(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
エステラーゼ阻害剤を含有する剤形が、チオエステルを含有する剤形と組合せてヒトを除く動物に投与される、該チオエステルのバイオアベイラビリティーを増加させるための方法であって、チオエステルが、チオイソ酪酸Ｓ−（２−｛［１−（２−エチル−ブチル）−シクロヘキサンカルボニル］−アミノ｝−フェニル）エステルであり、エステラーゼ阻害剤が、１−（３−ヘキシル−４−オキソ−オキセタン−２−イル）トリデカン−２−イル２−ホルミル−アミノ−４−メチル−ペンタノエートである、方法。
【請求項２】
エステラーゼ阻害剤を含有する剤形が、チオエステルを含有する剤形と同時に投与される、請求項１記載の方法。
【請求項３】
エステラーゼ阻害剤を含有する剤形が、チオエステルを含有する剤形の投与前に投与される、請求項１記載の方法。
【請求項４】
エステラーゼ阻害剤を含有する剤形が、チオエステルを含有する剤形の投与の１〜６０分前に投与される、請求項３記載の方法。
【請求項５】
エステラーゼ阻害剤対チオエステルの重量比が、１：１００〜１：５である、請求項１記載の方法。
【請求項６】
チオエステルと、少なくとも一つのエステラーゼ阻害剤とを含む薬学的組成物であって、チオエステルが、チオイソ酪酸Ｓ−（２−｛［１−（２−エチル−ブチル）−シクロヘキサンカルボニル］−アミノ｝−フェニル）エステルであり、エステラーゼ阻害剤が、１−（３−ヘキシル−４−オキソ−オキセタン−２−イル）トリデカン−２−イル２−ホルミル−アミノ−４−メチル−ペンタノエートである、薬学的組成物。
【請求項７】
（ａ）チオエステル、（ｂ）少なくとも一つのエステラーゼ阻害剤及び（ｃ）一つ又は複数の薬学的に許容されうる担体を含む薬学的組成物であって、チオエステルが、チオイソ酪酸Ｓ−（２−｛［１−（２−エチル−ブチル）−シクロヘキサンカルボニル］−アミノ｝−フェニル）エステルであり、エステラーゼ阻害剤が、１−（３−ヘキシル−４−オキソ−オキセタン−２−イル）トリデカン−２−イル２−ホルミル−アミノ−４−メチル−ペンタノエートである、薬学的組成物。
【請求項８】
（ａ）少なくとも一つの投薬単位が、チオエステルを含み、（ｂ）少なくとも一つの他の投薬単位が、エステラーゼ阻害剤を含み、チオエステルが、チオイソ酪酸Ｓ−（２−｛［１−（２−エチル−ブチル）−シクロヘキサンカルボニル］−アミノ｝−フェニル）エステルであり、エステラーゼ阻害剤が、１−（３−ヘキシル−４−オキソ−オキセタン−２−イル）トリデカン−２−イル２−ホルミル−アミノ−４−メチル−ペンタノエートである、別々の投薬単位を含むパッケージ。
【請求項９】
（ａ）治療有効量の（ｉ）チオエステル、及び（ｉｉ）薬学的に許容されうる担体を含む第一の薬学的組成物、（ｂ）（ｉ）少なくとも一つのエステラーゼ阻害剤、及び（ｉｉ）薬学的に許容されうる担体を含む第二の薬学的組成物、（ｃ）処方情報、並びに（ｄ）容器を含むキットであって、該第一及び該第二の薬学的組成物が同一でも異なっていてもよく、該処方情報がチオエステルとエステラーゼ阻害剤との同時投与に関する患者への助言を含み、チオエステルが、チオイソ酪酸Ｓ−（２−｛［１−（２−エチル−ブチル）−シクロヘキサンカルボニル］−アミノ｝−フェニル）エステルであり、エステラーゼ阻害剤が、１−（３−ヘキシル−４−オキソ−オキセタン−２−イル）トリデカン−２−イル２−ホルミル−アミノ−４−メチル−ペンタノエートである、キット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、エステラーゼ阻害剤及びチオエステルの併用投与に関する。
【０００２】
第一の局面では、本発明は、チオエステルのバイオアベイラビリティーを増加させるための方法であって、エステラーゼ阻害剤を含有する剤形がチオエステルを含有する剤形と併用投与される方法を提供する。
【０００３】
エステラーゼ阻害剤を含有する剤形は、チオエステルを含有する剤形と同時に投与してもよいか、又はエステラーゼ阻害剤を含有する剤形の投与が好ましくはチオエステルを含有する剤形の投与の前である、例えばチオエステルの投与の１〜６０分、例えば１〜４０分、例えば１〜２０分前である、順序で投与してもよい。
【０００４】
「エステラーゼ」という用語は、水との化学反応においてエステルを酸及びアルコールに、例えばチオエステルを酸及びチオアルコールに分割する一群の酵素を意味する。エステラーゼ阻害剤の例には、ベンジル誘導体、例えば１−｛４−［オキソ（フェニル）アセチル］フェニル｝−２−フェニルエタン−１，２−ジオン（Wadkins et al., J. Med. Chem. 48:2906-2915 (2005)、又はトリフルオロメチル−ケトン、例えば３−（ドデシルスルホニル）−１，１，１−トリフルオロプロパン−２，２−ジオール（Wadkins et al., Molecular Pharmacology 71:713-723 (2007)、又はニトロフェニルエステル誘導体、例えば４−ベンジル−ピペリジン−１−カルボン酸４−ニトロフェニルエステル、又はスルホンアミド誘導体、例えば４−クロロ−Ｎ−（４−｛［（４−クロロフェニル）スルホニル］アミノ｝フェニル）ベンゼンスルホンアミド（Wadkins et al. Molecular Pharmacology 65(6):1336-1343 (2004)のようなヒトカルボキシルエステラーゼの阻害剤（Satoh et al., Chemico-Biological Interactions 162:195-211 (2006) が挙げられる。エステラーゼ阻害剤の他の例には、オルリスタット及びセチリスタットなどのリパーゼの阻害剤（Birari and Bhutani, Drug Disc. Today 12:379-389 (2007)）が挙げられる。オルリスタット（テトラヒドロリピスタチン、１−（３−ヘキシル−４−オキソ−オキセタン−２−イル）トリデカン−２−イル２−ホルミル−アミノ−４−メチル−ペンタノエート）は、カプセル剤形で市販されている。各カプセルは、活性成分であるオルリスタットを含有し、不活性成分である微結晶セルロース、デンプングリコール酸ナトリウム、ラウリル硫酸ナトリウム、ポビドン、及びタルクもまた含有する。
【０００５】
本発明は、また、好ましくは式Ｉで示されるチオエステル、又はインビボでＳ−［２−（［［１−（２−エチルブチル）シクロヘキシル］カルボニル］アミノ）フェニル］チオールを形成するプロドラッグと、少なくとも一つのエステラーゼ阻害剤とを含む組合せを提供する。
【０００６】
別の態様では、本発明は、（ａ）好ましくは式Ｉで示されるチオエステル、又はインビボでＳ−［２−（［［１−（２−エチルブチル）シクロヘキシル］カルボニル］アミノ）フェニル］チオールを形成するプロドラッグ、（ｂ）少なくとも一つのエステラーゼ阻害剤、及び（ｃ）一つ又は複数の薬学的に許容されうる担体を含む薬学的組成物を提供する。担体又は賦形剤は、他の成分と適合性であり、そのレシピエントに有害ではないという意味で許容可能でなければならない。
【０００７】
本発明は、さらに、（ａ）少なくとも一つの投薬単位が、好ましくは式（Ｉ）で示されるチオエステル、又はインビボでＳ−［２−（［［１−（２−エチルブチル）シクロヘキシル］カルボニル］アミノ）フェニル］チオールを形成するプロドラッグを含み、（ｂ）少なくとも一つの他の投薬単位が、エステラーゼ阻害剤を含む、別々の投薬単位を含むパッケージを提供する。「パッケージ」は、投薬単位の安定な保存に有用な任意のパッケージであると理解されている。パッケージは、例えば一般に錠剤のパッケージング及び保存のために使用されるガラス又はパラスチック（例えば高密度ポリエチレン）製容器であってもよい。別のパッケージング形式は、ブリスターパックである。ブリスターパックは、パッケージング工業において周知であり、薬学的単位剤形（例えば、錠剤、カプセル剤など）のパッケージングに広く使用されている。ブリスターパックは、一般に好ましくは透明のプラスチック材料のフィルムで覆われた比較的堅い材料のシートから成る。パッケージング工程の間にプラスチックフィルムに凹みが形成される。凹みは、充填される錠剤又はカプセル剤の大きさ及び形状を有する。次に、錠剤又はカプセル剤が凹みに配置され、比較的堅い材料のシートが、凹みが形成された方向と逆のプラスチックフィルムのフィルム面に対して密封される。結果として、錠剤又はカプセル剤は、プラスチックフィルムとシートとの間の凹みに密封される。好ましくは、シートの強度は、手で凹みに圧力を加えることによってブリスターパックから錠剤又はカプセル剤を取り出すことができる程度であり、その際、凹みの位置でシートに開口が形成される。次に、錠剤又はカプセル剤は、開口を通して取り出すことができる。
【０００８】
本発明は、追加的に、（ａ）治療有効量の（ｉ）好ましくは式Ｉで示されるチオエステル、又はインビボでＳ−［２−（［［１−（２−エチルブチル）シクロヘキシル］カルボニル］アミノ）フェニル］チオールを形成するプロドラッグ、及び（ｉｉ）薬学的に許容されうる担体を含む第一の薬学的組成物、（ｂ）（ｉ）少なくとも一つのエステラーゼ阻害剤、及び（ｉｉ）薬学的に許容されうる担体を含む第二の薬学的組成物、（ｃ）処方情報、並びに（ｄ）容器を含むキットを提供し、ここで、第一及び第二の薬学的組成物は、同一でも異なっていてもよく、処方情報は、好ましくは式Ｉで示されるチオエステル、又はインビボでＳ−［２−（［［１−（２−エチルブチル）シクロヘキシル］カルボニル］アミノ）フェニル］チオールを形成するプロドラッグとエステラーゼ阻害剤との同時投与に関する患者への助言を含む。
【０００９】
本発明は、追加的に、患者における心血管障害の治療又は予防のための方法であって、治療有効量の（ａ）好ましくは式Ｉで示されるチオエステル、又はインビボでＳ−［２−（［［１−（２−エチルブチル）シクロヘキシル］カルボニル］アミノ）フェニル］チオールを形成するプロドラッグ、及び（ｂ）少なくとも一つのエステラーゼ阻害剤の組合せで患者を処置することを含む方法を提供する。好ましくは、エステラーゼ阻害剤は、チオエステルを含有する剤形の投与前に投与される。
【００１０】
心血管障害には、非限定的に心血管疾患、冠動脈心疾患、冠動脈疾患、低αリポタンパク血症（低レベルのＨＤＬコレステロール）、高βリポタンパク血症（高レベルのＬＤＬコレステロール）、高コレステロール血症、高脂血症、及びアテローム性動脈硬化症が挙げられる。治療又は予防できる追加的な心血管障害には、非限定的に、高血圧、高トリグリセリド血症、高脂タンパク血症（hyperlipidoproteinemia）、末梢血管疾患、アンギナ、虚血、原発性高コレステロール血症（ホモ接合性及びヘテロ接合性の家族性及び非家族性）、混合型脂質異常症（フレデリクソンＩＩａ及びＩＩｂ型）、及び心筋梗塞が挙げられる。上記組合せで処置後に、患者における（例えば冠動脈、頸動脈、及び／又は末梢動脈系の）アテローム性プラークの進行は、好ましくは減速又は停止する。好ましくは、患者における（例えば冠動脈、頸動脈、及び／又は末梢動脈系の）アテローム性プラークは、処置後に退縮する。
【００１１】
チオエステルの例には、例えばEP 1020439A1に開示されたもの、例えば式Ｉ
【００１２】
【化１】
0005538423.tif 000002
［式中、
Ｒは、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、Ｃ２−Ｃ１０アルケニル、ハロＣ１−Ｃ４アルキル、Ｃ３−Ｃ１０シクロアルキル、Ｃ５−Ｃ８シクロアルケニル、Ｃ３−Ｃ１０シクロアルキルＣ１−Ｃ１０アルキル、アリール、アラルキル又は１〜３個の窒素、酸素若しくは硫黄原子を有する５若しくは６員複素環式基であり、
Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３及びＸ４は、独立して水素、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ４アルキル、ハロＣ１−Ｃ４アルキル、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ、シアノ、ニトロ、アシル又はアリールであり、
Ｙは、−ＣＯ−又は−ＳＯ２であり；そして
Ｚは、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、Ｃ３−Ｃ１０シクロアルキル又はＣ３−Ｃ１０シクロアルキルＣ１−Ｃ１０アルキルである］で示される化合物が挙げられる。
【００１３】
本発明の好ましい態様では、チオエステルは、チオイソ酪酸Ｓ−（２−｛［１−（２−エチル−ブチル）−シクロヘキサンカルボニル］−アミノ｝−フェニル）エステルである。
【００１４】
チオエステルは、カプセル製剤又は錠剤製剤を含めた任意の従来製剤に製剤化してもよい。チオエステル錠剤製剤の例は、国際公開公報第２００４／０８２５９３号に開示されており、表１に示される。
【００１５】
【表１】
0005538423.tif 000003
【００１６】
エステラーゼ阻害剤及びチオエステルの併用経口投与は、患者の消化管におけるチオエステルの安定性及びバイオアベイラビリティーの増加を提供し、それは、以下の試験結果により示される：
【００１７】
実施例１：チオイソ酪酸Ｓ−（２−｛［１−（２−エチル−ブチル）−シクロヘキサンカルボニル］−アミノ｝−フェニル）エステルの安定性
原液：
（ａ）ＦｅＳＳＩＦ（給餌状態の模擬腸液）及びリン酸緩衝食塩水：
【００１８】
【表２】
0005538423.tif 000004
【００１９】
（ｂ）原液Ａ＝薬物溶液（０．５mg/mL）：
５mgのチオイソ酪酸Ｓ−（２−｛［１−（２−エチル−ブチル）−シクロヘキサンカルボニル］−アミノ｝−フェニル）エステル（化合物Ａ）を、５０μLのエタノールに溶解させ、９５０μLの大豆レシチン／グリココール酸ナトリウム（１５８／９７mg/mL）水性混合ミセルを添加した。１部の混合物を９部のリン酸緩衝食塩水（ｐＨ６．５）で希釈した。
（ｃ）原液Ｂ＝エステラーゼ阻害剤溶液（１．０mg/mL）
５mgの１−（３−ヘキシル−４−オキソ−オキセタン−２−イル）トリデカン−２−イル２−ホルミル−アミノ−４−メチル−ペンタノエート（化合物Ｂ）を２５０μLのエタノールに溶解させた。４．７５mLの大豆レシチン／グリココール酸ナトリウム（３０／８０．６mg/mL）混合ミセルを添加して、１mg/mLの化合物Ｂの溶液を得た。
（ｄ）原液Ｃ＝リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）（ｐＨ６．５）中のリパーゼ（最終酵素活性約４５０U/mLの２４mg/mLで例を示す）
２４０mgのリパーゼ（ブタ膵臓由来リパーゼ、２０．６U/mgリパーゼ、CAS番号9001-62-1、Fluka、品番62300）をバイアルに秤量し、１０mLのリン酸緩衝食塩水（ｐＨ６．５）中で撹拌することにより溶解させた。不溶性物質があれば５０００rpmで５分間遠心分離することにより除去した。実験のために上清を使用し、それをＰＢＳで希釈して終濃度０．５５mg/mLのリパーゼを得た。
【００２０】
２００μLの１−（３−ヘキシル−４−オキソ−オキセタン−２−イル）トリデカン−２−イル２−ホルミル−アミノ−４−メチル−ペンタノエート溶液（原液Ｂ）を１．６mLのリパーゼ溶液（原液Ｃ）に注入した（原液Ｃから０．５５mg/mLの酵素終濃度を得た）。これに２００μLの薬物溶液（原液Ａ）を０時間に注入した。この混合物を約２rpmの回転式振盪機で静かに混合しながら３７℃でインキュベーションした。規則的な間隔で２００μLの試料を採取し、直ちに６００μLのイソプロパノールで希釈した。混合した溶液/懸濁物を３０００rpmで５分間遠心分離し、上清中の化合物Ａに加えてその潜在的分解産物の濃度をＨＰＬＣ分析により測定した。
【００２１】
０時間での値を得るために、６００μLのイソプロパノールを０．５５mg/mLのリパーゼのリン酸緩衝食塩水溶液１８０μLに添加して酵素を阻害し、続いて２０μLの薬物溶液（原液Ａ）を添加した。
【００２２】
【表３】
0005538423.tif 000005
０．５５mg/mL（１１U/mL）リパーゼを有する化合物Ａ（理論的濃度は５０μg/mL）及びジスルフィドの濃度（μg/mL）
【００２３】
実施例２：異なる実験手順の比較及びチオイソ酪酸Ｓ−（２−｛［１−（２−エチル−ブチル）−シクロヘキサンカルボニル］−アミノ｝−フェニル）  エステルの安定性に及ぼすリパーゼ阻害剤濃度の影響
手順Ａ（リパーゼ及び化合物Ｂの予備混合に続く化合物Ａの添加）：
１６００μLのリパーゼのリン酸緩衝食塩水溶液（原液Ｃから０．５５mg/mLの最終酵素濃度を得る）を２００μLの化合物Ｂ（原液Ｂ）と混合して、３７℃で５分間予備インキュベーションした。０時間に２００μLの薬物溶液（原液Ａ）を添加した。この混合物を３７℃でインキュベーションした。１０分後に１部の混合物を３部のイソプロパノールで希釈することによって反応を停止させた。
【００２４】
手順Ｂ（化合物Ｂ及び化合物Ａの予備混合に続くリパーゼの添加）：
１００μLの薬物溶液（原液Ａ）を０、１２、２５又は５０μＬのエステラーゼ阻害剤溶液（原液Ｂ）と混合し、１００、８８、７５又は５０μLのＦｅＳＳＩＦ濃縮物（レシチン３７．５mM及びタウロコール酸ナトリウム１５０mM）を添加し、化合物Ｂの濃度が０、１２、２５又は５０μg/mLの溶液２００μLに調整した。０時間に、８００μLのリパーゼのリン酸緩衝食塩水溶液（原液Ｃから０．５５mg/mLの最終酵素濃度を得る）を添加した。反応混合物を３７℃でインキュベーションし、１０分後に１部の反応混合物を３部のイソプロパノールで希釈することによって停止させた。
【００２５】
【表４】
0005538423.tif 000006
０．５５mg/mL（１１U/mL）のリパーゼを有する化合物Ａ（理論的濃度は５０μg/ml）の濃度（μg/mL）
【００２６】
手順Ｂ’（化合物Ｂ及び化合物Ａの予備混合に続くリパーゼの添加）：
化合物Ｂの終濃度が０、３、６、１２μg/mlである以外は手順Ｂに記載したように試験を繰り返した。
【００２７】
【表５】
0005538423.tif 000007
０．５５mg/mL（１１U/mL）のリパーゼと共に１０分間インキュベーション後の化合物Ａ（理論的濃度は５０μｌg/ml）の濃度（μg/mL）
【００２８】
手順Ｃ（化合物Ａ及びリパーゼの予備混合に続く化合物Ｂの添加）：
注：化合物Ｂの終濃度：３μg/ml
第１回実験：
２２０μLの薬物溶液（原液Ａ）及び２２０μLのＦｅＳＳＩＦ濃縮物（レシチン３７．５mM及びタウロコール酸ナトリウム１５０mM）を混合した。０時間に１７００μlのリパーゼのリン酸緩衝食塩水溶液（原液Ｃから０．５５μg/mLの最終酵素濃度を得る）の添加によって反応を開始した。混合物を３７℃でインキュベーションし、５分後にＨＰＬＣ分析用に２００μLの試料を採取した。次に、予めリン酸緩衝食塩水に１：１０希釈した６０μLの化合物Ｂ溶液（原液Ｂ）（１００μg/mLの化合物Ｂに対応）を添加し、時間の関数として２００μLの試料を採取し、６００μLのイソプロパノールで直ちに希釈し、３０００rpmで５分間遠心分離した。上清をＨＰＬＣにより分析した。
【００２９】
第２回実験（試薬の添加順序が異なる以外は実験１と同様）：
１７００μlのリパーゼのリン酸緩衝食塩水溶液（原液Ｃから０．５５μg/mLの最終酵素濃度を得る）を２２０μLのＦｅＳＳＩＦ濃縮物と混合し、０時間に２２０μLの薬物溶液（原液Ａ）を添加した。７分間のインキュベーション後に、２００μLの試料を採取し、６０μLの希釈された化合物Ｂ溶液（原液Ｂ）を添加し、第１回実験について記載したように続けた。
【００３０】
【表６】
0005538423.tif 000008
０．５５μg/mL（１１U/mL）のリパーゼと共にインキュベーション後の化合物Ａ（理論的濃度は５０μg/mL）及びジスルフィドの濃度（μg/mL）
【００３１】
これらの実験により、リパーゼ阻害剤である化合物Ｂが化合物Ａのリパーゼ誘導性加水分解を効率的に抑制することを実証することができよう。エステラーゼ阻害剤の存在は、化合物Ａの安定性を効果的に維持し、ジスルフィドの形成を阻害した。
【００３２】
実施例３：ヒト腸液中のチオイソ酪酸Ｓ−（２−｛［１−（２−エチル−ブチル）−シクロヘキサンカルボニル］−アミノ｝−フェニル）エステルの安定性に及ぼすリパーゼ阻害剤濃度の影響
手順Ｄ（溶液中の化合物Ａ及び化合物Ｂ）：
空腹時腸液：一晩絶食後に４人の異なる対象から経鼻空腸チューブで液を採集し、貯留した。
【００３３】
刺激された腸液：一晩絶食後に３人の異なる対象から経鼻空腸チューブで液を採集し、貯留した。刺激のために、採集開始の２０分前に志願者にチューインガムを与え、１５分間咬むように求め、その間、約２分毎にガムを取替ることで味を維持した。
【００３４】
原液
（ａ）原液Ｄ＝薬物溶液（５mg/mL）：
５mgのチオイソ酪酸Ｓ−（２−｛［１−（２−エチル−ブチル）−シクロヘキサンカルボニル］−アミノ｝−フェニル）エステル（化合物Ａ）を５０μLのエタノールに溶解させ、９５０μLの大豆レシチン／グリココール酸ナトリウム（１５８／９７mg/mL）の水性混合ミセルを添加した。
（ｂ）原液Ｅ＝エステラーゼ阻害剤溶液（０．３mg/mL）
３mgの１−（３−ヘキシル−４−オキソ−オキセタン−２−イル）トリデカン−２−イル２−ホルミル−アミノ−４−メチル−ペンタノエート（化合物Ｂ）を１mLのエタノールに溶解させた。この溶液１００μLを９００μLのＦｅＳＳＩＦ濃縮物（１０×）で希釈した。
（ｃ）原液Ｆ＝化合物Ａ及び化合物Ｂの予備混合物（それぞれ５００及び３０μg/mL）
１００μLの薬物溶液（原液Ｄ）を１００μLのエステラーゼ阻害剤溶液（原液Ｅ）と混合し、８００μLのｐｒｏ−ＦａＳＳＩＦを添加した。
（ｄ）原液Ｇ＝化合物Ａ及び化合物Ｂの予備混合物（それぞれ５００及び１０μg/mL）
１００μLの予備混合物（原液Ｆ）を２００μLの薬物溶液（原液Ａ）と混合した。
（ｅ）原液Ｈ＝化合物Ａ及び化合物Ｂの予備混合物（それぞれ５００及び２０μg/mL）
２００μLの予備混合物（原液Ｆ）を１００μLの薬物溶液（原液Ａ）と混合した。
【００３５】
３１５μLの腸液（空腹時及び刺激後）を３７℃で約５分間予備加熱した。０時間に、３５μLの予備混合物溶液、すなわち原液Ａ、原液Ｇ、原液Ｈ又は原液Ｆのいずれかを添加し、５０μg/mLの化合物Ａ及び終濃度０、１、２又は３μg/mLの化合物Ｂを得た。試料を静かに撹拌しながら３７℃でインキュベーションした。１部の反応混合物を３部のイソプロパノールで希釈することにより、反応を２分後又は１０分後に停止させ、結果として生じた混合物を５０００rpmで５分間遠心分離した。上清をＨＰＬＣにより分析した。
【００３６】
【表７】
0005538423.tif 000009
空腹の対象から得られた腸液中の化合物Ａ（理論的濃度は５０μg/mL）及びジスルフィドの濃度（μg/mL）
【００３７】
【表８】
0005538423.tif 000010
刺激後の対象から得られた腸液中の化合物Ａ（理論的濃度は５０μg/mL）及びジスルフィドの濃度（μg/mL）
【００３８】
上記実験により、化合物Ｂの存在は、腸液に溶解した化合物Ａを加水分解に対して安定化し、ジスルフィドの形成を減少させることが明らかである。
【００３９】
実施例４：ヒト腸液中のチオイソ酪酸Ｓ−（２−｛［１−（２−エチル−ブチル）−シクロヘキサンカルボニル］−アミノ｝−フェニル）エステルの安定性に及ぼすリパーゼ阻害剤濃度の影響
手順Ｅ（懸濁物中の化合物Ａ及び化合物Ｂ、過剰の化合物を遠心分離により分離）：
原液Ｊ＝化合物Ｂ懸濁物（２mg/mL）
バイアル中で２mgのリパーゼ阻害剤１−（３−ヘキシル−４−オキソ−オキセタン−２−イル）トリデカン−２−イル２−ホルミル−アミノ−４−メチル−ペンタノエート（化合物Ｂ）を含有する市販のオルリスタット製剤（Xenical（登録商標）)４mgに１００μLのＦｅＳＳＩＦ濃縮物及び９００μLのｐｒｏ−ＦｅＳＳＩＦ（ｐＨ６．５）を添加し、１５分間静かに撹拌することによってその製剤を分散させ、微細均一懸濁物を得た。
【００４０】
１mLガラスバイアル中で１mgの化合物Ａに５００μLの解凍したばかりの腸液（空腹時及び刺激後状態）を添加し、続いて直ちに０、１０又は２０μLのいずれかの化合物Ｂ懸濁物（０、４０又は８０μg/mLの化合物Ｂに対応）（原液Ｊ）を添加した。化合物Ｂの量は、化合物Ａに対して０、２％又は４％の化合物Ｂであった。その混合物を静かに撹拌しながら３７℃でインキュベーションした。時間の関数として９０μLの試料を取り出し、１３０００rpm（約１２０００×ｇ）で５分間遠心分離した。５０μLの上清を１５０μLのイソプロパノールで希釈し、５０００rpmで５分間遠心分離し、透明な上清をＨＰＬＣにより分析した。
【００４１】
【表９】
0005538423.tif 000011
化合物Ｂを有さない空腹時及び刺激後のヒト腸液（ＨＩＦ）中の化合物Ａ（チオエステル）、チオフェノール及びジスルフィドの濃度（μg/mL）
【００４２】
【表１０】
0005538423.tif 000012
４０μg/mLの化合物Ｂを有する空腹時及び刺激後のヒト腸液（ＨＩＦ）中の化合物Ａ（チオエステル）、チオフェノール及びジスルフィドの濃度（μg/mL）
【００４３】
【表１１】
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８０μg/mLの化合物Ｂを有する空腹時及び刺激後のヒト腸液（ＨＩＦ）中の化合物Ａ（チオエステル）、チオフェノール及びジスルフィドの濃度（μg/mL）
【００４４】
上記実験により、懸濁物の形態の化合物Ｂの添加は、腸液中に過剰に存在するチオエステルを加水分解から、そして続いて形成したチオールの酸化から安定化することが示される。
【００４５】
実施例５：ヒト腸液中のチオイソ酪酸Ｓ−（２−｛［１−（２−エチル−ブチル）−シクロヘキサンカルボニル］−アミノ｝−フェニル）エステルの安定性に及ぼすリパーゼ阻害剤濃度の影響
手順Ｆ（懸濁物中の化合物Ａ及び化合物Ｂ、過剰の化合物を分離せずに直ちに分解を停止させる）：
原液Ｋ＝化合物Ｂ懸濁物（０．５mg/mL）
１部の化合物Ｂ懸濁物（原液Ｊ）を３部のＦｅＳＳＩＦ（ｐＨ６．５）溶液で希釈。
【００４６】
１mLガラスバイアル中で1．２mgの化合物Ａに５００μLの解凍したばかりの腸液（空腹時及び刺激後状態）を添加した。懸濁された化合物を３７℃で１５分間撹拌し、水和性で均一な懸濁物を得た。並行して、異なる濃度の化合物Ｂ懸濁物２０μLを有する４個のガラスバイアルを調製した。これらの濃度は、ＦｅＳＳＩＦ（ｐＨ６．５）及び化合物Ｂ懸濁物（原液Ｋ）を異なる比率、それぞれ１：０、１：３、１：１、０：１で混合して、化合物Ａに対して０、１、２及び４％を得ることによって得られた。０時間に、３７℃で予備インキュベーションした１００μLの化合物Ａ懸濁物を２０μLの化合物Ｂ懸濁物に添加した。その混合物を静かに撹拌しながら３７℃でインキュベーションした。１５分及び６０分後に、５０μLの試料を１５０μLのイソプロパノールと混合することによって反応を停止させ、５０００rpmで５分間遠心分離した。加水分解産物及びその酸化型について透明な上清をＨＰＬＣにより分析した。
【００４７】
【表１２】
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チオエステル濃度に対して０、１、２及び４％に対応する０、２０、４０及び８０μg/mLの化合物Ｂを有する空腹時ヒト腸液（ＨＩＦ）中の化合物Ａ、チオフェノール及びジスルフィドの濃度（μg/mL）
【００４８】
【表１３】
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チオエステル濃度に対して０、１、２及び４％に対応する０、２０、４０及び８０μg/mLの化合物Ｂを有する刺激後ヒト腸液（ＨＩＦ）中の化合物Ａ、チオフェノール及びジスルフィドの濃度（μg/mL）
【００４９】
これらの実験により、エステラーゼ阻害剤である化合物Ｂが、化合物Ａの消化管酵素誘導性加水分解を効率的に抑制することを実証することができよう。