(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
次の段階を含む退行性脳疾患の予防用または治療用の候補物質のスクリーニング方法：
（ａ）反応性星状細胞に、分析しようとする試料を接触させる段階と、
（ｂ）前記分析しようとする試料が、前記反応性星状細胞内のＧＡＢＡ濃度を低下させるか否かを測定する段階と、であり、
前記分析しようとする試料が、前記反応性星状細胞内のＧＡＢＡ濃度を低下させると測定される場合には、前記試料を退行性脳疾患の予防用または治療用の候補物質であると判断する。
【請求項２】
次の段階を含む退行性脳疾患の予防用または治療用の候補物質のスクリーニング方法：
（ａ）反応性星状細胞に、分析しようとする試料を接触させる段階と、
（ｂ）前記反応性星状細胞で、ベストロフィン１チャネルの細胞内分布様相を測定する段階と、であり、
前記ベストロフィン１チャネルの細胞内分布様相が、細胞体並びに主突起からマイクロドメイン方向に変化したと測定される場合には、前記試料を退行性脳疾患の予防用または治療用の候補物質であると判断する。
【請求項３】
次の段階を含む退行性脳疾患の予防用または治療用の候補物質のスクリーニング方法：
（ａ）反応性星状細胞に、分析しようとする試料を接触させる段階と、
（ｂ）前記反応性星状細胞内のＧＡＢＡトランスアミナーゼをコーディングする遺伝子の発現量、ＧＡＢＡトランスアミナーゼ蛋白質の量、またはＧＡＢＡトランスアミナーゼ蛋白質の活性を測定する段階と、であり、
前記ＧＡＢＡトランスアミナーゼ遺伝子の発現量、ＧＡＢＡトランスアミナーゼ蛋白質の量、またはＧＡＢＡトランスアミナーゼ蛋白質の活性が増大−調節されると測定される場合には、前記試料を退行性脳疾患の予防用または治療用の候補物質であると判断する。
【請求項４】
前記反応性星状細胞は、脳損傷動物モデルの脳組織、ウイルス感染動物の脳組織、パーキンソン病動物モデル、またはアルツハイマー疾患を有する動物モデルの脳組織から由来したことを特徴とする請求項１ないし請求項３のうち、いずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
前記脳組織は、海馬、線条体、黒質緻密部及び視床核からなる群から選択されることを特徴とする請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記退行性脳疾患は、アルツハイマー病、軽度認知障害、脳卒中及び血管性痴呆、前頭側頭葉痴呆、レビー小体痴呆、クロイツフェルト・ヤコブ病、外傷性頭部損傷、梅毒、後天性免疫欠乏症候群及びその他ウイルス感染、脳膿瘍、脳腫瘍、多発性硬化症、代謝性疾患による痴呆、低酸素症、パーキンソン病、ルー・ゲーリック病、ハンチントン病、ピック病、筋萎縮性側索硬化症、癲癇、虚血、中風、注意欠陥・多動性障害、精神分裂症、憂鬱症、躁鬱症、外傷後ストレス障害、脊髄損傷及び脊髄炎から選択されることを特徴とする請求項１ないし請求項３のうち、いずれか１項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、退行性脳疾患の予防用または治療用の薬学的組成物、及びそれをスクリーニングする方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
アルツハイマー病（Alzheimer’s disease）を始めとする退行性脳疾患は、概して、記憶力と認知機能の障害、行動能力の障害を誘発し、特に、アルツハイマー病は、数年以上の期間をおいて、漸進的に悪化する慢性的疾患であり、患者だけではなく、周囲の家族らにも深刻な精神的苦痛や莫大な医療費支出など、さまざまな問題を引き起こしている。しかし、現在まで開発された治療剤は、単に一時的に症状だけ緩和させるだけであるから、病気を根本的に治療したり、進行を抑制する薬物の開発が切実に要求されている。
【０００３】
アルツハイマー病を例にとれば、現在まで治療剤開発の主なターゲットは、アルツハイマー病で現れる神経伝達物質であって、特に、コリン性神経細胞をターゲットにしたコリンエステラーゼ抑制剤（Aricept、Exelon、Reminylなど）が現在市販中である。最近、アメリカ食品医薬品局（ＦＤＡ）承認のグルタメート受容体の拮抗剤であるメマンチン（memantine）も、代表的な神経伝達物質のグルタメートをターゲットとする。しかし、それら薬物も、病気の進行自体を根源的に防ぐことはできず、最近では、アルツハイマー病の主要特徴であるアミロイドプラーク（amyloid plaque）をなすβ−amyloid（Αβ）を主要ターゲットとし、Αβ生成に重要な役割を果たすβ−セクレターゼまたはγ−セクレターゼを抑制したり、生成されたＡβが分解する薬物を開発しようとする研究が活発に進められている。しかし、その場合、人体内に正常に存在する蛋白質をターゲットとするので、正常な機能を阻害することがあり、副作用が発生しうる。
【０００４】
従って、従来技術によっても、さまざまな退行性脳疾患と関連して、新しい蛋白質をターゲットとする予防用または治療用の薬学的組成物が要求されている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明の一具体例は、退行性脳疾患の予防用または治療用の候補物質のスクリーニング方法を提供することである。
【０００６】
本発明の他の具体例は、退行性脳疾患の予防用または治療用の薬学的組成物を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明の一様相は、次の段階を含む退行性脳疾患の予防用または治療用の物質のスクリーニング方法を提供する：
（ａ）反応性星状細胞に、分析しようとする試料を接触させる段階と、
（ｂ）前記分析しようとする試料が、前記反応性星状細胞内のＧＡＢＡ濃度を低下させるか否かを測定する段階と、であり、
前記分析しようとする試料が、前記反応性星状細胞内のＧＡＢＡ濃度を低下させると測定される場合には、前記試料を退行性脳疾患の予防用または治療用の候補物質であると判断する。
【０００８】
本発明の他の様相は、次の段階を含む退行性脳疾患の予防用または治療用の候補物質のスクリーニング方法を提供する：
（ａ）反応性星状細胞に、分析しようとする試料を接触させる段階と、
（ｂ）前記反応性星状細胞内のＭＡＯ−Ｂをコーディングする遺伝子の発現量、ＭＡＯ−Ｂ蛋白質の量、またはＭＡＯ−Ｂ蛋白質の活性を測定する段階と、であり、
前記ＭＡＯ−Ｂをコーディングする遺伝子の発現量、ＭＡＯ−Ｂ蛋白質の量、またはＭＡＯ−Ｂ蛋白質の活性が低減調節（down-regulation）されると測定される場合には、前記試料を退行性脳疾患の予防用または治療用の候補物質であると判断する。
【０００９】
本発明のさらに他の様相は、次の段階を含む退行性脳疾患の予防用または治療用の候補物質のスクリーニング方法を提供する：
（ａ）反応性星状細胞に、分析しようとする試料を接触させる段階と、
（ｂ）前記反応性星状細胞でベストロフィン１チャネルの細胞内分布様相を測定する段階と、であり、
前記ベストロフィン１チャネルの細胞内分布様相が、細胞体並びに主突起からマイクロドメイン方向に変化したと測定される場合には、前記試料を退行性脳疾患の予防用または治療用の候補物質であると判断する。
【００１０】
本発明のさらに他の様相は、次の段階を含む退行性脳疾患の予防用または治療用の候補物質のスクリーニング方法を提供する：
（ａ）反応性星状細胞に分析しようとする試料を接触させる段階と、
（ｂ）前記反応性星状細胞内のベストロフィン１をコーディングする遺伝子の発現量、ベストロフィン１蛋白質の量またはベストロフィン１蛋白質の活性を測定する段階と、であり、
前記ベストロフィン１をコーディングする遺伝子の発現量、ベストロフィン１蛋白質の量またはベストロフィン１蛋白質の活性が低減調節（down-regulation）されると測定される場合には、前記試料を退行性脳疾患の予防用または治療用の候補物質であると判断する。
【００１１】
本発明のさらに他の様相は、次の段階を含む退行性脳疾患の予防用または治療用の候補物質のスクリーニング方法を提供する：
（ａ）反応性星状細胞に、分析しようとする試料を接触させる段階と、
（ｂ）前記反応性星状細胞内のＧＡＢＡトランスアミナーゼをコーディングする遺伝子の発現量、ＧＡＢＡトランスアミナーゼ蛋白質の量、またはＧＡＢＡトランスアミナーゼ蛋白質の活性を測定する段階と、であり、
前記ＧＡＢＡトランスアミナーゼ遺伝子の発現量、ＧＡＢＡトランスアミナーゼ蛋白質の量、またはＧＡＢＡトランスアミナーゼ蛋白質の活性が増大−調節（up-regulation）されると測定される場合には、前記試料を退行性脳疾患の予防用または治療用の候補物質であると判断する。
【００１２】
本発明のさらに他の様相は、反応性星状細胞内で、ＧＡＢＡ濃度を低下させる物質を有効成分として含む退行性脳疾患の予防用または治療用の薬学的組成物を提供する。
【００１３】
本発明のさらに他の様相は、反応性星状細胞内で、ＭＡＯ−Ｂをコーディングする遺伝子の発現を抑制したり、あるいはＭＡＯ−Ｂ蛋白質の活性を低減させる物質を有効成分として含む退行性脳疾患の予防用または治療用の薬学的組成物を提供する。
【００１４】
本発明のさらに他の様相は、反応性星状細胞内で、ベストロフィン１チャネルの細胞内分布様相を、細胞体並びに主突起からマイクロドメイン方向に変化させる物質を有効成分として含む退行性脳疾患の予防用または治療用の薬学的組成物を提供する。
【００１５】
本発明さらに他の様相は、反応性星状細胞内で、ベストロフィン１チャンネルをコーディングする遺伝子の発現を抑制したり、またはベストロフィン１蛋白質の活性を低下させる物質を有効成分として含む退行性脳疾患の予防用または治療用の薬学的組成物を提供する。
【００１６】
本発明のさらに他の様相は、反応性星状細胞内で、ＧＡＢＡトランスアミナーゼをコーディングする遺伝子の発現を誘導したり、あるいはＧＡＢＡトランスアミナーゼ蛋白質の活性を増大させる物質を有効成分として含む退行性脳疾患の予防用または治療用の薬学的組成物を提供する。
【発明の効果】
【００１７】
本発明の一具体例による退行性脳疾患の予防用または治療用の候補物質のスクリーニング方法によれば、退行性脳疾患の予防物質または治療物質を効果的にスクリーニングすることができ、それによる退行性脳疾患の予防用または治療用の薬学的組成物は、さまざまな退行性脳疾患を効果的に予防または治療することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
【図１】アルツハイマー・マウスモデルの海馬で観察した反応性星状細胞及び反応性星状細胞内でのＧＡＢＡを示す共焦点蛍光イメージである。
【図２】アルツハイマー・マウスモデルの海馬で観察した反応性星状細胞内でのＭＡＯ−Ｂの発現量を示す共焦点蛍光イメージである。
【図３】アルツハイマー・マウスモデルの海馬で観察した反応性星状細胞内でのベストロフィン１チャネルの細胞内分布を示す共焦点蛍光イメージである。
【図４】アルツハイマー・マウスモデルの海馬で観察した反応性星状細胞内でのＧＡＢＡトランスアミナーゼの発現量を示す共焦点蛍光イメージである。
【図５】アルツハイマー・マウスモデルの海馬組織から観察したＧＡＢＡの分布を示した共焦点蛍光イメージである。
【図６】脳損傷マウスモデルの海馬で観察した反応性星状細胞内でのベストロフィン１チャネルの細胞内分布を示す共焦点蛍光イメージである。
【図７】脳損傷マウスモデルの海馬で観察した反応性星状細胞内でのＭＡＯ−Ｂの発現量を示す共焦点蛍光イメージである。
【図８】脳損傷マウスモデルの海馬で観察した反応性星状細胞内でのＧＡＢＡトランスアミナーゼの発現量を示す共焦点蛍光イメージである。
【図９】ヒトアルツハイマー患者の死後大脳組織で観察した反応性星状細胞内でのＧＡＢＡを示す光学顕微鏡イメージである。
【図１０】ヒトアルツハイマー患者の死後大脳組織で観察した反応性星状細胞内でのＭＡＯ−Ｂ発現量、ＧＡＢＡを示す共焦点蛍光イメージ、ＧＦＡＰ及びＭＡＯ−ＢｍＲＮＡの発現量増加を示すグラフである。
【図１１】ウイルス感染モデルマウスの視床核で観察した反応性星状細胞及び反応性星状細胞内でのＧＡＢＡを示す共焦点蛍光イメージである。
【図１２】パーキンソン病モデルラットの黒質緻密部で観察した反応性星状細胞及び反応性星状細胞内でのＭＡＯ−ＢとＧＡＢＡとを示す共焦点蛍光イメージである。
【図１３】パーキンソン病モデルマウスの黒質緻密部で観察した反応性星状細胞及び反応性星状細胞内でのベストロフィン１とＧＡＢＡとを示す共焦点蛍光イメージである。
【図１４】アルツハイマーモデルマウスの海馬抽出物のＭＡＯ−Ｂ酵素活性程度を示すグラフである。
【図１５】アルツハイマーモデルマウスの海馬組織内細胞に存在するＧＡＢＡの濃度を示す高性能液体クロマトグラフィ結果のグラフである。
【図１６】アルツハイマーモデルマウスの海馬歯状回顆粒細胞が、持続性ＧＡＢＡによって受ける抑制性電流の大きさを比較したトレース図面及びグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
以下、本発明について、望ましい実施例を挙げて詳細に説明する。
【００２０】
一様相は、次の段階を含む退行性脳疾患の予防用または治療用の物質のスクリーニング方法を提供する：
（ａ）反応性星状細胞に、分析しようとする試料を接触させる段階と、
（ｂ）前記分析しようとする試料が、前記反応性星状細胞内のＧＡＢＡ濃度を低下させるか否か、あるいは前記反応性星状細胞からのＧＡＢＡ放出を低減させるか否かを測定する段階と、であり、
前記分析しようとする試料が、前記反応性星状細胞内のＧＡＢＡ濃度を低下させるか、あるいは前記前記反応性星状細胞からのＧＡＢＡ放出を低減させると測定される場合には、前記試料を退行性脳疾患の予防用または治療用の候補物質であると判断する。
【００２１】
他の様相は、次の段階を含む退行性脳疾患の予防用または治療用の候補物質のスクリーニング方法を提供する：
（ａ）反応性星状細胞に、分析しようとする試料を接触させる段階と、
（ｂ）前記反応性星状細胞内のＭＡＯ−Ｂをコーディングする遺伝子の発現量、ＭＡＯ−Ｂ蛋白質の量、またはＭＡＯ−Ｂ蛋白質の活性を測定する段階と、であり、
前記ＭＡＯ−Ｂをコーディングする遺伝子の発現量、ＭＡＯ−Ｂ蛋白質の量、またはＭＡＯ−Ｂ蛋白質の活性が低減−調節（down-regulation）されると測定される場合には、前記試料を退行性脳疾患の予防用または治療用の候補物質であると判断する。
【００２２】
他の様相は、次の段階を含む退行性脳疾患の予防用または治療用の候補物質のスクリーニング方法を提供する：
（ａ）反応性星状細胞に、分析しようとする試料を接触させる段階と、
（ｂ）前記反応性星状細胞でベストロフィン１チャネルの細胞内分布様相を測定する段階と、であり、
前記ベストロフィン１チャネルの細胞内分布様相が、細胞体並びに主突起からマイクロドメイン方向に変化したと測定される場合には、前記試料を退行性脳疾患の予防用または治療用の候補物質であると判断する。
【００２３】
他の様相は、次の段階を含む退行性脳疾患の予防用または治療用の候補物質のスクリーニング方法を提供する：
（ａ）反応性星状細胞に分析しようとする試料を接触させる段階と、
（ｂ）前記反応性星状細胞内のベストロフィン１をコーディングする遺伝子の発現量、ベストロフィン１蛋白質の量またはベストロフィン１蛋白質の活性を測定する段階と、であり、
前記ベストロフィン１をコーディングする遺伝子の発現量、ベストロフィン１蛋白質の量またはベストロフィン１蛋白質の活性が低減調節（down-regulation）されると測定される場合には、前記試料を退行性脳疾患の予防用または治療用の候補物質であると判断する。
【００２４】
他の様相は、次の段階を含む退行性脳疾患の予防用または治療用の候補物質のスクリーニング方法を提供する：
（ａ）反応性星状細胞に、分析しようとする試料を接触させる段階と、
（ｂ）前記反応性星状細胞内のＧＡＢＡトランスアミナーゼをコーディングする遺伝子の発現量、ＧＡＢＡトランスアミナーゼ蛋白質の量、またはＧＡＢＡトランスアミナーゼ蛋白質の活性を測定する段階と、であり、
前記ＧＡＢＡトランスアミナーゼ遺伝子の発現量、ＧＡＢＡトランスアミナーゼ蛋白質の量、またはＧＡＢＡトランスアミナーゼ蛋白質の活性が増大−調節（up-regulation）されると測定される場合には、前記試料を退行性脳疾患の予防用または治療用の候補物質であると判断する。
【００２５】
本発明者らは、アルツハイマー疾患を始めとする退行性脳疾患の発病と関連した予防剤または治療剤を開発しようと研究努力し、結局、アルツハイマー疾患を有する動物モデルの海馬に存在する反応性星状細胞内で、神経伝達物質のうち一つであるガンマ−アミノブチル酸（ＧＡＢＡ：gamma-aminobutyric acid）の濃度が上昇するということを確認し、これは、ＧＡＢＡを生成する過程で、必須な酵素であるＭＡＯ−Ｂの発現量増加、またはＧＡＢＡトランスアミナーゼの発現量減少によるものであることを最初に究明した。また、反応性星状細胞で、ＧＡＢＡが通過することができるベストロフィン１チャンネルの細胞内分布様相の変化、またはベストロフィン１の発現量増加が起きることを確認した。
【００２６】
本発明は、反応性星状細胞内のＧＡＢＡ濃度を低下させる物質を、退行性脳疾患予防用または治療用の物質としてスクリーニングする方法に係り、退行性脳疾患と関連して、ＭＡＯ−Ｂ、ベストロフィン１チャネルまたはＧＡＢＡトランスアミナーゼを退行性脳疾患の予防または治療のターゲットとする。このように、退行性脳疾患のターゲットとして、前記蛋白質の新規用途は、アルツハイマー疾患を有するマウスモデルの海馬に存在する反応性星状細胞内で、正常マウスモデルと比較してＭＡＯ−Ｂの発現量が増加し、ＧＡＢＡトランスアミナーゼの発現量が減少し、反応性星状細胞内のＧＡＢＡ濃度が上昇し、ベストロフィン１チャネルの細胞内分布様相が変わり、ベストリフィン１の発現量が増加し、反応性星状細胞外部にＧＡＢＡが分泌され、持続性（tonic）ＧＡＢＡが生成されるという本発明者らの発見によるものである。
【００２７】
持続性ＧＡＢＡは、神経細胞の持続性ＧＡＢＡ受容体に結合し、塩素イオン（Ｃｌ−）が神経細胞内に入るようにする。これは、神経細胞の細胞膜の休止電位を低くし、正常な神経信号伝達を妨害する。欠神癲癇（absence epilepsy）では、持続性ＧＡＢＡにより、神経信号伝達が抑制されているということが知られており（David W． Cope, Giuseppe Di Giovanni, Sarah J． Fyson, Gergely Orban, Adam C． Errington, Magor L． Lorincz, Timothy M． Gould, David A． Carter, and Vincenzo Crunelli, Nat Med．, 2009, 15(12): 1392−1398）、 脳卒中の場合、持続性ＧＡＢＡを抑制して神経回復を促進することができるということが知られている（Andrew N． Clarkson, Ben S． Huang, Sarah E． MacIsaac, Istvan Mody and S． Thomas Carmichael, Nature, 2010, 468: 305−309）。また、海馬に特異的に存在する持続性ＧＡＢＡの受容体を抑制したとき、記憶と認知能力とが改善されるという報告がある（G． R． Dawson, K． A． Maubach, N．Collinson, M． Cobain, B． J． Everitt, A． M．MacLeod, H． I． Choudhury, L． M． McDonald, G．Pillai, W． Rycroft, A． J． Smith, F． Sternfeld, F． D． Tattersall, K． A． Wafford, D． S．Reynolds, G． R． SeabrookandJ． R． Atack, JPET, 2006, 316(3): 1335-1345及びH． Lal, B． Kumar, and M． J． Forster, The ＦＡＳＥＢ Journal, 1988, 2(11): 2707-2711)．
一方、退行性脳疾患は、中枢神経系の神経細胞に、退行性変化が現れつつ発生する脳疾患を総称する概念として解釈される。退行性脳疾患は、ほとんど発病原因が知られていないが、関連神経系に選択的に侵犯し、疾病の発病が徐々に始まり、持続的な進行を示すということが特徴である。一具体例によれば、前記退行性脳疾患は、例えば、アルツハイマー病、軽度認知障害、脳卒中及び血管性痴呆、前頭側頭葉痴呆、レビー小体（Lewy body）痴呆、クロイツフェルト・ヤコブ病、外傷性頭部損傷、梅毒、後天性免疫欠乏症候群及びその他ウイルス感染、脳膿瘍、脳腫瘍、多発性硬化症、代謝性疾患による痴呆、低酸素症、パーキンソン病、ルー・ゲーリック病、ハンチントン病、ピック病、筋萎縮性側索硬化症、癲癇、虚血、中風、注意欠陥・多動性障害（ＡＤＨＤ）、精神分裂症、憂鬱症、躁鬱症、外傷後ストレス障害、脊髄損傷及び脊髄炎からなる群から選択されるが、それらに限定されるものではない。
【００２８】
本発明の方法によれば、まず、反応性星状細胞に、分析しようとする試料を接触させる。一具体例によれば、前記反応性星状細胞は、脳損傷動物モデルの脳組織、ウイルス感染動物の脳組織、パーキンソン病動物モデルの脳組織、またはアルツハイマー疾患を有する動物モデルの脳組織から由来したものであってもよい。前記動物モデルは、哺乳類由来であって、例えば、マウス、ラットのような齧歯類、または猿のような霊長類であるが、それらに限定されるものではない。また、一具体例によれば、前記脳組織は、海馬、線条体、黒質緻密部または視床核であるが、それらに限定されるものではない。
【００２９】
前記スクリーニング方法を言及しつつ使われる用語「試料（sample）」は、前記反応性星状細胞内のＧＡＢＡ濃度を低下させるか否か、あるいは前記反応性星状細胞からのＧＡＢＡ放出を低減させるか否かを検査するために、スクリーニングで利用される未知の物質を意味する。前記ＧＡＢＡ濃度を低下させるか、あるいはＧＡＢＡ放出を低減させるメカニズムは、例えば、i）前記反応性星状細胞内のＭＡＯ−Ｂをコーディングする遺伝子の発現量、ＭＡＯ−Ｂ蛋白質の量、またはＭＡＯ−Ｂ蛋白質の活性の増大、ii）前記反応性星状細胞で、ベストロフィン１をコーディングする遺伝子の発現量、ベストロフィン１蛋白質の量またはベストロフィン１蛋白質の活性上昇、あるいはベストロフィン１チャネルの細胞内分布様相が、マイクロドメインから細胞体並びに主突起の方向に変化、またはiii）前記反応性星状細胞内のＧＡＢＡトランスアミナーゼをコーディングする遺伝子の発現量、ＧＡＢＡトランスアミナーゼ蛋白質の量、またはＧＡＢＡトランスアミナーゼ蛋白質の活性の低下によるものであってもよい。前記試料は、化学物質、ヌクレオチド、アンチセンスＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ（short hairpin ＲＮＡ）、ｓｉＲＮＡ（small interference ＲＮＡ）及び天産物抽出物を含むが、それらに限定されるものではない。
【００３０】
次に、分析しようとする試料が処理された反応性星状細胞内で、ＧＡＢＡ濃度を低下させるか否かを測定する。これは、下記３種の方法で測定可能である。
【００３１】
i）前記反応性星状細胞内のＭＡＯ−Ｂをコーディングする遺伝子の発現量、ＭＡＯ−Ｂ蛋白質の量、またはＭＡＯ−Ｂ蛋白質の活性を測定する。測定結果、前記ＭＡＯ−Ｂをコーディングする遺伝子の発現量、ＭＡＯ−Ｂ蛋白質の量、またはＭＡＯ−Ｂ蛋白質の活性が低減−調節（down-regulation）されると測定される場合には、前記試料を退行性脳疾患の予防用または治療用の候補物質と判定することができる。
【００３２】
ii）前記反応性星状細胞内のベストロフィン１をコーディングする遺伝子の発現量、ベストロフィン１蛋白質の量またはベストロフィン１蛋白質の活性を測定する。測定結果、前記ベストロフィン１をコーディングする遺伝子の発現量、ベストロフィン１蛋白質の量またはベストロフィン１蛋白質の活性が低減調節（down-regulation）されると測定される場合には、前記試料を退行性脳疾患の予防用または治療用の候補物質であると判定することができる。
【００３３】
iii）前記反応性星状細胞で、ベストロフィン１チャネルの細胞内分布様相を測定する。測定結果、前記ベストロフィン１チャネルの細胞内分布様相が、細胞体並びに主突起からマイクロドメイン方向に変化したと測定される場合には、前記試料を退行性脳疾患の予防用または治療用の候補物質と判定することができる。
【００３４】
iv）前記反応性星状細胞内のＧＡＢＡトランスアミナーゼをコーディングする遺伝子の発現量、ＧＡＢＡトランスアミナーゼ蛋白質の量、またはＧＡＢＡトランスアミナーゼ蛋白質の活性を測定を測定する。測定結果、前記ＧＡＢＡトランスアミナーゼ遺伝子の発現量、ＧＡＢＡトランスアミナーゼ蛋白質の量、またはＧＡＢＡトランスアミナーゼ蛋白質の活性が増大−調節（up-regulation）されると測定される場合には、前記試料を退行性脳疾患の予防用または治療用の候補物質と判定することができる。
【００３５】
前記蛋白質（ＭＡＯ−Ｂ、ベストロフィン１またはＧＡＢＡトランスアミナーゼ）をコーディングする遺伝子の発現量変化の測定は、当業界に公知の多様な方法を介して実施される。例えば、ＲＴ−ＰＣＲ、ノーザンブロッティング、ｃＤＮＡマイクロアレイを利用した混成化反応、またはインサイチュ（in situ）混成化反応を利用して実施することができる。例えば、ＲＴ−ＰＣＲプロトコルによって実施する場合には、まず、試料を処理した細胞で、総ＲＮＡが分離した後、オリゴｄＴプライマー及び逆転写酵素を利用して、第１鎖ｃＤＮＡを製造する。次に、第１鎖ｃＤＮＡをテンプレートとして利用し、前記蛋白質をコーディングする遺伝子特異的プライマーセットを利用してＰＣＲ（polymerase chain reaction）反応を実施する。その後、ＰＣＲ増幅産物を電気泳動し、形成されたバンドが分析し、前記蛋白質をコーディングする遺伝子の発現量変化を測定する。
【００３６】
前記蛋白質（ＭＡＯ−Ｂ、ベストロフィン１チャネルまたはＧＡＢＡトランスアミナーゼ）の量または細胞内分布変化は、当業界に公知の多様な方法を介して実施可能である。例えば、前記ＭＡＯ−Ｂ、ベストロフィン１またはＧＡＢＡトランスアミナーゼの量的変化は、免疫組織化学法、放射能免疫分析、放射能免疫沈殿、免疫沈殿、ウェスタンブロッティング、ＥＬＩＳＡ（enzyme-linked immunosorbent assay）、キャプチャＥＬＩＳＡ、サンドウィッチ分析法によって確認することができるが、それらに限定されるものではなく、前記蛋白質（ベストロフィン１チャネル）の細胞内分布変化は、免疫組織化学法及び透過電子顕微鏡（ＴＥＭ）を介して確認することができるが、それらに限定されるものではない。一方、前記蛋白質の活性変化は、当業界に知られた酵素活成分析（enzyme activity assay in vitro）方法によって測定可能である。
【００３７】
他の様相は、反応性星状細胞内で、ＧＡＢＡ濃度を低下させる物質を有効成分として含む退行性脳疾患の予防用または治療用の薬学的組成物を提供する。
【００３８】
他の様相は、反応性星状細胞内で、ＭＡＯ−Ｂをコーディングする遺伝子の発現を抑制したり、あるいはＭＡＯ−Ｂ蛋白質の活性を低減させる物質を有効成分として含む退行性脳疾患の予防用または治療用の薬学的組成物を提供する。
【００３９】
一具体例によれば、前記ＭＡＯ−Ｂ蛋白質の活性を低減させる物質は、下記化学式Ｉで表示される化合物、その薬学的に許容可能な塩、異性体、溶媒和物、水和物及びそれらの組み合わせからなる群から選択される化合物であってもよい。
【００４０】
【化１】
0005589037.tif 000002
【００４１】
前記化学式Ｉで、前記Ｒ１及びＲ２はそれぞれ独立して、水素、ハロゲン、ニトロ、シアノ、カルボキシル、ヒドロキシル、置換または非置換のＣ１−Ｃ１２アルキル、置換または非置換のＣ２−Ｃ１２アルケニル、置換または非置換のＣ２−Ｃ１２アルキニル、置換または非置換のＣ３−Ｃ１５シクロアルキル、置換または非置換の核原子数３ないし４０のヘテロシクロアルキル、（置換または非置換のＣ６−Ｃ２０アリール）Ｃ１−Ｃ１２アルキル、置換または非置換のＣ１−Ｃ１２アルコキシ、置換または非置換のＣ６−Ｃ２０アリールアミン、置換または非置換のＣ６−Ｃ３０ジアリールアミン、置換または非置換のＣ６−Ｃ２０アリールオキシ、置換または非置換のＣ６−Ｃ２０アリール、あるいは置換または非置換の核原子数５ないし２０のヘテロアリールであり、前記Ｘは、−Ｏ−、−Ｓ−または−Ｎ（Ｈ）−を有している。
【００４２】
本明細書で用語「アルキル」は、アルカンの単一炭素原子から、１個の水素原子を除去することによって誘導された飽和、分岐されたり、あるいは直鎖の一価炭化水素基を指す。典型的なアルキル基は、例えば、メチル、エチル、プロパン−１−イル、プロパン−２−イル、シクロプロパン−１−イルのようなプロピル；ブタン−１−イル、ブタン−２−イル、２−メチル−プロパン−１−イル、２−メチル−プロパン−２−イル、シクロブタン−１−イル、ｔｅｒｔ−ブチルのようなブチルなどを含むが、それらに限定されるものではない。特定具体例で、アルキル基は、１ないし１２個の炭素原子を含む。前記アルキル基に存在する一つ以上の水素原子は、ハロゲン、ヒドロキシル、低級アルキル基などで置換されてもよい。用語「低級アルキル」は、１ないし６個の炭素原子を含むアルキル基を指す。
【００４３】
用語「アルケニル」は、アルケンの単一炭素原子から、１個の水素原子を除去して誘導された少なくとも１個の炭素−炭素二重結合を有する不飽和分岐されたり、直鎖または環状アルキル基を指す。前記基は、二重結合近辺で、Ｚ形態またはＥ形態（またはシス立体形態またはトランス立体形態）であってもよい。典型的なアルケニル基は、例えば、エテニル；プロプ−１−エン−１−イル、プロプ−１−エン−２−イル、プロプ−２−エン−１−イル（アリル）、プロプ−２−エン−２−イル、シクロプロプ−１−エン−１−イルのようなプロペニル；シクロプロプ−２−エン−１−イル；ブト−１−エン−１−イル、ブト−１−エン−２−イル、２−メチル−プロプ−１−エン−１−イル、ブト−２−エン−１−イル、ブト−２−エン−２−イル、ブタ−１，３−ジエン−１−イル、ブタ−１，３−ジエン−２−イル、シクロブト−１−エン−１−イル、シクロブト−１−エン−３−イル、シクロブタ−１，３−ジエン−１−イルのようなブテニルなどを含むが、それらに限定されるものではない。特定具体例で、アルケニル基は、２ないし１２個の炭素原子を有するか、あるいは他の具体例で、２ないし６個の炭素原子を有し、すなわち「低級アルケニル」である。
【００４４】
用語「アルキニル」は、アルキンの単一炭素原子から、１個の水素原子を除去することによって誘導された少なくとも１個の炭素−炭素三重結合を有する不飽和、分岐されたり、あるいは直鎖を指す。典型的なアルキニル基は、例えば、エチニル；プロピニル；ブチニル、２−ペンチニル、３−ペンチニル、２−ヘキシニル、３−ヘキシニルなどを含むが、それらに限定されるものではない。一具体例で、アルキニル基は、２ないし１２個の炭素原子を有し、他の具体例で、２ないし６個の炭素原子（すなわち「低級アルキニル」）を有する。
【００４５】
用語「アルコキシ」は、ラジカル−ＯＲを指し、このとき、Ｒは、アルキルである。例えば、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、ブトキシ、シクロヘキシルオキシなどを含むが、それらに限定されるものではない。
【００４６】
用語「アリール」は、芳香族環系の単一炭素原子から、１個の水素原子を除去して誘導された一価芳香族炭化水素基を指す。アリールは、５員あるいは６員の炭素環芳香族環を含み、例えば、ベンゼン；二環（bicyclic）系（このとき、少なくとも１個の環は、炭素環及び芳香族、例えば、ナフチレン、インダン及びテトラリンである）；及び三環系（このとき、少なくとも１個の環は、炭素環であり、かつ芳香族、例えば、フルオレンである）である。例えば、アリールは、Ｎ、Ｏ及びＳから選択された１以上のヘテロ原子を含有する５員ないし７員のヘテロシクロアルキル環に融合された５員及び６員の炭素環芳香族環を含んでもよい。特定具体例で、アリール基は、６ないし１０個の炭素原子を含んでもよい。しかし、アリールは、以下で個別的に定義されたヘテロアリールを含まなかったり、あるいは重畳されていない。従って、１以上の炭素環芳香族環がヘテロシクロアルキル芳香族環と融合されれば、生成された環系は、本明細書で定義されているように、ヘテロアリールであって、アリールではない。
【００４７】
用語「カルボキシル」は、ラジカル−Ｃ（Ｏ）ＯＨを指す。
【００４８】
用語「シアノ」は、ラジカル−ＣＮを指す。
【００４９】
用語「シクロアルキル」は、飽和または不飽和であるが、非芳香族、環状アルキル基を指す。特定レベルの飽和を目的とする場合、名称「シクロアルカニル「または「シクロアルケニル」が使われる。典型的シクロアルキル基は、非制限的に、シクロプロパン、シクロブタン、シクロペンタン、シクロヘキサンなどから誘導された基を含む。特定具体例で、前記シクロアルキル基は、Ｃ３−１０シクロアルキル、例えば、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキルであってもよい。
【００５０】
用語「ヘテロシクロアルキル」は、飽和または不飽和であるが、非芳香族、環状アルキル基で、１以上の炭素原子（及び関連水素原子）は、独立して適切には、同一であるか、あるいは異なるヘテロ原子及びその関連水素原子によって置換される。炭素原子を置換する典型的なヘテロ原子は、非制限的に、Ｎ、Ｐ、Ｏ、Ｓ、及びＳｉを含む。典型的ヘテロシクロアルキル基は、非制限的に、エポキシド、イミダゾリジン、モルホリン、ピペラジン、ピペリジン、ピラゾリジン、ピロリジン、キヌクリジン、テトラヒドロフラン、テトラヒドロピランなどから誘導された基を含む。置換されたヘテロシクロアルキルは、またピペリジニルＮ−オキシド、モルホリニル−Ｎ−オキシド、１−オキソ−１−チオモルホリニル及び１，１−ジオキソ−１−チオモルホリニルのような１以上のオキソ（＝０）置換基またはオキシド（−Ｏ−）置換基によって置換された環系を含む。
【００５１】
用語「ハロ」は、フルオロ基、クロロ基、ブロモ基またはヨード基を指す。
【００５２】
用語「ヘテロアリール」は、ヘテロ芳香族環系の単一原子から、１個の水素原子を除去することによって誘導された一価ヘテロ芳香族基を指す。ヘテロアリールは、Ｎ、Ｏ、及びＳから選択された１以上の、例えば、１ないし４個、または特定具体例で、１ないし３個のヘテロ原子を含有し、残りの環原子は炭素である５員ないし７員の芳香族環、単環；Ｎ、Ｏ及びＳから選択される１以上、例えば、１ないし４個、または特定具体例で、１ないし３個のヘテロ原子を含有し、残りの環原子は炭素であり、また少なくとも１個のヘテロ原子が芳香族環に存在する多環ヘテロシクロアルキル環を含む。例えば、ヘテロアリールは、５員ないし７員のシクロアルキル環に融合された５員ないし７員のヘテロ芳香族環、及び５員ないし７員のヘテロシクロアルキル環に融合された５員ないし７員のヘテロ芳香族環を含む。環のただ一つが、１以上のヘテロ原子を含有するような融合された二環ヘテロアリール環の場合、付着点は、ヘテロ芳香族環またはシクロアルキル環であってもよい。ヘテロアリール基中のＳ原子及びＯ原子の全体数が１を超えれば、ヘテロ原子は、互いに隣接しない。特定具体例で、ヘテロアリール基中のＳ及びＯ原子の全体数は、２以下である。特定具体例で、ヘテロアリール基中のＳ及びＯ原子の全体数は、１以下である。ヘテロアリールは、前記で定義されたようなアリールを含まなかったり、あるいはそれと重畳されていない。典型的ヘテロアリール基は、非制限的に、アクリジン、アルシンドール、カルバゾール、β−カボリン、クロマン、クロメン、シンノリン、フラン、イミダゾール、インダゾール、インドール、インドリン、インドリジン、イソベンゾフラン、イソクロメン、イソインドール、イソインドリン、イソキノリン、イソチアゾール、イソオキサゾール、ナフチリジン、オキサジアゾール、オキサゾール、ペリニジン、フェナントリジン、フェナントロリン、フェナジン、フタラジン、プテリジン、プリン、ピラン、ピラジン、ピラゾール、ピリダジン、ピリジン、ピリミジン、ピロール、ピロリジン、キナゾリン、キノリン、キノリジン、キノキサリン、テトラゾール、チアジアゾール、チアゾール、チオフェン、トリアゾール、キサンテンなどから誘導された基を含む。特定具体例で、ヘテロアリール基は、例えば、５員ないし１０員ヘテロアリールのような５員ないし２０員ヘテロアリールであってもよい。特定具体例で、ヘテロアリール基は、チオフェン、ピロール、ベンゾチオフェン、ベンゾフラン、インドール、ピリジン、キノリン、イミダゾール、オキサゾール及びピラジンから誘導された基である。
【００５３】
一具体例によれば、前記化学式Ｉで表示される化合物で、前記Ｒ１及びＲ２はそれぞれ独立して、水素、ハロゲン、ニトロ、シアノ、置換または非置換のＣ１−Ｃ１２アルキル、あるいは置換または非置換のＣ１−Ｃ１２アルコキシであり、前記Ｘは、−Ｏ−または−Ｓ−であってもよい。
【００５４】
一具体例によれば、前記ＭＡＯ−Ｂ蛋白質の活性を低減させる物質は、Ｎ−シクロヘキシルー２−フェニルオキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジン、２−フェニル−５−（ピロリジン−１−イル）オキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジン、２−フェニル−５−（ピロリジン−１−イル）チアゾロ［５，４−ｂ］ピリジン、２−（２−クロロフェニル）−５−（ピロリジン−１−イル）オキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジン、２−（３−クロロフェニル）−５−（ピロリジン−１−イル）オキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジン、２−（４−フルオロフェニル）−５−（ピロリジン−１−イル）オキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジン、２−フェニル−５−（ピペリジン−１−イル）オキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジン、２−フェニル−５−（ピペリジン−１−イル）チアゾロ［５，４−ｂ］ピリジン、２−（２−クロロフェニル）−５−（ピペリジン−１−イル）オキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジン、２−（３−フルオロフェニル）−５−（ピペリジン−１−イル）オキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジン、２−（３−クロロフェニル）−５−（ピペリジン−１−イル）オキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジン、３−（５−（ピペリジン−１−イル）オキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジン−２−イル）ベンゾニトリル、２−（４−フルオロフェニル）−５−（ピペリジン−１−イル）オキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジン、２−（４−ブロモフェニル）−５−（ピペリジン−１−イル）オキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジン、２−（４−メトキシフェニル）−５−（ピペリジン−１−イル）オキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジン、２−（３−クロロフェニル）−Ｎ−メチルオキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジン−５−アミンまたは２−（４−クロロフェニル）−Ｎ−メチルオキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジン−５−アミンであってもよい。
【００５５】
他の様相は、反応性星状細胞内で、ベストロフィン１チャネルの細胞内分布様相を、細胞体並びに主突起からマイクロドメイン方向に変化させる物質を有効成分として含む退行性脳疾患の予防用または治療用の薬学的組成物を提供する。
【００５６】
他の様相は、反応性星状細胞内で、ＧＡＢＡトランスアミナーゼをコーディングする遺伝子の発現を誘導したり、あるいはＧＡＢＡトランスアミナーゼ蛋白質の活性を増大させる物質を有効成分として含む退行性脳疾患の予防用または治療用の薬学的組成物を提供する。
【００５７】
本発明の薬学的組成物は、化学物質、ヌクレオチド、アンチセンス、ｓｈＲＮＡ、ｓｉＲＮＡオリゴヌクレオチド及び天産物抽出物を有効成分として含んでもよい。
【００５８】
一具体例によれば、前記退行性脳疾患は、アルツハイマー病、軽度認知障害、脳卒中及び血管性痴呆、前頭側頭葉痴呆、レビー小体痴呆、クロイツフェルト・ヤコブ病、外傷性頭部損傷、梅毒、後天性免疫欠乏症候群及びその他ウイルス感染、脳膿瘍、脳腫瘍、多発性硬化症、代謝性疾患による痴呆、低酸素症、パーキンソン病、ルー・ゲーリック病、ハンチントン病、ピック病、筋萎縮性側索硬化症、癲癇、虚血、中風、注意欠陥・多動性障害、精神分裂症、憂鬱症、躁鬱症、外傷後ストレス障害、脊髄損傷及び脊髄炎からなる群から選択されるものであるが、、それらに限定されるものではない。
【００５９】
前記薬学的組成物は、薬学的に許容される担体を含んでもよい。前記薬学的組成物に含まれる薬学的に許容される担体は、製剤時に一般的に利用されるものであり、ラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、澱粉、アカシアゴム、リン酸カルシウム、アルギネート、ゼラチン、ケイ酸カルシウム、微細結晶性セルロース、ポリビニルピロリドン、セルロース、水、シロップ、メチルセルロース、メチルヒドロキシベンゾエート、プロピルヒドロキシベンゾエート、滑石、ステアリン酸マグネシウム及びミネラルオイルなどを含むが、それらに限定されるものではない。前記薬学的組成物は、前記成分以外に、潤滑剤、湿潤剤、甘味剤、香味剤、乳化剤、懸濁剤、保存剤などを追加して含んでもよい。適した薬学的に許容される担体及び製剤は、Remington’s Pharmaceutical Sciences（１９ｔｈ ｅｄ．，１９９５）に詳細に記載されている。
【００６０】
前記薬学的組成物は、経口または非経口の投与（例えば、静脈内投与、腹腔内投与、筋肉内投与、皮下投与または局部投与）が可能である。
【００６１】
前記薬学的組成物の適した投与量は、製剤化方法、投与方式、患者の年齢、体重、性、病的状態、飲食、投与時間、投与経路、排泄速度及び反応感応性のような要因によって多様に処方される。一方、前記薬学的組成物の投与量は、望ましくは、１日当たり０．００１−１００ｍｇ／ｋｇ（体重）であってもよい。
【００６２】
前記薬学的組成物は、当発明が属する技術分野で当業者が容易に実施することができる方法によって、薬学的に許容される担体及び／または賦形剤を利用して製剤化することによって、単位容量形態に製造されたり、あるいは多用量容器内に入れて製造される。このとき、剤形は、油性媒質または水性媒質中の溶液、懸濁液または乳化液形態であるか、エキス剤、粉末剤、顆粒剤、錠剤またはカプセル剤の形態でもあり、分散剤または安定化剤を追加して含んでもよい。
【００６３】
以下、一つ以上の具体例について、実施例を介してさらに詳細に説明する。しかし、それら実施例は、一つ以上の具体例を例示的に説明するためのものであり、本発明の範囲がそれら実施例に限定されるものではない。
【実施例】
【００６４】
〔実施例１−１：アルツハイマー・モデルマウスでの反応性星状細胞内ＧＡＢＡ増加の確認〕
アルツハイマー病で、正常星状細胞が反応性星状細胞に変わりつつ、細胞内ＧＡＢＡの量が増加するか否かを確認するために、周知のアルツハイマー病モデルであるＡＰＰｓｗｅ／ＰＳＥＮ１形質転換マウス（購入先：The Jackson Laboratory、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｊａｘ．ｏｒｇ）で、免疫組織化学法を遂行した。また、免疫染色を終えた組織に、チオフラビン−Ｓ染色を追加して遂行し、アルツハイマー病の特徴であるアミロイドプラーク（plaque）を共に観察した。
【００６５】
８〜９ヵ月齢のＡＰＰｓｗｅ／ＰＳＥＮ１マウスに、アバチン（avertin）で深く麻酔をかけた、４％パラホルムアルデヒドで潅流固定させた。脳を取り出し、海馬の３０μｍ厚の冠状超冷凍薄切薄片（coronal cryostat sections）を得て、りん酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で３回洗い、ブロッキング溶液（０．３％ Triton−Ｘ、２％ normal serum in ０．１Ｍ ＰＢＳ、Sigma）で１時間反応させた。ニワトリ抗ＧＦＡＰ抗体（１：５００、Chemmicon）及びギニアピッグ抗ＧＡＢＡ抗体（１：１，０００、Chemicon）の混合物と共に、４℃で一晩振蕩培養した。ＰＢＳで３回洗浄し、次に、対応する二次抗体が接合された抗ニワトリAlexa ４８８（１：２００、Invitrogen）及び抗ギニアピッグAlexa ６４７（１：２００、Invitrogen）で３時間反応させた後、さらにＰＢＳで３回洗浄した。５０％エタノール水溶液に溶かした１ｍＭチオフラビン−Ｓ（thioflavin−Ｓ）に８分間反応させ、８０％エタノールに１０秒間２回、三次蒸溜水に１０秒間３回洗浄した。染色が終わった組織は、ＰＢＳに移し、スライドガラス上に載せ、マウンティング培地（Dako）にマウンティングさせた。ＦＶ１０００共焦点顕微鏡（Olympus）を使用し、一連の共焦点蛍光イメージを得た。前記イメージは、Olympus ＦＬＵＯＶＩＥＷ software ｖｅｒ．２．１で加工した。
【００６６】
前記で得られたＡＰＰｓｗｅ／ＰＳＥＮ１形質転換マウス海馬でのＧＦＡＰ及びＧＡＢＡに対する抗体を利用した高倍率（ｘ４０）免疫組織化学共焦点イメージを図１に示した。図１で、アルツハイマー・モデルマウス海馬では、正常マウスにはないアミロイドプラーク（青色）が観察された。星状細胞マーカーであるＧＦＡＰ（緑色）で染色された細胞は、アルツハイマーモデルで、反応性星状細胞に変化しつつ、ＧＦＡＰで染色された程度が大きく上昇し、細胞体の大きさと主突起の太さとが増大したことが分かる。正常星状細胞内部には、ＧＡＢＡ（赤色）がないか、ほぼない一方、アルツハイマーモデルでは、細胞内ＧＡＢＡの量が劇的に増加するということを確認することができた。一方、ＧＦＡＰでは染色されないが、ＧＡＢＡで染色されたインターニューロン（interneuron）は、正常マウスとアルツハイマー・モデルマウスとで、大きさやＧＡＢＡ染色程度に差がなかった。
【００６７】
〔実施例１−２：アルツハイマー患者の脳での反応性星状細胞内ＧＡＢＡ増加の確認〕
アルツハイマー病にかかった患者で、正常星状細胞が反応性星状細胞に変わりつつ、細胞内ＧＡＢＡの量が増加するか否かを確認するために、正常人とアルツハイマー病患者との死後脳組織（出所：ボストン医科大学）の大脳部分で、免疫組織化学法を遂行した。固定された死後脳組織を、３０μｍ厚の冠状超冷凍薄切薄片（coronal cryostat sections）を得て、過酸化水素水溶液に反応させ、組織内に残っているフェロキシダーゼ酵素の活性を抑制させた後、ＰＢＳで３回すすぎ、ブロッキング溶液（０．３％Triton−Ｘ、０．１Ｍ ＰＢＳ中の２％ normal serumin、Sigma）で１時間反応させた。次に、ギニアピッグ抗ＧＡＢＡ抗体（１：１０００、Chemicon）の混合物と共に、４℃で一晩振盪培養した。ＰＢＳで３回洗浄し、次に、対応する二次抗体が接合された抗ギニアピッグＨＲＰ（１：２００、Invitrogen）で３時間反応させた後、再びＰＢＳで３回洗浄した。次に、ＤＡＢ溶液と反応させ、ＨＲＰ活性によって褐色の染色反応を現れようにした後、染色が終わった組織はＰＢＳに移し、スライドガラス上に載せ、マウンティング培地（Dako）にマウンティングして光学顕微鏡で観察した。正常人とアルツハイマー患者との死後大脳組織で、ＧＡＢＡに対する抗体を利用した高配率（ｘ４０）免疫組織化学光学イメージを図９に示した。図９で、正常人の大脳星状細胞内部には、ＧＡＢＡ（褐色）がないか、あるいはほとんどない一方、アルツハイマー患者の大脳星状細胞内部には、細胞内ＧＡＢＡの量が劇的に増加するということを確認することができた。前記結果から、ＧＡＢＡを蓄積する反応性星状細胞が現れる現象が、アルツハイマーモデルマウスだけではなく、実際のヒト患者でも同一に現れるので、本技術が、アルツハイマー病の予防と治療とに適用されることを裏付ける。
【００６８】
〔実施例２−１：反応性星状細胞のＭＡＯ−Ｂ、ベストロフィン１及びＧＡＢＡトランスアミナーゼの発現変化確認〕
反応性星状細胞内のＭＡＯ−Ｂ、ベストロフィン１及びＧＡＢＡトランスアミナーゼの発現変化を確認するために、下記のように、抗体の種類を追加したことを除いては、実施例１と同じ方法を使用し、免疫組織化学染色を遂行した。
【００６９】
一次抗体は、ニワトリ抗ＧＦＡＰ抗体（１：５００、Chemmicon）及びギニアピッグ抗ＧＡＢＡ抗体（１：１，０００、Chemicon）を基本とし、ウサギ抗ＭＡＯ−Ｂ抗体（１：５０、Sigma）、ウサギ抗Ｂｅｓｔ１抗体（１：１００、Soria et al．，2006）、ウサギ抗ＧＡＢＡトランスアミナーゼ抗体（１：１００、Epitomics）を追加した。二次抗体は、抗ニワトリDyLight ４８８（１：２００、Jackson ＩＲ）及び抗ギニアピッグAlexa ６４７（１：２００、Invitrogen）に、抗ウサギAlexa ５５５（１：２００Invitrogen）抗体を追加して反応させた。
【００７０】
その結果、図２から分かるように、反応性星状細胞内で、ＭＡＯ−Ｂが増加したということを確認することができ、図３から分かるように、反応性星状細胞内のＧＡＢＡトランスアミナーゼが減少するということを確認することができ、かようなＭＡＯ−Ｂの発現量増加及びＧＡＢＡトランスアミナーゼの発現量減少によって、反応性星状細胞内にＧＡＢＡの量が増加するということが分かった。また、図４から分かるように、対照群（wild type）と比較し、ベストロフィン１チャネルの細胞内分布位置（subcellular localization）が変化したということを確認することができ、これによって、ＧＡＢＡの分泌様相が変化し、アルツハイマー疾患を誘導するということが分かった。
【００７１】
〔実施例２−２：アルツハイマーモデルマウスの脳でのＭＡＯ−Ｂの蛋白質活性上昇の確認〕
本実験は、Aldrichから購買したヒトＭＡＯ−Ｂ酵素と、Amplex（登録商標） Red monoamine oxidase assay kitとを利用し、スタック溶液準備は、マニュアルに従った。このキット内には、５Ｘ reaction buffer、Amplex（登録商標） red reagent（１ｍｇ）、ＨＲＰ（horseradish peroxidase）、ＤＭＳＯ、Ｈ２Ｏ２、ｐ−チラミン（ＭＡＯ−Ａ，Ｂの基質）、ベンジルアミン（ＭＡＯ−Ｂの基質）、クロルジリン（ＭＡＯ−Ａの阻害剤）、パルギリン（ＭＡＯ−Ｂの阻害剤）が入っている。そのうち、ＭＡＯ−Ｂ基質として、ベンジルアミンを使用し、ＭＡＯ−Ｂの阻害剤としては、パルギリンを使用した。全体基質として作用する溶液の準備過程は、次の通りである。
【００７２】
Amplex（登録商標） red １ｍｇにＤＭＳＯ ２００μｌを入れて十分に溶かした２００μｌ、ＨＲＰと１ｍｌの１Ｘ bufferとを混ぜた１００μｌ、ベンジルアミンと１．２ｍｌのｄＨ２Ｏとに溶かした２００μｌを９．５ｍｌの１Ｘ bufferに入れて総１０ｍｌを作る。この量は、１００個のウェルに使用することができる。ＭＡＯ−Ｂ阻害剤であるパルギリンに１ｍｌのｄＨ２Ｏを混ぜて各ウェル当たり０．５μｌを入れる。
【００７３】
まず、準備した９６ウェルの最初の列（レーン）と２列目とにアルツハイマーマウスから分離した海馬抽出物を入れ、３列目と４列目とには、正常マウスから分離した海馬抽出物を入れる。マウスに麻酔をかけた後、脳を取り出して海馬を摘出し、海馬からＣＡ１部位とＤＧ部位とを別途に分離した。分離した組織は、新鮮な状態で均質化溶液に入れて押しつぶして均質化させた。遠心分離機を弱く回して大きい塊りを除去し、上澄み液だけ採取した後、高速遠心分離（１３，０００ｒｐｍ、２０分）してミトコンドリアが濃縮された沈殿物を得た。海馬から抽出したこの沈殿物を、５０μｇずつＭＡＯ−Ｂ酵素活性測定に利用した。
【００７４】
２列目と４列目には、パルギリン阻害製剤を０．５μｌずつ追加して入れる。実験の誤差を減らし、正確性を高めるために、１化合物当たり３回ずつ実験を反復した。３０分後、暗室で基質に作用する溶液を１００μｌずつ入れる。Amplex（登録商標） reagentが光に敏感であるために、暗室で実験を行う。結局、各ウェル当たり２００μｌの量がなる。２〜３時間後、発色の程度を測定すれば、最初の列と２列目とのデータ値の違いが、アルツハイマーマウスの海馬で、純粋にＭＡＯ−Ｂ酵素とその基質との反応による活性であり、３列目と４列目とのデータ値の違いが、正常マウスの海馬で、純粋にＭＡＯ−Ｂ酵素とその基質との反応による活性である。
【００７５】
図１４から、アルツハイマーマウスで、正常マウスに比べて、海馬のＭＡＯ−Ｂ活性が増大しているということが分かる。全体海馬抽出物はもとより、特に、海馬のＤＧ部分で、ＭＡＯ−Ｂの活性が２５％ほど上昇した。これにより、ＭＡＯ−Ｂの活性が増大し、アルツハイマー疾患を誘導するということが分かった。
【００７６】
〔実施例２−３：アルツハイマー患者の脳での反応性星状細胞のＭＡＯ−Ｂ発現増加の確認〕
反応性星状細胞内のＭＡＯ−Ｂの発現変化を確認するために、下記のように、抗体の種類を追加したことを除いては、実施例２と同じ方法を使用し、アルツハイマー患者の死後大脳組織で免疫組織化学染色を遂行した。
【００７７】
一次抗体は、ニワトリ抗ＧＦＡＰ抗体（１：５００、Chemmicon）、ギニアピッグ抗ＧＡＢＡ抗体（１：１０００、Chemicon）及びウサギ抗ＭＡＯ−Ｂ抗体（１：５０、Sigma）を使用した。二次抗体は、抗ニワトリDyLight４８８（１：２００、JacksonＩＲ）及び抗ギニアピッグAlexa ６４７（１：２００、Invitrogen）に、抗ウサギAlexa ５５５（１：２００、Invitrogen）抗体を追加して反応させた。
【００７８】
その結果、図１０Ａから分かるように、反応性星状細胞内で、ＭＡＯ−Ｂが増加したということを確認することができた。かようなＭＡＯ−Ｂの発現量増加によって、反応性星状細胞内に、ＧＡＢＡの量が増加するということが分かった。これにより、ヒトアルツハイマー患者でも、反応性星状細胞内のＭＡＯ−Ｂの発現量増加によってＧＡＢＡが増加し、アルツハイマー疾患を誘導するということが分かった。
【００７９】
また、quantitative ＲＴ−ＰＣＲ法を利用し、アルツハイマー患者の脳で、ＭＡＯ−ＢのｍＲＮＡ発現量が増加したということを確認した。アルツハイマー患者の死後脳組織から総ＲＮＡを採取し、オリゴｄＴプライマー及び逆転写酵素を利用して、第１鎖ｃＤＮＡを製造する。続いて、第１鎖ｃＤＮＡをテンプレートとして利用し、ＭＡＯ−Ｂ蛋白質とＧＦＡＰ蛋白質とをコーディングする遺伝子特異的プライマーセットを利用し、ＰＣＲ反応を実施する。その後、ＰＣＲ増幅産物を電気泳動と、形成されたバンドを分析し、前記蛋白質をコーディングする遺伝子の発現量変化を測定する。
【００８０】
その結果、図１０Ｂから分かるように、星状細胞マーカーであるＧＦＡＰの発現量が、アルツハイマー患者の脳で増加し、図１０Ｃでのように、ＧＡＢＡを作る酵素であるＭＡＯ−Ｂの発現量も、アルツハイマー患者の脳で増加していた。図１０Ｄは、各患者サンプルのＧＦＡＰとＭＡＯ−Ｂ発現量との相関関係を示したものである。これにより、アルツハイマー患者の脳で、ＭＡＯ−Ｂ蛋白質の量だけではなく、ｍＲＮＡ発現量も増加しているということが分かった。
【００８１】
〔実施例３−１：アルツハイマー・モデルマウスでの反応性星状細胞のＧＡＢＡ生産による海馬組織内持続性ＧＡＢＡの増加の確認〕
実施例１によって製作されたスライドから、ＦＶ１０００共焦点顕微鏡（Olympus）を使用し、低倍率（ｘ１０）で共焦点蛍光イメージを得た。図５から分かるように、アルツハイマー・モデルマウスの海馬で、歯状回（dentate gyrus）の分子層（molecular layer）部分に、ＧＡＢＡ染色が全体的に増加した（白色矢印）。これは、細胞内外のＧＡＢＡ量が増えることを意味し、実施例２の結果と共に、反応性星状細胞内で、ＭＡＯ−Ｂが増加することによって、細胞内部のＧＡＢＡが蓄積し、ベストロフィン１チャネルの細胞内分布位置（subcellular localization）が変化することによって、細胞外にＧＡＢＡが分泌され、持続性ＧＡＢＡになるということを確認することができた。かようなＧＡＢＡの分泌様相変化によって、アルツハイマー疾患を誘導するということを予想することができた。
【００８２】
〔実施例３−２：アルツハイマーモデルマウスでの反応性星状細胞のＧＡＢＡ生産による海馬組織内細胞外でのＧＡＢＡ濃度の増加の確認〕
アルツハイマーモデルマウスの海馬で、microdialysis微細透析法と、ＨＰＬＣ高性能液体クロマトグラフィ法とを利用し、組織内細胞外のＧＡＢＡ濃度が上昇するということを確認した。前記のモデルマウスに、isofluraneで麻酔をかけた後、stereotaxicに固定させ、図１５ａ及び、図１５ｂのように、海馬でアミロイドプラークが多く生じる部位に、guide cannulaと微細透析プローブとを移植した。マウスが麻酔から完全に覚めた後、プローブを介して人工脳脊髓液を流しつつ、微細透析されて出てきた液体を２０分間隔で採集して、この液体に入っているＧＡＢＡの量を高性能液体クロマトグラフィで分析した。
【００８３】
図１５で、アルツハイマーモデルマウスは、組織内細胞外のＧＡＢＡの濃度が、正常マウスに比べて、２倍ほど上昇しているということが分かった。これは、反応性星状細胞内で作られたＧＡＢＡが蓄積された後、細胞外に分泌されて持続性ＧＡＢＡを形成しているということを意味し、かようなＧＡＢＡの分泌増加によって、アルツハイマー疾患を誘導するということを予想することができた。
【００８４】
〔実施例３−３：アルツハイマーモデルマウスでの反応性星状細胞のＧＡＢＡ生産による海馬神経細胞が受ける抑制信号の増加の確認〕
アルツハイマーモデルマウスの海馬にある神経細胞が、ＧＡＢＡによって媒介された抑制信号を受ける程度を、全細胞パッチクランプ記録（whole-cell patch clamp)法で測定した。
【００８５】
アルツハイマーモデルマウスに、halothaneで麻酔にかけた後、頭を切って頭蓋骨から脳を迅速に取り出し、切断溶液（ice-cold cutting solution）に浸漬させ、前記溶液は、２５０ｍＭスクロース、２６ｍＭ ＮａＨＣＯ３、１０ｍＭ Ｄ（＋）グルコース、４ｍＭ ＭｇＣｌ２、３ｍＭ myo-inositol、２．５ｍＭ ＫＣｌ、２ｍＭ sodium pyruvate、１．２５ｍＭ ＮａＨ２ＰＯ４、０．５ｍＭ ascorbic acid、０．１ｍＭ ＣａＣｌ２及び１ｍＭkynurenic acid（ｐＨ７．４）を含む。あらゆる溶液を９５％Ｏ２及び５％ＣＯ２でガス処理した。脳の前部と小脳部分とをナイフで切って除去した後、海馬を含む３００μｍ厚の薄片をミクロトーム（Leica ＶＴ １０００）で切断し、人工脳脊髓液に移し、前記溶液は、１２６ｍＭ ＮａＣｌ、２４ｍＭ ＮａＨＣＯ３、１ｍＭ ＮａＨ２ＰＯ４、２．５ｍＭ ＫＣｌ、２．５ｍＭ ＣａＣｌ２、２ｍＭ ＭｇＣｌ２及び１０ｍＭ Ｄ（＋）グルコース（ｐＨ７．４）を含む。薄片を少なくとも常温で、４０分間インキュベーティングした。全細胞パッチ記録のために、海馬薄片を、flow controller（Synaptosoft）と、真空ポンプ（Charles Austen、model Capex ８Ｃ）とによって調節される人工脳脊髓液で継続して流し（superfusing、flow rate：２ｍｌ／ｍｉｎ）、電子生理学的記録チャンバ（ＲＣ−２６Ｇ、WarnerIn struments）に移した。スライスチャンバを、定立顕微鏡（upright microscope、Olympus）の対物台上に載せ、微分干渉対比（differential interference contrast）及び赤外線オプティックで、Ｘ６０水浸体（water immersion objective）で観察した。細胞形態を、Imaging Workbench ６．０（ＩＮＤＥＣ Systems，Ｉｎｃ．）、camera controller（Hamamatsu、Ｃ４７４２−９５）及びlight microscope controller（Olympus、ＴＨ４−２００）を介して視覚的に確認した。ほとんどの海馬の歯状回部分に位置する神経細胞である顆粒細胞（granule cell）の細胞体（somata）から、全細胞電圧クランプ記録を得た。
【００８６】
顆粒細胞記録のために、厚壁ＢＯＬＯＳＩＬＬＩＫ'ＥＩＴＥガラス毛細管（thick-walled borosilicate glass capillaries、ＳＣ１５０Ｆ−１０、Warner instrument Corp）から、パッチピペット（８−１２ＭΩ）を作り、ピペットを、次の組成を有する内部溶液で充填させた：１３５ｍＭ ＣｓＣｌ、４ｍＭ ＮａＣｌ、０．５ｍＭ ＣａＣｌ２、１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、５ｍＭ ＥＧＴＡ、２ｍＭ Ｍｇ−ＡＴＰ、０．５ｍＭ Ｎａ２−ＧＴＰ及び１０ｍＭ ＱＸ−３１４；ＣｓＯＨでｐＨ７．２に調整（２７８−２８５ｍＯｓｍｏｌ）（Rossi、ｅｔ ａｌ．，２００３）。かような内部溶液、電圧クランプＥｃｌ＝０ｍＶ及び維持電位−７０ｍＶに内向電流（inward current）が誘導された。顆粒細胞をパッチピペットで、全細胞パッチクランプ記録を行いつつ、興奮性物質であるglutamateによる神経信号伝達を抑制するために、ＡＰ−５とＣＮＱＸとを含んだ人工脳脊髓液を５分以上流し、抑制性物質であるＧＡＢＡによる神経信号だけ選択的に記録した。５分が経過すれば、ＧＡＢＡによる神経信号伝達を抑制するbicucullineを含んだ人工脳脊髓液を３分間流し、ＧＡＢＡ信号を抑制した。Bicuculillineで抑制される前後のbaselineを比較すれば、顆粒細胞が受ける持続性ＧＡＢＡ信号の量を知ることができた。
【００８７】
前記得られた信号を計数化し、ｐＣＬＡＭＰ １０．２ software（Molecular Devices）を使用し、Digidata １４４０Ａ（Molecular Devices）及びMulticlamp ７００Ｂ amplifier（Molecular Devices）で、５０μｓ間隔で（に）サンプリングした。Clampfit １０．２（Molecular Devices）、SigmaPlot１０．０（ＳＰＳＳ）及びExcel ２００３（Microsoft）を利用してオフライン分析を遂行した。
【００８８】
本実施例で使われたあらゆる薬物と化学物質は、次のような取り立てての言及がない限り、Sigma社から購入したものである：ＱＸ−３１４（Tocris）、ＡＰ−５（Tocris）、ＣＮＱＸ（Tocris）、bicuculline methobromide（Tocris）。
【００８９】
数値データは、means±Ｓ．Ｅ．Ｍで示した。比較用データの有意性は、Student’s two-tailed unpaired t testによって求め、有意レベルは、＊（ｐ＜０．０５）、＊＊（ｐ＜０．０１）及び＊＊＊（ｐ＜０．００１）で示した。データは、２ｋＨｚでフィルタリングした。
【００９０】
実験結果、アルツハイマーモデルマウスの海馬歯状回の顆粒細胞は、正常マウスと比較し、さらに多くの持続性ＧＡＢＡによる抑制を受けていた（図１６）。ＧＡＢＡによる細胞内塩素イオンの流入を示す電流の大きさは、アルツハイマーモデルマウスで、平均１２ｐＡ、正常マウスで８ｐＡであった。細胞の面積を考慮した持続性電流密度も、アルツハイマーマウスで、正常に比べて、２個ほど増加していた。これにより、アルツハイマー病の海馬内の反応性星状細胞が作ったＧＡＢＡが、細胞外の組織内に分泌され、神経細胞を抑制するということが分かる。これは、結果的に、神経細胞の円滑な信号伝達を抑制し、正常な脳機能を妨害し、アルツハイマー病の主な症状である記憶力減退などとして現れるものであると予想することができる。
【００９１】
〔実施例４−１：ウイルス感染モデルマウスでの反応性星状細胞内ＧＡＢＡ増加の確認〕
アルツハイマーモデルマウスのｌ代わりに、wildtype Ｃ５７ＢＬ／６マウス（購入先：The Jackson Laboratory）を利用し、マウスに麻酔をかけてstereotaxic装備に固定させた後、視床核部位に、ＧＦＰ蛍光蛋白質を発現するアデノウイルスを注射し、ウイルス感染を誘導した。ウイルスに感染されたマウスから、実施例１と同じ方法を使用し、免疫化学的試験を遂行した。
【００９２】
図１１から分かるように、ウイルスに感染されていない視床核では、星状細胞（緑色）にＧＡＢＡがほとんどないが、アデノウイルスを感染させた視床核では、アルツハイマーモデルと同様に、ＧＡＢＡをたくさん有した星状細胞（黄色）が現れた。
【００９３】
前記結果は、ＧＡＢＡを蓄積する反応性星状細胞が生じる状況が、アルツハイマー病だけではなく、ウイルス感染を含んだ他の退行性脳疾患及び脳損傷まで拡張するということを裏付ける。
【００９４】
〔実施例４−２：パーキンソン病モデルラットとマウスとでの反応性星状細胞内ＧＡＢＡ増加並びにＭＡＯ−Ｂ、ベストロフィン１の発現の変化確認〕
パーキンソン病モデルラットとしては、６−ＯＨＤＡを脳に注射したwildtypeラットを使用し、パーキンソン病モデルマウスとしては、ＭＰＴＰを腹腔に注射したwildtype Ｃ５７ＢＬ／６マウス（購入先：The Jackson Laboratory）を利用した。２つのモデルいずれも黒質緻密部（substantia nigra、pars compacta）部分にあるドーパミンを生成する神経細胞を殺し、パキスン症状を誘導した。これにより、実施例１と同じ方法を使用し、免疫化学的試験を遂行した。
【００９５】
図１２から分かるように、パーキンソン病モデルラットで、アルツハイマーモデルと同様に、反応性星状細胞内でＭＡＯ−Ｂ発現が上回り、ＧＡＢＡの量が増えることを確認することができた。また、図１３から分かるように、パーキンソン病モデルマウスで、ベストロフィン１チャンネルの細胞内分布様相が、反応性星状細胞で、マイクロドメインから細胞体及び主突起の方向に順次変化し、発現量も増加した。また、反応性星状細胞内で、ＧＡＢＡの量も増えた。
【００９６】
前記結果は、ＧＡＢＡを蓄積する反応性星状細胞が生じる状況が、アルツハイマー病だけではなく、パーキンソン病を含んだ他の退行性脳疾患及び脳損傷まで拡張するということを裏付ける。
【００９７】
〔実施例４−３：海馬損傷マウスモデルでの反応性星状細胞内ＧＡＢＡ増加と、ＭＡＯ−Ｂ、ベストロフィン１及びＧＡＢＡトランスアミナーゼの発現変化との確認〕
アルツハイマー・モデルマウスの代わりに、ＧＦＡＰ−ＥＧＦＰ形質転換マウス（購入先：The Jackson Laboratory）を利用し、実施例１と同じ方法でマウスに麻酔をかけ、麻酔状態のマウスの海馬に尖ったピンを導入し、海馬損傷を誘導した。海馬損傷後５日目、１４日目、マウスから実施例１と同じ方法を使用して免疫化学的試験を遂行した。
【００９８】
図５から分かるように、海馬損傷後５日目（injury＋５days）、１４日目（injury＋１４days）で、アルツハイマーモデルと同様に、反応性星状細胞のベストロフィン１チャネルの細胞内分布様相が、反応性星状細胞で、マイクロドメインから細胞体並びに主突起の方向に順次変化し、図７から分かるように、海馬損傷後５日目に、反応性星状細胞内で、ＭＡＯ−Ｂ発現が増加するということを確認することができた。また、図８から分かるように、海馬損傷後５日目に、星状細胞の細胞体並びに主突起の大きさ増大に比べ、細胞面積当たりＧＡＢＡトランスアミナーゼの発現は、減少したということを確認することができた。
【００９９】
前記結果は、ＧＡＢＡを蓄積する反応性星状細胞が生じうる状況が、アルツハイマー病だけではなく、他の退行性脳疾患及び脳損傷まで拡張されるということを裏付けている。
【０１００】
〔実施例５：ＭＡＯ−Ｂの活性を阻害させる物質のスクリーニングのための化合物の製造〕
前記実施例で説明したように、本発明の退行性脳疾患の治療と関連するＭＡＯ−Ｂの活性を阻害させる化合物をスクリーニングするために、下記のような方法で、全７９種の化合物を得た。
【０１０１】
〔実施例５−１：Ｎ−（２，６−ジクロロピリジン−３−イル）ベンズアミドの合成〕
【０１０２】
【化２】
0005589037.tif 000003
【０１０３】
塩化ベンゾイル（０．０３８ｍｌ、０．３３ｍｍｏｌ）をアセトニトリル４ｍｌに溶かした後、２，６−ジクロロピリジン−３−アミン（５０ｍｇ、０．３０ｍｍｏｌ）を入れ、７０℃で６時間還流した。ＴＬＣで反応終結を確認し、常温に冷やした後に減圧蒸留した。生成された褐色固体を少量のメタノールに入れれば、白色固体が生成されるが、これを濾過乾燥させ、目的化合物５８．７ｍｇ（０．２２ｍｍｏｌ、収得率：７３〜９０％）を得た。
【０１０４】
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＭｅＯＤ）δ ８．２９（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ）、８．００−７．９８（ｍ，２Ｈ）、７．６２（ｔ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，１Ｈ）、７．５７−７．５０（ｍ，３Ｈ）
〔実施例５−２：２−クロロ−Ｎ−（２，６−ジクロロピリジン−３−イル）ベンズアミドの合成〕
【０１０５】
【化３】
0005589037.tif 000004
【０１０６】
開始物質として、２−クロロベンゾイルクロリド（０．０４ｍｌ、０．３３ｍｍｏｌ）を使用したことを除いては、実施例５−１と同じ方法で目的化合物６５ｍｇ（０．１９ｍｍｏｌ、７５％）を得た。
【０１０７】
１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ ８．９８（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，１Ｈ）、８．６８（ｓ，１Ｈ）、７．８０（ｄ，Ｊ＝６．６７Ｈｚ，１Ｈ）、７．５６−７．５２（ｍ，２Ｈ）、７．４９−７．４５（ｍ，１Ｈ）、７．３９（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，１Ｈ）
〔実施例５−３：Ｎ−（２，６−ジクロロピリジン−３−イル）−３−フルオロベンズアミドの合成〕
【０１０８】
【化４】
0005589037.tif 000005
【０１０９】
開始物質として、３−フルオロベンゾイルクロリド（０．０４ｍｌ、０．３３ｍｍｏｌ）を使用したことを除いては、実施例５−１と同じ方法で、目的化合物４５ｍｇ（０．１８ｍｍｏｌ、６０〜１００％）を得た。
【０１１０】
１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ ８．９３（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，１Ｈ）、８．３７（ｓ，１Ｈ）、７．６８（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ）、７．５７（ｑ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ）、７．４１−７．３４（ｍ，２Ｈ）
〔実施例５−４：３−クロロ−Ｎ−（２，６−ジクロロピリジン−３−イル）ベンズアミドの合成〕
【０１１１】
【化５】
0005589037.tif 000006
【０１１２】
開始物質として、３−クロロベンゾイルクロリド（０．０４ｍｌ、０．３３ｍｍｏｌ）を使用したことを除いては、実施例５−１と同じ方法で、目的化合物５８．８ｍｇ（０．１９ｍｍｏｌ、５９％）を得た。
【０１１３】
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＭｅＯＤ）δ ８．２２（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，１Ｈ）、７．９７（ｔ，Ｊ＝１．９Ｈｚ，１Ｈ）、７．９０−７．８８（ｍ，１Ｈ）、７．６２−７．６１（ｍ，１Ｈ）、７．５（ｄｄ，Ｊ＝７．９，１１．６Ｈｚ，２Ｈ）
〔実施例５−５：Ｎ−（２，６−ジクロロピリジン−３−イル）−３−メチルベンズアミドの合成〕
【０１１４】
【化６】
0005589037.tif 000007
【０１１５】
開始物質として、３−メチルベンゾイルクロリド（０．６３ｍｌ、４。７ｍｍｏｌ）を使用したことを除いては、実施例５−１と同じ方法で、目的化合物１ｇ（３．６ｍｍｏｌ、８３％）を得た。
【０１１６】
１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ ８．９２（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ）、８．３６（ｓ，１Ｈ）、７．７２（ｓ，１Ｈ）、７．７０−７．６７（ｍ，１Ｈ）、７．４３（ｄ，Ｊ＝４．２Ｈｚ，１Ｈ）、７．３５（ｄ，Ｊ＝３．３Ｈｚ，１Ｈ）、２．４７（ｓ，３Ｈ）
〔実施例５−６：Ｎ−（２，６−ジクロロピリジン−３−イル）−３−ニトロベンズアミドの合成〕
【０１１７】
【化７】
0005589037.tif 000008
【０１１８】
開始物質として、３−ニトロベンゾイルクロリド（６２６ｍｇ、３．４ｍｍｏｌ）を使用したことを除いては、実施例５−１と同じ方法で、目的化合物９６０ｍｇ（３．０７ｍｍｏｌ、９９％）を得た。
【０１１９】
１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ ８．８７（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ）、８．７７（ｓ，１Ｈ）、８．４９（ｄｄ，Ｊ＝２．４，６．０Ｈｚ，１Ｈ）、８．３７（ｓ，１Ｈ）、８．２４（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ）、７．８９（ｔ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ）、７．５８（ｄ，Ｊ＝３．６Ｈｚ，１Ｈ）
〔実施例５−７：３−シアノ−Ｎ−（２，６−ジクロロピリジン−３−イル）ベンズアミドの合成〕
【０１２０】
【化８】
0005589037.tif 000009
【０１２１】
開始物質として、３−シアノベンゾイルクロリド（１ｇ、６．１ｍｍｏｌ）を使用したことを除いては、実施例５−１と同じ方法で、目的化合物１．５ｇ（５．１ｍｍｏｌ、８３％）を得た。
【０１２２】
１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ ８．４１（ｓ，１Ｈ）、８．２９（ｄ，Ｊ＝１０．５Ｈｚ，１Ｈ）、８．１８−８．０９（ｍ，２Ｈ）、７．７８（ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ）、７．６５（ｄｄ，Ｊ＝０．９，７．２Ｈｚ，１Ｈ）
〔実施例５−８：Ｎ−（２，６−ジクロロピリジン−３−イル）−４−フルオロベンズアミドの合成〕
【０１２３】
【化９】
0005589037.tif 000010
【０１２４】
開始物質として、４−フルオロベンゾイルクロリド（０．０４ｍｌ、０．３３ｍｍｏｌ）を使用したことを除いては、実施例５−１と同じ方法で、目的化合物７０ｍｇ（０．２８ｍｍｏｌ、９４％）を得た。
【０１２５】
１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ ８．７２（ｄ，Ｊ＝４．５Ｈｚ，１Ｈ）、８．２４（ｓ，１Ｈ）、７．７２（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ）、７．４６（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，２Ｈ）、７．２８（ｄ，Ｊ＝８．０ｚ，１Ｈ）
〔実施例５−９：４−クロロ−Ｎ−（２，６−ジクロロピリジン−３−イル）ベンズアミドの合成〕
【０１２６】
【化１０】
0005589037.tif 000011
【０１２７】
開始物質として、４−クロロベンゾイルクロリド（０．０４ｍｌ、０．３３ｍｍｏｌ）を使用したことを除いては、実施例５−１と同じ方法で、目的化合物９０ｍｇ（０．２９ｍｍｏｌ、９９％）を得た。
【０１２８】
１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ ８．９３（ｄ，Ｊ＝４．７Ｈｚ，１Ｈ）、８．３４（ｓ，１Ｈ）、７．８９（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，２Ｈ）、７．５６（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，２Ｈ）、７．３９（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，１Ｈ）
〔実施例５−１０：４−ブロモ−Ｎ−（２，６−ジクロロピリジン−３−イル）ベンズアミドの合成〕
【０１２９】
【化１１】
0005589037.tif 000012
【０１３０】
開始物質として、４−ブロモベンゾイルクロリド（７３９ｍｇ、３．３７ｍｍｏｌ）を使用したことを除いては、実施例５−１と同じ方法で、目的化合物６１０ｍｇ（１．７７ｍｍｏｌ、５６〜９５％）を得た。
【０１３１】
１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＭｅＯＤ）δ ８．２７（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，１Ｈ）、７．９２−７．８９（ｍ，２Ｈ）、７．７６−７．７３（ｍ，２Ｈ）、７．５１（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ）
〔実施例５−１１：Ｎ−（２，６−ジクロロピリジン−３−イル）−４−メチルベンズアミドの合成〕
【０１３２】
【化１２】
0005589037.tif 000013
【０１３３】
開始物質として、４−メチルベンゾイルクロリド（０．６３ｍｌ、４．７ｍｍｏｌ）を使用したことを除いては、実施例５−１と同じ方法で、目的化合物９７０ｍｇ（３．６ｍｍｏｌ、８０％）を得た。
【０１３４】
１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ ８．９７（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，１Ｈ）、８．３８（ｓ，１Ｈ）、７．８４（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，２Ｈ）、７．３８（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，３Ｈ）、２．４９（ｓ，３Ｈ）
〔実施例５−１２：Ｎ−（２，６−ジクロロピリジン−３−イル）−４−メトキシベンズアミドの合成〕
【０１３５】
【化１３】
0005589037.tif 000014
【０１３６】
開始物質として、４−メトキシベンゾイルクロリド（０．９５ｍｌ、６．７ｍｍｏｌ）を使用したことを除いては、実施例５−１と同じ方法で、目的化合物１．８ｇ（６．０ｍｍｏｌ、９８％）を得た。
【０１３７】
１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ ８．９６（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，１Ｈ）、８．３３（ｓ，１Ｈ）、７．９４−７．９０（ｍ，２Ｈ）、７．３８（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，１Ｈ）、７．０９−７．０４（ｍ，２Ｈ）、３．９４（ｓ，３Ｈ）
〔実施例５−１３：Ｎ−（２，６−ジクロロピリジン−３−イル）−４−ニトロベンズアミドの合成〕
【０１３８】
【化１４】
0005589037.tif 000015
【０１３９】
開始物質として、４−ニトロベンゾイルクロリド（６２０ｍｇ、６．７ｍｍｏｌ）を使用したことを除いては、実施例５−１と同じ方法で、目的化合物１．６ｇ（５．２ｍｍｏｌ、８４％）を得た。
【０１４０】
１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ ８．９３（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，１Ｈ）、８．４５（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，２Ｈ）、８．４１（ｓ，１Ｈ）、８．１３（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，２Ｈ）、７．４３（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，１Ｈ）
〔実施例５−１４：４−シアノ−Ｎ−（２，６−ジクロロピリジン−３−イル）ベンズアミドの合成〕
【０１４１】
【化１５】
0005589037.tif 000016
【０１４２】
開始物質として、４−シアノベンゾイルクロリド（１．１３ｍｌ、６．８ｍｍｏｌ）を使用したことを除いては、実施例５−１と同じ方法で、目的化合物１．７ｇ（５．９ｍｍｏｌ、９６％）を得た。
【０１４３】
１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ ８．９２（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，１Ｈ）、８．３８（ｓ，１Ｈ）、８．０５（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，２Ｈ）、７．９０（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，２Ｈ）、７．４２（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，１Ｈ）
〔実施例５−１５：５−クロロ−２−フェニルオキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジンの合成〕
【０１４４】
【化１６】
0005589037.tif 000017
【０１４５】
Ｎ−（２，６−ジクロロピリジン−３−イル）ベンズアミド（５８ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）と炭酸ナトリウム２５ｍｇとを、ジメチルホルムアミド２．２ｍｌに入れた後、１６０℃で２４時間還流させた。ＴＬＣで反応終結を確認し、常温に冷やした後、減圧濃縮した濃縮液に少量の蒸溜水を入れ、水層を塩化メチレンで抽出した。抽出した有機層を無水ＭｇＳＯ４で乾燥させた後、濾過して減圧濃縮した。濃縮液をカラムクロマトグラフィ（ヘキサン：酢酸エチル＝２０：１）で分離し、目的化合物４８ｍｇ（０．２１ｍｍｏｌ、９５％）を得た。
【０１４６】
１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ ８．３０（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ）、８．０５（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ）、７．６７−７．５７（ｍ，３Ｈ）、７．４３（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ）
〔実施例５−１６：５−クロロ−２−（２−クロロフェニル）オキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジンの合成〕
【０１４７】
【化１７】
0005589037.tif 000018
【０１４８】
開始物質として、２−クロロ−Ｎ−（２，６−ジクロロピリジン−３−イル）ベンズアミド（６００ｍｇ、２．０ｍｍｏｌ）を使用したことを除いては、実施例５−１５と同じ方法で、目的化合物４００ｍｇ（１．５ｍｍｏｌ、７５％）を得た。
【０１４９】
１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ ８．２０（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，１Ｈ）、７．９９（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ）、７．６５（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ）、７．４５−７．３３（ｍ，３Ｈ）
〔実施例５−１７：５−クロロ−２−（３−フルオロフェニル）オキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジンの合成〕
【０１５０】
【化１８】
0005589037.tif 000019
【０１５１】
開始物質として、Ｎ−（２，６−ジクロロピリジン−３−イル）−３−フルオロベンズアミド（３００ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）を使用したことを除いては、実施例５−１５と同じ方法で、目的化合物１３０ｍｇ（０．５２ｍｍｏｌ、５１〜８０％）を得た。
【０１５２】
１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ ８．０７（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，２Ｈ）、７．９７（ｄ，Ｊ＝９．１Ｈｚ，１Ｈ）、７．５７（ｑ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ）、７．４４（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ）、７．３６−７．３０（ｍ，１Ｈ）
〔実施例５−１８：５−クロロ−２−（３−クロロフェニル）オキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジンの合成〕
【０１５３】
【化１９】
0005589037.tif 000020
【０１５４】
開始物質として、３−クロロ−Ｎ−（２，６−ジクロロピリジン−３−イル）ベンズアミド（５００ｍｇ、１．６５ｍｍｏｌ）を使用したことを除いては、実施例５−１５と同じ方法で、目的化合物２７５ｍｇ（１．０３ｍｍｏｌ、６３％）を得た。
【０１５５】
１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ ８．２９（ｓ，１Ｈ）、８．５０（ｄｄ，Ｊ＝２．９，４．６Ｈｚ，１Ｈ）、８．０６（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ）、７．６３−７．５１（ｍ，２Ｈ）、７．４５（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ）
〔実施例５−１９：５−クロロ−２−ｍ−トリルオキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジンの合成〕
【０１５６】
【化２０】
0005589037.tif 000021
【０１５７】
開始物質として、Ｎ−（２，６−ジクロロピリジン−３−イル）−３−メチルベンズアミド（２００ｍｇ、０．７ｍｍｏｌ）を使用したことを除いては、実施例５−１５と同じ方法で、目的化合物１３０ｍｇ（０．５３ｍｍｏｌ、７６％）を得た。
【０１５８】
１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ ８．０７−７．９７（ｍ，３Ｈ）、７．４６−７．３２（ｍ，３Ｈ）、２．４６（ｓ，３Ｈ）
〔実施例５−２０：５−クロロ−２−（３−ニトロフェニル）オキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジンの合成〕
【０１５９】
【化２１】
0005589037.tif 000022
【０１６０】
開始物質として、Ｎ−（２，６−ジクロロピリジン−３−イル）−３−ニトロベンズアミド（２３０ｍｇ、０．７４ｍｍｏｌ）を使用したことを除いては、実施例５−１５と同じ方法で、目的化合物１０３ｍｇ（０．３７ｍｍｏｌ、５０％）を得た。
【０１６１】
１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ ９．１１（ｓ，１Ｈ）、８．５６（ｄ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，１Ｈ）、８．４４（ｄ，Ｊ＝５．１Ｈｚ，１Ｈ）、８．０８（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ）、７．７８（ｔ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ）、７．４５（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ）
〔実施例５−２１：３−（５−クロロオキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジン−２−イル）ベンゾニトリルの合成〕
【０１６２】
【化２２】
0005589037.tif 000023
【０１６３】
開始物質として、３−シアノ−Ｎ−（２，６−ジクロロピリジン−３−イル）ベンズアミド（５００ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）を使用したことを除いては、実施例５−１５と同じ方法で、目的化合物１６５ｍｇ（０．６５ｍｍｏｌ、３８％）を得た。
【０１６４】
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ ８．５５（ｓ，１Ｈ）、８．４７（ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，１Ｈ）、８．０６（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ）、７．８７（ｄ，Ｊ＝５．１Ｈｚ，１Ｈ）、７．７０（ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ）、７．４４（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ）
〔実施例５−２２：５−クロロ−２−（４−フルオロフェニル）オキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジンの合成〕
【０１６５】
【化２３】
0005589037.tif 000024
【０１６６】
開始物質として、Ｎ−（２，６−ジクロロピリジン−３−イル）−４−フルオロベンズアミド（４００ｍｇ、１．３７ｍｍｏｌ）を使用したことを除いては、実施例５−１５と同じ方法で、目的化合物２５０ｍｇ（１．０１ｍｍｏｌ、７３％）を得た。
【０１６７】
１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ ８．３２−８．２６（ｍ，２Ｈ）、８．０４（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ）、７．４３（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ）、７．３２−７．２１（ｍ，２Ｈ）
〔実施例５−２３：５−クロロ−２−（４−クロロフェニル）オキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジンの合成〕
【０１６８】
【化２４】
0005589037.tif 000025
【０１６９】
開始物質として、４−クロロ−Ｎ−（２，６−ジクロロピリジン−３−イル）ベンズアミド（５００ｍｇ、１．６５ｍｍｏｌ）を使用したことを除いては、実施例５−１５と同じ方法で、目的化合物２５５ｍｇ（０．９６ｍｍｏｌ、６０％）を得た。
【０１７０】
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ ８．５１（ｄｄ，Ｊ＝１．８，５．１Ｈｚ，２Ｈ）、８．０１（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ）、７．５４（ｄｄ，Ｊ＝１．８，５．２Ｈｚ，２Ｈ）、７．４０（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ）
〔実施例５−２４：２−（４−ブロモフェニル）−５−クロロオキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジンの合成〕
【０１７１】
【化２５】
0005589037.tif 000026
【０１７２】
開始物質として、４−ブロモ−Ｎ−（２，６−ジクロロピリジン−３−イル）ベンズアミド（６００ｍｇ、１．７ｍｍｏｌ）を使用したことを除いては、実施例５−１５と同じ方法で、目的化合物３００ｍｇ（０．９７ｍｍｏｌ、５７％）を得た。
【０１７３】
１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ ８．１５（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，２Ｈ）、８．０５（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ）、７．７４（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，２Ｈ）、７．４４（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ）
〔実施例５−２５：５−クロロ−２−ｐ−トリルオキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジンの合成〕
【０１７４】
【化２６】
0005589037.tif 000027
【０１７５】
開始物質として、Ｎ−（２，６−ジクロロピリジン−３−イル）−４−メチルベンズアミド（４５０ｍｇ、１．６ｍｍｏｌ）を使用したことを除いては、実施例５−１５と同じ方法で、目的化合物３４６ｍｇ（１．４ｍｍｏｌ、８８％）を得た。
【０１７６】
１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ ８．１８（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，２Ｈ）、８．０２（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ）、７．４２−７．３７（ｍ，３Ｈ）、２．５０（ｓ，４Ｈ）
〔実施例５−２６：５−クロロ−２−（４−メトキシフェニル）オキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジンの合成〕
【０１７７】
【化２７】
0005589037.tif 000028
【０１７８】
開始物質として、Ｎ−（２，６−ジクロロピリジン−３−イル）−４−メトキシベンズアミド（７００ｍｇ、２．３ｍｍｏｌ）を使用したことを除いては、実施例５−１５と同じ方法で、目的化合物４３４ｍｇ（１．６ｍｍｏｌ、７２％）を得た。
【０１７９】
１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ ８．２３（ｄｄ，Ｊ＝２．０，４．９Ｈｚ，２Ｈ）、７．９９（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ）、７．３９（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ）、７．０９（ｄｄ，Ｊ＝２．０，４．９Ｈｚ，２Ｈ）、３．９５（ｓ，３Ｈ）
〔実施例５−２７：５−クロロ−２−（４−ニトロフェニル）オキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジンの合成〕
【０１８０】
【化２８】
0005589037.tif 000029
【０１８１】
開始物質として、Ｎ−（２，６−ジクロロピリジン−３−イル）−４−ニトロベンズアミド（２３０ｍｇ、０．７ｍｍｏｌ）を使用したことを除いては、実施例５−１５と同じ方法で、目的化合物１０３ｍｇ（０．４ｍｍｏｌ、５１％）を得た。
【０１８２】
１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ ８．４７（ｓ，４Ｈ）、８．１３（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，１Ｈ）、７．５０（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，１Ｈ）
〔実施例５−２８：４−（５−クロロオキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジン−２−イル）ベンゾニトリルの合成〕
【０１８３】
【化２９】
0005589037.tif 000030
【０１８４】
開始物質として、４−シアノ−Ｎ−（２，６−ジクロロピリジン−３−イル）ベンズアミド（５００ｍｇ、１．７ｍｍｏｌ）を使用したことを除いては、実施例５−１５と同じ方法で、目的化合物１９７ｍｇ（０．８ｍｍｏｌ、４５％）を得た。
【０１８５】
１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ ８．４１（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，２Ｈ）、８．１１（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，１Ｈ）、７．９０（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，２Ｈ）、７．４９（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，１Ｈ）
〔実施例５−２９：５−クロロ−２−フェニルチアゾロ［５，４−ｂ］ピリジンの合成〕
【０１８６】
【化３０】
0005589037.tif 000031
【０１８７】
Ｎ−（２，６−ジクロロピリジン−３−イル）ベンズアミド（５０ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）とローソン試薬（Lawesson’s reagent）（１１７ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）とを３ｍｌのトルエンに入れた後、１１０℃で５時間還流させた。ＴＬＣで反応の進行を確認して冷やした後、減圧蒸留した濃縮液に、Ｋ２ＣＯ３（８０ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）とジメチルホルムアミド３ｍｌとを入れ、１６０℃で３時間還流させた。その後、ＴＬＣで反応終結を確認し、常温に冷やした後、少量の蒸溜水を入れ、水層を塩化メチレンで抽出した。有機層を無水Ｍｇ２ＳＯ４で乾燥させた後、濾過して減圧濃縮した濃縮液をカラムクロマトグラフィ（ヘキサン：酢酸エチル＝２０：１）で分離し、目的化合物２２ｍｇ（０．１ｍｍｏｌ、５０〜７０％）を得た。
【０１８８】
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ ８．２２（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，１Ｈ）、８．０９−８．０７（ｍ，２Ｈ）、７．５５−７．５０（ｍ，３Ｈ）、７．４５（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，１Ｈ）
〔実施例５−３０：２−フェニル−５−（ピロリジン−１−イル）オキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジンの合成〕
【０１８９】
【化３１】
0005589037.tif 000032
【０１９０】
５−クロロ−２−フェニルオキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジン（２００ｍｇ、０．９ｍｍｏｌ）と１０当量のピロリジンとをジメチルホルムアミド１ｍｌに入れた後、１３５℃で４時間還流させた。ＴＬＣで反応終結を確認し、常温に冷やした後、減圧蒸留してピロリジンを除去した。濃縮液に飽和ＮａＨＣＯ３溶液を入れ、水層を塩化メチレンで抽出し、有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた後、濾過して減圧濃縮した。濃縮液をカラムクロマトグラフィ（ヘキサン：酢酸エチル＝２０：１）で分離し、目的化合物３３ｍｇ（０．１ｍｍｏｌ、１５％）を得た。
【０１９１】
１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ ８．２３−８．２０（ｍ，２Ｈ）、７．８２（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，１Ｈ）、７．５３−７．４９（ｍ，３Ｈ）、６．４０（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，１Ｈ）、３．５６（ｔ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，４Ｈ）、２．１０−２．０６（ｍ，４Ｈ）
〔実施例５−３１：２−フェニル−５−（ピロリジン−１−イル）チアゾロ［５，４−ｂ］ピリジンの合成〕
【０１９２】
【化３２】
0005589037.tif 000033
【０１９３】
開始物質として、５−クロロ−２−フェニルチアゾロ［５，４−ｂ］ピリジン（１００ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）を使用したことを除いては、実施例５−３０と同じ方法で、目的化合物７４ｍｇ（０．３ｍｍｏｌ、６５％）を得た。
【０１９４】
１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ ８．０３（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，３Ｈ）、７．５０−７．４５（ｍ，３Ｈ）、６．５４（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，１Ｈ）、３．５８（ｔ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，４Ｈ）、２．１０−２．０５（ｍ，４Ｈ）
〔実施例５−３２：２−（２−クロロフェニル）−５−（ピロリジン−１−イル）オキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジンの合成〕
【０１９５】
【化３３】
0005589037.tif 000034
【０１９６】
開始物質として、５−クロロ−２−（２−クロロフェニル）オキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジン（１００ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）を使用したことを除いては、実施例５−３０と同じ方法で、目的化合物３８ｍｇ（０．１３ｍｍｏｌ、３２％）を得た。
【０１９７】
１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ ８．２１−８．１６（ｍ，１Ｈ）、７．９１（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，１Ｈ）、７．６０−７．５４（ｍ，１Ｈ）、７．４４−７．３８（ｍ，２Ｈ）、６．４３（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ）、３．５８（ｓ，４Ｈ）、２．０８（ｓ，４Ｈ）
〔実施例５−３３：２−（３−クロロフェニル）−５−（ピロリジン−１−イル）オキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジンの合成〕
【０１９８】
【化３４】
0005589037.tif 000035
【０１９９】
開始物質として、５−クロロ−２−（３−クロロフェニル）オキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジン（１００ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）を使用したことを除いては、実施例５−３０と同じ方法で、目的化合物３０ｍｇ（０．１ｍｍｏｌ、２６％）を得た。
【０２００】
１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ ８．２２（ｓ，１Ｈ）、８．０９−８．０６（ｍ，１Ｈ）、７．８２（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，１Ｈ）、７．４６−７．４４（ｍ，２Ｈ）、６．４２（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，１Ｈ）、３．５７（ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，４Ｈ）、２．１１−２．０７（ｍ，４Ｈ）
〔実施例５−３４：２−（４−フルオロフェニル）−５−（ピロリジン−１−イル）オキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジンの合成〕
【０２０１】
【化３５】
0005589037.tif 000036
【０２０２】
開始物質として、５−クロロ−２−（４−フルオロフェニル）オキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジン（１００ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）を使用したことを除いては、実施例５−３０と同じ方法で、目的化合物２５ｍｇ（０．１ｍｍｏｌ、２２％）を得た。
【０２０３】
１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ ８．１１（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，２Ｈ）、７．９０（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ）、７．３４−７．３２（ｍ，１Ｈ）、６．６７（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，２Ｈ）、３．４４（ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，４Ｈ）、２．１２−２．０９（ｍ，４Ｈ）
〔実施例５−３５：２−（４−クロロフェニル）−５−（ピロリジン−１−イル）オキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジンの合成〕
【０２０４】
【化３６】
0005589037.tif 000037
【０２０５】
開始物質として、５−クロロ−２−（４−クロロフェニル）オキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジン（１００ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）を使用したことを除いては、実施例５−３０と同じ方法で、目的化合物４０ｍｇ（０．１３ｍｍｏｌ、３４％）を得た。
【０２０６】
１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ ８．１６−８．１２（ｍ，２Ｈ）、７．８４−７．８０（ｍ，１Ｈ）、７．５１−７．４７（ｍ，２Ｈ）、７．３０（ｓ，１Ｈ）、６．４４（ｍ，１Ｈ）、３．５７（ｄ，Ｊ＝４．４Ｈｚ，４Ｈ）、２．０９（ｄ，Ｊ＝４．７Ｈｚ，４Ｈ）
〔実施例５−３６：２−（４−ブロモフェニル）−５−（ピロリジン−１−イル）オキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジンの合成〕
【０２０７】
【化３７】
0005589037.tif 000038
【０２０８】
開始物質として、２−（４−ブロモフェニル）−５−クロロオキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジン（１００ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）を使用したことを除いては、実施例５−３０と同じ方法で、目的化合物２０ｍｇ（０．０６ｍｍｏｌ、１５％）を得た。
【０２０９】
１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ ８．０６（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，２Ｈ）、７．８１（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，１Ｈ）、７．６４（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，２Ｈ）、６．４０（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，１Ｈ）、３．５６（ｔ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，４Ｈ）、２．１１−２．０６（ｍ，４Ｈ）
〔実施例５−３７：２−フェニル−５−（ピペリジン−１−イル）オキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジンの合成〕
【０２１０】
【化３８】
0005589037.tif 000039
【０２１１】
開始物質として、５−クロロ−２−フェニルオキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジン（１００ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）と１０当量のピペリジンとを使用したことを除いては、実施例５−３０と同じ方法で、目的化合物２８ｍｇ（０．１ｍｍｏｌ、２６％）を得た。
【０２１２】
１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ ８．２２−８．１６（ｍ，２Ｈ）、７．８０（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，１Ｈ）、７．８３−７．４７（ｍ，３Ｈ）、６．７０（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，１Ｈ）、３．６３（ｓ，４Ｈ）、１．６８（ｓ，６Ｈ）
〔実施例５−３８：２−フェニル−５−（ピペリジン−１−イル）チアゾロ［５，４−ｂ］ピリジンの合成〕
【０２１３】
【化３９】
0005589037.tif 000040
【０２１４】
開始物質として、５−クロロ−２−フェニルチアゾロ［５，４−ｂ］ピリジン（１００ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）を使用したことを除いては、実施例５−３０と同じ方法で、目的化合物８３ｍｇ（０．３ｍｍｏｌ、７３％）を得た。
【０２１５】
１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ ８．０４（ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，３Ｈ）、７．５１−７．４８（ｍ，３Ｈ）、６．８４（ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，１Ｈ）、３．６７（ｓ，４Ｈ）、１．７１（ｓ，６Ｈ）
〔実施例５−３９：２−（２−クロロフェニル）−５−（ピペリジン−１−イル）オキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジンの合成〕
【０２１６】
【化４０】
0005589037.tif 000041
【０２１７】
開始物質として、５−クロロ−２−（２−クロロフェニル）オキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジン（１００ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）を使用したことを除いては、実施例５−３０と同じ方法で、目的化合物２１ｍｇ（０．０６ｍｍｏｌ、１８％）を得た。
【０２１８】
１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ ８．１９−８．１６（ｍ，１Ｈ）、７．９１（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，１Ｈ）、７．５９−７．５６（ｍ，１Ｈ）、７．４４−７．４１（ｍ，２Ｈ）、６．７３（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，１Ｈ）、３．６７（ｓ，４Ｈ）、１．７２（ｓ，６Ｈ）
〔実施例５−４０：２−（３−フルオロフェニル）−５−（ピペリジン−１−イル）オキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジンの合成〕
【０２１９】
【化４１】
0005589037.tif 000042
【０２２０】
開始物質として、５−クロロ−２−（３−フルオロフェニル）オキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジン（１００ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）を使用したことを除いては、実施例５−３０と同じ方法で、目的化合物２３ｍｇ（０．１ｍｍｏｌ、１９％）を得た。
【０２２１】
１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ ８．００（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ）、７．９０（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ）、７．８４（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，１Ｈ）、７．５３−７．１８（ｍ，１Ｈ０）、７．２１（ｔ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，１Ｈ）、６．７３（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，１Ｈ）、３．６７（ｓ，４Ｈ）、１．７２（ｓ，６Ｈ）
〔実施例５−４１：２−（３−クロロフェニル）−５−（ピペリジン−１−イル）オキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジンの合成〕
【０２２２】
【化４２】
0005589037.tif 000043
【０２２３】
開始物質として、５−クロロ−２−（３−クロロフェニル）オキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジン（１００ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）を使用したことを除いては、実施例５−３０と同じ方法で、目的化合物６７ｍｇ（０．２ｍｍｏｌ、５６％）を得た。
【０２２４】
１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ ８．２２（ｓ，１Ｈ）、８．０９（ｄ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，１Ｈ）、７．８４（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ）、７．４７（ｓ，２Ｈ）、６．７２（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，１Ｈ）、３．６７（ｓ，４Ｈ）、１．７２（ｓ，６Ｈ）
〔実施例５−４２：５−（ピペリジン−１−イル）−２−ｍ−トリルオキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジンの合成〕
【０２２５】
【化４３】
0005589037.tif 000044
【０２２６】
開始物質として、５−クロロ−２−ｍ−トリルオキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジン（１００ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）を使用したことを除いては、実施例５−３０と同じ方法で、目的化合物６１ｍｇ（０．２ｍｍｏｌ、５２％）を得た。
【０２２７】
１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ ８．０７（ｓ，１Ｈ）、８．０２（ｄ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，１Ｈ）、７．４１（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ）、７．３２（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ）、３．６６（ｓ，４Ｈ）、２．４７（ｓ，３Ｈ）、１．７２（ｓ，６Ｈ）
〔実施例５−４３：２−（３−ニトロフェニル）−５−（ピペリジン−１−イル）オキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジンの合成〕
【０２２８】
【化４４】
0005589037.tif 000045
【０２２９】
開始物質として、５−クロロ−２−（３−ニトロフェニル）オキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジン（１００ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）を使用したことを除いては、実施例５−３０と同じ方法で、目的化合物３９ｍｇ（０．１２ｍｍｏｌ、３０％）を得た。
【０２３０】
１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ ９．０６（ｓ，１Ｈ）、８．５１（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ）、８．３５（ｄ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，１Ｈ）、７．８７（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，１Ｈ）、７．７１（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ）、６．７５（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，１Ｈ）、３．７０（ｓ，４Ｈ）、１．７３（ｓ，６Ｈ）
〔実施例５−４４：３−（５−（ピペリジン−１−イル）オキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジン−２−イル）ベンゾニトリルの合成〕
【０２３１】
【化４５】
0005589037.tif 000046
【０２３２】
開始物質として、３−（５−クロロオキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジン−２−イル）ベンゾニトリル（１００ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）を使用したことを除いては、実施例５−３０と同じ方法で、目的化合物２６ｍｇ（０．０９ｍｍｏｌ、２２％）を得た。
【０２３３】
１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ ８．５０（ｓ，１Ｈ）、８．４２（ｄ，Ｊ＝５．３Ｈｚ，１Ｈ）、７．８５（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，１Ｈ）、７．７８（ｄ，Ｊ＝３．５６Ｈｚ，１Ｈ）、７．６５（ｔ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ）、６．７５（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，１Ｈ）、３．７１（ｓ，４Ｈ）、１．７３（ｓ，６Ｈ）
〔実施例５−４５：２−（４−フルオロフェニル）−５−（ピペリジン−１−イル）オキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジンの合成〕
【０２３４】
【化４６】
0005589037.tif 000047
【０２３５】
開始物質として、５−クロロ−２−（４−フルオロフェニル）オキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジン（１００ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）を使用したことを除いては、実施例５−３０と同じ方法で、目的化合物２０ｍｇ（０．１ｍｍｏｌ、１１％）を得た。
【０２３６】
１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ ８．１１（ｄ，Ｊ＝９．１Ｈｚ，２Ｈ）、７．９２（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ）、７．３３（ｔ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ）、７．３６（ｄ，Ｊ＝９．１Ｈｚ，２Ｈ）、３．４３（ｓ，４Ｈ）、１．７２（ｓ，６Ｈ）
〔実施例５−４６：２−（４−クロロフェニル）−５−（ピペリジン−１−イル）オキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジンの合成〕
【０２３７】
【化４７】
0005589037.tif 000048
【０２３８】
開始物質として、５−クロロ−２−（４−クロロフェニル）オキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジン（１５０ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）を使用したことを除いては、実施例５−３０と同じ方法で、目的化合物３０ｍｇ（０．１ｍｍｏｌ、１７％）を得た。
【０２３９】
１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ ８．１４（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，２Ｈ）、７．８３（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，１Ｈ）、７．５０（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，２Ｈ）、６．７２（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，１Ｈ）、３．６７（ｓ，４Ｈ）、１．７２（ｓ，６Ｈ）
〔実施例５−４７：２−（４−ブロモフェニル）−５−（ピペリジン−１−イル）オキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジンの合成〕
【０２４０】
【化４８】
0005589037.tif 000049
【０２４１】
開始物質として、２−（４−ブロモフェニル）−５−クロロオキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジン（１５０ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）を使用したことを除いては、実施例５−３０と同じ方法で、目的化合物４０ｍｇ（０．１ｍｍｏｌ、２３％）を得た。
【０２４２】
１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ ８．１１（ｄ，Ｊ＝９．１Ｈｚ，２Ｈ）、７．９２（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ）、７．３３（ｔ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ）、７．３５（ｄ，Ｊ＝９．１Ｈｚ，２Ｈ）、３．４３（ｓ，４Ｈ）、１．７２（ｓ，６Ｈ）
〔実施例５−４８：５−（ピペリジン−１−イル）−２−ｐ−トリルオキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジンの合成〕
【０２４３】
【化４９】
0005589037.tif 000050
【０２４４】
開始物質として、５−クロロ−２−ｐ−トリルオキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジン（１００ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）を使用したことを除いては、実施例５−３０と同じ方法で、目的化合物３０ｍｇ（０．１ｍｍｏｌ、２５％）を得た。
【０２４５】
１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ ８．１１（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，２Ｈ）、７．８３（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ）、７．３４（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ）、６．７０（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ）、３．６６（ｓ，４Ｈ）、２．４６（ｓ，３Ｈ）、１．７２（ｓ，６Ｈ）
〔実施例５−４９：２−（４−メトキシフェニル）−５−（ピペリジン−１−イル）オキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジンの合成〕
【０２４６】
【化５０】
0005589037.tif 000051
【０２４７】
開始物質として、５−クロロ−２−（４−メトキシフェニル）オキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジン（１００ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）を使用したことを除いては、実施例５−３０と同じ方法で、目的化合物２０ｍｇ（０．０６ｍｍｏｌ、１７％）を得た。
【０２４８】
１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ ８．１５（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，２Ｈ）、７．８０（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ）、７．０４（ｄｄ，Ｊ＝２．８，６．９Ｈｚ，２Ｈ）、６．６９（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ）、３．９１（ｓ，３Ｈ）、３．６４（ｓ，４Ｈ）、１．７１（ｓ，６Ｈ）
〔実施例５−５０：４−（５−（ピペリジン−１−イル）オキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジン−２−イル）ベンゾニトリルの合成〕
【０２４９】
【化５１】
0005589037.tif 000052
【０２５０】
開始物質として、４−（５−クロロオキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジン−２−イル）ベンゾニトリル（１００ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）を使用したことを除いては、実施例５−３０と同じ方法で、目的化合物１８ｍｇ（０．０６ｍｍｏｌ、１５％）を得た。
【０２５１】
１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ ８．３０（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，２Ｈ）、７．８３（ｑ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，３Ｈ）、６．７５（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，１Ｈ）、３．７０（ｓ，４Ｈ）、１．７３（ｓ，６Ｈ）
〔実施例５−５１：２−（３−クロロフェニル）−Ｎ−シクロペンチルオキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジン−５−アミンの合成〕
【０２５２】
【化５２】
0005589037.tif 000053
【０２５３】
開始物質として、５−クロロ−２−（３−クロロフェニル）オキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジン（１００ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）と１０当量のシクロペンチルアミンとを使用したことを除いては、実施例５−３０と同じ方法で、目的化合物１８ｍｇ（０．０６ｍｍｏｌ、１５％）を得た。
【０２５４】
１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ ８．２１（ｓ，１Ｈ）、８．１０−８．０６（ｍ，１Ｈ）、７．８０（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，１Ｈ）、７．５０−７．４５（ｍ，２Ｈ）、６．４４（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，１Ｈ）、４．７５（ｄ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，１Ｈ）、４．２５−４．１９（ｍ，１Ｈ）、２．２１−２．１１（ｍ，２Ｈ）、１．８３−１．６８（ｍ，４Ｈ）、１．５８−１．５０（ｍ，２Ｈ）
〔実施例５−５２：Ｎ−シクロヘキシル−２−フェニルチアゾロ［５，４−ｂ］ピリジン−５−アミンの合成〕
【０２５５】
【化５３】
0005589037.tif 000054
【０２５６】
開始物質として、５−クロロ−２−フェニルチアゾロ［５，４−ｂ］ピリジン（９９ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）と１０当量のシクロペンチルアミンとを使用したことを除いては、実施例５−３０と同じ方法で、目的化合物１０ｍｇ（０．０３ｍｍｏｌ、９％）を得た。
【０２５７】
１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ ８．０３−７．９９（ｍ，３Ｈ）、７．４８（ｓ，３Ｈ）、６．５３（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，１Ｈ）、４．６８（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，１Ｈ）、３．７５（ｔ，Ｊ＝３．４Ｈｚ，１Ｈ）、２．１３（ｄ，Ｊ＝１２．１Ｈｚ，２Ｈ）、１．８４−１．８０（ｍ，２Ｈ）、１．７３−１．６９（ｍ，１Ｈ）、１．５４−１．４２（ｍ，２Ｈ）、１．３３−１．２２（ｍ，３Ｈ）
〔実施例５−５３：２−（３−クロロフェニル）−Ｎ−シクロヘキシルオキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジン−５−アミンの合成〕
【０２５８】
【化５４】
0005589037.tif 000055
【０２５９】
開始物質として、５−クロロ−２−（３−クロロフェニル）オキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジン（１００ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）を使用したことを除いては、実施例５−３０と同じ方法で、目的化合物２４ｍｇ（０．０７ｍｍｏｌ、１９％）を得た。
【０２６０】
１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＭｅＯＤ）δ ８．０７（ｓ，１Ｈ）、８．０３−８．００（ｍ，１Ｈ０）、７．６８（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，１Ｈ）、７．５４−７．５１（ｍ，２Ｈ）、６．５３（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，１Ｈ）、３．７９−３．７５（ｍ，１Ｈ）、２．０６（ｄ，Ｊ＝９．７Ｈｚ，２Ｈ）、１．８２（ｄ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，２Ｈ）、１．７０（ｄ，Ｊ＝３．６Ｈｚ，１Ｈ）、１．５４−１．４０（ｍ，２Ｈ）、１．３３−１．２５（ｍ，３Ｈ）
〔実施例５−５４：５−（アゼパン−１−イル）−２−フェニルオキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジンの合成〕
【０２６１】
【化５５】
0005589037.tif 000056
【０２６２】
開始物質として、５−クロロ−２−フェニルオキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジン（９７ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）と１０当量のヘキサメチレンイミンとを使用したことを除いては、実施例５−３０と同じ方法で、目的化合物７０ｍｇ（０．２ｍｍｏｌ、５７％）を得た。
【０２６３】
１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ ８．２４−８．２０（ｍ，２Ｈ）、７．８２（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚｍ１Ｈ）、７．５４−７．５０（ｍ，３Ｈ）、６．５４（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，１Ｈ）、３．７４（ｔ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，４Ｈ）、１．８８（ｓ，４Ｈ）、１．６３−１．５９（ｍ，４Ｈ）
〔実施例５−５５：５−（アゼパン−１−イル）−２−フェニルチアゾロ［５，４−ｂ］ピリジンの合成〕
【０２６４】
【化５６】
0005589037.tif 000057
【０２６５】
開始物質として、５−クロロ−２−フェニルチアゾロ［５，４−ｂ］ピリジン（８５ｍｇ、０．３５ｍｍｏｌ）を使用したことを除いては、実施例５−３０と同じ方法で、目的化合物５１ｍｇ（０．２ｍｍｏｌ、４７％）を得た。
【０２６６】
１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ ８．０５−８．００（ｍ，３Ｈ）、７．５０−７．４８（ｍ，３Ｈ）、６．６８（ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，１Ｈ）、３．７５（ｔ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，４Ｈ）、１．８７（ｓ，４Ｈ）、１．６３−１．５９（ｍ，４Ｈ）
〔実施例５−５６：５−（アゼパン−１−イル）−２−（４−フルオロフェニル）オキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジンの合成〕
【０２６７】
【化５７】
0005589037.tif 000058
【０２６８】
開始物質として、５−クロロ−２−（４−フルオロフェニル）オキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジン（１００ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）を使用したことを除いては、実施例５−３０と同じ方法で、目的化合物２９ｍｇ（０．１ｍｍｏｌ、２３％）を得た。
【０２６９】
１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ ８．２３−８．１８（ｍ，２Ｈ）、７．８０（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ）、７．２０（ｔ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，２Ｈ）、６．５４（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ、１Ｈ０、３．７３（ｔ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，４Ｈ）、１．８８（ｓ，４Ｈ）、１．６３−１．６０（ｍ，４Ｈ）
〔実施例５−５７：Ｎ−ベンジル−２−フェニルオキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジン−５−アミンの合成〕
【０２７０】
【化５８】
0005589037.tif 000059
【０２７１】
開始物質として、５−クロロ−２−フェニルオキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジン（９７ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）と１０当量のベンジルアミンとを使用したことを除いては、実施例５−３０と同じ方法で、目的化合物３０ｍｇ（０．１ｍｍｏｌ、２５％）を得た。
【０２７２】
１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ ８．２４−８．２１（ｍ，２Ｈ）、７．８２（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，１Ｈ）、７．５５−７．５１（ｍ，３Ｈ）、７．４６−７．３１（ｍ，５Ｈ）、６．４６（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，１Ｈ）、５．０４（ｓ，１Ｈ）、４．６７（ｄ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，２Ｈ）
〔実施例５−５８：Ｎ−ベンジル−２−フェニルチアゾロ［５，４−ｂ］ピリジン−５−アミンの合成〕
【０２７３】
【化５９】
0005589037.tif 000060
【０２７４】
開始物質として、５−クロロ−２−フェニルチアゾロ［５，４−ｂ］ピリジン（６０ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ）を使用したことを除いては、実施例５−３０と同じ方法で、目的化合物４９ｍｇ（０．２ｍｍｏｌ、６５％）を得た。
【０２７５】
１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ ８．０６−８．００（ｍ，３Ｈ）、７．５４−７．３１（ｍ，８Ｈ）、６．５７（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，１Ｈ）、５．１０（ｓ，１Ｈ）、４．６７（ｄ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，２Ｈ）
〔実施例５−５９：Ｎ−ベンジル−２−（３−フルオロフェニル）オキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジン−５−アミンの合成〕
【０２７６】
【化６０】
0005589037.tif 000061
【０２７７】
開始物質として、５−クロロ−２−（３−フルオロフェニル）オキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジン（７０ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）を使用したことを除いては、実施例５−３０と同じ方法で、目的化合物３０ｍｇ（０．１ｍｍｏｌ、３５％）を得た。
【０２７８】
１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ ８．００（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ）、７．９３−７．８８（ｍ，１Ｈ）、７．８２（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，１Ｈ）、７．５４−７．３２（ｍ，６Ｈ）、７．２６−７．１９（ｍ，１Ｈ）、６．４８（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，１Ｈ）、５．０７（ｓ，１Ｈ）、４．６７（ｄ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，２Ｈ）
〔実施例５−６０：Ｎ−ベンジル−２−（３−クロロフェニル）オキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジン−５−アミンの合成〕
【０２７９】
【化６１】
0005589037.tif 000062
【０２８０】
開始物質として、５−クロロ−２−（３−クロロフェニル）オキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジン（７０ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）を使用したことを除いては、実施例５−３０と同じ方法で、目的化合物２０ｍｇ（０．１ｍｍｏｌ、２３％）を得た。
【０２８１】
１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ ８．２２（ｓ，１Ｈ）、８．１０−８．０８（ｍ，１Ｈ）、７．８１（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，１Ｈ）、７．５１−７．３４（ｍ，７Ｈ）、６．４８（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，１Ｈ）、５．０８（ｓ，１Ｈ）、４．６７（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ）
〔実施例５−６１：Ｎ−ベンジル−２−（４−クロロフェニル）オキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジン−５−アミンの合成〕
【０２８２】
【化６２】
0005589037.tif 000063
【０２８３】
開始物質として、５−クロロ−２−（４−クロロフェニル）オキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジン（７０ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）を使用したことを除いては、実施例５−３０と同じ方法で、目的化合物２９ｍｇ（０．０９ｍｍｏｌ、３２％）を得た。
【０２８４】
１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ ８．１５（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ）、７．８１（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，１Ｈ）、７．５１（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ）、７．４６−７．３０（ｍ，５Ｈ）、６．４７（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，１Ｈ）、５．０６（ｓ，１Ｈ０、４．６７（ｄ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，２Ｈ）
〔実施例５−６２：Ｎ−（２−モルホリノエチル）−２−フェニルチアゾロ［５，４−ｂ］ピリジン−５−アミンの合成〕
【０２８５】
【化６３】
0005589037.tif 000064
【０２８６】
開始物質として、５−クロロ−２−フェニルチアゾロ［５，４−ｂ］ピリジン（５０ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）と２−モルホリノエタンアミン３当量とを使用したことを除いては、実施例５−３０と同じ方法で、目的化合物３１ｍｇ（０．１ｍｍｏｌ、５０％）を得た。
【０２８７】
１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ ８．０５−８．００（ｍ，３Ｈ）、７．５４−７．４７（ｍ，３Ｈ）、６．５９（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，１Ｈ）、５．３８（ｓ，１Ｈ）、３．７８（ｔ，Ｊ＝４．６Ｈｚ，４Ｈ）、３．５２（ｑ，Ｊ＝５．１Ｈｚ，２Ｈ）、２．６９（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ）、２．５５（ｔ，Ｊ＝４．４Ｈｚ，４Ｈ）
〔実施例５−６３：Ｎ−ベンジル−Ｎ−メチル−２−フェニルオキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジン−５−アミンの合成〕
【０２８８】
【化６４】
0005589037.tif 000065
【０２８９】
開始物質として、５−クロロ−２−フェニルオキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジン（２００ｍｇ、０．９ｍｍｏｌ）と５当量のＮ−ベンジルメチルアミンとを使用したことを除いては、実施例５−３０と同じ方法で、目的化合物２１８ｍｇ（０．７ｍｍｏｌ、８０％）を得た。
【０２９０】
１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ ８．２５−８．２１（ｍ，２Ｈ）、７．８５（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ）、７．５４−７．５０（ｍ，３Ｈ）、７．３９−７．２７（ｍ，５Ｈ）、６．５８（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ）、４．９１（ｓ，２Ｈ）、３．２１（ｓ，３Ｈ）
〔実施例５−６４：Ｎ−ベンジル−Ｎ−メチル−２−フェニルチアゾロ［５，４−ｂ］ピリジン−５−アミンの合成〕
【０２９１】
【化６５】
0005589037.tif 000066
【０２９２】
開始物質として、５−クロロ−２−フェニルチアゾロ［５，４−ｂ］ピリジン（１００ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）を使用したことを除いては、実施例５−３０と同じ方法で、目的化合物１００ｍｇ（０．３ｍｍｏｌ、７２％）を得た。
【０２９３】
１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ ８．０５（ｄ，Ｊ＝９．１Ｈｚ，３Ｈ）、７．５４−７．４７（ｍ，３Ｈ）、７．４０−７．２９（ｍ，５Ｈ）、６．７１（ｄ，Ｊ＝９．１Ｈｚ，１Ｈ）、４．９３（ｓ，２Ｈ）、３．２１（ｓ，３Ｈ）
〔実施例５−６５：Ｎ−ベンジル−２−（２−クロロフェニル）−Ｎ−メチルオキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジン−５−アミンの合成〕
【０２９４】
【化６６】
0005589037.tif 000067
【０２９５】
開始物質として、５−クロロ−２−（２−クロロフェニル）オキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジン（８０ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）を使用したことを除いては、実施例５−３０と同じ方法で、目的化合物７０ｍｇ（０．２ｍｍｏｌ、６７％）を得た。
【０２９６】
１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ ８．１９−８．１６（ｍ，１Ｈ）、７．９２（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ）、７．６０−７．５７（ｍ，１Ｈ）、７．４６−７．２８（ｍ，７Ｈ）、６．６０（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，１Ｈ）、４．９２（ｓ，２Ｈ）、３．２２（ｓ，３Ｈ）
〔実施例５−６６：Ｎ−ベンジル−２−（３−フルオロフェニル）−Ｎ−メチルオキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジン−５−アミンの合成〕
【０２９７】
【化６７】
0005589037.tif 000068
【０２９８】
開始物質として、５−クロロ−２−（３−フルオロフェニル）オキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジン（９０ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）を使用したことを除いては、実施例５−３０と同じ方法で、目的化合物１１８ｍｇ（０．４ｍｍｏｌ、９８％）を得た。
【０２９９】
１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ ８．０１（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ）、７．９３（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ）、７．８５（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ）、７．５３−７．４６（ｍ，１Ｈ）、７．４０−７．２８（ｍ，５Ｈ）、７．２４−７．１８（ｍ，１Ｈ）、６．５９（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ）、４．９１（ｓ，２Ｈ）、３．２１（ｓ，３Ｈ）
〔実施例５−６７：Ｎ−ベンジル−２−（３−クロロフェニル）−Ｎ−メチルオキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジン−５−アミンの合成〕
【０３００】
【化６８】
0005589037.tif 000069
【０３０１】
開始物質として、５−クロロ−２−（３−クロロフェニル）オキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジン（８０ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）を使用したことを除いては、実施例５−３０と同じ方法で、目的化合物５７ｍｇ（０．２ｍｍｏｌ、６５％）を得た。
【０３０２】
１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ ８．２４−８．２２（ｍ，１Ｈ）、８．１１−８．０８（ｍ，１Ｈ）、７．８５（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ）、７．４８−７．４６（ｍ，２Ｈ）、７．４０−７．３５（ｍ，２Ｈ）、７．３５−７．２８（ｍ，４Ｈ）、６．５９（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，１Ｈ）、４．９１（ｓ，２Ｈ）、３．２２（ｓ，３Ｈ）
〔実施例５−６８：Ｎ−ベンジル−２−（４−クロロフェニル）−Ｎ−メチルオキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジン−５−アミンの合成〕
【０３０３】
【化６９】
0005589037.tif 000070
【０３０４】
開始物質として、５−クロロ−２−（４−クロロフェニル）オキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジン（１００ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）を使用したことを除いては、実施例５−３０と同じ方法で、目的化合物１２１ｍｇ（０．３ｍｍｏｌ、９２％）を得た。
【０３０５】
１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ ８．１５（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，２Ｈ）、７．８３（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ）、７．５０（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，２Ｈ）、７．４０−７．２８（ｍ，５Ｈ）、６．５８（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ）、４．９０（ｓ，２Ｈ）、３．２１（ｓ，３Ｈ）
〔実施例５−６９：Ｎ−ベンジル−Ｎ−メチル−２−ｐ−トリルオキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジン−５−アミンの合成〕
【０３０６】
【化７０】
0005589037.tif 000071
【０３０７】
開始物質として、５−クロロ−２−ｐ−トリルオキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジン（１７２ｍｇ、０．７ｍｍｏｌ）を使用したことを除いては、実施例５−３０と同じ方法で、目的化合物１３０ｍｇ（０．４ｍｍｏｌ、６０％）を得た。
【０３０８】
１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ ８．１２（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，２Ｈ）、７．８３（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，１Ｈ）、７．３９−７．２８（ｍ，７Ｈ）、６．５６（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ）、４．９０（ｓ，２Ｈ）、３．２１（ｓ，３Ｈ）、２．４６（ｓ，３Ｈ）
〔実施例５−７０：Ｎ−ベンジル−２−（４−メトキシフェニル）−Ｎ−メチルオキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジン−５−アミンの合成〕
【０３０９】
【化７１】
0005589037.tif 000072
【０３１０】
開始物質として、５−クロロ−２−（４−メトキシフェニル）オキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジン（８８ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）を使用したことを除いては、実施例５−３０と同じ方法で、目的化合物６７ｍｇ（０．２ｍｍｏｌ、５７％）を得た。
【０３１１】
１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ ８．１７（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，２Ｈ０）、７．８１（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，１Ｈ）、７．３７−７．２８（ｍ，５Ｈ）、７．０４（ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，２Ｈ）、６．５５（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ）、４．９０（ｓ，２Ｈ）、３．９２（ｓ，３Ｈ）、３．２０（ｓ，３Ｈ）
〔実施例５−７１：Ｎ−ベンジル−Ｎ−メチル−２−（４−ニトロフェニル）オキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジン−５−アミンの合成〕
【０３１２】
【化７２】
0005589037.tif 000073
【０３１３】
開始物質として、５−クロロ−２−（４−ニトロフェニル）オキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジン（４５ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）を使用したことを除いては、実施例５−３０と同じ方法で、目的化合物６５ｍｇ（０．２ｍｍｏｌ、９９％）を得た。
【０３１４】
１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ ８．３６（ｓ，４Ｈ）、７．８８（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，１Ｈ）、７．４０−７．２６（ｍ，５Ｈ）、６．６３（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，１Ｈ）、４．９２（ｓ，２Ｈ）、３．２４（ｓ，３Ｈ）
〔実施例５−７２：４−（５−（ベンジル（メチル）アミノ）オキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジン−２−イル）ベンゾニトリルの合成〕
【０３１５】
【化７３】
0005589037.tif 000074
【０３１６】
開始物質として、４−（５−クロロオキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジン−２−イル）ベンゾニトリル（６３ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）を使用したことを除いては、実施例５−３０と同じ方法で、目的化合物６１ｍｇ（０．２ｍｍｏｌ、７１％）を得た。
【０３１７】
１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ ８．３０（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ、２Ｈ０）、７．８８−７．２８（ｍ，３Ｈ）、７．４０−７．２８（ｍ，５Ｈ）、６．６２（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，１Ｈ）、４．９２（ｓ，２Ｈ）、３．２３（ｓ，３Ｈ）
〔実施例５−７３：Ｎ−メチル−２−フェニルオキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジン−５−アミンの合成〕
【０３１８】
【化７４】
0005589037.tif 000075
【０３１９】
Ｎ−ベンジル−Ｎ−メチル−２−フェニルオキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジン−５−アミン（５０ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）と９５％ Ｈ２ＳＯ４０．２５ｍｌとを入れ、１２時間撹拌した。ＴＬＣで反応終結を確認し、常温に冷やした後、１．２５ｍｌ Ｈ２Ｏを滴加した。１５％ ＮａＯＨを使用し、ｐＨ４に滴定した。このとき、生成される固体を濾過させた後、濾液をさらにｐＨ１０に合わせた後、水層を塩化メチレンで抽出して減圧蒸留し、目的化合物２５ｍｇ（０．１ｍｍｏｌ、６９％）を得た。
【０３２０】
１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ ８．２４−８．２０（ｍ，２Ｈ０）、７．８３（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，１Ｈ）、７．５５−７．５１（ｍ，３Ｈ）、６．４６（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ、１Ｈ０）、４．７５（ｓ，１Ｈ）、３．０７（ｄ，Ｊ＝５．１Ｈｚ，３Ｈ）
〔実施例５−７４：Ｎ−メチル−２−フェニルチアゾロ［５，４−ｂ］ピリジン−５−アミンの合成〕
【０３２１】
【化７５】
0005589037.tif 000076
【０３２２】
開始物質として、Ｎ−ベンジル−Ｎ−メチル−２−フェニルチアゾロ［５，４−ｂ］ピリジン−５−アミン（７０ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）を使用したことを除いては、実施例５−７３と同じ方法で、目的化合物４７ｍｇ（０．２ｍｍｏｌ、９２％）を得た。
【０３２３】
１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ ８．０５−８．０１（ｍ，３Ｈ）、７．５２−７．４８（ｍ，３Ｈ）、６．５６（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，１Ｈ）、４．８７（ｓ，１Ｈ）、３．０６（ｄ，Ｊ＝５．１Ｈｚ，３Ｈ）
〔実施例５−７５：２−（３−フルオロフェニル）−Ｎ−メチルオキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジン−５−アミンの合成〕
【０３２４】
【化７６】
0005589037.tif 000077
【０３２５】
開始物質として、Ｎ−ベンジル−２−（３−フルオロフェニル）−Ｎ−メチルオキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジン−５−アミン（７０ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）を使用したことを除いては、実施例５−７３と同じ方法で、目的化合物３１ｍｇ（０．１ｍｍｏｌ、５８％）を得た。
【０３２６】
１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ ８．００（ｄ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，１Ｈ）、７．９０（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ）、７．８３（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，１Ｈ）、７．５４−７．４７（ｍ，１Ｈ）、７．２５−７．１８（ｍ，１Ｈ）、６．４７（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，１Ｈ）、４．７９（ｓ，１Ｈ）、３．０７（ｄ，Ｊ＝５．１Ｈｚ，３Ｈ）
〔実施例５−７６：２−（３−クロロフェニル）−Ｎ−メチルオキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジン−５−アミンの合成〕
【０３２７】
【化７７】
0005589037.tif 000078
【０３２８】
開始物質として、Ｎ−ベンジル−２−（３−クロロフェニル）−Ｎ−メチルオキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジン−５−アミン（５７ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）を使用したことを除いては、実施例５−７３と同じ方法で、目的化合物３０ｍｇ（０．１ｍｍｏｌ、７２％）を得た。
【０３２９】
１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ ８．２２（ｓ，１Ｈ）、８．１０−８．０７（ｍ，１Ｈ）、７．８２（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，１Ｈ）、７．５０−７．４３（ｍ，２Ｈ）、６．４７（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，１Ｈ）、４．７９（ｓ，１Ｈ）、３．０８（ｄ，Ｊ＝５．１Ｈｚ，３Ｈ）
〔実施例５−７７：２−（４−クロロフェニル）−Ｎ−メチルオキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジン−５−アミンの合成〕
【０３３０】
【化７８】
0005589037.tif 000079
【０３３１】
開始物質として、Ｎ−ベンジル−２−（４−クロロフェニル）−Ｎ−メチルオキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジン−５−アミン（７０ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）を使用したことを除いては、実施例５−７３と同じ方法で、目的化合物４３ｍｇ（０．２ｍｍｏｌ、８３％）を得た。
【０３３２】
１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ ８．１３（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，２Ｈ）、７．８０（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，１Ｈ）、７．５０（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，２Ｈ）、６．４５（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，１Ｈ）、４．７８（ｓ，１Ｈ）、３．０６（ｄ，Ｊ＝５．１Ｈｚ，３Ｈ）
〔実施例５−７８：Ｎ−メチル−２−ｐ−トリルオキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジン−５−アミンの合成〕
【０３３３】
【化７９】
0005589037.tif 000080
【０３３４】
開始物質として、Ｎ−ベンジル−Ｎ−メチル−２−ｐ−トリルオキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジン−５−アミン（４０ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）を使用したことを除いては、実施例５−７３と同じ方法で、目的化合物２１ｍｇ（０．０９ｍｍｏｌ、７５％）を得た。
【０３３５】
１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ ８．０９（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，２Ｈ）、７．７９（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，１Ｈ）、７．３２（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，２Ｈ）、６．４２（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ）、３．０４（ｓ，３Ｈ）、２．４４（ｓ，３Ｈ）
〔実施例５−７９：２−（４−メトキシフェニル）−Ｎ−メチルオキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジン−５−アミンの合成〕
【０３３６】
【化８０】
0005589037.tif 000081
【０３３７】
開始物質として、Ｎ−ベンジル−２−（４−メトキシフェニル）−Ｎ−メチルオキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジン−５−アミン（４０ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）を使用したことを除いては、実施例５−７３と同じ方法で、目的化合物１８ｍｇ（０．０７ｍｍｏｌ、６０％）を得た。
【０３３８】
１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ ８．１４（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，２Ｈ）、７．７７（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，１Ｈ）、７．０３（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，２Ｈ）、６．４２（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，１Ｈ）、３．９０（ｓ，３Ｈ）、３．０４（ｄ，Ｊ＝５．１Ｈｚ，３Ｈ）
１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ８。１４（ｄ、Ｊ＝９。０Ｈｚ、２Ｈ）、７。７７（ｄ、Ｊ＝８。５Ｈｚ、１Ｈ）、７。０３（ｄ、Ｊ＝９。０Ｈｚ、２Ｈ）、６。４２（ｄ、Ｊ＝８。６Ｈｚ、１Ｈ）、３。９０（ｓ、３Ｈ）、３。０４（ｄ、Ｊ＝５。１Ｈｚ、３Ｈ）
〔実施例５−８０：Ｎ−シクロヘキシル−２−フェニルオキサゾロ［５，６−ｂ］ピリジン−５−アミンの合成〕
【０３３９】
【化８１】
0005589037.tif 000082
【０３４０】
開始物質として、５−クロロ−２−フェニルオキサゾロ［５，４−ｂ］ピリジン（５０ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）と１０当量のシクロペンチルアミンとを使用したことを除いては、実施例５−３０と同じ方法で、目的化合物２０ｍｇ（０．０７ｍｍｏｌ、３４％）を得た。
【０３４１】
１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＭｅＯＤ）δ ８．１２−８．１１（ｍ，２Ｈ）、７．７０（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ、１Ｈ）、７．５７−７．５３（ｍ，３Ｈ）、６．５４（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ、１Ｈ）、３．７９（ｓ，１Ｈ）、２．０８（ｄ，Ｊ＝１２．２Ｈｚ、２Ｈ）、１．８３（ｄｄ，Ｊ＝３．９、５．７Ｈｚ、２Ｈ）、１．７１（ｄ，Ｊ＝１３．２Ｈｚ、１Ｈ）、１．５２−１．４２（ｍ，２Ｈ）、１．３０（ｔ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ、３Ｈ）
〔実施例６：ＭＡＯ−Ｂの活性を阻害させる物質のスクリーニング〕
前記実施例５で製作した化合物を対象に、前記化合物がＭＡＯ−Ｂの活性を阻害するか否かを実験した。
【０３４２】
本実験は、Aldrichから購買したヒトＭＡＯ−Ｂ酵素と、Amplex（登録商標） Red monoamine oxidase assay kitを利用し、スタックＫ溶液準備は、マニュアルに従った。前記キット中には、５Ｘ reaction buffer、 Amplex（登録商標） red reagent（１ｍｇ）、ＨＲＰ（horseradish peroxidase）、ＤＭＳＯ、Ｈ２Ｏ２、ｐ−チラミン（ＭＡＯ−Ａ、Ｂの基質）、ベンジルアミン（ＭＡＯ−Ｂの基質）、クロルジリン（ＭＡＯ−Ａの阻害剤）、パルギリン（ＭＡＯ−Ｂの阻害剤）が入っている。その中で本実験では、ＭＡＯ−Ｂ基質としてベンジルアミンを使用し、ＭＡＯ−Ｂの阻害剤としては、パルギリンを使用した。全体基質として作用する溶液の準備過程は、次の通り行った。
【０３４３】
Amplex（登録商標） red １ｍｇにＤＭＳＯ ２００μｌを入れて十分に溶かした２００μｌ、ＨＲＰと１ｍｌの１Ｘ bufferとを混ぜた１００μｌ、ベンジルアミンを１．２ｍｌのｄＨ２Ｏに溶かした２００μｌを、９．５ｍｌの１Ｘ bufferに入れて総１０ｍｌを製造した。この量は、１００個のウェルに使用することができる。ＭＡＯ−Ｂ阻害剤であるパルギリンに１ｍｌのｄＨ２Ｏを混ぜ、各ウェル当たり０．５μｌを入れた。合成した化合物の濃度は、１０μＭを基準にＭＡＯ−Ｂの活性を確認した。
【０３４４】
まず、準備した９６ウェルに、基準になるpositive、negativeそしてwild typeを準備した。Positive typeの場合、基質及び過酸化水素だけを入れ、negative typeの場合には、基質のみを入れた。最後に、wild typeは、合成した化合物を入れずに、酵素、基質そしてＭＡＯ−Ｂの阻害剤を入れた。その後、１ｍＭ濃度の合成した化合物を２μｌずつ分けて入れ、最初の列（レーン）には、ヒトＭＡＯ−Ｂ酵素だけを入れた。このとき、ヒトＭＡＯ−Ｂ酵素は、各ウェル当たり０．５μｇずつ１Ｘ buffer １００μｌと共に入れた。２列目には、ヒトＭＡＯ−Ｂ酵素にパルギリン阻害製剤を０．５μｌずつ共に入れた。実験の誤差を減らして正確性を高めるために、１化合物当たり３回ずつ実験を反復した。３０分後、暗室で、基質として作用する溶液を１００μｌずつ入れた。Amplex（登録商標） reagentが光に敏感であるために、暗室で実験を行った。結局、各ウェル当たり、２００μｌの量にした。２〜３時間後、発色の程度を測定すれば、最初の列と２列目とのデータ値の違いが、純粋にＭＡＯ−Ｂ酵素とその基質との反応による活性であり、合成した化合物を追加した場合は、化合物により、ＭＡＯ−Ｂが阻害されて残った活性（remaining activity）の値を求めることになる。かような方法を介して、ＭＡＯ−Ｂ酵素以外の他の酵素の活性を除外することができるのである。実験した化合物の濃度が１０μＭであるとき、活性値が良好であるものを集め、０．００１μＭ、０．０１μＭ、０．１μＭ、１μＭ、１０μＭの濃度別に活性実験を介して、濃度に依存するＩＣ５０値を求めるとができる。
【０３４５】
前記化合物のＭＡＯ−Ｂ活性に係わる阻害効果を測定した結果を、下記表１に記載した。
【０３４６】
【表１】
0005589037.tif 000083
【産業上の利用可能性】
【０３４７】
本発明の退行性脳疾患の予防用または治療用の薬学的組成物及びそのスクリーニング方法は、例えば、退行性脳疾患の予防関連または治療関連の技術分野に効果的に適用可能である。
【図１４】
0005589037.tif 000084
【図１６】
0005589037.tif 000085
【図１】
0005589037.tif 000086
【図２】
0005589037.tif 000087
【図３】
0005589037.tif 000088
【図４】
0005589037.tif 000089
【図５】
0005589037.tif 000090
【図６】
0005589037.tif 000091
【図７】
0005589037.tif 000092
【図８】
0005589037.tif 000093
【図９】
0005589037.tif 000094
【図１０】
0005589037.tif 000095
【図１１】
0005589037.tif 000096
【図１２】
0005589037.tif 000097
【図１３】
0005589037.tif 000098
【図１５】
0005589037.tif 000099