(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
腫瘍性Ｂ細胞増殖に関連した疾患または状態についてヒト患者を治療するためのキットであって、該治療は、（ｉ）シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチンおよびプレドニゾン（ＣＨＯＰ）と、（ｉｉ）アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の組み合わせを含む併用療法によるものであり、該抗ＣＤ４０抗体は、ヒトＢ細胞の表面上のＣＤ４０抗原に結合したとき有意なアゴニスト活性を有さず、かつ該抗ＣＤ４０抗体は、
ａ）ＡＴＣＣに特許寄託番号ＰＴＡ−５５４３として寄託されたハイブリドーマ細胞株によって産生されたモノクローナル抗体、
ｂ）配列番号２および４で示された両方の配列、または配列番号２および配列番号５で示された両方の配列を含む抗体、
ｃ）配列番号１７および１９で示された両方の配列、または配列番号１７および配列番号２０で示された両方の配列を含む抗体、
ｄ）配列番号１６および配列番号１８で示された両方の配列を含む抗体、
ｅ）配列番号１で示された配列によってコードされたアミノ酸配列と、配列番号３で示された配列によってコードされたアミノ酸配列とを有する抗体、ならびに
ｆ）ＣＤＲ−Ｌ１では配列番号１０で示したアミノ酸配列、ＣＤＲ−Ｌ２では配列番号１１で示したアミノ酸配列、ＣＤＲ−Ｌ３では配列番号１２で示したアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）およびＣＤＲ−Ｈ１では配列番号１３で示したアミノ酸配列、ＣＤＲ−Ｈ２では配列番号１４で示したアミノ酸配列、ＣＤＲ−Ｈ３では配列番号１５で示したアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を有する抗体
からなる群より選択され、
ここで、該患者は、ＣＨＯＰを以前に投与されており、かつ、該疾患または状態が、ＣＨＯＰによる治療に難治性である、キット。
【請求項２】
前記ＣＨＯＰおよび前記抗ＣＤ４０抗体を同時にまたは順次前記患者に投与することを特徴とする、請求項１に記載のキット。
【請求項３】
抗ＣＤ４０抗体の最初の用量を前記患者に投与する前に、該患者にＣＨＯＰの最初のサイクルを投与することを特徴とする、請求項２に記載のキット。
【請求項４】
抗ＣＤ４０抗体の最初の用量を前記患者に投与した後に、該患者にＣＨＯＰの最初のサイクルを投与することを特徴とする、請求項２に記載のキット。
【請求項５】
腫瘍性Ｂ細胞増殖に関連した疾患または状態についてヒト患者を治療するための医薬の製造におけるアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の使用であって、該治療は、該抗ＣＤ４０抗体と、シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチンおよびプレドニゾン（ＣＨＯＰ）との併用療法によるものであり、該抗ＣＤ４０抗体は、ヒトＢ細胞の表面上のＣＤ４０抗原に結合したとき有意なアゴニスト活性を有さず、かつ該抗ＣＤ４０抗体は、
ａ）ＡＴＣＣに特許寄託番号ＰＴＡ−５５４３として寄託されたハイブリドーマ細胞株によって産生されたモノクローナル抗体、
ｂ）配列番号２および４で示された両方の配列、または配列番号２および配列番号５で示された両方の配列を含む抗体、
ｃ）配列番号１７および１９で示された両方の配列、または配列番号１７および配列番号２０で示された両方の配列を含む抗体、
ｄ）配列番号１６および配列番号１８で示された両方の配列を含む抗体、
ｅ）配列番号１で示された配列によってコードされたアミノ酸配列と、配列番号３で示された配列によってコードされたアミノ酸配列とを有する抗体、ならびに
ｆ）ＣＤＲ−Ｌ１では配列番号１０で示したアミノ酸配列、ＣＤＲ−Ｌ２では配列番号１１で示したアミノ酸配列、ＣＤＲ−Ｌ３では配列番号１２で示したアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）およびＣＤＲ−Ｈ１では配列番号１３で示したアミノ酸配列、ＣＤＲ−Ｈ２では配列番号１４で示したアミノ酸配列、ＣＤＲ−Ｈ３では配列番号１５で示したアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を有する抗体
からなる群より選択され、
ここで、該患者は、ＣＨＯＰを以前に投与されており、かつ、該疾患または状態が、ＣＨＯＰによる治療に難治性である、使用。
【請求項６】
併用療法によって腫瘍性Ｂ細胞増殖に関連した疾患または状態についてヒト患者を治療するための少なくとも２種の別々の医薬品の製造における（ｉ）シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチンおよびプレドニゾンならびに（ｉｉ）アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の使用であって、該抗ＣＤ４０抗体は、ヒトＢ細胞の表面上のＣＤ４０抗原に結合したとき有意なアゴニスト活性を有さず、かつ該抗ＣＤ４０抗体は、
ａ）ＡＴＣＣに特許寄託番号ＰＴＡ−５５４３として寄託されたハイブリドーマ細胞株によって産生されたモノクローナル抗体、
ｂ）配列番号２および４で示された両方の配列、または配列番号２および配列番号５で示された両方の配列を含む抗体、
ｃ）配列番号１７および１９で示された両方の配列、または配列番号１７および配列番号２０で示された両方の配列を含む抗体、
ｄ）配列番号１６および配列番号１８で示された両方の配列を含む抗体、
ｅ）配列番号１で示された配列によってコードされたアミノ酸配列と、配列番号３で示された配列によってコードされたアミノ酸配列とを有する抗体、ならびに
ｆ）ＣＤＲ−Ｌ１では配列番号１０で示したアミノ酸配列、ＣＤＲ−Ｌ２では配列番号１１で示したアミノ酸配列、ＣＤＲ−Ｌ３では配列番号１２で示したアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）およびＣＤＲ−Ｈ１では配列番号１３で示したアミノ酸配列、ＣＤＲ−Ｈ２では配列番号１４で示したアミノ酸配列、ＣＤＲ−Ｈ３では配列番号１５で示したアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を有する抗体
からなる群より選択され、
ここで、該患者は、ＣＨＯＰを以前に投与されており、かつ、該疾患または状態が、ＣＨＯＰによる治療に難治性である、使用。
【請求項７】
前記疾患または状態が、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、前リンパ性白血病（ＰＬＬ）、小リンパ球性白血病（ＳＬＬ）、びまん性小リンパ球性白血病（ＤＳＬＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、へアリーセル白血病、非ホジキンリンパ腫、ホジキン病、エプスタインバーウイルス（ＥＢＶ）誘発リンパ腫、多発骨髄腫などの骨髄腫、ヴァルデンストレームマクログロブリン血症、Ｈ鎖病、粘膜関連リンパ組織リンパ腫、単球様Ｂ細胞リンパ腫、脾リンパ腫、リンパ腫様肉芽腫症、脈管内リンパ腫症、免疫芽球性リンパ腫およびＡＩＤＳ関連リンパ腫からなる群より選択される、請求項１〜４のいずれかに記載のキット。
【請求項８】
前記疾患または状態が非ホジキンリンパ腫である、請求項７に記載のキット。
【請求項９】
前記非ホジキンリンパ腫がびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）である、請求項８に記載のキット。
【請求項１０】
前記疾患または状態が、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、前リンパ性白血病（ＰＬＬ）、小リンパ球性白血病（ＳＬＬ）、びまん性小リンパ球性白血病（ＤＳＬＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、へアリーセル白血病、非ホジキンリンパ腫、ホジキン病、エプスタインバーウイルス（ＥＢＶ）誘発リンパ腫、多発骨髄腫などの骨髄腫、ヴァルデンストレームマクログロブリン血症、Ｈ鎖病、粘膜関連リンパ組織リンパ腫、単球様Ｂ細胞リンパ腫、脾リンパ腫、リンパ腫様肉芽腫症、脈管内リンパ腫症、免疫芽球性リンパ腫およびＡＩＤＳ関連リンパ腫からなる群より選択される、請求項５または６に記載の使用。
【請求項１１】
前記疾患または状態が非ホジキンリンパ腫である、請求項１０に記載の使用。
【請求項１２】
前記非ホジキンリンパ腫がびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）である、請求項１１に記載の使用。
【請求項１３】
アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体を含む、腫瘍性ヒトＢ細胞におけるＣＨＯＰ細胞毒性に対する抵抗性を防止するか、または低減するための組成物であって、該組成物を、１種または複数の腫瘍性ヒトＢ細胞と接触させることを特徴とし、該抗ＣＤ４０抗体が、ヒトＢ細胞の表面上のＣＤ４０抗原に結合したとき有意なアゴニスト活性を有さず、かつ該抗ＣＤ４０抗体は、
ａ）ＡＴＣＣに特許寄託番号ＰＴＡ−５５４３として寄託されたハイブリドーマ細胞株によって産生されたモノクローナル抗体、
ｂ）配列番号２および４で示された両方の配列、または配列番号２および配列番号５で示された両方の配列を含む抗体、
ｃ）配列番号１７および１９で示された両方の配列、または配列番号１７および配列番号２０で示された両方の配列を含む抗体、
ｄ）配列番号１６および配列番号１８で示された両方の配列を含む抗体、
ｅ）配列番号１で示された配列によってコードされたアミノ酸配列と、配列番号３で示された配列によってコードされたアミノ酸配列とを有する抗体、ならびに
ｆ）ＣＤＲ−Ｌ１では配列番号１０で示したアミノ酸配列、ＣＤＲ−Ｌ２では配列番号１１で示したアミノ酸配列、ＣＤＲ−Ｌ３では配列番号１２で示したアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）およびＣＤＲ−Ｈ１では配列番号１３で示したアミノ酸配列、ＣＤＲ−Ｈ２では配列番号１４で示したアミノ酸配列、ＣＤＲ−Ｈ３では配列番号１５で示したアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を有する抗体
からなる群より選択される、組成物。
【請求項１４】
アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体を含む、腫瘍性Ｂ細胞増殖に関連した疾患または状態を有するヒト患者におけるＣＨＯＰ細胞毒性に対するＢ細胞抵抗性を防止するか、または低減するための組成物であって、該抗ＣＤ４０抗体は、ヒトＢ細胞の表面上のＣＤ４０抗原に結合したとき有意なアゴニスト活性を有さず、かつ該抗ＣＤ４０抗体は、
ａ）ＡＴＣＣに特許寄託番号ＰＴＡ−５５４３として寄託されたハイブリドーマ細胞株によって産生されたモノクローナル抗体、
ｂ）配列番号２および４で示された両方の配列、または配列番号２および配列番号５で示された両方の配列を含む抗体、
ｃ）配列番号１７および１９で示された両方の配列、または配列番号１７および配列番号２０で示された両方の配列を含む抗体、
ｄ）配列番号１６および配列番号１８で示された両方の配列を含む抗体、
ｅ）配列番号１で示された配列によってコードされたアミノ酸配列と、配列番号３で示された配列によってコードされたアミノ酸配列とを有する抗体、ならびに
ｆ）ＣＤＲ−Ｌ１では配列番号１０で示したアミノ酸配列、ＣＤＲ−Ｌ２では配列番号１１で示したアミノ酸配列、ＣＤＲ−Ｌ３では配列番号１２で示したアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）およびＣＤＲ−Ｈ１では配列番号１３で示したアミノ酸配列、ＣＤＲ−Ｈ２では配列番号１４で示したアミノ酸配列、ＣＤＲ−Ｈ３では配列番号１５で示したアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を有する抗体
からなる群より選択される、組成物。
【請求項１５】
前記抗ＣＤ４０抗体が、該抗体をコードする１種または複数の発現ベクターを含有するＣＨＯ細胞から得られる、請求項１〜４および７〜９のいずれかに記載のキットまたは請求項１３もしくは１４に記載の組成物。
【請求項１６】
前記抗ＣＤ４０抗体が、ＡＴＣＣに特許寄託番号ＰＴＡ−５５４３として寄託されたハイブリドーマ細胞株によって産生されたモノクローナル抗体である、請求項１〜４、７〜９および１５のいずれかに記載のキットまたは請求項１３〜１５のいずれかに記載の組成物。
【請求項１７】
前記抗ＣＤ４０抗体が、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片およびＦｖ断片からなる群より選択される抗原結合抗体断片であり、該断片が、ヒトＢ細胞の表面上のＣＤ４０抗原に結合したとき有意なアゴニスト活性を有さない、請求項１〜４、７〜９、１５および１６のいずれかに記載のキットまたは請求項１３〜１６のいずれかに記載の組成物。
【請求項１８】
前記抗ＣＤ４０抗体が、該抗体をコードする１種または複数の発現ベクターを含有するＣＨＯ細胞から得られる、請求項５、６および１０〜１２のいずれかに記載の使用。
【請求項１９】
前記抗ＣＤ４０抗体が、ＡＴＣＣに特許寄託番号ＰＴＡ−５５４３として寄託されたハイブリドーマ細胞株によって産生されたモノクローナル抗体である、請求項５、６、１０〜１２および１８のいずれかに記載の使用。
【請求項２０】
前記抗ＣＤ４０抗体が、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片およびＦｖ断片からなる群より選択される抗原結合抗体断片であり、該断片が、ヒトＢ細胞の表面上のＣＤ４０抗原に結合したとき有意なアゴニスト活性を有さない、請求項５、６、１０〜１２、１８および１９のいずれかに記載の使用。
【請求項２１】
アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体を含む、併用療法によって腫瘍性Ｂ細胞増殖に関連した疾患または状態についてヒト患者を治療するための組成物であって、該組成物は、シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチンおよびプレドニゾン（ＣＨＯＰ）と組み合わせて投与されることを特徴とし、該抗ＣＤ４０抗体は、ヒトＢ細胞の表面上のＣＤ４０抗原に結合したとき有意なアゴニスト活性を有さず、かつ該抗ＣＤ４０抗体は、
ａ）ＡＴＣＣに特許寄託番号ＰＴＡ−５５４３として寄託されたハイブリドーマ細胞株によって産生されたモノクローナル抗体、
ｂ）配列番号２および４で示された両方の配列、または配列番号２および配列番号５で示された両方の配列を含む抗体、
ｃ）配列番号１７および１９で示された両方の配列、または配列番号１７および配列番号２０で示された両方の配列を含む抗体、
ｄ）配列番号１６および配列番号１８で示された両方の配列を含む抗体、
ｅ）配列番号１で示された配列によってコードされたアミノ酸配列と、配列番号３で示された配列によってコードされたアミノ酸配列とを有する抗体、ならびに
ｆ）ＣＤＲ−Ｌ１では配列番号１０で示したアミノ酸配列、ＣＤＲ−Ｌ２では配列番号１１で示したアミノ酸配列、ＣＤＲ−Ｌ３では配列番号１２で示したアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）およびＣＤＲ−Ｈ１では配列番号１３で示したアミノ酸配列、ＣＤＲ−Ｈ２では配列番号１４で示したアミノ酸配列、ＣＤＲ−Ｈ３では配列番号１５で示したアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を有する抗体
からなる群より選択され、
ここで、該患者は、ＣＨＯＰを以前に投与されており、かつ、該疾患または状態が、ＣＨＯＰによる治療に難治性である、組成物。
【請求項２２】
前記ＣＨＯＰおよび前記抗ＣＤ４０抗体を同時にまたは順次前記患者に投与することを特徴とする、請求項２１に記載の組成物。
【請求項２３】
抗ＣＤ４０抗体の最初の用量を前記患者に投与する前に、該患者にＣＨＯＰの最初のサイクルを投与することを特徴とする、請求項２２に記載の組成物。
【請求項２４】
抗ＣＤ４０抗体の最初の用量を前記患者に投与した後に、該患者にＣＨＯＰの最初のサイクルを投与することを特徴とする、請求項２２に記載の組成物。
【請求項２５】
前記疾患または状態が、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、前リンパ性白血病（ＰＬＬ）、小リンパ球性白血病（ＳＬＬ）、びまん性小リンパ球性白血病（ＤＳＬＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、へアリーセル白血病、非ホジキンリンパ腫、ホジキン病、エプスタインバーウイルス（ＥＢＶ）誘発リンパ腫、多発骨髄腫などの骨髄腫、ヴァルデンストレームマクログロブリン血症、Ｈ鎖病、粘膜関連リンパ組織リンパ腫、単球様Ｂ細胞リンパ腫、脾リンパ腫、リンパ腫様肉芽腫症、脈管内リンパ腫症、免疫芽球性リンパ腫およびＡＩＤＳ関連リンパ腫からなる群より選択される、請求項２１〜２４のいずれかに記載の組成物。
【請求項２６】
前記疾患または状態が非ホジキンリンパ腫である、請求項２５に記載の組成物。
【請求項２７】
前記非ホジキンリンパ腫がびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）である、請求項２６に記載の組成物。
【請求項２８】
前記抗ＣＤ４０抗体が、該抗体をコードする１種または複数の発現ベクターを含有するＣＨＯ細胞から得られる、請求項２１〜２７のいずれかに記載の組成物。
【請求項２９】
前記抗ＣＤ４０抗体が、ＡＴＣＣに特許寄託番号ＰＴＡ−５５４３として寄託されたハイブリドーマ細胞株によって産生されたモノクローナル抗体である、請求項２１〜２８のいずれかに記載の組成物。
【請求項３０】
前記抗ＣＤ４０抗体が、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片およびＦｖ断片からなる群より選択される抗原結合抗体断片であり、該断片が、ヒトＢ細胞の表面上のＣＤ４０抗原に結合したとき有意なアゴニスト活性を有さない、請求項２１〜２９のいずれかに記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、腫瘍性Ｂ細胞増殖に関連した疾患または状態の治療における抗ＣＤ４０抗体の新たな使用に関する。本発明は特に、（ｉ）ＣＨＯＰ、（ｉｉ）キメラ型抗ＣＤ２０モノクローナル抗体リツキシマブ、または（ｉｉｉ）ＣＨＯＰおよびリツキシマブの併用療法を既に投与されている患者の治療に有用である。
【背景技術】
【０００２】
ＣＤ４０は、正常および腫瘍性両方のヒトＢ細胞の表面上に存在する５０〜５５ｋＤａの細胞表面抗原である。Ｂ細胞系統の腫瘍由来の悪性Ｂ細胞は、ＣＤ４０を発現し、生存および増殖に関してＣＤ４０シグナル伝達に依存するようである。低および高悪性度Ｂ細胞リンパ腫、Ｂ細胞急性リンパ芽球性白血病、多発性骨髄腫、慢性リンパ球性白血病およびホジキン病を有する患者由来の形質転換細胞は、ＣＤ４０を発現する。ＣＤ４０発現はまた、急性骨髄芽球性白血病およびＡＩＤＳ関連リンパ腫の５０％において検出される。
【０００３】
抗ＣＤ４０抗体およびその使用は、例えば、特許文献１、特許文献２、特許文献３、特許文献４、特許文献５、特許文献６、特許文献７、特許文献８、特許文献９、特許文献１０、特許文献１１および特許文献１２として公開された共有国際特許出願に開示されている。これらの出願では特に、ヒトＩｇＧ１重鎖遺伝子座およびヒトκ軽鎖遺伝子座を有するトランスジェニックマウス（ＸｅｎｏＭｏｕｓｅ（登録商標）ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ；Ａｂｇｅｎｉｘ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）を免疫処置することによって生成されたＣＨＩＲ−１２．１２（しかし、現在ではＨＣＤ１２２として公知である）とその中で命名されているヒトＩｇＧ１抗ＣＤ４０モノクローナル抗体が開示されている。これらの出願はまた、腫瘍性Ｂ細胞増殖に関連した疾患または状態を治療するための抗ＣＤ４０抗体、例えば、ＨＣＤ１２２の使用を開示している。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】国際公開第２００５／０４４２９４号
【特許文献２】国際公開第２００５／０４４３０４号
【特許文献３】国際公開第２００５／０４４３０５号
【特許文献４】国際公開第２００５／０４４３０６号
【特許文献５】国際公開第２００５／０４４３０７号
【特許文献６】国際公開第２００５／０４４８５４号
【特許文献７】国際公開第２００５／０４４８５５号
【特許文献８】国際公開第２００６／０７３４４３号
【特許文献９】国際公開第２００６／１２５１１７号
【特許文献１０】国際公開第２００６／１２５１４３号
【特許文献１１】国際公開第２００７／０５３６６１号
【特許文献１２】国際公開第２００７／０５３７６７号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
いかなる単一の治療薬も患者に利益をもたらすことができるが、毒性を抑え、治療結果を高めるために、さらなる方法が必要である。さらに、上記疾患または状態は、初期の抵抗性または治療中に発達する抵抗性のいずれかの結果として、単一薬剤療法による治療に難治性になり得ることが多い。したがって、単一薬剤療法と比較して治療を改善できる併用療法を発見することには非常に関心が持たれている。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明は、腫瘍性Ｂ細胞増殖に関連した疾患または状態についてヒト患者を治療するための方法を提供する。この方法には、（ｉ）抗ＣＤ４０抗体ならびに（ｉｉ）シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチンおよびプレドニゾン（ＣＨＯＰ）による併用療法が関与する。本発明者らは、これら２種類の公知の療法の併用投与がインビボにおいて予期せぬ強力な治療効能を生じることを発見した。本発明者らは、これら２種類の療法の併用効果がそれぞれの療法の個々の効果の合計よりも大きく、すなわち、抗ＣＤ４０抗体（例えば、ＨＣＤ１２２）とＣＨＯＰの組み合わせは相乗的治療効果をもたらし得ることを発見した。理論に拘束されることは望まないが、本発明者らは、この予期せぬ強力な治療効能は、抗ＣＤ４０抗体がＮＦ−ｋＢ活性化を下方制御し、かつ／またはＣＤ４０Ｌによって誘導される接着分子の発現を阻害することによって、Ｂ細胞をＣＨＯＰ細胞毒性に感作させる抗ＣＤ４０抗体の能力から生じるものと考える。
【０００７】
本発明は、腫瘍性Ｂ細胞増殖に関連した疾患または状態についてヒト患者を治療する方法であって、前記患者に抗ＣＤ４０抗体と組み合わせてシクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチンおよびプレドニゾン（ＣＨＯＰ）を投与することを含む方法を提供する。
したがって、本発明は以下の項目を提供する：
（項目１）
腫瘍性Ｂ細胞増殖に関連した疾患または状態についてヒト患者を治療するための方法であって、該患者に抗ＣＤ４０抗体と組み合わせてシクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチンおよびプレドニゾン（ＣＨＯＰ）を投与することを含み、該抗ＣＤ４０抗体が、ヒトＢ細胞の表面上のＣＤ４０抗原に結合したとき有意なアゴニスト活性を有さず、該患者が以前に（ｉ）ＣＨＯＰ、（ｉｉ）キメラ型抗ＣＤ２０モノクローナル抗体リツキシマブ、または（ｉｉｉ）ＣＨＯＰおよびリツキシマブによる併用療法を投与されている方法。
（項目２）
上記疾患または状態が、（ｉ）ＣＨＯＰ、（ｉｉ）キメラ型抗ＣＤ２０モノクローナル抗体リツキシマブ、または（ｉｉｉ）ＣＨＯＰおよびリツキシマブの併用療法による治療に難治性である、項目１に記載の方法。
（項目３）
上記患者が、（ｉ）ＣＨＯＰ、（ｉｉ）キメラ型抗ＣＤ２０モノクローナル抗体リツキシマブ、または（ｉｉｉ）ＣＨＯＰおよびリツキシマブの併用療法による治療後再発している、項目１に記載の方法。
（項目４）
上記ＣＨＯＰおよび上記抗ＣＤ４０抗体を同時に上記患者に投与する、項目１に記載の方法。
（項目５）
上記ＣＨＯＰおよび上記抗ＣＤ４０抗体を順次上記患者に投与する、項目１に記載の方法。
（項目６）
抗ＣＤ４０抗体の最初の用量を上記患者に投与する前に、該患者にＣＨＯＰの最初のサイクルを投与する、項目５に記載の方法。
（項目７）
抗ＣＤ４０抗体の最初の用量を上記患者に投与した後に、該患者にＣＨＯＰの最初のサイクルを投与する、項目５に記載の方法。
（項目８）
（ｉ）シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチンおよびプレドニゾンのうちの１つまたは複数、（ｉｉ）抗ＣＤ４０抗体ならびに（ｉｉｉ）薬学的に許容される担体または賦形剤を含む医薬組成物であって、該抗ＣＤ４０抗体が、ヒトＢ細胞の表面上のＣＤ４０抗原に結合したとき有意なアゴニスト活性を有さない、医薬組成物。
（項目９）
腫瘍性Ｂ細胞増殖に関連した疾患または状態についてヒト患者を治療するための医薬品の製造における（ｉ）シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチンおよびプレドニゾンのうちの１つまたは複数ならびに（ｉｉ）抗ＣＤ４０抗体の使用であって、該抗ＣＤ４０抗体が、ヒトＢ細胞の表面上のＣＤ４０抗原に結合したとき有意なアゴニスト活性を有さず、該患者が以前に（ｉ）ＣＨＯＰ、（ｉｉ）キメラ型抗ＣＤ２０モノクローナル抗体リツキシマブ、または（ｉｉｉ）ＣＨＯＰおよびリツキシマブによる併用療法を投与されている、使用。
（項目１０）
併用療法によって腫瘍性Ｂ細胞増殖に関連した疾患または状態についてヒト患者を治療するための少なくとも２種の別々の医薬品の製造における（ｉ）シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチンおよびプレドニゾンのうちの１つまたは複数ならびに（ｉｉ）抗ＣＤ４０抗体の使用であって、該抗ＣＤ４０抗体が、ヒトＢ細胞の表面上のＣＤ４０抗原に結合したとき有意なアゴニスト活性を有さず、該患者が以前に（ｉ）ＣＨＯＰ、（ｉｉ）キメラ型抗ＣＤ２０モノクローナル抗体リツキシマブ、または（ｉｉｉ）ＣＨＯＰおよびリツキシマブによる併用療法を投与されている、使用。
（項目１１）
腫瘍性Ｂ細胞増殖に関連した疾患または状態についてヒト患者を治療するためのキットであって、
（ｉ）シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチンおよびプレドニゾンのうちの１つまたは複数、ならびに
（ｉｉ）抗ＣＤ４０抗体を含み、該抗ＣＤ４０抗体が、ヒトＢ細胞の表面上のＣＤ４０抗原に結合したとき有意なアゴニスト活性を有さない、キット。
（項目１２）
上記疾患または状態が、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、前リンパ性白血病（ＰＬＬ）、小リンパ球性白血病（ＳＬＬ）、びまん性小リンパ球性白血病（ＤＳＬＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、へアリーセル白血病、非ホジキンリンパ腫、ホジキン病、エプスタインバーウイルス（ＥＢＶ）誘発リンパ腫、多発骨髄腫などの骨髄腫、ヴァルデンストレームマクログロブリン血症、Ｈ鎖病、粘膜関連リンパ組織リンパ腫、単球様Ｂ細胞リンパ腫、脾リンパ腫、リンパ腫様肉芽腫症、脈管内リンパ腫症、免疫芽球性リンパ腫およびＡＩＤＳ関連リンパ腫からなる群より選択される、項目１〜１１のいずれかに記載の方法、組成物、使用またはキット。
（項目１３）
上記疾患または状態が非ホジキンリンパ腫である、項目１２に記載の方法、組成物、使用またはキット。
（項目１４）
上記非ホジキンリンパ腫がびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）である、項目１３に記載に記載の方法、組成物、使用またはキット。
（項目１５）
上記抗ＣＤ４０抗体がヒトＣＤ４０抗原のドメイン２に結合するモノクローナル抗体である、項目１〜１４のいずれかに記載の方法、組成物、使用またはキット。
（項目１６）
上記抗ＣＤ４０抗体が配列番号７または配列番号９で示されたヒトＣＤ４０配列の残基８２〜８７を含むエピトープに結合するモノクローナル抗体である、項目１〜１５のいずれかに記載の方法、組成物、使用またはキット。
（項目１７）
上記抗ＣＤ４０抗体が、
ａ）ＡＴＣＣに特許寄託番号ＰＴＡ−５５４３として寄託されたハイブリドーマ細胞株によって産生されたモノクローナル抗体ＨＣＤ１２２、
ｂ）配列番号２で示された配列、配列番号４で示された配列、配列番号５で示された配列、配列番号２および４で示された両方の配列、ならびに配列番号２および配列番号５で示された両方の配列からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む抗体、
ｃ）配列番号１７で示された配列、配列番号１９で示された配列、配列番号２０で示された配列、配列番号１７および１９で示された両方の配列、ならびに配列番号１７および配列番号２０で示された両方の配列からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む抗体、
ｄ）配列番号１６で示された配列、配列番号１８で示された配列ならびに配列番号１６および配列番号１８で示された両方の配列からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む抗体、
ｅ）配列番号１で示された配列、配列番号３で示された配列ならびに配列番号１および配列番号３で示された両方の配列からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含む核酸分子によってコードされたアミノ酸配列を有する抗体、
ｆ）ＣＤＲ−Ｌ１では配列番号１０で示したようなアミノ酸配列、ＣＤＲ−Ｌ２では配列番号１１で示したようなアミノ酸配列、ＣＤＲ−Ｌ３では配列番号１２で示したようなアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を有する抗体、
ｇ）ＣＤＲ−Ｈ１では配列番号１３で示したようなアミノ酸配列、ＣＤＲ−Ｈ２では配列番号１４で示したようなアミノ酸配列、ＣＤＲ−Ｌ３では配列番号１５で示したようなアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を有する抗体、ならびに
ｈ）ＣＤＲ−Ｌ１では配列番号１０で示したようなアミノ酸配列、ＣＤＲ−Ｌ２では配列番号１１で示したようなアミノ酸配列、ＣＤＲ−Ｌ３では配列番号１２で示したようなアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）およびＣＤＲ−Ｈ１では配列番号１３で示したようなアミノ酸配列、ＣＤＲ−Ｈ２では配列番号１４で示したようなアミノ酸配列、ＣＤＲ−Ｈ３では配列番号１５で示したようなアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を有する抗体
からなる群より選択される、項目１〜１６のいずれかに記載の方法、組成物、使用またはキット。
（項目１８）
上記抗ＣＤ４０抗体が、該抗体をコードする１種または複数の発現ベクターを含有するＣＨＯ細胞から得られる、項目１〜１７のいずれかに記載の方法、組成物、使用またはキット。
（項目１９）
上記抗ＣＤ４０抗体が、ＡＴＣＣに特許寄託番号ＰＴＡ−５５４３として寄託されたハイブリドーマ細胞株によって産生されたモノクローナル抗体ＨＣＤ１２２（ＣＨＩＲ−１２．１２）である、項目１〜１８のいずれかに記載の方法、組成物、使用またはキット。
（項目２０）
上記抗ＣＤ４０抗体が、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片およびＦｖ断片からなる群より選択される抗原結合抗体断片であり、該断片が、ヒトＢ細胞の表面上のＣＤ４０抗原に結合したとき有意なアゴニスト活性を有さない、項目１から１８のいずれかに記載の方法、組成物、使用またはキット。
（項目２１）
腫瘍性ヒトＢ細胞におけるＣＨＯＰ細胞毒性に対する抵抗性を防止するか、または低減するための方法であって、１種または複数の腫瘍性ヒトＢ細胞を抗ＣＤ４０抗体と接触させるステップを含み、該抗ＣＤ４０抗体が、ヒトＢ細胞の表面上のＣＤ４０抗原に結合したとき有意なアゴニスト活性を有さない、方法。
（項目２２）
ヒト患者におけるＣＨＯＰ細胞毒性に対するＢ細胞抵抗性を防止するか、または低減するための方法であって、該患者に抗ＣＤ４０抗体を投与するステップを含み、該抗ＣＤ４０抗体が、ヒトＢ細胞の表面上のＣＤ４０抗原に結合したとき有意なアゴニスト活性を有さない、方法。
（項目２３）
ＣＤ４０シグナル伝達によって誘導され、ＣＨＯＰ細胞毒性に対するＢ細胞抵抗性の発達に寄与する、Ｂ細胞におけるＮＦ−ｋＢ活性化を、上記抗ＣＤ４０抗体が下方制御する、項目１〜２２のいずれかに記載の方法。
（項目２４）
ＣＤ４０シグナル伝達によって誘導され、ＣＨＯＰ細胞毒性に対するＢ細胞抵抗性の発達に寄与する、Ｂ細胞上の１種または複数の細胞表面接着分子の発現を、上記抗ＣＤ４０抗体が阻害する、項目１〜２３のいずれかに記載の方法。
（項目２５）
上記抗ＣＤ４０抗体が、ＣＤ４０シグナル伝達によって誘導され、ＣＨＯＰ細胞毒性に対するＢ細胞抵抗性の発達に寄与する、Ｂ細胞におけるＮＦ−ｋＢ活性化を下方制御することができる抗ＣＤ４０抗体である、項目１〜２４のいずれかに記載の組成物、使用またはキット。
（項目２６）
上記抗ＣＤ４０抗体が、ＣＤ４０シグナル伝達によって誘導され、ＣＨＯＰ細胞毒性に対するＢ細胞抵抗性の発達に寄与する、Ｂ細胞上の１種または複数の細胞表面接着分子の発現を阻害することができる抗ＣＤ４０抗体である、項目１〜２５のいずれかに記載の組成物、使用またはキット。
【図面の簡単な説明】
【０００８】
【図１】ＲＬ  ＤＬＢＣＬ異種移植モデルにおいて様々な治療によってもたらされた抗腫瘍活性の試験結果を例示した図である（実施例１参照）。
【図２】ＳＵ−ＤＨＬ−４細胞に対するＣＨＯＰ細胞毒性に対するＣＤ４０ＬおよびＨＣＤ１２２の効果の試験結果を例示した図である。
【図３】ＲＬおよびＳＵ−ＤＨＬ−４細胞株におけるＮＦｋＢシグナル伝達に対するＣＤ４０ＬおよびＨＣＤ１２２の効果の試験結果を例示した図である。
【図４】ＲＬ細胞における特定の細胞表面接着分子の発現に対するＣＤ４０ＬおよびＨＣＤ１２２の効果の試験結果を例示した図である。
【図５】ＳＵ−ＤＨＬ−４細胞における特定の細胞表面接着分子の発現に対するＣＤ４０ＬおよびＨＣＤ１２２の効果の試験結果を例示した図である。
【図６−１】ＳＵ−ＤＨＬ−４細胞のインビトロにおける凝集に対するＣＤ４０ＬおよびＨＣＤ１２２の効果の試験結果を例示した図である。
【図６−２】ＳＵ−ＤＨＬ−４細胞のインビトロにおける凝集に対するＣＤ４０ＬおよびＨＣＤ１２２の効果の試験結果を例示した図である。
【発明を実施するための形態】
【０００９】
一部の実施形態では、抗ＣＤ４０抗体（本明細書では、「抗体療法」）ならびにシクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチンおよびプレドニゾン（ＣＨＯＰ、本明細書では「化学療法」）を同時に患者に投与する。これらの実施形態では、抗体療法は化学療法と正確に同時に患者に投与することができる（すなわち、２種類の療法は同時に投与される）。あるいは、抗体療法は、化学療法とほぼ同時に（すなわち、２種類の療法は正確に同時には投与されない）、例えば、医師またはその他の医療従事者の、その患者への同一訪問の間に投与することができる。
【００１０】
他の実施形態では、抗体療法および化学療法は患者に同時には投与しないが、いずれかの順番で順次（連続）投与する。これらの実施形態では、本発明の方法は、抗ＣＤ４０抗体の最初の用量を患者に投与する前に、患者に化学療法の最初のサイクルを投与することを含んでもよい。あるいは、この方法は、抗ＣＤ４０抗体の最初の用量を患者に投与した後で、患者に化学療法の最初のサイクルを投与することを含んでもよい。抗体療法および化学療法を順次に投与する実施形態では、必須ではないが、両方の療法が同時に患者に治療効果を発揮する様な方法で（すなわち、各療法が効果的である期間が重複してもよい）療法を投与してもよい。
【００１１】
したがって、本発明は、腫瘍性Ｂ細胞増殖に関連した疾患または状態についてヒト患者を治療する方法であって、シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチンおよびプレドニゾンのうちの１つまたは複数の投与前、投与中、または投与後に前記患者に抗ＣＤ４０抗体を投与することを含む方法を提供する。シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチンおよびプレドニゾンのうちの１つまたは複数の使用について本明細書で言及する場合は、シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチンおよびプレドニゾンのうちの１つまたは複数、２つ以上、３つ以上、または４つ全ての使用について言及する。
【００１２】
抗ＣＤ４０抗体の最初の用量を投与する前に化学療法の最初のサイクルを患者に投与する実施形態では、化学療法の最初のサイクルは、抗ＣＤ４０抗体の最初の用量を患者に投与する約１週間から約１年、約１週間から約１０カ月、約１週間から約８カ月、約１週間から約６カ月、約１週間から約４カ月、約１週間から約２カ月、約１週間から約１カ月、約１週間から約３週間、約１週間から約２週間、または約１週間前に投与してもよい。言い換えると、抗体療法は、化学療法の最初のサイクルの約１週間から約１年、約１週間から約１０カ月、約１週間から約８カ月、約１週間から約６カ月、約１週間から約４カ月、約１週間から約２カ月、約１週間から約１カ月、約１週間から約３週間、約１週間から約２週間、または約１週間後に投与してもよい。
【００１３】
抗ＣＤ４０抗体の最初の用量を投与した後で化学療法の最初のサイクルを患者に投与する実施形態では、化学療法の最初のサイクルは、抗ＣＤ４０抗体の最初の用量を患者に投与した約１週間から約１年、約１週間から約１０カ月、約１週間から約８カ月、約１週間から約６カ月、約１週間から約４カ月、約１週間から約２カ月、約１週間から約１カ月、約１週間から約３週間、約１週間から約２週間、または約１週間後に投与してもよい。言い換えると、抗体療法は、化学療法の最初のサイクルの約１週間から約１年、約１週間から約１０カ月、約１週間から約８カ月、約１週間から約６カ月、約１週間から約４カ月、約１週間から約２カ月、約１週間から約１カ月、約１週間から約３週間、約１週間から約２週間、または約１週間前に投与してもよい。
【００１４】
療法を同時に投与するとき、単一の医薬製剤として、または２種類以上の別々の医薬製剤として投与してもよい。療法を同時に投与しないとき、２種類以上の別々の医薬製剤として投与する。
【００１５】
２種類以上の別々の医薬製剤を使用するとき、抗体療法および化学療法の任意の適切な組合せを使用することができる。例えば、１医薬製剤は抗体療法を含有し、その他の医薬製剤（複数可）は化学療法薬シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチンおよびプレドニゾンを含有してもよい。あるいは、１医薬製剤が抗体療法および１種または複数の化学療法薬を含有し、その他の医薬製剤（複数可）がその他の化学療法薬（複数可）を含有してもよい。医薬製剤が抗体療法および１種または複数の化学療法薬を含有する実施形態では、この医薬製剤は、（ｉ）凍結乾燥した抗ＣＤ４０抗体組成物を得るステップと、（ｉｉ）滅菌希釈剤中に１種または複数の化学療法薬を含む組成物を得るステップと、（ｉｉｉ）１種または複数の化学療法薬を含む組成物を使用して凍結乾燥した抗体組成物を再構成するステップとを含む方法によって得ることができる。
【００１６】
したがって、本発明は、（ｉ）シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチンおよびプレドニゾンのうちの１つまたは複数、（ｉｉ）抗ＣＤ４０抗体、ならびに（ｉｉｉ）薬学的に許容される担体または賦形剤を含む医薬組成物を提供する。
【００１７】
本発明はまた、腫瘍性Ｂ細胞増殖に関連した疾患または状態についてヒト患者を治療するための医薬品の製造における、（ｉ）シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチンおよびプレドニゾンのうちの１つまたは複数、ならびに（ｉｉ）ＣＤ４０抗体の使用を提供する。他の実施形態では、本発明は、腫瘍性Ｂ細胞増殖に関連した疾患または状態についてヒト患者を併用療法で治療するための少なくとも２種類の別々の医薬品（２種類、３種類、４種類または５種類の医薬品）の製造における、（ｉ）シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチンおよびプレドニゾンのうちの１つまたは複数、ならびに（ｉｉ）ＣＤ４０抗体の使用を提供する。シクロホスファミド、ビンクリスチン、プレドニゾン、ドキソルビシンおよび抗ＣＤ４０抗体は、少なくとも３種類、少なくとも４種類、または５種類の別々の医薬品の製造において使用することができる。
【００１８】
本発明はまた、腫瘍性Ｂ細胞増殖に関連した疾患または状態についてヒト患者を治療するためのキットであって、（ｉ）シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチンおよびプレドニゾンのうちの１つまたは複数ならびに（ｉｉ）抗ＣＤ４０抗体を含むキットを提供する。キットはさらに、併用療法をヒト患者に投与するための１種または複数の装置、例えば、（ｉ）滅菌された針およびシリンジ、（ｉｉ）滅菌容器（例えば、ガラス瓶、プラスティック瓶またはプラスティックバッグ）および点滴容器、（ｉｉｉ）調節締め具の付いた滅菌チューブならびに（ｉｖ）カテーテルの１種または複数を含んでもよい。
【００１９】
本発明は、腫瘍性Ｂ細胞増殖に関連した疾患または状態についてヒト患者を治療する方法であって、前記患者にシクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチンおよびプレドニゾンのうちの１つまたは複数を投与することを含み、前記患者が抗ＣＤ４０抗体で予め治療されている方法を提供する。本発明はまた、腫瘍性Ｂ細胞増殖に関連した疾患または状態についてヒト患者を治療する方法であって、前記患者に抗ＣＤ４０抗体を投与することを含み、前記患者がシクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチンおよびプレドニゾンのうちの１つまたは複数で予め治療されている方法を提供する。
【００２０】
本発明はさらに、腫瘍性Ｂ細胞増殖に関連した疾患または状態についてヒト患者を治療するための医薬品の製造における抗ＣＤ４０抗体の使用であって、前記ヒト患者がシクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチンおよびプレドニゾンのうちの１つまたは複数で予め治療されている使用を提供する。本発明はまた、腫瘍性Ｂ細胞増殖に関連した疾患または状態についてヒト患者を治療するための医薬品の製造におけるシクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチンおよびプレドニゾンのうちの１つまたは複数の使用であって、前記ヒト患者が抗ＣＤ４０抗体で予め治療されている使用を提供する。
【００２１】
「予め治療された」または「予備治療」とは、被験体が第２の療法の前に第１の療法の１回または複数回の用量を受容したことを意味する。「予め治療された」または「予備治療」には、第２の治療で治療を開始する前の２年以内、１８カ月以内、１年以内、６カ月以内、２カ月以内、６週間以内、１カ月以内、４週間以内、３週間以内、２週間以内、１週間以内、６日以内、５日以内、４日以内、３日以内、２日以内または１日以内に第１の療法で治療された患者が含まれる。本発明の併用方法において、したがって「予め治療された」または「予備治療」には、化学療法で治療を開始する前の２年以内、１８カ月以内、１年以内、６カ月以内、２カ月以内、６週間以内、１カ月以内、４週間以内、３週間以内、２週間以内、１週間以内、６日以内、５日以内、４日以内、３日以内、２日以内または１日以内に抗ＣＤ４０抗体で治療された患者が含まれる。本発明の併用方法において、「予め治療された」または「予備治療」にはまた、抗ＣＤ４０抗体で治療を開始する前の２年以内、１８カ月以内、１年以内、６カ月以内、２カ月以内、６週間以内、１カ月以内、４週間以内、３週間以内、２週間以内、１週間以内、６日以内、５日以内、４日以内、３日以内、２日以内または１日以内に化学療法で治療された患者が含まれる。
【００２２】
抗ＣＤ４０抗体で予め治療された患者は、例えば、患者の診療記録を調べるか、または適切なインビトロ試験（複数可）を実施することによって、その他の患者から区別することができる。シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチンおよびプレドニゾンのうちの１つまたは複数で予め治療された患者は、例えば、患者の診療記録を調べるか、適切なインビトロ試験（複数可）を実施することによって、その他の患者から区別することができる。
【００２３】
本発明はまた、腫瘍性Ｂ細胞増殖に関連した疾患または状態についてヒト患者を治療するための医薬品の製造における抗ＣＤ４０抗体の使用であって、この医薬品をシクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチンおよびプレドニゾンの前に投与する使用を提供する。他の実施形態では、本発明は、腫瘍性Ｂ細胞増殖に関連した疾患または状態についてヒト患者を治療するための医薬品の製造における抗ＣＤ４０抗体の使用であって、この医薬品をシクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチンおよびプレドニゾンの後で投与する使用を提供する。本発明はまた、腫瘍性Ｂ細胞増殖に関連した疾患または状態についてヒト患者を治療するための医薬品の製造におけるシクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチンおよびプレドニゾンのうちの１つまたは複数の使用であって、この医薬品を抗ＣＤ４０抗体の前に投与する使用を提供する。他の実施形態では、本発明は、腫瘍性Ｂ細胞増殖に関連した疾患または状態についてヒト患者を治療するための医薬品の製造におけるシクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチンおよびプレドニゾンのうちの１つまたは複数の使用であって、抗ＣＤ４０抗体の後でこの医薬品を投与する使用を提供する。
【００２４】
本発明はまた、併用療法による腫瘍性Ｂ細胞増殖に関連した疾患または状態についてヒト患者を治療することにおいて、同時に、別々に、または順次使用するための抗ＣＤ４０抗体ならびにシクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチンおよびプレドニゾンのうちの１つまたは複数を提供する。本発明はまた、腫瘍性Ｂ細胞増殖に関連した疾患または状態についてヒト患者を治療するために、シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチンおよびプレドニゾンのうちの１つまたは複数と併用して同時または順次使用するための医薬品の製造における抗ＣＤ４０抗体の使用を提供する。本発明はまた、腫瘍性Ｂ細胞増殖に関連した疾患または状態についてヒト患者を治療するために、抗ＣＤ４０抗体と組み合わせて同時または順次使用するための医薬品の製造におけるシクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチンおよびプレドニゾンのうちの１つまたは複数の使用を提供する。
【００２５】
本発明の方法は、抗ＣＤ４０抗体の１用量を化学療法の最初またはその後のサイクルの任意の時点に投与することを含むことができる。あるいは、本発明の方法は、抗ＣＤ４０抗体の１用量を化学療法のサイクルの間に投与することを含むことができる。
【００２６】
前述したように、本発明者らは、抗ＣＤ４０抗体とＣＨＯＰでの併用療法が相乗的治療効果をもたらし得ることを発見した。したがって、本明細書で開示した方法、使用、組成物およびキットの一部の実施形態では、併用療法は、単独で投与したときの個々の治療薬と比較して治療効能の相乗的な改善をもたらす。「相乗」という用語は、それぞれの活性薬剤の個々の効果の合計よりも大きな２種以上の活性薬剤の組合せ効果を説明するために使用される。したがって、２種類以上の薬剤の組合せ効果が、ある活性またはプロセス、例えば、腫瘍増殖の「相乗的阻害」を生じる場合、その活性またはプロセスの阻害はそれぞれの活性薬剤の阻害効果の合計よりも大きいことを意味する。したがって、「相乗的治療効果」という用語は、治療効果（いくつかのパラメータのいずれか、例えば、本明細書の実施例１のような腫瘍増殖の遅延によって測定される）がそれぞれ個々の療法で認められる個々の治療効果の合計よりも大きい、２種以上の療法の組合せで認められる治療効果をいう。
【００２７】
前述したように、本発明者らは、本発明の併用療法によってもたらされる予期せぬ強力な治療効能は、ＮＦ−ｋＢ活性化を下方制御し、かつ／またはＣＤ４０Ｌによって誘導される接着分子の発現を阻害することによって（本明細書の実施例２〜４参照）、腫瘍性Ｂ細胞をＣＨＯＰ細胞毒性に対して感作させる抗ＣＤ４０抗体の能力から生じるものと考える。本明細書の実施例は、ＣＤ４０によるシグナル伝達がＢ細胞のＣＨＯＰ細胞毒性に対する抵抗性の発達に寄与し、この抵抗性はＣＤ４０シグナル伝達を低減するアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体（例えば、ＨＣＤ１２２）を使用することによって防止または低減され得ることを示している。本明細書の実施例はさらに、ＣＤ４０シグナル伝達によって誘導される、Ｂ細胞上における細胞表面接着分子の発現は、Ｂ細胞を凝集させ、それらの微小環境と相互作用させることによって、Ｂ細胞のＣＨＯＰ細胞毒性に対する抵抗性の発達に寄与し得ることを示している。これらの実施例は、Ｂ細胞上における細胞表面接着分子の発現はアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体（例えば、ＨＣＤ１２２）を使用することによって防止または低減され得ることを示唆している。
【００２８】
したがって、本発明は、腫瘍性ヒトＢ細胞におけるＣＨＯＰ細胞毒性に対する抵抗性を防止または低減するために（すなわち、腫瘍性Ｂ細胞をＣＨＯＰ細胞毒性に対して感作させるために）抗ＣＤ４０抗体の使用を提供する。本発明はまた、腫瘍性ヒトＢ細胞におけるＣＨＯＰ細胞毒性に対する抵抗性を防止または低減するための（すなわち、腫瘍性Ｂ細胞をＣＨＯＰ細胞毒性に対して感作させるための）方法であって、インビトロにおいて１種または複数の腫瘍性ヒトＢ細胞を抗ＣＤ４０抗体と接触させるステップを含む方法を提供する。
【００２９】
本発明はさらに、ヒト患者におけるＣＨＯＰ細胞毒性に対するＢ細胞抵抗性を防止または低減するための方法であって、抗ＣＤ４０抗体を前記患者に投与するステップを含む方法を提供する。本発明はまた、腫瘍性Ｂ細胞増殖に関連した疾患または状態についてヒト患者を治療する方法であって、抗ＣＤ４０抗体を前記患者に投与することによって前記患者におけるＣＨＯＰ細胞毒性に対するＢ細胞抵抗性を低減する（すなわち、患者の腫瘍性Ｂ細胞をＣＨＯＰ細胞毒性に対して感作させる）ステップを含む方法を提供する。
【００３０】
本発明はまた、インビトロで腫瘍性ヒトＢ細胞において（すなわち、腫瘍性Ｂ細胞をＣＨＯＰ細胞毒性に対して感作させるため）、またはインビボでヒト患者において（すなわち、患者の腫瘍性Ｂ細胞をＣＨＯＰ細胞毒性に対して感作させるため）ＣＨＯＰ細胞毒性に対する抵抗性を防止または低減するため、抗ＣＤ４０抗体を提供する。本発明はまた、ヒト患者においてＣＨＯＰ細胞毒性に対するＢ細胞抵抗性を防止または低減するため（すなわち、患者の腫瘍性Ｂ細胞をＣＨＯＰ細胞毒性に対して感作させるため）の医薬品の製造における抗ＣＤ４０抗体の使用を提供する。
【００３１】
好ましくは、これらの実施形態で使用した抗ＣＤ４０抗体は、ＮＦ−ｋＢ活性化を下方制御する。特に、この抗体は、ＣＤ４０シグナル伝達によって誘導され、ＣＨＯＰ細胞毒性に対するＢ細胞抵抗性の発達に寄与するＢ細胞におけるＮＦ−ｋＢ活性化を下方制御することができる。
【００３２】
好ましくは、これらの実施形態で使用した抗ＣＤ４０抗体は、Ｂ細胞上における１種または複数の細胞表面接着分子の発現を阻害する抗体である。特に、この抗体は、ＣＤ４０シグナル伝達によって誘導され、ＣＨＯＰ細胞毒性に対するＢ細胞抵抗性の発達に寄与するＢ細胞上の１種または複数の細胞表面接着分子の発現を阻害することができる。一部の実施形態では、抗ＣＤ４０抗体は、ＣＤ５４、ＣＤ８０、ＣＤ８６およびＣＤ９５の１種または複数（または、ＣＤ５４、ＣＤ８０、ＣＤ８６およびＣＤ９５の２種以上、３種以上、または４種全て）のＣＤ４０−Ｌによって誘導される発現を阻害する。
【００３３】
したがって、本発明の組成物、使用およびキットは、ＮＦ−ｋＢ活性化を下方制御することができ、かつ／またはＢ細胞上での１種または複数の細胞表面接着分子の発現を阻害することができる抗ＣＤ４０抗体を使用してもよい。
【００３４】
本発明を利用するために採用することができる標準的技術および手法の概要を以下に示す。本発明は、記載した特定の方法、プロトコール、細胞株、ベクターおよび試薬に限定されないことを理解されたい。本明細書で使用した専門用語は、特定の実施形態を説明するためだけのものであって、これらの専門用語は本発明の範囲を制限するものではないことも理解されたい。本発明の範囲は、添付の特許請求の範囲によってのみ制限される。
【００３５】
ヌクレオチドおよびアミノ酸の標準的略語を本明細書で使用する。本発明の実施では、特記しない限り、当業者の技術の範囲内である分子生物学、微生物学、組換えＤＮＡ技術および免疫学の従来技術を使用する。このような技術は、文献に十分に説明されている。
【００３６】
本発明は、腫瘍性Ｂ細胞増殖に関連した疾患または状態を有するヒト患者の治療するための抗ＣＤ４０抗体の使用に関する。「ＣＤ４０」、「ＣＤ４０抗原」または「ＣＤ４０受容体」とは、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）受容体ファミリーの５０〜５５ｋＤａ膜貫通糖タンパク質を意味する（例えば、米国特許第５，６７４，４９２号および第４，７０８，８７１号、Ｓｔａｍｅｎｋｏｖｉｃら（１９８９年）ＥＭＢＯ  ８巻：１４０３頁、Ｃｌａｒｋ（１９９０年）Ｔｉｓｓｕｅ  Ａｎｔｉｇｅｎｓ  ３６巻：３３頁、Ｂａｒｃｌａｙら（１９９７年）Ｔｈｅ  Ｌｅｕｃｏｃｙｔｅ  Ａｎｔｉｇｅｎ  Ｆａｃｔｓ  Ｂｏｏｋ（２版、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ）参照）。この遺伝子の選択的スプライシング転写物変種によってコードされたヒトＣＤ４０の２個のアイソフォームを同定した。第１のアイソフォーム（「長アイソフォーム」または「アイソフォーム１」としても公知である）は、２７７個のアミノ酸前駆体ポリペプチド（配列番号９、ジェンバンク受託番号ＣＡＡ４３０４５として最初に報告され、ジェンバンク受託番号ＮＰ＿００１２４１のアイソフォーム１として同定された）として発現し、最初の１９残基によって表されたシグナル配列を有する配列番号８（ジェンバンク受託番号Ｘ６０５９２およびＮＭ＿００１２５０参照）によってコードされる。第２のアイソフォーム（「短アイソフォーム」または「アイソフォーム２」としても公知である）は、２０３個のアミノ酸前駆体ポリペプチド（配列番号７、ジェンバンク受託番号ＮＰ＿６９０５９３）として発現し、また最初の１９残基によって表されたシグナル配列を有する配列番号６（ジェンバンク受託番号ＮＭ＿１５２８５４）によってコードされる。ヒトＣＤ４０のこれら２種のアイソフォームの前駆体ポリペプチドは、最初の１６５残基が共通している（すなわち、配列番号７および配列番号９の残基１〜１６５）。短アイソフォーム（配列番号７で示した）の前駆体ポリペプチドは、翻訳フレームシフトをもたらすコーディング部分の欠如した転写変種（配列番号６）によってコードされており、得られたＣＤ４０アイソフォームはＣＤ４０の長アイソフォームに含有されているＣ末端（配列番号９の残基１６６〜２７７で示したＣ末端）よりも短くて異なったＣ末端（配列番号７の残基１６６〜２０３）を含有する。本発明の目的ために、「ＣＤ４０」または「ＣＤ４０抗原」、「ＣＤ４０細胞表面抗原」または「ＣＤ４０受容体」という用語は、ＣＤ４０の短および長アイソフォームの両方を包含する。
【００３７】
本明細書では、「ＣＤ４０発現細胞」とは、検出可能なレベルのＣＤ４０抗原を発現する任意の正常または悪性細胞を意味する。細胞内でのＣＤ４０抗原発現を検出する方法は当技術分野では周知で、ＰＣＲ技術、免疫組織化学、フローサイトメトリー、ウェスタンブロット、ＥＬＩＳＡなどが含まれるがそれらだけには限定されない。これらの方法は、ＣＤ４０ｍＲＮＡ、ＣＤ４０抗原および細胞表面ＣＤ４０抗原の検出を可能にする。好ましくは、ＣＤ４０発現細胞は、検出可能なレベルの細胞表面ＣＤ４０抗原を発現する細胞である。
【００３８】
「ＣＤ４０リガンド」または「ＣＤ４０Ｌ」とは、３２〜３３ｋＤａの膜貫通タンパク質のことであり、２種類の生物学的活性のあるより小さな可溶型、それぞれ１８ｋＤａおよび３１ｋＤａとしても存在する（Ｇｒａｆら（１９９５年）Ｆｕｒ．  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ２５巻：１７４９〜１７５４頁、Ｍａｚｚｅｉら（１９９５年）Ｊ．  Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．  ２７０巻：７０２５〜７０２８頁、Ｐｉｅｔｒａｖａｌｌｅら（１９９６年）Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２７１巻：５９６５〜５９６７頁）。ヒトＣＤ４０Ｌはまた、ＣＤ１５４またはｇｐ３９として公知である。
【００３９】
「ヒト患者」とは、腫瘍性Ｂ細胞増殖に関連した任意の疾患または状態に罹患した、発症する、または再発する危険性があるヒトを意味する。
【００４０】
「腫瘍性Ｂ細胞増殖に関連した疾患または状態」とは、Ｂ細胞系統の細胞の無制御な増殖に関与する任意の疾患または状態（前悪性状態を含む）を意味する。このような疾患および状態には、限定はしないが、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、前リンパ性白血病（ＰＬＬ）、小リンパ球性白血病（ＳＬＬ）、びまん性小リンパ球性白血病（ＤＳＬＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、へアリーセル白血病、非ホジキンリンパ腫、ホジキン病、エプスタインバーウイルス（ＥＢＶ）誘発リンパ腫、多発骨髄腫などの骨髄腫、ヴァルデンストレームマクログロブリン血症、Ｈ鎖病、粘膜関連リンパ組織リンパ腫、単球様Ｂ細胞リンパ腫、脾リンパ腫、リンパ腫様肉芽腫症、脈管内リンパ腫症、免疫芽球性リンパ腫、ＡＩＤＳ関連リンパ腫などが含まれる。
【００４１】
本発明の方法は、異常なＢ細胞増殖または蓄積に関連する非ホジキンリンパ腫を有する被験体の治療における使用を見出す。本発明の目的のために、このようなリンパ腫は、Ｗｏｒｋｉｎｇ  Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ分類スキームに従うものとし、すなわち、低悪性度、中悪性度および高悪性度に分類されるＢ細胞リンパ腫である（「Ｔｈｅ  Ｎｏｎ−Ｈｏｄｇｋｉｎ’ｓ  Ｌｙｍｐｈｏｍａ  Ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃ  Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ  Ｐｒｏｊｅｃｔ」、Ｃａｎｃｅｒ  ４９巻（１９８２年）：２１１２〜２１３５頁を参照のこと）。したがって、低悪性度Ｂ細胞リンパ腫には、小リンパ球性、濾胞性小切れ込み核細胞、ならびに濾胞性混合型小切れ込み核および大細胞型リンパ腫が含まれ、中悪性度リンパ腫には、濾胞性大細胞、びまん性小切れ込み核細胞、びまん性混合型小および大細胞、ならびにびまん性大細胞型リンパ腫が含まれ、高悪性度リンパ腫には、大細胞免疫芽球性、リンパ芽球性、ならびにバーキットおよび非バーキット型の非切れ込み核小細胞型リンパ腫が含まれる。本発明の方法は、低、中、高悪性度Ｂ細胞リンパ腫の治療に使用することができる。
【００４２】
本発明の方法は、Ｒｅｖｉｓｅｄ  Ｅｕｒｏｐｅａｎ  ａｎｄ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｌｙｍｐｈｏｍａ  Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ（ＲＥＡＬ）システムに従って分類されるＢ細胞リンパ腫の治療的処置に有用である。このようなＢ細胞リンパ腫には、限定はしないが、前駆体Ｂ細胞新生物に分類されるリンパ腫、例えば、Ｂリンパ芽球性白血病／リンパ腫、末梢Ｂ細胞新生物、例えば、Ｂ細胞慢性リンパ性白血病／小リンパ球性リンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫／免疫細胞種、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、濾胞中心リンパ腫（濾胞性）（びまん性小細胞型、びまん性混合型小および大細胞型ならびにびまん性大細胞型リンパ腫を含む）、辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫（節外性、節性および脾臓原発型を含む、例えば、粘膜関連リンパ組織の節外性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫を含む）、形質細胞種／骨髄腫、亜型縦隔原発（胸腺）のびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、ならびにバーキット様高悪性度Ｂ細胞リンパ腫、および分類不能な低悪性度または高悪性度Ｂ細胞リンパ腫が含まれる。
【００４３】
本発明の方法では、併用療法は疾患または状態に関して正の治療応答を提供するために使用される。「正の治療応答」とは、併用療法の治療的活性の結果として疾患または状態の改善、および／または疾患または状態に関連した症状の改善を意図する。すなわち、抗増殖効果、さらなる腫瘍増殖の阻止、腫瘍の大きさの縮小、腫瘍細胞数の減少および／またはＣＤ４０発現細胞と関連した１種または複数の症状の低減を認めることができる。したがって、例えば、正の治療応答は、疾患における以下の改善、（１）腫瘍の大きさの縮小、（２）腫瘍細胞数の減少、（３）腫瘍細胞死の増加、（４）腫瘍細胞生存の阻害、（４）腫瘍増殖の阻害（すなわち、ある程度の遅滞、好ましくは停止）、（５）末梢器官内への腫瘍細胞浸潤の阻害（すなわち、ある程度の遅滞、好ましくは停止）、（６）腫瘍転移の阻害（すなわち、ある程度の遅滞、好ましくは停止）、（７）さらなる腫瘍増殖の阻止、（８）患者の生存率の増大、および（９）疾患または状態に関連した１種または複数の症状のある程度の緩和の１種または複数を意味する。
【００４４】
いかなる所与の疾患または状態における正の治療応答も、その疾患または状態に特異的な標準化された応答基準によって決定することができる。腫瘍の応答は、腫瘍形態（すなわち、全腫瘍負荷量、腫瘍の大きさなど）の変化について、スクリーニング技術、例えば、核磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）スキャン、Ｘ線画像法、コンピュータ断層撮影（ＣＴ）スキャン、骨スキャン画像法、内視鏡検査ならびに骨髄穿刺（ＢＭＡ）および循環中の腫瘍細胞の計数を含む腫瘍生検試料採取を用いて評価することができる。これらの正の治療応答に加えて、治療を受けている被験体は、その疾患に関連した症状の改善という有益な効果を経験することができる。したがって、Ｂ細胞腫瘍では、被験体は、いわゆるＢ症状、すなわち、寝汗、発熱、体重減少および／または蕁麻疹の低減を経験することができる。前悪性状態では、抗ＣＤ４０治療薬による療法により、意味未確定の単クローン性高ガンマグロブリン血症（ＭＧＵＳ）に罹患した被験体において、関連悪性状態の発症、例えば、多発骨髄腫の発症が阻止され、かつ／または発症までの時間が延長され得る。
【００４５】
疾患の改善は、完全な応答として特徴付けることができる。「完全な応答」とは、任意の以前の異常な放射線学的試験の正常化、骨髄腫の場合は、骨髄および脳脊髄液（ＣＳＦ）または異常なモノクローナルタンパク質の正常化による臨床的に検出可能な疾患の非存在を意味する。このような応答は、本発明の方法によって処置した後、少なくとも４から８週間、または場合によって６から８週間持続してもよい。あるいは、疾患の改善は、部分応答に分類してもよい。「部分応答」とは、４から８週間、または６から８週間持続し得る、新たな病変の非存在下における測定可能な全腫瘍負荷量（すなわち、被験体に存在する悪性細胞数または腫瘍体積の測定されたかさまたは異常なモノクローナルタンパク質の量）の少なくとも約５０％の低減を意味する。
【００４６】
本発明の方法および生成物には、抗ＣＤ４０抗体および４種類のＣＨＯＰ成分それぞれの治療または予防有効量の使用が関与する。「有効量」または「治療または予防有効量」とは、併用療法の一部として投与されると、患者の治療に関して正の治療応答をもたらす抗体療法または化学療法の量を意味する。適切な量は、本明細書の他のところで詳細に記載する。
【００４７】
本明細書で使用した「腫瘍（ｔｕｍｏｒ）」（または「腫瘍（ｔｕｍｏｕｒ）」）は、悪性であろうと良性であろうと、あらゆる腫瘍性（ｎｅｏｐｌａｓｔｉｃ）細胞の成長および増殖ならびにあらゆる前癌性および癌性の細胞および組織をいう。本明細書では、「腫瘍性」とは、悪性であろうと良性であろうと、異常な増殖をもたらす調節不全の、または無秩序な細胞増殖の任意の形態を意味する。したがって、「腫瘍性細胞」には、調節不全の、または無秩序な細胞増殖を有する悪性および良性の細胞が含まれる。「癌」および「癌の」という用語は、無秩序な細胞増殖を通常特徴とする哺乳類の生理学的状態を意味するか、または表す。
【００４８】
本明細書では、「治療」とは、患者への併用療法の適用もしくは投与、または患者由来の単離された組織への併用療法の適用もしくは投与であって、患者が疾患、疾患の症状または疾患に対する素因を有し、その目的が、疾患、疾患の症状または疾患に対する素因を治療、治癒、軽減、緩和、改変、矯正、改善、向上または影響を与えることである適用もしくは投与と定義される。
【００４９】
本発明の方法は、その他の腫瘍治療処置を既に受けた患者の治療に特に有用である。これには、本発明による併用療法を開始する前の任意の時点、例えば、本発明による併用療法を開始する前の１５年以内、１４年以内、１３年以内、１２年以内、１１年以内、１０年以内、９年以内、８年以内、７年以内、６年以内、５年以内、４年以内、３年以内、２年以内、１８カ月以内、１年以内、６カ月以内、２カ月以内、６週間以内、１カ月以内、４週間以内、３週間以内、２週間以内、１週間以内、６日以内、５日以内、４日以内、３日以内、２日以内または１日以内に別の腫瘍治療処置を受けた患者が含まれる。
【００５０】
特に、本発明の併用療法は、（ｉ）ＣＨＯＰのみ、（ｉｉ）抗ＣＤ４０抗体（例えば、ＨＣＤ１２２）のみ、（ｉｉｉ）抗ＣＤ２０抗体（例えば、キメラ型抗ＣＤ２０抗体リツキシマブ）のみ、または（ｉｖ）ＣＨＯＰおよび抗ＣＤ２０抗体の併用療法（例えば、リツキシマブ、この併用療法は通常Ｒ−ＣＨＯＰと称される）を既に投与されたヒト患者の治療に有用であり得る。
【００５１】
本発明は特に、その他の腫瘍治療処置による療法には難治性である疾患または状態を治療するために有用である。したがって、本発明は、（ｉ）ＣＨＯＰのみ、（ｉｉ）抗ＣＤ４０抗体（例えば、ＨＣＤ１２２）のみ、（ｉｉｉ）抗ＣＤ２０抗体（例えば、リツキシマブ）のみ、または（ｉｖ）ＣＨＯＰおよび抗ＣＤ２０抗体の併用療法（Ｒ−ＣＨＯＰ）による療法に難治性である疾患または状態の治療に有用であり得る。「難治性」とは、特定の疾患または状態が特定の癌治療薬による療法に抵抗性であるか、または非反応性であることを意味する。疾患または状態は、特定の治療薬による治療開始から（すなわち、治療薬に対する最初の曝露に非反応性）、または治療薬による最初の処置期間の経過中または治療薬によるその後の処置期間の間のいずれかで、治療薬に対する抵抗性の発達の結果として、特定の治療薬による療法に対して難治性になり得る。したがって、本発明は、腫瘍性Ｂ細胞増殖に関連した疾患または状態についてヒト患者を治療するための方法、組成物、使用およびキットであって、前記疾患または状態が本発明の併用療法以外の腫瘍治療処置に難治性である方法、組成物、使用およびキットを提供する。「腫瘍治療」という用語は、疾患または状態のための任意の治療、例えば、化学療法、抗体療法、手術、放射線療法およびそれらの組合せを意味するものとする。
【００５２】
本発明はまた、その他の腫瘍治療処置による療法の後、再発した患者を治療するために特に有用である。したがって、本発明は、（ｉ）ＣＨＯＰのみ、（ｉｉ）抗ＣＤ４０抗体（例えば、ＨＣＤ１２２）のみ、（ｉｉｉ）抗ＣＤ２０抗体（例えば、リツキシマブ）のみ、または（ｉｖ）ＣＨＯＰおよび抗ＣＤ２０抗体の併用療法（Ｒ−ＣＨＯＰ）による療法の後に再発した患者の治療に有用であり得る。「再発した」とは、患者が以前の腫瘍治療処置に部分的または完全な応答を実現したが、その後疾患または状態が再発したことを意味する。したがって、本発明は、腫瘍性Ｂ細胞増殖に関連した疾患または状態についてヒト患者を治療するための方法、組成物、使用およびキットであって、前記患者が本発明の併用療法以外の腫瘍治療処置による療法の後再発した方法、組成物、使用およびキットを提供する。
【００５３】
本発明の併用療法は、リツキシマブ（商標名リツキサン（登録商標）で市販されているＩＤＥＣ−Ｃ２Ｂ８モノクローナル抗体（Ｂｉｏｇｅｎ  ＩｄｅｃまたはＧｅｎｅｎｔｅｃｈ）を使用した療法に関連した問題に対処する。リツキシマブは、ヒトＩｇＧ１およびカッパ定常領域をマウス抗ＣＤ２０モノクローナル抗体から単離されたマウス可変領域と共に含有するキメラ型抗ＣＤ２０モノクローナル抗体である（Ｒｅｆｆら（１９９４年）Ｂｌｏｏｄ  ８３巻：４３５〜４４５頁）。本発明の方法は、別法でリツキシマブまたはリツキシマブと化学療法薬（例えば、ＣＨＯＰ）との併用療法によって治療された、ＣＤ４０発現Ｂ細胞に関連した疾患または状態を有する患者の治療を可能にする。
【００５４】
したがって、本発明はまた、併用療法によって腫瘍性Ｂ細胞増殖に関連した疾患または状態についてヒト患者を治療するための方法、組成物、使用およびキットであって、該患者が以前にキメラ型抗ＣＤ２０抗体リツキシマブを投与されている方法、組成物、使用およびキットを提供する。本発明は、（ｉ）リツキシマブのみ、または（ｉｉ）ＣＨＯＰおよびリツキシマブの併用療法（Ｒ−ＣＨＯＰ）による療法に難治性である疾患または状態の治療に有用であり得る。本発明はまた、（ｉ）リツキシマブのみ、または（ｉｉ）ＣＨＯＰおよびリツキシマブの併用療法（Ｒ−ＣＨＯＰ）による療法の後に再発した患者の治療に有用であり得る。
【００５５】
リツキシマブで予め治療された患者は、例えば、患者の診療記録を調べるか、適切なインビトロ試験（複数可）を実施することによって、その他の患者から区別することができる。例えば、循環ＣＤ１９＋Ｂ細胞の数は、リツキシマブで治療を受けた患者では枯渇しており、循環ＣＤ１９＋Ｂ細胞の数は、適切な方法、例えば、ＦＡＣＳ（ＭｃＬａｕｇｈｌｉｎら（１９９８年）Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｏｎｃｏｌ．  １６巻（８号）：２８２５〜２８３３頁、Ｍａｌｏｎｅｙら（１９９７年）Ｂｌｏｏｄ  ９０巻（６号）：２１８８〜２１９５頁）を使用してモニターすることができる。
【００５６】
本発明の方法には、抗ＣＤ４０抗体の使用が関与する。天然の抗体は通常、２本の同一の軽（Ｌ）鎖および２本の同一の重（Ｈ）鎖からなる約１５００００ダルトンのヘテロ４量体の糖タンパク質である。各軽鎖は１個の共有ジスルフィド結合によって重鎖と結合し、ジスルフィド結合の数は異なるアイソタイプの重鎖では異なる。各重鎖および軽鎖はまた、規則正しい間隔で鎖内ジスルフィド架橋を有する。各重鎖の１端には、可変ドメイン（ＶＨ）、続いていくつかの定常ドメインがある。各軽鎖は、一端に可変ドメイン（ＶＬ）および他端に定常ドメインを有し、軽鎖の定常ドメインは、重鎖の最初の定常ドメインと並んでおり、軽鎖の可変ドメインは、重鎖の可変ドメインと並んでいる。特定のアミノ酸残基が軽鎖可変ドメインと重鎖可変ドメイン間の界面を形成していると考えられる。「可変」という用語は、可変ドメインの特定の部分の配列が抗体間で広く異なる事実を意味する。可変領域は、抗原結合特異性を付与する。定常ドメインは、抗体の抗原への結合に直接関与していないが、様々なエフェクター機能、例えば、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）結合、抗体依存性細胞傷害における抗体の関与、補体依存性細胞毒性の開始、および肥満細胞脱顆粒を示す。
【００５７】
任意の脊椎動物種由来の抗体の「軽鎖」は、その定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、カッパ（κ）およびラムダ（λ）と呼ばれる明白に異なる２つの型の一方に割り当てることができる。
【００５８】
その「重鎖」の定常ドメインのアミノ酸配列に応じて、抗体は異なるクラスに割り当てることができる。ヒト抗体には主に５つのクラス：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧおよびＩｇＭがあり、これらのいくつかは、さらにサブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２に分けることができる。抗体の種々のクラスに対応する重鎖定常ドメインは、それぞれ、アルファ、デルタ、イプシロン、ガンマおよびミューと呼ばれる。種々のクラスの抗体のサブユニット構造および３次元立体配置は周知である。異なるアイソタイプは異なるエフェクター機能を有する。例えば、ヒトＩｇＧ１およびＩｇＧ３アイソタイプは、ＡＤＣＣ（抗体依存性細胞媒介型細胞毒性）活性を有する。ＩｇＧ１抗体、特にヒトＩｇＧ１抗体は、本発明の方法において特に有用である。
【００５９】
「ヒトエフェクター細胞」は、１種または複数のＦｃＲを発現し、エフェクター機能を発揮する白血球である。好ましくは、この細胞は、少なくともＦｃγＲＩＩＩを発現し、抗原依存性細胞媒介型細胞毒性（ＡＤＣＣ）エフェクター機能を実施する。ＡＤＣＣを媒介するヒト白血球の例には、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、単球、マクロファージ、好酸球および好中球が含まれ、ＰＢＭＣおよびＮＫ細胞が好ましい。ＡＤＣＣ活性を有する抗体は、典型的には、ＩｇＧ１またはＩｇＧ３アイソタイプのものである。ＩｇＧ１およびＩｇＧ３抗体を単離することに加え、ＡＤＣＣ媒介抗体は、非ＡＤＣＣ抗体由来の可変領域をＩｇＧ１またはＩｇＧ３アイソタイプ定常領域と一緒にすることにより作製することができることに注意されたい。
【００６０】
「Ｆｃ受容体」または「ＦｃＲ」という用語は、抗体のＦｃ領域に結合する受容体を記載するために使用される。好ましいＦｃＲは、天然配列のヒトＦｃＲである。さらに、好ましいＦｃＲは、ＩｇＧ抗体（ガンマ受容体）に結合するものであり、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩおよびＦｃγＲＩＩＩサブクラスの受容体が含まれ、これらの受容体の対立遺伝子変種および選択的スプライシング形態が含まれる。ＦｃγＲＩＩ受容体には、主にその細胞質ドメインが異なる類似アミノ酸配列を有する、ＦｃγＲＩＩＡ（「活性化受容体」）およびＦｃγＲＩＩＢ（「阻害受容体」）が含まれる。活性化受容体ＦｃγＲＩＩＡは、免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）をその細胞質ドメインに含有する。阻害受容体ＦｃγＲＩＩＢは、免疫受容体チロシンベース阻害モチーフ（ＩＴＩＭ）をその細胞質ドメインに含有する（Ｄａｅｒｏｎ（１９９７）Ａｎｎｕ．  Ｒｅｖ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １５巻：２０３〜２３４頁を参照のこと）。ＦｃＲは、ＲａｖｅｔｃｈおよびＫｉｎｅｔ（１９９１年）Ａｎｎｕ．  Ｒｅｖ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ９巻：４５７〜４９２頁（１９９１年）、Ｃａｐｅｌら（１９９４年）Ｉｍｍｕｎｏｍｅｔｈｏｄｓ  ４巻：２５〜３４頁、およびｄｅ  Ｈａａｓら（１９９５年）Ｊ．  Ｌａｂ．  Ｃｌｉｎ．  Ｍｅｄ．  １２６巻：３３０〜３４１頁に概説されている。その他のＦｃＲは、将来同定されるものも含め、本明細書における用語「ＦｃＲ」に包含される。この用語にはまた、母体ＩｇＧの胎児への移行を担う新生児受容体、ＦｃＲｎが含まれる（Ｇｕｙｅｒら（１９７６年）Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １１７巻：５８７頁およびＫｉｍら（１９９４年）Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ２４巻：２４９頁（１９９４年））。
【００６１】
「抗体」という用語は、本明細書では最も広い意味で用いられ、完全に構築された抗体、ＣＤ４０抗原に特異的に結合する能力を保持している抗体断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖおよびその他の断片）、単鎖抗体（ｓｃＦｖ）、ダイアボディ、二重特異性抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、完全なヒト抗体など、ならびに前述のものを含む組換えペプチドを包含する。「抗体」という用語は、ポリクローナル抗体およびモノクローナル抗体の両方を包含する。
【００６２】
本明細書では、「抗ＣＤ４０抗体」には、ＣＤ４０抗原を特異的に認識する任意の抗体が包含される。一部の実施形態において、本発明の方法において使用するための抗ＣＤ４０抗体、特に、抗ＣＤ４０モノクローナル抗体は、ＣＤ４０抗原に対して強力な単一部位結合親和性を表す。このようなモノクローナル抗体は、Ｂｉａｃｏｒｅ（商標）などの標準的アッセイを使用して測定した場合、少なくとも１０−５Ｍ、好ましくは少なくとも１０−６Ｍ、少なくとも１０−７Ｍ、少なくとも１０−８Ｍ、少なくとも１０−９Ｍ、少なくとも１０−１０Ｍ、少なくとも１０−１１Ｍまたは少なくとも１０−１２ＭのＣＤ４０に対する親和性（ＫＤ）を示す。Ｂｉａｃｏｒｅ解析は当技術分野では公知であり、詳細は、「ＢＩＡａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ」に示されている。
【００６３】
「特異的に認識する」または「に特異的に結合する」とは、抗ＣＤ４０抗体がヒトＢ細胞の表面上のＣＤ４０抗原には結合するが、ＣＤ２０抗原などのヒトＢ細胞の表面上のその他の抗原に有意な程度結合しないことを意味する。
【００６４】
本発明の方法で使用するための抗ＣＤ４０抗体は、当業者に公知の任意の適切な抗体生成方法を使用して生成することができる。
【００６５】
本発明の方法で使用される抗ＣＤ４０抗体は、モノクローナル抗体であってもよい。「モノクローナル抗体」（および「ｍＡｂ」）という用語は、本明細書では、実質的に均一な抗体集団から得られる抗体のことであり、すなわち、この集団を構成する個々の抗体は、微量で存在し得る天然に生じ得る変異以外は同一である。この用語は、抗体の種に関して限定されず、いかなる特定の方法による抗体の生成も必要としない。異なる抗原決定基（エピトープ）に指向される異なる抗体を通常含むポリクローナル抗体調製物とは対照的に、各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基（エピトープ）に指向される。
【００６６】
抗体に関して元々使用された「モノクローナル」という用語は、いずれも同一の標的タンパク質を認識するが、様々なＢ細胞によって産生され、そのタンパク質上の異なるエピトープに指向される「ポリクローナル」抗体とは対照的に、免疫細胞の単一クローン系によって産生される抗体を意味する。本明細書では、「モノクローナル」という用語は、特定の細胞由来を意味するものではないが、いずれも同一のアミノ酸配列を有し、同一標的タンパク質の同一エピトープを認識する抗体の任意の集団を意味する。したがって、モノクローナル抗体は、免疫細胞、非免疫細胞、無細胞系等を含む任意の適切なタンパク質合成系を使用して生成することができる。この用法は、当技術分野では一般的であり、例えば、マウス骨髄腫ＮＳ０細胞株で発現させたＣＤＲ移植ヒト化抗体Ｓｙｎａｇｉｓ（商標）、ＣＨＯ細胞株で発現させたヒト化抗体Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（商標）およびＣＨＯ細胞株で発現させたファージディスプレー抗体Ｈｕｍｉｒａ（商標）の製品データシートはいずれも、それらの製品をモノクローナル抗体と呼んでいる。
【００６７】
「エピトープ」とは、抗体が生成され、抗体が結合する抗原性分子の一部分であるものとする。エピトープは、線状アミノ酸残基（すなわち、エピトープ内の残基は、連続的に線状様式で配置されている）、非線状アミノ酸残基（本明細書では「非線状エピトープ」と称し、これらのエピトープは、連続的には配置されていない）、または線状と非線状両方のアミノ酸残基を含むことができる。
【００６８】
モノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒら（１９７５年）Ｎａｔｕｒｅ  ２５６巻：４９５頁によって最初に記載されたハイブリドーマ法によって作製することができるか、または組換えＤＮＡ法（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号を参照のこと）によって作製することができる。モノクローナル抗体はまた、例えば、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら（１９９０年）Ｎａｔｕｒｅ  ３４８巻：５５２〜５５４頁（１９９０年）および米国特許第５，５１４，５４８号に記載された手法を用いて作製された抗体ファージライブラリーから単離することができる。Ｃｌａｃｋｓｏｎら（１９９１年）Ｎａｔｕｒｅ  ３５２巻：６２４〜６２８頁およびＭａｒｋｓら（１９９１年）Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ２２２巻：５８１〜５９７頁にはそれぞれ、ファージライブラリーを用いたマウスおよびヒト抗体の単離が記載されている。その後の出版物には、鎖シャッフリング（Ｍａｒｋｓら（１９９２年）Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １０巻：７７９〜７８３頁）、ならびにコンビナトリアル感染およびインビボ組換えによる高親和性（ｎＭ範囲）ヒト抗体の作製が、非常に大きなファージライブラリー（Ｗａｔｅｒｈｏｕｓｅら（１９９３年）Ｎｕｃｌｅｉｃ．  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．  ２１巻：２２６５〜２２６６頁）を構築するための戦略として記載されている。
【００６９】
したがって、これらの技法は、モノクローナル抗体を単離するための、従来のモノクローナル抗体ハイブリドーマ技術の実現可能な代替法である。
【００７０】
本発明において使用するための抗ＣＤ４０抗体が組換えＤＮＡ法を用いて調製される場合、このモノクローナル抗体をコードするＤＮＡは、従来の方法を用いて容易に単離され、配列決定される。一旦単離されたら、このＤＮＡを発現ベクター内に配置し、次いで、他に免疫グロブリンタンパク質を産生しない宿主細胞、例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ細胞、サルＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、または骨髄腫細胞にトランスフェクトして、組換え宿主細胞内でモノクローナル抗体の合成を得ることができる。抗体をコードするＤＮＡの細菌における組換え発現に関する概説論文には、Ｓｋｅｒｒａら（１９９３年）Ｃｕｒｒ．  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ５巻：２５６頁およびＰｈｉｃｋｔｈｕｎ（１９９２年）Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｒｅｖｓ．  １３０巻：１５１頁が含まれる。あるいは、抗体は、米国特許第５，５４５，４０３号、第５，５４５，４０５号および第５，９９８，１４４号に開示されたように、ＣＨＯ細胞株などの細胞株において産生することができる。簡単に説明すると、この細胞株を軽鎖および重鎖それぞれを発現することができるベクターでトランスフェクトする。２種類のタンパク質を別々のベクターにおいてトランスフェクトすることにより、キメラ抗体を生成することができる。別の利点は、ＣＨＯ細胞における抗体の哺乳類型グリコシル化である。ＣＨＯ細胞は、本発明の併用療法において使用するための組換え抗体の好ましい供給源である。
【００７１】
本明細書では、「宿主細胞」とは、組換えベクターまたはその他の移動ポリヌクレオチドのレシピエントとして使用することができる、または使用されたことがある単細胞の存在体として培養された微生物または真核生物細胞もしくは細胞株のことであり、トランスフェクトされた元の細胞の子孫を含む。単一細胞の子孫は、自然な、偶発的または意図的な変異のため、必ずしも元の親と形態学的に、またはゲノムもしくは全ＤＮＡ相補鎖（ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ）が完全に同一とは限らないことを理解されたい。
【００７２】
ＣＤ４０に対するモノクローナル抗体は、当技術分野では公知である。例えば、ＭｃＭｉｃｈａｅｌ編（１９８７年；１９８９年）Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ  Ｔｙｐｉｎｇ  ＩＩＩ  ａｎｄ  ＩＶ（Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）においてＢ細胞抗原に割り当てられた部分、米国特許第５，６７４，４９２号、第５，８７４，０８２号、第５，６７７，１６５号、第６，０５６，９５９号、ＷＯ００／６３３９５、国際出願公開第ＷＯ０２／２８９０５号および第ＷＯ０２／２８９０４号、Ｇｏｒｄｏｎら（１９８８年）Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １４０巻：１４２５頁、Ｖａｌｌｅら（１９８９年）Ｅｕｒ．  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １９巻：１４６３頁、Ｃｌａｒｋら（１９８６）ＰＮＡＳ  ８３巻：４４９４頁、Ｐａｕｌｉｅら（１９８９年）Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １４２巻：５９０頁、Ｇｏｒｄｏｎら（１９８７年）Ｅｕｒ．  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １７巻：１５３５頁、Ｊａｂａｒａら（１９９０年）Ｊ．  Ｅｘｐ．  Ｍｅｄ．  １７２巻：１８６１頁、Ｚｈａｎｇら（１９９１年）Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １４６巻：１８３６年、Ｇａｓｃａｎら（１９９１）Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １４７巻：８頁、Ｂａｎｃｈｅｒｅａｕら（１９９１年）Ｃｌｉｎ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｓｐｅｃｔｒｕｍ  ３巻：８頁およびＢａｎｃｈｅｒｅａｕら（１９９１年）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５１巻：７０頁を参照のこと。
【００７３】
前記のように、本明細書で使用した抗体という用語は、キメラ抗体を包含する。「キメラ」抗体とは、最も好ましくは組換えＤＮＡ技術を使用して得られ、ヒト成分（免疫学的に「関連する」種、例えばチンパンジーを含む）と非ヒト成分の両方を含む抗体を意味する。したがって、キメラ抗体の定常領域は、最も好ましくは、天然ヒト抗体の定常領域と実質的に同一であり、キメラ抗体の可変領域は、最も好ましくは、非ヒト供給源から得られ、ＣＤ４０に対して所望する抗原特異性を有する。非ヒト供給源は、ＣＤ４０抗原に対して抗体を生成させるために使用することができる任意の脊椎動物供給源であることができる。このような非ヒト供給源には、限定はしないが、齧歯類（例えば、ウサギ、ラット、マウスなど；例えば、米国特許第４，８１６，５６７号を参照）および非ヒト霊長類（例えば、旧世界ザル、類人猿など；例えば、米国特許第５，７５０，１０５号および第５，７５６，０９６号を参照）が含まれる。「定常領域」という語句は、エフェクター機能を付与する抗体分子の一部分を意味する。ヒト疾患の療法において使用するための非免疫原性抗体の作製に向けられたこれまでの研究では、マウス定常領域をヒト定常領域で置換した。対象のヒト化抗体の定常領域は、ヒト抗体から得られた。しかし、このような抗体は、望ましくない潜在的に危険な免疫応答をヒトにおいて誘発する可能性があり、親和性が不十分であった。
【００７４】
前記のように、本明細書で使用した抗体という用語は、ヒト化抗体を包含する。「ヒト化」とは、非ヒト抗体配列から得られた最小限の配列を含有する抗体の企図した形態である。ほとんどの場合、ヒト化抗体は、レシピエントの超可変領域（相補性決定領域またはＣＤＲとしても公知である）由来の残基が、所望の特異性、親和性および能力を有する非ヒト種、例えば、マウス、ラット、ウサギまたは非ヒト霊長類（ドナー抗体）の超可変領域由来の残基で置換されたヒト抗体（レシピエント抗体）である。「相補性決定領域」という語句は、天然抗体結合部位の天然Ｆｖ領域の結合親和性および特異性を一緒に定義するアミノ酸配列を意味する。例えば、Ｃｈｏｔｈｉａら（１９８７年）Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  １９６巻：９０１〜９１７頁、Ｋａｂａｔら（１９９１年）Ｕ．  Ｓ．  Ｄｅｐｔ．  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．９１〜３２４２）を参照のこと。
【００７５】
ヒト化は、Ｗｉｎｔｅｒおよび共同研究者（Ｊｏｎｅｓら（１９８６年）Ｎａｔｕｒｅ  ３２１巻：５２２〜５２５頁、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら（１９８８年）Ｎａｔｕｒｅ  ３３２巻：３２３〜３２７頁、Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎら（１９８８年）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３９巻：１５３４〜１５３６頁）の方法に従って、ヒト抗体の対応する配列を齧歯類または変異型齧歯類ＣＤＲまたはＣＤＲ配列で置換することにより実施することができる。米国特許第５，２２５，５３９号、第５，５８５，０８９号、第５，６９３，７６１号、第５，６９３，７６２号、第５，８５９，２０５号も参照のこと。場合によっては、ヒト抗体の１種または複数の可変領域のフレームワーク領域内の残基を、対応する非ヒト残基で置換する（例えば、米国特許第５，５８５，０８９号、第５，６９３，７６１号、第５，６９３，７６２号および第６，１８０，３７０号を参照）。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体またはドナー抗体に見出されない残基を含んでいてもよい。抗体性能をさらに精巧にするため（例えば、所望する親和性を得るため）、このような改変を行う。一般的に、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全部を含み、超可変領域の全部または実質的に全部は、非ヒト抗体の超可変領域に対応し、フレームワーク領域の全部または実質的に全部は、ヒト抗体配列のフレームワーク領域である。ヒト化抗体は所望によりまた、抗体定常領域（Ｆｃ）、典型的にはヒト抗体の定常領域の少なくとも一部を含む。さらなる詳細については、Ｊｏｎｅｓら（１９８６年）Ｎａｔｕｒｅ  ３３１巻：５２２〜５２５頁；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら（１９８８年）Ｎａｔｕｒｅ  ３３２巻：３２３〜３２９頁およびＰｒｅｓｔａ（１９９２年）Ｃｕｒｒ．  Ｏｐ．  Ｓｔｒｕｃｔ．  Ｂｉｏｌ．  ２巻：５９３〜５９６頁を参照のこと。したがって、このような「ヒト化」抗体は、完全なヒト可変ドメインよりもかなり少ないドメインが非ヒト種由来の対応する配列によって置換された抗体を含んでもよい。実際には、ヒト化抗体は典型的には、いくつかのＣＤＲ残基およびおそらくいくつかのフレームワーク残基が齧歯類抗体の類似の部位の残基で置換されたヒト抗体である。例えば、米国特許第５，２２５，５３９号、第５，５８５，０８９号、第５，６９３，７６１号、第５，６９３，７６２号、第５，８５９，２０５号を参照のこと。ヒト化抗体および所定の抗原に対して改善された親和性を有するヒト化抗体を作製するための手法が開示された米国特許第６，１８０，３７０号および国際公開番号ＷＯ０１／２７１６０号も参照のこと。
【００７６】
ヒト化抗ＣＤ４０抗体はまた、抗体分子の結合活性を維持しながら免疫原性を軽減するための方法として記載された（例えば、Ｓｔｕｄｎｉｃｋａら（１９９４年）Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ７巻：８０５〜８１４頁および米国特許第５，７６６，８８６号参照）Ｈｕｍａｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ（商標）技術（Ｘｏｍａ  Ｌｔｄ．、Ｂｅｒｋｅｌｅｙ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）を使用して作製することができる。
【００７７】
ヒト化抗ＣＤ４０モノクローナル抗体には、マウス抗ＣＤ４０抗体ＳＧＮ−１４（Ｆｒａｎｃｉｓｃｏら（２０００年）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  ６０巻：３２２５〜３１頁）のヒト化形態であるＳＧＮ−４０（Ｔａｉら（２００４年）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  ６４巻：２８４６〜５２頁、米国特許第６，８３８，２６１号）などの抗体および米国特許出願公開第２００４／０１２０９４８号に開示された抗体が含まれる。
【００７８】
本発明はまた、内在性免疫グロブリン（Ｉｇ）遺伝子座が不活性化されていることを特徴とする非ヒト哺乳動物宿主、より詳細にはトランスジェニックマウスにおいて産生される異種抗体または改変抗体を使用して実施することができる。このようなトランスジェニック動物では、宿主の免疫グロブリンの軽鎖および重鎖のサブユニットの発現に適格な内在性遺伝子は非機能性になっており、類似のヒト免疫グロブリン遺伝子座で置換されている。これらのトランスジェニック動物は、宿主の免疫グロブリンの軽鎖または重鎖サブユニットの実質的非存在下でヒト抗体を産生する。例えば、米国特許第５，８７７，３９７号および第５，９３９，５９８号を参照のこと。
【００７９】
したがって、一部の実施形態において、例えば、ＣＤ４０に対する完全なヒト抗体は、トランスジェニックマウスを免疫処置することにより得られる。このようなマウスの一例は、ＸｅｎｏＭｏｕｓｅ（登録商標）技術（Ａｂｇｅｎｉｘ、Ｆｒｅｍｏｎｔ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）を用いて得られ、米国特許第６，０７５，１８１号、第６，０９１，００１号および第６，１１４，５９８号に開示されている。例えば、ＨＣＤ１２２抗体を作製するため、ヒトＩｇＧ１重鎖遺伝子座およびヒトκ軽鎖遺伝子座についてトランスジェニックであるマウスをヒトＣＤ４０を発現するＳｆ９細胞で免疫した。マウスはまた、その他のアイソタイプについてトランスジェニックであり得る。
【００８０】
一部の実施形態では、抗ＣＤ４０抗体は、ＨＣＤ１２２の軽鎖ＣＤＲ配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を有する。したがって、一部の実施形態では、抗ＣＤ４０抗体は、ＣＤＲ−Ｌ１では配列番号１０で示したようなアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ−Ｌ２では配列番号１１で示したようなアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ−Ｌ３では配列番号１２で示したようなアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを有する。その他の実施形態では、抗ＣＤ４０抗体は、ＨＣＤ１２２の重鎖ＣＤＲ配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を有する。したがって、一部の実施形態では、抗ＣＤ４０抗体は、ＣＤＲ−Ｈ１では配列番号１３で示したようなアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ−Ｈ２では配列番号１４で示したようなアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ−Ｈ３では配列番号１５で示したようなアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を有する。
【００８１】
他の実施形態では、抗ＣＤ４０抗体は、ＨＣＤ１２２の軽鎖ＣＤＲ配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）およびＨＣＤ１２２の重鎖ＣＤＲ配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を有する。したがって、他の実施形態では、抗ＣＤ４０抗体は、ＣＤＲ−Ｌ１では配列番号１０で示したようなアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ−Ｌ２では配列番号１１で示したようなアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ−Ｌ３では配列番号１２で示したようなアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）ならびにＣＤＲ−Ｈ１では配列番号１３で示したようなアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ−Ｈ２では配列番号１４で示したようなアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ−Ｈ３では配列番号１５で示したようなアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を有する。
【００８２】
所与の抗体可変ドメインのＣＤＲ残基を定義するために様々なスキームがある（例えば、Ｗｏｒｌｄ  Ｗｉｄｅ  Ｗｅｂ  （ｗｗｗ）に「ｂｉｏｉｎｆ．ｏｒｇ．ｕｋ／ａｂｓ」として指定されたウェブサイトを参照）。最も一般的に使用されるのは、Ｋａｂａｔ番号付けスキーム（Ｋａｂａｔら（１９９１年）「Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ」、第５版、Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，  Ｂｅｔｈｅｓｄａ、ＭＤ）である。Ｋａｂａｔ番号付けスキームによると、軽鎖可変領域のＣＤＲは、アミノ酸２４〜３４（ＣＤＲ−Ｌ１）、５０〜５６（ＣＤＲ−Ｌ２）および８９〜９７（ＣＤＲ−Ｌ３）であり、重鎖可変領域のＣＤＲは、アミノ酸３１〜３５（ＣＤＲ−Ｈ１）、５０〜６５（ＣＤＲ−Ｈ２）および９５〜１０２（ＣＤＲ−Ｈ３）である。別の周知のスキームは、Ｃｈｏｔｈｉａ番号付けスキーム（Ｃｈｏｔｈｉａ  ＆  Ｌｅｓｋ（１９８７年）Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  １９６巻：９０１〜９１７頁）である。Ｃｈｏｔｈｉａ番号付けスキームによると、軽鎖可変領域のＣＤＲは、アミノ酸２６〜３２（ＣＤＲ−Ｌ１）、５０〜５２（ＣＤＲ−Ｌ２）および９１〜９６（ＣＤＲ−Ｌ３）であり、重鎖可変領域のＣＤＲは、アミノ酸２６〜３２（ＣＤＲ−Ｈ１）、５３〜５５（ＣＤＲ−Ｈ２）および９６〜１０１（ＣＤＲ−Ｈ３）である。公知のスキームの１つまたは複数を使用して、当業者は、所与の抗体が前記で詳述した軽鎖および重鎖ＣＤＲ配列の必要性を満たすかどうかを容易に決定することができるだろう。
【００８３】
「抗体断片」は、完全な抗体の一部、好ましくは、完全な抗体の抗原結合または可変領域を含む。抗体断片の例には、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２およびＦｖ断片が含まれる。
【００８４】
「Ｆａｂ」とは、軽鎖の定常ドメインおよび重鎖の第１の定常ドメイン（ＣＨ１）を含有する抗体の１価の抗原結合断片である。抗体のパパイン消化は、２つの同一のＦａｂ断片および名前が容易に結晶化する能力を表している残りの「Ｆｃ」断片を生じる。「Ｆ（ａｂ’）２」とは、両軽鎖および両重鎖の一部を含有し、抗原に架橋結合する能力を保持している抗体の２価抗原結合断片を意味する。ペプシン処理によって、Ｆ（ａｂ’）２断片が生じる。「Ｆｖ」は、完全な抗原認識および結合部位を含有する抗体の最小断片である。この領域は、１つの重鎖可変ドメインと１つの軽鎖可変ドメインが強固に非共有結合した二量体からなる。各可変ドメインの３個のＣＤＲが相互作用してＶＨ−ＶＬ二量体の表面上の抗原結合部位を規定するのは、この立体配置においてである。集合的に、この６個のＣＤＲが抗体に抗原結合特異性を付与する。しかし、単一の可変ドメイン（または、抗原に特異的なＣＤＲ３個のみを含むＦｖの半分）であっても、結合部位全部よりも親和性は低いが、抗原を認識して結合する能力を有する。
【００８５】
本発明はまた、抗体のＶＨおよびＶＬドメインを含むポリペプチドであり、これらのドメインがポリペプチド１本鎖に存在している１本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）を使用してもよい（例えば、米国特許第４，９４６，７７８号、第５，２６０，２０３号、第５，４５５，０３０号および第５，８５６，４５６号参照）。一般的に、ｓｃＦｖポリペプチドは、ｓｃＦｖに抗原結合のために望ましい構造を形成させるポリペプチドリンカーをＶＨとＶＬドメインの間に含む。ｓｃＦｖの概説については、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ（１９９４年）、Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ、１１３巻、ＲｏｓｅｎｂｕｒｇおよびＭｏｏｒｅ編（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）、２６９〜３１５頁を参照のこと。
【００８６】
抗ＣＤ４０抗体の断片は、ヒトＢ細胞の表面上のＣＤ４０抗原に結合する能力を保持する限りは、本発明の方法で使用するために適している。このような断片は、本明細書では「抗原結合」断片という。このような断片は、対応する完全長抗体と類似した機能的特性によって特徴付けられることが好ましい。したがって、例えば、完全長抗ＣＤ４０抗体の断片は、ヒト細胞の表面上で発現したヒトＣＤ４０抗原に特異的に結合できることが好ましく、本明細書の他のところで記載したような有意なアゴニスト活性を持たない。本発明の方法で使用するための抗ＣＤ４０抗体の断片は、場合によって、関連するＦｃＲまたはＦｃＲ（複数可）に結合する能力を保持していてもよい。
【００８７】
抗体断片の作製のために様々な技術が開発されてきた。伝統的には、これらの断片は、完全な抗体のタンパク質分解的消化によって得られた（例えば、Ｍｏｒｉｍｏｔｏら（１９９２年）Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２４巻：１０７〜１１７頁（１９９２年）およびＢｒｅｎｎａｎら（１９８５年）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２９巻：８１頁を参照のこと）。しかし、これらの断片は、現在では、組換え宿主細胞によって直接産生することができる。例えば、抗体断片は、前述の抗体ファージライブラリーから単離することができる。あるいは、Ｆａｂ’−ＳＨ断片をＥ．ｃｏｌｉから直接回収し、化学的に結合させてＦ（ａｂ’）２断片を形成することができる（Ｃａｒｔｅｒら（１９９２年）Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １０巻：１６３〜１６７頁）。別の取り組みでは、Ｆ（ａｂ’）２断片は、組換え宿主細胞培養物から直接単離することができる。抗体断片を作製するためのその他の技術は、当業者には明らかであろう。
【００８８】
本発明の併用療法で使用した抗ＣＤ４０抗体は、ヒトＢ細胞表面上のＣＤ４０抗原に結合したとき、有意なアゴニスト活性を有さない。一部の実施形態において、抗体がヒトＢ細胞表面上のＣＤ４０に結合すると、Ｂ細胞の増殖および分化の阻害が生じ得る。本発明の方法で使用するために適した抗ＣＤ４０抗体には、示すことができる抗体が含まれる。「アゴニスト」は、細胞上の受容体と組み合わせて、この受容体の天然リガンドによって開始されるものと類似または同様の反応または活性を開始する。ＣＤ４０のアゴニストには、限定はしないが、以下の応答：Ｂ細胞増殖および／または分化；ＩＣＡＭ−１、Ｅ−セレクチン、ＶＣＡＭなどの分子による細胞間接着の上方制御；炎症誘発性サイトカイン、例えば、ＩＬ−１、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１２、ＴＮＦなどの分泌；ＣＤ４０受容体を介し、ＴＲＡＦ（例えば、ＴＲＡＦ２および／またはＴＲＡＦ３）、ＮＩＫ（ＮＦ−κＢ誘導キナーゼ）などのＭＡＰキナーゼ、Ｉ−カッパＢキナーゼ（ＩＫＫα／β）、転写因子ＮＦ−κＢ、ＲａｓおよびＭＥＫ／ＥＲＫ経路、ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ経路、Ｐ３８ＭＡＰＫ経路などの経路によるシグナル伝達；ＸＩＡＰ、ｍｃｌ−１、ｂｃｌ−ｘなどの分子による抗アポトーシスシグナルの伝達；Ｂおよび／またはＴ細胞記憶の生成；Ｂ細胞抗体産生；Ｂ細胞アイソタイプスイッチ、ＭＨＣクラスＩＩおよびＣＤ８０／８６などの細胞表面発現の上方制御のいずれかまたは全てが含まれる。
【００８９】
「有意な」アゴニスト活性とは、Ｂ細胞応答のアッセイにおいて測定したとき、陰性対照によって誘導されるアゴニスト活性より少なくとも３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％大きいアゴニスト活性を意味する。好ましくは、「有意な」アゴニスト活性は、Ｂ細胞応答のアッセイにおいて測定したとき、陰性対照によって誘導されるアゴニスト活性よりも少なくとも２倍大きいか、または少なくとも３倍大きいアゴニスト活性である。したがって、例えば、関心のあるＢ細胞応答がＢ細胞増殖である場合、「有意な」アゴニスト活性とは、陰性対照によって誘導されるＢ細胞増殖のレベルよりも少なくとも２倍大きいか、または少なくとも３倍大きいレベルのＢ細胞増殖の誘導である。一実施形態において、ＣＤ４０に結合しない抗体は陰性対照として役立つ。「有意なアゴニスト活性がない」物質は、Ｂ細胞応答のアッセイにおいて測定したとき、陰性対照によって誘導されるアゴニスト活性よりも約２５％以下、好ましくは、陰性対照によって誘導されるアゴニスト活性よりも約２０％以下、１５％以下、１０％以下、５％以下、１％以下、０．５％以下、またはさらに約０．１％以下しか大きくないアゴニスト活性を示すだろう。
【００９０】
ＣＤ４０の「アンタゴニスト」は、ＣＤ４０受容体がアゴニストリガンド、特にＣＤ４０Ｌに結合することによって誘導される応答のいずれかの誘導を防止するか、または低減する。アンタゴニストは、ＣＤ４０Ｌ結合に対する応答の誘導を、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、好ましくは、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、より好ましくは７０％、８０％、８５％、最も好ましくは、９０％、９５％、９９％または１００％低減することができる。
【００９１】
本発明の方法で使用するために好ましい抗体および断片は、ヒトＢ細胞上のＣＤ４０抗原に結合したとき有意なアゴニスト活性を有さず、ヒトＢ細胞上のＣＤ４０抗原に結合したときアンタゴニスト活性を示す抗ＣＤ４０抗体である。一部の実施形態では、抗ＣＤ４０抗体は、１種のＢ細胞応答において有意なアゴニスト活性を有さない。その他の実施形態では、抗ＣＤ４０抗体は、複数のＢ細胞応答（例えば、増殖および分化、または増殖、分化および抗体産生）のアッセイにおいて有意なアゴニスト活性を有さない。
【００９２】
抗ＣＤ４０治療用薬（例えば、抗ＣＤ４０抗体）のアンタゴニスト活性を測定するための方法は当技術分野で公知であり、限定はしないが、標準的な競合的結合アッセイ、Ｂ細胞による抗体分泌をモニターするアッセイ、Ｂ細胞増殖アッセイ、Ｂａｎｃｈｅｒｅａｕ様Ｂ細胞増殖アッセイ、抗体産生のＴ細胞ヘルパーアッセイ、Ｂ細胞増殖の共刺激アッセイ、およびＢ細胞活性化マーカーの上方制御のアッセイが含まれる。関連アッセイは、例えば、米国特許第６，０８７，３２９号およびＷＯ００／７５３４８、ＷＯ２００５／０４４２９４、ＷＯ２００５／０４４３０４、ＷＯ２００５／０４４３０５、ＷＯ２００５／０４４３０６、ＷＯ２００５／０４４３０７、ＷＯ２００５／０４４８５４、ＷＯ２００５／０４４８５５、ＷＯ２００６／０７３４４３、ＷＯ２００６／１２５１１７、ＷＯ２００６／１２５１４３、ＷＯ２００７／０５３６６１およびＷＯ２００７／０５３７６７として公開された国際出願公開パンフレットに記載されている。
【００９３】
当技術分野で公知のアッセイのいずれかを使用して、抗ＣＤ４０抗体が１種または複数のＢ細胞応答のアンタゴニストとしての機能を果たすかどうかを測定することができる。一部の実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、Ｂ細胞増殖、Ｂ細胞分化、抗体産生、細胞間接着、Ｂ細胞記憶の生成、アイソタイプスイッチ、ＭＨＣクラスＩＩおよびＣＤ８０／８６の細胞表面発現の上方制御ならびに炎症誘発性サイトカイン、例えば、ＩＬ−８、ＩＬ−１２およびＴＮＦの分泌からなる群より選択される少なくとも１種のＢ細胞応答のアンタゴニストとしての機能を果たす。特に関心があるのは、ヒトＢ細胞表面上のヒトＣＤ４０抗原に結合したとき、Ｂ細胞増殖に関して有意なアゴニスト活性がないアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体である。
【００９４】
抗ＣＤ４０抗体は、Ｂ細胞増殖アッセイにおいて測定したとき、可溶性または細胞表面ＣＤ４０Ｌによって誘導されるＢ細胞増殖のアンタゴニストであってもよい。適切なＢ細胞増殖アッセイは、当技術分野では公知である。適切なＢ細胞増殖アッセイはまた、以下に説明する。一部の実施形態において、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体はＢ細胞増殖を、陰性対照によって誘導されるＢ細胞増殖よりも約２５％以下しか大きくないレベル（すなわち、少なくとも７５％の阻害）、好ましくは、陰性対照によって誘導されるＢ細胞増殖よりも約２０％以下、１５％以下、１０％以下、５％以下、１％以下、０．５％以下、またはさらに約０．１％以下しか大きくないレベルに刺激する。
【００９５】
他の実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、Ｂ細胞増殖アッセイにおいて測定したとき、別の抗ＣＤ４０抗体（例えば、Ｓ２Ｃ６抗ＣＤ４０抗体、Ｋｗｅｋｋｅｂｏｏｍら（１９９３年）Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、７９巻：４３９〜４４４頁）によって誘導されたＢ細胞増殖のアンタゴニストであり、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の存在下でその他の抗ＣＤ４０抗体によって刺激されるＢ細胞増殖のレベルは、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の非存在下でその他の抗ＣＤ４０抗体によって誘導されるＢ細胞増殖の約２５％以下（すなわち、少なくとも７５％阻害）、好ましくは、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の非存在下でその他の抗ＣＤ４０抗体によって誘導されるＢ細胞増殖の約２０％、１５％、１０％、５％、１％、０．５％、またはさらに約０．１％以下である。
【００９６】
さらにその他の実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、Ｂ細胞活性化アッセイにおいて測定したとき、細胞株ＥＬ４Ｂ５（Ｋｗｅｋｋｅｂｏｏｍら（１９９３年）Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、７９巻：４３９〜４４４頁）によって誘導されるＢ細胞増殖のアンタゴニストであり、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の存在下でＥＬ４Ｂ５細胞株によって刺激されるＢ細胞増殖のレベルは、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の非存在下でこの細胞株によって誘導されるＢ細胞増殖の約２５％以下（すなわち、少なくとも７５％阻害）、好ましくは、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の非存在下でこの細胞株によって誘導されるＢ細胞増殖の約２０％、１５％、１０％、５％、１％、０．５％、またはさらに約０．１％以下である。
【００９７】
さらにその他の実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、Ｂ細胞による抗体産生のためのヒトＴ細胞ヘルパーアッセイにおいて測定したとき、ヒトＢ細胞によるヒトＴ細胞誘導性抗体産生のアンタゴニストである。このように、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の存在下でＴ細胞によって刺激されたＢ細胞によるＩｇＧ抗体産生、ＩｇＭ抗体産生、またはＩｇＧおよびＩｇＭ両方の抗体産生のレベルは、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の非存在下でＴ細胞によって刺激されたＢ細胞によるそれぞれの抗体産生の約５０％以下（すなわち、少なくとも７５％阻害）、好ましくは、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の非存在下でＴ細胞によって刺激されたＢ細胞によるそれぞれの抗体産生の約２５％、２０％、１５％、１０％、５％、１％、０．５％、またはさらに約０．１％以下である。
【００９８】
例えば、以下のアッセイを使用して、抗ＣＤ４０抗体のアンタゴニスト活性を評価することができる。これらのアッセイのためのヒトＢ細胞は、例えば、本質的にＤｅ  Ｇｒｏｏｔら（１９９０年）Ｌｙｍｐｈｏｋｉｎｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ（１９９０年）９巻：３２１頁に記載されたように、扁桃摘出術を受けた個体から採取された扁桃腺から単離することによって得ることができる。簡単に説明すると、組織を外科用メスで分散させ、Ｌ−ロイシンメチルエステル５ｍＭで処理することによって食細胞およびＮＫ細胞を除去し、２−アミノエチルイソチオウロニウムブロミドで処理したヒツジ赤血球（ＳＲＢＣ）のロゼッティングを１回行うことによってＴ細胞を枯渇する。得られたＢリンパ球調製物の純度は、抗（ＣＤ２０）ｍＡｂ  Ｂ１（Ｃｏｕｌｔｅｒ  Ｃｌｏｎｅ、Ｈｉａｌｅａｈ、ＦＡ）または抗（ＣＤ３）ｍＡｂ  ＯＫＴ３（Ｏｒｔｈｏ、Ｒａｒｉｔａｎ、ＮＪ）およびウサギ抗（マウスＩｇ）のＦＩＴＣ結合Ｆ（ａｂ’）２断片（Ｚｙｍｅｄ、Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ、ＣＡ）による間接免疫蛍光標識、ならびにＦＡＣＳ解析によって確認することができる。
【００９９】
Ｂ細胞増殖アッセイ
Ｂ細胞（４×１０４／ウェル）を、平底９６ウェルマイクロプレート内で１０％ウシ胎仔血清を補給したＩＭＤＭ２００μｌ中で培養する。Ｂ細胞を、固定化抗（ＩｇＭ）抗体（イムノビーズ、５μｇ／ｍｌ、ＢｉｏＲａｄ、Ｒｉｃｈｍｏｎｄ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）を添加することによって刺激する。所望するならば、組換えＩＬ−２  １００Ｕ／ｍｌを添加する。種々の濃度の試験モノクローナル抗体（ｍＡｂ）をミクロ培養の開始時に添加し、３日目に１８時間パルス後の（３Ｈ）−チミジンの取込みを測定することによって増殖を評価する。アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体は、固定化抗ＩｇＭの存在下、または固定化抗ＩｇＭおよびＩＬ−２の存在下では、ヒトＢ細胞増殖を著しく共刺激しない。
【０１００】
Ｂａｎｃｈｅｒｅａｕ様Ｂ細胞増殖アッセイ
抗ＣＤ４０モノクローナル抗体が、Ｂａｎｃｈｅｒｅａｕら（１９９１年）Ｓｃｉｅｎｃｅ（１９９１年）２５１巻：７０頁に記載されたものと類似の培養系においてＢ細胞増殖を刺激する能力を試験するため、ヒトＦｃγＲＩＩのＨＲ対立遺伝子形態を発現するマウス３Ｔ６トランスフェクト細胞を使用する。Ｂ細胞（ウェル当たり２×１０４個）を、平底マイクロウェル内で形質転換体細胞１×１０４個（５０００Ｒａｄを照射）の存在下で、１０％ウシ胎仔血清および組換えＩＬ−４  １００Ｕ／ｍｌを補給したＩＭＤＭ２００μｌ中で培養する。Ｂ細胞を添加する前に、３Ｔ６細胞を培養プラスティック器に少なくとも５時間付着させる。抗ＣＤ４０ｍＡｂを１５ｎｇ／ｍｌから２０００ｎｇ／ｍｌの種々の濃度で添加し、Ｂ細胞の増殖を、第７日に、［３Ｈ］チミジンによる１８時間パルス時のチミジン取込みの測定によって評価する。
【０１０１】
アンタゴニスト抗ＣＤ４０ｍＡｂを使用したＳ２Ｃ６刺激性Ｂ細胞増殖の阻害
アンタゴニスト抗ＣＤ４０モノクローナル抗体（ｍＡｂ）はまた、前述のＢ細胞増殖アッセイを使用して、Ｓ２Ｃ６（ＳＧＮ−１４としても公知で、正常Ｂ細胞増殖のＣＤ４０刺激のアゴニストであると報告されている、Ｆｒａｎｃｉｓｃｏら（２０００年）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  ６０巻：３２２５〜３２３１頁）などの抗ＣＤ４０抗体によるＢ細胞増殖の刺激を阻害する能力によって特徴付けることができる。ヒト扁桃Ｂ細胞（ウェル当たり４×１０４個）をマイクロウェル内で２００μｌ中で、セファロースビーズ（５μｇ／ｍｌ）に結合させた抗ＩｇＭおよび抗ＣＤ４０ｍＡｂ  Ｓ２Ｃ６（１．２５μｇ／ｍｌ）の存在下で培養する。関心のある抗ＣＤ４０ｍＡｂを種々の濃度で添加し、３日後に［３Ｈ］−チミジン取込みを評価する。対照として、抗（グルコセレブロシダーゼ）ｍＡｂ  ８Ｅ４を同様の濃度で添加することができる。Ｂａｒｎｅｖｅｌｄら（１９８３年）Ｅｕｒ．  Ｊ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  １３４巻、５８５頁。アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体は、ｍＡｂ  Ｓ２Ｃ６による抗ＩｇＭ誘導性ヒトＢ細胞増殖の共刺激を、例えば少なくとも７５％以上阻害することができる（すなわち、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の存在下でのＳ２Ｃ６刺激性増殖は、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の非存在下で認められる増殖の２５％以下である）。対照的に、β−グルコセレブロシダーゼに指向される同等量の非関連ｍＡｂ  ８Ｅ４では、有意な阻害は見られない。Ｂａｒｎｅｖｅｌｄら、前述。このような結果は、抗ＣＤ４０ｍＡｂはヒトＢ細胞の増殖のための刺激性シグナルを送達しないが、逆に、別のｍＡｂによるＣＤ４０の誘発によって生じる刺激性シグナルを阻害することができることを示すだろう。
【０１０２】
ＥＬ４Ｂ５細胞によるＢ細胞活性化アッセイ
Ｚｕｂｌｅｒら（１９８５年）Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９８５年）１３４巻：３６６２頁は、ＥＬ４Ｂ５として公知のマウス胸腺腫ＥＬ−４系統の変異型サブクローンは、インビトロにおいてマウスおよびヒト起源両方のＢ細胞を強力に刺激して増殖させ、免疫グロブリン分泌形質細胞に分化させることができることを観察した。この活性化は、抗原非依存性であり、ＭＨＣに拘束されないことが見出された。ヒトＢ細胞の最適な刺激のためには、活性化されたヒトＴ細胞の上清の存在が必要であったが、ＥＬ４Ｂ５細胞をホルボール−１２−ミリステート１３−アセテート（ＰＭＡ）またはＩＬ−１で予め活性化すると、Ｂ細胞応答も起こった。Ｚｕｂｌｅｒら（１９８７年）Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  ９９巻：２８１頁およびＺｈａｎｇら（１９９０年）Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １４４巻：２９５５頁。この培養系におけるＢ細胞活性化は効率的で、限界希釈実験によって、大部分のヒトＢ細胞が活性化されて増殖し、抗体分泌細胞に分化できることが示された。Ｗｅｎら（１９８７年）Ｅｕｒ．  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １７巻：８８７頁。
【０１０３】
Ｂ細胞（ウェル当たり１０００個）を照射した（５０００Ｒａｄ）ＥＬ４Ｂ５細胞（ウェル当たり５×１０４個）と一緒に、平底マイクロタイタープレート内において１０％熱不活化ウシ胎仔血清、ホルボール−１２−ミリステート１３−アセテート５ｎｇ／ｍｌおよび５％ヒトＴ細胞上清を補給したＩＭＤＭ２００μｌ中で培養する。ｍＡｂを種々の濃度で培養開始時に添加し、第６日に、［３Ｈ］−チミジンで１８時間パルスした後チミジン取込みを評価する。Ｔ細胞上清を調製するため、精製したＴ細胞を１０６／ｍｌの密度で３６時間、ＰＨＡ１μｇ／ｍｌおよびＰＭＡ１０ｎｇ／ｍｌの存在下で培養する。Ｗｅｎら（１９８７年）Ｅｕｒ．  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９８７年）１７巻：８８７頁。Ｔ細胞上清は、細胞を遠心分離することによって取得し、−２０℃で保存する。ＥＬ４Ｂ５−Ｂ細胞培養物におけるヒトＢ細胞増殖の増強におけるＴ細胞上清の有効性を試験し、最も有効な上清を実験において使用するために収集する。ＥＬ４Ｂ５誘導性ヒトＢ細胞増殖に対する抗ＣＤ４０抗体の効果を評価するとき、ＭＯＰＣ−１４１（ＩｇＧ２ｂ）などのモノクローナル抗体を対照として添加することができる。
【０１０４】
Ｂ細胞による抗体産生に対するヒトＴ細胞ヘルパーアッセイ
アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体は、Ｂ細胞による抗体産生のアンタゴニストとしての機能を果たすことができる。抗ＣＤ４０抗体は、この型のアンタゴニスト活性について、Ｔ細胞ヘルパーアッセイにおいて活性化Ｔ細胞によって接触依存的に刺激されたＢ細胞による抗体産生を阻害する該抗体の能力を評価することによって、試験することができる。この様式では、９６ウェル組織培養プレートを１：５００に希釈した抗ＣＤ３  ｍＡｂ  ＣＬＢ−Ｔ３／３（ＣＬＢ、Ａｍｓｔｅｒｄａｍ、Ｔｈｅ  Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）の腹水液でコーティングする。指示した通りに、共刺激性ｍＡｂ、抗ＣＤ２ｍＡｂ  ＣＬＢ−Ｔ１１．１／１およびＣＬＢ−Ｔ１１．２／１（ＣＬＢ、Ａｍｓｔｅｒｄａｍ、Ｔｈｅ  Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）を、いずれも腹水１：１０００で、ならびに抗ＣＤ２８  ｍＡｂ  ＣＬＢ−２８／１（ＣＬＢ、Ａｍｓｔｅｒｄａｍ、Ｔｈｅ  Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）を添加する。その後、扁桃Ｔ細胞（照射、３０００Ｒａｄ、ウェル当たり１０５個）、扁桃Ｂ細胞（ウェル当たり１０４個）およびｒＩＬ−２（２０Ｕ／ｍｌ）を添加する。各細胞培養の最終量は２００μｌである。８日後、細胞を遠心で沈降させ、無細胞上清を回収する。（希釈した）試料中のヒトＩｇＭおよびＩｇＧの濃度をＥＬＩＳＡによって以下に説明したように概算する。
【０１０５】
一実施形態において、ヒト扁桃Ｂ細胞（ウェル当たり１０４個）を照射した精製Ｔ細胞（３０００ｒａｄ、ウェル当たり１０５個）と一緒に、抗ＣＤ３  ｍＡｂでコーティングした９６ウェルプレート内で、Ｔ細胞を共刺激する異なるｍＡｂを伴って、または伴わないで培養する。８日間培養後、Ｂ細胞による抗体産生を測定するために上清を回収する。Ｂ細胞による抗体産生を以下に説明したＥＬＩＳＡアッセイによって評価する。関心のある抗ＣＤ４０抗体を培養開始から種々の濃度で添加する。対照として、ｍＡｂ  ＭＯＰＣ−１４１を添加することができる。
【０１０６】
アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体は、ヒトＴ細胞によって刺激されたＢ細胞のＩｇＧおよびＩｇＭ抗体産生を少なくとも５０％以上阻害することができる（すなわち、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の存在下でのＢ細胞によるＴ細胞誘導性の抗体産生は、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の非存在下で認められる抗体産生の５０％以下である）。対照的に、ＭＯＰＣ−１４１などの対照抗体は、Ｂ細胞によるＴ細胞誘導性の抗体産生に対して有意な効果を有しない。
【０１０７】
抗体定量のためのＥＬＩＳＡアッセイ
ヒトＩｇＭおよびＩｇＧの濃度は、ＥＬＩＳＡによって概算される。９６ウェルＥＬＩＳＡプレートを０．０５Ｍ炭酸緩衝液（ｐＨ＝９．６）中のマウス抗ヒトＩｇＧ  ｍＡｂ  ＭＨ１６−０１（ＣＬＢ、Ａｍｓｔｅｒｄａｍ、Ｔｈｅ  Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）４μｇ／ｍｌまたはマウス抗ヒトＩｇＭ  ｍＡｂ４１０２（Ｔａｇｏ、Ｂｕｒｌｉｎｇａｍｅ、ＣＡ）１．２μｇ／ｍｌで４℃で１６時間インキュベーションすることによってコーティングする。プレートをＰＢＳ−０．０５％Ｔｗｅｅｎ−２０（ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ）で３回洗浄し、ＢＳＡで１時間飽和させる。２回洗浄後、プレートを１時間３７℃で、異なる希釈度の試験試料と共にインキュベートする。３回洗浄後、結合したＩｇを、ペルオキシダーゼ標識マウス抗ヒトＩｇＧ  ｍＡｂ  ＭＨ１６−０１（ＣＬＢ）またはマウス抗ヒトＩｇＭ  ｍＡｂ  ＭＨ１５−０１（ＣＬＢ）１μｇ／ｍｌで１時間３７℃でインキュベーションすることによって検出する。プレートを４回洗浄し、結合したペルオキシダーゼ活性は、基質としてＯ−フェニレンジアミンを添加することによって明らかにする。ヒト標準血清（Ｈ００、ＣＬＢ）を用いて、各アッセイのための標準曲線を確立する。
【０１０８】
アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体は当業界では公知である。例えば、米国特許出願公開番号第２００２０１４２３５８号および第２００３００５９４２７号で開示されたＦ４−４６５と指定されたハイブリドーマによって産生されるヒト抗ＣＤ４０抗体を参照のこと。Ｆ４−４６５は、ＨＡＣマウス（Ｋｕｒｏｉｗａら（２０００年）Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ  １０巻：１０８６頁（２０００年））から得られたもので、したがって、ヒトラムダ軽鎖を発現する。
【０１０９】
アンタゴニスト活性に加えて、本発明の方法において使用するための抗ＣＤ４０抗体は、好ましくは、標的細胞に対して別の作用機構を有する。抗ＣＤ４０抗体は、好ましくはＡＤＣＣ活性を有する。
【０１１０】
本発明で特に関心が持たれるのは、ＨＣＤ１２２（ＡＴＣＣ（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）１０８０１  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｂｌｖｄ．、Ｍａｎａｓｓａｓ、Ｖｉｒｇｉｎｉａ  ２０１１０〜２２０９（ＵＳＡ））に２００３年９月１７日に特許寄託番号ＰＴＡ−５５４３として寄託されたハイブリドーマ細胞株によって産生された）の結合特性を共有する抗ＣＤ４０抗体である。このような抗体には、限定はしないが、
ａ）ＡＴＣＣに特許寄託番号ＰＴＡ−５５４３として寄託されたハイブリドーマ細胞株によって産生されたモノクローナル抗体ＨＣＤ１２２；
ｂ）配列番号２で示された配列、配列番号４で示された配列、配列番号５で示された配列、配列番号２および４で示された両方の配列、ならびに配列番号２および配列番号５で示された両方の配列からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む抗体；
ｃ）配列番号１７で示された配列、配列番号１９で示された配列、配列番号２０で示された配列、配列番号１７および１９で示された両方の配列、ならびに配列番号１７および配列番号２０で示された両方の配列からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む抗体；
ｄ）配列番号１６で示された配列、配列番号１８で示された配列ならびに配列番号１６および配列番号１８で示された両方の配列からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む抗体；
ｅ）配列番号１で示された配列、配列番号３で示された配列ならびに配列番号１および配列番号３で示された両方の配列からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含む核酸分子によってコードされたアミノ酸配列を有する抗体、
ｆ）ＣＤＲ−Ｌ１では配列番号１０で示したようなアミノ酸配列、ＣＤＲ−Ｌ２では配列番号１１で示したようなアミノ酸配列、ＣＤＲ−Ｌ３では配列番号１２で示したようなアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を有する抗体；
ｇ）ＣＤＲ−Ｈ１では配列番号１３で示したようなアミノ酸配列、ＣＤＲ−Ｈ２では配列番号１４で示したようなアミノ酸配列、ＣＤＲ−Ｈ３では配列番号１５で示したようなアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を有する抗体；
ｈ）ＣＤＲ−Ｌ１では配列番号１０で示したようなアミノ酸配列、ＣＤＲ−Ｌ２では配列番号１１で示したようなアミノ酸配列、ＣＤＲ−Ｌ３では配列番号１２で示したようなアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）ならびにＣＤＲ−Ｈ１では配列番号１３で示したようなアミノ酸配列、ＣＤＲ−Ｈ２では配列番号１４で示したようなアミノ酸配列、ＣＤＲ−Ｈ３では配列番号１５で示したようなアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を有する抗体；
ｉ）ヒトＣＤ４０抗原のドメイン２に結合する抗体；
ｊ）モノクローナル抗体ＨＣＤ１２２に結合することができるＣＤ４０エピトープに結合する抗体；
ｋ）配列番号７または配列番号９で示したヒトＣＤ４０配列の残基８２〜８７を含むエピトープに結合する抗体；ならびに
ｌ）競合結合アッセイにおいてモノクローナル抗体ＨＣＤ１２２と競合する抗体が含まれる。
【０１１１】
抗体をコードする１個または複数の発現ベクターを含有するＣＨＯ細胞から得られた抗ＣＤ４０抗体は、本発明の方法で使用することができる。
【０１１２】
ＡＴＣＣに特許寄託番号ＰＴＡ−５５４３として寄託されたハイブリドーマ細胞株によって産生されたモノクローナル抗体ＨＣＤ１２２は、本発明の方法で使用するために特に好ましい。
【０１１３】
モノクローナル抗体ＨＣＤ１２２はヒトＣＤ４０抗原のドメイン２に結合し、一方、アンタゴニスト特性を有する初期の抗ＣＤ４０抗体はヒトＣＤ４０のその他のドメインに結合することが見出された。
【０１１４】
ＨＣＤ１２２モノクローナル抗体はＥＬＩＳＡ型アッセイにおいて可溶性ＣＤ４０に結合し、細胞表面ＣＤ４０に対するＣＤ４０−リガンドの結合を阻害し、フローサイトメトリーアッセイによって測定すると、予め結合しているＣＤ４０−リガンドと置換する。正常なヒト被験体のＢ細胞増殖に対する効果をインビトロで試験すると、ＨＣＤ１２２はアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体として作用する。さらに、ＨＣＤ１２２は正常な被験体のヒトリンパ球の増殖を強力には誘導しない。この抗体は、抗体依存性細胞毒性（ＡＤＣＣ）によってＣＤ４０発現標的細胞を殺滅することができる。ＨＣＤ１２２のヒトＣＤ４０に対する結合親和性は、Ｂｉａｃｏｒｅ（商標）アッセイによって測定すると５×１０−１０Ｍである。
【０１１５】
ＨＣＤ１２２抗体のヌクレオチドおよびアミノ酸配列は公知である（例えば、ＷＯ２００５／０４４８５４参照）。さらに、ＨＣＤ１２２抗体を発現するマウスハイブリドーマ系１５３．８Ｅ２．Ｄ１０．Ｄ６．１２．１２（ＣＭＣＣ＃１２０５６）は、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ［ＡＴＣＣ、１０８０１  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｂｌｖｄ．、Ｍａｎａｓｓａｓ、Ｖｉｒｇｉｎｉａ  ２０１１０〜２２０９（ＵＳＡ）］に２００３年９月１７日に特許寄託番号ＰＴＡ−５５４３として寄託された。
【０１１６】
ＨＣＤ１２２の軽鎖の完全配列は、配列番号２に記載されており、リーダー配列（配列番号２の残基１〜２０）、可変領域（配列番号２の残基２１〜１３２）および定常領域（配列番号２の残基１３３〜２３９）を含む。ＨＣＤ１２２の重鎖の完全配列は、配列番号４に記載されており、リーダー配列（配列番号４の残基１〜１９）、可変領域（配列番号４の残基２０〜１３９）および定常領域（配列番号４の残基１４０〜４６９）を含む。ＨＣＤ１２２の変種の完全配列は、配列番号５に記載されており、リーダー配列（配列番号５の残基１〜１９）、可変領域（配列番号５の残基２０〜１３９）および定常領域（配列番号５の残基１４０〜４６９）を含む。この変種は、定常領域内にある配列番号４の１５３位のアラニン残基のセリン残基による置換を含む点で、ＨＣＤ１２２とは異なっている。ＨＣＤ１２２の軽鎖および重鎖をコードするヌクレオチド配列は、配列番号１（ＨＣＤ１２２の軽鎖のコーディング配列）および配列番号３（ＨＣＤ１２２の重鎖のコーディング配列）で記載される。
【０１１７】
リーダー配列を有さないＨＣＤ１２２軽鎖の可変領域のアミノ酸配列（すなわち、配列番号２の残基２１〜１３２）を配列番号１６に記載する。リーダー配列を有さないＨＣＤ１２２軽鎖の可変領域および定常領域のアミノ酸配列（すなわち、配列番号２の残基２１〜２３９）を配列番号１７に記載する。リーダー配列を有さないＨＣＤ１２２重鎖の可変領域のアミノ酸配列（すなわち、配列番号４の残基２０〜１３９）を配列番号１８に記載する。リーダー配列を有さないＨＣＤ１２２重鎖の可変領域および定常領域のアミノ酸配列（すなわち、配列番号４の残基２０〜４６９）を配列番号１９に記載する。ＨＣＤ１２２重鎖変種の可変領域および定常領域のアミノ酸配列（すなわち、配列番号５の残基２０〜４６９）を配列番号２０に記載する。
【０１１８】
本発明の方法で使用するための抗ＣＤ４０抗体には、ＨＣＤ１２２モノクローナル抗体とは異なるがＣＤＲを保持している抗体および１個または複数のアミノ酸の付加（複数可）、欠失（複数可）または置換（複数可）を有する抗体が含まれる。ＨＣＤ１２２は、完全なヒト抗体であるが、所望するならばさらに脱免疫化することができる。脱免疫した抗ＣＤ４０抗体は、例えば、ＷＯ９８／５２９７６およびＷＯ００／３４３１７に記載されたような公知の方法を使用して生成することができる。この様式で、抗ＣＤ４０抗体内の残基は、治療活性は保持しているが抗体のヒトに対する免疫原性を減少させるために改変することができる。
【０１１９】
関心のある結合特異性を有する任意の公知の抗体は、例えば、ＥＰ０９８３３０３、ＷＯ００／３４３１７およびＷＯ９８／５２９７６に記載された方法を使用して作製された配列変化を有することができる。例えば、ＣＤＲ内の配列は、抗体がＭＨＣクラスＩＩに結合する原因となり、ある種の患者において望ましくないヘルパーＴ細胞応答を引き起こし得ることが示された。保存的置換は、抗体が望ましくないＴ細胞応答を引き起こす能力を欠如しているにもかかわらず結合活性を保持することを可能にし得る。このような任意の保存的または非保存的置換は、当技術分野で認識された方法、例えば、本明細書の他のところで記載された方法を使用して行うことができ、得られた抗体はまた、本発明の方法で使用することができる。変種抗体は、本明細書で記載した方法を使用して、特定の活性、例えば、アゴニスト活性、親和性および特異性について常法通り試験することができる。
【０１２０】
例えば、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体、例えば、ＨＣＤ１２２モノクローナル抗体のアミノ酸配列変種は、関心のある抗体をコードするクローン化ＤＮＡ配列中の変異によって調製することができる。変異誘発およびヌクレオチド配列改変の方法は当技術分野で周知である。例えば、ＷａｌｋｅｒおよびＧａａｓｔｒａ編、（１９８３年）Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（ＭａｃＭｉｌｌａｎ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）、Ｋｕｎｋｅｌ（１９８５年）Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ８２巻：４８８〜４９２頁、Ｋｕｎｋｅｌら（１９８７年）Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．  １５４巻：３６７〜３８２頁、Ｓａｍｂｒｏｏｋら（１９８９年）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ  ｛Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）、米国特許第４，８７３，１９２号、およびそこで引用された参考文献を参照のこと。関心のあるポリペプチドの生物学的活性に影響を及ぼさない適切なアミノ酸置換に関する指針は、Ｄａｙｈｏｆｆら（１９７８年）Ａｔｌａｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ（Ｎａｔｌ．  Ｂｉｏｍｅｄ．  Ｒｅｓ．  Ｆｏｕｎｄ．、Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ、Ｄ．Ｃ．）のモデルに見出すことができる。保存的置換、例えば、１アミノ酸を類似の特性を有する別のものと交換することが好ましい可能性がある。保存的置換の例には、限定はしないが、Ｇｌｙ⇔Ａｌａ、Ｖａｌ⇔Ｉｌｅ⇔Ｌｅｕ、Ａｓｐ⇔Ｇｌｕ、Ｌｙｓ⇔Ａｒｇ、Ａｓｎ⇔Ｇｌｎ、およびＰｈｅ⇔Ｔｒｐ⇔Ｔｙｒが含まれる。
【０１２１】
関心のある抗体、例えば、関心のあるアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体ポリペプチドの変種の構築において、改変は、変種が継続して所望の活性、すなわち、類似の結合親和性を有するように、およびアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の場合は、ヒト細胞の表面上に発現したヒトＣＤ４０抗原に特異的に結合することができ、有意なアゴニスト活性はないが、ヒトＣＤ４０発現細胞上のＣＤ４０抗原に結合したときアンタゴニスト活性を示すことができるように行うことができる。明らかに、変種ポリペプチドをコードするＤＮＡ中に形成された任意の変異は、この配列をリーディングフレーム外に配置してはならず、好ましくは、ｍＲＮＡ二次構造を生成できる相補領域を生成しないものである（例えば、ＥＰ００７５４４４参照）。
【０１２２】
さらに、抗体、例えばアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の定常領域は、いくつかの方法で、エフェクター機能を改変するように変異させることができる。例えば、Ｆｃ受容体への抗体結合を最適化するＦｃ変異を開示している米国特許第６，７３７，０５６Ｂ１号および米国特許出願公開第２００４／０１３２１０１Ａ１号を参照のこと。
【０１２３】
好ましくは、参照抗体、例えばアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の変種は、この参照抗体、例えばアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体分子、例えば、本明細書で記載したＨＣＤ１２２モノクローナル抗体のアミノ酸配列と、少なくとも７０％または７５％の配列同一性、好ましくは少なくとも８０％または８５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％または９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する。より好ましくは、この分子は、少なくとも９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性を共有する。本発明の目的のため、パーセント配列同一性は、ギャップ開始ペナルティ１２およびギャップ伸張ペナルティ２、ＢＬＯＳＵＭマトリックス６２でアフィンギャップ検索を用いて、Ｓｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎ相同性検索アルゴリズムを使用して決定する。Ｓｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎ相同性検索アルゴリズムは、ＳｍｉｔｈおよびＷａｔｅｒｍａｎ（１９８１年）Ａｄｖ．  Ａｐｐｌ．  Ｍａｔｈ．  ２巻：４８２〜４８９頁に教示されている。変種は参照抗体、例えばアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体と、例えば、１から１５アミノ酸残基程度の少数、１から１０アミノ酸残基程度の少数、例えば、６〜１０、５程度の少数、４、３、２程度の少数、または１アミノ酸残基だけ異なっていてもよい。
【０１２４】
２種のアミノ酸配列の最適なアラインメントに関して、変種アミノ酸配列の連続する部分は、参照アミノ酸配列に対して付加されたアミノ酸残基または欠失したアミノ酸残基を有していてもよい。参照アミノ酸配列との比較に使用される連続部分は、少なくとも２０個の連続するアミノ酸残基を含み、３０、４０、５０またはそれ以上のアミノ酸残基であってもよい。保存的残基置換またはギャップと関連した配列同一性について補正を行うことができる（Ｓｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎ相同性検索アルゴリズムを参照のこと）。
【０１２５】
特に悪性Ｂ細胞上のＣＤ４０抗原に結合したとき、ＣＤ４０に特異的に結合し、アンタゴニスト活性を保持することができる抗体の正確な化学構造は、いくつかの要素に左右される。イオン化できるアミノ基およびカルボキシル基が抗体分子内に存在するので、特定のポリペプチドは、酸性もしくは塩基性の塩として、または中性形態で得ることができる。適当な環境条件に置かれたとき、その生物学的活性を保持しているこのような調製物は全て、本明細書で使用したようなアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の定義に含まれる。さらに、そのポリペプチドの一次アミノ酸配列を、糖部分を用いた誘導体化（グリコシル化）によって、またはその他の補助分子、例えば、脂質、リン酸、アセチル基などによって強化させることができる。また、糖類の結合によっても強化させることができる。このような強化の特定の態様は、産生宿主の翻訳後プロセシング系によって実現され、その他のこのような修飾は、インビトロで導入することができる。任意の事象において、このような修飾は、本明細書で使用した抗ＣＤ４０抗体の定義に含まれる。このような修飾は、様々なアッセイにおいて、ポリペプチドの活性を増強させるか、または低下させることによって、定量的または定性的に活性に影響を及ぼし得ることが予測される。さらに、鎖内の個々のアミノ酸残基は、酸化、還元またはその他の誘導体化によって修飾することができ、このポリペプチドは、活性を保持する断片を得るために切断することができる。
【０１２６】
当技術分野では、抗体変種の調製および使用に関する十分な指針が作成されている。抗ＣＤ４０抗体変種の調製において、当業者は、天然タンパク質のヌクレオチドまたはアミノ酸配列に対して、どの改変が本発明の方法において使用される医薬組成物の治療活性成分としての使用に適した変種をもたらすかを容易に決定することができよう。
【０１２７】
本発明の方法で使用するための抗ＣＤ４０抗体は、好ましくは、インビトロおよび／またはインビボにおいて、以下の生物学的活性、Ｔ細胞によって刺激される正常なヒト末梢Ｂ細胞による抗体分泌の阻害；ＣＤ４０Ｌ発現細胞または可溶性ＣＤ４０リガンド（ｓＣＤ４０Ｌ）によって刺激される正常なヒト末梢Ｂ細胞の生存および／または増殖の阻害；ジャーカットＴ細胞によって刺激される正常なヒト末梢Ｂ細胞の生存および／または増殖の阻害；ｓＣＤ４０Ｌまたは固相ＣＤ４０Ｌによって刺激される任意の細胞における「生存」抗アポトーシスの細胞内シグナルの阻害；ならびにｓＣＤ４０Ｌまたは固相ＣＤ４０Ｌとの連結時の任意の細胞におけるＣＤ４０シグナル伝達の阻害、限定はしないが、Ｔ細胞およびＢ細胞を含む、ＣＤ４０を有する標的細胞またはＣＤ４０に対するコグネイトリガンドを有する細胞の欠失、アネルギーおよび／または抵抗性誘導、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋調節Ｔ細胞の拡大または活性化の誘導（例えば、ＣＤ４０−ＣＤ４０Ｌ干渉を介したドナーアロ抗原特異的組織拒絶、ｖａｎ  Ｍａｕｒｉｋら（２００２年）Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １６９巻：５４０１〜５４０４頁）、任意の機構（限定はしないが、抗体依存性細胞媒介型細胞毒性（ＡＤＣＣ）、補体依存性細胞毒性（ＣＤＣ）、増殖の下方制御および／または標的細胞におけるアポトーシスを含む）を介した細胞毒性、標的細胞サイトカイン分泌および／または細胞表面分子発現の調節ならびにその組合せの少なくとも１つを有する。このような生物学的活性のアッセイは、本明細書で記載したように実施することができる。Ｓｃｈｕｌｔｚｅら（１９８８年）Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ９２巻：８２００〜８２０４頁、Ｄｅｎｔｏｎら（１９８８年）Ｐｅｄｉａｔｒ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ．  ２巻：６〜１５頁、Ｅｖａｎｓら（２０００年）Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６４巻：６８８〜６９７頁、Ｎｏｅｌｌｅ（１９８８年）Ａｇｅｎｔｓ  Ａｃｔｉｏｎｓ  Ｓｕｐｐｌ．  ４９巻：１７〜２２頁、Ｌｅｄｅｒｍａｎら（１９９６年）Ｃｕｒｒ．  Ｏｐｉｎ．  Ｈｅｍａｔｏｌ．  ３巻：７７〜８６頁、Ｃｏｌｉｇａｎら（１９９１年）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １３巻：１２頁、Ｋｗｅｋｋｅｂｏｏｍら（１９９３年）Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ７９巻：４３９〜４４４頁および米国特許第５，６７４，４９２号および第５，８４７，０８２号に記載されたアッセイも参照のこと。
【０１２８】
抗体のＡＤＣＣ活性を増加させるように操作することも可能である。特に、ＣＨ２ドメインのカルボキシ末端側の半分は、ＦｃＲＩＩＩ受容体によって媒介されるＡＤＣＣに重要である。ＣＨ２およびヒンジ領域は、エフェクター機能において重要な役割を有するので、余分なＣＨ２および／またはヒンジ領域を含有する一連の多ドメイン抗体を創出し、エフェクター効力における任意の変化について試験することができる（Ｇｒｅｅｎｗｏｏｄら（１９９４年）Ｔｈｅｒ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １巻（５号）：２４７〜５５頁を参照）。他の取り組みとしては、例えば、システインをキメラＩｇのＨ鎖に操作することによって二量体を創出して余分なドメインを平行して操作することであってもよい（Ｓｈｏｐｅｓ（１９９２年）Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １４８巻（９号）：２９１８〜２２頁を参照）。さらに、ＡＤＣＣ活性を増加させるための変更は、変異をＦｃ領域内に導入すること（例えば、米国特許第６，７３７，０５６Ｂ１号を参照）、細胞をフコシルトランスフェラーゼ欠損細胞株内で発現させること（例えば、米国特許出願公開第２００３／０１１５６１４号を参照）または抗体グリコシル化に対してその他の変更を実施すること（例えば、米国特許第６，６０２，６８４号を参照）により操作することができる。
【０１２９】
本明細書において同定されたＣＤ４０−抗原エピトープに特異的なアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体を検出するための代表的なアッセイは、「競合的結合アッセイ」である。競合的結合アッセイは、未知物質が、標識された既知リガンドのその特異的抗体への結合を阻害するその能力によって検出および定量される血清学的アッセイである。これはまた、競合的阻害アッセイと称される。代表的な競合的結合アッセイでは、標識されたＣＤ４０ポリペプチドを試料中の候補抗体によって、例えば、抗ＣＤ４０モノクローナル抗体の１個または複数のエピトープに対して生成させたモノクローナル抗体と組み合わせて沈殿させる。関心のあるエピトープと特異的に反応する抗ＣＤ４０抗体は、ＣＤ４０タンパク質または関心のあるＣＤ４０タンパク質の特定のエピトープを含むタンパク質の断片に対して調製された一連の抗体をスクリーニングすることにより同定することができる。例えば、ヒトＣＤ４０では、関心のあるエピトープには、配列番号７に示したヒトＣＤ４０の短アイソフォームの線状および／または非線状アミノ酸残基を含むエピトープ（ジェンバンク受託番号ＮＰ＿６９０５９３参照；配列番号６に示した配列にコードされる；ジェンバンク受託番号ＮＭ＿１５２８５４も参照）、またはヒトＣＤ４０の長アイソフォームの線状および／または非線状アミノ酸残基を含むエピトープ（配列番号９に示したジェンバンク受託番号ＣＡＡ４３０４５およびＮＰ＿００１２４１を参照、配列番号８に示した配列にコードされる；ジェンバンク受託番号Ｘ６０５９２およびＮＭ＿００１２５０を参照）が含まれる。あるいは、以前に同定された適当なアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体による競合的結合アッセイを使用して、以前に同定された抗体と同程度のモノクローナル抗体を選択することができるであろう。
【０１３０】
このようなイムノアッセイで使用される抗体は、標識されているか、または標識されていなくてもよい。未標識抗体は、凝集において使用され、標識抗体は、多種多様な標識を用いて多種多様なアッセイにおいて使用することができる。抗ＣＤ４０抗体と関心のあるエピトープとの間の抗体−抗原複合体の形成の検出は、検出可能な物質をこの抗体に結合させることによって容易にすることができる。適切な検出手段には、放射性核種、酵素、補酵素、蛍光剤、化学発光剤、色素原、酵素基質または補因子、酵素阻害剤、補欠分子族複合体、フリーラジカル、粒子、色素などの標識の使用が含まれる。適当な酵素の例には、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼまたはアセチルコリンエステラーゼが含まれ、適当な補欠分子族複合体の例には、ストレプトアビジン／ビオチンおよびアビジン／ビオチンが含まれ、適当な蛍光物質の例には、ウンベリフェロン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミンフルオレセイン、塩化ダンシルまたはフィコエリトリンが含まれ、発光物質の一例はルミノールであり、生物発光物質の例には、ルシフェラーゼ、ルシフェリンおよびエクオリンが含まれ、適当な放射性物質の例には、１２５Ｉ、１３１Ｉ、３５Ｓまたは３Ｈが含まれる。このような標識試薬は、様々な周知のアッセイ、例えば、放射免疫測定法、酵素免疫測定法、例えば、ＥＬＩＳＡ、蛍光免疫測定法などにおいて使用することができる。例えば、米国特許第３，７６６，１６２号、第３，７９１，９３２号、第３，８１７，８３７号および第４，２３３，４０２号を参照のこと。
【０１３１】
前述したように、本発明の併用療法は、リツキシマブ（商標名リツキサン（登録商標）として市販されている）を使用した療法を含む腫瘍性Ｂ細胞増殖に関連した疾患または状態の公知の療法に関する問題に取り組む。リツキシマブは、低、中および高悪性度非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）に有効な治療薬であり、その他のＢ細胞悪性疾患に活性があることが示された（例えば、Ｍａｌｏｎｅｙら（１９９４年）Ｂｌｏｏｄ  ８４巻：２４５７〜２４６６頁）、ＭｃＬａｕｇｈｌｉｎら（１９９８年）Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｏｎｃｏｌ．  １６巻：２８２５〜２８３３頁、Ｍａｌｏｎｅｙら（１９９７年）Ｂｌｏｏｄ  ９０巻：２１８８〜２１９５頁、Ｈａｉｎｓｗｏｒｔｈら（２０００年）Ｂｌｏｏｄ  ９５巻：３０５２〜３０５６頁、Ｃｏｌｏｍｂａｔら（２００１年）Ｂｌｏｏｄ  ９７巻：１０１〜１０６頁、Ｃｏｉｆｆｅｒら（１９９８年）Ｂｌｏｏｄ  ９２巻：１９２７〜１９３２頁）、Ｆｏｒａｎら（２０００年）Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｏｎｃｏｌ．  １８巻：３１７〜３２４頁、Ａｎｄｅｒｓｏｎら（１９９７年）Ｂｉｏｃｈｅｍ．  Ｓｏｃ．  Ｔｒａｎｓ．  ２５巻：７０５〜７０８頁またはＶｏｓｅら（１９９９年）Ａｎｎ．  Ｏｎｃｏｌ．  １０巻：５８ａ参照）。リツキシマブは、再発したＢ細胞性低悪性度または濾包性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）の治療のために認可されている。患者によっては、リツキシマブによる治療に抵抗性になっている（Ｗｉｔｚｉｇら（２００２年）Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｏｎｃｏｌ．  ２０巻：３２６２頁、Ｇｒｉｌｌｏ−Ｌｏｐｅｚら（１９９８年）Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｏｎｃｏｌ．  １６巻：２８２５頁またはＪａｚｉｒｅｈｉら（２００３年）Ｍｏｌ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒ．：２巻：１１８３〜１１９３頁参照）。例えば、患者によっては、抗ＣＤ２０抗体療法後、悪性Ｂ細胞上のＣＤ２０発現が低下している（Ｄａｖｉｓら（１９９９年）Ｃｌｉｎ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  ５巻：６１１頁）。さらに、低悪性度ＮＨＬの患者の３０％から５０％が、このモノクローナル抗体に対して臨床応答を示さない（Ｈａｉｎｓｗｏｒｔｈら（２０００年）Ｂｌｏｏｄ  ９５巻：３０５２〜３０５６頁、Ｃｏｌｏｍｂａｔら（２００１年）Ｂｌｏｏｄ  ９７巻：１０１〜１０６頁）。このモノクローナル抗体に抵抗性を生じたか、またはこの抗体による初期療法に抵抗性のＢ細胞リンパ腫を有する患者では、別の形態の治療介入が必要である。別の療法はまた、リツキシマブによる治療後に再発した患者に望ましい。リツキシマブと比較して、優れた治療活性、特に抗腫瘍活性を有する抗体の発見は、腫瘍性Ｂ細胞増殖に関連した疾患または状態、例えば、Ｂ細胞リンパ腫、特にＢ細胞非ホジキンリンパ腫の治療方法を劇的に改善することができでであろう。
【０１３２】
一部の実施形態では、例えば、ヒトリンパ腫または骨髄腫細胞株を使用したヌードマウス異種移植腫瘍モデルにおいて同等量のこれらの抗体で抗腫瘍活性をアッセイする場合、本発明の併用療法はリツキシマブよりも強力な治療効果をもたらす。他の実施形態では、例えば、ヒトリンパ腫または骨髄腫細胞株を使用したヌードマウス異種移植腫瘍モデルにおいて同等量のこれらの抗体で抗腫瘍活性をアッセイする場合、本発明の併用療法はリツキシマブおよびＣＨＯＰによる併用療法（通常、Ｒ−ＣＨＯＰとして公知）よりも強力な治療効果をもたらす。
【０１３３】
適切なヌードマウス異種移植腫瘍モデルには、ＮａｍａｌｗａおよびＤａｕｄｉとして公知のヒトバーキットリンパ腫細胞株を使用したものが含まれる。好ましい実施形態は、Ｄａｕｄｉヒトリンパ腫細胞株を使用して、病期の（ｓｔａｇｅｄ）ヌードマウス異種移植腫瘍モデルにおいて抗腫瘍活性をアッセイする。Ｄａｕｄｉリンパ腫細胞株を使用した病期のヌードマウス異種移植片腫瘍モデルは、病期のモデルでは抗体投与は腫瘍が測定可能な大きさに達した後でのみ開始されるので、非病期のモデルよりも、所与の抗体の治療効能の識別に有効である。非病期モデルでは、抗体投与は一般的に、腫瘍接種の約１日以内で触診可能な腫瘍が存在するようになる前に開始される。抗体が、病期モデルにおいてリツキシマブまたはＲ−ＣＨＯＰより優れた性能を示す（すなわち、治療活性の増大を示す）能力は、この抗体がリツキシマブよりも治療上有効であることの強力な指標である。さらに、Ｄａｕｄｉモデルでは、リツキシマブの標的である抗ＣＤ２０は、細胞表面上にＣＤ４０よりも高レベルで発現する。
【０１３４】
本明細書の実施例では、本発明者らはＲＬ（ＡＴＣＣ、ＣＲＬ−２２６１）およびＳＵ−ＤＨＬ−４（ＤＳＭＺ、ＡＣＣ４９５）ヒトＢ細胞リンパ腫細胞株を使用した。これらの細胞株はいずれも、この分野で使用した一般的なリンパ腫細胞株の多くとは対照的に、エプスタインバーウイルスゲノムについて陰性であることが報告されている。エプスタインバーウイルスに陽性の細胞株の使用は、それらの細胞株において発癌ＥＢＶによるシグナル伝達への影響のため、実験データを解釈するとき問題を引き起こし得る。ＲＬおよびＳＵ−ＤＨＬ−４リンパ腫細胞株がＥＢＶ陰性であり、結果は本当に信頼がおけるものであることがより確かで、すなわち、ヒトにおける治療効能が予測されるので、本発明者らによって特に選択された。
【０１３５】
したがって、一部の実施形態では、エプスタインバーウイルスゲノムが陰性のヒトリンパ腫細胞株を使用して、ヌードマウス異種移植腫瘍モデルにおいて同等量の抗体で抗腫瘍活性をアッセイする場合、本発明の併用療法はリツキシマブよりも強力な治療効果をもたらす。他の実施形態では、エプスタインバーウイルスゲノムが陰性のヒトリンパ腫細胞株を使用して、ヌードマウス異種移植腫瘍モデルにおいて同等量の抗体で抗腫瘍活性をアッセイする場合、本発明の併用療法はリツキシマブおよびＣＨＯＰの併用療法よりも強力な治療効果をもたらす。これらの実施形態では、ＲＬまたはＳＵ−ＤＨＬ−４リンパ腫細胞株を使用してもよい。
【０１３６】
抗ＣＤ４０抗体およびリツキシマブの「同等量」とは、重量当たりまたは体積当たりで同じｍｇ用量が投与されることを意味する。したがって、腫瘍モデルで使用した抗ＣＤ４０抗体をマウスの体重１ｋｇ当たり０．０１ｍｇで投与する場合、リツキシマブもマウスの体重１ｋｇ当たり０．０１ｍｇで投与する。
【０１３７】
抗体の効能の別の違いは、ＮＫ細胞の存在下でインビトロにおいて腫瘍細胞の最大溶解を得るために必要な抗体の濃度をインビトロで測定することである。例えば、抗ＣＤ４０抗体は、リツキシマブの濃度の１／２未満、好ましくは１／４未満、最も好ましくは１／１０未満のＥＣ５０で、Ｄａｕｄｉ細胞の最大溶解に達し得る。したがって、抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合断片は、ＷＯ２００７／０５３７６７で記載されたように、抗体依存性細胞毒性（ＡＤＣＣ）のアッセイ、例えば、ＣＤ４０発現細胞およびＣＤ２０発現細胞を単離されたヒトナチュラルキラー（ＮＫ）細胞と関連する抗体の存在下でインキュベートすることを含むアッセイにおいて、同等量のリツキシマブよりも強力であり得る。
【０１３８】
本発明は、腫瘍性Ｂ細胞増殖に関連した疾患または状態を治療するために抗ＣＤ４０抗体を使用する。
【０１３９】
本発明の抗ＣＤ４０抗体は、腫瘍性ＣＤ４０発現Ｂ細胞と関連した疾患または状態を治療するのに治療上有効である濃度で投与する。この目的を達成するため、抗体は、当技術分野で公知の様々な許容された担体および／または賦形剤を使用して製剤化することができる。抗ＣＤ４０抗体は、非経口投与経路によって投与することができる。典型的には、抗体は、静脈内または皮下のいずれかの注射によって投与される。この投与を行うための方法は、当業者に公知である。
【０１４０】
静脈内投与は、好ましくは、約１時間未満から約１０時間（より好ましくは１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０時間未満）の期間にわたる注入によって行う。その後の注入は、例えば、約１から約４時間、約１から約３時間または約１から約２時間を含む約１時間未満から約６時間の期間にわたって投与することができる。あるいは、用量は皮下投与することができる。
【０１４１】
本発明の医薬組成物は、企図する投与経路に適合するように製剤化される。非経口適用に使用される液剤または懸濁剤には、以下の成分、注射用水、生理食塩水などの滅菌希釈剤、ベンジルアルコールまたはメチルパラベンなどの抗菌剤、アスコルビン酸または亜硫酸水素ナトリウムなどの抗酸化剤、エチレンジアミン四酢酸などのキレート化剤、酢酸塩、クエン酸塩またはリン酸塩などの緩衝剤および塩化ナトリウムまたはデキストロースなど張度を調整するための薬剤を含めることができる。ｐＨは、酸または塩基、例えば、塩酸または水酸化ナトリウムで調節することができる。非経口用調製物は、アンプル、使い捨てシリンジ、またはガラスもしくはプラスティック製の反復投与用バイアル内に封入することができる。
【０１４２】
抗ＣＤ４０抗体は一般的に、標準的な手法によって、薬学的に許容される緩衝液、例えば、滅菌生理食塩水、滅菌緩衝水、前述のものの組合せなどの中に供給される。非経口投与可能な薬剤の調製方法は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：  Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ（第２１版；Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｌｋｉｎｓ、２００５年５月）に記載されている。また、例えば、本発明の方法における使用に適した安定化された抗体医薬製剤が記載されているＷＯ９８／５６４１８も参照のこと。
【０１４３】
投与される少なくとも１種類の抗ＣＤ４０抗体の量は、当業者によって容易に決定される。投与様式および少なくとも１種類の抗ＣＤ４０抗体のそれぞれの量に影響する要素には、限定はしないが、疾患の重症度、疾患の既往歴、療法を受けている個体の年齢、身長、体重、健康状態、疾患の型、および体調、または抗体注入に対する応答が含まれる。同様に、投与される抗ＣＤ４０抗体の量は、投与様式および被験体がこの抗腫瘍剤を単回用量または複数用量のいずれで受けるかに左右されるだろう。一般的に、療法を受けている被験体の体重が増加するにつれて、抗ＣＤ４０抗体の投薬量が多くなることが好ましい。
【０１４４】
投与される抗ＣＤ４０抗体の単回投与では、約０．１ｍｇ／ｋｇから約３５ｍｇ／ｋｇ、約０．５ｍｇ／ｋｇから約３０ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇから約３０ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇから約３０ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇから約２５ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇから約２０ｍｇ／ｋｇ、または約５ｍｇ／ｋｇから約１５ｍｇ／ｋｇの範囲であってもよい。したがって、例えば、用量は、０．３ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇ、２．５ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、７ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ、２５ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇ、３５ｍｇ／ｋｇまたは約０．３ｍｇ／ｋｇから約３５ｍｇ／ｋｇの範囲内に含まれるその他のこのような用量であってもよい。
【０１４５】
治療有効量の抗体による被験体の治療は、単回治療を含むことができ、または好ましくは、一連の治療を含むことができる。したがって、本発明の方法は、抗ＣＤ４０抗体の複数用量による投与を含むことができる。この方法は、複数用量での抗ＣＤ４０抗体の投与を含む。該方法は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０回またはそれ以上の治療上有効な分割された用量の抗ＣＤ４０抗体を含む医薬組成物の投与を含むことができる。複数用量での抗ＣＤ４０抗体を含む医薬組成物の投与頻度および投与期間は、当業者によって、過度な実験を行うことなく容易に決定することができる。同じ治療有効用量の抗ＣＤ４０抗体は、治療期間にわたって投与することができる。あるいは、異なる治療有効用量の抗ＣＤ４０抗体は、治療期間の過程にわたって使用することができる。
【０１４６】
一例において、被験体は、約０．１から２０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲の抗ＣＤ４０抗体で、１週間に１回、約１から１０週間、好ましくは約２から８週間、より好ましくは約３から７週間、さらにより好ましくは約４、５または６週間治療される。治療は、再発を予防するため、または再発の徴候時に、２から１２カ月毎の間隔で行うことができる。治療に使用される抗体の有効な投薬量は、特定の治療の過程において増減できることも理解されよう。診断用アッセイの結果から、投薬量の変更を行うことができ、明白となり得る。
【０１４７】
したがって、一実施形態において、投与計画には、治療期間の１、８、１５および２２日目における少なくとも１種類の抗ＣＤ４０抗体の治療有効用量の第１の投与が含まれる。
【０１４８】
別の実施形態において、投与計画には、毎日、または治療期間の１週間のうちの第１、３、５および７日に少なくとも１種類の抗ＣＤ４０抗体の治療有効用量の第１の投与を有する投与計画、治療期間の１週間のうちの第１および３〜４日に少なくとも１種類の抗ＣＤ４０抗体の治療有効用量の第１の投与を含む投与計画および治療期間の１週間のうちの第１日に少なくとも１種類の抗ＣＤ４０抗体の治療有効用量の第１の投与を含む好ましい投与計画が含まれる。処置期間は、少なくとも１週間、少なくとも２週間、少なくとも３週間、少なくとも１カ月、少なくとも２カ月、少なくとも３カ月、少なくとも６カ月、または少なくとも１年を含んでもよい。処置期間は、引き続き行うか、または少なくとも１週間、少なくとも２週間、少なくとも１カ月、少なくとも３カ月、少なくとも６カ月または少なくとも１年互いに分離することができる。
【０１４９】
その他の実施形態において、本明細書中の他のところで規定した抗ＣＤ４０抗体の初期治療有効用量は、より少ない投薬範囲（すなわち、約０．３ｍｇ／ｋｇから約２０ｍｇ／ｋｇ）であってもよく、その後の用量は、より多い投薬範囲（すなわち、約２０ｍｇ／ｋｇから約５０ｍｇ／ｋｇ）に含めることができる。
【０１５０】
その他の実施形態では、本明細書中の他のところで規定した抗ＣＤ４０抗体の初期治療有効用量は、より多い投薬範囲（すなわち、約２０ｍｇ／ｋｇから約５０ｍｇ／ｋｇ）であることができ、その後の用量は、より少ない投薬範囲（すなわち、約０．３ｍｇ／ｋｇから約２０ｍｇ／ｋｇ）に含める。したがって、本発明の一部の実施形態では、抗ＣＤ４０抗体療法は、抗体の「負荷用量」を治療を必要とする被験体に投与することにより開始することができる。「負荷用量」とは、投与する抗体の用量が、高投薬範囲（すなわち、約２０ｍｇ／ｋｇから約５０ｍｇ／ｋｇ）に含まれる、被験体に投与する抗ＣＤ４０抗体の初期用量のことである。「負荷用量」は、完全な「負荷用量」が約２４時間の期間に投与される限り、単回投与、例えば、抗体をＩＶ投与する単回注入として投与するか、または複数用量、例えば、抗体をＩＶ投与する反復注入として投与することができる。「負荷用量」の投与後、被験体には、その後、１つ以上の追加の用量の抗ＣＤ４０抗体を投与する。その後の治療有効用量は、例えば、毎週投薬計画に従って、または２週間に１回、３週間に１回もしくは４週間１回投与することができる。このような実施形態において、その後の治療有効用量は一般的に、低投薬範囲（すなわち、０．３ｍｇ／ｋｇから約２０ｍｇ／ｋｇ）に含まれる。
【０１５１】
あるいは、一部の実施形態では、「負荷用量」後、その後の治療有効用量の抗ＣＤ４０抗体は、「維持計画」に従って投与され、治療有効用量の該抗体は、１カ月に１回、６週間に１回、２カ月に１回、１０週間に１回、３カ月に１回、１４週間に１回、４カ月に１回、１８週間に１回、５カ月に１回、２２週間に１回、６カ月に１回、７カ月に１回、８カ月に１回、９カ月に１回、１０カ月に１回、１１カ月に１回、または１２カ月に１回投与される。このような実施形態において、治療有効用量の抗ＣＤ４０抗体は、特にその後の用量が高頻度な間隔で、例えば、２週間に１回から１カ月に１回投与される場合、低投薬範囲（すなわち、０．３ｍｇ／ｋｇから約２０ｍｇ／ｋｇ）に含まれるか、または、特にその後の用量が低頻度な間隔で、例えば、その後の用量が約１カ月から約１２カ月間隔で投与される場合、高投薬範囲（すなわち、約２０ｍｇ／ｋｇから約５０ｍｇ／ｋｇ）に含まれる。
【０１５２】
本発明の方法で使用するための本明細書に記載された医薬組成物中に存在する抗ＣＤ４０抗体は、天然のものであるか、または組換え技術によって得られるものであってもよく、哺乳動物供給源、例えば、マウス、ラット、ウサギ、霊長類、ブタおよびヒトを含む任意の供給源由来であってもよい。好ましくは、このようなポリペプチドは、ヒト供給源由来であり、より好ましくはハイブリドーマ細胞株由来の組換えヒトタンパク質である。
【０１５３】
治療活性成分として本明細書で記載した結合特性を有する抗ＣＤ４０抗体を含む任意の医薬組成物は、本発明の方法で使用することができる。したがって、１種または複数の抗ＣＤ４０抗体を含む、液状、凍結乾燥、または噴霧乾燥組成物は、本発明の方法によって被験体にその後投与するために、水性もしくは非水性液剤または懸濁剤として調製することができる。これらの組成物はそれぞれ、少なくとも１種の抗ＣＤ４０抗体を治療または予防上活性な成分として含む。「治療または予防上活性な成分」とは、医薬組成物が被験体に投与されると被験体の疾患または状態の治療、予防または診断に関して所望の治療応答または予防応答をもたらす組成物に、抗ＣＤ４０抗体が特異的に組み込まれることを意味する。好ましくは、医薬組成物は、調製および保存中のタンパク質の安定性および生物学的活性の低下に関連した問題を最小限にするため、適切な安定化剤、増量剤、またはその両方を含む。
【０１５４】
製剤化剤は、抗ＣＤ４０抗体を含む医薬組成物に添加することができる。これらの製剤化剤には、限定はしないが、油、ポリマー、ビタミン、炭水化物、アミン酸、塩、緩衝剤、アルブミン、界面活性剤または増量剤を含めることができる。好ましくは、炭水化物には、糖または糖アルコール、例えば、単、二もしくは多糖類、または水溶性グルカンが含まれる。糖類またはグルカンには、フルクトース、グルコース、トレハロース、マンノース、ソルボース、キシロース、マルトース、スクロース、デキストラン、プルラン、デキストリン、αおよびβ−シクロデキストリン、可溶性デンプン、ヒドロキシエチルデンプン、およびカルボキシメチルセルロース、またはそれらの混合物を含めることができる。「糖アルコール」は、ヒドロキシル基を有するＣ４からＣ８炭化水素と定義され、ガラクチトール、イノシトール、マンニトール、キシリトール、ソルビトール、グリセロールおよびアラビトールが含まれる。これらの糖類または糖アルコールは、個々に、または組み合わせて使用することができる。糖または糖アルコールの濃度は、１．０％と７％ｗ／ｖの間、より好ましくは２．０％と６．０％ｗ／ｖの間である。好ましくは、アミノ酸には、左旋性（Ｌ）形態のカルニチン、アルギニンおよびベタインが含まれるが、他のアミノ酸を添加してもよい。好ましいポリマーには、２，０００と３，０００の間の平均分子量を有するポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）、または３，０００と５，０００の間の平均分子量を有するポリエチレングリコール（ＰＥＧ）が含まれる。製剤に添加できる界面活性剤は、ＥＰ２７０，７９９および２６８，１１０に示されている。
【０１５５】
医薬組成物に組み込まれる製剤化剤は、抗ＣＤ４０抗体の安定性をもたらすべきである。すなわち、抗ＣＤ４０抗体は、物理的および／または化学的安定性を保持しているべきで、所望する生物学的活性、すなわち、本明細書で前記に定義したアンタゴニスト活性の１種または複数を有する。
【０１５６】
タンパク質の安定性をモニターする方法は、当技術分野では周知である。例えば、Ｊｏｎｅｓ（１９９３年）Ａｄｖ．  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｒｅｖ．  １０巻：２９〜９０頁；  Ｌｅｅ編（１９９１年）Ｐｅｐｔｉｄｅ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ（Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ、Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）；および本明細書において以下に開示する安定性アッセイを参照のこと。一般的に、タンパク質の安定性は、選択した温度において指定した期間で測定する。好ましい実施形態では、安定な抗体医薬製剤は、室温（約２５℃）で保存した場合、少なくとも１カ月、少なくとも３カ月もしくは少なくとも６カ月抗ＣＤ４０抗体の安定性をもたらし、かつ／または約２〜８℃では、少なくとも６カ月、少なくとも９カ月、少なくとも１２カ月、少なくとも１８カ月、少なくとも２４カ月安定である。
【０１５７】
抗体などのタンパク質は、医薬組成物に製剤化される場合、所与の時点で、その医薬組成物において沈殿、凝集および／または変性の視覚的表示（すなわち、変色または透明性の低下）または測定可能な表示（例えば、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）もしくはＵＶ光散乱を使用）が示されないならば、その物理的安定性を保持しているとみなされる。化学安定性に関して、抗体などのタンパク質は、医薬組成物に製剤化される場合、所与の時点で、化学安定性の測定によって、その医薬組成物においてそのタンパク質（すなわち、抗体）が関心のある生物学的活性を保持していることが示されるならば、その化学安定性を保持しているとみなされる。化学安定性の変化をモニターするための方法は当技術分野で周知であり、限定はしないが、例えば、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、ＳＥＣおよび／またはマトリックス支援レーザー脱離イオン化法／飛行時間型質量分析を使用して、クリッピング（ｃｌｉｐｐｉｎｇ）の結果などのタンパク質の化学的に変質された形態を検出するための方法、ならびに、例えば、イオン交換クロマトグラフィーを使用して、分子電荷の変化に関連した（例えば、脱アミド化に関連した）分解を検出するための方法が含まれる。例えば、本明細書において以下に開示する方法を参照のこと。
【０１５８】
抗ＣＤ４０抗体は、医薬組成物に製剤化される場合、所与の時点で、その時点での所望の生物学的活性が、所望の生物学的活性のために適当なアッセイで測定したとき、医薬組成物が調製された時点で示される所望の生物学的活性の約３０％以内、好ましくは約２０％以内であるならば、所望の生物学的活性を保持しているとみなされる。抗ＣＤ４０抗体の所望の生物学的活性を測定するためのアッセイは、本明細書の実施例に記載したように実施することができる。また、Ｓｃｈｕｌｔｚｅら（１９９８年）Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ９２巻：８２００〜８２０４頁、Ｄｅｎｔｏｎら（１９９８年）Ｐｅｄｉａｔｒ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ．  ２巻：６〜１５頁、Ｅｖａｎｓら（２０００年）Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６４巻：６８８〜６９７頁、Ｎｏｅｌｌｅ（１９９８年）Ａｇｅｎｔｓ  Ａｃｔｉｏｎｓ  Ｓｕｐｐｌ．  ４９巻：１７〜２２頁、Ｌｅｄｅｒｍａｎら（１９９６年）Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ．  Ｈｅｍａｔｏｌ，  ３巻：７７〜８６頁；Ｃｏｌｉｇａｎら（１９９１年）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １３巻：１２頁、Ｋｗｅｋｋｅｂｏｏｍら（１９９３年）Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ７９巻：４３９〜４４４頁および米国特許第５，６７４，４９２号および第５，８４７，０８２号に記載されたアッセイを参照のこと。
【０１５９】
本発明の一部の実施形態では、抗ＣＤ４０抗体は液体医薬製剤に製剤化される。抗ＣＤ４０抗体は、本明細書において前記に開示した方法を含む当技術分野で公知の任意の方法を使用して調製することができる。抗ＣＤ４０抗体は、ＣＨＯ細胞株において組換えにより作製することができる。
【０１６０】
抗ＣＤ４０抗体がその製剤化の前に保存される場合、例えば、≦−２０℃で凍結し、その後さらに製剤化するために室温で解凍することができる。液体医薬製剤は、治療有効量の抗ＣＤ４０抗体を含む。製剤中に存在するそれらの抗体の量には、投与経路および所望の投与量を考慮する。
【０１６１】
この様式では、液体医薬組成物は抗ＣＤ４０抗体を、約０．１ｍｇ／ｍｌから約５０．０ｍｇ／ｍｌ、約０．５ｍｇ／ｍｌから約４０．０ｍｇ／ｍｌ、約１．０ｍｇ／ｍｌから約３０．０ｍｇ／ｍｌ、約５．０ｍｇ／ｍｌから約２５．０ｍｇ／ｍｌ、約５．０ｍｇ／ｍｌから約２０．０ｍｇ／ｍｌ、または約１５．０ｍｇ／ｍｌから約２５．０ｍｇ／ｍｌの濃度で含む。一部の実施形態では、液体医薬組成物は抗ＣＤ４０抗体を、約０．１ｍｇ／ｍｌから約５．０ｍｇ／ｍｌ、約５．０ｍｇ／ｍｌから約１０．０ｍｇ／ｍｌ、約１０．０ｍｇ／ｍｌから約１５．０ｍｇ／ｍｌ、約１５．０ｍｇ／ｍｌから約２０．０ｍｇ／ｍｌ、約２０．０ｍｇ／ｍｌから約２５．０ｍｇ／ｍｌ、約２５．０ｍｇ／ｍｌから約３０．０ｍｇ／ｍｌ、約３０．０ｍｇ／ｍｌから約３５．０ｍｇ／ｍｌ、約３５．０ｍｇ／ｍｌから約４０．０ｍｇ／ｍｌ、約４０．０ｍｇ／ｍｌから約４５．０ｍｇ／ｍｌ、または約４５．０ｍｇ／ｍｌから約５０．０ｍｇ／ｍｌの濃度で含む。その他の実施形態において、液体医薬組成物は抗ＣＤ４０抗体を、約１５．０ｍｇ／ｍｌ、約１６．０ｍｇ／ｍｌ、約１７．０ｍｇ／ｍｌ、約１８．０ｍｇ／ｍｌ、約１９．０ｍｇ／ｍｌ、約２０．０ｍｇ／ｍｌ、約２１．０ｍｇ／ｍｌ、約２２．０ｍｇ／ｍｌ、約２３．０ｍｇ／ｍｌ、約２４．０ｍｇ／ｍｌ、または約２５．０ｍｇ／ｍｌの濃度で含む。液体医薬組成物は、抗ＣＤ４０抗体ならびに製剤のｐＨをｐＨ約５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７．０を含むｐＨ約５．０からｐＨ約７．０の範囲に維持する緩衝剤を含む。一部の実施形態において、緩衝剤は、製剤のｐＨをｐＨ約５．０からｐＨ約６．５、ｐＨ約５．０からｐＨ約６．０、ｐＨ約５．０からｐＨ約５．５、ｐＨ約５．５から約７．０、ｐＨ約５．５からｐＨ約６．５、またはｐＨ約５．５からｐＨ約６．０の範囲に維持する。
【０１６２】
抗体の物理化学的安定性および所望する生物学的活性が本明細書で前述したように保持される限り、液体抗ＣＤ４０抗体製剤のｐＨをｐＨ約５．０からｐＨ約７．０の範囲に維持する任意の適当な緩衝剤を製剤に使用することができる。適切な緩衝剤には、限定はしないが、従来の酸およびそれらの塩が含まれ、その対イオンは、例えば、ナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウムまたはマグネシウムであることができる。液体医薬製剤を緩衝するために使用することができる従来の酸およびそれらの塩の例には、限定はしないが、コハク酸またはコハク酸塩、クエン酸またはクエン酸塩、酢酸または酢酸塩、酒石酸または酒石酸塩、リン酸またはリン酸塩、グルコン酸またはグルコン酸塩、グルタミン酸またはグルタミン酸塩、アスパラギン酸またはアスパラギン酸塩、マレイン酸またはマレイン酸塩、およびリンゴ酸またはリンゴ酸塩緩衝剤が含まれる。製剤中の緩衝剤濃度は、約１ｍＭから約５０ｍＭであり、約１ｍＭ、２ｍＭ、５ｍＭ、８ｍＭ、１０ｍＭ、１５ｍＭ、２０ｍＭ、２５ｍＭ、３０ｍＭ、３５ｍＭ、４０ｍＭ、４５ｍＭ、５０ｍＭ、または約１ｍＭから約５０ｍＭの範囲内のその他のこのような値が含まれる。一部の実施形態において、製剤中の緩衝剤濃度は、約５ｍＭから約１５ｍＭであり、約５ｍＭ、６ｍＭ、７ｍＭ、８ｍＭ、９ｍＭ、１０ｍＭ、１１ｍＭ、１２ｍＭ、１３ｍＭ、１４ｍＭ、１５ｍＭ、または約５ｍＭから約１５ｍＭの範囲内のその他のこのような値が含まれる。
【０１６３】
本発明の一部の実施形態では、液体医薬製剤は、治療有効量の抗ＣＤ４０抗体、および製剤のｐＨをｐＨ約５．０からｐＨ約７．０、好ましくはｐＨ約５．０からｐＨ約６．５の範囲に維持する濃度のコハク酸緩衝剤またはクエン酸緩衝剤を含む。「コハク酸緩衝剤」または「クエン酸緩衝剤」とは、それぞれ、コハク酸の塩またはクエン酸の塩を含む緩衝剤を意味する。好ましい実施形態では、コハク酸塩またはクエン酸塩の対イオンはナトリウムカチオンであり、したがって、緩衝剤はそれぞれ、コハク酸ナトリウムまたはクエン酸ナトリウムである。しかし、任意のカチオンが有効であることが予測される。その他の可能なコハク酸塩またはクエン酸塩のカチオンには、限定はしないが、カリウム、アンモニウム、カルシウムおよびマグネシウムが含まれる。前記のように、製剤中のコハク酸またはクエン酸緩衝剤の濃度は、約１ｍＭから約５０ｍＭであり、約１ｍＭ、２ｍＭ、５ｍＭ、８ｍＭ、１０ｍＭ、１５ｍＭ、２０ｍＭ、２５ｍＭ、３０ｍＭ、３５ｍＭ、４０ｍＭ、４５ｍＭ、５０ｍＭ、または約１ｍＭから約５０ｍＭの範囲内のその他のこのような値が含まれ得る。一部の実施形態では、製剤中の緩衝剤濃度は、約５ｍＭから約１５ｍＭであり、約５ｍＭ、６ｍＭ、７ｍＭ、８ｍＭ、９ｍＭ、１０ｍＭ、１１ｍＭ、１２ｍＭ、１３ｍＭ、１４ｍＭまたは約１５ｍＭが含まれる。その他の実施形態では、液体医薬製剤は、抗ＣＤ４０抗体を約０．１ｍｇ／ｍｌから約５０．０ｍｇ／ｍｌ、または約５．０ｍｇ／ｍｌから約２５．０ｍｇ／ｍｌの濃度で、およびコハク酸塩またはクエン酸緩衝剤、例えば、コハク酸ナトリウムまたはクエン酸ナトリウム緩衝剤を約１ｍＭから約２０ｍＭ、約５ｍＭから約１５ｍＭ、好ましくは約１０ｍＭの濃度で含む。
【０１６４】
液体医薬製剤がほぼ等張性であることが望ましい場合、抗ＣＤ４０抗体および緩衝剤を含む液体医薬製剤は、この製剤をほぼ等張性にするのに十分な量の等張剤をさらに含むことができる。「ほぼ等張性」とは、水性の製剤のモル浸透圧濃度が約２４０ｍｍｏｌ／ｋｇから約３６０ｍｍｏｌ／ｋｇ、好ましくは約２４０から約３４０ｍｍｏｌ／ｋｇ、より好ましくは約２５０から約３３０ｍｍｏｌ／ｋｇ、さらにより好ましくは約２６０から約３２０ｍｍｏｌ／ｋｇ、なおより好ましくは約２７０から約３１０ｍｍｏｌ／ｋｇであることを意味する。溶液の等張性の測定方法は、当業者には公知である。
【０１６５】
当業者は、医薬組成物に等張性をもたらすのに有用な様々な薬学的に許容される溶質について熟知している。等張剤は、本発明の液体医薬製剤の浸透圧を体液の浸透圧にほぼ等しい値に調節することができる任意の試薬であることができる。生理学的に許容される等張剤を使用することが望ましい。したがって、治療有効量の抗ＣＤ４０抗体および緩衝剤を含む液体医薬製剤はさらに、等張性をもたらすために使用できる成分、例えば、塩化ナトリウム、アミノ酸、例えば、アラニン、バリンおよびグリシン、限定はしないが、グルコース、デキストロース、フルクトース、スクロース、マルトース、マンニトール、トレハロース、グリセロール、ソルビトールおよびキシリトールを含む糖類および糖アルコール（ポリオール）、酢酸、その他の有機酸またはそれらの塩、ならびに相対的に少量のクエン酸塩またはリン酸塩を含むことができる。当業者には、最適な張度の液状製剤を提供するのに適した他の薬剤は公知であろう。
【０１６６】
一部の好ましい実施形態では、抗ＣＤ４０抗体および緩衝剤を含む液体医薬製剤はさらに、等張剤として塩化ナトリウムを含む。製剤中の塩化ナトリウムの濃度は、その他の成分の張度への関与に左右される。一部の実施形態では、塩化ナトリウムの濃度は、約５０ｍＭから約３００ｍＭ、約５０ｍＭから約２５０ｍＭ、約５０ｍＭから約２００ｍＭ、約５０ｍＭから約１７５ｍＭ、約５０ｍＭから約１５０ｍＭ、約７５ｍＭから約１７５ｍＭ、約７５ｍＭから約１５０ｍＭ、約１００ｍＭから約１７５ｍＭ、約１００ｍＭから約２００ｍＭ、約１００ｍＭから約１５０ｍＭ、約１２５ｍＭから約１７５ｍＭ、約１２５ｍＭから約１５０ｍＭ、約１３０ｍＭから約１７０ｍＭ、約１３０ｍＭから約１６０ｍＭ、約１３５ｍＭから約１５５ｍＭ、約１４０ｍＭから約１５５ｍＭまたは約１４５ｍＭから約１５５ｍＭである。このような一実施形態では、塩化ナトリウムの濃度は約１５０ｍＭである。その他のこのような実施形態では、塩化ナトリウムの濃度は約１５０ｍＭであり、緩衝剤は、約５ｍＭから約１５ｍＭの濃度のコハク酸ナトリウムまたはクエン酸ナトリウム緩衝剤であり、液体医薬製剤は治療有効量の抗ＣＤ４０抗体を含み、この製剤のｐＨは、ｐＨ約５．０からｐＨ約７．０、ｐＨ約５．０からｐＨ約６．０またはｐＨ約５．５からｐＨ約６．５である。その他の実施形態では、液体医薬製剤は、抗ＣＤ４０抗体を約０．１ｍｇ／ｍｌから約５０．０ｍｇ／ｍｌまたは約５．０ｍｇ／ｍｌから約２５．０ｍｇ／ｍｌの濃度で含み、塩化ナトリウム約１５０ｍＭおよびコハク酸ナトリウムまたはクエン酸ナトリウム約１０ｍＭを含み、ｐＨがｐＨ約５．５である。
【０１６７】
本発明の液体医薬製剤の加工中の凍結解凍または機械的剪断によるタンパク質の分解は、溶液−空気界面における表面張力を低下させるために界面活性剤を製剤中に組み込むことによって阻害することができる。したがって、一部の実施形態では、液体医薬製剤は、治療有効量の抗ＣＤ４０抗体、緩衝剤を含み、さらに界面活性剤を含む。その他の実施形態では、液体医薬製剤は、抗ＣＤ４０抗体、緩衝剤、等張剤を含み、さらに界面活性剤を含む。
【０１６８】
使用される一般的な界面活性剤は、ポリオキシエチレンソルビトールエステル、例えば、ポリソルベート８０（Ｔｗｅｅｎ８０）およびポリソルベート２０（Ｔｗｅｅｎ２０）；ポリオキシプロピレン−ポリオキシエチレンエステル、例えば、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ  Ｆ６８；ポリオキシエチレンアルコール、例えば、Ｂｒｉｊ  ３５；シメチコン；ポリエチレングリコール、例えば、ＰＥＧ４００；リゾホスファチジルコリン；ならびにポリオキシエチレン−ｐ−ｔ−オクチルフェノール、例えば、Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００を含む非イオン界面活性剤である。界面活性剤または乳化剤による医薬品の古典的な安定化は、例えば、Ｌｅｖｉｎｅら（１９９１年）Ｊ．  Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ  Ｓｃｉ．  Ｔｅｃｈｎｏｌ．  ４５巻（３）：１６０〜１６５頁に記載されている。本発明の実施において使用する好ましい界面活性剤は、ポリソルベート８０である。界面活性剤を含める場合、一般的には、約０．００１％から約１．０％（ｗ／ｖ）、約０．００１％から約０．５％、約０．００１％から約０．４％、約０．００１％から約０．３％、約０．００１％から約０．２％、約０．００５％から約０．５％、約０．００５％から約０．２％、約０．０１％から約０．５％、約０．０１％から約０．２％、約０．０３％から約０．５％、約０．０３％から約０．３％、約０．０５％から約０．５％、または約０．０５％から０．２％の量で添加される。
【０１６９】
したがって、一部の実施形態では、液体医薬製剤は、治療有効量の抗ＣＤ４０抗体を含み、緩衝剤は、約１ｍＭから約５０ｍＭ、約５ｍＭから約２５ｍＭまたは約５ｍＭから約１５ｍＭの濃度のコハク酸ナトリウムまたはクエン酸ナトリウム緩衝剤であり、この製剤のｐＨは、ｐＨ約５．０からｐＨ約７．０、ｐＨ約５．０からｐＨ約６．０またはｐＨ約５．５からｐＨ約６．５のｐＨであり、この製剤はさらに、界面活性剤、例えばポリソルベート８０を約０．００１％から約１．０％または約０．００１％から約０．５％の量で含む。このような製剤は所望により、塩化ナトリウムなどの等張剤を、約５０ｍＭから約３００ｍＭ、約５０ｍＭから約２００ｍＭまたは約５０ｍＭから約１５０ｍＭの濃度で含むことができる。その他の実施形態では、液体医薬製剤は、約２０．０ｍｇ／ｍｌを含む約０．１ｍｇ／ｍｌから約５０．０ｍｇ／ｍｌまたは約５．０ｍｇ／ｍｌから約２５．０ｍｇ／ｍｌの濃度の抗ＣＤ４０抗体；塩化ナトリウム約１５０ｍＭを含む塩化ナトリウム約５０ｍＭから約２００ｍＭ；コハク酸ナトリウムまたはクエン酸ナトリウム約１０ｍＭを含むコハク酸ナトリウムまたはクエン酸ナトリウム約５ｍＭから約２０ｍＭ；約１５０ｍＭを含む約５０ｍＭから約２００ｍＭの濃度の塩化ナトリウム；および所望により、約０．００１％から約０．５％を含む約０．００１％から約１．０％の量の界面活性剤、例えばポリソルベート８０を含み、この液体医薬製剤のｐＨは、ｐＨ約５．０からｐＨ約７．０、ｐＨ約５．０からｐＨ約６．０、ｐＨ約５．０からｐＨ約５．５、ｐＨ約５．５からｐＨ約６．５またはｐＨ約５．５からｐＨ約６．０である。
【０１７０】
液体医薬製剤は、本明細書で前述したいかなる保存剤およびその他の担体、賦形剤または安定化剤を本質的に含まなくてもよい。あるいは、この製剤は、抗ＣＤ４０抗体の物理化学的安定性に悪影響を及ぼさないならば、本明細書で前述した１種または複数の保存剤、例えば、抗菌剤、薬学的に許容される担体、賦形剤または安定化剤を含むことができる。許容される担体、賦形剤および安定化剤の例には、限定はしないが、さらなる緩衝剤、共溶媒、界面活性剤、アスコルビン酸およびメチオニンを含む抗酸化剤、ＥＤＴＡなどのキレート化剤、金属複合体（例えば、Ｚｎ−タンパク質複合体）、ならびにポリエステルなどの生分解性ポリマーが含まれる。製剤化および薬学的に許容される担体、安定化剤およびイソモライト（ｉｓｏｍｏｌｙｔｅ）の選択の十分な考察については、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：  Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ（第２１版；Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｌｋｉｎｓｍ、２００５年５月）に見出すことができる。
【０１７１】
本明細書では、「担体」には、使用される投薬量および濃度で、それらに曝露されている細胞または哺乳類に対して無毒である薬学的に許容される担体、賦形剤または安定化剤が含まれる。生理学的に許容される担体は、水性のｐＨ緩衝溶液であることが多い。生理学的に許容される担体の例には、緩衝剤、例えば、リン酸塩、クエン酸塩、コハク酸塩およびその他の有機酸；アスコルビン酸を含む抗酸化剤；低分子量（約１０残基未満）のポリペプチド；タンパク質、例えば、血清アルブミン、ゼラチンまたは免疫グロブリン；親水性ポリマー、例えば、ポリビニルピロリドン；アミノ酸、例えば、グリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニンまたはリシン；グルコース、マンノースまたはデキストリンを含む単糖類、二糖類およびその他の炭水化物；キレート化剤、例えば、ＥＤＴＡ；糖アルコール、例えば、マンニトールまたはソルビトール；塩形成性対イオン、例えば、ナトリウム；および／または非イオン界面活性剤、例えば、ＴＷＥＥＮ、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）およびＰｌｕｒｏｎｉｃｓが含まれる。
【０１７２】
本明細書で記載した液体医薬製剤またはその他の医薬組成物を調製した後、分解を防ぐために凍結乾燥することができる。液体組成物を凍結乾燥する方法は、当業者には公知である。使用直前、組成物は、追加的成分を含んでいてもよい滅菌希釈剤（例えば、リンゲル液、蒸留水または滅菌生理食塩水）を用いて再構成することができる。再構成後、組成物は、好ましくは、当業者に公知の方法を使用して被験体に投与される。
【０１７３】
抗ＣＤ４０抗体を含有する医薬組成物は、ＷＯ２００７／１２４２９９として公開された共有の国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ２００７／０６６７５７号に記載された組成物であってもよい。特に、本発明の併用療法で使用するための医薬組成物は、（ｉ）抗ＣＤ４０抗体、組成物のｐＨを約ｐＨ５．０からｐＨ７．０に維持するための緩衝剤、および（ｉｉｉ）液体製剤をほぼ等張性にするのに十分な量のアルギニン−ＨＣｌを含んでいてもよい。これらの組成物では、緩衝剤は、クエン酸塩／クエン酸緩衝剤であってもよい。組成物はさらに、非イオン性界面活性剤および／またはさらなる安定化剤としてＬ−メチオニンを含んでもよい。組成物のモル浸透圧濃度は、約２４０ｍｍｏｌ／ｋｇから約３６０ｍｍｏｌ／ｋｇであってもよい。緩衝剤の濃度は、約５ｍＭから約１００ｍＭ、約５ｍＭから約２０ｍＭ、または約５ｍＭから約１５ｍＭ（例えば、１０ｍＭ）であってもよい。組成物のｐＨは、ｐＨ５．０からｐＨ６．０（例えば、約ｐＨ５．５）であってもよい。組成物は、アルギニン−ＨＣｌを、約５０ｍＭから約２００ｍＭ、約１００ｍＭから約１７５ｍＭ（例えば、約１５０ｍＭ）の濃度で含んでいてもよい。組成物はさらに、界面活性剤ポリソルベートを、例えば、約０．００１から約１．０％（ｗ／ｖ）の濃度で、または約０．０２５％から約０．１％（ｗ／ｖ）の濃度で含んでいてもよい。組成物はさらに、メチオニンを、約０．５ｍＭから約２０．０ｍＭの濃度で、または約１．０ｍＭから約２０．０ｍＭ（例えば、約５．０ｍＭ）の濃度で含んでいてもよい。抗ＣＤ４０抗体は、組成物中に、約０．１ｍｇ／ｍｌから約５０．０ｍｇ／ｍｌ、または約１．０ｍｇ／ｍｌから約３５．０ｍｇ／ｍｌ、または約１０．０ｍｇ／ｍｌから約３５．０ｍｇ／ｍｌで存在していてもよい。
【０１７４】
本発明はまた、化学療法薬シクロホスファミド（商標名シトキサン）、ドキソルビシン（商標名アドリアマイシン）、ビンクリスチン（商標名オンコビン）およびプレドニゾン（商標名デルタゾン）の使用を含む。これら４種の化学療法薬の併用は、ＣＨＯＰと呼ばれる。ＣＨＯＰ計画は通常、非ホジキンリンパ腫の患者の治療に使用され、ＣＨＯＰは、２５年超の間、びまん性大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）の患者の標準的療法と考えられてきた（Ｆｅｕｇｉｅｒら（２００５年）Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｏｎｃｏｌ．  ２３巻（１８号）：４１１７〜４１２６頁；Ｈａｂｅｒｍａｎｎら（２００６年）Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｏｎｃｏｌ．  ２４巻（１９号）：３１２１〜３１２７頁）。ＣＨＯＰは、ＤＬＢＣＬの治療においてリツキシマブと併用して使用されてきた（Ｆｅｕｇｉｅｒら（２００５年）Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｏｎｃｏｌ．  ２３巻（１８号）：４１１７〜４１２６頁；Ｈａｂｅｒｍａｎｎら（２００６年）Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｏｎｃｏｌ．  ２４巻（１９号）：３１２１〜３１２７頁）。
【０１７５】
ＣＨＯＰは、３種類の化学療法薬（シクロホスファミド、ドキソルビシンおよびビンクリスチン）およびステロイド（プレドニゾン）の組合せである。ＣＨＯＰ化学療法は、数多くの副作用と関連し、最も一般的なのは、疲労、骨髄に対する影響による血液細胞数の減少、悪心、脱毛、不妊、口腔炎（ｍｏｕｔｈ  ｓｏｒｅ）および口腔内潰瘍、食欲減退ならびに神経系の症状（例えば、ピンおよび針で刺すような痛み、腹痛）である。本発明の方法は、使用するＣＨＯＰ計画の用量を減少させてこれらの副作用の１種または複数を軽減するか、または除去することができる。したがって、一部の実施形態では、本発明の方法、使用、組成物およびキットは、ＣＨＯＰの投与に通常関連する副作用の１種または複数を回避するか、または軽減しながら、腫瘍性Ｂ細胞増殖に関連した疾患または状態についてヒト患者を治療するために使用することができる。
【０１７６】
本発明の併用療法はまた、使用する抗ＣＤ４０抗体の用量を減少させることによって、抗ＣＤ４０抗体の投与に関連した１種または複数の副作用を軽減するか、または除去することができる。したがって、一部の実施形態では、本発明の方法、使用、組成物およびキットは、抗ＣＤ４０抗体の投与に通常関連する副作用の１種または複数を回避するか、または軽減しながら、腫瘍性Ｂ細胞増殖に関連した疾患または状態についてヒト患者を治療するために使用することができる。
【０１７７】
治療活性成分（複数可）としてＣＨＯＰ成分を含む任意の医薬組成物は、本発明の方法で使用することができる。これらは、１種または複数のＣＨＯＰ成分および薬学的に許容される担体または賦形剤、例えば、本明細書の他のところで記載したような薬学的に許容される担体または賦形剤を含有する。適切な医薬組成物は当技術分野で周知である。「治療活性成分」とは、医薬組成物が被験体に投与されたとき、被験体の疾患または状態の治療に関して所望の治療応答をもたらすために関連する治療薬（複数可）が組成物に特異的に組み込まれることを意味する。ＣＨＯＰ成分は、腫瘍性Ｂ細胞増殖と関連した疾患または状態を治療するのに「治療上有効」である濃度で投与する。
【０１７８】
ＣＨＯＰ成分は、任意の適切な投与経路によって投与することができる。シクロホスファミド、ドキソルビシンおよびビンクリスチンは通常静脈内投与され、プレドニゾンは通常経口投与される。この投与を行うための方法は、当業者に公知である。
【０１７９】
ＣＨＯＰは通常、各サイクルがシクロホスファミド７５０ｍｇ／ｍ２を第１日目に、ドキソルビシン５０ｍｇ／ｍ２を第１日目に、ビンクリスチン１．４ｍｇ／ｍ２を第１日目に、プレドニゾン１００ｍｇ／ｍ２を第１日目から５日目に投与することを含む治療サイクルで投与される。このサイクルは一般的に、３週間隔（２１日間）で反復する。通常の治療期間は、全部で６サイクルから８サイクルよりなる。
【０１８０】
本発明の方法、使用、組成物およびキットでは、シクロホスファミドは、７５〜１０００ｍｇ／ｍ２、または１８５〜１０００ｍｇ／ｍ２、または５００〜１０００ｍｇ／ｍ２、または７００〜８００ｍｇ／ｍ２（例えば、７５０ｍｇ／ｍ２）で使用することができる。ドキソルビシンは、５〜７０ｍｇ／ｍ２、または１２〜７０ｍｇ／ｍ２、または３５〜７０ｍｇ／ｍ２、または４５〜５５ｍｇ／ｍ２（例えば、５０ｍｇ／ｍ２）で使用することができる。ビンクリスチンは、０．１〜２．０ｍｇ／ｍ２、または０．７〜２．０ｍｇ／ｍ２、または１．０〜２．０ｍｇ／ｍ２、または１．０〜１．６ｍｇ／ｍ２（例えば、１．４ｍｇ／ｍ２）で使用することができる。プレドニゾンは、１０〜１３０ｍｇ／ｍ２、または５０〜１３０ｍｇ／ｍ２、または６５〜１３０ｍｇ／ｍ２、または８５〜１２５ｍｇ／ｍ２（例えば、１００ｍｇ／ｍ２）で使用することができる。当業者であれば、本発明の併用療法において使用するために適切なＣＨＯＰ計画を容易に選択することができよう。
【０１８１】
本発明の方法、使用、組成物およびキットでは、ＣＨＯＰ計画は、好ましくは、３週間隔で反復するが、所望するならば、４週間隔、５週間隔、６週間隔、７週間隔、８週間隔、９週間隔または１０週間隔で反復してもよい。本発明の併用療法は、治療効能を維持しながら、使用するＣＨＯＰの用量を減少させることができ、それによってＣＨＯＰ計画のより頻繁な反復、例えば、毎週または２週間隔を可能にする。ＣＨＯＰは、任意の所望するサイクル数で、例えば、１〜２０回、好ましくは３〜１５回、より好ましくは５〜１０回投与することができる。
【０１８２】
「含んでいる（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という用語には、「含んでいる（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」ならびに「構成される（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ）」が包含される。例えば、Ｘを「含んでいる」組成物は、Ｘのみから構成されてもよく、または何か他のもの、例えば、Ｘ＋Ｙを含んでいてもよい。
【０１８３】
「実質的に」と語句は、「完全に」を排除せず、例えば、Ｙを「実質的に含まない」組成物は、Ｙを完全に含まなくてもよい。必要ならば、「実質的に」という用語は、本発明の定義から省いてもよい。
【０１８４】
数値ｘに関して「約」という用語は、例えば、ｘ±１０％を意味する。
【０１８５】
本発明の様々な態様および実施形態は、例示のみのためにより詳細にここで説明する。本発明の範囲を逸脱することなく細部の変更を行うことができることを理解されたい。
【実施例】
【０１８６】
実験
以下の実施例で使用した抗ＣＤ４０抗体は、モノクローナル抗体ＨＣＤ１２２（以前はＣＨＩＲ−１２．１２として公知であった）である。ＨＣＤ１２２の産生、配列決定および特徴付けは既に記載されている。
【０１８７】
（実施例１）
ＣＨＯＰとの組み合わせにおけるＨＣＤ１２２（Ｈ−ＣＨＯＰ）の抗腫瘍活性
ヒトモノクローナル抗体ＨＣＤ１２２およびＣＨＯＰはそれぞれ、単独で使用したときＲＬおよびＳＵ−ＤＨＫ−４リンパ腫モデルにおいて抗腫瘍効能を示した。ＲＬ細胞株（ＡＴＣＣ、ＣＲＬ−２２６１）は、ＮＨＬの５２歳白人男性患者から樹立されたヒトＢ細胞リンパ腫細胞株である。ＳＵ−ＤＨＬ−４細胞株（ＤＳＭＺ、ＡＣＣ４９５）は、Ｂ−ＮＨＬ（びまん性大細胞型切れ込み核細胞型）の３８歳男性の腹膜浸出液から樹立されたヒトＢ細胞リンパ腫である。これらの細胞株はいずれも、当技術分野で使用される通常のリンパ腫細胞株の多くとは対照的に、エプスタインバーウイルスゲノム陰性であることが報告されている。エプスタインバーウイルス陽性の細胞株の使用は、それらの細胞株で発癌ＥＢＶによってシグナル伝達に影響を及ぼすので、実験データを解釈するとき問題を引き起こす可能性がある。ＲＬおよびＳＵ−ＤＨＬ−４リンパ腫細胞株は、ＥＢＶ陰性であり、その結果は本当に信頼がおけるものであることがより確かなので、本発明者らによって特に選択された。
【０１８８】
ＣＨＯＰと組み合わせたＨＣＤ１２２の活性を、ＲＬびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）異種移植モデルで評価し、ＨＣＤ１２２単独およびＣＨＯＰ単独の活性と比較した。ＨＣＤ１２２およびＣＨＯＰの組合せは、以下にＨ−ＣＨＯＰと称する。Ｈ−ＣＨＯＰの治療効能はまた、通常、Ｒ−ＣＨＯＰと呼ばれるＣＨＯＰとキメラ型抗ＣＤ−２０モノクローナル抗体リツキシマブとの公知の組合せと比較した。
【０１８９】
材料および方法
ＨＣＤ１２２の抗腫瘍活性は、ＣＢ１７／ＳＣＩＤマウスにおいて、ＣＨＯＰと併用して、ＲＬ  ＤＬＢＣＬ異種移植モデルで試験した。ＲＬ細胞１０×１０６個は、等量のＭａｔｒｉｇｅｌ（商標）と共に２００μｌの容量で動物の胸椎正中部位に皮下移植した。抗体投与は、平均腫瘍体積が１５０〜２００ｍｍ３の大きさになったときに開始した（図１では１日目と記す）。ＨＣＤ１２２、リツキシマブおよび陰性対照ヒトＩｇＧ１抗体それぞれを腹腔内注射によって投与した。全モノクローナル抗体を週１回の計画で投与し、処置期間は４週間であった。ＣＨＯＰ計画は、これらの用量および計画で投与した；プレドニゾン、０．２ｍｇ／ｋｇ、経口、１〜５日目；シトキサン、４０ｍｇ／ｋｇ、静脈注射、１日目；ドキソルビシン、３．３ｍｇ／ｋｇ、静脈内注射、１日目；ビンクリスチン、０．５ｍｇ／ｋｇ、静脈内注射、１日目。群の大きさはｎ＝１２であった。腫瘍体積の測定では、長さ次いで幅をデジタルノギスで測定した。一旦腫瘍が視認できるようになったら、測定値は週２回記録した。腫瘍体積および倍加時間は、式、体積＝Ｌ×Ｗ２／２に基づいて計算した。動物の体重を記録し、群当たりの平均として評価した。
【０１９０】
結果
これらの実験の結果を、以下の図１ならびに表１および２に示す。
【０１９１】
【表１】
0005559695.tif 000002
療法は全て、ｈｕＩｇＧ対照抗体による処置と比較したとき、２５日目の腫瘍増殖を有意に低減した。ＣＨＯＰ単独またはＨＣＤ１２２単独（１ｍｇ／ｋｇで）で認められた腫瘍増殖阻害（ＴＧＩ）はそれぞれ、７７％および７１％であった（ｐ＜０．００１、チューキー法）。対照的に、Ｈ−ＣＨＯＰ組み合わせ（ＨＣＤ１２２を１ｍｇ／ｋｇで使用）で認められたＴＧＩは９５％（ｐ＜０．００１、チューキー法）であった。Ｒ−ＣＨＯＰ組み合わせ（リツキシマブを１０ｍｇ／ｋｇで使用）で認められたＴＧＩは９０％（ｐ＜０．００１、チューキー法）であった。
【０１９２】
【表２】
0005559695.tif 000003
腫瘍増殖遅延（腫瘍の大きさが５００ｍｍ３に至るまでの時間）は、ＣＨＯＰ単独（８日）またはＨＣＤ１２２単独（６日）よりもＨ−ＣＨＯＰ（１７．５日）では有意に長かった（ｐ＜０．００１）。毒性は、Ｈ−ＣＨＯＰ組み合わせでは認められなかった。試験の終了時（３５日目）、腫瘍増殖の低減は、Ｈ−ＣＨＯＰ（ＨＣＤ１２２  １ｍｇ／ｋｇ）を投与された処置群では、Ｒ−ＣＨＯＰ（リツキシマブ  １０ｍｇ／ｋｇ、ｐ＜０．０５、チューキー法）またはＣＨＯＰ単独（ｐ＜０．００１、チューキー法）を投与された群よりも有意に大きかった。
【０１９３】
これらのデータは、Ｈ−ＣＨＯＰ組み合わせによる処置は、ＨＣＤ１２２単独またはＣＨＯＰ単独による処置よりも大きな抗腫瘍効能をもたらすことを示している。ＨＣＤ１２２を１ｍｇ／ｋｇで使用したとき、Ｈ−ＣＨＯＰ組み合わせは、各薬剤の効果を単に相加した場合に予測されるよりも大きな治療効能を提供し、すなわち、Ｈ−ＣＨＯＰ組み合わせは相乗的な治療効果を提供することが見出された。したがって、これらのデータは、Ｈ−ＣＨＯＰ組み合わせは、例えば、治療効果の増強をもたらすか、またはＣＨＯＰ投薬量を減少させて、ＣＨＯＰ投与に関連した副作用の１種または複数を軽減もしくは除去することによって、その他の方法でＣＨＯＰ単独またはＨＣＤ１２２単独で治療されたかもしれないヒト患者における抗腫瘍療法を改善するために使用できることを示唆している。
【０１９４】
これらのデータはまた、Ｈ−ＣＨＯＰ組み合わせによる処置は、リツキシマブ単独またはリツキシマブおよびＣＨＯＰの組み合わせ（Ｒ−ＣＨＯＰ）による処置よりも大きな抗腫瘍効能をもたらすことを示している。したがって、これらのデータは、Ｈ−ＣＨＯＰ組み合わせは、例えば、治療効果の増強をもたらすか、またはＣＨＯＰ投薬量を減少させて、ＣＨＯＰに関連した副作用の１種または複数を軽減もしくは除去することによって、その他の方法でリツキシマブ単独またはＲ−ＣＨＯＰで治療されたかもしれないヒト患者における抗腫瘍療法を改善するために使用できることを示唆している。
【０１９５】
（実施例２）
ＨＣＤ１２２は、ＣＨＯＰに対するＣＤ４０Ｌ誘導性抵抗性を反転させる
Ｈ−ＣＨＯＰ組み合わせがインビボにおいて予期せぬ強力な抗腫瘍効能をもたらす機構を解明するために実験を実施した。ＳＵ−ＤＨＬ−４細胞を、（ｉ）陰性対照ｈｕＩｇＧ１抗体、（ｉｉ）ＨＣＤ１２２、（ｉｉｉ）ｈｕＩＧＧ１およびＣＤ４０Ｌまたは（ｉｖ）ＨＣＤ１２２およびＣＤ４０Ｌの存在下で培養した。ＳＵ−ＤＨＬ−４細胞を３００００細胞／ウェルで播種した。抗体は全て、１０μｇ／ｍｌで使用した。組換えヒト可溶性ＣＤ４０Ｌは、１μｇ／ｍｌで、リガンドエンハンサー２μｇ／ｍｌと共に使用した。細胞は全て、シトキサン１ｍｇ／ｋｇ、プレドニゾン１５μｇ／ｍｌ、ドキソルビシン２．５ｎｇ／ｍｌおよびビンクリスチン１ｐｇ／ｍｌで処置した。細胞は、３日間培養し、生存細胞の割合はＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏを使用して測定した。これらの実験の結果を図２に示す。これらのデータは、ＣＤ４０ＬはＳＵ−ＤＨＬ−４細胞に対するＣＨＯＰ細胞毒性の抵抗性を誘導するが、この抵抗性はＨＣＤ１２２を使用することによって克服でき、それによってＣＨＯＰに完全な細胞毒性効果を発揮させることを示している。これらのデータは、Ｈ−ＣＨＯＰの予期せぬ強力な抗腫瘍効能を説明する一助となる。
【０１９６】
（実施例３）
ＮＦｋＢの活性化に対するＨＣＤ１２２の効果
ＲＬおよびＳＵ−ＤＨＬ−４細胞を、ＣＤ４０Ｌで０、１０、３０および９０分間刺激し、ウェスタンブロットを実施した（図３）。ｐ６５のリン酸化は、ＲＬまたはＳＵ−ＤＨＬ−４細胞がＣＤ４０Ｌで刺激されている数分内に誘導されたことが見出された。このリン酸化は、これらの細胞株で少なくとも９０分間持続した。さらに、ＨＣＤ１２２の存在下ではＣＤ４０で刺激されたＲＬおよびＳＵ−ＤＨＬ−４細胞の両方におけるｐ６５リン酸化は、大きく阻害されることが見出された（図３）。これらのデータは、ＣＤ４０Ｌによって誘導されたＮＦ−ｋＢ活性化はＲＬおよびＳＵ−ＤＨＬ−４細胞の両方でＨＣＤ１２２によって完全に遮断されることを示している。細胞におけるＮＦ−ｋＢ活性化の下方制御は、ＣＨＯＰ細胞毒性に対して細胞を感作することができる（Ｃｈｕａｎｇら（２００２年）Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ６３巻：１７０９〜１７１６頁、Ｃｈｅｎｇら（２０００年）Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  １９巻：４９３６〜４９４０頁）。したがって、ＨＣＤ１２２がＮＦ−ｋＢ活性化を下方制御することを示しているこれらのデータは、ＣＨＯＰ細胞毒性に対するＣＤ４０Ｌ誘導性の抵抗性がなぜＨＣＤ１２２を使用して克服され得るかを説明する一助となる。
【０１９７】
（実施例４）
細胞表面接着分子に対するＨＣＤ１２２の影響
Ｈ−ＣＨＯＰ組み合わせがインビボにおいて予期せぬ強力な抗腫瘍効能をもたらす機構をさらに解明するために、さらに実験を実施した。Ｂ細胞が凝集し、それらの微小環境と相互作用する能力は、治療薬の効能に影響を及ぼし得る。したがって、ＲＬおよびＳＵ−ＤＨＬ−４細胞株における接着分子の発現に対するＨＣＤ１２２の効果を調べた。これらの試験で、ＨＣＤ１２２は、ＲＬおよびＳＵ−ＤＨＬ−４細胞株両方においてＣＤ５４、ＣＤ８６およびＣＤ９５のＣＤ４０Ｌ誘導性の発現を阻害することが見出された。ＲＬ細胞株の結果を図４に示す。ＳＵ−ＤＨＬ−４細胞株の結果を図５に示す。
【０１９８】
ＳＵ−ＤＨＬ−４細胞のＣＤ４０Ｌ誘導性の凝集に対するＨＣＤ１２２の効果は顕微鏡によって分析し、ＨＣＤ１２２がこの凝集を阻害することを見出した。これらの実験の結果を図６Ａから６Ｄに示す。図６Ａは、ｈｕＩｇＧ１で処理した細胞を示す。図６Ｂは、ＨＣＤ１２２で処理した細胞を示す。図６Ｃは、ｈｕＩｇＧ１およびＣＤ４０Ｌで処理した細胞を示す。図６Ｄは、ＨＣＤ１２２およびＣＤ４０Ｌで処理した細胞を示す。
【０１９９】
これらのデータは、ＣＤ４０Ｌが、インビボにおいてＢ細胞の凝集を引き起こすことによってＣＨＯＰなどの治療薬の効能を低減することができ、この凝集はＨＣＤ１２２を使用して阻害できることを示唆している。これらのデータは、なぜＨ−ＣＨＯＰ組み合わせがインビボにおいて予期せぬ強力な抗腫瘍効能をもたらすかをさらに説明するための一助となる。
【０２００】
本明細書で記載した本発明の多くの変更およびその他の実施形態は、前記の説明および添付の図面に提示した教示の利益を得る、これらの発明が関係する当業者には思いつくであろう。したがって、本発明は開示した特定の実施形態に限定されるものではなく、変更およびその他の実施形態は実施形態のリストの範囲および添付の特許請求の範囲内に含まれるものとする。特別な用語を本明細書で使用したが、一般的な説明的な意味でのみ使用されており、限定を意味するものではない。
【０２０１】
本明細書で引用した全出版物および特許出願は完全に、各個々の出版物または特許出願が具体的かつ個々に参考として組み込まれることを示されているように、同程度に参考として組み込まれる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【配列表】
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