(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
単離されるかまたは組換えの抗体であって、インターロイキン（ＩＬ）−３Ｒα鎖に特異的に結合し得：
（ｉ）それぞれ、配列番号２、３および４に示されるＣＤＲ１、２および３を含む、軽鎖可変領域（ＶＬ）；
（ｉｉ）それぞれ、配列番号５、６および７に示されるＣＤＲ１、２および３を含む、重鎖可変領域（ＶＨ）；ならびに
（ｉｉｉ）ＫａｂａｔのＥＵナンバリングシステムによるアミノ酸置換Ｓ２３９ＤおよびＩ３３２Ｅを含む重鎖定常領域、
を含む、抗体。
【請求項２】
ヒト化抗体であって：
（ｉ）配列番号８によるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）、および配列番号９によるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）；および
（ｉｉ）ＫａｂａｔのＥＵナンバリングシステムによるアミノ酸置換Ｓ２３９ＤおよびＩ３３２Ｅを含む重鎖定常領域、
を含む、請求項１に記載の単離されるかまたは組換えの抗体。
【請求項３】
前記重鎖定常領域が、配列番号１１の残基１２１〜４５０（inclusive（その前後値も包含する））の間に示される配列を含む、請求項１に記載の抗体。
【請求項４】
配列番号１３に示される配列を含む軽鎖、および配列番号１１に示される配列を含む重鎖を含むヒト化抗体である、請求項１に記載の抗体。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願情報
本出願は、２０１０年８月１７日出願の「ヒト化抗インターロイキン３レセプターα鎖抗体（Ｈｕｍａｎｉｚｅｄ  Ａｎｔｉ−Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ  ３  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  Ａｌｐｈａ  Ｃｈａｉｎ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ）」米国特許出願第６１／３７４，４８９号、および「１型インターフェロン産生細胞を標的とするための組成物および方法（Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓ  ａｎｄ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｆｏｒ  Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  Ｔｙｐｅ  １  Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ  Ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ  Ｃｅｌｌｓ）」というタイトルの国際特許出願第ＰＣＴ／ＡＵ２０１１／０００１５５から優先権を主張する。これらの出願の全体的な内容は、参照によって本明細書に援用される。
【０００２】
分野
本開示は、抗−インターロイキン３レセプターα鎖抗体およびその使用に関する。
【背景技術】
【０００３】
背景
機能的なインターロイキン３レセプターは、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）およびインターロイキン５（ＩＬ−５）のレセプターと共有される、特異的なα鎖（ＩＬ−３Ｒα；ＣＤ１２３）および「共通の（ｃｏｍｍｏｎ）」ＩＬ−３レセプターβ鎖（βｃ；ＣＤ１３１）を含むヘテロ二量体である。
【０００４】
ＩＬ−３Ｒαは、ＩＬ−３結合に関与する細胞外ドメイン、膜貫通ドメインおよび短い細胞質テール（約５０個のアミノ酸）を含む、約４１ｋＤａの推定の分子量を有するＩ型膜貫通タンパク質である。細胞外ドメインは、２つの領域から構成される：約１００個のアミノ酸のＮ末端領域（その配列は、ＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−５レセプターα−鎖の等価な領域に対して類似性を示す）；および４つの保存されたシステイン残基およびＷＳＸＷＳモチーフを含む膜貫通ドメインに対して近位の領域（システインレセプターファミリーの他のメンバーに対して共通）。
【０００５】
ＩＬ−３結合ドメインは、２つのＩｇ様折り畳みドメインから構成される約２００個のアミノ酸残基サイトカインレセプターモチーフ（ＣＲＭ）を含む。ＩＬ−３Ｒαの細胞外ドメインは、リガンド結合およびレセプターシグナル伝達の両方に必要なＮグリコシル化によって、高度にグリコシル化されている。  
【０００６】
ＩＬ−３Ｒαは、造血系全体を通じて広く発現され、造血系としては、造血前駆体、肥満細胞、赤血球細胞、巨核球、好塩基球、好酸球、単球／マクロファージ、好中球およびＣＤ５＋Ｂ−リンパ球が挙げられる。非−造血細胞、例えば、形質細胞様樹状細胞（ｐＤＣ）、ライディッヒ細胞、内皮細胞、および間質細胞もＩＬ−３Ｒαを発現する。
【０００７】
ＩＬ−３Ｒαはまた、特定の疾患状態に関与する細胞によっても発現され、この状態としては、骨髄異形成症候群、骨髄性白血病（例えば、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ））、悪性リンパ球増殖性障害、例えば、リンパ腫、アレルギーおよび自己免疫疾患、例えば、紅斑性狼瘡、シェーグレン症候群または強皮症が挙げられる。従って、抗−ＩＬ−３Ｒα抗体は、治療適用のために望ましい。
【発明の概要】
【０００８】
要旨
本開示は、ＩＬ−３Ｒαに特異的に結合するヒト化抗体の本発明者の産生に基づく。ヒト化の後、本発明者は、ＩＬ−３Ｒαに対する抗体の親和性が減少したことを見出した。従って、本発明者は、ＩＬ−３Ｒαに対する抗体の親和性を改善するための親和性成熟を行った。予測できないほど、親和性成熟した抗体は、重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）のフレームワーク領域（ＦＲ）において、ならびに軽鎖のＣＤＲ１において、変異を含んだ。
【０００９】
本発明者はまた、エフェクター機能の増強したレベルを誘導し得るこの抗体の形成を生み出した。
【００１０】
本発明者はまた、エフェクター機能の増大を誘導する特定の修飾によって、哺乳動物に対するこの修飾された抗体の投与後、哺乳動物におけるＮＫ細胞数は、最初に減少したが、次に投与前よりも大きいレベルに増殖したという点で、追加的な望ましい特性を生じるということを見出した。本発明者は、また、ＮＫ細胞数と、標的細胞、例えば、白血病細胞の溶解との間に相関があることを示した。
【００１１】
本開示は、広義には、ＩＬ−３Ｒα鎖に対して特異的に結合し得るマウス抗体に基づく免疫グロブリンに関する。
【００１２】
一実施例では、本開示は、ＩＬ−３Ｒα鎖に特異的に結合する単離または組換え免疫グロブリンを提供し、かつ配列番号８に示される配列を含むＶＬの相補性決定領域（ＣＤＲ）および配列番号９に示されるＶＨのＣＤＲを含む。
【００１３】
本開示は、追加的にまたは代替的に、単離、または組換えの抗体またはその抗原結合フラグメントを提供し、この抗体または抗原結合フラグメントは、ＩＬ−３Ｒα鎖に特異的に結合し得、かつ配列番号８に示される配列を含むＶＬのＣＤＲおよび配列番号９に示されるＶＨのＣＤＲを含んでいる。
【００１４】
本開示は、追加的にまたは代替的に、単離または組換えのヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントを提供し、この抗体または抗原結合フラグメントは、ＩＬ−３Ｒα鎖に対して特異的に結合し得、かつ配列番号８に示される配列を含むＶＬのＣＤＲおよび配列番号９に示されるＶＨのＣＤＲを含んでいる。
【００１５】
一実施例では、本開示は、ＩＬ−３Ｒα鎖に特異的に結合し、かつそれぞれ配列番号２〜７によるアミノ酸配列を含む、単離されるかまたは組換えの免疫グロブリンを提供する。
【００１６】
本開示は、追加的にまたは代替的に、単離されるか、または組換えの抗体またはその抗原結合フラグメントを提供し、この抗体または抗原結合フラグメントはＩＬ−３Ｒα鎖に対して特異的に結合し得、かつ配列番号２〜７によるアミノ酸配列を含む。
【００１７】
本開示は、追加的にまたは代替的に、単離されるかまたは組換えのヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントを提供し、この抗体または抗原結合フラグメントはＩＬ−３Ｒα鎖に対して特異的に結合し得、かつ配列番号２〜７によるアミノ酸配列を含んでいる。
【００１８】
例えば、免疫グロブリンまたは抗体は以下を包含する：
（ｉ）それぞれ、配列番号２、３および４に示されるＣＤＲ１、２および３を含んでいる軽鎖可変領域（ＶＬ）；ならびに
（ｉｉ）それぞれ、配列番号５、６および７に示されるＣＤＲ１、２および３に示される重鎖可変領域（ＶＨ）。
【００１９】
例えば、免疫グロブリンまたは抗体は以下を含む：
（ｉ）ＶＬであって以下を含む：
ａ）配列番号２に示される配列を含んでいる（または配列番号１４に示される配列によってコードされる）ＣＤＲ１；
ｂ）配列番号３に示される配列を含んでいる（または配列番号１５に示される配列によってコードされる）ＣＤＲ２；および
ｃ）配列番号４に示される配列を含んでいる（または配列番号１６に示される配列によってコードされる）ＣＤＲ３；ならびに
（ｉｉ）ＶＨであって以下を含む：
ｄ）配列番号５に示される配列を含んでいる（または配列番号１７に示される配列によってコードされる）ＣＤＲ１；
ｅ）配列番号６に示される配列を含んでいる（または配列番号１８に示される配列によってコードされる）ＣＤＲ２；および
ｆ）配列番号７に示される配列を含んでいる（または配列番号１９に示される配列によってコードされる）ＣＤＲ３。
【００２０】
本開示は、追加的にまたは代替的に、単離されるかまたは組換えのヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントを提供しており、この抗体または抗原結合フラグメントは、ＩＬ−３Ｒα鎖に対して特異的に結合し得、かつ配列番号８によるアミノ酸配列を含んでいる（または配列番号２０に示される配列によってコードされる）ＶＬおよび／または配列番号９によるアミノ酸配列を含む（または配列番号２１に示される配列によってコードされる）ＶＨを含んでいる。
【００２１】
本開示は、追加的にまたは代替的に、単離されるかまたは組換えのヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントを提供し、この抗体または抗原結合フラグメントは、ＩＬ−３Ｒα鎖に対して特異的に結合し得、かつ配列番号８によるアミノ酸配列を含んでいる（または配列番号２０に示される配列によってコードされる）ＶＬ、および配列番号９によるアミノ酸配列を含んでいる（または配列番号２１に示される配列によってコードされる）ＶＨを含んでいる。
【００２２】
本開示によって考慮される例示的な抗原結合フラグメントとしては、以下が挙げられる：
（ｉ）ドメイン抗体（ｄＡｂ）；
（ｉｉ）Ｆｖ；
（ｉｉｉ）ｓｃＦｖまたはその安定化型（例えば、ジスルフィド安定化ｓｃＦｖ）；
（ｉｖ）二量体のｓｃＦｖまたはその安定化型；
（ｖ）二重特異性抗体、三重特異性抗体、四重特異性抗体または高次の多量体；
（ｖｉ）Ｆａｂフラグメント；
（ｖｉｉ）Ｆａｂ’フラグメント；
（ｖｉｉｉ）Ｆ（ａｂ’）フラグメント；
（ｉｘ）Ｆ（ａｂ’）２フラグメント；
（ｘ）抗体のＦｃ領域に融合される（ｉ）〜（ｉｘ）のうちのいずれか１つ；
（ｘｉ）免疫エフェクター細胞に結合する、抗体またはその抗原結合フラグメントに対して融合される、（ｉ）〜（ｉｘ）のいずれか１つ。
【００２３】
一実施例では、免疫グロブリンまたは抗体は、これが結合する細胞、例えば、白血病細胞および／または好塩基球および／またはｐＤＣを、枯渇させるかまたは少なくとも部分的に排除する。
【００２４】
本明細書の開示から当業者に明白であるように、例示的な免疫グロブリンまたは抗体は、それが結合する細胞を、毒性の化合物に対して結合されることなく、枯渇させるかまたは少なくとも部分的に排除し得る。
【００２５】
一実施例では、免疫グロブリンまたは抗体は、エフェクター機能、例えば、細胞（免疫グロブリンまたは抗体が結合する）の殺傷を生じるエフェクター機能を誘発し得る。例示的なエフェクター機能としては、ＡＤＣＣ、抗体−依存性の細胞媒介性食作用（ＡＤＣＰ）および／または補体依存性の細胞毒性（ＣＤＣ）が挙げられる。
【００２６】
一実施例では、免疫グロブリンまたは抗体は、ＡＤＣＣを誘発し得る。
【００２７】
一実施例では、免疫グロブリンまたは抗体は、エフェクター機能を誘発し得る抗体Fc領域を含む。例えば、エフェクター機能は、Ｆｃ媒介性エフェクター機能である。一実施例では、Ｆｃ領域は、ＩｇＧ１のＦｃ領域またはＩｇＧ３のＦｃ領域またはハイブリッドのＩｇＧ１／ＩｇＧ２  Ｆｃ領域である。
【００２８】
一実施例では、免疫グロブリンまたは抗体は、野性型ヒトＩｇＧ１および／またはヒト  ＩｇＧ３のＦｃ領域と同様（例えば、有意に異なることはないかまたは約１０％以内）かまたは同じレベルのエフェクター機能を誘発し得る。
【００２９】
一実施例では、免疫グロブリンまたは抗体は、増強されたレベルのエフェクター機能を誘発し得る。
【００３０】
一実施例では、免疫グロブリンまたは抗体によって誘発されるエフェクター機能のレベルは、それが野性型のＩｇＧ１のＦｃ領域を含む場合、その免疫グロブリンまたは抗体のレベルに対して増強されている。
【００３１】
一実施例では、この免疫グロブリンまたは抗体は、アフコシル化されるか、またはアフコシル化されているＦｃ領域を含む。
【００３２】
別の実施例では、免疫グロブリンまたは抗体は、タンパク質のフコシル化のレベルを低下するように変化されていないヒトまたはＣＨＯ細胞によって産生される免疫グロブリンまたは抗体に対して比較して、フコシル化のレベルが低い。この実施例によれば、より低レベルのフコシル化とは、免疫グロブリンまたは抗体を含む組成物中で、フコシル化された免疫グロブリン（例えば、フコースを含む抗体のＡｓｎ２９７に結合されたグリコシル基）の割合が、タンパク質のフコシル化のレベルを低下するように変更されなかったヒトまたはＣＨＯ細胞によって産生されるよりも低いということを意味することが理解される。
【００３３】
例えば、免疫グロブリンまたは抗体は、配列番号８に示される配列を含む（または配列番号２０に示される配列によってコードされる）ＶＬおよび配列番号９に示される配列を含む（または配列番号２１に示される配列によってコードされる）ＶＨを含んでいる、アフコシル化されたヒト化抗体である。例えば、この免疫グロブリンまたは抗体は、配列番号１３に示される配列を含む（または配列番号２３に示される配列によってコードされる）軽鎖および配列番号１０に示される配列を含む（または配列番号２２に示される配列によってコードされる）重鎖を含んでいる、アフコシル化ヒト化抗体である。
【００３４】
一実施例では、この免疫グロブリンまたは抗体は、α−１，６−フコシルトランスフェラーゼ（ＦＵＴ８）の検出可能なレベルを発現しない（またはその低下したレベルを発現する）哺乳動物細胞（例えば、ＣＨＯ細胞）によって発現される、配列番号１３に示される配列を含む（または配列番号２３に示される配列によってコードされる）軽鎖および配列番号１０に示される配列を含む（または配列番号２２に示される配列によってコードされる）重鎖を含んでいる、ヒト化抗体である。
【００３５】
一実施例では、免疫グロブリンまたは抗体は、免疫グロブリンによって誘発されるエフェクター機能を増強する１つ以上のアミノ酸配列置換を含んでいる、Ｆｃ領域を含む。例えば、１つ以上のアミノ酸配列置換は、置換を含んでいないＦｃ領域に比べて、Ｆｃγレセプター（ＦｃγＲ）に対するＦｃ領域の親和性を増大する。例えば、１つ以上のアミノ酸置換は、置換を含まないＦｃ領域に比較して、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｃおよびＦｃγＲＩＩＩａからなる群より選択されるＦｃγＲに対するＦｃ領域の親和性の増大を増強する。一実施例では、１つ以上のアミノ酸配列置換は以下である：
（ｉ）ＫａｂａｔのＥＵナンバリングシステムによるＳ２３９Ｄ、Ａ３３０ＬおよびＩ３３２Ｅ；または
（ｉｉ）ＫａｂａｔのＥＵナンバリングシステムによるＳ２３９ＤおよびＩ３３２Ｅ。
【００３６】
例えば、免疫グロブリンまたは抗体は、配列番号８に示される配列を含む（または配列番号２０に示される配列によってコードされる）ＶＬおよび配列番号９に示される配列を含む（または配列番号２１に示される配列によってコードされる）ＶＨを含んでいる、ヒト化抗体であり、ここでこの抗体は、以下からなる群より選択される１つ以上のアミノ酸配列置換を含むＦｃ領域を含む：
（ｉ）ＫａｂａｔのＥＵナンバリングシステムによるＳ２３９Ｄ、Ａ３３０ＬおよびＩ３３２Ｅ；ならびに
（ｉｉ）ＫａｂａｔのＥＵナンバリングシステムによるＳ２３９ＤおよびＩ３３２Ｅ．
【００３７】
一実施例では、Ｆｃ領域は、配列番号１１の残基２３４〜４５０の間に示される配列を含む（ＫａｂａｔのＥＵナンバリングシステムによるＳ２３９ＤおよびＩ３３２Ｅの置換を含む）。
【００３８】
一実施例では、Ｆｃ領域は、配列番号１２の残基２３４〜４５０の間に示される配列を含む（ＫａｂａｔのＥＵナンバリングシステムによるＳ２３９Ｄ、Ａ３３０ＬおよびＩ３３２Ｅの置換を含んでいる）。
【００３９】
一実施例では、免疫グロブリンまたは抗体は、以下からなる群より選択される：  
（ｉ）抗体であって、配列番号１３に示される配列を含む軽鎖と、配列番号１１に示される配列を含む重鎖とを含む抗体；
（ｉｉ）抗体であって、配列番号１３に示される配列を含む軽鎖と、配列番号１２に示される配列を含む重鎖とを含んでいる抗体。
【００４０】
本明細書において上記で考察されるとおり、本発明者は、本明細書に記載される抗体の投与後、哺乳動物における循環中のＮＫ細胞数は、最初に低下し、次に投与前の哺乳動物における循環中のＮＫ細胞数に比較して増大されるということを確認した。本発明者はまた、標的細胞に対してＮＫ細胞数を増大することが、有効性を増大する、すなわち、より多数の標的細胞が殺傷されるということを示した。この効果は、定常領域またはＦｃ領域（ＫａｂａｔのＥＵナンバリングシステムによるアミノ酸置換Ｓ２３９ＤおよびＩ３３２Ｅを含む）を含んでいる抗体によって誘発される。
【００４１】
従って、一実施例では、本開示は、単離されるかまたは組換えの抗体であって、ＩＬ−３Ｒα鎖に対して特異的に結合し得、かつ以下：
（ｉ）それぞれ、配列番号２、３および４に示されるＣＤＲ１、２および３を含んでいる軽鎖可変領域（ＶＬ）；
（ｉｉ）それぞれ、配列番号５、６および７に示されるＣＤＲ１、２および３を含んでいる重鎖可変領域（ＶＨ）；ならびに
（ｉｉｉ）ＫａｂａｔのＥＵナンバリングシステムによるアミノ酸置換Ｓ２３９ＤおよびＩ３３２Ｅを含んでいる重鎖定常領域、
を含んでいる抗体を提供する。
【００４２】
一実施例では、本開示は、単離されるかまたは組換えのヒト化抗体であって、ＩＬ−３Ｒα鎖に対して特異的に結合し得、かつ以下：
（ｉ）ＶＬであって：
ａ）配列番号２に示される配列を含んでいる（または配列番号１４に示される配列によってコードされる）ＣＤＲ１；
ｂ）配列番号３に示される配列を含んでいる（または配列番号１５に示される配列によってコードされる）ＣＤＲ２；および
ｃ）配列番号４に示される配列を含んでいる（または配列番号１６に示される配列によってコードされる）ＣＤＲ３；
を含むＶＬと；
（ｉｉ）ＶＨであって：
ｄ）配列番号５に示される配列を含んでいる（または配列番号１７に示される配列によってコードされる）ＣＤＲ１；
ｅ）配列番号６に示される配列を含んでいる（または配列番号１８に示される配列によってコードされる）ＣＤＲ２；および
ｆ）配列番号７に示される配列を含んでいる（または配列番号１９に示される配列によってコードされる）ＣＤＲ３；
を含むＶＨと；
（ｉｉｉ）ＫａｂａｔのＥＵナンバリングシステムによるアミノ酸置換Ｓ２３９ＤおよびＩ３３２Ｅを含んでいる重鎖定常領域と、
を含む、抗体を提供する。
【００４３】
一実施例では、重鎖定常領域は、ヒトＩｇＧ１およびヒトＩｇＧ２の定常領域のハイブリッドである。
【００４４】
一実施例では、この定常領域は、配列番号１１の残基１２１〜４５０（その前後値も包含する）の間に示される配列を含む。
【００４５】
本開示は、追加的にまたは代替的に、単離されるかまたは組換えのヒト化抗体であって、ＩＬ−３Ｒα鎖に対して特異的に結合し得、かつ：
（ｉ）配列番号８によるアミノ酸配列を含む（または配列番号２０に示される配列によってコードされる）ＶＬおよび／または配列番号９によるアミノ酸配列を含む（または配列番号２１に示される配列によってコードされる）ＶＨ；ならびに
（ｉｉ）ＫａｂａｔのＥＵナンバリングシステムによるアミノ酸置換Ｓ２３９ＤおよびＩ３３２Ｅを含む重鎖定常領域を含んでいる抗体を提供する。
【００４６】
一実施例では、重鎖定常領域は、ヒトＩｇＧ１およびヒトＩｇＧ２の定常領域のハイブリッドである。
【００４７】
一実施例では、定常領域は、配列番号１１の残基１２１〜４５０（その前後値も包含する）の間に示される配列を含む。
【００４８】
本開示は、追加的にまたは代替的に、単離されるかまたは組換えのヒト化抗体を提供し、この抗体は、ＩＬ−３Ｒα鎖に対して特異的に結合し得、かつ配列番号８によるアミノ酸配列を含む（または配列番号２０に示される配列によってコードされる）ＶＬ、配列番号９によるアミノ酸配列を含む（または配列番号２１に示される配列によってコードされる）ＶＨ、ならびにＫａｂａｔのＥＵナンバリングシステムによるアミノ酸置換Ｓ２３９ＤおよびＩ３３２Ｅを含む重鎖定常領域を含んでいる。
【００４９】
一実施例では、この重鎖定常領域は、ヒトＩｇＧ１およびヒトＩｇＧ２定常領域のハイブリッドである。
【００５０】
一実施例では、この定常領域は、配列番号１１の残基１２１〜４５０（その前後値も包含する）の間に示される配列を含む。
【００５１】
一実施例では、本開示は、単離されるかまたは組換えのヒト化抗体を提供し、この抗体は、ＩＬ−３Ｒα鎖に対して特異的に結合し得、かつ配列番号１３に示される配列を含んでいる軽鎖と、配列番号１１に示される配列を含んでいる重鎖とを含んでいる。
【００５２】
一実施例では、本開示の免疫グロブリンまたは抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＩＬ−３シグナル伝達を中和する。
【００５３】
一実施例では、本開示の免疫グロブリンまたは抗体は、裸の免疫グロブリンもしくは抗体であり、または本開示のその抗原結合フラグメントは、裸の抗体またはその抗原結合フラグメントである。
【００５４】
一実施例では、本開示の免疫グロブリンまたは抗体は、全長抗体である。
【００５５】
一実施例では、本開示の免疫グロブリンまたは抗体は、１×１０−８Ｍ以下、例えば、５×１０−９Ｍ以下、例えば、３×１０−９Ｍ以下、例えば、２．５×１０−９Ｍ以下の平衡解離定数（ＫＤ）でＩＬ−３Ｒα鎖に結合する。
【００５６】
一実施例では、本開示の免疫グロブリンまたは抗体は、約２．２ｘ１０−９Ｍ以下というＫＤでＩＬ−３Ｒα鎖に結合する。一実施例では、ＫＤは、約１×１０−９Ｍ〜約２．５×１０−９Ｍであり、例えば、約２．２ｘ１０−９Ｍである。
【００５７】
一実施例では、本開示の免疫グロブリンまたは抗体は、９×１０−１０Ｍ以下、例えば、約８×１０−１０Ｍ以下というＫＤでＩＬ−３Ｒα鎖に結合する。一実施例では、ＫＤは、約５×１０−１０Ｍ〜約９×１０−１０Ｍであり、例えば、約７．８×１０−１０Ｍである。
【００５８】
本開示はまた、本開示の免疫グロブリンまたは抗体のフラグメント、改変体および誘導体を包含する。
【００５９】
一実施例では、本開示の免疫グロブリンまたは抗体は、哺乳動物（例えば、非ヒト霊長類、例えば、カニクイザル）に対して投与された場合、ＮＫ細胞数を低下し得る。例えば、免疫グロブリンまたは抗体は、哺乳動物に投与されるとき、投与の１２時間または１０時間または８時間内に少なくとも約２０％、例えば、少なくとも約３０％または４０％、ＮＫ細胞数を減少し得る。例えば、免疫グロブリンまたは抗体は、哺乳動物に投与されるとき、投与の６時間内に少なくとも約５０％ＮＫ細胞数を減少し得る。一実施例では、免疫グロブリンまたは抗体は、０．０００１ｍｇ／ｋｇ〜５０ｍｇ／ｋｇ、例えば約０．０００５ｍｇ／ｋｇ〜約４０ｍｇ／ｋｇ、例えば、約０．００１ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇ、例えば約０．００５ｍｇ／ｋｇ〜約２０ｍｇ／ｋｇ、例えば約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇの用量で投与されるとき、ＮＫ細胞数を減少し得る。例えば、免疫グロブリンまたは抗体は、哺乳動物に投与されるとき、ＮＫ細胞数を、約０．０１ｍｇ／ｋｇまたは０．１ｍｇ／ｋｇまたは１ｍｇ／ｋｇまたは１０ｍｇ／ｋｇの用量で投与されるとき、投与の６時間内に少なくとも約５０％減少し得る。一実施例では、用量は、約０．０１ｍｇ／ｋｇまたは０．１ｍｇ／ｋｇである。
【００６０】
一実施例では、哺乳動物中のＮＫ細胞数は、免疫グロブリンまたは抗体の投与の前の哺乳動物におけるＮＫ細胞数に比較して、免疫グロブリンまたは抗体を投与した後、約７または８または９または１０または１１または１２または１３または１４または１５または１６または１７または１８または１９または２０または２２または２９または５７日増大される。例えば、ＮＫ細胞数は、投与後、少なくとも約８または１１または１７または２２または２９日増大される。例えば、哺乳動物中のＮＫ細胞数は、免疫グロブリンまたは抗体の投与前の哺乳動物におけるＮＫ細胞数に比較して、約１０％または２０％または３０％または５０％または６０％または７０％または８０％増大される。例えば、哺乳動物中のＮＫ細胞数は、免疫グロブリンまたは抗体の投与の前の哺乳動物におけるＮＫ細胞数に比較して、用量で０．００１ｍｇ／ｋｇ〜０．１ｍｇ／ｋｇでの抗体または免疫グロブリンの投与後、少なくとも８日で約２０％増大される。例えば、哺乳動物におけるＮＫ細胞数は、免疫グロブリンまたは抗体の投与前の哺乳動物におけるＮＫ細胞数に比較して、０．００１ｍｇ／ｋｇ〜０．１ｍｇ／ｋｇの用量での抗体または免疫グロブリンの投与後、少なくとも１１、１７、２２または２９日で約５０％増大される。一実施例では、抗体または免疫グロブリンは、０．０１ｍｇ／ｋｇ〜０．１ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。例えば、免疫グロブリンまたは抗体は、０．０１ｍｇ／ｋｇまたは０．１ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。
【００６１】
本明細書の開示に基づき、本開示は、免疫グロブリンまたは抗体であって、哺乳動物に投与されたとき、その哺乳動物におけるＮＫ細胞数を増大させる免疫グロブリンまたは抗体を提供することが当業者には明白である。例えば、この免疫グロブリンまたは抗体は、哺乳動物に投与されるとき、哺乳動物のＮＫ細胞数の減少、続いてＮＫ細胞数の増大を生じる。一実施例では、ＮＫ細胞数は、免疫グロブリンまたは抗体の投与前の哺乳動物におけるＮＫ細胞数に比較して増大または減少される。
【００６２】
一実施例では、免疫グロブリンまたは抗体は、約０．０１ｍｇ／ｋｇまたは０．１ｍｇ／ｋｇの用量で投与される場合、投与の６時間内に少なくとも約５０％哺乳動物におけるＮＫ細胞数を低下し得、そして哺乳動物におけるＮＫ細胞数は、免疫グロブリンまたは抗体の投与前の哺乳動物におけるＮＫ細胞の数に比較して、０．００１ｍｇ／ｋｇ〜０．１ｍｇ／ｋｇの用量で、この抗体または免疫グロブリンの投与後に、少なくとも８日で約２０％増大される。
【００６３】
一実施例では、本開示は、本開示による免疫グロブリンまたは抗体、および薬学的に許容される担体、希釈剤または賦形剤を含んでいる医薬組成物を提供する。
【００６４】
本開示はまた、本開示の免疫グロブリンまたは抗体をコードする単離された核酸を提供する。
【００６５】
核酸の例示的な配列は、本開示の抗体または免疫グロブリンをコードする状況で考察され、本開示の本発明の実施形態に対して変更すべきところを変更すればあてはまるととられるべきである。
【００６６】
本開示はまた、高ストリンジェンシーのハイブリダイゼーション条件の下で本開示の核酸に対してハイブリダイズできる核酸を提供する。
【００６７】
本開示はまた、本開示の単離された核酸のフラグメント、ホモログおよび誘導体を包含する。
【００６８】
本開示はまた、本開示の単離された核酸、および１つ以上の追加のヌクレオチド配列、例えば、この核酸に対して作動可能に連結されたプロモーターを含んでいる遺伝子構築物も提供する。
【００６９】
一実施例では、この遺伝子構築物は、発現ベクターおよび本開示の単離された核酸を含んでいる発現構築物であり、この単離された核酸は、この発現ベクターにおける１つ以上の調節性核酸に対して作動可能に連結されている。
【００７０】
一実施例では、本開示の遺伝子構築物は、プロモーターに対して作動可能に連結されたポリペプチド（例えば、ＶＨを含んでいる）をコードする核酸、およびプロモーターに対して作動可能に連結された別のポリペプチド（例えば、ＶＬを含んでいる）をコードする核酸を含む。
【００７１】
別の実施例では、この遺伝子構築物は、バイシストロン性（ｂｉｃｉｓｔｒｏｎｉｃ）遺伝子構築物であり、例えば、以下の作動可能に連結された成分を、５’〜３’の順序で含む：
（ｉ）プロモーター  
（ｉｉ）第一のポリペプチドをコードする核酸；
（ｉｉｉ）内部リボソーム進入部位；および
（ｉｖ）第二のポリペプチドをコードする核酸
【００７２】
例えば、この第一のポリペプチドは、ＶＨを含み、かつこの第二のポリペプチドは、ＶＬを含むか、またはこの第一のポリペプチドは、ＶＬを含み、かつこの第二のポリペプチドは、ＶＨを含む。
【００７３】
本開示はまた、別々の遺伝子構築物を意図しており、そのうちの１つは、第一のポリペプチド（例えば、ＶＨを含んでいる）をコードし、もう一方は、第二のポリペプチド（例えば、ＶＬを含んでいる）をコードする。例えば、本開示はまた、以下を含む組成物を提供する：
（ｉ）あるプロモーターに対して作動可能に連結されるポリペプチド（例えば、ＶＨを含んでいる）をコードする核酸を含む、第一の発現構築物；および
（ｉｉ）あるプロモーターに対して作動可能に連結されるポリペプチド（例えば、ＶＬを含んでいる）をコードする核酸を含む、第二の発現構築物。
【００７４】
この開示はまた、本開示による遺伝子構築物を含んでいる宿主細胞を提供する。
【００７５】
一実施例では、本開示は、本開示の免疫グロブリンまたは抗体または抗原結合フラグメントを発現する単離された細胞、またはこの免疫グロブリン、抗体または抗原結合フラグメントを発現するように遺伝的に改変された組換え細胞を提供する。
【００７６】
一実施例では、この細胞は、本開示の遺伝子構築物、または以下：
（ｉ）プロモーターに対して作動可能に連結されたポリペプチド（例えば、ＶＨを含んでいる）をコードする核酸を含んでいる第一の遺伝子構築物；および
（ｉｉ）プロモーター対して作動可能に連結されたポリペプチド（例えば、ＶＬを含んでいる）をコードする核酸を含んでいる第二の遺伝子構築物、を含み、ここで、この第一のおよび第二のポリペプチドは、本開示の免疫グロブリン、抗体または抗原結合フラグメントを形成する。
【００７７】
この遺伝子構築物は、細胞中に組み込まれることが可能であり、またはエピソームを保持することが可能である。
【００７８】
本開示の細胞の例としては、細菌細胞、酵母細胞、昆虫細胞または哺乳動物細胞が挙げられる。
【００７９】
本開示はさらに、本開示の免疫グロブリン、抗体または抗原結合フラグメントを産生するための方法であって、この免疫グロブリン、抗体または抗原結合フラグメントが産生されるのに十分な条件下で本開示の遺伝子構築物（単数または複数）を維持することを包含する方法を提供する。
【００８０】
一実施例では、本開示の免疫グロブリン、抗体または抗原結合フラグメントを産生するための方法は、免疫グロブリン、抗体または抗原結合フラグメントが産生され、かつ必要に応じて分泌されるのに十分な条件下で開示の細胞を培養することを包含する。
【００８１】
一実施例では、本開示の免疫グロブリン、抗体または抗原結合フラグメントを産生するための方法は、さらに、この免疫グロブリン、抗体または抗原結合フラグメントを単離することを包含する。
【００８２】
本開示はさらに、本開示の組換えの免疫グロブリンまたは抗体を産生する方法であって、以下の工程：
（ｉ）本開示による発現ベクターを含んでいる宿主細胞を培養して、その結果上記組換えの免疫グロブリンまたは抗体をこの宿主細胞中で発現する工程と；
（ｉｉ）この組換えの免疫グロブリンを単離する工程と、を包含する方法を提供する。  
【００８３】
一実施例では、本開示の免疫グロブリン、抗体または抗原結合フラグメントを産生するための方法は、この免疫グロブリン、抗体または抗原結合フラグメントを、薬学的に許容される担体を用いて製剤化することをさらに包含する。
【００８４】
本開示はまた、哺乳動物における疾患または状態の予防的または治療的な処置の方法であって、哺乳動物に対して本開示の免疫グロブリンまたは抗体を投与してそれによってその疾患または状態を処置または予防する工程を包含する方法を提供する。
【００８５】
一実施例では、この哺乳動物はヒトである。
【００８６】
一実施例では、この哺乳動物は、処置または予防が必要である。
【００８７】
一実施例では、この必要な哺乳動物は、この疾患または状態に罹患している。
【００８８】
一実施例では、この必要な哺乳動物は、この疾患もしくは状態を発症するか、またはその再発のリスクがある。
【００８９】
本開示はまた、医薬における、本開示の免疫グロブリン、抗体もしくは抗原結合フラグメント、または本開示の組成物の使用を提供する。
【００９０】
本開示は、追加的にまたは代替的に、哺乳動物における疾患または状態の処置のための薬剤の製造における、本開示の免疫グロブリン、抗体または抗原結合フラグメントの使用を提供する。
【００９１】
本開示はまた、哺乳動物における疾患または状態の処置における使用のための、本開示の免疫グロブリン、抗体または抗原結合フラグメントを提供する。
【００９２】
一実施例では、この疾患または状態は、ＩＬ−３Ｒα−媒介性の疾患または状態である。
【００９３】
一実施例では、この疾患または状態は、骨髄異形成症候群である。
【００９４】
一実施例では、この疾患または状態は、癌、例えば、血液癌、例えば、白血病、例えば、急性白血病（例えば、急性骨髄性白血病）または慢性白血病（例えば、慢性骨髄単球性白血病）である。
【００９５】
一実施例では、この疾患または状態は、ＩＬ−３Ｒα−関連癌、例えば、白血病であり、すなわち、この癌（または白血病）は、ＩＬ−３Ｒαを発現する癌（または白血病）細胞によって特徴付けられる。
【００９６】
別の実施例では、この癌は、リンパ腫のような悪性のリンパ球増殖性障害である。
【００９７】
一実施例では、この疾患または状態は、自己免疫状態または炎症性状態である。例えば、この状態とは、紅斑性狼瘡、例えば、全身性エリテマトーデス、シェーグレン症候群または強皮症（例えば、全身性強皮症）である。
【００９８】
一実施例では、この方法は、有効量の免疫グロブリン、例えば、治療有効量の免疫グロブリン、抗体または抗原結合フラグメントを投与することを包含する。
【００９９】
一実施例では、この方法は、約０．０００１ｍｇ／ｋｇ〜５０ｍｇ／ｋｇの免疫グロブリン、抗体または抗原結合フラグメントを哺乳動物に対して投与することを包含する。例えば、この方法は、約０．０００５ｍｇ／ｋｇ〜約４０ｍｇ／ｋｇの投与を包含する。例えば、この方法は、約０．０００５ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇの投与を包含する。例えば、この方法は、約０．００１ｍｇ／ｋｇ〜約２０ｍｇ／ｋｇの投与を包含する。例えば、この方法は、約０．００１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇの投与を包含する。例えば、この方法は、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約５ｍｇ／ｋｇの投与を包含する。例えば、この方法は、約０．００１ｍｇ／ｋｇ〜約１ｍｇ／ｋｇの投与を包含する。
【０１００】
一実施例では、この方法は、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇの免疫グロブリン、抗体または抗原結合フラグメントの投与を包含する。例えば、この方法は、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約５ｍｇ／ｋｇの投与を包含する。例えば、この方法は、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約１ｍｇ／ｋｇの投与を包含する。
【０１０１】
一実施例では、この方法は、約１０ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇの免疫グロブリン、抗体または抗原結合フラグメントの投与を包含する。例えば、この方法は、約２０ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇの投与を包含する。
【０１０２】
一実施例では、この免疫グロブリン、抗体または抗原結合フラグメントは、０．０１ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。
【０１０３】
一実施例では、この免疫グロブリン、抗体または抗原結合フラグメントは、０．１ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。
【０１０４】
一実施例では、この免疫グロブリン、抗体または抗原結合フラグメントは、１ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。
【０１０５】
一実施例では、この免疫グロブリン、抗体または抗原結合フラグメントは、１０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。
【０１０６】
一実施例では、この免疫グロブリン、抗体または抗原結合フラグメントは、３０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。
【０１０７】
一実施例では、この免疫グロブリンまたは抗体は、哺乳動物に対して複数回投与される。一実施例では、投与の間の期間は、少なくとも約７日、例えば少なくとも約８日、例えば，少なくとも約９日または１０日である。一実施例では、投与の間の期間は、少なくとも約１１日である。別の実施例では、投与の間の期間は、少なくとも約１５日、例えば少なくとも約１６日、例えば，少なくとも約１８日または２０日である。一実施例では、投与の間の期間は、少なくとも約２２日である。別の実施例では、投与の間の期間は、少なくとも約２５日、例えば少なくとも約３０日、例えば、少なくとも約４０日または４５日である。一実施例では、投与の間の期間は、少なくとも約５７または６０日である。
【０１０８】
例えば、この免疫グロブリン、抗体または抗原結合ドメインは、０．０００１ｍｇ／ｋｇ〜５ｍｇ／ｋｇ、例えば０．０００５ｍｇ／ｋｇ〜５ｍｇ／ｋｇ、例えば、０．００１ｍｇ／ｋｇ〜５ｍｇ／ｋｇの用量で投与され、そして投与の間の期間は、少なくとも約７日または８日または９日または１０日または１１日または１４日または１７日または２１日または２２日または２８日または２９日または３０日または１カ月である。例えば、この免疫グロブリン、抗体または抗原結合ドメインは、０．０１ｍｇ／ｋｇ〜５ｍｇ／ｋｇの用量で投与され、そしてこの投与の間の期間は、少なくとも約７日または８日または９日または１０日または１１日または１４日である。例えば、この免疫グロブリン、抗体または抗原結合ドメインは、０．０１ｍｇ／ｋｇ〜２ｍｇ／ｋｇの用量で投与され、そしてこの投与の間の期間は、少なくとも約７日または８日または９日または１０日または１１日または１４日である。例えば、この免疫グロブリン、抗体または抗原結合ドメインは、０．０１ｍｇ／ｋｇ〜１ｍｇ／ｋｇの用量で投与され、そしてこの投与の間の期間は、少なくとも約７日または８日または９日または１０日または１１日または１４日である。いくつかの実施例では、投与の間の期間は、少なくとも約７日および約２２日未満、例えば少なくとも約１１日または１５日、および約２０日未満、例えば少なくとも約１３日および約１８日未満である。
【０１０９】
一実施例では、この免疫グロブリン、抗体または抗原結合ドメインは、０．０１ｍｇ／ｋｇの用量で投与され、そしてこの投与の間の期間は、６日または７日または８日または９日または１０日または１１日または１４日または１５日である。
【０１１０】
一実施例では、この免疫グロブリン、抗体または抗原結合ドメインは、０．１ｍｇ／ｋｇの用量で投与され、そしてこの投与の間の期間は、６日または７日または８日または９日または１０日または１１日または１４日または１５日である。
【０１１１】
一実施例では、この免疫グロブリンまたは抗体は、１ｍｇ／ｋｇの用量で投与され、そしてこの投与の間の期間は、６日または７日または８日または９日または１０日または１１日または１４日または１５日または２０日または２１日または２２日である。
【０１１２】
例えば、この免疫グロブリンまたは抗体は、６ｍｇ／ｋｇ〜５０ｍｇ／ｋｇの用量で投与され、そしてこの投与の間の期間は、少なくとも約１５日である。例えば、この免疫グロブリンまたは抗体は、１０ｍｇ／ｋｇ〜３０ｍｇ／ｋｇの用量で投与され、そしてこの投与の間の期間は、少なくとも約１４または１５日である。例えば、この免疫グロブリンまたは抗体は、２０ｍｇ／ｋｇ〜３０ｍｇ／ｋｇの用量で投与され、そしてこの投与の間の期間は、少なくとも約１４または１５日である。いくつかの実施例では、投与の間の期間は、少なくとも約２０日かつ約７０日未満、例えば少なくとも約２１または２２日かつ約６５日未満、例えば少なくとも約２５日かつ約５７日未満である．
【０１１３】
一実施例では、この免疫グロブリンまたは抗体は、１０ｍｇ／ｋｇの用量で投与され、そしてこの投与の間の期間は、１４日または１５日または２１日または２２日または３０日または４８日または５０日または５６日または５７日または６０日である。
【０１１４】
一実施例では、この免疫グロブリンまたは抗体は、３０ｍｇ／ｋｇの用量で投与され、そしてこの投与の間の期間は、１４日または１５日または２１日または２２日または３０日または４８日または５０日または５６日または５７日または６０日である。
【０１１５】
上記で考察されるように、本発明者は、本開示の免疫グロブリンまたは抗体の投与後、ＮＫ細胞数が、約８日内で投与前に存在する数を上回って増大されることを見出した。本発明者はまた、ＮＫ細胞数の増大が、標的細胞の死滅を誘発することにおける本開示の抗体または免疫グロブリンの有効性を増大することを示した。従って、一旦、ＮＫ細胞数が増大されれば、さらなる用量の抗体または免疫グロブリンが、治療的／予防的な効果を誘発するために投与され得る。例えば、本開示の免疫グロブリン、抗体または抗原結合フラグメントは、約０．００１ｍｇ／ｋｇ〜約１ｍｇ／ｋｇの用量で複数回投与され、ここで投与の間の期間は、少なくとも約７日、例えば、少なくとも約８日、例えば、少なくとも約１１日、例えば少なくとも約１４日、例えば、少なくとも約１７日、例えば少なくとも約２１日、例えば、少なくとも約２２日、例えば、２８日または２９日または１カ月または５６日または５７日または６０日である。一実施例では、投与の間の期間は、約７日である。一実施例では、投与の間の期間は、約８日である。一実施例では、投与の間の期間は、約１１日である。一実施例では、投与の間の期間は、約１４日である。一実施例では、投与の間の期間は、約１７日である。一実施例では、投与の間の期間は、約２１日である。一実施例では、投与の間の期間は、約２２日である。一実施例では、投与の間の期間は、約２８日である。一実施例では、投与の間の期間は、約２９日である。一実施例では、この用量は、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約０．１ｍｇ／ｋｇ、例えば、約０．０１ｍｇ／ｋｇまたは０．１ｍｇ／ｋｇの用量である。
【図面の簡単な説明】
【０１１６】
【図１Ａ】図１Ａは、抗体ＣＳＬ３６２Ｘ２の投与後、種々の時点（示したとおり）での非ヒト霊長類被験体由来のサンプル中でのＮＫ細胞数を示すグラフ表示である。細胞数は、抗体の投与前の細胞数の割合として示される。抗体の投薬量を示す。
【図１Ｂ】図１Ｂは、抗体ＣＳＬ３６２Ｂの投与後、種々の時点（示したとおり）での非ヒト霊長類被験体由来のサンプル中でのＮＫ細胞数を示すグラフ表示である。細胞数は、抗体の投与前の細胞数の割合として示される。抗体の投薬量を示す。
【図１Ｃ】図１Ｃは、ヒトＩｇＧ１定常ドメインと抗体７Ｇ３の可変領域とを含むキメラ抗体（ＣＳＬ３６０と命名）の投与後、種々の時点（示したとおり）での非ヒト霊長類被験体由来のサンプル中でのＮＫ細胞数を示すグラフ表示である。細胞数は、抗体の投与前の細胞数の割合として示される。抗体の投薬量を示す。
【図２Ａ】図２Ａは種々の濃度（Ｘ軸の上に示す）での、示した細胞集団および抗体ＣＳＬ３６２Ｘ１の存在下で溶解したＴＦ−１細胞の割合を示すグラフ表示である。
【図２Ｂ】図２Ｂは、種々の数のＮＫ細胞および抗体ＣＳＬ３６２Ｘ１の存在下でのＡＭＬ細胞の割合を示すグラフ表示である。標的細胞（白血病細胞；Ｔ）に対するエフェクター細胞（ＮＫ細胞；Ｅ）の比は、Ｘ軸上に示される。２人の患者由来の細胞を用いて得られた結果を示す。
【発明を実施するための形態】
【０１１７】
詳細な説明
配列表のキー
配列番号１−ＩＬ−３Ｒα鎖のアミノ酸配列
配列番号２−ヒト化抗−ＩＬ−３Ｒα鎖抗体ＣＳＬ３６２のＬＣＤＲ１およびその修飾型のアミノ酸配列
配列番号３−ヒト化抗−ＩＬ−３Ｒα鎖抗体ＣＳＬ３６２のＬＣＤＲ２およびその修飾型のアミノ酸配列
配列番号４−ヒト化抗−ＩＬ−３Ｒα鎖抗体ＣＳＬ３６２のＬＣＤＲ３およびその修飾型のアミノ酸配列
配列番号５−ヒト化抗−ＩＬ−３Ｒα鎖抗体ＣＳＬ３６２のＨＣＤＲ１およびその修飾型のアミノ酸配列
配列番号６−ヒト化抗−ＩＬ−３Ｒα鎖抗体ＣＳＬ３６２のＨＣＤＲ２およびその修飾型のアミノ酸配列
配列番号７−ヒト化抗−ＩＬ−３Ｒα鎖抗体ＣＳＬ３６２のＨＣＤＲ３およびその修飾型のアミノ酸配列
配列番号８−ヒト化抗−ＩＬ−３Ｒα鎖抗体ＣＳＬ３６２の軽鎖可変領域およびその修飾型のアミノ酸配列
配列番号９−ヒト化抗−ＩＬ−３Ｒα鎖抗体ＣＳＬ３６２の重鎖可変領域およびその修飾型のアミノ酸配列
配列番号１０−ヒト化抗−ＩＬ−３Ｒα鎖抗体ＣＳＬ３６２およびＣＳＬ３６２Ｂの重鎖のアミノ酸配列
配列番号１１−ヒト化抗−ＩＬ−３Ｒα鎖抗体ＣＳＬ３６２Ｘ１の重鎖のアミノ酸配列
配列番号１２−ヒト化抗−ＩＬ−３Ｒα鎖抗体ＣＳＬ３６２Ｘ２の重鎖のアミノ酸配列
配列番号１３−ヒト化抗−ＩＬ−３Ｒα鎖抗体ＣＳＬ３６２の軽鎖およびその修飾型のアミノ酸配列
配列番号１４−ヒト化抗−ＩＬ−３Ｒα鎖抗体ＣＳＬ３６２のＬＣＤＲ１およびその修飾型をコードするヌクレオチド配列
配列番号１５−ヒト化抗−ＩＬ−３Ｒα鎖抗体ＣＳＬ３６２のＬＣＤＲ２およびその修飾型をコードするヌクレオチド配列
配列番号１６−ヒト化抗−ＩＬ−３Ｒα鎖抗体ＣＳＬ３６２のＬＣＤＲ３およびその修飾型をコードするヌクレオチド配列
配列番号１７−ヒト化抗−ＩＬ−３Ｒα鎖抗体ＣＳＬ３６２のＨＣＤＲ１およびその修飾型をコードするヌクレオチド配列
配列番号１８−ヒト化抗−ＩＬ−３Ｒα鎖抗体ＣＳＬ３６２のＨＣＤＲ２およびその修飾型をコードするヌクレオチド配列
配列番号１９−ヒト化抗−ＩＬ−３Ｒα鎖抗体ＣＳＬ３６２のＨＣＤＲ３およびその修飾型をコードするヌクレオチド配列
配列番号２０−ヒト化抗−ＩＬ−３Ｒα鎖抗体ＣＳＬ３６２の軽鎖可変領域およびその修飾型をコードするヌクレオチド配列
配列番号２１−ヒト化抗−ＩＬ−３Ｒα鎖抗体ＣＳＬ３６２の重鎖可変領域およびその修飾型をコードするヌクレオチド配列
配列番号２２−ヒト化抗−ＩＬ−３Ｒα鎖抗体ＣＳＬ３６２およびＣＳＬ３６２Ｂの重鎖をコードするヌクレオチド配列
配列番号２３−ヒト化抗−ＩＬ−３Ｒα鎖抗体ＣＳＬ３６２の軽鎖およびその修飾型をコードするヌクレオチド配列
【０１１８】
概要
本明細書全体にわたって、別段言及しないか、または文脈上他が必要とされない限り、単一の工程、物質組成、工程の群、または物質の組成の群に対する言及は、１つおよび複数の（すなわち、１つ以上）のこれらの工程、物質組成、工程の群、または物質の組成の群を包含するものととるべきである。
【０１１９】
当業者は、本開示が、具体的に記載されるもの以外のバリエーションおよび改変を受けやすいことを理解する。この開示は、全てのこのようなバリエーションおよび改変を包含することが理解されるべきである。本開示はまた、本明細書において言及されるかまたは示される全ての工程、特徴、組成物および化合物を、個々にまたは集合的に、ならびに任意のかつ全ての組み合わせ、または任意の２つ以上のこのような工程または特徴を包含する。
【０１２０】
本開示は、例示の目的にしか過ぎない、本明細書に記載の特定の実施例による範囲に限定されるべきではない。機能的に等価な生成物、組成物および方法は、明らかに本開示の範囲内である。
【０１２１】
本明細書の本開示の任意の実施例は、別段特に言及しない限り、本開示の任意の他の実施例に対して必要な変更を加えるものととられるべきである。
【０１２２】
別段特に規定しない限り、本明細書において用いられる全ての技術的および科学的な用語は、当業者（例えば、細胞培養、分子遺伝学、免疫学、免疫組織化学、タンパク質化学、および生化学）によって通常理解されるのと同じ意味を有するものととられるべきである。
【０１２３】
別段示さない限り、本開示で利用される、組換えのタンパク質、細胞培養物、および免疫学的技術は、当業者に周知である、標準的な手順である。このような技術は、Ｊ．Ｐｅｒｂａｌ，Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ（１９８４），Ｊ．Ｓａｍｂｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｕｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ（１９８９），Ｔ．Ａ．Ｂｒｏｗｎ（編集），Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，第１巻および第２巻，ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ（１９９１），Ｄ．Ｍ．ＧｌｏｖｅｒおよびＢ．Ｄ．Ｈａｍｅｓ（編集），ＤＮＡ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，第１〜４巻，ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ（１９９５および１９９６），ならびにＦ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌら（編集），Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎｅ  Ｐｕｂ．Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ  ａｎｄ  Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ（１９８８，現在までの全ての更新を含んでいる）、Ｅｄ  Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｄａｖｉｄ  Ｌａｎｅ（編集）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｕｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，（１９８８）、ならびにＪ．Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎら（編集）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ（現在までの全ての更新を含んでいる）のような出典で文献全体にわたって記載されかつ説明される。
【０１２４】
本明細書の可変領域およびその一部、免疫グロブリン、抗体およびそのフラグメントの説明および定義は、Ｋａｂａｔ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．，１９８７  ａｎｄ  １９９１の考察によってさらに明確にされ得る。
【０１２５】
「および／または」という用語、例えば、「Ｘおよび／またはＹ」とは、「ＸおよびＹ」または「ＸまたはＹ」のいずれかを意味することが理解されるべきであり、そして両方の意味について、またはいずれかの意味について、明確な支持をもたらすものととられるべきである。
【０１２６】
本明細書全体にわたって、「含む、包含する（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、または変形、例えば「含む、包含する（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」または「含んでいる、包含している（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という用語は、言及された要素、整数もしくは工程、または要素、整数もしくは工程の群を包含するが、他の任意の要素、整数もしくは工程、または要素、整数もしくは工程の群を排除することを意味するものではないと理解される。
【０１２７】
本明細書において用いる場合、「由来する」という用語は、特定の整数が、特定の起源から（その起源に直接由来する必要はないのだが）得ることができるということを示すととられるべきである。
【０１２８】
選択される定義
本明細書において用いる場合、「免疫グロブリン」という用語は、免疫グロブリンアイソタイプＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＭ、ＩｇＧ、およびＩｇＥならびにその抗原結合フラグメントを含めて、免疫グロブリン遺伝子複合体の任意の抗原結合タンパク質生成物を包含する。例示的な免疫グロブリンは抗体である。例示的な免疫グロブリンは、モノクローナルである。「免疫グロブリン」という用語に含まれるのは、適切に脱免疫され、それによって哺乳動物に投与された免疫グロブリンに対するその哺乳動物による免疫応答を減少または排除する任意の免疫グロブリンである。ヒトの処置の場合、適切な免疫グロブリンとしては、キメラ、ヒト化またはヒトの免疫グロブリンが挙げられる。また、「免疫グロブリン」という用語内に含まれるのは、改変、突然変異された、キメラのおよび／またはヒト化の免疫グロブリンであって、これは、天然に存在するか、またはヒト介入によって産生されるか（例えば、組換えＤＮＡ技術による）にかかわらず、変更されたまたは改変体のアミノ酸残基、配列またはグリコシル化を含む。例示的なタンパク質は、Ｆｃレセプター結合部分を含む。例えば、「免疫グロブリン」という用語によって包含されるタンパク質としては、ドメイン抗体、ラクダ科（ｃａｍｅｌｉｄ）抗体および軟骨魚類由来の抗体が挙げられる（すなわち、免疫グロブリン新抗原レセプター（ＩｇＮＡＲ））。一般には、ラクダ科の抗体およびＩｇＮＡＲはＶＨを含むが、ＶＬは欠き、重鎖免疫グロブリンと呼ばれる場合が多い。他の「免疫グロブリン」としては、Ｔ細胞レセプターおよび他の免疫グロブリン様ドメイン含有タンパク質（例えば、可変領域を含む抗原結合部位のおかげで抗原に結合し得る）が挙げられる。
【０１２９】
当業者は、「抗体」とは一般に、複数のポリペプチド鎖（例えば、ＶＬを含むポリペプチド、およびＶＨを含むポリペプチド）からできている可変領域を含むタンパク質であるとみなされるということを認識する。抗体はまた一般には、定常ドメインを含み、そのいくつかは、定常領域、または定常フラグメントまたは結晶形成フラグメント（Ｆｃ）に配列され得る。ＶＨおよびＶＬは相互作用して、１または２〜３の密接に関連する抗原に対して特異的に結合し得る抗原結合領域を含んでいるＦｖを形成する。一般には、哺乳動物由来の軽鎖は、κ軽鎖またはλ軽鎖のいずれかであり、かつ哺乳動物由来の重鎖は、α、δ、ε、γ、またはμである。抗体は、任意の種類（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、およびＩｇＹ）、任意のクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２）またはサブクラスであってもよい。「抗体」という用語は、ヒト化抗体を包含する。
【０１３０】
「ヒト化抗体」という用語は、ヒト抗体由来のＦＲにグラフトされるか、またはその中に挿入された非ヒト種（例えば、マウス）由来の抗体由来のＣＤＲを含めてヒト様の可変領域を含んでいる抗体を指すことが理解されよう（この種の抗体はまた、「ＣＤＲ−グラフト抗体」とも呼ばれる）。ヒト化抗体としてはまた、ヒト抗体の１つ以上の残基が、１つ以上のアミノ酸置換によって改変されるか、および／またはヒトタンパク質の１つ以上のＦＲ残基が対応する非ヒト残基で置き換えられている、抗体も包含する。本明細書において例示されるように、ヒト化抗体はまた、ヒト抗体でも、非ヒト抗体でも見出されない残基を含んでもよい。抗体の任意の追加の領域（例えば、Ｆｃ領域）は一般にヒトである。ヒト化は、当該分野で公知の方法、例えば、米国特許第５２２５５３９号、米国特許第６０５４２９７号、米国特許第７５６６７７１号または米国特許第５５８５０８９号を用いて行われてもよい。「ヒト化抗体」という用語はまた、例えば、米国特許第７７３２５７８号に記載のような、スーパーヒト化（超ヒト化）タンパク質も包含する。
【０１３１】
「全長抗体」、「インタクトな抗体」または「全抗体」という用語は、抗体の抗原結合フラグメントとは対照的に、抗体をその実質的にインタクトな形態で指すために交換可能に用いられる。具体的には、全抗体としては、重鎖および軽鎖（Ｆｃ領域を含む）を有する抗体が挙げられる。定常ドメインは、野性型配列定常ドメイン（例えば、ヒト野性型配列定常ドメイン）またはそのアミノ酸配列改変体であってもよい。ある場合には、インタクトな抗体は、１つ以上のエフェクター機能を誘導し得る場合がある。
【０１３２】
「裸の抗体」という用語は、別の化合物、例えば、毒性化合物または放射性標識化合物にコンジュゲートされていない抗体を指す。
【０１３３】
抗体の「抗原結合フラグメント」は、インタクトな抗体の抗原結合ドメインおよび／または可変領域を含む。抗体フラグメントの例としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２およびＦｖフラグメント；二重特異性抗体；直鎖状抗体；単鎖抗体分子および抗体フラグメントから形成された多特異性抗体が挙げられる。
【０１３４】
本開示の文脈では、「エフェクター機能」とは、細胞の殺傷を生じる抗体のＦｃ領域（天然配列Ｆｃ領域またはアミノ酸配列改変体Ｆｃ領域）に結合する細胞またはタンパク質によって媒介される生物学的活性を指す。抗体または免疫グロブリンによって誘発されるエフェクター機能の例としては以下が挙げられる：補体依存性細胞毒性；抗体依存性細胞媒介性細胞毒性（ＡＤＣＣ）；抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）；およびＢ細胞活性化。本開示の状況では、この用語または「抗体によって誘発されるエフェクター機能」などの用語は、「免疫グロブリンのエフェクター機能」または「抗体のエフェクター機能」などの用語と交換可能に用いられ、各々が他に対して文字上の支持となる。
【０１３５】
「抗体依存性細胞媒介性細胞毒性」または「ＡＤＣＣ」とは、細胞毒性の形態であって、特定の細胞毒性細胞（例えば、ナチュラルキラー（「ＮＫ」）細胞、好中球およびマクロファージ）上に存在するＦｃレセプター（「ＦｃＲｓ」）上に結合された分泌Ｉｇが、これらの細胞毒性エフェクター細胞を、抗原保有標的細胞に対して特異的に結合し、引き続き細胞毒素によって標的細胞を殺傷できる、細胞毒性の形態を指す。目的の分子のＡＤＣＣ活性を評価するために、インビトロのＡＤＣＣアッセイを行ってもよい。このようなアッセイに有用なエフェクター細胞としては、末梢血単核球（「ＰＢＭＣ」）およびＮＫ細胞が挙げられる。
【０１３６】
本明細書において用いる場合、「可変領域」とは、抗原に特異的に結合し得、かつ例えば、ＣＤＲのアミノ酸配列；すなわち、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびにフレームワーク領域（ＦＲ）を含む、本明細書で規定の抗体の軽鎖および／または重鎖の一部を指す。例えば、可変領域は、３つまたは４つのＦＲ（例えば、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３および必要に応じてＦＲ４）と３つのＣＤＲを一緒に含む。ＶＨは、重鎖の可変領域を指す。ＶＬは軽鎖の可変領域を指す。
【０１３７】
本明細書において用いる場合、「相補性決定領域」（同義語はＣＤＲ類；すなわち、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）という用語は、その存在が特定の抗原結合に対する主要な寄与因子である、抗体可変領域のアミノ酸残基を指す。各々の可変領域は典型的には、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３として特定された３つのＣＤＲ領域を有する。一実施例では、ＣＤＲおよびＦＲに割り当てられたアミノ酸位置は、Ｋａｂａｔ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．，１９８７および１９９１（本明細書においては「Ｋａｂａｔナンバリングシステム」とも呼ばれる）によって規定される。Ｋａｂａｔのナンバリングシステムによれば、ＶＨ  ＦＲおよびＣＤＲは、以下のように位置決めされる：残基１〜３０（ＦＲ１）、３１−３５（ＣＤＲ１）、３６〜４９（ＦＲ２）、５０〜６５（ＣＤＲ２）、６６〜９４（ＦＲ３）、９５〜１０２（ＣＤＲ３）および１０３〜１１３（ＦＲ４）。Ｋａｂａｔのナンバリングシステムによれば、ＶＬのＦＲおよびＣＤＲは、以下のように位置決めされる：残基１−２３（ＦＲ１）、２４−３４（ＣＤＲ１）、３５−４９（ＦＲ２）、５０−５６（ＣＤＲ２）、５７−８８（ＦＲ３）、８９−９７（ＣＤＲ３）および９８−１０７（ＦＲ４）。  
【０１３８】
「フレームワーク領域」（本明細書において以降ではＦＲ）は、ＣＤＲ残基以外の可変ドメイン残基である。
【０１３９】
「定常領域」という用語は、本明細書において用いる場合、可変領域以外の抗体の重鎖または軽鎖の一部を指す。重鎖では、定常領域は一般には、複数の定常ドメインおよびヒンジ領域を含み、例えば、ＩｇＧ定常領域は、以下のリンクされた構成要素、すなわち定常重（ＣＨ）１、リンカー、ＣＨ２およびＣＨ３を含む。重鎖では、定常領域は、Ｆｃを含む。軽鎖では、定常領域は一般に、１つの定常ドメイン（ＣＬ１）を含む。
【０１４０】
「結晶形成フラグメント」または「Ｆｃ」もしくは「Ｆｃ領域」もしくは「Ｆｃ部分」（本明細書において交換可能に用いられ得る）という用語は、少なくとも１つの定常ドメインを含んでおり、一般には（必然ではないが）グリコシル化されており、１つ以上のＦｃレセプターおよび／または補体カスケードの成分に結合し得る、抗体のある領域を指す。重鎖定常領域は、任意の５つのアイソタイプから選択され得る：α、δ、ε、γ、またはμ。さらに、種々のサブクラスの重鎖（例えば、重鎖のＩｇＧサブクラス）は、異なるエフェクター機能を担い、従って、所望の重鎖定常領域を選択することによって、所望のエフェクター機能を有するタンパク質が生成され得る。例示的な重鎖定常領域は、γ１（ＩｇＧ１）、γ２（ＩｇＧ２）およびγ３（ＩｇＧ３）、またはそれらのハイブリッドである。
【０１４１】
「定常ドメイン」とは、抗体中のドメインであって、その配列が同種の抗体、例えば、ＩｇＧまたはＩｇＭまたはＩｇＥ中で極めて類似している、ドメインである。抗体の定常領域は概して、複数の定常ドメインを含み、例えば、γ、αまたはδ重鎖の定常領域は、２つの定常ドメインを含む。
【０１４２】
本明細書において用いる場合、「特異的に結合する」という用語は、ある免疫グロブリンまたは抗体とＩＬ−３Ｒα鎖との間の結合相互作用が、その免疫グロブリンまたは抗体によって結合されるＩＬ−３Ｒα鎖の抗原決定基またはエピトープの存在に依存することを意味する、免疫グロブリンまたは抗体を意味するものととられる。従って、この免疫グロブリンまたは抗体は、ＩＬ−３Ｒα鎖抗原決定基またはエピトープを、他の分子の混合物または生物体中に存在する場合でさえ、優先的に結合するかまたは認識する。一実施例では、この免疫グロブリンまたは抗体は、ＩＬ−３Ｒαまたはこれを発現する細胞と、別の抗原または細胞が反応するかまたは会合するよりも、より高頻度に、より迅速に、より長時間および／またはより大きい親和性で、反応するかまたは会合する。この定義を読めば、例えば、免疫グロブリンまたは抗体は特異的にＩＬ−３Ｒαに結合し、第二の抗原には特異的に結合することもあるし、しないこともあることが理解される。そのようなものとして、「特異的な結合」は、必ずしも、別の抗原の排他的な結合も検出不能な結合も必要としない。「特異的に結合する」という用語は、本明細書において、「選択的に結合する」と交換可能に用いられる。一般には、結合のついての本明細書の言及は、特異的な結合を意味し、各々の用語は、他の用語について明確な支持を提供すると理解されるものとする。一実施例では、ＩＬ−３Ｒαまたはこれを発現する細胞との「特異的な結合」とは、ＩＬ−３Ｒαまたはこれを発現する細胞に対して、免疫グロブリンまたは抗体が、１００ｎＭ以下、例えば、５０ｎＭ以下、例えば、２０ｎＭ以下、例えば、１ｎＭ以下、例えば、０．８ｎＭ以下という平衡定数（ＫＤ）で結合することを意味する。
【０１４３】
「ＫａｂａｔのＥＵナンバリングシステム」という用語は、抗体重鎖のナンバリングが、Ｋａｂａｔら、１９９１，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，第５版、Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ．に教示のようなＥＵインデックスによるものであることを意味することが理解される。ＥＵインデックスはヒトＩｇＧ１Ｅｕ抗体の残基ナンバリングに基づく。
【０１４４】
本明細書において用いる場合、「ＩＬ−３Ｒα−媒介性状態」という用語は、哺乳動物における過剰なＩＬ−３Ｒα発現および／またはＩＬ−３Ｒα発現細胞（例えば癌細胞（例えば、白血病細胞）および／または免疫細胞（例えば、形質細胞様樹状細胞））の過剰な数と関連するか、またはそれによって生じる状態を意味することが理解される。
【０１４５】
本明細書において用いる場合、「骨髄異形成症候群」または「ＭＤＳ」という用語は、血球の骨髄クラスの産生不全（または形成不全）を包含する血液学的医学的状態の多様な収集を指すことが理解される。ＭＤＳを有する被験体は、重度の貧血を発症する場合が多く、頻繁な輸血を要する場合がある。多くの場合、ＭＤＳが進行すると、進行性の骨髄不全に起因して被験体に血球減少症（低い血球数）を発症する。ＭＤＳの患者のほぼ三分の一では、この疾患は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）に変化する。ＭＤＳは、種々のシステムで診断または分類され得、このシステムとしては、Ｆｒｅｎｃｈ−Ａｍｅｒｉｃａｎ−Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ｂｅｎｎｅｔｔら、Ｂｒ．Ｊ．Ｈａｅｍａｔｏｌ．３３：４５１−４５８，１９７６）、Ｔｈｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ  Ｓｃｏｒｉｎｇ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ｇｒｅｅｎｂｅｒｇら、Ｂｌｏｏｄ  ８９：２０７９−８８，１９９７）または世界保健機関が公表したシステムが挙げられる。
【０１４６】
本明細書において用いる場合、「処置、治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」とは、臨床の病理学の経過の間に処置されている個体または細胞の自然な経過を変更するように設計された臨床的介入を指す。処置の望ましい効果としては、疾患進行の速度の低下、疾病状態の改善または緩和、および寛解または予後改善が挙げられる。個体は、例えば、疾患に関連する１つ以上の症状が軽減または排除される場合、首尾よく「処置される」。
【０１４７】
本明細書において用いる場合、「予防」という用語は、個体における疾患の発症または再発に対する予防をもたらすことを包含する。個体は、疾患または疾患再発を受けやすいか、または発症するリスクがある場合があるが、その疾患または再発とはまだ診断されていない。
【０１４８】
本明細書において用いる場合、疾患もしくは状態またはその再発を発症するか、または再発するという「リスクのある」哺乳動物は、検出可能な疾患または疾患の症状を有しても、有さなくてもよく、そして本開示による処置の前に、検出可能な疾患または疾患の症状を呈することはあってもよいし、なくてもよい。「リスクがある」とは、ある哺乳動物が、当該分野において公知であるか、および／または本明細書に記載されるような、疾患または状態の発生に関連する測定可能なパラメーターである、１つ以上の危険因子を有することを意味する。
【０１４９】
「有効量」とは、所望の治療的な結果または予防的な結果を得るために、必要な用量および期間で、有効な少なくともある量を指す。有効量は、１つ以上の投与中で提供されてもよい。本開示のいくつかの実施例では、「有効量」という用語は、本明細書において前記されるような疾患または状態の処置に効果を発揮するのに必要な量を意味する。この有効量は、処置されるべき疾患または状態に応じて、ならびにまた、処置されている哺乳動物に関する体重、年齢、人種的背景、性別、健康および／または身体的条件および他の要因に応じて変化し得る。一般には、有効量は、医療従事者による慣用的なトライアルおよび実験を通じて決定され得る、比較的広範な範囲（例えば、「投薬量」範囲）内におさまる。有効量は、単一用量で、または反復用量で、処置期間にわたって１回投与されてもまたは数回投与されてもよい。
【０１５０】
「治療上有効な量」とは、特定の障害（例えば、ＳＬＥ）の測定可能な改善を果たすために必要な少なくとも最小濃度である。本明細書における治療上有効な量とは、患者の疾患状態、年齢、性別および体重、ならびにこの免疫グロブリンまたは抗体が個体において所望の応答を誘発する能力などの要因に応じて変化してもよい。治療上有効な量とはまた、この免疫グロブリンまたは抗体の任意の毒性または有害な効果を、治療上有効な効果が上回る量である。
【０１５１】
「予防上有効な量」とは、所望の予防的な結果を達成するために必要な用量および期間で、有効な量を指す。一般には、ただし必須ではないが、予防的な用量は、疾患の初期段階より前または初期段階に哺乳動物に用いられるので、予防上有効な量は、治療上有効な量よりも少ない場合があり得る。
【０１５２】
「哺乳動物におけるＮＫ細胞数」という本明細書における言及は、哺乳動物由来のサンプル中のＮＫ細胞数を包含し、哺乳動物におけるＮＫ細胞の総数を決定する必要はないことが理解される。この数は、例えば、１ｍＬもしくは１ｄＬあたりの細胞として表現されてもよいし、あるいは、哺乳動物から異なる時点で採取されたサンプル由来の細胞数の割合として表現されてもよい。
【０１５３】
命名の目的に過ぎず、限定ではないが、ＩＬ−３Ｒα鎖のアミノ酸配列は、Ｇｅｎｅ  ＩＤアクセッション番号３５６３および／または配列番号１に教示される。
【０１５４】
本開示によって処置される「哺乳動物」は、非ヒト霊長類、またはヒトのような哺乳動物であってもよい。一実施例では、この哺乳動物はヒトである。
【０１５５】
「配列同一性」という用語は、本明細書において、その広義の意味で用いられ、配列が比較のウインドウにまたがって同一である程度を考慮して、標準的なアルゴリズムを用いて、適切なアラインメントを考慮している正確なヌクレオチドまたはアミノ酸のマッチの数を包含する。配列同一性は、アルゴリズムのコンピューターによる実施を用いる比較の配列のアラインメントによって（ＩｎｔｅｌｌｉｇｅｎｅｔｉｃｓによるＧｅｎｅｗｏｒｋｓプログラム；ＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡ、およびＴＦＡＳＴＡ、ｔｈｅ  Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｐａｃｋａｇｅ  Ｒｅｌｅａｓｅ  ７．０，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐ，５７５  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｄｒｉｖｅ  Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ，ＵＳＡ（参照によって本明細書に援用される））または選択される任意の種々の方法によって生成される検査および最適アラインメント（すなわち、比較ウインドウにまたがって最高の割合の相同性を生じる）によって決定され得る。参照はまた、例えば、Ａｌｔｓｃｈｕｌら、１９９７，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２５  ３３８９によって開示されるようなプログラムのＢＬＡＳＴファミリーに対してなされてもよい。配列分析の詳細な考察は、ＣＵＲＲＥＮＴ  ＰＲＯＴＯＣＯＬＳ  ＩＮ  ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ  ＢＩＯＬＯＧＹ、編集．Ａｕｓｕｂｅｌら、（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ  Ｉｎｃ  ＮＹ，１９９５−１９９９）の単元１９．３に見ることができる。
【０１５６】
この開示はまた、本開示の抗−ＩＬ−３Ｒα免疫グロブリン、抗体または抗原結合フラグメントの誘導体を提供する。本明細書において用いる場合、「誘導体の」タンパク質は、例えば、翻訳後の修飾（例えば、リン酸化、アセチル化など）、グリコシル化の修飾（例えば、グリコシル化の付加、除去または変更）および／または追加のアミノ酸配列の包含（当該分野で理解されるような）によって変更された。
【０１５７】
本明細書において用いられる場合、「核酸」という用語は、本開示の免疫グロブリン、抗体または抗原結合フラグメントまたはそれらのポリペプチド成分をコードし得る一本鎖または二本鎖のＤＮＡおよびＲＮＡを指す。ＤＮＡとしては、ゲノムＤＮＡおよびｃＤＮＡが挙げられる。ＲＮＡとしては、ｍＲＮＡおよびｃＲＮＡが挙げられる。核酸はまた、ＤＮＡ−ＲＮＡハイブリッドであってもよい。核酸は、ヌクレオチド配列を含み、これは、Ａ、Ｇ、Ｃ、ＴまたはＵの塩基を含む、ヌクレオチドを一般には含む。しかし、ヌクレオチド配列は、他の塩基、例えば、イノシン、メチルシトシン、メチルイノシン、メチルアデノシンおよび／またはチオウリジン（ただしこれれに限定されない）を含んでもよい。
【０１５８】
「ハイブリダイズするおよびハイブリダイゼーション」とは、本明細書において、ＤＮＡ−ＤＮＡ、ＲＮＡ−ＲＮＡまたはＤＮＡ−ＲＮＡのハイブリッドを産生するために少なくとも部分的に相補的なヌクレオチド配列の対合を意味して用いられる。相補的なヌクレオチド配列を含むハイブリッド配列は、当該分野で周知であるように、相補的なプリンとピリミジンとの間の塩基対合を通じて生じる。
【０１５９】
この関連で、修飾プリン（例えば、イノシン、メチルイノシンおよびメチルアデノシン）および修飾ピリミジン（チオウリジンおよびメチルシトシン）はまた、塩基対中で係合し得ることが理解される。
【０１６０】
「ストリンジェンシー」とは本明細書において用いる場合、ハイブリダイゼーションの間の、温度、およびイオン強度の条件、ならびに特定の有機溶媒および／または界面活性剤の有無を指す。ストリンジェンシーが高いほど、ハイブリダイズするヌクレオチド配列の間で必要な相補性のレベルが高くなる。
【０１６１】
「高ストリンジェンシー状態」とは、高頻度の相補性塩基を有する核酸のみがハイブリダイズする条件を指す。
高ストリンジェンシー条件に対する本明細書の言及は、以下を包含し、かつ網羅している：
（ｉ）４２℃でのハイブリダイゼーションに関して、少なくとも約３１％（ｖ／ｖ）〜少なくとも約５０％（ｖ／ｖ）のホルムアミドおよび少なくとも約０．０１Ｍ〜少なくとも約０．１５Ｍの塩、ならびに４２℃での洗浄に関して、少なくとも約０．０１Ｍ〜少なくとも約０．１５Ｍの塩；
（ｉｉ）６５℃でのハイブリダイゼーションに関して、１％のＢＳＡ、１ｍＭのＥＤＴＡ、０．５ＭのＮａＨＰＯ４（ｐＨ７．２）、７％のＳＤＳ、および約１時間の６５℃を超える温度での洗浄に関して、（ａ）０．１×ＳＳＣ、０．１％のＳＤＳ；または（ｂ）０．５％のＢＳＡ、１ｍＭのＥＤＴＡ、４０ｍＭのＮａＨＰＯ４（ｐＨ７．２）、１％のＳＤＳ；ならびに
（ｉｉｉ）約２０分間、６８℃以上の洗浄に関して、０．２×ＳＳＣ、０．１％のＳＤＳ。
【０１６２】
一般には、洗浄は、Ｔｍ＝６９．３＋０．４１（Ｇ＋Ｃ）％の−１２℃で行われる。一般には、二本鎖ＤＮＡのＴｍは、ミスマッチの塩基数が１％増大するごとに約１℃ずつ低下する。
【０１６３】
上記にかかわらず、ストリンジェントな条件は、Ａｕｓｕｂｅｌら、ＣＵＲＲＥＮＴ  ＰＲＯＴＯＣＯＬＳ  ＩＮ  ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ  ＢＩＯＬＯＧＹ  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．１９９５−２００９の第２．９章および第２．１０章に記載のように、当該分野で公知である。
【０１６４】
「発現ベクター」は、プラスミドのような自己複製の染色体外ベクターであっても、または宿主ゲノム中に組み込むベクターであってもいずれでもよい。
【０１６５】
免疫グロブリン
適切には、本開示の免疫グロブリンまたは抗体は、選択的にＩＬ−３Ｒα鎖に結合し、このことは、この免疫グロブリンまたは抗体とＩＬ−３Ｒα鎖との間の結合相互作用が、免疫グロブリンによって結合されるＩＬ−３Ｒα鎖の抗原決定基またはエピトープの存在に依存することを意味する。従って、この免疫グロブリンまたは抗体は、ＩＬ−３Ｒα鎖の抗原決定基またはエピトープに対して、他の分子の混合物または生物体中に存在する場合でさえ、優先的に結合するかまたは認識する。  
【０１６６】
抗体
一実施例では、任意の実施例による、本明細書に記載の免疫グロブリンは、例えば、本明細書に記載のＣＤＲおよび／または１つ以上の可変領域を含んでいる、抗体である。
【０１６７】
適切には、この免疫グロブリンは、それぞれ、配列番号２〜７による、軽鎖および重鎖のＣＤＲ１、２および３のアミノ酸配列を含むヒト化された、キメラまたはヒトの抗体である。一実施例では、この抗体は、配列番号９による重鎖可変領域のアミノ酸配列および配列番号８による軽鎖可変領域アミノ酸配列を含む。一実施例では、この抗体は、配列番号１０、配列番号１１または配列番号１２による重鎖アミノ酸配列と、配列番号１３による軽鎖アミノ酸配列とを含む。
【０１６８】
一実施例では、この抗体は、組換え抗体である。本明細書に記載のＣＤＲおよび／または可変領域を含んでいる抗体を産生するための方法は、本明細書の開示および／または本明細書に対して引用される文書に基づいて、当業者に明白である。
【０１６９】
一実施例では、本開示の抗体は、ＶＨおよび／またはＶＬを含み、これは本明細書に示されるＣＤＲ類およびヒト抗体由来のＦＲ類を含んでいる。必要に応じて、ＦＲ類は、１つ以上のアミノ酸置換、例えば、２以上または３以上または４以上または５以上または１０以上または１５以上のアミノ酸置換を含む。一実施例では、ＦＲ類は、ヒトＦＲ類に比較して、３０以下のアミノ酸置換、例えば、２０以下のアミノ酸置換を含む。
【０１７０】
一実施例では、本開示の抗体は、ＶＨおよび／またはＶＬを含み、これは本明細書に示されるＣＤＲ類および非ヒト霊長類抗体由来のＦＲ類を含んでおり、すなわち、この抗体は、例えば、ＷＯ２００７／０１９６２０に記載のように、シンヒューマナイズド（Ｓｙｎｈｕｍａｎｉｚｅｄ）されている。
【０１７１】
一実施例では、本開示の抗体は、例えば、ＷＯ２００６／０８２４０６に記載されるような、複合抗体である。
【０１７２】
本開示の一つの例示的な抗体は、例えば、本明細書に定義されるような、ヒト化抗体である。例示的なヒト化抗体は、本明細書に記載されている。一実施例では、このヒト化抗体は、親和性成熟されている。一実施例では、このヒト化抗体は以下を含む：
（ｉ）ＶＬであって：
ａ）配列番号２に示される配列を含んでいる（または配列番号１４に示される配列によってコードされる）ＣＤＲ１；
ｂ）配列番号３に示される配列を含んでいる（または配列番号１５に示される配列によってコードされる）ＣＤＲ２；および
ｃ）配列番号４に示される配列を含んでいる（または配列番号１６に示される配列によってコードされる）ＣＤＲ３；
を含むＶＬと；
（ｉｉ）ＶＨであって：
ｄ）配列番号５に示される配列を含んでいる（または配列番号１７に示される配列によってコードされる）ＣＤＲ１；
ｅ）配列番号６に示される配列を含んでいる（または配列番号１８に示される配列によってコードされる）ＣＤＲ２；および
ｆ）配列番号７に示される配列を含んでいる（または配列番号１９に示される配列によってコードされる）ＣＤＲ３、
を含むＶＨ。
【０１７３】
当業者は、本開示の免疫グロブリンまたは抗体が、例えば、親和性またはエフェクター機能を増大するために、ヒトで天然には見出されない配列を導入する、修飾を含んでもよいことを理解する。
【０１７４】
本開示はまた、本開示の免疫グロブリンまたは抗体の改変体を提供する。適切には、改変体は、配列番号２〜１３に示される任意のアミノ酸配列のいずれかと少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性を有する。
【０１７５】
例えば、当該分野では、いくつかのアミノ酸は、免疫グロブリンまたは抗体のＩＬ−３Ｒα特異性および／またはエフェクター機能に対して有害にも有意にも影響することなく、置換または欠失され得る（例えば、保存的置換）ことが理解される。
【０１７６】
本開示によって考慮される抗体または免疫グロブリンの誘導体としては、限定するものではないが、アミノ酸側鎖に対する修飾、天然でないアミノ酸および／またはそれらの誘導体の組み込み（ペプチドまたはポリペプチドの合成および架橋剤の使用の間）が挙げられる。
【０１７７】
本開示の例示的な抗体およびその抗原結合フラグメントは、表１に記載される。
【０１７８】
【表１】
0005524418.tif 000002
【０１７９】
抗体フラグメント
単一ドメイン抗体
いくつかの実施例では、本開示の抗体の抗原結合フラグメントは、単一ドメイン抗体（これは「ドメイン抗体」または「ｄＡｂ」という用語と相互交換可能に用いられる）であるか、またはそれを含む。単一ドメイン抗体とは、抗体の重鎖可変ドメインの全てまたは一部を含んでいる単一のポリペプチド鎖である。
【０１８０】
二重特異性抗体、三重特異性抗体、四重特異性抗体
いくつかの実施例では、本開示の抗原結合フラグメントは、ＷＯ９８／０４４００１および／またはＷＯ９４／００７９２１に記載されるもののような、二重特異性抗体、三重特異性抗体、四重特異性抗体またはより高次のタンパク質複合体であるか、またはそれらを含む。
【０１８１】
例えば、二重特異性抗体は、２つの関連するポリペプチド鎖を含むタンパク質であって、この各々のポリペプチド鎖は、構造ＶＬ−Ｘ−ＶＨまたはＶＨ−Ｘ−ＶＬを含んでおり、ここでＸは、単一ポリペプチド鎖中のＶＨおよびＶＬが、会合する（またはＦｖを形成する）ことを可能にするために十分な残基を含んでいないリンカーであるか、または存在せず、ここで、１つのポリペプチド鎖のＶＨは、他のポリペプチド鎖のＶＬに結合して、抗原結合部位を形成し、すなわち、１つ以上の抗原に対して特異的に結合し得るＦｖ分子を形成する。ＶＬおよびＶＨは、各々のポリペプチド鎖において同じであってもよいし、またはＶＬおよびＶＨは、各々のポリペプチド鎖において異なり、それによって二重に特異的な二重特異性抗体（すなわち、異なる特異性を有する２つのＦｖを含んでいる）が形成されてもよい。
【０１８２】
エフェクター活性を誘発し得る二重特異性抗体、三重特異性抗体、四重特異性抗体などは、ＩＬ−３Ｒαに結合し得る抗原結合ドメイン、および免疫細胞、例えば、Ｔ細胞（例えば、ＣＤ３）上の細胞表面分子に対して結合し得る抗原結合ドメインを用いて産生され得る。
【０１８３】
単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）フラグメント
当業者は、ｓｃＦｖｓが、単一ポリペプチド鎖中にＶＨおよびＶＬ領域、ならびにＶＨとＶＬとの間のポリペプチドリンカーを含み、これによって、ｓｃＦｖが抗原結合のための所望の構造を形成することが可能になる（すなわち、Ｆｖを形成するようにお互いと会合する単一ポリペプチド鎖のＶＨおよびＶＬについて）ことを承知する。例えば、このリンカーは、１２を超えるアミノ酸残基を含み、ここで（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）３はｓｃＦｖについてさらに好ましいリンカーの１つである。
【０１８４】
本開示はまた、ジスルフィド安定化Ｆｖ（またはｄｉＦｖまたはｄｓＦｖ）を考慮するが、ここでは、単一のシステイン残基は、ＶＨのＦＲおよびＶＬのＦＲ中に導入され、そしてシステイン残基が、ジスルフィド結合によって連結されて、安定なＦｖが生じる。
【０１８５】
あるいは、またはさらに、本開示は、二量体のｓｃＦｖ、すなわち、非共有結合または共有結合によって、例えば、ロイシンジッパードメイン（例えば、ＦｏｓまたはＪｕｎ由来）によって連結された２つのｓｃＦｖ分子を含むタンパク質を包含する。あるいは、２つのｓｃＦｖは、例えば、米国特許出願公開第２００６０２６３３６７号に記載のように、両方のｓｃＦｖが抗原を形成して抗原に結合することを可能にするのに十分な長さのペプチドリンカーによって連結される。
【０１８６】
本開示はまた、エフェクター活性を誘発し得る二量体のｓｃＦｖを考慮する。例えば、１つのｓｃＦｖは、ＩＬ−３Ｒαに結合し、かつ本明細書に記載されるＣＤＲおよび／または可変領域を含み、そして別のｓｃＦｖが、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞（例えば、ＣＤ３またはＣＤ１９）の上で細胞表面分子に結合する。一実施例では、二量体のタンパク質は、ｄＡｂおよびｓｃＦｖの組み合わせである。エフェクター機能を誘発し得る二重に特異的な抗体フラグメントの例は、例えば、米国特許第７２３５６４１号に記載される。
【０１８７】
他の抗体および抗体フラグメント
本開示はまた、以下のような他の抗体および抗体フラグメントも考慮する：
（ｉ）米国特許第５，７３１，１６８号に記載の「キー・アンド・ホール（カギと鍵穴）（ｋｅｙ  ａｎｄ  ｈｏｌｅ）」二重に特異的なタンパク質；
（ｉｉ）例えば、米国特許第４，６７６，９８０号に記載のようなヘテロコンジュゲートタンパク質；
（ｉｉｉ）例えば、米国特許第４，６７６，９８０号に記載のような化学的架橋を用いて産生されたヘテロコンジュゲートタンパク質；および
（ｉｖ）Ｆａｂ３（例えば、欧州特許第１９９３０３０２８９４号に記載のような）。
【０１８８】
定常領域
本開示は、抗体の定常領域および／または抗体のＦｃ領域を含んでいる、免疫グロブリンおよび抗体および抗原結合フラグメントを包含する。
【０１８９】
本発明の開示の免疫グロブリン、抗体または抗原結合フラグメントを産生するために有用な定常領域および／またはＦｃ領域の配列は、多数の異なる供給源から得てもよい。いくつかの実施例では、この免疫グロブリン、抗体または抗原結合フラグメントの定常領域、Ｆｃまたはその一部は、ヒト抗体由来である。定常領域、Ｆｃまたはその一部は、任意の抗体クラス、例としては、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＧ、ＩｇＤ、ＩｇＡおよびＩｇＥ、ならびに任意の抗体アイソタイプ、例としてはＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４由来であり得る。一実施例では、定常領域またはＦｃは、ヒトアイソタイプＩｇＧ１、またはヒトアイソタイプＩｇＧ２またはヒトアイソタイプＩｇＧ３または前述のいずれかのハイブリッドである。
【０１９０】
一実施例では、定常領域またはＦｃ領域は、エフェクター機能を誘導し得る。例えば、定常領域またはＦｃ領域は、ヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ３のＦｃ領域である。別の実施例では、この定常領域またはＦｃ領域は、ＩｇＧ１およびＩｇＧ２の定常領域もしくはＦｃ領域のハイブリッド、またはＩｇＧ１およびＩｇＧ３定常領域もしくはＦｃ領域のハイブリッド、またはＩｇＧ２およびＩｇＧ３定常領域もしくはＦｃ領域のハイブリッドである。ヒトＩｇＧ１およびＩｇＧ２定常領域またはＦｃ領域の例示的なハイブリッドは、Ｃｈａｐｐｅｌら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８８：９０３６〜９０４０，１９９１に記載される。
【０１９１】
Ｆｃ領域がエフェクター機能を誘発し得るか否かを決定するための方法は、当業者に明白であるか、および／または本明細書に記載される。
【０１９２】
エフェクター機能
適切には、本開示の抗−ＩＬ−３Ｒα免疫グロブリン、抗体または抗原結合フラグメントは、ＩＬ−３Ｒα＋細胞の少なくとも部分的な欠失、実質的な欠失または排除を容易にするかまたは可能にするエフェクター機能を有するかまたは示す。このようなエフェクター機能は、Ｆｃレセプターに対する結合親和性、抗体依存性細胞媒介性細胞毒性（ＡＤＣＣ）、抗体依存性細胞媒介性食作用（ＡＤＣＰ）および／または補体依存性細胞毒性（ＣＤＣ）を増強し得る。
【０１９３】
本明細書の説明に基づいて当業者に明らかとなるように、本開示のいくつかの実施例は、エフェクター機能を誘発し得る免疫グロブリン、抗体または抗原結合フラグメントを包含する。
【０１９４】
ＩｇＧクラスの抗体に関して、これらのエフェクター機能は、種々の免疫細胞上で、および／または補体、例えば、Ｃ１ｑで発現される、Ｆｃγレセプター（ＦｃγＲ）と呼ばれるレセプターのファミリーとのＦｃ領域の係合によって支配される。Ｆｃ／ＦｃγＲ複合体の形成は、これらの細胞を結合した抗原の部位に補充し、典型的には、シグナル伝達およびその後の免疫応答を生じる。エフェクター機能を増強するため、特に、「親」Ｆｃ領域に対するＡＤＣＣおよび／またはＣＤＣ活性を変更するための、抗体Ｆｃ領域に対するＦｃγＲの結合親和性を最適化するための方法は、当業者に公知である。これらの方法は、抗体のＦｃ領域の修飾であって、その関連のＦｃレセプターとの相互作用を増強し、それがＡＤＣＣおよびＡＤＣＰを促進するための能力を増大するための修飾を包含し得る。ＡＤＣＣ活性における増強はまた、Ｆｃ領域における保存されたＡｓｎ２９７でＩｇＧ１抗体に対して共有結合されたオリゴサッカライドの修飾後に記述された。
【０１９５】
この関連で、いくつかの非限定的な実施例では、ＡＤＣＣのようなエフェクター機能の増強は、正常にはグリコシル化された野性型定常ドメインを有する免疫グロブリンまたは抗体の修飾、例としてはグリコシル化の変更もしくは除去（例えば、ＷＯ００／６１７３９を参照のこと）および／またはアミノ酸配列変異（例えば、ＷＯ２００８０３６６８８を参照のこと）によって達成され得る。
【０１９６】
一実施例では、この免疫グロブリン、抗体または抗原結合フラグメントは、ＡＤＣＣのようなエフェクター機能を誘導し得るような方式で、ＩＬ−３Ｒαに対して結合する。
【０１９７】
一実施例では、この免疫グロブリン、抗体または抗原結合フラグメントは、ＩＬ−３Ｒα内のエピトープに対して結合し、これはエフェクター機能、例えば、ＡＤＣＣを誘発できる。
【０１９８】
別の実施例では、この免疫グロブリン、抗体または抗原結合フラグメントは、哺乳動物における細胞上でＩＬ−３Ｒαに対して結合し得、それによって、ＡＤＣＣのようなエフェクター機能を誘導する。
【０１９９】
例えば、この免疫グロブリン、抗体または抗原結合フラグメントは、ＡＤＣＣのようなエフェクター機能を誘導するのに十分な時間、細胞の表面上でＩＬ−３Ｒαに結合したままである。例えば、この免疫グロブリンまたは抗体は、ＡＤＣＣが誘導されることを可能にするように、内部移行が迅速すぎることはない。
【０２００】
あるいは、またはさらに、この免疫グロブリン、抗体または抗原結合フラグメントは、哺乳動物における細胞の表面上でＩＬ−３Ｒαに結合されて、免疫エフェクター細胞が免疫グロブリン、抗体または抗原結合フラグメントの定常領域またはＦｃ領域に結合することを可能にし、そしてＡＤＣＣのようなエフェクター機能を誘導する。例えば、免疫グロブリン、抗体または抗原結合フラグメントのＦｃ領域は、この免疫グロブリン、抗体または抗原結合フラグメントが、免疫エフェクター細胞上のＦｃレセプター（例えば、ＦｃγＲ）と相互作用し得るＩＬ−３Ｒαに結合されるときのような方式で露出される。本開示の文脈では、「免疫エフェクター細胞」という用語は、Ｆｃレセプターを発現し、それが結合される細胞をＡＤＣＣまたはＡＤＣＰによって殺傷し得る任意の細胞を意味することが理解されるものとする。一実施例では、免疫エフェクター細胞は、ＮＫ細胞である。
【０２０１】
免疫グロブリン、抗体または抗原結合フラグメントのエフェクター機能に関する上記のそれぞれの段落は、必要な変更を加えればＣＤＣの誘導にあてはまるととられるものとする。例えば、この免疫グロブリン、抗体または抗原結合フラグメントは、この免疫グロブリン、抗体または抗原結合フラグメントにおける定常領域またはＦｃ領域に対して補体成分Ｃ１ｑが結合することを可能にする方式で、細胞の表面上のＩＬ−３Ｒαに結合されてＣＤＣを誘導する。
【０２０２】
一実施例では、この免疫グロブリン、抗体または抗原結合フラグメントは、上昇したレベルのエフェクター機能を誘導し得る。
【０２０３】
一実施例では、定常領域またはＦｃ領域によって誘導されるエフェクター機能のレベルは、ＩｇＧ１抗体の野性型の定常領域もしくはＦｃ領域またはＩｇＧ３抗体の野性型の定常領域もしくはＦｃ領域に対して増強される。
【０２０４】
別の実施例では、定常領域またはＦｃ領域は、改変のない定常領域またはＦｃ領域に比較して、それが誘導し得るエフェクター機能のレベルを増大するように改変される。このような改変は、この定常領域またはＦｃ領域のアミノ酸レベルおよび／もしくは二次構造のレベルおよび／もしくは三次構造のレベルで、ならびに／またはそのグリコシル化に対してであってもよい。
【０２０５】
当業者は、より大きいエフェクター機能が、任意の多数の方法で、例えば、より大きいレベルの効果、より持続的な効果またはより高速の効果として顕在化され得ると理解する。
【０２０６】
例えば、抗−ＩＬ−３Ｒα免疫グロブリン、抗体または抗原結合フラグメントは、抗体依存性の細胞媒介性の細胞毒性（ＡＤＣＣ）を誘導するエフェクター機能を有するかまたは提示する。
【０２０７】
一実施例では、定常領域またはＦｃ領域は、１つ以上のアミノ酸の改変であって、それが増強されたエフェクター機能を誘導する能力を増大する改変を含む。一実施例では、この定常領域またはＦｃ領域は、１つ以上のＦｃγＲに対してより大きい親和性で結合する。一実施例では、定常領域またはＦｃ領域が有するＦｃγＲに対する親和性は、野性型の定常領域もしくはＦｃ領域のものよりも１倍を上回って大きいか、または野性型の定常領域もしくはＦｃ領域のものよりも５倍を上回って大きいか、または野性型の定常領域もしくはＦｃ領域のものよりも５倍〜３００倍大きい。一実施例では、この定常領域またはＦｃ領域は、以下からなる群より選択されるある位置で少なくとも１つのアミノ酸置換を含む：２３０、２３３、２３４、２３５、２３９、２４０、２４３、２６４、２６６、２７２、２７４、２７５、２７６、２７８、３０２、３１８、３２４、３２５、３２６、３２８、３３０、３３２、および３３５（ＫａｂａｔのＥＵインデックスに従ってナンバリングした）。一実施例では、この定常領域またはＦｃ領域は、以下からなる群より選択される少なくとも１つのアミノ酸置換を含む：Ｐ２３０Ａ、Ｅ２３３Ｄ、Ｌ２３４Ｅ、Ｌ２３４Ｙ、Ｌ２３４Ｉ、Ｌ２３５Ｄ、Ｌ２３５Ｓ、Ｌ２３５Ｙ、Ｌ２３５Ｉ、Ｓ２３９Ｄ、Ｓ２３９Ｅ、Ｓ２３９Ｎ、Ｓ２３９Ｑ、Ｓ２３９Ｔ、Ｖ２４０Ｉ、Ｖ２４０Ｍ、Ｆ２４３Ｌ、Ｖ２６４Ｉ、Ｖ２６４Ｔ、Ｖ２６４Ｙ、Ｖ２６６Ｉ、Ｅ２７２Ｙ、Ｋ２７４Ｔ、Ｋ２７４Ｅ、Ｋ２７４Ｒ、Ｋ２７４Ｌ、Ｋ２７４Ｙ、Ｆ２７５Ｗ、Ｎ２７６Ｌ、Ｙ２７８Ｔ、Ｖ３０２Ｉ、Ｅ３１８Ｒ、Ｓ３２４Ｄ、Ｓ３２４Ｉ、Ｓ３２４Ｖ、Ｎ３２５Ｔ、Ｋ３２６Ｉ、Ｋ３２６Ｔ、Ｌ３２８Ｍ、Ｌ３２８Ｉ、Ｌ３２８Ｑ、Ｌ３２８Ｄ、Ｌ３２８Ｖ、Ｌ３２８Ｔ、Ａ３３０Ｙ、Ａ３３０Ｌ、Ａ３３０Ｉ、Ｉ３３２Ｄ、Ｉ３３２Ｅ、Ｉ３３２Ｎ、Ｉ３３２Ｑ、Ｔ３３５Ｄ、Ｔ３３５Ｒ、およびＴ３３５Ｙ、（ＫａｂａｔのＥＵインデックスに従ってナンバリングした）。一実施例では、この定常領域またはＦｃ領域は、以下からなる群より選択されるアミノ酸置換を含む：Ｖ２６４Ｉ、Ｆ２４３Ｌ／Ｖ２６４Ｉ、Ｌ３２８Ｍ、Ｉ３３２Ｅ、Ｌ３２８Ｍ／Ｉ３３２Ｅ、Ｖ２６４Ｉ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２９８Ａ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｅ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｑ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｅ、Ａ３３０Ｙ、Ｉ３３２Ｄ、Ｌ３２８Ｉ／Ｉ３３２Ｅ、Ｌ３２８Ｑ／Ｉ３３２Ｅ、Ｖ２６４Ｔ、Ｖ２４０Ｉ、Ｖ２６６Ｉ、Ｓ２３９Ｄ、Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｄ、Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｎ、Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｑ、Ｓ２３９Ｅ／Ｉ３３２Ｄ、Ｓ２３９Ｅ／Ｉ３３２Ｎ、Ｓ２３９Ｅ／Ｉ３３２Ｑ、Ｓ２３９Ｎ／Ｉ３３２Ｄ、Ｓ２３９Ｎ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｑ／Ｉ３３２Ｄ、Ａ３３０Ｙ／Ｉ３３２Ｅ、Ｖ２６４Ｉ／Ａ３３０Ｙ／Ｉ３３２Ｅ、Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ、Ｖ２６４Ｉ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ、Ｌ２３４Ｅ、Ｌ２３４Ｙ、Ｌ２３４Ｉ、Ｌ２３５Ｄ、Ｌ２３５Ｓ、Ｌ２３５Ｙ、Ｌ２３５Ｉ、Ｓ２３９Ｔ、Ｖ２４０Ｍ、Ｖ２６４Ｙ、Ａ３３０Ｉ、Ｎ３２５Ｔ、Ｌ３２８Ｄ／Ｉ３３２Ｅ、Ｌ３２８Ｖ／Ｉ３３２Ｅ、Ｌ３２８Ｔ／Ｉ３３２Ｅ、Ｌ３２８Ｉ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｅ／Ｖ２６��Ｉ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｑ／Ｖ２６４Ｉ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｅ／Ｖ２６４Ｉ／Ａ３３０Ｙ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｙ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｎ／Ａ３３０Ｙ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｎ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ、Ｖ２６４Ｉ／Ｓ２９８Ａ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｄ／Ｓ２９８Ａ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｎ／Ｓ２９８Ａ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｄ／Ｖ２６４Ｉ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｄ／Ｖ２６４Ｉ／Ｓ２９８Ａ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｄ／Ｖ２６４Ｉ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ／Ａ３３０Ｉ、Ｐ２３０Ａ、Ｐ２３０Ａ／Ｅ２３３Ｄ／Ｉ３３２Ｅ、Ｅ２７２Ｙ、Ｋ２７４Ｔ、Ｋ２７４Ｅ、Ｋ２７４Ｒ、Ｋ２７４Ｌ、Ｋ２７４Ｙ、Ｆ２７５Ｗ、Ｎ２７６Ｌ、Ｙ２７８Ｔ、Ｖ３０２Ｉ、Ｅ３１８Ｒ、Ｓ３２４Ｄ、Ｓ３２４Ｉ、Ｓ３２４Ｖ、Ｋ３２６Ｉ、Ｋ３２６Ｔ、Ｔ３３５Ｄ、Ｔ３３５Ｒ、Ｔ３３５Ｙ、Ｖ２４０Ｉ／Ｖ２６６Ｉ、Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｙ／Ｉ３３２Ｅ／Ｌ２３４Ｉ、Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｙ／Ｉ３３２Ｅ／Ｌ２３５Ｄ、Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｙ／Ｉ３３２Ｅ／Ｖ２４０Ｉ、Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｙ／Ｉ３３２Ｅ／Ｖ２６４Ｔ、Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｙ／Ｉ３３２Ｅ／Ｋ３２６Ｅ、およびＳ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｙ／Ｉ３３２Ｅ／Ｋ３２６Ｔ、（ＫａｂａｔのＥＵインデックスに従ってナンバリングした）。
【０２０８】
別の実施例では、この定常領域またはＦｃ領域は、ＦｃγＲＩＩｂに対してよりも効率的にＦｃγＲＩＩＩａに結合する。例えば、この定常領域またはＦｃ領域は、以下からなる群より選択される位置で少なくとも１つのアミノ酸置換を含む：２３４、２３５、２３９、２４０、２６４、２９６、３３０、およびＩ３３２（ＫａｂａｔのＥＵインデックスに従ってナンバリングした）。一実施例では、この定常領域またはＦｃ領域は、以下からなる群より選択される少なくとも１つのアミノ酸置換を含む：Ｌ２３４Ｙ、Ｌ２３４Ｉ、Ｌ２３５Ｉ、Ｓ２３９Ｄ、Ｓ２３９Ｅ、Ｓ２３９Ｎ、Ｓ２３９Ｑ、Ｖ２４０Ａ、Ｖ２４０Ｍ、Ｖ２６４Ｉ、Ｖ２６４Ｙ、Ｙ２９６Ｑ、Ａ３３０Ｌ、Ａ３３０Ｙ、Ａ３３０Ｉ、Ｉ３３２Ｄ、およびＩ３３２Ｅ、（ＫａｂａｔのＥＵインデックスに従ってナンバリングした）。例えば、この定常領域またはＦｃ領域は、以下からなる群より選択されるアミノ酸置換を含む：Ｉ３３２Ｅ、Ｖ２６４Ｉ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｅ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｑ／Ｉ３３２Ｅ、Ｙ２９６Ｑ、Ａ３３０Ｌ、Ａ３３０Ｙ、Ｉ３３２Ｄ、Ｓ２３９Ｄ、Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ、Ａ３３０Ｙ／Ｉ３３２Ｅ、Ｖ２６４Ｉ／Ａ３３０Ｙ／Ｉ３３２Ｅ、Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ、Ｖ２６４Ｉ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ、Ｌ２３４Ｙ、Ｌ２３４Ｉ、Ｌ２３５Ｉ、Ｖ２４０Ａ、Ｖ２４０Ｍ、Ｖ２６４Ｙ、Ａ３３０Ｉ、Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｄ／Ｓ２９８Ａ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｎ／Ｓ２９８Ａ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｄ／Ｖ２６４Ｉ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｄ／Ｖ２６４Ｉ／Ｓ２９８Ａ／Ｉ３３２Ｅ、およびＳ２３９Ｄ／Ｖ２６４Ｉ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ、（ＫａｂａｔのＥＵインデックスに従ってナンバリングした）。
【０２０９】
さらなる実施例では、この定常領域またはＦｃ領域は、野性型の定常領域またはＦｃ領域によって媒介されるより大きいレベルでＡＤＣＣを誘発する。例えば、この定常領域またはＦｃ領域は、野性型の定常領域またはＦｃ領域によって誘発されるよりも５倍より大きいかまたは５倍〜１０００倍大きいレベルでＡＤＣＣを誘発する。一実施例では、この定常領域またはＦｃ領域は、以下からなる群より選択される位置で少なくとも１つのアミノ酸置換を含む：２３０、２３３、２３４、２３５、２３９、２４０、２４３、２６４、２６６、２７２、２７４、２７５、２７６、２７８、３０２、３１８、３２４、３２５、３２６、３２８、３３０、３３２、および３３５、（ＫａｂａｔのＥＵインデックスに従ってナンバリングした）。一実施例では、この定常領域またはＦｃ領域は、以下からなる群より選択される少なくとも１つのアミノ酸置換を含む：Ｐ２３０Ａ、Ｅ２３３Ｄ、Ｌ２３４Ｅ、Ｌ２３４Ｙ、Ｌ２３４Ｉ、Ｌ２３５Ｄ、Ｌ２３５Ｓ、Ｌ２３５Ｙ、Ｌ２３５Ｉ、Ｓ２３９Ｄ、Ｓ２３９Ｅ、Ｓ２３９Ｎ、Ｓ２３９Ｑ、Ｓ２３９Ｔ、Ｖ２４０Ｉ、Ｖ２４０Ｍ、Ｆ２４３Ｌ、Ｖ２６４Ｉ、Ｖ２６４Ｔ、Ｖ２６４Ｙ、Ｖ２６６Ｉ、Ｅ２７２Ｙ、Ｋ２７４Ｔ、Ｋ２７４Ｅ、Ｋ２７４Ｒ、Ｋ２７４Ｌ、Ｋ２７４Ｙ、Ｆ２７５Ｗ、Ｎ２７６Ｌ、Ｙ２７８Ｔ、Ｖ３０２Ｉ、Ｅ３１８Ｒ、Ｓ３２４Ｄ、Ｓ３２４Ｉ、Ｓ３２４Ｖ、Ｎ３２５Ｔ、Ｋ３２６Ｉ、Ｋ３２６Ｔ、Ｌ３２８Ｍ、Ｌ３２８Ｉ、Ｌ３２８Ｑ、Ｌ３２８Ｄ、Ｌ３２８Ｖ、Ｌ３２８Ｔ、Ａ３３０Ｙ、Ａ３３０Ｌ、Ａ３３０Ｉ、Ｉ３３２Ｄ、Ｉ３３２Ｅ、Ｉ３３２Ｎ、Ｉ３３２Ｑ、Ｔ３３５Ｄ、Ｔ３３５Ｒ、およびＴ３３５Ｙ、（ＫａｂａｔのＥＵインデックスに従ってナンバリングした）。一実施例では、この定常領域またはＦｃ領域は、以下からなる群より選択されるアミノ酸置換を含む：Ｖ２６４Ｉ、Ｆ２４３Ｌ／Ｖ２６４Ｉ、Ｌ３２８Ｍ、Ｉ３３２Ｅ、Ｌ３２８Ｍ／Ｉ３３２Ｅ、Ｖ２６４Ｉ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２９８Ａ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｅ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｑ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｅ、Ａ３３０Ｙ、Ｉ３３２Ｄ、Ｌ３２８Ｉ／Ｉ３３２Ｅ、Ｌ３２８Ｑ／Ｉ３３２Ｅ、Ｖ２６４Ｔ、Ｖ２４０Ｉ、Ｖ２６６Ｉ、Ｓ２３９Ｄ、Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｄ、Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｎ、Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｑ、Ｓ２３９Ｅ／Ｉ３３２Ｄ、Ｓ２３９Ｅ／Ｉ３３２Ｎ、Ｓ２３９Ｅ／Ｉ３３２Ｑ、Ｓ２３９Ｎ／Ｉ３３２Ｄ、Ｓ２３９Ｎ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｑ／Ｉ３３２Ｄ、Ａ３３０Ｙ／Ｉ３３２Ｅ、Ｖ２６４Ｉ／Ａ３３０Ｙ／Ｉ３３２Ｅ、Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ、Ｖ２６４Ｉ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ、Ｌ２３４Ｅ、Ｌ２３４Ｙ、Ｌ２３４Ｉ、Ｌ２３５Ｄ、Ｌ２３５Ｓ、Ｌ２３５Ｙ、Ｌ２３５Ｉ、Ｓ２３９Ｔ、Ｖ２４０Ｍ、Ｖ２６４Ｙ、Ａ３３０Ｉ、Ｎ３２５Ｔ、Ｌ３２８Ｄ／Ｉ３３２Ｅ、Ｌ３２８Ｖ／Ｉ３３２Ｅ、Ｌ３２８Ｔ／Ｉ３３２Ｅ、Ｌ３２８Ｉ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｅ／Ｖ２６４Ｉ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｑ／Ｖ２６４Ｉ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｅ／Ｖ２６４Ｉ／Ａ３３０Ｙ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｙ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｎ／Ａ３３０Ｙ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｎ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ、Ｖ２６４Ｉ／Ｓ２９８Ａ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｄ／Ｓ２９８Ａ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｎ／Ｓ２９８Ａ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｄ／Ｖ２６４Ｉ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｄ／Ｖ２６４Ｉ／Ｓ２９８Ａ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｄ／Ｖ２６４Ｉ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ／Ａ３３０Ｉ、Ｐ２３０Ａ、Ｐ２３０Ａ／Ｅ２３３Ｄ／Ｉ３３２Ｅ、Ｅ２７２Ｙ、Ｋ２７４Ｔ、Ｋ２７４Ｅ、Ｋ２７４Ｒ、Ｋ２７４Ｌ、Ｋ２７４Ｙ、Ｆ２７５Ｗ、Ｎ２７６Ｌ、Ｙ２７８Ｔ、Ｖ３０２Ｉ、Ｅ３１８Ｒ、Ｓ３２４Ｄ、Ｓ３２４Ｉ、Ｓ３２４Ｖ、Ｋ３２６Ｉ、Ｋ３２６Ｔ、Ｔ３３５Ｄ、Ｔ３３５Ｒ、Ｔ３３５Ｙ、Ｖ２４０Ｉ／Ｖ２６６Ｉ、Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｙ／Ｉ３３２Ｅ／Ｌ２３４Ｉ、Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｙ／Ｉ３３２Ｅ／Ｌ２３５Ｄ、Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｙ／Ｉ３３２Ｅ／Ｖ２４０Ｉ、Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｙ／Ｉ３３２Ｅ／Ｖ２６４Ｔ、Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｙ／Ｉ３３２Ｅ／Ｋ３２６Ｅ、およびＳ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｙ／Ｉ３３２Ｅ／Ｋ３２６Ｔ、（ＫａｂａｔのＥＵインデックスに従ってナンバリングした）。
【０２１０】
一実施例では、この定常領域またはＦｃ領域は、ＫａｂａｔのＥＵインデックスに従ってナンバリングした、以下のアミノ酸置換Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅを含む。この定常領域またはＦｃ領域は、野性型の定常領域またはＦｃ領域に比較してＦｃγＲＩＩＩａに対する親和性の約１４倍の増大、および野性型の定常領域またはＦｃ領域に比較して約３．３倍増大されたＡＤＣＣの誘発能力を有する。一実施例では、この定常領域は、配列番号１１の残基１２１〜４５０（その前後値も包含する）に示される配列を含む。一実施例では、Ｆｃ領域は、配列番号１１の残基２３４〜４５０に示される配列を含む。
【０２１１】
一実施例では、この定常領域またはＦｃ領域は、ＫａｂａｔのＥＵインデックスに従ってナンバリングした、以下のアミノ酸置換Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅを含む。この定常領域またはＦｃ領域は、野性型の定常領域またはＦｃ領域に比較してＦｃγＲＩＩＩａに対して親和性の約１３８倍の増大、および野性型の定常領域またはＦｃ領域に比較してＡＤＣＣを誘発する能力の約３２３倍の増大を有する。一実施例では、この定常領域は、配列番号１２の残基１２１〜４５０（その前後値も包含する）の間で示される配列を含む。一実施例では、Ｆｃ領域は、配列番号１２の残基２３４〜４５０の間に示される配列を含む。
【０２１２】
Ｆｃ領域がエフェクター機能を誘導する能力を増大するさらなるアミノ酸置換は、当該分野で公知であるか、および／または例えば、米国特許第６７３７０５６号または米国特許第７３１７０９１号に記載される。
【０２１３】
一実施例では、この定常領域またはＦｃ領域のグリコシル化は、それが増強されたエフェクター機能を誘導する能力を増大するように変更される。この関連で、哺乳動物細胞によって産生される天然の抗体は典型的には、この定常領域またはＦｃ領域のＣＨ２ドメインのＡｓｎ２９７に対するＮ連結によって一般に結合される、分岐した、二分岐のオリゴサッカライドを含む。このオリゴサッカライドは、種々の炭水化物、例えば、マンノース、Ｎ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）、ガラクトース、およびシアル酸、ならびに二分岐のオリゴサッカライド構造の「幹」においてＧｌｃＮＡｃに結合されたフコースを含んでもよい。いくつかの実施例では、本開示による定常領域またはＦｃ領域は、Ｆｃ領域に対して（直接または間接的に）結合されたフコースを欠く、炭水化物構造を含み、すなわち、Ｆｃ領域は、「アフコシル化」される。このような改変体は、ＡＤＣＣを誘導する能力が改善されている場合がある。アフコシル化抗体を産生するための方法は、α−１，６−フコシルトランスフェラーゼ（ＦＵＴ８）を発現できない細胞株で免疫グロブリンまたは抗体を発現すること（例えば、Ｙｕｍａｎｅ−Ｏｈｎｕｋｉら、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒ．，８７：６１４−６２２，２００４に記載のとおり）、ＦＵＴ８に対する低分子干渉性ＲＮＡを発現する細胞においてこの免疫グロブリンまたは抗体を発現すること（例えば、Ｍｏｒｉら、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒ．，８８：９０１〜９０８，２００４に記載のように）、グアノシンジホスフェート（ＧＤＰ）−マンノース４，６−デヒドラターゼ（ＧＭＤ）を発現できない細胞中でこの免疫グロブリンまたは抗体を発現すること（例えば、Ｋａｎｄａら、Ｊ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，１３０：３００−３１０，２００７に記載のように）を包含する。本開示はまた、例えば、β-（１，４）−Ｎ−アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＩＩＩ（ＧｎＴ−ＩＩＩ）（例えば、Ｕｍａｎａら、Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，１７：１７６−１８０，１９９９に記載されるような）を発現するように改変された細胞株を用いて産生される、フコシル化のレベルが低下している免疫グロブリンの使用も考慮する。
【０２１４】
一実施例では、本開示による免疫グロブリンまたは抗体は、アフコシル化される。例えば、この免疫グロブリンまたは抗体は、ＦＵＴ８を発現しない細胞（例えば、哺乳動物細胞、例えば、ＣＨＯ細胞）中で産生される。
【０２１５】
他の方法としては、増強されたＦｃ媒介性エフェクター機能を誘導し得る抗体を本質的に産生する細胞株（例えば、ウイルスワクチンの産生のためのダックの胚由来の幹細胞、ＷＯ２００８／１２９０５８；トリのＥＢＸ（登録商標）細胞での組換えタンパク質産生、ＷＯ２００８／１４２１２４）の使用が挙げられる。
【０２１６】
本開示の方法において有用な免疫グロブリンとしてはまた、両端切断のオリゴサッカライドを有する免疫グロブリン（例えば、ここでは、定常領域またはＦｃ領域に対して結合された二分岐のオリゴサッカライドがＧｌｃＮＡｃによって両端切断される）が挙げられる。このような免疫グロブリンは、フコシル化が低下していてもよいし、および／またはＡＤＣＣ機能が改善されていてもよい。このような免疫グロブリンの例は、例えば、米国特許第６６０２６８４号および米国特許出願公開第２００５０１２３５４６号に記載される。
【０２１７】
この定常領域またはＦｃ領域に結合されたオリゴサッカライドにおける少なくとも１つのガラクトース残基を有する免疫グロブリンもまた考慮される。このような免疫グロブリンは、ＣＤＣ機能が改善されている場合もある。このような免疫グロブリンは、例えば、ＷＯ１９９７／３００８７およびＷＯ１９９９／２２７６４に記載される。
【０２１８】
ＡＤＣＣ活性のレベルの増強を誘導する免疫グロブリンの非限定的な例としては以下が挙げられる：
（ｉ）配列番号１１に示される配列を含む重鎖と配列番号１３に示される配列を含む軽鎖とを含む抗体；
（ｉｉ）配列番号１２に示される配列を含む重鎖と配列番号１３に示される配列を含む軽鎖とを含む抗体；および
（ｉｉｉ）配列番号１０に示される配列を含む重鎖と配列番号１３に示される配列を含む軽鎖とを含み、ここでこの重鎖定常領域がアフコシル化されている抗体。
【０２１９】
増強したレベルのＡＤＣＣ活性を誘導する、開示の有利な抗体は、配列番号１１に示される配列を含む重鎖と配列番号１３に示される配列を含む軽鎖とを含む。本明細書において考察されるとおり、哺乳動物に対してこの抗体を投与した後（例えば、投与の少なくとも７または８または１１または１７または２２または２９日後）哺乳動物におけるＮＫ細胞数は、以下の１つ以上に比べて増大される：
（ｉ）この抗体の先行技術の投与の哺乳動物におけるＮＫ細胞数；
（ｉｉ）配列番号１０に示される配列を含む重鎖と配列番号１３に示される配列を含む軽鎖とを含む抗体であって、ここでこの重鎖定常領域がアフコシル化されている抗体を投与された哺乳動物におけるＮＫ細胞数（例えば、投与後同じ日に評価した）
；および
（ｉｉｉ）ＩＬ−３Ｒα鎖に特異的に結合し、かつヒトＩｇＧ１定常領域を有する抗体を投与された哺乳動物におけるＮＫ細胞数（例えば、投与後同じ日に評価した）。
【０２２０】
免疫グロブリンまたは抗体がエフェクター機能を誘導する能力を決定するための方法であって、当該分野で公知であるか、および／または本明細書にさらに詳細に記載される方法。
【０２２１】
追加の改変
本開示はまた、免疫グロブリンに対するさらなる改変を考慮する。
【０２２２】
例えば、この免疫グロブリンまたは抗体は、免疫グロブリンの半減期を延長する１つ以上のアミノ酸置換を含む。例えば、この免疫グロブリンまたは抗体は、定常領域またはＦｃ領域を含み、これは、新生児のＦｃ領域（ＦｃＲｎ）についてのこの定常領域またはＦｃ領域の親和性を増大する１つ以上のアミノ酸置換を含んでいる。例えば、この定常領域またはＦｃ領域は、低ｐＨ、例えば、およそｐＨ６．０でのＦｃＲｎに対する親和性の増大を有し、エンドソームにおけるＦｃ／ＦｃＲｎの結合を容易にする。一実施例では、この定常領域またはＦｃ領域は、およそｐＨ７．４でのその親和性に比較しておよそｐＨ６でＦｃＲｎに対して親和性の増大を有し、これによって、定常領域またはＦｃを細胞再循環後の血液に再放出することが容易になる。これらのアミノ酸置換は、血液からのクリアランスを低下させることによって、免疫グロブリンの半減期を延長するために有用である。
【０２２３】
例示的なアミノ酸置換としては、ＫａｂａｔのＥＵナンバリングシステムによる、Ｔ２５０Ｑおよび／またはＭ４２８Ｌが挙げられる。追加のまたは代替的なアミノ酸置換は、例えば、米国特許出願公開第２００７０１３５６２０号に記載される。
【０２２４】
核酸
本開示の別の実施例では、本開示の免疫グロブリンまたは抗体（この免疫グロブリンまたは抗体のフラグメント、改変体および誘導体を含む）をコードする単離された核酸を提供する。
【０２２５】
核酸の特定の実施例は、本開示の免疫グロブリンまたは抗体のＣＤＲ１〜６をそれぞれコードする、配列番号１４〜１９のうちの１つ以上に示されるヌクレオチド配列を含む。
【０２２６】
核酸の他の実施例は、配列番号２０〜２３のうちの１つ以上に示されるヌクレオチド配列を含む。
【０２２７】
本開示はまた、本明細書において以前に記載されるような、本開示の免疫グロブリンまたは抗体の改変体をコードする核酸ホモログを考慮する。
【０２２８】
例示的な、核酸ホモログは、配列番号２〜１３のいずれか１つをコードする単離された核酸と少なくとも８０％または８５％、例えば少なくとも９０％または９５％または９９％のヌクレオチド配列同一性を共有する。適切には、この核酸ホモログは、ＩＬ−３Ｒαに特異的に結合し得るマウス可変領域を含むタンパク質をコードしない。
【０２２９】
核酸ホモログは、高ストリンジェンシー条件下で、本開示の単離された核酸に対してハイブリダイズしてもよい。
【０２３０】
タンパク質産生
組換え発現
一実施例では、任意の実施例による本明細書に記載の免疫グロブリンまたは抗体は組換え体である。
【０２３１】
単なる例として、本開示の組換えの免疫グロブリンまたは抗体は、以下の工程を含んでいる方法によって産生されてもよい：
（ｉ）１つ以上の調節性ヌクレオチド配列（例えば、プロモーター）に対して作動可能に連結された、開示の単離された核酸を含む発現構築物を調整すること；
（ｉｉ）適切な宿主細胞を、発現構築物を用いてトランスフェクトまたは形質転換すること；
（ｉｉｉ）この宿主細胞において組換えの免疫グロブリンまたは抗体を発現すること；および
（ｉｖ）この宿主細胞から組換えの免疫グロブリンまたは抗体を単離すること。
【０２３２】
組換えの免疫グロブリンの場合、これをコードする核酸は、発現ベクター中にクローニングされ得、次いでこれが（トランスフェクトされなければ免疫グロブリンまたは抗体タンパク質を産生しない）宿主細胞、例えば、大腸菌細胞、酵母細胞、昆虫細胞または哺乳動物細胞、例えば、サルＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ヒト胎児腎臓（ＨＥＫ）細胞、または骨髄腫細胞中にトランスフェクトされる。
【０２３３】
免疫グロブリンまたは抗体を発現するために用いられる例示的な細胞は、ＣＨＯ細胞、骨髄腫細胞またはＨＥＫ細胞である。この細胞はさらに、改変された免疫グロブリンまたは抗体の発現を容易にする１つ以上の遺伝的変異および／または欠失を含んでもよい。１つの非限定的な例は、発現された免疫グロブリンまたは抗体のフコシル化に必要な酵素をコードする遺伝子の欠失である。例えば、欠失された遺伝子は、ＦＵＴ８をコードする。ＦＵＴ８欠失ＣＨＯ細胞の市販の供給源は、Ｂｉｏｗａ（Ｐｏｔｅｌｌｉｇｅｎｔ（商標）細胞）である。例えば、アフコシル化された免疫グロブリンまたは抗体の発現のために用いられる細胞は、ＦＵＴ８−欠失ＣＨＯ細胞、例えば、ＢｉｏｗａのＰｏｔｅｌｌｉｇｅｎｔ（商標）細胞である。
【０２３４】
これらの目標を達成するための分子クローニング技術は、当該分野で公知であり、例えば、Ａｕｓｕｂｅｌら、（編集），Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎｅ  Ｐｕｂ．Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ  ａｎｄ  Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ（１９８８，現在までの全ての更新を含んでいる）、またはＳａｍｂｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ（１９８９）に記載されている。広範な種々のクローニングおよびインビトロの増幅方法は、組換え核酸の構築のために適切である。組換えの抗体を産生する方法も当該分野で公知である。米国特許第４８１６５６７号または米国特許第５５３０１０１号を参照のこと。
【０２３５】
単離後、核酸を、無細胞系で、または細胞中でのさらなるクローニング（ＤＮＡの増幅）のため、または発現のために、遺伝子構築物または発現ベクター中でプロモーターに作動可能に連結して挿入する。従って、本開示の別の実施例では、本開示の単離された核酸および１つ以上の追加のヌクレオチド配列を含む、遺伝子構築物を提供する。適切には、この遺伝子構築物は、当該分野でよく理解されるとおり、プラスミド、バクテリオファージ、コスミド、酵母または細菌人工染色体の形態であるか、またはその遺伝子成分を含む。遺伝子構築物は、組換えＤＮＡ技術による操作のため、および／または本開示の核酸もしくはコードされる免疫グロブリンもしくは抗体の発現のための、細菌または他の宿主細胞における単離された核酸の維持および増殖に適切であり得る。宿主細胞発現の目的のため、遺伝子構築物は、発現構築物である。適切には、発現構築物は、プロモーターまたは調節性配列のような発現ベクター中の、１つ以上の追加の配列に対しして作動可能に連結される本開示の核酸を含む。
【０２３６】
典型的には、調節性のヌクレオチド配列としては、限定するものではないが、プロモーター配列、リーダーまたはシグナル配列、リボソーム結合部位、転写開始および終止配列、翻訳開始および終止配列、ならびにエンハンサーまたはアクチベーター配列を挙げることができる。
【０２３７】
本明細書において用いる場合、「プロモーター」という用語は、そのもっとも広義の文脈でとるべきであり、これには、ゲノム遺伝子の転写調節性配列を包含し、この配列には、例えば、発育および／もしくは外部刺激に対する応答において、または組織特異的な方式において、核酸の発現を変更する追加の調節性エレメント（例えば、上流の活性化配列、転写因子結合部位、エンハンサーおよびサイレンサー）の有無において、正確な転写開始に必要である、ＴＡＴＡボックスまたは開始エレメントを含む。本発明の文脈では、「プロモーター」という用語はまた、これが作動可能に連結される、組換え、合成、もしくは融合の核酸、または核酸の発現を付与するか、活性化するかもしくは増強する誘導体を記述するためにも用いられる。例示的なプロモーターは、このような核酸の発現をさらに増強するか、および／または空間的な発現および／または一時的な発現を変更するために、１つ以上の特異的な調節性エレメントの追加のコピーを含んでもよい。
【０２３８】
本明細書において用いる場合、「作動可能に連結される」という用語は、核酸の発現がプロモーターによって制御されるように、その核酸に対してプロモーターを位置決めすることを意味する。
【０２３９】
細胞中での発現のために多くのベクターが利用可能である。このベクター成分は一般には、限定するものではないが、以下のうちの１つ以上を包含する：シグナル配列、免疫グロブリンまたは抗体をコードする配列（例えば、本明細書に提供される情報に由来）、エンハンサーエレメント、プロモーター、および転写終止配列。当業者は、免疫グロブリンの発現のために適切な配列を承知している。例示的なシグナル配列としては、原核生物分泌シグナル（例えば、ｐｅｌＢ、アルカリホスファターゼ、ペニシリナーゼ、Ｉｐｐ、または熱安定エンテロトキシンＩＩ）、酵母分泌シグナル（例えば、インベルターゼリーダー、α因子リーダー、または酸ホスファターゼリーダー）または哺乳動物分泌シグナル（例えば、単純ヘルペスｇＤシグナル）が挙げられる。
【０２４０】
哺乳動物細胞において活性な例示的なプロモーターとしては、サイトメガロウイルス早初期プロモーター（ＣＭＶ−ＩＥ）、ヒト伸長因子１−αプロモーター（ＥＦ１）、低分子核内ＲＮＡプロモーター（Ｕ１ａおよびＵ１ｂ）、α−ミオシン重鎖プロモーター、シミアンウイルス４０プロモーター（ＳＶ４０）、ラウス肉腫ウイルスプロモーター（ＲＳＶ）、アデノウイルス主要後期プロモーター、β−アクチンプロモーター；ＣＭＶエンハンサー／β−アクチンプロモーターを含むハイブリッドの調節性エレメント、または免疫グロブリンもしくは抗体プロモーターまたはそれらの活性なフラグメントが挙げられる。有用な哺乳動物宿主細胞株の例は、ＳＶ４０で形質転換されたサル腎臓ＣＶ１株（ＣＯＳ−７、ＡＴＣＣ  ＣＲＬ１６５１）；ヒト胎児腎臓株（懸濁培養物中での増殖のためにサブクローニングされた２９３または２９３細胞；ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ，ＡＴＣＣ  ＣＣＬ１０）；またはチャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ）である。
【０２４１】
例えば、Ｐｉｃｈｉａ  ｐａｓｔｏｒｉｓ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅおよびＳ．ｐｏｍｂｅを含む群より選択される酵母細胞のような、酵母細胞での発現のために適切な代表的なプロモーターとしては、限定するものではないが、ＡＤＨ１プロモーター、ＧＡＬ１プロモーター、ＧＡＬ４プロモーター、ＣＵＰ１プロモーター、ＰＨＯ５プロモーター、ｎｍｔプロモーター、ＲＰＲ１プロモーター、またはＴＥＦ１プロモーターが挙げられる。
【０２４２】
単離された核酸またはこれを含んでいる発現構築物を発現のための細胞中に導入するための手段は、当業者に公知である。所定の細胞に用いられる技術は、公知の首尾よい技術に依存する。組換えＤＮＡを細胞に導入するための手段としては、マイクロインジェクション、ＤＥＡＥ−デキストランによって媒介されるトランスフェクション、リポフェクタミン（Ｇｉｂｃｏ，ＭＤ，ＵＳＡ）および／またはセルフェクチン（Ｇｉｂｃｏ，ＭＤ，ＵＳＡ）を用いることによるなどのリポソームによって媒介されるトランスフェクション、ＰＥＧ−媒介性のＤＮＡ取り込み、エレクトロポレーションおよび微小粒子銃（ｍｉｃｒｏｐａｒｔｉｃｌｅ  ｂｏｍｂａｒｄｍｅｎｔ）例えば、ＤＮＡ−コーティングタングステンまたは金粒子（Ａｇｒａｃｅｔｕｓ  Ｉｎｃ．，ＷＩ，ＵＳＡ）を用いるものなどがとりわけ挙げられる。
【０２４３】
この免疫グロブリンまたは抗体を産生するために用いられる宿主細胞は、用いられる細胞種次第で、種々の媒体中で培養され得る。市販の媒体、例えば、Ｈａｍ’ｓ  Ｆ１０（Ｓｉｇｍａ）、Ｍｉｎｉｍａｌ  Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ  Ｍｅｄｉｕｍ（（ＭＥＭ）、Ｓｉｇｍａ）、ＲＰＭ１−１６４０（Ｓｉｇｍａ）、およびダルベッコの改変イーグル培地（（ＤＭＥＭ），Ｓｉｇｍａ）は、哺乳動物細胞を培養するために適切である。本明細書に開示される他の細胞種類を培養するための媒体は、当該分野で公知である。
【０２４４】
タンパク質の単離
免疫グロブリンまたは抗体を精製するための方法は、当該分野で公知であるか、および／または本明細書に記載される。
【０２４５】
免疫グロブリンまたは抗体が、培地中に分泌される場合、このような発現系由来の上清は、市販のタンパク質濃縮フィルター、例えば、ＡｍｉｃｏｎまたはＭｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｐｅｌｌｉｃｏｎ限外濾過ユニットを用いて最初に濃縮され得る。プロテアーゼインヒビター、例えば、ＰＭＳＦが、タンパク質分解を阻害するために、前述のいずれかの工程に含まれてもよく、そして抗生物質が、外来性の汚染物質の増殖を妨げるために含まれてもよい。
【０２４６】
細胞から調製される免疫グロブリンまたは抗体は、例えば、イオン交換、ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析、アフィニティクロマトグラフィー（例えば、プロテインＡアフィニティクロマトグラフィー、またはプロテインＧクロマトグラフィー）、または前述の任意の組み合わせを用いて精製され得る。これらの方法は当該分野で公知であり、かつ例えば、ＷＯ９９／５７１３４またはＥｄ  ＨａｒｌｏｗおよびＤａｖｉｄ  Ｌａｎｅ（編集）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｕｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，（１９８８）に記載されている。
【０２４７】
当業者はまた、免疫グロブリンまたは抗体が、タグを含んで、精製または検出を容易にするように改変されてもよいことも承知する（例えば、ポリ−ヒスチジンタグ、例えば、ヘキサ−ヒスチジンタグ、またはインフルエンザウイルス血球凝集素（ＨＡ）タグ、またはシミアンウイルス５（Ｖ５）タグ、またはＦＬＡＧタグ、またはグルタチオンＳ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）タグ）。次いで、アフィニティ精製のような、当該分野で公知の方法を用いて、得られた免疫グロブリンまたは抗体を精製する。例えば、ヘキサ−ヒスチジンタグを含んでいる免疫グロブリンまたは抗体は、この免疫グロブリンまたは抗体を含むサンプルと、固体または半固体支持体上に固定されたヘキサ−ヒスチジンタグに特異的に結合するニッケル−ニトリロ三酢酸（Ｎｉ−ＮＴＡ）とを接触させること、このサンプルを洗浄して、未結合の免疫グロブリンを除去すること、および引き続き、結合した免疫グロブリンを溶出することによって精製される。あるいは、またはさらに、タグに結合するリガンドまたは抗体は、アフィニティ精製方法で用いられる。
【０２４８】
一実施例では、この免疫グロブリンまたは抗体はまた、第Ｘａ因子またはトロンビンについてのようなプロテアーゼ切断部位を有し、これによって、関連のプロテアーゼがこの免疫グロブリンまたは抗体を部分的に消化し、それによってこの免疫グロブリンまたは抗体をこのタグから遊離することが可能になる。次いで、この遊離された抗体または免疫グロブリンは、続くクロマトグラフィー分離によって融合パートナーから単離され得る。
【０２４９】
免疫グロブリンのアッセイ活性
本開示の免疫グロブリンまたは抗体は、例えば、下に記載されるように、生物学的活性について容易にスクリーニングされる。
【０２５０】
結合アッセイ
このようなアッセイの１形態は、例えば、Ｓｃｏｐｅｓに記載されるような抗原結合アッセイである（Ｐｒｏｔｅｉｎ  ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ：ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  ｐｒａｃｔｉｃｅ，第三版，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ  Ｖｅｒｌａｇ，１９９４）。このような方法は一般には、免疫グロブリンまたは抗体を標識すること、およびこれを固定された抗原と接触させることを包含する。非特異的な結合タンパク質を除去するための洗浄後、標識の量、および結果として、結合されたタンパク質が検出される。当然ながら、この免疫グロブリンまたは抗体は固定されて、抗原が標識され得る。パニング型のアッセイ、例えば、本明細書に記載または例示されるアッセイもまた用いられてもよい。
【０２５１】
中和の決定
本開示のいくつかの実施例では、免疫グロブリンまたは抗体は、ＩＬ−３シグナル伝達を中和できる。
【０２５２】
免疫グロブリンがレセプターを通じたリガンドのシグナル伝達を中和する能力をアッセイするためには種々のアッセイが当該分野で公知である。
【０２５３】
一実施例では、この免疫グロブリンまたは抗体は、ＩＬ−３が３Ｒα鎖ならびに／またはＩＬ−３Ｒα鎖およびＩＬ−３Ｒβ鎖のヘテロ二量体に結合することを軽減するかまたは予防する。これらのアッセイは、標識されたＩＬ−３および／または標識された免疫グロブリンを用いる競合的な結合アッセイとして行われ得る。例えば、標識されたＩＬ−３Ｒαもしくはその細胞外領域（抗体のＦｃ領域に融合された）またはＩＬ−３Ｒ（固定されてＩＬ−３を標識される）を発現する細胞を次に、固定されたレセプターまたは細胞に対して、試験の免疫グロブリンまたは抗体の有無において接触して、結合された標識の量を検出する。タンパク質の非存在下においてと比較して抗体または免疫グロブリンの存在下における結合された標識の量の減少によって、ＩＬ−３のＩＬ−３Ｒに対する結合を、この免疫グロブリンまたは抗体が減少または防止することが示される。複数の濃度の免疫グロブリンまたは抗体を試験することによって、ＩＣ５０（すなわち、ＩＬ−３Ｒに結合するＩＬ−３の量を減らすタンパク質の濃度）を決定するか、またはＥＣ５０（すなわち、免疫グロブリンまたは抗体によって達成される、ＩＬ−３Ｒに結合するＩＬ−３の結合の最大阻害の５０％を達成するタンパク質の濃度）を決定する。
【０２５４】
別の実施例では、この免疫グロブリンまたは抗体は、好塩基球からのＩＬ−３−媒介性ヒスタミン放出を軽減または予防する。例えば、好塩基球を含む低密度の白血球を、ＩｇＥ、ＩＬ−３および種々の濃度の免疫グロブリンまたは抗体とインキュベートする。コントロールの細胞は、免疫グロブリン（陽性コントロール）もＩＬ−３（陰性コントロール）も含まない。次いで、放出されたヒスタミンのレベルは、標準的な技術、例えば、ＲＩＡを用いて評価される。ヒスタミン放出のレベルを陽性コントロールよりも少ないレベルまで減少する免疫グロブリンまたは抗体は、ＩＬ−３シグナル伝達を中和するとみなされる。一実施例では、減少のレベルは、免疫グロブリンまたは抗体の濃度と関連している。ＩＬ−３−媒介性ヒスタミン放出を評価するための例示的な方法は、例えば、Ｌｏｐｅｚら、Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．，１４５：６９，１９９０に記載される。
【０２５５】
さらなる実施例では、この免疫グロブリンまたは抗体は、白血病細胞株ＴＦ−１のＩＬ−３−媒介性増殖を減少または防止する。例えば、ＴＦ−１細胞は、ＩＬ−３またはＧＭ−ＣＳＦなしに、増殖を停止するためにそれらについて十分な時間（例えば、２４〜４８時間）培養される。次いで、細胞をＩＬ−３および種々の濃度の免疫グロブリンまたは抗体の存在下で培養する。コントロールの細胞は、この免疫グロブリンまたは抗体（陽性コントロール）またはＩＬ−３（陰性コントロール）とは接触されない。次いで、細胞増殖を、標準的な技術、例えば、３Ｈ−チミジン取り込みを用いて評価する。ＩＬ−３の存在下で陽性コントロール未満のレベルまで細胞増殖を軽減または防止する免疫グロブリンまたは抗体は、ＩＬ−３シグナル伝達を中和するとみなされる。
【０２５６】
ＩＬ−３シグナル伝達中和を評価するための別のアッセイは、この免疫グロブリンまたは抗体が内皮細胞に対するＩＬ−３−媒介性の効果を減少または防止するか否かを決定することを包含する。例えば、ヒト臍帯静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）を、ＩＬ−３（必要に応じてＩＦＮ−γとともに）および種々の濃度の免疫グロブリンまたは抗体の存在下で培養する。次いで、分泌されたＩＬ−６の量を、例えば、酵素連結免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）を用いて評価する。コントロール培養物は、免疫グロブリンもしくは抗体（陽性コントロール）も、ＩＬ−３（陰性コントロール）も含まない。ＩＬ−３の存在下においてＩＬ−６産生を陽性コントロール未満のレベルまで減少または予防する免疫グロブリンまたは抗体は、ＩＬ−３シグナル伝達を中和するとみなされる。
【０２５７】
ＩＬ−３シグナル伝達の中和を評価するための他の方法が、本開示によって考慮される。
【０２５８】
エフェクター機能の決定
ＡＤＣＣ活性を評価するための方法は、当該分野で公知である。
【０２５９】
一実施例では、ＡＤＣＣ活性のレベルは、５１Ｃｒ放出アッセイ、ユーロピウム放出アッセイ、または３５Ｓ放出アッセイを用いて評価される。これらのアッセイの各々では、ＩＬ−３Ｒαを発現する細胞を、１つ以上の言及した化合物とともに、この化合物が細胞によって取り込まれるのに十分な時間および条件下で培養する。３５Ｓ放出アッセイの場合、ＩＬ−３Ｒαを発現する細胞を、３５Ｓ−標識されたメチオニンおよび／またはシステインとともに、標識されたアミノ酸が、新規に合成されたタンパク質に組み込まれるのに十分な時間培養されてもよい。次いで、細胞を、この免疫グロブリンまたは抗体の有無において、および免疫エフェクター細胞、例えば、末梢血単核球（ＰＢＭＣ）および／またはＮＫ細胞の存在下で培養する。次に、細胞培養培地中の５１Ｃｒ、ユーロピウムおよび／または３５Ｓの量を検出し、免疫グロブリンの非存在下における量と比較した免疫グロブリンまたは抗体の存在下における増大によって、この免疫グロブリンがエフェクター機能を有することが示される。免疫グロブリンによって誘導されるＡＤＣＣのレベルを評価するためのアッセイを開示する例示的な刊行物としては、Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍ，ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８３：７０５９−７０６３，１９８６、およびＢｒｕｇｇｅｍａｎｎ，ら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１６６：１３５１−１３６１，１９８７が挙げられる。
【０２６０】
免疫グロブリンまたは抗体によって誘発されるＡＤＣＣのレベルを評価するための他のアッセイとしては、フローサイトメトリーのためのＡＣＴＩ（商標）非放射性細胞毒性アッセイ（ＣｅｌｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．ＣＡ，ＵＳＡ）またはＣｙｔｏＴｏｘ  ９６（登録商標）非放射性細胞毒性アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ，ＷＩ，ＵＳＡ）が挙げられる。
【０２６１】
あるいは、またはさらに、免疫グロブリンまたは抗体のエフェクター機能を、例えば、米国特許第７３１７０９１号に記載のように、１つ以上のＦｃγＲについてその親和性を決定することによって評価する。
【０２６２】
Ｃ１ｑ結合アッセイはまた、この免疫グロブリンまたは抗体が、Ｃ１ｑに結合し得、かつＣＤＣを誘発し得ることを確認するためにも行ってもよい。補体活性化を評価するため、ＣＤＣアッセイを行ってもよい（例えば、Ｇａｚｚａｎｏ−Ｓａｎｔｏｒｏら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２０２：１６３，１９９６を参照のこと）。
【０２６３】
ＮＫ細胞数の決定
本明細書において考察されるように、本開示の免疫グロブリンおよび／または抗体は、哺乳動物におけるＮＫ細胞数に影響し得る。哺乳動物におけるＮＫ細胞数を評価するための方法は、当業者には明らかである。
【０２６４】
一実施例では、哺乳動物（例えば、非ヒト哺乳動物、例えば、非ヒト霊長類、例えば、カニクイザル）に対する本開示の免疫グロブリンまたは抗体の投与後、血液（または血清）のサンプルを得て、ＮＫ細胞数を、蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）を用いて評価した。ＮＫ細胞は、ＣＤ１６および／もしくはＣＤ５６の発現、ならびに／またはＣＤ２０および／またはＣＤ３の発現の欠失（または低レベルの発現）に基づいて検出され得る。ＮＫ細胞数の変化割合は、抗体または免疫グロブリンの初期の投与（例えば、投与前）に得られたサンプルにおけるＮＫ細胞の数に比較することによって決定され得る。
【０２６５】
親和性の決定
必要に応じて、ＩＬ−３Ｒαまたはそのエピトープに対するタンパク質の解離定数（Ｋｄ）または会合定数（Ｋａ）または平衡定数（ＫＤ）を決定する。免疫グロブリンまたは抗体についてのこれらの定数は、一実施例では、放射性標識されるか、または蛍光標識されたＩＬ−３Ｒα−結合アッセイによって測定される。このアッセイは、このタンパク質を、標識されたＩＬ−３Ｒα（またはその可溶型、例えば、Ｆｃ領域に融合されたＩＬ−３Ｒαの細胞外領域を含んでいる）の最小濃度と、未標識のＩＬ−３Ｒαの一連の滴定の存在下で、平衡にする。未結合のＩＬ−３Ｒαを除去するための洗浄後、標識の量を決定する。
【０２６６】
アフィニティ測定は、抗体反応についての標準的な方法論、例えば、イムノアッセイ、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）（ＲｉｃｈおよびＭｙｓｚｋａ  Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  １１：：５４，２０００；Ｅｎｇｌｅｂｉｅｎｎｅ  Ａｎａｌｙｓｔ．１２３：１５９９，１９９８）、等温滴定熱量測定（ＩＴＣ）または当該分野で公知の他の動力学的相互作用アッセイによって決定され得る。
【０２６７】
一実施例では、定数は、表面プラズモン共鳴アッセイを用いて、例えば、固定されたＩＬ−３Ｒαまたはその領域を用いるＢＩＡｃｏｒｅ表面プラズモン共鳴（ＢＩＡｃｏｒｅ，Ｉｎｃ．，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）を用いることによって、測定される。例示的なＳＰＲ方法は、米国特許第７２２９６１９号に記載される。
【０２６８】
治療有効性の評価
インビトロアッセイ
本明細書に記載の疾患または状態を処置する免疫グロブリンまたは抗体の能力を評価するには、種々のインビトロのアッセイが利用可能である。
【０２６９】
例えば、免疫グロブリンまたは抗体を、それが細胞、例えば、癌細胞、例えば、白血病細胞を殺傷できる能力について、本明細書に記載の方法を用いて評価する。
【０２７０】
別の実施例では、免疫細胞、例えば、ｐＤＣおよび／または好塩基球またはこれを含む細胞集団（例えば、ＰＢＭＣ）培養物を、免疫グロブリンまたは抗体およびその細胞のある疾患または状態を生じる誘導因子の有無において培養する（例えば、ＣｐＧオリゴヌクレオチドおよび／または免疫複合体）。次いで、この疾患または状態を処置するのにおけるこの免疫グロブリンまたは抗体の有効性を、例えば、ＥＬＩＳＡを用いて細胞培養培地中に分泌されるＩＦＮαのレベルを決定することによって評価する。あるいは、またはさらに、ヒスタミン分泌またはＩＬ−４、ＩＬ−６および／もしくはＩＬ−１３分泌のレベルを評価する。免疫グロブリンまたは抗体の非存在下において（またはアイソタイプのコントロールの免疫グロブリンまたは抗体の存在下において）と比較した、任意のこれらのサイトカインのレベルの減少は、この免疫グロブリンまたは抗体が、この疾患または状態を処置するために適切であることを示す。あるいは、またはさらに、細胞死のレベルを評価する。細胞死の増大は、この疾患または状態を処置するために適切な免疫グロブリンまたは抗体の指標である。
【０２７１】
インビボのアッセイ
一実施例では、ある疾患または状態を処置するための免疫グロブリンの有効性を、インビボアッセイを用いて評価する。
【０２７２】
一実施例では、癌の異種移植モデルを用いて、治療有効性を評価する。例えば、ＮＯＤ／ＳＣＩＤマウスを照射して、必要に応じて、抗−ＣＤ１２２抗体で処理して、ＮＫ細胞を枯渇させる。ヒト白血病細胞（例えば、急性骨髄性白血病細胞）およびマウスまたはヒトの骨髄幹細胞を、マウスに投与する。細胞の生着後、試験の免疫グロブリンまたは抗体をマウスに投与して、循環および／または骨髄および／またはリンパ節における白血病細胞のレベルを評価する。この抗体または免疫グロブリンの非存在下においてと比較した、抗体または免疫グロブリンの存在下における循環および／または骨髄および／またはリンパ節における白血病細胞の数の減少は、治療有効性を示す。
【０２７３】
別の実施例では、この免疫グロブリンまたは抗体は、非ヒト動物（例えば、非ヒト霊長類）に投与され、免疫細胞の数／レベル、例えば、ｐＤＣおよび／または好塩基球（循環中）が評価される。免疫細胞、例えば、ｐＤＣ類および／または好塩基球の数／レベルを、投与前に比べて、および／または免疫グロブリンまたは抗体が投与されなかったコントロールの哺乳動物において減少する免疫グロブリンまたは抗体は、この疾患または状態を処置するために適切であるとみなされる。
【０２７４】
別の実施例では、ＩＦＮαのようなサイトカインのレベルは、例えば、ＥＬＩＳＡを用いて、哺乳動物の循環中で検出される。サイトカインのレベルを、投与前のレベルに比べて、および／または免疫グロブリンまたは抗体が投与されなかったコントロールの哺乳動物において減少する免疫グロブリンまたは抗体は、この疾患または状態を処置するために適切であるとみなされる。ＩＦＮαのようなサイトカインは、いくつかの疾患／状態、例えば、紅斑性狼瘡においてある役割を果たすとみなされるので、ＩＦＮαの産生を減少する免疫グロブリンまたは抗体は、このような状態を処置するために適切であるとみなされる。
【０２７５】
組成物
適切には、哺乳動物に対する抗−ＩＬ−３Ｒα免疫グロブリンまたは抗体の投与のための組成物または方法において、この免疫グロブリンまたは抗体は、当該分野で理解されるように、薬学的に許容される担体、希釈剤および／または賦形剤と組み合わせられる。従って、本開示の一実施例は、薬学的に許容される担体、希釈剤および／または賦形剤と組み合わせて、本開示の免疫グロブリンまたは抗体を含んでいる医薬組成物を提供する。別の実施例では、本開示は、哺乳動物に対する投与前に免疫グロブリンまたは抗体と組み合わせるかまたは混合するために適切な、薬学的に許容される担体、希釈剤および／または賦形剤を備えるキットを提供する。本実施例では、このキットはさらに、使用説明書を備えてもよい。
【０２７６】
一般的な用語では、「担体、希釈剤または賦形剤」とは、固体または液体充填材、結合剤、希釈剤、カプセル化物質、乳化剤、湿潤剤、溶媒、懸濁剤、コーティングまたは潤滑剤（任意の哺乳動物、例えば、ヒトに安全に投与され得る）を意味する。特定の投与経路次第で、当該分野で公知の種々の許容される担体、希釈剤または賦形剤が、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．Ｎ．Ｊ．ＵＳＡ，１９９１）に記載のように用いられ得る。
【０２７７】
例示に過ぎないが、担体、希釈剤または賦形剤は、糖（例えば、スクロース、マルトース、トレハロース、グルコース）、デンプン、セルロースおよびその誘導体、モルト、ゼラチン、滑石、硫酸カルシウム、オイル例としては、植物油、合成油および合成のモノグリセリド、またはジグリセリド、低アルコール、ポリオール、アルギン酸、リン酸緩衝化溶液、潤滑剤、例えば、ステアリン酸ナトリウムまたはステアリン酸マグネシウム、等張性生理食塩水およびパイロジェンフリー水を含む群から選択され得る。例えば、担体、希釈剤、または賦形剤は、非経口投与と適合するかまたは適切である。非経口投与は、消化管を通じない任意の投与経路を包含する。非経口投与の非限定的な例としては、注射、注入などが挙げられる。例として、注射による投与には、静脈内注射、動脈内注射、筋肉内注射および皮下注射が挙げられる。例えば、皮内、筋肉内および皮下で送達され得るデポまたは徐放性の処方物による送達もまた考慮される。
【０２７８】
併用療法
一実施例では、本開示の免疫グロブリンまたは抗体は、ある疾患または状態を処置するために有用な別の化合物または治療的な処置と組み合わせて投与される。
【０２７９】
一実施例では、この免疫グロブリンまたは抗体は、例えば、白血病のような血液癌などの癌の処置のために、放射線療法の前に、例えば、１カ月または２週間または１週間前に投与される。
【０２８０】
一実施例では、他の化合物は、化学療法化合物、例えば、カボプラチン、シスプラチン、シクロホスファミド、ドセタキセル、ドキソルビシン、エルロチニブ、エトポシド、フルオロウラシル、イリノテカン、メトトレキサート、パクリタキセル、トポテカン、ビンクリスチンまたはビンブラスチンである。一実施例では、化学療法化合物は、メトトレキサート、１−アスパラギナーゼ、ビンクリスチン、ドキソルビシン、ダノルビシン、シタラビン、イダルビシン、ミトキサントロン、シクロホスファミド、フルダラビン、クロラムブシル、およびそれらの組み合わせからなる群より選択される。
【０２８１】
一実施例では、他の化合物は、メトトレキサート、１−アスパラギナーゼ、ビンクリスチン、ドキソルビシン、ダノルビシン、シタラビン、イダルビシン、ミトキサントロンおよびそれらの組み合わせからなる群より選択される化合物などの、急性白血病の処置に用いられる化学療法化合物である。
【０２８２】
一実施例では、他の化合物は、メトトレキサート、１−アスパラギナーゼ、ビンクリスチン、ドキソルビシン、ダノルビシンおよびそれらの組み合わせからなる群より選択される化合物などの、急性リンパ芽球性白血病の処置に用いられる化学療法化合物である。
【０２８３】
さらなる実施例では、他の化合物は、アザシチジンのような化学療法化合物である。
【０２８４】
一実施例では、他の化合物とは、癌を処置するために有用な生物製剤、例えば、リツキシマブ、トラスツズマブ、ベバシズマブ、アレムツズマブ、パニツムマブ、またはセツキシマブである。
【０２８５】
一実施例では、他の化合物とは、抗炎症性化合物である。あるいは、またはさらに、この他の化合物とは、免疫抑制剤である。あるいは、またはさらに、この他の化合物とは、コルチコステロイド、例えばプレドニゾンおよび／またはプレドニゾロンである。あるいは、またはさらに、この他の化合物は、抗マラリア化合物、例えばヒドロキシクロロキンまたはクロロキニンである。あるいは、またはさらに、この他の化合物とは、メトトレキサートである。あるいは、またはさらに、この他の化合物とは、アザチオプリンである。あるいは、またはさらに、この他の化合物とは、シクロホスファミドである。あるいは、またはさらに、この他の化合物とは、ミコフェノレートモフェチルである。あるいは、またはさらに、この他の化合物とは、抗−ＣＤ２０抗体（例えば、リツキシマブまたはオファツムマブ）である。あるいは、またはさらに、この他の化合物とは、抗−ＣＤ２２抗体（例えば、エプラツズマブ）である。あるいは、またはさらに、この他の化合物とは、抗−ＴＮＦ抗体（例えば、インフリキシマブまたはアダリムマブまたはゴリムマブ）である。あるいは、またはさらに、この他の化合物とは、ＣＴＬＡ−４アンタゴニスト（例えば、アバタセプト、ＣＴＬＡ４−Ｉｇ）である。あるいは、またはさらに、この他の化合物とは、抗−ＩＬ−６抗体である。あるいは、またはさらに、この他の化合物とは、ＢＬｙｓアンタゴニスト、例えば、抗−ＢＬｙｓ抗体（例えば、ベリムマブ）である。
【０２８６】
投与の用量およびタイミング
疾患もしくは状態またはその再発の予防または処置のために、適切な用量の活性剤（すなわち、本開示の免疫グロブリンまたは抗体）は、処置されるべき疾患の種類、その疾患の重篤度および経過（その免疫グロブリンまたは抗体が予防的な目的で投与されるかまたは治療的な目的で投与されるかにかかわらず）、事前の処置、患者の臨床的な病歴および免疫グロブリンに対する応答、ならびに担当医の裁量に依存する。特定の投薬計画、すなわち、用量、タイミングおよび反復は、特定の個体、および医師が評価するその個体の病歴に依存する。典型的には臨床医は、所望の結果を達成する投薬量が達成されるまで免疫グロブリンを投与する。
【０２８７】
本開示の方法は、哺乳動物における疾患または状態の症状を処置、緩和もしくは予防するために、または哺乳動物の予後診断を改善するために有用である。本開示の方法はまた、全身性紅斑性狼瘡を発症するかまたはその再発のリスクがある個体において、発症を遅らせるため、または全身性紅斑性狼瘡を予防するために有用である。
【０２８８】
本明細書に記載される免疫グロブリンまたは抗体の投与のために、正常な投薬量は、１日あたり個体の体重あたり約１０ｎｇ／ｋｇから最大約１００ｍｇ／ｋｇ以上まで変化し得る。その例示的な投薬量および範囲は本明細書に記載される。数日間以上にわたる反復投与のために、処置されるべき疾患または障害の重篤度に応じて、処置は、症状の所望の抑制が達成されるまで持続され得る。
【０２８９】
いくつかの実施例では、この免疫グロブリンまたは抗体は、約１ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇ、例えば約１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ、または約２ｍｇ／ｋｇまたは約３ｍｇ／ｋｇまたは４ｍｇ／ｋｇまたは５ｍｇ／ｋｇという初回（または負荷）用量で投与される。この免疫グロブリンまたは抗体は、次に、約０．０００１ｍｇ／ｋｇ〜約１ｍｇ／ｋｇ、例えば約０．０００５ｍｇ／ｋｇ〜約１ｍｇ／ｋｇ、例えば、約０．００１ｍｇ／ｋｇ〜約１ｍｇ／ｋｇ、例えば約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約１ｍｇ／ｋｇ、例えば約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約０．１ｍｇ／ｋｇ、例えば約０．０２ｍｇ／ｋｇまたは０．０３ｍｇ／ｋｇまたは０．０４ｍｇ／ｋｇまたは０．０５ｍｇ／ｋｇという維持用量で投与され得る。この維持用量は、７〜３０日ごとに、例えば、１０〜１５日ごとに、例えば、１０または１１または１２または１３または１４または１５日ごとに投与され得る。
【０２９０】
いくつかの実施例では、この免疫グロブリンまたは抗体は、約０．０００１ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇ、例えば約０．０００５ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇ、例えば、約０．００１ｍｇ／ｋｇ〜約４０ｍｇ／ｋｇ、例えば、約０．００５ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇ、例えば約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約２０ｍｇ／ｋｇという用量で投与される。例えば、この免疫グロブリンは、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ、例えば、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約１ｍｇ／ｋｇ、例えば約０．０２ｍｇ／ｋｇまたは０．０３ｍｇ／ｋｇまたは０．０４ｍｇ／ｋｇまたは０．０５ｍｇ／ｋｇまたは０．０６ｍｇ／ｋｇまたは０．０７ｍｇ／ｋｇまたは０．０８ｍｇ／ｋｇまたは０．０９ｍｇ／ｋｇまたは０．１ｍｇ／ｋｇまたは０．２ｍｇ／ｋｇまたは０．３ｍｇ／ｋｇまたは０．４ｍｇ／ｋｇまたは０．５ｍｇ／ｋｇまたは０．６ｍｇ／ｋｇまたは０．７ｍｇ／ｋｇまたは０．８ｍｇ／ｋｇまたは０．９ｍｇ／ｋｇ（例えば、より高用量の負荷用量なし）という用量で投与される。いくつかの実施例では、多数の用量が、例えば、７〜３０日ごと、例えば、１０〜２２日ごと、例えば、１０〜１５日ごと、例えば、１０または１１または１２または１３または１４または１５または１６または１７または１８または１９または２０または２１または２２日ごとに投与される。例えば、この免疫グロブリンまたは抗体は、７日ごと、または１４日ごと、または２１日ごとに投与される。
【０２９１】
いくつかの実施例では、この免疫グロブリンまたは抗体は、約１ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇ、例えば、約１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ、または約２ｍｇ／ｋｇまたは約３ｍｇ／ｋｇまたは４ｍｇ／ｋｇまたは５ｍｇ／ｋｇ、または例えば、約１０ｍｇ／ｋｇ〜３０ｍｇ／ｋｇ、例えば約１０ｍｇ／ｋｇまたは１５ｍｇ／ｋｇまたは２０ｍｇ／ｋｇまたは２５ｍｇ／ｋｇ（例えば、より低い維持用量なしで）という用量で投与される。いくつかの実施例では、多数の用量が、例えば、１０〜７０日ごとに、例えば、１４〜７０日ごとに、例えば、１４〜６０日ごとに、例えば、１４〜５０日ごとに、例えば、１４〜４０日ごとに、または１４〜３０日ごとに投与される。例えば、この用量は、１４または２１または２５または２８または３５または４０または４２または４９または５０または５５または５７または６３または７０日ごとに投与される。例えば、この免疫グロブリンまたは抗体は、２１日ごと、または２８日ごと、または３５日ごと、または４２日ごと、または４９日ごと、または５６日ごとに投与される。
【０２９２】
いくつかの実施例では、この免疫グロブリンまたは抗体は、例えば、投与の約６時間内に、投与後の哺乳動物におけるＮＫ細胞の減少を生じるか、または減少に関連する。いくつかの実施例では、哺乳動物におけるＮＫ細胞数が、投与前の哺乳動物におけるＮＫ細胞数の２０％または１０％または５％または１％内に戻るとき、さらなる用量の免疫グロブリンまたは抗体が投与される。いくつかの実施例では、哺乳動物におけるＮＫ細胞数が、投与前の哺乳動物におけるＮＫ細胞数を少なくとも約５％または１０％または２０％または３０％または４０％または５０％または６０％または７０％または８０％超えるとき、さらなる用量の免疫グロブリンまたは抗体が投与される。ＮＫ細胞数は、免疫グロブリンまたは抗体のさらなる用量を投与するとき、哺乳動物において、評価され得る。あるいは、この免疫グロブリンまたは抗体のさらなる用量を投与する時点は、ある集団またはあるモデルの生物体（例えば、非ヒト霊長類、例えば、カニクイザル）の事前の分析によって決定される。例えば、この免疫グロブリンのさらなる用量は、前の投与後、約７日または８日または１４日または１７日または２１日または２２日または２８日または２９日で投与される。
【０２９３】
いくつかの実施例では、治療開始の時点で、哺乳動物は、免疫グロブリンまたは抗体を７連続日または６連続日または５連続日または４連続日以下、投与される。
【０２９４】
処置に対して十分に応答していない哺乳動物の場合、１週に複数回用量を投与してもよい。あるいは、またはさらに、漸増用量を投与してもよい。
【０２９５】
別の実施例では、有害反応を経験している哺乳動物については、初期（または負荷）用量は、１週に何日にもわたって、または連続して何日にもわたって分割されてもよい。
【０２９６】
特定の免疫グロブリンまたは抗体についての投薬量は、免疫グロブリンの１回以上の投与を与えられた哺乳動物で経験的に決定され得る。免疫グロブリンの有効性を評価するために、疾患または状態の臨床症状をモニターしてもよい。
【０２９７】
本開示の方法による免疫グロブリンの投与は、その投与の目的が治療的であるかまたは予防的であるかにかかわらず、例えば、レシピエントの生理学的条件、および当業者に公知の他の要因に依存して、連続であっても、間欠的であってもよい。免疫グロブリンまたは抗体の投与は本質的に、事前に選択された期間にわたって連続的であってもよく、またはある条件の発達の間、または後のいずれかで、一連の間隔の空いた用量であってもよい。
【０２９８】
本開示は、以下の非限定的な実施例を包含する。
【実施例】
【０２９９】
非限定的な実施例
実施例１：ヒト化抗体
ＩＬ−３活性のアンタゴニストとして作用するヒトＩＬ−３Ｒα鎖に対して特異的に結合するヒト化抗体を産生した。このヒト化抗体は、Ｔａｎら、（Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６９，１１１９−１１２５，２００２）の手順に従って、ドナーおよびアクセプターＣＤＲの標準的構造に基づいて選択されるヒト可変フレームワーク生殖細胞系列配列に対してアンタゴニストのマウス抗体（７Ｇ３）のＣＤＲ配列をグラフトすることによって産生された；時には「超ヒト化（スーパーヒト化）（ｓｕｐｅｒｈｕｍａｎｉｚａｔｉｏｎ）」と呼ばれる。この作業は、ｓｃＦｖ形式の抗体を用いて行った。次いで、このアプローチは、ドナー抗体のＣＤＲ残基と、可変のフレームワークの生殖細胞系列のアクセプター配列の残基とを比較して、ＣＤＲ残基の最高の相関を有する残基をアクセプター配列として選択する。しかし、本発明の場合、ＣＤＲとの相関のレベルがより低い重鎖アクセプター配列を選択した。ヒト化プロセスの結果として全体的なヒト可変フレームワーク配列を含んだ、得られたヒト抗体はしかし、ＩＬ−３Ｒαに対する親和性が、親のマウス抗体と比較して低下していた。
【０３００】
親和性最適化（ａｆｆｉｎｉｔｙ  ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ）は、ヒト化抗体の結合親和性を増大するための労力において、抗体をｓｃＦｖ形式で用いて行ったリボソームディスプレイベースの突然変異生成プロセス（Ｋｏｐｓｉｄａｓら、ＢＭＣ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．７，１８，２００７）を用いて使用した。ＩｇＧ１形式に変換された場合、親のマウスモノクローナル抗体の結合親和性に対して、わずかに改善されたＩＬ−３Ｒα結合親和性を示す、親和性最適化したｓｃＦｖが産生された。予期せぬことに、親和性最適化プロセスは、ＶＨおよびＶＬのフレームワークにおいて、ならびに軽鎖のＣＤＲ１において、変異を生じた。そのため、ヒト化された親和性最適化抗体のＣＤＲ配列のセットは、親のマウスモノクローナル抗体のものとは異なる。これらの親和性最適化された抗体は、本明細書においてＣＳＬ３６２と呼ばれる。
【０３０１】
ヒト化された、親和性最適化された抗体のＦｃ遺伝子操作誘導体であって、抗体の軽鎖および重鎖の可変領域、ならびに３つのアミノ酸置換Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ（本明細書においてはＣＳＬ３６２Ｘ２と呼ばれる）を有するか、または２つのアミノ酸置換Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ（本明細書においてはＣＳＬ３６２Ｘ１と呼ばれる）を有するハイブリッドのＩｇＧ１／ＩｇＧ２定常ドメインを含むものを、ＣＨＯ−Ｓ細胞中での適切なベクターの発現によって産生した；特定された変異の位置は、ＥＵナンバリングシステムに基づく。
【０３０２】
ヒトＩｇＧ１定常ドメインを有するヒト化された親和性最適化された抗体のアフコシル化バージョンを、ＢｉｏｗａのＦＵＴ８−ノックアウトＣＨＯ細胞（Ｐｏｔｅｌｌｉｇｅｎｔ（登録商標）Ｃｅｌｌｓ）（本明細書においてはＣＳＬ３６２Ｂと呼ぶ）中で適切なベクターの発現によって生成した。
【０３０３】
実施例２：結合親和性決定
全長ｍＡｂの反応速度論：
全長抗体を分析するために、表面プラズモン共鳴（Ｂｉａｃｏｒｅ）アッセイを、捕獲形式で行い、ここでは、化学的に固定された抗ヒトまたは抗マウスのＦｃ特異的な抗体（抗ヒトヤギ抗ヒトＩｇＧ（γ）マウス吸着（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｔ  Ｎｏ．Ｈ１０５００）または抗マウスＦｃ特異的な抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｌａｂｓ  ｉｎｃ．Ｃａｔ  Ｎｏ．５１５−００５−０７１）を、標準的なアミンカップリング化学を用いてＣＭ−５センサー表面上に化学的に固定し、溶液からｍＡｂを捕獲するために用いた。次いで、可溶性のヒトＩＬ−３Ｒαを、捕獲された抗体の上に種々の濃度で注入した。応答は、抗体が捕獲されないが、そうでなければ同一に処理された、参照フローセル由来の応答から差引きした。次いで、参照の差引きされた応答を、ブランク注入由来の応答から差引きした。
【０３０４】
最終の較正された応答を、非線形回帰を用いて、大量輸送限界についての項目を含む、１：１の反応速度論を記述するモデルにフィットさせた。捕獲される抗体のレベルにおけるわずかな偏差について説明するために、Ｒｍａｘ値を、局所的にフィットさせた。会合速度（ｋａ）、解離速度（ｋｄ）および平衡解離定数（ＫＤ）を決定した。
【０３０５】
抗体を、０．３μｇ／ｍｌで１８０秒間捕獲した。
【０３０６】
可溶性のＩＬ−３Ｒαを、１０分間注入して、解離を３０分間モニターした。
【０３０７】
可溶性のＩＬ−３Ｒαは、０、０．６２、１．２５、２．５、５、１０、２０および４０ｎＭで注入し、ここで２．５ｎＭおよび５ｎＭは二重にした。
【０３０８】
再生は、各々のサイクルの後に、１００ｍＭのＨ３ＰＯ４の９０秒の注入で行った。
【０３０９】
このアッセイは、２５℃で行った。
【０３１０】
ｓｃＦｖの反応速度論：
ｓｃＦｖを分析するため、可溶性のヒトＩＬ−３Ｒαを、標準的なアミンカップリング化学を用いてＣＭ−５センサー上に化学的に固定して、ｓｃＦｖを種々の濃度で注入した。応答は、ＩＬ−３Ｒαが固定されないが、それ以外は同一に処理された、参照フローセル由来の応答から差引きした。次いで、参照の差引きされた応答を、ブランク注入由来の応答から差引きした。
【０３１１】
最終の較正された応答を、非線形回帰を用いて、大量輸送限界についての項目を含む、１：１の反応速度論を記述するモデルにフィットさせた。Ｒｍａｘ値を、全体的にフィットさせて、会合速度（ｋａ）、解離速度（ｋｄ）および平衡解離定数（ＫＤ）を決定した。
【０３１２】
ｓｃＦｖを、１０分間注入して、解離を２０分間モニターした。
【０３１３】
ｓｃＦｖを、０、０．６２、１．２５、２．５、５、１０、２０および４０ｎＭで注入し、ここで１０ｎＭは二重にした。
【０３１４】
再生は、各々のサイクルの後に、１００ｍＭのＨ３ＰＯ４の３０秒の注入、１ＭのＮａＣｌおよび１５秒の５０ｍＭのＮａＯＨの注入で行った。
【０３１５】
このアッセイは、２５℃で行った。
【０３１６】
抗体およびｓｃＦｖの親和性を、下の表２に作表する。
【０３１７】
【表２】
0005524418.tif 000003
【０３１８】
実施例３：ヒト化またはキメラ抗体の投与後のＮＫ細胞レベル
ナイーブなサル（非ヒト霊長類；ＮＨＰ）に、静脈内注入によって単回用量のＣＳＬ３６２ＢまたはＣＳＬ３６２Ｘ１を投与した。別の研究では、ナイーブなサルに、ヒト化抗体（７Ｇ３）を産生するために用いたマウス抗体の可変領域と、ヒトＩｇＧ１定常領域とを含んでいるキメラ抗体の反復用量（毎週×４）を投与した。末梢血を種々の時点で収集して、ＮＨＰ  ＮＫ細胞の分析をフローサイトメトリーによって行った。
【０３１９】
図１Ａに示されるとおり、ＣＳＬ３６２Ｘ１の投与は、ＮＫ細胞の初期の枯渇（例えば、投与の約６時間後）を生じた。０．０１ｍｇ／ｋｇ〜０．１ｍｇ／ｋｇの投与量では、このレベルは、投与後約８日まで投与前に観察されたレベルを超え、投与後少なくとも２２日または２９日までは上昇したまま保たれた。ＮＫ細胞数の増大はまた、１ｍｇ／ｋｇの投薬量でも観察された。
【０３２０】
前の段落で記載した結果とは対照的に、ＣＳＬ３６２Ｂの投与は、ＮＫ細胞の枯渇を生じたが、ＮＫ細胞数は、投与前の数をその後超えなかった（図１Ｂ）。  
【０３２１】
キメラ抗体の反復投与は、循環中で検出されたＮＫ細胞数を実質的に変化しなかった（図１Ｃ）。
【０３２２】
実施例４：ＮＫ細胞の存在下におけるヒト化抗体のＡＤＣＣの増強
ヒトＰＢＭＣまたはＮＫ細胞を、単離して、種々の濃度のＣＳＬ３６２Ｘ１の存在下でＴＦ−１細胞とともにインキュベートした。エフェクター細胞（Ｅ；ＰＢＭＣ）および標的細胞（Ｔ；ＴＦ−１細胞）を、組み合わせて、５０：１という比（Ｅ：Ｔの比）を得るか、またはエフェクターとして精製されたＮＫ細胞を用いる場合は、この比は２０：１であった。細胞溶解は、ＬＤＨ  ＣｙｔｏＴｏｘ  ９６  Ｎｏｎ−Ｒａｄｉｏａｃｔｉｖｅ  Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙキット（Ｐｒｏｍｅｇａ）を用いて測定した。
【０３２３】
特異的溶解は、以下の計算で決定した：
特異的溶解＝［サンプル溶解−自然な溶解］／［最大溶解−自然な溶解］×１００％。
【０３２４】
最大溶解は、０．７５％（ｖ／ｖ）という最終濃度に対するＥｘｔｒａｎ（商標）の添加によって評価した。自然な溶解とは、細胞単独（Ａｂなし）でウェル中で生じた溶解であった。
【０３２５】
しかし、図２Ａに示されるとおり、ＰＢＭＣの存在下で、およびＮＫ細胞の存在下で生じるＴＦ−１細胞の溶解は、ＮＫ細胞が除かれたＰＢＭＣでは実質的に減少された。
【０３２６】
別の実験では、２つの異なるＡＭＬ患者由来の白血病細胞を、標的細胞として用いた。このアッセイでは、単一濃度の抗体（１０μｇ／ｍＬ）を用いて、精製されたＮＫ細胞を添加して種々のＥ：Ｔ比を生成した。図２Ｂは、標的細胞（２つの異なるＡＭＬ患者由来の末梢血芽球）に対するＮＫ細胞数（すなわち、Ｅ：Ｔ比）が高いほど、ヒト化抗体による標的細胞の特異的溶解が大きくなることを示す。
本発明は以下の態様を含み得る。
［１］
単離されるかまたは組換えの抗体であって、インターロイキン（ＩＬ）−３Ｒα鎖に特異的に結合し得：
（ｉ）それぞれ、配列番号２、３および４に示されるＣＤＲ１、２および３を含む、軽鎖可変領域（ＶＬ）；
（ｉｉ）それぞれ、配列番号５、６および７に示されるＣＤＲ１、２および３を含む、重鎖可変領域（ＶＨ）；ならびに
（ｉｉｉ）ＫａｂａｔのＥＵナンバリングシステムによるアミノ酸置換Ｓ２３９ＤおよびＩ３３２Ｅを含む重鎖定常領域、
を含む、抗体。
［２］
単離されるかまたは組換えのヒト化抗体であって、インターロイキン（ＩＬ）−３Ｒα鎖に特異的に結合し得、かつ：
（ｉ）配列番号８によるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）、および配列番号９によるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）；および
（ｉｉ）ＫａｂａｔのＥＵナンバリングシステムによるアミノ酸置換Ｓ２３９ＤおよびＩ３３２Ｅを含む重鎖定常領域、
を含む、抗体。
［３］
前記重鎖定常領域定常領域が、配列番号１１の残基１２１〜４５０（inclusive（その前後値も包含する））の間に示される配列を含む、［１］または［２］に記載の抗体。
［４］
単離されるかまたは組換えのヒト化抗体であって、前記抗体は、ＩＬ−３Ｒα鎖に特異的に結合し得、かつ配列番号１３に示される配列を含む軽鎖、および配列番号１１に示される配列を含む重鎖を含む、抗体。
［５］
裸の（naked）抗体である、［１］〜［４］のいずれか１項に記載の抗体。
［６］
［１］〜［５］のいずれか１項に記載の抗体、および薬学的に許容される担体、希釈剤または賦形剤を含む、医薬組成物。
［７］
［１］〜［５］のいずれか１項に記載のヒト化抗体、またはその重鎖もしくは軽鎖をコードする核酸。
［８］
プロモーターに対して作動可能に連結された［１］〜［５］のいずれか１項に記載の抗体の重鎖をコードする核酸と、プロモーターに対して作動可能に連結された［１］〜［５］のいずれか１項に記載の抗体の軽鎖をコードする核酸とを含む、遺伝子構築物。
［９］
［１］〜［５］のいずれか１項に記載のヒト化抗体を発現する単離された細胞、または［１］〜［５］のいずれか１項に記載のヒト化抗体を発現するように遺伝子操作された細胞。
［１０］
［７］に記載の核酸または［８］に記載の遺伝子構築物を含む、［９］に記載の細胞。
［１１］
［１］〜［５］のいずれか１項に記載の抗体、または［６］に記載の組成物をそれを必要とする哺乳動物に対して投与することを包含する、哺乳動物における疾患または状態を処置するための方法。
［１２］
［１］〜［５］のいずれか１項に記載の抗体、または［６］の組成物の医薬における使用。
［１３］
哺乳動物における疾患または状態の処置のための薬剤の製造における、［１］〜［５］のいずれか１項に記載の抗体の使用。
［１４］
哺乳動物における疾患または状態の処置における使用のための、［１］〜［５］のいずれか１項に記載の抗体、または［６］に記載の組成物。
［１５］
前記疾患または状態がＩＬ−３Ｒα−媒介性疾患または状態である、［１１］に記載の方法、または［１２］もしくは［１３］に記載の使用、または［１４］に記載の抗体もしくは組成物。
［１６］
前記疾患または状態が癌または自己免疫状態または炎症性状態である、［１５］に記載の方法、使用、抗体または組成物。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図１Ｃ】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【配列表】
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