(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
レトロウイルス疾患の治療薬および／または予防薬の製造のための、
式（Ｉ）：
【化１】
0005465233.tif 000064
（式中、Ｒ１は、１〜３個の置換基を有するフェニル基を表し、前記置換基は、それぞれ独立して、ハロゲン、シアノ基、ニトロ基、トリフルオロメチル基、トリフルオロメトキシ基、トリフルオロメチルチオ基、（Ｃ１−Ｃ４）−アルキル基および（Ｃ１−Ｃ４）−アルコキシ基からなる群より選択され；
Ｒ２は、１〜３個の置換基を有していてもよいフェニル基を表し、前記置換基は、それぞれ独立して、ハロゲン、シアノ基、ニトロ基、トリフルオロメチル基、トリフルオロメトキシ基、トリフルオロメチルチオ基、（Ｃ１−Ｃ４）−アルキル基および（Ｃ１−Ｃ４）−アルコキシ基からなる群より選択され；
Ｒ３は、１〜３個の置換基を有していてもよい、窒素原子を介して結合した５〜８員環ヘテロ環を表し、前記置換基は、それぞれ独立して、ハロゲン、ヒドロキシ基、ヒドロキシメチル基、ホルミル基、アミノ基、オキソ基、トリフルオロメチル基、トリフルオロメトキシ基、（Ｃ１−Ｃ４）−アルキル基、（Ｃ１−Ｃ４）−アルコキシ基および（Ｃ１−Ｃ４）−アルコキシカルボニル基からなる群より選択される
（ただし、Ｒ３が
【化２】
0005465233.tif 000065
である場合を除く。））
の化合物もしくはその塩、またはそれらの溶媒和物の使用。
【請求項２】
Ｒ１が、１〜３個の置換基を有するフェニル基を表し、前記置換基が、それぞれ独立して、ハロゲン、シアノ基、ニトロ基、トリフルオロメチル基、トリフルオロメトキシ基、トリフルオロメチルチオ基、（Ｃ１−Ｃ４）−アルキル基および（Ｃ１−Ｃ４）−アルコキシ基からなる群より選択され；
Ｒ２が、１〜３個の置換基を有していてもよいフェニル基を表し、前記置換基が、それぞれ独立して、ハロゲン、シアノ基、ニトロ基、トリフルオロメチル基、トリフルオロメトキシ基、トリフルオロメチルチオ基、（Ｃ１−Ｃ４）−アルキル基および（Ｃ１−Ｃ４）−アルコキシ基からなる群より選択され；
Ｒ３が、１〜３個の置換基を有していてもよい、ピロリジン−１−イル、モルホリン−４−イル、チオモルホリン−４−イル、１，３−チアゾリジン−３−イル、ピペリジン−１−イル、ピペラジン−１−イルまたは１，４−オキサゼパン−４−イルを表し、前記置換基が、それぞれ独立して、ヒドロキシ基、ヒドロキシメチル基、ホルミル基、アミノ基、オキソ基、（Ｃ１−Ｃ４）−アルキル基、（Ｃ１−Ｃ４）−アルコキシ基および（Ｃ１−Ｃ４）−アルコキシカルボニル基からなる群より選択されることを特徴とする請求項１に記載の化合物の使用。
【請求項３】
Ｒ１が、１〜３個の置換基を有するフェニル基を表し、前記置換基が、それぞれ独立して、ハロゲン、シアノ基、ニトロ基、トリフルオロメチル基、トリフルオロメトキシ基、トリフルオロメチルチオ基、（Ｃ１−Ｃ４）−アルキル基および（Ｃ１−Ｃ４）−アルコキシ基からなる群より選択され；
Ｒ２が、１〜３個の置換基を有していてもよいフェニル基を表し、前記置換基が、それぞれ独立して、ハロゲン、シアノ基、ニトロ基、トリフルオロメチル基、トリフルオロメトキシ基、トリフルオロメチルチオ基、（Ｃ１−Ｃ４）−アルキル基および（Ｃ１−Ｃ４）−アルコキシ基からなる群より選択され；
Ｒ３が、１〜３個の置換基を有する、窒素原子を介して結合した５〜８員環ヘテロ環を表し、前記置換基が、それぞれ独立して、ハロゲン、ヒドロキシ基、ヒドロキシメチル基、ホルミル基、アミノ基、オキソ基、トリフルオロメチル基、トリフルオロメトキシ基、（Ｃ１−Ｃ４）−アルキル基、（Ｃ１−Ｃ４）−アルコキシ基および（Ｃ１−Ｃ４）−アルコキシカルボニル基からなる群より選択される；
または
Ｒ１が、１〜３個の置換基を有するフェニル基を表し、前記置換基が、それぞれ独立して、ハロゲン、シアノ基、ニトロ基、トリフルオロメチル基、トリフルオロメトキシ基、トリフルオロメチルチオ基、（Ｃ１−Ｃ４）−アルキル基および（Ｃ１−Ｃ４）−アルコキシ基からなる群より選択され；
Ｒ２が、１〜３個の置換基を有していてもよいフェニル基を表し、前記置換基が、それぞれ独立して、トリフルオロメトキシ基およびトリフルオロメチルチオ基からなる群より選択され；
Ｒ３が、置換基を有しない、窒素原子を介して結合した５〜８員環ヘテロ環を表すことを特徴とする請求項１または２に記載の化合物の使用。
【請求項４】
式（Ｉ）：
【化３】
0005465233.tif 000066
（式中、Ｒ１は、１〜３個の置換基を有するフェニル基を表し、前記置換基は、それぞれ独立して、ハロゲン、シアノ基、ニトロ基、トリフルオロメチル基、トリフルオロメトキシ基、トリフルオロメチルチオ基、（Ｃ１−Ｃ４）−アルキル基および（Ｃ１−Ｃ４）−アルコキシ基からなる群より選択され；
Ｒ２は、１〜３個の置換基を有していてもよいフェニル基を表し、前記置換基は、それぞれ独立して、ハロゲン、シアノ基、ニトロ基、トリフルオロメチル基、トリフルオロメトキシ基、トリフルオロメチルチオ基、（Ｃ１−Ｃ４）−アルキル基および（Ｃ１−Ｃ４）−アルコキシ基からなる群より選択され；
Ｒ３は、１〜３個の置換基を有する、窒素原子を介して結合した５〜８員環ヘテロ環を表し、前記置換基は、それぞれ独立して、ハロゲン、ヒドロキシ基、ヒドロキシメチル基、ホルミル基、アミノ基、オキソ基、トリフルオロメチル基、トリフルオロメトキシ基、（Ｃ１−Ｃ４）−アルキル基、（Ｃ１−Ｃ４）−アルコキシ基および（Ｃ１−Ｃ４）−アルコキシカルボニル基からなる群より選択される（ただし、Ｒ３が
【化４】
0005465233.tif 000067
である場合を除く。）；
または
Ｒ１は、１〜３個の置換基を有するフェニル基を表し、前記置換基は、それぞれ独立して、ハロゲン、シアノ基、ニトロ基、トリフルオロメチル基、トリフルオロメトキシ基、トリフルオロメチルチオ基、（Ｃ１−Ｃ４）−アルキル基および（Ｃ１−Ｃ４）−アルコキシ基からなる群より選択され；
Ｒ２は、１〜３個の置換基を有していてもよいフェニル基を表し、前記置換基は、それぞれ独立して、トリフルオロメトキシ基およびトリフルオロメチルチオ基からなる群より選択され；
Ｒ３は、置換基を有しない、窒素原子を介して結合した５〜８員環ヘテロ環を表す（ただし、Ｒ３が
【化５】
0005465233.tif 000068
である場合を除く。））
の化合物もしくはその塩、またはそれらの溶媒和物。
【請求項５】
疾患の治療および／または予防のための請求項４に記載の化合物。
【請求項６】
疾患の治療薬および／または予防薬の製造のための請求項４に記載の化合物の使用。
【請求項７】
レトロウイルス疾患の治療薬および／または予防薬の製造のための請求項４に記載の化合物の使用。
【請求項８】
請求項４に記載の化合物を、他の活性成分と共に含む医薬品。
【請求項９】
少なくとも１種の請求項４に記載の化合物を、少なくとも１種の不活性かつ無毒の薬学的に適する賦形剤と共に含む医薬品。
【請求項１０】
レトロウイルス疾患の治療および／または予防のための請求項９に記載の医薬品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規の置換ピラゾールアミド、この化合物の製造方法、ヒトおよび／または動物の疾患、特にレトロウイルス疾患の治療および／または予防のための前記化合物の使用、ならびに前記疾患の治療薬および／または予防薬の製造のための前記化合物の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
ＨＩＶ（ヒト免疫不全ウイルス）は、慢性の持続性かつ進行性の感染症を引き起こす。この疾患は、無症候性感染期からＡＩＤＳ（後天性免疫不全症候群）と呼ばれる病的状態に至るまで様々なステージを経て進行する。ＡＩＤＳは感染が引き起こす疾患の最終ステージである。ＨＩＶ／ＡＩＤＳ疾患は、持続性ウイルス血症を伴う臨床的潜伏期が長期にわたることが特徴であり、最終ステージでは免疫防御システムが破綻する。
【０００３】
抗ＨＩＶ剤併用療法の導入により、１９９０年代には、この疾患の進行を効果的に遅らせることが可能となり、これによって、ＨＩＶ感染患者の平均余命が大幅に延長された（Ｐａｌｅｌｌａら，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．１９９８，２３８，８５３−８６０）。
【０００４】
現在市販されている抗ＨＩＶ剤は、ウイルスに不可欠な酵素である逆転写酵素（ＲＴ）やプロテアーゼを阻害するか、またはＨＩＶ融合を阻止する（Ｒｉｃｈｍａｎ，Ｎａｔｕｒｅ，２００１，４１０，９９５−１００１参照）。ＲＴ阻害剤は２種類に分類される。ヌクレオシド系ＲＴ阻害剤（ＮＲＴＩ）は、ＤＮＡ合成における競争阻害や伸長停止によって作用する。非ヌクレオシド系ＲＴ阻害剤（ＮＮＲＴＩ）は、ＲＴの活性中心近傍の疎水性ポケットにアロステリックに結合してＲＴの構造変化を引き起こす。一方、現在市販されているプロテアーゼ阻害剤（ＰＩ）は、ウイルスのプロテアーゼの活性中心をブロックすることにより、新たに生成したウイルス粒子が感染性ビリオンに成熟するのを防ぐ。
【０００５】
現在市販の抗ＨＩＶ剤による単独療法では、耐性ウイルスが選択されて短期間のうちに治療が失敗に終わるため、通常は、異なる薬効群から構成された複数の抗ＨＩＶ剤による併用療法を行う（ＨＡＡＲＴ＝高活性抗レトロウイルス療法；Ｃａｒｐｅｎｔｅｒら，Ｊ．Ａｍ．Ｍｅｄ．Ａｓｓｏｃ．２０００，２８３，３８１−３９０）。
【０００６】
レトロウイルスに対する化学療法は進歩したものの、ＨＩＶの根絶、およびそれに伴うＨＩＶ感染症の治癒は、現在市販されている医薬品では望めないことが、最近の研究から明らかになっている。潜伏ウイルスは休止状態のリンパ球に残存しており、このようなリンパ球が、ウイルスが再活性化して新たに拡散するための貯蔵庫となっている（Ｆｉｎｚｉら，Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄ．１９９９，５，５１２−５１７；Ｒａｍｒａｔｎａｍら，Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄ．２０００，６，８２−８５）。従って、ＨＩＶ感染患者は生涯にわたって、有効な抗ウイルス治療に依存することになる。併用療法であっても、しばらくすると耐性ウイルスが選択される。それぞれの薬効群に特徴的な耐性変異は蓄積されるので、多くの場合、１つの治療法の失敗は１つの薬効群に含まれる薬剤全体の効力が失われることを意味する。このような交叉耐性の問題は、ＮＮＲＴＩにおいて最も顕著である。これは、ＮＮＲＴＩでは多くの場合、ＲＴに点突然変異が１つ生じるだけでも十分に、ＮＮＲＴＩ全体の効力を失わせてしまう恐れがあるためである（Ｋａｖｌｉｃｋ＆Ｍｉｔｓｕｙａ，Ａｎｔｉｒｅｔｒｏｖｉｒａｌ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ（Ｄｅ  Ｃｌｅｒｃｑ  Ｅ．編集），２００１，ＡＳＭ  Ｐｒｅｓｓ，２７９−３１２：総説）。
【０００７】
通常、耐性の獲得は、患者の服薬コンプライアンスの低さによって助長される。抗ＨＩＶ剤における服薬コンプライアンスの低さは、好ましくない副作用や複雑な投薬スケジュールが原因である。
【０００８】
従って、ＨＩＶ感染症を制御する新規の治療法が早急に求められている。そのため、増え続ける薬剤耐性ＨＩＶの臨床分離株に対して有効であって、かつ／またはＨＩＶの複製における新規ターゲットに焦点をあてた新規のリード化合物の化学構造を同定することが重要であり、かつＨＩＶ治療に関する研究の緊急の課題となっている。
【０００９】
ピラゾール化合物は、ＵＳ５，６２４，９４１およびＥＰ５７６３５７では、カンナビノイド受容体アンタゴニストとして記載されており、ＥＰ４１８８４５、ＥＰ５５４８２９およびＷＯ０４／０５０６３２では、特に炎症性疾患および血栓症の治療用として記載されており、ＷＯ０３／０３７２７４では、疼痛治療のためのナトリウムイオンチャネル阻害剤として記載されており、ＷＯ０６／０１５８６０では、炎症性および閉塞性呼吸器疾患の治療のためのアデノシン受容体リガンドとして記載されており、ＥＰ１７６２５６８およびＥＰ１５９１４４３では、血小板凝集阻害剤として記載されており、ＷＯ０７／００２５５９では、核内受容体の活性調節因子として記載されており、ＷＯ０７／０２０３８８およびＷＯ０５／０８０３４３では、特に肥満、精神疾患および神経疾患の治療のためのカンナビノイド受容体の調節因子として記載されており、ＷＯ０７／００９７０１およびＥＰ１７４３６３７では、心血管危険因子の治療用として記載されており、ＷＯ２００５／００２５７６では、種々のキナーゼに対する阻害剤として記載されており、ＤＥ１０ ２００４ ０５４ ６６６では、有害植物の防除用または植物成長調節用として記載されている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
従って、本発明の目的は、従来と同程度または改善された抗ウイルス活性を有し、かつ上述した欠点を持たない、ヒトおよび動物のウイルス性感染症の治療のための新規化合物を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
驚くべきことに、本発明に記載の置換ピラゾールアミドが抗ウイルス効果を有することが見出された。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
本発明は、レトロウイルス疾患の治療薬および／または予防薬の製造のための、
式（Ｉ）：
【化１】
0005465233.tif 000002
（式中、Ｒ１は、１〜３個の置換基を有するフェニル基を表し、前記置換基は、それぞれ独立して、ハロゲン、シアノ基、ニトロ基、トリフルオロメチル基、トリフルオロメトキシ基、トリフルオロメチルチオ基、（Ｃ１−Ｃ４）−アルキル基および（Ｃ１−Ｃ４）−アルコキシ基からなる群より選択され；
Ｒ２は、１〜３個の置換基を有していてもよいフェニル基を表し、前記置換基は、それぞれ独立して、ハロゲン、シアノ基、ニトロ基、トリフルオロメチル基、トリフルオロメトキシ基、トリフルオロメチルチオ基、（Ｃ１−Ｃ４）−アルキル基および（Ｃ１−Ｃ４）−アルコキシ基からなる群より選択され；
Ｒ３は、１〜３個の置換基を有していてもよい、窒素原子を介して結合した５〜８員環ヘテロ環を表し、前記置換基は、それぞれ独立して、ハロゲン、ヒドロキシ基、ヒドロキシメチル基、ホルミル基、アミノ基、オキソ基、トリフルオロメチル基、トリフルオロメトキシ基、（Ｃ１−Ｃ４）−アルキル基、（Ｃ１−Ｃ４）−アルコキシ基および（Ｃ１−Ｃ４）−アルコキシカルボニル基からなる群より選択される）
の化合物およびその塩、ならびにそれらの溶媒和物の使用に関する。
【００１３】
本発明の化合物とは、式（Ｉ）の化合物およびその塩、ならびにそれらの溶媒和物であり、さらに式（Ｉ）に包含され例示的な実施形態として以下に示される化合物およびその塩、ならびにそれらの溶媒和物でもある。ただし、式（Ｉ）に包含され以下に示される化合物とは、塩、溶媒和物および塩の溶媒和物ではない。
【００１４】
本発明の化合物には、その構造によっては立体異性体（エナンチオマー、ジアステレオマー）が存在する場合がある。従って、本発明は、エナンチオマーまたはジアステレオマー、およびそれぞれの混合物も包含する。このようなエナンチオマーおよび／またはジアステレオマーの混合物から、立体異性的に均一な化合物を公知の方法により単離することができる。
【００１５】
本発明の化合物において互変異性体が存在する場合は、すべての互変異性体が本発明に包含される。
【００１６】
本発明の目的に好適な塩は、本発明の化合物の生理学的に許容される塩である。ただし、医薬品としての適用には不適であっても本発明の化合物の単離、精製などに使用可能な塩は本発明に包含される。
【００１７】
本発明の化合物の生理学的に許容される塩としては、無機酸、カルボン酸またはスルホン酸が付加された酸付加塩が挙げられ、例えば塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、トルエンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ナフタレンジスルホン酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、プロピオン酸、乳酸、酒石酸、リンゴ酸、クエン酸、フマル酸、マレイン酸または安息香酸の塩が挙げられる。
【００１８】
また、本発明の化合物の生理学的に許容される塩としては、通常の塩基の塩が挙げられ、例として、好ましくは、アルカリ金属塩（例えばナトリウム塩やカリウム塩）、アルカリ土類金属塩（例えばカルシウム塩やマグネシウム塩）およびアンモニア由来のアンモニウム塩が挙げられる。また、炭素数１〜１６の有機アミンも包含され、例として、好ましくは、エチルアミン、ジエチルアミン、トリエチルアミン、エチルジイソプロピルアミン、モノエタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、ジシクロヘキシルアミン、ジメチルアミノエタノール、プロカイン、ジベンジルアミン、Ｎ−メチルモルホリン、アルギニン、リジン、エチレンジアミンおよびＮ−メチルピペリジンが挙げられる。
【００１９】
本発明の目的に適した溶媒和物とは、固体または液体状態にある本発明の化合物に溶媒分子が配位して錯体を形成している形態をいう。水和物とは、溶媒和物の特殊な形態であり、水が配位した溶媒和物である。
【００２０】
本発明における種々の置換基の定義は、特別の定めのない限り以下の通りである。
【００２１】
アルキル基、ならびにアルコキシ基およびアルコキシカルボニル基のアルキル部分とは、直鎖または分岐状のアルキル基を表し、例としては、特別の定めのない限り、（Ｃ１−Ｃ６）−アルキル基が挙げられ、具体的にはメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチルなどの（Ｃ１−Ｃ４）−アルキル基が挙げられる。
【００２２】
本発明の目的に適したアルコキシ基とは、好ましくは直鎖または分岐状のアルコキシ基を表し、具体的には炭素数１〜６、炭素数１〜４または炭素数１〜３の直鎖または分岐状のアルコキシ基を表す。好ましくは、炭素数１〜３の直鎖または分岐状のアルコキシ基である。例として、好ましくはメトキシ、エトキシ、ｎ−プロポキシ、イソプロポキシ、ｔ−ブトキシ、ｎ−ペントキシおよびｎ−ヘキソキシが挙げられる。
【００２３】
アルコキシカルボニル基の例として、好ましくは、メトキシカルボニル、エトキシカルボニル、ｎ−プロポキシカルボニル、イソプロポキシカルボニル、ｔ−ブトキシカルボニル、ｎ−ペントキシカルボニルおよびｎ−ヘキソキシカルボニルが挙げられる。
【００２４】
ヘテロ環とは、３個以下、好ましくは２個以下のヘテロ原子および／またはヘテロ基を有する５〜８員環、好ましくは５〜６員環の単環式ヘテロ環を表す。前記ヘテロ原子および／またはヘテロ基は、Ｎ、Ｏ、Ｓ、ＳＯおよびＳＯ２から選択され、窒素原子はＮ−オキシドを形成してもよい。前記ヘテロ環は、飽和環であっても、または部分的に不飽和であってもよい。好ましくは、Ｏ、ＮおよびＳから選択される２個以下のヘテロ原子を有する５〜８員環の単環式飽和ヘテロ環であり、例として、好ましくは１，４−オキサゼパニル、オキセタン−３−イル、ピロリジン−１−イル、ピロリジン−２−イル、ピロリジン−３−イル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロチエニル、ピラニル、１，３−チアゾリジニル、ピペリジン−１−イル、ピペリジン−２−イル、ピペリジン−３−イル、ピペリジン−４−イル、チオピラニル、モルホリン−２−イル、モルホリン−３−イル、モルホリン−４−イル、チオモルホリン−２−イル、チオモルホリン−３−イル、チオモルホリン−４−イル、ペルヒドロアゼピニル、ピペラジン−１−イルおよびピペラジン−２−イルが挙げられる。
【００２５】
特別の定めがない限り、ハロゲンは、フッ素原子、塩素原子、臭素原子またはヨウ素原子を表し、好ましくはフッ素原子および塩素原子である。
【００２６】
上記した一般例または好適な例として示された基の定義は、式（Ｉ）の最終生成物、および該生成物の調製に必要な出発原料および中間体にも適応される。
【００２７】
それぞれの組み合わせまたは好適な組み合わせとして具体的に示された基の定義は、所望のものとして示された特定の組み合わせに関係なく、他の組み合わせとして示される基の定義に置き換えることができる。
【００２８】
また本発明は、レトロウイルス疾患の治療薬および／または予防薬の製造のための、
式（Ｉ）（式中、Ｒ１は、１〜３個の置換基を有するフェニル基を表し、前記置換基は、それぞれ独立して、ハロゲン、シアノ基、ニトロ基、トリフルオロメチル基、トリフルオロメトキシ基、トリフルオロメチルチオ基、（Ｃ１−Ｃ４）−アルキル基および（Ｃ１−Ｃ４）−アルコキシ基からなる群より選択され；
Ｒ２は、１〜３個の置換基を有していてもよいフェニル基を表し、前記置換基は、それぞれ独立して、ハロゲン、シアノ基、ニトロ基、トリフルオロメチル基、トリフルオロメトキシ基、トリフルオロメチルチオ基、（Ｃ１−Ｃ４）−アルキル基および（Ｃ１−Ｃ４）−アルコキシ基からなる群より選択され；
Ｒ３は、１〜３個の置換基を有していてもよい、ピロリジン−１−イル、モルホリン−４−イル、チオモルホリン−４−イル、１，３−チアゾリジン−３−イル、ピペリジン−１−イル、ピペラジン−１−イルまたは１，４−オキサゼパン−４−イルを表し、前記置換基は、それぞれ独立して、ヒドロキシ基、ヒドロキシメチル基、ホルミル基、アミノ基、オキソ基、（Ｃ１−Ｃ４）−アルキル基、（Ｃ１−Ｃ４）−アルコキシ基および（Ｃ１−Ｃ４）−アルコキシカルボニル基からなる群より選択される）
の化合物およびその塩、ならびにそれらの溶媒和物の使用に関する。
【００２９】
また本発明は、レトロウイルス疾患の治療薬および／または予防薬の製造のための、
式（Ｉ）（式中、Ｒ１は、１〜３個の置換基を有するフェニル基を表し、前記置換基は、それぞれ独立して、ハロゲン、シアノ基、ニトロ基、トリフルオロメチル基、トリフルオロメトキシ基、トリフルオロメチルチオ基、（Ｃ１−Ｃ４）−アルキル基および（Ｃ１−Ｃ４）−アルコキシ基からなる群より選択され；
Ｒ２は、１〜３個の置換基を有していてもよいフェニル基を表し、前記置換基は、それぞれ独立して、ハロゲン、シアノ基、ニトロ基、トリフルオロメチル基、トリフルオロメトキシ基、トリフルオロメチルチオ基、（Ｃ１−Ｃ４）−アルキル基および（Ｃ１−Ｃ４）−アルコキシ基からなる群より選択され；
Ｒ３は、１〜３個の置換基を有する、窒素原子を介して結合した５〜８員環ヘテロ環を表し、前記置換基は、それぞれ独立して、ハロゲン、ヒドロキシ基、ヒドロキシメチル基、ホルミル基、アミノ基、オキソ基、トリフルオロメチル基、トリフルオロメトキシ基、（Ｃ１−Ｃ４）−アルキル基、（Ｃ１−Ｃ４）−アルコキシ基および（Ｃ１−Ｃ４）−アルコキシカルボニル基からなる群より選択される；
または
Ｒ１は、１〜３個の置換基を有するフェニル基を表し、前記置換基は、それぞれ独立して、ハロゲン、シアノ基、ニトロ基、トリフルオロメチル基、トリフルオロメトキシ基、トリフルオロメチルチオ基、（Ｃ１−Ｃ４）−アルキル基および（Ｃ１−Ｃ４）−アルコキシ基からなる群より選択され；
Ｒ２は、１〜３個の置換基を有していてもよいフェニル基を表し、前記置換基は、それぞれ独立して、トリフルオロメトキシ基およびトリフルオロメチルチオ基からなる群より選択され；
Ｒ３は、置換基を有しない、窒素原子を介して結合した５〜８員環ヘテロ環を表す）
の化合物およびその塩、ならびにそれらの溶媒和物の使用に関する。
【００３０】
また本発明は、式（Ｉ）（式中、Ｒ１は、１〜３個の置換基を有するフェニル基を表し、前記置換基は、それぞれ独立して、ハロゲン、シアノ基、ニトロ基、トリフルオロメチル基、トリフルオロメトキシ基、トリフルオロメチルチオ基、（Ｃ１−Ｃ４）−アルキル基および（Ｃ１−Ｃ４）−アルコキシ基からなる群より選択され；
Ｒ２は、１〜３個の置換基を有していてもよいフェニル基を表し、前記置換基は、それぞれ独立して、ハロゲン、シアノ基、ニトロ基、トリフルオロメチル基、トリフルオロメトキシ基、トリフルオロメチルチオ基、（Ｃ１−Ｃ４）−アルキル基および（Ｃ１−Ｃ４）−アルコキシ基からなる群より選択され；
Ｒ３は、１〜３個の置換基を有する、窒素原子を介して結合した５〜８員環ヘテロ環を表し、前記置換基は、それぞれ独立して、ハロゲン、ヒドロキシ基、ヒドロキシメチル基、ホルミル基、アミノ基、オキソ基、トリフルオロメチル基、トリフルオロメトキシ基、（Ｃ１−Ｃ４）−アルキル基、（Ｃ１−Ｃ４）−アルコキシ基および（Ｃ１−Ｃ４）−アルコキシカルボニル基からなる群より選択される；
または
Ｒ１は、１〜３個の置換基を有するフェニル基を表し、前記置換基は、それぞれ独立して、ハロゲン、シアノ基、ニトロ基、トリフルオロメチル基、トリフルオロメトキシ基、トリフルオロメチルチオ基、（Ｃ１−Ｃ４）−アルキル基および（Ｃ１−Ｃ４）−アルコキシ基からなる群より選択され；
Ｒ２は、１〜３個の置換基を有していてもよいフェニル基を表し、前記置換基は、それぞれ独立して、トリフルオロメトキシ基およびトリフルオロメチルチオ基からなる群より選択され；
Ｒ３は、置換基を有しない、窒素原子を介して結合した５〜８員環ヘテロ環を表す）
の化合物およびその塩、ならびにそれらの溶媒和物に関する。
【００３１】
また本発明は、Ｒ２が、置換基を有するフェニル基を表し、前記置換基が、このフェニル環がピラゾールに結合する部位に対して、メタ位またはパラ位に位置することを特徴とする式（Ｉ）の化合物に関する。
【００３２】
また本発明は、Ｒ３が、１〜３個の置換基を有していてもよい、ピロリジン−１−イル、モルホリン−４−イル、チオモルホリン−４−イル、１，３−チアゾリジン−３−イル、ピペリジン−１−イル、ピペラジン−１−イルまたは１，４−オキサゼパン−４−イルを表し、
前記置換基が、それぞれ独立して、ヒドロキシ基、ヒドロキシメチル基、ホルミル基、アミノ基、オキソ基、（Ｃ１−Ｃ４）−アルキル基、（Ｃ１−Ｃ４）−アルコキシ基および（Ｃ１−Ｃ４）−アルコキシカルボニル基からなる群より選択されることを特徴とする式（Ｉ）の化合物に関する。
【００３３】
また本発明は、Ｒ３が、ピロリジン−１−イル、モルホリン−４−イル、チオモルホリン−４−イル、１，３−チアゾリジン−３−イル、ピペリジン−１−イル、ピペラジン−１−イルまたは１，４−オキサゼパン−４−イルを表すことを特徴とする式（Ｉ）の化合物に関する。
【００３４】
また本発明は、式（II）：
【化２】
0005465233.tif 000003
（式中、Ｒ１およびＲ２は上記と同一の意味を有する）
の化合物を、式（III）：
【化３】
0005465233.tif 000004
（式中、Ａは、上記Ｒ３について定義したヘテロ環と同一である）
の化合物と反応させることを特徴とする、式（Ｉ）の化合物の製造方法に関する。
【００３５】
上記の反応は、一般に、不活性溶媒中、脱水剤の存在下、必要であれば塩基の存在下、好ましくは温度範囲−３０〜５０℃の大気圧下で行う。
【００３６】
不活性溶媒としては、例えば、ジクロロメタンまたはトリクロロメタンなどのハロゲン化炭化水素、ベンゼンなどの炭化水素、ニトロメタン、ジオキサン、ジメチルホルムアミドまたはアセトニトリルが挙げられる。これらの溶媒の混合物を用いてもよい。特に好ましくは、ジクロロメタンまたはジメチルホルムアミドである。
【００３７】
塩基としては、例えば、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸水素ナトリウム、炭酸水素カリウムなどのアルカリ金属炭酸塩、またはトリアルキルアミン（例えばトリエチルアミン）、Ｎ−メチルモルホリン、Ｎ−メチルピペリジン、４−ジメチルアミノピリジン、ジイソプロピルエチルアミンなどの有機塩基が挙げられる。
【００３８】
本発明における好適な脱水剤としては、例えば、Ｎ，Ｎ’−ジエチルカルボジイミド、Ｎ，Ｎ’−ジプロピルカルボジイミド、Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド、Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド、Ｎ−（３−ジメチルアミノイソプロピル）−Ｎ’−エチルカルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）、Ｎ−シクロヘキシルカルボジイミド−Ｎ’−プロピルオキシメチルポリスチレン（ＰＳ-カルボジイミド）などのカルボジイミド；カルボニルジイミダゾールなどのカルボニル化合物；２−エチル−５−フェニル−１，２−オキサゾリウム３−硫酸塩、２−ｔｅｒｔ−ブチル−５−メチルイソオキサゾリウム過塩素酸塩などの１，２−オキサゾリウム化合物；２−エトキシ−１−エトキシカルボニル−１，２−ジヒドロキノリンなどのアシルアミノ化合物；プロパンホスホン酸無水物；クロロギ酸イソブチル；ビス（２−オキソ−３−オキサゾリジニル）ホスホリルクロリド；Ｏ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスファート（ＨＢＴＵ）；２−（２−オキソ−１−（２Ｈ）−ピリジル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムテトラフルオロホウ酸塩（ＴＰＴＵ）；Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスファート（ＨＡＴＵ）；１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）；ベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリス（ジメチルアミノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスファート（ＢＯＰ）；ベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリス（ピロリジノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスファート（ＰｙＢＯＰ）；Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド；または上記化合物と塩基との混合物が挙げられる。
【００３９】
上記の縮合反応は、好ましくはＴＢＴＵを用いて、またはＨＯＢｔの存在下ＥＤＣを用いて行う。
【００４０】
別の製造方法としては、式（II）の化合物を、１段階目で塩化チオニルと反応させ、２段階目で、例えばトリエチルアミンなどの塩基の存在下、式（III）の化合物と反応させる。
【００４１】
上記した方法で製造された式（Ｉ）の化合物は保護基を有するが、この保護基は、式（Ｉ）で表されるさらなる化合物を得るために、必要に応じて当業者に公知の条件下で除去することが可能である。
【００４２】
式（III）の化合物は公知であるか、または対応する出発原料から公知の方法により合成することができる。
【００４３】
式（II）の化合物は公知の化合物であり、かつ/または式（IV）：
【化４】
0005465233.tif 000005
（式中、Ｒ１およびＲ２は上記と同一の意味を有する）
の化合物におけるエステルの塩基加水分解により製造することが可能である。
【００４４】
エステルの塩基加水分解は、一般に、不活性溶媒中、好ましくは室温〜溶媒の還流温度の大気圧下で行う。
【００４５】
塩基としては、例えば水酸化ナトリウム、水酸化リチウム、水酸化カリウムなどのアルカリ金属水酸化物、または炭酸セシウム、炭酸ナトリウム、炭酸カリウムなどのアルカリ金属炭酸塩が挙げられ、好ましくは、水酸化リチウムまたは水酸化ナトリウムである。
【００４６】
不活性溶媒としては、例えば塩化メチレン、トリクロロメタン、テトラクロロメタン、トリクロロエタン、テトラクロロエタン、１，２−ジクロロエタンまたはトリクロロエチレンなどのハロゲン化炭化水素；ジエチルエーテル、メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル、１，２−ジメトキシエタン、ジオキサン、テトラヒドロフラン、グリコールジメチルエーテルまたはジエチレングリコールジメチルエーテルなどのエーテル；メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノール、ｎ−ブタノールまたはｔｅｒｔ−ブタノールなどのアルコール；ベンゼン、キシレン、トルエン、ヘキサン、シクロヘキサンまたは石油留分などの炭化水素；ジメチルホルムアミド、ジメチルアセトアミド、ジメチルスルホキシド、アセトニトリルまたはピリジンなどの溶媒；水；またはこれらの溶媒の混合物が挙げられる。好適な溶媒は、テトラヒドロフランおよび／またはメタノールである。水酸化カリウムのメタノール溶液が好ましく用いられる。
【００４７】
式（IV）の化合物は、公知の化合物であり、かつ／または式（Ｖ）：
【化５】
0005465233.tif 000006
（式中、Ｒ２は上記と同一の意味を有する。）
の化合物を、１段階目で式（VI）：Ｒ３−ＮＨ−ＮＨ２（VI）（式中、Ｒ3は上記と同一の意味を有する）で表される化合物と反応させ、２段階目で、酢酸中で加熱することにより製造することが可能である。
【００４８】
１段階目の反応は、一般に、不活性溶媒中、好ましくは室温〜溶媒の還流温度の大気圧下で行う。
【００４９】
不活性溶媒としては、メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノール、ｎ−ブタノール、ｔｅｒｔ−ブタノールまたは２−メトキシエタノールなどのアルコールが挙げられ、好ましくはエタノールである。
【００５０】
２段階目の酢酸中での反応は、一般に、室温〜酢酸の還流温度の大気圧下で行う。またこの反応は、メタノール、エタノールまたはジオキサンなどの溶媒中、室温〜溶媒の還流温度で行うことも可能である。メタノール、エタノールまたはジオキサンと酢酸からなる混合溶媒の好適な容積比は、０．５／９９．５〜９９．５／０．５の範囲である。また、上記の条件下で、メタノール、エタノール、ジオキサンまたは酢酸と酢酸以外の酸からなる混合溶媒を用いてもよく、酢酸以外の酸としては、例えば塩酸、メタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、カンファースルホン酸またはトリフルオロ酢酸などが挙げられる。上記の反応は、酢酸中、還流下で行うのが好ましい。
【００５１】
式（Ｖ）および式（VI）の化合物は公知の化合物であるか、またはそれぞれ対応する出発原料から公知の方法で合成できる。
【００５２】
本発明の化合物の製造は、以下の合成スキームを例に挙げて説明することができる。
【００５３】
合成スキーム
【化６】
0005465233.tif 000007
【００５４】
本発明の化合物は、薬理学的に有用な予想外の効果を示す。
【００５５】
従って、本発明の化合物は、ヒトおよび動物の疾患の治療薬および／または予防薬としての使用に適している。
【００５６】
本発明の化合物は、特に、有利な抗レトロウイルス効果を示す点で優れている。
【００５７】
また本発明は、レトロウイルス、特にＨＩＶによる疾患の治療および／または予防のための本発明の化合物の使用に関する。
【００５８】
また本発明は、疾患、特に上述した疾患の治療および／または予防のための本発明の化合物の使用に関する。
【００５９】
また本発明は、疾患、特に上述した疾患の治療薬および／または予防薬の製造のための本発明の化合物の使用に関する。
【００６０】
また本発明は、治療上有効な量の本発明の化合物を用いる、疾患、特に上述した疾患の治療法および／または予防法に関する。
【００６１】
ヒト用医薬品としての適応領域を以下に例示する。
１）ヒトのレトロウイルス感染症の治療および予防
２）ＨＩＶ−Ｉ（ヒト免疫不全ウイルス；以前はＨＴＬＶ III／ＬＡＶと呼ばれていた）やＨＩＶ−IIによる感染症および疾患（ＡＩＤＳ）、ＡＲＣ（エイズ関連症候群）やＬＡＳ（リンパ節腫大症候群）などのＨＩＶ関連ステージ、ならびに上記ウイルスによる免疫不全症や脳症の治療および予防
３）単剤、複数剤または多剤耐性ＨＩＶによるＨＩＶ感染症の治療
【００６２】
本発明の目的において、耐性ＨＩＶとは、例えば、ヌクレオシド系阻害剤（ＲＴＩ）、非ヌクレオシド系阻害剤（ＮＮＲＴＩ）またはプロテアーゼ阻害剤（ＰＩ）に対して耐性を持つウイルス、または他の作用機序を有するもの（例えば、Ｔ２０（融合阻害剤））に対して耐性を持つウイルスを意味する。
４）ＡＩＤＳキャリア状態の治療または予防
５）ＨＴＬＶ−ＩまたはＨＴＬＶ−II感染症の治療または予防
【００６３】
動物用医薬品としての適応領域を以下に例示する。
ａ）マエディ・ビスナ（Ｍａｅｄｉ−ｖｉｓｎａ）ウイルスによる感染症（ヒツジおよびヤギ）
ｂ）進行性肺炎ウイルス（ＰＰＶ）による感染症（ヒツジおよびヤギ）
ｃ）ヤギ関節炎脳炎ウイルスによる感染症（ヒツジおよびヤギ）
ｄ）ｚｗｏｅｇｅｒｚｉｅｋｔｅウイルスによる感染症（ヒツジ）
ｅ）伝染性貧血ウイルスによる感染症（ウマ）
ｆ）ネコ白血病ウイルスによる感染症
ｇ）ネコ免疫不全ウイルス（ＦＩＶ）による感染症
ｈ）サル免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）による感染症
ヒト用医薬品としての適応領域においては、上記の２）、３）および４）が好ましい。
【００６４】
本発明の物質は、例えばエファビレンツまたはネビラピンなどの公知の非ヌクレオシド系逆転写酵素阻害剤に対して耐性を示すＨＩＶを制御するのに特に適している。
【００６５】
また本発明は、少なくとも１種の本発明の化合物および少なくとも１種以上の他の活性成分を含む医薬品、具体的には上述した疾患の治療薬および／または予防薬に関する。
【００６６】
また本発明の化合物は、特に上記の２）、３）および４）において、当該適用領域で有効な他の化合物１種以上との併用療法の一部として有利に使用できる。本発明の化合物は、例えば下記の作用機序に基づく抗ウイルス活性を有する薬剤の有効量と組み合わせて使用することができる。
【００６７】
ＨＩＶプロテアーゼ阻害剤:例えば、サキナビル、インジナビル、リトナビル、ネルフィナビル、アンプレナビル、ロピナビル、アタザナビル、ホスアンプレナビル、チプラナビル、ダルナビルなどが挙げられる。
【００６８】
ヌクレオシド系、ヌクレオチド系および非ヌクレオシド系ＨＩＶ逆転写酵素阻害剤:例えば、ジドブジン、ラミブジン、ジダノシン、ザルシタビン、スタブジン、ラミブジン、アバカビル、テノフォビル、アデフォビル、エムトリシタビン、アムドキソビル、アプリシタビン、ラシビル、ネビラピン、デラビルジン、エファビレンツ、エトラビリン、リルピビリン、ＵＫ−４５３，０６１などが挙げられる。
【００６９】
ＨＩＶインテグラーゼ阻害剤:例えば、ラルテグラビル、エルビテグラビルなどが挙げられる。
【００７０】
ＨＩＶ融合阻害剤:例えば、エンフビルチドなどが挙げられる。
【００７１】
ＣＸＣＲ４／ＣＣＲ５／ｇｐ１２０相互作用に対する阻害剤:例えば、マラビロック、ビクリビロック、ＩＮＣＢ００９４７１、ＡＭＤ−０７０などが挙げられる。
【００７２】
ポリ蛋白質の成熟阻害剤:例えば、ベビリマットなどが挙げられる。
【００７３】
本発明の化合物との可能な組み合わせを説明するために、いくつかの薬剤を選択したが、これらに限定されない。原則として、本発明の化合物と抗ウイルス活性を有する薬剤とのあらゆる組み合わせが本発明の範囲に包含される。
【００７４】
本発明の化合物は、全身および／または局所的に作用してもよく、このような目的に適した方法、例えば経口、非経口、経肺、経鼻、舌下、経舌（ｌｉｎｇｕａｌｌｙ）、経頬側、経腸、経皮（ｄｅｒｍａｌｌｙ，ｔｒａｎｓｄｅｒｍａｌｌｙ）、経結膜、経眼（ｏｔｉｃａｌｌｙ）などの投与経路で、またはインプラントもしくはステントとして投与することができる。
【００７５】
本発明の化合物は、これらの投与経路に適した剤形にして投与することができる。
【００７６】
経口投与に適した剤形は、先行技術に従って機能し、本発明の化合物を速やかにかつ／または改変された方法で送達するものであって、本発明の化合物を結晶体および／または非晶体および／または溶解した状態で含有するものである。例えば、錠剤（例えば、非コーティング錠またはコーティング錠、コーティングとしては、胃液抵抗性、遅延溶解性または不溶性であって、本発明の化合物の放出を制御するものが挙げられる）、口腔で速やかに崩壊する錠剤またはフィルム／ウエハー、フィルム／凍結乾燥剤、カプセル剤（例えば、ゼラチン製の硬カプセル剤や軟カプセル剤）、糖衣錠、粒剤、ペレット剤、散剤、乳剤、懸濁液剤、エアゾール剤、液剤などが挙げられる。
【００７７】
非経口投与は、吸収ステップを回避するように行ってもよく（例えば、静脈内、動脈内、心臓内、脊髄内、腰椎内投与）、吸収ステップを含むように行ってもよい（例えば、筋肉内、皮下、皮内、経皮、腹腔内投与）。非経口投与に適した剤形は、とりわけ液剤、懸濁液剤、乳剤、凍結乾燥剤または滅菌散剤などの注射用製剤および点滴用製剤である。
【００７８】
他の投与経路に適した剤形は、例えば吸入用の剤形（とりわけ粉末吸入器、ネブライザー）、点鼻剤、液剤、噴霧剤、経舌（ｌｉｎｇｕａｌ）投与、舌下投与または頬側投与に適した剤形（例えば錠剤、フィルム／ウエハーまたはカプセル剤）、坐剤、耳用または眼用製剤、膣用カプセル剤、水性懸濁液剤（ローション剤、振とう合剤）、親油性懸濁液剤、軟膏剤、クリーム剤、経皮吸収治療システム（例えば貼付剤など）、乳液剤、ペースト剤、フォーム剤、散布剤、インプラント、ステントなどが挙げられる。
【００７９】
本発明の化合物は、上述した剤形に製剤化することが可能であり、不活性かつ無毒の薬学的に許容される賦形剤と混合することによって、自体公知の方法で製剤化できる。賦形剤としては、特に、担体（例えば結晶セルロース、ラクトース、マンニトール）、溶媒（例えば液状ポリエチレングリコール）、乳化剤および分散剤または湿潤剤（例えば硫酸ドデシルナトリウム、ポリオキシソルビタンオレアート）、結合剤（例えばポリビニルピロリドン）、合成または天然ポリマー（例えばアルブミン）、安定化剤（例えばアスコルビン酸などの酸化防止剤）、着色料（例えば酸化鉄などの無機色素）および矯味剤および／または矯臭剤などが挙げられる。
【００８０】
また本発明は、少なくとも１種の本発明の化合物を、通常、１種以上の不活性かつ無毒の薬学的に許容される賦形剤と共に含む医薬品、および上述した目的のためのその使用に関する。
【００８１】
本発明の活性成分を合計０．１〜２００ｍｇ／ｋｇ体重、好ましくは１〜１００ｍｇ／ｋｇ体重の用量で、２４時間ごとに投与することはヒト用および動物用医薬品のいずれにおいても有利であることが一般に証明されており、所望の成果を達成するために、必要であれば数回に分けて投与する。体重１ｋｇあたりの単回用量は、１〜８０ｍｇ、特に１〜３０ｍｇの活性成分を含むのが好ましい。
【００８２】
ただし、必要に応じて、具体的には体重、投与経路、活性成分に対する個人の反応、製剤の種類および投与時間または間隔に応じて、上記の用量を変更する必要があるだろう。従って、上述した最低用量未満で十分な場合もあり、上述した最大用量を超える量が必要となる場合もある。高用量の投与を行う場合、１日に数回に分けて投与することが望ましい場合もある。
【００８３】
以下の試験および実施例において、特別の定めがない限り、パーセントは重量パーセントであり、部は重量部である。液体と液体からなる溶液における、溶媒の割合、希釈率および濃度は、いずれも容積を基準とする。「ｗ／ｖ」は「重量／容積」を意味する。従って、例えば、「１０％ｗ／ｖ」は、溶液または懸濁液１００ｍｌが物質１０ｇを含有することを意味する。
【実施例】
【００８４】
Ａ）実施例
略語：
ａｑ．          水性、水溶液
ｃｏｎｃ．      濃縮
ＤＣＩ          直接化学イオン化法（ＭＳ）
ＤＭＡ          Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド
ＤＭＦ          Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
ＤＭＳＯ        ジメチルスルホキシド
ＥＤＣ          Ｎ’−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ−エチルカルボジイミド
×  ＨＣｌ
ｅｑ．          当量
ＥＳＩ          エレクトロスプレーイオン化法（ＭＳ）
ｈ              時間
ＨＡＴＵ        Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’
−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスファート
ＨＰＬＣ        高圧、高速液体クロマトグラフィー
ＬＣ−ＭＳ      液体クロマトグラフィー質量分析法
ｍｉｎ          分
ＭＳ            質量分析法
ＮＭＲ          核磁気共鳴法
ＰｙＢＯＰ      ベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリス（ピロリジノ）
ホスホニウムヘキサフルオロホスファート
Ｒｔ            保持時間（ＨＰＬＣ）
ＲＴ            室温
ＴＢＴＵ        Ｏ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’
−テトラメチルウロニウムテトラフルオロホウ酸塩
ＴＦＡ          トリフルオロ酢酸
ＴＨＦ          テトラヒドロフラン
ＴＭＯＦ        オルトギ酸トリメチル
【００８５】
ＨＰＬＣ法：
方法１：機器：ＤＡＤ検出器を備えたＨＰ１１００；カラム：Ｋｒｏｍａｓｉｌ  １００  ＲＰ−１８、６０ｍｍ×２．１ｍｍ、３．５μｍ；溶離液Ａ：ＨＣｌＯ４（７０％）５ｍＬ／水１Ｌ、溶離液Ｂ：アセトニトリル；勾配：０ｍｉｎ  ２％Ｂ→０．５ｍｉｎ  ２％Ｂ→４．５ｍｉｎ  ９０％Ｂ→６．５ｍｉｎ  ９０％Ｂ→６．７ｍｉｎ  ２％Ｂ→７．５ｍｉｎ  ２％Ｂ；流速：０．７５ｍＬ／ｍｉｎ；温度：３０℃；ＵＶ検出：２１０ｎｍ
【００８６】
方法２：機器：ＤＡＤ検出器を備えたＨＰ１１００；カラム：Ｋｒｏｍａｓｉｌ  １００  ＲＰ−１８、６０ｍｍ×２．１ｍｍ、３．５μｍ；溶離液Ａ：ＨＣｌＯ４（７０％）５ｍＬ／水１Ｌ、溶離液Ｂ：アセトニトリル；勾配：０ｍｉｎ  ２％Ｂ→０．５ｍｉｎ  ２％Ｂ→４．５ｍｉｎ  ９０％Ｂ→９ｍｉｎ  ９０％Ｂ→９．２ｍｉｎ  ２％Ｂ→１０ｍｉｎ  ２％Ｂ；流速：０．７５ｍＬ／ｍｉｎ；温度：３０℃；ＵＶ検出：２１０ｎｍ
【００８７】
方法３：機器：ＤＡＤ検出器を備えたＨＰ１１００；カラム：Ｋｒｏｍａｓｉｌ  １００  ＲＰ−１８、６０ｍｍ×２．１ｍｍ、３．５μｍ；溶離液Ａ：ＨＣｌＯ４（７０％）５ｍＬ／水１Ｌ、溶離液Ｂ：アセトニトリル；勾配：０ｍｉｎ  ２％Ｂ→０．５ｍｉｎ  ２％Ｂ→４．５ｍｉｎ  ９０％Ｂ→１５ｍｉｎ  ９０％Ｂ→１５．２ｍｉｎ  ２％Ｂ→１６ｍｉｎ  ２％Ｂ；流速：０．７５ｍＬ／ｍｉｎ；温度：３０℃；ＵＶ検出：２１０ｎｍ
【００８８】
ＬＣ／ＭＳ法：
方法１：ＭＳ機種：Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ  ＺＱ；ＨＰＬＣ機種：Ｗａｔｅｒｓ  Ａｌｌｉａｎｃｅ  ２７９５；カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｓｙｎｅｒｇｉ  ２μ  Ｈｙｄｒｏ−ＲＰ  Ｍｅｒｃｕｒｙ  ２０ｍｍ×４ｍｍ；溶離液Ａ：水１Ｌ＋５０％ギ酸０．５ｍＬ、溶離液Ｂ：アセトニトリル１Ｌ＋５０％ギ酸０．５ｍＬ；勾配：０．０ｍｉｎ  ９０％Ａ→２．５ｍｉｎ  ３０％Ａ→３．０ｍｉｎ  ５％Ａ→４．５ｍｉｎ  ５％Ａ；流速：０．０ｍｉｎ  １ｍＬ／ｍｉｎ→２．５ｍｉｎ／３．０ｍｉｎ／４．５ｍｉｎ  ２ｍＬ／ｍｉｎ；オーブン：５０℃；ＵＶ検出：２１０ｎｍ
【００８９】
方法２：ＭＳ機種：Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ  ＺＱ；ＨＰＬＣ機種：ＨＰ１１００シリーズ；ＵＶ  ＤＡＤ；カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｓｙｎｅｒｇｉ  ２μ  Ｈｙｄｒｏ−ＲＰ  Ｍｅｒｃｕｒｙ  ２０ｍｍ×４ｍｍ；溶離液Ａ：水１Ｌ＋５０％ギ酸０．５ｍＬ、溶離液Ｂ：アセトニトリル１Ｌ＋５０％ギ酸０．５ｍＬ；勾配：０．０ｍｉｎ  ９０％Ａ→２．５ｍｉｎ  ３０％Ａ→３．０ｍｉｎ  ５％Ａ→４．５ｍｉｎ  ５％Ａ；流速：０．０ｍｉｎ  １ｍＬ／ｍｉｎ→２．５ｍｉｎ／３．０ｍｉｎ／４．５ｍｉｎ  ２ｍＬ／ｍｉｎ；オーブン：５０℃；ＵＶ検出：２１０ｎｍ
【００９０】
方法３：機器：ＨＰＬＣ  Ａｇｉｌｅｎｔ  １１００シリーズを備えたＭｉｃｒｏｍａｓｓ  Ｑｕａｔｔｒｏ  ＬＣＺ；カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｓｙｎｅｒｇｉ  ２μ  Ｈｙｄｒｏ−ＲＰ  Ｍｅｒｃｕｒｙ  ２０ｍｍ×４ｍｍ；溶離液Ａ：水１Ｌ＋５０％ギ酸０．５ｍＬ、溶離液Ｂ：アセトニトリル１Ｌ＋５０％ギ酸０．５ｍＬ；勾配：０．０ｍｉｎ  ９０％Ａ→２．５ｍｉｎ  ３０％Ａ→３．０ｍｉｎ  ５％Ａ→４．５ｍｉｎ  ５％Ａ；流速：０．０ｍｉｎ  １ｍＬ／ｍｉｎ→２．５ｍｉｎ／３．０ｍｉｎ／４．５ｍｉｎ  ２ｍＬ／ｍｉｎ；オーブン：５０℃；ＵＶ検出：２０８〜４００ｎｍ
【００９１】
方法４：ＭＳ機器：Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ  ＴＯＦ（ＬＣＴ）；ＨＰＬＣ機器：２連カラム、Ｗａｔｅｒｓ２６９０；カラム：ＹＭＣ−ＯＤＳ−ＡＱ、５０ｍｍ×４．６ｍｍ、３．０μｍ；溶離液Ａ：水＋０．１％ギ酸、溶離液Ｂ：アセトニトリル＋０．１％ギ酸；勾配：０．０ｍｉｎ  １００％Ａ→０．２ｍｉｎ  ９５％Ａ→１．８ｍｉｎ  ２５％Ａ→１．９ｍｉｎ  １０％Ａ→２．０ｍｉｎ  ５％Ａ→３．２ｍｉｎ  ５％Ａ；オーブン：４０℃；流速：３．０ｍＬ／ｍｉｎ；ＵＶ検出：２１０ｎｍ
【００９２】
出発化合物
＜実施例１Ａ＞
リチウム（１Ｚ）−４−エトキシ−３，４−ジオキソ−１−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］ブタ−１−エン−１−オラート
【化７】
0005465233.tif 000008
−７８℃にて、リチウムヘキサメチルジシラジド（ヘキサン溶液）５．７ｍＬ（５．７ｍｍｏｌ）をジエチルエーテルに加える。この溶液に、３−（トリフルオロメチル）アセトフェノン１ｇ（５．３１ｍｍｏｌ）をジエチルエーテル６ｍＬに溶解したものを滴下する。−７８℃で４５分経過した後、ジエチルオキサラート０．７９ｍＬ（５．８５ｍｍｏｌ）を滴下し、室温で１２時間撹拌する。反応液を半量になるまで蒸発させ、得られた固形物を吸引濾過によって回収する。回収した結晶をジエチルエーテルで洗浄し、減圧乾燥する。このようにして、生成物１．２６ｇ（４．３ｍｍｏｌ、理論値に対する収率８１％）を得る。得られた生成物は、次の段階においてそのまま使用する。
【００９３】
＜実施例２Ａ＞
リチウム（１Ｚ）−４−エトキシ−３，４−ジオキソ−１−｛３−［（トリフルオロメチル）チオ］フェニル｝ブタ−１−エン−１−オラート
【化８】
0005465233.tif 000009
実施例１Ａに記載の方法に従い、３−（トリフルオロメチルチオ）アセトフェノン１ｇ（４．５４ｍｍｏｌ）およびジエチルオキサラート０．６８ｍＬ（５ｍｍｏｌ）から、生成物１．２２ｇ（３．７ｍｍｏｌ、理論値に対する収率８２％）を得る。得られた生成物は、次の段階においてそのまま使用する。
【００９４】
＜実施例３Ａ＞
リチウム（１Ｚ）−４−エトキシ−３，４−ジオキソ−１−［３−（トリフルオロメトキシ）フェニル］ブタ−１−エン−１−オラート
【化９】
0005465233.tif 000010
実施例１Ａに記載の方法に従い、１−［３−（トリフルオロメトキシ）フェニル］エタン−１−オン５ｇ（２４．５ｍｍｏｌ）およびジエチルオキサラート３．６６ｍＬ（２６．９ｍｍｏｌ）から、生成物４．５３ｇ（１４．６ｍｍｏｌ、理論値に対する収率６０％）を得る。得られた生成物は、次の段階においてそのまま使用する。
【００９５】
＜実施例４Ａ＞
エチル１−（３−クロロフェニル）−５−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボキシラート
【化１０】
0005465233.tif 000011
実施例１Ａで得たリチウム（１Ｚ）−４−エトキシ−３，４−ジオキソ−１−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］ブタ−１−エン−１−オラート６３１．５ｍｇ（２．１５ｍｍｏｌ）をエタノール１５ｍＬに懸濁し、３−クロロフェニルヒドラジン塩酸塩５２２．７ｍｇ（２．９２ｍｍｏｌ）を加え、室温で４８時間撹拌する。反応液を蒸発させて約５ｍＬまで濃縮し、沈殿物を吸引濾過によって回収する。回収した結晶を乾燥した後、酢酸１５ｍＬに溶解し、還流下で１２時間撹拌する。反応液を酢酸エチルに加え、水、飽和炭酸水素ナトリウム溶液および塩化ナトリウム溶液で洗浄する。有機相を硫酸ナトリウムで乾燥し、ロータリーエバポレータで濃縮する。得られた残渣をシリカゲルフラッシュ（移動相：シクロヘキサン／酢酸エチル＝３：１）で精製し、ジエチルエーテル／ペンタンから結晶化する。このようにして、生成物５２８ｍｇ（１．５ｍｍｏｌ、理論値に対する収率６２％）を得る。
融点：１１４℃
ＨＰＬＣ（方法１）：Ｒｔ＝５．３９ｍｉｎ
ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３９５（Ｍ＋Ｈ）＋
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ＝７．７８（ｄ，１Ｈ），７．６８−７．５４（ｍ，５Ｈ），７．５（ｔ，１Ｈ），７．３５（ｓ，１Ｈ），７．２９（ｄ，１Ｈ），４．３６（ｑ，２Ｈ），１．３３（ｔ，３Ｈ）
【００９６】
＜実施例５Ａ＞
エチル１−（３−クロロフェニル）−５−｛３−［（トリフルオロメチル）チオ］フェニル｝−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボキシラート
【化１１】
0005465233.tif 000012
実施例４Ａに記載の方法に従い、実施例２Ａで得たリチウム（１Ｚ）−４−エトキシ−３，４−ジオキソ−１−｛３−［（トリフルオロメチル）チオ］フェニル｝−ブタ−１−エン−１−オラート１．２２ｇ（３．７４ｍｍｏｌ）および（３−クロロベンジル）ヒドラジン５６８．３５ｍｇ（３．６３ｍｍｏｌ）から、生成物８４５．１ｍｇ（２．１ｍｍｏｌ、理論値に対する収率７７％）を得る。
融点：９５℃
ＨＰＬＣ（方法１）：Ｒｔ＝５．５８ｍｉｎ
ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４２７（Ｍ＋Ｈ）＋
１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ＝７．７５（ｄ，１Ｈ），７．７−７．４２（ｍ，６Ｈ），７．３３−７．２２（ｍ，２Ｈ），４．３６（ｑ，２Ｈ），１．３２（ｔ，３Ｈ）
【００９７】
＜実施例６Ａ＞
エチル１−（３−クロロフェニル）−５−［３−（トリフルオロメトキシ）フェニル］−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボキシラート
【化１２】
0005465233.tif 000013
実施例４Ａに記載の方法に従い、実施例３Ａで得たリチウム（１Ｚ）−４−エトキシ−３，４−ジオキソ−１−［３−（トリフルオロメトキシ）フェニル］ブタ−１−エン−１−オラート４．５３ｇ（１４．６ｍｍｏｌ）および３−クロロフェニルヒドラジン塩酸塩３．５６ｇ（１９．８ｍｍｏｌ）から、生成物１．９８ｍｇ（４．８ｍｍｏｌ、理論値に対する収率３３％）を得る。
融点：８７℃
ＨＰＬＣ（方法１）：Ｒｔ＝５．３８ｍｉｎ
ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４１１（Ｍ＋Ｈ）＋
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ＝７．６−７．４５（ｍ，４Ｈ），７．４（ｄ，２Ｈ），７．３４−７．２５（ｍ，２Ｈ），７．２（ｓ，１Ｈ），４．３５（ｑ，２Ｈ），１．３２（ｔ，３Ｈ）
【００９８】
＜実施例７Ａ＞
１−（３−クロロフェニル）−５−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸
【化１３】
0005465233.tif 000014
実施例４Ａで得たエチル１−（３−クロロフェニル）−５−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボキシラート６ｇ（１５．２ｍｍｏｌ）をメタノール８０ｍＬに溶解した溶液に、水酸化カリウム８．５ｇ（１５２ｍｍｏｌ）を加え、還流下で３０分間撹拌する。反応液を水で希釈し、１モル濃度の塩酸を用いて酸性にし、酢酸エチルで抽出する。有機相を塩化ナトリウム溶液で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥して、ロータリーエバポレータで濃縮する。得られた残渣をジエチルエーテル／ペンタンから結晶化する。この結晶を吸引濾過によって回収し、少量のペンタンで洗浄し乾燥する。このようにして、生成物５．２ｇ（１４．２ｍｍｏｌ、理論値に対する収率９３％）を得る。
ＨＰＬＣ（方法２）：Ｒｔ＝４．５７ｍｉｎ
ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３６７（Ｍ＋Ｈ）＋
１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ＝１３．１５（ｓ，１Ｈ），７．７８（ｄ，１Ｈ），７．６８−７．４３（ｍ，６Ｈ），７．３−７．２３（ｍ，２Ｈ）
【００９９】
＜実施例８Ａ＞
１−（３−クロロフェニル）−５−｛３−［（トリフルオロメチル）チオ］フェニル｝−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸
【化１４】
0005465233.tif 000015
実施例７Ａに記載の方法に従い、実施例５Ａで得たエチル１−（３−クロロフェニル）−５−｛３−［（トリフルオロメチル）チオ］フェニル｝−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボキシラート８５０ｍｇ（１．９９ｍｍｏｌ）および水酸化カリウム１．１２ｇ（１９．９ｍｍｏｌ）から、結晶６９１．５ｍｇ（１．７ｍｍｏｌ、理論値に対する収率８７％）を得る。
融点：１４８℃
ＨＰＬＣ（方法１）：Ｒｔ＝４．９１ｍｉｎ
ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３９９（Ｍ＋Ｈ）＋
１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ＝１３．１５（ｓ，１Ｈ），７．７４（ｄ，１Ｈ），７．７−７．４２（ｍ，６Ｈ），７．３（ｄ，１Ｈ），７．２（ｓ，１Ｈ）
【０１００】
＜実施例９Ａ＞
１−（３−クロロフェニル）−５−［３−（トリフルオロメトキシ）フェニル］−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸
【化１５】
0005465233.tif 000016
実施例７Ａに記載の方法に従い、実施例６Ａで得たエチル１−（３−クロロフェニル）−５−［３−（トリフルオロメトキシ）フェニル］−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボキシラート１．９ｇ（４．６３ｍｍｏｌ）および水酸化カリウム２．５９ｇ（４６．２５ｍｍｏｌ）から、結晶１．６８ｇ（４．４ｍｍｏｌ、理論値に対する収率９５％）を得る。
ＨＰＬＣ（方法２）：Ｒｔ＝４．７６ｍｉｎ
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ＝７．６−７．４５（ｍ，４Ｈ），７．４４−７．３８（ｍ，２Ｈ），７．２８（ｄ，１Ｈ），７．２（ｄ，２Ｈ）
【０１０１】
＜実施例１０Ａ＞
リチウム（１Ｚ）−１−（３−シアノフェニル）−４−エトキシ−３，４−ジオキソブタ−１−エン−１−オラート
【化１６】
0005465233.tif 000017
実施例１Ａに記載の方法に従い、３−アセチルベンゾニトリル５ｇ（３４．４ｍｍｏｌ）およびジエチルオキサラート５．１５ｍＬ（３７．９ｍｍｏｌ）から、生成物５．４９ｇ（２１．９ｍｍｏｌ、理論値に対する収率６３％）を得る。得られた生成物は、次の段階においてそのまま使用する。
【０１０２】
＜実施例１１Ａ＞
４−（２，４−ジクロロフェニル）−２，４−ジオキソブタン酸エチルエステル
【化１７】
0005465233.tif 000018
Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ＆Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  １２（１６），２１３３（２００２）の記載に従い、調製する。
【０１０３】
＜実施例１２Ａ＞
４−（３，４−ジメトキシフェニル）−２，４−ジオキソブタン酸エチルエステル
【化１８】
0005465233.tif 000019
Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ＆Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  １２（１６），２１３３（２００２）の記載に従い、調製する。
【０１０４】
＜実施例１３Ａ＞
２，４−ジオキソ−４−フェニルブタン酸エチルエステル
【化１９】
0005465233.tif 000020
Ａ．Ｒｏｙ  ａｎｄ  Ｓ．Ｂａｔｒａ，Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（１５），２３２５（２００３）の記載に従い、調製する。
【０１０５】
＜実施例１４Ａ＞
３−（３−ニトロフェニル）−３−オキソプロパン酸エチルエステル
【化２０】
0005465233.tif 000021
Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  ６０（３１），６４７９（２００４）の記載に従い、調製する。
【０１０６】
＜実施例１５Ａ＞
エチル１−（４−メチルフェニル）−５−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボキシラート
【化２１】
0005465233.tif 000022
実施例４Ａに記載の方法に従い、実施例１Ａで得たリチウム（１Ｚ）−４−エトキシ−３，４−ジオキソ−１−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］ブタ−１−エン−１−オラート６３１．５ｍｇ（２．１５ｍｍｏｌ）および４−トリルヒドラジン塩酸塩４６３．２ｍｇ（２．９２ｍｍｏｌ）から、生成物５３５．８ｍｇ（１．４ｍｍｏｌ、理論値に対する収率６７％）を得る。
融点：１０２℃
ＨＰＬＣ（方法１）：Ｒｔ＝５．３６ｍｉｎ
ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３７５（Ｍ＋Ｈ）＋
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ＝７．７３（ｄ，１Ｈ），７．６４−７．５（ｍ，３Ｈ），７．３２−７．２（ｍ，５Ｈ），４．３３（ｑ，２Ｈ），２．３６（ｓ，３Ｈ），１．３２（ｔ，３Ｈ）
【０１０７】
＜実施例１６Ａ＞
エチル１−（３−クロロフェニル）−５−（３−シアノフェニル）−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボキシラート
【化２２】
0005465233.tif 000023
実施例４Ａに記載の方法に従い、実施例１０Ａで得たリチウム（１Ｚ）−１−（３−シアノフェニル）−４−エトキシ−３，４−ジオキソブタ−１−エン−１−オラート１０ｇ（３９．８１ｍｍｏｌ）および３−クロロフェニルヒドラジン塩酸塩９．７ｇ（５４．１５ｍｍｏｌ）から、生成物４．９７ｇ（１４ｍｍｏｌ、理論値に対する収率３５％）を得る。
融点：１０１℃
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝２．４５ｍｉｎ
ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３５２（Ｍ＋Ｈ）＋
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ＝７．３８（ｄ，２Ｈ），７．６−７．４３（ｍ，５Ｈ），７．３（ｓ，１Ｈ），７．２８（ｄ，１Ｈ），４．３５（ｑ，２Ｈ），１．３２（ｔ，３Ｈ）
【０１０８】
＜実施例１７Ａ＞
エチル１−（３−クロロフェニル）−５−（３，４−ジメトキシフェニル）−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボキシラート
【化２３】
0005465233.tif 000024
実施例４Ａに記載の方法に従い、実施例１２Ａで得た４−（３，４−ジメトキシフェニル）−２，４−ジオキソブタン酸エチルエステル１ｇ（３．５７ｍｍｏｌ）および３−クロロフェニルヒドラジン塩酸塩８６８．８ｍｇ（４．８５ｍｍｏｌ）から、生成物１．０３ｇ（２．７ｍｍｏｌ、理論値に対する収率７４％）を得た後、分取ＨＰＬＣによって精製する。
融点：９９℃
ＨＰＬＣ（方法２）：Ｒｔ＝４．８１ｍｉｎ
ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３８７（Ｍ＋Ｈ）＋
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ＝７．５７−７．４４（ｍ，３Ｈ），７．２７（ｄ，１Ｈ），７．１３（ｓ，１Ｈ），６．９５（ｄ，１Ｈ），６．８８（ｓ，１Ｈ），６．７７（ｄ，１Ｈ），４．３４（ｑ，２Ｈ），３．７５（ｓ，３Ｈ），３．６２（ｓ，３Ｈ），１．３２（ｔ，３Ｈ）
【０１０９】
＜実施例１８Ａ＞
エチル１−（３−クロロフェニル）−５−（２，４−ジクロロフェニル）−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボキシラート
【化２４】
0005465233.tif 000025
実施例４Ａに記載の方法に従い、実施例１１Ａで得た４−（２，４−ジクロロフェニル）−２，４−ジオキソブタン酸エチルエステル１ｇ（３．４６ｍｍｏｌ）および３−クロロフェニルヒドラジン塩酸塩８４２．２５ｍｇ（４．７ｍｍｏｌ）から、生成物２９７．５ｍｇ（０．７５ｍｍｏｌ、理論値に対する収率２２％）を得た後、分取ＨＰＬＣによって精製する。
融点：８７℃
ＨＰＬＣ（方法２）：Ｒｔ＝５．４９ｍｉｎ
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ＝７．７５（ｓ，１Ｈ），７．６３−７．５４（ｍ，２Ｈ），７．５２−７．３９（ｍ，３Ｈ），７．２−７．１（ｍ，２Ｈ），４．３５（ｑ，２Ｈ），１．３３（ｔ，３Ｈ）
【０１１０】
＜実施例１９Ａ＞
エチル１−（３−クロロフェニル）−５−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボキシラート
【化２５】
0005465233.tif 000026
Ｉｌ  Ｆａｒｍａｃｏ  ５９（１１），８４９（２００４）の記載に従い、調製する。
【０１１１】
＜実施例２０Ａ＞
エチル１−（３−クロロフェニル）−５−（３−ニトロフェニル）−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボキシラート
【化２６】
0005465233.tif 000027
実施例４Ａに記載の方法に従い、実施例１４Ａで得た３−（３−ニトロフェニル）−３−オキソプロパン酸エチルエステル１ｇ（３．７７ｍｍｏｌ）および３−クロロフェニルヒドラジン塩酸塩９１８．１３ｍｇ（５．１３ｍｍｏｌ）から、生成物８７４．５ｍｇ（２．４ｍｍｏｌ、理論値に対する収率６２％）を得た後、分取ＨＰＬＣによって精製する。
融点：１１６℃
ＨＰＬＣ（方法２）：Ｒｔ＝５．３３ｍｉｎ
ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３７２（Ｍ＋Ｈ）＋
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ＝８．３９（ｄ，１Ｈ），８．３（ｓ，１Ｈ），７．８９−７．７８（ｍ，２Ｈ），７．７８−７．６８（ｍ，２Ｈ），７．６３（ｔ，１Ｈ），７．５３（ｓ，１Ｈ），７．４６（ｄ，１Ｈ）
【０１１２】
＜実施例２１Ａ＞
エチル１−（３−メトキシフェニル）−５−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボキシラート
【化２７】
0005465233.tif 000028
実施例４Ａに記載の方法に従い、実施例１Ａで得たリチウム（１Ｚ）−４−エトキシ−３，４−ジオキソ−１−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］ブタ−１−エン−１−オラート１．５ｇ（５．２ｍｍｏｌ）および３−メトキシフェニルヒドラジン塩酸塩１ｇ（５．７３ｍｍｏｌ）から、生成物１．７３ｇ（４．４ｍｍｏｌ、理論値に対する収率８５％）を得た後、シリカゲル（フラッシュクロマトグラフィー）によって精製する。
ＬＣ−ＭＳ（方法２）：Ｒｔ＝２．９５ｍｉｎ
ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３９１（Ｍ＋Ｈ）＋
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ＝７．５９（ｄ，１Ｈ），７．５３（ｓ，１Ｈ），７．４３（ｔ，１Ｈ），７．３７（ｄ，１Ｈ），７．２８−７．１４（ｍ，２Ｈ），６．９３（ｓ，２Ｈ），６．８（ｄ，１Ｈ），４．４６（ｑ，２Ｈ），３．７５（ｓ，３Ｈ），１．４３（ｔ，３Ｈ）
【０１１３】
＜実施例２２Ａ＞
１−（４−メチルフェニル）−５−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸
【化２８】
0005465233.tif 000029
実施例７Ａに記載の方法に従い、実施例１５Ａで得たエチル１−（４−メチルフェニル）−５−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボキシラート４５０ｍｇ（１．２ｍｍｏｌ）および水酸化カリウム１３５ｍｇ（２．４ｍｍｏｌ）から、結晶３３４．７ｍｇ（０．９７ｍｍｏｌ、理論値に対する収率８０％）を得る。
融点：１５１℃
ＨＰＬＣ（方法１）：Ｒｔ＝４．６９ｍｉｎ
ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３４７（Ｍ＋Ｈ）＋
１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ＝１３．０８（ｓ，１Ｈ），７．７２（ｄ，１Ｈ），７．６３−７．５（ｍ，３Ｈ），７．３１−７．１８（ｍ，５Ｈ），２．３５（ｓ，３Ｈ）
【０１１４】
＜実施例２３Ａ＞
１−（３−クロロフェニル）−５−（３−シアノフェニル）−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸
【化２９】
0005465233.tif 000030
実施例７Ａに記載の方法に従い、実施例１６Ａで得たエチル１−（３−クロロフェニル）−５−（３−シアノフェニル）−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボキシラート２．７５ｇ（７．８２ｍｍｏｌ）および水酸化カリウム４．３９ｇ（７８．２ｍｍｏｌ）から、結晶２．３７ｍｇ（７．３ｍｍｏｌ、理論値に対する収率９４％）を得る。
ＨＰＬＣ（方法１）：Ｒｔ＝４．２０ｍｉｎ
ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３２４（Ｍ＋Ｈ）＋
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ＝１３．１５（ｓ，１Ｈ），７．９１−７．８４（ｍ，２Ｈ），７．６２−７．４３（ｍ，５Ｈ），７．２７−７．２２（ｍ，２Ｈ）
【０１１５】
＜実施例２４Ａ＞
１−（３−クロロフェニル）−５−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸
【化３０】
0005465233.tif 000031
実施例７Ａに記載の方法に従い、実施例１９Ａで得たエチル１−（３−クロロフェニル）−５−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボキシラート４００ｍｇ（１．２２ｍｍｏｌ）および水酸化カリウム６８６．８ｍｇ（１２．２４ｍｍｏｌ）から、結晶３３５．８ｍｇ（１．１ｍｍｏｌ、理論値に対する収率９２％）を得る。
融点：１８７℃
ＨＰＬＣ（方法２）：Ｒｔ＝４．４０ｍｉｎ
ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２９９（Ｍ＋Ｈ）＋
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ＝１３．０６（ｓ，１Ｈ），７．５５−７．３５（ｍ，６Ｈ），７．３３−７．２（ｍ，３Ｈ），７．０８（ｓ，１Ｈ）
【０１１６】
＜実施例２５Ａ＞
１−（３−クロロフェニル）−５−（３，４−ジメトキシフェニル）−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸
【化３１】
0005465233.tif 000032
実施例７Ａに記載の方法に従い、実施例１７Ａで得たエチル１−（３−クロロフェニル）−５−（３，４−ジメトキシフェニル）−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボキシラート５００ｍｇ（１．２９ｍｍｏｌ）および水酸化カリウム７２５．２ｍｇ（１２．９ｍｍｏｌ）から、結晶４３４．１ｍｇ（１．２ｍｍｏｌ、理論値に対する収率９４％）を得る。
融点：１６１℃
ＨＰＬＣ（方法２）：Ｒｔ＝４．１５ｍｉｎ
ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３５９（Ｍ＋Ｈ）＋
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ＝１３．１（ｓ，１Ｈ），７．５７−７．４２（ｍ，３Ｈ），７．２６（ｄ，１Ｈ），７．０６（ｓ，１Ｈ），６．９５（ｄ，１Ｈ），６．８６（ｓ，１Ｈ），６．７８（ｄ，１Ｈ），５．５７（ｓ，３Ｈ），３．６１（ｓ，３Ｈ）
【０１１７】
＜実施例２６Ａ＞
１−（３−クロロフェニル）−５−（２，４−ジクロロフェニル）−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸
【化３２】
0005465233.tif 000033
実施例７Ａに記載の方法に従い、実施例１８Ａで得たエチル１−（３−クロロフェニル）−５−（２，４−ジクロロフェニル）−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボキシラート２４０ｍｇ（０．６１ｍｍｏｌ）および水酸化カリウム３４０．３ｍｇ（６．１ｍｍｏｌ）から、結晶２０４ｍｇ（０．５５ｍｍｏｌ、理論値に対する収率９２％）を得る。
融点：１９１℃
ＨＰＬＣ（方法２）：Ｒｔ＝４．８７ｍｉｎ
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ＝１３．１７（ｓ，１Ｈ），７．７５（ｓ，１Ｈ），７．６３−７．５２（ｍ，２Ｈ），７．５２−７．３６（ｍ，３Ｈ），７．１６（ｄ，１Ｈ），７．０７（ｓ，１Ｈ）
【０１１８】
＜実施例２７Ａ＞
１−（３−クロロフェニル）−５−（３−ニトロフェニル）−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸
【化３３】
0005465233.tif 000034
実施例７Ａに記載の方法に従い、実施例２０Ａで得たエチル１−（３−クロロフェニル）−５−（３−ニトロフェニル）−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボキシラート４００ｍｇ（１．１ｍｍｏｌ）および水酸化カリウム６０３ｍｇ（１０．７ｍｍｏｌ）から、結晶３４０．５ｍｇ（０．９９ｍｍｏｌ、理論値に対する収率９２％）を得る。
融点：１８７℃
ＨＰＬＣ（方法２）：Ｒｔ＝４．３７ｍｉｎ
ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３４４（Ｍ＋Ｈ）＋
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ＝１３．１６（ｓ，１Ｈ），８．２４（ｄ，１Ｈ），８．１４（ｓ，１Ｈ），７．７７−７．４１（ｍ，５Ｈ），７．３６−７．２１（ｍ，２Ｈ）
【０１１９】
＜実施例２８Ａ＞
１−（３−メトキシフェニル）−５−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸
【化３４】
0005465233.tif 000035
実施例７Ａに記載の方法に従い、実施例２１Ａで得たエチル１−（３−メトキシフェニル）−５−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボキシラート１．６ｇ（４．１ｍｍｏｌ）および水酸化カリウム２．３ｇ（４１ｍｍｏｌ）から、結晶１．０７ｇ（２．９ｍｍｏｌ、理論値に対する収率７２％）を得る。
融点：１５４℃
ＬＣ−ＭＳ（方法３）：Ｒｔ＝２．３７ｍｉｎ
ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３６３（Ｍ＋Ｈ）＋
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ＝７．７７−７．７１（ｍ，１Ｈ），７．６５−７．５７（ｍ，３Ｈ），７．３６（ｔ，１Ｈ），７．２５（ｓ，１Ｈ），７．０７−７．０２（ｍ，１Ｈ），６．９６（ｓ，１Ｈ），６．８６（ｄ，１Ｈ），３．７１（ｓ，３Ｈ）
【０１２０】
例示的な実施形態
＜実施例１＞
４−（｛１−（３−クロロフェニル）−５−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］−１Ｈ−ピラゾール−３−イル｝カルボニル）−モルホリン
【化３５】
0005465233.tif 000036
実施例９Ａで得た１−（３−クロロフェニル）−５−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸１００ｍｇ（０．２７ｍｍｏｌ）をトルエン溶液３ｍＬに溶解した溶液に、塩化チオニル０．０６ｍＬ（０．８２ｍｍｏｌ）を無酸素下で加え、還流下で３時間撹拌する。反応液を冷却した後、ロータリーエバポレータで濃縮する。得られた中間体をジクロロメタン２ｍＬに溶解し、約０℃に冷却する。トリエチルアミン０．０６ｍＬ（０．４４ｍｍｏｌ）およびモルホリン０．０４ｍＬ（０．４４ｍｍｏｌ）を加え、室温でさらに１２時間撹拌する。反応液を酢酸エチルに加え、塩化ナトリウム溶液で２回洗浄する。有機相を硫酸ナトリウムで乾燥し、ロータリーエバポレータで濃縮する。得られた残渣をシリカゲルフラッシュ（移動相：シクロヘキサン／酢酸エチル＝１：１）で分離する。得られた油状物をジエチルエーテル／ペンタンから結晶化する。この結晶を吸引濾過によって回収し、乾燥する。このようにして、生成物９２．８ｍｇ（０．２１ｍｍｏｌ、理論値に対する収率７８％）を得る。
ＨＰＬＣ（方法１）：Ｒｔ＝４．８７ｍｉｎ
ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４３６（Ｍ＋Ｈ）＋
１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ＝７．７７（ｄ，１Ｈ），７．６８−７．４２（ｍ，６Ｈ），７．２８（ｄ，１Ｈ），７．１５（ｓ，１Ｈ），４．０（ｓ，２Ｈ），３．７５−３．５７（ｍ，６Ｈ）
【０１２１】
以下の化合物は実施例１の方法と同様にして調製する。
【表１−１】
0005465233.tif 000037
【表１−２】
0005465233.tif 000038
【表１−３】
0005465233.tif 000039
【表１−４】
0005465233.tif 000040
【表１−５】
0005465233.tif 000041
【０１２２】
＜実施例１４＞
１−｛［１−（３−クロロフェニル）−５−（３−トリフルオロメトキシフェニル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］カルボニル｝ピペラジン
【化３６】
0005465233.tif 000042
実施例９Ａの化合物およびｔｅｒｔ−ブチルピペラジン−１−カルボキシラートから実施例１の方法と同様にして調製した、ｔｅｒｔ−ブチル４−｛［１−（３−クロロフェニル）−５−（３−トリフルオロメトキシフェニル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］カルボニル｝ピペラジン−１−カルボキシラート１４０ｍｇ（０．２５ｍｍｏｌ）に、ジクロロメタン５ｍＬおよびトリフルオロ酢酸１ｍＬを無酸素下で加え、室温で１２時間撹拌する。反応液をジクロロメタンで希釈して、炭酸水素ナトリウム溶液および塩化ナトリウム溶液で洗浄する。有機相を硫酸ナトリウムで乾燥し、ロータリーエバポレータで濃縮する。このようにして、生成物１０１ｍｇ（理論値に対する収率８８％）を得る。これを６０℃、高真空下で完全に乾燥して残留溶媒を除去し、分析試料とする。
ＬＣ−ＭＳ（方法２）：Ｒｔ＝１．９２ｍｉｎ
ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４５１（Ｍ＋Ｈ）＋
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ＝７．５９−７．３８（ｍ，６Ｈ），７．２７（ｄ，１Ｈ），７．１７（ｓ，１Ｈ），７．０４（ｓ，１Ｈ），３．８３（ｓ，２Ｈ），３．５９（ｓ，２Ｈ），２７９−２．６９（ｍ，４Ｈ）
【０１２３】
＜実施例１５＞
４−｛［１−（３−クロロフェニル）−５−（３−トリフルオロメチルチオフェニル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］カルボニル｝−ピペラジン−１−カルボアルデヒド
【化３７】
0005465233.tif 000043
実施例８Ａの化合物およびピペラジンから実施例１の方法と同様にして調製した１−｛［１−（３−クロロフェニル）−５−（３−トリフルオロメチルチオフェニル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］カルボニル｝ピペラジン３５．０ｍｇ（０．０７ｍｍｏｌ）をＤＭＦ１ｍＬに溶解した溶液に、ＥＤＣ１７．２ｍｇ（０．０９ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ１１．７ｍｇ（０．０９ｍｍｏｌ）およびギ酸８．３ｍｇ（０．１８ｍｍｏｌ）を無酸素下で加え、室温で７２時間撹拌する。反応液を分取ＨＰＬＣによって分離する。このようにして、生成物１５．７ｍｇ（理論値に対する収率４２％）を得る。
ＬＣ−ＭＳ（方法２）：Ｒｔ＝２．６ｍｉｎ
ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４９５（Ｍ＋Ｈ）＋
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ＝８．１４（ｓ，１Ｈ），７．６６（ｄ，１Ｈ），７．５１−７．２３（ｍ，６Ｈ），７．１１−６．９８（ｍ，２Ｈ），４．１９（ｄ，２Ｈ），３．８５（ｄ，２Ｈ），３．６９（ｓ，２Ｈ），３．５１（ｓ，２Ｈ）
【０１２４】
＜実施例１６および実施例１７＞
下表の化合物を、それぞれに対応するピラゾールカルボン酸１００μｍｏｌから、実施例１の方法と同様にして調製する（ただし、アミドカップリングはＴＢＴＵおよびＤＭＦ溶媒を使用し、かつ分取ＨＰＬＣによって粗生成物を精製してから、［Ｍ＋Ｈ］＋としてそれぞれの分子量を測定する）。
【０１２５】
【表２】
0005465233.tif 000044
【０１２６】
以下の化合物は実施例１の方法と同様にして調製する。
【表３−１】
0005465233.tif 000045
【表３−２】
0005465233.tif 000046
【表３−３】
0005465233.tif 000047
【表３−４】
0005465233.tif 000048
【表３−５】
0005465233.tif 000049
【表３−６】
0005465233.tif 000050
【表３−７】
0005465233.tif 000051
【表３−８】
0005465233.tif 000052
【表３−９】
0005465233.tif 000053
【表３−１０】
0005465233.tif 000054
【表３−１１】
0005465233.tif 000055
【０１２７】
以下の化合物は実施例１４の方法と同様にして調製する。
【表４】
0005465233.tif 000056
【０１２８】
以下の化合物は実施例１５の方法と同様にして調製する。
【表５】
0005465233.tif 000057
【０１２９】
以下の化合物は実施例１６の方法と同様にして調製する。
【表６−１】
0005465233.tif 000058
【表６−２】
0005465233.tif 000059
【表６−３】
0005465233.tif 000060
【０１３０】
＜実施例４８＞
４−（｛１−（３−クロロフェニル）−５−［３−（トリフルオロメトキシ）フェニル］−１Ｈ−ピラゾール−３−イル｝カルボニル）−チオモルホリン−１−オキシド
【化３８】
0005465233.tif 000061
実施例１１の化合物９０ｍｇ（０．１９ｍｍｏｌ）をジクロロメタン４ｍＬに溶解したものに、７０％３−クロロ過安息香酸５７ｍｇ（０．２３ｍｍｏｌ）を０℃にて加える。この温度で２時間撹拌した後、希水酸化ナトリウム溶液およびチオ硫酸塩溶液で順次洗浄し、シリカゲル（Ｅｘｔｒｅｌｕｔ）に通して濾過する。溶出液を濃縮した後、残った油状物を分取ＨＰＬＣ（ＲＰ１８、アセトニトリル／水勾配）によって精製する。このようにして、生成物２０ｍｇ（理論値に対する収率２２％）を得る。
ＬＣ−ＭＳ（２）：Ｒｔ＝２．５ｍｉｎ
ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４８４（Ｍ＋Ｈ）＋
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ＝７．６−７．４５（ｍ，４Ｈ），７．４２（ｄ，２Ｈ），７．２９（ｄ，１Ｈ），７．１８（ｓ，１Ｈ），７．１（ｓ，１Ｈ），４．６（ｄ，１Ｈ），４．３９（ｄ，１Ｈ），４．０７（ｔ，１Ｈ），３．７３（ｔ，１Ｈ），３．０６−２．９１（ｍ，２Ｈ），２．８７−２．７８（ｍ，２Ｈ）
【０１３１】
以下の化合物は実施例４８の方法と同様にして得ることができる。
【表７】
0005465233.tif 000062
【０１３２】
Ｂ）生理活性の評価
略語：
ＲＰＭＩ１６４０培地：Ｇｉｂｃｏ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社製（ドイツ、カールスルーエ）
ＦＣＳ：ウシ胎児血清
レトロウイルス疾患の治療に、本発明の化合物が適することは以下のアッセイ系によって示すことができる。
【０１３３】
インビトロ分析
細胞培養におけるＨＩＶ感染
Ｐａｕｓｗｅｌｓら（Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｖｉｒｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  １９８８，２０，３０９−３２１参照）による方法に従い、これに変更を加えてＨＩＶ試験を行う。
【０１３４】
初代ヒト血液リンパ球（ＰＢＬ）を、フィコール・ハイパックを使用して濃縮し、２０％ウシ胎児血清を含むＲＰＭＩ１６４０培地中で、フィトヘマグルチニン（９０μｇ／ｍＬ）およびインターロイキン２（４０Ｕ／ｍＬ）で刺激する。感染性ＨＩＶに感染させるため、ＰＢＬをペレットにし、次いでこの細胞ペレットを、適切に希釈したＨＩＶウイルス吸着溶液１ｍＬに懸濁し、３７℃で１時間インキュベートする（ペレット感染）。次いで、吸着されなかったウイルスを遠心分離によって除去し、適切に希釈された供試物質を含むテストプレート（例えば、９６ウェルマイクロタイタープレート）に感染細胞を移す。
【０１３５】
あるいは、正常ヒト血液リンパ球の代わりに、例えばＨＩＶ感受性の永久細胞であるＨ９細胞（ＡＴＣＣまたはＮＩＡＩＤ、米国）を使用して、本発明の化合物の抗ウイルス効果を評価する。２％および／または２０％ウシ胎児血清を含むＲＰＭＩ１６４０培地中で、感染させたＨ９細胞を増殖させて試験に用いる。
【０１３６】
ウイルス吸着溶液を遠心分離し、１ｍＬあたり１×１０５細胞になるように感染細胞のペレットを増殖培地に懸濁する。上記のように感染させた細胞を約１×１０４細胞／ウェルになるように、９６ウェルマイクロタイタープレートのウェルにピペットで添加する（ペレット感染）。あるいは、マイクロタイタープレートに供試物質の希釈液を準備し、細胞を加えてから、別途ＨＩＶをピペットで添加する（上清感染）。
【０１３７】
マイクロタイタープレートの縦の第１列は、感染させなかったこと以外は上記と全く同様に処理した非感染細胞と増殖培地のみを含む（細胞コントロール）。マイクロタイタープレートの縦の第２列は、増殖培地中にＨＩＶ感染細胞（ウイルスコントロール）のみを含む。他のウェルは種々の濃度の本発明の化合物を含み、マイクロタイタープレートの縦の第３列のウェルから、供試物質が２倍ずつ段階的に２１０倍まで希釈されている。
【０１３８】
あるいは、上清感染により感染させる（上記参照）。すなわち、細胞を９６ウェルプレートに播種してから、ＨＩＶ５０μＬを加える。
【０１３９】
ＨＩＶに特有の合胞体が非処理のウイルスコントロールで形成されるまで（感染後３日目から６日目）、準備したプレートを３７℃でインキュベートし、顕微鏡観察、ｐ２４  ＥＬＩＳＡ法（Ｖｉｒｏｎｏｓｔｉｋａ、ビオメリュー社、オランダ）、またはアラマーブルー指示色素を使用した光度測定もしくは蛍光測定により評価する。上記の試験条件において、非処理の細胞コントロールでは合胞体が全く確認されないのに対し、非処理のウイルスコントロールでは約２０〜１００個の合胞体が確認される。同様に、ＥＬＩＳＡ試験では、細胞コントロールは０．１未満の値を示し、ウイルスコントロールは０．１〜２．９の値を示す。アラマーブルーで処理した細胞の光度測定による評価では、ウイルスコントロールは０．１〜３の吸光度を示すのに対し、同波長において、細胞コントロールは０．１未満の吸光度を示す。
【０１４０】
ＩＣ５０値は、ウイルスにより誘発された合胞体の５０％（約２０〜１００個の合胞体）が、本発明の化合物を用いた処理によって抑制されたときの供試物質の濃度として求める。カットオフ値は、ＥＬＩＳＡ試験、およびアラマーブルーを使用した光度測定または蛍光測定のそれぞれに応じて設定する。抗ウイルス効果の測定に加えて、処理した細胞における、細胞毒性の変化、細胞増殖抑制性の変化、または細胞学的変化、および溶解性についても顕微鏡下で調べる。活性濃度範囲において細胞を変化させる細胞毒性を示した活性化合物については、抗ウイルス活性の評価は行わない。
【０１４１】
本発明の化合物が、ＨＩＶ感染細胞をウイルス誘発性細胞破壊から保護することが分かる。表８に実験データを示す。
【０１４２】
【表８】
0005465233.tif 000063
【０１４３】
Ｃ）医薬組成物としての例示的な実施形態
本発明の化合物は以下の方法で医薬製剤とすることができる。
【０１４４】
錠剤：
組成：
実施例１の化合物１００ｍｇ、ラクトース（一水和物）５０ｍｇ、コーンスターチ（天然）５０ｍｇ、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ２５）（ＢＡＳＦ社、ドイツ、ルートウィックスハーフェン）１０ｍｇおよびステアリン酸マグネシウム２ｍｇ。
錠剤重量２１２ｍｇ、直径８ｍｍ、曲率半径１２ｍｍ。
製造：
本発明の化合物、ラクトースおよびコーンスターチからなる混合物を、５％（ｗ／ｗ）ＰＶＰ水溶液と混和して顆粒状にする。この顆粒を乾燥して、ステアリン酸マグネシウムと５分間混合する。得られた混合物を慣用のタブレット成形機を用いて圧縮成形する（錠剤の形態に関しては上記参照）。圧縮する際の圧縮力は、指針によれば１５ｋＮである。
【０１４５】
経口投与用液剤：
組成：
実施例１の化合物５００ｍｇ、ポリソルベート２．５ｇおよびポリエチレングリコール４００ ９７ｇ。２０ｇの経口液剤は、本発明の化合物に換算すると単回用量で１００ｍｇに相当する。
製造：
本発明の化合物を、ポリエチレングリコールとポリソルベートとの混合溶媒に加えて、撹拌しながら懸濁する。本発明の化合物が完全に溶解するまで、撹拌を続ける。
【０１４６】
静脈内投与用液剤：
本発明の化合物を、飽和溶解度以下の濃度になるように、生理学的に許容される溶媒（例えば等張生理食塩水、５％グルコース溶液、３０％ＰＥＧ ４００溶液など）に溶解する。この溶液を濾過滅菌して、発熱性物質を含まない滅菌済みの注射容器に分注する。