(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）変異株であって、
前記ＨＳＶ変異株が、ＨＳＶ−１変異株であり、
当該ＨＳＶ−１変異株のＨＳＶ−１の糖タンパク質Ｅをコードする遺伝子内にただ１つの不活性化変異を含み、
前記ＨＳＶ−１の糖タンパク質Ｅは、配列番号２のアミノ酸配列を有し、
前記不活性化変異は、前記ＨＳＶ−１糖タンパク質Ｅの前記アミノ酸配列の１２４〜５０８番目のアミノ酸をコードする、Ｕｓ８遺伝子の欠失変異であり、
前記ＨＳＶ変異株は、順方向及び逆方向の神経拡散の能力を欠損していることを特徴とするＨＳＶ変異株。
【請求項２】
対象における単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）感染症の治療のための薬剤を製造するための、請求項１に記載のＨＳＶ変異株の使用。
【請求項３】
対象における単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）感染症の発生率を減少させる又は再発までの潜伏期間を長くするための薬剤を製造するための、請求項１に記載のＨＳＶ変異株の使用。
【請求項４】
対象における単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）感染症の発症を減少させる、症状を改善する、二次的症状を改善するための薬剤を製造するための、請求項１に記載のＨＳＶ変異株の使用。
【請求項５】
請求項２乃至４のいずれかに記載のＨＳＶ変異株の使用であって、
前記ＨＳＶ感染症が、ＨＳＶ−１感染症であることを特徴とする使用。
【請求項６】
請求項２乃至５のいずれかに記載のＨＳＶ変異株の使用であって、
前記変異株の神経ウイルス拡散が阻害されていることを特徴とする使用。
【請求項７】
請求項２乃至６のいずれかに記載のＨＳＶ変異株の使用であって、
前記変異株が、前記対象の皮膚組織内での複製能を有することを特徴とする使用。
【請求項８】
請求項２乃至７のいずれかに記載のＨＳＶ変異株の使用であって、
前記ＨＳＶ感染症が、ＨＳＶ生殖器感染症、ＨＳＶ脳炎、眼疾患、またはＨＳＶ口唇炎であることを特徴とする使用。
【請求項９】
請求項２乃至８のいずれかに記載のＨＳＶ変異株の使用であって、
前記対象が、ＨＳＶに感染している又はＨＳＶに感染する危険性があることを特徴とする使用。
【請求項１０】
請求項２乃至９のいずれかに記載のＨＳＶ変異株の使用であって、
前記対象が、新生児、または高齢者であることを特徴とする使用。
【請求項１１】
請求項２乃至１０のいずれかに記載のＨＳＶ変異株の使用であって、
前記対象が、免疫不全者であることを特徴とする使用。
【請求項１２】
請求項２乃至１１のいずれかに記載のＨＳＶ変異株の使用であって、
前記薬剤が、前記対象における抗ＨＳＶ免疫応答を誘導することにより、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）感染症を、治療する、発症を減少させる、症状を改善する、二次的症状を改善する、発生率を減少させる又は再発までの潜伏期間を長くすることを特徴とする使用。
【請求項１３】
請求項１２に記載のＨＳＶ変異株の使用であって、
前記抗ＨＳＶ免疫応答が、抗ＨＳＶ中和抗体応答であることを特徴とする使用。
【請求項１４】
請求項２乃至１３のいずれかに記載のＨＳＶ変異株の使用であって、
前記薬剤が、表皮注射、筋肉内注射、皮下注射又は呼吸器官内粘膜注射による投与のための薬剤であることを特徴とする使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（連邦政府による資金提供を受けた研究開発の記載）
本明細書中に記載の発明は、その全体又は一部が、米国国立衛生研究所から助成されたものである（助成番号Ｒ０１ＡＩ３３０６３）。米国政府は、本発明において一定の権利を有する。
【０００２】
（技術分野）
本発明は、単純ヘルペスウイルス（Herpes Simplex Virus：ＨＳＶ）感染症及びそれに関連する疾患及び症状に対するワクチン接種を対象に行い、それによって、対象におけるＨＳＶ感染、神経ウイルス拡散、帯状疱疹様病変の形成、ヘルペス性眼疾患、ヘルペス媒介性脳炎及び生殖器潰瘍性疾患を、阻害する、抑止する、発生率を減少させる及び抑制する方法であって、ｇＥ、ｇＩ、Ｕｓ９又は他のタンパク質をエンコードしている遺伝子内に不活性化変異を含みかつ随意的にｇＤをエンコードしている遺伝子内に別の不活性化変異を含むＨＳＶ変異株を含有する組成物を、前記対象に接触させるステップを含む方法を提供する。
【背景技術】
【０００３】
単純ヘルペスウイルス（Herpes Simplex Virus：ＨＳＶ）１型又は２型は、典型的には親密な接触によって感染し、口腔及び生殖器の病変を引き起こす。ＨＳＶ―１は一般的に口腔潰瘍を引き起こし、ＨＳＶ２型は一般的に生殖器潰瘍を引き起こすが、その逆も起こり得る。ＨＳＶ−１又はＨＳＶ−２に感染した人物は、必ずウイルスの保菌者となる。最初の感染後、病変は治癒し、ＨＳＶは感覚神経内で休眠・潜伏状態で存在する。一定期間毎に、ＨＳＶは潜伏感染した神経から再活性化し、皮膚表面上に新たな潰瘍を形成する。新生児及び免疫不全者は特に、ＨＳＶ感染に対して脆弱であり、しばしば播種性感染症にかかり、致命的な結果となる。失明の主要原因であるＨＳＶ眼球感染症は、前記ＨＳＶの別の深刻な結果である。さらに、ＨＳＶ生殖器感染症は、ＨＩＶ感染率を２倍増大させる。そのため、ＨＳＶ感染を予防するためのワクチンが至急求められている。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００４】
本発明は、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）感染症及びそれに関連する疾患及び症状に対するワクチン接種を対象に行い、それによって、ＨＳＶ感染症、神経ウイルス拡散、帯状疱疹様損傷の形成、ヘルペス性眼疾患、ヘルペス媒介性脳炎及び生殖器潰瘍性疾患を、阻害する、抑止する、発生率を減少させる及び抑制する方法であって、ｇＥ、ｇＩ、Ｕｓ９又は他のタンパク質をエンコードしている遺伝子内に不活性化変異を含むＨＳＶの変異株を、前記対象に接触させるステップを含む方法を提供する。
【０００５】
他の実施形態では、本発明は、対象における単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）感染症を、治療する、発症を減少させる、症状を改善する、二次的症状を改善する、発生率を減少させる又は再発までの潜伏期間を長くする方法であって、Ｕｓ８遺伝子内に不活性化変異を含むＨＳＶワクチン変異株を含有する組成物を、前記対象に接触させるステップを含む方法を提供する。ある実施形態では、前記ＨＳＶワクチン変異株はＨＳＶ−１変異株である。一方、他の実施形態では、前記ＨＳＶワクチン変異株はＨＳＶ−２変異株である。ある実施形態では、前記ＨＳＶ感染症はＨＳＶ−１感染症である。一方、他の実施形態では、前記ＨＳＶ感染症はＨＳＶ−２感染症である。
【０００６】
ある実施形態では、前記変異株は、前記対象の皮膚組織内で複製可能である。
ある実施形態では、前記変異株の神経ウイルスの拡散が阻害される。
【０００７】
前記ＨＳＶワクチン変異株は、ある実施形態ではＵｓ７遺伝子内に、他の実施形態ではＵｓ９遺伝子内に、別の実施形態ではＵｓ７遺伝子及びＵｓ９遺伝子の両方の遺伝子内に、追加的な不活性化変異をさらに含む。ある実施形態では、前記ＨＳＶワクチン変異株は、ウイルス侵入に不必要な膜タンパク質をエンコードしている遺伝子内に、追加的な不活性化変異をさらに含む。ウイルス侵入に不必要な膜タンパク質をエンコードしている前記遺伝子は、ある実施形態ではＵｓ５遺伝子であり、他の実施形態ではＵｓ４遺伝子であり、別の実施形態ではＵＬ５３遺伝子であり、別の実施形態ではＵＬ１０遺伝子であり、別の実施形態ではＵｓ５遺伝子、Ｕｓ４遺伝子、ＵＬ５３遺伝子及びＵＬ１０遺伝子のいずれかの組み合わせである。ある実施形態では、前記ＨＳＶワクチン変異株は、ウイルス侵入に必要な膜タンパク質をエンコードしている遺伝子（ある実施形態ではＵｓ６）に、追加的な不活性化変異をさらに含む。
【０００８】
ある実施形態では、前記ＨＳＶ感染症は、ＨＳＶ生殖器感染症である。他の実施形態では、前記ＨＳＶ感染症は、ＨＳＶ脳炎である。他の実施形態では、前記ＨＳＶ感染症は、眼疾患である。他の実施形態では、前記ＨＳＶ感染症は、ＨＳＶ口唇炎である。他の実施形態では、前記ＨＳＶ感染症は、上記のいずれかの組み合わせである。
【０００９】
ある実施形態では、前記対象は、ＨＳＶに感染している。また、他の実施形態では、前記対象は、ＨＳＶに感染する危険性がある。他の実施形態では、前記対象は、新生児である。他の実施形態では、前記対象は、免疫不全である。他の実施形態では、前記対象は、高齢者である。他の実施形態では、前記対象は、免疫不全の新生児又は免疫不全の高齢者である。
【００１０】
ある実施形態では、本発明に係る方法は、前記対象における抗ＨＳＶ免疫応答を誘導する。ある実施形態では、前記抗ＨＳＶ免疫応答は、抗ＨＳＶ中和抗体応答である。
【００１１】
ある実施形態では、前記接触させるステップは、表皮注射を含む。他の実施形態では、前記接触させるステップは、筋肉内注射を含む。他の実施形態では、前記接触させるステップは、皮下注射を含む。他の実施形態では、前記接触させるステップは、呼吸器官内粘膜注射を含む。
【００１２】
ある実施形態では、本発明は、ｇＥタンパク質をエンコードしている遺伝子内に含まれる第１の不活性化変異と、第２の不活性化変異とを含む単離されたＨＳＶ−１変異株を提供する。他の実施形態では、ｇＥタンパク質をエンコードしている前記遺伝子は、Ｕｓ８遺伝子である。他の実施形態では、前記第２の不活性化変異は、Ｕｓ７遺伝子に含まれる。他の実施形態では、前記第２の不活性化変異は、Ｕｓ９遺伝子に含まれる。他の実施形態では、前記第２の不活性化変異は、当該技術分野で既知のその他のＨＳＶ−１遺伝子に含まれる。他の実施形態では、前記単離されたＨＳＶ−１変異株は、ｇＥタンパク質、ｇＩタンパク質及びＵｓ９タンパク質をエンコードしている各遺伝子内に不活性化変異を含む。
【００１３】
他の実施形態では、本発明は、ｇＥタンパク質をエンコードしている遺伝子に含まれる第１の不活性化変異と、１つ以上の追加的な不活性化変異とを含む単離されたＨＳＶ−２変異株を提供する。ある実施形態では、ｇＥタンパク質をエンコードしている前記遺伝子は、Ｕｓ８遺伝子である。ある実施形態では、前記追加的な不活性化変異は、ウイルス侵入に不必要な膜タンパク質に含まれる。ある実施形態では、前記追加的な不活性化変異は、Ｕｓ７遺伝子に含まれる。ある実施形態では、前記追加的な不活性化変異は、Ｕｓ９遺伝子に含まれる。ある実施形態では、前記追加的な不活性化変異は、Ｕｓ５遺伝子、Ｕｓ４遺伝子、ＵＬ５３遺伝子、ＵＬ１０遺伝子又はその組み合わせに含まれる。ある実施形態では、前記追加的な不活性化変異は、ウイルス侵入に必要な膜タンパク質に含まれる。他の実施形態では、前記追加的な不活性化変異は、Ｕｓ６遺伝子に含まれる。他の実施形態では、前記追加的な不活性化変異は、当該技術分野で既知のその他のＨＳＶ−２遺伝子に含まれる。他の実施形態では、前記単離されたＨＳＶ−２変異株は、ｇＥタンパク質、ｇＩタンパク質及びＵｓ９タンパク質をエンコードしている各遺伝子内に不活性化変異を含む。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】神経内でＨＳＶが拡散する様子を示す図である。
【図２】マウスの横腹の典型的なＨＳＶ−１感染症を示す図である。
【図３】マウス（ワクチン接種モデル）の横腹における皮膚疾患のスペクトラムを示す図である。
【図４】ＨＳＶ−１（ｇＥヌル）ワクチン又は毒性ＨＳＶ−１（レスキューｇＥヌル）に感染後のマウス生存率を示すグラフである。
【図５】ＨＳＶ−１（ｇＥヌル）ワクチン又は毒性ＨＳＶ−１（レスキューｇＥヌル）に感染後の一次皮膚疾患を示すグラフである。
【図６】ＨＳＶ−１（ｇＥヌル）ワクチン又は毒性ＨＳＶ−１（レスキューｇＥヌル）に感染後の二次（帯状疱疹様）皮膚疾患を示すグラフである。
【図７】ワクチン又は毒性ＨＳＶ−１に感染後の、皮膚のウイルス力価を示すグラフである。
【図８】ワクチン又は野生型ＨＳＶ−１に感染後の、皮膚のＨＳＶ検出を示す図である。
【図９】ワクチン又は毒性ＨＳＶ−１に感染後の、後根神経節（dorsal root ganglion：ＤＲＧ）のウイルス力価を示すグラフである。
【図１０】１０５ｐｆｕのＷＴのＨＳＶ−１（ＮＳ）でチャレンジさせた後の、ワクチン接種又はモック（偽）ワクチン接種したマウスにおける生存率を示すグラフである。
【図１１】１０５ｐｆｕのＷＴのＨＳＶ−１（ＮＳ）でチャレンジさせたワクチン接種マウスにおける一次皮膚疾患のスコアを示すグラフである。
【図１２】１０５ｐｆｕのＷＴのＨＳＶ−１（ＮＳ）でチャレンジさせたワクチン接種マウスの皮膚におけるウイルス力価を示すグラフである。
【図１３】１０５ｐｆｕのＷＴのＨＳＶ−１（ＮＳ）でチャレンジさせたワクチン接種又は偽ワクチン接種したマウスにおける皮膚のウイルス力価を示す図である。
【図１４】１０５ｐｆｕのＷＴのＨＳＶ−１でチャレンジさせたワクチン接種マウスにおける二次（帯状疱疹様）皮膚疾患を示すグラフである。
【図１５】１０５ｐｆｕのＷＴのＨＳＶ−１でチャレンジさせたワクチン接種又は偽ワクチン接種したマウスにおける神経節のウイルス力価を示すグラフである。
【図１６】ワクチンが神経節を潜伏感染から保護することを示す表である。
【図１７】５×１０５ｐｆｕのＨＳＶ−１ΔｇＥをワクチン接種したマウスにおける、１０５ｐｆｕのＨＳＶ−２（２．１２）の横腹におけるチャレンジに対する交差防御を示すグラフである。「モックワクチン」は、モック（偽）ワクチン接種を意味する。「ＤｇＥワクチン」は、５×１０５ｐｆｕのＨＳＶ−１ΔｇＥのワクチン接種を意味する。エラーバーは、標準誤差（standard error of the mean：ＳＥＭ）を表す。
【図１８】５×１０５ｐｆｕのＨＳＶ−１ΔｇＥをワクチン接種したマウスにおける、横腹を５×１０５ｐｆｕのＨＳＶ−１（ＫＯＳ）でチャレンジさせた後の潜伏に対する防御を示すグラフである。
【図１９Ａ】５×１０５ｐｆｕのＨＳＶ−１ΔｇＥをワクチン接種したマウスにおける、膣を１０５ｐｆｕのＨＳＶ−１（ＮＳ）でチャレンジさせた後の、死亡、可視的な疾患及び広範囲のウイルス複製に対する防御を示すグラフである。上側の図は生存曲線を示すグラフであり、下側の図は、膣スワブにより評価したウイルス力価を示すグラフである。エラーバーは、標準誤差（ＳＥＭ）を表す。
【図１９Ｂ】チャレンジ後８日目のマウスの写真である。
【図２０Ａ】異なる経路（「Ep. Scar」は表皮乱切を意味し、「SubQ」は皮下を意味する）により５×１０５ｐｆｕのＨＳＶ−１ΔｇＥをワクチン接種したマウスにおける、横腹での１０５ｐｆｕのＨＳＶ−１（ＮＳ）によるチャレンジに対する防御を示すグラフである。「ＤｇＥワクチン」は、ＨＳＶ−１ΔｇＥのワクチン接種を意味する。エラーバーは、標準誤差（ＳＥＭ）を表す。この図は、生存率を示すグラフである。
【図２０Ｂ】異なる経路（「Ep. Scar」は表皮乱切を意味し、「SubQ」は皮下を意味する）により５×１０５ｐｆｕのＨＳＶ−１ΔｇＥをワクチン接種したマウスにおける、横腹での１０５ｐｆｕのＨＳＶ−１（ＮＳ）によるチャレンジに対する防御を示すグラフである。「ＤｇＥワクチン」は、ＨＳＶ−１ΔｇＥのワクチン接種を意味する。この図は、接種部位疾患を示すグラフである。
【図２０Ｃ】異なる経路（「Ep. Scar」は表皮乱切を意味し、「SubQ」は皮下を意味する）により５×１０５ｐｆｕのＨＳＶ−１ΔｇＥをワクチン接種したマウスにおける、横腹での１０５ｐｆｕのＨＳＶ−１（ＮＳ）によるチャレンジに対する防御を示すグラフである。「ＤｇＥワクチン」は、ＨＳＶ−１ΔｇＥのワクチン接種を意味する。この図は、帯状疱疹様疾患を示すグラフである。
【図２１】異なる経路により５×１０５ｐｆｕのＨＳＶ−１ΔｇＥをワクチン接種したマウスにおける抗体反応中和の誘導を示すグラフである。示されたパーセンテージは、偽ワクチン接種されたマウスからの血清と比較したものである。ｎ＝３（Ep. ScarとSubQ）、ｎ＝１（ＩＭ）、分析は２回行った。エラーバーは、標準誤差（ＳＥＭ）を表す。
【図２２Ａ】５×１０５ｐｆｕのＨＳＶ−１ΔｇＥをワクチン接種したマウスにおける、１０５ｐｆｕのＨＳＶ−１（ＮＳ、Ｆ又は１７）をチャレンジした横腹に対する防御を示すグラフである。エラーバーは、標準誤差（ＳＥＭ）を表す。この図は、生存率を示すグラフである。
【図２２Ｂ】５×１０５ｐｆｕのＨＳＶ−１ΔｇＥをワクチン接種したマウスにおける、１０５ｐｆｕのＨＳＶ−１（ＮＳ、Ｆ又は１７）をチャレンジした横腹に対する防御を示すグラフである。この図は、接種部位疾患を示すグラフである。
【図２２Ｃ】５×１０５ｐｆｕのＨＳＶ−１ΔｇＥをワクチン接種したマウスにおける、１０５ｐｆｕのＨＳＶ−１（ＮＳ、Ｆ又は１７）をチャレンジした横腹に対する防御を示すグラフである。この図は、帯状疱疹様疾患を示すグラフである。
【図２３Ａ】５×１０５ｐｆｕのＨＳＶ−１ΔｇＥをワクチン接種されたマウスにおける、１０５〜７ｐｆｕのＨＳＶ−１（ＮＳ）をチャレンジした横腹に対する防御を示すグラフである。エラーバーは、標準誤差（ＳＥＭ）を表す。この図は、生存率を示すグラフである。
【図２３Ｂ】５×１０５ｐｆｕのＨＳＶ−１ΔｇＥをワクチン接種されたマウスにおける、１０５〜７ｐｆｕのＨＳＶ−１（ＮＳ）をチャレンジした横腹に対する防御を示すグラフである。エラーバーは、標準誤差（ＳＥＭ）を表す。この図は、接種部位疾患を示すグラフである。
【図２３Ｃ】５×１０５ｐｆｕのＨＳＶ−１ΔｇＥをワクチン接種されたマウスにおける、１０５〜７ｐｆｕのＨＳＶ−１（ＮＳ）をチャレンジした横腹に対する防御を示すグラフである。エラーバーは、標準誤差（ＳＥＭ）を表す。この図は、帯状疱疹様疾患を示すグラフである。
【図２４Ａ１】ＨＳＶ−１（ＮＳ）ｇＥ（配列番号２）とＨＳＶ−２（ＨＧ５２）ｇＥ（配列番号６）とを整列させた状態を示す図である。
【図２４Ａ２】図２４Ａ１の続きである。
【図２４Ｂ】ｇＥ−２欠失を生成するためのストラテジーを示す図である。
【図２５】Ｕｓ領域のさらなる欠失を示す図であり、ＨＳＶ−２ゲノム（全ゲノムサイズは１５５ｋｂ）の前記Ｕｓ部分内の４．５ｋｂ領域の概略図である。前記領域は、ＨＳＶ−１ΔｇＥワクチン株内の欠失させられた領域に相当し、さらなる欠失が提案された領域が示されている。
【図２６Ａ】感染した細胞抽出物内でのｇＤ（Ｕｓ６）及びｇＩ（Ｕｓ７）を検出するためのウエスタンブロット法を示す図である。
【図２６Ｂ】インビトロでのＫＯＳ−ｇＤＡ３Ｃウイルスの安定性を示す図である。ＫＯＳ又はＫＯＳ−ｇＤＡ３ＣのＰＣＲ増幅されたｇＤ遺伝子断片のＳｓｐｌ消化を示す。
【図２６Ｃ】インビトロでのＫＯＳ−ｇＤＡ３Ｃ変異ウイルスの安定性を示す図である。ＫＯＳ又はＫＯＳ−ｇＤＡ３Ｃ感染マウスのＤＲＧから得られたＰＣＲ増幅されたｇＤ遺伝子断片は、Ｓｓｐｌにより切断されている又は未切断のままである。
【図２７】（Ａ）Ｖｅｒｏ、（Ｂ）Ｂ７８−Ｈ１、（Ｃ）Ａ１０又は（Ｄ）Ｃ１０細胞へのＫＯＳ、ｒＫＯＳ−ｇＤＡ３Ｃ及びＫＯＳ−ｇＤＡ３Ｃウイルスのエントリーを示す図である。結果は、それぞれ３回ずつ行った３つの異なる感染の平均＋ＳＥを示す。
【図２８】Ａ１０（Ａ、Ｃ）又はＣ１０（Ｂ、Ｄ）細胞において行われた、ＫＯＳ、ｒＫＯＳ−ｇＤＡ３Ｃ及びＫＯＳ−ｇＤＡ３Ｃについての一段階（Ａ、Ｂ）及び多段階（Ｃ、Ｄ）の成長カーブを示すグラフである。結果は、３つの異なる感染の平均＋ＳＥを示す。
【図２９Ａ】マウスの横腹モデルにおける疾患を示すグラフである。５×１０５ｐｆｕのＫＯＳ、ｒＫＯＳ−ｇＤＡ３Ｃ又はＫＯＳ−ｇＤＡ３Ｃを接種されたマウスにおける接種部位の疾患スコアを示す。エラーバーはＳＥを表す。
【図２９Ｂ】マウスの横腹モデルにおける疾患を示すグラフである。５×１０５ｐｆｕのＫＯＳ、ｒＫＯＳ−ｇＤＡ３Ｃ及びＫＯＳ−ｇＤＡ３Ｃを接種されたマウスにおける帯状疱疹部位の疾患スコアを示す。エラーバーはＳＥを表す。
【図２９Ｃ】ＫＯＳ、ｒＫＯＳ−ｇＤＡ３Ｃ及びＫＯＳ−ｇＤＡ３Ｃに感染後１０目のマウスの横腹の写真である。
【図３０】ＤＲＧ内のウイルス力価及びゲノムコピー数を示すグラフである。ＤＲＧは、ＫＯＳ、ｒＫＯＳ−ｇＤＡ３Ｃ及びＫＯＳ−ｇＤＡ３Ｃに感染したマウスから切開して取り出し、力価（Ａ）又はウイルスゲノムコピー数（Ｂ）について分析した。結果は、平均＋ＳＥを表す。
【図３１】ＫＯＳ−ｇＤＡ３Ｃの感染前の、ＷＴのＨＳＶ−１によるチャレンジに対する防御を示すグラフである。結果は、感染後３〜７日後の接種部位（Ａ）及び帯状疱疹部位（Ｂ）における平均疾患スコア＋ＳＥを示す。ＤＲＧウイルス力価（Ｃ）及びゲノムコピー数（Ｄ）を、ＮＳによるチャレンジ後の５日目に測定した。結果は、平均＋ＳＥを表す。
【図３２】マウスにおけるＫＯＳ−ｇＤＡ３Ｃ感染のモデルを示す図である。上皮細胞（Ｅ）に感染したＫＯＳは、接種部位で疾患を引き起こす。ウイルスは、ＤＲＧ内のニューロン（Ｎ）に拡散し、複製し、隣接するニューロンに拡散した後、皮膚内の上皮細胞に戻って帯状疱疹様疾患を引き起こす。ＫＯＳ−ｇＤＡ３Ｃは、侵入能力が低く、感染する上皮細胞がより少ない。その結果、ＤＲＧ内で感染するニューロンがより少なくなる。侵入能力の欠陥により、ＤＲＧ内の隣接するニューロンへの感染度が低下し、その結果として、帯状疱疹様疾患が減少する。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
本発明は、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）感染症及びそれに関連する疾患及び症状に対するワクチン接種を対象に行い、それによって、ＨＳＶ感染症、神経ウイルス拡散、帯状疱疹様損傷の形成、ヘルペス性眼疾患、ヘルペス媒介性脳炎及び生殖器潰瘍性疾患を、阻害する、抑止する、発生率を減少させる及び抑制する方法であって、ｇＥ、ｇＩ、Ｕｓ９又は他のタンパク質をエンコードしている遺伝子内に不活性化変異を含むＨＳＶの変異株を、前記対象に接触させるステップを含む方法を提供する。他の実施形態では、前記ＨＳＶの前記変異株は、ｇＥ（ある実施形態ではｇＥヌル変異体）をエンコードしている遺伝子内に不活性化変異を含む。他の実施形態では、本発明は、ｇＥ（ある実施形態ではｇＥヌル変異体）をエンコードしている遺伝子内に不活性化変異を含むＨＳＶ変異株を含有する医薬組成物を提供する。他の実施形態では、本発明は、ｇＥ、ｇｌ、Ｕｓ９、他のタンパク質又はその組み合わせをエンコードしている遺伝子内に不活性化変異を含むＨＳＶ変異株を含有する医薬組成物を提供する。
【００１６】
ある実施形態では、本発明は、ＨＳＶ感染症に対するワクチン接種を対象に行う方法であって、ｇＥタンパク質をエンコードしている遺伝子内に不活性化変異を含むＨＳＶ変異株を、前記対象に接触させるステップを含む方法を提供する。
【００１７】
他の実施形態では、本発明は、対象におけるＨＳＶ−１感染症を阻害する方法であって、ｇＥタンパク質をエンコードしているＵｓ８遺伝子内に不活性化変異を含むＨＳＶ変異株を、前記対象に接触させるステップを含む方法を提供する。
【００１８】
他の実施形態では、本発明は、対象におけるＨＳＶ−２感染症を阻害する方法であって、ｇＥタンパク質をエンコードしているＵｓ８遺伝子内に不活性化変異を含むＨＳＶ変異株を、前記対象に接触させるステップを含む方法を提供する。
【００１９】
他の実施形態では、本発明は、対象におけるＨＳＶの一次感染を阻害する方法であって、ｇＥタンパク質をエンコードしているＵｓ８遺伝子内に不活性化変異を含むＨＳＶ変異株を、前記対象に接触させるステップを含む方法を提供する。他の実施形態では、本発明は、対象におけるＨＳＶ−１の一次感染を阻害する方法であって、ｇＥタンパク質をエンコードしているＵｓ８遺伝子内に不活性化変異を含むＨＳＶ変異株を、前記対象に接触させるステップを含む方法を提供する。他の実施形態では、本発明は、対象におけるＨＳＶ−２の一次感染を阻害する方法であって、ｇＥタンパク質をエンコードしているＵｓ８遺伝子内に不活性化変異を含むＨＳＶ変異株を、前記対象に接触させるステップを含む方法を提供する。
【００２０】
「ＨＳＶ感染を阻害する」及び「ＨＳＶの一次感染を阻害する」という表現は、ある実施形態では、感染性ウイルスの力価を９０％減少させることを意味する。他の実施形態では、前記力価は、５０％減少させられる。他の実施形態では、前記力価は、５５％減少させられる。他の実施形態では、前記力価は、６０％減少させられる。他の実施形態では、前記力価は、６５％減少させられる。他の実施形態では、前記力価は、７０％減少させられる。他の実施形態では、前記力価は、７５％減少させられる。他の実施形態では、前記力価は、８０％減少させられる。他の実施形態では、前記力価は、８５％減少させられる。他の実施形態では、前記力価は、９２％減少させられる。他の実施形態では、前記力価は、９５％減少させられる。他の実施形態では、前記力価は、９６％減少させられる。他の実施形態では、前記力価は、９７％減少させられる。他の実施形態では、前記力価は、９９％減少させられる。他の実施形態では、前記力価は、９９％減少させられる。他の実施形態では、前記力価は、９９％を超えて減少させられる。
【００２１】
他の実施形態では、前記表現は、ウイルス複製の程度を９０％減少させることを意味する。他の実施形態では、前記ウイルス複製は、５０％減少させられる。他の実施形態では、前記ウイルス複製は、５５％減少させられる。他の実施形態では、前記ウイルス複製は、６０％減少させられる。他の実施形態では、前記ウイルス複製は、６５％減少させられる。他の実施形態では、前記ウイルス複製は、７０％減少させられる。他の実施形態では、前記ウイルス複製は、７５％減少させられる。他の実施形態では、前記ウイルス複製は、８０％減少させられる。他の実施形態では、前記ウイルス複製は、８５％減少させられる。他の実施形態では、前記ウイルス複製は、９２％減少させられる。他の実施形態では、前記ウイルス複製は、９５％減少させられる。他の実施形態では、前記ウイルス複製は、９６％減少させられる。他の実施形態では、前記ウイルス複製は、９７％減少させられる。他の実施形態では、前記ウイルス複製は、９９％減少させられる。他の実施形態では、前記ウイルス複製は、９９％減少させられる。他の実施形態では、前記ウイルス複製は、９９％を超えて減少させられる。
【００２２】
ＨＳＶ感染を測定する方法は当該技術分野では公知であり、ある実施形態では、皮膚病変及びウイルス媒介性疾患（例１及び４）の外観及び重傷度の測定を含む。他の実施形態では、ウイルス感染の測定方法は、例えば、「Burgos JS et al. (Herpes Simplex Virus type 1 infection via the bloodstream with apolipoprotein E dependence in the gonads is influenced by gender. J Virol. 2005 Feb;79(3): 1605-12)」及び「Parr MB et al. (Intravaginal administration of Herpes Simplex Virus type 2 to mice leads to infection of several neural and extraneural sites. J Neurovirol. 2003 Dec;9(6):594-602)」に記載されている。ＨＳＶ複製及びＨＳＶ感染の程度を測定する他の方法は、例えば、「Lambiase A et al. (Topical treatment with nerve growth factor in an animal model of herpetic keratitis. Graefes Arch Clin Exp Ophthalmol. 2007 May 4)」、「Ramaswamy M et al. (Interactions and management issues in HSV and HIV coinfection. Expert Rev Anti Infect Ther. 2007 Apr;5(2):231-43)」及び「Jiang C et al. (Mutations that decrease DNA binding of the processivity factor of the Herpes Simplex Virus DNA polymerase reduce  viral yield, alter the kinetics of viral DNA replication, and decrease the fidelity of DNA replication. J Virol. 2007 Apr;81(7):3495-502)」に詳しく記載されている。
【００２３】
本明細書中に記載したように、本発明のｇＥヌルＨＳＶ株のワクチン接種は、その後の毒性ＨＳＶ感染から対象を防御する。他の実施形態では、前記ワクチン接種は、毒性ＨＳＶによって引き起こされる疾患から対象を防御する。他の実施形態では、前記ワクチン株自体は、重大な疾患（ある実施形態ではヘルペス、例１又は４）を引き起こさない。他の実施形態では、前記ワクチン株自体は、重大な病状をもたらさない。
【００２４】
ｇＥ内の「不活性化変異」は、ある実施形態では、ＨＳＶの神経拡散を抑制する変異体である。他の実施形態では、前記用語は、ＨＳＶの細胞間拡散を抑制する変異である。他の実施形態では、前記用語は、ＨＳＶの軸索に沿った拡散を抑制する変異である。他の実施形態では、前記拡散は、逆方向である（定義は後述）。他の実施形態では、前記拡散は、順方向である（定義は後述）。他の実施形態では、逆方向及び順方向の両方向の拡散が抑制される。
【００２５】
ある実施形態では、神経拡散は、９０％減少させられる。他の実施形態では、神経拡散は、６０％減少させられる。他の実施形態では、前記減少は、６５％である。他の実施形態では、前記減少は、７０％である。他の実施形態では、前記減少は、７５％である。他の実施形態では、前記減少は、８０％である。他の実施形態では、前記減少は、８５％である。他の実施形態では、前記減少は、９５％である。他の実施形態では、前記減少は、９６％である。他の実施形態では、前記減少は、９７％である。他の実施形態では、前記減少は、９８％である。他の実施形態では、前記減少は、９９％である。他の実施形態では、前記減少は、９９％を超える。
【００２６】
ある実施形態では、前記用語は、ｇＥタンパク質におけるホスト反ＨＳＶ抗体を隔離する能力を抑制することを意味する。他の実施形態では、ｇＥによる抗ＨＳＶ抗体の隔離は、９０％減少させられる。他の実施形態では、前記隔離は、５０％減少させられる。他の実施形態では、前記減少は、６５％である。他の実施形態では、前記減少は、７０％である。他の実施形態では、前記減少は、７５％である。他の実施形態では、前記減少は、８０％である。他の実施形態では、前記減少は、８５％である。他の実施形態では、前記減少は、９５％である。他の実施形態では、前記減少は、９６％である。他の実施形態では、前記減少は、９７％である。他の実施形態では、前記減少は、９８％である。他の実施形態では、前記減少は、９９％である。他の実施形態では、前記減少は９９％を超える。
【００２７】
ある実施形態では、前記用語は、ｇＥタンパク質におけるＩｇＧモノマーと結合する能力を抑制することを意味する。他の実施形態では、ｇＥによるＩｇＧモノマーとの結合は、９０％減少させられる。他の実施形態では、前記結合は、５０％減少させられる。他の実施形態では、前記減少は、６５％である。他の実施形態では、前記減少は、７０％である。他の実施形態では、前記減少は、７５％である。他の実施形態では、前記減少は、８０％である。他の実施形態では、前記減少は、８５％である。他の実施形態では、前記減少は、９５％である。他の実施形態では、前記減少は、９６％である。他の実施形態では、前記減少は、９７％である。他の実施形態では、前記減少は、９８％である。他の実施形態では、前記減少は、９９％である。他の実施形態では、前記減少は９９％を超える。
【００２８】
ある実施形態では、前記用語は、ｇＥタンパク質におけるＩｇＧ複合体と結合する能力を抑制することを意味する。他の実施形態では、ｇＥによるＩｇＧ複合体との結合は、９０％減少させられる。他の実施形態では、前記結合は、５０％減少させられる。他の実施形態では、前記減少は、６５％である。他の実施形態では、前記減少は、７０％である。他の実施形態では、前記減少は、７５％である。他の実施形態では、前記減少は、８０％である。他の実施形態では、前記減少は、８５％である。他の実施形態では、前記減少は、９５％である。他の実施形態では、前記減少は、９６％である。他の実施形態では、前記減少は、９７％である。他の実施形態では、前記減少は、９８％である。他の実施形態では、前記減少は、９９％である。他の実施形態では、前記減少は、９９％を超える。
【００２９】
ある実施形態では、ｇＥ内の不活性化変異は、アミノ酸１２４〜５０８の欠失を含む。他の実施形態では、ｇＥ内の不活性化変異は、アミノ酸１１０〜５００の欠失を含む。他の実施形態では、ｇＥ内の不活性化変異は、アミノ酸１〜５５２の欠失を含む。他の実施形態では、ｇＥ内の不活性化変異は、アミノ酸１〜５０の欠失を含む。他の実施形態では、ｇＥ内の不活性化変異は、アミノ酸１〜１００の欠失を含む。他の実施形態では、ｇＥ内の不活性化変異は、アミノ酸１〜２５０の欠失を含む。他の実施形態では、ｇＥ内の不活性化変異は、アミノ酸１００〜３００の欠失を含む。他の実施形態では、ｇＥ内の不活性化変異は、アミノ酸１〜４００の欠失を含む。他の実施形態では、ｇＥ内の不活性化変異は、アミノ酸２００〜５００の欠失を含む。他の実施形態では、ｇＥ内の不活性化変異は、アミノ酸２４〜７１の欠失を含む。他の実施形態では、ｇＥ内の不活性化変異は、アミノ酸３０〜５０８の欠失を含む。他の実施形態では、ｇＥ内の不活性化変異は、アミノ酸４０〜７０の欠失を含む。他の実施形態では、ｇＥ内の不活性化変異は、ｇＥをエンコードしている遺伝子のタンパク質内への非天然配列の挿入を含み、その結果として、前記ｇＥは不活性化される。他の実施形態では、ｇＥ内の不活性化変異は、アミノ酸残基の置換を含む。そのような置換としては、当業者には既知のように、例えば、非極性残基から極性残基への置換、極性残基から非極性残基への置換、非荷電残基から荷電残基への置換、負荷電残基から正荷電残基への置換、又はそれらの逆、或いはそれらの組み合わせがある。他の実施形態では、ｇＥ内の不活性化変異は、上記に列挙した変異のいずれかから本質的に成る。他の実施形態では、ｇＥ内の不活性化変異は、上記に列挙した変異のいずれかから成る。他の実施形態では、本明細書にて第１のＨＳＶ株について記載されたｇＥ又は他のタンパク質に含まれる不活性化変異は、第２のＨＳＶ株においても対応するタンパク質の同等位置においても存在する場合がある。前記同等位置における挿入、欠失又は置換は、当該技術分野では公知のように配列アラインメントから推測することができ、前記第１の株内の前記変異体の前記配列と整列する前記第２の株内の領域は変異している場合がある。
【００３０】
ｇＤ内の「不活性化変異」は、ある実施形態では、タンパク質／受容体の相互作用（ある実施形態では、ＨＶＥＭ細胞受容体、ネクチン−１細胞受容体、又はその両方との相互作用）を抑制する変異を意味する。他の実施形態では、前記用語は、細胞へのウイルス侵入を抑制する変異、ｇＢ、ｇＨ及びｇＬの下流活性化を抑制する変異、ウイルス外皮の細胞膜との融合を抑制する変異、又はそれらの組み合わせを行う変異を意味する。ある実施形態では、ｇＤ内の不活性化変異は、ｇＤペプチドのアミノ末端内（ある実施形態では残基１〜１５）に含まれ、他の実施形態では、前記変異は、ｇＤがＨＶＥＭと結合したときのヘアピンループ構造の形成を抑制する。他の実施形態では、前記変異体は、アミノ酸３、３８又はその両方に存在し、ある実施形態では、それらの位置のアラニン及びチロシン残基がシステイン残基（Ａ３Ｃ／Ｙ３８Ｃ）に置換され、前記アミノ末端で３〜３８ジスルフィド結合及び／又は固定ヘアピンループが形成される。
【００３１】
ある実施形態では、本発明の不活性化変異は、当該技術分野で既知の用具を使用して作成される。ある実施形態では、本発明で使用される前記核酸、並びに、本発明の及び／又は本発明の方法で使用されるタンパク質をエンコードしている前記核酸は、当該技術分野で公知の任意の合成又は組み替えプロセスにより作成することができる。核酸は、生物物理的又は生物学的な性質を変えるために、当該技術分野で既知の技術によって、さらに改変することができる。例えば、前記核酸は、該核酸のヌクレアーゼに対する安定性（例えば、「末端キャッピング」）を増加させるために、又は、該核酸の相補配列に対する脂溶性、溶解性又は結合親和性を変えるために、改変することができる。他の実施形態では、遺伝子の不活性化変異を作成するのに、トランスポゾンが使用され得る。ある実施形態では、前記トランスポゾンは、Ｔｎ５５１、Ｍｉｎｏｓ、Ｈｅｒｍｅｓ又はピギーバックであり得る。他の実施形態では、前記トランスポゾンは、ＡＴ−２（ｔｙｌベースのトランスポゾン, Perkin Elmer; Devine et al. (1997) Genome Res. 7:551-563）、ＧＰＳ−１（New England Biolabs）、ＧＰＳ−２（New England Biolabs）、ＥＺ：：ｔｎ（Ｔｎ５ベースのトランスポゾン, Epicenter Technologies）、ＳＩＦ（Ｔｎ７ベースのトランスポゾン, Biery et al. (2000) Nucl Acid Res 28:1067-1077）、又は（Finnzymes, Haapa et al. (1999) Nucl Acid Res 13:2777-2784）であり得る。ある実施形態では、個々のトランスポゾン変異体から消化されたＤＮＡのサザンブロット分析が、トランスポゾン挿入を確認するのに使用される。他の実施形態では、配列分析、ＰＣＲ及び／又はハイブリダイゼーション分析が、トランスポゾン挿入を測定するのに使用される。変異体はまた、エチルメタンスルフォン酸（ＥＭＳ）又は放射物を使用して誘起され得る。他の実施形態では、化学物質による変異誘発が用いられる。そのような化学的変異誘発物質は、他の実施形態では、ＤＮＡの非複製に影響を及ぼす化学物質（ＨＮＯ２及びＮＨ２ＯＨ）、並びに、ＤＮＡの複製に影響を及ぼす化学物質（アクリジン色素、フレームシフト変異を引き起こすことが知られている）を含む。放射物又は化学物質を使用して変異体を作成する方法は当該技術分野では公知であり、本発明の方法には任意の方法を使用可能である（例えば、「Thomas D. Brock in Biotechnology: A Textbook of Industrial Microbiology, Second Edition (1989) Sinauer Associates, Inc., Sunderland, MA.」又は「Deshpande, Mukund V., Appl. Biochem. Biotechnol. 36, 227 (1992)」を参照されたい）。
【００３２】
ある実施形態では、ＤＮＡは、４つのヌクレオチドから、当該技術分野で公知の方法の全体又は一部を用いて、化学的に合成することができる。そのような方法は、「Caruthers (1985; Science 230:281-285)」に記載されているものを含む。ＤＮＡはまた、重複二本鎖オリゴヌクレオチドを作成し、ギャップ内に充填し、そして、端部を互いに連結することにより合成することができる（概要は、「Sambrook et al. (1989; Molecular Cloning-A Laboratory Manual, 2nd Edition. Cold Spring Habour Laboratory Press, New York)」を参照されたい）。他の実施形態では、不活性化変異は、部位特異的突然変異誘発法によって野生型ＤＮＡから作成され得る（例えば、「Zoller et al. (1982; DNA. 1984 Dec;3(6):479-88)」、「Zoller (1983)」、「Zoller (1984; DNA. 1984 Dec;3(6):479-88)」及び「McPherson (1991; Directed Mutagenesis: A Practical Approach. Oxford University Press, NY)」を参照されたい。得られた前記ＤＮＡは、当該技術分野で既知の方法によって増幅させることができる。適切な方法の１つは、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）法であり、「Saiki et al. (1988; Science. 1988 Jan 29;239(4839):487-491)」、「Mullis et al., U.S. Pat. No.4,683,195」及び「Sambrook et al. (1989)」に記載されている。
【００３３】
他の実施形態では、本発明は、対象におけるＨＳＶ潜伏感染の確立を阻害する方法であって、ｇＥタンパク質をエンコードしているＵｓ８遺伝子内に不活性化変異を含むＨＳＶ変異株を前記対象に接触させるステップを含む方法を提供する。他の実施形態では、ＨＳＶの一次感染に続発するＨＳＶ潜伏感染が予防される。他の実施形態では、前記対象は、ワクチン接種前にＨＳＶに感染している。他の実施形態では、前記対象は、ＨＳＶに感染する危険性がある。他の実施形態では、ワクチン接種時における前記対象のＨＳＶ感染の有無に関わらず、本発明の方法によるワクチン接種は、ＨＳＶ一次感染に続発するＨＳＶ潜伏感染から前記対象を防御するのに有効である。
【００３４】
ある実施形態では、本発明は、対象におけるＨＳＶ炎症を抑制する方法であって、ｇＥタンパク質をエンコードしているＵｓ８遺伝子内に不活性化変異を含むＨＳＶ変異株を前記対象に接触させるステップを含む方法を提供する。他の実施形態では、ＨＳＶに続発するＨＳＶ炎症が予防される。他の実施形態では、前記対象は、ワクチン接種前にＨＳＶに感染している。他の実施形態では、前記対象は、ＨＳＶに感染する危険性がある。他の実施形態では、ワクチン接種時における前記対象のＨＳＶ感染の有無に関わらず、本発明の方法によるワクチン接種は、ＨＳＶ感染に続発するＨＳＶ炎症から前記対象を防御するのに有効である。
【００３５】
ある実施形態では、本発明は、対象をＨＳＶ炎症から防御する方法であって、ｇＥタンパク質をエンコードしているＵｓ８遺伝子内に不活性化変異を含むＨＳＶ変異株を前記対象に接触させるステップを含む方法を提供する。他の実施形態では、前記対象をＨＳＶに曝露させた後に発生するＨＳＶ炎症が予防される。他の実施形態では、前記対象は、ワクチン接種前にＨＳＶに感染している。他の実施形態では、前記対象は、ＨＳＶに感染する危険性がある。他の実施形態では、ワクチン接種時における前記対象のＨＳＶ感染の有無に関わらず、本発明の方法によるワクチン接種は、前記対象をＨＳＶに曝露させた後のＨＳＶ炎症から前記対象を防御するのに有効である。
【００３６】
ある実施形態では、本発明は、対象におけるＨＳＶ炎症の発生率を減少させる方法であって、ｇＥタンパク質をエンコードしている遺伝子内に不活性化変異を含むＨＳＶ変異株を、前記対象に接触させるステップを含む方法を提供する。他の実施形態では、前記対象をＨＳＶに曝露させた後の、ＨＳＶ炎症の発生が防止される。他の実施形態では、前記対象は、ワクチン接種前にＨＳＶに感染している。他の実施形態では、前記対象は、ＨＳＶに感染する危険性がある。他の実施形態では、ワクチン接種時における前記対象のＨＳＶ感染の有無に関わらず、本発明の方法によるワクチン接種は、前記対象をＨＳＶに曝露させた後のＨＳＶ炎症の発生率を減少させるのに有効である。
【００３７】
ある実施形態では、本発明は、対象におけるＨＳＶ再発を抑制する方法であって、ｇＥタンパク質をエンコードしている遺伝子内に不活性化変異を含むＨＳＶ変異株を、前記対象に接触させるステップを含む方法を提供する。他の実施形態では、前記対象をＨＳＶに曝露させた後のＨＳＶ再発が予防される。他の実施形態では、前記対象は、ワクチン接種前にＨＳＶに感染している。他の実施形態では、前記対象は、ＨＳＶに感染する危険性がある。他の実施形態では、ワクチン接種時における前記対象のＨＳＶ感染の有無に関わらず、本発明の方法によるワクチン接種は、前記対象をＨＳＶに曝露させた後のＨＳＶ再発から前記対象を防御するのに有効である。
【００３８】
ある実施形態では、本発明は、対象におけるＨＳＶ再発の発生率を減少させる方法であって、ｇＥタンパク質をエンコードしているＵｓ８遺伝子内に不活性化変異を含むＨＳＶ変異株を接触させるステップを前記対象に含む方法を提供する。他の実施形態では、前記対象をＨＳＶに曝露させた後のＨＳＶ再発が防止される。他の実施形態では、前記対象は、ワクチン接種前にＨＳＶに感染している。他の実施形態では、前記対象は、ＨＳＶに感染する危険性がある。他の実施形態では、ワクチン接種時における前記対象のＨＳＶ感染の有無に関わらず、本発明の方法によるワクチン接種は、前記対象をＨＳＶに曝露させた後させた後のＨＳＶ再発の発生率を減少させるのに有効である。
【００３９】
他の実施形態では、本発明は、対象におけるＨＳＶ−１感染を抑制する方法であって、ｇＥタンパク質をエンコードしているＵｓ８遺伝子内に不活性化変異を含むＨＳＶ変異株を前記対象に接触させるステップを含む方法を提供する。他の実施形態では、前記ＨＳＶ変異株は、ＨＳＶ−１変異株である。他の実施形態では、前記ＨＳＶ変異株は、ＨＳＶ−２変異株である。
【００４０】
他の実施形態では、本発明は、対象におけるＨＳＶ−２感染を抑制する方法であって、ｇＥタンパク質をエンコードしているＵｓ８遺伝子内に不活性化変異を含むＨＳＶ変異株を前記対象に接触させるステップを含む方法を提供する。他の実施形態では、前記ＨＳＶ変異株は、ＨＳＶ−１変異株である。他の実施形態では、前記ＨＳＶ変異株は、ＨＳＶ−２変異株である。
【００４１】
本発明に係る方法のいずれか、及びある実施形態では、前記対象は人間である。他の実施形態では、前記対象は、ネズミである。他の実施形態では、前記対象は、マウスである。他の実施形態では、前記対象は、ラットである。他の実施形態では、前記対象は、イヌ、ネコ、ウシ又はブタである。他の実施形態では、前記対象は、哺乳類である。他の実施形態では、前記対象は、ＨＳＶにより感染にかかりやすい任意の生物である。
【００４２】
他の実施形態では、本発明は、人間の対象における帯状疱疹様病変又は類似する病変の突発発生から前記対象を防御する方法であって、ｇＥタンパク質をエンコードしているＵｓ８遺伝子内に不活性化変異を含むＨＳＶ変異株を前記対象に接触させるステップを含む方法を提供する。
【００４３】
他の実施形態では、本発明は、人間の対象におけるＨＳＶ帯状疱疹様病変又は類似する病変の突発発生を阻害する方法であって、ｇＥタンパク質をエンコードしているＵｓ８遺伝子内に不活性化変異を含むＨＳＶ変異株を前記対象に接触させるステップを含む方法を提供する。
【００４４】
他の実施形態では、前記対象をＨＳＶに曝露させた後の、前記帯状疱疹様病変又は類似する病変の突発発生が阻害される。他の実施形態では、前記対象は、ワクチン接種前にＨＳＶに感染している。他の実施形態では、前記対象は、ＨＳＶに感染する危険性がある。他の実施形態では、ワクチン接種時における前記対象のＨＳＶ感染の有無に関わらず、本発明の方法によるワクチン接種は、前記対象をＨＳＶに曝露させた後に、前記帯状疱疹様病変又は類似する病変の突発発生を阻害するのに有効である。
【００４５】
他の実施形態では、本発明は、人間の対象におけるＨＳＶ帯状疱疹様病状及び類似病状の拡散を阻害する方法であって、ｇＥタンパク質をエンコードしているＵｓ８遺伝子内に不活性化変異を含むＨＳＶ変異株を前記対象に接触させるステップを含む方法を提供する。他の実施形態では、前記人間の対象をＨＳＶに曝露させた後のＨＳＶ帯状疱疹様症状及び類似症状の拡散が阻害される。他の実施形態では、前記対象は、ワクチン接種前にＨＳＶに感染している。他の実施形態では、前記対象は、ＨＳＶに感染する危険性がある。他の実施形態では、ワクチン接種時における前記対象のＨＳＶ感染の有無に関わらず、本発明の方法によるワクチン接種は、前記対象をＨＳＶに曝露させた後のＨＳＶ帯状疱疹様病状及び類似病状の拡散を阻害するのに有効である。
【００４６】
「帯状疱疹様（Zosteriform）」は、ある実施形態では、特に再活性化感染中の、ＨＳＶ感染の皮膚病変の特徴を意味し、ある実施形態では、発疹として始まり、その後、皮節の近傍に広がり、一般に、ストリップ又はベルト様の模様を生じさせる。ある実施形態では、前記発疹は、小胞又は漿液が満たされた小水疱に発展する。ある実施形態では、ＨＳＶと接触したマウスに帯状疱疹様病変が形成される。他の実施形態では、ＨＳＶと接触した人間に帯状疱疹様病変が形成される。
【００４７】
「帯状疱疹様の拡散」は、ある実施形態では、神経節から皮節内の２次的な皮膚部位に拡散するＨＳＶ感染を意味する。他の実施形態では、この用語は、最初の感染部位と同一の皮節内での拡散を意味する。他の実施形態では、この用語は、当該技術分野で既知のその他の「帯状疱疹様の拡散」の定義を意味する。「突発発生（Outbreak）」は、他の実施形態では、疾病の症状又は疾病の流行における突然の増加を意味し、ある実施形態では、帯状疱疹様病変の突然の増加を意味する。一方、他の実施形態では、「突発発生」は、帯状疱疹様病変の突然の発生を意味する。
【００４８】
ある実施形態では、本発明は、人間の対象における皮節病変又は類似病状の形成を阻害する方法であって、ｇＥタンパク質をエンコードしているＵｓ８遺伝子内に不活性化変異を含むＨＳＶ変異株を前記対象に接触させるステップを含む方法を提供する。他の実施形態では、前記患者をＨＳＶに曝露させた後の皮節病変又は類似病状が阻害される。他の実施形態では、皮節病変は、ＨＳＶと接触した人間に形成される。他の実施形態では、人間の皮節病変は、ほとんどの場合、神経節内のウイルスが潜伏状態から再活性化した場合に発現し、ある実施形態では神経から拡散し、ある実施形態では再発性感染症を引き起こす。他の実施形態では、皮節病変は、ＨＳＶと接触したマウスに形成される。他の実施形態では、前記対象は、ワクチン接種前にＨＳＶに感染している。他の実施形態では、前記対象は、ＨＳＶに感染する危険性がある。他の実施形態では、ワクチン接種時における前記対象のＨＳＶ感染の有無に関わらず、本発明の方法によるワクチン接種は、前記患者をＨＳＶに曝露させた後の皮節病変又は類似状態の形成を阻害するのに有効である。
【００４９】
本明細書中に記載したように、本発明のｇＥヌルＨＳＶ株のワクチン接種は、その後の毒性ＨＳＶ感染後の、ＨＳＶ潜伏感染症（例５）及び帯状疱疹様病変及び皮節病変の形成（例４）から対象を防御する。他の実施形態では、前記ワクチン接種は、ＨＳＶ潜伏感染によって引き起こされる又は関連する疾病から対象を防御する。他の実施形態では、前記ワクチン接種自体は、重大な疾患を引き起こさない（例２）。
【００５０】
「毒性ＨＳＶ」は、ある実施形態では、自然発生のＨＳＶ株である。他の実施形態では、この用語は、感染を引き起こすことが可能なＨＳＶ株を意味する。他の実施形態では、この用語は、潜伏感染を確立することが可能なＨＳＶ株を意味する。
【００５１】
他の実施形態では、本発明は、対象における神経拡散を阻害する方法であって、ｇＥタンパク質をエンコードしているＵｓ８遺伝子内に不活性化変異を含むＨＳＶ変異株を前記対象に接触させるステップを含む方法を提供する。他の実施形態では、前記対象をＨＳＶに曝露させた後の神経拡散が阻害される。他の実施形態では、前記対象は、ワクチン接種前にＨＳＶに感染している。他の実施形態では、前記対象は、ＨＳＶに感染する危険性がある。他の実施形態では、ワクチン接種時における前記対象のＨＳＶ感染の有無に関わらず、本発明の方法によるワクチン接種は、前記対象をＨＳＶに曝露させた後の神経拡散を阻害するのに有効である。
【００５２】
ＨＳＶの神経拡散を測定する方法は当該技術分野では公知であり、ある実施形態では、２次的な皮節病変の存在及び程度の測定を含む（例２）。ウイルス拡散の測定方法の他の実施形態は、例えば、「Labetoulle M et al. (Neuronal propagation of HSVl from the oral mucosa to the eye. Invest Ophthalmol Vis Sci. 2000 Aug;41(9):2600-6)」及び「Thompson KA et al. (Herpes simplex replication and dissemination is not increased by corticosteroid treatment in a rat model of focal Herpes encephalitis. J Neurovirol. 2000 Feb;6(1):25-32)」に記載されている。
【００５３】
ある実施形態では、本発明は、対象におけるヘルペス性眼疾患の発生率を減少させる方法であって、ｇＥタンパク質をエンコードしているＵｓ８遺伝子内に不活性化変異を含むＨＳＶ変異株を前記対象に接触させるステップを含む方法を提供する。他の実施形態では、前記対象は、ＨＳＶに感染している。他の実施形態では、前記対象は、ＨＳＶに感染する危険性がある。
【００５４】
ある実施形態では、本発明は、対象におけるヘルペス性眼疾患の重症度を減少させる方法であって、ｇＥタンパク質をエンコードしているＵｓ８遺伝子内に不活性化変異を含むＨＳＶ変異株を前記対象に接触させるステップを含む方法を提供する。他の実施形態では、前記対象は、ＨＳＶに感染している。他の実施形態では、前記対象は、ＨＳＶに感染する危険性がある。他の実施形態では、前記ワクチン株は、チャレンジ株（challenge strain）とは異なる種に由来するものである。他の実施形態では、前記ワクチン株は、チャレンジ株と同一の種である。
【００５５】
他の実施形態では、ある実施形態では、本発明は、対象におけるＨＳＶ−１角膜感染症、ヘルペス性角膜炎、又はその他のヘルペス性眼疾患の発生率を減少させる方法であって、ＨＳＶの変異株を前記対象に投与するステップを含む方法を提供する。他の実施形態では、本発明のＨＳＶ変異株を前記対象に投与することにより、ＨＳＶ−１に対する免疫応答を誘起する。
【００５６】
ヘルペス性眼疾患、角膜感染症及びヘルペス性角膜炎の存在及び程度を測定する方法は当該技術分野では公知であり、例えば、「Labetoulle M et al. (Neuronal propagation of HSV1 from the oral mucosa to the eye. Invest Ophthalmol Vis Sci. 2000 Aug;41(9):2600-6)」及び「Majumdar S i (Dipeptide monoester ganciclovir prodrugs for treating HSV-1-induced corneal epithelial and stromal keratitis: in vitro and in vivo evaluations. J Ocul Pharmacol Ther. 2005 Dec;21(6):463-74)」に記載されている。
【００５７】
ある実施形態では、本発明は、対象における生殖器潰瘍性疾患の発生率を減少させる方法であって、ｇＥタンパク質をエンコードしているＵｓ８遺伝子内に不活性化変異を含むＨＳＶ変異株を前記対象に接触させるステップを含む方法を提供する。他の実施形態では、前記対象は、ＨＳＶに感染している。他の実施形態では、前記対象は、ＨＳＶに感染する危険性がある。
【００５８】
ある実施形態では、本発明は、対象における生殖器潰瘍性疾患の重症度を減少させる方法であって、ｇＥタンパク質をエンコードしているＵｓ８遺伝子内に不活性化変異を含むＨＳＶ変異株を前記対象に接触させるステップを含む方法を提供する。他の実施形態では、前記対象は、ＨＳＶに感染している。他の実施形態では、前記対象は、ＨＳＶに感染する危険性がある。
【００５９】
ある実施形態では、生殖器潰瘍性疾患は、生殖器の潰瘍性病変に特徴付けられる。生殖器潰瘍性疾患の存在及び程度を測定する方法は当該技術分野では公知である。
【００６０】
ある実施形態では、本発明は、対象におけるＨＳＶ−１媒介性脳炎の発生率を減少させる方法であって、ｇＥタンパク質をエンコードしているＵｓ８遺伝子内に不活性化変異を含むＨＳＶ変異株を前記対象に接触させるステップを含む方法を提供する。「ＨＳＶ−１脳炎」は、ある実施形態では、ＨＳＶ−１によって引き起こされた脳炎を意味する。他の実施形態では、この用語は、ＨＳＶ−１に関連する脳炎を意味する。他の実施形態では、この用語は、当該技術分野で既知のその他の種類のＨＳＶ−１媒介性脳炎を意味する。他の実施形態では、前記対象は、ＨＳＶに感染している。他の実施形態では、前記対象は、ＨＳＶに感染する危険性がある。他の実施形態では、前記ワクチン株は、チャレンジ株と異なる種に由来するものである。他の実施形態では、前記ワクチン株は、チャレンジ株と同一の種に由来するものである。
【００６１】
「ＨＳＶ−１」は、ある実施形態では、単純ヘルペスウイルス１型を意味する。他の実施形態では、この用語は、ＫＯＳ株を意味する。他の実施形態では、この用語は、Ｆ株を意味する。他の実施形態では、この用語は、ＮＳ株を意味する。他の実施形態では、この用語は、ＣＬ１０１株を意味する。他の実施形態では、この用語は、「１７」株を意味する。他の実施形態では、この用語は、「１７＋ｓｙｎ」株を意味する。他の実施形態では、この用語は、ＭａｃＩｎｔｙｒｅ株を意味する。他の実施形態では、この用語は、ＭＰ株を意味する。他の実施形態では、この用語は、ＨＦ株を意味する。他の実施形態では、この用語は、当該技術分野で既知のその他のＨＳＶ−１株を意味する。
【００６２】
「ＨＳＶ−２」は、ある実施形態では、単純ヘルペスウイルス２型を意味する。他の実施形態では、この用語は、ＨＳＶ−２ ３３３株を意味する。他の実施形態では、この用語は、２．１２株を意味する。他の実施形態では、この用語は、ＨＧ５２株を意味する。他の実施形態では、この用語は、ＭＳ株を意味する。他の実施形態では、この用語は、１８６株を意味する。他の実施形態では、この用語は、Ｇ株を意味する。他の実施形態では、この用語は、当該技術分野で既知のその他のＨＳＶ−２株を意味する。
【００６３】
他の実施形態では、本発明は、対象におけるＨＳＶ−２媒介性脳炎の発生率を減少させる方法であって、ｇＥタンパク質をエンコードしているＵｓ８遺伝子内に不活性化変異を含むＨＳＶ変異株を前記対象に接触させるステップを含む方法を提供する。「ＨＳＶ−２脳炎」は、ある実施形態では、ＨＳＶ−１によって引き起こされた脳炎を意味する。他の実施形態では、この用語は、ＨＳＶ−１に関連する脳炎を意味する。他の実施形態では、この用語は、当該技術分野で既知のその他のＨＳＶ−２媒介性脳炎を意味する。他の実施形態では、前記対象は、ＨＳＶに感染している。他の実施形態では、前記対象は、ＨＳＶに感染する危険性がある。
【００６４】
ある実施形態では、本発明は、対象におけるヘルペス媒介性脳炎の重症度を減少させる方法であって、ｇＥタンパク質をエンコードしているＵｓ８遺伝子内に不活性化変異を含むＨＳＶ変異株を前記対象に接触させるステップを含む方法を提供する。他の実施形態では、前記対象は、ＨＳＶに感染している。他の実施形態では、前記対象は、ＨＳＶに感染する危険性がある。
【００６５】
ある実施形態では、本発明の方法により治療又は予防される前記ヘルペス媒介性脳炎は、局所性のヘルペス脳炎である。他の実施形態では、前記ヘルペス媒介性脳炎は、新生児のヘルペス脳炎である。他の実施形態では、前記ヘルペス媒介性脳炎は、当該技術分野で既知のその他の種類のヘルペス媒介性脳炎である。
【００６６】
ある実施形態では、本発明は、対象における播種性ＨＳＶ感染症の発生率を減少させる方法であって、ｇＥタンパク質をエンコードしているＵｓ８遺伝子内に不活性化変異を含むＨＳＶ変異株を前記対象に接触させるステップを含む方法を提供する。他の実施形態では、前記対象は、ＨＳＶに感染している。他の実施形態では、前記対象は、ＨＳＶに感染する危険性がある。
【００６７】
ある実施形態では、本発明は、対象における播種性ＨＳＶ感染症の重症度を減少させる方法であって、ｇＥタンパク質をエンコードしているＵｓ８遺伝子内に不活性化変異を含むＨＳＶ変異株を前記対象に接触させるステップを含む方法を提供する。他の実施形態では、前記対象は、ＨＳＶに感染している。他の実施形態では、前記対象は、ＨＳＶに感染する危険性がある。
【００６８】
ある実施形態では、本発明は、対象における新生児ＨＳＶ感染症の発生率を減少させる方法であって、ｇＥタンパク質をエンコードしているＵｓ８遺伝子内に不活性化変異を含むＨＳＶ変異株を前記対象に接触させるステップを含む方法を提供する。ある実施形態では、前記子供が前記ＨＳＶ変異株に接触させられる。他の実施形態では、前記対象は、ＨＳＶに感染している。他の実施形態では、前記対象は、ＨＳＶに感染する危険性がある。
【００６９】
ある実施形態では、本発明は、対象の子供における新生児ＨＳＶ−２感染症の発生率を減少させる方法であって、ｇＥタンパク質をエンコードしているＵｓ８遺伝子内に不活性化変異を含むＨＳＶ変異株を前記対象に接触させるステップを含む方法を提供する。他の実施形態では、前記対象は、ＨＳＶに感染している。他の実施形態では、前記対象は、ＨＳＶに感染する危険性がある。
【００７０】
ある実施形態では、本発明は、対象からその子供へのＨＳＶ−１感染症の伝達を減少させる方法であって、ｇＥタンパク質をエンコードしているＵｓ８遺伝子内に不活性化変異を含むＨＳＶ変異株を前記対象に接触させるステップを含む方法を提供する。
【００７１】
ある実施形態では、本発明は、対象からその子供へのＨＳＶ−２感染症の伝達を減少させる方法であって、ｇＥタンパク質をエンコードしているＵｓ８遺伝子内に不活性化変異を含むＨＳＶ変異株を前記対象に接触させるステップを含む方法を提供する。
【００７２】
ある実施形態では、本発明は、子供へのＨＳＶ−１感染症の伝達を減少させる方法であって、ｇＥタンパク質をエンコードしているＵｓ８遺伝子内に不活性化変異を含むＨＳＶ変異株を前記対象に接触させるステップを含む方法を提供する。当該技術分野では既知のように、ＨＳＶ−２感染症は、生殖器分泌物内へのＨＳＶ−１ウイルス排出を増加させる（Nagot N et at. Reduction of HIV-I RNA levels with therapy to suppress Herpes Simplex Virus. N Engl J Med. 2007 Feb 22;356(8): 790-9）。したがって、本発明によるＨＳＶ−２感染を抑制する方法は、子供へのＨＳＶ−１感染を減少させるのにも有効であると考えられる。他の実施形態では、前記ＨＳＶ変異株は、ＨＳＶ−１変異株である。他の実施形態では、前記ＨＳＶ変異株は、ＨＳＶ−２変異株である。
【００７３】
他の実施形態では、本発明は、性的パートナーへのＨＳＶ−１感染を減少させる方法であって、ｇＥタンパク質をエンコードしているＵｓ８遺伝子内に不活性化変異を含むＨＳＶ変異株を前記対象に接触させるステップを含む方法を提供する。当該技術分野では既知のように、ＨＳＶ−２感染症は、生殖器分泌物内へのＨＳＶ−１ウイルス排出を増加させる。したがって、本発明によるＨＳＶ−２感染を抑制する方法は、性的パートナーへのＨＳＶ−１感染を減少させるのにも有効であると考えられる。他の実施形態では、前記ＨＳＶ変異株は、ＨＳＶ−１変異株である。他の実施形態では、前記ＨＳＶ変異株は、ＨＳＶ−２変異株である。
【００７４】
ある実施形態では、本発明は、ＨＳＶ−１に対する感受性を減少させる方法であって、ｇＥタンパク質をエンコードしているＵｓ８遺伝子内に不活性化変異を含むＨＳＶ変異株を対象に接触させるステップを含む方法を提供する。当該技術分野では既知のように、ＨＳＶ−２感染症は、ＨＳＶ−１の複製を増加させる（Ouedraogo A et al. Impact of suppressive herpes therapy on genital（生殖器） HlV-I RNA among women taking anti retroviral therapy: a randomized controlled trial. AIDS. 2006 Nov 28;20(18):2305-13）。したがって、本発明によるＨＳＶ−２感染を抑制する方法は、ＨＳＶ−１に対する感受性を減少させるのにも有効であると考えられる。他の実施形態では、前記ＨＳＶ変異株は、ＨＳＶ−１変異株である。他の実施形態では、前記ＨＳＶ変異株は、ＨＳＶ−２変異株である。
【００７５】
ある実施形態では、本発明は、対象の子供における新生児ＨＳＶ感染症の重症度を減少させる方法であって、ｇＥタンパク質をエンコードしているＵｓ８遺伝子内に不活性化変異を含むＨＳＶ変異株を前記対象に接触させるステップを含む方法を提供する。他の実施形態では、前記対象は、ＨＳＶに感染している。他の実施形態では、前記対象は、ＨＳＶに感染する危険性がある。
【００７６】
本発明は、対象におけるヘルペス媒介性脳炎に関連する又は続発する疾病、疾患又は症状の発生率を減少させる方法であって、ｇＥタンパク質をエンコードしているＵｓ８遺伝子内に不活性化変異を含むＨＳＶ変異株を前記対象に接触させるステップを含む方法を提供する。
【００７７】
ある実施形態では、本発明は、対象におけるヘルペス媒介性脳炎に関連する又は続発する疾病、疾患又は症状を治療する方法であって、ｇＥタンパク質をエンコードしているＵｓ８遺伝子内に不活性化変異を含むＨＳＶ変異株を前記対象に接触させるステップを含み、そのことによって、対象におけるヘルペス媒介性脳炎に関連する又は続発する疾病、疾患又は症状を治療する方法を提供する。
【００７８】
ある実施形態では、前記疾病、疾患又は症状は、発熱である。他の実施形態では、前記疾病、疾患又は症状は、頭痛である。他の実施形態では、前記疾病、疾患又は症状は、肩凝りである。他の実施形態では、前記疾病、疾患又は症状は、発作である。他の実施形態では、前記疾病、疾患又は症状は、半身不随である。他の実施形態では、前記疾病、疾患又は症状は、知覚麻痺である。他の実施形態では、前記疾病、疾患又は症状は、昏睡である。他の実施形態では、前記疾病、疾患又は症状は、ヘルペス媒介性脳炎に関連する又は続発する、当該技術分野で既知のその他の疾病、疾患又は症状である。
【００７９】
ヘルペス媒介性脳炎の存在及び重症度を測定する方法は当該技術分野では公知であり、例えば、「Bonkowsky JL et al. (Herpes Simplex Virus central nervous system relapse during treatment of infantile spasms with corticotropin. Pediatrics. 2006 May;117(5):e1045-8)」及び「Khan OA et al. (Herpes encephalitis presenting as mild aphasia: case report. BMC Fam Pract. 2006 Mar 24;7:22)」に記載されている。
【００８０】
ある実施形態では、本発明は、対象におけるＨＳＶ感染に関連する疾病、疾患又は症状を治療する方法であって、ｇＥタンパク質をエンコードしているＵｓ８遺伝子内に不活性化変異を含むＨＳＶ変異株を前記対象に接触させるステップを含む方法を提供する。
【００８１】
ある実施形態では、本発明は、対象におけるＨＳＶ感染に関連する疾病、疾患又は症状の発生率を減少させる方法であって、ｇＥタンパク質をエンコードしているＵｓ８遺伝子内に不活性化変異を含むＨＳＶ変異株を前記対象に接触させるステップを含む方法を提供する。
【００８２】
ある実施形態では、本発明は、対象におけるＨＳＶ感染に後続する疾病、疾患又は症状を治療する方法であって、ｇＥタンパク質をエンコードしているＵｓ８遺伝子内に不活性化変異を含むＨＳＶ変異株を前記対象に接触させるステップを含む方法を提供する。
【００８３】
ある実施形態では、本発明は、対象におけるＨＳＶ感染に後続する疾病、疾患又は症状の発生率を減少させる方法であって、ｇＥタンパク質をエンコードしているＵｓ８遺伝子内に不活性化変異を含むＨＳＶ変異株を前記対象に接触させるステップを含む方法を提供する。
【００８４】
ある実施形態では、ＨＳＶ感染に後続する疾病、疾患又は症状は、口腔病変である。他の実施形態では、前記疾病、疾患又は症状は、生殖器病変である。他の実施形態では、前記疾病、疾患又は症状は、口腔潰瘍である。他の実施形態では、前記疾病、疾患又は症状は、生殖器潰瘍である。他の実施形態では、前記疾病、疾患又は症状は、発熱である。他の実施形態では、前記疾病、疾患又は症状は、頭痛である。他の実施形態では、前記疾病、疾患又は症状は、筋肉痛である。他の実施形態では、前記疾病、疾患又は症状は、鼠径部における腺肥大である。他の実施形態では、前記疾病、疾患又は症状は、排尿時の痛みである。他の実施形態では、前記疾病、疾患又は症状は、膣排出物である。他の実施形態では、前記疾病、疾患又は症状は、水疱形成である。他の実施形態では、前記疾病、疾患又は症状は、インフルエンザ様倦怠感である。他の実施形態では、前記疾病、疾患又は症状は、角膜炎である。他の実施形態では、前記疾病、疾患又は症状は、疱疹性ひょう疽である。他の実施形態では、前記疾病、疾患又は症状は、ベル麻痺である。他の実施形態では、前記疾病、疾患又は症状は、ヘルペス性多形性紅斑である。他の実施形態では、前記疾病、疾患又は症状は、腰背部症状（例えば、しびれ、臀部又は肛門周辺領域のうずき、尿閉、便秘、及び勃起不全）である。他の実施形態では、前記疾病、疾患又は症状は、限局性ヘルペス性湿疹である。他の実施形態では、前記疾病、疾患又は症状は、播種性ヘルペス性湿疹である。他の実施形態では、前記疾病、疾患又は症状は、剣状ヘルペスである。他の実施形態では、前記疾病、疾患又は症状は、ヘルペス性毛瘡である。他の実施形態では、前記疾病、疾患又は症状は、食道の症状（例えば、嚥下又は燃焼の困難、嚥下中の絞るような咽喉痛、体重減少、嚥下中の胸郭上部又はその背部の痛み）である。他の実施形態では、前記疾病、疾患又は症状は、当該技術分野で既知のその他の疾病、疾患又は症状である。
【００８５】
本発明の方法及び組成物によって治療又は改善される前記ＨＳＶ感染症は、ある実施形態では、ＨＳＶ生殖器感染症である。他の実施形態では、前記ＨＳＶ感染症は、ＨＳＶ口腔感染症である。他の実施形態では、前記ＨＳＶ感染症は、ＨＳＶ眼球感染症である。他の実施形態では、前記ＨＳＶ感染症は、ＨＳＶ皮膚感染症である。
【００８６】
ある実施形態では、前記ＨＳＶ感染症は、ＨＳＶ−２感染症である。他の実施形態では、前記ＨＳＶ感染症は、ＨＳＶ−１感染症である。他の実施形態では、前記ＨＳＶ感染症は、当該技術分野で既知のその他の種類のＨＳＶ感染症である。
【００８７】
ある実施形態では、本発明は、対象におけるＨＳＶ−１感染症の迅速な除去を誘導する方法であって、ｇＥタンパク質をエンコードしているＵｓ８遺伝子内に不活性化変異を含むＨＳＶ変異株を前記対象に接触させるステップを含む方法を提供する。他の実施形態では、前記ＨＳＶ変異株は、ＨＳＶ−１変異株である。他の実施形態では、前記ＨＳＶ変異株は、ＨＳＶ−２変異株である。
【００８８】
ある実施形態では、対象におけるＨＳＶ−２感染症の迅速な除去を誘導する方法であって、ｇＥタンパク質をエンコードしているＵｓ８遺伝子内に不活性化変異を含むＨＳＶ変異株を前記対象に接触させるステップを含む方法を提供する。他の実施形態では、前記ＨＳＶ変異株は、ＨＳＶ−１変異株である。他の実施形態では、前記ＨＳＶ変異株は、ＨＳＶ−２変異株である。
【００８９】
ある実施形態では、対象における抗ＨＳＶ免疫応答を誘導する方法であって、ｇＥタンパク質をエンコードしているＵｓ８遺伝子内に不活性化変異を含むＨＳＶ変異株を前記対象に接触させるステップを含む方法を提供する。他の実施形態では、前記ＨＳＶ変異株は、ＨＳＶ−１変異株である。他の実施形態では、前記ＨＳＶ変異株は、ＨＳＶ−２変異株である。
【００９０】
ある実施形態では、対象における抗ＨＳＶ中和抗体応答を誘導する方法であって、ｇＥタンパク質をエンコードしているＵｓ８遺伝子内に不活性化変異を含むＨＳＶ変異株を前記対象に接触させるステップを含む方法を提供する。他の実施形態では、前記ＨＳＶ変異株は、ＨＳＶ−１変異株である。他の実施形態では、前記ＨＳＶ変異株は、ＨＳＶ−２変異株である。
【００９１】
ある実施形態では、本発明は、対象における口唇ＨＳＶを抑制する方法であって、ＨＳＶに対するワクチン接種を前記対象に行うステップを含む方法を提供する。
【００９２】
他の実施形態では、本発明は、対象における口唇ＨＳＶを抑制する方法であって、前記対象におけるＨＳＶ感染を阻害するステップを含む方法を提供する。
【００９３】
ある実施形態では、本発明の方法及び組成物により誘導された免疫応答は、細胞性免疫反応である。他の実施形態では、前記免疫応答は、ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）応答を含む。他の実施形態では、前記免疫応答は、ＣＤ４＋ヘルパーＴ細胞応答を含む。他の実施形態では、前記免疫応答は、体液性免疫応答を含む。
【００９４】
本発明の方法における変異株の投与経路は、ある実施形態では、表皮的である。他の実施形態では、前記変異株は、表皮の乱切又は引っ掻きにより投与される。他の実施形態では、前記変異株は、筋肉内に投与される。他の実施形態では、前記変異株は、皮下に投与される。他の実施形態では、前記変異株は、鼻腔内に投与される。他の実施形態では、前記変異株は、経皮的に投与される。他の実施形態では、前記変異株は、膣内に投与される。他の実施形態では、前記変異株は、経粘膜的に投与され、ある実施形態では呼吸器官内の粘膜に投与される。他の実施形態では、前記変異株は、鼻腔内に投与される。他の実施形態では、前記変異株は、エアロゾルで投与される。他の実施形態では、前記変異株は、当該技術分野で既知のその他の経路を介して投与される。
【００９５】
ある実施形態では、本発明の方法及び組成物において説明された、ＨＳＶ株のｇＥをエンコードしている遺伝子内の不活性化変異は、欠失変異である。他の実施形態では、前記不活性化変異は、挿入変異である。他の実施形態では、前記不活性化変異は、置換変異である。他の実施形態では、前記不活性化変異は、ｇＥヌル変異である。他の実施形態では、前記不活性化変異は、当該技術分野で既知のその他の種類の変異である。
【００９６】
ある実施形態では、本発明の方法及び組成物において説明された、ＨＳＶ株の糖タンパク質をエンコードしている遺伝子内の不活性化変異は、欠失変異である。他の実施形態では、前記不活性化変異は、挿入変異である。他の実施形態では、前記不活性化変異は、置換変異である。他の実施形態では、前記不活性化変異は、ヌル変異である。他の実施形態では、前記不活性化変異は、当該技術分野で既知のその他の種類の変異である。ある実施形態では、前記挿入、欠失又は置換変異は、１個のアミノ酸の挿入、欠失又は置換を含み、他の実施形態では、１〜５個のアミノ酸、１〜１０５個のアミノ酸、５〜２０個のアミノ酸、１０〜５０個のアミノ酸、２５〜１００個のアミノ酸、１００〜５００個のアミノ酸、３００〜４００個のアミノ酸、２００〜１０００個のアミノ酸、又は１０００個以上のアミノ酸の挿入、欠失又は置換を含む。
【００９７】
ある実施形態では、本発明は、ｇＥタンパク質をエンコードしている遺伝子内に含まれる第１の不活性化変異と、第２の不活性化変異とを有する単離されたＨＳＶ−１変異株を提供する。他の実施形態では、前記ｇＥタンパク質をエンコードしている遺伝子は、Ｕｓ８遺伝子である。他の実施形態では、前記変異体は、ｇＥ−ヌル変異である。ある実施形態では、本発明の方法及び組成物において説明された単離されたＨＳＶ−１変異株は、１つ以上の追加的な変異（ある実施形態では、不活性化変異である）をさらに含む。他の実施形態では、前記第２の又は追加的な変異は、Ｕｓ７遺伝子内に含まれる。他の実施形態では、前記第２の又は追加的な変異は、Ｕｓ９遺伝子内に含まれる。他の実施形態では、前記第２の変異は、神経毒性を付与する任意の遺伝子内に含まれる。他の実施形態では、前記第２の変異は、ホスト細胞へのウイルス侵入に必要な任意の遺伝子内に含まれる。他の実施形態では、前記第２の変異は、ホストシャットオフ遺伝子内に含まれる。他の実施形態では、前記第２の変異は、チミジンキナーゼ遺伝子内に含まれる。他の実施形態では、前記第２の変異は、当該技術分野で既知のその他のＨＳＶ−１遺伝子内に含まれる。他の実施形態では、前記単離されたＨＳＶ−１変異株は、ｇＥタンパク質をエンコードしている遺伝子、Ｕｓ７遺伝子及びＵｓ９遺伝子内に、不活性化変異を含む。他の実施形態では、本発明の方法及び組成物において説明した、単離されたＨＳＶ−１変異株は、ｇＤタンパク質をエンコードしている遺伝子内に追加的な変異をさらに含む。
【００９８】
ある実施形態では、本発明は、ｇＥタンパク質をエンコードしている遺伝子内に含まれる第１の不活性化変異と、第２の不活性化変異とを有する単離されたＨＳＶ−２変異株を提供する。他の実施形態では、前記ｇＥタンパク質をエンコードしている遺伝子は、Ｕｓ８遺伝子である。他の実施形態では、前記変異は、ｇＥヌル変異である。ある実施形態では、本発明の方法及び組成物において説明された単離されたＨＳＶ−１変異株は、１つ以上の追加的な変異（ある実施形態では、不活性化変異である）をさらに含む。他の実施形態では、前記第２の又は追加的な変異は、Ｕｓ７遺伝子内に含まれる。他の実施形態では、前記第２の又は追加的な変異は、Ｕｓ９遺伝子内に含まれる。他の実施形態では、前記第２の変異は、神経毒性を付与する任意の遺伝子内に含まれる。他の実施形態では、前記第２の変異は、ホスト細胞へのウイルス侵入に必要な任意の遺伝子内に含まれる。他の実施形態では、前記第２の変異は、ホストシャットオフ遺伝子内に含まれる。他の実施形態では、前記第２の変異は、チミジンキナーゼ遺伝子内に含まれる。他の実施形態では、前記第２の変異は、当該技術分野で既知のその他のＨＳＶ−２遺伝子内に含まれる。他の実施形態では、前記単離されたＨＳＶ−２変異株は、ｇＥタンパク質をエンコードしている遺伝子、Ｕｓ７遺伝子及びＵｓ９遺伝子内に、不活性化変異を含む。他の実施形態では、本発明の方法及び組成物において説明した、単離されたＨＳＶ−２変異株は、ｇＤタンパク質をエンコードしている遺伝子内に追加的な変異をさらに含む。
【００９９】
ある実施形態では、変異した前記Ｕｓ７遺伝子は、アルファヘルペスウイルス内に高度に保存されている。他の実施形態では、変異した前記Ｕｓ７遺伝子は、ウイルスの順方向の拡散に必要である。他の実施形態では、変異した前記Ｕｓ７遺伝子は、ウイルスの逆方向の拡散に必要である。
【０１００】
ある実施形態では、変異した前記Ｕｓ９遺伝子は、アルファヘルペスウイルス内に高度に保存されている。他の実施形態では、変異した前記Ｕｓ９遺伝子は、ウイルスの順方向の拡散に必要である。他の実施形態では、変異した前記Ｕｓ９遺伝子は、ウイルスの逆方向の拡散に必要である。
【０１０１】
ある実施形態では、前記Ｕｓ７及び／又はＵｓ９内の前記変異は、不活性化変異である。他の実施形態では、前記変異は、欠失変異である。他の実施形態では、前記変異は、挿入変異である。他の実施形態では、前記変異は、置換変異である。他の実施形態では、前記変異は、当該技術分野で既知のその他の種類の変異である。
【０１０２】
ある実施形態では、変異した前記追加的な遺伝子は、アルファヘルペスウイルス内に高度に保存されている。他の実施形態では、前記追加的な遺伝子は、ウイルスの順方向の拡散に必要である。他の実施形態では、前記追加的な遺伝子は、ウイルスの逆方向の拡散に必要である。
【０１０３】
ある実施形態では、変異した前記追加的な遺伝子は、ビリオン膜タンパク質である。ある実施形態では、前記追加的な遺伝子は、ウイルス侵入に不必要な又は必須でないビリオン膜タンパク質である。他の実施形態では、前記膜タンパク質は、糖タンパク質である。他の実施形態では、前記追加的な遺伝子は、糖タンパク質Ｊである。他の実施形態では、前記追加的な遺伝子は、糖タンパク質Ｇである。他の実施形態では、前記追加的な遺伝子は、糖タンパク質Ｋである。他の実施形態では、前記追加的な遺伝子は、糖タンパク質Ｍである。他の実施形態では、前記追加的な遺伝子は、糖タンパク質Ｊ、糖タンパク質Ｇ、糖タンパク質Ｋ及び糖タンパク質Ｍから選択される。
【０１０４】
「順方向（anterograde）」は、ある実施形態では、神経節から皮膚への拡散を意味する。他の実施形態では、この用語は、細胞体から軸索へ向かっての拡散を意味する。他の実施形態では、この用語は、当該技術分野で許容されるその他の定義を意味する。
【０１０５】
「逆方向（retrograde）」は、ある実施形態では、感染部位から神経節への拡散を意味する。他の実施形態では、この用語は、軸索から細胞体へ向かっての拡散を意味する。他の実施形態では、この用語は、当該技術分野で許容されるその他の定義を意味する。
【０１０６】
他の実施形態では、前記追加的な変異は、ＨＳＶ−１変異株の順方向拡散の抑制を向上させるために導入される。他の実施形態では、前記追加的な変異は、ｇＥ変異体と組み合わせて、ＨＳＶ−１変異株の順方向拡散の抑制を付与するために必要である。他の実施形態では、前記ｇＥ変異は、ＨＳＶ−１変異株の順方向拡散の抑制を付与するためには不十分である。他の実施形態では、前記追加的な変異は、ｇＥ変異体を欠く場合、前記ＨＳＶ−１変異株の順方向拡散の抑制を付与するためには十分である。
【０１０７】
他の実施形態では、前記追加的な変異は、ＨＳＶ−２変異株の順方向拡散の抑制を向上させるために導入される。他の実施形態では、前記追加的な変異は、ｇＥ変異体と組み合わせて、ＨＳＶ−２変異株の順方向拡散の抑制を付与するために必要である。他の実施形態では、前記ｇＥ変異は、ＨＳＶ−２変異株の順方向拡散の抑制を付与するためには不十分である。他の実施形態では、前記追加的な変異は、ｇＥ変異体を欠く場合、前記ＨＳＶ−２変異株の順方向拡散の抑制を付与するためには十分である。
【０１０８】
ある実施形態では、前記追加的な変異は、ＨＳＶ−１変異株又はＨＳＶ−２変異株或いはその両方の毒性弱化を向上させるために導入される。他の実施形態では、前記追加的な変異は、ｇＥ変異体と組み合わせて、毒性弱化のために必要である。
【０１０９】
ある実施形態では、変異された前記追加的な変異は、ビリオン膜タンパク質である。他の実施形態では、前記追加的な変異体は、ウイルス侵入に必要なビリオン膜タンパク質である。他の実施形態では、前記追加的な変異は、糖タンパク質Ｂである。他の実施形態では、前記追加的な変異は、糖タンパク質Ｄである。他の実施形態では、前記追加的な変異は、糖タンパク質Ｈである。他の実施形態では、前記追加的な変異は、糖タンパク質Ｌである。
【０１１０】
ある実施形態では、本発明の方法及び組成物において説明された前記ＨＳＶ変異株は、前記対象の皮膚組織内で複製可能である。他の実施形態では、前記変異株は、前記対象の皮膚細胞内で複製可能である。他の実施形態では、前記変異株は、前記対象が属する種の皮膚組織内で複製可能である。他の実施形態では、前記変異株は、前記対象が属する種の皮膚組織に由来する細胞株内で複製可能である。他の実施形態では、前記変異株は、前記対象が属する種の皮膚細胞の培養物内で複製可能である。他の実施形態では、前記変異株は、前記対象が属する種の皮膚細胞に由来する細胞株内で複製可能である。
【０１１１】
「複製可能」は、ある実施形態では、複製する能力を意味する。他の実施形態では、この用語は、低下したが依然として検出可能な複製レベルを示す株を含む。他の実施形態では、この用語は、測定可能な複製を示す株を意味する。
【０１１２】
ある実施形態では、本発明の方法及び組成物において説明された前記ＨＳＶ変異株は、接種部位から脊髄後根神経節（dorsal root ganglia：ＤＲＧ）へ拡散する能力を欠損している。ある実施形態では、前記脊髄後根神経節は、神経線維の神経細胞体を含む。他の実施形態では、前記ＨＳＶ変異株は、逆方向の拡散能力を欠損している。他の実施形態では、前記ＨＳＶ変異株は、逆方向の拡散能力が低下している。他の実施形態では、前記ＨＳＶ変異株は、逆方向の拡散能力が著しく低下している。他の実施形態では、前記ＨＳＶ変異株は、逆方向の拡散能力が低下しているが、皮膚内で複製可能である。
【０１１３】
ある実施形態では、本発明の方法及び組成物において説明された前記ＨＳＶ変異株は、ＤＲＧから皮膚へ拡散する能力を欠損している。他の実施形態では、前記ＨＳＶ変異株は、順方向の拡散能力を欠損している。他の実施形態では、前記ＨＳＶ変異株は、順方向の拡散能力が低下している。他の実施形態では、前記ＨＳＶ変異株は、順方向の拡散能力が著しく低下している。他の実施形態では、前記ＨＳＶ変異株は、順方向の拡散能力が低下しているが、皮膚内で複製可能である。
【０１１４】
「ＤＲＧ」は、ある実施形態では、神経細胞体を意味する。他の実施形態では、この用語は、当該技術分野で使用される「ＤＲＧ」のその他の定義を意味する。
【０１１５】
「炎症」又は「再発」は、ある実施形態では、潜伏性神経ＨＳＶに感染後の、皮膚組織の再感染を意味する。他の実施形態では、この用語は、潜伏期間後のＨＳＶ再活性化を意味する。他の実施形態では、この用語は、無症候性潜伏期間後の症候性ＨＳＶ病変を意味する。
【０１１６】
ある実施形態では、本発明のＨＳＶ変異株は、特定の組織又は全般（例えば神経組織）において、複製能力を欠損している。ウイルス複製を測定する方法は当該技術分野では公知であり、ある実施形態では、接種部位近傍の組織サンプルのタイター分析を含む。他の実施形態では、接種部位近傍の組織サンプルから回収した感染ウイルスが使用される（本明細書中の例）。本発明の方法及び組成物において説明されたウイルス複製測定方法の他の実施形態は、例えば、「Thi TN et al. (Rapid determination of antiviral drug susceptibility of Herpes Simplex Virus types 1 and 2 by real-time PCR. Antiviral Res. 2006 Mar;69(3): 152-7)」、「Schang LM et al. (Roscovitine, a specific inhibitor of cellular cyclin-dependent kinases, inhibits Herpes Simplex Virus DNA synthesis in the presence of viral early proteins. J Virol. 2000 Mar; 74(5):2107-20)」及び「Kennedy PG et al. (Replication of the Herpes Simplex Virus type 1 RLl mutant 1716 in primary neuronal cell cultures- possible relevance to use as a viral vector. J Neurol Sci. 2000 Oct 1;179(S 1-2):108-14)」に記載されている。
【０１１７】
ある実施形態では、本発明の方法及び組成物において説明された変異株は、対象の神経組織内での拡散が阻害される。他の実施形態では、前記変異株は、対象の神経細胞の培養物内での拡散が阻害される。他の実施形態では、前記変異株は、対象が属する種の神経組織内での拡散が阻害される。他の実施形態では、前記変異株は、対象が属する種の神経組織に由来する細胞株内での拡散が阻害される。他の実施形態では、前記変異株は、対象が属する種の神経細胞の培養物内での拡散が阻害される。他の実施形態では、前記変異株は、対象が属する種の神経細胞に由来する細胞株内での拡散が阻害される。
【０１１８】
ある実施形態では、本発明の方法及び組成物において説明された変異株は、対象の神経組織へ侵入する能力が阻害される。他の実施形態では、前記変異株は、対象の神経細胞の培養物へ侵入する能力が阻害される。他の実施形態では、前記変異株は、対象が属する種の神経組織へ侵入する能力が阻害される。他の実施形態では、前記変異株は、対象が属する種の神経組織に由来する細胞株へ侵入する能力が阻害される。他の実施形態では、前記変異株は、対象が属する種の神経細胞の培養物へ侵入する能力が阻害される。他の実施形態では、前記変異株は、対象が属する種の神経細胞に由来する細胞株へ侵入する能力が阻害される。
【０１１９】
ある実施形態では、本発明の方法及び組成物において説明された変異株は、抗ＨＳＶ免疫応答を誘導する。他の実施形態では、前記免疫応答は、前記対象内でのＨＳＶの複製を阻害する。他の実施形態では、前記免疫応答は、前記対象内でのＨＳＶの神経拡散を阻害する。他の実施形態では、前記免疫応答は、前記対象内のＨＳＶ感染細胞を殺滅する。
【０１２０】
ある実施形態では、本発明の方法及び組成物において説明されたＨＳＶ変異株は、ＨＳＶ−１変異株である。他の実施形態では、前記ＨＳＶ−１変異株は、ＨＳＶ−１の感染、拡散又はその結果（例えば、帯状疱疹様病変やヘルペス性眼疾患）に対する防御を付与する。他の実施形態では、前記ＨＳＶ変異株は、ＨＳＶ−２変異株である。他の実施形態では、前記ＨＳＶ−２変異株は、ＨＳＶ−２の感染、拡散又はその結果（例えば、帯状疱疹様病変やヘルペス性眼疾患）に対する防御を付与する。他の実施形態では、ＨＳＶ変異株は、当該技術分野で既知のその他のＨＳＶ−１変異株である。
【０１２１】
ある実施形態では、本発明のＨＳＶ−１変異株は、野生型ＨＳＶ−１の感染に関連する感染症及び疾患及び症状から対象を防御する。他の実施形態では、前記疾患及び症状は、口唇ヘルペス（冷たい傷又は発熱する水膨れ）を含む。他の実施形態では、前記疾患及び症状は、ＨＳＶ媒介性の角膜疾患を含む。他の実施形態では、前記疾患及び症状は、ヘルペス媒介性の網膜炎を含む。他の実施形態では、前記疾患及び症状は、ヘルペス媒介性の脳炎を含む。他の実施形態では、前記疾患及び症状は、ＨＳＶ−１媒介性の生殖器潰瘍性疾患を含む。他の実施形態では、本発明のＨＳＶ−１変異株は、ＨＳＶ−１感染に対する実質的な防御、及びＨＳＶ−２感染に関連する１つ以上の症状に対する部分的な防御を提供する。他の実施形態では、前記ＨＳＶ−２感染に関連する症状は、本明細書中で上述した症状を含む。
【０１２２】
他の実施形態では、前記疾患及び症状は、免疫不全者（ＨＩＶ感染者を含む）におけるＨＳＶ感染症を含む。他の実施形態では、本発明のＨＳＶ−１変異体は、ワクチン接種された母体から新生児への生殖器ＨＳＶ−１の伝染を予防又は抑制する。他の実施形態では、本発明のＨＳＶ−１変異体は、高齢者におけるＨＳＶを治療、抑制、予防、又は抑止する。
【０１２３】
ある実施形態では、本発明のＨＳＶ−２変異株は、野生型ＨＳＶ−２の感染に関連する感染症及び疾患及び症状から対象を防御する。他の実施形態では、前記ＨＳＶ−２変異体は、ワクチン接種された母体から新生児への生殖器ＨＳＶ−１の伝染を予防又は抑制する。他の実施形態では、前記ＨＳＶ−２変異体は、生殖器潰瘍性疾患を予防又は抑制する。他の実施形態では、前記ＨＳＶ−２変異体は、ＨＳＶ−２及びＨＳＶ−１の両方に対する実質的な防御を提供する。
【０１２４】
本発明の方法のいずれか、及びある実施形態では、前記感染はＨＳＶ−１感染である。他の実施形態では、前記感染はＨＳＶ−２感染である。
【０１２５】
本発明に係る方法のいずれか、及びある実施形態では、前記ワクチン株は、対象をある株から防御する場合に、その株（チャレンジ株）とは異なる種に由来する。他の実施形態では、前記ワクチン株は、チャレンジ株と同一の種である。
【０１２６】
ある実施形態では、本発明の方法及び組成物において説明されたワクチンは、異種ＨＳＶによるチャレンジから対象を防御する。他の実施形態では、前記異種チャレンジ株（heterologous challenge）は、同一の種の異なる株である。他の実施形態では、ＨＳＶ−１ワクチン変異株の場合、前記ワクチンは異種ＨＳＶ−１株に対して防御する。他の実施形態では、ＨＳＶ−２ワクチン変異株の場合、前記ワクチンは異種ＨＳＶ−２株に対して防御する。他の実施形態では、前記非相同株は、前記ワクチン株に対して著しく異種である抗原タンパク質を有する。他の実施形態では、前記抗原タンパク質は、ｇＤである。他の実施形態では、前記抗原タンパク質は、ｇＢである。他の実施形態では、前記抗原タンパク質は、当該技術分野で既知のその他の抗原タンパク質である。
【０１２７】
ある実施形態では、前記異種株は、前記ワクチン株に対して著しく異種であるｇＤタンパク質を有する。他の実施形態では、前記異種株の前記ｇＤタンパク質は、前記ワクチン株と５０％の相同性を有する。他の実施形態では、前記ｇＤタンパク質と前記ワクチン株との間の相同性は５５％である。他の実施形態では、前記相同性は、６０％である。他の実施形態では、前記相同性は、６５％である。他の実施形態では、前記相同性は、７０％である。他の実施形態では、前記相同性は、７５％である。他の実施形態では、前記相同性は、８０％である。他の実施形態では、前記相同性は、８５％である。他の実施形態では、前記相同性は、９０％である。他の実施形態では、前記相同性は、９５％である。他の実施形態では、前記相同性は、９８％である。他の実施形態では、前記相同性は、９８％を超える。
【０１２８】
ある実施形態では、前記異種株は、前記ワクチン株に対して著しく異種であるｇＢタンパク質を有する。他の実施形態では、前記異種株の前記ｇＢタンパク質は、前記ワクチン株と５０％の相同性を有する。他の実施形態では、前記ｇＢタンパク質と前記ワクチン株との間の相同性は５５％である。他の実施形態では、前記相同性は、６０％である。他の実施形態では、前記相同性は、６５％である。他の実施形態では、前記相同性は、７０％である。他の実施形態では、前記相同性は、７５％である。他の実施形態では、前記相同性は、８０％である。他の実施形態では、前記相同性は、８５％である。他の実施形態では、前記相同性は、９０％である。他の実施形態では、前記相同性は、９５％である。他の実施形態では、前記相同性は、９８％である。他の実施形態では、前記相同性は、９８％を超える。
【０１２９】
ある実施形態では、前記異種チャレンジ株は、ＨＳＶ−１ ＮＳである。他の実施形態では、前記異種チャレンジ株は、ＨＳＶ−１（Ｆ）である。他の実施形態では、前記異種チャレンジ株は、ＨＳＶ−１（１７）である。他の実施形態では、前記異種チャレンジ株は、当該技術分野で既知のその他のＨＳＶ−１株である。
【０１３０】
ある実施形態では、前記異種チャレンジ株は、ＨＳＶ−２（２．１２）である。他の実施形態では、前記異種チャレンジ株は、当該技術分野で既知のその他のＨＳＶ−２株である。
【０１３１】
ある実施形態では、前記異種チャレンジ株は、ＨＳＶの異種である。他の実施形態では、ＨＳＶ−１変異株の場合、前記ワクチンはＨＳＶ−２チャレンジ株に対する防御を付与する。他の実施形態では、ＨＳＶ−２変異株の場合、前記ワクチンはＨＳＶ−１チャレンジ株に対する防御を付与する。
【０１３２】
ある実施形態では、本発明の方法及び組成物において説明されたワクチンは、ＨＳＶの大量接種によるチャレンジ株から対象を防御する。他の実施形態では、前記大量接種は、１０６ｐｆｕ（プラーク形成単位）である。他の実施形態では、前記接種量は、１．５×１０６ｐｆｕである。他の実施形態では、前記接種量は、２×１０６ｐｆｕである。他の実施形態では、前記接種量は、３×１０６ｐｆｕである。他の実施形態では、前記接種量は、４×１０６ｐｆｕである。他の実施形態では、前記接種量は、５×１０６ｐｆｕである。他の実施形態では、前記接種量は、７×１０６ｐｆｕである。他の実施形態では、前記接種量は、１×１０７ｐｆｕである。他の実施形態では、前記接種量は、１．５×１０７ｐｆｕである。他の実施形態では、前記接種量は、２×１０７ｐｆｕである。他の実施形態では、前記接種量は、３×１０７ｐｆｕである。他の実施形態では、前記接種量は、４×１０７ｐｆｕである。他の実施形態では、前記接種量は、５×１０７ｐｆｕである。他の実施形態では、前記接種量は、７×１０７ｐｆｕである。他の実施形態では、前記接種量は、１０８ｐｆｕである。他の実施形態では、前記接種量は、１０３〜１０６ｐｆｕである。他の実施形態では、前記接種量は、１０３〜１０５ｐｆｕである。他の実施形態では、前記接種量は、１０４〜１０６ｐｆｕである。他の実施形態では、前記接種量は、３×１０４〜３×１０６ｐｆｕである。他の実施形態では、前記接種量は、１０４〜１０７ｐｆｕである。他の実施形態では、前記接種量は、３×１０４〜３×１０７ｐｆｕである。他の実施形態では、前記接種量は、１０５〜１０８ｐｆｕである。他の実施形態では、前記接種量は、３×１０５〜３×１０８ｐｆｕである。他の実施形態では、前記接種量は、１０８ｐｆｕを超える量である。
【０１３３】
ある実施形態では、本発明の方法及び組成物において説明されたワクチンは、神経節への感染が不能であるため、ｇＥ含有ＨＳＶワクチン株と比較して向上した安全性を示す。他の実施形態では、本発明の方法は、神経内での拡散が不能であるため、ｇＥ含有ＨＳＶワクチン株と比較して向上した安全性を示す。
【０１３４】
本発明の方法の他の実施形態では、ＨＳＶ変異粒子の投与量の様々な実施形態を用いることができる。他の実施形態では、前記投与量は、１０３ｐｆｕである。他の実施形態では、前記投与量は、２×１０３ｐｆｕである。他の実施形態では、前記投与量は、３×１０３ｐｆｕである。他の実施形態では、前記投与量は、５×１０３ｐｆｕである。他の実施形態では、前記投与量は、１０４ｐｆｕである。他の実施形態では、前記投与量は、１．５×１０４ｐｆｕである。他の実施形態では、前記投与量は、２×１０４ｐｆｕである。他の実施形態では、前記投与量は、３×１０４ｐｆｕである。他の実施形態では、前記投与量は、５×１０４ｐｆｕである。他の実施形態では、前記投与量は、７×１０４ｐｆｕである。他の実施形態では、前記投与量は、１０５ｐｆｕである。他の実施形態では、前記投与量は、２×１０５ｐｆｕである。他の実施形態では、前記投与量は、３×１０５ｐｆｕである。他の実施形態では、前記投与量は、５×１０５ｐｆｕである。他の実施形態では、前記投与量は、７×１０５ｐｆｕである。他の実施形態では、前記投与量は、１０６ｐｆｕである。他の実施形態では、前記投与量は、２×１０６ｐｆｕである。他の実施形態では、前記投与量は、３×１０６ｐｆｕである。他の実施形態では、前記投与量は、５×１０６ｐｆｕである。他の実施形態では、前記投与量は、７×１０６ｐｆｕである。他の実施形態では、前記投与量は、１０７ｐｆｕである。他の実施形態では、前記投与量は、２×１０７ｐｆｕである。他の実施形態では、前記投与量は、３×１０７ｐｆｕである。他の実施形態では、前記投与量は、５×１０７ｐｆｕである。他の実施形態では、前記投与量は、７×１０７ｐｆｕである。他の実施形態では、前記投与量は、１０８ｐｆｕである。他の実施形態では、前記投与量は、２×１０８ｐｆｕである。他の実施形態では、前記投与量は、３×１０８ｐｆｕである。他の実施形態では、前記投与量は、５×１０８ｐｆｕである。他の実施形態では、前記投与量は、７×１０８ｐｆｕである。
【０１３５】
他の実施形態では、前記投与量は、１０３ｐｆｕ／回である。他の実施形態では、前記投与量は、２×１０３ｐｆｕ／回である。他の実施形態では、前記投与量は、３×１０３ｐｆｕ／回である。他の実施形態では、前記投与量は、５×１０３ｐｆｕ／回である。他の実施形態では、前記投与量は、１０４ｐｆｕ／回である。他の実施形態では、前記投与量は、１．５×１０４ｐｆｕ／回である。他の実施形態では、前記投与量は、２×１０４ｐｆｕ／回である。他の実施形態では、前記投与量は、３×１０４ｐｆｕ／回である。他の実施形態では、前記投与量は、５×１０４ｐｆｕ／回である。他の実施形態では、前記投与量は、７×１０４ｐｆｕ／回である。他の実施形態では、前記投与量は、１０５ｐｆｕ／回である。他の実施形態では、前記投与量は、２×１０５ｐｆｕ／回である。他の実施形態では、前記投与量は、３×１０５ｐｆｕ／回である。他の実施形態では、前記投与量は、５×１０５ｐｆｕ／回である。他の実施形態では、前記投与量は、７×１０５ｐｆｕ／回である。他の実施形態では、前記投与量は、１０６ｐｆｕ／回である。他の実施形態では、前記投与量は、２×１０６ｐｆｕ／回である。他の実施形態では、前記投与量は、３×１０６ｐｆｕ／回である。他の実施形態では、前記投与量は、５×１０６ｐｆｕ／回である。他の実施形態では、前記投与量は、７×１０６ｐｆｕ／回である。他の実施形態では、前記投与量は、１０７ｐｆｕ／回である。他の実施形態では、前記投与量は、２×１０７ｐｆｕ／回である。他の実施形態では、前記投与量は、３×１０７ｐｆｕ／回である。他の実施形態では、前記投与量は、５×１０７ｐｆｕ／回である。他の実施形態では、前記投与量は、７×１０７ｐｆｕ／回である。他の実施形態では、前記投与量は、１０８ｐｆｕ／回である。他の実施形態では、前記投与量は、２×１０８ｐｆｕ／回である。他の実施形態では、前記投与量は、３×１０８ｐｆｕ／回である。他の実施形態では、前記投与量は、５×１０８ｐｆｕ／回である。他の実施形態では、前記投与量は、７×１０８ｐｆｕ／回である。他の実施形態では、前記投与量は、１０８ｐｆｕを超える量である。他の実施形態では、前記投与量は、１０３〜１０６ｐｆｕである。他の実施形態では、前記投与量は、１０３〜１０５ｐｆｕである。他の実施形態では、前記投与量は、１０４〜１０６ｐｆｕである。他の実施形態では、前記投与量は、３×１０４〜３×１０６ｐｆｕである。他の実施形態では、前記投与量は、１０４〜１０７ｐｆｕである。他の実施形態では、前記投与量は、３×１０４〜３×１０７ｐｆｕである。他の実施形態では、前記投与量は、１０５〜１０８ｐｆｕである。他の実施形態では、前記投与量は、３×１０５〜３×１０８ｐｆｕである。
【０１３６】
ある実施形態では、「治療」は、上述したような標的とされる病状又は疾患の予防又は軽減を目的とした治療処置及び予防対策の両方を意味する。したがって、ある実施形態では、治療は、疾病、疾患、病状又はそれらの組み合わせに関連する症状に対しての、直接的な影響、治癒、抑制、抑止、予防、重症度の低減、発病の遅延、症状の軽減を含む。それ故に、ある実施形態では、「治療」は、とりわけ、進行の遅延、寛解の促進、寛解の誘導、寛解の増大、迅速な回復、他の治療の効果増大又は他の治療への抵抗減少、或いはそれらの組み合わせを意味する。ある実施形態では、「予防」は、とりわけ、症状の発症遅延、疾病の再発予防、再発の発生回数又は頻度の減少、病状発生間の潜伏時間の増加、或いはそれらの組み合わせを意味する。ある実施形態では、「抑制」又は「抑止」は、とりわけ、病状の重症度の低減、急性発作の重症度の低減、症状の回数の減少、疾患関連症状の発生率の低減、症状の潜伏時間の減少、症状の改善、二次的症状の減少、二次的感染の減少、対象の生存期間の延長、或いはそれらの組み合わせを意味する。
【０１３７】
ある実施形態では、症状は一次的である。一方、他の実施形態では、症状は二次的である。ある実施形態では、「一次的」は、対象がウイルス感染した結果として直接的に生じた症状を意味する。一方、ある実施形態では、「二次的」は、一次的要因に由来する症状を意味する。ある実施形態では、本発明で使用する化合物及び株は、ＨＳＶ感染に関連する一次的若しくは二次的症状又は二次的な合併症を治療する。
【０１３８】
他の実施形態では、「症状」は、ＨＳＶ感染のその他の兆候であり得え、女性の尿道、頸部、大腿上部及び／又は肛門並びに男性のペニス、尿道、陰嚢、大腿上部及び／又は肛門における水膨れ、潰瘍又は病変、炎症、腫れ、発熱、インフルエンザ様症状、口内炎、咽喉炎、咽頭炎、痛み、炎症、舌、口又は唇における水膨れ、潰瘍、冷たい傷、頸痛、リンパ節肥大、発赤、出血、そう痒、排尿障害、頭痛、筋肉痛、或いはそれらの組み合わせを含む。
【０１３９】
ある実施形態では、本発明の方法及び組成物において説明された前記ｇＥタンパク質は、次の配列を持つ。
【０１４０】
ＭＤＲＧＡＶＶＧＦＬＬＧＶＣＶＶＳＣＬＡＧＴＰＫＴＳＷＲＲＶＳＶＧＥＤＶＳＬＬＰＡＰＧＰＴＧＲＧＰＴＱＫＬＬＷＡＶＥＰＬＤＧＣＧＰＬＨＰＳＷＶＳＬＭＰＰＫＱＶＰＥＴＶＶＤＡＡＣＭＲＡＰＶＰＬＡＭＡＹＡＰＰＡＰＳＡＴＧＧＬＲＴＤＦＶＷＱＥＲＡＡＶＶＮＲＳＬＶＥＨＧＶＲＥＴＤＳＧＬＹＴＬＳＶＧＤＩＫＤＰＡＲＱＶＳＶＶＬＶＶＱＰＡＰＶＰＴＰＰＰＴＰＡＤＹＤＥＤＤＮＤＥＧＥＤＥＳＬＡＧＴＰＡＳＧＴＰＲＬＰＰＰＰＡＰＰＲＳＷＰＳＡＰＥＶＳＨＶＲＧＶＴＶＲＭＥＴＰＥＡＩＬＦＳＰＧＥＴＦＳＴＮＶＳＩＨＡＩＡＨＤＤＱＴＹＳＭＤＶＶＷＬＲＦＤＶＰＴＳＣＡＥＭＲＩＹＥＳＣＬＹＨＰＱＬＰＥＣＬＳＰＡＤＡＰＣＡＡＳＴＷＴＳＲＬＡＶＲＳＹＡＧＣＳＲＴＮＰＰＰＲＣＳＡＥＡＨＭＥＰＶＰＧＬＡＷＱＡＡＳＶＮＬＥＦＲＤＡＳＰＱＨＳＧＬＹＬＣＶＶＹＶＮＤＨＩＨＡＷＧＨＩＴＩＳＴＡＡＱＹＲＮＡＶＶＥＱＰＬＰＱＲＧＡＤＬＡＥＰＴＨＰＨＶＧＡＰＰＨＡＰＰＴＨＧＡＬＲＬＧＡＶＭＧＡＡＬＬＬＳＡＬＧＬＳＶＷＡＣＭＴＣＷＲＲＲＡＷＲＡＶＫＳＲＡＳＧＫＧＰＴＹＩＲＶＡＤＳＥＬＹＡＤＷＳＳＤＳＥＧＥＲＤＱＶＰＷＬＡＰＰＥＲＰＤＳＰＳＴＮＧＳＧＦＥＩＬＳＰＴＡＰＳＶＹＰＲＳＤＧＨＱＳＲＲＱＬＴＴＦＧＳＧＲＰＤＲＲＹＳＱＡＳＤＳＳＶＦＷ（配列番号２）。他の実施形態では、前記ｇＥタンパク質は、配列番号２の相同体である。他の実施形態では、前記ヌクレオチド分子は、配列番号２の配列の変異体である。他の実施形態では、前記ヌクレオチド分子は、配列番号２の配列のイソ型である。他の実施形態では、前記ヌクレオチド分子は、配列番号２の配列の断片である。他の実施形態では、前記ヌクレオチド分子は、配列番号２の配列を含む。
【０１４１】
他の実施形態では、前記ｇＥタンパク質は、次の配列を持つヌクレオチド配列によってエンコードされている。ａｔｇｇａｔｃｇｃｇｇｇｇｃｇｇｔｇｇｔｇｇｇｇｔｔｔｃｔｔｃｔｃｇｇｔｇｔｔｔｇｔｇｔｔｇｔａｔｃｇｔｇｃｔｔｇｇｃｇｇｇａａｃｇｃｃｃａａａａｃｇｔｃｃｔｇｇａｇａｃｇｇｇｔｇａｇｔｇｔｃｇｇｃｇａｇｇａｃｇｔｔｔｃｇｔｔｇｃｔｔｃｃａｇｃｔｃｃｇｇｇｇｃｃｔａｃｇｇｇｇｃｇｃｇｇｃｃｃｇａｃｃｃａｇａａａｃｔａｃｔａｔｇｇｇｃｃｇｔｇｇａａｃｃｃｃｔｇｇａｔｇｇｇｔｇｃｇｇｃｃｃｃｔｔａｃａｃｃｃｇｔｃｇｔｇｇｇｔｃｔｃｇｃｔｇａｔｇｃｃｃｃｃｃａａｇｃａｇｇｔｇｃｃｃｇａｇａｃｇｇｔｃｇｔｇｇａｔｇｃｇｇｃｇｔｇｃａｔｇｃｇｃｇｃｔｃｃｇｇｔｃｃｃｇｃｔｇｇｃｇａｔｇｇｃｇｔａｃｇｃｃｃｃｃｃｃｇｇｃｃｃｃａｔｃｔｇｃｇａｃｃｇｇｇｇｇｔｃｔａｃｇａａｃｇｇａｃｔｔｃｇｔｇｔｇｇｃａｇｇａｇｃｇｃｇｃｇｇｃｃｇｔｇｇｔｔａａｃｃｇｇａｇｔｃｔｇｇｔｔａｔｔｃａｃｇｇｇｇｔｃｃｇａｇａｇａｃｇｇａｃａｇｃｇｇｃｃｔｇｔａｔａｃｃｃｔｇｔｃｃｇｔｇｇｇｃｇａｃａｔａａａｇｇａｃｃｃｇｇｃｔｃｇｃｃａａｇｔｇｇｃｃｔｃｇｇｔｇｇｔｃｃｔｇｇｔｇｇｔｇｃａａｃｃｇｇｃｃｃｃａｇｔｔｃｃｇａｃｃｃｃａｃｃｃｃｃｇａｃｃｃｃａｇｃｃｇａｔｔａｃｇａｃｇａｇｇａｔｇａｃａａｔｇａｃｇａｇｇｇｃｇａｇｇａｃｇａａａｇｔｃｔｃｇｃｃｇｇｃａｃｔｃｃｃｇｃｃａｇｃｇｇｇａｃｃｃｃｃｃｇｇｃｔｃｃｃｇｃｃｔｃｃｃｃｃｃｇｃｃｃｃｃｃｃｇａｇｇｔｃｔｔｇｇｃｃｃａｇｃｇｃｃｃｃｃｇａａｇｔｃｔｃａｃａｔｇｔｇｃｇｔｇｇｇｇｔｇａｃｃｇｔｇｃｇｔａｔｇｇａｇａｃｔｃｃｇｇａａｇｃｔａｔｃｃｔｇｔｔｔｔｃｃｃｃｃｇｇｇｇａｇａｃｇｔｔｃａｇｃａｃｇａａｃｇｔｃｔｃｃａｔｃｃａｔｇｃｃａｔｃｇｃｃｃａｃｇａｃｇａｃｃａｇａｃｃｔａｃｔｃｃａｔｇｇａｃｇｔｃｇｔｃｔｇｇｔｔｇａｇｇｔｔｃｇａｃｇｔｇｃｃｇａｃｃｔｃｇｔｇｔｇｃｃｇａｇａｔｇｃｇａａｔａｔａｃｇａａｔｃｇｔｇｔｃｔｇｔａｔｃａｃｃｃｇｃａｇｃｔｃｃｃａｇａａｔｇｔｃｔｇｔｃｃｃｃｇｇｃｃｇａｃｇｃｇｃｃｇｔｇｃｇｃｃｇｃｇａｇｔａｃｇｔｇｇａｃｇｔｃｔｃｇｃｃｔｇｇｃｃｇｔｃｃｇｃａｇｃｔａｃｇｃｇｇｇｇｔｇｔｔｃｃａｇａａｃａａａｃｃｃｃｃｃａｃｃｇｃｇｃｔｇｔｔｃｇｇｃｃｇａｇｇｃｔｃａｃａｔｇｇａｇｃｃｃｇｔｃｃｃｇｇｇｇｃｔｇｇｃｇｔｇｇｃａｇｇｃｇｇｃｃｔｃｃｇｔｃａａｔｃｔｇｇａｇｔｔｃｃｇｇｇａｃｇｃｇｔｃｃｃｃａｃａａｃａｃｔｃｃｇｇｃｃｔｇｔａｔｃｔｇｔｇｔｇｔｇｇｔｇｔａｃｇｔｃａａｃｇａｃｃａｔａｔｔｃａｃｇｃｃｔｇｇｇｇｃｃａｃａｔｔａｃｃａｔｃａｇｃａｃｃｇｃｇｇｃｇｃａｇｔａｃｃｇｇａａｃｇｃｇｇｔｇｇｔｇｇａａｃａｇｃｃｃｃｔｃｃｃａｃａｇｃｇｃｇｇｃｇｃｇｇａｔｔｔｇｇｃｃｇａｇｃｃｃａｃｃｃａｃｃｃｇｃａｃｇｔｃｇｇｇｇｃｃｃｃｔｃｃｃｃａｃｇｃｇｃｃｃｃｃａａｃｃｃａｃｇｇｃｇｃｃｃｔｇｃｇｇｔｔａｇｇｇｇｃｇｇｔｇａｔｇｇｇｇｇｃｃｇｃｃｃｔｇｃｔｇｃｔｇｔｃｔｇｃａｃｔｇｇｇｇｔｔｇｔｃｇｇｔｇｔｇｇｇｃｇｔｇｔａｔｇａｃｃｔｇｔｔｇｇｃｇｃａｇｇｃｇｔｇｃｃｔｇｇｃｇｇｇｃｇｇｔｔａａａａｇｃａｇｇｇｃｃｔｃｇｇｇｔａａｇｇｇｇｃｃｃａｃｇｔａｃａｔｔｃｇｃｇｔｇｇｃｃｇａｃａｇｃｇａｇｃｔｇｔａｃｇｃｇｇａｃｔｇｇａｇｃｔｃｇｇａｃａｇｃｇａｇｇｇａｇａａｃｇｃｇａｃｃａｇｇｔｃｃｃｇｔｇｇｃｔｇｇｃｃｃｃｃｃｃｇｇａｇａｇａｃｃｃｇａｃｔｃｔｃｃｃｔｃｃａｃｃａａｔｇｇａｔｃｃｇｇｃｔｔｔｇａｇａｔｃｔｔａｔｃａｃｃａａｃｇｇｃｔｃｃｇｔｃｔｇｔａｔａｃｃｃｃｃｇｔａｇｃｇａｔｇｇｇｃａｔｃａａｔｃｔｃｇｃｃｇｃｃａｇｃｔｃａｃａａｃｃｔｔｔｇｇａｔｃｃｇｇａａｇｇｃｃｃｇａｔｃｇｃｃｇｔｔａｃｔｃｃｃａｇｇｃｃｔｃｃｇａｔｔｃｇｔｃｃｇｔｃｔｔｃｔｇｇｔａａ（配列番号３）。他の実施形態では、前記ｇＥタンパク質は、配列番号３の配列と相同するヌクレオチド分子によってエンコードされている。他の実施形態では、前記ヌクレオチド分子は、配列番号３の配列の変異体である。他の実施形態では、前記ヌクレオチド分子は、配列番号３の配列のイソ型である。他の実施形態では、前記ヌクレオチド分子は、配列番号３の配列の断片である。他の実施形態では、前記ヌクレオチド分子は、配列番号３の配列を含む。
【０１４２】
他の実施形態では、本発明の方法及び組成物において説明された前記ｇＥタンパク質は、次の配列を持つ。
【０１４３】
ＭＤＲＧＡＶＶＧＦＬＬＧＶＣＶＶＳＣＬＡＧＴＰＫＴＳＷＲＲＶＳＶＧＥＤＶＳＬＬＰＡＰＧＰＴＧＲＧＰＴＱＫＬＬＷＡＶＥＰＬＤＧＣＧＰＬＨＰＳＷＶＳＬＭＰＰＫＱＶＰＥＴＶＶＤＡＡＣＭＲＡＰＶＰＬＡＭＡＹＡＰＰＡＰＳＡＴＧＧＬＲＴＤＦＶＷＱＥＲＡＡＶＶＮＲＳＬＶＩＹＧＶＲＥＴＤＳＧＬＹＴＬＳＶＧＤＩＫＤＰＡＲＱＶＡＳＶＶＬＶＶＱＰＡＰＶＰＴＰＰＰＴＰＡＤＹＤＥＤＤＮＤＥＧＥＧＥＤＥＳＬＡＧＴＰＡＳＧＴＰＲＬＰＰＳＰＡＰＰＲＳＷＰＳＡＰＥＶＳＨＶＲＧＶＴＶＲＭＥＴＰＥＡＩＬＦＳＰＧＥＡＦＳＴＮＶＳＩＨＡＩＡＨＤＤＱＴＹＴＭＤＶＶＷＬＲＦＤＶＰＴＳＣＡＥＭＲＩＹＥＳＣＬＹＨＰＱＬＰＥＣＬＳＰＡＤＡＰＣＡＡＳＴＷＴＳＲＬＡＶＲＳＹＡＧＣＳＲＴＮＰＰＰＲＣＳＡＥＡＨＭＥＰＦＰＧＬＡＷＱＡＡＳＶＮＬＥＦＲＤＡＳＰＱＨＳＧＬＹＬＣＶＶＹＶＮＤＨＩＨＡＷＧＨＩＴＩＮＴＡＡＱＹＲＮＡＶＶＥＱＰＬＰＱＲＧＡＤＬＡＥＰＴＨＰＨＶＧＡＰＰＨＡＰＰＴＨＧＡＬＲＬＧＡＶＭＧＡＡＬＬＬＳＡＬＧＬＳＶＷＡＣＭＴＣＷＲＲＲＡＷＲＡＶＫＳＲＡＳＧＫＧＰＴＹＩＲＶＡＤＳＥＬＹＡＤＷＳＳＤＳＥＧＥＲＤＱＶＰＷＬＡＰＰＥＲＰＤＳＰＳＴＮＧＳＧＦＥＩＬＳＰＴＡＰＳＶＹＰＲＳＤＧＨＱＳＲＲＱＬＴＴＦＧＳＧＲＰＤＲＲＹＳＱＡＳＤＳＳＶＦＷ（配列番号４）。他の実施形態では、前記ｇＥタンパク質は、配列番号４の相同体である。他の実施形態では、前記ヌクレオチド分子は、配列番号４の配列の変異体である。他の実施形態では、前記ヌクレオチド分子は、配列番号４の配列のイソ型である。他の実施形態では、前記ヌクレオチド分子は、配列番号４の配列の断片である。他の実施形態では、前記ヌクレオチド分子は、配列番号４の配列を含む。
【０１４４】
他の実施形態では、前記ｇＥタンパク質は、次の配列を持つヌクレオチド配列によってエンコードされている。
【０１４５】
ａｔｇｇａｔｃｇｃｇｇｇｇｃｇｇｔｇｇｔｇｇｇｇｔｔｔｃｔｔｃｔｃｇｇｔｇｔｔｔｇｔｇｔｔｇｔａｔｃｇｔｇｃｔｔｇｇｃｇｇｇａａｃｇｃｃｃａａａａｃｇｔｃｃｔｇｇａｇａｃｇｇｇｔｇａｇｔｇｔｃｇｇｃｇａｇｇａｃｇｔｔｔｃｇｔｔｇｃｔａｃｃａｇｃｔｃｃｇｇｇｇｃｃｔａｃｇｇｇｇｃｇｃｇｇｃｃｃｇａｃｃｃａｇａａａｃｔａｃｔａｔｇｇｇｃｃｇｔｇｇａａｃｃｃｃｔｇｇａｔｇｇｇｔｇｃｇｇｃｃｃｃｔｔａｃａｃｃｃｇｔｃｇｔｇｇｇｔｃｔｃｇｃｔｇａｔｇｃｃｃｃｃｃａａｇｃａｇｇｔａｃｃｃｇａｇａｃｇｇｔｃｇｔｇｇａｔｇｃｇｇｃｇｔｇｃａｔｇｃｇｃｇｃｔｃｃｇｇｔｃｃｃｇｃｔｇｇｃｇａｔｇｇｃａｔａｃｇｃｃｃｃｃｃｃｇｇｃｃｃｃａｔｃｔｇｃｇａｃｃｇｇｇｇｇｔｃｔａｃｇｇａｃｇｇａｃｔｔｃｇｔｇｔｇｇｃａｇｇａｇｃｇｃｇｃｇｇｃｃｇｔｇｇｔｔａａｃｃｇｇａｇｔｃｔｇｇｔｔａｔｔｔａｃｇｇｇｇｔｃｃｇａｇａｇａｃｇｇａｃａｇｃｇｇｃｃｔｇｔａｔａｃｃｃｔｇｔｃｔｇｔｇｇｇｃｇａｃａｔａａａｇｇａｃｃｃｇｇｃｔｃｇｃｃａａｇｔｇｇｃｃｔｃｇｇｔｇｇｔｃｃｔｇｇｔｇｇｔｇｃａａｃｃｇｇｃｃｃｃａｇｔｔｃｃｇａｃｔｃｃａｃｃｃｃｃｇａｃｃｃｃａｇｃｃｇａｔｔａｃｇａｃｇａｇｇａｔｇａｃａａｔｇａｃｇａｇｇｇｃｇａｇｇｇｃｇａｇｇａｃｇａａａｇｔｃｔａｇｃｃｇｇｃａｃｔｃｃｃｇｃｃａｇｃｇｇｇａｃｃｃｃｃｃｇｇｃｔｃｃｃｇｃｃｔｔｃｃｃｃｃｇｃｃｃｃｃｃｃｇａｇｇｔｃｔｔｇｇｃｃｃａｇｃｇｃｃｃｃｃｇａａｇｔｃｔｃａｃａｃｇｔｇｃｇｔｇｇｇｇｔｇａｃｃｇｔｇｃｇｔａｔｇｇａｇａｃｔｃｃｇｇａａｇｃｔａｔｃｃｔｇｔｔｔｔｃｃｃｃｃｇｇｇｇａｇｇｃｇｔｔｔａｇｃａｃｇａａｃｇｔｃｔｃｃａｔｃｃａｔｇｃｃａｔｃｇｃｃｃａｃｇａｃｇａｃｃａｇａｃｃｔａｃａｃｃａｔｇｇａｃｇｔｃｇｔｃｔｇｇｔｔｇａｇｇｔｔｃｇａｃｇｔｇｃｃｇａｃｃｔｃｇｔｇｔｇｃｃｇａｇａｔｇｃｇａａｔａｔａｃｇａａｔｃｇｔｇｔｃｔｇｔａｔｃａｔｃｃｇｃａｇｃｔｃｃｃａｇａｇｔｇｔｃｔｇｔｃｃｃｃｇｇｃｃｇａｃｇｃｔｃｃｇｔｇｃｇｃｃｇｃｇａｇｔａｃｇｔｇｇａｃｇｔｃｔｃｇｃｃｔｇｇｃｃｇｔｃｃｇｃａｇｃｔａｃｇｃｇｇｇｇｔｇｔｔｃｃａｇａａｃａａａｃｃｃｃｃｃｇｃｃｇｃｇｃｔｇｔｔｃｇｇｃｃｇａｇｇｃｔｃａｃａｔｇｇａｇｃｃｃｔｔｃｃｃｇｇｇｇｃｔｇｇｃｇｔｇｇｃａｇｇｃｇｇｃｃｔｃａｇｔｃａａｔｃｔｇｇａｇｔｔｃｃｇｇｇａｃｇｃｇｔｃｃｃｃａｃａａｃａｃｔｃｃｇｇｇｃｔｇｔａｔｃｔｇｔｇｃｇｔｇｇｔｇｔａｃｇｔｃａａｃｇａｃｃａｔａｔｔｃａｃｇｃａｔｇｇｇｇｃｃａｃａｔｔａｃｃａｔｃａａｃａｃｃｇｃｇｇｃｇｃａｇｔａｃｃｇｇａａｃｇｃｇｇｔｇｇｔｇｇａａｃａｇｃｃｃｃｔｃｃｃａｃａｇｃｇｃｇｇｃｇｃｇｇａｔｔｔｇｇｃｃｇａｇｃｃｃａｃｃｃａｃｃｃｇｃａｃｇｔｃｇｇｇｇｃｃｃｃｔｃｃｃｃａｃｇｃｇｃｃｃｃｃａａｃｃｃａｃｇｇｃｇｃｃｃｔｇｃｇｇｔｔａｇｇｇｇｃｇｇｔｇａｔｇｇｇｇｇｃｃｇｃｃｃｔｇｃｔｇｃｔｇｔｃｔｇｃｇｃｔｇｇｇｇｔｔｇｔｃｇｇｔｇｔｇｇｇｃｇｔｇｔａｔｇａｃｃｔｇｔｔｇｇｃｇｃａｇｇｃｇｔｇｃｃｔｇｇｃｇｇｇｃｇｇｔｔａａａａｇｃａｇｇｇｃｃｔｃｇｇｇｔａａｇｇｇｇｃｃｃａｃｇｔａｃａｔｔｃｇｃｇｔｇｇｃｃｇａｃａｇｃｇａｇｃｔｇｔａｃｇｃｇｇａｃｔｇｇａｇｃｔｃｇｇａｃａｇｃｇａｇｇｇａｇａａｃｇｃｇａｃｃａｇｇｔｃｃｃｇｔｇｇｃｔｇｇｃｃｃｃｃｃｃｇｇａｇａｇａｃｃｃｇａｃｔｃｔｃｃｃｔｃｃａｃｃａａｔｇｇａｔｃｃｇｇｃｔｔｔｇａｇａｔｃｔｔａｔｃａｃｃａａｃｇｇｃｔｃｃｇｔｃｔｇｔａｔａｃｃｃｃｃｇｔａｇｃｇａｔｇｇｇｃａｔｃａａｔｃｔｃｇｃｃｇｃｃａｇｃｔｃａｃａａｃｃｔｔｔｇｇａｔｃｃｇｇａａｇｇｃｃｃｇａｔｃｇｃｃｇｔｔａｃｔｃｃｃａｇｇｃｃｔｃｃｇａｔｔｃｇｔｃｃｇｔｃｔｔｃｔｇｇｔａａ（配列番号５）。他の実施形態では、前記ｇＥタンパク質は、配列番号５の配列と相同するヌクレオチド分子によってエンコードされている。他の実施形態では、前記ヌクレオチド分子は、配列番号５の配列の変異体である。他の実施形態では、前記ヌクレオチド分子は、配列番号５の配列のイソ型である。他の実施形態では、前記ヌクレオチド分子は、配列番号５の配列の断片である。他の実施形態では、前記ヌクレオチド分子は、配列番号５の配列を含む。
【０１４６】
他の実施形態では、本発明の方法及び組成物において説明された前記ｇＥタンパク質は、ある実施形態では、次の配列を持つ。
【０１４７】
ＭＡＲＧＡＧＬＶＦＦＶＧＶＷＶＶＳＣＬＡＡＡＰＲＴＳＷＫＲＶＴＳＧＥＤＶＶＬＬＰＡＰＡＥＲＴＲＡＨＫＬＬＷＡＡＥＰＬＤＡＣＧＰＬＲＰＳＷＶＡＬＷＰＰＲＲＶＬＥＴＷＤＡＡＣＭＲＡＰＥＰＬＡＩＡＹＳＰＰＦＰＡＧＤＥＧＬＹＳＥＬＡＷＲＤＲＶＡＶＶＮＥＳＬＶＩＹＧＡＬＥＴＤＳＧＬＹＴＬＳＶＶＧＬＳＤＥＡＲＱＶＡＳＶＶＬＶＶＥＰＡＰＶＰＴＰＴＰＤＤＹＤＥＥＤＤＡＧＶＴＮＡＲＲＳＡＦＰＰＱＰＰＰＲＲＰＰＶＡＰＰＴＨＰＲＶＩＰＥＶＳＨＶＲＧＶＴＶＨＭＥＴＬＥＡＩＬＦＡＰＧＥＴＦＧＴＮＶＳＩＨＡＩＡＨＤＤＧＰＹＡＭＤＶＶＷＭＲＦＤＶＰＳＳＣＡＤＭＲＩＹＥＡＣＬＹＨＰＱＬＰＥＣＬＳＰＡＤＡＰＣＡＶＳＳＷＡＹＲＬＡＶＲＳＹＡＧＣＳＲＴＴＰＰＰＲＣＦＡＥＡＲＭＥＰＶＰＧＬＡＷＬＡＳＴＶＮＬＥＦＱＨＡＳＰＱＨＡＧＬＹＬＣＶＶＹＶＤＤＨＩＨＡＷＧＨＭＴＩＳＴＡＡＱＹＲＮＡＶＶＥＱＨＬＰＱＲＱＰＥＰＶＥＰＴＲＰＨＶＲＡＰＨＰＡＰＳＡＲＧＰＬＲＬＧＡＶＬＧＡＡＬＬＬＡＡＬＧＬＳＡＷＡＣＭＴＣＷＲＲＲＳＷＲＡＶＫＳＲＡＳＡＴＧＰＴＹＴＲＶＡＤＳＥＬＹＡＤＷＳＳＤＳＥＧＥＲＤＧＳＬＷＱＤＰＰＥＲＰＤＳＰＳＴＮＧＳＧＦＥＩＬＳＰＴＡＰＳＶＹＰＨＳＥＧＲＫＳＲＲＰＬＴＴＦＧＳＧＳＰＧＲＲＨＳＱＡＳＹＰＳＶＬＷ（配列番号６；このタンパク質は、実施例１〜５で突然変異される）。他の実施形態では、前記ｇＥタンパク質は、配列番号６の相同体である。他の実施形態では、前記ｇＥタンパク質は、配列番号６の配列の変異体である。他の実施形態では、前記ｇＥタンパク質は、配列番号６の配列のイソ型である。他の実施形態では、前記ｇＥタンパク質は、配列番号６の配列の断片である。他の実施形態では、前記ｇＥタンパク質は、配列番号６の配列を含む。
【０１４８】
他の実施形態では、前記ｇＥタンパク質は、次の配列を持つヌクレオチド配列によってエンコードされている。
【０１４９】
ａｔｇｇｃｔｃｇｃｇｇｇｇｃｃｇｇｇｔｔｇｇｔｇｔｔｔｔｔｔｇｔｔｇｇａｇｔｔｔｇｇｇｔｃｇｔａｔｃｇｔｇｃｃｔｇｇｃｇｇｃａｇｃａｃｃｃａｇａａｃｇｔｃｃｔｇｇａａａｃｇｇｇｔａａｃｃｔｃｇｇｇｃｇａｇｇａｃｇｔｇｇｔｇｔｔｇｃｔｔｃｃｇｇｃｇｃｃｃｇｃｇｇａａｃｇｃａｃｃｃｇｇｇｃｃｃａｃａａａｃｔａｃｔｇｔｇｇｇｃｃｇｃｇｇａａｃｃｃｃｔｇｇａｔｇｃｃｔｇｃｇｇｔｃｃｃｃｔｇｃｇｃｃｃｇｔｃｇｔｇｇｇｔｇｇｃｇｃｔｇｔｇｇｃｃｃｃｃｃｃｇａｃｇｇｇｔｇｃｔｃｇａｇａｃｇｇｔｃｇｔｇｇａｔｇｃｇｇｃｇｔｇｃａｔｇｃｇｃｇｃｃｃｃｇｇａａｃｃｇｃｔｃｇｃｃａｔａｇｃａｔａｃａｇｔｃｃｃｃｃｇｔｔｃｃｃｃｇｃｇｇｇｃｇａｃｇａｇｇｇａｃｔｇｔａｔｔｃｇｇａｇｔｔｇｇｃｇｔｇｇｃｇｃｇａｔｃｇｃｇｔａｇｃｃｇｔｇｇｔｃａａｃｇａｇａｇｔｃｔｇｇｔｃａｔｃｔａｃｇｇｇｇｃｃｃｔｇｇａｇａｃｇｇａｃａｇｃｇｇｔｃｔｇｔａｃａｃｃｃｔｇｔｃｃｇｔｇｇｔｃｇｇｃｃｔａａｇｃｇａｃｇａｇｇｃｇｃｇｃｃａａｇｔｇｇｃｇｔｃｇｇｔｇｇｔｔｃｔｇｇｔｃｇｔｇｇａｇｃｃｃｇｃｃｃｃｔｇｔｇｃｃｇａｃｃｃｃｇａｃｃｃｃｃｇａｃｇａｃｔａｃｇａｃｇａａｇａａｇａｃｇａｃｇｃｇｇｇｃｇｔｇａｃｇａａｃｇｃａｃｇｃｃｇｇｔｃａｇｃｇｔｔｃｃｃｃｃｃｃｃａａｃｃｃｃｃｃｃｃｃｃｇｔｃｇｔｃｃｃｃｃｃｇｔｃｇｃｃｃｃｃｃｃｇａｃｇｃａｃｃｃｔｃｇｔｇｔｔａｔｃｃｃｃｇａｇｇｔｇｔｃｃｃａｃｇｔｇｃｇｃｇｇｇｇｔａａｃｇｇｔｃｃａｔａｔｇｇａｇａｃｃｃｔｇｇａｇｇｃｃａｔｔｃｔｇｔｔｔｇｃｃｃｃｃｇｇｇｇａｇａｃｇｔｔｔｇｇｇａｃｇａａｃｇｔｃｔｃｃａｔｃｃａｃｇｃｃａｔｔｇｃｃｃａｃｇａｃｇａｃｇｇｔｃｃｇｔａｃｇｃｃａｔｇｇａｃｇｔｃｇｔｃｔｇｇａｔｇｃｇｇｔｔｔｇａｃｇｔｇｃｃｇｔｃｃｔｃｇｔｇｃｇｃｃｇａｔａｔｇｃｇｇａｔｃｔａｃｇａａｇｃｔｔｇｔｃｔｇｔａｔｃａｃｃｃｇｃａｇｃｔｔｃｃａｇａｇｔｇｔｃｔａｔｃｔｃｃｇｇｃｃｇａｃｇｃｇｃｃｇｔｇｃｇｃｃｇｔａａｇｔｔｃｃｔｇｇｇｃｇｔａｃｃｇｃｃｔｇｇｃｇｇｔｃｃｇｃａｇｃｔａｃｇｃｃｇｇｃｔｇｔｔｃｃａｇｇａｃｔａｃｇｃｃｃｃｃｇｃｃｇｃｇａｔｇｔｔｔｔｇｃｃｇａｇｇｃｔｃｇｃａｔｇｇａａｃｃｇｇｔｃｃｃｇｇｇｇｔｔｇｇｃｇｔｇｇｃｔｇｇｃｃｔｃｃａｃｃｇｔｃａａｔｃｔｇｇａａｔｔｃｃａｇｃａｃｇｃｃｔｃｃｃｃｃｃａｇｃａｃｇｃｃｇｇｃｃｔｃｔａｃｃｔｇｔｇｃｇｔｇｇｔｇｔａｃｇｔｇｇａｃｇａｔｃａｔａｔｃｃａｃｇｃｃｔｇｇｇｇｃｃａｃａｔｇａｃｃａｔｃａｇｃａｃｃｇｃｇｇｃｇｃａｇｔａｃｃｇｇａａｃｇｃｇｇｔｇｇｔｇｇａａｃａｇｃａｃｃｔｃｃｃｃｃａｇｃｇｃｃａｇｃｃｃｇａｇｃｃｃｇｔｃｇａｇｃｃｃａｃｃｃｇｃｃｃｇｃａｃｇｔｇａｇａｇｃｃｃｃｃｃａｔｃｃｃｇｃｇｃｃｃｔｃｃｇｃｇｃｇｃｇｇｃｃｃｇｃｔｇｃｇｃｃｔｃｇｇｇｇｃｇｇｔｇｃｔｇｇｇｇｇｃｇｇｃｃｃｔｇｔｔｇｃｔｇｇｃｃｇｃｃｃｔｃｇｇｇｃｔｇｔｃｃｇｃｇｔｇｇｇｃｇｔｇｃａｔｇａｃｃｔｇｃｔｇｇｃｇｃａｇｇｃｇｃｔｃｃｔｇｇｃｇｇｇｃｇｇｔｔａａａａｇｃｃｇｇｇｃｃｔｃｇｇｃｇａｃｇｇｇｃｃｃｃａｃｔｔａｃａｔｔｃｇｃｇｔｇｇｃｇｇａｃａｇｃｇａｇｃｔｇｔａｃｇｃｇｇａｃｔｇｇａｇｔｔｃｇｇａｃａｇｃｇａｇｇｇｇｇａｇｃｇｃｇａｃｇｇｇｔｃｃｃｔｇｔｇｇｃａｇｇａｃｃｃｔｃｃｇｇａｇａｇａｃｃｃｇａｃｔｃｔｃｃｃｔｃｃａｃａａａｔｇｇａｔｃｃｇｇｃｔｔｔｇａｇａｔｃｔｔａｔｃａｃｃａａｃｇｇｃｔｃｃｇｔｃｔｇｔａｔａｃｃｃｃｃａｔａｇｃｇａｇｇｇｇｃｇｔａａａｔｃｔｃｇｃｃｇｃｃｃｇｃｔｃａｃｃａｃｃｔｔｔｇｇｔｔｃｇｇｇａａｇｃｃｃｇｇｇｃｃｇｔｃｇｔｃａｃｔｃｃｃａｇｇｃｃｔｃｃｔａｔｃｃｇｔｃｃｇｔｃｃｔｃｔｇｇｔａａ（配列番号：７；このタンパク質は、実施例１〜５で突然変異される）。他の実施形態では、前記ｇＥタンパク質は、配列番号７の配列と相同するヌクレオチド分子によってエンコードされている。他の実施形態では、前記ヌクレオチド分子は、配列番号７の配列の変異体である。他の実施形態では、前記ヌクレオチド分子は、配列番号７の配列のイソ型である。他の実施形態では、前記ヌクレオチド分子は、配列番号７の配列の断片である。他の実施形態では、前記ヌクレオチド分子は、配列番号７の配列を含む。
【０１５０】
ある実施形態では、前記ｇＥタンパク質は、次の遺伝子銀行アクセス番号に規定された配列の１つによってエンコードされている。ＤＱ８８９５０２、ＮＣ＿００１８０６、ＮＣ＿００１７９８、Ｚ８６０９９、Ｘ１４１１２、Ｌ０００３６、Ｘ０２１３８及びＸ０４７９８、並びに、ＡＪ６２６４６９〜ＡＪ６２６４９８のいずれか１つ。他の実施形態では、前記ｇＥタンパク質は、上記の遺伝子銀行アクセス番号に記載されたいずれかの配列の相同体である。他の実施形態では、前記ｇＥタンパク質は、上記の遺伝子銀行アクセス番号に記載されたいずれかの配列の変異体である。他の実施形態では、前記ｇＥタンパク質は、上記の遺伝子銀行アクセス番号に記載されたいずれかの配列の断片である。
【０１５１】
ある実施形態では、ｇＥタンパク質ＨＳＶ１糖タンパク質Ｅ（ｇＥ）は、神経内で拡散するのに必要な（ある実施形態では、軸索に沿って、神経細胞体への方向（逆方向）又は神経細胞体からの方向（順方向）のいずれかの方向に拡散するのに必要な）ビリオン表面タンパク質である。他の実施形態では、ｇＥはまた、ホスト抗体をＨＳＶ−１から隔離して不活性化することにより、ホスト免疫システムの回避を促進する。ある実施形態では、ｇＥを欠失したＨＳＶ−１は皮膚内で複製するが、潜伏を確立する又はホストの抗体反応を回避するために、神経に沿って拡散することはできない。したがって、ある実施形態では、弱毒化した生のｇＥ欠失ＨＳＶ−１又はＨＳＶ−２による感染は、皮膚におけるロバストな免疫応答を誘起し、その後、ホストが野生型ウイルスと遭遇することを防止する。
【０１５２】
ある実施形態では、前記ｇＥタンパク質は、ＨＳＶ−１のｇＥタンパク質である。他の実施形態では、前記ｇＥタンパク質は、ＨＳＶ−１（ＮＳ）ｇＥタンパク質である。他の実施形態では、前記ｇＥタンパク質は、ＨＳＶ−１（１７）ｇＥタンパク質である。他の実施形態では、前記ｇＥタンパク質は、ＨＳＶ−１（Ｆ）ｇＥタンパク質である。他の実施形態では、前記ｇＥタンパク質は、ＨＳＶ−１（ＫＯＳ）ｇＥタンパク質である。他の実施形態では、前記ｇＥタンパク質は、ＨＳＶ−１（ＣＬ１０１）ｇＥタンパク質である。他の実施形態では、前記ｇＥタンパク質は、ＨＳＶ−１（MacIntyre）ｇＥタンパク質である。他の実施形態では、前記ｇＥタンパク質は、ＨＳＶ−１（ＭＰ）ｇＥタンパク質である。他の実施形態では、前記ｇＥタンパク質は、ＨＳＶ−１（１７＋ｓｙｎ）ｇＥタンパク質である。他の実施形態では、前記ｇＥタンパク質は、ＨＳＶ−１（ＨＦ）ｇＥタンパク質である。他の実施形態では、前記ｇＥタンパク質は、当該技術分野で既知のその他のＨＳＶ−１ｇＥタンパク質である。
【０１５３】
ある実施形態では、前記ｇＥタンパク質は、ＨＳＶ−２のｇＥタンパク質である。他の実施形態では、前記ｇＥタンパク質は、ＨＳＶ−２（ＨＧ５２）ｇＥタンパク質である。他の実施形態では、前記ｇＥタンパク質は、ＨＳＶ−２（２．１２）ｇＥタンパク質である。他の実施形態では、前記ｇＥタンパク質は、ＨＳＶ−２（ＭＳ）ｇＥタンパク質である。他の実施形態では、前記ｇＥタンパク質は、ＨＳＶ−２（１８６）ｇＥタンパク質である。他の実施形態では、前記ｇＥタンパク質は、ＨＳＶ−２（Ｇ）ｇＥタンパク質である。他の実施形態では、前記ｇＥタンパク質は、当該技術分野で既知のその他のＨＳＶ−２ｇＥタンパク質である。
【０１５４】
ある実施形態では、前記ｇＥタンパク質は、上記に列挙したｇＥタンパク質又は核酸配列の１つと、ある実施形態では８０％を超える相同性を有する、他の実施形態では８５％を超える相同性を有する、別の実施形態では９５％を超える相同性を有する、さらなる別の実施形態では９８％を超える相同性を有する、その他のＨＳＶ−１又はＨＳＶ−２ｇＥタンパク質である。他の実施形態では、前記ｇＥタンパク質は、ＨＳＶ（ＮＳ）又はＨＳＶ（１７）、或いはその両方に対して、９８．６％の相同性を有する。
【０１５５】
ある実施形態では、前記ｇＥタンパク質は、当該技術分野で既知のその他のｇＥタンパク質である。他の実施形態では、前記ｇＥタンパク質は、当該技術分野で既知の任意のＵｓ８ヌクレオチドによってエンコードされている。ある実施形態では、前記Ｕｓ８遺伝子は、遺伝子銀行アクセス番号ＧｅｎｅＩＤ：２７０３４４８又はＧｅｎｅｌＤ：１４８７３６０に規定された配列に対応する核酸配列を有する。或いは、前記Ｕｓ８遺伝子は、ある実施形態では遺伝子銀行アクセス番号ＮＰ＿０４４６７０．１又はＮＰ＿０４４５３８．１に規定された配列に相当する、糖タンパク質Ｅのタンパク質配列をエンコードする核酸配列を有する。
【０１５６】
ある実施形態では、本発明の及び本発明の方法で使用する前記ＨＳＶ株は、追加的な不活性化変異（ある実施形態では、Ｕｓ６遺伝子を不活性化させたもの）を含む。ある実施形態では、前記Ｕｓ６遺伝子は、次の遺伝子銀行アクセス番号に規定された配列に対応する核酸配列を有する。ＧｅｎｅＩＤ：２７０３４４４、ＧｅｎｅＩＤ：１４８７３５８、ＮＣ＿００１８０６、ＮＣ＿００１７９８、ＥＵ０２９１５８、ＥＦ１７７４５１、ＥＦ１７７４５０、ＥＦ１５７３２２、ＥＦ１５７３２１、ＥＦ１５７３２０、ＥＦ１５７３１９、Ｚ８６０９９、ＡＪ００４８０１、Ｘ１４１１２、ＡＦ１４７８０６、ＡＹ７７９７５４、ＡＹ７７９７５３、ＡＹ７７９７５２、ＡＹ７７９７５１、ＡＹ７７９７５０、ＡＹ５１７４９２、ＡＹ１５５２２５、ＡＢ０１６４３２、ＡＦ０２１３４２、Ｕ１２１８３、Ｕ１２１８２、Ｕ１２１８１、Ｕ１２１８０、又はＩｎｔｅｒＰｒｏ：ＩＰＲ００２８９６。或いは、前記Ｕｓ６遺伝子は、ある実施形態では次の遺伝子銀行アクセス番号に規定された配列に対応する、糖タンパク質Ｄのタンパク質配列をエンコードする核酸配列を有する。ＮＰ＿０４４６６８．１、ＮＰＪＭ４５３６．１、ＣＡＡ３８２４５、ＡＡＢ５９７５４、ＡＡＡ１９６２９、ＡＡＡ１９６３１、ＡＡＡ１９６３０、ＡＡＫ９３９５０、ＡＢＳ８４８９９、ＡＢＭ６６８４８、ＡＢＭ６６８４７、ＡＡＷ２３１３４、ＡＡＷ２３１３３、ＡＡＷ２３１３２、ＡＡＷ２３１３１、ＡＡＷ２３１３０、ＡＡＳ０１７３０、ＡＢＭ５２９８１、ＡＢＭ５２９８０、ＡＢＭ５２９７９、ＡＢＭ５２９７８、ＡＡＮ７４６４２、ＡＡＯ２６２１１、ＡＡＬ９０８８４、ＡＡＬ９０８８３、ＡＡＫ１９５９７、ＡＡＡ４５７８５、ＢＡＡ０００２０、ＡＡＢ６０５５５、ＡＡＢ６０５５４、ＡＡＢ６０５５３、ＡＡＢ６０５５２、ＡＡＡ９８９６２、ＡＡＡ９８９６３、ＡＡＡ４５８４２、ＡＡＡ４５７８６、ＶＧＢＥＤＺ、ＣＡＢ０６７１３、ＣＡＡ３２２８３、ＡＡＢ７２１０２、又はＣＡＢ０６７１３．１。
【０１５７】
他の実施形態では、前記ｇＤタンパク質は、上記に列挙したｇＤタンパク質又は核酸配列の１つと、ある実施形態では８０％を超える相同性を有する、他の実施形態では８５％を超える相同性を有する、別の実施形態では９５％を超える相同性を有する、さらなる別の実施形態では９８％を超える相同性を有する、その他のＨＳＶ−１又はＨＳＶ−２ｇＤタンパク質である。
【０１５８】
ある実施形態では、本発明の及び本発明の方法で使用する前記ＨＳＶ株は、追加的な不活性化変異（ある実施形態では、Ｕｓ９遺伝子を不活性化させたもの）を含む。ある実施形態では、前記Ｕｓ９遺伝子は、遺伝子銀行アクセス番号ＧｅｎｅＩＤ：２７０３４５２又はＧｅｎｅＩＤ：１４８７３６２に規定された配列に対応する核酸配列を有する。或いは、前記Ｕｓ９遺伝子は、ある実施形態では遺伝子銀行アクセス番号ＮＰ＿０４４６７２．１又はＮＰ＿０４４５４０．１に規定された配列に対応する、Ｕｓ９膜タンパク質のタンパク質配列をエンコードする核酸配列を有する。
【０１５９】
ある実施形態では、本発明の及び本発明の方法で使用する前記ＨＳＶ株は、追加的な不活性化変異（ある実施形態では、Ｕｓ５遺伝子を不活性化させたもの）を含む。ある実施形態では、前記Ｕｓ５遺伝子は、遺伝子銀行アクセス番号ＧｅｎｅＩＤ：２７０３４０６又はＧｅｎｅＩＤ：１４８７３５７に規定された配列に対応する核酸配列を有する。或いは、前記Ｕｓ５遺伝子は、ある実施形態では遺伝子銀行アクセス番号ＮＰ＿０４４６６７．１又はＮＰ＿０４４５３４．１に規定された配列に対応する、糖タンパク質Ｊのタンパク質配列をエンコードする核酸配列を有する。
【０１６０】
ある実施形態では、本発明の及び本発明の方法で使用する前記ＨＳＶ株は、追加的な不活性化変異（ある実施形態では、Ｕｓ４遺伝子を不活性化させたもの）を含む。ある実施形態では、前記Ｕｓ４遺伝子は、遺伝子銀行アクセス番号ＧｅｎｅＩＤ：２７０３４０４又はＧｅｎｅＩＤ：１４８７３５６に規定された配列に対応する核酸配列を有する。或いは、前記Ｕｓ４遺伝子は、ある実施形態では遺伝子銀行アクセス番号ＮＰ＿０４４６６６．１又はＮＰ＿０４４５３４．１に規定された配列に対応する、糖タンパク質Ｇのタンパク質配列をエンコードする核酸配列を有する。
【０１６１】
ある実施形態では、本発明の及び本発明の方法で使用する前記ＨＳＶ株は、追加的な不活性化変異（ある実施形態では、ＵＬ５３遺伝子を不活性化させたもの）を含む。ある実施形態では、前記ＵＬ５３遺伝子は、遺伝子銀行アクセス番号ＧｅｎｅＩＤ：２７０３４２５又はＧｅｎｅＩＤ：１４８７３４２に規定された配列に対応する核酸配列を有する。或いは、前記ＵＬ５３遺伝子は、ある実施形態では遺伝子銀行アクセス番号ＮＰ＿０４４６５６．１又はＮＰ＿０４４５２４．１に規定された配列に対応する、糖タンパク質Ｋのタンパク質配列をエンコードする核酸配列を有する。
【０１６２】
ある実施形態では、本発明の及び本発明の方法で使用する前記ＨＳＶ株は、追加的な不活性化変異（ある実施形態では、ＵＬ１０遺伝子を不活性化させたもの）を含む。ある実施形態では、前記ＵＬ１０遺伝子は、遺伝子銀行アクセス番号ＧｅｎｅＩＤ：２７０３３７９又はＧｅｎｅＩＤ：１４８７２９３に規定された配列に対応する核酸配列を有する。或いは、前記ＵＬ１０遺伝子は、ある実施形態では遺伝子銀行アクセス番号ＮＰ＿０４４６１１．１又はＮＰ＿０４４４７９．１に規定された配列に対応する、糖タンパク質Ｍのタンパク質配列をエンコードする核酸配列を有する。
【０１６３】
ある実施形態では、本発明の及び本発明の方法で使用する前記ＨＳＶ株は、追加的な不活性化変異（ある実施形態では、ＵＬ１遺伝子を不活性化させたもの）を含む。ある実施形態では、前記ＵＬ１遺伝子は、遺伝子銀行アクセス番号ＧｅｎｅＩＤ：２７０３３９３又はＧｅｎｅＩＤ：１４８７２９２に規定された配列に対応する核酸配列を有する。或いは、前記ＵＬ１遺伝子は、ある実施形態では遺伝子銀行アクセス番号ＮＰ＿０４４６０２．１又はＮＰ＿０４４４７０．１に規定された配列に対応する、糖タンパク質Ｌのタンパク質配列をエンコードする核酸配列を有する。
【０１６４】
ある実施形態では、本発明の及び本発明の方法で使用する前記ＨＳＶ株は、追加的な不活性化変異（ある実施形態では、ＵＬ２２遺伝子を不活性化させたもの）を含む。ある実施形態では、前記ＵＬ２２遺伝子は、遺伝子銀行アクセス番号ＧｅｎｅＩＤ：２７０３３７３又はＧｅｎｅＩＤ：１４８７３０６に規定された配列に対応する核酸配列を有する。或いは、前記ＵＬ２２遺伝子は、ある実施形態では遺伝子銀行アクセス番号ＮＰ＿０４４６２３．１又はＮＰ＿０４４４９１．１に規定された配列に対応する、糖タンパク質Ｈのタンパク質配列をエンコードする核酸配列を有する。
【０１６５】
ある実施形態では、本発明の及び本発明の方法で使用する前記ＨＳＶ株は、追加的な不活性化変異（ある実施形態では、ＵＬ２７遺伝子を不活性化させたもの）を含む。ある実施形態では、前記ＵＬ２７遺伝子は、遺伝子銀行アクセス番号ＧｅｎｅＩＤ：２７０３４５５又はＧｅｎｅＩＤ：１４８７３１２に規定された配列に対応する核酸配列を有する。或いは、前記ＵＬ２７遺伝子は、ある実施形態では遺伝子銀行アクセス番号ＮＰ＿０４４６２９．１又はＮＰ＿０４４４９７．１に規定された配列に対応する、糖タンパク質Ｂのタンパク質配列をエンコードする核酸配列を有する。
【０１６６】
ある実施形態では、本発明の及び本発明の方法で使用する前記ＨＳＶ株は、追加的な不活性化変異（ある実施形態では、ＵＬ４４遺伝子を不活性化させたもの）を含む。ある実施形態では、前記ＵＬ４４遺伝子は、遺伝子銀行アクセス番号ＧｅｎｅＩＤ：２７０３４１０又はＧｅｎｅＩＤ：１４８７３３１に規定された配列に対応する核酸配列を有する。或いは、前記ＵＬ４４遺伝子は、ある実施形態では遺伝子銀行アクセス番号ＮＰ＿０４４６４６．１又はＮＰ＿０４４５１４．１．に規定された配列に対応する、糖タンパク質Ｃのタンパク質配列をエンコードする核酸配列を有する。
【０１６７】
ある実施形態では、本発明の及び本発明の方法で使用する前記ＨＳＶ株は、追加的な不活性化変異（ある実施形態では、ＵＬ４９ａ遺伝子を不活性化させたもの）を含む。ある実施形態では、前記ＵＬ４９ａ遺伝子は、遺伝子銀行アクセス番号ＧｅｎｅＩＤ：２７０３４１９又はＧｅｎｅＩＤ：１４８７３３７に規定された配列に対応する核酸配列を有する。或いは、前記ＵＬ４９ａ遺伝子は、ある実施形態では遺伝子銀行アクセス番号ＮＰ＿０４４６５２．１又はＮＰ＿０４４５２０．１に規定された配列に対応する、糖タンパク質Ｎのタンパク質配列をエンコードする核酸配列を有する。
【０１６８】
他の実施形態では、前記さらなる変異体は、ＨＳＶ−１又はＨＳＶ−２糖タンパク質内に存在し、上記に列挙した糖タンパク質と、ある実施形態では８０％を超える相同性を有する、他の実施形態では８５％を超える相同性を有する、別の実施形態では９５％を超える相同性を有する、さらなる別の実施形態では９８％を超える相同性を有する。
【０１６９】
ある実施形態では、本発明の及び本発明の方法で使用する前記ＨＳＶ株は、ｇＤをエンコードしている遺伝子内に、不活性化変異（ある実施形態ではＵｓ６である）を含む。他の実施形態では、本発明の及び本発明の方法で使用する前記ＨＳＶ株は、ｇＥをエンコードしている遺伝子内に、不活性化変異（ある実施形態ではＵｓ８である）を含む。他の実施形態では、本発明の及び本発明の方法で使用する前記ＨＳＶ株は、ｇＥをエンコードしている遺伝子内に及びｇＤをエンコードしている遺伝子内に、不活性化変異を含む。ある実施形態では、前記Ｕｓ６変異体は、強毒性のＵｓ８変異を含むＨＳＶ株を弱力化するために導入される。ある実施形態では、前記Ｕｓ６変異体は、ウイルス侵入を減少させる。Ｕｓ６変異並びに本発明の変異のいずれかでは、ＨＳＶ−１又はＨＳＶ−２のいずれか或いは両方に存在する。ある実施形態では、ＨＳＶ−１ｇＤ及びＨＳＶ−２ｇＤは、相同性が高い。ある実施形態では、ＨＳＶ−１ｇＤ及びＨＳＶ−２ｇＤのアミノ酸配列は、８１％の相同性を有し、他の実施形態では８０％を超える相同性を有し、他の実施形態では８５％を超える相同性を有し、他の実施形態では９０％を超える相同性を有し、他の実施形態では９５％を超える相同性を有する。ある実施形態では、ＨＳＶ−１ｇＤ及びＨＳＶ−２ｇＤの核酸配列は、８５％の相同性を有し、他の実施形態では８０％を超える相同性を有し、他の実施形態では８５％を超える相同性を有し、他の実施形態では９０％を超える相同性を有し、他の実施形態では９５％を超える相同性を有する。
【０１７０】
ある実施形態では、本発明の方法及び組成物において説明された前記ｇＤタンパク質は、次の配列を持つ。
【０１７１】
ＭＧＧＴＡＡＲＬＧＡＶＩＬＦＶＶＩＶＧＬＨＧＶＲＧＫＹＡＬＡＤＡＳＬＫＭＡＤＰＮＲＦＲＧＫＤＬＰＶＬＤＱＬＴＤＰＰＧＶＲＲＶＨＩＱＡＧＬＰＤＰＦＱＰＰＳＬＰＩＴＶＹＹＡＶＬＥＲＡＣＲＳＶＬＬＮＡＰＳＥＡＰＱＩＶＲＧＡＳＥＤＶＲＫＱＰＹＮＬＴＩＡＷＦＲＭＧＧＮＣＡＩＰＩＴＶＭＥＹＴＥＣＳＹＮＫＳＬＧＡＣＰＩＲＴＱＰＲＷＮＹＹＤＳＦＳＡＶＳＥＤＮＬＧＦＬＭＨＡＰＡＦＥＴＡＧＴＹＬＲＬＶＫＩＮＤＷＴＥＩＴＱＦＩＬＥＨＲＡＫＧＳＣＫＹＡＬＰＬＲＩＰＰＳＡＣＬＳＰＱＡＹＱＱＧＶＴＶＤＳＩＧＭＬＰＲＦＩＰＥＮＱＲＴＶＡＶＹＳＬＫＩＡＧＷＨＧＰＫＡＰＹＴＳＴＬＬＰＰＥＬＳＥＴＰＮＡＴＱＰＥＬＡＰＥＤＰＥＤＳＡＬＬＥＤＰＶＧＴＶＡＰＱＩＰＰＮＷＨＩＰＳＩＱＤＡＡＴＰＹＨＰＰＡＴＰＮＮＭＧＬＬＡＧＡＶＧＧＳＬＬＡＡＬＶＩＣＧＩＶＹＷＭＨＲＲＴＲＫＡＰＫＲＩＲＬＰＨＩＲＥＤＤＱＰＳＳＨＱＰＬ（配列番号１４）。他の実施形態では、前記ｇＤタンパク質は、配列番号１４の相同体である。他の実施形態では、前記ｇＤタンパク質は、配列番号１４の配列の変異体である。他の実施形態では、前記ｇＤタンパク質は、配列番号１４の配列のイソ型である。他の実施形態では、前記ｇＤタンパク質は、配列番号１４の配列の断片である。他の実施形態では、前記ｇＤタンパク質は、配列番号１４の配列を含む。ある実施形態では、前記ｇＤアミノ酸配列は、ＨＳＶ−１アミノ酸配列である。
【０１７２】
他の実施形態では、前記ｇＤタンパク質は、次の配列を持つヌクレオチド配列によってエンコードされている。
【０１７３】
ｇｔｇｇｃｃｃｃｇｇｃｃｃｃｃａａｃａａａａａｔｃａｃｇｇｔａｇｃｃｃｇｇｃｃｇｔｇｔｇａｃａｃｔａｔｃｇｔｃｃａｔａｃｃｇａｃｃａｃａｃｃｇａｃｇａａｃｃｃｃｔａａｇｇｇｇｇａｇｇｇｇｃｃａｔｔｔｔａｃｇａｇｇａｇｇａｇｇｇｇｔａｔａａｃａａａｇｔｃｔｇｔｃｔｔｔａａａａａｇｃａｇｇｇｇｔｔａｇｇｇａｇｔｔｇｔｔｃｇｇｔｃａｔａａｇｃｔｔｃａｇｃｇｃｇａａｃｇａｃｃａａｃｔａｃｃｃｃｇａｔｃａｔｃａｇｔｔａｔｃｃｔｔａａｇｇｔｃｔｃｔｔｔｔｇｔｇｔｇｇｔｇｃｇｔｔｃｃｇｇｔａｔｇｇｇｇｇｇｇａｃｔｇｃｃｇｃｃａｇｇｔｔｇｇｇｇｇｃｃｇｔｇａｔｔｔｔｇｔｔｔｇｔｃｇｔｃａｔａｇｔｇｇｇｃｃｔｃｃａｔｇｇｇｇｔｃｃｇｃｇｇｃａａａｔａｔｇｃｃｔｔｇｇｃｇｇａｔｇｃｃｔｃｔｃｔｃａａｇａｔｇｇｃｃｇａｃｃｃｃａａｔｃｇｃｔｔｔｃｇｃｇｇｃａａａｇａｃｃｔｔｃｃｇｇｔｃｃｔｇｇａｃｃａｇｃｔｇａｃｃｇａｃｃｃｔｃｃｇｇｇｇｇｔｃｃｇｇｃｇｃｇｔｇｔａｃｃａｃａｔｃｃａｇｇｃｇｇｇｃｃｔａｃｃｇｇａｃｃｃｇｔｔｃｃａｇｃｃｃｃｃｃａｇｃｃｔｃｃｃｇａｔｃａｃｇｇｔｔｔａｃｔａｃｇｃｃｇｔｇｔｔｇｇａｇｃｇｃｇｃｃｔｇｃｃｇｃａｇｃｇｔｇｃｔｃｃｔａａａｃｇｃａｃｃｇｔｃｇｇａｇｇｃｃｃｃｃｃａｇａｔｔｇｔｃｃｇｃｇｇｇｇｃｃｔｃｃｇａａｇａｃｇｔｃｃｇｇａａａｃａａｃｃｃｔａｃａａｃｃｔｇａｃｃａｔｃｇｃｔｔｇｇｔｔｔｃｇｇａｔｇｇｇａｇｇｃａａｃｔｇｔｇｃｔａｔｃｃｃｃａｔｃａｃｇｇｔｃａｔｇｇａｇｔａｃａｃｃｇａａｔｇｃｔｃｃｔａｃａａｃａａｇｔｃｔｃｔｇｇｇｇｇｃｃｔｇｔｃｃｃａｔｃｃｇａａｃｇｃａｇｃｃｃｃｇｃｔｇｇａａｃｔａｃｔａｔｇａｃａｇｃｔｔｃａｇｃｇｃｃｇｔｃａｇｃｇａｇｇａｔａａｃｃｔｇｇｇｇｔｔｃｃｔｇａｔｇｃａｃｇｃｃｃｃｃｇｃｇｔｔｔｇａｇａｃｃｇｃｃｇｇｃａｃｇｔａｃｃｔｇｃｇｇｃｔｃｇｔｇａａｇａｔａａａｃｇａｃｔｇｇａｃｇｇａｇａｔｔａｃａｃａｇｔｔｔａｔｃｃｔｇｇａｇｃａｃｃｇａｇｃｃａａｇｇｇｃｔｃｃｔｇｔａａｇｔａｃｇｃｃｃｔｃｃｃｇｃｔｇｃｇｃａｔｃｃｃｃｃｃｇｔｃａｇｃｃｔｇｃｃｔｃｔｃｃｃｃｃｃａｇｇｃｃｔａｃｃａｇｃａｇｇｇｇｇｔｇａｃｇｇｔｇｇａｃａｇｃａｔｃｇｇｇａｔｇｃｔｇｃｃｃｃｇｃｔｔｃａｔｃｃｃｃｇａｇａａｃｃａｇｃｇｃａｃｃｇｔｃｇｃｃｇｔａｔａｃａｇｃｔｔｇａａｇａｔｃｇｃｃｇｇｇｔｇｇｃａｃｇｇｇｃｃｃａａｇｇｃｃｃｃａｔａｃａｃｇａｇｃａｃｃｃｔｇｃｔｇｃｃｃｃｃｇｇａｇｃｔｇｔｃｃｇａｇａｃｃｃｃｃａａｃｇｃｃａｃｇｃａｇｃｃａｇａａｃｔｃｇｃｃｃｃｇｇａａｇａｃｃｃｃｇａｇｇａｔｔｃｇｇｃｃｃｔｃｔｔｇｇａｇｇａｃｃｃｃｇｔｇｇｇｇａｃｇｇｔｇｇｃｇｃｃｇｃａａａｔｃｃｃａｃｃａａａｃｔｇｇｃａｃａｔｃｃｃｇｔｃｇａｔｃｃａｇｇａｃｇｃｃｇｃｇａｃｇｃｃｔｔａｃｃａｔｃｃｃｃｃｇｇｃｃａｃｃｃｃｇａａｃａａｃａｔｇｇｇｃｃｔｇａｔｃｇｃｃｇｇｃｇｃｇｇｔｇｇｇｃｇｇｃａｇｔｃｔｃｃｔｇｇｃａｇｃｃｃｔｇｇｔｃａｔｔｔｇｃｇｇａａｔｔｇｔｇｔａｃｔｇｇａｔｇｃａｃｃｇｃｃｇｃａｃｔｃｇｇａａａｇｃｃｃｃａａａｇｃｇｃａｔａｃｇｃｃｔｃｃｃｃｃａｃａｔｃｃｇｇｇａａｇａｃｇａｃｃａｇｃｃｇｔｃｃｔｃｇｃａｃｃａｇｃｃｃｔｔｇｔｔｔｔａｃｔａｇａｔａｃｃｃｃｃｃｃｔｔａａｔｇｇｇｔｇｃｇｇｇｇｇｇｇｔｃａｇｇｔｃｔｇｃｇｇｇｇｔｔｇｇｇａｔｇｇｇａｃｃｔｔａａｃｔｃｃａｔａｔａａａｇｃｇａｇｔｃｔｇｇａａｇｇｇｇｇｇａａａｇｇｃｇｇａｃａｇｔｃｇａｔａａｇｔｃｇｇｔａｇｃｇｇｇｇｇａｃｇｃｇｃａｃｃｔｇｔｔｃｃｇｃｃｔｇｔｃｇｃａｃｃｃａｃａｇｃｔｔｔｔｔｃｇｃｇａａｃｃｇｔｃｃｃｇｔｔｔｔｃｇｇｇａｔ（配列番号１５）。他の実施形態では、前記ｇＤタンパク質は、前記ｇＥタンパク質は、配列番号１５の配列と相同するヌクレオチド分子によってエンコードされている。他の実施形態では、前記ヌクレオチド分子は、配列番号１５の配列の変異体である。他の実施形態では、前記ヌクレオチド分子は、配列番号１５の配列のイソ型である。他の実施形態では、前記ヌクレオチド分子は、配列番号１５の配列の断片である。他の実施形態では、前記ヌクレオチド分子は、配列番号１５の配列を含む。ある実施形態では、前記ｇＤヌクレオチド配列は、ＨＳＶ−１ヌクレオチド配列である。
【０１７４】
ある実施形態では、本発明の方法及び組成物において説明された前記ｇＤタンパク質は、次の配列を持つ。
【０１７５】
ＭＧＲＬＴＳＧＶＧＴＡＡＬＬＶＶＡＶＧＬＲＷＣＡＫＹＡＬＡＤＰＳＬＫＭＡＤＰＮＲＦＲＧＫＮＬＰＶＬＤＱＬＴＤＰＰＧＶＫＲＶＹＨＩＱＰＳＬＥＤＰＦＱＰＰＳＩＰＩＴＶＹＹＡＶＬＥＲＡＣＲＳＶＬＬＨＡＰＳＥＡＰＱＩＶＲＧＡＳＤＥＡＲＫＨＴＹＮＬＴＩＡＷＹＲＭＧＤＮＣＡＩＰＩＴＶＭＥＹＴＥＣＰＹＮＫＳＬＧＶＣＰＩＲＴＱＰＲＷＳＹＹＤＳＦＳＡＶＳＥＤＮＬＧＦＬＭＨＡＰＡＦＥＴＡＧＴＹＬＲＬＶＫＩＮＤＷＴＥＩＴＱＦＩＬＥＨＲＡＲＡＳＣＫＹＡＬＰＬＲＩＰＰＡＡＣＬＴＳＫＡＹＱＱＧＶＴＶＤＳＩＧＭＬＰＲＦＩＰＥＮＱＲＴＶＡＬＹＳＬＫＩＡＧＷＨＧＰＫＰＰＹＴＳＴＬＬＰＰＥＬＳＤＴＴＮＡＴＱＰＥＬＶＰＥＤＰＥＤＳＡＬＬＥＤＰＡＧＴＶＳＳＱＩＰＰＮＷＨＩＰＳＩＱＤＶＡＰＨＨＡＰＡＡＰＳＮＰＧＬＩＩＧＡＬＡＧＳＴＬＡＶＬＶＩＧＧＩＡＦＷＶＲＲＲＡＱＭＡＰＫＲＬＲＬＰＨＩＲＤＤＤＡＰＰＳＨＱＰＬＦＹ（配列番号１６）。他の実施形態では、前記ｇＤタンパク質は、配列番号１６の相同体である。他の実施形態では、前記ｇＤタンパク質は、配列番号１６の配列の変異体である。他の実施形態では、前記ｇＤタンパク質は、配列番号１６の配列のイソ型である。他の実施形態では、前記ｇＤタンパク質は、配列番号１６の配列の断片である。他の実施形態では、前記ｇＤタンパク質は、配列番号１６の配列を含む。ある実施形態では、前記ｇＤアミノ酸配列は、ＨＳＶ−２アミノ酸配列である。
【０１７６】
他の実施形態では、前記ｇＤタンパク質は、次の配列を持つヌクレオチド配列によってエンコードされている。
【０１７７】
ａｔｇｇｇｇｃｇｔｔ  ｔｇａｃｃｔｃｃｇｇ  ｃｇｔｃｇｇｇａｃｇ  ｇｃｇｇｃｃｃｔｇｃ  ｔａｇｔｔｇｔｃｇｃ  ｇｇｔｇｇｇａｃｔｃ  ｃｇｃｇｔｃｇｔｃｔ  ｇｃｇｃｃａａａｔａ  ｃｇｃｃｔｔａｇｃａ  ｇａｃｃｃｃｔｃｇｃ  ｔｔａａｇａｔｇｇｃ  ｃｇａｔｃｃｃａａｔ  ｃｇａｔｔｔｃｇｃｇ  ｇｇａａｇａａｃｃｔ  ｔｃｃｇｇｔｔｔｔｇ  ｇａｃｃａｇｃｔｇａ  ｃｃｇａｃｃｃｃｃｃ  ｃｇｇｇｇｔｇａａｇ  ｃｇｔｇｔｔｔａｃｃ  ａｃａｔｔｃａｇｃｃ  ｇａｇｃｃｔｇｇａｇ  ｇａｃｃｃｇｔｔｃｃ  ａｇｃｃｃｃｃｃａｇ  ｃａｔｃｃｃｇａｔｃ  ａｃｔｇｔｇｔａｃｔ  ａｃｇｃａｇｔｇｃｔ  ｇｇａａｃｇｔｇｃｃ  ｔｇｃｃｇｃａｇｃｇ  ｔｇｃｔｃｃｔａｃａ  ｔｇｃｃｃｃａｔｃｇ  ｇａｇｇｃｃｃｃｃｃ  ａｇａｔｃｇｔｇｃｇ  ｃｇｇｇｇｃｔｔｃｇ  ｇａｃｇａｇｇｃｃｃ  ｇａａａｇｃａｃａｃ  ｇｔａｃａａｃｃｔｇ  ａｃｃａｔｃｇｃｃｔ  ｇｇｔａｔｃｇｃａｔ  ｇｇｇａｇａｃａａｔ  ｔｇｃｇｃｔａｔｃｃ  ｃｃａｔｃａｃｇｇｔ  ｔａｔｇｇａａｔａｃ  ａｃｃｇａｇｔｇｃｃ  ｃｃｔａｃａａｃａａ  ｇｔｃｇｔｔｇｇｇｇ  ｇｔｃｔｇｃｃｃｃａ  ｔｃｃｇａａｃｇｃａ  ｇｃｃｃｃｇｃｔｇｇ  ａｇｃｔａｃｔａｔｇ  ａｃａｇｃｔｔｔａｇ  ｃｇｃｃｇｔｃａｇｃ  ｇａｇｇａｔａａｃｃ  ｔｇｇｇａｔｔｃｃｔ  ｇａｔｇｃａｃｇｃｃ  ｃｃｃｇｃｃｔｔｃｇ  ａｇａｃｃｇｃｇｇｇ  ｔａｃｇｔａｃｃｔｇ  ｃｇｇｃｔａｇｔｇａ  ａｇａｔａａａｃｇａ  ｃｔｇｇａｃｇｇａｇ  ａｔｃａｃａｃａａｔ  ｔｔａｔｃｃｔｇｇａ  ｇｃａｃｃｇｇｇｃｃ  ｃｇｃｇｃｃｔｃｃｔ  ｇｃａａｇｔａｃｇｃ  ｔｃｔｃｃｃｃｃｔｇ  ｃｇｃａｔｃｃｃｃｃ  ｃｇｇｃａｇｃｇｔｇ  ｃｃｔｃａｃｃｔｃｇ  ａａｇｇｃｃｔａｃｃ  ａａｃａｇｇｇｃｇｔ  ｇａｃｇｇｔｃｇａｃ  ａｇｃａｔｃｇｇｇａ  ｔｇｃｔａｃｃｃｃｇ  ｃｔｔｔａｔｃｃｃｃ  ｇａａａａｃｃａｇｃ  ｇｃａｃｃｇｔｃｇｃ  ｃｃｔａｔａｃａｇｃ  ｔｔａａａａａｔｃｇ  ｃｃｇｇｇｔｇｇｃａ  ｃｇｇｃｃｃｃａａｇ  ｃｃｃｃｃｇｔａｃａ  ｃｃａｇｃａｃｃｃｔ  ｇｃｔｇｃｃｇｃｃｇ  ｇａｇｃｔｇｔｃｃｇ  ａｃａｃｃａｃｃａａ  ｃｇｃｃａｃｇｃａａ  ｃｃｃｇａａｃｔｃｇ  ｔｔｃｃｇｇａａｇａ  ｃｃｃｃｇａｇｇａｃ  ｔｃｇｇｃｃｃｔｃｔ  ｔａｇａｇｇａｔｃｃ  ｃｇｃｃｇｇｇａｃｇ  ｇｔｇｔｃｔｔｃｇｃ  ａｇａｔｃｃｃｃｃｃ  ａａａｃｔｇｇｃａｃ  ａｔｃｃｃｇｔｃｇａ  ｔｃｃａｇｇａｃｇｔ  ｃｇｃｇｃｃｇｃａｃ  ｃａｃｇｃｃｃｃｃｇ  ｃｃｇｃｃｃｃｃａｇ  ｃａａｃｃｃｇｇｇｃ  ｃｔｇａｔｃａｔｃｇ  ｇｃｇｃｇｃｔｇｇｃ  ｃｇｇｃａｇｔａｃｃ  ｃｔｇｇｃｇｇｔｇｃ  ｔｇｇｔｃａｔｃｇｇ  ｃｇｇｔａｔｔｇｃｇ  ｔｔｔｔｇｇｇｔａｃ  ｇｃｃｇｃｃｇｃｇｃ  ｔｃａｇａｔｇｇｃｃ  ｃｃｃａａｇｃｇｃｃ  ｔａｃｇｔｃｔｃｃｃ  ｃｃａｃａｔｃｃｇｇ  ｇａｔｇａｃｇａｃｇ  ｃｇｃｃｃｃｃｃｔｃ  ｇｃａｃｃａｇｃｃａ  ｔｔｇｔｔｔｔａｃｔ  ａｇ（配列番号１７）。他の実施形態では、前記ｇＤタンパク質は、前記ｇＥタンパク質は、配列番号１７の配列と相同するヌクレオチド分子によってエンコードされている。他の実施形態では、前記ヌクレオチド分子は、配列番号１７���配列の変異体である。他の実施形態では、前記ヌクレオチド分子は、配列番号１７の配列のイソ型である。他の実施形態では、前記ヌクレオチド分子は、配列番号１７の配列の断片である。他の実施形態では、前記ヌクレオチド分子は、配列番号１７の配列を含む。ある実施形態では、前記ｇＤ核酸配列は、ＨＳＶ−２核酸配列である。
【０１７８】
ある実施形態では、ｇＤをエンコードしている遺伝子内の不活性化変異は、ＨＳＶ−１・ｇＤ又はＨＳＶ−２・ｇＤのアミノ酸３におけるアラニンがシステイン（Ａ３Ｃ）に変異された変異を含む。他の実施形態では、ｇＤをエンコードしている遺伝子内の不活性化変異は、ＨＳＶ−１・ｇＤ又はＨＳＶ−２・ｇＤの残基３におけるアラニンがシステイン（Ａ３Ｃ）に変異された、残基２におけるチロシンがアラニン（Ｙ２Ａ）に変異された、残基４におけるレクチンがアラニン（Ｌ４Ａ）に変異された、或いはそれらの組み合わせの変異を含む。他の実施形態では、ｇＤをエンコードしている遺伝子内の不活性化変異は、ＨＳＶ−１・ｇＤ又はＨＳＶ−２・ｇＤの残基３が欠失した、残基２のチロシンが欠失した、残基４におけるレクチンが欠失した、或いはそれらの組み合わせの変異を含む。他の実施形態では、ｇＤをエンコードしている遺伝子内の不活性化変異は、アミノ酸位置３８、２２２、２２３、２１５又はそれらの組み合わせでの変異を含む。他の実施形態では、ｇＤをエンコードしている遺伝子内の不活性化変異は、Ｙ３８Ｃ変異を含む。一方、他の実施形態では、ｇＤをエンコードしている遺伝子内の不活性化変異は、Ｒ２２２Ｎ、Ｆ２２３Ｉ、Ｄ２１５Ｇ変異体又はそれらの組み合わせを含む。
【０１７９】
他の実施形態では、ｇＤをエンコードしている遺伝子内の不活性化変異は、アミノ酸２及び３、３及び４、２〜４、１〜５、１〜７又は１〜１０における変異を含む。他の実施形態では、ｇＤをエンコードしている遺伝子内の不活性化変異は、ＨＳＶ−１・ｇＤ又はＨＳＶ−２・ｇＤのアミノ酸３におけるアラニンがシステイン（Ａ３Ｃ）に変異された変異体から本質的に成る。他の実施形態では、ｇＤをエンコードしている遺伝子内の不活性化変異は、ＨＳＶ−１・ｇＤ又はＨＳＶ−２・ｇＤのアミノ酸３におけるアラニンがシステイン（Ａ３Ｃ）に変異された変異から成る。ある実施形態では、変異の位置を説明するために使用される数字は、シグナル配列の開裂後の成熟ペプチドのアミノ酸の番号付けを意味し、ある実施形態では、当該技術分野で既知のように、ＨＳＶ−１・ｇＤ又はＨＳＶ−２・ｇＤの最初の２５個のアミノ酸である。
【０１８０】
本明細書に記載したように及びある実施形態では、ｇＤ内に変異体を含有する本発明のＨＳＶ変異株は、病原性（例２１）及びＤＲＧへの到達能力（例２２）が低下する。他の実施形態では、本発明によるｇＤ内に変異体を含むＨＳＶ変異株のワクチン接種は、その後の病原性ＨＳＶ感染後の潜伏性ＨＳＶ感染から対象を防御することを含む。他の実施形態では、前記ワクチン接種は、潜伏性ＨＳＶ感染に起因又は関連する疾病から対象を防御する。他の実施形態では、前記ワクチン接種自体は、重大な疾患を引き起こさない。
【０１８１】
いくつかの実施形態では、本発明の及び本発明の方法で使用されるＨＳＶ変異株のいずれかは、本明細書中で説明したいずれかの形態又は実施形態の、本発明の不活性化変異を含む。いくつかの実施形態では、本発明のＨＳＶ変異株のいずれかは、本明細書中で説明したいずれかの形態又は実施形態の、本発明の不活性化変異から成る。いくつかの実施形態では、本発明のＨＳＶ変異株のいずれかは、本明細書中で説明したいずれかの形態又は実施形態の、本発明の不活性化変異から本質的に成る。いくつかの実施形態では、「含む」という用語は、不活性化変異を含有すること（例えば、ｇＥ又はｇＤ内の変異体）、並びに、当該技術分野で既知の他の変異を含有することを意味する。いくつかの実施形態では、「から本質的に成る」という表現は、株が本明細書中に記載された機能変異体を唯一の機能変異として含むが、前記株の利用に直接関与しない他の変異体をも含み得ることを意味する。いくつかの実施形態では、「から成る」という表現は、株が、特定の遺伝子の変異、又は特定の変異を含むことを意味する。
【０１８２】
ある実施形態では、前記不活性化変異を補完するのにプラスミド相補体を使用し得、ある実施形態では、本発明のＨＳＶ変異体との少なくとも１回の感染を可能にする。
【０１８３】
ある実施形態では、本発明は、対象における帯状疱疹様病変の形成を阻害するための組成物であって、本発明のＨＳＶ変異株を含む組成物を提供する。
【０１８４】
ある実施形態では、本発明は、対象におけるヘルペス性眼疾患を阻害するための組成物であって、本発明のＨＳＶ変異株を含む組成物を提供する。
【０１８５】
ある実施形態では、本発明は、ＨＳＶ感染に対するワクチン接種用の組成物であって、、本発明のＨＳＶ変異株を含む組成物を提供する。
【０１８６】
ある実施形態では、本発明は、ＨＳＶ感染を阻害するための組成物であって、本発明のＨＳＶ変異株を含む組成物を提供する。
【０１８７】
ある実施形態では、本発明は、ヘルペス媒介性脳炎を阻害するための組成物であって、本発明のＨＳＶ変異株を含む組成物を提供する。
【０１８８】
ある実施形態では、本発明のｇＥタンパク質は、本明細書で記載又は列挙されたペプチドと相同する。「相同」、「相同性」などの用語は、任意のタンパク質又はペプチドに関して用いる際は、ある実施形態では、候補配列内における、アミノ酸（ＡＡ）残基が対応する天然ポリペプチドの残基と一致するパーセンテージを意味する。相同性は、候補配列を一列に整列させて求め、必要に応じて相同性のパーセンテージが最大になるようにギャップを導入する。その際、同類置換の残基は、対応するものと同一とは見なさない。整列させるための方法及びコンピュータプログラムは、当該技術分野では公知である。
【０１８９】
相同性は、ある実施形態では、配列アライメント用のコンピュータアルゴリズムを用いて、当該技術分野で周知の方法により決定される。例えば、核酸配列の相同性を分析するためのコンピュータアルゴリズムは、入手可能なあらゆるソフトウエアパッケージの利用を含むことができ、そのようなフトウエアパッケージとしては、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＤＯＭＡＩＮ、ＢＥＡＵＴＹ（BLAST Enhanced Alignment Utility）、ＧＥＮＰＥＰＴ、及びＴＲＥＭＢＬパッケージがある。
【０１９０】
他の実施形態では、「相同」は、配列番号２〜７から選択された１つの配列との一致が７０％を越えることを意味する。他の実施形態では、「相同」は、配列番号２〜７から選択された１つの配列との一致が７２％を越えることを意味する。他の実施形態では、「相同」は、配列番号２〜７から選択された１つの配列との一致が７５％を越えることを意味する。他の実施形態では、「相同」は、配列番号２〜７から選択された１つの配列との一致が７８％を越えることを意味する。他の実施形態では、「相同」は、配列番号２〜７から選択された１つの配列との一致が８０％を越えることを意味する。他の実施形態では、「相同」は、配列番号２〜７から選択された１つの配列との一致が８２％を越えることを意味する。他の実施形態では、「相同」は、配列番号２〜７から選択された１つの配列との一致が８３％を越えることを意味する。他の実施形態では、「相同」は、配列番号２〜７から選択された１つの配列との一致が８５％を越えることを意味する。他の実施形態では、「相同」は、配列番号２〜７から選択された１つの配列との一致が８７％を越えることを意味する。他の実施形態では、「相同」は、配列番号２〜７から選択された１つの配列との一致が８８％を越えることを意味する。他の実施形態では、「相同」は、配列番号２〜７から選択された１つの配列との一致が９０％を越えることを意味する。他の実施形態では、「相同」は、配列番号２〜７から選択された１つの配列との一致が９２％を越えることを意味する。他の実施形態では、「相同」は、配列番号２〜７から選択された１つの配列との一致が９３％を越えることを意味する。他の実施形態では、「相同」は、配列番号２〜７から選択された１つの配列との一致が９５％を越えることを意味する。他の実施形態では、「相同」は、配列番号２〜７から選択された１つの配列との一致が９６％を越えることを意味する。他の実施形態では、「相同」は、配列番号２〜７から選択された１つの配列との一致が９７％を越えることを意味する。他の実施形態では、「相同」は、配列番号２〜７から選択された１つの配列との一致が９８％を越えることを意味する。他の実施形態では、「相同」は、配列番号２〜７から選択された１つの配列との一致が９９％を越えることを意味する。他の実施形態では、「相同」は、配列番号２〜７から選択された１つの配列との一致が１００％を越えることを意味する。
【０１９１】
ある実施形態では、相同性は、当該技術分野では公知である候補配列ハイブリダイゼーション測定法により決定される。例えば、「Nucleic Acid Hybridization" Hames, B. D., and Higgins S. J., Eds. (1985)」、「Sambrook et al., 2001, Molecular Cloning, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press, N. Y.」、及び「Ausubel et al., 1989, Current Protocols in Molecular Biology, Green Publishing Associates and Wiley Interscience, N. Y」を参照されたい。他の実施形態では、ハイブリダイゼーション方法は、天然カスパーゼペプチドをエンドードしているＤＮＡの補完物（complement）に対して、穏やかな条件から厳密な条件下で実施される。ハイブリダイゼーションの条件は、例えば、１０〜２０％のホルムアミド、５Ｘ ＳＳＣ（１５０ｍＭのＮａＣｌ、１５ｍＭのクエン酸三ナトリウム）、５０ｍＭのリン酸ナトリウム（ｐＨ７．６）、５Ｘデンハルト溶液、１０％硫酸デキストラン、及び２０μｇ／ｍｌの変性及びせん断されたサケ精子ＤＮＡを含む溶液内で、４２℃で一晩培養する。
【０１９２】
本明細書に列記したＡＡ配列についてのタンパク質及び／又はペプチドの相同性は、ある実施形態では、イムノブロット解析や様々なソフトウエアパッケージを用いたコンピュータアルゴリズム解析などの当該技術分野で周知の方法により確立された手法に従って決定される。これらのパッケージとしては、ＦＡＳＴＡ、ＢＬＡＳＴ、ＭＰｓｒｃｈ、又はＳｃａｎｐｓがある。前記パッケージは、他の実施形態では、分析のために、例えば、スミス・ウォーターマンアルゴリズム、及び／又はグローバル／ローカル又はＢＬＯＣＫＳアラインメントを利用する。 
【０１９３】
ある実施形態では、「変異体」は、それが属する集団の大多数とは異なるが、共通モードが十分に類似しており、それらの１つと認識されるアミノ酸又は核酸配列（或いは、ある実施形態では、有機体又は組織）を意味する（例えばスプライス変異体）。
【０１９４】
ある実施形態では、「異性体」は、同一の要素から成るが、原子配置が異なるために化学的及び／又は生物学的性質が異なる任意の２つ以上の物質のいずれか１つを意味し、ある実施形態では光学異性体であり、他の実施形態では構造異性体又は互変異性体である。ある実施形態では、異性体は、光学異性体、鏡像異性体、幾何異性体、Ｄ異性体、Ｌ異性体、位置異性体、又はシス・トランス異性である。
【０１９５】
本発明のある実施形態では、「核酸」又は「ヌクレオチド」は、少なくとも２つの塩基−糖−リン酸塩が組み合わさった鎖を意味する。この用語は、ある実施形態では、ＤＮＡ及びＲＮＡを含む。「ヌクレオチド」は、核酸ポリマーのモノマー単位を意味する。ＲＮＡは、ある実施形態では、ｔＲＮＡ（転移ＲＮＡ）、ｓｎＲＮＡ（核内低分子ＲＮＡ）、ｒＲＮＡ（リボソームＲＮＡ）、ｍＲＮＡ（メッセンジャーＲＮＡ）、アンチセンスＲＮＡ、阻害的低分子ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、ミクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、及びリボザイムの形態である。ｓｉＲＮＡ及びｍｉＲＮＡの使用は、「Caudy AA et al, Genes & Devel 16: 2491-96（及びその中の参照文献）」に記載されている。ＤＮＡは、他の実施形態では、プラスミドＤＮＡ、ウイルスＤＮＡ、線状ＤＮＡ、又は染色体ＤＮＡ、或いはそれらの誘導体の形態であり得る。さらに、これらの形態のＤＮＡ及びＲＮＡは、単鎖、二重鎖、三重鎖、又は四重鎖であり得る。他の実施形態では、この用語はまた、同一の塩基ではなく、他の型のバックボーンを有する人工核酸を含む。ある実施形態では、前記人工核酸は、ＰＮＡ（ペプチド核酸）である。ＰＮＡは、ペプチドのバックボーンとヌクレオチド塩基を含み、ある実施形態では、ＤＮＡ分子及びＲＮＡ分子の両方に結合可能である。他の実施形態では、前記ヌクレオチドは、オキセタンで修飾される。他の実施形態では、前記ヌクレオチドは、１つ以上のリン酸ジエステル結合をホスホロチオエート結合に置換することにより修飾される。他の実施形態では、前記人工核酸は、当該技術分野で既知のその他の、天然核酸のリン酸バックボーンの変異体を含む。ホスホチオレート核酸及びＰＮＡの使用は当業者には既知であり、例えば、「Neilsen PE, Curr Opin Struct Biol 9:353-57」や「Raz NK et al., Biochem Biophys Res Commun. 297:1075-84」に記載されている。核酸の作成及び使用は、当業者には既知であり、例えば、「Molecular Cloning, (2001), Sambrook and Russell, eds.」や「Methods in Enzymology: Methods for molecular cloning in eukaryotic cells (2003) Purchio and G. C. Fareed」に記載されている。
【０１９６】
ある実施形態では、本発明は、本発明に係る方法の実施に使用される化合物又は組成物を含むキットを提供する。他の実施形態では、本発明は、本発明に係る組成物、器具又は装置を含むキットを提供する。
【０１９７】
「接触」は、ある実施形態では、標的細胞に本発明のＨＳＶ変異株を直接的に接触させることを意味する。他の実施形態では、「接触」は、標的細胞に本発明のＨＳＶ変異株を間接的に接触させることを意味する。したがって、ある実施形態では、本発明に係る方法は、対象にＨＳＶ変異株を接触させる方法であって、拡散又は当該技術分野で既知のその他の能動若しくは受動輸送により、化合物を体内で循環させて、前記ＨＳＶ変異体を標的細胞に接触させる方法を含む。
【０１９８】
本発明に係る方法のある実施形態では、前記ＨＳＶ変異株は、対象の血流で標的細胞へ運ばれる。他の実施形態では、前記ＨＳＶ変異株は、拡散により標的細胞へ運ばれる。他の実施形態では、前記ＨＳＶ変異株は、能動輸送により標的細胞へ運ばれる。他の実施形態では、前記ＨＳＶ変異株は、標的細胞に直接的に接触させるような方法で、対象に投与される。
【０１９９】
医薬組成物及び投与方法
【０２００】
ある実施形態では、本発明に係る方法は、前記ＨＳＶ変異株と薬学的に許容される担体とを含有する医薬組成物を投与するステップを含む。
【０２０１】
「医薬組成物」は、ある実施形態では、治療上有効な量の活性成分（すなわち、ＨＳＶ変異株）を、薬学的に許容される担体又は希釈剤と共に含んでいる組成物である。「治療上有効な量」は、ある実施形態では、所与の条件及び投薬計画において治療効果を与える量を意味する。
【０２０２】
ＨＳＶ変異株を含んでいる医薬組成物は、ある実施形態では、例えば、非経口的、経粘膜的、経皮的、筋肉内、静脈内、皮内、皮下、腹膜内、脳室内、脳内、膣内又は腫瘍内などの、当業者に既知のいずれかの方法によって対象に投与することができる。
【０２０３】
本発明の方法及び組成物において説明された他の実施形態では、前記医薬組成物は、経口投与に適した形態（すなわち、固形又は液体製剤）に製剤化され、経口投与される。適切な経口用固形製剤としては、錠剤、カプセル、ピル、顆粒、ペレットなどがある。また、適切な経口用液体製剤としては、溶液、懸濁液、分散液、乳濁液、油などがある。本発明の他の実施形態では、前記活性成分はカプセル製剤化される。本発明の他の実施形態では、前記活性成分は、この実施形態では、本発明に係る組成物は、前記活性成分及び不活性担体（又は希釈剤）に加えて、硬ゲル化カプセルを含む。
【０２０４】
他の実施形態では、前記医薬組成物は、液体製剤の静脈内注射、動脈内注射又は筋肉内注射によって投与される。適切な液体製剤としては、溶液、懸濁液、分散液、乳濁液、油などがある。他の実施形態では、前記医薬組成物は、静脈内投与に適した形態に製剤化され、静脈内に投与される。他の実施形態では、前記医薬組成物は、動脈内投与に適した形態に製剤化され、動脈内に投与される。他の実施形態では、前記医薬組成物は、筋肉内投与に適した形態に製剤化され、筋肉内に投与される。
【０２０５】
さらに、他の実施形態では、前記医薬組成物は、局所投与に適した形態に製剤化され、身体の表面に局所的に投与される。適切な局所性製剤としては、ゲル、軟膏、クリーム、ローション、液滴などがある。局所的に投与するために、前記ＨＳＶ変異株は、薬学的担体を用いて又は用いることなく、生理学的に認容される希釈液と共に、水溶液、懸濁液又は乳状液として製剤化され塗布される。
【０２０６】
他の実施形態では、本明細書に記載された前記医薬組成物は、投与後に前記ＨＳＶ変異株を長期間に渡って放出する制御放出組成物である。制御又は持続放出型組成物としては、脂溶性の持続性製剤（例えば、脂肪酸、ワックス、オイル）がある。他の実施形態では、前記医薬組成物は、投与直後に全てのＨＳＶ変異株を放出する即放型組成物である。
【０２０７】
上記の添加剤、賦形剤、製剤、及び投与方法のそれぞれは、本発明の別個の実施形態に相当する。
【０２０８】
実施例
【０２０９】
実施例１：ＨＳＶ（ｇＥヌル）は疾病を引き起こさない
【０２１０】
材料及び実験方法（実施例１〜４）
【０２１１】
ウイルス株
【０２１２】
継代数の少ない臨床分離株である野生型ＨＳＶ−１ ＮＳ株を、変異ウイルスの作成に使用した。ＨＳＶ−１（ｇＥヌル）を構築するために、ｇＥをコードしている全配列を、ＸｂａＩでｐＣＭＶ３ｇＥ−１から切り出し、ｐＳＰＴ１８へクローンした。ｐＳＰＴ１８は次の配列を持つ。
【０２１３】
ｇａａｔａｃａａｇｃｔｔｇｃａｔｇｃｃｔｇｃａｇｇｔｃｇａｃｔｃｔａｇａｇｇａｔｃｃｃｃｇｇｇｔａｃｃｇａｇｃｔｃｇａａｔｔｃｃｇｇｔｃｔｃｃｃｔａｔａｇｔｇａｇｔｃｇｔａｔｔａａｔｔｔｃｇａｔａａｇｃｃａｇｃｔｇｇｇｃｃｔｃｇｃｇｃｇｔｔｔｃｇｇｔｇａｔｇａｃｇｇｔｇａａａａｃｃｔｃｔｇａｃａｃａｔｇｃａｇｃｔｃｃｃｇｇａｇａｃｇｇｔｃａｃａｇｃｔｔｇｔｃｔｇｔａａｇｃｇｇａｔｇｃｃｇｇｇａｇｃａｇａｃａａｇｃｃｃｇｔｃａｇｇｇｃｇｃｇｔｃａｇｃｇｇｇｔｇｔｔｇｇｃｇｇｇｔｇｔｃｇｇｇｇｃｇｃａｇｃｃａｔｇａｃｃｃａｇｔｃａｃｇｔａｇｃｇａｔａｇｃｇｇａｇｔｇｔａｔａｔａｃｔｇｇｃｔｔａａｃｔａｔｇｃｇｇｃａｔｃａｇａｇｃａｇａｔｔｇｔａｃｔｇａｇａｇｔｇｃａｃｃａｔａｔｇｃｇｇｔｇｔｇａａａｔａｃｃｇｃａｃａｇａｔｇｃｇｔａａｇｇａｇａａａａｔａｃｃｇｃａｔｃａｇｇｃｇｃｔｃｔｔｃｃｇｃｔｔｃｃｔｃｇｃｔｃａｃｔｇａｃｔｃｇｃｔｇｃｇｃｔｃｇｇｔｃｇｔｔｃｇｇｃｔｇｃｇｇｃｇａｇｃｇｇｔａｔｃａｇｃｔｃａｃｔｃａａａｇｇｃｇｇｔａａｔａｃｇｇｔｔａｔｃｃａｃａｇａａｔｃａｇｇｇｇａｔａａｃｇｃａｇｇａａａｇａａｃａｔｇｔｇａｇｃａａａａｇｇｃｃａｇｃａａａａｇｇｃｃａｇｇａａｃｃｇｔａａａａａｇｇｃｃｇｃｇｔｔｇｃｔｇｇｃｇｔｔｔｔｔｃｃａｔａｇｇｃｔｃｃｇｃｃｃｃｃｃｔｇａｃｇａｇｃａｔｃａｃａａａａａｔｃｇａｃｇｃｔｃａａｇｔｃａｇａｇｇｔｇｇｃｇａａａｃｃｃｇａｃａｇｇａｃｔａｔａａａｇａｔａｃｃａｇｇｃｇｔｔｔｃｃｃｃｃｔｇｇａａｇｃｔｃｃｃｔｃｇｔｇｃｇｃｔｃｔｃｃｔｇｔｔｃｃｇａｃｃｃｔｇｃｃｇｃｔｔａｃｃｇｇａｔａｃｃｔｇｔｃｃｇｃｃｔｔｔｃｔｃｃｃｔｔｃｇｇｇａａｇｃｇｔｇｇｃｇｃｔｔｔｃｔｃａａｔｇｃｔｃａｃｇｃｔｇｔａｇｇｔａｔｃｔｃａｇｔｔｃｇｇｔｇｔａｇｇｔｃｇｔｔｃｇｃｔｃｃａａｇｃｔｇｇｇｃｔｇｔｇｔｇｃａｃｇａａｃｃｃｃｃｃｇｔｔｃａｇｃｃｃｇａｃｃｇｃｔｇｃｇｃｃｔｔａｔｃｃｇｇｔａａｃｔａｔｃｇｔｃｔｔｇａｇｔｃｃａａｃｃｃｇｇｔａａｇａｃａｃｇａｃｔｔａｔｃｇｃｃａｃｔｇｇｃａｇｃａｇｃｃａｃｔｇｇｔａａｃａｇｇａｔｔａｇｃａｇａｇｃｇａｇｇｔａｔｇｔａｇｇｃｇｇｔｇｃｔａｃａｇａｇｔｔｃｔｔｇａａｇｔｇｇｔｇｇｃｃｔａａｃｔａｃｇｇｃｔａｃａｃｔａｇａａｇｇａｃａｇｔａｔｔｔｇｇｔａｔｃｔｇｃｇｃｔｃｔｇｃｔｇａａｇｃｃａｇｔｔａｃｃｔｔｃｇｇａａａａａｇａｇｔｔｇｇｔａｇｃｔｃｔｔｇａｔｃｃｇｇｃａａａｃａａａｃｃａｃｃｇｃｔｇｇｔａｇｃｇｇｔｇｇｔｔｔｔｔｔｔｇｔｔｔｇｃａａｇｃａｇｃａｇａｔｔａｃｇｃｇｃａｇａａａａａａａｇｇａｔｃｔｃａａｇａａｇａｔｃｃｔｔｔｇａｔｃｔｔｔｔｃｔａｃｇｇｇｇｔｃｔｇａｃｇｃｔｃａｇｔｇｇａａｃｇａａａａｃｔｃａｃｇｔｔａａｇｇｇａｔｔｔｔｇｇｔｃａｔｇａｇａｔｔａｔｃａａａａａｇｇａｔｃｔｔｃａｃｃｔａｇａｔｃｃｔｔｔｔａａａｔｔａａａａａｔｇａａｇｔｔｔｔａａａｔｃａａｔｃｔａａａｇｔａｔａｔａｔｇａｇｔａａａｃｔｔｇｇｔｃｔｇａｃａｇｔｔａｃｃａａｔｇｃｔｔａａｔｃａｇｔｇａｇｇｃａｃｃｔａｔｃｔｃａｇｃｇａｔｃｔｇｔｃｔａｔｔｔｃｇｔｔｃａｔｃｃａｔａｇｔｔｇｃｃｔｇａｃｔｃｃｃｃｇｔｃｇｔｇｔａｇａｔａａｃｔａｃｇａｔａｃｇｇｇａｇｇｇｃｔｔａｃｃａｔｃｔｇｇｃｃｃｃａｇｔｇｃｔｇｃａａｔｇａｔａｃｃｇｃｇａｇａｃｃｃａｃｇｃｔｃａｃｃｇｇｃｔｃｃａｇａｔｔｔａｔｃａｇｃａａｔａａａｃｃａｇｃｃａｇｃｃｇｇａａｇｇｇｃｃｇａｇｃｇｃａｇａａｇｔｇｇｔｃｃｔｇｃａａｃｔｔｔａｔｃｃｇｃｃｔｃｃａｔｃｃａｇｔｃｔａｔｔａａｔｔｇｔｔｇｃｃｇｇｇａａｇｃｔａｇａｇｔａａｇｔａｇｔｔｃｇｃｃａｇｔｔａａｔａｇｔｔｔｇｃｇｃａａｃｇｔｔｇｔｔｇｃｃａｔｔｇｃｔａｃａｇｇｃａｔｃｇｔｇｇｔｇｔｃａｃｇｃｔｃｇｔｃｇｔｔｔｇｇｔａｔｇｇｃｔｔｃａｔｔｃａｇｃｔｃｃｇｇｔｔｃｃｃａａｃｇａｔｃａａｇｇｃｇａｇｔｔａｃａｔｇａｔｃｃｃｃｃａｔｇｔｔｇｔｇｃａａａａａａｇｃｇｇｔｔａｇｃｔｃｃｔｔｃｇｇｔｃｃｔｃｃｇａｔｃｇｔｔｇｔｃａｇａａｇｔａａｇｔｔｇｇｃｃｇｃａｇｔｇｔｔａｔｃａｃｔｃａｔｇｇｔｔａｔｇｇｃａｇｃａｃｔｇｃａｔａａｔｔｃｔｃｔｔａｃｔｇｔｃａｔｇｃｃａｔｃｃｇｔａａｇａｔｇｃｔｔｔｔｃｔｇｔｇａｃｔｇｇｔｇａｇｔａｃｔｃａａｃｃａａｇｔｃａｔｔｃｔｇａｇａａｔａｇｔｇｔａｔｇｃｇｇｃｇａｃｃｇａｇｔｔｇｃｔｃｔｔｇｃｃｃｇｇｃｇｔｃａａｔａｃｇｇｇａｔａａｔａｃｃｇｃｇｃｃａｃａｔａｇｃａｇａａｃｔｔｔａａａａｇｔｇｃｔｃａｔｃａｔｔｇｇａａａａｃｇｔｔｃｔｔｃｇｇｇｇｃｇａａａａｃｔｃｔｃａａｇｇａｔｃｔｔａｃｃｇｃｔｇｔｔｇａｇａｔｃｃａｇｔｔｃｇａｔｇｔａａｃｃｃａｃｔｃｇｔｇｃａｃｃｃａａｃｔｇａｔｃｔｔｃａｇｃａｔｃｔｔｔｔａｃｔｔｔｃａｃｃａｇｃｇｔｔｔｃｔｇｇｇｔｇａｇｃａａａａａｃａｇｇａａｇｇｃａａａａｔｇｃｃｇｃａａａａａａｇｇｇａａｔａａｇｇｇｃｇａｃａｃｇｇａａａｔｇｔｔｇａａｔａｃｔｃａｔａｃｔｃｔｔｃｃｔｔｔｔｔｃａａｔａｔｔａｔｔｇａａｇｃａｔｔｔａｔｃａｇｇｇｔｔａｔｔｇｔｃｔｃａｔｇａｇｃｇｇａｔａｃａｔａｔｔｔｇａａｔｇｔａｔｔｔａｇａａａａａｔａａａｃａａａｔａｇｇｇｇｔｔｃｃｇｃｇｃａｃａｔｔｔｃｃｃｃｇａａａａｇｔｇｃｃａｃｃｔｇａｃｇｔｃｔａａｇａａａｃｃａｔｔａｔｔａｔｃａｔｇａｃａｔｔａａｃｃｔａｔａａａａａｔａｇｇｃｇｔａｔｃａｃｇａｇｇｃｃｃｔｔｔｃｇｔｃｔｃｇｃｇｃｇｔｔｔｃｇｇｔｇａｔｇａｃｇｇｔｇａａａａｃｃｔｃｔｇａｃａｃａｔｇｃａｇｃｔｃｃｃｇｇａｇａｃｇｇｔｃａｃａｇｃｔｔｇｔｃｔｇｔａａｇｃｇｇａｔｇｃｃｇｇｇａｇｃａｇａｃａａｇｃｃｃｇｔｃａｇｇｇｃｇｃｇｔｃａｇｃｇｇｇｔｇｔｔｇｇｃｇｇｇｔｇｔｃｇｇｇｇｃｔｇｇｃｔｔａａｃｔａｔｇｃｇｇｃａｔｃａｇａｇｃａｇａｔｔｇｔａｃｔｇａｇａｇｔｇｃａｃｃａｔａｔｃｇａｃｇｃｔｃｔｃｃｃｔｔａｔｇｃｇａｃｔｃｃｔｇｃａｔｔａｇｇａａｇｃａｇｃｃｃａｇｔａｇｔａｇｇｔｔｇａｇｇｃｃｇｔｔｇａｇｃａｃｃｇｃｃｇｃｃｇｃａａｇｇａａｔｇｇｔｇｃａｔｇｃａａｇｇａｇａｔｇｇｃｇｃｃｃａａｃａｇｔｃｃｃｃｃｇｇｃｃａｃｇｇｇｃｃｔｇｃｃａｃｃａｔａｃｃｃａｃｇｃｃｇａａａｃａａｇｃｇｃｔｃａｔｇａｇｃｃｃｇａａｇｔｇｇｃｇａｇｃｃｃｇａｔｃｔｔｃｃｃｃａｔｃｇｇｔｇａｔｇｔｃｇｇｃｇａｔａｔａｇｇｃｇｃｃａｇｃａａｃｃｇｃａｃｃｔｇｔｇｇｃｇｃｃｇｇｔｇａｔｇｃｃｇｇｃｃａｃｇａｔｇｃｇｔｃｃｇｇｃｇｔａｇａｇｇａｔｃｔｇｇｃｔａｇｃｇａｔｇａｃｃｃｔｇｃｔｇａｔｔｇｇｔｔｃｇｃｔｇａｃｃａｔｔｔｃｃｇｇｇｔｇｃｇｇｇａｃｇｇｃｇｔｔａｃｃａｇａａａｃｔｃａｇａａｇｇｔｔｃｇｔｃｃａａｃｃａａａｃｃｇａｃｔｃｔｇａｃｇｇｃａｇｔｔｔａｃｇａｇａｇａｇａｔｇａｔａｇｇｇｔｃｔｇｃｔｔｃａｇｔａａｇｃｃａｇａｔｇｃｔａｃａｃａａｔｔａｇｇｃｔｔｇｔａｃａｔａｔｔｇｔｃｇｔｔａｇａａｃｇｃｇｇｃｔａｃａａｔｔａａｔａｃａｔａａｃｃｔｔａｔｇｔａｔｃａｔａｃａｃａｔａｃｇａｔｔｔａｇｇｔｇａｃａｃｔａｔａ（配列番号：１）。
【０２１４】
１２４〜５０８番目のアミノ酸（ＡＡ）をコードする１．１ｋｂのＨｐａＩ―ＢｇｌＩＩ断片を切り出し、ＨｐａＩ部位をＢｇｌＩＩ部位に変更した。ＨＳＶ ＩＣＰ６プロモーターの制御下に大腸菌Β−ガラクトシダーゼ遺伝子（Β−ｇａｌ）を含むｐＤ６Ｐ由来４．３ｋｂの断片を、ＢｇｌＩＩ部位へクローンした。得られたベクターは、ＮＳ ＤＮＡの５´末端配列の３７４ｂｐとＩＣＰ６：：ｌａｃＺカセットの３´末端配列２２５ｂｐを含み、ｇＥヌルウイルスを構築するために使用した。フランキング配列ベクターを含むＸｂａＩ断片を単離し、その７５０ｎｇをリン酸カルシウムトランスフェクションによって１．０μｇのＮＳ ＤＮＡとともにベロ細胞へ同時にトランスフェクトした。ＤＮＡ−リン酸カルシウム混合物を除去し、細胞を１５％のグリセロールでショックを与えた。３０〜４０パーセントの細胞において細胞変性効果が認められた時に細胞を採取し、ウイルスプールを調製するために超音波処理した。Β―ｇａｌを発現する組み換えｇＥヌルウイルスは、ベロ細胞へ感染させ、細胞を０．５％のアガロース、５．０％のウシ胎仔血清（ＦＢＳ）及び３００μｇの５−ブロモ−Ｄ−ガラクトピラノサイド（Ｘ−Ｇａｌ）のオーバーレイで選択した。青色のプラークを採取し、Ｘ−Ｇａｌアガロースオーバーレイで２回精製し、限界希釈法で１回精製した。ウイルスは、５〜７０％ショ糖密度勾配液中の感染ベロ細胞の上清液から精製した。
【０２１５】
ＨＳＶ−１（ｇＥヌル・レスキュー）は、１．０μｇのＮＳ−ｇＥヌルＤＮＡと、ｐＣＭＶ３ｇＥ−１（ＮｒｕＩでＨＳＶ−１（ＮＳ）ＤＮＡを消化して得られた）から精製した１．５μｇの野生型ｇＥ断片とをベロ細胞に共トランスフェクトすることで作成した。子孫ウイルスは、感染細胞の表面上におけるｇＥの発現を確認するために、抗ｇＥ ＭＡｂ１ＢＡｌＯを用いた免疫ペルオキシダーゼ染色法で調べた。プラークは、限界希釈法で精製し、ウイルスプールを調製した。
【０２１６】
ウイルスストックは、融合ベロ細胞（confluent Vero cells）（アフリカ緑ザル腎臓上皮細胞株）上で２．０のＭＯＩで培養した。感染から２４時間後に、細胞を培地で掻き集め、３，０００ｘｇで遠心分離した。上清を１ｍｌ残して取り除き、細胞を、再度懸濁し、３秒間超音波で分解し、５０ｍｃＬ（マイクロリットル）のアリコートに分けた。偽感染用に、非感染細胞を使用して同様のアリコートを作成した。
【０２１７】
マウスの脇腹における感染のプロトコル
【０２１８】
全実験プロトコルは、ペンシルバニア大学動物実験委員会（ＩＡＣＵＣ）によって認可された。生後５から６週間のＢａＩｂＣマウス（国立癌研究所）を、一定の温度及び光周期（１２時間の明期、１２時間の暗期）条件の下で１週間、バイオセーフティーレベル２の動物施設に順化させた。右脇腹に沿って（ワクチン接種のために）、又は左脇腹に沿って（チャレンジのために）、マウスの毛を剃って脱毛クリーム（Nair（登録商標））で脱毛し、それから温かい水で洗浄した。翌日、マウスを、１４．３ｍｇ／ｍｌのケタミン及び１．８ｍｇ／ｍｌのキシラジン含有のＰＢＳ溶液７５ｍｃｌを腹腔内注射することで麻酔し、その後、脊柱側から１ｃｍ離れた脇腹の１ｃｍ２の領域内に、５×１０３−５×１０５ｐｆｕのＨＳＶを含む１０ｍｃＬの液滴が注入された２６Ｇ×３／８インチ（０．９５ｃｍ）口径針で、６０個の引っ掻き傷を表面に作ることにより感染させた（図１）。脇腹でＨＳＶに感染したマウスにおいて、１つ以上の脊髄神経節の神経から皮膚へと逆行して二次的に広がった感染が、帯状の病斑として現れた（図２）。マウスを、ＣＯ２で窒息死させた後に、頸椎脱臼させた。接種より３日後から、２４時間間隔でマウスを観察し始め、皮膚病斑及び疾患の出現と重症度を記録した。観察に一貫性があるようにするために、病斑の重症度を評価するための標準化された評価システムを使用した（図３）。
【０２１９】
ワクチン接種及びウイルス攻撃（チャレンジ）
【０２２０】
ワクチン接種を行うために、ＨＳＶ−１（ｇＥヌル）又はウイルス非含有細胞溶解物（上記で説明した）のいずれかを含む接種材料をマウスの右脇腹につけ、引っ掻き傷を作って感染させた。２８日後に、１×１０５ｐｆｕのＨＳＶ−１（ＮＳ）を含む液滴を反対側（左側）の脇腹につけて引っ掻くことによって、マウスをチャレンジさせた。
【０２２１】
後根神経節及び皮膚の解剖
【０２２２】
脊柱の右側（ＨＳＶ−１（ｇＥヌル）ワクチンの接種又はＨＳＶ−１（ｇＥヌルレスキュー）感染の分析のために）または左側（ＨＳＶ−１（ＮＳ）によるチャレンジの分析のために）のいずれかに沿った後根神経節（ＤＲＧ）を摘出し、プールし、１１０ｍｃＬのＤＭＥＭ（２．５％ＦＢＳ）に入れ、分析まで−８０℃で凍結した。
【０２２３】
接種部位の１ｃｍ２の皮膚領域を摘出した。サンプルの半分を、１１０ｍｃＬのＤＭＥＭ（２．５％ＦＢＳ）を含むチューブ内に入れ、分析までに−８０℃で凍結した。もう半分は、同様なサンプルと共に索引カード上に置かれ、４％パラホルムアルデヒド含有の１×ＰＢＳに４℃で２４時間浸し、その後、溶液を１×ＰＢＳと取り替えた。サンプルは、組織学的分析のための処理までに４℃で保存した。
【０２２４】
切片法、組織学及び免疫組織化学
【０２２５】
皮膚サンプルのパラフィン包埋、切片化及び染色が、フィラデルフィア小児病院の病理学部門のコア施設によって行われた。皮膚切片のＨＳＶ−１抗原を、抗ＨＳＶ−１ウサギポリクローナル抗体（ＤＡＫＯ）で染色し、ヘマトキシリンで逆染色した。
【０２２６】
結果
【０２２７】
５匹のマウスのグループを、脇腹にて、１０３．５、１０４．５又は１０５．５のプラーク形成ユニット（ｐｆｕ）のワクチン株ＨＳＶ−１（ｇＥヌル）に感染させた。ＨＳＶ−１の病原型と比較するために、他の５匹のマウスグループを、１０５．５ｐｆｕのＨＳＶ−１（ｇＥヌルレスキュー）（ｇＥをエンコードする遺伝子が復帰されたワクチン株のバックボーン）で脇腹にて感染させた。ＨＳＶ−１（ｇＥヌルレスキュー）感染は、疾患及び６０％の死亡率を引き起こした（図４）。しかしながら、ＨＳＶ−１（ｇＥヌル）ワクチンを接種したものには疾病、疾患又は死亡の臨床兆候は全く起きなかった。
【０２２８】
また、ＨＳＶ−１（ｇＥヌルレスキュー）感染により、潰瘍性及び壊死性を現す重度の一次的な病斑が引き起こされた（図５）。その一方で、ＨＳＶ−１（ｇＥヌル）感染により、接種部位において、偽のワクチン接種の場合と区別ができないような軽度の皮膚病変が引き起こされた。このように、ＨＳＶ−１（ｇＥヌル）接種後の皮膚病変の全て又は実質的に全ては、スクラッチ接種の過程自体に起因する。
【０２２９】
これらの結果から、ｇＥヌルヘルペスウイルスの感染は疾病を引き起こさないことが分かる。
【０２３０】
実施例２：ＨＳＶ（ｇＥヌル）は感覚神経内で拡散しない
【０２３１】
ＨＳＶ−１（ｇＥヌルレスキュー）感染は、感染から４〜５日後で初めて現れる重度の二次的な（帯状疱疹様の）潰瘍性及び壊死性のある病斑を引き起こす（図６）。対照的に、ＨＳＶ−１（ｇＥヌル）感染後では二次的な病斑は見られなかった。皮節に沿った二次的な病斑の形成は、神経に沿って皮膚から神経節へと拡散し再び逆行するというウイルスの能力に依存するため、これらの結果は、ワクチンが感覚神経内で拡散不可能であることを表している。故に、ＨＳＶ（ｇＥヌル）は再発性の感染を引き起こすことは不可能である。
【０２３２】
実施例３：ＨＳＶ（ｇＥヌル）は皮膚細胞内で複製する
【０２３３】
皮膚細胞におけるＨＳＶ−１（ｇＥヌル）の複製範囲を決定するために、マウス（ｎ＝３）をＨＳＶ−１（ｇＥヌル）又は病原型のＨＳＶ−１（ｇＥヌルレスキュー）で感染させた。接種より１、３、６及び１３日後に、マウスを屠殺し、接種部位の皮膚を除去し、各マウスの右側からのＤＲＧをプールした。均質化された組織のウイルス含有量を決定するために力価測定（Titering）を行ったところ、ＨＳＶ−１（ｇＥヌル）がワクチン接種後に皮膚で複製するが、ＨＳＶ−１（ｇＥヌルレスキュー）より複製量が大幅に少ないことが明らかとなった（図７）。さらに、ＨＳＶ−１（ｇＥヌル）ワクチンを接種された皮膚には、免疫細胞に侵入し、６日後までにウイルスが除去された（図８）。
【０２３４】
これらの結果から、ＨＳＶ（ｇＥヌル）が皮膚において複製し、宿主による炎症反応を引き起こすことが予想されることが分かる。
【０２３５】
ＨＳＶ−１（ｇＥヌルレスキュー）のレベルは、ＨＳＶ−１（ｇＥヌル）のレベルより４等級分高かった（図９）。また、ＨＳＶ−１（ｇＥヌル）に感染したマウスのＤＲＧでは、感染性のウイルスは検出されなかった。特徴的な帯状の病斑や神経節において検出可能なウイルスが存在しなかったことから、ＨＳＶ−１（ｇＥヌル）ワクチンを接種しても、このウイルスが神経において決して拡散しないことが判明した。
【０２３６】
したがって、ｇＥを有さないＨＳＶは、感染しても、その感染は宿主の皮膚に限定され、免疫系によって即座に検知されて除去される。
【０２３７】
実施例４：ＨＳＶ−１（ｇＥヌル）ワクチンの接種は野生型ＨＳＶ−１感染に対して保護する
【０２３８】
感染
【０２３９】
偽ワクチンを接種された、又はＨＳＶ−１（ｇＥヌル）ワクチンを接種されたマウスは、ワクチン接種から２８日後に、致死量に当たる１０５ｐｆｕのＷＴ ＨＳＶ−１（ＮＳ株）でチャレンジされた。チャレンジ後、偽ワクチンを接種されたマウスの１００％が死亡したのに対して、ＨＳＶ−１（ｇＥヌル）ワクチンを接種されたマウスの１００％が致死量のチャレンジを切り抜けて生き延びた（図１０）。ＨＳＶ−１（ｇＥヌル）は、試験された全ての接種量（１０３．５、１０４．５、１０５．５ｐｆｕ）において、チャレンジに対して保護することができた。また、ＨＳＶ−１（ｇＥヌル）ワクチンを接種されたマウスにおいてチャレンジ後に一次的な（接種部位の）病変はほとんど観察されなかった（図１１）。ワクチン接種されたマウスは、皮膚において、偽ワクチンを接種されたマウスより少なくとも５等級低く、検出不可能なレベルのチャレンジウイルスを有した（図１２）。
【０２４０】
偽ワクチンを接種された重症のマウスとは対照的に、ワクチン接種されたマウスでは一次的な疾病が即座に治癒された。この観察結果を確かめるために、同等の皮膚サンプルに対して免疫組織化学な手法で分析したところ、ワクチン接種されたマウスにおいて３日後には抗原がほとんど存在することなく、６日後までには抗原が除去されたことが判明した（図１３）。また、組織学的分析により、ワクチン接種されたマウスでは免疫細胞の有意な進入があったことが明らかとなり、ワクチンが宿主免疫系を有効に抗原刺激したことが分かった。
【０２４１】
偽ワクチンが接種されたマウスにおいてウイルスが帯状疱疹様に拡散したことで生じた重度の皮節病斑とは異なり、ワクチン接種されたマウスでは帯状疱疹様病変は認められなかった（図１４）。また、粉状のＤＲＧにおけるウイルス滴定量は、ワクチン接種されたマウスでは検出不可能であり、偽ワクチンを接種されたマウスより少なくとも４等級低いレベルであった（図１５）。
【０２４２】
実施例５：ＨＳＶ（ｇＥヌル）ワクチンの接種はチャレンジ後の野生型ＨＳＶ−１潜伏感染の確立を抑止する
【０２４３】
材料及び実験方法
【０２４４】
組織からの感染性ウイルスの回収
【０２４５】
マウスを屠殺した直後にＤＲＧ及び皮膚サンプルを摘出した（１、３、６、８又は１３ｄｐｉで）。３匹のマウスを各データポイントで感染させ、同様に、これらのマウスから得られた組織を個々に分析した。組織を２．５％のＦＢＳを含む１１０ｍｃＬのＤＭＥＭに置き、分析までに−８０℃で保存した。ウイルスの力価を測定するために、組織を解凍し、使い捨ての乳棒で粉末化された。連続的に希釈した（１：１０，１：１００及び１：１０００）上清５０ｍｃＬに存在する感染性ウイルスを、１２ウエルを有するシャーレ内の融合ベロ細胞でプラーク分析を行って定量した。
【０２４６】
ＤＲＧの移植
【０２４７】
潜伏的に感染したマウスから感染性ウイルスを回収するために、ＨＳＶ−１（ｇＥヌル）に感染された同じ（右）側からＤＲＧを摘出した。個々のマウスから得られた全ＤＲＧを、それぞれ、ＤＭＥＭ（２．５％ＦＢＳ）に浸された融合ベロ細胞を有する１２ウエル−シャーレの１つのウエルに置いた。培地を２日毎に取り替え、ＤＲＧ感染性のウイルスを含んでいることを示すＣＰＥの兆候に関して細胞を観察した。
【０２４８】
結果
【０２４９】
ＤＲＧを、ワクチン接種したマウスから摘出し、チャレンジの２８日後に、潜伏チャレンジウイルスを再活性化するために移植した。ワクチン接種されたマウスのうち１／１５のマウスだけにおいて、関連した神経からの再活性化が摘出の際に引き起こされた（図１６）。
【０２５０】
この結果及び前述の実施例の結果は、ＨＳＶ（ｇＥヌル）が、チャレンジの際に発生する神経感染、及びＷＴのＨＳＶの感染に伴う潜伏感染の進行からマウスを保護することを示している。
【０２５１】
実施例６：マウスへのＨＳＶ−１ΔｇＥワクチンの接種はＨＳＶ−２チャレンジに対して交差保護する
【０２５２】
材料及び実験方法
【０２５３】
６〜８週齢のメスＢａｌｂ／Ｃマウスを、１０日間動物施設で順化させた。マウスを麻酔し、毛を剃り、Ｎａｉｒ処理で右脇腹を脱毛した。翌日、接種材料の液滴１０ｍｃＬをマウスにつけ、それを介して２６Ｇ×３／８インチ（０．９５ｃｍ）口径針で６０回引っ掻くことにより、マウスを偽ワクチン又は５×１０５ｐｆｕのＨＳＶ−１ΔｇＥワクチン（ある態様においては、ｇＥヌルと称される）を接種した。２７日後に、各マウスの反対側の脇腹（左側）を、前段階と同様に毛剃りして露出させた。翌日（２８日後）、マウスを１０５ｐｆｕのＨＳＶ−２（株２．１２）のスクラッチ接種でチャレンジさせた。マウスを、接種部位における病変、帯状疱疹様病変及び生存に関して毎日観察して評価した（評価点：０＝病変無し＝＞４＝重度壊死性病変）。エラーバーは、平均値の標準誤差（ＳＥＭ）を表す。
【０２５４】
結果
【０２５５】
ＨＳＶ−１ΔｇＥワクチンの接種がＨＳＶ−２病変に対して保護する能力を試験するために、ＨＳＶ−１ΔｇＥワクチンを接種したマウスに野生型ＨＳＶ−２を表皮からチャレンジさせた。ＨＳＶ−１ΔｇＥワクチンを接種されたマウスは一匹も死亡しなかったのに対して、偽ワクチンを接種したマウス８０％は死亡した（図１７、最上部のパネル）。ワクチン接種したマウスは、接種部位において病変を発症したが、ワクチン接種しなかったマウスと比較して迅速に治癒された（図１７、中部のパネル）。また、ワクチン接種したマウスは、偽ワクチンを接種したマウスで観察された帯状疱疹様病変及び死亡から完全に保護された（図１７、最下部のパネル）。
【０２５６】
したがって、ΔｇＥ ＨＳＶワクチンの接種は、異種の単純ヘルペスであっても、非相同ＨＳＶ病変に対して対象を保護することができる。
【０２５７】
実施例７：ＨＳＶ−１ΔｇＥワクチンの接種はＨＳＶ−１(ＫＯＳ)に対して保護しＨＳＶ−１の潜伏の確立を阻害する
【０２５８】
材料及び実験方法
【０２５９】
ワクチン接種及び病変の評価は、５×１０５ｐｆｕのＨＳＶ−１のＫＯＳ株をチャレンジのために使用したことを除き、前述の例で説明したように実施した。潜伏感染の測定のために、マウスをチャレンジから４１日後に屠殺し、右側及び左側からＤＲＧを摘出し、ＤＭＥＭ／１０％ＦＢＳに置き、はさみで細分化し、そして副融合ベロ細胞の単層上へ移植した。２０日間毎日、潜伏からの再活性化を示すプラーク形成について培養物を観察した。
【０２６０】
結果
【０２６１】
この実験は、非相同ＨＳＶ−１野生型株に関連した病変からマウスを保護するＨＳＶ−１ΔｇＥワクチン接種の能力について試験した。ＨＳＶ−１ΔｇＥワクチンを接種されたマウスを野生型ＨＳＶ−１Ｈ（ＫＯＳ株）でチャレンジさせると、接種部位で病変を発症し、ワクチンを接種しなかったマウスと比較して迅速に治癒した（図１８、最上部のパネル）。また、ＨＳＶ−１ΔｇＥワクチンの接種によって、ＨＳＶ−１（ＫＯＳ）でチャレンジされたマウスは帯状疱疹様病変に対して完全に保護された（図１８、中部のパネル）。マウスのＨＳＶ−１（ＫＯＳ）感染は致命的ではないので、チャレンジ後の４週目にこの株を使用して偽ワクチン接種済マウスとＨＳＶ−１ΔｇＥが接種済マウスとを、潜伏状態からのウイルスの再活性化に関して比較した。偽ワクチンを接種したマウスに関しては、その１００％の移植ＤＲＧからＨＳＶ−１（ＫＯＳ）が再活性化したのに対して、ＨＳＶ−１ΔｇＥワクチンを接種したマウスに関しては、その１／１０（１０％）だけが再活性化を示した（図１８、最下部のパネルの表）（ワクチン又は攻撃ウイルスのいずれかによって潜伏感染されていたと考えられる）。したがって、ＨＳＶ−１ΔｇＥワクチンの接種は、非相同ＨＳＶウイルスによる病変及び潜伏の確立の両方からマウスを保護する効果がある。
【０２６２】
実施例８：ＨＳＶ−１ΔｇＥワクチンの接種はＨＳＶ−１膣内チャレンジに対して保護する
【０２６３】
材料及び実験方法
【０２６４】
ワクチン接種は、実施例６で説明したように実施した。メドロキシプロゲステロン酢酸塩（２ｍｇ）（Sicor Pharmaceuticals, Inc., Irvine CA）を、全体積が１００ｍｃｌになるように、０．９％ＮａＣｌ／１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳのバッファで希釈し、３３日後に、各マウスの頸部で皮下接種した。その５日経過後（３８日目）、マウスを麻酔し、ＰＢＳに浸したアルギン酸カルシウムスワブで膣内をふき、５×１０５ｐｆｕのＨＳＶ−１（ＮＳ株）を膣内に注入してチャレンジさせた。その後、マウスをケージ内で腹臥位に置き休息させた。チャレンジさせたマウスは、毎日、膣内疾病及び生存について観察した。ベロ細胞によるウイルス力価測定による分析のために、毎日、膣内スワブを取った。
【０２６５】
結果
【０２６６】
ＨＳＶ−１ΔｇＥワクチンの接種が野生型ＨＳＶ−１の膣内チャレンジに対して保護する能力が試験された。ＨＳＶ−１ΔｇＥワクチンを接種された全てのマウスがチャレンジを切り抜けて生き延びたが、その一方で、偽ワクチンを接種されたマウスの６０％が疾病のため死亡した（図１９Ａ、最上部のパネル）。偽ワクチンを接種されたマウス全ては、膣部内において目視できる疾病の兆候を示したが、ＨＳＶ−１ΔｇＥワクチンを接種されたマウスは、目視できる明瞭な疾病の兆候は全く示さなかった（図１９Ｂ）。チャレンジ後の１日目までには、ＨＳＶ−１ワクチンを接種されたマウスは偽ワクチンを接種された動物より１００倍少ない感染性ウイルスを有していた（膣内スワブのサンプルからの検出結果）。膣内チャレンジ後の３日目までには、ＨＳＶ−１ΔｇＥワクチンを接種されたマウスからのスワブでは、感染性のウイルスは全く検出されず、偽ワクチンを接種されたマウスで同日に検出された値よりも少なくとも３０，０００倍少ない値であった。また、ＨＳＶ−１ΔｇＥワクチンを接種されたマウスの感染症は、偽ワクチンを接種されたマウスより約３倍早く取り除かれた（図１９Ａ、最下部のパネル）。したがって、ＨＳＶ−１ΔｇＥワクチンを接種すると、動物は、ＨＳＶ−１の膣内チャレンジに関連した死亡及び疾病から免れ、ＨＳＶ感染症を迅速に取り除くことができるようになる。
【０２６７】
実施例９：表皮、皮下及び筋肉内のＨＳＶ−１ΔｇＥワクチンの接種はＨＳＶ−１のチャレンジに対して保護する
【０２６８】
材料及び実験方法
【０２６９】
ワクチン接種は、１０ｍｃｌの接種材料の液滴をマウスにつけてそれを介して２６Ｇ×３／８インチ（０．９５ｃｍ）口径針で６０回引っ掻くことにより、又は、１００ｍｃｌの接種材料を首筋へ皮下注入することにより、又は、１００ｍｃｌの接種材料を右後部大腿筋へ筋肉内注入することにより、５×１０５ｐｆｕのＨＳＶ−１ΔｇＥを用いて実施した。
【０２７０】
潜伏感染の測定のために、マウスをチャレンジから３２日後に屠殺し、右側及び左側の両方からＤＲＧを摘出して、ＤＭＥＭ/１０％ＦＢＳに置き、はさみで細分化し、そして副融合ベロ細胞（sub-confluent Vero cell）の単層上に移植した。１５日間毎日、潜伏状態からの再活性化を示すプラーク形成について培養物を観察された。
【０２７１】
結果
【０２７２】
ＨＳＶ−１ΔｇＥワクチンの筋肉内及び皮下接種法の効果が、前述の例で使用された表皮の乱切と比較した。全てのワクチン接種の経路は、表皮を介したＨＳＶ−１（ＮＳ）のチャレンジによる死亡からマウスを保護する効果がある（図２０、最上部のパネル）。３つの経路のいずれかを介してワクチン接種されたマウスは、ＨＳＶ−１（ＮＳ）によるチャレンジを行った際に接種部位で病変を示したが、偽チャレンジされたマウスより、ほんのわずかに大きいだけであった（図２０、最下部の左のパネル）。表皮の乱切又は筋肉内注入によるＨＳＶ−１ΔｇＥワクチンの接種は、帯状疱疹様病変に対して完全にマウスを保護した（図２０、最下部の右のパネル）。チャレンジ後、皮下経路でワクチン接種されたマウスのうちの１／５のマウスは、いくつかの不連続な帯状疱疹様病斑を示したが、この病斑は重症になることなく、迅速に除去された（図２０、最下部の右のパネル）。また、ワクチンの潜伏感染に対する抑止能力に関しても測定した。全ての経路を介したＨＳＶ−１ΔｇＥワクチンの接種によって、潜伏の確立に対してマウスは保護された（表１）。偽ワクチンを接種されたマウスは１００％の再活性を示した（表１、及び図１８参照）。
【０２７３】
表１．異なる経路を介したＨＳＶ−１ワクチンの接種がＨＳＶ−１の潜伏に対して保護する。
ワクチン接種法                                      潜伏からの再活性
偽                                                  １匹中１匹
表皮の乱切                                          ４匹中０匹
筋肉内                                              ５匹中０匹
皮下                                                ５匹中１匹
【０２７４】
したがって、表皮、筋肉内又は皮下経路を介したＨＳＶ−１ΔｇＥの接種は、それぞれ野生型ＨＳＶチャレンジによる急性の疾病、炎症及び潜在的な疾病に対して保護する。
【０２７５】
実施例１０：表皮の乱切、皮下注入及び筋肉内注入によるＨＳＶ−１ΔｇＥワクチンの接種は中和抗体を誘導する
【０２７６】
材料及び実験方法
【０２７７】
前述の実施例で説明したようにマウスにワクチンを接種した。２１日後、マウスを頸静脈から出血させた。２８日目、各マウスの反対の脇腹（左側）を、前述のように毛剃りし、露出させた。５０ｍｃｌ血清の希釈液（１：１０から１：３２０）を１０２ｐｆｕのＨＳＶ−１（ＮＳ）５ｍｃｌと共に３７℃で１時間培養し、その後ベロ細胞の単層に接種することにより、血清サンプルでの中和分析を実施した。
【０２７８】
結果
【０２７９】
中和抗体誘導に対する表皮の乱切、筋肉内経路及び皮下経路によるＨＳＶ−１ΔｇＥワクチンの接種効果を測定した。マウスへのＨＳＶ−１ΔｇＥワクチンの接種は、全ての経路において、中和抗体の形成を誘導し、表皮の乱切及び筋肉内経路による接種では、皮下ワクチン接種の場合よりも著しく高いレベルで誘導が引き起こされた（図２１）。
【０２８０】
実施例１１：ＨＳＶ−１ΔｇＥワクチンの接種は、脇腹における様々な非相同ＨＳＶ−１株によるチャレンジに対して保護する
【０２８１】
ＨＳＶ−１ΔｇＥワクチン接種の、病原性の高い非相同の野生型ＨＳＶ−１株（Ｆ及び１７）に対して保護する能力に関して測定した。ワクチン接種及びチャレンジは、様々な株をチャレンジに使用したことを除いて、実施例７で説明したように実施した。ＨＳＶ−１ΔｇＥワクチンの接種は、ＨＳＶ−１（ＮＳ）、ＨＳＶ−１（Ｆ）及びＨＳＶ−１（１７）の表皮を介したチャレンジによる死亡からマウスを完全に保護した（図２２、最上部のパネル）。また、ワクチンの接種によって接種部位の病変は軽減したが、ＨＳＶ−１（Ｆ）でチャレンジさせた場合、ＨＳＶ−１（ＮＳ）又はＨＳＶ−１（１７）でチャレンジさせた場合よりも、わずかに大きな病変が接種部位に発生した（図２２、中部のパネル）。さらに、ＨＳＶ−１ΔｇＥワクチン接種は、ＨＳＶ−１（ＮＳ）及びＨＳＶ−１（１７）でチャレンジされたマウス全て、及びＨＳＶ−１（Ｆ）でチャレンジされたマウスの２／３を完全に帯状疱疹様病変から保護した。ＨＳＶ−１（Ｆ）でチャレンジされたマウスの残りは２つの小さな帯状疱疹様病斑を有した（図２２、最下部のパネル）。したがって、ＨＳＶ−１ΔｇＥワクチンの接種は、マウスをＨＳＶ−１の様々な非相同株から保護する。
【０２８２】
実施例１２：ＨＳＶ−１ΔｇＥワクチンの接種は脇腹における１×１０７ｐｆｕまでのＨＳＶ−１（ＮＳ）のチャレンジに対して保護する
【０２８３】
ＨＳＶ−１ΔｇＥワクチンの接種の、より高い接種量の野生型ＨＳＶ−１に対して保護する能力が測定された。ワクチン接種及びチャレンジは、チャレンジに１０５、１０６又は１０７ｐｆｕのＨＳＶ−１（ＮＳ）を使用したことを除いて、実施例７で説明したように実施した。ワクチン接種されたマウスは、死亡及び帯状疱疹様病変から完全に保護された（図２３、最上部及び最下部のパネル）。１０５ｐｆｕのＨＳＶ−１（ＮＳ）でチャレンジさせたワクチン接種済マウスは、偽のチャレンジをさせたマウスよりわずかに重度の接種部位の病変を示した。これは、病変の大半が乱切（針による引っ掻き）により引き起こされたことを示す。ＨＳＶ−１ΔｇＥワクチンを接種したマウスを１０６又は１０７ｐｆｕのウイルスでチャレンジさせると、偽ワクチンを接種したたマウスと比較して、接種部位の病変が著しく軽減し、迅速に治癒した（中部のパネル）。
【０２８４】
実施例１３：ＨＳＶ−２（ｇＥヌル）は疾病を引き起こさない
【０２８５】
材料及び実験方法
【０２８６】
細胞及びウイルス
【０２８７】
ベロ細胞（ＡＴＣＣ ＣＣＬ８１）を、加熱不活性化した１０％新生子牛血清（Life Technologies, Gaithersburg, Md.）、５０マイクログラム（ｍｃｇ）／ｍｌのペニシリン、５０ｍｃｇ／ｍｌのステプトマイシン及び０．１５ｍｃｇ／ｍｌのファンギゾン（登録商標）（Life Technologies）を含むダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ）内で、３７℃及び５％ＣＯ２で培養した。ＨＳＶ−２株の精製ストックは、感染したベロ細胞の単層から調製し、使用までに−８０℃で保存した。ウイルスの力価は、標準的なプラーク分析で測定した。
【０２８８】
下記のように、ＨＳＶ−２ ｇＥをエンコードするＨＳＶ−２（２．１２）Ｕｓ８遺伝子の１６３５ｂｐ内の３６９−１４７９番までの塩基対（ｂｐ）欠失させた。ＨＳＶ−２（２．１２）から２つのＰＣＲ断片、すなわち、意図される欠失の５´末端領域に対応する６５８ｂｐ断片及び意図される欠失の３´末端領域に対応する５３６ｂｐ断片を、pBluescript SK＋のマルチクローニング部位（ＭＣＳ）にサブクローン化した。５´末端のフランキング領域は、pBluescript SK＋のＭＣＳのＫｐｎｌ及びＨｉｎｄＩＩＩ部位へサブクローン化し、３´末端のフランキング領域はＭＣＳのＰｓｔＩ及びＳａｃＩ部位にサブクローン化した。これにより、５´末端及び３´末端のフランキング領域間のＭＣＳに短い伸長部が残り、その伸長部は、ＥｃｏＲＩ及びＥｃｏＲＶ制限酵素部位を含み、ｇＥの最初の１２３個のアミノ酸だけが発現するようなフレームシフトを起こす（図２４Ｂ）。ベクターは、相同的組み換えを可能にするために、ＨＳＶ−２（２．１２）ゲノムＤＮＡとともにベロ細胞へ共トランスフェクションされた。得られたプラークから精製されたビリオンＤＮＡは、欠失の導入を検出するために、ＰＣＲによりスクリーニングされた。
【０２８９】
マウスのＨＳＶ−２膣内感染モデル
【０２９０】
発情周期と同調させるため及びＨＳＶ−２の膣内感染に対する感受性を高めるために、マウスを、ウイルス 接種より７日及び１日前に、首筋に２．０ｍｇのデポ・プロベラ（Depo-Provera）（Upjohn, Kalamazoo, MI）で皮下処理する。膣内を湿ったアルギン酸カルシウムスワブ（Fisher Scientific, Pittsburgh, Pa.）でふき、それから乾いたスワブでふいた後にＨＳＶ−２ウイルス（１０４ｐｆｕ）を膣腔内に注入する。接種後１４日間、毎日、（抜け毛及び膣付近の紅斑によって示されるような）症候性疾患に関して動物を評価する。生存は、接種後２１日にかけて続く。感染の追加的な指標である膣内スワブは、収集し、ベロ細胞上に含まれるウイルスについて試験する。
【０２９１】
結果
【０２９２】
ｇＥヌルＨＳＶ−２ウイルスを、ＨＳＶ−１（実施例１）で使用した方法と同様の方法を使用して、ＨＧ５２株から構築した。ＨＳＶ−１（ＮＳ）ｇＥ（実施例１〜５）及びＨＳＶ−２（ＨＧ５２）ｇＥ配列は、７２％の同一性を有し、７９％（正の）類似性を有する（図２４Ａ）。また、ＨＳＶ−２（ｇＥヌルレスキュー）が構築される。
【０２９３】
ＨＳＶ−２（ｇＥヌル）株が疾病を引き起こすか否かを試験するために、接種量が１０４ｐｆｕ（野生型ウイルスの場合の致死量）の野生型ＨＳＶ−２及びＨＳＶ−２（ｇＥヌル）株が個別のマウスグループに接種する。野生型及びＨＳＶ−２（ｇＥヌルレスキュー）ウイルスを接種マウスは死亡することが予想される一方で、ＨＳＶ−２（ｇＥヌル）株を接種されたマウスは生き延びることが予想され、また、疾病の著しい兆候を示さないことが予想される。
【０２９４】
実施例１４：ＨＳＶ−２（ｇＥヌル）ワクチン接種は野生型ＨＳＶ−２感染に対して保護する
【０２９５】
材料及び実験方法
【０２９６】
マウスには、前述の実施例で述べたようにＨＳＶ−２（ｇＥヌル）をワクチン接種するかまたは偽ワクチン接種し、２８日後に致死量のＷＴのＨＳＶ−２でチャレンジさせる。ＨＳＶ−２（ｇＥヌル）ワクチン接種マウスは致死的なチャレンジから保護されることが期待されるが、偽ワクチン接種マウスは感染により死ぬことが期待される。さらに、ＨＳＶ−２（ｇＥヌル）ワクチン接種は、ｗｔのＨＳＶ−２によるチャレンジ後に原発性疾患（接種部位）を大いに減少させるかまたは除去することが期待される。偽ワクチン接種マウスにおいて膣付近で脱毛及び紅斑が期待されるのとは違い、ワクチン接種マウスにおいては帯状疱疹様の疾患が観察されないことが期待される。同等の皮膚試料に対して免疫組織化学的検査を行うと、この観察を裏付けるように、チャレンジ後数日でワクチン接種マウスにおける抗原レベルが著しく低下することを示すことが期待される。免疫学的解析を行うと、ワクチン接種マウスにおいて免疫細胞が著しく浸潤しているということが判明することが期待される。
【０２９７】
追加実験では、ＨＳＶ−２（ｇＥヌル）ワクチンは、マウス側腹部モデル（実施例４〜５）においてテストされ、ＨＳＶ−２感染に対して保護することが期待される。
【０２９８】
実施例１５：モルモットモデルにおける既存のＨＳＶ−２性器感染に対するＨＳＶ−２（ｇＥヌル）ワクチン接種の効力
【０２９９】
材料及び実験方法
【０３００】
性器疱疹のモルモットモデル 
【０３０１】
接種当日、事前に湿らせておいたアルギン酸カルシウムスワブにより膣の閉鎖膜を破裂させる。膣の円蓋を乾燥したアルギン酸カルシウムスワブで拭き、注射器及び２０ゲージのプラスチックカテーテルを用いて１０５．７ｐｆｕのＨＳＶ−２を膣の円蓋内に染み込ませる。この投与量は、ほぼ全ての被接種動物に感染を与えるが、致死未満である。急性性器感染中、動物について、接種後１４日目まで毎日、性器皮膚疾患及び尿閉を調べる。疾患は、スコア０（疾患なし）からスコア４（解離状態の大きな潰瘍群によって特徴付けられる重度の疾患）まで皮膚病変採点法によって定量化される。急性疾患に続いて、動物は、疾患の重症度に基づき統計的に類似した群を作り出すように分配される。外面再発性ヘルペス性病変の頻度を確立するために各動物の採点を接種後２１〜５６日目に毎日行う。
【０３０２】
ウイルス排出の検出
【０３０３】
モルモットは、疾患の徴候がないときですら、膣腔からＨＳＶ−２を自然に排出した。ウイルスＤＮＡは、潜在的に感染したモルモットの膣からのスワブの１０ないし２０％で検出することができ、それによってウイルス排出頻度の調査及び量の比較ができる。接種後２２〜４３日目に、アルギン酸カルシウムが先端に付いたスワブで膣腔を毎日拭く。ＤＮＡは、ＱＩＡｍｐ（登録商標）ＤＮＡ抽出システム（Qiagen, Inc, Chats worth, CA）を用いて各スワブ試料から抽出され、試料汚染のためのモニターとしての偽スワブのブランクを含み、ＤＮＡポリメラーゼ遺伝子を標的にするプライマーを用いてＨＳＶ−２ ＤＮＡに対する定量ＰＣＲを行う。鋳型の質及び量に対処するために、第２のプライマ−セットで単一コピーのアルブミン遺伝子を増幅する別の反応を各試料に対して行う。得られた４９８ｐｂのアンプリマー（amplimer）を、各試料におけるＤＮＡ濃度を正規化し、ＨＳＶ−２負荷をより定量的に評価するために使用する。ＭＳ ＨＳＶ−２のストックで確立されたゲノム等価物（genomic equivalents）の一連の１０倍段階希釈物を増幅させた際の産物に対して、陽性試料を比較する。反応は、ＧｅｎｅＡｍｐ（登録商標）ＰＣＲシステム９６００（Perkin-Elmer Corp, Norwalk, Conn）を用いて、最初に「ホットスタート」９５℃２分、その後、変性（denaturation）９５℃１分（３５サイクル）、結合（annealing）６５℃１分、伸長（extension）７２℃１分３０秒、最終伸長（final extension）７２℃７分で行う。各試料の増幅産物、陽性及び陰性対照、並びに一連の既知の標準物質を、サザンブロッティングによって検出する。ＨＳＶ−２負荷量は、試料と平行して増幅された一連の既知ゲノム等価物の希釈物のバンド密度から確立される直線的な関係から推定される。
【０３０４】
モルモットの後根神経節におけるＨＳＶ−２ ＤＮＡのコピー数の決定
【０３０５】
仙骨後根神経節（動物１匹当たり６〜８）を切開及び秤量し、ＱＩＡａｍｐ（登録商標）ＤＮＡミニキット（QIAGEN）を用いてウイルスＤＮＡを抽出し、リアルタイムＰＣＲを行う。ＨＳＶ−２ ｇＤ遺伝子配列を含む精製プラスミドを用いて、各実験に対して標準曲線を作成する。データを、モルモットのラクトアルブミンＤＮＡに特異的なプローブに規準化する。
【０３０６】
結果
【０３０７】
モルモットモデルを用いて、再発性疱疹性疾患に対するＩＳＳの効力を調べる。このモデルは、ヒトＨＳＶ−２感染に見られるものと同様な自然発生再発性疾患を与え、潜伏感染したモルモットは、ヒトにおいて観察されるものと同様な頻度でウイルスを経膣的に排出した。
【０３０８】
モルモットにＨＳＶ−２（ｇＥヌル）をワクチン接種するかまたは偽ワクチン接種し、２８日後に１０５．７ｐｆｕのＨＳＶ−２でチャレンジさせる。ＨＳＶ−２（ｇＥヌル）ワクチン接種は、偽ワクチン接種された動物と比較して性器病変発生の頻度を著しく減少させ、何らかの再発を経験する動物の数を減少させることが期待される。その上、ＨＳＶ−２（ｇＥヌル）ワクチン接種は、ウイルス排出量を著しく減少させることが期待される。
【０３０９】
ＨＳＶ−２の潜伏感染の確立に対するＨＳＶ−２（ｇＥヌル）ワクチン接種の効果をテストするため、モルモットＤＲＧにおけるｗｔのＨＳＶ−２ウイルスゲノムの蓄積を調べる。ＨＳＶ−２（ｇＥヌル）ワクチン接種は、ＤＲＧにおけるウイルスゲノムの数を著しく減少させることが期待される。
【０３１０】
この例及びこれより前の例は、ＨＳＶ−２（ｇＥヌル）ワクチンはＨＳＶ−２感染及びそれに続く性器の再活性化から被検体を保護する効果があることの追加的な証拠を提供することが期待される。
【０３１１】
実施例１６：ΔｇＥ−２ワクチンの順方向拡散をさらに防ぐためのＵ領域への追加欠失の導入
【０３１２】
ΔｇＥ−２ワクチン株をさらに弱毒化するために、Ｕｓ８を欠失したＨＳＶ−２のを構築するために用いたアプローチと同様のアプローチを用いて、ｇｌ及びＵｓ９タンパク質をコードするＵｓ７及びＵｓ９をさらに欠失させた（図２５）。２つの５００〜１０００塩基対フランキング領域（各々、目的とする欠失のＤＮＡ配列５´または３´のいずれかに相同的である）を含むクローニングベクターを構築する。これら２つの領域のＤＮＡは、ＨＳＶ−２（２．１２）ゲノムＤＮＡをＰＣＲすることによって得られる。相同組換えによって欠失がウイルスＤＮＡに組み込まれるようにするために、クローニングベクターを、ＨＳＶ−２のゲノムＤＮＡと同時トランスフェクトする。得られたプラークを、Ｕｓが正確に欠失したものに関してＰＣＲでスクリーニングする。
【０３１３】
実施例１７：ΔｇＥ−２ワクチン株の順方向拡散を妨げる追加変異の同定
【０３１４】
ＲＮＡｉ遺伝子サイレンシング方法を利用して、ウイルス拡散に関与するｇＥ、Ｕｓ７及びＵｓ９以外の遺伝子を同定する。ＲＮＡｉ技術は、サイレンシングの標的になるウイルス遺伝子と同一の配列を有する約２０〜２２塩基対二本鎖ＲＮＡ断片を用いる。ＨＳＶ−１またはＨＳＶ−２のウイルス遺伝子上の配列を標的にするため、ウイルスＲＮＡと同一の配列の小さなＲＮＡ二本鎖断片を、当分野で既知の標準技術を用いて合成し、トランスフェクションによって、後からＨＳＶ−１またはＨＳＶ−２野生型または変異ウイルスに感染させることになる細胞内に導入する。欠陥ウイルスの拡散は、ヒト表皮ケラチノ部位（ＨａＣａＴ）細胞における小プラークのスクリーニングによって検出される（Collins WJ et al. Herpes simplex virus gE/gI expressed in epithelial cells interferes with cell-to-cell spread. J Virol. 2003 Feb;77(4):2686-95）。小プラークを誘発するＲＮＡｉ断片によって標的にされる遺伝子は、遺伝子欠失調査に用いられる。その後、上記のＲＮＡｉスクリーニング法によって同定された遺伝子内に不活性化変異を導入し、変異ウイルスを作る。変異ウイルスの拡散特性は、ラットの上頸神経節細胞神経培養（Wang F, Tang W, McGraw HM, Bennett J, Enquist LW, and Friedman HM. J. Virol 79:13362-72, 2005）及びマウスの目の網膜感染モデル（Wang F, Tang W, McGraw HM, Bennett J, Enquist LW, Friedman HM. J. Virol 79:13362-72, 2005）を用いてインビトロで調べる。実験動物内に接種されたときに疾患をほとんどまたは全く引き起こさず、かつＤＲＧにおけるウイルスＤＮＡを低レベルまたは無しにさせ、かつ野生型ＨＳＶ−１またはＨＳＶ−２による感染でチャレンジされるときに疾患及びウイルス潜伏の確立に対して最大の予防を提供するような変異の最適な組合せを同定するために、インビトロまたはインビボで拡散特性を改変するような同定されたウイルス変異株を、ｇＥ、Ｕｓ７またはＵｓ９の欠失を含む株に導入して複数の遺伝子において欠失を含む株を作成する。
【０３１５】
他の実験においては、ビリオン膜タンパク質、例えば、糖タンパク質Ｊ、Ｇ、Ｋ、Ｍに焦点を当てる。ウイルス侵入に必要な膜糖タンパク質、例えば、糖タンパク質Ｂ、Ｄ、Ｈ、Ｌは除外する。これらのビリオン膜タンパク質は、前の段落で述べたように分析する。
【０３１６】
実施例１８：ＨＳＶ ｇＤ変異体の特徴及び安定性
【０３１７】
材料及び実験方法（実施例１８〜２３）
【０３１８】
ウイルス株
【０３１９】
野生型ＨＳＶ−１株（ＫＯＳ）を用いてｇＤ変異体を準備した。ＨＳＶ−１（ｇＥヌル）を構築するため、５´側に４７４の塩基対及び３´側に９８５の塩基対に隣接したＫＯＳのｇＤオープンリーディングフレームを含むプラスミドｐＲＭ４１６内にＡ３Ｃ（アラニンからシステイン）及びＹ３８Ｃ（トリオシンからシステイン）変異を挿入することによってプラスミドｐＳＣ５９４を構築した。ＨＳＶ−１のｇＤヌルＤＮＡ及びｐＳＣ５９４ＤＮＡをＶＤ６０細胞内に共トランスフェクトした。ベロ細胞での複製によって組換えウイルスをスクリーニングし、その後プラーク精製した。各プラーク精製の後、変異部位を含んだｇＤ遺伝子の５´末端でＰＣＲによって６００塩基対を増幅した。増幅されたｇＤ断片を、制限酵素マッピングによってスクリーニングした。新たなＳｓｐＩ部位の導入によってＡ３Ｃ変異の存在が確認され、ＲｓａＩ部位の喪失によってＹ３８Ｃ変異の存在が確認された。さらなるプラーク精製に続いて、ＤＮＡ塩基配列決定法によって変異の存在が確認された。クローンをベロ細胞上で高力価に成長させ、１０％ないし６０％のショ糖勾配で精製し、最終的なＤＮＡ配列解析及び制限マッピングを行ったところ、Ａ３Ｃ変異のみが残ることが明らかになった。ショ糖勾配でＫＯＳ−ｇＤＡ３Ｃをさらに精製し、ｇＤ遺伝子全体の配列を決定して、Ａ３Ｃ変異の存在及び追加の意図しない変異がないことを確認した。
【０３２０】
レスキュー（rescued）ＫＯＳ−ｇＤＡ３Ｃウイルス（ｒＫＯＳ−ｇＤＡ３Ｃと呼ぶ）は、ＫＯＳ−ｇＤＡ３Ｃ及びｐＲＭ４１６のＤＮＡをベロ細胞に共トランスフェクトすることによって作成した。
【０３２１】
ウイルスストックを、１０％ウシ胎児血清（ＦＣＳ）含有ＤＭＥＭ（Dulbecco's minimum essential medium）中で生育させた。ＨＳＶ−１侵入に対して非許容なマウスメラノーマ細胞であるＢ７８−Ｈ１細胞を、５％ＦＣＳ含有のＤＭＥＭ中で生育させた。ＨＶＥＭ及びネクチン−１をそれぞれ安定的に発現するＢ７８−Ｈ１−Ａ１０細胞（Ａ１０）及びＢ７８−Ｈ１−Ｃ１０細胞（Ｃ１０）を、５％ＦＣＳ及び５００μｇ／ｍｌのＧ４１８を含有するＤＭＥＭ中で生育させた。ｇＤ−ヌルウイルスを、ｇＤのＤＮＡが安定的にトランスフェクトされたベロ細胞（ＶＤ６０細胞）内で増殖させた。低継代臨床分離株であるＨＳＶ−１のＮＳ株をマウスにおけるチャレンジ試験に用いた。ウイルスをベロ細胞内で生育させ、特に断りのない限り、ショ糖勾配で精製し、−８０℃で保存した。
【０３２２】
マウス側腹部感染プロトコル
【０３２３】
全ての実験プロトコルは、ペンシルバニア大学の動物及び実験資源ＩＡＣＵＣ委員会による承認を受けた。５匹の６週齢Ｂａｌｂ／ｃマウス（Charles River）を、１週間にわたって一定温度及び光周期（１２時間明、１２時間暗）でバイオセーフティーレベル２の動物施設に順化させた。マウスは、右側腹部（ワクチン接種用）または左側腹部（攻撃用）に沿って剃毛しかつ脱毛クリーム（ＮａｉｒＴＭ）により脱毛し、その後温水で洗浄した。翌日、マウスに、７５ｍｃＬの１４．３ｍｇ／ｍｌのケタミン及び１．８ｍｇ／ｍｌのキシラジン含有ＰＢＳの腹腔内投与により麻酔し、その後、脊椎から１ｃｍ離れた側腹部の１ｃｍ２の範囲に、３０ゲージの針で、５×１０５ｐｆｕのＨＳＶを含む１０ｍｃＬの液滴を介して６０個の表面引っ掻き傷を作ることによって感染させた。マウスは、接種後３日目から始めて２４時間間隔で観察され、皮膚病変及び疾病の外観及び重症度が記録された。接種部位でのスコアは０から５に及び、帯状疱疹様の部位でのスコアは０から１０に及んだ。１小胞当たり１点が割り当てられ、あるいは、病変が融合的であれば、融合性病変のサイズに基づき複数点が割り当てられた。
【０３２４】
侵入アッセイ
【０３２５】
ＫＯＳ−ｇＤＡ３Ｃ、ｒＫＯＳ−ｇＤＡ３ＣまたはＫＯＳ（４００ｐｆｕ）をＢ７８−Ｈ１細胞、Ａ１０細胞、Ｃ１０細胞またはベロ細胞と共に４℃で１時間インキュベートした。細胞を、０、１０、３０、６０または１２０分間、３７℃まで温め、その後、非結合ウイルスを除去するために洗浄し、結合しているが細胞に入っていないウイルスを不活性化するために１分間クエン酸塩緩衝剤ｐＨ３．０洗浄液に暴露した。さらに洗浄した後、細胞を、ＤＭＥＭに溶解した０．６％低融点寒天に重層し、プラークを６８時間後に可視化して数えた。
【０３２６】
一段階及び多段階増殖曲線
【０３２７】
３ＭＯＩでＫＯＳ、ＫＯＳ−ｇＤＡ３ＣまたはｒＫＯＳ−ｇＤＡ３Ｃウイルスを接種したＢ７８−Ｈ１、Ａ１０及びＣ１０細胞上で一段階増殖曲線を作成した。１時間後、３７℃で、細胞を１分間クエン酸塩緩衝剤ｐＨ３．０で処置し、細胞及び上清液を直ちに（時間０）または２、４、８、１０、１２、２０及び２４時間で回収した。試料を、１０秒間毎に１回凍結融解して３回超音波で分解し、ベロ細胞上で力価測定した。感染を０．０１ＭＯＩで実施し、力価は２４、４８及び７２時間で測定したことを除いて、多段階増殖曲線も同じ方法で作成した。
【０３２８】
後根神経節（ＤＲＧ）におけるウイルスＤＮＡに対するリアルタイム定量ＰＣＲ
【０３２９】
接種部位に最も近いＤＲＧを採取し、ＱｉａＡｍｐミニＤＮＡキット（Qiagen）を用いてＤＮＡを単離した。Ｕｓ９遺伝子を増幅し、ＤＲＧにおけるウイルスゲノムのコピー数を計数した。ＤＲＧから得た最低２００ｎｇのＤＮＡに対して５０ｍｃｌの容量でＰＣＲ反応を行った。５０ｐｍｏｌのフォワードプライマー５´ｃｇａｃｇｃｃｔｔａａｔａｃｃｇａｃｔｇｔｔ（配列番号８）及びリバースプライマー５´ａｃａｇｃｇｃｇａｔｃｃｇａｃａｔｇｔｃ（配列番号９）及び１５ｐｍｏｌのタックマンプローブ５´ｔｃｇｔｔｇｇｃｃｇｃｃｔｃｇｔｃｔｔｃｇｃｔ（配列番号１０）を加えた。５０ｍｃｌ反応当たり１ユニットのＡｍｐｌｉＴａｑ Ｇｏｌｄ（Applied Bioscience）を加えた。ＡＢＩプリズム７７００配列検出装置（Applied Biosystems）でリアルタイムＰＣＲ増幅を行った。精製ＨＳＶ−１（ＮＳ）ＤＮＡから標準曲線を作成した。細胞のハウスキーピング遺伝子であるマウスアジプシンも、同一条件下でＤＲＧ ＤＮＡから増幅した。増幅に用いたプライマーは、フォワードプライマー５´ｇａｔｇｃａｇｔｃｇａａｇｇｔｇｔｇｇｔｔａ（配列番号１１）及びリバースプライマー5´ｃｇｇｔａｇｇａｔｇａｃａｃｔｃｇｇｇｔａｔ（配列番号１２）であったが、検出にはタックマン（Taqman）プローブ５´ｔｃｔｃｇｃｇｔｃｔｇｔｇｇｃａａｔｇｇｃ（配列番号１３）を用いた。ウイルスＤＮＡのコピーは、その後、マウスアジプシンのコピー数に基づいて規準化した。
【０３３０】
結果
【０３３１】
ｇＤ転写物はｇＩ及びｇＪとの共通３´末端（co-terminal）なので、ｇＤ及びｇｌの分子量を、ＷＴ、ｒＫＯＳ−ｇＤＡ３ＣまたはＫＯＳ−ｇＤＡ３Ｃウイルスに感染した細胞のウエスタンブロットによって調べた。タンパク質のサイズは３つのウイルスに対してよく似た大きさであったが（図２６Ａ）、ＤＮＡ塩基配列決定法によりＫＯＳ−ｇＤＡ３ＣにおけるｇＪ遺伝子の完全性を確認した（結果は示さず）。ｇＤＡ３Ｃ変異の安定性は、ＰＣＲ増幅されたＤＮＡ断片に対してＳｓｐＩを用いた制限消化を行うことによってポジション３にシステイン残基があることを確認した。ＳｓｐＩ部位は３０継代を通じて維持された。ころはは、ポジション３でのアラニンのシステインへの変更が安定的であった（図２６Ｂ）ことを示唆している。このことを、５継代毎の後にＤＮＡ配列解析によって確認した。
【０３３２】
マウスの側腹部にＫＯＳ−ｇＤＡ３Ｃを引っ掻き接種し、感染後５日目に、インビボでのｇＤＡ３Ｃ変異の安定性を確認するためにＤＲＧを採取した。３つの個々のプラークからウイルスを単離した。３つの単離されたウイルスは全て、ＳｓｐＩ部位（図２６Ｃ）を保持した（ＤＮＡ塩基配列決定法によって確認された）。これはアミノ酸３におけるシステイン残基が維持されたことを示唆している。
【０３３３】
実施例１９：侵入能が低下した生ワクチンとしてのＨＳＶ ｇＤ変異体
【０３３４】
ＨＶＥＭ受容体を発現する細胞（Ａ１０）、ネクチン−１受容体を発現する細胞（Ｃ１０）、両受容体を発現する細胞（ベロ）、またはいずれの受容体も発現しない細胞（Ｂ７８−Ｈ１）内へのＫＯＳ、ｒＫＯＳ−ｇＤＡ３Ｃ及びＫＯＳ−ｇＤＡ３Ｃの侵入を評価した。ベロ細胞内への３つのウイルスの侵入は同程度であったが（図２７Ａ）、各ウイルスはＢ７８−Ｈ１細胞に侵入できなかった（図２７Ｂ）。ＫＯＳまたはｒＫＯＳ−ｇＤＡ３Ｃと比較して、Ａ１０細胞内へのＫＯＳ−ｇＤＡ３Ｃの侵入は、約５０％減少し（図２７Ｃ）、Ｃ１０細胞への侵入は約７０％減少した（図２７Ｄ）。
【０３３５】
これらの結果は、ｇＤＡ３Ｃ変異が、ＨＶＥＭ受容体及びネクチン−１受容体の両方によって媒介される侵入を減少させることを示している。
【０３３６】
実施例２０：ＨＳＶ ｇＤ変異ウイルスの増殖曲線
【０３３７】
３ＭＯＩで一段階増殖曲線を作成することによってウイルス複製を検査した。ＫＯＳ、ｒＫＯＳ−ｇＤＡ３Ｃ及びＫＯＳ−ｇＤＡ３Ｃは、Ｂ７８−Ｈ１細胞に感染することができなかった（結果は示さず）。３つのウイルスの複製は、時間０で（１時間の吸着期間が終わった時に）ＫＯＳ−ｇＤＡ３Ｃの力価が減少していた（例１９で見られた侵入欠陥を反映している）ことを除いて、Ａ１０細胞（図２８Ａ）及びＣ１０細胞（図２８Ｂ）において同程度であった。
【０３３８】
複数サイクルのウイルス複製を許容するように０．０１ＭＯＩで細胞を感染させることによって多段階増殖曲線を作成した。ＫＯＳ及びｒＫＯＳ−ｇＤＡ３Ｃと比較して、ＫＯＳ−ｇＤＡ３Ｃのピーク力価は、７２時間経過時に、Ａ１０細胞において約１．５ ｌｏｇ１０（図２８Ｃ）、Ｃ１０細胞において２ ｌｏｇ１０（図２８Ｄ）だけ減少していた。
【０３３９】
実施例２１：ＨＳＶ ｇＤ変異体は毒性が低い
【０３４０】
マウス側腹部モデルにおいてＫＯＳ−ｇＤＡ３Ｃ変異体の毒性を調べた。マウスは、５×１０５ＰＦＵのＫＯＳ、ｒＫＯＳ−ｇＤＡ３ＣまたはＫＯＳ−ｇＤＡ３Ｃに感染させ、動物の接種部位及び帯状疱疹様の部位における疾患を採点した。ＫＯＳ−ｇＤＡ３Ｃに感染させられたマウスは、接種部位においてあまり重症でない疾患を有し（図２９Ａ）、５日目には帯状疱疹様の疾患がほとんどなかった（３０匹のマウスのうち１匹だけに３つの病変が発生した）（図２９Ｂ）。１０日目の帯状疱疹様の部位の疾患の写真を示す（図２９Ｃ）。
【０３４１】
これらの所見は、ｇＤ変異疱疹ウイルスによる感染が微小疾患を引き起こすことを示している。
【０３４２】
実施例２２：ＨＳＶ ｇＤ変異体はＤＲＧに到達する能力が低い
【０３４３】
マウスに５×１０５ＰＦＵのＫＯＳ、ｒＫＯＳ−ｇＤＡ３ＣまたはＫＯＳ−ｇＤＡ３Ｃを接種し、感染後５日目に、ＤＲＧを採取してウイルス力価（図３０Ａ）及びウイルスゲノムコピー数（図３０Ｂ）を測定したところ、これらの数値は、ＫＯＳ−ｇＤＡ３Ｃの場合、ＫＯＳまたはｒＫＯＳ−ｇＤＡ３Ｃに比べて低下していた。
【０３４４】
これらの所見は、ｇＤ変異疱疹ウイルスはＤＲＧへの到達において欠陥があることを示している。
【０３４５】
実施例２３：弱毒化生ワクチンとしてのＨＳＶ ｇＤ変異体
【０３４６】
マウスは、偽感染させるかあるいはｒＫＯＳ−ｇＤＡ３ＣまたはＫＯＳ−ｇＤＡ３Ｃに感染させて、回復させられた。ｒＫＯＳ−ｇＤＡ３Ｃは広範な疾患を出現させたが、ＫＯＳに感染した全てのマウスがそうであったように、全ての動物は生存していた。３０日後、ＫＯＳ−ｇＤＡ３ＣまたはｒＫＯＳ−ｇＤＡ３Ｃに感染したマウスの逆側腹部を、１０６ＰＦＵ（ＬＤ５０が約２０）のＨＳＶ−１株ＮＳでチャレンジさせた。チャレンジウイルスは、偽感染群における接種部位（図３１Ａ）及び帯状疱疹様の部位（図３１Ｂ）に広範な疾患を引き起こした。ＫＯＳ−ｇＤＡ３Ｃ及びｒＫＯＳ−ｇＤＡ３Ｃは接種部位で疾患から守られ、両ウイルスは帯状疱疹様の疾患を完全に予防した。ｒＫＯＳ−ｇＤＡ３ＣまたはＫＯＳ−ｇＤＡ３Ｃ感染マウスのいずれもＮＳ株攻撃後に死亡しなかったが、偽感染マウスの１００％が死亡した（結果は示さず）。
【０３４７】
これらの結果は、ＫＯＳ−ｇＤＡ３Ｃが、より悪性のｒＫＯＳ−ｇＤＡ３Ｃによって与えられる保護と同程度の対チャレンジ保護を与えたことを示している。
【０３４８】
ＷＴウイルスがＤＲＧに到達するのを防止する、ＫＯＳ−ｇＤＡ３Ｃ感染の能力を調べた。マウスは、偽感染させるかあるいは側腹部において５×１０５ｐｆｕのｒＫＯＳ−ｇＤＡ３ＣまたはＫＯＳ−ｇＤＡ３Ｃに感染させた。３０日後、マウスを、逆側腹部において１０６ｐｆｕのＮＳでチャレンジさせた。チャレンジ部位を神経支配するＤＲＧをチャレンジ後５日目に採取した。ＮＳウイルス力価は、予め偽感染させたマウスのＤＲＧでは約６ｌｏｇ１０であったが、ｒＫＯＳ−ｇＤＡ３ＣまたはＫＯＳ−ｇＤＡ３Ｃ（図３１Ｃ）に以前に感染させたマウスのＤＲＧからはウイルスが回収されなかった。
【０３４９】
チャレンジ後５日目にＤＲＧで定量ＰＣＲを行った。以前にｒＫＯＳ−ｇＤＡ３ＣまたはＫＯＳ−ｇＤＡ３Ｃに感染させたマウスにおいてそれぞれ３．４または３．２ ｌｏｇ１０のＤＮＡコピーであったのに比べて、以前に偽感染させたマウスのＤＲＧにおいて約５．８ｌｏｇ１０のＨＳＶ−１ゲノムコピーが検出された（図３１Ｄ）。
【０３５０】
これらの結果は、ＫＯＳ−ｇＤＡ３Ｃが、接種部位及び帯状疱疹様の部位に皮膚病変を生じさせる点及びＤＲＧに感染する点では弱毒化しているがＷＴのＨＳＶ−１攻撃からマウスを保護する点ではｒＫＯＳ−ｇＤＡ３Ｃと同じくらい効果的であることを示している。
【０３５１】
これらの実施例は、ｇＤにおける変異を有するＨＳＶ株がＨＳＶワクチンとして用いられ得ることを示唆している。図３２は、ウイルスの生活環の各ステップにおいて、ウイルス侵入の欠陥が原因でより少ないＫＯＳ−ｇＤＡ３Ｃが産出されるようなモデルを示す。これらのステップは、表皮細胞（符号Ｅ）及びＤＲＧ核（符号Ｎ）において産出され、帯状疱疹様の部位で皮膚に戻るようなウイルスの量を含む。
【０３５２】
ある実施形態では、本発明の実施例は、１つ若しくは複数の不活性化変異を含むＨＳＶ変異株を対象に接触させることでＨＳＶ感染に対してワクチン接種をするという方法を支持するものである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９Ａ】
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【図１９Ｂ】
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【図２０Ａ】
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【図２０Ｂ】
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【図２０Ｃ】
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【図２１】
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【図２２Ａ】
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【図２２Ｂ】
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【図２２Ｃ】
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【図２３Ａ】
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【図２３Ｂ】
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【図２３Ｃ】
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【図２４Ａ１】
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【図２４Ａ２】
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【図２４Ｂ】
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【図２５】
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【図２６Ａ】
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【図２６Ｂ】
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【図２６Ｃ】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９Ａ】
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【図２９Ｂ】
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【図２９Ｃ】
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【図３０】
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【図３１】
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【図３２】
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【配列表】
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