(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
７−メトキシ−６−［５−（４−メチル−チアゾール−２−イル）−３Ｈ−イミダゾール−４−イル］−ベンゾチアゾール又はその医薬上許容される塩。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＴＧＦ−βのＩ型受容体であるａｃｔｉｖｉｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ−ｌｉｋｅ  ｋｉｎａｓｅ  ５（ＡＬＫ５）の阻害作用を有する化合物に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
Ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ−β（ＴＧＦ−β）は、ａｃｔｉｖｉｎ、ＢＭＰなどと共にＴＧＦ−βスーパーファミリーに属する分子である。ＴＧＦ−βからのシグナルを細胞内に伝達する受容体は、Ｉ型及びＩＩ型の２種類があり、共に細胞内にセリン／スレオニンカイネース領域を有する。ＴＧＦ−βが受容体に結合すると、ＩＩ型受容体がＩ型受容体をリン酸化し、その結果Ｉ型受容体が活性化され、Ｓｍａｄ２／３経路又はＴＡＢ１／ＴＡＫ１経路を介して核へシグナルが伝達される。【０００３】
ＴＧＦ−βは極めて多様な生理作用を有することが明らかにされているが、そのひとつとして、細胞外マトリックス構成蛋白質の産生促進と分解抑制を介して、細胞外マトリックスを組織に蓄積させる作用を有することがよく知られている（非特許文献１）。このため、ＴＧＦ−βの持続的な産生亢進やシグナル伝達系の活性化が、多くの線維化疾患を引き起こす原因となっている。例えば、腎臓においては、糸球体腎炎、糖尿病性腎症などの腎疾患における腎間質の線維化や糸球体硬化にＴＧＦ−βが深く関与していることが（非特許文献２、３）、また肝臓においては、ＴＧＦ−βが非実質細胞の細胞外マトリックスの産生を促し、肝線維化症、肝硬変の発症に関与することが示されている（非特許文献４）。その他にも、肺線維化症、増殖性硝子体網膜症、強皮症など、多数の線維化を伴う難病の病因として、ＴＧＦ−βの機能亢進による細胞外マトリックスの蓄積が挙げられる。【０００４】
ＡＬＫ５の阻害剤はＴＧＦ−β／Ｓｍａｄシグナルを遮断することによってＴＧＦ−βによって惹起される細胞外マトリックスの蓄積を抑制することが報告されており（非特許文献５〜７）、腎、肝、肺などの線維化に伴う様々な疾患に対する治療又は予防のための医薬品として有用であると考えられる。【０００５】
一方、ＴＧＦ−βは、上皮細胞、血管内皮細胞、血球細胞、リンパ球など多くの細胞に対して、強力な増殖抑制作用を示すことが知られている（非特許文献１）。毛包においては、ＴＧＦ−βの発現亢進により毛包細胞の増殖抑制／アポトーシスが誘導され、毛周期が成長期から休止期に移行することが報告されており、ＴＧＦ−βが脱毛症の進展に深く関与していることが明らかにされてきた（非特許文献８、９）。本出願の出願人は、ＡＬＫ５の阻害剤がＴＧＦ−βによる毛包細胞の増殖抑制を阻害することを報告した（特許文献１）。従って、ＡＬＫ５の阻害剤は毛包細胞増殖促進剤、発毛剤、育毛剤としても有用であると考えられる。【０００６】
ＡＬＫ５阻害作用を有する化合物については多くの特許文献で報告があり（例えば特許文献２〜４）、特許文献１には本発明化合物と類似した構造を有する化合物群が記載されているが、本発明化合物は記載されていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】ＷＯ２００５／０８５２４１
【特許文献２】ＷＯ０１／６２７５６
【特許文献３】ＷＯ０３／０８７３０４
【特許文献４】ＷＯ０３／０４２２０７
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】Annu Rev Cell Biol 6, 597-641 (1990)
【非特許文献２】J Clin Invest 86, 453-462 (1990)
【非特許文献３】Nature 346, 371-374 (1990)
【非特許文献４】Biochim Biophys Acta 1032, 79-87 (1990)
【非特許文献５】J Pharmacol Exp Ther 313, 943-951 (2005)
【非特許文献６】Br J Pharmacol 145, 166-177 (2005)
【非特許文献７】Exp Mol Pathol 83, 39-46 (2007)
【非特許文献８】J Invest Dermatol 111, 948-954 (1998)
【非特許文献９】FASEB J 14, 752-760 (2000)
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明は、ＴＧＦ−βのＩ型受容体であるＡＬＫ５阻害作用に基づいた、糸球体腎炎、糖尿病性腎症、肝線維化症、肝硬変、肺線維化症、増殖性硝子体網膜症、強皮症、脱毛症等の疾患の予防又は治療に有用な新規な化合物又はその医薬上許容される塩を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明者らは種々検討した結果、本発明化合物がＡＬＫ５阻害作用を有することを見出し、本発明を完成した。【００１１】
すなわち本発明は、
（１）７−メトキシ−６−［５−（４−メチル−チアゾール−２−イル）−３Ｈ−イミダゾール−４−イル］−ベンゾチアゾール又はその医薬上許容される塩。
（２）７−メトキシ−６−［５−（４−メチル−チアゾール−２−イル）−３Ｈ−イミダゾール−４−イル］−ベンゾチアゾール又はその医薬上許容される塩を有効成分とする、糸球体腎炎、糖尿病性腎症、肝線維化症、肝硬変、肺線維化症、増殖性硝子体網膜症、強皮症、又は脱毛症等の疾患の予防剤又は治療剤。
（３）７−メトキシ−６−［５−（４−メチル−チアゾール−２−イル）−３Ｈ−イミダゾール−４−イル］−ベンゾチアゾール又はその医薬上許容される塩を有効成分とする、毛包細胞増殖促進剤、発毛剤、又は育毛剤。
である。
【発明の効果】
【００１２】
本発明化合物はＡＬＫ５阻害作用を有するので、ＴＧＦ−β／Ｓｍａｄシグナルを遮断することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】投与１時間後に、実施例１投与群のリン酸化Ｓｍａｄ２レベルが、基剤投与群のそれより有意に低いことを示した図である。＊：ｐ＜０．０５（Ｗｅｌｃｈ検定）。
【図２】投与８時間後に、実施例１投与群のリン酸化Ｓｍａｄ２レベルが、基剤投与群のそれより有意に低いことを示した図である。＊＊：ｐ＜０．０１（Ｗｅｌｃｈ検定）
【図３】投与１時間後に、比較例１投与群のリン酸化Ｓｍａｄ２レベルが、基剤投与群のそれより有意に低いことを示した図である。＊：ｐ＜０．０５（Ｗｅｌｃｈ検定）。
【図４】投与８時間後に、比較例１投与群のリン酸化Ｓｍａｄ２レベルは基剤投与群のそれより低かったが、両者の間に有意な差は認められないことを示した図である。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
本発明化合物である７−メトキシ−６−［５−（４−メチル−チアゾール−２−イル）−３Ｈ−イミダゾール−４−イル］−ベンゾチアゾールは下記の構造を有する化合物である。
【００１５】
【化１】
0005569816.tif 000002
【００１６】
本発明において「医薬上許容される塩」とは、酢酸、プロピオン酸、酪酸、ぎ酸、トリフルオロ酢酸、マレイン酸、酒石酸、クエン酸、ステアリン酸、コハク酸、エチルコハク酸、ラクトビオン酸、グルコン酸、グルコヘプトン酸、安息香酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、２−ヒドロキシエタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、パラトルエンスルホン酸、ラウリル硫酸、リンゴ酸、アスパラギン酸、グルタミン酸、アジピン酸、システイン、Ｎ−アセチルシステイン、塩酸、臭化水素酸、リン酸、硫酸、ヨウ化水素、ニコチン酸、シュウ酸、ピクリン酸、チオシアン酸、ウンデカン酸、アクリル酸ポリマー、カルボキシビニルポリマー等との塩を挙げることができる。
【００１７】
本発明化合物又はその医薬上許容される塩は溶媒和物としても存在しうる。例えば、化合物の水和物、及び化合物の医薬上許容される塩の水和物等が挙げられる。これらも全て本発明に包含される。
【００１８】
本発明化合物を医薬として用いるには、本発明の化合物を常用の賦形剤、増量剤、ｐＨ調節剤、溶解剤などを添加し、常用の製剤技術によって錠剤、顆粒剤、丸剤、カプセル剤、粉剤、液剤、懸濁剤、注射剤、塗布剤などに調製し、経口的、経皮的あるいは静脈内に投与することができる。
【００１９】
本発明化合物は、成人の患者に対して１日あたり０．０１〜１００ｍｇ／ｋｇを１回〜数回に分けて投与することができる。この投与量は疾病の種類、患者の年齢、体重、症状などにより適宜増減することができる。
【実施例】
【００２０】
以下、実施例および試験例により本発明をさらに詳細に説明する。【００２１】
本発明化合物は、例えば以下に示す方法によって合成することができる。なお、カラムクロマトグラフィーを使用して精製した際の「シリカゲル」及び「ＮＨシリカゲル」は、関東化学及びＦｕｊｉ  Ｓｉｌｙｓｉａにてそれぞれ市販されているシリカゲル６０Ｎ及びクロマトレックスＮＨを使用した。【００２２】
実施例１
７−メトキシ−６−［５−（４−メチル−チアゾール−２−イル）−３Ｈ−イミダゾール−４−イル］−ベンゾチアゾール
（１）６，６−ジブロモ−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−ベンゾチアゾール−７−オンの合成
５，６−ジヒドロ−４Ｈ−ベンゾチアゾール−７−オン（１００．０ｇ）の酢酸（８８０ｍＬ）溶液に室温で臭化水素酸（３５．４ｍｌ、４８％）を滴下した懸濁液に臭素（７０．２ｍＬ）を１時間かけて滴下した。反応混合物を４０℃〜４５℃で７．５時間攪拌後、室温に冷却して得られた沈殿物をろ過し、酢酸で洗浄した。得られた固体に水（１．１Ｌ）と酢酸エチル（０．５Ｌ）を加えた懸濁液に炭酸水素ナトリウムを加えて中和後、水（１．０Ｌ）を加えて酢酸エチルで抽出し、有機層を硫酸マグネシウムで乾燥した。ろ過し得られたろ液を濃縮して６，６−ジブロモ−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−ベンゾチアゾール−７−オン（１５５．４ｇ）を淡褐色粉末として得た。
1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ ppm: 3.14 - 3.19 (m, 2 H), 3.21 - 3.26 (m, 2 H), 9.08 (s, 1 H)【００２３】
（２）６−ブロモベンゾチアゾール−７−オールの合成
６，６−ジブロモ−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−ベンゾチアゾール−７−オン（１５４．４ｇ）のテトラヒドロフラン（２．５Ｌ）溶液に、氷冷下１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ−７−エン（２２２ｍＬ）を２０分かけて滴下後、室温で１．５時間攪拌した。塩酸（１．６Ｌ、１．０Ｎ水溶液）を加え、酢酸エチル（５．０Ｌ）で抽出して得られた有機層を飽和食塩水で洗浄後、硫酸マグネシウムで乾燥した。ろ過し得られたろ液を濃縮して６−ブロモベンゾチアゾール−７−オール（１１０．５ｇ）を褐色粉末として得た。
1H NMR (200 MHz, DMSO-d6) δ ppm: 7.54 (d, J=8.8 Hz, 1 H), 7.65 (d, J=8.4 Hz, 1 H), 9.33 (s, 1 H), 10.70 (br s, 1 H)【００２４】
（３）６−ブロモ−７−メトキシベンゾチアゾールの合成
６−ブロモベンゾチアゾール−７−オール（１１６ｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１．１Ｌ）溶液に氷冷下で炭酸カリウム（１３９ｇ）を加え、次いでヨウ化メチル（３５ｍＬ）を滴下後、室温で１２．５時間攪拌した。反応混合液に水を加え、酢酸エチルで３回抽出した有機層を飽和食塩水で洗浄後、硫酸マグネシウムで乾燥した。ろ過し得られたろ液を濃縮して６−ブロモ−７−メトキシベンゾチアゾール（１００ｇ）を淡茶色粉末として得た。
1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ ppm: 4.05 (s, 3 H), 7.64 - 7.70 (m, 1 H), 7.74 - 7.79 (m, 1 H), 8.96 (s, 1 H)【００２５】
（４）７−メトキシ−６−トリメチルシリルエチニル−ベンゾチアゾールの合成
６−ブロモ−７−メトキシベンゾチアゾール（２００ｍｇ）のアセトニトリル（３ｍＬ）溶液にトリエチルアミン（１．５ｍＬ）、テトラキストリフェニルホスフィンパラジウム（９５ｍｇ）、ヨウ化銅（１６ｍｇ）とトリメチルシリルアセチレン（５８０μＬ）を加え、８０℃で６．５時間攪拌した。反応液を濃縮し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル／ヘキサン＝２５％）で精製して７−メトキシ−６−トリメチルシリルエチニル−ベンゾチアゾール（１４３ｍｇ）を淡茶色油状物として得た。
1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ ppm: 0.28 (s, 9 H), 4.21 (s, 3 H), 7.54 (d, J=8.3 Hz, 1 H), 7.76 (d, J=8.3 Hz, 1 H), 8.99 (s, 1 H)【００２６】
（５）６−エチニル−７−メトキシベンゾチアゾールの合成
７−メトキシ−６−トリメチルシリルエチニル−ベンゾチアゾール（１０２．６ｇ）のメタノール（１．０Ｌ）懸濁液に炭酸カリウム（５９．７ｇ）を加え、室温で３０分攪拌した。飽和塩化アンモニウム水溶液（６００ｍｌ）と水を加え、酢酸エチルで抽出した有機層を飽和食塩水で洗浄後、硫酸マグネシウムで乾燥した。ろ過し得られたろ液を濃縮し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル／クロロホルム＝０〜２％）で精製して６−エチニル−７−メトキシベンゾチアゾール（６３．８ｇ）を淡茶色油状物して得た。
1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ ppm: 3.40 (s, 1 H), 4.20 (s, 3 H), 7.51 - 7.64 (m, 1 H), 7.74 - 7.85 (m, 1 H), 9.01 (s, 1 H)【００２７】
（６）７−メトキシ−６−（４−メチルチアゾール−２−イルエチニル）−ベンゾチアゾールの合成
窒素雰囲気下、６−エチニル−７−メトキシベンゾチアゾール（２９．８ｇ）、２−ヨード−４−メチルチアゾール（４２．５ｇ）、トリエチルアミン（３００ｍＬ）のアセトニトリル（６００ｍＬ）懸濁液にテトラキストリフェニルホスフィンパラジウム（１０．９ｇ）を加え、８０℃で７時間攪拌した。析出物をろ過し、ろ液を濃縮して得られた残渣をＮＨ型シリカゲルを用いたカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル）、次いでシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル／クロロホルム／ヘキサン＝７５／０／２５〜５０／２５／２５〜３７．５／２５／３７．５）で精製して７−メトキシ−６−（４−メチルチアゾール−２−イルエチニル）−ベンゾチアゾール（６６．７ｇ）を淡茶色油状物として得た。
1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ ppm: 2.51 (d, J=0.9 Hz, 3 H), 4.29 (s, 3 H), 6.96 (q, J=0.9 Hz, 1 H), 7.65 (d, J=8.3 Hz, 1 H), 7.83 (d, J=8.3 Hz, 1 H), 9.03 (s, 1 H)【００２８】
（７）１−（７−メトキシベンゾチアゾール−６−イル）−２−（４−メチルチアゾール−２−イル）−エタン−１，２−ジオンの合成
７−メトキシ−６−（４−メチルチアゾール−２−イルエチニル）−ベンゾチアゾール（６００ｍｇ）のアセトン（４０ｍＬ）−バッファー（２０ｍＬ）懸濁液に過マンガン酸カリウム（６６２ｍｇ）、を加え、４０分間攪拌した。バッファーには、炭酸水素ナトリウム（６．８ｇ）と無水硫酸マグネシウム（６８．４ｇ）を水（３．０ｌ）に溶解させた水溶液を用いた。氷冷後、亜硝酸ナトリウム（２６０ｍｇ）、硫酸（３ｍＬ、１０％水溶液）を加え、２０分間攪拌した。クロロホルム（１００ｍＬ）を加え、セライト（登録商標）を用いてろ過し、ろ液に水を加えてさらにクロロホルムで抽出し、有機層を硫酸マグネシウムで乾燥した。ろ過し得られたろ液を濃縮して、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル／ヘキサン＝５０％）で精製して１−（７−メトキシベンゾチアゾール−６−イル）−２−（４−メチルチアゾール−２−イル）−エタン−１，２−ジオン（６２８ｍｇ）を淡黄色粉末として得た。
1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ ppm: 2.49 (s, 3 H), 3.83 (s, 3 H), 7.33 - 7.37 (m, 1 H), 8.01 (d, J=8.3 Hz, 1 H), 8.23 (d, J=8.7 Hz, 1 H), 9.17 (s, 1 H)【００２９】
（８）７−メトキシ−６−［５−（４−メチル−チアゾール−２−イル）−３Ｈ−イミダゾール−４−イル］−ベンゾチアゾール
１−（７−メトキシベンゾチアゾール−６−イル）−２−（４−メチルチアゾール−２−イル）−エタン−１，２−ジオン（３４．０ｇ）のテトラヒドロフラン（８００ｍＬ）とメタノール（４００ｍＬ）懸濁液にパラホルムアルデヒド（３４.０ｇ）と酢酸アンモニウム（６６.０ｇ）を加え、６０℃で１２５時間攪拌後、パラホルムアルデヒド（３４．０ｇ）と酢酸アンモニウム（６６．０ｇ）を加え、６０℃で６８時間攪拌した。飽和重曹水を加え、クロロホルムで抽出し、硫酸マグネシウムで乾燥した。ろ過し得られたろ液を濃縮して、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（メタノール／クロロホルム＝０〜１０％）で精製後、ＮＨ型シリカゲルを用いてカラムクロマトグラフィー（メタノール／クロロホルム＝０〜２％）で精製し、無色アモルファス（２０．６ｇ）を得た。同様の方法で得られた無色アモルファス（６２．２ｇ）を再結晶（酢酸エチル）して７−メトキシ−６−［５−（４−メチル−チアゾール−２−イル）−３Ｈ−イミダゾール−４−イル］−ベンゾチアゾール（４２．７ｇ）を無色粉末として得た。
1H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ ppm: 2.20 (br. s., 3 H) 3.65 (s, 3 H) 7.01 (s, 1 H) 7.63 (br. s., 1 H) 7.83 (s, 1 H) 7.84 (d, J=8.25 Hz, 1 H) 9.43 (s, 1 H) 12.72 (br. s., 1 H)【００３０】
試験例１  溶解性試験
試験化合物としては、上記実施例１で合成した７−メトキシ−６−［５−（４−メチル−チアゾール−２−イル）−３Ｈ−イミダゾール−４−イル］−ベンゾチアゾールとＷＯ２００５／０８５２４１に記載された６−［５−（４−メチル−チアゾール−２−イル）−３Ｈ−イミダゾール−４−イル］−ベンゾチアゾール（以下、比較例１）を用いた。比較例１の構造を以下に示す。【００３１】
【化２】
0005569816.tif 000003
【００３２】
１，３−ブチレングリコール（１０ｇ）を秤量してメスシリンダーに入れ、ＥｔＯＨ（７９ｍＬ）を加えて攪拌して均質とした後、総体積が１００ｍＬになるように水を加え基剤を調製した。過剰量の試験化合物を試験管に入れ、上記で調整した基剤を加えて室温で２４時間攪拌後にメンブランフィルター（０．４５μｍ）でろ過し、得られたろ液を５０％アセトニトリル／水混液で希釈してＨＰＬＣで定量し、得られた値を溶解度とした。比較例１の溶解度は１４．９ｍｇ／ｍＬであり、実施例１の溶解度は５１．８ｍｇ／ｍＬであった。【００３３】
本試験より、実施例１は比較例１に比べて基剤への溶解性が大幅に高くなっていることがわかった。【００３４】
試験例２［皮膚Ｓｍａｄ２リン酸化抑制試験］
試験化合物としては、試験例１と同様に実施例１及び比較例１を用いた。Ｃ５７ＢＬ／６マウスの背部を抜毛し、１６日後に試験例１で調製した基剤、又は基剤に溶解した試験化合物溶液を塗布投与し、投与１時間後及び８時間後に皮膚を採取した。試験化合物の濃度は、比較例１は最大溶解濃度である１．５％で、実施例１は３％で行った。各皮膚検体に１％  ＮＰ−４０および１５０ｍＭ  塩化ナトリウムを含む５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ  ７．６）を添加し、ホモジナイズした後、３，０００  ｒｐｍで１５分間遠心分離し、その上清を用いてウエスタンブロット解析を行った。一次抗体として抗リン酸化Ｓｍａｄ２抗体または抗Ｓｍａｄ２抗体を、二次抗体としてＨＲＰ標識した抗ラビットＩｇＧ抗体を、また検出用試薬としてＥＣＬ  Ｐｌｕｓ  Ｗｅｓｔｅｒｎ  Ｂｌｏｔｔｉｎｇ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  Ｒｅａｇｅｎｔｓ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を用い、Ｌｕｍｉ−Ｉｍａｇｅｒ  Ｆ１（Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）を用いてリン酸化Ｓｍａｄ２およびＳｍａｄ２の発光量を測定した。試験は各群５例で行った。リン酸化Ｓｍａｄ２レベルは、基剤投与群のリン酸化Ｓｍａｄ２／Ｓｍａｄ２の平均値を１とした場合の相対値として表した。【００３５】
比較例１のＳｍａｄ２リン酸化抑制率は１時間後で８０．４％であり、８時間後で２８．３％であった。また８時間後の結果は、Ｓｍａｄ２のリン酸化を有意に抑制したとはいえなかった。一方、実施例１のＳｍａｄ２リン酸化抑制率は１時間後で７８．８％であり、８時間後で７２．６％であり、いずれもＳｍａｄ２のリン酸化を有意に抑制した。結果を図に示した。【００３６】
以上の結果より、実施例１は比較例１に比べて基剤への溶解性が向上したので基剤へ高用量で溶解させることができることになり、より持続的な皮膚Ｓｍａｄ２リン酸化抑制作用を示すことがわかった。
【産業上の利用可能性】
【００３７】
本発明化合物はＡＬＫ５の阻害作用を有するので、ＴＧＦ−β／Ｓｍａｄシグナルを遮断することによって、糸球体腎炎、糖尿病性腎症、肝線維化症、肝硬変、肺線維化症、増殖性硝子体網膜症、強皮症、又は脱毛症等の疾患の予防剤又は治療剤、さらには、毛包細胞増殖促進剤、発毛剤、又は育毛剤として有用である。
【図１】
0005569816.tif 000004
【図２】
0005569816.tif 000005
【図３】
0005569816.tif 000006
【図４】
0005569816.tif 000007