(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
所定量の抗体または抗原が固定化された第１反応容器に、測定対象の抗原または抗体を含む所定試料量の試料と、第１希釈量の希釈液と、を含む第１の量の溶液を注入し、抗原抗体複合体を形成させ、当該抗原抗体複合体の量を測定することによって前記試料に含まれる抗原または抗体の量を測定する第１の測定工程と、
前記第１の測定工程の測定の結果、前記試料に含まれる抗原または抗体の量が前記第１の測定工程の測定範囲を超える場合、前記所定量の抗体または抗原が固定化された別の反応容器であって前記第１反応容器と同じ仕様を有する第２反応容器に、前記所定試料量の試料と、前記第１希釈量より多い第２希釈量の希釈液と、を含む前記第１の量より多い第２の量の溶液を注入し、抗原抗体複合体を形成させ、当該抗原抗体複合体の量を測定することによって前記試料に含まれる抗原または抗体の量を測定する第２の測定工程と、
を含み、
前記第１反応容器及び前記第２反応容器は、それぞれ、前記抗体又は抗原が固定化された底面を備え前記第１の量に対応した容量を有する第１液体収容部と、前記第１液体収容部を含みつつ前記第１液体収容部の上段において水平方向に広がった収容部であって前記第２の量に対応した容量を有する第２液体収容部と、を有する、
ことを特徴とする免疫測定方法。
【請求項２】
所定量の抗体または抗原が固定化された第１反応容器に、測定対象の抗原または抗体を含む所定試料量の試料と、第１希釈量の希釈液と、を含む第１の量の溶液を注入し、抗原抗体複合体を形成させ、当該抗原抗体複合体の量を測定することによって前記試料に含まれる抗原または抗体の量を測定する第１の測定工程を実行する手段と、
前記第１の測定工程の測定の結果、前記試料に含まれる抗原または抗体の量が前記第１の測定工程の測定範囲を超える場合、前記所定量の抗体または抗原が固定化された別の反応容器であって前記第１反応容器と同じ仕様を有する第２反応容器に、前記所定試料量の試料と、前記第１希釈量より多い第２希釈量の希釈液と、を含む前記第１の量より多い第２の量の溶液を注入し、抗原抗体複合体を形成させ、当該抗原抗体複合体の量を測定することによって前記試料に含まれる抗原または抗体の量を測定する第２の測定工程を実行する手段と、
を含み、
前記第１反応容器及び前記第２反応容器は、それぞれ、前記抗体又は抗原が固定化された底面を備え前記第１の量に対応した収容量を有する第１液体収容部と、前記第１液体収容部を含みつつ前記第２液体収容部の上段において水平方向に広がった収容部であって前記第２の量に対応した収容量を有する第２液体収容部と、を有する、
ことを特徴とする免疫測定装置。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、抗原抗体反応を用いる免疫測定方法および装置に関する。
【背景技術】
【０００２】
ＥＬＩＳＡ（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay）など、抗原抗体反応を用いる免疫測定法（イムノアッセイ）が知られている。
【０００３】
例えば、サンドイッチＥＬＩＳＡでは、抗体（または抗原）が固定化された反応容器に、測定対象となる抗原（または抗体）を含む検体を分注し、検体中の抗原等を固定化された抗体等と反応させ、抗原抗体複合体を形成させる。その後、当該抗原抗体複合体と標識抗体または標識抗原を反応させ、サンドイッチ複合体を形成させる。そして、サンドイッチ複合体の量を測定することにより、試料に含まれる抗原等の量を測定する。
【０００４】
特許文献１には、生化学検査におけるアルカリフオスフアターゼの測定法において、１回目の測定結果が定量上限を超えたサンプルについて、サンプルの希釈率を自動的に可変（試薬量は１回目の測定条件と同じにしてサンプル量を少なくして希釈率を大きくする）して再検査を行うことが記載されている。
【０００５】
特許文献２には、試料中の目的成分の濃度または活性値を測定する自動分析装置において、試料が濃度または活性値の算出が可能な濃度範囲の限界を外れている場合に、試料濃度を変えた再検査を指示することが記載されている。
【０００６】
特許文献３には、排水のＢＯＤ（生物学酸素要求量）と紫外線吸光度との関係の直線性を利用してＢＯＤを測定するＢＯＤ測定装置において、原排水と希釈水を混合して所定の希釈倍率の希釈原排水を得て、当該希釈原排水の紫外線吸光度を測定し、吸光度が設定値以上である場合に、希釈倍率を上げて再度吸光度を測定することが記載されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】特開昭６３−１２９９９８号公報
【特許文献２】特開平６−３４６３８号公報
【特許文献３】特開平７−１９１０１５号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
ところで、免疫測定において、試料中の測定対象の抗原または抗体の含量が多くて当初の測定範囲を超える場合、試料を別容器で希釈し、希釈された試料を当初の測定と同量だけ反応容器に入れて再測定することが考えられる。
【０００９】
本発明は、免疫測定において、試料中の測定対象の抗原または抗体の含量が当初の測定範囲を超える場合に、試料を希釈するだけの場合と比べて有利に測定範囲を拡大して再測定を行うことが可能な免疫測定方法および装置を提供する。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明に係る免疫測定方法は、所定量の抗体または抗原が固定化された反応容器に、測定対象の抗原または抗体を含む試料を含む第１の量の溶液を注入し、抗原抗体複合体を形成させ、当該抗原抗体複合体の量を測定することによって前記試料に含まれる抗原または抗体の量を測定する第１の測定工程と、前記第１の測定工程の測定の結果、前記試料に含まれる抗原または抗体の量が前記第１の測定工程の測定範囲を超える場合、前記所定量の抗体または抗原が固定化された別の反応容器に、前記試料を含む前記第１の量より多い第２の量の溶液を注入し、抗原抗体複合体を形成させ、当該抗原抗体複合体の量を測定することによって前記試料に含まれる抗原または抗体の量を測定する第２の測定工程と、を含むことを特徴とする。
【００１１】
本発明の一態様では、前記第２の測定工程の溶液は、前記第１の測定工程の溶液に含まれる試料と同量の試料を含む。
【００１２】
本発明に係る免疫測定装置は、所定量の抗体または抗原が固定化された反応容器に、測定対象の抗原または抗体を含む試料を含む第１の量の溶液を注入し、抗原抗体複合体を形成させ、当該抗原抗体複合体の量を測定することによって前記試料に含まれる抗原または抗体の量を測定する第１の測定工程を実行する手段と、前記第１の測定工程の測定の結果、前記試料に含まれる抗原または抗体の量が前記第１の測定工程の測定範囲を超える場合、前記所定量の抗体または抗原が固定化された別の反応容器に、前記試料を含む前記第１の量より多い第２の量の溶液を注入し、抗原抗体複合体を形成させ、当該抗原抗体複合体の量を測定することによって前記試料に含まれる抗原または抗体の量を測定する第２の測定工程を実行する手段と、を含むことを特徴とする。
【発明の効果】
【００１３】
本発明によれば、免疫測定において、試料中の測定対象の抗原または抗体の含量が当初の測定範囲を超える場合に、試料を希釈するだけの場合と比べて有利に測定範囲を拡大して再測定を行うことが可能となる。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】反応溶液量を１０μＬとしたときの抗原量と抗原抗体複合体量との関係を示すグラフである。
【図２】反応溶液量を３００μＬとしたときの抗原量と抗原抗体複合体量との関係を示すグラフである。
【図３】反応溶液量を１０μＬとしたときに対応する、抗原量とサンドイッチ複合体量との関係を示すグラフである。
【図４】反応溶液量を３００μＬとしたときに対応する、抗原量とサンドイッチ複合体量との関係を示すグラフである。
【図５】実施の形態に係る免疫測定方法の手順を示すフローチャートである。
【図６】実施の形態に係る免疫測定方法の具体的な手順の一例を示すフローチャートである。
【図７】実施の形態に係る免疫測定方法に用いられる反応容器の構造の一例を示す斜視図である。
【図８】本実施の形態に係る免疫測定方法に用いられる反応容器の構造の一例を示す断面図である。
【図９】本実施の形態に係る免疫測定方法に用いられる反応容器の構造の一例を示す上面図である。
【図１０】本実施の形態に係る免疫測定方法に用いられる反応容器の構造の一例を示す側面図である。
【図１１】反応容器の構造の別の一例を示す斜視図である。
【図１２】反応容器の構造の別の一例を示す断面図である。
【図１３】反応容器の構造のさらに別の一例を示す斜視図である。
【図１４】反応容器の構造のさらに別の一例を示す断面図である。
【図１５】実施の形態に係る免疫測定装置の構成の一例を示すブロック図である。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
以下、本発明の実施の形態を図面に従って説明する。
【００１６】
抗原抗体反応において、抗原と抗体は水素結合、クーロン力、ファンデルファールス力で結合しており、その結合は可逆的である。また、その反応には、質量作用の法則が成り立ち、十分な反応時間をとったとしても、抗原、抗体の濃度、抗体の親和力によって、抗原抗体複合体、遊離の抗原、抗体の濃度が決まる。具体的には、下記式（１）が成立する。
Ｋａ＝［Ａｇ−Ａｂ］／［Ａｇ］［Ａｂ］
＝Ｋｏｎ／Ｋｏｆｆ                  ・・・（１）
【００１７】
上記式（１）において、［Ａｇ］、［Ａｂ］、［Ａｇ−Ａｂ］はそれぞれ抗原、抗体、抗原抗体複合体のモル濃度（ｍｏｌ／Ｌ）であり、Ｋａは結合定数である。また、Ｋｏｎは結合速度定数であり、Ｋｏｆｆは解離速度定数である。
【００１８】
反応前の抗原のモル濃度をａ、反応前の抗体のモル濃度をｂ、反応後に形成された抗原抗体複合体のモル濃度をｘとすると、下記式（２）が成立する。
Ｋａ＝ｘ／（ａ−ｘ）（ｂ−ｘ）  ・・・（２）
【００１９】
上記式（２）を変形すると、下記式（３）が得られる。
【数１】
0005396217.tif 000002
【００２０】
上記式（３）をさらに変形すると、下記式（４）が得られる。
【数２】
0005396217.tif 000003
【００２１】
上記式（４）を用いて、反応前の抗原および抗体の濃度から、形成される抗原抗体複合体の濃度を計算することができる。
【００２２】
ここで、底面に抗体（１次抗体）が固定された反応容器に、抗原を含む反応溶液を入れて反応させた場合を例にとって、以下の条件で実際に計算してみると、図１，２に示される計算結果が得られる。なお、ここでは、１次抗体はモノクロナール抗体であるものとする。
（条件）
抗原の分子量：２４０００
抗体固定量：１０００〜１．０ｎｇ／ｗｅｌｌ
＝６．７×１０-12〜６．７×１０-15ｍｏｌ／ｗｅｌｌ
抗原量：１００〜１×１０-4ｎｇ
＝４×１０-12〜４×１０-18ｍｏｌ
結合定数：１×１０9（一般的なマウスモノクロナール抗体の値）
反応溶液量：１０μＬ、３００μＬ
反応容器：内径φ８ｍｍ、底面のみ抗体を固定、容器深さ６ｍｍ以上
【００２３】
図１，２は、抗原量（または濃度）と抗原抗体複合体量（または濃度）との関係を示すグラフである。図１には、反応溶液量を１０μＬとしたときの計算結果が示されており、図２には、反応溶液量を３００μＬとしたときの計算結果が示されている。
【００２４】
図１，２において、丸印、四角印、三角印、バツ印は、それぞれ、抗体固定量を１０００，１００，１０，１ｎｇ／ｗｅｌｌとしたときの結果を示す。したがって、丸印、四角印、三角印、バツ印は、図１においては抗体濃度６．７×１０-7，６．７×１０-8，６．７×１０-9，６．７×１０-10ｍｏｌ／Ｌに対応し、図２においては抗体濃度２．２×１０-8，２．２×１０-9，２．２×１０-10，２．２×１０-11ｍｏｌ／Ｌに対応する。
【００２５】
図１，２のバツ印を見てみると、図１では抗原量が約３×１０-14ｍｏｌでプラトーに達しているのに対し、図２では抗原量が約３×１０-13ｍｏｌでプラトーに達している。また、三角印を見てみると、図１では抗原量が約１×１０-13ｍｏｌでプラトーに達しているのに対し、図２では抗原量が約３×１０-13ｍｏｌでプラトーに達している。また、四角印を見てみると、図１では抗原量が約１×１０-12ｍｏｌでプラトーに達しているのに対し、図２では抗原量が約１×１０-12ｍｏｌでプラトーに達している。
【００２６】
このように、図１と図２とを比較してみると分かるように、抗体固定量が少ない場合、反応溶液量を１０μＬから３００μＬに増やすと、プラトーに達する抗原量は３〜１０倍になり、抗原量が多い領域での直線性が増加する。すなわち、抗原量の変化に応じて抗原抗体複合体量が十分な変化を示す領域が広くなる。
【００２７】
次に、上記の計算結果を利用して、上記反応容器に一定濃度（６．７×１０-9ｍｏｌ／Ｌ）の２次抗体を入れ、上記抗原抗体複合体と２次抗体を反応させた場合に得られるサンドイッチ複合体（１次抗体−抗原−２次抗体）の量（および濃度）を計算すると、図３，４に示される計算結果が得られる。なお、ここでは、２次抗体はモノクロナール抗体であるものとする。
【００２８】
図３，４は、抗原量（または濃度）とサンドイッチ複合体量（または濃度）との関係を示すグラフである。図３は、図１に続いて得られるものであり、反応溶液量を１０μＬとしたときに対応する。図４は、図２に続いて得られるものであり、反応溶液量を３００μＬとしたときに対応する。
【００２９】
図３，４において、丸印、四角印、三角印、バツ印は、図１，２と同様、それぞれ、抗体固定量を１０００，１００，１０，１ｎｇ／ｗｅｌｌとしたときの結果を示す。
【００３０】
図３，４のバツ印を見てみると、図３では抗原量が約３×１０-14ｍｏｌでプラトーに達しているのに対し、図４では抗原量が約３×１０-13ｍｏｌでプラトーに達している。また、丸印を見てみると、図３では抗原量が約１×１０-13ｍｏｌでプラトーに達しているのに対し、図４では抗原量が約３×１０-12ｍｏｌでプラトーに達している。
【００３１】
このように、図３と図４とを比較してみると分かるように、反応溶液量を１０μＬから３００μＬに増やすと、プラトーに達する抗原量は１０〜３０倍になり、抗原量が多い領域での直線性が増加する。すなわち、抗原量の変化に応じてサンドイッチ複合体量が十分な変化を示す領域が広くなる。
【００３２】
サンドイッチＥＬＩＳＡでは、２次抗体には標識がなされており、その標識からのシグナル量を測定することにより、抗原量（または濃度）を測定する。ここで、シグナル量はサンドイッチ複合体量に比例するため、反応溶液量を増加させると、抗原量を定量的に測定できる範囲が拡大すると言える。
【００３３】
このような傾向は、親和力の弱い抗体（すなわち結合定数Ｋａの小さい抗体）を用いると、より顕著となる。これは、結合力が弱いため、より高い抗原量（または濃度）でないとプラトーにならないためである。
【００３４】
なお、上記では、抗体が固定化された反応容器に、測定対象となる抗原を含む溶液を入れる場合を例にとって説明したが、抗原が固定化された反応容器に、測定対象となる抗体を含む溶液を入れる場合も同様である。すなわち、上記の説明において、抗体と抗原を逆にしても同様の結果が得られる。
【００３５】
以上の結果より、本実施の形態では、測定対象の抗原または抗体の量を測定する際、当初の測定（通常の測定）では、検出感度が良く、反応時間短縮が図れる反応溶液量が比較的少ない条件で測定を行う。そして、試料（検体）中の測定対象物の含量が多くて測定不能な場合は、反応溶液量を増加させ、反応溶液量が当初よりも多い条件で再測定を行う。
【００３６】
図５は、本実施の形態に係る免疫測定方法の手順を示すフローチャートである。
【００３７】
図５に示されるように、本実施の形態に係る免疫測定方法は、第１の測定工程（Ｓ１）および第２の測定工程（Ｓ２）を含む。
【００３８】
第１の測定工程では、所定量の抗体または抗原が固定化された反応容器に、測定対象の抗原または抗体を含む試料を含む第１の量の溶液を注入し、抗原抗体複合体を形成させ、当該抗原抗体複合体の量を測定することによって上記試料に含まれる抗原または抗体の量を測定する（Ｓ１）。
【００３９】
上記第１の測定工程の測定の結果、試料に含まれる抗原または抗体の量が第１の測定工程の測定範囲を超える場合、再測定のための第２の測定工程を行う。
【００４０】
第２の測定工程では、上記所定量の抗体または抗原が固定化された別の反応容器に、試料を含む第１の量より多い第２の量の溶液を注入し、抗原抗体複合体を形成させ、当該抗原抗体複合体の量を測定することによって試料に含まれる抗原または抗体の量を測定する（Ｓ２）。すなわち、溶液量を増やして再測定を行う。上記「別の反応容器」は、第１の測定工程で用いられた反応容器とは別の反応容器を意味する。具体的な一態様では、第２の測定工程で用いられる別の反応容器は、第１の測定工程で用いられる反応容器と同様の容器である。すなわち、第１の測定工程と第２の測定工程とで、反応容器の寸法、形状、抗体等の固定量など、反応容器の仕様は同じである。
【００４１】
一つの態様では、第２の測定工程の溶液は、第１の測定工程の溶液に含まれる試料と同量の試料を含む。したがって、例えば、第２の測定工程では、試料の量を第１の測定工程と実質的に同じとしつつ、希釈液を第１の測定工程より増やすことにより溶液量を増やす。より具体的には、第２の測定工程では、第１の測定工程と実質的に同じ量（所定試料量）の試料を反応容器に入れるとともに、第１の測定工程より多量の希釈液（第１の測定工程での第１希釈量よりも多い第２希釈量の希釈液）を反応容器に入れる。
【００４２】
なお、上記測定される抗原または抗体の量は、具体的には、試料中の抗原または抗体の濃度であってもよいし、反応容器に入れられた試料中の抗原または抗体の絶対量（例えばモル数）であってもよい。
【００４３】
図６は、本実施の形態に係る免疫測定方法の具体的な手順の一例を示すフローチャートである。以下、図６を参照して、サンドイッチＥＬＩＳＡを例にとって具体的な手順の一例を説明する。
【００４４】
まず、１次抗体が底面に固定化された反応容器（第１反応容器）に、測定対象となる抗原を含む検体（例えば血清や尿）を所定量だけ含む第１の量の溶液を分注し（Ｓ１１）、抗原抗体反応（１次反応）させる（Ｓ１２）。これにより、１次抗体に抗原が結合して、抗原抗体複合体が形成される。ここで、第１の量は例えば１０μＬであり、ステップＳ１１では、例えば、検体を１μＬ、希釈液（バッファ液）を９μＬ分注する。
【００４５】
次に、１次洗浄（Ｂ／Ｆ分離）を行って、未反応の抗原などを除去する（Ｓ１３）。
【００４６】
次に、酵素標識抗体である２次抗体を含む溶液を反応容器に分注し（Ｓ１４）、抗原抗体反応（２次反応）させる（Ｓ１５）。これにより、抗原抗体複合体に２次抗体が結合して、サンドイッチ複合体（１次抗体−測定対象の抗原−２次抗体）が形成される。
【００４７】
次に、２次洗浄（Ｂ／Ｆ分離）を行って、未反応の二次抗体などを除去する（Ｓ１６）。
【００４８】
次に、反応容器に基質を分注し（Ｓ１７）、発光、蛍光、吸光などのシグナルを測定する（Ｓ１８）。
【００４９】
次に、検体中の抗原の量が測定範囲を超えているか否かを判断する（Ｓ１９）。具体的には、ステップＳ１８で測定されたシグナルが所定の上限値を超えているか否かを判断する。
【００５０】
シグナルが上限値を超えていないと判断した場合、すなわち検体中の抗原の量が測定範囲を超えていないと判断した場合（Ｓ１９：ＮＯ）、再測定は不要であるとして、ステップＳ１８で測定されたシグナル（すなわち１回目に測定されたシグナル）に基づき、検体中の抗原の量（または濃度）を定量する（Ｓ２０）。具体的には、検体中の抗原の量とシグナルとの対応関係を示す予め作成された第１の検量線を用いて、上記シグナルに基づいて検体中の抗原の量を求める。ここで、第１の検量線は、第１の量の溶液を分注した場合に対応するものである。ステップＳ１９における判断方法としては、例えば定量値（検体中の抗原の量）の相対標準偏差（標準偏差／平均値）を求め、所定の範囲（例えば１０％以内）に収まるか否かで判断するようにしてもよい。
【００５１】
一方、シグナルが上限値を超えていると判断した場合、すなわち検体中の抗原の量が測定範囲を超えていると判断した場合（Ｓ１９：ＹＥＳ）、再測定が必要であるとして、溶液量を増やして２回目の測定を行う。
【００５２】
具体的には、１回目の測定と同仕様の別の反応容器（第２反応容器）に、測定対象となる抗原を含む検体を所定量だけ含む第２の量の溶液を分注し（Ｓ２１）、抗原抗体反応（１次反応）させる（Ｓ２２）。これにより、抗原抗体複合体が形成される。ここで、第２の量は、１回目の測定における第１の量よりも多く、例えば１００μＬである。ステップＳ２１では、ステップＳ１１と同量の検体（例えば１μＬ）を分注し、ステップＳ１１よりも多量のバッファ液（例えば２９９μＬ）を分注する。
【００５３】
次に、１次洗浄（Ｂ／Ｆ分離）を行って、未反応の抗原などを除去する（Ｓ２３）。
【００５４】
次に、酵素標識抗体である２次抗体を含む溶液を反応容器に分注し（Ｓ２４）、抗原抗体反応（２次反応）させる（Ｓ２５）。これにより、サンドイッチ複合体が形成される。具体的には、ステップＳ２５では、上記ステップＳ１５と同じ２次抗体濃度の溶液を分注する。分注される溶液の量は、例えばステップＳ１５と同じである。
【００５５】
次に、２次洗浄（Ｂ／Ｆ分離）を行って、未反応の二次抗体などを除去する（Ｓ２６）。
【００５６】
次に、反応容器に基質を分注し（Ｓ２７）、発光、蛍光、吸光などのシグナルを測定する（Ｓ２８）。
【００５７】
そして、ステップＳ２８で測定されたシグナル（すなわち２回目に測定されたシグナル）に基づき、検体中の抗原の量（または濃度）を定量する（Ｓ２９）。具体的には、検体中の抗原の量とシグナルとの対応関係を示す予め作成された第２の検量線を用いて、上記シグナルに基づいて検体中の抗原の量を求める。ここで、第２の検量線は、第２の量の溶液を分注した場合に対応するものである。第２の検量線は、第１の検量線とは異なる形状を有し、感度を有する領域（すなわち抗原の量の変化に応じてシグナルが十分な変化を示す領域）が第１の検量線よりも広い。例えば、第１の検量線は図３に対応し、第２の検量線は図４に対応する。
【００５８】
なお、上記の説明では、再測定を１回行う場合を例示したが、再測定を２回以上行うようにしてもよい。例えば、２回目の測定の結果、試料に含まれる抗原または抗体の量が２回目の測定の測定範囲を超える場合、さらに溶液量を増やして３回目の測定を行ってもよい。同様に、４回目以降の測定を行ってもよい。
【００５９】
上記本実施の形態に係る免疫測定方法において、反応容器は、抗体または抗原が固定された底面の表面に反応溶液を薄く広げることができ、かつ再測定時には液量を増加させることができるように構成されていることが好ましい。
【００６０】
ここで、均一な抗原抗体反応を得る観点より、底面の表面全体に反応溶液が行き渡ることが望ましく、メニスカスが形成されることは望ましくない。
【００６１】
そこで、メニスカスの形成を防止する等の観点より、一つの態様では、反応容器は、抗体または抗原が表面に固相化された底面部と、当該底面部の周囲に設けられ、第１および第２の測定工程に対応する少なくとも２段の液体収容部を形成する側壁部とを有し、上記液体収容部は、当該液体収容部に対応する測定工程の予め定められた量の溶液が注入された場合に、当該液体収容部の上端開口の周縁部が上記溶液の液面と同レベルの水平面を形成するように形成される。
【００６２】
図７、８、９、１０は、それぞれ本実施の形態に係る免疫測定方法に用いられる反応容器の構造の一例を示す斜視図、断面図、上面図、側面図である。
【００６３】
図７〜１０に示されるように、反応容器１は、底面部１０および側壁部２０を有する。
【００６４】
底面部１０の表面には、抗体または抗原が固定化される。例えば、サンドイッチＥＬＩＳＡにおいて、底面部１０の表面には、一次抗体が固定化される。
【００６５】
側壁部２０は、底面部１０の周囲に設けられ、第１および第２の測定工程を含む免疫測定の工程に対応する２段以上の液体収容段を形成する。図７〜１０の例では、側壁部２０は、複数段（具体的には４段）の液体収容段３１，３２，３３，３４を形成する。すなわち、反応容器１は、側壁部２０が複数の段を持つ構造となっている。液体収容段３１，３２，３３，３４のそれぞれの上端開口の周囲には、水平方向に広がる周縁部３１ａ，３２ａ，３３ａ，３４ａが形成されている。 第１の液体収容部は第１段の液体収容段３１により構成され、第２の液体収容部は第１段から第２段までの液体収容段３１，３２により構成され、第３の液体収容部は第１段から第３段までの液体収容段３１，３２，３３により構成され、第４の液体収容部は第１段から第４段までの液体収容段３１，３２，３３，３４により構成される。第２の液体収容部に着目すると、それは、第１の液体収容部（第１段の液体収容段３１）を含みつつ当該第１の液体収容部の上段で水平方向に広がった第２段の液体収容段３２を含んで構成されている。
【００６６】
各液体収容部は、当該液体収容部に対応する工程の予め定められた量の液体が注入された場合に、当該液体収容部の上端開口（当該液体収容部を構成する液体収容段の内で最上段の液体収容段の上端開口）の周縁部が当該液体の液面と同レベルの水平面を形成するように形成される。
【００６７】
具体的には、各液体収容部の容量は、当該液体収容部に対応する工程の予め定められた液量と等しくなっており、当該液体収容部の上端開口の周縁部は水平面状に形成されている。ここで、液体収容部の容量は、上記予め定められた液量と厳密に等しくなくても、略等しければよく、例えばやや少な目になっていてもよい。
【００６８】
例えば、１段目の液体収容段３１つまり第１の液体収容部は１回目の測定工程に対応し、１段目の液体収容部の容量は第１の量と等しい。また、１段目の液体収容段３１及び２段目の液体収容段３２からなる第２の液体収容部は２回目の測定工程に対応し、第２の液体収容部の容量は第２の量と等しい。
【００６９】
ところで、図７〜１０に示される構造では、反応容器１は直角の隅部を含み、洗浄の際に、この隅部に洗浄液等の廃液が残る可能性がある。そこで、好適な一態様では、側壁部２０は、底面部１０および周縁部のうち少なくとも１つの外周側の側面が外側に向かって上昇する傾斜面となるように形成される。傾斜面は、望ましくは曲面であり、より望ましくは緩やかに上昇する曲面である。例えば、図１１，１２に示されるように、反応容器１は、多段のお椀状の構造を有する。
【００７０】
なお、反応容器１の段構造は、図７〜１０のような階段状に限られず、例えば図１３，１４に示されるような、側面に窪みを持つ構造など、階段状以外の構造とされてもよい。図１３，１４では、反応容器の側面には、第１の量および第２の量のそれぞれに対応する高さに、窪みが設けられている。
【００７１】
液面の高さが異なり、測光上不都合が生じる場合には、反応容器は透明とされ、反応容器の下面側から測光される。
【００７２】
上記本実施の形態に係る免疫測定方法は、例えば、自動分析装置などの免疫測定装置により実行される。
【００７３】
図１５は、本実施の形態に係る免疫測定装置の構成の一例を示すブロック図である。
【００７４】
図１５において、免疫測定装置５０は、分注機構５１、洗浄機構５２、検出機構５３、および制御装置５４を有する。
【００７５】
分注機構５１は、試料、希釈液、二次抗体、基質などの液体を反応容器に分注する機構である。分注機構５１は、例えば、分注ノズルと、分注ノズルにて液体を吸引、吐出する吸引吐出機構と、分注ノズルを移動させる移動機構とを含む。
【００７６】
洗浄機構５２は、１次洗浄や２次洗浄など、反応容器を洗浄する機構である。洗浄機構５２は、例えば、洗浄ノズルと、洗浄ノズルにて洗浄液を吸引、吐出する吸引吐出機構と、洗浄ノズルを移動させる移動機構とを含む。
【００７７】
検出機構５３は、反応容器内の液体の、発光、蛍光、吸光などのシグナルを検出する機構である。検出機構５３は、例えば、反応容器内の液体の発光量を検出する光電子増倍管などの光検出器を含む。
【００７８】
制御装置５４は、免疫測定装置５０の動作を制御する。具体的には、制御装置５４は、分注機構５１、洗浄機構５２、および検出機構５３を用いて、第１の測定工程および第２の測定工程を実行する制御を行う。一つの態様では、制御装置５４は、ハードウェア資源とソフトウェアとの協働により実現され、例えばコンピュータにより実現される。具体的には、制御装置５４は、プログラムが記録された記録媒体と、メインメモリと、ＣＰＵ（Central Processing Unit）とを含み、制御装置５４の機能は、記録媒体に記録されたプログラムがメインメモリに読み出されてＣＰＵにより実行されることによって実現される。上記プログラムは、ＣＤ−ＲＯＭ等のコンピュータ読み取り可能な記録媒体に記録されて提供されることも可能であるし、データ信号として通信により提供されることも可能である。ただし、制御装置５４は、ハードウェアのみにより実現されてもよい。
【００７９】
以上説明した本実施の形態によれば、以下の効果が得られる。
【００８０】
（１）本実施の形態では、所定量の抗体または抗原が固定化された反応容器に、測定対象の抗原または抗体を含む試料を含む第１の量の溶液を注入し、抗原抗体複合体を形成させ、当該抗原抗体複合体の量を測定することによって上記試料に含まれる抗原または抗体の量を測定する第１の測定工程を行う。そして、第１の測定工程の測定の結果、上記試料に含まれる抗原または抗体の量が第１の測定工程の測定範囲を超える場合、上記所定量の抗体または抗原が固定化された別の反応容器に、上記試料を含む上記第１の量より多い第２の量の溶液を注入し、抗原抗体複合体を形成させ、当該抗原抗体複合体の量を測定することによって上記試料に含まれる抗原または抗体の量を測定する第２の測定工程を行う。すなわち、免疫測定において、試料中の測定対象物の含量が多くて測定範囲を超える場合に、溶液量を増やして再測定を行う。これにより、試料中の測定対象物の含量が当初の測定範囲を超える際に、試料を希釈するだけの場合と比べて有利に測定範囲を拡大して再測定を行うことが可能となる。
【００８１】
（２）試料および希釈液を直接反応容器に注入して液量を増やして再測定を行うことができ、他容器で試料を希釈したものを反応容器に移して再測定を行う場合と比べて、工程を簡易化することができる。
【００８２】
（３）一つの態様では、第２の測定工程の溶液は、第１の測定工程の溶液に含まれる試料と同量の試料を含む。この態様によれば、第１の測定工程と第２の測定工程とで同量の試料を注入すればよく、試料の注入が容易となる。
【００８３】
（４）一つの態様では、第２の測定工程で用いられる反応容器は、第１の測定工程で用いられる反応容器と同じ仕様のものである。この態様によれば、再測定用の別仕様の反応容器を用意する必要がなく、コストを抑えることができる。
【００８４】
（５）一つの態様では、反応容器は、抗体または抗原が表面に固定化された底面部と、当該底面部の周囲に設けられ、第１および第２の測定工程に対応する少なくとも２段の液体収容段を形成する側壁部とを有する。そして、各液体収容部は、当該液体収容部に対応する工程の予め定められた量の液体が注入された場合に、当該液体収容部の上端開口の周縁部が液体の液面と同レベルの水平面を形成するように形成される。このため、第１および第２の測定工程において、予め定められた第１および第２の量の溶液を注入した場合に、液面が略平坦となり、実質的にメニスカスが形成されない。これにより、底面部の表面全体に均一に液体が行き渡り、均一な抗原抗体反応が得られる。
【００８５】
なお、本発明は、上記実施の形態に限定されるものではなく、本発明の要旨を逸脱しない範囲内で種々変更することができる。
【符号の説明】
【００８６】
１  反応容器、１０  底面部、２０  側壁部、３１〜３４  液体収容段、３１ａ〜３４ａ  周縁部、５０  免疫測定装置、５１  分注機構、５２  洗浄機構、５３  検出機構、５４  制御装置。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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