(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
水系媒体中の２４０ｎｍ未満の平均粒径を有する固体ナノ粒子の安定な分散液を調製するためのプロセスであって、前記プロセスは、
（ａ）水および乳化剤としてのヒトアルブミンの生体適合性ポリマーを含む水相と、
（ｂ）水不溶性の物質、水非混和性有機溶媒、必要に応じて界面潤滑剤としての水混和性有機溶媒、およびオストワルド熟成阻害剤を含む有機相と、
を混合するステップと、
（ｃ）高圧ホモジナイザーを使用して水中油型エマルジョンを形成するステップと、
（ｄ）前記媒体から前記水非混和性有機溶媒、および界面潤滑剤として使用した前記任意の有機溶媒を真空下で除去するステップと、
を含み、これによって前記阻害剤および前記水不溶性の物質を含む固体粒子を形成し、前記オストワルド熟成阻害剤はコレステロール、ステアリン酸コレステリル、ヘキサデカン酸ヘキサデシル、グリセリルトリステアレート、およびそれらの組合せからなる群より選択される阻害剤であることを特徴とするプロセス。
【請求項２】
前記水不溶性の物質が水不溶性の薬理学的に活性な化合物である、請求項１に記載のプロセス。
【請求項３】
前記水不溶性の薬理学的に活性な化合物は微小管阻害剤である、請求項２に記載のプロセス。
【請求項４】
前記微小管阻害剤が、タキサン、エポチロン、エポチロン誘導体、ビンカアルカロイド、ポドフィロトキシンおよびその誘導体、コルヒチンおよびその誘導体、ドラスタチンおよびその誘導体、リゾキシンおよびその誘導体、エクチナサイジン、コンブレタスタチンおよびその誘導体、インドール誘導体、ディスコデルモライドおよびその誘導体、スポンジスタチンおよびその誘導体、クリプトフィシンおよびその誘導体、ジデムニンおよびその誘導体、グリセオフルビンおよびその誘導体、メイタンシンおよびその誘導体、ハリコンドリンおよびその誘導体、ヘミアスタリンおよびその誘導体ならびにラメラリンおよびその誘導体からなる群から選択される、請求項３に記載のプロセス。
【請求項５】
前記微小管阻害剤がドセタキセルおよびパクリタキセルからなる群から選択される、請求項３に記載のプロセス。
【請求項６】
前記微小管阻害剤がエポチロン−Ａおよびエポチロン−Ｂである、請求項３に記載のプロセス。
【請求項７】
前記微小管阻害剤がＭＡＣ−３２１、ＴＬ−９０９およびＴＬ−３１０である、請求項３に記載のプロセス。
【請求項８】
前記オストワルド熟成阻害剤が、コレステロールおよびヘキサデカン酸ヘキサデシルの混合物である、請求項１に記載のプロセス。
【請求項９】
前記オストワルド熟成阻害剤が、コレステロールおよびグリセリルトリステアレートの混合物である、請求項８に記載のプロセス。
【請求項１０】
前記オストワルド熟成阻害剤が、コレステロールおよびステアリン酸コレステリルの混合物である、請求項１に記載のプロセス。
【請求項１１】
前記有機相がさらに、６個以上の炭素原子を含む長鎖脂肪族アルコールである共阻害剤を備える、請求項１に記載のプロセス。
【請求項１２】
前記有機相がさらに、コレステロールである共阻害剤を含む、請求項１に記載のプロセス。
【請求項１３】
前記オストワルド熟成阻害剤が前記分散液中の固体粒子を形成するのに充分、前記水不溶性の物質と混和性であり、前記粒子が前記物質および前記オストワルド熟成阻害剤の単一相の混合物を含む、請求項１に記載のプロセス。
【請求項１４】
水系媒体中の５００ｎｍ未満の平均粒径を有する水不溶性の薬理学的に活性な物質の固体ナノ粒子の安定な分散液を調製するためのプロセスであって、
（ａ）水および乳化剤としてのヒトアルブミンの生体適合性ポリマーを含む水相と、
（ｂ）水不溶性の物質、水非混和性有機溶媒、必要に応じて界面潤滑剤としての水混和性有機溶媒、および粒子成長阻害剤を含む有機相と、
を混合するステップと、
（ｃ）高圧ホモジナイザーを使用して水中油型エマルジョンを形成するステップと、
（ｄ）前記分散液から水非混和性有機溶媒、および界面潤滑剤として使用した前記任意の水混和性有機溶媒を真空下で除去するステップと、
を含み、これによって前記粒子成長阻害剤および前記水不溶性の物質を含む固体粒子を形成し、
前記粒子成長阻害剤は前記薬理学的に活性な物質よりも水溶性が小さく、前記オストワルド熟成阻害剤はコレステロール、ステアリン酸コレステリル、ヘキサデカン酸ヘキサデシル、グリセルトリステアレート、およびそれらの組合せからなる群から選択される、プロセス。
【請求項１５】
前記固体粒子の平均粒径が５００ｎｍ未満であることを特徴とする、請求項１４に記載のプロセス。
【請求項１６】
請求項１から請求項１５のいずれか１項に記載のプロセスによって調製される安定な水系分散液であって、前記分散液は、連続する水相および前記連続する水相に分散した固体粒子を含み、前記固体粒子はオストワルド熟成阻害剤および水不溶性の物質を含み、前記オストワルド熟成阻害剤はコレステロール、ステアリン酸コレステリル、ヘキサデカン酸ヘキサデシル、グリセルトリステアレート、およびそれらの組合せからなる群より選択される、安定な水系分散液。
【請求項１７】
前記オストワルド熟成阻害剤はコレステロール、ステアリン酸コレステリル、ヘキサデカン酸ヘキサデシル、グリセルトリステアレート、およびそれらの組合せからなる群より選択される、請求項１から請求項１５のいずれか１項に記載のプロセスによって調製される、オストワルド熟成阻害剤および水不溶性の物質を含む固体粒子。
【請求項１８】
前記水不溶性の物質が水不溶性の薬理学的に活性な物質である、請求項１７に記載の固体粒子。
【請求項１９】
薬理学的に許容できる担体または希釈剤と合わせて、請求項１から請求項１８のいずれか１項に記載の固体粒子を含む医薬製剤。
【請求項２０】
水系媒体中の水不溶性の物質の固体ナノ粒子の分散液におけるオストワルド熟成を阻害するプロセスであって、
（ａ）水および乳化剤としてのヒトアルブミンの生体適合性ポリマーを含む水相と、
（ｂ）水不溶性の物質、水非混和性有機溶媒、必要に応じて界面潤滑剤としての水混和性有機溶媒、およびオストワルド熟成阻害剤を含む有機相と、
を混合するステップと、
（ｃ）高圧ホモジナイザーを使用して水中油型エマルジョンを形成するステップと、
（ｄ）前記分散液から前記水非混和性有機溶媒、および界面潤滑剤として使用した任意の水混和性有機溶媒を真空下で除去するステップと、
を含み、これによって前記オストワルド熟成阻害剤および前記水不溶性の物質を含む固体粒子を形成して、水系媒体中の前記水不溶性の固体粒子の分散液をもたらし、前記オストワルド熟成阻害剤はコレステロール、ステアリン酸コレステリル、ヘキサデカン酸ヘキサデシル、グリセルトリステアレート、およびそれらの組合せからなる群より選択される
、方法。
【請求項２１】
前記固体粒子の平均粒径が１μｍ未満である、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記生体適合性ポリマーを含む前記水相のｐＨが３〜１０の間に調整される、請求項１に記載のプロセス。
【請求項２３】
請求項１に記載のプロセスによって製造される水不溶性の医薬品物質と、さらに薬理学的に許容できる防腐剤とを含む、固体ナノ粒子組成物。
【請求項２４】
請求項１に記載のプロセスによって製造される水不溶性の医薬品物質と、さらに生体適合性のイオン性界面活性剤および非イオン性界面活性剤とを含む、固体ナノ粒子組成物。
【請求項２５】
請求項１に記載のプロセスによって製造される水不溶性の医薬品物質と、さらに生体適合性キレート剤とを含む、固体ナノ粒子組成物。
【請求項２６】
請求項１に記載のプロセスによって製造される水不溶性の医薬品物質と、さらに生体適合性抗酸化剤とを含む、固体ナノ粒子脂質組成物。
【請求項２７】
請求項１に記載のプロセスによって製造される水不溶性の医薬品物質と、さらに生体適合性緩衝剤とを含む、固体ナノ粒子脂質組成物。
【請求項２８】
請求項１に記載のプロセスによって製造される水不溶性の医薬品物質と、さらに生体適合性賦形剤とを含む、固体ナノ粒子脂質組成物。
【請求項２９】
前記薬理学的に許容できる防腐剤が、フェノール、クロロブタノール、ベンジルアルコール、メチルパラベン、プロピルパラベン、メチルパラベンナトリウム、プロピルパラベンナトリウム、塩化ベンザルコニウムおよび塩化セチルピリジニウムから選択される、請求項２３に記載の固体ナノ粒子組成物。
【請求項３０】
前記生体適合性キレート剤が、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）、エチレングリコール−ビス（２−アミノエチルエーテル）−四酢酸（ＥＧＴＡ）、Ｎ−（ヒドロキシエチル）−エチレンジアミン三酢酸（ＨＥＤＴＡ）、ニトリロ三酢酸（ＮＴＡ）、トリエタノールアミン、８−ヒドロキシキノリン、クエン酸、酒石酸、リン酸、グルコン酸、糖酸、チオジプロピオン酸、アセトンジカルボン酸、ジ（ヒドロキシエチル）グリシン、フェニルアラニン、トリプトファン、グリセリン、ソルビトール、ジグライムおよびこれらの薬理学的に許容できる塩から選択される、請求項２５に記載の固体ナノ粒子組成物。
【請求項３１】
前記生体適合性抗酸化剤が、アスコルビン酸誘導体（アスコルビン酸、エリソルビン酸、アスコルビン酸ナトリウムなど）；チオール誘導体（チオグリセロール、システイン、アセチルシステイン、シスチン、ジチオエリスリトール、ジチオトレイトール、グルタチオンなど）；トコフェロール；ブチル化ヒドロキシアニソール；ブチル化ヒドロキシトルエン；亜硫酸塩（硫酸ナトリウム、亜硫酸水素ナトリウム、アセトン亜硫酸水素ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、亜硫酸ナトリウム、ホルムアルデヒドスルホキシル酸ナトリウム、チオ硫酸ナトリウムなど）およびノルジヒドログアヤレト酸から選択される、請求項２６に記載の固体ナノ粒子脂質組成物。
【請求項３２】
前記緩衝剤が、第１リン酸ナトリウムおよび第二リン酸ナトリウム、安息香酸ナトリウム、安息香酸カリウム、クエン酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、酒石酸ナトリウムおよび他の薬剤である、請求項２７に記載の固体ナノ粒子組成物。
【請求項３３】
前記賦形剤が、マンニトール、ソルビトール、フルクトース、グルコース、ラクトース、スクロース、トレハロースおよび任意の他の水溶性糖類である、請求項２８に記載の固体ナノ粒子組成物。
【請求項３４】
前記阻害剤に対する前記水不溶性の物質の重量比が９９：１〜１：９９である、請求項１に記載のプロセス。
【請求項３５】
請求項１に記載の前記プロセスであって、前記水不溶性の物質を含む水溶液が、無菌環境で０．２２ミクロンのフィルターを通して濾過することにより滅菌される、プロセス。
【請求項３６】
前記医薬組成物が種々のサイズのバイアルの中でフリーズドライ法にかけられるかまたは凍結乾燥され、後の哺乳動物に対しての使用に適した真空条件下で栓で塞がれる、請求項３５に記載のプロセス。
【請求項３７】
前記哺乳動物がヒトである、請求項３６に記載の前記プロセス。
【請求項３８】
前記水不溶性の医薬品物質の量が０．０１ｍｇ／ｍＬ〜１００ｍｇ／ｍＬである、請求項３５に記載のプロセス。
【請求項３９】
細胞増殖性疾患を治療する方法に用いられる医薬組成物であって、かかる治療を必要とする患者に、治療上有効量の請求項３８に記載のプロセスにより製造された組成物を投与することを目的とした医薬組成物。
【請求項４０】
前記生体適合性ポリマーが天然に存在するポリマー、半合成ポリマー、合成ポリマー、またはこれらの組合せである、請求項１に記載のプロセス。
【請求項４１】
前記合成ポリマーが、合成ポリアミノ酸、ポリビニルアルコール、ポリメタクリル酸ヒドロキシエチル、ポリアクリル酸、ポリエチルオキサゾリン、ポリアクリルアミド、ポリビニルピロリジノン、ポリアルキレングリコール、ポリラクチド、ポリグリコリド、ポリカプロラクトン、またはこれらのコポリマー、ならびにこれらのうちの任意の２つ以上の混合物から選択される、請求項４０に記載のプロセス。
【請求項４２】
請求項２０から請求項２２のいずれか１項に記載のプロセスによって調製される、オストワルド熟成阻害剤および水不溶性の物質を含む固体粒子であって、前記オストワルド熟成阻害剤はコレステロール、ステアリン酸コレステリル、ヘキサデカン酸ヘキサデシル、グリセルトリステアレート、およびそれらの組合せからなる群より選択されることを特徴とする、オストワルド熟成阻害剤および水不溶性の物質を含む固体粒子。
【請求項４３】
前記生体適合性ポリマーを含む前記水相のｐＨが３〜１０の間に調整される、請求項１４に記載のプロセス。
【請求項４４】
請求項１４に記載のプロセスによって製造される水不溶性の医薬品物質と、さらに薬理学的に許容できる防腐剤とを含む、ナノ粒子組成物。
【請求項４５】
請求項１４に記載のプロセスによって製造される水不溶性の医薬品物質と、さらに生体適合性イオン性界面活性剤および非イオン性界面活性剤とを含む、固体ナノ粒子組成物。
【請求項４６】
請求項１４に記載のプロセスによって製造される水不溶性の医薬品物質と、さらに生体適合性キレート剤を含む、固体ナノ粒子組成物。
【請求項４７】
請求項１４に記載のプロセスによって製造される水不溶性の医薬品物質と、さらに生体適合性抗酸化剤とを含む、固体ナノ粒子脂質組成物。
【請求項４８】
請求項１４に記載のプロセスによって製造される水不溶性の医薬品物質と、さらに生体適合性緩衝剤とを含む、固体ナノ粒子脂質組成物。
【請求項４９】
請求項１４に記載のプロセスによって製造される水不溶性の医薬品物質と、さらに生体適合性賦形剤とを含む、固体ナノ粒子脂質組成物。
【請求項５０】
前記生体適合性ポリマーを含む前記水相のｐＨが３〜１０の間に調整される、請求項２０に記載のプロセス。
【請求項５１】
請求項２０に記載のプロセスによって製造される水不溶性の医薬品物質と、さらに薬理学的に許容できる防腐剤とを含む、ナノ粒子組成物。
【請求項５２】
請求項２０に記載のプロセスによって製造される水不溶性の医薬品物質と、さらに生体適合性イオン性界面活性剤および非イオン性界面活性剤とを含む、固体ナノ粒子組成物。
【請求項５３】
請求項２０に記載のプロセスによって製造される水不溶性の医薬品物質と、さらに生体適合性キレート剤とを含む、固体ナノ粒子組成物。
【請求項５４】
請求項２０に記載のプロセスによって製造される水不溶性の医薬品物質と、さらに生体適合性抗酸化剤とを含む、固体ナノ粒子脂質組成物。
【請求項５５】
請求項２０に記載のプロセスによって製造される水不溶性の医薬品物質と、さらに生体適合性緩衝剤とを含む、固体ナノ粒子脂質組成物。
【請求項５６】
請求項２０に記載のプロセスによって製造される水不溶性の医薬品物質と、さらに生体適合性賦形剤とを含む、固体ナノ粒子脂質組成物。
【請求項５７】
前記阻害剤に対する前記水不溶性の物質の重量比が９９：１〜１：９９である、請求項１４に記載のプロセス。
【請求項５８】
請求項１４に記載の前記プロセスであって、前記水不溶性の物質を含有する培地が、無菌環境で０．２２ミクロンのフィルターを通して濾過することにより滅菌される、プロセス。
【請求項５９】
前記阻害剤に対する前記水不溶性の物質の重量比が９９：１〜１：９９である、請求項２０に記載のプロセス。
【請求項６０】
請求項２０に記載の前記プロセスであって、前記水不溶性の物質を含む培地が、無菌環境で０．２２ミクロンのフィルターを通して濾過することにより滅菌される、プロセス。
【請求項６１】
前記固体粒子の平均粒径が３００ｎｍ未満である、請求項１４に記載のプロセス。
【請求項６２】
前記固体粒子の平均粒径が２２０ｎｍ未満である、請求項１４に記載のプロセス。
【請求項６３】
前記固体粒子の平均粒径が５００ｎｍ未満である、請求項２０に記載のプロセス。
【請求項６４】
前記固体粒子の平均粒径が２２０ｎｍ未満である、請求項２０に記載のプロセス。
【請求項６５】
前記生体適合性ポリマーを含む前記水相のｐＨが５〜８の間に調整される、請求項１に記載のプロセス。
【請求項６６】
請求項３５に記載のプロセスによって製造される水不溶性の医薬品物質を含み、前記水不溶性の医薬品物質の量が０．１ｍｇ／ｍＬ〜５０ｍｇ／ｍＬである、固体ナノ粒子組成物。
【請求項６７】
請求項３５に記載のプロセスによって製造される水不溶性の医薬品物質を含み、前記水不溶性の医薬品物質の量が０．５ｍｇ／ｍＬ〜１０ｍｇ／ｍＬである、固体ナノ粒子組成物。
【請求項６８】
前記生体適合性ポリマーを含む前記水相のｐＨが５〜８の間に調整される、請求項１４に記載のプロセス。
【請求項６９】
前記生体適合性ポリマーを含む前記水相のｐＨが５〜８の間に調整される、請求項２０に記載のプロセス。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願の相互参照）
本願は、２００６年７月２４日出願の、本発明者らによる米国特許仮出願第６０／８３２５８７号の利益を主張する。
【０００２】
本発明は、ナノ粒子を作製するためのプロセスに関する。より具体的には、本発明は、水不溶性の物質が水に溶解し得るようにその水不溶性の物質のナノ粒子を作製するためのプロセスに関する。さらにより具体的には、本発明は、水不溶性医薬品を水系媒体で送達することができるように、その水不溶性の医薬品のナノ粒子を作製するためのプロセスに関する。
【背景技術】
【０００３】
ほとんどの抗癌剤の治療効力は、腫瘍部位への十分な局所的送達を実現することに基礎を置いている。多くの癌用化学療法薬は生体外で非常に有効であるが、生体内ではそれほど有効でないことが示されている。この不一致は、薬物を腫瘍部位に治療レベルで送達することの難しさ、および回復するためにはほとんど１００％の細胞殺滅が必要であることに一部は起因すると考えられている（Ｊａｉｎ  １９９４；Ｔａｎｎｏｃｋ  １９９８）。治療用分子であるサイトカイン、抗体、およびウイルスベクターは、血管壁を横断することが困難であるため、腫瘍に作用する能力には限界があることが多い（Ｙｕａｎ  １９９８）。不十分な特異的送達は、現在の癌用化学療法薬に関して認められるしばしば低い治療指数につながる可能性がある。これは、これらの化合物の広範な拡散および非特異的作用に起因する重大な全身毒性に姿を変える。
【０００４】
別の問題は、投与に適した薬理学的に許容できるビヒクル中のいくつかの強力な化学療法薬の溶解性である。化学療法で広く使用されている２種類の分子は、微小管阻害剤（タキサン誘導体など）およびトポイソメラーゼＩ阻害剤（カンプトテシン（ｃａｍｐｔｈｏｔｈｅｃｉｎ）誘導体など）である。しかしながら、これらの重要な２種類の薬物がヒトにとって非常に有毒なビヒクル中で処方されてきたことが、実際、現在公知である。本発明は、水不溶性の医薬品物質の溶解性およびビヒクル毒性の問題を克服するための新規な医薬組成物を開示するためになされた。
【０００５】
（治療薬としての微小管阻害剤）
パクリタキセル（タキソール、図１）は、Ｗａｎｉら（１９７１）によってタイヘイヨウイチイの木（Ｔａｘｕｓ  ｂｒｅｖｉｆｏｌｉａ）から単離された天然のジテルペン産物である。タキサン、パクリタキセルおよびドセタキセル（特許文献１）は、微小管を安定化し腫瘍細胞死に導く新規な種類の抗癌剤に属する。同定された最初の微小管安定剤であるパクリタキセル（タキソール（登録商標）、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ  Ｃｏ．、米国、ニュージャージー州）が多くの種類の癌の治療にとって大きな価値があることは明らかになっている（Ｒｏｗｉｎｓｋｙ  ２００１、Ｈｏｌｔｏｎ  １９９５）。パクリタキセルの臨床的成功によって、第二世代のタキサン、ドセタキセル（タキソテール（登録商標）、Ｓａｎｏｆｉ−Ａｖｅｎｔｉｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ、米国、ニュージャージー州）が開発され、同様の作用機構をもつ他の化合物の集中的な探索が開始された。数種類の構造的に多様な微小管安定化化合物が同定されている。同定された非タキサン安定剤である、エポチロン（Ｂｏｌｌａｇ  １９９５）、Ｔａｃｃａｌｏｎｏｌｉｄｅ（Ｔｉｎｌｅｙ  ２００３）およびディスコデルモライド（ｄｉｓｃｏｄｅｒｍｏｌｉｄｅ）（Ｍｏｏｂｅｒｒｙ  ２００４および１９９９；Ｍａｒｔｅｌｌｏ  ２０００）は優れた前臨床活性を有しており、抗癌剤として臨床試験で評価されている。
【０００６】
微小管は、多くの細胞機能に関与するチューブリンポリマーであり（Ｄｕｓｔｉｎ  １９８４）、その多くの細胞機能のうちの１つが、細胞分裂の間に新しく形成する細胞の極に移動する染色体にとって必要な紡錘体の形成である（Ａｖｉｌａ  １９９０）。細胞機能にとって微小管が重要であることから、微小管は生物学的な微小管の毒に対する鋭敏な標的となる。微小管の安定化または破壊という点で微小管と相互作用するすべての化合物は微小管阻害剤と呼ばれる。それらは、細胞毒性効果を有し、そして細胞を殺すこともある。微小管は細胞増殖において有糸分裂を行うために必要とされるので、微小管阻害剤は、正常細胞よりも頻繁に分裂する癌細胞を主に攻撃するであろう。それゆえ、それらの多くは非常に重要な抗腫瘍化合物である。
【０００７】
チューブリンは、四次構造が２つのポリペプチドサブユニット、α−チューブリンおよびβ−チューブリンから構成されているタンパク質である。高等真核生物における各サブユニットについていくつかのイソタイプが記載されている。微小管の機能は、その重合および解重合する能力に基づいている。このプロセスは非常に動的であり、この細胞構造の急激な短縮または伸長を伴う。チューブリンはＧＴＰ結合タンパク質であり、このヌクレオチドがタンパク質に結合することは、微小管重合のために必要とされるが、他方、重合したチューブリンに結合したＧＴＰの加水分解は、微小管の解重合のために必要とされる。正常細胞における微小管安定性は、微小管安定化を促す微小管結合タンパク質（ＭＡＰ）と呼ばれるいくつかのタンパク質の存在下で調節される。微小管重合を調節する細胞機構は、Ｃａ２＋の濃度に非常に鋭敏である。ほとんどの真核細胞の休止状態に特徴的な低い細胞質Ｃａ２＋濃度は微小管重合を促し、Ｃａ２＋の局所的増加は微小管解離（ｄｉｓａｓｓｅｍｂｌｙ）を引き起こす（Ｇｅｌｆｏｒｄ  １９９１）。微小管は、各々がα−チューブリンおよびβ−チューブリンを有する１つの分子からなるタンパク質二量体の重合を介して形成される。二量体およびポリマーは動的平衡の状態にあり、そのネットワークは機能上の要求に柔軟かつ迅速に反応することができる。このポリマーは通常は内径および直径がそれぞれ１４ｎｍおよび２８ｎｍの微細な無分岐の円筒、いわゆる微小管を形成する（図２；Ｋｉｎｇｓｔｏｎ  ２００１）。重合は、α，β−二量体を一緒に結合して短いプロトフィラメントを形成することによって開始され、続いてそのプロトフィラメントの１３本が並んで配列し微小管を形成する。引き続くこの微小管の成長は有極性であり、主に、プロトフィラメントのいわゆるプラス端でさらなる二量体の付加によって起こる。付加にはＧＴＰが関与する。このＧＴＰは二量体に結合され、ＧＤＰに切断され、このＧＤＰはチューブリンに結合したままで残る。ＧＴＰに対する結合部位は、ｂ−サブユニット上にある。細胞がＧＴＰ−チューブリン二量体に富むようになると、ＧＤＰ−チューブリンへの加水分解が重合速度に遅れ、α，β−チューブリン−ＧＴＰキャップがプロトフィラメントのプラス端で生成し、微小管のさらなる成長を遮断する。
【０００８】
微小管阻害剤は、様々な生物学的供給源に由来して細胞骨格機能への強い影響力および強い毒性を有する化学的に非常に変化に富んだ一群の化合物を表す。細胞における微小管機能は、チューブリンが重合する能力または微小管が解重合する能力に依存する。これらのプロセスに影響を及ぼすことができる化合物、すなわち微小管阻害剤（抗チューブリン薬、抗有糸分裂薬などとも呼ばれる）は、その作用機構に従って４つの群に分けることができる。１．ＧＴＰ部位に結合する化合物；２．コルヒチン部位に結合する化合物；３．微小管安定剤として影響を及ぼす化合物；および４．微小管ネットワーク破壊を行う化合物。
【０００９】
タキソールの構造には、２つの芳香環およびこの薬物の活性に必要なオキセタン環を含む四環式構造が存在する。この化合物の一次作用は、微小管を安定化し、その解重合を防止することである（図２）。このように、タキソールは細胞周期の中のＧ２と有糸分裂との間で細胞を増殖させることを遮断するはずである。タキソールの結合は、β−チューブリンのアミノ末端の異なる場所で発生するようであるが、α−チューブリンの中間領域への結合もまた報告されている（Ｌｏｅｂ  １９９７）。
【００１０】
新しい種類の微小管安定化化合物が細菌Ｓｏｒａｎｇｉｕｍ  ｃｅｌｌｕｌｏｓｕｍから単離された。これらのマクロライド化合物は、それらの典型的な構造単位がエポキシド、チアゾール、およびケトンであるため、エポチロン（図３）と呼ばれた（Ｋｏｗａｌｓｋｉ  １９９７；Ｓｃｈｉｎｚｅｒ  １９９６）。エポチロンは、２つの構造的に異なるもの、エポチロンＡおよびエポチロンＢとして存在する。エポチロンＢは付加的なメチル基を含む（Ｈｙｆｌｅ  １９９６）。エポチロンＡは、細菌代謝の主要産物であり、エポチロンＢの収率はエポチロンＡの収率の２０〜３０％に達する。化学構造の小さな違いにもかかわらず、多くの試験系においてエポチロンＢは、約１０倍より有効である。これらの化合物は、微小管の重合を安定化するという顕著な効果を示し、それらは発酵プロセスによって大規模に容易に得られる（Ｇｅｒｔｈ  １９９４）。両方のエポチロンは、非常に狭い範囲の活性を示し、タキソールがするように細胞をＧ２−Ｍ相で休止させる。エポチロンの全合成は、多くの研究室から報告された（Ｂａｌｏｇ  １９９６；Ｓｕ  １９９７；Ｙａｎｇ  １９９７；Ｓｃｈｉｎｚｅｒ  １９９７）。
【００１１】
臨床用途を有するタキソールの興味深い半合成アナログは、Ｃ−４位およびＣ−５位でオキセタン環に、そしてＣ−１３でエステル側鎖に連結されたタキサン環を含む化合物であるドセタキセル（タキソテール；図２）である。
【００１２】
その幅広い臨床的有用性にもかかわらず、パクリタキセルおよびドセタキセルが水に不要であることに起因して、それらを処方する上での困難さが存在する。パクリタキセルの水溶性は、約１２ｍｇ／リットルにすぎない。パクリタキセルおよびドセタキセルは、ほとんどの薬理学的に許容できる溶媒にも不溶であり、しかもより溶解しやすい塩を形成するための適切な化学官能性を欠く。その結果、パクリタキセルおよびドセタキセルの非経口投与のために特別の製剤が必要になる。パクリタキセルおよびドセタキセルは、経口投与された場合、ほとんど吸収されない（１％未満）。患者への投与について規制当局の許可を受けたパクリタキセルの経口製剤は得られていない。
【００１３】
パクリタキセルは、現在、１ｍＬあたり５２７ｍｇのポリオキシエチル化ヒマシ油（Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ（登録商標）ＥＬ）と４９．７％（ｖ／ｖ）無水エチルアルコール（米国薬局方）からなるビヒクル中に１ｍＬあたり６ｍｇパクリタキセルを含有する高濃度の非水系液剤である、タキソール（登録商標）として処方されている（Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ  Ｃｏ．、米国、ニュージャージー州から入手可能）。Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ  ＥＬはその液剤の物理的安定性を改善し、エチルアルコールはパクリタキセルを可溶化する。この液剤は冷蔵して保存され、使用直前に５％デキストロースまたは０．９％生理食塩水中で希釈される。パクリタキセルの静脈内注射は、一般に０．３〜１．２ｍｇ／ｍＬの濃度範囲内で患者に投与するように調製される。パクリタキセルに加えて、投与用の希釈溶液は、１０％以下のエタノール、１０％以下のＣｒｅｍｏｐｈｏｒ  ＥＬおよび８０％以下の水溶液からなる。しかしながら、所定の濃度に希釈すると、沈殿を生じる可能性がある過飽和溶液を生成する可能性がある。命を脅かす可能性がある微粒子の注入を避けるために、タキソテール（登録商標）の投与の際にはインラインの０．２２ミクロンフィルターが使用される。
【００１４】
ドセタキセルは、現在、１０４０ｍｇのポリソルベート８０からなるビヒクル中に１ｍＬあたり４０ｍｇのドセタキセルを含有する高濃度の非水系液剤であるタキソテール（登録商標）として処方されており、注射のために１３％（ｖ／ｖ）無水エチルアルコールを含む水で希釈される（Ｓａｎｏｆｉ−Ａｖｅｎｔｉｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  Ｉｎｃ．、米国、ニュージャージー州から入手可能）。第一段階の希釈溶液は、使用直前に、５％デキストロースまたは０．９％生理食塩水中にさらに希釈される。ドセタキセルの静脈内注射は、一般に０．３〜０．７４ｍｇ／ｍＬの濃度範囲内で患者に投与するように調製される。しかしながら、所定の濃度に希釈すると、結晶化して沈殿する可能性がある過飽和溶液を生成する可能性がある。命を脅かす可能性がある粒子の注入を避けるために、タキソテール（登録商標）の投与の際にはインラインの０．２２ミクロンフィルターが使用される。
【００１５】
いくつかの有毒な副作用が、タキソテール（登録商標）製剤中のドセタキセルの投与から生じる。この副作用としては、アナフィラキシー反応、低血圧、血管性浮腫、じんましん、末梢神経障害、関節痛、粘膜炎、吐き気、嘔吐、脱毛症、アルコール中毒、呼吸窮迫症（例えば呼吸困難）、心血管異常、流感のような症状（例えば筋肉痛）、胃腸障害、血液系の合併症（例えば好中球減少）、尿生殖器への影響および皮膚発疹が挙げられる。これらの望ましくない副作用のいくつかは臨床試験において経験されており、ある場合にはその反応は致命的である。これらの反応の発生率および重篤性を低下させるために、患者は、コルチコステロイド、ジフェンヒドラミン、Ｈ２アンタゴニスト、抗ヒスタミン薬、または顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）で予め投薬治療され、輸液の継続時間は長時間に設定されてきた。かかる予めの投薬治療は、重篤な超過敏反応の発生率を５％未満にまで低下させたが、軽度の反応は未だ約３０％の患者において報告されている。タキソテール（登録商標）での治療を受けたすべての患者は、体液貯留の発生率および重篤性ならびに超過敏反応の重篤性を低下させるために、経口によるコルチコステロイドで予めの投薬治療（タキソテール（登録商標）投与の１日前に始めて３日間、１日あたりデキサメタゾン１６ｍｇ）を受ける必要がある。
【００１６】
現在のタキサン組成物よりも安全で耐性が高いタキサン組成物を生成するために、様々な戦略が進められている。Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒおよびポリソルベート８０の使用を回避するパクリタキセルおよびドセタキセルの代替的な製剤が提案されている。
【００１７】
パクリタキセル、ドセタキセルおよび他の活性なタキサンに対するリン脂質ベースのリポソーム製剤が開発されており（Ｓｈａｒｍａら  １９９３；ＳｈａｒｍａおよびＳｔｒａｕｂｉｎｇｅｒ  １９９４），これらのタキサン製剤および他のタキサン製剤の物理特性が研究されている（ＳｈａｒｍａおよびＳｔｒａｕｂｉｎｇｅｒ  １９９４；Ｂａｌａｓｕｂｒａｍａｎｉａｎ  １９９４；Ｂａｌａｓｕｂｒａｍａｎｉａｎ  １９９４）。これらの製剤の主な効用は、いくつかの動物腫瘍モデルにおいて実証されているとおり、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ  ＥＬ賦形剤に関する毒性の排除であり、タキサン自体の毒性の低下である（Ｓｈａｒｍａ  １９９３；Ａ．Ｓｈａｒｍａ  １９９５；Ｓｈａｒｍａ  １９９６）。この観察は、パクリタキセル（Ｓｈａｒｍａ  １９９５）に加えていくつかのタキサンについても当てはまる。ある場合には、この薬物の抗腫瘍作用は、リポソームベースの製剤よりもわずかに大きいようである（Ｓｈａｒｍａ  １９９３）。
【００１８】
特許文献２は、分散系としてタキサンを安定化させる方法を開示する。この方法は、分散系におけるタキサンの物理的安定性を改善する分子にタキサンを接触させることを含む。分散系のタキサンの物理的安定性を改善することによって、より高いタキサン含有量を実現することができる。この特許は、リポソームに対して２０ｍｏｌ％未満の全タキサンの量でリポソーム中に存在する１種以上のタキサンを含有するリポソームを含み、そのリポソームが少なくとも３０％グリセロールを有するグリセロール：水  組成物に懸濁している、安定なタキサン含有リポソーム調製物を提供する。
【００１９】
特許文献３、特許文献４および特許文献５は、実質的に水不溶性の薬理学的に活性な物質（抗癌剤であるタキソールなど）の体内送達のための組成物を開示する。この薬理学的に活性な薬剤は、可溶性の形態または懸濁した粒子の形態で送達される。特に、この可溶性の形態は、タンパク質の壁のシェル内に収容された生体適合性の分散剤中の薬理学的に活性な薬剤の溶液を含んでいてもよい。あるいは、このタンパク質の壁のシェルは、タキソールの粒子を含有していてもよい。このポリマーシェルは、ジスルフィド結合の存在によって架橋された生体適合性ポリマー（アルブミンなど）である。中に実質的に水不溶性の薬理学的に活性な物質を含有するポリマーシェルは、次いで投与のために生体適合性の水性液体に懸濁される。かかるポリマーシェルを作製するためのプロセスは、非極性溶媒（クロロホルムなど）に溶解した薬物のみおよびアルブミンの水溶液を乳化させ、そのエマルジョンを約５０℃で急速にエバポレーションすることによる。これらの特許によれば、このプロセスは、アルブミン分子間でジスルフィド結合を形成することによるアルブミンの架橋されたポリマータンパク質シェルを生成し、薬物は、容器としてのこのポリマーシェルの内部に存在する。さらに、これらの特許は、その発明を、タンパク質の最少の変性を伴う特異的ジスルフィド結合の形成による化学的架橋および熱変性方法により形成されるタンパク質ミクロスフェアとは区別する。加えて、ポリマーシェル内に収容される実質的に水不溶性の薬理学的に活性な物質の粒子は、先行技術の架橋されかまたは熱変性されたタンパク質ミクロスフェアとは異なる。なぜなら、そのプロセスにより生成されるポリマーシェルは、被覆された粒子の直径に比べて相対的に薄いからである。
【００２０】
しかしながら、タンパク質を乳化剤として使用する水中油型エマルジョンにおいて、ある量のそのタンパク質が、そのタンパク質と油−水間の界面領域との相互作用に起因して変性するかも知れず、そして、天然のタンパク質に比べて変性したタンパク質の溶解度が低いため、その変性したタンパク質は凝集してより大きい粒径を形成する可能性があるということが先行技術において知られている（Ｈｅｇｇ  １９８２）。そのタンパク質の残りは、水相に単量体として残るであろう。これは、２〜５％アルブミン溶液中のクロロホルムの均質化によって形成される水中油型マイクロエマルジョンの急速なエバポレーションによって約５０℃でのエバポレーション後に濁ったタンパク質溶液が生成し、粒径分析器によって測定すると９５％を超えるタンパク質が単量体または二量体のいずれかとして溶液中に存在するという事実によって実証することができる。換言すれば、タンパク質は、何らの認められる架橋を伴わずに可溶性の形態で回収することができる。さらに、ジスルフィド架橋は球状タンパク質のゲル生成における決定要因ではなく（Ｈｅｇｇ  １９８２）、そして界面における分子の凝集が、エマルジョン安定性にとって重要である（Ｄｉｍｉｔｒｏｖａ  ２００１）ことが示されている。このように、特許文献３は、表面上のアルブミン分子によって囲まれた非晶質タキソールナノ粒子の形成を、タンパク質中の−ＳＨ基の架橋により形成されるタンパク質ポリマーシェル中に封入されたタキソールと呼んでいるのかもしれない。
【００２１】
さらに特許文献３および特許文献５によれば、ナノ粒子形成の従来の方法とは異なり、ポリマー（例えば、ポリ乳酸）は油相に溶解されない。開示された組成物の調製において用いられる油相は、溶媒に溶解した薬理学的に活性な薬剤しか含有しない。特許文献３および特許文献５は、もっぱら薬理学的に活性な薬剤のみを油相に溶解することに注目しており、他の何かを溶解することには注目していないため、これは重要である。
【００２２】
特許文献３に開示された技術を使用して、商業的に実行可能なパクリタキセル製剤が製造され、２００５年にヒトへの使用についてＦＤＡに承認された。それは、ＡＢＲＡＸＡＮＥ（登録商標）（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  Ｐａｒｔｎｅｒｓ  Ｉｎｃ．、米国、イリノイ州）として上市された。この製品の説明書は、注射用懸濁剤のためのＡＢＲＡＸＡＮＥ（登録商標）（注射用懸濁剤のためのパクリタキセルのタンパク質結合粒子）は、約１３０ｎｍの平均粒径を有するパクリタキセルのアルブミン結合形態であると主張する。ＡＢＲＡＸＡＮＥ（登録商標）は、静脈注射に先立って２０ｍＬの０．９％塩化ナトリウム注射液（米国薬局方）を用いて再構成するための白色〜黄色の、無菌の、凍結乾燥された粉末として供給される。各使い捨てのバイアルは１００ｍｇのパクリタキセルおよび約９００ｍｇのヒトアルブミンを含有する。再構成された懸濁液の１ミリリットル（ｍＬ）は５ｍｇのパクリタキセルを含有する。ＡＢＲＡＸＡＮＥ（登録商標）は、溶媒を含まない。
【００２３】
特許文献３に開示される技術は薬物送達にとって非常に有用であるが、それは、タンパク質溶液に懸濁された実質的に水不溶性の医薬品のみの非晶質のナノ粒子を生成する。非晶質の粒子の状態において、粒子間の弱いファンデルワールス相互作用を除いて実質的に水不溶性薬剤の分子間には他の安定化する力は存在しないため、それらは不安定（例えば、オストワルド熟成）になりがちである。なぜなら、非晶質粒子の溶解は、主として、所定の媒体に対する非晶質の粒子中の化合物の溶解性によって決定されるからである。
【００２４】
実際、ナノ粒子懸濁液を生成するための特許文献３に記載される方法は、ドセタキセルナノ粒子分散液を生成するために適用した場合、粒子は、オストワルド熟成に起因して調製後１時間以内に沈殿しはじめた。このように、ナノ粒子分散液を生成するための特許文献３および特許文献５に開示される方法は、水系媒体に懸濁された特定の実質的に水不溶性の医薬品（ドセタキセルナノ粒子など）の調製には有用ではなく、水溶液において実質的に水不溶性の医薬品の安定なナノ粒子分散液を製造するための新規なプロセスに対するニーズが存在する。
【００２５】
特許文献６は、タンパク質で安定化されたリポソームについての組成物および方法、タンパク質で安定化されたリポソームの作製、ならびにタンパク質で安定化されたリポソームの投与を開示する。このプロセスは、溶媒エバポレーション技法を使用するリポソームの調製のための安定剤としてタンパク質を使用する水中油型エマルジョンの使用を含み、本発明で開示される固体非晶質ナノ粒子とは異なる物理特性を備えたリポソームを生成する。
【００２６】
特許文献７は、水系媒体中の固体粒子の安定な分散液を調製するためのプロセスを開示する。この方法は、（ａ）実質的に水不溶性の物質、水混和性有機溶媒および阻害剤を含む第１の溶液を、（ｂ）水および必要に応じて安定剤を含む水相とを混合し、これによって阻害剤および実質的に水不溶性の物質を含む固体粒子を沈殿させるステップと、必要に応じて、水混和性有機溶媒を除去するステップとを含み、この阻害剤はその記載で定義されるような非ポリマー性の疎水性有機化合物である。このプロセスは、水系媒体中の固体粒子分散液を提供し、その粒子はオストワルド熟成によって媒介される粒子成長が低下している。この出願は、水混和性有機溶媒を使用することによる、沈殿技法によるナノ粒子の調製を記載している。沈殿技法によって粒径を制御することが困難であるため、この方法についての問題は粒子のサイズを制御することである。この方法は、水非混和性の有機溶媒を使用して細かい水中油型エマルジョンを形成し、引き続いて水非混和性有機溶媒をエバポレーションしてナノ粒子を形成する本発明とは全体的に異なる。
【００２７】
特許文献８は、水系媒体中の固体粒子の安定な分散液の調製を開示する。この調製法は、（ａ）チアゾール化合物である実質的に水不溶性の物質、水混和性有機溶媒および阻害剤を含む第１の溶液と、（ｂ）水および必要に応じて安定剤を含む水相とを混合し、これにより阻害剤および実質的に水不溶性の物質を含む固体粒子を沈殿させるステップと、必要に応じて水混和性有機溶媒を除去するステップとを含み、この阻害剤は非ポリマー性疎水性有機化合物である。
【００２８】
（ナノ粒子調製のための方法）
固体ナノ粒子を調製するための方法が、文献にいくつか開示されている。例えば、固体脂質ナノ粒子（ＳＬＮ）は、固体脂質から構成されるマトリックスを備えるナノ粒子である。すなわちその脂質は、室温でも体温でも固体である（Ｍｕｌｌｅｒら、１９９５；ＬｕｃｋｓおよびＭｕｌｌｅｒ、１９９６；Ｍｕｌｌｅｒら、２０００；ＭｅｈｎｅｒｔおよびＭａｄｅｒ、２００１）。この脂質は、その融点の約５℃上で融解し、薬物は融解した脂質に溶解または分散される。引き続いて、この融液は、高速撹拌によって熱界面活性剤溶液中に分散される。得られた粗エマルジョンは高圧ユニット中で、通常、５００ｂａｒおよび３回の均質化サイクルで均質化される。熱水中油型ナノエマルジョンが得られ、冷却され、脂質が再結晶し、固体脂質ナノ粒子を形成する。薬物ナノ結晶と同じく、ＳＬＮは、接着特性を有する。それらは、腸壁に付着し、薬物が吸収されるべき場所で正確にその薬物を放出する。加えて、脂質は、脂溶性薬物（ビタミンＥなど）に対してのみならず薬物一般に対しても吸収促進特性を有することが知られている（ＰｏｒｔｅｒおよびＣｈａｒｍａｎ、２００１；Ｓｅｋら、２００１；Ｃｈａｒｍａｎ、２０００）。それでも脂質の構造に依存して、脂質吸収の増大には差は存在する（Ｓｅｋら、２００２）。基本的には、身体はこの脂質および可溶化された薬物を同時に摂取している。
【００２９】
その一方で、固体マトリックスを用いた第二世代の脂質ナノ粒子、いわゆるナノ構造の脂質担体が開発されている（Ｍｕｌｌｅｒら、２０００ｂ）。ＮＬＣ（登録商標）は、固体脂質と液体脂質（油）のブレンドから脂質マトリックスを調製することによって、あるナノ構造が粒子マトリックスに付与されていることを特徴とする。この混合物は、４０℃ではまだ固体である。これらの粒子は、薬物の最大含有量に関して改良された特性を有し、薬物放出プロフィールを調節することにおいてより柔軟性があり、そして薬物放出を開始させるのに適してもいる（Ｍｕｌｌｅｒら、２００２；ＲａｄｔｋｅおよびＭｕｌｌｅｒ、２００１ｂ）。それらはまた、ＳＬＮと同様、経口薬物投与および非経口薬物投与のためにも使用することができるが、いくつかの付加的な興味深い特徴を有する。
【００３０】
ＬＤＣ（登録商標）ナノ粒子技術（ＭｕｌｌｅｒおよびＯｌｂｒｉｃｈ、１９９９ｂ、２０００ｂ、２０００ｃ）において、「結合体」（この用語はその最も広い意味で使用される）は、（例えば、アミノ基含有分子と脂肪酸との）塩形成あるいは共有結合による連結（例えばエーテル、エステル、例えばトリブチリン）のいずれかによって調製された。脂質結合体のほとんどは約５０〜１００℃のどこかで融解する。結合体は融解され、熱界面活性剤溶液中に分散される。さらなる処理は、ＳＬＮおよびＮＬＣと同様に行われる。得られたエマルジョン系は高圧均質化によって均質化され、得られたナノ分散液は冷却され、結合体が再結晶化し、ＬＤＣナノ粒子を形成する。この懸濁液をプロドラッグのナノ懸濁液であると考えることもできよう。
【００３１】
特許文献９は、脂質マトリックスが安定な同質異像の状態にある主に異方性形状のコロイド状固体脂質粒子（ＳＬＰ）の懸濁液の調製、およびミクロン粒子およびサブミクロンの生物活性剤粒子（ＰＢＡ）の懸濁液の調製を開示する。生物活性剤粒子（ＰＢＡ）の少なくとも約１２ヶ月安定な懸濁液は、以下の（ａ）少なくとも１種の固体生物活性剤を融解させるステップと、（ｂ）分散液媒体をステップ（ａ）で形成された少なくとも１種の融解した固体生物活性剤とほぼ同じ温度まで加熱するステップと、（ｃ）分散液媒体中で別々の相を形成しない少なくとも１種の非常に流動的な水溶性または水分散性の安定剤を、再結晶の間に新しく作製される表面を安定化させるために乳化後有効な量で分散液媒体に加え、必要に応じて少なくとも１種の脂溶性または脂質分散性の安定剤を上記少なくとも１種の融解した生物活性剤に加えるステップと、（ｄ）上記少なくとも１種の融解した生物活性剤および分散液媒体を予め混合し、引き続いてこの混合物を高圧均質化、微小流体化および／もしくは超音波処理によって均質化するステップと、（ｅ）分散された生物活性剤の再結晶によって固体粒子が形成されるまで、この均質化された分散液を冷却するステップを有する乳化プロセスによって製造される。
【００３２】
タキサンを含有する固体ナノ粒子の調製のためにこれらの技法を適用する際の問題点の１つは、ドセタキセルなどのいくつかのタキサンがこれらの技法で使用される高温で分解する傾向があることである。別の不都合は、封入された薬物の安定性および放出特性に影響を及ぼす可能性がある結晶性ナノ粒子の形成である。
【００３３】
固体ナノ粒子を調製するための別の一般的な方法は、水中油型エマルジョンの溶媒エバポレーションによる。この油相は、１つ以上の医薬品物質を含有し、水相は緩衝剤または乳化剤のみを含有する。エマルジョンは２つの非混和性液体（通常は油および水）からなり、その液体のうちの一方は他方の中に小さい球状の液滴として分散している。ほとんどの食品において、例えば、液滴の直径は、通常、０．１〜１００μｍの間のいずれかにある（ＤｉｃｋｉｎｓｏｎおよびＳｔａｉｎｓｂｙ  １９８２、Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ  １９９２）。エマルジョンは、油相および水相の分布に従って便宜的に分類することができる。水相に分散した油液滴からなる系は水中油型エマルジョンまたはＯ／Ｗエマルジョンと呼ばれる（例えば、マヨネーズ、牛乳、クリームなど）。油相に分散した水液滴からなる系は油中水型またはＷ／Ｏエマルジョンと呼ばれる（例えばマーガリン、バターおよびスプレッド）。２つの別々の非混和性液体をエマルジョンに変換するプロセス、または，既存のエマルジョンの液滴のサイズを小さくするプロセスは、均質化として知られている。
【００３４】
純粋な油および純水を一緒に均質化することによってエマルジョンを形成することはできるが、その２つの相は、水の層（高密度）の上に油の層（低密度）が存在する系にすぐに分離する。これは、液滴はその隣あう液滴と合体する傾向があり、最終的に完全な相分離に到るからである。エマルジョンは、通常、熱力学的に不安定な系である。均質化に先立って乳化剤および／または増粘剤として公知の物質を含めることによって、かなりの時間（数分、数時間、数日、数週間、数ヶ月または数年）速度論的に安定な（準安定な）エマルジョンを形成することが可能である。
【００３５】
乳化剤は、均質化の中で新たに形成した液滴の表面に吸着して、液滴が凝集するのに十分一緒に近づくのを防止する保護膜を形成する界面活性な分子である。ほとんどの乳化剤は、同じ分子中に極性領域および非極性領域を有する分子である。食品産業で最も一般的に使用される乳化剤は、両親媒性タンパク質、低分子界面活性剤、およびモノグリセリド（脂肪酸のスクロースエステル、モノグリセリドのクエン酸エステル）、脂肪酸の塩などである（Ｋｒｏｇ、１９９０）。
【００３６】
増粘剤は、エマルジョンの連続相の粘度を高めるために使用される成分であり、それらは液滴の動きを遅延させることによりエマルジョン安定性を高める。安定剤は、エマルジョンの安定性を高めるために使用することができる任意の成分であり、それゆえ、乳化剤または増粘剤のいずれであってもよい。
【００３７】
「エマルジョン安定性」との用語は、エマルジョンが経時的なその特性の変化に抵抗することができる能力を記述するために広く使用される。エマルジョンは、クリーム状化、沈降、軟凝集、合体、および相反転が挙げられる種々の物理的プロセスによって不安定になる可能性がある。クリーム状化および沈降はともに重力分離の形態である。クリーム状化は、液滴が周りを取り囲む液体よりも低い密度を有することに由来する液滴の上方向の動きを表し、一方、沈降は、液滴が周りを取り囲む液体よりも高い密度を有することに由来する液滴の下方向の動きを表す。軟凝集および合体はともに液滴の凝集の一種である。軟凝集は、２つ以上の液滴が一緒になって液滴が個々の全体性を保持した凝集体を形成するときに起こり、他方、合体は、２つ以上の液滴が一緒に合体して１つのより大きい液滴を形成するプロセスである。大々的に液滴の合体が起こると、最終的にサンプルの上に分離した油相が形成された状態になり得る。これは「オイルオフ」として公知である。
【００３８】
ほとんどのエマルジョンは、便宜的に、異なる物理化学的特性を有する３つの領域、つまり液滴の内部、連続相、および界面からなると考えることができる。エマルジョン中の分子は、その濃度および極性に従ってこれら３つの領域の中に分散する（Ｗｅｄｚｉｃｈａ  １９８８）。非極性分子は主に油相に局在する傾向があり、極性分子は水相に局在する傾向があり、親媒性分子は界面に局在する傾向がある。平衡状態においてさえ異なる領域間で分子の連続的な交換が起こり、この交換は系全体にわたる分子の物質移行に依存する速度で起こることに留意するべきである。分子は、エマルジョンの環境条件の何らかの変化（例えば、口内での温度変化または希釈）があると、１つの領域から別の領域に動くかも知れない。エマルジョン内の分子の位置および物質移行は、食品の芳香、フレーバー放出、質感、および物理化学的安定性に重大な影響を及ぼす（Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ  １９８２；Ｗｅｄｚｉｃｈａ  １９９１；Ｃｏｕｐｌａｎｄ  １９９６）。
【００３９】
エマルジョンの多くの特性は、その動的性質を参照してのみ理解することができる。均質化によるエマルジョンの形成は、液滴の激しい崩壊およびバルク液体から界面領域への界面活性分子の迅速な動きを含む非常に動的なプロセスである。エマルジョンが形成された後でさえ、エマルジョン中の液滴は、ブラウン運動、重力、または印加された機械的な力によって絶え間なく動いており、頻繁に互いに衝突している（Ｍｅｌｉｋ  １９８８；Ｄｕｋｈｉｎ  １９９６）。液滴の絶え間ない動きおよび相互作用のために、エマルジョンの特性は種々の不安定化プロセス（温度の変化または時間の変化）に起因して経時的に変化する。
【００４０】
エマルジョンの最も重要な特性は、それが含む液滴のサイズによって決定される（Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ  １９８２；１９９２）。その結果、エマルジョン中の液滴のサイズを制御、予測および測定することが重要である。エマルジョン中のすべての液滴が同じサイズであれば、そのエマルジョンは単分散性と呼ばれるが、存在するサイズに範囲があれば、そのエマルジョンは多分散性であると呼ばれる。単分散性エマルジョン中の液滴のサイズは、１つの数（例えば、液滴直径（ｄ）または半径（ｒ））によって完全に特徴付けることができる。単分散性エマルジョンは、実験による測定値の解釈が多分散性エマルジョンの場合よりもはるかに単純であるため、それらは基礎的研究のために使用されることがある。しかしながら、均質化によるエマルジョンは常に液滴サイズの分布を含み、その液滴サイズの指定は単分散性系の場合よりも複雑である。理想を言えば、エマルジョンの全粒径分布についての情報（すなわち、その系の液滴の各々のサイズ）を持ちたいところである。多くの場合、液滴の平均サイズおよび分布の幅がわかれば十分である（Ｈｕｎｔｅｒ  １９８６）。
【００４１】
効率よい乳化剤は、経時的に油相と水相との目に見える分離が存在しないエマルジョンを生成する。何らかのエマルジョンの破壊が起こったとしても、相分離は、長期間人の目には見えないかも知れない。乳化剤の効率を決定するより定量的な方法は、エマルジョンの粒径分布の経時変化を測定することである。効率よい乳化剤は粒径分布が経時的に変化しないエマルジョンを生成するが、他方、低質の乳化剤は合体および／または軟凝集に起因して粒径が大きくなるエマルジョンを生成する。エマルジョン安定性の動力学は、粒径が経時的に大きくなる速度を測定することにより確立することができる。
【００４２】
（乳化剤としてのタンパク質）
水中油型エマルジョンにおいて、タンパク質はほとんど界面活性剤および乳化剤として使用される。ｏ／ｗエマルジョンで使用される食用タンパク質のうちの１つは、乳漿タンパク質である。乳漿タンパク質としては４つのタンパク質が挙げられる：β−ラクトグロブリン、α−ラクトアルブミン、ウシ血清アルブミンおよびイムノグロブリン（Ｔｏｒｎｂｅｒｇ  １９９０）。工業的には、等電点〜５の乳漿タンパク質分離物（ＷＰＩ）（Ｔｏｒｎｂｅｒｇ  １９９０）がｏ／ｗエマルジョン調製に使用されている。Ｈｕｎｔ（１９９５）によれば、８％の乳漿タンパク質濃度が自己支持性ゲルを生成するために使用されてきた。後になって、自己支持性ゲルを生成するための乳漿タンパク質の限界濃度が４〜５％に低下したことが公知になった。９０℃または１２１℃の温度での熱処理および５０ｍＭを超えるイオン強度を使用することにより、２％ｗ／ｗという低い乳漿タンパク質濃度でゲルを生成することが可能である（Ｈｕｎｔ  １９９５）。
【００４３】
特許文献１０は、油、水および不溶性タンパク質を高せん断で混合することにより安定な水中油型エマルジョンを調製する方法を開示する。不溶性タンパク質の量を変えることにより、このエマルジョンは液体、半固体または固体になり得る。好ましい不溶性タンパク質は、不溶性線維性タンパク質（コラーゲンなど）である。このエマルジョンは、親水性もしくは疎水性の薬理学的に活性な薬剤とともに投薬することができ、創傷包帯または軟膏としてまたはそれらの中において有用である。
【００４４】
特許文献１１は、水相、脂肪相および界面活性剤を含み、この脂肪相が少なくとも１つの化粧用油および少なくとも１つの揮発性フルオロ化合物の混和性混合物を含有し、少なくとも１つの揮発性フルオロ化合物が脂肪相の屈折率が水相の屈折率の±０．０５に等しくなるような割合で存在する、透明または半透明な化粧品エマルジョンに関する発明を開示する。この発明はまた、上記エマルジョンを調製するためのプロセス、ならびにスキンケア、毛髪のコンディショニングおよび日焼け止めおよび／または人為的な日焼けにおける上記エマルジョンの使用にも関する。
【００４５】
乳漿から誘導されたタンパク質は、乳化剤として広く使用されている（Ｐｈｉｌｌｉｐｓ  １９９４；Ｄａｌｇｌｅｉｓｈ  １９９６）。それらは、均質化の間に油液滴の表面に吸収され、液滴が合体するのを防止する保護膜を形成する（Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ  １９９８）。乳漿タンパク質分離物（ＷＰＩ）によって安定化されたエマルジョンの物理化学的特性は、水相の組成（例えば、イオン強度およびｐＨ）ならびに製品の加工条件および保存条件（例えば、加熱、冷却、および機械的な撹拌）に関連する。エマルジョンはＷＰＩの等電点の周辺で軟凝集しやすいが、高ｐＨまたは低ｐＨでは安定である（Ｐｈｉｌｉｐｓ  １９９４）。軟凝集に対する安定性は、液滴間のコロイド相互作用、すなわち、ファンデルワールス力、静電的反発力および立体的な力によって解釈することができた（Ｐｈｉｌｉｐｓ  １９９４；Ｄａｌｇｌｅｉｓｈ  １９９６）。ファンデルワールス相互作用は、距離の６乗の逆数に依存するため、かなり短距離でしか効果がない。同じ電荷を帯びた液滴間の静電的相互作用は反発的であり、その大きさおよび範囲はイオン強度が大きくなるにつれて減少する。短距離相互作用は、界面層の厚み以下のオーダーの液滴分離で重要になる（例えば、立体的な力、熱変動による力および水和力）（Ｉｓｒａｅｌａｃｈｖｉｌｉ  １９９２）。かかる相互作用は、界面層の厚みより大きい距離では無視できるが、層が重なる場合には強く反発する力となり、液滴がより近づくのを防止する。タンパク質乳化剤についての基準は、油／水界面で素早く吸収される能力であり、表面疎水性は二次的な重要性しか有しないことが示されている（Ｌｏｃｋｈｅａｄ  １９９９）。
【００４６】
このように、溶媒エバポレーション技法を使用するナノ粒子の調製において、タンパク質は微細な水中油型エマルジョンを形成するための乳化剤として使用することができ、その後、エマルジョン中の有機溶媒をエバポレーションしてナノ粒子を形成することができる。ヒト血清アルブミンは、ヒトにおいて免疫原性ではなく、乳化剤としての所望の特性を有し、かつ腫瘍部位に対する選択的な標的特性を有するため、かかる調製物にとっては理想的なものとなり得る。りん光偏光解消法を用いた測定は、ＢＳＡの中性溶液中における、ヒト血清アルブミンの結晶構造におけるもののようなアルブミンのかなり剛直なハート型をした構造（８ｎｍ×８ｎｍ×３．２ｎｍ）を支持し（Ｆｅｒｒｅｒ  ２００１）、血清アルブミンは良好なゲル化特性を有することが示されている（Ｈｅｇｇ  １９８２）。
【００４７】
（乳化剤としてのポリマー）
乳化剤としてのタンパク質とは別に、いくつかの天然ポリマー、半天然ポリマー、および合成ポリマーを乳化剤として使用することができる。ポリマー乳化剤としては、天然に存在する乳化剤、例えば、寒天、カラギーナン、ファーセレラン（ｆｕｒｃｅｌｌａｒａｎ）、タマリンド種子多糖体、タラガム（ｇｕｍ  ｔａｒｅ）、カラヤガム、ペクチン、キサンタンガム、アルギン酸ナトリウム、トラガカントガム、グアーガム、ローカストビーンガム、プルラン、ジェランガム、アラビアガムおよび種々のデンプン類が挙げられる。半合成乳化剤としては、カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）、メチルセルロース（ＭＣ）、ヒドロキシエチルセルロース（ＨＥＣ）、アルギン酸  プロピレングリコールエステル、化学変性デンプン（可溶性デンプンを含む）が挙げられ、合成ポリマーとしては、ポリビニルアルコール、ポリエチレングリコールおよびポリアクリル酸ナトリウムが挙げられる。これらのポリマー乳化剤は、エマルジョン組成物（エマルジョンフレーバーなど）または粉末組成物（脂肪粉末および油および粉末フレーバーなど）の製造に使用される。粉末組成物は、油、脂溶性フレーバーなどおよび水系成分をポリマー乳化剤を用いて乳化させ、次いでこのエマルジョンを噴霧乾燥などにかけることによって製造される。この場合、粉末組成物は、マイクロカプセルの形態にあることが多い。
【００４８】
（オストワルド熟成）
一般に、広い範囲のサイズを有する粒子が媒体に分散される場合、媒体への粒子の溶解速度は異なるであろう。溶解速度が異なると、より大きい粒子と比べてより小さい粒子が熱力学的に不安定になり、より小さい粒子からより大きい粒子への物質の流束が生じる。この効果は、より小さい粒子が媒体に溶解し、その溶解した物質がより大きい粒子の上に堆積し、これにより粒径の増大が生じることである。粒子成長に関する１つのかかるメカニズムは、オストワルド熟成として公知である（Ｏｓｔｗａｌｄ  １８９６および１８９７）。オストワルド熟成は、材料科学および医薬品科学におけるその重要性から精力的に研究されてきた（Ｂａｌｄａｎ  ２００２；Ｖｏｏｒｈｅｅｓ  １９９２；Ｍａｄｒａｓ  ２００１および２００２；Ｌｉｆｓｈｉｔｚ  １９６１およびＤａｖｉｅｓ  １９８１）。
【００４９】
分散液中の粒子の成長は、保存中の分散液の不安定性をもたらすことがあり、分散液からの粒子の沈降を引き起こすことがある。薬理学的に活性な化合物の分散液の粒径が一定で留まることは特に重要である。なぜなら、粒径の変化は生物学的利用能、毒性、それゆえその化合物の効力に影響を及ぼすことが予想されるからである。さらに、分散液が静脈内投与のために必要とされる場合、分散液中での粒子の成長が起こると、その分散液はこの目的のために適さないものとなり、恐らくは不都合なまたは危険な副作用につながる。
【００５０】
理論上は、分散液中のすべての粒子が同じサイズであれば、オストワルド熟成に由来する粒子の成長は、排除される。しかしながら、現実には完全に均一な粒径を実現することは不可能であり、粒径の小さい差でさえ粒子の成長を引き起し得る。
【００５１】
特許文献１２は、温度および注入速度を制御した条件下で水系沈殿液を有機液体中の固体の溶液に注ぎ、これによって粒径を制御することによる、固体の均一なサイズの粒子を調製するためのプロセスを記載する。特許文献１３は、沈殿液が非水系である類似のプロセスを記載する。しかしながら、その粒子が沈殿媒体に対して小さいが有限の溶解度を有する場合、粒子が沈殿した後に粒径の成長が観察される。これらのプロセスを使用して特定の粒径を維持するためには、粒子が沈殿するや否や粒子その粒子を単離して粒子の成長を最少にすることが必要である。それゆえ、これらのプロセスによって調製された粒子は、分散液として液体媒体中で保存することができない。さらに、ある物質については、オストワルド熟成の速度は非常に大きいので、懸濁液から小さい粒子（特にナノ粒子）を単離することは現実的ではない。
【００５２】
ＨｉｇｕｃｈｉおよびＭｉｓｒａ（非特許文献１）は、疎水性化合物（ヘキサデカンなど）をエマルジョンの油相に加えることによる、水中油型エマルジョン中の油液滴の成長を阻害する方法を記載する。特許文献１４は、１０，０００以下の分子量を有するポリマー物質を水中油型エマルジョンの分散した油相に添加してオストワルド熟成を阻害することを記載する。Ｗｅｌｉｎ−Ｂｅｒｇｅｒら（非特許文献２）は、疎水性物質を水中油型エマルジョンの油相に添加してエマルジョン中の油液滴のオストワルド熟成を阻害することを記載する。これら後者の３つの先行技術文献においては、油相に添加される物質は油相に溶解され、水系連続媒体に分散された単一の相油を与える。
【００５３】
特許文献１５は、分散相が疎水性溶媒に溶解された疎水性農薬である水中油型エマルジョンを安定化するためにポリマー安定剤を添加することを記載する。
【００５４】
特許文献１６は、オストワルド熟成を制御するためにイオン性分散剤が添加された有機溶媒中の固体農薬の分散液を開示する。
【００５５】
特許文献１７は、分散した油相がナノカプセル外膜を形成するように設計された物質と、有機溶媒と、必要に応じて活性成分とを含む水中油型エマルジョンを形成することによる、小嚢状のナノカプセルを調製するためのプロセスを記載する。安定なエマルジョンの形成後、溶媒は抽出され、ナノカプセルの分散液が残される。
【００５６】
特許文献１８は、水不溶性の物質とリン脂質との間に複合体を含む粒子がその物質およびリン脂質を水系媒体の中へと共沈殿することにより調製されるプロセスを記載する。一般に、複合体の形成を確実にするためのリン脂質と物質とのモル比は１：１である。
【００５７】
特許文献１９は、物質の粒子が脂質マトリックスに分散されている脂質マトリックス担体を記載する。脂質マトリックス担体の主要相は、疎水性脂質物質（リン脂質など）を含む。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００５８】
【特許文献１】米国特許第４，８１４，４７０号明細書
【特許文献２】米国特許第６，３４８，２１５号明細書
【特許文献３】米国特許第５，４３９，６８６号明細書
【特許文献４】米国特許第５，５６０，９３３号明細書
【特許文献５】米国特許第５，９１６，５９６号明細書
【特許文献６】米国特許出願公開第２００４０２４７６６０号明細書
【特許文献７】米国特許出願公開第２００５０００９９０８号明細書
【特許文献８】米国特許出願公開第２００６０１４１０４３Ａ号明細書
【特許文献９】米国特許第６，２０７，１７８号明細書
【特許文献１０】米国特許第６，１０６，８５５号明細書
【特許文献１１】米国特許第６，６１６，９１７号明細書
【特許文献１２】米国特許第４，８２６，６８９号明細書
【特許文献１３】米国特許第４，９９７，４５４号明細書
【特許文献１４】米国特許第６，０７４，９８６号明細書（国際公開第９５／０７６１４号パンフレット）
【特許文献１５】欧州特許第５８９８３８号明細書
【特許文献１６】米国特許第４，３４８，３８５号明細書
【特許文献１７】国際公開第９９／０４７６６号パンフレット
【特許文献１８】米国特許第５，１００，５９１号明細書
【特許文献１９】米国特許第４，６１０，８６８号明細書
【非特許文献】
【００５９】
【非特許文献１】Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．，５１（１９６２）４５９
【非特許文献２】Ｉｎｔ．Ｊｏｕｒ．ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ  ２００（２０００）２４９−２６０頁
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００６０】
オストワルド熟成を阻害することによる実質的に安定なナノ粒子が、タンパク質（血清アルブミンなど）またはポリマー（ポリビニルアルコールなど）を乳化剤として使用して、水中油型エマルジョンの溶媒エバポレーションによって形成できることは、本願に先立つ当該技術分野において認識されておらず、理解もされていない。本発明は、ヒトの疾患に対する毒性が低下した治療のための、感知できるほどのオストワルド熟成効果を伴わない、ナノ粒子として選択された実質的に水不溶性の医薬品物質の送達のための新規な薬物送達システムを開示する。
【課題を解決するための手段】
【００６１】
本発明者らは、タンパク質または他のポリマーを界面活性剤として使用する水中油型エマルジョンプロセスを使用して、水系媒体中のドセタキセルの固体粒子の実質的に安定な分散液が調製できることを、驚きをもって見出した。本発明によって調製される分散液は、オストワルド熟成によって媒介される形成後の粒子の成長がほとんどないかまたはまったくない。
【００６２】
本発明の第１の態様によれば、水系媒体中の固体粒子の実質的に安定な分散液を調製するためのプロセスであって、
（ａ）実質的に水不溶性の物質、水非混和性有機溶媒、必要に応じて水混和性有機溶媒、およびオストワルド熟成阻害剤を含む第１の溶液と、
（ｂ）水および乳化剤（タンパク質が好ましい）を含む水相と、
を混合するステップと、
高圧均質化条件下で水中油型エマルジョンを形成するステップと、
前記水非混和性有機溶媒を真空下で急速にエバポレーションするステップと、
を含み、これによって前記オストワルド熟成阻害剤および前記実質的に水不溶性の物質を含む固体粒子を製造し、
（ｉ）前記オストワルド熟成阻害剤は実質的に水に不溶性の非ポリマー性疎水性有機化合物であり、
（ｉｉ）前記オストワルド熟成阻害剤は前記実質的に水不溶性の物質よりも水溶性が小さく、かつ
（ｉｉｉ）前記オストワルド熟成阻害剤はリン脂質ではない、
ことを特徴とするプロセスが提供される。
【００６３】
本発明にかかるプロセスにより、非常に小さい粒子（特にナノ粒子）の実質的に安定な分散液が粒子の成長なく高濃度で調製できるようになる。
【００６４】
本発明にかかる分散液は実質的に安定である。これは、前記分散液中の前記固体粒子において、オストワルド熟成によって媒介される粒子の成長が減少したかまたは実質的にまったく起こらないことを意味する。「粒子の成長が減少した」とは、オストワルド熟成阻害剤を使用することなく調製した粒子と比べて、オストワルド熟成によって媒介される粒子の成長の速度が低下していることを意味する。「粒子の成長が実質的にまったく起こらない」との用語は、前記水系媒体中の前記粒子の平均粒径が、本発明のプロセスで水相に分散した後２０℃で１２〜１２０時間にわたって１０％を超えて増加しない（より好ましくは５％以下だけ）ことを意味する。「実質的に安定な粒子またはナノ粒子」との用語は、前記水系媒体中の前記粒子の平均粒径が２０℃で１２〜１２０時間にわたって１０％を超えて増加しない（より好ましくは５％以下だけ）ことを意味する。前記粒子には、好ましくは１２〜１２０時間にわたって、より好ましくは２４〜１２０時間にわたって、そしてより好ましくは４８〜１２０時間にわたって粒子の成長が実質的にまったくない。
【００６５】
固体粒子が非晶質形態で調製される場合、生成した粒子は一般に、水系分散液として保存する間にいずれは熱力学的により安定な結晶形態に戻ることを理解するべきである。かかる分散液が再結晶するために要する時間は物質に依存し、数時間から数日の間で変わり得る。一般に、かかる再結晶は、粒子の成長、および分散液から沈降しがちな大きい結晶性粒子の形成をもたらすであろう。本発明は前記懸濁液中の非晶質の粒子が結晶状態へと変換するのを防止するものではないことは理解するべきである。本発明にかかる粒子中にオストワルド熟成阻害剤が存在することで、本願明細書においてすでに記載したように、オストワルド熟成によって媒介される粒子の成長は有意に軽減または解消される。それゆえ、前記粒子はオストワルド熟成に対して安定であり、本願明細書において使用される「安定な」との用語はこのような内容として解釈されるべきである。
【００６６】
前記分散液中の前記固体粒子は、好ましくは１０μｍ未満、より好ましくは５μｍ未満、さらにより好ましくは１μｍ未満、特に５００ｎｍ未満の平均粒径を有する。前記分散液中の前記粒子が１０〜５００ｎｍ、より特に５０〜３００ｎｍ、そしてさらにより特に５０〜２００ｎｍの平均粒径を有することが特に好ましい。前記分散液中の前記粒子の平均サイズは、従来の技法を使用して、例えば強度平均粒径を測定するための動的光散乱によって測定することができる。
【００６７】
一般に、本発明によって調製される分散液中の固体粒子は、狭い単峰性の粒径分布を示す。
【００６８】
前記固体粒子は結晶性であっても、半結晶性であってもまたは非晶質であってもよい。一実施形態では、前記固体粒子は、実質的に非晶質形態の薬理学的に活性な物質を含む。多くの薬理学的化合物が、結晶形態または半結晶形態よりも非晶質形態でより高い生物学的利用能を示すため、これは好都合であり得る。得られる粒子の正確な形態は、前記プロセスのエバポレーションステップで使用される条件に依存する。一般に、本発明のプロセスは、前記エマルジョンの急速なエバポレーションを行い、実質的に非晶質の粒子を形成する。
【００６９】
本発明は、２２０ｎｍ未満の平均直径サイズ、より好ましくは約２０〜２００ｎｍの平均直径サイズ、最も好ましくは約５０〜１８０ｎｍの平均直径サイズを有する固体ナノ粒子を製造する方法を提供する。これらの固体ナノ粒子懸濁液は、０．２２μｍのフィルターを通すことにより濾過滅菌することができ、凍結乾燥することができる。この無菌懸濁液は、抗凍結剤（スクロース、マンニトール、トレハロースなど）を用いて、またはこれを用いずにバイアル中でケーキの形態で凍結乾燥することができる。凍結乾燥されたケーキは、ナノ粒子サイズ、安定性および薬物効力を変えることなくもとの固体ナノ粒子懸濁液に再構成することができ、このケーキは２４ヶ月を超えて安定である。
【００７０】
別の実施形態では、濾過滅菌された固体ナノ粒子は、抗凍結剤（スクロース、マンニトール、トレハロースなど）を使用して、バイアル中でケーキの形態で凍結乾燥することができる。凍結乾燥されたケーキは、固体ナノ粒子の粒径を変えることなくもとのリポソームに再構成することができる。これらのナノ粒子は、種々の経路、好ましくは静脈内経路、非経口経路、腫瘍内経路および経口経路によって投与される。
【００７１】
図面では、同じ要素は同じ参照番号によって描かれている。図面は、手短に以下に説明される。本願明細書に組み込まれ本願明細書の一部を形成する添付の図面は、本発明の実施形態を例証し、詳細な説明と一緒になって本発明の原理を説明する役割を果たす。
【図面の簡単な説明】
【００７２】
【図１】タキサンの化学構造の図である。
【図２】チューブリン−微小管の動態の図（Ｋｉｎｇｓｔｏｎ  ２００１）である。
【図３】エポチロンの化学構造の図である。
【図４】クロロホルムおよびエタノールを用いた均質化後の４％アルブミンの粒径分析のグラフである。
【図５】４％アルブミンの粒径分析のグラフである。
【図６Ａ】阻害剤としてコレステロールを含有するドセタキセルの粒径分析のグラフである。
【図６Ｂ】阻害剤としてコレステロールを含有するドセタキセルの粒径分析のグラフである。
【図６Ｃ】阻害剤としてコレステロールを含有するドセタキセルの粒径分析のグラフである。
【図６Ｄ】阻害剤としてコレステロールを含有するドセタキセルの粒径分析のグラフである。
【図６Ｅ】阻害剤としてコレステロールを含有するドセタキセルの粒径分析のグラフである。
【図６Ｆ】阻害剤としてコレステロールを含有するドセタキセルの粒径分析のグラフである。
【図７Ａ】阻害剤としてステアリン酸コレステリルおよびコレステロールを含有するドセタキセルの粒径分析のグラフである。
【図７Ｂ】阻害剤としてステアリン酸コレステリルおよびコレステロールを含有するドセタキセルの粒径分析のグラフである。
【図７Ｃ】阻害剤としてステアリン酸コレステリルおよびコレステロールを含有するドセタキセルの粒径分析のグラフである。
【図７Ｄ】阻害剤としてステアリン酸コレステリルおよびコレステロールを含有するドセタキセルの粒径分析のグラフである。
【図７Ｅ】阻害剤としてステアリン酸コレステリルおよびコレステロールを含有するドセタキセルの粒径分析のグラフである。
【図８Ａ】阻害剤としてヘキサデカン酸ヘキサデシルおよびコレステロールを含有するドセタキセルの粒径分析のグラフである。
【図８Ｂ】阻害剤としてヘキサデカン酸ヘキサデシルおよびコレステロールを含有するドセタキセルの粒径分析のグラフである。
【図８Ｃ】阻害剤としてヘキサデカン酸ヘキサデシルおよびコレステロールを含有するドセタキセルの粒径分析のグラフである。
【図８Ｄ】阻害剤としてヘキサデカン酸ヘキサデシルおよびコレステロールを含有するドセタキセルの粒径分析のグラフである。
【図８Ｅ】阻害剤としてヘキサデカン酸ヘキサデシルおよびコレステロールを含有するドセタキセルの粒径分析のグラフである。
【図８Ｆ】阻害剤としてヘキサデカン酸ヘキサデシルおよびコレステロールを含有するドセタキセルの粒径分析のグラフである。
【図８Ｇ】阻害剤としてヘキサデカン酸ヘキサデシルおよびコレステロールを含有するドセタキセルの粒径分析のグラフである。
【図８Ｈ】阻害剤としてヘキサデカン酸ヘキサデシルおよびコレステロールを含有するドセタキセルの粒径分析のグラフである。
【図９Ａ】阻害剤としてグリセリルトリステアレートおよびコレステロールを含有するドセタキセルの粒径分析のグラフである。
【図９Ｂ】阻害剤としてグリセリルトリステアレートおよびコレステロールを含有するドセタキセルの粒径分析のグラフである。
【図９Ｃ】阻害剤としてグリセリルトリステアレートおよびコレステロールを含有するドセタキセルの粒径分析のグラフである。
【図９Ｄ】阻害剤としてグリセリルトリステアレートおよびコレステロールを含有するドセタキセルの粒径分析のグラフである。
【図９Ｅ】阻害剤としてグリセリルトリステアレートおよびコレステロールを含有するドセタキセルの粒径分析のグラフである。
【図９Ｆ】阻害剤としてグリセリルトリステアレートおよびコレステロールを含有するドセタキセルの粒径分析のグラフである。
【図９Ｇ】阻害剤としてグリセリルトリステアレートおよびコレステロールを含有するドセタキセルの粒径分析のグラフである。
【図９Ｈ】阻害剤としてグリセリルトリステアレートおよびコレステロールを含有するドセタキセルの粒径分析のグラフである。
【図１０Ａ】阻害剤をまったく含まないドセタキセルの粒径分析のグラフである。
【図１０Ｂ】阻害剤をまったく含まないドセタキセルの粒径分析のグラフである。
【図１１Ａ】有機溶媒のエバポレーションのプロセスの間で比較した粒径の図である。
【図１１Ｂ】有機溶媒のエバポレーションのプロセスの間で比較した粒径の図である。
【図１１Ｃ】有機溶媒のエバポレーションのプロセスの間で比較した粒径の図である。
【図１１Ｄ】有機溶媒のエバポレーションのプロセスの間で比較した粒径の図である。
【図１１Ｅ】有機溶媒のエバポレーションのプロセスの間で比較した粒径の図である。
【図１１Ｆ】有機溶媒のエバポレーションのプロセスの間で比較した粒径の図である。
【図１１Ｇ】有機溶媒のエバポレーションのプロセスの間で比較した粒径の図である。
【図１１Ｈ】有機溶媒のエバポレーションのプロセスの間で比較した粒径の図である。
【図１１Ｉ】有機溶媒のエバポレーションのプロセスの間で比較した粒径の図である。
【発明を実施するための形態】
【００７３】
微小管動態または安定性を妨害して細胞分裂を阻害し細胞死へと導く能力が「微小管阻害剤」として理解される。かかる作用は、いくつかの天然化合物、半合成化合物および合成化合物によって行われる。それらは、チューブリン上のそれらの結合部位によって分類される。チューブリン上の薬物結合部位には３つの一般的種類、つまりコルヒチン結合部位、タキソール部位およびビンカアルカロイド部位が存在する。ほとんどの他の薬物は、これらの薬物の少なくとも１つと競合してまたは競合しないで結合するようである。これは、それらが重なる結合モチーフを共有することを示唆する。また、３つの一般的な相互作用モード、つまりチューブリン捕捉薬物（コルヒチンなど）、別のポリマーを誘発する薬物（ビンカアルカロイドなど）、および微小管を安定化する薬物（タキソールなど）が存在する。「微小管阻害剤」との用語は、しばしば、チューブリンに結合し微小管動態を妨害するすべての化合物についての一般用語として使用され、同様に、これらの化合物に対する受容体は、「チューブリン」として一般に公知である。微小管阻害剤は、チューブリン阻害剤、抗チューブリン薬、有糸分裂阻害剤、抗微小管薬および抗有糸分裂薬とも呼ばれる。
【００７４】
本願明細書において使用する場合、「μｍ」との用語、または「マイクロメートルまたはミクロン」との用語は、１メートルの百万分の１の測定単位を指す。
【００７５】
本願明細書において使用する場合、「ｎｍ」との用語または「ナノメートル」との用語は、１メートルの１０億分の１の測定単位を指す。
【００７６】
本願明細書において使用する場合、「μｇ」との用語または「マイクログラム」との用語は、１グラムの百万分の１の測定単位を指す。
【００７７】
本願明細書において使用する場合、「ｎｇ」との用語または「ナノグラム」との用語は、１グラムの１０億分の１の測定単位を指す。
【００７８】
本願明細書において使用する場合、「ｍＬ」との用語は１リットルの千分の１の測定単位を指す。
【００７９】
本願明細書において使用する場合、「ｍＭ」との用語は、１モルの千分の１の測定単位を指す。
【００８０】
本願明細書において使用する場合、「生体適合性」との用語は、ある物質が生物系に導入されたときに、その生物系を感知できるほどには変えないかまたはまったく不都合な影響を及ぼさない物質を表す。
【００８１】
本願明細書において使用する場合、「実質的に水不溶性の医薬品物質または薬剤」との用語は、水にあまり溶解しないかまたは水にほとんど溶解しない生物学的に活性な化合物を意味する。かかる化合物の例は、パクリタキセル、ドセタキセル、ＳＮ−３８、オレアンドリン、シクロスポリン、ジギトキシンなどである。
【００８２】
「粒子の成長が低下した」との用語は、オストワルド熟成に媒介される粒子の成長の速度が、オストワルド熟成阻害剤を使用せずに調製した粒子と比べて低下していることを意味する。
【００８３】
「実質的に粒子の成長がない」との用語は、本発明のプロセスにおいて水相に分散させた後、２０℃で１２〜１２０時間の間に、水系媒体中の粒子の平均粒径が１０％を超えて増大しない（より好ましくは５％以内だけしか増大しない）ことを意味する。
【００８４】
「実質的に安定な粒子またはナノ粒子」との用語は、２０℃で１２〜１２０時間の間に、水系媒体中の粒子の平均粒径が１０％を超えて増大しない（より好ましくは５％以内だけしか増大しない）ことを意味する。粒子は、好ましくは１２〜１２０時間の間、より好ましくは２４〜１２０時間、より好ましくは４８〜１２０時間の間、実質的に粒子の成長がない。
【００８５】
「細胞増殖性疾患」との用語は、本願明細書においては、形態学的に周囲の組織から異なっているように見えることが多い悪性細胞および良性細胞の集団を意味することが意図されている。
【００８６】
「タキサン」との用語は、本願明細書において使用する場合、微小管作用機構を有し、かつ独特のタキサン環系（図１を参照）および細胞増殖抑制作用のために必要な立体特異的側鎖を含む構造を有する種類の抗腫瘍薬または抗有糸分裂薬を指す。パクリタキセル（タキソールとしても公知）は臨床的に使用された最初のタキサンである。活性なアナログであるドセタキセルも臨床的に使用されており、１０−ＤＡＢ  ＩＩＩから合成される（Ｃｏｌｉｎらに対して１９８９年３月２１日に発行された米国特許第４，８１４，４７０号）。ＳＢ−Ｔ−１０１１と呼ばれるタキサンは、同様にイチイの針葉から得られる１４β−ヒドロキシ−１０−ＤＡＢ  ＩＩＩから合成された（Ｏｊｉｍａら  １９９４）。パクリタキセルの側鎖には、アミド結合によって連結された２つの芳香環があるが（図１）、他の活性なアナログ（ドセタキセルなど）（Ｇｕｅｒｉｔｔｅ−Ｖｏｅｇｅｌｅｉｎら  １９９０；Ｇｕｅｒｉｔｔｅ−Ｖｏｅｇｅｌｅｉｎら  １９９１）が存在することは、基本的なパクリタキセル側鎖モチーフに対するある構造上の改変が許容され得ることを実証する。
【００８７】
使用することができるタキサンの例としては、タキソール（パクリタキセル）；タキソテール（ドセタキセル）；ＭＡＣ−３２１；ＴＬ−９０９；ＴＬ−３１０；スピカチン（ｓｐｉｃａｔｉｎ）；タキサン−２，１３−ジオン，５β，９β，１０β−トリヒドロキシ−，アセトンとの環状９，１０−アセタール、アセテート；タキサン−２，１３−ジオン，５β，９β，１０β−トリヒドロキシ−，アセトンとの環状９，１０−アセタール；タキサン−２β，５β，９β，１０β−テトロール，アセトンとの環状９，１０−アセタール；タキサン；セファロマンニン−７−キシロシド；７−エピ−１０−デアセチルセファロマンニン；１０−デアセチルセファロマンニン；セファロマンニン（ｃｅｐｈａｌｏｍａｎｎｉｎｅ）；タキソールＢ；１３−（２’，３’−ジヒドロキシ−３’−フェニルプロピオニル）バッカチン  ＩＩＩ；ユンナンキソール（ｙｕｎｎａｎｘｏｌ）；７−（４−アジドベンゾイル）バッカチン  ＩＩＩ；Ｎ−デベンゾイルタキソールＡ；Ｏ−アセチルバッカチン  ＩＶ；７−（トリエチルシリル）バッカチン  ＩＩＩ；７，１０−ジ−Ｏ−［（２，２，２−トリクロロエトキシ）カルボニル］バッカチン  ＩＩＩ；バッカチン  ＩＩＩ  １３−Ｏ−アセテート；バッカチンジアセテート；バッカチン；バッカチンＶＩＩ；バッカチンＶＩ；バッカチンＩＶ；７−エピ−バッカチンＩＩＩ；バッカチンＶ；バッカチンＩ；バッカチンＩＩＩ；バッカチンＡ；１０−デアセチル−７−エピタキソール；エピタキソール；１０−デアセチルタキソールＣ；７−キシロシル−１０−デアセチルタキソール；１０−デアセチルタキソール−７−キシロシド；７−エピ−１０−デアセチルダキソール；１０−デアセチルタキソール；および１０−デアセチルタキソールＢが挙げられるが、これらに限定されない。
【００８８】
「ドセタキセル」との用語は、タキソテール（登録商標）の活性成分または他にタキソテール（登録商標）自体を指す。
【００８９】
「オストワルド熟成」との用語は、沈殿物または媒体に分散した固体粒子の粗大化を指し、これは、溶液における相分離の最終段階にあり、この間により小さい粒子を犠牲にして沈殿物または固体粒子のより大きい粒子が成長し、小さい粒子は消失する。Ｏｓｔｗａｌｄ（１８９６および１８９７）が認識したように、今では彼の名前を冠しているこのプロセスの駆動力は、沈殿物または固体粒子と溶質との間の表面張力に起因するより小さい粒子の溶解性の増大である。溶質が沈殿物または固体粒子と局所的な平衡にあると仮定すると、この溶解性の差は溶質濃度の勾配を誘発し、より小さい粒子からより大きい粒子への拡散する流束を導く。（粒子表面における溶質原子の緩慢な堆積が律速になる成長とは異なり）拡散律速成長とも呼ばれる。
【００９０】
「阻害剤」との用語は、一般に、オストワルド熟成に起因する水系媒体に分散した固体ナノ粒子の不安定性を軽減するために実質的に水不溶性の物質に加えられる有機物質を指す。
【００９１】
好ましい実施形態では、本発明は、微小管阻害剤から選択される実質的に水不溶性の医薬品物質の、オストワルド熟成に起因する粒子の成長がない固体ナノ粒子処方物、ならびにかかる処方物を調製および使用する方法を提供する。
【００９２】
これらのナノ粒子処方物の利点は、実質的に水不溶性の医薬品物質がオストワルド熟成の阻害剤と共沈殿されることである。これらの組成物は、ゆっくりとした輸液によって、またはボーラス注入法によって、または他の非経口もしくは経口送達経路によってナノ粒子または懸濁液の形態で送達することができる薬理学的に活性な薬剤の非常に低い毒性形態を提供することが観察されている。これらのナノ粒子は、４００ｎｍ未満、好ましくは２００ｎｍ未満、そしてより好ましくは１４０ｎｍ未満のサイズを有し、親水性タンパク質がそのナノ粒子の表面に吸着されている。これらのナノ粒子は、異なるモルホロジーをとることができ、それらは非晶質の粒子または結晶性粒子として存在することができる。
【００９３】
実質的に不溶性とは、２５℃の水に対して０．５ｍｇ／ｍｌ未満、好ましくは０．１ｍｇ／ｍｌ未満、そして特には０．０５ｍｇ／ｍｌ未満の溶解度を有する物質を意味する。
【００９４】
粒子の成長の阻害に対する最大の影響は、その物質が２５℃の水に対して０．０５μｇ／ｍｌを超える溶解度を有するときに観察される。好ましい実施形態では、その物質は、０．０５μｇ／ｍｌ〜０．５ｍｇ／ｍｌの範囲、例えば０．０５μｇ／ｍｌ〜０．０５ｍｇ／ｍｌの範囲の溶解度を有する。
【００９５】
水に対するその物質の溶解度は、従来の技法を使用して測定することができる。例えば、２５℃で過剰量の物質を水に加え、その溶液を４８時間平衡化させることによりその物質の飽和溶液が調製される。過剰の固体は遠心分離または濾過によって取り除かれ、水に対するその物質の濃度は適切な分析技法（ＨＰＬＣなど）によって測定される。
【００９６】
本発明にかかるプロセスは、広範囲の実質的に水不溶性の物質の安定な水系分散液を調製するために使用することができる。適切な物質としては、顔料、農薬、除草剤、殺菌剤、工業的な殺生物剤、化粧品、薬理学的に活性な化合物および薬理学的に不活性な物質（薬理学的に許容できる担体および希釈剤など）が挙げられるが、これらに限定されない。
【００９７】
好ましい実施形態では、実質的に水不溶性の物質は、実質的に水不溶性の薬理学的に活性な物質である。多くの種類の薬理学的に活性な化合物が本発明で使用するのに適しており、その例としては、実質的に水不溶性の抗癌剤（例えばビカルタミド）、ステロイド、好ましくはグルココルチコステロイド（特に、抗炎症性グルココルチコステロイド、例えばブデソニド）、血圧降下薬（例えばフェロジピンまたはプラゾシン）、β遮断薬（例えばピンドロールまたはプロプラノロール）、脂質低下薬、抗凝固剤、抗血栓剤、抗真菌薬（例えばグリセオフルビン）、抗ウイルス薬、抗生物質、抗菌剤（例えばシプロフロキサシン）、抗精神病薬、抗うつ剤、鎮痛剤、麻酔薬、抗炎症剤（胃腸の炎症性疾患の治療のための化合物、例えば国際公開第９９／５５７０６号パンフレットに記載される化合物および他の抗炎症性化合物、例えばケトプロフェンを含む）、抗ヒスタミン薬、ホルモン（例えばテストステロン）、免疫調整剤または避妊薬が挙げられるが、これらに限定されない。これらの物質は、単一の実質的に水不溶性の物質を含んでいてもよく、または２つ以上のかかる物質の組合せを含んでいてもよい。
【００９８】
本発明によって製造されるナノ粒子は約６０〜１９０ｎｍの直径を有するため、それらはＲＥＳによる摂取量が減少し、その結果、より長い循環時間、生物学的安定性および化学的安定性の向上、および腫瘍部位での蓄積量の増大を示す。もっとも重要なことは、このナノ粒子が薬物動態および生体内分布を変えることができるため、このナノ粒子処方物が、毒性が実質的に低下しマウスに対して抗腫瘍活性の著しい増加をもたらすことができることである。これは有毒な副作用を軽減することができ、その療法の効力を高めることができる。
【００９９】
（オストワルド熟成阻害剤）
オストワルド熟成阻害剤は、水非混和性有機相に存在する実質的に水不溶性の物質よりも水に対する溶解性が低い非ポリマー性疎水性有機化合物であるが、このオストワルド熟成阻害剤はリン脂質ではない。適切なオストワルド熟成阻害剤は、２５℃において０．１ｍｇ／ｌ未満、より好ましくは０．０１ｍｇ／ｌ未満の水に対する溶解度を有する。本発明の実施形態にでは、オストワルド熟成阻害剤は、２５℃において０．０５μｇ／ｍｌ未満、例えば０．１ｎｇ／ｍｌ〜０．０５μｇ／ｍｌの水に対する溶解度を有する。
【０１００】
本発明の実施形態では、オストワルド熟成阻害剤は、２０００未満、例えば５００未満、例えば４００未満の分子量を有する。本発明の別の実施形態では、オストワルド熟成阻害剤は、１０００未満、例えば６００未満の分子量を有する。例えば、オストワルド熟成阻害剤は、２００〜２０００の範囲の分子量を有していてよく、好ましくは４００〜１０００の範囲、より好ましくは２００〜６００の範囲の分子量を有していてよい。
【０１０１】
適切なオストワルド熟成阻害剤としては、分類（ｉ）〜（ｖｉｉ）から選択された阻害剤またはかかる阻害剤の２つ以上の組合せが挙げられる。
（ｉ）脂肪酸のモノグリセリド、ジグリセリドまたは（より好ましくは）トリグリセリド。適切な脂肪酸としては、８〜１２個、より好ましくは８〜１０個の炭素原子を含む中鎖脂肪酸、または１２個より多い炭素原子、例えば１４〜２０個の炭素原子、より好ましくは１４〜１８個の炭素原子を含む長鎖脂肪酸が挙げられる。この脂肪酸は、飽和脂肪酸であってもよく、不飽和脂肪酸であってもよく、または飽和脂肪酸と不飽和脂肪酸との混合物であってもよい。脂肪酸は任意に１つ以上のヒドロキシル基を含んでいてもよい（例えばリシノール酸）。グリセリドは、周知の技法、例えば、グリセロールを１つ以上の長鎖脂肪酸または中鎖脂肪酸とエステル化することにより、調製することができる。好ましい実施形態では、オストワルド熟成阻害剤は、グリセロールを長鎖脂肪酸、または好ましくは中鎖脂肪酸の混合物とエステル化することにより得られるトリグリセリドの混合物である。脂肪酸の混合物は、天然物から、例えば天然油（ヤシ油など）からの抽出によって得ることができる。ヤシ油から抽出された脂肪酸は、約５０〜８０重量％のデカン酸および２０〜５０重量％のオクタン酸を含有する。グリセロールをエステル化するために脂肪酸の混合物を使用すると、異なるアシル鎖長の混合物を含むグリセリドの混合物が得られる。長鎖トリグリセリドおよび中鎖トリグリセリドは市販されている。例えば、８〜１２個、より好ましくは８〜１０個の炭素原子を有するアシル基を含む中鎖トリグリセリド（ＭＣＴ）はグリセロールとヤシ油から抽出された脂肪酸とのエステル化により調製され、８〜１２個、より好ましくは８〜１０個の炭素原子を有するアシル基を含むトリグリセリドの混合物が得られる。このＭＣＴは、Ｍｉｇｌｙｏｌ  ８１２Ｎ（Ｈｕｌｓ、ドイツ）として市販されている。他の市販されているＭＣＴとしては、Ｍｉｇｌｙｏｌ  ８１０およびＭｉｇｌｙｏｌ  ８１８（Ｈｕｌｓ、ドイツ）が挙げられる。さらなる適切な中鎖トリグリセリドは、トリラウリン（グリセロールトリラウレート）である。市販されている長鎖トリグリセリドとしては、グリセリルトリステアレート、グリセリルトリパルミテート、大豆油、ゴマ油、ヒマワリ油、ヒマシ油または菜種油が挙げられる。
モノグリセリドおよびジグリセリドは、グリセロールと適切な脂肪酸、または脂肪酸の混合物との部分エステル化によって得ることができる。必要に応じて、モノグリセリドおよびジグリセリドは、従来の技法を使用して、例えば反応混合物からの抽出および引き続くエステル化によって、分離し生成することができる。モノグリセリドが使用される場合、それは長鎖モノグリセリド、例えばグリセロールと１８個の炭素原子を含む脂肪酸とのエステル化により形成されるモノグリセリドであることが好ましい。
（ｉｉ）Ｃ２−１０ジオールの脂肪酸モノエステルまたは（好ましくは）ジエステル。好ましくは、このジオールは、飽和であってもよくまたは不飽和であってもよい脂肪族ジオール、例えば直鎖ジオールであっても分枝鎖ジオールであってもよいＣ２−１０アルカンジオールである。より好ましくは、このジオールは、直鎖ジオールであっても分枝鎖ジオールであってもよいＣ２−６アルカンジオール、例えばエチレングリコールまたはプロピレングリコールである。適切な脂肪酸としては、グリセリドに関連して上に記載した中鎖脂肪酸および長鎖脂肪酸が挙げられる。好ましいエステルは、プロピレングリコールと１０〜１８個の炭素原子を含む１つ以上の脂肪酸とのジエステル、例えばＭｉｇｌｙｏｌ  ８４０（Ｈｕｌｓ、ドイツ）である。
（ｉｉｉ）アルカノールまたはシクロアルカノールの脂肪酸エステル。適切なアルカノールとしては、直鎖であっても分枝鎖であってもよいＣ１−２０アルカノール、例えばエタノール、プロパノール、イソプロパノール、ｎ−ブタノール、ｓｅｃ−ブタノールまたはｔｅｒｔ−ブタノールが挙げられる。適切なシクロアルカノールとしては、Ｃ３−６シクロアルカノール、例えばシクロヘキサノールが挙げられる。適切な脂肪酸としては、グリセリドに関連して上に記載した中鎖脂肪酸および長鎖脂肪酸が挙げられる。好ましいエステルは、Ｃ２−６アルカノールと８〜１０個の炭素原子、より好ましくは１２〜２９個の炭素原子を含む１つ以上の脂肪酸とのエステルである。この脂肪酸は飽和であっても不飽和であってもよい。適切なエステルとしては、例えばドデカン酸ドデシルまたはオレイン酸エチルが挙げられる。
（ｉｖ）ワックス。適切なワックスとしては、長鎖脂肪酸と少なくとも１２個の炭素原子を含むアルコールとのエステルが挙げられる。このアルコールは、脂肪族アルコールであってもよく、芳香族アルコールであってもよく、脂肪族基および芳香族基を含むアルコールであってもよく、２つ以上のかかるアルコールの混合物であってもよい。アルコールが脂肪族アルコールである場合、それは飽和であっても不飽和であってもよい。この脂肪族アルコールは、直鎖であってもよく、分枝鎖であってもよくまたは環状であってもよい。適切な脂肪族アルコールとしては、１２個より多い炭素原子、好ましくは１４個より多い炭素原子、特に１８個より多い炭素原子、例えば１２〜４０個、より好ましくは１４〜３６個および特に１８〜３４個の炭素原子を含む脂肪族アルコールが挙げられる。適切な長鎖脂肪酸としては、グリセリドに関連して上に記載した長鎖脂肪酸、好ましくは１４個より多い炭素原子、特に１８個より多い炭素原子、例えば１４〜４０個、より好ましくは１４〜３６個、特に１８〜３４個の炭素原子を含む長鎖脂肪酸が挙げられる。このワックスは、天然ワックス（例えば蜜ろう）であってもよく、植物性素材に由来するワックスでもよく、脂肪酸と長鎖アルコールとのエステル化によって調製される合成ワックスであってもよい。他の適切なワックスとしては、石油ろう（パラフィンワックスなど）が挙げられる。
（ｖ）長鎖脂肪族アルコール。適切なアルコールとしては、６個以上の炭素原子、より好ましくは８個以上の炭素原子、例えば１２個以上の炭素原子、例えば１２〜３０個、例えば１４〜２８個の炭素原子を有するアルコールが挙げられる。長鎖脂肪族アルコールが１０〜２８個、特に１４〜２２個の炭素原子、例えば１４〜２２個の炭素原子を有することが特に好ましい。このアルコールは、直鎖であってもよく、分枝鎖であってもよく、飽和であってもよく不飽和であってもよい。適切な長鎖アルコールの例としては、１−ヘキサデカノール、１−オクタデカノールまたは１−ヘプタデカノールが挙げられる。または、
（ｖｉ）硬化植物油、例えば硬化ヒマシ油。
（ｖｉｉ）コレステロールおよびコレステロールの脂肪酸エステル。
【０１０２】
本発明の一実施形態では、オストワルド熟成阻害剤は、６〜２２個、好ましくは１０〜２０個の炭素原子を含む長鎖トリグリセリドおよび長鎖脂肪族アルコールから選択される。好ましい長鎖トリグリセリドおよび長鎖脂肪族アルコールは、上に定義されている。好ましい実施形態では、オストワルド熟成阻害剤は、１２〜１８個の炭素原子を有するアシル基を含む長鎖トリグリセリドまたはかかるトリグリセリドの混合物、および１０〜２２個の炭素原子を含む脂肪族アルコール（好ましくは１−ヘキサデカノール）のエステルまたはこれらの混合物（例えばヘキサデシルヘキサデカノエート）から選択される。
【０１０３】
本発明の別の実施形態では、オストワルド熟成阻害剤は、コレステロールのエステルおよびコレステロールから選択される。好ましいコレステリルエステルは、パルミチン酸コレステリルまたはステアリン酸コレステリルである。
【０１０４】
実質的に水不溶性の物質が薬理学的に活性な化合物である場合、オストワルド熟成阻害剤は薬理学的に不活性な物質であることが好ましい。
【０１０５】
オストワルド熟成阻害剤は、粒子中に、懸濁液中の粒子のオストワルド熟成を防止するのに十分な量で存在する。オストワルド熟成阻害剤は、オストワルド熟成阻害剤および実質的に水不溶性の物質を含む、本発明のプロセスにおいて形成される固体粒子中の少量成分であることが好ましい。それゆえ、オストワルド熟成阻害剤が分散液中の粒子のオストワルド熟成を防止するのにちょうど十分な量で存在し、これにより粒子中に存在するオストワルド熟成阻害剤の量を最少にすることが好ましい。
【０１０６】
本発明の実施形態では、オストワルド熟成阻害剤および実質的に水不溶性の物質の総重量に対するオストワルド熟成阻害剤の重量分率（すなわち、オストワルド熟成阻害剤の重量／（オストワルド熟成阻害剤の重量＋実質的に水不溶性の物質の重量））が０．０１〜０．９９であり、好ましくは０．０５〜０．９５であり、特に０．２〜０．９５であり、とりわけ０．３〜０．９５である。好ましい実施形態では、オストワルド熟成阻害剤および実質的に水不溶性の物質の総重量に対するオストワルド熟成阻害剤の重量分率は、０．９５未満であり、より好ましくは０．９以下であり、例えば０．２〜０．９、例えば０．３〜０．９、例えば約０．８である。この実質的に水不溶性の物質が薬理学的に活性な物質であり、オストワルド熟成阻害剤が比較的無毒であり（例えば０．８を超える重量分率）かつ生体内に投与されたときに望ましくない副作用を生じず、そして／または薬理学的に活性な物質の溶解速度／生物学的利用能に影響を及ぼさないかも知れない場合には、これは特に好ましい。
【０１０７】
さらに、本発明者らは、オストワルド熟成による粒子の成長を防止し、これにより小さい（好ましくは１０００ｎｍ未満、好ましくは５００ｎｍ未満）安定な粒子が調製できるようにするためには、オストワルド熟成阻害剤および実質的に水不溶性の物質に対するオストワルド熟成阻害剤の低い重量比（すなわち０．５未満）で一般に十分であることを見出した。小さく一定の粒径が望ましい場合が多く、実質的に水不溶性の物質が例えば静脈内投与に使用される薬理学的に活性な物質である場合には特にそうである。
【０１０８】
本発明にかかるプロセスによって調製される分散液の１つの応用は、薬理学的に活性な化合物の毒物学の研究である。本発明のプロセスによって調製される分散液は、特に物質の粒径が５００ｎｍ未満である場合には、別のプロセスを使用して調製される分散液と比べて改善された生物学的利用能を示すことができる。この応用において、オストワルド熟成阻害剤の存在に関連する毒物学に対するいかなる効果も最少になるように、活性な化合物に対するオストワルド熟成阻害剤の量を最少にすることが好都合である。
【０１０９】
実質的に水不溶性の物質がオストワルド熟成阻害剤に対してかなりの溶解度を有する場合、実質的に水不溶性の物質に対するオストワルド熟成阻害剤の重量比は、実質的に水不溶性の物質の量がオストワルド熟成阻害剤中の実質的に水不溶性の物質の飽和溶液を形成するのに必要とされる量を超えることを確実にするたように選択されるべきである。これにより、実質的に水不溶性の物質の固体粒子が分散液中で形成されることが確実になる。オストワルド熟成阻害剤中の実質的に水不溶性の物質の溶液を含む液体液滴、あるいは固体物質および大領域の液体オストワルド熟成阻害剤を含む２相系がこのプロセスで形成されないことを確実にするために、分散液が調製される温度（例えば周囲温度）でオストワルド熟成阻害剤が液体である場合に、これは重要である。
【０１１０】
理論に拘束されることは望まないが、本発明者らは、粒子中で物質とオストワルド熟成阻害剤との間で相分離が起こる系は、固体粒子が実質的に単一相系を形成する系よりもオストワルド熟成を起こしやすいと考える。従って、好ましい実施形態では、オストワルド熟成阻害剤は、実質的に水不溶性の物質およびオストワルド熟成阻害剤の実質的に単一相の混合物を含む分散液中の固体粒子を形成するのに十分その物質と混和性である。本発明によって形成される粒子の組成は、従来の技法、例えばオストワルド熟成阻害剤に対する実質的に水不溶性の物質の（熱力学的）溶解度、固体粒子中の相分離を検出するための慣用的な示差走査熱量測定（ＤＳＣ）法を使用して得られる融解エントロピーおよび融点の分析を用いて分析することができる。さらに、核磁気共鳴（ＮＭＲ）を用いたナノ懸濁液の研究（例えば、粒子中のいずれかの成分の線幅拡大）を使用して粒子中の相分離を検出することができる。
【０１１１】
一般に、オストワルド熟成阻害剤は、実質的に単一相粒子を形成するのに十分な上記物質との混和性を有するべきである。これは、オストワルド熟成阻害剤が固体粒子中に分子レベルで分散しているか、または固体粒子全体にわたって分散しているオストワルド熟成阻害剤の小さい領域中に存在することを意味する。多くの物質について、物質／オストワルド熟成阻害剤混合物は非理想的混合物であると考えられる。これは、その２つの成分の混合が非ゼロエンタルピー変化を伴うことを意味する。
【０１１２】
（本発明のナノ粒子の調製）
水系媒体に分散した固体ナノ粒子を形成するために、実質的に水不溶性の医薬品物質およびオストワルド熟成阻害剤（複数種であってもよい）は、適切な溶媒（例えば、クロロホルム、塩化メチレン、酢酸エチル、エタノール、テトラヒドロフラン、ジオキサン、アセトニトリル、アセトン、ジメチルスルホキシド、ジメチルホルムアミド、メチルピロリジノンなど、およびこれらのうちの任意の２つ以上の混合物）中に溶解される。本発明を実施するために使用することが想起されるさらなる溶媒としては、大豆油、ココナッツオイル、オリーブ油、サフラワー油、綿実油、ゴマ油、オレンジ油、リモネン油、Ｃ１−Ｃ２０アルコール、Ｃ２−Ｃ２０エステル、Ｃ３−Ｃ２０ケトン、ポリエチレングリコール、脂肪族炭化水素、芳香族炭化水素、ハロゲン化炭化水素およびこれらの組合せが挙げられる。
【０１１３】
次の段階では、固体ナノ粒子を作製するために、タンパク質（例えば、ヒト血清アルブミン）を（水相に）加えて、安定なナノ液滴の形成のための安定剤または乳化剤として作用させる。タンパク質は、約０．０５〜２５％（ｗ／ｖ）の範囲、より好ましくは約０．５％〜１０％（ｗ／ｖ）の範囲の濃度で加えられる。
【０１１４】
次の段階では、固体ナノ粒子を作製するために、高圧下および高せん断力下での均質化によってエマルジョンが形成される。かかる均質化は、約３，０００〜３０，０００ｐｓｉ（約２１〜約２０７ＭＰａ）の範囲の圧力で通常運転される高圧ホモジナイザー中で実施されることが好都合である。かかるプロセスは、約６，０００〜２５，０００ｐｓｉ（約４１〜約１７２ＭＰａ）の範囲の圧力で実施されることが好ましい。生成したエマルジョンは、実質的に水不溶性の医薬品物質、オストワルド熟成阻害剤および他の薬剤を含有する非水系溶媒の非常に小さいナノ液滴を含む。許容できる均質化方法としては、高せん断およびキャビテーションを付与するプロセス（高圧均質化、高せん断ミキサー、超音波処理、高せん断インペラなど）が挙げられる。
【０１１５】
最後に、固体ナノ粒子を作製するために、溶媒が減圧下でエバポレーションされ、固体形態の実質的に水不溶性の医薬品物質およびオストワルド熟成阻害剤（複数種であってもよい）ならびにタンパク質の固体ナノ粒子から構成されるコロイド系が得られる。許容できるエバポレーション方法としては、ロータリーエバポレーター、流下膜式エバポレーター、噴霧乾燥機、凍結乾燥機などの使用が挙げられる。溶媒のエバポレーション後、液体懸濁液は乾燥され、薬理学的に活性な薬剤およびタンパク質を含有する粉末が得られ得る。生成した粉末は、任意の好都合なときに適切な水系媒体（生理食塩水、緩衝化生理食塩水、水、緩衝化水系媒体、アミノ酸の溶液、ビタミンの溶液、炭水化物の溶液など、ならびにこれらのうちの任意の２つ以上の組合せなど）の中に再懸濁することができ、哺乳動物に投与することができる懸濁液が得られる。この粉末を得るために想起される方法としては、フリーズドライ法（ｆｒｅｅｚｅ−ｄｒｙｉｎｇ）、噴霧乾燥などが挙げられる。
【０１１６】
本発明の具体的な実施形態によれば、実質的に水不溶性の医薬品物質およびオストワルド成長に対するオストワルド熟成阻害剤を含有する異常に小さいサブミクロン固体粒子、すなわち直径２００ナノメートル未満である粒子を形成するための方法が提供される。かかる粒子は、使用前に液体懸濁液の形態で濾過滅菌することができる。本発明の処方プロセスの最終生成物（すなわち、実質的に水不溶性の医薬品物質の粒子）を濾過滅菌することができるということは、非常に重要である。なぜなら、高濃度のタンパク質（例えば、血清アルブミン）を含有する分散液を従来の手段（高圧蒸気殺菌法など）によって滅菌することができないからである。
【０１１７】
実質的に水不溶性の医薬品物質の濾過滅菌できる固体ナノ粒子（すなわち、２００ｎｍ未満の粒子）を得るために、実質的に水不溶性の医薬品物質およびオストワルド熟成阻害剤（複数種であってもよい）は最初に実質的に水非混和性の有機溶媒（例えば、水に対して約５％未満の溶解度を有する溶媒。例えば、クロロホルム）に高濃度で溶解され、これにより実質的に水不溶性の医薬品物質、オストワルド熟成阻害剤および他の薬剤を含有する油相が形成される。適切な溶媒はこれまでに示されている。次に、水混和性の有機溶媒（例えば、水に対して約１０％を超える溶解度を有する溶媒。例えば、エタノール）が全有機相の約１％〜９９％ｖ／ｖの範囲、より好ましくは約５％〜２５％ｖ／ｖの範囲の最終濃度で油相に加えられる。この水混和性有機溶媒は、酢酸エチル、エタノール、テトラヒドロフラン、ジオキサン、アセトニトリル、アセトン、ジメチルスルホキシド、ジメチルホルムアミド、メチルピロリジノンなどの溶媒から選択することができる。あるいは、水非混和性溶媒と水混和性溶媒との混合物が最初に調製され、次いで実質的に水不溶性の医薬品物質、オストワルド熟成阻害剤および他の薬剤がその混合物に溶解される。有機相中の水混和性溶媒は有機相と水相との間の界面の潤滑剤として作用し、均質化の間に微細な水中油型エマルジョンの形成をもたらすと考えられる。
【０１１８】
次の段階では、オストワルド成長が減少した実質的に水不溶性の医薬品物質の固体ナノ粒子の形成のために、ヒト血清アルブミンまたはこれまでに記載した任意の他の適切な安定剤が水系媒体に溶解される。この成分は、安定なナノ液滴の形成のための乳化剤として作用する。必要に応じて、十分な量の第１の有機溶媒（例えばクロロホルム）が水相に溶解され、その水系媒体は飽和濃度に近づけられる。別個の測定された量の有機相が飽和水相に加えられ（この時点で、これは実質的に水不溶性の医薬品物質、第１の有機溶媒および第２の有機溶媒を含有する）、有機相の相分率が約０．５％〜１５％ｖ／ｖ、より好ましくは１％〜８％ｖ／ｖであるようにされる。次に、低せん断力での均質化によってマイクロ液滴およびナノ液滴から構成される混合物が形成される。これは、例えば、約２，０００〜約１５，０００ｒｐｍの範囲で運転される従来の実験室用のホモジナイザーを用いて、当業者が容易に認識できるような種々の方法で実現することができる。これは、続いて高圧（すなわち、約３，０００〜３０，０００ｐｓｉ（約２１〜約２０７ＭＰａ）の範囲）で均質化される。生成した混合物は、タンパク質水溶液（例えば、ヒト血清アルブミン）、実質的に水不溶性の医薬品物質、オストワルド熟成阻害剤（複数種であってもよい）、他の薬剤、第１の溶媒および第２の溶媒を含む。最後に、溶媒は真空下で急速にエバポレーションされ、非常に小さいナノ粒子の形態（すなわち，直径が約５０ｎｍ〜２００ｎｍの範囲の粒子）のコロイド状分散系（実質的に水不溶性の医薬品物質、オストワルド熟成阻害剤および他の薬剤ならびにタンパク質の固体）が得られ、このように濾過滅菌することができる。粒子の好ましいサイズ範囲は、処方および操作パラメータに依存して約５０ｎｍ〜１７０ｎｍである。
【０１１９】
本発明によって調製される固体ナノ粒子は、例えば、適切な温度−時間プロフィールで凍結乾燥することにより、そこから水を除去することによって粉末形態へとさらに変換されてもよい。タンパク質（例えば、ヒト血清アルブミン）自体が抗凍結剤として作用し、マンニトール、スクロース、トレハロース、グリシンなどの従来の抗凍結剤を使用する必要なく、粉末は、水、生理食塩水または緩衝液を加えることにより容易に再構成される。必要でないが、所望される場合には従来の抗凍結剤が本発明の処方物に添加されてもよいことは、当然理解される。実質的に水不溶性の医薬品物質を含有する固体ナノ粒子によって、比較的小さい体積で高用量の薬理学的に活性な薬剤の送達が可能になる。
【０１２０】
本発明の実施形態によれば、実質的に水不溶性の医薬品物質を含有する固体ナノ粒子は約２ミクロンより大きい断面直径を有する。１ミクロン未満の断面直径がより好ましく、静脈内投与経路にとっては０．２２ミクロン未満の断面直径が現在最も好ましい。
【０１２１】
本発明によって安定剤として使用することが想起されるタンパク質としては、アルブミン（３５個のシステイン残基を含む）、イムノグロブリン、カゼイン、インスリン（６個のシステインを含む）、ヘモグロビン（１つのα２β２ユニットあたり６個のシステイン残基を含む）、リゾチーム（８個のシステイン残基を含む）、イムノグロブリン、α−２−マクログロブリン、フィブロネクチン、ビトロネクチン、フィブリノゲン、リパーゼなどが挙げられる。タンパク質、ペプチド、酵素、抗体およびこれらの組合せは、本発明で使用することが想起される一般的な種類の安定剤である。
【０１２２】
使用するために現在好ましいタンパク質はアルブミンである。ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）は、最も豊富にある血漿タンパク質（〜６４０
【化１】
0005571380.tif 000002
）であり、ヒトに対しては免疫原性ではない。タンパク質は、主に、広範な範囲の疎水性低分子リガンド（脂肪酸、ビリルビン、チロキシン、胆汁酸およびステロイドが挙げられる）に結合するその顕著な能力によって特徴付けられる。このタンパク質は、これらの化合物についての可溶化剤および輸送体としての役割を果たし、ある場合には、遊離濃度の重要な緩衝作用をもたらす。ＨＳＡはまた、内在性リガンドの結合場所と重なる２つの主要な部位で実に様々な薬物を結合する。このタンパク質は、３つの相同ドメイン（Ｉ〜ＩＩＩ）を含む６６ｋＤのらせん状の単量体であり、その相同ドメインの各々はＡサブドメインおよびＢサブドメインから構成される。りん光偏光解消法を用いて中性溶液においてエリトロシン−ウシ血清アルブミン複合体ついて行った測定結果は、ナノ秒〜数ミリ秒の時間範囲ではＢＳＡの溶液中の大きいタンパク質セグメントの独立した動きは存在しないことと整合する。これらの測定結果は、ＢＳＡの中性溶液中で、ヒト血清アルブミンの結晶構造におけるようなアルブミンのハート型をした構造（８ｎｍ×８ｎｍ×８ｎｍ×３．２ｎｍ）を有していることを支持する（Ｆｅｒｒｅｒ  ２００１）。アルブミンの別の利点は、薬物を腫瘍部位へと輸送する能力である。特異的抗体も、特異的場所へナノ粒子を標的化するために利用することができる。
【０１２３】
本発明の組成物の調製において、実質的に水不溶性実質的に水不溶性の医薬品物質を懸濁または溶解するために実に様々な有機媒体を用いることができる。本発明の実施のために使用することが想起される有機媒体としては、薬理学的に活性な薬剤を懸濁または溶解することはできるが、乳化剤として用いたポリマーとも、薬理学的に活性な薬剤自体とも化学反応しない任意の非水性液体が挙げられる。例としては、植物油（例えば、大豆油、オリーブ油など）、ココナッツオイル、サフラワー油、綿実油、ゴマ油、オレンジ油、リモネン油、４〜３０個の炭素原子を有する脂肪族、脂環式または芳香族の炭化水素（例えば、ｎ−ドデカン、ｎ−デカン、ｎ−ヘキサン、シクロヘキサン、トルエン、ベンゼンなど）、２〜３０個の炭素原子を有する脂肪族または芳香族のアルコール（例えば、オクタノールなど）、２〜３０個の炭素原子を有する脂肪族または芳香族のエステル（例えば、カプリル酸エチル（オクタン酸エチル）など）、２〜３０個の炭素原子を有するアルキルエーテル、アリールエーテルまたは環状エーテル（例えば、ジエチルエーテル、テトラヒドロフランなど）、１〜３０個の炭素原子（および必要に応じて１個より多いハロゲン置換基、例えば、ＣＨ３Ｃｌ、ＣＨ２Ｃｌ２、ＣＨ２Ｃｌ−ＣＨ２Ｃｌなど）を有するアルキルハライドまたはアリールハライド、３〜３０個の炭素原子を有するケトン（例えば、アセトン、メチルエチルケトンなど）、ポリアルキレングリコール（例えば、ポリエチレングリコールなど）、あるいはこれらのうちの任意の２つ以上の組合せが挙げられる。
【０１２４】
本発明の実施のために使用することが想起される有機媒体の特に好ましい組合せは、典型的には約２００℃以下の沸点を有し、そしてより高分子量の（あまり揮発性でない）有機媒体を伴った、例えばジクロロメタン、クロロホルム、酢酸エチル、ベンゼンなど（すなわち、薬理学的に活性な薬剤に対して高い溶解度を有し、用いる他の有機媒体に可溶である溶媒）のような揮発性液体を含む。他の有機媒体に加えられる場合、これらの揮発性添加剤は、薬理学的に活性な薬剤の有機媒体中への溶解度を駆動することを補助する。このステップは通常時間がかかるため、これは望ましい。溶解後、この揮発性成分は、（必要に応じて真空下での）エバポレーションにより除去されてよい。
【０１２５】
液滴サイズを小さくするために、本発明によって調製される固体ナノ粒子処方物は、均質化のあいだエマルジョンをさらに安定化するためのある量の生体適合性界面活性剤をさらに含んでいてもよい。これらの生体適合性界面活性剤は、天然のレシチン（卵レシチン、大豆レシチンなど）；植物性モノガラクトシルジグリセリド（硬化物）または植物性ジガラクトシルジグリセリド（硬化物）；合成レシチン（ジヘキサノイル−Ｌ−□−レシチン、ジオクタノイル−Ｌ−□−レシチン、ジデカノイル−Ｌ−□−レシチン、ジドデカノイル−Ｌ−□−レシチン、ジテトラデカノイル−Ｌ−□−レシチン、ジヘキサデカノイル−Ｌ−□−レシチン、ジオクタデカノイル−Ｌ−□−レシチン、ジオレイル−Ｌ−□−レシチン、ジリノレオイル−Ｌ−□−レシチン、□−パルミト−□−オレオイル−Ｌ−□−レシチン、Ｌ−□−グリセロホスホリルコリンなど）；ポリオキシエチル化炭化水素または植物油（Ｃｒｅｍａｐｈｏｒ（登録商標）  ＥＬもしくはＲＨ４０、Ｅｍｕｌｐｈｏｒ（登録商標）  ＥＬ−６２０ＰもしくはＥＬ−７１９、Ａｒｌａｃｅｌ（登録商標）−１８６、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標）  Ｆ−６８など）；ソルビタンエステル（ソルビタンモノラウレート、ソルビタンモノステアレート、ソルビタンモノパルミテート、ソルビタントリステアレート、ソルビタンモノオレエートなど）；ＰＥＧ脂肪酸エステル（ＰＥＧ２００  ジココエート、ＰＥＧ３００  ジステアレート、ＰＥＧ４００  セスキオエレート、ＰＥＧ４００  ジオレエートなど）；エトキシ化グリセリンエステル（ＰＯＥ（２０）  グリセロールモノステアレート、ＰＯＥ（２０）  グリセロールモノオレエートなど）；エトキシ化脂肪族アミン（ＰＯＥ（１５）  ココリルアミン、ＰＯＥ（２５）  ココリルアミン、ＰＯＥ（８０）  オレイルアミンなど）；エトキシ化ソルビタンエステル（ＰＯＥ（２０）  ソルビタンモノラウレート、ＰＯＥ（２０）  ソルビタンモノステアレート、ＰＯＥ（２０）  ソルビタントリステアレート、ＰＯＥ（２０）  ソルビタントリオレエートなど）；エトキシ化脂肪酸（ＰＯＥ（５）  オレイン酸、ＰＯＥ（５）  ヤシ油脂肪酸、ＰＯＥ（１４）  ヤシ油脂肪酸、ＰＯＥ（９）  ステアリン酸、ＰＯＥ（４０）  ステアリン酸など）；アルコール−脂肪酸エステル（パルミチン酸２−エチルヘキシル、オレイン酸イソブチル、アジピン酸ジトリデシルなど）；エトキシ化アルコール（ＰＯＥ（２）−２−エチルヘキシルアルコール、ＰＯＥ（１０）  セチルアルコール、ＰＯＥ（４）  デシルアルコール、ＰＯＥ（６）  ラウリルアルコールなど）；アルコキシ化ヒマシ油（ＰＯＥ（５）  ヒマシ油、ＰＯＥ（２５）  ヒマシ油、ＰＯＥ（２５）  硬化ヒマシ油など）；グリセリンエステル（グリセロールモノステアレート、グリセロールトリカプリレートなど）；ポリエチレングリコール（ポリエチレングリコール−２００、ポリエチレングリコール−３００、ポリエチレングリコール−４００など）；糖エステル（スクロース脂肪酸エステルなど）から選択することができる。処方物中の生体適合性界面活性剤の割合（％）は、０．００２重量％〜１重量％で変わり得る。
【０１２６】
本発明によって調製される固体ナノ粒子処方物は、さらに、所定のキレート剤を含んでいてよい。処方物に加えられる生体適合性キレート剤は、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）、エチレングリコール−ビス（□−アミノエチルエーテル）−四酢酸（ＥＧＴＡ）、Ｎ−（ヒドロキシエチル）−エチレンジアミン三酢酸（ＨＥＤＴＡ）、ニトリロ三酢酸（ＮＴＡ）、トリエタノールアミン、８−ヒドロキシキノリン、クエン酸、酒石酸、リン酸、グルコン酸、糖酸、チオジプロピオン酸、アセトンジカルボン酸、ジ（ヒドロキシエチル）グリシン、フェニルアラニン、トリプトファン、グリセリン、ソルビトール、ジグライムおよびこれらの薬理学的に許容できる塩から選択することができる。
【０１２７】
本発明によって調製されるナノ粒子処方物は、さらに、アスコルビン酸誘導体（アスコルビン酸、エリソルビン酸、アスコルビン酸ナトリウムなど）；チオール誘導体（チオグリセロール、システイン、アセチルシステイン、シスチン、ジチオエリスリトール（ｄｉｔｈｉｏｅｒｙｔｈｒｅｉｔｏｌ）、ジチオトレイトール、グルタチオンなど）；トコフェロール；ブチル化ヒドロキシアニソール；ブチル化ヒドロキシトルエン；亜硫酸塩（硫酸ナトリウム、亜硫酸水素ナトリウム、アセトン亜硫酸水素ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、亜硫酸ナトリウム、ホルムアルデヒドナトリウムなど）から選択することができる抗酸化剤を含んでいてもよい。
【０１２８】
本発明によって調製されるナノ粒子処方物は、さらに、必要に応じてある防腐剤を含んでいてもよい。本発明の処方物に加えるための防腐剤は、フェノール、クロロブタノール、ベンジルアルコール、メチルパラベン、プロピルパラベン、塩化ベンザルコニウムおよび塩化セチルピリジニウムから選択することができる。
【０１２９】
上で説明したようにして調製される、タンパク質とともに実質的に水不溶性の医薬品物質およびオストワルド熟成阻害剤を含有する固体ナノ粒子は、生体適合性水性液体中の懸濁液として送達される。この液体は、水、生理食塩水、適切な緩衝液を含む溶液、栄養剤（アミノ酸、糖類、タンパク質、炭水化物、ビタミンまたは脂肪など）を含む溶液から選択することができる。
【０１３０】
長期保存安定性を向上させるために、固体ナノ粒子処方は、１つ以上の保護剤（スクロース、マンニトール、トレハロースなど）の存在下で凍結および凍結乾燥されてもよい。凍結乾燥された固体ナノ粒子処方物の再水和によって、懸濁液は、本質的にすべてのそれ以前に加えられた実質的に水不溶性の医薬品物質および粒径を保持する。再水和は、単に純水または滅菌水または０．９％塩化ナトリウム注射液または５％デキストロース溶液を加え、次いでその懸濁液を緩やかにかき混ぜることにより実現される。固体ナノ粒子処方中の実質的に水不溶性の医薬品物質の効力は、凍結乾燥および再構成の後も失われることはない。
【０１３１】
本発明の固体ナノ粒子処方物は、オストワルド熟成阻害剤の存在に起因してオストワルド熟成を起こしにくいことが示されており、先行技術で開示されている処方物よりも溶液中で安定である。本発明において、様々なオストワルド熟成阻害剤組成物、粒径、および実質的に水不溶性の医薬品物質とタンパク質との比を有する本発明の固体ナノ粒子処方効力は、種々の系（ヒト細胞株および細胞増殖活性についての動物モデルなど）に対して研究された。
【０１３２】
本発明の固体ナノ粒子処方物は、遊離形態で投与された実質的に水不溶性の医薬品物質ほどには有毒でないことが示された。さらに、様々な肉腫をもつマウスおよび腫瘍をもたない正常なマウスの体重に対する、固体ナノ粒子処方物および遊離形態の種々の実質的に水不溶性の医薬品物質の効果が研究されている。しかしながら、本願明細書に提供された実施例は、決して、本発明の範囲を限定することも制限することも意図されておらず、本発明の技術を実施するためにもっぱら利用しなければならない条件、パラメータ、試薬、または出発物質を提供していると解釈されるべきではない。
【実施例】
【０１３３】
（実施例１）
（阻害剤としてのコレステロールを有する不安定な固体ナノ粒子の調製）
９６ｍｇのコレステロールおよび１００ｍｇのドセタキセル（Ｇｕｉｙｕａｎｃｈｅｍｐｈａｒｍ、中国）の混合物を、２．５ｍＬのクロロホルムと０．５ｍＬのエタノールの混合物に溶解した。１．５ｇのヒトアルブミン（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｏ、米国）を５０ｍＬの無菌のＩ型水（Ｔｙｐｅ  Ｉ  ｗａｔｅｒ）に溶解することにより、３％ヒトアルブミン溶液を調製した。滅菌水中の１Ｎ塩酸または１Ｎ水酸化ナトリウム溶液のいずれかを加えることにより、このヒトアルブミン溶液のｐＨを６．０〜６．８に調整した。上記の有機溶液を上記アルブミン相に加え、混合物をＩＫＡホモジナイザー（ＩＫＡ  Ｗｏｒｋｓ、ドイツ）を用いて４０００〜６０００ＲＰＭで予均一化した。生成したエマルジョンを高圧均質化（Ａｖｅｓｔｉｎ  Ｉｎｃ、米国）にかけた。圧力を１５，０００〜２０，０００ｐｓｉ（約１０３〜約１３８ＭＰａ）の間で変え、この乳化プロセスを５〜８回続けた。均質化の間、温度制御した熱交換器（Ｊｕｌａｂｏ、米国）からホモジナイザーを通して冷媒を循環させることにより、エマルジョンを５℃〜１０℃で冷却した。これにより、均質で非常に微細な水中油型エマルジョンが得られた。このエマルジョンをロータリーエバポレータ（Ｂｕｃｈｉ、スイス）に移し、ナノ粒子懸濁液へと急速にエバポレーションした。エバポレータの圧力は、エバポレーションの間、真空ポンプ（Ｗｅｌｃｈ）によって０．５〜４ｍｍＨｇに設定し、エバポレーションの間の浴槽温度は３５℃に設定した。
【０１３４】
この懸濁液の粒径は、Ｍａｌｖｅｒｎ  Ｚｅｔａｓｉｚｅｒを用いて光子相関分光法によって測定した。２．５ｇの抗凍結剤トレハロース二水和物（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｏ、米国）を１０ｍＬの無菌のＩ型水に溶解し、懸濁液中のトレハロース二水和物の濃度が４〜９重量％の範囲にあるようにこの溶液を上記懸濁液に加えた。この懸濁液を０．２２μｍフィルター（Ｎａｌｇｅｎｅ、米国）を通して濾過滅菌した。この懸濁液の粒径は、３０〜２２０ｎｍであった。この懸濁液を−４０℃よりも低い温度で凍結し、凍結乾燥した。凍結乾燥したケーキを、さらなる使用の前に再構成した。再構成した溶液の１つのアリコートを２５℃で保存し、他は２〜６℃で保存した。これら２つのアリコートの粒径を、２４℃で８時間にわたってモニタリングした。両方のサンプルの粒子は、１〜２時間後に変化し始め、４時間後にオストワルド熟成によって沈殿し始めた（図６）。上記の組成を含有する処方物を、オストワルド熟成によって不安定なものである、と分類した。
【０１３５】
（実施例２）
（阻害剤としてのコレステロールおよびステアリン酸コレステリルを有する安定な固体ナノ粒子の調製）
１００ｍｇのコレステロール（Ｎｏｒｔｈｅｒｎ  Ｌｉｐｉｄｓ、カナダ）、５００ｍｇのステアリン酸コレステリル（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ、ミズーリ州）および１００ｍｇのドセタキセル（Ｇｕｉｙｕａｎｃｈｅｍｐｈａｒｍ、中国）の混合物を、２．５ｍＬのクロロホルムと０．５ｍＬのエタノールの混合物に溶解した。２．５ｇのヒトアルブミン（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｏ、米国）を５０ｍＬの無菌のＩ型水に溶解することにより、５％ヒトアルブミン溶液を調製した。滅菌水中の１Ｎ塩酸または１Ｎ水酸化ナトリウム溶液のいずれかを加えることにより、このヒトアルブミン溶液のｐＨを６．０〜６．８に調整した。上記の有機溶液を上記アルブミン相に加え、混合物をＩＫＡホモジナイザー（ＩＫＡ  Ｗｏｒｋｓ、ドイツ）を用いて４０００〜６０００ＲＰＭで予均一化した。生成したエマルジョンを高圧均質化（Ａｖｅｓｔｉｎ  Ｉｎｃ、米国）にかけた。圧力を１５，０００〜２０，０００ｐｓｉ（約１０３〜約１３８ＭＰａ）の間で変え、この乳化プロセスを５〜８回続けた。均質化の間、温度制御した熱交換器（Ｊｕｌａｂｏ、米国）からホモジナイザーを通して冷媒を循環させることにより、エマルジョンを５℃〜１０℃で冷却した。これにより、均質で非常に微細な水中油型エマルジョンが得られた。このエマルジョンをロータリーエバポレータ（Ｂｕｃｈｉ、スイス）に移し、ナノ粒子懸濁液へと急速にエバポレーションした。エバポレータの圧力は、エバポレーションの間、真空ポンプ（Ｗｅｌｃｈ）によって、０．５〜４ｍｍＨｇに設定し、エバポレーションの間の浴槽温度は３５℃に設定した。
【０１３６】
懸濁液の粒径は、Ｍａｌｖｅｒｎ  Ｚｅｔａｓｉｚｅｒを用いて光子相関分光法によって測定した。２．５ｇの抗凍結剤トレハロース二水和物（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｏ、米国）を１０ｍＬの無菌のＩ型水に溶解し、懸濁液中のトレハロース二水和物の濃度が４〜９重量％の範囲にあるようにこの溶液を上記懸濁液に加えた。この懸濁液を０．２２μｍフィルター（Ｎａｌｇｅｎｅ、米国）を通して濾過滅菌した。この懸濁液の粒径は、３０〜２２０ｎｍであった。この懸濁液を−４０℃よりも低い温度で凍結し、凍結乾燥した。この懸濁液を−４０℃よりも低い温度で凍結し、凍結乾燥した。凍結乾燥したケーキを、さらなる使用の前に再構成した。再構成した溶液の１つのアリコートを２５℃で保存し、他は２〜６℃で保存した。これら２つのアリコートの粒径を、２４℃で８日間にわたってモニタリングした（図７）。粒径は４８時間後も変化せず、４日間安定であった。上記の組成を含有する処方物を、オストワルド熟成によって安定なものである、と分類した。
【０１３７】
（実施例３）
（阻害剤としてのコレステロールおよびステアリン酸コレステリルを有する安定な固体ナノ粒子の調製）
５０ｍｇのコレステロール（Ｎｏｒｔｈｅｒｎ  Ｌｉｐｉｄｓ、カナダ）、２５０ｍｇのステアリン酸コレステリル（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ、ミズーリ州）および１００ｍｇのドセタキセル（Ｇｕｉｙｕａｎｃｈｅｍｐｈａｒｍ、中国）の混合物を、２．５ｍＬのクロロホルムと０．５ｍＬのエタノールの混合物に溶解した。２．５ｇのヒトアルブミン（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｏ、米国）を５０ｍＬの無菌のＩ型水に溶解することにより、５％ヒトアルブミン溶液を調製した。滅菌水中の１Ｎ塩酸または１Ｎ水酸化ナトリウム溶液のいずれかを加えることにより、このヒトアルブミン溶液のｐＨを６．０〜６．８に調整した。上記の有機溶液を上記アルブミン相に加え、混合物をＩＫＡホモジナイザー（ＩＫＡ  Ｗｏｒｋｓ、ドイツ）を用いて４０００〜６０００ＲＰＭで予均一化した。生成したエマルジョンを高圧均質化（Ａｖｅｓｔｉｎ  Ｉｎｃ、米国）にかけた。圧力を１５，０００〜２０，０００ｐｓｉ（約１０３〜約１３８ＭＰａ）の間で変え、この乳化プロセスを５〜８回続けた。均質化の間、温度制御した熱交換器（Ｊｕｌａｂｏ、米国）からホモジナイザーを通して冷媒を循環させることにより、エマルジョンを５℃〜１０℃で冷却した。これにより、均質で非常に微細な水中油型エマルジョンが得られた。このエマルジョンをロータリーエバポレータ（Ｂｕｃｈｉ、スイス）に移し、ナノ粒子懸濁液へと急速にエバポレーションした。エバポレータの圧力は、エバポレーションの間、真空ポンプ（Ｗｅｌｃｈ）によって、０．５〜２ｍｍＨｇに設定し、エバポレーションの間の浴槽温度は３５℃に設定した。
【０１３８】
懸濁液の粒径は、Ｍａｌｖｅｒｎ  Ｚｅｔａｓｉｚｅｒを用いて光子相関分光法によって測定した。２．５ｇの抗凍結剤トレハロース二水和物（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｏ、米国）を１０ｍＬの無菌のＩ型水に溶解し、懸濁液中のトレハロース二水和物の濃度が４〜９重量％の範囲にあるようにこの溶液を上記懸濁液に加えた。この懸濁液を０．２２μｍフィルター（Ｎａｌｇｅｎｅ、米国）を通して濾過滅菌した。この懸濁液の粒径は、３０〜２２０ｎｍであった。この懸濁液を−４０℃よりも低い温度で凍結し、凍結乾燥した。凍結乾燥したケーキを、さらなる使用の前に再構成した。再構成した溶液の１つのアリコートを２５℃で保存し、他は２〜６℃で保存した。これら２つのアリコートの粒径を、２４℃で８日間にわたってモニタリングした。粒径は４８時間後も変化せず、３日間安定であった。上記の組成を含有する処方物を、オストワルド熟成によって安定なものである、と分類した。
【０１３９】
（実施例４）
（阻害剤としてのコレステロールおよびヘキサデカン酸ヘキサデシルを有する安定な固体ナノ粒子の調製）
１００ｍｇのコレステロール（Ｎｏｒｔｈｅｒｎ  Ｌｉｐｉｄｓ、カナダ）、５００ｍｇのヘキサデカン酸ヘキサデシル（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ、ミズーリ州）および１００ｍｇのドセタキセル（Ｇｕｉｙｕａｎｃｈｅｍｐｈａｒｍ、中国）の混合物を、２．０ｍＬのクロロホルムと０．５ｍＬのエタノールの混合物に溶解した。２．５ｇのヒトアルブミン（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｏ、米国）を５０ｍＬの無菌のＩ型水に溶解することにより、５％ヒトアルブミン溶液を調製した。滅菌水中の１Ｎ塩酸または１Ｎ水酸化ナトリウム溶液のいずれかを加えることにより、このヒトアルブミン溶液のｐＨを６．０〜６．８に調整した。上記の有機溶液を上記アルブミン相に加え、混合物をＩＫＡホモジナイザー（ＩＫＡ  Ｗｏｒｋｓ、ドイツ）を用いて４０００〜６０００ＲＰＭで予均一化した。生成したエマルジョンを高圧均質化（Ａｖｅｓｔｉｎ  Ｉｎｃ、米国）にかけた。圧力を１５，０００〜２０，０００ｐｓｉ（約１０３〜約１３８ＭＰａ）の間で変え、この乳化プロセスを５〜８回続けた。均質化の間、温度制御した熱交換器（Ｊｕｌａｂｏ、米国）からホモジナイザーを通して冷媒を循環させることにより、エマルジョンを５℃〜１０℃で冷却した。これにより、均質で非常に微細な水中油型エマルジョンが得られた。このエマルジョンをロータリーエバポレータ（Ｂｕｃｈｉ、スイス）に移し、ナノ粒子懸濁液へと急速にエバポレーションした。エバポレータの圧力は、エバポレーションの間、真空ポンプ（Ｗｅｌｃｈ）によって、０．５〜２ｍｍＨｇに設定し、エバポレーションの間の浴槽温度は３５℃に設定した。
【０１４０】
懸濁液の粒径は、Ｍａｌｖｅｒｎ  Ｚｅｔａｓｉｚｅｒを用いて光子相関分光法によって測定した。２．５ｇの抗凍結剤トレハロース二水和物（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｏ、米国）を１０ｍＬの無菌のＩ型水に溶解し、懸濁液中のトレハロース二水和物の濃度が４〜９重量％の範囲にあるようにこの溶液を上記懸濁液に加えた。この懸濁液を０．２２μｍフィルター（Ｎａｌｇｅｎｅ、米国）を通して濾過滅菌した。この懸濁液の粒径は、３０〜２２０ｎｍであった。この懸濁液を−４０℃よりも低い温度で凍結し、凍結乾燥した。凍結乾燥したケーキを、さらなる使用の前に再構成した。再構成した溶液の１つのアリコートを２５℃で保存し、他は２〜６℃で保存した。これら２つのアリコートの粒径を、２４℃で８日間にわたってモニタリングした（図８）。粒径は４８時間後も変化せず、５日間安定であった。上記の組成を含有する処方物を、オストワルド熟成によって安定なものである、と分類した。
【０１４１】
（実施例５）
（阻害剤としてのコレステロールおよびグリセリルトリステアレートを有する安定な固体ナノ粒子の調製）
１００ｍｇのコレステロール（Ｎｏｒｔｈｅｒｎ  Ｌｉｐｉｄｓ、カナダ）、２００ｍｇのグリセリルトリステアレート（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ、ミズーリ州）および１００ｍｇのドセタキセル（Ｇｕｉｙｕａｎｃｈｅｍｐｈａｒｍ、中国）の混合物を、３．０ｍＬのクロロホルムと０．５ｍＬのエタノールの混合物に溶解した。２．５ｇのヒトアルブミン（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｏ、米国）を５０ｍＬの無菌のＩ型水に溶解することにより、５％ヒトアルブミン溶液を調製した。滅菌水中の１Ｎ塩酸または１Ｎ水酸化ナトリウム溶液のいずれかを加えることにより、このヒトアルブミン溶液のｐＨを６．０〜６．８に調整した。上記の有機溶液を上記アルブミン相に加え、混合物をＩＫＡホモジナイザー（ＩＫＡ  Ｗｏｒｋｓ、ドイツ）を用いて４０００〜６０００ＲＰＭで予均一化した。生成したエマルジョンを高圧均質化（Ａｖｅｓｔｉｎ  Ｉｎｃ、米国）にかけた。圧力を１５，０００〜２０，０００ｐｓｉ（約１０３〜約１３８ＭＰａ）の間で変え、この乳化プロセスを５〜８回続けた。均質化の間、温度制御した熱交換器（Ｊｕｌａｂｏ、米国）からホモジナイザーを通して冷媒を循環させることにより、エマルジョンを５℃〜１０℃で冷却した。これにより、均質で非常に微細な水中油型エマルジョンが得られた。このエマルジョンをロータリーエバポレータ（Ｂｕｃｈｉ、スイス）に移し、ナノ粒子懸濁液へと急速にエバポレーションした。エバポレータの圧力は、エバポレーションの間、真空ポンプ（Ｗｅｌｃｈ）によって、０．５〜２ｍｍＨｇに設定し、エバポレーションの間の浴槽温度は３５℃に設定した。
【０１４２】
懸濁液の粒径は、Ｍａｌｖｅｒｎ  Ｚｅｔａｓｉｚｅｒを用いて光子相関分光法によって、測定した。２．５ｇの抗凍結剤トレハロース二水和物（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｏ、米国）を１０ｍＬの無菌のＩ型水に溶解し、懸濁液中のトレハロース二水和物の濃度が４〜９重量％の範囲にあるようにこの溶液を上記懸濁液に加えた。この懸濁液を０．２２μｍフィルター（Ｎａｌｇｅｎｅ、米国）を通して濾過滅菌した。この懸濁液の粒径は、３０〜２２０ｎｍであった。この懸濁液を−４０℃よりも低い温度で凍結し、凍結乾燥した。凍結乾燥したケーキを、さらなる使用の前に再構成した。再構成した溶液の１つのアリコートを２５℃で保存し、他は２〜６℃で保存した。これら２つのアリコートの粒径を、２４℃で８日間にわたってモニタリングした（図９）。粒径は４８時間後も変化せず、５日間安定であった。上記の組成を含有する処方物を、オストワルド熟成によって安定なものである、と分類した。
【０１４３】
（実施例６）
（ヒト血清アルブミンに対する乳化の効果）
３．５ｍＬのクロロホルムと０．６ｍＬの無水エタノールとを混合することにより、有機相を調製した。２ｇのヒトアルブミン（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｏ、米国）を５０ｍＬの無菌のＩ型水に溶解することにより、４％ヒトアルブミン溶液を調製した。滅菌水中の１Ｎ塩酸または１Ｎ水酸化ナトリウム溶液のいずれかを加えることにより、このヒトアルブミン溶液のｐＨを６．０〜６．７に調整した。上記の有機溶液を上記アルブミン相に加え、混合物をＩＫＡホモジナイザー（ＩＫＡ  Ｗｏｒｋｓ、ドイツ）を用いて６０００〜１００００ＲＰＭで予均一化した。生成したエマルジョンを高圧均質化（Ａｖｅｓｔｉｎ  Ｉｎｃ、米国）にかけた。圧力を２０，０００〜３０，０００ｐｓｉ（約１３８〜約２０７ＭＰａ）の間で変え、この乳化プロセスを５〜８回続けた。均質化の間、温度制御した熱交換器（Ｊｕｌａｂｏ、米国）からホモジナイザーを通して冷媒を循環させることにより、エマルジョンを５℃〜１０℃で冷却した。これにより、均質で非常に微細な水中油型エマルジョンが得られた。次いでこのエマルジョンをロータリーエバポレーター（Ｂｕｃｈｉ、スイス）に移し、急速にエバポレーションし、高圧均質化にかけたアルブミン溶液を得た。エバポレータの圧力は、エバポレーションの間、真空ポンプ（Ｗｅｌｃｈ）によって、１〜５ｍｍＨｇに設定し、エバポレーションの間の浴槽温度は３５℃に設定した。
【０１４４】
アルブミン溶液の粒径は、Ｍａｌｖｅｒｎ  Ｚｅｔａｓｉｚｅｒを用いて光子相関分光法によって測定した。約５〜８ｎｍに１つ、そして約１２０〜１４０ｎｍに１つの２つのピークが存在することが観察された、約５〜８ｎｍのピークは約９９体積％を占め、約１２０〜１４０ｎｍのピークは、１体積％未満を占めていた（図４）。対照として、４％ヒト血清溶液中の粒径分布を測定した。それは約５〜８ｎｍに１つのピークのみを有していた（図５）。これらの研究は、アルブミン溶液を水中油型エマルジョン中で均質化すると、２〜３％未満のアルブミン分子が変性により凝集することになるということを示す。
【０１４５】
（実施例７）
（阻害剤をまったく含まない不安定な固体ナノ粒子の調製）
１００ｍｇのドセタキセル（Ｇｕｉｙｕａｎｃｈｅｍｐｈａｒｍ、中国）を、２．５ｍＬのクロロホルムと０．５ｍＬのエタノールの混合物に溶解した。２．５ｇのウシ血清アルブミン（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｏ、米国）を５０ｍＬの無菌のＩ型水に溶解することにより、５％ウシ血清アルブミン溶液を調製した。滅菌水中の１Ｎ塩酸または１Ｎ水酸化ナトリウム溶液のいずれかを加えることにより、このヒトアルブミン溶液のｐＨを６．０〜６．８に調整した。上記の有機溶液を上記アルブミン相に加え、混合物をＩＫＡホモジナイザー（ＩＫＡ  Ｗｏｒｋｓ、ドイツ）を用いて４０００〜６０００ＲＰＭで予均一化した。生成したエマルジョンを高圧均質化（Ａｖｅｓｔｉｎ  Ｉｎｃ、米国）にかけた。圧力を１５，０００〜２０，０００ｐｓｉ（約１０３〜約１３８ＭＰａ）の間で変え、この乳化プロセスを８〜１２回続けた。均質化の間、温度制御した熱交換器（Ｊｕｌａｂｏ、米国）からホモジナイザーを通して冷媒を循環させることにより、エマルジョンを５℃〜１０℃で冷却した。これにより、均質で非常に微細な水中油型エマルジョンが得られた。このエマルジョンをロータリーエバポレータ（Ｂｕｃｈｉ、スイス）に移し、ナノ粒子懸濁液へと急速にエバポレーションした。エバポレータの圧力は、エバポレーションの間、真空ポンプ（Ｗｅｌｃｈ）によって、０．５〜３ｍｍＨｇに設定し、エバポレーションの間の浴槽温度は３５℃に設定した。
【０１４６】
エバポレーション後、この溶液が他の処方物よりも濁っていることが判明した。２．５ｇの抗凍結剤トレハロース二水和物（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｏ、米国）を１０ｍＬの無菌のＩ型水に溶解し、懸濁液中のトレハロース二水和物の濃度が４〜９重量％の範囲にあるようにこの溶液を上記懸濁液に加えた。この懸濁液を０．４５μｍフィルターを通して濾過し、この溶液を濾過するのに２７０ｍｍ超のフィルターが必要であった。この溶液を０．２２μｍフィルター（Ｎａｌｇｅｎｅ、米国）を通してもう一度濾過した。これらのフィルターを各々２５ｍＬのアセトニトリルで洗浄し、このフィルター上の沈殿した薬物を回収した。懸濁液の粒径は、Ｍａｌｖｅｒｎ  Ｚｅｔａｓｉｚｅｒを用いて光子相関分光法によって測定した。０．２２μｍフィルターで濾過した懸濁液の粒径は、２４０〜３９０ｎｍであった（図１０）。０．２２μｍフィルターで濾過した懸濁液およびフィルターから回収したドセタキセルについて、ＨＰＬＣ法によってドセタキセル濃度を測定した。ドセタキセルの約５０％がフィルターから回収され、残りは懸濁液中に存在することが判明した。この懸濁液の１つのアリコートを２５℃で保存し、他は２〜６℃で保存した。両方のサンプルの粒子は、１〜３時間後に変化し始め、８時間後にオストワルド熟成によって、沈殿し始めた。
【０１４７】
この処方物を再度調製したが、上記と同じ沈殿の問題を観察した。上記の組成を含有する処方物を、オストワルド熟成によって不安定なものである、と分類した。
【０１４８】
（実施例８）
（阻害剤をまったく含まない不安定な固体ナノ粒子の調製）
１６０ｍｇのドセタキセル（Ｇｕｉｙｕａｎｃｈｅｍｐｈａｒｍ、中国）を、２．５ｍＬのクロロホルムと０．５ｍＬのエタノールの混合物に溶解した。２．５ｇのヒト血清アルブミン（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｏ、米国）を５０ｍＬの無菌のＩ型水に溶解することにより、５％ヒト血清アルブミン溶液を調製した。滅菌水中の１Ｎ塩酸または１Ｎ水酸化ナトリウム溶液のいずれかを加えることにより、このアルブミン溶液のｐＨを６．２〜６．５に調整した。上記の有機溶液を上記アルブミン相に加え、混合物をＩＫＡホモジナイザー（ＩＫＡ  Ｗｏｒｋｓ、ドイツ）を用いて４０００〜６０００ＲＰＭで予均一化した。生成したエマルジョンを高圧均質化（Ａｖｅｓｔｉｎ  Ｉｎｃ、米国）にかけた。圧力を１５，０００〜２４，０００ｐｓｉ（約１０３〜約１６５ＭＰａ）の間で変え、この乳化プロセスを８〜１２回続けた。均質化の間、温度制御した熱交換器（Ｊｕｌａｂｏ、米国）からホモジナイザーを通して冷媒を循環させることにより、エマルジョンを５℃〜１０℃で冷却した。これにより、均質で非常に微細な水中油型エマルジョンが得られた。このエマルジョンをロータリーエバポレータ（Ｂｕｃｈｉ、スイス）に移し、ナノ粒子懸濁液へと急速にエバポレーションした。エバポレータの圧力は、エバポレーションの間、真空ポンプ（Ｗｅｌｃｈ）によって０．５〜３ｍｍＨｇに設定し、エバポレーションの間の浴槽温度は３５℃に設定した。
【０１４９】
エバポレーション後、この溶液が他の処方物よりも濁っていることが判明した。懸濁液の粒径は、Ｍａｌｖｅｒｎ  Ｚｅｔａｓｉｚｅｒを用いて光子相関分光法によって測定した。濾過していない懸濁液の粒径は２００〜１０００ｎｍであった（図１１）。懸濁液の１つのアリコートを２５℃で保存し、他は２〜６℃で保存した。両方のサンプルの粒子は、１〜３時間後に変化し始め、８時間後にオストワルド熟成によって沈殿し始めた。上記の組成を含有する処方物を、オストワルド熟成によって不安定なものである、と分類した。
【産業上の利用可能性】
【０１５０】
本発明は、タンパク質または他のポリマーを界面活性剤として使用する水中油型エマルジョンプロセスを使用して調製される、水系媒体中の非水溶性物質の固体粒子の実質的に安定な分散液の作製に関連するあらゆる目的のために使用することができ、本発明によって調製される分散液は、オストワルド熟成によって媒介される、形成後の粒子の成長がほとんどないかまたはまったくない。本発明は、癌治療として使用する水溶性組成物を作製するために使用することができるが、当業者は他の応用も同様に思いつくであろう。
【図１】
0005571380.tif 000003
【図２】
0005571380.tif 000004
【図３】
0005571380.tif 000005
【図４】
0005571380.tif 000006
【図５】
0005571380.tif 000007
【図６Ａ】
0005571380.tif 000008
【図６Ｂ】
0005571380.tif 000009
【図６Ｃ】
0005571380.tif 000010
【図６Ｄ】
0005571380.tif 000011
【図６Ｅ】
0005571380.tif 000012
【図６Ｆ】
0005571380.tif 000013
【図７Ａ】
0005571380.tif 000014
【図７Ｂ】
0005571380.tif 000015
【図７Ｃ】
0005571380.tif 000016
【図７Ｄ】
0005571380.tif 000017
【図７Ｅ】
0005571380.tif 000018
【図８Ａ】
0005571380.tif 000019
【図８Ｂ】
0005571380.tif 000020
【図８Ｃ】
0005571380.tif 000021
【図８Ｄ】
0005571380.tif 000022
【図８Ｅ】
0005571380.tif 000023
【図８Ｆ】
0005571380.tif 000024
【図８Ｇ】
0005571380.tif 000025
【図８Ｈ】
0005571380.tif 000026
【図９Ａ】
0005571380.tif 000027
【図９Ｂ】
0005571380.tif 000028
【図９Ｃ】
0005571380.tif 000029
【図９Ｄ】
0005571380.tif 000030
【図９Ｅ】
0005571380.tif 000031
【図９Ｆ】
0005571380.tif 000032
【図９Ｇ】
0005571380.tif 000033
【図９Ｈ】
0005571380.tif 000034
【図１０Ａ】
0005571380.tif 000035
【図１０Ｂ】
0005571380.tif 000036
【図１１Ａ】
0005571380.tif 000037
【図１１Ｂ】
0005571380.tif 000038
【図１１Ｃ】
0005571380.tif 000039
【図１１Ｄ】
0005571380.tif 000040
【図１１Ｅ】
0005571380.tif 000041
【図１１Ｆ】
0005571380.tif 000042
【図１１Ｇ】
0005571380.tif 000043
【図１１Ｈ】
0005571380.tif 000044
【図１１Ｉ】
0005571380.tif 000045