(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
油内に浮遊した粒子状物質を有する油を含む経口で用いる医薬組成物において、前記粒子状物質は、
ａ．疎水性表面を有するシリカナノ粒子と親和性非共有結合した多糖であって、前記シリカナノ粒子の大きさは１〜１００ナノメートルである、多糖と、
ｂ．前記シリカナノ粒子および多糖と非共有結合し、治療活性を有する、タンパク質またはペプチドと、
を含む医薬組成物。
【請求項２】
前記多糖は分岐多糖を含む、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
前記分岐多糖は、アミロペクチン、でんぷんおよびグリコーゲンから成る群から選択されるか；または
前記分岐多糖は４００℃以下の融解温度を有する、
請求項２に記載の医薬組成物。
【請求項４】
セルロース、キチン、αグルカン、およびβグルカンから成る群から選択される直鎖多糖を含む、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項５】
エラスチン、コラーゲン、ケラチン、およびフィブリノゲンから成る群から選択される構造タンパク質をさらに含む、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項６】
エラスチン、コラーゲン、ケラチン、およびフィブリノゲンから成る群から選択される構造タンパク質をさらに含む、請求項４に記載の医薬組成物。
【請求項７】
前記組成物は無水物であるか；または
前記シリカナノ粒子の前記大きさは５〜３０ナノメートルの間であるか；または
前記シリカナノ粒子は６００℃以上の融解温度を有するか；または
前記シリカナノ粒子の前記疎水性表面は炭化水素部分を有するか；または
アルギニン、リジン、グルタミン酸、アスパラギン酸およびヒスチジンから成る群から選択されるアミノ酸をさらに含むか；または
前記油は油の混合物を含むか；または
前記油は天然植物油および合成油から選択される油の混合物を含むか；または
前記油は抗酸化物質をさらに含むか；または
前記油は少なくとも５〜１０℃の融解温度を有する油を含むか；または
前記油は付加的な油成分を含み、少なくとも５〜１０℃の融解温度を有する油を含むか；または
ワックスをさらに含む、
請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項８】
前記タンパク質またはペプチドは赤血球生成促進因子であるか；または
前記タンパク質またはペプチドは下垂体成長ホルモンであるか；または
前記タンパク質またはペプチドは酢酸ガラティラメルであるか；または
前記タンパク質またはペプチドはアポリタンパク質Ａ−１様ペプチドであるか；または
前記タンパク質またはペプチドはタンパク質ＣＤ２０に対するモノクローナル抗体であるか；または
前記タンパク質またはペプチドは、カルシトニン、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）タンパク質、インターフェロン−α、インターフェロン−β、インターフェロン−γから成る群から選択されるか；または
前記タンパク質またはペプチドは、ＤＮａｓｅ、ＲＮａｓｅまたはその両方である、
請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項９】
前記粒子状物質の重量は、前記医薬組成物の体積の２５％以下である、請求項１〜８のうちいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
治療活性を有する生物学的活性タンパク質またはペプチドを経口投与するための、請求項１〜９のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
前記タンパク質またはペプチドは酵素であるか；または
前記タンパク質またはペプチドはペプチドホルモンであるか；または
前記タンパク質またはペプチドは抗体であるか；または
前記タンパク質またはペプチドは赤血球生成促進因子であるか；または
前記タンパク質またはペプチドは下垂体成長ホルモンであるか；または
前記タンパク質またはペプチドは酢酸ガラティラメルであるか；または
前記タンパク質またはペプチドはアポリタンパク質Ａ−１様ペプチドであるか；または
前記タンパク質またはペプチドはタンパク質ＣＤ２０に対するモノクローナル抗体であるか；または
前記タンパク質またはペプチドは、カルシトニン、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）タンパク質、インターフェロン−α、インターフェロン−β、インターフェロン−γから成る群から選択されるか；または
前記タンパク質またはペプチドは、ＤＮａｓｅ、ＲＮａｓｅまたはその両方である、
請求項１０に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
経口送達するために製剤した医薬組成物の製造方法において、前記方法は、
ａ．シリカナノ粒子と多糖とを乾燥混合する工程であって、前記シリカナノ粒子は疎水性表面を有し、前記シリカナノ粒子の大きさは１〜１００ナノメートルであり、前記シリカナノ粒子は前記多糖と親和性非共有結合を形成する工程と、
ｂ．治療活性を有するタンパク質またはペプチドを油と混合する工程と、
ｃ．前記シリカナノ粒子および多糖を前記油内に入れて混合する工程であって、前記タンパク質またはペプチドは、前記シリカナノ粒子および前記多糖と親和性非共有結合を形成し、前記シリカナノ粒子、前記多糖、および前記生物学的活性タンパク質またはペプチドは、前記油内で分散する工程と、
を含む、方法。
【請求項１３】
前記多糖は分岐多糖を含むか；または
前記多糖は分岐多糖および直鎖多糖を含むか；または
構造タンパク質を前記シリカナノ粒子および多糖の混合物に加える工程をさらに含むか；または
直鎖多糖および構造タンパク質を前記シリカナノ粒子および多糖の混合物に加える工程をさらに含むか；または
前記油を加えた後に付加的な油成分を加える工程をさらに含むか；または
前記油を加えた後にワックスを加える工程をさらに含む、
請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記タンパク質またはペプチドは、工程（ｂ）の前に凍結乾燥した形態であるか；または
前記タンパク質またはペプチドは、工程（ｂ）の前に水溶液内で溶解する、
請求項１２に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、油性担体内の固体粒子原料の親和性混合物を有する、経口投与組成物に関するものである。好ましくは、この組成物は無水物である。とくに、この医薬品組成物は、疎水性面、多糖、および生物活性タンパク質またはペプチドを有する薬理学的に不活性のシリカナノ粒子の親和性混合物に非共有結合した粒子を有し、粒子混合物は油もしくは油の混合物内で縣濁または組み込まれている。本発明は、さらに、同様のものの製造方法および、活性タンパク質およびペプチドの経口送達に関して同様のものを利用する治療方法に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
タンパク薬物の医学的用途は、３個の大きな欠点によって制限される。第１は、いくつかの場合において頻回投与が必要となる短い生物学的半減期である。第２は、体腔を概して覆う粘膜組織内で起こる急速分解である。最後に、ほとんどのタンパク薬物は、大きな分子であり、それゆえ腸管上皮を容易に超えることができない。その結果、経口投与したタンパク薬物の生物学的利用能は、概して極度に低くなる。したがって、タンパク薬物投与の最も一般的な方法は、非経口経路である。しかし、患者への不便さは別として、非経口送達システムは、生産および薬物投与の観点では最も高価である。したがって、生物分解に対して保護を提供し、および／または粘膜関門にわたって輸送を向上させるタンパク薬物の効果的な非経口でない投与に関する満たされていない医学的な要求がある。経鼻投与システムのような高度な非経口でないシステムが開発されているが、患者のコンプライアンスを増加させる便利さといった大きな利点を有する経口投与が最も好ましい。
【０００３】
例えば、ＤＮａｓｅ（デオキシリボヌクレアーゼ）は、水、酸化的ストレス、温度変動、および酸性ｐＨ条件において不安定である。最大の活性は、６〜８のｐＨ範囲内で観察される。これらの特性が経口ＤＮａｓｅ投与を困難にする。活性ＤＮａｓｅを血漿へ送達する現在利用されている方法は、注射を経由するものである（ＩＶ，ＳＣまたはＩＭ）。ＲＮａｓｅ（リボヌクレアーゼ）は、ＲＮａｓｅ分子の異なる領域間で相互作用によって非活性化することができ、この種の相互作用を防ぐことができる製剤を必要とする。
【０００４】
生物活性タンパク質の例は、限定することはないが、成長因子、サイトカイン、ペプチドホルモン、鎮痛ペプチド、酵素、血液凝固因子、ペプチド神経伝達物質、抗体を含み、アミノ酸の合成ポリマーを含むことができる。生物活性タンパク質またはペプチドの特別な例には、下垂体成長ホルモン、赤血球生成促進因子、ＤＮａｓｅ、ＲＮａｓｅ、およびそれらのモノクローナル抗体がある。
【０００５】
生体高分子および活性剤の送達におけるそれらの用途
多糖類のような生体高分子は、昔から知られている。多糖類は、例えば、Vandecruysにより特許文献１およびBlouquinにより特許文献２で開示されているような、経口投与形態における賦形剤として広く用いられている。これらの参考文献は、ナノ粒子または油と組み合わせで生体高分子を開示も提案もしていない。
【０００６】
ナノ粒子および活性剤の送達におけるそれらの用途
シリカナノ粒子は、当業者に製剤賦形剤としてよく知られ、その用途も、例えば、Muhlhoferにより特許文献３およびTennentにより特許文献４等に開示されている。ナノ粒子−生体高分子複合体と油のコーティング、または活性剤の経口投与における同様の用途は、開示も提案もされていない。
【０００７】
ナノ粒子を疎水面に付与する方法は、当業者によく知られ、例えば非特許文献１において開示されている。さらなる方法は、逆ミセル法（非特許文献２）、液体沈降法（非特許文献３）、およびゾル−ゲル法（非特許文献４）を含む。生体高分子と組み合わせたナノ粒子の用途、ナノ粒子−生体高分子の油でのコーティング、または活性剤の経口投与における同様の用途は、開示も提案もされていない。
【０００８】
特許文献５，６，７，８，９，１０および１１等は、タンパク質の賦形剤としてナノ粒子またはマイクロ粒子の用途を開示している。これらの参考文献は、生体高分子とナノ粒子の密接な非共有結合または油コーティングにおけるナノ粒子−高分子複合体の組み込むことを開示も提案もしていない。
【０００９】
Paiによる特許文献１２は、対イオン物質、脂質、高分子、および乳化剤との複合体内の帯電した水溶性薬物を有するナノ粒子を含有する経口投与組成物を開示している。この組成物は、（ａ）対イオンと薬物をイオン結合させる工程と、（ｂ）脂質、ポリマー、および可溶化剤を加える工程と；全混合物を溶解させる工程と、この溶液を乳化剤を含む水溶液内に導入する工程と、（ｃ）可溶化剤を除去する工程とによって形成する。Allenによる特許文献１３および１４は、活性剤を送達する送達体であって、輸送体核を形成する生分解性疎水性ポリマーおよびポリマー核を囲む外側の両親媒層を構成するナノ粒子を含み、安定化脂質を含有するものを開示する。
【００１０】
Shastriによる特許文献１５は、脂質を有するナノ粒子およびイオンまたはイオン性部分を有するポリマーを開示している。これらの組成物も、（ａ）ポリマーがナノ粒子の外側ではなくそれらの一部を形成する点、および（ｂ）油がナノ粒子−ポリマー混合物をコーティングする代わりにナノ粒子の一部を形成する点において本発明の組成物と顕著に異なる。加えて、本発明の複合体キャリア組成物の独特の構造は、開示も提案もされていない。
【００１１】
Alonso Fernandezによる特許文献１６は、イオン脂質−多糖の複合体の形成を通してコロイド系を調製する方法を開示している。コロイド系は、正に帯電したアミノ多糖類および負に帯電したリン脂質から成る界面で、イオン複合体を形成することによって安定化する。これらの組成物も、（ａ）ポリマーがナノ粒子の外側でなくその一部を形成する点、および（ｂ）油がそれらをコーティングする代わりにナノ粒子の一部を形成する点において本発明の組成物と顕著に異なる。加えて、本発明の複合体キャリアの独特な構造は開示も提案もされていない。
【００１２】
Tan等による特許文献１７は、シリカコートしたナノ粒子およびシリカコートしたナノ粒子の製造方法を開示している。シリカコートしたナノ粒子は、油中水型マイクロ乳剤の水部分に溶解する試薬からナノサイズの核を沈殿させることによって調製する。反応性ケイ酸塩を加えて、シリカで核をコートする。ケイ酸塩コーティングは、さらに、タンパク質で誘導体化する。Gurnyによる特許文献１８は、低い水溶性を有する薬剤の経口投与用の医薬組成物を開示している。この薬剤は高分子で溶解し、ナノ粒子はこれから形成する。
【００１３】
化粧品処方において、油相内に分散する水相を含有する油中水型の乳化剤を有する組成物を用いるのが一般的である。シリカナノ粒子および多糖類が液体脂肪相内に含まれる多くの例がある。例えば、特許文献１９には、疎水性または親水性のヒュームドシリカ、分岐多糖アルキルエーテル、乳化界面活性剤および油を含む液体脂質相を有する油中水型乳化剤を開示している。これらの組成物は、それらが水相と、組成物の因子を形成する最も重要な構造として機能する界面活性剤とを有する点で本発明の組成物と顕著に異なる。
【００１４】
さらなる方法
生物活性タンパク質およびペプチドの経口投与方法は、広大な研究努力の目的であるが、今まで概して効果がなかった。経口投与したタンパク質の分解を防ぐための多くの方策が提案されてきており、コアシェル粒子（Gowerの特許文献２０）およびナノチューブ（Dennisの特許文献２１）の使用を含む。リポソームは、経口投与したタンパク質に関するキャリア、水溶性乳濁液および縣濁液（Watkinsの特許文献２２，２３，２４および２５）、およびガス充填リポソーム（Ungerらの特許文献２６，２７および２８）として使用した。他の組成物は、水溶性媒体内で分散するナノ液滴を有する（特許文献２９）。さらなる方策は、Ben-Sasonによる特許文献３０，３１および３２で見られ、疎水性タンパク質の投与に対する生物学的障壁を越える浸透するペプチド効果を有する複合体キャリアを開示し、Guerrero Gomez-Pamoによる特許文献３３は、有機塩の沈殿によって安定化した、生物学的な活性物質の経口投与に対する非共有タンパク質−多糖複合体の調製を開示している。これらの参考文献のいずれも、生体高分子または油コーティング内に組み込んだナノ粒子−高分子複合体と密接な非共有結合したナノ粒子を開示または提案していない。
【００１５】
上述の違いに加えて、上述の参考文献のいずれも、本発明の組成物の向上した生物学的利用能を開示または提案していない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１６】
【特許文献１】米国特許第６６６７０６０号明細書
【特許文献２】米国特許出願第２００４／０１１５２６４号明細書
【特許文献３】米国特許第６３２２７６５号明細書
【特許文献４】米国特許第６６９８２４７号明細書
【特許文献５】米国特許第７１０５２２９号明細書
【特許文献６】米国特許第６９８９１９５号明細書
【特許文献７】米国特許第６４８２５１７号明細書
【特許文献８】米国特許第６６３８６２１号明細書
【特許文献９】米国特許第６４５８３８７号明細書
【特許文献１０】米国特許第７０４５１４６号明細書
【特許文献１１】米国特許第５４６２８６６号明細書
【特許文献１２】米国特許出願第２００７／０１５４５５９号明細書
【特許文献１３】米国特許出願第２００６／０１７７４９５号明細書
【特許文献１４】米国特許出願第２００３／０２３５６１９号明細書
【特許文献１５】米国特許出願第２００６／００８３７８１号明細書
【特許文献１６】国際公開第９６／３７２３２号パンフレット
【特許文献１７】米国特許第６５４８２６４号明細書
【特許文献１８】米国特許出願第２００７／０２７５９６９号明細書
【特許文献１９】米国特許第６２２８３７７号明細書
【特許文献２０】米国特許第７０９０８６８号明細書
【特許文献２１】米国特許第７１９５７８０号明細書
【特許文献２２】米国特許第７３１６８１８号明細書
【特許文献２３】国際公開第０６／０６２５４４号パンフレット
【特許文献２４】米国特許第６０７１５３５号明細書
【特許文献２５】米国特許第５８７４１０５号明細書
【特許文献２６】米国特許第６５５１５７６号明細書
【特許文献２７】米国特許第６８０８７２０号明細書
【特許文献２８】米国特許第７０８３５７２号明細書
【特許文献２９】米国特許出願第２００７／０１８４０７６号明細書
【特許文献３０】国際公開第０６／０９７７９３号パンフレット
【特許文献３１】国際公開第０５／０９４７８５号パンフレット
【特許文献３２】国際公開第０３／０６６８５９号パンフレット
【特許文献３３】欧州特許第０４９１１１４Ｂ１号明細書
【非特許文献】
【００１７】
【非特許文献１】Chung et al., “エアロゾルスプレーリアクタを用いたシリカナノ粒子の疎水性修飾(Hydrophobic modification of silica nanoparticle by using aerosol spray reactor)” Colloids and Surfaces A: Physicochem. Eng. Aspects 236 (2004) 73-79
【非特許文献２】Fu X, Qutubuddin S, Colloids Surf. A: Physicochem. Eng. Aspects 179: 65, 2001
【非特許文献３】Krysztafkiewicz A, Jesionowski T, Binkowski S, Colloids Surf. A: Physicochem. Eng. Aspects 173:73, 2000
【非特許文献４】Jean J, Yang S, J. Am. Ceram. Soc. 83(8):1928, 2000; Zhang J, Gao L, Ceram. Int. 27: 143, 2001
【発明の概要】
【００１８】
本発明は、多糖およびタンパク質またはペプチドと密接な非共有結合において、疎水性面を有する薬理学的不活性なナノ粒子を有する粒子状物質を有するタンパク質またはペプチドの活性剤の経口送達に適切な、複合体キャリア組成物であって、粒子状物質が油中に縣濁、組み込み、または分散するものを提供する。本発明は、さらに、複合体キャリア組成物と結合した生物学的活性タンパク質またはペプチドを有する医薬組成物と、その製造方法と、生物学的活性タンパク質と結合した同様のものを有する医薬組成物と、および同様のものを利用する治療方法を提供する。
【００１９】
タンパク薬物の効果的な経口キャリアは、内腔および刷子縁ペプチドに対してその内容物を保護することができ、通常高分子量である、タンパク薬物の摂取を、胃腸（ＧＩ）上皮を越えて促進することができる。本発明の組成物は、驚くべきことに、生物学的活性のタンパク質およびペプチドの経口的生物学的利用能を可能にすることを初めて示す。従来技術の組成物において、ほとんどの治療的活性がペプチドまたはタンパク質の薬剤の経口製剤で達成されていなくても、本発明は体循環で輸送したペプチドまたはタンパク質の薬剤を吸収させることができる。
【００２０】
ひとつの態様において、本発明は、疎水性面を有する薬学的に不活性なシリカナノ粒子を有し、タンパク質またはペプチドの活性物質を経口送達する複合体キャリア組成物であって、そのシリカナノ粒子の大きさは少なくとも１個の分岐多糖と密接に非共有結合において１〜１００ナノメートルであり、シリカナノ粒子−多糖複合体は、油中に組み込み、分散または縣濁させたものを提供する。他の態様において、複合体キャリア組成物は複数の油類を含む。他の態様において、シリカナノ粒子および分岐多糖を含む粒子状物質の重量は、組成物の全重量の２５％以下ではない。好ましくは、多糖の重量は、シリカの重量よりも大きい。いくつかの実施形態において、多糖の重量は、少なくともシリカのものの少なくとも２倍であり、他の実施形態において、多糖の重量はシリカのものの５倍であり、さらに他の実施形態において、多糖はシリカナノ粒子の重量の少なくとも１０倍であるだろう。それぞれの場合を、本発明の別々の実施形態で示す。
【００２１】
本発明の好ましい実施形態において、多糖は、分岐状の多糖を有する。他の実施形態において、分岐状の多糖は、アミロペクチン、でんぷんおよびグリコーゲンから成る群から選択するものとする。他の実施形態において、分岐状の多糖はでんぷんである。
【００２２】
他の態様において、本発明は、（ａ）疎水性面を有する薬学的に不活性なナノ粒子であって、ナノ粒子の大きさは、多糖を有する生体高分子と密接に非共有結合において１〜１００ナノメートルの間であるものと、（ｂ）ナノ粒子および生体高分子に非共有結合した生物学的活性のタンパク質またはペプチドとを含む医薬組成物において、ナノ粒子、生体高分子および生物学的に活性なタンパク質またはペプチドによって形成された複合体は油中に組み込まれるものを提供する。現在好ましい実施形態によると、生体高分子は多糖の混合物を有する。現在より好ましい実施形態によると、生体高分子は、少なくとも１種の分岐状の多糖を含む。
【００２３】
一つの実施形態において、生物学的活性タンパク質またはペプチドは、ナノ粒子の疎水性面および生体高分子の親水性面に非共有的に結合する。他の実施形態において、生物学的に活性なタンパク質またはペプチドの疎水性および親水性部分は、それぞれ、ナノ粒子の疎水性面および生体高分子の親水性面に接触する。他の実施形態において、生物学的に活性なタンパク質またはペプチドの疎水性部分も、生体高分子の疎水性表面に非共有的に接触することができる。それぞれの場合を本発明の別々の実施形態で示す。
【００２４】
他の実施形態において、本発明の複合体キャリア組成物は、非共有結合力によってまとめる（図１）。他の実施形態において、複合体組成物の組成物間の非共有結合力は、本願明細書で説明したように、成分が互いに混合するとき、複合体組成物が自己組織化することができる。他の実施形態において、非共有結合力によって、ナノ粒子および生体高分子は親和複合体を形成する。他の実施形態において、複合体組成物は、秩序だったフラクタル構造を示す。それぞれの場合を本発明の別々の実施形態で示す。
【００２５】
他の実施形態において、ナノ粒子−生体高分子複合体は、複合体組成物の油相内で分散する。他の実施形態において、油相は、複合体組成物のナノ粒子−生体高分子複合体を含浸させる。本願明細書で示すように、本発明は、ナノ粒子および生体高分子が油相によって含浸され完全に囲まれた複合体を形成する組成体を提供する。それぞれの場合を本発明の別々の実施形態に示す。
【００２６】
「疎水性」表面を有するような本発明のナノ粒子に関して、疎水性に修飾した表面を有するナノ粒子を包含する。他の実施形態において、ナノ粒子は、炭化水素で表面をコーティングすることによって修飾される。他の実施形態において、コーティングによって、ナノ粒子がその表面で疎水部分を示す。ナノ粒子に疎水表面を与える方法は、当業者によく知られており、とりわけ本願明細書で説明する。それぞれの場合を本発明の別々の実施形態で示す。
【００２７】
他の実施形態において、本発明の医薬組成物は、天然植物油およびそれの合成した類似物から選択した油の混合物を有する。
【００２８】
他の実施形態において、本発明の複合体組成物は、さらに、付加的な油成分を含む。用語「付加的な油成分」は、本願明細書の他の部分で説明するように、付加的な油または油の混合物を示す。他の実施形態において、付加的な油成分は抗酸化物質を含む。それぞれの場合を本発明の別々の実施形態で示す。
【００２９】
他の実施形態において、本発明の複合体組成物は、さらに、上述の付加的な油または油の混合物に加えて第三の油または油の混合物を含む。他の実施形態において、第三油成分は抗酸化物質を含む。それぞれの場合を本発明の別々の実施形態で示す。
【００３０】
他の実施形態において、本発明の複合体組成物は、さらに、ワックスを含む。
【００３１】
他の実施形態において、医薬組成物のタンパク質またはペプチドは赤血球生成促進因子である。他の実施形態において、タンパク質またはペプチドは下垂体成長ホルモンである。他の実施形態において、タンパク質またはペプチドは酢酸グラチラマーである。他の実施形態において、タンパク質またはペプチドはアポリタンパク質Ａ−１類似ペプチドである。他の実施形態において、タンパク質またはペプチドはモノクローナル抗体である。他の実施形態において、タンパク質またはペプチドは、タンパク質ＣＤ２０に対するモノクローナル抗体である。他の実施形態において、タンパク質またはペプチドは、カルシトニン、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）タンパク質、インターフェロン−α、インターフェロン−β、およびインターフェロン−γから成る群から選択される。他の実施形態において、本発明の経口投与に対して調製した本発明の複合体組成物は、ソフトゲルカプセル、ハードゼラチンカプセル、および縣濁液から選択した形態である。
【００３２】
他の実施形態において、本発明は、生物学的活性タンパク質またはペプチドを、それを必要とする対象に投与する方法であって、本発明の医薬組成物を対象に経口投与して、それによって対象に生物学的活性タンパク質またはペプチドを投与する方法を提供する。
【００３３】
一定の実施形態において、本発明の医薬組成物における活性タンパク質またはペプチドの成分は、経口投与することによって、２０％以上の完全生物学的活性、好ましくは３０％以上の完全生物学的活性、より好ましくは少なくとも４０％の完全生物学的活性、最も好ましくは少なくとも５０％の完全生物学的活性で、対象の血流に到達することができる。他の実施形態において、６０％以上の生物学的活性が元の状態のままである。他の実施形態において、７０％以上の生物学的活性が元の状態のままである。他の実施形態において、８０％以上の生物学的活性が元の状態のままである。他の実施形態において、９０％以上の生物学的活性が元の状態のままである。いずれの作用の理論または機構に縛られることなく、これらの特性は、本発明の医薬組成物の賦形剤による腸内の消化酵素および物理的力からの活性物質の保護によるものと考えられる。
【００３４】
いくつかの実施形態において、本発明の医薬組成物を、短時間放出するように設計する。本願明細書で用いる「短時間放出」は、投与後最大活性４時間で８〜１２時間以内に放出することを意味する。他の実施形態において、本発明の医薬組成物を、中時間放出するように設計する。本願明細書で用いる「中時間放出」は、投与後最大活性４〜６時間で１２〜１８時間以内に放出することを意味する。他の実施形態において、本発明の医薬組成物を、長時間放出するように設計する。本願明細書で用いる「長時間放出」は、投与後最大活性４〜８時間で１８〜４８時間以内に放出することを意味する。他の実施形態において、本発明の医薬組成物を、超長時間放出するように設計する。本願明細書で用いる「超長時間放出」は、投与後最大活性６〜８時間で１８〜７２間以内に放出することを意味する。他の実施形態において、本発明の組成物の放出時間が長いほど、低いピーク活性に従い長い尾を有する低いピークを示す。それぞれの場合を本発明の別々の実施形態で示す。
【００３５】
他の態様において、本発明は、複合体キャリア組成物の製造方法を提供し、この方法は、（ａ）疎水性表面を有するナノ粒子を乾燥混合する工程であって、ナノ粒子の大きさは１〜１００ナノメートルであり、多糖を含む生体高分子を有し、ナノ粒子は生体高分子と密接に非共有結合を形成する工程と、（ｂ）油中でナノ粒子および生体高分子を混合する工程とを有する。好ましくは、ナノ粒子および生体高分子は複合体を形成する。他の実施形態において、複合体は油中に組み込む。他の実施形態において、複合体キャリア組成物の粒径は、１００〜５０００００ナノメートル（ｎｍ）である。いくつかの好ましい実施形態において、複合体キャリア組成物の粒径は１００〜５００００ｎｍである。それぞれの場合を本発明の別々の実施形態で示す。
【００３６】
他の実施形態において、本発明は、複合体キャリア組成物の製造方法を提供し、この方法は、（ａ）疎水性表面を有する薬学的不活性なナノ粒子を乾燥混合する工程であって、ナノ粒子の大きさは１〜１００ナノメートルであり、多糖を含む生体高分子を有し、ナノ粒子は生体高分と密接に非共有結合を形成する工程と、（ｂ）生物学的活性タンパク質またはペプチドを油中に溶解または分散させる工程と、（ｃ）ナノ粒子および生体高分子の親和混合物を油中で混合する工程とを有し、それによってナノ粒子、生体高分子、およびタンパク質またはペプチドは油中に組み込まれるようになる。好ましくは、ナノ粒子、生体高分子およびタンパク質またはペプチドは複合体を形成する。他の実施形態において、複合体を油中に組み込み、分散、浸入、または縣濁させる。他の実施形態において、生物学的活性タンパク質またはペプチドは、ナノ粒子の疎水性表面および生体高分子の親水性表面に非共有結合力を介して結合する。他の実施形態において、複合体キャリア組成物の粒径は、１００〜５００００ナノメートルである。それぞれの場合を本発明の別々の実施形態で示す。
【００３７】
組成物は１個以上の生物学的活性タンパク質またはペプチドを有することが本発明の範囲内であることは容易に理解すべきである。例えば、各々のタンパク質またはペプチドは、少なくとも１個の油と混合し、その後乾燥微粒子賦形剤の親和混合物と結合する。各々のタンパク質またはペプチドに用いる油もしくは油の混合物は、同一または異なる。代案の実施形態において、２個以上の異なるペプチドまたはタンパク質を固体の微粒子賦形剤の単一混合物内に組み合わせて、油成分と混合させる。代案の実施形態において、２個以上の活性タンパク質またはペプチドは、微粒子賦形剤と個々で組み合わせて、その後個々の混合物をさらに油成分を混合する。
【００３８】
本願明細書で示すように、方法は経口投与の形態で、様々な生物学的活性タンパク質またはペプチドを調製することを開発する。一定の好ましい実施形態において、成分は、特定の順番で混合して、胃および小腸における消化過程から活性成分を保護する油でコートした複合体キャリア組成物を生成する。生体高分子は、特に分岐しているとき、消化の間の水力学および物理的な圧力を吸収する。油コーティングは、消化酵素に対して更なる保護を提供する物理的障壁を形成する。
【００３９】
さらに、いずれかの活性の理論または機構に縛られることなく、本発明の複合体キャリア組成物は、消化系において、元の組成物の構造と同じ以外で大きさのより小さい粒子に変わり（図２）、カイロミクロンと同様に吸収され、肝臓内の初回通過代謝を経ることなく血流に到達する。タンパク質およびペプチドの生物学的活性は、本発明の組成物における経口投与に従って大きく維持される。
【図面の簡単な説明】
【００４０】
【図１】リボヌクレアーゼおよび多糖を含む複合体キャリアの概略的な構造を示す図である。上図は疎水性シリカナノ粒子で含浸した多糖または生体高分子の分岐状線維構造を含むマクロ構造を示す図である。下図はマイクロ構造を示す図である。
【図２】流体力学および酵素過程の結合作用による小腸において形成された構造の概略図である。
【図３】図3Ａは、第一放出のＤＮａｓｅ複合体組成物の経口投与後のマウス血漿におけるＤＮａｓｅ活性を示す図である。図3Ｂは本発明のＤＮａｓｅの経口組成物７５ｍｇを経口投与した後のヒト血漿におけるＤＮａｓｅ活性を示す図である。それぞれの線は、ＤＮａｓｅの経口組成物の摂取前（第１点）および後の異なる対象を示す図である。
【図４】ＲＮａｓｅの注射またはＲＮａｓｅ複合体組成物の経口投与後のマウス血漿におけるＲＮａｓｅ活性を示す図である。各組み合わせの第１線：経口投与ＲＮａｓｅ。各組み合わせの第２線：注射ＲＮａｓｅ。各組み合わせの第３線：ＲＮａｓｅ：本発明の経口組成物。
【図５Ａ】図5Ａはインスリン複合体キャリア製剤ＩＶ（実施例６）の光学顕微鏡写真を示す図である。異なる記号はそれぞれのマウスを示す。
【図５Ｂ】図５Ｂは本発明のＡｃｔｒａｐｉｄ（商標）インスリン経口組成物の糖尿病（ＳＴＺ−処理）マウスにおける血中グルコース濃度（ＢＧＬ）に対する効果を示す図である。異なる記号はそれぞれのマウスを示す。
【図６】糖尿病（ＳＴＺ−処理）マウスにおけるＢＧＬに、本発明のＮｏｖｏＲａｐｉｄ（商標）インスリン経口組成物の経口投与の効果を示す図である。異なる記号はそれぞれのマウスを示す。
【図７】ＰＢＳ（強制飼養）で２５ＩＵインスリン（ＢＩＯＣＯＮによる）投与後のＳＴＺ処理マウスにおけるＢＧＬ濃度を示す図である。
【図８Ａ】図８Ａは本発明のインスリン経口組成物に対する投与量曲線（少なくとも５匹のマウスに基づいた平均グルコース濃度）を示す図である。図における中断は投与時間を示す。横軸：時間。縦軸：平均ＢＧＬ濃度、ｍｇ／ｄＬで０〜５００の範囲である。異なる記号はそれぞれのマウスを示す。
【図８Ｂ】図８Ｂは２ＩＵで個々のマウスからのデータを示す図である。図における中断は投与時間を示す。横軸：時間。縦軸：平均ＢＧＬ濃度、ｍｇ／ｄＬで０〜５００の範囲である。異なる記号はそれぞれのマウスを示す。
【図８Ｃ】図８ＢＣは５ＩＵで個々のマウスからのデータを示す図である。図における中断は投与時間を示す。横軸：時間。縦軸：平均ＢＧＬ濃度、ｍｇ／ｄＬで０〜５００の範囲である。異なる記号はそれぞれのマウスを示す。
【図８Ｄ】図８Ｄは１０ＩＵで個々のマウスからのデータを示す図である。図における中断は投与時間を示す。横軸：時間。縦軸：平均ＢＧＬ濃度、ｍｇ／ｄＬで０〜５００の範囲である。異なる記号はそれぞれのマウスを示す。
【図８Ｅ】図８ＥはＳＴＺマウスへのＳＣ注射インスリン効果を示す図である。図における中断は投与時間を示す。横軸：時間。縦軸：平均ＢＧＬ濃度、ｍｇ／ｄＬで０〜５００の範囲である。異なる記号はそれぞれのマウスを示す。
【図８Ｆ】図8Ｆは正常マウスへのインスリン組成物の１２ＩＵ効果を示す図である。図における中断は投与時間を示す。横軸：時間。縦軸：平均ＢＧＬ濃度、ｍｇ／ｄＬで０〜１６０の範囲である。異なる記号はそれぞれのマウスを示す。
【図８Ｇ】図８Ｇは本発明の１０ＩＵインスリン経口組成物対同量のインスリンの注射の比較を示す図である。
【図８Ｈ】図８Ｈは本発明の５ＩＵインスリン経口組成物対同量のインスリンの注射の比較を示す図である。
【図８Ｉ】図８Ｉは本発明の２ＩＵインスリン経口組成物対同量のインスリンの注射の比較を示す図である。
【図９】健康（Ａ）および糖尿病（B）のヒト被験者に対するインスリン組成物の効果を示す図である。図９Ａは３０ＩＵのアクトラピッドの比較的短時間放出インスリン複合体キャリア製剤は１２：００に投与し、グラフにおける縞で示した。図9Ｂは日常平均血中グルコース濃度を示す図である。Ｇｌｕｃｏ−Ｒｉｔｅ（商標）を１〜１２日目に投与した。本発明のインスリン経口組成物を最初に13日目、続いて１４日目に投与した。
【図１０Ａ】インスリン組成物の毒性実験を示す図である。肝臓の顕微鏡分析である。それぞれの場合において、左のパネルは対照サンプルで、右のパネルが処理したサンプルである。上下のパネルはそれぞれ４０倍および２００倍の倍率である。
【図１０Ｂ】インスリン組成物の毒性実験を示す図である。腎臓の顕微鏡分析である。それぞれの場合において、左のパネルは対照サンプルで、右のパネルが処理したサンプルである。上下のパネルはそれぞれ４０倍および２００倍の倍率である。
【図１０Ｃ】インスリン組成物の毒性実験を示す図である。十二指腸の顕微鏡分析である。それぞれの場合において、左のパネルは対照サンプルで、右のパネルが処理したサンプルである。上下のパネルは、それぞれ１００倍および２００倍の倍率である。
【図１１】図１１Ａはリポ多糖体（ＬＰＳ）のＨＰＬＣ分析の設定を示す図である。図１１Ｂは分析結果：陽性対照血清：ＬＰＳ１ｍｇを注射したマウス（曲線Ａ）；陰性対照血清：無処理のマウス（曲線Ｂ）；本発明の経口（強制）インスリン経口組成物を１〜１５日目に、１ｍｇのＬＰＳを１４日目および１５日目に与えたマウス（曲線Ｃ）；１ｍＬのＰＢＳを１〜１５日目、１４日目および１５日目に１ｍｇのＬＰＳを与えたマウス（曲線Ｄ）。
【図１２】本発明の赤血球生成促進因子（ＥＰＯ）複合体キャリア組成物の投与後のラットにおける網状赤血球形成濃度を示す図である。縦軸：相対網状赤血球数（成熟赤血球からの網状摂家級（未成熟赤血球）の％）
【図１３】本発明の１５０ＩＵＥＰＯ経口組成物を経口投与後のラット血清におけるＥＰＯ濃度を示す図である。
【図１４】アポリタンパク質Ａ−１類似ペプチド３Ｆ−２および３Ｆ−１４のらせん状の輪を示す図である。この輪は、下に面した疎水性側を有するＮからＣ末端までのらせん状の軸に沿って示す。主要な構造は、上記それぞれの輪の図に従う。両ペプチドのアミノ酸成分は同じである。配列は異なる。プラスおよびマイナス符号は、中性ｐＨでのアミノ酸の電荷を示す。太字は、芳香族残基を示す。
【発明を実施するための形態】
【００４１】
本発明は、疎水性表面を有する薬学的不活性なナノ粒子を、多糖または高分子量のタンパク質と親和性非共有結合して含む複合体キャリア組成物であって、ナノ粒子含有複合体は、油中に縣濁、取り込み、または分散するものを提供する。本発明はさらに、複合体キャリア組成物を結合した生物学的活性タンパク質またはペプチドを含む医薬組成物と、その製造方法と、生物学的活性タンパク質と結合した同様のものの医薬組成物と、同様のものを利用した治療方法を提供する。
【００４２】
一つの実施形態において、本発明は、疎水性表面を有する薬学的不活性なナノ粒子を、多糖を含む生体高分子と親和性非共有結合して含む複合体キャリア組成物であって、ナノ粒子の直径は１〜１００ナノメートルであり、ナノ粒子−生体高分子複合体は、油中に組み込み、分散、浸入、または縣濁し、複合体キャリア組成物の粒径は１００〜５０００００ナノメートル（ｎｍ）であるモノを提供する。特定の好ましい実施形態において、粒径は１００〜５００００ｎｍとする。他の実施形態において、複合体キャリア組成物の油相は複数の油を含む。それぞれの場合を本発明の別々の実施形態で示す。
【００４３】
他の実施形態において、複合体キャリア組成物は非共有結合力によって結び付ける（図１）。他の実施形態において、いずれかの活性の理論または機構に縛られることなく、複合体キャリア組成物間の非共有結合力によって、本願明細書で記載したように、成分が互いに混ざるとき、複合体組成物は自己組織化することができる。他の実施形態において、いずれかの活性の理論または機構に縛られることなく、複合体キャリア組成物は、異なる性質で少なくとも２個の固体の薬学的不活性な材料（シリカナノ粒子および多糖）を含有する固相を含む。他の実施形態において、非共有結合力によって、ナノ粒子および生体高分子は親和複合体を形成する。他の実施形態において、複合体組成物は、秩序だったフラクタル構造を示す。それぞれの場合を本発明の別々の実施形態で示す。
【００４４】
他の実施形態において、ナノ粒子−生体高分子複合体は、複合体組成物の油相内で分散する。他の実施形態において、油相は、複合体組成物のナノ粒子−生体高分子複合体を含浸させる。本願明細書で示すように、本発明は、ナノ粒子および生体高分子が油相によって含浸または完全に囲まれた複合体を形成する組成体を提供する。それぞれの場合を本発明の別々の実施形態に示す。
【００４５】
本願明細書で用いる、組み込み、分散、浸入または縣濁した粒子状物質を有する油は、油と接触した粒子状物質を示す。全体として組成物は、粒子状物質の分布に関して均一である必要はない。むしろ、粒子状物質は、撹拌するときに油中に組み込み、分散、浸入または縣濁することができる。粒子状物質は、完全に均一である必要はないが、むしろ本願明細書で示す成分を含むその内容物、および本発明の油との親和性接触のよって特徴づけられる。本発明の範囲内で粒子状物質が塊状で沈殿する成分である。
【００４６】
ナノ粒子
本発明の方法および組成物のナノ粒子は、好ましくは薬学的に不活性である。他の実施形態において、ナノ粒子は、一般的に安全と認定された（ＧＲＡＳ）材料から成る。他の実施形態において、ナノ粒子は無毒性である。他の実施形態において、ナノ粒子は非催奇性である。他の実施形態において、ナノ粒子は生物学的不活性である。それぞれの場合を本発明の別々の実施形態で示す。
【００４７】
他の実施形態において、ナノ粒子はシリカナノ粒子である。一つの好ましい実施形態において、ナノ粒子はヒュームドシリカナノ粒子である。他の実施形態において、ナノ粒子は酸化亜鉛から成る。他の実施形態において、ナノ粒子は炭素から成る。他の実施形態において、ナノ粒子はチタンから成る。他の実施形態において、ナノ粒子はシリカナノ粒子と類似の硬さの他の物質から成る。それぞれの場合を本発明の別々の実施形態で示す。
【００４８】
他の実施形態において、ナノ粒子はシリカ含有ナノ粒子である。「シリカ含有ナノ粒子」は、好ましくは、シリカ、ケイ酸塩、またはそれらの組み合わせを有するナノ粒子である。「シリカ」は二酸化ケイ素を示す。シリカ含有ナノ粒子は、例えば９９．９９％純の細挽きのシリカ等で、購入可能である。当業者には理解できることには、低い純度のシリカも本発明に適応できる。「ケイ酸塩」は、シリコンおよび酸素を含む化合物で、例えばＳｉＯ４の四面体単位がある。他の実施形態において、その用語は、１個以上の中央のケイ素原子を陰性配位子に囲まれたアニオンを有する化合物を示す。ケイ酸塩の非限定的な例には、ヘキサフルオロケイ酸塩、ケイ酸ナトリウム（Ｎａ２ＳｉＯ４）、ケイ酸アルミニウム、ケイ酸マグネシウムなどがある。本発明の構造におけるナノ粒子は、単一型または多岐型のいずれかであり、多岐型が存在する場合には、少なくとも１個の型はシリカ含有ナノ粒子であることを理解すべきである。他の実施形態において、基本的にすべてのナノ粒子はシリカ含有ナノ粒子である。シリカは、安全な食品添加物として広く認められている（Thirteenth report of the Joint FAO/WHO Expert Committee on Food Additives, FAO Nutrition Meetings Report Series; from the Joint FAO/WHO Expert Committee on Food Additives meeting in Rome, May 27- June 4, 1969）。それぞれの場合を本発明の別々の実施形態で示す。
【００４９】
「疎水性」表面を有する本発明のナノ粒子に関して、一つの実施形態において、ナノ粒子表面の少なくとも４０％が疎水性であることを示す。他の実施形態において、表面の少なくとも５０％が疎水性である。他の実施形態において、表面の少なくとも６０％が疎水性である。他の実施形態において、表面の少なくとも７０％が疎水性である。他の実施形態において、表面の少なくとも８０％が疎水性である。他の実施形態において、表面の少なくとも９０％が疎水性である。他の実施形態において、表面の少なくとも９５％が疎水性である。他の実施形態において、表面の４０〜１００％が疎水性である。他の実施形態において、表面の５０〜１００％が疎水性である。他の実施形態において、表面の６０〜１００％が疎水性である。他の実施形態において、表面の７０〜１００％が疎水性である。他の実施形態において、表面の８０〜１００％が疎水性である。他の実施形態において、表面の９０〜１００％が疎水性である。他の実施形態において、表面の９５〜１００％が疎水性である。他の実施形態において、表面の４０〜６０％が疎水性である。他の実施形態において、表面の４０〜５０％が疎水性である。他の実施形態において、表面の４０〜７０％が疎水性である。他の実施形態において、表面の４０〜８０％が疎水性である。それぞれの場合を本発明の別々の実施形態で示す。
【００５０】
他の実施形態において、「疎水性」表面を有するナノ粒子に関して、疎水性に修飾した表面を有するナノ粒子を示す。他の実施形態において、ナノ粒子は、炭化水素で表面をコーティングすることによって修飾する。他の実施形態において、コーティングによって、ナノ粒子は炭化水素部分を表面に示す。他の実施形態において、炭化水素部分は、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、Ｔ−ブチル、ペンチル、およびイソ−ペンチルから成る群から選択される。他の実施形態において、コーティングによって、ナノ粒子はその表面にメチル部分を示す。疎水性表面をナノ粒子に取り込む方法は、当業者には既知であり、本願明細書でとりわけ説明する。当業者に既知であるように、化学反応によってヒュームドシリカの表面を化学的修飾させることができ、シラノール基の数を減少して生成する。とくに、シラノール基は、疎水基で置換して疎水性シリカを得る。疎水基はトリメチルシロキシ基であり、ヘキサメチルジシラザンの存在下でヒュームドシリカを処理することでとくに得られる。したがって、シリカは、ＣＴＦＡ（第６版、１９９５）に従って「シリル化シリカ」として既知である。それらは固体であり、例えば、Degussa社の「Aerosil R812（登録商標）」、Cabot 社の「CAB-O-SIL TS-530（登録商標）」があり、ジメチルシリルオキシまたはポリジメチルソロキサン基で、ポリジメチルシロキサンまたはジメチルジクロロシランの存在下でヒュームドシリカを処理することによってとくに得られる。従って、シリカは、ＣＴＦＡ（第６版、１９９５）に従って「シリル化シリカジメチル」として既知である。それらは固体であり、例えば、Degussa社の「Aerosil R972（登録商標）」「Aerosil R974（登録商標）」、Cabot 社の「CAB-O-SIL TS-610（登録商標）」「CAB-O-SIL TS-720（登録商標）」がある。それぞれの場合を本発明の別々の実施形態で示す。
【００５１】
他の実施形態において、本発明の組成物のナノ粒子は、水に実質的に不溶である。「実質的に不溶」とは、他の実施形態において、１万重量／重量に対して１００部未満の溶解度（ｐｐｍ）を示す。他の実施形態において、この用語は２００ｐｐｍ未満の溶解度を示す。他の実施形態において、この用語は８０ｐｐｍ未満の溶解度を示す。他の実施形態において、この用語は６０ｐｐｍ未満の溶解度を示す。他の実施形態において、この用語は５０ｐｐｍ未満の溶解度を示す。他の実施形態において、この用語は４０ｐｐｍ未満の溶解度を示す。他の実施形態において、この用語は３０ｐｐｍ未満の溶解度を示す。他の実施形態において、この用語は２０ｐｐｍ未満の溶解度を示す。他の実施形態において、この用語は１５ｐｐｍ未満の溶解度を示す。他の実施形態において、この用語は１０ｐｐｍ未満の溶解度を示す。それぞれの場合を本発明の別々の実施形態で示す。
【００５２】
他の実施形態において、本発明の方法および組成物のナノ粒子の直径は、５〜３０ナノメートルの間である。他の実施形態において、直径は７〜４０ナノメートル（ｎｍ）である。他の実施形態において、直径は２〜４００ナノメートル（ｎｍ）である。他の実施形態において、直径は２〜３００ナノメートル（ｎｍ）である。他の実施形態において、直径は３〜２００ナノメートル（ｎｍ）である。他の実施形態において、直径は４〜１５０ナノメートル（ｎｍ）である。他の実施形態において、直径は４〜１００ナノメートル（ｎｍ）である。他の実施形態において、直径は５〜５０ナノメートル（ｎｍ）である。他の実施形態において、直径は５〜４０ナノメートル（ｎｍ）である。他の実施形態において、直径は６〜２５ナノメートル（ｎｍ）である。他の実施形態において、本発明において用いる疎水性シリカナノ粒子の平均直径は１０〜１１ｎｍである。他の実施形態において、平均直径は約５ｎｍである。他の実施形態において、平均直径は約６ｎｍである。他の実施形態において、平均直径は約７ｎｍである。他の実施形態において、平均直径は約８ｎｍである。他の実施形態において、平均直径は約９ｎｍである。他の実施形態において、平均直径は約１０ｎｍである。他の実施形態において、平均直径は約１２ｎｍである。他の実施形態において、平均直径は約１４ｎｍである。他の実施形態において、平均直径は約１６ｎｍである。他の実施形態において、平均直径は約１８ｎｍである。他の実施形態において、平均直径は約２０ｎｍである。他の実施形態において、平均直径は、本願明細書で示す範囲内におさまる他の直径である。それぞれの場合を本発明の別々の実施形態で示す。
【００５３】
他の実施形態において、本発明のナノ粒子は、本発明の組成にとくに適切な融解温度の範囲内にある。特定の実施形態において、ナノ粒子は６００℃以上の融解温度（Ｔｍ）を有する。他の実施形態において、Ｔｍは６００〜４５００℃である。好ましくは、Ｔｍは８００〜４５００℃である。他の実施形態において、Ｔｍは本願明細書で示す範囲内のいずれかのＴｍである。それぞれの場合を本発明の別々の実施形態で示す。
【００５４】
ナノ粒子に疎水性表面の付与
ナノ粒子に疎水性表面を付与する方法は、当業者には既知であり、とりわけ非特許文献１において開示されている。さらなる方法には、逆ミセル法（非特許文献２）、液体沈降法（非特許文献３）、およびゾル−ゲル法（非特許文献４）がある。
【００５５】
さらなる方法は、米国特許公開第２００７／０１７２４２６号明細書において、ナノ粒子に疎水性表面を付与する方法が開示され、ナノ粒子の表面へ吸収する第１端および、ナノ粒子から離れて広がり粒子に疎水性を付与する第２端を有する材料とそれらが結合することによる方法を提供する。この材料は、極性末端基を有する一般的な脂肪族化合物である。化合物の各分子の第１端には、粒子表面に吸収するカルボキシル基、アミン基、シラン等を含むことができる。化合物の各分子の第２端には、粒子から離れて広がるアルカン基を含むことができる。疎水性表面層を提供するのに用いる材料には、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、およびステアリン酸等の飽和脂肪酸と、パルミチン酸、オレイン酸、リノール酸、およびリノレン酸等の不飽和変異体とがある。オクタデシルトリクロロシラン等のシランも、機能化酸化物表面に広く用いることができる。疎水性表面層は、粒子をコーティングするのに適切な疎水性コーティング材料の体積中にナノ粒子を混合させることによって提供する。過剰な疎水性コーティング材料は、ナノ粒子が疎水性コーティング材料において縣濁液を形成するようなものを一般的に使用する。各ナノ粒子は、その後その表面上に疎水性層を示す。
【００５６】
ナノ粒子をコーティングするために疎水性表面を利用するさらなる方法は、米国特許公開第２００６／００５３９７１号明細書において開示されている。さらなる方法は、米国特許公開第２００７／００９８９９０号明細書において開示されている。開示された方法は、第１酸は低分子量の有機カルボン酸であり、第２酸は高分子量の有機カルボン酸である複合的な多岐の有機酸を利用する。上述の各特許文献の内容を本願明細書で参照する。
【００５７】
生体高分子
本発明の方法および組成物の生体高分子は、好ましくは、分岐状の生体高分子である。本願明細書で用いる「分岐状」は、天然で分岐および、熱的および／または超音波処理等の物理的処理によって分岐するように処理した高分子の両方を示す。概して、分岐状の高分子は、単量体サブユニットの置換基が高分子の他の共有結合鎖によって置換される高分子として規定される。他の実施形態において、分岐状の生体高分子は、架橋結合した高分子である。他の実施形態において、分岐状の生体高分子は架橋結合されていない。分岐状の高分子の非限定的な例には、それぞれ動物および植物において見られるでんぷんの形の、グリコーゲンおよびアミロペクチンがある。グリコーゲンおよびアミロペクチンの構造を以下に示す。
【化１】
0005432183.tif 000002
【化２】
0005432183.tif 000003
【００５８】
他の実施形態において、生体高分子は繊維状生体高分子である。「繊維状生体高分子」は、分離した糸状の形の網目状の高分子を示す。繊維状高分子の非限定的な例は、グアーガム（Benefiber（商標）等で見られる）、コラーゲン、ケラチン、フィブリン、エラスチンがある。生体高分子は天然で繊維状であるか、または物理的および化学的処理によって繊維状にする。
【００５９】
各種類の分岐および繊維状の生体高分子は、本発明の別々の実施形態で示す。
【００６０】
他の実施形態において、本発明の組成物の生体高分子は、本発明の組成物にとくに適切な融解温度の範囲内である。他の実施形態において、生体高分子は４００℃未満の融解温度を有する。他の実施形態において、Ｔｍは３５０℃以下である。他の実施形態において、Ｔｍは３００℃以下である。他の実施形態において、Ｔｍは２５０℃以下である。他の実施形態において、Ｔｍは２００℃以下である。他の実施形態において、Ｔｍは１５０℃以下である。他の実施形態において、Ｔｍは１００〜４００℃である。他の実施形態において、Ｔｍは本願明細書で示す範囲内のいずれかのＴｍである。それぞれの場合を本発明の別々の実施形態で示す。
【００６１】
好ましくは、本発明の方法および組成物の生体高分子は、多糖および高分子量の構造のタンパク質から成る群から選択する。
【００６２】
多糖
「糖類」は、単糖、単糖誘導体、単糖類似体、砂糖、多糖のそれぞれの単位を形成するものを含むいずれかの単純な炭水化物を示す。「単糖」は、ポリヒドロキシアルデヒド（アルドース）またはポリヒドロキシケトン（ケトース）および、それらの誘導体および類似体を示す。
【００６３】
「多糖」は、ヘミアセタールまたはグリコシド結合によって互いに結合した約５００〜１０００００単糖類単位から形成された高分子を示す。多糖は、直鎖、単一分岐、または多岐分岐し、各岐はさらに第２枝を有し、単糖は、それぞれ、Ｄ−フルクトースおよびＤ−ガラクトース糖のような、ピラノース（６員環）もしくはフラノース（５員環）の形で標準のＤ−またはＬ−環状糖であることや、または、それらは環状糖誘導体で、例えば、Ｄ−グルコサミン等のアミノ糖、Ｄ−フコースもしくはＬ−ラムノース等のデオキシ糖、Ｄ−リボース−５−リン酸塩等の糖リン酸、Ｄ−グルタミン酸等の糖酸、もしくは、Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミン、Ｎ−アセチルノイラミン酸（シアル酸）、もしくはＮ−スルフェート−Ｄ−グルコサミン等の多岐誘導糖であることができる。天然から単離すると、多糖の調製は分子量が不均一である分子を含む。多糖には、他の化合物の中には、ガラクトマンナンおよびガラクトマンナン誘導体、ガラクト−ラムノガラクツロン誘導体、およびガラクト−アラビノガラクツロン誘導体がある。
【００６４】
本発明の方法において用いる多糖は、他の実施形態において、天然に生じる多糖である。他の実施形態において、多糖は合成した多糖である。合成した多糖の非限定的な例には、米国特許第６５２８４９７号明細書およびOkada M. et al. Polymer journal, 15 (11); 821-26 (1983)において見つけることができる。他の実施形態において、多糖は分岐多糖である。この用語は、当業者には既知であり、単糖モノマー間の結合における、いずれかの枝の数および構造を示す。他の実施形態において、多糖は天然分岐多糖である。他の実施形態において、多糖は合成分岐多糖である。それぞれの場合を本発明の別々の実施形態で示す。
【００６５】
他の実施形態において、多糖の平均分子量MWは、少なくとも１００キロダルトン（ｋＤａ）である。他の実施形態において、平均分子量は少なくとも１５０ｋＤａである。他の実施形態において、平均分子量は少なくとも２００ｋＤａである。他の実施形態において、平均分子量は少なくとも３００ｋＤａである。他の実施形態において、平均分子量は少なくとも４００ｋＤａである。他の実施形態において、平均分子量は少なくとも５００ｋＤａである。他の実施形態において、平均分子量は少なくとも６００ｋＤａである。他の実施形態において、平均分子量は少なくとも８００ｋＤａである。他の実施形態において、平均分子量は少なくとも１０００ｋＤａである。他の実施形態において、平均分子量は１００〜１０００ｋＤａである。他の実施形態において、平均分子量は１５０〜１０００ｋＤａである。他の実施形態において、平均分子量は２００〜１０００ｋＤａである。他の実施形態において、平均分子量は１００〜８００ｋＤａである。他の実施形態において、平均分子量は１００〜６００ｋＤａである。それぞれの場合を本発明の別々の実施形態で示す。
【００６６】
他の実施形態において、多糖は、でんぷん、デキストリン、セルロース、キチン、αグルカン、およびβグルカン、およびそれら誘導体から成る群から選択する。典型的には、セルロース、デキストリン、でんぷんおよびグルカゴンは、すべてグルコースの高分子であり、化学式（Ｃ６Ｈ１２Ｏ６）ｎである。
【００６７】
他の実施形態において、多糖は以下の構造を有するでんぷんである。でんぷんの非限定的な例には、コーンスターチ、ジャガイモでんぷん、米でんぷん、小麦でんぷん、プラムでんぷん、および藻からのでんぷんがある。他の実施形態において、でんぷんは当業者に既知のいずれか他のでんぷんである。それぞれの場合を本発明の別々の実施形態で示す。
【化３】
0005432183.tif 000004
【００６８】
他の実施形態において、多糖はデキストリンである。他の実施形態における「デキストリン」は、でんぷんの加水分解によって生成した低分子量の炭水化物を示す。他の実施形態において、この用語は、α−（１，６）結合で開始した直鎖α−（１，４）−結合Ｄ−グルコース高分子または同様のものの混合物を示す。デキストリンは、広く購入可能で、とりわけ、α−アミラーゼで分岐アミロペクチンまたはグルカゴンを消化させることによって生成する。デキストリンの非限定的な例には、以下の構造を有するマルトデキストリンがある。他の実施形態において、デキストリンは当業者に既知のいずれか他のデキストリンである。それぞれの場合を本発明の別々の実施形態で示す。
【化４】
0005432183.tif 000005
【００６９】
他の実施形態において、多糖はセルロースである。でんぷんの非限定的な例には、以下の構造式を有するα−セルロースがある。他の実施形態において、セルロースは当業者に既知のいずれか他のセルロースである。それぞれの場合を本発明の別々の実施形態で示す。
【化５】
0005432183.tif 000006
【００７０】
他の実施形態において、多糖はキチンである。キチンの非限定的な例には、分子式（Ｃ８Ｈ１３ＮＯ５）ｎで、以下の構造式である。他の実施形態において、キチンは当業者に既知のいずれか他のキチンである。それぞれの場合を本発明の別々の実施形態で示す。
【化６】
0005432183.tif 000007
【００７１】
他の実施形態において、多糖はα−グルカンである。本発明のα―グルカンは、α１−２，α１−３，α１−４，および／もしくはα１−６グリコシド結合を有するグルコースの直鎖または分岐の高分子である。例えば、植物から誘導したα−アミロース等のα−グルカンは、α１−４グリコシド結合を有する未分岐の直鎖グルコース高分子であり、植物から誘導したアミロペクチン等のα−グルカンは、骨格においてα１−４グリコシド結合および分岐点においてα１−６結合を有する分岐グルコース高分子である。他の実施形態において、α−グルカンは、当業者に既知のいずれか他のα−グルカンである。それぞれの場合を本発明の別々の実施形態で示す。
【００７２】
他の実施形態において、多糖はβ−グルカンである。「β−グルカン」は、（１→３）または（１→４）β結合によって互いに結合したＤ−グルコピラノシル単位を有する多糖を示す。β−グルカンは、オートムギおよびオオムギ等の多くの穀物において天然で存在する。穀物で生じるβ−グルカン分子の分子量は、典型的には２００〜２０００ｋＤａである。他の実施形態において、β−グルカンは当業者に既知のいずれか他のβ−グルカンである。それぞれの場合を本発明の別々の実施形態で示す。
【００７３】
他の実施形態において、本発明の組成物の多糖のＴｍは、本発明の組成物にとくに適切な融解温度の範囲内である。他の実施形態において、多糖は４００℃以下の融解温度を有する。他の実施形態において、Ｔｍは他のＴｍまたは本願明細書で示す範囲内のＴｍである。それぞれの場合を本発明の別々の実施形態で示す。
【００７４】
他の実施形態において、本発明の医薬組成物は、直鎖生体高分子である生体高分子を更に含む。他の実施形態において、さらなる生体高分子は直鎖多糖である。他の実施形態において、さらなる生体高分子は、直鎖高分子量のタンパク質である。他の実施形態において、さらなる生体高分子は、キチン、セルロース、α−グルカン、β−グルカンから成る群から選択する。この組み合わせの非限定的な例は、アミロペクチン、分岐の生体高分子、およびキチン、直鎖多糖である。本願明細書で示す他の分岐および直鎖の生体高分子も適切である。それぞれの場合を本発明の別々の実施形態で示す。
【００７５】
本発明の方法および組成物の他の実施形態において、組成物の生体高分子は、直鎖多糖である。この実施形態において、分岐生体高分子は存在する必要がない。
【００７６】
他の実施形態において、本発明の方法および組成物のさらなる生体高分子は、線維、好ましくは食物繊維である。本願明細書で用いる用語「線維」および「食物繊維」の定義には、利用不可能な炭水化物、消化不良の残渣、植物細胞の多糖およびリグニンがあり、これらすべてはヒトの消化酵素による加水分解に抵抗する。好ましい繊維は、グアーガム、ペクチン、フルクト−オリゴ糖およびそれらの誘導体から成る群から選択する。フィチン、タンニン、サポニン、およびクチン等の少量の他の消化不良の化合物は、消化が悪く、食物繊維多糖に結合するため、食物繊維に含むことができる。他の実施形態において、食物繊維は不溶繊維である。他の実施形態において、食物繊維は直鎖不溶繊維である。他の実施形態において、食物繊維は可溶繊維である。他の実施形態において、食物繊維は直鎖可溶繊維である。それぞれの場合を本発明の別々の実施形態で示す。
【００７７】
他の実施形態において、本発明の組成物は、分岐生体高分子、直鎖生体高分子、および不溶繊維を含む。他の実施形態において、本発明の組成物は、分岐生体高分子、ポリペプチド、および不溶繊維を含む。この例には、アミロペクチン、分岐多糖；ケラチン、ポリペプチド；およびセルロース、不溶繊維を含む組成物がある。本願明細書で示す他の分岐多糖、ポリペプチド、および不溶繊維も同様に適切である。他の実施形態において、本発明の組成物は、分岐多糖、直鎖多糖、および不溶繊維を含む。この例には、アミロペクチン、分岐多糖；キチン、直鎖多糖；およびセルロース、不溶繊維を含む組成物がある。本願明細書で示す他の分岐および直鎖の多糖および不溶繊維も適切である。それぞれの場合を本発明の別々の実施形態で示す。
【００７８】
構造タンパク質
特定の実施形態に従って、組成物の乾燥固体成分は、さらに構造タンパク質を有する。本発明の方法および組成物の構造タンパク質は、高分子量（ＭＷ）構造タンパク質である。いくつかの実施形態において、構造タンパク質は、生物学的活性タンパク質またはペプチドの、それぞれ疎水性および親水性領域に相互接続する、親水性および疎水性残基の両方を有する。
【００７９】
他の実施形態において、構造タンパク質の平均分子量は、少なくとも１００キロダルトン（ｋＤａ）である。他の実施形態において、平均分子量は少なくとも１５０ｋＤａである。他の実施形態において、平均分子量は少なくとも２００ｋＤａである。他の実施形態において、平均分子量は少なくとも３００ｋＤａである。他の実施形態において、平均分子量は少なくとも４００ｋＤａである。他の実施形態において、平均分子量は少なくとも５００ｋＤａである。他の実施形態において、平均分子量は少なくとも６００ｋＤａである。他の実施形態において、平均分子量は少なくとも８００ｋＤａである。他の実施形態において、平均分子量は少なくとも１０００ｋＤａである。他の実施形態において、平均分子量は１００〜１０００ｋＤａである。他の実施形態において、平均分子量は１５０〜１０００ｋＤａである。他の実施形態において、平均分子量は２００〜１０００ｋＤａである。他の実施形態において、平均分子量は１００〜８００ｋＤａである。他の実施形態において、平均分子量は１００〜６００ｋＤａである。それぞれの場合を本発明の別々の実施形態で示す。
【００８０】
「構造タンパク質」は、一つの実施形態において、複合体キャリア組成物に関連する構造を含むタンパク質を示す。他の実施形態において、本発明の構造タンパク質は、治療活性に欠ける。他の実施形態において、この用語は、細胞、細胞膜、または生体内の細胞外膜の構造を与えるタンパク質を示す。他の実施形態において、構造タンパク質は繊維タンパク質である。他の実施形態において、構造タンパク質は硬タンパク質である。他の実施形態において、構造タンパク質は、エラスチン、コラーゲン、ケラチン、およびフィブリノゲンから成る群から選択する。他の実施形態において、構造タンパク質は、当業者に既知の他のいずれの繊維タンパク質または硬タンパク質である。それぞれの場合を本発明の別々の実施形態で示す。
【００８１】
他の実施形態において、構造タンパク質はエラスチンである。エラスチンタンパク質の非限定的な例には、とりわけGenBank Accession numbers NP_031951, NPJ786966およびAAC98394で示される。他の実施形態において、エラスチンは当業者に既知のいずれか他のエラスチンである。それぞれの場合を本発明の別々の実施形態で示す。
【００８２】
他の実施形態において、構造タンパク質はコラーゲンである。コラーゲンタンパク質の非限定的な例には、遺伝子記号COL3A1, COL14A1, COLl 1 A2, COL5A2, COLI lAl, COL5A1, COL4A6, COL4A5, COL4A4, COL4A3, COL4A2, COL1A2, COL5A3, COL18A1, COL12A1, COL19A1, COL24A1, COL4A1, およびCOL2A1によって示すものがある。他の実施形態において、コラーゲンは当業者に既知のいずれか他のコラーゲンである。それぞれの場合を本発明の別々の実施形態で示す。
【００８３】
他の実施形態において、構造タンパク質はケラチンである。ケラチンタンパク質の非限定的な例には、ケラチン１８、ケラチン１４、ケラチン３およびケラチン８６（それぞれGenBank  Accession numbers P05783, P02533, P12035, 043790）がある。他の実施形態において、ケラチンは当業者に既知のいずれか他のケラチンである。それぞれの場合を本発明の別々の実施形態で示す。
【００８４】
他の実施形態において、構造タンパク質はフィブリノゲンである。フィブリノゲンは、３対のポリペプチド：２個のα、２個のβ、２個のγ鎖から成るグリコタンパク質である。フィブリノゲンα、β、γ鎖の非限定的な例には、とりわけGenBank Accession numbers P02671, P02675, および P02679で示すものがある。他の実施形態において、フィブリノゲンは当業者に既知のいずれか他のフィブリノゲンである。それぞれの場合を本発明の別々の実施形態で示す。
【００８５】
他の実施形態において、構造タンパク質のＴｍは、本発明の組成物にとくに適切な融解温度の範囲内である。他の実施形態において、多糖は４００℃以下の融解温度を有する。他の実施形態において、Ｔｍは他のＴｍまたは本願明細書で示す範囲内のいずれかのＴｍである。それぞれの場合を本発明の別々の実施形態で示す。
【００８６】
油および油コーティング
本発明の組成物の固体粒子相は、油キャリアにおいて包囲、浸入、定着、分散または縣濁される。概して、油相は、固体相をコーティングするのに加えて、ナノ粒子、生体高分子および薬学的活性分子から成る固体層に含浸する。「油」、「油層」、「油相」または「油コーティング」は、さらなる成分または本発明の方法において有効な成分の存在を除外しない（例えば、脂溶性補助因子または抗酸化物質）。むしろ、この用語は、油、油層、油相、またはコーティングが複数の薬学的に可能な油キャリアから主に成り、他の成分は混合および／または溶解する。油キャリアは、本願明細書でさらに説明するように１個または複数の種類の油から成ることができる。他の実施形態において、コーティングは脂質および／または油から主に成る。他の実施形態において、組成物のコーティングは、薬学的に可能な油キャリアを含む。他の実施形態において、油キャリアは天然油である。他の実施形態において、油は天然植物油の混合物である。他の実施形態において、油キャリアはゴマ油である。他の実施形態において、油キャリアはオリーブオイルである。他の実施形態において、油キャリアはアマニ油である。他の実施形態において、油キャリアは月見草油である。他の実施形態において、油キャリアはシリコンオイルである。他の実施形態において、油キャリアはクロウメモドキ油である。他の実施形態において、油キャリアは、ゴマ油、オリーブオイル、アマニ油、月見草油、シリコンオイル、およびクロウメモドキ油から成る群から選択する。他の実施形態において、油キャリアは、限定することはないが、ヒマワリ油、コーン油、ダイズ油、ホホバ油、マロー油、グレープ油、ヘーゼルナッツ油、アプリコット油、マカデミア油およびヒマシ油から成る群から選択するものを含む。
【００８７】
他の実施形態において、油キャリアはラノリン等の動物由来のものである。
【００８８】
他の実施形態において、油キャリアは合成油である。他の実施形態において、油キャリアは脂肪アルコールである。特定の好ましい実施形態において、油キャリアは２−オクチルドデカノールである。特定の他の好ましい実施形態において、油キャリアは、脂肪酸エステルおよびフェニルシリコンから成る群から選択する。特定のより好ましい実施形態において、油キャリアはフェニルトリメチコン、ジフェニルジメチコン、およびポリ−メチルフェニルシロキサンから成る群から選択する。
【００８９】
他の実施形態において、油キャリアは当業者に既知の他の適切な油キャリアである。それぞれの場合を本発明の別々の実施形態で示す。
【００９０】
他の実施形態において、油は、天然由来の脂質および／または油から主に成る。それぞれの場合を本発明の別々の実施形態で示す。
【００９１】
「複数の油」は、他の実施形態において、２個以上の油を示す。他の実施形態において、本発明の組成物は３個以上の油を有する。他の実施形態において、本発明の組成物は４個以上の油を有する。他の実施形態において、本発明の組成物は４個を超える油を有する。他の実施形態において、油相は、天然植物油から選択した油の混合物を有する。それぞれの場合を本発明の別々の実施形態で示す。
【００９２】
他の実施形態において、本発明の油成分は、対象によって摂取されるとき胆汁塩または胆汁酸の分泌を刺激することができる成分を有する。他の実施形態において、胆汁刺激成分は油である。他の実施形態において、その成分はオリーブオイルまたはそれらの抽出物である。他の実施形態において、その成分は当業者に既知のいずれか他の胆汁塩／酸刺激脂質可溶物質である。他の実施形態において、そのキャリアは胆汁塩／刺激物質である。他の実施形態において、胆汁塩／酸刺激物質は、キャリアから分離した物質である。それぞれの場合を本発明の別々の実施形態で示す。
【００９３】
他の実施形態において、本発明の油成分は、１個以上の抗酸化物質を多量に含む。例えば、クロウメモドキ（oblepicha）油は、多量のβ−カロテンを含む。他の実施形態において、１個以上の抗酸化物質を豊富に含むいずれか他の油を用いる。それぞれの場合を本発明の別々の実施形態で示す。
【００９４】
他の実施形態において、本発明の組成物の油成分は、比較的高い融解温度を有する油を含む。いくつかの実施形態によると、本発明の油成分は、少なくとも５〜１０℃の融解温度（Ｔｍ）を有する成分を含む。他の実施形態において、高いＴｍの成分は室温で液体である。他の実施形態において、油キャリアは高いＴｍの成分である。他の実施形態において、高いＴｍの成分は他の油キャリアに加えて含む。高いＴｍの成分の非限定的な例は、ホホバ油である。他の実施形態において、高いＴｍの油は当業者に既知のいずれか他の高い融解温度の油である。他の実施形態において、高いＴｍの油は、本発明の複合体キャリアにおける油キャリアの大部分として用いる。それぞれの場合を本発明の別々の実施形態で示す。
【００９５】
他の実施形態において、本発明の複合体組成物は、さらに付加的な油成分を有する。本願明細書で示すように、本願明細書で示す方法に従った本発明の組成物の多岐の油成分の混合物は、自由エネルギーの吸収および最小化によって、複合体構造の自己秩序化または自己組織化を提供する。用語「付加的な油成分」は、本願明細書でいずれかで示すように、油または油の混合物を示す。他の実施形態において、付加的な油成分の油キャリアはオリーブオイルである。他の実施形態において、油キャリアは当業者に既知の他の適切な油である。他の実施形態において、付加的な油成分は抗酸化物質を有する。それぞれの場合を本発明の別々の実施形態で示す。
【００９６】
他の実施形態において、生物学的活性タンパク質またはペプチドを、最初に加えた油または油の混合物の代わりに、付加的な油または油成分内に含む。他の実施形態において、生物学的活性のタンパク質またはペプチドは、固相に加える前に抗酸化物質および油に結合する（最初に加えたもしくは付加的な油または油の混合物）。それぞれの場合を本発明の別々の実施形態で示す。
【００９７】
他の実施形態において、付加的な油、油または油の混合物は、最初に加えた油または油の混合物よりも高い粘度を有する。他の実施形態において、いずれかの作用の理論または機構に縛られることなく、この段階で高い粘度の油または油の混合物を用いるのは、自由エネルギーの吸収および最小化のために構造の自己秩序化または自己組織化を可能にする。それぞれの場合を本発明の別々の実施形態で示す。
【００９８】
他の実施形態において、本発明の複合体組成物は、さらに第３の油または油の混合物を含む。他の実施形態において、第３油成分は抗酸化物質を含む。他の実施形態において、第３油成分はゴマ油である。他の実施形態において、第３油成分は当業者に既知の、他の適切な油である。他の実施形態において、第３油、油または油の混合物は、付加的な油または油の混合物よりも高い粘度を有する。それぞれの場合を本発明の別々の実施形態で示す。
【００９９】
他の実施形態において、高い浸透性の油キャリアを、外側の油または油の混合物内に含む。高い浸透性の油の非限定的な例には、ゴマ油、ティーツリー（メラレウカ）油、ラベンダー油、アーモンド油、およびグレープシード油がある。他の実施形態において、高い浸透性の油キャリアは、血中への物質の効果的な輸送を促進する。それぞれの場合を本発明の別々の実施形態で示す。
【０１００】
他の実施形態において、本発明の複合体組成物または医薬組成物は、さらに薬学的に可能なワックスを含む。用語「ワックス」は、室温（２５℃）で固体であり、固体／液体状態に可逆に変化し、３０℃以上で、最高１２０℃の融解温度を有する、親油性化合物を示す。ワックスを液体状態（融解）にすることによって、いずれかの油の存在で混和し光顕微鏡で見て均一な混合物を形成することができるが、室温まで混合物の温度を戻すと、混合物の油におけるワックスの再結晶体が得られる。ワックスは、例えばベスワックス等の天然ワックス、植物材料から誘導したワックス、または脂肪酸および長鎖アルコールのエステル化によって調製した合成ワックスであることができる。他の適切なワックスには、パラフィンワックス等の石油系ワックスを含む。他の実施形態において、ワックスは複合体キャリア組成物を安定化する。他の実施形態において、ワックスの包含物は複合体キャリア組成物を含むタブレットの形成を容易にする。それぞれの場合を本発明の別々の実施形態で示す。
【０１０１】
医薬組成物
他の実施形態において、本発明は、医薬組成物を提供し、この医薬組成物は、（ａ）疎水性表面を有する薬学的不活性ナノ粒子であって、ナノ粒子の大きさは１〜１００ナノメートルであり、多糖を含む生体高分子と親和性非共有結合を形成するナノ粒子と、（ｂ）ナノ粒子および生体高分子に非共有的に結合した生物学的活性タンパク質またはペプチドとを含み、ナノ粒子、生体高分子、および生物学的活性タンパク質またはペプチドによって形成される複合体は油中に組み込み、分散、浸入または縣濁する。他の実施形態において、生物学的活性タンパク質またはペプチドは、ナノ粒子の疎水性表面および生体高分子の親水性表面に非共有的に結合する。他の実施形態において、生物学的活性タンパク質またはペプチドは、生体高分子の疎水性表面に非共有的に結合する。他の実施形態において、その調整後であるが摂取される前の、医薬組成物の粒径は１００〜５０００００ｎｍである。他の実施形態において、粒径は１００〜５００００ｎｍである。他の実施形態において、粒径は１００〜５０００ｎｍである。それぞれの場合を本発明の別々の実施形態で示す。
【０１０２】
本発明の医薬組成物の様々な成分、すなわち、ナノ粒子、生体高分子、および油は、上述で説明する。他の実施形態において、複合体キャリア組成物の油相は複数の油を含む。他の実施形態において、ナノ粒子、生体高分子およびタンパク質またはペプチドを含む、粒子状物質の合計重量は、組成物の全重量の２５％以下である。それぞれの場合を本発明の別々の実施形態で示す。
【０１０３】
他の実施形態において、複合体キャリア組成物は、非共有結合力でまとまる。他の実施形態において、いずれかの作用の理論または機構に縛られることなく、複合体組成物の成分間の非共有結合力によって、本願明細書で記載するように、成分を互いに混合するとき複合体組成物が自己組織化できる。他の実施形態において、非共有結合力によって、ナノ粒子、生体高分子、およびタンパク質／ペプチドは親和混合物を形成する。他の実施形態において、複合体組成物は、秩序立ったフラクタル構造を示す。それぞれの場合を本発明の別々の実施形態で示す。
【０１０４】
他の実施形態において、ナノ粒子−生体高分子−タンパク質／ペプチド複合体は、複合体組成物の油相内で分散する。他の実施形態において、油相を、複合体組成物のナノ粒子−生体高分子−タンパク質／ペプチド複合体に含浸する。本願明細書で示すように、本発明は、複合体からのナノ粒子、生体高分子、およびタンパク質またはペプチドが油相によって含浸または完全に包囲されている組成物を提供する。それぞれの場合を本発明の別々の実施形態で示す。
【０１０５】
本発明の組成物における活性剤として適切なタンパク質またはペプチド
本願明細書で用いる「治療活性を有するタンパク質またはペプチド」は、それらが必要な対象において治療できる活性を示すタンパク質またはペプチドを表す。特定の好ましい実施形態において、この用語は、概して生物学的活性を示すことを知られるタンパク質またはペプチドを示し、本発明の組成物におけるそれらの製剤に限定されない。他の実施形態において、生物学的活性タンパク質またはペプチドは、グリコタンパク質またはグリコシル化ペプチドである。他の実施形態において、タンパク質またはペプチドは、グリコシル化でない。他の実施形態において、タンパク質またはペプチドは、当業者に既知のいずれか他の種類のタンパク質またはペプチドである。それぞれの場合を本発明の別々の実施形態で示す。
【０１０６】
生物学的活性タンパク質またはペプチドの分子量（ＭＷ）は、他の実施形態において、１００キロダルトン（ｋＤａ）未満である。他の実施形態において、分子量は９０ｋＤａ未満である。他の実施形態において、分子量は８０ｋＤａ未満である。他の実施形態において、分子量は７０ｋＤａ未満である。他の実施形態において、分子量は６０ｋＤａ未満である。他の実施形態において、分子量は５０ｋＤａ未満である。他の実施形態において、分子量は４５ｋＤａ未満である。他の実施形態において、分子量は４０ｋＤａ未満である。他の実施形態において、分子量は３５ｋＤａ未満である。他の実施形態において、分子量は３０ｋＤａ未満である。他の実施形態において、分子量は２５ｋＤａ未満である。他の実施形態において、分子量は２０ｋＤａ未満である。それぞれの場合を本発明の別々の実施形態で示す。
【０１０７】
他の実施形態において、生物学的活性タンパク質またはペプチドの分子量は、１００ｋＤａ以上である。他の実施形態において、分子量は１００〜５０００ｋＤａである。他の実施形態において、分子量は１００〜４０００ｋＤａである。他の実施形態において、分子量は１００〜３０００ｋＤａである。他の実施形態において、分子量は１００〜２０００ｋＤａである。他の実施形態において、分子量は１００〜１５００ｋＤａである。他の実施形態において、分子量は１００〜１０００ｋＤａである。他の実施形態において、分子量は１００〜８００ｋＤａである。他の実施形態において、分子量は１００〜７００ｋＤａである。他の実施形態において、分子量は１００〜６００ｋＤａである。他の実施形態において、分子量は１００〜５００ｋＤａである。他の実施形態において、分子量は１００〜４００ｋＤａである。他の実施形態において、分子量は１００〜３００ｋＤａである。他の実施形態において、分子量は１００〜２００ｋＤａである。他の実施形態において、分子量は１００〜１５０ｋＤａである。他の実施形態において、生物学的活性タンパク質またはペプチドは、未知のまたは様々な分子量の合成高分子である。それぞれの場合を本発明の別々の実施形態で示す。
【０１０８】
本願明細書で示すように、様々な分子量の生物学的活性タンパク質またはペプチドは、本発明の複合体キャリアに上手に組み込むことができる。例えば、インスリン（分子量５８０８）；リボ核酸（分子量１４０００）；およびデオキシリボ核酸（３００００ダルトン以上の分子量）を用いた。
【０１０９】
他の実施形態において、生物学的活性タンパク質またはペプチドは、成長因子、サイトカイン、ペプチドホルモン、鎮痛ペプチド、酵素、小ペプチド、血液凝固因子ペプチド、およびペプチド神経伝達物質から選択する。他の実施形態において、生物学的活性タンパク質またはペプチドは合成高分子である。他の実施形態において、タンパク質またはペプチドは、当業者に既知の、いずれか他の種類の生物学的活性タンパク質またはペプチドである。それぞれの場合を本発明の別々の実施形態で示す。
【０１１０】
他の実施形態において、生物学的活性タンパク質またはペプチドは成長因子である。成長因子の非限定的な例は、血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）、幹細胞成長因子（ＳＣＦ）、ヘパトサイト成長因子（ＨＧＦ）、形質転換成長因子（ＴＧＦ）神経成長因子（ＮＧＦ）、上皮成長因子（ＥＧＦ）、線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ）、およびインスリン様成長因子（ＩＧＦ）である。他の実施形態において、成長因子は当業者に既知の、いずれか他の種類の成長因子である。それぞれの場合を本発明の別々の実施形態で示す。
【０１１１】
他の実施形態において、生物学的活性タンパク質またはペプチドはサイトカインである。サイトカインの非限定的な例は、腫瘍壊死因子、インターフェロン、およびインターロイキンである。他の実施形態において、サイトカインは当業者に既知のいずれか他の種類のサイトカインである。それぞれの場合を本発明の別々の実施形態で示す。
【０１１２】
他の実施形態において、生物学的活性タンパク質またはペプチドは造血因子である。造血因子の非限定的な例は、赤血球生成促進因子、顆粒球コロニー刺激因子、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子、マクロファージコロニー刺激因子およびトロンボポエチンである。他の実施形態において、造血因子は当業者に既知の。いずれか他の種類の造血因子である。それぞれの場合を本発明の別々の実施形態で示す。
【０１１３】
他の実施形態において、生物学的活性ペプチドはペプチドホルモンである。ペプチドホルモンの非限定的な例は、黄体形成ホルモン放出因子（ＬＨ−ＲＨ）、甲状腺刺激ホルモン放出ホルモン（ＴＲＨ）、ソマトスタチン、下垂体成長ホルモン、黄体刺激ホルモン、副腎皮質刺激ホルモン（ＡＣＴＨ）、メラノサイト刺激ホルモン（ＭＳＨ）、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）、黄体形成ホルモン（ＬＨ）、卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、バソプレシン、オキシトキシン、カルシトニン、副甲状腺ホルモン（ＰＴＨ）、グルカゴン、ガストリン、セクレチン、パンクレオザイミン、コレスチラミン、アンジオテンシン、ヒト胎盤性ラクト−ゲン、ヒト絨毛性ゴナドトロピン（ＨＣＧ）、セルリアン、モチリン、グルコース依存性インスリン分泌ポリペプチド（ＧＩＰ）、およびグルカゴン様ペプチド（ＧＬＰ−１）である。他の実施形態において、ペプチドホルモンは当業者に既知のいずれか他の種類のペプチドホルモンである。それぞれの場合を本発明の別々の実施形態で示す。
【０１１４】
他の実施形態において、生物学的活性ペプチドは鎮痛ペプチドである。鎮痛ペプチドの非限定的な例は、エンケファリン、エンドルフィン、ダイノルフィン、キョトルフィンである。他の実施形態において、鎮痛ペプチドは当業者に既知のいずれか他の種類の鎮痛ペプチドである。それぞれの場合を本発明の別々の実施形態で示す。
【０１１５】
他の実施形態において、生物学的活性タンパク質は酵素である。本願明細書で示すように、本発明の組成物は、かなりの割合の酵素活性を維持する間、酵素を投与することができる。酵素の非限定的な例は、ＤＮａｓｅ、ＲＮａｓｅ、スーパーオキシドジスムターゼ（ＳＯＤ）、ウロキナーゼ、組織プラスミノゲン活性化因子（ＴＰＡ）、アスパラギナーゼ、カリクレイン、およびピルビン酸デビドロゲナーゼである。他の実施形態において、酵素は当業者に既知の、いずれか他の種類の酵素である。それぞれの場合を本発明の別々の実施形態で示す。
【０１１６】
他の実施形態において、生物学的活性ペプチドは神経伝達物質である。ペプチド神経伝達物質の非限定的な例は、ボンベシン、ニューロテンシン、ブラジキニン、および物質Ｐである。他の実施形態において、神経伝達物質は当業者に既知の、いずれか他の種類の神経伝達物質である。それぞれの場合を本発明の別々の実施形態で示す。
【０１１７】
他の実施形態において、生物学的活性タンパク質またはペプチドは抗凝固ペプチドである。
【０１１８】
他の実施形態において、生物学的活性ペプチドは抗体である。他の実施形態において、抗体はモノクローナル抗体である。他の実施形態において、抗体は抗腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）抗体である。抗ＴＮＦ抗体は購入可能であり、Infliximab（商標）, Etanercept（商標）, および Adalimumab（商標）を含む。他の実施形態において、抗体は当業者に既知のいずれか他の抗ＴＮＦ抗体である。他の実施形態において、抗体は抗癌胎児性抗原（ＣＥＡ）に対するものである。他の実施形態において、抗体は卵巣癌関連抗体ＣＡ１２５に対するものである。他の実施形態において、抗体は当業者に既知の、いずれか他の治療活性を有する抗体である。それぞれの場合を本発明の別々の実施形態で示す。
【０１１９】
他の実施形態において、生物学的活性ペプチドは抗体フラグメントである。他の実施形態において、抗体フラグメントはＦｃフラグメントである。他の実施形態において、抗体フラグメントはＦａｂフラグメントである。他の実施形態において、抗体フラグメントは軽鎖である。他の実施形態において、抗体フラグメントは重鎖である。他の実施形態において、抗体フラグメントは当業者に既知の、いずれか他の種類の抗体フラグメントである。他の実施形態において、抗体フラグメントは抗ＴＮＦ抗体のフラグメントである。他の実施形態において、抗体フラグメントは当業者に既知の、いずれか他の治療活性を有する抗体のフラグメントである。それぞれの場合を本発明の別々の実施形態で示す。
【０１２０】
他の実施形態において、生物学的活性ペプチドは、医薬品に接合した抗体である。他の実施形態において、医薬品はサイトカインである。他の実施形態において、医薬品は優性阻害腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）タンパク質である。他の実施形態において、医薬品は腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）タンパク質である。他の実施形態において、医薬品は放射性同位体である。他の実施形態において、医薬品は当業者に既知の、いずれか他の医薬品である。他の実施形態において、抗体−医薬品接合は、ウイルス感染に対して活性を示す。他の実施形態において、抗体−医薬品接合は、細菌感染に対して活性を示す。それぞれの場合を本発明の別々の実施形態で示す。
【０１２１】
他の実施形態において、生物学的活性ペプチドは医薬品に接合した抗体フラグメントである。
【０１２２】
他の実施形態において、生物学的活性ペプチドは、カルシトニン、赤血球生成促進因子、下垂体成長ホルモン、優性阻止腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）タンパク質、インターフェロン−α、インターフェロン−β、インターフェロン−γ、および抗腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）抗体から選択する。
【０１２３】
他の実施形態において、生物学的活性タンパク質またはペプチドはＤＮａｓｅである。この用語は、制限エンドヌクレアーゼおよび非制限エンドヌクレアーゼを含む。ＤＮａｓｅは、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）の加水分解時に、個々の３´または５´−リン酸デオキシヌクレオシド内にポリデオキシリボ核酸を加水分解することができるリン酸ジエステラーゼである。ＤＮａｓｅの非限定的な例は、ＤＮａｓｅ  Ｉ、ＤＮａｓｅ  ＩＩ、およびGenBank Accession Numbers YP_001911052, CAA62587, Q8WZ79, および NP_650672の配列を有するタンパク質である。他の実施形態において、ＤＮａｓｅは当業者に既知の、いずれか他のＤＮａｓｅである。それぞれの場合を本発明の別々の実施形態で示す。
【０１２４】
他の実施形態において、生物学的活性タンパク質またはペプチドはＲＮａｓｅである。この用語は、エンドリボヌクレアーゼおよびエキソリボヌクレアーゼを含む。ＲＮａｓｅは、ポリＲＮＡを分解することができる。ＲＮａｓｅの非限定的な例は、ＲＮａｓｅ  Ａ，ＲＮａｓｅ  Ｈ，ＲＮａｓｅ  Ｉ，ＲＮａｓｅ  ＩＩＩ，ＲＮａｓｅ  Ｌ，ＲＮａｓｅ  Ｐ，ＲＮａｓｅ  ＰｈｙＭ，ＲＮａｓｅ  Ｔ１，ＲＮａｓｅ  Ｔ２，ＲＮａｓｅ  Ｕ２，ＲＮａｓｅ  ＶＩ，ＲＮａｓｅ  Ｖ，ＰＮＰａｓｅ，ＲＮａｓｅＩＩ，ＲＮａｓｅ  Ｒ，ＲＮａｓｅ  Ｄ，ＲＮａｓｅ  Ｔ，オリゴリボヌクレオチド、エキソリボヌクレオチドＩ，およびエキソリボヌクレオチドＩＩである。他の実施形態において、ＲＮａｓｅは抗酸化物質と一緒に投与する。それぞれの場合を本発明の別々の実施形態で示す。
【０１２５】
他の実施形態において、生物学的活性タンパク質またはペプチドは下垂体成長ホルモンである。下垂体成長ホルモンは、ポリペプチドホルモン、概して全長で１９１アミノ酸であり、ヒト下垂体前葉（下垂体後部）によって分泌され、ＧＨまたはソマトトロピンとしても知られている。下垂体成長ホルモンの非限定的な一連の例は、GenBank Accession numbers NM_000515, NM_022559,NM_022560, NM_022561, および NM_022562に記載される。他の実施形態において、下垂体成長ホルモンは当業者に既知の、いずれか他の下垂体成長ホルモンである。それぞれの場合を本発明の別々の実施形態で示す。
【０１２６】
他の実施形態において、生物学的活性タンパク質またはペプチドは、Copaxone（商標）である。Copaxone（商標）およびガラティラメル酢酸塩としても知られている共重合体１（Ｃｏｐ１）は、複合的な硬化症の治療の薬である。それは、Ｌ−アラニン、Ｌ−リジン、Ｌ−グルタミン酸およびＬ−チロシンの合成高分子から成り、それぞれ平均モル比が０．１４１，０．４２７，０．０９５および０．３３８であり、平均分子量が５０００〜９０００ダルトンである。共重合体１に加えて、Copaxone（商標）は、ＢＢＢ浸透性を高める４０ｍｇ／ｍＬのマンニトールを含む。Copaxone（商標）は、当業者には既知であり、例えば、Jacobs L. et al. (Advances in specific therapy for multiple sclerosis. Curr. Opin. Neurol. 7:250-4, 1994)において開示されている。他の実施形態において、本発明の組成物は、生物学的活性ポリペプチドとしてのCopaxone（商標）および、さらにマンニトールを有する。それぞれの場合を本発明の別々の実施形態で示す。
【０１２７】
他の実施形態において、生物学的活性タンパク質またはペプチドは、アポリタンパク質Ａ−１様ペプチドである。アポリタンパク質Ａ−１様ペプチドは当業者には既知であり、例えば、Ou J. et al. (L-4F, an apolipoprotein A-I mimetic, dramatically improves vasodilation in hypercholesterolemia and sickle cell disease. Circulation, 107:2337-41, 2003)において開示されている。アポリタンパク質Ａ−１様ペプチドの非限定的な例は、Ｌ−４Ｆである。さらなるアポリタンパク質Ａ−１様ペプチドの構造を図１４で示す。他の実施形態において、アポリタンパク質Ａ−１様ペプチドは当業者に既知の、いずれか他のアポリタンパク質Ａ−１様ペプチドである。それぞれの場合を本発明の別々の実施形態で示す。
【０１２８】
他の実施形態において、生物学的活性タンパク質またはペプチドはリツキシマブである。リツキシマブ（Rituxan（登録商標））は、ＣＤ２０陽性Ｂ−細胞を選択的に標的にする治療である。リツキシマブは当業者に既知であり、例えばRamos-Casals M. et al. (A systematic review of the off-label use of biological therapies in systemic autoimmune diseases. Medicine (Baltimore). 87:345-64, 2008)において開示されている。
【０１２９】
他の実施形態において、生物学的活性タンパク質またはペプチドはカルシトニンである。カルシトニンの非限定的な例は、GenBank Accession numbers NM_001741, NM_001033953, および NM_001033952に記載される。他の実施形態において、カルシトニンは当業者に既知の、いずれか他のカルシトニンである。他の実施形態において、カルシトニン含有組成物を骨粗しょう症の治療に用いる。それぞれの場合を本発明の別々の実施形態で示す。
【０１３０】
他の実施形態において、生物学的活性タンパク質またはペプチドは赤血球生成促進因子である。赤血球生成促進因子の非限定的な一連の例は、GenBank Accession numbers NM_000799 and AM933611に記載される。赤血球生成促進因子の他の非限定的な例は、Eprex（商標）として購入可能なエポエチンα, Epogen（商標）, およびProcrit（商標）；Recormon（商標） （エポエチンβ）； Aranesp（商標） （ダーベポエチンα）；および Mircera（商標） （メトキシポリエチレングリコール−エポエチンβ）である。他の実施形態において、赤血球生成促進因子は当業者に既知の、いずれか他の赤血球生成促進因子である。それぞれの場合を本発明の別々の実施形態で示す。
【０１３１】
他の実施形態において、生物学的活性タンパク質またはペプチドはインターフェロン−αである。インターフェロン−αタンパク質の非限定的な一連の例は、GenBank Accession numbers NM_024013, NM_000605, NM_002170, NM_002173, NM_021057, NM_002175, NM_021268, NM_002172, NM_006900, NM_002171, NM_021002, NM_002169, NM_21068に記載される。他の実施形態において、インターフェロン−αは当業者に既知の、いずれか他のインターフェロン−αである。それぞれの場合を本発明の別々の実施形態で示す。
【０１３２】
他の実施形態において、生物学的活性タンパク質またはペプチドはインターフェロン−βである。インターフェロン−βタンパク質の非限定的な一連の例は、GenBank Accession numbers NM_002176, DJ418445, および AL390882に記載される。他の実施形態において、インターフェロン−βは当業者に既知のいずれか他のインターフェロン−βである。それぞれの場合を本発明の別々の実施形態で示す。
【０１３３】
他の実施形態において、生物学的活性タンパク質またはペプチドはインターフェロン−γである。インターフェロン−γタンパク質の非限定的な一連の例は、GenBank Accession numbers NM_000619, BC070256, V00543,およびX13274に記載される。他の実施形態において、インターフェロン−γは当業者に既知の、いずれか他のインターフェロン−γである。それぞれの場合を本発明の別々の実施形態で示す。
【０１３４】
他の実施形態において、生物学的活性タンパク質またはペプチドはウレアーゼである。ウレアーゼタンパク質の非限定的な一連の例は、GenBank Accession numbers AF468788 およびM65260に記載される。他の実施形態において、ウレアーゼは当業者に既知の、いずれか他のウレアーゼである。それぞれの場合を本発明の別々の実施形態で示す。
【０１３５】
他の実施形態において、生物学的活性タンパク質またはペプチドはカタラーゼである。カタラーゼタンパク質の非限定的な一連の例は、GenBank Accession numbers NM_001752およびNM_012520に記載される。他の実施形態において、カタラーゼは当業者に既知の、いずれか他のカタラーゼである。それぞれの場合を本発明の別々の実施形態で示す。
【０１３６】
他の実施形態において、生物学的活性ポリペプチドは、ペプチド様またはペプチドを模倣して設計したタンパク質類似鎖である。
【０１３７】
他の実施形態において、「ペプチド様」は、非天然で生じるアミノ酸またはアミノ酸類似体を含むペプチドを示す。他の実施形態において、アミノ酸類似体は、以下の化学式を有するＤまたはＬ残基であり：ＮＨ−ＣＨＲ−ＣＯ、Ｒは脂肪族基、置換脂肪族基、ベンジル基、置換ベンジル基、芳香族基、または置換芳香族基であり、Ｒは天然で生じるアミノ酸の側鎖に反応しない。この用語はまた、天然に生じるアミノ酸の片方のＤ−アミノ酸も示す。アミノ酸類似体は当業者には既知であり、多くのこれらの類似体は購入可能である。他の実施形態において、ペプチドにおいて非天然で生じるアミノ酸の使用は、それらを認識できない酵素による分解により耐えられるという利点を有する。
【０１３８】
代案として、官能基は側鎖に加えたり、側鎖から取り除いたり、または他の官能基と交換することができる。この種の非保存的な置換基は、アミンまたはヒドロキシル、カルボキシル酸をバリン、ロイシン、イソロイシンの脂肪族側鎖に加えたり、アミンを有するアスパラギン酸またはグルタミン酸の側鎖にカルボキシル酸を置換したり、または、リシンまたはオルニチンの側鎖にアミン基を取り除くことを含む。さらに他の実施形態において、置換したアミノ酸の側鎖は、置換されるアミノ酸の官能基と大きく異なる立体構造および電気特性を有する。この修飾の例には、グリシンに対するトリプトファン、アスパラギン酸に対するリシン、セリンの側鎖に対する−（ＣＨ２）４ＣＯＯＨを含む。
【０１３９】
アミノ酸類似体は、同類置換および非同類置換の両方として本発明の組成物におけるアミノ酸残基と置換することができる。これらのペプチド様有機部分は、必須アミノ酸および非必須アミノ酸残基と置換するか、または取り除かれた（非必須アミノ酸の）アミノ酸の代わりにペプチド内で空間群として作用するいずれかである。ペプチド様有機部分は、しばしば、置換したアミノ酸と類似の立体構造、電気または構造の特性を有し、このようなペプチド様は重要な位置においてアミノ酸を置換するのに使用し、同類置換として見なす。しかし、この類似点は必ずしも必要ではない。ペプチド様体の使用における制限のみが、ペプチドがそれらの治療特性を維持する。ペプチド様体は、有機合成技術によって製造することができる。適切なペプチド様体の例には、Ｌアミノ酸に対応するＤアミノ酸；テトラゾール、アミド結合の等量式；ＬＬ３アミノ２プロペニドン６カルボキシル酸を含む。さらなる適切なペプチド様体は、ヒドロキシ−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−３−カルボキシレート；１，２，３，４テトラヒドロ−イソキノリン−３−カルボキシレート；ヒスチジンイソキノロンカルボキシル酸（ＨＩＣ）；（２Ｓ，３Ｓ）メチルフェニルアラニン、（２Ｓ，３Ｒ）メチルフェニルアラニン、および（２Ｒ，３Ｓ）メチルフェニルアラニンおよび（２Ｒ，３Ｒ）メチルフェニルアラニンを含む。
【０１４０】
上述の例のペプチド様体は、限定的な意味ではない。それぞれの場合を本発明の別々の実施形態で示す。
【０１４１】
付加的成分
他の実施形態において、本発明の組成物は、さらに抗酸化物質を有する。他の実施形態において、抗酸化物質は薬学的に可能な抗酸化物質である。他の実施形態において、抗酸化物質は、ビタミンＥ、スーパーオキシドジムスターゼ（ＳＯＤ）、オメガ−３およびβ−カロテンからなる群から選択される。それぞれの場合を本発明の別々の実施形態で示す。
【０１４２】
他の実施形態において、組成物はさらに、生物学的活性タンパク質またはペプチドのエンハンサ−を有する。他の実施形態において、組成物はさらに、生物学的活性タンパク質またはペプチドの補因子を有する。それぞれの場合を本発明の別々の実施形態で示す。
【０１４３】
他の実施形態において、本発明の組成物はさらに医薬品グレードの界面活性剤を含む。界面活性剤は当業者には既知であり、とりわけHandbook of Pharmaceutical Excipients (eds. Raymond C Rowe, Paul J Sheskey, and Sian C Owen, copyright Pharmaceutical Press, 2005)において開示されている。他の実施形態において、界面活性剤は当業者に既知のいずれか他の界面活性剤である。それぞれの場合を本発明の別々の実施形態で示す。
【０１４４】
他の実施形態において、本発明の組成物はさらに医薬品グレードの乳化剤または乳液（皮膚軟化剤）を含む。乳化剤または乳液は当業者には既知であり、とりわけHandbook of Pharmaceutical Excipients(ibid)において開示されている。乳化剤または乳液の非限定的な例は、ユームルギン、ユームルギンＢ１  ＰＨ、ユームルギンＢ２  ＰＨ、水素化ヒマシ油セトステアリルアルコール、およびセチルアルコールである。他の実施形態において、乳化剤または乳液は、当業者に既知のいずれか他の乳化剤または乳液である。それぞれの場合を本発明の別々の実施形態で示す。
【０１４５】
他の実施形態において、本発明の組成物はさらに、医薬品グレードの安定化剤を含む。安定化剤は当業者には既知であり、とりわけ、Handbook of Pharmaceutical Excipients(ibid)において開示されている。他の実施形態において、安定化剤は当業者に既知のいずれか他の安定化剤である。それぞれの場合を本発明の別々の実施形態で示す。
【０１４６】
他の実施形態において、本発明の組成物はさらに、アルギニン、リジン、アスパラギン酸塩、グルタミン酸塩、およびヒスチジンから成る群から選択したアミノ酸を含む。他の実施形態において、アルギニン、リジン、アスパラギン酸塩、グルタミン酸塩、およびヒスチジンの類似体または修飾変種には、用語「アルギニン」、「リジン」、「アスパラギン酸塩」、「グルタミン酸塩」、および「ヒスチジン」をそれぞれ含む。他の実施形態において、アミノ酸は、リボ核酸または他の活性分子のさらなる保護を提供する。他の実施形態において、アミノ酸は、生物学的活性タンパク質またはペプチドと標的細胞の相互作用を促進する。他の実施形態において、アミノ酸は組成物の油成分を含有する。それぞれの場合を本発明の別々の実施形態で示す。
【０１４７】
他の実施形態において、本発明の組成物はさらに、１個以上の製剤可能な賦形剤を有し、複合体キャリア組成物をその中で混合する。他の実施形態において、賦形剤は１個以上の付加的な多糖類を有する。他の実施形態において、賦形剤は１個以上のワックスを有する。他の実施形態において、賦形剤は組成物に所望の味を提供する。他の実施形態において、賦形剤は薬の濃度、ゲルカプセルまたはハードゲルカプセル等の最終投与量に影響を与える。
【０１４８】
賦形剤の非制限的な例には、消泡剤（ジメチコーン、シメチコン）；抗菌性保存剤（塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼルソニウム、ブチルパラベン、塩化セチルビリジニウム、クロロブタノール、クロロクレゾール、クレゾール、エチルパラベン、メチルパラベン、メチルパラベンナトリウム、フェノール、フェニルエチルアルコール、酢酸フェニル水銀、硝酸フェニル水銀、安息香酸カリウム、ソルビン酸カリウム、プロピルパラベン、プロピルパラベンナトリウム、安息香酸ナトリウム、デヒドロ酢酸ナトリウム、プロピオン酸ナトリウム、ソルビン酸、チメロサール、チモール）；キレート剤（エデト酸２ナトリウム、エチルジアミン４酢酸および塩、エデト酸）、コーティング剤（カルボキシメチルセルロースナトリウム、酢酸セルロース、酢酸フタル酸セルロース、エチルセルロース、ゼラチン、薬品シロップ、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、フタル酸ヒドロキシプロピルメチルセルロース、メタクリル酸共重合体、メチルセルロース、ポリエチレングリコール、酢酸フタル酸ポリビニル、セラック、スクロース、二酸化チタン、カルナバワックス、微結晶ワックス、ゼイン）；着色剤（カラメル、赤、黄、黒またはブレンド、酸化鉄）錯化剤（エチレンジアミン４酢酸および塩（ＥＤＴＡ）、エデト酸、ゲンチアニン酸エタノールアミド、硫酸オキシキノリン）；乾燥剤（塩化カルシウム、硫酸カルシウム、二酸化ケイ素）、乳化剤および／または可溶化剤（アカシア、コレステロール、ジエタノールアミン（補助）、グリセロールモノステアレート、ラノリンアルコール、レシチン、モノおよびジグリセリド、モノエタノールアミン（補助）、オレイン酸（補助）、オレイルアルコール（安定化剤）、ポロキサマー、ポリオキシエチレン５０ステアレート、ポリキシル３５ヒマシ油、ポリオキシル４０水添ヒマシ油、ポリオキシル１０オレイルエーテル、ポリオキシル２０セトステアリルエーテル、ポリオキシル４０ステアレート、ポリソルベート２０、ポリソルベート４０、ポリソルベート６０、ポリソルベート８０、プロピレングリコール２酢酸、プロピレングリコールモノステアレート、ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸ナトリウム、ソルビタンラウリン酸モノエステル、モノパルチミン酸ソルビタン、モノステアリン酸ソルビタン、ステアリン酸、トロラミン、乳化ワックス）；芳香剤および香味料（アネトール、ベンズアルデヒド、エチルバニリン、メンソール、サリチル酸メチル、グルタミン酸ナトリウム、オレンジ花油、ペパーミント、ペパーミント油、ハッカ精、ローズ油、強ローズ水、チモール、トルバルサンチンキ、バニラ、バニラチンキ、バニリン）；保湿剤（グリセリン、へキシレングリコール、プロピレングリコール、ソルビトール）；高分子（例えば、酢酸セルロース、アルキルセルロース、ヒドロキシアルキルセルロース、アクリル酸高分子および共重合体）；縣濁および／または増粘剤（アカシア、寒天、アルギニン酸、ステアリン酸アルミニウム、ベントナイト、精製ベントナイト、マグマベントナイト、カルボマー９３４ｐ、カルボキシメチルセルロースカルシウム、カルボキシメチルセルロースナトリウム、カルボキシメチルセルロースナトリウム１２、カラギーン、微結晶およびカルボキシメチルセルロースナトリウムセルロース、デキストリン、ゼラチン、グアーガム、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ケイ酸マグネシウムアルミニウム、メチルセルロース、ペクチン、酸化ポリエチレン、ポリビニルアルコール、ポビドン、アルギン酸プロピレングリコール、二酸化ケイ素、コロイド状に酸化ケイ素、アルギン酸ナトリウム、トラガカント、キサンタンガム）；甘味料（アスパラテーム、デキストレート、デキストロース、賦形剤デキストロース、フルクトース、マンニトール、サッカリン、サッカリンカルシウム、サッカリンナトリウム、ソルビトール、スクロース、圧縮糖、菓子糖、シロップ）；を含む。この一覧は、限定的ではないが、賦形剤の単に代表例であり、本発明の経口投与組成物において用いることができる特定の賦形剤である。それぞれの場合を本発明の別々の実施形態で示す。
【０１４９】
他の実施形態において、本発明の組成物の粒子状物質の重量は、油相の重量の３３％以下である。活性成分を含まない複合体キャリアの場合、粒子状物質はナノ粒子および生体高分子から成る。複合体キャリア医薬組成物の場合、粒子状物質は、ナノ粒子、生体高分子、および活性成分から成る。油相の重量は、もしあれば、混合したすべての油成分に対して、油キャリアの重量を、そこに混合した付加的な油およびそこに溶解した物質を加えたものである。他の実施形態において、粒子状物質の重量は、油相の重量の２５％以下である。他の実施形態において、粒子状物質の重量は、油相の重量の２０％以下である。他の実施形態において、粒子状物質の重量は、油相の重量の１５％以下である。他の実施形態において、粒子状物質の重量は、油相の重量の１０％以下である。他の実施形態において、粒子状物質の重量は、油相の重量の８％以下である。他の実施形態において、粒子状物質の重量は、油相の重量の５％以下である。それぞれの場合を本発明の別々の実施形態で示す。
【０１５０】
他の実施形態において、粒子状物質の重量は、組成物の全重量の７５％以下である。他の実施形態において、粒子状物質の重量は、組成物の全重量の５０％以下である。他の実施形態において、粒子状物質の重量は、組成物の全重量の３０％以下である。他の実施形態において、粒子状物質の重量は、組成物の全重量の２５％以下である。他の実施形態において、粒子状物質の重量は、組成物の全重量の２０％以下である。他の実施形態において、粒子状物質の重量は、組成物の全重量の１５％以下である。他の実施形態において、粒子状物質の重量は、組成物の全重量の１０％以下である。他の実施形態において、粒子状物質の重量は、組成物の全重量の８％以下である。他の実施形態において、粒子状物質の重量は、組成物の全重量の６％以下である。他の実施形態において、粒子状物質の重量は、組成物の全重量の５％以下である。それぞれの場合を本発明の別々の実施形態で示す。
【０１５１】
投与方法
他の実施形態において、本発明は、生物学的活性タンパク質またはペプチドを、それらが必要な対象に投与する方法を提供し、その方法は、本発明の医薬組成物を対象に経口で投与する工程を含み、それによって生物学的活性タンパク質またはペプチドを対象に投与する。
【０１５２】
他の実施形態において、生物学的活性タンパク質またはペプチドはＤＮａｓｅである。他の実施形態において、生物学的活性タンパク質またはペプチドは、ＲＮａｓｅである。他の実施形態において、生物学的活性タンパク質またはペプチドは、カルシトニンである。他の実施形態において、生物学的活性タンパク質またはペプチドは、赤血球生成促進因子である。他の実施形態において、生物学的活性タンパク質またはペプチドは、カルシトニン、赤血球生成促進因子、下垂体成長ホルモン、優性阻害腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）タンパク質、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）タンパク質、インターフェロン−α、インターフェロン−βおよびインターフェロン−γから成る群から選択する。他の実施形態において、生物学的活性タンパク質またはペプチド当業者に既知のいずれか他の生物学的活性タンパク質またはペプチドである。それぞれの場合を本発明の別々の実施形態で示す。
【０１５３】
生物学的活性タンパク質またはペプチドの大きさ、特性、分類は本願明細書で説明したいずれかのものであることができる。それぞれの場合を本発明の別々の実施形態で示す。
【０１５４】
製剤方法
他の実施形態において、本発明は、複合体キャリア組成物の製造方法を提供し、その方法は、（ａ）疎水性表面を有するナノ粒子を乾燥混合する工程であって、ナノ粒子の大きさは、多糖を有する生体高分子で、１〜１００ナノメートルであり、ナノ粒子は生体高分と親和性非共有結合を形成する工程と、（ｂ）油中でナノ粒子および生体高分子を混合する工程とを含む。好ましくは、ナノ粒子および生体高分子は複合体を形成する。他の実施形態において、複合体を油中に組み込み、分散、浸入または縣濁させる。他の実施形態において、複合体キャリア組成物の粒径は、１００〜５０００００ナノメートルである。他の実施形態において、複合体キャリア組成物の粒径は１００〜５００００ナノメートルである。他の実施形態において、粒径は１００〜５０００ｎｍである。それぞれの場合を本発明の別々の実施形態で示す。本発明の製剤方法は、付加的な化合物が工程（ａ）において存在する実施形態を示す。他の実施形態において、１個以上の種類の生体高分子がナノ粒子と共に存在する。他の実施形態において、分岐多糖および食物繊維がナノ粒子と共に存在する。他の実施形態において、分岐多糖および直鎖多糖がナノ粒子と共に存在する。他の実施形態において、分岐生体高分子、直鎖多糖、および不溶繊維がナノ粒子と共に存在する。
【０１５５】
他の実施形態において、複合体キャリア組成物の製造方法は、疎水性表面を有するシリカナノ粒子ならびに、多糖および高分子量の構造タンパク質を有する生体高分子を油中で混合する工程を含み、ナノ粒子は、生体高分子と親和性非共有的に結合する。
【０１５６】
他の実施形態において、本発明は、複合体キャリア組成物の製造方法を提供し、この方法は、（ａ）疎水性表面を有する薬学的不活性なナノ粒子を乾燥混合する工程であって、ナノ粒子の大きさは、多糖を有する生体高分子で１〜１００ナノメートルであり、ナノ粒子は生体高分と親和性非共有結合を形成する工程と、（ｂ）生物学的活性タンパク質またはペプチドを油中に溶解させる工程と、（ｃ）ナノ粒子および生体高分子の親和混合物を油中で混合する工程であって、ナノ粒子、生体高分子、およびタンパク質またはペプチドを油中に組み込み、分散、浸入または縣濁する工程とを有する。好ましくは、ナノ粒子、生体高分子およびタンパク質またはペプチドは複合体を形成する。他の実施形態において、生物学的活性タンパク質またはペプチドは、ナノ粒子の疎水性表面および生体高分子の親水性表面に非共有結合力を介して結合する。他の実施形態において、複合体キャリア組成物の粒径は、１００〜５００００ナノメートルである。他の実施形態において、複合体キャリア組成物の粒径は１００〜５０００ナノメートルである。それぞれの場合を本発明の別々の実施形態で示す。
【０１５７】
他の実施形態において、上述の方法の工程（ｂ）は、油または油の混合物内に親液化タンパク質またはペプチドを直接溶解させる工程を有する。他の実施形態において、生物学的活性タンパク質またはペプチドの溶液は、油または油の混合物と混合し、その後水相を除去する。それぞれの場合を本発明の別々の実施形態で示す。
【０１５８】
他の実施形態において、生物学的活性タンパク質またはペプチドは、油または油の混合物と混合して縣濁液を形成する。他の実施形態において、生物学的活性タンパク質またはペプチドは油または油の混合物内に溶解する。本願明細書で説明するように、Ｃｏｐａｘｏｎｅ等の油内で低い溶解度を有することが期待される帯電タンパク質またはペプチドを、本発明の油含有複合体組成物内に混合することができる。いずれか活性の理論または機構に縛られることなく、これは、本発明の組成物の固相上のペプチドの吸着の結果であることができる。吸着は、各非共有結合力を介して、ナノ粒子表面とペプチドの疎水領域の相互作用によって媒介される一方、ペプチドの親水領域は、多糖の親水領域と相互作用する。他の実施形態において、タンパク質またはペプチドは、アルコールの存在下で油と混合する。他の実施形態において、ポリエチレングリコールは、２００〜８０００ダルトン範囲の分子量を有する。他の実施形態において、タンパク質またはペプチドは、ペルフルオロカーボンの存在下で油と混合する。他の実施形態において、ペルフルオロカーボンは室温で液体である。それぞれの場合を本発明の別々の実施形態で示す。
【０１５９】
他の実施形態において、タンパク質またはペプチドは、無水条件下で油と混合する。他の実施形態において、水分が存在する。他の実施形態において、タンパク質またはペプチドの水溶液を油と混合する。それぞれの場合を本発明の別々の実施形態で示す。
【０１６０】
上述の方法の、ナノ粒子、生体高分子、および生物学的活性タンパク質またはペプチドの特性および分類を本願明細書で説明するもののいずれかであることができる。それぞれの可能性を本発明の別々の実施形態で示す。本発明の方法において示す「油」は、単一の油、油の混合物、または油相を示すことができる。本願明細書で説明するように、油の混合物または油相は、概して１個の油キャリアを有する。他の実施形態において、油の混合物または油相は、さらに、付加的な（複数の）油または付加的な（複数の）成分を含む。それぞれの場合を本発明の別々の実施形態で示す。
【０１６１】
他の実施形態において、本発明の製剤方法の工程（ａ）は、さらに、ナノ粒子および生体高分子が適度に均一になるように確認する工程を含む。他の実施形態において、以下の３個の試験のいずれかを利用する：（ａ）混合物が均一に見える；（ｂ）混合物の体積が２成分の合計体積より小さい；（ｃ）混合物を水の静止した面においたとき沈まない。それぞれの場合を本発明の別々の実施形態で示す。
【０１６２】
乾燥混合の工程は、他の実施形態において、高いせん断力の混合器を用いて行う。他の実施形態において、混合の工程は、高速混合器を用いて行う。他の実施形態において、混合の工程は、ナノ粒子および生体高分子から均一な固相を生成するのに適切ないずれか他の方法を用いて行う。それぞれの場合を本発明の別々の実施形態で示す。
【０１６３】
他の実施形態において、本発明の製剤方法はさらに、最初に加えた油または油の混合物を加えた後に、付加的な油を加える工程を含む。用語「付加的な油」は、本願明細書の他の部分で示すように、油または油の混合物である。他の実施形態において、付加的な油成分は抗酸化物質を含む。それぞれの場合を本発明の別々の実施形態で示す。
【０１６４】
他の実施形態において、生物学的活性タンパク質またはペプチドを、最初に加えた油または油の混合物の代わりに、付加的な油または油の混合物内で含む。
【０１６５】
他の実施形態において、付加的な油、油または油の混合物は、最初に加えた油または油の混合物よりも高い粘度を有する。他の実施形態において、作用の理論または機構のいずれかに縛られることなく、より高い粘度の油または油の混合物をこの段階で用いると、組成物内で秩序だった構造の形成が可能になる。
【０１６６】
他の実施形態において、本発明の方法はさらに、上述の付加的な油または油の混合物を加えた後に、第３油または油の混合物を加える工程を含む。他の実施形態において、第３油成分は抗酸化物質を含む。それぞれの場合を本発明の別々の実施形態で示す。
【０１６７】
他の実施形態において、本発明の製剤方法はさらに、最初に加えた油または油の混合物を加えた後に、製剤可能なワックスを加える工程を有する。他の実施形態において、ワックスは、蜜ろうと類似の特性を有する物質である。他の実施形態において、ワックスルは、以下の特性を有する物質であり：（ａ）通常の室温でプラスチック性（可鍛性）；（ｂ）約４５℃（１１３°Ｆ）以上の融解温度を有する；（ｃ）典型的なプラスチックと比較して融解したとき低い粘度を有する；（ｄ）水に不溶である；（ｅ）疎水性である。特定の好ましい実施形態において、ワックスは蜜ろうである。他の実施形態において、ワックスは複合体キャリア組成物を安定化する。他の実施形態において、ワックスの含有物は、複合体キャリア組成物を含むタブレットを形成できる。それぞれの場合を本発明の別々の実施形態で示す。
【０１６８】
他の実施形態において、ワックスを本発明の方法の一部として加熱する。他の実施形態において、ワックスは粉砕する。他の実施形態において、ワックスを加熱および粉砕する。他の実施形態において、加熱および／または粉砕を、他の成分と混合する前に行う。他の実施形態において、ワックスは、他の成分との混合が開始しても熱いままである。他の実施形態において、加熱および／粉砕は、他の成分との混合の間に行う。他の実施形態において、加熱および／または粉砕は、他の成分との混合の前および間に行う。それぞれの場合を本発明の別々の実施形態で示す。
【０１６９】
他の実施形態において、高い浸透性の油キャリアを、外側油または油の混合物内で含む。他の実施形態において、高い浸透性の油キャリアは、血液中への物質の効果的な輸送を促進する。それぞれの場合を本発明の別々の実施形態で示す。
【０１７０】
他の実施形態において、本発明の製剤方法は、さらに、油または油の混合物内にアミノ酸を含有させる工程を含む。他の実施形態において、アミノ酸を最後に加えた油または油の混合物内に含む。他の実施形態において、アミノ酸は帯電アミノ酸である。他の実施形態において、アミノ酸を、アルギニン酸塩、リジン、およびそれらの誘導体から成る群から選択する。他の実施形態において、抗酸化物質、強化剤、または補因子を含む。それぞれの場合を本発明の別々の実施形態で示す。
【０１７１】
本願明細書で示すように、方法は、経口投与の形態における様々な生物学的活性タンパク質またはペプチドを製剤するために開発する。特定の好ましい実施形態において、成分は、特定の順番で混合して、胃内の消化過程から活性成分を保護する複合体キャリア組成物の縣濁液を製造する。作用の理論または機構のいずれに縛られることなく、生体高分子、とくに分岐している生体高分子は、消化の間に経験する水圧および物理的圧力を吸収する。油コーティングは、消化酵素に対して付加的な保護を与える物理的障壁を構成する。
【０１７２】
作用の理論または機構のいずれに縛られることなく、胆汁酸の分泌は、小さい粒子内に油の縣濁液を分散させ、これが小腸内で吸収できる。ナノ粒子の大きさは、本発明の複合体キャリアの独特の構造のために、油内で固相の分散の程度に影響を与える。粒径は、胃を通過し小腸に入った後に小さくなると同時に、粒子は３０〜１０００ｎｍの範囲の大きさを維持し、これはリパーゼおよびペプチダーゼに対する基質では大きすぎ、組成物の保護効果を妨げる。特定の好ましい実施形態において、粒子は、胃を通過し小腸に入った後３０〜７００ｎｍの範囲の大きさを維持する（図２）。有利には、この大きさの脂質コーティング粒子は、小腸の絨毛を起源とするリンパ管である、乳糜血管によるカイロミクロンと類似の方法で吸収できる。この方法で吸収された粒子は、初回通過代謝を経ることなく血流に到達し、活性剤の生物学的活性を大きく維持する。
【０１７３】
以下の式および情報は、本発明を実践するために当業者への手引きを提供する。
【０１７４】
ナノ粒子および生体高分子の相対量は、以下の数式に従って計算する。
0005432183.tif 000008
−上式のＶＩＳＦおよびＶＩＩＳＦは、それぞれナノ粒子および生体高分子の体積である。ＥｂＩＳＦは、ナノ粒子の分子結合エネルギーである（概して３ｅＶ以上）。ＥｂＩＩＳＦは、生体高分子における最低分子または水素結合エネルギーである。
【０１７５】
いずれかのタンパク質またはペプチドに対する複合体キャリアは以下の原理を用いて設計することができる。
１．最終製剤における活性剤の必要な濃度は経験則、薬物動態学および薬力学に基づくものである。
２．上記に基づいて、活性物質のモル濃度ならびに、ナノ粒子および生体高分子の全表面積を推定する。
３．活性物質の吸着面積を、活性物質の分子量および３次元構造に基づいて推定する。球形分子の場合、吸着面積は分子の球表面の３０〜４０％である。細長い分子の場合、吸着面積は、分子の長さおよび、最も広い分子の、分子分岐の幅を有する単一の縞の面積と同じであると推定する。他の分子は両方の形状の組み合わせで推定する。
４．保護油相の厚さを、活性分子の３次元構造を基づいて推定する。球形分子の直径または、細長い分子の最大分枝の大きさの、少なくとも１０倍である。本発明の複合体キャリアの油コーティングの厚さを、油または油の混合物の以下の特性によって規定する：（ａ）粘度および融解温度；（ｂ）酸度；および（ｃ）極性基の濃度である。
５．本発明の複合体キャリアの形成に必要なナノ粒子の推定面積を計算する。この面積は、工程３において規定した活性物質の推定吸着面積の少なくとも１０倍である。
６．本発明の複合体キャリアの形成に必要な生体高分子の推定面積を計算する。この面積は、工程５において規定したナノ粒子の少なくとも１０倍である。
７．活性分子を加える第１油を選択し、好ましくは、比較的低い粘性および低い濃度の極性基を有する油である。適切な例は、月見草油、ゴマ油、およびシリコンオイルである。
８．両固相をこの油内に注入し、生体高分子の表面上にナノ粒子を吸着させる。これは、保護油相の完全性を維持する。
９．第２油成分を加える。第２油は、その粘度に基づいて選択し、複合体キャリアから活性分子の放出が所定の割合で比例する。
１０．第２油成分を加えて、活性分子とその標的物との間の相互作用を改善して、さらに消化から活性分子を保護する。例えば、クロウメモドキ油は十分な量の抗酸化物質、ビタミンEおよびβ−カロチンを含み、活性分子を活性ラジカルおよび酸化から保護する。
【０１７６】
本発明の原理を以下の非限定的な実施例を用いて実践する。
【実施例】
【０１７７】
実施例１：中時間放出型ＤＮａｓｅ複合体キャリア組成物
以下の製剤（ＤＮａｓｅ製剤Ｉ）を中時間型ＤＮａｓｅ放出として設計した：
３０ｍＬのホホバ油および１２０ｍＬのクロウメモドキ（Oblepicha）油をビーカー内に入れ、２分間１００ｒｐｍで、磁性撹拌子で撹拌した。７グラム（ｇ）のＤＮａｓｅを油混合物内に入れ２０ｒｐｍで２分間、その後５０ｒｐｍで５分間撹拌した。１８ｇの米多糖（Ambrotose（商標）, Mannatech Inc, Coppell, TX 75019, USA）を、分析計を用いて重量を測定し、３ｍｇのヒューム疎水性シリカＲ９７２（Degussa Inc）を加え、９００ｒｐｍで、５分間渦で混合した。Ambrotose（商標）およびシリカの間の結合を、水を充填したビーカーの表面においた後の、混合物の浮力によって規定した。Ambrotose（商標）／シリカ混合物を、油−ＤＮａｓｅ溶液に加え、１５分間５０ｒｐｍで撹拌した。７５ｍＬのオリーブオイルを加え、混合物を５０ｒｐｍで３分間撹拌した。体積をゴマ油で３００ｍＬに合わせて、混合物を５０ｒｐｍで２０分間撹拌した。その生成物を冷蔵庫で保管した（３〜８℃）。
【０１７８】
いくつかの実験において、生成物は、Shionogi and Company, Ltd, Japanから購入可能なゼラチン腸溶性カプセル等のゼラチン腸溶性カプセルに入れる。
【０１７９】
さらなる実験において、ビタミンＥを、複合体をコートするのに用いた油のいずれか一つに含む。
【０１８０】
実施例２：遅時間放出ＤＮａｓｅ複合体キャリア組成物
以下の製剤（ＤＮａｓｅ製剤ＩＩ）を長時間放出として設計した：
６０ｍＬのホホバ油および１２０ｍＬのクロウメモドキ（Oblepicha）油をビーカー内に入れ、２分間１００ｒｐｍで磁性撹拌子で撹拌した。６ｇのＤＮａｓｅを油混合物内に入れ２０ｒｐｍで２分間、その後５０ｒｐｍで５分間撹拌した。３ｇの米多糖（Benefiber（商標）（Novartis Nutrition GmbH, Germany）および１．２ｇの疎水性ヒュームドシリカＲ９７２（Degussa Inc）を、ボルテックスによって９００ｒｐｍで５分間混合した。Benefiber（商標）およびシリカの結合を、水を充填したビーカーの表面上においた後に、混合物の浮力によって規定した。次いでBenefiber（商標）／シリカ混合物を、油−ＤＮａｓｅ溶液に加え、２５分間５０ｒｐｍで撹拌した。７５ｍＬのオリーブオイルを加え、混合物を５０ｒｐｍで３分間撹拌した。容量をゴマ油で３００ｍＬとし、混合物を５０ｒｐｍで２０分間撹拌した。生成物を冷蔵庫で保管した（３〜８℃）。
【０１８１】
いくつかの実験において、生成物をゼラチン腸溶性カプセル等のゼラチン腸溶性カプセル内に入れる。
【０１８２】
実施例３：マウスにおけるＮａｓｅ複合体キャリア組成物の生体内放出特性
実験方法：
ヒト血清におけるＤＮａｓｅ活性を、感度単一酵素放射状拡散（ＳＲＥＤ）分析を用いて分析した。デオキシリボ核酸Ｉの単一酵素放射状拡散（ＥＲＳＤ）分析方法において、酵素溶液の正確に測定した体積は、ＤＮＡおよび臭化エチジウムが均一に分散するアガロースゲル相内の円状ウェル内に分散する。円状の暗いゾーンは、酵素がウェルからゲル内に放射状に拡散し基質ＤＮＡを消化するように形成する。加水分解したDNAの暗いゾーンの直径は、時間とともに大きくなり、ウェルに入る酵素の量に直線的に相互関連する。この分析方法は、３０分以内で１μＬの血清サンプル内のピコグラムからフェムトグラムの量のＤＮａｓｅＩを規定することができる。分析した酵素の一単位は、精製ヒトＤＮａｓｅＩの０．６ｎｇに対して分析した。用いた実験条件は、Nadano D, et al.,Clinical Chemistry 39: 448-452, 1993において説明されたものに従った。図３Ｂにおいて示した実験結果は、ＳＲＥＤ方法を用いて得た。マウス血清におけるＤＮａｓｅ活性は、図３Ａにおいてその結果を示し、Ｓａｍｓｏｎ−Ｍｅｄ  Ｂｉｏ−Ａｓｓａｙを用いて測定した。
【０１８３】
表１におけるデータは、ＤＮＡ濃度を測定するバートンの方法を用いて得た：標準ＤＮＡ溶液（Sigma Cat. No-1626）を、１０ｍｍｏｌ／LのＭｇＣｌ２で、ｐＨ８．０、トリス塩酸緩衝液１０ｍｍｏｌ／L内に５，１０，２０および５０μｇ／ｍＬに希釈し、ジフェニルアミン方法を用いて標準曲線を得た（Burton K, Determination of DNA concentration with diphenylamine (DPA) In Methods in Enzymology ed. Grossman, L. & Moldave, K. Vol. XIIB, pp. 163-166. New York: Academic Press. 1968）。ヒト血清におけるＤＮＡ量を、以下のように規定した：２００μLの血漿サンプルを２００μLの１Ｎ  ＨＣｌＯ４および６００μLのＤＰＡと混合した。サンプルを３７℃で２０時間培養し、その後１０分間遠心分離した（１５０００ｇ，２５℃）。３００μLの浮遊物を９６ウェルプレートに移しサンプルの６００ｎｍでの吸光度を測定した。
【０１８４】
結果
本発明の短時間放出ＤＮａｓｅ組成物（経口Ｏｓｈａｄｉ  ＤＮａｓｅとも呼ぶ）、注射ＤＮａｓｅおよび経口投与ＤＮａｓｅの生体外ＤＮａｓｅ活性を比較した。経口Ｏｓｈａｄｉ  ＤＮａｓｅの最初のＤＮａｓｅの活性の５０％を１２時間後も維持したが、注射ＤＮａｓｅおよび経口投与ＤＮａｓｅはともに６時間しか活性を検出しなかった（図３Ａ）。
【０１８５】
他の実施例において、７５ｍｇの上述の中時間ＤＮａｓｅ複合体キャリア経口組成物をヒト対象に投与し、血清ＤＮａｓｅ活性を測定した。強力な活性をすべての対象において投与後４，８，および１２時間後に観察した（図３B）。
【０１８６】
他の実施例において、２０ｍｇ／日の上述の中時間ＤＮａｓｅ複合体キャリア組成物を経口的に４人のヒト対象に１週間投与し、血清内自由のＤＮＡ濃度をそれぞれの対象に対して測定した。すべての対象は、血清において自由ＤＮＡ濃度の減少を示した（表１）。
【０１８７】
【表１】
0005432183.tif 000009
【０１８８】
上述の実施例は、本発明の複合体組成物の放出速度が、所望の、対象の必要量および治療剤に従って容易に制御できることを示す。
【０１８９】
実施例４：ＲＮａｓｅ複合体キャリア組成物の調製（ＲＮａｓｅ製剤Ｉ）
１２ｇのAmbrotose（商標）米多糖を分析計で測量し、４ｇの疎水性シリカＲ９７２を入れ、ボルテックスによって９００ｒｐｍで５分間混合した。Ambrotose（商標）およびシリカの結合を、水を充填したビーカーの表面においた後に、混合物の浮力によって規定した。１２０ｍＬのアマニ油および６０ｍＬのクロウメモドキ（Oblepicha）油をビーカー内に入れ、２分間１００ｒｐｍで磁性撹拌子を用いて撹拌した。８ｇのＲＮａｓｅを分析計で測量し、油の混合物中で２０ｒｐｍで１分間、その後５０ｒｐｍで３分間撹拌した。Ambrotose（商標）／シリカ混合物を、油−ＲＮａｓｅ溶液に加え、２０分間５０ｒｐｍで撹拌した。６０ｍＬのオリーブオイルを加え、混合物を５０ｒｐｍで４分間撹拌した。“Ｐｌｕｓ”Ｄｒｉｅｄ  Ａｍｉｎｏ  Ａｃｉｄｓ（L-Glutamic Acid, Glycine, L-Lysine, L- Arginine; from Mannatech Inc, Coppell, TX 75019, USA）の10錠を粉砕し、ふるいにかけて破片を除去し、その後混合物内に入れて２０ｒｐｍで３０分間撹拌した。容量をゴマ油で４００ｍＬとし、混合物を５０ｒｐｍで５分間撹拌した。生成物を冷蔵庫で保管した（３〜８℃）。
【０１９０】
いくつかの実験において、生成物をゼラチン腸溶性カプセル等のゼラチン腸溶性カプセル内に入れる。
【０１９１】
実施例５：ＲＮａｓｅ複合体キャリア組成物の生体内放出特性
ＲＮａｓｅ活性を、以下のようにＳａｍｓｏｎ−Ｍｅｄ  Ｂｉｏ−Ａｓｓａｙを用いて測定した：３０μＬの血清を１０分間１ｍｇの酵母ＲＮＡと共に培養した。ＲＮＡ濃度の減少を観察し光度的に測定した。
【０１９２】
結果
投与したＲＮａｓｅ複合体キャリア組成物（製剤ＩＩＩ−実施例４）（経口Ｏｓｈａｄｉ  ＲＮａｓｅとも呼ぶ）、注射ＲＮａｓｅおよび経口投与ＲＮａｓｅ（対照）の生体内ＲＮａｓｅ活性を比較した。ＲＮａｓｅ活性を、ＲＮａｓｅ投与後３，６，および１７時間後に測定した。製剤は全試験時間（１７時間）ＲＮａｓｅ活性を与え、注射ＲＮａｓｅの活性は６時間後で元のＲＮａｓｅ濃度に到達した。加えて、最大ＲＮａｓｅ活性は、ＲＮａｓｅ複合体キャリア組成物において注射ＲＮａｓｅよりも３倍高くなった。経口投与ＲＮａｓｅは検出可能な活性を全く示さなかった（図４）。
【０１９３】
実施例６：インスリン複合体キャリア組成物の調製
Actrapid（商標）複合体キャリア組成物（製剤Ｖ）を以下の成分を用いて生成した：
−オリーブオイル、１１ｍＬ
−Benefiber（商標）、３ｇ
−インスリンActrapid（商標）、９ｍＬ
−oblepicha油、９ｍＬ
−疎水性シリカＲ９７２、１．２ｇ
−ゴマ油、最大７５ｍＬ
Benefiber（商標）（Novartis Nutrition GmbH, Germany）およびシリカを、ビーカー内に入れ、ボルテックスによって９００ｒｐｍで５分間混合した。Benefiber（商標）およびシリカの結合を、水を充填したビーカーの表面においた後に、混合物の浮力によって規定した。Actrapid（商標）インスリンを加えて１５分間５０ｒｐｍで撹拌した。ゴマ油およびクロウメモドキ（oblepicha）油をビーカー内に入れ、１５分間低速度でボルテックスにおいた。オリーブオイルをその油に加えガラス棒で撹拌した。固相混合物および油混合物を入れて１００ｒｐｍで磁性撹拌子を用いて混合した。体積をゴマ油で７５ｍＬとし、ガラス棒で撹拌した。動物実験において、この組成物をチューブによって投与した。生成物は１２ＩＵ／ｍＬのインスリンを含み、ゼラチン腸溶性カプセル内に入れた。
【０１９４】
さらなるインスリン複合体キャリア組成物（製剤ＶＩ）をNovoRapid（商標）インスリンを用いて上述の手順で調製した。このとき、Actrapid（商標）インスリンの代わりにNovoRapid（商標）インスリンを用いた。
【０１９５】
以下の成分を用いたさらなるActrapid （商標）製剤（製剤ＩＩ）を短時間インスリン放出として設計した：
−インスリンActrapid（商標）、１ｍＬ
−オリーブオイル、１．５ｍＬ
−Ambrotose（商標）、０．７ｇ
−シリカＲ９７２、０．１ｇ
−oblepicha油、１．５ｍＬ
−月見草油、最大５ｍＬ
０．７ｇの米多糖（Ambrotose（商標） ,Mannatech Inc, Coppell, TX 75019, USA）０．１ｇと疎水性ヒュームドシリカＲ９７２（Degussa Inc）を入れ、ボルテックスによって９００ｒｐｍで５分間混合した。Ambrotose（商標）およびシリカの結合を、水を充填したビーカーの表面においた後に、混合物の浮力によって規定した。１ｍＬのActrapid（商標）インスリンを加え２分間１００ｒｐｍで磁性撹拌子を用いて撹拌した。クロウメモドキ（Oblepicha）油を加え、２分間１００ｒｐｍで磁性撹拌子を用いて撹拌した。体積を月見草油で５ｍＬとし、５０ｒｐｍで２０分間撹拌した。生成物を冷蔵庫で保管した（３〜８℃）。それぞれの調製において、成分の量を２倍とし異なる結果とした。
【０１９６】
最終インスリン濃度は２０ＩＵ／ｍＬであった。ヒト投与のために、生成物をゼラチン腸溶性カプセル内に入れた。
【０１９７】
さらなるインスリン複合体キャリア組成物（製剤ＩＶ）を、ＢＩＯＣＯＮインスリンを用いて、以下の手順で調製し、成分を表２において示し、前の実施例に記載したものと類似した方法を用いた。組成物の光顕微鏡画像を図５Ａに示す。
１．oblepicha油＋オリーブ油＋１／３のゴマ油を混合
２．Insugen（商標）インスリン粉末（ＢＩＯＣＯＮ）を油の混合物内に加え、混合
３．線維＋キチン＋アミロペクチン＋シリカを混合
４．工程３の混合物を、油の混合物および工程２のインスリンに加え、混合
５．残りのゴマ油を加え、混合
【０１９８】
【表２】
0005432183.tif 000010
【０１９９】
実施例７：糖尿病マウスにおける本発明の経口インスリン組成物の効能
材料および実験方法
糖尿病を、体重２３〜２８ｇｒのオス成熟ＢＡＬＢ／ｃマウス（７〜１０週齢）においてストレプトゾトシンによって誘発した。対照マウスは週齢および体重を一致させた。
【０２００】
ストレプトゾトシン（ＳＴＺ）−誘発糖尿病処理：糖尿病を、１．５ｍｇ／ｍＬのストレプトゾトシンを５００および７００μＬの２回、４８時間おいて注射することによって、平均体重２３〜２８ｇｒのオス成熟ＢＡＬＢ／ｃマウス（７〜１０週齢）において誘発した。ほぼ同じ週齢および体重の未処理マウスを対照として用いた。血中グルコース濃度（ＢＧＬ）を、ＳＴＺ注射後４８時間で尾静脈サンプルから、標準FreeStyle（商標）グルコメーター (Abbot Diabetes Cere Inc, Alameda, CA)によって測定した。
【０２０１】
食物または水を前もって剥奪することなく、インスリン組成物をチューブでマウスに経口的に投与した（１ｍＬ）。実験の間マウスに食物および水を通常のように与えた。
【０２０２】
組成物：第１実験は、実施例６において説明した製剤ＶおよびＶＩを用いた。第２実験は、実施例６において説明した製剤ＩＶを用いた。
【０２０３】
血中インスリン濃度：血中インスリン濃度をＥＬＩＳＡ（Human Insulin ELISA kit, Linco）によって検出した。
【０２０４】
処理群
１．対照群１：ＳＴＺ処理なし、インスリン投与なし
２．対照群２：ＳＴＺ処理なし、本発明のインスリン組成物のチューブによる経口投与
３．対照群３：ＳＴＺ処理、インスリン投与なし
４．糖尿病（ＳＴＺ処理）マウス：ＳＣ注射によるインスリン投与
５．糖尿病（ＳＴＺ処理）マウス：インスリンをチューブによって投与
６．糖尿病（ＳＴＺ処理）マウス：インスリンを、本発明のインスリン組成物を使用してチューブによって経口投与
７．糖尿病（ＳＴＺ処理）マウス：チューブによって複合体キャリア（インスリンなし）投与、対照
【０２０５】
結果
第１実験において、糖尿病をストレプトゾトシン（ＳＴＺ）によってオス成熟ＢＡＬＢ／ｃマウスにおいて誘発し、その後、本発明のインスリン組成物（製剤ＶおよびＶＩ）に基づくActrapid（商標）−（１２ＩＵ）およびNovoRapid（商標）−（９．５ＩＵ）を投与した。両組成物は血中グルコース濃度を大きく低減した（それぞれ、図５Ｂおよび６）。逆に、何も含まない複合体キャリア組成体（インスリン含まない）を与えたＳＴＺ−処理マウス、Actrapid（商標）もしくはNovoRapid（商標）インスリンを経口投与したＳＴＺ−処理マウス、または、ＰＢＳ中に２５ＩＵインスリン（ＢＩＯＣＯＮ）を与えられた（チューブ）ＳＴＺ−処理マウス（図７）は、血中グルコース濃度の大きな減少を示さなかった。インスリン組成物を与えられた正常マウス（ＳＴＺ処理していない）は、血中グルコース濃度において大きな減少は見られなかった。逆に、インスリンを注射した正常および糖尿病マウスは、低血糖症を示し、いくつかの場合には死に至った。
【０２０６】
第２実験において、本発明のインスリン組成物（製剤ＩＶ）をＳＴＺ−処理マウスにチューブ（体積１ｍＬ）で、２〜１０ＩＵの範囲の投与量で経口投与した。血中グルコース濃度における投与量に対する減少を９〜１２時間観察したが、濃度は１００ｍｇ／ｄＬ以下にはほとんど落ちなかった（図８Ａ−Ｄ）。インスリン複合体キャリア組成物の投与後の血中におけるヒトインスリンの存在を、ＥＬＩＳＡによって確認した。逆に、１０ＩＵインスリンの皮下注射は、致死に近い低血糖症を引き起こした（図８Ｅ）。２，５または１０ＩＵのインスリン複合体キャリア組成物を与えた正常マウスは、血中グルコース濃度がわずかな減少のみを示したが（図８Ｆ）、インスリンを与えたマウスは、グルコース濃度が急激に場合によっては致命的に落ちる。前述同様に、何も含まない複合体キャリア組成物（インスリンを含まない）を与えたＳＴＺ処理マウス、インスリンを経口投与したＳＴＺ処理マウス、または未処理のままであるＳＴＺ処理マウスは、血中グルコース濃度の減少をはっきり示さなかった。
【０２０７】
他の実施形態において、１４〜２５ｇのマウスにおける、１０，５または２ＩＵのインスリン複合体キャリア組成物（製剤ＩＶ）対、同量のインスリン溶液（標準製剤）の直接的な比較によって、本発明の経口インスリン組成物で処理したマウスがインスリン注射したマウスと比較して、長時間正常のグルコース濃度を維持したことを示した。これらの観察は、本発明の複合体キャリア組成物内に投与したときインスリンの生物学的利用能の増加に影響を反映した。加えて、複合体キャリア組成物を投与したマウスは、全く低血糖を示さなかったが、注射したマウスは、重度の低血糖症を示した（それぞれ１０，５および２ＩＵに対して図８Ｇ，Ｈ，Ｉ）
【０２０８】
注射したインスリンと比較して、本発明の組成物を用いる経口投与したインスリンの生物学的利用能の増加は、「有効面積」を計算することによってわかることができる。「有効面積」は、規定した時間に沿って、基本濃度に対する血中グルコース濃度（ＢＧＬ）における純変化の合計として規定し、以下のように計算する：
１．各時点に対するＢＧＬの平均基準値を得る
２．各時点に対して、平均基準値から処理群（本発明の経口インスリン組成物および注射インスリン）におけるＢＧＬを差し引く
３．すべての時点に対して工程２において得られた値を足す
【０２０９】
表３における値を得るために、異なる処理をした「有効面積」をその後減算または割算する。
【０２１０】
【表３】
0005432183.tif 000011
【０２１１】
表３において示すように、注射インスリンに対する比較的低い１０ＩＵ／５ＩＵおよび１０ＩＵ／２ＩＵの比は、これらの投与量がマウスに対して飽和投与量に近いことを示す。逆に、インスリン複合体キャリア組成物に対する比較的高い比は、飽和投与量から離れていることを示す。したがって、本発明の複合体キャリア組成物は、標準的な注射したインスリン製剤と比較して、それらの治療範囲内の正確な投与量により影響を受けやすい。
【０２１２】
次に、本発明の経口インスリン組成物の効果を、２人のヒト対象、１人は健康および、１人は糖尿病の方で試験した。３０ＩＵのActrapid（商標）複合体キャリア組成物（製剤ＩＩ）は、健康な対象において６時間のテスト時間で、１０５から８０〜９０ｍｇ／ｄＬまで血中グルコース濃度を減少させた。この対象は、通常ではない程度の空腹を示したが、副作用を全く示さなかった。逆に、健康な対象にインスリンを注射で投与すると、低血糖を引き起こし、いくつかの場合には重症となり、副作用も同時に示すことが知られている。
【０２１３】
１０ＩＵの製剤Ｖを、未処理のとき１７０以上、Gluco-Rite（商標）.を与えたとき１３０〜１７０のグルコース濃度を示す、Ｉ／ＩＩ型の糖尿病を有する６７歳以上の対象に、１４日間１日３回投与した。製剤Ｖを摂取すると、血中グルコース濃度は平均約１３０まで落ちた。対象は、本発明の経口インスリン組成物を与えられている間中体調が良いと報告した。対象は、必要があれば組成物を、必要に応じ、１日３〜４回摂取し続け、その結果、副作用が全くなしにグルコース濃度を十分にコントロールできた。逆に、対象は、多くの異なる注射インスリン製剤を接種後、長年の不安および心配の深刻な感覚を有した。
【０２１４】
インスリン組成物の投与後、糖尿病の対象の血中におけるインスリン濃度の上昇の存在を、ＥＬＩＳＡによって確認した。したがって、本発明の複合体キャリア組成物は、糖尿病を効果的に治療できる生物学的活性な形態において、様々な形態でインスリンを経口送達することができる。それらは糖尿病または正常な対象のいずれかにおいて、低血糖症を示すことがないという更なる利点を有する。
【０２１５】
実施例８：インスリン組成物の長期経口投与の毒性研究
材料および実験方法
１５匹の１０週齢のＢａｌｂ／Ｃオスマウスを用いた。マウスに、毎日１ｍＬのインスリン複合体キャリア組成物（２５ＩＵ／ｍＬ）（実験群）または、ＰＢＳ（チューブ対照群）をチューブを介して１５日間投与した。１４日目および１５日目に、マウスに、インスリン複合体キャリア組成物またはＰＢＳと一緒に、１００ｎｇのリポ多糖体（ＬＰＳ）を経口投与した。陰性対照マウスに、１３日間チューブによって１ｍＬのＰＢＳを投与し、１４日目および１５日目に、１ｍＬのＰＢＳ内１００ｎｇのＬＰＳをチューブによって投与した。陽性対照マウスに、１ｍＬのＰＢＳ内１ｍｇＬＰＳを注射した。ＬＰＳ投与して３時間後、マウスを犠牲にして、血液を回収し（ＬＰＳ検出のため）、胃、肝臓および腎臓を組織学的分析のためにパラホルムアルデヒド（ＰＦＡ）４％において固定した。
【０２１６】
補足および巨視的分析：マウスは、３日おきに体重を計測し、その毛の状態を毎日検出した。犠牲にした後、すべての臓器または組織を病変の存在の確認のために調査した。
【０２１７】
内部臓器収集および固定：１５日目に、マウスを犠牲にして、それらの胃、腎臓および肝臓を腹腔から収集し、重量を測定し、１０％のホルマリン溶液において固定した。
【０２１８】
血液収集および血漿調製：血液をマウスの心臓からＥＤＴＡを含むチューブ内に収集した。血漿を血液から遠心分離：最初は１５分間３０００×ｇｍａｘ、その後、１５分間１６０００×ｇｍａｘによって分離した。浮遊物を除去し、新しいチューブに入れ、−２０℃で保管した。
【０２１９】
マウス血清におけるＬＰＳの検出：マウス血清におけるＬＰＣをＨＰＬＣによって検出した。上述の群から１５日目に取った血清を、０．１ＭのＥＤＴＡを加えてＨＰＬＣ分析で調製した。
【０２２０】
結果
本発明の経口インスリン組成物の長期投与の毒性を測定した。病変は動物の行動において観察されなかった。それらの毛は、滑らかで、きれいで明るい正常状態であった。体重減少は全く観察されず、マウスは正常に大きくなった。
【０２２１】
巨視的分析
内部臓器の巨視的分析は、いずれの病変の証拠を全く観察しかった。すべてのマウスの臓器は、正常に発達し、正常の大きさ、形、外見（明るさおよび滑らかさ）、体重であり、正常の色であり、また、正常の位置にあった。巨視的分析は、すべての群におけるマウスの組織における病変の証拠を全く示さなかった（肝臓−図１０Ａ；腎臓−図１０Ｂ；十二指腸−図１０Ｃ）。
【０２２２】
処理および未処理のマウスからの血清も、ＬＰＳの存在で試験した。ＬＰＳは、本発明の経口インスリン組成物＋ＬＰＳを与えたマウスの血清において存在せず（図１１、曲線Ｃ）、１ｍＬのＰＢＳ＋ＬＰＳを与えたマウスの血清においても見られず（図１１、曲線Ｄ）、複合体キャリア組成物またはチューブのいずれもマウスの胃腸内面の健全性を失う。１ｍＬのＰＢＳにおける１ｍｇのＬＰＳを注射したマウスからの血清は、陽性対照として機能し（図１１、曲線Ａ）、未処理のマウスは陰性対照として機能する（図１１、曲線Ｂ）。
【０２２３】
実施例９：赤血球生成促進因子複合体キャリア組成物の調製
赤血球生成促進因子（ＥＰＯ）複合体キャリア組成物を以下の成分を用いて生成した：
EPREX（商標）エポエチンα、１ｍＬ
オリーブオイル、７ｍＬ
Ambrotose（商標）、０．６ｇ
シリカ、０．１ｇ
oblepicha油、８ｍＬ
アマニ油
【０２２４】
その組成物を上述の実施例において説明したように調製した。この組成物の体積をアマニ油で２０ｍＬとした。最終ＥＰＯ濃度は１５０ＩＵ／ｍＬであった。
【０２２５】
実施例１０：赤血球生成促進因子複合体キャリア組成物の生体内放出特性
実施例９からのＥＰＯ複合体キャリア組成物の生体内放出特性をラットにおいて規定した。相対網状赤血球数を、２００ＩＵのＥＰＯを含む複合体組成物を経口投与した後に測定した。ＥＰＯ組成物を実験の１日目および４日目の２回投与した；血液サンプルを１０日目に得た（２投与；５匹のラット）。対照として、ＥＰＯを含まない複合体キャリアを投与した（５匹のラット）。ＥＰＯ複合体キャリアの投与は、網状赤血球製剤を強く刺激した（図１２）。
【０２２６】
実施例１１：赤血球生成促進因子複合体キャリア組成物を投与した正常および貧血ラットにおけるＥＰＯ活性
オスＳＤラットを、腎臓の５／６を除去する腎摘出手術し、腎臓障害モデルとして機能し；対照ラットをそのままとした。実施例９からの１ｍＬのＥＰＯ複合体キャリア組成物を、ラットにチューブによって経口投与し、全部で１５０ＩＵのＥＰＯを投与した。ＥＰＯ濃度をＥＬＩＳＡ（Human EPO Immunoassay by Quantikine（商標） IVD）によって、ＥＰＯ投与後１〜２４時間の様々な時点で測定した。ＥＰＯは、正常および貧血ラットの両方によって効果的に吸収された（図１３）。
【０２２７】
他の実験において、１５０ＩＵのＥＰＯを、１日目および５日目で複合体キャリア組成物をおいて経口投与、または、１日目および５日目に皮下投与した。網状赤血球および血中ヘモグロビンの数を、ＥＰＯ投与後２〜５週間の間に異なる時間に行った。ＥＰＯ複合体キャリア組成物は、注射ＥＰＯと同じ効果であった。代表的な時点からのデータを表４において示す。
【０２２８】
【表４】
0005432183.tif 000012
【０２２９】
実施例１２：成長ホルモン（ＧＨ）複合体キャリア組成物の調製
成長ホルモン（ＧＨ）複合体キャリア組成物を、以下の成分を用いて生成した：
【０２３０】
【表５】
0005432183.tif 000013
【０２３１】
Genotropin（商標）成長ホルモンをPharmacia and Upjohnから、凍結乾燥粉末含有ソマトロピンの形で得て［ｒＤＮＡ源］、それは組み換え型ＤＮＡ起源のポリペプチドホルモンである。それは、１９１アミノ酸残渣および２２１２４ダルトンの分子量を有する。生成物のアミノ酸配列は、下垂体起源の成長ホルモン（ソマトロピン）と一致する。
【０２３２】
実施例１３：中時間型放出ＴＧＦ−β複合体キャリア組成物
以下の製剤を、中時間型ＴＧＦ−β放出のために設計した：３０ｍＬのゴマ油および１２０ｍＬのクロウメモドキ（oblepicha）油をビーカー内に入れ、３分間６０ｒｐｍで磁性撹拌子を用いて撹拌した。２０グラム（ｇ）のＴＧＦ−β（５３ｋＤ）を油混合物内に入れ２０ｒｐｍで４分間、その後６０ｒｐｍで７分間撹拌した。１８ｇのmaizeからのアミロペクチン（Fluka catalog number 22720）を分析計を用いて重長を測定し、３ｍｇの疎水性シリカヒュームドＲ９７２（Degussa Inc）を加え、ボルテックスによって９００ｒｐｍで５分間混合した。アミロペクチンおよびシリカの結合を、水を充填したビーカーの表面においた後、混合物の浮力によって規定した。アミロペクチン／シリカ混合物を、油−ＴＧＦ−β溶液に加え、２５分間４０ｒｐｍで撹拌した。７５ｍＬのオリーブオイルを加え、混合物を５０ｒｐｍで３分間撹拌した。体積をゴマ油で３００ｍＬとし、混合物を５０ｒｐｍで２０分間撹拌した。生成物を冷蔵庫で保管した（３〜８℃）。
【０２３３】
いくつかの実験において、その生成物は、Shionogi and Company, Ltd, Japanから購入可能なゼラチン腸溶性カプセル等のゼラチン腸溶性カプセル内に入れる。
【０２３４】
実施例１４：Copaxone（商標）複合体キャリア組成物の調製
Copaxone（商標）組成物（Copaxone−製剤Ｉ）を、以下の成分を用いて生成した：
−Copaxone粉末、５ｇ
−ホホバ油４０ｍＬ
−オリーブオイル、５０ｍＬ
−α−グルカン、２ｇ
−β−グルカン、２ｇ
−アミロペクチン７ｇ
−シリカＲ９７２、２ｇ
−クロウメモドキ油、８０ｍＬ
−ゴマ油、最大２００ｍＬ
１．αおよびβ−グルカンをアミロペクチンと１０分間混合
２．シリカＲ９７２を加え、１５分間強く混合
３．混合物の質を湿潤によって検査（粉は湿らすことなく水表面に浮くはずである）
４．クロウメモドキ（oblepicha）油およびホホバ油を５分間混合
５．Copaxone粉末をクロウメモドキおよびホホバ油混合物に加える。１５分間円運動を用いて１５分間混合
６．工程２からの混合物を工程５からのCopaxone混合物に加え、２５分間円運動によっておだやかに混合
７．オリーブオイルおよびゴマ油を加え、磁性撹拌子を用いて４０分間撹拌
【０２３５】
次に、付加的なCopaxone（商標）組成物（Copaxone−製剤ＩＩ）を、以下の成分を用いて生成した：
−Copaxone（商標）粉末、５ｇ
−クロウメモドキ油３０ｍＬ
−オリーブオイル、５０ｍＬ
−β−グルカン、４ｇ
−アミロペクチン７ｇ
−シリカＲ９７２、２ｇ
−蜜ろう、１７０ｇ
【０２３６】
手順：
１．β−グルカンをアミロペクチンと１０分間混合
２．シリカＲ９７２を加え、１５分間強く混合
３．混合物の質を湿潤によって検査（粉は湿らすことなく水表面に浮くはずである）
４．クロウメモドキ（oblepicha）油およびオリーブオイルを５分間混合
５．Copaxone（商標）粉末をクロウメモドキおよびオリーブオイル混合物に加える。１５分間円運動を用いて混合
６．工程２からの混合物を工程５からのCopaxone混合物に加え、２５分間円運動によっておだやかに混合
７．蜜ろうを加熱して、それを粉砕し、工程６の油縣濁液に加える。混合および冷却
【０２３７】
実施例１５：アポリタンパク質Ａ−１様ペプチド複合体キャリア組成物の調製
アポリタンパク質Ａ−１様ペプチド複合体キャリア組成物を、以下の成分を用いて生成する：
−ＡＰＯ  Ａ−１様ペプチド粉末、１１ｇ
−クロウメモドキ油５０ｍＬ
−オリーブオイル、５０ｍＬ
−β−グルカン、３ｇ
−キチン、２ｇ
−アミロペクチン８ｇ
−シリカＲ９７２、４．５ｇ
−蜜ろう、１４０ｇ
【０２３８】
手順：
１．β−グルカンをキチンおよびアミロペクチンと１０分間混合
２．シリカＲ９７２を加え、１５分間強く混合
３．混合物の質を湿潤によって検査（粉は湿らすことなく水表面に浮くはずである）
４．クロウメモドキ（oblepicha）油およびオリーブオイルを５分間混合
５．アポリタンパク質Ａ−１粉末をクロウメモドキおよびオリーブオイル混合物に加える。２５分間円運動を用いておだやかに混合
６．工程２からの混合物を工程５からのアポリタンパク質Ａ−１混合物に加え、３０分間円運動によっておだやかに混合
７．蜜ろうを加熱して、それを粉砕し、工程６の油縣濁液に加える。混合および冷却
【０２３９】
実施例１６：Rituxan（登録商標）（治療的モノクローナル抗体）複合体キャリア組成物の調製
Rituxan（登録商標）（Mab Thera）を以下の成分を用いて生成する：
−凍結乾燥粉末Rituxan粉末、７ｇ
−クロウメモドキ油４０ｍＬ
−オリーブオイル、４０ｍＬ
−キチン、３ｇ
−アミロペクチン８ｇ
−シリカＲ９７２、３．２ｇ
−蜜ろう、１４０ｇ
【０２４０】
手順：
１．キチンおよびアミロペクチンを１０分間混合
２．シリカＲ９７２を加え、１５分間強く混合
３．混合物の質を湿潤によって検査（粉は湿らすことなく水表面に浮くはずである）
４．クロウメモドキ（oblepicha）油およびオリーブオイルを５分間混合
５．Rituxan（登録商標）粉末をクロウメモドキおよびオリーブオイル混合物に加える。２５分間円運動を用いておだやかに１５分間混合
６．工程２からの混合物を工程５からのRituxan混合物に加え、２５分間円運動によっておだやかに混合
７．蜜ろうを加熱して、それを粉砕し、工程６の油縣濁液に加える。混合および冷却
【０２４１】
上述の具体的な実施形態は、本発明の一般的な性質を完全に示し、他は、現在の知識を取り入れることで、適度な実験をすることなく、汎用的な概念から離れることなく、このような具体的な実施形態を様々な応用に容易に修正および／または適用することができ、したがって、このような適用および修正は、開示した実施形態の意味および均等物の範囲内で理解すべきでありそれを目的とする。本願明細書で用いた用語または専門用語は、説明の目的とするものであり限定しないことを理解すべきである。様々な開示した機能を実行するための方法、材料、および工程は、本発明から離れることなく様々な代わりの形態をとることができる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図６】
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【図７】
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【図８Ａ】
0005432183.tif 000022
【図８Ｂ】
0005432183.tif 000023
【図８Ｃ】
0005432183.tif 000024
【図８Ｄ】
0005432183.tif 000025
【図８Ｅ】
0005432183.tif 000026
【図８Ｆ】
0005432183.tif 000027
【図８Ｇ】
0005432183.tif 000028
【図８Ｈ】
0005432183.tif 000029
【図８Ｉ】
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【図９】
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【図１０Ａ】
0005432183.tif 000032
【図１０Ｂ】
0005432183.tif 000033
【図１０Ｃ】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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