(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
キチンおよびＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析により決定した約２１８、１８４、１３８、１２９、７１、６６、５５、５１、４３、３０、２５、１７ｋＤａの分子量を持つタンパク質を含む有機マトリックスと結合して存在する、Ｃｈｅｒａｘ属の十脚甲殻類から得られた安定な非結晶質炭酸カルシウム（ＡＣＣ）を含み、固体の剤形、液体懸濁液またはゲルの形態である、骨粗鬆症、損傷後の骨修復、骨軟化症、低カルシウム血症およびその他の骨の病気から成る群から選択される病気の治療に使用するための経口投与可能な組成物。
【請求項２】
安定なＡＣＣが、ＡＣＣを示す１５００ｃｍ−１を中心とする幅広い吸収域と８７０ｃｍ−１のピーク、およびキチンを示す１６５０ｃｍ−１のピークを持つとしてＦＴＩＲ分析により特徴付けられる、請求項１に記載の経口投与可能な組成物。
【請求項３】
安定なＡＣＣが、ＡＣＣを示す２θ＝約３０°と２θ＝約４５°を中心とする幅広いピーク、およびキチンを示す２θ＝約１９°のピークを示し、本質的に結晶質炭酸カルシウムを示す信号を含まないＸ線回折パターンにより特徴付けられる、請求項１に記載の経口投与可能な組成物。
【請求項４】
十脚甲殻類がＣｈｅｒａｘ  ｑｕａｄｒｉｃａｒｉｎａｔｕｓである、請求項１に記載の経口投与可能な組成物。
【請求項５】
ＡＣＣがＣ．  ｑｕａｄｒｉｃａｒｉｎａｔｕｓの胃石から得られたものである、請求項４に記載の経口投与可能な組成物。
【請求項６】
固体の剤形が錠剤、カプセル、散剤、顆粒剤、トローチ剤および芳香剤から成る群から選択される、請求項１に記載の経口投与可能な組成物。
【請求項７】
ザリガニから胃石を採取し、その胃石を粉砕して粉末にし、その粉末を経口投与剤形に製剤化する段階を含む、請求項１に記載の安定な非結晶質炭酸カルシウムを含む経口投与可能な組成物の調製方法。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
カルシウムは人体内において最も量の多いミネラルであり、全体重の1.5%以上を占める。最近の研究により、現代の食事には必要とされるカルシウム量の3分の1程度しか含まれていないことが示された。食品添加物市場は大規模かつ急成長しており、カルシウム添加剤はその内の重要な部分を占める。主として骨粗鬆症の予防薬であるカルシウム補給剤は通常、地球上の堆積物由来またはサンゴや貝殻（カルシウム含有量が低い有機カルシウム塩も含む）のような海産物由来の炭酸カルシウムを使用して製造される。サンゴおよび貝殻原料は共に結晶質である。胃酸生産が低下していると、これらの結晶型の炭酸カルシウムからのカルシウムの生物学的利用能が低い（特に中高年層において）ことがいくつかの栄養学的研究において報告されている。そのため食品添加物や治療用組成物の製造に用いる代わりのカルシウム原料が必要とされている。
【０００２】
この目的を達成するために、結晶質炭酸カルシウムミネラル（例えば、方解石や霰石）より溶解性の高い非結晶質炭酸カルシウム(ACC)が、従来の配合物に用いられている結晶質炭酸カルシウムよりカルシウム消費の点で好ましい代替物となると思われた。
【０００３】
しかしながら、そのような堆積物が天然に稀なことから考えて、非結晶質堆積物（例えばACC）の工業規模の製造および/または精製には問題があり、その原因の一部は、それら非結晶質の特有の不安定さおよびその結果として、より安定な結晶性ミネラルへと自発的に変換することを防ぐために特殊な化合物が必要であることであろう。
【０００４】
ある甲殻類において（例えばザリガニ（Cherax quadricarinatus、他のザリガニ種）、および他の十脚甲殻類）、ACCは、外骨格を硬化させるために使用される主なミネラルであり、キチン画分とタンパク質から予め形成された有機マトリックス中に沈積することが確立されている。ザリガニのライフサイクルでは、定期的に脱皮し、脱皮の間非結晶質ミネラルは外骨格から再吸収され、専用の組織である胃石に集められ、一時的に蓄えられる。脱皮の後に、胃石は酸消化により胃で速やかに溶解し、溶解したミネラルは再利用され、新たな外骨格に再度沈積する。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
したがって、本発明は、主として、安定ACC含有の経口投与可能な組成物に関する。ここで「安定」という用語は、非結晶質炭酸カルシウムが有機物と結合して存在していることを示すために使用されており、その有機物の役割は、当該非結晶質の状態の炭酸カルシウムを結晶型へと実質的に変換させずに長い期間（例えば、数ヶ月から数年）維持することである。ここで使用されている用語「経口投与可能な組成物」は、その範囲内において栄養補助食品（フードサプリメント）と同様に医薬および栄養補給の組成物を含む。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明の１つの実施形態において、組成物中に存在する安定ACCは、共にACCを示す1500cm-1を中心とする幅広い吸収域と870cm-1のピーク、そしてキチンを示す1650cm-1のピークを持つFTIRスペクトルを示す。一般的に、本発明の組成物において使用されている安定ACCから得られるFTIRスペクトルは図２に示しているものと類似である。
【０００７】
別の実施形態において、組成物中に存在する安定ACCは、ACCを示す2θ=約30°と2θ=約45°を中心とする幅広いピークおよびキチンを示す2θ=約19°のピークを示すX線回折パターンを示し、当該パターンは実質的に結晶質炭酸カルシウムを示す信号を含まない。本明細書において、「実質的に結晶質炭酸カルシウムを示す信号を含まない」という用語は、そのような信号が検出されたならば、それは全炭酸カルシウム含有量の５% (w/w)以下の量で存在する結晶質炭酸カルシウムによるものであるということを意味する。しかしながら、一般的に、結晶質炭酸カルシウム含有量は１%以下であり、好ましくは結晶質の炭酸カルシウムは存在しない。
【０００８】
一般的に、本発明の組成物において使用されている安定ACCから得られるX線回折スペクトルは図１に示してあるものと類似である。
【０００９】
本発明の経口投与可能な組成物は、ACCと結合した有機マトリックス内に見られるタンパク質の点からも特徴づけられる。好ましい実施形態の１つにおいて、ACCと結合している有機マトリックスは、キチンと、SDS-PAGE分析により決定した約218、184、138、129、71、66、55、51、43、30、25、17kDaの分子量を持つタンパク質を含む。一般的に安定ACCは図５に示しているものと類似のSDS-PAGE電気泳動像を持つことにより特徴づけられる。
【００１０】
本発明の特に好ましい実施形態の1つにおいて、前述の経口投与可能な組成物はザリガニ類を含む十脚甲殻類（特にCherax属の甲殻類）から得られる石灰化物質を含む。特に好ましい実施形態において、石灰化物質はザリガニC. quadricarinatus.から得られる。前述の石灰化物質の最も好ましい解剖学的原料は胃石である。あるいは石灰化物質は甲殻類の外骨格、好ましくは脱皮後の捨てられた外骨格から得られる(脱皮殻)。甲殻類由来の石灰化物質はそれらを必要とする人や動物患者に投与するのに適切な物理的形態で本発明の組成物内に存在し得る。１つの実施形態において、胃石もしくは外骨格物質は採取された物理的形態の当該物質を洗浄することにより非常に簡便に調製することができる（例えば、そのままの胃石、またはその大きな断片）。しかし、より一般的には石灰化物質は胃石や外骨格の破片を粉末に粉砕することにより調製される。
【００１１】
好ましくは、本発明の経口投与可能な組成物は固体の剤形として調製される。例えば、粉砕した胃石もしくは外骨格由来の粉末の場合、カプセルに充てんするために使用され得るか、または錠剤へと圧縮その他の方法で成形され得る。その他の適切な固体の剤形には散剤、顆粒剤、分包剤(sachet)、トローチ剤、芳香剤(pastille)が含まれる。さらに前述の固体の剤形のいくつかの場合にはACCおよび結合した有機マトリックスがバルク原料（少量の無機成分も含む）を構成するが、当該剤形は通常当技術分野において周知の１つもしくはそれ以上の賦形剤をさらに含む。賦形剤の例には希釈剤（例えば、微結晶セルロース、アルファ化デンプン）、結合剤（例えば、カルボポール、ポビドン、キサンタンガム）、充填剤（例えば、乳糖）、滑沢剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、ステアリルフマル酸ナトリウム）、流動促進剤(glidant)（例えば、タルク、コロイド状二酸化ケイ素）、および崩壊剤（例えば、アルギン酸、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルデンプン、クロスカルメロースナトリウム、デンプングリコール酸ナトリウム）が含まれる（これに限られない）。ある状況下において安定ACCの有機マトリックスが内在性結合剤としても機能するということも留意されたい。
【００１２】
当技術分野において周知なように、錠剤またはカプレットの形態の固体剤形は、例えば打錠機を用いた直接圧縮を含めて様々な異なる方法で製造される。直接圧縮に代わる方法として、活性成分および賦形剤を乾式混合により混ぜ合わさ、乾式造粒した後に打錠成型してもよい。別の代替法は、活性成分と共に賦形剤の少なくともいくらかを混ぜ、さらに造粒液の存在下で混合する湿式造粒を利用することである。様々な粉末を凝集させた後、その凝集体（すなわち顆粒）をふるい分け（スクリーニング）もしくはミル粉砕により大きさで分類し、乾燥する。
【００１３】
カプセル（例えば、軟ゼラチンカプセル）に充填するための固体製剤混合物は、該カプセルに充填する前に、乾式混合または湿式もしくは乾式造粒により調製することができる。
【００１４】
好ましい実施形態において、石灰化物質はまた経口投与可能な液体懸濁液またはゲルの形態で調製することもできる。液体懸濁液の場合、製剤は、活性成分（例えば、ACCおよびその結合した有機マトリックス成分）に加えて、乳化剤（例えば、カルボマー、セチルアルコール、ゼラチン）、溶剤（例えば、水、植物油、グリセリン）、着香剤（例えば、バニリン、フルーツ酸、メントール）、甘味料（例えば、スクロース、フルクトース、アスパルテーム、サッカリン）、そして緩衝液を含む様々な他の液体もしくは固体の賦形剤も含み得る（これに限られない）。
【００１５】
本発明において使用するのが適切な固体、液体そしてゲルの剤形の調製法に関する更なる情報は、例えばRemington’s Pharmaceutical Science (Martin E W [1995], Mack Publishing Company, 19th ed.)のような標準的な薬学文献から得ることができる。
【００１６】
上に開示し、そして以下により詳細に記載する安定非結晶質炭酸カルシウムを含む経口投与可能な組成物は、普段の食材において人または動物患者によって摂取される食物カルシウム量を増加させるために食品添加剤もしくは（栄養）補助食品として使用され得る。他の実施形態において、本発明の組成物は正常以下の血液、組織もしくは骨のカルシウムレベルに関連し、あるいは、カルシウムの投与によって改善され得る病状の管理に治療的にも使用され得る。そのような症状には骨粗鬆症、損傷後の骨修復、骨軟化症、低カルシウム血症が含まれる（これに限られない）。
【００１７】
もう１つの側面において、本発明はザリガニの胃石採取を最適化する方法にも関し、当該方法は：
a) 所定範囲内の重さのザリガニを選別する；
b) デジタルX線画像分析を使用して胃石の成長をモニター（観測）する；
c) 任意に、生理学的および内分泌学的に胃石形成を誘発する；
d) 胃石幅の甲皮長さに対する比である脱皮石化指数(MMI)をそれぞれのザリガニに対して計算する；そして
e) 甲殻類の脱皮が近づいていること（約２日）、そして胃石のカルシウム含有量が最大限に達していることを示す所定値よりも大きいMMIを持つザリガニを選別して採取する
の段階から成る。
【００１８】
上記の胃石形成誘導の任意段階は例えば、X臓器洞腺複合体を操作することおよび/またはエクジステロイドのレベルを制御することといったような当技術分野において周知の様々な手法からなり得る。
【００１９】
C. quadricarinatusの場合、(a)段階における所定重量範囲は25〜80 g、所定MMI値は0.1である。
【００２０】
上記で定義したザリガニの胃石採取を最適化する方法のその他の実施形態において、当該方法は：
a) 所定範囲内の重さのザリガニを選別する；
b) デジタルX線イメージングを使用して胃石の成長を観測する；
c) 任意に、生理学的および内分泌学的手段により胃石形成を誘発する；
d) 段階(b)において得られた生のX線画像からバックグラウンド補正されたデジタル画像を入手し、それらから最適な胃石に成長するまでの日数を予測する；
e) 段階(d)において予測された時間に基づいて、胃石の成長段階にしたがい、ザリガニを分類する；そして
f) 最適に成長した胃石を持つとして段階(e)において分類されたザリガニを選別し、採取する
の段階から成る。
【００２１】
また、もう１つの側面において、本発明は安定非結晶質炭酸カルシウムを含む経口投与可能な組成物を調製するための方法にも関し、当該方法はザリガニから胃石を採取し、その胃石を粉砕して粉末とし、そしてその粉末を使用して経口投与剤形に調製する段階を含む。本発明のこの側面の好ましい実施形態の１つにおいて、胃石採取段階は上記のようにデジタルX線分析を用いて行われる。
【００２２】
さらに本発明は、カルシウムの補給を必要とする患者に対して経口でのカルシウム摂取を補う方法を含み、当該方法は甲殻類由来もしくは代わりに合成的に生産された安定ACCを、他の場合には準安定であるミネラルを安定化させる特定のマトリックス成分と共に含む組成物の経口投与を含む。そのような補給は予防法の一部として効果があり得る（例えば、骨粗鬆症や類似の病気の発病の予防のため）。
【００２３】
本発明は骨粗鬆症、損傷後の骨修復、骨軟化症、低カルシウム血症およびその他の骨の病気から成る群から選択される病気の治療法も提供し、当該方法は安定ACCを含む組成物の経口投与を含む。
【００２４】
上記の全てと、本発明のその他の特徴と利点は以下の好ましい実施形態の具体的な非限定例、および添付図面からさらに理解されよう。
【実施例】
【００２５】
以下の実施例は、本発明をより詳しく説明、記載するために挙げるものである。しかし、本発明はこれらの実施例に記載されている特定の実施形態に限定されない。
【００２６】
実施例 1：  ザリガニの胃石の化学分析
脱皮時期の近くに、胃石が最大の大きさに達したとき、動物（ザリガニ種 Cherax quadricarinatus）を解剖し、胃石を採取する。それから胃石を水で洗浄し、空気乾燥し、さらに使用するまで冷蔵庫に保管した。それから10 gの洗浄および乾燥したザリガニの胃石を総合化学分析のために調製した。
【００２７】
化学分析は下記の方法を使用して行った。分析は誘導結合プラズマ(ICP)炎光光度法と紫外分光法を使用して行った。含水量は200℃まで熱することにより測定した。炭酸塩は、900℃まで熱したときの二酸化炭素の放出による試料の重量損失から測定した。化学分析の結果を次の表に示す。
【表１】
0005614916.tif 000002
【００２８】
実施例 ２：  ザリガニの胃石のさらなる分析
ザリガニ（C. quadricarinatus; 実施例１に記載したように調製）の胃石と外皮の組成物を、銅Kα線 (λ=1.54Å)を用いたPhilips 1050/70の粉末X線回折装置を使用してさらに特長付けた。代表的な分析結果を図１に示す。４つの別個の回折パターンを一対の軸上に示す。上の３本の線は上から下に順に脱皮間、脱皮前、そして脱皮後に採取された外皮試料に対応している。一番下の線は胃石試料に対応している。これらの回折パターンの最も顕著な特徴は結晶質炭酸カルシウムに帰属する信号がないことである。2θ=約30°と2θ=約45°にある幅広いピークはACC由来であり、一方、2θ=19°にあるピークはキチン由来である。
【００２９】
FTIR分析はBruker equinox 55装置を用いて行った。外皮および胃石物質のFTIR分析の結果を図２に示す。一番上から一番下までの４つの線は次の試料に対応する。外皮（脱皮前）、外皮（脱皮）、胃石（石化）、そして胃石（脱灰）。スペクトル中に見られるピークは試料中の主要なミネラル種がACCであることを示す（1500cm-1を中心とする幅広い吸収域と870cm-1のピーク）。他のピークのほとんどは例えばキチンや様々なマトリックスタンパク質のような他の細胞外マトリックス成分の存在によるものである。
【００３０】
図５はザリガニの胃石の細胞外マトリックスのタンパク質プロフィールを表す（クマシー・ブルー[CB]およびステインオール[SA]で染色した）SDS-PAGEゲルを示している。電気泳動法は["Gel electrophoresis essential data" D. patel, John Wiley, & Sons 1994] に準じて行った。有機マトリックスはタンパク質の混合物を含んでいることが分かる。銀染色法により視覚化された最も顕著なバンドは約218、184、138、129、71、66、55、51、43、30、25および17kDaの分子量を有する。
【００３１】
実施例 ３：  ザリガニからの安定ACCの採取
（胃石の形態における）有機マトリックスに結合した安定ACCは図６に示す手順により、ザリガニの胃石および/または外骨格から採取される。
【００３２】
本発明者の研究室によって開発された、海草マトリックスを用いるザリガニ生育方法 [Parnes, S. & Sagi, A. (2002) Aquacult. Eng. 26: 251-262] を使用し、30〜40 gの重さのザリガニを格付け装置(grading device)もしくは大きさ調節トラップ(size adjusted trap)を用いて分類選別する。強化条件下において、ザリガニは成育期間の始まりから50〜70日の間にこれらの大きさに達しはじめる[Manor, R. et al. (2002) Aquacult. Eng. 26: 263-276]。大きさによる選別の後、デジタルX線イメージング(DXI) (70 kV、7 mA/0.05 sec)および本発明者により開発された脱皮石化指数（MMI、下記参照）を使用してザリガニの胃石の成長をモニターする。採取手順に従い、閾値の30〜40 gに達した個々のザリガニをX線イメージングにより分類し、脱皮が近づいている動物を示す値である0.1より大きいMMIを持つ動物を選ぶ。この方法は脱皮するザリガニにおいて、自然なACC生産の最大の能力を選択するため、同時に天然胃石およびソフトシェル産物（軟殻）の最大の収量が可能になる。
【００３３】
図３は異なる脱皮段階でのザリガニのX線画像を表し、矢印により成長している胃石が示されている。0〜11日は脱皮前段階および胃石の成長を表している。脱皮は11日と12日の間に起こる。12〜17日は脱皮後段階および胃石の分解を表している。
【００３４】
脱皮石化指数(MMI)の計算：
本発明者の研究室で開発されたMMIは歯科用X線装置（Instrumentarium Imaging、モード：Focus DC）を使用した胃石の視覚化とデジタX線センサー（Schick Technologies）を用いた評価に基づいている。胃石幅は画面の枠の上に置いた目盛り付き金属グリッド(62 mm)を用いて計算する。長さの較正はCDRソフトウェアー（Schick Technologies）を使用して行う。甲皮長さはキャリパーを使用して測定し、それからMMIを胃石幅と甲皮長さの比として計算する。
【００３５】
本方法の生理学的精度は次の方法により決定した。エタノール消毒後に第３尾節から100μlの血液リンパを採取することにより、血液リンパにおける循環20‐ヒドロキシエクジソン（脱皮ホルモン）を測定した。0.65×32 mmの針を使用して出血させ、300μlのメタノールを含むチューブに血液を集めた。ラジオイノムアッセイ(RIA)を行ってエクジソンレベルを評価した。このホルモン判定の結果およびMMIとの相関関係を、脱皮周期の間にわたって図４にグラフとして示す。この図において、計算されたMMI値は黒い四角の点で表されており、一方、循環20‐ヒドロキシエクジソンレベルは黒丸で表されている。
【００３６】
DXIに基づいた胃石採取に関する自動意思決定のためのコンピューター化された方法：
胃石採取時期に関する決定は、上記のように（すなわち、手動でMMIを導くことにより）行うことができるが、代わりの方法として本発明者によって開発されたコンピュータープログラムを使用することがある。このプログラムは、成長胃石のデジタルX線画像処理を実行すること、およびいつ脱皮が起こるのかを自動で決定することが可能である。現行様式において、ソフトウェア・パッケージはMatlabの作業環境のもとで作動するように設計されている。
【００３７】
図７に示してあるように、プログラムは２つのユーザーパラメーターの入力を必要とする。すなわち、デジタルX線画像の名称、および動物の大きさの単位（例えば、mmの甲皮長さ、もしくは動物の重さ）である。初めにプログラムは強度積分と指数対比補正に基づいた数学的分析を使用し、デジタル画像を分析する。それから、正規化に基づく様々な数学的手法、非線形関数、を使用して胃石が小さい、もしくは存在しない、中程度または大きいかどうかを決定する。
【００３８】
胃石の大きさを計算し、またいつ脱皮が起こるのかを規定する数学的モデルを設計する前に、胃石がどのように見えるかのモデルが必要であった。画像の強度積分により、必要とされる解決法が得られた。この手法において、高強度領域である高吸収領域（白）は単一の値に組み込まれるのに対し、低強度領域である低吸収領域（灰〜黒）はバックグラウンドと見なされ、捨てられた。ソフトウェア・パッケージに組み込まれた本数学的モデルは胃石の発達段階を明瞭に特定することができる。
【００３９】
デジタル画像分析の後、どの程度の胃石発達段階までザリガニが成長したのかについて決定される。この目的のために、その段階は３段階に分割される：段階１、胃石無し、もしくは非常に小さく微々たる胃石；段階２、中程度の大きさの胃石（さらに２〜７日間の成長の可能性）；そして段階３、最大の大きさに達した、もしくはほぼ達した胃石であり、脱皮までせいぜい３日。最大精度を達成するために、生のデータを正規化した非線形関数に基づく異なる数学的手法を用いて、異なる段階の間の積分強度差を増加させ、また、同じ段階における積分強度差を減少させた。この方法を使用することにより、段階１と段階２または３の間を見分けることが可能になった。必要な場合は、その後、段階２または段階３を決定した。
【００４０】
実施例 4：  活性成分として安定ACCを含む錠剤の調製‐錠剤製剤 no. 1
胃石は上記実施例３に記載されたX線イメージング手法により同定する。脱皮時期に近づき、胃石が最大の大きさに達したとき、その動物を解剖し、胃石を採取する。それから胃石を水で洗浄し、空気乾燥し、さらに使用するまで冷蔵庫で保管する。
【００４１】
保管した胃石を粉砕し、篩い分けする。次に50〜100メッシュ、または100〜500メッシュの顆粒を秤量し、賦形剤を用いることなく3メールトンもしくは4メートルトンの圧力で作動するカーバー研究所の錠剤圧縮機(Model C, Fred S, Carver Inc)を使用して1 gまたは1.5 gの顆粒を含む錠剤を形成する。
【００４２】
実施例 5：  活性成分として安定ACCを含む錠剤の調製‐錠剤製剤 no. 2
実施例４に記載したようにして錠剤を調製するが、崩壊剤としてカルボキシルメチルデンプン、またはカルボキシメチルセルロースの一方を加える。1.0 gの粉砕ACC(100〜500メッシュ)を4〜6重量パーセントの最終濃度で選択された崩壊剤と混合し、続いて上記実施例４に記載したようにして圧縮する。再蒸留水に崩壊剤含有錠剤を沈めると、錠剤は直ちに崩壊した。
【００４３】
実施例 6：  活性成分として安定ACCを含むカプセルの調製
空の硬ゼラチンカプセルもしくはCAPSUGEL Quality（登録商標）提供の藻類由来セルロースカプセルを使用して手作業によるカプセル作成法でカプセルを調製する。0.6 gの100〜500メッシュもしくは0.65 gの50〜100メッシュの粒度サイズの粉砕胃石粉末をそれぞれのカプセルに含ませる。
【００４４】
実施例 7：  栄養補助食品として使用する安定ACCの調製
胃石を水で洗浄し、空気乾燥し、粉砕し、篩い分けする。＞500メッシュの顆粒を天然ヨーグルトおよび/または類似または高粘度の他の消化性食品に加える。
【００４５】
説明のために本発明の具体的な実施例について記載して来たが、実際には本発明はその思想から外れることなく、また特許請求の範囲を超えることなく、当業者により多くの修正、変形および適応がされ、実施されると理解される。
【図面の簡単な説明】
【００４６】
【図１】図１は様々な脱皮段階で採取したザリガニの胃石および外皮のX線回折分析の結果を示す。
【図２】図２はザリガニの胃石（石化および脱灰の両方）および外皮（脱皮および脱皮前）の試料のFTIRスペクトルを示す。
【図３】図３は異なる脱皮段階におけるザリガニの胃石の大きさを表すデジタルX線画像である。
【図４】図４は脱皮周期における胃石を採取するための最適な時期を決定する脱皮石化指数(MMI)の使用の正当性を確認する手段としてのMMIとエクジソン血中濃度を比較したグラフである。
【図５】図５はザリガニの胃石の細胞外マトリックスのタンパク質プロフィールを示すSDS-PAGEゲルの写真である。左側に示されるレーン(CB)はクマシー・ブルーで染色されており、それに対し、右側のレーン(SA)はステインオール(Stains all)色素で染色されている。
【図６】図６は本発明のザリガニの胃石採取方法の概略を示す。
【図７】図７はデジタルX線イメージング(DXI)に基づき、胃石採取に関して自動的に意思決定するための本発明の方法の様々な段階を図式的に示す。
【図１】
0005614916.tif 000003
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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