−２４（２０００））で刺激した。細胞を、３７℃にて一晩インキュベートした。ルシフェラーゼ基質Ｓｔｅａｄｙ−Ｇｌｏ（登録商標）（Ｐｒｏｍｅｇａ）をウェルに添加し、発光を測定してＴＬＲ９に駆動される（ＴＬＲ９−ｄｒｉｖｅｎ）遺伝子活性化の程度を決定した。発光データを用いて各々の試料についてのＩＣ５０を算出した。ＩＣ５０は、化合物の不在下で、言い換えれば完全な刺激を伴って観察される発光の５０％まで発光を抑制する化合物の濃度として定義される。このアッセイの結果を下の表２に示す。比較化合物のＩＣ５０は、０．１６マイクロモルであることが見出された。化合物１のＩＣ５０は、０．０６マイクロモルであることが見出され、残りの化合物のＩＣ５０は、０．０４マイクロモル未満であった。
【００９１】
（Ｂ．二次アッセイ）
（１）ＨＥＫ／ＴＬＲ７活性化アッセイ：一次アッセイと同じ化合物を、以下の違いを伴って同じように試験した。ＨＥＫ細胞株をトランスフェクトするために使用したプラスミドは、ＴＬＲ９の代わりにヒトＴＬＲ７をコードし、オリゴＣｐＧ２００６の代わりにＲ８４８を用いて細胞を刺激した。このアッセイの結果も表２に記載する。試験した各々の化合物について、上のＨＥＫ／ＴＬＲ９活性化アッセイから得られるＩＣ５０は、ＨＥＫ／ＴＬＲ７アッセイから得られるＩＣ５０よりも有意に低く、ＴＬＲ７に対するよりもＴＬＲ９に対する特異性が大きいことが示される。
【００９２】
（２）脾細胞ＣｐＧ１６６８アッセイ：一次アッセイで試験した一部の化合物は、ヌクレオチド配列５’−ＴＣＣ  ＡＴＧ  ＡＣＧ  ＴＴＣ  ＣＴＧ  ＡＴＧ  ＣＴ−３’（配列番号２）とともに、合成ホスホロチオエートオリゴヌクレオチドであるオリゴＣｐＧ１６６８（Ｋｒｉｅｇ  ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ．３７４：５４６−９（１９９５））による刺激に応答するマウス脾臓ＩＬ−６産生の抑制についてもアッセイした。各々の化合物を分離された脾細胞に添加してから、刺激性オリゴヌクレオチドを添加した。細胞を培養中で７２時間刺激し、ＩＬ−６レベルのＥＬＩＳＡ分析用に上清を取り出した。ここで、ＩＣ５０は、化合物の不在下で、言い換えれば完全な刺激を伴って観察されるサイトカイン産生の５０％までサイトカイン産生を抑制する化合物の濃度として定義される。比較化合物を除いて、試験した全ての化合物は、１μＭより低いＩＣ５０でマウス脾細胞の刺激を阻害した。このアッセイの結果を下の表２に示す。
【００９３】
（３）脾臓ＣＴ  Ｇｌｏアッセイ：化合物が生細胞への有害作用を有するかどうかを決定するため、分離されたマウス脾細胞を一部の化合物とともに７２時間インキュベートした。インキュベーションの終わりにＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（商標）試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ．Ｍａｄｉｓｏｎ．ＷＩ）を添加し、製造業者の指図書によって発光を読み取った。この試薬は、ＡＴＰを細胞代謝の指標として測定する。死細胞は、シグナルを生じないものである。ＩＣ５０は、化合物の不在下で観察される生存力の５０％まで生存力を抑制する化合物の濃度として定義される。生存力に測定可能な程度に影響を及ぼした少数の化合物は、ＴＬＲ９刺激に応答するサイトカイン放出に影響を及ぼす濃度よりもはるかに高い濃度で影響を及ぼした。結果を表２に示す。これらの結果は、ＴＬＲ９抑制が細胞の死または脆弱性に起因するものでないことを示す。
【００９４】
（４）ＰＢＭＣ  ＣｐＧ２２１６アッセイ：上記のように試験した化合物の一部は、ヌクレオチド配列５’−ｇｇＧ  ＧＧＡ  ＣＧＡ  ＴＣＧ  ＴＣｇ  ｇｇｇ  ｇＧ−３’（小文字はホスホロチオエート結合を示す、その他は全てホスホジエステル）（配列番号３）とともに、合成オリゴホスホロチオエート／ホスホジエステルオリゴヌクレオチドであるオリゴＣｐＧ２２１６（Ｖｏｌｌｍｅｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．３４：２５１−６２（２００４））による刺激に対するヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）α−インターフェロン応答の抑制についてもアッセイした。各々の化合物をＦｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕｅ（商標）（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，ＵＫ）に添加して、健常なボランティアドナーから単核細胞を分離した後、刺激性オリゴヌクレオチドを添加した。細胞を培養中で７２時間刺激し、α−インターフェロンのＥＬＩＳＡ分析用に上清を取り出し、ＥＬＩＳＡ分析をＶｅｒｉＫｉｎｅ（商標）ヒトＩＦＮ−αＥＬＩＳＡキット（Ｐｅｓｔｋａ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，ＮＪ）を用いて行った。このアッセイで試験した全ての化合物は、１μＭより低いＩＣ５０でヒトＰＢＭＣの刺激を阻害した。
【００９５】
下の表２は、試験した化合物、および上に記載され考察されるアッセイの各々から得られる結果を示す。
【００９６】
【表３Ａ】
0005486602.tif 000042
【表３Ｂ】
0005486602.tif 000043
【００９７】
（実施例１０）
（インビボ生物活性：短期ＣｐＧ刺激）
短期ＣｐＧ刺激アッセイ：上の実施例９に記載されるＨＥＫ／ＴＬＲ９および脾細胞ＣｐＧ１６６８アッセイにおいて効力を有すると特定された化合物を、インビボでの短期ＣｐＧ刺激アッセイにおいて試験した。マウスに水中の化合物を経口投与し、９０分以内に、３０μｇのオリゴＣｐＧ１６６８の皮下（ｓ．ｃ．）注射を投与した。２時間後、血清を採取し、ＥＬＩＳＡ分析を用いてＩＬ−６についてアッセイした。このアッセイの結果を下の表３に示す。異なる日付に反復されたアッセイから得られる結果は、コンマで隔てられる複数の数字として示される。
【００９８】
【表４】
0005486602.tif 000044
【００９９】
表３は、２０ｍｇ／ｋｇの化合物２３、化合物３０、または化合物２６の経口投与の１．５時間後に少なくとも６９％のＩＬ−６の抑制が観察されたことを示す。少なくとも７５％のＩＬ−６の抑制が化合物２３および化合物３０の経口投与後に観察された。上記のインビトロアッセイで高レベルの抑制を提示したにもかかわらず、試験した２種類の化合物、化合物１４および化合物２０の投与後には抑制は観察されなかった。残りの化合物は様々なレベルのＩＬ−６抑制を提示した。
【０１００】
（実施例１１）
（インビボ生物活性：リンパ節応答）
上の実施例１０に記載されるアッセイされた２種類の化合物、化合物２３および化合物３０は、特に高レベルの抑制を示した。マウスにそれらの２種類の化合物の１種類またはヒドロキシクロロキン（「ＨＣＱ」）を、毎日２０ｍｇ／ｋｇかまたは６０ｍｇ／ｋｇで２週間経口投与した。インビボ投薬の後、リンパ節を取り出してインビトロで１μｇ／ｍｌのＣｐＧ１６６８を用いて７２時間刺激し、その後上清を取り出してＥＬＩＳＡによりＩＬ−６についてアッセイした。このアッセイの結果を図１に示す。投薬のレベルは図中に表示される各々の化合物名の後に示される。
【０１０１】
図１の結果は、化合物２と化合物２３の両方がリンパ節においてＩＬ−６放出を抑制したことを示し、化合物２３はわずか２０ｍｇ／ｋｇの投与によっても特に高レベルの抑制を示した。
【０１０２】
（実施例１２）
（インビボ生物活性：自発的狼瘡モデル）
（Ａ．ＭＲＬ／ＭｐＪ−ｆａｓｌｐｒ／Ｊ  実験１）
この実験では、Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓより入手したＭＲＬ／ＭｐＪ−ｆａｓｌｐｒ／Ｊマウス（「ＭＲＬ／ｌｐｒ」）に、水中２０または６０ｍｇ／ｋｇの化合物２３を経口的に投薬した。ＭＲＬ／ｌｐｒマウスは、リンパ球死に欠陥を有し、ヒト全身性紅斑性狼瘡（ＳＬＥ）に見出される抗核抗体を含む自己抗体を自発的に発生させる。投薬は、５週齢に開始して週に５回毎日行った。血液および尿試料を１日目の投薬前に採取し、以降３〜４週毎に採取した。ＥＬＩＳＡアッセイを用いて投薬の７週前および７週後の血清抗ｄｓＤＮＡを測定した。マウス抗ｄｓＤＮＡ全Ｉｇ定性ＥＬＩＳＡキット（Ａｌｐｈａ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ．Ｓａｎ  Ａｎｔｏｎｉｏ，ＴＸ）を用いてアッセイを行った。結果を図２に示す。図２は、この自己抗体への用量設定効果を示し、ビヒクルを投与された動物に対して４５０ｎｍでの平均光学濃度（Ｏｐｔｉｃａｌ  Ｄｅｎｓｉｔｙ）（ＯＤ４５０）が統計上有意に抑制された。統計的有意差は投薬１０週でなお観察されたが、その後化合物治療群は１２週およびそれ以降に、経口によってｄＨ２Ｏを投薬されたビヒクル治療動物に一層類似するようになった。全体的な様子または体重測定で判断して、投薬量に関連する毒性の根拠は見られなかった。
【０１０３】
抗核抗体（「ＡＮＡ」）も、この実験において、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ｉｎｃ．製のスライド上の固定された試料として得た固定されたＨｅｐＧ２細胞を、上記のように化合物２３を２０または６０ｍｇ／ｋｇで投薬したマウスから得た希釈血清に曝露し、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ｉｎｃ．により供給されるキット試薬をキットの説明書に従って使用してマウス免疫グロブリンについて染色することにより調査された。次に、蛍光染色の強度を顕微鏡で読み取り、スコアに−から＋＋＋の間の値を割り当てた。試料の識別表示はデータ収集のために隠した（ｂｌｉｎｄｅｄ）。
【０１０４】
図３は、ＡＮＡ試験の結果をグラフによって図示する。図３は、ビヒクル処理マウスが５〜１２週齢の間に徐々にＡＮＡ陽性となったが、一方、化合物処理マウスから得た血清が陽性ＡＮＡ染色に対してはるかに遅い進行を示したという点で、ＡＮＡ発生の用量依存性の抑制を示す。
【０１０５】
（Ｂ．ＭＲＬ／ｌｐｒ  実験２）
このＳＬＥ実験において、投薬群は、下の表４に記載される通りであった。化合物２３の２種類の用量レベルをＨＣＱおよびシクロホスファミド（Ｃｙｔｏｘａｎ（登録商標））と比較した。ＨＣＱおよびシクロホスファミドは、それぞれ、皮膚狼瘡および全身性狼瘡の治療に現在使用されている。シクロホスファミドは、一貫した血清抗ｄｓＤＮＡレベルの抑制を示した。この差は、ＡＮＯＶＡによりビヒクルに対して試験した場合に８週および１２週の投薬時点で統計上有意であった。１２週間の投薬前および投薬後の個々の動物血清について４５０ナノメートルでの光学濃度（ＯＤ４５０）のＥＬＩＳＡアッセイから得られる結果を図４に示す。血清は、ＰＢＳ中１：６００希釈でアッセイした。（マウス抗ｄｓＤＮＡ全Ｉｇ定性ＥＬＩＳＡキット、Ａｌｐｈａ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ）。投薬は、経口（ｐ．ｏ．）かまたは腹腔内（ｉ．ｐ．）投与のいずれかにより行った。このアッセイから得られる個々のデータポイントを図４に図示する。図４は、１２週で、ビヒクルと高用量の化合物２３との間に平均ｄｓＤＮＡレベルの統計上の有意差があったことも示す。
【０１０６】
タンパク尿（ＢＣＡタンパク質アッセイにより測定）または皮膚病変への影響は、この実験でいずれの化合物によっても見られなかった。
【０１０７】
【表５】
0005486602.tif 000045
【０１０８】
（実施例１３）
（インビボ生物活性：ＮＺＢＷＦ１／Ｊ自発的狼瘡モデル）
化合物２３および化合物３０のインビボ研究を、ＮＺＢＷＦ１／Ｊマウスモデルで行った。マウスはＪａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓより入手し、１２の群に分け、水中の化合物を５ヶ月齢で開始し週に５日、経口的に投薬した。投薬の詳細を下の表５に提供する。
【０１０９】
【表６】
0005486602.tif 000046
【０１１０】
この研究で試験した化合物の化合物２３または化合物３０はいずれも、２０ｍｇ／ｋｇまたは６０ｍｇ／ｋｇの化合物の投薬後の１６週の治療の間、抗ｄｓＤＮＡへの効果を示さなかった。この研究の結果を図５に図示する。短期アッセイで化合物２３よりも多少高い効力を示した化合物３０は、６０ｍｇ／ｋｇの高用量で抗ｄｓＤＮＡをいくらか抑制したが、これは統計上有意でなかった。ＡＮＡを同じ実験で測定し、１２頭のビヒクル治療動物のうち５頭しか＋／−またはそれよりも高いスコアに達しなかったものの、１２週の治療後のＡＮＡスコアの分布に化合物の効果はなかった。ＡＮＡスコアリングの結果を図６に図示する。
【０１１１】
化合物２３および化合物３０は、３〜４ヶ月の投薬後にＮＺＢＷＦ１／Ｊマウス系統において用量に関連する体重減少を一貫して生じた。筋肉、脳、腎臓および脾臓の組織学的検査は、ヘマトキシリンおよびエオシン染色において明らかな病態を示さなかった。
【０１１２】
６０および２０ｍｇ／ｋｇの化合物２３を用いる毎日経口投薬の結果として、ＳＬＥのＭＬＲ／ｌｐｒモデルにおける抗ｄｓＤＮＡの抑制がもたらされた。化合物２３はまた、抗核抗体発生の用量依存性の阻害も示した。シクロホスファミドはＭＲＬ／ｌｐｒモデルにおいて抗ｄｓＤＮＡを抑制したが、一方ヒドロキシクロロキンは検出可能な効果がなかった。さらに、ＮＺＢ／Ｗ系での化合物２３の試験により、抗ｄｓＤＮＡ、ＡＮＡ、またはタンパク尿への効果は示されなかった。用量依存性の体重減少は、ＮＺＢ／Ｗマウスにおいて数ヶ月の投薬の後に観察された。
【０１１３】
（実施例１４）
（インビボ生物活性：実験的自己免疫性脳炎  多発性硬化症モデル）
実験的自己免疫性脳炎（ＥＡＥ）は、ヒト多発性硬化症を模倣する、マウスにおいて誘導される自己免疫であり、自己免疫には、自己抗体、および中枢神経系抗原に対して標的とされる細胞応答が含まれる。ＥＡＥを誘導するため、８頭の雄Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウス（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）の群を、完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）中２００μｇ／マウスの用量で、アミノ酸配列ＭＥＶＧＷＹＲＳＰＦＳＲＶＶＨＬＹＲＮＧＫ（配列番号４）とともに、合成ペプチドＭＯＧｐ３５−５５（Ｂｅｃｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１１２：１１８６−１１９１（２００３））で０日目に皮下に免疫化した。同時に、動物に百日咳毒素を腹腔内に３０ｎｇ／マウスで投与した。２日目に、百日咳注射を繰り返した。７日目に、マウスを不完全フロイントアジュバント中２００μｇ／マウスのＭＯＧｐ３５−５５で追加免疫した。９日目から、２０ｍｇ／ｋｇまたは６０ｍｇ／ｋｇの水中の化合物２３を用いて経口胃管栄養法により毎日投与した。尾および四肢の麻痺の程度および位置を観察することにより症状をスコア化し、各々の８頭のマウス群の平均スコアを示す。
【０１１４】
この研究の結果を図７に示す。ＭＯＧに誘導されるＥＡＥは、対照マウスと比較して、２０ｍｇ／ｋｇの化合物２３を投与したマウスにおいて有意に抑制され、６０ｍｇ／ｋｇの同じ化合物を投与したマウスにおいてさらに抑制されたことを観察することができる。
【０１１５】
（実施例１５）
（インビボ生物活性：コラーゲン誘発関節炎）
ＩＩ型コラーゲン誘発関節炎モデルを、関節炎の治療のために化合物２をインビボで評価するために使用した。このモデルでは、関節炎を、完全フロイントアジュバントを用いて雄ＤＢＡ／１Ｊ（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｓ）マウスにおいて誘導した。最初のプライミング／免疫化用量の３００μｇの、等容積の完全フロイントアジュバントで乳化したウシＩＩ型コラーゲンを、尾の付け根から少なくとも５ｍｍの皮下に（ｓ．ｃ．）注射する。
【０１１６】
免疫化後９日目に開始して、以降毎日週に５日、各々のマウスに、６ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ、または６０ｍｇ／ｋｇの化合物２あるいはプラセボを１週間あたり５日、経口的に投与した。
【０１１７】
２回目の免疫化用量は、最初の免疫化の２１日後に、等容積の不完全フロイントアジュバントで乳化した、２００μｇのウシＩＩ型コラーゲンの最初の免疫化部位よりも上に皮下注射により投与した。関節炎の進行をさらに促進するため、２回目の免疫化の３日後に、動物にリポ多糖（ＬＰＳ）（ＰＢＳ中１μｇ／マウス）の腹腔内注射を投与した。
【０１１８】
最初の免疫化用量の２１、２５、２８、および３１日後に、足腫脹のエビデンスについて動物を調べ、各々の時点の関節炎スコアを動物に割り当てた。このアッセイの結果を図８に示す。足腫脹の抑制は、６および２０ｍｇ／ｋｇを用いる投薬後に観察されたが、６０ｍｇ／ｋｇを用いる投薬後の結果は不明であった。異例の６０ｍｇ／ｋｇの結果から、この特定の動物モデルについての適切な上限投薬レベルを決定するさらなる研究の必要性が示唆される。
【０１１９】
（実施例１６）
（インビボ生物活性：盲腸結紮穿刺術）
盲腸結紮穿刺（ＣＬＰ）モデルは、腹部切開を行って盲腸（消化管の容易に単離される部分）を露出させ、盲腸の一部分を結紮する外科手技を伴う。次に、盲腸を穿刺し、少量の腸内容物を押し出す。切開を閉じ、動物に蘇生のための生理食塩水および抗生物質を与える。敗血症は、主に押し出された腸内容物からの殺菌に起因して発症し、疾患の発症は、盲腸の穿刺のサイズおよび数に依存する迅速性および重篤度とともに起こる。
【０１２０】
（Ａ．盲腸結紮穿刺術）
ケタミン、キシラジンおよびアセプロマジンの組合せの腹腔内投与によりマウスにおいて麻酔を誘導する。動物の腹部領域は短く刈ってよく、体温を測定するためのトランスポンダを皮下に埋め込む。この手順は無菌生存手術に適した領域で行う。この手順の間中、動物は加温パッドの上に置く。腹部領域は、ポビドン／ヨードおよびアルコールで最低３回交互に拭いて準備する。
【０１２１】
正中切開を行って腹部を開き、盲腸を露出する。生理食塩水で湿らせた綿棒（cotton-tipped applicators）を用いて盲腸を腹腔から摘出する。回盲弁のすぐ遠位で４−０縫合糸（sutures）を用いて盲腸の先端を結紮する。盲腸の内容物を一端に移動させて、次に盲腸を滅菌針で穿刺する。圧力を加えて少量の物質を盲腸から腹膜腔に押し出す。結紮は所定の位置に残して動かさない。筋肉および筋膜を連続的な４−０縫合糸で閉じ、皮膚を創傷ステープル（wound staples）で閉じる。
【０１２２】
手術直後に、体重１００ｇあたり５ｍｌの暖かい蘇生のための生理食塩水を皮下注射する。温度および体重のベースライン読みを記録する。手術１時間後、２０ｍｇ／ｋｇ用量の抗生物質モキシフロキサシンを試験されているいずれかの抗敗血症薬剤候補とともに腹腔内に投与する。研究の持続のために抗生物質を２４時間間隔で投与する。投与する抗生物質の用量は、ＣＬＰにより放出される細菌を根絶することを目的としているのではなく、その代わりにヒトが抗生物質を投与されるがそれらが効果のない場合の臨床シナリオをモデル化するために使用される。モキシフロキサシンはＱＴ間隔の延長に関係しているが、好ましくない薬物相互作用が回避される限り、臨床使用に安全であると考えられ（Ｔｏｒｒｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｓｕｒｇ  Ｒｅｓ．１２５：８８−９３（２００５））、該抗生物質は別のマウス敗血症モデルにおいて安全かつ効果的であると既に証明されている（Ａｌｋｏｒｔａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ  Ｊ．Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ  ２５（２）：１６３−７，（２００５））。
【０１２３】
（Ｂ．試験化合物の投与）
化合物は、手術の約１時間後に抗生物質注射の時に投与されるが、このタイミングは変動する可能性がある。化合物は、候補化合物の薬物動態特性に応じて１日に２回投与される。試験化合物の投与は、投与のために確立されたガイドラインに従って、次の経路：尾静脈からの経口、腹腔内、皮下、または静脈注射のいずれかによって行われる。
【０１２４】
１０頭前後の動物の群が使用される。薬物評価実験は、盲腸結紮穿刺を経験し、ビヒクルのみを投与される１つの群（対照群）、およびＣＬＰを経験し、試験治療化合物を投与される群を有する。化合物は手術後１時間に投与され、動物をその日中２時間おきに生存についてモニターする。トランスポンダを介して２時間おきに体温をとり、動物の健康を各時点でモニターする。体重は４時間間隔で量る。毎日少なくとも８時間の期間動物をモニターする。サイトカインレベルの測定のために血清試料を採取する。死亡数をモニターし、薬物治療の有効性の尺度として使用する。
【図１】
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【図２】
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【図３Ａ−３Ｃ】
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【図３Ｄ−３Ｆ】
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【図３Ｇ−３Ｉ】
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【図４】
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【図５】
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【図６Ａ−６Ｃ】
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【図６Ｄ．６Ｅ】
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【図７】
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【図８】
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【配列表】
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