(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくとも１つの抗体、
少なくとも１つの等張剤、
少なくとも１つの緩衝液、
少なくとも１つのキレート化剤、
少なくとも１つの界面活性剤
を含み、ｐＨが５．８〜６．８であり、
前記少なくとも１つの緩衝液がヒスチジンであり、
前記少なくとも１つの等張剤がトレハロースであり、
前記抗体が配列番号１の重鎖可変領域配列と配列番号２の軽鎖可変領域配列を含む、
液体抗ＮＧＦ抗体組成物。
【請求項２】
等張剤がトレハロース二水和物である、請求項１に記載の液体組成物。
【請求項３】
トレハロース二水和物が１ｍｇ／ｍｌ〜１００ｍｇ／ｍｌである、請求項２に記載の液体組成物。
【請求項４】
界面活性剤がポリソルベートである、請求項１から３のいずれか一項に記載の液体組成物。
【請求項５】
界面活性剤がポリソルベート２０である、請求項４に記載の液体組成物。
【請求項６】
ポリソルベートの濃度が０．０１〜０．１５ｍｇ／ｍｌである、請求項４または５に記載の液体組成物。
【請求項７】
ヒスチジン緩衝液の濃度が１．０〜１５ｍＭである、請求項１から６のいずれか１項に記載の液体組成物。
【請求項８】
キレート化剤がＥＤＴＡ二ナトリウムである、請求項１から７のいずれか一項に記載の液体組成物。
【請求項９】
ＥＤＴＡ二ナトリウムの濃度が０．０１〜０．１ｍｇ／ｍｌである、請求項８に記載の液体組成物。
【請求項１０】
抗体濃度が５０ｍｇ／ｍｌ以下である、請求項１から９のいずれか一項に記載の液体組成物。
【請求項１１】
抗体濃度が、２ｍｇ／ｍｌ、２．５ｍｇ／ｍｌ、５ｍｇ／ｍｌ、１０ｍｇ／ｍｌ、２０ｍｇ／ｍｌ、２２ｍｇ／ｍｌおよび５０ｍｇ／ｍｌから選択される、請求項１０に記載の液体組成物。
【請求項１２】
抗酸化剤および／または保存料をさらに含む、請求項１から１１のいずれか一項に記載の液体組成物。
【請求項１３】
０．５ｍｇ／ｍｌ〜５０ｍｇ／ｍｌの少なくとも１つの抗体、
１．０ｍＭ〜１５ｍＭのヒスチジン緩衝液、
１ｍｇ／ｍｌ〜１００ｍｇ／ｍｌのトレハロース二水和物、
０．０１〜０．１５ｍｇ／ｍｌのＰＳ２０、
０．０１〜０．１ｍｇ／ｍｌのＥＤＴＡ二ナトリウム
を含むまたはそれからなり、ｐＨが５．８〜６．８である、請求項１から１２のいずれか一項に記載の液体組成物。
【請求項１４】
２．５ｍｇ／ｍｌ、５ｍｇ／ｍｌ、１０ｍｇ／ｍｌ、２０ｍｇ／ｍｌ、２２ｍｇ／ｍｌまたは５０ｍｇ／ｍｌの少なくとも１つの抗体、
１０ｍＭのヒスチジン緩衝液、
８４ｍｇ／ｍｌのトレハロース二水和物、
０．１ｍｇ／ｍｌのＰＳ２０、
０．０５ｍｇ／ｍｌのＥＤＴＡ二ナトリウム
を含むまたはそれからなり、ｐＨが６．０±０．２である、請求項１３に記載の液体組成物。
【請求項１５】
２．５ｍｇ／ｍｌ、５ｍｇ／ｍｌ、１０ｍｇ／ｍｌ、２０ｍｇ／ｍｌ、２２ｍｇ／ｍｌまたは５０ｍｇ／ｍｌの少なくとも１つの抗体、
１０ｍＭのヒスチジン緩衝液、
８４ｍｇ／ｍｌのトレハロース二水和物、
０．１ｍｇ／ｍｌのＰＳ２０、
０．０５ｍｇ／ｍｌのＥＤＴＡ二ナトリウム
を含むまたはそれからなり、ｐＨが５．８〜６．５である、請求項１３に記載の液体組成物。
【請求項１６】
少なくとも１つの抗体がヒトまたはヒト化モノクローナル抗体である、請求項１から１５のいずれか一項に記載の液体組成物。
【請求項１７】
少なくとも１つの抗体がＩｇＧ２抗体である、請求項１から１６のいずれか一項に記載の液体組成物。
【請求項１８】
少なくとも１つの抗体が、ヒトＮＧＦと２ｎＭ以下のＫｄで結合する、請求項１から１７のいずれか一項に記載の液体組成物。
【請求項１９】
凍結乾燥していない、請求項１から１８のいずれか一項に記載の液体組成物。
【請求項２０】
複数の凍結解凍サイクル後に抗体の凝集に対して耐性を有する、請求項１から１９のいずれか一項に記載の液体組成物。
【請求項２１】
少なくとも２６週間の期間、４０℃の温度で保管することができ、組成物の抗体の凝集が１０％未満の増加である、請求項１から１９のいずれか一項に記載の液体組成物。
【請求項２２】
少なくとも２６週間の期間、４０℃の温度で保管することができ、組成物の抗体の酸化が１０％未満の増加である、請求項１から１９のいずれか一項に記載の液体組成物。
【請求項２３】
少なくとも２６週間の期間、４０℃の温度で保管することができ、組成物の抗体の活性が１０％未満の減少である、請求項１から１９のいずれか一項に記載の液体組成物。
【請求項２４】
少なくとも２６週間の期間、２〜８℃の温度で保管することができ、組成物の抗体の凝集が１０％未満の増加である、請求項１から１９のいずれか一項に記載の液体組成物。
【請求項２５】
哺乳動物において疼痛を処置する医薬品を製造するための、請求項１から２４のいずれかに記載の液体組成物の使用。
【請求項２６】
医薬品の投与パターンが、８週間に１回の医薬品の用量の投与を含む、哺乳動物において疼痛を処置する医薬品を製造するための、請求項１から２４のいずれかに記載の液体組成物の使用。
【請求項２７】
用量の体積が２．５ｍｌ以下である、請求項２６に記載の使用。
【請求項２８】
用量が５０ｍｇ以下の抗体を含有する、請求項２６または請求項２７に記載の使用。
【請求項２９】
用量の投与が静脈内または皮下のどちらかである、請求項２５から２８のいずれか一項に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、抗体の医薬配合物の分野に関する。具体的には、本発明は、安定な液体抗体配合物ならびにその医薬調製物および使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
治療的または予防的使用を意図する抗体調製物は、使用前の保管および輸送中の経時的な変性、酸化または凝集の効果が原因の、タンパク質の活性または構造的完全性の損失を防止するために安定化剤を必要とする。これらの問題は、治療的投与にしばしば所望される高濃度の抗体において悪化する。
【０００３】
抗体配合物の開発の主な目的は、抗体、溶解度、安定性およびその抗原結合能を維持することである。静脈内または皮下注射での使用前に滅菌濾過を必要とし、投与経路を限定することになる、溶液中の凝集体および粒子は回避することが特に望ましい。抗体凝集体は、それらを含有する配合物を静脈内注射した場合に疼痛およびアナフィラキシー様副作用を引き起こす場合がある。
【０００４】
凍結乾燥（ｌｙｏｐｈｉｌｉｓａｔｉｏｎ）および凍結乾燥（ｆｒｅｅｚｅ  ｄｒｙｉｎｇ）は抗体の液体配合物に対する代替法である。どちらのプロセスも、特に再構成の際に抗体の変性を誘導してその抗原結合活性を減少させる性向を有する。
【０００５】
塩、界面活性剤、ｐＨおよび糖などの等張剤は凝集の問題の克服に寄与することができる。抗体調製物の配合は、タンパク質の変性および抗原結合活性の損失を回避するために、とりわけこれらの要因の注意深い選択を必要とする。抗体調製物のｐＨ範囲に関して、低いｐＨ値を有する抗体配合物を静脈内注射した場合、多くの場合疼痛または注射が起こる。抗体配合物を注射剤として使用する場合、ほぼ中性のｐＨ範囲のｐＨ値を有することが望ましく、また、対象への注射に有害な配合物中の気泡を回避するために、界面活性剤のレベルを最小限にすることも有利である。
【０００６】
モノクローナル抗ＣＴＬＡ４抗体の液体配合物がＷＯ２００６／０９６４９１号（Ｐｈａｒｍａｃｉａ  ａｎｄ  Ｕｐｊｏｈｎ  Ｃｏｍｐａｎｙ）から知られており、これは、２０ｍｇ／ｍｌの抗体、２０ｍＭのヒスチジン緩衝液、８４ｍｇ／ｍｌのトレハロース、０．２ｍｇ／ｍｌのＰＳ８０界面活性剤、０．０５ｍｇ／ｍｌのＥＤＴＡ、ｐＨ５．５を含む。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
溶液中の高濃度の生物活性抗体を安定に支持し、静脈内、筋肉内、腹腔内、皮内または皮下注射を含めた非経口投与に適した、安定な液体抗体配合物の必要性が存在する。配合物は、最小限の気泡形成およびアナフィラキシー様副作用の危険性を有することがさらに望ましい。
【０００８】
さらに、抗ＮＧＦ抗体のそのような安定な液体配合物を提供する必要性が存在する。ＮＧＦは、末梢および中枢ニューロンのどちらの開発および維持においても中心的な役割を果たすことが知られている。神経系におけるその効果に加えて、ＮＧＦレベルの増加は、全身性エリテマトーデス、多発性硬化症、乾癬、関節炎、間質（ｉｎｔｅｒｓｔｉｔｉｔａｌ）膀胱炎および喘息を含めた様々な炎症状態と関連づけられている。また、ＮＧＦは様々な疼痛状態における活性も実証されている。抗ＮＧＦ抗体Ｅ３は、癌性疼痛、関節リウマチ疼痛、骨関節炎疼痛および手術後疼痛も含めた急性および慢性の疼痛状態の処置に有用であることが示されている（たとえばＷＯ２００４／０５８１８４号を参照）。ＮＧＦによって媒介される炎症および疼痛状態に罹患している患者の医学的要求を満たすための、抗ＮＧＦ抗体の安定な液体抗体調製物の必要性が存在する。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
一態様では、本発明は、少なくとも１つの抗体、少なくとも１つの等張剤、少なくとも１つの緩衝液、少なくとも１つのキレート化剤、少なくとも１つの界面活性剤を含み、ｐＨが５．０〜７．５である液体組成物を提供する。
【００１０】
一態様では、本発明は、少なくとも１つの抗体、少なくとも１つの等張剤、少なくとも１つの緩衝液、少なくとも１つのキレート化剤、少なくとも１つの界面活性剤を含み、ｐＨが５．８〜６．８である液体組成物を提供する。
【００１１】
また、本発明は、少なくとも１つの抗体、少なくとも１つの等張剤、少なくとも１つの緩衝液、少なくとも１つのキレート化剤、少なくとも１つの界面活性剤からなる、またはそれから本質的になり、ｐＨが５．８〜６．８である液体組成物も提供する。
【００１２】
本発明による液体組成物は、溶液中の高濃度の生物活性抗体を安定に支持し、静脈内、筋肉内、腹腔内、皮内または皮下注射を含めた非経口投与に適するという利点を提供する。また、これは、最小限の気泡形成およびアナフィラキシー様副作用の危険性を有する。
【００１３】
本発明の好ましい実施形態によれば、液体組成物は少なくとも１つの抗体を含むことができる。一部の実施形態では、複数の抗体が存在し得る。少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、またはそれより多くの異なる抗体が存在することができる。一般に、２つ以上の異なる抗体は、互いに有害な影響を与えない相補的な活性を有する。また、その抗体またはそれぞれの抗体は、抗体の有効性を増強および／または補完する役割を果たす他の薬剤と併せて使用することができる。
【００１４】
本発明の好ましい実施形態によれば、ｐＨは、５．０〜７．５の範囲、より好ましくは約ｐＨ７．５と約ｐＨ５．１、５．２、５．３、５．４または５．５のうちの任意のものとの間であることができる。さらに好ましくは、ｐＨは、ｐＨ５．６、５．７または５．８のうちの任意の１つと約ｐＨ７．５、７．４、７．３、７．２、７．１、７．０、６．９、６．８、６．７、６．６、６．５、６．４、６．３、６．２、６．１、６．０、５．９、５．８または５．７のうちの任意の１つとの間から選択される範囲内である。
【００１５】
好ましい実施形態では、ｐＨは、約ｐＨ５．５と約ｐＨ６．０、６．２、６．５または６．８のうちの任意のものとの間の範囲内であることができ、あるいは、ｐＨは、約ｐＨ５．８と約ｐＨ６．０、６．２、６．５または６．８のうちの任意のものとの間の範囲内であることができる。
【００１６】
より好ましくは、ｐＨは、約５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７．０、７．１、７．２、７．３、７．４または７．５のうちの任意のｐＨ値から選択されることができ、最も好ましくは、ｐＨはｐＨ６．０±０．２である。これらの範囲内のｐＨの値は、注射に際した疼痛またはアナフィラキシー様副作用の危険性を低下させるために、抗体の凝集および断片化からの保護が増強されており、生理的ｐＨに近い（約ｐＨ７．２〜７．４）液体組成物を提供する。
【００１７】
本発明のさらなる好ましい実施形態によれば、等張剤は、好ましくは、ポリオール、サッカライド、炭水化物、塩化ナトリウムなどの塩、またはその混合物を含む。好ましくは、ポリオールは約６００ｋＤ未満（たとえば約１２０〜約４００ｋＤの範囲内）の分子量を有しており、好ましくは、マンニトール、トレハロース、ソルビトール、エリスリトール、イソマルト、ラクチトール、マルチトール、キシリトール、グリセロール、ラクチトール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、イノシトール、またはその混合物から選択される。好ましくは、サッカライドまたは炭水化物は、単糖、二糖および多糖またはその混合物の群から選択される。好ましくは、サッカライドまたは炭水化物は、フルクトース、グルコース、マンノース、スクロース、ソルボース、キシロース、ラクトース、マルトース、スクロース、デキストラン、プルラン、デキストリン、シクロデキストリン、可溶性デンプン、ヒドロキシエチルデンプン、水溶性グルカン、およびその混合物からなる群から選択される。好ましくは、等張剤は、還元糖もしくは非還元糖またはその混合物の群から選択されるサッカライドを含む。さらに好ましくは、等張剤は、非還元糖であるサッカライド（ｓａｃｈａｒｉｄｅ）、好ましくは、スクロース、トレハロース、およびその混合物からなる群から選択されるものを含む。最も好ましくは、等張剤は、トレハロース、好ましくはトレハロース二水和物を含む。本発明によれば、等張剤、特にトレハロース、好ましくはトレハロース二水和物は、冷蔵保管、たとえば０〜１０℃、特に５〜８℃、さらには５℃、または凍結保管中、ならびに凍結および解凍のサイクル中に、液体組成物に抗体安定性の増強ならびに凝集、酸化および断片化に対する耐性を与える。生じる抗体配合物が糖化を被らないため、トレハロースが特に有利である。
【００１８】
液体組成物中の等張剤の濃度の範囲は、約１ｍｇ／ｍｌ〜約３００ｍｇ／ｍｌ、約１ｍｇ／ｍｌ〜約２００ｍｇ／ｍｌ、または約１ｍｇ／ｍｌ〜約１００ｍｇ／ｍｌである。好ましくは、液体組成物中の等張剤の濃度は、約６０ｍｇ／ｍｌ、約６５ｍｇ／ｍｌ、約７０ｍｇ／ｍｌ、約７５ｍｇ／ｍｌ、約８０ｍｇ／ｍｌ、約８１ｍｇ／ｍｌ、約８２ｍｇ／ｍｌ、約８３ｍｇ／ｍｌ、約８４ｍｇ／ｍｌ、約８５ｍｇ／ｍｌ、約８６ｍｇ／ｍｌ、約８７ｍｇ／ｍｌ、約８８ｍｇ／ｍｌ、約８９ｍｇ／ｍｌ、約９０ｍｇ／ｍｌ、約９１ｍｇ／ｍｌ、約９２ｍｇ／ｍｌ、約９３ｍｇ／ｍｌ、約９４ｍｇ／ｍｌ、約９５ｍｇ／ｍｌ、約９６ｍｇ／ｍｌ、約９７ｍｇ／ｍｌ、約９８ｍｇ／ｍｌ、約９９ｍｇ／ｍｌ、約１００ｍｇ／ｍｌ、約１０５ｍｇ／ｍｌ、約１１０ｍｇ／ｍｌ、約１２０ｍｇ／ｍｌ、または約１３０ｍｇ／ｍｌである。最も好ましくは、液体組成物中の等張剤の濃度は約８４ｍｇ／ｍｌである。
【００１９】
等張剤が塩を含む場合、液体組成物中の塩の濃度の範囲は約１ｍｇ／ｍｌ〜約２０ｍｇ／ｍｌである。薬学的に許容でき、本発明に適した塩には、塩化ナトリウム、コハク酸ナトリウム、硫酸ナトリウム、塩化カリウム（ｐｏｔａｓｓｕｉｍ）、塩化マグネシウム、硫酸マグネシウム、および塩化カルシウムが含まれる。本発明に好ましい塩は塩化ナトリウムおよび塩化マグネシウムであり、塩化マグネシウムもタンパク質を脱アミド化から保護することによって抗体安定性を向上させ得る。好ましくは、液体組成物中の塩は、約１ｍｇ／ｍｌ、２ｍｇ／ｍｌ、３ｍｇ／ｍｌ、４ｍｇ／ｍｌ、５ｍｇ／ｍｌ、６ｍｇ／ｍｌ、７ｍｇ／ｍｌ、８ｍｇ／ｍｌ、９ｍｇ／ｍｌ、１０ｍｇ／ｍｌ、１１ｍｇ／ｍｌ、１２ｍｇ／ｍｌ、１３ｍｇ／ｍｌ、１４ｍｇ／ｍｌ、１５ｍｇ／ｍｌ、１６ｍｇ／ｍｌ、１７ｍｇ／ｍｌ、１８ｍｇ／ｍｌ、１９ｍｇ／ｍｌおよび２０ｍｇ／ｍｌのうちの任意の濃度範囲から選択される。
【００２０】
本発明の好ましい実施形態によれば、界面活性剤は、好ましくは、ポリソルベート、ポロキサマー、トリトン、ドデシル硫酸ナトリウム、ラウリル硫酸ナトリウム、オクチルグリコシドナトリウム、ラウリル−スルホベタイン、ミリスチル−スルホベタイン、リノレイル（ｌｉｎｏｌｅｙｌ）−スルホベタイン、ステアリル−スルホベタイン、ラウリル−サルコシン、ミリスチル−サルコシン、リノレイル−サルコシン、ステアリル−サルコシン、リノレイル−ベタイン、ミリスチル−ベタイン、セチル−ベタイン、ラウロアミドプロピル−ベタイン、コカミドプロピル−ベタイン、リノレアミドプロピル−ベタイン、ミリストアミドプロピル−ベタイン、パルミドプロピル−ベタイン、イソステアラミドプロピル−ベタイン、ミリストアミドプロピル−ジメチルアミン、パルミドプロピル−ジメチルアミン、イソステアラミドプロピル−ジメチルアミン、メチルココイル−タウリン酸ナトリウム、メチルオレイル−タウリン酸二ナトリウム、ジヒドロキシプロピルＰＥＧ５リノレアンモニウムクロリド、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、およびその混合物からなる群から選択される。さらに好ましくは、界面活性剤は、ポリソルベート２０、ポリソルベート２１、ポリソルベート４０、ポリソルベート６０、ポリソルベート６１、ポリソルベート６５、ポリソルベート８０、ポリソルベート８１、ポリソルベート８５、およびその混合物からなる群から選択される。より好ましくは、界面活性剤は、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０、ＰＥＧ３３５０、またはその混合物から選択される。最も好ましくは、界面活性剤はポリソルベート２０である。本発明によれば、界面活性剤、特にポリソルベート２０は、液体組成物に抗体安定性の増強ならびに凝集および断片化に対する耐性をもたらす。
【００２１】
界面活性剤の濃度の範囲は、一般に、約０．０１ｍｇ／ｍｌ〜約１０ｍｇ／ｍｌ、約０．０１ｍｇ／ｍｌ〜約５．０ｍｇ／ｍｌ、約０．０１ｍｇ／ｍｌ〜約２．０ｍｇ／ｍｌ、約０．０１ｍｇ／ｍｌ〜約１．５ｍｇ／ｍｌ、約０．０１ｍｇ／ｍｌ〜約０１．０ｍｇ／ｍｌ、約０．０１ｍｇ／ｍｌ〜約０．５ｍｇ／ｍｌ、約０．０１ｍｇ／ｍｌ〜約０．４ｍｇ／ｍｌ、約０．０１ｍｇ／ｍｌ〜約０．３ｍｇ／ｍｌ、約０．０１ｍｇ／ｍｌ〜約０．２ｍｇ／ｍｌ、約０．０１ｍｇ／ｍｌ〜約０．１５ｍｇ／ｍｌ、約０．０１ｍｇ／ｍｌ〜約０．１ｍｇ／ｍｌ、または約０．０１ｍｇ／ｍｌ〜約０．０５ｍｇ／ｍｌである。さらに好ましくは、界面活性剤の濃度は、約０．５ｍｇ／ｍｌ、約０．０５ｍｇ／ｍｌ、約０．０６ｍｇ／ｍｌ、約０．０７ｍｇ／ｍｌ、約０．０８ｍｇ／ｍｌ、約０．０９ｍｇ／ｍｌ、約０．１ｍｇ／ｍｌ、約０．１１ｍｇ／ｍｌ、約０．１２ｍｇ／ｍｌ、約０．１３ｍｇ／ｍｌ、約０．１４ｍｇ／ｍｌ、約０．１５ｍｇ／ｍｌ、約０．１６ｍｇ／ｍｌ、約０．１７ｍｇ／ｍｌ、約０．１８ｍｇ／ｍｌ、約０．１９ｍｇ／ｍｌ、約０．２ｍｇ／ｍｌである。最も好ましくは、界面活性剤の濃度は約０．１ｍｇ／ｍｌである。約０．１ｍｇ／ｍｌの界面活性剤の濃度を用いた実施形態は、この濃度で溶液中の配合物の抗体の安定性の維持を可能にする一方で、配合物の調製、配合物の取扱いおよび非経口投与の調製中において、特に調製および輸送中における振盪およびかき混ぜに関連する応力からの、配合物中に気泡が形成される傾向も低下させるため、非常に好ましい。
【００２２】
本発明の好ましい実施形態によれば、緩衝液は、アセテート、スクシネート、グルコネート、シトレート、ヒスチジン、酢酸、ホスフェート、リン酸、アスコルベート、酒石（ｔａｒｔａｒｔｉｃ）酸、マレイン酸、グリシン、ラクテート、乳酸、アスコルビン酸、イミダゾール、炭酸水素および炭酸、コハク酸、安息香酸ナトリウム、安息香酸、グルコネート、エデテート、アセテート、マレート、イミダゾール、トリス、リン酸、ならびにその混合物からなる群から選択されることができる。好ましくは、緩衝剤はヒスチジンであり、ヒスチジンは、Ｌ−ヒスチジンもしくはＤ−ヒスチジンのどちらか、ヒスチジンの溶媒和形態、ヒスチジンの水和形態（たとえば一水和物）、またはヒスチジンの無水形態あるいはその混合物を含むことができる。
【００２３】
本発明によれば、緩衝液、特に好ましい緩衝液であるヒスチジンは、液体組成物に、注射に際した疼痛またはアナフィラキシー様副作用の危険性を低下させるための生理的ｐＨに近いｐＨをもたらし、また、抗体安定性の増強ならびに凝集、酸化および断片化に対する耐性ももたらす。
【００２４】
緩衝液の濃度は約０．１ミリモーラー（ｍＭ）〜約１００ｍＭの範囲であることができる。好ましくは、緩衝液の濃度は、約０．５ｍＭ〜約５０ｍＭ、さらに好ましくは、約１ｍＭ〜約３０ｍＭ、より好ましくは約１ｍＭ〜約１８ｍＭ、さらに好ましくは約１ｍＭ〜約１５ｍＭである。好ましくは、緩衝液の濃度は、約１ｍＭ、約２ｍＭ、約３ｍＭ、約４ｍＭ、約５ｍＭ、約６ｍＭ、約７ｍＭ、約８ｍＭ、約９ｍＭ、約１０ｍＭ、約１１ｍＭ、約１２ｍＭ、約１３ｍＭ、約１４ｍＭ、約１５ｍＭ、約１６ｍＭ、約１７ｍＭ、約１８ｍＭ、約１９ｍＭ、約２０ｍＭ、約２１ｍＭ、約２２ｍＭ、約２３ｍＭ、約２４ｍＭ、約２５ｍＭ、約３０ｍＭ、約３５ｍＭ、約４０ｍＭ、約４５ｍＭまたは約５０ｍＭである。最も好ましくは、緩衝液の濃度は約１０ｍＭである。
【００２５】
本発明の好ましい実施形態によれば、キレート化剤は、アミノポリカルボン酸、ヒドロキシアミノカルボン酸、Ｎ−置換グリシン、２−（２−アミノ−２−オキソクチル（ｏｘｏｃｔｈｙｌ））アミノエタンスルホン酸（ＢＥＳ）、デフェロキサミン（ＤＥＦ）、クエン酸、ナイアシンアミド、およびデスオキシコレートおよびその混合物からなる群から選択されることができる。さらに好ましくは、キレート化剤は、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ジエチレントリアミン五酢酸５（ＤＴＰＡ）、ニトリロ三酢酸（ＮＴＡ）、Ｎ−２−アセトアミド−２−イミノ二酢酸（ＡＤＡ）、ビス（アミノエチル）グリコールエーテル、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−四酢酸（ＥＧＴＡ）、トランス−ジアミノシクロヘキサン四酢酸（ＤＣＴＡ）、グルタミン酸、およびアスパラギン酸、Ｎ−ヒドロキシエチルイミノ二酢酸（ＨＩＭＤＡ）、Ｎ，Ｎ−ビス−ヒドロキシエチルグリシン（ビシン）およびＮ−（トリスヒドロキシメチルメチル）１０グリシン（トリシン）、グリシルグリシン、ナトリウムデスオキシコレート、エチレンジアミン、プロピレンジアミン、ジエチレントリアミン、トリエチレンテトラアミン（トリエン）、エチレンジアミンテトラアセトＥＤＴＡ、ＥＤＴＡ二ナトリウム、ＥＤＴＡカルシウムシュウ酸、マレート、クエン酸、クエン酸一水和物、およびクエン酸三ナトリウム二水和物、８−ヒドロキシキノレート、アミノ酸、ヒスチジン、システイン、メチオニン、ペプチド、ポリペプチド、およびタンパク質ならびにその混合物からなる群から選択される。さらに好ましくは、キレート化剤は、エデト酸二カリウム、エデト酸二ナトリウム、エデト酸カルシウム二ナトリウム、エデト酸ナトリウム、エデト酸三ナトリウム、およびエデト酸カリウムを含めたＥＤＴＡの塩からなる群から選択され、デフェロキサミン（ＤＥＦ）の適切な塩はメシル酸デフェロキサミン（ＤＦＭ）、またはその混合物である。可能な場合、本発明で使用するキレート化剤は、化合物の遊離酸もしくは遊離塩基形態または塩形態として、また、化合物または対応する塩の無水、溶媒和または水和した形態としても存在することができる。
【００２６】
最も好ましくは、キレート化剤は、ＥＤＴＡ二ナトリウム、ＥＤＴＡカルシウムのどちらか、最も好ましくはＥＤＴＡ二ナトリウムである。
【００２７】
ＥＤＴＡ二ナトリウムは液体組成物に抗体安定性の増強および／または凝集耐性をもたらすため、特に好ましい。
【００２８】
キレート化剤の濃度の範囲は、一般に、約０．０１ｍｇ／ｍｌ〜約５０ｍｇ／ｍｌ、約１ｍｇ／ｍｌ〜約１０．０ｍｇ／ｍｌ、約１５ｍｇ／ｍｌ〜約５．０ｍｇ／ｍｌ、約０．０１ｍｇ／ｍｌ〜約１．０ｍｇ／ｍｌ、または約０．０３ｍｇ／ｍｌ〜約０．５ｍｇ／ｍｌである。さらに好ましくは、キレート化剤の濃度の範囲は、一般に、約０．０１ｍＭ〜約２．０ｍＭ、約０．０１ｍＭ〜約１．５ｍＭ、約０．０１ｍＭ〜約０．５ｍＭ、約０．０１ｍＭ〜約０．４ｍＭ、約０．０１ｍＭ〜約０．３ｍＭ、約０．０１ｍＭ〜約０．２ｍＭ、約０．０１ｍＭ〜約０．１５ｍＭ、約０．０１ｍＭ〜約０．１ｍＭ、約０．０１ｍＭ〜約０．０９ｍＭ、約０．０１ｍＭ〜約０．０８ｍＭ、約０．０１ｍＭ〜約００７ｍＭ、約０．０１ｍＭ〜約０．０６ｍＭ、約０．０１ｍＭ〜約０．０５ｍＭ、約０．０１ｍＭ〜約０．０４ｍＭ、約０．０１ｍＭ〜約０．０３ｍＭ、約０．０１ｍＭ〜約０．０２ｍＭまたは約０．０５ｍＭ〜約０．０１ｍＭである。好ましくは、キレート化剤の濃度は、約０．０１ｍｇ／ｍｌ、０．０２ｍｇ／ｍｌ、０．０３ｍｇ／ｍｌ、約０．０４ｍｇ／ｍｌ、約０．０５ｍｇ／ｍｌ、約０．０６ｍｇ／ｍｌ、約０．０７ｍｇ／ｍｌ、約０．１０ｍｇ／ｍｌ、約０．２０ｍｇ／ｍｌであることができる。さらに好ましくは、キレート化剤の濃度は、約０．０４５ｍｇ／ｍｌ、約０．０４６ｍｇ／ｍｌ、約０．０４７ｍｇ／ｍｌ、約０．０４８ｍｇ／ｍｌ、約０．０４９ｍｇ／ｍｌ、約０．０５ｍｇ／ｍｌ、約０．０５１ｍｇ／ｍｌ、約０．０５２ｍｇ／ｍｌ、約０．０５３ｍｇ／ｍｌ、約０．０５４ｍｇ／ｍｌ、約０．０５５ｍｇ／ｍｌ、または約０．０５６ｍｇ／ｍｌである。最も好ましくは、キレート化剤の濃度は約０．０５ｍｇ／ｍｌである。
【００２９】
キレート化剤は、本発明の組成物中の還元酸素種の形成を低減させる、酸性種（たとえば脱アミド化）の形成を低下させる、抗体の凝集を低下させる、および／または抗体の断片化を低下させる、および／または抗体の酸化を低下させることができる。そのようなキレート化剤は、キレート化剤の保護なしの抗体と比較して、形成された抗体の分解を低下または防止することができる。
【００３０】
別段に記述しない限りは、本明細書中に記載した濃度は周囲条件下での濃度である［すなわち２５℃および大気圧］。
【００３１】
本発明の好ましい実施形態によれば、液体組成物はさらに抗酸化剤を含むことができる。好ましくは、抗酸化剤は、メチオニン、チオ硫酸ナトリウム、カタラーゼ、および白金を含む群から選択される。
【００３２】
抗酸化剤の濃度の範囲は、一般に、約０．０１ｍｇ／ｍｌ〜約５０ｍｇ／ｍｌ、約０．０１ｍｇ／ｍｌ〜約１０．０ｍｇ／ｍｌ、約０．０１ｍｇ／ｍｌ〜約５．０ｍｇ／ｍｌ、約０．０１ｍｇ／ｍｌ〜約１．０ｍｇ／ｍｌ、または約０．０１ｍｇ／ｍｌ〜約０．０２ｍｇ／ｍｌである。好ましくは、抗酸化剤の濃度は、約０．０１ｍｇ／ｍｌ、０．０２ｍｇ／ｍｌ、０．０３ｍｇ／ｍｌ、約０．０４ｍｇ／ｍｌ、約０．０５ｍｇ／ｍｌ、約０．０６ｍｇ／ｍｌ、約０．０７ｍｇ／ｍｌ、０．０８ｍｇ／ｍｌ、０．０９ｍｇ／ｍｌ、約０．１０ｍｇ／ｍｌ、０．１１ｍｇ／ｍｌ、０．１２ｍｇ／ｍｌ、０．１３ｍｇ／ｍｌ、約０．１４ｍｇ／ｍｌ、約０．１５ｍｇ／ｍｌ、約０．１６ｍｇ／ｍｌ、約０．１７ｍｇ／ｍｌ、０．１８ｍｇ／ｍｌ、０．１９ｍｇ／ｍｌ、約０．２０ｍｇ／ｍｌ、約０．２５ｍｇ／ｍｌ、０．３ｍｇ／ｍｌ、０．４ｍｇ／ｍｌ、０．５ｍｇ／ｍｌ、０．６ｍｇ／ｍｌ、０．７ｍｇ／ｍｌ、０．８ｍｇ／ｍｌ、０．９ｍｇ／ｍｌ、１．０ｍｇ／ｍｌであることができる。最も好ましくは、抗酸化剤の濃度は約０．０１ｍｇ／ｍｌである。
【００３３】
本発明のさらなる好ましい実施形態によれば、液体組成物はさらに保存料を含むことができる。好ましくは、保存料は、フェノール、ｍ−クレゾール、ベンジルアルコール、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンズアルトニウム（ｂｅｎｚａｌｔｈｏｎｉｕｍ）、フェノキシエタノールおよびメチルパラベンから選択される。
【００３４】
保存料の濃度の範囲は、一般に、約０．００１ｍｇ／ｍｌ〜約５０ｍｇ／ｍｌ、約０．００５ｍｇ／ｍｌ〜約１５．０ｍｇ／ｍｌ、約０．００８ｍｇ／ｍｌ〜約１２．０ｍｇ／ｍｌまたは約０．０１ｍｇ／ｍｌ〜約１０．０ｍｇ／ｍｌである。好ましくは、保存料の濃度は、約０．１ｍｇ／ｍｌ、０．２ｍｇ／ｍｌ、０．３ｍｇ／ｍｌ、約０．４ｍｇ／ｍｌ、約０．５ｍｇ／ｍｌ、約０．６ｍｇ／ｍｌ、約０．７ｍｇ／ｍｌ、０．８ｍｇ／ｍｌ、０．９ｍｇ／ｍｌ、約１．０ｍｇ／ｍｌ、２．０ｍｇ／ｍｌ、３．０ｍｇ／ｍｌ、約４．０ｍｇ／ｍｌ、約５．０ｍｇ／ｍｌ、約６．０ｍｇ／ｍｌ、約７．０ｍｇ／ｍｌ、８．０ｍｇ／ｍｌ、９．０ｍｇ／ｍｌ、約９．１ｍｇ／ｍｌ、約９．２ｍｇ／ｍｌ、９．３ｍｇ／ｍｌ、９．４ｍｇ／ｍｌ、９．５ｍｇ／ｍｌ、９．６ｍｇ／ｍｌ、９．７ｍｇ／ｍｌ、９．８ｍｇ／ｍｌ、９．９ｍｇ／ｍｌ、１０．０ｍｇ／ｍｌであることができる。最も好ましくは、保存料の濃度は約０．１ｍｇ／ｍｌまたは９．０ｍｇ／ｍＬである。
【００３５】
本発明の一態様によれば、液体配合物は抗酸化剤を含有しない。
【００３６】
本発明の一態様によれば、液体配合物は保存料を含有しない。
【００３７】
本発明本発明の好ましい実施形態によれば、抗体の濃度は約０．１〜約２００ｍｇ／ｍｌの範囲であることができる。好ましくは、抗体の濃度は、約０．５ｍｇ／ｍｌ、約１ｍｇ／ｍｌ、約２ｍｇ／ｍｌ、約２．５ｍｇ／ｍｌ、約３ｍｇ／ｍｌ、約３．５ｍｇ／ｍｌ、約４ｍｇ／ｍｌ、約４．５ｍｇ／ｍｌ、約５ｍｇ／ｍｌ、約５．５ｍｇ／ｍｌ、約６ｍｇ／ｍｌ、約６．５ｍｇ／ｍｌ、約７ｍｇ／ｍｌ、約７．５ｍｇ／ｍｌ、約８ｍｇ／ｍｌ、約８．５ｍｇ／ｍｌ、約９ｍｇ／ｍｌ、約９．５ｍｇ／ｍｌ、約１０ｍｇ／ｍｌ、約１１ｍｇ／ｍｌ、約１２ｍｇ／ｍｌ、約１３ｍｇ／ｍｌ、約１４ｍｇ／ｍｌ、約１５ｍｇ／ｍｌ、約１６ｍｇ／ｍｌ、約１７ｍｇ／ｍｌ、約１８ｍｇ／ｍｌ、約１９ｍｇ／ｍｌ、約２０ｍｇ／ｍｌ、約２１ｍｇ／ｍｌ、約２２ｍｇ／ｍｌ、約２３ｍｇ／ｍｌ、約２４ｍｇ／ｍｌ、約２５ｍｇ／ｍｌ、約２６ｍｇ／ｍｌ、約２７ｍｇ／ｍｌ、約２８ｍｇ／ｍｌ、約２９ｍｇ／ｍｌ、約３０ｍｇ／ｍｌ、約３１ｍｇ／ｍｌ、約３２ｍｇ／ｍｌ、約３３ｍｇ／ｍｌ、約３４ｍｇ／ｍｌ、約３５ｍｇ／ｍｌ、約３６ｍｇ／ｍｌ、約３７ｍｇ／ｍｌ、約３８ｍｇ／ｍｌ、約３９ｍｇ／ｍｌ、約４０ｍｇ／ｍｌ、約４１ｍｇ／ｍｌ、約４２ｍｇ／ｍｌ、約４３ｍｇ／ｍｌ、約４４ｍｇ／ｍｌ、約４５ｍｇ／ｍｌ、約４６ｍｇ／ｍｌ、約４７ｍｇ／ｍｌ、約４８ｍｇ／ｍｌ、約４９ｍｇ／ｍｌ、約５０ｍｇ／ｍｌ、約５１ｍｇ／ｍｌ、約５２ｍｇ／ｍｌ、約５３ｍｇ／ｍｌ、約５４ｍｇ／ｍｌ、約５５ｍｇ／ｍｌ、約５６ｍｇ／ｍｌ、約５７ｍｇ／ｍｌ、約５８ｍｇ／ｍｌ、約５９ｍｇ／ｍｌ、約６０ｍｇ／ｍｌ、約７０ｍｇ／ｍｌ、約８０ｍｇ／ｍｌ、約９０ｍｇ／ｍｌ、約１００ｍｇ／ｍｌまたは約１１０ｍｇ／ｍｌである。最も好ましくは、抗体の濃度は約５０ｍｇ／ｍｌ以下であり、約２ｍｇ／ｍｌ、約２．５ｍｇ／ｍｌ、約５ｍｇ／ｍｌ、約１０ｍｇ／ｍｌ、約１９ｍｇ／ｍｌ、約２０ｍｇ／ｍｌ、２２ｍｇ／ｍｌおよび約５０ｍｇ／ｍｌを含む群から選択され得る。
【００３８】
抗体は、好ましくは、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、抗体断片（たとえば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、Ｆｃ、ＳｃＦｖなど）、キメラ抗体、二重特異性抗体、ヘテロコンジュゲート抗体、単鎖（ＳｃＦｖ）、その突然変異体、抗体部分（たとえばドメイン抗体）を含む融合タンパク質、ヒト化抗体、ヒト抗体、ならびに、抗体のグリコシル化変異体、抗体のアミノ酸配列変異体、および共有的に改変された抗体を含めた、所要の特異性の抗原認識部位を含む免疫グロブリン分子の任意の他の改変された立体配置の群から選択される。抗体は、ネズミ、ラット、ヒト、または任意の他の起源由来であり得る（キメラまたはヒト化抗体が含まれる）。一部の実施形態では、抗体はヒトであることができるが、より好ましくはヒト化したものである。好ましくは、抗体は単離されており、さらに好ましくは実質的に純粋である。抗体が抗体断片である場合、これは、元の抗体の機能的特徴、すなわち、リガンド結合および／または拮抗もしくは作用活性を保持していることが好ましい。
【００３９】
本発明の好ましい実施形態によれば、抗体重鎖定常領域は、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、およびＩｇＥなどの任意の種類の定常領域、ならびにＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４などの任意のアイソタイプからのものであり得る。好ましくは、抗体はＩｇＧ２抗体である。
【００４０】
本発明によれば、抗体はヒト重鎖ＩｇＧ２ａ定常領域を含むことができる。一部の実施形態では、抗体はヒト軽鎖カッパ定常領域を含む。一部の実施形態では、抗体は、免疫学的に不活性である、たとえば、補体媒介性の溶解を始動しない、または抗体依存性細胞性細胞毒性（ＡＤＣＣ）を刺激しない定常領域などの、改変された定常領域を含む。他の実施形態では、定常領域は、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、（１９９９）２９：２６１３〜２６２４、ＰＣＴ公開ＷＯ０９９／５８５７２号、および／またはＵＫ特許出願第９８０９９５１．８号に記載のように改変する。さらに他の実施形態では、抗体は、Ａ３３０Ｐ３３１からＳ３３０Ｓ３３１への突然変異を含むヒト重鎖ＩｇＧ２ａ定常領域を含む（アミノ酸の付番は野生型ＩｇＧ２ａ配列を参照）、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、（１９９９）２９：２６１３〜２６２４。
【００４１】
本発明の好ましい実施形態によれば、抗体は、高い親和性でＮＧＦ（ヒトＮＧＦなど）と結合する抗ＮＧＦ抗体である。一部の実施形態では、高い親和性とは、（ａ）約２ｎＭ未満（約１ｎＭ、８００ｐＭ、６００ｐＭ、４００ｐＭ、２００ｐＭ、１００ｐＭ、９０ｐＭ、８０ｐＭ、７０ｐＭ、６０ｐＭ、５０ｐＭ、４０ｐＭ、３０ｐＭ、２０ｐＭ、１０ｐＭ、５ｐＭもしくはそれ未満のうちの任意のものなど）のＫＤ、および／または約６×１０−５ｓ−１よりも遅いｋｏｆｆでＮＧＦと結合する、ならびに／または（ｂ）約２００ｐＭ、１５０ｐＭ、１００ｐＭ、８０ｐＭ、６０ｐＭ、４０ｐＭ、２０ｐＭ、１０ｐＭ、もしくはそれ未満のうちの任意のＩＣ５０（約１５ｐＭのＮＧＦの存在下）でマウスＥ１３．５三叉神経ニューロンのヒトＮＧＦ依存性の生存を阻害する（低下および／もしくは遮断する）、ならびに／または（ｃ）約５０ｐＭ、４０ｐＭ、３０ｐＭ、１０ｐＭ、２０ｐＭ、１０ｐＭ、５ｐＭ、２ｐＭ、１ｐＭ、もしくはそれ未満のうちの任意のＩＣ５０（約１．５ｐＭのＮＧＦの存在下）でマウスＥ１３．５三叉神経ニューロンのヒトＮＧＦ依存性の生存を阻害する（低下および／もしくは遮断する）、ならびに／または（ｄ）約１５０ｐＭ、１２５ｐＭ、１００ｐＭ、８０ｐＭ、６０ｐＭ、４０ｐＭ、３０ｐＭ、２０ｐＭ、１０ｐＭ、５ｐＭ、もしくはそれ未満のうちの任意のＩＣ５０（約１５ｐＭのＮＧＦの存在下）でマウスＥ１３．５三叉神経ニューロンのラットＮＧＦ依存性の生存を阻害する（低下および／もしくは遮断する）、ならびに／または（ｅ）約３０ｐＭ、２５ｐＭ、２０ｐＭ、１５ｐＭ、１０ｐＭ、５ｐＭ、４ｐＭ、３ｐＭ、２ｐＭ、１ｐＭ、もしくはそれ未満のうちの任意のＩＣ５０（約１．５ｐＭのＮＧＦの存在下）でマウスＥ１３．５三叉神経ニューロンのラットＮＧＦ依存性の生存を阻害する（低下および／もしくは遮断する）、ならびに／または（ｆ）および／またはｔｒｋＡ受容体よりも高い親和性でＮＧＦと結合することである。
【００４２】
別の態様では、抗体は、（ａ）約２ｎＭ未満（約１ｎＭ、８００ｐＭ、６００ｐＭ、４００ｐＭ、２００ｐＭ、１００ｐＭ、９０ｐＭ、８０ｐＭ、７０ｐＭ、６０ｐＭ、５０ｐＭ、４０ｐＭ、３０ｐＭ、２０ｐＭ、１０ｐＭ、５ｐＭもしくはそれ未満のうちの任意のものなど）のＫＤ、および／または約６×１０−５ｓ−１よりも遅いｋｏｆｆでＮＧＦ（ヒトＮＧＦなど）と結合する、ならびに／または（ｂ）約２００ｐＭ、１５０ｐＭ、１００ｐＭ、８０ｐＭ、６０ｐＭ、４０ｐＭ、２０ｐＭ、１０ｐＭ、もしくはそれ未満のうちの任意のＩＣ５０（約１５ｐＭのＮＧＦの存在下）でマウスＥ１３．５三叉神経ニューロンのヒトＮＧＦ依存性の生存を阻害する、ならびに／または（ｃ）約５０ｐＭ、４０ｐＭ、３０ｐＭ、１０ｐＭ、２０ｐＭ、１０ｐＭ、５ｐＭ、２ｐＭ、１ｐＭ、もしくはそれ未満のうちの任意のＩＣ５０（約１．５ｐＭのＮＧＦの存在下）でマウスＥ１３．５三叉神経ニューロンのヒトＮＧＦ依存性の生存を阻害する、ならびに／またはｔｒｋＡ受容体よりも高い親和性でＮＧＦと結合する。一部の実施形態では、抗体は、（ａ）約２ｎＭ未満のＫＤでＮＧＦと結合する、および／または（ｂ）約１００ｐＭ以下のＩＣ５０でマウスＥ１３．５三叉神経ニューロンのヒトＮＧＦ依存性の生存を阻害する（ＩＣ５０は約１５ｐＭのＮＧＦの存在下で測定する）、および／または（ｃ）約１０ｐＭ以下のＩＣ５０でマウスＥ１３．５三叉神経ニューロンのヒトＮＧＦ依存性の生存を阻害する（ＩＣ５０は約１．５ｐＭのＮＧＦの存在下で測定する）。一部の実施形態では、抗体は、（ａ）約１００ｐＭ未満のＫＤでＮＧＦと結合する、および／または（ｂ）約２０ｐＭ以下のＩＣ５０でマウスＥ１３．５三叉神経ニューロンのヒトＮＧＦ依存性の生存を阻害する（ＩＣ５０は約１５ｐＭのＮＧＦの存在下で測定する）、および／または（ｃ）約２ｐＭ以下のＩＣ５０でマウスＥ１３．５三叉神経ニューロンのヒトＮＧＦ依存性の生存を阻害する（ＩＣ５０は約１．５ｐＭのＮＧＦの存在下で測定する）。
【００４３】
抗体によって結合されることができるエピトープ（複数可）は、連続的または非連続的であることができる。一実施形態では、抗体は、Ｈｏｎｇｏら、Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ、１９：２１５〜２２７（２０００）に記載されているＭＡｂ９１１、ＭＡｂ９１２、およびＭＡｂ９３８からなる群から選択される抗体、本明細書中で定義する抗体（抗体Ｅ３など）、ならびに／あるいは、その内容が全体で参考として本明細書中に組み込まれている、ＷＯ２００５０１９２６６号（抗体４Ｄ４、１４Ｄ１０、６Ｇ９、７Ｈ２、１４Ｆ１１および４Ｇ６が含まれる）もしくはＷＯ２００６１３１９５１号（抗体Ｈｕ−ａＤ１１が含まれる）、ＷＯ０９０２３５４０号またはＵＳ２００９００４１７１７号に記載されているものと本質的に同じｈＮＧＦエピトープと結合する。別の実施形態では、抗体はＭＡｂ９１１と本質的に同じｈＮＧＦエピトープと結合する。別の実施形態では、抗体はＭＡｂ９０９と本質的に同じエピトープと結合する。Ｈｏｎｇｏら、上記。たとえば、エピトープは、ｈＮＧＦの可変領域１（アミノ酸２３〜３５）内の残基Ｋ３２、Ｋ３４およびＥ３５、ｈＮＧＦの可変領域４（アミノ酸８１〜８８）内の残基Ｆ７９およびＴ８１、可変領域４内の残基Ｈ８４およびＫ８８、ｈＮＧＦの可変領域５（アミノ酸９４〜９８）とｈＮＧＦのＣ末端（アミノ酸１１１〜１１８）との間の残基Ｒ１０３、ｈＮＧＦの前可変領域１（アミノ酸１０〜２３）内の残基Ｅ１１、ｈＮＧＦの可変領域２（アミノ酸４０〜４９）とｈＮＧＦの可変領域３（アミノ酸５９〜６６）との間のＹ５２、ｈＮＧＦのＣ末端内の残基Ｌ１１２およびＳ１１３、ｈＮＧＦの可変領域３内の残基Ｒ５９およびＲ６９、またはｈＮＧＦの前可変領域１内の残基Ｖ１８、Ｖ２０、およびＧ２３のうちの、１つまたは複数を含み得る。さらに、エピトープは、ｈＮＧＦの可変領域１、可変領域３、可変領域４、可変領域５、Ｎ末端領域、および／またはＣ末端のうちの１つまたは複数を含むことができる。別の実施形態では、抗体は、ｈＮＧＦの残基Ｒ１０３の溶媒接近性を顕著に低下させる。上述のエピトープはヒトＮＧＦに関連するが、当業者は、ヒトＮＧＦの構造を他の種のＮＧＦとアラインメントして、これらのエピトープの適当な対応物を同定できることが理解されよう。
【００４４】
一態様では、本発明は、配列番号９を含む重鎖可変領域［Ｉ３４はＳ、Ｌ、Ｖ、Ａ、またはＩであり、Ｎ３５はＮ、ＴまたはＳで置換されている］を含むポリペプチド（抗体など）を提供する。本明細書中では、利便上、このコンテキストまたはアミノ酸への言及における「置換された」または「である（ｉｓ）」とは、所定の位置のアミノ酸（複数可）の選択肢をいう。明らかに、置換または選択肢は、配列番号または図中に表したアミノ酸であり得る。残基番号は、記述した配列番号を参照し、抗体の残基付番に従うことで容易に決定される。
【００４５】
別の態様では、本発明は、配列番号１０を含む重鎖可変領域［Ｍ５０はＭ、Ｉ、Ｇ、Ｑ、Ｓ、またはＬであり、Ａ６２はＡまたはＳであり、Ｌ６３はＬまたはＶである］を含むポリペプチド（抗体など）を提供する。
【００４６】
別の態様では、本発明は、配列番号１１を含む重鎖可変領域［Ｙ１００はＹ、Ｌ、またはＲであり、Ｙ１０１はＹまたはＷであり、Ｇ１０３はＧ、Ａ、またはＳであり、Ｔ１０４はＴまたはＳであり、Ｓ１０５はＳ、Ａ、またはＴであり、Ｙ１０６はＹ、Ｒ、Ｔ、またはＭであり、Ｙ１０７はＹまたはＦであり、Ｆ１０８はＦまたはＷであり、Ｄ１０９はＤ、Ｎ、またはＧであり、Ｙ１１０はＹ、Ｋ、Ｓ、ＲまたはＴである］を含むポリペプチド（抗体など）を提供する。
【００４７】
別の態様では、本発明は、配列番号１１を含む重鎖可変領域［Ｙ１００はＹ、Ｌ、またはＲであり、Ｙ１０１はＹまたはＷであり、Ｇ１０３はＧ、Ａ、またはＳであり、Ｔ１０４はＴまたはＳであり、Ｓ１０５はＳ、Ａ、またはＴであり、Ｙ１０６はＹ、Ｒ、Ｔ、またはＭであり、Ｙ１０７はＹまたはＦであり、Ｆ１０８はＦまたはＷであり、Ｄ１０９はＳ、Ａ、Ｃ、Ｇ、Ｄ、Ｎ、Ｔ、またはＧであり、Ｙ１１０は任意のアミノ酸である］を含むポリペプチド（抗体など）を提供する。
【００４８】
別の態様では、本発明は、配列番号１１を含む重鎖可変領域［Ｇ９８はＧ、Ｓ、Ａ、Ｃ、Ｖ、Ｎ、Ｄ、またはＴであり、Ｇ９９はＧ、Ｓ、Ａ、Ｃ、Ｖ、Ｎ、Ｄ、またはＴであり、Ｙ１００はＹ、Ｌ、またはＲであり、Ｙ１０１はＹまたはＷであり、Ｇ１０３はＧ、Ａ、またはＳであり、Ｔ１０４はＴまたはＳであり、Ｓ１０５はＳ、Ａ、またはＴであり、Ｙ１０６はＹ、Ｒ、Ｔ、またはＭであり、Ｙ１０７はＹまたはＦであり、Ｆ１０８はＦまたはＷであり、Ｄ１０９はＳ、Ａ、Ｃ、Ｇ、Ｄ、Ｎ、Ｔ、またはＧであり、Ｙ１１０は任意のアミノ酸である］を含むポリペプチド（抗体など）を提供する。
【００４９】
別の態様では、本発明は、配列番号１２を含む軽鎖可変領域［Ｓ２６はＳまたはＦであり、Ｄ２８はＤ、Ｓ、Ａ、またはＹであり、Ｈ３２はＨ、Ｎ、またはＱである］を含むポリペプチド（抗体など）を提供する。
【００５０】
別の態様では、本発明は、配列番号１３を含む軽鎖可変領域［Ｉ５１はＩ、Ｔ、ＶまたはＡであり、Ｓ５６はＳまたはＴである］を含むポリペプチド（抗体など）を提供する。
【００５１】
別の態様では、本発明は、配列番号１４を含む軽鎖可変領域［Ｓ９１はＳまたはＥであり、Ｋ９２はＫ、Ｈ、Ｒ、またはＳであり、Ｙ９６はＹまたはＲである］を含むポリペプチド（抗体など）を提供する。
【００５２】
別の態様では、本発明は、配列番号１４を含む軽鎖可変領域［Ｓ９１はＳまたはＥであり、Ｋ９２は任意のアミノ酸であり、Ｔ９３は任意のアミノ酸であり、Ｙ９６はＹまたはＲである］を含むポリペプチド（抗体など）を提供する。
【００５３】
一態様では、本発明は、配列番号９に示すアミノ酸配列［Ｉ３４はＳ、Ｌ、Ｖ、Ａ、またはＩであり、Ｎ３５はＮ、ＴまたはＳである］を含むポリペプチド（抗体など）を提供する。
【００５４】
別の態様では、本発明は、配列番号１０に示すアミノ酸配列［Ｍ５０はＭ、Ｉ、Ｇ、Ｑ、Ｓ、またはＬであり、Ａ６２はＡまたはＳであり、Ｌ６３はＬまたはＶである］を含むポリペプチド（抗体など）を提供する。
【００５５】
別の態様では、本発明は、配列番号１１に示すアミノ酸配列［Ｙ１００はＹ、Ｌ、またはＲであり、Ｙ１０１はＹまたはＷであり、Ｇ１０３はＧ、Ａ、またはＳであり、Ｔ１０４はＴまたはＳであり、Ｓ１０５はＳ、Ａ、またはＴであり、Ｙ１０６はＹ、Ｒ、Ｔ、またはＭであり、Ｙ１０７はＹまたはＦであり、Ｆ１０８はＦまたはＷであり、Ｄ１０９はＤ、Ｎ、またはＧであり、Ｙ１１０はＹ、Ｋ、Ｓ、ＲまたはＴである］を含むポリペプチド（抗体など）を提供する。
【００５６】
別の態様では、本発明は、配列番号１１に示すアミノ酸配列［Ｙ１００はＹ、Ｌ、またはＲであり、Ｙ１０１はＹまたはＷであり、Ｇ１０３はＧ、Ａ、またはＳであり、Ｔ１０４はＴまたはＳであり、Ｓ１０５はＳ、Ａ、またはＴであり、Ｙ１０６はＹ、Ｒ、Ｔ、またはＭであり、Ｙ１０７はＹまたはＦであり、Ｆ１０８はＦまたはＷであり、Ｄ１０９はＳ、Ａ、Ｃ、Ｇ、Ｄ、Ｎ、Ｔ、またはＧであり、Ｙ１１０は任意のアミノ酸である］を含むポリペプチド（抗体など）を提供する。
【００５７】
別の態様では、本発明は、配列番号１１に示すアミノ酸配列［Ｇ９８はＧ、Ｓ、Ａ、Ｃ、Ｖ、Ｎ、Ｄ、またはＴであり、Ｇ９９はＧ、Ｓ、Ａ、Ｃ、Ｖ、Ｎ、Ｄ、またはＴであり、Ｙ１００はＹ、Ｌ、またはＲであり、Ｙ１０１はＹまたはＷであり、Ｇ１０３はＧ、Ａ、またはＳであり、Ｔ１０４はＴまたはＳであり、Ｓ１０５はＳ、Ａ、またはＴであり、Ｙ１０６はＹ、Ｒ、Ｔ、またはＭであり、Ｙ１０７はＹまたはＦであり、Ｆ１０８はＦまたはＷであり、Ｄ１０９はＳ、Ａ、Ｃ、Ｇ、Ｄ、Ｎ、Ｔ、またはＧであり、Ｙ１１０は任意のアミノ酸である］を含むポリペプチド（抗体など）を提供する。
【００５８】
別の態様では、本発明は、配列番号１２に示すアミノ酸配列［Ｓ２６はＳまたはＦであり、Ｄ２８はＤ、Ｓ、Ａ、またはＹであり、Ｈ３２はＨ、Ｎ、またはＱである］を含むポリペプチド（抗体など）を提供する。
【００５９】
別の態様では、本発明は、配列番号１３に示すアミノ酸配列［Ｉ５１はＩ、Ｔ、ＶまたはＡであり、Ｓ５６はＳまたはＴである］を含むポリペプチド（抗体など）を提供する。
【００６０】
別の態様では、本発明は、配列番号１４に示すアミノ酸配列［Ｓ９１はＳまたはＥであり、Ｋ９２はＫ、Ｈ、Ｒ、またはＳであり、Ｙ９６はＹまたはＲである］を含むポリペプチド（抗体など）を提供する。
【００６１】
別の態様では、本発明は、配列番号１４に示すアミノ酸配列［Ｓ９１はＳまたはＥであり、Ｋ９２は任意のアミノ酸であり、Ｔ９３は任意のアミノ酸であり、Ｙ９６はＹまたはＲである］を含むポリペプチド（抗体など）を提供する。
【００６２】
別の態様では、本発明は、配列番号９のＣＤＲ１領域［Ｉ３４はＳ、Ｌ、Ｖ、Ａ、またはＩであり、Ｎ３５はＮ、ＴまたはＳである］、配列番号１０のＣＤＲ２領域［Ｍ５０はＭ、Ｉ、Ｇ、Ｑ、Ｓ、またはＬであり、Ａ６２はＡまたはＳであり、Ｌ６３はＬまたはＶである］、および配列番号１１のＣＤＲ３領域［Ｙ１００はＹ、Ｌ、またはＲであり、Ｙ１０１はＹまたはＷであり、Ｇ１０３はＧ、Ａ、またはＳであり、Ｔ１０４はＴまたはＳであり、Ｓ１０５はＳ、Ａ、またはＴであり、Ｙ１０６はＹ、Ｒ、Ｔ、またはＭであり、Ｙ１０７はＹまたはＦであり、Ｆ１０８はＦまたはＷであり、Ｄ１０９はＤ、Ｎ、またはＧであり、Ｙ１１０はＹ、Ｋ、Ｓ、ＲまたはＴである］を含む重鎖可変領域を含む、ポリペプチド（ヒト化抗体を含めた抗体など）を提供する。一部の実施形態では、重鎖可変領域は、配列番号１１のＣＤＲ３領域［Ｙ１００はＹ、Ｌ、またはＲであり、Ｙ１０１はＹまたはＷであり、Ｇ１０３はＧ、Ａ、またはＳであり、Ｔ１０４はＴまたはＳであり、Ｓ１０５はＳ、Ａ、またはＴであり、Ｙ１０６はＹ、Ｒ、Ｔ、またはＭであり、Ｙ１０７はＹまたはＦであり、Ｆ１０８はＦまたはＷであり、Ｄ１０９はＳ、Ａ、Ｃ、Ｇ、Ｄ、Ｎ、Ｔ、またはＧであり、Ｙ１１０は任意のアミノ酸である］を含む。他の実施形態では、重鎖可変領域は、配列番号１１のＣＤＲ３領域［Ｇ９８はＧ、Ｓ、Ａ、Ｃ、Ｖ、Ｎ、Ｄ、またはＴであり、Ｇ９９はＧ、Ｓ、Ａ、Ｃ、Ｖ、Ｎ、Ｄ、またはＴであり、Ｙ１００はＹ、Ｌ、またはＲであり、Ｙ１０１はＹまたはＷであり、Ｇ１０３はＧ、Ａ、またはＳであり、Ｔ１０４はＴまたはＳであり、Ｓ１０５はＳ、Ａ、またはＴであり、Ｙ１０６はＹ、Ｒ、Ｔ、またはＭであり、Ｙ１０７はＹまたはＦであり、Ｆ１０８はＦまたはＷであり、Ｄ１０９はＳ、Ａ、Ｃ、Ｇ、Ｄ、Ｎ、Ｔ、またはＧであり、Ｙ１１０は任意のアミノ酸である］を含む。一部の実施形態では、ポリペプチド（抗体など）は抗体軽鎖可変領域をさらに含む。
【００６３】
別の態様では、本発明は、配列番号１２のＣＤＲ１領域［Ｓ２６はＳまたはＦであり、Ｄ２８はＤ、Ｓ、Ａ、またはＹであり、Ｈ３２はＨ、Ｎ、またはＱである］、配列番号１３のＣＤＲ２領域［Ｉ５１はＩ、Ｔ、ＶまたはＡであり、Ｓ５６はＳまたはＴである］、および配列番号１４のＣＤＲ３領域［Ｓ９１はＳまたはＥであり、Ｋ９２はＫ、Ｈ、Ｒ、またはＳであり、Ｙ９６はＹまたはＲである］を含む軽鎖可変領域を含む、ポリペプチド（抗体など）を提供する。一部の実施形態では、軽鎖可変領域は、配列番号１４のＣＤＲ３領域［Ｓ９１はＳまたはＥであり、Ｋ９２は任意のアミノ酸であり、Ｔ９３は任意のアミノ酸であり、Ｙ９６はＹまたはＲである］を含む。一部の実施形態では、ポリペプチド（抗体など）は抗体重鎖をさらに含む。
【００６４】
別の態様では、本発明は、（ａ）配列番号９のＣＤＲ１領域［Ｉ３４はＳ、Ｌ、Ｖ、Ａ、またはＩであり、Ｎ３５はＮ、ＴまたはＳである］、配列番号１０のＣＤＲ２領域［Ｍ５０はＭ、Ｉ、Ｇ、Ｑ、Ｓ、またはＬであり、Ａ６２はＡまたはＳであり、Ｌ６３はＬまたはＶである］、および配列番号１１のＣＤＲ３領域［Ｙ１００はＹ、Ｌ、またはＲであり、Ｙ１０１はＹまたはＷであり、Ｇ１０３はＧ、Ａ、またはＳであり、Ｔ１０４はＴまたはＳであり、Ｓ１０５はＳ、Ａ、またはＴであり、Ｙ１０６はＹ、Ｒ、Ｔ、またはＭであり、Ｙ１０７はＹまたはＦであり、Ｆ１０８はＦまたはＷであり、Ｄ１０９はＤ、Ｎ、またはＧであり、Ｙ１１０はＹ、Ｋ、Ｓ、ＲまたはＴである］を含む重鎖可変領域、ならびに（ｂ）配列番号１２のＣＤＲ１領域［Ｓ２６はＳまたはＦであり、Ｄ２８はＤ、Ｓ、Ａ、またはＹであり、Ｈ３２はＨ、Ｎ、またはＱである］、配列番号１３のＣＤＲ２領域［Ｉ５１はＩ、Ｔ、ＶまたはＡであり、Ｓ５６はＳまたはＴである］、および配列番号１４のＣＤＲ３領域［Ｓ９１はＳまたはＥであり、Ｋ９２はＫ、Ｈ、Ｒ、またはＳであり、Ｙ９６はＹまたはＲである］を含む軽鎖可変領域を含む、ポリペプチド（抗体など）を提供する。一部の実施形態では、軽鎖可変領域は、配列番号１４のＣＤＲ３領域［Ｓ９１はＳまたはＥであり、Ｋ９２は任意のアミノ酸であり、Ｔ９３は任意のアミノ酸であり、Ｙ９６はＹまたはＲである］を含む。一部の実施形態では、重鎖可変領域は、配列番号１１のＣＤＲ３領域［Ｙ１００はＹ、Ｌ、またはＲであり、Ｙ１０１はＹまたはＷであり、Ｇ１０３はＧ、Ａ、またはＳであり、Ｔ１０４はＴまたはＳであり、Ｓ１０５はＳ、Ａ、またはＴであり、Ｙ１０６はＹ、Ｒ、Ｔ、またはＭであり、Ｙ１０７はＹまたはＦであり、Ｆ１０８はＦまたはＷであり、Ｄ１０９はＳ、Ａ、Ｃ、Ｇ、Ｄ、Ｎ、Ｔ、またはＧであり、Ｙ１１０は任意のアミノ酸である］を含む。他の実施形態では、重鎖可変領域は、配列番号１１のＣＤＲ３領域［Ｇ９８はＧ、Ｓ、Ａ、Ｃ、Ｖ、Ｎ、Ｄ、またはＴであり、Ｇ９９はＧ、Ｓ、Ａ、Ｃ、Ｖ、Ｎ、Ｄ、またはＴであり、Ｙ１００はＹ、Ｌ、またはＲであり、Ｙ１０１はＹまたはＷであり、Ｇ１０３はＧ、Ａ、またはＳであり、Ｔ１０４はＴまたはＳであり、Ｓ１０５はＳ、Ａ、またはＴであり、Ｙ１０６はＹ、Ｒ、Ｔ、またはＭであり、Ｙ１０７はＹまたはＦであり、Ｆ１０８はＦまたはＷであり、Ｄ１０９はＳ、Ａ、Ｃ、Ｇ、Ｄ、Ｎ、Ｔ、またはＧであり、Ｙ１１０は任意のアミノ酸である］を含む。一部の実施形態では、ポリペプチドは抗体軽鎖をさらに含む。
【００６５】
別の態様では、本発明は、配列番号９に示すアミノ酸配列［Ｉ３４はＳ、Ｌ、Ｖ、Ａ、またはＩであり、Ｎ３５はＮ、ＴまたはＳである］、配列番号１０に示すアミノ酸配列［Ｍ５０はＭ、Ｉ、Ｇ、Ｑ、Ｓ、またはＬであり、Ａ６２はＡまたはＳであり、Ｌ６３はＬまたはＶである］、および配列番号１１に示すアミノ酸配列［Ｙ１００はＹ、Ｌ、またはＲであり、Ｙ１０１はＹまたはＷであり、Ｇ１０３はＧ、Ａ、またはＳであり、Ｔ１０４はＴまたはＳであり、Ｓ１０５はＳ、Ａ、またはＴであり、Ｙ１０６はＹ、Ｒ、Ｔ、またはＭであり、Ｙ１０７はＹまたはＦであり、Ｆ１０８はＦまたはＷであり、Ｄ１０９はＤ、Ｎ、またはＧであり、Ｙ１１０はＹ、Ｋ、Ｓ、ＲまたはＴである］を含む、ポリペプチド（ヒト化抗体を含めた抗体など）を提供する。一部の実施形態では、ポリペプチドは、配列番号１１に示すアミノ酸配列［Ｙ１００はＹ、Ｌ、またはＲであり、Ｙ１０１はＹまたはＷであり、Ｇ１０３はＧ、Ａ、またはＳであり、Ｔ１０４はＴまたはＳであり、Ｓ１０５はＳ、Ａ、またはＴであり、Ｙ１０６はＹ、Ｒ、Ｔ、またはＭであり、Ｙ１０７はＹまたはＦであり、Ｆ１０８はＦまたはＷであり、Ｄ１０９はＳ、Ａ、Ｃ、Ｇ、Ｄ、Ｎ、Ｔ、またはＧであり、Ｙ１１０は任意のアミノ酸である］を含む。他の実施形態では、ポリペプチドは、配列番号１１に示すアミノ酸配列［Ｇ９８はＧ、Ｓ、Ａ、Ｃ、Ｖ、Ｎ、Ｄ、またはＴであり、Ｇ９９はＧ、Ｓ、Ａ、Ｃ、Ｖ、Ｎ、Ｄ、またはＴであり、Ｙ１００はＹ、Ｌ、またはＲであり、Ｙ１０１はＹまたはＷであり、Ｇ１０３はＧ、Ａ、またはＳであり、Ｔ１０４はＴまたはＳであり、Ｓ１０５はＳ、Ａ、またはＴであり、Ｙ１０６はＹ、Ｒ、Ｔ、またはＭであり、Ｙ１０７はＹまたはＦであり、Ｆ１０８はＦまたはＷであり、Ｄ１０９はＳ、Ａ、Ｃ、Ｇ、Ｄ、Ｎ、Ｔ、またはＧであり、Ｙ１１０は任意のアミノ酸である］を含む。一部の実施形態では、ポリペプチド（抗体など）は抗体軽鎖可変領域をさらに含む。
【００６６】
別の態様では、本発明は、配列番号１２に示すアミノ酸配列［Ｓ２６はＳまたはＦであり、Ｄ２８はＤ、Ｓ、Ａ、またはＹであり、Ｈ３２はＨ、Ｎ、またはＱである］、配列番号１３に示すアミノ酸配列［Ｉ５１はＩ、Ｔ、ＶまたはＡであり、Ｓ５６はＳまたはＴである］、および配列番号１４に示すアミノ酸配列［Ｓ９１はＳまたはＥであり、Ｋ９２はＫ、Ｈ、Ｒ、またはＳであり、Ｙ９６はＹまたはＲである］を含むポリペプチド（抗体など）を提供する。
【００６７】
本発明のさらなる好ましい実施形態によれば、抗体は、
（ａ）配列番号３に示すＣＤＲ１領域、
（ｂ）配列番号４に示すＣＤＲ２領域、および
（ｃ）配列番号５、１１、５６、５８、６０、６２、６４に示すＣＤＲ３領域
を含む重鎖可変領域を含む抗ＮＧＦ抗体であることができる。
【００６８】
本発明のさらなる好ましい実施形態によれば、抗体は、
（ａ）配列番号６に示すＣＤＲ１領域、
（ｂ）配列番号７に示すＣＤＲ２領域、および
（ｃ）配列番号８、１４、５５、５７、５９、６１または６３に示すＣＤＲ３領域
を含む軽鎖可変領域を含む抗ＮＧＦ抗体であることができる。
【００６９】
本発明の好ましい実施形態によれば、抗体は、
（ａ）配列番号３に示すＣＤＲ１領域、
（ｂ）配列番号４に示すＣＤＲ２領域、および
（ｃ）配列番号５に示すＣＤＲ３領域
を含む重鎖可変領域を含む抗ＮＧＦ抗体であることができる。
【００７０】
本発明によれば、抗体は、
（ａ）配列番号６に示すＣＤＲ１領域、
（ｂ）配列番号７に示すＣＤＲ２領域、および
（ｃ）配列番号８に示すＣＤＲ３領域
を含む軽鎖可変領域を含む抗ＮＧＦ抗体であることができる。
【００７１】
抗ＮＧＦ抗体は、
（ａ）配列番号３に示すＣＤＲ１領域、
（ｂ）配列番号４に示すＣＤＲ２領域、および
（ｃ）配列番号５に示すＣＤＲ３領域
を含む重鎖可変領域をさらに含み得る。
【００７２】
抗ＮＧＦ抗体は、配列番号１のアミノ酸配列と少なくも約８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％もしくは９９％の任意で同一のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および／または配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも約８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％もしくは９９％のうちの任意で同一のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含んでいてよく、抗体はＮＧＦと特異的に結合する。
【００７３】
ヒト化抗ＮＧＦ抗体の重鎖可変領域および／または軽鎖可変領域は、１つまたは複数の対応するフレームワーク突然変異を含み得る。一態様では、フレームワーク突然変異では、ヒトフレームワーク残基を相補的なマウスフレームワーク残基で置き換え得る。突然変異は、重鎖可変領域中に置換Ｖ７１Ｋを含み得る。
【００７４】
抗ＮＧＦ抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含んでいてよく、かつ／または配列番号２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含んでいてよい。
【００７５】
抗ＮＧＦ抗体は、配列番号１および２に示すアミノ酸配列を含む抗体であり得る。
【００７６】
抗ＮＧＦ抗体は、配列番号１６のアミノ酸配列と少なくとも約８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％もしくは９９％のうちの任意で同一のアミノ酸配列を含む重鎖領域および／または配列番号１７のアミノ酸配列と少なくとも約８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％のうちの任意で同一のアミノ酸配列を含む軽鎖領域を含んでいてよく、抗体はＮＧＦと特異的に結合する。
【００７７】
抗ＮＧＦ抗体は、配列番号１６のアミノ酸配列を含む重鎖領域を含んでいてよく、かつ／または配列番号１７のアミノ酸配列を含む軽鎖領域を含んでいてよい。
【００７８】
抗ＮＧＦ抗体は、配列番号１６および１７を示すアミノ酸配列を含む抗体であり得る。
【００７９】
抗ＮＧＦ抗体は、ＮＧＦ結合について本明細書中に定義した抗ＮＧＦ抗体と競合し得る。抗ＮＧＦ抗体は、ＮＧＦ結合について、配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および／または配列番号２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む抗体と競合し得る。
【００８０】
抗ＮＧＦ抗体は、ヒトおよびげっ歯類のＮＧＦと特異的に結合するヒト化かつ親和性成熟の抗体Ｅ３であり得る。抗体Ｅ３は、その内容がその全体で本明細書中に参考として組み込まれているＷＯ２００４／０５８１８４号に記載されている。Ｅ３の重鎖および軽鎖可変領域のアミノ酸配列をそれぞれ配列番号１および２に示す（ＷＯ２００４／０５８１８４号の図１Ａおよび１Ｂ）。抗体Ｅ３のＣＤＲ部分（コチアおよびカバットＣＤＲが含まれる）をＷＯ２００４／０５８１８４号の図１Ａおよび１Ｂに図示する。Ｅ３の重鎖および軽鎖、ならびに個々の伸長ＣＤＲのアミノ酸配列も以下に示す（以下の「抗体配列」を参照）。抗体Ｅ３は、ＮＧＦを補足してその受容体との相互作用を防止することにおいて非常に強力である。Ｅ３およびそのネズミ前駆抗体９１１は、関節炎、癌性疼痛および手術後疼痛を含めた病理的疼痛の非臨床動物モデルにおいて有効な鎮痛剤であることが示されている。
【００８１】
また、抗ＮＧＦ抗体は、抗体Ｅ３の断片または領域も含み得る（本明細書中で互換性があるように「Ｅ３」と呼ぶ）。一実施形態では、断片は、ＷＯ２００４／０５８１８４号の図１Ｂおよび本明細書中の配列番号１７に示す抗体Ｅ３の軽鎖である。別の実施形態では、断片は、ＷＯ２００４／０５８１８４号の図１Ａおよび本明細書中の配列番号１６に示す抗体Ｅ３の重鎖。さらに別の実施形態では、断片は、抗体Ｅ３の軽鎖および／または重鎖からの１つまたは複数の可変領域を含有する。さらに別の実施形態では、断片は、ＷＯ２００４／０５８１８４号の図１Ａおよび１Ｂならびにそれぞれ本明細書中の配列番号１７および１６に示す、抗体Ｅ３の軽鎖および／または重鎖からの１つまたは複数のＣＤＲを含有する。
【００８２】
別の態様では、抗体は、ＡＴＣＣ番号ＰＴＡ４８９３号またはＡＴＣＣ番号ＰＴＡ４８９４号の受託番号を有する宿主細胞によって産生されるポリヌクレオチドによってコードされている軽鎖を含む。別の態様では、抗体は、ＡＴＣＣ番号ＰＴＡ４８９５号の受託番号を有する宿主細胞によって産生されるポリヌクレオチドによってコードされている重鎖を含む。別の態様では、抗体は、（ａ）ＡＴＣＣ番号ＰＴＡ４８９４号またはＡＴＣＣ番号ＰＴＡ４８９３号の受託番号を有する宿主細胞によって産生されるポリヌクレオチドによってコードされている軽鎖、および（ｂ）ＡＴＣＣ番号ＰＴＡ４８９５号の受託番号を有する宿主細胞によって産生されるポリヌクレオチドによってコードされている重鎖を含む（本明細書中では、利便上、受託宿主細胞によって産生されるポリヌクレオチド（複数可）は、ＡＴＣＣ番号ＰＴＡ−４８９４号、ＰＴＡ−４８９３号およびＰＴＡ−４８９５号の受託番号を有すると呼ぶ）。別の態様では、抗体は、ＡＴＣＣ番号ＰＴＡ４８９４号またはＡＴＣＣ番号ＰＴＡ４８９３号の受託番号を有する宿主細胞によって産生されるポリヌクレオチドによってコードされている軽鎖の軽鎖可変領域を含む。別の態様では、抗体は、ＡＴＣＣ番号ＰＴＡ４８９５号の受託番号を有する宿主細胞によって産生されるポリヌクレオチドによってコードされている重鎖の重鎖可変領域を含む。別の態様では、抗体は、（ａ）ＡＴＣＣ番号ＰＴＡ４８９４号またはＡＴＣＣ番号ＰＴＡ４８９３号の受託番号を有する宿主細胞によって産生されるポリヌクレオチドによってコードされている軽鎖の軽鎖可変領域、および（ｂ）ＡＴＣＣ番号ＰＴＡ４８９５号の受託番号を有する宿主細胞によって産生されるポリヌクレオチドによってコードされている重鎖の重鎖可変領域を含む。さらに別の態様では、抗体は、（ａ）ＡＴＣＣ番号ＰＴＡ４８９４号の受託番号を有する宿主細胞によって産生されるポリヌクレオチド、および／または（ｂ）ＡＴＣＣ番号ＰＴＡ４８９５号の受託番号を有する宿主細胞によって産生されるポリヌクレオチドによってコードされている重鎖によってコードされている１つまたは複数のＣＤＲを含む。
【００８３】
別の態様では、抗体は、ａ）配列番号１〜８または配列番号３〜８（ＷＯ２００４／０５８１８４号の図１Ａおよび１Ｂ）に示す抗体Ｅ３の１つまたは複数のＣＤＲ、ｂ）配列番号１および５（ＷＯ２００４／０５８１８４号の図１Ａ）に示す抗体Ｅ３の重鎖からのＣＤＲ  Ｈ３、ｃ）配列番号２および８（ＷＯ２００４／０５８１８４号の図１Ｂ）に示す抗体Ｅ３の軽鎖からのＣＤＲ  Ｌ３、ｄ）配列番号２、６〜８（ＷＯ２００４／０５８１８４号の図１Ｂ）に示す抗体Ｅ３の軽鎖からの３つのＣＤＲ、ｅ）配列番号１、３〜５（ＷＯ２００４／０５８１８４号の図１Ａ）に示す抗体Ｅ３の重鎖からの３つのＣＤＲ、ならびにｆ）配列番号１〜８（ＷＯ２００４／０５８１８４号の図１Ａおよび１Ｂ）に示す抗体Ｅ３の軽鎖からの３つのＣＤＲおよび重鎖からの３つのＣＤＲのうちの、任意の１つまたは複数を含む。別の態様では、抗体は、ａ）配列番号１〜８（ＷＯ２００４／０５８１８４号の図１Ａおよび１Ｂ）に示す抗体Ｅ３に由来する１つもしくは複数（１、２、３、４、５、もしくは６個）のＣＤＲ、ｂ）配列番号１および５（ＷＯ２００４／０５８１８４号の図１Ａ）に示す抗体Ｅ３の重鎖からのＣＤＲ  Ｈ３に由来するＣＤＲ、ならびに／またはｃ）配列番号２および８（ＷＯ２００４／０５８１８４号の図１Ｂ）に示す抗体Ｅ３の軽鎖からのＣＤＲ  Ｌ３に由来するＣＤＲのうちの、任意の１つまたは複数を含む。一部の実施形態では、ＣＤＲは、カバットＣＤＲ、コチアＣＤＲ、またはカバットおよびコチアＣＤＲの組合せであり得る（本明細書中で「伸長」または「組合せ」ＣＤＲと呼ぶ）。一部の実施形態では、ポリペプチドは、本明細書中に記載のＣＤＲ立体配置（組合せ、変異体などが含まれる）のうちの任意のものを含む。
【００８４】
別の実施形態では、抗体は以下を含み得る：
（ａ）以下を含む重鎖可変領域：
（ｉ）配列番号３０のＣＤＲ１領域、
（ｉｉ）配列番号３１の配列を含むＣＤＲ２領域、
（ｉｉｉ）配列番号１１、５６、５８、６０、６２および６４からなる群から選択されるＣＤＲ３領域、ならびに
（ｂ）以下を含む軽鎖可変領域：
（ｉ）配列番号１８のＣＤＲ１領域、
（ｉｉ）配列番号１９のＣＤＲ２領域、
（ｉｉｉ）配列番号１４、５５、５７、５９、６１および６３からなる群から選択されるＣＤＲ３領域。
【００８５】
本発明の一部の実施形態では、本明細書中に記載の抗ＮＧＦ抗体のうちの任意のものの重鎖のＣ末端リシンを欠失させる。様々な事例において、本明細書中に記載の抗ＮＧＦ抗体の重鎖および／または軽鎖には、場合によりシグナル配列が含まれていてもよい。
【００８６】
別の実施形態では、抗体は、ＷＯ２００５０１９２６６号（抗体４Ｄ４、１４Ｄ１０、６Ｇ９、７Ｈ２、１４Ｆ１１および４Ｇ６が含まれる）、ＷＯ２００６１３１９５１号（抗体Ｈｕ−αＤ１１が含まれる）、ＷＯ０９０２３５４０号またはＵＳ２００９００４１４１７号に記載されている抗体などの、当分野で知られている抗ＮＧＦ抗体から選択され得る。抗体は、Ｈｏｎｇｏら、Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ、１９：２１５〜２２７（２０００）に記載のＭａｂ９１１、ＭＡｂ９１２、およびＭＡｂ９３８、ならびにＷＯ２００５０１９２６６号（抗体４Ｄ４、１４Ｄ１０、６Ｇ９、７Ｈ２、１４Ｆ１１および４Ｇ６が含まれる）、ＷＯ２００６１３１９５１号（抗体Ｈｕ−αＤ１１が含まれる）、ＷＯ０９０２３５４０号もしくはＵＳ２００９００４１４１７号に記載の抗体などの、当分野で知られている抗ＮＧＦ抗体と同じエピトープと結合してもよく、かつ／または、ＮＧＦとの結合についてそのような抗体と競合し得る。
【００８７】
本発明のさらなる態様によれば、
約０．５ｍｇ／ｍｌ〜約５０ｍｇ／ｍｌの少なくとも１つの抗体、
約１．０ｍＭ〜約１５ｍＭのヒスチジン緩衝液、
約１ｍｇ／ｍｌ〜約１００ｍｇ／ｍｌのトレハロース二水和物、
約０．０１〜約０．１５ｍｇ／ｍｌのＰＳ２０、
約０．０１〜約０．１ｍｇ／ｍｌのＥＤＴＡ二ナトリウム
を含むまたはそれからなる液体組成物を提供し、前記組成物は、約ｐＨ５．５と約ｐＨ６．０、６．２、６．５もしくは６．８のうちの任意のものとの間の範囲、または約ｐＨ５．８と約ｐＨ６．０、６．２、６．５または６．８のうちの任意のものとの間の範囲から選択されるｐＨである。
【００８８】
本発明のさらなる態様によれば、
約２．５ｍｇ／ｍｌ、５ｍｇ／ｍｌ、１０ｍｇ／ｍｌ、２０ｍｇ／ｍｌ、２２ｍｇ／ｍｌまたは約５０ｍｇ／ｍｌのうちの任意のものの少なくとも１つの抗体、
約１．０ｍＭ〜約１５ｍＭのヒスチジン緩衝液、
約１ｍｇ／ｍｌ〜約１００ｍｇ／ｍｌのトレハロース二水和物、
約０．０１〜約０．１５ｍｇ／ｍｌのＰＳ２０、
約０．０１〜約０．１ｍｇ／ｍｌのＥＤＴＡ二ナトリウム
を含むまたはそれからなる液体組成物を提供し、前記組成物は、約ｐＨ５．５と約ｐＨ６．０、６．２、６．５もしくは６．８のうちの任意のものとの間の範囲、または約ｐＨ５．８と約ｐＨ６．０、６．２、６．５もしくは６．８のうちの任意のものとの間の範囲から選択されるｐＨである。
【００８９】
好ましい実施形態によれば、液体組成物は、
約２．５ｍｇ／ｍｌ、５ｍｇ／ｍｌ、１０ｍｇ／ｍｌ、２０ｍｇ／ｍｌ、２２ｍｇ／ｍｌまたは約５０ｍｇ／ｍｌのうちの任意のものの少なくとも１つの抗体、
約１０ｍＭのヒスチジン緩衝液、
約８４ｍｇ／ｍｌのトレハロース二水和物、
約０．１ｍｇ／ｍｌのＰＳ２０、
約０．０５ｍｇ／ｍｌのＥＤＴＡ二ナトリウム
を含むまたはそれからなり、前記組成物は、約ｐＨ５．５と約ｐＨ６．０、６．２、６．５もしくは６．８のうちの任意のものとの間の範囲、または約ｐＨ５．８と約ｐＨ６．０、６．２、６．５もしくは６．８のうちの任意のものとの間の範囲から選択されるｐＨであり、好ましくはｐＨ５．８〜６．５であり、前記抗体は、配列番号１の可変重鎖配列および配列番号２の可変軽鎖配列を含む。
【００９０】
好ましい実施形態によれば、液体組成物は、
約２．５ｍｇ／ｍｌ、５ｍｇ／ｍｌ、１０ｍｇ／ｍｌ、２０ｍｇ／ｍｌ、２２ｍｇ／ｍｌまたは約５０ｍｇ／ｍｌのうちの任意のものの少なくとも１つの抗体、
約１０ｍＭのヒスチジン緩衝液、
約８４ｍｇ／ｍｌのトレハロース二水和物、
約０．１ｍｇ／ｍｌのＰＳ２０、
約０．０５ｍｇ／ｍｌのＥＤＴＡ二ナトリウム
を含むまたはそれからなり、前記組成物はｐＨ６．０±０．２であり、前記抗体は配列番号１の可変重鎖配列および配列番号２の可変軽鎖配列を含む。好ましい実施形態では、使用する用量体積は１ｍｌである。
【００９１】
一態様では、凍結乾燥しておらず、凍結乾燥に供していない液体組成物を提供する。
【００９２】
本発明のさらなる態様によれば、複数の凍結解凍サイクル後に抗体の凝集に対して耐性を有する、本発明の液体組成物を提供する。
【００９３】
好ましくは、抗体は、組成物の凍結および解凍の少なくとも１つのサイクル中に凝集に対して耐性を有し、さらに好ましくは、抗体は、複数の凍結解凍サイクル中、好ましくは少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４または１５回の凍結解凍サイクル中に、凝集に対して耐性を有する。最も好ましくは、抗体は、液体組成物の少なくとも１５回の凍結および解凍サイクル、さらに好ましくは、４または１５回のサイクル中に、凝集に対して耐性を有する。
【００９４】
さらに好ましくは、抗体は、凍結解凍前の同じ組成物、または同一もしくはほぼ同一の組成の等価試料と比較して、液体組成物の複数の凍結解凍サイクル後に約１０％未満の凝集の増加を実証し、より好ましくは、凍結解凍前の同じ組成物、または同一もしくはほぼ同一の組成の等価試料と比較して、液体組成物の複数の凍結解凍サイクル後に約９未満、８、７、６、５、４、３、２、１、０．５または０％の凝集の増加を実証する。
【００９５】
本発明のさらなる態様によれば、少なくとも約２６または５２週間の期間、約５、２５または４０℃のうちの任意の温度で保管することができ、組成物の抗体の凝集が約３５％未満、さらに好ましくは約１０％未満増加する、本発明の液体組成物を提供する。好ましくは、抗体の濃度は約１０ｍｇ／ｍｌまたは約５０ｍｇ／ｍｌのどちらかである。
【００９６】
好ましくは、保管期間前の同じ組成物、または同一もしくはほぼ同一の組成の等価試料と比較して、約２、４、８、９、１３、２６または５２週間のうちの任意の期間、約５、２５または４０℃のうちの任意の温度で保管した場合に、液体配合物の抗体の凝集が約３５％未満、さらに好ましくは約１０％未満増加する。好ましくは、抗体の濃度は約１０ｍｇ／ｍｌまたは約５０ｍｇ／ｍｌのどちらかである。
【００９７】
さらに好ましくは、液体組成物の抗体は、保管期間前の同じ組成物、または同一もしくはほぼ同一の組成の等価試料と比較して、２、４、８、９、１３、２６または５２週間、約５、２５または４０℃のうちの任意の温度での保管期間後に、約３５％未満、さらに好ましくは約１０％未満の凝集の増加、さらに好ましくは、約３４％、３３％、３２％、３１％、３０％、２９％、２８％、２７％、２６％、２５％、２４％、２３％、２２％、２１％、２０％、１９％、１８％、１７％、１６％、１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、１０％、９％のうちの任意のもの未満、より好ましくは約８未満、７、６、５、４、３、２、１、もしくは０．５％または約０％に等しい凝集の増加を実証し、最も好ましくは、４０℃で５２週間後に約２０％未満、または４０℃で２６週間後に約１０％未満を実証する。好ましくは、抗体の濃度は約１０ｍｇ／ｍｌまたは約５０ｍｇ／ｍｌのどちらかである。
【００９８】
本発明のさらなる態様によれば、少なくとも約２６または５２週間の期間、約５、２５または４０℃のうちの任意の温度で保管することができ、保管期間前の同じ組成物、または同一もしくはほぼ同一の組成の等価試料と比較して、組成物の抗体の酸化が約３５％未満、さらに好ましくは約１０％未満増加する、本発明の液体組成物を提供する。好ましくは、抗体の濃度は約１０ｍｇ／ｍｌまたは約５０ｍｇ／ｍｌのどちらかである。
【００９９】
好ましくは、液体組成物の抗体は、保管期間前の同じ組成物、または同一もしくはほぼ同一の組成の等価試料と比較して、約２、４、８、９、１３、２６または５２週間のうちの任意の間、約５、２５または４０℃のうちの任意の温度での保管期間の後、約３５％未満、さらに好ましくは約１０％未満の酸化の増加、さらに好ましくは、約３４％、３３％、３２％、３１％、３０％、２９％、２８％、２７％、２６％、２５％、２４％、２３％、２２％、２１％、２０％、１９％、１８％、１７％、１６％、１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、１０％、９％のうちの任意のもの未満、より好ましくは約８未満、７、６、５、４、３、２、１もしくは０．５％、または約０％に等しい酸化の増加を実証し、最も好ましくは、５２週間後に約３０％未満もしくは約３１％未満、または４０℃で２６週間後に約１１％未満もしくは１０％を実証する。好ましくは、抗体の濃度は約１０ｍｇ／ｍｌまたは約５０ｍｇ／ｍｌのどちらかである。
【０１００】
本発明のさらなる態様によれば、少なくとも約２６または５２週間の期間、約５、２５または４０℃のうちの任意の温度で保管することができ、組成物の抗体の活性が３０％未満減少する、本発明の液体組成物を提供する。
【０１０１】
好ましくは、保管期間前の同じ組成物、または同一もしくはほぼ同一の組成の等価試料と比較して、少なくとも約２、４、８、１３、または２６週間のうちの任意の期間、約５、２５または４０℃のうちの任意の温度で保管した場合に、液体配合物の抗体の活性が約３０％未満減少し、さらに好ましくは約２５％未満、さらに好ましくは２０％、より好ましくは、配合物の抗体の活性約１９未満、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、１、０．５または０％減少する。好ましくは、抗体の濃度は約１０ｍｇ／ｍｌまたは約５０ｍｇ／ｍｌのどちらかである。
【０１０２】
本発明のさらなる態様によれば、少なくとも約２６週間の期間、約５、２５または４０℃のうちの任意の温度で保管することができ、保管期間前の同じ組成物、または同一もしくはほぼ同一の組成の等価試料と比較して、組成物の抗体の断片化が約１５％未満増加し、好ましくは抗体の濃度が約１０ｍｇ／ｍｌまたは約５０ｍｇ／ｍｌのどちらかである、本発明の液体組成物を提供する。好ましくは、液体組成物の抗体は、保管期間前の同じ組成物、または同一もしくはほぼ同一の組成の等価試料と比較して、約２、４、８、９、１３または２６週間のうちの任意の間、約５、２５または４０℃のうちの任意の温度での保管期間後に、約１５％未満、さらに好ましくはさらに好ましくは、約１４％、１３％、１２％、１１％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％もしくは０．５％のうちの任意のもの未満、または約０％に等しい断片化の増加を実証し、最も好ましくは、約４０℃で約２６週間の後に約１４％未満を実証する。好ましくは、抗体の濃度は約１０ｍｇ／ｍｌまたは約５０ｍｇ／ｍｌのどちらかである。
【０１０３】
本発明のさらなる態様によれば、少なくとも約５２週間の期間、２〜８℃の温度、好ましくは５℃で保管することができ、組成物の抗体の活性が２０％未満減少する、本発明の液体組成物を提供する。好ましくは、抗体の濃度は、約２．５、５、１０、２０または５０ｍｇ／ｍｌのうちの任意のものである。
【０１０４】
好ましくは、保管期間前の同じ組成物、同一またはほぼ同一の組成の等価試料と比較して、少なくとも約２、４、８、１３、２６または５２週間のうちの任意の期間、さらに好ましくは、少なくとも約２、３、６、９、１２、１８または２４カ月のうちの任意の期間、約２〜８℃の温度、好ましくは５℃で保管した場合に、液体配合物の抗体の活性が約１５％未満、さらに好ましくは約１０％未満減少する。好ましくは、抗体の濃度は、約２．５、５、１０、２０または５０ｍｇ／ｍｌのうちの任意のものである。
【０１０５】
さらに好ましくは、液体組成物の抗体は、保管期間前の同じ組成物、または同一もしくはほぼ同一の組成の等価試料と比較して、保管期間後に、約１５％未満の凝集の増加、さらに好ましくは、約１０％未満、より好ましくは約９未満、８、７、６、５、４、３、２、１、０．５または０％の活性の減少を実証する。
【０１０６】
本発明のさらなる態様によれば、少なくとも約５２週間または少なくとも２４カ月の期間、２〜８℃の温度、好ましくは５℃で保管することができ、組成物の抗体の凝集２０％未満増加する、本発明の液体組成物を提供する。好ましくは、抗体の濃度は、約２．５、５、１０、２０または５０ｍｇ／ｍｌのうちの任意のものである。
【０１０７】
好ましくは、保管期間前の同じ組成物、同一またはほぼ同一の組成の等価試料と比較して、少なくとも約２、４、８、１３、２６または５２週間のうちの任意の期間、さらに好ましくは、少なくとも約２、３、６、９、１２、１８または２４カ月のうちの任意の期間、約２〜８℃の温度、好ましくは５℃で保管した場合に、液体配合物の抗体の凝集が約１５％未満、さらに好ましくは、約１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、１、０．５％のうちの任意のもの未満または０％に等しく増加する。好ましくは、抗体の濃度は、約２．５、５、１０、２０または５０ｍｇ／ｍｌのうちの任意のものである。
【０１０８】
本発明のさらなる態様によれば、少なくとも約５２週間または少なくとも２４カ月の期間、２〜８℃の温度、好ましくは５℃で保管することができ、組成物の抗体の酸化が２０％未満増加する、本発明の液体組成物を提供する。好ましくは、抗体の濃度は、約２．５、５、１０、２０または５０ｍｇ／ｍｌのうちの任意のものである。
【０１０９】
好ましくは、保管期間前の同じ組成物、同一またはほぼ同一の組成の等価試料と比較して、少なくとも約２、４、８、１３、２６または５２週間のうちの任意の期間、さらに好ましくは、少なくとも約２、３、６、９、１２、１８または２４カ月のうちの任意の期間、約２〜８℃の温度、好ましくは５℃で保管した場合に、液体配合物の抗体の酸化が約１５％未満、さらに好ましくは、約１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、１、０．５％のうちの任意のもの未満または０％に等しく増加する。好ましくは、抗体の濃度は、約２．５、５、１０、２０または５０ｍｇ／ｍｌのうちの任意のものである。
【０１１０】
本発明のさらなる態様によれば、少なくとも約５２週間または少なくとも２４カ月の期間、２〜８℃の温度、好ましくは５℃で保管することができ、組成物の抗体の断片化が２０％未満増加する、本発明の液体組成物を提供する。好ましくは、抗体の濃度は、約２．５、５、１０、２０または５０ｍｇ／ｍｌのうちの任意のものである。
【０１１１】
好ましくは、保管期間前の同じ組成物、同一またはほぼ同一の組成の等価試料と比較して、少なくとも約２、４、８、１３、２６または５２週間のうちの任意の期間、さらに好ましくは、少なくとも約２、３、６、９、１２、１８または２４カ月のうちの任意の期間、約２〜８℃の温度、好ましくは５℃で保管した場合に、液体配合物の抗体の断片化が約１５％未満、さらに好ましくは、約１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、１、０．５％のうちの任意のもの未満または０％に等しく増加する。好ましくは、抗体の濃度は、約２．５、５、１０、２０または５０ｍｇ／ｍｌのうちの任意のものである。
【０１１２】
本発明のさらなる好ましい態様によれば、哺乳動物において疼痛を処置する医薬品を製造するための、任意の前述の態様または実施形態による液体組成物を提供する。
【０１１３】
好ましくは、疼痛は、急性疼痛、慢性疼痛、神経因性、炎症性、侵害受容性、混合病因疼痛、痛覚異常過敏、アロディニア、内臓痛、体性痛および背痛のうちの１つまたは複数から選択される。
【０１１４】
本発明のさらなる実施形態によれば、疼痛および／または間質性膀胱炎に関連する下部尿路症状（ＬＵＴ）および／または有痛性膀胱症候群および／または膀胱痛症候群を処置する医薬品を製造するための、任意の前述の態様または実施形態による液体組成物を提供する。
【０１１５】
本発明のさらなる実施形態によれば、疼痛および／または慢性前立腺炎および／または慢性骨盤痛症候群を処置する医薬品を製造するための、任意の前述の態様または実施形態による液体組成物を提供する。別の態様によれば、疼痛ならびに／または子宮内膜症およびもしくは子宮筋腫に関連する他の症状を処置する医薬品を製造するための、任意の前述の態様または実施形態による液体組成物を提供する。
【０１１６】
好ましくは、哺乳動物は、げっ歯類（マウス、ラットおよびウサギなど、ペット（ネコ、イヌおよびウマなど）、家畜（ウシ、ヒツジ、ブタおよびヤギなど）、スポーツ動物および／またはペット（ネコ、イヌおよびウマ）、霊長類、より好ましくヒトから選択される。
【０１１７】
好ましい実施形態によれば、液体組成物は、血流内、筋肉内、組織内、脂肪内、または内蔵内に直接投与することができる。非経口投与に適した手段には、静脈内、動脈内、腹腔内、くも膜下腔内、脳室内、尿道内、胸骨内、頭蓋内、筋肉内、骨内、皮内および皮下が含まれる。非経口投与に適した装置には、針（微小針、微小突起、可溶性針および他の微小孔形成技術が含まれる）注射器、無針注射器およびインフュージョン技術が含まれる。
【０１１８】
一部の実施形態では、医薬品の投与パターンは、１週間に１回、２週間に１回、３週間に１回、４週間に１回、５週間に１回、６週間に１回、７週間に１回、８週間に１回、９週間に１回、１０週間に１回、１５週間に１回、２０週間に１回、２５週間に１回、または２６週間に１回の、医薬品の用量の投与を含む。一部の実施形態では、抗ＮＧＦ拮抗抗体は、１カ月に１回、２カ月に１回、３カ月に１回、４カ月に１回、５カ月に１回、または６カ月に１回投与する。最も好ましくは、医薬品の投与パターンは、８週間に１回の医薬品の用量の投与を含む。
【０１１９】
一部の実施形態では、用量の体積は、約２０ｍｌ、約１５ｍｌ、約１０ｍｌ、約５ｍｌ、約２．５ｍｌ、約１．５ｍｌ、約１．０ｍｌ、約０．７５ｍｌ、約０．５ｍｌ、約０．２５ｍｌまたは約０．０１ｍｌ以下である。
【０１２０】
一部の実施形態では、用量の体積は、約２０ｍｌ、約１９ｍｌ、約１８ｍｌ、約１７ｍｌ、約１６ｍｌ、約１５ｍｌ、約１４ｍｌ、約１３ｍｌ、約１２ｍｌ、約１１ｍｌ、約１０ｍｌ、約９ｍｌ、約８ｍｌ、約７ｍｌ、約６ｍｌ、約５ｍｌ、約４ｍｌ、約３ｍｌ、約２ｍｌまたは約１ｍｌである。あるいは、約２０．５ｍｌ、約１９．５ｍｌ、約１８．５ｍｌ、約１７．５ｍｌ、約１６．５ｍｌ、約１５．５ｍｌ、約１４．５ｍｌ、約１３．５ｍｌ、約１２．５ｍｌ、約１１．５ｍｌ、約１０．５ｍｌ、約９．５ｍｌ、約８．５ｍｌ、約７．５ｍｌ、約６．５ｍｌ、約５．５ｍｌ、約４．５ｍｌ、約３．５ｍｌ、約２．５ｍｌ、約１．５ｍｌ、または約０．５である。あるいは、約９００マイクロリットル、約８００マイクロリットル、約７００マイクロリットル、約６００マイクロリットル、約５００マイクロリットル、約４００マイクロリットル、約３００マイクロリットル、約２００マイクロリットル、または約１００マイクロリットル、あるいは、約９５０マイクロリットル、約８５０マイクロリットル、約７５０マイクロリットル、約６５０マイクロリットル、約５５０マイクロリットル、約４５０マイクロリットル、約３５０マイクロリットル、約２５０マイクロリットル、約１５０マイクロリットル、または約５０マイクロリットルである。最も好ましくは、用量の体積は約２．５ｍｌ以下である。
【０１２１】
好ましい実施形態によれば、抗体の濃度は、約０．１〜約２００ｍｇ／ｍｌの範囲であることができる。好ましくは、抗体の濃度は、約０．５ｍｇ／ｍｌ、約１ｍｇ／ｍｌ、約２ｍｇ／ｍｌ、約２．５ｍｇ／ｍｌ、約３ｍｇ／ｍｌ、約３．５ｍｇ／ｍｌ、約４ｍｇ／ｍｌ、約４．５ｍｇ／ｍｌ、約５ｍｇ／ｍｌ、約５．５ｍｇ／ｍｌ、約６ｍｇ／ｍｌ、約６．５ｍｇ／ｍｌ、約７ｍｇ／ｍｌ、約７．５ｍｇ／ｍｌ、約８ｍｇ／ｍｌ、約８．５ｍｇ／ｍｌ、約９ｍｇ／ｍｌ、約９．５ｍｇ／ｍｌ、約１０ｍｇ／ｍｌ、約１１ｍｇ／ｍｌ、約１２ｍｇ／ｍｌ、約１３ｍｇ／ｍｌ、約１４ｍｇ／ｍｌ、約１５ｍｇ／ｍｌ、約１６ｍｇ／ｍｌ、約１７ｍｇ／ｍｌ、約１８ｍｇ／ｍｌ、約１９ｍｇ／ｍｌ、約２０ｍｇ／ｍｌ、約２１ｍｇ／ｍｌ、約２２ｍｇ／ｍｌ、約２３ｍｇ／ｍｌ、約２４ｍｇ／ｍｌ、約２５ｍｇ／ｍｌ、約２６ｍｇ／ｍｌ、約２７ｍｇ／ｍｌ、約２８ｍｇ／ｍｌ、約２９ｍｇ／ｍｌ、約３０ｍｇ／ｍｌ、約３１ｍｇ／ｍｌ、約３２ｍｇ／ｍｌ、約３３ｍｇ／ｍｌ、約３４ｍｇ／ｍｌ、約３５ｍｇ／ｍｌ、約３６ｍｇ／ｍｌ、約３７ｍｇ／ｍｌ、約３８ｍｇ／ｍｌ、約３９ｍｇ／ｍｌ、約４０ｍｇ／ｍｌ、約４１ｍｇ／ｍｌ、約４２ｍｇ／ｍｌ、約４３ｍｇ／ｍｌ、約４４ｍｇ／ｍｌ、約４５ｍｇ／ｍｌ、約４６ｍｇ／ｍｌ、約４７ｍｇ／ｍｌ、約４８ｍｇ／ｍｌ、約４９ｍｇ／ｍｌ、約５０ｍｇ／ｍｌ、約５１ｍｇ／ｍｌ、約５２ｍｇ／ｍｌ、約５３ｍｇ／ｍｌ、約５４ｍｇ／ｍｌ、約５５ｍｇ／ｍｌ、約５６ｍｇ／ｍｌ、約５７ｍｇ／ｍｌ、約５８ｍｇ／ｍｌ、約５９ｍｇ／ｍｌ、約６０ｍｇ／ｍｌ、約７０ｍｇ／ｍｌ、約８０ｍｇ／ｍｌ、約９０ｍｇ／ｍｌ、約１００ｍｇ／ｍｌまたは約１１０ｍｇ／ｍｌである。最も好ましくは、抗体の濃度は５０ｍｇ／ｍｌ以下であり、約２ｍｇ／ｍｌ、約２．５ｍｇ／ｍｌ、約５ｍｇ／ｍｌ、約１０ｍｇ／ｍｌ、約１９ｍｇ／ｍｌ、約２０ｍｇ／ｍｌ、約２２ｍｇ．ｍｌおよび約５０ｍｇ／ｍｌを含む群から選択され得る。
【０１２２】
好ましい実施形態によれば、用量は、約０．５ｍｇ、約１ｍｇ、約２ｍｇ、約３ｍｇ、約４ｍｇ、約５ｍｇ、約６ｍｇ、約７ｍｇ、約８ｍｇ、約９ｍｇ、約１０ｍｇ、約１１ｍｇ、約１２ｍｇ、約１３ｍｇ、約１４ｍｇ、約１５ｍｇ、約１６ｍｇ、約１７ｍｇ、約１８ｍｇ、約１９ｍｇ、約２０ｍｇ、約２１ｍｇ、約２２ｍｇ、約２３ｍｇ、約２４ｍｇ、約２５ｍｇ、約２６ｍｇ、約２７ｍｇ、約２８ｍｇ、約２９ｍｇ、約３０ｍｇ、約３１ｍｇ、約３２ｍｇ、約３３ｍｇ、約３４ｍｇ、約３５ｍｇ、約３６ｍｇ、約３７ｍｇ、約３８ｍｇ、約３９ｍｇ、約４０ｍｇ、約４１ｍｇ、約４２ｍｇ、約４３ｍｇ、約４４ｍｇ、約４５ｍｇ、約４６ｍｇ、約４７ｍｇ、約４８ｍｇ、約４９ｍｇ、約５０ｍｇ、約５１ｍｇ、約５２ｍｇ、約５３ｍｇ、約５４ｍｇ、約５５ｍｇ、約５６ｍｇ、約５７ｍｇ、約５８ｍｇ、約５９ｍｇ、約６０ｍｇ、約７０ｍｇ、約８０ｍｇ、約９０ｍｇ、約１００ｍｇ、または約１１０ｍｇ以下の抗体を含有する。最も好ましくは、用量は、約５０ｍｇ以下の抗体を含有する。
【０１２３】
好ましい実施形態によれば、用量は、約１μｇ／ｋｇ、約１０μｇ／ｋｇ、約２０μｇ／ｋｇ、約２５μｇ／ｋｇ、約５０μｇ／ｋｇ、約１００μｇ／ｋｇ、約２００μｇ／ｋｇ、約２５０μｇ／ｋｇ、約５００μｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、約２ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ、約４ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ、約６ｍｇ／ｋｇ、約７ｍｇ／ｋｇ、約８ｍｇ／ｋｇ、約９ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ、または約１１ｍｇ／ｋｇ（用量を投与する哺乳動物の質量あたり）の抗体の量を含有する。最も好ましくは、用量は、約２０μｇ／ｋｇ、約２５μｇ／ｋｇ、約５０μｇ／ｋｇ、約１００μｇ／ｋｇ、約２００μｇ／ｋｇ、約２５０μｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇまたは約２ｍｇ／ｋｇを含有する。
【０１２４】
投薬レジメンは、従事者が達成したいと望む薬物動態学的な崩壊のパターンに依存し得る。たとえば、一部の実施形態では、１週間に１〜４回の投薬が企図される。より低い頻度の投薬を使用し得る。一部の実施形態では、用量は、２週間に１回、３週間に１回、４週間に１回、５週間に１回、６週間に１回、７週間に１回、８週間に１回、９週間に１回、１０週間に１回、１５週間に１回、２０週間に１回、２５週間に１回、またはより長い間隔で投与する。一部の実施形態では、用量は、１カ月に１回、２カ月に１回、３カ月に１回、４カ月に１回、５カ月に１回、６カ月に１回、またはより長い間隔で投与する。最も好ましくは、用量は８週間に１回投与する。この治療の進行は、慣用技術およびアッセイによって容易に監視される。投薬レジメンは経時的に変動する場合がある。
【０１２５】
本発明の目的のために、医薬品の適切な用量は、用いる抗体、処置する疼痛の種類および重篤度、薬剤を予防的または治療的目的のどちらで投与するのか、以前の治療、患者の病歴および薬剤に対する応答、ならびに担当医の判断に依存する。典型的には、所望の結果をもたらす用量に達するまで、臨床家が医薬品を投与する。用量は経験的に決定する、たとえば、医薬品の有効性を評価するために個体に漸増的な用量を与え、疼痛の数値化スケール（ＮＲＳ）の変化などの疼痛の指標を追跡し得る。
【０１２６】
用量および／または頻度は処置の経過と共に変動する場合がある。一般に、抗体半減期などの経験的考慮が用量の決定に寄与する。投与の頻度は治療の経過と共に決定および調整してよく、必ずしもではないが、一般に、疼痛の処置および／または抑制および／または寛解および／または遅延に基づく。一部の個体では、複数の用量が必要であり得る。投与の頻度は、治療の経過と共に決定および調整し得る。数日間以上にわたる繰り返し投与には、疼痛およびその重篤度次第では、所望の症状の抑制が起こるまで、または疼痛を低下させるために十分な治療的レベルに達するまで、処置を持続させる。
【０１２７】
液体組成物を含む医薬品の投与は、たとえば、レシピエントの生理的条件、投与の目的が治療的であるか予防的であるか、および当業者に知られている他の要因に応じて、連続的または断続的であることができる。液体組成物を含む医薬品の投与は、たとえば疼痛が発生する前、その間、またはその後の、事前に選択された期間にわたって本質的に連続的であってよく、または一連の間隔の用量であってよい。
【０１２８】
好ましくは、用量の投与は非経口投与であり、好ましくは、静脈内、動脈内、腹腔内、くも膜下腔内、脳室内、尿道内、胸骨内、頭蓋内、筋肉内、骨内、皮内および皮下から選択される。好ましくは、医薬品は、非経口投与用の単位用量の無菌的な液剤形態である。
【０１２９】
処置の有効性は、鎮痛を監視することによって評価することができる。鎮痛は緩和の経時変化によって特徴づけ得る。したがって、一部の実施形態では、緩和は投与後の約２４時間以内に観察する。他の実施形態では、緩和は投与後の約３６、４８、６０、７２時間または４日以内に観察する。一部の実施形態では、疼痛の頻度および／もしくは強度が減少する、および／または疼痛を患っている者の生活の質が増加する。一部の実施形態では、鎮痛は、医薬品の単一用量の後に、少なくとも約７日間、少なくとも約１４日間、少なくとも約２１日間、少なくとも約２８日間、少なくとも約３５日間、少なくとも約４２日間、少なくとも約４９日間、少なくとも約５６日間、少なくとも約６３日間、少なくとも約７０日間、少なくとも約７７日間、少なくとも約８４日間、少なくとも約１８０日間、またはそれより長い期間の間提供される。
【０１３０】
組合せ
任意の態様または実施形態による液体組成物は、特に哺乳動物における疼痛の処置において、別の薬理学的に活性のある化合物または２つ以上の他の薬理学的に活性のある化合物と有用に組み合わせてもよく、以下から選択される１つまたは複数の薬剤と同時に、連続的に、または別々に組み合わせて投与し得る：
（ｉ）オピオイド鎮痛剤、たとえば、モルヒネ、ヘロイン、ヒドロモルホン、オキシモルホン、レボルファノール、レバロルファン、メサドン、メペリジン、フェンタニル、コカイン、コデイン、ジヒドロコデイン、オキシコドン、ヒドロコドン、プロポキシフェン、ナルメフェン、ナロルフィン、ナロキソン、ナルトレキソン、ブプレノルフィン、ブトルファノール、ナルブフィンまたはペンタゾシン、
（ｉｉ）非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、たとえば、アスピリン、ジクロフェナク、ジフルシナル、エトドラク、フェンブフェン、フェノプロフェン、フルフェニサル、フルルビプロフェン、イブプロフェン、インドメタシン、ケトプロフェン、ケトロラック、メクロフェナム酸、メフェナム酸、ナブメトン、ナプロキセン、オキサプロジン、フェニルブタゾン、ピロキシカム、スリンダク、トルメチンもしくはゾメピラック、または薬学的に許容できるその塩、
（ｉｉｉ）バルビツレート鎮痛剤、たとえば、アモバルビタール、アプロバルビタール、ブタバルビタール、ブタビタール（ｂｕｔａｂｉｔａｌ）、メホバルビタール、メタルビタール、メトヘキシタール、ペントバルビタール、フェノバルチタール（ｐｈｅｎｏｂａｒｔｉｔａｌ）、セコバルビタール、タルブタール、テアミラール（ｔｈｅａｍｙｌａｌ）もしくはチオペンタールまたは薬学的に許容できるその塩、
（ｉｖ）鎮痛作用を有するベンゾジアゼピン、たとえば、クロルジアゼポキシド、クロラゼプ酸、ジアゼパム、フルラゼパム、ロラゼパム、オキサゼパム、テマゼパムもしくはトリアゾラムまたは薬学的に許容できるその塩、
（ｖ）鎮痛作用を有するＨ１拮抗剤、たとえば、ジフェンヒドラミン、ピリラミン、プロメタジン、クロルフェニルアミンもしくはクロルシクリジンまたは薬学的に許容できるその塩、
（ｖｉ）鎮痛剤、たとえば、グルテチミド、メプロバメート、メタカロンもしくはジクロラルフェナゾンまたは薬学的に許容できるその塩、
（ｖｉｉ）骨格筋弛緩剤、たとえば、バクロフェン、カリソプロドール、クロルゾキサゾン、シクロベンザプリン、メトカルバモールもしくはオルフレナジンまたは薬学的に許容できるその塩、
（ｖｉｉｉ）ＮＭＤＡ受容体拮抗剤、たとえば、デキストロメトルファン（（＋）−３−ヒドロキシ−Ｎ−メチルモルフィナン）やその代謝物デキストロルファン（（＋）−３−ヒドロキシ−Ｎ−メチルモルフィナン）、ケタミン、メマンチン、ピロロキノリンキノンもしくはシス−４−（ホスホノメチル）−２−ピペリジンカルボン酸または薬学的に許容できるその塩、
（ｉｘ）α−アドレナリン作用剤、たとえば、ドキサゾシン、タムスロシン、クロニジンまたは４−アミノ−６，７−ジメトキシ−２−（５−メタンスルホンアミド−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノール−２−イル）−５−（２−ピリジル）キナゾリン、
（ｘ）三環系抗鬱剤、たとえば、デシプラミン、イミプラミン、アミトリプチリンまたはノルトリプチリン、
（ｘｉ）抗痙攣剤、たとえば、カルバマゼピンまたはバルプロエート、
（ｘｉｉ）タキキニン（ＮＫ）拮抗剤、特にＮＫ−３、ＮＫ−２またはＮＫ−１拮抗剤、たとえば、（αＲ，９Ｒ）−７−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）ベンジル］−８，９，１０，１１−テトラヒドロ−９−メチル−５−（４−メチルフェニル）−７Ｈ−［１，４］ジアゾシノ［２，１−ｇ］［１，７］ナフトリジン−６−１３−ジオン（ＴＡＫ−６３７）、５−［［（２Ｒ，３Ｓ）−２−［（１Ｒ）−１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エトキシ−３−（４−フルオロフェニル）−４−モルホリニル］メチル］−１，２−ジヒドロ−３Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−オン（ＭＫ−８６９）、ラネピタント、ダピタントまたは３−［［２−メトキシ−５−（トリフルオロメトキシ）フェニル］メチルアミノ］−２−フェニル−ピペリジン（２Ｓ，３Ｓ）、
（ｘｉｉｉ）ムスカリン性拮抗剤、たとえば、オキシブチン、トルテロジン、プロピベリン、塩化トロプシウム（ｔｒｏｐｓｉｕｍ）またはダリフェナシン、
（ｘｉｖ）ＣＯＸ−２阻害剤、たとえば、セレコキシブ、ロフェコキシブまたはバルデコキシブ、
（ｘｖ）非選択的ＣＯＸ阻害剤（好ましくはＧＩ保護を有するもの）、たとえばニトロフルルビプロフェン（ＨＣＴ−１０２６）、
（ｘｖｉ）コールタール鎮痛剤、特にパラセタモール、
（ｘｖｉｉ）神経遮断剤、たとえばドロペリドール、
（ｘｖｉｉｉ）バニロイド受容体作用剤（たとえばレシンフェラトキシン（ｒｅｓｉｎｆｅｒａｔｏｘｉｎ））または拮抗剤（たとえばカプサゼピン）、
（ｘｉｘ）β−アドレナリン作用剤、たとえばプロプラノロール、
（ｘｘ）局所麻酔剤、たとえばメキシレチン、
（ｘｘｉ）コルチコステロイド、たとえばデキサメタゾン、
（ｘｘｉｉ）セロトニン受容体作用剤または拮抗剤、
（ｘｘｉｉｉ）コリン作動性（ニコチン性）鎮痛剤、
（ｘｘｉｖ）Ｔｒａｍａｄｏｌ（商標）、
（ｘｘｖ）ＰＤＥＶ阻害剤、たとえば、シルデナフィル、バルデナフィルまたはタラダフィル（ｔａｌａｄａｆｉｌ）、
（ｘｘｖｉ）α−２−デルタリガンド、たとえば、ガバペンチンまたはプレガバリン、および
（ｘｘｖｉｉ）カナビノイド。
【図面の簡単な説明】
【０１３１】
【図１】４０℃での５０ｍｇ／ｍＬの抗ＮＧＦ抗体：等張剤のスクリーニング研究からの％凝集（ＳＥＣによる）データの要約を示す図である。
【図２】４０℃での５０ｍｇ／ｍＬの抗ＮＧＦ抗体：等張剤のスクリーニング研究からの％断片（還元ＣＧＥによる）データの要約を示す図である。
【図３】１５回の凍結解凍サイクルに供した２２ｍｇ／ｍＬの抗ＮＧＦ抗体からの％凝集（ＳＥＣによる）データの要約を示す図である。
【図４】ヒスチジン緩衝液、ｐＨ６．０中のトレハロース、ＥＤＴＡ、ポリソルベート２０を含有する抗ＮＧＦ抗体Ｅ３配合物の、２．５、５、１０、２０および５０ｍｇ／ｍＬにおける長期安定性研究の、５℃での％凝集データ（ＳＥＣによる）を示す図である。
【図５】ヒスチジン緩衝液、ｐＨ６．０中のトレハロース、ＥＤＴＡ、ポリソルベート２０を含有する抗ＮＧＦ抗体Ｅ３配合物の、２．５、５、１０、２０および５０ｍｇ／ｍＬにおける長期安定性研究の、５℃での％断片化データ（還元ＣＧＥによる）を示す図である。
【図６】ヒスチジン緩衝液、ｐＨ６．０中のトレハロース、ＥＤＴＡ、ポリソルベート２０を含有する抗ＮＧＦ抗体Ｅ３配合物の、２．５、５、１０、２０および５０ｍｇ／ｍＬにおける長期安定性研究の、５℃での％酸化データを示す図である
【発明を実施するための形態】
【０１３２】
定義
本明細書中で使用する、抗体に関連する用語「配合物」または「組成物」とは、少なくとも１つの等張剤、少なくとも１つの緩衝液、少なくとも１つのキレート化剤、少なくとも１つの界面活性剤を含む薬学的に許容できる賦形剤と組み合わせた抗体を説明することを意味し、ｐＨは定義したとおりである。
【０１３３】
用語「医薬組成物」とは、活性成分の生物活性が有効であることを可能にする形態にある調製物をいう。
【０１３４】
「薬学的に許容できる賦形剤」（ビヒクル、添加剤）とは、対象に安全に投与して、用いる活性成分を有効用量で提供することを可能にするものである。本明細書中で使用する用語「賦形剤」または「担体」とは、一般的に薬物の希釈剤、ビヒクル、保存料、結合剤または安定化剤として使用される不活性物質をいう。本明細書中で使用する用語「希釈剤」とは、薬学的に許容できる（ヒトへの投与に安全かつ無毒性）溶媒をいい、本明細書中の液体配合物の調整に有用である。例示的な希釈剤には、それだけには限定されないが、滅菌水および静菌注射用水（ＢＷＦＩ）が含まれる。
【０１３５】
本明細書中で使用する用語「抗体」とは、特異的結合についてインタクトな抗体と競合する、インタクトな抗体または抗原結合部分をいう。一般に、Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、第７章（Ｐａｕｌ，Ｗ．編、第２版、Ｒａｖｅｎ  Ｐｒｅｓｓ、Ｎ．Ｙ．、（１９８９）を参照されたい。抗原結合部分は、組換えＤＮＡ技術またはインタクトな抗体の酵素的もしくは化学的切断によって産生し得る。一部の実施形態では、抗原結合部分には、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ、Ｆｖ、ｄＡｂ、および相補性決定領域（ＣＤＲ）断片、単鎖抗体（ｓｃＦｖ）、キメラ抗体、二重特異性抗体ならびにポリペプチドに特異的抗原結合を与えるために十分な抗体の少なくとも一部分を含有するポリペプチドが含まれる。Ｎ末端からＣ末端に、成熟軽鎖および重鎖可変ドメインはどちらもＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３およびＦＲ４の領域を含む。それぞれのドメインへのアミノ酸の割当ては、Ｋａｂａｔ、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．、（１９８７および１９９１））、ＣｈｏｔｈｉａおよびＬｅｓｋ、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、１９６：９０１〜９１７（１９８７）、またはＣｈｏｔｈｉａら、Ｎａｔｕｒｅ、３４２：８７８〜８８３（１９８９）の定義に従う。本明細書中で使用する用語「ポリペプチド」には、ネイティブまたは人工タンパク質、タンパク質断片およびタンパク質配列のポリペプチド類似体が包含される。ポリペプチドは単量体または多量体であり得る。
【０１３６】
本明細書中で使用するＦｄ断片とは、ＶＨおよびＣＨ１ドメインからなる抗体断片を意味し、Ｆｖ断片は抗体の単一アームのＶ１およびＶＨドメインからなり、ｄＡｂ断片（Ｗａｒｄら、Ｎａｔｕｒｅ、３４１：５４４〜５４６（１９８９））は１つのＶＨドメインからなる。
【０１３７】
用語「抗体」と共に使用する用語「またはその抗原結合部分」とは、アミノ末端および／またはカルボキシ末端の欠失を有するが、残りのアミノ酸配列が天然に存在する配列中の対応する位置と同一であるポリペプチドをいう。一部の実施形態では、断片の長さは少なくとも５、６、８または１０個のアミノ酸である。他の実施形態では、断片の長さは少なくとも１４、少なくとも２０、少なくとも５０、または少なくとも７０、８０、９０、１００、１５０もしくは２００個のアミノ酸である。
【０１３８】
本明細書中で使用する用語「モノクローナル抗体」とは、均一な抗体集団をいい、モノクローナル抗体は、抗原の選択的結合に関与するアミノ酸（天然に存在するものおよび天然に存在しないもの）からなる。モノクローナル抗体の集団は特異性が高く、単一の抗原部位に向けられている。用語「モノクローナル抗体」には、インタクトなモノクローナル抗体および完全長のモノクローナル抗体だけでなく、その断片（Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖなど）、単鎖（ＳｃＦｖ）、その突然変異体、抗体部分を含む融合タンパク質、ならびに所要の特異性の抗原認識部位および抗原と結合する能力を含む免疫グロブリン分子の任意の他の改変された立体配置も包含される。抗体の供給源またはそれを作製する様式（たとえば、ハイブリドーマ、ファージ選択、組換え発現、トランスジェニック動物によってなど）に関して限定されることを意図しない。
【０１３９】
単鎖抗体（ｓｃＦｃ）とは、ＶＬおよびＶＨ領域が対合して、それらが単一のタンパク質鎖として作製されることを可能にする合成リンカーを介して一価分子を形成する抗体である（Ｂｉｒｄら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２４２：４２３〜４２６（１９８８）およびＨｕｓｔｏｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８５：５８７９〜５８８３（１９８８））。
【０１４０】
二重特異性抗体とは二価の二重特異性抗体であり、ＶＨおよびＶＬドメインは単一のポリペプチド鎖上で発現されるが、同じ鎖上の２つのドメイン間の対合を許容するには短すぎるリンカーを用いることによって、別の鎖の相補的ドメインと対合することを強制して２つの抗原結合部位が生じる。
【０１４１】
「キメラ抗体」とは、重鎖および軽鎖のアミノ酸配列のそれぞれの一部分が、特定の種に由来するまたは特定のクラスに属する抗体中の対応する配列に相同的である一方で、鎖の残りのセグメントが別の抗体中の対応する配列と相同的である抗体をいう。典型的には、これらのキメラ抗体では、軽鎖および重鎖の可変領域はどちらも哺乳動物の１つの種に由来する抗体の可変領域を模倣する一方で、定常部分は別の種に由来する抗体中の配列に相同的である。そのようなキメラ体の１つの明らかな利点は、たとえば、可変領域を容易に入手可能な非ヒト宿主生物からのハイブリドーマまたはＢ細胞を用いて現在知られている供給源から好都合に誘導し、たとえばヒト細胞調製物に由来する定常領域と組み合わせることができることである。可変領域は調製が容易であるという利点を有しており、特異性はその供給源によって影響を受けないが、ヒトである定常領域は、抗体を注射した際にヒト対象において免疫応答を誘発させる可能性が、非ヒト源からの定常領域よりも低い。しかし、この定義はこの具体的な例に限定されない。
【０１４２】
抗体の「可変領域」とは、単独でまたは組み合わせた、抗体軽鎖の可変領域または抗体重鎖の可変領域をいう。重鎖および軽鎖の可変領域は、それぞれ、超可変領域としても知られる３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）によって接続された４つのフレームワーク領域（ＦＲ）からなる。それぞれの鎖中のＣＤＲは、ＦＲによって非常に近位に一緒に保たれ、他方の鎖からのＣＤＲと共に、抗体の抗原結合部位の形成に寄与する。ＣＤＲを決定する技術は少なくとも２つ存在する：（１）異種間の配列可変性に基づいた手法（すなわち、Ｋａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、（第５版、１９９１、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ  ＭＤ））、および（２）抗原−抗体の複合体の結晶学的研究に基づいた手法（Ｃｈｏｔｈｉａら、（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ、３４２：８７７、Ａｌ−ｌａｚｉｋａｎｉら、（１９９７）Ｊ．Ｍｏｌｅｃ．Ｂｉｏｌ．、２７３：９２７〜９４８））。本明細書中で使用するＣＤＲとは、いずれかの手法または両方の手法の組合せによって定義されたＣＤＲを指し得る。
【０１４３】
抗体の「定常領域」とは、単独でまたは組み合わせた、抗体軽鎖の定常領域または抗体重鎖定常領域をいう。
【０１４４】
本明細書中で使用する用語「Ｅ３」、「３Ｅ」、および「抗体Ｅ３」とは互換性があるように使用され、それぞれ配列番号１および配列番号２（ＷＯ２００４／０５８１８４号の図１Ａおよび１Ｂ）に示す重鎖および軽鎖可変領域のアミノ酸配列を含む抗体をいう。Ｅ３の作製および特徴づけは、その内容の全体が本明細書中に参考として組み込まれているＷＯ２００４／０５８１８４号の実施例に記載されている。一部の実施形態では、用語「Ｅ３」とは、（ａ）ＡＴＣＣ番号ＰＴＡ４８９３号またはＡＴＣＣ番号ＰＴＡ４８９４号の受託番号を有するＥ３軽鎖をコードしているポリヌクレオチド、および（ｂ）ＡＴＣＣ番号ＰＴＡ４８９５号の受託番号を有するＥ３重鎖をコードしているポリヌクレオチドによってコードされている免疫グロブリンをいう。
【０１４５】
本明細書中で使用する用語「単離した抗体」または「精製した抗体」とは、その起源または派生源のおかげで、以下のうちの１〜４つを有する抗体をいう：（１）そのネイティブ状態でそれに付随する、天然で会合している構成要素と会合していないこと、（２）同じ種からの他のタンパク質を含まないこと、（３）異なる種の細胞によって発現されること、または（４）天然に存在しないこと。
【０１４６】
抗体は、試料の少なくとも約６０〜７５％が単一の抗体種を示す場合に「実質的に純粋」、「実質的に均一」、または「実質的に精製した」である。実質的に純粋な抗体は、典型的には、約５０％、６０％、７０％、８０％または９０％ｗ／ｗの抗体試料を含み、より通例では約９５％、好ましくは９９％を超えて純粋であることができる。抗体の純度または均一性は、ポリアクリルアミドゲル電気泳動またはＨＰＬＣなどの当分野で周知のいくつかの手段によって試験し得る。
【０１４７】
本明細書中で使用する用語「ヒト抗体」には、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列に由来する可変および定常領域を有する抗体が含まれることを意図する。このヒト抗体の定義には、少なくとも１つのヒト重鎖ポリペプチドまたは少なくとも１つのヒト軽鎖ポリペプチドを含む抗体が含まれる。本発明のヒト抗体には、たとえばＣＤＲ中、特にＣＤＲ３中に、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列によってコードされていないアミノ酸残基（たとえば、ランダムまたはｉｎ  ｖｉｔｒｏ部位特異的突然変異誘発またはｉｎ  ｖｉｖｏ体細胞突然変異によって導入された突然変異）が含まれ得る。しかし、本明細書中で使用する用語「ヒト抗体」には、マウスなどの別の哺乳動物種の生殖系列に由来するＣＤＲ配列がヒトフレームワーク配列上に移植された抗体が含まれることを意図しない。
【０１４８】
本明細書中で使用する「ヒト化」抗体とは、キメラ免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖、またはその断片（Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２もしくは抗体の他の抗原結合部分配列など）であり、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小限の配列を含有する、非ヒト（たとえばネズミ）抗体の形態をいう。好ましくは、ヒト化抗体は、ヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）であり、レシピエントの相補性決定領域（ＣＤＲ）からの残基が、所望の特異性、親和性、および能力を有するマウス、ラット、またはウサギなどの非ヒト種（ドナー抗体）のＣＤＲからの残基によって置き換えられている。一部の例では、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク領域（ＦＲ）残基は、対応する非ヒト残基によって置き換えられている。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体中にも輸入されたＣＤＲまたはフレームワーク配列中にも見つからないが、抗体の性能をさらに洗練および最適化するために含められた残基を含み得る。一般に、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的にすべてを含み、ＣＤＲ領域のすべてまたは実質的にすべては、非ヒト免疫グロブリンのそれに対応し、ＦＲ領域のすべてまたは実質的にすべては、ヒト免疫グロブリンのコンセンサス配列のものである。また、ヒト化抗体は、最適には、免疫グロブリン定常領域またはドメイン（Ｆｃ）の少なくとも一部分、典型的にはヒト免疫グロブリンのものも含む。ＷＯ９９／５８５７２号に記載のように修飾されたＦｃ領域を有する抗体が好ましい。ヒト化抗体の他の形態は、元の抗体に関して変更されている１つまたは複数のＣＤＲ（ＣＤＲ  Ｌ１、ＣＤＲ  Ｌ２、ＣＤＲ  Ｌ３、ＣＤＲ  Ｈ１、ＣＤＲ  Ｈ２、またはＣＤＲ  Ｈ３）を有し、これらは、元の抗体からの１つまたは複数のＣＤＲ「に由来する」１つまたは複数のＣＤＲとも呼ばれる。
【０１４９】
モノクローナル抗体のヒト化には４つの一般的なステップが存在する。これらは、（１）開始抗体の軽鎖および重鎖可変ドメインのヌクレオチドおよび予測されたアミノ酸配列を決定するステップ、（２）ヒト化抗体を設計するステップ、すなわち、ヒト化プロセス中にどの抗体フレームワーク領域を使用するかを決定するステップ、（３）実際のヒト化方法／技術のステップ、ならびに（４）ヒト化抗体を形質移入および発現させるステップである。たとえば、米国特許第４，８１６，５６７号、第５，８０７，７１５号、第５，８６６，６９２号、第６，３３１，４１５号、第５，５３０，１０１号、第５，６９３，７６１号、第５，６９３，７６２号、第５，５８５，０８９号、および第６，１８０，３７０号を参照されたい。
【０１５０】
非ヒト免疫グロブリンに由来する抗原−結合部位を含むいくつかの「ヒト化」抗体分子が記載されており、ヒト定常ドメインと融合した、げっ歯類または改変されたげっ歯類のＶ領域およびその関連する相補性決定領域（ＣＤＲ）を有するキメラ抗体が含まれる。たとえば、Ｗｉｎｔｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ、３４９：２９３〜２９９（１９９１）、Ｌｏｂｕｇｌｉｏら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８６：４２２０〜４２２４（１９８９）、Ｓｈａｗら、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１３８：４５３４〜４５３８（１９８７）、およびＢｒｏｗｎら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．、４７：３５７７〜３５８３（１９８７）を参照されたい。他の参考文献は、適切なヒト抗体定常ドメインと融合させる前にヒト支持フレームワーク領域（ＦＲ）内に移植したげっ歯類ＣＤＲを記載している。たとえば、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら、Ｎａｔｕｒｅ、３３２：３２３〜３２７（１９８８）、Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２３９：１５３４〜１５３６（１９８８）、およびＪｏｎｅｓら、Ｎａｔｕｒｅ、３２１：５２２〜５２５（１９８６）を参照されたい。別の参考文献は、組換えによって張り合わせたげっ歯類フレームワーク領域によって支持されるげっ歯類ＣＤＲを記載している。たとえば欧州特許公開第０５１９５９６号を参照されたい。これらの「ヒト化」分子は、ヒトレシピエント中のこれらの部分の治療的用途の持続期間および有効性を制限する、げっ歯類抗ヒト抗体分子に対する望まない免疫学的応答を最小限にするように設計されている。たとえば、抗体定常領域は、免疫学的に不活性である（たとえば補体溶解を始動しない）ように操作することができる。ＰＣＴ公開ＷＯ９９／５８５７２号、ＵＫ特許出願第９８０９９５１．８号を参照されたい。やはり利用し得る抗体をヒト化する他の方法は、Ｄａｕｇｈｅｒｔｙら、Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．、１９：２４７１〜２４７６（１９９１）ならびに米国特許第６，１８０，３７７号、第６，０５４，２９７号、第５，９９７，８６７号、第５，８６６，６９２号、第６，２１０，６７１号、および第６，３５０，８６１号、また、ＰＣＴ公開ＷＯ０１／２７１６０号に開示されている。
【０１５１】
本明細書中で使用する用語「組換え抗体」には、組換え手段によって調製、発現、作製または単離したすべての抗体、たとえば、宿主細胞内に形質移入した組換え発現ベクターによって発現させた抗体、組換えコンビナトリアルヒト抗体ライブラリから単離した抗体、ヒト免疫グロブリン遺伝子にトランスジェニックな動物（たとえばマウス）から単離したまたは調製した抗体が含まれることを意図し、そのような組換えヒト抗体はｉｎ  ｖｉｔｒｏ突然変異誘発に供することができる。
【０１５２】
本明細書中で使用する用語「特異的に結合することができる」、「特異的に結合する」、または「優先的に結合する」とは、抗体が、≦１μＭ、好ましくは≦１ｎＭ、最も好ましくは≦１０ｐＭの解離定数で抗原と結合することをいう。抗体またはポリペプチドと「特異的に結合する」または「優先的に結合する」エピトープ（本明細書中で互換性があるように使用する）とは、当分野で十分に理解されている用語であり、そのような特異的または優先的な結合を決定する方法も当分野で周知である。分子は、別の細胞または物質と比較して、特定の細胞の物質とより頻繁に、より迅速に、より長く持続しておよび／またはより高い親和性で反応または会合する場合に、「特異的結合」または「優先的結合」を示すとされる。抗体は、他の物質と比較して、より高い親和性、結合力、より容易に、および／またはより長く持続して結合する場合に、標的と「特異的に結合する」または「優先的に結合する」。たとえば、ＮＧＦエピトープと特異的または優先的に結合する抗体とは、他のＮＧＦエピトープまたは非ＮＧＦエピトープとの結合と比較して、より高い親和性、結合力、より容易に、および／またはより長く持続してこのエピトープと結合する抗体である。また、この定義を読むことによって、たとえば、第１の標的と特異的または優先的に結合する抗体（または部分もしくはエピトープ）は、第２の標的と特異的または優先的に結合してもしなくてもよいことも理解されよう。したがって、「特異的結合」または「優先的結合」には、必ずしも排他的な結合を必要としない（ただし、含まれることができる）。
【０１５３】
本明細書中で使用する、抗体の「免疫特異的」結合とは、抗体の抗原結合部位とその抗体によって認識される特異的抗原との間で起こる、抗原特異的な結合の相互作用をいう（すなわち、ＥＬＩＳＡまたは他の免疫アッセイにおいて、抗体はタンパク質と反応し、非関連のタンパク質とは検出可能に反応しない）。
【０１５４】
抗体に関連して本明細書中で使用する用語「競合する」とは、第１の抗体とその同族エピトープとの結合の結果が、第２の抗体の非存在下における第１の抗体の結合と比較して、第２の抗体の存在下において検出可能に減少するように、第１の抗体またはその抗原結合部分が、第２の抗体またはその抗原結合部分との結合に十分に類似した様式でエピトープと結合することを意味する。代替として、第２の抗体とそのエピトープとの結合も第１の抗体の存在下で検出可能に減少する場合もあるが、そうでなくてもよい。言い換えると、第２の抗体が第１の抗体とその対応するエピトープとの結合を阻害することなしに、第１の抗体は第２の抗体とそのエピトープとの結合を阻害することができる。しかし、それぞれの抗体が他の抗体とその同族エピトープまたはリガンドとの結合を検出可能に阻害する場合、同程度、より高い程度、またはより低い程度かにかかわらず、抗体は、その対応するエピトープ（複数可）との結合について互いに「交差競合する」とされる。競合および交差競合抗体はどちらも本発明によって包含される。そのような競合または交差競合が起こる機構にかかわらず（たとえば、立体障害、コンホメーション変化、または共通エピトープもしくはその一部分との結合）、当業者は、本明細書中に提供した教示に基づいて、そのような競合および／または交差競合抗体が包含され、本明細書中に開示した方法に有用な場合があることを理解されよう。
【０１５５】
本明細書中で使用する用語「神経成長因子」および「ＮＧＦ」とは、ＮＧＦの生物活性の少なくとも一部を保持する神経成長因子およびその変異体をいう。本明細書中で使用するＮＧＦには、ヒト、イヌ科動物、ネコ科動物、ウマ科動物、またはウシ亜科動物を含めたすべての哺乳動物種のネイティブ配列ＮＧＦが含まれる。
【０１５６】
「ＮＧＦ受容体」とは、ＮＧＦによって結合または活性化されるポリペプチドをいう。ＮＧＦ受容体には、それだけには限定されないが、ヒト、イヌ科動物、ネコ科動物、ウマ科動物、霊長類、またはウシ亜科動物を含めた任意の哺乳動物種のＴｒｋＡ受容体およびｐ７５受容体が含まれる。
【０１５７】
本明細書中で使用する「抗ＮＧＦ抗体」（互換性があるように「抗ＮＧＦ拮抗抗体」と呼ばれる）とは、ＮＧＦと結合して、ＮＧＦの生物活性および／またはＮＧＦシグナル伝達によって媒介される下流経路（複数可）を阻害、遮断、拮抗、抑制または低下させることができる抗体をいう。一部の実施形態では、用語「抗ＮＧＦ拮抗抗体」には、以前に同定したすべての用語、名称、ならびに機能状態および特徴が包含され、ＮＧＦ自体、ＮＧＦ生物活性（それだけには限定されないが、手術後疼痛の任意の態様を媒介するその能力が含まれる）、または生物活性の結果が任意の有意義な度合で実質的に無効化、減少、または中和されている。一部の実施形態では、抗ＮＧＦ拮抗抗体はＮＧＦと結合して、ＮＧＦの二量体化ならびに／またはＮＧＦ受容体（ｐ７５および／もしくはｔｒｋＡなど）との結合を防止する。他の実施形態では、抗ＮＧＦ抗体はＮＧＦと結合して、ｔｒｋＡ受容体の二量体化および／またはｔｒｋＡの自己リン酸化を防止する。抗ＮＧＦ拮抗抗体の例を本明細書中に提供する。
【０１５８】
用語「同一性」とは、２つのアミノ酸配列または２つの核酸配列のパーセント「同一性」をいう。パーセント同一性は、一般に、最適な比較目的のために配列アラインメントし（たとえば、第２の配列との最良のアラインメントのために、第１の配列中にギャップを導入することができる）、対応する位置でのアミノ酸残基またはヌクレオチドを比較することによって決定される。「最良のアラインメント」とは、最高のパーセント同一性をもたらす、２つの配列のアラインメントである。パーセント同一性は、配列内の同一のアミノ酸残基またはヌクレオチドの数を比較することによって決定する（すなわち、％同一性＝同じ位置の数／位置の合計数×１００）。
【０１５９】
２つの配列間のパーセント同一性の決定は、当業者に知られている数学アルゴリズムを用いて達成することができる。２つの配列を比較するための数学アルゴリズムの例は、ＫａｒｌｉｎおよびＡｌｔｓｃｈｕｌ（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９０：５８７３〜５８７７のように改変した、ＫａｒｌｉｎおよびＡｌｔｓｃｈｕｌ（１９９０）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８７：２２６４〜２２６８のアルゴリズムである。Ａｌｔｓｃｈｕｌら、（１９９０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２１５：４０３〜４１０のＮＢＬＡＳＴおよびＸＢＬＡＳＴプログラムがそのようなアルゴリズムを組み込んでいる。ＮＢＬＡＳＴプログラムを用いて、スコア＝１００、ワード長＝１２でＢＬＡＳＴヌクレオチド検索を行なって、本発明の核酸分子に相同的なヌクレオチド配列を得ることができる。ＸＢＬＡＳＴプログラムを用いて、スコア＝５０、ワード長＝３でＢＬＡＳＴタンパク質検索を行なって、本発明のタンパク質分子と相同的なアミノ酸配列を得ることができる。比較目的でギャップ付きアラインメントを得るために、Ａｌｔｓｃｈｕｌら、（１９９７）Ｎｕｃｌｉｅｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．、２５：３３８９〜３４０２に記載のようにギャップ付きＢＬＡＳＴを利用することができる。あるいは、ＰＳＩ−Ｂｌａｓｔを用いて、分子間の距離関係を検出する反復検索を行なうことができる（同上）。ＢＬＡＳＴ、ギャップ付きＢＬＡＳＴ、およびＰＳＩ−Ｂｌａｓｔプログラムを利用する場合は、それぞれのプログラム（たとえばＸＢＬＡＳＴおよびＮＢＬＡＳＴ）の初期設定パラメータを使用することができる。ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖを参照されたい。配列の比較に利用する数学アルゴリズムの別の例は、ＭｙｅｒｓおよびＭｉｌｌｅｒ、ＣＡＢＩＯＳ（１９８９）のアルゴリズムである。ＧＣＧ配列アラインメントソフトウェアパッケージの一部であるＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）がそのようなアルゴリズムを組み込んでいる。当分野で知られている配列解析の他のアルゴリズムには、ＴｏｒｅｌｌｉｓおよびＲｏｂｏｔｔｉ（１９９４）Ｃｏｍｐｕｔ．Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｓｃｉ．、１０：３〜５に記載のＡＤＶＡＮＣＥおよびＡＤＡＭ、ならびにＰｅａｒｓｏｎおよびＬｉｐｍａｎ（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．、８５：２４４４〜８に記載のＦＡＳＴＡが含まれる。ＦＡＳＴＡ内で、ｋｔｕｐとは検索の感度および速度を設定する制御オプションである。
【０１６０】
「治療上有効な量」とは、必要な用量および期間で、抗ＮＧＦ抗体のコンテキストにおいては標的とした病理状態、たとえば炎症または疼痛の処置または予防が含まれる、所望の治療的結果を達成するために必要な量をいう。用量値は緩和させる状態の重篤度に応じて変動し得ることに注意されたい。さらに、任意の特定の対象において、具体的な投薬レジメンは、個々の必要性および組成物を投与する人または投与を監督する人の専門的判断に従って経時的に調整するべきであり、本明細書中で設定する用量範囲は例示的のみであり、特許請求した組成物の範囲または実施を限定することを意図しないことを理解されたい。同様に、抗体または抗体部分の治療上有効な量は、個体の病状、年齢、性別、および重量、個体において所望の応答を誘発する抗体または抗体部分の能力、ならびに抗体配合物の所望の投与経路などの要因に応じて変動し得る。また、治療上有効な量とは、抗体または抗体部分の任意の毒性または有害な効果よりも治療上有益な効果が勝るものである。
【０１６１】
本明細書中で使用する用語「処置」とは、治療処置および予防的（ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃまたはｐｒｅｖｅｎｔａｔｉｖｅ）手段をどちらもいい、その目的は、標的とした病理状態、たとえば疼痛を予防または遅延させる（軽減させる）ことである。処置を必要とする者には、既に状態を患っている者、状態を患い易い者、または状態を予防すべき者が含まれる。本明細書中で使用する「処置」とは、有益または所望の臨床的結果を得るための手法であり、それだけには限定されないが、疼痛の任意の態様を含めた疼痛に関連する１つまたは複数の症状の軽減、緩和（疼痛の持続期間の短縮、疼痛の感受性または感覚の低下など）のうちの１つまたは複数が含まれる。
【０１６２】
「有効量」の薬物、化合物、または医薬組成物とは、標的とした病理状態、たとえば疼痛感覚の緩和または低下などの臨床的結果を含めた有益または所望の効果をもたらすために十分な量である。有効量は１つまたは複数の投与で投与することができる。本発明の目的のために、有効量の薬物、化合物、または医薬組成物とは、標的とした病理状態、たとえば炎症または疼痛の強度を処置、寛解、低下させるために十分な量である。一部の実施形態では、「有効量」は安静時の疼痛（安静時疼痛）もしくは機械的に誘導された疼痛（動作後の疼痛が含まれる）、またはその両方を低下させる場合があり、有痛刺激の前、その間またはその後に投与し得る。臨床的なコンテキストで理解されるように、有効量の薬物、化合物、または医薬組成物は、別の薬物、化合物、または医薬組成物と併せてまたは併せずに達成し得る。したがって、「有効量」とは、１つまたは複数の治療剤の投与のコンテキストで考慮してもよく、１つまたは複数の他の薬剤と併せて望ましい結果が達成され得るまたは達成される場合は、単一の薬剤を有効量で与えることを考慮し得る。
【０１６３】
本明細書中で使用する「疼痛」とは、急性および慢性疼痛を含めた任意の病因学の疼痛、ならびに炎症性構成要素を有する任意の疼痛をいう。本明細書中で使用する「疼痛」には侵害受容および疼痛感覚が含まれ、疼痛は、疼痛スコアおよび当分野で周知の他の方法を用いて客観的および主観的に評価することができる。当分野で周知のように、疼痛は一次または二次疼痛であることができる。
【０１６４】
処置目的において本明細書中で使用する用語「対象」には、任意の対象、好ましくは標的とした病理状態、たとえば炎症または疼痛の処置を必要としている対象が含まれる。予防目的では、対象は任意の対象、好ましくは標的とした病理状態、たとえば炎症または疼痛を発生する危険性にある、またはその素因を有する対象である。用語「対象」には、生命体、たとえば原核生物および真核生物が含まれることを意図する。対象の例には、哺乳動物、たとえば、ヒト、イヌ、ウシ、ウマ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ネコ、マウス、ウサギ、ラット、およびトランスジェニック非ヒト動物が含まれる。本発明の具体的な実施形態では、対象はヒトである。
【０１６５】
本発明の要素またはその好ましい実施形態（複数可）を紹介する際、冠詞「ａ」、「ａｎ」、「ｔｈｅ」および「前記」とは、その要素が１つまたは複数存在することを意味することを意図する。用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含むこと（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、「含むこと（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」、「含めた（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」および「有する」とは、包括的であることを意図し、記載した要素以外の追加の要素が存在し得ることを意味する。
【０１６６】
本明細書中で互換性があるように使用する、本明細書中で使用する用語「ポリヌクレオチド」または「核酸」とは、リボヌクレオチドもしくはデオキシヌクレオチドまたはどちらかの種類のヌクレオチドの修飾された形態である、ヌクレオチドの多量体を意味し、１本鎖および二本鎖の形態であり得る。別段に指定しない限りは、「ポリヌクレオチド」または「核酸」配列にはその補体が包含される。本明細書中で使用する用語「単離したポリヌクレオチド」または「単離した核酸」とは、ゲノム、ｃＤＮＡ、もしくは合成起源のポリヌクレオチドまたはその何らかの組合せを意味し、その起源または派生源のおかげで、単離したポリヌクレオチドは以下のうちの１〜３つを有する：（１）「単離したポリヌクレオチド」と共に天然で見つかるポリヌクレオチドのすべてまたは一部分と会合していないこと、（２）それが天然で連結していないポリヌクレオチドと作動可能に連結していること、または（３）より大きな配列の一部として天然に存在しないこと。
【０１６７】
本明細書中で使用する用語「キレート化剤」とは、金属イオンと少なくとも１つの結合（たとえば、共有、イオン、または他のもの）を形成することができる賦形剤である。キレート化剤は、典型的には、そうでなければ不安定性を促進し得る種と錯化する安定化剤として液体組成物中で使用することができる多座配位リガンドである。
【０１６８】
本明細書中で使用する用語「緩衝剤（緩衝液）」とは、典型的にはその酸−塩基の共役構成要素の作用によって、液体抗体配合物がｐＨの変化に抵抗することを可能にする、添加する組成物である。緩衝液の濃度に言及する場合、示した濃度は、緩衝剤の遊離酸または遊離塩基形態のモル濃度を表すことを意図する。
【０１６９】
本明細書中で使用する用語「等張剤」または「等張化剤」とは、液体抗体配合物の浸透圧を調整することができる賦形剤をいう。特定の実施形態では、等張剤は、抗体配合物が対象の体組織の細胞と生理的に適合性を有するように、液体抗体配合物の浸透圧を等張に調整することができる。さらに他の実施形態では、「等張剤」は本明細書中に記載の抗体の安定性の向上に寄与し得る。「等張」な配合物とは、ヒト血液と本質的に同じ浸透圧を有するものである。等張な配合物は、一般に約２５０〜３５０ｍＯｓｍの浸透圧を有する。用語「低張」とは、ヒト血液よりも低い浸透圧を有する配合物を記載する。それに対応して、用語「高張」とは、ヒト血液よりも高い浸透圧を有する配合物を説明するために使用する。等張性は、たとえば蒸気圧または氷凍結型の浸透圧計を用いて測定することができる。等張剤は鏡像異性体（たとえばＬ−もしくはＤ−鏡像異性体）またはラセミ体、異性体、たとえば、α，α、またはβ，β、またはα，β、またはβ，αを含めた、αまたはβ、遊離酸または遊離塩基の形態、水和形態（たとえば一水和物）、あるいは無水形態であることができる。
【０１７０】
本明細書中で使用する用語「ポリオール」とは複数のヒドロキシル基を有する賦形剤をいい、糖（還元および非還元糖）、糖アルコールならびに糖酸が含まれる。
【０１７１】
本明細書中で使用する用語「界面活性剤」とは、液体抗体配合物の表面張力を変更することができる賦形剤をいう。特定の実施形態では、界面活性剤は液体抗体配合物の表面張力を低下させる。さらに他の実施形態では、「界面活性剤」は、配合物中の抗体のうちの任意のものの安定性の向上に寄与し得る。界面活性剤は、配合した抗体の凝集を低下させる、および／または配合物中の粒子の形成を最小限にする、および／または吸着を低下させ得る。また、界面活性剤は、凍結／解凍サイクル中またはその後の抗体の安定性も向上させ得る。
【０１７２】
本明細書中で使用する用語「サッカライド」とは、多価アルコールの誘導体である分子のクラスをいう。サッカライドは一般的に炭水化物と呼ばれ、様々な量の糖（サッカライド）単位、たとえば、単糖、二糖および多糖を含有し得る。
【０１７３】
本明細書中で使用する用語「還元糖」とは、金属イオンを還元させる、またはタンパク質中のリシンおよび他のアミノ基と共有的に反応することができるヘミアセタール基を含有する糖であり、「非還元糖」とは、還元糖のこれらの特性を有さない糖である。
【０１７４】
本明細書中で使用する「薬学的に許容できる担体」には、活性成分と組み合わせた場合に、成分が生物活性を保持することを可能にし、対象の免疫系と非反応性である、任意の材料が含まれる。例には、それだけには限定されないが、標準の医薬担体のうちの任意のもの、たとえば、リン酸緩衝溶液、水、油／水乳濁液などの乳濁液、および様々な種類の湿潤剤が含まれる。エアロゾルまたは非経口投与用の好ましい希釈剤は、リン酸緩衝溶液または通常（０．９％）生理食塩水である。そのような担体を含む組成物は、周知の慣用方法によって配合する（たとえば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、第１８版、Ａ．Ｇｅｎｎａｒｏ編、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．、Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ、１９９０およびＲｅｍｉｎｇｔｏｎ、Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ、第２０版、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ、２０００を参照）。
【０１７５】
本明細書中で使用する用語「Ｋｏｆｆ」とは、抗体が抗体／抗原の複合体から解離する解離速度定数をいうことを意図する。
【０１７６】
本明細書中で使用する用語「Ｋｄ」とは、抗体−抗原の相互作用の解離定数をいうことを意図する。ＮＧＦに対する抗体のＫｄまたは結合親和性を決定する一方法は、抗体の一官能性Ｆａｂ断片の結合親和性を測定することによる。一官能性Ｆａｂ断片を得るためには、抗体（たとえばＩｇＧ）をパパインで切断するか、組換えによって発現させることができる。抗体の抗ＮＧＦ  Ｆａｂ断片の親和性は、表面プラズモン共鳴（ＢＩＡｃｏｒｅ３０００（商標）表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）システム、ＢＩＡｃｏｒｅ，ＩＮＣ、Ｐｉｓｃａｗａｙ  ＮＪ）によって決定することができる。ＣＭ５チップは、供給者の指示に従って、Ｎ−エチル−Ｎ’−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイニド塩酸塩（ＥＤＣ）およびＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）を用いて活性化することができる。ヒトＮＧＦ（または任意の他のＮＧＦ）を１０ｍＭの酢酸ナトリウム、ｐＨ４．０で希釈し、０．００５ｍｇ／ｍＬの濃度で活性化したチップ上に注入することができる。個々のチップチャネルにわたって可変のフロー時間を用いて、２つの抗原密度範囲を得ることができる：詳細な動力学的研究には１００〜２００応答単位（ＲＵ）およびスクリーニングアッセイには５００〜６００ＲＵ。精製したＦａｂ試料段階希釈液（０．１〜１０×推定ＫＤ）を１分間、１００マイクロリットル／分で注入し、２時間までの解離時間を許容する。Ｆａｂタンパク質の濃度は、標準として既知の濃度のＦａｂ（アミノ酸分析によって決定）を用いたＥＬＩＳＡおよび／またはＳＤＳ−ＰＡＧＥ電気泳動によって決定する。動力学的会合速度（ｋｏｎ）および解離速度（ｋｏｆｆ）は、ＢＩＡｅｖａｌｕａｔｉｏｎプログラムを用いてデータを１：１のラングミュア結合モデルに当てはめることによって同時に得られる（Ｋａｒｌｓｓｏｎ，Ｒ．、Ｒｏｏｓ，Ｈ．、Ｆａｇｅｒｓｔａｍ，Ｌ．、Ｐｅｔｅｒｓｓｏｎ，Ｂ．、（１９９４）．Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、６．、９９〜１１０）。平衡解離定数（ＫＤ）値はｋｏｆｆ／ｋｏｎとして計算する。このプロトコルは、ヒトＮＧＦ、別の脊椎動物（一部の実施形態では哺乳動物）のＮＧＦ（マウスＮＧＦ、ラットＮＧＦ、霊長類ＮＧＦなど）を含めた任意のＮＧＦに対する抗体の結合親和性の決定に使用するため、ならびに関連ニューロトロフィンであるＮＴ３、ＮＴ４／５、および／またはＢＤＮＦなどの他のニューロトロフィンで使用するために適している。
【０１７７】
本発明で使用する抗ＮＧＦ拮抗抗体は、当分野で知られている方法を用いて同定または特徴づけることができ、ＮＧＦ生物活性の低下、寛解、または中和が検出および／または測定される。ＰＣＴ  ＷＯ０４／０６５５６０号に記載の方法を使用することができる。別の方法、たとえば、米国特許第５，７６６，８６３号および第５，８９１，６５０号に記載のキナーゼ受容体活性化（ＫＩＲＡ）アッセイを用いて、抗ＮＧＦ剤を同定することができる。
【０１７８】
また、抗ＮＧＦ拮抗抗体は、候補剤、たとえば抗体または抗ＮＧＦ抗体をＮＧＦと共にインキュベーションし、以下の特徴のうちの任意の１つまたは複数を監視することによっても同定することができる：（ａ）ＮＧＦと結合して、ＮＧＦの生物活性またはＮＧＦシグナル伝達機能によって媒介される下流経路を阻害すること、（ｂ）ＮＧＦ受容体の活性化（ＴｒｋＡの二量体化および／または自己リン酸化が含まれる）を阻害、遮断または減少させること、（ｃ）ＮＧＦのクリアランスを増加させること、（ｄ）疼痛を処置または予防すること、（ｅ）ＮＧＦの合成、産生または放出を阻害する（低下させる）こと。また、ＮＧＦの生物活性を遮断または中和する抗ＮＧＦ拮抗抗体の能力は、Ｈｏｎｇｏら、Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ、１９：２１５〜２２７（２０００）に記載の胚性ラット後根神経節生存バイオアッセイにおいて、候補剤がＮＧＦに媒介される生存を阻害する能力を監視することによっても評価することができる。
【０１７９】
疼痛の「発生率の低下」とは、重篤度の低下（たとえばオピエートを含めた、この状態に一般に使用される他の薬物および／もしくは療法の必要性および／もしくは量（たとえばそれへの曝露）の低下が含まれることができる）、持続期間の低下、ならびに／または頻度の低下（たとえば、個体における手術後疼痛までの時間を遅延または増加させることが含まれる）のうちの任意のものを意味する。当業者には理解されるように、個体は処置に対するその応答に関して変動する場合があり、したがって、たとえば、「個体において関節リウマチ疼痛または骨関節炎疼痛の発生率を低下させる方法」とは、そのような投与がその特定の個体においてそのような発生率の低下を引き起こす可能性が高いという、合理的な予想に基づいて抗ＮＧＦ拮抗抗体を投与することを反映する。
【０１８０】
疼痛または疼痛の１つもしくは複数の症状（関節リウマチ疼痛もしくは骨関節炎疼痛など）の「寛解」とは、抗ＮＧＦ拮抗抗体を投与しないことと比較して、疼痛の１つまたは複数の症状を軽減または向上させることを意味する。また、「寛解」には、症状の持続期間の短縮または低下も含まれる。
【０１８１】
疼痛または疼痛の１つもしくは複数の症状（関節リウマチ疼痛もしくは骨関節炎疼痛など）を「和らげる」とは、本発明による抗ＮＧＦ拮抗抗体で処置した個体または個体の集団における、手術後疼痛の１つまたは複数の望ましくない臨床徴候の程度の軽減を意味する。
【０１８２】
本明細書中で使用する、疼痛の発生の「遅延」とは、疼痛（手術後疼痛、関節リウマチ疼痛、または骨関節炎疼痛など）の進行を先送りにする、妨害する、遅らせる、減速させる、安定にする、および／または延期することを意味する。この遅延は、病歴および／または処置する個体に応じて様々な時間の長さであることができる。当業者には明らかなように、十分または有意な遅延には、個体が疼痛を発生しないという点で、事実上、予防が包含させる場合がある。症状の発生を「遅延させる」方法とは、方法を使用しない場合と比較して、所定のタイムフレーム内で症状が発生する確率を低下させる、および／または所定のタイムフレーム内で症状の程度を低下させる方法である。そのような比較は、典型的には、統計的に有意な数の対象を用いた臨床的研究に基づいている。
【０１８３】
「疼痛」とは、実際もしくは潜在的な組織損傷に関連する不快な感覚および感情の経験を意味すると受け取られるか、またはそのような損傷に関して記載される。疼痛は、異なる病態生理学によりいくつかの異なる領域に分類することができ、これらには侵害受容性、炎症性、神経因性の疼痛などが含まれる。いくつかの疼痛の種類は複数の病因論を有し、したがって複数の領域に分類することができることに注意されたい。たとえば、背痛、癌性疼痛はどちらも侵害受容性および神経因性の構成要素を有する。
【０１８４】
本明細書中で使用する「慢性疼痛」とは、慢性障害に関連する疼痛、すなわち、外傷、悪性疾患、疾患、感染症または根底にあるそのような障害の回復もしくは傷害の治癒を越えて持続する疼痛であって、多くの場合、根底にあるプロセスまたは障害によって予測されるよりも強い疼痛を意味すると受け取られる。また、慢性疼痛は、たとえば侵害受容性および／または神経因性疼痛および／または炎症性疼痛および／または癌性疼痛のどちらにも関与する、「混合病因疼痛」であり得る。その結果、慢性疼痛は、多くの場合、鎮痛に対する応答が予測不可能である。「二重機構疼痛」とは、末梢および中枢性感作のどちらによっても増幅および維持される疼痛を意味すると受け取られる。
【０１８５】
「炎症性疼痛」とは、組織傷害およびその結果の炎症プロセスに応答した疼痛を意味すると受け取られる。炎症性疼痛は、神経機能にも影響を与え得る反応性炎症プロセスを受ける、傷害が与えられた組織から生じ得る。炎症性疼痛は、生化学的媒介物質（ＰＧＥ２、ブラジキニン、サイトカイン、および神経ペプチド）と、疼痛伝達ニューロン上の受容体との結合およびその機能の変更に関与する場合があり、その興奮性が増加し、したがって疼痛感覚が増加する。用語、炎症性疼痛には慢性および急性疼痛が含まれる。
【０１８６】
「混合病因疼痛」とは、炎症性および／または神経因性および／または侵害受容性構成要素をどちらも含有する疼痛を意味すると受け取られる。「二重機構疼痛」とは、末梢および中枢性感作のどちらによっても増幅および維持される疼痛を意味すると受け取られる。
【０１８７】
「神経因性疼痛」とは、末梢または中枢神経系中のニューロンの損傷または機能不全によって生じる疼痛を意味すると受け取られる。
【０１８８】
「急性疼痛」および「急性炎症性疼痛」とは、侵害性の化学的、熱的または機械的刺激に対する正常な予測可能な適切な生理的応答、または、急性炎症および急性炎症性疼痛応答をもたらす組織傷害の恐れがあるもしくはそれを生じる疾患プロセスを意味すると受け取られ、そのような急性疼痛は、多くの場合、侵害受容性疼痛の構成要素を含む。一般に、急性疼痛の強度は刺激の強度に比例し、刺激が持続する限り、または組織傷害が治癒するまで持続する。急性炎症性疼痛は、一般に、傷害、侵襲性手順、外傷、感染症、免疫反応、アレルギー、過敏症および疾患に関連する。
【０１８９】
「侵害受容性疼痛」とは、侵害刺激が組織傷害をシグナル伝達または組織傷害を切迫することによって引き起こされる侵害受容器によって伝達される疼痛を意味すると受け取られる。侵害受容性疼痛は求心性ニューロンを介した脊髄の後角への疼痛シグナルの伝達を含み、二次ニューロンが高等中枢へとシグナルを伝達する。通常、侵害受容性疼痛は、それを誘起した状態が回復した後に回復し、また、急性疼痛の特徴でもある。
【０１９０】
「痛覚異常過敏」とは、疼痛に対する極端な感受性であり、多くの場合、身体の軟組織中の侵害受容器への損傷によって引き起こされる。これは、典型的には傷害に関連する病巣の形態で経験される場合があり、２つの亜型に分類される：（１）一次痛覚過敏、すなわち、損傷組織中で直接起こる疼痛の感受性、（２）二次痛覚異常過敏、すなわち、周辺の損傷していない組織中で起こる疼痛の感受性。また、これは、より拡散した、身体全体の形態として経験される場合もある。痛覚異常過敏は、急性または慢性炎症状態によって誘導される場合がある。そのような痛覚異常過敏の開発の鍵は、そのような炎症状態またはアレルギー性応答から生じる血小板凝集因子（ＰＡＦ）の作用であり、これは、免疫細胞が末梢神経系と相互作用して疼痛をもたらすサイトカインおよびケモカインを放出することを介して起こる。炎症状態は、長期増強と呼ばれる脊髄における増幅の形態と一致したパターンで疼痛線維の刺激を誘導することができ、脊髄におけるそのような増幅は痛覚異常過敏を生じる経路をもたらす。
【０１９１】
「アロディニア」とは、通常は有痛性でない刺激から生じる疼痛であり、そうでない場合は非侵害である刺激に対する誇張された応答であり、静的または動的アロディニアのいずれかであることができる、すなわち、動作に伴わずに自発的にまたは動作に伴って起こる。また、アロディニアは、刺激した領域以外の他の領域で認知される場合もあり、したがって、これは感覚異常である場合もある。これは、炎症状態、特に関節の炎症に一般的である。
【０１９２】
「体性痛」とは、皮膚または深部の組織から生じる疼痛を意味すると受け取られ、筋骨格組織中で起こる場合は「深部体性痛」と呼ばれる。「内臓痛」とは、胸部、腹部、または骨盤の内臓の浸潤、圧迫、伸長、または拡張の結果生じる疼痛受容体の活性化によって引き起こされる疼痛を意味すると受け取られる。
【０１９３】
本明細書中で使用する「疼痛」とは、急性および慢性疼痛を含めた任意の病因学の疼痛、ならびに炎症性構成要素を有する任意の疼痛をいう。疼痛の例には、手術後疼痛（ｐｏｓｔ−ｓｕｒｇｉｃａｌ）、手術後（ｐｏｓｔ−ｏｐｅｒａｔｉｖｅ）疼痛（歯痛が含まれる）、偏頭痛、頭痛および三叉神経痛、熱傷、創傷または腎結石に関連する疼痛、外傷（頭部外傷が含まれる）に関連する疼痛、神経因性疼痛、慢性腰痛などの背痛、関節リウマチなどの筋骨格障害に関連する疼痛、骨関節炎、強直性脊椎炎、血清陰性（非リウマチ）関節症、非関節リウマチおよび関節周囲障害に関連する疼痛、ならびに癌関連する疼痛（「突発疼痛」、末期癌に関連する疼痛および骨転移に関連するが含まれる）、末梢神経障害およびヘルペス後神経痛、間質性膀胱炎および／または有痛性膀胱症候群および／または膀胱痛症候群に関連する疼痛、慢性前立腺炎および／または慢性骨盤痛症候群に関連する疼痛、子宮内膜症および／または子宮筋腫に関連する疼痛が含まれる。炎症性構成要素を有する疼痛の例には、（上述の一部に加えて）リウマチ性疼痛、粘膜炎に関連する疼痛、および月経困難症が含まれる。
【０１９４】
「手術後疼痛」（「切開後」または「外傷後疼痛」と互換性があるように呼ばれる）とは、切創、穿刺、切開、裂傷、または個体の組織内の創傷などの外部の外傷に起因するまたはそれから生じる疼痛をいう（侵襲性または非侵襲性にかかわらず、すべての外科的処置に起因するものが含まれる）。本明細書中で使用する手術後疼痛には、外部の物理的な外傷を伴わずに起こる（起因または派生する）疼痛は含まれない。一部の実施形態では、手術後疼痛は内部または外部（末梢が含まれる）の疼痛であり、創傷、切創、外傷、裂傷または切開は、偶発的（外傷創傷の場合）または意図的（手術時の切開の場合）に起こり得る。本明細書中で使用する「疼痛」には侵害受容および疼痛の感覚が含まれ、疼痛は疼痛スコアおよび当分野で周知の他の方法を用いて客観的および主観的に評価することができる。本明細書中で使用する手術後疼痛にはアロディニア（すなわち、通常は非侵害である刺激に対する応答の増加）および痛覚異常過敏（すなわち、通常は侵害性または不快な刺激に対する応答の増加）が含まれ、これらは熱的または機械的（触角）な性質である場合がある。一部の実施形態では、疼痛は、熱感受性、機械的感受性および／または安静時疼痛によって特徴づけられる。一部の実施形態では、手術後疼痛は、機械的に誘導された疼痛または安静時疼痛を含む。他の実施形態では、手術後疼痛は安静時疼痛を含む。
【０１９５】
当分野で周知のように、疼痛は一次または二次疼痛であることができる。
【０１９６】
間質性膀胱炎および／または有痛性膀胱症候群および／または膀胱痛症候群に関連する疼痛は、下腹部（骨盤）疼痛、膀胱痛、恥骨上痛、膣痛、陰茎、精巣、陰嚢および会陰の疼痛、尿道痛、性交疼痛（ｄｙｓｐａｒｅｎｅｕｒｉａ）、膀胱が充満される際に増加し得る疼痛、圧力または不快感を含み得る。
【０１９７】
慢性前立腺炎および／または慢性骨盤痛症候群に関連する疼痛は、下腹部（骨盤）疼痛、胃下部疼痛、膀胱痛、恥骨上痛、陰茎、精巣、陰嚢および会陰の疼痛、尿道痛、性交疼痛、膀胱が充満される際に増加し得る疼痛、圧力または不快感、排尿障害、ならびに射精疼痛を含み得る。
【０１９８】
下部尿路症状（ＬＵＴ）は、貯蔵（刺激性）、排尿（閉塞性）および排尿後症状として定義され得る、３つの泌尿系症状の群を含み得る。貯蔵症状は尿意切迫、頻尿、夜間多尿、切迫尿失禁および緊張性尿失禁を含み、これらは過活動膀胱（ＯＡＢ）および良性前立腺肥大（ＢＰＨ）に関連する場合がある。排尿症状は躊躇、流れ不良、間欠、しぶり（ｓｔｒａｉｎｉｎｇ）および排尿障害を含む。排尿後症状は終末時滴下、排尿後滴下および残尿感を含む。
【０１９９】
子宮内膜症および／または子宮筋腫に関連する疼痛および／または他の症状は、月経困難症（ｄｙｓｍｅｎｏｒｒｈｏｅａ）、慢性無月経、骨盤痛、性交疼痛、排便障害（ｄｙｓｃｈｅｘｉａ）、月経過多、下腹部痛または背痛、不妊症および低妊孕率、排尿障害、腹部膨満および排尿時疼痛、嘔気、嘔吐および／または下痢を含み得る。また、症状は、子宮内膜症病変に関連する症状または腹膜腔の外に位置する子宮筋腫も含んでいてもよく、たとえば、喀血、気胸または血胸として現れる胸部子宮内膜症候群、および呼吸困難および肺腫瘤として現れる肺平滑筋腫が含まれる。
【０２００】
以下の実施例は、本発明を例示するために提供するが、限定するためではない。本発明で使用するための抗体を例示するためにＷＯ２００４／０５８１８４号の実施例に言及する。ＷＯ２００４／０５８１８４号の内容全体が本明細書中に参考として組み込まれている。
【実施例】
【０２０１】
（実施例１）
抗体の産生および精製
完全抗体を発現させるために、重鎖および軽鎖可変領域を２つの哺乳動物発現ベクター（軽鎖にはＥｂ．９１１．Ｅ３またはＥｂ．ｐｕｒ．９１１．３Ｅ、重鎖にはＤｂ．９１１．３Ｅ、本明細書中に記載）中にクローニングし、一過性発現のためにリポフェクタミンを用いてＨＥＫ２９３細胞内に形質移入した。抗体は標準方法を使用してタンパク質Ａを用いて精製した。
【０２０２】
抗ＮＧＦ抗体Ｅ３の作製、産生、精製および特徴づけは、その内容の全体が本明細書中に参考として組み込まれているＷＯ２００４／０５８１８４号の実施例に記載されている。Ｅ３軽鎖およびＥ３重鎖を組み込んだベクターはＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ、１０８０１  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｂｏｕｌｅｖａｒｄ、Ｍａｎａｓｓａｓ，Ｖｉｒｇｉｎｉａ、米国（ＡＴＣＣ）に寄託されている：
材料                                      ＡＴＣＣ受託番号    寄託日
Ｅｂ．９１１．３Ｅ          Ｅ３軽鎖      ＰＴＡ−４８９３    ２００３年１月８日
Ｅｂ．ｐｕｒ．９１１．３Ｅ  Ｅ３軽鎖      ＰＴＡ−４８９４    ２００３年１月８日
Ｄｂ．９１１．３Ｅ          Ｅ３重鎖      ＰＴＡ−４８９５    ２００３年１月８日
【０２０３】
これらの寄託に関する詳細は、その内容がその全体で本明細書中に参考として組み込まれているＷＯ２００４０５８１８４号に見つかる。
【０２０４】
哺乳動物細胞中での抗体Ｅ３の発現に使用するために、３つの哺乳動物発現ベクターを設計および構築した。
【０２０５】
ベクターＤｂ．９１１．３ＥはＥ３抗体の重鎖可変領域およびヒトＩｇＧ２ａ定常領域を含む発現ベクターであり、重鎖の一過性または安定発現に適している。Ｄｂ．９１１．３Ｅは以下の領域に対応するヌクレオチド配列からなる：ネズミサイトメガロウイルスプロモーター領域（ヌクレオチド１〜６１２）、合成イントロン（ヌクレオチド６１９〜１５０７）、ＤＨＦＲコード領域（ヌクレオチド７０７〜１２６７）、ヒト成長ホルモンシグナルペプチド（ヌクレオチド１５２５〜１６０２）、抗体３Ｅ重鎖可変領域（ヌクレオチド１６０３〜１９６５）、Ａ３３０Ｐ３３１からＳ３３０Ｓ３３１への突然変異を含有するヒト重鎖ＩｇＧ２ａ定常領域（アミノ酸の付番は野生型ＩｇＧ２ａ配列を参照、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、（１９９９）２９：２６１３〜２６２４を参照）、ＳＶ４０後期ポリアデニル化シグナル（ヌクレオチド２９７４〜３２１７）、ＳＶ４０エンハンサー領域（ヌクレオチド３２１８〜３４６３）、ファージｆ１領域（ヌクレオチド３５５１〜４００６）およびβラクタマーゼ（ＡｍｐＲ）コード領域（ヌクレオチド４４４３〜５３００）。Ｄｂ．９１１．３Ｅは２００３年１月８日にＡＴＣＣに寄託され、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−４８９５が割り当てられた。
【０２０６】
ベクターＥｂ．９１１．３ＥはＥ３抗体の軽鎖可変領域およびヒトカッパ鎖定常領域を含む発現ベクターであり、軽鎖の一過性発現に適している。Ｅｂ．９１１．３Ｅは以下の領域に対応するヌクレオチド配列からなる：ネズミサイトメガロウイルスプロモーター領域（ヌクレオチド１〜６１２）、ヒトＥＦ−１イントロン（ヌクレオチド６１９〜１１４２）、ヒト成長ホルモンシグナルペプチド（ヌクレオチド１１７３〜１１５０）、抗体Ｅ３軽鎖可変領域（ヌクレオチド１２５１〜１５７１）、ヒトカッパ鎖定常領域（ヌクレオチド１５７２〜１８９２）、ＳＶ４０後期ポリアデニル化シグナル（ヌクレオチド１９１０〜２１５３）、ＳＶ４０エンハンサー領域（ヌクレオチド２１５４〜２３９９）、ファージｆ１領域（ヌクレオチド２４８７〜２９４２）およびβラクタマーゼ（ＡｍｐＲ）コード領域（ヌクレオチド３３７９〜４２３６）。Ｅｂ．９１１．３Ｅは２００３年１月８日にＡＴＣＣに寄託され、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−４８９３が割り当てられた。
【０２０７】
ベクターＥｂ．ｐｕｒ．９１１．３ＥはＥ３抗体の軽鎖可変領域およびヒトカッパ定常領域を含む発現ベクターであり、軽鎖の安定発現に適している。Ｅｂ．ｐｕｒ．９１１．３Ｅは以下の領域に対応するヌクレオチド配列からなる：ネズミサイトメガロウイルスプロモーター領域（ヌクレオチド１〜６１２）、ヒトＥＦ−１イントロン（ヌクレオチド６１９〜１７５８）、ｐａｃ遺伝子（ピューロマイシンＲ）コード領域（ヌクレオチド７３９〜１２３５）、ヒトｈｓｐ７０  ５’非翻訳領域（ヌクレオチド１７７１〜１９７３）、ヒト成長ホルモンシグナルペプチド（ヌクレオチド１９８５〜２０６２）、抗体Ｅ３軽鎖可変領域（ヌクレオチド２０６３〜２３８３）、ヒトカッパ鎖定常領域（ヌクレオチド２３８４〜２７０４）、ＳＶ４０後期ポリアデニル化シグナル（ヌクレオチド２７２２〜２９６５）、ＳＶ４０エンハンサー領域（ヌクレオチド２９６６〜３２１１）、ファージｆ１領域（ヌクレオチド３２９９〜３６５４）およびβラクタマーゼ（ＡｍｐＲ）コード領域（ヌクレオチド４１９１〜５０４８）。Ｅｂ．ｐｕｒ．９１１．Ｅ３は２００３年１月８日にＡＴＣＣに寄託され、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−４８９４が割り当てられた。
【０２０８】
一過性の細胞発現を以下のように行なった：１５０ｍｍの皿中のＣＨＯおよびＨＥＫ２９３Ｔ細胞を、２５ｕｇのそれぞれのプラスミド（すなわち、１つのプラスミドは重鎖を含有し、１つのプラスミドは軽鎖を含有）で一過的に同時形質移入した。製造者の指示に従ってＤＮＡを１００ｕｌのｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ２０００（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）と混合した。ＤＮＡ−脂質の複合体を、血清または抗生物質を含まないＤＭＥＭ／Ｆ１２倍地中の細胞と５時間接触させた。このインキュベーション後、発現用に、培地を、添加剤を全く含まないＯｐｔｉ−ＭＥＭ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）に２日間交換した。抗体を含有する細胞上清を４回まで連続的に収集し、その都度続いて培地を交換した。ＭａｐＳｅｌｅｃｔタンパク質Ａ樹脂（Ａｍｅｒｓｈａｍ  ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  １７−５１９９−０２）を用いたアフィニティークロマトグラフィーによって上清を精製した。抗体を０．３Ｍのグリシン、０．６ＭのＮａＣｌ緩衝液、ｐＨ８中のタンパク質Ａ樹脂と結合させ、その後、０．１Ｍのシトレート緩衝液、ｐＨ３で溶出させた。抗体を含有する画分をすぐに１Ｍのトリス緩衝液、ｐＨ８．０で中和し、その後、抗体画分をＰＢＳ中で透析して濃縮した。抗体を選択し、以下のようにアッセイした。
【０２０９】
Ｂｉａｃｏｒｅアッセイ
抗ＮＧＦ  Ｆａｂおよびモノクローナル抗体の親和性を、ＢＩＡｃｏｒｅ３０００（商標）表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）システム（ＢＩＡｃｏｒｅ，ＩＮＣ、Ｐｉｓｃａｗａｙ  ＮＪ）を用いて決定した。ＣＭ５チップを、供給者の指示に従って、Ｎ−エチル−Ｎ’−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイニド（ｃａｒｂｏｄｉｉｎｉｄｅ）塩酸塩（ＥＤＣ）およびＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）を用いて活性化した。ヒトＮＧＦを１０ｍＭの酢酸ナトリウム、ｐＨ４．０で希釈し、０．００５ｍｇ／ｍＬの濃度で活性化したチップ上に注入した。個々のチップチャネルにわたって可変のフロー時間を用いて、２つの抗原密度範囲が得られた：詳細な動力学的研究には１００〜２００応答単位（ＲＵ）およびスクリーニングアッセイには５００〜６００ＲＵ。チップをエタノールアミンで遮断した。再生研究により、Ｐｉｅｒｃｅ溶出緩衝液（製品番号２１００４、Ｐｉｅｒｃｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ）および４ＭのＮａＣｌ（２：１）の混合物が、結合したＦａｂを有効に除去した一方で、チップ上のｈＮＧＦの活性が２００回を超える注入にわたって保たれたことが示された。ＨＢＳ−ＥＰ緩衝液（０．０１ＭのＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４、０．１５のＮａＣｌ、３ｍＭのＥＤＴＡ、０．００５％の界面活性剤Ｐ２９）をすべてのＢＩＡｃｏｒｅアッセイのランニング緩衝液として使用した。
【０２１０】
スクリーニングアッセイ
スクリーニングＢＩＡｃｏｒｅ  アッセイを、ライブラリからのＦａｂクローンの親和性を決定するために最適化した。少量の培養溶解物の上清を５０μｌ／分で２分間注入した。１０〜１５分の解離時間を用いて、ＢＩＡｅｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウェアを使用して単一指数解離速度（ｋｏｆｆ）を決定した。ライブラリを作製するために使用した鋳型（クローン８Ｌ２−６Ｄ５、ｋｏｆｆ１×１０−３ｓ−１）と同じ範囲のｋｏｆｆ速度を示した試料を確認のために注入し、より良好なｋｏｆｆ値を得るために４５分までの解離時間を許容した。向上した（より遅い）ｋｏｆｆ値を示すクローンを大スケールで発現させ、完全動力学的パラメータｋｏｎおよびｋｏｆｆを精製したタンパク質で決定した。このアッセイでは、約２倍以上である親和性の差異を検出することができた。
【０２１１】
親和性決定アッセイ
精製したＦａｂ試料の段階希釈液（０．１〜１０×推定ＫＤ）を１分間、１００μＬ／分で注入し、２時間までの解離時間を許容した。Ｆａｂタンパク質の濃度は、標準として既知の濃度のＦａｂ（アミノ酸分析によって決定）を用いたＥＬＩＳＡおよび／またはＳＤＳ−ＰＡＧＥ電気泳動によって決定した。動力学的会合速度（ｋｏｎ）および解離速度（ｋｏｆｆ）は、ＢＩＡｅｖａｌｕａｔｉｏｎプログラムを用いてデータを１：１のラングミュア結合モデルに当てはめることによって同時に得られた（Ｋａｒｌｓｓｏｎ，Ｒ．、Ｒｏｏｓ，Ｈ．、Ｆａｇｅｒｓｔａｍ，Ｌ．、Ｐｅｔｅｒｓｓｏｎ，Ｂ．、（１９９４）．Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、６．、９９〜１１０）。平衡解離定数（ＫＤ）値はｋｏｆｆ／ｋｏｎとして計算した。
【０２１２】
（実施例２）
緩衝液およびｐＨの分析
抗体の凝集および断片化に対する４つの異なる緩衝液の効果を評価するための研究を実施した。
【０２１３】
具体的には、抗ＮＧＦ抗体Ｅ３を含み、アセテート、スクシネート、ヒスチジンまたはシトレートで緩衝した４つの液体配合物を調製した。その後、配合物を５、２５および４０℃で保管し、抗体の凝集、断片化および酸化の測定を０、４、９および１３週間目に行なった。
【０２１４】
製造プロセスは以下のように要約することができる。緩衝液を調製し、ｐＨを調整し、滅菌濾過した（詳細には表２．１および２．２を参照）。抗体を濃縮し、その後、緩衝液を交換した。抗体をＵＶで分析し、その後、それぞれの緩衝液で２０ｍｇ／ｍＬまで希釈した。その後、２０ｍｇ／ｍＬの溶液を滅菌濾過した。最後に、無菌的な溶液を充填し、栓をし、オーバーシールでキャップした。
【０２１５】
凝集分析：
表２．２の抗体配合物を５、２５および４０℃の温度で０、４、９および１３週間保管した。
【０２１６】
サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）を用いてそれぞれの配合物を凝集について分析した。サイズ排除クロマトグラフィーは、ＴＳＫゲルＧ３０００ＳＷＸＬ−Ｇ２０００ＳＷＸＬカラム、移動相は０．２Ｍのリン酸ナトリウム緩衝液、ｐＨ７．０、流速は１ｍｌ／分、およびＵＶ検出は２１４ｎｍを用いて実施した。
【０２１７】
凝集レベルは、それぞれの配合物についてクロマトグラムのピーク下の面積を積分し、高分子量種のピーク下の積分した面積を全ピーク面積のパーセンテージとして報告することによって計算した。表２．３に見られるように、ヒスチジンで緩衝した配合物、特にｐＨ６のものが、最も低い凝集レベルを示し、次いで、順にアセテート、スクシネート、その後シトレートで緩衝した配合物であった。
【０２１８】
断片化分析：
表２．２の抗体配合物を５、２５および４０℃の温度で０、４、９および１３週間保管した。
【０２１９】
また、還元キャピラリーゲル電気泳動（ｒＣＧＥ）を用いてそれぞれの配合物を断片化についても分析した。タンパク質は、還元ＣＧＥ中でそのジスルフィド結合が切断された後、折り畳みがほどけて（変性して）「棒様」の構造となる。「還元」されたタンパク質はその重鎖および軽鎖へと分離し、断片化した種と共にそれが量子化される。還元ＣＧＥは、パーセント断片（％不純物）を定量するための信頼性のある方法であるとみなされている。配合物のそれぞれについて断片化のパーセンテージを関連する時点で測定した。断片化レベルは全バンド体積のパーセンテージとして計算した。表２．４に見られるように、ヒスチジンで緩衝した配合物、特にｐＨ６のものが、最も低い断片化レベルを示した。
【０２２０】
酸化分析：
抗ＮＧＦ抗体Ｅ３中のアミノ酸位置ＸおよびＹのメチオニン残基の酸化レベルを、５、２５および４０℃で０、４、９および１３週間保管した後、リシン−Ｃマッピング方法によって測定した。その後、試験したそれぞれの配合物の試料を、トリス緩衝液、ｐＨ８．０中のＬｙｃ−Ｃ酵素を用いて、標準の条件下で消化し、逆相高速液体クロマトグラフィーによって分析した。分離は、Ｇｒａｃｅ  Ｖｙｄａｅタンパク質Ｃ４分析カラムを使用して、水中に０．１％のＴＦＡおよびアセトニトリル中に０．０８５％のＴＦＡの勾配溶出を用いて行なった。抗ＮＧＦ抗体Ｅ３中のメチオニンアミノ酸のパーセント酸化を記録した。
【０２２１】
表２．５の結果は、シトレート配合物のパーセント酸化が最高であることを示している。
【０２２２】
【表１】
0005642683.tif 000002
【０２２３】
【表２】
0005642683.tif 000003
【０２２４】
【表３】
0005642683.tif 000004
【０２２５】
【表４】
0005642683.tif 000005
【０２２６】
【表５】
0005642683.tif 000006
【０２２７】
（実施例３）
等張剤の分析、トレハロースｖｓスクロースｖｓソルビトール
抗ＮＧＦ抗体Ｅ３配合物の安定性に対する等張剤、特にトレハロース、スクロースおよびソルビトールの効果を比較するための研究を実施した。
【０２２８】
具体的には、抗ＮＧＦ抗体Ｅ３およびトレハロース、スクロースまたはソルビトールを含む３つの液体配合物を、表３．１に記載のように調製した。その後、配合物を５、２５および４０℃で保管し、抗体の凝集、断片化および酸化の測定を２、４、８、１３および２６週間目に行なった。
【０２２９】
表３．１の配合物の製造プロセスは以下のように要約することができる。緩衝液を調製し、ｐＨを調整し、滅菌濾過した（詳細には表３．１を参照）。ストックの賦形剤溶液を調製し、滅菌濾過した。抗体を濃縮し、その後、緩衝液を交換した。濃縮した抗体をＵＶで分析し、その後、それぞれの緩衝液で５０ｍｇ／ｍＬまで希釈し、それぞれの賦形剤を所要の濃度まで合わせた。その後、５０ｍｇ／ｍＬの溶液を滅菌濾過した。最後に、無菌的な溶液を充填し、栓をし、オーバーシールした。すべての配合物は、６．０のｐＨおよび５０ｍｇ／ｍｌの抗ＮＧＦ抗体Ｅ３濃度を有する。
【０２３０】
凝集分析：
表３．１の抗体配合物を５、２５および４０℃の温度で２、４、８、１３および２６週間保管した。
【０２３１】
実施例２に記載の方法を用いて、それぞれの配合物を凝集について分析した。凝集レベルを計算し、図１に示す。
【０２３２】
断片化分析：
表３．１の抗体配合物を５、２５および４０℃の温度で２、４、８、１３および２６週間保管した。
【０２３３】
また、実施例２の方法を用いて、それぞれの配合物を断片化についても分析した。図２に見ることができるように、トレハロース配合物が１３週間の保管で最も低い断片化レベルを示した。
【０２３４】
【表６】
0005642683.tif 000007
【０２３５】
（実施例４）
等張剤のスクリーニング研究：トレハロースｖｓ．スクロース
抗ＮＧＦ抗体Ｅ３配合物の安定性および活性に対する等張剤、特にトレハロースおよびスクロースの効果を比較するための研究を実施した。希酸溶液中でのスクロースからフルクトースおよびグルコースへの加水分解は周知である。また、グルコース分子は、タンパク質のアミノ酸配列のリシン残基とランダムに結合することも知られている。これは糖化として知られる。したがって、酸性ｐＨに緩衝し、スクロースを含有するタンパク質配合物は、スクロースの加水分解、その後に糖化を経験する可能性がある。糖化されたタンパク質は糖化されていないタンパク質よりも容易に分解プロセスを受ける可能性がある。したがって、液体タンパク質配合物中のスクロースの存在は、その貯蔵寿命にわたってタンパク質の品質に有害な影響を与える可能性がある。これとは対照的に、トレハロースはそのような加水分解に基づいた分解を受けることは知られておらず、タンパク質配合物中での優先的な等張性改変剤である可能性がある。
【０２３６】
具体的には、抗ＮＧＦ抗体Ｅ３およびスクロースを含む６つの液体配合物ならびに抗ＮＧＦ抗体Ｅ３およびトレハロース含む２つの液体配合物を調製した。表４．１を参照されたい。その後、配合物を５、２５および４０℃で保管し、抗体の凝集および糖化の測定を２、４、８、１３および２６週間目に行なった。
【０２３７】
表４．１の配合物の製造プロセスは以下のように要約することができる。緩衝液を調製し、ｐＨを調整し、滅菌濾過した（詳細には表４．１を参照）。ストックの賦形剤溶液を調製し、滅菌濾過した。抗体を濃縮し、その後、緩衝液を交換した。濃縮した抗体をＵＶで分析し、その後、それぞれの緩衝液で１０ｍｇ／ｍｌまたは５０ｍｇ／ｍｌまで希釈し、それぞれの賦形剤を所要の濃度まで合わせた。その後、１０ｍｇ／ｍｌまたは５０ｍｇ／ｍｌの溶液を滅菌濾過した。最後に、無菌的な溶液を充填し、栓をし、オーバーシールした。
【０２３８】
凝集分析：
表４．１の抗体配合物を５、２５、４０および５０℃の温度で２、４、８、１３および２６週間保管した。
【０２３９】
実施例２に記載のように、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）を用いてそれぞれの配合物を凝集について分析した。計算した凝集レベルを表４．２で比較し、トレハロースでは、調査した同じ抗体濃度について、スクロースと比較して同等に低いまたはそれよりも低い凝集レベルが実証されたことが示された。
【０２４０】
糖化分析：
表４．１によるスクロースまたはトレハロース等張剤のいずれかを含む配合物の試料（１０ｍｇ／ｍｌの抗体、１０ｍＭのヒスチジン、ｐＨ６．０）について、配合物を２５、４０および５０℃で０、２、４、８および１３週間保管した後、抗ＮＧＦ抗体Ｅ３中のリシン残基の糖化レベルを質量分析マッピング方法によって測定した。糖化は等張剤の加水分解の速度に比例していることが判明した。トレハロースの加水分解は実証されておらず、したがって、配合物の抗体の糖化が回避されるため、抗体配合物にはトレハロースがスクロースよりも好ましい等張剤であり、スクロースでは２５℃で１０４週間保管した配合物において１％〜２％の加水分解が実証された。
【０２４１】
【表７】
0005642683.tif 000008
【０２４２】
【表８】
0005642683.tif 000009
【０２４３】
【表９】
0005642683.tif 000010
【０２４４】
（実施例５）
界面活性剤およびポリマー安定化剤の分析
抗ＮＧＦ抗体Ｅ３配合物の安定性に対する界面活性剤およびポリマー安定化剤、特にＰＳ２０、ＰＳ８０、ＰＥＧ３３５０、ＰＥＧ３３５０＋ＰＳ２０の効果を比較するための研究を実施した。
【０２４５】
具体的には、抗ＮＧＦ抗体Ｅ３およびＰＳ２０、ＰＳ８０、ＰＥＧ３３５０、ＰＥＧ３３５０＋ＰＳ２０を含む４つの液体配合物を、表５．１に記載のように調製した。その後、配合物を５、２５および４０℃で保管し、抗体の凝集、断片化および酸化の測定を２、４、８、１３および２６週間目に行なった。
【０２４６】
すべての配合物は、６．０のｐＨおよび５０ｍｇ／ｍｌの抗ＮＧＦ抗体Ｅ３濃度を有していた。表５．１の配合物の製造プロセスは以下のように要約することができる。緩衝液を調製し、ｐＨを調整し、滅菌濾過した（詳細には表５．１を参照）。ストックの賦形剤溶液を調製し、滅菌濾過した。抗体を濃縮し、その後、緩衝液を交換した。濃縮した抗体をＵＶで分析し、その後、それぞれの緩衝液で５０ｍｇ／ｍｌまで希釈し、それぞれの賦形剤を所要の濃度まで合わせた。その後、５０ｍｇ／ｍｌの溶液を滅菌濾過した。最後に、無菌的な溶液を充填し、栓をし、オーバーシールした。表５．２および５．３に結果を報告する。
【０２４７】
凝集分析：
表５．１の抗体配合物を５、２５および４０℃の温度で２、４、８、１３および２６週間保管した。
【０２４８】
実施例２に記載のように、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）を用いてそれぞれの配合物を凝集について分析した。計算した凝集レベルを表５．２で比較し、０．２ｍｇ／ｍｌの濃度のＰＳ２０では、調査したＰＳ８０の０．２ｍｇ／ｍｌおよびＰＥＧ３３５０の１ｍｇ／ｍｌと比較して、同等の凝集レベルが実証されたことが示された。０．１ｍｇ／ｍｌの濃度のＰＳ２０でも同等の結果が実証された（データは４０℃）。
【０２４９】
断片化分析：
表５．１の抗体配合物を５、２５および４０℃の温度で２、４、８、１３および２６週間保管した。
【０２５０】
実施例２の方法を用いて、それぞれの配合物を断片化について分析した。４０℃の試料から収集したデータを表５．３に示し、０．２ｍｇ／ｍｌの濃度のＰＳ２０では、調査したＰＳ８０の０．２ｍｇ／ｍｌおよびＰＥＧ３３５０の１ｍｇ／ｍｌと比較して、同等の断片化レベルが実証されたことが示された。０．１ｍｇ／ｍｌの濃度のＰＳ２０でも同等の結果が実証されることが示された。
【０２５１】
【表１０】
0005642683.tif 000011
【０２５２】
【表１１】
0005642683.tif 000012
【０２５３】
【表１２】
0005642683.tif 000013
【０２５４】
（実施例６）
抗酸化剤の分析
抗ＮＧＦ抗体Ｅ３配合物の安定性に対する抗酸化剤、特にメチオニンの効果を比較するための研究を実施した。
【０２５５】
具体的には、メチオニンを含むおよび含まない、抗ＮＧＦ抗体Ｅ３を含む９つの液体配合物を調製した。すべての配合物は、６．０のｐＨ、ならびに１０または５０ｍｇ／ｍｌの抗ＮＧＦ抗体Ｅ３濃度、８４ｍｇ／ｍｌのトレハロースまたはスクロースおよび０．１ｍｇ／ｍｌのＰＳ２０、１０ｍＭのヒスチジンを有し、０．０５ｍｇ／ｍｌのＥＤＴＡを含むまたは含まない。
【０２５６】
配合物の製造プロセスは以下のように要約することができる。緩衝液を調製し、ｐＨを調整し、滅菌濾過した。ストックの賦形剤溶液を調製し、滅菌濾過した。抗体を濃縮し、その後、緩衝液を交換した。濃縮した抗体をＵＶで分析し、その後、それぞれの緩衝液で１０または５０ｍｇ／ｍｌまで希釈し、それぞれの賦形剤を所要の濃度まで合わせた。その後、１０ｍｇ／ｍｌまたは５０ｍｇ／ｍｌの溶液を滅菌濾過した。最後に、無菌的な溶液を充填し、栓をし、オーバーシールした。
【０２５７】
その後、配合物を５、２５および４０℃で保管し、抗体の凝集、断片化および酸化の測定を２、４、８、１３、２６および５２週間目に行なった。
【０２５８】
凝集分析：
抗体配合物を５、２５および４０℃の温度で０、８、１３、２６および５２週間保管した。
【０２５９】
実施例２に記載のように、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）を用いてそれぞれの配合物を凝集について分析した。計算した凝集レベルを比較し、メチオニンを含むまたは含まない、５または２５℃で２６週間保管した試料で有意に異ならず、メチオニンの存在は凝集に対して識別可能な効果を有さないことが判明した。
【０２６０】
断片化分析：
抗体配合物を５、２５および４０℃の温度で０、８、１３および２６週間保管し、断片化の測定を２６週間目に行なった。
【０２６１】
実施例２の方法を用いて、それぞれの配合物を断片化について分析した。計算した断片化レベルを比較し、メチオニンを含むまたは含まない、５または２５℃で２６週間保管した試料で有意に異ならず、メチオニンの存在は断片化に対して識別可能な効果を有さないことが判明した。
【０２６２】
酸化分析：
抗ＮＧＦ抗体Ｅ３中のアミノ酸位置ＸおよびＹのメチオニン残基の酸化レベルを、５、２５および４０℃で０、１３、２６および５２週間保管した後、リシン−Ｃマッピング方法によって測定した。実施例２に記載のように抗ＮＧＦ抗体Ｅ３中のメチオニンアミノ酸のパーセント酸化を記録した。
【０２６３】
表６．１の結果は、長期の保管下では、抗体のパーセント酸化がメチオニンの存在によって低下したことを示す。
【０２６４】
【表１３】
0005642683.tif 000014
【０２６５】
（実施例７）
トレハロースを含むまたは含まない凍結解凍の安定性研究
５０ｍｇ／ｍｌの抗ＮＧＦ抗体Ｅ３、１０ｍＭのヒスチジン緩衝液、ｐＨ６．０、および８４ｍｇ／ｍｌのトレハロースを含む抗体配合物を調製し、トレハロースを欠く同一の試料を調製した。試料を４回までの凍結および解凍サイクルに供し、試料の凝集を決定した。凍結解凍サイクルは、７２時間の−７０℃での凍結および４８時間の５℃での解凍である。
【０２６６】
実施例２に記載のように、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）を用いてそれぞれの配合物を凝集について分析した。計算した凝集レベルを表７．１で比較し、トレハロースを含む試料は抗体の凝集に対して凍結解凍の効果からの完全な保護をもたらすことが示される。トレハロースを含む試料は、経時的に凝集レベルの認識可能な増加を示さない。
【０２６７】
【表１４】
0005642683.tif 000015
【０２６８】
（実施例８）
トレハロースを含む抗ＮＧＦ抗体Ｅ３配合物の複数の凍結解凍の安定性
２２ｍｇ／ｍｌの抗ＮＧＦ抗体Ｅ３、１０ｍＭのヒスチジン緩衝液、ｐＨ６．０、および８４ｍｇ／ｍｌのトレハロース、０．０５ｍｇ／ｍＬのＥＤＴＡ二ナトリウムおよび０．１ｍｇ／ｍＬのポリソルベート２０を含む抗体配合物（１１２７４６−１２４および１１２７４６−１２５）を調製した。試料を１５回までの凍結および解凍サイクルに供し、試料の凝集を決定した。
【０２６９】
実施例２に記載のように、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）を用いてそれぞれの配合物を凝集について分析した。計算した凝集レベルを図３で比較し、トレハロースを含むすべての試料が抗体の凝集に対して凍結解凍の効果からの完全な保護をもたらすことが示される。トレハロースを含む試料は、経時的に凝集レベルの認識可能な増加を示さない。
【０２７０】
（実施例９）
１０および５０ｍｇ／ｍＬの抗ＮＧＦ抗体Ｅ３での長期安定性研究：安定化剤としてのトレハロースの効果
１０ｍｇ／ｍｌの抗ＮＧＦ抗体Ｅ３、１０ｍＭのヒスチジン緩衝液、ｐＨ６．０、および８４ｍｇ／ｍｌのトレハロースを含む抗体配合物を調製し、トレハロースを欠く同一の試料を調製した。研究した試料の詳細は表９．１に示す。試料を５、２５および４０℃の温度で２、４、８、１３、２６および５２週間保管し、試料の凝集を決定した。実施例２に記載のように、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）を用いてそれぞれの配合物を凝集について分析した。収集したデータにより、４０℃の加速条件での保管の際、トレハロースを含む試料は抗体の凝集に対する効果からの高レベルの保護をもたらすことが示された。
【０２７１】
【表１５】
0005642683.tif 000016
【０２７２】
【表１６】
0005642683.tif 000017
【０２７３】
（実施例１０）
ヒスチジン緩衝液、ｐＨ６．０中のトレハロース、ＥＤＴＡ、ポリソルベート２０を含有する抗ＮＧＦ抗体Ｅ３配合物の、２．５、５、１０、２０および５０ｍｇ／ｍＬにおける長期安定性研究
２．５、または５または１０または２０または５０ｍｇ／ｍＬの抗ＮＧＦ抗体Ｅ３、１０ｍＭのヒスチジン緩衝液、ｐＨ６．０、および８４ｍｇ／ｍｌのトレハロース、０．０５ｍｇ／ｍＬのＥＤＴＡおよび０．１ｍｇ／ｍＬのポリソルベート２０を含む抗体配合物を調製した。試料を５〜８℃の温度で２４カ月までおよびそれ以上保管し、試料の凝集、断片化、酸化を決定した。
【０２７４】
データを収集し、図４、５、および６に表し、２．５、５、１０、２０または５０ｍｇ／ｍＬのｍＡｂ濃度の抗ＮＧＦ抗体Ｅ３の前記配合物は５２週間まで安定であることが示されている。
【０２７５】
本発明による液体抗体組成の一例は、
配列番号１の可変重鎖配列および配列番号２の可変軽鎖配列を含む、約２．５ｍｇ／ｍｌ、５ｍｇ／ｍｌ、１０ｍｇ／ｍｌ、２０ｍｇ／ｍｌ、２２ｍｇ／ｍｌまたは約５０ｍｇ／ｍｌのうちの任意のものの抗体、
約１０ｍＭのヒスチジン緩衝液、
約８４ｍｇ／ｍｌのトレハロース二水和物、
約０．０１重量／体積のポリソルベート２０、
約０．００５％のＥＤＴＡ二ナトリウム、
であり、ｐＨは６．０±０．２である。液体抗体組成の全体積は好ましくは約１ｍｌである。
【０２７６】
抗体配列
重鎖可変領域Ｅ３（カバットＣＤＲに下線を引き、コチアＣＤＲを太字かつ斜体にした）
ＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＦＳＬＩＧＹＤＬＮＷＩＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＩＧＩＩＷＧＤＧＴＴＤＹＮＳＡＶＫＳＲＶＴＩＳＫＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＧＧＹＷＹＡＴＳＹＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳ（配列番号１）
【０２７７】
軽鎖可変領域Ｅ３（カバットＣＤＲに下線を引き、コチアＣＤＲを太字かつ斜体にした）
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＳＩＳＮＮＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＹＴＳＲＦＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣＱＱＥＨＴＬＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲＴ（配列番号２）
【０２７８】
Ｅ３重鎖伸長ＣＤＲ
ＣＤＲＨ１：ＧＦＳＬＩＧＹＤＬＮ（配列番号３）
ＣＤＲＨ２：ＩＩＷＧＤＧＴＴＤＹＮＳＡＶＫＳ（配列番号４）
ＣＤＲＨ３：ＧＧＹＷＹＡＴＳＹＹＦＤＹ（配列番号５）
【０２７９】
Ｅ３軽鎖伸長ＣＤＲ
ＣＤＲＬ１：ＲＡＳＱＳＩＳＮＮＬＮ（配列番号６）
ＣＤＲＬ２：ＹＴＳＲＦＨＳ（配列番号７）
ＣＤＲＬ３：ＱＱＥＨＴＬＰＹＴ（配列番号８）
【０２８０】
マウスモノクローナル抗体９１１伸長ＣＤＲ
９１１重鎖伸長ＣＤＲ
ＣＤＲＨ１：ＧＦＳＬＩＧＹＤＩＮ（配列番号９）
ＣＤＲＨ２：ＭＩＷＧＤＧＴＴＤＹＮＳＡＬＫＳ（配列番号１０）
ＣＤＲＨ３：ＧＧＹＹＹＧＴＳＹＹＦＤＹ（配列番号１１）
【０２８１】
９１１軽鎖伸長ＣＤＲ
ＣＤＲＬ１：ＲＡＳＱＤＩＳＮＨＬＮ（配列番号１２）
ＣＤＲＬ２：ＹＩＳＲＦＨＳ（配列番号１３）
ＣＤＲＬ３：ＱＱＳＫＴＬＰＹＴ（配列番号１４）
【０２８２】
Ｅ３重鎖アミノ酸配列（完全）
ＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＦＳＬＩＧＹＤＬＮＷＩＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＩＧＩＩＷＧＤＧＴＴＤＹＮＳＡＶＫＳＲＶＴＩＳＫＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＧＧＹＷＹＡＴＳＹＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＮＦＧＴＱＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＴＶＥＲＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＦＲＶＶＳＶＬＴＶＶＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＴＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＭＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号１６）
【０２８３】
３Ｅ軽鎖アミノ酸配列（完全抗体）
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＳＩＳＮＮＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＹＴＳＲＦＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣＱＱＥＨＴＬＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号１７）
【０２８４】
他追加のＣＤＲ配列は以下と呼ぶ：
ＲＡＳＱＳＩＳＮＮＬＮ（配列番号１８）
ＹＴＳＲＦＨＳ（配列番号１９）
ＧＦＳＬＩＧＹＤＬＮ（配列番号３０）
ＩＩＷＧＤＧＴＴＤＹＮＳＡＶ（配列番号３１）
ＱＱＥＨＴＬＰＹＴ（配列番号５５）
ＧＧＹＷＹＡＴＳＹＹＦＤＹ（配列番号５６）
ＱＱＥＳＴＬＰＹＴ（配列番号５７）
ＧＧＹＷＹＳＴＳＹＹＦＤＹ（配列番号５８）
ＱＱＥＫＴＬＰＹＴ（配列番号５９）
ＧＧＹＹＹＡＴＳＹＹＦＤＹ（配列番号６０）
ＱＱＥＲＴＬＰＹＴ（配列番号６１）
ＧＧＹＷＹＡＴＳＹＹＦＤＹ（配列番号６２）
ＱＱＥＲＴＬＰＹＴ（配列番号６３）
ＧＧＹＹＹＡＴＳＹＹＦＤＹ（配列番号６４）
【０２８５】
３Ｅ重鎖ヌクレオチド配列（完全抗体）
ＣＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＣＡＧＧＡＧＴＣＴＧＧＣＣＣＡＧＧＡＣＴＧＧＴＧＡＡＧＣＣＴＴＣＣＧＡＧＡＣＣＣＴＧＴＣＣＣＴＣＡＣＣＴＧＣＡＣＴＧＴＣＴＣＴＧＧＧＴＴＣＴＣＡＣＴＴＡＴＣＧＧＣＴＡＴＧＡＴＣＴＴＡＡＣＴＧＧＡＴＣＣＧＡＣＡＧＣＣＴＣＣＡＧＧＧＡＡＧＧＧＡＣＴＧＧＡＧＴＧＧＡＴＴＧＧＧＡＴＴＡＴＣＴＧＧＧＧＴＧＡＴＧＧＡＡＣＣＡＣＡＧＡＣＴＡＴＡＡＴＴＣＡＧＣＴＧＴＣＡＡＡＴＣＣＣＧＣＧＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＡＡＡＡＧＡＣＡＣＣＴＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＧＴＴＣＴＣＣＣＴＧＡＡＧＣＴＧＡＧＣＴＣＴＧＴＧＡＣＣＧＣＣＧＣＧＧＡＣＡＣＧＧＣＣＧＴＧＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＧＡＧＡＧＧＡＧＧＴＴＡＴＴＧＧＴＡＣＧＣＣＡＣＴＡＧＣＴＡＣＴＡＣＴＴＴＧＡＣＴＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＣＡＣＣＣＴＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡＧＣＣＴＣＣＡＣＣＡＡＧＧＧＣＣＣＡＴＣＴＧＴＣＴＴＣＣＣＡＣＴＧＧＣＣＣＣＡＴＧＣＴＣＣＣＧＣＡＧＣＡＣＣＴＣＣＧＡＧＡＧＣＡＣＡＧＣＣＧＣＣＣＴＧＧＧＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＡＣＴＡＣＴＴＣＣＣＡＧＡＡＣＣＴＧＴＧＡＣＣＧＴＧＴＣＣＴＧＧＡＡＣＴＣＴＧＧＣＧＣＴＣＴＧＡＣＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＣＣＣＡＧＣＴＧＴＣＣＴＧＣＡＧＴＣＣＴＣＡＧＧＴＣＴＣＴＡＣＴＣＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＧＣＣＡＴＣＣＡＧＣＡＡＣＴＴＣＧＧＣＡＣＣＣＡＧＡＣＣＴＡＣＡＣＣＴＧＣＡＡＣＧＴＡＧＡＴＣＡＣＡＡＧＣＣＡＡＧＣＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧＴＣＧＡＣＡＡＧＡＣＣＧＴＧＧＡＧＡＧＡＡＡＧＴＧＴＴＧＴＧＴＧＧＡＧＴＧＴＣＣＡＣＣＴＴＧＴＣＣＡＧＣＣＣＣＴＣＣＡＧＴＧＧＣＣＧＧＡＣＣＡＴＣＣＧＴＧＴＴＣＣＴＧＴＴＣＣＣＴＣＣＡＡＡＧＣＣＡＡＡＧＧＡＣＡＣＣＣＴＧＡＴＧＡＴＣＴＣＣＡＧＡＡＣＣＣＣＡＧＡＧＧＴＧＡＣＣＴＧＴＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＣＧＴＧＴＣＣＣＡＣＧＡＧＧＡＣＣＣＡＧＡＧＧＴＧＣＡＧＴＴＣＡＡＣＴＧＧＴＡＴＧＴＧＧＡＣＧＧＡＧＴＧＧＡＧＧＴＧＣＡＣＡＡＣＧＣＣＡＡＧＡＣＣＡＡＧＣＣＡＡＧＡＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＴＣＡＡＣＴＣＣＡＣＣＴＴＣＡＧＡＧＴＧＧＴＧＡＧＣＧＴＧＣＴＧＡＣＣＧＴＧＧＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡＣＴＧＧＣＴＧＡＡＣＧＧＡＡＡＧＧＡＧＴＡＴＡＡＧＴＧＴＡＡＧＧＴＧＴＣＣＡＡＣＡＡＧＧＧＡＣＴＧＣＣＡＴＣＣＡＧＣＡＴＣＧＡＧＡＡＧＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＧＡＣＣＡＡＧＧＧＡＣＡＧＣＣＡＡＧＡＧＡＧＣＣＡＣＡＧＧＴＧＴＡＴＡＣＣＣＴＧＣＣＡＣＣＡＴＣＣＡＧＡＧＡＧＧＡＧＡＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＧＧＴＧＴＣＣＣＴＧＡＣＣＴＧＴＣＴＧＧＴＧＡＡＧＧＧＡＴＴＣＴＡＴＣＣＡＴＣＣＧＡＣＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＧＴＣＣＡＡＣＧＧＡＣＡＧＣＣＡＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＴＡＡＧＡＣＣＡＣＣＣＣＴＣＣＡＡＴＧＣＴＧＧＡＣＴＣＣＧＡＣＧＧＡＴＣＣＴＴＣＴＴＣＣＴＧＴＡＴＴＣＣＡＡＧＣＴＧＡＣＣＧＴＧＧＡＣＡＡＧＴＣＣＡＧＡＴＧＧＣＡＧＣＡＧＧＧＡＡＡＣＧＴＧＴＴＣＴＣＴＴＧＴＴＣＣＧＴＧＡＴＧＣＡＣＧＡＧＧＣＣＣＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡＣＴＡＴＡＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＣＴＧＴＣＣＣＴＧＴＣＴＣＣＡＧＧＡＡＡＧＴＡＡ（配列番号６５）
【０２８６】
３Ｅ重鎖可変ドメインヌクレオチド配列
ＣＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＣＡＧＧＡＧＴＣＴＧＧＣＣＣＡＧＧＡＣＴＧＧＴＧＡＡＧＣＣＴＴＣＣＧＡＧＡＣＣＣＴＧＴＣＣＣＴＣＡＣＣＴＧＣＡＣＴＧＴＣＴＣＴＧＧＧＴＴＣＴＣＡＣＴＴＡＴＣＧＧＣＴＡＴＧＡＴＣＴＴＡＡＣＴＧＧＡＴＣＣＧＡＣＡＧＣＣＴＣＣＡＧＧＧＡＡＧＧＧＡＣＴＧＧＡＧＴＧＧＡＴＴＧＧＧＡＴＴＡＴＣＴＧＧＧＧＴＧＡＴＧＧＡＡＣＣＡＣＡＧＡＣＴＡＴＡＡＴＴＣＡＧＣＴＧＴＣＡＡＡＴＣＣＣＧＣＧＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＡＡＡＡＧＡＣＡＣＣＴＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＧＴＴＣＴＣＣＣＴＧＡＡＧＣＴＧＡＧＣＴＣＴＧＴＧＡＣＣＧＣＣＧＣＧＧＡＣＡＣＧＧＣＣＧＴＧＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＧＡＧＡＧＧＡＧＧＴＴＡＴＴＧＧＴＡＣＧＣＣＡＣＴＡＧＣＴＡＣＴＡＣＴＴＴＧＡＣＴＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＣＡＣＣＣＴＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡ（配列番号６６）
【０２８７】
３Ｅ軽鎖ヌクレオチド配列（完全抗体）
ＧＡＴＡＴＣＣＡＧＡＴＧＡＣＡＣＡＧＴＣＣＣＣＡＴＣＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＧＣＣＴＣＴＧＴＧＧＧＴＧＡＣＣＧＣＧＴＣＡＣＣＡＴＣＡＣＣＴＧＣＣＧＣＧＣＡＴＣＴＣＡＧＴＣＣＡＴＴＡＧＣＡＡＴＡＡＴＣＴＧＡＡＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＧＣＣＡＧＧＣＡＡＡＧＣＣＣＣＡＡＡＡＣＴＣＣＴＧＡＴＣＴＡＣＴＡＣＡＣＣＴＣＡＣＧＣＴＴＣＣＡＣＴＣＡＧＧＴＧＴＣＣＣＡＴＣＡＣＧＣＴＴＣＡＧＴＧＧＣＡＧＴＧＧＣＴＣＴＧＧＴＡＣＡＧＡＴＴＴＣＡＣＣＴＴＣＡＣＣＡＴＴＡＧＣＡＧＣＣＴＧＣＡＡＣＣＡＧＡＡＧＡＴＡＴＴＧＣＣＡＣＴＴＡＴＴＡＣＴＧＣＣＡＡＣＡＧＧＡＧＣＡＴＡＣＣＣＴＴＣＣＡＴＡＴＡＣＣＴＴＣＧＧＴＣＡＡＧＧＣＡＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡＧＡＴＣＡＡＡＣＧＣＡＣＴＧＴＧＧＣＴＧＣＡＣＣＡＴＣＴＧＴＣＴＴＣＡＴＣＴＴＴＣＣＴＣＣＡＴＣＴＧＡＴＧＡＧＣＡＧＴＴＧＡＡＡＴＣＣＧＧＡＡＣＴＧＣＣＴＣＴＧＴＴＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＴＡＡＣＴＴＣＴＡＴＣＣＡＣＧＣＧＡＧＧＣＣＡＡＡＧＴＡＣＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧＧＡＴＡＡＣＧＣＣＣＴＣＣＡＡＴＣＣＧＧＴＡＡＣＴＣＣＣＡＧＧＡＧＡＧＴＧＴＣＡＣＡＧＡＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＧＡＣＡＧＣＡＣＣＴＡＣＡＧＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＣＣＴＧＡＧＣＡＡＡＧＣＡＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＡＣＡＣＭＡＡＧＴＣＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＣＡＣＣＣＡＴＣＡＧＧＧＣＣＴＧＡＧＴＴＣＴＣＣＡＧＴＣＡＣＡＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＣＧＣＧＧＴＧＡＧＴＧＣＴＡＡ（配列番号６７）
【０２８８】
３Ｅ軽鎖可変ドメインヌクレオチド配列
ＧＡＴＡＴＣＣＡＧＡＴＧＡＣＡＣＡＧＴＣＣＣＣＡＴＣＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＧＣＣＴＣＴＧＴＧＧＧＴＧＡＣＣＧＣＧＴＣＡＣＣＡＴＣＡＣＣＴＧＣＣＧＣＧＣＡＴＣＴＣＡＧＴＣＣＡＴＴＡＧＣＡＡＴＡＡＴＣＴＧＡＡＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＧＣＣＡＧＧＣＡＡＡＧＣＣＣＣＡＡＡＡＣＴＣＣＴＧＡＴＣＴＡＣＴＡＣＡＣＣＴＣＡＣＧＣＴＴＣＣＡＣＴＣＡＧＧＴＧＴＣＣＣＡＴＣＡＣＧＣＴＴＣＡＧＴＧＧＣＡＧＴＧＧＣＴＣＴＧＧＴＡＣＡＧＡＴＴＴＣＡＣＣＴＴＣＡＣＣＡＴＴＡＧＣＡＧＣＣＴＧＣＡＡＣＣＡＧＡＡＧＡＴＡＴＴＧＣＣＡＣＴＴＡＴＴＡＣＴＧＣＣＡＡＣＡＧＧＡＧＣＡＴＡＣＣＣＴＴＣＣＡＴＡＴＡＣＣＴＴＣＧＧＴＣＡＡＧＧＣＡＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡＧＡＴＣＡＡＡＣＧＣ（配列番号６８）
【０２８９】
上記配列および本明細書中に記載の他の配列は、添付の配列表中に提供する。
【０２９０】
本明細書中に記載の実施例および実施形態は例示目的のみのためであり、それに鑑みた様々な改変または変化が当業者に示唆され、本出願の精神および範囲内に含まれるべきであることを理解されたい。
【受託番号】
【０２９１】
ＡＴＣＣ番号ＰＴＡ４８９３号
ＡＴＣＣ番号ＰＴＡ４８９４号
ＡＴＣＣ番号ＰＴＡ４８９５号
【図１】
0005642683.tif 000018
【図２】
0005642683.tif 000019
【図３】
0005642683.tif 000020
【図４】
0005642683.tif 000021
【図５】
0005642683.tif 000022
【図６】
0005642683.tif 000023
【配列表】
0005642683000001.app