(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉの化合物
【化１】
0005443988.tif 000026
（式中、
Ｒ１は、チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−２−イル、チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−２−イル、チエノ［２，３−ｃ］ピリジン−２−イル、またはチエノ［２，３−ｂ］ピリジン−２−イルであり、これらはそれぞれ、Ｃ１〜Ｃ３−アルキル、−（Ｃ１〜Ｃ３−アルキル）−Ｓ−（Ｃ１〜Ｃ３−アルキル）、−Ｓ−Ｃ１〜Ｃ３−アルキル、−（Ｃ１〜Ｃ３−アルキル）−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ３−アルキル）、−Ｏ−Ｃ１〜Ｃ３−アルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−Ｃ１〜Ｃ３−アルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−Ｈ、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ３０Ｒ３１、ハロ、−ＣＮ、および−ＯＨからなる群からそれぞれ独立に選択される１個〜３個の置換基で任意に置換されていてもよく、ここで規定するＲ３０およびＲ３１は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ３アルキル−ＯＨ、Ｃ１〜Ｃ３−アルキル、ハロ、および−Ｏ−Ｃ１〜Ｃ３−アルキルからなる群からそれぞれ独立に選択され、
Ｒ２およびＲ３は、水素、Ｃ１〜Ｃ３−アルキル、−（Ｃ１〜Ｃ３−アルキル）−Ｓ−（Ｃ１〜Ｃ３−アルキル）、−Ｓ−Ｃ１〜Ｃ３−アルキル、−（Ｃ１〜Ｃ３−アルキル）−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ３−アルキル）、−Ｏ−Ｃ１〜Ｃ３−アルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−Ｃ１〜Ｃ３−アルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−Ｈ、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ３０Ｒ３１、ハロ、−ＣＮ、−ＯＨ、およびＣ３〜Ｃ６−シクロアルキルからなる群から独立に選択され、ここで規定するＲ３０およびＲ３１は、ＨおよびＣ１〜Ｃ３アルキルからなる群からそれぞれ独立に選択され、
あるいはＲ２およびＲ３は一緒になって５員もしくは６員ヘテロアリール、フェニル、Ｃ４〜Ｃ６−シクロアルキル、または４〜６員ヘテロシクロアルキルを形成していてもよく、前記Ｃ４〜Ｃ６−シクロアルキルまたは４〜６員ヘテロシクロアルキルは、ハロ、−ＯＨ、オキソ、およびＣ１〜Ｃ３アルキルから独立に選択される１個〜３個の置換基で任意に置換されていてもよく、前記５員もしくは６員ヘテロアリールまたはフェニルは、ハロ、−ＣＮ、−ＯＨ、−Ｏ−Ｃ１〜Ｃ３アルキル、およびＣ１〜Ｃ３アルキルから独立に選択される１個〜３個の置換基で任意に置換されていてもよく、
Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、およびＲ７は、Ｈ、−ＯＨ、Ｃ３−シクロアルキル、Ｃ１〜Ｃ３−アルキル、−（Ｃ１〜Ｃ３−アルキル）−Ｓ−（Ｃ１〜Ｃ３−アルキル）、−Ｓ−Ｃ１〜Ｃ３−アルキル、−（Ｃ１〜Ｃ３−アルキル）−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ３−アルキル）、−Ｏ−Ｃ１〜Ｃ３−アルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−Ｃ１〜Ｃ３−アルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−Ｈ、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ３０Ｒ３１、ハロ、−ＣＮ、および−ＯＨからなる群から選択され、ここで規定するＲ３０およびＲ３１は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ３−アルキル、−Ｏ−Ｃ１〜Ｃ３−アルキル、およびハロからなる群からそれぞれ独立に選択される）
または薬学的に許容できるその塩。
【請求項２】
Ｒ１が、チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−２−イルまたはチエノ［２，３−ｃ］ピリジン−２−イルであり、これらは、−ＯＨ、Ｃ１〜Ｃ３アルキル、ハロ、および−Ｏ−Ｃ１〜Ｃ３アルキルからなる群からそれぞれ独立に選択される１個〜３個の置換基で任意に置換されていてもよい、請求項１に記載の化合物または薬学的に許容できるその塩。
【請求項３】
Ｒ２およびＲ３が、水素、Ｃ１〜Ｃ３−アルキル、−（Ｃ１〜Ｃ３−アルキル）−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ３−アルキル）、−Ｏ−Ｃ１〜Ｃ３−アルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−Ｃ１〜Ｃ３−アルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−Ｈ、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ３０Ｒ３１、ハロ、−ＣＮ、−ＯＨ、およびＣ３〜Ｃ６−シクロアルキルからなる群から独立に選択され、ここで規定するＲ３０およびＲ３１が、ＨおよびＣ１〜Ｃ３アルキルからなる群からそれぞれ独立に選択される、請求項１もしくは２に記載の化合物または薬学的に許容できるその塩。
【請求項４】
Ｒ２およびＲ３が、水素およびＣ１〜Ｃ３アルキルからなる群から独立に選択される、請求項１、２もしくは３に記載の化合物、または薬学的に許容できるその塩。
【請求項５】
Ｒ２がＣ１〜Ｃ２アルキルであり、Ｒ３が水素である、請求項１、２、３もしくは４に記載の化合物、または薬学的に許容できるその塩。
【請求項６】
前記化合物が、
２−［１−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］チエノ［３，２−ｃ］ピリジン、
２−［３，４−ジメチル−１−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］チエノ［３，２−ｃ］ピリジン、
２−［３−メチル−１−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］チエノ［３，２−ｃ］ピリジン、
２−［３−エチル−１−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］チエノ［３，２−ｃ］ピリジン、
２−［４−エチル−１−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］チエノ［３，２−ｃ］ピリジン、および
薬学的に許容できるこれらの塩からなる群から選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項７】
前記化合物が、２−［４−メチル−１−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］チエノ［３，２−ｃ］ピリジンである、請求項１に記載の化合物または薬学的に許容できるその塩。
【請求項８】
瘢痕形成を抑制するための医薬の製造における、請求項１〜７いずれかに記載の化合物または薬学的に許容できるその塩の使用。
【請求項９】
瘢痕形成を抑制するための医薬の製造における、２−［４−メチル−１−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］チエノ［３，２−ｃ］ピリジンまたは薬学的に許容できるその塩の使用。
【請求項１０】
治療有効量の請求項１〜７いずれかに記載の化合物または薬学的に許容できるその塩と、薬学的に許容できる賦形剤とを含む医薬組成物。
【請求項１１】
前記化合物が、２−［４−メチル−１−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］チエノ［３，２−ｃ］ピリジンまたは薬学的に許容できるその塩である、請求項１０に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
治療有効量の請求項１〜７いずれかに記載の化合物、または薬学的に許容できるその塩と、局所適用に適する薬学的に許容できる賦形剤とを含む局所用医薬組成物。
【請求項１３】
前記瘢痕が、ケロイド瘢痕または過形成性瘢痕である、請求項８または９記載の使用。
【請求項１４】
細胞におけるＳｍａｄ結合エレメント（ＳＢＥ）媒介性活性の阻害のための医薬の製造における、請求項１〜７いずれか記載の化合物または薬学的に許容できるその塩の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
【背景技術】
【０００２】
ＴＧＦ−β（トランスフォーミング増殖因子β）は、線維性および腫瘍促進性のシグナリングカスケードを活性化する。ＴＧＦβ１、ＴＧＦβ２およびＴＧＦβ３の３種の哺乳類ＴＧＦβがＴＧＦβ経路を活性化し得る。ＴＧＦβは、細胞表面受容体に結合し、それを通して信号を送る（Ｓｉｎｇｈら（２００４年）、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃ．ａｎｄ  Ｄｅｖ．、第７巻：４３７〜４４５ページを参照されたい）。ＴＧＦβは、最初にＩＩ型受容体（ＴβＲＩＩ）に結合し、次いでこれがＩ型受容体（ＴβＲＩ）（すなわち、アクチビン受容体様キナーゼ（ＡＬＫ））に結合し、それをリン酸化する。ＡＬＫタンパク質というファミリーに含まれるＡＬＫ−５は、ＴＧＦβに対して最も特異的なＡＬＫである。ＡＬＫ−５が活性化されると、細胞内タンパク質がリン酸化され、これによって線維化および腫瘍化が調節される。したがって、ＡＬＫ−５阻害剤の発見は、癌、および線維化が関与する状態を治療する阻害剤を発見するための活発な研究領域である（Ｓｉｎｇｈら（２００４年）を参照されたい）。
【０００３】
線維化が関与する状態の一例は、創傷修復の際の瘢痕形成である。過形成性瘢痕およびケロイド瘢痕を含めた瘢痕は通常、創傷部位でコラーゲンが沈着する結果として生じる。創傷は、手術、偶発的な損傷、火傷、外傷などを含めた、多くの異なる種類の機序を通して生じ得る。ＴＧＦβ経路を阻害するＴＧＦβ３、ＴＧＦβ１およびＴＧＦβ２に対する抗体の適用が、瘢痕を縮小させる助けになり得ることが報告されている（Ｏ’ＫａｎｅおよびＦｅｒｇｕｓｏｎ（１９９７年）、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．、第２９巻：６３〜７８ページ）。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
したがって、瘢痕形成の軽減、さらには他の線維性状態ならびに癌の治療に使用することのできる小分子ＡＬＫ−５阻害剤が、当業界で依然として求められている。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
一態様では、本発明は、式Ｉの化合物
【０００６】
【化１】
0005443988.tif 000002
または薬学的に許容できるその塩［式中、Ｒ１は、チエノ［３，２−ｃ］ピリジニル、チエノ［３，２−ｂ］ピリジニル、チエノ［２，３−ｃ］ピリジニル、またはチエノ［２，３−ｂ］ピリジニルであり、これらはそれぞれ、−Ｃ１〜Ｃ３−アルキル、−（Ｃ１〜Ｃ３−アルキル）−Ｓ−（Ｃ１〜Ｃ３−アルキル）、−Ｓ−Ｃ１〜Ｃ３−アルキル、−（Ｃ１〜Ｃ３−アルキル）−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ３−アルキル）、−Ｏ−Ｃ１〜Ｃ３−アルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−Ｃ１〜Ｃ３−アルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−Ｈ、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ３０Ｒ３１、ハロ、−ＣＮ、−ＯＨからなる群からそれぞれ独立に選択される１個〜３個の置換基で置換されていてもよく、ここでＲ３０およびＲ３１は、Ｈ、−Ｃ１〜Ｃ３アルキル−ＯＨ、−Ｃ１〜Ｃ３−アルキル、ハロ、および−Ｏ−Ｃ１〜Ｃ３−アルキルからなる群からそれぞれ独立に選択され、Ｒ２およびＲ３は、水素、−Ｃ１〜Ｃ３−アルキル、−（Ｃ１〜Ｃ３−アルキル）−Ｓ−（Ｃ１〜Ｃ３−アルキル）、−Ｓ−Ｃ１〜Ｃ３−アルキル、−（Ｃ１〜Ｃ３−アルキル）−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ３−アルキル）、−Ｏ−Ｃ１〜Ｃ３−アルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−Ｃ１〜Ｃ３−アルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−Ｈ、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ３０Ｒ３１、ハロ、−ＣＮ、−ＯＨ、およびＣ３〜Ｃ６−シクロアルキルからなる群からそれぞれ独立に選択され、ここでＲ３０およびＲ３１は、Ｈおよび−Ｃ１〜Ｃ３アルキルからなる群からそれぞれ独立に選択され、またはＲ２およびＲ３は一緒になって５員もしくは６員ヘテロアリール、フェニル、Ｃ４〜Ｃ６−シクロアルキル、または４〜６員ヘテロシクロアルキルを形成していてもよく、前記Ｃ４〜Ｃ６−シクロアルキルまたは４〜６員のヘテロシクロアルキルは、ハロ、−ＯＨ、オキソ、および−Ｃ１〜Ｃ３アルキルからそれぞれ独立に選択される１個〜３個の置換基で置換されていてもよく、前記５員もしくは６員ヘテロアリールまたはフェニルは、ハロ、−ＣＮ、−ＯＨ、−Ｏ−Ｃ１〜Ｃ３アルキルおよび−Ｃ１〜Ｃ３アルキルからそれぞれ独立に選択される１個〜３個の置換基で置換されていてもよく、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、およびＲ７は、Ｈ、−ＯＨ、Ｃ３−シクロアルキル、−Ｃ１〜Ｃ３−アルキル、−（Ｃ１〜Ｃ３−アルキル）−Ｓ−（Ｃ１〜Ｃ３−アルキル）、−Ｓ−Ｃ１〜Ｃ３−アルキル、−（Ｃ１〜Ｃ３−アルキル）−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ３−アルキル）、−Ｏ−Ｃ１〜Ｃ３−アルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−Ｃ１〜Ｃ３−アルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−Ｈ、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ３０Ｒ３１、ハロ、−ＣＮ、−ＯＨからなる群から選択され、ここでＲ３０およびＲ３１は、Ｈ、−Ｃ１〜Ｃ３アルキル、−Ｏ−Ｃ１〜Ｃ３−アルキル、およびハロからなる群からそれぞれ独立に選択される］を提供する。
【０００７】
ある実施形態では、Ｒ１は、本明細書で指定するとおり置換されていてもよいチエノ［３，２−ｃ］ピリジニルである。チエノ［３，２−ｃ］ピリジンの各位置には、以下のように番号が振られる。
【０００８】
【化２】
0005443988.tif 000003
チエノ［３，２−ｃ］ピリジニルは、チエノ［３，２−ｃ］ピリジンの一価の基である。したがって、本発明の特定の実施形態では、式ＩＩの化合物は次のとおりである。
【０００９】
【化３】
0005443988.tif 000004
［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、およびＲ７は、本明細書で指定する意味のいずれかを有し、チエノ［３，２−ｃ］基は、２、３、４、６または７位のいずれかで結合している。］
【００１０】
ある実施形態では、Ｒ１は、指定するとおり置換されていてもよいチエノ［２，３−ｃ］ピリジニルである。チエノ［２，３−ｃ］ピリジンの各位置には、以下のように番号が振られる。
【００１１】
【化４】
0005443988.tif 000005
チエノ［２，３−ｃ］ピリジニルは、チエノ［２，３−ｃ］ピリジンの一価の基である。したがって、本発明ある実施形態では、式ＩＩＩの化合物は次のとおりである。
【００１２】
【化５】
0005443988.tif 000006
［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、およびＲ７は、本明細書で指定する意味のいずれかを有し、チエノ［２，３−ｃ］基は、２、３、４、５または７位のいずれかで結合している。］
【００１３】
ある実施形態では、Ｒ１は、本明細書で指定するとおり置換されていてもよいチエノ［２，３−ｂ］ピリジニルである。チエノ［２，３−ｂ］ピリジンの各位置には、以下のように番号が振られる。
【００１４】
【化６】
0005443988.tif 000007
チエノ［２，３−ｂ］ピリジニルは、チエノ［２，３−ｃ］ピリジンの一価の基である。したがって、本発明のある実施形態では、式ＩＶの化合物は次のとおりである。
【００１５】
【化７】
0005443988.tif 000008
［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、およびＲ７は、本明細書で指定する意味のいずれかを有し、チエノ［２，３−ｂ］基は、２、３、４、５または６位のいずれかで結合している。］
【００１６】
ある実施形態では、Ｒ１は、本明細書で指定するとおり置換されていてもよいチエノ［３，２−ｂ］ピリジニルである。チエノ［３，２−ｂ］ピリジンの各位置には、以下のように番号が振られる。
【００１７】
【化８】
0005443988.tif 000009
チエノ［３，２−ｂ］ピリジニルは、チエノ［３，２−ｃ］ピリジンの一価の基である。したがって、本発明のある実施形態では、式Ｖの化合物は次のとおりである。
【００１８】
【化９】
0005443988.tif 000010
［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、およびＲ７は、本明細書で指定する意味のいずれかを有し、チエノ［３，２−ｂ］基は、２、３、５、６または７位のいずれかで結合している。］
【００１９】
ある実施形態では、Ｒ１は、チエノ［３，２−ｃ］ピリジニルまたはチエノ［２，３−ｃ］ピリジニルである。
【００２０】
ある実施形態では、Ｒ１は、Ｃ１〜Ｃ３−アルキル、−（Ｃ１〜Ｃ３−アルキル）−Ｓ−（Ｃ１〜Ｃ３−アルキル）、−Ｓ−Ｃ１〜Ｃ３−アルキル、−（Ｃ１〜Ｃ３−アルキル）−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ３−アルキル）、−Ｏ−Ｃ１〜Ｃ３−アルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−Ｃ１〜Ｃ３−アルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−Ｈ、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ３０Ｒ３１、ハロ、−ＣＮ、−ＯＨからなる群からそれぞれ独立に選択される１〜３個の置換基で置換されていてもよいチエノ［３，２−ｃ］ピリジニルまたはチエノ［２，３−ｃ］ピリジニルであり、Ｒ３０およびＲ３１は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ３アルキル−ＯＨ、Ｃ１〜Ｃ３−アルキル、ハロ、および−Ｏ−Ｃ１〜Ｃ３−アルキルからなる群からそれぞれ独立に選択される。
【００２１】
ある実施形態では、Ｒ１は、−ＯＨ、Ｃ１〜Ｃ３アルキル、ハロ、および−Ｏ−Ｃ１〜Ｃ３アルキルからなる群からそれぞれ独立に選択される１個〜３個の置換基で置換されていてもよいチエノ［３，２−ｃ］ピリジニルまたはチエノ［２，３−ｃ］ピリジニルである。
【００２２】
ある実施形態では、Ｒ２およびＲ３は一緒になってＣ４〜Ｃ６−シクロアルキルまたは４〜６員ヘテロシクロアルキルを形成しており、前記Ｃ４〜Ｃ６−シクロアルキルまたは４〜６員ヘテロシクロアルキルは、オキソおよびＣ１〜Ｃ３アルキルからそれぞれ独立に選択される１個〜３個の置換基で置換されていてもよい。他の実施形態では、Ｒ２およびＲ３は一緒になってＣ５−シクロアルキルまたは４〜６員ヘテロシクロアルキルを形成しており、前記４〜６員ヘテロシクロアルキルは、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロチエニル、イミダゾリジニル、オキサゾリジニル、イミダゾリニル、イソキサゾリジニル、およびピロリジニルからなる群から選択される。他の実施形態では、Ｒ２およびＲ３は一緒になってＣ５−シクロアルキルを形成しており、Ｒ１は、チエノ［３，２−ｃ］ピリジニルまたはチエノ［２，３−ｃ］ピリジニルである。
【００２３】
ある実施形態では、本発明の化合物は、２−（２−（６−メチルピリジン−２−イル）−２，４，５，６−テトラヒドロシクロペンタ［ｃ］ピラゾール−３−イル）チエノ［３，２−ｃ］ピリジン（ＩＵＰＡＣ名：２−（１−（６−メチルピリジン−２−イル）−２，４，５，６−テトラヒドロシクロペンタ［ｃ］ピラゾール−５−イル）チエノ［３，２−ｃ］ピリジン）または薬学的に許容できるその塩である。
【００２４】
ある実施形態では、本発明の化合物は、２−（２−（６−メチルピリジン−２−イル）−２，４，５，６−テトラヒドロシクロペンタ［ｃ］ピラゾール−３−イル）チエノ［２，３−ｃ］ピリジン（ＩＵＰＡＣ名：２−（１−（６−メチルピリジン−２−イル）−２，４，５，６−テトラヒドロシクロペンタ［ｃ］ピラゾール−５−イル）チエノ［２，３−ｃ］ピリジン）または薬学的に許容できるその塩である。
【００２５】
他の実施形態では、Ｒ２およびＲ３は、水素、Ｃ１〜Ｃ３−アルキル、−（Ｃ１〜Ｃ３−アルキル）−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ３−アルキル）、−Ｏ−Ｃ１〜Ｃ３−アルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−Ｃ１〜Ｃ３−アルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−Ｈ、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ３０Ｒ３１、ハロ、−ＣＮ、−ＯＨ、およびＣ３〜Ｃ６−シクロアルキルからなる群からそれぞれ独立に選択され、Ｒ３０およびＲ３１は、ＨおよびＣ１〜Ｃ３アルキルからなる群からそれぞれ独立に選択される。特定の実施形態では、Ｒ２およびＲ３は、水素およびＣ１〜Ｃ３アルキルからなる群からそれぞれ独立に選択される。さらに特定の実施形態では、Ｒ２はＣ１〜Ｃ２アルキルであり、Ｒ３は水素である。
【００２６】
ある実施形態では、Ｒ５、Ｒ６およびＲ７はＨであり、Ｒ４はＣ１〜Ｃ３−アルキルである。さらに他の実施形態では、Ｒ４はメチルである。ある実施形態では、Ｒ５、Ｒ６およびＲ７はＨであり、Ｒ４はメチルである。
【００２７】
ある実施形態では、Ｒ１は、−ＯＨ、Ｃ１〜Ｃ３アルキル、ハロ、および−Ｏ−Ｃ１〜Ｃ３アルキルからなる群からそれぞれ独立に選択される１個〜３個の置換基で置換されていてもよいチエノ［３，２−ｃ］ピリジニルまたはチエノ［２，３−ｃ］ピリジニルである。
【００２８】
ある実施形態では、Ｒ１は、−ＯＨ、Ｃ１〜Ｃ３アルキル、ハロ、および−Ｏ−Ｃ１〜Ｃ３アルキルからなる群からそれぞれ独立に選択される１個〜３個の置換基で置換されていてもよいＲ１は、チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−２−イルまたはチエノ［２，３−ｃ］ピリジン−２−イルである。
【００２９】
ある実施形態では、Ｒ１は、−ＯＨ、Ｃ１〜Ｃ３アルキル、ハロ、および−Ｏ−Ｃ１〜Ｃ３アルキルからなる群からそれぞれ独立に選択される１個〜３個の置換基で置換されていてもよいチエノ［３，２−ｃ］ピリジン−２−イルである。特定の実施形態では、Ｒ１はチエノ［３，２−ｃ］ピリジニル−２イルである。
【００３０】
ある実施形態では、Ｒ５、Ｒ６、およびＲ７はＨであり、Ｒ４はＣ１〜Ｃ３−アルキルであり、Ｒ１は、−ＯＨ、Ｃ１〜Ｃ３アルキル、ハロ、および−Ｏ−Ｃ１〜Ｃ３アルキルからなる群からそれぞれ独立に選択される１個〜３個の置換基で置換されていてもよいチエノ［３，２−ｃ］ピリジニルまたはチエノ［２，３−ｃ］ピリジニルである。ある実施形態では、Ｒ５、Ｒ６およびＲ７はＨであり、Ｒ４はメチルであり、Ｒ１は、−ＯＨ、Ｃ１〜Ｃ３アルキル、ハロ、および−Ｏ−Ｃ１〜Ｃ３アルキルからなる群からそれぞれ独立に選択される１個〜３個の置換基で置換されていてもよいチエノ［３，２−ｃ］ピリジニルまたはチエノ［２，３−ｃ］ピリジニルである。ある実施形態では、Ｒ５、Ｒ６およびＲ７はＨであり、Ｒ４はメチルであり、Ｒ１はチエノ［３，２−ｃ］ピリジニルまたはチエノ［２，３−ｃ］ピリジニルである。ある実施形態では、Ｒ５、Ｒ６、およびＲ７はＨであり、Ｒ４はメチルであり、Ｒ１はチエノ［２，３−ｃ］ピリジニルである。ある実施形態では、Ｒ５、Ｒ６およびＲ７はＨであり、Ｒ４はメチルであり、Ｒ１はチエノ［３，２−ｃ］ピリジニルである。
【００３１】
ある実施形態では、Ｒ５、Ｒ６およびＲ７はＨであり、Ｒ４はメチルであり、Ｒ１はチエノ［２，３−ｃ］ピリジニルであり、Ｒ２およびＲ３は、水素およびＣ１〜Ｃ３アルキルからなる群からそれぞれ独立に選択される。
【００３２】
ある実施形態では、Ｒ５、Ｒ６およびＲ７はＨであり、Ｒ４はメチルであり、Ｒ１はチエノ［３，２−ｃ］ピリジニルであり、Ｒ２およびＲ３は、水素およびＣ１〜Ｃ３アルキルからなる群からそれぞれ独立に選択される。
【００３３】
ある実施形態では、Ｒ５、Ｒ６およびＲ７はＨであり、Ｒ４はメチルであり、Ｒ１はチエノ［２，３−ｃ］ピリジン−２−イルであり、Ｒ２およびＲ３は、水素およびＣ１〜Ｃ３アルキルからなる群からそれぞれ独立に選択される。
【００３４】
ある実施形態では、Ｒ５、Ｒ６およびＲ７はＨであり、Ｒ４はメチルであり、Ｒ１はチエノ［３，２−ｃ］ピリジン−２−イルであり、Ｒ２およびＲ３は、水素およびＣ１〜Ｃ３アルキルからなる群からそれぞれ独立に選択される。
【００３５】
式Ｉの化合物の例には、以下のものが含まれる。
２−［１−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］チエノ［３，２−ｃ］ピリジン、
２−［３，４−ジメチル−１−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］チエノ［３，２−ｃ］ピリジン、
２−［３−メチル−１−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］チエノ［３，２−ｃ］ピリジン、
２−［３−エチル−１−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］チエノ［３，２−ｃ］ピリジン、
２−［４−エチル−１−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］チエノ［３，２−ｃ］ピリジン、および薬学的に許容できるこれらの塩。
【００３６】
式Ｉの化合物の別の例は、２−［４−メチル−１−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］チエノ［３，２−ｃ］ピリジンおよび薬学的に許容できるその塩である。特定の一実施形態では、化合物は２−［４−メチル−１−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］チエノ［３，２−ｃ］ピリジンである。
【００３７】
式Ｉの化合物の別の例は、２−（４−メチル−１−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）チエノ［２，３−ｃ］ピリジンまたは薬学的に許容できるその塩である。
【００３８】
別の態様では、本発明は、瘢痕形成を軽減する方法であって、そのような治療を必要とする哺乳動物に、治療有効量の式Ｉの化合物または薬学的に許容できるその塩を投与することを含む方法を提供する。ある実施形態では、式Ｉの化合物は、局所投与する。ある実施形態では、式Ｉの化合物は、２−［４−メチル−１−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］チエノ［３，２−ｃ］ピリジンまたは薬学的に許容できるその塩である。
【００３９】
ある実施形態では、本発明は、現存する瘢痕を縮小させる方法であって、そのような治療を必要とする哺乳動物に、治療有効量の式Ｉの化合物または薬学的に許容できるその塩を投与することを含む方法を提供する。
【００４０】
ある実施形態では、２−［４−メチル−１−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］チエノ［３，２−ｃ］ピリジンまたは薬学的に許容できるその塩は、瘢痕形成を抑制するための医薬の製造において使用することができる。
【００４１】
別の態様では、本発明は、ＴＧＦβが仲介する状態の治療方法であって、そのような治療を必要とする哺乳動物に、治療有効量の式Ｉの化合物または薬学的に許容できるその塩を投与することを含む方法を提供する。ある実施形態では、ＴＧＦβが仲介する状態は、癌、乳癌、肺癌、大腸癌、前立腺癌、卵巣癌、膵癌、黒色腫、線維性疾患、糸球体腎炎、糖尿病性腎症、肝線維症、肺線維症、動脈肥厚、再狭窄、強皮症、および皮膚瘢痕からなる群から選択される。ある実施形態では、ＴＧＦβが仲介する状態は、皮膚瘢痕である。ある実施形態では、式Ｉの化合物は、２−［４−メチル−１−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］チエノ［３，２−ｃ］ピリジンまたは薬学的に許容できるその塩である。ある実施形態では、ＴＧＦβが仲介する状態は皮膚瘢痕であり、式Ｉの化合物は、２−［４−メチル−１−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］チエノ［３，２−ｃ］ピリジンまたは薬学的に許容できるその塩である。
【００４２】
別の態様では、本発明は、治療有効量の式Ｉの化合物と薬学的に許容できる賦形剤とを含む医薬組成物を提供する。ある実施形態では、式Ｉの化合物は、２−［４−メチル−１−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］チエノ［３，２−ｃ］ピリジンまたは薬学的に許容できるその塩である。
【００４３】
別の態様では、本発明は、治療有効量の式Ｉの化合物または薬学的に許容できるその塩と、局所適用に適する薬学的に許容できる賦形剤とを含む、局所用医薬組成物を提供する。ある実施形態では、式Ｉの化合物は、２−［４−メチル−１−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］チエノ［３，２−ｃ］ピリジンまたは薬学的に許容できるその塩である。
【００４４】
別の実施形態では、本発明は、本発明の化合物の少なくとも１種を小売り販売用に包装したものが、消費者にＴＧＦβが仲介する状態を緩和するための化合物の使用法を助言する説明書と合わせて入っているキットを対象とする。追加の実施形態は、ＴＧＦβによって活性化される経路の不適正な活性化を検出する診断薬としての化合物の使用を対象とする。
【００４５】
定義
以下の用語は、特許請求の範囲を含めた本出願を通して、特に別段の指摘がない限り、以下で定義する意味を有する。
【００４６】
複数形および単数形は、数の表示以外は、共通のものとして扱うべきである。
【００４７】
「瘢痕」とは、創傷部位で創傷の修復後に存在する跡である。「瘢痕」という用語は、ケロイド瘢痕、過形成性瘢痕、およびほとんど盛り上がりがなく、ほとんど元の創傷の境界を超えて成長しない瘢痕を包含する。
【００４８】
「ケロイド瘢痕」とは、通常は元の創傷の境界を超えて成長する、創傷部位での瘢痕組織の異常増殖である。
【００４９】
「過形成性瘢痕」とは、ほとんど元の創傷の境界を超えて成長しない盛り上がった瘢痕である。
【００５０】
「創傷」という用語は、皮膚などの組織の正常な完全性を崩壊させる損傷を指す。「創傷」は、意図的に生じる場合もあり、偶然に生じる場合もある。創傷の例には、裂傷、挫傷、閉鎖性創傷、開放性創傷、穿孔性創傷、切創、刺創、火傷などが含まれる。
【００５１】
「式Ｉの化合物」、「本発明の化合物」、および「化合物」という用語は、本出願を通して区別なく使用し、同義語として扱うべきである。
【００５２】
「患者」という用語は、例えば、モルモット、マウス、ラット、スナネズミ、ネコ、ウサギ、イヌ、サル、チンパンジー、ベニガオザル、ヒトなどの温血動物を指す。
【００５３】
用語「治療する」とは、化合物が、患者の疾患（もしくは状態）または疾患に関連する任意の組織損傷を軽減し、緩和し、またはその進行を緩慢にする能力を指す。
【００５４】
用語「哺乳動物」とは、哺乳綱のメンバーを指す。哺乳動物の例には、限定するものではないが、ヒト、霊長類、チンパンジー、げっ歯類、マウス、ラット、ウサギ、ウマ、家畜、イヌ、ネコ、ヒツジ、および乳牛が含まれる。特定の一実施形態では、哺乳動物はヒトである。
【００５５】
「異性体」という用語は、以下で定義するような「立体異性体」および「幾何異性体」を意味する。
【００５６】
「立体異性体」という用語は、１つまたは複数のキラル中心を有し、各中心がＲ配置またはＳ配置で存在し得る化合物を意味する。立体異性体には、すべてのジアステレオ異性体、鏡像異性体、およびエピマーの形態、ならびにそのラセミ体および混合物が含まれる。
【００５７】
「幾何異性体」という用語は、シス、トランス、アンチ、Ｅ（ｅｎｔｇｅｇｅｎ）、およびＺ（ｚｕｓａｍｍｅｎ）型で存在し得る化合物、ならびにこれらの混合物を意味する。
【００５８】
式（Ｉ）の化合物のうちのいくつかは、幾何異性体として存在し得る。式（Ｉ）の化合物は、１つまたは複数の不斉中心を有し、したがって２種以上の立体異性体形態として存在する。本発明は、式（Ｉ）の化合物のすべての個々の立体異性体および幾何異性体、ならびにその混合物を包含する。個々の鏡像異性体は、キラル分離によって、合成する際に適切な立体化学の妥当な不斉中心が組み込まれている入手可能な合成構成単位を使用して、またはアキラルな合成構成単位から出発する不斉合成によって得ることができる。
【００５９】
ある種の本発明の化合物は、互変異性体形態として存在する場合もある。そのようなすべての互変異性体形態は、本発明の範囲内に含まれる。
【００６０】
さらに、本発明の化合物は、溶媒和していない形態でだけでなく、水和した形態を含めて、水、エタノールなどの薬学的に許容できる溶媒と溶媒和した形態で存在する場合もある。本発明の化合物は、１種または複数の結晶状態、すなわち多形体で存在する場合もあり、または非晶質固体として存在する場合もある。このような形態はすべて、本発明の範囲内に含まれるものとする。
【００６１】
「アルキル基」または「アルキル」という用語は、直鎖または分枝鎖アルカンの一価の基を意味する。例えば、「Ｃ１〜３アルキル」とは、１〜３個の炭素原子を有するアルキル基である。Ｃ１〜Ｃ３直鎖アルキル基の例には、メチル、エチル、およびｎ−プロピルが含まれる。分枝鎖Ｃ１〜Ｃ３アルキル基の例には、イソプロピルが含まれる。
【００６２】
アルキルという用語は、「無置換アルキル」および「置換アルキル」の両方を包含し、後者は、炭化水素主鎖の１個または複数の炭素上の水素（例えば１〜６個の置換基）を置換する置換基を有するアルキル基を指す。そのような置換基は、ハロ、Ｉ、Ｂｒ、Ｃｌ、Ｆ、−ＯＨ、−ＣＯＯＨ、および−ＮＨ２からなる群からそれぞれ独立に選択されるものでよい。
【００６３】
典型的な置換Ｃ１〜Ｃ３直鎖アルキル基としては、２−クロロプロピル、２−ヒドロキシ−エチル、２−アミノプロピル、およびトリフルオロメチルが挙げられる。
【００６４】
「Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル」という用語は、３〜６個の炭素を含んでいる単環式アルカンの一価の基を指す。「Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル」の例には、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、およびシクロヘキシルが含まれる。
【００６５】
「Ｃ４〜Ｃ６シクロアルキル」という用語は、４〜６個の炭素を含んでいる単環式アルカンの一価の基を指す。「Ｃ４〜Ｃ６シクロアルキル」の例には、シクロブチル、シクロペンチル、およびシクロヘキシルが含まれる。
【００６６】
「４〜６員ヘテロシクロアルキル」とは、４〜６員単環式ヘテロシクロアルカンの一価の基を指す。
【００６７】
４員ヘテロシクロアルキルは、３個の炭素と、酸素、窒素、硫黄から選択されるヘテロ原子を含んでいる４員環である。硫黄は、Ｓ（Ｏ）またはＳ（Ｏ）２として存在してもよい。４員ヘテロシクロアルキル基の例には、オキセタニル、チエタニル、およびアゼチジニルが含まれる。
【００６８】
５員ヘテロシクロアルキルは、２〜４個の炭素原子と、１個のＯ；１個のＳ；１個のＮ；２個のＮ；１個のＳと１個のＮ；１個のＳと２個のＮ；１個のＯと１個のＮ；および１個のＯと２個のＮからなる群から選択される１〜３個のヘテロ原子とを含んでおり、２個のＯ原子、または１個のＯ原子と１個のＳ原子が環中に存在するとき、その２個のＯ原子または１個のＯ原子と１個のＳ原子は、互いに直接に結合していない。硫黄は、Ｓ（Ｏ）またはＳ（Ｏ）２として存在してもよい。５員ヘテロシクロアルキルの例には、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロチエニル、イミダゾリジニル、オキサゾリジニル、イミダゾリニル、イソキサゾリジニル、およびピロリジニルが含まれる。
【００６９】
「６員ヘテロシクロアルキル」は、３〜５個の炭素原子と、１個のＯ；２個のＯ；１個のＳ；２個のＳ；１個のＮ；２個のＮ；３個のＮ；１個のＳ、１個のＯ、および１個のＮ；１個のＳと１個のＮ；１個のＳと２個のＮ；１個のＳと１個のＯ；１個のＳと２個のＯ；１個のＯと１個のＮ；ならびに１個のＯと２個のＮからなる群から選択される１〜３個のヘテロ原子を含んでおり、２個のＯ原子、または１個のＯ原子と１個のＳ原子が存在するとき、その２個のＯ原子、または１個のＯ原子と１個のＳ原子は、互いに直接に結合していない。硫黄は、Ｓ（Ｏ）またはＳ（Ｏ）２として存在してもよい。６員ヘテロシクロアルキルの例には、テトラヒドロピラニル、ジオキサニル、１，３−ジオキソラニル、１，４−ジチアニル、ヘキサヒドロピリミジン、モルホリニル、ピペラジニル、ピペリジニル、ピラゾリジニル、ピラゾリニル、１，２，３，６−テトラヒドロピリジニル、テトラヒドロチオピラニル、１，１−ジオキソ−ヘキサヒドロ−１λ６−チオピラニル、１，１−ジオキソ−１λ６−チオモルホリニル、チオモルホリニル、チオキサニル、および１，３，５−トリチアニルが含まれる。
【００７０】
「５員ヘテロアリール」は、２〜４個の炭素原子と、１個のＯ；１個のＳ；１個のＮ；２個のＮ；３個のＮ；１個のＳと１個のＮ；１個のＳと２個のＮ；１個のＯと１個のＮ；および１個のＯと２個のＮからなる群から選択される１〜３個のヘテロ原子とを有する５員単環式芳香環基である。ある実施形態では、５員ヘテロアリールは、フラニル、イミダゾリル、イソオキサゾリル、イソチアゾリル、オキサジアゾリル、オキサゾリル、ピラゾリル、ピロリル、チエニル、チアゾリル、およびトリアゾリルからなる群から選択される。
【００７１】
「６員ヘテロアリール」は、４〜５個の炭素原子と、１個のＮ；および２個のＮからなる群から選択される１または２個のヘテロ原子を有する６員単環式芳香環基である。ある実施形態では、６員ヘテロアリールは、ピリジニル、ピリミジニル、ピリダジニル、およびピラジニルからなる群から選択される。
【発明を実施するための形態】
【００７２】
化合物の調製
式Ｉの化合物を調製するための一般合成スキームを以下で述べる。
【００７３】
【化１０】
0005443988.tif 000011
スキーム１は、ピラゾール６の合成を示すものである。チエノ［３，２−ｃ］ピリジン１（例えば、Ｗｉｋｅｌら（１９９３年）、Ｊ．Ｈｅｔ．Ｃｈｅｍ．、第３０巻：２８９〜２９０ページを参照されたい）を、ＴＨＦ（テトラヒドロフラン）、ジエチルエーテルなどの非プロトン性溶媒中にて、約−４０℃以下でｎ−ブチルリチウムなどのアルキル−リチウム試薬と反応させることができる。チエノ［３，２−ｃ］ピリジンは、スキーム１では無置換として示すが、本明細書に記載のとおりに置換されていてもよい。次いで、反応液に、Ｎ−メチル−Ｎ−メトキシアセトアミド２（またはＮ−アセチル−モルホリン、無水酢酸、塩化アセチルなどの他の適切なアシル化剤）を加え、反応を−３０〜−４５℃で進行させて、ケトン３（例えば、１−（チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−２−イル）エタノン）を得る。
【００７４】
次いで、ケトン３を、ＤＭＦ（ジメチルホルムアミド）中にて約７０℃でジメトキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチルメタンアミン（「ＤＭＦ−ＤＭＡ」）と反応させて、４（例えば（Ｅ）−３−（ジメチルアミノ）−１−（チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−２−イル）プロパ−２−エン−１−オン）を得る。４を、酢酸中にて約８０℃でピリジニル−ヒドラジン５（例えば１−（６−メチルピリジン−２−イル）ヒドラジン）処理して、位置異性体６および７を得る。沈殿、濾過、カラムクロマトグラフィーなどの従来の精製技術を使用して、６から位置異性体７を分離すると６を得ることができる。
【００７５】
【化１１】
0005443988.tif 000012
スキーム２は、ピラゾール６への代替合成経路を示すものである。チエノ［３，２−ｃ］ピリジン１の溶液を、窒素ガス雰囲気中にてＴＨＦなどの溶媒中、約−５０℃〜−７８℃でｎ−ブチルリチウムなどのアルキルリチウム試薬と反応させることができる。チエノ［３，２−ｃ］ピリジンは、スキーム２では無置換として示すが、本明細書に記載のとおりに置換されていてもよい。ホウ酸トリイソプロピルおよびリン酸を加えると、ボロン酸９のリン酸塩が得られる。次いで、無機炭酸塩基（例えば、Ｎａ２ＣＯ３、Ｋ２ＣＯ３、ＮａＨＣＯ３など）やリン酸三カリウムなどの塩基と、Ｐｄ（Ｃｌ２）ｄｐｐｆ（ジクロロ（１，１ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン）パラジウム（ＩＩ））やｄｐｐｆ［（１，１ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセンなどのパラジウム触媒を加えて、ボロン酸９をピリジニル−ピラゾール１０に結合させて、ピラゾール６を得る。反応は、ＴＨＦや１，２−ジメトキシエタンなどの適切な溶媒中にて１〜２４時間還流させて、またはジオキサン中にて約８０〜１００℃で実施することができる。この反応は、ＫＦおよび水の存在下で実施することもできる。ボロン酸９の代わりに、対応するボロン酸エステルを使用することができる。１０の基ＬＧは、トリフルオロメタンスルホニル、Ｂｒ、Ｉ、Ｃｌなどの適切な脱離基を表す。１の代わりにそれぞれチエノ［３，２−ｂ］ピリジン、チエノ［２，３−ｃ］ピリジン、およびチエノ［２，３−ｂ］ピリジンを使用して、６の対応するチエノ［３，２−ｂ］ピリジン−２−イル、チエノ［２，３−ｃ］ピリジン−２−イル、およびチエノ［２，３−ｂ］ピリジン−２−イル類似体を調製することができる。
【００７６】
薬学的に許容できる塩
本発明の化合物（例えば、式Ｉの化合物）は、その限りでないが酸付加塩および／または塩基の塩を含めて、薬学的に許容できる塩を形成することができる。式（Ｉ）の化合物の薬学的に許容できる塩には、その（二塩を含めた）酸付加塩および塩基の塩が含まれる。適切な塩の例は、例えば、ＳｔａｈｌおよびＷｅｒｍｕｔｈ、「Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ：Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ，ａｎｄ  Ｕｓｅ」、Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ、ドイツ国Ｗｅｉｎｈｅｉｍ（２００２年）、およびＢｅｒｇｅら、「Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ」、Ｊ．ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ、１９７７年、第６６巻：１〜１９ページで見ることができる。
【００７７】
式Ｉの化合物の薬学的に許容できる酸付加塩には、塩酸、硝酸、リン酸、硫酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、亜リン酸などの無機酸から誘導される非毒性の塩、ならびに脂肪族モノおよびジカルボン酸、フェニル置換されたアルカン酸、ヒドロキシアルカン酸、アルカン二酸、芳香族の酸、脂肪族の酸、芳香族スルホン酸などの有機酸から誘導される非毒性の塩が含まれる。したがって、そのような塩には、式Ｉの化合物の酢酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベシル酸塩（ベンゼンスルホン酸塩）、炭酸水素塩／炭酸塩、硫酸水素塩、カプリル酸塩、カンシル酸塩（カンファースルホン酸塩）、クロロ安息香酸塩、クエン酸塩、エジシル酸塩（１，２−エタンジスルホン酸塩）、リン酸二水素塩、ジニトロ安息香酸塩、エシル酸塩（エタンスルホン酸塩）、フマル酸塩、グルセプト酸塩、グルコン酸塩、グルクロン酸塩、ヒベンズ酸塩、塩酸塩／塩化物、臭化水素酸塩／臭化物、ヨウ化水素酸塩／ヨウ化物、イソ酪酸塩、一リン酸水素塩、イセチオン酸塩、Ｄ−乳酸塩、Ｌ−乳酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、マンデル酸塩、メシル酸塩（メタンスルホン酸塩）、メタリン酸塩、メチル安息香酸塩、メチル硫酸塩、２−ナプシル酸塩（２−ナフタレンスルホン酸塩）、ニコチン酸塩、硝酸塩、オロト酸塩、シュウ酸塩、パルモ酸塩、フェニル酢酸塩、リン酸塩、フタル酸塩、プロピオン酸塩、ピロリン酸塩、ピロ硫酸塩、糖酸塩、セバシン酸塩、ステアリン酸塩、スベリン酸塩、コハク酸硫酸塩、亜硫酸塩、Ｄ−酒石酸塩、Ｌ−酒石酸塩、トシル酸塩（トルエンスルホン酸塩）、キシナホ酸塩などが含まれる。アルギン酸塩、グルコン酸塩、ガラクツロン酸塩などの、アミノ酸の塩も企図する。
【００７８】
塩基性化合物の酸付加塩は、遊離の塩基形態を十分な量の所望の酸と接触させて特定の塩を生成することにより調製することができる。遊離塩基形態は、塩形態を塩基と接触させ、遊離塩基を単離することにより再生することもできる。遊離塩基形態は、極性溶媒への溶解性などの特定の物理的性質がそのそれぞれの塩形態と多少異なる場合もある。
【００７９】
薬学的に許容できる塩基付加塩は、アルカリ金属水酸化物およびアルカリ土類金属水酸化物または有機アミンなどの金属またはアミンを相手に生成することができる。陽イオンとして用いられる金属の例は、アルミニウム、カルシウム、マグネシウム、カリウム、ナトリウムなどである。適切なアミンの例には、アルギニン、コリン、クロロプロカイン、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン、ジエチルアミン、ジエタノールアミン、ジオールアミン、エチレンジアミン（エタン−１，２−ジアミン）、グリシン、リジン、メグルミン、Ｎ−メチルグルカミン、オールアミン、プロカイン（ベンザチン）、およびトロメタミンが含まれる。
【００８０】
酸性化合物の塩基付加塩は、遊離酸形態を十分な量の所望の塩基と接触させて、従来の方法で塩を生成することにより調製できる。遊離酸形態は、塩形態を酸と接触させ、遊離酸を単離することにより再生することもできる。遊離酸形態は、極性溶媒への溶解性などの特定の物理的性質がそのそれぞれの塩形態と多少異なる場合もある。
【００８１】
医薬組成物
一般に、本発明の化合物は、１種または複数の薬学的に許容できる賦形剤を含む医薬組成物として投与することができる。「医薬組成物」という表現は、医学的または獣医学的使用での投与に適する組成物を指す。「治療有効量」という表現は、特定の対象または対象集団において、単独で、または別の医薬または治療と共に投与するとき、治療対象となる疾患を抑制し、停止させ、または改善させるのに十分な、化合物または薬学的に許容できるその塩の量を意味する。例えば、ヒトまたは他の哺乳動物において、治療される特定の疾患および対象のための治療有効量は、研究室または臨床現場で実験的に決定することができる。
【００８２】
適切な剤形、投与量、および投与経路の決定は、製薬および医学技術の通常の技量の範囲内であり、以下に記載することを理解されたい。
【００８３】
「賦形剤」という用語は、本明細書では、本発明の化合物以外の任意の成分について述べるのに使用する。賦形剤の選択は通常、大部分は特定の投与方式、賦形剤が溶解性および安定性に及ぼす影響、剤形の性質などの要素に応じて決まる。薬学的に許容できる賦形剤は、投与される特定の組成物によって、ならびに組成物の投与に用いる特定の方法によって決定される部分もある。したがって、本発明の医薬組成物の適切な処方は、多種多様である（例えば、「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ」、第２０版、Ｇｅｎｎａｒｏら編、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ａｎｄ  Ｗｉｌｋｉｎｓ、２０００年を参照されたい）。
【００８４】
本発明の化合物は、シロップ、エリキシル、懸濁液、粉末、顆粒、錠剤、カプセル、トローチ剤、トローチ、水溶液、クリーム、軟膏、ローション、ゲル、乳濁液などの形で医薬組成物として製剤することができる。
【００８５】
本発明の化合物から医薬組成物を調製するには、薬学的に許容できる賦形剤は通常、固体および液体賦形剤とする。固体形態の製剤には、粉末、錠剤、丸剤、カプセル、カシェ剤、坐剤、および分散性顆粒が含まれる。固体賦形剤は、希釈剤、着香剤、結合剤、保存剤、錠剤崩壊剤、またはカプセル封入材料としても働き得る１種または複数の物質とすることができる。
【００８６】
粉末では、賦形剤は通常、固体を砕いたものであり、砕いた活性成分との混合物になっている。錠剤では、活性成分を、必要な結合性の性質を適度に有する賦形剤と混合し、所望の形状および大きさに成形する。
【００８７】
粉末および錠剤は通常、１％〜９５％（ｗ／ｗ）の活性化合物を含有する。ある実施形態では、活性化合物は、５％から７０％（ｗ／ｗ）に及ぶ。適切な賦形剤は、炭酸マグネシウム、ステアリン酸マグネシウム、タルク、糖、ラクトース、ペクチン、デキストリン、デンプン、ゼラチン、トラガカント、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、低融点ろう、カカオ脂などである。「製剤」という用語は、カプセルをもたらす賦形剤としてのカプセル化材料を伴う活性化合物の処方を包含するものとし、活性成分は、他の賦形剤を含みまたは含まない賦形剤によって囲まれ、したがってそれとつながっている。同様に、カシェ剤およびトローチ剤も含まれる。錠剤、粉末、カプセル剤、丸剤、カシェ剤、およびトローチ剤は、経口投与に適する固体剤形として使用することができる。
【００８８】
坐剤を調製するには、脂肪酸グリセリドまたはカカオ脂の混合物などの低融点ろうを最初に融解させ、活性成分を、例えば攪拌することによってその中に均一に分散させる。次いで、溶融した均質な混合物を、サイズ分けされた好都合な鋳型に注ぎ、冷まし、それによって凝固させることができる。
【００８９】
液体形態の製剤には、溶液、懸濁液、および乳濁液、例えば、水または水／プロピレングリコール溶液が含まれる。液体製剤は、活性成分を、当業界で知られているような懸濁化剤、甘味剤、着香剤、および保存剤を含有していてもよい薬学的に許容できる水性または非水性の溶媒に溶解させて調製することができる。
【００９０】
使用直前に経口投与用の液体形態製剤に変換することが企図された固体形態製剤も含まれる。そのような液体形態としては、溶液、懸濁液、および乳濁液が挙げられる。これらの製剤は、活性成分に加え、着色剤、香味剤、安定剤、緩衝液、人工および天然の甘味剤、分散剤、増粘剤、可溶化剤などを含有してよい。
【００９１】
単独のまたは他の適切な構成成分と組み合わせた本発明の化合物をエアロゾル製剤にすると（すなわち化合物は「噴霧する」ことができる）、吸入で投与することができる。エアロゾル製剤は、ジクロロジフルオロメタン、プロパン、窒素などの、許容できる加圧した噴射剤中に入れることができる。
【００９２】
本発明による局所用組成物は、溶液、ローション、膏薬、クリーム、軟膏、リポソーム、スプレー、ゲル、フォーム、ローラースティック、または局所用の医薬組成物を送達するのに日常的に使用される他の任意の製剤形態の形でよい。
【００９３】
静脈内、筋肉内、皮内、および皮下の経路によるものなどの非経口投与に適する製剤形態には、酸化防止剤、緩衝液、静菌剤、およびその製剤形態を目的のレシピエントの血液と等張性にする溶質を含有していてよい水性および非水性の等張性無菌注射溶液、ならびに懸濁化剤、可溶化剤、増粘剤、安定剤、および保存剤を含有していてよい水性および非水性の無菌懸濁液が含まれる。
【００９４】
医薬製剤は、単位剤形にすることが好ましい。そのような形態では、製剤を、適切な量の活性成分を含有する単位用量に小分けする。単位剤形は、包装された製剤でよく、パッケージは、バイアルまたはアンプル中に投与単位の錠剤、カプセル剤、粉末などの個別の量の製剤を含んでいる。また、単位剤形は、カプセル、錠剤、カシェ剤、もしくはトローチ剤それ自体でもよく、またはこれらのいずれかを適切な数で包装した形態でもよい。化合物の製剤形態は、アンプルやバイアルなどの単位用量または多用量密閉容器の体裁でよい。
【００９５】
本発明の化合物を含有する組成物は、小売り販売向け（すなわち製品）に包装することもできる。このような製品は、患者に製品の使用法を教えるような形でラベルを貼り、包装することができる。そのような説明書は、治療する状態、治療期間、投薬計画などを含むものでよい。
【００９６】
単位用量製剤中の活性成分の量は、特定の用途および活性成分の効力に従って、０．１ｍｇ〜１０００ｍｇ、好ましくは１．０ｍｇ〜１００ｍｇ、または単位用量の０．０１％〜９５％（ｗ／ｗ）と様々でよく、または調整することができる。対象に投与する用量は、本発明に関しては、対象において経時的に有益な治療応答をもたらすのに十分なものにすべきである。組成物は、所望ならば、他の適合性のある治療薬も含有してよい。
【００９７】
特定の状況のための適切な投与量の決定は、従業者の技量の範囲内である。用量は通常、用いる特定の化合物の有効性、対象の状態、治療対象となる疾患の重症度、ならびに治療を受ける対象の体重または表面積によって決定される。用量の規模は、特定の対象における特定の化合物の投与に付随する任意の有害な副作用の存在、性質、および程度によって決定される。治療対象となる疾患の治療または予防において投与される化合物の有効量を決定する際、医師は、化合物の循環血漿レベル、化合物の毒性、および／または疾患の進行などの要素を評価することができる。さらに、本発明の化合物は、諸要素によって決定される速度で投与することができ、その要素としては、化合物の薬物動態プロフィール、禁忌薬、および集団に適用したときの様々な濃度での化合物の副作用、ならびに対象の全体的な健康状態を挙げることができる。
【００９８】
治療は一般に、化合物の最適な用量より少ない少なめの投与量で開始する。その後、状況に応じた最適な効果に到達するまで投与量を少しずつ増加させる。所望ならば、便宜上、合計１日投与量を分け、日中に少量ずつ投与してもよい。
【００９９】
使用法
本発明の化合物は、瘢痕を縮小させるための使用が最も典型的であるといえるが、本発明はこの特定の状態に限定されない。本発明の化合物は、現存する瘢痕を縮小させるのに使用することができる。本発明の化合物は、ＴＧＦβが仲介する任意のタイプの状態を緩和するのに使用することもできる。ＴＧＦβが仲介する状態の例には、すべてのタイプの癌（例えば、乳癌、肺癌、大腸癌、前立腺癌、卵巣癌、膵臓癌、黒色腫、すべての血液の悪性病変など）、ならびにすべてのタイプの線維性疾患（例えば、糸球体腎炎、糖尿病性腎症、肝線維症、肺線維症、動脈肥厚および再狭窄、強皮症、皮膚瘢痕）が含まれる。特定の一実施形態では、ＴＧＦβが仲介する状態は皮膚瘢痕である。
【０１００】
「投与する」という用語は、化合物を対象と接触させる方法を指す。したがって、本発明の化合物は、注射を含めた様々な経路によって、すなわち、静脈内、筋肉内、皮内、皮下、十二指腸内に、非経口的に、または腹腔内に投与することができる。本明細書に記載の化合物はまた、吸入によって、例えば鼻腔内に投与することができる。さらに、本発明の化合物は、経皮的に、局所的に、また埋め込みによって投与することができる。ある実施形態では、本発明の化合物は、経口的に送達される。化合物は、直腸、頬側、膣内、または眼に送達することもできる。
【０１０１】
瘢痕を縮小させるために投与するとき、本発明の化合物は通常、創傷および／または創傷周囲の部位に適用することができる。例えば、本発明の化合物は、パッチ、溶液、ローション、膏薬、クリーム、軟膏、リポソーム、スプレー、ゲル、フォーム、ローラースティック、または局所用の医薬組成物を送達するのに日常的に使用される他の任意の製剤形態の形で、創傷に局所投与することができる。別法として、本発明の化合物は、創傷または創傷周囲部位への注射によって投与することもできる。ある実施形態では、本発明の化合物は、縫合され、ステープリングされ、テーピングされ、かつ／または包帯を当てられるなどした創傷に投与する。ある実施形態では、本発明の化合物は、創傷が生じた直後に投与する。他の実施形態では、本発明の化合物は、創傷発生後１時間、８時間、１２時間、１日、２日、３日、１週間、２週間、１カ月、６カ月、１年以内に、または１年を超える期間内に投与する。特定の一実施形態では、創傷は、切開によって生じる。ある実施形態では、治療有効量の本発明の化合物または薬学的に許容できるその塩を、ケロイド瘢痕形成を抑制する治療を必要とする哺乳動物に投与することができる。ある実施形態では、治療有効量の本発明の化合物または薬学的に許容できるその塩を、過形成性瘢痕形成を抑制する治療を必要とする哺乳動物に投与することができる。特定の実施形態では、瘢痕形成を抑制する方法は、そのような治療を必要とする哺乳動物に、治療有効量の式Ｉの化合物または薬学的に許容できるその塩を投与することを含み、瘢痕は、皮膚上に生じるものとする。
【０１０２】
瘢痕の縮小または瘢痕形成の抑制とは、患者または医療従業者（例えば医師）が判断したとき、本発明の化合物が瘢痕の外観を縮小させることに関することを意味するものとする。瘢痕の縮小または瘢痕形成の抑制は、治癒の際の細胞外マトリクス沈着の減少、コラーゲン沈着の減少、大きさの縮小、形状の縮小、厚さの縮小、表面積の縮小、重症度の軽減、高さの縮小、呈色の改善などを含めた徴候の１種または複数の改善を伴うものでよい。
【０１０３】
典型的な実施形態では、化合物を局所投与する。本明細書では、局所（的）とは、化合物（および随意選択の担体）を皮膚または創傷部位に直接に適用することを指す。局所投与は、皮膚への創傷に特に相応しい。用量は様々となり得るが、一般の指針として、化合物は、薬学的に許容できる担体中に約０．０１〜５０ｗ／ｗ％、より典型的な例では約０．１〜１０ｗ／ｗ％の量で存在してよい。医薬組成物は、１日１〜４回患部に適用することができる。
【０１０４】
本発明の別の実施形態では、化合物を他の化合物、薬剤、または包帯剤と共投与して、その活性をさらに強化し、または潜在的な副作用を最小限に抑えることができる。本出願では、共投与するとは、所望の成果を促進する投与計画を使用して、式Ｉの化合物を、通常は異なる作用機序を有する第２の医薬と共に投与することを指す。これは、同時の投薬、１日の間の異なる時期の投薬、または異なる日の投薬をも指し得る。化合物は別々に投与することもでき、または組み合わせて単一の製剤形態にすることもできる。瘢痕の縮小では、ＴＧＦβ３、ＴＧＦβ１抗体、ＴＧＦβ２抗体、トリアムシノロンアセトニド（９−フルオロ−１１，１６，１７−トリヒドロキシ−１７−（２−ヒドロキシアセチル）−１０，１３−ジメチル−６，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−ドデカヒドロシクロペンタ［ａ］フェナントレン−３−オン）、ステロイド、副腎皮質ステロイド、抗生物質、局所用抗生物質、シリコーン保護被覆材を含めた、薬剤、化合物、または包帯剤を、本発明の化合物と共投与することができる。また、５−フルオロウラシル、エストロゲン、ｎＡＣｈ（ニコチン性アセチルコリン）受容体作動薬、ＦＧＦ（線維芽細胞成長因子）、ＥＧＦ（上皮成長因子）、ＩＧＦ（インスリン様成長因子）、およびＰＤＧＦ（血小板由来成長因子）を含めて、傷の治癒を増進する薬剤、化合物、または包帯剤を、創傷に共投与することもできる。
【０１０５】
さらに、以下の治療薬を本発明の化合物と共投与して、ＴＧＦβが仲介する状態を治療することもできる。適切な治療薬の例には、標準の非ステロイド性抗炎症薬（以下ではＮＳＡＩＤ）（例えば、ピロキシカム、ジクロフェナク）、プロピオン酸（例えば、ナプロキセン、フルビプロフェン（ｆｌｕｂｉｐｒｏｆｅｎ）、フェノプロフェン、ケトプロフェン、およびイブプロフェン）、フェナム酸（例えば、メフェナム酸、インドメタシン、スリンダク、アパゾン）、ピラゾロン（例えばフェニルブタゾン）、サリチラート（例えばアスピリン）、ＣＯＸ−２阻害剤（例えば、セレコキシブ、バルデコキシブ、およびエトリコキシブ）、鎮痛薬および関節内治療薬（例えば副腎皮質ステロイド）およびヒアルロン酸（例えば、ヒアルガン（ｈｙａｌｇａｎ）およびシンビスク（ｓｙｎｖｉｓｃ））、抗癌剤（例えば、エンドスタチンおよびアンジオスタチン）、細胞傷害性薬物（例えば、アドリアマイシン、ダウノマイシン、シスプラチナム（ｃｉｓ−ｐｌａｔｉｎｕｍ）、エトポシド、タキソール、タキソテール）、アルカロイド（例えばビンクリスチン）、代謝拮抗薬（例えばメトトレキサート）、心血管薬剤（例えばカルシウムチャネル遮断薬）、脂質低下薬（例えばスタチン）、フィブラート、β遮断薬、ＡＣＥ阻害剤、アンジオテンシン２受容体拮抗薬および血小板凝集阻害剤、（例えば抗うつ薬としての（セルトラリンなどの））ＣＮＳ薬剤、抗パーキンソン病薬（例えば、デプレニル、Ｌドーパ、Ｒｅｑｕｉｐ、Ｍｉｒａｐｅｘ）、ＭＡＯＢ阻害剤（例えば、セレギン（ｓｅｌｅｇｉｎｅ）およびラサギリン）、ｃｏｍＰ阻害剤（例えばＴａｓｍａｒ）、Ａ−２阻害剤、ドーパミン再取込み阻害剤、ＮＭＤＡ拮抗薬、ニコチン作動薬、ドーパミン作動薬、ニューロン一酸化窒素シンターゼ阻害剤、抗アルツハイマー病薬（例えば、ドネペジル、タクリン、ＣＯＸ−２阻害剤、プロペントフィリン、またはメトリホナート）、骨粗鬆症薬（例えば、ロロキシフェン（ｒｏｌｏｘｉｆｅｎｅ）、ドロキシフェン（ｄｒｏｌｏｘｉｆｅｎｅ）、ラソフォキシフェン、またはフォソマックス（ｆｏｓｏｍａｘ））、ならびに免疫抑制薬（例えば、ＦＫ−５０６およびラパマイシン）が含まれるがこの限りでない。
【０１０６】
本発明についてその詳細な実施形態に関して述べてきたが、別の変更形態を受け入れる余地があること、ならびに本出願が、一般に本発明の原理に従って、また当業界の周知または通例の慣行の範囲内にあるようなこの開示からの逸脱を含めて、本発明のいかなる変形形態、使用、または適合形態をも包含するものであることは理解されよう。以下の実施例および生物学的なデータは、本発明をさらに例示するために提供するものである。その開示は、いかようにも本発明を限定しないものと解釈すべきである。
【実施例】
【０１０７】
【化１２】
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（実施例１）
２−（１−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）チエノ［３，２−ｃ］ピリジン
ステップｉ：チエノ［３，２−ｃ］ピリジン。チエノ［３，２−ｃ］ピリジン（９．２０ｇ、濃橙褐色の固体、Ｗｉｋｅｌら（１９９３年）、Ｊ．Ｈｅｔ．Ｃｈｅｍ．、第３０巻：２８９〜２９０ページを参照されたい）をＣＨ２Ｃｌ２に溶解させ、カラムクロマトグラフィー（Ｂｉｏｔａｇｅ  Ｈｏｒｉｚｏｎシステム、１２０ｇ  Ｉｓｃｏ  ＲｅｄｉＳｅｐカラム、ヘキサンで平衡化、４５％ＥｔＯＡｃ（「酢酸エチル」）／ヘキサンで溶出、定組成）にかけた。収集された画分は、淡黄色の油状物であり、これを真空中で濃縮すると、固体８．４８ｇが得られた。
【０１０８】
別法として、チエノ［３，２−ｃ］ピリジンを以下のようにも精製した。チエノ［３，２−ｃ］ピリジン（８４．６ｇ）を約１８０ｍＬのジクロロメタンに溶解させた。溶液をほぼ一様に３分割した。各部分をフラッシュシリカカートリッジ（Ａｎａｌｏｇｉｘ  ＳｕｐｅｒＦｌａｓｈ  ＳＦ６５−４００）にかけ、定組成法（４５％または５０％のヘキサン中酢酸エチル）で溶出した。所望の画分を濃縮して、チエノ［３，２−ｃ］ピリジンを薄黄色の固体として得た。合わせた３回のクロマトグラフィーから、合計７５ｇの表題化合物が得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ９．１２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．０Ｈｚ）、８．４４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝５．７Ｈｚ）、７．７９（ｄｔ，１Ｈ，Ｊ＝５．７，１．０Ｈｚ）、７．４７（ｍ，１Ｈ）、７．４３（ｍ，１Ｈ）；ＭＳ（ＡＰＣＩ＋）ｍ／ｚ  １３６（ＭＨ＋）。
【０１０９】
ステップｉｉ：１−（チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−２−イル）エタノン。チエノ［３，２−ｃ］ピリジン（５．０ｇ）を７５ｍＬのＴＨＦ（テトラヒドロフラン）に溶かした溶液を、ＣＨ３ＣＮ／ドライアイス浴に入れて−４５℃に冷却した。ｎ−ブチルリチウム（ヘキサン中１．６Ｍ）（３５．０ｍｌ）を滴下し、内温を−４０℃以下に保つ。滴下には約４５分かかった。反応液を−４５℃で１時間攪拌した。Ｎ−メチル−Ｎ−メトキシアセトアミドを含む５ｍＬのＴＨＦを加えると、結果として反応液が−３０℃に温まった。反応液を−４５℃で１．５時間攪拌した。反応を飽和ＮＨ４Ｃｌで失活させた。水層のｐＨは約８であった。水層をＥｔＯＡｃに３回抽出した。合わせた有機抽出物をブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させた。材料を濾過し、ロータリーエバポレーターで濃縮し、カラムクロマトグラフィー（Ｂｉｏｔａｇｅ  Ｈｏｒｉｚｏｎシステム、１２０ｇ  Ａｎａｌｏｇｉｘカラム、ヘキサンで平衡化、５０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶出）にかけた。最も純粋な画分をロータリーエバポレーターで濃縮し、次いでＥｔ２Ｏで摩砕して、若干の呈色をなくし、淡橙色の固体を濾過によって収集した（２．６６７ｇ）。
【０１１０】
ステップｉｉｉ：（Ｅ）−３−（ジメチルアミノ）−１−（チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−２−イル）プロパ−２−エン−１−オン。１−（チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−２−イル）エタノン（３．１７ｇ）を２０ｍＬのＤＭＦに溶かした溶液に、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド−ジメチルアセタール（ＤＭＦ−ＤＭＡ）（９．５ｍｌ）を加えた。反応液を一晩かけて７０℃に加熱した。次いで、反応液を室温に冷却した。ロータリーエバポレーターでＤＭＦを除去し、濃い橙褐色の固体を得た。残渣をＥｔＯＡｃおよび水で希釈した。多量の黄色の固体がはっきりとわかった。これを濾過によって収集した（３．５４ｇ）。この固体を５０℃の真空オーブンで乾燥させた。
【０１１１】
ステップｉｖ：２−（１−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）チエノ［３，２−ｃ］ピリジン
（Ｅ）−３−（ジメチルアミノ）−１−（チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−２−イル）プロパ−２−エン−１−オン（３．６９ｇ）および１−（６−メチルピリジン−２−イル）ヒドラジン（３．３ｇ）（以下で実施例７、ステップｉｉについて述べるとおりに合成できる）を、４０ｍＬの酢酸に溶解させた。反応液を４．５時間かけて８０℃に加熱した。反応液を室温に冷却し、ロータリーエバポレーターで溶媒を除去した。
【０１１２】
濃橙赤色の残渣をＥｔＯＡｃに溶解させ、水層がｐＨ約７〜８になるまで飽和ＮａＨＣＯ３を加えた（約２５０ｍＬ）。水層をＥｔＯＡｃに４回抽出した。合わせた有機抽出物をブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させた。材料を濾過し、濃縮し、カラムクロマトグラフィー（Ｂｉｏｔａｇｅ  Ｈｏｒｉｚｏｎシステム、８０ｇ  Ｉｓｃｏ  ＲｅｄｉＳｅｐカラム、０〜５０％のＥｔＯＡｃ／ヘキサン、５０％で保持、５０〜７５％、７５％で保持）にかけた。
【０１１３】
所望の材料を含有する画分を合わせ、濃縮した。得られる材料を熱ＭｅＯＨに溶解させ、室温に冷却すると沈殿が生成した。室温で１時間経過後、フラスコを４℃で３時間保存した。固体を濾過によって収集し、ヘキサンですすいで２．７９ｇを得た。材料を沸騰アセトニトリルに溶解させ、室温に冷ました。沈殿がはっきりとわかるようになったなら、沈殿を濾過によって収集した。沈殿は、所望でない位置異性体（２−（１−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）チエノ［３，２−ｃ］ピリジン）であった。この過程を４回繰り返して、所望の位置異性体（２−（１−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）チエノ［３，２−ｃ］ピリジン）を含有するアセトニトリル濾液を濃縮した。冷却したアセトニトリル濾液は白色の沈殿を含んでおり、それが所望の生成物であった。総収量１．２１ｇの所望の生成物が得られた（２−（１−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）チエノ［３，２−ｃ］ピリジン）。
【０１１４】
【化１３】
0005443988.tif 000014
（実施例２）
２−［３−メチル−１−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］チエノ［３，２−ｃ］ピリジン
ステップｉ：チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−２−イルボロン酸。チエノ［３，２−ｃ］ピリジン（５．０ｇ、３７ｍｍｏｌ、１当量）を含んでいる、内部温度計を装着した三口フラスコを真空にし、次いで窒素ガス雰囲気で満たした。ＴＨＦ（６０ｍＬ）を加え、溶液を−４４℃に冷却した（ＣＨ３ＣＮ／ドライアイス）。内温を−３３℃以下に保ちながら、ｎ−ブチルリチウム（１．６Ｍ／ヘキサン、２５ｍＬ、４１ｍｍｏｌ、１．１当量）を１０分間かけて加えた。反応液を−３３〜−４５℃で６０分間攪拌した。ホウ酸トリイソプロピル（１０．２ｍＬ、４４ｍｍｏｌ、１．２当量）を加え、冷却浴を取り外した。１０５分間反応を進行させた。次いで、３．０ｍＬのリン酸（８５％水溶液、３．０ｍＬ、４４ｍｍｏｌ、１．２当量）を加えた。黄色の固体を生成し、水およびＥｔ２Ｏ（それぞれ約１５０ｍＬ）で希釈した。黄色の固体を濾過によって収集し、終夜減圧乾燥した（５．０５ｇ）。分析用データ：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，メタノール−ｄ４）δｐｐｍ７．９５（１Ｈ，ｓ）、８．０９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．９Ｈｚ）、８．３４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．１Ｈｚ）、９．０９（１Ｈ，ｓ）。ＭＳ（ＡＰＣＩ，Ｍ＋１）１８０．１。Ｃ７Ｈ６ＢＮＳＯ２．Ｈ３ＰＯ４の微量分析：計算値Ｃ，３０．３５、Ｈ，３．２７、Ｎ，５．０６、Ｐ，１１．１８。実測値：Ｃ，４１．１２、Ｈ，３．１９、Ｎ，６．５３、Ｐ，０．６８％。
【０１１５】
ステップｉｉ．３−メチル−１−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−５−オール。アセト酢酸エチル（１０ｍＬ、７８ｍｍｏｌ）および（６−メチル−ピリジン−２−イル）−ヒドラジン（１０．１ｇ、８２ｍｍｏｌ）を１００ｍＬの酢酸中に合わせた。反応液を４時間１５分かけて８０℃に加熱した。反応液を室温に冷却した。ロータリーエバポレーターで溶媒を除去して、暗色の残渣を得、これをＥｔＯＡｃに溶解させた。溶液を飽和ＮａＨＣＯ３で２回、次いで水で１回、次いでブラインで１回洗浄した。二相性の混合物中で赤褐色の固体がはっきりとわかるようになった。二相性混合物を濾過し、固体を収集した。固体をＥｔ２Ｏで洗浄して、第１の固体（６．０２ｇ）を得た。分液漏斗を使用して濾液の層を分離した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させた。材料を濾過し、回転蒸発によって濃縮した。得られる褐色の固体をＥｔ２Ｏで摩砕し、濾過にかけて、第２の固体（１．９８ｇ）および第１の濾液を得た。第１の濾液から固体が析出し、それを、濾液を別のフィルターへと注ぐことによって収集して、第３の固体１．６９ｇを得た。第１の濾液および１．９８ｇ（第２の固体）を濃縮乾燥した。得られる固体を熱ＥｔＯＡｃに溶解させ、濁りが持続するまでヘキサンを加えた。溶液を一晩静置した。非常に暗色の固体を濾過によって単離し、カラムクロマトグラフィー（Ｂｉｏｔａｇｅ  Ｈｏｒｉｚｏｎシステム、３５ｇ  Ａｎａｌｏｇｉｘカラム、３０％のＥｔＯＡｃ／ヘキサン）にかけた。黄色の固体を単離し、熱ＥｔＯＡｃに溶解させ、濁りが持続するまでヘキサンを加えた。溶液を一晩静置した。母液をデカントし、固体を５０℃の真空オーブンで数時間乾燥させて、第４の固体を得た。第１の固体（６．０２ｇ）、第３の固体（１．６９ｇ）、および第４の固体（４．０３ｇ）を合わせて、表題化合物１１．７４ｇを得た。
【０１１６】
ステップｉｉｉ．トリフルオロメタンスルホン酸３−メチル−１−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル。３−メチル−１−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−５−オール（ＣＨ２Ｃｌ２中１０．０ｇ、１００ｍＬ）とＥｔ３Ｎ（トリエチルアミン）（８．１ｍＬ）の混合物を−７０℃で冷却した。温度を−５０℃未満に保ちながら、トリフルオロメタンスルホン酸無水物（９．８ｍＬ）を１０分間かけて加えた。反応懸濁液を室温に温めると溶液になった。溶液を濃縮して、ＣＨ２Ｃｌ２の大部分を除去した。Ｂｉｏｔａｇｅ自動分取装置、ＥｔＯＡｃ／ヘキサン（２０／８０）を使用して、溶液を直接Ａｎａｌｏｇｉｘ  ＳｕｐｅｒＦｌａｓｈ  ＳＦ６５−４００にかけた。無色の液体を含有する画分を単離した（９．４６ｇ）。
【０１１７】
ステップｉｖ：２−［３−メチル−１−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］チエノ［３，２−ｃ］ピリジン
還流冷却器を装着した１００ｍＬ容三口丸底フラスコにおいて、トリフルオロメタンスルホン酸３−メチル−１−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル（１．１６ｇ）、チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−２−イルボロン酸（１．０ｇ）、リン酸三カリウム（２．３ｇ）、および３０ｍＬのジオキサンを加えた。フラスコを減圧下で真空にし、懸濁液を窒素ガスでバブルした。これに、ＰｄＣｌ２（ｄｐｐｆ）（Ｓｔｒｅｍ、ジクロロ［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］パラジウム（ＩＩ）ジクロロメタン付加体、０．６０ｇ）を加えた。再度減圧下でフラスコを真空にし、懸濁液を窒素ガスでバブルした。反応液を１００℃に加熱し、一晩反応させた。反応液を室温に冷却し、セライトパッドで濾過し、ＥｔＯＡｃ（約６００ｍＬ）で溶出した。ＥｔＯＡｃ濾液をロータリーエバポレーターで濃縮乾燥した。残渣をＣＨ２Ｃｌ２で希釈し、ベージュ色の固体を濾別した。ＣＨ２Ｃｌ２濾液をカラムクロマトグラフィー（Ｂｉｏｔａｇｅ  Ｈｏｒｉｚｏｎシステム、３４ｇ  Ａｎａｌｏｇｉｘカラム、０〜１００％のＥｔＯＡｃ／ｈｅｐ、１００％のＥｔＯＡｃ、次いで１０％のＭｅＯＨ／ＥｔＯＡｃで保持）によって精製した。所望の生成物を含有する画分を合わせ、ロータリーエバポレーターで濃縮して、暗色の油状物を得た。
【０１１８】
暗色の油状物（約８００ｍｇ）を、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｇｅｍｉｎｉ  Ｃ−１８カラムでの分取カラムクロマトグラフィー（１５０×１９ｍｍ、５μＭ、移動相Ａ：水（＋０．１％ＮＨ４ＯＨ）、Ｂ：ＣＨ３ＣＮ（＋０．１％ＮＨ４ＯＨ）、勾配：１０分かけて９０〜１０％のＡ、９０％のＡで１．５分間保持、流速：２８ｍＬ／分、注入体積：２ｍＬ、検出：ＤＡＤ  ２１０〜３５０ｎｍ、ＭＳ  ＡＰＣＩ＋、ＭＳＡＰＣＩ−）にかけた。
【０１１９】
所望の画分をロータリーエバポレーターで十分に乾燥させた。固体を熱ＥｔＯＨに溶解させ、次いで２〜５ｍＬのヘプタンを加えた。静置した後、材料を濾過した。
【０１２０】
濾液を濃縮乾燥した。ジエチルエーテルを加え、焼結ガラス漏斗において溶液を濾過した。追加のジエチルエーテルを使用して、焼結ガラス漏斗上に残る褐色の固体が１０ｍｇ未満になるまで材料を洗浄する。濾液を濃縮乾燥して、オフホワイトの固体を得た。
【０１２１】
オフホワイトの固体を熱ＥｔＯＨ（約１〜２ｍＬ）に溶解させ、濁りが持続するまでヘプタンで希釈し、静置した。次いで、針状晶（淡黄色）が溶液から沈殿し始めた。約３時間後、母液を別のフラスコにデカントした。針状晶を４０℃の真空オーブンで４８時間かけて乾燥させて、６５ｍｇの白色固体を得た。融点１３１〜１３２℃。
【０１２２】
【化１４】
0005443988.tif 000015
（実施例３）
２−［３−エチル−１−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］チエノ［３，２−ｃ］ピリジン
ステップｉ：５−エチル−２−（６−メチル−ピリジン−２−イル）−２Ｈ−ピラゾール−３−オール。６−メチル−ピリジン−２−イル）−ヒドラジン（１０．０ｇ）およびプロピオニル酢酸エチル（１２ｍＬ）を氷酢酸（１００ｍＬ）に混ぜた攪拌混合物を、５時間かけて８０℃に温めた。反応混合物を減圧下で濃縮し、蒸発残物（ｅｖａｐｏｒａｔｅ）を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（２００ｍＬ）で処理した。混合物を酢酸エチル（２００ｍＬ）で抽出した。有機相を新たな分の飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（２００ｍＬ）、水（２００ｍＬ）、およびブライン溶液（２００ｍＬ）で洗浄した。その後、有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮した。蒸発残物を、フラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製した。勾配（１００％ヘキサン→６０％ヘキサン中酢酸エチル）をかけてシリカカートリッジ（Ａｎａｌｏｇｉｘ、４００ｇ）で溶出すると、油状物が得られた。その油状物をクロロホルム中で再形成し、溶液を減圧下で濃縮して、表題化合物を油状物（７．２ｇ）として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１３．０７（ブロードｓ，１Ｈ）、７．７０（ｍ，１Ｈ）、７．６４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．２Ｈｚ）、６．９２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．４Ｈｚ）、５．４２（ｓ，１Ｈ）、２．５９（四重線，２Ｈ，Ｊ＝７．６Ｈｚ）、２．５１（ｓ，３Ｈ）、１．２４（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７．６Ｈｚ）、１３Ｃ  ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１３．５、２２．７、２３．８、８６．８、１０８．８、１１９．２、１４０．２、１５４．３、１５５．０、１５７．２、１５７．４；ＭＳ（ＡＰＣＩ＋）２０４（ＭＨ＋）。
【０１２３】
ステップｉｉ：トリフルオロ−メタンスルホン酸５−エチル−２−（６−メチル−ピリジン−２−イル）−２Ｈ−ピラゾール−３−イルエステル。５−エチル−２−（６−メチル−ピリジン−２−イル）−２Ｈ−ピラゾール−３−オール（７．１ｇ）およびトリエチルアミン（５．４ｍＬ）をジクロロメタン（７５ｍＬ）に混ぜた攪拌混合物に、窒素雰囲気中にて−７８℃で、トリフルオロメタンスルホン酸無水物（６．５ｍＬ）を５分間かけて加えた。冷浴を取り外し、反応混合物を室温に温め、終夜攪拌した。反応混合物を減圧下で濃縮し、濃縮物をフラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製した。勾配（２４００ｍＬにかけて１００％のヘキサン→３５％のヘキサン中酢酸エチル）をかけてシリカカートリッジ（Ａｎａｌｏｇｉｘ  ＳｕｐｅｒＦｌａｓｈ  ＳＦ６５−４００）で溶出すると、クロロホルムで追跡後に表題化合物が油状物（１０．３８ｇ）として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．６９（ｍ，１Ｈ）、７．５９（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．２，０．６Ｈｚ）、７．０７（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．６，０．４Ｈｚ）、６．１０（ｓ，１Ｈ）、２．６８（四重線，２Ｈ，Ｊ＝７．６Ｈｚ）、２．５７（ｓ，３Ｈ）、１．２８（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７．６Ｈｚ）；１９Ｆ  ＮＭＲ（３７６ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ−７３．９（ｓ）；ＭＳ（ＡＰＣＩ＋）３３６（ＭＨ＋）、２０４（ＭＨ＋−ＳＯ２ＣＦ３）。
【０１２４】
ステップｉｉｉ：２−［３−エチル−１−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］チエノ［３，２−ｃ］ピリジン。還流冷却器を装着した１００ｍＬ容三口丸底フラスコにおいて、トリフルオロメタンスルホン酸３−エチル−１−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル（１．２１ｇ）、チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−２−イルボロン酸（１．０ｇ）、リン酸三カリウム（２．３ｇ）、および３０ｍＬのジオキサンを加えた。減圧下でフラスコを真空にし、懸濁液を窒素ガスでバブルした。これに、ＰｄＣｌ２（ｄｐｐｆ）（Ｓｔｒｅｍ、ジクロロ［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］パラジウム（ＩＩ）ジクロロメタン付加体、０．６０ｇ）を加えた。再度減圧下でフラスコを真空にし、懸濁液を窒素ガスでバブルした。反応液を１００℃に加熱し、反応を一晩進行させた。反応液を室温に冷却した。次いで、反応液をセライトで、ＥｔＯＡｃで十分にすすぎながら濾過した。濾液をロータリーエバポレーターで濃縮し、暗色の油性材料をＣＨ２Ｃｌ２で希釈した。オフホワイトの固体をＣＨ２Ｃｌ２から濾別した。濾液をカラム（Ｂｉｏｔａｇｅ  Ｈｏｒｉｚｏｎシステム、３４ｇ  Ａｎａｌｏｇｉｘカラム、０〜１００％のヘプタン／ＥｔＯＡｃ、次いで１００％のＥｔＯＡｃで保持）にかけた。所望の画分を収集して、暗色の油状物（約９００ｍｇ）を得た。画分を、実施例２で上述したとおりに、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｇｅｍｉｎｉ  Ｃ−１８カラムでのクロマトグラフィーにかけた。
【０１２５】
所望の画分を合わせ、ロータリーエバポレーターで十分に乾燥させて、固体サンプルを得た。固体サンプルを温ＥｔＯＨに溶解させた。溶液をロータリーエバポレーターで濃縮乾燥して、暗色の残渣を得た。残渣を４５℃の真空オーブンで２時間乾燥させた。得られる材料は、一部分は暗色の油状物であり、一部分は固体であった。ジエチルエーテルを加え、材料を濾過して、暗褐色の固体と薄橙黄色の濾液を得た。濾液を濃縮乾燥して、黄褐色の固体（２３１ｍｇ）を得た。
【０１２６】
黄褐色の固体にジエチルエーテルを加えた。材料をひだ付き濾紙で濾過し、濾紙に褐色の残渣を残した。濾液をロータリーエバポレーターで濃縮乾燥した。得られる固体を再度熱ＥｔＯＨ（１〜２ｍＬ）に溶解させ、濁りが持続するまでヘプタンで希釈した。２時間静置した後、はっきりとわかる沈殿はなくなった。次いで、液体を濃縮乾燥した。ロータリーエバポレーターにかけている間、液体が元の体積のほぼ半分になったとき、褐色の固体がはっきりとわかった。液体をロータリーエバポレーターから取り外すと、溶液が白濁を示し始めた。液体を、濾紙を用いて別のフラスコに濾過して、褐色の固体を除去した。濾液中に白色固体が沈殿し始めた。約１５分後、沈殿はそれ以上認められず、この材料を濾過して固体を得た。固体を４０℃の真空オーブンで約４８時間乾燥させて、７１ｍｇを得た。融点８９〜９０℃。
【０１２７】
【化１５】
0005443988.tif 000016
（実施例４）
２−［４−エチル−１−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］チエノ［３，２−ｃ］ピリジン
ステップｉ：４−エチル−１−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−５−オール。ＫＯＭｅ（１４．０ｇ）および酪酸エチル（１９．８ｍＬ）のＤＭＦ（１５ｍＬ）懸濁液を室温で攪拌した。ギ酸エチル（８．１ｍＬ）を１５分間かけて加えると、たくさんの泡立ちが生じた。反応液をもう１時間攪拌すると、反応液が、泡沫層のない非常に攪拌しやすい混合物になった。１−（６−メチルピリジン−２−イル）ヒドラジン（１２．３ｇ）、ＭｅＯＨ（３５ｍＬ）、およびＨＯＡｃ（５．７ｍＬ）の溶液を２０分間かけて加えた。反応液は発熱性であり、最初に加えた後、温度３０℃に到達した。氷水浴を使用して反応液を２０℃未満に保って、溶液の残りの添加を行った。反応液を３時間加熱還流し、次いで室温で約４８時間攪拌した。
【０１２８】
氷水浴を用いて反応液を１０℃に冷却した。ＨＯＡｃ（１０ｍＬ）でｐＨを約７に調整して、濃厚な攪拌できない塊を得た。反応液をＨ２Ｏ（１００ｍＬ）で希釈して、暗赤色の溶液を得た。溶液をＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）で抽出した。有機相をＨ２Ｏ（２×１００ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、ＳｉＯ２（３０ｍＬ）およびＳｉＯ２（３０ｍＬ）で濾過した。材料を濃縮して、１０．５０ｇの暗褐色の油状物を得た。油状物を、Ａｎａｌｏｇｉｘ  ＳｕｐｅｒＦｌａｓｈ  ＳＦ６５−４００およびＢｉｏｔａｇｅ自動分取装置、ＥｔＯＡｃ／ヘキサン（４０／６０）を使用するクロマトグラフィーにかけた。所望の生成物を含有する画分を合わせて、６．４０ｇの黄橙色の液体を得た。
【０１２９】
ステップｉｉ：トリフルオロメタンスルホン酸４−エチル−１−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル。４−エチル−１−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−５−オール（６．４０ｇ）をＣＨ２Ｃｌ２（６５ｍＬ）およびＥｔ３Ｎ（４．８ｍＬ）に溶かした溶液を、−７０℃で冷却した。温度を−５０℃未満に保ちながら、トリフルオロメタンスルホン酸無水物（Ｔｆ２Ｏ）（５．８３ｍＬ）を１０分間かけて加えた。反応液は発熱性である。反応液を−５０℃未満でさらに３０分間攪拌し、次いで室温に温めた。次いで、反応液を−５０℃未満に冷却し、追加分のＴｆ２Ｏ（１．１ｍＬ、２０％）およびＥｔ３Ｎ（１．０ｍＬ、２０％）を加えた。１時間インキュベートした後、反応液を濃縮して、ＣＨ２Ｃｌ２の大部分を除去した。Ｈｏｒｉｚｏｎ自動分取装置およびＥｔＯＡｃ／ヘプタン（２０／８０）を使用して、反応液を直接Ａｎａｌｏｇｉｘ  ＳｕｐｅｒＦｌａｓｈ  ＳＦ４０−１５０にかけた。カラムをＥｔＯＡｃ／ヘプタン（３０／７０）で洗浄した。所望の生成物を含有する画分を収集して、６．９８ｇを淡黄色の液体として得た。
【０１３０】
ステップｉｉｉ：２−［４−エチル−１−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］チエノ［３，２−ｃ］ピリジン。還流冷却器を装着した１００ｍＬ容三口丸底フラスコにおいて、トリフルオロメタンスルホン酸４−エチル−１−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル（１．２ｇ）、チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−２−イルボロン酸（１．２ｇ）、リン酸三カリウム（２．３ｇ）、および３０ｍＬのジオキサンを加えた。減圧下でフラスコを真空にし、懸濁液を窒素ガスでバブルした。これに、ＰｄＣｌ２（ｄｐｐｆ）（Ｓｔｒｅｍ、ジクロロ［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］パラジウム（ＩＩ）ジクロロメタン付加体、０．６０ｇ）を加えた。再度減圧下でフラスコを真空にし、懸濁液を窒素ガスでバブルした。反応液を終夜１００℃に加熱した。次いで、０．２９５ｇのＰｄＣｌ２（ｄｐｐｆ）（Ｓｔｒｅｍ、ジクロロ［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］パラジウム（ＩＩ）ジクロロメタン付加体）を加え、反応を４時間１５分継続した。反応液を室温に冷却した。
【０１３１】
反応液の内容物をセライトで濾過し、所望の生成物が溶出されるまでＥｔＯＡｃで十分にすすいだ。濾液をロータリーエバポレーターで濃縮乾燥して、暗色の残渣を生成した。暗色の残渣をＣＨ２Ｃｌ２に溶かし、固体を濾別した。ロータリーエバポレーターで濃縮して、得られる濾液を減らした後、材料をカラム（Ｂｉｏｔａｇｅ  Ｈｏｒｉｚｏｎシステム、７００ｍＬにわたり０〜１００％のＥｔＯＡｃ、次いで１００％のＥｔＯＡｃで保持、５００ｍＬ）にかけた。大部分の生成物がはっきりとわかる管は、フラスコ側面に白色固体を伴っていた。
【０１３２】
所望の生成物を含有する管を回転蒸発によって濃縮して、暗色の油状物を得た。暗色の油状物をＥｔ２Ｏで摩砕し、固体を濾別した。さらなる固体沈殿を濾液から単離し、最初の濾過の固体と合わせた。合わせた固体を熱ＥｔＯＨ（約２ｍＬ）に溶解させた。沈殿が生成し始めるまでヘプタンを加えた。暗色の固体が生成した。約１０分後、固体の析出が終わったように思われた。混合物を濾紙で別のフラスコに濾過した。濁りが持続するまで濾液をヘプタンで希釈した。濾液を終夜室温で静置した。フラスコ中に白色の針状晶が生成し、フラスコの底面には暗色の残渣が存在した。フラスコの内容物をロータリーエバポレーターで濃縮乾燥し、１〜２ｍＬの熱ＥｔＯＨに溶解させ、濾紙で濾過し、濁りが持続するまでヘプタンで希釈した。フラスコを２時間静置した。次いで、混合物をロータリーエバポレーターにかけて、材料の体積を減らした。ロータリーエバポレーターにかけている間、最初の体積のほぼ半分が存在するとき、褐色の固体がはっきりとわかるようになった。フラスコをロータリーエバポレーターから取り外し、濾紙を用いて別のフラスコに濾過して、褐色の固体を除去した。濾液中に白色固体が沈殿し始めた。白色固体を濾過によって収集し、４０℃の真空オーブンで４８時間かけて乾燥させて、８５ｍｇの表題化合物を得た。
【０１３３】
【化１６】
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（実施例５）
２−（２−（６−メチルピリジン−２−イル）−２，４，５，６−テトラヒドロシクロペンタ［ｃ］ピラゾール−３−イル）チエノ［３，２−ｃ］ピリジン（ＩＵＰＡＣ名：２−（１−（６−メチルピリジン−２−イル）−２，４，５，６−テトラヒドロシクロペンタ［ｃ］ピラゾール−５−イル）チエノ［３，２−ｃ］ピリジン）
ステップｉ：チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−２−ボロン酸。無水テトラヒドロフラン（２５ｍＬ）中のチエノ［３，２−ｃ］ピリジン（２．０ｇ）からなる−４０℃の攪拌混合物に、ヘキサン（１０ｍＬ）中１．６Ｍのｎ−ブチルリチウムからなる溶液を数分間かけて（最初は滴下して、次いで緩徐な安定した流れによって）加えた。反応混合物を５分間攪拌し、ホウ酸トリイソプロピル（４．２ｍＬ）をその後加えた。冷浴を取り外し、混合物を１時間攪拌した。攪拌混合物に水（２ｍＬ）を加えると、それによって淡黄色の固体が直ちに沈殿した。沈殿を減圧濾過によって収集し、固体を水で（濁った黄色の濾液が得られる）、その後ジエチルエーテルで（暗橙色の濾液が得られる）で軽くすすいだ。濾液の水性部分を有機溶媒から分離し、次いで１，４−ジオキサン（１００ｍＬ）で希釈し、溶液を減圧下で濃縮した。濃縮物に１，４−ジオキサン（１００ｍＬ）を加え、その後減圧下での濃縮を２回繰り返して、最終的な蒸発にかけると後黄色の粉末（０．８ｇ）が得られた。
【０１３４】
ステップｉｉ：２−［（６−メチル−ピリジン−２−イル）−ヒドラゾノ］−シクロペンタンカルボン酸エチルエステル。２−オキソシクロペンタンカルボン酸エチル（６．３４ｇ、５．８８ｍＬ）および（６−メチル−ピリジン−２−イル）−ヒドラジン（５ｇ）のエタノール（１００ｍＬ）溶液を、窒素雰囲気中で約１９時間かけて８０℃に加熱した。反応混合物を室温に冷却し、溶媒を真空中で除去して、粗製材料（７．７２ｇ）を得、これをそのまま次の反応に持ち越した。
【０１３５】
ステップｉｉｉ：２−（６−メチル−ピリジン−２−イル）−２，４，５，６−テトラヒドロ−シクロペンタピラゾール−３−オール。未精製の２−［（６−メチル−ピリジン−２−イル）−ヒドラゾノ］−シクロペンタンカルボン酸エチルエステル（６．６ｇ）およびナトリウムメトキシド（２．７３ｇ）をメタノール（２５０ｍＬ）に溶かした溶液を、ほぼ乾燥するまで減圧下で濃縮して、褐色のペーストを得た。次いで、このペーストを、過剰な泡立ちが起こらないように注意しながら２時間かけて１６０℃に加熱した。２時間後、反応液を室温に冷却し、水（１００ｍＬ）を加えた。１Ｎ  ＨＣｌでｐＨを７に調整し、次いで酢酸エチル（２００ｍＬ）を加え、得られる混合物を、沈殿が溶解するまで攪拌した。層を分離し、水層を別の分の酢酸エチル（１００ｍＬ）で洗浄した。合わせた有機層を水（２００ｍＬ）およびブライン（２００ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮して、生成物（３．６ｇ）を得、それ以上精製せずに使用した。
【０１３６】
別法として、２１．０ｇの２−［（６−メチル−ピリジン−２−イル）−ヒドラゾノ］−シクロペンタンカルボン酸エチルエステルから出発し、同じ反応を１２５℃というより低い温度で実施して、１７．３ｇの粗生成物を得ることもできる。
【０１３７】
ステップｉｖ：トリフルオロ−メタンスルホン酸２−（６−メチル−ピリジン−２−イル）−２，４，５，６−テトラヒドロ−シクロペンタピラゾール−３−イルエステル。オーブンで乾燥させた丸底フラスコに、ジクロロメタン（３５０ｍＬ）中の２−（６−メチル−ピリジン−２−イル）−２，４，５，６−テトラヒドロ−シクロペンタピラゾール−３−オール（１７．３ｇ）およびトリエチルアミン（９．７６ｇ、１３．４４ｍＬ）を加え、反応混合物を−７８℃に冷却した。これに、トリフルオロメタンスルホン酸無水物（１６．２３ｍＬ）を等圧化漏斗で１０分間かけて加えた。得られる混合物を−７８℃で１時間攪拌し、次いで室温に温め、もう１時間攪拌した。真空中で溶媒を除去して、褐色の沈殿を得た。褐色の沈殿を、フラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（６０％ヘキサン／４０％酢酸エチル）によって精製して、オフホワイトの固体（８．８４８ｇ）、次いで別バッチのわずかに純度の劣る材料（１２．２ｇ）を得た。
【０１３８】
ステップｉｖ：２−（２−（６−メチルピリジン−２−イル）−２，４，５，６−テトラヒドロシクロペンタ［ｃ］ピラゾール−３−イル）チエノ［３，２−ｃ］ピリジン。還流冷却器および気体入口弁を備え付けた、オーブンで乾燥させた三口丸底フラスコに、チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−２−ボロン酸（０．７ｇ）を装入した。フラスコを真空にし、窒素ガスで３回パージした。フラスコの内容物を窒素雰囲気中で４日間保存した。反応フラスコに、トリフルオロ−メタンスルホン酸２−（６−メチル−ピリジン−２−イル）−２，４，５，６−テトラヒドロ−シクロペンタピラゾール−３−イルエステル（０．７ｇ）、リン酸三カリウム（２．５ｇ）、および１，４−ジオキサン（３０ｍＬ）を加えた。フラスコを真空にし、窒素でもう３回パージした。ジクロロ［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］パラジウム（ＩＩ）ジクロロメタン付加体（０．６５ｇ）および１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン（０．４３ｇ）を加え、混合物を脱気し、窒素でもう３回パージした。攪拌混合物を終夜還流させた。反応混合物を酢酸エチル（２５０ｍＬ）で希釈し、溶液を活性炭で処理し、セライトで濾過した。
【０１３９】
得られる濾液を減圧下で濃縮し、濃縮物を、１８００ｍＬにかけて１００％のヘキサン→１００％の酢酸エチル、次いで１００％の酢酸エチルを所望の材料が溶出されるまで用い、Ｂｉｏｔａｇｅシステムの１２０ｇ  ＲｅｄｉＳｅｐフラッシュシリカカートリッジで精製した。所望の材料は暗色の残渣であった。暗色の液体が、フラスコの内側に付着した固体から分離した。この液体を無水エタノールと共にピペットで抜き出し、暗色の溶液を一晩蒸発にかけて、暗色の粘稠性残渣とした。この材料をアセトニトリル（１５ｍＬ）に溶解させ、分取ＨＰＬＣ（Ｗａｔｅｒｓ分取ＨＰＬＣシステム、固定相：Ｗａｔｅｒｓ  ＤｅｌｔＰａｋ  Ｃ１８  ５μｍ、１００Å、３００×内径５０ｍｍ、Ｐ／Ｎ０１１８０１、ＷＡＴ０１１８０１、Ｎｏ．３３０Ｃ０９１２５Ｗ、移動相：３０分間かけて８０：２０→４０：６０の水−アセトニトリル、０．１％ギ酸含有）によって精製した。合わせた画分を合わせ、減圧下で濃縮して、無色透明の水溶液を得た。溶液を飽和炭酸カリウム水溶液で処理して、乳状の懸濁液を得た。１部のジエチルエーテルおよび２部の酢酸エチルで抽出し、合わせた抽出物を無水炭酸カリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮すると薄膜が得られ、その薄膜は時間と共に凝固し始めた。薄膜を無水エタノールに溶解させ、減圧下で濃縮して、薄黄色の油状物を得たが、油状物は時間と共に凝固した。材料を室温で高真空にさらして、表題化合物を薄黄色の固体（２１ｍｇ）として得た。融点：固体形態は１２１〜１２６℃で変形し、１４６〜１４８℃で融解する。
【０１４０】
【化１７】
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（実施例６）
２−［３，４−ジメチル−１−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］チエノ［３，２−ｃ］ピリジン
ステップｉ．３，４−ジメチル−１−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−５−オール。２５０ｍＬ容丸底フラスコに、２−メチルアセト酢酸エチル（５．０ｇ、３５ｍｍｏｌ）、１−（６−メチルピリジン−２−イル）ヒドラジン（４．４８ｇ、３６ｍｍｏｌ）、および１２ｍＬの酢酸を加えた。混合物を８０℃で９時間加熱した。混合物に水およびＥｔＯＡｃを加えた。層を分離した。水層をＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機層を水およびブラインで洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、濾過し、真空中で濃縮した（６．６８ｇ）。
【０１４１】
ステップｉｉ．トリフルオロメタンスルホン酸３，４−ジメチル−１−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル。３，４−ジメチル−１−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−５−オール（６．６８ｇ、３３ｍｍｏｌ）を含んでいる５００ｍＬ容丸底フラスコに、Ｅｔ３Ｎ（５．５ｍＬ、３９ｍｍｏｌ）および３５ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２を加えた。溶液をドライアイスアセトン浴で冷却した。Ｔｆ２Ｏ（６．１ｍＬ、３６ｍｍｏｌ）をゆっくりと加えた。混合物を−７８℃で攪拌し、室温に温めた。次いで、混合物を真空中で濃縮した。粗生成物を、Ｂｉｏｔａｇｅ  Ｈｏｒｉｚｏｎシステム（０〜２５％のＥｔＯＡｃ／ヘキサン）を使用して精製して、無色の油状物（８．２８ｇ）を得た。
【０１４２】
ステップｉｉｉ：２−［３，４−ジメチル−１−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］チエノ［３，２−ｃ］ピリジン。還流冷却器を装着した１００ｍＬ容三口丸底フラスコにおいて、トリフルオロメタンスルホン酸３，４−ジメチル−１−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル（０．９０ｇ、２．７ｍｍｏｌ、１．２当量）、チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−２−イルボロン酸リン酸三水素塩（０．７２ｇ、２．６ｍｍｏｌ、１当量）、リン酸三カリウム、および２０ｍＬのジオキサンを加えた。減圧下でフラスコを真空にし、懸濁液を窒素ガスでバブルした。これに、ＰｄＣｌ２（ｄｐｐｆ）（Ｓｔｒｅｍ、ジクロロ［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］パラジウム（ＩＩ）ジクロロメタン付加体、０．５４ｇ、０．６５ｍｍｏｌ、０．３当量）を加えた。再度減圧下でフラスコを真空にし、懸濁液を窒素ガスでバブルした。反応液を１６時間かけて１００℃に加熱し、次いで室温に冷却した。
【０１４３】
反応液をセライトで濾過し、所望の材料がすべて溶出されるまでＥｔＯＡｃ（約４００ｍＬ）で十分にすすいだ。ＥｔＯＡｃ濾液を濃縮して暗色の残渣とした。暗色の残渣をＣＨ２Ｃｌ２に溶かし、固体を濾別した。ＣＨ２Ｃｌ２を、カラムクロマトグラフィー（Ｂｉｏｔａｇｅ  Ｈｏｒｉｚｏｎシステム、８００ｍＬにわたり０〜１００％のヘプタン／ＥｔＯＡｃ、次いで１００％のＥｔＯＡｃで保持、５００ｍＬ）にかけた。画分を３部分に濃縮した。薄い色の油状物（４２０ｍｇ）を含んでいた部分が、一晩静置した後部分的に凝固した。材料を熱ＥｔＯＨに溶解させ、ヘプタンを加えた。一晩静置しても、沈殿したと思われる固体はなかった。材料を濃縮乾燥した。約１５ｍＬのＥｔ２Ｏを加え、材料を濾紙で濾過すると、微量の黄褐色の残渣が残った。残渣を濃縮乾燥し、約１ｍＬのＥｔ２Ｏを加えた。次いで、混合物が濁ったままになるまで約１５ｍＬのヘプタンを加えた。４℃で約２時間静置した後、沈殿は見当たらなくなった。次いで、材料を濃縮乾燥して、褐色の油状物を得た。ヘプタンを加えると、小さな環状の固体が生成し、オフホワイトのものもあれば、褐色のものもあった。ヘプタンをデカントし、固体を５０℃の真空オーブンで約４８時間乾燥させて、２２９ｍｇの黄褐色の固体を得た。融点１０８〜１０９℃。
【０１４４】
【化１８】
0005443988.tif 000019
（実施例７）
２−［４−メチル−２−（６−メチル−ピリジン−２−イル）−２Ｈ−ピラゾール−３−イル］−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン（ＩＵＰＡＣ名：２−［４−メチル−１−（６−メチル−ピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン）
ステップｉ：チエノ［３，２−ｃ］ピリジン２−ボロン酸リン酸三水素塩。チエノ［３，２−ｃ］ピリジン（２．０ｇ）を無水テトラヒドロフラン（２５ｍＬ）に混ぜた−４０℃の攪拌混合物に、１．６Ｍのｎ−ブチルリチウムのヘキサン溶液（１０ｍＬ）を５分間かけて滴下した。反応混合物を１０分間攪拌し、その後ホウ酸トリイソプロピル（４．２ｍＬ）を加えた。冷浴を取り外し、混合物を３時間攪拌した。攪拌混合物にリン酸（８５％水溶液、１．２ｍＬ）を加えた。その後水（１０ｍＬ）を加えると、淡黄色の固体が直ちに沈殿した。さらに水（１００ｍＬ）を加え、ジエチルエーテル（１００ｍＬ）を加えた。懸濁液を減圧濾過した。固体を減圧乾燥して、表題化合物を淡黄色の粉末（２．７３ｇ）として得る；Ｃ７Ｈ６ＢＮＯ２Ｓ・Ｈ３ＰＯ４の微量分析：％Ｃ（計算値／実測値）３０．３５／３１．４１、％Ｈ  ３．２７／３．２４、％Ｎ  ５．０６／５．０４、％Ｓ  １１．５８／１１．９３、％Ｐ  １１．１８／８．５８；１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６、ＣＤＣｌ３、ＣＤ３ＯＤ、Ｄ２Ｏ混合物）δ９．０１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．０Ｈｚ）、８．２６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．０Ｈｚ）、７．９４（ｓ，１Ｈ）、７．９１〜７．８３（ｍ，１Ｈ）；ＭＳ（ＡＰＣＩ＋）ｍ／ｚ  １８０（ＭＨ＋）。
【０１４５】
ステップｉｉ：１−（６−メチルピリジン−２−イル）ヒドラジン。２−ブロモ−６−メチル−ピリジン（６０２．１０ｇ）とヒドラジン水和物（１５７０ｍｌ）の混合物を１２０℃で６時間還流させ、次いで室温で約４８時間攪拌した。分離した固体をジエチルエーテル（３×１．５Ｌ）で抽出し、合わせたエーテル抽出物をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮した（約４３０ｇ）。残渣をエーテル（２００ｍｌ）とヘキサン（１．５Ｌ）の混合物中で攪拌し、濾過し、５％のヘキサン中ジエチルエーテルで洗浄して、淡黄色の固体（粘着性）を得た。固体を１０６〜１１３℃／２ｍｍで減圧蒸留し、直ちに凝固させた。次いで、固体を２Ｌのジエチルエーテルに溶解させ、２Ｌのヘキサンを加えて沈殿させ、濾過し、減圧乾燥させて、１−（６−メチルピリジン−２−イル）ヒドラジンを白色固体（２４０ｇ）として得た。
【０１４６】
別法として、１−（６−メチル−ピリジン−２−イル）−ヒドラジンを以下のように合成した。ジャケット付き反応フラスコに、機械式スターラー、窒素取入れ口、および還流冷却器を備え付け、ジャケットを１０℃に冷却した。反応器は、いかなる時点でも内温が８０℃を超えたならば自動的に０℃に冷えるようにプログラミングした。反応器を安定した窒素ガス流でパージした。反応器に、２５ｇ（０．２２５ｍｏｌ）の２−フルオロ−６−メチルピリジン、次いで１００ｍｌのイソプロパノールを装入し、ジャケット温度を（７０℃の内温に対応する）７３℃に調整した。反応器に４４ｇ（０．９０ｍｏｌ）の６５％ヒドラジン水溶液を装入し、ジャケットを７０℃にセットした状態で混合物を終夜攪拌した。反応器の内容物を１２５ｍｌのメチルｔ−ブチルエーテル（ＭＴＢＥ）および１３ｍｌの飽和ブラインで希釈して２つの層を得、これを分離した。水層を２×６０ｍｌのＭＴＢＥで抽出した。合わせた有機層を合わせ、硫酸ナトリウム（無水）で乾燥させた。乾燥剤を濾過によって除去し、有機の濾液を回転蒸発によって濃縮した。得られる油状物は、静置すると凝固して、所望の生成物（２１．１ｇ）が白色固体として得られた。
【０１４７】
ステップｉｉｉ：４−メチル−２−（６−メチル−ピリジン−２−イル）−２Ｈ−ピラゾール−３−オール。オーブンで乾燥させた５００ｍＬ容三口反応容器中の、ナトリウムメトキシド（１３．６ｇ）を無水テトラヒドロフラン（５０ｍＬ）に混ぜた攪拌混合物に、窒素雰囲気中にて室温で無水ギ酸メチル（１２．６ｍＬ）を加えた。混合物を泡立たせ、懸濁液に、ギ酸エチル（２８．７ｍＬ）をシリンジによって緩徐な安定した流れで加え、その間反応容器を、手で円を描くように振盪して、懸濁液がより効率よく混合されるようにした。その後混合物を室温で５時間攪拌した。氷酢酸（１４ｍＬ）を加え、その間反応容器を数分間手で円を描くように激しく振盪して、より効率よく混合されるようにした。その後懸濁液を終夜攪拌し、セライトで濾過した。セライトフィルター充填物をジエチルエーテルで２回洗浄し（２×２００ｍＬ）、吸引した（ｓｕｃｔｉｏｎｅｄ）。濾液が低密度の白色固体沈殿を生じ、それを中型のガラス製ブフナー漏斗でさらに減圧濾過して除去した。その後濾液を減圧下で濃縮して（水浴温度＝４５℃）、透明な薄色の油状物（約１５ｇ）を得た。油状物は、明瞭な酢酸臭を有していた。油状物を無水エタノール（５０ｍＬ）に溶解させた。この溶液に、固体（６−メチル−ピリジン−２−イル）−ヒドラジン（５．４ｇ）を加えた。攪拌混合物を窒素雰囲気中で４日間穏やかに還流させた。混合物を減圧下で濃縮し、得られる橙色の油状物をジクロロメタン（５０ｍＬ）に溶解させた。ジクロロメタン溶液をＢｉｏｔａｇｅ装置の４００ｇ  Ａｎａｌｏｇｉｘフラッシュシリカカートリッジにかけた。勾配（４カラム体積または２４００ｍＬにわたり１００％のヘプタン→７０％のヘプタン中酢酸エチル）を用いたＢｉｏｔａｇｅ装置での溶出。画分を十分に乾燥させて、固体（７．１ｇ）を得た。
【０１４８】
別法として、４−メチル−２−（６−メチル−ピリジン−２−イル）−２Ｈ−ピラゾール−３−オールを以下のように生成した。ギ酸エチル（１１７．５ｇ）およびプロピオン酸エチル（５４．０ｇ）を４０ｍｌのテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）に溶かした溶液に、カリウムｔ−ブトキシド（１．０モル濃度のＴＨＦ溶液を５０２ｍｌ）を周囲温度で約０．５時間かけて滴下した。若干の泡立ちと共に白色の沈殿が生成し始めた。さらに７．５時間経過後、反応液を濾過し、固体をジエチルエーテルで洗浄し、次いで真空中にて４０℃で１６時間乾燥させて、カリウム２−エトキシカルボニル−プロペン−１−オラートを灰色粉末（２３．５ｇ）として得た。
【０１４９】
このカリウム塩（１７．６ｇ）を４５０ｍｌの１−プロパノールに溶かした溶液に、（６−メチル−ピリジン−２−イル）−ヒドラジン（１１．７ｇ）、次いで酢酸（６．５ｍｌ）を加えた。１０分間攪拌した後、混合物を穏やかに還流させながら５時間加熱した。酢酸（５．５ｍｌ）をさらに加え、還流をさらに１６時間継続した。
【０１５０】
真空中で溶媒を除去した。得られる残渣を酢酸エチル（３５０ｍｌ）で希釈し、残りの酢酸が中和されるまで、溶液を飽和炭酸水素ナトリウム溶液（２００ｍｌ）で慎重に洗浄した。相を分離し、水相を酢酸エチル（５０ｍｌ）で抽出した。有機相を合わせ、水（１００ｍｌ）、次いでブライン（１００ｍｌ）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させた。乾燥剤を濾過によって除去し、真空中で溶媒を除去して、生成物を橙色の固体（１６．２６ｇ）として得た。
【０１５１】
ステップｉｖ：トリフルオロ−メタンスルホン酸４−メチル−２−（６−メチル−ピリジン−２−イル）−２Ｈ−ピラゾール−３−イルエステル。４−メチル−２−（６−メチル−ピリジン−２−イル）−２Ｈ−ピラゾール−３−オールのジクロロメタン溶液（５０ｍＬのジクロロメタン中１３．３９ｇ）およびトリエチルアミン（１１ｍＬ）を追加のジクロロメタン（さらに５０ｍＬ、合計１００ｍＬのジクロロメタン）に混ぜた攪拌混合物に、窒素雰囲気中にて−７８℃で、トリフルオロメタンスルホン酸無水物（１３．３ｍＬ）を、シリンジによって緩徐な安定した流れで５分間かけて加えた。冷浴を取り外し、混合物を１時間３０分かけて徐々に室温に温めた。混合物を減圧下で濃縮し、濃縮物をフラッシュシリカクロマトグラフィーによって精製した。勾配（３カラム体積または１８００ｍＬにわたり１００％のヘプタン→３０％のヘプタン中酢酸エチル、次いで追加の２カラム体積または１２００ｍＬにわたり３０％→４５％の酢酸エチル）をかけてＢｉｏｔａｇｅ装置の４００−ｇ  Ａｎａｌｏｇｉｘフラッシュシリカカートリッジで溶出すると、表題化合物が無色透明の油状物（１８．０４ｇ）として得られた。１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．６８（ｍ，１Ｈ）、７．５９（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ）、７．５０（ｓ，１Ｈ）、７．０７（ｄ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，１Ｈ）、２．５６（ｓ，３Ｈ）、２．０７（ｓ，３Ｈ）；１９Ｆ−ＮＭＲ（３７６ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ−７４．１２（ｓ，３Ｆ）；１３Ｃ−ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１５７．９、１５１．１、１４１．３、１３９．５、１３９．０、１２２．０、１１８．６（四重線，ＪＣ−Ｆ＝３２１．０Ｈｚ）、１１１．９、１０８．７、２３．６、７．３；ＭＳ（ＡＰＣＩ＋）ｍ／ｚ  ３２２。
【０１５２】
ステップｖ：２−［４−メチル−２−（６−メチル−ピリジン−２−イル）−２Ｈ−ピラゾール−３−イル］−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン。還流冷却器および気体入口弁を備え付けた、オーブンで乾燥させた三口丸底フラスコに、チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−２−ボロン酸リン酸三水素塩（１．０ｇ）、トリフルオロ−メタンスルホン酸４−メチル−２−（６−メチル−ピリジン−２−イル）−２Ｈ−ピラゾール−３−イルエステル（１．１６ｇ）、リン酸三カリウム（２．３ｇ）、１，４−ジオキサン（３０ｍＬ）、ジクロロ［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］パラジウム（ＩＩ）ジクロロメタン付加体（０．６０ｇ）、および１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン（０．４０ｇ）を装入し、攪拌混合物を窒素雰囲気中で１８時間還流させた。反応混合物を酢酸エチル（２５０ｍＬ）で希釈し、溶液を活性炭で処理し、セライトで濾過した。濾液を減圧下で濃縮し、濃縮物をシリカゲルクロマトグラフィーによって精製した。１８００ｍＬにわたり１００％のヘプタン→１００％の酢酸エチル、次いで所望の質量の材料が溶出されるまで１００％の酢酸エチルを用い、Ｂｉｏｔａｇｅシステムの１２０ｇ  ＲｅｄｉＳｅｐフラッシュシリカカートリッジで溶出すると、油状物（１．２ｇ）が得られた。ＭＳ（ＡＰＣＩ＋）ｍ／ｚ  ３０７（ＭＨ＋）。生成物をアセトニトリル（３０ｍＬ）に溶解させ、同等の２部分に分けることによりさらに精製した。濾過した後、溶液を分取ＨＰＬＣ（Ｗａｔｅｒｓ分取ＨＰＬＣシステム、固定相：Ｗａｔｅｒｓ  ＤｅｌｔＰａｋ  Ｃ１８  ５μｍ、１００Å、３００×内径５０ｍｍ、Ｐ／Ｎ０１１８０１、ＷＡＴ０１１８０１、Ｎｏ．３３０Ｃ０９１２５Ｗ、移動相：３０分間かけて９０：１０→５０：５０の水−アセトニトリル、０．１％ギ酸含有）によって逐次精製した。合わせた画分を減圧下で濃縮し、アセトニトリルを除去して水溶液とした。透明な水溶液を飽和炭酸カリウム水溶液で処理して、濁った白色懸濁液を得た。懸濁液を室温で一晩静置した。生成した固体白色沈殿を減圧濾過によって収集し、真空オーブン（７７℃）で一晩乾燥させて、表題化合物を白色固体（０．５０６ｇ）として得た。融点１５７〜１５８℃。
【０１５３】
実施例１〜７の１Ｈ  ＮＭＲおよび質量分析の分析データを以下で表１に報告する。
【０１５４】
【表１】
0005443988.tif 000020
【０１５５】
（実施例８）
２−［４−メチル−２−（６−メチル−ピリジン−２−イル）−２Ｈ−ピラゾール−３−イル］−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン（ＩＵＰＡＣ名：２−［４−メチル−１−（６−メチル−ピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン）
ステップｉ．２−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン
チエノ［３，２−ｃ］ピリジン（５．０ｇ）を１００ｍＬのＴＨＦに溶かした溶液を、Ｎ２雰囲気中で−７８℃に冷却した（アセトン／ドライアイス）。ｎ−ブチルリチウム（２８ｍｌ、ヘキサン中１．６Ｍ、新たに開けたボトル）を２０分かけて滴下し、その間内温を−６４℃以下に保った。混合物を−７８℃で１時間攪拌し、ホウ酸トリイソプロピル（新たに開けたボトル、１０．２ｍｌ）をその後加えた。冷浴を取り外し、混合物を３０分かけて室温に温めた。混合物を室温で１時間攪拌した。反応混合物に、ピナコール（５．９ｇ）をジエチルエーテル（２０ｍＬ）に混ぜた混合物を加えた。２０分後、氷酢酸（２．２ｍＬ）を加えると、反応混合物中に沈殿が生成した。反応混合物をセライトで濾過し、ＵＶ活性材料が溶出されるまで（約２５００ｍＬ）クロロホルムですすいだ。濾液を５％水酸化ナトリウム水溶液で２回抽出した（合計約５００ｍＬ）。塩基性水溶液を室温で一晩放置した。水層をＣＨ３ＣＮ／ドライアイス浴で冷却し、１０％塩酸水溶液で中和し、その間内温を５℃以下に保った。中和された水溶液を１０回クロロホルムに抽出した。合わせた抽出物を無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、減圧下で濃縮して固体を得た。この生成物を、同じスケールで同じようにして実施した他の３つの反応の生成物と合わせて、まとめた固体（２３．５２ｇ）を得た。まとめた固体を約１Ｌの沸騰エタノールに溶解させた。溶液を室温に冷ました。室温で約４時間経過後、溶液を４℃で一晩保存した。黄褐色の材料が溶液から沈殿した。液体を、フィルターを通してデカントした。固体を真空オーブン（５０℃）で１時間乾燥させて、表題化合物（１４．０２ｇ）を黄褐色の固体として得た。１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，完全に溶解させるためにＤ２Ｏを１滴加えたＣＤＣｌ３）δ１．３９（１２Ｈ，ｓ）、７．８９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．３Ｈｚ）、７．９７（１Ｈ，ｓ）、８．４５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝４．５Ｈｚ）、９．１８（１Ｈ，ｓ）；ＭＳ（ＡＰＣＩ＋）ｍ／ｚ  ２６２。
【０１５６】
別法として、２−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−チエノ［３，２−ｃ］ピリジンを以下のように生成した。チエノ［３，２−ｃ］ピリジン（２１．６ｇ）を４００ｍＬの無水テトラヒドロフランに溶かした−７０℃の溶液に、窒素ガス中にて、温度を−６５℃未満に保ちながら、ｎ−ブチルリチウム（１．６モル濃度のヘキサン溶液を９９．９ｍｌ）を約１５〜２０分かけて加えた。溶液は、濁り、暗褐色になった。４５分後、ホウ酸トリイソプロピル（３３．０６ｇ）を加えると、混合物が均質になった。混合物を−７０〜−７５℃で２時間攪拌した。混合物を−３０℃に温め、次いでピナコールを１００ｍＬのジエチルエーテルに溶かした溶液を４分かけて加えた。反応混合物が橙色の均質な溶液になった。温度を５℃に温め、その温度で１時間保った。反応混合物を１，４−ジオキサン中４Ｍの塩酸４０ｍＬで非常にゆっくりと中和し（ｐＨ７）、温度を１０℃未満に保った。沈殿を生成した。反応混合物を１時間攪拌し、次いで固体を濾過によって収集した。固体を４０℃の真空中で１６時間乾燥させた。乾燥した固体（３６ｇ）を４００ｍＬの水と共に１．５時間攪拌した。スラリーを濾過し、固体を収集した。固体を空気流中で６０時間乾燥させて、所望の生成物（３４．５ｇ）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム−ｄ）δｐｐｍ１．２１（ｓ，１２Ｈ）７．６６〜７．７０（ｍ，１Ｈ）７．８０（ｄ，Ｊ＝０．７８Ｈｚ，１Ｈ）８．２８（ｄ，Ｊ＝５．６５Ｈｚ，１Ｈ）８．９８（ｄ，Ｊ＝０．９７Ｈｚ，１Ｈ）。
【０１５７】
ステップｉｉ：２−［４−メチル−２−（６−メチル−ピリジン−２−イル）−２Ｈ−ピラゾール−３−イル］−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン。還流冷却器および気体入口弁を備え付けた、オーブンで乾燥させた５００ｍＬ容三口丸底フラスコに、２−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン（１１．５６ｇ）、トリフルオロ−メタンスルホン酸５−エチル−２−（６−メチル−ピリジン−２−イル）−２Ｈ−ピラゾール−３−イルエステル（１６．４ｇ）、リン酸三カリウム（２８ｇ）、および１，４−ジオキサン（３００ｍＬ）を装入した。反応容器を真空にし、窒素ガスでフラッシュした。脱気および窒素フラッシュを２回繰り返した。混合物に、ジクロロ［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］パラジウム（ＩＩ）ジクロロメタン付加体（７．３ｇ）および１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン（５．０ｇ）を加え、攪拌混合物をもう３回脱気し、窒素ガスでフラッシュし、その後３０分間かけて徐々に穏やかな還流に導いた。混合物を窒素中で還流しながら２．５時間攪拌し、その後フッ化カリウム（１３ｇ）および水（１．２ｍＬ）を加えた。混合物の攪拌を還流しながら１５分間続け、その後少し冷却し、セライトで濾過した。フィルターパッドを酢酸エチル（１Ｌ）で洗浄し、濾液を活性炭で処理した。炭素懸濁液をセライトで濾過した。このフィルターパッドを追加の酢酸エチル（３００ｍＬ）で洗浄し、濾液を減圧下で濃縮して、未精製の赤褐色の油性残渣（約３５ｇ）を得た。残渣を数ミリリットルの無水エタノールで処理し、減圧下で濃縮した。残渣を、フラッシュシリカゲル（１００ｇ）、および５％のメタノール酢酸エチル溶液（２００ｍＬ）と混合した。混合物を濾過し、シリカを新鮮な５％のメタノール酢酸エチル溶液２００ｍＬで２回洗浄した。濾液を減圧下で濃縮して、赤褐色の油性残渣（約２５ｇ）を得た。残渣を数ミリリットルのエタノールに溶解させた。その後静置すると沈殿が生成し、減圧濾過によって収集した。固体をヘプタンで洗浄して、粘着性の赤橙色粉末（４．６ｇ）を得た。エタノール−ヘプタン濾液が沈殿を呈し、それを減圧濾過によって収集して、ベージュ色の固体（４．３ｇ）を得た。ベージュ色の固体を、水蒸気の上で無水エタノールに溶解させた。透明な溶液をゆっくりと冷却すると沈殿が生じ、それを減圧濾過によって収集した。吸引乾燥すると、固体（２．２５ｇ）が得られた。固体を無水エタノール（１５ｍＬ）中で煮沸し、これから沈殿させて、白色固体（１．６２ｇ）を得た。固体をエタノール中で煮沸し、これから再度沈殿させて、表題化合物を白色固体（１．２０ｇ）として得た。１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ９．１２（ｓ，１Ｈ）、８．４６（ｄ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，１Ｈ）、７．９４（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，１Ｈ）、７．６８〜７．６４（ｍ，２Ｈ）、７．４８〜７．４３（ｍ，２Ｈ）、７．０４（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ）、２．２１（ｓ，３Ｈ）、２．１９（ｓ，３Ｈ）；ＭＳ（ＡＰＣＩ＋）ｍ／ｚ  ３０７。
【０１５８】
（実施例９）
２−［４−メチル−２−（６−メチル−ピリジン−２−イル）−２Ｈ−ピラゾール−３−イル］−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン（ＩＵＰＡＣ名：２−［４−メチル−１−（６−メチル−ピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン）
ステップｉ：２−メチル−６−（４−メチル−ピラゾール−１−イル）−ピリジン
反応条件１
４−メチル−ピラゾール（１．０ｇ）を５０ｍＬの無水アセトニトリルに溶かした溶液に、炭酸セシウム（５．９ｇ）、次いで２−フルオロ−６−メチルピリジン（１．５ｇ）を加えた。反応混合物を還流温度で１８時間攪拌した。反応混合物を濾過して、セシウム塩を除去し、次いで濾液を蒸発させて、未精製の油状物を得た。フラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、２０％のヘプタン中酢酸エチル）によって精製すると、乾燥後、表題化合物１．３２ｇが黄色の油状物として得られた。１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ；ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．３４（ｓ，１Ｈ）、７．８０（ｔ，１Ｈ）、７．６３（ｄ，１Ｈ）、７．５９（ｓ，１Ｈ）、７．１３（ｄ，１Ｈ）、２．４７（ｓ，３Ｈ）、２．０８（ｓ，３Ｈ）；ＭＳ（ＡＰＣＩ＋）ｍ／ｚ  １７４（ＭＨ＋）。
【０１５９】
反応条件２
ステップｉについて反応１で実施した反応を、４−メチル−ピラゾール（５．０ｇ）から出発して、より大きいスケールで同じようにして実施した。表題化合物５．９２ｇを生成した。
【０１６０】
反応条件３
別法として、アセトニトリル中の４−メチル−ピラゾール（１．０ｇ）から出発し、１．１当量のカリウムｔ−ブトキシドを塩基として使用して、表題化合物１．７５ｇを生成した。
【０１６１】
反応条件４
別法として、ＴＨＦ中の４−メチル−ピラゾール（１．０ｇ）から出発し、１．１当量のカリウムｔ−ブトキシドを塩基として使用し、表題化合物０．２３８ｇを生成した。
【０１６２】
反応条件５
さらに、ステップｉの表題化合物を以下のように調製した。窒素雰囲気中の６０％水素化ナトリウム（８．０４ｇ）の無水ＤＭＦ（４０ｍＬ）懸濁液に、４−メチル−ピラゾール（１５ｇ）を３０ｍｌのＤＭＦに溶かした溶液を、氷浴中で４０分間かけて滴下した。得られる混合物を室温で０．５時間攪拌し、次いで２−フルオロ−６−メチルピリジン（２２．３３ｇ）を滴下した。混合物を８０℃で３時間攪拌し、冷却した。反応混合物を氷水中に注ぎ、酢酸エチルで２回抽出した。合わせた有機相を水およびブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過した。濾液を真空中で濃縮して残渣を得、これをクロマトグラフィー（２％〜１０％のヘプタン中酢酸エチル）によって精製して、表題化合物２９．９ｇを無色の油状物として得た。
【０１６３】
ステップｉｉ：２−（５−ブロモ−４−メチルピラゾール−１−イル）−６−メチルピリジン。２−メチル−６−（４−メチル−ピラゾール−１−イル）−ピリジン（０．５２ｇ）（ステップｉの反応条件１によって調製したもの）を１４ｍＬの無水ＴＨＦに溶かした冷（−６０℃）溶液に、２．５Ｍのｎ−ブチルリチウム（０．２１ｇ）ヘキサン溶液１．３３ｍＬを加えた。反応混合物を−６０℃で１時間攪拌した。１０ｍＬのＮ−ブロモスクシンイミド（０．５９ｇ）のＴＨＦ溶液を加え、次いで最終的な溶液を−６０℃で２時間攪拌した。飽和塩化アンモニウム（２０ｍＬ）を加え、次いで反応混合物を２４℃に温めた。反応混合物を３００ｍＬの酢酸エチルで希釈し、次いで水相を分離した。有機相を追加の飽和塩化アンモニウム（５０ｍＬ）、次いでブライン（５０ｍＬ）で洗浄した。有機層を分離し、乾燥させ（硫酸ナトリウム）、濾過し、次いで濾液を蒸発させて、未精製の赤色油状物を得た。フラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、２０％のヘプタン中酢酸エチル）で精製すると、乾燥後、表題化合物０．３７７ｇが黄色の油状物として得られた。１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ；ＤＭＳＯ−ｄ６）δ７．８８（ｔ，１Ｈ）、７．６９（ｓ，１Ｈ）、７．４４（ｓ，１Ｈ）、７．３２（ｓ，１Ｈ）、２．５０（ｓ，３Ｈ）、２．０２（ｓ，３Ｈ）；ＭＳ（ＡＰＣＩ＋）ｍ／ｚ  ２５４（ＭＨ＋）。
【０１６４】
代替反応条件：ステップｉｉの化合物２−（５−ブロモ−４−メチルピラゾール−１−イル）−６−メチルピリジンは、以下のようにも調製した。
１．）上述したのと同様の反応条件を使用し、２−メチル−６−（４−メチル−ピラゾール−１−イル）−ピリジン（１．０ｇ）から出発して２−（５−ブロモ−４−メチルピラゾール−１−イル）−６−メチルピリジンを調製し、表題化合物（８２９ｍｇ）を得た。
２．）上述したのと同様の反応条件を使用し、２−メチル−６−（４−メチル−ピラゾール−１−イル）−ピリジン（５．０ｇ）から出発して２−（５−ブロモ−４−メチルピラゾール−１−イル）−６−メチルピリジンを調製し、表題化合物（２．６４ｇ）を得た。
３．）上述したのと同様の反応条件を使用し、２−メチル−６−（４−メチル−ピラゾール−１−イル）−ピリジン（１．０ｇ）から出発して２−（５−ブロモ−４−メチルピラゾール−１−イル）−６−メチルピリジンを調製し、表題化合物を得た。また、臭素化剤（７５６ｍｇ）としてのＮ−ブロモスクシンイミド（ＮＢＳ）の代わりに１，２−ジブロモテトラフルオロエタン（１．５当量）を使用した。
【０１６５】
ステップｉｉｉ：２−［４−メチル−２−（６−メチル−ピリジン−２−イル）−２Ｈ−ピラゾール−３−イル］−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン。２−（５−ブロモ−４−メチルピラゾール−１−イル）−６−メチルピリジン（２．０ｇ）を２０ｍＬの無水１，２−ジメトキシエタン（ＤＭＥ）に溶かした溶液に、パラジウムビストリフェニルホスフィン二塩化物（０．１５３ｇ）を加えた。反応混合物を室温で３０分間攪拌し、次いで２０ｍＬの水を加えた後、炭酸水素ナトリウム（２．０ｇ）、次いでトリフルオロ−メタンスルホン酸５−エチル−２−（６−メチル−ピリジン−２−イル）−２Ｈ−ピラゾール−３−イルエステル（３．１ｇ）を加えた。反応混合物を１８時間還流させ、次いで室温に冷却した。反応混合物を４００ｍＬのジエチルエーテルで希釈し、次いで有機相を水（１００ｍＬ）、飽和炭酸水素ナトリウム（２×１００ｍＬ）、およびブライン（１００ｍＬ）で洗浄した。有機層を乾燥させ（硫酸マグネシウム）、濾過し、次いで濾液を蒸発させて黄色のスラリーを得た。混合物を２５ｍＬの酢酸エチルで希釈した。材料は、すべてが溶液にはならなかった。混合物を１５分間摩砕し、次いで濾過して（最初の濾過）黄色の固体を除去し、これを酢酸エチル（２×１０ｍＬ）ですすいだ。固体を１５分間風乾して、わずかに不純な生成物４４８ｍｇを得た。上記の最初の濾過からの濾液を６ｇのシリカゲルに蒸着させ、フラッシュクロマトグラフィーにかけて（シリカゲル、８０％のヘプタン中酢酸エチル、酢酸エチル、次いで９５％のメタノール中酢酸エチル）、０．５６５ｇを得た。表題化合物の重量を合わせると、黄色の固体として１．０１ｇであった。エタノールから沈殿させると、表題化合物（０．７６４ｇ）が黄色の固体として得られた。融点１５５〜１５６℃；ＭＳ（ＡＰＣＩ＋）ｍ／ｚ  ３０７（ＭＨ＋）。
【０１６６】
（実施例１０）
２−［４−メチル−２−（６−メチル−ピリジン−２−イル）−２Ｈ−ピラゾール−３−イル］−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン（ＩＵＰＡＣ名：２−［４−メチル−１−（６−メチル−ピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン）
ステップｉ：４−ブロモ−ピリジン。４−ブロモピリジン塩酸塩（２０．０ｇ、１０２．９ｍｍｏｌ）をＥｔＯＡｃと５％ＮａＨＣＯ３とに分配した。層を分離し、水相をＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機抽出物を水およびブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、４０℃の浴に入れて減圧下で蒸発させて、１３．７ｇ（８４％）の揮発油を得、これを次のステップで直ちに使用した。
【０１６７】
ステップｉｉ：４−ブロモ−ピリジン−３−カルバルデヒド。４−ブロモピリジン（１３．７ｇ、８６．８ｍｍｏｌ）を３００ｍＬのＴＨＦに懸濁させた懸濁液をＮ２でパージし、乾燥Ｎ２雰囲気中で−７８℃に冷却した。リチウムジイソプロピルアミドの溶液（２．０Ｍのヘプタン／ＴＨＦ／エチルベンゼン溶液、４３．４ｍＬ、８６．８ｍｍｏｌ）を約３分かけて加えた。３０分後、ＤＭＦ（ジメチルホルムアミド）を加えた。反応混合物を３時間−７８℃に保った後、一晩かけて周囲温度に温めた。反応混合物を飽和ＮＨ４Ｃｌで失活させ、減圧下で濃縮して、ＴＨＦの大部分を除去した。水性の混合物をＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機抽出物を水およびブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、蒸発させ、クロマトグラフィーにかけた（１５０ｇ  Ａｎａｌｏｇｉｘシリカゲルカラム、４５分かけて１００％のヘプタン→３０％のＥｔＯＡｃ／ヘプタンの勾配で溶出）。生成物を含有する画分を合わせ、蒸発にかけて、表題化合物２．２０ｇ（１３．６％）を得た。ＭＳ  ｍ／ｚ  １８６（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１６８】
ステップｉｉｉ：１−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−２−イル−プロパン−１−オン。ナトリウムヒドロスルフィド水和物（１．３１ｇ、１７．７ｍｍｏｌ）を５ｍＬの水に溶かした溶液に、ＤＭＦ（３０ｍＬ）およびＫ２ＣＯ３（３．２７ｇ、２３．７ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を氷浴で０℃に冷却した後、１−ブロモ−２−ブタノン（２．６８ｇ、１７．７ｍｍｏｌ）を加えた。１５分後、４−ブロモピリジン−３−カルバルデヒド（２．２０ｇ、１１．８ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２０ｍＬ）溶液を加えた。反応混合物を４５℃で２．５日間攪拌した。反応混合物を水で希釈し、ＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機抽出物を水およびブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた、蒸発にかけて、粗生成物（１．８０ｇ、８０％）を得、これをそれ以上精製せずに次のステップで使用した。ＭＳ  ｍ／ｚ  １９２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１６９】
ステップｉｖ：３−ジメチルアミノ−２−メチル−１−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−２−イル−プロペノン。１−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−２−イル−プロパン−１−オン（１．８０ｇ、９．４１ｍｍｏｌ）およびジメトキシメチル−ジメチル−アミン（５．３２ｍＬ、３７．８ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２０ｍＬ）溶液をＮ２でパージし、１８時間かけて８０℃に加熱した。反応混合物を１：１の水／ブラインで希釈し、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機抽出物を１：１の水／ブラインおよびブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、蒸発にかけて、２．１ｇの粗製材料を得た。残渣を繰り返しトルエンに溶解させ、残渣が恒量に達するまで蒸発にかけた。ＭＳ  ｍ／ｚ  ２４７（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１７０】
【化１９】
0005443988.tif 000021
ステップｖ：２−［４−メチル−２−（６−メチル−ピリジン−２−イル）−２Ｈ−ピラゾール−３−イル］−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン。３−ジメチルアミノ−２−メチル−１−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−２−イル−プロペノン（１．３１ｇ、５．３２ｍｍｏｌ）の酢酸（２０ｍＬ）溶液を９０℃に加熱した。（６−メチル−ピリジン−２−イル）−ヒドラジンの酢酸（８ｍＬ）溶液を９０℃に加熱した後、３−ジメチルアミノ−２−メチル−１−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−２−イル−プロペノン溶液に加えた。混合物を９５℃で１５分間加熱した後、熱を取り、周囲温度で１８時間攪拌した。減圧下で溶媒を除去し、残渣を２回トルエンからの蒸発にかけた。そうして得られた残渣をクロマトグラフィーにかけて（Ａｎａｌｏｇｉｘ  １１０ｇシリカゲルカラム、１００％のＣＨ３ＣＮを溶離液とする）、０．４５ｇ（２８％）の橙色油状物を得た。
【０１７１】
実施例１０ステップｉｉｉの化合物（１−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−２−イル−プロパン−１−オン）を調製する第２の方法も以下のように実施した。
ステップｉ．４−ブロモ−ピリジン−３−カルバルデヒド。４−ブロモピリジン塩酸塩（５．０ｇ、２５．７ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１００ｍＬ）懸濁液をＮ２でパージし、−７８℃に冷却した。リチウムジイソプロピルアミドの溶液（２．０Ｍのヘプタン／ＴＨＦ／エチルベンゼン溶液、２７．０ｍＬ、５４．０ｍｍｏｌ）を３分かけて加えた。３０分後、ＤＭＦ（８．５６ｍＬ、１１０．６ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を−７８℃で１５分間攪拌した後、水浴で急速に室温に温めた。反応液を周囲温度で１８時間攪拌した。反応液を飽和ＮＨ４Ｃｌ（１００ｍＬ）で失活させ、ＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機抽出物を水およびブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、蒸発にかけ、クロマトグラフィーにかけて（Ａｎａｌｏｇｉｘ  １５０ｇシリカゲルカラム、１時間かけて１００％のヘプタン  ５０％のＥｔＯＡｃ／ヘプタンの勾配で溶出）、１．５０ｇ（３１％）の表題化合物を淡黄色の固体として得た。ＭＳ  ｍ／ｚ  １８６（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１７２】
ステップｉｉ．チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−２−カルボン酸メチルエステル。４−ブロモ−ピリジン−３−カルバルデヒド（１．５０ｇ、８．０６ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１０ｍＬ）および水（１ｍＬ）に溶かした溶液に、Ｋ２ＣＯ３（１．３４ｇ、９．６８ｍｍｏｌ）およびチオグリコール酸メチル（０．８７ｍＬ、９．６８ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を４５℃で１８時間加熱した。反応混合物を加熱浴から取り外し、水（５０ｍＬ）で希釈した。１時間後、生成した綿毛状の固体を濾別し、水で洗浄した。そうして得られた材料を６０℃の真空オーブンで乾燥させて、恒量０．９２ｇ（５９％）とした。ＭＳ  ｍ／ｚ  １９４（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１７３】
ステップｉｉｉ．チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−２−カルボン酸メトキシ−メチル−アミド。Ｏ，Ｎ−ジメチルヒドロキシルアミン塩酸塩（２．３２ｇ、２３．８ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（２０ｍＬ）懸濁液を、Ｎ２でパージし、−７８℃に冷却した後、ｎ−ブチルリチウム（ヘキサン中１．６Ｍ、３０．０ｍＬ、４８．１ｍｍｏｌ）を加えた。浴を取り外し、１５分間攪拌した後、浴を取り替え、チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−２−カルボン酸メチルエステル（０．９２ｇ、４．７６ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１０ｍＬ）溶液を加えた。４５分後、飽和ＮＨ４Ｃｌを加えた。混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、水、１Ｍ  ＨＣｌ、水、５％ＮａＨＣＯ３、水、およびブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、蒸発にかけて、０．５４ｇ（５１％）の油状物を得たが、静置すると凝固した。こうして得られた生成物をそれ以上精製せずに次のステップで使用した。ＭＳ  ｍ／ｚ  ２２３（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１７４】
ステップｉｖ．１−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−２−イル−プロパン−１−オン。チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−２−カルボン酸メトキシ−メチル−アミド（０．５４ｇ、２．４３ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（１０ｍＬ）に溶解させ、Ｎ２でパージし、氷浴で０℃に冷却した。臭化エチルマグネシウム（エーテル中３Ｍ、２．４３ｍＬ、７．２９ｍｍｏｌ）を加え、反応液を一晩かけて周囲温度に温めた。反応混合物をさらに精製した。ＭＳ  ｍ／ｚ  １９２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１７５】
実施例１０ステップｉｉｉの化合物（１−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−２−イル−プロパン−１−オン）を調製する第２第３の方法も以下のように実施した。
ステップｉ：Ｎ−メトキシ−Ｎ−メチル−プロピオンアミド。Ｏ，Ｎ−ジメチル−ヒドロキシルアミン塩酸塩（１１．１ｇ）および塩化プロピオニル（９．４ｍＬ）をジクロロメタン（３００ｍＬ）に混ぜた攪拌混合物に、窒素雰囲気中にて０℃でピリジン（１８．２ｍＬ）を加えた。冷浴を取り外し、混合物を徐々に室温に温め、その温度で週末にかけて攪拌した。攪拌混合物中に白色の沈殿が生成した。混合物を１０％の塩酸水溶液で処理し、沈殿が二相性の溶液に溶解するまで攪拌した。層を分離し、ジクロロメタン相を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（１００ｍＬ）およびブライン溶液（１００ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、減圧下で濃縮して、表題化合物を無色透明の油状物（１２．０５ｇ）として得た。１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ；ＣＤＣｌ３）δ３．６２（ｓ，３Ｈ）、３．１１（ｓ，３Ｈ）、２．３８（四重線，Ｊ＝７．６Ｈｚ，２Ｈ）、１．０７（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，３Ｈ）；１３Ｃ−ＮＭＲ（１００ＭＨｚ；ＣＤＣｌ３）δ１７５．５、６１．３、３２．５、２５．４、８．９；ＭＳ（ＡＰＣＩ＋）ｍ／ｚ  １１８（ＭＨ＋）。
【０１７６】
ステップｉｉ：１−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−２−イル−プロパン−１−オン。チエノ［３，２−ｃ］ピリジン（１．０ｇ）を無水テトラヒドロフラン（５０ｍＬ）に混ぜた−４０℃（アセトニトリル−ドライアイス浴）の攪拌混合物に、ｎ−ブチルリチウム（１．６Ｍ、４．７ｍＬ）のヘキサン溶液を加えた。混合物を−７８℃に冷却した後、引き続いてＮ−メトキシ−Ｎ−メチル−プロピオンアミド（０．９７ｇ）の無水テトラヒドロフラン（１０ｍＬ）溶液を加えた。冷浴を取り外し、反応混合物を徐々に室温に温めた。混合物を終夜（１４時間）攪拌した。混合物を塩化アンモニウム飽和水溶液（１５０ｍＬ）で処理した。次いで混合物を酢酸エチル（５００ｍＬ）で抽出し、抽出物をブライン溶液（１００ｍＬ）で洗浄した。有機相を無水炭酸カリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮し、クロロホルム中で戻し、再度減圧下で濃縮して、橙褐色の半固体（１．１７ｇ）を得た。半固体を、Ａｎａｌｏｇｉｘシリカカラム（１１５ｇシリカ）を使用し、０〜３０％の酢酸エチル／ヘプタン、次いで３０〜６０％の酢酸エチル／ヘプタンを溶離液とするフラッシュシリカクロマトグラフィーによって精製した。生成物を含有する画分を濃縮すると、生成物０．４９ｇが得られた。適切な画分を蒸発させて、出発材料（０．４５ｇ）も単離した。
【０１７７】
（実施例１１）
２−［４−メチル−２−（６−メチル−ピリジン−２−イル）−２Ｈ−ピラゾール−３−イル］−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン（ＩＵＰＡＣ名：２−［４−メチル−１−（６−メチル−ピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン）。
還流冷却器および気体入口弁を備え付けた５００ｍＬ容三口丸底フラスコに、２−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン（１０ｇ）、トリフルオロ−メタンスルホン酸４−メチル−２−（６−メチル−ピリジン−２−イル）−２Ｈ−ピラゾール−３−イルエステル（１４ｇ）、リン酸三カリウム（２４ｇ）、および１，４−ジオキサン（２００ｍＬ）を装入した。反応容器を真空にし、窒素ガスでフラッシュした。脱気および窒素フラッシュを２回繰り返した。混合物に、ジクロロ［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］パラジウム（ＩＩ）ジクロロメタン付加体（３．２ｇ）、１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン（２．２ｇ）、フッ化カリウム（１１ｇ）、および水（１ｍＬ）を加え、攪拌混合物を脱気し、窒素ガスでもう３回フラッシュし、その後２０分間かけて徐々に８０℃にした。混合物を８０℃で１０分間攪拌し、その後一晩かけて徐々に室温に冷却した。混合物をセライトで減圧濾過し、フィルター充填物を介して２回分の酢酸エチル（８００ｍＬおよび６００ｍＬ）で洗浄した。濾液を合わせ、減圧下で濃縮して、暗色の残渣を得た。残渣をジクロロメタン（２００ｍＬ）に溶解させた。固体が沈殿し、減圧濾過によって除去した。濾液を減圧下で濃縮して、橙褐色の固体（２０ｇ）を得た。固体を室温のアセトニトリル（２００ｍＬ）で処理し、得られる懸濁液を、円を描くように振盪し、減圧濾過して、黄色の固体（９．１ｇ）を得た。この第２の固体を水蒸気浴上で沸騰アセトニトリルに溶解させ（７５ｍＬ溶液体積、熱）、橙色の溶液を３０分かけて室温に冷ました。固体が沈殿し、フラスコを密閉し、４℃で一晩保存した。沈殿を減圧濾過し、減圧乾燥して、表題化合物をオフホワイトの固体（４．８０ｇ）として得た。この固体を、同じようにして単離した他の実験からの固体バッチと合わせて（合計質量２１．５ｇ）、まとめた固体を得た。
【０１７８】
まとめた固体を、以下の実験から得られた固体（８．９２ｇ）とさらに合わせた。３−ジメチルアミノ−２−メチル−１−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−２−イル−プロペノン（３１．３５ｇ）の氷酢酸（５００ｍＬ）溶液および（６−メチル−ピリジン−２−イル）−ヒドラジン（１５．６７ｇ）の氷酢酸（２００ｍＬ）溶液を乾燥窒素でパージし、窒素ガス中で９０℃に加熱した。２つの混合物を合わせ、１５分かけて９５℃に加熱した。加熱を中断し、反応混合物を冷まし、室温で終夜攪拌した。減圧下で未精製の反応混合物を濃縮して、約１００ｇの暗色の油状物とした。残渣をトルエンに溶解させ、蒸発にかけて約７０ｇとした。強い酢酸臭がはっきりとわかったので、蒸発残物をトルエンに溶解させ、蒸発にかけて、約７０ｇの油状物とした。こうして得られた残渣は、それでもかすかな酢酸臭を有していたが、アセトニトリル（２００ｍＬ）に溶解させ、室温で静置した。２．５日後、沈殿が生成していなかったので、溶液を６０℃の浴中にて減圧下で蒸発にかけた。得られる油状物をアセトニトリル（約２００ｍＬ）に溶解させ、室温に冷ました。少量の沈殿が生成し、これを収集し、少量のアセトニトリルで洗浄した。濾過すると、多量の固体が母液から沈殿した。沈殿を収集し、少量のアセトニトリルで洗浄した。６０℃の真空オーブンで乾燥させると、１２．０５ｇの材料が得られた。こうして得られた固体を、２５０ｍＬの沸騰アセトニトリルから単離し直して、６０℃の真空オーブンで乾燥させて恒量にした後、固体（８．９２ｇ）２−［４−メチル−２−（６−メチル−ピリジン−２−イル）−２Ｈ−ピラゾール−３−イル］−チエノ［３，２−ｃ］ピリジンを得た。
【０１７９】
２１．５ｇと８．９２ｇのバッチを合わせてアセトニトリルに懸濁させ、総体積５００ｍＬとした。懸濁液を水蒸気浴上で加熱して沸騰させた。固体の大部分が溶解して溶液になったが、一部の微粒子が溶解しないままであったので、熱減圧濾過によって除去した。２Ｌ容吸引ビンに収集された濾液が、急速に白色固体沈殿を生じた。アセトニトリルを加えて体積を６００ｍＬとした。固体がすべて溶解するまで濾液を水蒸気浴上で煮沸した。フラスコを水蒸気浴から移し、混合物を、実験台で２．５時間放置して徐々に室温に冷却した。その時間にわたり溶液から生成した白色固体を減圧濾過によって収集して、表題化合物を白色固体（２４．８５ｇ）として得た。１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ９．０６（ｄ，Ｊ＝０．８Ｈｚ，１Ｈ）、８．４３（ｄ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，１Ｈ）、７．７２（ｄｄｄ，Ｊ＝５．７，１．０，０．８Ｈｚ，１Ｈ）、７．６４（ｓ，１Ｈ）、７．６１（ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ）、７．３６（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ）、７．３１（ｄ，Ｊ＝０．８Ｈｚ，１Ｈ）、７．０３（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ）、２．２６（ｓ，３Ｈ）、２．１８（ｓ，３Ｈ）；ＭＳ（ＡＰＣＩ＋）ｍ／ｚ  ３０７（ＭＨ＋），（ＡＰＣＩ−）ｍ／ｚ  ３０５（Ｍ−Ｈ＋）。
【０１８０】
【化２０】
0005443988.tif 000022
（実施例１２）
２−（４−メチル−１−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）チエノ［２，３−ｃ］ピリジン
実施例１２ステップｉｉｉのチエノ［２，３−ｃ］ピリジンは、以前から合成されている（例えば、Ｇｒａｕｌｉｃｈら（２００４年）、Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、第１２巻：１９３５〜１９３７年；Ｇｒａｕｌｉｃｈら（２００５年）、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．第４８巻（１５）：４９７２〜４９８２ページを参照されたい）。
【０１８１】
ステップｉ．（２，２−ジメトキシ−エチル）−チオフェン−２−イルメチレン−アミン。チオフェン−２−カルボキサルデヒド（７．５ｍＬ、８２．３ｍｍｏｌ、Ａｌｆａ  Ａｅｓａｒ）、アミノアセトアルデヒドジメチルアセタール（８．８２ｍＬ、８２．３ｍｍｏｌ、Ａｌｆａ  Ａｅｓａｒ）を１００ｍＬのトルエンに溶かした溶液を、ディーンスタークトラップを使用して１１５℃に加熱して、水を除去した。３時間後、反応液を室温に冷却した。反応液をロータリーエバポレーターに載せてトルエンを蒸発させると、褐色の液体（約１７．３ｇ）が得られ、これをそれ以上操作せずに次のステップで使用した。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム−ｄ）δｐｐｍ  ３．４２（６Ｈ，ｓ）、３．７３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．３Ｈｚ）、４．６５（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．３Ｈｚ）、７．０７〜７．４１（３Ｈ，ｍ）。
【０１８２】
ステップｉｉ．｛［（２，２−ジメトキシ−エチル）−エトキシカルボニル−アミノ］−チオフェン−２−イル−メチル｝−ホスホン酸ジメチルエステル。ステップｉで得た油状物（１６．３ｇ、８２．３ｍｍｏｌ）に、Ｎ２雰囲気中で６０ｍＬのＴＨＦを加えた。反応液を−１０℃に冷却し（ＭｅＯＨ／氷）、内部温度計を装着した。内温を−９．５℃以下に保ちながらクロロギ酸エチル（７．９ｍＬ、８２．３ｍｍｏｌ）を滴下した。反応液を１０分間−１０℃で攪拌し、次いで浴を取り外し、反応液を室温に温めた。氷浴をヒートシンクとして使用して、トリメチル亜リン酸エステル（１０．７ｍＬ、９０．５ｍｍｏｌ）を加えた。反応液を徐々に室温に温め、終夜攪拌した。溶媒をロータリーエバポレーターで除去した。トルエンを加え、ロータリーエバポレーターで蒸発させた。次いで、トルエン添加と蒸発の２回目を実施した。
【０１８３】
得られる濃厚な褐色の油状物をカラムクロマトグラフィー（Ｂｉｏｔａｇｅ  Ｈｏｒｉｚｏｎシステム、３３０ｇ  Ｉｓｃｏ  ＲｅｄｉＳｅｐカラム、１カラム体積にわたり０〜１００％のＥｔＯＡｃ／ヘキサン、次いで１００％のＥｔＯＡｃで保持）によって精製した。所望の画分を合わせ、濃縮して、２３．４８ｇの濃厚な褐色の油状物を得た。
【０１８４】
ステップｉｉｉ．チエノ［２，３−ｃ］ピリジン。ステップｉｉからの材料（２３．５ｇ、６１．６ｍｍｏｌ）を１００ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２に溶解させた。三口フラスコにＮ２雰囲気中で還流冷却器および内部温度計を装着した。フラスコを真空にし、窒素でパージした。反応液に塩化チタン（ＩＶ）（４０ｍＬ、３６９ｍｍｏｌ）をゆっくりと加えた。反応温度を４０℃付近に保った。約１５ｍＬを加えた後、反応液を氷浴に入れて温度を制御した。反応液を徐々に室温に温めた後、一晩かけて４０℃に加熱した。反応液を１８時間かけて４０℃に加熱し、次いで室温に冷却した。反応内容物を、２００ｇの氷および２００ｍＬのＮＨ４ＯＨを含有する大型のビーカーに少量ずつ注ぐと、たくさんの発煙が認められた。反応液を数分間激しく攪拌した。反応液を濾過し、固体をＣＨＣｌ３（３×１００ｍＬ）ですすいだ。
【０１８５】
二相性の濾液を分液漏斗に移し、層を分離した。有機層を１Ｎ  ＨＣｌ（２×１００ｍＬ）に抽出した。ＨＣｌ水溶液の層を２０ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２で洗浄し、ｐＨが約９に到達するまで濃ＮＨ４ＯＨで慎重に塩基性にした。生成物をＣＨ２Ｃｌ２（３×１００）に抽出した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮して橙色の油状物とし、これが凝固して橙色の固体となった。粗製材料をカラムクロマトグラフィー（Ｂｉｏｔａｇｅ  Ｈｏｒｉｚｏｎシステム、１２０ｇ  Ｉｓｃｏ  ＲｅｄｉＳｅｐカラム、１００％のヘプタンで平衡化、４５％のＥｔＯＡｃ／ヘプタンで溶出）によって精製した。白色固体を単離した（４．２０ｇ）。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ  ７．５６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝５．５，０．８Ｈｚ）、７．８６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝５．５，１．０Ｈｚ）、８．１０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．３Ｈｚ）、８．４６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ）、９．２５（１Ｈ，ｓ）。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム−ｄ）δｐｐｍ  ７．４０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ）、７．７４（２Ｈ，ｍ）、８．５２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ）、９．１９（１Ｈ，ｓ）。ＭＳ（ＡＰＣＩ，Ｍ＋１）１３６．０。
【０１８６】
ステップｉｖ．チエノ［２，３−ｃ］ピリジン−２−イルボロン酸リン酸三水素塩。ステップｉｉｉからの材料（４．１２ｇ、３０．５ｍｍｏｌ）を含有する、内部温度計を装着した三口フラスコを真空にし、次いで窒素雰囲気で満たした。ＴＨＦ（５０ｍＬ）を加え、溶液を−４４℃に冷却した（ＣＨ３ＣＮ／ドライアイス）。内温を−３５℃以下に保ちながらｎ−ブチルリチウム（１．６Ｍ／ヘキサン、２１ｍＬ、３４ｍｍｏｌ）を１０分かけて加えた。反応液を−３３〜−４５℃で７５分間攪拌した。ホウ酸トリイソプロピル（８．４ｍＬ、３６．６ｍｍｏｌ）を加え、冷却浴を除去した。反応液を１時間攪拌し、次いでリン酸（８５％水溶液、２．５ｍＬ、３３．５ｍｍｏｌ）を加えた。反応液を１０ｍＬの水で希釈すると、沈殿が得られた。反応液を１５分間激しく攪拌した。黄色の固体を濾過によって収集し、ＥｔＯＡｃ（約５０ｍＬ）ですすいで、白色の粉状固体（９．５７ｇ）を得た。材料の約半分を５０ｍＬの水で洗浄して、淡いピンク色の固体３．１６ｇを単離した。材料の両方の収穫物は、スペクトルデータによって判定したところ同じである。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，メタノール−ｄ４）δｐｐｍ  ７．８７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ）、７．９５（１Ｈ，ｓ）、８．４１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．７Ｈｚ）、９．１１（１Ｈ，ｓ）。
【０１８７】
ステップｖ．２−（４−メチル−１−（６−メチルピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）チエノ［２，３−ｃ］ピリジン。２５０ｍＬ容三口フラスコにおいて、トリフルオロ−メタンスルホン酸４−メチル−２−（６−メチル−ピリジン−２−イル）−２Ｈ−ピラゾール−３−イルエステル（１．２３ｇ、実施例７ステップｉｖに記載のとおりに合成できる）、ステップｉｖからの材料（２．００ｇ）、フッ化カリウム（１．１１ｇ）、リン酸三カリウム（２．４４ｇ）を含有する５０ｍＬのジオキサンを加えた。フラスコを吸引によって真空にし、窒素ガスでパージした。これに、ＰｄＣｌ２（ｄｐｐｆ）（Ｓｔｒｅｍ、ジクロロ［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］パラジウム（ＩＩ）ジクロロメタン付加体、２８０ｍｇ）およびｄｐｐｆ配位子（Ｓｔｒｅｍ、１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン、２１２ｍｇ）、および水（０．１０ｍＬ）を加えた。反応液を２．５時間かけて８０〜１１１℃に加熱し、次いで室温に冷却した。反応液を、同じようにして実施した別の反応からの材料と合わせた。未精製の反応材料を、ＥｔＯＡｃ（約７５０ｍＬ）ですすぎながらセライトパッドで濾過した。濾液をロータリーエバポレーターで濃縮乾燥した。暗色の残渣をＣＨ２Ｃｌ２で希釈し、固体を濾別した。ＣＨ２Ｃｌ２濾液をロータリーエバポレーターで濃縮して、黒色の残渣とした。粗製材料を、５０％のＥｔＯＡｃ／ヘキサン（合計約８００ｍＬ）で溶出しながらシリカゲル充填物で濾過して精製した。シリカゲル充填物濾過からの画分から、２組の材料（一方は純粋、一方は不純）が得られた。これらを別々に濃縮乾燥した。不純な材料をＥｔ２Ｏで摩砕し、白色固体を濾過によって収集した。濾液を濃縮し、Ｅｔ２Ｏ摩砕を繰り返して８３ｍｇを得た。所望の生成物のみを含有する各画分プラス８３ｍｇのバッチを合わせ、純粋な組と一緒に精製した。材料に約５〜１０ｍＬのＥｔＯＨを加え、これを加熱して沸騰させた。材料をすべて溶解させたなら、熱源から外し、静置した。次いで、ベージュ色の固体が沈殿し始めた。母液をデカントして除き、沈殿を少量の冷ＥｔＯＨですすいだ。沈殿を５０℃の真空オーブンで終夜乾燥させて、５５０ｍｇのベージュ色の固体を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δｐｐｍ  ９．０９（１Ｈ，ｓ）、８．５０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．７Ｈｚ）、７．６２〜７．６９（３Ｈ，ｍ）、７．３９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．９９Ｈｚ）、７．２７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝０．６Ｈｚ）、７．０４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．４Ｈｚ）、２．２５（３Ｈ，ｓ）、２．１９（３Ｈ，ｓ）。ＭＳ（ＡＰＣＩ，Ｍ＋１）３０７．１。融点１２４〜１２５℃。
【０１８８】
【化２１】
0005443988.tif 000023
（実施例１３）
２−（２−（６−メチルピリジン−２−イル）−２，４，５，６−テトラヒドロシクロペンタ［ｃ］ピラゾール−３−イル）チエノ［２，３−ｃ］ピリジン（ＩＵＰＡＣ名：２−（１−（６−メチルピリジン−２−イル）−２，４，５，６−テトラヒドロシクロペンタ［ｃ］ピラゾール−５−イル）チエノ［２，３−ｃ］ピリジン）。
２５０ｍＬ容三口フラスコにおいて、トリフルオロ−メタンスルホン酸２−（６−メチル−ピリジン−２−イル）−２，４，５，６−テトラヒドロ−シクロペンタピラゾール−３−イルエステル（１．３３ｇ、実施例５ステップｉｖに記載のとおりに合成できる）、実施例１２ステップｉｖからの材料（２．００ｇ）、フッ化カリウム（１．１１ｇ）、リン酸三カリウム（２．４４ｇ）を含有する４５ｍＬのジオキサンを加えた。フラスコを減圧下で真空にし、窒素ガスでパージした。これに、ＰｄＣｌ２（ｄｐｐｆ）（Ｓｔｒｅｍ、ジクロロ［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］パラジウム（ＩＩ）ジクロロメタン付加体、２８０ｍｇ）およびｄｐｐｆ配位子（Ｓｔｒｅｍ、１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン、２１２ｍｇ）、および水（０．１０ｍＬ）を加えた。反応液を３．５時間かけて８０〜１１１℃に加熱し、次いで室温に冷却した。反応材料を、ＥｔＯＡｃ（約２５０ｍＬ）ですすぎながらセライトパッドで濾過した。ＥｔＯＡｃ濾液をロータリーエバポレーターで濃縮乾燥した。得られる暗色の残渣をＣＨ２Ｃｌ２で希釈し、固体を濾別した。ＣＨ２Ｃｌ２濾液をロータリーエバポレーターで濃縮して黒色の残渣とし、これをＣＨ３ＣＮで希釈し、超音波処理した。黄褐色の固体（０．５２０ｇ）を濾過によって収集した。濾液を濃縮乾燥し、カラムクロマトグラフィー（Ｂｉｏｔａｇｅ  Ｈｏｒｉｚｏｎシステム、１２ｇ  Ａｎａｌｏｇｉｘカラム、０〜５０％のＥｔＯＡｃ／ヘプタン、次いで５０％のＥｔＯＡｃ／ヘプタンで保持）によって精製して、約３００ｍｇの固体を得た。３００ｍｇの固体および黄褐色の固体（０．５２０ｇ）を合わせ、約１０ｍＬのＥｔＯＨで希釈し、加熱して沸騰させ、濾過し、室温に冷ました。固体材料が沈殿し始めた。室温で一晩静置した後、母液をデカントして除き、残りの材料を少量の冷ＥｔＯＨですすいだ。固体を４５℃の真空オーブンで１．５時間かけて乾燥させて、４１０ｍｇの固体を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δｐｐｍ  ９．０５（１Ｈ，ｓ）、８．４５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．７Ｈｚ）、７．７０（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．７Ｈｚ）、７．６２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．７Ｈｚ）、７．３８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ）、７．２５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．２Ｈｚ）、７．１５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ）、２．８５〜２．９１（４Ｈ，ｍ）、２．５１〜２．５８（２Ｈ，ｍ）、２．４６（３Ｈ，ｓ）。ＭＳ（ＡＰＣＩ，Ｍ＋１）３３３．１。融点１４５〜１４６℃。
【０１８９】
（実施例１４）
２−［４−メチル−２−（６−メチルピリジン−２−イル）２Ｈ−ピラゾロ−３−イル］チエノ［３，２−ｃ］ピリジン（ＩＵＰＡＣ名：２−［４−メチル−１−（６−メチルピリジン−２−イル）１Ｈ−ピラゾロ−５−イル］チエノ［３，２−ｃ］ピリジン）。
トリフルオロ−メタンスルホン酸４−メチル−２−（６−メチル−ピリジン−２−イル）−２Ｈ−ピラゾール−３−イルエステル（３６．６ｇ、１１４ｍｍｏｌ）、炭酸カリウム（３９．４ｇ、２８５ｍｍｏｌ）、および２−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン（３１．２ｇ、１２０ｍｍｏｌ）を、トルエン（３００ｍＬ）、イソプロピルアルコール（ＩＰＡ）（７５ｍＬ）、および水（７５ｍＬ）中にスラリー化した。反応混合物を逐次減圧にさらした後、窒素でパージした。これを合計５回繰り返した。塩化ビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（ＩＩ）（４．４ｇ、６．２７ｍｍｏｌ）を加え、反応液を７８℃に加熱した。２時間後、反応混合物を冷ました。水層を分離し、有機層を濾過して黒色の触媒残渣を除去した。有機層を水（８０ｍＬ）で洗浄した。有機層を３Ｍ  ＨＣｌ（１００ｍＬ）および水（１００ｍＬ）で抽出した。水性物質に炭素（０．５ｇ）およびセライト（９ｇ）を加え、溶液を濃縮して残りのトルエンを除去した。水層を濾過した。５０％ＮａＯＨを加えて水性物質を塩基性（ｐＨ＝１０）にした。黄色の固体が沈殿した。固体を濾過し、水で洗浄し、空気を吹きかけて乾燥させて、黄色の固体２４．１ｇ（６９．１％）を得た。固体をトルエン（２５０ｍＬ）中にスラリー化した。スラリーを６５℃に加熱し、濾過した。濾液を濃縮した。残渣をトルエン（１００ｍＬ）中にスラリー化し、濾過した。ケーキをトルエン（４０ｍＬ）で洗浄した。空気を吹きかけてケーキを乾燥させて、粗生成物１９．２ｇ（５５％）を得た。
【０１９０】
１９．２ｇを他の同様に調製したサンプルと合わせて、１４１．７ｇを得た。合わせた固体をＩＰＡ（５００ｍＬ）中にスラリー化し、スラリーを８３℃に加熱したが、固体はすべて溶液にはならなかった。ＩＰＡ（３００ｍＬ）を加え、スラリーを８３℃に加熱して、暗色の溶液を得た。溶液を８℃／時間で室温に冷ました。スラリーを濾過し、ケーキをＩＰＡ（２００ｍｌ）で洗浄した。ケーキを５０℃で６０時間乾燥させて、所望の生成物１３１．８ｇを得た。
【０１９１】
（生物学実施例１）
ＡＬＫ−５キナーゼ試験法については、当業界に記述がある（例えば、Ｌａｐｉｎｇら（２００２年）、Ｍｏｌ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２００２年、第６２巻：５８〜６２ページを参照されたい）。明細に述べた実施例で命名した化合物を、ＡＬＫ−５自己リン酸化活性およびα−カゼインのＡＬＫ−５リン酸化の阻害について、以下のように試験した。
【０１９２】
材料：
・  緩衝液：５０ｍＭのＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．６）に１０ｍＭのＮａＣｌ、１０ｍＭのＭｇＣｌ２、および１ｍＭのＤＴＴを加えたもの。
・  ＧＳＴ−ＡＬＫ−５タンパク質−０．４４ｍｇ／ｍｌ（およそ７μＭの保存液）。１：３５０希釈物は、２０ｎＭの保存液、言い換えればアッセイでは最終的に２ｎＭとなる。ヒトＡＬＫ−５は、ｐＦａｓｔＢａｃベクター（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）においてＮ−末端でグルタチオンＳトランスフェラーゼＧＳＴに融合したＡＬＫ−５切断配列（アミノ酸Ｈ１４９−Ｍ５０３）を発現するバキュロウイルスに感染させたＳｆ９昆虫細胞中で発現させた。４℃で超音波処理して細胞を崩壊させた。可溶化液を４００００×ｇで４５分間遠心分離し、上清を、３００ｍＭのＮａＣｌ、１０％のグリセロール、１％のＮＰ４０、２ｍＭのジチオスレイトール（ＤＴＴ）、および５０ｍｌあたり１錠のプロテアーゼ阻害剤Ｃｏｍｐｌｅｔｅ  ＥＤＴＡ−ｆｒｅｅ錠（Ｒｏｃｈｅ）を含有する１００ｍＭのトリス−ＨＣｌ（ｐＨ７．６）緩衝液で平衡化したＧｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ  Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ  ４  Ｆａｓｔ  Ｆｌｏｗ（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｓｅｓ）の１０ｍｌカラムにかけた。カラムを、１５０ｍＮのＮａＣｌ、１０％のグリセロール、２ｍＭのＤＴＴ、および１００ｍｌあたり１錠のプロテアーゼ阻害剤Ｃｏｍｐｌｅｔｅ  ＥＤＴＡ−ｆｒｅｅ錠を含有する５カラム体積の５０ｍＭのトリスＨＣｌ（ｐＨ８．０）で洗浄した。カラムを、８ｍＭの還元型グルタチオンを含有する洗浄緩衝液で溶出した。画分を収集し、１０％のグリセロール、１５０ｍＭのＮａＣｌ、２ｍＭのＤＴＴ、および１ｍＭのフッ化物４−（２−アミノエチル）−ベンゼンスルホニル．ＨＣｌ（ＡＥＢＳＦ）（Ｓｉｇｍａ）を含有する２０ｍＭのトリスＨＣｌ（ｐＨ８．０）中にて４℃で終夜透析した。
・  α−カゼイン（Ｓｉｇｍａ、＃Ｃ８０３２）は、緩衝液（５０ｍｇ／ｍｌ）中に２ｍＭで調製する。
・  コールドＡＴＰは、（緩衝液中の１０ｍＭ保存液からの）１０μＭのコールドＡＴＰを含有する。
・  ホットＡＴＰは、緩衝液中の０．５μＣｉ／ウェルのγ−３３Ｐ−ＡＴＰ（Ａｍｅｒｓｈａｍ、ＡＨ９９６８）からなる。
・  アッセイ緩衝液−緩衝液１０ｍｌあたり
１ｍｌの５００ｍＭ  ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．６）
２０μｌの５Ｍ  ＮａＣｌ
１００μｌの１Ｍ  ＭｇＣｌ２
１０μｌの１Ｍ  ＤＴＴ（ジチオスレイトール）
【０１９３】
試験法：
９６ウェルフィルター底プレート（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、＃ＭＳＤＶ  Ｎ６Ｂ５０）において、５８μｌのアッセイ緩衝液を加えてウェルに達するようにした。アッセイ緩衝液中のコールドＡＴＰ混合物１０μｌ、次いでα−カゼイン保存液の１：１０希釈物１０μｌを加える。次いで、２μｌの試験化合物（ＤＭＳＯ）を最終濃度の５０倍で加える。ホットＡＴＰ混合物（１０μｌ）を加え、０．０５％ＢＳＡ（ウシ血清アルブミン）含有アッセイ緩衝液中のＡＬＫ−５タンパク質１：３５０希釈物１０μｌ（最終２ｎＭ）を加えて反応を開始した。反応液を室温で５分間混合し、次いで反応を室温で１４５分間継続した。次いで、１００μｌの氷冷２０％ＴＣＡ（トリクロロ酢酸）を加えて反応を停止した。次いで、アッセイ物を４℃で少なくとも１時間インキュベートし、次いで各ウェルの内容物をフィルターで吸引濾過した。ウェルを２００μｌの氷冷１０％ＴＣＡで３回洗浄した。プラスチック製の基部を取り外す前後にプレート下部をブロットし、室温で終夜乾燥させた。３０μｌのシンチレーション液を加え、Ｗａｌｌａｃ  Ｔｒｉ−Ｌｕｘシンチレーション計数器でウェルあたり１分カウントした。
【０１９４】
ＩＣ５０（ｎＭ）値は、１つまたは複数の実験で求めた２つ以上のＩＣ５０値の平均として以下で表２に報告する。測定数（「ｎ」）を括弧内に報告する。測定が４回以下である場合、平均ＩＣ５０値の基になった個々の値を括弧内に挙げる。標準誤差（ＳＥ）も報告する。標準誤差は、標準偏差を測定数（「ｎ」）で割ったものである。
【０１９５】
【表２】
0005443988.tif 000024
【０１９６】
（生物学実施例２）
ＡＬＫ−５遺伝子レポーターアッセイ法は、当業界に記述がある（例えば、Ｍａｌｉｅｋａｌら（２００４年）、Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ、第２７９巻（３５）：３６２８７〜３６２９２ページを参照されたい）。明細に述べた実施例で命名した化合物を、ＴＧＦβ１で刺激したＮＩＨ−３Ｔ３細胞におけるＳｍａｄ結合エレメント（ＳＢＥ）ルシフェラーゼレポーター活性の阻害について以下のように試験した。以下のルシフェラーゼアッセイでは、Ｓｍａｄ結合エレメント（ＳＢＥ）ルシフェラーゼレポーター構築物を一過性に形質移入したＮＩＨ／３Ｔ３（ネズミ線維芽細胞）細胞を用いる。その発現される構築物は、Ｓｍａｄシグナル伝達経路を刺激する薬剤に応答する。
【０１９７】
材料：
・  ＮＩＨ−３Ｔ３細胞（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−１６５８）
・  フェノールレッド含有ダルベッコ変法イーグル培地（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  １１９６５−０９２）
・  フェノールレッドなしのダルベッコ変法イーグル培地（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  ２１０６３−０２９）
・  ウシ胎児血清（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  ＳＨ３００７１．０３）
・  Ｆｕｇｅｎｅ（Ｒｏｃｈｅ１８１４４４３）
・  Ｏｐｔｉ−ＭＥＭ  Ｉ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  ３１９８５−０７０）
・  Ｄｕａｌ−Ｇｌｏルシフェラーゼアッセイシステム（Ｐｒｏｍｅｇａ  Ｅ２９４０、Ｅ２９８０）
・  ゲンタマイシン溶液（１０ミリグラム／ミリメートル）（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  １５７１０−０６４）
・  ９６ウェルアッセイプレート、白色、ＴＣＴ（Ｃｏｒｎｉｎｇ  Ｃｏｓｔａｒ  ３９１７）
・  ７５センチメートル組織培養フラスコ（Ｃｏｒｎｉｎｇ  Ｃｏｓｔａｒ  ４３０６４１）
・  ｐＲＬ−ＣＭＶベクター（Ｐｒｏｍｅｇａ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、ウィスコンシン州マディソン、製品Ｅ２２６１）（ｐＲＬは、常時活性型サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーターの制御下でウミシイタケルシフェラーゼをコードするベクターである）
・  トランスフォーミング増殖因子β１−（Ｒ＆Ｄ  ｓｙｓｔｅｍｓ、ミネソタ州ミネアポリス、製品２４０−Ｂ）
・  ｐＳＢＥ４−Ｌｕｃ／ＢＶ４ベクター（ｐＳＢＥ４−ｌｕｃベクターとしても知られている）（４コピーのＳｍａｄ結合エレメントおよびホタルルシフェラーゼコード領域を含んでいる）（Ｚａｗｅｌら（１９９８）、Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ．第１巻（４）：６１１〜６１７ページ）。
【０１９８】
方法：
ＮＩＨ−３Ｔ３細胞を、１０％ウシ胎児血清および１０マイクログラム／ｍｌのゲンタマイシンを含有するダルベッコ変法イーグル培地中で維持する。細胞を月曜毎に１：５〜１：１０に分割し、水曜に再度分割する。細胞を金曜に１：２０に分割して、細胞が月曜のアッセイおよびメンテナンスに必要となるのに備える。細胞が完全に集密になるまで成長しないようにする。
【０１９９】
１日目０時間（実験開始）
７５センチメートルのフラスコに１６０万個のＮＩＨ／３Ｔ３細胞を播き、１５ミリメートルの増殖培地（ダルベッコ変法イーグル培地、１０％ウシ胎児血清、１０マイクログラム／ミリメートルのゲンタマイシン）を使用して形質移入した。
【０２００】
１日目、実験開始７時間後
形質移入の準備：
ａ．１．５ミリメートルの微量遠心管において、４００μｌのＯｐｔｉ−ＭＥＭに４８μｌのＦｕｇｅｎｅをそのまま加える。室温で５分間インキュベートする。
ｂ．上記インキュベート期間の間、４００μｌのＯｐｔｉ−ＭＥＭに、８マイクログラムのＳＢＥ−ｌｕｃおよび０．１６マイクログラムのＣＭＶ−ｐＲＬを等分する。
ｃ．ステップ「ｂ」のＤＮＡに、ステップ「ａ」からのＦｕｇｅｎｅ／Ｏｐｔｉ−ＭＥＭを加える。室温で１５〜４５分間インキュベートする。
ｄ．上記（１日目０時間目）で播いた細胞に、複合型のＤＮＡを加える。培地を変える必要はない。３７℃、５％ＣＯ２で終夜インキュベートする。
【０２０１】
２日目、実験開始２４時間後
形質移入した細胞（１日目、ステップ２）から、ダルベッコ変法イーグル培地、１０％のウシ胎児血清、１０マイクログラム／ミリメートルのゲンタマイシン中に、２０００００細胞／ｍｌの密度で細胞懸濁液を調製する。細胞を、９６ウェルプレートについて１００μｌ／ウェルでアッセイプレート（白色ＴＣＴ）に播く。これによって２００００細胞／ウェルでの細胞数となる。３７℃、５％ＣＯ２で５〜６時間インキュベートする。
【０２０２】
２日目、実験開始３１時間後
ａ．必要なら用量反応プレートを準備する。
ｂ．プレートを、血清なしの１００μｌのダルベッコ変法イーグル培地、１０マイクログラム／ミリメートルのゲンタマイシンで洗浄する。
ｃ．１７０μｌ／ウェルのダルベッコ変法イーグル培地、１０マイクログラム／ミリメートルのゲンタマイシン、０．５％のウシ胎児血清を加える。
ｄ．試験化合物および対照を、９６ウェルプレートについて２０μｌの１０倍保存液としてアッセイプレート（白色、ＴＣＴ）に移す。
ｅ．化合物で３０〜６０分処理した後、各ウェルに、２５０ピコグラム／ミリメートルのトランスフォーミング増殖因子β１を加える。（１０μｌの２０倍保存液を加える）。
【０２０３】
３日目、実験開始５１時間後
ルシフェラーゼ活性用のアッセイプレート
ａ．凍結乾燥したＤｕａｌ−Ｇｌｏルシフェラーゼ基質を、製造者の説明書に従ってＤｕａｌ−Ｇｌｏルシフェラーゼ緩衝液で戻す。
ｂ．インキュベーターからアッセイプレートを取り出し、１０分間かけて室温に達するようにする。
ｃ．アッセイプレートから培地を吸引する。フェノールレッドなしで１部のダルベッコ変法イーグル培地を含有する、希釈したＳｔｅａｄｙ−Ｇｌｏルシフェラーゼ基質８０μｌを加える。プレートを密閉し、室温で少なくとも１０分間インキュベートする。
ｄ．Ｐａｃｋａｒｄ  ＴｏｐＣｏｕｎｔ  ＨＴＳプレートリーダーで、単一光子計数（ＳＰＣ）方式を使用してウェルあたり６秒間かけて読んで、ｐＳＢＥ４−Ｌｕｃ／ＢＶ４  ｐＳＢＥ４−ｌｕｃからのホタルルシフェラーゼ活性を読み取る。
ｅ．プレートのホタルルシフェラーゼ活性を読み取った後、シールを取り除き、各ウェルに４０μｌのＳｔｏｐ試薬およびＧｌｏ試薬を加える。プレートをシールし直し、室温で少なくとも１０分間インキュベートする。プレートをホタルルシフェラーゼでのようにＰａｃｋａｒｄ  ＴｏｐＣｏｕｎｔで読んで、ｐＲＬからのレニラルシフェラーゼ活性を読み取る。
【０２０４】
レニラルシフェラーゼ活性は、形質移入対照となる。ホタルルシフェラーゼ活性は、アッセイ読み値として使われる。ルシフェラーゼアッセイ活性は、それぞれの特定のサンプルについてレニラアッセイ活性を標準として比較する。
【０２０５】
ＩＣ５０（ｎＭ）値は、１つまたは複数の実験で求めた２つ以上のＩＣ５０値の平均値として以下で表３に報告する。測定数（「ｎ」）を括弧内に報告する。ｎが４以下である場合、平均ＩＣ５０値の基になった個々の値を括弧内に挙げる。標準誤差（ＳＥ）も報告する。標準誤差は、標準偏差を測定数（「ｎ」）で割ったものである。
【０２０６】
【表３】
0005443988.tif 000025
【０２０７】
（製剤実施例１）
２％（ｗ／ｗ）の２−［４−メチル−２−（６−メチル−ピリジン−２−イル）−２Ｈ−ピラゾール−３−イル］−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン（ＩＵＰＡＣ名：２−［４−メチル−１−（６−メチル−ピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン）を含有するゲルの調製
【０２０８】
材料：
エタノール（２００プルーフ）、ＵＳＰ（Ａａｐｅｒ  Ａｌｃｏｈｏｌ  ａｎｄ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ、ケンタッキー州）
プロピレングリコール（純度＞９９．５％）、ＡＣＳ試薬（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ、ミズーリ州セントルイス）
ポリエチレングリコール（ＰＥＧ４００）、分子量：３８０〜４２０（Ｍａｌｌｉｎｋｒｏｄｔ  Ｂａｋｅｒ  Ｉｎｃ．、ニュージャージー州フィリップスバーグ）
ヒドロキシプロピルセルロース（ＫＬＵＣＥＬ（登録商標）ＨＦ）（Ｈｅｒｃｕｌｅｓ  Ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｅｄ、デラウェア州Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ）
ＨＰＬＣ用の水、Ｃｈｒｏｍｏｓｏｌｖｅ（登録商標）（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ、ミズーリ州セントルイス）
ベンジルアルコール（純度＞９９％）（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ、ミズーリ州セントルイス）
【０２０９】
手順：
２−［４−メチル−２−（６−メチル−ピリジン−２−イル）−２Ｈ−ピラゾール−３−イル］−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン（２ｇ）を１５０ｍＬ容ガラス瓶に移した。次いで瓶に、プロピレングリコール（３０ｇ）、ポリエチレングリコール（３０ｇ）、水（１０ｇ）、ベンジルアルコール（２ｇ）、およびエタノール（２０ｇ）を加えた。混合物を２時間攪拌した。次いで、溶液にＫＬＵＣＥＬ（登録商標）ＨＦ（５００ｍｇ）を加えた後、エタノールを適量加えて１００ｇとした。溶液を終夜攪拌して、２％（ｗ／ｗ）の２−［４−メチル−２−（６−メチル−ピリジン−２−イル）−２Ｈ−ピラゾール−３−イル］−チエノ［３，２−ｃ］ピリジンを含有するゲルを得た。
【０２１０】
（製剤実施例２）
１％（ｗ／ｗ）の２−［４−メチル−２−（６−メチル−ピリジン−２−イル）−２Ｈ−ピラゾール−３−イル］−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン（ＩＵＰＡＣ名：２−［４−メチル−１−（６−メチル−ピリジン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル］−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン）を含有するゲルの調製
【０２１１】
材料：
エタノール（２００プルーフ）、ＵＳＰ（Ａａｐｅｒ  Ａｌｃｏｈｏｌ  ａｎｄ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ、ケンタッキー州）
プロピレングリコール（純度＞９９．５％）、ＡＣＳ試薬（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ、ミズーリ州セントルイス）
ポリエチレングリコール（ＰＥＧ４００）、分子量：３８０〜４２０（Ｍａｌｌｉｎｋｒｏｄｔ  Ｂａｋｅｒ  Ｉｎｃ．、ニュージャージー州フィリップスバーグ）
ヒドロキシプロピルセルロース（ＫＬＵＣＥＬ（登録商標）ＨＦ）（Ｈｅｒｃｕｌｅｓ  Ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｅｄ、デラウェア州Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ）
ＨＰＬＣ用の水、Ｃｈｒｏｍｏｓｏｌｖｅ（登録商標）（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ、ミズーリ州セントルイス）
ベンジルアルコール（純度＞９９％）（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ、ミズーリ州セントルイス）
【０２１２】
手順：
２−［４−メチル−２−（６−メチル−ピリジン−２−イル）−２Ｈ−ピラゾール−３−イル］−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン（１ｇ）を１５０ｍＬ容ガラス瓶に移した。次いで瓶に、プロピレングリコール（３０ｇ）、ポリエチレングリコール（３０ｇ）、水（１０ｇ）、ベンジルアルコール（２ｇ）、およびエタノール（２０ｇ）を加えた。混合物を３０分〜１時間攪拌した。次いで、溶液にＫＬＵＣＥＬ（登録商標）ＨＦ（５００ｍｇ）を加えた後、エタノールを適量加えて１００ｇとした。溶液を終夜攪拌して、１％（ｗ／ｗ）の２−［４−メチル−２−（６−メチル−ピリジン−２−イル）−２Ｈ−ピラゾール−３−イル］−チエノ［３，２−ｃ］ピリジンを含有するゲルを得た。
【０２１３】
本明細書に記載の実施例および実施形態は、例示目的のためのものにすぎないこと、またそれに照らした様々な改変または変更は、当業者には明白となり、本出願の真意および視野ならびに添付の特許請求の範囲の範囲内に含まれることは理解される。本明細書で引用したすべての刊行物、特許、および特許出願は、これによってすべて目的でその全体が参照により援用される。