(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
グレープフルーツの抽出物を有効成分として含有するメラノサイト由来細胞におけるビタミンＣトランスポーター産生促進剤と、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸とを組合せてなるビタミンＣ吸収促進用組成物及びエキナセアの抽出物を含む美白用外用組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ビタミンＣトランスポーター産生促進作用を有する化合物及び植物に関する。また、その化合物及び植物を利用したビタミンＣ吸収促進用組成物、該ビタミンＣ吸収促進用組成物を含む美白用組成物又はコラーゲン合成促進用組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
ビタミンＣは、生体における水溶性抗酸化物質としてスーパーオキシドアニオンやその他の活性酸素種に対して優れた抗酸化作用を持ち、細胞内における脂質成分の酸化を予防する。また、コラーゲン合成におけるプロリン残基のヒドロキシル化やメラニン合成の律速酵素として知られるチロシナーゼの制御、ビタミンＣのキレート作用による鉄運搬の調整、更に酸化と還元を調節することによって様々な酵素反応に関与している。多機能を有するビタミンＣであるが、モルモット及びヒトを含む霊長類は、Ｌ−グロノラクトンオキシターゼの欠損によってビタミンＣ合成能力がなく、更にビタミンＣは、水溶性の性質をもち、他の脂溶性ビタミンに比べ生体保持時間が短いことから、ビタミンＣの機能不足に陥りやすいことが考えられる。  【０００３】
ビタミンＣの欠乏によって起こる疾患として、壊血病、創傷治癒能の低下、骨や結合組織の障害、血管運動の不安定化などが挙げられる。更に、心疾患、癌、白内障、風邪などを加えた様々な疾患に対して、ビタミンＣは、予防や治療を目的として用いられてきた（非特許文献１）。また疾患以外にも肌に対して、美白や肌のうるおい強化、更には抗老化作用を目的にしたビタミンＣ製剤が数多く提供されてきた。  【０００４】
一方、ビタミンＣの機能やその有効性に関する知見は数多く報告されているものの、ビタミンＣの各組織への取込み機構については、依然として不明な点が多い。1999年Tsukaguchiらは、ラットからビタミンＣの取込みを担う膜タンパク質のクローニングに成功し、ナトリウムイオン：ビタミンＣ＝2：１の割合にて細胞内へ輸送するナトリウム依存性ビタミンＣトランスポーター（ＳＶＣＴ）を見出した（非特許文献２）。その後の研究で、ヒトにおいてもビタミンＣトランスポーターが存在することが明らかとなり、また、ビタミンＣトランスポーターには１型（ＳＶＣＴ１）と２型（ＳＶＣＴ２）の２種類のアイソフォームがあることが明らかとなった。ＳＶＣＴ１は、主に小腸、肝臓、腎臓、大腸、子宮、前立腺などの上皮組織に分布し、ＳＶＣＴ２は肺、骨格筋、目、骨、脳などの内皮組織に幅広く分布している。共にビタミンＣを特異的に輸送するが、ＳＶＣＴ１に比べＳＶＣＴ２の方が特異性に優れていることが速度論的解析より明らかにされている（非特許文献３）。  【０００５】
Alexanderらは加齢に伴うビタミンＣ保有量とビタミンＣトランスポーターの発現量の関係について調べ、ラット肝臓においてビタミンＣトランスポーター（ＳＶＣＴ１）の発現量低下とビタミンＣ保有量の減少を報告した（非特許文献４）。ビタミンＣ保有量低下の予防あるいは改善の方法として、ビタミンＣの継続的な摂取が挙げられるが、MacDonaldらは過剰なビタミンＣの摂取はビタミンＣトランスポーター（ＳＶＣＴ１）の発現を低下させ、さらに、ビタミンＣの取込み能力を低下させることをヒト腸管モデルを用いて推測している（非特許文献５）。これらの知見からビタミンＣ保有量低下に起因するビタミンＣの機能低下に関する予防あるいは改善にビタミンＣトランスポーター産生促進剤が効果的な方法であることが考えられた。  【０００６】
現在までＳＶＣＴ１及びＳＶＣＴ２の発現を高める化合物や植物に関する報告は極めて少ない。Fujitaらはマウス骨芽細胞を用いてデキサメサゾンがＳＶＣＴ２の発現を高め、ビタミンＣの取込み量を上昇させることを報告している（非特許文献６）。しかし、テキサメサゾンは、ホルモン用作用を示すため、副作用という観点から使用にあたって大きな制約となる。また、ＳＶＣＴ１の発現を増強する化合物あるいは植物に関する報告は未だない。    
【非特許文献１】Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｍｅｍｂｒａｎｅ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，２００１，Ｖｏｌ．１８，８７−９５
【非特許文献２】Ｎａｔｕｒｅ，１９９９，  Ｖｏｌ．３９９，７０−７５
【非特許文献３】ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔｅｒ，１９９９，  Ｖｏｌ．４６０，４８０−４８４
【非特許文献４】Ａｒｃｈｉｖｅｓ  ｏｆ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃｓ，２００３，  Ｖｏｌ．４１０，１１２−１２０
【非特許文献５】Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ，２００２，  Ｖｏｌ．８７，９７−１００
【非特許文献６】Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ，２００１，  Ｖｏｌ．８６，１４５−１４９
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、ビタミンＣの標的組織への取込みを促進させるビタミンＣトランスポーター産生促進剤の提供を課題とする。さらに、別の課題はそのよう促進剤を含む美白用組成物又はコラーゲン合成促進用組成物の提供である。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者らは、上記諸課題を解決すべく鋭意検討した結果、ビタミンＣトランスポーター産生促進作用を有する化合物及び植物等を見出し、ビタミンＣ吸収促進用組成物、美白用組成物、コラーゲン合成促進用組成物として極めて有用であるという知見から本発明を完成するに至った。すなわち、ここで提案する解決手段は、次の構成をとる。
（１）マルビイン、コレステリルベンゾエート、ウガフェリン、ラピフェリン、ゲラニルアセタート、ネロリドール、ジヒドロジャスモン、カルバクリルアセタート、グアイズレン、ジヒドロコニフェリルアルコール、ステビオシド、ＤＬ−アルファ-ピレン、ベルベナリン、１−ヘプタコサノール、４−ヒドロキシクマリン、コール酸 、オレイン酸コレステリル、フラキシン、ベルガプトールからなる化合物群より選択される少なくとも１種以上を含有することを特徴とするビタミンＣトランスポーター産生促進剤。
（２）前記（１）記載のいずれかの化合物を含む植物、動物、鉱物、微生物の粉砕物、その抽出物、あるいは抽出物の加水分解物を含むビタミンＣトランスポーター産生促進剤。
（３）前記（１）又は（２）記載のビタミンＣトランスポーター産生促進剤と、ビタミンＣあるいはビタミンＣ誘導体とを組合せてなるビタミンＣ吸収促進用組成物。
（４）ビタミンＣ誘導体が、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−アスコルビン酸である前記（３）に記載のビタミンＣ吸収促進用組成物。
（５）前記（３）又は（４）記載のビタミンＣ吸収促進用組成物を含む美白用組成物。
（６）前記（３）又は（４）記載のビタミンＣ吸収促進用組成物を含むコラーゲン合成促進用組成物。
（７）ホオノキ、アーモンド、アマチャ、グレープフルーツ、ジャノヒゲ、セイヨウキズタ、サボンソウ、ドクダミ、カミツレ、アセンヤク、ハマメリス、マグワ、コメヌカ、スギナからなる群より選択される少なくとも１種類以上の粉砕物、その抽出物、あるいは抽出物の加水分解物を含有することを特徴とするビタミンＣトランスポーター産生促進剤。
（８）前記（７）記載のビタミンＣトランスポーター産生促進剤と、ビタミンＣあるいはビタミンＣ誘導体とを組合せてなることを特徴とするビタミンＣ吸収促進用組成物。
（９）ビタミンＣ誘導体が、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−アスコルビン酸である前記（８）に記載のビタミンＣ吸収促進用組成物。
（１０）前記（８）又は（９）記載のビタミンＣ吸収促進用組成物を含むことを特徴とする美白用組成物。
（１１）前記（８）又は（９）記載のビタミンＣ吸収促進用組成物を含むことを特徴とするコラーゲン合成促進用組成物。
（１２）前記（３）、（４）、（８）又は（９）記載のビタミンＣ吸収促進用組成物及びグルコシダーゼ剤を含有することを特徴とする美白用組成物。
（１３）グルコシダーゼ剤がエキナセア、酵母、ビフィズス菌、乳酸菌からなる群より選択される少なくとも１種類以上の粉砕物、その抽出物、あるいは抽出加水分解物である前記（１２）記載の美白用組成物。
【発明の効果】
【０００９】
本発明により見出した特定の化合物及び植物を含むビタミンＣトランスポーター産生促進剤によれば、細胞を用いた解析においてＳＶＣＴ１及び／又は２のｍＲＮＡの発現を顕著に促進することが確認できた。  本発明のビタミンＣトランスポーター産生促進剤は、美白用組成物、コラーゲン合成促進用組成物として利用することができ、その使用形態としては、経口用、皮膚外用、注射、化粧品、医薬などが挙げられる。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】３次元皮膚モデルによるメラニン生成抑制試験の結果を示したグラフである。
【図２】炎症の抑制効果を示したグラフである。
【図３】色素沈着の改善効果を示したグラフである。
【図４】グレープフルーツ抽出物のＳＶＣＴ産生促進効果を示す図である。
【図５】三次元皮膚モデルの顕微鏡写真を示す図である。
【図６】三次元皮膚モデルのフォンタナ・マッソン染色像を示す図である。
【図７】ＨＰＬＣによるアスコルビン酸（０．５ｍＭ）の分析チャートを示す図である。
【図８】ＨＰＬＣによる細胞内のアスコルビン酸の分析チャートを示す図である。
【図９】マウスメラノーマＢ１６−Ｆ１０細胞におけるグレープフルーツ抽出物のビタミンＣ吸収促進効果の測定結果を示す図である。
【図１０】ヒト大腸がん由来Ｃａｃｏ２細胞におけるグレープフルーツ抽出物のビタミンＣ吸収促進効果の測定結果を示す図である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１１】
以下、本発明の詳細を説明する。  本発明のビタミンＣトランスポーター産生促進剤に含まれる化合物としては、マルビイン、コレステリルベンゾエート、ウガフェリン、ラピフェリン、ゲラニルアセタート、ネロリドール、ジヒドロジャスモン、カルバクリルアセタート、グアイズレン、ジヒドロコニフェリルアルコール、ステビオシド、ＤＬ−アルファ-ピレン、ベルベナリン、１−ヘプタコサノール、４−ヒドロキシクマリン、コール酸、オレイン酸コレステリル、フラキシン、ベルガプトールなどが使用可能である。これらの化合物は、単独で１種類用いてもよく、また、２種類以上を組み合わせて用いることもできる。また、これらの化合物を含有する植物、動物、鉱物、微生物の粉砕物、その抽出物、あるいは抽出加水分解物も使用できる。  【００１２】
マルビイン（ＣＡＳ：４６５−９２−９）を含む植物としては、シソ科ニガハッカ属のマルビウム・アセタバロサム（Marrubium acetabulosum）、マルビウム・アドファイン（Marrubium adfine）、マルビウム・アエネニイ（Marrubium aellenii）、マルビウム・アフィネ（Marrubium affine）、マルビウム・アフリカナム（Marrubium africanum）、マルビウム・アルバム（Marrubium album）、マルビウム・オルタニデンス（Marrubium alternidens）、マルビウム・アリッソイデス（Marrubium alyssoides）、マルビウム・アリッソン（Marrubium alysson）、マルビウム・アングスティフォリウム（Marrubium  angustifolium）、マルビウム・アニソドン（Marrubium anisodon）、マルビウム・アプラム（Marrubium apulum）、マルビウム・アクアティカム（Marrubium aquaticum）、マルビウム・アサルソニ（Marrubium  aschersoni）、マルビウム・アストラカニカム（Marrubium astracanicum）、マルビウム・アトランティカム（Marrubium atlanticum）、マルビウム・アヤルディイ（Marrubium ayardii）、マルビウム・ボロタ（Marrubium ballota）、マルビウム・ペレグリナム（Marrubium ballotaeforme）、マルビウム・バロトイデス（Marrubium ballotoides）、マルビウム・バステタナム（Marrubium bastetanum）、マルビウム・ボルンマエレリ（Marrubium bornmuelleri）、マルビウム・ボルガエイ（Marrubium bourgaei）、マルビウム・ブラチヨドン（Marrubium brachyodon）、マルビウム・カンディディシマウ（Marrubium candidissimum）、マルビウム・カラリアエフォリウム（Marrubium catariaefolium）、マルビウム・セパランタム（Marrubium cephalanthum）、マルビウム・シネラセンス（Marrubium cinerascens）、マルビウム・シネレウム（Marrubium cinereum）、マルビウム・シルシナタム（Marrubium circinnatum）、マルビウム・シビス（Marrubium civice）、マルビウム・コエルレセンス（Marrubium coerulescens）、マルビウム・コデンサタム（Marrubium condensatum）、マルビウム・コルダタム（Marrubium cordatum）、マルビウム・クラシデンス（Marrubium crassidens）、マルビウム・クレティカム（Marrubium creticum）、マルビウム・クリスパム（Marrubium crispum）、マルビウム・カネアテュム（Marrubium cuneatum）、マルビウム・シレネウム（Marrubium cylleneum）、マルビウム・デパウペラタム（Marrubium depauperatum）、マルビウム・デザティ（Marrubium deserti）、マルビウム・デュアベンセ（Marrubium duabense）、マルビウム・エキナタム（Marrubium echinatum）、マルビウム・エリオセファラム（Marrubium eriocephalum）、マルビウム・エリオスタチュム（Marrubium eriostachyum）、マルビウム・ファウシデンス（Marrubium faucidens）、マルビウム・フラバム（Marrubium flavum）、マルビウム・フェキサム（Marrubium flexuosum）、マルビウム・フォンティアナム（Marrubium fontianum）、マルビウム・フライワルドスカナム（Marrubium friwaldskyanum）、マルビウム・ガモドン（Marrubium gamodon）、マルビウム・ゲルマニカム（Marrubium germanicum）、マルビウム・グレコマエフォリウム（Marrubium glechomaefolium）、マルビウム・グロボサム（Marrubium globosum）、マルビウム・ゴクスチャイカム（Marrubium goktschaicum）、マルビウム・ガイリエルモンディイ（Marrubium guilliermondii）、マルビウム・ハマタム（Marrubium hamatum）、マルビウム・ペルモニス（Marrubium hermonis）、マルビウム・ヘテロクラダム（Marrubium heterocladum）、マルビウム・ヘテロドン（Marrubium heterodon）、マルビウム・ヒエラポリタニウム（Marrubium hierapolitanum）、マルビウム・ヒルスタム（Marrubium hirsutum）、マルビウム・ヒスパニカム（Marrubium hispanicum）、マルビウム・ヒュンベルティイ（Marrubium humbertii）、マルビウム・ヒュミレ（Marrubium humile）、マルビウム・ハイパロカム（Marrubium hyperleucum）、マルビウム・インカナム（Marrubium incanum）、マルビウム・インシサム（Marrubium incisum）、マルビウム・インディカ（Marrubium indicum）、マルビウム・コシイ（Marrubium kotschyi）、マルビウム・カルディカム（Marrubium kurdicum）、マルビウム・カスネゾイ（Marrubium kusnezowii）、マルビウム・ラミオイデス（Marrubium lamioides）、マルビウム・ラナタム（Marrubium lanatum）、マルビウム・ラリカム（Marrubium laricum）、マルビウム・ラウリフォリウム（Marrubium laurifolium）、マルビウム・レオニウロイデス（Marrubium leonuroides）、マルビウム・リバノティカム（Marrubium libanoticum）、マルビウム・リタディエレイ（Marrubium litardierei）、マルビウム・ラテセンス（Marrubium lutescens）、マルビウム・マクロドン（Marrubium macrodon）、マルビウム・マルコルミアニウム（Marrubium malcolmianum）、マルビウム・マルビアスタラム（Marrubium marrubiastrum）、マルビウム・ミクランチウム（Marrubium micranthum）、マルビウム・ミクロフィリラム（Marrubium microphyllum）、マルビウム・モリシマム（Marrubium mollissimum）、マルビウム・モンテネグリニウム（Marrubium montenegrinum）、マルビウム・マルチブラクテアチウム（Marrubium multibracteatum）、マルビウム・ナナム（Marrubium nanum）、マルビウム・ニグラム（Marrubium nigrum）、マルビウム・ノエアナム（Marrubium noeanum）、マルビウム・オドラチシマム（Marrubium odoratissimum）、マルビウム・オリエンタレ（Marrubium orientale）、マルビウム・パリダム（Marrubium pallidum）、マルビウム・パニカラタム（Marrubium paniculatum）、マルビウム・パンノニカム（Marrubium pannonicum）、マルビウム・パルナスシカム（Marrubium parnassicum）、マルビウム・パルビフロラム（Marrubium parviflorum）、マルビウム・ポウシフロラム（Marrubium pauciflorum）、マルビウム・ペレグリナム（Marrubium peregrinum）、マルビウム・ペルシカム（Marrubium persicum）、マルビウム・ペスタロザエ（Marrubium pestalozzae）、マルビウム・プリカタム（Marrubium plicatum）、マルビウム・プラモサム（Marrubium plumosum）、マルビウム・ポリオドン（Marrubium polyodon）、マルビウム・プラエコックス（Marrubium praecox）、マルビウム・プロセラム（Marrubium procerum）、マルビウム・プロピンキュウム（Marrubium propinquum）、マルビウム・ペスドアリッサム（Marrubium pseudo-alyssum）、マルビウム・ペスドジクタムナス（Marrubium pseudo-dictamnus）、マルビウム・プルプレウム（Marrubium  purpureum）、マルビウム・ラヂアタム（Marrubium radiatum）、マルビウム・レモタム（Marrubium remotum）、マルビウム・ロタンディフォリウム（Marrubium   rotundifolium）、マルビウム・ラブラム（Marrubium rubrum）、マルビウム・ラゴサム（Marrubium rugosum）、マルビウム・スクロファラリアエフォリウム（Marrubium scrophulariaefolium）、マルビウム・セゴブリセンセ（Marrubium  segobricense）、マルビウム・セリセウム（Marrubium sericeum）、マルビウム・セタセウム（Marrubium setaceum）、マルビウム・セヴェルゾビ（Marrubium sewerzowi）、マルビウム・サフルティコサム（Marrubium suffruticosum）、マルビウム・サピナム（Marrubium supinum）、マルビウム・セサラム（Marrubium thessalum）、マルビウム・トウイニ（Marrubium thouini）、マルビウム・トラキティカム（Marrubium trachyticum）、マルビウム・タルケビクジイ（Marrubium turkeviczii）、マルビウム・ウンシナタム（Marrubium uncinatum）、マルビウム・アンダラタム（Marrubium undulatum）、マルビウム・バイランティイ（Marrubium vaillantii）、マルビウム・バネンセ（Marrubium vanense）、マルビウム・ベルチナム（Marrubium velutinum）、マルビウム・ビレスセンス（Marrubium virescens）、マルビウム・バルカニカム（Marrubium vulcanicum）、ニガハッカあるいは別名ホワハウンド（Marrubium vulgare）、マルビウム・ベルネリ（Marrubium werneri）、マルビウム・ウイルコミイ（Marrubium wilkommi）、シソ科メハジキ属のコモン・マザーワート（Leonurus cardiaca）、シソ科カエンキセワタ属のカエンキセワタ（Leonotis leonurus）などが挙げられる。  【００１３】
コレステリルベンゾエート（ＣＡＳ：６０４−３２−０）を含む動物としては、ヨウジウオ科のヨウジウオ（Syngnathus acus）などが挙げられる。  【００１４】
ウガフェリン（ＣＡＳ：６３０２６−５８−４）を含む植物としては、セリ科オオウイキョウ属のフェルラ・アリゴニイ（Ferula arrigonii）、フェルラ・アサホエティダ（Ferula assafoetida）、オオウイキョウ（Ferula communis）、フェルラ・インボルクラタ（Ferula involucrata）、フェルラ・クヒスタニカ（Ferula kuhistanica）、フェルラ・ラピドサ（Ferula lapidosa）、フェルラ・ラティピッナ（Ferula latipinna）、フェルラ・ロコグラファ（Ferula leucographa）、フェルラ・リンキ（Ferula linkii）、フェルラ・シナイカ（Ferula sinaica）、フェルラ・スンガリカ（Ferula soongarcia）、フェルラ・テニエスタ（Ferula tenuiesta）、フェルラ・ウガミカ（Ferula ugamica）などが挙げられる。  【００１５】
ラピフェリン（ＣＡＳ：８６９９２−４１−８）を含む植物としては、セリ科オオウイキョウ属のフェルラ・アリゴニイ（Ferula arrigonii）、フェルラ・アサホエティダ（Ferula assafoetida）、オオウイキョウ（Ferula communis）、フェルラ・インボルクラタ（Ferula involucrata）、フェルラ・クヒスタニカ（Ferula kuhistanica）、フェルラ・ラピドサ（Ferula lapidosa）、フェルラ・ラティピッナ（Ferula latipinna）、フェルラ・ロコグラファ（Ferula leucographa）、フェルラ・リンキ（Ferula linkii）、フェルラ・シナイカ（Ferula sinaica）、フェルラ・スンガリカ（Ferula soongarcia）、フェルラ・テニエスタ（Ferula tenuiesta）、フェルラ・ウガミカ（Ferula ugamica）などが挙げられる。  【００１６】
ゲラニルアセタート（ＣＡＳ：１０５−８７−３）を含む植物としては、マツ科モミ属のオオシラビソ（Abies mariesii）、キク科カッコウアザミ属のオオカッコウアザミ（Ageratum houstonianum）、キク科オケラ属のホソバオケラ（Atractylodes lancea）、キク科バッカリス属のバッカリス・ドラカンカリフォリア（Baccharis  dracunculifollia）、バッカリス・ラティフォリア（Baccharis  latifolia）、バッカリス・サリシフォリア（Baccharis  salicifollia）、キク科ヒナギク属のヒナギク（Bellis perennis）、キク科キンセンカ属のトウキンセンカ（Calendula officinalis）、セリ科キャラウェー属のヒメウイキョウ（Carum carvi）、イワヅタ科イワズタ属のスリコギツタ（Caulerpa racemosa）、ナス科キチョウジ属のヤコウカ（Cestrum nocturnum）、セリ科カンギウム属のミントウジン（Changium smyrnioides）、ミカン科ミカン属のライム（Citrus aurantifolia）、ダイダイ（Citrus aurantium）、ベルガモット（Citrus bergamia）、ブンタン（Citrus grandis）、ハッサク（Citrus hassaku）、イヨカン（Citrus iyo）、ユズ（Citrus junos）、キシュウミカン（Citrus kinokuni）、レモン（Citrus limon）、シトロン（Citrus medica）、ナツミカン（Citrus natsudaidai）、グレープフルーツ（Citrus paradise）、ポンカン（Citrus reticulate）、スイートオレンジ（Citrus sinensis）、カボス（Citrus sphaerocarpa）、スダチ（Citrus sudachi）、サンポウカン（Citrus sulcata）、タチバナ（Citrus tachibana）、ウンシュウミカン（Citrus unshiu）、ミル科ミル属のコディウム・トメントサム（Codium tomentosum）、セリ科クミン属のクミン（Cuminum cyminum）、イネ科オガルカヤ属の（Cymbopogon caesius）、レモングラス（Cymbopogon citratus）、シムボポゴン・カシアナス（Cymbopogon khasianus）、ジャワシトロネラソウ（Cymbopogon winterianus）、セリ科ニンジン属のニンジン（Daucus carota）、シソ科ムシャリンドウ属のドラコセファラム・コツシュイ（Dracocephalum kotschyi）、フトモモ科ユーカリ属のユーカリプタス・ウロフィラ（Eucalyptus urophylla）、キク科ムギワラギク属のムギワラギク（Helichrysum bracteatum）、ドクダミ科ドクダミ属のドクダミ（Houttuynia cordata）、シキミ科シキミ属のイリシウム・グリフィチ（Illicium griffithii）、イリシウム・メリリアナム（Illicium merrillianum）、ヒノキ科ネズミサシ属のジュニペラス・フォルモサナ（Juniperus formosana）、ネズ（Juniperus rigida）、フトモモ科ネズモドキ属のレプトスペルム・ジャバニカム（Leptospermum javanicum）、セリ科マルバトウキ属のリガスティカム・マテリナ（Ligusticum mutellina）、クマツヅラ科イワダレソウ属のリッピア・ジャバニカ（Lippia javanica）、シソ科ニガハッカ属のニガハッカ（Marrubium vulgare）、シソ科ハナハッカ属のオリガニナム・ロタンディフォリウム（Origanum rotundifolium）、フウロソウ科テンジクアオイ属のニオイテンジクアオイ（Pelargonium graveolens）、クスノキ科タイワンイヌグス属のホーベ・ポロサ（Phoebe porosa）、ツツジ科ツツジ属のロドデンドロン・プリマレフロラム（Rhododendron primulaeflorum）、バラ科バラ属のセンティフォリアバラ（Rosa centifolia）、シソ科アキギリ属のサルビア・クレベカンディ（Salvia clevelandii）、サルビア・フラクチコサ（Salvia fructicosa）、セージ（Salvia officinalis）、オニサルビア（Salvia sclarea）、キク科マンジュギク属のマリーゴールド（Tagetes erecta）、シクンシ科モモタマナ属のテルミナリア・ベンゾエ（Terminalia bentzoe）、ヒノキ科クロベ属のチュジャ・コライエンシス（Thuja koraiensis）、シソ科イブキジャコウソウ属のタイマス・シピレアス（Thymus sipyleus）、タイマス・スラシカス（Thymus thracicus）、タイム（Thymus vulgaris）、タイマス・ジギス（Thymus zygis）、ミカン科サンショウ属のザンソキシラム・バンゲナム（Zanthoxylum bungeanum）、イヌザンショウ（Zanthoxylum schinifolium）などが挙げられる。  【００１７】
ネロリドール（ＣＡＳ：７２１２−４４−４）を含む植物としては、キク科ノコギリソウ属のノコギリソウ（Achillea alpine）、キバナノコギリソウ（Achillea filipendulina）、アチレア・リグスティカ（Achillea ligustica）、セイヨウノコギリソウ（Achillea milleifolium）、ジャコウノコギリソウ（Achillea moschata）、オオバナノコギリソウ（Achillea ptarmica）、ヒメノコギリソウ（Achillea tomentosa）、キク科カッコウアザミ属のカッコウアザミ（Ageratum conyzoides）、オオカッコウアザミ（Ageratum houstonianum）、ショウガ科アモマム属のベンガルカルダモン（Amomum aromaticum）、ショウズク（Amomum cardamomum）、グレーターカルダモン（Amomum subulatum）、シュクシャ（Amomum xanthioides）、ショウガ（Amomum zingiber）、マメ科クロバナエンジュ属のクロバナエンジュ（Amorpha fruticosa）、ツバキ科ツバキ属のチャ（Camellia sinensis）、マメ科ナタマメ属のタチナタマメ（Canavalia ensiformis）、ナタマメ（Canavalia gladiata）、ハマナタマメ（Canavalia maritima）、ナス科キチョウジ属のキチョウジ（Cestrum aurantiacum）、ヤコウカ（Cestrum nocturnum）、ベニチョウジ（Cestrumpurpureum）、ミカン科ミカン属のライム（Citrus aurantifolia）、ダイダイ（Citrus aurantium）、ベルガモット（Citrus bergamia）、ブンタン（Citrus grandis）、ハッサク（Citrus hassaku）、イヨカン（Citrus iyo）、ユズ（Citrus junos）、キシュウミカン（Citrus kinokuni）、レモン（Citrus limon）、シトロン（Citrus medica）、ナツミカン（Citrus natsudaidai）、グレープフルーツ（Citrus paradise）、ポンカン（Citrus reticulate）、スイートオレンジ（Citrus sinensis）、カボス（Citrus sphaerocarpa）、スダチ（Citrus sudachi）、サンポウカン（Citrus sulcata）、タチバナ（Citrus tachibana）、ウンシュウミカン（Citrus unshiu）、トウダイグサ科ハズ属のクロトン・アウブレビレイ（Croton aubrevillei）、カスカリラノキ（Croton eluteria）、アカメガシワ（Croton japonicum）、ナンキンハゼ（Croton sebiferus）、ハズ（Croton tiglium）、クロトン・ザムベシカス（Croton zambesicus）、セリ科ニンジン属のニンジン（Daucus carota）、キワタ科ドリアン属のドリアン（Durio zibethinus）、シソ科ナギナタコウジュ属のナギナタコウジュ（Elsholtzia ciliata）、エルショルトチア・ラガロサ（Elsholtzia rugulosa）、ムクロジ科リュウガン属のリュウガン（Euphoria longan）、イチョウ科イチョウ属のイチョウ（Ginkgo biloba）、ヒノキ科ネズミサシ属のセイヨウネズ（Juniperus communis）、ハイネズ（Juniperus conferta）、ジュニペラス・フォルモサナ（Juniperus formosana）、ネズ（Juniperus rigida）、セリ科マルバトウキ属のリガスティカム・マテリナ（Ligusticum mutellina）、クマツヅラ科イワダレソウ属のリッピア・アルバ（Lippia alba）、ボウシュウボク（Lippia citriodora）、リッピア・ジャバニカ（Lippia javanica ）、イワダレソウ（Lippia nodiflora）、リッピア・マルタフロラ（Lippia maltuflora）、シソ科ハッカ属のベルガモットミント（Mentha aquatica）、ハッカ（Mentha arvensis）、メンタ・カナデンシス（Mentha canadensis）、ホースミント（Mentha longifolia）、セイヨウハッカ（Mentha piperita）、ペニローヤルミント（Mentha pulegium）、ミドリハッカ（Mentha spicata）、シソ科ミクロメリア属のミクロメリア・カルミネア（Micromeria carminea）、アカテツ科ミマソプス属のミマソプス・エレンギ（Mimusops elengi）、シソ科メボウキ属のメボウキ（Ocimum basilicum）、カンホールバジル（Ocimum kilimandoscharicum）、カミメボウキ（Ocimum tenuiflorum）、セリ科セリ属のセリ（Oenanthe javanica）、タコノキ科タコノキ属（Pandanus boninensis）、アダン（Pandanus tectorius）、コショウ科コショウ属のコルドンキージョ（Piper aduncum）、キンマ（Piper betle）、フトウカズラ（Piper kadsura）、インドナガコショウ（Piper longum）、カバ（Piper methysticum）、コショウ（Piper nigrum）、ジャワナガコショウ（Piper retrofractum）、スベリヒユ科スベリヒユ属のマツバボタン（Portulaca grandiflora）、スベリヒユ（Portulaca oleracea）、シソ科アキギリ属のサルビア・クレベカンディ（Salvia clevelandii）、サルビア・クリプタンサ（Salvia cryptantha）、サルビア・フラクチコサ（Salvia fructicosa）、セージ（Salvia officinalis）、オニサルビア（Salvia sclarea）、その他、精油の原料となる植物などが挙げられる。  【００１８】
ジヒドロジャスモン（ＣＡＳ：１１２８−０８−０１）を含む植物としては、ミカン科ミカン属のライム（Citrus aurantifolia）、ダイダイ（Citrus aurantium）、ベルガモット（Citrus bergamia）、ブンタン（Citrus grandis）、ハッサク（Citrus hassaku）、イヨカン（Citrus iyo）、ユズ（Citrus junos）、キシュウミカン（Citrus kinokuni）、レモン（Citrus limon）、シトロン（Citrus medica）、ナツミカン（Citrus natsudaidai）、グレープフルーツ（Citrus paradise）、ポンカン（Citrus reticulate）、スイートオレンジ（Citrus sinensis）、カボス（Citrus sphaerocarpa）、スダチ（Citrus sudachi）、サンポウカン（Citrus sulcata）、タチバナ（Citrus tachibana）、ウンシュウミカン（Citrus unshiu）、キョウチクトウ科カリッサ属のカリッサ（Carissa carandas）、オオバナカリッサ（Carissa grandiflora）、その他、精油の原料となる植物などが挙げられる。  【００１９】
カルバクリルアセタート（ＣＡＳ：６３８０−２８−５）を含む植物としては、セリ科クミン属のクミン（Cuminum cyminum）、クマツヅラ科イワダレソウ属のボウシュウボク（Lippia citriodora）、リッピア・ジャバニカ（Lippia javanica ）、イワダレソウ（Lippia nodiflora）、リッピア・マルタフロラ（Lippia maltuflora）、シソ科イブキジャコウソウ属のタイマス・デカッサタス（Thymus decassatus）、タイマス・シピレアス（Thymus sipyleus）、タイマス・スラシカス（Thymus thracicus）、タイム（Thymus vulgaris）、タイマス・ジギス（Thymus zygis）、オミナエシ科カノコソウ属のカノコソウ（Valeriana fauriei）、ツルカノコソウ（Valeriana flaccidissima）、セイヨウカノコソウ（Valeriana officinalis）などが挙げられる。  【００２０】
グアイズレン（ＣＡＳ：４８９−８４−９）を含む植物としてはキク科ヨモギ属のニガヨモギ（Artemisia absinthium）、カワラニンジン（Artemisia apiacea）、カワラヨモギ（Artemisia capillaris）、タラゴン（Artemisia dracunculus）、ミブヨモギ（Artemisia maritime）、ヨモギ（Artemisia princeps）、ヒノキ科マオウヒバ属のブラックピネ（Callitris calcarata）、ライトピネ（Callitris cupressiformis）、バタビアシナモン（Cinnamomum burmanni）、クスノキ（Cinnamomum camphora）、カシア（Cinnamomum cassia）、ヤブニッケイ（Cinnamomum japonica）、コスターム（Cinnamomum parthenoxylon）、ニッケイ（Cinnamomum seiboldii）、セイロンニッケイ（Cinnamomum verum）、フトモモ科フトモモ属のユゲニア・バンダレニシス（Eugenia banderensis）、フウロソウ科フウロソウ属のフウロソウ（Geranium macrorrhizum）、ゲンノショウコ（Geranium nepalense）、フジマツモ科ソゾ属のラレンシア・オブタス（Laurencia obtuse）、キク科シカギク属のカミツレ（Matricaria chamomilla）、アオイ科ヤノネボンテンカ属のパボニア・オドラタ（Pavonia odorata）などが挙げられる。【００２１】
ジヒドロコニフェリルアルコール（ＣＡＳ：２３０５−１３−７）を含む植物としては、マツ科マツ属のアカマツ（Pinus densiflora）、チョウセンゴヨウ（Pinus koraiensis）、ハイマツ（Pinus pumila）、ヨーロッパアカマツ（Pinus sylvestris）、マツ科イヌカラマツ属のイヌカラマツ（Pseudolarix  amabilis）などが挙げられる。  【００２２】
ステビオシド（ＣＡＳ：５７８１７−８９−７）を含む植物としては、キク科ステビア属のアマハステビア（Stevia rebaudiana）などが挙げられる。  【００２３】
ＤＬ−アルファ-ピレン（CAS：２４３７−９５−８）を含む植物としては、フトモモ科ユーカリ属ナガバユーカリ（Eucalyptus amygdalina）、ギンマルバユーカリ（Eucalyptus cinera）、ユーカリ（Eucalyptus globulus）、ヤナギユーカリ（Eucalyptus leucoxylon）、セイタカユーカリ（Eucalyptus regnans）、その他、精油の原料となる植物などが挙げられる。【００２４】
ベルベナリン（ＣＡＳ：５４８−３７−８）は別名コルニン（Cornin）と呼ばれることもある化合物である。ベルベナリンを含む植物としては、ミズキ科ミズキ属のヒマラヤヤマボウシ（Cornus capitata）、ゴゼンタチバナ（Cornus canadensis）、ミズキ（Cornus controversa）、ハナミズキ（Cornus florida）、ヤマボウシ（Cornus kousa）、クマノミズキ（Cornus macrophylla）、セイヨウサンシュユ（Cornus mas）、サンシュユ（Cornus officinalis）、ゴマノハグサ科イワブクロ属のイワブクロ（Pentstemon frutescens）、ペンステモン・グロキニオアイデス（Pentstemon  gloxinioides）、ペンステモン・ニティダス（Pentstemon nitidus）、クマツヅラ科クマツヅラ属のビジョザクラ（Verbena hybrida）、クマツヅラ（Verbena officinalis）、バーベナ・ペルビアナ（Verbena peruviana）、シュッコンバーベナ（Verbena rigida）、バーベナ・ストリクタ（Verbena stricta）、ヒメビジョザクラ（Verbena tenera）などが挙げられる。  【００２５】
１−ヘプタコサノール（ＣＡＳ：２００４−３９−９）を含む植物としては、リュウゼツラン科リュウゼツラン属のアオノリュウゼツラン（Agave americana）、カンタラアサ（Agave cantala）、オウヒササノユキ（Agave filifera）、ヘネケン（Agave fourcroydes）、ライジン（Agave potatorum）、サイザルアサ（Agave sisalana）、ササノユキ（Agave victoriae-reginae）、ウリ科スイカ属のコロシントウリ（Citrullus colocynthis）、スイカ（Citrullus lanatus）、マメ科ヌスビトハギ属のデスモジウム・ラキシフロラム（Desmodium laxiflorum）、フジカンゾウ（Desmodium oldhamii）、アレチヌスビトハギ（Desmodium paniculatum）、ヌスビトハギ（Desmodium padocarpum）、クワ科イチジク属のオオバイチジク（Ficus auriculata）、カンテンイタビ（Ficus awkeotsang）、ベルガルボダイジュ（Ficus bengalensis）、シダレガジュマル（Ficus benjamina）、イチジク（Ficus carica）、コバンボダイジュ（Ficus diversifolia）、インドゴムノキ（Ficus elastoca）、イヌワビ（Ficus erecta）、カシワバゴムノキ（Ficus lyrata）、ガジュマル（Ficus microcarpa）、イタビカズラ（Ficus oxyphylla）、オオイタビ（Ficus pumila）、インドボダイジュ（Ficus religiosa）、アコウ（Ficus superba）、エジプトイチジク（Ficus sycomorus）、キク科メナモミ属のシゲスベッキア・グラブレセンス（Siegesbeckia glabrescens）、メナモミ（Siegesbeckia orientalis）などが挙げられる。  【００２６】
４−ヒドロキシクマリン（ＣＡＳ：１０７６−３８−６）を含む微生物としては、アオカビ属のペニシリウム・カマンベルティ（Penicillium camembertii）、ペニシリウム・ジェンセニ（Penicillium jensenii）、ペニシリウム・ノタタム（Penicillium notatum）、ペニシリウム・ロックフォルティ（Penicillium roquefortii）などが挙げられる。４−ヒドロキシクマリンを含む植物としては、マメモドキ科アゲラエア属のアゲラエア・ニチダ（Agelaea nitida）、アゲラエア・オブリグア（Agelea obligua）、アゲラエア・トリフォリア（Agelea trifolia）、マメモドキ科ビルソカルパス属のビルソカルパス・コシネアス（Byrsocarpus coccineus）、マメモドキ科コネスチス属のコネスチス・コルニカラタス（Cnestis corniculatus）、コネスチス・フェルギネア（Cnestis ferruginea）、セリ科オオウイキョウ属のフェルラ・アリゴニイ（Ferula arrigonii）、フェルラ・アサホエティダ（Ferula assafoetida）、オオウイキョウ（Ferula  communis）、フェルラ・インボルクラタ（Ferula involucrata）、フェルラ・クヒスタニカ（Ferula kuhistanica）、フェルラ・ラピドサ（Ferula lapidosa）、フェルラ・ラティピッナ（Ferula latipinna）、フェルラ・ロコグラファ（Ferula leucographa）、フェルラ・リンキ（Ferula linkii）、フェルラ・シナイカ（Ferula sinaica）、フェルラ・スンガリカ（Ferula soongarcia）、フェルラ・テニエスタ（Ferula tenuiesta）、フェルラ・ウガミカ（Ferula ugamica）、ミカン科ヘンルーダ属のコヘンルーダ（Ruta chalepensis）、ヘンルーダ（Ruta graveolens）などが挙げられる。  【００２７】
コール酸（ＣＡＳ：８１−２５−４）は 、多くの哺乳類の胆汁に含有されている。  【００２８】
オレイン酸コレステリル（ＣＡＳ：３０３−４３−５）を含む微生物としては、マダニ（Dermacentor andersoni）などが挙げられる。  【００２９】
フラキシン（ＣＡＳ：５２４−３０−１）を含む植物としては、カエデ科カエデ属のカラコギカエデ（Acer aidzuense）、オオモミジ（Acer amoenum）、アサノハカエデ（Acer argutum）、トウカエデ（Acer buergerianum）、コブカエデ（Acer campestre）、チドリノキ（Acer carpinifolium）、ウリカエデ（Acer crataegifolium）、オニモミジ（Acer diabolicum）、マルバカエデ（Acer distylum）、チョウセンカラコギカエデ（Acer ginnala）、ハウチワカエデ（Acer japonica）、イダヤカエデ（Acer mono）、トネリコバノカエデ（Acer negundo）、ブラック・メープル（Acer nigrum）、メグスリノキ（Acer nikoense）、テツカエデ（Acer nipponicum）、イロハモミジ（Acer palmatum）、ヨーロッパカエデ（Acer platanoides）、セイヨウカジカエデ（Acer pseudoplatanus）、ハナノキ（Acer pycnanthum）、ウリハダカエデ（Acer rufinerve）、サトウカエデ（Acer saccharum）、コハウチワカエデ（Acer sieboldianum）、ミネカエデ（Acer tschonoskii）、オガラバナ（Acer ukurunduense）、トノチキ科トチノキ属のシナトチノキ（Aesculus chinensis）、セイヨウトチノキ（Aesculus hippocastanum）、トチノキ（Aesculus turbinate）、モクセイ科トネリコ属のアメリカトネリコ（Fraxinus americana）、シナトネリコ（Fraxinus chinensis）、セイヨウトネリコ（Fraxinus excelsior）、シマトネリコ（Fraxinus griffithii）、フラキナス・ヒンコフィラ（Fraxinus hynchophylla）、トネリコ（Fraxinus japonica）、ケアオダモ（Fraxinus lanuginose）、ヤチダモ（Fraxinus mandshurica）、マンナノキ（Fraxinus ornus）、フラキナス・オキシフィラ（Fraxinus oxyphylla）、シオジ（Fraxinus spaethiana）、マルバアオダモ（Fraxinus sieboldiana）、ツツジ科スノキ属のローブッシュ・ブルーベリー（Vaccinium angustifolium）、ラビットアイ・ブルーベリー（Vaccinium ashei）、ハイブッシュ・ブルーベリー（Vaccinium australe）、シャシャンボ（Vaccinium bracteatum）、ウスノキ（Vaccinium hirtum）、アクシバ（Vaccinium japonicum）、クランベリー（Vaccinium macrocarpon）、ビルベリー（Vaccinium myrtillus）、ナツハゼ（Vaccinium oldhami）、ツルコケモモ（Vaccinium oxycoccus）、イワツツジ（Vaccinium praestans）、スノキ（Vaccinium smallii）、クロマメノキ（Vaccinium uliginosumu）、コケモモ（Vaccinium vitis-idaea）、スイカズラ科タニウツギ属のオオベニウツギ（Weigela florida）などが挙げられる。  【００３０】
ベルガプトール（ＣＡＳ：４８６−６０−２）を含む植物としては、ミカン科ミカン属のライム（Citrus aurantifolia）、ダイダイ（Citrus aurantium）、ベルガモット（Citrus bergamia）、ブンタン（Citrus grandis）、ハッサク（Citrus hassaku）、イヨカン（Citrus iyo）、ユズ（Citrus junos）、キシュウミカン（Citrus kinokuni）、レモン（Citrus limon）、シトロン（Citrus medica）、ナツミカン（Citrus natsudaidai）、グレープフルーツ（Citrus paradise）、ポンカン（Citrus reticulate）、スイートオレンジ（Citrus sinensis）、カボス（Citrus sphaerocarpa）、スダチ（Citrus sudachi）、サンポウカン（Citrus sulcata）、タチバナ（Citrus tachibana）、ウンシュウミカン（Citrus unshiu）、クワ科ドルステニア属のドルステニア・コントラジェルバ（Dorstenia contrajerva）、ドルステニア・エリプティカ（Dorstenia elliptica）、クワ科イチジク属のオオバイチジク（Ficus auriculata）、カンテンイタビ（Ficus awkeotsang）、ベルガルボダイジュ（Ficus bengalensis）、シダレガジュマル（Ficus benjamina）、イチジク（Ficus carica）、コバンボダイジュ（Ficus diversifolia）、インドゴムノキ（Ficus elastoca）、イヌワビ（Ficus erecta）、カシワバゴムノキ（Ficus lyrata）、ガジュマル（Ficus microcarpa）、イタビカズラ（Ficus oxyphylla）、オオイタビ（Ficus pumila）、インドボダイジュ（Ficus religiosa）、アコウ（Ficus superba）、エジプトイチジク（Ficus sycomorus）、セリ科ノトプテリギウム属のノトプテリギウム・フランチェティ（notopterygium franchetii）、キョウカツ（notopterygium incisium）、ノトプテリギウム・リゾメス（notopterygium rhizomes）などが挙げられる。  【００３１】
本発明のビタミンＣトランスポーター産生促進剤には、ホオノキ、アーモンド、アマチャ、グレープフルーツ、ジャノヒゲ、セイヨウキズタ、サボンソウ、ドクダミ、カミツレ、アセンヤク、ハマメリス、マグワ、コメヌカ、スギナなどが使用可能である。これらは単独で１種類用いてもよく、また、２種類以上を組み合わせて用いることもできる。また、これらの植物は、その粉砕物、その抽出物、あるいは抽出加水分解物のいずれも使用できる。  【００３２】
ホオノキ（Magnolia obovata）とは、モクレン科モクレン属の落葉高木で北海道から九州及び中国に分布し、山地に生え、庭園樹、公園樹建築剤などに植栽されているものである。学名Magnolia hypoleucaを指すこともある。薬用部位の樹皮にはアルカロイドのマグノクラリン、マグノフロリン、リグナン類のマグノロール、ホオノキオールなどが含まれ、腹痛、下痢、吐き気などの症状緩和に用いられてきたものである。  【００３３】
アーモンド（Prunus dulcis）とは、バラ科サクラ属の落葉高木で、生育は夏季雨の少ない地域で温暖な風土に適し、現在、地中海沿岸諸国とアメリカカリフォルニア州が主産地とされている植物である。学名Prunus amygdalus、Prunus communis、Amygdalus dulcis、Amygdalus communis、Amygdalus sativusを指すこともある。種子を圧搾して得られた油は乳化剤、マッサージオイル、香料、リキュールの製造、製菓などに利用されてきた。スイートアーモンドは青酸配糖体であるアミグダリンを含まないため、生食が可能で、バター、塩などで味付けしてナッツとして利用されてきた。  【００３４】
アマチャ（Hydrangea macrophylla）とは、ユキノシタ科アジサイ属の落葉低木で、庭木や薬用として栽培されてきた植物である。植物体に甘味を呈し、砂糖の代用として利用されてきた。甘味成分としてフィロズルチン、イソフィロズルチンが明らかになっており、乾燥葉は甘茶として飲用されてきた。  【００３５】
グレープフルーツ（Citrus paradise）とは、ミカン科ミカン属の植物で、暖地で栽培される常緑高木である。果肉は柔らかく、多汁で、クエン酸１〜２％を含みやや酸味が強く、リモニンにより苦味があり、大きさはナツミカン程度ある。肉色は品種により異なるが黄色から紅色まである。紅色はリコピンによる。利用は、生食やジュースなどにするが、大半は冷凍濃縮果汁に加工される。  【００３６】
ジャノヒゲ（Ophiopogon jponicus）とは、ハナヤスリ科ハナヤスリ属のシダ植物で、北海道から九州及び中国、朝鮮半島に分布する植物である。別名リュウノヒゲ、根の膨大部はバクモンドウと呼ばれ、バクモンドウは滋養強壮、鎮咳、去痰などに利用されてきたものである。  【００３７】
セイヨウキズタ（Hedera helix）とは、ウコギ科キズタ属で、ヨーロッパ、北アフリカに幅広く分布するつる植物である。別名イングリッシュ・アイビーなどと呼ばれることもある。葉は結石症、黄疸などの治療に用いられてきた。  【００３８】
サボンソウ（Saponiria officinalis）とは、ナデシコ科サボンソウ属の植物で、ヨーロッパを原産とする多年草である。別名コモン・ソープワートと呼ばれることもある。また、学名Silence saponaliaと表すこともある。薬用としては、葉や根茎を使用し湿疹などの皮膚病に用いられてきた。ヨーロッパでは古くから石鹸の代用として利用されてきた。  【００３９】
ドクダミ（Houttuynia cordata）とは、ドクダミ科ドクダミ属の植物で、本州、四国、九州、沖縄、及び台湾、中国、ヒマラヤ、ジャワなどに分布する多年草である。ドクダミの地上部の乾燥物は解熱、解毒、利尿、湿疹、消炎薬として用いられてきた。特有の臭気はララリンアルデヒドやカプリンアルデヒドなどのアルデヒド類によることが知られている。アジアでは薬用として利用されているが、欧米では観賞用として栽培されることもある。  【００４０】
カミツレ（Matricaria chamomilla）とは、ヨーロッパを原産とするキク科シカギク属の1年草の植物である。別名カミルル、カミレ、ゲルマンカミツレ、ドイツカミツレ、カモミールと呼ぶこともある。薬用を目的としてヨーロッパ各地をはじめ温暖な地帯で栽培され、薬用部位の頭花は、発汗、駆虫の目的に使用され、またカミツレから採られた精油はリキュールやタバコの香付け、香水、シャンプーに利用されてきた。  【００４１】
アセンヤク（uncalia gambir）とは、アカネ科カギカズラ属の植物で、マレー半島、スマトラ、ボルネイなどに分布し、東南アジア各地で栽培されるつる性常緑低木である。薬用部位として、葉や小枝を使用し、便血、尿血、血痢の緩和を目的に用いられている。また口内清涼剤の原料としても用いられている。同様の目的としてアセンヤクノキ（Acacia catechu）の心材を用いることもある。  【００４２】
ハマメリス（Hamamelis virginiana）とは、北米東部から南部が原産とされるマンヤク科マンヤク属の植物である。葉は薬用茶としてインディアンによって利用されてきた歴史を持ち、下剤、痔疾に用いられてきた。葉や樹皮にはハマメリスタンニンが含まれることが知られている。  【００４３】
マグワ（Morus alba）とは、東アジア原産のクワ科クワ属の植物で、別名トウグワ、シログワ、ホワイトマルベリーと呼ばれることもある。漢方では若い枝を柔枝、葉を柔葉、果実を柔椹子、根の皮を柔白皮と呼んでいる。柔枝はリウマチや神経痛などに、柔葉は解熱に、柔椹子は滋養強壮、貧血、養毛に、柔白皮は消炎性利尿、鎮咳、高血圧に用いられてきた。  【００４４】
コメヌカ（Oryza sativa）とは、イネ科イネ属の植物で日本の主食である米の糠を指す。  【００４５】
スギナ（Equisetum arvense）とは、トクサ科トクサ属のシダ植物で、栄養茎はスギナ、胞子茎はツクシと呼ばれている。スギナとツクシは同じ地下茎から出ており、春先にまずツクシがのび、あとでスギナが展開する。スギナは薬用として利尿、止血、鎮咳、解熱に服用され、また、皮膚疾患、うるしかぶれなどに外用として用いられてきた。  【００４６】
上記列挙した本発明より見出された化合物を含む植物及び本発明の植物は、葉、茎、芽、花、木質部、木皮部（樹皮）等の地上部、及び、根、塊茎等の地下部、種子、樹脂等すべての部位が使用可能である。また、上記列挙した本発明により見出された化合物を含む微生物は、例えば、液体培養物、固体培養物を用いることができ、菌類の場合には、菌糸体、子実体などいずれも使用可能である。  【００４７】
上記列挙した本発明により見出された化合物を含む植物、鉱物、微生物、動物は、原体、原体の加水分解物、抽出物、抽出物の加水分解物として使用可能である。また、これらの化合物は化学合成されたものであっても使用可能である。  【００４８】
本発明の化合物を植物、鉱物、微生物、動物から得るための抽出方法としては、例えば、グレープフルーツの場合、グレープフルーツを乾燥させた乾燥物、その粉砕物、グレープフルーツを圧搾して得られる搾汁等を適当な溶媒で抽出し、場合によっては加水分解処理を施し、不溶部分を濾過等で取り除きこの液から溶媒を除去した後にカラムクロマトグラフィー等の通常の精製手段を用いて目的の化合物を得る方法が挙げられる。  【００４９】
抽出に用いる溶媒としてはメタノール、エタノール、プロパノール、１,３−ブチレングリコール等のアルコール類、エーテル、アセトン、酢酸エチル、ヘキサン、シクロヘキサン、ジクロロメタン、クロロホルム等の有機溶媒、水等が挙げられる。これらの溶媒は単独で用いても良く、また２種以上混合して用いても良い。抽出条件は、特に限定されないが、例えば、温度は５〜９５℃、好ましくは１５〜８５℃で常温でも好適に抽出することが出来る。圧力は常圧、加圧、減圧の何れでも良い。抽出時間は選定した溶媒によっても異なるが数分〜数時間であり、反復抽出、振とう抽出、抽出時間の延長等により抽出効率を高めることができる。また、加水分解を行う場合、エステラーゼのような酵素による分解や、乳酸菌や酵母等の微生物による分解、塩酸、硫酸、酢酸、リン酸、クエン酸、乳酸、酒石酸、フマル酸、リンゴ酸等の酸による分解、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム等のアルカリによる分解等が挙げられる。加水分解の条件は、特に限定されないが酵素や微生物を用いる場合は使用する酵素や微生物の至適温度、ｐHに合わせ、通常、１０〜５５℃、ｐH３〜８、５〜２４時間程度、加水分解を行う。酸やアルカリを用いて加水分解を行う場合、通常、２〜１５重量％の濃度で常温〜６０℃にて０．５〜２４時間程度、加水分解を行う。  【００５０】
これらの抽出物や抽出物の加水分解物は、必要に応じてｐH調整を行った後、凍結乾燥、減圧蒸留、減圧・真空乾燥、スプレードライ等の公知の方法で濃縮乾燥物を得ことが出来る。精製処理の方法については特に限定されないが、例えば、順相及び逆相クロマトグラフィーによる精製、再結晶、再沈殿、脱色処理、脱臭処理等を組み合わせて精製することができる。  【００５１】
上記方法により抽出されたグレープフルーツの抽出物を含め、本発明で列挙された植物の抽出物及び本発明で列挙された化合物は、細胞を用いた解析においてビタミンＣトランスポーターの発現を顕著に促進することが確認できた。このことから、本発明のビタミンＣトランスポーター産生促進剤は、ビタミンＣ吸収用組成物、美白用組成物、更にコラーゲン産生用組成物として有用である。  【００５２】
本発明における「ビタミンＣトランスポーター産生促進剤」とは、ナトリウム依存性ビタミンＣトランスポーター1型（ＳＶＣＴ１）又は２型（ＳＶＣＴ２）のいずれか一方あるいは両方の発現を高めるもの、また換言すれば、ＳＬＣ２３Ａ１、又はＳＬＣ２３Ａ２として表される遺伝子のいずれか一方あるいは両方の産物の発現を高めるものをいう。  【００５３】
本発明における「ビタミンＣ吸収促進用組成物」とは、ビタミンＣトランスポーター産生促進剤にビタミンＣあるいはその誘導体の少なくとも１種類以上を組み合わせたものをいい、経口あるいは塗布によって摂取したビタミンＣ、あるいはその誘導体の標的臓器におけるビタミンＣ濃度が高まる組成物のことを指す。  【００５４】
本発明における「ビタミンＣ誘導体」としては、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−アスコルビン酸に加え、Ｌ−アスコルビン酸モノステアレート、Ｌ−アスコルビン酸モノパルミテート、Ｌ−アスコルビン酸モノオレート等のアスコルビン酸モノアルキルエステル類、Ｌ−アスコルビン酸モノリン酸エステル、Ｌ−アスコルビン酸−２−硫酸等のアスコルビン酸モノエステル誘導体、Ｌ−アスコルビン酸ジステアレート、Ｌ−アスコルビン酸ジパルミテート、Ｌ−アスコルビン酸ジオレート等のアスコルビン酸ジアルキルエステル類、Ｌ−アスコルビン酸ジリン酸エステル等のアスコルビン酸ジエステル誘導体、Ｌ−アスコルビン酸トリステアレート、Ｌ−アスコルビン酸トリパルミテート、Ｌ−アスコルビン酸トリオレート等のアスコルビン酸トリアルキルエステル類、Ｌ−アスコルビン酸トリリン酸エステル等のアスコルビン酸トリエステル誘導体等を挙げることができるがこれらに限定されるわけではない。塩としては、アスコルビン酸と各種塩基との塩があげることができる。例えば、アルカリ金属塩（例えばナトリウム塩等）、アルカリ土類金属塩（例えば、カルシウム塩、マグネシウム塩等）等が挙げることができるがこれらに限定されるわけではない。  【００５５】
本発明における「美白用組成物」とは既成のシミ・ソバカスに対する淡色化作用を示す組成物を指す。シミ・ソバカスはメラニン生成が過剰となりその沈着によっておこる結果であるが、ビタミンＣは、メラニン生成に深く関与するチロシナーゼの阻害物質であり、また、酸化型濃色メラニンから還元型淡色メラニンにする作用を亢進させることが知られている。臨床的に既成のシミ・ソバカス等の色素沈着を改善することが報告されている（非特許文献７：臨皮１９６７，Ｖｏｌ  ２１（７），７２５−７２９）。本発明の美白用組成物は、皮膚細胞におけるビタミンＣ濃度を高めることによりビタミンＣの美白作用を増強する組成物のことを指す。本発明の美白用組成物は、本発明のビタミンＣ吸収促進用組成物を含むものであればよく、さらに、ビタミンＣ吸収促進作用を阻害しないものであれば他に添加物を添加して調整することもできる。  【００５６】
本発明における「コラーゲン産生用組成物」とは、ビタミンＣが有するコラーゲン産生促進作用をビタミンＣ濃度を高めることによって増強するものをいう。例えば、コラーゲン産生細胞が皮膚細胞の場合は、肌のうるおいを高める組成物のことを指し、コラーゲン産生細胞が骨形成細胞の場合、骨強度を増強する組成物のことを指す。本発明のコラーゲン産生用組成物は、本発明のビタミンＣ吸収促進用組成物を含むものであればよく、さらに、コラーゲン産生促進作用を阻害しないものであれば、他に添加物を添加して調整することもできる。  【００５７】
本発明における「グルコシダーゼ剤」とは、そのもの自身がグルコシダーゼ活性を有するもの、又はグルコシダーゼ活性を活性化させるものをいう。それ自身がグルコシダーゼ活性を有するものとして、例えば、酵母、ビフィズス菌、乳酸菌が挙げられ、更に、ストレプトコッカス属、アスペルギルス属、ストレプトミセス属、リゾープス属、クロストリジューム属、ストレプトミセス属などの微生物由来のグルコシダーゼも使用することが可能であるが、これらに限定されるわけではない。また、グルコシダーゼ活性を活性化させるものとして、キク科エキナセア属のエキナセア（Echinacea purpurea、Echinacea angustifolia、Echinacea pallida、Echinacea simulata、Echinacea paradoxa、Echinacea atrorubens）等を挙げることができるが（特許文献１：特開２００５−０２９５４６号公報）、これに限定されるわけではない。本発明のグルコシダーゼ剤は、上記素材をそのまま粉砕して用いることができ、また、上記素材の抽出物、抽出加水分解物を用いても良い。  【００５８】
本発明の剤あるいは組成物は、食品、医薬品、化粧品等として使用できる。食品としては、通常の食品の他、栄養補助食品、機能性食品、健康食品、特定保健用食品等として使用しても良く、例えば、ジュースのような飲料に配合することもできる。  【００５９】
医薬品においては、投与に関しては、有効成分を経口投与、非経口摂取の場合、直腸内投与、注射等の投与方法に適した固体又は液体の医薬用無毒性担体と混合して、慣用の医薬製剤の形態で投与することができる。形態としては、例えば、粉末、散剤、顆粒、錠剤、カプセル、等の固形剤、溶液剤、懸濁剤、乳剤等の液剤、凍結乾燥製剤等が挙げられ、これらの製剤は常套手段により調製することが可能である。上記の医薬品用無毒性担体としては、例えば、グルコース、乳糖、ショ糖、澱粉、マンニトール、デキストリン、脂肪酸グリセリド、ポリエチレングルコール、ヒドロキシエチレンデンプン、エチレングリコール、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、アミノ酸、ゼラチン、アルブミン、水、生理食塩水等が挙げられる。必要に応じて、安定化剤、湿潤剤、乳化剤、結合剤、等張化剤等の添加剤を適宜添加することも可能である。【００６０】
本発明の剤あるいは組成物において、選定された化合物の有効投与量は、対象者の年齢、体重、症状、投与経路、投与スケジュール、製剤形態、等により、適宜選択決定されるが、例えば、経口用の場合、ステビオシドの投与量は、1日あたり１〜５０００mgが好ましく、特に好ましくは１０〜１０００mgである。また、ビタミンＣとしては1日あたり１０〜２０００mgが好ましく、特に好ましくは１００〜１０００mgである。これを1日に数回に分けて投与しても良い。  【００６１】
本発明の剤あるいは組成物において、選定された植物、動物、鉱物、微生物の粉砕物、乾燥物、抽出物、抽出加水分解物の有効投与量は、対象者の年齢、体重、症状、投与経路、投与スケジュール、製剤形態、素材の活性の強さ等により、適宜選択決定されるが、例えば、経口用の場合、ドクダミ抽出物の投与量は、1日あたり１〜５００００mgが好ましく、特に好ましくは１０〜１０００mgである。また、ビタミンＣとしては1日あたり１０〜２０００mgが好ましく、特に好ましくは１００〜１０００mgである。これを1日に数回に分けて投与しても良い。  【００６２】
また、本発明の剤あるいは組成物は、皮膚外用として、薬事法の言う化粧品、医薬部外品、医薬品等に含まれる製品とすることができる。乳液、クリーム、ローションのようなスキンケア製品、軟膏等に用いられる。特に限定されるものではないが、その剤型は水溶液系、可溶化系、乳化系、粉末系、油液系、ゲル系、軟膏系、エアゾール系、水―油２層系、水―油―粉末３層系等、幅広い剤型を取り得る。  【００６３】
本発明の剤あるいは組成物において、選定された化合物の皮膚外用における含有量は、症状の違いにより適宜選択されるが、例えば、マルビインの場合、全重量の０．００１〜１０重量％程度、好ましくは０．０１〜２重量％である。また、ビタミンＣ誘導体として２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−アスコルビン酸を用いた場合、全重量の０．００１〜５０重量％程度、好ましくは０．１〜１０重量％である。これを１〜４回／日に分けて塗布することももちろん差し支えない。  【００６４】
本発明の剤あるいは組成物において、選定された植物の皮膚外用における含有量は、症状の違いにより適宜選択されるが、例えば、グレープフルーツ抽出物の場合、全重量の０．００１〜５０重量％程度、好ましくは０．０１〜１０重量％である。また、ビタミンＣ誘導体として２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−アスコルビン酸を用いた場合、全重量の０．００１〜５０重量％程度、好ましくは０．１〜１０重量％である。これを１〜４回／日に分けて塗布することももちろん差し支えない。
以下に実施例を挙げて、具体的に説明するが、これに限定されるものではない。
【実施例１】
【００６５】
（植物の抽出）
ホオノキ（Magnolia obovata）、アーモンド（Prunus dulcis）、アマチャ（Hydrangea macrophylla）、グレープフルーツ（Citrus paradise）、ジャノヒゲ（Ophiopogon jponicus）、セイヨウキズタ（Hedera helix）、サボンソウ（Saponiria officinalis）、ドクダミ（Houttuynia cordata）、カミツレ（Matricaria chamomilla）、アセンヤク（uncalia gambir）、ハマメリス（Hamamelis virginiana）、マグワ（Morus alba）、コメヌカ（Oryza sativa）、スギナ（Equisetum arvense）の乾燥物１０００ｇに９０％エタノール液１２Ｌ（リットル）を加え、４０℃、５時間攪拌し、ろ紙によりろ液を回収した。この操作を２回繰り返し、ろ液をエバポレーターにて減圧濃縮し、エタノール溶媒を取り除いた。その結果、ホオノキ抽出物１２０．６ｇ、アーモンド抽出物１５０．４ｇ、アマチャ抽出物１７０．９ｇ、グレープフルーツ抽出物１２７．３ｇ、ジャノヒゲ抽出物１１５．３ｇ、セイヨウキズタ抽出物２０４．８ｇ、サボンソウ抽出物１４３．７ｇ、カボチャ抽出物１３３．９ｇ、カミツレ抽出物１９３．２ｇ、アセンヤク抽出物１６８．２ｇ、ハマメリス抽出物１１２．０ｇ、マグワ抽出物１０３．８ｇ、コメヌカ抽出物１８４．７ｇ、スギナ抽出物１０２．７ｇの乾燥重量を得た。
【実施例２】
【００６６】
（肝細胞におけるビタミンＣトランスポーター（ＳＶＣＴ）の産生促進活性の測定）
ヒト肝癌由来ＨｅｐＧ２細胞（大日本製薬株式会社製）を直径３．５ｃｍのシャーレ（ファルコン社製）に５×１０３ ｃｅｌｌｓとなるように播種し、１０％の非働化したウシ胎児血清（ＦＢＳ）含有ＤＭＥＭ培養液（ギブコ社製）にて、３７℃、５％炭酸ガス存在下で３日間培養した。３日後、新しい培養液に置換し被験物質添加用の細胞とした。被験物質であるマルビイン、コレステリルベンゾエート、ウガフェリン、ラピフェリン、ゲラニルアセタート、ネロリドール、ジヒドロジャスモン、カルバクリルアセタート、グアイズレン、ジヒドロコニフェリルアルコール、ステビオシド、ＤＬ−アルファ-ピレン、ベルベナリン、１−ヘプタコサノール、４−ヒドロキシクマリン、コール酸 、オレイン酸コレステリル、フラキシン、ベルガプトールは、フナコシ社より購入した。被験物質はジメチルサルフォキシド（ＤＭＳＯ）に溶解させ、最終濃度１００μＭとなるよう被験物質添加用の細胞に添加し、６時間後、ＴＲＩＺＯＬ試薬（インビトロジェン社製）を用いて、常法に従い全ＲＮＡを回収した。  回収した全ＲＮＡは、Ｆｉｒｓｔ−ｓｔｒａｎｄｃＤＮＡ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｋｉｔ（アマシャムバイオサイエンス社製）を用いてｃＤＮＡに変換し、リアルタイムＰＣＲに供した。リアルタイムＰＣＲは、ＱｕａｎｔｉＴｅｃｔＳＹＢＲ Ｇｒｅｅｎ ＰＣＲＫｉｔ（キアゲン社製）に従いテンプレートを調製し、リアルタイムＰＣＲ装置（ＭＪリサーチ社製）を用いてＳＶＣＴ１、ＳＶＣＴ２及びグリセルアルデヒド3-リン酸デヒドロゲナーゼ（ＧＡＰＤＨ）ｍＲＮＡの発現促進活性を測定した。ＧＡＰＤＨ遺伝子はハウスキーピング遺伝子として知られ、全ての細胞で恒常的に発現していることから、内部標準のコントロール遺伝子として広く用いられている。また、被験物質無添加（ＤＭＳＯ０．１％）をコントロール群とした。ＰＣＲ用プライマー及びＰＣＲ条件を以下に示す。  【００６７】
＜プライマー＞
ＳＶＣＴ１用
５’−ＴＴＣ ＴＧＡ ＴＴＧＴＧＣ ＴＧＣ ＴＧＡＣＣ−３’（配列表配列番号１）
５’−ＡＴＧ ＴＣＡ ＣＴＧＴＴＧ ＧＣＡ ＴＧＡＧＣ−３’（配列表配列番号２）
ＳＶＣＴ２用
５’−ＧＧＡ ＡＣＣ ＴＣＴＴＴＧ ＴＧＣ ＴＴＧＧＡ−３’（配列表配列番号３）
５’−ＣＣＴ ＧＧＧ ＡＴＧＧＴＧ ＴＴＡ ＴＣＣＡＧ−３’（配列表配列番号４）
ＧＡＰＤＨ用
５’−ＣＧＡ ＣＣＡ ＣＴＴＴＧＴ ＣＡＡ ＧＣＴＣＡ−３’（配列表配列番号５）
５’−ＴＴＣ ＣＴＣ ＴＴＧＴＧＣ ＴＣＴ ＴＧＣＴＧ−３’（配列表配列番号６）  
＜ＰＣＲの反応条件＞
ＳＶＣＴ１及びＳＶＣＴ２について
（ｉ）９５℃、１５分  →（ｉｉ）９４℃、１５秒  →（ｉｉｉ）５５℃、３０秒  →（ｉｖ）７２℃、３０秒を１サイクルとして、（ｉｉ）〜（ｉｖ）を更に３５回繰り返した後、４℃で保存した。
ＧＡＰＤＨについて
（ｉ）９５℃、１５分  →（ｉｉ）９４℃、１５秒  →（ｉｉｉ）５８℃、３０秒  →（ｉｖ）７２℃、３０秒を１サイクルとして、（ｉｉ）〜（ｉｖ）を更に３５回繰り返した後、４℃で保存した。  【００６８】
ＰＣＲプライマーの適正は、ＰＣＲ産物の融解曲線とＲＴ−ＰＣＲ産物の電気泳動により確認した。目的遺伝子の発現量は、ＰＣＲ産物の指数関数増幅領域の適当なところに閾値（ｔｈｒｅｓｈｏｌｄ）を設定し、閾値とＰＣＲ産物増幅曲線の交点から得られるサイクル数（ｔｈｒｅｓｈｏｌｄ  ｃｙｃｌｅ：Ｃｔ値）を算出し、評価した。各被験物質間における発現量の評価は、コントロール群である被験物質無添加（ＤＭＳＯ０．１％）のＳＶＣＴ１あるいはＳＶＣＴ２のｍＲＮＡのＣｔ値をＧＡＰＤＨのＣｔ値で割った値を１とし、被験物質添加時の発現量と比較検討を行った。結果を表１及び表２に示す。  【００６９】
その結果、コントロール群と比べ、ＳＶＣＴ１及びＳＶＣＴ２の両方を発現促進する化合物がマルビインとコレステリルベンゾエートであり、ＳＶＣＴ１のみを発現促進する化合物がステビオシド、ＤＬ−アルファ-ピレン、ベルベナリン、１−ヘプタコサノール、４−ヒドロキシクマリン、コール酸 、オレイン酸コレステリル、フラキシン、そしてベルガプトールであり、ＳＶＣＴ２のみを発現促進する化合物がウガフェリン、ラピフェリン、ゲラニルアセタート、ネロリドール、ジヒドロジャスモン、カルバクリルアセタート、グアイズレン、そしてジヒドロコニフェリルアルコールであることが明らかとなった。
また、骨芽細胞においてＳＶＣＴ２の発現促進作用を有することが知られているデキサメサゾンを用いて本発明の化合物と活性の比較評価を試みたが、デキサメサゾンは肝細胞においてはＳＶＣＴ２の発現促進作用は全く認められなかった。  【００７０】
【表１】
0005571897.tif 000002
【００７１】
【表２】
0005571897.tif 000003
【実施例３】
【００７２】
（メラノサイトにおけるビタミンＣトランスポーター（ＳＶＣＴ）の産生促進活性の測定）
ヒト正常メラノサイト由来ＮＨＥＭ細胞（クラボウ社製）を直径３．５ｃｍのシャーレ（ファルコン社製）に５×１０３ｃｅｌｌｓとなるように播種し、特注添加剤含有２５４Ｓ培養液（クラボウ社製）にて、３７℃、５％炭酸ガス存在下で８日間培養した。８日後、新しい培養液に置換し被験物質添加用の細胞とした。被験物質として実施例１により抽出した植物、ホオノキ（Magnolia obovata）、アーモンド（Prunus dulcis）、アマチャ（Hydrangea macrophylla）、グレープフルーツ（Citrus paradise）、ジャノヒゲ（Ophiopogon jponicus）、セイヨウキズタ（Hedera helix）、サボンソウ（Saponiria officinalis）、ドクダミ（Houttuynia cordata）、カミツレ（Matricaria chamomilla）、アセンヤク（uncalia gambir）、ハマメリス（Hamamelis virginiana）、マグワ（Morus alba）、コメヌカ（Oryza sativa）、スギナ（Equisetum arvense）を用いた。被験物質は１％固形分となるように５０％  １,３−ブチレングリコール水に再溶解させ、その溶液が最終濃度０．５％となるように被験物質添加用の細胞に添加し、６時間後、ＴＲＩＺＯＬ試薬（インビトロジェン社製）を用いて、常法に従い全ＲＮＡを回収した。ＳＶＣＴ１、ＳＶＣＴ２及びＧＡＰＤＨのリアルタイムＰＣＲを用いた発現評価は、実施例２と同様の評価方法にて実施した。結果を表３に示す。  【００７３】
その結果、コントロール群と比べ、実施例１より抽出した植物抽出物は、ＳＶＣＴ２の発現を促進することが明らかとなった。また、骨芽細胞においてＳＶＣＴ２の発現促進作用を有することが知られているデキサメサゾンはメラノサイトにおいてはＳＶＣＴ２の発現促進作用は全く認められなかった。なお、本実施例にて用いたヒト正常メラノサイト由来ＮＨＥＭ細胞は、ＳＶＣＴ１の発現は認められなかったため、ＳＶＣＴ１の発現促進活性については評価を実施できなかった。  【００７４】
【表３】
0005571897.tif 000004
【実施例４】
【００７５】
（メラニン生成抑制試験）
本発明で得られた植物とビタミンＣとの美白作用に関する併用効果を評価するため以下の試験によって、メラニン生成抑制活性を測定した。メラニンを生成する細胞として、マウス由来Ｂ１６−Ｆ１０メラノーマ細胞を用いて４８ウェルプレートの各ウェルに２×１０３  ｃｅｌｌｓとなるように播種し、ＦＢＳを終濃度１０％となるように添加したグルコサミン含有最少基礎培養液（ＭＥＭ）にて５日間培養した。その後、培養液を１０％ＦＢＳ、テオフィリン含有ＭＥＭに交換し被験物質添加用の細胞とした。被験物質は、実施例１で得られたホオノキ、アーモンド、アマチャ、グレープフルーツ、ジャノヒゲ、セイヨウキズタ、サボンソウ、ドクダミを１％固形分となるよう５０％  １，３−ブチレングリコール水に再溶解させたものを用いた。添加濃度は、被験物質が最終濃度０．５％となるように、及び同時にビタミンＣが最終濃度１００μｇ／ｍｌとなるように被験物質添加用の細胞に添加し、３日間培養してメラニン生成抑制評価用の試料とした。メラニン量は、細胞をクレーパー処理により剥がし、遠心後、１％ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）により可溶化して４７５ｎｍ、２６０ｎｍの吸光度を測定することにより求めた。メラニン生成抑制率は、４７５ｎｍ、２６０ｎｍの吸光度における被験物質を添加した培養液で培養した細胞の吸光度をＳ４７５、Ｓ２６０、被験物質を添加しない培養液で培養した細胞の吸光度をＣ４７５、Ｃ２６０として次式１により算出した。この結果を表４に示す。表４に示したように、被験物質の単独添加では、メラニン生成抑制効果は認められないが、ビタミンＣとの同時添加により、ビタミンＣの単独に比べ明らかにメラニン生成が抑制されていることがわかった。このことから、これらの被験物質とビタミンＣを含む組成物は、メラニン生成抑制機能を有し、美白作用を有することが明らかとなった。  【００７６】
［数］
式１
メラニン生成抑制率（％）＝１−［（S475／S260）／（C475／C260）］×１００  【００７７】
【表４】
0005571897.tif 000005
【実施例５】
【００７８】
（３次元皮膚モデルによるメラニン生成抑制試験）
本発明で得られたグレープフルーツ抽出物、ビタミンＣ誘導体である２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−アスコルビン酸（ＡＡ２Ｇ）、更にグルコシダーゼ活性化剤としてエキナセア抽出物を用いた美白作用に関する併用効果を評価するため、以下の試験によってメラニン生成抑制活性を測定した。
評価系としてクラボウ社より発売されている正常ヒト由来メラノサイトを含む３次元皮膚モデル（ＭＥＬ−３００キット）を用いた。キットの説明に従い培養を開始し、培養液及び被験物質は２日ごとに新たなものに交換し、１０日間培養を行った。１０日後、リン酸塩緩衝液（ＰＢＳ）にて組織を洗浄後、１．５ｍｌチューブに回収し、蒸留水１００μｌを加えて超音波破砕した。更に、Ｓｏｌｕｅｎｅ−３５０（和光純薬社製）を９００μｌ加え、４５分、１００℃に静置し、組織及びメラニンを可溶化し、不溶画分は遠心分離（１０，０００ｒｐｍ、１０分）より除去した。メラニンの測定は、合成メラニン（シグマアルドリッチ社製）より検量線を作成し、５００ｎｍの吸光度により算出した。
被験物質は、実施例１で得られたグレープフルーツを１％固形分となるよう５０％１，３−ブチレングリコール水に再溶解させたもの（Ｇｒ）、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−アスコルビン酸（ＡＡ２Ｇ）、エキナセアの葉の乾燥物を３０％エタノール水にて抽出したエキナセア抽出液（Ｅｃｈ）（エキナセア抽出物（固形物）を０．３％含有する）を用いた。３次元皮膚モデルへの添加濃度は、Ｇｒが最終濃度０．５％となるよう、あるいは同時にＡＡ２Ｇが最終濃度２％となるよう、あるいは同時にＥｃｈが０．２％となるよう添加し、それぞれが単独、併用の場合のメラニン生成抑制活性を評価した。その結果を図１に示す。
図１に示すように、グレープフルーツ抽出液（Ｇｒ）、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−アスコルビン酸（ＡＡ２Ｇ）、エキナセア抽出液（Ｅｃｈ）のいずれも単独では無添加のコントロール群と比較して有意差は認められなかったが、３つの併用によってメラニン生成抑制活性を有意に認めることが明らかとなった。
【実施例６】
【００７９】
（ヒト皮膚における紫外線照射による炎症の抑制、色素沈着の改善試験）
１．被験者  健康成人男性１０名（２７〜３５歳）の背部を用いて実験した。
２．検体  ビタミンＣ誘導体である２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−アスコルビン酸（ＡＡ２Ｇ）とビタミンＣトランスポーター産生促進剤であるグレープフルーツ抽出物（ＧＦＥ）を用いて下記表５に示す組成となるように検体を調製した。
以下、下記組成の検体を用いて評価試験を行った。  【００８０】
【表５】
0005571897.tif 000006
ＡＡ２Ｇ：林原製  ２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−アスコルビン酸
ＧＦＥ  ：一丸ファルコス製  グレープフルーツ果実エキス  ファルコレックス  グレー
プフルーツＢ中の固形分
１，３−ＢＧ：１，３−ブチレングリコール  【００８１】
３．試験方法
３．１  炎症の抑制効果の評価  背部に、検体ごとに４×４ｃｍの塗布領域を設定し、検体を８週間塗布した。塗布量は１回に３ｍＬ、１週間に約４回、８週間で約３２回（２８〜３５回）塗布した。８週間後に、その部位のＬ＊ａ＊ｂ＊表色系のa＊値を測色し、さらに、ＭＥＤの１．２倍の太陽紫外線を照射し、２日後に、同部位のa＊値を測色した。紫外線照射２日後のa＊値から紫外線照射前のa＊値を差し引いてΔa＊値を求めた。Δa＊値が小さいほど、炎症の抑制効果が高い。  【００８２】
３．２  色素沈着の改善効果の評価
背部に検体ごとに４×４ｃｍの塗布領域を設定し、検体塗布前のＬ＊ａ＊ｂ＊表色系のＬ＊値を測色した。次いでＭＥＤの１．２倍の太陽紫外線を照射し、２日後に同部位のＬ＊値を測色した。２日後のＬ＊値を測色後から検体の塗布を開始した。塗布量は１回に３ｍＬ、１週間に約４回、８週間で約３２回（２８〜３５回）塗布した。紫外線照射２、４、８週間後に同部位のＬ＊値を測色した。紫外線照射２日後及び紫外線照射２、４、８週間後のＬ＊値から検体塗布前（紫外線照射前）のＬ＊値を差し引いてΔＬ＊値を求めた。ΔＬ＊値の負の値が小さいほど、色素沈着が改善されている。  【００８３】
３．３  測定機器
測色          ：MINOLTA製  分光測色計CM-800D
紫外線照射  ：SOLAR LIGHT CO.製  MODEL XPS 200  【００８４】
４．測定結果
４．１  炎症の抑制効果 各検体塗布部位のΔa＊値を表６、図２に示す。  【００８５】
【表６】
0005571897.tif 000007
【００８６】
ビタミンＣトランスポーター産生促進剤であるＧＦＥのみ配合した比較例２のΔa＊値は、何も配合していない比較例３のΔa＊値とほぼ同じ値である。従って、ＧＦＥのみでは抗炎症効果が認められないことがわかった。一方、ＧＦＥとビタミンＣ誘導体であるＡＡ２Ｇを併用した実施例６は比較例３と比べて、有意な抗炎症効果を示した。そして、実施例６のΔa＊値はＡＡ２Ｇのみ配合した比較例１のΔa＊値の６０％に低減している。ＧＦＥ自体の抗炎症効果は認められないので、ＧＦＥとＡＡ２Ｇを併用した実施例６がＡＡ２Ｇを単独で配合した比較例１と比べて優れた抗炎症効果を示すことは、予測できない顕著な効果であるといえる。  【００８７】
４．２色素沈着の改善効果
各検体塗布部位のΔＬ＊値を表７、図３に示す。  【００８８】
【表７】
0005571897.tif 000008
【００８９】
紫外線照射２週間後において、ビタミンＣトランスポーター産生促進剤であるＧＦＥのみ配合した比較例２のΔＬ＊値は、何も配合していない比較例３のΔＬ＊値よりも負の値が大きくなっている。従って、ＧＦＥのみでは色素沈着改善効果が認められないことがわかった。一方、ＧＦＥとビタミンＣ誘導体であるＡＡ２Ｇを併用した実施例６は比較例３と比べて、有意な色素沈着改善効果を示した。そして、実施例６のΔＬ＊値はＡＡ２Ｇのみ配合した比較例１のΔＬ＊値の負の値の６０％に低減しており、比較例１と比べて有意な色素沈着改善効果を示した。ＧＦＥ自体の色素沈着改善効果は認められないので、ＧＦＥとＡＡ２Ｇを併用した実施例６がＡＡ２Ｇを単独で配合した比較例１と比べて優れた色素沈着改善効果を示すことは、予測できない顕著な効果であるといえる。紫外線照射４週間後においても、紫外線照射２週間後とほぼ同様の傾向が認められた。紫外線照射８週間後においても、実施例６の色素沈着改善効果が最も優れていた。以下に処方例を挙げて、具体的に説明するが、これに限定されるものではない。  
【実施例７】
【００９０】
（グレープフルーツ抽出物によるビタミンＣトランスポーター（ＳＶＣＴ）の産生促進活性の測定）
マウスメラノーマＢ１６−Ｆ１０細胞（大日本製薬株式会社製）を直径３．５ｃｍのシャーレ（ファルコン社製）に５ラ１０３ ｃｅｌｌｓとなるように播種し、１０％の非働化したウシ胎児血清（ＦＢＳ）含有ＤＭＥＭ培養液（ギブコ社製）にて、３７、５％炭酸ガス存在下で培養した。３日間培養の後、新しい培地に置換し被験物質であるグレープフルーツ(Citrus paradise)抽出物を培地中の最終濃度として０.６， １.８， ６,  １８， ６０， １８０ μg/mlとなるように添加し、６時間後にＴＲＩＺＯＬ試薬（インビトロジェン社製）を用いて常法に従い全ＲＮＡを回収した。グレープフルーツ抽出物として実施例６で用いた一丸ファルコス製  グレープフルーツ果実エキス  ファルコレックス  グレープフルーツＢを添加した。本グレープフルーツ抽出物は、グレープフルーツ  citrus paradisi Macfadyen(Rutaceae)の生の果実５ｋｇに１，３−ブチレングリコールを加えて浸漬し、ろ過し、このろ液２０ｋｇに精製水２０ｋｇを加えて混和し、ろ過することにより得られるものである。グレープフルーツ抽出物の濃度は固形物濃度に換算するとグレープフルーツ抽出液中０．６％（６ｍｇ／ｍＬ）である。
回収した全ＲＮＡはリアルタイム定量ワンステップＲＴ−ＰＣＲに供した。ＱｕａｎｔｉＴｅｃｔ  ＳＹＢＲ  Ｇｒｅｅｎ  ＰＣＲ  Ｋｉｔ（キアゲン社製）に従いテンプレートを調製し、ＰＣＲ装置（ＭＪリサーチ社製）を用いてＳＶＣＴ２及びグリセルアルデヒド３−リン酸デヒドロゲナーゼ（ＧＡＰＤＨ）ｍＲＮＡの発現促進活性を測定した。ＰＣＲ用プライマー及び、ＰＣＲ条件を以下に示す。【００９１】
＜プライマー＞
ＳＶＣＴ２用
Mm_Slc23a2_1_SG QuantiTect Primer Assay（キアゲン社製）
ＧＡＰＤＨ用
５’−ＡＡＣ ＴＴＴ ＧＧＣ ＡＴＴ ＧＴＧ ＧＡＡ ＧＧ−３’（配列表配列番号７）
５’−ＡＣＡ ＣＡＴ ＴＧＧ ＧＧＧ ＴＡＧ ＧＡＡ ＣＡ−３’（配列表配列番号８）【００９２】
＜ＰＣＲの反応条件＞
（ｉ）５０℃、３０分  →（ｉｉ）９５℃、１５分  →（ｉｉｉ）９４℃、１５秒  →（ｉｖ）５５℃、３０秒  →（ｖ）７２℃、３０秒を１サイクルとして、（ｉｉ）〜（ｖ）を更に４０回繰り返した後、４℃で保存した。【００９３】
ＰＣＲプライマーの適正は、ＰＣＲ産物の融解曲線とＲＴ−ＰＣＲ産物の電気泳動により確認した。目的遺伝子の発現量は、ＰＣＲ産物の指数関数増幅領域の適当なところに閾値を設定し、閾値とＰＣＲ産物増幅曲線の交点から得られるサイクル数（Ｃｔ値）から、以下の式にて算出し、内部標準であるＧＡＰＤＨの発現量に対する数値で示した。【００９４】
［数］
式２
ＲＮＡ発現量Ｙ＝2-(Ct)
［数］
式３
ＳＶＣＴ２の発現量＝Y(SVCT2)/Y(GAPDH)【００９５】
発現量の比較評価には、被験物質無添加のコントロール群のＳＶＣＴ２の発現量を１として相対値による比較を行った。結果を図４に示す。その結果、グレープフルーツ抽出物の濃度に依存してＳＶＣＴ２の発現が促進されることが明らかとなった。ＰＣＲの原理上Ｃｔ値の計測値から生じる誤差を考慮し、さらに実施例３においてＳＶＣＴ産生促進効果が１．４倍以上認められた植物抽出物は、実施例４におけるメラニン生成抑制試験においてビタミンＣと同時添加することでビタミンＣ単独に比べてメラニン抑制効果の増強作用を有していたことから、コントロール群に比べて１．４倍以上ＳＶＣＴの発現量が増加しているものについてはＳＶＣＴ促進効果があると判断した。その結果、マウスメラノーマＢ１６−Ｆ１０細胞においてはグレープフルーツ抽出物１８μｇ／ｍｌ以上でＳＶＣＴ２の発現促進効果があることが明らかとなった。
【実施例８】
【００９６】
（化合物によるビタミンＣトランスポーター（ＳＶＣＴ）の産生促進活性の測定）
ヒト大腸がん由来Ｃａｃｏ２細胞（大日本製薬株式会社製）を直径３．５ｃｍのシャーレに５×１０３ ｃｅｌｌｓとなるように播種し、１０％の非働化したウシ胎児血清（ＦＢＳ）含有ＤＭＥＭ培養液にて、３７℃、５％炭酸ガス存在下で培養した。３日間培養の後、新しい培地に置換し被験物質であるステビオシド（ＣＡＳ：５７８１７−８９−７）、ゲラニルアセタート（ＣＡＳ：１０５−８７−３）、ネロリドール（ＣＡＳ：７２１２−４４−４）、ジヒドロジャスモン（ＣＡＳ：１１２８−０８−０１）、マルビイン（ＣＡＳ：４６５−９２−９）、ベルベナリン（ＣＡＳ：５４８−３７−８）、フラキシン（ＣＡＳ：５２４−３０−１））、ベルガプトール（ＣＡＳ：４８６−６０−２）を培地中の最終濃度として１００μＭとなるように添加した。被験物質添加から６時間後にＴＲＩＺＯＬ試薬を用いて常法に従い全ＲＮＡを回収した。回収した全ＲＮＡはリアルタイム定量ワンステップＲＴ−ＰＣＲに供した。ＱｕａｎｔｉＴｅｃｔ ＳＹＢＲ Ｇｒｅｅｎ ＰＣＲ Ｋｉｔ（キアゲン社製）に従いテンプレートを調製し、ＰＣＲ装置（ＭＪリサーチ社製）を用いてＳＶＣＴ１、ＳＶＣＴ２及びグリセルアルデヒド３−リン酸デヒドロゲナーゼ（ＧＡＰＤＨ）ｍＲＮＡの発現促進活性を測定した。ＰＣＲ用プライマーは実施例２で使用したものと同様のものを用いた。ＰＣＲ条件を以下に示す。【００９７】
＜ＰＣＲの反応条件＞
ＳＶＣＴ１及びＳＶＣＴ２について
（ｉ）５０℃、３０分  →  （ｉｉ）９５℃、１５分  →（ｉｉｉ）９４℃、１５秒
→（ｉｖ）５５℃、３０秒  →（ｖ）７２℃、３０秒を１サイクルとして、（ｉｉ）〜（ｖ）を更に４０回繰り返した後、４℃で保存した。
ＧＡＰＤＨについて
（ｉ）５０℃、３０分  →  （ｉｉ）９５℃、１５分  →（ｉｉｉ）９４℃、１５秒  →（ｉｖ）５８℃、３０秒  →（ｖ）７２℃、３０秒を１サイクルとして、（ｉｉ）〜（ｉｖ）を更に３５回繰り返した後、４℃で保存した。【００９８】
ＰＣＲプライマーの適正は、ＰＣＲ産物の融解曲線とＲＴ−ＰＣＲ産物の電気泳動により確認し、実施例７と同様の算出方法で目的遺伝子の発現量の比較を行った。結果を表８に示す。実施例７と同様にコントロール群に比べて１．４倍以上ＳＶＣＴの発現量が増加しているものについてはＳＶＣＴ促進効果があるとすると、ＳＶＣＴ１のみを発現促進する化合物はステビオシド、ゲラニルアセタート、ジヒドロジャスモン、ベルベナリン、フラキシン、ベルガプトールであり、ＳＶＣＴ２のみを発現促進する化合物はマルビインであった。ネロリドールはＳＶＣＴ１，ＳＶＣＴ２の両方を発現促進することが明らかとなった。【００９９】
【表８】
0005571897.tif 000009
【実施例９】
【０１００】
（三次元肝細胞モデルを用いた化合物によるビタミンＣトランスポーター（ＳＶＣＴ）の産生促進活性の測定）
生体内に近い環境での評価を行うために中空糸内でヒト肝細胞を三次元培養したヒト三次元肝細胞モデル ＴＥＳＴＬＩＶＥＲＴＭ（東洋紡社製）を用いた。ヒト三次元肝細胞モデルは１２ウェルプレート中でヒト肝細胞無血清培地（東洋紡社製）にて、３７℃、５％炭酸ガス存在下に設置した振とう機上で振とう培養を行った。３日間振とう培養の後、新しい培地に置換し被験物質であるステビオシド、ゲラニルアセタート、ネロリドール、ジヒドロジャスモン、マルビイン、ベルベナリン、フラキシン、ベルガプトールを培地中の最終濃度として１００μＭとなるように添加した。培地の交換は２４時間毎に行い、その都度被験物質を添加した。被験物質添加から３日後にＴＲＩＺＯＬ試薬を用いて常法に従い全ＲＮＡを回収した。ＳＶＣＴ２およびＧＡＰＤＨのリアルタイムＰＣＲを用いた発現評価は、実施例８と同様の評価方法にて実施した。結果を表９に示す。
実施例７と同様にコントロール群に比べて１．４倍以上ＳＶＣＴの発現量が増加しているものについてはＳＶＣＴ促進効果があるとすると、ＳＶＣＴ１のみを発現促進する化合物はゲラニルアセタート、ベルベナリンであり、ＳＶＣＴ２のみを発現促進する化合物はネロリドールであった。ＳＶＣＴ１，ＳＶＣＴ２の両方を発現促進する化合物はステビオシド、ジヒドロジャスモン、マルビイン、フラキシン、ベルガプトールであることが明らかとなった。【０１０１】
【表９】
0005571897.tif 000010
【実施例１０】
【０１０２】
（三次元皮膚モデルによるメラニン生成抑制試験（フォンタナ・マッソン染色））
三次元皮膚モデルＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（クラボウ社製）において、グレープフルーツ抽出物とビタミンＣを同時添加した際のメラニン生成抑制効果の評価及び、メラニン細胞の形態的観察を行うためフォンタナ・マッソン染色によるメラニンの染色を行った。また、α-グルコシダーゼの活性を上昇させ、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−アスコルビン酸を速やかに活性型Ｌ−アスコルビン酸に変換させる作用を有するエキナセア抽出物併用時についても評価を行った。三次元皮膚モデルはキットの説明に従い、培養を開始し、培地及び被験物質は２日ごとに新たなものに交換し、被験物質は実施例５で用いたものと同様の組み合わせで用いた。但し、グレープフルーツ抽出物は実施例７で用いた抽出物を用いた。培養１０日目に顕微鏡による形態観察を行い、ＰＢＳにて組織を洗浄後、常法に従いフォンタナ・マッソン染色を行った。結果を図５，６に示す。
その結果、３０μｇ／ｍＬのグレープフルーツ抽出物（ＧＦＥ）、６μｇ／ｍＬのエキナセア抽出物（ＥＣＥ）の単独及び両者の組み合わせではメラノサイトは活性化していたが、２質量％の２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシルーアスコルビン酸（ＡＡ２Ｇ）を加えることでメラニン細胞は収縮し不活性化することが明らかになった。さらに、３０μｇ／ｍＬのグレープフルーツ抽出物（ＧＦＥ）と併用することでメラニン産生抑制活性が促進されることが明らかとなった。また、２質量％の２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシルーアスコルビン酸（ＡＡ２Ｇ）、３０μｇ／ｍＬのグレープフルーツ抽出物（ＧＦＥ）、６μｇ／ｍＬのエキナセア抽出物（ＥＣＥ）の三種類を併用することで最もメラニン生成抑制活性が高まることが明らかとなった。グレープフルーツ抽出物（ＧＦＥ）は実施例７に記載したグレープフルーツ抽出液を用いて添加した。エキナセア抽出物は実施例５に記載したエキナセア抽出液を用いて添加した。
【実施例１１】
【０１０３】
（ビタミンＣの細胞内取り込み量の測定）
マウスメラノーマＢ１６−Ｆ１０細胞およびヒト大腸がん由来Ｃａｃｏ２細胞をそれぞれ直径１０ｃｍのシャーレに１×１０６ｃｅｌｌｓとなるように播種し、１０％の非働化したウシ胎児血清（ＦＢＳ）含有ＤＭＥＭ培養液にて、３７℃、５％炭酸ガス存在下で培養した。マウスメラノーマＢ１６−Ｆ１０細胞は培養３日後のものを、ヒト大腸がん由来Ｃａｃｏ２細胞は培養1週間後のものをビタミンＣ取り込み試験用の細胞とした。実施例７に記載したグレープフルーツ抽出液を用いて、グレープフルーツ抽出物を培養液中の最終濃度として３０μｇ／ｍｌとなるように添加し２４時間後の細胞をビタミンＣ取り込み試験に用いた。培養液をインキュベーション用バッファー（１５ｍＭ Ｈｅｐｅｓ,  １３５ｍＭ  ＮａＣｌ, ５ｍＭ  ＫＣｌ, １．８ｍＭ ＣａＣｌ２ , ０．８ｍＭ ＭｇＣｌ２）で２回洗浄を行った後、３７℃、５％炭酸ガス存在下で1時間のプレインキュベーションを行った。新しいインキュベーション用バッファーに置換しビタミンＣとしてアスコルビン酸（シグマ社製）５ｍＭとなる様に添加しマウスメラノーマＢ１６−Ｆ１０細胞は３時間、ヒト大腸がん由来Ｃａｃｏ２細胞は１時間インキュベーションの後、氷冷しておいたＰＢＳで３回洗浄し反応を停止させた。１ｍＭ ＥＤＴＡを含む７０％ＭｅＯＨ １ｍｌにアスコルビン酸を溶出させた後、還元剤として１０ｍＭ ジチオトレイトール（和光純薬工業株式会社製）を加え１０分間反応させて還元型アスコルビン酸に変換し、０．２μｍ フィルター（アドバンテック社製）でフィルターろ過したものを分析に用いた。分析には高速液体クロマトグラフ（ＨＰＬＣ）を用い、カラムはＬ−カラム ＯＤＳ（４．６ｍｍ×２５０ｍｍ）（化学物質評価研究機構製）、移動層にはＡ層（１０ｍＭ テトラブチルアンモニウムヒドロキシド溶液／１０ｍＭリン酸二水素カリウム／０．５％メタノール  ＰＨ＝６）とＢ層（５０％メタノール）とを用いた。溶離条件として０〜１５分間はＡ層のみ、１５〜２５分間はＡ層からＢ層へ、２５〜３５分間はＢ層からＡ層へとグラジエントをかけ、３５〜６０分間はＡ層のみとした。この条件での還元型アスコルビン酸の溶出時間は２１分であった。この時のピーク高さより、検量線を用いて細胞内のアスコルビン酸濃度を算出し、ビタミンＣの細胞内取り込み量とした。同時に細胞用タンパク質抽出試薬（ＰＩＥＲＣＥ社製）を用いて細胞からのタンパク質抽出を行った。たんぱく質定量キットとしてＤＣ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａｓｓａｙ（ＢＩＯ−ＲＡＤ）を用いてＬｏｗｒｙ法により計測したタンパク質量から、細胞内へのアスコルビン酸取り込み量を補正し、アスコルビン酸量（μmol）/タンパク質量（mg protein）として表した。結果を図７〜１０に示す。その結果、グレープフルーツ抽出物を３０μｇ／ｍｌ添加することによって、細胞内へのビタミンＣの取り込み量はマウスメラノーマＢ１６−Ｆ１０細胞では約２．４倍、ヒト大腸がん由来Ｃａｃｏ２細胞では約１．５倍にまで増加することが明らかになった。
【実施例１２】
【０１０４】
（グレープフルーツ抽出物中のベルガプトールの定量分析）
実施例６，７，１０，１１で用いたグレープフルーツ抽出物（一丸ファルコス製  グレープフルーツ果実エキス  ファルコレックス  グレープフルーツＢ中の固形分）に含まれるベルガプトールの濃度をＨＰＬＣ法により分析した。その結果、グレープフルーツ抽出物中のベルガプトールは０．０１５質量％であった。
ＨＰＬＣ分析条件
（カラム：Capcell  pak  C18  4.6mmφ×250mm（SHISEIDO）
カラム温度：  ４０℃
検出器：  ＵＶ  315nm
溶離液：  （Ａ）５％酢酸水溶液：（Ｂ）アセトニトリル＝７５：２５
流速：  １．０ｍＬ／分、
注入量：  ２０μＬ、
試料希釈溶媒：  ＤＭＳＯ／エタノール＝２：１８（Ｖ／Ｖ））。
ベルガプトール溶出時間：  ９．６分
【実施例１３】
【０１０５】
（化合物群のメラニン生成抑制試験）
本発明で得られた化合物とビタミンＣとの美白作用に関する併用効果を評価するため以下の試験によって、メラニン生成抑制活性を測定した。
メラニンを生成する細胞として、マウス由来Ｂ１６−Ｆ１０メラノーマ細胞を用いて６ウェルプレートの各ウェルに１×１０５  ｃｅｌｌｓとなるように播種し、ＤＭＥＭ＋１０％  ＦＢＳの培養液（ギブコ社製）にて２４時間培養し細胞を接着させた。その後、ＤＭＥＭ＋１０％  ＦＢＳにて培養液を置換し、１００ｎＭとなるよう［Ｎｌｅ４，Ｄ−Ｐｈｅ７］α−ＭＳＨ（シグマアルドリッチ社製）を添加してメラニン産生を誘導した。同時に被験物質としてウガフェリンは２５μＭ（０．１％ＤＭＳＯを含有する）、マルビイン、ラピフェリンは５０μＭ（０．１％ＤＭＳＯを含有する）、フラキシンは１００μＭ（０．１％ＤＭＳＯを含有する）、コントロールは０．１％ＤＭＳＯとなるよう添加した。被験物質単独群は、その後４８時間インキュベーションしてメラニン生成抑制評価を行った。被験物質とビタミンＣの併用群はその後、２４時間おきにビタミンＣ（シグマアルドリッチ社製）最終濃度４ｍＭを２回添加し（合計すると８ｍＭ添加）、メラニン生成抑制評価を行った。
メラニン量の測定は、細胞をトリプシン処理により剥がし、ＰＢＳ洗浄を２回繰り返し、１％ＴｒｉｔｏｎＸ（和光純薬社製）により細胞を可溶化して４７５ｎｍの吸光度をすることにより行った。メラニン量は合成メラニン（シグマアルドリッチ社製）を用いて検量線を作成し、算出した。被験物質とビタミンＣによる併用効果は次式４のメラニン生成抑制率より計算した。【０１０６】
〔式４〕
併用効果によるメラニン生成抑制率（％）＝（１−ビタミンＣ併用時のメラニン量／被験物質単独時のメラニン量）×１００
但し、コントロールの被験物質単独時におけるメラニン量値とは、被験物質の溶解に用いた溶媒であるDMSOを最終濃度０．１％添加した時のメラニン量を意味し、コントロールのビタミンC併用時におけるメラニン量値とは、０．１％DMSOとビタミンCを併用した時のメラニン量を意味する。また、コントロールの併用効果によるメラニン生成抑制率とは、０．１％DMSOを単独添加した時のメラニン量に対する０．１％DMSOとビタミンCの併用添加時のメラニン量をメラニン生成抑制率として表した値である。
この結果を表１０に示す。０．１％DMSOとビタミンCを併用添加した場合、０．１％DMSO単独添加した場合のメラニン量に対するメラニン生成抑制率は６１．４％であったが、マルビイン、ウガフェリン、ラピフェリン、フラキシンとビタミンＣを併用するとメラニン生成抑制率がそれぞれ６９．７％、６４．６％、６８．１％、６８．４％に向上する。これは、０．１％DMSOとビタミンCを併用添加のデータ及びマルビイン、ウガフェリン、ラピフェリン、フラキシン単独のデータからは予測できない顕著な相乗効果である。
この相乗効果はマルビイン、ウガフェリン、ラピフェリン、フラキシンのＳＶＣＴ産生促進効果によるものと推測できる。【０１０７】
【表１０】
0005571897.tif 000011
【実施例１４】
【０１０８】
（化合物群のコラーゲン産生評価試験）
本発明で得られた化合物とビタミンＣとのコラーゲン産生能（コラーゲン合成促進能ともいう）に関する併用効果を評価するため以下の試験によって、コラーゲン産生促進作用を測定した。正常ヒト皮膚由来繊維芽細胞であるＮＨＤＦ細胞（Ｃａｍｂｒｅｘ  Ｂｉｏ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｗａｌｋｅｒｓｖｉｌｌｅ社製）を２４穴マルチプレート（ファルコン社製）に５×１０４  ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌとなるように播種し、ＤＭＥＭ＋１０％  ＦＢＳの培養液（ギブコ社製）にて、３７℃、５％炭酸ガス存在下で３日間培養した。ＦＢＭ（ｓｅｒｕｍ  ｆｒｅｅ）の培養液（三光純薬会製）に置換して、被験物質としてマルビインは５０μＭ、ステビオシド、ベルガプトールは１００μＭ、コントロールは０．１％ＤＭＳＯを添加し、２４時間のプレインキュベートした。プレインキュベーション後、ＦＢＭ培養液で細胞を洗浄し、ＦＢＭ培養液に置換後、ビタミンＣ（シグマアルドリッチ社製）を最終濃度１０μＭとなるように培養液に添加し、１時間処理して細胞内にビタミンＣを取り込ませた。その後、ＦＢＭ培養液で細胞を洗浄し、ＦＢＭ培養液に置換して２４時間後、各ウエル全てについて１ｍｌのｃｏｎｄｉｔｉｏｎｅｄ  ｍｅｄｉｕｍ（ＣＭ）を回収しｔｙｐｅ１  ｃｏｌｌａｇｅｎ測定の試料とした。前記回収したＣＭについて、ｔｙｐｅ１  ｃｏｌｌａｇｅｎＣ‐ｐｅｐｔｉｄｅ（ＰＩＰ）ＥＩＡ  ｋｉｔ（タカラ社製）にてコラーゲン量を測定した（検出限界濃度；１０ｎｇ／ｍｌ）。抗ＰＩＰモノクローナル抗体プレート（９６  ｗｅｌｌ）にペルオキシダーゼ標識抗ＰＩＰモノクローナル抗体１００μｌを各ｗｅｌｌに加え、次にあらかじめ１％牛血清アルブミン含有ＰＢＳで２０倍希釈したＣＭを２０μｌずつ添加し、３７℃、３時間インキュベートした。その後、反応液を捨て、２００μｌ  ＰＢＳで４回洗浄後、基質のＴＭＢＺ（３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジン）を１００μｌずつ加え室温で１５分反応させた。反応終了には１Ｎ硫酸を１００μｌ加え、測定は波長４５０  ｎｍの吸光度を測定した。
マルビインについての測定結果を表１１に示す。マルビインはビタミンＣ併用時において、コントロールと比較してコラーゲン産生促進作用が認められた。
ステビオシド、ベルガプトールの結果を表１２に示す。ステビオシド、ベルガプトールはビタミンＣ併用時において、コントロールと比較してコラーゲン産生促進作用が認められた。【０１０９】
【表１１】
0005571897.tif 000012
【０１１０】
【表１２】
0005571897.tif 000013
【０１１１】
処方例１
[錠剤の製造]
ドクダミ抽出物及びビタミンＣを用いて常法に従って、下記組成の錠剤を製造した。
0005571897.tif 000014
【０１１２】
処方例２
[ジュースの製造] 
ステビオシドを含むアマハステビア抽出物及びビタミンＣを用いて常法に従って、下記組成のジュースを製造した。
0005571897.tif 000015
【０１１３】
処方例３
[軟膏の製造]  
マルビイン及びビタミンＣを用いて常法に従って、下記組成の軟膏を製造した。
0005571897.tif 000016
【０１１４】
処方例４
[化粧水の製造]  
グレープフルーツ抽出物、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−アスコルビン酸（ＡＡ２Ｇ）、エキナセア抽出物を用いて常法に従って、下記組成の化粧水を製造した。
0005571897.tif 000017
【０１１５】
処方例５
[シートマスクの製造]  
グレープフルーツ抽出物、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−アスコルビン酸（ＡＡ２Ｇ）、エキナセア抽出物を用いて常法に従って、下記組成のシートマスクを製造した。
0005571897.tif 000018
【０１１６】
処方例６
[乳液の製造]  
グレープフルーツ抽出物、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−アスコルビン酸（ＡＡ２Ｇ）、エキナセア抽出物を用いて常法に従って、下記組成の乳液を製造した。
0005571897.tif 000019
【０１１７】
処方例７
[化粧水の製造]  
ゲラニルアセタート、ネロリドール、ジヒドロジャスモン、ベルカプトール、２−Ｏ−α
−Ｄ−グルコピラノシル−アスコルビン酸（ＡＡ２Ｇ）、エキナセア抽出物を用いて常法
に従って、下記組成の化粧水を製造した。
0005571897.tif 000020
【産業上の利用可能性】
【０１１８】
本発明のビタミンＣトランスポーター産生促進剤によれば、細胞を用いた解析においてＳＶＣＴ１及び／又はＳＶＣＴ２のｍＲＮＡの発現を顕著に促進することができ、これを美白用組成物又はコラーゲン合成促進用組成物として利用することができる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図９】
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【図１０】
0005571897.tif 000026
【図５】
0005571897.tif 000027
【図６】
0005571897.tif 000028
【図７】
0005571897.tif 000029
【図８】
0005571897.tif 000030
【配列表】
0005571897000001.app