(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
抗原結合領域を含む結合蛋白質であって、前記結合蛋白質はヒトＩＬ−１２のｐ４０サブユニットと結合することができ、前記抗原結合領域は、ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２、ＣＤＲ−Ｈ３、ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２及びＣＤＲ−Ｌ３の６つのＣＤＲを含み、前記６つのＣＤＲは、
（Ａ）ＣＤＲ−Ｈ１が、Ｋ−Ｓ−Ｖ−Ｍ−Ｇ−Ｖ−Ｓ（配列番号３５の残基３１−３７）、
ＣＤＲ−Ｈ２が、Ｈ−Ｉ−Ｙ−Ｗ−Ｄ−Ｄ−Ｄ−Ｋ−Ｙ−Ｙ−Ｎ−Ｐ−Ｓ−Ｌ−Ｋ−Ｓ（配列番号３５の残基５２−６７）、  
ＣＤＲ−Ｈ３が、Ｒ−Ｇ−Ｉ−Ｒ−Ｓ−Ａ−Ｍ−Ｄ−Ｙ（配列番号３５の残基１００−１０８）、
ＣＤＲ−Ｌ１が、Ｋ−Ａ−Ｓ−Ｑ−Ｓ−Ｖ−Ｓ−Ｎ−Ｄ−Ｖ−Ａ（配列番号３６の残基２４−３４）、
ＣＤＲ−Ｌ２が、Ｙ−Ａ−Ｓ−Ｎ−Ｒ−Ｙ−Ｔ（配列番号３６の残基５０−５６）及び
ＣＤＲ−Ｌ３が、Ｑ−Ｑ−Ｄ−Ｙ−Ｎ−Ｓ−Ｐ−Ｗ−Ｔ（配列番号３６の残基８９−９７）；
（Ｂ）ＣＤＲ−Ｈ１が、Ｔ−Ｓ−Ｇ−Ｍ−Ｇ−Ｖ−Ｓ（配列番号３７の残基３１−３７）、
ＣＤＲ−Ｈ２が、Ｈ−Ｉ−Ｗ−Ｗ−Ｄ−Ｇ−Ｄ−Ｎ−Ｙ−Ｙ−Ｎ−Ｐ−Ｓ−Ｌ−Ｋ−Ｓ（配列番号３７の残基５２−６７）、
ＣＤＲ−Ｈ３が、Ｒ−Ｔ−Ｒ−Ｖ−Ｎ−Ｙ−Ａ−Ｍ−Ｄ−Ｙ（配列番号３７の残基１００−１０９）、
ＣＤＲ−Ｌ１が、Ｋ−Ａ−Ｓ−Ｑ−Ｓ−Ｖ−Ｓ−Ｎ−Ｄ−Ｖ−Ａ（配列番号３８の残基２４−３４）、
ＣＤＲ−Ｌ２が、Ｙ−Ａ−Ｓ−Ｎ−Ｒ−Ｙ−Ｔ（配列番号３８の残基５０−５６）及び
ＣＤＲ−Ｌ３が、Ｑ−Ｑ−Ｄ−Ｙ−Ｎ−Ｓ−Ｐ−Ｗ−Ｔ（配列番号３８の残基８９−９７）；
（Ｃ）ＣＤＲ−Ｈ１が、Ｓ−Ｙ−Ｗ−Ｉ−Ｅ（配列番号３９の残基３１−３５）、
ＣＤＲ−Ｈ２が、Ｄ−Ｉ−Ｌ−Ｐ−Ｇ−Ｓ−Ｇ−Ｓ−Ｔ−Ｎ−Ｙ−Ｎ−Ｅ−Ｋ−Ｆ−Ｋ−Ｄ（配列番号３９の残基５０−６６）、
ＣＤＲ−Ｈ３が、Ｒ−Ｒ−Ｆ−Ｒ−Ｇ−Ｌ−Ｄ−Ｙ（配列番号３９の残基９９−１０６）、
ＣＤＲ−Ｌ１が、Ｋ−Ａ−Ｓ−Ｑ−Ｓ−Ｖ−Ｓ−Ｎ−Ｄ−Ｖ−Ａ（配列番号４０の残基２４−３４）、
ＣＤＲ−Ｌ２が、Ｙ−Ａ−Ｓ−Ｎ−Ｒ−Ｙ−Ｔ（配列番号４０の残基５０−５６）及び
ＣＤＲ−Ｌ３が、Ｑ−Ｑ−Ｄ−Ｙ−Ｔ−Ｓ−Ｐ−Ｆ−Ｔ（配列番号４０の残基８９−９７）；
（Ｄ）ＣＤＲ−Ｈ１が、Ｄ−Ｙ−Ｗ−Ｉ−Ｅ（配列番号４１の残基３１−３５）、
ＣＤＲ−Ｈ２が、Ｇ−Ｆ−Ｓ−Ｈ−Ｇ−Ｓ−Ｇ−Ｓ−Ｔ−Ｎ−Ｙ−Ｎ−Ｅ−Ｋ−Ｆ−Ｋ−Ｇ（配列番号４１の残基５０−６６）、
ＣＤＲ−Ｈ３が、Ｒ−Ｒ−Ｆ−Ｒ−Ｇ−Ｍ−Ｄ−Ｙ（配列番号４１の残基９９−１０６）、
ＣＤＲ−Ｌ１が、Ｋ−Ａ−Ｓ−Ｑ−Ｓ−Ｖ−Ｓ−Ｎ−Ｄ−Ｖ−Ａ（配列番号４２の残基２４−３４）、
ＣＤＲ−Ｌ２が、Ｙ−Ａ−Ｓ−Ｎ−Ｒ−Ｙ−Ｔ（配列番号４２の残基５０−５６）及び
ＣＤＲ−Ｌ３が、Ｑ−Ｑ−Ｄ−Ｙ−Ｓ−Ｓ−Ｐ−Ｗ−Ｓ（配列番号４２の残基８９−９７）；
（Ｅ）ＣＤＲ−Ｈ１が、Ｄ−Ｙ−Ｓ−Ｍ−Ｈ（配列番号４３の残基３１−３５）、
ＣＤＲ−Ｈ２が、Ｗ−Ｉ−Ｎ−Ｔ−Ｅ−Ｔ−Ｇ−Ｅ−Ｐ−Ｔ−Ｙ−Ａ−Ｄ−Ｄ−Ｆ−Ｋ−Ｇ（配列番号４３の残基５０−６６）、
ＣＤＲ−Ｈ３が、Ｒ−Ｒ−Ｙ−Ｒ−Ａ−Ｆ−Ｄ−Ｙ（配列番号４３の残基９９−１０６）、
ＣＤＲ−Ｌ１が、Ｋ−Ａ−Ｓ−Ｑ−Ｓ−Ｖ−Ｓ−Ｎ−Ｄ−Ｖ−Ａ（配列番号４４の残基２４−３４）、
ＣＤＲ−Ｌ２が、Ｙ−Ａ−Ｓ−Ｎ−Ｒ−Ｙ−Ｔ（配列番号４４の残基５０−５６）及び
ＣＤＲ−Ｌ３が、Ｑ−Ｑ−Ｄ−Ｙ−Ｔ−Ｓ−Ｐ−Ｙ−Ｔ（配列番号４４の残基８９−９７）；
（Ｆ）ＣＤＲ−Ｈ１が、Ｄ−Ｙ−Ｇ−Ｍ−Ｖ（配列番号４５の残基３１−３５）、
ＣＤＲ−Ｈ２が、Ｓ−Ｉ−Ｓ−Ｓ−Ｇ−Ｓ−Ｓ−Ｎ−Ｉ−Ｙ−Ｙ−Ａ−Ｄ−Ｔ−Ｖ−Ｋ−Ｇ（配列番号４５の残基５０−６６）、
ＣＤＲ−Ｈ３が、Ｎ−Ｐ−Ｙ（配列番号４５の残基９９−１０１）、
ＣＤＲ−Ｌ１が、Ｋ−Ａ−Ｓ−Ｑ−Ｎ−Ｖ−Ｇ−Ｔ−Ｎ−Ｖ−Ａ（配列番号４６の残基２４−３４）、
ＣＤＲ−Ｌ２が、Ｓ−Ａ−Ｓ−Ｈ−Ｒ−Ｙ−Ｓ（配列番号４６の残基５０−５６）及び
ＣＤＲ−Ｌ３が、Ｑ−Ｑ−Ｙ−Ｎ−Ｓ−Ｙ−Ｐ−Ｌ−Ｔ（配列番号４６の残基８９−９７）；
（Ｇ）ＣＤＲ−Ｈ１が、Ｄ−Ｙ−Ｇ−Ｍ−Ｖ（配列番号４７の残基３１−３５）、
ＣＤＲ−Ｈ２が、Ｙ−Ｉ−Ｓ−Ｓ−Ｇ−Ｓ−Ｓ−Ｔ−Ｉ−Ｈ−Ｙ−Ａ−Ｄ−Ｔ−Ｍ−Ｋ−Ｇ（配列番号４７の残基５０−６６）、
ＣＤＲ−Ｈ３が、Ｒ−Ｈ−Ｙ−Ｙ−Ａ−Ｍ−Ｄ−Ｙ（配列番号４７の残基９９−１０６）、
ＣＤＲ−Ｌ１が、Ｋ−Ａ−Ｓ−Ｑ−Ｓ−Ｖ−Ｓ−Ｎ−Ｄ−Ｖ−Ａ（配列番号４８の残基２４−３４）、
ＣＤＲ−Ｌ２が、Ｙ−Ａ−Ｓ−Ｎ−Ｒ−Ｙ−Ｔ（配列番号４８の残基５０−５６）及び
ＣＤＲ−Ｌ３が、Ｑ−Ｑ−Ｄ−Ｙ−Ｔ−Ｓ−Ｐ−Ｆ−Ｔ（配列番号４８の残基８９−９７）；
（Ｈ）ＣＤＲ−Ｈ１が、Ｄ−Ｔ−Ｆ−Ｍ−Ｈ（配列番号４９の残基３１−３５）、
ＣＤＲ−Ｈ２が、Ｒ−Ｉ−Ｄ−Ｐ−Ａ−Ｎ−Ｇ−Ｈ−Ｔ−Ｋ−Ｙ−Ｄ−Ｐ−Ｋ−Ｆ−Ｑ−Ｇ（配列番号４９の残基５０−６６）、
ＣＤＲ−Ｈ３が、Ｗ−Ｇ−Ｑ−Ｆ−Ｇ−Ｌ−Ｌ−Ｗ−Ｎ−Ａ−Ｍ−Ｄ−Ｙ（配列番号４９の残基９９−１１１）、
ＣＤＲ−Ｌ１が、Ｒ−Ａ−Ｓ−Ｅ−Ｓ−Ｖ−Ｄ−Ｎ−Ｙ−Ｇ−Ｉ−Ｓ−Ｆ−Ｍ−Ｎ（配列番号５０の残基２４−３８）、
ＣＤＲ−Ｌ２が、Ａ−Ａ−Ｓ−Ｎ−Ｑ−Ｇ−Ｓ（配列番号５０の残基５４−６０）及び
ＣＤＲ−Ｌ３が、Ｑ−Ｑ−Ｓ−Ｋ−Ｅ−Ｖ−Ｐ−Ｐ−Ｔ（配列番号５０の残基９３−１０１）；
（Ｉ）ＣＤＲ−Ｈ１が、Ｔ−Ｓ−Ｇ−Ｍ−Ｇ−Ｖ−Ｓ（配列番号５１の残基３１−３７）、
ＣＤＲ−Ｈ２が、Ｈ−Ｉ−Ｗ−Ｗ−Ｄ−Ｇ−Ｄ−Ｓ−Ｙ−Ｓ−Ｎ−Ｐ−Ｓ−Ｌ−Ｒ−Ｓ（配列番号５１の残基５２−６７）、
ＣＤＲ−Ｈ３が、Ｒ−Ｔ−Ｒ−Ｖ−Ｎ−Ｙ−Ａ−Ｍ−Ｄ−Ｙ（配列番号５１の残基１００−１０９）、
ＣＤＲ−Ｌ１が、Ｋ−Ａ−Ｓ−Ｑ−Ｓ−Ｖ−Ｓ−Ｎ−Ｄ−Ｖ−Ａ（配列番号５２の残基２４−３４）、
ＣＤＲ−Ｌ２が、Ｙ−Ａ−Ｓ−Ｎ−Ｒ−Ｙ−Ｔ（配列番号５２の残基５０−５６）及び
ＣＤＲ−Ｌ３が、Ｑ−Ｑ−Ｄ−Ｙ−Ｎ−Ｓ−Ｐ−Ｗ−Ｔ（配列番号５２の残基８９−９７）；並びに
（Ｊ）ＣＤＲ−Ｈ１が、Ｄ−Ｙ−Ｙ−Ｉ−Ｈ（配列番号５３の残基３１−３５）、
ＣＤＲ−Ｈ２が、Ｗ−Ｉ−Ｄ−Ｐ−Ｅ−Ｎ−Ｇ−Ｙ−Ｓ−Ｅ−Ｙ−Ａ−Ｐ−Ｒ−Ｆ−Ｑ−Ｄ（配列番号５３の残基５０−６６）、
ＣＤＲ−Ｈ３が、Ｇ−Ｅ−Ｌ−Ａ−Ｒ−Ｙ−Ｆ−Ｄ−Ｙ（配列番号５３の残基９９−１０７）、
ＣＤＲ−Ｌ１が、Ｒ−Ａ−Ｓ−Ｑ−Ｓ−Ｉ−Ｓ−Ｋ−Ｎ−Ｌ−Ｈ（配列番号５４の残基２４−３４）、
ＣＤＲ−Ｌ２が、Ｙ−Ｔ−Ｓ−Ｑ−Ｓ−Ｉ−Ｓ（配列番号５４の残基５０−５６）及び
ＣＤＲ−Ｌ３が、Ｑ−Ｑ−Ｓ−Ｉ−Ｓ−Ｗ−Ｐ−Ｌ−Ｔ（配列番号５４の残基８９−９７）
のＣＤＲのセットから選択される、結合蛋白質。
【請求項２】
ＶＨについて配列番号３５及びＶＬについて配列番号３６、
ＶＨについて配列番号６１及びＶＬについて配列番号６２、
ＶＨについて配列番号６３及びＶＬについて配列番号６４、
ＶＨについて配列番号６５及びＶＬについて配列番号６６、
ＶＨについて配列番号６５及びＶＬについて配列番号３６、
ＶＨについて配列番号３５及びＶＬについて配列番号６２、
ＶＨについて配列番号８０及びＶＬについて配列番号８１、
ＶＨについて配列番号８２及びＶＬについて配列番号８３、
ＶＨについて配列番号８４及びＶＬについて配列番号８５、
ＶＨについて配列番号８６及びＶＬについて配列番号８７、
ＶＨについて配列番号３７及びＶＬについて配列番号３８、
ＶＨについて配列番号６７及びＶＬについて配列番号６８、
ＶＨについて配列番号６９及びＶＬについて配列番号７０、
ＶＨについて配列番号６７及びＶＬについて配列番号７０、
ＶＨについて配列番号６９及びＶＬについて配列番号６８、
ＶＨについて配列番号６９及びＶＬについて配列番号３８、
ＶＨについて配列番号３７及びＶＬについて配列番号７０、
ＶＨについて配列番号３７及びＶＬについて配列番号６８、
ＶＨについて配列番号６７及びＶＬについて配列番号３８、
ＶＨについて配列番号６７及びＶＬについて配列番号７９、
ＶＨについて配列番号９８及びＶＬについて配列番号９９、
ＶＨについて配列番号１００及びＶＬについて配列番号１０１、
ＶＨについて配列番号１０２及びＶＬについて配列番号１０３、
ＶＨについて配列番号３９及びＶＬについて配列番号４０、
ＶＨについて配列番号４１及びＶＬについて配列番号４２、
ＶＨについて配列番号７５及びＶＬについて配列番号７６、
ＶＨについて配列番号７７及びＶＬについて配列番号７８、
ＶＨについて配列番号９０及びＶＬについて配列番号９１、
ＶＨについて配列番号４３及びＶＬについて配列番号４４、
ＶＨについて配列番号４５及びＶＬについて配列番号４６、
ＶＨについて配列番号７１及びＶＬについて配列番号７２、
ＶＨについて配列番号８８及びＶＬについて配列番号８９、
ＶＨについて配列番号１０４及びＶＬについて配列番号１０５、
ＶＨについて配列番号１０６及びＶＬについて配列番号１０７、
ＶＨについて配列番号１０８及びＶＬについて配列番号１０９、
ＶＨについて配列番号４７及びＶＬについて配列番号４８、
ＶＨについて配列番号４９及びＶＬについて配列番号５０、
ＶＨについて配列番号５１及びＶＬについて配列番号５２及び
ＶＨについて配列番号５３及びＶＬについて配列番号５４
からなる群から選択される重鎖可変領域（ＶＨ）配列及び軽鎖可変領域（ＶＬ）配列を含む、請求項１に記載の結合蛋白質。
【請求項３】
重鎖可変領域（ＶＨ）配列が配列番号８２であり、軽鎖可変領域（ＶＬ）配列が配列番号８３である請求項２に記載の結合蛋白質。
【請求項４】
重鎖可変領域（ＶＨ）配列が配列番号６７であり、軽鎖可変領域（ＶＬ）配列が配列番号６８である請求項２に記載の結合蛋白質。
【請求項５】
重鎖可変領域（ＶＨ）配列が配列番号７７であり、軽鎖可変領域（ＶＬ）配列が配列番号７８である請求項２に記載の結合蛋白質。
【請求項６】
重鎖可変領域（ＶＨ）配列が配列番号７１であり、軽鎖可変領域（ＶＬ）配列が配列番号７２である請求項２に記載の結合蛋白質。
【請求項７】
ヒトＩＬ−１２及びヒトＩＬ−２３から成る群から選択されるターゲットに結合することができる請求項１〜６のいずれか１項に記載の結合蛋白質。
【請求項８】
ヒトＩＬ−１２及びヒトＩＬ−２３から成る群から選択されるターゲットの生理機能を調節することができる請求項７に記載の結合蛋白質。
【請求項９】
ヒトＩＬ−１２及びヒトＩＬ−２３から成る群から選択されるターゲットの生理機能を中和することができる請求項７に記載の結合蛋白質。
【請求項１０】
表面プラズモン共鳴法により測定した場合にターゲットに対して少なくとも１０２Ｍ−１ｓ−１会合速度定数（Ｋｏｎ）をもつ請求項７に記載の結合蛋白質。
【請求項１１】
表面プラズモン共鳴法により測定した場合にターゲットに対して多くとも１０−３ｓ−１の解離速度定数（Ｋｏｆｆ）をもつ請求項７に記載の結合蛋白質。
【請求項１２】
ターゲットに対して多くとも１０−７Ｍの解離定数（ＫＤ）をもつ請求項７に記載の結合蛋白質。
【請求項１３】
結晶である請求項１に記載の結合蛋白質。
【請求項１４】
請求項１〜６のいずれか１項に記載の結合蛋白質と、医薬的に許容可能なキャリヤーとを含有する医薬組成物。
【請求項１５】
医薬的に許容可能なキャリヤーが結合蛋白質の吸収又は分散を増進するために有用なアジュバントとして機能し、前記アジュバントがヒアルロニダーゼである請求項１４に記載の医薬組成物。
【請求項１６】
ヒトアクセプターフレームワークをさらに含む請求項１に記載の結合蛋白質。
【請求項１７】
ヒトアクセプターフレームワークが、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号９２、配列番号９３、配列番号９４、配列番号９５、配列番号９６及び配列番号９７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む請求項１６に記載の結合蛋白質。
【請求項１８】
請求項１〜６のいずれか１項に記載の結合蛋白質のアミノ酸配列をコードする単離核酸。
【請求項１９】
請求項１８に記載の単離核酸を含むベクター。
【請求項２０】
ｐｃＤＮＡ、ｐＴＴ、ｐＴＴ３、ｐＥＦＢＯＳ、ｐＢＶ、ｐＪＶ及びｐＢＪからなる群から選択される請求項１９に記載のベクター。
【請求項２１】
請求項１８に記載の単離核酸又は請求項１９に記載のベクターを含む宿主細胞。
【請求項２２】
原核細胞である請求項２１に記載の宿主細胞。
【請求項２３】
原核細胞が大腸菌細胞である請求項２２に記載の宿主細胞。
【請求項２４】
真核細胞である請求項２１に記載の宿主細胞。
【請求項２５】
真核細胞が原生生物細胞、動物細胞、植物細胞及び真菌細胞からなる群から選択される請求項２４に記載の宿主細胞。
【請求項２６】
真菌細胞が酵母細胞である請求項２５に記載の宿主細胞。
【請求項２７】
動物細胞が哺乳動物細胞、鳥類細胞及び昆虫細胞からなる群から選択される請求項２５に記載の宿主細胞。
【請求項２８】
哺乳動物細胞がＣＨＯ細胞又はＣＯＳ細胞である請求項２７に記載の宿主細胞。
【請求項２９】
請求項１〜６のいずれか１項に記載の結合蛋白質の作製方法であって、結合蛋白質を産生させるために十分な条件下で請求項２１〜２８のいずれか１項に記載の宿主細胞を培地で培養することを含む、方法。
【請求項３０】
請求項１〜６のいずれか１項に記載の結合蛋白質と、医薬的に許容可能なキャリヤーとを含有する、ＩＬ−１２又はＩＬ−２３活性が有害である疾患又は障害を治療するための医薬組成物。
【請求項３１】
ＩＬ−１２又はＩＬ−２３活性が害をもたらす障害を治療するための少なくとも１種の他の治療剤をさらに含む請求項３０に記載の医薬組成物。
【請求項３２】
他の治療剤が、治療剤、イメージング剤、細胞傷害性物質、血管新生阻害剤、キナーゼ阻害剤、共刺激分子遮断薬、接着分子遮断薬、抗サイトカイン抗体又はその機能的フラグメント、メトトレキセート、シクロスポリン、ラパマイシン、ＦＫ５０６、検出可能なラベル又はレポーター、ＴＮＦアンタゴニスト、抗リウマチ薬、筋肉弛緩剤、麻薬、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、鎮痛剤、麻酔剤、鎮静剤、局所麻酔剤、神経筋遮断薬、抗微生物薬、乾癬治療薬、コルチコステロイド、同化ステロイド、エリスロポエチン、免疫、免疫グロブリン、免疫抑制剤、成長ホルモン、ホルモン補充薬、放射性薬剤、抗鬱剤、抗精神病薬、覚醒剤、喘息薬、βアゴニスト、吸入ステロイド、エピネフリン又はアナログ、サイトカイン及びサイトカインアンタゴニストからなる群から選択される請求項３１に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明はＩＬ−１２ｐ４０結合蛋白質、特に急性及び慢性炎症性疾患の予防及び／又は治療におけるその使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
ヒトインターロイキン１２（ＩＬ−１２）はユニークな構造と多面的効果をもつサイトカインである（Ｋｏｂａｙａｓｈｉら（１９８９）Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  １７０：８２７−８４５；Ｓｅｄｅｒら（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．９０：１０１８８−１０１９２，Ｌｉｎｇら（１９９５）Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  １５４：１１６−１２７；Ｐｏｄｌａｓｋｉら（１９９２）Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．２９４：２３０−２３７）。ＩＬ−１２は免疫応答や炎症応答を伴う数種の疾患に関連する病理において重要な役割を果たす。ＩＬ−１２、その生理活性及び疾患におけるその役割についてはＴｒｉｎｃｈｉｅｒｉ，Ｇ．（２００３）Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎ．３：１３３−１４６に記載されている。構造的には、ＩＬ−１２はジスルフィド結合により相互に結合した３５ｋＤａサブユニット（ｐ３５）と４０ｋＤａサブユニット（ｐ４０）を含むヘテロ二量体蛋白質（「ｐ７０蛋白質」と言う）である。このヘテロ二量体蛋白質は単球、マクロファージ及び樹状細胞等の抗原提示細胞により主に産生される。これらの細胞種は更にｐ７０サブユニットに比較して過剰のｐ４０サブユニットを分泌する。ｐ４０サブユニットとｐ３５サブユニットは遺伝的に無関係であり、どちらも生理活性をもつとは報告されていないが、ｐ４０ホモ二量体はＩＬ−１２アンタゴニストとして機能するらしい。
【０００３】
機能的には、ＩＬ−１２は抗原特異的Ｔヘルパー１型（Ｔｈ１）及び２型（Ｔｈ２）リンパ球のバランスの調節に中心的役割を果たす。Ｔｈ１及びＴｈ２細胞は自己免疫疾患の発症と進行を司り、ＩＬ−１２はＴｈ１リンパ球分化及び成熟の調節に重要である。Ｔｈ１細胞により放出されるサイトカインは炎症性であり、インターフェロンγ（ＩＦＮγ）、ＩＬ−２及びリンホトキシン（ＬＴ）が挙げられる。Ｔｈ２細胞はＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−１０及びＩＬ−１３を分泌し、体液性免疫、アレルギー反応及び免疫抑制を助長する。自己免疫疾患におけるＴｈ１応答の優勢とＩＦＮγの前炎症活性に一致し、ＩＬ−１２は関節リウマチ（ＲＡ）、多発性硬化症（ＭＳ）、乾癬（ＰＳ）及びクローン病（ＣＤ）等の多数の自己免疫疾患及び炎症性疾患に関連する病理に主要な役割を果たすと思われる。
【０００４】
ヒトＭＳ患者は急性ＭＳプラーク中のｐ４０  ｍＲＮＡ濃度により報告されているように、ＩＬ−１２発現の増加が実証されている（Ｗｉｎｄｈａｇｅｎら，（１９９５）Ｊ  Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８２：１９８５−１９９６）。更に、ＭＳ患者に由来するＣＤ４０Ｌ発現Ｔ細胞で抗原提示細胞をｅｘ  ｖｉｖｏ刺激すると、対照Ｔ細胞に比較してＩＬ−１２産生が増加し、ＣＤ４０／ＣＤ４０Ｌ相互作用はＩＬ−１２の強力なインデューサーであるという見解に一致した。ＲＡ患者の滑液でも健常対照に比較してＩＬ−１２ｐ７０濃度の増加が検出されている（Ｍｏｒｉｔａら（１９９８）Ａｒｔｈ．ａｎｄ  Ｒｈｅｕｍａｔ．４１：３０６−３１４）。ＲＡ滑液中のサイトカインメッセンジャーリボ核酸（ｍＲＮＡ）発現プロファイルによると、主にＴｈ１サイトカインであることが分かった（Ｂｕｃｈｔら（１９９６）Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１０３：３４７−３６７）。ＩＬ−１２はクローン病に関連する病理においても重要な役割を果たしていると思われる。クローン病患者の腸粘膜でＩＮＦγ及びＩＬ−１２の発現増加が観察されている（Ｆａｉｓら（１９９４）Ｊ  Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ  Ｒｅｓ．１４：２３５−２３８；Ｐａｒｒｏｎｃｈｉら（１９９７）Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈ．１５０：８２３−８３２；Ｍｏｎｔｅｌｅｏｎｅら（１９９７）Ｇａｓｔｒｏｅｎｔ．１１２：１１６９−１１７８、及びＢｅｒｒｅｂｉら（１９９８）Ａｍ．Ｊ  Ｐａｔｈ  １５２：６６７−６７２）。クローン病患者（ＣＤ患者）の固有層に由来するＴ細胞のサイトカイン分泌プロファイルはＩＦＮγ濃度の著しい増加を含むＴｈ１応答優勢の特徴を示す（Ｆｕｓｓら（１９９６）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５７：１２６１−１２７０）。更に、クローン病患者に由来する結腸組織切片はＩＬ−１２を発現するマクロファージとＩＦＮγを発現するＴ細胞の含有量が多い（Ｐａｒｒｏｎｃｈｉら（１９９７）Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈ．１５０：８２３−８３２）。
【０００５】
ＩＬ−２３もヘテロ二量体サイトカインであり、ＩＬ−１２とＩＬ−２７を含む５種の同様のヘテロ二量体サイトカインのファミリーに属する（Ｔｒｉｎｃｈｉｅｒｉら，（２００３）Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  １９：６４１−６４４）。ＩＬ−２３はｐ４０サブユニットがＩＬ−１２と同一であるが、ジスルフィド結合を介してｐ１９サブユニットと結合している。ｐ１９サブユニットはＩＬ−６、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）及びＩＬ−１２のｐ３５サブユニットと構造的に近縁である。ＩＬ−２３はＩＬ−１２と同様の細胞種により産生され、その受容体はＴ細胞、ＮＫ細胞並びに貪食及び樹状造血細胞で発現される。ＩＬ−２３はＩＬ−２３Ｒ及びＩＬ−１２β１から構成されるヘテロ二量体受容体と結合することによりシグナル伝達を媒介する。ＩＬ−１２β１サブユニットはＩＬ−１２β１とＩＬ−１２β２から構成されるＩＬ−１２受容体の成分でもある。ＩＬ−２３は（ＩＦＮγ産生、Ｔｈ１細胞分化及び樹状細胞の抗原提示機能の活性化を誘導することにより）ＩＬ−１２とオーバーラップする機能をもつが、選択的に記憶Ｔ細胞の増殖を誘導する（Ｏｐｐｍａｎｎら（２０００）Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  １３：７１５−７２５，Ｐａｒｈａｍら（２００２）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６８：５６９９−５７０８）。
【０００６】
自己免疫性炎症におけるＩＬ−２３の役割はｐ１９ノックアウトマウスの試験により分析されている（Ｍｕｒｐｈｙら，Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  １９８：１９５１−１９５７；Ｃｕａら（２００３）Ｎａｔｕｒｅ  ４２１：７４４−７４８）。試験によると、ＩＬ−２３は感染に対する免疫応答を調節することが実証されている（例えばＰｉｒｈｏｎｅｎら（２００２）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６９：５６７３−５６７８；Ｂｒｏｂｅｒｇら（２００２）Ｊ．Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ  Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  Ｒｅｓ．２２：６４１−６５１；Ｅｌｋｉｎｓら（２００２）Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ７０：１９３６−１９４８；Ｃｏｏｐｅｒら（２００２）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６８：１３２２−１３２７参照）。ＩＬ−２３は免疫による炎症性疾患に役割を果たすと考えられている（Ｌａｎｇｒｉｓｈら（２００４）Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｒｅｖｉｅｗｓ２０２：９６−１０５）。
【０００７】
各種ヒト疾患におけるヒトＩＬ−１２の役割により、ＩＬ−１２活性を阻害又は抑制するように治療ストラテジーが設計されている。特に、ＩＬ−１２と結合してこれを中和する抗体はＩＬ−１２活性を阻害するための手段として検討されている。最初期抗体としてはＩＬ−１２を免疫したマウスのリンパ球から作製したハイブリドーマにより分泌させたマウスモノクローナル抗体（ｍＡｂ）があった（例えばＳｔｒｏｂｅｒら，ＰＣＴ公開ＷＯ９７／１５３２７；Ｇａｔｅｌｙら，ＷＯ９９３７６８２  Ａ２；Ｎｅｕｒａｔｈら，Ｊ  Ｅｘｐ．Ｍｅｄ  １８２：１２８１−１２９０（１９９５）；Ｄｕｃｈｍａｒｍら，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２６：９３４−９３８（１９９６）参照）。これらのマウスＩＬ−１２抗体はマウス抗体をヒトに投与することに伴う問題（例えば、血清半減期が短く、所定のヒトエフェクター機能を発揮できず、ヒトではマウス抗体に対して望ましくない免疫応答を誘発する（「ヒト抗マウス抗体」（ＨＡＭＡ）反応））があるため、そのｉｎ  ｖｉｖｏ使用が制限されている。
【０００８】
ヒトで完全マウス抗体を使用することに伴う問題を解決するための１つのアプローチはＳａｌｆｅｌｄら，ＰＣＴ公開ＷＯ００／５６７７２  Ａ１に開示されている抗体等の完全ヒト抗体を作製する方法である。ヒトで完全マウス抗体を使用することに伴う問題を解決するための他のアプローチでは抗体をより「ヒト様」にするように遺伝子組換えしている。例えば、抗体鎖の可変領域がマウスに由来し、抗体鎖の定常領域がヒトに由来するキメラ抗体が作製されている（Ｊｕｎｇｈａｎｓら（１９９０）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５０：１４９５−１５０２；Ｂｒｏｗｎら（１９９１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８８：２６６３−２６６７；Ｋｅｔｔｌｅｂｏｒｏｕｇｈら（１９９１）Ｐｒｏｔ．Ｅｎｇｉｎｅｅｒ．４：７７３−７８３）。ＩＬ−１２に対するこのようなキメラ抗体もＰｅｒｉｔｔら，ＰＣＴ公開ＷＯ２００２０９７０４８Ａ２に開示されている。しかし、これらのキメラ抗体は依然としてマウス可変領域鎖配列を保持しているので、特に長期投与する場合には望ましくない免疫反応であるヒト抗キメラ抗体（ＨＡＣＡ）反応を誘発する可能性がある。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
ＩＬ−１２のｐ４０サブユニット（ＩＬ−１２ｐ４０）と結合することが可能な改善型抗体が当分野で必要とされている。抗体はＩＬ−１２及び／又はＩＬ−２３と結合することが好ましい。抗体はＩＬ−１２及び／又はＩＬ−２３を中和できることが好ましい。本発明はＩＬ−１２ｐ４０と高い親和性で結合することができ、ＩＬ−１２及び／又はＩＬ−２３と結合してこれを中和することが可能な結合蛋白質の新規ファミリー、ＣＤＲグラフト抗体、ヒト化抗体及びそのフラグメントを提供する。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
発明の概要
本発明はＩＬ−１２ｐ４０結合蛋白質、特にヒトＩＬ−１２のｐ４０サブユニット及びヒトＩＬ−２３のｐ４０サブユニットと結合することが可能な抗体に関する。更に、本発明はＩＬ−１２ｐ４０結合蛋白質の作製方法と使用方法を提供する。
【００１１】
本発明の１側面はＩＬ−１２のｐ４０サブユニットと結合することが可能な抗原結合領域を含む結合蛋白質に関する。１態様では、抗原結合領域は、
ＣＤＲ−Ｈ１．Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７（配列番号５５）
（式中、Ｘ１はＤ、Ｋ、Ｔ又はＳであり；
Ｘ２はＹ、Ｓ又はＴであり；
Ｘ３はＹ、Ｖ、Ｇ、Ｗ、Ｓ又はＦであり；
Ｘ４はＩ又はＭであり；
Ｘ５はＨ、Ｇ、Ｅ又はＶであり；
Ｘ６はＶ又は不存在であり；
Ｘ７はＳ又は不存在である）；
ＣＤＲ−Ｈ２．Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−Ｘ８−Ｘ９−Ｘ１０−Ｘ１１−Ｘ１２−Ｘ１３−Ｘ１４−Ｘ１５−Ｘ１６−Ｘ１７−Ｘ１８−Ｘ１９−Ｘ２０（配列番号５６）
（式中、Ｘ１はＨ、Ｄ、Ｇ、Ｗ、Ｓ、Ｙ又はＲであり；
Ｘ２はＩ又はＦであり；
Ｘ３はＹ、Ｗ、Ｌ、Ｓ、Ｎ、Ｄ又はＧであり；
Ｘ４はＷ、Ｐ、Ｈ、Ｔ又はＳであり；
Ｘ５はＤ、Ｇ、Ｅ、Ａ又はＩであり；
Ｘ６はＤ、Ｇ、Ｓ、Ｔ又はＮであり；
Ｘ７はＤ、Ｇ、Ｓ又はＰであり；
Ｘ８はＫ、Ｎ、Ｓ、Ｅ、Ｔ又はＨであり；
Ｘ９はＹ、Ｔ、Ｐ、Ｉ又はＮであり；
Ｘ１０はＹ、Ｎ、Ｔ、Ｈ、Ｋ、Ｓ又はＧであり；
Ｘ１１はＮ又はＹであり；
Ｘ１２はＰ、Ｎ、Ａ、Ｄ又はＳであり；
Ｘ１３はＳ、Ｅ、Ｄ又はＰであり；
Ｘ１４はＬ、Ｋ、Ｄ、Ｔ又はＹであり；
Ｘ１５はＫ、Ｆ、Ｖ、Ｍ、Ｒ又はＡであり；
Ｘ１６はＳ、Ｋ、Ｑ、Ｐ又は不存在であり；
Ｘ１７はＤ、Ｇ、Ｒ又は不存在であり；
Ｘ１８はＦ又は不存在であり；
Ｘ１９はＱ又は不存在であり；
Ｘ２０はＤ又は不存在である）；
ＣＤＲ−Ｈ３．Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−Ｘ８−Ｘ９−Ｘ１０−Ｘ１１−Ｘ１２−Ｘ１３（配列番号５７）
（式中、Ｘ１はＲ、Ｎ又はＷであり；
Ｘ２はＧ、Ｔ、Ｒ、Ｐ又はＨであり；
Ｘ３はＩ、Ｒ、Ｆ、Ｙ又はＱであり；
Ｘ４はＲ、Ｖ、Ｙ、Ｆ又はＡであり；
Ｘ５はＳ、Ｎ、Ｇ、Ａ又はＲであり；
Ｘ６はＡ、Ｙ、Ｌ、Ｆ又はＭであり；
Ｘ７はＭ、Ａ、Ｄ、Ｌ又はＦであり；
Ｘ８はＤ、Ｍ、Ｙ又はＷであり；
Ｘ９はＹ、Ｄ又はＮであり；
Ｘ１０はＹ、Ａ又は不存在であり；
Ｘ１１はＭ又は不存在であり；
Ｘ１２はＤ又は不存在であり；
Ｘ１３はＹ又は不存在である）；
ＣＤＲ−Ｌ１．Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−Ｘ８−Ｘ９−Ｘ１０−Ｘ１１−Ｘ１２−Ｘ１３−Ｘ１４−Ｘ１５（配列番号５８）
（式中、Ｘ１はＫ又はＲであり；
Ｘ２はＡであり；
Ｘ３はＳであり；
Ｘ４はＱ又はＥであり；
Ｘ５はＳ又はＮであり；
Ｘ６はＶ又はＩであり；
Ｘ７はＳ、Ｇ又はＤであり；
Ｘ８はＮ、Ｔ又はＫであり；
Ｘ９はＤ、Ｎ又はＹであり；
Ｘ１０はＶ、Ｇ又はＬであり；
Ｘ１１はＡ、Ｉ又はＨであり；
Ｘ１２はＳ又は不存在であり；
Ｘ１３はＦ又は不存在であり；
Ｘ１４はＭ又は不存在であり；
Ｘ１５はＮ又は不存在である）；
ＣＤＲ−Ｌ２．Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−Ｘ８（配列番号５９）
（式中、Ｘ１はＹ又はＳであり；
Ｘ２はＡ又はＴであり；
Ｘ３はＳ又はＡであり；
Ｘ４はＮ、Ｈ、Ｓ又はＱであり；
Ｘ５はＲ、Ｎ又はＳであり；
Ｘ６はＹ、Ｑ又はＩであり；
Ｘ７はＴ、Ｓ又はＧであり；
Ｘ８はＳ又は不存在である）；及び
ＣＤＲ−Ｌ３．Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−Ｘ８−Ｘ９（配列番号６０）
（式中、Ｘ１はＱであり；
Ｘ２はＱであり；
Ｘ３はＤ、Ｙ又はＳであり；
Ｘ４はＹ、Ｎ、Ｋ又はＩであり；
Ｘ５はＮ、Ｔ、Ｓ又はＥであり；
Ｘ６はＳ、Ｙ、Ｖ又はＷであり；
Ｘ７はＰであり；
Ｘ８はＷ、Ｆ、Ｙ、Ｌ又はＰであり；
Ｘ９はＴ又はＳである）から構成される群から選択されるアミノ酸配列を含む少なくとも１個のＣＤＲを含む。
【００１２】
抗原結合領域は配列番号３５の残基３１−３７；配列番号３５の残基５２−６７；配列番号３５の残基１００−１０８；配列番号３６の残基２４−３４；配列番号３６の残基５０−５６；配列番号３６の残基８９−９７；配列番号３７の残基３１−３７；配列番号３７の残基５２−６７；配列番号３７の残基１００−１０９；配列番号３８の残基２４−３４；配列番号３８の残基５０−５６；配列番号３８の残基８９−９７；配列番号３９の残基３１−３５；配列番号３９の残基５０−６６；配列番号３９の残基９９−１０６；配列番号４０の残基２４−３４；配列番号４０の残基５０−５６；配列番号４０の残基８９−９７；配列番号４１の残基３１−３５；配列番号４１の残基５０−６６；配列番号４１の残基９９−１０６；配列番号４２の残基２４−３４；配列番号４２の残基５０−５６；配列番号４２の残基８９−９７；配列番号４３の残基３１−３５；配列番号４３の残基５０−６６；配列番号４３の残基９９−１０６；配列番号４４の残基２４−３４；配列番号４４の残基５０−５６；配列番号４４の残基８９−９７；配列番号４５の残基３１−３５；配列番号４５の残基５０−６６；配列番号４５の残基９９−１０１；配列番号４６の残基２４−３４；配列番号４６の残基５０−５６；配列番号４６の残基８９−９７；配列番号４７の残基３１−３５；配列番号４７の残基５０−６６；配列番号４７の残基９９−１０６；配列番号４８の残基２４−３４；配列番号４８の残基５０−５６；配列番号４８の残基８９−９７；配列番号４９の残基３１−３５；配列番号４９の残基５０−６６；配列番号４９の残基９９−１１１；配列番号５０の残基２４−３８；配列番号５０の残基５３−６０；配列番号５０の残基９３−１０１；配列番号５１の残基３１−３７；配列番号５１の残基５２−６７；配列番号５１の残基１００−１０９；配列番号５２の残基２４−３４；配列番号５２の残基５０−５６；配列番号５２の残基８９−９７；配列番号５３の残基３１−３５；配列番号５３の残基４７−６６；配列番号５３の残基９９−１０７；配列番号５４の残基２４−３４；配列番号５４の残基５０−５６；及び配列番号５４の残基８９−９７から構成される群から選択されるアミノ酸配列を含む少なくとも１個のＣＤＲを含むことが好ましい。好ましい１態様では、結合蛋白質は上記配列から構成される群から選択される少なくとも３個のＣＤＲを含む。選択される３個のＣＤＲは、
【００１３】
【表２】
0005396080.tif 000002
0005396080.tif 000003
0005396080.tif 000004
から構成される可変領域ＣＤＲセットから選択することがより好ましい。
【００１４】
１態様では、本発明の結合蛋白質は少なくとも２個の可変領域ＣＤＲセットを含む。２個の可変領域ＣＤＲセットはＶＨ  １Ｄ４  ＣＤＲセットとＶＬ  １Ｄ４  ＣＤＲセット；ＶＨ  １Ａ６  ＣＤＲセットとＶＬ  １Ａ６  ＣＤＲセット；ＶＨ  １Ｄ８  ＣＤＲセットとＶＬ  １Ｄ８  ＣＤＲセット；ＶＨ  ３Ｇ７  ＣＤＲセットとＶＬ  ３Ｇ７  ＣＤＲセット；ＶＨ  ５Ｅ８  ＣＤＲセットとＶＬ  ５Ｅ８  ＣＤＲセット；ＶＨ  ８Ｅ１  ＣＤＲセットとＶＬ  ８Ｅ１  ＣＤＲセット；ＶＨ  １Ｈ６  ＣＤＲセットとＶＬ  １Ｈ６  ＣＤＲセット；ＶＨ  ３Ａ１１  ＣＤＲセットとＶＬ  ３Ａ１１  ＣＤＲセット；ＶＨ  ４Ｂ４  ＣＤＲセットとＶＬ  ４Ｂ４  ＣＤＲセット；及びＶＨ  ７Ｇ３  ＣＤＲセットとＶＬ  ７Ｇ３  ＣＤＲセットから構成される群から選択することがより好ましい。
【００１５】
別の態様では、上記開示の結合蛋白質は更にヒトアクセプターフレームワークを含む。ヒトアクセプターフレームワークは配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号９２、配列番号９３、配列番号９４、配列番号９５、配列番号９６及び配列番号９７から構成される群から選択されるアミノ酸配列を含むことが好ましい。
【００１６】
好ましい１態様では、結合蛋白質はＩＬ−１２又はＩＬ−２３のｐ４０サブユニットと結合することが可能なＣＤＲグラフト抗体又はその抗原結合部分である。ＣＤＲグラフト抗体又はその抗原結合部分は１個以上の上記開示のＣＤＲを含むことが好ましい。ＣＤＲグラフト抗体又はその抗原結合部分は配列番号６１、配列番号６２、配列番号６３、配列番号６４、配列番号６５、配列番号６６、配列番号６７、配列番号６８、配列番号６９、配列番号７０、配列番号７１、配列番号７２、配列番号７３、配列番号７４、配列番号７５、配列番号７６、配列番号７７及び配列番号７８から構成される群から選択されるアミノ酸配列をもつ少なくとも１個の可変領域を含むことがより好ましい。ＣＤＲグラフト抗体又はその抗原結合部分は上記開示の群から選択される２個の可変領域を含むことが最も好ましい。ＣＤＲグラフト抗体又はその抗原結合部分はヒトアクセプターフレームワークを含むことが好ましい。ヒトアクセプターフレームワークは上記開示のヒトアクセプターフレームワークのいずれか１種であることがより好ましい。
【００１７】
好ましい１態様では、結合蛋白質はＩＬ−１２又はＩＬ−２３のｐ４０サブユニットと結合することが可能なヒト化抗体又はその抗原結合部分である。ヒト化抗体又はその抗原結合部分はヒトアクセプターフレームワークのヒト抗体可変領域に組込まれた１個以上の上記開示のＣＤＲを含むことが好ましい。ヒト化抗体可変領域はコンセンサスヒト可変領域であることが好ましい。ヒトアクセプターフレームワークはキー残基に少なくとも１個のフレームワーク領域アミノ酸置換を含み、前記キー残基はＣＤＲに隣接する残基；グリコシル化部位残基；レア残基；ヒトＩＬ−１２のｐ４０サブユニットと相互作用することが可能な残基；ＣＤＲと相互作用することが可能な残基；カノニカル残基；重鎖可変領域と軽鎖可変領域の間の接触残基；バーニヤゾーン内の残基；及びＣｈｏｔｈｉａの定義による重鎖可変領域ＣＤＲ１とＫａｂａｔの定義による第１番目の重鎖フレームワークのオーバーラップする領域の残基から構成される群から選択することがより好ましい。キー残基は３Ｈ、５Ｈ、１０Ｈ、１１Ｈ、１２Ｈ、１３Ｈ、１５Ｈ、１６Ｈ、１８Ｈ、１９Ｈ、２３Ｈ、２４Ｈ、２５Ｈ、３０Ｈ、４１Ｈ、４４Ｈ、４６Ｈ、４９Ｈ、６６Ｈ、６８Ｈ、７１Ｈ、７３Ｈ、７４Ｈ、７５Ｈ、７６Ｈ、７７Ｈ、７８Ｈ、７９Ｈ、８１Ｈ、８２Ｈ、８２ＡＨ、８２ＢＨ、８２ＣＨ、８３Ｈ、８４Ｈ、８５Ｈ、８６Ｈ、８７Ｈ、８９Ｈ、９３Ｈ、９８Ｈ、１０８Ｈ、１０９Ｈ、１Ｌ、２Ｌ、３Ｌ、７Ｌ、８Ｌ、９Ｌ、１０Ｌ、１１Ｌ、１２Ｌ、１３Ｌ、１５Ｌ、１７Ｌ、１９Ｌ、２０Ｌ、２１Ｌ、２２Ｌ、３６Ｌ、４１Ｌ、４２Ｌ、４３Ｌ、４５Ｌ、４６Ｌ、５８Ｌ、６０Ｌ、６２Ｌ、６３Ｌ、６７Ｌ、７０Ｌ、７３Ｌ、７４Ｌ、７７Ｌ、７８Ｌ、７９Ｌ、８０Ｌ、８３Ｌ、８５Ｌ、８７Ｌ、１０４Ｌ及び１０６Ｌから構成される群から選択することが好ましい。ヒトアクセプターフレームワークは少なくとも１個のフレームワーク領域アミノ酸置換を含み、フレームワークのアミノ酸配列は前記ヒトアクセプターフレームワークの配列と少なくとも６５％一致しており、前記ヒトアクセプターフレームワークと一致する少なくとも７０個のアミノ酸残基を含むことが好ましい。
【００１８】
好ましい１態様では、結合蛋白質はＩＬ−１２又はＩＬ−２３のｐ４０サブユニットと結合することが可能なヒト化抗体又はその抗原結合部分である。ヒト化抗体又はその抗原結合部分は１個以上の上記開示のＣＤＲを含むことが好ましい。ヒト化抗体又はその抗原結合部分は３個以上の上記開示のＣＤＲを含むことがより好ましい。ヒト化抗体又はその抗原結合部分は６個の上記開示のＣＤＲを含むことが最も好ましい。
【００１９】
本発明の別の態様では、ヒト化抗体又はその抗原結合部分は配列番号７９、配列番号８０、配列番号８１、配列番号８２、配列番号８３、配列番号８４、配列番号８５、配列番号８６、配列番号８７、配列番号８８、配列番号８９、配列番号９０、配列番号９１、配列番号９８、配列番号９９、配列番号１００、配列番号１０１、配列番号１０２、配列番号１０３、配列番号１０４、配列番号１０５、配列番号１０６、配列番号１０７、配列番号１０８及び配列番号１０９から構成される群から選択されるアミノ酸配列をもつ少なくとも１個の可変領域を含む。ヒト化抗体又はその抗原結合部分は上記開示の群から選択される２個の可変領域を含むことがより好ましい。ヒト化抗体又はその抗原結合部分は２個の可変領域を含み、前記２個の可変領域は配列番号６７と配列番号７９、配列番号８０と配列番号８１、配列番号８２と配列番号８３、配列番号８４と配列番号８５、配列番号８６と配列番号８７、配列番号８８と配列番号８９、配列番号９０と配列番号９１、配列番号９８と配列番号９９、配列番号１００と配列番号１０１、配列番号１０２と配列番号１０３、配列番号１０４と配列番号１０５、配列番号１０６と配列番号１０７及び配列番号１０８と配列番号１０９から構成される群から選択されるアミノ酸配列をもつことか最も好ましい。
【００２０】
好ましい１態様では、上記開示の結合蛋白質はヒトＩｇＭ定常領域、ヒトＩｇＧ１定常領域、ヒトＩｇＧ２定常領域、ヒトＩｇＧ３定常領域、ヒトＩｇＧ４定常領域、ヒトＩｇＥ定常領域及びヒトＩｇＡ定常領域から構成される群から選択される重鎖免疫グロブリン定常領域を含む。結合蛋白質は配列番号２、配列番号３、配列番号４及び配列番号５を含むことがより好ましい。
【００２１】
本発明の結合蛋白質はＩＬ−１２及びＩＬ−２３から構成される群から選択されるターゲットと結合することができる。結合蛋白質はＩＬ−１２及びＩＬ−２３から構成される群から選択されるターゲットの生理機能を調節できることが好ましい。結合蛋白質はＩＬ−１２及びＩＬ−２３から構成される群から選択されるターゲットを中和できることがより好ましい。
【００２２】
１態様では、本発明の結合蛋白質は表面プラズモン共鳴法により測定した場合にＩＬ−１２又はＩＬ−２３に対して少なくとも約１０２Ｍ−１ｓ−１、少なくとも約１０３Ｍ−１ｓ−１、少なくとも約１０４Ｍ−１ｓ−１、少なくとも約１０５Ｍ−１ｓ−１、又は少なくとも約１０６Ｍ−１ｓ−１の会合速度定数（Ｋｏｎ）をもつ。本発明の結合蛋白質は表面プラズモン共鳴法により測定した場合にＩＬ−１２又はＩＬ−２３に対して１０２Ｍ−１ｓ−１〜１０３Ｍ−１ｓ−１、１０３Ｍ−１ｓ−１〜１０４Ｍ−１ｓ−１、１０４Ｍ−１ｓ−１〜１０５Ｍ−１ｓ−１、又は１０５Ｍ−１ｓ−１〜１０６Ｍ−１ｓ−１の会合速度定数（Ｋｏｎ）をもつことが好ましい。
【００２３】
別の態様では、本発明の結合蛋白質は表面プラズモン共鳴法により測定した場合にＩＬ−１２又はＩＬ−２３に対して多くとも約１０−３ｓ−１、多くとも約１０−４ｓ−１、多くとも約１０−５ｓ−１、又は多くとも約１０−６ｓ−１の解離速度定数（Ｋｏｆｆ）をもつ。本発明の結合蛋白質は表面プラズモン共鳴法により測定した場合にＩＬ−１２又はＩＬ−２３に対して１０−３ｓ−１〜１０−４ｓ−１、１０−４ｓ−１〜１０−５ｓ−１、又は１０−５ｓ−１〜１０−６ｓ−１の解離速度定数（Ｋｏｆｆ）をもつことが好ましい。
【００２４】
別の態様では、本発明の結合蛋白質はＩＬ−１２又はＩＬ−２３に対して多くとも約１０−７Ｍ、多くとも約１０−８Ｍ、多くとも約１０−９Ｍ、多くとも約１０−１０Ｍ、多くとも約１０−１１Ｍ、多くとも約１０−１２Ｍ、又は多くとも約１０−１３Ｍの解離定数（ＫＤ）をもつ。本発明の結合蛋白質はＩＬ−１２又はＩＬ−２３に対して１０−７Ｍ〜１０−８Ｍ、１０−８Ｍ〜１０−９Ｍ、１０−９Ｍ〜１０−１０Ｍ、１０−１０Ｍ〜１０−１１Ｍ、１０−１１Ｍ〜１０−１２Ｍ、又は１０−１２Ｍ〜１０−１３Ｍの解離定数（ＫＤ）をもつことが好ましい。本発明の１態様は上記開示の結合蛋白質のいずれか１種とリンカーポリペプチド又は免疫グロブリンを含む抗体構築物を提供する。好ましい１態様では、抗体構築物は免疫グロブリン分子、モノクローナル抗体、キメラ抗体、ＣＤＲグラフト抗体、ヒト化抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ジスルフィド結合Ｆｖ、ｓｃＦｖ、シングルドメイン抗体、ダイアボディ、多重特異性抗体、二重特異性抗体及び二種特異性抗体から構成される群から選択される。好ましい１態様では、抗体構築物はヒトＩｇＭ定常領域、ヒトＩｇＧ１定常領域、ヒトＩｇＧ２定常領域、ヒトＩｇＧ３定常領域、ヒトＩｇＧ４定常領域、ヒトＩｇＥ定常領域及びヒトＩｇＡ定常領域から構成される群から選択される重鎖免疫グロブリン定常領域を含む。抗体構築物は配列番号２、配列番号３、配列番号４及び配列番号５を含むことがより好ましい。別の態様では、本発明は上記開示の抗体構築物と、免疫接着分子、イメージング剤、治療剤及び細胞傷害性物質から構成される群から選択される物質を含む抗体コンジュゲートを提供する。好ましい１態様では、イメージング剤は放射性ラベル、酵素、蛍光ラベル、発光ラベル、生物発光ラベル、磁気ラベル及びビオチンから構成される群から選択される。イメージング剤は３Ｈ、１４Ｃ、３５Ｓ、９０Ｙ、９９Ｔｃ、１１１Ｉｎ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１７７Ｌｕ、１６６Ｈｏ及び１５３Ｓｍから構成される群から選択される放射性ラベルであることがより好ましい。好ましい１態様では、治療剤又は細胞傷害性物質は代謝拮抗剤、アルキル化剤、抗生物質、成長因子、サイトカイン、抗血管新生剤、抗有糸分裂剤、アントラサイクリン、毒素及びアポトーシス剤から構成される群から選択される。
【００２５】
別の態様では、抗体構築物はグリコシル化されている。グリコシル化はヒトグリコシル化パターンであることが好ましい。
【００２６】
別の態様では、上記開示の結合蛋白質、抗体構築物又は抗体コンジュゲートは結晶として存在する。結晶はキャリヤーフリー医薬制御放出結晶であることが好ましい。好ましい１態様では、結晶化結合蛋白質、結晶化抗体構築物又は結晶化抗体コンジュゲートはその可溶性対応部分よりも長いｉｎ  ｖｉｖｏ半減期をもつ。別の好ましい態様では、結晶化結合蛋白質、結晶化抗体構築物又は結晶化抗体コンジュゲートは結晶化後に生理活性を保持する。
【００２７】
本発明の１側面は上記開示の結合蛋白質、抗体構築物又は抗体コンジュゲートのいずれか１種をコードする単離核酸に関する。別の態様は上記開示の単離核酸を含むベクターを提供し、前記ベクターはｐｃＤＮＡ；ｐＴＴ（Ｄｕｒｏｃｈｅｒら，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ２００２，Ｖｏｌ  ３０，Ｎｏ．２）；ｐＴＴ３（ｐＴＴに多重クローニング部位を付加したもの）；ｐＥＦＢＯＳ（Ｍｉｚｕｓｈｉｍａ，Ｓ．ａｎｄ  Ｎａｇａｔａ，Ｓ．，（１９９０）Ｎｕｃｌｅｉｃ  ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｖｏｌ  １８，Ｎｏ．１７）；ｐＢＶ；ｐＪＶ；及びｐＢＪから構成される群から選択される。
【００２８】
別の側面では、上記開示のベクターで宿主細胞を形質転換する。宿主細胞は原核細胞が好ましい。宿主細胞は大腸炎がより好ましい。１関連態様では、宿主細胞は真核細胞である。真核細胞は原生生物細胞、動物細胞、植物細胞及び真菌細胞から構成される群から選択することが好ましい。宿主細胞は哺乳動物細胞（限定されないが、例えばＣＨＯ及びＣＯＳ）；又は真菌細胞（例えばＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）；又は昆虫細胞（例えばＳｆ９）であることがより好ましい。
【００２９】
本発明の別の側面はＩＬ−１２のｐ４０サブユニットと結合する結合蛋白質の作製方法として、ＩＬ−１２のｐ４０サブユニットと結合する結合蛋白質を産生させるために十分な条件下で上記開示の宿主細胞のいずれか１種を培地で培養する段階を含む方法を提供する。別の態様は上記開示の方法により作製された結合蛋白質を提供する。
【００３０】
１態様は結合蛋白質の放出用組成物を提供し、前記組成物は上記開示の結晶化結合蛋白質、結晶化抗体構築物又は結晶化抗体コンジュゲート及び成分を含有する製剤と；少なくとも１種のポリマーキャリヤーを含有する。ポリマーキャリヤーはポリ（アクリル酸）、ポリ（シアノアクリレート）、ポリ（アミノ酸）、ポリ（酸無水物）、ポリ（デプシペプチド）、ポリ（エステル）、ポリ（乳酸）、ポリ（乳酸・グリコール酸コポリマー）ないしＰＬＧＡ、ポリ（ｂ−ヒドロキシブチレート）、ポリ（カプロラクトン）、ポリ（ジオキサノン）、ポリ（エチレングリコール）、ポリ［（ヒドロキシプロピル）メタクリルアミド］、ポリ［（オルガノ）ホスファゼン］、ポリ（オルトエステル）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリ（ビニルピロリドン）、マレイン酸無水物・アルキルビニルエーテルコポリマー、プルロニックポリオール、アルブミン、アルギン酸塩、セルロース及びセルロース誘導体、コラーゲン、フィブリン、ゼラチン、ヒアルロン酸、オリゴ糖、グリコサミノグリカン、硫酸化多糖、そのブレンド及びコポリマーから構成される群の１種以上から選択されるポリマーであることが好ましい。成分はアルブミン、スクロース、トレハロース、ラクチトール、ゼラチン、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン、メトキシポリエチレングリコール及びポリエチレングリコールから構成される群から選択することが好ましい。別の態様は有効量の上記開示の組成物を哺乳動物に投与する段階を含む哺乳動物の治療方法を提供する。
【００３１】
本発明は更に上記開示の結合蛋白質、抗体構築物又は抗体コンジュゲートと、医薬的に許容可能なキャリヤーを含有する医薬組成物を提供する。別の態様では、医薬組成物はＩＬ−１２及び／又はＩＬ−２３活性が有害である障害を治療するための少なくとも１種の他の治療剤を含有する。他の治療剤は治療剤、イメージング剤、細胞傷害性物質、血管新生阻害剤（限定されないが、抗ＶＥＧＦ抗体又はＶＥＧＦトラップ）；キナーゼ阻害剤（限定されないが、ＫＤＲ及びＴＩＥ−２阻害剤）；共刺激分子遮断薬（限定されないが、抗Ｂ７．１、抗Ｂ７．２、ＣＴＬＡ４−Ｉｇ、抗ＣＤ２０）；接着分子遮断薬（限定されないが、抗ＬＦＡ−１抗体、抗Ｅ／Ｌセレクチン抗体、小分子阻害剤）；抗サイトカイン抗体又はその機能的フラグメント（限定されないが、抗ＩＬ−１８、抗ＴＮＦ、抗ＩＬ−６／サイトカイン受容体抗体）；メトトレキセート；シクロスポリン；ラパマイシン；ＦＫ５０６；検出可能なラベル又はレポーター；ＴＮＦアンタゴニスト；抗リウマチ薬；筋肉弛緩剤、麻薬、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、鎮痛剤、麻酔剤、鎮静剤、局所麻酔剤、神経筋遮断薬、抗微生物薬、乾癬治療薬、コルチコステロイド、同化ステロイド、エリスロポエチン、免疫、免疫グロブリン、免疫抑制剤、成長ホルモン、ホルモン補充薬、放射性薬剤、抗鬱剤、抗精神病薬、覚醒剤、喘息薬、βアゴニスト、吸入ステロイド、エピネフリン又はアナログ、サイトカイン及びサイトカインアンタゴニストから構成される群から選択することが好ましい。
【００３２】
別の側面では、本発明はヒトＩＬ−１２及び／又はヒトＩＬ−２３活性の阻害方法として、ヒトＩＬ−１２及び／又はヒトＩＬ−２３活性を阻害するようにヒトＩＬ−１２及び／又はヒトＩＬ−２３を上記開示の結合蛋白質と接触させる段階を含む方法を提供する。１関連側面では、本発明はＩＬ−１２及び／又はＩＬ−２３活性が有害である障害をもつヒト対象におけるヒトＩＬ−１２及び／又はヒトＩＬ−２３活性の阻害方法として、ヒト対象におけるヒトＩＬ−１２及び／又はヒトＩＬ−２３活性を阻害し、治療を達成するようにヒト対象に上記開示の結合蛋白質を投与する段階を含む方法を提供する。前記障害は関節炎、変形性関節症、若年性慢性関節炎、敗血症性関節炎、ライム関節炎、乾癬性関節炎、反応性関節炎、脊椎関節症、全身性エリテマトーデス、クローン病、潰瘍性大腸炎、炎症性腸疾患、インスリン依存性糖尿病、甲状腺炎、喘息、アレルギー疾患、乾癬、皮膚炎、強皮症、移植片対宿主病、臓器移植拒絶反応、臓器移植に伴う急性又は慢性免疫疾患、サルコイドーシス、アテローム性動脈硬化症、播種性血管内凝固症候群、川崎病、グレーブス病、ネフローゼ症候群、慢性疲労症候群、ウェグナー肉芽腫症、シェーンライン・ヘノッホ紫斑病、腎臓の顕微鏡的血管炎、慢性活動性肝炎、ブドウ膜炎、敗血症性ショック、毒素性ショック症候群、敗血症症候群、悪液質、感染症、寄生虫症、後天性免疫不全症候群、急性横断性脊髄炎、ハンチントン舞踏病、パーキンソン病、アルツハイマー病、脳卒中、原発性胆汁性肝硬変、溶血性貧血、悪性腫瘍、心不全、心筋梗塞、アジソン病、散発性Ｉ型多腺性内分泌不全症及びＩＩ型多腺性内分泌不全症、シュミット症候群、成人（急性）呼吸窮迫症候群、脱毛症、先天性脱毛症、血清反応陰性関節症、関節症、ライター病、乾癬性関節症、潰瘍性大腸炎性関節症、腸病性滑膜炎、クラミジア、エルシニア及びサルモネラ関連関節症、脊椎関節症、アテローム性疾患／動脈硬化症、アトピー性アレルギー、自己免疫性水疱症、尋常性天疱瘡、紅斑性天疱瘡、類天疱瘡、線状ＩｇＡ疾患、自己免疫性溶血性貧血、クームス陽性溶血性貧血、後天性悪性貧血、若年性悪性貧血、筋痛性脳炎／ロイヤルフリー病、慢性粘膜皮膚カンジダ症、巨細胞性動脈炎、原発性硬化性肝炎、特発性自己免疫性肝炎、後天性免疫不全症候群、後天性免疫不全症関連疾患、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、分類不能型免疫不全症（分類不能型低ガンマグロブリン血症）、拡張型心筋症、女性不妊症、卵巣不全、早発卵巣不全、線維性肺疾患、特発性線維化性肺胞炎、炎症後間質性肺疾患、間質性肺炎、結合組織病関連間質性肺疾患、混合性結合組織病関連肺疾患、全身性硬化症関連間質性肺疾患、関節リウマチ関連間質性肺疾患、全身性エリテマトーデス関連肺疾患、皮膚筋炎／多発性筋炎関連肺疾患、ショーグレン病関連肺疾患、強直性脊椎炎関連肺疾患、血管炎性びまん性肺疾患、ヘモジデリン沈着症関連肺疾患、薬物誘発性間質性肺疾患、線維症、放射線線維症、閉塞性細気管支炎、慢性好酸球性肺炎、リンパ球浸潤性肺疾患、感染後間質性肺疾患、通風性関節炎、自己免疫性肝炎、１型自己免疫性肝炎（旧称自己免疫性又はルポイド肝炎）、２型自己免疫性肝炎（抗ＬＫＭ抗体肝炎）、自己免疫性低血糖症、黒色表皮症を伴うＢ型インスリン抵抗性、副甲状腺機能低下症、臓器移植に伴う急性免疫疾患、臓器移植に伴う慢性免疫疾患、変形性関節症、原発性硬化性胆管炎、１型乾癬、２型乾癬、特発性白血球減少症、自己免疫性好中球減少症、腎疾患ＮＯＳ、糸球体腎炎、腎臓の顕微鏡的血管炎、ライム病、円板状エリテマトーデス、特発性男性不妊症ないしＮＯＳ、精子自己免疫、多発性硬化症（全サブタイプ）、交感性眼炎、結合組織病続発性肺高血圧症、グッドパスチャー症候群、結節性多発性動脈炎の肺症状、急性リウマチ熱、リウマチ性脊椎炎、スティル病、全身性硬化症、ショーグレン症候群、高安動脈炎、自己免疫性血小板減少症、特発性血小板減少症、自己免疫性甲状腺疾患、甲状腺機能亢進症、甲状腺腫性自己免疫性甲状腺機能低下症（橋本病）、萎縮性自己免疫性甲状腺機能低下症、原発性粘液水腫、水晶体起因性ブドウ膜炎、原発性血管炎、白斑急性肝疾患、慢性肝疾患、アルコール性肝硬変、アルコール性肝傷害、胆汁鬱滞症、特異体質性肝疾患、薬物誘発性肝炎、非アルコール性脂肪肝炎、アレルギー及び喘息、Ｂ群連鎖球菌（ＧＢＳ）感染症、精神障害（例えば鬱病及び統合失調症）、Ｔｈ２型及びＴｈ１型疾患、急性及び慢性疼痛（各種疼痛）、及び癌（例えば肺癌、乳癌、胃癌、膀胱癌、結腸癌、膵臓癌、卵巣癌、前立腺癌及び直腸癌）及び血液悪性疾患（白血病及びリンパ腫）、無βリポ蛋白血症、先端チアノーゼ、急性及び慢性寄生虫又は感染プロセス、急性白血病、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性又は慢性細菌感染症、急性膵炎、急性腎不全、腺癌、心房異所性拍動、エイズ痴呆合併症、アルコール性肝炎、アレルギー性結膜炎、アレルギー性接触皮膚炎、アレルギー性鼻炎、同種移植片拒絶反応、α１抗トリプシン欠乏症、筋萎縮性側索硬化症、貧血、狭心症、前角細胞変性、抗ｃｄ３抗体療法、抗リン脂質抗体症候群、抗受容体過敏反応、大動脈及び末梢動脈瘤、大動脈解離、動脈性高血圧、動脈硬化症、動静脈瘻、運動失調、心房細動（持続性及び発作性）、心房粗動、房室ブロック、Ｂ細胞リンパ腫、骨移植拒絶反応、骨髄移植（ＢＭＴ）拒絶反応、脚ブロック、バーキットリンパ腫、火傷、心不整脈、心臓性失神症候群、心臓腫瘍、心筋症、心肺バイパス炎症応答、軟骨移植拒絶反応、小脳皮質変性、小脳障害、無秩序型又は多源性心房頻拍、化学療法関連障害、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性アルコール依存症、慢性炎症、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、慢性サリチル酸中毒、結腸直腸癌、鬱血性心不全、結膜炎、接触皮膚炎、肺性心、冠動脈疾患、クロイツェルフェルト・ヤコブ病、培養陰性敗血症、嚢胞性線維症、サイトカイン療法関連障害、拳闘家痴呆、脱髄疾患、デング出血熱、皮膚炎、皮膚疾患、糖尿病、真性糖尿病、糖尿病性動脈硬化症、びまん性レビー小体病、拡張型鬱血性心筋症、基底核障害、中高年ダウン症候群、ＣＮＳドーパミン受容体を遮断する薬剤により誘発される薬剤誘発性運動障害、薬剤過敏症、湿疹、脳脊髄炎、心内膜炎、内分泌障害、喉頭蓋炎、エプスタイン・バールウイルス感染症、肢端紅痛症、錐体外路及び小脳障害、家族性血球貪食リンパ組織球��、胎児胸腺移植拒絶反応、フリードリヒ運動失調症、機能性末梢動脈障害、真菌性敗血症、ガス壊疽、胃潰瘍、糸球体腎炎、任意臓器又は組織の移植片拒絶反応、グラム陰性菌敗血症、グラム陽性菌敗血症、細胞内生物による肉芽腫、ヘアリー細胞白血病、ハレルフォルデン・スパッツ病、橋本甲状腺炎、花粉症、心臓移植拒絶反応、ヘモクロマトーシス、血液透析、溶血性尿毒症症候群／血栓性血小板減少性紫斑病、出血、肝炎（Ａ）、Ｈｉｓ束不整脈、ＨＩＶ感染症／ＨＩＶ神経障害、ホジキン病、多動性運動障害、過敏反応、過敏性肺炎、高血圧、運動低下障害、視床下部−下垂体−副腎軸評価、特発性アジソン病、特発性肺線維症、抗体による細胞傷害、無力症、小児脊髄性筋萎縮症、大動脈の炎症、ａ型インフルエンザ、電離放射線被爆、虹彩毛様体炎／ブドウ膜炎／視神経炎、虚血再潅流傷害、虚血性脳卒中、若年性関節リウマチ、若年性脊髄性筋萎縮症、カポジ肉腫、腎移植拒絶反応、レジオネラ症、リーシュマニア症、ハンセン病、皮質脊髄系傷害、脂肪性浮腫、肝移植拒絶反応、リンパ水腫、マラリア、悪性リンパ腫、悪性組織球症、悪性メラノーマ、髄膜炎、髄膜炎菌症、代謝性／特発性偏頭痛、ミトコンドリア多系統疾患、混合性結合組織病、モノクローナル免疫グロブリン症、多発性骨髄腫、多系統変性症（Ｍｅｎｃｅｌ  Ｄｅｊｅｒｉｎｅ−Ｔｈｏｍａｓ  Ｓｈｉ−Ｄｒａｇｅｒ及びＭａｃｈａｄｏ−Ｊｏｓｅｐｈ）、重症筋無力症、トリ型結核菌イントラセルラーレ菌感染症、ヒト型結核菌感染症、骨髄異形成症候群、心筋梗塞、心筋虚血障害、上咽頭癌、新生児慢性肺疾患、腎炎、ネフローゼ、神経変性疾患、Ｉ型神経原性筋委縮症、好中球減少時の発熱、非ホジキンリンパ腫、腹部大動脈とその分枝の閉塞、閉塞性動脈障害、ｏｋｔ３療法、精巣炎／副睾丸炎、精巣炎／精管切除再吻合術、臓器腫大、骨粗鬆症、膵臓移植拒絶反応、膵臓癌、腫瘍随伴症候群／悪性腫瘍による高カルシウム血症、副甲状腺移植拒絶反応、骨盤内炎症性疾患、通年性鼻炎、心膜疾患、末梢アテローム性動脈硬化症、末梢血管障害、腹膜炎、悪性貧血、ニューモシスチス・カリニ肺炎、肺炎、ＰＯＥＭＳ症候群（多発ニューロパシー、臓器腫大、内分泌障害、モノクローナル免疫グロブリン症及び皮膚変化症候群）、潅流後症候群、心肺バイパス術後症候群、ＭＩ心膜切開後症候群、子癇前症、進行性核上性麻痺、原発性肺高血圧症、放射線療法、レイノー現象及びレイノー病、レイノー病、レフサム病、規則的なＱＲＳ幅の狭い頻拍、腎血管性高血圧症、再潅流傷害、拘束型心筋症、肉腫、強皮症、老人性舞踏病、レビー小体型老人性痴呆症、血清反応陰性関節症、ショック、鎌状赤血球貧血、皮膚同種移植片拒絶反応、皮膚変化症候群、小腸移植拒絶反応、充実性腫瘍、特異的不整脈、脊髄性運動失調症、脊髄小脳変性症、連鎖球菌性筋炎、小脳の構造傷害、亜急性硬化性汎脳炎、失神、心臓血管系梅毒、全身性アナフィラキシー、全身性炎症反応症候群、全身性若年性関節リウマチ、Ｔ細胞ないしＦＡＢ  ＡＬＬ、毛細血管拡張症、閉塞性血栓性血管炎、血小板減少症、中毒症、移植、外傷／出血、ＩＩＩ型過敏反応、ＩＶ型過敏反応、不安定狭心症、尿毒症、尿路性敗血症、蕁麻疹、心臓弁膜症、静脈瘤、血管炎��静脈疾患、静脈血栓症、心室細動、ウイルス及び真菌感染症、ウイルス性脳炎／無菌性髄膜炎、ウイルス関連血球貪食症候群、ウェルニッケ・コルサコフ症候群、ウィルソン病、任意臓器又は組織の異種移植片拒絶反応を含む群から選択することが好ましい。
【００３３】
別の側面では、本発明はヒトＩＬ−１２及び／又はヒトＩＬ−２３が有害である障害をもつ患者の治療方法として、上記のように、第２の物質の投与前、投与と同時又は投与後に上記開示の結合蛋白質のいずれか１種を投与する段階を含む方法を提供する。好ましい１態様では、第２の物質はブデソニド、上皮成長因子、コルチコステロイド、シクロスポリン、スルファサラジン、アミノサリチル酸塩、６−メルカプトプリン、アザチオプリン、メトロニダゾール、リポキシゲナーゼ阻害剤、メサラミン、オルサラジン、バルサラジド、抗酸化剤、トロンボキサン阻害剤、ＩＬ−１受容体アンタゴニスト、抗ＩＬ−１βモノクローナル抗体、抗ＩＬ−６モノクローナル抗体、成長因子、エラスターゼ阻害剤、ピリジニル−イミダゾール化合物、ＴＮＦ、ＬＴ、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１８、ＥＭＡＰ−ＩＩ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＦＧＦ及びＰＤＧＦの抗体又はアゴニスト、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ６９、ＣＤ９０又はそのリガンドの抗体、メトトレキセート、シクロスポリン、ＦＫ５０６、ラパマイシン、ミコフェノール酸モフェチル、レフルノミド、ＮＳＡＩＤ、イブプロフェン、コルチコステロイド、プレドニゾロン、ホスホジエステラーゼ阻害剤、アデノシンアゴニスト、抗血栓剤、補体阻害剤、アドレナリン作用薬、ＩＲＡＫ、ＮＩＫ、ＩＫＫ、ｐ３８、ＭＡＰキナーゼ阻害剤、ＩＬ−１β変換酵素阻害剤、ＴＮＦα変換酵素阻害剤、Ｔ細胞シグナル伝達阻害剤、メタロプロテイナーゼ阻害剤、スルファサラジン、アザチオプリン、６−メルカプトプリン、アンギオテンシン変換酵素阻害剤、可溶性サイトカイン受容体、可溶性ｐ５５  ＴＮＦ受容体、可溶性ｐ７５  ＴＮＦ受容体、ｓＩＬ−１ＲＩ、ｓＩＬ−１ＲＩＩ、ｓＩＬ−６Ｒ、抗炎症性サイトカイン、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１３及びＴＧＦβから構成される群から選択される。好ましい１態様では、上記開示の医薬組成物は非経口、皮下、筋肉内、静脈内、関節内、気管支内、腹腔内、被膜内、軟骨内、洞内、体腔内、小脳内、脳室内、結腸内、子宮頸管内、胃内、肝内、心筋内、骨内、骨盤内、心膜内、腹膜内、胸膜内、前立腺内、肺内、直腸内、腎内、網膜内、脊髄内、滑膜内、胸腔内、子宮内、膀胱腔内、ボーラス、膣、直腸、口腔、舌下、鼻腔内及び経皮から選択される少なくとも１種の方法により対象に投与される。
【００３４】
本発明の１側面は本発明の少なくとも１種のＩＬ−１２結合蛋白質に対する少なくとも１種のＩＬ−１２抗イディオタイプ抗体を提供する。抗イディオタイプ抗体は免疫グロブリン分子の少なくとも一部を含む任意蛋白質又はペプチド含有分子を含み、このような免疫グロブリン部分としては限定されないが、重鎖もしくは軽鎖の少なくとも１個の相補性決定領域（ＣＤＲ）もしくはそのリガンド結合部分、重鎖もしくは軽鎖可変領域、重鎖もしくは軽鎖定常領域、フレームワーク領域、又は本発明の結合蛋白質に組込むことができるその任意部分が挙げられる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３５】
発明の詳細な説明
本発明はＩＬ−１２ｐ４０結合蛋白質、特にＩＬ−１２ｐ４０と結合する抗ＩＬ−１２ｐ４０抗体又はその抗原結合部分に関する。本発明の各種側面は抗体及び抗体フラグメントとその医薬組成物、並びに前記抗体及びフラグメントを作製するための核酸、組換え発現ベクター及び宿主細胞に関する。ヒトＩＬ−１２ｐ４０、ヒトＩＬ−１２及びヒトＩＬ−２３を検出するため；ヒトＩＬ−１２及び／又はヒトＩＬ−２３活性をｉｎ  ｖｉｔｒｏ又はｉｎ  ｖｉｖｏ阻害するため；並びに遺伝子発現を調節するための本発明の抗体の使用方法も本発明に含まれる。
【００３６】
特に指定しない限り、本発明に関して使用する科学技術用語は当業者に一般に理解されている意味をもつ。用語の意味と範囲は明白であるが、潜在的に曖昧な場合には、辞書又は外部の定義よりも本明細書に記載する定義を優先する。更に、内容からそうでないことが必要とされる場合を除き、単数形の用語は複数形を含み、複数形の用語は単数形を含む。本明細書では、特に指定しない限り、「又は」の使用は「及び／又は」を意味する。更に、「含む」なる用語とその変形（例えば「含んでいる」や「含まれる」）の使用は非限定的である。また、特に指定しない限り、「要素」や「成分」等の用語は１単位からなる要素及び成分と、２個以上のサブユニットからなる要素及び成分の両者を意味する。
【００３７】
一般に、本明細書に記載する細胞及び組織培養、分子生物学、免疫学、微生物学、遺伝学並びに蛋白質及び核酸化学及びハイブリダイゼーションに関して使用する術語とその技術は当分野で周知であり、広く使用されているものである。特に指定しない限り、本発明の方法及び技術は本明細書の随所に引用及び記載する各種一般文献及び特定文献に記載されているような当分野で周知の慣用方法に従って一般に実施される。酵素反応及び精製技術は製造業者の仕様に従うか、当分野で一般に実施されている方法に従うか、又は本明細書の記載に従って実施される。本明細書に記載する分析化学、有機合成化学、医化学及び薬化学に関して使用する術語とその実験手順及び技術は当分野で周知であり、広く使用されているものである。化学合成、化学分析、医薬製造、製剤化及び送達並びに患者の治療には標準技術を使用する。
【００３８】
本発明を理解し易くするために、選択用語を以下に定義する。
【００３９】
本明細書で使用する「ポリペプチド」なる用語はアミノ酸の任意ポリマー鎖を意味する。「ペプチド」及び「蛋白質」なる用語はポリペプチドなる用語と同義に使用し、同様にアミノ酸のポリマー鎖を意味する。「ポリペプチド」なる用語は天然又は人工蛋白質、蛋白質フラグメント及び蛋白質配列のポリペプチドアナログを包含する。ポリペプチドはモノマーでもポリマーでもよい。
【００４０】
「単離蛋白質」又は「単離ポリペプチド」なる用語はその起源又は由来源によりその天然状態でこれに結合している天然結合成分と結合していないか、同一種に由来する他の蛋白質を実質的に含まないか、別の種に由来する細胞により発現されるか、あるいは自然界に存在しない蛋白質又はポリペプチドである。従って、化学的に合成されるか又はその天然由来源である細胞とは異なる細胞系で合成されるポリペプチドはその天然結合成分から「単離」される。蛋白質は当分野で周知の蛋白質精製技術を使用して、単離により天然結合成分を実質的に除去することもできる。
【００４１】
本明細書で使用する「回収」なる用語は例えば当分野で周知の蛋白質精製技術を使用して、ポリペプチド等の化学種から天然結合成分を単離により実質的に除去するプロセスを意味する。
【００４２】
本明細書で使用する「ヒトＩＬ−１２」（本明細書ではｈＩＬ−１２又はＩＬ−１２と略称する）なる用語は単球マクロファージや樹状細胞等の抗原提示細胞により主に分泌されるヒトサイトカインを包含する。この用語はジスルフィド結合により相互に結合された３５ｋＤサブユニット（ｐ３５）と４０ｋＤサブユニット（ｐ４０）からなるヘテロ二量体蛋白質を含む。このヘテロ二量体蛋白質を「ｐ７０蛋白質」と言う。ヒトＩＬ−１２の構造は例えばＫｏｂａｙａｓｈｉら（１９８９）Ｊ．Ｅｘｐ  Ｍｅｄ．１７０：８２７−８４５；Ｓｅｄｅｒら（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．９０：１０１８８−１０１９２；Ｌｉｎｇら（１９９５）Ｊ．Ｅｘｐ  Ｍｅｄ．１５４：１１６−１２７；Ｐｏｄｌａｓｋｉら（１９９２）Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．２９４：２３０−２３７に詳細に記載されている。ヒトＩＬ−１２なる用語は標準組換え発現法により作製することができる組換えヒトＩＬ−１２（ｒｈ  ＩＬ−１２）を含むものとする。
【００４３】
本明細書で使用する「ヒトＩＬ−２３」（本明細書ではｈＩＬ−２３又はＩＬ−２３と略称する）なる用語はＩＬ−１２及びＩＬ−２７を含む５種の同様のヘテロ二量体サイトカインのファミリーに属するヘテロ二量体ヒトサイトカインを包含する（Ｔｒｉｎｃｈｉｅｒｉら，（２００３）Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  １９：６４１−６４４）。この用語はジスルフィド結合により相互に結合された１９ｋＤサブユニット（ｐ１９）と４０ｋＤサブユニット（ｐ４０）からなるヘテロ二量体蛋白質を含む。ヒトＩＬ−２３なる用語は標準組換え発現法により作製することができる組換えヒトヒトＩＬ−２３（ｒｈ  ＩＬ−２３）を含むものとする。
【００４４】
本明細書で使用する「ＩＬ−１２ｐ４０」（単に「ｐ４０」とも言う）なる用語は「ＩＬ−２３ｐ４０」と同一であり、ヒトサイトカインＩＬ−１２の４０ｋＤサブユニット（ｐ４０）及びヒトサイトカインＩＬ−２３の４０ｋＤサブユニットを含む。表１は当分野で公知のＩＬ−１２ｐ４０のアミノ酸配列（配列番号１）を示す。
【００４５】
【表３】
0005396080.tif 000005
【００４６】
本明細書で使用する「生理活性」なる用語はサイトカインの全固有生物学的性質を意味する。ＩＬ−１２の生物学的性質としては限定されないが、ＩＬ−１２受容体との結合、インターフェロンγ（ＩＦＮγ）分泌の誘導、並びに抗原特異的Ｔヘルパー１型（Ｔｈ１）及び２型（Ｔｈ２）リンパ球のバランスの調節が挙げられる。ＩＬ−２３の生物学的性質としては限定されないが、ＩＬ−２３受容体との結合、ＩＦＮγ産生、Ｔｈ１細胞分化及び樹状細胞の抗原提示機能の活性化の誘導、並びに記憶Ｔ細胞の増殖の選択的誘導が挙げられる。
【００４７】
抗体、蛋白質又はペプチドと第２の化学種の相互作用に関して本明細書で使用する「特異的結合」又は「特異的に結合する」なる用語は相互作用が化学種上の特定構造（例えば抗原決定基又はエピトープ）の存在に依存することを意味し、例えば、抗体は蛋白質一般ではなく特定蛋白質構造を認識してこれと結合する。抗体がエピトープ「Ａ」に特異的であるならば、標識「Ａ」と抗体を含む反応にエピトープＡ（即ち遊離未標識Ａ）を含む分子が存在すると、標識Ａの抗体結合量は減少する。
【００４８】
本明細書で使用する「抗体」なる用語は２本の重（Ｈ）鎖と２本の軽（Ｌ）鎖の４本のポリペプチド鎖から構成される任意免疫グロブリン（Ｉｇ）分子、又はＩｇ分子の必須エピトープ結合特徴を保持するその任意機能的フラグメント、突然変異体、変異体もしくは誘導体を広義に意味する。このような突然変異体、変異体又は誘導体抗体フォーマットは当分野で公知である。その非限定的な態様を以下に記載する。
【００４９】
全長抗体では、各重鎖は重鎖可変領域（本明細書ではＨＣＶＲ又はＶＨと略称する）と重鎖定常領域から構成される。重鎖定常領域はＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３の３個のドメインから構成される。各軽鎖は軽鎖可変領域（本明細書ではＬＣＶＲ又はＶＬと略称する）と軽鎖定常領域から構成される。軽鎖定常領域は１個のドメインＣＬから構成される。ＶＨ及びＶＬ領域は更に相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ぶ超可変領域とその間に配置されたフレームワーク領域（ＦＲ）と呼ぶ保存度の高い領域に細分される。各ＶＨ及びＶＬはアミノ末端からカルボキシ末端に向かってＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４の順に配置された３個のＣＤＲと４個のＦＲから構成される。免疫グロブリン分子は任意型（例えばＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ及びＩｇＹ）、クラス（例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１及びＩｇＡ２）又はサブクラスとすることができる。
【００５０】
本明細書で使用する抗体の「抗原結合部分」（又は単に「抗体部分」）なる用語は抗原（例えばｈＩＬ−１２）と特異的に結合する能力を保持する抗体の１個以上のフラグメントを意味する。抗体の抗原結合機能は全長抗体のフラグメントにより実施可能であることが分かっている。このような抗体の態様は更に二種特異性、二重特異性又は多重特異性フォーマットでもよく、２個以上の異なる抗原と特異的に結合することもできる。抗体の「抗原結合部分」なる用語に含まれる結合フラグメントの例としては、（ｉ）ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ及びＣＨ１ドメインから構成される１価フラグメントであるＦａｂフラグメント；（ｉｉ）ヒンジ領域でジスルフィド橋により結合した２個のＦａｂフラグメントからなる２価フラグメントであるＦ（ａｂ’）２フラグメント；（ｉｉｉ）ＶＨドメインとＣＨ１ドメインから構成されるＦｄフラグメント；（ｉｖ）抗体の単一アームのＶＬドメインとＶＨドメインから構成されるＦｖフラグメント；（ｖ）単一可変領域から構成されるｄＡｂフラグメント（いずれも参照により本明細書に組込むＷａｒｄら，（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ  ３４１：５４４−５４６，Ｗｉｎｔｅｒら，ＰＣＴ公開ＷＯ９０／０５１４４  Ａ１）；並びに（ｖｉ）単離相補性決定領域（ＣＤＲ）が挙げられる。更に、Ｆｖフラグメントの２個のドメインＶＬ及びＶＨは別々の遺伝子によりコードされるが、ＶＬ領域とＶＨ領域が対合して１価分子を形成する単一蛋白鎖（１本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）と言う；例えばＢｉｒｄら（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２：４２３−４２６；及びＨｕｓｔｏｎら（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８５：５８７９−５８８３参照）としての作製を可能にする合成リンカーにより組換え法を使用して結合することができる。このような１本鎖抗体も抗体の「抗原結合部分」なる用語に含むものとする。ダイアボディ等の他の形態の１本鎖抗体も含む。ダイアボディはＶＨ及びＶＬドメインが１本のポリペプチド鎖で発現される２価の二種特異性抗体であるが、非常に短いリンカーを使用するため、同一鎖の２領域間で対合することができず、これらの領域は別の鎖の相補性領域と対合し、２個の抗原結合部位を形成する（例えばＨｏｌｌｉｇｅｒ，Ｐ．ら（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：６４４４−６４４８；Ｐｏｌｊａｋ，Ｒ．Ｊ．ら（１９９４）Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ２：１１２１−１１２３参照）。このような抗体結合部分は当分野で公知である（Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ  ａｎｄ  Ｄｕｂｅｌ  ｅｄｓ．，Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ（２００１）Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ．Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ．７９０  ｐｐ．（ＩＳＢＮ  ３−５４０−４１３５４−５）。
【００５１】
本明細書で使用する「抗体構築物」なる用語はリンカーポリペプチド又は免疫グロブリン定常領域に結合した１個以上の本発明の抗原結合部分を含むポリペプチドを意味する。リンカーポリペプチドはペプチド結合により結合した２個以上のアミノ酸残基を含み、１個以上の抗原結合部分と結合するために使用される。このようなリンカーポリペプチドは当分野で周知である（例えばＨｏｌｌｉｇｅｒ，Ｐ．ら（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ９０：６４４４−６４４８；Ｐｏｌｊａｋ，Ｒ．Ｊ．ら（１９９４）Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ２：１１２１−１１２３参照）。免疫グロブリン定常領域とは重鎖又は軽鎖定常領域を意味する。ヒトＩｇＧ重鎖及び軽鎖定常領域アミノ酸配列は当分野で公知であり、表２に示す。
【００５２】
【表４】
0005396080.tif 000006
【００５３】
更に、抗体又はその抗原結合部分は抗体又は抗体部分と１種以上の他の蛋白又はペプチドの共有又は非共有的結合により形成される大きな免疫接着分子の一部でもよい。このような免疫接着分子の例としてはストレプトアビジンコア領域の使用による四量体ｓｃＦｖ分子の作製（Ｋｉｐｒｉｙａｎｏｖ，Ｓ．Ｍ．ら（１９９５）Ｈｕｍａｎ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ  ６：９３−１０１）や、システイン残基、マーカーペプチド及びＣ末端ポリヒスチジンタグの使用による２価ビオチン化ｓｃＦｖ分子の作製（Ｋｉｐｒｉｙａｎｏｖ，Ｓ．Ｍ．ら（１９９４）Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３１：１０４７−１０５８）が挙げられる。Ｆａｂ及びＦ（ａｂ’）２フラグメント等の抗体部分は夫々完全抗体のパパイン又はペプシン消化等の慣用技術により完全抗体から作製することができる。更に、抗体、抗体部分及び免疫接着分子は本明細書に記載するように標準組換えＤＮＡ技術を使用して得ることができる。
【００５４】
本明細書で使用する「単離抗体」とは異なる抗原特異性をもつ他の抗体を実質的に含まない抗体を意味する（例えばｈＩＬ−１２と特異的に結合する単離抗体はｈＩＬ−１２以外の抗原と特異的に結合する抗体を実質的に含まない）。しかし、ｈＩＬ−１２と特異的に結合する単離抗体は他の抗原（例えば他の種に由来するＩＬ−１２分子）と交差反応性をもつ場合がある。更に、単離抗体は他の細胞材料及び／又は化学物質を実質的に含まない場合がある。
【００５５】
本明細書で使用する「ヒト抗体」なる用語はヒト生殖細胞系列免疫グロブリン配列に由来する可変領域と定常領域をもつ抗体を包含するものとする。本発明のヒト抗体はヒト生殖細胞系列免疫グロブリン配列によりコードされないアミノ酸残基（例えばランダムもしくは部位特異的突然変異誘発によりｉｎ  ｖｉｔｒｏ又は体細胞突然変異によりｉｎ  ｖｉｖｏで導入される突然変異）を例えばＣＤＲ、特にＣＤＲ３に含んでいてもよい。他方、本明細書で使用する「ヒト抗体」なる用語は別の哺乳動物種（例えばマウス）の生殖細胞系列に由来するＣＤＲ配列をヒトフレームワーク配列にグラフトした抗体を含むものではない。
【００５６】
本明細書で使用する「組換えヒト抗体」なる用語は組換え手段により作製、発現、創製又は単離した全ヒト抗体を含むものとし、宿主細胞にトランスフェクトした組換え発現ベクターを使用して発現させた抗体（下記セクションＩＩ  Ｃに詳述）、組換えコンビナトリアルヒト抗体ライブラリーから単離した抗体（Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  Ｈ．Ｒ．，（１９９７）ＴＩＢ  Ｔｅｃｈ．１５：６２−７０；Ａｚｚａｚｙ  Ｈ．，ａｎｄ  Ｈｉｇｈｓｍｉｔｈ  Ｗ．Ｅ．，（２００２）Ｃｌｉｎ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．３５：４２５−４４５；Ｇａｖｉｌｏｎｄｏ  Ｊ．Ｖ．，ａｎｄ  Ｌａｒｒｉｃｋ  Ｊ．Ｗ．（２００２）ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ２９：１２８−１４５；Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  Ｈ．，ａｎｄ  Ｃｈａｍｅｓ  Ｐ．（２０００）Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｔｏｄａｙ  ２１：３７１−３７８）、ヒト免疫グロブリン遺伝子にトランスジェニックな動物（例えばマウス）から単離した抗体（例えばＴａｙｌｏｒ，Ｌ．Ｄ．ら（１９９２）Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２０：６２８７−６２９５；Ｋｅｌｌｅｒｍａｎｎ  Ｓ−Ａ．，ａｎｄ  Ｇｒｅｅｎ  Ｌ．Ｌ．（２００２）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １３：５９３−５９７；Ｌｉｔｔｌｅ  Ｍ．ら（２０００）Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｔｏｄａｙ  ２１：３６４−３７０参照）、あるいはヒト免疫グロブリン遺伝子配列を他のＤＮＡ配列にスプライスする操作を含む他の任意手段により作製、発現、創製又は単離した抗体が挙げられる。このような組換えヒト抗体はヒト生殖細胞系列免疫グロブリン配列に由来する可変領域と定常領域をもつ。しかし、所定態様では、このような組換えヒト抗体はｉｎ  ｖｉｔｒｏ突然変異誘発（又は、ヒトＩｇ配列にトランスジェニックな動物を使用する場合には、ｉｎ  ｖｉｖｏ体細胞突然変異誘発）を受け、従って、組換え抗体のＶＨ領域とＶＬ領域のアミノ酸配列は、ヒト生殖細胞系列ＶＨ及びＶＬ配列に由来し、近縁であるが、天然にヒト抗体生殖細胞系列レパートリー内にｉｎ  ｖｉｖｏで存在していなくてもよい配列である。
【００５７】
「キメラ抗体」なる用語はある種に由来する重鎖及び軽鎖可変領域配列と、別の種に由来する定常領域配列を含む抗体（例えばヒト定常領域に結合したマウス重鎖及び軽鎖可変領域をもつ抗体）を意味する。
【００５８】
「ＣＤＲグラフト抗体」なる用語はある種に由来する重鎖及び軽鎖可変領域を含むが、ＶＨ及び／又はＶＬのＣＤＲ領域の１個以上の配列を別の種のＣＤＲ配列で置換した抗体（例えばマウスＣＤＲの１個以上（例えばＣＤＲ３）をヒトＣＤＲ配列で置換したマウス重鎖及び軽鎖可変領域をもつ抗体）を意味する。
【００５９】
「ヒト化抗体」なる用語は非ヒト種（例えばマウス）に由来する重鎖及び軽鎖可変領域配列を含むが、ＶＨ及び／又はＶＬ配列の少なくとも一部をより「ヒト様」即ちヒト生殖細胞系列可変配列に類似するように改変した抗体を意味する。ヒト化抗体の１例はヒトＣＤＲ配列を非ヒトＶＨ及びＶＬ配列に導入して対応する非ヒトＣＤＲ配列を置換したＣＤＲグラフト抗体である。
【００６０】
「Ｋａｂａｔナンバリング」、「Ｋａｂａｔ定義」及び「Ｋａｂａｔラベリング」なる用語は本明細書では同義に使用する。これらの用語は当分野で認識されている通り、抗体又はその抗原結合部分の重鎖及び軽鎖可変領域の他のアミノ酸残基よりも可変性（即ち超可変性）のアミノ酸残基のナンバリングシステムを意味する（Ｋａｂａｔら（１９７１）Ａｎｎ．ＮＹ  Ａｃａｄ，Ｓｃｉ．  １９０：３８２−３９１及びＫａｂａｔ，Ｅ．Ａ．ら．（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．９１−３２４２）。重鎖可変領域では、超可変領域はＣＤＲ１のアミノ酸３１〜３５位、ＣＤＲ２のアミノ酸５０〜６５位、及びＣＤＲ３のアミノ酸９５〜１０２位である。軽鎖可変領域では、超可変領域はＣＤＲ１のアミノ酸２４〜３４位、ＣＤＲ２のアミノ酸５０〜５６位、及びＣＤＲ３のアミノ酸８９〜９７位である。
【００６１】
本明細書で使用する「アクセプター」及び「アクセプター抗体」なる用語はフレームワーク領域の１個以上のアミノ酸配列の少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は１００％を提供又はコードする抗体又は核酸配列を意味する。所定態様では、「アクセプター」なる用語は定常領域を提供又はコードする抗体アミノ酸又は核酸配列を意味する。更に別の態様では、「アクセプター」なる用語はフレームワーク領域の１個以上と定常領域を提供又はコードする抗体アミノ酸又は核酸配列を意味する。特定態様では、「アクセプター」なる用語はフレームワーク領域の１個以上のアミノ酸配列の少なくとも８０％、好ましくは少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は１００％を提供又はコードするヒト抗体アミノ酸又は核酸配列を意味する。この態様によると、アクセプターはヒト抗体の１個以上の特定位置に存在しない少なくとも１個、少なくとも２個、少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個、又は少なくとも１０個のアミノ酸残基を含むことができる。アクセプターフレームワーク領域及び／又はアクセプター定常領域は例えば生殖細胞系列抗体遺伝子、成熟抗体遺伝子、機能的抗体（例えば当分野で周知の抗体、開発中の抗体又は市販抗体）から誘導又は入手することができる。
【００６２】
本明細書で使用する「ＣＤＲ」なる用語は抗体可変配列内の相補性決定領域を意味する。重鎖及び軽鎖可変領域の各々に３個のＣＤＲがあり、可変領域の各々についてＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３と呼ぶ。本明細書で使用する「ＣＤＲセット」なる用語は抗原と結合することが可能な単一可変領域に存在する３個１組のＣＤＲを意味する。これらのＣＤＲの厳密な境界は種々のシステムにより種々に定義されている。Ｋａｂａｔにより記載されているシステム（Ｋａｂａｔら，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９８７）ａｎｄ（１９９１））は抗体の任意可変領域に適用可能な明確な残基ナンバリングシステムを提供するのみならず、３個のＣＤＲを定義する厳密な残基境界を提供する。これらのＣＤＲをＫａｂａｔ  ＣＤＲと言う場合がある。Ｃｈｏｔｈｉａら（Ｃｈｏｔｈｉａ  ＆  Ｌｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７（１９８７）及びＣｈｏｔｈｉａら，Ｎａｔｕｒｅ  ３４２：８７７−８８３（１９８９））はＫａｂａｔ  ＣＤＲ内の所定のサブ部分がアミノ酸配列レベルでは大きく相違するにも拘わらず、ほぼ同一のペプチド主鎖配置をとることを見いだした。これらのサブ部分はＬ１、Ｌ２及びＬ３又はＨ１、Ｈ２及びＨ３と命名され、ここで「Ｌ」及び「Ｈ」は夫々軽鎖領域と重鎖領域を表す。これらの領域をＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲと呼ぶ場合があり、その境界はＫａｂａｔ  ＣＤＲとオーバーラップする。Ｋａｂａｔ  ＣＤＲとオーバーラップするＣＤＲを定義する他の境界はＰａｄｌａｎ（ＦＡＳＥＢ  Ｊ．９：１３３−１３９（１９９５））とＭａｃＣａｌｌｕｍ（Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ２６２（５）：７３２−４５（１９９６））により記載されている。上記システムの１種に厳密には従わないとしても、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲとオーバーラップする更に他のＣＤＲ境界定義もあり、特定残基又は残基群又はＣＤＲ全体が抗原結合に有意影響を与えないという予想又は実験知見に基づいて短縮したものや、延長したものがある。本発明で使用する方法はこれらのシステムのいずれに従って定義されたＣＤＲも使用することができるが、好ましい態様はＫａｂａｔ又はＣｈｏｔｈｉａの定義によるＣＤＲを使用する。
【００６３】
本明細書で使用する「カノニカル」残基なる用語はＣｈｏｔｈｉａらにより定義されているように特定カノニカルＣＤＲ構造を定義するＣＤＲ又はフレームワークにおける残基を意味する（いずれも参照により本明細書に組込むＪ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９０７（１９８７）；Ｃｈｏｔｈｉａら，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２７：７９９（１９９２））。Ｃｈｏｔｈｉａらによると、多くの抗体のＣＤＲの必須部分はアミノ酸配列レベルでは大きく相違するにも拘わらず、ほぼ同一のペプチド主鎖配置をもつ。各カノニカル構造は主にループを形成するアミノ酸残基の連続セグメントについて１組のペプチド主鎖ねじれ角を規定する。
【００６４】
本明細書で使用する「ドナー」及び「ドナー抗体」なる用語は１個以上のＣＤＲを提供する抗体を意味する。好ましい１態様では、ドナー抗体はフレームワーク領域を入手又は誘導する抗体と異なる種に由来する抗体である。ヒト化抗体に関して「ドナー抗体」なる用語は１個以上のＣＤＲを提供する非ヒト抗体を意味する。
【００６５】
本明細書で使用する「フレームワーク」又は「フレームワーク配列」なる用語は可変領域からＣＤＲを除いた残りの配列を意味する。ＣＤＲ配列の厳密な定義は種々のシステムにより決定することができるので、フレームワーク配列の意味は相応に種々に解釈される。６個のＣＤＲ（軽鎖のＣＤＲ−Ｌ１、−Ｌ２及び−Ｌ３と重鎖のＣＤＲ−Ｈ１、−Ｈ２及び−Ｈ３）は軽鎖及び重鎖のフレームワーク領域を更に各鎖で４個のサブ領域（ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３及びＦＲ４）に分割し、ＣＤＲ１はＦＲ１とＦＲ２の間、ＣＤＲ２はＦＲ２とＦＲ３の間、ＣＤＲ３はＦＲ３とＦＲ４の間に位置する。特定領域をＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３又はＦＲ４と指定せずに、一般にフレームワーク領域と言う場合には、１本の天然に存在する免疫グロブリン鎖の可変領域内のＦＲの集合を表す。本明細書で使用するＦＲとは４個のサブ領域の１個を表し、ＦＲｓはフレームワーク領域を構成する４個のサブ領域の２個以上を表す。
【００６６】
ヒト重鎖及び軽鎖アクセプター配列は当分野で公知である。本発明の１態様では、ヒト重鎖及び軽鎖アクセプター配列は表３及び表４に記載する配列から選択される。
【００６７】
【表５】
0005396080.tif 000007
【００６８】
【表６】
0005396080.tif 000008
【００６９】
本明細書で使用する「生殖細胞系列抗体遺伝子」又は「遺伝子フラグメント」なる用語は特定免疫グロブリンの発現のために遺伝子再配列及び突然変異を誘導する成熟プロセスを受けていない非リンパ細胞によりコードされる免疫グロブリン配列を意味する（例えばＳｈａｐｉｒｏら，Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２２（３）：１８３−２００（２００２）；Ｍａｒｃｈａｌｏｎｉｓら，Ａｄｖ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  Ｂｉｏｌ．４８４：１３−３０（２００１）参照）。本発明の各種態様により提供される利点の１つは生殖細胞系列抗体遺伝子が成熟抗体遺伝子よりも種における個体の必須アミノ酸配列構造特徴を保存する傾向が強く、従ってこの種で治療に使用した場合に外来源に由来するとみなしにくいという認識に起因する。
【００７０】
本明細書で使用する「キー」残基なる用語は抗体、特にヒト化抗体の結合特異性及び／又は親和性に強く影響する可変領域内の所定残基を意味する。キー残基としては限定されないが、ＣＤＲに隣接する残基、潜在グリコシル化部位残基（Ｎ−グリコシル化部位でもＯ−グリコシル化部位でもよい）、レア残基、抗原と相互作用することが可能な残基、ＣＤＲと相互作用することが可能な残基、カノニカル残基、重鎖可変領域と軽鎖可変領域の間の接触残基、バーニヤゾーン内の残基、及びＣｈｏｔｈｉａの定義による重鎖可変領域ＣＤＲ１とＫａｂａｔの定義による第１番目の重鎖フレームワークのオーバーラップする領域の残基の１種以上が挙げられる。
【００７１】
本明細書で使用する「ヒト化抗体」なる用語は該当抗原と免疫特異的に結合し、実質的にヒト抗体のアミノ酸配列をもつフレームワーク（ＦＲ）領域と、実質的に非ヒト抗体のアミノ酸配列をもつ相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む抗体又はその変異体、誘導体、アナログもしくはフラグメントである。ＣＤＲに関して本明細書で使用する「実質的に」なる用語は非ヒト抗体ＣＤＲのアミノ酸配列に少なくとも８０％、好ましくは少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％一致するアミノ酸配列をもつＣＤＲを意味する。ヒト化抗体はＣＤＲ領域の全部又は実質的に全部が非ヒト免疫グロブリン（即ちドナー抗体）のＣＤＲ領域のに対応し、フレームワーク領域の全部又は実質的に全部がヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のフレームワーク領域である少なくとも１個、一般には２個の可変領域（Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、ＦａｂＣ、Ｆｖ）の実質的に全部を含む。ヒト化抗体は更に免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）、一般にヒト免疫グロブリンの定常領域の少なくとも一部を含むことが好ましい。所定態様では、ヒト化抗体は軽鎖と重鎖の少なくとも可変領域を含む。抗体は更に重鎖のＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２、ＣＨ３及びＣＨ４領域を含む場合がある。所定態様では、ヒト化抗体はヒト化軽鎖のみを含む。所定態様では、ヒト化抗体はヒト化重鎖のみを含む。特定態様では、ヒト化抗体は軽鎖のヒト化可変領域及び／又はヒト化重鎖のみを含む。
【００７２】
ヒト化抗体はＩｇＭ、ＩｇＧ、ＩｇＤ、ＩｇＡ及びＩｇＥを含む任意クラスの免疫グロブリンと、任意イディオタイプ（限定されないが、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４が挙げられる）から選択することができる。ヒト化抗体は２種以上のクラス又はイディオタイプに由来する配列を含むことができ、当分野で周知の技術を使用して所望エフェクター機能を最適化するように特定定常領域を選択することができる。
【００７３】
ヒト化抗体のフレームワーク領域とＣＤＲ領域は親配列に厳密に対応する必要はなく、例えばその部位のＣＤＲ又はフレームワーク残基がドナー抗体又はコンセンサスフレームワークのいずれにも対応しないように少なくとも１個のアミノ酸残基の置換、挿入及び／又は欠失によりドナー抗体ＣＤＲ又はコンセンサスフレームワークを突然変異誘発してもよい。しかし、好ましい１態様では、このような突然変異は広範にならないようにする。通常、ヒト化抗体残基の少なくとも８０％、好ましくは少なくとも８５％、より好ましくは少なくとも９０％、最も好ましくは少なくとも９５％が親ＦＲ及びＣＤＲ配列に対応する。本明細書で使用する「コンセンサスフレームワーク」なる用語はコンセンサス免疫グロブリン配列中のフレームワーク領域を意味する。本明細書で使用する「コンセンサス免疫グロブリン配列」なる用語は近縁免疫グロブリン配列のファミリーに最高頻度で存在するアミノ酸（又はヌクレオチド）から形成される配列を意味する（例えばＷｉｎｎａｋｅｒ、Ｆｒｏｍ  Ｇｅｎｅｓ  ｔｏ  Ｃｌｏｎｅｓ（Ｖｅｒｌａｇｓｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ、Ｗｅｉｎｈｅｉｍ、Ｇｅｒｍａｎｙ  １９８７参照）。免疫グロブリンファミリーでは、コンセンサス配列における各位置はこのファミリーでこの位置に最高頻度で存在するアミノ酸により占有される。２種のアミノ酸が等頻度で存在する場合には、どちらをコンセンサス配列に加えてもよい。
【００７４】
本明細書で使用する「バーニヤ」ゾーンとはＦｏｏｔｅ  ａｎｄ  Ｗｉｎｔｅｒ（参照により本明細書に組込む１９９２，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２４：４８７−４９９）により記載されているようにＣＤＲ構造を調節し、抗原に微調整することができるフレームワーク残基のサブセットを意味する。バーニヤゾーン残基はＣＤＲの基層を形成し、ＣＤＲの構造と抗体の親和性に影響を与える。
【００７５】
本明細書で使用する「中和」なる用語は結合蛋白質がサイトカインと特異的に結合する場合のサイトカインの生理活性の中和を意味する。中和結合蛋白質はｈＩＬ−１２及び／又はｈＩＬ−２３と結合することによりｈＩＬ−１２及び／又はｈＩＬ−２３の生理活性を阻害する中和抗体であることが好ましい。中和結合蛋白質はｈＩＬ−１２及び／又はｈＩＬ−２３と結合し、ＩＬ−１２及び／又はｈＩＬ−２３の生理活性を少なくとも約２０％、４０％、６０％、８０％、８５％又はそれ以上低下させることが好ましい。中和結合蛋白質によるｈＩＬ−１２及び／又はｈＩＬ−２３の生理活性の阻害は当分野で周知のｈＩＬ−１２及び／又はｈＩＬ−２３生理活性の１種以上の指標を測定することにより評価することができる。例えばＰＨＡ芽球インターフェロンγ誘導アッセイ（実施例１．１．Ｃ参照）におけるヒトフィトヘムアグルチニン芽球増殖の阻害や、ヒトＩＬ−１２受容体結合アッセイ（Ｓａｌｆｅｌｄら，ＰＣＴ公開ＷＯ００／５６７７２  Ａ１も参照）における受容体結合の阻害の測定が挙げられる。
【００７６】
「活性」なる用語は抗原に対する抗体（例えばＩＬ−１２抗原と結合する抗ｈＩＬ−１２抗体）の結合特異性／親和性及び／又は抗体（例えばｈＩＬ−１２と結合することによりｈＩＬ−１２の生理活性を阻害する抗ｈＩＬ−１２抗体）の中和能（例えばヒトＩＬ−１２受容体結合アッセイ又はＰＨＡ芽球インターフェロンγ誘導アッセイ（実施例１．１．Ｃ参照）におけるＰＨＡ芽球増殖の阻害又は受容体結合の阻害）等の活性を包含する。
【００７７】
「エピトープ」なる用語は免疫グロブリン又はＴ細胞受容体と特異的に結合することが可能な任意ポリペプチド決定基を包含する。所定態様では、エピトープ決定基はアミノ酸、糖側鎖、ホスホリル又はスルホニル等の化学的に活性な表面分子群を含み、所定態様では、特異的三次元構造特徴及び／又は特異的電荷特徴をもつ場合がある。エピトープは抗体と結合した抗原の１領域である。所定態様では、抗体は蛋白質及び／又は巨大分子の複雑な混合物中でそのターゲット抗原を優先的に認識するときに抗原と特異的に結合すると言う。
【００７８】
本明細書で使用する「表面プラズモン共鳴」なる用語は例えばＢＩＡｃｏｒｅシステム（Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒ  ＡＢ，Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ及びＰｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）を使用してバイオセンサーマトリックス内の蛋白濃度の変化の検出によりリアルタイム生体特異的相互作用の分析を可能にする光学現象を意味する。更に詳細については、Ｊｏｎｓｓｏｎ，Ｕ．ら（１９９３）Ａｎｎ．Ｂｉｏｌ．Ｃｌｉｎ．５１：１９−２６；Ｊｏｎｓｓｏｎ，Ｕ．ら（１９９１）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  １１：６２０−６２７；Ｊｏｈｎｓｓｏｎ，Ｂ．ら（１９９５）Ｊ．Ｍｏｌ  Ｒｅｃｏｇｎｉｔ．８：１２５−１３１；及びＪｏｈｎｎｓｏｎ，Ｂ．ら（１９９１）Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１９８：２６８−２７７参照。
【００７９】
本明細書で使用する「Ｋｏｎ」なる用語は当分野で公知の通り、抗体／抗原複合体を形成する抗体と抗原の会合速度定数を意味する。
【００８０】
本明細書で使用する「Ｋｏｆｆ」なる用語は当分野で公知の通り、抗体／抗原複合体から抗体が解離する解離速度定数を意味する。
【００８１】
本明細書で使用する「Ｋｄ」なる用語は当分野で公知の通り、特定抗体−抗原相互作用の解離定数を意味する。
【００８２】
本明細書で使用する「標識結合蛋白質」なる用語は結合蛋白質を識別できるようにラベルを付加した蛋白質を意味する。ラベルは検出可能なマーカーであることが好ましく、例えば放射性標識アミノ酸を付加する方法や、標識アビジン（例えば蛍光マーカー又は光学的方法もしくは比色法により検出可能な酵素活性を付加したストレプトアビジン）により検出可能なビオチニル部分をポリペプチドに結合する方法が挙げられる。ポリペプチドのラベルの例としては限定されないが、放射性同位体ないし放射性核種（例えば３Ｈ、１４Ｃ、３５Ｓ、９０Ｙ、９９Ｔｃ、１１１Ｉｎ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１７７Ｌｕ、１６６Ｈｏ又は１５３Ｓｍ）；蛍光ラベル（例えばＦＴＴＣ、ローダミン、ランタニド蛍光体）、酵素ラベル（例えば西洋ワサビペルオキシダーゼ、ルシフェラーゼ、アルカリホスファターゼ）；化学発光マーカー；ビオチニル基；二次レポーターにより認識される所定ポリペプチドエピトープ（例えばロイシンジッパー対配列、二次抗体の結合部位、金属結合ドメイン、エピトープタグ）；及び磁性物質（例えばガドリニウムキレート）が挙げられる。
【００８３】
「抗体コンジュゲート」なる用語は第２の化学部分（例えば治療剤や細胞傷害性物質）と化学的に結合した結合蛋白質（例えば抗体）を意味する。「物質」なる用語は本明細書では化合物、化合物の混合物、生体巨大分子又は生体材料から作製された抽出物の意味で使用する。治療剤又は細胞傷害性物質としては限定されないが、好ましくは百日咳毒素、タキソール、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、臭化エチジウム、エメチン、マイトマイシン、エトポシド、テノポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシアントラシンジオン、ミトキサントロン、ミトラマイシン、アクチノマイシンＤ、１−デヒドロテストステロン、グルココルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロール及びピューロマイシン並びにそのアナログ又はホモログが挙げられる。
【００８４】
本明細書で使用する「結晶」及び「結晶化」なる用語は結晶形態で存在する抗体又はその抗原結合部分を意味する。結晶は物質の固体状態の１形態であり、アモルファス固体状態や液体結晶状態等の他の形態から区別される。結晶は原子、イオン、分子（例えば抗体等の蛋白質）、又は分子集合（例えば抗原／抗体複合体）の規則的な反復三次元配列から構成される。これらの三次元配列は当分野で詳細に解明されている特定の数学的関係に従って配置されている。結晶中で反復している基本単位ないし構成単位を非対称単位と言う。所定の明確な結晶対称性に一致する配置で非対称単位が反復することにより、結晶の「単位格子」を構成する。単位格子が全３方向に規則的変換により反復することにより、結晶を構成する。Ｇｉｅｇｅ，Ｒ．ａｎｄ  Ｄｕｃｒｕｉｘ，Ａ．Ｂａｒｒｅｔｔ，Ｃｒｙｓｔａｌｌｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，２ｎｄ  ｅａ．，ｐｐ．２０  １−１６，Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，（１９９９）参照。
【００８５】
本明細書で使用する「ポリヌクレオチド」なる用語はリボヌクレオチドもしくはデオキシヌクレオチド又はそのいずれかのヌクレオチド型の修飾形態の２個以上のヌクレオチドのポリマー形態を意味する。この用語は１本鎖形態と２本鎖形態のＤＮＡを含むが、２本鎖ＤＮＡが好ましい。
【００８６】
本明細書で使用する「単離ポリヌクレオチド」なる用語は（例えばゲノム、ｃＤＮＡ又は合成起源、あるいはその組合せの）ポリヌクレオチドを意味し、その起源により、「単離ポリヌクレオチド」は「単離ポリヌクレオチド」が自然界で結合しているポリヌクレオチドの全部又は一部と結合していないか；自然界で連結していないポリヌクレオチドと機能的に連結しているか；あるいはより長い配列の一部として自然界に存在しない。
【００８７】
本明細書で使用する「ベクター」なる用語はこれと結合した別の核酸を輸送することが可能な核酸分子を意味する。ベクターの１例は「プラスミド」であり、これは他のＤＮＡセグメントを連結することが可能な環状２本鎖ＤＮＡループを意味する。ベクターの別の例は他のＤＮＡセグメントをウイルスゲノムに連結することができるウイルスベクターである。所定のベクターはこれらのベクターを導入する宿主細胞で自律複製することができる（例えば細菌複製起点をもつ細菌ベクターやエピソーム哺乳動物ベクター）。他のベクター（例えば非エピソーム哺乳動物ベクター）も宿主細胞に導入後に宿主細胞のゲノムに組込むことができ、宿主ゲノムと共に複製される。更に、所定のベクターはこれらを機能的に連結した遺伝子の発現を誘導することができる。このようなベクターを本明細書では「組換え発現ベクター」（又は単に「発現ベクター」）と言う。一般に、組換えＤＮＡ技術で有用な発現ベクターはプラスミド形態であることが多い。プラスミドは最も広く使用されている形態のベクターであるので、本明細書では、「プラスミド」と「ベクター」を同義に使用する場合がある。しかし、本発明はウイルスベクター（例えば複製欠損レトロウイルスベクター、アデノウイルス及びアデノ随伴ウイルス）等の等価機能をもつ他の同様の形態の発現ベクターも含むものとする。
【００８８】
「機能的に連結」なる用語は指定成分がその所期方法で機能できるような関係で配置されていることを意味する。コーディング配列に「機能的に連結」した調節配列は調節配列に適合可能な条件下でコーディング配列の発現が達成されるように連結されている。「機能的に連結」した配列は、該当遺伝子に隣接する発現調節配列と、該当遺伝子を調節するようにｉｎ  ｔｒａｎｓ又は少し離れて作用する発現調節配列の両者を含む。本明細書で使用する「発現調節配列」なる用語はこの配列が連結されたコーディング配列の発現及びプロセシングをもたらすために必要なポリヌクレオチド配列を意味する。発現調節配列としては適切な転写開始、終結、プロモーター及びエンハンサー配列；効率的ＲＮＡプロセシングシグナル（例えばスプライシングシグナルやポリアデニル化シグナル）；細胞質ｍＲＮＡを安定化する配列；翻訳効率を増加する配列（即ちコザックコンセンサス配列）；蛋白質安定性を増加する配列；更には所望により、蛋白質分泌を増加する配列が挙げられる。このような調節配列の種類は宿主生物により異なり、原核生物では、このような調節配列としては一般にプロモーター、リボソーム結合部位及び転写終結配列が挙げられ、真核生物では、一般にこのような調節配列としてはプロモーターと転写終結配列が挙げられる。「調節配列」なる用語はその存在が発現とプロセシングに必須である成分を含むものとし、更に存在していると有利である他の成分（例えばリーダー配列や融合パートナー配列）も含む場合がある。
【００８９】
本明細書で定義する「形質転換」とは外来ＤＮＡが宿主細胞に導入される任意プロセスを意味する。形質転換は当分野で周知の各種方法を使用して天然又は人工条件下に実施することができる。形質転換は外来核酸配列を原核又は真核宿主細胞に挿入する任意公知方法により実施することができる。方法は形質転換する宿主細胞に応じて選択され、限定されないが、ウイルス感染、エレクトロポレーション、リポフェクション及び粒子撃ち込みが挙げられる。このような「形質転換」細胞としては、挿入されたＤＮＡが自律複製プラスミド又は宿主染色体の一部として複製できる安定型形質転換細胞が挙げられる。更に、挿入されたＤＮＡ又はＲＮＡを短期間一過性発現する細胞も挙げられる。
【００９０】
本明細書で使用する「組換え宿主細胞」（又は単に「宿主細胞」）なる用語は外来ＤＮＡが導入された細胞を意味する。当然のことながら、このような用語は特定対象細胞のみならず、このような細胞の子孫も意味する。後続世代には突然変異又は環境影響により所定の変異が生じる場合があるので、このような子孫は実際には親細胞と同一でない場合もあるが、本明細書で使用する「宿主細胞」なる用語の範囲に含むものとする。宿主細胞としては生物界の任意のものから選択される原核細胞及び真核細胞が好ましい。好ましい真核細胞としては原生生物細胞、真菌細胞、植物細胞及び動物細胞が挙げられる。最も好ましい宿主細胞としては限定されないが、原核細胞株として大腸菌；哺乳動物細胞株としてＣＨＯ、ＨＥＫ２９３及びＣＯＳ；昆虫細胞株株としてＳｆ９；並びに真菌細胞としてＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅが挙げられる。
【００９１】
組換えＤＮＡ、オリゴヌクレオチド合成、並びに組織培養及び形質転換（例えばエレクトロポレーション、リポフェクション）には標準技術を使用することができる。酵素反応及び精製技術は製造業者の仕様に従うか、当分野で一般に実施されている方法に従うか、又は本明細書の記載に従って実施することができる。上記技術及び手順は本明細書の随所に引用及び記載する各種一般文献及び特定文献に記載されているような当分野で周知の慣用方法に従って一般に実施することができる。例えば参照により全目的で本明細書に組込むＳａｍｂｒｏｏｋら，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（２ｄ  ｅｄ．，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．（１９８９））参照。
【００９２】
当分野で公知であり、本明細書で使用する「トランスジェニック生物」とはトランスジーンを導入した細胞をもつ生物を意味し、生物（又は生物の祖先）に導入されたトランスジーンはこの生物で天然には発現されないポリペプチドを発現する。「トランスジーン」はトランスジェニック生物が発生する細胞のゲノムに安定的且つ機能的に組込まれ、トランスジェニック生物の１種以上の細胞種又は組織でコードされる遺伝子産物の発現を誘導するＤＮＡ構築物である。
【００９３】
「制御」及び「調節」なる用語は同義に使用され、本明細書で使用する場合には、該当分子の活性（例えばｈＩＬ−１２の生理活性）の変更又は改変を意味する。調節は該当分子の所定活性又は機能の強さの増加又は低下とすることができる。分子の活性及び機能の例としては限定されないが、結合特性、酵素活性、細胞受容体活性化及びシグナル伝達が挙げられる。
【００９４】
同様に、本明細書で使用する「モジュレーター」なる用語は該当分子の活性又は機能（例えばｈＩＬ−１２の生理活性）を変更又は改変することが可能な化合物である。例えば、モジュレーターはモジュレーターの不在下で観察される活性又は機能の強さに比較して分子の所定活性又は機能の強さを増加又は低下させることができる。所定態様では、モジュレーターは分子の少なくとも１種の活性又は機能の強さを低下させる阻害剤である。阻害剤の例としては限定されないが、蛋白質、ペプチド、抗体、ペプチボディ、糖鎖又は有機小分子が挙げられる。ペプチボディは例えばＷＯ０１／８３５２５に記載されている。
【００９５】
本明細書で使用する「アゴニスト」なる用語は該当分子と接触した場合に、アゴニストの不在下で観察される活性又は機能の強さに比較して分子の所定活性又は機能の強さを増加するモジュレーターを意味する。特定該当アゴニストとしては限定されないが、ＩＬ−１２ポリペプチド又はｈＩＬ−１２と結合するポリペプチド、核酸、糖鎖もしくは他の任意分子が挙げられる。
【００９６】
本明細書で使用する「アンタゴニスト」又は「阻害剤」なる用語は該当分子と接触した場合に、アンタゴニストの不在下で観察される活性又は機能の強さに比較して分子の所定活性又は機能の強さを低下させるモジュレーターを意味する。特定該当アンタゴニストとしては、ｈＩＬ−１２及び／又はｈＩＬ−２３の生理活性又は免疫活性を阻害又は調節するものが挙げられる。ｈＩＬ−１２及び／又はｈＩＬ−２３のアンタゴニスト及び阻害剤としては限定されないが、ｈＩＬ−１２及び／又はｈＩＬ−２３と結合する蛋白質、核酸、糖鎖又は他の任意分子が挙げられる。
【００９７】
本明細書で使用する「有効量」なる用語は障害又はその１種以上の症状の重篤度及び／又は持続期間を低減又は改善するため、障害の進行を予防するため、障害の退縮を生じるため、障害に関連する１種以上の症状の再発、発現、発症又は進行を予防するため、障害を検出するため、あるいは別の施療剤（例えば予防剤又は治療剤）の予防又は治療効果を強化又は改善するために十分な施療剤の量を意味する。
【００９８】
本明細書で使用する「サンプル」なる用語はその最も広義な意味で使用する。本明細書で使用する「生体サンプル」としては限定されないが、生体又はかつての生体に由来する任意量の物質が挙げられる。このような生体としては限定されないが、ヒト、マウス、ラット、サル、イヌ、ウサギ及び他の動物が挙げられる。このような物質としては限定されないが、血液、血清、尿、滑液、細胞、臓器、組織、骨髄、リンパ節及び脾臓が挙げられる。
【００９９】
Ｉ．ヒトＩＬ−１２ｐ４０と結合する抗体
本発明の１側面は高い親和性と、低い解離速度と、高い中和能でＩＬ−１２ｐ４０と結合する単離マウスモノクローナル抗体又はその抗原結合部分を提供する。本発明の第２の側面はＩＬ−１２ｐ４０と結合するキメラ抗体を提供する。本発明の第３の側面はＩＬ−１２ｐ４０と結合するＣＤＲグラフト抗体又はその抗原結合部分を提供する。本発明の第４の側面はＩＬ−１２ｐ４０と結合するヒト化抗体又はその抗原結合部分を提供する。抗体又はその部分は単離抗体であることが好ましい。本発明の抗体は中和ヒト抗ＩＬ−１２及び／又はヒト抗ＩＬ−２３抗体であることが好ましい。
【０１００】
Ａ．抗ＩＬ−１２ｐ４０抗体の作製方法
本発明の抗体は当分野で公知の多数の技術の任意のものにより作製することができる。
【０１０１】
１．ハイブリドーマ技術を使用した抗ＩＬ−１２ｐ４０モノクローナル抗体
モノクローナル抗体はハイブリドーマ、組換え及びファージディスプレイ技術又はその組合せ等の当分野で公知の多様な技術を使用して作製することができる。例えば、モノクローナル抗体は例えばＨａｒｌｏｗら，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，２ｎｄ  ｅｄ．１９８８）；Ｈａｍｍｅｒｌｉｎｇら，ｉｎ：Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｔ−ＣｅＩｌ  Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ  ５６３−６８１（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，Ｎ．Ｙ．，１９８１）（前記文献はその開示内容全体を参照により本明細書に組込む）に教示されている当分野で公知の技術等のハイブリドーマ技術を使用して作製することができる。本明細書で使用する「モノクローナル抗体」なる用語はハイブリドーマ技術により作製される抗体に限定されない。「モノクローナル抗体」なる用語は任意真核、原核又はファージクローン等の単一クローンに由来する抗体を意味し、その作製方法に限定されない。
【０１０２】
ハイブリドーマ技術を使用した特定対抗体の作製及びスクリーニング方法は当分野で日常的に利用されており、周知である。１態様では、本発明はモノクローナル抗体の作製方法と、本発明の抗体を分泌するハイブリドーマ細胞を培養する段階を含む方法により作製された抗体を提供し、ハイブリドーマは本発明の抗原を免疫したマウスから単離した脾細胞を骨髄腫細胞と融合した後に、本発明のポリペプチドと結合することが可能な抗体を分泌するハイブリドーマクローンについて融合から得られたハイブリドーマをスクリーニングすることにより作製される（実施例１．２参照）。要約すると、マウスにＩＬ−１２抗原を免疫すればよい。好ましい１態様では、免疫応答を刺激するためのアジュバントと共にＩＬ−１２抗原を投与する。このようなアジュバントとしては完全もしくは不完全フロイントアジュバント、ＲＩＢＩ（ムラミルジペプチド）又はＩＳＣＯＭ（免疫刺激複合体）が挙げられる。このようなアジュバントはポリペプチドを局所堆積層に隔離することにより迅速分散を防ぐものでもよいし、マクロファージや免疫系の他の成分に対して化学走化性の因子を分泌するように宿主を刺激する物質を含有するものでもよい。ポリペプチドを投与する場合には、免疫スケジュールは数週間にわたってポリペプチドを２回以上投与する。
【０１０３】
動物にＩＬ−１２抗原を免疫後、動物から抗体及び／又は抗体産生細胞が得られる。動物から採血又は動物を屠殺することにより抗ＩＬ−１２抗体を含有する血清を採取する。血清は動物から採取したまま使用してもよいし、血清から免疫グロブリンフラクションを採取してもよいし、血清から抗ＩＬ−１２抗体を精製してもよい。こうして得られた血清又は免疫グロブリンはポリクローナルであるので、不均質な一連の特性をもつ。
【０１０４】
免疫応答が検出されたら（例えば抗原ＩＬ−１２に特異的な抗体がマウス血清で検出されたら）マウス脾臓を抽出し、脾細胞を単離する。次に脾細胞を周知技術により適切な任意骨髄腫細胞（例えばＡＴＣＣから入手可能な細胞株ＳＰ２０に由来する細胞）と融合する。ハイブリドーマを選択し、限界希釈法によりクローニングする。次に、ＩＬ−１２と結合することが可能な抗体を分泌する細胞についてハイブリドーマクローンを当分野で公知の方法によりアッセイする。陽性ハイブリドーマクローンをマウスに免疫することにより、一般に高濃度の抗体を含有する腹水を作製することができる。
【０１０５】
別の態様では、免疫動物から抗体産生不死化ハイブリドーマを作製することができる。免疫後に動物を屠殺し、脾臓Ｂ細胞を当分野で周知のように不死化骨髄腫細胞と融合する。例えばＨａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ，前出参照。好ましい１態様では、骨髄腫細胞は免疫グロブリンポリペプチドを分泌しない（非分泌型細胞株）。融合及び抗体選択後、ＩＬ−１２もしくはその一部又はＩＬ−１２発現細胞を使用してハイブリドーマをスクリーニングする。好ましい１態様では、初期スクリーニングは酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）又は放射免疫測定法（ＲＩＡ）、好ましくはＥＬＩＳＡを使用して実施される。ＥＬＩＳＡスクリーニングの１例は参照により本明細書に組込むＷＯ００／３７５０４に記載されている。
【０１０６】
抗ＩＬ−１２ｐ４０抗体を産生するハイブリドーマを選択し、クローニングし、以下に詳述するように活発なハイブリドーマ増殖、高い抗体産生及び望ましい抗体特性等の望ましい特性について更にスクリーニングする。ハイブリドーマを培養し、同系動物、免疫系を欠損する動物（例えばヌードマウス）でｉｎ  ｖｉｖｏ増殖させるか、あるいは細胞培養でｉｎ  ｖｉｔｒｏ増殖させる。ハイブリドーマの選択、クローニング及び増殖方法は当業者に周知である。
【０１０７】
好ましい１態様では、ハイブリドーマは上記のようにマウスハイブリドーマである。別の好ましい態様では、ハイブリドーマは非ヒト非マウス種（例えばラット、ヒツジ、ブタ、ヤギ、ウシ又はウマ）で産生される。別の態様では、ハイブリドーマは抗ＩＬ−１２抗体を発現するヒト細胞にヒト非分泌型骨髄腫を融合したヒトハイブリドーマである。
【０１０８】
特定エピトープを認識する抗体フラグメントは公知技術により作製することができる。例えば、本発明のＦａｂ及びＦ（ａｂ’）２フラグメントは（Ｆａｂフラグメントを作製するためには）パパイン又は（Ｆ（ａｂ’）２フラグメントを作製するためには）ペプシン等の酵素を使用して免疫グロブリン分子の蛋白分解開裂により作製することができる。Ｆ（ａｂ’）２フラグメントは可変領域と、軽鎖定常領域と、重鎖のＣＨ１ドメインを含む。
【０１０９】
２．ＳＬＡＭを使用した抗ＩＬ−１２ｐ４０モノクローナル抗体
本発明の別の側面では、米国特許第５，６２７，０５２号、ＰＣＴ公開ＷＯ９２／０２５５１及びＢａｂｃｏｃｋ，Ｊ．Ｓ．ら（１９９６）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ９３：７８４３−７８４８に記載されているように、選択リンパ球抗体法（ＳＬＡＭ）と当分野で呼ばれる手順を使用して単一単離リンパ球から組換え抗体を作製する。この方法では、抗原特異的溶血プラークアッセイを使用して該当抗体を分泌する単一細胞（例えばセクション１に記載した免疫動物の任意１種に由来するリンパ球）をスクリーニングするものであり、リンカー（例えばビオチン）を使用して抗原ＩＬ−１２、ＩＬ−１２のサブユニット又はそのフラグメントをヒツジ赤血球と結合し、これを使用してＩＬ−１２に対する特異性をもつ抗体を分泌する単一細胞を同定する。該当抗体分泌細胞の同定後、重鎖及び軽鎖可変領域ｃＤＮＡを逆転写酵素−ＰＣＲにより細胞からレスキューした後、これらの可変領域をＣＯＳ又はＣＨＯ細胞等の哺乳動物宿主細胞で適切な免疫グロブリン定常領域（例えばヒト定常領域）のコンテキストにおいて発現させることができる。ｉｎ  ｖｉｖｏ選択したリンパ球に由来する増幅免疫グロブリン配列をトランスフェクトした宿主細胞をその後、例えばトランスフェクト細胞をパニングすることにより更にｉｎ  ｖｉｔｒｏ分析及び選択し、ＩＬ−１２に対する抗体を発現する細胞を単離することができる。ＰＣＴ公開ＷＯ９７／２９１３１及びＰＣＴ公開ＷＯ００／５６７７２に記載されている方法等のｉｎ  ｖｉｔｒｏ親和性成熟法等により増幅免疫グロブリン配列を更にｉｎ  ｖｉｔｒｏ操作することができる。
【０１１０】
３．トランスジェニック動物を使用した抗ＩＬ−１２ｐ４０モノクローナル抗体
本発明の別の態様では、ヒト免疫グロブリン遺伝子座の一部又は全部を含む非ヒト動物にＩＬ−１２抗原を免疫することにより抗体を作製する。好ましい１態様では、非ヒト動物はヒト免疫グロブリン遺伝子座の大きなフラグメントを含み且つマウス抗体産生を欠損する遺伝子組換えマウス系列であるＸＥＮＯＭＯＵＳＥトランスジェニックマウスである。例えばＧｒｅｅｎら，Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  ７：１３−２１（１９９４）並びに米国特許第５，９１６，７７１号、５，９３９，５９８号、５，９８５，６１５号、５，９９８，２０９号、６，０７５，１８１号、６，０９１，００１号６，１１４，５９８号及び６，１３０，３６４号参照。更にＷＯ９１／１０７４１（公開日１９９１年７月２５日）、ＷＯ９４／０２６０２（公開日１９９４年２月３日）、ＷＯ９６／３４０９６及びＷＯ９６／３３７３５（いずれも公開日１９９６年１０月３１日）、ＷＯ９８／１６６５４（公開日１９９８年４月２３日）、ＷＯ９８／２４８９３（公開日１９９８年６月１１日）、ＷＯ９８／５０４３３（公開日１９９８年１１月１２日）、ＷＯ９９／４５０３１（公開日１９９９年９月１０日）、ＷＯ９９／５３０４９（公開日１９９９年１０日２１日）、ＷＯ０００９５６０（公開日２０００年２月２４日）並びにＷＯ００／０３７５０４（公開日２０００年６月２９日）も参照。ＸＥＮＯＭＯＵＳＥトランスジェニックマウスは完全ヒト抗体の成人様ヒトレパートリーを産生し、抗原特異的ヒトＭａｂを産生する。ＸＥＮＯＭＯＵＳＥトランスジェニックマウスはヒト重鎖遺伝子座とｘ軽鎖遺伝子座のメガベースサイズの生殖細胞系列構成ＹＡＣフラグメントの導入によりヒト抗体レパートリーの約８０％を含む。その開示内容を参照により本明細書に組込むＭｅｎｄｅｚら，Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  １５：１４６−１５６（１９９７），Ｇｒｅｅｎ  ａｎｄ  Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ  Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８８：４８３−４９５（１９９８）参照。
【０１１１】
４．組換え抗体ライブラリーを使用した抗ＩＬ−１２モノクローナル抗体
抗体ライブラリーをスクリーニングして所望結合特異性をもつ抗体を同定するｉｎ  ｖｉｔｒｏを使用して本発明の抗体を作製することもできる。組換え抗体ライブラリーのこのようなスクリーニング方法は当分野で周知であり、例えば各々その開示内容を参照により本明細書に組込むＬａｄｎｅｒら，米国特許第５，２２３，４０９号；Ｋａｎｇら，ＰＣＴ公開ＷＯ９２／１８６１９；Ｄｏｗｅｒら，ＰＣＴ公開ＷＯ９１／１７２７１；Ｗｉｎｔｅｒら，ＰＣＴ公開ＷＯ９２／２０７９１；Ｍａｒｋｌａｎｄら，ＰＣＴ公開ＷＯ９２／１５６７９；Ｂｒｅｉｔｌｉｎｇら，ＰＣＴ公開ＷＯ９３／０１２８８；ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら，ＰＣＴ公開ＷＯ９２／０１０４７；Ｇａｒｒａｒｄら，ＰＣＴ公開ＷＯ９２／０９６９０；Ｆｕｃｈｓら（１９９１）Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ９：１３７０−１３７２；Ｈａｙら（１９９２）Ｈｕｍ  Ａｎｔｉｂｏｄ  Ｈｙｈｒｉｄｏｍａｓ  ３：８１−８５；Ｈｕｓｅら（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４６：１２７５−１２８１；ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら，Ｎａｔｕｒｅ（１９９０）３４８：５５２−５５４；Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓら（１９９３）ＥＭＢＯ  Ｊ  １２：７２５−７３４；Ｈａｗｋｉｎｓら（１９９２）Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ２２６：８８９−８９６；Ｃｌａｃｋｓｏｎら（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ  ３５２：６２４−６２８；Ｇｒａｍら（１９９２）ＰＮＡＳ  ８９：３５７６−３５８０；Ｇａｒｒａｄら（１９９１）Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ９：１３７３−１３７７；Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍら（１９９１）Ｎｕｃ  Ａｃｉｄ  Ｒｅｓ  １９：４１３３−４１３７；並びにＢａｒｂａｓら（１９９１）ＰＮＡＳ  ８８：７９７８−７９８２，米国特許出願公開２００３０１８６３７４、及びＰＣＴ公開ＷＯ９７／２９１３１に記載されている方法が挙げられる。
【０１１２】
組換え抗体ライブラリーはＩＬ−１２もしくはＩＬ−２３又はＩＬ−１２もしくはＩＬ−２３の一部を免疫した対象に由来するものとすることができる。あるいは、組換え抗体ライブラリーはナイーブ対象、即ちＩＬ−１２又はＩＬ−２３を免疫していない対象に由来するもの（例えばヒトＩＬ−１２又はＩＬ−２３を免疫していないヒト対象に由来するヒト抗体ライブラリー）でもよい。ヒトＩＬ−１２ｐ４０を含むペプチドで組換え抗体ライブラリーをスクリーニングし、ＩＬ−１２ｐ４０を認識する抗体を選択することにより本発明の抗体を選択する。このようなスクリーニング及び選択を実施するための方法は前段落に列挙した文献に記載されているように当分野で周知である。ｈＩＬ−１２に対する特定結合親和性をもつ本発明の抗体（例えば特定ｋｏｆｆ速度定数でヒトＩＬ−１２から解離する抗体）を選択するためには、当分野で公知の表面プラズモン共鳴法を使用して所望ｋｏｆｆ速度定数をもつ抗体を選択することができる。ｈＩＬ−１２に対する特定中和活性をもつ本発明の抗体（例えば特定ＩＣ５０をもつ抗体）を選択するためには、ｈＩＬ−１２活性の阻害を評価するための当分野で公知の標準方法を使用することができる。
【０１１３】
１側面では、本発明はヒトＩＬ−１２及び／又はヒトＩＬ−２３と結合する単離抗体又はその抗原結合部分に関する。抗体は中和抗体が好ましい。各種態様では、抗体は組換え抗体又はモノクローナル抗体である。
【０１１４】
例えば、本発明の抗体は当分野で公知の各種ファージブィスプレイ法を使用して作製することもできる。ファージディスプレイ法では、機能的抗体ドメインをコードするポリヌクレオチド配列をもつファージ粒子表面にこれらのドメインを提示させる。特に、このようなファージを利用してレパートリー又はコンビナトリアル抗体ライブラリー（例えばヒト又はマウス）から発現される抗原結合ドメインを提示させることができる。抗原（例えば標識抗原又は固体表面もしくはビーズに結合もしくは固定した抗原）を使用して、該当抗原と結合する抗原結合ドメインを発現するファージを選択又は同定することができる。これらの方法で使用されるファージは一般にファージ遺伝子ＩＩＩ又は遺伝子ＶＩＩＩ蛋白質と組換え融合したＦａｂ、Ｆｖ又はジスルフィド安定化Ｆｖ抗体ドメインをもつファージから発現されるｆｄ及びＭ１３結合ドメインを含む線維状ファージである。本発明の抗体を作製するために使用することができるファージディスプレイ法の例としては、各々その開示内容全体を参照により本明細書に組込むＢｒｉｎｋｍａｎら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  １８２：４１−５０（１９９５）；Ａｍｅｓら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  １８４：１７７−１８６（１９９５）；Ｋｅｔｔｌｅｂｏｒｏｕｇｈら，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：９５２−９５８（１９９４）；Ｐｅｒｓｉｃら，Ｇｅｎｅ  １８７  ９−１８（１９９７）；Ｂｕｒｔｏｎら，Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ５７：１９１−２８０（１９９４）；ＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＧＢ９１／０１１３４；ＰＣＴ公開ＷＯ９０／０２８０９；ＷＯ９１／１０７３７；ＷＯ９２／０１０４７；ＷＯ９２／１８６１９；ＷＯ９３／１１２３６；ＷＯ９５／１５９８２；ＷＯ９５／２０４０１；並びに米国特許第５，６９８，４２６号；５，２２３，４０９号；５，４０３，４８４号；５，５８０，７１７号；５，４２７，９０８号；５，７５０，７５３号；５，８２１，０４７号；５，５７１，６９８号；５，４２７，９０８号；５，５１６，６３７号；５，７８０，２２５号；５，６５８，７２７号；５，７３３，７４３号及び５，９６９，１０８号に開示されている方法が挙げられる。
【０１１５】
上記文献に記載されているように、ファージ選択後、ファージに由来する抗体コーディグ領域を単離し、これを使用してヒト抗体又は他の任意所望抗原結合フラグメントを含む完全抗体を作製し、例えば以下に詳述するように、哺乳動物細胞、昆虫細胞、植物細胞、酵母及び細菌等の任意所望宿主で発現させることができる。例えば、ＰＣＴ公開ＷＯ９２／２２３２４；Ｍｕｌｌｉｎａｘら，ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  １２（６）：８６４−８６９（１９９２）；Ｓａｗａｉら，ＡＪＲＩ  ３４：２６−３４（１９９５）；及びＢｅｔｔｅｒら，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４０：１０４１−１０４３（１９８８）（前記文献はその開示内容全体を参照により本明細書に組込む）に開示されている方法等の当分野で公知の方法を使用してＦａｂ、Ｆａｂ’及びＦ（ａｂ’）２フラグメントを組換え作製するための技術を利用することもできる。１本鎖Ｆｖ及び抗体を作製するために使用することができる技術の例としては、米国特許第４，９４６，７７８号及び５，２５８，４９８号；Ｈｕｓｔｏｎら，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  ２０３：４６−８８（１９９１）；Ｓｈｕら，ＰＮＡＳ  ９０：７９９５−７９９９（１９９３）；並びにＳｋｅｒｒａら，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４０：１０３８−１０４０（１９８８）に記載されている方法が挙げられる。
【０１１６】
ファージディスプレイ法により組換え抗体ライブラリーをスクリーニングする代法として、大規模コンビナトリアルライブラリーをスクリーニングするための当分野で公知の他の方法を利用して本発明の二重特異性抗体を同定することもできる。代替発現システムの１例はＰＣＴ公開ＷＯ９８／３１７００（Ｓｚｏｓｔａｋ  ａｎｄ  Ｒｏｂｅｒｔｓ）及びＲｏｂｅｒｔｓ，Ｒ．Ｗ．ａｎｄ  Ｓｚｏｓｔａｋ，Ｊ．Ｗ．（１９９７）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９４：１２２９７−１２３０２に記載されているように、組換え抗体ライブラリーをＲＮＡ−蛋白質融合体として発現させるシステムである。このシステムでは、ペプチドアクセプター抗生物質であるピューロマイシンを３’末端に付加した合成ｍＲＮＡのｉｎ  ｖｉｔｒｏ翻訳により、ｍＲＮＡとこのｍＲＮＡによりコードされるペプチド又は蛋白質の共有融合体を形成する。従って、コードされるペプチド又は蛋白質（例えば抗体又はその部分）の特性（例えば二重特異性抗原と抗体又はその部分の結合）に基づいてｍＲＮＡの複雑な混合物（例えばコンビナトリアルライブラリー）から特定ｍＲＮＡを集積させることができる。このようなライブラリーのスクリーニングから回収された抗体又はその部分をコードする核酸配列を上記のような組換え手段により（例えば哺乳動物宿主細胞で）発現させることができ、更に、最初に選択した配列に突然変異を導入したｍＲＮＡ−ペプチド融合体のスクリーニングラウンドの追加又は上記のような組換え抗体の他のｉｎ  ｖｉｔｒｏ親和性成熟法により更に親和性成熟させることができる。
【０１１７】
別のアプローチでは、当分野で公知の酵母ディスプレイ法を使用して本発明の抗体を作製することもできる。酵母ディスプレイ法では、遺伝子法を使用して抗体ドメインを酵母細胞壁に結合した後に酵母表面に提示させる。特に、このような酵母はレパートリー又はコンビナトリアル抗体ライブラリー（例えばヒト又はマウス）から発現される抗原結合ドメインを提示させるために利用することができる。本発明の抗体を作製するために使用することができる酵母ディスプレイ法の例としては、参照により本明細書に組込むＷｉｔｔｒｕｐら，米国特許第６，６９９，６５８号に開示されている方法が挙げられる。
【０１１８】
Ｂ．組換えＩＬ−１２ｐ４０抗体の作製
本発明の抗体は当分野で公知の多数の技術の任意のものにより作製することができる。例えば、重鎖と軽鎖をコードする発現ベクターを標準技術により宿主にトランスフェクトして宿主細胞から発現させる。「トランスフェクション」なる用語の各種活用形は原核又は真核宿主細胞に外来ＤＮＡを導入するために広く使用されている多様な技術（例えばエレクトロポレーション、リン酸カルシウム沈殿法、ＤＥＡＥ−デキストラントランスフェクション等）を包含するものとする。本発明の抗体は原核宿主細胞でも真核宿主細胞でも発現させることができるが、真核細胞（特に哺乳動物細胞）のほうが原核細胞よりも適正に折り畳まれた免疫活性抗体を産生及び分泌し易いので、真核細胞で抗体を発現させることが好ましく、哺乳動物宿主細胞で発現させることが最も好ましい。
【０１１９】
本発明の組換え抗体を発現させるための好ましい哺乳動物宿主細胞としては、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ細胞）（例えばＲ．Ｊ．Ｋａｕｆｍａｎ  ａｎｄ  Ｐ．Ａ．Ｓｈａｒｐ（１９８２）Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１５９：６０１−６２１に記載されているようなＤＨＦＲ選択マーカーと併用されるＵｒｌａｕｂ  ａｎｄ  Ｃｈａｓｉｎ，（１９８０）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ７７：４２１６−４２２０に記載のｄｈｆｒ−ＣＨＯ細胞を含む）、ＮＳ０骨髄腫細胞、ＣＯＳ細胞及びＳＰ２細胞が挙げられる。抗体遺伝子をコードする組換え発現ベクターを哺乳動物宿主細胞に導入する場合には、宿主細胞で抗体を発現させるため、又はより好ましくは宿主細胞を増殖させる培地に抗体を分泌させるために十分な時間宿主細胞を培養することにより抗体を産生させる。標準蛋白質精製法を使用して培地から抗体を回収することができる。
【０１２０】
ＦａｂフラグメントやｓｃＦｖ分子等の機能的抗体フラグメントを作製するために宿主細胞を使用することもできる。当然のことながら、上記手順の変法も本発明の範囲に含まれる。例えば、本発明の抗体の軽鎖及び／又は重鎖の機能的フラグメントをコードするＤＮＡを宿主細胞にトランスフェクトすることが望ましいと思われる。該当抗原との結合に不要な軽鎖及び重鎖の一方又は両方をコードするＤＮＡの一部又は全部を除去するために組換えＤＮＡ技術を使用してもよい。このような短縮型ＤＮＡ分子から発現される分子も本発明の抗体に含まれる。更に、標準化学架橋法により本発明の抗体を第２の抗体に架橋することにより、一方の重鎖と一方の軽鎖が本発明の抗体であり、他方の重鎖と軽鎖が該当抗原以外の抗原に特異的である二機能性抗体を作製することもできる。
【０１２１】
本発明の抗体又はその抗原結合部分の好ましい組換え発現システムでは、抗体重鎖と抗体軽鎖の両者をコードする組換え発現ベクターをリン酸カルシウムトランスフェクションによりｄｈｆｒ−ＣＨＯ細胞に導入する。組換え発現ベクター内で、抗体重鎖及び軽鎖遺伝子は遺伝子の高レベル転写を誘導するように各々ＣＭＶエンハンサー／ＡｄＭＬＰプロモーター調節エレメントと機能的に連結されている。組換え発現ベクターは更に、メトトレキセート選択／増幅を使用してベクターをトランスフェクトしたＣＨＯ細胞の選択を可能にするＤＨＦＲ遺伝子をもつ。選択された形質転換宿主細胞を培養し、抗体重鎖及び軽鎖を発現させ、無傷の抗体を培地から回収する。標準分子生物学技術を使用して組換え発現ベクターを作製し、宿主細胞にトランスフェクトし、形質転換細胞を選択し、宿主細胞を培養し、培地から抗体を回収する。更に、本発明は本発明の組換え抗体が合成されるまで適切な培地で本発明の宿主細胞を培養することにより本発明の組換え抗体を合成する方法を提供する。本方法は更に培地から組換え抗体を単離する段階を含むことができる。
【０１２２】
１．抗ＩＬ−１２ｐ４０抗体
表５は本発明の好ましい抗ｈＩＬ−１２ｐ４０抗体ＶＨ及びＶＬ領域のアミノ酸配列表である。
【０１２３】
【表７】
0005396080.tif 000009
0005396080.tif 000010
0005396080.tif 000011
0005396080.tif 000012
0005396080.tif 000013
0005396080.tif 000014
【０１２４】
上記単離抗ＩＬ−１２ｐ４０抗体ＣＤＲ配列は下表６に示すＣＤＲ配列を含むポリペプチドを含む本発明に従って単離されたＩＬ−１２ｐ４０結合蛋白質の新規ファミリーを構成する。ｈＩＬ−１２及び／又はｈＩＬ−２３に対して好ましいＩＬ−１２ｐ４０結合及び／又は中和活性をもつ本発明のＣＤＲを作製及び選択するためには、本発明の結合蛋白質を作製し、これらの結合蛋白質のＩＬ−１２及び／又はＩＬ−２３結合及び／又は中和特性を評価するための当分野で公知の標準方法を使用することができ、限定されないが、本明細書に具体的に記載する方法が挙げられる。
【０１２５】
【表８】
0005396080.tif 000015
【０１２６】
２．抗ＩＬ−１２ｐ４０キメラ抗体
キメラ抗体は抗体の異なる部分が異なる動物種に由来する分子であり、例えばマウスモノクローナル抗体に由来する可変領域とヒト免疫グロブリン定常領域をもつ抗体が挙げられる。キメラ抗体の作製方法は当分野で公知であり、実施例２．１に詳述する。例えばその開示内容全体を参照により本明細書に組込むＭｏｒｒｉｓｏｎ，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２９：１２０２（１９８５）；Ｏｉら，ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ４：２１４（１９８６）；Ｇｉｌｌｉｅｓら，（１９８９）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  １２５：１９１−２０２；米国特許第５，８０７，７１５号；４，８１６，５６７号；及び４，８１６，３９７号参照。更に、適切な抗原特異性のマウス抗体分子に由来する遺伝子を適切な生理活性のヒト抗体分子に由来する遺伝子とスプライシングすることにより「キメラ抗体」を作製するために開発された技術（その開示内容全体を参照により本明細書に組込むＭｏｒｒｉｓｏｎら，１９８４，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８１：８５１−８５５；Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒら，１９８４，Ｎａｔｕｒｅ  ３１２：６０４−６０８；Ｔａｋｅｄａら，１９８５，Ｎａｔｕｒｅ  ３１４：４５２−４５４）も使用できる。
【０１２７】
１態様では、本発明のキメラ抗体はセクション１に記載したマウスモノクローナル抗ヒトＩＬ−１２抗体の重鎖定常領域をヒトＩｇＧ１定常領域で置換することにより作製される。特定態様では、本発明のキメラ抗体は配列番号３５、配列番号３７、配列番号３９、配列番号４１、配列番号４３、配列番号４５、配列番号４７、配列番号４９、配列番号５１又は配列番号５３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）と、配列番号３６、配列番号３８、配列番号４０、配列番号４２、配列番号４４、配列番号４６、配列番号４８、配列番号５０、配列番号５２又は列番号５４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。
【０１２８】
３．抗ＩＬ−１２ｐ４０  ＣＤＲグラフト抗体
本発明のＣＤＲグラフト抗体はヒト抗体に由来する重鎖及び軽鎖可変領域配列を含み、ＶＨ及び／又はＶＬのＣＤＲ領域の１個以上が本発明のマウス抗体のＣＤＲ配列で置換されている。任意ヒト抗体に由来するフレームワーク配列をＣＤＲグラフトの鋳型として使用することができる。しかし、このようなフレームワークをそのまま鎖置換すると、抗原に対する結合親和性が多少低下することが多い。元のマウス抗体に対するヒト抗体の相同度が高いほど、マウスＣＤＲとヒトフレームワークの結合によりＣＤＲが歪んで親和性を低下する可能性は低くなる。従って、ＣＤＲ以外のマウス可変領域フレームワークに置換するために選択されるヒト可変領域フレームワークはマウス抗体可変領域フレームワークに対して少なくとも６５％の配列一致度をもつことが好ましい。ＣＤＲ以外のヒト及びマウス可変領域は少なくとも７０％の配列一致度をもつことがより好ましい。ＣＤＲ以外のヒト及びマウス可変領域は少なくとも７５％の配列一致度をもつことが更に好ましい。ＣＤＲ以外のヒト及びマウス可変領域は少なくとも８０％の配列一致度をもつことが最も好ましい。キメラ抗体の作製方法は当分野で公知であり、実施例２．２に詳述する方法（ＥＰ  ２３９，４００；ＰＣＴ公開ＷＯ９１／０９９６７；米国特許第５，２２５，５３９号；５，５３０，１０１号；及び５，５８５，０８９号も参照）に加え、ベニアリング又はリサーフェシング（ＥＰ  ５９２，１０６；ＥＰ  ５１９，５９６；Ｐａｄｌａｎ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ２８（４／５）：４８９−４９８（１９９１）；Ｓｔｕｄｎｉｃｋａら，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ７（６）：８０５−８１４（１９９４）；Ｒｏｇｕｓｋａら，ＰＮＡＳ  ９１：９６９−９７３（１９９４））やチェーンシャフリング（米国特許第５，５６５，３５２号）か挙げられる。
【０１２９】
特定態様では、本発明は表７に記載するようなＶＨ及び／又はＶＬ鎖をもつＣＤＲグラフト抗体を提供する。
【０１３０】
【表９】
0005396080.tif 000016
0005396080.tif 000017
0005396080.tif 000018
【０１３１】
４．抗ＩＬ−１２ｐ４０ヒト化抗体
ヒト化抗体は所望抗原と結合する非ヒト種抗体に由来する分子であり、非ヒト種に由来する１個以上の相補性決定領域（ＣＤＲ）とヒト免疫グロブリン分子に由来するフレームワーク領域をもつ。公知ヒトＩｇ配列は例えば各々その開示内容全体を参照により本明細書に組込むｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｅｎｔｒｅｚ−／ｑｕｅｒｙ．ｆｃｇｉ；ｗｗｗ．ａｔｃｃ．ｏｒｇ／ｐｈａｇｅ／ｈｄｂ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｓｃｉｑｕｅｓｔ．ｃｏｍ／；ｗｗｗ．ａｂｃａｍ．ｃｏｍ／；ｗｗｗ．ａｎｔｉｂｏｄｙｒｅｓｏｕｒｃｅ．ｃｏｍ／ｏｎｌｉｎｅｃｏｍｐ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｐｕｂｌｉｃ．ｉａｓｔａｔｅ．ｅｄｕ／．ａｂｏｕｔ．ｐｅｄｒｏ／ｒｅｓｅａｒｃｈ＿ｔｏｏｌｓ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｍｇｅｎ．ｕｎｉ−ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ．ｄｅ／ＳＤ／ＩＴ／ＩＴ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｗｈｆｒｅｅｍａｎ．ｃｏｍ／ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ／ＣＨ−０５／ｋｕｂｙ０５．ｈｔｍ；ｗｗｗ．ｌｉｂｒａｒｙ．ｔｈｉｎｋｑｕｅｓｔ．ｏｒｇ／１２４２９／Ｉｍｍｕｎｅ／Ａｎｔｉｂｏｄｙ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｈｈｍｉ．ｏｒｇ／ｇｒａｎｔｓ／ｌｅｃｔｕｒｅｓ／１９９６／ｖｌａｂ／；ｗｗｗ．ｐａｔｈ．ｃａｍ．ａｃ．ｕｋ／．ａｂｏｕｔ．ｍｒｃＴ／ｍ−ｉｋｅｉｍａｇｅｓ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ａｎｔｉｂｏｄｙｒｅｓｏｕｒｃｅ．ｃｏｍ／；ｍｃｂ．ｈａｒｖａｒｄ．ｅｄｕ／ＢｉｏＬｉｎｋｓ／Ｉｍｍｕｎｏ−ｌｏｇｙ．ｈｔｍｌ．ｗｗｗ．ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙｌｉｎｋ．ｃｏｍ／；ｐａｔｈｂｏｘ．ｗｕｓｔｌ．ｅｄｕ／．ａｂｏｕｔ．ｈｃｅｎｔｅｒ／ｉｎｄｅｘ．−ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｂｉｏｔｅｃｈ．ｕｆｌ．ｅｄｕ／．ａｂｏｕｔ．ｈｃｌ／；ｗｗｗ．ｐｅｂｉｏ．ｃｏｍ／ｐａ／３４０９１３／３４０９１３．ｈｔｍｌ−；ｗｗｗ．ｎａｌ．ｕｓｄａ．ｇｏｖ／ａｗｉｃ／ｐｕｂｓ／ａｎｔｉｂｏｄｙ／；ｗｗｗ．ｍ．ｅｈｉｍｅ−ｕ．ａｃｊｐ／．ａｂｏｕｔ．ｙａｓｕｈｉｔｏ−／Ｅｌｉｓａ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｂｉｏｄｅｓｉｇｎ．ｃｏｍ／ｔａｂｌｅ．ａｓｐ；ｗｗｗ．ｉｃｎｅｔ．ｕｋ／ａｘｐ／ｆａｃｓ／ｄａｖｉｅｓ／ｌｉｎ−ｋｓ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｂｉｏｔｅｃｈ．ｕｆｌ．ｅｄｕ／．ａｂｏｕｔ．ｆｃｃｌ／ｐｒｏｔｏｃｏｌ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｉｓａｃ−ｎｅｔ．ｏｒｇ／ｓｉｔｅｓ＿ｇｅｏ．ｈｔｍｌ；ａｘｉｍｔｌ．ｉｍｔ．ｕｎｉ−ｍａｒｂｕｒｇ．ｄｅ／．ａｂｏｕｔ．ｒｅｋ／ＡＥＰ−Ｓｔａｒｔ．ｈｔｍｌ；ｂａｓｅｒｖ．ｕｃｉ．ｋｕｎ．ｎｌ／．ａｂｏｕｔ．ｊｒａａｔｓ／ｌｉｎｋｓｌ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｒｅｃａｂ．ｕｎｉ−ｈｄ．ｄｅ／ｉｍｍｕｎｏ．ｂｍｅ．ｎｗｕ．ｅｄｕ／；ｗｗｗ．ｍｒｃ−ｃｐｅ．ｃａｍ．ａｃ．ｕｋ／ｉｍｔ−ｄｏｃ／ｐｕ−ｂｌｉｃ／ＩＮＴＲＯ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｉｂｔ．ｕｎａｍ．ｍｘ／ｖｉｒ／Ｖ＿ｍｉｃｅ．ｈｔｍｌ；ｉｍｇｔ．ｃｎｕｓｃ．ｆｒ：８１０４／；ｗｗｗ．ｂｉｏｃｈｅｍ．ｕｃｌ．ａｃ．ｕｋ／．ａｂｏｕｔ．ｍａｒｔｉｎ／ａｂｓ／ｉｎｄｅｘ．ｈｔｍｌ；ａｎｔｉｂｏｄｙ．ｂａｔｈ．ａｃ．ｕｋ／；ａｂｇｅｎ．ｃｖｍ．ｔａｍｕ．ｅｄｕ／ｌａｂ／ｗｗｗａｂｇｅｎ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｕｎｉｚｈ．ｃｈ／．ａｂｏｕｔ．ｈｏｎｅｇｇｅｒ／ＡＨＯｓｅｍ−ｉｎａｒ／Ｓｌｉｄｅ０１．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｃｒｙｓｔ．ｂｂｋ．ａｃ．Ｕｋ／．ａｂｏｕｔ．ｕｂｃｇ０７ｓ／；ｗｗｗ．ｎｉｍｒ．ｍｒｃ．ａｃ．ｕｋ／ＣＣ／ｃｃａｅｗｇ／ｃｃａｅｗｇ．ｈｔｍ；ｗｗｗ．ｐａｔｈ．ｃａｍ．ａｃ．ｕｋ／．ａｂｏｕｔ．ｍｒｃ７／ｈ−ｕｍａｎｉｓａｔｉｏｎ／ＴＡＨＨＰ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｉｂｔ．ｕｎａｍ．ｍｘ／ｖｉｒ／ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ／ｓｔａｔ＿ａｉｍ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｂｉｏｓｃｉ．ｍｉｓｓｏｕｒｉ．ｅｄｕ／ｓｍｉｔｈｇｐ／ｉｎｄｅｘ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｃｒｙｓｔ．ｂｉｏｃ．ｃａｍ．ａｃ．ｕｋ／．ａｂｏ−ｕｔ．ｆｍｏｌｉｎａ／Ｗｅｂ−ｐａｇｅｓ／Ｐｅｐｔ／ｓｐｏｔｔｅｃｈ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｊｅｒｉｎｉ．ｄｅ／ｆｒ  ｒｏｄｕｃｔｓ．ｈｔｍ；ｗｗｗ．ｐａｔｅｎｔｓ．ｉｂｍ．ｃｏｍ／ｉｂｍ．ｈｔｍｌ．；Ｋａｂａｔら，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐｔ．Ｈｅａｌｔｈ（１９８３）に開示されている。このようなインポート配列を使用して免疫原性を低下させたり、結合、親和性、会合速度、解離速度、アビディティ、特異性、半減期、又は当分野で公知の他の適切な任意特性を低下、増加又は改変することができる。
【０１３２】
抗原結合を改変、好ましくは改善するためには、ヒトフレームワーク領域のフレームワーク残基をＣＤＲドナー抗体に由来する対応する残基で置換すればよい。これらのフレームワーク置換は当分野で周知の方法により同定され、例えば抗原結合に重要なフレームワーク残基を同定するにはＣＤＲ残基とフレームワーク残基の相互作用のモデル化を使用し、特定位置の異常なフレームワーク残基を同定するには配列比較を使用する。（例えばその開示内容全体を参照により本明細書に組込むＱｕｅｅｎら，米国特許第５，５８５，０８９；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら，Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３（１９８８）参照）。三次元免疫グロブリンモデルは広く入手可能であり、当業者に周知である。選択された候補免疫グロブリン配列の推定三次元配座構造を図解表示するコンピュータープログラムも入手可能である。これらの表示を検討すると、候補免疫グロブリン配列の機能に残基が果たすと予想される役割を分析することができ、即ち候補免疫グロブリンがその抗原と結合する能力に影響を与える残基を分析することができる。こうして、ターゲット抗原に対する親和性の増加等の所望抗体特性が得られるようにコンセンサス及びインポート配列からＦＲ残基を選択し、組み合わせることができる。一般に、ＣＤＲ残基は抗原結合に影響を与える直接的且つ最も実質的な因子である。当分野で公知の各種技術を使用して抗体をヒト化することができ、限定されないが、各々その開示内容全体を参照により本明細書に組込むＪｏｎｅｓら，Ｎａｔｕｒｅ  ３２１：５２２（１９８６）；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎら，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３９：１５３４（１９８８）），Ｓｉｍｓら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２２９６（１９９３）；Ｃｈｏｔｈｉａ  ａｎｄ  Ｌｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１（１９８７），Ｃａｒｔｅｒら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８９：４２８５（１９９２）；Ｐｒｅｓｔａら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２６２３（１９９３），Ｐａｄｌａｎ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ２８（４／５）：４８９−４９８（１９９１）；Ｓｔｕｄｎｉｃｋａら，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ７（６）：８０５−８１４（１９９４）；Ｒｏｇｕｓｋａら，ＰＮＡＳ  ９１：９６９−９７３（１９９４）；ＰＣＴ公開ＷＯ９１／０９９６７，ＰＣＴ／：ＵＳ９８／１６２８０，ＵＳ９６／１８９７８，ＵＳ９１／０９６３０，ＵＳ９１／０５９３９，ＵＳ９４／０１２３４，ＧＢ８９／０１３３４，ＧＢ９１／０１１３４，ＧＢ９２／０１７５５；ＷＯ９０／１４４４３，ＷＯ９０／１４４２４，ＷＯ９０／１４４３０，ＥＰ  ２２９２４６，ＥＰ  ５９２，１０６；ＥＰ  ５１９，５９６，ＥＰ  ２３９，４００，米国特許第５，５６５，３３２号、５，７２３，３２３号、５，９７６，８６２号、５，８２４，５１４号、５，８１７，４８３号、５８１４４７６号、５７６３１９２号、５７２３３２３号、５，７６６８８６号、５，７１４，３５２号、６，２０４，０２３号、６，１８０，３７０号、５，６９３，７６２号、５，５３０，１０１号、５，５８５，０８９号、５，２２５，５３９号、４，８１６，５６７号及びその引用文献に記載されて��る技術が挙げられる。
【０１３３】
Ｃ．抗体及び抗体産生細胞株の作製
本発明の抗ＩＬ−１２ｐ４０抗体は例えば当分野で公知の数種のｉｎ  ｖｉｔｒｏ及びｉｎ  ｖｉｖｏアッセイの任意１種により評価した場合に、ＩＬ−１２活性を低下又は中和する高い能力を示すことが好ましい（例えば実施例１．１．Ｃ参照）。例えば、これらの抗体はＩＬ−１２の誘導下のＰＨＡ芽球によるインターフェロンγの産生を少なくとも約１０−８Ｍ、約１０−９Ｍ又は約１０−１０Ｍの範囲のＩＣ５０値で中和する。本発明の抗ＩＬ−１２ｐ４０抗体はＩＬ−２３活性を低下又は中和する高い能力も示すことが好ましい。
【０１３４】
好ましい態様では、単離抗体又はその抗原結合部分はヒトＩＬ−１２ｐ４０と結合し、前記抗体又はその抗原結合部分は表面プラズモン共鳴法により測定した場合に約０．１ｓ−１以下のｋｏｆｆ速度定数でヒトＩＬ−１２ｐ４０から解離するか、又は約１×１０−６Ｍ以下のＩＣ５０でヒトＩＬ−１２及び／又はヒトＩＬ−２３活性を阻害する。あるいは、抗体又はその抗原結合部分は表面プラズモン共鳴法により測定した場合に約１×１０−２ｓ−１以下のｋｏｆｆ速度定数でヒトＩＬ−１２ｐ４０から解離するか、又は約１×１０−７Ｍ以下のＩＣ５０でヒトＩＬ−１２及び／又はヒトＩＬ−２３活性を阻害する。あるいは、抗体又はその抗原結合部分は表面プラズモン共鳴法により測定した場合に約１×１０−３ｓ−１以下のｋｏｆｆ速度定数でヒトＩＬ−１２ｐ４０から解離するか、又は約１×１０−８Ｍ以下のＩＣ５０でヒトＩＬ−１２及び／又はヒトＩＬ−２３を阻害する。あるいは、抗体又はその抗原結合部分は表面プラズモン共鳴法により測定した場合に約１×１０−４ｓ−１以下のｋｏｆｆ速度定数でヒトＩＬ−１２ｐ４０から解離するか、又は約１×１０−９Ｍ以下のＩＣ５０でＩＬ−１２及び／又はヒトＩＬ−２３活性を阻害する。あるいは、抗体又はその抗原結合部分は表面プラズモン共鳴法により測定した場合に約１×１０−５ｓ−１以下のｋｏｆｆ速度定数でヒトＩＬ−１２ｐ４０から解離するか、又は約１×１０−１０Ｍ以下のＩＣ５０でＩＬ−１２及び／又はヒトＩＬ−２３活性を阻害する。あるいは、抗体又はその抗原結合部分は表面プラズモン共鳴法により測定した場合に約１×１０−５ｓ−１以下のｋｏｆｆ速度定数でヒトＩＬ−１２ｐ４０から解離するか、又は約１×１０−１１Ｍ以下のＩＣ５０でＩＬ−１２及び／又はヒトＩＬ−２３活性を阻害する。
【０１３５】
所定態様では、抗体はＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＭ又はＩｇＤ定常領域等の重鎖定常領域を含む。重鎖定常領域はＩｇＧ１重鎖定常領域又はＩｇＧ４重鎖定常領域であることが好ましい。更に、抗体はκ軽鎖定常領域又はλ軽鎖定常領域のいずれかの軽鎖定常領域を含むことができる。抗体はκ軽鎖定常領域を含むことが好ましい。あるいは、抗体部分は例えばＦａｂフラグメント又は１本鎖Ｆｖフラグメントとすることができる。
【０１３６】
抗体エフェクター機能を改変するためにＦｃ部分のアミノ酸残基を置換することは当分野で公知である（Ｗｉｎｔｅｒら，米国特許第５，６４８，２６０号；５６２４８２１号）。抗体のＦｃ部分は数種の重要なエフェクター機能（例えばサイトカイン誘導、ＡＤＣＣ、貪食作用、補体依存性細胞傷害作用（ＣＤＣ）並びに抗体及び抗原−抗体複合体の半減期／クリアランス率）を媒介する。これらのエフェクター機能は治療目的に応じて治療用抗体に望ましい場合もあるが、不要又は有害な場合もある。所定ヒトＩｇＧアイソタイプ、特にＩｇＧ１及びＩｇＧ３は夫々ＦｃγＲ及び補体Ｃ１ｑとの結合を介してＡＤＣＣ及びＣＤＣを媒介する。新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）は抗体の循環半減期を決定する必須成分である。更に別の態様では、抗体のエフェクター機能を改変するように、抗体の定常領域（例えば抗体のＦｃ領域）の少なくとも１個のアミノ酸を置換する。
【０１３７】
１態様は本発明の抗体又は抗体部分を誘導体化又は別の機能的分子（例えば別のペプチド又は蛋白質）と結合した標識結合蛋白質を提供する。例えば、別の抗体（例えば二種特異性抗体又はダイアボディ）、検出可能な物質、細胞傷害性物質、薬剤、及び／又は抗体もしくは抗体部分と別の分子（例えばストレプトアビジンコア領域又はポリヒスチジンタグ）との結合を媒介することができる蛋白質もしくはペプチド等の１個以上の他の分子部分と本発明の抗体又は抗体部分を（化学的カップリング、遺伝子融合、非共有的結合又は他の方法により）機能的に連結することにより、本発明の標識結合蛋白質を誘導することができる。
【０１３８】
本発明の抗体又は抗体部分を誘導体化することができる有用な検出可能な物質としては蛍光化合物が挙げられる。検出可能な蛍光物質の例としてはフルオレセイン、イソチオシアン酸フルオレセイン、ローダミン、５−ジメチルアミン−１−ナフタレンスルホニルクロリド、フィコエリスリン等が挙げられる。アルカリホスファターゼ、西洋ワサビペルオキシダーゼ、グルコースオキシダーゼ等の検出可能な酵素で抗体を誘導体化することもできる。検出可能な酵素で抗体を誘導体化する場合には、検出可能な反応生成物を生成するために酵素により使用される他の試薬を加えることにより抗体を検出する。例えば、検出可能な物質として西洋ワサビペルオキシダーゼを使用する場合には、過酸化水素とジアミノベンジジンを加えると、検出可能な着色反応生成物が得られる。抗体をビオチンで誘導体化し、アビジン又はストレプトアビジン結合の間接測定により検出することもできる。
【０１３９】
本発明の別の態様は結晶化結合蛋白質を提供する。好ましくは、本発明は本明細書に開示する完全抗ＩＬ−１２ｐ４０抗体及びそのフラグメントの結晶、並びに前記結晶を含有する製剤及び組成物に関する。１態様では、結晶化結合蛋白質は結合蛋白質の可溶性対応部分よりも長いｉｎ  ｖｉｖｏ半減期をもつ。別の態様では、結合蛋白質は結晶化後に生理活性を保持する。
【０１４０】
本発明の結晶化結合蛋白質は参照により本明細書に組込むＷＯ０２０７２６３６に開示されているような当分野で公知の方法に従って作製することができる。
【０１４１】
本発明の別の態様は抗体又はその抗原結合部分が１個以上の糖鎖残基を含むグリコシル化結合蛋白質を提供する。蛋白質は初期ｉｎ  ｖｉｖｏ産生後に更に翻訳後修飾と呼ばれるプロセシングを受ける場合がある。特に、糖鎖（グリコシル）残基が酵素により付加される場合があり、このプロセスをグリコシル化と言う。その結果として得られた蛋白質は共有結合オリゴ糖側鎖をもち、グリコシル化蛋白質又は糖蛋白質と呼ばれる。抗体はＦｃドメインと可変領域に１個以上の糖鎖残基をもつ糖蛋白質である。Ｆｃドメインの糖鎖残基はＦｃドメインのエフェクター機能に重要な影響を与え、抗体の抗原結合又は半減期には殆ど影響を与えない（Ｒ．Ｊｅｆｆｅｒｉｓ，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｐｒｏｇ．２１（２００５），ｐｐ．１１−１６）。他方、可変領域のグリコシル化は抗体の抗原結合活性に影響を与えると思われる。可変領域のグリコシル化は恐らく立体障害により抗体結合親和性に負の影響を与える（Ｃｏ，Ｍ．Ｓ．ら，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９９３）３０：１３６１−１３６７）か、又は抗原に対する親和性を増加すると思われる（Ｗａｌｌｉｃｋ，Ｓ．Ｃ．ら，Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．（１９８８）１６８：１０９９−１１０９；Ｗｒｉｇｈｔ，Ａ．ら，ＥＭＢＯ  Ｊ．（１９９１）１０：２７１７  ２７２３）。
【０１４２】
本発明の１側面は結合蛋白質のＯ−又はＮ−結合型グリコシル化部位を突然変異させたグリコシル化部位突然変異体の作製に関する。当業者は標準周知技術を使用してこのような突然変異体を作製することができる。生理活性を保持しながら結合活性が増加又は低下したグリコシル化部位突然変異体も本発明の目的である。
【０１４３】
更に別の態様では、本発明の抗体又は抗原結合部分のグリコシル化を改変する。例えば、非グリコシル化抗体を作製することができる（即ち抗体はグリコシル化を欠損する）。例えば抗原に対する抗体の親和性を増加するようにグリコシル化を改変することができる。このような糖鎖修飾は例えば抗体配列内の１個以上のグリコシル化部位を改変することにより実施することができる。例えば、１個以上の可変領域グリコシル化部位を除去することによりこの部位のグリコシル化を排除するように１個以上のアミノ酸置換を行うことができる。このような非グリコシル化は抗原に対する抗体の親和性を増加することができる。このようなアプローチは各々その開示内容全体を参照により本明細書に組込むＰＣＴ公開ＷＯ２００３０１６４６６Ａ２、並びに米国特許第５，７１４，３５０号及び６，３５０，８６１号に更に詳細に記載されている。
【０１４４】
上記に追加又は代用する方法として、改変グリコシル化型をもつ本発明の改変抗体（例えばフコシル残基量の少ない低フコシル化抗体又はバイセクティングＧｌｃＮＡｃ構造の増加した抗体）を作製することができる。このような改変グリコシル化パターンは抗体のＡＤＣＣ能を増加することが実証されている。このような糖鎖修飾は例えば改変グリコシル化機構をもつ宿主細胞で抗体を発現させることにより実施することができる。改変グリコシル化機構をもつ細胞は文献に記載されており、本発明の組換え抗体を発現させるための宿主細胞として使用することにより、改変グリコシル化抗体を作製することができる。例えば、各々その開示内容全体を参照により本明細書に組込むＳｈｉｅｌｄｓ，Ｒ．Ｌ．ら（２００２）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７７：２６７３３−２６７４０；Ｕｍａｎａら（１９９９）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．１７：１７６−１、並びにヨーロッパ特許第ＥＰ  １，１７６，１９５号；ＰＣＴ公開ＷＯ０３／０３５８３５；ＷＯ９９／５４３４２  ８０参照。
【０１４５】
蛋白質グリコシル化は該当蛋白質のアミノ酸配列と、蛋白質が発現される宿主細胞に依存する。生物によって産生されるグリコシル化酵素（例えばグリコシルトランスフェラーゼやグリコシダーゼ）は異なり、利用可能な基質（ヌクレオチド糖）も異なる。このような因子により、蛋白質グリコシル化パターンとグリコシル残基の組成は特定蛋白質が発現される宿主系により異なる。本発明で有用なグリコシル残基としては限定されないが、グルコース、ガラクトース、マンノース、フコース、ｎ−アセチルグルコサミン及びシアル酸が挙げられる。グリコシル化結合蛋白質はグリコシル化パターンがヒトであるようなグリコシル残基を含むことが好ましい。
【０１４６】
蛋白質グリコシル化の相違により異なる蛋白質特性が得られることは当業者に公知である。例えば、酵母等の微生物宿主で産生され、酵母内在経路を利用してグリコシル化された治療用蛋白質の効力はＣＨＯ細胞株等の哺乳動物細胞で発現される同一蛋白質の抗力に比較して低下していると思われる。このような糖蛋白質はヒトでも免疫原性であり、投与後のｉｎ  ｖｉｖｏ半減期が短くなっていると思われる。ヒト及び他の動物における特定受容体は特定グリコシル残基を認識し、血流からの蛋白質の迅速なクリアランスを促進する場合がある。他の有害な作用としては、蛋白質フォールディング、溶解度、プロテアーゼ感受性、トラフィキング、輸送、区画化、分泌、他の蛋白質もしくは因子による認識、抗原性又はアレルゲン性の変化が挙げられる。従って、臨床医は特定グリコシル化組成及びパターン（例えばヒト細胞又は所期対象動物の種特異的細胞で産生されるものと同一又は少なくとも同様のグリコシル化組成及びパターン）をもつ治療用蛋白質を好むと思われる。
【０１４７】
宿主細胞と異なるグリコシル化蛋白質を発現させるには、異種グリコシル化酵素を発現するように宿主細胞を遺伝子改変することにより実施することができる。当分野で公知の技術を使用して臨床医はヒト蛋白質グリコシル化を示す抗体又はその抗原結合部分を作製することができる。例えば、非天然グリコシル化酵素を発現するように酵母株を遺伝子改変し、酵母株で産生されるグリコシル化蛋白質（糖蛋白質）が動物細胞、特にヒト細胞と同一の蛋白質グリコシル化を示すような操作が実施されている（米国特許出願第２００４００１８５９０号及び２００２０１３７１３４号並びにＰＣＴ公開ＷＯ２００５１００５８４  Ａ２）。
【０１４８】
結合蛋白質に加え、本発明は本発明のこのような結合蛋白質に特異的な抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体にも関する。抗Ｉｄ抗体は別の抗体の抗原結合領域に一般に関連するユニークな決定基を認識する抗体である。抗Ｉｄは結合蛋白質又はそのＣＤＲ含有領域を動物に免疫することにより作製することができる。免疫した動物は免疫抗体のイディオタイプ決定基を認識し、これに応答して抗Ｉｄ抗体を産生する。更に別の動物に免疫応答を誘発するための「免疫原」として抗Ｉｄ抗体を使用し、所謂抗抗Ｉｄ抗体を作製することもできる。
【０１４９】
更に、当業者に自明の通り、ライブラリーのメンバー宿主細胞が変異グリコシル化パターンをもつ該当蛋白質を産生するように、各種グリコシル化酵素を発現するように遺伝子改変した宿主細胞ライブラリーを使用して該当蛋白質を発現させることもできる。その後、臨床医は特定の新規グリコシル化パターンをもつ該当蛋白質を選択し、単離することができる。特に選択された新規グリコシル化パターンをもつ蛋白質は改善又は改変された生物学的性質を示す。
【０１５０】
Ｄ．抗ＩＬ−１２ｐ４０抗体の使用
本発明の抗ヒトＩＬ−１２ｐ４０抗体又はその部分はヒトＩＬ−１２ｐ４０と結合することができるので、酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）、放射免疫測定法（ＲＩＡ）又は組織免疫組織化学等の慣用イムノアッセイを使用して（例えば血清や血漿等の生体サンプル中で）ＩＬ−１２及び／又はヒトＩＬ−２３を検出するために使用することができる。本発明は生体サンプル中のＩＬ−１２及び／又はヒトＩＬ−２３の検出方法として、生体サンプルを本発明の抗体又は抗体部分と接触させる段階と、ＩＬ−１２及び／又はヒトＩＬ−２３と結合した抗体（又は抗体部分）又は未結合抗体（又は抗体部分）を検出することにより、生体サンプル中のＩＬ−１２及び／又はヒトＩＬ−２３を検出する段階を含む方法を提供する。抗体は結合抗体又は未結合抗体の検出を容易にするために検出可能な物質で直接又は間接的に標識する。適切な検出可能な物質としては各種酵素、補欠分子族、蛍光材料、発光材料及び放射性材料が挙げられる。適切な酵素の例としては西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼ又はアセチルコリンエステラーゼが挙げられ；適切な補欠分子族複合体の例としてはストレプトアビジン／ビオチンとアビジン／ビオチンが挙げられ；適切な蛍光材料の例としてはウンベリフェロン、フルオレセイン、イソチオシアン酸フルオレセイン、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミンフルオレセイン、ダンシルクロリド又はフィコエリスリンが挙げられ；発光材料の１例としてはルミノールが挙げられ；適切な放射性材料の例としては３Ｈ、１４Ｃ、３５Ｓ、９０Ｙ、９９Ｔｃ、１１１Ｉｎ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１７７Ｌｕ、１６６Ｈｏ又は１５３Ｓｍが挙げられる。
【０１５１】
抗体を標識する代わりに、検出可能な物質で標識したｒｈＩＬ−１２標準と未標識抗ヒトＩＬ−１２ｐ４０抗体を利用する競合イムノアッセイにより生物体液中のヒトＩＬ−１２をアッセイすることもできる。このアッセイでは、生体サンプルと標識ｒｈＩＬ−１２標準と抗ヒトＩＬ−１２ｐ４０抗体を混合し、未標識抗体に結合した標識ｒｈＩＬ−１２標準の量を測定する。生体サンプル中のヒトＩＬ−１２の量は抗ＩＬ−１２ｐ４０抗体に結合した標識ｒｈＩＬ−１２標準の量に反比例する。同様に、検出可能な物質で標識したｒｈＩＬ−２３標準と未標識抗ヒトＩＬ−１２ｐ４０抗体を利用する競合イムノアッセイにより生物体液中のヒトＩＬ−２３もアッセイすることもできる。
【０１５２】
本発明の抗体及び抗体部分はｉｎ  ｖｉｔｒｏ及びｉｎ  ｖｉｖｏの両者でヒトＩＬ−１２及び／又はヒトＩＬ−２３活性を中和できることが好ましい。従って、本発明のこのような抗体及び抗体部分は、例えばｈＩＬ−１２及び／又はｈＩＬ−２３を含有する細胞培養液や、本発明の抗体と交差反応するＩＬ−１２及び／又はｈＩＬ−２３をもつヒト対象又は他の哺乳動物対象においてｈＩＬ−１２及び／又はｈＩＬ−２３活性を阻害するために使用することができる。１態様では、本発明はｈＩＬ−１２及び／又はｈＩＬ−２３活性の阻害方法として、ｈＩＬ−１２及び／又はｈＩＬ−２３活性を阻害するようにｈＩＬ−１２及び／又はｈＩＬ−２３を本発明の抗体又は抗体部分と接触させる段階を含む方法を提供する。例えば、ｈＩＬ−１２及び／又はｈＩＬ−２３を含有するか又は含有する疑いのある細胞培養液において、培養液中のｈＩＬ−１２及び／又はｈＩＬ−２３活性を阻害するために本発明の抗体又は抗体部分を培地に添加することができる。
【０１５３】
別の態様では、本発明は対象、有利にはＩＬ−１２又はＩＬ−２３活性が有害である疾患又は障害をもつ対象におけるｈＩＬ−１２及び／又はｈＩＬ−２３活性の低下方法を提供する。本発明は前記疾患又は障害をもつ対象におけるＩＬ−１２及び／又はＩＬ−２３活性の低下方法として、対象のＩＬ−１２及び／又はＩＬ−２３活性を低下させるように本発明の抗体又は抗体部分を対象に投与する段階を含む方法を提供する。ＩＬ−１２はヒトＩＬ−１２であり、ＩＬ−２３はヒトＩＬ−２３であり、対象はヒト対象であることが好ましい。あるいは、対象は本発明の抗体が結合することが可能なＩＬ−１２及び／又はＩＬ−２３を発現する哺乳動物でもよい。更に、対象は（例えばＩＬ−１２及び／又はＩＬ−２３の投与又はＩＬ−１２及び／又はＩＬ−２３トランスジーンの発現により）ＩＬ−１２及び／又はＩＬ−２３を導入した哺乳動物でもよい。本発明の抗体は治療目的でヒト対象に投与することができる。更に、本発明の抗体は抗体が獣医学的目的又はヒト疾患の動物モデルとして結合することが可能なＩＬ−１２及び／又はＩＬ−２３を発現する非ヒト哺乳動物に投与することもできる。後者に関して、このような動物モデルは本発明の抗体の治療効果の評価（例えば投与量及び投与時間の試験）に有用であると思われる。
【０１５４】
本明細書で使用する「ＩＬ−１２及び／又はＩＬ−２３活性が害をもたらす障害」なる用語はこの障害をもつ対象におけるＩＬ−１２及び／又はＩＬ−２３の存在が障害の病理生理の原因であるか又は障害の悪化に寄与する因子であることが分かっているか又はその疑いのある疾患及び他の障害を包含するものとする。従って、ＩＬ−１２及び／又はＩＬ−２３活性が害をもたらす障害はＩＬ−１２及び／又はＩＬ−２３活性の低下が障害の症状及び／又は進行を緩和すると予想される障害である。このような障害は例えば障害をもつ対象の体液中のＩＬ−１２及び／又はＩＬ−２３濃度の増加（例えば対象の血清、血漿、滑液等におけるＩＬ−１２及び／又はＩＬ−２３濃度の増加）により判断することができ、例えば上記のような抗ＩＬ−１２ｐ４０を使用して検出することができる。本発明の抗体で治療することができる障害の非限定的な例としては本発明の抗体の医薬組成物に関する下記セクションに記載する障害が挙げられる。
【０１５５】
Ｄ．医薬組成物
本発明は本発明の抗体又はその抗原結合部分と医薬的に許容可能なキャリヤーを含有する医薬組成物も提供する。本発明の抗体を含有する医薬組成物は限定されないが、障害の診断、検出もしくは監視、障害もしくはその１種以上の症状の予防、治療、管理もしくは改善、及び／又は研究に利用される。特定態様では、組成物は本発明の１種以上の抗体を含有する。別の態様では、医薬組成物は本発明の１種以上の抗体と、本発明の抗体以外のＩＬ−１２及び／又はＩＬ−２３活性が害をもたらす障害を治療するための１種以上の予防剤又は治療剤を含有する。予防剤又は治療剤は障害又はその１種以上の症状の予防、治療、管理又は改善に有用であることが知られているか又は従来からもしくは現在使用されているものが好ましい。これらの態様によると、組成物は更にキャリヤー、希釈剤又は賦形剤から構成することができる。
【０１５６】
本発明の抗体及び抗体部分は対象に投与するのに適した医薬組成物に配合することができる。一般に、医薬組成物は本発明の抗体又は抗体部分と医薬的に許容可能なキャリヤーを含有する。本明細書で使用する「医薬的に許容可能なキャリヤー」は生理的に適合可能な全溶媒、分散媒、コーティング、抗細菌及び抗真菌剤、等張及び吸収遅延剤等を包含する。医薬的に許容可能なキャリヤーの例としては水、食塩水、リン酸緩衝食塩水、デキストロース、グリセロール、エタノール等の１種以上とその組み合わせが挙げられる。多くの場合には、例えば糖類、多価アルコール（例えばマンニトール、ソルビトール）、又は塩化ナトリウム等の等張剤を組成物に加えることが好ましい。医薬的に許容可能なキャリヤーとしては更に抗体又は抗体部分の保存期間又は効力を増す微量の補助剤（例えば湿潤剤、乳化剤、防腐剤又は緩衝剤）も挙げられる。
【０１５７】
各種送達システムが公知であり、本発明の１種以上の抗体あるいは本発明の１種以上の抗体と障害又はその１種以上の症状を予防、管理、治療又は改善するために有用な予防剤又は治療剤の併用剤を投与するために使用することができ、例えばリポソーム、微粒子、マイクロカプセル封入、抗体又は抗体フラグメントを発現することが可能な組換え細胞、受容体によるエンドサイトーシス（例えばＷｕ  ａｎｄ  Ｗｕ，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６２：４４２９−４４３２（１９８７）参照）、レトロウイルス又は他のベクターの一部としての核酸の構築等が挙げられる。本発明の予防剤又は治療剤の投与方法としては限定されないが、非経口投与（例えば皮内、筋肉内、腹膜内、静脈内及び皮下）、硬膜外投与、腫瘍内投与及び粘膜投与（例えば鼻腔内及び経口経路）が挙げられる。更に、例えばインヘラー又はネブライザーの使用やエアロゾル化剤の配合により、肺投与を利用することもできる。例えば各々その開示内容全体を参照により本明細書に組込む米国特許第６，０１９，９６８号、５，９８５，３２０号、５，９８５，３０９号、５，９３４，２７２号、５，８７４，０６４号、５，８５５，９１３号、５，２９０，５４０及び４，８８０，０７８号；並びにＰＣＴ公開ＷＯ９２／１９２４４、ＷＯ９７／３２５７２、ＷＯ９７／４４０１３、ＷＯ９８／３１３４６及びＷＯ９９／６６９０３参照。１態様では、Ａｌｋｅｒｍｅｓ  ＡＩＲ（登録商標）肺薬剤送達技術（Ａｌｋｅｒｍｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，Ｍａｓｓ．）を使用して本発明の抗体、併用施療剤又は本発明の組成物を投与する。特定態様では、本発明の予防剤又は治療剤を筋肉内、静脈内、腫瘍内、経口、鼻腔内、肺又は皮下投与する。予防剤又は治療剤は適切な任意経路、例えば輸液又はボーラス注射、上皮又は皮膚粘膜内壁（例えば口腔粘膜、直腸及び腸粘膜等）吸収により投与することができ、他の生理活性剤と共に投与することができる。投与は全身でも局所でもよい。
【０１５８】
特定態様では、処置を必要とする領域に本発明の予防剤又は治療剤を局所投与することが望ましく、これは限定されないが、例えば局所輸液、注射又はインプラントにより実施することができ、前記インプラントは多孔性又は無孔性材料からなり、例えばシラスチック膜、ポリマー、繊維性マトリックス（例えばＴｉｓｓｕｅｌ（登録商標））又はコラーゲンマトリックス等の膜及びマトリックスが挙げられる。１態様では、障害又はその症状を予防、治療、管理及び／又は改善するために有効量の本発明の１種以上の抗体であるアンタゴニストを対象の患部に局所投与する。別の態様では、障害又はその１種以上の症状を予防、治療、管理及び／又は改善するために有効量の本発明の１種以上の抗体を本発明の抗体以外の有効量の１種以上の施療剤（例えば１種以上の予防剤又は治療剤）と対象の患部に局所併用投与する。
【０１５９】
別の態様では、予防剤又は治療剤を制御放出又は持続放出システムで送達することができる。１態様では、制御又は持続放出を達成するためにポンプを使用することができる（Ｌａｎｇｅｒ，前出；Ｓｅｆｔｏｎ，１９８７，ＣＲＣ  Ｃｒｉｔ．Ｒｅｆ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｅｎｇ．１４：２０；Ｂｕｃｈｗａｌｄら，１９８０，Ｓｕｒｇｅｒｙ  ８８：５０７；Ｓａｕｄｅｋら，１９８９，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３２１：５７４参照）。別の態様では、本発明の施療剤の制御又は持続放出を達成するためにポリマー材料を使用することができる（例えばＭｅｄｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ，Ｌａｎｇｅｒ  ａｎｄ  Ｗｉｓｅ（ｅｄｓ．），ＣＲＣ  Ｐｒｅｓ．，Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ，Ｆｌａ．（１９７４）；Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ，Ｄｒｕｇ  Ｐｒｏｄｕｃｔ  Ｄｅｓｉｇｎ  ａｎｄ  Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ，Ｓｍｏｌｅｎ  ａｎｄ  Ｂａｌｌ（ｅｄｓ．），Ｗｉｌｅｙ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９８４）；Ｒａｎｇｅｒ  ａｎｄ  Ｐｅｐｐａｓ，１９８３，Ｊ．，Ｍａｃｒｏｍｏｌ．Ｓｃｉ．Ｒｅｖ．Ｍａｃｒｏｍｏｌ．Ｃｈｅｍ．２３：６１参照；更にＬｅｖｙら，１９８５，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２８：１９０；Ｄｕｒｉｎｇら，１９８９，Ａｎｎ．Ｎｅｕｒｏｌ．２５：３５１；Ｈｏｗａｒｄら，１９８９，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ．７  １：１０５；米国特許第５，６７９，３７７号；米国特許第５，９１６，５９７号；米国特許第５，９１２，０１５号；米国特許第５，９８９，４６３号；米国特許第５，１２８，３２６号；ＰＣＴ公開ＷＯ９９／１５１５４；及びＰＣＴ公開ＷＯ９９／２０２５３も参照）。持続放出製剤で使用されるポリマーの例としては限定されないが、ポリ（２−ヒドロキシエチルメタクリレート）、ポリ（メチルメタクリレート）、ポリ（アクリル酸）、ポリ（エチレン酢酸ビニルコポリマー）、ポリ（メタクリル酸）、ポリグリコリド（ＰＬＧ）、ポリ酸無水物、ポリ（Ｎ−ビニルピロリドン）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリアクリルアミド、ポリ（エチレングリコール）、ポリラクチド（ＰＬＡ）、ポリ（ラクチドグリコリドコポリマー）（ＰＬＧＡ）及びポリオルトエステルが挙げられる。好ましい１態様では、持続放出製剤で使用されるポリマーは不活性であり、浸出性不純物を含まず、保存安定性であり、無菌であり、生分解性である。更に別の態様では、制御又は持続放出システムを予防又は治療ターゲットに近接配置し、全身投与量のごく一部で済ますことができる（例えばＧｏｏｄｓｏｎ，ｉｎ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ，前出，ｖｏｌ．２，ｐｐ．１１５−１３８（１９８４）参照）。
【０１６０】
制御放出システムはＬａｎｇｅｒの論文（１９９０，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４９：１５２７−１５３３）に記載されている。本発明の１種以上の治療剤を含有する持続放出製剤を製造するためには、当業者に公知の任意技術を使用することができる。例えば各々その開示内容全体を参照により本明細書に組込む米国特許第４，５２６，９３８号、ＰＣＴ公開ＷＯ９１／０５５４８、ＰＣＴ公開ＷＯ９６／２０６９８、Ｎｉｎｇら，１９９６，“Ｉｎｔｒａｔｕｍｏｒａｌ  Ｒａｄｉｏｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｈｙ  ｏｆ  ａ  Ｈｕｍａｎ  Ｃｏｌｏｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｘｅｎｏｇｒａｆｔ  Ｕｓｉｎｇ  ａ  Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ−Ｒｅｌｅａｓｅ  Ｇｅｌ，”Ｒａｄｉｏｔｈｅｒａｐｙ  ＆  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  ３９：１７９−１８９，Ｓｏｎｇら，１９９５，“Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｍｅｄｉａｔｅｄ  Ｌｕｎｇ  Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｏｆ  Ｌｏｎｇ−Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ  Ｅｍｕｌｓｉｏｎｓ，”ＰＤＡ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ＆  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ５０：３７２−３９７，Ｃｌｅｅｋら，１９９７，“Ｂｉｏｄｅｇｒａｄａｂｌｅ  Ｐｏｌｙｍｅｒｉｃ  Ｃａｒｒｉｅｒｓ  ｆｏｒ  ａ  ｂＦＧＦ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｆｏｒ  Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ，”Ｐｒｏ．Ｉｎｔ’ｌ．Ｓｙｍｐ．Ｃｏｎｔｒｏｌ．Ｒｅｌ．Ｂｉｏａｃｔ．Ｍａｔｅｒ．２４：８５３−８５４、及びＬａｍら，１９９７，“Ｍｉｃｒｏｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  Ｈｕｍａｎｉｚｅｄ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｆｏｒ  Ｌｏｃａｌ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ，”Ｐｒｏｃ．Ｉｎｔ’ｌ．Ｓｙｍｐ．Ｃｏｎｔｒｏｌ  Ｒｅｌ．Ｂｉｏａｃｔ．Ｍａｔｅｒ．２４：７５９−７６０参照。
【０１６１】
本発明の組成物が予防剤又は治療剤をコードする核酸である特定態様では、適切な核酸発現ベクターの一部として予防剤又は治療剤を構築し、例えばレトロウイルスベクターの使用（米国特許第４，９８０，２８６号参照）、又は直接注射、又は微粒子撃ち込みの使用（例えば遺伝子銃；Ｂｉｏｌｉｓｔｉｃ，Ｄｕｐｏｎｔ）、又は脂質もしくは細胞表面受容体もしくはトランスフェクト剤のコーティングにより細胞内に取込むように投与するか、あるいは核に侵入することが知られているホメオボックス様ペプチドに結合して投与することにより、そのコードされる予防剤又は治療剤の発現を促進するように核酸をｉｎ  ｖｉｖｏ投与することができる（例えばＪｏｌｉｏｔら，１９９１，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８８：１８６４−１８６８参照）。あるいは、核酸を細胞内に導入し、相同組換えにより発現させるために宿主細胞ＤＮＡ内に組込むこともできる。
【０１６２】
本発明の医薬組成物はその所期投与経路に適合できるように製剤化される。投与経路の例としては限定されないが、非経口（例えば静脈内、皮内、皮下）、経口、鼻腔内（例えば吸入）、経皮（例えば局所）、経粘膜及び直腸投与が挙げられる。特定態様では、組成物はヒトに静脈内、皮下、筋肉内、経口、鼻腔内又は局所投与するのに適した医薬組成物として常用手順に従って製剤化される。一般に、静脈内投与用組成物は滅菌等張水性緩衝液中の溶液である。必要に応じて、溶解補助剤や、注射部位の痛みを緩和するための局所麻酔剤（例えばリドカイン）を組成物に更に添加してもよい。
【０１６３】
本発明の組成物を局所投与する場合には、組成物は軟膏、クリーム、経皮パッチ、ローション、ジェル、シャンプー、スプレー、エアゾール、溶液、エマルション又は当業者に周知の他の形態に製剤化することができる。例えばＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ａｎｄ  Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｔｏ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ，１９ｔｈ  ｅｄ．，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂ．Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．（１９９５）参照。非スプレー型の局所剤形には、局所塗布に適合可能なキャリヤー又は１種以上の賦形剤を含有しており、好ましくは水よりも高い動粘度をもつ粘性〜半固体又は固体形態が一般に利用される。適切な製剤としては限定されないが、溶液剤、懸濁液剤、エマルション、クリーム、軟膏、散剤、塗布薬、サルベ等が挙げられ、所望により滅菌するか又は各種性質（例えば浸透圧）に作用するための補助剤（例えば防腐剤、安定剤、湿潤剤、緩衝剤又は塩）と混合する。他の適切な局所剤形としては、活性成分を好ましくは固体又は液体不活性キャリヤーと共に加圧揮発性物質（例えばフレオン等の気体噴射剤）との混合物又はスクイーズボトルにパッケージングしたスプレー型エアゾール製剤が挙げられる。所望により、モイスチャライザーやヒューメクタントも医薬組成物及び製剤に添加してもよい。このような付加成分の例は当分野で周知である。
【０１６４】
本発明の方法が組成物の鼻腔内投与を含む場合には、組成物はエアゾール形態、スプレー、ミスト又は滴剤形態に製剤化することができる。特に、本発明で使用する予防剤又は治療剤は適切な噴射剤（例えばジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素又は他の適切なガス）を利用して加圧パック又はネブライザーからエアゾールスプレー製剤として簡便に送達することができる。加圧エアゾールの場合には、一定量を送達するためのバルブを配置することにより用量単位を定量することができる。化合物と適切な粉末基剤（例えばラクトースや澱粉）の粉末混合物を充填した（例えばゼラチンから構成される）インヘラー又はインサフレーター用カプセル及びカートリッジに製剤化することもできる。
【０１６５】
本発明の方法が経口投与を含む場合には、錠剤、カプセル剤、カシェ剤、ゲルカップ剤、溶液剤、懸濁液剤等の形態に組成物を経口製剤化することができる。錠剤又はカプセル剤は結合剤（例えばプレゲル化トウモロキシ澱粉、ポリビニルピロリドン又はヒドロキシプロピルメチルセルロース）；増量剤（例えばラクトース、微結晶セルロース又はリン酸水素カルシウム）；滑沢剤（例えばステアリン酸マグネシウム、タルク又はシリカ）；崩壊剤（例えばジャガイモ澱粉又は繊維素グリコール酸ナトリウム）；又は湿潤剤（例えばラウリル硫酸ナトリウム）等の医薬的に許容可能な賦形剤と共に慣用手段により製造することができる。錠剤は当分野で周知の方法によりコーティングしてもよい。経口投与用液体製剤は限定されないが、溶液剤、シロップ剤又は懸濁液剤の形態をとることができ、あるいは使用前に水又は他の適切なビークルで再構成する乾燥製剤の形態でもよい。このような液体製剤は懸濁剤（例えばソルビトールシロップ、セルロース誘導体又は水素化食用脂肪）；乳化剤（例えばレシチン又はアラビアガム）；非水性ビークル（例えばアーモンド油、油性エステル、エチルアルコール又は分留植物油）；及び防腐剤（例えばｐ−ヒドロキシ安息香酸メチルもしくはプロピル又はソルビン酸）等の医薬的に許容可能な添加剤と共に慣用手段により製造することができる。製剤には更に緩衝塩類、香味剤、着色剤及び甘味剤を適宜添加してもよい。経口投与用製剤は予防剤又は治療剤を遅延放出、制御放出又は持続放出するように製剤化しても適切である。
【０１６６】
本発明の方法は例えばインヘラー又はネブライザー、エアロゾル化剤を配合した組成物の使用による肺投与も含むことができる。例えば各々その開示内容全体を参照により本明細書に組込む米国特許第６，０１９，９６８号、５，９８５，３２０号、５，９８５，３０９号、５，９３４，２７２号、５，８７４，０６４号、５，８５５，９１３号、５，２９０，５４０号及び４，８８０，０７８号；並びにＰＣＴ公開ＷＯ９２／１９２４４、ＷＯ９７／３２５７２、ＷＯ９７／４４０１３、ＷＯ９８／３１３４６及びＷＯ９９／６６９０３参照。特定態様では、Ａｌｋｅｒｍｅｓ  ＡＩＲ（登録商標）肺薬剤送達技術（Ａｌｋｅｒｍｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，Ｍａｓｓ．）を使用して本発明の抗体、併用施療剤及び／又は本発明の組成物を投与する。
【０１６７】
本発明の方法は注射（例えばボーラス注射又は連続輸液）による非経口投与用に製剤化した組成物の投与も含むことができる。注射用製剤は防腐剤を添加した単位用量形態（例えばアンプル又はマルチドーズ容器）とすることができる。組成物は懸濁液、溶液又は油性もしくは水性ビークル中のエマルション等の形態でもよく、懸濁剤、安定剤及び／又は分散剤等の添加剤を添加してもよい。あるいは、活性成分は使用前に適切なビークル（例えば滅菌パイロジェンフリー水）で再構成する粉末状でもよい。本発明の方法は更にデポー製剤として製剤化した組成物の投与も含むことができる。このような長時間作用型製剤は（例えば皮下又は筋肉内）移植又は筋肉内注射により投与することができる。従って、例えば、組成物は（例えば許容可能な油中のエマルションとしての）適切なポリマーもしくは疎水性材料又はイオン交換樹脂を配合してもよいし、難溶性誘導体として（例えば難溶性塩として）製剤化してもよい。
【０１６８】
本発明の方法は中性又は塩形態として製剤化された組成物の投与を含む。医薬的に許容可能な塩としては塩酸、リン酸、酢酸、蓚酸、酒石酸等から誘導される塩等のアニオンから形成される塩と、ナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム、水酸化第２鉄、イソプロピルアミン、トリエチルアミン、２−エチルアミノエタノール、ヒスチジン、プロカイン等から誘導される塩等のカチオンから形成される塩が挙げられる。
【０１６９】
一般に、組成物の成分は単位用量形態（例えば活性剤の量を指示するアンプル又はサシェット等の密封容器に収容した乾燥凍結乾燥粉末又は無水濃縮物）で別々又は混合物として提供される。投与方法が輸液の場合には、滅菌医薬グレード水又は食塩水を充填した輸液びんを使用して組成物を分配することができる。投与方法が注射の場合には、成分を投与前に混合できるように注射用滅菌水又は食塩水のアンプルを提供することができる。
【０１７０】
特に、本発明は薬剤の量を指示するアンプル又はサシェット等の密封容器に本発明の予防剤又は治療剤又は医薬組成物の１種以上をパッケージングすることも提案する。１態様では、密封容器に収容した乾燥滅菌凍結乾燥粉末又は無水濃縮物として本発明の予防剤又は治療剤又は医薬組成物の１種以上を提供し、対象に投与するのに適した濃度まで（例えば水又は食塩水で）再構成することができる。密封容器に収容した乾燥滅菌凍結乾燥粉末として本発明の予防剤又は治療剤又は医薬組成物の１種以上を少なくとも５ｍｇの単位用量で提供することが好ましく、より好ましくは少なくとも１０ｍｇ、少なくとも１５ｍｇ、少なくとも２５ｍｇ、少なくとも３５ｍｇ、少なくとも４５ｍｇ、少なくとも５０ｍｇ、少なくとも７５ｍｇ、又は少なくとも１００ｍｇとする。本発明の凍結乾燥予防剤又は治療剤又は医薬組成物はその元の容器に２℃〜８℃で保存すべきであり、本発明の予防剤又は治療剤又は医薬組成物は再構成後１週間以内、好ましくは５日以内、７２時間以内、４８時間以内、２４時間以内、１２時間以内、６時間以内、５時間以内、３時間以内、又は１時間以内に投与すべきである。代替態様では、薬剤の量と濃度を指示する密封容器に本発明の予防剤又は治療剤又は医薬組成物の１種以上を液体形態で提供する。投与する組成物の液体形態は少なくとも０．２５ｍｇ／ｍｌを密封容器で提供することが好ましく、より好ましくは少なくとも０．５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも１ｍｇ／ｍｌ、少なくとも２．５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも８ｍｇ／ｍｌ、少なくとも１０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも１５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも２５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも５０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも７５ｍｇ／ｍｌ又は少なくとも１００ｍｇ／ｍｌとする。液体形態はその元の容器に２℃〜８℃で保存すべきである。
【０１７１】
本発明の抗体及び抗体部分は非経口投与に適した医薬組成物に配合することができる。抗体０．１〜２５０ｍｇ／ｍｌを含有する注射溶液として抗体又は抗体部分を製造することが好ましい。注射溶液はフリントもしくはアンバーバイアル、アンプル又はプレフィルドシリンジに収容した液体又は凍結乾燥剤形から構成することができる。緩衝液はＬ−ヒスチジン（１〜５０ｍＭ）、最適値５〜１０ｍＭ，ｐＨ５．０〜７．０（最適値ｐＨ６．０）とすることができる。他の適切な緩衝液としては限定されないが、琥珀酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、リン酸ナトリウム又はリン酸カリウムが挙げられる。濃度０〜３００ｍＭ（液体剤形には１５０ｍＭが最適）の溶液の毒性を変化させるためには塩化ナトリウムを使用することができる。凍結乾燥剤形には凍害保護剤として主に０〜１０％スクロース（最適値０．５〜１．０％）を添加することができる。他の適切な凍害保護剤としてはトレハロースとラクトースが挙げられる。凍結乾燥剤形にはバルク剤として主に１〜１０％マンニトール（最適値２〜４％）を添加することができる。液体及び凍結乾燥剤形の両者で安定剤として主に１〜５０ｍＭ  Ｌ−メチオニン（最適値５〜１０ｍＭ）を使用することができる。他の適切なバルク剤としてはグリシン、アルギニンが挙げられ、０〜０．０５％ポリソルベート８０（最適値０．００５〜０．０１％）として界面活性剤も添加することができる。その他の界面活性剤としては限定されないが、ポリソルベート２０及びＢＲＩＪ界面活性剤が挙げられる。非経口投与用注射溶液として製造された本発明の抗体及び抗体部分を含有する医薬組成物は治療用蛋白質（例えば抗体）の吸収又は分散を増進するために使用されるもの等のアジュバントとして有用な物質を更に添加することができる。特に有用なアジュバントはＨｙｌｅｎｅｘ（登録商標）（組換えヒトヒアルロニダーゼ）等のヒアルロニダーゼである。注射溶液にヒアルロニダーゼを添加すると、非経口投与、特に皮下投与後のヒトバイオアベイラビリティが改善する。更に、苦痛と不快感を減らし、注射部位反応の発生を最小限にしながら、注射部位容量を増加することも可能になる（即ち＞１ｍｌ）（参照により本明細書に組込むＷＯ２００４０７８１４０、ＵＳ２００６１０４９６８参照）。
【０１７２】
本発明の組成物は各種形態を取ることができる。これらの形態としては、例えば液体、半固体及び固体剤形が挙げられ、例えば溶液（例えば注射溶液及び輸液溶液）、分散液、懸濁液、錠剤、ピル、散剤、リポソーム及び座剤が挙げられる。好ましい剤形は所期投与方法及び治療用途により異なる。典型的な好ましい組成物は他の抗体をヒトに受動免疫するために使用されているものと同様の組成物等の注射溶液又は輸液溶液の形態である。好ましい投与方法は非経口投与（例えば静脈内、皮下、腹膜内、筋肉内）である。好ましい１態様では、静脈内輸液又は注射により抗体を投与する。別の好ましい態様では、筋肉内又は皮下注射により抗体を投与する。
【０１７３】
治療用組成物は一般に製造及び保存条件下で無菌安定でなければならない。組成物は溶液、マイクロエマルション、分散液、リポソーム、又は高薬剤濃度に適した他の注文構造として製剤化することができる。滅菌注射溶液は必要量の活性化合物（即ち抗体又は抗体部分）を必要に応じて上記成分の１種又はその組み合わせと共に適切な溶媒に加えた後に濾過滅菌することにより製造することができる。一般に、分散液は塩基性分散媒と上記から選択される必要な他の成分を含有する滅菌ビークルに活性化合物を加えることにより製造される。滅菌注射溶液の調製用滅菌凍結乾燥粉末の場合には、好ましい製造方法は活性成分と乾燥前の滅菌濾過溶液からの任意付加所望成分の粉末を生成する真空乾燥と噴霧乾燥である。例えばレシチン等のコーティングの使用、分散液の場合には必要な粒度の維持及び界面活性剤の使用により、溶液の適正な流動性を維持することができる。吸収を遅らせる物質（例えばモノステアリン酸塩やゼラチン）を組成物に加えることにより、注射用組成物の長期吸収が可能になる。
【０１７４】
本発明の抗体及び抗体部分は当分野で公知の各種方法により投与することができるが、多くの治療用途に好ましい投与経路／方法は皮下注射、静脈内注射又は輸液である。当業者に自明の通り、投与経路及び／又は方法は所望結果により異なる。所定態様では、化合物の迅速な放出を防止するキャリヤーを活性化合物に配合することができ、例えばインプラント、経皮パッチ及びマイクロカプセル送達システム等の制御放出製剤が挙げられる。エチレン酢酸ビニル、ポリ酸無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル及びポリ乳酸等の生分解性生体適合性ポリマーを使用することができる。このような製剤の多数の製造方法が特許登録されており、あるいは一般に当業者に公知である。例えばＳｕｓｔａｉｎｅｄ  ａｎｄ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｊ．Ｒ．Ｒｏｂｉｎｓｏｎ，ｅｄ．，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９７８参照。
【０１７５】
所定態様では、本発明の抗体又は抗体部分を例えば不活性希釈剤又は同化性可食性キャリヤーと共に経口投与することができる。化合物（及び所望により他の成分）をハード又はソフトシェルゼラチンカプセルに封入してもよいし、錠剤に圧縮してもよいし、対象の食事に直接添加してもよい。経口治療投与には、化合物に賦形剤を添加し、内服錠、口腔錠、トローチ剤、カプセル剤、エリキシル剤、懸濁液剤、シロップ剤、ウェハース剤等の形態で使用することができる。本発明の化合物を非経口投与以外の方法で投与するためには、その不活性化を防止するための材料を化合物にコーティングしたり、化合物と併用投与することが必要な場合がある。
【０１７６】
補助活性化合物も組成物に添加することができる。所定態様では、ＩＬ−１２活性が有害である障害の治療に有用な１種以上の他の治療剤と本発明の抗体又は抗体部分を合剤化及び／又は併用投与する。例えば、他のターゲットと結合する１種以上の他の抗体（例えば他のサイトカインと結合するか又は細胞表面分子と結合する抗体）と本発明の抗ｈＩＬ−１２抗体又は抗体部分を合剤化及び／又は併用投与することができる。更に、１種以上の本発明の抗体を上記治療剤の２種以上と併用することもできる。このような併用療法は治療剤の投与用量を減らし、各種単独療法に伴う可能性のある毒性や合併症を避けることができるという利点がある。
【０１７７】
所定態様では、ＩＬ−１２の抗体又はそのフラグメントを当分野で公知の半減期延長ビークルに結合する。このようなビークルとしては限定されないが、Ｆｃドメイン、ポリエチレングリコール及びデキストランが挙げられる。このようなビークルは例えば参照により全目的で本明細書に組込む米国出願第０９／４２８，０８２号及び公開ＰＣＴ出願ＷＯ９９／２５０４４に記載されている。
【０１７８】
特定態様では、遺伝子治療により障害又はその１種以上の症状を治療、予防、管理又は改善するために、本発明の抗体又は本発明の予防剤もしくは治療剤をコードするヌクレオチド配列を含む核酸配列を投与する。遺伝子治療とは発現された核酸又は発現可能な核酸を対象に投与することにより実施される治療を意味する。本発明のこの態様では、核酸はこれらの核酸によりコードされる予防効果又は治療効果を媒介する本発明の抗体又は予防剤又は治療剤を産生する。
【０１７９】
本発明によると、当分野で入手可能な任意遺伝子治療法を使用することができる。遺伝子治療法の一般論については、Ｇｏｌｄｓｐｉｅｌら，１９９３，Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｐｈａｒｍａｃｙ  １２：４８８−５０５；Ｗｕ  ａｎｄ  Ｗｕ，１９９１，Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｙ  ３：８７−９５；Ｔｏｌｓｔｏｓｈｅｖ，１９９３，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．３２：５７３−５９６；Ｍｕｌｌｉｇａｎ，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２６０：９２６−９３２（１９９３）；及びＭｏｒｇａｎ  ａｎｄ  Ａｎｄｅｒｓｏｎ，１９９３，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．６２：１９１−２１７；Ｍａｙ，１９９３，ＴＩＢＴＥＣＨ  １１（５）：１５５−２１５参照。使用することができる組換えＤＮＡ技術の分野で広く知られている方法はＡｕｓｕｂｅｌら（ｅｄｓ．），Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，ＮＹ（１９９３）；及びＫｒｉｅｇｌｅｒ，Ｇｅｎｅ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ  ａｎｄ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｓｔｏｃｋｔｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ（１９９０）に記載されている。各種遺伝子治療法の詳細な記載は参照により本明細書に組込むＵＳ２００５００４２６６４  Ａ１に開示されている。
【０１８０】
インターロイキン１２は免疫及び炎症要素を伴う各種疾患に関連する病理に重要な役割を果たす。これらの疾患としては限定されないが、関節リウマチ、変形性関節症、若年性慢性関節炎、敗血症性関節炎、ライム関節炎、乾癬性関節炎、反応性関節炎、脊椎関節症、全身性エリテマトーデス、クローン病、潰瘍性大腸炎、炎症性腸疾患、インスリン依存性糖尿病、甲状腺炎、喘息、アレルギー疾患、乾癬、皮膚炎、強皮症、移植片対宿主病、臓器移植拒絶反応、臓器移植に伴う急性又は慢性免疫疾患、サルコイドーシス、アテローム性動脈硬化症、播種性血管内凝固症候群、川崎病、グレーブス病、ネフローゼ症候群、慢性疲労症候群、ウェグナー肉芽腫症、シェーンライン・ヘノッホ紫斑病、腎臓の顕微鏡的血管炎、慢性活動性肝炎、ブドウ膜炎、敗血症性ショック、毒素性ショック症候群、敗血症症候群、悪液質、感染症、寄生虫症、後天性免疫不全症候群、急性横断性脊髄炎、ハンチントン舞踏病、パーキンソン病、アルツハイマー病、脳卒中、原発性胆汁性肝硬変、溶血性貧血、悪性腫瘍、心不全、心筋梗塞、アジソン病、散発性Ｉ型多腺性内分泌不全症及びＩＩ型多腺性内分泌不全症、シュミット症候群、成人（急性）呼吸窮迫症候群、脱毛症、先天性脱毛症、血清反応陰性関節症、関節症、ライター病、乾癬性関節症、潰瘍性大腸炎性関節症、腸病性滑膜炎、クラミジア、エルシニア及びサルモネラ関連関節症、脊椎関節症、アテローム性疾患／動脈硬化症、アトピー性アレルギー、自己免疫性水疱症、尋常性天疱瘡、紅斑性天疱瘡、類天疱瘡、線状ＩｇＡ疾患、自己免疫性溶血性貧血、クームス陽性溶血性貧血、後天性悪性貧血、若年性悪性貧血、筋痛性脳炎／ロイヤルフリー病、慢性粘膜皮膚カンジダ症、巨細胞性動脈炎、原発性硬化性肝炎、特発性自己免疫性肝炎、後天性免疫不全症候群、後天性免疫不全症関連疾患、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、分類不能型免疫不全症（分類不能型低ガンマグロブリン血症）、拡張型心筋症、女性不妊症、卵巣不全、早発卵巣不全、線維性肺疾患、特発性線維化性肺胞炎、炎症後間質性肺疾患、間質性肺炎、結合組織病関連間質性肺疾患、混合性結合組織病関連肺疾患、全身性硬化症関連間質性肺疾患、関節リウマチ関連間質性肺疾患、全身性エリテマトーデス関連肺疾患、皮膚筋炎／多発性筋炎関連肺疾患、ショーグレン病関連肺疾患、強直性脊椎炎関連肺疾患、血管炎性びまん性肺疾患、ヘモジデリン沈着症関連肺疾患、薬物誘発性間質性肺疾患、線維症、放射線線維症、閉塞性細気管支炎、慢性好酸球性肺炎、リンパ球浸潤性肺疾患、感染後間質性肺疾患、通風性関節炎、自己免疫性肝炎、１型自己免疫性肝炎（旧称自己免疫性又はルポイド肝炎）、２型自己免疫性肝炎（抗ＬＫＭ抗体肝炎）、自己免疫性低血糖症、黒色表皮症を伴うＢ型インスリン抵抗性、副甲状腺機能低下症、臓器移植に伴う急性免疫疾患、臓器移植に伴う慢性免疫疾患、変形性関節症、原発性硬化性胆管炎、１型乾癬、２型乾癬、特発性白血球減少症、自己免疫性好中球減少症、腎疾患ＮＯＳ、糸球体腎炎、腎臓の顕微鏡的血管炎、ライム病、円板状エリテマトーデス、特発性男性不妊症ないしＮＯＳ、精子自己免疫、多発性硬化症（全サブタイプ）、交感性眼炎、結合組織病続発性肺高血圧症、グッドパスチャー症候群、結節性多発性動脈炎の肺症状、急性リウマチ熱、リウマチ性脊椎炎、スティル病、全身性硬化症、ショーグレン症候群、高安動脈炎、自己免疫性血小板減少症、特発性血小板減少症、自己免疫性甲状腺疾患、甲状腺機能亢進症、甲状腺腫性自己免疫性甲状腺機能低下症（橋本病）、萎縮性自己免疫性甲状腺機能低下症、原発性粘液水腫、水晶体起因性ブドウ膜炎、原発性血管炎、白斑急性肝疾患、慢性肝疾患、アルコール性肝硬変、アルコール性肝傷害、胆汁鬱滞症、特異体質性肝疾患、薬物誘発性肝炎、非アルコール性脂肪肝炎、アレルギー及び喘息、Ｂ群連鎖球菌（ＧＢＳ）感染症、精神障害（例えば鬱病及び統合失調症）、Ｔｈ２型及びＴｈ１型疾患、急性及び慢性疼痛（各種疼痛）、及び癌（例えば肺癌、乳癌、胃癌、膀胱癌、結腸癌、膵臓癌、卵巣癌、前立腺癌及び直腸癌）及び血液悪性疾患（白血病及びリンパ腫）、無βリポ蛋白血症、先端チアノーゼ、急性及び慢性寄生虫又は感染プロセス、急性白血病、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性又は慢性細菌感染症、急性膵炎、急性腎不全、腺癌、心房異所性拍動、エイズ痴呆合併症、アルコール性肝炎、アレルギー性結膜炎、アレルギー性接触皮膚炎、アレルギー性鼻炎、同種移植片拒絶反応、α１抗トリプシン欠乏症、筋萎縮性側索硬化症、貧血、狭心症、前角細胞変性、抗ｃｄ３抗体療法、抗リン脂質抗体症候群、抗受容体過敏反応、大動脈及び末梢動脈瘤、大動脈解離、動脈性高血圧、動脈硬化症、動静脈瘻、運動失調、心房細動（持続性及び発作性）、心房粗動、房室ブロック、Ｂ細胞リンパ腫、骨移植拒絶反応、骨髄移植（ＢＭＴ）拒絶反応、脚ブロック、バーキットリンパ腫、火傷、心不整脈、心臓性失神症候群、心臓腫瘍、心筋症、心肺バイパス炎症応答、軟骨移植拒絶反応、小脳皮質変性、小脳障害、無秩序型又は多源性心房頻拍、化学療法関連障害、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性アルコール依存症、慢性炎症、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、慢性サリチル酸中毒、結腸直腸癌、鬱血性心不全、結膜炎、接触皮膚炎、肺性心、冠動脈疾患、クロイツェルフェルト・ヤコブ病、培養陰性敗血症、嚢胞性線維症、サイトカイン療法関連障害、拳闘家痴呆、脱髄疾患、デング出血熱、皮膚炎、皮膚疾患、糖尿病、真性糖尿病、糖尿病性動脈硬化症、びまん性レビー小体病、拡張型鬱血性心筋症、基底核障害、中高年ダウン症候群、ＣＮＳドーパミン受容体を遮断する薬剤により誘発される薬剤誘発性運動障害、薬剤過敏症、湿疹、脳脊髄炎、心内膜炎、内分泌障害、喉頭蓋炎、エプスタイン・バールウイルス感染症、肢端紅痛症、錐体外路及び小脳障害、家族性血球貪食リンパ組織球症、胎児胸腺移植拒絶反応、フリードリヒ運動失調症、機能性末梢動脈障害、真菌性敗血症、ガス壊疽、胃潰瘍、糸球体腎炎、任意臓器又は組織の移植片拒絶反応、グラム陰性菌敗血症、グラム陽性菌敗血症、細胞内生物による肉芽腫、ヘアリー細胞白血病、ハレルフォルデン・スパッツ病、橋本甲状腺炎、花粉症、心臓移植拒絶反応、ヘモクロマトーシス、血液透析、溶血性尿毒症症候群／血栓性血小板減少性紫斑病、出血、肝炎（Ａ）、Ｈｉｓ束不整脈、ＨＩＶ感染症／Ｈ��Ｖ神経障害、ホジキン病、多動性運動障害、過敏反応、過敏性肺炎、高血圧、運動低下障害、視床下部−下垂体−副腎軸評価、特発性アジソン病、特発性肺線維症、抗体による細胞傷害、無力症、小児脊髄性筋萎縮症、大動脈の炎症、ａ型インフルエンザ、電離放射線被爆、虹彩毛様体炎／ブドウ膜炎／視神経炎、虚血再潅流傷害、虚血性脳卒中、若年性関節リウマチ、若年性脊髄性筋萎縮症、カポジ肉腫、腎移植拒絶反応、レジオネラ症、リーシュマニア症、ハンセン病、皮質脊髄系傷害、脂肪性浮腫、肝移植拒絶反応、リンパ水腫、マラリア、悪性リンパ腫、悪性組織球症、悪性メラノーマ、髄膜炎、髄膜炎菌症、代謝性／特発性偏頭痛、ミトコンドリア多系統疾患、混合性結合組織病、モノクローナル免疫グロブリン症、多発性骨髄腫、多系統変性症（Ｍｅｎｃｅｌ  Ｄｅｊｅｒｉｎｅ−Ｔｈｏｍａｓ  Ｓｈｉ−Ｄｒａｇｅｒ及びＭａｃｈａｄｏ−Ｊｏｓｅｐｈ）、重症筋無力症、トリ型結核菌イントラセルラーレ菌感染症、ヒト型結核菌感染症、骨髄異形成症候群、心筋梗塞、心筋虚血障害、上咽頭癌、新生児慢性肺疾患、腎炎、ネフローゼ、神経変性疾患、Ｉ型神経原性筋委縮症、好中球減少時の発熱、非ホジキンリンパ腫、腹部大動脈とその分枝の閉塞、閉塞性動脈障害、ｏｋｔ３療法、精巣炎／副睾丸炎、精巣炎／精管切除再吻合術、臓器腫大、骨粗鬆症、膵臓移植拒絶反応、膵臓癌、腫瘍随伴症候群／悪性腫瘍による高カルシウム血症、副甲状腺移植拒絶反応、骨盤内炎症性疾患、通年性鼻炎、心膜疾患、末梢アテローム性動脈硬化症、末梢血管障害、腹膜炎、悪性貧血、ニューモシスチス・カリニ肺炎、肺炎、ＰＯＥＭＳ症候群（多発ニューロパシー、臓器腫大、内分泌障害、モノクローナル免疫グロブリン症及び皮膚変化症候群）、潅流後症候群、心肺バイパス術後症候群、ＭＩ心膜切開後症候群、子癇前症、進行性核上性麻痺、原発性肺高血圧症、放射線療法、レイノー現象及びレイノー病、レイノー病、レフサム病、規則的なＱＲＳ幅の狭い頻拍、腎血管性高血圧症、再潅流傷害、拘束型心筋症、肉腫、強皮症、老人性舞踏病、レビー小体型老人性痴呆症、血清反応陰性関節症、ショック、鎌状赤血球貧血、皮膚同種移植片拒絶反応、皮膚変化症候群、小腸移植拒絶反応、充実性腫瘍、特異的不整脈、脊髄性運動失調症、脊髄小脳変性症、連鎖球菌性筋炎、小脳の構造傷害、亜急性硬化性汎脳炎、失神、心臓血管系梅毒、全身性アナフィラキシー、全身性炎症反応症候群、全身性若年性関節リウマチ、Ｔ細胞ないしＦＡＢ  ＡＬＬ、毛細血管拡張症、閉塞性血栓性血管炎、血小板減少症、中毒症、移植、外傷／出血、ＩＩＩ型過敏反応、ＩＶ型過敏反応、不安定狭心症、尿毒症、尿路性敗血症、蕁麻疹、心臓弁膜症、静脈瘤、血管炎、静脈疾患、静脈血栓症、心室細動、ウイルス及び真菌感染症、ウイルス性脳炎／無菌性髄膜炎、ウイルス関連血球貪食症候群、ウェルニッケ・コルサコフ症候群、ウィルソン病、任意臓器又は組織の異種移植片拒絶反応が挙げられる（Ｐｅｒｉｔｔら，ＰＣＴ公開ＷＯ２００２０９７０４８Ａ２，Ｌｅｏｎａｒｄら，ＰＣＴ公開ＷＯ９５２４９１８  Ａ１及びＳａｌｆｅｌｄら，ＰＣＴ公開ＷＯ００／５６７７２Ａ１参照）。
【０１８１】
本発明の抗体又は抗体部分は自己免疫疾患、特に炎症に関連するもの（例えばリウマチ性脊椎炎、アレルギー、自己免疫性糖尿病、自己免疫性ブドウ膜炎）をもつヒトを治療するために使用することができる。本発明の抗体又はその抗原結合部分は関節リウマチ、クローン病、多発性硬化症、インスリン依存性糖尿病及び乾癬を治療するために使用することが好ましい。
【０１８２】
本発明の抗体又は抗体部分は自己免疫性疾患及び炎症性疾患の治療に有用な１種以上の他の治療剤と併用投与することもできる。
【０１８３】
本発明の抗体又はその抗原結合部分はこのような疾患を治療するために単独又は組み合わせて使用することができる。当然のことながら、本発明の抗体又はその抗原結合部分は単独で使用してもよいし、他の物質（例えば治療剤）と併用してもよく、前記他の物質はその所期目的に合わせて当業者により選択される。例えば、他の物質は本発明の抗体により治療される疾患又は症状を治療するために有用であると当分野で認められている治療剤とすることができる。他の物質は治療用組成物に有益な属性を付与する物質（例えば組成物の粘性に作用する物質）でもよい。
【０１８４】
更に当然のことながら、本発明に含まれる併用剤はその所期目的に有用な併用剤である。上記物質は例証を目的とし、これらに限定するものではない。本発明に含まれる併用剤は本発明の抗体と下記から選択される少なくとも１種の他の物質から構成することができる。形成される組成物がその所期機能を実施できるような併用剤であるならば、併用剤は２種以上の他の物質、例えば２種又は３種の他の物質を含有することもできる。
【０１８５】
本明細書に記載する結合蛋白質は抗リウマチ薬（ＤＭＡＲＤ）又は非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）又はステロイド又はその任意組合せ等の他の治療剤と併用することができる。ＤＭＡＲＤの好ましい例はヒドロキシクロロキン、レフルノミド、メトトレキセート、非経口金、経口金及びスルファサラジンである。非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤとも言う）の好ましい例としてはイブプロフェン等の薬剤が挙げられる。他の好ましい併用剤はプレドニゾロン等のコルチコステロイドであり、患者に本発明の抗ＩＬ−１２抗体と併用投与する際に必要なステロイド用量を徐々に減らすことによりステロイド使用の周知副作用を少なくするかあるいはなくすことさえできる。本発明の抗体又は抗体部分と併用することができる関節リウマチ治療剤の非限定的な例としては、サイトカイン抑制性抗炎症薬（ＣＳＡＩＤ）；他のヒトサイトカイン又は成長因子（例えばＴＮＦ、ＬＴ、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１８、ＩＬ−２１、ＩＬ−２３、インターフェロン、ＥＭＡＰ−ＩＩ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＦＧＦ及びＰＤＧＦ）の抗体又はアンタゴニストが挙げられる。本発明の抗体又はその抗原結合部分はＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ６９、ＣＤ８０（Ｂ７．１）、ＣＤ８６（Ｂ７．２）、ＣＤ９０、ＣＴＬＡ等の細胞表面分子又はそのリガンド（例えばＣＤ１５４（ｇｐ３９又はＣＤ４０Ｌ））に対する抗体と併用することができる。
【０１８６】
治療剤の好ましい併用剤は自己免疫及び後続炎症カスケードの種々の点に介入することができ、好ましい例としてはＴＮＦアンタゴニストが挙げられ、例えば可溶性ｐ５５又はｐ７５  ＴＮＦ受容体、その誘導体（ｐ７５ＴＮＦＲＩｇＧ（Ｅｎｂｒｅｌ（登録商標））又はｐ５５ＴＮＦＲＩｇＧ（Ｌｅｎｅｒｃｅｐｔ））、キメラ、ヒト化もしくはヒトＴＮＦ抗体又はそのフラグメント（例えばインフリキシマブ（Ｒｅｍｉｃａｄｅ（登録商標），Ｊｏｈｎｓｏｎ  ａｎｄ  Ｊｏｈｎｓｏｎ；参照により本明細書に組込む米国特許第５，６５６，２７２号に記載）、ＣＤＰ５７１（ヒト化モノクローナル抗ＴＮＦαＩｇＧ４抗体）、ＣＤＰ  ８７０（ヒト化モノクローナル抗ＴＮＦα抗体フラグメント）、抗ＴＮＦ  ｄＡｂ（Ｐｅｐｔｅｃｈ）、ＣＮＴＯ  １４８（ゴリムマブ；Ｍｅｄａｒｅｘ  ａｎｄ  Ｃｅｎｔｏｃｏｒ，ＷＯ０２／１２５０２参照）、及びアダリムマブ（Ｈｕｍｉｒａ（登録商標）  Ａｂｂｏｔｔ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，ＵＳ  ６，０９０，３８２にＤ２Ｅ７として記載されているヒト抗ＴＮＦ  ｍＡｂ））が挙げられる。本発明で使用することができるその他のＴＮＦ抗体は各々参照により本明細書に組込む米国特許第６，５９３，４５８号；６，４９８，２３７号；６，４５１，９８３号；及び６，４４８，３８０号に記載されている。ＴＮＦα変換酵素（ＴＡＣＥ）阻害剤、ＩＬ−１阻害剤（インターロイキン１変換酵素阻害剤、ＩＬ−１ＲＡ等）等の他の併用剤も同じ理由で有効であると思われる。他の好ましい併用剤としてはインターロイキン１１が挙げられる。更に別の好ましい併用剤はＩＬ−１２機能に平行、依存又は協調して作用することができる自己免疫応答の他の主要因子であり、ＩＬ−１８抗体又は可溶性ＩＬ−１８受容体又はＩＬ−１８結合蛋白質等のＩＬ−１８アンタゴニストが特に好ましい。ＩＬ−１２とＩＬ−１８はオーバーラップするが、別個の機能をもち、両者のアンタゴニストを併用すると最も有効であることが分かっている。更に別の好ましい併用剤は非枯渇性抗ＣＤ４阻害剤である。更に他の好ましい併用剤としては共刺激経路ＣＤ８０（Ｂ７．１）又はＣＤ８６（Ｂ７．２）のアンタゴニスト（例えば抗体、可溶性受容体又はアンタゴニスト性リガンド）が挙げられる。
【０１８７】
本発明の抗体又はその抗原結合部分はメトトレキセート、６−ＭＰ、アザチオプリンスルファサラジン、メサラジン、オルサラジンクロロキン／ヒドロキシクロロキン、ペンシラミン、金チオリンゴ酸塩（筋肉内及び経口）、アザチオプリン、コルヒチン、コルチコステロイド（経口、吸入及び局所注射）、β２アドレナリン受容体アゴニスト（サルブタモール、テルブタリン、サルメテロール）、キサンチン（テオフィリン、アミノフィリン）、クロモグリケート、ネドクロミル、ケトチフェン、イプラトロピウム及びオキシトロピウム、シクロスポリン、ＦＫ５０６、ラパマイシン、ミコフェノール酸モフェチル、レフルノミド、ＮＳＡＩＤ（例えばイブプロフェン）、コルチコステロイド（例えばプレドニゾロン）、ホスホジエステラーゼ阻害剤、アデノシンアゴニスト、抗血栓剤、補体阻害剤、アドレナリン作用薬、前炎症性サイトカイン（例えばＴＮＦα又はＩＬ−１）によるシグナル伝達を妨害する物質（例えばＩＲＡＫ、ＮＩＫ、ＩＫＫ、ｐ３８又はＭＡＰキナーゼ阻害剤）、ＩＬ−１β変換酵素阻害剤、ＴＮＦα変換酵素（ＴＡＣＥ）阻害剤、Ｔ細胞シグナル伝達阻害剤（例えばキナーゼ阻害剤、メタロプロテイナーゼ阻害剤）、スルファサラジン、アザチオプリン、６−メルカプトプリン、アンギオテンシン変換酵素阻害剤、可溶性サイトカイン受容体とその誘導体（例えば可溶性ｐ５５又はｐ７５  ＴＮＦ受容体と誘導体ｐ７５ＴＮＦＲＩｇＧ（Ｅｎｂｒｅｌ（登録商標））及びｐ５５ＴＮＦＲＩｇＧ（Ｌｅｎｅｒｃｅｐｔ）、ｓＩＬ−１ＲＩ、ｓＩＬ−１ＲＩＩ、ｓＩＬ−６Ｒ）、抗炎症性サイトカイン（例えばＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１３及びＴＧＦβ）、セレコキシブ、葉酸、硫酸ヒドロキシクロロキン、ロフェコキシブ、エタネルセプト、インフリキシマブ、ナプロキセン、バルデコキシブ、スルファサラジン、メチルプレドニゾロン、メロキシカム、酢酸メチルプレドニゾロン、金チオリンゴ酸ナトリウム、アスピリン、トリアムシノロン・アセトニド、ナプシル酸プロポキシフェン／アセトアミノフェン、フォレート、ナブメトン、ジクロフェナック、ピロキシカム、エトドラック、ジクロフェナックナトリウム、オキサプロジン、塩酸オキシコドン、重酒石酸ヒドロコドン／アセトアミノフェン、ジクロフェナックナトリウム／ミソプロストール、フェンタニル、アナキンラ（ヒト組換え）、塩酸トラマドール、サルサレート、スリンダク、シアノコバラミン／葉酸／ピリドキシン、アセトアミノフェン、アレンドロン酸ナトリウム、プレドニゾロン、硫酸モルヒネ、塩酸リドカイン、インドメタシン、硫酸グルコサミン／コンドロイチン、塩酸アミトリプチリン、スルファジアジン、塩酸オキシコドン／アセトアミノフェン、塩酸オロパタジン、ミソプロストール、ナプロキセンナトリウム、オメプラゾール、シクロホスファミド、リツキシマブ、ＩＬ−１  ＴＲＡＰ、ＭＲＡ、ＣＴＬＡ４−ＩＧ、ＩＬ−１８  ＢＰ、抗ＩＬ−１８、抗ＩＬ１５、ＢＩＲＢ−７９６、ＳＣＩＯ−４６９、ＶＸ−７０２、ＡＭＧ−５４８、ＶＸ−７４０、ロフルミラスト、ＩＣ−４８５、ＣＤＣ−８０１及びメソプラム等の物質と併用することもできる。好ましい併用剤としてはメトトレキセート��はレフルノミドが挙げられ、中度又は重度関節リウマチの場合にはシクロスポリンが挙げられる。
【０１８８】
同様に関節リウマチを治療するためにＩＬ−１２又はＩＬ−２３抗体又はその抗原結合部分と併用することができる非限定的なその他の物質としては限定されないが、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）；サイトカイン抑制性抗炎症薬（ＣＳＡＩＤ）；ＣＤＰ−５７１／ＢＡＹ−１０−３３５６（ヒト化抗ＴＮＦα抗体；Ｃｅｌｌｔｅｃｈ／Ｂａｙｅｒ）；ｃＡ２／インフリキシマブ（ｃキメラ抗ＴＮＦα抗体；Ｃｅｎｔｏｃｏｒ）；７５ｋｄＴＮＦＲ−ＩｇＧ／エタネルセプト（７５ｋＤ  ＴＮＦ受容体−ＩｇＧ融合蛋白質；Ｉｍｍｕｎｅｘ；例えばＡｒｔｈｒｉｔｉｓ  ＆  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９４）Ｖｏｌ．３７，Ｓ２９５；Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｍｅｄ．（１９９６）Ｖｏｌ．４４，２３５Ａ参照）；５５ｋｄ  ＴＮＦ−ＩｇＧ（５５ｋＤ  ＴＮＦ受容体−ＩｇＧ融合蛋白質；Ｈｏｆｆｍａｎｎ−ＬａＲｏｃｈｅ）；ＩＤＥＣ−ＣＥ９．１／ＳＢ  ２１０３９６（非枯渇性ｐｒｉｍａｔｉｚｅｄ  抗ＣＤ４抗体；ＩＤＥＣ／ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ；例えばＡｒｔｈｒｉｔｉｓ  ＆  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９５）Ｖｏｌ．３８，Ｓ１８５参照）；ＤＡＢ  ４８６−ＩＬ−２及び／又はＤＡＢ  ３８９−ＩＬ−２（ＩＬ−２融合蛋白質；Ｓｅｒａｇｅｎ；例えばＡｒｔｈｒｉｔｉｓ  ＆  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９３）Ｖｏｌ．３６，１２２３参照）；抗Ｔａｃ（ヒト化抗ＩＬ−２Ｒα；Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄｅｓｉｇｎ  Ｌａｂｓ／Ｒｏｃｈｅ）；ＩＬ−４（抗炎症性サイトカイン；ＤＮＡＸ／Ｓｃｈｅｒｉｎｇ）；ＩＬ−１０（ＳＣＨ  ５２０００；組換えＩＬ−１０，抗炎症性サイトカイン；ＤＮＡＸ／Ｓｃｈｅｒｉｎｇ）；ＩＬ−４；ＩＬ−１０及び／又はＩＬ−４アゴニスト（例えばアゴニスト抗体）；ＩＬ−１ＲＡ（ＩＬ−１受容体アンタゴニスト；Ｓｙｎｅｒｇｅｎ／Ａｍｇｅｎ）；アナキンラ（Ｋｉｎｅｒｅｔ（登録商標）／Ａｍｇｅｎ）；ＴＮＦ−ｂｐ／ｓ−ＴＮＦ（可溶性ＴＮＦ結合蛋白質；例えばＡｒｔｈｒｉｔｉｓ  ＆  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９６）Ｖｏｌ．３９，Ｎｏ．９（ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ），Ｓ２８４；Ａｍｅｒ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．−Ｈｅａｒｔ  ａｎｄ  Ｃｉｒｃｕｌａｔｏｒｙ  Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ（１９９５）Ｖｏｌ．２６８，ｐｐ．３７−４２参照）；Ｒ９７３４０１（ＩＶ型ホスホジエステラーゼ阻害剤；例えばＡｒｔｈｒｉｔｉｓ  ＆  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９６）Ｖｏｌ．３９，Ｎｏ．９（ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ），Ｓ２８２参照）；ＭＫ−９６６（ＣＯＸ−２阻害剤；例えばＡｒｔｈｒｉｔｉｓ  ＆  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９６）Ｖｏｌ．３９，Ｎｏ．９（ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ），Ｓ８１参照）；イロプロスト（例えばＡｒｔｈｒｉｔｉｓ  ＆  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９６）Ｖｏｌ．３９，Ｎｏ．９（ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ），Ｓ８２参照）；メトトレキセート；サリドマイド（例えばＡｒｔｈｒｉｔｉｓ  ＆  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９６）Ｖｏｌ．３９，Ｎｏ．９（ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ），Ｓ２８２参照）及びサリドマイド関連薬剤（例えばＣｅｌｇｅｎ）；レフルノミド（抗炎症及びサイトカイン阻害剤；例えばＡｒｔｈｒｉｔｉｓ  ＆  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９６）Ｖｏｌ．３９，Ｎｏ．９（ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ），Ｓ���３１；Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ（１９９６）Ｖｏｌ．４５，ｐｐ．１０３−１０７参照）；トラネキサム酸（プラスミノーゲン活性化阻害剤；例えばＡｒｔｈｒｉｔｉｓ  ＆  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９６）Ｖｏｌ．３９，Ｎｏ．９（ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ），Ｓ２８４参照）；Ｔ−６１４（サイトカイン阻害剤；例えばＡｒｔｈｒｉｔｉｓ  ＆  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９６）Ｖｏｌ．３９，Ｎｏ．９（ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ），Ｓ２８２参照）；プロスタグランジンＥ１（例えばＡｒｔｈｒｉｔｉｓ  ＆  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９６）Ｖｏｌ．３９，Ｎｏ．９（ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ），Ｓ２８２参照）；テニダップ（非ステロイド性抗炎症薬；例えばＡｒｔｈｒｉｔｉｓ  ＆  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９６）Ｖｏｌ．３９，Ｎｏ．９（ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ），Ｓ２８０参照）；ナプロキセン（非ステロイド性抗炎症薬；例えばＮｅｕｒｏ  Ｒｅｐｏｒｔ（１９９６）Ｖｏｌ．７，ｐｐ．１２０９−１２１３参照）；メロキシカム（非ステロイド性抗炎症薬）；イブプロフェン（非ステロイド性抗炎症薬）；ピロキシカム（非ステロイド性抗炎症薬）；ジクロフェナック（非ステロイド性抗炎症薬）；インドメタシン（非ステロイド性抗炎症薬）；スルファサラジン（例えばＡｒｔｈｒｉｔｉｓ  ＆  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９６）Ｖｏｌ．３９，Ｎｏ．９（ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ），Ｓ２８１参照）；アザチオプリン（例えばＡｒｔｈｒｉｔｉｓ  ＆  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９６）Ｖｏｌ．３９，Ｎｏ．９（ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ），Ｓ２８１参照）；ＩＣＥ阻害剤（酵素インターロイキン１β変換酵素の阻害剤）；ｚａｐ−７０及び／又はｌｃｋ阻害剤（チロシンキナーゼｚａｐ−７０又はｌｃｋの阻害剤）；ＶＥＧＦ阻害剤及び／又はＶＥＧＦ−Ｒ阻害剤（血管内皮細胞増殖因子又は血管内皮細胞増殖因子受容体の阻害剤；血管新生阻害剤）；コルチコステロイド抗炎症薬（例えばＳＢ２０３５８０）；ＴＮＦコンバーターゼ阻害剤；抗ＩＬ−１２抗体；抗ＩＬ−１８抗体；インターロイキン１１（例えばＡｒｔｈｒｉｔｉｓ  ＆  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９６）Ｖｏｌ．３９，Ｎｏ．９（ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ），Ｓ２９６参照）；インターロイキン１３（例えばＡｒｔｈｒｉｔｉｓ  ＆  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９６）Ｖｏｌ．３９，Ｎｏ．９（ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ），Ｓ３０８参照）；インターロイキン１７阻害剤（例えばＡｒｔｈｒｉｔｉｓ  ＆  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９６）Ｖｏｌ．３９，Ｎｏ．９（ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ），Ｓ  １２０参照）；金；ペニシラミン；クロロキン；クロラムブシル；ヒドロキシクロロキン；シクロスポリン；シクロホスファミド；全リンパ照射；抗胸腺細胞グロブリン；抗ＣＤ４抗体；ＣＤ５毒素；経口投与ペプチド及びコラーゲン；ロベンザリト２ナトリウム；サイトカイン調節剤（ＣＲＡ）ＨＰ２２８及びＨＰ４６６（Ｈｏｕｇｈｔｅｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．）；ＩＣＡＭ−１アンチセンスホスホロチオエートオリゴデオキシヌクレオチド（ＩＳＩＳ  ２３０２；Ｉｓｉｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．）；可溶性補体受容体１（ＴＰ１０；Ｔ  Ｃｅｌｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｉ���ｃ．）；プレドニゾン；オルゴテイン；ポリ硫酸グリコサミノグリカン；ミノサイクリン；抗ＩＬ２Ｒ抗体；海産物及び植物脂質（魚類及び植物種子脂肪酸；例えばＤｅＬｕｃａら（１９９５）Ｒｈｅｕｍ．Ｄｉｓ．Ｃｌｉｎ．Ｎｏｒｔｈ  Ａｍ．２１：７５９−７７７参照）；アウラノフィン；フェニルブタゾン；メクロフェナム酸；フルフェナム酸；静脈内免疫グロブリン；ジレウトン；アザリビン；ミコフェノール酸（ＲＳ−６１４４３）；タクロリムス（ＦＫ−５０６）；シロリムス（ラパマイシン）；アミプリロース（テラフェクチン）；クラドリビン（２−クロロデオキシアデノシン）；メトトレキセート；抗ウイルス薬；並びに免疫調節剤が挙げられる。
【０１８９】
１態様では、ＩＬ−１２抗体又はその抗原結合部分をＫＤＲの小分子阻害剤（ＡＢＴ−１２３）、Ｔｉｅ−２の小分子阻害剤；メトトレキセート；プレドニゾン；セレコキシブ；葉酸；硫酸ヒドロキシクロロキン；ロフェコキシブ；エタネルセプト；インフリキシマブ；レフルノミド；ナプロキセン；バルデコキシブ；スルファサラジン；メチルプレドニゾロン；イブプロフェン；メロキシカム；酢酸メチルプレドニゾロン；金チオリンゴ酸ナトリウム；アスピリン；アザチオプリン；トリアムシノロン・アセトニド；ナプシル酸プロポキシフェン／アセトアミノフェン；フォレート；ナブメトン；ジクロフェナック；ピロキシカム；エトドラック；ジクロフェナックナトリウム；オキサプロジン；塩酸オキシコドン；重酒石酸ヒドロコドン／アセトアミノフェン；ジクロフェナックナトリウム／ミソプロストール；フェンタニル；アナキンラ（ヒト組換え）；塩酸トラマドール；サルサレート；スリンダク；シアノコバラミン／葉酸／ピリドキシン；アセトアミノフェン；アレンドロン酸ナトリウム；プレドニゾロン；硫酸モルヒネ；塩酸リドカイン；インドメタシン；硫酸グルコサミン／コンドロイチン；シクロスポリン；塩酸アミトリプチリン；スルファジアジン；塩酸オキシコドン／アセトアミノフェン；塩酸オロパタジン；ミソプロストール；ナプロキセンナトリウム；オメプラゾール；ミコフェノール酸モフェチル；シクロホスファミド；リツキシマブ；ＩＬ−１  ＴＲＡＰ；ＭＲＡ；ＣＴＬＡ４−ＩＧ；ＩＬ−１８  ＢＰ；ＡＢＴ−８７４；ＡＢＴ−３２５（抗ＩＬ  １８）；抗ＩＬ  １５；ＢＩＲＢ−７９６；ＳＣＩＯ−４６９；ＶＸ−７０２；ＡＭＧ−５４８；ＶＸ−７４０；ロフルミラスト；ＩＣ−４８５；ＣＤＣ−８０１；及びメソプラムである関節リウマチ治療剤の１種と併用投与する。別の態様では、ＩＬ−１２又はＩＬ−２３抗体又はその抗原結合部分をＩＬ−１２又はＩＬ−２３関連障害の治療のために上記関節リウマチ治療剤の１種と併用投与する。
【０１９０】
本発明の抗体又は抗体部分と併用することができる炎症性腸疾患治療剤の非限定的な例としては、ブデソニド；上皮成長因子；コルチコステロイド；シクロスポリン，スルファサラジン；アミノサリチル酸塩；６−メルカプトプリン；アザチオプリン；メトロニダゾール；リポキシゲナーゼ阻害剤；メサラミン；オルサラジン；バルサラジド；抗酸化剤；トロンボキサン阻害剤；ＩＬ−１受容体アンタゴニスト；抗ＩＬ−１βモノクローナル抗体；抗ＩＬ−６モノクローナル抗体；成長因子；エラスターゼ阻害剤；ピリジニル−イミダゾール化合物；他のヒトサイトカイン又は成長因子（例えばＴＮＦ、ＬＴ、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１８、ＥＭＡＰ−ＩＩ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＦＧＦ及びＰＤＧＦ）の抗体又はアンタゴニストが挙げられる。本発明の抗体又はその抗原結合部分はＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ６９、ＣＤ９０等の細胞表面分子又はそのリガンドの抗体と併用することができる。本発明の抗体又はその抗原結合部分はメトトレキセート、シクロスポリン、ＦＫ５０６、ラパマイシン、ミコフェノール酸モフェチル、レフルノミド、ＮＳＡＩＤ（例えばイブプロフェン）、コルチコステロイド（例えばプレドニゾロン）、ホスホジエステラーゼ阻害剤、アデノシンアゴニスト、抗血栓剤、補体阻害剤、アドレナリン作用薬、前炎症性サイトカイン（例えばＴＮＦα又はＩＬ−１）によるシグナル伝達を妨害する物質（例えばＩＲＡＫ、ＮＩＫ、ＩＫＫ、ｐ３８又はＭＡＰキナーゼ阻害剤）、ＩＬ−１β変換酵素阻害剤、ＴＮＦα変換酵素阻害剤、Ｔ細胞シグナル伝達阻害剤（例えばキナーゼ阻害剤、メタロプロテイナーゼ阻害剤）、スルファサラジン、アザチオプリン、６−メルカプトプリン、アンギオテンシン変換酵素阻害剤、可溶性サイトカイン受容体とその誘導体（例えば可溶性ｐ５５又はｐ７５  ＴＮＦ受容体、ｓＩＬ−１ＲＩ、ｓＩＬ−１ＲＩＩ、ｓＩＬ−６Ｒ）及び抗炎症性サイトカイン（例えばＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１３及びＴＧＦβ）等の物質と併用することもできる。
【０１９１】
抗体又は抗原結合部分と併用することができるクローン病治療剤の好ましい例としては、ＴＮＦアンタゴニスト（例えば抗ＴＮＦ抗体、Ｄ２Ｅ７（ＰＣＴ公開ＷＯ９７／２９１３１；ＨＵＭＩＲＡ）、ＣＡ２（ＲＥＭＩＣＡＤＥ）、ＣＤＰ  ５７１、ＴＮＦＲ−Ｉｇ構築物（ｐ７５ＴＮＦＲＩｇＧ（ＥＮＢＲＥＬ）及びｐ５５ＴＮＦＲＩｇＧ（ＬＥＮＥＲＣＥＰＴ）））阻害剤及びＰＤＥ４阻害剤が挙げられる。本発明の抗体又はその抗原結合部分はコルチコステロイド（例えばブデソニド及びデキサメタゾン）と併用することができる。本発明の抗体又はその抗原結合部分はスルファサラジン、５−アミノサリチル酸及びオルサラジン等の物質や、前炎症性サイトカイン（例えばＩＬ−１）の合成又は作用を妨害する物質（例えばＩＬ−１β変換酵素阻害剤及びＩＬ−１ｒａ）と併用することもできる。本発明の抗体又はその抗原結合部分はＴ細胞シグナル伝達阻害剤（例えばチロシンキナーゼ阻害剤）、６−メルカプトプリンと併用することもできる。本発明の抗体又はその抗原結合部分はＩＬ−１１と併用することもできる。本発明の抗体又はその抗原結合部分はメサラミン、プレドニゾン、アザチオプリン、メルカプトプリン、インフリキシマブ、琥珀酸メチルプレドニゾロンナトリウム、ジフェノキシレート／硫酸アトロピン、塩酸ロペラミド、メトトレキセート、オメプラゾール、フォレート、シプロフロキサシン／デキストロース−水、重酒石酸ヒドロコドン／アセトアミノフェン、塩酸テトラサイクリン、フルオシノニド、メトロニダゾール、チメロサール／硼酸、コレスチラミン／スクロース、塩酸シプロフロキサシン、硫酸ヒオスシアミン、塩酸メペリジン、塩酸ミダゾラム、塩酸オキシコドン／アセトアミノフェン、塩酸プロメタジン、リン酸ナトリウム、スルファメトキサゾール／トリメトプリム、セレコキシブ、ポリカルボフィル、ナプシル酸プロポキシフェン、ヒドロコルチゾン、マルチビタミン、バルサラジド２ナトリウム、リン酸コデイン／アセトアミノフェン、塩酸コレセベラム、シアノコバラミン、葉酸、レボフロキサシン、メチルプレドニゾロン、ナタリズマブ及びインターフェロンγと併用することができる。
【０１９２】
本発明の抗体又は抗体部分と併用することができる多発性硬化症治療剤の非限定的な例としては、コルチコステロイド；プレドニゾロン；メチルプレドニゾロン；アザチオプリン；シクロホスファミド；シクロスポリン；メトトレキセート；４−アミノピリジン；チザニジン；インターフェロンβ１ａ（ＡＶＯＮＥＸ；Ｂｉｏｇｅｎ）；インターフェロンβ１ｂ（ＢＥＴＡＳＥＲＯＮ；Ｃｈｉｒｏｎ／Ｂｅｒｌｅｘ）；インターフェロンαｎ３（Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ／Ｆｕｊｉｍｏｔｏ）、インターフェロンα（Ａｌｆａ  Ｗａｓｓｅｒｍａｎｎ／Ｊ＆Ｊ）、インターフェロンβ１Ａ−ＩＦ（Ｓｅｒｏｎｏ／Ｉｎｈａｌｅ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、ペグ化インターフェロンα２ｂ（Ｅｎｚｏｎ／Ｓｃｈｅｒｉｎｇ−Ｐｌｏｕｇｈ）、コポリマー１（Ｃｏｐ−１；ＣＯＰＡＸＯＮＥ；Ｔｅｖａ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ、Ｉｎｃ．）；高圧酸素；静脈内免疫グロブリン；クラドリビン；他のヒトサイトカイン又は成長因子とその受容体（例えばＴＮＦ、ＬＴ、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−２３、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１８、ＥＭＡＰ−ＩＩ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＦＧＦ及びＰＤＧＦ）の抗体又はアンタゴニストが挙げられる。本発明の抗体又はその抗原結合部分はＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ６９、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ９０等の細胞表面分子又はそのリガンドに対する抗体と併用することができる。本発明の抗体又はその抗原結合部分はメトトレキセート、シクロスポリン、ＦＫ５０６、ラパマイシン、ミコフェノール酸モフェチル、レフルノミド、ＮＳＡＩＤ（例えばイブプロフェン）、コルチコステロイド（例えばプレドニゾロン）、ホスホジエステラーゼ阻害剤、アデノシンアゴニスト、抗血栓剤、補体阻害剤、アドレナリン作用薬、前炎症性サイトカイン（例えばＴＮＦα又はＩＬ−１）によるシグナル伝達を妨害する物質（例えばＩＲＡＫ、ＮＩＫ、ＩＫＫ、ｐ３８又はＭＡＰキナーゼ阻害剤）、ＩＬ−１β変換酵素阻害剤、ＴＡＣＥ阻害剤、Ｔ細胞シグナル伝達阻害剤（例えばキナーゼ阻害剤、メタロプロテイナーゼ阻害剤）、スルファサラジン、アザチオプリン、６−メルカプトプリン、アンギオテンシン変換酵素阻害剤、可溶性サイトカイン受容体とその誘導体（例えば可溶性ｐ５５又はｐ７５  ＴＮＦ受容体、ｓＩＬ−１ＲＩ、ｓＩＬ−１ＲＩＩ、ｓＩＬ−６Ｒ）及び抗炎症性サイトカイン（例えばＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３及びＴＧＦβ）等の物質と併用することもできる。
【０１９３】
抗体又はその抗原結合部分と併用することができる多発性硬化症治療剤の好ましい例としてはインターフェロンβ（例えばＩＦＮβ１ａ及びＩＦＮβ１ｂ）；コパキソン、コルチコステロイド、カスパーゼ阻害剤（例えばカスパーゼ−１の阻害剤）、ＩＬ−１阻害剤、ＴＮＦ阻害剤、及びＣＤ４０リガンドとＣＤ８０の抗体が挙げられる。
【０１９４】
本発明の抗体又はその抗原結合部分はアレムツズマブ、ドロナビノール、Ｕｎｉｍｅｄ、ダクリズマブ、ミトキサントロン、塩酸キサリプロデン、ファムプリジン、酢酸グラチラマー、ナタリズマブ、シンナビドール、ａ−イムノカインＮＮＳＯ３、ＡＢＲ−２１５０６２、ＡｎｅｒｇｉＸ．ＭＳ、ケモカイン受容体アンタゴニスト、ＢＢＲ−２７７８、カラグアリン、ＣＰＩ−１１８９、ＬＥＭ（リポソーム封入ミトキサントロン）、ＴＨＣ．ＣＢＤ（カンナビノイドアゴニスト）ＭＢＰ−８２９８、メソプラム（ＰＤＥ４阻害剤）、ＭＮＡ−７１５、抗ＩＬ−６受容体抗体、ニューロバクス、ピルフェニドン・アロトラップ１２５８（ＲＤＰ−１２５８）、ｓＴＮＦ−Ｒ１、タラムパネル、テリフルノミド、ＴＧＦ−β２、チプリモチド、ＶＬＡ−４アンタゴニスト（例えば、ＴＲ−１４０３５、ＶＬＡ４  Ｕｌｔｒａｈａｌｅｒ，Ａｎｔｅｇｒａｎ−ＥＬＡＮ／Ｂｉｏｇｅｎ）、インターフェロンγアンタゴニスト、ＩＬ−４アゴニスト等の物質と併用することもできる。
【０１９５】
本発明の抗体又は抗体部分と併用することができる狭心症治療剤の非限定的な例としては、アスピリン、ニトログリセリン、一硝酸イソソルビド、琥珀酸メトプロロール、アテノロール、酒石酸メトプロロール、ベシル酸アムロジピン、塩酸ジルチアゼム、二硝酸イソソルビド、重硫酸クロピドグレル、ニフェジピン、アトルバスタチンカルシウム、塩化カリウム、フロセミド、シンバスタチン、塩酸ベラパミル、ジゴキシン、塩酸プロプラノロール、カルベジロール、リシノプリル、スピロノラクトン、ヒドロクロロチアジド、マレイン酸エナラプリル、ナドロール、ラミプリル、エノキサパリンナトリウム、ヘパリンナトリウム、バルサルタン、塩酸ソタロール、フェノフィブラート、エゼチミブ、ブメタニド、ロサルタンカリウム、リシノプリル／ヒドロクロロチアジド、フェロジピン、カプトプリル、フマル酸ビソプロロールが挙げられる。
【０１９６】
本発明の抗体又は抗体部分と併用することができる強直性脊椎炎治療剤の非限定的な例としては、イブプロフェン、ジクロフェナック及びミソプロストール、ナプロキセン、メロキシカム、インドメタシン、ジクロフェナック、セレコキシブ、ロフェコキシブ、スルファサラジン、メトトレキセート、アザチオプリン、ミノサイクリン、プレドニゾン、エタネルセプト、インフリキシマブが挙げられる。
【０１９７】
本発明の抗体又は抗体部分と併用することができる喘息治療剤の非限定的な例としては、アルブテロール、サルメテロール／フルチカゾン、モンテルカストナトリウム、プロピオン酸フルチカゾン、ブデソニド、プレドニゾン、キシナホ酸サルメテロール、塩酸レバルブテロール、硫酸アルブテロール／イプラトロピウム、リン酸プレドニゾロンナトリウム、トリアムシノロン・アセトニド、ジプロピオン酸ベクロメタゾン、臭化イプラトロピウム、アジスロマイシン、酢酸ピルブテロール、プレドニゾロン、無水テオフィリン、琥珀酸メチルプレドニゾロンナトリウム、クラリスロマイシン、ザフィルルカスト、フマル酸フォルモテロール、インフルエンザウイルスワクチン、メチルプレドニゾロン、アモキシシリン三水和物、フルニソリド、アレルギー注射、クロモリンナトリウム、塩酸フェキソフェナジン、フルニソリド／メントール、アモキシシリン／クラブラン酸塩、レボフロキサシン、インヘラー補助装置、グアイフェネシン、デキサメタゾンリン酸ナトリウム、塩酸モキシフロキサシン、ドキシサイクリン塩酸塩水和物、グアイフェネシン／ｄ−メトルファン、ｐ−エフェドリン／コデイン／クロルフェニル、ガチフロキサシン、塩酸セチリジン、フランカルボン酸モメタゾン、キシナホ酸サルメテロール、ベンゾナテート、セファレキシン、ｐ−エフェドリン／ヒドロコドン／クロルフェニル、塩酸セチリジン／プソイドエフェドリン、フェニルエフリン／コデイン／プロメタジン、コデイン／プロメタジン、セフプロジル、デキサメタゾン、グアイフェネシン／プソイドエフェドリン、クロルフェニラミン／ヒドロコドン、ネドクロミルナトリウム、硫酸テルブタリン、エピネフリン、メチルプレドニゾロン、硫酸メタプロテレノールが挙げられる。
【０１９８】
本発明の抗体又は抗体部分と併用することができるＣＯＰＤ治療剤の非限定的な例としては、硫酸アルブテロール／イプラトロピウム、臭化イプラトロピウム、サルメテロール／フルチカゾン、アルブテロール、キシナホ酸サルメテロール、プロピオン酸フルチカゾン、プレドニゾン、無水テオフィリン、琥珀酸メチルプレドニゾロンナトリウム、モンテルカストナトリウム、ブデソニド、フマル酸フォルモテロール、トリアムシノロン・アセトニド、レボフロキサシン、グアイフェネシン、アジスロマイシン、ジプロピオン酸ベクロメタゾン、塩酸レバルブテロール、フルニソリド、セフトリアキソンナトリウム、アモキシシリン三水和物、ガチフロキサシン、ザフィルルカスト、アモキシシリン／クラブラン酸塩、フルニソリド／メントール、クロルフェニラミン／ヒドロコドン、硫酸メタプロテレノール、メチルプレドニゾロン、フランカルボン酸モメタゾン、ｐ−エフェドリン／コデイン／クロルフェニル、酢酸ピルブテロール、ｐ−エフェドリン／ロラタジン、硫酸テルブタリン、臭化チオトロピウム、（Ｒ，Ｒ）−フォルモテロール、ＴｇＡＡＴ、シロミラスト、ロフルミラストが挙げられる。
【０１９９】
本発明の抗体又は抗体部分と併用することができるＨＣＶ治療剤の非限定的な例としては、インターフェロンα２ａ、インターフェロンα２ｂ、インターフェロンαｃｏｎ１、インターフェロンαｎ１、ペグ化インターフェロンα２ａ、ペグ化インターフェロンα２ｂ、リバビリン、ペグ化インターフェロンα２ｂ＋リバビリン、ウルソデオキシコール酸、グリチルリチン酸、Ｔｈｙｍａｌｆａｓｉｎ、Ｍａｘａｍｉｎｅ、ＶＸ−４９７並びにＨＣＶポリメラーゼ、ＨＣＶプロテアーゼ、ＨＣＶヘリカーゼ、ＨＣＶ  ＩＲＥＳ（内部リボソーム進入部位）をターゲットとして妨害することによりＨＣＶを治療するために使用される任意化合物が挙げられる。
【０２００】
本発明の抗体又は抗体部分と併用することができる特発性肺線維症治療剤の非限定的な例としては、プレドニゾン、アザチオプリン、アルブテロール、コルヒチン、硫酸アルブテロール、ジゴキシン、γインターフェロン、琥珀酸メチルプレドニゾロンナトリウム、ロラゼパム、フロセミド、リシノプリル、ニトログリセリン、スピロノラクトン、シクロホスファミド、臭化イプラトロピウム、アクチノマイシンｄ、アルテプラーゼ、プロピオン酸フルチカゾン、レボフロキサシン、硫酸メタプロテレノール、硫酸モルヒネ、塩酸オキシコドン、塩化カリウム、トリアムシノロン・アセトニド、タクロリムス無水物、カルシウム、インターフェロンα、メトトレキセート、ミコフェノール酸モフェチル、インターフェロンγ１βが挙げられる。
【０２０１】
本発明の抗体又は抗体部分と併用することができる心筋梗塞治療剤の非限定的な例としては、アスピリン、ニトログリセリン、酒石酸メトプロロール、エノキサパリンナトリウム、ヘパリンナトリウム、重硫酸クロピドグレル、カルベジロール、アテノロール、硫酸モルヒネ、琥珀酸メトプロロール、ウァルファリンナトリウム、リシノプリル、一硝酸イソソルビド、ジゴキシン、フロセミド、シンバスタチン、ラミプリル、テネクテプラーゼ、マレイン酸エナラプリル、トルセミド、レタバーゼ、ロサルタンカリウム、塩酸キナプリル／炭酸マグネシウム、ブメタニド、アルテプラーゼ、エナラプリラート、塩酸アミオダロン、塩酸チロフィバンｍ−水和物、塩酸ジルチアゼム、カプトプリル、イルベサルタン、バルサルタン、塩酸プロプラノロール、フォシノプリルナトリウム、塩酸リドカイン、エプチフィバチド、セファゾリンナトリウム、硫酸アトロピン、アミノカプロン酸、スピロノラクトン、インターフェロン、塩酸ソタロール、塩化カリウム、ドクセートナトリウム、塩酸ドブタミン、アルプラゾラム、プラバスタチンナトリウム、アトルバスタチンカルシウム、塩酸ミダゾラム、塩酸メペリジン、二硝酸イソソルビド、エピネフリン、塩酸ドーパミン、ビバリルジン、ロスバスタチン、エゼチミブ／シンバスタチン、アバシミブ、カリポリドが挙げられる。
【０２０２】
本発明の抗体又は抗体部分と併用することができる乾癬治療剤の非限定的な例としては、ＫＤＲの小分子阻害剤（ＡＢＴ−１２３）、Ｔｉｅ−２の小分子阻害剤、カルシポトリエン、プロピオン酸クロベタゾール、トリアムシノロン・アセトニド、プロピオン酸ハロベタゾール、タザロテン、メトトレキセート、フルオシノニド、ジプロピオン酸ベタメタゾン（高用量）、フルオシノロン・アセトニド、アシトレチン、タールシャンプー、吉草酸ベタメタゾン、フランカルボン酸モメタゾン、ケトコナゾール、プラモキシン／フルオシノロン、吉草酸ヒドロコルチゾン、フルランドレノリド、尿素、ベタメタゾン、プロピオン酸クロベタゾール／エモリエント、プロピオン酸フルチカゾン、アジスロマイシン、ヒドロコルチゾン、保湿剤、葉酸、デソニド、ピメクロリムス、コールタール、二酢酸ジフロラゾン、葉酸エタネルセプト、乳酸、メトクスサレン、ヒドロコルチゾン／次没食子酸ビスマス／ｚｎｏｘ／レゾルシノール、酢酸メチルプレドニゾロン、プレドニゾン、日焼け止め剤、ハルシノニド、サリチル酸、アントラリン、ピバル酸クロコルトロン、石炭抽出液、コールタール／サリチル酸、コールタール／サリチル酸／硫黄、デゾキシメタゾン、ジアゼパム、エモリエント、フルオシノニド／エモリエント、鉱油／ひまし油／乳酸ナトリウム、鉱油／落花生油、石油／ミリスチン酸イソプロピル、プソラレン、サリチル酸、石鹸／トリブロムサラン、チメロサール／硼酸、セレコキシブ、インフリキシマブ、シクロスポリン、アレファセプト、エファリズマブ、タクロリムス、ピメクロリムス、ＰＵＶＡ、ＵＶＢ、スルファサラジンが挙げられる。
【０２０３】
本発明の抗体又は抗体部分と併用することができる乾癬性関節炎治療剤の非限定的な例としては、メトトレキセート、エタネルセプト、ロフェコキシブ、セレコキシブ、葉酸、スルファサラジン、ナプロキセン、レフルノミド、酢酸メチルプレドニゾロン、インドメタシン、硫酸ヒドロキシクロロキン、プレドニゾン、スリンダク、ジプロピオン酸ベタメタゾン（高用量）、インフリキシマブ、メトトレキセート、フォレート、トリアムシノロン・アセトニド、ジクロフェナック、ジメチルスルホキシド、ピロキシカム、ジクロフェナックナトリウム、ケトプロフェン、メロキシカム、メチルプレドニゾロン、ナブメトン、トルメチンナトリウム、カルシポトリエン、シクロスポリン、ジクロフェナックナトリウム／ミソプロストール、フルオシノニド、硫酸グルコサミン、金チオリンゴ酸ナトリウム、重酒石酸ヒドロコドン／アセトアミノフェン、イブプロフェン、リセドロネートナトリウム、スルファジアジン、チオグアニン、バルデコキシブ、アレファセプト、エファリズマブが挙げられる。
【０２０４】
本発明の抗体又は抗体部分と併用することができる再狭窄治療剤の非限定的な例としては、シロリムス、パクリタキセル、エベロリムス、タクロリムス、ＡＢＴ−５７８、アセトアミノフェンが挙げられる。
【０２０５】
本発明の抗体又は抗体部分と併用することができる座骨神経痛治療剤の非限定的な例としては、重酒石酸ヒドロコドン／アセトアミノフェン、ロフェコキシブ、塩酸シクロベンザプリン、メチルプレドニゾロン、ナプロキセン、イブプロフェン、塩酸オキシコドン／アセトアミノフェン、セレコキシブ、バルデコキシブ、酢酸メチルプレドニゾロン、プレドニゾン、リン酸コデイン／アセトアミノフェン、塩酸トラマドール／アセトアミノフェン、メタキサロン、メロキシカム、メトカルバモール、塩酸リドカイン、ジクロフェナックナトリウム、ガバペンチン、デキサメタゾン、カリソプロドール、ケトロラックトロメタミン、インドメタシン、アセトアミノフェン、ジアゼパム、ナブメトン、塩酸オキシコドン、塩酸チザニジン、ジクロフェナックナトリウム／ミソプロストール、ナプシル酸プロポキシフェン／アセトアミノフェン、アスピリン／オキシコドン／テレフタル酸オキシコドン、イブプロフェン／重酒石酸ヒドロコドン、塩酸トラマドール、エトドラック、塩酸プロポキシフェン、塩酸アミトリプチリン、カリソプロドール／リン酸コデイン／アスピリン、硫酸モルヒネ、マルチビタミン、ナプロキセンナトリウム、クエン酸オルフェナドリン、テマゼパムが挙げられる。
【０２０６】
抗体又は抗原結合部分と併用することができるＳＬＥ（狼瘡）治療剤の好ましい例としては、ＮＳＡＩＤ（例えばジクロフェナック、ナプロキセン、イブプロフェン、ピロキシカム、インドメタシン）；ＣＯＸ２阻害剤（例えば、セレコキシブ、ロフェコキシブ、バルデコキシブ）；抗マラリア剤（例えば、ヒドロキシクロロキン）；ステロイド（例えば、プレドニゾン、プレドニゾロン、ブデソニド、デキサメタゾン）；細胞傷害性物質（例えば、アザチオプリン、シクロホスファミド、ミコフェノール酸モフェチル、メトトレキセート）；ＰＤＥ４阻害剤又はプリン合成阻害剤（例えばセルセプト）が挙げられる。本発明の抗体又はその抗原結合部分はスルファサラジン、５−アミノサリチル酸、オルサラジン、イムラン及び前炎症性サイトカイン（例えばＩＬ−１）の合成、産生又は作用を妨害する物質（例えばＩＬ−１β変換酵素阻害剤等のカスパーゼ阻害剤やＩＬ−１ｒａ）等の物質と併用することもできる。本発明の抗体又はその抗原結合部分はＴ細胞シグナル伝達阻害剤（例えばチロシンキナーゼ阻害剤）；又はＴ細胞活性化分子をターゲットとする分子（例えばＣＴＬＡ−４−ＩｇＧ又は抗Ｂ７ファミリー抗体、抗ＰＤ−１ファミリー抗体）と併用することもできる。本発明の抗体又はその抗原結合部分はＩＬ−１１又は抗サイトカイン抗体（例えば、フォントリズマブ（抗ＩＦＮｇ抗体））又は抗受容体抗体（例えば抗ＩＬ−６受容体抗体やＢ細胞表面分子に対する抗体）と併用することもできる。本発明の抗体又はその抗原結合部分はＬＪＰ  ３９４（アベチムス）、Ｂ細胞を枯渇又は不活性化する物質（例えば、リツキシマブ（抗ＣＤ２０抗体）、リンフォスタット（抗ＢｌｙＳ抗体））、ＴＮＦアンタゴニスト（例えば抗ＴＮＦ抗体、Ｄ２Ｅ７（ＰＣＴ公開ＷＯ９７／２９１３１；ＨＵＭＩＲＡ）、ＣＡ２（ＲＥＭＩＣＡＤＥ）、ＣＤＰ  ５７１、ＴＮＦＲ−Ｉｇ構築物（ｐ７５ＴＮＦＲＩｇＧ（ＥＮＢＲＥＬ）及びｐ５５ＴＮＦＲＩｇＧ（ＬＥＮＥＲＣＥＰＴ）））と併用することもできる。
【０２０７】
本発明の医薬組成物は「治療有効量」又は「予防有効量」の本発明の抗体又は抗体部分を含有することができる。「治療有効量」とは必要な用量と期間で所望治療結果を達成するために有効な量を意味する。抗体又は抗体部分の治療有効量は当業者が決定することができ、個体の疾患状態、年齢、性別及び体重や、抗体又は抗体部分が個体に所望応答を誘発する能力等の因子により異なる。治療有効量は抗体又は抗体部分の有益な治療作用が毒性又は有害作用を上回る量でもある。「予防有効量」とは必要な用量と期間で所望予防結果を達成するために有効な量を意味する。一般に、予防用量は初期疾患ステージ又はそれ以前の対象で使用するので、予防有効量は治療有効量よりも少ない。
【０２０８】
最適所望応答（例えば治療又は予防応答）が得られるように投与レジメンを調節することができる。例えば、単回ボーラスを投与してもよいし、時間をかけて用量を数回に分けて投与してもよいし、治療状況の緊急性に応じて用量を比例的に増減してもよい。投与し易く、用量を均一にするために非経口組成物を用量単位形態に製剤化すると特に有利である。本明細書で使用する用量単位形態とは治療する哺乳動物対象に単位用量として適した物理的に別個の単位を意味し、各単位は所望治療効果を生じるように計算された所定量の活性化合物を必要な医薬キャリヤーと共に含有する。本発明の用量単位形態の仕様は（ａ）活性化合物の固有特性及び達成すべき特定治療又は予防効果と、（ｂ）個体の過敏症の治療用としてこのような活性化合物を配合する技術に内在する問題により決定され、これらの因子に直接依存する。
【０２０９】
本発明の抗体又は抗体部分の治療有効量又は予防有効量の非限定的な範囲の例は０．１〜２０ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは１〜１０ｍｇ／ｋｇである。なお、用量値は緩和しようとする症状の種類と重篤度により異なる。更に、当然のことながら、任意特定対象の特定投与レジメンは個体の必要と組成物の投与者又は投与監理者の専門的判断に従って時間と共に調節すべきであり、本明細書に記載する用量範囲は例示に過ぎず、特許請求の範囲に記載する組成物の範囲又は実施を制限するものではない。
【０２１０】
当業者に自明の通り、本明細書に記載する本発明の方法の他の適切な変形及び応用も自明であり、本発明の範囲又は本明細書に開示する態様から逸脱せずに適切な等価物を使用して実施することができる。以上、本発明を詳細に記載したが、以下の実施例を参照することにより更に明瞭に理解されよう。なお、以下の実施例は例証のみを目的とし、本発明を限定するものではない。
【実施例１】
【０２１１】
抗ヒトＩＬ−１２モノクローナル抗体の作製及び単離
実施例１．１：抗ヒトＩＬ−１２抗体を同定するためのアッセイ
実施例１全体を通して、特に指定しない限り、以下のアッセイを使用して抗ヒトＩＬ−１２抗体を同定及び特性決定した。
【０２１２】
実施例１．１．Ａ：ＥＬＩＳＡ
ヒトＩＬ−１２と結合する抗体をスクリーニングするための酵素免疫測定法は以下のように実施した。
【０２１３】
実施例１．１．Ａ．１：ＩＬ−１２ｐ７０と抗ヒトＩＬ−１２抗体の結合を検出するためのＥＬＩＳＡ法
ＥＬＩＳＡプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ  Ｃｏｓｔａｒ，Ａｃｔｏｎ，ＭＡ）にリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）中５μｇ／ｍｌヤギ抗マウスＩｇＧ  Ｆｃ特異的抗体（Ｐｉｅｒｃｅ  ＃  ３１１７０，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ．）５０μＬ／ウェルを４℃で一晩コーティングした。０．０５％  Ｔｗｅｅｎ−２０を添加したＰＢＳでプレートを１回洗浄した。ＰＢＳ（ＢｉｏＲａｄ  ＃１７０−６４０４，Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ．）で２％まで希釈したブロッキング溶液２００μＬ／ウェルを加えることによりプレートを１時間室温でブロックした。ブロッキング後に０．０５％  Ｔｗｅｅｎ−２０を添加したＰＢＳでプレートを１回洗浄した。
【０２１４】
上記のように調製したＥＬＩＳＡプレートに０．１％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）（Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ．）を添加したＰＢＳで希釈したマウス血清又はハイブリドーマ上清５０μＬ／ウェルを加え、１時間室温でインキュベートした。０．０５％  Ｔｗｅｅｎ−２０を添加したＰＢＳでウェルを３回洗浄した。０．１％  ＢＳＡを添加したＰＢＳで１００ｎｇ／ｍＬまで希釈したビオチン化組換え精製ヒトＩＬ−１２ｐ７０（５０μＬ）を各ウェルに加え、１時間室温でインキュベートした。０．０５％  Ｔｗｅｅｎ−２０を添加したＰＢＳでプレートを３回洗浄した。０．１％  ＢＳＡを添加したＰＢＳでストレプトアビジンＨＲＰ（Ｐｉｅｒｃｅ  ＃  ２１１２６，Ｒｏｃｋｌａｎｄ，ＩＬ．）を２００００倍に希釈し、５０μＬ／ウェルを加え、プレートを１時間室温でインキュベートした。０．０５％  Ｔｗｅｅｎ−２０を添加したＰＢＳでプレートを３回洗浄した。ＴＭＢ溶液（Ｓｉｇｍａ  ＃  Ｔ０４４０，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ．）５０μＬを各ウェルに加え、１０分間室温でインキュベートした。１Ｎ硫酸を加えて反応を停止した。プレートを分光光度法により波長４５０ｎｍで読み取った。
【０２１５】
実施例１．１．Ａ．２：ＩＬ−１２ｐ７０又はＩＬ−１２ｐ４０がＩＬ−１２ｐ７０と抗ヒトＩＬ−１２抗体の結合に競合する能力を評価するためのＥＬＩＳＡ法
ＥＬＩＳＡプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ  Ｃｏｓｔａｒ，Ａｃｔｏｎ，ＭＡ）にＰＢＳ中５μｇ／ｍｌヤギ抗マウスＩｇＧ  Ｆｃ特異的抗体（Ｐｉｅｒｃｅ  ＃  ３１１７０，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ．）５０μＬ／ウェルを４℃で一晩コーティングした。プレートをＰＢＳ＋０．０５％  Ｔｗｅｅｎ−２０で１回洗浄した。ＰＢＳ＋１０％脱脂粉乳を加えることによりプレートを１時間室温でブロックした。ブロッキング後にプレートをＰＢＳ＋０．０５％  Ｔｗｅｅｎ−２０で３回洗浄した。
【０２１６】
実施例１．１．Ａ２（ａ）：ＩＬ−１２ｐ７０競合ＥＬＩＳＡ法プロトコール
０．１％  ＢＳＡ（Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ．）を添加したＰＢＳで予想抗体力価に応じてマウス血清又はハイブリドーマ上清を希釈した。０．１％  ＢＳＡを添加したＰＢＳ中０．１μｇ／ｍｌの３倍濃縮（３×）ストックとしてビオチン化組換え精製ヒトＩＬ−１２ｐ７０を調製した。０．１％  ＢＳＡを添加したＰＢＳ中０．１〜１０μｇ／ｍｌの各種濃度で組換え精製ヒトＩＬ−１２ｐ７０を調製した。希釈マウス血清又はハイブリドーマ上清、ビオチン化組換え精製ヒトＩＬ−１２ｐ７０、及び組換え精製ヒトＩＬ−１２ｐ７０の各溶液を等容量（７５μＬ）で混合した。この混合物５０μＬを上記コートＥＬＩＳＡプレートに加え、１時間室温でインキュベートした。０．０５％  Ｔｗｅｅｎ−２０を添加したＰＢＳでウェルを３回洗浄した。０．１％  ＢＳＡを添加したＰＢＳでストレプトアビジンＨＲＰ（Ｐｉｅｒｃｅ  ＃  ２１１２６，Ｒｏｃｋｌａｎｄ，ＩＬ．）を２００００倍に希釈し、５０μＬ／ウェルを加え、プレートを１時間室温でインキュベートした。０．０５％  Ｔｗｅｅｎ−２０を添加したＰＢＳでプレートを３回洗浄した。ＴＭＢ溶液（Ｓｉｇｍａ  ＃  Ｔ０４４０，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ．）５０μＬを各ウェルに加え、１０分間室温でインキュベートした。１Ｎ硫酸を加えて反応を停止した。プレートを分光光度法により波長４５０ｎｍで読み取った。
【０２１７】
実施例１．１．Ａ２（ｂ）：ＩＬ−１２ｐ４０競合ＥＬＩＳＡ法プロトコール
０．１％  ＢＳＡ（Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ．）を添加したＰＢＳで予想抗体力価に応じてマウス血清又はハイブリドーマ上清を希釈した。０．１％  ＢＳＡを添加したＰＢＳ中０．１μｇ／ｍｌの３倍濃縮（３×）ストックとしてビオチン化組換え精製ヒトＩＬ−１２ｐ７０を調製した。０．１％  ＢＳＡを添加したＰＢＳ中０．１〜１０μｇ／ｍｌの各種濃度で組換え精製ヒトＩＬ−１２ｐ４０を調製した。希釈マウス血清又はハイブリドーマ上清、ビオチン化組換え精製ヒトＩＬ−１２ｐ７０、及び組換え精製ヒトＩＬ−１２ｐ４０の各溶液を等容量（７５μＬ）で混合した。この混合物５０μＬをコートＥＬＩＳＡプレートに加え、１時間室温でインキュベートした。０．０５％  Ｔｗｅｅｎ−２０を添加したＰＢＳでウェルを３回洗浄した。０．１％  ＢＳＡを添加したＰＢＳでストレプトアビジンＨＲＰ（Ｐｉｅｒｃｅ  ＃  ２１１２６，Ｒｏｃｋｌａｎｄ，ＩＬ．）を２００００倍に希釈し、５０μＬ／ウェルを加え、プレートを１時間室温でインキュベートした。０．０５％  Ｔｗｅｅｎ−２０を添加したＰＢＳでプレートを３回洗浄した。ＴＭＢ溶液（Ｓｉｇｍａ  ＃  Ｔ０４４０，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ．）５０μＬを各ウェルに加え、１０分間室温でインキュベートした。１Ｎ硫酸を加えて反応を停止した。プレートを分光光度法により波長４５０ｎｍで読み取った。
【０２１８】
実施例１．１．Ｂ：ＢＩＡＣＯＲＥ技術を使用した親和性測定
ＢＩＡＣＯＲＥアッセイ（Ｂｉａｃｏｒｅ，Ｉｎｃ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）は会合速度定数と解離速度定数の動的測定により抗体の親和性を測定する。２５℃のランニング緩衝液ＨＢＳ−ＥＰ（１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ［ｐＨ７．４］，１５０ｍＭ  ＮａＣｌ，３ｍＭ  ＥＤＴＡ，及び０．００５％界面活性剤Ｐ２０）を使用してＢｉａｃｏｒｅ（登録商標）３０００計器（Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）ＡＢ，Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）で表面プラズモン共鳴法測定により組換え精製ヒトＩＬ−１２ｐ７０又は組換え精製ヒトＩＬ−１２ｐ４０と抗体の結合を測定した。全化学物質はＢｉａｃｏｒｅ（登録商標）ＡＢ（Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）又は本明細書に記載するような別の供給業者から入手した。ヤギ抗マウスＩｇＧ（Ｆｃγ）フラグメント特異的ポリクローナル抗体（Ｐｉｅｒｃｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｃ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ）約５０００ＲＵを１０ｍＭ酢酸ナトリウム（ｐＨ４．５）で希釈し、標準アミンカップリングキットを製造業者の指示と手順に従って２５μｇ／ｍｌで使用してＣＭ５研究グレードバイオセンサーチップに直接固定化した。バイオセンサー表面の未反応部分をエタノールアミンでブロックした。フローセル２及び４の修飾カルボキシメチルデキストラン表面を反応表面として使用した。フローセル１及び３のヤギ抗マウスＩｇＧを固定していない未修飾カルボキシメチルデキストランを参照表面として使用した。動的分析のために、Ｂｉａｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ４．０．１ソフトウェアを使用することにより（グローバルフィット分析を使用して）、１：１ラングミュア結合モデルから誘導した速度方程式を全８種の注入液の会合相と解離相に同時にフィットさせた。ヤギ抗マウスＩｇＧ特異的反応表面に固定するために精製抗体をＨＥＰＥＳ緩衝食塩水で希釈した。リガンドとして固定するマウス抗体（２５μｇ／ｍｌ）を反応マトリックスに流速５μｌ／分で注入した。２５μｌ／分の連続流量下に会合速度定数と解離速度定数ｋｏｎ（単位Ｍ−１ｓ−１）及びｋｏｆｆ（単位ｓ−１）を測定した。速度定数は１０〜２００ｎＭの１０種の異なる抗原濃度で動的結合測定を行うことにより誘導した。次に、マウス抗体と組換え精製ヒトＩＬ−１２ｐ７０又は組換え精製ヒトＩＬ−１２ｐ４０の反応の平衡解離定数（単位Ｍ）を次式ＫＤ＝ｋｏｆｆ／ｋｏｎにより動的速度定数から計算した。時間の関数として結合を記録し、動的速度定数を計算する。このアッセイでは、１０６Ｍ−１ｓ−１程度の高い会合速度と１０−６ｓ−１程度の低い解離速度を測定することができる。
【０２１９】
実施例１．１．Ｃ：抗ヒトＩＬ−１２抗体の機能活性
本発明の抗ヒトＩＬ−１２抗体の機能活性を試験するために、ＩＬ−１２活性を阻害する抗体の能力を測定する以下のアッセイで抗体を使用した。
【０２２０】
実施例１．１．Ｃ１：ヒトＰＨＡ活性化リンパ芽球の調製
健常ドナーから採取したロイコパックからＣｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｕｎｉｔ  ７．１に記載されているように４５分間１５００ｒｐｍでＦｉｃｏｌｌ−Ｈｙｐａｑｕｅ勾配遠心によりヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を単離した。血液水溶液とリンパ球分離媒体の界面のＰＢＭＣを採取し、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）で３回洗浄し、１５分間１５００ｒｐｍで遠心してＦｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕｅ粒子を除去した。
【０２２１】
次にＣｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｕｎｉｔ  ６．１６に記載されているようにＰＢＭＣを活性化し、リンパ芽球を形成した。０．０１ｍｇ／ｍＬ  ＰＨＡ−Ｐ（Ｓｉｇｍａ  ＃Ｌ８７５４，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）を補充したＲＰＭＩ完全培地（ＲＰＭＩ  １６４０培地，１０％胎仔ウシ血清（ＦＢＳ），１００  Ｕ／ｍｌペニシリン，１００ｔｇ／ｍｌストレプトマイシン）に洗浄したＰＢＭＣを０．５〜１×１０６個／ｍＬで再懸濁し、５％  ＣＯ２雰囲気下に４日間３７℃で培養した、４日後、０．０１ｍｇ／ｍＬ  ＰＨＡ−Ｐと５０Ｕ／ｍＬ組換えヒトＩＬ−２（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  ＃２０２−ＥＬ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ．）を添加した培地に細胞培養液を細胞１×１０６個／ｍＬで再播種した。細胞を３７℃で２４時間インキュベートし、ＲＰＭＩ完全培地で洗浄した後、９５％  ＦＢＳ，５％  ＤＭＳＯ中、１×１０７個／ｍｌで凍結した。
【０２２２】
実施例１．１．Ｃ２：ＰＨＡ芽球ＩＦＮγ誘導アッセイ：ヒトＩＬ−１２活性の阻害
抗ヒトＩＬ−１２抗体がヒトＩＬ−１２の誘導下のＰＨＡ芽球によるＩＦＮγ産生を阻害する能力を以下のように分析した。各種濃度の免疫マウス血清、マウスハイブリドーマ上清又は精製抗ヒトＩＬ−１２抗体をマイクロタイタープレート（Ｕ底，９６ウェル，Ｃｏｓｔａｒ）でＲＰＭＩ完全培地１００μＬ中、４００ｐｇ／ｍｌ組換え精製ヒトＩＬ−１２ｐ７０と共に１時間３７℃でプレインキュベートした。上記のように単離したＰＨＡ芽球を一度洗浄し、ＲＰＭＩ完全培地に細胞密度１×１０７個／ｍｌまで再懸濁した。ＰＨＡ芽球（１×１０６個／ｍｌを１００μＬ）を抗体と組換え精製ヒトＩＬ−１２ｐ７０の混合物（ＩＬ−１２ｐ７０終濃度２００ｐｇ／ｍｌ）に加え、１８時間３７℃でインキュベートした。インキュベーション後、無細胞上清１５０μＬを各ウェルから回収し、ヒトＩＦＮγ  ＥＬＩＳＡ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  Ｃａｔ＃ＤＩＦ５０）を使用してヒトＩＦＮγ産生レベルを測定した。
【０２２３】
実施例１．１．Ｃ３：ＰＨＡ芽球ＩＦＮγ誘導アッセイ：カニクイザル（サル）ＩＬ−１２活性の阻害
抗ヒトＩＬ−１２抗体がカニクイザルＩＬ−１２の誘導下のＰＨＡ芽球によるＩＦＮγ産生を阻害する能力を以下のように分析した。各種濃度の免疫マウス血清、マウスハイブリドーマ上清又は精製抗ヒトＩＬ−１２抗体をマイクロタイタープレート（Ｕ底，９６ウェル，Ｃｏｓｔａｒ）でＲＰＭＩ完全培地１００μＬ中、１５０ｐｇ／ｍＬ組換え精製サルＩＬ−１２ｐ７０と共に１時間３７℃でプレインキュベートした。上記のように単離したＰＨＡ芽球を一度洗浄し、ＲＰＭＩ完全培地に細胞密度１×１０７個／ｍｌまで再懸濁した。ＰＨＡ芽球（１×１０７個／ｍｌを１００μＬ）を抗体と組換え精製サルＩＬ−１２ｐ７０の混合物（サルＩＬ−１２ｐ７０終濃度７５μｇ／ｍｌ）に加え、１８時間３７℃でインキュベートした。インキュベーション後、無細胞上清１５０μＬを各ウェルから回収し、ヒトＩＦＮγ  ＥＬＩＳＡ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  Ｃａｔ＃ＤＩＦ５０）を使用してヒトＩＦＮγ産生レベルを測定した。
【０２２４】
実施例１．２：抗ヒトＩＬ−１２モノクローナル抗体の作製
以下のように抗ヒトＩＬ−１２マウスモノクローナル抗体を得た。
【０２２５】
実施例１．２．Ａ：ヒトＩＬ−１２抗原によるマウスの免疫
１日目に完全フロイントアジュバント（Ｒｏｃｋｌａｎｄ  Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ，Ｇｉｌｂｅｒｔｓｖｉｌｌｅ，ＰＡ）と混合した２０μｇの組換え精製ヒトＩＬ−１２ｐ７０を６〜８週齢Ｂａｌｂ／Ｃ及び５ＡＪマウス５匹に皮下注射した。２４日、３８日、及び４９日目にＩｍｍｕｎｏｅａｓｙアジュバント（Ｑｉａｇｅｎ，Ｖａｌｅｎｃｉａ，ＣＡ）と混合した２０μｇの組換え精製ヒトＩＬ−１２ｐ７０を同一のＢａｌｂ／Ｃ及び５ＡＪマウス５匹に皮下注射した。８４日又は１１２日又は１４４日目に１０ｕｇの組換え精製ヒトＩＬ−１２ｐ７０又は２ｕｇの組換え精製ヒトＩＬ−１２ｐ４０（Ｒ  ＆  Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ）をマウスに静脈内注射した。
【０２２６】
実施例１．２．Ｂ：ハイブリドーマの作製
実施例１．２．Ａに記載した免疫マウスから得られた脾細胞をＫｏｈｌｅｒ，Ｇ．ａｎｄ  Ｍｉｌｓｔｅｉｎ  １９７５，Ｎａｔｕｒｅ，２５６：４９５に記載されている確立方法に従ってＳＰ２／Ｏ−Ａｇ−１４細胞と５：１の比で融合し、ハイブリドーマを作製した。９６ウェルプレートでアザセリンとヒポキサンチンを添加した選択培地に融合産物を脾細胞２．５×１０６個／ウェルの密度で播種した。融合から７〜１０日後に肉眼的ハイブリドーマコロニーが観察された。ハイブリドーマコロニーを含む各ウェルからの上清を（実施例１．１．Ａ．１に記載したように）ＩＬ−１２ｐ７０に対する抗体の有無についてＥＬＩＳＡ法により試験した。ＩＬ−１２ｐ７０との結合が陽性であった上清を次に（実施例１．１．Ａ．２に記載したように）ＩＬ−１２ｐ７０又はＩＬ−１２ｐ４０競合ＥＬＩＳＡ法により試験し、ｐ４０特異的であるか否かを判定した。ＩＬ−１２ｐ４０特異的活性を示す上清を次に（実施例１．１．Ｃに記載したように）ＩＦＮγのＰＨＡ芽球アッセイでＩＬ−１２中和能について試験した。
【０２２７】
【表１０】
0005396080.tif 000019
【０２２８】
実施例１．２．Ｃ：抗ヒトＩＬ−１２ｐ４０モノクローナル抗体の同定及び特性決定
ＩＬ−１２と結合した抗体を産生し、実施例１．２．Ｂ及び１．２．Ｃに従って作製され、ＩＬ−１２ｐ４０と特異的に結合することが可能なハイブリドーマ、特にＰＨＡ芽球アッセイで１２ｎＭ又は１２ｎＭ未満のＩＣ５０値をもつハイブリドーマを増殖させ、限界希釈法によりクローニングした。
【０２２９】
１０％低ＩｇＧ胎仔ウシ血清（Ｈｙｃｌｏｎｅ  ＃ＳＨ３０１５１，Ｌｏｇａｎ，ＵＴ．）を添加した培地でハイブリドーマ細胞を増殖させた。平均して（クローン集団に由来する）各ハイブリドーマ上清２５０ｍＬを回収し、濃縮し、Ｈａｒｌｏｗ，Ｅ．ａｎｄ  Ｌａｎｅ，Ｄ．１９８８  “Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ”に記載されているようにプロテインＡアフィニティークロマトグラフィーにより精製した。実施例１．１．Ｃ２及び１．１．Ｃ３に記載したようにＰＨＡ芽球アッセイを使用して精製ｍＡｂのＩＬ−１２活性阻害能を測定した。表９は１０種のモノクローナル抗体のＰＨＡ芽球アッセイからのＩＣ５０値を示す。
【０２３０】
【表１１】
0005396080.tif 000020
【０２３１】
実施例１．１．Ｂに記載したように表面プラズモン共鳴法（Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標））測定を使用して組換え精製ヒトＩＬ−１２ｐ７０に対するモノクローナル抗体の結合親和性を測定した。表１０はヒトＩＬ−１２ｐ７０に対する上記１０種のモノクローナル抗体の親和性を示す。
【０２３２】
【表１２】
0005396080.tif 000021
【０２３３】
実施例１．２．Ｃ．１：マウスモノクローナル抗ヒトＩＬ−１２ｐ４０抗体の種特異性
上記１０種のモノクローナル抗体がマウスＩＬ−１２を認識するか否かを判定するために、２種のＥＬＩＳＡ法を準備した。まず、ＥＬＩＳＡプレートに組換え精製マウスＩＬ−１２（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ）５ｕｇ／ｍｌを直接コーティングすることにより直接ＥＬＩＳＡ法を準備した。０．１％  ＢＳＡ（Ｓｉｇｍａ，ＳｔＬｏｕｉｓ，ＭＯ）を添加したＰＢＳ中３〜２００ｎｇ／ｍｌの各種濃度でマウス抗ヒトＩＬ−１２ｐ４０  ｍＡｂを調製した。各抗体希釈液５０μｌをコートＥＬＩＳＡプレートに加え、１時間室温でインキュベートした。０．０５％  Ｔｗｅｅｎ−２０を添加したＰＢＳでウェルを３回洗浄した。０．１％  ＢＳＡを添加したＰＢＳで抗マウスＩｇＧ−ＨＲＰ抗体（Ｒ＆Ｄ  ＃ＨＡＦ００７，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ）を２０００倍に希釈し、５０ｕｌ／ウェルを加え、プレートを１時間室温でインキュベートした。ＴＭＢ溶液（Ｓｉｇｍａ  ＃  Ｔ０４４０，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ．）５０μＬを各ウェルに加え、１０分間室温でインキュベートした。２Ｎ硫酸を加えて反応を停止した。プレートを分光光度法により波長４５０ｎｍで読み取った。
【０２３４】
第２に、ＥＬＩＳＡプレートに５ｕｇ／ｍｌヤギ抗マウスＩｇＧ，Ｆｃフラグメント特異的抗体（Ｐｉｅｒｃｅ  ＃  ３１１７０，Ｒｏｃｋｌａｎｄ，ＩＬ）をコーティングすることにより間接ＥＬＩＳＡ法を準備した。０．１％  ＢＳＡを添加したＰＢＳ中０．１〜１００ｎｇ／ｍｌの各種濃度でマウス抗ヒトＩＬ−１２ｐ４０  ｍＡｂを調製し、各抗体希釈液５０μｌをコートＥＬＩＳＡプレートに加え、１時間室温でインキュベートした。０．０５％  Ｔｗｅｅｎ−２０を添加したＰＢＳでウェルを３回洗浄した。０．１％  ＢＳＡを添加したＰＢＳで組換え精製マウスＩＬ−１２（Ｐｒｅｐｒｏｔｅｃｈ）を０．２ｕｇ／ｍｌに希釈し、５０ｕｌ／ウェルを加え、プレートを１時間室温でインキュベートした。０．０５％  Ｔｗｅｅｎ−２０を添加したＰＢＳでウェルを３回洗浄した。０．１％  ＢＳＡを添加したＰＢＳでビオチン化抗マウスＩＬ−１２抗体（Ｒ＆Ｄ  ＃  ＢＡＦ４１９）を０．２ｕｇ／ｍｌに希釈し、５０ｕｌ／ウェルを加え、プレートを１時間室温でインキュベートした。０．０５％  Ｔｗｅｅｎ−２０を添加したＰＢＳでウェルを３回洗浄した。０．１％  ＢＳＡを添加したＰＢＳでストレプトアビジンＨＲＰ（Ｐｉｅｒｃｅ  ＃  ２１１２６，Ｒｏｃｋｌａｎｄ，ＩＬ．）を２００００倍に希釈し、５０μＬ／ウェルを加え、プレートを１時間室温でインキュベートした。０．０５％  Ｔｗｅｅｎ−２０を添加したＰＢＳでプレートを３回洗浄した。ＴＭＢ溶液５０μＬを各ウェルに加え、１０分間室温でインキュベートした。２Ｎ硫酸を加えて反応を停止した。プレートを分光光度法により波長４５０ｎｍで読み取った。１０種のモノクローナル抗体で実施した直接及び間接ＥＬＩＳＡ法からの結果を表１１に示す。
【０２３５】
【表１３】
0005396080.tif 000022
【０２３６】
実施例１．２．Ｄ：各マウス抗ヒトＩＬ−１２ｐ４０  ｍＡｂの可変領域のアミノ酸配列の決定
各アミノ酸配列決定のために、ハイブリドーマ細胞約１０×１０６個を遠心により単離し、製造業者の指示に従ってＴｒｉｚｏｌ（Ｇｉｂｃｏ  ＢＲＬ／Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ．）で処理し、全ＲＮＡを単離した。製造業者の指示に従ってＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ  Ｆｉｒｓｔ−Ｓｔｒａｎｄ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）を使用して全ＲＮＡを第１鎖ＤＮＡ合成に供した。オリゴ（ｄＴ）を使用して第１鎖合成を開始し、ポリ（Ａ）＋ＲＮＡを選択した。次にマウス免疫グロブリン可変領域の増幅用に設計されたプライマー（Ｉｇ−Ｐｒｉｍｅｒ  Ｓｅｔｓ，Ｎｏｖａｇｅｎ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）を使用して第１鎖ｃＤＮＡ産物をＰＣＲ増幅した。ＰＣＲ産物をアガロースゲル上で分離し、切出し、精製した後、ＴＯＰＯクローニングキットを使用してｐＣＲ２．１−ＴＯＰＯベクター（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）にサブクローニングし、化学コンピテント大腸菌ＴＯＰ１０（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）に形質転換した。形質転換細胞でコロニーＰＣＲを実施し、インサートを含むクローンを同定した。ＱＩＡｐｒｅｐ  Ｍｉｎｉｐｒｅｐ  ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ，Ｖａｌｅｎｃｉａ，ＣＡ）を使用してインサートを含むクローンからプラスミドＤＮＡを単離した。Ｍ１３フォワードプライマーとＭ１３リバースプライマー（Ｆｅｒｍｅｎｔａｓ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｈａｎｏｖｅｒ  ＭＤ）を使用してプラスミド中のインサートを両鎖解析し、重鎖可変領域又は軽鎖可変領域ＤＮＡ配列を決定した。実施例１．２．Ｃに記載した１０種のモノクローナル抗体の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域配列を表１に示す。
【０２３７】
実施例２：組換え抗ヒトＩＬ−１２ｐ４０抗体
【実施例２】
【０２３８】
実施例２．１：組換えキメラ抗ヒトＩＬ−１２ｐ４０抗体の構築及び発現
マウス抗ヒトＩＬ−１２ｐ４０モノクローナル抗体３Ｇ７、８Ｅ１、１Ａ６及び１Ｄ４の重鎖定常領域をコードするＤＮＡを細菌で相同組換えすることにより２箇所のヒンジ領域アミノ酸突然変異を含むヒトＩｇＧ１定常領域をコードするｃＤＮＡフラグメントで置換した。これらの突然変異は２３４位（ＥＵナンバリング）のロイシン→アラニン置換と２３５位のロイシン→アラニン置換である（Ｌｕｎｄら，１９９１，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４７：２６５７）。これらの抗体の各々の軽鎖定常領域をヒトκ定常領域で置換した。重鎖シグナル配列ＭＥＦＧＬＳＷＬＦＬＶＡＩＬＫＧＶＱＣ（配列番号１１０）と軽鎖シグナル配列ＭＤＭＲＶＰＡＱＬＬＧＬＬＬＬＷＦＰＧＳＲＣ（（配列番号１１１）を含むｐＢＯＳ発現プラスミド（Ｍｉｚｕｓｈｉｍａ  ａｎｄ  Ｎａｇａｔａ，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  １９９０，Ｖｏｌ  １８，ｐｇ  ５３２２）にライゲーションしたキメラ重鎖及び軽鎖ｃＤＮＡのコトランスフェクションにより全長キメラ抗体をＣＯＳ細胞で一過性に発現させた。
【０２３９】
組換えキメラ抗体を含む細胞上清をプロテインＡセファロースクロマトグラフィーにより精製し、酸性緩衝液の添加により結合抗体を溶出させた。抗体を中和し、ＰＢＳで透析した。
【０２４０】
（上記）キメラ３Ｇ７をコードする重鎖ｃＤＮＡを１Ｄ４キメラ軽鎖ｃＤＮＡ（いずれもｐＢＯＳベクターにライゲーション）と共にＣＯＳ細胞にコトランスフェクトした。組換えキメラ抗体を含む細胞上清をプロテインＡセファロースクロマトグラフィーにより精製し、酸性緩衝液の添加により結合抗体を溶出させた。抗体を中和し、ＰＢＳで透析した。
【０２４１】
次に実施例１．１．Ｃ２及び１．１．Ｃ３に記載したようにＩＬ−１２の誘導下のＰＨＡ芽球によるＩＦＮγの産生を阻害する能力について精製キメラ抗ヒトＩＬ−１２モノクローナル抗体を試験した。表１２は５種のキメラ抗体のＰＨＡ芽球アッセイからのＩＣ５０値を示す。
【０２４２】
【表１４】
0005396080.tif 000023
【０２４３】
実施例２．２：ＣＤＲグラフト抗ヒトＩＬ−１２ｐ４０抗体の構築及び発現
ＣＤＲグラフト抗ヒトＩＬ−１２抗体を以下のように作製した。
【０２４４】
実施例２．２．１：ヒト抗体フレームワークの選択
Ｖｅｃｔｏｒ  ＮＴＩソフトウェアを使用して（表３に記載するような）各マウス重鎖可変領域及び軽鎖可変領域遺伝子配列を（ＮＣＢＩ  Ｉｇ  Ｂｌａｓｔウェブサイトｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｉｇｂｌａｓｔ／ｒｅｔｒｉｅｖｅｉｇ．ｈｔｍｌ．から入手した）４４種のヒト免疫グロブリン生殖細胞系列重鎖可変領域配列又は４６種の生殖細胞系列軽鎖可変領域配列と各々整列させた。元のマウス配列に対して最高の総相同度（及び抗原結合に重要であることが分かっている位置の最高相同度）（Ｗｅｌｓｃｈｏｆ，Ｍ．ａｎｄ  Ｋｒａｕｓｓ，Ｊ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ  ２０７）をもつヒト可変領域配列を各重鎖及び軽鎖配列に選択し、ＣＤＲグラフト用のフレームワーク（ＦＷ）１、２及び３配列を得た。各マウス重鎖及び軽鎖ＦＷ４領域をＮＣＢＩデータベースの６種のヒト免疫グロブリン生殖細胞系列結合重鎖配列と５種の生殖細胞系列結合軽鎖配列と各々整列させることにより、適切なヒト重鎖及び軽鎖可変領域ＦＷ４領域（「結合」領域とも言う）の同定を行った。（ＮＣＢＩウェブサイトに由来する）ヒト可変領域ＣＤＲ配列を（ハイブリドーマに由来する）マウスＣＤＲ配列で置換し、（ＮＣＢＩウェブサイトに由来する）ＦＷ４領域を各３’末端に付加することにより、完全ＣＤＲグラフト抗体のｉｎ  ｓｉｌｉｃｏ構築を実施した。
【０２４５】
実施例２．２．２：ＣＤＲグラフト抗体の構築
上記ｉｎ  ｓｉｌｉｃｏ構築したＣＤＲグラフト抗体をオリゴヌクレオチドによりｄｅ  ｎｏｖｏ構築した。各可変領域ｃＤＮＡについて、各オリゴヌクレオチドの５’及び／又は３’末端で相互に２０ヌクレオチドオーバーラップするように各６０〜８０ヌクレオチドのオリゴヌクレオチド６個を設計した。アニール反応では、全６個のオリゴヌクレオチドを混合し、煮沸し、ｄＮＴＰの存在下でアニールした。次にＤＮＡポリメラーゼＩ，ラージ（Ｋｌｅｎｏｗ）フラグメント（Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｂｉｏｌａｂｓ  ＃Ｍ０２１０，Ｂｅｖｅｒｌｅｙ，ＭＡ．）を加え、オーバーラップするオリゴヌクレオチド間の約４０ｂｐギャップを埋めた。次に改変ｐＢＯＳベクター（Ｍｉｚｕｓｈｉｍａ，Ｓ．ａｎｄ  Ｎａｇａｔａ，Ｓ．，（１９９０）Ｎｕｃｌｅｉｃ  ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｖｏｌ  １８，Ｎｏ．１７））の多重クローニング部位に相補的なオーバーハング配列を含む２個の最も外側のプライマーを使用してＰＣＲを実施し、完全可変領域遺伝子を増幅した。
【０２４６】
各ｃＤＮＡアセンブリから得られたＰＣＲ産物をアガロースゲル上で分離し、予想可変領域ｃＤＮＡサイズに対応するバンドを切出し、精製した。細菌で相同組換えすることにより２箇所のヒンジ領域アミノ酸突然変異を含むヒトＩｇＧ１定常領域をコードするｃＤＮＡフラグメント（配列番号３）に重鎖可変領域をインフレーム挿入した。これらの突然変異は２３４位（ＥＵナンバリング）のロイシン→アラニン置換と２３５位のロイシン→アラニン置換である（Ｌｕｎｄら，１９９１，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４７：２６５７）。軽鎖可変領域を相同組換えによりヒトκ定常領域（配列番号４）にインフレーム挿入した。細菌コロニーを単離し、プラスミドＤＮＡを抽出し、ｃＤＮＡインサートを完全に配列決定した。各抗体に対応する正しいＣＤＲグラフト重鎖及び軽鎖をＣＯＳ細胞にコトランスフェクトし、全長ＣＤＲグラフト抗ヒトＩＬ−１２抗体を一過性に産生させた。１Ａ６では、１Ａ６重鎖をグラフトしたｃＤＮＡと１Ｄ４軽鎖をグラフトしたｃＤＮＡを含むｐＢＯＳベクターをＣＯＳ細胞にコトランスフェクトした（１Ａ６軽鎖配列はグラフトした場合には１Ｄ４軽鎖配列と同一であった）。組換えキメラ抗体を含む細胞上清をプロテインＡセファロースクロマトグラフィーにより精製し、酸性緩衝液の添加により結合抗体を溶出させた。抗体を中和し、ＰＢＳで透析した。９種のＣＤＲグラフト抗体を表５に記載する。
【０２４７】
実施例１．１．Ｃ２及び１．１．Ｃ３に記載したようにＰＨＡ芽球アッセイにより精製ＣＤＲグラフト抗体がＩＬ−１２活性を阻害する能力を測定した。実施例１．１．Ｂに記載したように表面プラズモン共鳴法（Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標））測定を使用して組換え精製ヒトＩＬ−１２ｐ７０に対する精製ＣＤＲグラフト抗体の結合親和性を測定した。表１３はヒトＩＬ−１２ｐ７０とカニクイザルＩＬ−１２ｐ７０について表７に記載した９種のＣＤＲグラフト抗体のＰＨＡ芽球アッセイからのＩＣ５０値と親和性を示す。
【０２４８】
【表１５】
0005396080.tif 000024
0005396080.tif 000025
【０２４９】
実施例２．３：ヒト化抗ヒトＩＬ−１２抗体の構築
抗ヒトＩＬ−１２抗体のヒト化を以下のように実施した。
【０２５０】
実施例２．３．１：ＣＤＲグラフト抗体によるホモロジーモデリング
抗体結合部位の構造に必須であると予想されるマウス抗体配列（ＣＤＲ）に固有の残基を同定するためにホモロジーモデリングを使用した。
【０２５１】
ホモロジーモデリングは蛋白質の近似三次元座標を生成するコンピューター手法である。三次元座標が分かっており、その配列が第１の蛋白質の配列に近縁である第２の蛋白質を参照蛋白質とし、初期座標源とそのリファインメントの指針として使用する。２種の蛋白質の配列間の関係を使用して参照蛋白質と座標が所望される蛋白質であるターゲット蛋白質の対応を生成する。参照蛋白質からターゲット蛋白質に直接コピーする２種の蛋白質の一致部分の座標と参照蛋白質及びターゲット蛋白質の一次配列を整列させる。例えば残基突然変異、挿入又は欠失に由来する２種の蛋白質のミスマッチ部分の座標を一般構造鋳型から構築し、先にコピーしたモデル座標との整合性を確保するようにエネルギーリファインメントを行う。このコンピューター蛋白質構造を更にリファインメントしてもよいし、モデリング試験で直接使用してもよい。この記載から明らかなように、モデル構造の品質は参照蛋白質とターゲット蛋白質が近縁であるという前提の確度と、配列アラインメントを構築する精度により決定される。
【０２５２】
マウス配列１Ａ６、８Ｅ１及び１Ｄ４について、ＢＬＡＳＴ検索と目視検査を併用して適切な参照構造を同定した。１Ａ６と１Ｄ４に選択した参照構造はＰＤＢエントリー１ＪＲＨであった。８Ｅ１では、重鎖参照構造はＰＤＢエントリー１ＦＬ３であり、軽鎖参照構造は１ＭＥＸであった。参照アミノ酸配列とターゲットアミノ酸配列の一致度は２５％であり、ホモロジーモデリング実施を試みるために必要な最小値であるとみなされる。配列アラインメントを手動構築し、プログラムＪａｃｋａｌを使用してモデル座標を生成した（Ｐｅｔｒｅｙ，Ｄ．，Ｘｉａｎｇ，Ｚ．，Ｔａｎｇ，Ｃ．Ｌ．，Ｘｉｅ，Ｌ．，Ｇｉｍｐｅｌｅｖ，Ｍ．，Ｍｉｔｒｏｓ，Ｔ．，Ｓｏｔｏ，Ｃ．Ｓ．，Ｇｏｌｄｓｍｉｔｈ−Ｆｉｓｃｈｍａｎ，Ｓ．，Ｋｅｒｎｙｔｓｋｙ，Ａ．，Ｓｃｈｌｅｓｓｉｎｇｅｒ，Ａ．ら２００３．Ｕｓｉｎｇ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ａｌｉｇｎｍｅｎｔｓ，ｆａｓｔ  ｍｏｄｅｌ  ｂｕｉｌｄｉｎｇ，ａｎｄ  ｅｎｅｒｇｅｔｉｃ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｉｎ  ｆｏｌｄ  ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｈｏｍｏｌｏｇｙ  ｍｏｄｅｌｉｎｇ．Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ５３（Ｓｕｐｐｌ．６）：４３０−４３５参照）。
【０２５３】
選択した抗体のマウス及びヒトフレームワーク領域の一次配列は有意一致度をもつ。相違する残基位置がマウス抗体の観測結合能を維持するためにヒト化配列に加えるマウス残基の候補である。ヒト配列とマウス配列間で相違するフレームワーク残基のリストを手動作成した。
【０２５４】
所定フレームワーク残基が抗体の結合特性に影響を与える確率はＣＤＲ残基とのその近接性に依存する。従って、モデル構造を使用してマウス配列とヒト配列間で相違する残基をＣＤＲにおける任意原子からの距離に従って格付けした。任意ＣＤＲ原子から４．５Å以内の残基を最重要とし、ヒト化抗体で維持するマウス残基の候補として推奨した（即ち復帰突然変異）。
【０２５５】
コンピューターモデルの試験によると、抗体１Ａ６．１では軽鎖（１Ｄ４．１  ＶＫＢ３）の残基Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３６及びＬ６７がＣＤＲと有意に接触していると思われ、従って、これらの位置ではマウス残基を維持すべきであると思われる。１Ｄ４．１の場合には、重鎖（１Ｄ４．１  ＶＨ２−７０）の残基Ｈ１及びＨ９８と軽鎖（１Ｄ４．１  ＶＫＢ３）のＬ２及びＬ６７が復帰突然変異位置として同定された。
【０２５６】
実施例２．３．２：ハイブリッド抗体の作製
どのＣＤＲグラフト鎖（ＶＨ，ＶＬ又は両者）がフレームワーク復帰突然変異の恩恵を受けるのかを調べるために、ＣＤＲグラフトＨ又はＬ鎖を適切なキメラマウスＨ又はＬ鎖と対合した後にＣＯＳ細胞にコトランスフェクトすることにより「ハイブリッド」抗体を構築した。表１４はハイブリッド抗体１Ａ６．３、１Ａ６．４、１Ａ６．７、１Ａ６．８、１Ｄ４．４及び１Ｄ４．５のＶＨ及びＶＬアミノ酸配列を示す。
【０２５７】
【表１６】
0005396080.tif 000026
【０２５８】
ハイブリッド抗体をプロテインＡアフィニティークロマトグラフィー（実施例１．２．Ｃ）により精製し、実施例１．１．Ｃ２及び１．１．Ｃ３に記載したようにＰＨＡ芽球アッセイで力価を試験した。実施例１．１．Ｂに記載したようにＢＩＡｃｏｒｅを使用して動的測定を実施した。表１５はハイブリッド抗体のＫＤ及びＩＣ５０値を示す。ハイブリッドｍＡｂで得られた力価及び親和性データを適切なＣＤＲグラフトｍＡｂで生成したデータ（実施例２．３．１）と比較し、特定ＶＨ又はＶＬ鎖に起因する力価及び親和性の変化を確認した。実施例２．３．１に記載した方法を使用してヒト化ＶＨ又はＶＬ鎖が最適鎖であるか否かを検討した。場合により、任意ＣＤＲ原子から４．５Å以内になかった残基も復帰突然変異のターゲットとした。
【０２５９】
【表１７】
0005396080.tif 000027
【０２６０】
実施例２．３．３：ＣＤＲグラフト抗体におけるフレームワーク復帰突然変異の構築
ヒト化抗体を作製するために、突然変異誘発プライマーとＱｕｉｋＣｈａｎｇｅ  Ｍｕｌｔｉ  Ｓｉｔｅ−Ｄｉｒｅｃｔｅｄ  Ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ  ｋｉｔ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ  ＃２００５１３，Ｌａ  Ｊｏｌｌａ，ＣＡ）を製造業者の指示に従って使用してフレームワーク復帰突然変異をＣＤＲグラフト抗体に導入した。ＣＤＲグラフトの各々に復帰突然変異の各種組み合わせを構築し、各残基の相対重要性を識別した。１Ａ６．１軽鎖ＶＫＢ３変異体１（Ｌ１−Ｄ→Ｓ，Ｌ２−Ｉ→Ｖ，Ｌ３６−Ｙ→Ｆ，Ｌ６７−Ｓ→Ｙ）、１Ｄ４．１  ＶＫＢ３変異体２（Ｌ１−Ｄ→Ｓ，Ｌ３６−Ｙ→Ｆ，Ｌ６７−Ｓ→Ｙ）、１Ｄ４．１  ＶＫＢ３変異体３（Ｌ１−Ｄ→Ｓ，Ｌ６７−Ｓ→Ｙ）、１Ｄ４．１  ＶＫＢ３変異体４（Ｌ２−Ｉ→Ｖ，Ｌ６７−Ｓ→Ｙ）、及び１Ｄ４．１  ＶＫＢ３変異体５（Ｌ６７−Ｓ→Ｙ）。１Ｄ４．１重鎖ＶＨ２−７０変異体１（Ｈ１−Ｅ→Ｑ，Ｈ９３−Ａ→Ｔ）、及び１Ｄ４．１  ＶＨ２−７０変異体２（Ｈ９３−Ａ→Ｔ）。次に突然変異１本鎖ＤＮＡをＸＬ１０−Ｇｏｌｄウルトラコンピテントセルに形質転換した。形質転換細胞でコロニー配列決定を実施し、所望突然変異をもつクローンを同定した。Ｑｉａｇｅｎ  Ｍａｘｉｐｒｅｐ  ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ，Ｖａｌｅｎｃｉａ，ＣＡ）を使用して陽性クローンからプラスミドＤＮＡを単離し、可変領域と定常領域を完全に配列決定した。
【０２６１】
上記のように、ＣＤＲグラフト抗体の各々に復帰突然変異の数種の他の組み合わせを構築した。上記に開示したように作製したヒト化抗体の特性決定を下記実施例２．３．４に開示するように実施した。
【０２６２】
実施例２．３．４：ヒト化抗体の発現及び特性決定
フレームワーク復帰突然変異を含む重鎖と軽鎖をもつＰＢＯＳ発現ベクター（実施例２．１及び２．２．２参照）をＣＯＳ細胞にコトランスフェクトし、全長ヒト化抗体を一過性産生させた。ヒト化抗体のＶＨ及びＶＬ領域のアミノ酸配列を表１６に開示する。
【０２６３】
【表１８】
0005396080.tif 000028
0005396080.tif 000029
【０２６４】
ＣＤＲグラフト抗体のＶＨ及びＶＬの復帰突然変異アミノ酸位置を表１７に示す。
【０２６５】
【表１９】
0005396080.tif 000030
【０２６６】
ヒト化抗体を含む細胞上清を実施例１．２．Ｃに記載したように精製した。実施例１．１．Ｃ２及び１．１．Ｃ３に記載したようにＰＨＡ芽球アッセイを使用して精製ヒト化抗体がＩＬ−１２をｉｎ  ｖｉｔｒｏで中和する能力を測定した。実施例１．１．Ｂに記載したようにＢＩＡｃｏｒｅを使用して組換え精製ヒトＩＬ−１２ｐ７０に対する精製抗体の結合親和性をを測定した。表１８はＰＨＡ芽球アッセイからのＩＣ５０値とＢＩＡｃｏｒｅからのＫＤを示す。
【０２６７】
【表２０】
0005396080.tif 000031
【０２６８】
実施例２．４；他のヒト化抗ヒトＩＬ−１２抗体の作製
Ｑｕｅｅｎ，Ｃ．ら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８６：１００２９−１００３３（１９８９）の手順にほぼ従ってマウスモノクローナル抗体８Ｅ１及び１Ａ６の可変領域のヒト化を実施した。まず、マウスモノクローナル抗体ＶＨ又はＶＬアミノ酸配列に対して高い相同度をもつヒトＶセグメントを同定した。次に、選択したヒトフレームワーク配列に相補性決定領域（ＣＤＲ）配列とＣＤＲの構造を維持するために重要なフレームワークアミノ酸をグラフトした。更に、対応するＶ領域サブグループで希少であることが分かったヒトフレームワークアミノ酸をコンセンサスアミノ酸で置換し、潜在免疫原性を低下させた。得られたヒト化モノクローナル抗体を以下に記載するように細胞で発現させ、精製し、特性決定した。
【０２６９】
ヒト化モノクローナル抗体８Ｅ１．４、８Ｅ１．５、８Ｅ１．６、１Ａ６．１０、１Ａ６．１１及び１Ａ６．１２を以下のように作製した。
【０２７０】
実施例２．４．１：ヒト化モノクローナル抗体８Ｅ１．４、８Ｅ１．５、８Ｅ１．６の作製
８Ｅ１可変領域をヒト化するために、配列相同性に基づいて８Ｅ１のＣＤＲのアクセプターとして使用するヒトＶ領域フレームワークを選択した。まず、コンピュータープログラムＡＢＭＯＤ及びＥＮＣＡＤ（Ｌｅｖｉｔｔ，Ｍ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１６８：５９５−６２０（１９８３））を使用して８Ｅ１可変領域の分子モデルを構築した。次に、ヒトＶ及びＪセグメント配列との相同性検索に基づき、ＶＨセグメントＨＡ３Ｄ１（Ｏｌｅｅ，Ｔ．ら，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７５：８３１−８４２（１９９２））とＪセグメントＪＨ４（Ｒａｖｅｔｃｈ，Ｊ．Ｖ．ら，Ｃｅｌｌ  ２７：５８３−５９１（１９８１））を選択し、８Ｅ１．４、８Ｅ１．５及び８Ｅ１．６重鎖可変領域のフレームワークを得た。８Ｅ１．４、８Ｅ１．５及び８Ｅ１．６軽鎖可変領域には、ＶＬセグメントＨＫ１３７（Ｂｅｎｔｌｅｙ，Ｄ．Ｌ．，ａｎｄ  Ｒａｂｂｉｔｔｓ，Ｔ．Ｈ．，Ｃｅｌｌ  ３２：１８１−１８９（１９８３））とＪセグメントＪＫ２（Ｈｉｅｔｅｒ，Ｐ．Ａ．ら，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５７：１５１６−１５２２（１９８２））を使用した。８Ｅ１  ＶＨとアクセプターヒトＨＡ３Ｄ１及びＪＨ４セグメント間のフレームワークアミノ酸の一致度は８４％であり、８Ｅ１  ＶＬとアクセプターヒトＨＫ１３７及びＪＫ４セグメント間の一致度は６７％であった。他のヒト化抗ヒトＩＬ−１２抗体を作製するために使用したヒト抗体重鎖及び軽鎖アクセプター配列を表１９及び２０に示す。
【０２７１】
【表２１】
0005396080.tif 000032
【０２７２】
【表２２】
0005396080.tif 000033
【０２７３】
実施例２．４．２：８Ｅ１．４、８Ｅ１．５及び８Ｅ１．６抗体の構築
文献記載の方法（Ｒｏｕｉｌｌａｒｄ，Ｊ．−Ｍ．ら，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．３２：Ｗ１７６−Ｗ１８０（２００４））に従ってオーバーラップする約２０〜４０塩基長の合成オリゴヌクレオチド約３０個を使用して重鎖及び軽鎖可変領域遺伝子を構築し、増幅した。Ｅｘｐａｎｄ  Ｈｉｇｈ  Ｆｉｄｅｌｉｔｙ  ＰＣＲ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ）を使用してオリゴヌクレオチドをアニールし、アセンブルし、全長産物を得た。得られた産物をＥｘｐａｎｄ  Ｈｉｇｈ  Ｆｉｄｅｌｉｔｙ  ＰＣＲ  Ｓｙｓｔｅｍでポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）により増幅した。ＰＣＲ増幅フラグメントをゲル精製し、ＭｌｕＩとＸｂａＩで消化し、夫々ｐＶｇ１．Ｄ．Ｔｔ（Ｃｏｌｅ，Ｍ．Ｓ．ら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５９：３６１３−３６２１（１９９７）；及び下記参照）とｐＶｋ（Ｃｏ，Ｍ．Ｓ．ら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８：１１４９−１１５４（１９９２））の改変体にサブクローニングした。
【０２７４】
コンピューターモデルによりＣＤＲとの有意接触が示唆されたフレームワーク位置で、マウスＶ領域に由来するアミノ酸を元のヒトフレームワークアミノ酸に置換した。これは８Ｅ１．４及び８Ｅ１．５重鎖では残基４９で実施し、８Ｅ１．６の重鎖では更に残基７４でも実施した。８Ｅ１．５及び８Ｅ１．６の軽鎖では、残基４６を置換し、８Ｅ１．５では更に残基６０も置換した。対応するヒトＶ領域サブグループの夫々の位置に低頻度でしか存在しないフレームワーク残基をその位置のヒトコンセンサスアミノ酸で置換した。これは８Ｅ１．５及び８Ｅ１．６重鎖の両者の残基７８と、８Ｅ１．５及び８Ｅ１．６軽鎖の残基３６で実施した。
【０２７５】
ＱｕｉｋＣｈａｎｇｅ  ＩＩ  Ｓｉｔｅ−Ｄｉｒｅｃｔｅｄ  Ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ  Ｋｉｔ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ，Ｌａ  Ｊｏｌｌａ，ＣＡ）を製造業者の推奨に従って使用して合成Ｖ遺伝子の部位特異的突然変異誘発を実施した。突然変異誘発オリゴヌクレオチドと当分野で周知のＰＣＲ法を使用して８Ｅ１．６  ＶＨ遺伝子の特異的突然変異を形成した。ＰＣＲ段階はＰｆｕＵｌｔｒａ  ＨＦ  ＤＮＡ  Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）を製造業者の推奨に従って使用し、９５℃で３０秒間インキュベーション後に、９５℃で３０秒間。５５℃で１分間及び６８℃で１分間を１８サイクル行い、その後、６８℃で７分間インキュベーションすることにより実施した。ＤｐｎＩで消化後、大腸菌株ＴＯＰ１０化学コンピテントセル（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）をＰＣＲ産物の小部分で形質転換した。配列を確認したミニプレップＤＮＡをＭｌｕＩとＸｂａＩで消化し、突然変異８Ｅ１．６  ＶＨ遺伝子を含む得られた制限フラグメントを下記改変ｐＶｇ１．Ｄ．Ｔｔ発現ベクターにサブクローニングした。
【０２７６】
同様に、突然変異誘発オリゴヌクレオチドと当分野で周知のＰＣＲ法を使用して８Ｅ１．５  ＶＬ遺伝子の特異的突然変異を形成した。ＰＣＲ段階は上記のように実施し、ＭｌｕＩとＸｂａＩで消化後、得られた制限フラグメントをｐＶｋ発現ベクターにサブクローニングした。ヌクレオチドシーケンシングにより突然変異を確認した。
【０２７７】
シグナルペプチドと、スプライスドナー配列と、哺乳動物発現ベクターに後期クローニングするために適切な制限酵素を含むミニエキソンとしてヒト化ＶＨ又はＶＬをコードする遺伝子を設計した。ＶＨ及びＶＬミニエキソンのスプライスドナーシグナルは夫々対応するヒト生殖細胞系列ＪＨ及びＪＫ配列に由来するものとした。シグナルペプチド配列はヒト化ＶＨミニエキソンではＭＥＦＧＬＳＷＬＦＬＶＡＩＬＫＧＶＱＣ（配列番号１１０）であり、ヒト化ＶＬエキソンではＭＤＭＲＶＰＡＱＬＬＧＬＬＬＬＷＦＰＧＳＲＣ（配列番号１１１）であった。８Ｅ１．４、８Ｅ１．５及び８Ｅ１．６  ＶＨ及びＶＬ遺伝子はオーバーラップする合成オリゴヌクレオチドのアセンブリと当分野で周知のＰＣＲ法により構築した。
【０２７８】
実施例２．４．３：ヒト化モノクローナル抗体１Ａ６．１０、１Ａ６．１１及び１Ａ６．１２の作製
１Ａ６．１０、１Ａ６．１１及び１Ａ６．１２可変領域をヒト化するために、本発明で提案する一般アプローチに従った。まず、コンピュータープログラムＡＢＭＯＤ及びＥＮＣＡＤ（Ｌｅｖｉｔｔ，Ｍ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１６８：５９５−６２０（１９８３））を使用して１Ａ６可変領域の分子モデルを構築した。次に、ヒトＶ及びＪセグメント配列との相同性検索に基づき、ＶＨセグメントＭ６０（Ｓｃｈｒｏｅｄｅｒ，Ｊｒ．，Ｈ．Ｗ．ａｎｄ  Ｗａｎｇ，Ｊ．Ｙ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８７：６１４６−６１５０（１９９０））とＪセグメントＪＨ４（Ｒａｖｅｔｃｈ，Ｊ．Ｖ．ら，Ｃｅｌｌ  ２７：５８３−５９１（１９８１））を選択し、１Ａ６．１０及び１Ａ６．１２重鎖可変領域のフレームワークを得た。１Ａ６．１０、１Ａ６．１１及び１Ａ６．１２軽鎖可変領域には、ＶＬセグメントＩＩＩ−３Ｒ（Ｍａｎｈｅｉｍｅｒ−Ｌｏｒｙ，Ａ．ら，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７４：１６３９−１６５２（１９９１））とＪセグメントＪＫ４（Ｈｉｅｔｅｒ，Ｐ．Ａ．ら，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５７：１５１６−１５２２（１９８２））を使用した。１Ａ６  ＶＨとアクセプターヒトＭ６０及びＪＨ４セグメント間のフレームワークアミノ酸の一致度は７４％であり、１Ａ６  ＶＬとアクセプターヒトＩＩＩ−３Ｒ及びＪＫ４セグメント間の一致度は７１％であった。抗体配列は実施例２．３．３に開示したように作製した。
【０２７９】
コンピューターモデルによりＣＤＲとの有意接触が示唆されたフレームワーク位置で、マウスＶ領域に由来するアミノ酸を元のヒトフレームワークアミノ酸に置換した。これは１Ａ６．１０、１Ａ６．１１及び１Ａ６．１２重鎖では残基６８で実施した。軽鎖では、１Ａ６．１１及び１Ａ６．１２では残基３６及び６７を置換し、１Ａ６．１２では更に残基６０も置換した。対応するヒトＶ領域サブグループの夫々の位置に低頻度でしか存在しないフレームワーク残基をその位置のヒトコンセンサスアミノ酸で置換した。これは１Ａ６．１０、１Ａ６．１１及び１Ａ６．１２の重鎖の残基１０、４６、８３、８４、８６及び８７と軽鎖の残基６２で実施した。上記のように突然変異誘発オリゴヌクレオチドとＰＣＲ法を使用して部位特異的突然変異誘発を実施した。
【０２８０】
作製した他のヒト化抗ＩＬ−１２抗体の得られたＶＨ及びＶＬ領域のアミノ酸配列を表２１に示す。
【０２８１】
【表２３】
0005396080.tif 000034
【０２８２】
突然変異したフレームワークのアミノ酸位置を表２２に示す。
【０２８３】
【表２４】
0005396080.tif 000035
【０２８４】
実施例２．４．４：他のヒト化抗体の発現
発現プラスミドｐＶｇ１．Ｄ．Ｔｔにおけるヒトγ１定常領域遺伝子のアロタイプをＧｌｍ（ｚ，ａ）からｚ，非ａアロタイプに改変した。オーバーラップ伸長ＰＣＲ法（Ｈｉｇｕｃｈｉ，Ｒ．，ｉｎ“ＰＣＲ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｆｏｒ  ＤＮＡ  Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ”，Ｓｔｏｃｋｔｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９８９），ｐｐ．６１−７０）を使用し、突然変異誘発プライマーを使用してアミノ酸置換Ｄ３５６Ｅ及びＬ３５８Ｍを作製した（ナンバリングはＫａｂａｔ，Ｅ．Ａ．ら，“Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ”，５ｔｈ  ｅｄ．，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９９１）のＥＵインデックスに従う）。ＰＣＲ段階はＱｕｉｋＣｈａｎｇｅ  ＩＩ  Ｓｉｔｅ−Ｄｉｒｅｃｔｅｄ  Ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ  Ｋｉｔ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）を使用して実施した。ＰＣＲ産物をＳｆｉＩとＥａｇＩで消化後、ヒンジエキソンとＣＨ２エキソンの間のイントロンにＮｈｅＩ制限部位を含むｐＶｇ１．Ｄ．Ｔｔ発現ベクターの改変体に得られた制限フラグメントをサブクローニングした。
【０２８５】
γ１定常領域遺伝子の下部ヒンジ領域の突然変異も部位特異的突然変異誘発により作製した。具体的には、突然変異誘発オリゴヌクレオチドを使用してアミノ酸置換Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａを作製した（ナンバリングはＫａｂａｔ，Ｅ．Ａ．らのＥＵインデックスに従う）。ＰＣＲ段階は上記のようにＱｕｉｋＣｈａｎｇｅ  ＩＩ  Ｓｉｔｅ−Ｄｉｒｅｃｔｅｄ  Ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ  Ｋｉｔ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）を使用して実施した。ＰＣＲ産物をＮｈｅＩとＥａｇＩで消化後、Ｄ３５６Ｅ及びＬ３５８Ｍ突然変異を含むと共にヒンジエキソンとＣＨ２エキソンの間のイントロンにＮｈｅＩ部位を含む上記改変ｐＶｇ１．Ｄ．Ｔｔ発現ベクターに得られた制限フラグメントをサブクローニングした。
【０２８６】
ヒト化ＶＨ及びＶＬミニエキソンのアミノ酸配列を表２１に示す。得られたＶ遺伝子フラグメントを夫々ｐＶｇＬＤ．Ｔｔ及びｐＶｋの改変体にクローニングした。
【０２８７】
７．５％  ＣＯ２インキュベーターで１０％胎仔ウシ血清（ＦＢＳ）（ＨｙＣｌｏｎｅ，Ｌｏｇａｎ，ＵＴ）、０．１ｍＭ  ＭＥＭ非必須アミノ酸（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）及び２ｍＭ  Ｌ−グルタミン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）を添加した３７℃のＤＭＥＭ（ＢｉｏＷｈｉｔｔａｋｅｒ，Ｗａｌｋｅｒｓｖｉｌｌｅ，ＭＤ）（以下、２９３培地と言う）にヒト腎細胞株２９３Ｔ／１７（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，Ｍａｎａｓｓｕｓ，ＶＡ）を保持した。一過性トランスフェクション後にモノクローナル抗体を発現及び精製するために、１０％低ＩｇＧ  ＦＢＳ（ＨｙＣｌｏｎｅ）、０．１ｍＭ  ＭＥＭ非必須アミノ酸及び２ｍＭ  Ｌ−グルタミンを添加したＤＭＥＭ（以下、低ＩｇＧ２９３培地と言う）で２９３Ｔ／１７細胞をインキュベートした。
【０２８８】
２９３Ｔ／１７細胞の一過性トランスフェクションはＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ  ２０００（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）を製造業者の推奨に従って使用して実施した。１回のトランスフェクション当たり細胞約２×１０７個をＴ−１７５フラスコで２９３培地５０ｍｌに播種し、コンフルエンスまで一晩増殖させた。翌日、軽鎖プラスミド３５μｇと重鎖プラスミド３５μｇをＨｙｂｒｉｄｏｍａ−ＳＦＭ（ＨＳＦＭ）（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ）３．７５ｍｌに加えた。別の試験管にＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ  ２０００試薬１７５μｌとＨＳＦＭ  ３．７５ｍｌを加え、５分間室温でインキュベートした。Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ  ２０００−ＨＳＦＭ混合物３．７５ｍｌをＤＮＡ−ＨＳＦＭ混合物３．７５ｍｌと静かに混合し、室温で２０分間インキュベートした。２９３Ｔ／１７細胞を覆っている培地を吸引し、ＩｇＧ  ２９３培地に交換した後、リポフェクタミン−ＤＮＡ複合体を細胞に滴下し、スワールにより静かに混合し、７．５％  ＣＯ２インキュベーターで７日間３７℃でインキュベートした後、上清を回収した。
【０２８９】
８Ｅ１．４、８Ｅ１．５及び８Ｅ１．６を産生する一過性トランスフェクタントを上記のように作製した。
【０２９０】
ヒト化８Ｅ１．４、８Ｅ１．５及び８Ｅ１．６抗体の発現をサンドイッチＥＬＩＳＡ法により測定した。ＡｆｆｉｎｉＰｕｒｅヤギ抗ヒトＩｇＧ  Ｆｃγ鎖特異的ポリクローナル抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｗｅｓｔ  Ｇｒｏｖｅ，ＰＡ）を０．２Ｍ炭酸ナトリウム−重炭酸ナトリウム緩衝液，ｐＨ９．４で１０００倍に希釈した希釈液１００μｌ／ウェルをＭａｘｉＳｏｒｐ  ＥＬＩＳＡプレート（Ｎｕｎｃ  Ｎａｌｇｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｒｏｃｈｅｓｔｅｒ，ＮＹ）に一晩４℃でコーティングし、洗浄用緩衝液（０．１％  Ｔｗｅｅｎ  ２０を添加したＰＢＳ）で洗浄し、ＴＢＳ中ＳｕｐｅｒＢｌｏｃｋ  Ｂｌｏｃｋｉｎｇ  Ｂｕｆｆｅｒ（Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ）３００μｌ／ウェルで１時間室温でブロックした。洗浄用緩衝液で洗浄後、８Ｅ１．４、８Ｅ１．５又は８Ｅ１．６を含むサンプルをＥＬＩＳＡ用緩衝液（１％ＢＳＡと０．１％  Ｔｗｅｅｎ  ２０を添加したＰＢＳ）で適宜希釈し、１００μｌ／ウェルをＥＬＩＳＡプレートに加えた。標準としてヒト化ＩｇＧ１／κ抗体ダクリズマブ（ＰＤＬ  ＢｉｏＰｈａｒｍａ，Ｉｎｃ．）を使用した。プレートを１時間室温でインキュベートし、洗浄用緩衝液で洗浄した後、ＨＲＰ標識ヤギ抗ヒトκ軽鎖特異的ポリクローナル抗体（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ，ＡＬ）の１０００倍希釈液１００μｌ／ウェルを使用して結合抗体を検出した。１時間室温でインキュベートし、洗浄用緩衝液で洗浄した後、ＡＢＴＳ  Ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ  Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ／Ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ  Ｂ（ＫＰＬ，Ｉｎｃ．，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ）１００μｌ／ウェルを加えて発色させた。７分間室温でインキュベートした後、２％蓚酸５０μｌ／ウェルを加えて発色を停止した。ＶｅｒｓａＭａｘマイクロプレートリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ，ＣＡ）を使用して４１５ｎｍで吸光度を読み取った。一過性トランスフェクトした２９３Ｔ／１７細胞から得られた培養上清を８Ｅ１．４、８Ｅ１．５及び８Ｅ１．６の産生についてＥＬＩＳＡ法により分析した。約３０〜５０μｇ／ｍｌの発現レベルが一般に観察された。陽性サンプルを下記のように精製した。
【０２９１】
実施例２．４．５：他のヒト化抗体の精製
枯渇後の培養上清から８Ｅ１．４、８Ｅ１．５及び８Ｅ１．６  ＩｇＧ１／κモノクローナル抗体をプロテインＡセファロースカラムで以下のように精製した。一過性トランスフェクションからの培養上清を遠心により回収し、滅菌濾過した。１／５０容量の１Ｍクエン酸ナトリウム，ｐＨ７．０を加えることにより、濾過上清のｐＨを調整した。２０ｍＭクエン酸ナトリウム，１５０ｍＭ  ＮａＣｌ，ｐＨ７．０で予め平衡化した１ｍｌ  ＨｉＴｒａｐ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａ  ＨＰカラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｂｉｏ−Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）に上清を流した。カラムを同一緩衝液で洗浄し、結合抗体を２０ｍＭクエン酸ナトリウム，ｐＨ３．５で溶出させた。１／５０容量の１．５Ｍクエン酸ナトリウム，ｐＨ６．５を加えることにより中和後、１５ｍｌ  Ａｍｉｃｏｎ  Ｕｌｔｒａ−１５遠心フィルター装置（３０，０００ダルトンＭＷＣＯ）（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｂｅｄｆｏｒｄ，ＭＡ）を使用して抗体プールフラクションを〜０．５〜１．０ｍｇ／ｍｌまで濃縮した。次にＨＴ  Ｔｕｆｆｒｙｎメンブラン付き０．２μｍ  Ａｃｒｏｄｉｓｃシリンジフィルター（Ｐａｌｌ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｅａｓｔ  Ｈｉｌｌｓ，ＮＹ）を使用してサンプルを濾過滅菌した。２８０ｎｍの吸光度を測定することにより精製抗体の濃度をＵＶ分光光度法により測定した（１ｍｇ／ｍｌ＝１．４Ａ２８０）。
【０２９２】
非還元条件下のＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析によると、抗体は分子量約１５０〜１６０ｋＤであることが分かった。還元条件下の分析によると、抗体は分子量約５０ｋＤの重鎖と分子量約２５ｋＤの軽鎖から構成されることが分かった。抗体の純度は９５％を上回ると思われた。
【０２９３】
実施例２．４．６：競合ＥＬＩＳＡ法を使用した他のヒト化抗体の特性決定
０．２Ｍ炭酸ナトリウム−重炭酸ナトリウム緩衝液，ｐＨ９．４中、１．０μｇ／ｍｌ  ヒトＩＬ−１２（１００μｌ／ウェル）をＭａｘｉＳｏｒｐ  ＥＬＩＳＡプレート（Ｎａｌｇｅ  Ｎｕｎｃ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ）に一晩４℃でコーティングし、洗浄用緩衝液（０．１％  Ｔｗｅｅｎ  ２０を添加したＰＢＳ）で洗浄し、ＴＢＳ中ＳｕｐｅｒＢｌｏｃｋ  Ｂｌｏｃｋｉｎｇ  Ｂｕｆｆｅｒ（Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ）３００μｌ／ウェルで１時間室温でブロックした。洗浄用緩衝液で洗浄後、ＥＬＩＳＡ用緩衝液１００μｌ／ウェル中のビオチン化８Ｅ１（０．８μｇ／ｍｌ終濃度）と競合抗体（８Ｅ１又は８Ｅ１．４又は８Ｅ１．５又は８Ｅ１．６）（１００μｇ／ｍｌ終濃度から出発して３倍系列希釈）の混合物を２本ずつ加えた。アイソタイプ対照として、ＥＬＩＳＡ用緩衝液中１００μｇ／ｍｌマウスＩｇＧ１／κ（ＭｕＦｄ７９）又はヒト化ＩｇＧ１／κ（ＨｕＦｄ７９）モノクローナル抗体１００μｌ／ウェルを使用した。非競合対照として、ＥＬＩＳＡ用緩衝液１００μｌ／ウェルを使用した。プレートを１時間室温でインキュベートし、洗浄用緩衝液で洗浄した後、ＥＬＩＳＡ用緩衝液中１μｇ／ｍｌ  ＨＲＰ標識ストレプトアトビジン（Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙ）１００μｌ／ウェルを使用して結合抗体を検出した。１時間室温でインキュベートし、洗浄用緩衝液で洗浄した後、ＡＢＴＳ  Ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ  Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ／Ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ  Ｂ（ＫＰＬ，Ｉｎｃ．）１００μｌ／ウェルを加えて発色させた。５分間室温でインキュベートした後、２％蓚酸５０μｌ／ウェルを加えて発色を停止した。４１５ｎｍで吸光度を読み取った。
【０２９４】
ヒトＩＬ−１２に対する８Ｅ１．４、８Ｅ１．５及び８Ｅ１．６の親和性を上記のように競合ＥＬＩＳＡ法により分析した。８Ｅ１と３種のヒト化抗体はいずれもビオチン化８Ｅ１と濃度依存的に競合した。表２３はコンピューターソフトウェアＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｉｎｃ．，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）を使用して得られた８Ｅ１、８Ｅ１．４、８Ｅ１．５及び８Ｅ１．６のＩＣ５０値を示す。
【０２９５】
【表２５】
0005396080.tif 000036
【０２９６】
実施例２．３に記載した方法を使用して抗体１Ａ６．１０、１Ａ６．１１、１Ａ６．１２、８Ｅ１．４及び８Ｅ１．５も作製した。夫々実施例２．２．２及び１．２．Ｃに記載したようにＣＯＳ細胞で抗体を発現させ、プロテインＡアフィニティークロマトグラフィーにより精製した。これらの精製ｍＡｂを実施例１．１．Ｂ及び１．１．Ｃ２に従ってＩＣ５０とＫＤについて特性決定した。表２４は１Ａ６．１０、１Ａ６．１１、１Ａ６．１２、８Ｅ１．４及び８Ｅ１．５の結合特性を示す。
【０２９７】
【表２６】
0005396080.tif 000037
【０２９８】
本発明は分子生物学分野で周知の技術全体を参照により組込む。これらの技術としては限定されないが、以下の刊行物に記載されている技術が挙げられる。
Ａｕｓｕｂｅｌ，Ｆ．Ｍ．ら編，Ｓｈｏｒｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  Ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（４ｔｈ  Ｅｄ．１９９９）Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，ＮＹ．（ＩＳＢＮ  ０−４７１−３２９３８−Ｘ）．
Ｌｕ  ａｎｄ  Ｗｅｉｎｅｒ編，Ｃｌｏｎｉｎｇ  ａｎｄ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｖｅｃｔｏｒｓ  ｆｏｒ  Ｇｅｎｅ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎ  Ａｎａｌｙｓｉｓ（２００１）ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  Ｐｒｅｓｓ．Ｗｅｓｔｂｏｒｏｕｇｈ，ＭＡ．２９８  ｐｐ．（ＩＳＢＮ  １−８８１２９９−２１−Ｘ）．
Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ  ａｎｄ  Ｄｕｂｅｌ編，Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ（２００１）Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ．Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ．７９０  ｐｐ．（ＩＳＢＮ  ３−５４０−４１３５４−５）．
Ｏｌｄ，Ｒ．Ｗ．＆  Ｓ．Ｂ．Ｐｒｉｍｒｏｓｅ，Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｇｅｎｅ  Ｍａｎｉｐｕｌａｔｉｏｎ：Ａｎ  Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  Ｔｏ  Ｇｅｎｅｔｉｃ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ（３ｄ  Ｅｄ．１９８５）Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｂｏｓｔｏｎ．Ｓｔｕｄｉｅｓ  ｉｎ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ；Ｖ．２：４０９  ｐｐ．（ＩＳＢＮ  ０−６３２−０１３１８−４）．
Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｊ．ら編，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（２ｄ  Ｅｄ．１９８９）Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ．Ｖｏｌｓ．１−３．（ＩＳＢＮ  ０−８７９６９−３０９−６）．
Ｗｉｎｎａｃｋｅｒ，Ｅ．Ｌ．Ｆｒｏｍ  Ｇｅｎｅｓ  Ｔｏ  Ｃｌｏｎｅｓ：Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  Ｔｏ  Ｇｅｎｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（１９８７）ＶＣＨ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，ＮＹ（Ｈｏｒｓｔ  Ｉｂｅｌｇａｕｆｔｓ訳）．６３４  ｐｐ．（ＩＳＢＮ  ０−８９５７３−６１４−４）。
【０２９９】
【表２７】
0005396080.tif 000038
0005396080.tif 000039
0005396080.tif 000040
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0005396080.tif 000042
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0005396080.tif 000045
0005396080.tif 000046
0005396080.tif 000047
【０３００】
以上、多数の態様と特徴について記載したが、当業者に自明の通り、本明細書の開示又は特許請求の範囲に記載する発明から逸脱せずに記載した態様及び特徴の変更及び変形が可能である。本明細書に引用する各刊行物は参照により本明細書に組込む。
【配列表】
0005396080000001.app