(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
免疫原性組成物の投与を含んでなる治療方法に対して患者が治療的に応答するか否かを試験するため、または免疫原性組成物を投与した後患者がより長く生存し易いか否かを予測するためのエクスビボ方法であって、以下の工程：
−患者から取得した血液サンプル中の、ＣＤ１６、ＣＤ５６およびＣＤ６９細胞表面抗原を発現する活性化ＮＫ細胞のレベルを測定することを含んでなり、
ここで、活性化ＮＫ細胞の低いレベルは、患者は免疫原性組成物に対する予防的または治療的な免疫応答を生ずるか、または前記患者はより長い生存率を有することを示し、
活性化ＮＫ細胞の低いレベルは末梢血リンパ球の５％未満である、方法。
【請求項２】
前記治療方法が癌治療方法である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記活性化ＮＫ細胞が、ＣＤ３細胞表面抗原を発現しない、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記活性化ＮＫ細胞のレベルが、フローサイトメトリーによって測定される、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
前記活性化ＮＫ細胞のレベルが、ＣＤ１６、ＣＤ５６およびＣＤ６９細胞表面抗原に特異的な抗体を用いて決定される、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記血液サンプルが、全末梢血および単離された末梢血単核細胞からなる群から選択される、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記免疫原性組成物が、少なくとも一つの異種ヌクレオチド配列の全部または一部をインビボで発現する少なくとも一つの組み換えベクターを含んでなる、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記組み換えベクターがウイルスベクターである、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記ウイルスベクターが複製可能である、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記ウイルスベクターが複製欠損性である、請求項８に記載の方法。
【請求項１１】
前記ウイルスベクターが組み換えアデノウイルスベクターである、請求項８〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
前記ウイルスベクターが組み換えワクシニアベクターである、請求項８〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
前記組み換えワクシニアベクターが組み換えＭＶＡベクターである、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記免疫原性組成物が少なくとも一つの標的抗原の全部または一部を含んでなる、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
前記患者が化学療法剤で治療された患者である、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
活性化ＮＫ細胞からなる、使用免疫原性組成物の投与により患者が予防的または治療的な免疫応答を生じ易いか否かを予測するため、または免疫原性組成物を投与した後患者がより長く生存し易いか否かを予測するための、および、前記免疫原性組成物の投与前の患者から採取された血液サンプルにおいて前記活性化ＮＫ細胞のレベルを測定するためのバイオマーカーであって、前記活性化ＮＫ細胞は、ＣＤ１６、ＣＤ５６およびＣＤ６９細胞表面抗原を発現する、前記バイオマーカー。
【請求項１７】
免疫原性組成物の投与を含んでなる治療方法に対して患者が治療的に応答するか否かを試験するためのキットであって、
−患者由来の血液サンプルにおける、ＣＤ１６、ＣＤ５６およびＣＤ６９細胞表面抗原を発現する活性化ＮＫ細胞のレベルを決定するための抗体であって、ＣＤ１６、ＣＤ５６および／またはＣＤ６９細胞表面抗原に特異的である前記抗体、および、
−取得されるデータの説明のための使用説明書であって、活性化ＮＫ細胞の低いレベルは、患者が免疫原性組成物に対する予防的または治療的な免疫応答を生ずるか、または前記患者は免疫原性組成物を投与した後より長く生存するであろうことを示し、活性化ＮＫ細胞の低いレベルは、末梢血リンパ球の５％未満のレベルであることを記載する、使用説明書
を含んでなる、キット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、免疫学の分野に関し、特に例えば感染または癌を原因とする疾病に対する患者の免疫療法に関する。より詳細には、本発明は、そのような免疫療法後、対象が予防的または治療的免疫応答を発生し易いか否かを予測する方法に関する。本発明は、免疫原性組成物、特に、ワクチンで治療されるべき患者の生存率を改善する方法および組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
免疫応答を誘発できる抗原（例えば、ペプチド、タンパク質）を動物系内に導入し、それにより例えば、感染症に対して前記動物を保護することを含む伝統的なワクチン接種技術は長年公知である。これらの技術は更に、生ワクチンおよび不活化ワクチンの両方を開発することを含んでいた。生ワクチンは、一般に、感染体の病原型に指向された免疫応答を刺激することができる、感染体の弱毒化された非病原型である。
【０００３】
多数の研究グループは、様々な癌型に対する潜在的な治療モダリティとしてのワクチンの使用も研究してきた。この特定の種類のワクチン戦略は、一般に免疫療法と称されている。
【０００４】
近年、組換えワクチン、特に組換え生ワクチンの開発に進歩が見られ、興味対象の外来抗原がコード化され、ベクターから発現されている。中でも、組換えウイルスに基づくベクターは非常に有望視されており、新しいワクチンの開発に重要な役割を果たしている。多くのウイルスは、外来病原体または腫瘍組織からタンパク質を発現し、インビボでこれらの抗原に対する特異的免疫応答を誘発するそれらの能力に関して研究されている。一般に、これらの遺伝子に基づくワクチンは、強力な液性免疫および細胞免疫応答を刺激することができ、ウイルスベクターは、抗原をコードする遺伝子の送達と、抗原提示の促進および増強との両方に関して有効な戦略であり得る。ワクチン担体として使用するために、理想的なウイルスベクターは、安全であり、かつ要求される病原特異的抗原の免疫系に対する効率的な提示を可能にする必要がある。更に、ベクター系は、該ベクター系の大規模生産を可能にする基準を満たす必要がある。かくして今日まで数種のウイルスワクチンベクターが出現したが、それらの全ては、提案された用途に応じて、相対的な利点および限界を有する（組換えウイルスワクチンの再考には、例えばHarrop and Carroll, 2006, Front Biosci., 11, 804-817；Yokoyama et al., 1997, J Vet Med Sci.,59, 311-322を参照されたい）。
【０００５】
プラスミドＤＮＡベクターがインビボで動物細胞に直接トランスフェクトできるという１９９０年初期の観察の後、抗原をコードするＤＮＡを動物に直接導入することによる、ＤＮＡプラスミドを用いた免疫応答誘発に基づくワクチン接種技術を開発する相当の研究努力が行われている。ＤＮＡワクチン接種と広く称されるそれらの技術は、多数の疾病モデルにおいて保護的免疫応答を引き出すために使用されている。ＤＮＡワクチンの再考には、Reyes-Sandoval and Ertl, 2001 (Current Molecular Medicine, 1, 217-243)
を参照されたい。
【０００６】
しかしながら、ワクチン分野における一般的な課題は、ワクチン接種した個人において十分に強力な免疫応答を誘発する手段を同定して、感染症および疾病から保護しおよび／または該感染症および疾病を治療することにより、致命的な疾病、例えば癌を有する患者の生存を延長することである。
【０００７】
従って、近年、例えばワクチンにより誘発される免疫応答を増大させる役割を果たすであろう、免疫系の重要な所定の局面を刺激することにより作用する、新しい薬物化合物を発見する主な努力が行われている。免疫応答変更因子（ＩＲＭ）またはアジュバントと称されるこれらの化合物の殆どは、トール様受容体（ＴＬＲ）を経由した基礎免疫系の機構を介して作用して、様々な重要なサイトカイン生合成（例えば、インターフェロン、インターロイキン、腫瘍壊死因子等、例えばSchiller et al., 2006, Exp Dermatol., 15, 331-341
参照）を誘発するように思われる。そのような化合物は、所定の樹状細胞、単球／マクロファージ誘導サイトカインの迅速な放出を刺激し、またＢ細胞を刺激してＩＲＭ化合物の抗ウイルスおよび抗腫瘍活性に重要な役割を果たす抗体を分泌させることが可能であると示されている。
【０００８】
代替的に、その殆どがプライムブーストワクチン接種レジメンに基づくワクチン接種戦略が提案されている。これらの「プライムブースト」ワクチン接種プロトコールによれば、免疫系は最初に患者（pafient）にプライミング組成物を投与することにより誘発され、次いで第二のブースティング組成物を投与することにより追加免疫される（例えば、欧州特許第１４１１９７４号または米国特許第２００３０１９１０７６号参照）。
【０００９】
ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の細胞傷害性の機能的活性化および下方調節が、生殖成績（reproductive outcome）に重要な役割を果たし得ることが示されている（Nitrivalas et al.,2001, Human Reproduction, 16, 855-861
）。より詳細には、Thum et al, 2004, Human Reproduction, 19, 2395-2400
は、Ｉｎｔｒａ  Ｖｉｔｒｏ  Ｆｅｃｏｎｄａｔｉｏｎ（ＩＶＦ）治療後の着床および流産率に対する、末梢血ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞上の特定のマーカーの発現の絶対数の影響を評価した。著者等は、末梢血中の活性化ＮＫ細胞の絶対数の増加が、ＩＶＦ治療における胚着床率の低下に関連すると断定した。更に、妊娠を達成できる末梢血ＮＫ細胞の絶対数が高い女性は、有意なより高い流産率を有する。
【００１０】
本出願人は、今般、新規な手段およびワクチン接種戦略を同定した。第一の態様によれば、本発明は、少なくとも一種の抗原を含んでなる免疫原性組成物を投与することによる、患者のヒト疾病を治療する方法に関し、前記患者は、低いレベルの活性化ＮＫ細胞を有する患者から構成される患者集団から選択される。
【００１１】
従って、本発明は、少なくとも一種の抗原を含んでなる免疫原性組成物を投与することによる患者のヒト疾病を治療する方法であって、以下の工程：
−低いレベルの活性化ＮＫ細胞を有する患者から構成される患者集団から一人の患者を選択し、
−選択された患者に免疫原性組成物を投与すること
を含んでなる方法に関する。
【００１２】
別の態様によれば、本発明は、ヒト疾病を治療するための、免疫原性組成物を投与することによる患者内で免疫応答を誘発する（即ち、免疫応答を高める）方法に関し、患者は、低いレベルの活性化ＮＫ細胞を有する患者から構成される患者集団から選択される。
【００１３】
別の態様によれば、本発明は、ヒト疾病を治療するための、免疫原性組成物を投与することによる患者内で少なくとも一種の抗原に対する免疫応答を誘発する（即ち、免疫応答を高める）方法に関し、前記患者は、低いレベルの活性化ＮＫ細胞を有する患者から構成される患者集団から選択される。
【００１４】
別の態様によれば、本発明は、ヒト疾病を治療するための、免疫原性組成物を投与することによる患者内で免疫応答を誘発する（即ち、免疫応答を高める）方法に関し、患者は、低いレベルの活性化ＮＫ細胞を有する患者から構成される患者集団から選択され、高められた免疫応答は、自然免疫応答である。自然免疫応答は、病原体に対する身体の初期免疫防御であり、抗原提示細胞、即ち「ＡＰＣ」を含む多様な細胞から引き出される。これらの細胞は、外来起源の分子（例えば、細菌およびウイルス核酸、タンパク質、炭水化物）を認識する表面受容体および細胞質受容体を発現する。これらのシグナルを検出すると、樹状細胞およびマクロファージが、サイトカイン（インターフェロン、ＴＮＦ−αおよびＩＬ−１２を含む）と、未成熟樹状細胞、マクロファージ、ＮＫ細胞および顆粒球等の細胞を攻撃の部位に誘引するケモカインとの放出を含む防御応答を引き出す。このように、自然免疫応答が非特異的な保護を与える一方で、身体は適応応答を生じている。
【００１５】
従って、本発明は、ヒト疾病の治療のための、免疫原性組成物を投与することによる患者内で免疫応答を誘導する（即ち、免疫応答を高める）方法であって、以下の工程：
−低いレベルの活性化ＮＫ細胞を有する患者から構成される患者集団から一人の患者を選択し、
−前記選択された患者に前記免疫原性組成物を投与すること
を含んでなる方法に関する。
【００１６】
別の態様によれば、本発明は、ヒト疾病を治療するための、免疫原性組成物を投与することによる患者内で少なくとも一種の抗原に対する免疫応答を誘発する（即ち、免疫応答を高める）方法であって、以下の工程：
−低いレベルの活性化ＮＫ細胞を有する患者から構成される患者集団から一人の患者を選択し、
−前記選択された患者に前記免疫原性組成物を投与すること
を含んでなる方法に関する。
【００１７】
別の態様によれば、本発明は、ヒト疾病を治療するための、免疫原性組成物を投与することによる患者内で免疫応答を誘発する（即ち、免疫応答を高める）方法であって、高められた免疫応答は自然免疫応答であり、かつ以下の工程：
−低いレベルの活性化ＮＫ細胞を有する患者から構成される患者集団から患者を選択し、
−前記選択された患者に前記免疫原性組成物を投与すること
を含んでなる方法に関する。
【００１８】
別の態様によれば、本発明は、ヒト疾病を治療するための、免疫原性組成物を投与することによる患者内で免疫応答を誘発する（即ち、免疫応答を高める）方法であって、以下の工程：
−患者内の活性化ＮＫ細胞のレベルを測定し、
−前記患者が低いレベルの活性化ＮＫ細胞を有する場合、患者に前免疫原性組成物を投与すること
を含んでなる方法に関する。
【００１９】
別の態様によれば、本発明は、ヒト疾病を治療するための、免疫原性組成物を投与することによる患者内で少なくとも一種の抗原に対する免疫応答を誘発する（即ち、免疫応答を高める）方法であって、以下の工程：
−患者内の活性化ＮＫ細胞のレベルを測定し、
−前記患者が低いレベルの活性化ＮＫ細胞を有する場合、患者に前記免疫原性組成物を投与すること
を含んでなる方法に関する。
【００２０】
別の態様によれば、本発明は、ヒト疾病を治療するための、免疫原性組成物を投与することによる患者内で免疫応答を誘発する（即ち、免疫応答を高める）方法であって、高められた免疫応答は自然免疫応答であり、以下の工程：
−患者内の活性化ＮＫ細胞のレベルを測定し、
−前記患者が低いレベルの活性化ＮＫ細胞を有する場合、患者に前記免疫原性組成物を投与すること
を含んでなる方法に関する。
【００２１】
別の態様によれば、本発明は、免疫原性組成物の投与による、患者が予防的または治療的免疫応答を生じ易いか否かを予測する方法であって、以下の工程：
−患者から血液サンプルを取得し、
−活性化ＮＫ細胞のレベルを測定することを含んでなり、ここで活性化ＮＫ細胞の低いレベルは、患者の予防的または治療的免疫応答の発生し易さが増大していることが予測されることを示す方法に関する。
【００２２】
別の態様によれば、本発明は、免疫原性組成物の投与による、予防的または治療的免疫応答を発生し易い患者を選択する方法であって、以下の工程：
−患者から血液サンプルを取得し、
−活性化ＮＫ細胞のレベルを測定することを含んでなり、ここで活性化ＮＫ細胞の低いレベルは、患者の予防的または治療的免疫応答の発生し易さが増大していることを示す方法に関する。
【００２３】
別の態様によれば、本発明は、患者が免疫原性組成物の投与を含んでなる治療に対して正に応答し易いか否かを予測する方法であって、以下の工程：
−患者から血液サンプルを取得し、
−活性化ＮＫ細胞のレベルを測定することを含んでなり、ここで活性化ＮＫ細胞の低いレベルは、患者の予防的または治療的免疫応答の発生し易さが増大していることが予測されることを示す方法に関する。
【００２４】
別の態様によれば、本発明は、免疫原性組成物の投与を含んでなる治療に対して正に応答し易い患者を選択する方法であって、以下の工程：
−患者から血液サンプルを取得し、
−活性化ＮＫ細胞のレベルを測定することを含んでなり、ここで活性化ＮＫ細胞の低いレベルは、患者の予防的または治療的免疫応答の発生し易さが増大していることを示す方法に関する。
【００２５】
別の態様によれば、本発明は、患者が免疫原性組成物の投与を含んでなる治療方法に治療的に応答するか否かを試験するエクスビボ方法であって、以下の工程：
−患者から血液サンプルを取得し、
−活性化ＮＫ細胞のレベルを測定することを含み、ここで活性化ＮＫ細胞の低いレベルは、患者が免疫原性組成物に対して予防的または治療的免疫応答を生ずるであろうことを示す方法に関する。
【００２６】
別の態様によれば、本発明は、患者が免疫原性組成物の投与による癌の治療方法に治療的に応答するか否かを試験するエクスビボ方法であって、以下の工程： 
−患者から血液サンプルを取得し、
−活性化ＮＫ細胞のレベルを測定することを含んでなり、ここで活性化ＮＫ細胞の低いレベルは、患者が癌の治療方法に治療的に応答するであろうことを示す方法に関する。
【００２７】
本願全体において本明細書で使用されているように、単数に対する言及（「ａ」および「ａｎ」）は、文脈が別様に指示しない限り、それらが「少なくとも一つの」、「少なくとも第一の」、「一つまたはそれ以上の」または「複数の」参照化合物またはステップを意味するよう使用される。例えば、用語「細胞( a cell)
」は、その混合物を含む複数の細胞を包含する。より詳細には、「少なくとも一つの」および「一つまたはそれ以上の」は、一つまたは一つより大きい数を意味し、１、２または３が特に優先される。
【００２８】
用語「および／または」は、本明細書で使用する場合は常に、「および」、「または」、および「前記用語により接続される要素の全部または任意の他の組み合わせ」の意味を含む。
【００２９】
本明細書において、用語「約」または「ほぼ」は、２０％、好ましくは１０％、より好ましくは５％以内であることを意味する。
【００３０】
用語「患者」、「対象」は、脊椎動物、特に哺乳動物種のメンバーを指し、家畜、競技用動物（sport animal）、ヒトを含む霊長類を含むがこれらに限定されるわけではない。
【００３１】
本明細書において、用語「治療」または「治療している」は予防および治療を包含する。従って、本発明の免疫原性組成物または方法は治療用途に限定されず、予防用途にも使用され得る。このことは、本明細書で「予防的または治療的免疫応答を発生すること」という表現により補助される。「予防」は即時型疾病（例えば、感染症）の予防に限定されず、更にこれらの感染症の長期の結果、例えば硬変または癌等の予防も包含する。
【００３２】
活性化合物の「有効量」または「十分な量」は、臨床的結果を含む有益なまたは所望の結果を達成するに十分な量である。有効量は、１回またはそれ以上の投与にて投与されてもよい。「治療的有効量」は、ウイルス感染症に関連した一つまたはそれ以上の症状の緩和、および疾病の予防（例えば、感染症の一つまたはそれ以上の症状の予防）を含むがこれらに限定されない、有益な臨床的結果を達成するに十分な量である。
【００３３】
用語「低いレベルの活性化ＮＫ細胞を有する患者から構成される選択された患者」は、活性化ＮＫ細胞のレベルが本明細書に開示するように測定され、低いレベルの活性化ＮＫ細胞を有する患者を意味するものと理解するべきである。試験された患者数が１を越える場合、前記患者は患者集団を形成する。
【００３４】
本明細書において、用語「活性化ＮＫ細胞」は、ＣＤ１６、ＣＤ５６およびＣＤ６９細胞表面抗原を発現するリンパ球細胞を意味する。好ましい態様によれば、前記活性化ＮＫ細胞は更に、ＣＤ３表面抗原を発現しない。再考には、Vivier et al., 2008, Nature Immunology, 9, 503-510を参照されたい。代替的に、活性化ＮＫ細胞は更に、ＩＬ２７（Villarino et al, 2005, J Immunol., 174, 7684-91）、Ｌｙ１０８（Zhong and Veilette, 2008, JBC, 283(28), 19255-64）、パーフォリン（Morissette et al., 2007, Respir Res., 8, 62）、グランザイムＢ（Ida et al, 2003, Eur J Immunol., 33, 3284- 92）、ＩＬ２１／２１Ｒ（Frederiksen et al, 2008, Cancer Immunol Immunother., 57, 1439-49；Dodds et al., 2008, Cancer Immunol Immunother., October）、ＣＸＣＲ１（Inngjerdingen et al., 2001, Blood., 97,367-75）、ＣＤ２４４（Gao et al., J Immunol. 2006 Mar 1 ; 176(5) :2758-64）、ＩＬ１５Ｒおよび／またはグラニュリシンの発現および／または産生に基づき定義されてもよい。それらの用語は当技術分野で広く使用されている。
【００３５】
特別な態様によれば、「患者は治療的に応答するであろう」という表現は、前記患者の生存率が増大することを意味する。
【００３６】
本発明によれば、活性化ＮＫ細胞のレベルは、例えばフローサイトメトリー（例えば、フローサイトフルオロメトリー）、標的細胞溶解アッセイ、より詳細には三色またはそれ以上のサイトメトリー（例えば、ベクトン・ディッキンソン社、ベックマンコールター社）により測定されてもよい。例えば、非特許文献５ ; Borrego et al, 1993, Eur. J. Immunol., 23, 1039-1043を参照されたい。
【００３７】
本発明によれば、活性化ＮＫ細胞のレベルは全血サンプルまたは単離された末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）に関して測定されてもよい［例えば、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）のフィコール・ハイパック（Ficoll- Hypaque）精製によって（Bennett & Breit 1994, J Leukoc Biol., 56(3), 236-40）、またはＳｉｇｍａ  Ａｃｃｕｓｐｉｎ（商標）システム（シグマ・アルドリッチ社）を使用して製造業者の説明書により、等］。
【００３８】
本発明の一態様によれば、活性化ＮＫ細胞のレベルは、抗体を使用して測定される。
【００３９】
本発明の特定の一態様によれば、前記抗体はモノクローナル抗体である。
【００４０】
本発明の特定の一態様によれば、前記抗体は、例えば蛍光、放射標識、酵素、ビオチン、または前記抗体で標識された細胞を検出可能とするよう設計された任意の他の方法によりタグ付けされる。これらの技術は広く使用されており、当技術分野にて公知である。
【００４１】
本発明の好ましい態様によれば、活性化ＮＫ細胞のレベルは、ＣＤ１６、ＣＤ５６および／またはＣＤ６９に特異的な抗体、好ましくはＣＤ１６、ＣＤ５６およびＣＤ６９に特異的な抗体を使用することにより測定される。代替的に、前記活性化ＮＫ細胞のレベルは、更にＣＤ３に特異的な抗体を使用することにより測定される。
【００４２】
従って、例えば活性化ＮＫ細胞のレベルは、末梢血を収集し、細胞をモノクローナル抗体（例えば、抗−ＣＤ３、抗−ＣＤ４、抗−ＣＤ８、抗−ＣＤ１９、抗−ＣＤ５６、抗−ＣＤ６９および／または抗−ＣＤ１６）と共にインキュベートすることにより測定される。次いで、活性化ＮＫ細胞のレベルは、インストルメンテーションラボラトリー−ベックマンコールター社製の機器により、４つの異なる蛍光色素（フルオレセインイソチオシアネートＦＩＴＣ、フィコエリトリンＰＥ／ＲＤ１、ＥＣＤ、ＰＣ５／ＰＥ）を認識するＨｅ−Ｎｅレーザー光を用いて決定される。
【００４３】
活性化ＮＫ細胞のレベルは、（ｉ）ＣＤ１６、ＣＤ５６およびＣＤ６９細胞表面抗原を発現する末梢血リンパ球の百分率（％）、または（ｉｉ）全末梢血のマイクロリットル当たりの活性化ＮＫ細胞の絶対数のいずれかで表され得る。一態様によれば、前記末梢血リンパ球は、全血から単離され、分析時まで冷凍保管される。
【００４４】
本明細書で使用されるように、用語「低いレベルの活性化ＮＫ細胞」は、（ｉ）約５％未満、有利には約４．５％未満、好ましくは約４％未満、更により好ましくは約３．５％未満、更により詳細には約３．４５％未満の活性化ＮＫ細胞のレベル、または（ｉｉ）全末梢血のマイクロリットル当たり約７５未満、好ましくは約６０未満、より好ましくは約５０未満の活性化ＮＫ細胞、より詳細には約３５未満の活性化ＮＫ細胞（好ましくは細胞集団中に存在するもの）のいずれかを意味する。
【００４５】
本明細書において、用語「免疫原性組成物」「ワクチン組成物」、「ワクチン」または類似した用語は交換可能に使用することができ、患者の免疫系を刺激し／誘発し／増大させて、現在の病状を回復させ、または現在もしくは未来の害もしくは感染（ウイルス感染、細菌感染、寄生虫感染を含む）から保護しもしくはそれらを低減し、例えば腫瘍細胞の増殖もしくは生存を低減し、患者内での病原菌の複製もしくは拡散を低減し、または病状に関連した望ましくない症状（一つまたは複数）を検出可能に低減し、患者の生存時間を延長するのに適した薬剤を意味する。前記免疫原性組成物は、（ｉ）少なくとも一つの標的抗原の全部もしくは一部、および／または（ｉｉ）インビボで少なくとも一つの異種ヌクレオチド配列、特に少なくとも一つの標的抗原の全部もしくは一部をコードする異種ヌクレオチド配列の全部もしくは一部を発現する少なくとも一つの組換えベクターを含んでもよい。代替的な態様によれば、本発明の免疫原性組成物は、（ｉｉｉ）少なくとも一種の免疫応答変更因子を単独で、または（ｉ）および／または（ｉｉ）との組み合わせにて含んでなる。そのような免疫応答変更因子（ＩＲＭ）の例としては、ＣｐＧオリゴヌクレオチド（例えば、米国特許第６，１９４，３８８号；米国特許第２００６０９４６８３号；国際公開第２００４０３９８２９号参照）、リポ多糖類、ポリイノシン酸−ポリシチジル酸複合体（Kadowaki, et al.,10 2001, J. Immunol. 166, 2291-2295）、ならびに樹状細胞および／または単球／マクロファージからのサイトカイン産生を誘発することが知られるポリペプチドおよびタンパク質が挙げられる。そのような免疫応答変更因子（ＩＲＭ）の他の例は、イミダゾキノリンアミン、イミダゾピリジンアミン、６，７−縮合シクロアルキルイミダゾピリジンアミン、イミダゾナフチリジンアミン、オキサゾロキノリンアミン、チアゾロキノリンアミンおよび１，２−架橋イミダゾキノリンンアミン等の小有機分子である（例えば、米国特許第４，６８９，３３８号；米国特許第５，３８９，６４０号；米国特許第６，１１０，９２９号；および米国特許第６，３３１，５３９号参照）。
【００４６】
本明細書において、用語「抗原」は、免疫応答の標的であることが可能な、複合体抗原（例えば、腫瘍細胞、ウイルス感染細胞等）を含む任意の物質を指す。抗原は、例えば患者により生じる細胞介在性および／または液性免疫応答の標的であってもよい。用語「抗原」は、例えばウイルス抗原、腫瘍特異的または腫瘍関連抗原、細菌抗原、寄生虫抗原、アレルゲン等の全部または一部を包含する：
【００４７】
−ウイルス抗原としては、例えば肝炎ウイルスＡ、Ｂ、Ｃ、ＤおよびＥ、ＨＩＶ、ヘルペスウイルス、サイトメガロウイルス、水痘帯状疱疹、乳頭腫ウイルス、エプスタイン・バーウイルスウイルス、インフルエンザウイルス、パラインフルエンザウイルス、アデノウイルス、コックスサッキーウイルス、ピコルナウイルス、ロタウイルス、呼吸器多核体ウイルス、ポックスウイルス、ライノウイルス、風疹ウイルス、パボウイルス、流行性耳下腺炎ウイルス、はしかウイルスからの抗原が挙げられ；公知のいくつかのウイルス抗原の非限定的な例としては、以下が挙げられる：ｔａｔ、ｎｅｆ、ｇｐ１２０もしくはｇｐ１６０、ｇｐ４０、ｐ２４、ｇａｇ、ｅｎｖ、ｖｉｆ、ｖｐｒ、ｖｐｕ、ｒｅｖまたはそれらの一部および／もしくは組み合わせ等のＨＩＶ−Ｉ由来の抗原；ｇＨ、ｇＬ、ｇＭ、ｇＢ、ｇＣ、ｇＫ、ｇＥもしくはｇＤまたはそれらの一部および／もしくは組み合わせ等のヒトヘルペスウイルス由来の抗原、またはＨＳＶｌもしくはＨＳＶ２からのＩＣＰ２７、ＩＣＰ４７、ＩＣＰ４、ＩＣＰ３６等の最初期タンパク質；ｇＢまたはその誘導体等のサイトメガロウイルス、特にヒトサイトメガロウイルス由来の抗原；ｇｐ３５０またはその誘導体等のエプスタイン・バーウイルス由来の抗原；ｇｐ１、１１、１１１およびＩＥ６３等の水痘帯状疱疹ウイルス由来の抗原；肝炎Ｂ、肝炎Ｃまたは肝炎Ｅウイルス抗原等の肝炎ウイルス由来の抗原（例えば、ＨＣＶのｅｎｖタンパク質Ｅ１もしくはＥ２、コアタンパク質、ＮＳ２、ＮＳ３、ＮＳ４ａ、ＮＳ４ｂ、ＮＳ５ａ、ＮＳ５ｂ、ｐ７、またはそれらの一部および／もしくは組み合わせ）；ヒト乳頭腫ウイルス由来の抗原（例えば、ＨＰＶ６、１１、１６、１８、例えばＬ１、Ｌ２、Ｅ１、Ｅ２、Ｅ３、Ｅ４、Ｅ５、Ｅ６、Ｅ７、またはそれらの一部および／もしくは組み合わせ）；他のウイルス性病原体由来の抗原、例えば呼吸器多核体ウイルス（例えば、ＦおよびＧタンパク質またはそれらの誘導体）、パラインフルエンザウイルス、はしかウイルス、流行性耳下腺炎ウイルス、フラビウイルス（例えば、黄熱病ウイルス、デングウイルス、ダニ媒介脳炎ウイルス、日本脳炎ウイルス）またはインフルエンザウイルス細胞（例えば、ＨＡ、ＮＰ、ＮＡもしくはＭタンパク質、またはそれらの一部および／もしくは組み合わせ）等。
【００４８】
−腫瘍特異的または腫瘍関連抗原としては、癌腫、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫および白血病が挙げられるがこれらに限定されるわけではない。そのような癌のより詳細な例には、乳癌、前立腺癌、結腸癌、扁平上皮癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、胃腸癌、膵臓癌、神経膠芽腫、頸部癌、卵巣癌、肝臓癌、膀胱癌、肝細胞癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌、唾液腺癌腫、腎臓癌、肝臓癌、外陰癌、甲状腺癌、肝癌、および様々な種類の頭頸部癌、腎癌、悪性黒色腫、喉頭癌、前立腺癌が挙げられる。癌抗原は、潜在的に明らかに腫瘍特異的免疫応答を刺激し得る抗原である。これらの抗原のいくつかはコードされているが、必ずしも正常な細胞により発現されるわけではない。これらの抗原は、正常な細胞内で通常サイレントな（即ち、発現されない）もの、低いレベルでまたは分化の所定の段階でのみ発現されるもの、および胚および胎児抗原等、一時的に発現されるものとして特徴付けることができる。他の癌抗原は、癌遺伝子（例えば、活性化ｒａｓ癌遺伝子）、抑制遺伝子（例えば、変異体ｐ５３）、内部欠失または染色体転座から生じた融合タンパク質等の変異体細胞遺伝子によりコードされている。更なる他の癌抗原は、ＲＮＡおよびＤＮＡ腫瘍ウイルスにより支持されるもの等のウイルス遺伝子によりコードされ得る。腫瘍特異的または腫瘍関連抗原のいくつかの非限定的な例としては、ＭＡＲＴ−１／Ｍｅｌａｎ−Ａ、ｇｐ１００、ジペプチジルペプチダーゼＩＶ（ＤＰＰＩＶ）、アデノシンデアミナーゼ結合タンパク質（ＡＤＡｂｐ）、シクロフィリンｂ、結腸直腸関連の抗原（ＣＲＣ）−Ｃ０１７−１Ａ／ＧＡ７３３、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）およびその免疫原性エピトープＣＡＰ−１およびＣＡＰ−２、ｅｔｖ６、ａｍｌ１、前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）ならびにその免疫原性エピトープＰＳＡ−１、ＰＳＡ−２およびＰＳＡ−３、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、Ｔ細胞受容体／ＣＤ３−ζ鎖、腫瘍抗原のＭＡＧＥ−ファミリー（例えば、ＭＡＧＥ−Ａ１、ＭＡＧＥ−Ａ２、ＭＡＧＥ−Ａ３、ＭＡＧＥ−Ａ４、ＭＡＧＥ−Ａ５、ＭＡＧＥ−Ａ６、ＭＡＧＥ−Ａ７、ＭＡＧＥ−Ａ８、ＭＡＧＥ−Ａ９、ＭＡＧＥ−Ａ１０、ＭＡＧＥ−Ａ１１、ＭＡＧＥ−Ａ１２、ＭＡＧＥ−Ｘｐ２（ＭＡＧＥ−Ｂ２）、ＭＡＧＥ−Ｘｐ３（ＭＡＧＥ−Ｂ３）、ＭＡＧＥ−Ｘｐ４（ＭＡＧＥ−Ｂ４）、ＭＡＧＥ−Ｃ１、ＭＡＧＥ−Ｃ２、ＭＡＧＥ−Ｃ３、ＭＡＧＥ−Ｃ４、ＭＡＧＥ−Ｃ５）、腫瘍抗原のＧＡＧＥ−ファミリー（例えば、ＧＡＧＥ−１、ＧＡＧＥ−２、ＧＡＧＥ−３、ＧＡＧＥ−４、ＧＡＧＥ−５、ＧＡＧＥ−６、ＧＡＧＥ−７、ＧＡＧＥ−８、ＧＡＧＥ−９）、ＢＡＧＥ、ＲＡＧＥ、ＬＡＧＥ−１、ＮＡＧ、ＧｎＴ−Ｖ、ＭＵＭ−１、ＣＤＫ４、チロシナーゼ、ｐ５３、ＭＵＣファミリー（例えば、ＭＵＣ−１）、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ｐ２１ｒａｓ、ＲＣＡＳ１、α−フェトプロテイン、Ｅ−カドヘリン、α−カテニン、β−カテニンおよびγ−カテニン、ｐ１２０ｃｔｎ、ｇｐ１００．ｓｕｐ．Ｐｍｅ１１１７、ＰＲＡＭＥ、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ｃｄｃ２７、大腸腺腫症タンパク質（ＡＰＣ）、フォドリン、コネキシン３７、Ｉｇイディオタイプ、ｐ１５、ｇｐ７５、ＧＭ２およびＧＤ２ガングリオシド、ヒト乳頭��ウイルスタンパク質等のウイルス産物、腫瘍抗原のＳｍａｄファミリー、ｌｍｐ−１、Ｐ１Ａ、ＥＢＶ−コード化核抗原（ＥＢＮＡ）−１、脳グリコーゲンホスホリラーゼ、ＳＳＸ−１、ＳＳＸ−２（ＨＯＭ−ＭＥＬ−４０）、ＳＳＸ−１、ＳＳＸ−４、ＳＳＸ−５、ＳＣＰ−１およびＣＴ−７、ならびにｃ−ｅｒｂＢ−２が挙げられる。
【００４９】
−細菌抗原としては、例えば、ＴＢおよびハンセン病を起こすマイコバクテリアからの抗原、肺炎球菌（pneumocci）、好気性グラム陰性菌、マイコプラズマ、ブドウ球菌感染症（staphyloccocal infection）、連鎖球菌感染症、サルモネラ菌、クラミジア、ナイセリア（neisseriae）が挙げられる。
【００５０】
−他の抗原には、例えばマラリア、リーシュマニア症、トリパノソーマ症、トキソプラズマ症、住血吸虫症、フィラリア症からの抗原が挙げられる。
【００５１】
−アレルゲンは、感受性の患者においてアレルギー応答または喘息症状を誘発し得る物質を指す。アレルゲンのリストは膨大であり、花粉、昆虫毒、動物の鱗屑埃、真菌胞子および薬物（例えば、ペニシリン）を含み得る。天然の、動物および植物アレルゲンの例としては、以下の属に特異的なタンパク質が挙げられるが、これらに限定されるわけではない：イヌ属（Ｃａｎｉｓ  ｆａｍｉｌｉａｒｉｓ）；ヒョウヒダニ属（例えば、Ｄｅｒｍａｔｏｐｈａｇｏｉｄｅｓ  ｆａｒｉｎａｅ）；ネコ属（Ｆｅｌｉｓ  ｄｏｍｅｓｔｉｃｕｓ）；ブタクサ属（Ａｍｂｒｏｓｉａ  ａｒｔｅｍｉｉｓｆｏｌｉａ；ドクムギ属（例えば、Ｌｏｌｉｕｍ  ｐｅｒｅｎｎｅまたはＬｏｌｉｕｍ  ｍｕｌｔｉｆｌｏｒｕｍ）；スギ属（Ｃｒｙｐｔｏｍｅｒｉａ  ｊａｐｏｎｉｃａ）；アルテルナリア属（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ  ａｌｔｅｒｎａｔａ）；アルダー；ハンノキ属（Ａｌｎｕｓ  ｇｕｌｔｉｎｏａｓａ）；カバノキ属（Ｂｅｔｕｌａ  ｖｅｒｒｕｃｏｓａ）；カシ属（Ｑｕｅｒｃｕｓ  ａｌｂａ）；オリーブ属（Ｏｌｅａ  ｅｕｒｏｐａ）；ヨモギ属（Ａｒｔｅｍｉｓｉａ  ｖｕｌｇａｒｉｓ）；オオバコ属（例えば、Ｐｌａｎｔａｇｏ  ｌａｎｃｅｏｌａｔａ）；ヒカゲミズ属（例えば、Ｐａｒｉｅｔａｒｉａ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ  またはＰａｒｉｅｔａｒｉａ  ｊｕｄａｉｃａ）；チャバネゴキブリ属（例えば、Ｂｌａｔｔｅｌｌａ  ｇｅｒｍａｎｉｃａ）；ミツバチ属（例えば、  Ａｐｉｓ  ｍｕｌｔｉｆｌｏｒｕｍ）；イトスギ属（例えば、Ｃｕｐｒｅｓｓｕｓ  ｓｅｍｐｅｒｖｉｒｅｎｓ、Ｃｕｐｒｅｓｓｕｓ  ａｒｉｚｏｎｉｃａおよびＣｕｐｒｅｓｓｕｓ  ｍａｃｒｏｃａｒｐａ）；ビャクシン属（例えば、Ｊｕｎｉｐｅｒｕｓ  ｓａｂｉｎｏｉｄｅｓ、Ｊｕｎｉｐｅｒｕｓ  ｖｉｒｇｉｎｉａｎａ、Ｊｕｎｉｐｅｒｕｓ  ｃｏｍｍｕｎｉｓおよびＪｕｎｉｐｅｒｕｓ  ａｓｈｅｉ）；クロベ属（例えば、Ｔｈｕｙａ  ｏｒｉｅｎｔａｌｉｓ）；ヒノキ属（例えば、Ｃｈａｍａｅｃｙｐａｒｉｓ  ｏｂｔｕｓａ）；ゴキブリ類（例えば、Ｐｅｒｉｐｌａｎｅｔａ  ａｍｅｒｉｃａｎａ）；カモジグサ属（例えば、Ａｇｒｏｐｙｒｏｎ  ｒｅｐｅｎｓ）；ライムギ属（例えば、Ｓｅｃａｌｅ  ｃｅｒｅａｌｅ）；コムギ属（例えば、Ｔｒｉｔｉｃｕｍ  ａｅｓｔｉｖｕｍ）／カモガヤ属（例えば、Ｄａｃｔｙｌｉｓ  ｇｌｏｍｅｒａｔａ）；ウシノケグサ属（例えば、Ｆｅｓｔｕｃａ  ｅｌａｔｉｏｒ）；イチゴツナギ属（例えば、Ｐｏａ  ｐｒａｔｅｎｓｉｓまたはＰｏａ  ｃｏｍｐｒｅｓｓａ）；カラスムギ属（例えば、Ａｖｅｎａ  ｓａｔｉｖａ）；シラゲガヤ属（例えば、Ｈｏｌｃｕｓ  ｌａｎａｔｕｓ）；ハルガヤ属（例えば、Ａｎｔｈｏｘａｎｔｈｕｍ  ｏｄｏｒａｔｕｍ）；オオカニツリ属（例えば、Ａｒｒｈｅｎａｔｈｅｒｕｍ  ｅｌａｔｉｕｓ）；コヌカグサ属（例えば、Ａｇｒｏｓｔｉｓ  ａｌｂａ）；アワガエリ属（例えば、Ｐｈｌｅｕｍ  ｐｒａｔｅｎｓｅ）；クサヨシ属（例えば、Ｐｈａｌａｒｉｓ  ａｒｕｎｄｉｎａｃｅａ）；スズメノヒエ属（例えば、Ｐａｓｐａｌｕｍ  ｎｏｔａｔｕｍ）；モロコシ属（例えば、Ｓｏｒｇｈｕｍ  ｈａｌｅｐｅｎｓｉｓ）；ならびにスズメノチャヒキ属（例えば、Ｂｒｏｍｕｓ  ｉｎ��ｒｍｉｓ）。
【００５２】
特別な一態様によれば、前記抗原は、異種ヌクレオチド配列によりコードされ、組換えベクターによりインビボで発現される。
【００５３】
特に好ましい態様において、本発明の異種ヌクレオチド配列は、一つまたはそれ以上の以下の抗原の全部または一部をコードする。ＨＢＶ−ＰｒｅＳ１  ＰｒｅＳ２および表面ｅｎｖタンパク質、コアおよびｐｏｌＨＩＶ−ｇｐ１２０  ｇｐ４０、ｇｐ１６０、ｐ２４、ｇａｇ、ｐｏｌ、ｅｎｖ、ｖｉｆ、ｖｐｒ、ｖｐｕ、ｔａｔ、ｒｅｖ、ｎｅｆ；ＨＰＶ−Ｅ１、Ｅ２、Ｅ３、Ｅ４、Ｅ５、Ｅ６、Ｅ７、Ｅ８、Ｌ１、Ｌ２（例えば、国際公開第９０／１０４５９号、国際公開９８／０４７０５号、国際公開９９／０３８８５号参照）；ＨＣＶ  ｅｎｖタンパク質Ｅ１またはＥ２、コアタンパク質、ＮＳ２、ＮＳ３、ＮＳ４ａ、ＮＳ４ｂ、ＮＳ５ａ、ＮＳ５ｂ、ｐ７（例えば、国際公開２００４１１１０８２号、国際公開２００５０５１４２０）号参照；Ｍｕｃ−１（例えば、米国特許第５，８６１，３８１号；米国特許第６，０５４，４３８号；国際公開第９８／０４７２７号；国際公開第９８／３７０９５号参照）。
【００５４】
本発明の変形によれば、免疫原性組成物は、少なくとも２つの抗原、または少なくとも２つの抗原をコードする異種ヌクレオチド配列、または少なくとも２つの抗原をコードする少なくとも２つの異種ヌクレオチド配列、またはそれらの任意の組み合わせを含む。
【００５５】
別の特別な態様によれば、本発明の前記異種ヌクレオチド配列は、ＨＰＶのＥ６初期コード領域、ＨＰＶのＥ７初期コード領域、およびそれらの誘導体または組み合わせからなる群より選択されるＨＰＶ抗原（一つまたは複数）の全部または一部をコードする。
【００５６】
本発明による組換えベクターによりコードされるＨＰＶ抗原は、ＨＰＶ  Ｅ６ポリペプチド、ＨＰＶ  Ｅ７ポリペプチドまたはＨＰＶ  Ｅ６ポリペプチドとＨＰＶ  Ｅ７ポリペプチドの両方からなる群より選択される。本発明は、ｐ５３に対する結合が変更されまたは少なくとも有意に低減される任意のＨＰＶ  Ｅ６ポリペプチドの使用、および／またはＲｂに対する結合が変更されまたは少なくとも有意に低減される任意のＨＰＶ  Ｅ７ポリペプチドの使用を包含する（Hunger et al., 1989, EMBO J. 8, 4099-15 4105 ;  Crook et al., 1991, Cell 67, 547-556 ;  Heck et al., 1992, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89, 4442-4446 ;  Phelps et al., 1992, J. Virol. 66, 2148-2427）。本発明の目的に適した非発癌性ＨＰＶ−１６  Ｅ６変異体は、ほぼ１１８位からほぼ１２２位（＋１は、ＨＰＶ−１６  Ｅ６ポリペプチドの最初のメチオニン残基を表す）に位置する一つまたはそれ以上のアミノ酸残基が欠失され、特に残基１１８〜１２２（ＣＰＥＥＫ）が完全に欠失されていることが好ましい。本発明の目的に適した非発癌性ＨＰＶ−１６  Ｅ７変異体は、ほぼ２１位からほぼ２６位（＋１は、天然ＨＰＶ−１６  Ｅ７ポリペプチドの最初のアミノ酸を表す）に位置する一つまたはそれ以上のアミノ酸残基が欠失され、特に残基２１〜２６（ＤＬＹＣＹＥ）が完全に欠失されていることが好ましい。好ましい態様によれば、本発明で使用する一つまたはそれ以上のＨＰＶ−１６初期ポリペプチドは、ＭＨＣクラスＩおよび／もしくはＭＨＣクラスＩＩ提示を向上させ、ならびに／または抗ＨＰＶ免疫を刺激するために更に修飾される。ＨＰＶ  Ｅ６およびＥ７ポリペプチドは核タンパク質であり、膜提示によりその核タンパク質の治療的有効性の向上が可能となることが以前に示されている（例えば、国際公開第９９／０３８８５号参照）。従って、少なくとも一つのＨＰＶ初期ポリペプチドを該ペプチドが細胞膜に固着されるように修飾することが望ましい。膜固着（membrane anchorage）は、ＨＰＶ初期ポリペプチドに膜固着配列を組み込むことにより、また天然ポリペプチドがそれを欠いている場合、分泌配列（即ち、シグナルペプチド）を組み込むことにより容易に達成することができる。膜固着配列および分泌配列は、当技術分野にて公知である。手短には、分泌配列は、提示される膜または分泌されるポリペプチドのＮ末端に存在し、それらの小胞体（ＥＲ）内への通過を開始させる。分泌配列は通常、１５〜３５の基本的に疎水性のアミノ酸を含んでなり、これは次に特定のＥＲに位置するエンドペプチダーゼにより除去されて成熟ポリペプチドを与える。膜固着配列は通常、本質的に非常に疎水性であり、ポリペプチドを細胞膜に固着する役割を果たす（例えば、Introduction to Protein Structure p. 202-214, NY GarlandにおけるBranden and Tooze, 1991参照）。
【００５７】
本発明の状況で使用され得る膜固着配列および分泌配列の選択肢は膨大である。それらは、例えば狂犬病糖タンパク質、ＨＩＶウイルスエンベロープ糖タンパク質、またははしかウイルスＦタンパク質等の、膜固着配列および分泌配列を含んでなる任意の膜固着ポリペプチドおよび／または分泌ポリペプチド（例えば、細胞ポリペプチドまたはウイルスポリペプチド）から得ることができ、または合成することができる。本発明に従って使用される各初期ＨＰＶ−１６ポリペプチドに挿入される膜固着配列および／または分泌配列は、共通のまたは異なる起源を有し得る。分泌配列の挿入に好ましい部位は、翻訳開始コドンの下流のＮ末端であり、膜固着配列の挿入に好ましい部位は、例えば終止コドンのすぐ上流のＣ末端である。
【００５８】
本発明で使用されるＨＰＶ  Ｅ６ポリペプチドは、はしかＦタンパク質の分泌シグナルおよび膜固着シグナルの挿入により修飾されることが好ましい。場合により、または組み合わせにおいて、本発明で使用されるＨＰＶ  Ｅ７ポリペプチドは、狂犬病糖タンパク質の分泌シグナルおよび膜固着シグナルの挿入により修飾されることが好ましい。
【００５９】
組換えベクターの治療的有効性は、免疫賦活剤ポリペプチド（一つまたは複数）をコードする一つまたはそれ以上の核酸の使用によっても向上され得る。例えば、ＨＰＶ初期ポリペプチド（一つまたは複数）をカルレティキュリン（Cheng et al., 2001, J. Clin. Invest. 108, 669-678）、結核菌熱ショックタンパク質７０（ＨＳＰ７０）（Chen et al., 2000, Cancer Res. 60, 15 1035-1042）、ユビキチン（Rodriguez et al., 1997, J. Virol. 71, 8497-8503）または例えば緑膿菌（Pseudomonas aeruginosa）外毒素Ａ（ＥＴＡ（ｄＩＩＩ））等の細菌毒素のトランスロケーションドメイン（Hung et al., 2001 Cancer Res. 61, 3698-3703）等のポリペプチドに結合することが有利であり得る。
【００６０】
別の好ましい態様によれば、本発明による組換えベクターは、上記に定義した一つまたはそれ以上の初期ポリペプチド（一つまたは複数）、より詳細にはＨＰＶ−１６および／またはＨＰＶ−１８初期Ｅ６および／またはＥ７ポリペプチドをコードする核酸を含んでなる。
【００６１】
別の特別な好ましい態様によれば、前記本発明の異種ヌクレオチド配列は、ＭＵＣ１抗原またはその誘導体の全部または一部をコードする。
【００６２】
別の特別な態様によれば、本発明の前記異種ヌクレオチド配列は、一つまたはそれ以上の以下の全部または一部をコードする：ＨＣＶ  ｅｎｖタンパク質Ｅ１もしくはＥ２、コアタンパク質、ＮＳ２、ＮＳ３、ＮＳ４ａ、ＮＳ４ｂ、ＮＳ５ａ、ＮＳ５ｂ、ｐ７またはそれらの誘導体。別の特別な態様によれば、前記本発明の異種ヌクレオチド配列は、一つまたはそれ以上の融合タンパク質をコードし、ここで構造は、少なくとも一つのＮＳポリペプチドが天然の構造とは異なる順で出現するという意味で天然ではない。従って、融合タンパク質がＮＳ３ポリペプチド、ＮＳ４ＡポリペプチドおよびＮＳ５Ｂポリペプチドを含んでなる場合、天然構造は、ＮＳ３がＮ末端に存在し、ＮＳ５ＢがＣ−末端に存在するＮＳ３−ＮＳ４Ａ−ＮＳ５Ｂであろう。対照的に、非天然構造は、ＮＳ５Ｂ−ＮＳ３−ＮＳ４Ａ、ＮＳ５Ｂ−ＮＳ４Ａ−ＮＳ３、ＮＳ４Ａ−ＮＳ３−ＮＳ５Ｂ、ＮＳ４Ａ−ＮＳ５Ｂ−ＮＳ３またはＮＳ３−ＮＳ５Ｂ−ＮＳ４Ａであり得る。より詳細には、本発明による融合タンパク質は、以下の少なくとも一つを含んでなる：
【００６３】
・ＮＳ３ポリペプチドのＮ末端に直接またはリンカーを介して縮合したＮＳ４Ａポリペプチド；
・ＮＳ５ＢポリペプチドのＮ末端に直接またはリンカーを介して縮合したＮＳ３ポリペプチド；
・ＮＳ５ＢポリペプチドのＮ末端に直接またはリンカーを介して縮合したＮＳ４Ｂポリペプチド；
・ＮＳ４ＢポリペプチドのＮ末端に直接またはリンカーを介して縮合したＮＳ３ポリペプチドのＮ末端に直接またはリンカーを介して縮合したＮＳ４Ａポリペプチド；および／または
・ＮＳ５ＢポリペプチドのＮ末端に直接またはリンカーを介して縮合したＮＳ４ＢポリペプチドのＮ末端に直接またはリンカーを介して縮合したＮＳ３ポリペプチド。
【００６４】
そのような本発明の融合タンパク質の特定の部分において、各ＮＳポリペプチドは、独立して天然であり、または修飾されていてもよい。例えば、ＮＳ４Ａ−ＮＳ３部分に含まれるＮＳ４Ａポリペプチドは天然であり得る一方で、ＮＳ３ポリペプチドは、以下に記載する修飾の少なくとも一つを含んでなる。
【００６５】
必要であれば、本発明で使用される核酸分子を、特定の宿主細胞または生物体、例えばヒト宿主細胞または生物体内で、標的抗原（例えば、ＨＰＶ初期ポリペプチド（一つまたは複数））の高いレベルの発現を提供するよう最適化してもよい。典型的には、コドン最適化は、哺乳動物宿主細胞内で殆ど使用されないコドンに対応する一つまたはそれ以上の「天然」（例えば、ＨＰＶ）コドンを、同一のアミノ酸をコードする、より頻繁に使用される一つまたはそれ以上のコドンで置き換えることにより実行される。これは従来の変異誘発または化学合成技術（例えば、合成核酸をもたらす）により達成することができる。発現の増大は、部分的な置き換えによっても達成できるため、殆ど使用されないコドンに対応する天然コドンの全てを置き換える必要はない。更に、最適化されたコドン使用の厳守からの多少の逸脱は、制限酵素部位（一つまたは複数）の導入を受け入れることにより為され得る。
【００６６】
本明細書において、用語「組換えベクター」は、染色体外ベクター（例えば、エピソーム）、マルチコピーベクターおよび統合ベクター（即ち、宿主染色体に組み込まれた）を含む、ウイルスベクターおよび非ウイルスベクターを指す。本発明の状況においては、遺伝子療法に使用されるベクター（即ち、宿主生物体に核酸を送達可能な）、および様々な発現系に使用される発現ベクターが特に重要である。好適な非ウイルスベクターとしては、ｐＲＥＰ４、ｐＣＥＰ４（インビトロジェン社）、ｐＣＩ（プロメガ社）、ｐＣＤＭ８（Seed, 1987, Nature 329, 840）、ｐＶＡＸおよびｐｇＷｉｚ（ジーンセラピーシステム社；Himoudi et al., 2002, J. Virol. 76, 12735-12746）等のプラスミドが挙げられる。好適なウイルスベクターは、様々な異なるウイルス（例えば、レトロウイルス、アデノウイルス、ＡＡＶ、ポックスウイルス、ヘルペスウイルス、麻疹ウイルス、泡沫状ウイルス等）に由来し得る。本明細書で使用されるように、用語「ウイルスベクター」は、ベクターＤＮＡ／ＲＮＡ、およびそれらから生成されるウイルス粒子を包含する。ウイルスベクターは複製能を有してもよく、または複製欠損もしくは複製障害であるよう遺伝的に不能にされていてもよい。本明細書で使用されるように、用語「複製能を有する」は、特定の宿主細胞、例えば、腫瘍細胞）内でより良好にまたは選択的に複製するよう操作された、複製選択的なウイルスベクターおよび条件付きで複製するウイルスベクターを包含する。
【００６７】
一態様において、本発明で使用される組換えベクターは、組換えアデノウイルスベクターである（再考には、"Adenovirus vectors for gene therapy", 2002, Ed D. Curiel and J. Douglas, Academic Pressを参照されたい)。組換アデノウイルスベクターは、様々なヒトまたは動物源に由来することができ、アデノウイルス血清型１  から５１までの任意の血清型を使用することができる。ヒトアデノウイルス２（Ａｄ２）、５（Ａｄ５）、６（Ａｄ６）、１１（Ａｄ１１）、２４（Ａｄ２４）および３５（Ａｄ３５）が特に好ましい。それらのアデノウイルスは、アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション（American Type Culture Collection）（ＡＴＣＣ、メリーランド州ロックビル）から入手可能であり、それらの配列、機構および製造方法を説明する多数の刊行物の患者が存在し、当業者がそれらを適用できるようにしている（例えば、米国特許第６，１３３，０２８号；米国特許第６，１１０，７３５号；国際公開第０２／４０６６５号；国際公開第００／５０５７３号；欧州特許第１０１６７１１号；Vogels et al., 2003, J. Virol. 77, 8263-8271参照）。
【００６８】
本発明で使用されるアデノウイルスベクターは、複製能を有し得る。当業者は複製能を有するアデノウイルスベクターの多数の例を容易に入手することができる（例えば、Hernandez-Alcoceba et al., 2000, Human Gene Ther. 11, 2009- 2024 ;  Nemunaitis et al., 2001, Gene Ther. 8, 746-759 ;  Alemany et al., 2000, Nature Biotechnology 18, 723-727参照）。例えば、それらは野生型アデノウイルスゲノムからＥ１Ａ  ＣＲ２ドメインを削除することにより（例えば、国際公開第００／２４４０８号参照）、ならびに／または天然Ｅ１および／もしくはＥ４プロモーターを、組織、腫瘍もしくは細胞状態特異的なプロモーターと置き換えることにより（例えば、米国特許第５，９９８，２０５号、国際公開第９９／２５８６０号、米国特許第５，６９８，４４３号、国際公開第００／４６３５５号、国際公開第００／１５８２０号および国際公開第０１／３６６５０号参照）、操作されてもよい。
【００６９】
代替的に、本発明で使用されるアデノウイルスベクターは複製欠損である（例えば、国際公開第９４／２８１５２号；Lusky et al., 1998, J. Virol 72, 2022-2032参照）。好ましい複製欠損アデノウイルスベクターは、Ｅ１欠失がほぼ４５９位から３３２８位まで、またはほぼ４５９位から３５１０位まで延びる（ＧｅｎｅＢａｎｋの受入番号Ｍ  ７３２６０にて開示されるヒトアデノウイルスタイプ５の配列、およびChroboczek et al., 1992, Virol. 186, 280-285を参照して）Ｅ１−欠損（例えば、米国特許第６，１３６，５９４号および米国特許第６，０１３，６３８号参照）である。クローニング能力は、アデノウイルスゲノムの追加の部分（一つまたは複数）（非必須Ｅ３領域または他の必須Ｅ２、Ｅ４領域の全部または一部）の削除により更に向上され得る。アデノウイルスベクターの任意の位置への核酸の挿入は、Chartier et al. (1996, J. Virol. 70, 4805-4810）に記載されているような相同組換えにより達成することができる。例えば、ＨＰＶ−１６  Ｅ６ポリペプチドをコードする核酸をＥ１領域と置き換えて挿入することができ、ＨＰＶ−１６  Ｅ７ポリペプチドをコードする核酸をＥ３領域と置き換えて挿入することができ、またはその逆も同様である。
【００７０】
別の好ましい態様において、本発明で使用されるベクターは、ポックスウイルスベクターである（例えば、Cox et al. "Viruses in Human Gene Therapy" Ed J. M. Hos, Carolina Academic Press参照）。別の好ましい態様によれば、ベクターはワクシニアウイルスからなる群より選択され、好適なワクシニアウイルスには、コペンハーゲン株（Goebel et al., 1990, Virol. 179, 247-266および517-563 ;  Johnson et al., 1993, Virol. 196, 381-401）、ワイス（Wyeth）株、およびＭＶＡを含む、それら由来の高度に弱毒化された弱毒化されたウイルス（再考には、Mayr, A., et al., 1975, Infection 3, 6-14参照）およびその誘導体（例えば、ＭＶＡワクシニア株５７５（ＥＣＡＣＣ  Ｖ００１２０７０７−米国特許第６，９１３，７５２号）、ＮＹＶＡＣ（国際公開第９２／１５６７２号−Tartaglia et al., 1992, Virology, 188, 217-232参照）等）が挙げられるが、これらに限定されるわけではない。ＭＶＡゲノムの完全配列の決定と、コペンハーゲンＶＶゲノムとの比較により、ＭＶＡゲノム内に生じた７つの欠失（Ｉ〜ＶＩＩ）を正確に同定することができ（Antoine et al., 1998, Virology 244, 365-396）、これらのいずれも抗原コード核酸の挿入に使用することができる。ベクターは、特にフォウルポックス（例えば、ＴＲＯＶＡＣ、Paoletti et al, 1995, Dev Biol Stand., 84, 159-163参照）；カナリアポックス（例えば、ＡＬＶＡＣ、国際公開第９５／２７７８０号、Paoletti et al, 1995, Dev Biol Stand., 84, 159- 163）；ピジョンポックス；スワインポックス等のポックスウイルス科の任意の他のメンバーからも得ることができる。例として、当業者は、そのような異種ヌクレオチド配列、特に抗原をコードするヌクレオチド配列を発現可能なポックスウイルスに基づく発現ベクターの生成を記載する国際公開第９２  １５６７２号（参照により組み入れられる）を参照することができる。
【００７１】
発現に必要な核酸および関連した調節エレメントをポックスウイルスゲノム内に挿入する基本的な技術は、当業者が利用できる多数の文書に記載されている（Paul et al., 2002, Cancer Gene Ther. 9, 470-477 ;  Piccini et al., 1987, Methods of Enzymology 153, 545-563；米国特許第４，７６９，３３０号；米国特許第４，７７２，８４８号；米国特許第４，６０３，１１２号；米国特許第５，１００，５８７号および米国特許第５，１７９，９９３号）。通常、ウイルスゲノムと、挿入する核酸を支持するプラスミドとの両方に存在する重複配列（即ち、所望の挿入部位）間で相同組換えが進行する。
【００７２】
本発明の抗原をコードする核酸は、組換えポックスウイルスが生存可能かつ感染性に留まるように、ウイルスゲノムの非必須座内に挿入されることが好ましい。非必須領域は、非コード化遺伝子間領域、または不活性化もしくは欠失がウイルス増殖、複製もしくは感染を有意に損なわない任意の遺伝子である。ウイルス粒子の生成中に、欠損機能がトランス内に供給されることを条件として、例えばポックスウイルスゲノム内で削除された配列に対応する相補配列を支持するヘルパー細胞株を使用することにより、必須ウイルス座内への挿入も想定することができる。
【００７３】
コペンハーゲンワクシニアウイルスを使用する場合、抗原コード核酸はチミジンキナーゼ遺伝子（ｔｋ）内に挿入されることが好ましい（Hruby et al., 1983, Proc. Natl. Acad. Sci USA 80, 3411-3415 ; Weir et al., 1983, J. Virol. 46, 530- 537）。しかしながら、他の挿入部位、例えばヘマグルチニン遺伝子内（Guo et al., 1989, J. Virol. 63, 4189-4198）、Ｋ１Ｌ座内、ｕ遺伝子内（Zhou et al., 10 1990, J. Gen. Virol. 71, 2185-2190）、または、様々な自発性欠失もしくは操作された欠失が文献に報告されているワクシニアウイルスゲノムの左末端も適切である（Altenburger et al., 1989, Archives Virol. 105, 15-27 ; Moss et al. 1981, J. Virol. 40, 387-395 ; Panicali et al., 1981,15 J. Virol. 37, 1000-1010 ; Perkus et al, 1989, J. Virol. 63, 3829-3836 ; Perkus et al, 1990, Virol. 179, 276-286 ; Perkus et al, 1991, Virol. 180, 406-410）。
【００７４】
ＭＶＡを使用する場合、抗原コード核酸は、同定された欠失Ｉ〜ＶＩＩの任意の一つ、およびＤ４Ｒ座内に挿入することができるが、欠失ＩＩまたはＩＩＩ内への挿入が好ましい（Meyer et al., 1991, J. Gen. Virol. 72, 1031-1038 ; Sutter et al., 1994, Vaccine 12, 1032-1040）。
【００７５】
フォウルポックスウイルスを使用する場合、チロシンキナーゼ遺伝子内への挿入を考慮することができるが、抗原コード核酸は、ＯＲＦ７〜９間に位置する遺伝子間領域内に導入されることが好ましい（例えば、欧州特許第３１４５６９号および米国特許第５，１８０，６７５号参照）。
【００７６】
特別な一態様によれば、前記組換えベクターは、組換えプラスミドＤＮＡまたは組換えウイルスベクターである。
別の特別な態様によれば、前記組換えウイルスベクターは、組換えアデノウイルスベクターである。
別の特別な態様によれば、前記組換えウイルスベクターは、組換えワクシニアベクターである。
別の特別な態様によれば、前記組換えワクシニアベクターは、組換えＭＶＡベクターである。
【００７７】
本発明で使用される抗原コード核酸は、宿主細胞または生物体内でその発現に適した形態にあることが好ましく、即ち抗原をコードする核酸配列が宿主細胞または生物体内で、その発現に必要な一つまたはそれ以上の調節配列の制御下に配置されていることが好ましい。本明細書で使用されるように、用語「調節配列」は、核酸またはその誘導体の一つ（即ちｍＲＮＡ）の複製、重複、転写、スプライシング、翻訳、安定性および／または宿主細胞内への輸送を含む、所定の宿主細胞内での核酸の発現を可能にし、または発現に寄与し、または発現を調節する任意の配列を指す。当業者は、調節配列の選択が、宿主細胞、ベクター、および所望の発現のレベル等の因子に依存し得ることを理解するであろう。抗原をコードする核酸は、真核生物細胞内で抗原核酸の発現を指示する遺伝子発現配列に作動可能に結合している。遺伝子発現配列は、該配列が作動可能に結合する抗原核酸の効率的な転写および翻訳を促進するプロモーター配列、またはプロモーター−エンハンサーの組み合わせ等の、任意の調節ヌクレオチド配列である。遺伝子発現配列は、例えば構成的プロモーターまたは誘導性プロモーター等の、哺乳動物またはウイルスプロモーターであってもよい。構成的哺乳動物プロモーターとしては、以下の遺伝子のためのプロモーターが挙げられるが、これらに限定されるわけではない：ヒポキサンチンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＰＲＴ）、アデノシンデアミナーゼ、ピルベートキナーゼ、ｂ−アクチンプロモーターおよび他の構成的プロモーター。真核生物細胞内で構成的に機能する例示的なウイルスプロモーターとしては、例えば、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、サルウイルス（例えば、ＳＶ４０）、乳頭腫ウイルス、アデノウイルス、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、ラウス肉腫ウイルス、サイトメガロウイルス、モロニー白血病ウイルスの長い末端反復（ＬＴＲ）および他のレトロウイルスからのプロモーター、ならびに単純ヘルペスウイルスのチロシンキナーゼプロモーターが挙げられる。他の構成的プロモーターは、当業者に公知である。本発明の遺伝子発現配列として有用なプロモーターは、誘導性プロモーターも含む。誘導性プロモーターは、誘発因子の存在下で発現される。例えば、メタロチオネインプロモーターは、金属イオンの存在下で、所定の転写および翻訳を促進するよう誘発される。他の誘導性プロモーターは、当業者に公知である。一般に、遺伝子発現配列は、必要に応じて、ＴＡＴＡボックス、キャッピング配列、ＣＡＡＴ配列等の、それぞれが転写および翻訳の開始に係わる５′非転写および５′非翻訳配列を含むべきである。特に、そのような５′非転写配列は、作動可能に連結した抗原核酸の転写制御のためのプロモーター配列を含むプロモーター領域を有するであろう。遺伝子発現配列は場合により、所望によるエンハンサー配列または上流活性化因子配列を含む。ポックスウイルスベクター内で使用するのに好ましいプロモーター（下記参照）としては、ワクシニアプロモーター７．５Ｋ、Ｈ５Ｒ、ＴＫ、ｐ２８、ｐ１１およびＫ１Ｌ、初期と後期ポックスウイルスプロモーター間のキメラプロモーター、ならびにChakrabarti et al. (1997, Biotechniques 23, 1094-1097), Hammond et al. (1997, J. Virological Methods 66, 135-138）およびKumar and Boyle (1990, Virology 179, 151-158）に記載されているような合成プロモーターが挙げられるが、これらに限定されるわけではない。
【００７８】
プロモーターは特に重要であり、本発明は、多数の種類の宿主細胞内で核酸の発現を指示する構成的プロモーターと、所定の宿主細胞内でのみ、または特定の事象もしくは外来因子（例えば、温度、栄養素添加物、ホルモンもしくは他のリガンドによる）に応答して発現を指示する構成的プロモーターの使用を包含する。好適なプロモーターは文献に広く記載されており、例えばＲＳＶ、ＳＶ４０、ＣＭＶおよびＭＬＰプロモーター等のウイルスプロモーターをより具体的に引用することができる。ポックスウイルスベクター内で使用するのに好ましいプロモーターとしては、ワクシニアプロモーター７．５Ｋ、Ｈ５Ｒ、ＴＫ、ｐ２８、ｐ１１およびＫ１Ｌ、初期と後期ポックスウイルスプロモーター間のキメラプロモーター、ならびにChakrabarti et al. (1997, Biotechniques 23, 1094-1097）、Hammond et al.(1997, J. Virological Method 66, 135-138）およびKumar and Boyle (1990, Virology 179, 151-158)に記載されているような合成プロモーターが挙げられるが、これらに限定されるわけではない。
【００７９】
当業者は、本発明の核酸分子の発現を制御する調節エレメントは、転写の適切な開始、調節および／または終止（例えば、ｐｏｌｙＡ転写終止配列）、ｍＲＮＡ輸送（例えば、核極在化シグナル配列）、プロセシング（例えば、スプライシングシグナル）、および安定性（例えば、イントロンならびに非コード化５′および３′配列）、宿主細胞または生物体への翻訳（例えば、ペプチドシグナル、プロペプチド、三者間リーダー配列（tripartite leader sequence）、リボソーム結合部位、Ｓｈｉｎｅ−Ｄａｌｇａｍｏ配列等）のための追加のエレメントを更に含んでなり得ることを理解するであろう。
【００８０】
代替的に、本発明で使用される組換えベクターは、少なくとも一つのサイトカインをコードする少なくとも一つの核酸を更に含んでなり得る。好適なサイトカインとしては、インターロイキン（例えば、ＩＬ−２、ＩＬ−７、ＩＬ−１５、ＩＬ−１８、ＩＬ−２１）およびインターフェロン（例えば、ＩＦＮγ、ＩＮＦα）が挙げられるが、これらに限定されるわけではなく、インターロイキンＩＬ−２が特に好ましい。本発明の組換えワクチンがサイトカイン発現核酸を含む場合、前記核酸は一つもしくはそれ以上の抗原をコードする組換えベクター、または同一のもしくは異なる起源のものであってもよい独立した組換えベクターにより支持され得る。
【００８１】
好ましい一態様によれば、本発明で使用される組換えベクターは、ＭＵＣ１抗原、上記に列挙されている少なくとも一つのサイトカイン、および好ましくはインターロイキン、特にＩＬ２の全部または一部をコードする。本発明で使用される好ましい組換えベクターは、ＭＵＣ１抗原、上記に列挙されている少なくとも一つのサイトカイン、および好ましくはインターロイキン、特にＩＬ２の全部または一部をコードするＭＶＡである。
【００８２】
上述した組換えウイルスベクターを含んでなる感染性ウイルス粒子は、日常的プロセスにより作製することができる。例示的なプロセスは、
ａ．ウイルスベクターを好適な細胞株内に導入し、
ｂ．前記細胞株を好適な条件下で培養して前記感染性ウイルス粒子を生成し、
ｃ．生成された感染性ウイルス粒子を前記細胞株の培養物から回収し、
ｄ．場合により前記回収した感染性ウイルス粒子を精製することを含んでなる。
【００８３】
アデノウイルスベクターの増殖に適切な細胞は、例えば２９３細胞、ＰＥＲＣ６細胞、ＨＥＲ９６細胞、または国際公開第９４／２８１５２号、国際公開第９７／００３２６号、米国特許第６，１２７，１７５号に開示されている細胞である。
【００８４】
ポックスウイルスベクターの増殖に適切な細胞は、鳥の細胞であり、最も好ましくは受精卵から得られる鶏胚から準備された一次鶏胚線維芽細胞（ＣＥＦ）である。
【００８５】
感染性ウイルス粒子は、培養物上澄み、または溶解（例えば、化学的手段、凍結／解凍、浸透圧衝撃、機械的衝撃（mecanic shock）、超音波処理等による）後の細胞から回収されてもよい。ウイルス粒子は、プラーク精製（plaque purification）の連続ラウンドにより単離された後、当技術分野の方法（クロマトグラフ法、塩化セシウム又ショ糖勾配超遠心分離法）を用いて精製されてもよい。
【００８６】
所望であれば、本発明による患者のヒト疾病ヒト疾病の治療のための方法または使用（即ち、少なくとも一種の抗原を含んでなる免疫原性組成物の投与による）は、選択された患者において、一つまたはそれ以上の従来の治療的モダリティ（例えば、放射線、化学療法および／または手術）と共に行ってもよい。複数の治療的手法の使用は、選択された患者に、より幅広い治療的介入を提供する。一態様では、本発明による患者のヒト疾病ヒト疾病の治療のための方法または使用は、外科的介入の前または後であってもよい。別の態様では、本発明による患者のヒト疾病の治療のための方法または使用は、放射線治療（例えば、γ線）の前または後であってもよい。当業者は、使用し得る適切な放射線療法プロトコールおよびパラメータを容易に定めることができる（例えば、Perez and Brady, 1992, Principles and Practice of Radiation Oncology, 2nd Ed. JB Lippincott Coを参照；当業者に容易に明らかであろう適切な適応および変更を用いて）。尚別の態様では、本発明の方法または使用は、一種またはそれ以上の薬物（例えば、ウイルス感染症、ウイルス関連の病態、癌等の治療または予防に都合よく使用される薬物）を用いた化学療法に関連する。
【００８７】
従って、本発明は、化学療法薬により化学療法を受けている癌患者の治療を改善する方法であって、以下の工程：
−低いレベルの活性化ＮＫ細胞を有する患者から構成される患者集団から患者を選択し、
−前記選択された患者に本発明による免疫原性組成物および化学療法薬を投与すること
を含んでなる方法に関する。
【００８８】
従って、本発明は、化学療法薬による化学療法治療を受けている癌患者の治療を改善する方法であって、以下の工程：
−患者内のＮＫ細胞のレベルを測定し、
−患者が、本発明の低いレベルの活性化ＮＫ細胞を有する場合、患者に前記免疫原性組成物および化学療法薬を投与すること
を含んでなる方法に関する。
【００８９】
一態様によれば、前記化学療法薬の投与は、前記免疫原性組成物の投与に先立って行われる。
別の態様によれば、前記化学療法薬の投与は、前記免疫原性組成物の投与後に行われる。
別の態様によれば、前記化学療法薬の投与は、前記免疫原性組成物の投与と同時に行われる。
一態様によれば、前記化学療法薬は、シスプラチンおよび／またはゲムシタビン、またはそれらの等価物である。
【００９０】
本発明は更に、細胞傷害性薬物の細胞傷害有効性または放射線治療を改善する方法に関し、該方法は、低いレベルの活性化ＮＫ細胞を有する患者から構成される患者集団から選択された患者を、本発明による免疫原性組成物で共治療することを含んでなる。
【００９１】
別の態様において、本発明の方法または使用は、プライムブースト治療モダリティに従って行われ、該モダリティは、一種またはそれ以上のプライマー組成物と、一種またはそれ以上のブースター組成物との連続投与を含んでなる。一般に、プライミングおよびブースティング組成物は、共通の少なくとも一つの抗原ドメインを含んでなるまたはコードする異なる媒体を使用する。プライミング組成物が最初に宿主生物体に投与され、続いて１日〜１２ヶ月の様々な期間の後に、ブースティング組成物が同一の宿主生物体に投与される。本発明の方法は、プライミング組成物の１〜１０回の連続投与と、続くブースティング組成物の１〜１０回の連続投与とを含んでなってもよい。望ましくは、注入の間隔は、１週間〜６ヶ月の程度である。更に、プライミング組成物およびブースティング組成物は、同一の部位に投与されても、または同一の投与経路もしくは異なる投与経路により別の部位に投与されてもよい。
【００９２】
特別な一態様によれば、本発明は、前記ヒト疾病が癌である、上記に記載した方法に関する。
【００９３】
好ましい態様によれば、前記癌は、例えば乳癌、結腸癌、腎臓癌、直腸癌、肺癌、頭頸部癌、腎癌、悪性黒色腫、喉頭癌、卵巣癌、頸部癌、前立腺癌、非小細胞肺癌、血液癌、胃癌、骨髄腫である。
【００９４】
特別な一態様によれば、本発明は、前記ヒト疾病が感染症である、上記に記載した方法に関する。
【００９５】
好ましい態様によれば、前記感染症は、例えばＨＩＶ、ＨＣＶ、ＨＢＶ、ＨＰＶ等により誘発される疾病等のウイルス誘発疾病である。
【００９６】
更なる態様において、特定の患者集団における患者のヒト疾病を治療する医薬を製造するための、標的抗原の全部または一部を含んでなる免疫原性組成物の使用を提供し、ここで前記集団の患者は、低いレベルの活性化ＮＫ細胞を有する。
【００９７】
更なる態様において、特定の患者集団における患者内の免疫応答を誘発して（即ち、免疫応答を高めて）、患者のヒト疾病を治療する医薬を製造するための免疫原性組成物の使用を提供し、ここで前記集団の患者は、低いレベルの活性化ＮＫ細胞を有する。
【００９８】
別の態様において、特定の患者集団における患者内の少なくとも一種の抗原に対する免疫応答を誘発して（即ち、免疫応答を高めて）、患者のヒト疾病を治療する医薬を製造するための免疫原性組成物の使用を提供し、ここで前記集団の患者は、低いレベルの活性化ＮＫ細胞を有する。
【００９９】
別の態様において、特定の患者集団における患者内の標的抗原に対する免疫応答を誘発して（即ち、免疫応答を高めて）、患者のヒト疾病を治療する医薬を製造するための免疫原性組成物の使用を提供し、ここで前記集団の患者は、低いレベルの活性化ＮＫ細胞を有する。
【０１００】
別の態様において、特定の患者集団における患者内の免疫応答を誘発して（即ち、免疫応答を高めて）、患者のヒト疾病を治療する医薬を製造するための免疫原性組成物の使用を提供し、ここで前記集団の患者は、低いレベルの活性化ＮＫ細胞を有し、前記高められた免疫応答は、自然免疫応答である。
【０１０１】
特別な一態様によれば、前記患者集団における前記「高められた免疫応答」は、腫瘍特異的もしくは腫瘍関連抗原および／またはウイルス抗原に指向される。一態様によれば、前記患者集団における前記「高められた免疫応答」は、異なる抗原に指向される。特別な一態様によれば、前記患者集団における前記「高められた免疫応答」は、ＭＵＣ１抗原の全部または一部に指向される。別の特別な態様によれば、前記患者集団における前記「高められた免疫応答」は、Ｔ細胞免疫応答であり、好ましくはＣＤ８＋（細胞傷害性Ｔリンパ球）免疫応答である。別の特別な態様によれば、前記患者集団における前記「高められた免疫応答」は、非特異的免疫応答である。別の特別な態様によれば、前記患者集団における前記「高められた免疫応答」は、自然免疫応答の刺激である。
【０１０２】
動物またはヒト生物体内への投与後の免疫応答の誘発または刺激の能力は、当技術分野にて標準的な多様なアッセイを用いてインビトロまたはインビボのいずれかで評価することができる。免疫応答の開始および活性化の評価に利用可能な技術の一般的記載に関しては、例えばColigan et al. (1992 and 1994, Current Protocols in Immunology ; ed J Wiley & Sons Inc, National Institute of Health)を参照されたい。細胞免疫の測定は、ＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞に由来するものを含む、活性化エフェクター細胞により分泌されるサイトカインプロファイルの測定（例えば、ＥＬＩスポットによるＩＬ−１０もしくはＩＦＮγ産生細胞の定量化）、または免疫エフェクター細胞の活性化状態の測定（例えば、古典的な［３Ｈ］チミジン取り込みによるＴ細胞増殖アッセイ）、または感作された患者における抗原特異的なＴリンパ球に関するアッセイ（例えば、細胞傷害性アッセイにおけるペプチド特異的な溶解）、または蛍光ＭＨＣおよび／もしくはペプチド多量体（例えば、四量体）による抗原特異的なＴ細胞の検出により行われてもよい。液性応答を刺激する能力は、抗体結合および／または結合の競合により測定することができる（例えば、Harlow, 1989, Antibodies, Cold Spring Harbor Pressを参照）。本発明の方法はまた、抗−抗原免疫応答の誘発または増強を反映する抗−腫瘍活性を測定するために、適切な腫瘍誘発剤（例えば、ＭＵＣ１−発現ＴＣ１細胞）でチャレンジした動物モデルにおいて検証することができる。
【０１０３】
従って、本発明は更に、免疫原性組成物を投与することによるヒト疾病、例えば癌の治療を受けている患者の生存を延長する方法であって、以下の工程：
−低いレベルの活性化ＮＫ細胞を有する患者から構成される患者集団から患者を選択し、
−選択された患者に前記免疫原性組成物を投与すること
を含んでなる方法に関する。
【０１０４】
本発明は更に、免疫原性組成物を投与することによる、ヒト疾病、例えば癌の治療を受けている患者の生存率を延長する方法であって、以下の工程：
−患者内の活性化ＮＫ細胞のレベルを測定し、
−患者が低いレベルの活性化ＮＫ細胞を有する場合、患者に免疫原性組成物を投与すること
を含んでなる方法に関する。
【０１０５】
本発明は更に、免疫原性組成物および化学療法薬（上記参照）を投与することによる、ヒト疾病、例えば癌の治療を受けている患者の生存率を延長する方法であって、以下の工程：
−患者内のＮＫ細胞のレベルを測定し、
−患者が低いレベルの活性化ＮＫ細胞を有する場合、患者に免疫原性組成物および化学療法薬を投与すること
を含んでなる方法に関する。
【０１０６】
別の態様によれば、本発明は、患者が免疫原性組成物の投与により予防的または治療的免疫応答を発生し易いか否かを予測するためのバイオマーカーとしての活性化ＮＫ細胞の使用に関する。
【０１０７】
より詳細には、本発明は、患者が免疫原性組成物の投与により予防的または治療的免疫応答を発生し易いか否かを予測するためのバイオマーカーとしての活性化ＮＫ細胞のレベルの使用に関し、ここで低いレベルの活性化ＮＫ細胞は、患者の予防的または治療的免疫応答の発生し易さが増大されていることが予測されることを示す。
【０１０８】
換言すれば、本発明は、患者が免疫原性組成物の投与後に、より長く生存し易いか否かを予測するためのバイオマーカーとしての活性化ＮＫ細胞のレベルの使用に関し、ここで低いレベルの活性化ＮＫ細胞は、患者が、より高いレベルの活性化ＮＫ細胞を有する治療された患者と比較して、より長い生存率を有することが予測されることを示す。
【０１０９】
従って、本発明は更に、化学療法薬による化学療法治療を受けている患者が、免疫原性組成物の投与後に予防的または治療的免疫応答を発生し易いか否か（例えば、より長く生存するために）を予測するためのバイオマーカーとしての活性化ＮＫ細胞のレベルの使用に関する。
【０１１０】
従って、本発明は更に、化学療法薬による化学療法治療を受けている患者が、免疫原性組成物の投与後に予防的または治療的免疫応答を発生し易いか否か（例えば、より長く生存するために）を予測するためのバイオマーカーとしての活性化ＮＫ細胞のレベルの使用に関し、ここで低いレベルの活性化ＮＫ細胞は、患者の予防的または治療的免疫応答の発生し易さが増大されていることが予測されることを示す。
【０１１１】
従って、本発明は、化学療法薬による化学療法治療を受けている癌患者の治療を改善する方法であって、以下の工程：
−患者内のＮＫ細胞のレベルを測定し、
−前記患者が、本発明の低いレベルの活性化ＮＫ細胞を有する場合、患者に前記免疫原性組成物および化学療法薬を投与すること
を含んでなる方法に関する。
【０１１２】
本発明は更に、免疫原性組成物を投与することによる、ヒト疾病、例えば癌の治療を受けている患者の生存を延長する方法であって、以下の工程：
−患者内のＮＫ細胞のレベルを測定し、
−患者が低いレベルの活性化ＮＫ細胞を有する場合、患者に免疫原性組成物を投与すること
を含んでなる方法に関する。
【０１１３】
本発明は更に、免疫原性組成物および化学療法薬（上記参照）を投与することによる、ヒト疾病、例えば癌の治療を受けている患者の生存を延長する方法であって、以下の工程：
−患者内の活性化ＮＫ細胞のレベルを測定し、
−前記患者が低いレベルの活性化ＮＫ細胞を有する場合、患者に前記免疫原性組成物および化学療法薬を投与すること
を含んでなる方法に関する。
【０１１４】
本発明は、本明細書に記載した方法を実施するための、本明細書に提供した実施例から明らかであろう部品を含むキット（即ち、コンパニオンテスト）も提供する。部品からなるキット（一つまたは複数）は、活性化ＮＫ細胞の血清レベルの収集およびまたは測定のための試薬を含んでもよい。そのような試薬は、抗体を含んでもよい。キットは、生物学的サンプルを収集および／または処理する装置を更に含んでもよい。キットは、使用説明書、カットオフ値および／またはそれらの測定のための説明書、ならびにキットを使用して得られたデータを解釈する説明書も含むと思われる。
【０１１５】
特別な一態様によれば、前記部品からなるキット（一つまたは複数）は、上記に開示した、および／または下記の実施例部分に開示される免疫原性組成物を更に含んでもよい。
【０１１６】
本発明は更に、臨床試験と活性化ＮＫ細胞レベルを監視するコンピュータプログラムおよび／またはアルゴリズムを提供し、そのようなレベルが閾値レベルを上回るかまたは下回るかを決定し、および／または治療レジメンの変更を推薦して、患者の免疫療法に対する応答を改善する。コンピュータプログラムおよび／またはアルゴリズムは、例えばキットまたは機器の形態の必須のハードウェアと共に提供されてもよく、該キットまたは機器はまた生物学的サンプルを受容し、サンプル中に存在する活性化ＮＫ細胞の相対的なレベルを測定し得る。上述したコンピュータプログラムおよび／または機器は、適切な説明書、および抗体を含む試薬と共に、内科医または臨床検査室に提供されると思われる。
【０１１７】
本発明は例証様式にて記載されており、使用した用語は、記載された単語の本質に含まれることを意図し、限定するものではない。上記の教示を考慮すれば、本発明の多数の修正および変更が明らかに可能である。従って、本発明は、付属の請求項の範囲内において、本明細書に詳細に記載されるものとは異なる方法で実施できることを理解するべきである。
【０１１８】
上記に引用した全ての特許、刊行物およびデータベース事項は、それらの個々の特許、刊行物または事項の各々が参照により組み入れられることを明確に、かつ個別に示された場合と同一の範囲で、それらの全体が参照により本明細書に明確に組み入れられる。
【実施例】
【０１１９】
実施例１：
免疫原性組成物、有名なワクチンＴＧ４０１０を使用し、標準的な化学療法と組み合わせて、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）患者を治療した。
【０１２０】
ＴＧ４０１０は、ＩＬ２および腫瘍関連の抗原ＭＵＣ１の両方を発現している組換え修飾ウイルスＡｎｋａｒａ（ＭＶＡ）である。
【０１２１】
１４８人の患者を、
−化学療法（ｄ１にシスプラチン７５ｍｇ／ｍ２および１日目と８日目にゲムシタビン１２５０ｍｇ／ｍ２を３週間毎に６サイクルまで）を単独で（Ｓｔｕｄｙ  Ａｒｍ  ２）、または、
−化学療法をＴＧ４０１０（Ｓｔｕｄｙ  Ａｒｍ  １）と一緒に
受容するよう無作為化した。
【０１２２】
腫瘍は６週間毎に評価された（ＷＨＯ基準）。終点は、分析の処理を目的とする６ヶ月目における無進行生存（ＰＦＳ）と、全生存であった。
【０１２３】
治療の前に血液サンプルを採取し、中央免疫学研究所（central immunology lab）へ直ちに出荷し、該研究所にて血液から末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を単離し、分析まで冷凍保管した。
【０１２４】
ＰＢＭＣはＣＤ１６、ＣＤ５６およびＣＤ６９の発現に関して、それらの抗原に特異的なモノクローナル抗体（各々、ＩＭ０８１４、ＩＭ２０７３およびＩＭ２６５６、全てベックマンコールター社より）を用いて、フローサイトメトリーにより評価された。これらの抗原を発現している細胞の割合は、評価された全リンパ球の％、またはＰＢＭＣ集団中のＣＤ１６＋  ＣＤ５６＋  およびＣＤ６９＋  の数／全血として表すことができる。
【０１２５】
図１は、ベースラインで＜３．４５％のＣＤ１６＋  ＣＤ５６＋  ＣＤ６９＋  リンパ球を有する患者［Ａｒｍ  １（ＴＧ４０１０＋化学療法）］が、ＴＧ４０１０ワクチンおよび化学療法の両方で治療された際、＞３．４５％のＣＤ１６＋  ＣＤ５６＋  ＣＤ６９＋  リンパ球を有する患者（中間生存期間１７．１ヶ月）よりも長く生存することを示す（中央生存期間＝１６．１ヶ月）。
【０１２６】
同様に、図２のデータは、患者が＜  または  ＞３５のＣＤ１６＋  ＣＤ５６＋  ＣＤ６９＋  リンパ球／μｌ全血（ＰＢＭＣを用いた測定値に基づき）に基づいて選択される場合に、同一の結果が達成されることを示す。＜３５のＣＤ１６＋  ＣＤ５６＋  ＣＤ６９＋  リンパ球／μｌ全血（ＰＢＭＣを用いた測定値に基づき）を有する患者は、≧３５のＣＤ１６＋  ＣＤ５６＋  ＣＤ６９＋  リンパ球／全血（ＰＢＭＣを用いた測定値に基づき）を有する患者（中央生存期間＝９．９ヶ月）よりも長く生存する（中央生期間＝１９．９ヶ月）。
【０１２７】
図３および図４のデータは、リンパ球上でのＣＤ１６、ＣＤ５６およびＣＤ６９の発現に基づく患者の選択の効果が、ワクチンを受容している患者に限定されることを示す。図３は、ベースラインで＜  または  ≧３．４５％のＣＤ１６＋  ＣＤ５６＋  ＣＤ６９＋  リンパ球を有する患者が、同一の生存予想値を有することを示す。図４は、ベースラインで３５のＣＤ１６＋  ＣＤ５６＋  ＣＤ６９＋  リンパ球／μｌ全血を用いた観察を示す。
【図面の簡単な説明】
【０１２８】
【図１】肺癌におけるワクチン免疫療法を記載する生存曲線：＜  または  ＞３．４５％の活性化ＮＫを有する患者    グループ１：低いレベルの活性化ＮＫ細胞を有する患者におけるワクチン（即ち、免疫原性組成物）＋化学療法。低いレベルは、末梢血中の＜３．４５％のＣＤ１６＋  ＣＤ５６＋  ＣＤ６９＋  リンパ球と定義する。患者４８人    グループ２：高いレベルの活性化ＮＫ細胞を有する患者におけるワクチン＋化学療法。高いレベルは、末梢血中の＞３．４５％のＣＤ１６＋  ＣＤ５６＋  ＣＤ６９＋  リンパ球と定義する。患者２１人有意な差異、ｌｏｇ  ｒａｎｋによる：ｐ＝０．００１８Ｏ  完了＋打ち切り
【図２】肺癌におけるワクチン免疫療法を記載する生存曲線：＜  または  ＞３５の活性化ＮＫ／μｌ全血を有する患者。    グループ１：低いレベルの活性化ＮＫ細胞を有する患者におけるワクチン＋化学療法。低いレベルは、＜３５のＣＤ１６＋  ＣＤ５６＋  ＣＤ６９＋  リンパ球／μｌ末梢血と定義する。患者３３人。    グループ２：高いレベルの活性化ＮＫ細胞を有する患者におけるワクチン＋化学療法。高いレベルは、≧３５のＣＤ１６＋  ＣＤ５６＋  ＣＤ６９＋  リンパ球／μｌ末梢血と定義する。患者の２２人。有意な差異、ｌｏｇ  ｒａｎｋによる：ｐ＝０．０１７Ｏ  完了＋打ち切り
【図３】肺癌における化学療法を記載する生存曲線：＜  または  ＞３．４５％の活性化ＮＫを有する患者    グループ１：低いレベルの活性化ＮＫ細胞を有する患者における化学療法単独（ワクチンなし）。低いレベルは、末梢血中の＜３．４５％のＣＤ１６＋  ＣＤ５６＋  ＣＤ６９＋  リンパ球として定義する。患者５３人。    グループ２：高いレベルの活性化ＮＫ細胞を有する患者における化学療法単独（ワクチンなし）。高いレベルは、末梢血中の＞３．４５％のＣＤ１６＋  ＣＤ５６＋  ＣＤ６９＋  リンパ球として定義する。患者１６人。有意な差異、ｌｏｇ  ｒａｎｋによる：ｐ＝０．３０（統計的に有意ではない）Ｏ  完了＋打ち切り
【図４】肺癌における化学療法を記載する生存曲線：＜  または  ＞３５の活性化ＮＫ／μｌ全血を有する患者。    グループ１：低いレベルの活性化ＮＫ細胞を有する患者における化学療法単独（ワクチンなし）。低いレベルは、＜３５のＣＤ１６＋  ＣＤ５６＋  ＣＤ６９＋  リンパ球／μｌ末梢血として定義する。患者４５人。    グループ２：化学療法単独（ワクチンなし）。患者１６人有意な差異、ｌｏｇ  ｒａｎｋによる：ｐ＝０．０８（有意ではない）Ｏ  完了＋打ち切り
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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