(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ビタミンＤ３と、リュウキュウヤナギ（Ｓｏｌａｎｕｍ  ｇｌａｕｃｏｐｈｙｌｌｕｍ）の葉及び／又はその抽出物とを含む、魚類用又は甲殻類用飼料組成物。
【請求項２】
前記ビタミンＤ３を、４０．０μｇ／ｋｇ〜２５０．０μｇ／ｋｇ（１，６００〜１０，０００ＩＵ／ｋｇ）含む、請求項１に記載の魚類用飼料。
【請求項３】
前記リュウキュウヤナギ（Ｓｏｌａｎｕｍ  ｇｌａｕｃｏｐｈｙｌｌｕｍ）の葉又はその抽出物を、活性型ビタミンＤ３濃度換算値で２μｇ／ｋｇ〜１００μｇ／ｋｇ含む、請求項１又は２に記載の魚類用飼料組成物。
【請求項４】
前記リュウキュウヤナギ（Ｓｏｌａｎｕｍ  ｇｌａｕｃｏｐｈｙｌｌｕｍ）の葉又はその抽出物を、活性型ビタミンＤ３濃度換算値で３μｇ／ｋｇ〜７０μｇ／ｋｇ含む、請求項３に記載の魚類用飼料組成物。
【請求項５】
前記ビタミンＤ３を、１００．０μｇ／ｋｇ〜２５０．０μｇ／ｋｇ（４，０００〜１０，０００ＩＵ／ｋｇ）含む、請求項１〜４の何れか１項に記載の魚類用飼料組成物。
【請求項６】
魚粉を、４０質量％未満、１０質量％以上含む、請求項１〜５の何れか１項に記載の魚類用飼料組成物。
【請求項７】
カルシウム及びリンを、それぞれ０．５質量％〜５．０質量％含む、請求項１〜６の何れか１項に記載の魚類用飼料組成物。
【請求項８】
動物性及び／又は植物性の油脂、又は油脂以外の原料に由来する油を、２．０質量％〜４０．０質量％の範囲で含む、請求項１〜７の何れか１項に記載の魚類用飼料組成物。
【請求項９】
生体中のカルシウム及びリンの蓄積を促すための、請求項１〜８の何れか１項に記載の魚類用飼料組成物。
【請求項１０】
成長を増進するための、請求項１〜９の何れか１項に記載の魚類用飼料組成物。
【請求項１１】
前記魚類が、サケ属（Ｏｎｃｏｒｈｙｎｃｈｕｓ）、イワナ属（Ｓａｌｖｅｌｉｎｕｓ）、ウナギ属（Ａｎｇｕｉｌｌａ）、コイ属（Ｃｙｐｒｉｎｕｓ）、アユ属（Ｐｌｅｃｏｇｌｏｓｓｕｓ）、マダイ属（Ｐａｇｒｕｓ）、スズキ属（Ｌａｔｅｏｌａｂｒａｘ）、マハタ属（Ｅｐｉｎｅｐｈｅｌｕｓ）、ブリ属（Ｓｅｒｉｏｌａ）、トラフグ属（Ｔａｋｉｆｕｇｕ）、ヒラメ属（Ｐａｒａｌｉｃｈｔｈｙｓ）、又はマツカワ属（Ｖｅｒａｓｐｅｒ）の魚である、請求項１〜１０に記載の魚類用飼料組成物。
【請求項１２】
前記ビタミンＤ３を、６２．５μｇ／ｋｇ〜２５０．０μｇ／ｋｇ（２，５００〜１０，０００ＩＵ／ｋｇ）含む、請求項１に記載の甲殻類用飼料組成物。
【請求項１３】
前記リュウキュウヤナギ（Ｓｏｌａｎｕｍ  ｇｌａｕｃｏｐｈｙｌｌｕｍ）の葉又はその抽出物を、活性型ビタミンＤ３濃度換算値で０．０１μｇ／ｋｇ〜１００μｇ／ｋｇ含む、請求項１又は１２に記載の甲殻類用飼料組成物。
【請求項１４】
前記リュウキュウヤナギ（Ｓｏｌａｎｕｍ  ｇｌａｕｃｏｐｈｙｌｌｕｍ）の葉又はその抽出物を、活性型ビタミンＤ３濃度換算値で０．１μｇ／ｋｇ〜１０μｇ／ｋｇ含む、請求項１３に記載の甲殻類用飼料組成物。
【請求項１５】
前記ビタミンＤ３を、１２５μｇ／ｋｇ〜２２５μｇ／ｋｇ（５，０００〜９，０００ＩＵ／ｋｇ）含む、請求項１及び１２〜１４の何れか１項に記載の甲殻類用飼料組成物。
【請求項１６】
カルシウムおよびリンを、それぞれ０．５質量％〜５．０質量％含む、請求項１及び１２〜１５の何れか１項に記載の甲殻類用飼料組成物。
【請求項１７】
動物性及び／又は植物性の油脂、又は油脂以外の原料に由来する油を、２．０質量％〜４０．０質量％含む、請求項１及び１２〜１６の何れか１項に記載の甲殻類用飼料組成物。
【請求項１８】
生体中のカルシウム及びリンの蓄積を促すための、請求項１及び１２〜１７の何れか１項に記載の甲殻類用飼料組成物。
【請求項１９】
殻の硬度を高めるための、請求項１及び１２〜１８の何れか１項に記載の甲殻類用飼料組成物。
【請求項２０】
前記甲殻類がクルマエビ科（Ｐｅｎａｅｉｄａｅ）の甲殻類である、請求項１及び１２〜１９に記載の甲殻類用飼料。
【請求項２１】
ビタミンＤ３と、リュウキュウヤナギ（Ｓｏｌａｎｕｍ  ｇｌａｕｃｏｐｈｙｌｌｕｍ）の葉及び／又はその抽出物とを供与する、魚類又は甲殻類の飼育方法。
【請求項２２】
請求項１〜８の何れか１項に記載の飼料組成物又はそれを含む飼料を給与する、魚類の飼育方法。
【請求項２３】
請求項１２〜１７の何れか１項に記載の飼料組成物又はそれを含む飼料を給与する、甲殻類の飼育方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、魚類又は甲殻類に用いる飼料組成物、及び魚類又は甲殻類の飼育方法に関し、より具体的には、ビタミンＤ３と共にリュウキュウヤナギの葉又はその抽出物を配合した魚類又は甲殻類用飼料組成物、並びにそのような成分を含む飼料を給与して、生体へのカルシウム及びリンの蓄積を促し、魚類の成長を増進する又は甲殻類の殻の硬度を高める飼育方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
わが国において養殖対象となる魚類は、蛋白質の要求が高く、水産物養殖用飼料の多くは動物質性蛋白原料、特に魚粉を多く含む。しかし、日本では、魚粉の多くが南米で漁獲されるアンチョビー、アジ、米国やロシアで漁獲されるタラ、カレイ等に由来し、輸入品に依存している。
近年、世界的に魚粉の需要が増大している一方で、魚粉の生産量はエルニーニョや漁獲制限等により生産が不安定な状態にある。このため、魚粉の価格は高騰した状態が続いており、今後もこの傾向が続くものと予想されている。このような現状の中、国内の魚類の養殖業者を中心に、生産コストの低い経済性の高い飼料が強く要求されている。
【０００３】
このような要求に対して、近年、魚粉よりも安価な大豆油粕やコーングルテンミール等の植物質性蛋白原料で魚粉を代替する「魚粉削減飼料」の開発が試みられている。しかしながら、魚粉配合率を低減すると、魚の成長が悪化し、同様の成長を達成するためにより長い飼育期間と、より多くの飼料を必要とする（非特許文献１）。このため、必ずしも生産コストの引き下げに寄与できていないのが現状である。
【０００４】
また、甲殻類の養殖に対しては更に別の要求が存在する。例えば、クルマエビは、活きた状態で市場に流通させることで商品価値を高めることが一般的に行われている。市場では、クルマエビの大きさは勿論であるが、クルマエビの活きの良さや色調等によってクルマエビの価格が左右される。
【０００５】
クルマエビの活きの良さを表す指標の１つとしては、殻の硬さがあり、殻の硬いクルマエビほど、「活きが良い」と評価され、市場価値が高い。このため、クルマエビ等の甲殻類の養殖業者には、殻がより硬い甲殻類を育成可能な飼料に対する要求がある。
【０００６】
従来、魚類や甲殻類の発育向上を目的として、ビタミンＤ３（コレカルシフェロール）を含有する飼料が用いられている。ビタミンＤ３の発育向上に好適な添加量については、例えば、サケ科の魚では、Ｎ．Ｒ．Ｃ飼養標準で、ビタミンＤ３を２，４００ＩＵ／ｋｇ添加することが推奨されている（非特許文献２）。他の魚種に関しては、例えば、Ｎｅｗ，Ｍ．Ｂ．の報告で、スズキ（Ｓｅａ  ｂａｓｓ）、マダイ（Ｓｅａ  ｂｒｅａｍ）、ハタ（Ｇｒｏｕｐｅｒ）、ブリ（Ｙｅｌｌｏｗｔａｉｌ）などの海水魚用の飼料であっても、ニジマスとほぼ同じ量のビタミンＤ（２，５００ＩＵ／ｋｇ）を添加することが推奨されている（非特許文献３）。また、高松の報告で、アユ又はコイ用の飼料で２，０００ＩＵ／ｋｇ、ウナギ用の飼料で３，０００ＩＵ／ｋｇと、ニジマスとほぼ近似したビタミンＤの添加量が推奨されている（非特許文献４）。
【０００７】
また、一定量を超えるビタミンＤ３を添加した場合に、更なる成長改善の効果を期待出来ず、成長が低下することもあることが報告されている。
例えば、ニジマスに、ビタミンＤ３を１，６００ＩＵ／ｋｇ又は２，４００ＩＵ／ｋｇ添加した飼料を給与した場合、両者に増重量に関し差異が無かったことが報告されている（非特許文献５）。
また、ニジマスに、ビタミンＤ３を４，０００、１０．４万又は１００．４万ＩＵ／ｋｇ添加した飼料を給与した場合、いずれの添加量でも成長に差が認められないことが報告されている（非特許文献６）。
また、ニジマスに、ビタミンＤ３を２，５００、２５万又は２５０万ＩＵ／ｋｇ添加した飼料を給与した場合、ビタミンＤ３を２５万ＩＵ／ｋｇ以上添加した場合にニジマスの成長が低下し、生体中のカルシウム及びリンの含有量には変化が無かったことが報告されている（非特許文献７）
このような背景から、魚類に関しては、対象となる魚種に応じて、１，６００〜３，０００ＩＵ／ｋｇ（４０．０〜７５．０μｇ／ｋｇ）程度のビタミンＤ３を含む飼料が一般的に用いられている。
【０００８】
甲殻類に関しては、例えば、中南米や東南アジア等で養殖されているバナメイエビ（Ｐｅｎａｅｕｓ  ｖａｎｎａｍｅｉ）に０．２ｍｇ／ｋｇ（８，０００ＩＵ／ｋｇ）添加した飼料を給与する事により、ビタミンＤ３欠乏飼料よりも成長が改善されることが報告されている（非特許文献８）。
また、東南アジア等で養殖されているブラックタイガー（Ｐｅｎａｅｕｓ  ｍｏｎｏｄｏｎ）に、ビタミンＤ３を添加した飼料を給与する事によって成長が改善されたことが報告されている（非特許文献９）。但し、この報告では０．１〜０．２ｍｇ／ｋｇ（４，０００〜８，０００ＩＵ／ｋｇ）のビタミンＤ３の添加で増重率の増加が認められたものの、０．３ｍｇ／ｋｇ（１２，０００ＩＵ／ｋｇ）以上添加すると、むしろ増重率が低下することが示されている。また、飼料中のビタミンＤ３の含有量を高めても、生体中のカルシウム含有量に変化はなかったことも報告されている。
本発明者の知る限り、飼料中のビタミンＤ３の含有量と甲殻類の殻の硬度との関連について検討した報告例は無い。
【０００９】
魚類の発育向上等を目的とする飼料として、活性型ビタミンＤ３（１，２５−（−ＯＨ）２ビタミンＤ３）等のビタミンＤ３（コレカルシフェロール）の代謝物を含有する飼料についての検討もなされている。例えば、ビタミンＤ関連物質を含まない飼料を給与したニジマスと、ビタミンＤ２（エルゴカルシフェロール）を含む飼料とを給与したニジマスに、ビタミンＤ３をそれぞれ１，６００ＩＵ／ｋｇ（４０μｇ／ｋｇ）及び２，４００ＩＵ／ｋｇ（６０μｇ／ｋｇ）添加した飼料、並びに活性型ビタミンＤ３をそれぞれ４μｇ／ｋｇ及び６μｇ／ｋｇ（活性型のビタミンＤ３の活性がビタミンＤ３の約１０倍と仮定している）添加した飼料を供与した各グループについて比較した報告がなされている（非特許文献５）。この報告では、ビタミンＤ関連物質を含まない飼料を供与したグループでは、活性型ビタミンＤ３を４μｇ／ｋｇ添加した飼料を供与したニジマスに比べ、６μｇ／ｋｇ添加した飼料を供与したニジマスで増重率が増加し、６μｇ／ｋｇ添加した飼料を供与したニジマスでは、ビタミンＤ３を２，４００ＩＵ／ｋｇ（６０μｇ／ｋｇ）添加した飼料を供与したニジマスよりも高い増重率を示したとされている。一方、ビタミンＤ２を含む飼料を供与したグループでは、活性型ビタミンＤ３の添加量が増えても体重増加率の増加は見られず、活性型ビタミンＤ３を添加した飼料を供与したニジマスは、ビタミンＤ３を添加した飼料を供与したニジマスに比べて体重増加率が低くなるという結果が示されている。
また、この報告で用いられている活性型ビタミンＤ３は、主にコレステロールを原料として製造される合成品であるが、現在、日本の水産養殖用飼料分野では、合成品の活性型ビタミンＤ３の使用が認められていない。
【００１０】
天然物であるリュウキュウヤナギ（Ｓｏｌａｎｕｍ  ｇｌａｕｃｏｐｈｙｌｌｕｍ）の葉は、活性型ビタミンＤ３を含有することが知られており（非特許文献１０）、リュウキュウヤナギを含有する飼料を家禽類や豚に給与することで増重率が向上したことを示す報告もある（特許文献１）。この特許文献に記載の発明は、ビタミンＤが脂溶性であり体内に蓄積され副作用を生起するとの問題点に鑑み、これに代え、より水溶性の高い活性型ビタミンＤ３を用いることを提案するものである。リュウキュウヤナギの葉を含有する飼料はその一態様として提案されている。この特許文献では、魚類の場合、発育向上と同時に、ハマチ、ヒラメ、ウナギ等の骨曲がり防止等の効果が得られるとの記載がなされている。しかし、この文献には、リュウキュウヤナギを含有する飼料を魚類に給与した場合に実際にどのような効果が得られるのかについて具体的な開示はない。また、この発明の課題及び特徴からも明らかな通り、ビタミンＤ３と組み合わせることは開示されていない。また、この文献では甲殻類用の飼料については何も記載されていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１１】
【特許文献１】特開２００９−２４７３３９号公報
【非特許文献】
【００１２】
【非特許文献１】Ｈｅｒｎａｎｄｅｚ  ｅｔ  ａｌ．，２００５，Ｆｉｓｈ．Ｓｃｉ．，７１：８１７−８２２
【非特許文献２】Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｒｅｓｅｒａｃｈ  Ｃｏｕｎｃｉｌ（１９８３），Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，ＤＣ
【非特許文献３】Ｎｅｗ，Ｍ．Ｂ．（１９８６），Ｋｕｗａｉｔ  Ｂｕｌｌ，Ｍａｒ．Ｓｃｉ．，７，７５−１５１
【非特許文献４】高松  千秋：  魚用飼料．配合飼料講座、上巻、設計篇、チクサン出版社、東京、１９８０、ｐｐ．５７９−５９９
【非特許文献５】Ｂａｒｎｅｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，１９８２，Ｊ．Ｎｕｔｒ．，１１２：２０２０−２０２６
【非特許文献６】Ｈｉｌｔｏｎ  ａｎｄ  Ｆｅｒｇａｓｏｎ，１９８２，Ｊ．Ｆｉｓｈ  Ｂｉｏｌ．，２１：３７３−３７９
【非特許文献７】Ｖｉｅｌｍａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８，Ａｑｕａｃｕｌｔｕｒｅ，１６３：３０９−３２３
【非特許文献８】Ｈｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２，Ａｑｕａｃｕｌｔｕｒｅ，１０３：１７７−１８５
【非特許文献９】Ｓｈｉａｕ  ａｎｄ  Ｈｗａｎｇ，１９９４，Ｊ．Ｎｕｔｒ．，１２４：２４４５−２４５０
【非特許文献１０】Ｗａｓｓｅｒｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９７６，Ｊ．Ｎｕｔｒ．，１０６：４５７−４６５
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１３】
前述した技術的背景において、本発明は、魚粉等の動物質性蛋白原料に対する依存度を低減可能としながら魚類の成長を向上させることができ、引いては、魚類の生産コストを低減可能な飼料及び飼育方法を提供することを目的とする。
本発明はまた、甲殻類の外骨格の硬度を高めることができる飼料及び飼育方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
本発明は、上記課題を解決するものとして、その一の実施の形態において、ビタミンＤ３と、リュウキュウヤナギ（Ｓｏｌａｎｕｍ  ｇｌａｕｃｏｐｈｙｌｌｕｍ）の葉及び／又はその抽出物とを含む、魚類用飼料組成物又は成長増進剤（本願明細書の以下の記載では、特に言及しない限りまとめて魚類用飼料組成物という）を提供する。
この実施形態の魚類用飼料組成物では、好ましくは活性型ビタミンＤ３濃度換算値で２μｇ／ｋｇ〜１００μｇ／ｋｇのリュウキュウヤナギ（Ｓｏｌａｎｕｍ  ｇｌａｕｃｏｐｈｙｌｌｕｍ）の葉又はその抽出物を含む。また、典型的には１００μｇ／ｋｇ〜２１０μｇ／ｋｇ（４，０００〜８，４００ＩＵ／ｋｇ）のビタミンＤ３を含む。
本発明はまた、他の実施の形態において、リュウキュウヤナギ（Ｓｏｌａｎｕｍ  ｇｌａｕｃｏｐｈｙｌｌｕｍ）の葉及び／又はその抽出物を含む、甲殻類用飼料組成物又は甲殻類の殻強度増進剤（本願明細書の以下の記載では、特に言及しない限りまとめて甲殻類用飼料組成物という）を提供する。この実施の形態の甲殻類用飼料組成物では、好ましくは、活性型ビタミンＤ３濃度換算値で０．０１μｇ／ｋｇ〜１００μｇ／ｋｇのリュウキュウヤナギ（Ｓｏｌａｎｕｍ  ｇｌａｕｃｏｐｈｙｌｌｕｍ）の葉又はその抽出物を含む。また、この実施の形態の特に好ましい態様では、ビタミンＤ３と、リュウキュウヤナギ（Ｓｏｌａｎｕｍ  ｇｌａｕｃｏｐｈｙｌｌｕｍ）の葉及び／又はその抽出物とを含む。この好ましい態様の甲殻類用飼料組成物では、典型的には、１２５μｇ／ｋｇ〜２２５μｇ／ｋｇ（５，０００〜９，０００ＩＵ／ｋｇ）のビタミンＤ３を含む。
本発明は、更に他の実施形態において、ビタミンＤ３と、リュウキュウヤナギ（Ｓｏｌａｎｕｍ  ｇｌａｕｃｏｐｈｙｌｌｕｍ）の葉及び／又はその抽出物とを組み合わせた魚類用飼料（ビタミンＤ３とリュウキュウヤナギとは、１つの飼料中に配合してもよく、異なる飼料中に配合してもよい）を給与する魚類の飼育方法又は魚類の成長を増進する方法（本願明細書の以下の記載では、特に言及しない限りまとめて魚類の飼育方法という）を提供する。
本発明はまた、更に他の実施形態において、リュウキュウヤナギ（Ｓｏｌａｎｕｍ  ｇｌａｕｃｏｐｈｙｌｌｕｍ）の葉及び／又はその抽出物を含む飼料を給与する、甲殻類の飼育方法又は甲殻類の殻の硬度を高める方法（本願明細書の以下の記載では、特に言及しない限りまとめて甲殻類の飼育方法という）を提供する。この実施の形態の方法では、ビタミンＤ３と、リュウキュウヤナギ（Ｓｏｌａｎｕｍ  ｇｌａｕｃｏｐｈｙｌｌｕｍ）の葉及び／又はその抽出物とを組み合わせた飼料（ビタミンＤ３とリュウキュウヤナギとは、１つの飼料中に配合してもよく、それぞれ異なる飼料中に配合してもよい）を給与する、甲殻類の飼育方法が特に好ましい。
【００１５】
本発明は、上述の通り、その好ましい実施の形態において、ビタミンＤ３とリュウキュウヤナギの葉又はその抽出物とを組み合わせたことを特徴の１つとし、この組み合わせにより予想外の効果を奏する。即ち、ビタミンＤ３に加え、リュウキュウヤナギの葉又はその抽出物を添加すると、生体へのカルシウムやリンの蓄積が促され、基本的にビタミンＤ３の濃度変化に依存せずに、魚類では増重率が更に大きくなり、甲殻類では殻の硬度が高くなるという効果を奏する。
より具体的には、魚類用飼料組成物の場合、従来の各報告でビタミンＤ３をそれ以上添加しても増重率の向上が期待できないとされる閾値以下の添加量は勿論、その付近やそれ以上の量のビタミンＤ３を含んでいても、リュウキュウヤナギの葉又はその抽出物を添加することで、更なる増重率の向上を達成できるという予想外の効果を奏する。言うまでも無く、活性型ビタミンＤ３（１，２５−（−ＯＨ）２ビタミンＤ３）はビタミンＤ３（コレカルシフェロール）の代謝物であり、活性型ビタミンＤ３は１０倍量のビタミンＤ３に対応すると理解されているので、この結果は驚くべき結果である。また、このような効果は、従来の報告で指摘されているようなビタミンＤ３単独を増量することでは達成できない増重率を達成することができ、魚粉等の動物質性蛋白原料を削減しながら魚類の好適な成長を確保し得る飼料の提供を可能とする。また、生体へのカルシウムやリンの蓄積が促される現象は、本発明の飼料組成物で初めて見出されたものである。
【００１６】
また、リュウキュウヤナギの葉又はその抽出物を供与することで、甲殻類の殻の硬度が高まるという効果は今回初めて見出された事象である。特に、魚類用飼料とは異なり、従来の各報告でそれ以上添加しても増重率の向上が期待できないとされる閾値付近やそれ以上の量のビタミンＤ３を含む飼料組成物にリュウキュウヤナギの葉又はその抽出物を添加すると、増重率は向上しなかったにも拘らず殻の硬度が高くなった。これは、従来の知見からは全く予想外の効果である。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
本発明の飼料組成物は、上述の通り、その一の実施の形態で、ビタミンＤ３とリュウキュウヤナギの葉又はその抽出物とを組み合わせた、魚類又は甲殻類用飼料組成物を提供する。また、他の実施の形態で、リュウキュウヤナギの葉又はその抽出物を含む、甲殻類用飼料組成物を提供する。
本発明の飼料組成物においては、ビタミンＤ３を、飼料を供与する対象の魚類又は甲殻類の栄養要求に応じて必要量含むことができる。例えば、魚類用飼料組成物の場合、魚の種類に応じて、ビタミンＤ３を２５μｇ／ｋｇ〜２，６００μｇ／ｋｇ（１，０００〜１０４，０００ＩＵ／ｋｇ）含むことができる。また、甲殻類用飼料の場合にも、その種類に応じて、ビタミンＤ３を６２．５μｇ／ｋｇ〜２５０μｇ／ｋｇ（２，５００〜１０，０００ＩＵ／ｋｇ）を含むことができる。また、ニジマス、ギンザケ、サケ、ヤマメ、アマゴ、ヒメマス等のサケ属（Ｏｎｃｏｒｈｙｎｃｈｕｓ）の魚、及びイワナ等のイワナ属（Ｓａｌｖｅｌｉｎｕｓ）の魚を含むサケ科（Ｓａｌｍｏｎｉｄａｅ）の魚；ニホンウナギ（Ａｎｇｕｉｌｌａ  ｊａｐｏｎｉｃａ）などのウナギ属（Ａｎｇｕｉｌｌａ）の魚；コイ（Ｃｙｐｒｉｎｕｓ  ｃａｒｐｉｏ）などのコイ属（Ｃｙｐｒｉｎｕｓ）の魚；アユ（Ｐｌｅｃｏｇｌｏｓｓｕｓ  ａｌｔｉｖｅｌｉｓ  ａｌｔｉｖｅｌｉｓ）などのアユ属（Ｐｌｅｃｏｇｌｏｓｓｕｓ）の魚；マダイ（Ｐａｇｒｕｓ  ｍａｊｏｒ）などのマダイ属（Ｐａｇｒｕｓ）の魚；スズキ（Ｌａｔｅｏｌａｂｒａｘ  ｊａｐｏｎｉｃｕｓ）等のスズキ属（Ｌａｔｅｏｌａｂｒａｘ）の魚；マハタ（Ｅｐｉｎｅｐｈｅｌｕｓ  ｓｅｐｔｅｍｆａｓｃｉａｔｕｓ）などのマハタ属（Ｅｐｉｎｅｐｈｅｌｕｓ）の魚；ブリ（Ｓｅｒｉｏｌａ  ｑｕｉｎｑｕｅｒａｄｉａｔａ）などのブリ属（Ｓｅｒｉｏｌａ）の魚；トラフグ（Ｔａｋｉｆｕｇｕ  ｒｕｂｒｉｐｅｓ）などのトラフグ属（Ｔａｋｉｆｕｇｕ）の魚；ヒラメ（Ｐａｒａｌｉｃｈｔｈｙｓ  ｏｌｉｖａｃｅｕｓ）などのヒラメ属（Ｐａｒａｌｉｃｈｔｈｙｓ）の魚；マツカワ（Ｖｅｒａｓｐｅｒ  ｍｏｓｅｒｉ）などのマツカワ属（Ｖｅｒａｓｐｅｒ）の魚を対象とした飼料では、魚の種類に応じて、４０．０μｇ／ｋｇ〜７５．０μｇ／ｋｇ（１，６００〜３，０００ＩＵ／ｋｇ）のビタミンＤ３を含有させることが一般的に好ましいとされており（例えば、非特許文献２、３、４、５、６及び７）、この範囲でビタミンＤ３を含有させてもよいが、本発明の飼料組成物においては、例えば、４０．０μｇ／ｋｇ〜２５０．０μｇ／ｋｇ（１，６００〜１０，０００ＩＵ／ｋｇ）のビタミンＤ３を含有してもよい。また、ブラックタイガー、バナメイエビ等のＰｅｎａｅｕｓ属の甲殻類や車えび等のＭａｒｓｕｐｅｎａｅｕｓ属の甲殻類を含むクルマエビ科（Ｐｅｎａｅｉｄａｅ）の甲殻類を対象とした飼料では、１００．０〜２００．０μｇ／ｋｇ（４，０００〜８，０００ＩＵ／ｋｇ）のビタミンＤ３を含有することが一般的に好ましいと考えられ（非特許文献８及び９）、この範囲でビタミンＤ３を含有させてもよいが、本発明の飼料組成物においては、例えば、６２．５〜２５０．０μｇ／ｋｇ（２，５００〜１０，０００ＩＵ／ｋｇ）のビタミンＤ３を含有してもよい。
また、ビタミンＤ３の栄養要求量について十分な調査研究が行われていない魚類又は甲殻類であっても、栄養要求性試験等を実施することにより、ビタミンＤ源としてビタミンＤ３単独を使用した場合の増重率の向上が期待できる範囲を特定でき、これまでの知見からサケ属の魚の要求量と近似することが予想される。従って、上述した魚類又は甲殻類と同様の範囲でビタミンＤ３を含有させることができる。「栄養要求性試験」は、例えば、ビタミンＤ３以外のビタミンを、Ｎ．Ｒ．Ｃ飼養標準、高松又はＮｅｗ，Ｍ．Ｂ．の提唱する推奨量で添加した飼料に対して、ビタミンＤ３の濃度を段階的に変化させ、成長が頭打ちとなるビタミンＤ３の添加量を知ることによって、実施することができる（非特許文献２、３及び４）。
【００１８】
本発明の飼料組成物は、前述のように、リュウキュウヤナギの葉又はその抽出物の添加により、ビタミンＤ３の濃度に非依存的に、魚類では増重率を、甲殻類では殻の硬度を向上させる。このため、増重率を向上させるビタミンＤ３濃度の上限付近やそれを越える濃度のビタミンＤ３をリュウキュウヤナギの葉等と共に含有する飼料では、ビタミンＤ３に関連する物質の起源としてビタミンＤ３単独を添加し、その量を増加させた飼料では達成できない高いレベルでの魚類の増重率を可能とし、甲殻類の殻の硬度を向上する。この意味においては、このような高濃度のビタミンＤ３を含有する飼料は、本発明によって技術的意義を有するに至った一実施形態ということができる。
【００１９】
具体的には、魚類用飼料組成物では、ビタミンＤ３を、４０．０μｇ／ｋｇ〜２，６００μｇ／ｋｇ（１，６００〜１０４，０００ＩＵ／ｋｇ）含んでよく、４０．０μｇ／ｋｇ〜２５０μｇ／ｋｇ（１，６００〜１０，０００ＩＵ／ｋｇ）含むものが好ましく、４５．０μｇ／ｋｇ〜２２５．０μｇ／ｋｇ（１，８００〜９，０００ＩＵ／ｋｇ）含むものがより好ましく、６２．５μｇ／ｋｇ〜２２５．０μｇ／ｋｇ（２，５００〜９，０００ＩＵ／ｋｇ）含むものが更に好ましく、１００．０μｇ／ｋｇ〜２１０．０μｇ／ｋｇ（４，０００〜８，４００ＩＵ／ｋｇ）含むものが特に好ましい。
また、甲殻類用飼料組成物では、ビタミンＤ３を、１００μｇ／ｋｇ〜２５０μｇ／ｋｇ（４，０００〜１０，０００ＩＵ／ｋｇ）を含んでよく、１２５μｇ／ｋｇ〜２２５μｇ／ｋｇ（５，０００〜９，０００ＩＵ／ｋｇ）含むものが好ましい。また、１７５μｇ／ｋｇ〜２２５μｇ／ｋｇ（７，０００〜９，０００ＩＵ／ｋｇ）含む飼料組成物としてもよい。
より具体的には、サケ属（Ｏｎｃｏｒｈｙｎｃｈｕｓ）及びイワナ属（Ｓａｌｖｅｌｉｎｕｓ）の魚を含むサケ科（Ｓａｌｍｏｎｉｄａｅ）の魚；ウナギ属（Ａｎｇｕｉｌｌａ）の魚；コイ属（Ｃｙｐｒｉｎｕｓ）の魚；アユ属（Ｐｌｅｃｏｇｌｏｓｓｕｓ）の魚；マダイ属（Ｐａｇｒｕｓ）の魚；スズキ属（Ｌａｔｅｏｌａｂｒａｘ）の魚；マハタ属（Ｅｐｉｎｅｐｈｅｌｕｓ）の魚；ブリ属（Ｓｅｒｉｏｌａ）の魚；トラフグ属（Ｔａｋｉｆｕｇｕ）の魚；ヒラメ属（Ｐａｒａｌｉｃｈｔｈｙｓ）の魚；マツカワ属（Ｖｅｒａｓｐｅｒ）の魚を対象とした飼料組成物では、ビタミンＤ３を、４０．０μｇ／ｋｇ〜２，６００μｇ／ｋｇ（１，６００〜１０４，０００ＩＵ／ｋｇ）含んでもよく、４０．０μｇ／ｋｇ〜２５０μｇ／ｋｇ（１，６００〜１０，０００ＩＵ／ｋｇ）含むものが好ましく、４５．０μｇ／ｋｇ〜２２５．０μｇ／ｋｇ（１，８００〜９，０００ＩＵ／ｋｇ）含むものがより好ましく、６２．５μｇ／ｋｇ〜２２５．０μｇ／ｋｇ（２，５００〜９，０００ＩＵ／ｋｇ）含むものが更に好ましく、１００．０μｇ／ｋｇ〜２１０．０μｇ／ｋｇ（４，０００〜８，４００ＩＵ／ｋｇ）含むものが特に好ましい。
また、クルマエビ科の甲殻類を対象とする場合では、ビタミンＤ３を１００μｇ／ｋｇ〜２５０μｇ／ｋｇ（４，０００〜１０，０００ＩＵ／ｋｇ）を含む飼料組成物でもよく、１２５μｇ／ｋｇ〜２２５μｇ／ｋｇ（５，０００〜９，０００ＩＵ／ｋｇ）含む飼料組成物が好ましい。また、ビタミンＤ３を１７５μｇ／ｋｇ〜２２５μｇ／ｋｇ（７，０００〜９，０００ＩＵ／ｋｇ）含む飼料組成物でもよい。
本発明の飼料に含有されるビタミンＤ３は、合成によるものでも、天然物に由来するものでもよい。例えば、ＲＯＶＩＭＩＸ（登録商標）ＡＤ３（ＤＳＭ  Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ  Ｊａｐａｎ社製）等各種ビタミンの混合物が市販されており、これを利用するのが便利である。また、動物性油等の動物質性原料には、ビタミンＤ３が含まれているものがあり、このようなビタミン添加剤以外の原料に由来してもよい。
【００２０】
リュウキュウヤナギの葉又はその抽出物は、魚類用飼料組成物の場合、カルシウムやリンの蓄積を促し、増重率を向上する点から、飼料組成物中に０．０２質量％〜１．００質量％（活性型ビタミンＤ３濃度換算で２μｇ／ｋｇ〜１００μｇ／ｋｇ）含有することが好ましく、０．０３質量％〜０．７０質量％（活性型ビタミンＤ３濃度換算で３μｇ／ｋｇ〜７０μｇ／ｋｇ）含有することがより好ましく、０．０５質量％〜０．５０質量％（活性型ビタミンＤ３濃度換算で５μｇ／ｋｇ〜５０μｇ／ｋｇ）含有することがより好ましく、０．０８質量％〜０．３０質量％（活性型ビタミンＤ３濃度換算で８μｇ／ｋｇ〜３０μｇ／ｋｇ）含有することが特に好ましい。このようなリュウキュウヤナギの葉又はその抽出物の添加量は、サケ属（Ｏｎｃｏｒｈｙｎｃｈｕｓ）及びイワナ属（Ｓａｌｖｅｌｉｎｕｓ）の魚を含むサケ科の魚；ウナギ属（Ａｎｇｕｉｌｌａ）の魚；コイ属（Ｃｙｐｒｉｎｕｓ）の魚；アユ属（Ｐｌｅｃｏｇｌｏｓｓｕｓ）の魚；マダイ属（Ｐａｇｒｕｓ）の魚；スズキ属（Ｌａｔｅｏｌａｂｒａｘ）の魚；マハタ属（Ｅｐｉｎｅｐｈｅｌｕｓ）の魚；ブリ属（Ｓｅｒｉｏｌａ）の魚；トラフグ属（Ｔａｋｉｆｕｇｕ）の魚；ヒラメ属（Ｐａｒａｌｉｃｈｔｈｙｓ）の魚；マツカワ属（Ｖｅｒａｓｐｅｒ）の魚でより好ましく、中でもサケ属を含むサケ科の魚で特に好ましい。
【００２１】
一方、甲殻類用の飼料組成物の場合、甲殻類へのカルシウムの蓄積を促して殻の硬度を強化する点から、飼料中にリュウキュウヤナギの葉又はその抽出物を０．０００１質量％〜１．０質量％（活性型ビタミンＤ３濃度換算で０．０１μｇ／ｋｇ〜１００μｇ／ｋｇ）含有することが好ましく、０．００１質量％〜０．１０質量％（活性型ビタミンＤ３濃度換算で０．１μｇ／ｋｇ〜１０μｇ／ｋｇ）含有することが好ましく、０．００５質量％〜０．０５質量％（活性型ビタミンＤ３濃度が０．５μｇ／ｋｇ〜５μｇ／ｋｇ）含有することが更に好ましく、０．００７質量％〜０．０２質量％（活性型ビタミンＤ３濃度換算で０．７μｇ／ｋｇ〜２μｇ／ｋｇ）含有することが特に好ましい。このようなリュウキュウヤナギの葉又はその抽出物の添加量は、特に、Ｐｅｎａｅｕｓ属及びＭａｒｓｕｐｅｎａｅｕｓ属を含むクルマエビ科（Ｐｅｎａｅｉｄａｅ）の甲殻類で特に好ましい。
【００２２】
本発明で用いられるリュウキュウヤナギの葉は、生葉であってもよいが、乾燥して粉砕したものが好ましい。乾燥方法については特に制限はなく、例えば天日乾燥、加熱乾燥、流動層乾燥、凍結乾燥などの既知の方法で乾燥することができる。乾燥は常温で行なわれても加熱条件下で行なわれてもよい。また、乾燥は常圧で行なわれても減圧下で行なわれてもよい。常圧で加熱する場合には、８０℃以下の温度で３時間以下の時間加熱することが有効成分の損失が少ない点で好ましい。乾燥後の水分は１２重量％以下とすることが好ましい。
【００２３】
リュウキュウヤナギの葉の抽出物は、例えば、水、エタノール又は両者を混合した含水エタノールを溶媒として抽出して得ることができる。抽出溶媒は、水、エタノールの他、抽出効率を大きく損なわない範囲で他の成分（例えば、塩類、アミノ酸類、糖類など）を含んでもよい。抽出は既知の方法で行えばよく、抽出方法としては、例えば浸漬、静置保存、加熱還流などがある。抽出温度は、常温であっても加熱条件下であってもよい。抽出時間は、温度や乾燥条件にもよるが、３０分以上〜３年以下とすることができ、通常１時間〜１ヶ月間である。溶媒量は特に制限はないが、葉（通常は乾燥物である）に対して等重量以上１０倍量以下の溶媒で抽出することが好ましい。
前述した溶媒抽出後においては、有効成分を含む抽出液を残渣から遠心分離や濾過などで分離することが好ましい。分離後の抽出液はそのまま飼料組成物に添加してもよいし、当該抽出液を更に濃縮液又は濃縮乾燥物とした後に飼料組成物に添加してもよい。また、前述した抽出溶媒を用いて希釈した後に飼料組成物に添加してもよい。濃縮液及び濃縮乾燥物は、常圧又は減圧条件下で溶媒を蒸発させることで得られる。
【００２４】
得られた抽出液又は抽出液の濃縮液若しくは希釈液は、そのまま飼料組成物に添加してもよいが、これらを賦形剤に吸着させた後に飼料組成物に添加することもできる。賦形剤は、フスマ、小麦粉、脱脂糠、シリカ、コーンコブミール、タルク、グレー等の一般的に水産飼料に用いられるものでよい。このようにして得られる添加剤では、水分を１２重量％以下とする事が好ましく、必要に応じて更に乾燥することが好ましい。
【００２５】
本発明は、上述した通り、リュウキュウヤナギの葉又はその抽出物を含むことで、或いはこれとビタミンＤ３とを組み合わせることで、魚類の増重率又は甲殻類の殻の硬度を向上し得る飼料組成物を提供する。このため、本発明の飼料では、従来魚類の増重率又は甲殻類の殻の硬度を向上するために配合されていた成分を低減することができる。例えば、魚類用飼料においては所望の成長効果を達成するために、従来４０質量％以上の動物質性蛋白原料（典型的には魚粉）を含有する飼料が用いられていたが、魚粉等の動物質性蛋白原料の含有量を４０質量％未満、より具体的には１０質量％以上４０質量％未満、好ましくは１５質量％〜３５質量％、より好ましくは２０質量％〜３０質量％としながら、従来の飼料と同程度又はそれ以上の成長効果を達成し得る飼料を提供できる。この場合、魚粉等の動物質性原料の一部を、大豆油粕、コーングルテンミール、大豆胚芽、菜種油粕、大豆及び／又は菜種等の蛋白濃縮物、小麦グルテン、並びにごま油粕等の植物質性蛋白原料で代替するのが好ましい。これら植物質性蛋白原料は、その総量で飼料中に２〜８０質量％含有させることができ、５〜７０質量％含有させることが好ましい。
【００２６】
本発明の飼料においては、適宜他の成分を含むことができ、例えば、ビタミンＡ、ビタミンＥ、ビタミンＫ３、ビタミンＢ１、ビオチン、ビタミンＢ２、ビタミンＢ６、ニコチン酸、パントテン酸、葉酸、コリン、ビタミンＢ１２、パラアミノ安息香酸、イノシトール、及びアスコルビン酸等の他のビタミンを含むことができる。ビタミンＤ２は含めてもよいがビタミンＤ関連物質は、ビタミンＤ３及びその誘導体（典型的には活性型ビタミンＤ３）以外を含まないことが好ましい。
また、リジン、メチオニン、タウリン、グリシン、アラニン、アルギニン、グルタミン酸、トレオニン、及びバリン等の（結晶）アミノ酸を含むことができる。また、カルシウム、リン、マグネシウム、カリウム、ナトリウム、鉄、亜鉛、マンガン、銅、コバルト、セレン、ヨウ素、アルミニウム、硫黄、塩素等の無機質（即ちミネラル分）を供給する金属塩等を含むことができる。また、動物性及び／又は植物性油（典型的には油脂）、又はそれ以外の原料由来の油分を含むことができる。
上述の他のビタミン及び（結晶）アミノ酸は、それぞれの栄養要求量を満たすとされる濃度で含むことが好ましい。
また、カルシウム及びリンは、それぞれが飼料中に０．５〜５．０質量％含有させることができ、１．０〜４．０質量％含有させることが好ましい。他のミネラル分に関しては、それぞれの栄養要求量を満たすとされる濃度で含むことが好ましい。
また、油分は、養殖対象とする魚種や、成長段階によって異なるが、飼料中に２．０〜４０．０質量％含むことが好ましい。
【００２７】
本発明における飼料組成物は、種々の形態に製造することができ、例えば、乾燥原料を混合・粉砕した粉末状飼料組成物、粉体を固形化した飼料組成物、又はペースト状の飼料組成物とすることができる。粉末状飼料組成物は、そのまま最終的な飼料として用いることもできるが、最終的な飼料を調製するための添加剤として使用することもできる。例えば、その目的に応じて、粉末状飼料組成物を冷凍イワシ、サバ、サンマ等の生餌に加えて混練してモイストペレットを製造することができる。また、粉末状飼料組成物を水及び油脂と混練して最終飼料を調製することもできる。固形化飼料組成物としては、エクストルーダーやペレットマシンなどで押出成型したペレット状飼料組成物、流動層造粒機、攪拌造粒機又は転動造粒機などで成型された顆粒状飼料組成物がある。ペースト状飼料組成物としては、粉末状飼料組成物に生餌を加えてペースト状にし、更にビタミンやミネラルなどを添加した飼料を挙げることができる。
【００２８】
本発明の飼料組成物又はそれを含む飼料を魚類又は甲殻類に供与して飼育する方法については、特に制限はなく、各魚類又は甲殻類で従来行われていた方法で実施すればよい。例えば、魚類及び甲殻類のいずれにおいても、本発明の飼料組成物をエクストルーダー又はペレットマシン等で押出成型したペレット状の飼料及び／又はこれらを破砕し、篩別したクランブル状の飼料を飽食供与で各魚類又は甲殻類供与して飼育すればよい。
本発明の飼育方法においては、ビタミンＤ３と、リュウキュウヤナギ（Ｓｏｌａｎｕｍ  ｇｌａｕｃｏｐｈｙｌｌｕｍ）の葉及び／又はその抽出物とを給与する場合、ビタミンＤ３と、リュウキュウヤナギを含む飼料を給与することが好ましいが、これらの成分の一方のみを含む飼料を組み合わせて給与することもできる。
【実施例】
【００２９】
以下、実施例により本発明をさらに詳細に説明する。但し、以下の実施例は、本発明を限定するものではない。
【００３０】
リュウキュウヤナギの葉の添加量がニジマス稚魚の成長に及ぼす影響に関する試験（１回目）
表１に示した３種類（比較例１、実施例１及び実施例２）の配合内容の試験飼料を作製した。
魚油を除く各原料を秤量・混合した後、ＪＩＳ標準篩２４メッシュ以下に粉砕し、これに少量の水を加えて混練した後、ペレットマシンを用いて直径約３ｍｍ及び５ｍｍのペレットを成型した。これを熱風乾燥機により乾燥した後、３％の魚油を吸着させて試験飼料とした。何れの試験飼料も、ビタミン混合と魚油由来のビタミンＤ３を計２０２μｇ／ｋｇ（８，０９０ＩＵ／ｋｇ）含むが、比較例１の飼料はリュウキュウヤナギの葉を含まず、実施例１の飼料はリュウキュウヤナギの葉を０．０２重量％（活性型ビタミンＤ３濃度換算で２μｇ／ｋｇ）含み、実施例２の飼料はリュウキュウヤナギの葉を０．１０重量％（同１０μｇ／ｋｇ）含む。
【００３１】
【表１】
0005433039.tif 000002
魚粉：Ｓｔｅａｍ  Ｄｒｉｅｄ  Ｐｒｉｍｅ  Ｆｉｓｈｍｅａｌ（Ａｕｓｔｒａｌ  Ｇｒｏｕｐ  Ｓ．Ａ．Ａ．製、原魚  Ａｎｃｈｏｖｅｔａ）
植物質性蛋白原料：大豆油粕発酵物、コーングルテンミール
魚油：ナイスフィードオイルＳ（植田製油株式会社製、イワシウィンタリング油、３，０００ＩＵ／ｋｇのビタミンＤ３含有）
ビタミン混合：ビタミンＤ３、ビタミンＡ、ビタミンＥ、ビタミンＫ３、ビタミンＢ１、ビオチン、ビタミンＢ２、ビタミンＢ６、ニコチン酸、パントテン酸、葉酸、コリン、ビタミンＢ１２、イノシトール、ビタミンＣを含有。
ミネラル混合：リン酸カルシウム、炭酸亜鉛、硫酸亜鉛、ヨウ素酸カルシウム、硫酸コバルト、硫酸鉄、硫酸銅、硫酸マンガン、硫酸マグネシウム、リン酸二水素カリウム、水酸化アルミニウム、フマル酸第一鉄を含有。
リュウキュウヤナギ：Ｐａｎｂｏｎｉｓ（Ｈｅｒｂｏｎｉｓ  ＡＧ  ＧｍｂＨ製、活性型ビタミンＤ３１０μｇ／ｇ含有）
【００３２】
５０リットル容ガラス水槽４面に平均魚体重１９ｇのニジマス３５尾を収容し、水温１４℃の環境下で飼育試験を実施した。投餌は朝１回、飽食給与とした。測定項目は、体重、平均増重率及び血清中活性型ビタミンＤ３濃度とした。表２に飼育結果を、表３に血清中の活性型ビタミンＤ３濃度を示した。統計処理は、Ｄｕｎｃａｎｎ法に基づく検定を行った。
【００３３】
【表２】
0005433039.tif 000003
平均増重率の算出は次式に倣った。
平均増重率  ＝  終了時平均体重 / 開始時平均体重 × １００
【００３４】
表２に示す通り、何れの試験飼料もビタミンＤ３を２０２μｇ／ｋｇ（８，０９０ＩＵ／ｋｇ）含むが、リュウキュウヤナギの葉が無添加の比較例１の飼料に比べ、０．０２質量％（活性型ビタミンＤ３濃度換算で２μｇ／ｋｇ）添加した実施例１の飼料、及び０．１０質量％（活性型ビタミンＤ３濃度換算で１０μｇ／ｋｇ）添加した実施例２の飼料で、終了時平均体重及び平均増重率がより高く、成長改善効果を認めた。
【００３５】
【表３】
0005433039.tif 000004
【００３６】
表３に試験終了時における血清中の活性型ビタミンＤ３濃度の測定結果を示した。その結果、飼料へのリュウキュウヤナギの葉の添加により血清中活性型ビタミンＤ３濃度を増加し、リュウキュウヤナギの葉の添加量を増加するに伴って血清中活性型ビタミンＤ３濃度が増加した。
【００３７】
リュウキュウヤナギの葉の添加量がニジマス稚魚の成長に及ぼす影響に関する試験（２回目）
本試験は、リュウキュウヤナギの葉の好適な添加量の範囲を決定することを目的とし、実施例１よりも、リュウキュウヤナギの葉をより広範囲の量添加した飼料について試験を行なった。
具体的には、表４に示す６種類（比較例２及び実施例３〜７）の配合内容の試験飼料を作製した。魚油を除く各原料を秤量・混合したのち、ＪＩＳ標準篩２４メッシュ以下に粉砕し、これに少量の魚油と水を加えながら２軸エクストルーダーによりペレットを成型した。飼料の大きさは、直径約３．２ｍｍとした。これを乾燥機により乾燥した後、残りの魚油を吸着させて製品とした。
試験飼料は何れも、ビタミン混合及び魚油由来のビタミンＤ３を計１０５μｇ／ｋｇ（４，１９５ＩＵ／ｋｇ）含有するが、比較例２の飼料はリュウキュウヤナギの葉を含まず、実施例３の飼料はリュウキュウヤナギの葉を０．０１質量％（活性型ビタミンＤ３濃度換算で１μｇ／ｋｇ）含み、実施例４の飼料は０．０２質量％（同  ２μｇ／ｋｇ）含み、実施例５の飼料は０．１０質量％（同  １０μｇ／ｋｇ）含み、実施例６の飼料は０．５０質量％（同  ５０μｇ／ｋｇ）含み、実施例７の飼料は１．００質量％（同  １００μｇ／ｋｇ）含む。
【００３８】
【表４】
0005433039.tif 000005
魚粉：Ｓｔｅａｍ  Ｄｒｉｅｄ  Ｐｒｉｍｅ  Ｆｉｓｈｍｅａｌ（Ａｕｓｔｒａｌ  Ｇｒｏｕｐ  Ｓ．Ａ．Ａ．、原魚  Ａｎｃｈｏｖｅｔａ）
植物質性蛋白原料：大豆油粕、コーングルテンミール、大豆胚芽
魚油：ナイスフィードオイルＳ（植田製油株式会社製、イワシウィンタリング油、３，０００ＩＵ／ｋｇのビタミンＤ３含有）
ビタミン混合：ビタミンＤ３、ビタミンＡ、ビタミンＥ、ビタミンＫ３、ビタミンＢ１、ビオチン、ビタミンＢ２、ビタミンＢ６、ニコチン酸、パントテン酸、葉酸、コリン、ビタミンＢ１２、イノシトール、ビタミンＣを含有。
ミネラル混合：リン酸カルシウム、炭酸亜鉛、硫酸亜鉛、ヨウ素酸カルシウム、硫酸コバルト、硫酸鉄、硫酸銅、硫酸マンガン、硫酸マグネシウム、リン酸二水素カリウム、水酸化アルミニウム、フマル酸第一鉄を含有。
リュウキュウヤナギ：Ｐａｎｂｏｎｉｓ（Ｈｅｒｂｏｎｉｓ  ＡＧ  ＧｍｂＨ製、活性型ビタミンＤ３１０μｇ／ｇ含有）
【００３９】
５０リットル容ガラス水槽６面に、平均魚体重２８ｇのニジマス２３尾を収容し、水温１４℃の環境下で飼育試験を実施した。投餌は１日２回、飽食給与とした。測定項目は、体重、平均増重率とした。表５に飼育結果を、表６に生体１尾当たりのカルシウム及びリンの含有量を示した。統計処理は、Ｄｕｎｃａｎｎ法に基づく検定を行った。
【００４０】
【表５】
0005433039.tif 000006
【００４１】
表５に示す通り、試験飼料は何れもビタミンＤ３を１０５μｇ／ｋｇ（４，１９５ＩＵ／ｋｇ）含有するが、リュウキュウヤナギの葉が無添加の比較例２の飼料に比べ、０．０２質量％（活性型ビタミンＤ３濃度が２μｇ／ｋｇ）以上のリュウキュウヤナギの葉を添加した実施例４から７の飼料で成長が改善される傾向を示した。特に、リュウキュウヤナギの葉をそれぞれ０．１０質量％及び０．５０質量％添加した実施例５及び６の飼料で増重率が顕著に増加し、リュウキュウヤナギの葉を０．１０質量％添加した実施例５の飼料で最大の増重率を示した。
【００４２】
【表６】
0005433039.tif 000007
【００４３】
表６に示す通り、上述の増重率と同様に、リュウキュウヤナギの葉の添加量に伴って１尾当たりのＣａ及びＰの含有量が高まる傾向を示し、リュウキュウヤナギの葉を０．１０質量％添加した実施例５の飼料で最大となった。以上の結果から、リュウキュウヤナギの葉の添加により、生体へのＣａ及びＰの蓄積が促され、これが増重率の増加に関与していることが示唆される。
【００４４】
ニジマス稚魚を用いた魚粉配合率が中程度の飼料との成長比較試験
本試験は、リュウキュウヤナギの葉を添加していない魚粉配合率が中程度の飼料と、リュウキュウヤナギの葉を添加した魚粉削減飼料との成長増進効果を評価することを目的とする。
表７に示す３種類（比較例３及び４並びに実施例８）の配合内容の試験飼料を実施例２で記載した方法に準拠して作製した。試験飼料には、ビタミン混合及び魚油由来のビタミンＤ３を計１０５μｇ／ｋｇ〜１０６μｇ／ｋｇ（４，１９５〜４，２５５ＩＵ／ｋｇ）添加した。他方、比較例３の飼料は、魚粉含有率が４０質量％と中程度であるのに対し、比較例４及び実施例８の飼料では魚粉含有率を２５質量％にまで削減した。また、比較例３及び４の飼料では、リュウキュウヤナギの葉を添加せず、実施例８の飼料にのみリュウキュウヤナギの葉を０．１０質量％添加した。
【００４５】
【表７】
0005433039.tif 000008
魚粉：Ｓｔｅａｍ  Ｄｒｉｅｄ  Ｐｒｉｍｅ  Ｆｉｓｈｍｅａｌ（Ａｕｓｔｒａｌ  Ｇｒｏｕｐ  Ｓ．Ａ．Ａ．、原魚  Ａｎｃｈｏｖｅｔａ）
植物質性蛋白原料：大豆油粕、コーングルテンミール、大豆胚芽
魚油：ナイスフィードオイルＳ（植田製油株式会社製、イワシウィンタリング油、３，０００ＩＵ／ｋｇのビタミンＤ３含有）
ビタミン混合：ビタミンＤ３、ビタミンＡ、ビタミンＥ、ビタミンＫ３、ビタミンＢ１、ビオチン、ビタミンＢ２、ビタミンＢ６、ニコチン酸、パントテン酸、葉酸、コリン、ビタミンＢ１２、イノシトール、ビタミンＣを含有。
ミネラル混合：リン酸カルシウム、炭酸亜鉛、硫酸亜鉛、ヨウ素酸カルシウム、硫酸コバルト、硫酸鉄、硫酸銅、硫酸マンガン、硫酸マグネシウム、リン酸二水素カリウム、水酸化アルミニウム、フマル酸第一鉄を含有。
リュウキュウヤナギ：Ｐａｎｂｏｎｉｓ（Ｈｅｒｂｏｎｉｓ  ＡＧ  ＧｍｂＨ製、活性型ビタミンＤ３１０μｇ／ｇ含有）
【００４６】
５０リットル容ガラス水槽６面に、平均魚体重２６ｇのニジマス２０尾を収容し、水温１４℃の環境下で飼育試験を実施した。投餌は１日２回、飽食給与とした。測定項目は、体重、平均増重率とした。表８に飼育結果を示した。統計処理は、Ｄｕｎｃａｎｎ法に基づく検定を行った。
【００４７】
【表８】
0005433039.tif 000009
【００４８】
表８に示す通り、リュウキュウヤナギの葉が無添加で、魚粉配合率４０質量％の比較例３の飼料と、リュウキュウヤナギの葉を０．１０質量％添加し、魚粉配合率２５質量％とした実施例８の飼料が同等の平均体重及び平均増重率を示した。一方、リュウキュウヤナギの葉が無添加で、魚粉配合率２５％の比較例４の飼料は、平均体重及び平均増重率が他の試験区よりも低かった。
【００４９】
クルマエビ育成用飼料の殻硬度等に関する試験
表９に示す４種類（比較例５及び実施例９〜１１）の配合内容の試験飼料を作製した。
魚油を除く各原料を秤量・混合後、ＪＩＳ標準篩２４メッシュ以下に粉砕した。これに魚油と水を加えた後、ミートチョッパーを用いて直径約２．７ｍｍのペレット状に成型し、乾燥して試験試料を作製した。何れの試験飼料にも、ビタミン混合及び魚油由来のビタミンＤ３を計１８８μｇ／ｋｇ（７，５３０ＩＵ／ｋｇ）添加したが、比較例５の飼料にはリュウキュウヤナギの葉を配合せず、実施例９〜１１の飼料には、リュウキュウヤナギの葉を各々０．００１質量％（活性型ビタミンＤ３濃度が０．１μｇ／ｋｇ）、０．０１質量％（同  １μｇ／ｋｇ）、及び０．１０質量％（同  １０μｇ／ｋｇ）配合した。
【００５０】
【表９】
0005433039.tif 000010
動物質性飼料：イカミール、魚粉（Ｓｔｅａｍ  Ｄｒｉｅｄ  Ｐｒｉｍｅ  Ｆｉｓｈｍｅａｌ，Ａｕｓｔｒａｌ  Ｇｒｏｕｐ  Ｓ．Ａ．Ａ．、原魚  Ａｎｃｈｏｖｅｔａ）、オキアミミール、エビミール、アサリミール
魚油：ナイスフィードオイルＳ（植田製油株式会社製、イワシウィンタリング油、３，０００ＩＵ／ｋｇのビタミンＤ３含有）
ビタミン混合：ビタミンＤ３、ビタミンＡ、ビタミンＥ、ビタミンＫ３、ビタミンＢ１、ビオチン、ビタミンＢ２、ビタミンＢ６、ニコチン酸、パントテン酸、葉酸、コリン、ビタミンＢ１２、イノシトール、ビタミンＣを含有。
リュウキュウヤナギ：Ｐａｎｂｏｎｉｓ（Ｈｅｒｂｏｎｉｓ  ＡＧ  ＧｍｂＨ製、活性型ビタミンＤ３１０μｇ／ｇ含有）
【００５１】
２００Ｌポリカーボネート製の水槽の底を二重底とし、珪砂を敷いた水槽へ平均体重約６．５ｇのクルマエビを各１５尾収容し、３反復で試験を行った。各試験水槽にはセラミックヒーターを投入し、飼育水温が常に２６±１℃になるように調節した。試験期間は４０日間とした。各試験飼料は、飽食となるよう給餌量を調節した。測定項目は、体重、増重量及び平均増重率とした。統計処理は、Ｄｕｎｃａｎｎ法に基づく検定を行った。
【００５２】
【表１０】
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【００５３】
表１０に示す通り、平均増重率は各区間で有意な差が認められなかった。従って、リュウキュウヤナギの葉の添加はクルマエビの成長に影響を及ぼさないことが分かった。
【００５４】
試験終了時に各区１０尾の頭胸部及び第１腹節の硬度について、レオメーターＣＲ３００型（サン科学）を用いて測定した。測定条件は表１１の通りであった。クルマエビ殻硬度測定結果は表１２の通りであった。
【００５５】
【表１１】
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【００５６】
【表１２】
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【００５７】
表１２に示す通り、リュウキュウヤナギの葉を含まない比較例５の飼料に比べ、リュウキュウヤナギの葉を添加した実施例９〜１１の飼料では、頭胸部及び第１腹節における殻硬度が有意に上昇した。また、特にリュウキュウヤナギの葉を０．０１質量％（活性型ビタミンＤ３濃度換算で１μｇ／ｋｇ）添加した実施例１０の飼料において顕著な上昇が見られた。
【００５８】
更に、試験終了時に各区６尾をプールして１検体とし、Ｃａ含量を測定した。クルマエビ全体内のＣａ含量測定結果は表１３の通りであった。
【００５９】
【表１３】
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【００６０】
表１３に示す通り、比較例５の飼料に比べ、リュウキュウヤナギの葉を添加した実施例９〜１１の飼料では、クルマエビ全体のＣａ含量が上昇し、特に実施例１０の飼料において顕著な上昇が見られた。
【００６１】
以上説明したように、魚類用飼料ではビタミンＤ３を少なくとも１０５μｇ／ｋｇ（４，１９５ＩＵ／ｋｇ）、１０６μｇ／ｋｇ（４，２３５ＩＵ／ｋｇ）及び２０２μｇ／ｋｇ（８，０９０ＩＵ／ｋｇ）含有する飼料にリュウキュウヤナギの葉を添加、具体的には０．０２質量％〜１．００質量％（活性型ビタミンＤ３の濃度換算で２μｇ／ｋｇ〜１００μｇ／ｋｇ）添加することで、カルシウムやリンの蓄積が促され、増重率及び体重が増大した。また、リュウキュウヤナギの葉を添加した魚粉削減飼料（魚粉２５質量％）が、中程度（４０質量％）の魚粉を含有する飼料と同レベルの成長増進効果を有することが確認された。これにより、成長増進効果を有しながら生産コストの低い飼料の提供が期待される。
一方、甲殻類用飼料では、魚類とは異なり、ビタミンＤ３を少なくとも１８８μｇ／ｋｇ（７，５３０ＩＵ／ｋｇ）含有する飼料にリュウキュウヤナギの葉を添加しても増重率及び体重に変化は見られなかった。しかし、リュウキュウヤナギの葉を添加、より具体的にはリュウキュウヤナギの葉を０．００１質量％〜０．１０質量％（活性型ビタミンＤ３の濃度が０．１μｇ／ｋｇ〜１０μｇ／ｋｇ）添加することで、殻の硬度が大きくなった。