(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式Ｉ：
【化１】
0005642074.tif 000041
（式中
Ｒ１は、それぞれヒドロキシ、シアノ、またはハロゲンで置換されてもよい、（Ｃ１−８）アルキル、（Ｃ３−８）シクロアルキル、または（Ｃ３−８）シクロアルキル（Ｃ１−３）アルキルであり；
Ｒ２は、ハロゲンを表し；
Ｒ３は、それぞれ１個以上のハロゲンで置換されてもよい、（Ｃ１−６）アルキル、（Ｃ３−６）シクロアルキル、または（Ｃ３−６）シクロアルキル（Ｃ１−３）アルキルであり；
Ａは、Ｎ、Ｏ、およびＳから選択される複素原子を１から３個含むヘテロアリール環を表し、この環は、ＸがＣの場合は五員または六員であり、ＸがＮの場合は五員であり；
ｎは１または２である。）
を有する１−（４−ウレイドベンゾイル）ピペラジン誘導体またはこの医薬的に許容される塩。
【請求項２】
Ａはフラン−２，５，ジイルまたはピリジン−２，６−ジイルを表す、請求項１の１−（４−ウレイドベンゾイル）ピペラジン誘導体。
【請求項３】
Ｒ２は、１個または２個存在し、ＦおよびＣｌから選択されるハロゲンを表す、請求項１または２の１−（４−ウレイドベンゾイル）ピペラジン誘導体。
【請求項４】
Ｒ３はｔｅｒｔ−ブチルである、請求項１から３のいずれか一項の１−（４−ウレイドベンゾイル）ピペラジン誘導体。
【請求項５】
Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−５−（（４−（４−（３−シクロブチルウレイド）−３−フルオロベンゾイル）ピペラジン−１−イル）メチル）フラン−２−カルボキサミド；
Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−５−（（４−（３−フルオロ−４−（３−イソブチルウレイド）ベンゾイル）ピペラジン−１−イル）メチル）フラン−２−カルボキサミド；
Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−５−（（４−（４−（３−（シクロプロピルメチル）ウレイド）−３−フルオロベンゾイル）ピペラジン−１−イル）メチル）フラン−２−カルボキサミド；
Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−５−（（４−（３−フルオロ−４−（３−ネオペンチルウレイド）ベンゾイル）ピペラジン−１−イル）メチル）フラン−２−カルボキサミド；
Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−５−（（４−（３−フルオロ−４−（３−イソペンチルウレイド）ベンゾイル）ピペラジン−１−イル）メチル）フラン−２−カルボキサミド；
Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−５−（（４−（４−（３−ブチルウレイド）−３−フルオロベンゾイル）ピペラジン−１−イル）メチル）フラン−２−カルボキサミド塩酸塩；
Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−５−（（４−（３−クロロ−４−（３−ネオペンチルウレイド）ベンゾイル）ピペラジン−１−イル）メチル）フラン−２−カルボキサミド；
Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−５−（（４−（３−クロロ−４−（３−イソブチルウレイド）ベンゾイル）ピペラジン−１−イル）メチル）フラン−２−カルボキサミド；
Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−５−（（４−（３−クロロ−４−（３−（シクロプロピルメチル）ウレイド）ベンゾイル）ピペラジン−１−イル）メチル）フラン−２−カルボキサミド；
Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−５−（（４−（３−クロロ−４−（３−シクロブチルウレイド）ベンゾイル）ピペラジン−１−イル）メチル）フラン−２−カルボキサミド；
Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−５−（（４−（３−クロロ−４−（３−イソペンチルウレイド）ベンゾイル）ピペラジン−１−イル）メチル）フラン−２−カルボキサミド；
Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−５−（（４−（４−（３−ブチルウレイド）−３−クロロベンゾイル）ピペラジン−１−イル）メチル）フラン−２−カルボキサミド；
Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−５−（（４−（４−（３−（シクロプロピルメチル）ウレイド）−２，３−ジフルオロベンゾイル）ピペラジン−１−イル）メチル）フラン−２−カルボキサミド；
Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−５−（（４−（２，３−ジフルオロ−４−（３−ネオペンチルウレイド）ベンゾイル）ピペラジン−１−イル）メチル）フラン−２−カルボキサミド；
Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−５−（（４−（２，３−ジフルオロ−４−（３−イソブチルウレイド）ベンゾイル）ピペラジン−１−イル）メチル）フラン−２−カルボキサミド；
Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−５−（（４−（４−（３−シクロブチルウレイド）−２，３−ジフルオロベンゾイル）ピペラジン−１−イル）メチル）フラン−２−カルボキサミド；
Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−５−（（４−（４−（３−ブチルウレイド）−２，３−ジフルオロベンゾイル）ピペラジン−１−イル）メチル）フラン−２−カルボキサミド；
Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−５−（（４−（２，３−ジフルオロ−４−（３−イソペンチルウレイド）ベンゾイル）ピペラジン−１−イル）メチル）フラン−２−カルボキサミド；
Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−６−（（４−（４−（３−シクロブチルウレイド）−３−フルオロベンゾイル）ピペラジン−１−イル）メチル）ピコリンアミド；
Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−６−（（４−（３−フルオロ−４−（３−ネオペンチルウレイド）ベンゾイル）ピペラジン−１−イル）メチル）ピコリンアミド；
Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−６−（（４−（３−フルオロ−４−（３−イソペンチルウレイド）ベンゾイル）ピペラジン−１−イル）メチル）ピコリンアミド；
Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−６−（（４−（４−（３−（シクロプロピルメチル）ウレイド）−３−フルオロベンゾイル）ピペラジン−１−イル）メチル）ピコリンアミド；およびこれらの医薬的に許容される塩から選択される、
請求項１の１−（４−ウレイドベンゾイル）ピペラジン誘導体。
【請求項６】
治療に用いるための、請求項１から５のいずれか一項の１−（４−ウレイドベンゾイル）ピペラジン誘導体。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、１−（４−ウレイドベンゾイル）ピペラジン誘導体、これを含む医薬的組成物、および粥状動脈硬化の治療におけるこれらの１−（４−ウレイドベンゾイル）ピペラジン誘導体の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
肝臓Ｘ受容体（ＬＸＲ）は、天然のオキシステロールの結合により活性化されて標的遺伝子の転写を誘導する核内受容体のファミリーである。ＬＸＲには２種のサブタイプ（αおよびβ）が同定されており、これらはリガンド結合ドメインおよびＤＮＡ結合ドメインの両方で７７％の相同性を示す。どちらのサブタイプもヒトと齧歯類の間で高度に保存されているが、これらの組織発現パターンは顕著に異なっている。ＬＸＲαの発現は、脂質代謝に関与する組織に制限されており、最も発現するのは肝臓においてであるが、腎臓、脾臓、小腸、および脂肪組織にもかなりのレベルで存在する。ＬＸＲβは、広範囲に分布し、肝臓および脳を含む、実質的に全ての調査された組織で見出されている。ＬＸＲαおよびＬＸＲβのどちらも、マクロファージで発現されている。Ｃｏｓｔｅｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ  ２７５：２８２４０−２８２４５（２０００）を参照。
【０００３】
ＬＸＲ受容体の役割は完全には解明されていないが、ＬＸＲは、肝臓および末梢組織における脂質代謝のマスター調節因子として、およびＡＴＰ結合カセット輸送体Ａ１（ＡＢＣＡ１）遺伝子の重要な誘導因子として十分に確立されている（Ｖｅｎｋａｔｅｓｗａｒａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ  Ｓ  Ａ．９７：１２０９７−１２１０２（２０００））。ヒトの集団では、ＡＢＣＡ１遺伝子の変異は、リポタンパク質プロファイルを高度にアテローム生成へ導き（Ｓｉｎｇａｒａｊａ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ．Ｔｈｒｏｍｂ．Ｖａｓｃ．Ｂｉｏｌ．２３：１３２２−１３３２（２００３））、最も深刻な形では、タンジール病および関連する早発性粥状動脈硬化を引き起こす（Ｂｏｄｚｉｏｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｇｅｎｅｔ．２２：３４７−３５１（１９９９）およびＲｕｓｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｇｅｎｅｔ．２２：３５２−３５５（１９９９）を参照）。この稀な遺伝性疾患は、極めて低レベルの高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）、コレステロールエステルのマクロファージ蓄積、および粥状動脈硬化性疾患の危険性が顕著に増加することを特徴とする（Ｂｒｏｏｋｓ−Ｗｉｌｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｇｅｎｅｔ．２２：３３６−３４５（１９９９））。
【０００４】
証拠により、ヒトマクロファージおよび小腸細胞におけるＡＢＣＡ１の上方制御が、ＬＸＲ活性化により媒介されることが実証されている（Ｃｏｓｔｅｔ  ｅｔ  ａｌ．，既出）。そのうえ、ＬＸＲアゴニストは、コレステロール流出を促進することも示されている。Ｃｌａｕｄｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ  Ｓ  Ａ．９８：２６１０−２６１５（２００１）を参照。従って、ＬＸＲ受容体はマクロファージでのコレステロール恒常性に決定的な役割を果たし、進行性動脈硬化性プラークの局所的環境内での抑制は疾患の病理の重要な特性であり得る。
【０００５】
粥状動脈硬化の治療においてＬＸＲアゴニストが有用である可能性は、ここ数年でますます報告が増えている。例えば、Ｌｅｖｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ．Ｔｈｒｏｍｂ．Ｖａｓｃ．Ｂｉｏｌ．２５：１３５−１４２（２００５）を参照。粥状動脈硬化は、何年も症状を引き起こすことなく存在する動脈疾患である。しかしながら、進行性動脈硬化性プラークは、破裂に対して脆弱となり、急性血栓症および臨床兆候（心筋梗塞（ＭＩ）および発作など）を促進する可能性がある。動脈硬化性プラークの破裂、およびその後の臨床兆候に関係する主要な細胞の種類は、マクロファージである。
【０００６】
粥状動脈硬化においてＬＸＲアゴニストで効果が得られる主要な機構は、動脈のコレステロール負担を下げることで（ＡＢＣＡ１の上方制御を介して）、より安定した領域を生成し、それにより臨床兆候を減少させることで生じると予想される。さらに、ＬＸＲアゴニストは、肝臓による新生ＨＤＬの産生におけるＡＢＣＡ１の役割により、循環ＨＤＬレベルを上昇させることができる。ＬＸＲアゴニストには、炎症の抑制（Ｊｏｓｅｐｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：２１３−２１９（２００３））および糖代謝効果によるさらなる動脈硬化抑制効果の可能性がある。Ｌａｔｉｆｆｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ  Ｓ  Ａ．１００：５４１９−２４（２００３）を参照。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Ｃｏｓｔｅｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ  ２７５：２８２４０−２８２４５（２０００）
【非特許文献２】Ｖｅｎｋａｔｅｓｗａｒａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ  Ｓ  Ａ．９７：１２０９７−１２１０２（２０００）
【非特許文献３】Ｓｉｎｇａｒａｊａ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ．Ｔｈｒｏｍｂ．Ｖａｓｃ．Ｂｉｏｌ．２３：１３２２−１３３２（２００３）
【非特許文献４】Ｂｏｄｚｉｏｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｇｅｎｅｔ．２２：３４７−３５１（１９９９）
【非特許文献５】Ｒｕｓｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｇｅｎｅｔ．２２：３５２−３５５（１９９９）
【非特許文献６】Ｂｒｏｏｋｓ−Ｗｉｌｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｇｅｎｅｔ．２２：３３６−３４５（１９９９）
【非特許文献７】Ｃｌａｕｄｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ  Ｓ  Ａ．９８：２６１０−２６１５（２００１）
【非特許文献８】Ｌｅｖｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ．Ｔｈｒｏｍｂ．Ｖａｓｃ．Ｂｉｏｌ．２５：１３５−１４２（２００５）
【非特許文献９】Ｊｏｓｅｐｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：２１３−２１９（２００３）
【非特許文献１０】Ｌａｔｉｆｆｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ  Ｓ  Ａ．１００：５４１９−２４（２００３）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
ＬＸＲ修飾因子として有効な化合物に対する要求が依然として存在する。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
この目的に対して、本発明は、以下の一般式Ｉ：
【００１０】
【化１】
0005642074.tif 000002
式中
Ｒ１は、それぞれヒドロキシ、シアノ、またはハロゲンで置換されてもよい、（Ｃ１−８）アルキル、（Ｃ３−８）シクロアルキル、または（Ｃ３−８）シクロアルキル（Ｃ１−３）アルキルであり；
Ｒ２は、１個または２個の随意のハロゲンを表し；
Ｒ３は、それぞれ１個以上のハロゲンで置換されてもよい、（Ｃ１−６）アルキル、（Ｃ３−６）シクロアルキル、または（Ｃ３−６）シクロアルキル（Ｃ１−３）アルキルであり；
Ａは、Ｎ、Ｏ、およびＳから選択される複素原子を１から３個含むヘテロアリール環系を表し、この環系は、ＸがＣの場合は五員または六員であり、ＸがＮの場合は五員であり；
ｎは１または２である；
を有する１−（４−ウレイドベンゾイル）ピペラジン誘導体またはこの医薬的に許容される塩を提供する。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
（Ｃ１−８）アルキルという用語は、式Ｉの定義において用いられる場合、炭素原子を１から８個有する分岐鎖または直鎖のアルキル基（オクチル、ヘキシル、ペンチル、イソペンチル、ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、プロピル、イソプロピル、エチル、およびメチルなど）を意味する。
【００１２】
（Ｃ１−６）アルキルという用語は、式Ｉの定義において用いられる場合、炭素原子を１から６個有する分岐鎖または直鎖のアルキル基（ヘキシル、ペンチル、ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、プロピル、イソプロピル、エチル、およびメチルなど）を意味する。
【００１３】
同様に、式Ｉの定義において用いられる（Ｃ１−３）アルキルという用語は、炭素原子を１から３個有する分岐鎖または非分岐鎖のアルキル基（プロピル、イソプロピル、エチル、およびメチルなど）を意味する。
【００１４】
（Ｃ３−８）シクロアルキルという用語は、炭素原子を３から８個有するシクロアルキル基（シクロヘプチル、シクロヘキシル、シクロペンチル、シクロブチル、およびシクロプロピルなど）を意味する。
【００１５】
（Ｃ３−８）シクロアルキル（Ｃ１−３）アルキルという用語は、上記で定義されるとおりの意味を有する（Ｃ３−８）シクロアルキル基で置換された、上記で定義されるとおりの意味を有する（Ｃ１−３）アルキル基を意味する。例として、シクロプロピルメチル、シクロブチルメチル、２−シクロプロピルエチル、２−シクロブチルエチルなどが挙げられる。好適な（Ｃ３−８）シクロアルキル（Ｃ１−３）アルキルはシクロプロピルメチルである。
【００１６】
Ｎ、Ｏ、およびＳから選択される複素原子を１から３個含む五員または六員のヘテロアリール環系という用語は、複素芳香環（オキサゾール、イソオキサゾール、オキサジアゾール、チアジアゾール、フラン、ピロール、ピラゾール、ピラジン、ピリジン（ｐｙｒｉｄｉｎｅｌ）、ピリミジン、イミダゾール、チアゾール、チアジアゾール、チオフェンなどが挙げられる。）に由来する１，３−ジラジカルヘテロアリーレン基を意味する。このような五員ヘテロアリーレンの例として、オキサゾール−２，４−ジイル、イソオキサゾール−３，５−ジイル、チアゾール−２，４−ジイル、フラン−２，５，−ジイル、チオフェン−２，５−ジイル、ピラゾール−１，３−ジイル、ピロール−１，３−ジイル、イミダゾール−１，４−ジイル、テトラゾール−２，５−ジイル、［１，２，４］オキサジアゾール−３，５−ジイルなどが挙げられる。六員ヘテロアリーレンの例として、ピリジン−２，４−ジイル、ピリジン−２，６−ジイル、ピリミジン−２，４−ジイル、ピリダジン−３，５−ジイル、ピラジン−２，６−ジイルなどが挙げられる。
【００１７】
ハロゲンという用語は、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、またはＩを意味する。好適なのは、ＦおよびＣｌである。
【００１８】
式中Ａがフラン−２，５，ジイルまたはピリジン−２，６−ジイルを表す式Ｉの１−（４−ウレイドベンゾイル）ピペラジン誘導体が好ましい。
【００１９】
より好適であるのは、式中さらにＲ２がＦおよびＣＩから選択されるハロゲン１個または２個を表す式Ｉの１−（４−ウレイドベンゾイル）ピペラジン誘導体である。
【００２０】
より好適であるのは、式中さらにＲ３がｔｅｒｔ−ブチルである式Ｉの１−（４−ウレイドベンゾイル）ピペラジン誘導体である。
【００２１】
本発明の特定の１−（４−ウレイドベンゾイル）ピペラジン誘導体は、以下：
Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−５−（（４−（４−（３−シクロブチルウレイド）−３−フルオロベンゾイル）ピペラジン−１−イル）メチル）フラン−２−カルボキサミド；
Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−５−（（４−（３−フルオロ−４−（３−イソブチルウレイド）ベンゾイル）ピペラジン−１−イル）メチル）フラン−２−カルボキサミド；
Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−５−（（４−（４−（３−（シクロプロピルメチル）ウレイド）−３−フルオロベンゾイル）ピペラジン−１−イル）メチル）フラン−２−カルボキサミド；
Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−５−（（４−（３−フルオロ−４−（３−ネオペンチルウレイド）ベンゾイル）ピペラジン−１−イル）メチル）フラン−２−カルボキサミド；
Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−５−（（４−（３−フルオロ−４−（３−イソペンチルウレイド）ベンゾイル）ピペラジン−１−イル）メチル）フラン−２−カルボキサミド；
Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−５−（（４−（４−（３−ブチルウレイド）−３−フルオロベンゾイル）ピペラジン−１−イル）メチル）フラン−２−カルボキサミド塩酸塩；
Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−５−（（４−（３−クロロ−４−（３−ネオペンチルウレイド）ベンゾイル）ピペラジン−１−イル）メチル）フラン−２−カルボキサミド；
Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−５−（（４−（３−クロロ−４−（３−イソブチルウレイド）ベンゾイル）ピペラジン−１−イル）メチル）フラン−２−カルボキサミド；
Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−５−（（４−（３−クロロ−４−（３−（シクロプロピルメチル）ウレイド）ベンゾイル）ピペラジン−１−イル）メチル）フラン−２−カルボキサミド；
Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−５−（（４−（３−クロロ−４−（３−シクロブチルウレイド）ベンゾイル）ピペラジン−１−イル）メチル）フラン−２−カルボキサミド；
Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−５−（（４−（３−クロロ−４−（３−イソペンチルウレイド）ベンゾイル）ピペラジン−１−イル）メチル）フラン−２−カルボキサミド；
Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−５−（（４−（４−（３−ブチルウレイド）−３−クロロベンゾイル）ピペラジン−１−イル）メチル）フラン−２−カルボキサミド；
Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−５−（（４−（４−（３−（シクロプロピルメチル）ウレイド）−２，３−ジフルオロベンゾイル）ピペラジン−１−イル）メチル）フラン−２−カルボキサミド；
Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−５−（（４−（２，３−ジフルオロ−４−（３−ネオペンチルウレイド）ベンゾイル）ピペラジン−１−イル）メチル）フラン−２−カルボキサミド；
Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−５−（（４−（２，３−ジフルオロ−４−（３−イソブチルウレイド）ベンゾイル）ピペラジン−１−イル）メチル）フラン−２−カルボキサミド；
Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−５−（（４−（４−（３−シクロブチルウレイド）−２，３−ジフルオロベンゾイル）ピペラジン−１−イル）メチル）フラン−２−カルボキサミド；
Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−５−（（４−（４−（３−ブチルウレイド）−２，３−ジフルオロベンゾイル）ピペラジン−１−イル）メチル）フラン−２−カルボキサミド；
Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−５−（（４−（２，３−ジフルオロ−４−（３−イソペンチルウレイド）ベンゾイル）ピペラジン−１−イル）メチル）フラン−２−カルボキサミド；
Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−６−（（４−（４−（３−シクロブチルウレイド）−３−フルオロベンゾイル）ピペラジン−１−イル）メチル）ピコリンアミド；
Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−６−（（４−（３−フルオロ−４−（３−ネオペンチルウレイド）ベンゾイル）ピペラジン−１−イル）メチル）ピコリンアミド；
Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−６−（（４−（３−フルオロ−４−（３−イソペンチルウレイド）ベンゾイル）ピペラジン−１−イル）メチル）ピコリンアミド；
Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−６−（（４−（４−（３−（シクロプロピルメチル）ウレイド）−３−フルオロベンゾイル）ピペラジン−１−イル）メチル）ピコリンアミド；またはこれらの医薬的に許容される塩である。
【００２２】
本発明の１−（４−ウレイドベンゾイル）ピペラジン誘導体は、有機合成の当分野で既知の一般的な合成法を用いて調製することができる。式中ＸがＣである式Ｉの化合物の合成経路をスキーム１に、式中ＸがＮである式Ｉの化合物の合成経路をスキーム２に示す。当業者は、スキーム１およびスキーム２の式２から１３で示される重要な構成要素の添加順序が変えられるものであり、それでも式Ｉの所望の生成物を与えることを理解している。
【００２３】
スキーム１に示される経路に従って、式中Ｙがアミノ保護基（例えば、ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル基（ｔ−Ｂｏｃ）など）を表す式２のピペラジン中間体を、溶媒（例えばジクロロメタンまたはアセトニトリル）中、室温でまたは温度を上げて、有機塩基（例えばトリエチルアミン）または無機塩基（例えば炭酸カリウム）を用いて、式３のヘテロアリールエステル誘導体（式中、アルキルは低級アルキル基、好ましくはメチルを表し、Ｌは脱離基（クロロ、ブロモ、またはＯＳＯ２Ｍｅなど）を表す。）でアルキル化し、式４の中間アミノエステル誘導体とする。
【００２４】
例えばメタノール／水中で水酸化ナトリウムを用いて式４の中間体をエステル加水分解することにより、酸または酸ナトリウム塩とする。酸または酸ナトリウム塩を、溶媒（例えばジクロロメタン）中、カップリング剤（例えばＮ−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ’−エチルカルボジイミド塩酸塩または１−プロパンホスホン酸環状無水物など）を用いて、式Ｈ２ＮＲ３のアミン（式中、Ｒ３は上記で定義されるとおりの意味を有する。）とカップリングさせることにより式５のアミド誘導体とすることができる。式５の中間体のＢｏｃ保護したピペラジンアミノ官能基の、例えばジクロロメタン中トリフルオロ酢酸を用いた脱保護により、式６の中間ピペラジン誘導体とし、続いてこれを、溶媒（例えばジクロロメタン）中、カップリング剤（例えばＮ−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ’−エチルカルボジイミド塩酸塩または１−プロパンホスホン酸環状無水物など）を用いて、式７（式中、Ｒ２はすでに定義されるとおりの意味を有する。）の安息香酸誘導体とカップリングして式８のアニリン中間体とする。溶媒（例えばジクロロメタン）中、室温でまたは温度を上げてこのアニリン中間体を４−ニトロフェニルクロロホルメートと、または炭酸（ビス（トリクロロメチル）（トリホスゲン）と反応させることにより活性化し、続いて塩基（例えばトリエチルアミンまたはＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン）の存在下、式Ｒ１ＮＨ２のアミン（式中、Ｒ１はすでに定義されるとおりの意味を有する。）との反応により、本発明の式Ｉの１−（４−ウレイドベンゾイル）ピペラジン誘導体を生成する。
【００２５】
【化２】
0005642074.tif 000003
【００２６】
スキーム２に示される経路に従って、式９のメチル化ヘテロアリール誘導体を、溶媒（例えばジクロロメタン）中、室温でまたは温度を上げて、式Ｒ３−ＮＣＯのイソシアナート（式中、Ｒ３はすでに定義されるとおりの意味を有する。）と反応させ、式１０の尿素誘導体とする。四塩化炭素中、室温でまたは温度を上げて、Ｎ−ブロモスクシンイミドおよび過酸化ベンゾイルを用いたブロモ化により芳香族メチル置換基を活性化して、式１１の中間尿素誘導体（式中、脱離基Ｌは臭素である。）とする。
【００２７】
式中ＹがＮ保護基（例えば、ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル基（ｔ−Ｂｏｃ）など）である式２のピペラジン誘導体を、溶媒（例えばジクロロメタンまたはアセトニトリル）中、室温でまたは温度を上げて、有機塩基（例えばトリエチルアミン）または無機塩基（例えば炭酸カリウム）を用いて、式１１の尿素誘導体でアルキル化し、続いて、例えばトリフルオロ酢酸およびジクロロメタンを用いたＢｏｃ−基の脱保護により、式１２のピペラジン誘導体とする。
【００２８】
【化３】
0005642074.tif 000004
【００２９】
式１２のピペラジン誘導体を、溶媒（例えばジクロロメタン）中、カップリング剤（例えばＮ−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ’−エチルカルボジイミド塩酸塩または１−プロパンホスホン酸環状無水物など）を用いて、式７の安息香酸誘導体（式中、Ｒ２はすでに定義されるとおりの意味を有する。）と反応させ、式１３のアニリン中間体とする。本発明の式Ｉの１−（４−ウレイドベンゾイル）ピペラジン誘導体（式中、ＸはＮである。）は、溶媒（例えばジクロロメタン）中、室温でまたは温度を上げて、式１３の中間体を４−ニトロフェニルクロロホルメートと、または炭酸（ビス（トリクロロメチル）（トリホスゲン）と反応させ、続いて塩基（例えばトリエチルアミンまたはＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン）の存在下、所望の式Ｒ１ＮＨ２のアミン（式中、Ｒ１はすでに定義されるとおりの意味を有する。）を加えることにより、調製することができる。
【００３０】
式２のピペラジン誘導体、式３のエステル誘導体、式７の４−アミノ安息香酸誘導体、ならびに式９のメチル化ヘテロアリール誘導体は、当分野で周知である方法を用いて、市販されている中間体から調製することができる。
【００３１】
Ｎ−保護基という用語は、上記で使用されるとおり、アミノ基の保護によく用いられる基（アロキシカルボニル（ａｌｌｏｘｙｃａｒｂｏｎｙｌ）（Ａｌｌｏｃ）基、ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）基、ベンジルオキシカルボニル（Ｚ）基、または９−フルオレニルメチルオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）基など）を意味する。これらの保護基およびその他の保護基の除去は、そうした保護基の性質に依存して様々なやり方で行なうことができる。保護基およびこの除去法の概説は、Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ  ａｎｄ  Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ，「Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」，２ｎｄ  ｅｄｉｔｉｏｎ，１９９１，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．に与えられる。
【００３２】
式Ｉの１−（４−ウレイドベンゾイル）ピペラジン誘導体およびこの塩は、少なくとも１つの不斉中心を含有することができ、従って鏡像異性体およびジアステレオマーを含む立体異性体として存在することができる。本発明は、この範囲内に上記の立体異性体と、他方の鏡像異性体を実質的に含まない、即ち５％未満、好ましくは２％未満、特には１％未満で他方の鏡像異性体を伴う式Ｉの化合物およびこの塩の個々のＲおよびＳ鏡像異性体それぞれと、および２種の鏡像異性体を実質的に同量で含有するラセミ混合物を含むこのような鏡像異性体の任意の割合での混合物とを含む。純粋な立体異性体を与える不斉合成法は、当分野で周知であり、例えば、キラル導入する合成またはキラル中間体から出発する合成、エナンチオ選択的酵素変換、キラル媒体でのクロマトグラフィーを用いた立体異性体または鏡像異性体の分離である。そうした方法は、例えば、Ｃｈｉｒａｌｉｔｙ  ｉｎ  Ｉｎｄｕｓｔｒｙ（ｅｄｉｔｅｄ  ｂｙ  Ａ．Ｎ．Ｃｏｌｌｉｎｓ，Ｇ．Ｎ．Ｓｈｅｌｄｒａｋｅ  ａｎｄ  Ｊ．Ｃｒｏｓｂｙ，１９９２；Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ）に記載されている。
【００３３】
本発明のさらなる態様において、式Ｉの１−（４−ウレイドベンゾイル）ピペラジン誘導体およびこの塩は、構造部位のいずれかに非天然の同位体を１個以上含有できる。このような放射標識した本発明の化合物は、例えば、これらの吸収、分布、代謝、および排出（ＡＤＭＥ）のｉｎ  ｖｉｖｏ研究で用いることができる。同位体として放射性同位体（トリチウムおよび１４Ｃなど）が挙げられる。または、化合物は、安定同位体（重水素、１３Ｃ、１８Ｏ、および１５Ｎなど）を豊富にしたものも可能である。ＰＥＴ（陽電子放出断層撮影）トレーサーとして用いるために本発明の化合物に組込むのに１１Ｃおよび１８Ｆが好適な同位体である。
【００３４】
医薬的に許容される塩は、式Ｉの１−（４−ウレイドベンゾイル）ピペラジン誘導体の遊離塩基を、鉱酸（塩酸、臭化水素酸、リン酸、および硫酸など）、または有機酸（例えば、アスコルビン酸、クエン酸、酒石酸、乳酸、マレイン酸、マロン酸、フマル酸、グリコール酸、コハク酸、プロピオン酸、酢酸、メタンスルホン酸など）で処理することにより得ることができる。
【００３５】
本発明の化合物は、溶媒和していない形でも、医薬的に許容される溶媒（水、エタノールなど）で溶媒和した形でも存在できる。一般に、溶媒和した形は、本発明の目的に対して溶媒和していない形と等価であるとみなされる。
【００３６】
本発明はさらに、一般式Ｉを有する１−（４−ウレイドベンゾイル）ピペラジン誘導体、またはこの医薬的に許容される塩を、医薬的に許容される助剤との混合物として、および場合により他の治療薬を含む医薬的組成物を提供する。「許容される」という用語は、組成物のその他の成分と適合性があり、この組成物のレシピエントに有害ではないことを意味する。組成物として、例えば、経口、舌下、皮下、静脈内、硬膜外、くも膜下腔内、筋肉内、経皮、肺、局所、または直腸投与などに適した、全ての投与用単位剤形を含む。
【００３７】
経口投与については、活性成分は、分離した単位（錠剤、カプセル剤、粉剤、顆粒、溶液、懸濁液など）として存在させることができる。非経口投与については、本発明の医薬的組成物は、単位用量または多用量容器に入れて存在させることができ（例えば、密閉バイアルおよびアンプルに入れた、例えば、予定量の注射液）、使用前に滅菌液体担体（例えば水）の添加以外必要としないフリーズドライ（凍結乾燥）状態で貯蔵することもできる。
【００３８】
例えば、標準的な参照のＧｅｎｎａｒｏ，Ａ．Ｒ．ｅｔ  ａｌ．，Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ（２０ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ，２０００，特にＰａｒｔ  ５：Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇを参照）に記載されるような医薬的に許容される助剤と混合されて、活性剤は、圧縮されて固体投薬単位（丸薬、錠剤など）になるか、処理されてカプセル剤、坐剤またはパッチ剤になることができる。医薬的に許容される液体により、活性剤は、流体組成物として、例えば注射製剤として、溶液、懸濁液、乳濁液の形で、またはスプレー（例えば、鼻スプレー）として用いることができる。
【００３９】
固体投薬単位を作成するため、従来の添加物（充填剤、着色料、重合体結合剤など）の使用が考慮される。一般に、活性化合物の機能に干渉しない任意の医薬的に許容される添加剤を用いることができる。固体組成物として本発明の活性剤と一緒に投与することができる適した担体として、適した量で用いられる、ラクトース、デンプン、セルロース誘導体など、またはこれらの混合物が挙げられる。非経口投与については、医薬的に許容される分散剤および／または湿潤剤（プロピレングリコールまたはブチレングリコールなど）を含有する、水性懸濁液、等張生理食塩水、および滅菌注射液を用いることができる。
【００４０】
本発明はさらに、上記で記載したとおりの医薬的組成物を、前記組成物に適した包装材料と組み合わせたものを含み、前記包装材料は上記で記載したとおりの用途のための組成物の使用説明書を含む。
【００４１】
本発明の１−（４−ウレイドベンゾイル）ピペラジン誘導体は、ＬＸＲαおよび／またはＬＸＲβの修飾因子であり、特にこれらに対するアゴニスト活性を有することが見出されたので、粥状動脈硬化ならびにコレステロールおよび胆汁酸の輸送および代謝と関係がある関連疾患、例えば高コレステロール血症（例えば冠動脈心疾患）、コレステロール胆石、脂質貯蔵疾患、糖尿病、および肥満などの危険性を予防および減少させるのに有用である。
【００４２】
本発明の化合物は、さらに以下に示されるものにも有用である可能性がある：
炎症性疾患：
ＬＸＲのリガンド活性化は、多数の炎症経路（例えばインターロイキン１−β、インターロイキン−６、シクロオキシゲナーゼ−２など）を阻害することが示されており、直近では、Ｃ−反応性タンパク質発現を直接阻害することが示されている。Ｂｌａｓｃｈｋｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｉｒｃ．Ｒｅｓ．９９：８８−９９．（２００６）を参照。本発明の化合物は、炎症性疾患（接触性皮膚炎（ｄｅｒｍｉｔｉｔｉｓ）など）（Ｆｏｗｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．１２０：２４６−５５．（２００３）を参照）、神経炎症性疾患（多発性硬化症など）（Ｚｈａｎｇ−Ｇａｎｄｈｉ  ａｎｄ  Ｄｒｅｗ．Ｊ．Ｎｅｕｒｏｉｍｍｕｎｏｌ．１８３：５０−５９．（２００７））、および自己免疫性脳脊髄炎の炎症の抑制に治療的有用性を有する可能性がある。Ｈｉｎｄｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．Ｒｅｓ．８４：１２２５−１２３４（２００６）を参照。
【００４３】
増殖性血管障害：
ＬＸＲリガンドＴ０９０１３１７は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏでバルーン傷害に続いて血管平滑筋細胞増殖および新生内膜形成を阻害することが示されている。従って、本発明の化合物は、増殖性血管障害に治療的有用性を有する可能性がある。Ｂｌａｓｃｈｋｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｉｒｃ．Ｒｅｓ．９５：１１０−１２３（２００４）を参照。
【００４４】
糖尿病／メタボリックシンドローム：
最近の文献は、インスリン抵抗性および糖尿病の動物モデルでＬＸＲアゴニストの有効性を実証しており、従って、本発明の化合物は、糖尿病およびメタボリックシンドロームの治療に治療的有用性を有する可能性がある（Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ．１４７：５０６１−５０６８（２００６）；Ｆｅｒｎａｎｄｅｚ−Ｖｅｌｅｄｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｄｉａｂｅｔｏｌｏｇｉａ．４９：３０３８−３０４８（２００６）を参照）。
【００４５】
癌：
ＬＸＲアゴニストＴ０９０１３１７は、前立腺癌の動物モデルで腫瘍の進行を遅らせた。本発明の化合物は、前立腺癌の治療に有用である可能性を有する。Ｃｈｕｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ．Ｒｅｓ．６６：６４８２−６４８６（２００６）を参照。
【００４６】
神経変性疾患：
ＬＸＲアゴニストは、細胞コレステロールレベルの調節を介して、脳へのβ−アミロイドの沈着を減少させることができる。さらに、Ｔ０９０１３１７は、β−アミロイドの沈着を減少させるだけでなく記憶を改善することが示されている。Ｒｉｄｄｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．３４：６２１−６２８（２００７）を参照。従って、本発明のアゴニスト誘導体は、神経変性疾患（アルツハイマー病など）に治療的有用性を有する可能性がある。
【００４７】
併用療法：
本発明の化合物は、他の代謝疾患（高血圧、高脂血症、脂質異常症、糖尿病、慢性炎症性疾患、肥満、ならびにコレステロール逆転送の向上および／またはＬＤＬ：ＨＤＬ比の改善が治療上有益となる可能性がある任意の症状など）の治療に有用な別の治療薬と組み合わせることができる。このような療法の例として以下が挙げられる：３−ヒドロキシ−３−メチル−グルタリル−ＣｏＡレダクターゼ（ＨＭＧＣｏＡレダクターゼ）阻害剤（例えばアトルバスタチン、プラバスタチン、シンバスタチン、ロバスタチン、ロスバスタチン、およびその他）、コレステロール吸収阻害剤（例えばエゼチミブ）、胆汁捕捉剤（例えばコレスチラミン）、ミクロソームトリグリセリド輸送タンパク質（ＭＴＰ）阻害剤、ペルオキシソーム増殖剤活性化受容体修飾因子（例えばムラグリタザール（ｍｕｒａｇｌｉｔａｚａｒ）、ロシグリタゾン、フィブラート系製剤、およびその他）、コレステロールエステル転送タンパク質阻害剤、ニコチン酸誘導体（例えばＮｉａｓｐａｎ（登録商標）など）、アシル補酵素Ａ：コレステロールアシルトランスフェラーゼ（ＡＣＡＴ）阻害剤（例えばエフルシミベ（ｅｆｌｕｃｉｍｉｂｅ））、ファルネソイドＸ受容体修飾因子、メタボリックシンドロームまたはＩＩ型糖尿病の治療に用いられる治療薬（例えばメトホルミン）。本発明の化合物は、抗炎症治療薬（例えばアスピリン）と、および神経変性疾患用治療（例えば、Ａｒｉｃｅｐｔ（登録商標）、Ｅｘｅｌｏｎ（登録商標）、Ｒｅｍｉｎｙｌ（登録商標）およびＥｂｉｘａ（登録商標））と組み合わせることができる。
【００４８】
本発明の化合物は、症状を軽減するのに十分な量および十分な時間でヒトに投与することができる。例示として、ヒトについての一日の投薬レベルは、体重１ｋｇあたり０．００１から５０ｍｇの範囲、好ましくは体重１ｋｇあたり０．０１から２０ｍｇの一日投薬量が可能である。
【００４９】
本発明は、以下の実施例により例示される。
【００５０】
実験全般
高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）
この実験の節内ではＨＰＬＣ精製が用いられる。ＨＰＬＣは高速液体クロマトグラフィーを示す。化合物の精製に用いることができる、一般方法の幾つかの例として、以下が挙げられる：５％アセトニトリル／９５％水から１００％アセトニトリルへの標準勾配を用いる酸性逆相ＨＰＬＣ（水／アセトニトリル／０．１％トリフルオロ酢酸）または１０％アセトニトリル／９０％水から１００％アセトニトリルへの標準勾配を用いる塩基性逆相ＨＰＬＣ（水／アセトニトリル／０．１％アンモニア溶液）。ＵＶ検出（例えば２５４ｎＭ）を用いて、ＨＰＬＣから画分を分取する。この記載は、一般方法を与えるものであり、装置、カラム、移動相、検出波長、溶媒勾配、および実行時間の変形も、化合物の精製に用いることができる。
【００５１】
遊離塩基および塩
酸性ＨＰＬＣによる精製後、塩基性生成物は、トリフルオロ酢酸塩として単離するか、または一般的な通常法（例えば、２Ｍのアンモニア含有メタノールで溶出させる強カチオン交換クロマトグラフィーまたはシリカカーボナートカラムクロマトグラフィー、または有機溶媒（例えば酢酸エチル）と塩基性水（例えば炭酸水素ナトリウム水溶液）の間で分配し、有機層を分離し、無機固体（例えば硫酸マグネシウム）で乾燥させ、ろ過し、減圧濃縮する。）により遊離塩基として遊離させることができる。
【００５２】
遊離塩基の生成物は、通常法（例えば遊離塩基をジクロロメタンに溶解し、２Ｍの塩酸を含むエーテルを加え、減圧濃縮して塩酸塩とする。）により塩酸塩に変換することもできる。
【００５３】
略称：
Ｂｏｃ：ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル；ＣＤＣｌ３：クロロホルム−ｄ；ＣＤ３ＯＤ：メタノール−ｄ４；（ＣＤ３）２ＳＯ：ジメチルスルホキシド−ｄ６；ＨＰＬＣ：高速液体クロマトグラフィー；ＨＡＴＵ：Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ，Ｎ−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスファート；ＳＣＸ：強カチオン交換；トリホスゲン：炭酸ビス（トリクロロメチル）。
【実施例１】
【００５４】
Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（（４−（４−（３−シクロブチルウレイド）ベンゾイル）ピペラジン−１−イル）メチル）オキサゾール−４−カルボキサミド２，２，２−トリフルオロ酢酸塩
【００５５】
【化４】
0005642074.tif 000005
【００５６】
Ａ：メチル２−（ピペラジン−１−イルメチル）オキサゾール−４−カルボキシラート２，２，２−トリフルオロ酢酸塩
【００５７】
【化５】
0005642074.tif 000006
【００５８】
ｔｅｒｔ−ブチル−１−ピペラジンカルボキシラート（１．０６ｇ、５．７０ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（２．９８ｍｌ、１７．１ｍｍｏｌ）のジメチルスルホキシド（１０ｍＬ）溶液を、室温で、メチル（２−クロロメチル）オキサゾール−４−カルボキシラート（１．０ｇ、５．７０ｍｍｏｌ；少しずつ加える。）で処理し、一晩撹拌した。混合物を酢酸エチルで希釈し、飽和塩化ナトリウム水溶液で洗った。有機層を硫酸マグネシウムで乾燥させ、ろ過し、濃縮して、中間体ｔｅｒｔ−ブチル４−（（４−（メトキシカルボニル）オキサゾール−２−イル）メチル）ピペラジン−１−カルボキシラートを得た（ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ３２５．７［Ｍ＋Ｈ］＋）。中間体を、室温で、ジクロロメタン（１５ｍＬ）に溶解し、トリフルオロ酢酸（５ｍＬ）を滴下して処理した。混合物を４時間撹拌し、次いで減圧濃縮して表題化合物を得た（１．６０ｇ）。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ２２６．１［Ｍ＋Ｈ］＋。
【００５９】
Ｂ：エチル４−（３−シクロブチルウレイド）ベンゾアート
【化６】
0005642074.tif 000007
【００６０】
エチル４−イソシアナトベンゾアート（２５ｇ、１３０．８ｍｍｏｌ）のジクロロメタン溶液を撹拌しながら、これにシクロブチルアミン（２７．９１ｇ、３９２．４ｍｍｏｌ、３３．５ｍＬ）を滴加した。４０分撹拌後、形成された固体沈殿物をろ別し、乾燥させて、表題化合物を得た（３０．２８ｇ）。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ２６３．１［Ｍ＋Ｈ］＋
【００６１】
Ｃ：４−（３−シクロブチルウレイド）安息香酸
【００６２】
エチル４−（３−シクロブチルウレイド）ベンゾアート（４９．９ｍｍｏｌ、１３．１ｇ）をエタノール（４００ｍｌ）に懸濁させ、４Ｍの水酸化ナトリウム（３００ｍｍｏｌ、７４．９ｍｌ）で処理した。次いで混合物を１８時間還流撹拌した。反応物を放冷し、トルエン（１００ｍＬ）で希釈し、減圧濃縮した。５Ｍの塩酸水でｐＨ３の酸性にすると白色固体が生じた。固体を吸引濾過して集め、冷エタノールで洗い、減圧乾燥させて、表題化合物を白色粉末として得た（１１．０ｇ）。
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，４００ＭＨｚ）：δ１．７３（２Ｈ，ｍ）、１．９２（２Ｈ，１ｍ）、２．３２（２Ｈ，１ｍ）、４．２２（１Ｈ，ｍ）、７．４５（２Ｈ，ｄ）、７．９０（２Ｈ，ｄ）
【００６３】
Ｄ：メチル２−（（４−（４−（３−シクロブチルウレイド）ベンゾイル）ピペラジン−１−イル）メチル）オキサゾール−４−カルボキシラート
【００６４】
【化７】
0005642074.tif 000008
【００６５】
メチル２−（ピペラジン−１−イルメチル）オキサゾール−４−カルボキシラート２，２，２−トリフルオロ酢酸塩（１７４ｍｇ、５１３μｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３ｍＬ）溶液および４−（３−シクロブチルウレイド）安息香酸（１２０ｍｇ、５１３μｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（５ｍＬ）に加えたものに、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（３５７μＬ、２．０５ｍｍｏｌ）、続いてＯ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ，Ｎ−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスファート（２９３ｍｇ、７７０μｍｏｌ；ＨＡＴＵ）を加えた。混合物を室温で２２時間撹拌し、次いで減圧濃縮した。残渣を酢酸エチルに取り、飽和塩化アンモニウム水溶液およびブラインで洗った。有機相を硫酸マグネシウムで乾燥させ、ろ過し、減圧濃縮した。粗残渣をシリカゲルカラムに加え、２５％酢酸エチルを含むｎ−ヘキサンで溶出させて、表題化合物を得た（３４ｍｇ）。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ４４２．１［Ｍ＋Ｈ］＋
【００６６】
Ｅ：２−（（４−（４−（３−シクロブチルウレイド）ベンゾイル）ピペラジン−１−イル）メチル）オキサゾール−４−カルボン酸２，２，２−トリフルオロ酢酸塩
【００６７】
メチル２−（（４−（４−（３−シクロブチルウレイド）ベンゾイル）ピペラジン−１−イル）メチル）オキサゾール−４−カルボキシラート（３０ｍｇ、６８μｍｏｌ）を、室温で、メタノール／水混合物（５：１；３ｍＬ）に溶解した。水酸化リチウム（２０ｍｇ、４７７μｍｏｌ；一水和物）を加え、混合物を１時間撹拌した。混合物をほぼ乾固するまで濃縮し、水（２ｍＬ）で希釈し、濃塩酸を加えてｐＨ２から３にした。粗溶液を酸性逆相ＨＰＬＣで精製して、表題化合物を得た（３２ｍｇ）。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ４２８．１［Ｍ＋Ｈ］＋
【００６８】
Ｆ：１−（４−（１−（（４−（ｔｅｒｔ−ブチルカルバモイル）オキサゾール−２−イル）メチル）ピペラジン−４−カルボニル）フェニル）−３−シクロブチル尿素２，２，２−トリフルオロ酢酸塩
【００６９】
２−（（４−（４−（３−シクロブチルウレイド）ベンゾイル）ピペラジン−１−イル）メチル）−オキサゾール−４−カルボン酸２，２，２−トリフルオロ酢酸塩（８ｍｇ、１５μｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルアセトアミド（１ｍＬ）溶液に、Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ，Ｎ−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスファート（５．７ｍｇ、１５μｍｏｌ；ＨＡＴＵ）、ｔｅｒｔ−ブチルアミン（１．６μＬ、１５μｍｏｌ）、およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（３．９μＬ、２３μｍｏｌ）を加えた。反応液を室温で２０時間撹拌し、次いで減圧濃縮した。粗残渣を酸性逆相ＨＰＬＣで精製して、表題化合物を得た（５．６ｍｇ）。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ４８３．１［Ｍ＋Ｈ］＋
【００７０】
以下の化合物を同様な様式で調製した：
１Ｂ：Ｎ−シクロブチル−２−（（４−（４−（３−シクロブチルウレイド）ベンゾイル）ピペラジン−１−イル）メチル）オキサゾール−４−カルボキサミド
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ４８１．１［Ｍ＋Ｈ］＋
１Ｃ：Ｎ−ｓｅｃ−ブチル−２−（（４−（４−（３−シクロブチルウレイド）ベンゾイル）ピペラジン−１−イル）メチル）オキサゾール−４−カルボキサミド２，２，２−トリフルオロ酢酸塩、ラセミ体
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ４８３．１［Ｍ＋Ｈ］＋。
１Ｄ：２−（（４−（４−（３−シクロブチルウレイド）ベンゾイル）ピペラジン−１−イル）メチル）−Ｎ−シクロペンチルオキサゾール−４−カルボキサミド２，２，２−トリフルオロ酢酸塩
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ４９５．１［Ｍ＋Ｈ］＋。
【実施例２】
【００７１】
Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（（４−（４−（３−（シクロプロピルメチル）ウレイド）−３−フルオロベンゾイル）ピペラジン−１−イル）メチル）チアゾール−４−カルボキサミド
【００７２】
【化８】
0005642074.tif 000009
【００７３】
Ａ：エチル２−（（４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピペラジン−１−イル）メチル）チアゾール−４−カルボキシラート
【００７４】
【化９】
0005642074.tif 000010
【００７５】
ｔｅｒｔ−ブチル１−ピペラジンカルボキシラート（１．８１１ｇ、９．７２ｍｍｏｌ）、２−クロロメチルチアゾール−４−カルボン酸エチルエステル（２ｇ、９．７２ｍｍｏｌ）、炭酸カリウム（２．６９ｇ、１９．４５ｍｍｏｌ）、およびヨウ化ナトリウム（０．２９２ｇ、１．９４５ｍｍｏｌ）をまとめてアセトニトリル中２時間還流撹拌した。反応物を減圧濃縮した。残渣をジクロロメタンに取りろ過した。ろ液を減圧濃縮して、表題化合物を得た（４．３８ｇ）。
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ３５６．５［Ｍ＋Ｈ］＋
【００７６】
Ｂ：ナトリウム２−（（４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピペラジン−１−イル）メチル）チアゾール−４−カルボキシラート
【００７７】
【化１０】
0005642074.tif 000011
【００７８】
エチル２−（（４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピペラジン−１−イル）メチル）チアゾール−４−カルボキシラート（４．３８７１ｇ、１２．３４ｍｍｏｌ）および水酸化ナトリウム（０．４９４ｇ、１２．３４ｍｍｏｌ）をまとめてエタノール中３時間還流撹拌した。反応物を減圧濃縮して、表題化合物を得た（３．５６ｇ）。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ３２８．３［Ｍ＋Ｈ］＋
【００７９】
Ｃ：ｔｅｒｔ−ブチル４−（（４−（ｔｅｒｔ−ブチルカルバモイル）チアゾール−２−イル）メチル）ピペラジン−１−カルボキシラート
【００８０】
【化１１】
0005642074.tif 000012
【００８１】
ナトリウム２−（（４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピペラジン−１−イル）メチル）チアゾール−４−カルボキシラート（３．５９６ｇ、１０．２９ｍｍｏｌ）、ｔｅｒｔブチルアミン（０．７５３ｇ、１０．２９ｍｍｏｌ、１．０８２ｍＬ）、およびトリエチルアミン（３．１２ｇ、３０．９ｍｍｏｌ、４．２９ｍＬ）のジクロロメタン（５０ｍＬ）溶液に、１−プロパンホスホン酸環状無水物（１３．１０ｇ、２０．５８ｍｍｏｌ、１２．２５ｍＬ、５０％酢酸エチル溶液）を加えた。反応物を減圧濃縮し、残渣を酢酸エチルに取り、重炭酸ナトリウム（３回）およびブラインで洗った。有機相を減圧濃縮して、表題化合物を得た（２．１０ｇ）。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ２８３．５［Ｍ＋Ｈ］＋
【００８２】
Ｄ：Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（ピペラジン−１−イルメチル）チアゾール−４−カルボキサミド
【００８３】
ｔｅｒｔ−ブチル４−（（４−（ｔｅｒｔ−ブチルカルバモイル）チアゾール−２−イル）メチル）ピペラジン−１−カルボキシラート（２．１ｇ、５．４９ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（２０ｍＬ）に溶解し、２，２，２−トリフルオロ酢酸（２０ｍＬ）を加え、反応液を２時間撹拌した。反応物を減圧濃縮しＳＣＸカラムクロマトグラフィーで精製して、表題化合物を得た（１．２８ｇ）。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ２８３．４［Ｍ＋Ｈ］＋
【００８４】
Ｅ：２−（（４−（４−アミノ−３−フルオロベンゾイル）ピペラジン−１−イル）メチル）−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルチアゾール−４−カルボキサミド
【００８５】
【化１２】
0005642074.tif 000013
【００８６】
４−アミノ−３−フルオロ安息香酸（０．７０３ｇ、４．５３ｍｍｏｌ）、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（ピペラジン−１−イルメチル）チアゾール−４−カルボキサミド（１．２８ｇ、４．５３ｍｍｏｌ）、およびトリエチルアミン（０．４５９ｇ、４．５３ｍｍｏｌ、０．６３０ｍＬ）のジクロロメタン溶液に、１−プロパンホスホン酸環状無水物（２．８８ｇ、４．５３ｍｍｏｌ、２．７０ｍＬ、５０％酢酸エチル溶液）を加えた。反応物を減圧濃縮し、残渣を酢酸エチルに取り、重炭酸ナトリウム（３回）およびブラインで洗った。有機相を減圧濃縮して、表題化合物を得た（０．８７ｇ）。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ４２０．３［Ｍ＋Ｈ］＋
【００８７】
Ｆ：Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（（４−（４−（３−（シクロプロピルメチル）ウレイド）−３−フルオロベンゾイル）ピペラジン−１−イル）メチル）チアゾール−４−カルボキサミド
【００８８】
２−（（４−（４−アミノ−３−フルオロベンゾイル）ピペラジン−１−イル）メチル）−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルチアゾール−４−カルボキサミド（１００ｍｇ、０．２３８ｍｍｏｌ）および４−ニトロフェノールクロロホルメート（４８ｍｇ、０．２３８ｍｍｏｌ）をまとめてジクロロメタン中室温で１時間撹拌した。シクロプロピルメチルアミン（５０．９ｍｇ、０．７１５ｍｍｏｌ、６２μｌ）を加え、反応物を３０分間撹拌した。反応液を水で希釈し、疎水性フリットを通してフラッシュした。有機相を減圧濃縮し酸性逆相ＨＰＬＣで精製して、表題化合物を得た（５ｍｇ）。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ５１７．３［Ｍ＋Ｈ］＋
【００８９】
以下の化合物を同様な様式で調製した：
２Ｂ：Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（（４−（４−（３−シクロブチルウレイド）ベンゾイル）ピペラジン−１−イル）メチル）チアゾール−４−カルボキサミド
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ５１７．５［Ｍ＋Ｈ］＋
２Ｃ：Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（（４−（４−（３−イソペンチルウレイド）ベンゾイル）ピペラジン−１−イル）メチル）チアゾール−４−カルボキサミド
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ５３３．５［Ｍ＋Ｈ］＋
【実施例３】
【００９０】
Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−５−（（４−（４−（３−シクロブチルウレイド）−３−フルオロベンゾイル）ピペラジン−１−イル）メチル）フラン−２−カルボキサミド
【００９１】
【化１３】
0005642074.tif 000014
【００９２】
Ａ：ｔｅｒｔ−ブチル４−（（５−（メトキシカルボニル）フラン−２−イル）メチル）ピペラジン−１−カルボキシラート
【００９３】
【化１４】
0005642074.tif 000015
【００９４】
ｔｅｒｔ−ブチル１−ピペラジンカルボキシラート（２．１３４ｇ、１１．４６ｍｍｏｌ）、メチル５−（クロロメチル）−２−フロアート（２ｇ、１１．４６ｍｍｏｌ）、炭酸カリウム（３．１７ｇ、２２．９１ｍｍｏｌ）、およびヨウ化ナトリウム（０．３４３ｇ、２．２９１ｍｍｏｌ）をまとめてアセトニトリル中２時間還流撹拌した。反応物を減圧濃縮した。残渣をジクロロメタンに取り、ろ過した。ろ液を減圧濃縮し、表題化合物を得た（４．９９ｇ）。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ３２５．３［Ｍ＋Ｈ］＋
【００９５】
Ｂ：ナトリウム５−（（４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピペラジン−１−イル）メチル）フラン−２−カルボキシラート
【００９６】
ｔｅｒｔ−ブチル４−（（５−（メトキシカルボニル）フラン−２−イル）メチル）ピペラジン−１−カルボキシラート（４．９９ｇ、１５．３９ｍｍｏｌ）および水酸化ナトリウム（０．６１６ｇ、１５．３９ｍｍｏｌ）をまとめて３時間還流撹拌した。反応物を減圧濃縮し、表題化合物を得た（４．５９ｇ）。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ３１１．４［Ｍ＋Ｈ］＋
【００９７】
Ｃ：ｔｅｒｔ−ブチル４−（（５−（ｔｅｒｔ−ブチルカルバモイル）フラン−２−イル）メチル）ピペラジン−１−カルボキシラート
【００９８】
【化１５】
0005642074.tif 000016
【００９９】
ナトリウム５−（（４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピペラジン−１−イル）メチル）フラン−２−カルボキシラート（４．５５８ｇ、１３．７２ｍｍｏｌ）、２−メチルプロパン−２−アミン（１．００３ｇ、１３．７２ｍｍｏｌ、１．４４１ｍＬ）、およびトリエチルアミン（４．１６ｇ、４１．１ｍｍｏｌ、５．７２ｍＬ）のジクロロメタン溶液に、１−プロパンホスホン酸環状無水物（１７．４６ｇ、２７．４ｍｍｏｌ、１６．３３ｍＬ、５０％酢酸エチル溶液）を加えた。反応物を２時間撹拌し、次いで減圧濃縮した。残渣を酢酸エチルに取り、重炭酸ナトリウム、水、およびブラインで洗った。有機相を減圧濃縮し、表題化合物を得た（２．４ｇ）。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ３６６．３［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１００】
Ｄ：Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−５−（ピペラジン−１−イルメチル）フラン−２−カルボキサミド
【０１０１】
【化１６】
0005642074.tif 000017
【０１０２】
ｔｅｒｔ−ブチル４−（（５−（ｔｅｒｔ−ブチルカルバモイル）フラン−２−イル）メチル）ピペラジン−１−カルボキシラート（６．５７ｍｍｏｌ、２．４ｇ）をジクロロメタン（２０ｍＬ）に溶解した。２，２，２−トリフルオロ酢酸（２０ｍＬ）を加え、反応液を２時間撹拌した。反応物を減圧濃縮しＳＣＸクロマトグラフィーで精製して、表題化合物を得た（１．５１ｇ）。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ２６６．４［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１０３】
Ｅ：５−（（４−（４−アミノ−３−フルオロベンゾイル）ピペリジン−１−イル）メチル）−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルフラン−２−カルボキサミド
【０１０４】
【化１７】
0005642074.tif 000018
【０１０５】
４−アミノ−３−フルオロ安息香酸（０．８８３ｇ、５．６９ｍｍｏｌ）、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−５−（ピペラジン−１−イルメチル）フラン−２−カルボキサミド（１．５１ｇ、５．６９ｍｍｏｌ）、およびトリエチルアミン（０．５７６ｇ、５．６９ｍｍｏｌ、０．７９１ｍＬ）のジクロロメタン溶液に、１−プロパンホスホン酸環状無水物（３．６２ｇ、５．６９ｍｍｏｌ、３．３９ｍＬ、５０％酢酸エチル溶液）を加えた。反応物を２時間撹拌し、次いで減圧濃縮した。残渣を酢酸エチルに取り、重炭酸ナトリウム、水、およびブラインで洗った。有機相を減圧濃縮し、表題化合物を得た（０．９３ｇ）。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ４０３．６［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１０６】
Ｆ：Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−５−（（４−（４−（３−シクロブチルウレイド）−３−フルオロベンゾイル）ピペラジン−１−イル）メチル）フラン−２−カルボキサミド
【０１０７】
５−（（４−（４−アミノ−３−フルオロベンゾイル）ピペラジン−１−イル）メチル）−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルフラン−２−カルボキサミド（１１３ｍｇ、０．２８０ｍｍｏｌ）および４−ニトロフェノールクロロホルメート（５６ｍｇ、０．２３８ｍｍｏｌ）をまとめてジクロロメタン中室温で１時間撹拌した。シクロブチルアミン（５９．６ｍｇ、０．８３９ｍｍｏｌ、７１．６μｌ）を加え、反応物を３０分間撹拌した。反応液を水で希釈し、疎水性フリットに通してフラッシュした。有機相を減圧濃縮し酸性逆相ＨＰＬＣで精製して、表題化合物を得た（１０ｍｇ）。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ５００．３［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１０８】
以下の化合物を同様な様式で調製した：
３Ｂ：Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−５−（（４−（３−フルオロ−４−（３−イソペンチルウレイド）ベンゾイル）ピペラジン−１−イル）メチル）フラン−２−カルボキサミド
【０１０９】
【化１８】
0005642074.tif 000019
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ５１６．５［Ｍ＋Ｈ］＋
【実施例４】
【０１１０】
Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−５−（（４−（３−フルオロ−４−（３−イソブチルウレイド）ベンゾイル）ピペラジン−１−イル）メチル）フラン−２−カルボキサミド
【０１１１】
【化１９】
0005642074.tif 000020
【０１１２】
５−（（４−（４−アミノ−３−フルオロベンゾイル）ピペラジン−１−イル）メチル）−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルフラン−２−カルボキサミド（実施例３；０．０５ｇ、０．１２４ｍｍｏｌ）とＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．０２８ｍＬ）をジクロロメタン（５ｍＬ）に溶解した。炭酸ビス（トリクロロメチル）（０．０１４ｇ、０．０４６ｍｍｏｌ）を滴加し、反応物を３０分間撹拌した。反応物にＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．０９４ｍＬ）、続いて２−メチルプロパン−１−アミン（０．０１８ｇ、０．２４８ｍｍｏｌ、０．０２５ｍＬ）を加え、反応物をさらに２時間撹拌した。反応液を水で洗い、疎水性フリットに通してフラッシュした。有機相を減圧濃縮し塩基性逆相ＨＰＬＣで精製して、表題化合物を得た（５ｍｇ）。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ５０２．５［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１１３】
以下の化合物を同様な様式で調製した：
４Ｂ：Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−５−（（４−（４−（３−（シクロプロピルメチル）ウレイド）−３−フルオロベンゾイル）ピペラジン−１−イル）メチル）フラン−２−カルボキサミド
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ５００．５［Ｍ＋Ｈ］＋
４Ｃ：Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−５−（（４−（３−フルオロ−４−（３−ネオペンチルウレイド）ベンゾイル）ピペラジン−１−イル）メチル）フラン−２−カルボキサミド
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ５１６．３［Ｍ＋Ｈ］＋
【実施例５】
【０１１４】
以下の化合物を、実施例１から４に記載されるものと同様な方法を用いて調製した：
５Ａ：Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−５−（（４−（４−（３−ブチルウレイド）−３−フルオロベンゾイル）ピペラジン−１−イル）メチル）フラン−２−カルボキサミド塩酸塩
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ５０２．５［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１１５】
５Ｂ：Ｎ−シクロブチル−５−（（４−（４−（３−シクロブチルウレイド）−３−フルオロベンゾイル）ピペラジン−１−イル）メチル）フラン−２−カルボキサミド
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ４９８．５［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１１６】
５Ｃ：Ｎ−シクロブチル−５−（（４−（３−フルオロ−４−（３−イソブチルウレイド）ベンゾイル）ピペラジン−１−イル）メチル）フラン−２−カルボキサミド
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ５００．４［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１１７】
５Ｄ：（Ｒ）−Ｎ−ｓｅｃ−ブチル−５−（（４−（４−（３−（シクロプロピルメチル）ウレイド）ベンゾイル）ピペラジン−１−イル）メチル）フラン−２−カルボキサミド
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ４８２．４［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１１８】
５Ｅ：５−（（４−（４−（３−（シクロプロピルメチル）ウレイド）−３−フルオロベンゾイル）ピペラジン−１−イル）メチル）−Ｎ−（１−メチルシクロプロピル）フラン−２−カルボキサミド
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ４９８．５［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１１９】
５Ｆ：５−（（４−（４−（３−（シクロプロピルメチル）ウレイド）−３−フルオロベンゾイル）ピペラジン−１−イル）メチル）−Ｎ−（３，３−ジフルオロシクロブチル）フラン−２−カルボキサミド
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ５３４．３［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１２０】
５Ｇ：Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−５−（（４−（３−クロロ−４−（３−ネオペンチルウレイド）ベンゾイル）ピペラジン−１−イル）メチル）フラン−２−カルボキサミド
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ５３２．５［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１２１】
５Ｈ：Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−５−（（４−（３−クロロ−４−（３−イソブチルウレイド）ベンゾイル）ピペラジン−１−イル）メチル）フラン−２−カルボキサミド
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ５１８．８［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１２２】
５Ｉ：Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−５−（（４−（３−クロロ−４−（３−（シクロプロピルメチル）ウレイド）ベンゾイル）ピペラジン−１−イル）メチル）フラン−２−カルボキサミド
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ５１６．５［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１２３】
５Ｊ：Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−５−（（４−（３−クロロ−４−（３−イソペンチルウレイド）ベンゾイル）ピペラジン−１−イル）メチル）フラン−２−カルボキサミド
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ５３２．３［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１２４】
５Ｋ：Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−５−（（４−（４−（３−ブチルウレイド）−３−クロロベンゾイル）ピペラジン−１−イル）メチル）フラン−２−カルボキサミド
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ５１８．５［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１２５】
５Ｌ：Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−５−（（４−（３−クロロ−４−（３−シクロブチルウレイド）ベンゾイル）ピペラジン−１−イル）メチル）フラン−２−カルボキサミド
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ５１６．５［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１２６】
５Ｍ：Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−５−（（４−（３−クロロ−４−（３−（２−ヒドロキシ−２−メチルプロピル）ウレイド）ベンゾイル）ピペラジン−１−イル）メチル）フラン−２−カルボキサミド
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ５３４．５［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１２７】
５Ｎ：Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−５−（（４−（３−クロロ−４−（３−（（１−ヒドロキシシクロプロピル）メチル）ウレイド）ベンゾイル）ピペラジン−１−イル）メチル）フラン−２−カルボキサミド
【０１２８】
【化２０】
0005642074.tif 000021
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ５３２．３［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１２９】
５Ｏ：Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−５−（（４−（３−クロロ−４−（３−（（１−イソシアノシクロプロピル）メチル）ウレイド）ベンゾイル）ピペラジン−１−イル）メチル）フラン−２−カルボキサミド
【０１３０】
【化２１】
0005642074.tif 000022
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ５４１．５［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１３１】
合成に必要な１−（アミノメチル）シクロプロパンカルボニトリルを、以下のとおり調製した：
工程１：エチル１−シアノシクロプロパンカルボキシラート（３５．９ｍｍｏｌ、５ｇ）、ジメトキシエタン（１００ｍＬ）、およびメタノール（１０ｍＬ）の混合物に、水素化ホウ素ナトリウム（２８７ｍｍｏｌ、１０．８７ｇ）をゆっくりと加え、混合物を室温で１８時間撹拌した。溶液を飽和炭酸水素ナトリウムでゆっくりと希釈し、次いで１０％メタノール／ジクロロメタン（３回）で抽出した。有機層を１つにまとめ、硫酸ナトリウムで脱水させ、減圧濃縮して、中間体１−（ヒドロキシメチル）シクロプロパンカルボニトリルを得た（２．３６ｇ）。
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）：δ０．９９（２Ｈ，ｍ）、１．２８（２Ｈ，ｍ）、２．５（１Ｈ，ｂｒ  ｓ）、３．６２（２Ｈ，ｓ）
【０１３２】
工程２：１−（ヒドロキシメチル）シクロプロパンカルボニトリル（２４．３０ｍｍｏｌ、２．３６ｇ）をジクロロメタン（３０ｍＬ）に加えた混合物を撹拌し、反応液を０℃に保ちながら、これにトリエチルアミン（４８．６ｍｍｏｌ、６．８３ｍＬ、４．９２ｇ）、およびメタンスルホニルクロリド（３１．６ｍｍｏｌ、２．４４５ｍＬ、３．６２ｇ）を少しずつ加えて処理した。溶液を１時間撹拌し、次いで飽和炭酸水素ナトリウムで希釈し、１０％メタノール／ジクロロメタン（３回）で抽出した。有機層を１つにまとめ減圧濃縮して、中間体（１−シアノシクロプロピル）メチルメタンスルホナートを得た（３．７７ｇ）。
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）：δ１．１８（２Ｈ，ｍ）、１．４６（２Ｈ，ｍ）、３．１４（３Ｈ，ｓ）、４．１８（２Ｈ，ｓ）
【０１３３】
工程３：（１−シアノシクロプロピル）メチルメタンスルホナート（２１．５２ｍｍｏｌ、３．７７ｇ）とアジ化ナトリウム（４３．０ｍｍｏｌ、２．８０ｇ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（４０ｍＬ）に加えた混合物を撹拌し、約１８時間１２０℃に加熱した。混合物を放冷し、水と酢酸エチルで希釈した。有機層を分離し、硫酸ナトリウムで脱水させ、減圧濃縮して、油状物を得た。この油状物をエーテルに取り、水で洗い、乾燥させ、減圧濃縮して、中間体１−（アジドメチル）シクロプロパンカルボニトリル（１．８ｇ）を油状物として得た。
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）：δ１．０２（２Ｈ，ｍ）、１．３６（２Ｈ，ｍ）、３．３８（２Ｈ，ｓ）
【０１３４】
工程４：１−（アジドメチル）シクロプロパンカルボニトリル（１４．７４ｍｍｏｌ、１．８ｇ）のメタノール（２０ｍＬ）溶液に、１０％パラジウム担持炭素（１４．７４ｍｍｏｌ、２００ｍｇ）を含有する水（２００μｌ）を加えた。混合物を、水素３ｂａｒ下、室温で一晩撹拌した。触媒をろ過して除去し、ろ液を減圧濃縮して、表題化合物を得た（１．３ｇ）。
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）：δ０．８７（２Ｈ，ｍ）、１．２３（２Ｈ，ｍ）、２．７６（２Ｈ，ｓ）
【０１３５】
５Ｐ：Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−５−（（４−（４−（３−（シクロプロピルメチル）ウレイド）−２，３−ジフルオロベンゾイル）ピペラジン−１−イル）メチル）フラン−２−カルボキサミド
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ５１８．５［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１３６】
５Ｑ：Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−５−（（４−（２，３−ジフルオロ−４−（３−ネオペンチルウレイド）ベンゾイル）ピペラジン−１−イル）メチル）フラン−２−カルボキサミド
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ５３４．５［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１３７】
５Ｒ：Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−５−（（４−（４−（３−ブチルウレイド）−２，３−ジフルオロベンゾイル）ピペラジン−１−イル）メチル）フラン−２−カルボキサミド
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ５２０．３［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１３８】
５Ｓ：Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−５−（（４−（２，３−ジフルオロ−４−（３−イソブチルウレイド）ベンゾイル）ピペラジン−１−イル）メチル）フラン−２−カルボキサミド
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ５２０．７［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１３９】
５Ｔ：Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−５−（（４−（２，３−ジフルオロ−４−（３−イソペンチルウレイド）ベンゾイル）ピペラジン−１−イル）メチル）フラン−２−カルボキサミド
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ５３４．３［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１４０】
５Ｕ：Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−５−（（４−（４−（３−シクロブチルウレイド）−２，３−ジフルオロベンゾイル）ピペラジン−１−イル）メチル）フラン−２−カルボキサミド
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ５１８．５［Ｍ＋Ｈ］＋
【実施例６】
【０１４１】
５−（（４−（４−（３−（シクロプロピルメチル）ウレイド）ベンゾイル）ピペラジン−１−イル）メチル）−Ｎ−ｔｅｒｔ−ペンチルチオフェン−２−カルボキサミド
【０１４２】
【化２２】
0005642074.tif 000023
【０１４３】
Ａ：エチル４−（３−（シクロプロピルメチル）ウレイド）ベンゾアート
【０１４４】
【化２３】
0005642074.tif 000024
【０１４５】
シクロプロピルメタンアミン（５７．５ｍｍｏｌ、４．９９ｍｌ、４．０９ｇ）をジクロロメタン（４０ｍＬ）に加え、これにエチル４−イソシアナトベンゾアート（５２．３ｍｍｏｌ、１０ｇ）をジクロロメタン（４５ｍＬ）に加えたものを加え、反応物を一晩撹拌した。次いで反応物を減圧濃縮し、表題化合物を得た（１４．７ｇ）。
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）：δ０．２（２Ｈ，ｍ）０．５、（２Ｈ，ｍ）０．９５（１Ｈ，ｍ）１．４（３Ｈ，ｔ）、３．１（２Ｈ，ｍ）４．３５（２Ｈ，ｑ）、５．１５（１Ｈ，ｂｒ  ｓ）、７．０、１Ｈ、７．４（２Ｈ，ｄ）８．０（２Ｈ，ｄ）
【０１４６】
Ｂ：４−（３−（シクロプロピルメチル）ウレイド）安息香酸
【０１４７】
【化２４】
0005642074.tif 000025
【０１４８】
エチル４−（３−（シクロプロピルメチル）ウレイド）ベンゾアート（５５．３ｍｍｏｌ、１４．５ｇ）をエタノール（４００ｍｌ）に懸濁させ、４Ｍの水酸化ナトリウム（３３２ｍｍｏｌ、８３ｍＬ）を加えた。次いで反応物を還流して完全に鹸化した。エタノールを蒸発により除去し、反応物を濃塩酸で中和した。白色沈殿を集め、水で洗った。生成物を減圧乾燥して、表題化合物を得た（１２．１ｇ）
１Ｈ  ＮＭＲ（（ＣＤ３）２ＳＯ，４００ＭＨｚ）：δ０．２（２Ｈ，ｍ）０．５、（２Ｈ，ｍ）０．９５（１Ｈ，ｍ）、３．０（２Ｈ，ｍ）６．３５（１Ｈ，ｂｒ  ｓ）７．４（２Ｈ，ｄ）７．８（２Ｈ，ｄ）８．９（１Ｈ，ｂｒ  ｓ）
【０１４９】
Ｃ：ｔｅｒｔ−ブチル４−（４−（３−（シクロプロピルメチル）ウレイド）ベンゾイル）ピペラジン−１−カルボキシラート
【０１５０】
【化２５】
0005642074.tif 000026
【０１５１】
ｔｅｒｔ−ブチルピペラジン−１−カルボキシラート（４５．８ｍｍｏｌ、８．５３ｇ）と４−（３−（シクロプロピルメチル）ウレイド）安息香酸（４５．８ｍｍｏｌ、１０．７３ｇ）をジクロロメタン（２００ｍＬ）に加えて混ぜ、トリエチルアミン（１０３ｍｍｏｌ、１４．３６ｍｌ、１０．４３ｇ）、続いて１−プロパンホスホン酸環状無水物（６８．７ｍｍｏｌ、４０．７ｍＬ、４３．７ｇ、５０％酢酸エチル溶液）を加えた。反応物を１時間撹拌し、次いで飽和炭酸水素ナトリウム溶液に注いでジクロロメタンで抽出した。有機相を乾燥させ（硫酸マグネシウム）、ろ過し、減圧濃縮して、表題化合物を得た（１７．１３ｇ）。
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ４０３．５［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１５２】
Ｄ：１−（シクロプロピルメチル）−３−（４−（ピペラジン−１−カルボニル）フェニル）尿素
【０１５３】
【化２６】
0005642074.tif 000027
【０１５４】
ｔｅｒｔ−ブチル４−（４−（３−（シクロプロピルメチル）ウレイド）ベンゾイル）ピペラジン−１−カルボキシラート（４６．７ｍｍｏｌ、１８．７８ｇ）をジクロロメタン（３０ｍＬ）に溶解し、トリフルオロ酢酸（２３３ｍｍｏｌ、１７．３３ｍｌ、２６．６ｇ）を加えた。反応物を１時間撹拌し、次いで減圧濃縮した。粗生成物をエーテルと粉砕し、高真空乾燥して白色粉末を得た。白色粉末を水に取り、慎重に炭酸ナトリウムでｐＨ１０にした。次いで水溶液をジクロロメタンで抽出し、有機相を１つにまとめて乾燥させ、ろ過し、減圧濃縮して、表題化合物を得た（１３．４ｇ）。
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）：δ０．２（２Ｈ，ｍ）０．５、（２Ｈ，ｍ）０．９５（１Ｈ，ｍ）２．２（２Ｈ，ｓ，ｂｒ）、２．８（４Ｈ，ｂｒ  ｓ）、３．６（４Ｈ，ｂｒ  ｓ）、５．８（１Ｈ，ｍ）７．２（４Ｈ，ｍ）
【０１５５】
Ｅ：メチル５−（（４−（４−（３−（シクロプロピルメチル）ウレイド）ベンゾイル）ピペラジン−１−イル）メチル）チオフェン−２−カルボキシラート
【０１５６】
【化２７】
0005642074.tif 000028
【０１５７】
１−（シクロプロピルメチル）−３−（４−（ピペラジン−１−カルボニル）フェニル）尿素（４．２５ｍｍｏｌ、１．２８６ｇ）、メチル５−（ブロモメチル）チオフェン−２−カルボキシラート（４．２５ｍｍｏｌ、１ｇ）、および炭酸カリウム（１２．７６ｍｍｏｌ、１．７６４ｇ）をアセトニトリル（２０ｍＬ）に加えて室温で１８時間撹拌した。反応液を減圧濃縮し、得られる残渣をジクロロメタンに取り、水で洗い、硫酸ナトリウムで脱水させ、減圧濃縮して、表題化合物を得た（１．７６４ｇ）。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ４５７．５［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１５８】
Ｆ：５−（（４−（４−（３−（シクロプロピルメチル）ウレイド）ベンゾイル）ピペラジン−１−イル）メチル）チオフェン−２−カルボン酸
【０１５９】
メチル５−（（４−（４−（３−（シクロプロピルメチル）ウレイド）ベンゾイル）ピペラジン−１−イル）メチル）チオフェン−２−カルボキシラート（３．８６ｍｍｏｌ、１．７６４ｇ）および水酸化ナトリウム（３．８６ｍｍｏｌ、０．１５５ｇ）をまとめてメタノール中１８時間加熱還流した。反応液を減圧濃縮し、得られる残渣をＳＣＸカラムクロマトグラフィーで精製して、表題化合物を得た（１．００ｇ）。
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ４４３．３［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１６０】
Ｇ：５−（（４−（４−（３−（シクロプロピルメチル）ウレイド）ベンゾイル）ピペラジン−１−イル）メチル）−Ｎ−ｔｅｒｔ−ペンチルチオフェン−２−カルボキサミド
【０１６１】
５−（（４−（４−（３−（シクロプロピルメチル）ウレイド）ベンゾイル）ピペラジン−１−イル）メチル）チオフェン−２−カルボン酸（１００ｍｇ、０．２２６ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（９９ｍｇ、０．１２７ｍＬ、０．４５２ｍｍｏｌ）、およびｔｅｒｔ−ペンチルアミン（３９ｍｇ、０．４５２ｍｍｏｌ）をまとめてジクロロメタン中で撹拌した。１−プロパンホスホン酸環状無水物（２１６ｍｇ、０．２０２ｍＬ、０．３３９ｍｍｏｌ、５０％酢酸エチル溶液）を加え、反応物を室温で１時間撹拌した。反応液を飽和重炭酸ナトリウム溶液で洗い、硫酸ナトリウムで脱水させ、減圧濃縮し、逆相酸性分取ＨＰＬＣで精製して、表題化合物を得た（５ｍｇ）。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ５１２．８［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１６２】
以下の化合物を同様な様式で調製した：
６Ｂ：Ｎ−ｔｅｆｔ−ブチル−５−（（４−（４−（３−（シクロプロピルメチル）ウレイド）ベンゾイル）ピペラジン−１−イル）メチル）チオフェン−２−カルボキサミド
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ４９８．５［Ｍ＋Ｈ］＋
【実施例７】
【０１６３】
Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−３−（（４−（４−（３−シクロブチルウレイド）−３−フルオロベンゾイル）ピペラジン−１−イル）メチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−カルボキサミド
【０１６４】
【化２８】
0005642074.tif 000029
【０１６５】
Ａ：Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−３−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−カルボキサミド
【０１６６】
【化２９】
0005642074.tif 000030
【０１６７】
ｔｅｒｔ−ブチルイソシアナート（１．５７ｍＬ、１．３４ｇ、１３．７０ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（３０ｍＬ）に加え、これに３−メチル−１Ｈ−ピラゾール（０．９８ｍＬ、１ｇ、１２．１８ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で一晩撹拌し、次いで減圧濃縮した。粗生成物をシリカクロマトグラフィー（ジクロロメタンで溶出）で精製して、表題化合物を得た（２．１ｇ）。
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，４００ＭＨｚ）：δ１．４６（９Ｈ，ｓ）、２．２８（３Ｈ，ｓ）、６．１４（２Ｈ，ｄ）、７．０２（１Ｈ，ｂｒ  ｓ）、８．０８（１Ｈ，ｄ）
【０１６８】
Ｂ：３−（ブロモメチル）−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−１Ｈ−ピラゾール−１−カルボキサミド
【０１６９】
【化３０】
0005642074.tif 000031
【０１７０】
Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−３−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−カルボキサミド（６０９ｍｇ、３．３６ｍｍｏｌ）を四塩化炭素（１２ｍＬ）に加え、これにＮ−ブロモスクシンイミド（８４９ｍｇ、４．７７ｍｍｏｌ）および過酸化ベンゾイル（１１４ｍｇ、０．４７０ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を一晩加熱還流し、次いで水と酢酸エチルで希釈した。有機層を分離し、乾燥させ、減圧濃縮した。粗生成物をシリカクロマトグラフィー（１０％酢酸エチルを含むヘプタンで溶出）で精製して、表題化合物を得た（２８０ｍｇ）。
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）：δ１．４７（９Ｈ，ｓ）、４．４３（２Ｈ，ｄ）、６．４２（１Ｈ，ｄ）、６．９９（１Ｈ，ｂｒ  ｓ）、８．１４（１Ｈ，ｄ）
【０１７１】
Ｃ：ｔｅｒｔ−ブチル４−（４−アミノ−３−フルオロベンゾイル）ピペラジン−１−カルボキシラート
【０１７２】
【化３１】
0005642074.tif 000032
【０１７３】
４−アミノ−３−フルオロ安息香酸（４．９７ｇ、３２．０４ｍｍｏｌ）、ｔｅｒｔ−ブチルピペラジン−１−カルボキシラート（５．９７ｇ、３２．０４ｍｍｏｌ）、およびトリエチルアミン（１０ｍＬ）のジクロロメタン（１００ｍＬ）溶液を撹拌しながら、これに１−プロパンホスホン酸環状無水物（２０ｍＬ、５０％酢酸エチル溶液、滴下）を加えた。反応液を１時間撹拌し、次いで酢酸エチルで希釈し、炭酸カリウム（水溶液）で洗い、乾燥させ（硫酸マグネシウム）、減圧濃縮して、表題化合物を得た（９．５ｇ）。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：３２４．５［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１７４】
Ｄ：ｔｅｒｔ−ブチル４−（４−（３−シクロブチルウレイド）−３−フルオロベンゾイル）ピペラジン−１−カルボキシラート
【０１７５】
【化３２】
0005642074.tif 000033
【０１７６】
ｔｅｒｔ−ブチル４−（４−アミノ−３−フルオロベンゾイル）ピペラジン−１−カルボキシラート（９．５ｇ、２９．４１ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（１００ｍＬ）に溶解し、４−ニトロフェニルカルボノクロリダート（５．９３ｇ、２９．４１ｍｍｏｌ）を加えた。反応液を２０時間撹拌し、シクロブチルアミン（７．５ｍｌ、８８．２ｍｍｏｌ）を加えた。２時間後、反応液をシリカのクロマトフラフィー（ジクロロメタンからジクロロメタン／酢酸エチルで溶出）にかけ、表題化合物を得た（２．８ｇ）。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：４２１．０［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１７７】
Ｅ：１−シクロブチル−３−（２−フルオロ−４−（ピペラジン−１−カルボニル）フェニル）尿素
【０１７８】
ｔｅｒｔ−ブチル４−（４−（３−シクロブチルウレイド）−３−フルオロベンゾイル）ピペラジン−１−カルボキシラート（２．８ｇ、６６．６７ｍｍｏｌ）、トリフルオロ酢酸、およびジクロロメタンを２０時間撹拌し、次いで減圧濃縮した。残渣をジクロロメタン／メタノールに取り、強カチオン交換カラムにかけ、ジクロロメタン／メタノールで洗った。２Ｍのアンモニアを含むメタノールでカラムから溶出させて、表題化合物を得た（１．６ｇ）。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：３２１．４［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１７９】
Ｆ：Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−３−（（４−（４−（３−シクロブチルウレイド）−３−フルオロベンゾイル）ピペラジン−１−イル）メチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−カルボキサミド
【０１８０】
３−（ブロモメチル）−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−１Ｈ−ピラゾール−１−カルボキサミド（１０２ｍｇ、０．３９２ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（３．９ｍＬ）に加え、これに１−シクロブチル−３−（２−フルオロ−４−（ピペラジン−１−カルボニル）フェニル）尿素（１２６ｍｇ、０．３９２ｍｍｏｌ）、およびトリエチルアミン（１０９μＩ、７９ｍｇ、０．７８２ｍｍｏｌ）を加えた。この混合物に、スパチュラ先端分のヨウ化ナトリウムを加えた。混合物を一晩加熱還流させ、次いで水と酢酸エチルで希釈した。有機層を分離し、乾燥させ、減圧濃縮した。残渣をシリカクロマトグラフィーにかけ、２％メタノールを含むジクロロメタンで溶出させて精製した。残渣をジクロロメタン／メタノールに取り、強カチオン交換カラムにかけ、ジクロロメタン／メタノールで洗った。２Ｍのアンモニアを含むメタノールでカラムから溶出させて、表題化合物を得た（４４ｍｇ）。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ５００．３［Ｍ＋Ｈ］＋
【実施例８】
【０１８１】
Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−４−（（４−（４−（３−シクロブチルウレイド）−３−フルオロベンゾイル）ピペラジン−１−イル）メチル）ピコリンアミド
【０１８２】
【化３３】
0005642074.tif 000034
【０１８３】
Ａ：Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−４−メチルピコリンアミド
【０１８４】
【化３４】
0005642074.tif 000035
【０１８５】
４−メチルピリジン−２−カルボン酸（５００ｍｇ、３．６５ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（１．２７ｇ、１２．５ｍｍｏｌ、１．７５ｍＬ）、およびｔｅｒｔ−ブチルアミン（２６７ｍｇ、３．８５ｍｍｏｌ）をまとめてジクロロメタン（１０ｍＬ）中で撹拌した。１−プロパンホスホン酸環状無水物（４．８２ｇ、７．５ｍｍｏｌ、４．５ｍＬ、５０％酢酸エチル溶液）を滴加し、反応物を室温で１時間撹拌した。反応液を減圧濃縮し、得られる残渣を酢酸エチルに取り、飽和重炭酸ナトリウム溶液で洗った。有機相を硫酸ナトリウムで脱水させ、減圧濃縮し、表題化合物を得た（３７６ｍｇ）。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ１９３．４［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１８６】
Ｂ：４−（ブロモメチル）−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルピコリンアミド
【０１８７】
【化３５】
0005642074.tif 000036
【０１８８】
Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−４−メチルピコリンアミド（１００ｍｇ、０．５２ｍｍｏｌ）およびＮ−ブロモスクシンイミド（４６ｍｇ、０．５２ｍｍｏｌ）をまとめてクロロベンゼン（５ｍＬ）に加え、太陽灯の下で１時間撹拌した。反応液を減圧濃縮した。得られる残渣をジクロロメタンに取り、水で洗った。有機相を硫酸ナトリウムで脱水させ、減圧濃縮し、表題化合物を得た（１２０ｍｇ）。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ２７１．５［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１８９】
Ｃ：Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−４−（（４−（４−（３−シクロブチルウレイド）−３−フルオロベンゾイル）ピペラジン−１−イル）メチル）ピコリンアミド
【０１９０】
４−（ブロモメチル）−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルピコリンアミド（７０ｍｇ、０２５８ｍｍｏｌ）、１−（シクロブチルメチル）−３−（２−フルオロ−４−（ピペラジン−１−カルボニル）フェニル）尿素（８３ｍｇ、０．２５８ｍｍｏｌ）、および炭酸カリウム（１０６ｍｇ、０．７４４ｍｍｏｌ）をまとめてアセトニトリル中１時間加熱還流した。反応液を減圧濃縮し、得られる残渣を逆相酸性分取ＨＰＬＣで精製して、表題化合物を得た（４１ｍｇ）。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ５１１．６［Ｍ＋Ｈ］＋
【実施例９】
【０１９１】
Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−６−（（４−（４−（３−シクロブチルウレイド）−３−フルオロベンゾイル）ピペラジン−１−イル）メチル）ピコリンアミド
【０１９２】
【化３６】
0005642074.tif 000037
【０１９３】
Ａ：メチル６−（（メチルスルホニルオキシ）メチル）ピコリナート
【０１９４】
【化３７】
0005642074.tif 000038
【０１９５】
６−（ヒドロキシメチル）ピコリナート（２００ｍｇ、１．１９６ｍｍｏｌ）とトリエチルアミン（３６３ｍｇ、３．５８８ｍｍｏｌ、０．５ｍＬ）をまとめてジクロロメタン（２ｍＬ）中０℃で撹拌した。メタンスルホニルクロリド（２０６ｍｇ、１．７９４ｍｍｏｌ）を加え、反応物を１時間かけて室温まで昇温させた。反応物を水で洗い、硫酸ナトリウムで脱水させ、減圧濃縮し、表題化合物を得た（２９３ｍｇ）。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ２４６．３［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１９６】
Ｂ：メチル６−（（４−（４−（３−シクロブチルウレイド）−３−フルオロベンゾイル）ピペラジン−１−イル）メチル））ピコリナート
【０１９７】
【化３８】
0005642074.tif 000039
【０１９８】
メチル６−（（メチルスルホニルオキシ）メチル）ピコリナート（３００ｍｇ、１．２２ｍｍｏｌ）、１−（シクロブチルメチル）−３−（２−フルオロ−４−（ピペラジン−１−カルボニル）フェニル）尿素（３９１ｍｇ、１．２２ｍｍｏｌ）、および炭酸カリウム（５０５ｍｇ、３．６６ｍｍｏｌ）をまとめてアセトニトリル中１８時間撹拌した。反応液を減圧濃縮した。得られる残渣をジクロロメタンに取り、水で洗い、硫酸ナトリウムで脱水させ、減圧濃縮して、表題化合物を得た（４０７ｍｇ）。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ４７０．５［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１９９】
Ｃ：ナトリウム６−（（４−（４−（３−シクロブチルウレイド）−３−フルオロベンゾイル）ピペラジン−１−イル）メチル）ピコリナート
【０２００】
メチル６−（（４−（４−（３−シクロブチルウレイド）−３−フルオロベンゾイル）ピペラジン−１−イル）メチル）ピコリナート（４００ｍｇ、０．８５２ｍｍｏｌ）と水酸化ナトリウム（３５ｍｇ、０．８５２ｍｍｏｌ）をまとめてメタノール中１８時間加熱還流させた。反応液を減圧濃縮して、表題化合物を得た（３２３ｍｇ）。
ＭＳ［ＥＳＩ］ｍ／ｚ４５６．５［Ｍ＋Ｈ］＋
【０２０１】
Ｄ：Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−６−（（４−（４−（３−シクロブチルウレイド）−３−フルオロベンゾイル）ピペラジン−１−イル）メチル）ピコリンアミド
【０２０２】
ナトリウム６−（（４−（４−（３−シクロブチルウレイド）−３−フルオロベンゾイル）ピペラジン−１−イル）メチル）ピコリナート（１００ｍｇ、０．２０９ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（６６ｍｇ、０．６９３ｍｍｏｌ、０．０９１ｍＬ）、およびｔｅｒｔ−ブチルアミン（３２ｍｇ、０．４３５ｍｍｏｌ）をまとめてジクロロメタン中室温で撹拌した。１−プロパンホスホン酸環状無水物（２０８ｍｇ、０．３２６ｍｍｏｌ、０．１９４ｍＬ、５０％酢酸エチル溶液）を滴加し、反応物を１時間撹拌した。反応液を減圧濃縮し、得られる残渣を酢酸エチルに取り、飽和重炭酸ナトリウム溶液で洗った。有機相を硫酸ナトリウムで脱水させ、減圧濃縮し、表題化合物を得た（２４ｍｇ）。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ５１１．６［Ｍ＋Ｈ］＋
【０２０３】
以下の化合物を同様な方法で調製した：
９Ｂ：Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−６−（（４−（３−フルオロ−４−（３−ネオペンチルウレイド）ベンゾイル）ピペラジン−１−イル）メチル）ピコリンアミド
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ５２７．０［Ｍ＋Ｈ］＋
９Ｃ：Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−６−（（４−（３−フルオロ−４−（３−イソペンチルウレイド）ベンゾイル）ピペラジン−１−イル）メチル）ピコリンアミド
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ５２７．０［Ｍ＋Ｈ］＋
９Ｄ；Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−６−（（４−（４−（３−（シクロプロピルメチル）ウレイド）−３−フルオロベンゾイル）ピペラジン−１−イル）メチル）ピコリンアミド
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ５１１．３［Ｍ＋Ｈ］＋
【実施例１０】
【０２０４】
Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（（４−（４−（３−シクロブチルウレイド）−３−フルオロベンゾイル）ピペラジン−１−イル）メチル）イソニコチンアミド
【０２０５】
【化３９】
0005642074.tif 000040
【０２０６】
Ａ：メチル２−（（メチルスルホニルオキシ）メチル）イソニコチナート
【０２０７】
メチル２−（ヒドロキシメチル）イソニコチナート（３．１７ｍｍｏｌ、０．５３０ｇ）とトリエチルアミン（９．５１ｍｍｏｌ、１．３２２ｍＬ、０．９６３ｇ）を、０℃でジクロロメタン（２０ｍＬ）に加えて撹拌した。メタンスルホニルクロリド（４．７６ｍｍｏｌ、０．３６８ｍＬ、０．５４５ｇ）を滴加し、反応物を室温で１時間撹拌した。反応液を水で洗い、硫酸ナトリウムで脱水させ、減圧濃縮して、表題化合物を得た（６８６ｍｇ）。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ２４６．４［Ｍ＋Ｈ］＋
【０２０８】
Ｂ：メチル２−（（４−（４−（３−シクロブチルウレイド）−３−フルオロベンゾイル）ピペラジン−１−イル）メチル）イソニコチナート
【０２０９】
メチル２−（メチルスルホニルメチル）イソニコチナート（２．９９ｍｍｏｌ、０．６８６ｇ）、１−シクロブチル−３−（２−フルオロ−４−（ピペラジン−１−カルボニル）フェニル）尿素（２．９９ｍｍｏｌ、０．９５９ｇ）、および炭酸カリウム（８．９８ｍｍｏｌ、１．２４１ｇ）をまとめてアセトニトリル（２０ｍＬ）中４０℃で２時間加熱した。反応液を減圧濃縮し、残渣をジクロロメタンに取った。有機相を硫酸ナトリウムで脱水させ、減圧濃縮した。残渣をシリカクロマトグラフィー（ジクロロメタンから６％メタノール／ジクロロメタンの溶媒勾配で溶出）で精製して、表題化合物を得た（８２２ｍｇ）。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ４７０．５［Ｍ＋Ｈ］＋
【０２１０】
Ｃ：ナトリウム２−（（４−（４−（３−シクロブチルウレイド）−３−フルオロベンゾイル）ピペラジン−１−イル）メチル）イソニコチナート
【０２１１】
メチル２−（（４−（４−（３−シクロブチルウレイド）−３−フルオロベンゾイル）ピペラジン−１−イル）メチル）イソニコチナート（１．７４６ｍｍｏｌ、０．８２ｇ）と水酸化ナトリウム（１．７４６ｍｍｏｌ、０．０７０ｇ）をメタノール（２０ｍＬ）に加え１８時間加熱還流した。反応液を減圧濃縮し、表題化合物を得た（７９８ｍｇ）。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ４５６．５［Ｍ＋Ｈ］＋
【０２１２】
Ｄ：Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（（４−（４−（３−シクロブチルウレイド）−３−フルオロベンゾイル）ピペラジン−１−イル）メチル）イソニコチンアミド
【０２１３】
ナトリウム２−（（４−（４−（３−シクロブチルウレイド）−３−フルオロベンゾイル）ピペラジン−１−イル）メチル）イソニコチナート（０．２０９ｍｍｏｌ、０．１ｇ）、ｔｅｒｔ−ブチルアミン（０．４１９ｍｍｏｌ、０．０８８ｍＬ、０．０６１ｇ）、およびトリエチルアミン（０．６２８ｍｍｏｌ、０．０８７ｍＬ、０．０６４ｇ）をジクロロメタン（１０ｍＬ）に加えて撹拌した。１−プロパンホスホン酸環状無水物（０．２０９ｍｍｏｌ、０．０６２ｍＬ、０．０６７ｇ、５０％酢酸エチル溶液）を加え、反応物を室温で１時間撹拌した。反応液を減圧濃縮した。残渣を酢酸エチルに取り、飽和重炭酸ナトリウム溶液で洗った。有機相を硫酸ナトリウムで脱水させ、減圧濃縮した。得られる残渣を逆相酸性分取ＨＰＬＣで精製して、表題化合物を得た（３５ｍｇ）。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ５１１．６［Ｍ＋Ｈ］＋
【実施例１１】
【０２１４】
組換えヒトＬＸＲαまたはＬＸＲβタンパク質を用いた放射性リガンド競合結合シンチレーション近接アッセイ（ＳｐＡ）。
【０２１５】
これらのアッセイを用いて、化合物のアゴニスト放射性リガンド［３Ｈ］Ｔ０９０１３１７の結合と競合する能力についてこの効力を評価する。これらのアッセイは、グルタチオンＳトランスフェラーゼ（ＧＳＴ）標識タンパク質に融合した、肝臓Ｘ受容体α（ＬＸＲα）または肝臓Ｘ受容体β（ＬＸＲβ）のリガンド結合ドメイン（ＬＢＤ）を精製したもの（ＬＸＲα−ＬＢＤ−ＧＳＴおよびＬＸＲβ−ＬＢＤ−ＧＳＴ）、およびシンチレーション近接アッセイ（ＳｐＡ）技法を用いて、ヒト核内ホルモン受容体ＬＸＲαまたはＬＸＲβのリガンド結合ドメイン（ＬＢＤ）での化合物の結合親和性（ｐＫｉ）を求める。
【０２１６】
組換えヒトＬＸＲαおよびＬＸＲβの調製
【０２１７】
ヒトＬＸＲαおよびＬＸＲβを、Ｅ．ｃｏｌｉでＧＳＴ融合タンパク質として発現させた。ＬＸＲαまたはＬＸＲβのＬＢＤをＰＣＲで増幅し、原核生物発現ベクターｐＧＥＸ−４Ｔ−１（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）にサブクローニングした。Ｅ．ｃｏｌｉでのｐＧＥＸ−４Ｔ−１プラスミドからのＬＸＲαまたはＬＸＲβの発現が、組換えグルタチオンＳトランスフェラーゼ（ＧＳＴ）ＬＸＲα−ＬＢＤまたはＬＸＲβ−ＬＢＤ融合タンパク質の産生をもたらした。
【０２１８】
ＬＸＲαまたはＬＸＲβ  ｐＧＥＸ−４Ｔ−１プラスミドのいずれかを含有するＥ．ｃｏｌｉを、増殖させ、誘導し、遠心分離で収穫した。細菌ペレットを、５０ｍＭのトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（ＴＲＩＳ）−ｐＨ８．０、１００ｍＭの塩化ナトリウム（ＮａＣＩ）、１ｍＭのエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、およびプロテイナーゼインヒビターカクテルのコンプリート／ＥＤＴＡフリー（Ｒｏｃｈｅ）錠剤を１個含有する溶解緩衝液（緩衝液５０ｍｌあたり）に、再懸濁させた。混合物を氷上でＢｒａｎｓｏｎソニファイアーで超音波処理した。懸濁液を遠心し、上清にジチオトレイトール（ＤＴＴ）を加えて最終濃度２５ｍＭとした。得られる上清をグルタチオン−セファロースＦａｓｔ  ｆｌｏｗ（Ａｍｅｒｓｈａｍ）のアフィニティークロマトグラフィーにかけ、グルタチオン（５０ｍＭのｔｒｉｓ（ｐＨ８．０）、２ｍＭのＤＴＴ、１０ｍＭのグルタチオン）含有緩衝液でタンパク質を溶出させて、組換えヒトＬＸＲα−ＬＢＤ−ＧＳＴまたはＬＸＲβ−ＬＢＤ−ＧＳＴタンパク質を精製した。タンパク質は、２０ｍＭのＮ−２−ヒドロキシエチルピペラジン−Ｎ’−２−エタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）、１０％グリセロール含有２ｍＭのＤＴＴ中、−８０℃で貯蔵した。
【０２１９】
ＬＸＲαまたはＬＸＲβＬＢＤとの結合
【０２２０】
ＬＸＲαまたはＬＸＲβアッセイのため、組換えヒトＬＸＲα−ＬＢＤ−ＧＳＴまたはＬＸＲβ−ＬＢＤ−ＧＳＴタンパク質の一定分量を、０．５μｇ／ｍＬに希釈し、タンパク質−Ａ結合シンチラント充填ＹｔＳｉ  ＳｐＡビーズ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を最終濃度１ｍｇ／ｍｌで、およびヤギ抗ＧＳＴ抗体（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を最終濃度５μｇ／ｍｌで含有する最終体積１００μｌのＳｐＡ緩衝液（１０ｍＭのリン酸水素カリウム無水物［Ｋ２ＨＰＯ４］、１０ｍＭのリン酸一カリウム［ＫＨ２ＰＯ４］、２ｍＭのＥＤＴＡ（ｐＨ７．１）、５０ｍＭのＮａＣＬ、１ｍＭのＤＴＴ、２ｍＭの３−［（３−コラミドプロピル）ジメチルアンモニオ］−１−プロパンスルホナート（ＣＨＡＰＳ））中で温置した。各アッセイでＴ０９０１３１７（Ｋｄ＝１０ｎＭ）を参照として用いた。アッセイ混合物に、５０ｎＭの［３Ｈ］Ｔ０９Ｇ１３１７（５０Ｃｉ／ｍｍｏｌ）、＋試験化合物を加え、混合物をプレートシェーカー上１５℃で２時間温置した。温置後、アッセイプレートをＰａｃｋａｒｄ  ＴｏｐＣｏｕｎｔで読んだ。ＬＸＲαおよびＬＸＲβ結合アッセイにおけるＴ０９０１３１７のｐＫｉ値：ｐＫｉ＝８．４±０．２。Ｔ０９０１３１７は、最大結合対照として、５μＭ濃度で用いた。これらのアッセイにおいて、活性化合物は、ＬＸＲαおよび／またはＬＸＲβでｐＫｉ値＞５．５を示すものであり、好適な化合物は、ＬＸＲαおよび／またはＬＸＲβでｐＫｉ値＞７を示すものである。
【０２２１】
ＬＸＲαおよびＬＸＲβトランス活性化アッセイ
【０２２２】
ＬＸＲαおよびＬＸＲβでの細胞内アゴニスト活性を、天然のエストロゲン応答配列（ＥＲＥ）含有ルシフェラーゼレポーターコンストラクトと、ヒトエストロゲン受容体α（ＥＲα）／ＬＸＲαまたはＥＲα／ＬＸＲβキメラ受容体タンパク質（それぞれ真核生物発現コンストラクト由来）のいずれかとを安定して発現する組換えチャイニーズハムスター卵巣Ｋ１（ＣＨＯ．Ｋ１）細胞を用いて、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで測定した。ＥＲα／ＬＸＲαおよびＥＲα／ＬＸＲβキメラ受容体タンパク質は、それぞれヒトＥＲα受容体ＤＮＡ結合ドメイン（ＤＢＤ）に融合したヒトＬＸＲαおよびヒトＬＸＲβ受容体ＬＢＤを含有する。これらのアッセイにおいて、ヒトＬＸＲαまたはＬＸＲβ受容体のＬＢＤに結合できる化合物は、キメラ受容体タンパク質を細胞内で活性化することができる。活性化に続いて、ＥＲαＤＢＤは、ラットオキシトシンプロモータールシフェラーゼコンストラクト（ｐＲＯＬＵＣ）に存在する天然のＥＲＥを介して、ＥＲＥ介在性ルシフェラーゼ発現を誘導することができる。この系を用いて、ＬＸＲαおよびＬＸＲβアゴニスト誘導性ルシフェラーゼアッセイは、Ｔ０９０１３１７をアゴニスト対照として用いて行なった。
【０２２３】
コンストラクト
【０２２４】
発現コンストラクトは、ヒトＥＲα転写因子ＤＮＡ結合ドメイン（ＤＢＤ）に隣接するヒトＬＸＲαまたはヒトＬＸＲβｃＤＮＡのリガンド結合ドメイン（ＬＢＤ）を挿入してｐＮＧＶ１．ＥＲαＤＢＤ−ＬＸＲαＬＢＤおよびｐＮＧＶ１．ＥＲαＤＢＤ−ＬＸＲβＬＢＤを作成することにより調製した。ｐＮＧＶ１哺乳類発現コンストラクト（ＥＭＢＬヌクレオチド配列データベースファイルＡＳＰＮＧＶ１、ａｃｃ．＃Ｘ９９２７４）は、ネオマイシンに対する選択マーカー（Ｇ４１８）を保有する。ラットオキシトシンプロモーター（ＲＯ）のＥＲα応答配列を用いて、ルシフェラーゼレポーター遺伝子と隣接して配置されたＥＲα応答配列（ＥＲＥ）を複数コピー含有するプロモーターコンストラクトｐＲＯＬＵＣを作成した。プロモーターコンストラクトの構築は、ＨｉｎｄＩＩＩ／Ｍｂｏｌ制限酵素フラグメントとして切除された、ホタルルシフェラーゼコード配列と連結したＲＯプロモーター領域（位置−３６３／＋１６）に基づいて行なった（Ｉｖｅｌｌ  ａｎｄ  Ｒｉｃｈｔｅｒ．，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ．７：２００６−２０１０（１９８４）を参照）。形質移入およびネオマイシンを用いた陽性発現クローンの選択により、ｐＮＧＶ１．ＥＲαＤＢＤ−ＬＸＲαＬＢＤまたはｐＮＧＶ１．ＥＲαＤＢＤ−ＬＸＲβＬＢＤをｐＲＯＬＵＣと組み合わせて発現する安定なＣＨＯ．Ｋ１細胞株を作成した。最適な細胞株（ＣＨＯ．Ｋ１  ＬＸＲαおよびＣＨＯ．Ｋ１  ＬＸＲβ）を、３μＭのＴ０９０１３１７に応答したアゴニスト窓（ａｇｏｎｉｓｔ  ｗｉｎｄｏｗ）および２０代目までの応答の安定性に基づいて選択した。
【０２２５】
ＬＸＲαおよびＬＸＲβトランス活性化アッセイにおける試験化合物のアゴニスト活性。
【０２２６】
ＬＸＲαおよびＬＸＲβトランス活性化アッセイのため、ＣＨＯ．Ｋ１  ＬＸＲαおよびＣＨＯ．Ｋ１  ＬＸＲβ細胞それぞれを、５％ＣＯ２の加湿雰囲気中３７℃で、９６ウェルプレートの、５％チャコール処理したウシ仔ウシ血清含有ダルベッコ修飾イーグル培地（フェノール赤を含まず）２００μｌに、細胞２５０００個／ウェルの密度で播種した。播種６時間後、化合物をある濃度範囲にわたって１６時間細胞とともに温置することにより特性決定した。各アッセイにおいて、３μＭ濃度でのＴ０９０１３１７を、最大アゴニスト対照として用いた。ルシフェラーゼアッセイキット（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）を用いてルシフェラーゼ活性を求めた。ルシフェラーゼ活性の測定は、溶解緩衝液を各ウェルに添加することで開始し、発光をＰａｃｋａｒｄ  Ｔｏｐｃｏｕｎｔ読み取り機を用いて測定した。ＬＸＲαおよびＬＸＲβトランス活性化アッセイにおけるＴ０９０１３１７のｐＥＣ５０値：それぞれ、ｐＥＣ５０＝７．３±０．２および７．４±０．２。試験化合物のアゴニスト活性を、最大アゴニスト対照と比較した。本発明の好適な化合物は、これらのアッセイプロトコルを用いてＬＸＲαおよび／またはＬＸＲβアゴニスト活性を有することが示された。