(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒト癌患者に対して使用する、全身性抗腫瘍免疫応答を誘起することによって限局性或いは転移性腫瘍の量の増加を抑制または遅延させる薬剤の製造のための非増殖性アデノウィルス遺伝子を運搬するベクターの利用法であって、該ベクターは腫瘍に投与され、該ベクターはチミジンキナーゼをコード化したヌクレオチド配列を含んでおり、該チミジンキナーゼをコード化したヌクレオチド配列は、唯一のプロドラッグ活性化遺伝子であり、そして該ヒト癌患者は該ベクターの投与後にガンシクロビル或いは類似プロドラッグを投与され、
前記遺伝子運搬ベクターと前記プロドラッグは前記癌患者に対して放射線療法との組み合わせで投与されることを特徴とする利用法。
【請求項２】
前記ベクターは、免疫賦活遺伝子、ゼノ抗原、前記腫瘍に対するハイパー抗原或いはスーパー抗原をさらに含んでいることを特徴とする請求項１記載の利用法。
【請求項３】
前記プロドラッグはバルシクロビル、ファムシクロビル或いはその他の経口投与用類似体であることを特徴とする請求項１または２記載の利用法。
【請求項４】
前記ベクターはインターフェロン、コロニー刺激因子、インターロイキン、ケモカイン或いは共刺激分子である追加の外因性遺伝子を運搬することを特徴とする請求項１から３のいずれかに記載の利用法。
【請求項５】
標的の腫瘍は前立腺癌、頭部、首、頚部、脳、膀胱、直腸、膵臓、結腸、肺臓或いは乳房の腫瘍であることを特徴とする請求項１から４のいずれかに記載の利用法。
【請求項６】
前記腫瘍は前立腺の腫瘍であることを特徴とする請求項５記載の利用法。
【請求項７】
前記ベクターは１０9から１０15の有効粒子投与量で投与されるように製剤されているこ
とを特徴とする請求項１から６のいずれかに記載の利用法。
【請求項８】
前記ベクターは１０9から１０13の有効粒子投与量で投与されるように製剤されているこ
とを特徴とする請求項１から７のいずれかに記載の利用法。
【請求項９】
前記ベクターは１０9から１０11の有効粒子投与量で投与されるように製剤されているこ
とを特徴とする請求項１から８のいずれかに記載の利用法。
【請求項１０】
ヒト癌患者に対して使用する、全身性抗腫瘍免疫応答を誘起することによって限局性或いは転移性腫瘍の量の増加を抑制または遅延させる組成物であって、該組成物は非増殖性アデノウィルス遺伝子運搬ベクターを含有し、そして、該ベクターはチミジンキナーゼをコード化したヌクレオチド配列を含んでおり、該チミジンキナーゼをコード化したヌクレオチド配列は、唯一のプロドラッグ活性化遺伝子であり；
前記組成物は、腫瘍に投与され、そして、前記ヒト癌患者は前記組成物の投与後にガンシクロビル或いは類似プロドラッグを投与されることを特徴とし；
前記組成物と前記プロドラッグは前記癌患者に対して放射線療法との組み合わせで投与されることをさらに特徴とする組成物。
【請求項１１】
前記ベクターは、免疫賦活遺伝子、ゼノ抗原、前記腫瘍に対するハイパー抗原或いはスーパー抗原をさらに含んでいることを特徴とする請求項１０記載の組成物。
【請求項１２】
前記プロドラッグはバルシクロビル、ファムシクロビル或いはその他の経口投与用類似体であることを特徴とする請求項１０または１１記載の組成物。
【請求項１３】
前記ベクターはインターフェロン、コロニー刺激因子、インターロイキン、ケモカイン或いは共刺激分子である追加の外因性遺伝子を運搬することを特徴とする請求項１０から１２のいずれかに記載の組成物。
【請求項１４】
標的の腫瘍は前立腺癌、頭部、首、頚部、脳、膀胱、直腸、膵臓、結腸、肺臓或いは乳房の腫瘍であることを特徴とする請求項１０から１３のいずれかに記載の組成物。
【請求項１５】
前記腫瘍は前立腺の腫瘍であることを特徴とする請求項１４記載の組成物。
【請求項１６】
前記ベクターは１０9から１０15の有効粒子投与量で投与されるように製剤されているこ
とを特徴とする請求項１０から１５のいずれかに記載の組成物。
【請求項１７】
前記ベクターは１０9から１０13の有効粒子投与量で投与されるように製剤されているこ
とを特徴とする請求項１０から１６のいずれかに記載の組成物。
【請求項１８】
前記ベクターは１０9から１０11の有効粒子投与量で投与されるように製剤されているこ
とを特徴とする請求項１０から１７のいずれかに記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【技術分野】
関連出願
本願は１９９９年１０月７日出願の米国仮特許願第６０/１５８０６８号「遺
伝子治療による固体腫瘍及び転移の治療方法」の優先権を主張する。
米国政府の権利
本研究は米国政府の援助資金を受けた。よって、米国政府は本願発明に一定の
権利を主張することができる。
技術分野
本願発明は一般的に癌治療に関し、特定すれば、ベクター構造体、プロドラッ
グ活性技術、免疫刺激構造体及び現在の標準治療法と両立する方法によるそれら
の利用を通じた固体腫瘍の成長と転移の抑制方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
発明の背景
癌患者の増加
癌は何百万もの人々を苦しめている。癌は米国で第２位の死因であり、全死亡
件数の４分の１を占める。初期形態、転移形態を含んで多くの異なるタイプの癌
症状が存在し、次のものは米国における予想された疾病率と死亡率の一部である
(S. H :Landis, T. Murray, S. Bolden and P. A. Wingo, CA Cancer J. Clin. 49: 8-31,1999)。
【０００３】
１９９９年に１２２１８００名が新たに癌にかかると予測された。そのうち、
６２３８００名は男性であり、５９８０００名は女性である。２７００００件の
生殖器系腫瘍（子宮頚部、子宮体、卵巣、陰門、膣、前立腺、睾丸等々）、２２
６０００件の消化器系腫瘍（食道、胃、小腸、結腸、直腸、肛門、膵臓、肝臓等
々）、１８００００件の新たに診断される乳癌が発生すると予測された。残りの新
たに診断された癌を含んだその他の腫瘍には、泌尿系（８６５００件）、リンパ
腫（６４０００件）、呼吸器系（１８７６００件）、脳及び他の神経系（１７０００件）、皮膚（
５４０００件）が含まれる。非固体腫瘍（白血病）は新規に診断された腫瘍のう
ちのたった３００００件である。
【０００４】
１９９９年に癌で５６００００名が死亡すると予測された（２９００００名の
男性と２７００００名の女性）。女性の中で、６１０００名は消化器系、６９０
００名は呼吸系（ほとんどが肺癌）、４３０００名が乳癌で死亡し、その他の固
体腫瘍部位での死亡は２７０００名であると予測された。非固体腫瘍の癌を原因
とする死亡は約９７００名を占めると予測された。男性では、７００００名が消
化器系、９５０００名が呼吸系（ほとんどが肺癌）、３７０００名が前立腺癌で
、残りの２９００００名はその他の腫瘍が原因であると予測された。たった１２
０００名の癌による死亡者が非固体腫瘍によるものと予測された。
【０００５】
癌による死亡のほとんどは病気の転移によるものである。転移性の疾患とは元
来の部位以外での腫瘍細胞の成長である。癌患者に初期の診断で転移が発見され
ないことは異常ではない。これらは微小転移(micrometastasis)と呼称されるこ
とがある。
現行治療法
癌は細胞の無制御な分裂を特徴とする。この無制御分裂は典型的には腫瘍の形
成につながる。それはその後に他の部位に転移することがある。
【０００６】
現行の癌治療法は大きく４つのカテゴリーに分類できる。手術治療、放射線治
療、化学治療及び免疫治療である。
【０００７】
手術による腫瘍治療はさらに３種に分類される。治癒を目的としたもの、縮小
を目的としたもの及び（痛み等の）軽減を目的としたものである。手術の主要な
目的は腫瘍を完全に切除し、“正常な”周囲部を確保することである。腫瘍を完
全に取り除くことはしばしば不可能である。腫瘍の部位の問題であったり、周囲
の正常組織が侵略されている場合である。例えば、神経根、筋肉または骨内に侵
略した腫瘍の場合である。手術は、血液またはリンパ管を介して他部位に転移し
ておらず、手術が困難な組織を冒していない癌の初期段階で診断された腫瘍に必
要な唯一の治療である。しかし、そのような場合でさえ追加的治療を要するであ
ろう。例えば、乳腺腫瘤摘出手術を受けた女性患者は再発防止のため、手術後に
放射線治療を受けることが多い。患者が手術のみで治癒すると認定されるには完
全な潜伏評価が必要である。この潜伏評価は病気が拡散していないことを確認す
るものである。しかし、その後でも、腫瘍を完全に切除したと考えられた多くの
患者で再発が見られる。手術は腫瘍縮小のためにも実行される。腫瘍はさらに化
学治療あるいは放射線治療、またはそれらの両方で抑制される。放射線治療及び
化学治療を最初に実施する理由は、当初、腫瘍が大きすぎて切除できず、手術が
できる程度にまで腫瘍を縮小させなければならないからである。手術の別の役割
は軽減（例えば、痛みの除去）である。この意味では手術は治療ではなく、症状
の軽減を目的とする。脊椎を圧迫する病気を有した患者の軽減腫瘍手術の場合、
腫瘍は痛みや神経欠損の症状を和らげるために取り除かれる。簡単に言えば、手
術は癌の切除により癌を治療するものである。
【０００８】
放射線治療は癌患者の約５０％に適用されている。放射線治療は治癒目的、補
助目的または軽減目的で利用される。放射線治療のみで治療できる癌も存在する
。放射線治療に適したと判断された患者群とは充分な潜伏観察が施され、局部的
または限定的な病気であると判断された患者たちである。外科医がメスを使用す
るのと同様に、放射線医師は放射線ビームを使用して細胞のＤＮＡの二重螺旋の
破壊等の物理的ダメージを与えることで癌細胞を破壊する。放射線投与量は多量
、少量、短時間、長時間等で制御される。放射線源は放射性シード、放射性源プ
ローブ、またはリニア加速器と呼ばれる機械で発生される高エネルギーＸ線のご
とき外部放射線ビーム等である。程度や状況によって、放射線のみで治癒が可能
な癌は前立腺癌、頭部及び頚部癌、脳腫瘍等々である。しかし、他の癌治療法と
同様に再発する患者も多い。
【０００９】
大抵の場合、放射線治療は補助的に利用される。放射線は手術前後または化学
治療前後に与えられる。これらの例には乳腺腫瘤摘出後に放射線が適用される乳
癌患者、手術で取り除かれた頭部または頚部の癌患者で再発が危惧される患者、
及び手術が困難な患者が含まれる。このような状況は化学治療の場合も同様であ
る。例えば、腫瘍が化学治療で縮小し、化学治療では破壊されなかった残りの腫
瘍細胞を全滅させる目的で放射線を使用する場合や、５-フルオロウラシル(5-fl
uorouracil)のごときで放射線治療と化学治療を相互に補完させる場合である。
【００１０】
放射線治療が利用される別の場合は、脳または脊髄圧迫に関係する骨の痛みや
神経症状を軽減させることを目的とした場合である。
【００１１】
化学治療は細胞サイクルを妨害することで、あるいは癌細胞のＤＮＡに侵入す
ることで効果を発揮する。他の方法の場合と同様に、化学治療は完全治癒を目的
としたり、補助的に利用されたり、放射線に付随的に利用されたり、軽減目的で
利用される。利用される化学治療の養生法は治療部位と病理学上のサブタイプに
よって決定される。化学治療は全身的に行われ、全身の癌細胞に作用する。この
全身効果は治療部位の癌細胞のみを破壊する放射線治療や手術治療の場合とは異
なる点である。大抵の場合、化学治療剤はそれぞれの薬剤の作用の異なる作用を
利用し、１種の薬剤抵抗性突然変異細胞の拡散を回避するために複数の薬剤によ
る治療薬として投与される。
【００１２】
化学治療は睾丸腫瘍とリンパ腫の患者に対して良好な治療結果をもたらす。化
学治療は手術、放射線治療あるいは両方と組み合わされて補助的に使用されるこ
とが多い。例えば、化学治療は非小型細胞肺癌、膀胱癌、頭部及び頚部癌並びに
ホドキンズリンパ腫の患者での放射線治療に先立って利用される。小型細胞肺癌
、肛門癌、ほとんどの胃腸悪性腫瘍（胃、直腸、食道、膵臓）の患者に対して放
射線と共に利用される。その治療は膀胱癌、膵臓癌、胃癌、乳癌及び他の固体腫
瘍の手術後に施される。痛みや神経症状を持つ患者の軽減措置としても利用され
る。
【００１３】
現在の治療法の限界
前述の標準的治療法は大きな限界がある。１００％の治療効果があるものは
なく、すべてのものに副作用がある。手術と放射線治療には限界があり、これら
は局部的にのみ利用できる。用量の限界もあり、付近の正常細胞を痛めないよう
に過剰な量の放射線を利用することができない。同様に、どこまで手術で切除す
るかの決定も困難であるという限界もある。正常な組織の過剰切除は患者に過剰
な疾病の可能性を残す。化学治療は身体の全ての組織に影響を及ぼす。なぜなら、
全身的に投与されるからである。複数の異なる化学治療剤は異なる臓器に異なる
作用で影響を及ぼす。最も普通に影響を受けるのは骨髄であり、血液値の降下は
化学治療剤の投与量を制限する。腎臓、肝臓、胃腸及び他の組織への悪影響もある。
【００１４】
原発性固体腫瘍は一般的に手術による切除で治療される。しかし、固体腫瘍を
有する患者の大多数は原発性腫瘍部位以外に微小転移を有している。手術のみの治
療ではこれら患者の７０％は癌の再発を経験するであろう。従って、手術に加え
て多くの患者は細胞毒性化学治療薬（例えば、ビンクリスチン、ビンブラスチン
、シスプラチン、メトトレキサート、５-ＦＵ、等々）が関与する治療及び/又は
放射線治療をも併せて受ける。しかしこの方法の１つの問題は、放射線治療と化
学治療剤は正常組織に有害であり、しばしば重大な副作用を起こすことである。
加えて、これらの方法はしばしば非常に高い失敗/回復率（癌のタイプによって
は９０％程度まで）を有する。
【００１５】
治療法の開発
手術、化学治療及び放射線治療の外に、癌細胞を排除するために患者自身の免
疫力を高める多くの試みがなされている。いくつかの免疫治療は腫瘍細胞を破壊
させる免疫力を高めるために補助体としてバクテリアあるいはウィルス成分を利
用する。そのような成分の例にはＢＣＧ、内生毒素、混合バクテリアワクチン、
インターフェロン（α、β及びγ）、インターフェロン誘引剤（例えば、牛流産
菌、様々なウィルス）及び胸腺因子（例えば、チモシン因子５、チモシンα１）
（概して、"Principlesof Cancer Biotherapy,"Oldham (ed.), Raven Press,
NewYork, 1987を参照のこと）が含まれる。そのような治療薬は一般的に補佐
薬として、及び動物の腫瘍モデルでの非特定刺激剤として有効であった。しかし、
人患者に対する効果は実証されていない。
【００１６】
リンホカインも癌の治療に利用されてきた。リンホカインは種々な細胞により分泌され
、免疫反応の発生で特定細胞に影響を及ぼす。リンパ液の例には、ＴＮＦ-α、
インターフェロン、インターロイキン（例えば、ＩＬ-１、-２、-３、-４及び-
１２、Ｇ-ＣＳＦ、ＧＭ-ＣＳＦ、Ｍ-ＣＳＦのごときコロニー刺激因子）が含ま
れる。近年、腫瘍細胞に対して細胞毒性である多量の細胞を生産するためにＩＬ
-２の利用が研究された。別な研究対象はケモカイン(chemokines)である
(Rosenberget al.,N. Engl. J Med. 313 : 1485-1492,1985)。これらは
免疫細胞を所定部位に引きつけて免疫反応を刺激し得る別の薬剤である。この１例はラ
ンテス(Rantes)である。
【００１７】
抗体利用抗癌治療も提案されている。ユニークであるか、正常細胞よりも癌細
胞において優勢な所定の細胞表面抗原を認識する抗体が開発され得る。これら抗体あ
るいは“魔法の弾丸”は腫瘍細胞を選択的に殺傷するために単独または毒素と共
に利用できる(Dillman,"AntibodyTherapy,"Principles of Cancer Biotherapy, 
Oldham(ed.), Raven Press, Ltd., New York, 1987).。例えば、ボール他
(Blood 62 :1203-1210,1983)は、白血病に特定的な幾種類かのモノクロナー
ル抗体で急性骨髄性白血病の患者を数名治療し、治療中に循環する白血病細胞の
大きな減少を確認した。同様に、例えば、黒腫、結腸直腸癌、前立腺癌、乳癌、
及び肺癌等の様々な腫瘍の治療に毒素抱合抗体が利用された(Dillman、上記）。
しかし、１つの問題は、大抵のモノクロナール抗体はマウスを源にしており、
マウス抗体に対するアレルギーが（特に反復治療後に）治療効果を限定的にする。
通常の副作用は、発熱、発汗、悪寒、発疹、関節炎、及び神経麻痺である。
最近、人間患者用モノクロナール薬剤が試験され、少なくとも１つは認可された
（“ハーセプチン/トラスツズマブ”）。これは腫瘍細胞のher2-neuマーカを
認識するモノクロナール抗体である。この薬剤は転移性乳癌の治療に認可された
(Goldenberg,Clin. Therapy 21 : 309-318,1999) 。しかし、乳癌治療の
効果は決定されていない。
【００１８】
遺伝子治療（遺伝子ビークル）
遺伝子治療ベクターは２種のタイプに分類できる。ウィルスと非ウィルスであ
る。両タイプはＴ.フレイドマン編集の「ヒト遺伝子治療方法」（コールドスプ
リングプレス社出版、１９９９年）に詳述されている。最も普通に使用されるウ
ィルス系ベクターはレトロウィルスベクター(retroviral vector)とアデノウィ
ルスベクター(adenoviralvector)である。これは部分的には歴史的な理由と、
部分的には臨床的に有用な量で比較的簡単に生産できるからである。これらのベ
クターは両方とも臨床的に多用されており、アデノ関連ウィルスベクター(Adeno
-associatedviral vector)、ラブドウィルス(rhabdovirus)、ヘルペスウィルス
ベクター(herpesviral vector)及びワクシニアウィルス(vaccinia virus)また
はポックスウィルス(poxvirus)に基くベクターを使用して臨床実験が実施された
。これらウィルスは利点と弱点とを併せ有している。しかし、これら全ては遺伝
子をターゲットである目標組織に比較的効率良く搬送する。これらの弱点は充分
な量が生産できないこと、生体内で遺伝子を正確にターゲットに運べないこと、
ウィルス遺伝子生成物の毒性あるいは免疫副作用があることである。しかしなが
ら、比較的に効率的なウィルスであっても遺伝子を全ての病気細胞に運搬すると
考えることはできない。よって、治療はこの問題を解消させる手段で実施される
必要がある。
【００１９】
非ウィルス系には、裸(naked)ＤＮＡ、細胞内脂肪粒子(lipososome)内で形成
されたＤＮＡ及びポリカチオン濃縮剤(polycation condensing agent)またはハ
イブリッド系で形成されたＤＮＡが含まれる。これらの系は生体内で長期の半減期を
提供し、ターゲット細胞/組織へＤＮＡを運搬し、細胞質と核への侵入を実現さ
せ、続いて発現させるように、充分に制御されたステップでの構築にさらに好都
合である。これらの問題にはそれぞれ可能な解消策が存在するが、それらは効率
的には組み合わされておらず、生体内の遺伝子搬送の効率化は今日でも問題であ
る。よって、これらの系においても、遺伝子を全ての細胞（例えば腫瘍）
に搬送できると考えるのは妥当ではない。
【００２０】
従って、遺伝子運搬体を使用した癌治療において、遺伝子運搬の効率を高める
手段の利用が必要である。それらには免疫系の刺激効果、種々な形態の傍観者効
果(bystandereffect)、アポトシス(apoptosis)の拡散効率、抗脈管形成効果、
凝結促進効果、転写性ウィルスベクターの利用等が含まれる。
【００２１】
癌遺伝子治療法
多くの癌患者に対する一般的な治療の困難性及び前述したごときの従来治療法
の改善の停滞のため、癌の治療には遺伝子治療のごとき新規な方法への期待が高
まっている(F.Farzaneh, U. Trefzer, W. Sterry and P Walden :"Gene therapy 
ofCancer"Immunology Today 19: 294-296,1998を参照)。これらには次のような
様々な例が含まれる。腫瘍及びその推定腫瘍関連抗原（例えば、Addison et al.
Gene Ther.5: 1400-1409 1998)に対する免疫力を高めるために様々なサイト
カイン及びケモカインのための遺伝子の導入、それら抗原(例えば、Schlom & 
HodgeImmunol Rev. 170: 73-84 1999)に対する免疫力を高める特定ＴＡＡのための遺伝
子の投与、腫瘍抑制剤またはｐ５３（Eastham JA J. Urol.164: 814-9 2000)
のごときアポトシス誘導遺伝子(apoptosis inducing gene)での治療、脈管形成
の抑圧に導く遺伝子による治療、またはその他の腫瘍部位への血流を減少させる
治療（例えば、Grischelli et al Proc Natl Acad Sci USA 95: 6367-6372 1998,
WO96/21416）、不活性化合物を活性抗腫瘍化合物に代謝させる遺伝子での治療
（Connors,Gene Ther. 2: 702-709 1995, Deonarian et al. Gene Ther. 2: 
235-244 1995）、並びにそれらの組み合わせ（例えば、Ｓoler MN,Cancer 
ImmunolImmunother. 48: 91-99 1999）、及びＴ細胞抗腫瘍反応を有効化する
他の方法である。使用されるベクターにはレトロウィルスベクター、アデノ
ウィルスベクター、裸及び加工ＤＮＡ、ヘルペスウイルスベクター、アデノ
関連ベクター、及び他の多種類のベクター（T. Friemann 1999 前掲）が含まれる。
動物実験はこれらの治療法とベクターの成功の可能性を示唆しており、多くは将
来の実用性を期待させる。しかし、前述のように、実用には論理的な困難が伴う。
残念なことは、遺伝子治療の取り組みは、一般的に単独治療であると考えられており、
他の治療に効果が期待できないような治療の最終段階の患者で単独に使用されている。
遺伝子治療の導入と利用は、他の標準的な治療と同列に扱われるべきものであり、
他の治療法と組み合わせて利用すべきであり、遺伝子治療が補助的に利用されると問
題は単純化する。
【００２２】
多数の動物腫瘍研究が、ヘルペスウィルスチミジンキナーゼ(Herps virus thy
midine kinase)をエンコード(encode)したアデノウィルスベクターを使用して行
われてきた（ＨＳＶＴＫ、ＡdＴk、ＡdＶ-tk等々）（J. A. Eastham et al. Hum. 
Gene Ther. 7515-523 1996 ; M. Y. Hurwitz et al. Human Gene Ther. 9: 
1323-13331998、および他のこの文献で引用される文献、これらの文献は、
本明細書において参考として援用される。）。さらに、ＴＫをエンコード
したアデノウィルスベクターの複製(O. Wildner etal. Gene Therapy 6:
57-621999) と、プロドラッグ活性遺伝子（ＰＤＡＧ）をエンコードした
アデノウィルスベクターの放射線治療との併用(Freytag et alHum. Gene 
Ther. 9:1323-1333 1998、および他のこの文献で引用される文献、これらの文献は、
本明細書において参考として援用される。が動物モデルで報告された。しかし、
これら治療の臨床適用は前述の問題を孕んでいる。さらに、ＴＫをエンコード
するアデノウィルスベクターとガンシクロビル(gancyclovir)とを使用した臨床
実験結果もステージＴ２での放射線治療後の局部再発を伴った前立腺癌の患者
で報告された(J.R. Herman, Hum. Gene Ther. 10: 1239-1249 1999)。
このデータから、アデノ-ＴＫ単独治療は固体腫瘍の治療にはさほど有効では
ないように思われる。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００２３】
新治療法導入での問題
臨床実験は正規なルールに基いて正当に行われる（例えば、米国法典第21を参照）。
このようなガイドラインは患者支援団体、米国立衛生研究所、倫理規準および
医師の助言によって、特定の医療機関で施行された各々の臨床試験における
そのような問題を具体的に検討するように設立された治験審査委員会によって、
そして、国の医薬品承認機関（米国では、これは、米国医薬品食品局、ＦＤＡ
である。）によって実行され監視される。試験は患者から通常の場合に患者に
対してなされることになる最も適切な治療を受ける権利を奪うことなく進められる。
従って、特に癌の場合に、新治療法の単独効果を決定することは困難である。
そのような新治療法が臨床的に導入できるのは、他の治療法が試され、
他に有効な治療の手段が無い場合に限られる。そのような患者は通常において
病気が既に進行しており、余命が長くはないと考えられる患者である。
このことは新治療法の実験を非常に困難にし、効果の発揮が
ほとんど望めないものとする。このような取り組みの代用として、現行の治療に
追加する形で実験される。よって、新治療法は少なくとも現行の治療法の邪魔を
することができない。理想は、新治療法は現行の治療法の手助けをすることであ
る。さらに、遺伝子治療が入院や長いホームケアを必要とする場合には困難が増
幅し、費用もかかる。従って、そのような余分な負担がかからない新治療法が患
者、医者及び治療費を賄う団体にとって受け容れ易い。結果として、そのような
治療法は国の認可を得られ易くなり、医者に利用され易くなる。
【課題を解決するための手段】
【００２４】
発明の概要
プロドラッグ活性遺伝子をコードした遺伝子運搬ベクターが腫瘍の成長を阻害
するために、現行の標準治療法に加えて、さらなる遺伝子治療ベクターとともに
または伴わないで利用される。この遺伝子治療は現行の標準治療法に加えて実施さ
れる。本願発明の１特徴において、遺伝子治療はＨＳＶＴＫのごときプロドラッ
グ活性遺伝子をエンコードするアデノウィルスベクターでの治療と組み合わされ
、対応するプロドラッグと放射線治療にフォローされて前立腺癌腫瘍または乳癌
腫瘍の成長を阻害するために行われる。本願発明の別な特徴によれば、方法は前
立腺癌と乳癌の転移病変の成長を阻害するために提供される。本願発明の１実施
例においては、ステージＴ２a以下、ＰＳＡレベル＜１０ng/ml、グリーソンスコ
ア(Gleasonscore)１０以下の患者が、前立腺の両部分へ注射によって５ｘ１０
１１のウィルス粒子(vp)のベクターが第０日に投与され、ほぼ同量が第１５日に
投与される。第１日〜２８日に２gの p.o.t.i.d.のバルシクロビル(Valacyclovi
r)（Valtrex（登録商標））が投与され、第２日〜３日に開始する放射線治療が７週間で約７
０ＧＹ投与される。本願発明の別実施例では、病気ステージＴ３、グリーソンス
コア７以上、ＰＳＡレベル１０ng/ml以上の患者に対して、前立腺内に５ｘ１０
１１のvpのアデノＴＫベクターを第０日、５６日及び７０日に注射投与し、バラ
シクロビルを第１日〜１４日、５７日〜７１日、７１日〜８４日に投与し、第５
６日〜５７日に開始される放射線治療が施され、７０ＧＹの量を７週間で投与さ
れた。本願発明の別実施例では、局部的リンパ腺へ転移した患者に対して、前立
腺に５ｘ１０１１のvpのアデノＴＫベクターを第０日、５０日及び７０日に投与
し、バルシクロビルを第１日〜１４日、５７日〜１日、７１日〜８４日に投与し
、放射線治療を第５６日〜５７日に開始して７週間かけて７０ＧＹを投与した。
【００２５】
別の実施例で膵臓癌患者はＡd-tkが直接的に腫瘍内注入され、その後にアシク
ロビル投与及び放射線治療と化学治療を受けた。別の実施例では頚-子宮癌患者
はＡd-tkの直接的腫瘍内注入され、アシクロビル投与及び放射線治療と化学治療
を受けた。別の頭部と首部の癌患者はＡd-tkの直接的腫瘍内注入に続き、アシクロビ
ル投与及び放射線治療を受けた。
本願発明の別の形態では、アデノウィルスベクターが利用可能な希釈剤または
キャリヤーと共に薬剤組成物として提供される。本願発明のこれら及び他の特徴
は以下の詳細な説明と図面とによって詳しく説明されている
【発明を実施するための形態】
【００２７】
発明の詳細な説明
上述したように、本発明は、腫瘍の成長を抑制して固形腫瘍および転移におけ
る治療法を向上させる方法に関する。
【００２８】
簡潔にまとめれば、遺伝子輸送ビークル（ＧＤＶ）による腫瘍細胞へのヘルペ
スチミンキナーゼの導入によって、多数の腫瘍細胞を除去し、全身的な抗腫瘍効
果を刺激する能力は、さらにプロドラッグ、ガンシクロビルや類似の化合物を用
いた処置によって補足される。現行の治療法のコンテキスト内でこれを行なうこ
とは、標準治療の療法に魅力ある使用しやすい追加効果を提供する。さらに、こ
の治療法が標準治療と拮抗しない場合や、それどころか協調して働く場合には、
臨床試験ははるかに簡単になり、医師と患者はこの新しい治療法を進んで用いる
ことになり、患者には付加的な臨床的利益がもたらされるであろう。しかしなが
ら、さらなる問題は新治療法の複雑さと費用である。臨床治療に関する主要なコ
スト問題は、入院期間の長さ、およびまたは患者を看護する医師や看護婦の人数
である。このように、ガンシクロビル注入（通常は１４日間毎日数時間にわたる
）のような治療法は、通常は、この期間の入院または費用のかさむ自宅療養が必
要となる。これが従来の処置では必要ない場合、入院、費用、不便といった余計
な負担が、この新治療法の使用の頻度を低下させることになろう。したがって、
本発明の一実施例は、経口で服用可能なバラシクロビルやファムシクロビルとい
った、容易に自己投与できるプロドラッグの使用である。
【００２９】
遺伝子構成体
本発明では、様々な種類の遺伝子構成体が実施される。プロドラッグ活性化遺
伝子は通常、プロモータとなるコード化シークエンス（配列）を持つ。ＤＮＡ形式
であればポリアデニル化部位である。もう一つの実施例においては、ベクタ
ーは以下のようなＲＮＡゲノムを持つ。すなわち、アルファウイルスベクター、
ポリオウイルスベクター、インフルエンザウイルスベクター、棒状ウイルスベク
ター、ポリカチオン性凝縮剤により製剤化されたＲＮＡ分子、様々な種類の脂質
剤など、当該分野で公知のその他の製剤である。ＲＮＡベクターのケースで
は、コード化シークエンスは遺伝子の発現を導く配置で遺伝子輸送ベクタのゲノ
ムに挿入される。プロモータはウイルス性もしくは非ウイルス性で、一実施例に
おいては、前立腺組織にはＰＳＡプロモータによってといったように、組織特異
的な発現を持つように設計されている。別の実施例においては、プロモータは、
細胞サイクルの回転に反応したり、ｐ５３突然変異腫瘍細胞内のｐ２１プロモー
タのような、沈黙遺伝子の発現を導く腫瘍細胞内の変化に反応したりするプロモ
ータによって腫瘍特異的発現を示すように設計されている。さらに別の実施例に
おいては、プロモータは、ラウス肉腫ウイルスＬＴＲプロモータやＣＭＶ最初期
プロモータなどによって、ほとんどの組織で無差別な発現をするように設計され
ている。さらに別の実施例においては、組織およびまたは腫瘍の特異性は、増大
エレメント、遺伝子座コントロール領域、特定のＲＮＡの核外輸送、スプライシ
ング配列、翻訳コントロールエレメント、細胞タイプ特異的タンパク質プロセシ
ング機能など、その他の細胞特異的生化学的プロセスによって決められる。
【００３０】
好適な実施例においては、遺伝子を活性化するプロドラッグはＲＳＶ  ＬＴＲ
プロモータによって駆動される。
【００３１】
遺伝子及び薬剤を活性化するプロドラッグ（ＰＤＡＧ）
遺伝子を活性化するプロドラッグは、不活性の薬剤を、細胞増殖を抑制したり
、細胞や場合によっては近隣の細胞を殺したり（“ｂｙｓｔａｎｄｅｒ  ｅｆｆ
ｅｃｔ”  Ｔｏｕｒａｉｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｈｕｍ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．
９：２３８５−２３９、１９９８”）、もしくは細胞の機能のいくつか（例え
ば、転移能力、血管形成プロモータの分泌能力、免疫システムの抑制能力、その
他腫瘍細胞や腫瘍床や腫瘍エリア内の細胞が持つ異常な特性）を抑制したりする
などの、薬学的に活性の状態に変化させる機能をエンコードした遺伝子やタンパ
ク質産物である。本発明において、遺伝子を活性化するプロドラッグ（ウイルス
性、非ヒト由来、ヒト由来）が、広範にわたって考察されている（Ｃｏｎｎｏｒ
ｓ，  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．  ２：７０２−７０９、１９９５、Ｄｅｏｎａｒｉ
ａｎ  ｅｔ  ａｌ．  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．  ２：２３５−２４４、１９９５、
参照。これらは出典を明記することによりその開示内容全体を本願明細書の一部
とする）。すなわち、ガンシクロビル、アシクロビル、バラシクロビル、ファム
シクロビルと併用したＨＳＶ  ＴＫ遺伝子、同じプロドラッグと併用した他のヘ
ルペスウイルスＴＫ遺伝子、フルオロシトシンと併用したシトシンデアミナーゼ
遺伝子、ＣＢ１９４５と併用したニトロレダクターゼ遺伝子、チオキサンチンと
併用した大腸菌ｇｐｔ遺伝子、エトポサイドリン酸カルボキシペプチダーゼＧ２
とナイトロジェンマスタードプロドラッグと併用したアルカリ性ホスファターゼ
遺伝子など、その他様々な遺伝子と薬剤の組み合わせである。
【００３２】
ベクタで搬送される他の遺伝子または機能
本発明の別の実施例においては、遺伝子輸送ビークルは、遺伝子活性化プロド
ラッグに加えて、付加的な外因性の遺伝子を、個別のコード化領域として、もし
くは遺伝子活性化プロドラッグと融合して運ぶ。本発明のもう１つの態様では、
遺伝子活性化プロドラッグの産物は活性化プロドラッグの特性のほかに付加的な
特性を持つ。それは例えば、本発明の別の実施例においてはＨＳＶ−ｔｋのハイ
パー抗原機能である。付加される外因性の遺伝子は、他のＰＤＡＧ、またはＴＫ
シトシンデアミナーゼ融合物のようなこれらの物質の融合物である。本発明のさ
らに別の実施例においては、付加される外因性の遺伝子は、インターフェロンα
、β、γといったサイトカインや、ＧＭＣＳＦ、ＧＣＳＦ、ＭＣＳＦといったコ
ロニー刺激ファクタをエンコードしている。さらに別の実施例においては、付加
される外因性の遺伝子は、ＩＬ１、ＩＬ２、ＩＬ３、ＩＬ６、ＩＬ７、ＩＬ８、
ＩＬ１０、ＩＬ１２、ＩＬ１３、ＩＬ１５、ＴＮＦといったサイトカインから選
ばれる。別の実施例においては、付加される遺伝子は、ランテス、Ｍｙｐ１αＣ
ＸＣＲ４リガンドといったケモカインであるか、Ｂ７．１、Ｂ７．２、β２マイ
クログロブリン、ＮＫ刺激分子、ＩＣＡＭ１、２、３、ＨＬＡ分子といった免疫
学的共刺激分子である。さらに別の実施例においては、付加される遺伝子は、細
胞受容体や細胞経路といったプロドラッグ用の輸送分子をエンコードしている。
さらに別の実施例においては、付加される遺伝子は、近隣の細胞の外因性タンパ
ク質の摂取を促進するコネキシンやＶＰ２２との融合物やＨＩＶ−ｔａｔといっ
た、近隣に及ぼす効果を促進する分子をコードしている。さらに別の実施例にお
いては、付加される遺伝子は、エンドスタチン、アンジオスタチン、βインター
フェロンといった血管新生阻害剤や、組織因子（Ｔｉｓｓｕｅ  Ｆａｃｔｏｒ）
のような凝血促進遺伝子や、これらの変異体などをコードしている。さらに本発明は
、ＰＤＡＧではなく、標準治療で使用されるカテゴリーの遺伝子のみとともにＧ
ＤＶを使用する方法についても考察している。ＰＤＡＧの中のタンパク質はまた
、従来の異物的抗原やスーパー抗原（例Ｘ参照）として免疫反応を刺激するとい
った、他の抗腫瘍機能も持っている。スーパー抗原はこの場合、免疫「拡張」に
よる抗腫瘍効果を持つ。その際、細胞内の１抗原に対する免疫反応が、他の抗原
や、その細胞内のそれ以前は免疫を生じるとは見なされなかった自己抗原にまで
対抗する免疫反応につながるのである。
【００３３】
遺伝子輸送ビークル
様々なタイプのベクタ（例えば、Ｆｒｉｅｄｍａｎｎ  １９９９、前掲書中の
Ｄ．Ｊ．Ｊｏｌｌｙ参照）を複製することが、一つには、上で略述した諸問題に
対処するために、また一つには、関係するウイルスの自然特性を利用するために
提案された。これらは、例えばポックスウイルス、アデノウイルス（米国特許第
５９９８２０５号、米国特許第５８７１７２６号）、ヘルペスウイルス（米国特
許第５７２８３７９号）、パルボウイルス、アルファウイルス、レトロウイルス
、棒状ウイルス、その他に基づくものである。NEED noncondotional ref REFS
一実施例においては、ベクタ構築には、適性のある複製、第１世代（Ｅ１遺伝
子領域削除）、第２世代（Ｅ１、Ｅ４またはＥ２削除）、第３世代（「実質のな
い」）のアデノウイルスベクタを含む、アデノウイルスベクタが用いられる。本
発明の別の実施例においては、ＧＤＶは特定の細胞マーカーと結合されることに
よって、特定の細胞タイプをターゲットとできるアデノウイルスベクタに変更さ
れている。そのためにリガンドがウイルスベクタコートに加工されている（Ｐｒ
ｉｎｔｚ  ｅｔ  ａｌ．  Ｈｕｍ．  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．  １１：１９１−２
０４、２０００）。本発明の遺伝子輸送ビークルはまた、他のウイルス性キャリ
ア（Ｔ．Ｆｒｉｅｄｍａｎｎ  １９９９、前掲参照）でもよい。それ
には例えば、ポリオウイルス（Ｅｖａｎｓ  ｅｔ  ａｌ．、  Ｎａｔｕｒｅ  ３
３９：３８５−３８８、１９８９およびＳａｂｉｎ、Ｊ．  ｏｆ  Ｂｉｏｌ  Ｓ
ｔａｎｄａｒｄｉｚａｔｉｏｎ  １：１１５−１１８、１９７３）、ハナカゼウ
イルスや、カナリアポックスウイルス、牛痘ウイルスなどのポックスウイルス（
Ｆｉｓｈｅｒ−Ｈｏｃｈ  ｅｔ  ａｌ．、  ＰＮＡＳ  ８６：３１７−３２１、
１９８９、Ｆｌｅｘｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．、Ａｎｎ．  Ｎ．ｙ．  Ａｃａｄ．  
Ｓｃｉ．  ５６９：８６−１０３、１９８９、Ｆｌｅｘｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．、
Ｖａｃｃｉｎｅ  ８：１７−２１、１９９０、米国特許第４，６０３，１１２号
および同第４，７６９，３３０号、ＷＯ  ８９／０１９７３）、ＳＶ４０（Ｍｕ
ｌｌｉｇａｎ  ｅｔ  ａｌ．、  Ｎａｔｕｒｅ  ２７７：１０８−１１４、１９
７９、ｓｔｒａｙｅｒ  ｅｔ  ａｌ．、Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．  ４：２１９−２
２５、１９９７）、インフルエンザウイルス（Ｌｕｙｔｊｅｓ  ｅｔ  ａｌ．、
Ｃｅｌｌ  ５９：１１０７−１１１３、１９８９、ＭｃＭｉｃｈｅａｌ  ｅｔ
ａｌ．、  Ｔｈｅ  Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄ
ｉｃｉｎｅ  ３０９：１３−１７、１９８３、Ｙａｐ  ｅｔ  ａｌ．、  Ｎａｔ
ｕｒｅ  ２７３：２３８−２３９、１９７８）、条件つきで発現するベクタや複
製タイプやミニアデノタイプなどを含む様々なタイプのアデノウイルスベクタ（
Ｂｅｒｋｎｅｒ、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ６：６１６−６２７、１９８８
、Ｒｏｓｅｎｆｅｌｄ  ｅｔ  ａｌ．、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５２：４３１−４３
４、１９９１、Ｋｏｃｈａｎｅｋ、Ｈｕｍ．  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．  １０：２
４５１、１９９９、Ｓｔｅｉｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．、Ｃａｎｃｅｒ  Ｇｅｎｅ  
Ｔｈｅｒａｐｙ  ６：４５６−４６４、１９９９、Ｃｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．、Ｐ
ｒｏｃ  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ９４：１６４５−１６５
０、１９９７、Ｚｈａｎｇ、Ｃａｎｃｅｒ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．  ６：１１３
−１３８、１９９９）、アデノ関連ウイルスなどのパルボウイルス（Ｓａｍｕｌ
ｓｋｉ  ｅｔ  ａｌ．、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｖｉｒｏｌｏｇｙ  ６３：３８
２２−３８２８、１９８９、Ｍｅｎｄｅｌｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．、Ｖｉｒｏｌｏ
ｇｙ  Ｊ．  ６６：１５４−１６５、１９８８）、ヘルペス（Ｋｉｔ、Ａｄｖ．
Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．  ２１５：２１９−２３６、１９８９）、ＨＩＶと
レンチウイルス（Ｔｒｏｎｏ，  ｅｔ  ａｌ．、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３６：２６
３、１９９６）、麻疹（ＥＰ０４４０，２１９）、シンドビスウイルスなどのア
ルファウイルス（Ｘｉｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３４：１１８
８−１１９１、１９８９、Ｐｏｌｏ  ｅｔ  ａｌ．、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｉｌ．  
Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９６：４５９８−４６０３、１９９９）、棒状ウ
イルス、コロナウイルスがある。さらに、ウイルス性キャリアは同族関係で、非
病原性の（欠損がある）、複製に適したウイルスでもよい（例えば、Ｏｖｅｒｂ
ａｕｇｈ  ｅｔ  ａｌ．、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３３９：９０６−９１０、１９８８
）。様々なタイプの複製ベクタ（例えば、Ｄ．Ｊ．Ｊｏｌｌｙ  ｉｎ  Ｆｒｉｅｄ
ｍａｎｎ  １９９９、前掲参照）も使用されうる。これらは例えば、ポックス
ウイルス、アデノウイルス（米国特許第５９９８２０５号、米国特許第５８７
１７２６号）、ヘルペスウイルス（米国特許第５７２８３７９号）、パルボウイルス
、アルファウイルス、レトロウイルス、棒状ウイルスなどに基づいている。
【００３４】
ＧＤＶはまた、１つ以上のベクタを構成要素とするハイブリッドベクタであっ
てもよい（例えば、Ｄ．Ｊｏｌｌｙ  ｃｈ  ９  ｉｎ  Ｔ．Ｆｒｉｅｄｍａｎｎ
１９９９  前掲参照）。
ＧＤＶはまた、非ウイルス性の輸送システムでもよい。
【００３５】
用法及び標準治療処置との相乗作用
本発明はＧＤＶ処置を標準的がん治療法と併用して使用する。発明にいたる背
景について述べたように、がん治療には４つの主要なクラスがある。すなわち、
外科手術、放射線、化学療法、免疫療法である。以下に述べるのは、前立腺がん
患者の処置法を決定する際に生じる典型的な経過に基づいた評価のタイプと、そ
の結果とられる多様な治療法の一例である。なんらかの測定可能な発症を伴なう
ほとんどすべてのがんが、同様の方式で論じられる。したがって、処置の決定は
当初は複雑に見えたとしても、実際は広範な臨床経験に基づくものであり、一群
の処置ルールとしてまったく容易に理解されうるものである。これが「標準治療
」の治療法を構成している。そしてこれが、ほとんどの医師が処方し、同業者が
正規と認め、保険会社が支払いを行い、同等の臨床的業績のない治療法と恣意的
に交換されてはならない処置なのである。例えば、グリーソンスコアが６未満で
、ＰＳＡレベルが１０ｎｇ／ｍｌ未満のＴ２段階の前立腺患者は、外部放射線照
射または放射性ペレットのインプランテーション（小線源治療）といった放射線療法
か、上述の考察に基づいた外科的介入によって処置される。乳がん患者は原発性
腫瘍の切除の後、外部放射線照射によって処置され、評価時にかなり進行した
段階のすい臓腫瘍患者は放射線療法で処置される。これらの標準治療の治療法は
腫瘍学者や専門技術者には周知のことで、多くは教科書にも載っており、
学会その他の関連団体の雑誌に定期的に発表されるガイドライン
にも示されている。標準治療の記録の例は、特定のがんに使用できるものについ
ては、Ｊｏｕｒｎａｌ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙで発表されているＮａｔｉｏｎａｌ  
Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｎｅｔｗｏｒｋ、ペンシルベニア
州ロックレッジ１９０４６（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｃｎ．ｏｒｇ）で入手
でき、また患者用のバージョンはＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｓｏｃｉｅ
ｔｙ，  ＵＳ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ
Ｃｏｎｓｅｎｓｕｓ  Ｓｔａｔｅｍｅｎｔ（ｈｔｔｐ：／／ｏｄｐ．ｏｄ．ｎ
ｉｈ．ｇｏｖ／ｃｏｎｓｅｎｓｕｓ／ｃｏｎｓ／ｃｏｎｓ．ｈｕｎ）で、おりお
りにＮｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅで発表
された医療トピックスや特定の疾病やがんの報告（例えば、Ｊａｙ  Ｒ．  Ｈａ
ｒｒｉｓ  ｅｔ  ａｌ．、“Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｐｒｏｇｒｅｓｓ：Ｂｒｅａｓｔ
Ｃａｎｃｅｒ”、Ｎｅｗ  Ｅｎｇ．  Ｊ．Ｍｅｄ．  Ｖｏｌ．３７２−３１９
、Ｊｕｌｙ、３０、１９９２）である。
【００３６】
本発明の好適な実施例においては、プロドラッグの活性化機能やＧＤＶがエン
コードした他の機能は、これらの治療法と拮抗するものではなく、特に好適な実
施例においては、遺伝子療法は「標準治療」の治療法と協働する。
【００３７】
協働的、協調的、相助的効果といった用語はどれも、２つ以上の作用因の累積
効果がそれぞれの作用因の効果を加算したときに予想されるよりも大きい場合を
指す。これは専門技術者が知っている多くの方法によって規定されうる。例えば
、Ｅｎｚｙｍｅ  ａｎｄ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｃ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ、第１巻、
Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ所収のＷｅｂｂ，  Ｊ．Ｌ．（１９６３）は、生
化学反応に関するこれらの用語のオリジナルの定義を記述している。またＡ．Ｍ
．  Ｌｏｐｅｚ  ｅｔ  ａｌ（１９９９）Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓ
ｃｉ．ＵＳ  ９６：１３０２３−１３０２８では、マウスの腫瘍モデルのような
さらに複雑な状況について、これを再検討している。これらの論文は出典を明記
することによりその開示内容全体を本願明細書の一部とする。拮抗作用とは相助
作用と正反対のものであり、２つ以上の作用因が組み合わされると効果が加算さ
れたときよりも減少する場合である。作用因は、この定義によって形式的には拮
抗すると考えられた場合にも、なおも一緒に使われて役立つ場合もありうる。こ
れはまた、単純に加算された作用因についても当てはまる。
【００３８】
したがって、拮抗作用や協力作用がない場合は、これらの治療法をマウスモデ
ルで遺伝子療法と併用して使用することで確認できる。単一の作用因による処置
のヒトに対する腫瘍治療法の結果調査が完全に予測可能なわけではないことは周
知のことであるが、２つの作用因間に相助作用があるかないかの決定は信頼性が
なければならず、これらのモデルにおいて容易に達成できるものでなければなら
ない。その一例として、ＨＳＶＴＫによって変化させ、次いでガンシクロビルと
放射線療法を行なった前立腺腫瘍のアッセイが、例２に示されている。
【００３９】
投与法、投与量、製剤（化）
本発明のもう１つの態様においては、ＰＤＡＧや他の遺伝子を運ぶＧＤＶ構成
体は、効果粒子数１０４から１０１５までの範囲の様々な投与量で、患者の固形
腫瘍に投与される。診療で使われるアデノウイルスベクタのタイターは、通常１
０８から１０１３ｖｐ／ｍｌまでの範囲である。患者は１回または数回の投与で
０．３から５００ｍｌのベクタを注入される。腫瘍の病巣の大きさは、例えば軟
組織の肉腫、多発性骨髄腫、頭部や頚部の扁平上皮細胞がん腫では、１から２０
ｃｍまでである。患者は５日間にわたり、１回の注入につき０．３ｍｌ、０．５
ｍｌ、１．０ｍｌと段階的に増量した投与量を与えられることもある。しかしな
がら、投与量は腫瘍のサイズと場所によって異なってもよいので、１日に５００
ｍｌのベクタまでは投与することができる。この投与量は、一定期間にわたり同
じ腫瘍に、１回または数回の注入で投与される。あるいはまた、１日５００ｍｌ
までの投与量を５日間にわたって投与し、これを１クールと設定することもでき
る。患者は中毒を起こさなければ反応を確かめるのに必要な回数のクールを受け
られる。各クールは、例えば、数ヶ月または数年にわたって、毎週または隔週で
施される。
【００４０】
上記のように、本発明の好適な実施例においては、薬学的混合物はＰＤＡＧベ
クタ構成体を運ぶＧＤＶを、薬学的に許容できるキャリアや希釈剤と組み合わせ
て含有しているとことになる（Ｎｙｂｅｒｇ−Ｈｏｆｆｍａｎ  ａｎｄ  Ａｇｕ
ｌｉａｒ−Ｃｏｒｄｏｖａ、  Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、  Ａｐｒｉｌ
１９９９参照−この論文の内容は参照により本明細書に組み込むものとする）
。混合物は、液状の水剤でも投与前に溶液に溶かす固体状（例えば、凍結乾燥）
でもよい。さらに、混合物には、表面投与、注入、経口投与、直腸投与などに適
したキャリアや希釈剤を調合してもよい。
【００４１】
薬学的に許容できるキャリアや希釈剤は、使用される濃度と調剤量で、受診者
に中毒症状を起こさないものとする。注入溶液用のキャリアや希釈剤の典型例に
は、水や、生理学的ｐＨやベクターが安定するｐＨに緩衝処理された等張食塩水
（リン酸緩衝食塩水、トリス緩衝食塩水など）、マンニトール、デキストロース
、サッカロース、グリセロール、エタノール、ならびにポリペプチドやヒトの血
清アルブミンのようなタンパク質がある。
【００４２】
腫瘍にベクター構成体を直接に投与するには、本発明のコンテキスト内では、
病巣内直接注入、点滴投与、局部送達など、様々な方法が利用できる。例えば、
一実施例においては、病巣の位置が突き止められれば、ベクターは腫瘍本体の異
なった数箇所に１回または数回注入される。あるいはまた、腫瘍を養う動脈や血
管が同定されれば、ベクターは腫瘍に直接に届くように、その血管に注入される
。もう一つの実施例においては、腫瘍の中心にある壊死部分が吸引され、ベクタ
ーは中空となった腫瘍の中心に直接に注入される。さらに別の実施例においては
、ベクター構成体は、例えばベクター構成体を含有した局部的薬学的混合物や、
好ましくはベクター構成体を運ぶ組み換えウイルスベクターの塗布によって、腫
瘍の表面に直接に投与される。ベクター粒子は腫瘍病巣の場所に直接に投与する
（例えば、外科的介入の間に、静脈内、筋肉内、腹膜内、皮下、経口、直腸内、
眼球内、鼻内、膀胱内で）こともできる。または、ベクター構成体は以下のよう
な様々な身体的方法による製剤化の後で送達されることもある。すなわち、リポ
フェクション（Ｆｅｌｇｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．、ＰＮＡＳ  ８４：７４１３−７
４１７、１９８９）、ＤＮＡ直接注入（Ｆｕｎｇ  ｅｔ  ａｌ．、ＰＮＡＳ  ８
０：３５３−３５７、１９８３；Ｓｅｅｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．、ＰＮＡＳ  ８１
：５８４９−５８５２；Ａｓｃａｄｉ  ｅｔ  ａｌ．、Ｎａｔｕｒｅ  ３５２：
８１５−８１８、１９９１）、マイクロ弾射出（Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ｅｔ  ａｌ
．、ＰＮＡＳ  ８８：２７２６−２７３０、１９９１）、数タイプのリポソーム
（例えば、Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．、ＰＮＡＳ  ８４：７８５１−７８５５、１
９８７参照）、ＣａＰＯ４（Ｄｕｂｅｎｓｋｙ  ｅｔ  ａｌ．、ＰＮＡＳ  ８１
：７５２９−７５３３、１９８４）、ＤＮＡリガンド（Ｗｕ  ｅｔ  ａｌ．、Ｊ
．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．  ２６４：１６９８５−１６９８７、１９８９）、核酸
のみの投与（ＷＯ  ９０／１１０９２）、殺したアデノウイルスと結合したＤＮ
Ａの投与（Ｃｕｒｉｅｌ  ｅｔ  ａｌ．、Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．  ３：
１４７−１５４、１９９２）、受容体特異的リガンドを利用したポリリシンなど
のポリカチオン化合物を介して、ならびに、エレクトロポレーションや圧力仲介
送達によるソラーレンで不活性化したセンダイウイルスやアデノウイルスによっ
てである。さらに、ベクター粒子や製剤化された構成体は、複合注入、放射線シ
ード導入、組織分離、当該分野で公知のその他の方法で、望みの場所に直接注入
するか、もしくは患者への負担が最低限になるような様々な形式のカテーテルな
どの臨床的に許容できる他の方法を施した後に、カテーテルによって可能となっ
た操作と関連してベクターの注入や放出が行なわれる。
【００４３】
ベクター粒子や定式化されたベクタ構成体は、病巣が存在する多様なタイプの
組織およびまたは細胞に投与されうる。例えば、脳およびまたは脊髄、骨髄、眼
球、肝臓、鼻、咽喉、肺、心臓、血管、脾臓、皮膚、循環器、筋肉、前立腺、乳
房、すい臓、腎臓、子宮頚管、その他の器官である。
【００４４】
がん患者の評価
なんらかの腫瘍を持つ患者はすべて、信頼できる評価と効果的な疾病管理がで
きるように、使用する手段や方法や、その実績の累積に応じて、様々な方式で追
跡調査され、段階づけをされる（例えば、Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ：
Ｂａｓｉｃ  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｍａｎａｇｅ
ｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ  ｂｙ  Ｐａｕｌ  Ｃａｌａｂｒｅｓｉ、Ｐｈｉ
ｌｉｐ  Ｓ．  ＳｃｈｅｉｎＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ  １９９３、Ｃａｎｃｅｒ
，  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｏｎｃｏｌｏｇ
ｙ  ５ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，  Ｖｉｎｃｅｎｔ  Ｔ．  ＤｅＶｉｔａ，  Ｓａ
ｍｕｅｌ  Ｈｅｌｌｍａｎ  ａｎｄ  Ｓｔｅｖｅｎ  Ａ．Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ  
Ｅｄｓ．  Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ−Ｒａｖｅｎ  １９９７参照）。例えば、睾丸
がんはベータＨＣＧ、ＡＦＰ、ＬＤＨについて、結腸がんは多くの場合ＣＥＡレ
ベルについて、前立腺がんはＰＳＡレベルについて、卵巣がんはＣＡ−１２５レ
ベルについて、追跡調査される。頭部と頚部の腫瘍や上部呼吸管と消化管の腫瘍
は、目で見ることが容易な位置にあるので、多くの場合視覚的検査によって追跡
される。子宮頸管がんの場合も同様である。容易に目で見たり触診したりできな
いエリアは、ＣＴスキャンやＭＲＩスキャンで評価される。ＭＲＩスキャンは、
神経軸や中枢神経システムの腫瘍の評価にきわめて有用である。ＰＥＴスキャン
はがんの診療にはそれほど利用されていない。以下の節では、固形腫瘍疾病の段
階づけと処置決定の一例として、前立腺がんが使われている。
【００４５】
前立腺がん患者の段階づけと使用される治療法
上記のように、前立腺がんはアメリカ合衆国では毎年およそ１８万件の新たな
評価が下され、数多くの患者が発生している。患者の段階づけと処置はスタンダ
ード化され、十分に定義されている（Ｊ．Ｅ．Ｏｅｓｔｅｒｌｉｎｇ，  ２．Ｆ
ｕｋｓ，  Ｃ．Ｔ．Ｌｅｅ  ａｎｄ  Ｈ．Ｊ．Ｓｃｈｅｒ  “Ｃａｎｃｅｒ  ｏ
ｆ  ｔｈｅ  Ｐｒｏｓｔａｔｅ”  ｉｎ  Ｖｉｎｃｅｎｔ  Ｔ．ＤｅＶｉｔａ  
Ｊｒ．  ｅｔ  ａｌ．  ｅｄｓ  ｏｐ  ｃｉｔ  １９９７、Ｃｈａｐｔｅｒ  ３
３．４  ａｎｄ  Ｗ．Ｊ．Ｃａｔａｌｏｎａ  Ｎ．Ｅｎｇ．Ｊ．Ｍｅｄ．  ３３
１：９９６−１００４、  １９９４参照）。
【００４６】
前立腺がんはＴＭＮ（腫瘍サイズ、結節の状態、転移）段階づけシステムによ
って定義される。
【００４７】
表１  前立腺がん用ＡＪＣＣ段階づけシステム
初期腫瘍
ＴＸ          初期腫瘍は発見されない
Ｔ０          初期腫瘍の徴候はない
Ｔ１          触診もできずイメージングで見ることもできない臨床的に不顕性
の腫瘍
Ｔ１ａ  組織学的所見に伴なう切除組織の５パーセント未満の腫瘍
Ｔ１ｂ  組織学的所見に伴なう切除組織の５パーセント以上の腫瘍
Ｔ１ｃ  針生検（例えば、精密なＰＳＡ）によって同定された腫瘍
Ｔ２          前立腺にとどまる触診可能な腫瘍＊１
Ｔ２ａ  片葉を巻き込む腫瘍
Ｔ２ｂ  両葉を巻き込む腫瘍
Ｔ３          前立腺嚢にまで広がった腫瘍＊２
Ｔ３ａ  嚢外への拡張（一側性または両側性）
Ｔ３ｂ  精嚢に侵入した腫瘍
Ｔ４          以下のような精嚢以外の近隣組織に侵入または定着した腫瘍
膀胱頸部、外部spincter、直腸、挙筋およびまたは骨盤壁
＊１：針生検によって双葉に見つかったか、または葉には見つからなかったが、
触診できず、イメージングで見ることもできない腫瘍は、Ｔ１ｃに分類される。
＊２：前立腺先端または前立腺嚢への（ただしそれ以上越えてはいない）侵入は
Ｔ３ではなくＴ２に分類される。
Ｂ．当該部分のリンパ節（Ｎ）
ＮＸ          領域リンパ節は発見されない
Ｎ０          領域リンパ節転移はない
Ｎ１−Ｎ３    １つ以上の領域リンパ節に転移
【００４８】
遠隔の節の病変や転移病変の確証がある患者は、放射線療法の候補者とは見な
されない。このような患者はホルモン操作で処置されることになる。患者は、そ
のＴ段階の位置（図１参照。ＡＩＣＣ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｓｔａｇｉｎｇ  Ｍａｎ
ｕａｌ，  ５ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ  ｐ２２０，  １９９７，  Ｌｉｐｐｉｎｃ
ｏｔｔ−Ｔａｖｅｎ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，  Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，  
ＵＳＡから転載）、処置以前のグリーソンスコア（値が割り当てられる低倍率の
評価に基づく病理学的値−Ｇｌｅａｓｏｎ  D．F．，  “Ｈｉｓｔｏｌｏｇｉｃ
ａｌ  ｇｒａｄｉｎｇ  ａｎｄ  ｓｔａｇｉｎｇ  ｏｆ  ｐｒｏｓｔａｔｉｃ  
ｃａｒｃｉｎｏｍａ”；ｉｎ  Ｕｒｏｌｏｇｉｃ  Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ  Ｔｈｅ
Ｐｒｏｓｔａｔｅ  Ｍ．Ｔａｎｎｅｎｂａｕｍ  Ｅｄ．  １９７７，  １７１
−１９８  Ｌｅａ  ＆  Ｆｅｂｉｇｅｒ  Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ参照）、処
置以前の血流中の前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）レベルに応じて、２グループに分
けられる。予後の良好な患者は、転移病変を探すために行なうそれ以上の段階づ
けをする必要はない。この患者グループは、Ｔ２ａ以下の病変、グリーソンスコ
ア６以下、処置以前のＰＳＡ＜１０ｎｇ／ｍｌである。このグループ分けに当て
はまらない患者は、胸部Ｘ線撮影とともに腹部および骨盤の骨スキャンとＣＴス
キャンが必要である。予後の良くないグループの患者は、放射線とともにネオア
ジュバントのホルモン療法を受ける。
【００４９】
予後の良好なグループの患者は、初期処置として外科手術か放射線療法を選択
できる。外科医は、患者の年齢やリスク要因（医学上危険な問題点など）に基づ
いて手術の候補者とするかどうかを決定する。一般に、７０歳以上の患者には放
射線療法を施すことになる。外科医は多くの場合、手術時点のリンパ節への関与
、精嚢への関与、嚢外への拡張のリスクを記述するのにＰａｒｔｉｎの表を利用
する。
【００５０】
予後の思わしくない患者は、予定された手術の時点でこれらの病理学的特質を
示す公算が高く、その場合は患者に手術を受けるのを思いとどまらせることにな
る。放射線療法を受ける患者は、ＰＳＡレベルについて綿密に追跡調査される。
放射線治療終了後およそ１８ヶ月で、血流中のＰＳＡレベルが最低を示すことが
期待される。血流中のＰＳＡレベルは、１．０ｎｇ／ｍｌ未満でなければならな
い。処置以前の特質を示す予後のかんばしくない患者は、放射線治療の前に２ヶ
月間継続してホルモン投与を受ける。ホルモンは通常、放射線療法のクールを通
じて投与される。この時点では、患者がどれだけの期間ホルモン療法を続けなけ
ればならないかは誰にもわからないが、放射線治療の完了を以って中止されるこ
とが多い。患者がホルモン療法の延長クール中でなければ、ＰＳＡレベルはこの
場合もまた、放射線治療の完了後およそ１８ヶ月で最低を示さなければならない
。ホルモン療法の延長クールの場合には、ＰＳＡ最低値が現われるべき時点につ
いては定められた時刻表がある。ＰＳＡ最低値が１未満であれば、この期間のお
よそ８０パーセントの間、疾病をコントロールした指標となる。
【００５１】
様々な段階と処置について、経過が適切に規定され、記録されている。これら
は、処置の５年後と１０年後の時点で、ＰＳＡレベルと臨床検査により判断して
再発の徴候がない患者のパーセントによって計測されている（Ｅ．Ｏｅｓｔｅｒ
ｌｉｎｇ，  Ｚ．Ｆｕｋｓ，  Ｃ．Ｔ．Ｌｅｅ  ａｎｄ  Ｈ．Ｉ．Ｓｃｈｅｒ  
“Ｃａｎｃｅｒ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｐｒｏｓｔａｔｅ”  ｉｎ  Ｖｉｎｃｅｎｔ  
Ｔ．ＤｅＶｉｔａ  Ｊｒ．  ｅｔ  ａｌ．  ｅｄｓ  ｏｐ  ｃｉｔ  １９９７，
Ｃｈａｐｔｅｒ３３．４参照）。こうした数字から見て、結果は完璧とは程遠
く、改善の余地がかなりあることは明白である。例えば、Ｔ２患者の５０パーセ
ント程度（研究により異なる）が、外科手術か放射線治療の５年後に疾病再発の
徴候を見ている。この数字はＴ３／４段階の疾病の放射線治療（この段階の患者
には外科手術は選択できない）後になると７０パーセントに跳ね上がる。
【００５２】
【実施例】
例１：アデノウイルスベクターとその構築法
ＡｄＶ．ＲＳＶ−ｔｋは、ＲＳＶ−ＬＴＲプロモータの転写コントロールの下
で、ＨＳＶ−ｔｋ遺伝子を運ぶ、複製−欠損組み換えウイルスである。ＡｄＶ−
βｇａｌは、β−ガラクトシダーゼ（β−ｇａｌ）発現カセットを持つ同様のベ
クタである。これらのベクタは標準的方法で記述され、作成された（Ｃｈｅｎ  
ｅｔ  ａｌ．  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９２：２
５７７−２５８１２  １９９５，  Ｎｙｂｅｒｇ−Ｈｏｆｆｍａｎ  ｅｔ  ａｌ
．  Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ３：５０６−５１１，  １９９８）。ベ
クター粒子（ｖ．ｐ．）タイターは、記述されたように（Ｎｙｂｅｒｇ−Ｈｏｆ
ｆｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９８  ｏｐ．ｃｉｔ．）、２９３細胞系の末端
の細胞変性効果を利用した連続的希薄化による分光光度吸収と伝染性ユニット（
ｉ．ｕ．）タイターによって規定された。どちらのベクターも、伝染性ユニット
（ＩＵ）に対するｖｐの比率が２０未満で、５Ｘ１０１２ｖｐ／ｍｌの範囲内の
タイターを持っていた。
【００５３】
例２：アデノＴＫ、プロドラッグ、放射線療法の協同を示す動物腫瘍モデル
マウスの前立腺がん細胞系ＲＭ−１は、記述された（Ｌｕ  ｅｔ  ａｌ．，  
１９９２；  Ｂａｌｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９５）マウス前立腺再構成（Ｍ
ＰＲ）腫瘍組織に由来するものであった。細胞は、型どおりの中膜変化を続けて
、拡張しており、パッセージ８か９で、液体窒素の中に入れてあった。それぞれ
の実験には、凍結ＲＭ−１細胞の新しいバイアルが使われた。
【００５４】
腫瘍モデルとベクター注入
ジャクソン研究所から来た免疫力の高いＣ５７ＢＬ／６とＢａｌｂ／ｃのマウス
がＲＭ−１の注入に使われた。動物は、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉ
ｏｎ  ｆｏｒ  Ａｃｃｒｅｄｉｔａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ａ
ｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅによって承認された設備内に置かれた。動物実験はすべて
、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  ＨｅａｌｔｈのＧｕｉｄｅ  
ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  ｏｆ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ａ
ｎｉｍａｌｓ「実験動物の管理と使用に関する手引き」に概説された原則と手続
きに沿うように遂行された。実験時には、動物たちは生後ほぼ６週間で、それぞ
れ体重２０グラム程度であった。腫瘍は、５０μｌ中１Ｘ１０４個のＲＭ−１細
胞もしくはＴＭ−４０Ｄ細胞（それぞれ、前立腺と乳腺の細胞）の皮下注入によ
って作られた。この細胞投与は、それぞれ５−７日後と２１−２８日後に５０−
６０ｍｍ３の腫瘍を生ぜしめた。腫瘍インプラントは、内臓に放射線損傷が広が
る合併症を避けるため、脇腹後部に行なわれた。ＡｄＶ．ＲＳＶ−ｔｋ投与量は
、投与量漸増実験により決定され、１腫瘍につき２０ｕｌ中１Ｘ１０９から１Ｘ
１０１１までのｖ．ｐ．の投与量を使用し、その後、６日間にわたり１日２回、
ＧＣＶを２０ｍｇ／ｋｇ腹腔内に投与した。針を抜くときのベクタの漏出を最小
限にするために、腫瘍に届く前に皮内の管を通して針が入れられた。腫瘍のサイ
ズは４日ごとに副尺つきカリパスで縦横の軸で計測され、腫瘍の体積は公式（ａ
Ｘｂ２）／２で算出された。この場合、ａは腫瘍の長い方の軸で、ｂは短い方の
軸である（Ｍｉｌｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  １９８８）。
【００５５】
腫瘍と細胞の注入、ベクターの接種、放射線治療は、ペントバルビタールを５
０ｕｇ／ｇの投与量で使用して、全身麻酔のもとで行なわれた。処置後のケアに
は、動物が麻酔から覚めるまで暖めたパッドの上に置いて、温かい環境を保つこ
とも含まれていた。動物は処置後の合併症の有無を同定するために、局部感染、
食物と液体の摂取、グルーミング、活動性についてモニタされた。腫瘍サイズが
どちらかの軸で最大２５ｍｍを越えた場合、または動物が、体重の著しい減少、
呼吸困難、身体的損傷、脱毛など、健康を害した徴候を表わした場合、その動物
は安楽死させた。
【００５６】
放射線療法
５０−６０ｍｍ３の腫瘍に、常用電圧Ｘ線発生器を用いて１回の照射量を５Ｇ
ｙ、１０Ｇｙ、１５Ｇｙとして、放射線を当てた。内臓が放射線の損傷に不必要
に晒されるのを避けるために、周囲の組織を護る適切なシールドが施された。動
物は、放射線が誘発する毒性の徴候を示すかモニタされた。
【００５７】
併用治療法研究のために、上述のようにＡｄｖ／ＲＳＶ−ｔｋまたはＡｄＶ／
ＲＳＶ−β−ｇａｌ（１腫瘍につき３Ｘ１０１０ｖ．ｐ．）が腫瘍に直接に注入
された。ベクター注入の７２時間後に、腫瘍は１回の照射量５Ｇｙで放射線を当
てられた。上述のように、動物と腫瘍がモニタされた。
【００５８】
組織構造と免疫学
組織は、厚さ５ｍｍのセクションにカットしてパラフィンに埋め込み、ホルマ
リンに浸し、その後組織学的評価用にヘマトキシリンとエオシンで染色した。免
疫学的−組織学的分析のために、腫瘍標本は液体窒素で凍結させて組織−Ｔｅｃ
ＯＣＴ化合物に留めた。それらを６ｕｍの薄片にスライスし、ポリリシンコー
トのスライドに乗せ、２０分間−２０℃の冷たいアセトン／メタノール（１：１
）に浸した。免疫組織化学的染色は、アビジン−ビオチン−ペルオキシダーゼＶ
ｅｃｔａｓｔａｉｎ  Ｅｌｉｔｅ  ＡＢＣキット（Ｖｅｃｔｏｒ  Ｌａｂｏｒａ
ｔｏｒｉｅｓ、バーリンゲーム、カリフォルニア州）を用いて行なった。第一の
ラット抗マウスＣＤ４とＣＤ８は、Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ（サンディエゴ、カリ
フォルニア州）から、アンチＦ４／８０（抗マクロファージ）はＳｅｒｏｔｅｃ
（オクスフォード、英国）から購入した。抗体の希釈率は、抗体ＣＤ４と抗体Ｃ
Ｄ８については１：１００、抗体Ｆ４０／８０については１：４００であった。
免疫反応産物はＤＡＢ／Ｈ２Ｏ２で視覚化された。ポジティブに染色された細胞
が、顕微鏡下でブラインドで、がんエリアのスクリーニングによってカウントさ
れた。その結果は、がんエリア１ｍｍ２についての免疫陽性細胞の数として記録
された。
【００５９】
統計的分析
異なった処置を施したグループで観察された腫瘍の成長と免疫成分に関するデ
ータの統計的分析は、スチューデントのテストとＡＮＯＶＡ（分散分析）を用い
て行なわれた。さらに、生存率曲線はＷｉｌｃｏｘｏｎ  ｔｅｓｔを用いて比較
された。
【００６０】
ＡｄＶ／ＲＳＶ−ｔｋの樹立と放射線照射量
ＨＳＶ−ｔｋ遺伝子と放射線療法の相助作用を評価するために、それぞれの作
用因で効果はあるが治癒力はない投与量が要求された。この研究のためのベクタ
投与量を選択するために、マウスの皮下で樹立された前立腺腫瘍と乳腺腫瘍に、
ＡｄＶ−ｔｋを投与量を漸増させて直接に注入し、２４時間後に、ＩＰ  ＧＣＶ
を１日２回２０ｍｇ／Ｋｇ、６日間注入した。ＡｄＶ−ｔｋの投与量は、１腫瘍
につき１Ｘ１０９、３Ｘ１０９、１Ｘ１０１０、３Ｘ１０１０、１Ｘ１０１１（
ｖ．ｐ．）が分析された（図１Ａ）。すべての処置グループが腫瘍成長の遅延を
示したが、ベクター注入後４日、８日、１２日に施した最高投与量間で、統計的
に有意な差異はなかった（ｐ＞０．１）。いずれの処置グループも治癒力はなく
、明らかな毒性もなかった。これらの結果に基づいて、１腫瘍につき３Ｘ１０１
０（ｖ．ｐ．）の投与量が、併用治療法研究のために選ばれた。
【００６１】
放射線照射量を選択するために、１回分の照射量として５、１０、１５Ｇｙが
比較された。３つの照射量で腫瘍の成長の遅延が観察されたが、５Ｇｙと他の２
つの高照射量グループの間では統計的に有意な差異があり、ベクター注入後８日
と１２日にｐ＜０．００２（図１Ｂ）であった。照射量の高い方では腫瘍の著し
い壊死を示した。腫瘍の成長には、５Ｇｙと対照（ｐ＞０．２）の間で有意な差
異は観察できなかった。いずれの照射量でも、全身的な毒性は認められなかった
。このデータに基づいて、併用治療法研究のためには放射線照射量５Ｇｙが選ば
れた。
【００６２】
Ｉｎ  ｖｉｖｏの併用治療法
併用治療法研究のために、６グループが設置された。第１グループは、処置な
しの対照群で、ＰＢＳ注射のみを受けた。第２グループは、ベクタの特異的効果
のない対照群で、ＡｄＶ−β−ｇａｌの注射を受けた。第３と第４のグループは
単一の療法使用の効果を調べる対照群で、それぞれ、ＡｄＶ−ｔｋ＋ＧＣＶと５
ＧｙのＸＲＴを受けた。第５のグループは、ＸＲＴとアデノウイルスベクターの
潜在的な特異的相互作用なしの対照群であった。このグループはＡｄＶ−β−ｇ
ａｌと５ＧｙのＸＲＴを受けた。第６グループはテスト動物であり、ＡｄＶ−ｔ
ｋ＋ＧＣＶおよび５ＧｙのＸＲＴを受けた。予想されたとおり、単一の療法使用
のグループはどちらも、対照群と比較して腫瘍の成長に抑制が見られた（図２Ａ
）。腫瘍の体積は一定に保たれ、ＡｄＶ−β−ｇａｌやＰＢＳの対照群と比較し
て、動物は処置後８日間を通して健康に見えた。ＡｄＶ−ｔｋ＋ＧＣＶプラス放
射線のグループの動物はすべて、処置後１２日まで健康に見えた。併用療法グル
ープでは、他の処置グループすべてと比較して、腫瘍の成長の有意な抑制が観察
された、ｐ＜０．０２（図２Ａ）。ＡｄＶ−β−ｇａｌ対照群では４日目と１２
日目に腫瘍の成長が著しく進んだ（ｐ≦０．００６）が、８日目には単一療法の
対照群に匹敵する腫瘍の成長の遅延を示したことを注記する。さらに、ＡｄＶ−
β−ｇａｌ＋ＸＲＴグループは、ＡｄＶ−ｔｋグループ（ｐ＝０．０２９）とＸ
ＲＴグループ（ｐ＝０．０７７）を含めた他の単一療法グループと比較して、８
日目には腫瘍の成長の大きな遅延を示したが、処置から４日目と１２日目には差
異は認められなかった（ｐ＞０．２）。
【００６３】
生存率研究では、生存期間１３．８日のＰＢＳと１４．３日のＡｄＶ−β−ｇ
ａｌの動物の間では有意な差異は見られなかった。単一療法グループは対照グル
ープ（ｐ＜０．０２）と比較して、それぞれＡｄＶ．ＲＳＶ−ｔｋグループは１
６．４日、ＸＲＴグループは１６．８日、ＡｄＶ−β−ｇａｌ＋ＸＲＴグループ
は１８．５日の中間生存期間で、生存率の向上を見た。３つの単一療法グループ
内で有意な差異は認められなかった（ｐ＞０．１）。併用療法グループは、中間
生存期間２２日で、単一療法グループ、対照グループのどちらと比較しても、有
意な向上を示した、Ｐ＜０．０１。
【００６４】
組織学的研究では、併用療法で、中庸から高度にいたる程度で広がったリンパ
細胞の浸潤とまだらの壊死エリアが発見された。単一療法や対照グループと比較
して、このグループではＣＤ４＋の浸潤に統計的に有意な増加が見られた。併用
処置グループではＣＤ８＋細胞も増えてていたが、これは重要ではない。異なっ
た処置グループの間で、マクロファージマーカー陽性細胞の数に有意な差異は認
められなかった（データは示していない）。
【００６５】
例３：放射線シードと組み合わせたアデノウイルスベクターの使用
アデノウイルスベクターは、活動度１００パーセント以上の放射線ゴールドシ
ードを内包したミクロ遠心分離機のチューブ内の３つの５００ｕｌのアリコート
に配置された。ゴールドシードは半減期２．５日である。対照アリコートがゴー
ルドシードを含むアリコートから離れた位置に配置された。アリコートはコンス
タントな混合を維持するために、回転する台に設置された。１０から２５ｕｌの
サンプルが、１５分、３０分、６０分に、そして２４日、４８日、７２日に採取
され、滴定が行なわれた。放射線ゴールドシードに接触しているサンプルのタイ
ターは、対照アリコートのタイターと統計的に同一であった。これらの結果は、
アデノウイルスベクターの潜在能力を犠牲にすることなく、放射腺シードとアデ
ノウイルスベクターを共−注入できることを表わしている。
【００６６】
例４：アデノＴＫ、プロドラッグ、放射線療法が転移に及ぼす効果
腫瘍は、ＲＭ−１細胞の１Ｘ１０４の皮下接種と５Ｘ１０３の尾静脈注射によ
って樹立された。われわれは、併用療法を２つの単一療法使用と無処置の対照群
と比較した。２０ｕｌに３Ｘ１０１０のＡｄＶ−ｔｋの投与量で、ＡｄＶ／ＲＳ
Ｖ−ｔｋが皮下の腫瘍に注入された。ガンシクロビル処置がＨＳＶ−ｔｋ注入２
４時間後に開始され、その７２時間後に１回の照射量５Ｇｙの放射線が当てられ
た。ベクター注入後１０日に、胸腔内に腫瘍を探した。肺を解剖し、ピクリン酸
に浸し、腫瘍の小結節をカウントした。既述のように（Ｔｉｍｍｅ  ＴＬ  ｅｔ
ａｌ．，  Ｃａｎｃｅｒ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．  Ｍａｒ−Ａｐｒ：５（２）
：７４−８２．（１９９８））、また付図に示したように、ＨＳＶ−ｔｋ療法は
肺におけるコロニー形成を著しく縮減することが認められた（ｐ＜０．０５）。
しかしながら、併用療法は肺への転移の数をさらに著しく縮減させる結果となっ
た（ｐ＜０．０５）。
【００６７】
例５：ＨＳＶ−ＴＫのハイパー抗原作用
ウイルス性ベクターを用いると、特定のベクター蛋白質に応答して、細胞傷害
性Ｔ細胞のエフェクター機能とＴ細胞依存抗体産生を含むＴ細胞媒介反応が次々
と起こる。腫瘍傷害に関連する細胞残屑及びアポトーシスが非特異的炎症性反応
を起こす。マクロファージは周囲を浸潤し、アポトーシス小体を食菌し且つ同族
のＴ細胞に抗原を提示する。この動的環境によって、免疫系がベクタ、腫瘍そし
ておそらくは導入遺伝子に対して複合反応を展開することが可能となる。免疫反
応は、有益な起こり得る有益な抗腫瘍免疫反応を強化する。
【００６８】
大多数の人々は、循環抗体及び通常のアデノウイルス抗原型に対するメモリＴ
細胞特異性を持っている。これらの人々が、臨床上の攻撃に対して、抗体分泌や
Ｂリンパ球とＴ細胞エフェクター機能におけるクラススイッチを含む重要な反応
を開始するのである。これらの反応は、ｉｎ  ｖｉｖｏの治験及び実験モデルの
成功に重要な役割を果たしている。
【００６９】
次に、特定の導入遺伝子に対する免疫反応が立証された。これらの細胞内蛋白
質は処理されて、ペプチド抗原と誘導細胞傷害性リンパ球（ＣＴＬ）の同族のＴ
細胞からの反応として、通常の主要組織適合抗原系（ＭＨＣ）クラスＩ経路に入
ると考えられる。ＣＤ４Ｔ細胞とＭＨＣクラス２経路に依存する抗導入遺伝子抗
体の発生に関する証拠もある。それゆえ、ウイルス性ベクタによる導入遺伝子の
投与は、幾つかの異なるメカニズムによって主免疫系を著しく活性化する。我々
はアデノウイルスのバックボーンにおいて最も広く使われている自殺遺伝子、Ｈ
ＳＶ−ｔｋに対する免疫反応を特徴づけることを目指した。
【００７０】
驚くべきことに、ＨＳＶ―ｔｋは、ただＭＨＣクラス２対立遺伝子がのあると
きにのみ、ナイーブＴ細胞の増殖を支援することができる。この観察は、ＨＳＶ
−ｔｋがスーパー抗原（ＳＡｇｓ）と呼ばれる明確に特徴づけられた一群の蛋白
質と同様に、固有の免疫活性化特性を持っているかもしれないということを示し
ている。定義上、これらのプロテインは多くのＭＨＣクラス２イソタイプに抗原
結合溝の外側で結合する。続いて、この協働相互作用はＴＣＲの二重鎖の比較的
不変な部分に結合することによって、さらに安定化する。適正なＶ？エレメント
をもつＴ細胞のポリクローナル活性化によってサイトカインが盛んに分泌される
ようになる。この免疫系との相互作用は、ＳＡｇｓによって媒介された毒性の基
礎を成す。これらの蛋白質は、グラム陽性球菌やレトロウイルスを含むがそれだ
けには限定されない幅広い病原体によって作りあげられる。幅広く分岐した有機
体の間に構造的な相同関係がないにもかかわらず、この機能と生物学的活動の保
全が保全されていることは、これらの蛋白質が、宿主に感染している間又は病原
体のライフサイクルの中で選択的優位性を備えるということを示唆している。Ｈ
ＳＶ−ｔｋは新しいウイルス性スーパー抗原或いはヒトＴリンパ球に対する弱い
マイトジェンであるというのが我々の主張である。この所見は遺伝子治療におけ
る治療剤としてのＨＳＶ−ｔｋの安全性及び／又は有効性に対し重大な影響を与
えるだろう。
【００７１】
Ｖ−ｔｋを含むアデノウイルスのｉｎ  ｖｉｔｒｏでの促進能力
Ａｄ５ＴＫが、マウスＬ細胞（ＭＨＣクラス２ネガティブ）とヒトクラス２（
ＤＲ、ＤＰ及びＤＱ）によってトランスフェクションされたＬ細胞を形質導入す
るために使用された。これらの細胞は異種、同種及び同系Ｔリンパ球に対する抗
原提示細胞（ＡＰＣ）として使用された。トランスフェクションされたＤＲ−１
（クローンＤ５−３．１）又は親Ｌ細胞は、Ａｄ５含有ガラクトシダーゼ、ＨＳ
Ｖ−ｔｋ又はＶＳａｇ−７（マウスレトロウイルススーパー抗原）を含むＡｄ５
によって形質導入された。我々は、特定の提示分子の状況において、これらの細
胞がＴ細胞の増殖を支援する能力を試験した。導入制御ではないＨＳＶ−ｔｋは
Ｔ細胞の増殖を支援する。この増殖はヒトＭＨＣクラス２があるときに明らかで
あるにすぎなかった。ＭＨＣクラス２依存性の固有のパラメータは、人工物に特
徴的なものではない。次に我々はＨＳＶ−ｔｋが限定されたＤＲ−１であるか否
か、又二つの他のヒトイソタイプがＴ細胞の増殖を支援するかどうかを試験した
。ＤＱ及びＤＰＭＨＣクラス２トランスフェクタントが、同様のＴ細胞検査にけ
るＡＰＣとして使用された。三つの全ての対立遺伝子が、同程度のトリチウム化
チミジンの滴定取り込み反応を支援することができた。Ｔ細胞刺激のレベルは名
ばかりの抗原反応よりもはるかに大きかった。用量漸増曲線の形は、緩やかな上
昇と低い極大振幅及びＴ細胞ドナとトンランスフェクションされた対立遺伝子の
独立性によって特徴づけられている。この特色は、有効性がＨＳＶ−ｔｋそれ自
体の特徴を反映していることを示唆している。個別反応の絶対範囲は、約２５，
０００ｃｐｍを平均として、１５，０００ｃｐｍ乃至６０，０００ｃｐｍの間に
ある。
【００７２】
ベクターとインサート制御
我々は、アデノウイルスのバックボーン内に含まれるＨＳＶ−ｔｋは、自由な
ＭＨＣクラス２分子があるときにＴ細胞の増殖を支援できることを示した。Ａｄ
５含有ガラクトシダーゼ及びその他のインサートが同じタイプのＴ細胞の増殖を
支援しなかったという観察ゆえに、このＴ細胞増殖はインサート依存性であると
考えられた。インサートの分析には？１−抗トリプシン（分泌蛋白質）、緑色蛍
光蛋白質（クラゲ由来）或いはＩＤＳ（ヒト蛋白質）が含まれた。次に、我々は
また野生型Ａｄ５も試験した。様々な濃度においても、同じドナからの細胞がＡ
ｄＴｋに反応するできる一方で、野生型Ａｄ５はＴ細胞増殖を支援することはで
きなかった。これらの一連の実験は、ＨＳＶ−ｔｋが特にＴ細胞増殖を促進する
という観察と一致する。しかしながら、Ａｄ５ｔｋがアデノウイルス遺伝子産物
をトランスアクチベートしているのか否か、及びＭＨＣ２クラス依存Ｔ細胞増殖
を間接的に要求しているのか否かについては明らかでない。ＨＳＶ−ｔｋがアデ
ノウイルスのバックボーンの外で分裂誘起性を保持しているのか否かを試験する
ために、我々はＤＲ−１（フロサイトメトリにより評価される）及びＨＳＶ−ｔ
ｋ（ＧＣＶに対する感受性により評価される）を発現する二重に安定的なトラン
スフェクタントを、プラスミド媒介トランスフェクションと薬剤選択によって造
った。三つの独立したクローンは、Ｔ細胞増殖を支援する能力を審査された。Ｃ
５、すなわちＧＣＶ反応性ＤＲ−１＋クローンは、一貫してネオマイシン単独プ
ラスミドを以上にＴ細胞増殖を支援した。Ｃ５は、ＤＲ−１のみの場合と比較し
て、より低いレベルのＭＨＣクラス２を発現した。この観察によって、我々は、
ＨＳＶ−ｔｋが、ＭＨＣクラス２決定基に対して常に不適当に組み合わされる混
合リンパ反応を単に強化しているだけではないと信ずるに至った。次に、ＭＨＣ
クラス２適合個体がドナとして使用されるとき、Ｔ細胞はＤＲ−１単独ではない
ＨＳＶ−ｔｋに反応して増殖した。これらの観察は、反応の大きさ（内因性の相
互刺激のない場合は、ＭＬＲ反応は通常５，０００ｃｐｍ以下である）に加え、
同系反応に対する反証となる。興味深いのは、ＤＲ−１発現と、三つの安定的に
トランスフェクションされたクローン間のＴ細胞増殖との間に相関関係があると
いうことである。ＨＳＶ−ｔｋに対する反応は、大多数のドナにおいて見られた
が、これは絶対的なものではない（２０試験済）。それにもかかわらず、ＤＲ−
１が存在してしかもＴ細胞がそのために選択されるＭＨＣクラス２のハプロタイ
プではない場合に、多くのドナがＨＳＶ−ｔｋに対して反応できるということは
、ＨＳＶ−ｔｋが自由なＭＨＣクラス２依存性Ｔ細胞マイトジェンであることの
さらなる証拠である。
【００７３】
ＤＲ−１＋繊維芽細胞を発現するＨＳＶ−ｔｋによる刺激に対するＴ細胞の芽球
化
前方散乱対側方散乱における変化を受けた細胞の割合を量るために、Ｔ細胞の
フロサイトメトリック分析を行った。このタイプの変化は、マイトジェンとスー
パー抗原の様々なタイプに一致する。ドナ次第で、ＤＲ−１に対する同系反応に
比較してブラステッド細胞の総数は、２乃至３倍増加する。ブラステッドゲート
は、循環されているヨウ化プロビジウム染色によって評価される細胞を含む。こ
れらの細胞はＣＤ３＋と殆どがＣＤ２５＋であり、細胞は活性化され、細胞のチ
ミジンのレベルではなく、トリチウム化したチミジンがＤＮＡターンオーバーの
真の尺度であることを示唆している。細胞は、Ｔ細胞上のＭＨＣクラスＩマーカ
ーであるＫｋに関しては着色しなかった。Ｋｋ陽性細胞の欠如は、ブラステッド
細胞が本質的には線維芽細胞ではないことをはっきりと示している。顕微分析は
フロサイトメトリックのデータと一致している。ＨＳＶ−ｔｋとＤＲ−１がある
溶液中で、はっきりとしたリンパ球集合体が見られた。いくつかの細胞の凝集塊
がより長い時点で同系反応に一致するＤＲ−１刺激と共に見られた。
【００７４】
例６：アデノＴＫ、バラシクロビル及び外部放射線療法による患者治療
これは、原発性及び転移性疾患に対するＡｄｔｋ療法と放射線療法の結合の効
果を分析すべくたてられた既存の臨床研究計画の例である。一例として、我々は
前立腺のモデルを利用するが、この方法はこの疾患部位に限られるものではない
。
【００７５】
この研究は三部門（被験者集団の基準に関しては下記を参照）よりなる。Ａ部
門は低リスク患者（好ましい予後要因を有する）を含み、Ｂ部門は高リスク患者
（好ましくない予後要因を有する）を有し、Ｃ部門は局所的に重症な患者を含ん
でいる。Ｂ部門及びＣ部門の患者は、標準的治療としてネオアジュバントのアン
ドロゲン除去を受ける。アポトーシス、ネクロシス、腫瘍増殖及び免疫学的反応
が存在するような再生検時の組織交代によるばかりでなく、ＰＳＡ血清レベルの
変化及びデジタル直腸検査によって評価されるような臨床反応は、次のようなＨ
ＳＶ−ｔｋバラクシロビル治療により評価される。血液サンプルは、全身性免疫
反応の評価のためにも採取される。血清テストステロンは測定される。加えて、
患者はｎａｄｉｒＰＳＡ、ＰＳＡ進行からの解放及び局部的、遠隔的進行からの
解放及び全体的な生存を評価するためにしっかりと追跡される。
【００７６】
８．０  プロトコルの説明
８．１ 患者登録
患者は、このプロトコルのためのインフォームドコンセントの書類に記入する
ことによってこの研究に参加する。患者の適格性（付属書２）は、ベイラー医科
大学Ｂａｙｌｏｒ  Ｃｏｌｌｅｇｅ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ放射線療法学科の
データマネージャによって確認される。患者は、データマネージャによってグル
ープ分けされる。この治験への参加或いは不参加によって、患者にとって望まし
い他の治療が影響を受けることはない。
【００７７】
８．２ データ収集とモニタリング
８．２.１ 研究のモニタリング
治験担当医師は研究モニタ及びＦＤＡが研究書類（例えばコンセントフォーム
、分析証明書、事例報告書及び関連病院又は診療所のカルテ）を調べることを許
可する。
【００７８】
８．２.２ 副作用の報告
副作用（ＡＤＲｓ）はＦＤＡ、ＲＡＣ及びＩＲＢに速やかに報告される。ＡＤ
Ｒ報告は、単なる薬物作用の疑いだけであっても必要とされる。事前に分らなか
った第２度又は第３度の作用は、１０就業日以内に書面で報告される。第四度及
び治療中の患者の死亡は２４時間以内に電話で報告される。続いて書面での報告
を１０就業日以内に行う。
【００７９】
８．２.３ プロトコル修正手続
プロトコルの改定は全ての治験担当医師、ＦＤＡ及び他に必要とされる者によ
って検討される。現行のプロトコルを改定する合意がなされると、変更の正式リ
ストが修正されたプロトコルに添付され、これらの書類はＦＤＡ、ベイラー医科
大学Ｂａｙｌｏｒ  Ｃｏｌｌｅｇｅ  ｏｆ  ＭｅｄｉｃｉｎｅのＩＲＢ及び関係
委員会に提出される。
【００８０】
８．２.４ 治験結果の公表
あらゆる手稿、要約書または発表物は、このプロトコルに関係するすべての治
験担当医師に利用される。被験者及び研究からのデータの秘密は法律の範囲内で
保持される。
【００８１】
８．３ 手順（付属書３）と治療剤
８．３．１ ＨＳＶ−ｔｋ遺伝子のデリバリ
注射に先だって、全ての患者は１日に２回服用の広域経口抗生物質を受け取り
、注射に先立つ日が開始される。これは３乃至５日間続けられる。経直腸超音波
が前立腺内注射の四ヶ所の部位を局限するために用いられ、２ヶ所はそれぞれ前
立腺葉に局限する。第０日目は、合計１乃至２ｃｃのＡｄＶ  ＨＳＶ−ｔｋアデ
ノウイルスベクター（ＩＮＤ６３７１、６６３６及び７３１１において使用され
たものと同一のベクター）（付属書４参照）が２０ゲージ針を用いて注射される
（各側葉には１ｃｃまで）。ベイラーＢａｙｌｏｒでのフェーズ１投与量研究に
よる毒性結果に基づき、腫瘍ごとに総量５×１０１１のベクター粒子が注射され
る。前立腺注射に関連して起こり得る流出障害を防ぐために、フォーリカテーテ
ルを注射の後に取り付けてもよい。Ａ部門の患者に対しては、アデノウイルス前
立腺内注射が１４日繰り返される。Ｂ部門の患者に対しては、アデノウイルス前
立腺内注射は５６及び７０日繰り返される。
【００８２】
８．３．２ バラシクロビルの投与
バラシクロビル（付属書５参照）治療は各ウイルス注射後２４時間後に始まり
適当な時期に１回当り２ｇｍの投与量で、１４日間続く。この投与量は、８時間
毎に１０ｍｇ／ｋｇ投与されるＩＶアシクロビルと同様の曲線下面積（ａｕｃ、
ｈ−μｇ／ｍｌ）を与えるよう計算された。これはＩＮＤ７３１１（「再発性卵
巣癌の腺筋症温存手術後の患者における、アシクロビルの静脈投与及びトポテカ
ンによる化学療法が後に続く卵巣癌のＨＳＶ−ｔｋ遺伝子との併存アデノウイル
ス媒介形質導入のフェーズ１研究」）で用いられた投薬計画と同じ投与量である
。それゆえ、Ａ部門の患者は第１日乃至第１４日及び第１５日乃至第２８日にバ
ラシクロビルを与えられる。Ｂ部門の患者は、第１日乃至第１４日、第５７日乃
至第７０日及び第７１乃至第８４日にバラシクロビルを与えられる。
【００８３】
８．３．３ アンドロゲンの除去
高リスク患者に対しては、第０日に最初のアデノウイルス注射に付随してアン
ドロゲン除去が開始される。治療はＬＨＲＨ作動薬酢酸リュープロライド徐放剤
（Ｌｕｐｒｏｎ徐放剤、３０ｍｇ−付属書５）の１回の筋肉注射とフルタミド（
Ｅｕｌｅｘｉｎ、１２５ｍｇ×２を一日３回経口服用―付属書５）よりなる。こ
れは、我々の標準的なアンドロゲン除去投薬計画であり、３０ｍｇのＬｕｐｒｏ
ｎは４ヵ月持続する。フルタミドはＬｕｐｒｏｎ投与と共に最初の２週間与えら
れる。
【００８４】
８．３．４ 放射線治療
放射線治療は、Ａ部門においては最初のアデノウイルスベクター注射に続き４
８乃至７２時間で開始され、Ｂ部門及びＣ部門においては２回目のアデノウイル
スベクター注射後４８乃至７２時間で開始される。高エネルギーフォトン（＞１
０ＭＶ）及び２Ｇｙフラクションで与えられた総線量７０．０ＧｙがＡ部門及び
Ｂ部門の前立腺を囲む等線量ラインに与えられる。Ｃ部門に対しては、骨盤リン
パ管をカバーするために１．８Ｇｙフラクションで４５Ｇｙが骨盤に与えられ、
前立腺はさらに２Ｇｙフラクションで２６Ｇｙによって増強される。
【００８５】
９．０被験者集団と治療評価
９．１  患者の適格性
全ての患者は、前立腺癌であることを証明する生検を受けなければならない。
Ａ部門の患者は、次の特性を有していなければならない：ＰＳＡ＜１０、グリ
ーソンスコア≦６及び臨床病期Ｔ２ａ。
Ｂ部門の患者は次の特性のうち少なくとも１つ又はそれ以上を有しなければな
らない：ＰＳＡ≧１０、グリーソンスコア＞６及び臨床病期Ｔ２ｂ乃至Ｔ３
Ｃ部門の患者は前立腺の病理的領域リンパ節転移を有していなければならない
。
【００８６】
先行する外科、ホルモン、又は放射線による前立腺治療がないこと。
転移性疾患又はその他の悪性腫瘍（扁平上皮乳頭腫又は基底細胞皮膚癌を除く
）の徴候がないこと。
患者はエントリから３ヵ月以内にＰＳＡを受けなければならない。
患者は登録に先だち、研究に固有のインフォームドコンセントを提出しなけれ
ばならない。
【００８７】
患者はプロトコルの開始に先だつ次の臨床検査によって評価された、十分な基
本臓器機能を有していなければならない：
血清中クレアチニン＜１．５ｍｇ／ｄＬ
総ビリルビン＜２．５ｍｇ／ｄＬ、ＡＬＴ、ＡＳＴ、ＧＧＴ及びＡＰ＜２×正常
値
Ｐｔｓ＞１００，０００／ｍｌ３、ＡＮＣ＞１５００／ｍｌ３、Ｈｇｂ＞１０ｇ
ｍ／ｄＬ
正常な部分トロンボプラスチン時間（ＰＴＴ）及びプロトロンビン時間（ＰＴ）
【００８８】
９．２除外基準
転移性疾患又はリンパ節転移（Ｃ部門における領域腸骨リンパ節転移を除く）
の徴候があること。
【００８９】
先行する前立腺外科治療（温熱療法、凍結療法等）があること。
【００９０】
先行する骨盤放射線治療があること。
【００９１】
先行するアンドロゲン除去ホルモン療法（登録に先だって３ヵ月以上中断され
ているフィナステライドは除く）があること。
【００９２】
コルチコステロイド又は何らかの免疫抑制剤を服用中の患者。
【００９３】
ＨＩＶ＋の患者。
【００９４】
急性感染症（ウイルス性、細菌性又は治療を必要とする真菌感染症）を有する
患者。
【００９５】
肝硬変を有する患者。
【００９６】
９．３ 治療前評価
病歴と前立腺ダイアグラム、身長及び体重を含む健康診断。
【００９７】
血液検査―ＣＢＣ、ＰＬＴＳ、ＰＴ、ＰＴＴ
化学検査−Ｎａ、Ｋ、ＣＬ、ＣＯ２、ＢＵＮ、Ｃｒ、ＬＤＨ
肝機能検査−ＡＳＴ、ＡＬＴ、ＡＰ、ＧＧＴ、総ビリルビン
尿検査
登録の３ヵ月以内のＰＳＡ
６ヶ所の前立腺生検−ベイラー医科大学で検査されるべき病理外のもの。
【００９８】
Ｂ部門患者においてはリンパ節症を除外するために骨盤ＣＴが行われる。
Ｂ部門患者においてはＣＸＲ（後方及び前方図）、及び骨のスキャンが行われ
る。もし指示があれば、単純フィルム撮影が行われる。ＭＲＩは、何らかの疑い
のある部位をさらに評価するために予定さる。
Ａ部門患者においてはテストステロンレベルがチェックされる。
Ｃ部門患者においては、骨盤リンパ節郭清（開放式か腹腔鏡のどちらかで）が
行われる。骨盤リンパ節転移は病理学的に確認される必要がある。
【００９９】
９．４ 治療中の評価
第０日は、最初にＡＤＶ  ＨＳＶ−ｔｋ注射が行われる。ＰＳＡ及び免疫学的
検討のために採血が行われる。
【０１００】
排尿試験。必要があれば、フォーリカテーテルがウイルス注射の直後に取り付
けられ２４時間以内にはずされる。もし患者が排尿できないようであれば、カテ
ーテルを再度取り付け、排尿試験が指示されたように繰り返される。
【０１０１】
理学検査は、治療に関連する急性毒性をモニタするために毎週行われる。
【０１０２】
化学検査：血小板を持つＣＢＣは全患者の治療期間を通して毎週モニタされる
。ＡＳＴ、ＡＬＴ、ＡＰ、ＧＧＴ、総ビリルビン、ＬＤＨ及びＣｒは第２及び第
４週（Ａ部門）；第２、第１０、第１２週（Ｂ、Ｃ部門）にモニタされる。Ｂ及
びＣ部門の患者に対しては、２回目のウイルス注射と放射線療法の開始の前に、
リピートＰＳＡレベルが第５６日に得られる。追加の血液検査が、臨床的に必要
とされたときに行われる。Ａ部門の患者に対しては第二週及び第六週に、ＰＳＡ
もまた採られる。
【０１０３】
免疫学的調査（付属書６）は、Ａ部門の患者に対しては第１４日と第２８日に
、Ｂ及びＣ部門の患者に対しては第５６日、第７０及び第８０日に行われる。
Ａ部門の患者に対しては、第６週にテストステロンレベルがチェックされる。
バラシコビルのレベルは治療期間を通じてチェックされる。
前立腺生検：単一経直腸−超音波誘導前立腺生検は、Ａ部門患者に対しては第
１４日に、Ｂ及びＣ部門の患者に対しては第５６と第７０日に行われる。
【０１０４】
９．５ 治療後評価
患者は、放射線治療の終了後６週間観察される。その後、最初の１年間は３―
４ヶ月毎に、それ以降は６ヵ月毎に追跡調査がある。それぞれの追跡調査訪問で
の評価は、以下を含む：
前立腺ダイアグラムを伴う理学検査
ＰＳＡ
持続的又は再発性の局部疾患評価のための、放射線治療終了後およそ６週間後
、６ヵ月後、１２ヵ月後、１８ヵ月後及び２４ヵ月後での前立腺生検
精液サンプルが求められ、起こり得るウイルス感染のために第６週(最初の追
跡調査訪問)にＰＣＲ分析を受け、もし陽性ならば、陰性になるまで後に続く追
跡調査訪問毎に分析を受ける。しかしながら、精液サンプルを提供することがで
きない患者もいる。
【０１０５】
６週間後の免疫学的調査（血清）
テストステロンレベルはＡ部門の患者に対して６週間後に行われる。
個別的調査或いはこのプロトコルに特定された試験は、患者の承諾、スケジュ
ール上の困難、設備の故障、或いは主要な治験担当医師又は主治医の判断のよう
な要因に支配されており、また試験が個別的事例においてプロトコルに違反する
ことなしには行われないだろうということが理解される。しかし、患者の安全に
関連しているか否かということに点で、オリジナルプロトコルのいかなる意図的
な変更も、ＩＲＢに提示される。どの死亡した患者についても完全な検死解剖が
なされるであろう。標準的な病理検査に加えて、細胞組織が持続性の組み換えア
デノウイルスＤＮＡの発見のためのＰＣＲ分析用に採取されることもある。
【０１０６】
９．６  治療に対する腫瘍反応の基準
完全な反応は、血清ＰＳＡの＜１．０ｎｇ／ｍｌへの減少と定められる。
部分的反応は、治療前のベースラインと比較して、血清ＰＳＡレベルが少なく
とも５０％減少と定められる。
最小反応は、血清ＰＳＡレベルの少なくとも２５％（しかし５０％以下）の減
少と定められる。
【０１０７】
病気の安定は、以下のうちの一つによって定められる：安定した血清ＰＳＡレ
ベル、２５％以下レベル血清ＰＳＡの最小限の減少、或いは当初評価の２０％以
下の血清ＰＳＡの最小限の増加。
病気の進行は、治療前ベースラインを２０％以上超えるＰＳＡの増加と定めら
れる。
また、ＤＲＥの結果、繰り返し行われる生検、ＰＳＡ減少率、ｎａｄｉｒＰＳ
Ａに達する時間と期間、フリーＰＳＡも治療に対する腫瘍反応の評価において評
価される。
【０１０８】
９．７  病気の再発
３回連続するＰＳＡにおける上昇はどれも治療の失敗として記録される。治療
失敗の時間とは、ウイルス注射及びアンドロゲン除去開始から一連のＰＳＡ上昇
における最初の上昇までの時間間隔である。
【０１０９】
局所的失敗：２年後の陽性生検は局所的失敗として記録される。デジタル直腸
検査での増大する局所疾患及び上記のＰＳＡ上昇を有する患者は、局所的失敗と
記録される。
【０１１０】
遠隔的失敗：陰性のＤＲＥ及び陰性の経直腸超音波誘導生検を有し、上昇ＰＳ
Ａを有し、転移性疾患のレントゲンの証拠を有する又は有しないすべての患者は
遠隔的には失敗であるが、局所的に制御されていると記録される。
【０１１１】
９．８ 毒性及び生活の質（ＱＯＬ）
ＨＳＶ−ｔｋ＋バラクシロビル及びアンドロゲン除去の毒性は、ＮＣＩのＣＴ
ＥＰにより公表されている共通毒性基準によって評価される（付属書７）。
放射線治療腫瘍班（ＲＴＯＧ）急性及び末期疾病率スコアリング（付属書８）が
放射線治療による毒性を等級化するために用いられる。国際前立腺症状スコア（
Ｉ−ＰＳＳ）及び生活の質アンケート（付属書９及び１０）が評価のために患者
に与えられる。
【０１１２】
９．９  治療中止基準
ａ．  ＣＴＥＰ又はＲＴＯＧで特定された恒久的第３度毒性又は再発性第４度毒
性。
ｂ．  前立腺腫瘍のウイルス形質導入には直接関連しない（バラシクロビル投与
に派生的な毒性のような）その他の予想される毒性現象、或いは悪性の前立腺腫
瘍の自然な生長によって説明される合併症は、研究中止に十分な指標とは考えら
れない。どんな追加的に現れる毒性もＩＲＢの議長によって検討される。
ｃ．患者又はその代理人の求めによって、患者は研究から離脱し得る。
【０１１３】
１０．０  潜在的危険と不安
１０．１  ベクタ注射の潜在的合併症
ａ．  投与が経直腸経由であるがゆえに、前立腺及び泌尿器系感染症及び全身性
敗血症が起こり得るが、これは前立腺生検を受けた患者の１％以下に現れる。抗
生物質療法は、前立腺へのウイルス注射の前と後の予防として行われる。
ｂ．  前立腺生検に続く肉眼的血尿は、患者の１％以下で見られ、通常は自己制
限的である。
ｃ．  限局性腫脹の結果尿閉が起こり得る。その処置の際にフォーリカテーテル
が取り付けられ２４時間そのままにしておく。
【０１１４】
１０．２  アデノウイルスベクタ注射に特有の潜在的合併症
前立腺への注射から生じる合併症に加えて、特にベクタ治療に関連した合併症
が起こり得る。今までのところ、ＡｄＶ−ＨＳＶ−ｔｋの予定された投与量で治
療された患者に深刻な合併症は観察されていない。
【０１１５】
１０．３  医療従事者に対する潜在的バイオハザードの危険
ａ．  ベクタ注射に関わる要員：ベクタ注射に関わる要員に対し低い潜在的可能
性のバイオハザードの危険がある。ウイルスベクタは、少量（〜１．０ｍｌ）の
緩衝液に浮遊させられ、クライオバイアルに封入されている。注射器はベクタを
取りこぼしなくガラス瓶から充填される。腫瘍内注射がなされ、針の跡に沿って
漏出する量は極めて微量であると思われる。ガラス瓶からのベクタの流出事故が
発生した場合は、作用物質を不活性化するために一般の消毒薬を使用できる。全
ての要員は、処置を行う前にベクタの安全な利用と潜在的な生物学的災害につい
て指導を受ける。
【０１１６】
ｂ．外科的医療後の労働者：ＡＤＶ／ＨＳＶ−ｔｋウイルスが、患者の尿、便、
唾液、鼻汁、涙或いはその他の排泄物を通して漏出する可能性がある。人間以外
の霊長類の研究は、その可能性が非常に低いことを指摘している。６匹のヒヒ使
った研究では、２日前にベクタを注射された１匹のヒヒの血清からたった１個の
血小板が発見された（ＩＮＤ申請書６３７１又はＲＡＣプロトコル１２９４−０
９８を参照）。やや寛容な宿主であるコットンラットでは、心臓内注射の後、極
僅かなウイルスが発見されたに過ぎなかった（Ｒｏｊａｓ他）。流出した複製欠
損ウイルスにさらされても、ウイルス価が極端に低いので、危険は非常に限定さ
れている。ベクタが、患者に宿っている野生型アデノウイルスを再結合する理論
的可能性はある（上記参照）。このウイルスに感染すると、通常のアデノウイル
ス感染に似た穏やかな自己制限感染が引き起こされる。医療労働者は、患者と働
く許可を得る前にウイルスベクタの安全な利用と潜在的な生物学的災害について
指導を受ける。
【０１１７】
１０．４  バラシクロビル（Ｖａｌｔｒｅｘョ）
バラシクロビルカプレットは経口投与である。バラシクロビルはアシクロビル
のバリン−エステルであり、腸及び／又は肝代謝の初回通過によってアシクロビ
ルに急速に変換される。最大血漿バラシクロビル濃度は、一般的には全投与量で
０．５ｍｃｇ／ｍｌより少ない。
【０１１８】
４アシクロビルを経口バラシクロビルの搬送と比較する臨床研究は、８時間毎
に１時間以上の４アンシクロビル１０ｍｇｒ／kgと８時間毎の２グラムのバラシ
クロビルが、アンシクロビル濃度−時間曲線下の同様の面積を持っていることを
示した（「再発性卵巣癌の腺筋症温存手術後の患者における、アシクロビルの静
脈投与及びトポテカンによる化学療法が後に続く卵巣癌のＨＳＶ−ｔｋ遺伝子と
の併存アデノウイルス媒介形質導入のフェーズ１研究」、ＮＩＨ／遺伝子組換え
局ＤＮＡ＃９８０１−２２８）。上記の研究に基づき、このプロトコルは１４日
間にわたり８時間ごとに２グラムの投与量を用いる。
【０１１９】
バラシコビルの最もありふれた有害事象は、患者の６乃至１５％が悪心、１４
乃至３５％が頭痛、１乃至６％が吐き気、２乃至１１％がめまい又は腹痛、１乃
至６％が関節痛及び１乃至７％が憂鬱であった。貧血、白血球減少、血小板減少
及び血清クレアチニンの上昇が患者の１％に現れた一方で、肝機能の異常試験の
ような実験室での異常は、患者の１乃至４％に観察された。加えて、次の有害事
象が臨床実践において確認された：アレルギー反応（アナフラキシ、血管性浮腫
、呼吸困難、掻痒、発疹及び蕁麻疹）、ＣＮＳ症状（錯乱、幻覚、動揺、攻撃行
動、躁病）、胃腸（下痢）、腎不全、多形性紅斑、顔面浮腫、高血圧、頻脈。
【０１２０】
１０．５  放射線療法
放射線療法によるリスクには、放射線療法中に起こり得る放射線による膀胱炎
、尿道炎及び直腸炎がを含まれる。通常はこれらの症状は自己制限的で、放射線
療法後２乃至３週間で改善する。照射療法では遅発型の副作用は、非常にまれで
あるが、それには持続性の下痢、直腸又は泌尿器の出血、直腸潰瘍化、直腸壁壊
死及び臀部無血管性壊死が含まれる。大きな外科的処置（人工肛門形成術、臀部
置換等）を必要とする合併症が現れるのは、１％以下であると報告されている。
【０１２１】
１０．６  アンドロゲン除去
１０．６．１  フルタミド
最も頻繁に報告されているＬＨＲＨ作動薬と併用でのＥｕｌｅｘｉｎ  Ｃａｐ
ｓｕｌｅｓによる治療中の有害事象（５％以上のもの）は、ほてり６１％、性欲
の喪失３６％、インポテンス３３％、下痢１２％、悪心／吐き気１１％、女性化
乳房９％、その他７％、その他の胃腸症状６％である。トランスアミナーゼ異常
、胆汁鬱滞性黄疸、肝臓壊死、肝性脳症状がフルタミドの使用によって報告され
ているので、定期的な肝機能検査を考慮にいれるべきである。肝機能障害（例え
ば掻痒症、暗色尿、持続的食欲不振、黄疸、右上方腹部の圧痛或いは説明できな
い「インフルエンザに似た」症状）の最初の症状／徴候があったときに適切な臨
床検査がなされるべきである。もし患者に黄疸が現れたり肝臓の損傷を示す検査
結果があれば、肝臓転移の生検確認がなくても、Ｅｕｌｅｘｉｎ療法を中止する
か又は投薬量を減らすべきである。この肝臓損傷は、通常治療を中止した後は可
逆であり、幾らかの患者においては、投薬の減量で可逆である。しかしながら、
フルタミドの使用に関連する重篤な肝臓損傷の後に死亡との報告もあった。
【０１２２】
１０．６．２  リュープロライドアセテート
ルプロンデポットＬｕｐｒｏｎ  Ｄｅｐｏｔ（徐放性製剤支持のためのリュー
プロライドアセテート）の治験において、以下の副作用は、治療担当医によって
副作用の原因とされた本剤に関係する可能性があるか又は確実に関係があると報
告されている：浮腫１２．５％、悪心／吐き気５．４％、精巣の縮小５．４％、
ほてり／発汗５８．９％、インポテンス５．４％、全身的な痛み７．１％、呼吸
困難５．４％及び無力症５．４％。以下の、検査室での調査の高さが注目される
：ＳＧＯＴ（＞２×正常値）５．４％、ＬＤＨ（＞２正常値）１９．６％、及び
アルカリホスファターゼ（＞１．５×正常値）５．４％。
【０１２３】
１１．０  費用
患者は、保険またはその他の手段により、全ての標準的治療薬剤及び処置に責
任を負う。ベクタ、ベクタ送達又はプロトコルで特定された薬剤又は処置に対す
る患者負担はない。
【０１２４】
１２．０  同意手続
全ての患者は、この研究に対する適格者であるために、同意したインフォーム
ドコンセントの文書に署名しなければならない（Ａ部門低リスク患者に対しては
付属文書１１、Ｂ部門高リスク患者に対しては付属書１２、Ｃ部門ＤＩに対して
は付属書１３）。
【０１２５】
１３．０  秘密保持
患者の記録の秘密は法律の範囲内で保持される。本研究のデータは公表される
が、いかなる患者も氏名を明らかにされたり、特定されたりしない。
【０１２６】
１４．０  潜在的利益
本研究は、研究の被験者になんら利益を与えるものではない。しかしながら、
臨床前研究は、ヒト前立腺癌腫瘍モデルにおける重要な細胞抹殺を示している。
もう一つのフェーズ１のヒト研究は、再発性前立腺癌においてＧＣＶが後に続く
ＨＳＶ−ｔｋのＡＤＶ搬送を用いて最小限の毒性を示した。大きな量の局所疾患
を有する前立腺癌においては、放射線療法によって最適な局所制御よりもより少
ない結果となっている。それゆえ、二つの局所治療を、毒性が重ならないように
組み合わせることにおいて、局所制御はほとんど余計な毒性なしに改善されるだ
ろう。臨床的に局所化された前立腺癌を有する患者においては、局所制御の改善
が、病気から解放された生存の改善に転換されるであろう。
１５．０  リスク便益比
ＡｄＶ／ＨＳＶ−ｔｋ遺伝子治療だけのフェーズ１及び２の研究が示すところ
は、長くは続かない毒性と患者にとっての最小限の不安をである。この研究の患
者グループは、標準的な治療として、普通にアンドロゲン除去及び／又は放射線
治療を受け、それゆえ治療のこの部分に余計なリスクはない。局所制御の改善と
いう臨床上の利点を考えれば、リスク便益比は好ましいものであると思われる。
【０１２７】
本プロトコルはＯＳＨＡ／ＨＨＳのＨＩＶ／ＨＢＶ労働安全ガイドラインに適
合する。
【０１２８】
付表２
0005557974.tif 000002
【０１２９】
（はい／いいえ）１．前立腺癌を証明する生検
２．Ａ部門＝ＰＳＡ＜１０、グリーソン  ？６、臨床段階Ｔ１−Ｔ２ａ
Ｂ部門＝次のうちの一つ又はそれ以上：ＰＳＡ≧１０、グリーソンスコア＞６
及び臨床段階  Ｔ２ｂ−Ｔ３
Ｃ部門＝前立腺癌が関与する病理的領域リンパ節転移
（いいえ）３．先行する外科、ホルモン、放射線前立腺治療
（いいえ）４．転移性疾患又はその他の悪性腫瘍（骨盤リンパ節陽性、扁平上皮
乳頭腫又は基底細胞皮膚癌を除く）
（はい）５．ＰＳＡが登録の３ヶ月以内行われていること
日付
（はい）６．研究に固有のインフォームドコンセント書類にサイン済
（はい）７．以下の検査評価によって評価されている十分な基本臓器機能
血清中クレアチニン＜１．５ｍｇ％
総ビリルビン＜２．５ｍｇ／ｄＬ、ＡＬＴ、ＡＳＴ、ＧＧＴ及びＡＰ＜２×正常
値
Ｐｔｓ＞１００，０００／ｍｍ３、ＡＮＣ＞１５００／ｍｌ３、Ｈｇｂ＞１０ｇ
ｍ／ｄＬ
正常な部分トロンボプラスチン時間（ＰＴＴ）及びプロトロンビン時間（ＰＴ）
（いいえ）８．患者はコルチコステロイド剤又は何らかの免疫抑制薬を服用中で
あるか？
（いいえ）９．患者には何らかの急性感染症（ウイルス性、細菌性、又は治療を
必要とする真菌感染症）があるか？
（いいえ）１０．患者には肝硬変があるか？
（はい）１１．患者はＨＩＶ陰性であるか？
患者はどのようにして遺伝子治療を知ったか？
記入者名：
日付：
【０１３０】
0005557974.tif 000003
【０１３１】
例７  アデノＴＫ、ｖａｌａｃｙｃｌｏｖｉｒ及び小線源照射療法による患者の
治療
これは、Ａｄｔｋ療法と放射性種を用いて実施される放射線療法との組合せの
効果を分析するための臨床検査計画の一例である。
プロトコルが上述したものと類似しておりその一部ではあるが本明細書中に例
として取り込まれているため、前立腺モデルを一例として使用するが、その手法
はこの罹患部位に限定されず、膵臓癌を非限定的に含む他の部位に対しても現在
適用されている。
【０１３２】
８．０  プロトコルの説明
８．１  患者の登録
患者は、このプロトコルに対するインフォームドコンセント形式を完了するこ
とにより、この検査に入ることができる。患者の適格性は、ベイラー医科大学（
Ｂａｙｌｏｒ  Ｃｏｌｌｅｇｅ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ）の放射線治療科のデ
ータ管理者により確認される。患者は、データ管理者によりグループ分けされる
。この臨床試験への参加或いは非参加は。患者が適格性を有し得る他の治療に影
響することはない。
【０１３３】
８．２  データ収集及びモニタ
８．２．１  検査のモニタ
検査者は、検査モニタとＦＤＡに検査文書（例えば、同意書、分析証明書、症
例報告書、及び関連治療又は臨床チャート）を精査させる。
【０１３４】
８．２．２  副作用の報告
副作用（ＡＤＲ）は、直ちにＦＤＡ、ＲＡＣ、及びＩＲＢに報告される。副作
用報告書は、薬剤の作用の疑いが例えわずかでもある場合には、提出が義務付け
られる。従来知られていない等級２又は３の副作用は、１０就業日以内に文書で
報告される。等級４の副作用と治療中の患者の死亡は、２４時間以内に電話で報
告される。続いて、文書による報告が１０就業日以内に求められる。
【０１３５】
８．２．３  プロトコル改定手続き
プロトコルの改定は、全ての検査員、ＦＤＡ及びその他必要とされる人員によ
り協議される。現在のプロトコルを改定することで合意がなされた場合には、正
規の変更表が作成され、ＦＤＡ、ベイラー医科大学のＩＲＢ、及びその他の関係
部署に提出される。
【０１３６】
８．２．４  試験に基づく出版
このプロトコルに関わる全ての検査検査員は、どんな原稿、要約又は提示物で
も利用可能である。検査から生じる被験者及びデータの秘密は、法律の範囲内で
厳守される。
【０１３７】
８．３  手続き及び治療薬剤
８．３．１  ＨＳＶ−ｔｋ遺伝子の送給
注射に先立ち、注射前日の晩及び注射当日の朝、全ての患者は、広範囲抗菌ス
ペクトル性の経口抗生物質を服用する。これを５日間継続する。前立腺内注射を
行なう部位を各前立腺葉に２ヵ所ずつ、計４ヶ所特定するために、経直腸超音波
が使用される。０日目に合計１乃至２ｃｃのＡｄＶ．ＨＳＶ−ｔｋｖ．アデノウ
イルスベクター（ＩＮＤ−６３７１、６６３６、及び７３１１で使用されるもの
と同一のベクター）（付表１を参照）が、２０番針を用いて（各前立腺葉に１ｃ
ｃまで）注射される。ベイラー医科大学におけるフェーズ１投与量の増加に関す
る検査の毒性結果に基づいて，腫瘍毎に合計５ｘ１０１１個のヴェクター粒子が
注射される。前立腺注射に関係した流出阻害が生じないように、フォリカテーテ
ルを注射に続いて留置してもよい。腕Ａの患者に対して、アデノウイルスの前立
腺内注射が、２乃至３週間内に反復される。腕Ｂの患者に対しては、アデノウイ
ルス前立腺内注射は、５４日及び７０日目に反復される。
【０１３８】
８．３．２  Ｖａｌａｃｙｃｌｏｖｉｒの投与
Ｖａｌａｃｙｃｌｏｖｉｒ（付表２参照）治療は、１日に２回、２ｇｍの経口
投与で、各ウイルス注射後２４時間経過時に開始され、１４日間継続される。こ
の投与量は、１０ｍｇ／ｋｇのＩ．Ｖ．ａｃｙｃｌｏｖｉｒを８時間毎に投与し
たときと同じ薬物血中濃度時間曲線下面積（ＡＵＣ、ｈ−μｇ／ｍｌ）を与える
ように計算されている。これは、ＩＮＤ７３１１「再発性卵巣癌の最適ディバル
キング手術後の患者のトポテカンに対するａｃｙｃｌｏｖｉｒ静脈投与と化学療
法を伴なう、ＨＳＶ−ｔｋ遺伝子による卵巣癌の付随アデノウイルス介在形質導
入のフェーズ１検査」（Ｐｈａｓｅ  １  Ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  Ｃｏｎｃｏｍｉｔ
ａｎｔ  Ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ−Ｍｅｄｉａｔｅｄ  Ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ
ｏｆ  Ｏｖａｒｉａｎ  Ｃａｎｃｅｒ  ｗｉｔｈ  ＨＳＶ−ｔｋ  Ｇｅｎｅ  
Ｆｏｌｌｏｗｅｄ  ｂｙ  Ｉｎｔｒａｖｅｎｏｕｓ  Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉ
ｏｎ  ｏｆ  Ａｃｙｃｌｏｖｉｒ  ａｎｄ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ  ｗｉｔ
ｈ  Ｔｏｐｏｔｅｃａｎ  ｉｎ  Ｐａｔｉｅｎｔｓ  Ａｆｔｅｒ  ｏｐｔｉｍａ
ｌ  Ｄｅｂｕｌｋｉｎｇ  Ｓｕｒｇｅｒｙ  ｆｏｒ  Ｒｅｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｖ
ａｒｉａｎ  Ｃａｎｃｅｒ）で使用されたものと同じ投薬計画である。従って、
腕Ａの患者は、１乃至１４日目と１５乃至２９日目にｖａｌａｃｙｃｌｏｖｉｒ
の投与を受ける。腕Ｂの患者は、１乃至１４日目と、５６乃至６９日目と、７０
乃至８４日目にｖａｌａｃｙｃｌｏｖｉｒの投与を受ける。
【０１３９】
８．３．３  アンドロゲン遮断
０日目に第一のアデノウイルス注射に付随して、高い確率で、アンドロゲン遮
断が生じる。治療法は、ＬＨＲＨ作用薬のロイプロライドアセテート沈着（ルプ
ロン沈着、３０ｍｇ−付表２）の毎月の注射と、フラットアミド（ユーレキシン
、２５０ｍｇを１日に３回経口投与−付表２）の投与とから成る。これは、我々
の標準的なアンドロゲン遮断投薬計画であり、合計４ヶ月に亘り継続される。
【０１４０】
８．３．４  放射線療法
腕Ａに対して：放射性金種の移植が、０日目にＨＳＶ−ｔｋアデノウイルスベ
クターの第一の前立腺内注射と同時に（経直腸超音波と透視評価の誘導下で）行
われる。放射性金種の移植後２乃至３週間以内に外部光線放射線療法（ＩＭＲＴ
）が開始される（外部光線放射線療法は、第二のアデノウイルス前立腺内注射後
７２時間以内に行われる）。
【０１４１】
放射性金種の移植は、経直腸超音波の誘導下で会陰腺を経て前立腺内に約４０
個の種を移植することにより行われる。各放射性金種は、約２ｍＣｉであるので
、合計約８０ｍＣｉとなり、通常、２０乃至３０Ｇｙを搬送する。
【０１４２】
高エネルギ光子（＞１０ＭＶ）及びフラクション当たり２Ｇｙで与えられる５
０Ｇｙの合計線量は、前立腺を覆う等線量線まで搬送される。寒冷部位は、強度
を調節した放射線療法で補償される。
【０１４３】
９．０  被検体数及び治療評価
全ての患者は、前立腺の生検で判明した腺癌を有しなければならない。
腕Ａの患者は、以下の特性即ちＰＳＡ＜１０、グリソン点≦６、及び臨床段階
Ｔ２ａ以下の特性を有するべきである。
腕Ｂの患者は、以下の特性即ちＰＳＡ≧１０、グリソン点＞６、及び臨床段階
Ｔ２ｂ乃至Ｔ３の特性のうち少なくとも一つ以上を有するべきである。
【０１４４】
以前に、外科的治療、ホルモン治療或いは放射線療法による前立腺治療を受け
たことが無いこと。
転移性疾患又は他の悪性腫瘍（扁平上皮細胞癌又は基底細胞皮膚癌を除く）の
徴候兆候が見られないこと。
【０１４５】
患者は、登録の３ヶ月以内にＰＳＡを有しなければならない。
患者は、登録に先立ち、本検査固有のインフォームドコンセントを与えなけれ
ばならない。
患者は、プロトコルの開始前に、以下の実験値により評価されるような十分な
基準組織機能を有しなければならない。
【０１４６】
血清クレアチニン＜１．５ｍｇ％
Ｔ．ビリルビン＜２．５ｍｇ％、  ＡＬＴ及びＡＳＴ＜Ｚｘで正常
Ｐｔｓ＞１００，０００ｍｍ３、ＡＮＣ＞１５００ｍｍ３、Ｈｇｈ＞１０ｇｍ
％
部分トロンボプラスチン時間（ＰＴＴ）とプロトロンビン時間（ＰＴ）が正常
【０１４７】
９．２  排除基準
転移性疾患、リンパ腺関係疾患の徴候。
以前に前立腺の手術（加温療法、凍結療法等）を受けた経験があること。
以前に骨盤の放射線治療を受けた経験があること。
以前にアンドロゲン除去ホルモン治療（登録前に、中断時でフィナステライド
＞３ｍｏの場合を除く）を受けた経験があること。
【０１４８】
コルチコステロイド又は任意の免疫抑制薬を服用中の患者。
ＨＩＶ患者。
急性感染症（治療を必要とするウイルス性、細菌性、又は真菌性感染症）の患
者。
肝硬変の患者。
【０１４９】
９．３  前処置の評価
病歴及び前立腺図、身長、体重を含む検診。
血液学的評価  ＣＢＣ、ＰＬＴＳ、ＰＴ、ＰＴＴ。
化学的評価  Ｎａ、Ｋ、Ｃｌ、ＣＯ２、ＣＲ、ＡＳＴ、ＡＬＴ、ＬＤＨ、ビリ
ルビン、Ｃａ。
尿検査。
登録の３ヶ月以内のＰＳＡ。
ＣＸＲ（前後及び側方から視認）
疑わしい部位を評価するために確保されたＭＲＩによる骨スキャン。
前立腺の六分儀生検。
【０１５０】
免疫学的検査：野生型アデノウイルスの抗体を中和する血清の存在。
骨盤アデノパシを防ぐためにリスクの高い患者内で骨盤のＣＴスキャンを実施
。
【０１５１】
９．４  処置中の評価
検診。検診は、各患者を診察して行なわれる。
【０１５２】
患者は、毎月評価され、急性毒性に対して患者が毎週モニタされる放射線療法
の間中、アンドロゲンの使用中止に対する耐性と薬剤関連の毒性とに関してＬＨ
ＲＨ作用薬注射を受ける。
【０１５３】
排尿検査：必要に応じてフォリカテーテルをウイルス注射直後に留置してもよ
く、この場合、カテーテルを２４時間以内に除去する。患者が排尿することがで
きない場合、カテーテルを交換し、排尿検査を指示通り行なう。
【０１５４】
化学的検査：血清クレアチニン、肝機能検査、ＣＢＣ、凝固検査、及び血液の
化学検査は、治療の間中毎週、全患者に対してモニタされる。腕Ｂの患者に対し
ては、反復ＰＳＡレベルが、第二のウイルス注射と放射線療法の開始前の５６日
目に得られる。臨床的に指示された場合、追加の血液検査が行われる。
【０１５５】
免疫学的検査：腕Ａの患者に対しては１５日目に、腕Ｂの患者に対しては５６
日目と７１日目にアデノウイルスに対する血清抗体のタイター。
【０１５６】
前立腺生検：経直腸超音波に誘導された前立腺生検が、腕Ａの患者に対しては
ＨＳＶ−ｔｋの第二の前立腺内注射時に、腕Ｂの患者に対してはＨＳＶ−ｔｋの
第二及び第三の注射時に反復される。
【０１５７】
膀胱内の種の評価のために及び膀胱内のウイルスの洗浄のために、放射性金種
の移植中に膀胱鏡検査。
【０１５８】
９．５  処置後の評価
患者は、放射線療法の終了後６週目に評価される。
次に、追跡検査が、最初の年は３ヶ月毎に、それ以降は６ヶ月毎に行なわれる
。各診察時の評価は、
前立腺図による検診、
ＰＳＡ
持続性又は再発性の局部疾患の評価のために、放射線療法の終了後６週目、及
び６ヶ月目、１２ヶ月目、１８ヶ月目及び２４ヶ月目に行なう前立腺生検、
を含む。
【０１５９】
６週目（第一回目の追跡検査時）に精液標本が採取され、ウイルス感染の可能
性に対するＰＣＲ分析が行われる。陽性の場合には、陰性になるまで、後の追跡
検査毎に採取とＰＣＲ分析が行われる。しかしながら、患者によってはこうした
標本を提出することができない。
【０１６０】
このプロトコルで指示された個々の検査又は試験の性能は、患者の従順さ、ス
ケジュールの困難さ、装置の誤動作、或いは主用検査者又は患者の主治医の臨床
判断等によって左右されること、並びに特定の場合には試験がプロトコルに違反
することなく行なわれ得ないことを理解されたい。しかしながら、この点に関し
ては、元のプロトコルの体系的な変更があれば、患者の安全性に関わりがあろう
があるまいが、ＩＲＢに提出される。死亡した患者に対しては完全な死体解剖を
行なう試みがなされる。標準的な病理学的検査に加えて、持続性の組換えアデノ
ウイルスＤＮＡのＰＣＲ分析のために組織を採取してもよい。
【０１６１】
９．６  治療に対する腫瘍反応の基準
完全な反応は、正常範囲（≦１．０ｎｇ／ｍｌ）内への血清ＰＳＡの減少とし
て定義される。
部分的な反応は、治療前基準と比較して少なくとも５０％の血清ＰＳＡレベル
の減少として定義される。
【０１６２】
最小反応は、少なくとも２５％（しかし５０％未満）の血清ＰＳＡレベルの減
少として定義される。
【０１６３】
安定疾患は、以下の中の一つにより定義される。安定した血清ＰＳＡレベル、
２５％未満の血清ＰＳＡの最小減少、又はＰＳＡレベルの初期値の２０％以下の
ＰＳＡレベルの最小増加。
進行性疾患は、治療前基準の２０％を超えるＰＳＡの増加として定義される。
【０１６４】
また、治療に対する腫瘍反応の評価において、ＤＲＥの結果、反復生検の結果
、ＰＳＡ減少率、ネイダＰＳＡ、フリーＰＳＡ、ＰＡＰの時間と継続期間及びア
ルカリホスファターゼが評価されてもよい。
【０１６５】
９．７  疾患の再発
ＰＳＡが２度続けて上昇すると、治療不全として記録される。治療不全までの
時間は、ウイルス注射及びアンドロゲン遮断の開始の日から、一連のＰＳＡの上
昇においてＰＳＡが最初に上昇した日までの時間間隔である。
【０１６６】
局部不全：２年目に行なわれる生検が陽性の場合、局部不全として記録される
。デジタル直腸検査時に局部疾患が増加した患者、及び上述したようにＰＳＡが
上昇した患者も、局部不全として記録される。
【０１６７】
遠隔不全：放射線写真による転移性疾患の徴候の有無に拘わらＰＳＡが上昇し
且つＤＲＥと経直腸超音波誘導生検の結果が陰性の患者は、遠隔不全として記録
されるが、局部的には制御される。
【０１６８】
９．８  毒性
ＨＳＶ−ｔｋ  ＋  ｖａｌａｃｙｃｌｏｖｉｒとアンドロゲン遮断に対する毒
性は、ＮＣＩのＣＴＥＰにより出版された共通毒性基準により評価される（付表
３）。ラディエーション・セラピ・オンコロジ・グループ（ＲＴＯＧ：Ｒａｄｉ
ａｔｉｏｎ  Ｔｈｅｒａｐｙ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  Ｇｒｏｕｐ）による急性及び
晩発性疾病得点表（付表４）は、放射線療法から毒性を等級分けするために使用
される。
【０１６９】
９．９  治療中断基準
ａ．ＲＴＯＧのＣＴＥＰで指定された固定等級３の毒性と再発性等級４の毒性
。
ｂ．（ｖａｌａｃｙｃｌｏｖｉｒの投与に付随する毒性等の）前立腺腫瘍のウ
イルスを介した形質導入に直接関係しない他の予期される毒性現象、或いは悪性
前立腺腫瘍の自然発達により説明し得る合併症は、検査を終了するための十分な
徴候として認められない。別の毒性の発生は、ＩＲＢの委員長と協議される。
ｃ．患者又は代行権限を有する者の要求があり次第、患者は当該検査から撤退
することができる。
【図面の簡単な説明】
【図１】  図１は単一治療投与量増加分析(single therapy dose escalation analysis)を示している。皮下ＲＭ-１腫瘍（５０〜６０mm3）が、組み合わせ治療の研究目的で、効果的ではあるが非完全治癒単一治療量にて使用された。Ａ）ベクター投与量は、１ｘ１０9から１ｘ１０11のv.p./腫瘍（halflog increments）に対して単一ＡdＶ.ＲＳＶ-tkを腫瘍内注入し、その後に６日間、ＧＣＶを２０mg/kg(bid)投与することで分析された。Ｂ）放射線投与量は実施例２のごとく５、１０、１５Ｇyの単一部分搬送(singlefraction delivery)で分析された。
【図２】  図２はマウス前立腺腫瘍モデルの腫瘍成長に対する組み合わせ治療効果を示す。アデノウィルスベクターを受領した腫瘍には３ｘ１０10のＡdＶ-tkまたはＡdＶ-β-gal v.p.が注入された。放射線治療された腫瘍は５Ｇyの単一投与を受けた。Ａ）治療処置後のコントロール、単一治療及び組み合わせ治療グループの相対的腫瘍成長。Ｂ）Ｃ５７ＢＬ/６匹マウス、a)ＡdＶ-b-gal+５Ｇy、b)Ａd-tkのみ、c)５Ｇyのみ、d)ＡdＶ-tk+５Ｇyでの治療後１０日。腫瘍は動物の両脇腹に見られる。Ｃ）治療動物とコントロールの相対的生存率。
【図３】図３はマウスの乳癌腫瘍モデルでの腫瘍成長に対する組み合わせ治療の効果を示す。腫瘍は前述のようにアデノウィルスベクターを受領した。ＡdＶ-b-gal+５Gy、ＡdＶ-tkのみ、５Ｇyのみ、ＡdＶ-tk+５Ｇyでの処理後１０日のＢａｌｂ／cマウス。腫瘍は動物の右脇腹に見える。
【図４】図４は治療の免疫効果を示す。単一または組み合わせ治療での治療後の腫瘍の免疫細胞浸透結果。それぞれの腫瘍の冷凍部分は免疫特性に特定的な抗体で着色され、mm2単位のポジティブ細胞の相対数が少なくとも１０顕微鏡フィールドで定量(cuantitated)された。
【図５】  図５は組み合わせ治療の抗転移効果を示す。Ａ）肺臓転移の数グラフ。Ｂ）それぞれのグループからの代表肺臓。腫瘍は１ｘ１０4の皮下注入と、５ｘ１０3のＲＭ-１細胞の尻尾静脈注入で確立された。組み合わせ治療は２つの単一治療法及び非治療コントロールと比較された。３ｘ１０10のＡdＶ-tkが２０ulのＡdＶ/ＲＳＶ-tkで皮下腫瘍に注入された。ガンシクロビル治療はＨＳＶ-tk注入後２４時間で開始され、単一投与の５Ｇyの放射線が７２時間後に投与された。胸の孔部はベクトル注入後１０日目に腫瘍の検査のために調べられた。肺臓は切開され、ピクリン酸で固定され、腫瘍塊が数えられた。ＨＳＶ-tk治療は肺臓のコロニー化を大きく減少させた（p<0.05）。組み合わせ治療は肺臓の転移数をさらに大きく減少させた（p<0.05）。
【図１】
0005557974.tif 000004
【図３】
0005557974.tif 000005
【図４】
0005557974.tif 000006
【図２】
0005557974.tif 000007
【図５】
0005557974.tif 000008