(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
酵母を主原料とし、粉乳、植物脂肪粉末、炭酸カルシウム、及びデンプンを含み、任意で麦芽デキストリン、乳糖、精白糖、及び矯味剤を含む酵母栄養食品において、
前記酵母栄養食品は、ビタミンＢ群及び微量元素を豊富に含む酵母をさらに含み、
前記酵母栄養食品は、以下の重量部で、
酵母  ５〜９７、
粉乳  １〜２０、
植物脂肪粉末  １〜５０、
炭酸カルシウム  ０．１〜５０、
デンプン  １〜５０、
麦芽デキストリン  ０〜５０、
乳糖  ０〜５０、
精白糖  ０〜７０、
葉酸  ０〜１、
ビタミンＢ１２  ０〜１、
ビタミンＢ１ ０．０００１〜１０、
ビタミンＢ２  ０．０００１〜１０、
ビタミンＡ  ０〜１０、
ビタミンＣ  ０〜２０、
セレン強化酵母  ０．０００１〜１０、
亜鉛強化酵母  １〜４０、
鉄強化酵母  ０〜１０、
クロム強化酵母  ０．０００１〜１０、
微晶セルロース  ０〜２０、及び、
矯味剤  ０〜２０を含む、酵母栄養食品。
【請求項２】
前記成分は、以下の重量部で、
精白糖  1〜７０、
葉酸  ０．００００１〜１、
ビタミンＢ１２  ０．００００１〜１、
ビタミンＡ  ０．０００１〜１０、
ビタミンＣ  ０．０００１〜２０、
鉄強化酵母  １〜１０、及び
微晶セルロース  １〜２０を含む、請求項１記載の酵母栄養食品。
【請求項３】
酵母を主原料とし、粉乳、植物脂肪粉末、炭酸カルシウム、及びデンプンを含み、任意で麦芽デキストリン、乳糖、精白糖、及び矯味剤を含む酵母栄養食品において、
前記酵母栄養食品は、ビタミンＢ群及び微量元素を豊富に含む酵母をさらに含み、
前記酵母栄養食品は、以下の重量部で、
酵母  ５〜９７、
粉乳  １〜２０、
植物脂肪粉末  １〜５０、
炭酸カルシウム  ０．１〜５０、
デンプン  １〜５０、
麦芽デキストリン  ０〜５０、
乳糖  ０〜５０、
精白糖  ０〜７０、
葉酸  ０〜１、
ビタミンＢ１２  ０〜１、
ビタミンＢ１ ０．０００１〜１０、
ビタミンＢ２  ０．０００１〜１０、
ビタミンＡ  ０〜１０、
ビタミンＣ  ０〜２０、
亜セレン酸ナトリウム  ０．０００１〜１０、
硫酸亜鉛、グルコン酸亜鉛、乳酸亜鉛、クエン酸亜鉛、アミノ酸キレート亜鉛またはそれらの任意の混合物  １〜４０、
グルコン酸第一鉄、アミノ酸キレート鉄、硫酸第一鉄、フマル酸第一鉄、乳酸第一鉄またはそれらの任意の混合物  ０〜１０、
クロム強化酵母  ０．０００１〜１０、
微晶セルロース  ０〜２０、及び、
矯味剤  ０〜２０を含み、前記矯味剤はクエン酸又はリンゴ酸である、酵母栄養食品。
【請求項４】
以下の重量部で、
脱水ネギスライス  １〜１０、
ココアパウダー  １〜２０、
果物・野菜粉末  １〜２０、
ゴマ  １〜５０、
ミルクティーパウダー  １〜２０、
豆乳パウダー  １〜２０、及び
燕麦片  １〜２０の一種または複数種をさらに含む、請求項１又は３に記載の酵母栄養食品。
【請求項５】
前記主原料である酵母は、酵母粉末または酵母スラリーである、請求項１又は３に記載の酵母栄養食品。
【請求項６】
請求項１又は３に記載の酵母栄養食品を製造する方法であって、
前記酵母と他の原料とを配合比に応じて混合するステップと、
加水攪拌して均一にするステップと、
噴霧乾燥及び包装して、粉末状の酵母栄養食品を得るステップと、
を含む、酵母栄養食品の製造方法。
【請求項７】
請求項１又は３に記載の酵母栄養食品を製造する方法であって、
前記酵母を加水攪拌して均一にするステップと、
ドラム式乾燥機を用いて乾燥温度を１８０℃に制御して乾燥するステップと、
乾燥後に収集してふるいを用いて篩過するステップと、
前記酵母以外の成分を加えて混合して均一にするステップと、
包装し、フレーク状の酵母栄養食品を得るステップと、
を含む、酵母栄養食品の製造方法。
【請求項８】
請求項１又は３に記載の酵母栄養食品を製造する方法であって、
前記酵母と他の原料とを配合比に応じて混合するステップと、
造粒、乾燥、打錠等の工程により錠剤を製造するステップと、
包装して錠剤の酵母栄養食品を得るステップと、
を含む、酵母栄養食品の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、酵母栄養食品及びその製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
酵母菌体は単細胞真核微生物であって、シイタケやキクラゲ等と同様に菌藻類食物に属し、タンパク質、ビタミン、炭水化物、脂肪、ミネラル、核酸等の多種の栄養成分を豊富に含んでいる。酵母菌には必須アミノ酸を含む１８種類のアミノ酸が含まれ、特に、穀物タンパク質中の含有量が比較的少ないリジンは酵母菌体中の含有量が比較的高い。また、酵母のアミノ酸比率は国際連合食糧農業機関（ＦＡＯ）が推奨する理想的なアミノ酸成分値に近いため、栄養価が高い。世界人口の急速な増加に伴って、食料不足が日増しに顕著になっており、とりわけタンパク質食品不足が顕著になっている。伝統的な動植物タンパク質食品の生産は農業技術及び各種環境因子の制限を受けるため、生産の増加は緩慢であり、人類のタンパク質消費の需要を満たすことは困難である。酵母という単細胞タンパク質源の出現により、新たなタンパク質獲得分野が開拓された。
【０００３】
また、酵母菌中にはビタミン、ミネラル及び多糖が豊富に含まれ、よりバランスのとれた栄養を人体に提供することができる。また、酵母中の脂肪の含有量は非常に低く、コレステロールを含まないため、低カロリー、高栄養の健康食品である。
【０００４】
酵母はこのように豊富な栄養を含んでいるため、酵母を用いて栄養健康食品を製造することが可能である。現在、従来技術において酵母を主原料とした栄養食品に含まれる原料は数種類にすぎず、酵母は酵母粉末のみが用いられ、また、製造プロセスも単一である。例えば、特許「栄養酵母食品及びその製造方法（特許文献１）」により開示される栄養酵母食品には、栄養酵母粉末、全脂粉乳、β−シクロデキストリン、甘味料、植物脂肪粉末及びその他の添加剤が含まれるにすぎず、当該食品の製造には錠剤の製造プロセスが用いられているにすぎない。従って、多種の栄養成分を含み、様々な剤形を有し、様々な人に食感が適合する酵母栄養食品を製造することに人々の関心が向けられている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】中国特許出願公開第２００５１００１５００５．２号明細書
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、酵母栄養食品の組成が限られていること、製造プロセスが単一であること等の従来の技術における課題を解決するための酵母栄養食品及びその製造方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明の一つの態様は、酵母を主原料とし、粉乳、麦芽デキストリン、乳糖、植物脂肪粉末、炭酸カルシウム、デンプン、精白糖及び矯味矯臭剤、香料を含む酵母栄養食品を提供し、前記酵母栄養食品は、ビタミンＢ群及び微量元素を豊富に含む酵母をさらに含み、前記成分は、以下の重量部で、
酵母  ５〜９７、
粉乳  １〜２０、
植物脂肪粉末  １〜５０、
炭酸カルシウム  ０．１〜５０、
デンプン  １〜５０、
麦芽デキストリン  ０〜５０、
乳糖  ０〜５０、
精白糖  ０〜７０、
葉酸  ０〜１、
ビタミンＢ１２  ０〜１、
ビタミンＢ１  ０〜１０、
ビタミンＢ２  ０〜１０、
ビタミンＡ  ０〜１０、
ビタミンＣ  ０〜２０、
セレン強化酵母  ０〜１０、
亜鉛強化酵母  ０〜４０、
鉄強化酵母  ０〜１０、
クロム強化酵母  ０〜１０、及び
微晶セルロース  ０〜２０を含むことを特徴とする。
【０００８】
本発明による酵母栄養食品であって、以下の重量部で、
精白糖  1〜７０、
葉酸  ０．００００１〜１、
ビタミンＢ１２  ０．００００１〜１、
ビタミンＢ１  ０．０００１〜１０、
ビタミンＢ２  ０．０００１〜１０、
ビタミンＡ  ０．０００１〜１０、
ビタミンＣ  ０．０００１〜２０、
セレン強化酵母  ０．０００１〜１０、
亜鉛強化酵母  1〜４０、
鉄強化酵母  1〜１０、
クロム強化酵母  ０．０００１〜１０、及び
微晶セルロース  １〜２０を含む。
【０００９】
本発明による酵母栄養食品であって、以下の重量部で、
脱水ネギスライス  １〜１０、
ココアパウダー  １〜２０、
果物・野菜粉末  １〜２０、
ゴマ  １〜５０、
ミルクティーパウダー  １〜２０、
豆乳パウダー  １〜２０、及び
燕麦片  １〜２０を含む。
【００１０】
本発明による酵母栄養食品において、主原料である酵母は酵母粉末または酵母ミルクでありうる。
【００１１】
本発明による酵母栄養食品は、さらに鉄強化酵母またはクロム強化酵母を含む。
【００１２】
本発明による酵母栄養食品であって、鉄強化酵母はグルコン酸第一鉄、アミノ酸キレート鉄、硫酸第一鉄、フマル酸第一鉄、乳酸第一鉄またはそれらの任意の混合物で置換可能であり、亜鉛強化酵母は硫酸亜鉛、グルコン酸亜鉛、乳酸亜鉛、クエン酸亜鉛、アミノ酸キレート亜鉛またはそれらの任意の混合物で置換可能であり、セレン強化酵母は亜セレン酸ナトリウムで置換可能であり、矯味矯臭剤はクエン酸、リンゴ酸である。
【００１３】
本発明の酵母栄養食品の具体的な実施の形態において、酵母栄養食品は、以下の重量部で、酵母  ５〜９７、粉乳  １〜２０、植物脂肪粉末  １〜５０、炭酸カルシウム  ０．１〜５０、デンプン  １〜５０、ビタミンＣ  ０．１〜０．３、精白糖  ２０〜７０、及び、ココアパウダー  １〜２０を含む。
【００１４】
本発明の酵母栄養食品の具体的な実施の形態において、酵母栄養食品は、以下の重量部で、酵母  ５〜９７、粉乳  １〜２０、植物脂肪粉末  １〜５０、炭酸カルシウム  ０．１〜５０、デンプン  １〜５０、及び、微晶セルロース  １〜２０を含む。
【００１５】
本発明の酵母栄養食品の具体的な実施の形態において、酵母栄養食品は、以下の重量部で、酵母  ５〜９５、粉乳  １〜２０、植物脂肪粉末  １〜５０、炭酸カルシウム  ０．１〜５０、デンプン  １〜５０、ゴマ  １〜２０、精白糖  １〜２０、及び、麦芽デキストリン  １０〜５０を含む。
【００１６】
本発明の酵母栄養食品の具体的な実施の形態において、酵母栄養食品は、以下の重量部で、酵母  ５〜９５、粉乳  １〜２０、植物脂肪粉末  １〜５０、炭酸カルシウム  ０．１〜５０、デンプン  １〜５０、精白糖  ２０〜７０、果物・野菜粉末  １〜２０、及び、矯味矯臭剤  １〜２０を含む。
【００１７】
本発明の酵母栄養食品の具体的な実施の形態において、酵母栄養食品は、以下の重量部で、酵母  ５〜９５、粉乳  １〜２０、植物脂肪粉末  １〜５０、炭酸カルシウム  ０．１〜５０、デンプン  1〜５０、及び、脱水ネギスライス  １〜１０を含む。
【００１８】
本発明の酵母栄養食品の具体的な実施の形態において、酵母栄養食品は以下の重量部で、酵母  ５〜９５、粉乳  １〜２０、植物脂肪粉末  １〜５０、炭酸カルシウム  ０．１〜５０、デンプン  1〜５０、葉酸  ０．０５〜０．１、ビタミンＢ１２  ０．０００２、ビタミンＡ  ０．１〜０．３、ビタミンＣ  ０．１〜０．３、及び、鉄強化酵母  １〜１０を含む。
【００１９】
本発明による酵母栄養食品において、ビタミンＢ群は、ビタミンＢ１、ビタミンＢ２、ビタミンＢ１２、パントテン酸、ニコチン酸からなる群から選ばれるいずれか一つである。
【００２０】
本発明の酵母栄養食品の具体的な実施の形態において、酵母栄養食品は、以下の重量部で、酵母  ５〜９５、粉乳  １〜２０、植物脂肪粉末  １〜５０、炭酸カルシウム  ０．１〜５０、デンプン  1〜５０、亜鉛強化酵母  １〜１０、セレン強化酵母  １〜１０、クロム強化酵母  １〜１０、及び、鉄強化酵母  １〜１０を含む。
【００２１】
本発明の酵母栄養食品の具体的な実施の形態において、酵母栄養食品は、以下の重量部で、酵母  ５〜９５、粉乳  １〜２０、植物脂肪粉末  １〜５０、炭酸カルシウム  ０．１〜５０、デンプン  １〜５０、ミルクティーパウダー、豆乳パウダー、及び、燕麦片  計６０を含む。
【００２２】
本発明による酵母栄養食品は、粉末状、フレーク状、錠剤のいずれの剤形にも適合する。
【００２３】
本発明の別の態様では、本発明による酵母栄養食品の製造方法を提供する。
【００２４】
本発明による酵母栄養食品を製造する方法は、酵母と他の原料とを配合比に応じて混合するステップと、加水攪拌して均一にするステップと、その後噴霧乾燥及び包装して、粉末状の酵母栄養食品を得るステップとを含む。
【００２５】
本発明による酵母栄養食品を製造する方法は、酵母を加水攪拌して均一にするステップと、その後ドラム式乾燥機を用いて乾燥温度を１８０℃に制御して乾燥するステップと、乾燥後に収集してふるいを用いて篩過するステップと、さらに前記他の補助原料を加え混合して均一にするステップと、最後に包装し、これによりフレーク状の酵母栄養食品を得るステップとを含む。
【００２６】
本発明による酵母栄養食品を製造する方法は、酵母と他の原料とを配合比に応じて混合するステップと、その後造粒、乾燥、打錠等の工程により錠剤を製造するステップと、最後に包装して錠剤の酵母栄養食品を得るステップとを含む。
【００２７】
従来技術と比較して、本発明の酵母栄養食品は、従来技術において既存の原料以外に、さらにビタミンＡ、ビタミンＢ群、ビタミンＣ、鉄強化酵母、亜鉛強化酵母、セレン強化酵母、クロム強化酵母等の多種の物質を含み、酵母食品の栄養性を向上させるとともに、多種の栄養物質に対する利用者のニーズを満たしている。また、本発明は多種のプロセスを用いて酵母栄養食品を製造しており、粉末状、フレーク状、錠剤等の様々な剤形の酵母栄養食品を得ることができ、様々な人々の服用に適合した食感の栄養食品を開発している。
【発明を実施するための形態】
【００２８】
以下、本発明の酵母栄養食品の具体的な実施例を列挙する。当業者にとって、列挙される具体的な実施例は本発明の範囲を制限するものではなく、例示を目的としたものに過ぎないことは自明である。
【００２９】
（実施例１）
本発明の実施例１において、酵母栄養食品は、以下の重量部で、酵母  ９０、粉乳  １８、植物脂肪粉末  ４５、炭酸カルシウム  ５．３、デンプン  ５０、セレン強化酵母  ２、亜鉛強化酵母  ２、クロム強化酵母  ２、葉酸  ０．１、ビタミンＢ１  ０．１、ビタミンＢ２  ０．１、ビタミンＢ１２  ０．００１、及び、鉄強化酵母  ２を含む。
【００３０】
（実施例２）
本発明の実施例２において、酵母栄養食品は、以下の重量部で、酵母  １０、粉乳  １０、植物脂肪粉末  １０、炭酸カルシウム  １０、デンプン  １７．６、セレン強化酵母  ８、亜鉛強化酵母  ８、クロム強化酵母  ８、鉄強化酵母  ８、ビタミンＢ１  ０．００２、ビタミンＢ２  ０．００２、ビタミンＢ１２  ０．００００５、精白糖  ２０、ココアパウダー  １０、及び、麦芽デキストリン  １０を含む。
【００３１】
（実施例３）
本発明の実施例３において、酵母栄養食品は、以下の重量部で、酵母  ５０、粉乳  ５、植物脂肪粉末  ２０、炭酸カルシウム  ４０、デンプン  ３０、セレン強化酵母  ５、亜鉛強化酵母  １０、クロム強化酵母  ５、葉酸  ０．０５、ビタミンＢ１  ５、ビタミンＢ２  ５、ビタミンＢ１２  ０．００１、及び、精白糖  ４．９５を含む。
【００３２】
本発明の酵母栄養食品は、粉末状、フレーク状、錠剤という様々な剤形を含むのに好適である。そのため、異なる剤形に対し、本発明の酵母栄養食品を製造する方法は以下の三種類を含みうる：
【００３３】
粉末状の酵母栄養食品を製造する方法であって、酵母と他の原料とを配合比に応じて混合するとともに加水攪拌して均一にするステップと、その後噴霧乾燥及び包装して、粉末状の酵母栄養食品を得るステップとを含む。
【００３４】
フレーク状の酵母栄養食品を製造する方法であって、酵母を加水攪拌して均一にするステップと、その後ドラム式乾燥機を用いて乾燥温度を１８０℃に制御して乾燥するステップと、乾燥後に収集してふるいを用いて篩過するステップと、さらに前記他の補助原料を加えて混合して均一にするステップと、最後に包装することにより、フレーク状の酵母栄養食品を得るステップとを含む。
【００３５】
錠剤の酵母栄養食品を製造する方法であって、酵母と他の原料とを配合比に応じて混合するステップと、その後造粒、乾燥、打錠等の工程により錠剤を製造するステップと、最後に包装して錠剤の酵母栄養食品を得るステップとを含む。錠剤の製造には、湿式法、ワンステップ造粒機による方法、または直接打錠法を用いることが可能である。
【００３６】
機能性試験により、本発明が顕著な免疫力増進機能を具備し、かつその作用は同類の製品と比較して向上していることが実証された。具体的な実験データは以下の通りである。
１材料及び方法
１．１  被験物：本願発明の実施例１、２、３の酵母栄養食品（以下、酵母栄養食品Ａ１、Ａ２、Ａ３と略称する）、及び発明特許「栄養酵母食品及びその製造方法（２００５１００１５００５．２）」による酵母栄養食品（以下、酵母栄養食品Ｂと略称する。配合は、栄養酵母粉末  １８ｇ、全脂粉乳  ４４ｇ、植物脂肪粉末  １５ｇ、ショ糖  ９ｇ、果糖  ７．５ｇ、β‐シクロデキストリン  ２ｇ、ココアパウダー  １．０５ｇ、コーヒーパウダー  ０．０５ｇ、ココアパウダー香料  ３．４ｇ）。成人推奨量は１０ｇ／ｄであり、成人の体重６０ｋｇで換算すると、０．１７ｇ／ｋｇ．ｂｗである。様々な所定濃度の溶液を調製して胃内に投与した。
【００３７】
１．２  被験動物：クリーンレベルＢＡＬＢ／ｃマウス、オス、２００匹、１８〜２２ｇ（湖北省実験動物研究センター）。
【００３８】
１．３  群分け及び投与：マウスを、通常対照群、酵母栄養食品Ａ１、Ａ２、Ａ３を与える群、酵母栄養食品Ｂを与える群、の５つの群に無作為に分けた。酵母栄養食品Ａ１〜Ａ３を与える３つの群及び酵母栄養食品Ｂを与える群には、人体摂取量の３０倍（５．０ｇ／ｋｇ．ｂｗ）で胃内投与し、胃内投与体積は０．２ｍｌ／１０ｇ．ｂｗとした。
【００３９】
１．４  主要機器及び試薬：直径５ｍｍのパンチャー、顕微鏡、微量血液凝固試験板、遠心分離機、酵素ラベルメーター、９６ウェル培養プレート、５％ＣＯ２インキュベーター、注射用インク、コンカナバリンＡ（ＣｏｎＡ）、ＭＴＴ、ＤＮＦＢ、生理食塩水、ニワトリ赤血球、Ｇｉｅｍｓａ染色液、ＹＡＣ−１細胞、Ｈａｎｋｓ液、ＰＲＭＩ１６４０完全培養液、乳酸リチウム、ヨードニトロテトラゾリウムクロリド（ＩＮＴ）、フェナジンメトサルフェート（ＰＭＳ）、ＮＡＤ、Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液。
【００４０】
１．５  実験方法
１．５．１  カーボンクリアランス試験及び臓器／体重比測定：実験の最後において、マウスの体重を測定した後に、体重に応じて希釈したインドインク（１００ｍｇ／ｋｇ）をマウスの尾静脈から注入し、インク注入の２分後、１０分後に、それぞれ内眼角静脈叢から２０μｌ採血し、即座に２ｍｌの０．１％  Ｎａ２ＣＯ３溶液中に加えた。Ｎａ２ＣＯ３溶液をブランクコントロールとし、７２１光学型分光計を用いて６００ｎｍにおける光学密度値（ＯＤ）を測定した。マウスを絶命させて解剖し、肝臓、脾臓及び胸腺を摘出して、ろ紙で血痕を吸収した後に重量を測定した。
【００４１】
１．５．２  遅発性過敏反応（ＤＴＨ）：マウスに連続３０日間胃内投与した後、各マウスの腹部の皮膚を脱毛剤を用いて約３ｃｍ×３ｃｍの範囲で脱毛処理し、その後ＤＮＦＢ溶液５０μｌを均一に塗布して感作した。５日後、再度ＤＮＦＢ溶液１０μｌをマウスの右耳両面に均一に塗布して刺激した。２４時間後、頸椎脱臼によりマウスを絶命させ、左右両耳を切除してパンチャーで直径５ｍｍの耳片を採取し、重量を測定した。
【００４２】
１．５．３  マウス腹腔マクロファージのニワトリ赤血球貪食実験（半体内法）：マウスに連続３０日間胃内投与した後、各マウスの腹腔に２％のニワトリ赤血球懸濁液１ｍｌを注射した。３０分後、頸椎脱臼によりマウスを絶命させ、プレート上に仰向けに固定し、腹壁の皮膚を正中切開し、腹腔から生理食塩水２ｍｌを注入し、マウスのプレートを１分間転動させ、その後腹腔洗浄液を１ｍｌ抽出し、２つのスライドガラスに平均に滴下し、湿らせたガーゼを敷いた琺瑯容器内に置いて、３７℃のインキュベーターで３０分間保温した。保温後、生理食塩水ですすいで、接合していない細胞を除去した。自然乾燥し、１：１のアセトン：メタノール溶液で２０分間固定し、４％（ｖ／ｖ）のＧｉｅｍｓａ−リン酸緩衝液で３分間染色し、さらに蒸留水ですすいで自然乾燥し、顕微鏡下でマクロファージをカウントした。
【００４３】
１．５．４  ＣｏｎＡ誘発マウス脾臓リンパ細胞転化実験及びマウスＮＫ細胞活性測定（乳酸脱水素酵素ＬＤＨ測定法）：マウスに連続３０日間胃内投与した後、頸椎脱臼によりマウスを絶命させ、無菌で脾臓を摘出し、適量の無菌Ｈａｎｋｓ液を入れたシャーレに置き、脾臓をピンセットで裂いて、２００メッシュのふるいで篩過し、単細胞懸濁液を得た。細胞懸濁液を２つに分け、それぞれＣｏｎＡ誘発マウス脾臓リンパ細胞転化実験及びマウスＮＫ細胞活性測定に用いた。
【００４４】
１．５．４．１  ＣｏｎＡ誘発マウス脾臓リンパ細胞転化実験：Ｈａｎｋｓ液を用いて細胞懸濁液を２回洗浄し、その都度１０分間遠心分離（１０００ｒ／分）し、その後細胞を１ｍｌの完全培養液中に懸濁させて、トリパンブルーで染色して生細胞数（９５％以上のもの）をカウントした。細胞の濃度は３×１０６個／ｍｌに調整した。各細胞懸濁液を２ウェルに分けて２４ウェル培養プレートに各ウェル１ｍｌずつ加え、一方のウェルには７５μｌのＣｏｎＡ液を加え、他方のウェルは対照とした。インキュベーター内に置いて７２時間インキュベートした。インキュベート終了の４時間前に、各ウェルから上清０．７ｍｌを除いて０．７ｍｌの血清を含まないＲＰＭＩ１６４０培養液を加え、同時にＭＴＴを５０μｌ／ウェル加えて、引き続き４時間インキュベートした。インキュベート終了後、各ウェルに１ｍｌの酸性イソプロピルアルコールを加え、均一に攪拌して溶解させた。その後、９６ウェル培養プレートに分けて入れ、各ウェルは３つの平行ウェルとし、酵素ラベルメーターを用いて５７０ｎｍの波長で光学密度値を測定した。
【００４５】
マウスＮＫ細胞活性測定（乳酸脱水素酵素ＬＤＨ測定法）：実験の２４時間前に標的細胞を継代培養し、適用前にＨａｎｋｓ液で３回洗浄し、ＰＲＭＩ１６４０完全培養液を用いて細胞の濃度を４×１０５個／ｍｌに調整した。Ｈａｎｋｓ液を用いて細胞懸濁液を２回洗浄し、その都度１０分間遠心分離（１０００ｒ／分）した。上清を捨てて細胞のスラリーを弾き、０．５ｍｌの滅菌水２０ｓを加え、細胞溶解後にさらに０．５ｍｌの２ｘＨａｎｋｓ液及び８ｍｌのＨａｎｋｓ液を加え、１０分間遠心分離（１０００ｒ／分）し、１ｍｌの完全培地で再懸濁し、１％氷酢酸で希釈した後にカウントし、トリパンブルーで染色して生細胞数（９５％以上のもの）をカウントした。細胞の濃度は２×１０７個／ｍｌに調整した。標的細胞とエフェクター細胞をそれぞれ１００μｌ取り（エフェクター：標的細胞の比率は５０：１）、９６ウェル培養プレートに加えた。標的細胞の自然ＬＤＨ放出ウェルに標的細胞及び培養液を各１００μｌ加え、標的細胞の最大ＬＤＨ放出ウェルに標的細胞１％及びＮＰ４０を各１００μｌ加えた。上記はそれぞれトリプリケートで行い、３７℃、５％  ＣＯ２インキュベーター中で４時間インキュベートし、その後培養プレートを５分間遠心分離（１５００ｒ／分）し、各ウェルから上清１００μｌを取って９６ウェル培養プレートに置き、同時にＬＤＨ基液１００μｌを加えて３分間反応させ、各ウェルに１ｍｏｌ／ＬのＨＣ  １３０μｌを加え、酵素ラベルメーターで４９０ｎｍにおける光学密度値（ＯＤ）を測定した。
【００４６】
結果
２．１  二種類の酵母栄養食品のマウスの臓器／体重比への影響について、結果は表１を参照。
【００４７】
表１  二種類の酵母栄養食品のマウスの臓器／体重比への影響（ｘｂａｒ±ｓ）
【００４８】
【表１】
0005433003.tif 000002
＊Ｐ＜０．０５（対照群と比較）
【００４９】
二種類の酵母栄養食品の脾臓／体重比は、対照群と比較するとＰ＞０．０５であり、有意な相違はなかった；胸腺／体重比は、対照群と比較するとＰ＜０．０５であり、有意に相違していた。
【００５０】
２．２  二種類の酵母栄養食品のマウスの細胞免疫機能（マウス脾臓リンパ細胞転化実験及びマウス遅発性過敏反応（ＤＴＨ））への影響について、表２を参照。
【００５１】
表２  二種類の酵母栄養食品のマウスの細胞免疫機能への影響（ｘｂａｒ±ｓ）
【００５２】
【表２】
0005433003.tif 000003
（１）Ｐ＜０．０１（対照群と比較）
（２）Ｐ＜０．０５（対照群と比較）
（３）Ｐ＜０．０５（酵母栄養食品Ａ１〜Ａ３群を酵母栄養食品Ｂグループ群と比較）
【００５３】
酵母栄養食品Ａ１〜Ａ３群のリンパ細胞増殖実験におけるＯＤ差分値は、対照群と比較するとＰ＜０．０１であり、有意に相違していた；耳腫脹の程度も、対照群と比較するとＰ＜０．０１で有意に相違しており、また、酵母栄養食品Ａ１〜Ａ３群を酵母栄養食品Ｂ群と比較するとＰ＜０．０５であり、有意に相違していた。
【００５４】
二種類の酵母栄養食品のマウスの単核‐マクロファージ機能（マウスカーボンクリアランス試験、マウス腹腔マクロファージのニワトリ赤血球貪食能力）への影響について、表３を参照。
【００５５】
表３  二種類の酵母栄養食品のマウスの単核‐マクロファージ機能への影響（ｘｂａｒ±ｓ）
【００５６】
【表３】
0005433003.tif 000004
【００５７】
（１）Ｐ＜０．０１（対照群と比較）
（２）Ｐ＜０．０５（対照群と比較）
（３）Ｐ＜０．０５（酵母栄養食品Ａ１〜Ａ３群を酵母栄養食品Ｂ群と比較）
【００５８】
酵母栄養食品Ａ１〜Ａ３群のマウスカーボンクリアランス試験における貪食指数は、対照群と比較するとＰ＜０．０１であり、極めて有意に相違していた；マウス腹腔マクロファージのニワトリ赤血球貪食の貪食率は、対照群と比較するとＰ＜０．０１であり、極めて有意に相違していた。また、酵母栄養食品Ａ１〜Ａ３群を酵母栄養食品Ｂ群と比較するとＰ＜０．０５であり、有意に相違していた。
【００５９】
二種類の酵母栄養食品のマウスのＮＫ細胞活性への影響について、表４を参照。
【００６０】
表４  二種類の酵母栄養食品のマウスのＮＫ細胞活性への影響（ｘｂａｒ ±ｓ）。
【００６１】
【表４】
0005433003.tif 000005
（１）Ｐ＜０．０１（対照群と比較）
（２）Ｐ＜０．０５（対照群と比較）
（３）Ｐ＜０．０１（酵母栄養食品Ａ１〜Ａ３群を酵母栄養食品Ｂ群と比較）
【００６２】
酵母栄養食品Ａ１〜Ａ３群のマウスのＮＫ細胞活性は、対照群と比較するとＰ＜０．０１であり、極めて有意に相違していた。また、酵母栄養食品Ａ１〜Ａ３群を酵母栄養食品Ｂ群と比較するとＰ＜０．０１であり、有意に相違していた。
【００６３】
結論
本実験では、マウスに本発明の酵母栄養食品（酵母栄養食品Ａ１〜Ａ３）及び発明特許「栄養酵母食品及びその製造方法（特許文献１）」による栄養酵母食品（酵母栄養食品Ｂ）を投与し、マウスの細胞免疫機能実験（マウス脾臓リンパ細胞転化実験及びマウス遅発性過敏反応（ＤＴＨ））、単核‐マクロファージ機能実験（マウスカーボンクリアランス試験、マウス腹腔マクロファージのニワトリ赤血球貪食能力）、ＮＫ細胞活性実験を行った。実験結果は、本発明の酵母栄養食品Ａ１〜Ａ３が、酵母栄養食品Ｂと比較して、マウスの各種免疫機能をより著しく向上させることを示した。
【００６４】
以上、特定の好適な実施の形態に基づいて本発明を説明したが、当業者にとって、添付の「特許請求の範囲」に規定される本発明の要旨及び範囲を逸脱しない範囲で、各種の変更及び改変を加えることが可能であることは自明である。