(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
被験体における角膜炎症を治療または予防するための医薬であって、角膜炎症を治療または予防するのに有効な量のＴＬＲ４アンタゴニストを含み、
前記ＴＬＲ４アンタゴニストが式（Ｉ）の化合物：
0005550641.tif 000048
またはその薬学的に受容可能な塩またはリン酸エステルであって、ここで、Ｒ1が：
0005550641.tif 000049
からなる群より選択され、
各Ｊ、Ｋ、およびＱは、独立して、直鎖または分枝鎖Ｃ１〜Ｃ１５アルキルであり；ＬはＯ、ＮＨ、またはＣＨ2であり；ＭはＯまたはＮＨであり；ならびにＧはＮＨ、Ｏ、Ｓ、ＳＯ、またはＳＯ2であり；
Ｒ2は直鎖または分枝鎖Ｃ５〜Ｃ１５アルキルであり；
Ｒ3は直鎖または分枝鎖Ｃ５〜Ｃ１８アシル、
0005550641.tif 000050
からなる群より選択され、
ここで、ＥはＮＨ、Ｏ、Ｓ、ＳＯ、またはＳＯ2であり；各Ａ、Ｂ、およびＤは、独立して、直鎖または分枝鎖Ｃ１〜Ｃ１５アルキルであり；
Ｒ4は直鎖または分枝鎖Ｃ４〜Ｃ２０アルキルおよび
0005550641.tif 000051
からなる群より選択され、
ここで、各ＵおよびＶは、独立して、直鎖または分枝鎖Ｃ２〜Ｃ１５アルキルであり、ならびにＷは水素または直鎖もしくは分枝鎖Ｃ１〜Ｃ５アルキルであり；
ＲAはＲ5またはＲ5−Ｏ−ＣＨ2−であり、Ｒ5は水素、Ｊ’、−Ｊ’−ＯＨ、−Ｊ’−Ｏ−Ｋ’、−Ｊ’−Ｏ−Ｋ’−ＯＨ、および−Ｊ’−Ｏ−ＰＯ（ＯＨ）2からなる群より選択され、ここで、各Ｊ’およびＫ’は独立して、直鎖または分枝鎖Ｃ１〜Ｃ５アルキルであり；
Ｒ6は、ヒドロキシ、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ５アルコキシおよびＣ１〜Ｃ５アシルオキシからなる群より選択され；
Ａ1およびＡ2は、独立して、
ＯＨ、
0005550641.tif 000052
からなる群より選択され、ここで、Ｚは直鎖もしくは分枝鎖Ｃ１〜Ｃ１０アルキルである、医薬。
【請求項２】
前記ＴＬＲ４アンタゴニストが式（ＩＩ）の化合物：
0005550641.tif 000053
またはその薬学的に受容可能な塩またはリン酸エステルである、請求項１に記載の医薬。
【請求項３】
式（ＩＩ）の前記ＴＬＲ４アンタゴニスト化合物が構造：
0005550641.tif 000054
またはその薬学的に受容可能な塩またはリン酸エステルを有する、請求項２に記載の医薬。
【請求項４】
式（ＩＩ）の前記ＴＬＲ４アンタゴニスト化合物が構造：
0005550641.tif 000055
を有する、請求項２に記載の医薬。
【請求項５】
前記角膜炎症がＬＰＳ誘導性角膜炎症である、請求項１に記載の医薬。
【請求項６】
前記被験体は角膜炎症を有していないが、角膜炎症を発症するリスクがある、請求項１に記載の医薬。
【請求項７】
前記被験体が角膜炎症を有する、請求項１に記載の医薬。
【請求項８】
前記被験体に局所投与される、請求項１に記載の医薬。
【請求項９】
眼科用製剤である、請求項１に記載の医薬。
【請求項１０】
前記角膜炎症が角膜炎に関連する、請求項１に記載の医薬。
【請求項１１】
前記角膜炎症が無菌性角膜炎症に関連する、請求項１に記載の医薬。
【請求項１２】
前記角膜炎症がコンタクトレンズ着用に関連する、請求項１に記載の医薬。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、角膜炎症および／または角膜炎症に関連する状態の治療および予防のために有用である組成物および方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
角膜への損傷の後で、免疫系および炎症系は、眼の完全性を防御するように応答する。この防御メカニズムは、細胞浸潤から潰瘍形成までの範囲にわたる臨床的徴候を有し得る。防御的ではあるが、これらのプロセスは、角膜の血管新生、瘢痕化、および／または穿孔を引き起こすことによって、しばしば、眼の主要な機能を損なう。
【０００３】
例えば、リポポリサッカライド（ＬＰＳ）または他の細菌産物への擦過した角膜表面への曝露は、好中球が豊富な浸潤物をもたらす角膜炎症を角膜基質において誘導することが実証されてきた（例えば、非特許文献１〜５参照）。
【０００４】
角膜表面への損傷が存在する場合、炎症性細胞および／または免疫細胞が損害を修復するために送られる。これらの細胞は角膜の領域に集合でき、臨床的に同定可能な浸潤物として可視的である。この浸潤物形成および生じる角膜炎症は、感染性または非感染性のいずれかの状態から生じ得る。角膜に有害な効果を与え得る１つの感染性状態は細菌性角膜炎である。米国および世界における細菌性角膜炎の主要な原因には、緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）種、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）、表皮ブドウ球菌（Ｓ．ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ）、および連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）種による感染が含まれる。発展途上国においては、細菌性角膜炎は、主として、農作業に関係する外傷に付随するのに対して、先進工業国においては、細菌性角膜炎はコンタクトレンズ着用に付随する。
【０００５】
感染性角膜炎に加えて、コンタクトレンズ着用もまた、コンタクトレンズ関連充血（ＣＬＡＲＥ）、コンタクトレンズ周辺潰瘍（ＣＬＰＵ）、およびコンタクトレンズ関連角膜浸潤ＣＬＡＣＩを含む、無菌性、培養陰性臨床徴候と関連する（例えば、非特許文献６参照）。これらの徴候からの症状は、感染性角膜炎に伴う徴候よりも重篤ではなく、罹患した個体は、痛み、充血、かすみ目、および強い不快感を有する。コンタクトレンズ着用者の数が米国で３４００万人、世界で１億４０００万を超えていると仮定すると、これらの臨床的徴候を有するコンタクトレンズ着用者の割合が比較的少ないとしても、罹患している個体の総数は大きいと解釈される（例えば、非特許文献６参照）。
【０００６】
現在、ステロイドの使用が、角膜浸潤のための唯一の治療である。ステロイドの使用の副作用は顕著である。感染性角膜炎において、ステロイドは感染の消散後にのみ与えられる；さもなくば、これらは感染に対して有害な効果を有し得る。さらに、ステロイドの使用は、眼圧の増加を引き起こし得、それによって、緑内障のリスクを増加し、しばしば、抗緑内障治療と一緒に投与される。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Ｊｏｈｎｓｏｎら、Ｉｎｖｅｓｔ．Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  Ｖｉｓ．Ｓｃｉ．２００５；４６：５８９−５９５
【非特許文献２】Ｋｈａｔｒｉら、Ｉｎｖｅｓｔ．Ｏｐｔｈａｌｍｏｌ．Ｖｉｓ．Ｓｃｉ．２００２；４３：２２７８−２２８４
【非特許文献３】Ｓｃｈｕｌｔｚら、Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ２０００；６８：１７３１−１７３４
【非特許文献４】Ｓｃｈｕｌｔｚら、Ｅｘｐｅｒ．Ｅｙｅ  Ｒｅｓ．１９９７；６４：３−９
【非特許文献５】Ｓｕｎら、Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ２００６；７４：５３２５−５３３２
【非特許文献６】Ｓｔａｐｌｅｔｏｎら、Ｏｐｔｏｍ．Ｖｉｓ．Ｓｃｉ．２００７；８４：２５７−２７２
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明は、被験体における角膜炎症を治療するための方法に関する。この方法は、被験体における角膜炎症を治療するために、治療有効量のｔｏｌｌ様受容体４（ＴＬＲ４）アンタゴニストを被験体に投与する工程を包含する。
【０００９】
本発明はまた、コンタクトレンズ着用に関連する被験体における角膜炎症を治療する方法にも関する。この方法は、コンタクトレンズ着用に関連する角膜炎症を治療するために、治療有効量のＴＬＲ４アンタゴニストを被験体に投与する工程を包含する。
【００１０】
本発明はまた、被験体の角膜におけるＴＬＲ誘導性炎症性応答を治療する方法にも関する。この方法は、ＴＬＲ誘導性炎症性応答を治療するために治療有効量のＴＬＲ４アンタゴニストを被験体に投与する工程を包含する。
【００１１】
本発明はまた、被験体における角膜炎症を治療するためのコンタクトレンズに関する。このコンタクトレンズは、基材とコーティングを含む。このコーティングは、被験体における角膜炎症を治療する際に有効な量のＴＬＲ４アンタゴニストを含む。
【００１２】
本発明はさらに、被験体における角膜炎症を治療するための眼科用製剤に関する。この眼科用製剤は、点眼溶液、および被験体における角膜炎症を治療する際に有効な量のＴＬＲ４アンタゴニストを含む。
【００１３】
本発明はまた、被験体における感染性角膜炎を治療する方法にも関する。この方法は、治療有効量のＴＬＲ４アンタゴニスト、および、抗菌剤、抗ウイルス剤、または抗真菌剤の少なくとも１つを被験体に投与する工程を包含する。
【００１４】
＝＝関連出願＝＝
本願は、２００８年９月３０日に出願された米国仮出願６１／１０１，４９３および２００８年６月１３日に出願された６１／０６１，２９１に基づく優先権を主張し、その内容は参照により本明細書に援用される。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】図１は、本発明の治療方法の１つの態様に従うエリトラン（ｅｒｉｔｏｒａｎ）四ナトリウムで処理された角膜の表面に適用されたコンタクトレンズの写真である。
【図２】図２は、エリトラン四ナトリウム（Ｅ）（Ｅ５５６４）またはプラセボ（Ｐ）で処理されたＬＰＳ刺激角膜からのケモカイン産生を比較するグラフを図示する。
【図３】図３は、Ｐａｍ３Ｃｙｓ刺激角膜、エリトラン処理角膜（Ｅ）、およびプラセボグループ（Ｐ）からのケモカイン産生を比較するグラフを図示する。
【図４】図４は、ＬＰＳ、エリトラン四ナトリウム（Ｅ）およびＬＰＳ、ならびにプラセボおよびＬＰＳで刺激された角膜中央部の共焦点顕微鏡画像を図示する。
【図５】図５は、エリトラン四ナトリウム（Ｅ）またはプラセボ（Ｐ）で処理されたマウスの異なる用量応答についてのＬＰＳ刺激角膜における好中球浸潤を比較するグラフを図示する。
【図６】図６は、エリトラン四ナトリウム（Ｅ）またはプラセボ（Ｐ）で処理されたマウスの異なる用量応答についてのＬＰＳ刺激角膜における基質のかすみを比較するグラフを図示する。
【図７】図７は、エリトラン四ナトリウム（Ｅ）またはプラセボ（Ｐ）で処理されたマウスの異なる用量応答についてのＰａｍ３Ｃｙｓ刺激角膜における好中球浸潤を比較するグラフを図示する。
【図８】図８は、エリトラン四ナトリウム（Ｅ）またはプラセボ（Ｐ）で処理されたマウスの異なる用量応答についてのＰａｍ３Ｃｙｓ刺激角膜における基質のかすみを比較するグラフを図示する。
【図９】図９は、ＬＰＳ刺激の前後でのエリトラン四ナトリウム（Ｅ）またはプラセボ（Ｐ）で処理されたマウスの異なる用量応答についての角膜における好中球浸潤を比較するグラフを図示する。
【図１０】図１０は、ＬＰＳ刺激の前後でのエリトラン四ナトリウム（Ｅ）またはプラセボ（Ｐ）で処理されたマウスの異なる用量応答についての角膜における基質のかすみを比較するグラフを図示する。
【図１１】図１１は、ＬＰＳ刺激後にエリトラン四ナトリウムで角膜中の好中球浸潤を治療するための用量応答を比較するグラフを図示する。
【図１２】図１２は、ＬＰＳ刺激後にエリトラン四ナトリウムで角膜中の基質のかすみを治療するための用量応答を比較するグラフを図示する。
【図１３】図１３は、ターミナルデオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼｄＵＴＰニック末端標識（ＴＵＮＥＬ）アッセイを使用して染色され、個々の細胞を同定するために４’，６−ジアミジノ−２−フェニルインドール（ＤＡＰＩ）で対比染色された、エリトラン四ナトリウム（Ｅ）またはプラセボ（Ｐ）で処理されたＬＰＳ刺激マウス角膜切片を図示する。
【図１４】図１４は、エリトラン四ナトリウム（Ｅ）対プラセボ（Ｐ）の存在下でＬＰＳで刺激されたヒト角膜上皮細胞（ＨＣＥ−Ｔ）の培養上清中の２４時間後のＩＬ−８レベルを示すグラフを図示する。
【図１５】図１５は、エリトラン四ナトリウム（Ｅ）対プラセボ（Ｐ）の存在下でＰａｍ３ｃｙｓで刺激されたヒト角膜上皮細胞（ＨＣＥ−Ｔ）の培養上清中の２４時間後のＩＬ−８レベルを示すグラフを図示する。
【図１６】図１６は、エリトラン四ナトリウム（Ｅ）対プラセボ（Ｐ）の存在下でＬＰＳで刺激されたマクロファージ（Ｕ９３７）の培養上清中の３時間後のＩＬ−８レベルを示すグラフを図示する。
【図１７】図１７は、エリトラン四ナトリウム（Ｅ）対プラセボ（Ｐ）の存在下でＰａｍ３ｃｙｓで刺激されたマクロファージ（Ｕ９３７）の培養上清中の３時間後のＩＬ−８レベルを示すグラフを図示する。
【図１８】図１８は、エリトラン四ナトリウム（Ｅ）対プラセボ（Ｐ）の存在下でＬＰＳで刺激された好中球（ＨＬ６０）の培養上清中の３時間後のＩＬ−８レベルを示すグラフを図示する。
【図１９】図１９は、エリトラン四ナトリウム（Ｅ）対プラセボ（Ｐ）の存在下でＰａｍ３ｃｙｓで刺激された好中球（ＨＬ６０）の培養上清中の３時間後のＩＬ−８レベルを示すグラフを図示する。
【図２０】図２０は、Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａで刺激されたＣ５７ＢＬ／６、ＴＬＲ４−／−、およびＭＤ−２−／−マウスの角膜における２４時間後の好中球浸潤を比較するグラフを図示する。
【図２１】図２１は、Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａで刺激されたＣ５７ＢＬ／６、ＴＬＲ４−／−、およびＭＤ−２−／−マウスの角膜における２４時間後の基質の厚さを比較するグラフを図示する。
【図２２】図２２は、Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａで刺激されたＣ５７ＢＬ／６、ＴＬＲ４−／−、およびＭＤ−２−／−マウスの角膜における２４時間後の基質のかすみを比較するグラフを図示する。
【図２３】図２３は、エリトラン四ナトリウムまたはプラセボで処理された、Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａで刺激されたＣ５７ＢＬ／６マウスの角膜における２４時間後の好中球浸潤を比較するグラフを図示する。
【図２４】図２４は、エリトラン四ナトリウムまたはプラセボで処理された、Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａで刺激されたＣ５７ＢＬ／６マウスの角膜における２４時間後の基質の厚さを比較するグラフを図示する。
【図２５】図２５は、エリトラン四ナトリウムまたはプラセボで処理された、Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａで刺激されたＣ５７ＢＬ／６マウスの角膜における２４時間後の基質のかすみを比較するグラフを図示する。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
便宜上、本明細書、実施例、および添付の特許請求の範囲において利用される特定の用語はここに集められている。他に定義されない限り、本明細書で使用されるすべての技術的および科学的用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって共通して理解されるのと同じ意味を有する。
【００１７】
本明細書で使用される場合、「Ｔｏｌｌ様受容体４アンタゴニスト」または「ＴＬＲ４アンタゴニスト」という用語は、細胞のＴＬＲ４の活性化を実質的に低減、阻害、遮断、および／または軽減する能力がある小分子、ポリペプチド、ポリヌクレオチドなどの因子をいう。
【００１８】
本明細書で使用される場合、「被験体」という用語は、ヒト、ブタ、ラット、マウス、イヌ、ヤギ、ヒツジ、ウマ、サル、類人猿、ウサギ、ウシなどを含むがこれらに限定されない任意の温血動物をいう。
【００１９】
本明細書で使用される場合、「治療」、「治療すること」、または「治療する」という用語は、例えば、角膜炎症が発症することを予防すること、角膜炎症の発症を阻害すること、角膜炎症に関連する臨床徴候の発症を停止させること、および／または角膜炎症に関連する症状を軽減することを含む、疾患または病理学的状態（例えば、角膜炎症）の治癒、阻害、減少、除去、または改善のために使用される任意の特定の方法または手順をいう。
【００２０】
本明細書で使用される場合、「有効量」という用語は、角膜炎症および／または角膜炎症に関連する疾患もしくは障害の治療を提供するために有効かつ／または十分である、単独でまたは任意のさらなる治療剤とともに投与されるＴＬＲ４アンタゴニストの投薬量をいう。有効量は、被験体、治療される疾患、およびもたらされる治療に依存して変化し得る。
【００２１】
本明細書で使用される場合、「治療有効量」という用語は、角膜炎症に関連する症状および／または角膜炎症に関連する疾患もしくは障害の改善を生じ、ならびに／あるいは治療的に関連する効果を生じる、単独でおよび／またはさらなる治療剤と組み合わせて投与されるＴＬＲ４アンタゴニストの量をいう。例として、「治療有効量」は、被験体における角膜炎症を減少させるために必要とされるＴＬＲ４アンタゴニストの量として理解されてもよい。
【００２２】
本明細書で使用される場合、「非経口投与」および「非経口的に投与される」とは、通常は注射による、腸内投与および局所投与以外の投与の様式をいい、非限定的に、静脈内、筋肉内、動脈内、くも膜下腔内、脳室内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内、被膜下、くも膜下、脊髄内、および胸骨内の注射および注入を含む。
【００２３】
本明細書で使用される場合、「薬学的または薬理学的に受容可能な」という用語は、適切に動物またはヒトに投与された場合に、有害な、アレルギー性の、またはその他の都合の悪い反応を生じない分子的実体または組成物をいう。獣医学的用途は等しく本発明の中に含まれ、「薬学的に受容可能な」製剤は、臨床的用途および／または獣医学的用途の両方のための製剤を含む。
【００２４】
本明細書で使用される場合、「薬学的に受容可能なキャリア」には、任意のおよびすべての溶媒、分散媒体、コーティング、抗菌剤および抗真菌剤、等張剤および吸収遅延剤などが含まれる。薬学的に活性な物質のためのこのような媒体および剤の使用は当該分野において周知である。任意の従来的な媒体または剤が活性成分と適合可能でない場合を除いて、治療組成物中でのその使用が意図される。ヒト投与のために、調製物は、ＦＤＡ局の生物製剤標準によって必要とされる無菌性、発熱性、一般的安全性、および純度標準に合致するべきである。補助活性成分もまた、組成物に組み入れることができる。
【００２５】
本明細書で使用される場合、「単位投薬量」製剤は、特定の時間の送達のために適合された投与される成分の用量または部分用量（sub-dose）を含むものである。例えば、「単位投薬量」製剤は、毎日の用量もしくは単位または毎日の部分用量、あるいは毎週の用量もしくは単位または毎週の部分用量などを含むものである。
【００２６】
本明細書で使用される場合、「アルキル」という用語は、分枝鎖または直鎖であってもよく、アルキル鎖に沿った任意の位置において１つ以上のハロゲンで任意に置換されてもよい脂肪族有機基をいう。
【００２７】
本明細書で使用される場合、「薬学的に受容可能な塩」とは、化合物、および有機酸もしくは無機酸または有機塩基もしくは無機塩基の組み合わせから誘導される化合物の塩を含む。
【００２８】
本発明は、一般的に、被験体における角膜炎症を治療する方法、ならびに角膜炎症に関連する角膜の混濁（例えば、角膜のかすみ、基質のかすみ、および基質の厚さ）を軽減する方法に関する。１つの例において、角膜炎症は、コンタクトレンズ着用によって引き起こされ、および／またはコンタクトレンズ着用に関連し得る。他の例において、角膜炎症は、ブドウ膜炎、強膜炎、上強膜炎、角膜炎、眼または眼科的手術（例えば、角膜手術）、眼内炎、虹彩炎、萎縮性黄斑変性、網膜色素変性、医原性網膜症、網膜裂傷および網膜裂孔、類嚢胞黄斑浮腫、糖尿病性黄斑浮腫、糖尿病性網膜症、鎌状赤血球網膜症、網膜静脈および網膜動脈の閉塞、視神経症、滲出性黄斑変性、血管新生緑内障、角膜血管新生、毛様体炎、鎌状赤血球網膜症、および翼状片と関連し得る。
【００２９】
本発明の方法の実施形態に従って、被験体における角膜炎症は、ＴＬＲ４の活性化を遮断、阻害、および／または軽減するための有効な量で被験体の角膜にＴＬＲ４アンタゴニストを投与することによって、実質的に減少および／または軽減できる。従って、本発明の１つの態様は、被験体における角膜炎症を減少および／または軽減するために、治療有効量の少なくともＴＬＲ４アンタゴニストを被験体に投与することによって、角膜炎症を治療する方法に関する。
【００３０】
本発明の１つの実施形態において、被験体における角膜炎症を治療するために使用されるＴＬＲ４アンタゴニストは式（Ｉ）の化合物：
0005550641.tif 000002
またはその薬学的に受容可能な塩またはリン酸エステルであり、ここで、Ｒ１が：
0005550641.tif 000003
からなる群より選択され、
各Ｊ、Ｋ、およびＱは、独立して、直鎖または分枝鎖Ｃ１〜Ｃ１５アルキルであり；ＬはＯ、ＮＨ、またはＣＨ２であり；ＭはＯまたはＮＨであり；ならびにＧはＮＨ、Ｏ、Ｓ、ＳＯ、またはＳＯ２であり；
Ｒ２は直鎖または分枝鎖Ｃ５〜Ｃ１５アルキルであり；
Ｒ３は直鎖または分枝鎖Ｃ５〜Ｃ１８アルキル、
0005550641.tif 000004
からなる群より選択され、
ここで、ＥはＮＨ、Ｏ、Ｓ、ＳＯ、またはＳＯ２；であり、各Ａ、Ｂ、およびＤは、独立して、直鎖または分枝鎖Ｃ１〜Ｃ１５アルキルであり；
【００３１】
Ｒ４は直鎖または分枝鎖Ｃ４〜Ｃ２０アルキル、および
0005550641.tif 000005
からなる群より選択され、ここで、各ＵおよびＶは、独立して、直鎖または分枝鎖Ｃ２〜Ｃ１５アルキルであり、ならびにＷは水素または直鎖もしくは分枝鎖Ｃ１〜Ｃ５アルキルであり；
【００３２】
ＲＡはＲ５またはＲ５−Ｏ−ＣＨ２−であり、Ｒ５は水素、Ｊ’、−Ｊ’−ＯＨ、−Ｊ’−Ｏ−Ｋ’、−Ｊ’−Ｏ−Ｋ’−ＯＨ、および−Ｊ’−Ｏ−ＰＯ（ＯＨ）２からなる群より選択され、ここで、各Ｊ’およびＫ’は独立して、直鎖または分枝鎖Ｃ１〜Ｃ５アルキルであり；
【００３３】
Ｒ６は、ヒドロキシ、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ５アルコキシおよびＣ１〜Ｃ５アシルオキシからなる群より選択され；
【００３４】
Ａ１およびＡ２は、独立して、
ＯＨ、
0005550641.tif 000006
からなる群より選択され、ここで、Ｚは直鎖もしくは分枝鎖Ｃ１〜Ｃ１０アルキルである。
【００３５】
１つの実施形態において、式（Ｉ）のＴＬＲ４アンタゴニストが式（ＩＩ）の化合物：
0005550641.tif 000007
またはその薬学的に受容可能な塩またはリン酸エステルである。
【００３６】
別の実施形態において、式（ＩＩ）のＴＬＲ４アンタゴニストは：
0005550641.tif 000008
またはその薬学的に受容可能な塩またはリン酸エステルである。
【００３７】
別の実施形態において、ＴＬＲ４アンタゴニストはエリトラン四ナトリウム（化合物Ｅ５６６４としてもまた知られる）である。エリトラン四ナトリウムは、すぐ上に示される化合物の四ナトリウム塩である。エリトラン四ナトリウムは米国特許第５，９３５，９３８号に記載されている。
【００３８】
本発明の方法において角膜炎症を有する被験体を治療するために使用できる他のＴＬＲ４アンタゴニストには以下の化合物：
0005550641.tif 000009
0005550641.tif 000010
0005550641.tif 000011
0005550641.tif 000012
0005550641.tif 000013
0005550641.tif 000014
またはその薬学的に受容可能な塩またはリン酸エステルが含まれる（米国特許出願番号２００７／００７２８２４Ａ１を参照のこと）。
【００３９】
本発明において使用できるさらなるＴＬＲ４アンタゴニストには、例えば、化合物Ｂ５３１（米国特許第５，５３０，１１３号）、ならびに以下の特許において記載されている他の化合物が含まれる：米国特許第５，９３５，３８９号（例えば、式Ｉによって同定される置換リポサッカライド）；米国特許第５，６１２，４７６号（例えば、カラム２−４１において開示されているリピドＡアナログ）；米国特許第５，７５６，７１８号（例えば、カラム２−４０において開示されているリピドＡアナログ）；米国特許第５，８４３，９１８号（例えば、カラム２−４８において開示されているリピドＡアナログ）；米国特許第５，７５０，６６４号（例えば、式Ｉによって同定される置換リポサッカライド）；米国特許第６，２３５，７２４号（例えば、式ＩおよびＩＩによって同定されるリピドＡアナログ）；米国特許第６，１８４，３６６号（例えば、式Ｉによって同定されるリピドＡアナログ）；米国特許第５，６８１，８２４号、米国特許出願公開番号２００３０１４４５０３Ａ１、および米国特許出願公開番号２００２００２８９２７Ａ１。これらの化合物を作製するための方法もまた、これらの文書の中に記載されている。このような化合物を作製するためのさらなる方法は、例えば、ＷＯ  ０２／９４０１９に記載されている。
【００４０】
本発明の方法に従って角膜炎症を有する被験体を治療するために使用できるＴＬＲ４アンタゴニストのさらなる他の例には、式（ＩＩＩ）の化合物：
0005550641.tif 000015
またはその薬学的に受容可能な塩またはリン酸エステルであって、ここで、ｎ１、ｎ３、およびｎ５は同じかまたは異なり、たとえば、１から約１０（たとえば、１０）の正の整数である；ｎ２、ｎ４、およびｎ６は同じかまたは異なり、８未満の正の整数である、化合物が含まれる。式（ＩＩＩ）の化合物は、インビトロでヒト末梢血単球においてサイトカイン産生もしくは他の遺伝子発現を刺激しないか、またはインビボで炎症応答を誘導する、合成リピドＡ模倣物である（Ｓｔｏｖｅｒら（Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｖｏｌ．２７，Ｎｏ．６））。
【００４１】
１つの例において、ｎ２、ｎ４、およびｎ６の少なくとも１つが７未満であり、その結果、式（ＩＩＩ）の少なくとも１つの二級アシル基が１０未満の炭素である。１０未満の炭素の少なくとも１つの二級アシル基を有する式（ＩＩＩ）の化合物は、強力なＴＬＲ４アンタゴニストであることが示された（Ｓｔｏｖｅｒら（Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｖｏｌ．２７、Ｎｏ．６））。
【００４２】
１つの実施形態において、本発明の方法において使用される式（ＩＩＩ）のＴＬＲ４アンタゴニストは、以下の構造：
0005550641.tif 000016
またはその薬学的に受容可能な塩またはリン酸エステルを有する。上記に同定したＴＬＲ４アンタゴニストは、商品名ＣＲＸ  ５２６の下で、ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ（ＵＫ）から市販されている（Ｆｏｒｔ，Ｍａｄｅｌｉｎｅ  Ｍ．らＪｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１７４：６４１６−６４２３（２００５）を参照のこと）。
【００４３】
他の実施形態において、式（ＩＩＩ）のＴＬＲ４アンタゴニストは、以下の１つから選択される化合物：
0005550641.tif 000017
0005550641.tif 000018
0005550641.tif 000019
0005550641.tif 000020
0005550641.tif 000021
またはその薬学的に受容可能な塩またはリン酸エステルである。上記に同定された式（ＩＩＩ）の例は、合成リピドＡ模倣物としてＳｔｏｖｅｒら（Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｖｏｌ．２７、Ｎｏ．６）によって同定され、Ｊｏｈｎｓｏｎら、Ｂｉｏｒｏｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．９、２２７３−２２７８に記載されるように合成された。
【００４４】
ある実施形態において、ＴＬＲ４アンタゴニストが式（Ｉ）の化合物：
0005550641.tif 000022
またはその薬学的に受容可能な塩またはリン酸エステルであって、ここで、Ｒ１が：
0005550641.tif 000023
からなる群より選択され、
各Ｊ、Ｋ、およびＱは、独立して、直鎖または分枝鎖Ｃ１〜Ｃ１５アルキルであり；
Ｒ２は直鎖または分枝鎖Ｃ５〜Ｃ１５アルキルであり；
Ｒ３は直鎖または分枝鎖Ｃ５〜Ｃ１８アシルおよび
0005550641.tif 000024
からなる群より選択され、
ここで、ＡおよびＢは、各々独立して、直鎖または分枝鎖Ｃ１〜Ｃ１５アルキルであり；
Ｒ４は直鎖または分枝鎖Ｃ４〜Ｃ２０アルキルおよび
0005550641.tif 000025
からなる群より選択され、ここで、各ＵおよびＶは、独立して、直鎖または分枝鎖Ｃ２〜Ｃ１５アルキルであり、ならびにＷは水素または直鎖もしくは分枝鎖Ｃ１〜Ｃ５アルキルであり；
ＲＡはＲ５−Ｏ−ＣＨ２−であり、Ｒ５は水素、Ｊ’、−Ｊ’−ＯＨ、−Ｊ’−Ｏ−Ｋ’、−Ｊ’−Ｏ−Ｋ’−ＯＨ、および−Ｊ’−Ｏ−ＰＯ（ＯＨ）２からなる群より選択され、ここで、各Ｊ’およびＫ’は独立して、直鎖または分枝鎖Ｃ１〜Ｃ５アルキルであり；
Ｒ６は、ヒドロキシ、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ５アルコキシおよびＣ１〜Ｃ５アシルオキシからなる群より選択され；
Ａ１およびＡ２は、各々独立して、
0005550641.tif 000026
である。
【００４５】
ある実施形態において、Ｒ１は
0005550641.tif 000027
であり、ここで、Ｊは直鎖または分枝鎖Ｃ１０〜Ｃ１５アルキルである。
【００４６】
他の実施形態において、Ｒ１は
0005550641.tif 000028
であり、ここで、Ｊは直鎖または分枝鎖Ｃ１〜Ｃ３アルキルであり、Ｋは直鎖または分枝鎖Ｃ８〜Ｃ１５アルキルである。さらに他の実施形態において、Ｒ１は
0005550641.tif 000029
であり、ここで、Ｊは直鎖または分枝鎖Ｃ１〜Ｃ３アルキルであり、Ｋは直鎖または分枝鎖Ｃ８〜Ｃ１５アルキルであり、Ｑは直鎖または分枝鎖Ｃ１〜Ｃ３アルキルである。さらなる実施形態において、Ｒ１は
0005550641.tif 000030
であり、ここで、Ｊは直鎖または分枝鎖Ｃ１〜Ｃ３アルキルであり、Ｋは直鎖または分枝鎖Ｃ８〜Ｃ１５アルキルである。
【００４７】
例えば、ある実施形態において、Ｒ１は
0005550641.tif 000031
であり、ここでＪは−ＣＨ２−であり、Ｋは直鎖または分枝鎖Ｃ１０〜Ｃ１３アルキルである。他の実施形態において、Ｒ１は
0005550641.tif 000032
であり、ここでＪは−ＣＨ２−であり、Ｋは直鎖または分枝鎖Ｃ１０〜Ｃ１３アルキルであり、Ｑは直鎖または分枝鎖−ＣＨ３である。さらなる実施形態において、Ｒ１は
0005550641.tif 000033
であり、ここでＪは−ＣＨ２−であり、Ｋは直鎖または分枝鎖Ｃ１０〜Ｃ１３アルキルである。
【００４８】
ある実施形態において、Ｒ２は直鎖または分枝鎖Ｃ８〜Ｃ１２アルキル、例えば、直鎖または分枝鎖Ｃ１０アルキルである。ある実施形態において、Ｒ３は直鎖または分枝鎖Ｃ１０〜Ｃ１８アシル、例えば、Ｃ１８アシルである。他の実施形態において、Ｒ３は
0005550641.tif 000034
であり、ここで、Ａは直鎖または分枝鎖Ｃ７〜Ｃ１２アルキルであり、Ｂは直鎖または分枝鎖Ｃ４〜Ｃ９アルキルである。例えば、ある実施形態において、Ｒ３は
0005550641.tif 000035
であり、ここで、Ａは直鎖または分枝鎖Ｃ９アルキルであり、Ｂは直鎖または分枝鎖Ｃ６アルキルである。
【００４９】
ある実施形態において、Ｒ４は直鎖または分枝鎖Ｃ８〜Ｃ１２アルキルであり、例えば、直鎖または分枝鎖Ｃ１０アルキルである。他の実施形態において、Ｒ４は
0005550641.tif 000036
であり、ここでＵは直鎖または分枝鎖Ｃ２〜Ｃ４アルキルであり、Ｖは直鎖または分枝鎖Ｃ５〜Ｃ９アルキルであり、そしてＷは水素または−ＣＨ３である。例えば、ある実施形態において、Ｒ４は
0005550641.tif 000037
であり、Ｕは直鎖または分枝鎖Ｃ２アルキルであり、Ｖは直鎖または分枝鎖Ｃ７アルキルであり、そしてＷは水素または−ＣＨ３である。
【００５０】
ある実施形態において、ＲＡはＲ５−Ｏ−ＣＨ２−であり、ここで、Ｒ５はＪ’であり、ここで、Ｊ’は直鎖または分枝鎖Ｃ１〜Ｃ５アルキルである。ある実施形態において、ＲＡはＲ５−Ｏ−ＣＨ２−であり、ここで、Ｒ５は−ＣＨ３である。
【００５１】
ある実施形態において、Ｒ６はヒドロキシルである。
【００５２】
さらなる実施形態において、ＴＬＲ４アンタゴニストは式（Ｉ）の化合物：
0005550641.tif 000038
またはその薬学的に受容可能な塩またはリン酸エステルであって、ここで、Ｒ１が：
0005550641.tif 000039
から選択され、
Ｊは直鎖または分枝鎖Ｃ１〜Ｃ３アルキルであり、Ｋは直鎖または分枝鎖Ｃ８〜Ｃ１５アルキルであり、そしてＱは直鎖または分枝鎖Ｃ１〜Ｃ３アルキルであり；
Ｒ２は直鎖または分枝鎖Ｃ８〜Ｃ１２アルキルであり；
Ｒ３は
0005550641.tif 000040
であり、ここで、Ａは直鎖または分枝鎖Ｃ７〜Ｃ１２アルキルであり、Ｂは直鎖または分枝鎖Ｃ４〜Ｃ９アルキルであり、
Ｒ４は直鎖または分枝鎖Ｃ８〜Ｃ１２アルキルおよび
0005550641.tif 000041
から選択され、ここで、Ｕは直鎖または分枝鎖Ｃ２〜Ｃ４アルキルであり、Ｖは直鎖または分枝鎖Ｃ５〜Ｃ９アルキルであり、そしてＷは水素または−ＣＨ３であり；
ＲＡはＲ５−Ｏ−ＣＨ２−であり、ここで、Ｒ５はＪ’であり、ここで、Ｊ’は直鎖または分枝鎖Ｃ１〜Ｃ５アルキルであり；
Ｒ６はヒドロキシルであり；
Ａ１およびＡ２は各々独立して、
0005550641.tif 000042
である。
【００５３】
さらなる実施形態において、ＴＬＲ４アンタゴニストは式（Ｉ）の化合物：
0005550641.tif 000043
またはその薬学的に受容可能な塩またはリン酸エステルであって、ここで、Ｒ１が：
0005550641.tif 000044
であり、
Ｊは直鎖または分枝鎖Ｃ１〜Ｃ３アルキルであり、Ｋは直鎖または分枝鎖Ｃ８〜Ｃ１５アルキルであり、そしてＱは直鎖または分枝鎖Ｃ１〜Ｃ３アルキルであり；
Ｒ２は直鎖または分枝鎖Ｃ８〜Ｃ１２アルキルであり；
Ｒ３は
0005550641.tif 000045
であり、ここで、Ａは直鎖または分枝鎖Ｃ７〜Ｃ１２アルキルであり、Ｂは直鎖または分枝鎖Ｃ４〜Ｃ９アルキルであり、
Ｒ４は
0005550641.tif 000046
であり、
ここで、Ｕは直鎖または分枝鎖Ｃ２〜Ｃ４アルキルであり、Ｖは直鎖または分枝鎖Ｃ５〜Ｃ９アルキルであり、そしてＷは水素または−ＣＨ３であり；
ＲＡはＲ５−Ｏ−ＣＨ２−であり、ここで、Ｒ５はＪ’であり、ここで、Ｊ’は直鎖または分枝鎖Ｃ１〜Ｃ５アルキルであり；
Ｒ６はヒドロキシルであり；
Ａ１およびＡ２は各々独立して
0005550641.tif 000047
である。
【００５４】
本発明の別の実施形態において、ＴＬＲ４アンタゴニストは、ＴＬＲ４受容体の少なくとも一部に対応し、ＴＬＲ４シグナル伝達事象の間にＴＬＲ４リガンドを結合するＴＬＲ４のポリペプチドフラグメントなどのＴＬＲ４ポリペプチド配列である。ＴＬＲ４アンタゴニストの別の例には、ＴＬＲ４活性を阻害する非ＴＬＲ４タンパク質もしくはポリペプチド、ＴＬＲ４活性の小分子阻害剤、またはＴＬＲ４の天然のリガンドの改変体、すなわち、細菌リポポリサッカライドである阻害リガンド（例えば、上記のようなＬＰＳのリピドＡ領域のアナログ）が含まれる。利用されるＴＬＲ４アンタゴニストの型に関わらず、ＴＬＲ４アンタゴニストは、ＴＬＲ４機能の少なくとも一時的な遮断を達成するために投与でき、それによって、角膜炎症に対するＴＬＲ４の効果を中和または少なくとも部分的に阻害する。
【００５５】
１つの例において、ＴＬＲ４のポリペプチドフラグメントは、約１０〜１００または１０〜５０アミノ酸長（またはより短い）の短いポリペプチドを含むことができ、これは、ＴＬＲ−４リガンド結合ドメインを含む。これらのペプチドフラグメントは、Ｎ末端またはＣ末端融合タンパク質の一部でもまたあり得る。様々なヒトＴＬＲ４アイソフォームの全長配列は公知である（Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＰ＿６  １２５６４（アイソフォームＡ）、ＮＰ＿６  １２５６６（アイソフォームＢ）、ＮＰ＿００３２５７（アイソフォームＣ）、およびＮＰ＿６  １２５６７（アイソフォームＤ）を参照のこと。これらの各々は、その全体が参照により援用される）。他の哺乳動物ＴＬＲ−４ホモログの配列もまた公知であり、これには、マウス、ラット、オランウータンなどの配列が含まれる。
【００５６】
非ＴＬＲ４タンパク質またはＴＬＲ４のポリペプチド阻害剤もまた、文献に同定されてきており、これらは本発明の方法および組成物において使用できる。２つのこのような阻害剤が、Ｙａｎｇら、「Ｎｏｖｅｌ  ＴＬＲ４  Ａｎｔａｇｏｎｉｚｉｎｇ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ  Ｉｎｈｉｂｉｔ  ＬＰＳ−Ｉｎｄｕｃｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  ｏｆ  Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  Ｍｅｄｉａｔｏｒｓ  ｂｙ  Ｍｏｎｏｃｙｔｅｓ」Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．３２９．３：８４６−５４（２００５）において同定されており、ケモカイン受容体４およびそのリガンドもまた有効であることが示されてきた（Ｋｉｓｈｏｒｅら、「Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  Ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  Ｔｏｌｌ−ｌｉｋｅ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ４  Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｂｙ  Ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ４」ＦＥＢＳＬｅｔｔ．５７９（３）：６９９−７０４（２００５））。
【００５７】
本発明の方法において使用できるＴＬＲ４アンタゴニストの別の例はＲｈｏｄｏｂａｃｔｅｒ  ｓｐｈａｅｒｏｉｄｅｓリピドＡ（ＲＳＬＡ）である。ＲＳＬＡは、多くのグラム陰性細菌からのリピドＡ上の６個と比較される５個のアシル鎖を有し、他のグラム陰性リピドＡに対して顕著な拮抗作用活性を有し、そしてある細胞型に対してはわずかなアゴニスト活性のみを有する（Ｋｕｔｕｚｏｖａら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００１；１６７：４８２−４８９；Ｇｏｌｅｎｂｏｃｋら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．１９９１；２６６：１９４９０−１９４９８；Ｑｕｒｅｓｈｉら、Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  １９９１；５９：４４１−４４４）。
【００５８】
ＴＬＲ４アンタゴニストの別の例には、非限定的に、以下が含まれる：ＴＡＫ−２４２（Ｉｉら、「Ａ  Ｎｏｖｅｌ  Ｃｙｃｌｏｈｅｘｅｎｅ  Ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅ，（ＴＡＫ−２４２），Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅｌｙ  Ｉｎｈｉｂｉｔｓ  Ｔｏｌｌ−ｌｉｋｅ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ４−ｍｅｄｉａｔｅｄ  Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  Ｔｈｒｏｕｇｈ  Ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  Ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ」Ｍｏ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．６９（４）：１２８  ８−９５（２００６）；内因性ＴＬＲ４阻害剤ＲＰ１ＯＳ（Ｄｉｖａｎｏｖｉｃら、「Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ＴＬＲ４／ＭＤ−２  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ｂｙ  ＲＰ１Ｏ５／ＭＤ−１」Ｊ．Ｅｎｄｏｔｏｘｉｎ  Ｒｅｓ．１１（６）：３６３−３６８（２００５）；ＣｙＰ、ラン藻Ｏｓｃｉｌｌａｔｏｒｉａｐｌａｎｋｔｏｔｈｒｉｘ  ＦＰ１に由来する天然のＬＰＳ模倣物（Ｍａｃａｇｎｏら「Ａ  Ｃｙａｎｏｂａｃｔｅｒｉａｌ  ＬＰＳ  Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ  Ｐｒｅｖｅｎｔｓ  Ｅｎｄｏｔｏｘｉｎ  Ｓｈｏｃｋ  ａｎｄ  Ｂｌｏｃｋｓ  Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ  ＴＬＲ４  Ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ  Ｒｅｑｕｉｒｅｄ  ｆｏｒ  Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ」Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．２０３（６）：１４８１−１４９２（２００６）；Ｔ．ｓｏｃｒａｎｓｋｉｉ  ｓｕｂｓｐ．ｓｏｃｒａｎｓｋｉｉ（ＴＳＳ−Ｐ）からのフェノール／水抽出物（Ｌｅｅら「Ｐｈｅｎｏｌ／ｗａｔｅｒ  Ｅｘｔｒａｃｔ  ｏｆ  Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ  ｓｏｃｒａｎｓｋｉｉ  ｓｕｂｓｐ．ｓｏｃｒａｎｓｋｉｉ  ａｓ  ａｎ  Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ  ｏｆ  Ｔｏｌｌ−ｌｉｋｅ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ４  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ」Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．１  ５２（２）：５３５−４６（２００６））；Ｍｏｎａｒｃｈ−ｉなどのＣＬＲタンパク質（Ｗｉｌｌｉａｍｓら「Ｔｈｅ  ＣＡＴＥＲＰＩＬＬＥＲ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｍｏｎａｒｃｈ−ｉ  Ｉｓ  ａｎ  Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ  ｏｆ  Ｔｏｌｌ−ｌｉｋｅ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ−，Ｔｕｍｏｒ  Ｎｅｃｒｏｓｉｓ  Ｆａｃｔｏｒ  ａｌｐｈａ−，ａｎｄ  Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｐｒｏ−ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｓｉｇｎａｌｓ」Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｉｎ．２８０（４８）：３９９１４−３９９２４（２００５））；ならびにＥＲ８１  １２４３、ＥＲ８１１２１  ｉ、およびＥＲ８１  １２３２などの小分子ＴＬＲ−４／ＴＬＲ−２二重アンタゴニスト（Ｃｈｏｗらへの米国特許出願公開番号２００５０１１３３４５）。ＴＬＲ４阻害剤またはアンタゴニストのさらなる例はＷＯ２００６／１３８６８１Ａ２において見い出すことができる。
【００５９】
本発明の方法において使用されるＴＬＲ４アンタゴニストは、例えば、眼科的、局所、非経口、皮下、静脈内、関節内、くも膜下腔内、筋肉内、腹腔内、皮内の注射、または経皮、口腔内、口腔粘膜、経口経路、または吸入経由を含む標準的な方法を使用して角膜炎症を治療するために被験体に投与できる。特定の被験体のために使用される特定のアプローチおよび投薬量は、例えば、被験体の一般的健康、体重、および年齢を含むいくつかの要因に依存する。これらのような要因に基づいて、医療従事者は治療に対する適切なアプローチを選択することができる。
【００６０】
本発明の方法に従う治療は、角膜炎症の状態に依存して、被験体において変更、停止、または再開できる。治療は、当業者によって適切であるように決定された間隔で実行できる。例えば、投与は、１日に１、２、３、または４回実行することができる。本発明の別の態様において、ＴＬＲ４アンタゴニストは、炎症性応答の誘導が起こった後で投与できる。
【００６１】
本発明の方法は、治療有効量のＴＬＲ４アンタゴニストを被験体に投与する工程を包含する。治療有効量の決定は当業者の能力の範囲内である。正確な処方、投与の経路、および投薬量は、被験体の状態に鑑みて個々の医師によって選択できる。
【００６２】
上述の（およびその他の）投与の様式における使用のための薬学的化合物の製剤は、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（第１８版）、Ａ．Ｇｅｎｎａｒｏ編、１９９０、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．において記載されている。例えば、以下もまた参照のこと：Ｍ．Ｊ．Ｒａｔｈｂｏｎｅ編、Ｏｒａｌ  Ｍｕｃｏｓａｌ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ，Ｄｒｕｇｓ  ａｎｄ  ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｓｅｒｉｅｓ，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎ．Ｙ．，Ｕ．Ｓ．Ａ．，１９９６；Ｍ．Ｊ．Ｒａｔｈｂｏｎｅら編、Ｍｏｄｉｆｉｅｄ−Ｒｅｌｅａｓｅ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｄｒｕｇｓ  ａｎｄ  ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｓｅｒｉｅｓ，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎ．Ｙ．，Ｕ．Ｓ．Ａ．，２００３；Ｇｈｏｓｈら編、Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｔｏ  ｔｈｅ  Ｏｒａｌ  Ｃａｖｉｔｙ，Ｄｒｕｇｓ  ａｎｄ  ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｓｅｒｉｅｓ，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎ．Ｙ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，１９９９。
【００６３】
１つの例において、ＴＬＲ４アンタゴニストは、被験体の眼に投与できる眼科用製剤中に提供できる。この眼科用製剤は、薬学的に受容可能な溶液、懸濁液、または軟膏中にＴＬＲ４アンタゴニストを含有させることができる。濃度のある程度の変動が、利用される特定のＴＬＲ４アンタゴニスト、治療される被験体の状態などに依存して生じ得、治療の責任者は個々の被験体のために最も適切な濃度を決定することができる。この眼科用製剤は、所望される場合、さらなる成分、例えば、保存剤、緩衝剤、等張剤、抗酸化剤、安定剤、非イオン性湿潤剤または清澄剤、および増粘剤を含む滅菌水溶液の型であり得る。
【００６４】
このような溶液中での使用のための保存剤の例には、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、クロロブタノール、チメロサールなどが含まれる。緩衝剤の例には、約ｐＨ  ６から約ｐＨ  ８の間のｐＨ、例えば、約ｐＨ  ７から約ｐＨ  ７．５の間のｐＨを維持するために十分な量のホウ酸、炭酸水素ナトリウムまたは炭酸水素カリウム、ホウ酸ナトリウムまたはホウ酸カリウム、炭酸ナトリウムまたは炭酸カリウム、酢酸ナトリウム、およびリン酸二水素ナトリウムが含まれる。等張剤の例は、デキストラン４０、デキストラン７０、デキストロース、グリセリン、塩化カリウム、プロピレングリコール、および塩化ナトリウムである。
【００６５】
抗酸化剤および安定剤の例には、重亜硫酸ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、チオ亜硫酸ナトリウム、およびチオウレアが含まれる。湿潤剤および清澄剤の例には、ポリソルベート８０、ポリソルベート２０、ポロキサマー２８２、およびチロキサポールが含まれる。増粘剤の例には、ゼラチン、グリセリン、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシメチルプロピルセルロース、ラノリン、メチルセルロース、ワセリン、ポリエチレングリコール、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、およびカルボキシメチルセルロースが含まれる。眼科用製剤は、従来的な方法によって、例えば、点眼薬の型でまたは眼を眼科用溶液に浸すことによって、治療の必要な被験体の眼に局所投与される。
【００６６】
ＴＬＲ４アンタゴニストは、皮膚を通した局所投与のためにもまた製剤化できる。「局所送達系」は、投与される成分を含む経皮パッチもまた含む。皮膚を通した送達はさらに、所望される場合、イオン導入または電気輸送によってもまた達成できる。
【００６７】
皮膚への局所投与のための製剤には、例えば、薬学的に受容可能なキャリア中にＴＬＲ４アンタゴニストを含む軟膏、クリーム、ゲル、およびペーストが含まれる。局所的使用のためのＴＬＲ４アンタゴニストの製剤には、当業者に周知であるような、油性または水溶性の軟膏ベースの調製物が含まれる。例えば、これらの製剤は、植物油、動物脂肪、および例えば、石油から得られる半固体炭化水素を含んでもよい。使用される特定の成分には、白色軟膏、黄色軟膏、セチルエステルワックス、オレイン酸、オリーブ油、パラフィン、ワセリン、白色ワセリン、鯨ろう、デンプングリセリン製剤、白ろう、黄ろう、ラノリン、脱水ラノリン、およびモノステアリン酸グリセリンが含まれてもよい。グリコールエーテルおよび誘導体、ポリエチレングリコール、ポリオキシ４０ステアレート、およびポリソルベートを含む種々の水溶性軟膏ベースもまた、使用されてもよい。
【００６８】
眼科的投与（例えば、点眼薬）および／もしくは局所的投与による治療を容易に利用できない、または、眼科的投与（例えば、点眼薬）および／もしくは局所的投与による治療が適切ではない角膜炎症に罹患した（または角膜炎症のリスクがある）被験体は、静脈内注入などの全身的アプローチによって治療できる。例えば、ＴＬＲ４アンタゴニストは、連続的静脈内注入によって低投薬量で投与できる。患者が長期的な看護を必要とする別の例において、ＴＬＲ４アンタゴニストは断続的に投与できる（例えば、１２〜２４時間毎）。このアプローチのバリエーションにおいて、開始またはローディング用量の次に、ローディング用量よりも少ない（例えば、半分の）維持用量、または連続注入を続けることができる。このような治療の期間は、例えば、状態の重篤度および改善の観察等の要因に基づいて、当業者によって決定される。
【００６９】
静脈内注入によって被験体にＴＬＲ４アンタゴニストを投与する場合、ＴＬＲ４アンタゴニストと適合可能である装置および備品（例えば、中心静脈カテーテルまたは末梢静脈カテーテルなどのカテーテル、チュービング、ドリップチャンバー、フラッシュバックバルブ、注射Ｙ部位、ストップコック、および注入バッグ）が使用できる。
【００７０】
ＴＬＲ４アンタゴニストが投与される被験体は、それらの細胞膜上にＴＬＲを発現する哺乳動物を含むことができる。より詳細には、これらの被験体は、角膜上皮細胞、マクロファージ、および好中球の膜上にＴＬＲを発現する哺乳動物である。
【００７１】
本発明の方法に従って治療される被験体には角膜炎症を有するものが含まれる。加えて、角膜炎症を有さないが、角膜炎症を発症するリスクがある被験体が、本発明の方法に従って治療できる。後者の被験体のグループにおいて、この治療は、被験体における角膜炎症の発症を阻害または予防することができる。
【００７２】
本発明の１つの態様において、本明細書に記載される方法によって治療される角膜炎症は、ブドウ膜炎、強膜炎、上強膜炎、角膜炎、眼または眼科的手術（例えば、角膜手術）、眼内炎、虹彩炎、萎縮性黄斑変性、網膜色素変性、医原性網膜症、網膜裂傷および網膜裂孔、類嚢胞黄斑浮腫、糖尿病性黄斑浮腫、糖尿病性網膜症、鎌状赤血球網膜症、網膜静脈および網膜動脈の閉塞、視神経症、滲出性黄斑変性、血管新生緑内障、角膜血管新生、毛様体炎、鎌状赤血球網膜症、および翼状片などの眼の疾患または眼科的障害、ならびに辺縁潰瘍などのコンタクトレンズ着用誘導性の状態に関連する。本発明のより特定の態様において、これらの方法は、微生物感染に関連する角膜炎症を治療するために使用されてもよい。１つの特定の例において、角膜炎は、グラム陰性細菌Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａおよびＳｅｒｒａｔｉａ  ｍａｒｃｅｓａｎｓ、ならびにＳ．ａｕｒｅｕｓ、Ｓ．ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ、およびＣｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ種（Ｐ．ａｃｎｅｓ）を含むグラム陽性細菌などの種々の微生物感染によって引き起こされる可能性がある。従って、本発明の１つの態様において、被験体において阻害される角膜炎症は、細菌性角膜炎に関連する角膜炎症である。
【００７３】
本発明の別の態様において、本明細書に記載される方法は、真菌性角膜炎に関連する角膜炎症を治療するために使用できる。より詳細には、本発明の方法は、例えば、Ｆｕｓａｒｉｕｍ、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ、Ｃｅｐｈａｌｏｓｐｏｒｉｕｍ（Ａｃｒｅｍｏｎｉｕｍ）、Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ、Ｍｉｃｒｏｓｐｏｒｕｍ、Ｅｐｉｄｅｒｍｏｐｈｙｔｏｎ、Ｓｃｏｐｕｌａｒｉｏｐｓｉｓ、およびＣａｎｄｉｄａを含む真菌属に関連する角膜炎症を治療するために使用できる。
【００７４】
本発明の別の態様において、本明細書に記載される方法は、コンタクトレンズまたは角膜表面のいずれからも生きている生物が回収されない無菌性角膜炎症を治療するために使用できる。より詳細には、本発明の方法は、コンタクトレンズ着用に関連する被験体における角膜炎症を治療するために使用できる。これらの症候群には、コンタクトレンズ関連角膜浸潤（ＣＬＡＣＩ）、コンタクトレンズ関連充血（ＣＬＡＲＥ）、コンタクトレンズ周辺潰瘍（ＣＰＬＵ）を含み得るがこれらに限定されない。無菌性浸潤および感染性浸潤は、通常、しかし、常にではなく、当業者によってスリットランプ試験によって区別できる。
【００７５】
なお別の実施形態において、本明細書に記載されるＴＬＲ４アンタゴニストは、さらなる治療剤を伴う組み合わせ治療の一部として投与できる。「組み合わせ治療」または「併用治療」という語句は、治療剤の同時作用による有益な効果を提供するよう意図する、ＴＬＲ４アンタゴニスト、ならびに特定の治療レジメンの一部としての１種以上の治療剤の投与を包含する。組み合わせにおけるこれらの治療剤の投与は、典型的には、所定の期間（選択される組み合わせに依存して、通常、数分間、数時間、数日間、または数週間）にわたって実行される。「組み合わせ治療」または「併用治療」は、各治療剤が異なる時間に投与される、連続する様式でのこれらの治療剤の投与、ならびに実質的に同時の様式でのこれらの治療剤、または少なくとも２種の治療剤の投与を包含することを意図する。実質的に同時の投与は、例えば、固定比率の各治療剤を有する個々の用量、または治療剤各々についての複数の個別の用量で、被験体に投与することによって、達成できる。各治療剤の連続的投与または実質的に同時の投与は、経口経路、静脈内経路、筋肉内経路、および粘膜組織を通しての直接吸収を含むがこれらに限定されない、任意の適切な経路によってもたらすことができる。治療剤は、同じ経路または異なる経路を通して投与できる。治療剤が投与される順番は厳密に限定されない。
【００７６】
例えば、組み合わせ治療は、角膜炎症を治療するために、抗菌剤、抗ウイルス剤、または抗真菌剤の少なくとも１つとともにＴＬＲ４アンタゴニストを投与することを含むことができる。抗菌剤の例には、メチシリン耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ（ＭＲＳＡ）感染のためのバンコマイシンで強化されたゲンタマイシン、第４世代フルロキノリン様モキシフロキサシンまたはガチフロキサシン、セファゾリンまたはバンコマイシン、およびフルオロキノリンが含まれる。１つの特定の例において、組み合わせ治療は、ＴＬＲ４アンタゴニスト、および眼科用抗生物質または眼科用抗ウイルス剤の少なくとも１つを含む。眼科用抗生物質には、例えば、コハク酸クロラムフェニコールナトリウム眼科用（クロラムフェニカール）；コルチスポリン（ＣＯＲＴＩＳＰＯＲＩＮ）（ネオマイシンおよびポリミキシン βサルフェートおよびヒドロコルチゾンアセテートクリーム）；イロチシン（ＩＬＯＴＹＣＩＮ）（エリスロマイシン眼科用軟膏）；ネオデカドロン（ＮＥＯＤＥＣＡＤＲＯＮ）（ネオマイシンサルフェート−デキサメタゾンナトリウムホスフェート）；ポリトリム（ＰＯＬＹＴＲＩＭ）（トリメトプリムおよびポリサイキシンβサルフェート眼科用溶液）；テラ−コートリル（ＴＥＲＲＡ−ＣＯＲＴＲＩＬ）（オキシテトラサイクリンＨＣＬおよびヒドロコルチゾンアセテート）；テラマイシン（ＴＥＲＲＡＭＹＣＩＮ）（オキシテトラサイクリン）；およびＴＯＢＲＡＤＥＸ（トブラマイシンおよびデキサメタゾン眼科用懸濁液および軟膏）が含まれる。
【００７７】
眼科用抗ウイルス剤には、例えば、ＶＩＲＡ−Ａ眼科用軟膏（ビダラビン）が含まれる。眼科用キナロンには、例えば、キブロキシン（ＣＨＩＢＲＯＸＩＮ）（ノルフロキサシン眼科用溶液）；シロキサン（ＣＩＬＯＸＡＮ）眼科用溶液、（シプロフロキサシンＨＣＬ）；およびオクフロックス（Ｏｃｕｆｌｏｘ）眼科用溶液（オフロキサシン）が含まれる。眼科用スルホンアミドには、例えば、ブレファミド（ＢＬＥＰＨＡＭＩＤＥ）眼科用軟膏（スルフアセトアミドナトリウムおよび酢酸プレドニゾロン）；およびブレファミド（ＢＬＥＰＨＡＭＩＤＥ）眼科用懸濁液（スルフアセトアミドナトリウムおよび酢酸プレドニゾロン）が含まれる。抗真菌剤には、例えば、ナタマイシンおよびアムホテリシンＢが含まれる。
【００７８】
本明細書はさらに、被験体の角膜におけるＴＬＲ誘導性炎症性応答を治療する方法に関する。この方法は、治療有効量のＴＬＲ４アンタゴニストを被験体に投与する工程を包含する。本発明の１つの態様において、ＴＬＲ誘導性炎症性応答の治療は、被験体の角膜への細胞浸潤の阻害を含むことができる。より特定には、ＴＬＲ誘導性炎症性応答の治療は、被験体の角膜基質への好中球浸潤の阻害を含むことができる。
【００７９】
本発明の別の態様において、ＴＬＲ誘導性炎症性応答の治療は、インターロイキン−８（ＩＬ−８）の阻害などのＣＸＣケモカイン分泌の阻害を含むことができる。ＩＬ−８は、好中球が血流を離れ、かつ周囲の組織に入ることができるように誘導することができるＣＸＣケモカインである。角膜で産生され、かつ好中球活性を有する他のＣＸＣケモカインには、ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ２、ＣＸＣＬ５が含まれ、これらはまた、本発明の方法による標的となり得る。
【００８０】
本発明は、被験体における角膜炎症を治療するためのコンタクトレンズにもまた関する。このコンタクトレンズは、コンタクトレンズ基材、およびその基材上の少なくとも一部分に提供されるコーティングを備える。このコーティングは、被験体へのコンタクトレンズの装着の際に、被験体における角膜炎症を治療するために有効な量のＴＬＲ４アンタゴニストを含むことができる。
【００８１】
ＴＬＲ４アンタゴニストを含むコーティングは、当該分野において公知である多数のコンタクトレンズ基材材料に適用できる。光学的に透明であるという条件で、コンタクトレンズに構築できる当該分野において公知である実質的に任意の基材が本発明において使用できる。
【００８２】
本発明の１つの態様において、基材は、長期的な角膜の健康のために十分である量の酸素が角膜に到達することを可能にする、光学的に透明な材料を含むことができる。基材の例には、シリコーン共重合体、共重合体（ｉｎｔｅｒｐｏｌｙｍｅｒｓ）、オリゴマー、およびマクロマーなどの疎水性材料から作られたポリマーが含まれる。例証的なポリシリコーンは、ポリジメチルシロキサン、ポリジメチル−コ−ビニルメチルシロキサンである。他のシリコーンには、Ｂｅｃｋｅｒによる米国特許第３，２２８，７４１号に記載されたシリコーンラバー；Ｂｕｒｄｉｃｋらによる米国特許第３，３４１，４９０号に記載されたものなどのブレンド；およびＰｏｌｍａｎｔｅｅｒによる米国特許第３，５１８，３２４号に記載されたようなシリコーン組成物が含まれる。米国特許第４，１３６，２５０号；同第５，３８７，６２３号；同第５，７６０，１００号；同第５，７８９，４６１号；同第５，７７６，９９９号；同第５，８４９，８１１号；同第５，３１４，９６０号、および同第５，２４４，９８１号に記載された基材もまた本発明で使用できる。メチルグルコースのプロポキシレートおよびプロピレンオキシドおよびＨＥＭＡベースのハイドロゲルの架橋ポリマーもまた、コンタクトレンズの基材として使用できる。
【００８３】
本発明のコンタクトレンズを形成する際に使用できるシリコーン組成物は、ヒドロシリル化、同時縮合の手段により、または、参照により本明細書に援用される米国特許第４，１４３，９４９号においてＣｈｅｎによって記載されたようなフリーラジカル機構によって、架橋シロキサンプレポリマーによって得られた架橋ポリシロキサンである。さらなるシリコーンベースの基材は、α，ω−ビスアミノプロピル（ｂｉｓａｍｉｏｎｐｒｏｐｙｌ）ポリジメチルシロキサン、およびグリシジルメタクリレートの架橋ポリマーである架橋ポリマーである。本発明によって意図されるシリコーン組成物はまた、次に他のモノマーと重合して最終基材を与えるマクロマーを形成するために、基移動重合（ＧＴＰ）触媒の存在下で、１つ以上のシリコーンモノマーとメタクリレートを合わせることから作られる。基移動（ＧＴＰ）ポリマーを作製するために使用できる開始剤、反応条件、モノマー、および触媒は、Ｏ．Ｗ．Ｗｅｂｓｔｅｒによる「Ｇｒｏｕｐ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ  Ｐｏｌｙｍｅｒｉｚａｔｉｏｎ」、Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ  ｏｆ  Ｐｏｌｙｍｅｒ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  Ｅｄ．所収（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ）ｐ．５８０、１９８７に記載されている。米国特許第６，９５１，８９４号に記載されている基材もまた、本発明における使用のために適切である。
【００８４】
コーティングは、水溶液、懸濁液、またはコロイドとして調製および適用でき、次いで、基材と接触したコーティングを提供できる任意のプロセスに従って、コンタクトレンズ基材に適用される。例えば、基材にコーティングを適用するためのプロセスには、浸漬、吹き付け、はけ塗り、およびスピンコーティングが含まれる。一旦、レンズ基材がコートされると、それは、コンタクトレンズの製造において実施される任意の数のさらなる工程に供されてもよい。これらは、例えば、膨潤工程および洗浄工程、界面活性剤などの添加物の添加、抽出工程などを含むことができる。
【００８５】
ＴＬＲ４アンタゴニストを含むコーティングは、例えば、共有結合もしくはイオン結合などの化学結合、または物理的結合によってコンタクトレンズに接着できる。ある態様において、このコーティングは、その有用な製品寿命（例えば、保存時間プラスそれが使用者の眼と接触している時間）を通して、レンズ基材に固定されたままであり得る。
【００８６】
このコンタクトレンズはまた、１つより多くのコーティング層を含むこともできる。このことは、コーティング層が必要な表面特性（例えば、角膜炎症の治療）を提供するが、レンズ基材それ自体とは特に適合性ではない場合に好ましくあり得る。例えば、結合層またはカップリング剤が使用でき、コーティングを基材に付着させる。適合性のレンズ基材、ＴＬＲ４アンタゴニストコーティング、および結合層（必要な場合）の材料の選択は、十分に当業者の知識の範囲内にある。
【００８７】
本発明の態様において、コンタクトレンズは、被験体の角膜炎症の治療を提供しながら、被験体の角膜または他の組織に対して非毒性である。
【００８８】
本発明は、被験体における角膜炎症を治療するための眼科用溶液にもまた関する。この溶液は水溶液であり得、上記のようなＴＬＲ４アンタゴニストを含む。角膜炎症の治療において使用できる有用な溶液の例には、多目的レンズ溶液、眼科用すすぎ溶液、眼用途のための外科用スクラブ、点眼薬、眼洗浄液、コンタクトレンズ溶液、市販の局所用眼および眼周囲溶液（すなわち、人工涙液）、眼および眼周囲洗浄溶液、眼注水溶液、および／または外科用スクラブもしくは局所適用のための抗菌溶液などの眼瞼および／または眼と接触する溶液が含まれる。
【００８９】
ある態様において、ＴＬＲ４アンタゴニストは、角膜炎症を治療するために市販のコンタクトレンズ溶液または多目的レンズ溶液に加えられてもよい。他の態様において、ＴＬＲ４アンタゴニストは、角膜炎症を治療するために市販されているのではない、コンタクトレンズ溶液または多目的レンズ溶液としての使用のために調製された水溶液に加えられてもよい。
【００９０】
眼科用溶液が洗浄液を含むある態様において、洗浄液は、レンズのフィルム状沈着物および表面細片を効果的に洗浄するための洗浄剤を含むことができる。使用することができる洗浄剤の例には、ポロキサマーおよびポリ（オキシチレン（ｏｘｙｔｈｙｌｅｎｅ））親水性単位を含むｔｅｔｒｏｎｉｃ界面活性剤が含まれる。すべての実施形態において、洗浄剤は非毒性であり、角膜炎症について治療される被験体の視覚を歪めない。
【００９１】
他の態様において、ＴＬＲ４アンタゴニストは、従来的な眼科用溶液において見い出される等張剤および緩衝剤に加えられてもよい。等張剤の例には、デキストロース、塩化カリウム、および／または塩化ナトリウムが含まれる。緩衝剤の例には、ホウ酸、ホウ酸ナトリウム、クエン酸ナトリウムまたはクエン酸カリウム、炭酸水素ナトリウム、リン酸ナトリウム、およびリン酸カリウムが含まれる。
【００９２】
加えて、多目的レンズ溶液などの従来的な眼科用溶液において見い出される抗菌剤が加えられてもよい。この溶液中での使用のための抗菌剤には、例えば、ポリアミノプロピルビグアニド、塩酸アレキシジン、ポリクアテニウム−１、ポリクアテニウム４２、ミリストアミドプロピルジメチルアミン、または当業者に公知であるその他の剤が含まれる。
【００９３】
ある態様において、この溶液は、被験体のコンタクトレンズの水和および潤滑を提供するために、快適または保湿剤をさらに含んでもよい。このような剤には、例えば、ポリクアテニウム１０、ポロキサマー、プロピレングリコール、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）または当業者に公知であるその他の剤が含まれる。
【００９４】
ある態様において、この溶液は眼瞼および／または眼に局所投与されるように意図されているので、この溶液は、病原体生物が含まれておらず、および／または無菌性であることが企図される。無菌溶液の利点は、これが被験体の眼瞼および／または眼に夾雑物を導入する可能性を減少させることである。無菌性または適切な抗微生物性の保存は、本発明のこの溶液の一部として提供されてもよい。ある態様において、これらの溶液は無菌条件下で製造される。
【００９５】
無菌化に加えて、または無菌化の代わりに、ＴＬＲ４アンタゴニストの水溶液は、微生物夾雑の可能性を最小化するために、生理学的に受容可能な保存剤を含んでもよい。生理学的に受容可能な保存剤は、溶液の安定性を増加させるために、本発明の溶液中で使用されてもよい。保存剤には、例えば、ポリアミノプロピルビグアニド、ポリヘキサメチレンビグアニド（ＰＨＭＢ）、ポリクアテニウム−１、ミリストアミドプロピル、およびソルビン酸が含まれる。
【００９６】
本発明は、特許請求の範囲を限定することを意図しない、以下の実施例によってさらに例証される。
【実施例】
【００９７】
以下の実施例において、Ｃ５７ＢＬ／６マウス角膜は擦過され、ＬＰＳまたはＴＬＲ２リガンドＰａｍ３Ｃｙｓを用いる刺激の前またはその後に、エリトラン四ナトリウムまたはプラセボで処理された。阻害および刺激の期間の全体を通して、ソフトコンタクトレンズからの２ｍｍ直径のパンチを使用して角膜表面を覆った。角膜浸潤物は、インビボ共焦点顕微鏡法（ＣＯＮＦＯＳＣＡＮ）によって検出し、好中球については免疫組織化学によって検出した。ＬＰＳおよびＰａｍ３Ｃｙｓ刺激されたヒト角膜上皮細胞（ＨＣＥＣ）、マクロファージ、および好中球によるＩＬ−８産生に対するエリトラン四ナトリウムの効果もまた評価した。
【００９８】
以下の実施例において例証されているように、本発明者らは、エリトラン四ナトリウムが、ＬＰＳ（ＴＬＲ４）を用いる刺激に応答した、角膜におけるＣＸＣケモカイン産生および角膜浸潤物、特に、好中球の発生を顕著に阻害するが、Ｐａｍ３Ｃｙｓ（ＴＬＲ２）を用いる刺激については阻害しないことを観察した。エリトラン四ナトリウムがＬＰＳ刺激の後に適用された場合、好中球浸潤は顕著に阻害されたが、より高濃度が必要であった。さらに、ＴＬＲ４刺激されたＨＣＥＣ、マクロファージ、および好中球細胞系統によるＩＬ−８産生もまた顕著に減少したが、ＴＬＲ２刺激されたものは減少しなかった。
【００９９】
本発明者らは、エリトラン四ナトリウムが、炎症性応答の誘導後に与えられた後でさえ、コンタクトレンズに関連するＬＰＳ誘導性角膜浸潤物の高度に有効なアンタゴニストであることもまた観察した。ＴＬＲ４に特異的であったが、エリトラン四ナトリウムは、いくつかの細胞型において、ＬＰＳ誘導性ＩＬ８産生を阻害することがここで示される。
【０１００】
実施例１：エリトラン四ナトリウムの調製
エリトラン四ナトリウムまたはプラセボは、Ｅｉｓａｉ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ａｎｄｏｖｅｒ，ＭＡから入手し、エンドトキシンフリー水（Ｓｉｇｍａ；ＵＫ）で１．１ｍｇ／ｍｌに再構成した。このストック試薬を分注し、−８０℃で保存した。サンプルは超音波処理し、その後、各実験で述べられた濃度まで希釈した。
【０１０１】
実施例２：細胞系統およびインビトロ刺激
ＳＶ−４０をトランスフェクトしたヒト角膜上皮細胞系統（ＨＣＥ−Ｔ）はＡＴＣＣから入手した。刺激前に、ＨＣＥ細胞は４８ウェルプレートにプレートし、一晩、上皮増殖因子飢餓状態にした。ＨＣＥ細胞はＬＰＳに応答するために外因性ＭＤ−２を必要とするので、超高純度ＬＰＳ（ＴＬＲ４特異的、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ  Ｋ１２，Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ；Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）を用いる刺激の前に、２００ｎｇ／ｍｌ組換えヒトＭＤ−２（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ）とともに１時間インキュベートした。ＨＣＥ細胞はまた、ＭＤ−２の非存在下でＰａｍ３ＣｙｓＫ４（ＥＭＣ  Ｍｉｃｒｏｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎｓ，Ｇｅｒｍａｎｙ）とともにインキュベートした。
【０１０２】
Ｕ９３７マクロファージ−細胞系統は、１０％  ＦＢＳを含むＲＰＭＩ培地（ＧＩＢＣＯ）中で培養し、５×１０４細胞／ウェルを９６ウェルプレートに加えた。ヒト好中球様細胞系統（ＨＬ−６０）を、１０％  ＦＢＳを含むＲＰＭＩ中で維持し、１．２％  ＤＭＳＯ中で５日間インキュベートして、好中球表現型を生成した。
【０１０３】
すべての細胞はエリトランまたはプラセボとともにインキュベートし、続いて、各細胞系統のために最適な濃度（結果に記す）でＬＰＳまたはＰａｍ３ＣｙｓＫ４を用いる刺激を行った。３時間後、無細胞上清を収集し、ＣＸＣＬ８／ＩＬ−８をＥＬＩＳＡ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）によって測定した。
【０１０４】
結果を図２、３、および１４〜１９に示す。
【０１０５】
実施例３：コンタクトレンズ角膜炎症のマウスモデル
Ｃ５７ＢＬ／６マウス（６〜８週齢）をＴｈｅ  Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  （Ｂａｒ  Ｈａｒｂｏｒ，ＭＥ）から入手した。マウスは０．４ｍｌ  ２，２，２−トリブロモエタノール（ＴＢＥ）の腹腔内注射によって麻酔した。本発明者らの以前の研究に記載したように、２６ゲージ針を使用して、角膜上皮において３つの平行した擦過傷を作製した。各実験について示された濃度のエリトラン四ナトリウムまたはプラセボを局所的に加え、通常のコンタクトレンズ（ＬＯＴＲＡＦＩＬＣＯＮ  Ａ；ＣＩＢＡ  ＶＩＳＩＯＮ）からの２ｍｍ直径のパンチを角膜表面に加えた（図１を参照のこと）。さらに１時間後、レンズを手早く取り外し、２μｌ  ＬＰＳ（２０ｍｇ／ｍｌ）またはＰａｍ３Ｃｙｓ（５ｍｇ／ｍｌ）を角膜表面に配置した。次いで、コンタクトレンズボタンを交換し、さらに１時間後、レンズを取り外し、マウスを麻酔から回復させた。ある実験においては、アゴニストおよびアンタゴニストの順番を逆にするか、または両方を同時に与えた。
【０１０６】
実施例４：Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ誘導性角膜炎症
Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ株ＡＴＣＣ  １９６６０はＡＴＣＣから直接入手し、−８０℃にてストック中に維持した。細菌はトリプシンダイズブロス（ＴＳＢ）中で一晩（１８時間）増殖させ、これらの静止培養の分注を１：１００に希釈し、ＯＤ６５０＝０．２（１×１０８ＣＦＵ／ｍＬ）までＴＳＢ中で増殖させた。細菌は遠心分離し、ＰＢＳ中で洗浄し、そして０．３％  トブラマイシン（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）含有ＰＢＳ中で２×１０９細菌／ｍＬに再懸濁した。細菌の死滅はＴＳＢ寒天培地上での増殖の非存在によって確認した。角膜を、３つの平行したひっかき傷によって擦過し、１×１０７個の菌体を含む５μＬ細菌懸濁液を角膜表面上に配置し、前述のように、シリコンハイドロゲルコンタクトレンズ（Ｌｏｔｒａｆｉｌｃｏｎ；Ｃｉｂａ  Ｖｉｓｉｏｎ）からの２ｍｍ直径パンチによって覆った。
【０１０７】
実施例５：角膜の厚みおよびかすみのインビボ共焦点顕微鏡分析
細胞浸潤のインビボ分析はＮＩＤＥＫ  ＣＯＮＦＯＳＣＡＮを使用して行った。マウスは麻酔しかつ固定し、そして角膜は、媒体として透明ゲル（Ｇｅｎｔｅａｌ，Ｎｏｖａｒｔｉｓ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｉｃｓ，Ｄｕｌｕｔｈ，ＧＡ）とともに４０×対物レンズを使用して調べた。全体の角膜の一連の画像はＮＡＶＩＳソフトウェアを使用して取り込み、基質の厚さ（表皮基底と角膜内皮の間の領域）をＮＡＶＩＳソフトウェアを使用して直接測定した。全体の浸潤物（角膜のかすみと呼ばれる）を測定するために、角膜基質の各１〜２μｍ画像の光強度の読み取りをＰｒｉｓｍ（Ｇｒａｐｈ  Ｐａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）にエクスポートし、次いで、曲線下の総面積を以前に記載されたように計算した（Ｓｕｎ  Ｙら、Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ２００６；７４：５３２５−５３３２；Ｊｏｈｎｓｏｎ  ＡＣら、Ｉｎｖｅｓｔ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  Ｖｉｓ  Ｓｃｉ  ２００５；４６：５８９−５９５）。
【０１０８】
実施例６：免疫組織化学
眼は液体窒素で瞬間的に凍結させ、５μｍ切片を、１％  ウシ胎仔血清／ＴＢＳ（１％ＦＣＳ／ＴＢＳ）中２μｇ／ｍｌに希釈した抗好中球抗体ＮＩＭＰ−Ｒ１４とともに２時間インキュベートした。洗浄後、角膜切片は、ストックから１％ＦＣＳ／ＴＢＳで１：２００希釈されたＦＩＴＣ結合体化ウサギ抗ラット抗体（Ｖｅｃｔｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｂｕｒｌｉｎｇａｍｅ，ＣＡ）とともにインキュベートした。スライドをＤＡＰＩ（Ｖｅｃｔｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）を含むＶｅｃｔａｓｈｉｅｌｄで封入し、各切片における好中球の数を蛍光顕微鏡によって調べ、直接計数によって定量した。
【０１０９】
実施例７：アポトーシスアッセイ
インビトロでの細胞の生存度はトリパンブルーによって測定した。角膜切片は、製造業者（Ｒｏｃｈｅ，Ｐｅｎｚｂｅｒｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ）の説明書に従って、ターミナルデオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼ媒介ｄＵＴＰニック末端標識（ＴＵＮＥＬ）試薬とともにインキュベートし、角膜におけるＴＵＮＥＬ陽性細胞の数は蛍光顕微鏡法によって定量した。
【０１１０】
実施例８：統計学
統計学的分析は、対応のないｔ検定（Ｐｒｉｓｍ；Ｇｒａｐｈ  Ｐａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）を使用して実施した。０．０５未満のｐ値を有意であると見なした。
【０１１１】
実施例９：角膜におけるＬＰＳ誘導性ＣＸＣケモカイン産生に対するエリトラン四ナトリウムの効果
ＬＰＳ誘導性角膜炎症におけるエリトラン四ナトリウムの役割は、実施例３に記載したコンタクトレンズ角膜炎症のモデルを使用して決定した。手短に述べると、Ｃ５７ＢＬ／６マウスの角膜は、３つの平行したひっかき傷によりその表面を擦過した。２μｌの３５０ｍｇ／ｍｌエリトランまたはプラセボを局所的に加え、ソフトコンタクトレンズからの２ｍｍ直径パンチを、図１に示すのと同様に角膜表面上に配置した。１時間後、レンズを取り外し、２μｌ  ＬＰＳ（２０ｍｇ／ｍｌ）またはＰａｍ３Ｃｙｓ（５ｍｇ／ｍｌ）を局所的に加え、そしてレンズを交換した。１時間後、レンズを取り外し、そして３時間後（刺激の４時間後）、角膜を解剖し、ホモジナイズし、そしてＣＸＣＬ１／ＫＣをＥＬＩＳＡによって測定した。
【０１１２】
図２は、ＬＰＳ刺激した角膜におけるＣＸＣＬ１／ＫＣが、プラセボと比較してエリトランによって有意に阻害されたことを示す（ｐ＝０．００３）。しかし、ＬＰＳ（およびプラセボ）の存在下で、ＣＸＣＬ１／ＫＣは有意に上昇した。しかし、角膜がＬＰＳの前にエリトラン四ナトリウムで前処理された場合には、ケモケイン産生は除去され、このモデルにおけるエリトラン四ナトリウムの拮抗的効果を実証する。
【０１１３】
本発明者らは、エリトラン四ナトリウムの特異性を決定するために、Ｐａｍ３Ｃｙｓでの刺激の前にエリトラン四ナトリウムで角膜を処理した。図３は、Ｐａｍ３Ｃｙｓ刺激角膜におけるＣＸＣＬ１／ＫＣにおいて、エリトランとプラセボの間で違いがなかったことを示す。この実験は、群あたり５匹のマウスを用いた２回の反復実験のうちの代表的なものである。
【０１１４】
実施例１０：角膜基質の細胞浸潤に対するエリトラン四ナトリウムの効果
Ｐａｍ３Ｃｙｓ／ＴＬＲ２誘導性角膜炎症に対してエリトラン四ナトリウムの効果はなく（図２、下のパネル）、このアンタゴニストの選択的効果をさらに実証した。
【０１１５】
実施例１１：中心角膜基質への細胞浸潤に対するエリトラン四ナトリウムの効果
細胞浸潤に対するエリトラン四ナトリウムの効果を決定するために、角膜を擦過し、エリトラン四ナトリウムまたは上記の実施例３に記載されるようなコンタクトレンズを用いるプラセボで処理した。２時間後、コンタクトレンズを取り外し、好中球浸潤のピークである２４時間後、角膜はインビボ共焦点顕微鏡法（ＣＯＮＦＯＳＣＡＮ）によって調べ、中心角膜の画像を取り込んだ。インビボ共焦点顕微鏡法画像は図４に示す。図４の画像は、ＬＰＳ単独でまたはプラセボの存在下のいずれかでの、コンタクトレンズに付随するＬＰＳへの曝露の２４時間後に、未処理マウスの角膜においては浸潤細胞が存在しないのに対して、ＬＰＳ処理角膜は中心角膜基質（小さな明るい反射性の細胞として検出される）において強烈な細胞浸潤を示したことを示す。極めて対照的に、本発明者らは、ＬＰＳの前にエリトラン四ナトリウムで処理した角膜は、中心角膜基質中における最小限の細胞浸潤を示したことを観察し、このことは、エリトラン四ナトリウム前処理が、この角膜炎症のモデルにおいて角膜基質への細胞浸潤を阻害することを示す。
【０１１６】
実施例１２：ＬＰＳ誘導性コンタクトレンズ関連好中球動員および角膜のかすみの発生に対する、エリトラン四ナトリウムを用いる前処理の効果
角膜は、上記の実施例３において議論されるように、そして図１において示されるように、コンタクトレンズ角膜炎症のモデルを使用して処理した。次いで、本発明者らは、２４時間後に、実施例４に従う角膜基質における反射率を測定することによって、角膜への細胞浸潤物に対するエリトラン四ナトリウムの阻害効果を定量した。前方から後方までの基質の各１μｍ切片を、光反射率について測定した。これらの測定を使用して曲線を生成した。曲線の下の面積は総浸潤物を表している。次いで、角膜切片あたりの好中球の数を直接計数した。
【０１１７】
図５および６は、擦過されかつコンタクトレンズ単独とインキュベートされた角膜が、切片あたり約５０個の好中球を有していたのに対して、ＬＰＳ処理角膜では３００個好中球／角膜切片よりも多かった。ＬＰＳの前にエリトラン四ナトリウムの局所適用を与えたマウスは、用量依存的な好中球数の減少を示し、５０％まで好中球数を減少させるためには０．３５ｍｇ／ｍｌが必要であった。外傷対照（Ｔｒ）は、生理食塩水にのみ曝露され、コンタクトレンズとともに２時間インキュベートした擦過された角膜であった。エリトランとプラセボの間の有意な違い（ｐ＜０．０５）はアスタリスクによって示される。反復実験は、０．３５ｍｇ／ｍｌが最小阻害濃度であったことを示した。
【０１１８】
図７および８は、Ｐａｍ３Ｃｙｓで刺激された角膜における好中球浸潤および反射率を示す。ＴＬＲ２活性化は、好中球浸潤および角膜のかすみの発生を誘導した。最高濃度のエリトラン四ナトリウムでの前処理は、好中球浸潤または総反射率のいずれに対しても効果がなかった。まとめると、これらの知見は、エリトラン四ナトリウムは、ＴＬＲ４誘導性角膜炎症に対して用量依存的なアンタゴニスト効果を有するが、ＴＬＲ２誘導性角膜炎症に対しては有さないことを実証する。
【０１１９】
実施例１３：ＬＰＳ誘導性角膜炎症後に適用されたエリトラン四ナトリウムの効果
エリトラン四ナトリウムは応答が開始した後で角膜炎症を阻害できるか否かを決定するために、上記のように、角膜を擦過し、ＬＰＳで刺激した。本発明者らは、ＬＰＳ刺激の１時間後にエリトラン四ナトリウムを加えた。このプロトコールは、エリトラン四ナトリウムで前処理したマウスと、エリトラン四ナトリウムおよびＬＰＳを同時に与えたマウスのいずれかを用いて並行して実施した。好中球浸潤および角膜のかすみは以前と同様に試験し、結果は図９〜１２に示す。  
【０１２０】
図９および１０は、ＬＰＳ誘導性好中球浸潤および角膜のかすみはプラセボと比較してすべてのエリトラン四ナトリウム群において有意に減少したことを示し、このことは、炎症応答が開始した後でさえ、拮抗作用は有効なままであることを示す。ある実験において、エリトラン四ナトリウムは、３時間後に再度適用したが（コンタクトレンズがもはや存在しないとき）、しかし、これと単独のエリトラン四ナトリウム処理の間で有意な違いはなかった。図１１および１２は、ＬＰＳ刺激後の治療用エリトラン四ナトリウムについての用量応答を示す。アスタリスクは、エリトランとプラセボの間で有意な違い（ｐ＜０．０５）を示す。好中球数は各プロトコールにおいて有意に低いのに対して、１．１ｍｇ／ｍｌより低い濃度は有意な効果を示さなかったことは注目すべきことである。これらの実験は３回反復して同様の結果であった。
【０１２１】
実施例１４：角膜上皮におけるアポトーシスに対するエリトラン四ナトリウムの効果
実施例７における実験は、エリトラン四ナトリウムが角膜上皮に対するアポトーシス誘発効果があるか否かを決定するために実施した。マウスは、上記のようにＬＰＳの前に２．２μｇ  エリトラン四ナトリウムで前処理し、眼は急速冷凍した。本発明者らは、アポトーシス細胞を同定するために、５μｍの角膜切片上でＴＵＮＥＬアッセイを使用した。総細胞はＤＡＰＩを使用して同定した。図１３に示されるように、本発明者らは、ＬＰＳの存在下または非存在下のいずれかでエリトラン四ナトリウムで処理した角膜上皮においてＴＵＮＥＬ陽性細胞は観察できなかった。本発明者らは、単独でまたはプラセボを伴うかのいずれかでＬＰＳ処理した角膜の角膜基質においてＴＵＮＥＬ陽性細胞を検出し、これは好中球の存在と一致している（示さず）。これらの観察は、このモデルにおいて、エリトラン四ナトリウムのアポトーシス誘発効果は存在しないことを示す。
【０１２２】
実施例１５：ヒト角膜上皮細胞、マクロファージ、および好中球によるＬＰＳ誘導性ＩＬ−８産生に対するエリトラン四ナトリウムの効果
実施例１０はエリトラン四ナトリウムがインビボで阻害的役割を有することを示したので、次に、本発明者らは、角膜における特定の細胞型によるＬＰＳ誘導性のＣＸＣケモカインＩＬ−８の産生に対するエリトラン四ナトリウムの効果を試験した。通常の哺乳動物角膜上皮は、ＴＬＲリガンドに応答できる角膜上皮細胞の外部多層、常在するマクロファージおよびＴＬＲを発現する樹状細胞、ならびに好中球を含む。本発明者らは代表的な細胞系統を利用した。
【０１２３】
ヒト角膜上皮細胞（ＨＣＥ−Ｔ）、マクロファージ（Ｕ９３７）、および好中球（ＨＬ−６０）から誘導した細胞系統は、エリトラン四ナトリウムまたはプラセボの存在下で、ＬＰＳまたはＰａｍ３Ｃｙｓで刺激させた。３時間後（Ｕ９３７細胞およびＨＬ−６０細胞）または２４時間後（ＨＣＥ−Ｔ  細胞）、培養上清中のＩＬ−８レベルはＥＬＩＳＡによって定量した。図１４は、ＨＣＥ−Ｔ細胞が、０．２μｇ／ｍｌの外因性ＭＤ−２（ＬＰＳに対するＨＣＥ応答のために必須である）の存在下で９００ｎｇ／ｍｌ  ＬＰＳ、および示された濃度のエリトランまたはプラセボとともにインキュベートされたことを示す。反応しなかった対照には、ＭＤ−２単独（Ｍ）、プラセボ単独（Ｐ）、エリトラン単独（Ｅ）、ＭＤ−２非存在下でのＬＰＳ（Ｌ）が含まれる。図１５は、同様の条件下で、５００ｎｇ／ｍｌ  Ｐａｍ３Ｃｙｓとともにインキュベートした角膜上皮細胞を示す。図１６および１７は、エリトランまたはプラセボの存在下での１０ｎｇ／ｍｌ  ＬＰＳまたは５００ｎｇ／ｍｌ  Ｐａｍ３Ｃｙｓで刺激されたマクロファージを示す。図１８および１９は、１ｎｇ／ｍｌ  ＬＰＳまたは５００ｎｇ／ｍｌ  Ｐａｍ３Ｃｙｓおよびエリトランまたはプラセボで刺激された好中球を示す。ＬＰＳ濃度は、最適なＩＬ−８産生を示す予備的データに基づいた。ＬＰＳについて各細胞型のエリトランによる用量依存的阻害であるが、Ｐａｍ３Ｃｙｓ刺激細胞ではないことは注目すべきことである。グラフはサンプルあたり３つのウェルの平均＋／−ＳＥＭである。実験は３回反復し、同様の結果であった。
【０１２４】
図１４〜１９は、各細胞型がＬＰＳに応答してＩＬ−８を産生したことを示す。さらに、エリトラン四ナトリウムは、用量依存的に、ＬＰＳ誘導性ＩＬ−８産生を阻害したのに対して、Ｐａｍ３Ｃｙｓ誘導性応答に対しては効果がなかった。マクロファージおよび好中球細胞系統は高レベルのＩＬ−８を産生し、これは、１ｎｇ／ｍｌエリトラン四ナトリウムによって阻害された。対照的に、外因性ＭＤ−２の存在下でのみＬＰＳに対して応答するヒト角膜上皮細胞は、より少ないＩＬ−８を産生し、阻害するためにより高用量のエリトラン四ナトリウムを必要とした。
【０１２５】
実施例１６：抗生物質で死滅されたＰ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａによって誘導される角膜炎症はＴＬＲ／４ＭＤ−２依存性であり、エリトラン四ナトリウムによって阻害される
Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａは、コンタクトレンズ関連細菌性角膜炎の主要な原因であるので、本発明者らは、Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ誘導性角膜炎症のモデルにおけるエリトラン四ナトリウムの効果もまた調べた。本発明者らは、熱によるまたはトブラマイシンとの短時間のインキュベーション後のいずれかで死滅したＰ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａによって誘導される角膜炎症において違いがないことを見い出した（データ示さず）。Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ誘導性角膜炎症におけるＴＬＲ４およびＭＤ−２の役割を決定するために、本発明者らは、細菌を死滅させるために（プレーティングの後で確認）Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａをトブラマイシン中で３０分間インキュベートし、１×１０７個の菌体を含む２μｌ細菌懸濁液（抗生物質の存在下）を、Ｃ５７ＢＬ／６、ＴＬＲ４−／−、およびＭＤ−２−／−マウスの擦過された角膜表面に加えた。細菌は、シリコンハイドロゲルコンタクトレンズからの２ｍｍ直径パンチで２時間覆った。２４時間後、角膜炎症を調べた。図２０〜２２は、Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ処理されたＣ５７ＢＬ／６マウスの角膜が角膜基質への顕著な好中球浸潤を有したことを示す；しかし、好中球浸潤、角膜の厚さおよび角膜のかすみは、Ｃ５７ＢＬ／６マウスの角膜と比較して、ＴＬＲ４−／−およびＭＤ−２−／−マウスの角膜において有意に低かった。同様の結果はＬＰＳについても見い出された（示さず）。
【０１２６】
図２３〜２５は、エリトラン四ナトリウムの存在下で（２μＬ  Ｈ２Ｏ中２．２μｇ  エリトラン四ナトリウム）、トブラマイシンで死滅されたＰ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａが角膜に加えられたときに、角膜炎症のこれらのマーカーの各々が、プラセボと比較して有意に阻害されたことを示す。これらの知見は、抗生物質で死滅したＰ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａによって誘導される角膜炎症がＴＬＲ４／ＭＤ−２依存性であり、エリトラン四ナトリウムによって阻害できることを示す。
【０１２７】
本発明の上記の説明から、当業者は、改良、変更、および改変することができる。当業者の範囲内にあるこのような改良、変更、および改変は、添付の特許請求の範囲によって網羅されることが意図される。本願中のすべての参考文献、刊行物、および特許は、それらの全体が参照により本明細書に援用される。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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