(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
藤茶（Ａｍｐｅｌｏｐｓｉｓ  ｇｒｏｓｓｅｄｅｎｔａｔａ）の水抽出物を有効成分として含有することを特徴とする薬剤性肝炎治療剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】  本発明は、顕著な肝機能の低下抑制又は改善効果を有する肝臓疾患治療剤に関し、特に、飲食品、医薬品、化粧料等の分野において、使用可能な天然物系肝臓疾患治療剤に関するものである。
【背景技術】
【０００２】  肝臓は、生体内において糖代謝、タンパク質代謝、脂質代謝、薬物代謝、解毒代謝などにおいて中心的な役割を果たしているが、ウイルス、薬物、アルコール、栄養不良、肝循環系障害などの様々な因子により障害を受け、急性肝炎、慢性肝炎、脂肪肝、黄疸、肝硬変などの肝臓疾患を引き起こす。【０００３】  現在までのところ、これらの肝臓疾患治療剤として臨床的に認められ、使用されているのは、マロチラートの他数種にとどまっている。また、インターフェロンを始めとする抗ウイルス剤においても肝炎ウイルスを確実に排除するには至っていない。更に、安静、輸液療法、ステロイド剤、免疫賦活剤等による薬物療法などを含め、明らかに有効な肝臓疾患治療剤は見出されていない。【０００４】  また、肝臓疾患、中でも、慢性化した肝臓疾患に対しては、現在のところ、未だ満足できる治療剤は見出されておらず、特に、抗ウイルス剤、ステロイド剤、免疫賦活剤等による薬物療法では、重篤な副作用を招くおそれがあるという問題がある。
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】  本発明は、このような状況下、従来における諸問題を解決し、以下の目的を達成することを課題とする。
即ち、本発明は、顕著な肝機能の低下抑制又は改善効果を有し、使用し易く、安全性に優れ、特に飲食品、医薬品、化粧料等の分野において、好適に使用可能な天然物系肝臓疾患治療剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】  本発明者は、前記課題に鑑み、より有効かつ安全な肝臓疾患治療剤を開発する目的で鋭意研究を重ねた結果、ブドウ科Ａｍｐｅｌｏｐｓｉｓ属植物の抽出物（特に藤茶（Ａｍｐｅｌｏｐｓｉｓ  ｇｒｏｓｓｅｄｅｎｔａｔａ）、大叶蛇葡萄（Ａｍｐｅｌｏｐｓｉｓ  ｍｅｇａｌｏｐｈｙｌｌａ）及び広東蛇葡萄（Ａｍｐｅｌｏｐｓｉｓ  ｃａｎｔｏｎｉｅｎｓｉｓ）の抽出物）、又はジヒドロフラボノール類（特にアンペロプシン）が顕著な肝機能の低下抑制又は改善効果を有することを知見し、本発明をなすに至った。
【０００７】  即ち、本発明は、前記課題を解決するため、下記の肝臓疾患治療剤を提供する。
【０００８】  請求項１の発明は、ブドウ科アンペロプシス（Ａｍｐｅｌｏｐｓｉｓ）属植物の抽出物を有効成分として含有することを特徴とする肝臓疾患治療剤である。
【０００９】  請求項２の発明は、藤茶（Ａｍｐｅｌｏｐｓｉｓ  ｇｒｏｓｓｅｄｅｎｔａｔａ）、大叶蛇葡萄（Ａｍｐｅｌｏｐｓｉｓ  ｍｅｇａｌｏｐｈｙｌｌａ）及び広東蛇葡萄（Ａｍｐｅｌｏｐｓｉｓ  ｃａｎｔｏｎｉｅｎｓｉｓ）から選ばれるＡｍｐｅｌｏｐｓｉｓ属植物を水若しくは親水性有機溶媒又はこれらの混合溶媒で抽出して得られる抽出物を有効成分として含有する請求項１記載の肝臓疾患治療剤である。
【００１０】  請求項３の発明は、下記一般式（１）で表される少なくとも１種のジヒドロフラボノール類を有効成分として含有することを特徴とする肝臓疾患治療剤である。
【００１１】
【化２】
0005614910.tif 000002
（但し、式中、Ｒ１〜Ｒ５は互いに独立した水素原子又は水酸基を示す。）
【００１２】  請求項４の発明は、ジヒドロフラボノール類が、上記一般式（１）中、Ｒ１〜Ｒ５がすべて水酸基であるアンペロプシン（Ａｍｐｅｌｏｐｓｉｎ）である請求項３記載の肝臓疾患治療剤である。
【００１３】  請求項５の発明は、ジヒドロフラボノール類が、藤茶（Ａｍｐｅｌｏｐｓｉｓ  ｇｒｏｓｓｅｄｅｎｔａｔａ）、大叶蛇葡萄（Ａｍｐｅｌｏｐｓｉｓ  ｍｅｇａｌｏｐｈｙｌｌａ）、広東蛇葡萄（Ａｍｐｅｌｏｐｓｉｓ  ｃａｎｔｏｎｉｅｎｓｉｓ）、ケンポナシ（Ｈｏｖｅｎｉａ  ｄｕｌｃｉｓ）、オノエヤナギ（Ｓａｌｉｘ  ｓａｃｈａｌｉｎｅｎｓｉｓ）、ヨレハマツ（Ｐｉｎｕｓ  ｃｏｎｔｏｒｔａ）、Ｅｒｙｔｈｒｏｐｈｌｅｕｍ  ａｆｒｉｃａｎｕｍ及びカツラ（Ｃｅｒｃｉｄｉｐｈｙｌｌｕｍ  ｊａｐｏｎｉｃｕｍ）から選ばれる植物の抽出物から単離精製して得られる請求項３又は４記載の肝臓疾患治療剤である。
【００１４】  請求項６の発明は、急性又は慢性のウイルス性肝炎、急性又は慢性の薬剤性肝炎或いは劇症肝炎の予防又は治療に用いられる請求項１乃至５のいずれか１項記載の肝臓疾患治療剤である。
【００１５】  ここで、ブドウ科Ａｍｐｅｌｏｐｓｉｓ属植物の中では、学名（Ａｍｐｅｌｏｐｓｉｓ  ｇｒｏｓｓｅｄｅｎｔａｔａ  （Ｈａｎｄ．−Ｍａｚｚ．）Ｗ．Ｔ．Ｗａｎｇ（藤茶））が知られており、この藤茶は、中国の中部から南部にわたる広い地域で自生する多年生の蔓性植物であり、台湾では栽培もされており、中国では古来よりその葉をお茶として用いると共に、風邪、のどの痛みなどの治療用の民間薬としても利用されてきた安全性の高い植物である。
【００１６】  一方、ジヒドロフラボノール類としては、藤茶油出物の有効成分としてアンペロプシン及びミリセチンが報告されている（Ｎａｔｕｒａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ａｎｄ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，９，４１−４３（１９９７））が、アンペロプシンは、藤茶以外の大叶蛇葡萄（Ａｍｐｅｌｏｐｓｉｓ  ｍｅｇａｌｏｐｈｙｌｌａ）、広東蛇葡萄（Ａｍｐｅｌｏｐｓｉｓ  ｃａｎｔｏｎｉｅｎｓｉｓ）などの他のＡｍｐｅｌｏｐｓｉｓ属植物からも単離されており、Ａｍｐｅｌｏｐｓｉｓ属植物の他、ケンポナシ（Ｈｏｖｅｎｉａ  ｄｕｌｃｉｓ）、オノエヤナギ（Ｓａｌｉｘ  ｓａｃｈａｌｉｎｅｎｓｉｓ）、ヨレハマツ（Ｐｉｎｕｓ  ｃｏｎｔｏｒｔａ）、Ｅｒｙｔｈｒｏｐｈｌｅｕｍ  ａｆｒｉｃａｎｕｍ、カツラ（Ｃｅｒｃｉｄｉｐｈｙｌｌｕｍ  ｊａｐｏｎｉｃｕｍ）などからも単離されており、植物界に広く存在する可能性がある。
【００１７】  しかしながら、アンペロプシンの薬理作用についてはほとんど解明されておらず、藤茶抽出物が活性酸素消去作用及び血小板凝集抑制作用（特開２００１−９７８７３号公報）を有することなどが知られているのみであり、Ａｍｐｅｌｏｐｓｉｓ属植物及びアンペロプシンが肝疾患治療作用を有することは全く知られておらず、このことは本発明者の新知見である。
【発明を実施するための形態】
【００１８】  以下、本発明について更に詳しく説明する。
本発明の肝臓疾患治療剤は、第１の態様として、ブドウ科アンペロプシス（Ａｍｐｅｌｏｐｓｉｓ）属植物の抽出物を有効成分として含有する。
【００１９】  前記ブドウ科アンペロプシス（Ａｍｐｅｌｏｐｓｉｓ）属植物としては、例えば、藤茶（Ａｍｐｅｌｏｐｓｉｓ  ｇｒｏｓｓｅｄｅｎｔａｔａ）、大叶蛇葡萄（Ａｍｐｅｌｏｐｓｉｓ  ｍｅｇａｌｏｐｈｙｌｌａ）及び広東蛇葡萄（Ａｍｐｅｌｏｐｓｉｓ  ｃａｎｔｏｎｉｅｎｓｉｓ）から選ばれる１種又は２種以上が好適に用いられる。これらの中でも藤茶が好ましい。
【００２０】  本発明の肝臓疾患治療剤は、上記ブドウ科アンペロプシス（Ａｍｐｅｌｏｐｓｉｓ）属植物を抽出原料とし、水若しくは親水性有機溶媒又はこれらの混合溶媒に投入し、室温乃至溶媒の沸点以下の温度で任意の装置を用いて抽出することにより得ることができる。
【００２１】  前記抽出溶媒として使用し得る水としては、純水、水道水、井戸水、鉱泉水、鉱水、温泉水、湧水、淡水等の他、これらに各種処理を施したものが含まれる。水に施す処理としては、例えば、精製、加熱、殺菌、滅菌、ろ過、イオン交換、浸透圧の調整、緩衝化等が含まれる。従って、本発明において抽出溶媒として使用し得る水には、精製水、熱水、イオン交換水、生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水等も含まれる。
【００２２】  前記親水性有機溶媒としては、例えばメタノール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコール等の炭素数１〜５の低級アルコール；アセトン、メチルエチルケトン等の低級脂肪族ケトン；１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、イソプロピレングリコール、グリセリン等の炭素数２〜５の多価アルコールなどが挙げられ、これら親水性有機溶媒と水との混合溶媒などを用いることができる。なお、水と親水性有機溶媒との混合系溶媒を使用する場合には、低級アルコールの場合は水１０質量部に対して１〜９０質量部、低級脂肪族ケトンの場合は水１０質量部に対して１〜４０質量部、多価アルコールの場合は水１０質量部に対して１０〜９０質量部添加することが好ましい。
【００２３】  具体的には、抽出溶媒を満たした処理槽に、前記ブドウ科アンペロプシス（Ａｍｐｅｌｏｐｓｉｓ）属植物（例えば、藤茶の枝葉部）の乾燥・粉砕物を投入し、必要に応じて時々攪拌しながら、３０分〜２時間静置して可溶性成分を溶出した後、濾過して固形物を除去し、得られた抽出液から抽出溶媒を留去し、乾燥することにより抽出物が得られる。抽出溶媒量は、抽出原料の通常５〜１５倍量（質量比）であることが好ましく、抽出条件は、抽出溶媒として水を用いた場合には、通常５０〜９５℃で１〜４時間程度である。また、抽出溶媒として水とエタノールとの混合溶媒を用いる場合には、通常４０〜８０℃で３０分〜４時間程度である。
【００２４】  ろ過又は遠心分離にて得られた抽出液から溶媒を留去するとペースト状の濃縮物が得られる。更に乾燥すれば、固形の抽出物が得られる。但し、本発明に利用するＡｍｐｅｌｏｐｓｉｓ属植物の抽出物は固形の抽出物にしたものである必要はなく、上記抽出液又はその濃縮液の状態であっても良い。これらは、本発明の目的達成を妨げない場合、活性炭処理、吸着樹脂処理、イオン交換樹脂、液一液向流分配などの方法により精製してから用いても構わない。
【００２５】  次に、本発明の肝臓疾患治療剤は、第２の態様として、下記一般式（１）で表される少なくとも１種のジヒドロフラボノール類を有効成分として含有する。
【００２６】
【化３】
0005614910.tif 000003
【００２７】  上記式（１）中、Ｒ１〜Ｒ５は互いに独立した水素原子又は水酸基を示し、中でも、Ｒ１〜Ｒ５がすべて水酸基である下記式で表されるアンペロプシン（Ａｍｐｅｌｏｐｓｉｎ）が好ましい。
【００２８】
【化４】
0005614910.tif 000004
【００２９】  前記アンペロプシンは、例えば、藤茶（Ａｍｐｅｌｏｐｓｉｓ  ｇｒｏｓｓｅｄｅｎｔａｔａ）、大叶蛇葡萄（Ａｍｐｅｌｏｐｓｉｓ  ｍｅｇａｌｏｐｈｙｌｌａ）、広東蛇葡萄（Ａｍｐｅｌｏｐｓｉｓ  ｃａｎｔｏｎｉｅｎｓｉｓ）、ケンポナシ（Ｈｏｖｅｎｉａ  ｄｕｌｃｉｓ）、オノエヤナギ（Ｓａｌｉｘ  ｓａｃｈａｌｉｎｅｎｓｉｓ）、ヨレハマツ（Ｐｉｎｕｓ  ｃｏｎｔｏｒｔａ）、Ｅｒｙｔｈｒｏｐｈｌｅｕｍ  ａｆｒｉｃａｎｕｍ及びカツラ（Ｃｅｒｃｉｄｉｐｈｙｌｌｕｍ  ｊａｐｏｎｉｃｕｍ）から選ばれる植物の抽出物から単離精製することができる。これらの中でも藤茶が好ましい。
【００３０】  具体的には、ジヒドロフラボノール類、特にアンペロプシンは、Ａｍｐｅｌｏｐｓｉｓ属植物である藤茶（Ａｍｐｅｌｏｐｓｉｓ  ｇｒｏｓｓｅｄｅｎｔａｔａ）から、下記のようにして得ることができる。
乾燥させた藤茶の枝葉部を含水エタノールで抽出した抽出物を濃縮し、例えば多孔性樹脂（ＤＩＡＩＯＮ  ＨＰ−２０）を用いたカラムクロマトグラフィーにかけ、８０容量％含水メタノールで溶出される分画にアンペロプシンが得られる。これを逆相シリカゲルカラムクロマトグラフィーや再結晶により、更に精製することができる。
【００３１】  前記ジヒドロフラボノール類は、上記単離精製方法のほかに、抽出液を濃縮することにより、アンペロプシンを析出させる方法、高速液体クロマトグラフィー等によっても、単離精製することが可能である。
【００３２】  なお、本発明の肝臓疾患治療剤には、上記のように単離精製した化合物の他、Ａｍｐｅｌｏｐｓｉｓ属植物の抽出物や各製造段階の粗精製物も同様に使用できる。
【００３３】  本発明のブドウ科Ａｍｐｅｌｏｐｓｉｓ属植物抽出物（特に藤茶抽出物）、又はジヒドロフラボノール類（特にアンペロプシン）を肝臓疾患の予防及び治療剤として用いるには、本発明品を、固体又は液体の賦形剤の担体と混合し、経口又は非経口投与（例えば、筋注、静注、皮下投与、直腸投与、経皮投与など）に適した状態に調製して使用することができる。
【００３４】  前記固形剤としては、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、細粒剤に調製することができ、コーティング法により腸溶性コーティング剤にしても良い。また、液剤としては生理的に許容できる塩を形成してから、水に溶解して調製することができる。
【００３５】  上記の製剤を調製するには、医学的に許容される添加剤を配合して、従来の製剤の製造法に従って製造することができる。
添加剤としては、経口投与製剤の場合、でんぷん、乳糖、白糖、コーンスターチ、結晶セルロース、マンニトール、マルチトール等の賦形剤；部分アルファー化デンプン、クロスカルメロースナトリウム、カルボキシメチルスターチナトリウム、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース等の崩壊剤；ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、水添植物油、タルク等の滑沢剤などが挙げられる。
【００３６】  用時溶解型注射剤の場合、賦形剤（例えば、リン酸二水素ナトリウム、リン酸水素ナトリウム等）、無痛化剤（例えば、クロロブタノール、塩酸キシロカイン等）などを添加することができる。
【００３７】  本発明の肝臓疾患治療剤の投与量は、患者の年齢、疾病の種類、程度などにより変動し、一概に規定することはできないが、一般成人に対して、経口投与の場合は、１日量２０〜１０００ｍｇ、好ましくは５０〜５００ｍｇである。
非経口投与の場合は、患者の年齢、疾病の種類、程度などにより変化し、一概に規定することはできないが、一般成人に対して、１日量２〜１００ｍｇ、好ましくは５〜５０ｍｇであり、症状に応じて必要により１〜３回に分けて投与することが好ましい。
【００３８】  また、本発明の肝臓疾患治療剤は、飲食品、医薬品、化粧料等の分野において使用可能なものである。この場合、肝臓疾患治療剤の添加量は、添加する飲食品、化粧料又は医薬品に応じて異なり一概には規定できないが、通常０．０１〜５０質量％程度である。
【００３９】  前記飲食品としては、例えば、清涼飲料、炭酸飲料、栄養飲料、果実飲料、乳酸飲料等の飲料(これらの飲料の濃縮原液及び調整用粉末を含む)；アイスクリーム、アイスシャーベット、かき氷等の冷菓；そば、うどん、はるさめ、ぎょうざの皮、しゅうまいの皮、中華麺、即席麺等の麺類；飴、キャンディー、ガム、チョコレート、錠菓、スナック菓子、ビスケット、ゼリー、ジャム、クリーム、焼き菓子等の菓子類；かまぼこ、ハム、ソーセージ等の水産・畜産加工食品；加工乳、発酵乳等の乳製品；サラダ油、てんぷら油、マーガリン、マヨネーズ、ショートニング、ホイップクリーム、ドレッシング等の油脂及び油脂加工食品；ソース、たれ等の調味料；その他種々の形態の健康・栄養補助食品；錠剤、カプセル剤、ドリンク剤、トローチ等の医薬品、医薬部外品などが挙げられ、これらを製造するに当り通常用いられる補助的な原料や添加物と共に添加することができる。
【実施例】
【００４０】  以下、製造例及び実施例を示し、本発明を具体的に説明するが、本発明は下記実施例に何ら制限されるものではない。【００４１】    〔製造例１〕  藤茶抽出物（１）の製造
藤茶（Ａｍｐｅｌｏｐｓｉｓ  ｇｒｏｓｓｅｄｅｎｔａｔａ）枝葉部の乾燥物の粗砕物５００ｇを蒸留水５Ｌに投入し、加熱還流下で２時間抽出した。
得られた抽出物を減圧下で濃縮してペースト状物を得た。このペースト状物を凍結乾燥して粉末状抽出物７３ｇを得た。【００４２】    〔製造例２〕  藤茶抽出物（２）の製造
藤茶（Ａｍｐｅｌｏｐｓｉｓ  ｇｒｏｓｓｅｄｅｎｔａｔａ）枝葉部の乾燥物の粗砕物５００ｇを５０容量％含水エタノール５Ｌに投入し、加熱還流下で２時間抽出した。
得られた抽出物を減圧下で濃縮してペースト状物を得た。このペースト状物を凍結乾燥して粉末状抽出物１２９ｇを得た。【００４３】    〔製造例３〕  藤茶抽出物（３）の製造
藤茶（Ａｍｐｅｌｏｐｓｉｓ  ｇｒｏｓｓｅｄｅｎｔａｔａ）枝葉部の乾燥物の粗砕物５００ｇをエタノール５Ｌに投入し、加熱還流下で２時間抽出した。
得られた抽出物を減圧下で濃縮してペースト状物を得た。このペースト状物を凍結乾燥して粉末状抽出物２６ｇを得た。【００４４】    〔製造例４〕  アンペロプシンの製造
製造例２で得られた藤茶抽出物乾燥品１２９ｇを多孔性樹脂ダイアイオンＨＰ−２０（三菱化学製）を充填したカラムに通し、水及び３０容量％含水メタノールでよく洗浄した後、吸着分画を８０容量％含水メタノールで溶出した。
このカラム吸着部分から溶媒を減圧下で留去して、３７．２ｇの固形分を得た。得られた固形分を分取用逆相樹脂（富士シリシア製、Ｃｈｒｏｍａｔｏｒｅｘ  ＯＤＳ  ＤＭ−１０２０Ｔ）及び溶媒として３０容量％含水メタノールを用いたクロマトグラフィーにより分画した。
このアンペロプシンが含まれる分画を分取し、減圧下で溶媒を留去後、水により再結晶化を行い、１０ｇのアンペロプシンを得た。【００４５】    〔実施例１〕  ガラクトサミン誘発試験
得られた藤茶抽出物及びアンペロプシンを用いて、下記方法によりガラクトサミン誘発試験を行った。【００４６】  なお、下記実施例で用いている略語は次の通りの意味である。
ＧＯＴ：ｇｌｕｔａｍｉｃ  ｏｘａｌｏａｃｅｔｉｃ  ｔｒａｎｓａｍｉｎａｓｅ（グルタミン酸オキサロ酢酸トランスアミナーゼ）
ＧＰＴ：ｇｌｕｔａｍｉｃ  ｐｙｒｕｖｉｃ  ｔｒａｎｓａｍｉｎａｓｅ（グルタミン酸ピルビン酸トランスアミナーゼ）
ＬＤＨ：ｌａｃｔａｔｅ  ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ（乳酸デヒドロゲナーゼ）【００４７】<試験動物>
日本ＳＬＣより４週齢（体重５０〜５５ｇ）で購入したＷｉｓｔａｒ系雄ラットを一群６匹として、下記ガラクトサミン誘発試験に供した。【００４８】<ガラクトサミン誘発試験方法>
藤茶抽出物添加ラット群及びアンペロプシン添加ラット群には、基本食に製造例１の藤茶抽出物を１質量％添加した飼料、及び基本食にアンペロプシンを０．１質量％添加した飼料を自由摂取で飼育し、飼育開始後７日目に、ガラクトサミン水溶液を体重あたり４０ｍｇ／ｋｇになるように腹腔内投与した。【００４９】  肝障害ラット群には、基本食を自由摂取で与え、７日目にガラクトサミン水溶液を体重あたり４０ｍｇ／ｋｇになるように腹腔内投与した。
なお、対照ラット群には、基本食を自由摂取で与え、７日目に同量の蒸留水を腹腔内投与した。【００５０】  ガラクトサミン投与後も引き続き基本食を与えた肝障害ラット群、ガラクトサミン投与後も引き続き基本食に製造例１の藤茶抽出物を１質量％添加した飼料を与えた藤茶抽出物添加ラット群、及び基本食にアンペロプシンを０．１質量％添加した飼料を与えたアンペロプシン添加ラット群、及び対照ラット群についてそれぞれ飼育を継続した。【００５１】  ガラクトサミンを投与した後、２２時間後にネンブタール麻酔下、心臓からの採血を行った。血液を２，００００×ｇで２０分間遠心分離し、得られた血漿について下記方法によりＧＯＴ、ＧＰＴ、ＬＤＨ活性、肝臓脂質過酸化物（ＴＢＡＲＳ）、及びグルタチオンを測定した。また、体重増加量、食餌量、肝臓質量を求めた。結果を表１，２に示す。【００５２】  なお、実験結果は平均値±標準誤差で表示した。各群間の有意差（Ｐ＜０．０５）は、一元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ）を行った後、Ｄｕｎｃａｎの多重比較検定を用いて検定した。また、等分散でない場合はＭａｎｎ−Ｗｈｉｔｎｅｙ検定を用いて検定した。【００５３】<血漿ＧＯＴ活性の測定>
血漿ＧＯＴ活性は、測定サンプルとして前述の方法で得た血漿１０〜１００μＬを用い、ＧＯＴ−ＵＶテストワコー（ＵＶ−ｒａｔｅ法、和光純薬工業株式会社製）を使用して測定した。測定では３４０ｎｍでの吸光度変化を経時的に測定した。
吸光度変化の傾きが直線にならない場合は、サンプルの添加量を吸光度変化の傾きが直線になるまで減らしてから同様に測定し、その添加量に基づいて、それぞれのサンプルのＧＯＴ活性値を算出した。なお、ＧＯＴ活性は国際単位(Ｉ．Ｕ．)で表した。【００５４】<血漿ＧＰＴ活性の測定>
血漿ＧＰＴ活性は、同じく前述の血漿１０〜１００μＬを測定サンプルとして用い、ＧＰＴ−ＵＶテストワコー（ＵＶ−ｒａｔｅ法、和光純薬工業株式会社製）を用いて血漿ＧＯＴ活性の場合と同様に測定し、ＧＰＴ活性値を求めた。【００５５】<血漿ＬＤＨ活性の測定>
血漿ＬＤＨ活性は、同じく前述の血漿１０〜１００μＬを測定サンプルとして用い、ＬＤＨ−ＵＶテストワコー（ＵＶ−ｒａｔｅ法、和光純薬工業株式会社製）を用いて血漿ＧＯＴ活性の場合と同様に測定し、ＬＤＨ活性値を求めた。【００５６】<肝臓脂質過酸化物（ＴＢＡＲＳ）の測定>
採血後、採取した肝臓の右葉部０．５ｇをＤｅｌ  Ｂｏｃｃｉｏらの方法（Ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ，８１，１２７−１３５．（１９９０））に従って、２．５ｍＬの氷冷０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．４、１ｍＭ  ＥＤＴＡ含有）中でホモジナイズした。
次いで、その２倍容の２．３％塩化カリウム水溶液を加えてホモジナイズを行った。その一部を使用し、内山、八木らの方法（Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，８６，２７１−２７８．（１９７８））に従って、脂質過酸化物の測定を行った。【００５７】<グルタチオンの測定>
採血後、採取し、−７０℃で凍結保存を行った肝臓を実験に使用した。この凍結肝臓を、氷冷下、１０倍容の０．４Ｎ過塩素酸（２．０ｍＭ  ＥＤＴＡ含有）でホモジナイズし、５℃下、１０，０００×ｇで遠心分離を行った。
上清を０．２μｍのフィルターでろ過後、Ｈａｒｖｅｙらの方法（Ｃｌｉｎｉｃａ  Ｃｈｅｍｉｃａ  Ａｃｔａ．，１８０，２０３−２１２（１９８９））に従って、イオンペア逆相ＨＰＬＣ分析を行い、還元型グルタチオン（ＧＳＨ）と、酸化型グルタチオン（ＧＳＳＧ）を定量した。なお、検出にはクーロケム電気化学検出器を使用した。【００５８】
【表１】
0005614910.tif 000005
なお、表１中の異なる肩文字ａ〜ｃは、危険率＜０．０５で各群間に有意差が確認されたことを示す。【００５９】
【表２】
0005614910.tif 000006
なお、表２中の異なる肩文字ａ〜ｂは、危険率＜０．０５で各群間に有意差が確認されたことを示す。【００６０】  表１，２の結果から、藤茶抽出物及びアンペロプシン添加により、ガラクトサミンで誘発された実験的肝障害ラットに対して、肝臓障害の指標となるＧＰＴ、ＧＯＴ、ＬＤＨ等の逸脱酵素の上昇、及び生体内過酸化物産生量の上昇を著しく抑制し得、肝臓疾患の予防及び治療に有効であることが確認できた。
【発明の効果】
【００６１】  本発明によれば、ブドウ科Ａｍｐｅｌｏｐｓｉｓ属植物の抽出物（特に藤茶抽出物）、又はジヒドロフラボノール類（特にアンペロプシン）を有効成分として含有する、高い安全性を有し、使用し易く、安価な肝臓疾患治療剤が得られる。
【００６２】  また、本発明の肝臓疾患治療剤は、従来の抗ウイルス剤、ステロイド剤、免疫賦活剤等による薬物療法のように重篤な副作用がなく、安全性に優れ、環境性に優れた天然物系肝臓疾患治療剤として、飲食品、医薬品、化粧料等の分野において幅広く用いることができる。