(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
豚における、ＰＣＶ２とＰＣＶ２以外の１又は複数のウイルス性、細菌性及び／又は真菌性の病原体とによって引き起こされる随伴感染を減少させる方法であって、前記豚に有効量のＰＣＶ２のＯＲＦ２タンパク質と１又は複数の獣医学的に許容できる担体とからなる免疫原性組成物を投与する工程を有することを特徴とする方法。
【請求項２】
前記１又は複数の獣医学的に許容できる担体が、溶媒、分散媒、被覆剤、補助剤、安定剤、希釈剤、防腐剤、抗細菌及び抗真菌剤、等張剤、並びに吸着遅延剤からなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記随伴感染が、ウイルス性病原体によって引き起こされることを特徴とする、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
前記随伴感染が、ＰＲＲＳウイルスによって引き起こされることを特徴とする、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記随伴感染が、細菌性病原体によって引き起こされることを特徴とする、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項６】
前記随伴感染が、腸内病原体によって引き起こされることを特徴とする、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項７】
前記随伴感染が、アクチノバチルス・プルロニューモニア、ヘモフィルス・パラスイス、マイコプラズマ・ハイオリニス、マイコプラズマ・ハイオニューモニエ、パスツレラ・ムルトシダ、サルモネラ属、ストレプトコッカス・スイスによって引き起こされることを特徴とする、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項８】
非ワクチン接種のコントロール群と比較して、前記随伴感染の割合が、１又は複数の前記感染に関して１０％より多く減少することを特徴とする、請求項１〜７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
ＰＣＶ２とＰＣＶ２以外の１又は複数のウイルス性、細菌性及び／又は真菌性の病原体とによって引き起こされる随伴感染に対する豚の抵抗性を向上させる方法であって、前記豚に有効量のＰＣＶ２のＯＲＦ２タンパク質と１又は複数の獣医学的に許容できる担体とからなる免疫原性組成物を投与する工程を有することを特徴とする方法。
【請求項１０】
前記１又は複数の獣医学的に許容できる担体が、溶媒、分散媒、被覆剤、補助剤、安定剤、希釈剤、防腐剤、抗細菌及び抗真菌剤、等張剤、並びに吸着遅延剤からなる群から選択されることを特徴とする、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記随伴感染が、ウイルス性病原体によって引き起こされることを特徴とする、請求項９又は１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記随伴感染が、ＰＲＲＳウイルスによって引き起こされることを特徴とする、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記随伴感染が、細菌性病原体によって引き起こされることを特徴とする、請求項９又は１０に記載の方法。
【請求項１４】
前記随伴感染が、腸内病原体によって引き起こされることを特徴とする、請求項９又は１０に記載の方法。
【請求項１５】
前記随伴感染が、アクチノバチルス・プルロニューモニア、ヘモフィルス・パラスイス、マイコプラズマ・ハイオリニス、マイコプラズマ・ハイオニューモニエ、パスツレラ・ムルトシダ、サルモネラ属、ストレプトコッカス・スイスによって引き起こされることを特徴とする、請求項９又は１０に記載の方法。
【請求項１６】
非ワクチン接種のコントロール群と比較して、前記随伴感染の割合が、１又は複数の前記感染に関して１０％より多く減少することを特徴とする、請求項９〜１５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１７】
豚におけるＰＣＶ２とＰＣＶ２以外の１又は複数のウイルス性、細菌性及び／又は真菌性の病原体とによって引き起こされる随伴感染を減少させる免疫原性組成物の製造のための、ＰＣＶ２のＯＲＦ２タンパク質と１又は複数の獣医学的に許容できる担体とからなる免疫原性組成物の使用。
【請求項１８】
前記１又は複数の獣医学的に許容できる担体が、溶媒、分散媒、被覆剤、補助剤、安定剤、希釈剤、防腐剤、抗細菌及び抗真菌剤、等張剤、並びに吸着遅延剤からなる群から選択されることを特徴とする、請求項１７に記載の使用。
【請求項１９】
前記随伴感染が、ウイルス性病原体によって引き起こされることを特徴とする、請求項１７又は１８に記載の使用。
【請求項２０】
前記随伴感染が、ＰＲＲＳウイルスによって引き起こされることを特徴とする、請求項１９に記載の使用。
【請求項２１】
前記随伴感染が、細菌性病原体によって引き起こされることを特徴とする、請求項１７又は１８に記載の使用。
【請求項２２】
前記随伴感染が、アクチノバチルス・プルロニューモニア、ヘモフィルス・パラスイス、マイコプラズマ・ハイオリニス、マイコプラズマ・ハイオニューモニエ、パスツレラ・ムルトシダ、サルモネラ属、ストレプトコッカス・スイスによって引き起こされることを特徴とする、請求項１７又は１８に記載の使用。
【請求項２３】
非ワクチン接種のコントロール群と比較して、前記随伴感染の割合が、１又は複数の前記感染に関して１０％を超えて減少することを特徴とする、請求項１７〜２２のいずれか１項に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
［配列表］
本願は、紙形式及びコンピュータ可読形式で配列表を有しており、その教示及び内容は参照することにより本明細書に援用される。配列表は、ＷＯ０６／０７２０６５に包含されているものと同一である。
【０００２】
［技術分野］
本発明は獣医学の分野、特には感染症に関する。また、本発明は、ＰＣＶ−２以外の病原体によって引き起こされるブタの随伴感染を減少させる方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
１９９６年に、「離乳後多臓器消耗症候群（ＰＭＷＳ）」と言われる新興症が、それより５年前にカナダで観察されたケースに関連して報告された（Ｃｌａｒｋ  Ｔ．Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｐｏｓｔｗｅａｎｉｎｇ  Ｍｕｌｔｉｓｙｓｔｅｍｉｃ  Ｗａｓｔｉｎｇ  Ｓｙｎｄｒｏｍｅ  ｏｆ  Ｐｉｇｓ．１９９６  ｐ．２２−５）。豚サーコウイルス２型（ＰＣＶ２）が、この疾患症候群の必須原因病原体として特定された。これまでの間、ＰＭＷＳは、豚を生産する実質的に世界の全ての地域で観察されている（Ｂｒｕｎｂｏｒｇ  ＩＭ，Ｍｏｌｄａｌ  Ｔ，Ｊｏｎａｓｓｅｎ  ＣＭ．Ｊ  Ｖｉｒｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２００４  Ｄｅｃ  １５；１２２（２）：１７１−８）。５〜１５週齢の豚は、最も影響を受けることが多い（Ａｌｌａｎ  Ｇ，ＭｃＮｅｉｌｌｙ  Ｆ．ＰＭＷＳ／ＰＣＶＤ：Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ，Ｄｉｓｅａｓｅ  ａｎｄ  Ｃｏｎｔｒｏｌ：Ｗｈａｔ  ｄｏ  ｗｅ  ｋｎｏｗ？  ２００６  Ｊｕｌ  １６−２００６  Ｊｕｌ  １９；２００６；Ａｌｌａｎ  ＧＭ，ｅｔ  ａｌ．，Ｖｅｔ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ  ２００４  Ｆｅｂ  ４；９８（２）：１６５−８；Ｃｈａｅ  Ｃ．Ｖｅｔ  Ｊ  ２００４  Ｊｕｌ；１６８（１）：４１−９）。臨床兆候としては、死亡率の顕著な増加、消耗、リンパ節の全体的な拡大、呼吸兆候、時折の蒼白、黄疸、及び下痢が挙げられる（Ｃｈａｅ  Ｃ．Ｖｅｔ  Ｊ  ２００５  Ｍａｙ；１６９（３）：３２６−３６；Ｓｅｇａｌｅｓ  Ｊ．ｅｔ  ａｌ．Ｖｅｔ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ  ２００４  Ｆｅｂ  ４；９８（２）：１５１−８）。これらの臨床兆候は、ＰＭＷＳ単一感染した豚の群れの中で必ずしも全て同時に見られるわけではなく、臨床兆候の発現には異なる器官系を優先的に標的にする農場特異的な重病原体（ｃｏ−ｐａｔｈｏｇｅｎｓ）が間接的に関係しているように思われる。疫学的調査によると、豚繁殖器呼吸器症候群ウイルス（ＰＲＲＳＶ）、ブタインフルエンザウイルス（ＳＩＶ）、豚パルボウイルス（ＰＰＶ）、ヘモフィルス・パラスイス、アクチノバチルス・プルロニューモニア（ＡＰＰ）、ストレプトコッカス・スイス及びマイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｃｈａｅ  Ｃ．Ｖｅｔ  Ｊ  ２００４  Ｊｕｌ；１６８（１）：４１−９）が、当該疾患症候群と組み合わせて最もよく見られることが示されている。
【０００４】
ＰＭＷＳ産生には、免疫系の活性化が極めて重要なイベントであると仮定されている（（Ｋｒａｋｏｗｋａ  Ｓ．ｅｔ  ａｌ．，Ｖｅｔ  Ｐａｔｈｏｌ  ２００１  Ｊａｎ；３８（１）：３１−４２））。ＰＣＶ２単独での実験接種を行うと、臨床的無症候性感染とわずかな炎症の組織学的証拠をもたらすのみであるのに対し、ＰＣＶ２とＰＰＶ若しくはＰＲＲＳＶとの二重感染を行うと、より深刻な臨床兆候、肉眼的及び組織学的病変、より広範な拡大並びに感染組織内でのより高いＰＣＶ２ウイルス負荷をもたらす。ＰＲＲＳＶ又はＰＰＶ単独での感染では、同程度の臨床兆候又は病変はもたらされないため、これらの知見は主にＰＣＶ２によって引き起こされるように思われる（Ａｌｌａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｃｏｍｐ  Ｐａｔｈｏｌ  １９９９  Ｊｕｌ；１２１（１）：１−１１；Ａｌｌａｎ  ＧＭ，ｅｔ  ａｌ．，Ａｒｃｈ  Ｖｉｒｏｌ  ２０００；１４５（１１）：２４２１−９；Ｈａｒｍｓ  ＰＡ，  ｅｔ  ａｌ．，Ｖｅｔ  Ｐａｔｈｏｌ  ２００１  Ｓｅｐ；３８（５）：５２８−３９；Ｋｒａｋｏｗｋａ  Ｓ，ｅｔ  ａｌ．，Ｖｅｔ  Ｐａｔｈｏｌ  ２０００  Ｍａｙ；３７（３）：２５４−６３；Ｏｓｔａｎｅｌｌｏ  Ｆ，ｅｔ  ａｌ．，Ｖｅｔ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ  ２００５  Ｊｕｌ  １；１０８（３−４）：１７９−８６；Ｒｏｖｉｒａ  Ａ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｖｉｒｏｌ  ２００２  Ａｐｒ；７６（７）：３２３２−９）。また、豚を不完全フロイントアジュバント中のキーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ／ＩＣＦＡ）で免疫刺激した場合にも、他の重感染性病原体なしで似たような疾患重症度の上昇を達成することが出来た。（Ｋｒａｋｏｗｋａ  Ｓ．ｅｔ  ａｌ．，Ｖｅｔ  Ｐａｔｈｏｌ  ２００１  Ｊａｎ；３８（１）：３１−４２）。  
【０００５】
豚の免疫系におけるＰＣＶ２の影響は完全には知られていない。ＰＣＶ２複製の主要標的細胞は、単球／マクロファージ系列、及び、濾胞樹状細胞などの他の抗原含有細胞であることが報告されている（Ｄａｒｗｉｃｈ  Ｌ，ｅｔ  ａｌ．，Ａｒｃｈ  Ｖｉｒｏｌ  ２００４  Ｍａｙ；１４９（５）：８５７−７４）。ＰＣＶ２が、分裂細胞、マクロファージ及びＢリンパ球に感染し、該Ｂ細胞のアポトーシスを引き起こし、これによりリンパ組織にダメージを与え、甚大なリンパ球枯渇をもたらすことを示唆する研究もあった（Ｄａｒｗｉｃｈ  Ｌ，ｅｔ  ａｌ．，Ａｒｃｈ  Ｖｉｒｏｌ  ２００４  Ｍａｙ；１４９（５）：８５７−７４）。特に、ＰＭＷＳ感染の豚は、濾胞中心及び傍濾胞ゾーンの両方の組織球浸潤及びリンパ球枯渇、及びＰＣＶ２の存在と関連する兆候を示す（Ｓｅｇａｌｅｓ  Ｊ．ｅｔ  ａｌ．Ｖｅｔ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ  ２００４  Ｆｅｂ  ４；９８（２）：１５１−８；Ｄａｒｗｉｃｈ  Ｌ，ｅｔ  ａｌ．，Ａｒｃｈ  Ｖｉｒｏｌ  ２００４  Ｍａｙ；１４９（５）：８５７−７４）。これらの事実により、ＰＣＶ２感染は免疫抑制を引き起こすかもしれないということを提案するものもいた（Ｄａｒｗｉｃｈ  Ｌ，ｅｔ  ａｌ．，Ａｒｃｈ  Ｖｉｒｏｌ  ２００４  Ｍａｙ；１４９（５）：８５７−７４；Ｋｒａｋｏｗｋａ  Ｓ，ｅｔ  ａｌ．，Ｖｉｒａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２００２；１５（４）：５６７−８２）。
【０００６】
ＤＮＡワクチンに基づいたＰＣＶ２感染、特にはＰＭＷＳを治療するアプローチが、Ｕ．Ｓ．Ｐａｔｅｎｔ  Ｎｏ．６，７０３，０２３に記載されている。ＷＯ０３／０４９７０３には、病原性ＰＣＶ２株の免疫原性遺伝子がＰＣＶ１骨格の遺伝子に取って代わったＰＣＶ１骨格を含有する生存キメラワクチンの製造が記載されている。ＷＯ９９／１８２１４では、いくつかのＰＣＶ２株及び死滅ＰＣＶ２ワクチンの製造方法が提供されている。有効なＯＲＦ−２系のサブユニットワクチンがＷＯ０６／０７２０６５において報告されている。そのようなワクチンはいずれも、ＰＭＷＳに対する豚のワクチン接種／治療に用いることを目的とする。
【０００７】
様々な豚関連病原体によって引き起こされる随伴感染（混合感染）の発症におけるＰＣＶ２感染の潜在的影響について述べた報告は存在しない。特に、アクチノバチルス・プルロニューモニア、ヘモフィルス・パラスイス、マイコプラズマ・ハイオリニス、パスツレラ・ムルトシダ、ＰＲＲＳＶ、サルモネラ属、ＳＩＶ又はストレプトコッカス・スイスなどの特定の病原体に対するＰＣＶ２の潜在的影響について述べた報告は存在しない。また、別のＰＣＶ２ワクチンが短期間公知であるとしても、豚におけるＰＣＶ２以外の随伴感染におけるそれらの影響は未だ知られていない。
【図面の簡単な説明】
【０００８】
【図１】ＰＣＶ２ウイルス血症の分析結果。前もって選択されたプラセボ治療の動物（図１Ａ；ｎ＝１１０）とワクチン接種した動物（図１Ｂ；ｎ＝１１０）の血液サンプルを、図に示した時点で回収した。定量的ＰＣＲの結果に基づいて、動物を亜臨床的ウイルス負荷（１０4〜１０6ｇＥ／ｍＬ）を有する動物と臨床的関連性のあるウイルス負荷（＞１０6ｇＥ／ｍＬ）を有する動物に分類した。白色のバーは１サンプリング日当たりの亜臨床的ウイルス負荷を有する動物の割合を表し、黒色のバーは１サンプリング日当たりの臨床的関連性のあるウイルス負荷を有する動物の割合を示す。
【発明の概要】
【０００９】
本発明は、ＰＣＶ２ワクチンが豚又は豚の群れにおけるＰＣＶ２感染の割合だけではなく、サーコウイルス以外、特にはＰＣＶ２以外の病原体によって引き起こされる随伴感染の割合をも減少させるという驚くべき知見に基づく。
【００１０】
従って、ある態様によると、本発明は、豚若しくは豚の群れにおける、ＰＣＶ２以外の１又は複数の病原体によって引き起こされる随伴感染の割合を減少させる方法であって、前記豚に有効量のＰＣＶ２抗原又はＰＣＶ２抗原を有する免疫原性組成物を投与する工程を有することを特徴とする方法に関する。
【００１１】
本明細書で用いられる「随伴感染」とは、サーコウイルス以外、特にはＰＣＶ２以外の、ウイルス性、細菌性、真菌性、又は寄生虫性（ｗｏｒｍ）の病原体によって引き起こされる豚の感染を意味するが、これらに限定されるものではないものとする。本明細書で用いられる「随伴病原体」とは、サーコウイルス以外、特にはＰＣＶ２以外の豚病原体を意味するが、これらに限定されるものではない。従って他の態様によると、本発明は、豚若しくは豚の群れにおける、サーコウイルス以外、特にはＰＣＶ２以外の、１又は複数のウイルス性、細菌性、真菌性又は寄生虫性の病原体によって引き起こされる随伴感染の割合を減少させる方法であって、前記豚に有効量のＰＣＶ２抗原又はＰＣＶ２抗原を有する免疫原性組成物を投与する工程を有することを特徴とする方法を提供する。好ましくは、前記随伴感染は、１又は複数の細菌性、ウイルス性若しくは真菌性の病原体、又はこれらの組み合わせによって引き起こされる。さらに好ましくは、前記随伴感染は、１又は複数の細菌性若しくはウイルス性の病原体、又はこれらの組み合わせによって引き起こされる。
【００１２】
本発明の他の態様によれば、「随伴感染」とは、サーコウイルス以外、特にはＰＣＶ２以外の１又は複数の随伴病原体に感染した豚が、ＰＣＶ２に重感染することをも意味する。従って他の態様によると、本発明は、ＰＣＶ２に重感染した豚又は豚の群れにおける、サーコウイルス以外、特にはＰＣＶ２以外の１又は複数の病原体によって引き起こされる随伴感染の割合を減少させる方法であって、前記豚に有効量のＰＣＶ２抗原又はＰＣＶ２抗原を有する免疫原性組成物を投与する工程を有する方法を提供する。好ましくは、前記随伴感染は、サーコウイルス以外、特にはＰＣＶ２以外の、１又は複数のウイルス性、細菌性、真菌性、又は寄生虫性の病原体によって引き起こされる。
【００１３】
本明細書で用いられる「ＰＣＶ２に重感染した」とは、あらゆる形のＰＣＶ２への重感染を意味するが、これらに限定されるものではなく、サーコウイルス以外、特にはＰＣＶ２以外の病原体に感染する前、感染と同時、又は感染の後にＰＣＶ２感染が起こることを意味する。また、「ＰＣＶ２に重感染した」とは、亜臨床経過過程、臨床的に明らかな経過過程、激症経過過程、及び慢性経過過程のＰＣＶ２感染が含まれる。この文脈において、明らかな経過過程はＰＭＷＳには限られず、豚呼吸器複合症（ＰＲＤＣ）、豚皮膚炎腎症症候群（ＰＤＮＳ）、生殖障害、肉芽腫性腸炎、潜在的、先天性けいれん症（ｃｏｎｇｅｎｉｔａｌ  ｔｒｅｍｏｒ）（ＣＴ−Ａｌｌ）及び周産期心筋症（ｐｅｒｉｎａｔａｌ  ｍｙｏｃａｒｄｉｔｉｓ）などの、あらゆる他の臨床的に明らかなＰＣＶ２感染をも含む（Ｃｈａｅ，Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ  Ｊ．，２００５；１６９：３２６−３３６）。
【００１４】
しかしながら、「随伴感染」とは、必ずしも豚又は豚の群れがＰＣＶ２に重感染することを意味するものではない。また、「随伴感染」とは、豚又は豚の群れがＰＣＶ２にさらされている場合、又はＰＣＶ２に感染するリスクが存在する場合をも意味するが、これらに限定されるものではない。従って他の態様によると、本発明は、ＰＣＶ２にさらされた豚又は豚の群れ、又はＰＣＶ２に感染する危険の高い若しくは感染しやすい豚又は豚の群れにおける、サーコウイルス以外、特にはＰＣＶ２以外の１又は複数の病原体によって引き起こされる随伴感染の割合を減少させる方法であって、前記豚に有効量のＰＣＶ２抗原又はＰＣＶ２抗原を有する免疫原性組成物を投与する工程を有することを特徴とする方法を提供する。好ましくは、前記随伴感染は、サーコウイルス以外、特にはＰＣＶ２以外の、１又は複数のウイルス性、細菌性、真菌性、又は寄生虫性の病原体によって引き起こされる。
【００１５】
「随伴感染の割合を減少させる」とは、非ワクチン接種のコントロール群と比較して、サーコウイルス以外の病原体に感染した豚の数が、前記病原体に関して１０％を超えて、好ましくは２０％を超えて、より好ましくは３０％を超えて、さらにより好ましくは４０％を超えて、さらにより好ましくは５０％を超えて、さらにより好ましくは６０％を超えて、さらにより好ましくは８０％を超えて、さらにより好ましくは１００％を超えて、減少することを意味するものとする。この文脈において、「非ワクチン接種のコントロール群」とは、有効量のＰＣＶ２抗原又はＰＣＶ２抗原を有する免疫原性組成物が投与されていない豚のグループを意味するものとする。従って、他の態様によれば、本発明は、豚又は豚の群れにおける、ＰＣＶ２以外の病原体によって引き起こされる随伴感染の割合を減少させる方法であって、前記豚に有効量のＰＣＶ２抗原又はＰＣＶ２抗原を含む免疫原性組成物を投与する工程を有し、且つ、非ワクチン接種のコントロール群と比較して、サーコウイルス以外の前記病原体に感染した豚の数が、前記病原体に関して１０％を超えて、好ましくは２０％を超えて、より好ましくは３０％を超えて、さらにより好ましくは４０％を超えて、さらにより好ましくは５０％を超えて、さらにより好ましくは６０％を超えて、さらにより好ましくは８０％を超えて、さらにより好ましくは１００％を超えて減少することを特徴とする方法をも提供する。前記随伴感染は、サーコウイルス以外、特にはＰＣＶ２以外の、ウイルス性、細菌性、又は真菌性の病原体によって引き起こされることが好ましい。前記豚又は豚の群れは、上記で定義するようにＰＣＶ２に重感染しているか、ＰＣＶ２にさらされているか、又は、ＰＣＶ２に感染する危険にさらされ若しくは感染しやすいことがより好ましい。
【００１６】
サーコウイルス以外、特にはＰＣＶ２以外のウイルス性、細菌性、又は真菌性病原体によって引き起こされる随伴感染は、感染動物において腸内、呼吸器官、生殖器官、中枢神経、運動器官の症状を引き起こしてもよい。各病原体によって引き起こされるこれらの臨床症状のいずれの発生も減少し得る。従って他の態様によると、本発明は、豚又は豚の群れにおける、ＰＣＶ２以外の１又は複数の腸内、呼吸器官、生殖器官、中枢神経、又は運動器官の病原体によって引き起こされる随伴感染の割合を減少させる方法であって、前記豚に有効量のＰＣＶ２抗原又はＰＣＶ２抗原を有する免疫原性組成物を投与する工程を有することを特徴とする方法に関する。前記豚は、上記で定義するようにＰＣＶ２に重感染しているか、ＰＣＶ２にさらされているか、又は、ＰＣＶ２に感染する危険にさらされ若しくは感染しやすいことが好ましい。非ワクチン接種のコントロール群と比較すると、サーコウイルス以外の腸内、呼吸器官、中枢神経又は運動器官の病原体に感染した豚の数が、前記腸内、呼吸器官、中枢神経又は運動器官の病原体に関して、１０％を超えて、好ましくは２０％を超えて、より好ましくは３０％を超えて、さらにより好ましくは４０％を超えて、さらにより好ましくは５０％を超えて、さらにより好ましくは６０％を超えて、さらにより好ましくは８０％を超えて、さらにより好ましくは１００％を超えて減少することがより好ましい。
【００１７】
腸内病原体は、例えば、ローソニア・イントラセルラリス（Ｌａｗｓｏｎｉａ  ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｉｓ）、エシェリキア・コーライ（Ｅ．ｃｏｌｉ）、ストレプトコッカス・スイス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｓｕｉｓ）、クロストリジウム属（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｓｐｐ．）、サルモネラ属（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｓｐｐ．）、ブラキスピラ属（Ｂｒａｃｈｙｓｐｉｒａ  ｓｐｐ．）、ロタウイルス（ｒｏｔａｖｉｒｕｓｅｓ）、又はコロナウイルス（ｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓｅｓ）である。呼吸器官の病原体は、例えば、ＰＲＲＳＶ、マイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、マイコプラズマ・ハイオリニス（Ｍ．ｈｙｏｒｈｉｎｉｓ）である。生殖器官の病原体は、例えば、レプトスピラ属（Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ  ｓｐｐ．）、ＰＲＲＳＶ、クラミジア属（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  ｓｐｐ．）である。運動器官の病原体は、例えば、ストレプトコッカス・スイス（Ｓ．ｓｕｉｓ）、マイコプラズマ・ハイオリニス（Ｍ．ｈｙｏｒｈｉｎｉｓ）、エリシペロスリクス・ルシオパシエ（Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｒｉｘ  ｒｕｓｉｏｐａｔｈｉａｅ）である。中枢神経系の病原体は、例えば、仮性狂犬病ウイルス（Ｐｓｅｕｄｏｒａｂｉｅｓ  ｖｉｒｕｓ）、ストレプトコッカス・スイス（Ｓ．ｓｕｉｓ）、ヘモフィルス属（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｓｐ．）である。
【００１８】
一般的に「ＰＣＶ２以外の病原体」とは、以下からなる群から選択される１又は複数の病原体を意味するが、これらに限定されるものではない：アクチノバチルス・スイス（Ａｃｔｉｎｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｉｓ）；アルカノバクテリウム・ピオゲネス（Ａｒｃａｎｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ）；アクチノバチルス・プルロニューモニア（Ａｃｔｉｎｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐｌｅｕｒｏｐｎｅｕｍｏｎｉａ）（ＡＰＰ）；アフリカブタ熱ウイルス（Ａｆｒｉｃａｎ  ｓｗｉｎｅ  ｆｅｖｅｒ  ｖｉｒｕｓ）；アスペルギルス属；アストロウイルス；アスカリス・スウム（Ａｓｃａｒｉｓ  ｓｕｕｍ）；ブラストシスティス属（Ｂｌａｓｔｏｃｙｓｔｉｓ  ｓｐｐ．）；ボルデテラ・ブロンキセプティカ；ブラキスピラ属（Ｂｒａｃｈｙｓｐｉｒａ  ｓｐｐ．）、ブラキスピラ・ヒオディセンテリア（Ｂ．ｈｙｏｄｙｓｅｎｔｅｒｉａｅ）、ブラキスピラ・ピロシコリ（Ｂ．ｐｉｌｏｓｉｃｏｌｉ）；ブルセラ・スイス（Ｂｒｕｃｅｌｌａ  ｓｕｉｓ）、ブルセラ・スイス次亜種（ｂｉｏｖａｒｓ）１、２及び３；カンジダ属（Ｃａｎｄｉｄａ  ｓｐｐ．）；古典的ブタ熱ウイルス（Ｃｌａｓｓｉｃａｌ  ｓｗｉｎｅ  ｆｅｖｅｒ  ｖｉｒｕｓ）；クロストリジウム属、特にクロストリジウム・ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）、クロストリジウム・パーフリンゲンス（Ｃ．ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）Ａ、Ｂ及びＣ型、クロストリジウム・ノビイ（Ｃ．ｎｏｖｙｉ）、クロストリジウム・セプティカム（Ｃ．ｓｅｐｔｉｃｕｍ）、クロストリジウム・ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）、クロストリジウム・テタニ（Ｃ．ｔｅｔａｎｉ）；クラミジア属（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  ｓｐｐ．）、クリプトスポリジウム属（Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ  ｓｐｐ．）、脳心筋炎ウイルス（Ｅｎｃｅｐｈａｌｏｍｙｏｃａｒｄｉｔｉｓ  ｖｉｒｕｓ）；エペリスロゾーノシス・スイス（Ｅｐｅｒｙｔｈｒｏｚｏｏｎｏｓｉｓ  ｓｕｉｓ）；エリシペロスリクス・ルシオパシエ（Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｈｒｉｘ  ｒｕｈｓｉｏｐａｔｈｉａｅ）；エシェリキア・コーライ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）；フザリウム属（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｓｐｐ．）；ヘモフィルス・パラスイス（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｐａｒａｓｕｉｓ）；ブタ血球凝集性脳脊髄炎ウイルス（Ｈｅｍａｇｇｌｕｔｉｎａｔｉｎｇ  ｅｎｃｅｐｈａｌｏｍｙｅｌｉｔｉｓ  ｖｉｒｕｓ）；Ｅ型肝炎ウイルス（Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｅ  ｖｉｒｕｓ）；日本脳炎ウイルス（Ｊａｐａｎｅｓｅ  ｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｉｓ  ｖｉｒｕｓ）；ヒオストロンギルス・ルビドゥス（Ｈｙｏｓｔｒｏｎｇｙｌｕｓ  ｒｕｂｉｄｕｓ）；ローソニア・イントラセルラリス（Ｌａｗｓｏｎｉａ  ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｉｓ）；レプトスピラ属（Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ  ｓｐｐ．）、レプトスピラ・オーストラリス（Ｌ．ａｕｓｔｒａｌｉｓ）、レプトスピラ・カニコーラ（Ｌ．ｃａｎｉｃｏｌａ）、レプトスピラ・グリポティフォーサ（Ｌ．ｇｒｉｐｐｏｔｙｐｈｏｓａ）、レプトスピラ・ポモナ（Ｌ．ｐｏｍｏｎａ）、レプトスピラ・イクテロヘモルハジカ（Ｌ．ｉｃｔｅｒｏｈａｅｍｏｒｒｈａｇｉｃａｅ）、レプトスピラ・インテロガンス（Ｌ．ｉｎｔｅ���ｒｏｇａｎｓ）、レプトスピラ・タラッソビ（Ｌ．ｔａｒａｓｓｏｖｉ）、レプトスピラ・ハージョ（Ｌ．ｈａｒｄｊｏ）、レプトスピラ・セジュロ（Ｌ．ｓｅｊｒｏｅ）、レプトスピラ・ブラティスラヴァ（Ｌ．ｂｒａｔｉｓｌａｖａ）；マンヘミア・ヘモリチカ（Ｍａｎｎｈｅｉｍｉａ  ｈａｅｍｏｌｙｔｉｃａ）；メナングルウイルス（Ｍｅｎａｎｇｌｅ  ｖｉｒｕｓ）；マイコバクテリウム属（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｓｐｐ．）、マイコバクテリウム・アビウム（Ｍ．ａｖｉｕｍ）、マイコバクテリウム・イントラセルラーレ（Ｍ．ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｅ）、マイコバクテリウム・ツベルクローシス（Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）；マイコプラズマ属（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｓｐｐ．）、マイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍ．ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、マイコプラズマ・ハイオリニス（Ｍ．ｈｙｏｒｈｉｎｉｓ）；ニパウイルス（Ｎｉｐａｈ  ｖｉｒｕｓ）；エソファゴストム属（Ｏｅｓｏｐｈａｇｏｓｔｕｍ  ｓｐｐ．）、エソファゴストム・デンタタム（Ｏｅｓｏｐｈａｇｏｓｔｕｍ  ｄｅｎｔａｔｕｍ）、エソファゴストム・クアドロスピヌラタム（Ｏｅｓｏｐｈａｇｏｓｔｕｍ  ｑｕａｄｒｏｓｐｉｎｕｌａｔｕｍ）；パスツレラ属（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ  ｓｐｐ．）、パスツレラ・ムルトシダ（Ｐ．ｍｕｌｔｏｃｉｄａ）；ペニシリウム属（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｓｐｐ．）；豚アデノウイルス（Ｐｏｒｃｉｎｅ  ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ）；豚サイトメガロウイルス（Ｐｏｒｃｉｎｅ  ｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓ）；ブタ腸内カリシウイルス（Ｐｏｒｃｉｎｅ  ｅｎｔｅｒｉｃ  ｃａｌｉｃｉｖｉｒｕｓｅｓ）；ブタ腸内ピコルナウイルス（Ｐｏｒｃｉｎｅ  ｅｎｔｅｒｉｃ  ｐｉｃｏｒｎａｖｉｒｕｓｅｓ）；豚パルボウイルス（Ｐｏｒｃｉｎｅ  ｐａｒｖｏｖｉｒｕｓ）；豚呼吸器コロナウイルス（Ｐｏｒｃｉｎｅ  ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ  ｃｏｒｏｎａ  ｖｉｒｕｓ）；ＰＲＲＳウイルス（ＰＲＲＳ  ｖｉｒｕｓ）；仮性狂犬病ウイルス（Ｐｓｅｕｄｏｒａｂｉｅｓ  ｖｉｒｕｓ）；レオウイルス（Ｒｅｏｖｉｒｕｓ）；ロタウイルス（Ｒｏｔａｖｉｒｕｓ）；ルブラウイルス（Ｒｕｂｕｌａｖｉｒｕｓ）；サルモネラ属（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｓｐｐ．）、サルモネラ・チフィリウム（Ｓ．ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）、サルモネラ・コレラエスイス（Ｓ．ｃｈｏｌｅｒａｅｓｕｉｓ）、サルモネラ・ダブリン（Ｓ．ｄｕｂｌｉｎ）；ヒゼンダニ属（Ｓａｒｃｏｐｔｅｓ  ｓｐｐ．）；スタフィロコッカス・ハイカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｈｙｉｃｕｓ）；ストレプトコッカス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｓｐｐ．），ストレプトコッカス・スイス（Ｓ．ｓｕｉｓ）、ストレプトコッカス・ポルシナス（Ｓ．ｐｏｒｃｉｎｕｓ）、ストレプトコッカス・ディスガラクティエ（Ｓ．ｄｙｓｇａｌａｃｔｉａｅ）、ストレプトコッカス・ディスガラクティエ亜種エキシミリス（Ｓ．ｄｙｓｇａｌａｃｔｉａｅ  ｓｕｂｓｐ．  ｅｑｕｉｓｉｍｉｌｉｓ）；糞線虫（Ｓｔｒｏｎｇｙｌｏｉｄｅｓ  ｒａｎｓｏｍｉ）；ブタヘルペスウイルス（Ｓｗｉｎｅ  ｈｅｒｐｅｓ  ｖｉｒｕｓ）；ブタインフルエンザウイルス（Ｓｗｉｎｅ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａ  ｖｉｒ���ｓ）；豚ポックスウイルス（Ｓｗｉｎｅ  ｐｏｘ  ｖｉｒｕｓ）；ブタ伝染性胃腸炎ウイルス（Ｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｂｌｅ  ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｉｔｉｓ  ｖｉｒｕｓ）；トリチュリス属（Ｔｒｉｃｈｕｒｉｓ  ｓｐｐ．）；テニア属（Ｔａｅｎｉａ  ｓｐｐ．）、トリキネラ・スピラリス（Ｔｒｉｃｈｉｎｅｌｌａ  ｓｐｉｒａｌｉｓ）；水疱性口内炎ウイルス（Ｖｅｓｉｃｕｌａｒ  ｓｔｏｍａｔｉｔｉｓ  ｖｉｒｕｓ）；ブタ水疱疹ウイルス（Ｖｉｒｕｓ  ｏｆ  ｖｅｓｉｃｕｌａｒ  ｅｘａｎｔｈｅｍａ  ｏｆ  ｓｗｉｎｅ）；ウェストナイルウイルス（Ｗｅｓｔ  Ｎｉｌｅ  ｖｉｒｕｓ）；  又はエルシニア属（Ｙｅｒｓｉｎａ  ｓｐｐ．）、エルシニア・シュードツベルクローシス（Ｙ．ｐｓｅｕｄｏｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）、エルシニア・エンテロコリティカ（Ｙ．ｅｎｔｅｒｏｃｏｌｉｔｉｃａ）。
【００１９】
従って他の態様によると、本発明は、豚又は豚の群れにおけるＰＣＶ２以外の１又は複数の病原体によって引き起こされる随伴感染の割合を減少させる方法であって、前記豚に有効量のＰＣＶ２抗原又はＰＣＶ２抗原を有する免疫原性組成物を投与する工程を有し、且つ、前記随伴感染を引き起こす前記病原体が以下からなる群から選択されることを特徴とする方法に関する：アクチノバチルス・スイス；アルカノバクテリウム・ピオゲネス；アクチノバチルス・プルロニューモニア（ＡＰＰ）；アフリカブタ熱ウイルス；アスペルギルス属；アストロウイルス；アスカリス・スウム；ブラストシスティス属；ボルデテラ・ブロンキセプティカ；ブラキスピラ属、ブラキスピラ・ヒオディセンテリア、ブラキスピラ・ピロシコリ；ブルセラ・スイス、ブルセラ・スイス次亜種１、２及び３；カンジダ属；古典的ブタ熱ウイルス；クロストリジウム属、特にクロストリジウム・ディフィシル、クロストリジウム・パーフリンゲンスＡ、Ｂ及びＣ型、クロストリジウム・ノビイ、クロストリジウム・セプティカム、クロストリジウム・ディフィシル、クロストリジウム・テタニ；クラミジア属、クリプトスポリジウム属、脳心筋炎ウイルス；エペリスロゾーノシス・スイス；エリシペロスリクス・ルシオパシエ；エシェリキア・コーライ；フザリウム属；ヘモフィルス・パラスイス；ブタ血球凝集性脳脊髄炎ウイルス；Ｅ型肝炎ウイルス；日本脳炎ウイルス；ヒオストロンギルス・ルビドゥス；ローソニア・イントラセルラリス；レプトスピラ属、レプトスピラ・オーストラリス、レプトスピラ・カニコーラ、レプトスピラ・グリポティフォーサ、レプトスピラ・ポモナ、レプトスピラ・イクテロヘモルハジカ、レプトスピラ・インテロガンス、レプトスピラ・タラッソビ、レプトスピラ・ハージョ、レプトスピラ・セジュロ、レプトスピラ・ブラティスラヴァ；マンヘミア・ヘモリチカ；メナングルウイルス；マイコバクテリウム属、マイコバクテリウム・アビウム、マイコバクテリウム・イントラセルラーレ、マイコバクテリウム・ツベルクローシス；マイコプラズマ属、マイコプラズマ・ハイオニューモニエ、マイコプラズマ・ハイオリニス；ニパウイルス；エソファゴストム属、エソファゴストム・デンタタム、エソファゴストム・クアドロスピヌラタム；パスツレラ属、パスツレラ・ムルトシダ；ペニシリウム属；豚アデノウイルス；豚サイトメガロウイルス；ブタ腸内カリシウイルス；ブタ腸内ピコルナウイルス；豚パルボウイルス；豚呼吸器コロナウイルス；ＰＲＲＳウイルス；仮性狂犬病ウイルス；レオウイルス；ロタウイルス；ルブラウイルス；サルモネラ属、サルモネラ・チフィリウム、サルモネラ・コレラエスイス、サルモネラ・ダブリン；ヒゼンダニ属；スタフィロコッカス・ハイカス；ストレプトコッカス属、ストレプトコッカス・スイス、ストレプトコッカス・ポルシナス、ストレプトコッカス・ディスガラクティエ、ストレプトコッカス・ディスガラクティエ亜種エキシミリス；糞線虫；ブタヘルペスウイルス；ブタインフルエンザウイルス；豚ポックスウイルス；ブタ伝染性胃腸炎ウイルス；トリチュリス属；テニア属、トリキネラ・スピラリス；水疱性口内炎ウイルス；ブタ水疱疹ウイルス；ウェストナイルウイルス；又はエルシニア属、エルシニア・シュードツベルクローシス、エルシニア・エンテロコリティカ。
【００２０】
前記随伴感染は以下からなる群から選択される１又は複数の病原体により引き起こされることが好ましい：アクチノバチルス・プルロニューモニア；ヘモフィルス・パラスイス；マイコプラズマ・ハイオリニス（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｈｙｒｈｉｎｉｓ）；パスツレラ・ムルトシダ；ＰＲＲＳ；サルモネラ属及びストレプトコッカス・スイス。前記随伴感染は以下からなる群から選択される１又は複数の病原体により引き起こされることが最も好ましい：アクチノバチルス・プルロニューモニア；ヘモフィルス・パラスイス；マイコプラズマ・ハイオリニス（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｈｙｒｈｉｎｉｓ）；パスツレラ・ムルトシダ；ＰＲＲＳ；サルモネラ属及びストレプトコッカス・スイス。前記随伴感染は以下からなる群から選択される１又は複数の病原体により引き起こされることがより好ましい：アクチノバチルス・プルロニューモニア；マイコプラズマ・ハイオリニス及びＰＲＲＳ。中でも、マイコプラズマ・ハイオリニス及び／又はＰＲＲＳにより引き起こされることが最も好ましい。
【００２１】
前記豚は、上記に定義するようにＰＣＶ２に重感染しているか、ＰＣＶ２にさらされているか、又は、ＰＣＶ２に感染する危険にさらされ若しくは感染しやすいことが好ましい。非ワクチン接種のコントロール群と比較すると、サーコウイルス以外の１又は複数の前記病原体に感染した豚の数は、前記病原体に関して１０％を超えて、好ましくは２０％を超えて、より好ましくは３０％を超えて、さらにより好ましくは４０％を超えて、さらにより好ましくは５０％を超えて、さらにより好ましくは６０％を超えて、さらにより好ましくは８０％を超えて、さらにより好ましくは１００％を超えて減少することがより好ましい。多重感染の場合には、上記減少率は各特定の病原体に言及する。例えば、多重感染の豚における随伴感染が１０％を超えて減少するとは、特定の病原体に関する感染率が１０％を超えて減少することを意味する。非ワクチン接種のコントロール群と比較して全病原体に関する感染率が１０％を超えて減少すること、又は、豚の群れに関して前記群れの豚の１０％未満が前記病原体の全てに感染することを必ずしも意味するものではない。
【００２２】
本明細書で用いられる「ＰＣＶ２抗原」とは、宿主中のＰＣＶ２に対する免疫応答を引き起こすアミノ酸配列を意味する。本明細書で用いられる抗原には、あらゆるＰＣＶ２タンパクの全長配列、そのアナログ、又はそれらの免疫原性断片が含まれる。
【００２３】
「免疫原性断片」とは、１又は複数のエピトープを有しそれ故宿主中の免疫応答を引き起こすタンパク質断片を意味する。そのような断片は、当技術分野でよく知られたさまざまなエピトープマッピング技術を用いて特定することができる。例えば、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．６６（Ｇｌｅｎｎ  Ｅ．Ｍｏｒｒｉｓ，Ｅｄ．，１９９６）Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，Ｎｅｗ  Ｊｅｒｓｅｙに記載のエピトープマッピングプロトコルを参照することが出来る。例えば、固体支持体上でタンパク質分子の一部分に相当する多数のペプチドを同時に合成し、該ペプチドを支持体に結合させたまま当該ペプチドと抗体とを反応させるなどの方法により、直線状エピトープを決定してもよい。そのような技術は当技術分野において公知であり、例えば、Ｕ．Ｓ．Ｐａｔｅｎｔ  Ｎｏ．４，７０８，８７１；Ｇｅｙｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９８４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８１：３９９８−４００２；Ｇｅｙｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９８６）Ｍｏｌｅｃ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２３：７０９−７１５に記載されている。同様に、立体構造エピトープは、例えばＸ線結晶学や二次元核磁気共鳴などにより、アミノ酸の空間配置を求めることによって容易に特定される。例えば、上記エピトープマッピングプロトコルを参照出来る。
【００２４】
ポリエピトープ、フランキング（ｆｌａｎｋｉｎｇ）エピトープ、及び、他の組み換え又は合成由来の抗原などの合成抗原も定義中に含まれる。例えば、Ｂｅｒｇｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９３）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２３：２７７７−２７８１；Ｂｅｒｇｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９６），Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５７：３２４２−３２４９；Ｓｕｈｒｂｉｅｒ，Ａ．（１９９７），Ｉｍｍｕｎｏｌ．ａｎｄ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．７５：４０２−４０８；Ｇａｒｄｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９８）１２ｔｈ  Ｗｏｒｌｄ  ＡＩＤＳ  Ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ，Ｇｅｎｅｖａ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ，Ｊｕｎｅ  ２８−Ｊｕｌｙ  ３，１９９８を参照することが出来る。
【００２５】
「免疫応答」とは、宿主における、抗原、目的の免疫原性組成物又はワクチンに対する細胞性及び／又は抗体介在性の免疫応答の発達を意味するが、これらに限定されるものではない。通常、「免疫応答」は以下の効果を１又は複数含むが、これらに限定されるものではない：抗原、又は目的の組成物若しくはワクチン中に含まれる抗原に特異的な、抗体、Ｂ細胞、ヘルパーＴ細胞、サプレッサーＴ細胞、及び／又は細胞障害性Ｔ細胞の産生又は活性化。宿主は、新たな感染に対する抵抗性が高まるように及び／又は病気の臨床的重症度が減少するように、治療免疫（記憶）応答（ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ（ｍｅｍｏｒｙ）ｒｅｓｐｏｎｓｅ）か防御免疫（記憶）応答（ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ（ｍｅｍｏｒｙ）ｒｅｓｐｏｎｓｅ）のいずれかを示すことが好ましい。そのような防御は、ウイルス血症の発症時期の遅れ、ウイルス持続の減少、総合的なウイルス負荷の減少及び／又はウイルス排出の減少の中で、ＰＣＶ２感染と関連した１若しくは複数の症状の数若しくは重症度の減少、又はその症状の欠如により実証される。
【００２６】
本明細書で用いられる「免疫原性組成物」又は「ワクチン」（両用語は同義に用いられる）とは、ＰＣＶ２抗原を有するあらゆる医薬組成物を意味し、該医薬組成物は問題とするＰＣＶ２感染関連疾患若しくは症状を予防又は治療するために使われ得る。免疫原性組成物はＰＣＶ２に対する免疫応答を誘発、刺激又は増進することが出来ることが好ましい。従って、上記の用語には、下記のサブユニット免疫原性組成物、並びに、死滅したＰＣＶ２又は弱毒化及び／若しくは不活性化したＰＣＶ２を含む組成物の両方が含まれる。
【００２７】
従って、ある態様によると、本発明は、豚又は豚の群れにおけるＰＣＶ２以外の１又は複数の病原体によって引き起こされる随伴感染の割合を減少させる方法であって、前記豚に有効量のＰＣＶ２抗原又はＰＣＶ２抗原を有する免疫原性組成物を投与する工程を有し、且つ、前記ＰＣＶ２抗原を有する免疫原性組成物は、サブユニット免疫原性組成物、又は死滅したＰＣＶ２若しくは弱毒化及び／若しくは不活性化したＰＣＶ２を有する組成物であることを特徴とする方法に関する。前記豚は、上記に定義するようにＰＣＶ２に重感染しているか、ＰＣＶ２にさらされているか、又は、ＰＣＶ２に感染する危険にさらされ若しくは感染しやすいことが好ましい。非ワクチン接種のコントロール群と比較すると、サーコウイルス以外の前記病原体に感染した豚の数が、１又は複数の前記病原体に関し、１０％を超えて、好ましくは２０％を超えて、より好ましくは３０％を超えて、さらにより好ましくは４０％を超えて、さらにより好ましくは５０％を超えて、さらにより好ましくは６０％を超えて、さらにより好ましくは８０％を超えて、さらにより好ましくは１００％を超えて減少することがより好ましい。
【００２８】
本明細書で用いられる「サブユニット免疫原性組成物」とは、必ずしもＰＣＶ２由来の若しくはＰＣＶ２由来の抗原と相同な抗原を全て有する必要はないが、ＰＣＶ２由来の若しくはＰＣＶ２由来の抗原と相同な免疫原性ポリペプチド又は抗原を少なくとも１つ有する組成物を意味する。そのような組成物には実質的に無傷のＰＣＶ２がない。従って、「サブユニット免疫原性組成物」は、少なくとも部分的に精製若しくは断片化された（好ましくは実質的に精製された）ＰＣＶ２由来の免疫原性ポリペプチド、又はその組み換えアナログから作られる。サブユニット免疫原性組成物は、ＰＣＶ２由来の他の抗原若しくはポリペプチドが実質的に存在しない目的のサブユニット抗原若しくは抗原、又はその断片を含有することが出来る。免疫原性サブユニット組成物は、下記ＰＣＶ２のＯＲＦ−２タンパク質を有することが好ましい。最も好ましくは、全体を参照することにより本明細書に援用されるＷＯ０６／０７２０６５の中で提供されるＰＣＶ２抗原のいずれかを有するサブユニット組成物である。
【００２９】
他の態様によれば、本明細書で用いられる免疫原性組成物は、ＰＣＶ２のＯＲＦ−２が発現するポリペプチド、又はその断片を有することが最も好ましい。本明細書において組成物の製造のために用いられ、本明細書で提供される方法の中で用いられるＰＣＶ２のＯＲＦ−２のＤＮＡ及びタンパク質は、ＰＣＶ２分離株中で高度に保存されたドメインであり、それ故、ＰＣＶ２のＯＲＦ−２は本明細書で用いられるあらゆるＰＣＶ２のＯＲＦ−２のＤＮＡ及び／又はポリペプチドの材料として有効である。ＰＣＶ２のＯＲＦ−２タンパク質は、ＷＯ０６／０７２０６５の配列番号１１のタンパク質であることが好ましい。また、ＰＣＶのＯＲＦ−２ポリペプチドは、ＷＯ０６／０７２０６５の配列番号５として提供されることがさらに好ましい。しかしながら、この配列は、配列相同性（シークエンスホモロジー）において６〜１０％変化しても免疫原性組成物中で有益な抗原特性を保つことが出来ると当業者に理解される。免疫原性組成物の抗原特性は、例えば、ＷＯ０６／０７２０６５の実施例４で提供されるような抗原投与実験により評価出来る。また、ＷＯ０６／０７２０６５の中で提供される配列番号３又は配列番号４のポリヌクレオチド配列にエンコードされたＰＣＶ２のＯＲＦ−２タンパク質と比較して、改良抗原が少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも９０％の防御免疫が出来る場合、改良抗原の抗原特性は未だ維持されている。
【００３０】
従ってある態様によれば、本発明は、豚又は豚の群れにおける、ＰＣＶ２以外の病原体によって引き起こされる随伴感染の割合を減少させる方法であって、前記豚に有効量のＰＣＶ２抗原又はＰＣＶ２抗原を有する免疫原性組成物を投与する工程を有し、且つ、前記ＰＣＶ２抗原が、ＷＯ０６／０７２０６５の中で提供される配列番号３又は配列番号４のポリヌクレオチド配列によってエンコードされたＰＣＶ２のＯＲＦ−２タンパク質と比較して、少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも９０％の防御免疫を有するＰＣＶ２のＯＲＦ−２タンパク質抗原であることを特徴とする方法に関する。前記ＰＣＶ２のＯＲＦ−２はＷＯ０６／０７２０６５の配列番号１１又は配列番号５の配列を有することが好ましい。前記豚は、上記に定義するようにＰＣＶ２に重感染しているか、ＰＣＶ２にさらされているか、又は、ＰＣＶ２に感染する危険にさらされ若しくは感染しやすいことが好ましい。非ワクチン接種のコントロール群と比較すると、サーコウイルス以外の前記病原体に感染した豚の数が、４０％を超えて、好ましくは５０％を超えて、より好ましくは６０％を超えて、さらにより好ましくは８０％を超えて、さらにより好ましくは１００％を超えて減少することがより好ましい。
【００３１】
いくつかの形態において、ＰＣＶ２のＯＲＦ−２タンパク質の免疫原性部位は、ＰＣＶ２抗原を有する免疫原性組成物中の抗原成分として用いられる。本明細書で用いられる「免疫原性部位」とは、ＰＣＶ２のＯＲＦ−２タンパク質及び／若しくはポリヌクレオチドそれぞれの切断及び／若しくは置換型又は断片を意味する。そのような切断及び／若しくは置換型又は断片は全長ＯＲＦ−２ポリペプチドから少なくとも６個の連続したアミノ酸を有することが好ましい。そのような切断及び／若しくは置換型又は断片は、全長ＯＲＦ−２ポリペプチドから少なくとも１０個、より好ましくは少なくとも１５個、さらに好ましくは少なくとも１９個の連続したアミノ酸を有することがより好ましい。この点に関し、２つの好ましい配列がＷＯ０６／０７２０６５の配列番号９及び配列番号１０として提供される。また、そのような配列は、より大きな断片又は切断型の一部であってもよいものとする。
【００３２】
上記の通り、ＰＣＶ２のＯＲＦ−２ポリペプチドは、配列番号３又は配列番号４のヌクレオチド配列によりエンコードされるいずれか１つであることがさらに好ましい。しかしながら、この配列は配列相同性において６〜２０％変化しても免疫原性組成物中で有益な抗原特性を保つことが出来ると当業者に理解される。いくつかの形態において、このＰＣＶ２のＯＲＦ−２ポリペプチドの切断若しくは置換型又は断片が、当該組成物中の抗原成分として用いられる。そのような切断若しくは置換型又は断片は、例えば配列番号３や配列番号４などの、全長ＰＣＶ２・ＯＲＦ−２ヌクレオチド配列から少なくとも１８個の連続したヌクレオチドを有することが好ましい。前記切断若しくは置換型又は断片は、例えば配列番号３や配列番号４などの全長ＰＣＶ２・ＯＲＦ−２ヌクレオチド配列のうち、少なくとも３０個、より好ましくは少なくとも４５個、さらに好ましくは少なくとも５７個の連続したヌクレオチドを有することがより好ましい。
【００３３】
当技術分野で公知の「配列同一性」とは、２以上のポリペプチド配列間又は２以上のポリヌクレオチド配列間の関係、すなわち、参照配列と、当該参照配列と比較される特定の配列との関係を意味する。配列同一性は、一連の参照配列と特定の配列間の一致（マッチ）により求められる配列類似性が高くなるように参照配列と特定の配列を最適に整列し、その後に特定の配列を参照配列と比較することにより求められる。そのような整列について、配列同一性は一点ずつ（ｐｏｓｉｔｉｏｎ−ｂｙ−ｐｏｓｉｔｉｏｎ）確かめられる。例えば、もし特定の場所でヌクレオチド又はアミノ酸残基が同一である場合、その配列は当該場所で「同一」である。その後、そのような場所同一性の合計数を参照配列中のヌクレオチド又は残基の合計数で割り、％配列同一性が得られる。配列同一性は公知の方法により容易に計算できる。例えば、Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｌｅｓｋ，Ａ．Ｎ．，ｅｄ．，Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９８８），Ｂｉｏｃｏｍｐｕｔｉｎｇ：Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  ａｎｄ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｐｒｏｊｅｃｔｓ，Ｓｍｉｔｈ，Ｄ．Ｗ．，  ｅｄ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９９３）；Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｄａｔａ，Ｐａｒｔ  Ｉ，Ｇｒｉｆｆｉｎ，Ａ．Ｍ．，ａｎｄ  Ｇｒｉｆｆｉｎ，Ｈ．Ｇ．，ｅｄｓ．，Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｊｅｒｓｅｙ（１９９４）；Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，ｖｏｎ  Ｈｅｉｎｇｅ，Ｇ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ（１９８７）；Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｐｒｉｍｅｒ，Ｇｒｉｂｓｋｏｖ，Ｍ．ａｎｄ  Ｄｅｖｅｒｅｕｘ，Ｊ．，ｅｄｓ．，Ｍ．Ｓｔｏｃｋｔｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９９１）；及び、Ｃａｒｉｌｌｏ，Ｈ．，ａｎｄ  Ｌｉｐｍａｎ，Ｄ．，ＳＩＡＭ  Ｊ．Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｍａｔｈ．，４８：１０７３（１９８８）に記載の方法が挙げられるが、これらに限定されるものではない。上記文献の教示は、参照することにより本明細書に援用される。配列同一性を決める方法としては、テストされる配列間で最も大きな一致が得られるように設計された方法が好ましい。配列同一性を求める方法は、特定の配列間の配列同一性を求める公的に入手可能なコンピュータープログラム中に体系化されている。そのようなプログラムとしては、ＧＣＧプログラムパッケージ（Ｄｅｖｅｒｅｕｘ，  Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１２（１）：３８７（１９８４））、ＢＬＡＳＴＰ、ＢＬＡＳＴＮ及びＦＡＳＴＡ（Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．Ｆ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌｅｃ．Ｂｉｏｌ．，２１５：４０３−４１０（１９９０））が挙げられるが、これらに限定されるものではない。ＢＬＡＳＴＸプログラムはＮＣＢＩ及び他のソースから公的に入手可能である（ＢＬＡＳＴ  Ｍａｎｕａｌ，Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．ｅｔ  ａｌ．，ＮＣＶＩ  ＮＬＭ  ＮＩＨ  Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ  ２０８９４，Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．Ｆ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌｅｃ．Ｂｉｏｌ．，２１５：４０３−４１０（１９９０）：なお、これらの教示は参照することにより本明細書に援用される）。これらのプログラムは、特定の配列と参照配列との間で最も高いレベルの配列同一性を生み出すために、初期設定値のギャップウェイトを用いて最適に配列を整列させる。例として、参照ヌクレオチド配列に対し、例えば少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％の「配列同一性」を有するヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチドとは、特定のポリヌクレオチドのヌクレオチド配列が、参照ヌクレオチド配列１００ヌクレオチド当たり１５点以下、好ましくは１０点以下、より好ましくは５点以下の突然変異を有していてもよいということを除いて、参照配列と同一であることを意味する。つまり、参照ヌクレオチド配列に対して少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％の同一性を有するヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチドにおいて、参照配列中の１５％以下、好ましくは１０％以下、より好ましくは５％以下のヌクレオチドは欠失若しくは他のヌクレオチドに置換していてもよく、又は、参照配列中の全ヌクレオチドの１５％以下、好ましくは１０％以下、より好ましくは５％以下のヌクレオチド数が参照配列中に挿入されていてもよい。参照配列のこれらの突然変異は、参照配列中のヌクレオチドのうちで個別に散在するか、又は、参照配列中の１又は複数の連続したグループ中に散在した形で、参照ヌクレオチド配列の５’若しくは３’末端、又はそれらの末端間のどこかで起きていてもよい。同様に、参照アミノ酸配列に対して例えば少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％の配列同一性を有する特定のアミノ酸配列を有するポリペプチドとは、特定のポリペプチド配列が、参照アミノ酸配列の１００アミノ酸当たり１５以下、好ましくは１０以下、より好ましくは５以下のアミノ酸の改変を有していてもよいという点を除き、ポリペプチドの特定のアミノ酸配列が参照配列と同一であることを意味する。つまり、参照アミノ酸配列と少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％の配列同一性を有する特定のポリペプチド配列を得るために、参照配列中の１５％以下、好ましくは１０％以下、より好ましくは５％以下のアミノ酸残基が、欠失又は他のアミノ酸に置換されていてもよく、参照配列中のアミノ酸残基の合計数の１５％以下、好ましくは１０％以下、より好ましくは５％以下の数が参照配列中に挿入されていてもよい。参照配列のこれらの改変は、参照配列の残基のうちで個別に散在するか、又は、参照配列中の１又は複数の連続したグループ中に散在した形で、参照アミノ酸配列のアミノ末端若しくはカルボキシ末端、又はそれらの末端間のどこかで起きていてもよい。同一ではない残基位置は、保存アミノ酸置換（ｃｏｎｓｅｒｖａｔｉｖｅ  ａｍｉｎｏ  ａｃｉｄ  ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｉｏｎｓ）により異なることが好ましい。しかしながら、配列同一性を求める際、保存置換は一致として含まれない。
【００３４】
本明細書で用いられる「配列相同性」とは、２つの配列の関連性を求める方法を意味する。配列相同性を求めるために、２以上の配列を最適に整列させ、必要に応じてギャップを導入する。しかしながら、「配列同一性」とは対照的に、配列相同性を求める際に保存アミノ酸置換は一致としてカウントされる。つまり、参照配列と９５％の配列相同性を有するポリペプチド若しくはポリヌクレオチドを得るためには、参照配列中のアミノ酸残基若しくはヌクレオチドの８５％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％が一致するか、他のアミノ酸若しくはヌクレオチドとの保存置換を含有していなければならない。または、参照配列中の保存置換を含まない全アミノ酸残基若しくはヌクレオチドの１５％以下、好ましくは１０％以下、より好ましくは５％以下のアミノ酸もしくはヌクレオチドが、参照配列中に挿入されていてもよい。相同配列は、一続きで少なくとも５０、好ましくは少なくとも１００、より好ましくは少なくとも２５０、さらにより好ましくは少なくとも５００ヌクレオチドを有することが好ましい。
【００３５】
「保存置換」とは、アミノ酸残基又はヌクレオチドを、全体の機能性が大きく変化しないように、サイズや疎水性などを含めて類似した特徴若しくは特性を有する他のアミノ酸残基又はヌクレオチドに置換することを意味する。
【００３６】
「単離された」とは、自然状態から「人の手によって」変えられたということ、すなわち、自然界で生じるとすれば、本来の環境から変えられたか取り除かれた、あるいはその両方であるということを意味する。例えば、生体内に生まれつき存在するポリヌクレオチドやポリペプチドは「単離され」ていないが、自然状態の共存物質から分離した同一のポリヌクレオチドやポリペプチドは本明細書で用いられるように「単離され」ている。
【００３７】
従って、ある態様によると、本発明は、豚又は豚の群れにおけるＰＣＶ２以外の１又は複数の病原体によって引き起こされる随伴感染の割合を減少させる方法であって、前記豚に有効量のＰＣＶ２抗原又はＰＣＶ抗原を有する免疫原性組成物を投与する工程を有し、且つ、前記ＰＣＶ２のＯＲＦ−２タンパク質が上記のいずれかであることを特徴とする方法に関する。好ましくは、前記ＰＣＶ２のＯＲＦ−２タンパク質は、以下のｉ）〜ｖｉｉｉ）である：
ｉ）  ＷＯ０６／０７０６５の配列番号５、配列番号６、配列番号９、配列番号１０又は配列番号１１の配列を含むポリペプチド；
ｉｉ）  前記ｉ）のポリペプチドと少なくとも８０％相同（ホモログ）なポリペプチド；
ｉｉｉ）  前記ｉ）及び／又はｉｉ）のポリペプチドの免疫原性部位；
ｉｖ）  ＷＯ０６／０７２０６５の配列番号５、配列番号６、配列番号９、配列番号１０又は配列番号１１の配列に含まれる少なくとも１０個の連続したアミノ酸を有する前記ｉｉｉ）の免疫原性部位；
ｖ）ＷＯ０６／０７２０６５の配列番号３又は配列番号４の配列を有するＤＮＡによってエンコードされるポリペプチド；
ｖｉ）  前記ｖ）のポリヌクレオチドと少なくとも８０％相同であるポリヌクレオチドによってエンコードされるポリペプチド；
ｖｉｉ）  前記ｖ）及び／又はｖｉ）のポリヌクレオチドによってエンコードされるポリペプチドの免疫原性部位；
ｖｉｉｉ）  前記免疫原性部位をコードするポリヌクレオチドが、ＷＯ０６／０７２０６５の配列番号３又は配列番号４の配列に含まれる少なくとも３０個の連続したアミノ酸を有する、前記ｖｉｉ）の免疫原性部位。
【００３８】
これらの免疫原性部位のいずれも、ＷＯ０６／０７０６５の配列番号３又は配列番号４の配列によってエンコードされているＰＣＶ２のＯＲＦ−２タンパク質の免疫原特性を有することが好ましい。
【００３９】
前記感染した豚は、上記に定義するようにＰＣＶ２に重感染しているか、ＰＣＶ２にさらされているか、又は、ＰＣＶ２に感染する危険にさらされ若しくは感染しやすいことが好ましい。非ワクチン接種のコントロール群と比較すると、サーコウイルス以外の前記病原体に感染した豚の数が、１又は複数の前記病原体に関し、１０％を超えて、好ましくは２０％を超えて、より好ましくは３０％を超えて、さらにより好ましくは４０％を超えて、さらにより好ましくは５０％を超えて、さらにより好ましくは６０％を超えて、さらにより好ましくは８０％を超えて、さらにより好ましくは１００％を超えて減少することがより好ましい。
【００４０】
別の態様によれば、ＰＣＶ２のＯＲＦ−２タンパク質は、亜臨床的にＰＣＶ２に感染した動物の治療に効果的な抗原含有レベルで免疫原性組成物に供給される。当該ＰＣＶ２のＯＲＦ−２タンパク質含有レベルは、好ましくは最終的な免疫原性組成物１ｍＬ当たり少なくとも０．２μｇ抗原（μｇ／ｍｌ）であり、より好ましくは約０．２〜約４００μｇ／ｍＬであり、さらにより好ましくは約０．３〜約２００μｇ／ｍＬであり、さらにより好ましくは約０．３５〜約１００μｇ／ｍＬであり、さらにより好ましくは約０．４〜約５０μｇ／ｍＬであり、さらにより好ましくは約０．４５〜約３０μｇ／ｍＬであり、さらにより好ましくは約０．６〜約１５μｇ／ｍＬであり、さらにより好ましくは約０．７５〜約８μｇ／ｍＬであり、さらにより好ましくは約１．０〜約６μｇ／ｍＬであり、さらにより好ましくは約１．３〜約３．０μｇ／ｍＬであり、さらにより好ましくは約１．４〜約２．５μｇ／ｍＬであり、さらにより好ましくは約１．５〜約２．０μｇ／ｍＬであり、最も好ましくは約１．６μｇ／ｍＬである。
【００４１】
別の態様によれば、当該ＰＣＶ２のＯＲＦ−２タンパク質含有レベルは、最終的な抗原組成物の１回投与当たり少なくとも０．２μｇのＰＣＶ２・ＯＲＦ−２タンパク質であり（μｇ／ｄｏｓｅ）、より好ましくは約０．２〜約４００μｇ／ｄｏｓｅであり、さらにより好ましくは約０．３〜約２００μｇ／ｄｏｓｅであり、さらにより好ましくは約０．３５〜約１００μｇ／ｄｏｓｅであり、さらにより好ましくは約０．４〜約５０μｇ／ｄｏｓｅであり、さらにより好ましくは約０．４５〜約３０μｇ／ｄｏｓｅであり、さらにより好ましくは約０．６〜約１５μｇ／ｄｏｓｅであり、さらにより好ましくは約０．７５〜約８μｇ／ｄｏｓｅであり、さらにより好ましくは約１．０〜約６μｇ／ｄｏｓｅであり、さらにより好ましくは約１．３〜約３．０μｇ／ｄｏｓｅであり、さらにより好ましくは約１．４〜約２．５μｇ／ｄｏｓｅであり、さらにより好ましくは約１．５〜約２．０μｇ／ｄｏｓｅであり、最も好ましくは約１．６μｇ／ｄｏｓｅである。
【００４２】
本発明によれば、免疫原性組成物中で用いられるＰＣＶ２のＯＲＦ−２ポリペプチドは、ＰＣＶ２のＯＲＦ２の単離及び精製、標準的なタンパク合成、並びに組み換え（リコンビナント）方法論を含むあらゆる方法で得ることが出来る。ＰＣＶ２のＯＲＦ−２ポリペプチドを得る好ましい方法はＷＯ０６／０７２０６５の中で提供されており、その教示内容は全体を参照することにより本明細書に援用される。簡潔に述べると、感受性細胞をＰＣＶ２のＯＲＦ−２のＤＮＡをコードする配列を有する組み換えウイルスベクターに感染させ、ＰＣＶ２のＯＲＦ−２ポリペプチドを当該組み換えウイルスに発現させる。発現したＰＣＶ２のＯＲＦ−２ポリペプチドを濾過により上清から回収し、公知の方法により、好ましくはバイナリーエチレンイミンを用いて不活性化し、その後中和して不活性処理を停止する。
【００４３】
本明細書で用いられる免疫原性組成物は、ｉ）好ましくは上記濃度で、上記いずれかのＰＣＶ２のＯＲＦ−２タンパク質、及び、ｉｉ）前記ＰＣＶ２のＯＲＦ−２タンパク質を発現するウイルスベクター、好ましくは組み換えバキュロウイルスの少なくとも一部、を有する組成物をも意味する。また、当該免疫原性組成物は、ｉ）好ましくは上記濃度で、上記いずれかのＰＣＶ２のＯＲＦ−２タンパク質、ｉｉ）前記ＰＣＶ２のＯＲＦ−２タンパク質を発現するウイルスベクター、好ましくは組み換えバキュロウイルスの少なくとも一部、及びｉｉｉ）細胞培養上清の一部、を含有することが出来る。
【００４４】
従って、ある態様によると、本発明は、豚又は豚の群れにおけるＰＣＶ２以外の１又は複数の病原体によって引き起こされる随伴感染の割合を減少させる方法であって、前記豚に有効量のＰＣＶ２抗原又はＰＣＶ抗原を有する免疫原性組成物を投与する工程を有し、且つ、前記ＰＣＶ２抗原が組み換えＰＣＶ２のＯＲＦ−２、好ましくはバキュロウイルスが発現したＰＣＶ２のＯＲＦ−２であることを特徴とする方法に関する。これらの組み換え又はバキュロウイルス発現のＰＣＶ２のＯＲＦ−２は、上記の配列を有することが好ましい。
【００４５】
本明細書で用いられる免疫原性組成物は、ｉ）好ましくは上記濃度で、上記いずれかのＰＣＶ２のＯＲＦ−２タンパク質、ｉｉ）前記ＰＣＶ２のＯＲＦ−２タンパク質を発現するウイルスベクター、好ましくは組み換えバキュロウイルスの少なくとも一部、及びｉｉｉ）細胞培養の一部、を有し、これらの成分の約９０％が１μｍ未満のサイズを有する組成物をも意味する。
【００４６】
本明細書で用いられる免疫原性組成物は、ｉ）好ましくは上記濃度で、上記いずれかのＰＣＶ２のＯＲＦ−２タンパク質、ｉｉ）前記ＰＣＶ２のＯＲＦ−２タンパク質を発現するウイルスベクター、好ましくは組み換えバキュロウイルスの少なくとも一部、ｉｉｉ）細胞培養の一部、及び、ｉｖ）組み換えウイルスベクターを不活性化させる不活性化剤、好ましくはＢＥＩを有し、前記ｉ）〜ｉｉｉ）の成分の約９０％が１μｍ未満のサイズを有する、組成物をも意味する。ＢＥＩはバキュロウイルスを不活性化させるのに有効な濃度で、好ましくは２〜約８ｍＭ・ＢＥＩの量で、より好ましくは約５ｍＭ・ＢＥＩの量で存在することが好ましい。
【００４７】
本明細書で用いられる免疫原性組成物は、ｉ）好ましくは上記濃度で、上記いずれかのＰＣＶ２のＯＲＦ−２タンパク質、ｉｉ）前記ＰＣＶ２のＯＲＦ−２タンパク質を発現するウイルスベクターの少なくとも一部、ｉｉｉ）細胞培養の一部、ｉｖ）組み換えウイルスベクターを不活性化させる不活性化剤、好ましくはＢＥＩ、及びｖ）不活性化剤を介して行われる不活性化を停止する中和剤を有し、前記ｉ）〜ｉｉｉ）の成分の約９０％が１μｍ未満のサイズを有する、組成物をも意味する。不活性化剤がＢＥＩの場合、前記組成物はＢＥＩと等量のチオ硫酸ナトリウムを含有することが好ましい。
【００４８】
ポリペプチドは、ＰＣＶ２感染にかかりやすい動物に投与され得る組成物に包含される。好ましい形態において、当該組成物は当業者に公知の付加成分を含んでもよい（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ．（１９９０）．１８ｔｈ  ｅｄ．Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌ．，Ｅａｓｔｏｎを参照）。また、当該組成物は１又は複数の獣医学的に許容できる担体を含んでいてもよい。本明細書で用いられる「獣医学的に許容できる担体」には、あらゆる溶媒、分散媒、被覆剤、補助剤、安定剤、希釈剤、防腐剤、抗細菌及び抗真菌剤、等張剤、吸着遅延剤（ａｄｓｏｒｐｔｉｏｎ  ｄｅｌａｙｉｎｇ  ａｇｅｎｔｓ）などが含まれる。好ましい実施態様において、免疫原性組成物は、補助剤、好ましくはカルボポル（Ｃａｒｂｏｐｏｌ）、及び生理的食塩水と組み合わせて、本明細書で提供されるＰＣＶ２のＯＲＦ−２タンパク質を好ましくは上記濃度で含有する。
【００４９】
当業者であれば、本明細書で用いられる当該組成物が、公知の注射可能な、生理学的に許容できる滅菌溶液を包含してもよいことを理解するであろう。非経口の注射又は注入用の使いやすい溶液を用意するには、例えば生理食塩水などの水溶性等張液や対応するプラズマタンパク質溶液が容易に入手可能である。また、本発明の免疫原性及びワクチン組成物は、希釈剤、等張剤、安定剤又は補助剤を有することが出来る。希釈剤としては、水、生理食塩水、デキストロース、エタノール、グリセロールなどが挙げられる。等張剤としては、特に、塩化ナトリウム、デキストロース、マンニトール、ソルビトール及びラクトースが挙げられる。安定剤としては、特に、アルブミン及びエチレンジアミン四酢酸のアルカリ塩が挙げられる。
【００５０】
本明細書で用いられる「補助剤」には、水酸化アルミニウム及びリン酸アルミニウム、Ｑｕｉｌ  Ａ，ＱＳ−２１（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ  Ｉｎｃ．，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  ＭＡ），ＧＰＩ−０１００（Ｇａｌｅｎｉｃａ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．，Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ，ＡＬ）などのサポニン、Ｗ／Ｏ（ｗａｔｅｒ−ｉｎ−ｏｉｌ）エマルジョン、Ｏ／Ｗ（ｏｉｌ−ｉｎ−ｗａｔｅｒ）エマルジョン、Ｗ／Ｏ／Ｗ（ｗａｔｅｒ−ｉｎ−ｏｉｌ−ｉｎ−ｗａｔｅｒ）エマルジョンが含まれ得る。エマルジョンは特に、軽質液体パラフィンオイル（Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅａ  ｔｙｐｅ）；アルケン、特にイソブテン若しくはデケンのオリゴマー形成から得られるスクアラン若しくはスクアレンオイルなどのイソプレノイドオイル；直鎖アルキル基を有する酸若しくはアルコールのエステル、特に植物オイル、オレイン酸エチル、プロピレングリコールジ−（カプリラート／カプラート）、グリセリルトリ−（カプリラート／カプラート）若しくはプロピレングリコールジオレアート；分岐鎖状の脂肪酸若しくはアルコールのエステル、特にイソステアリン酸エステルを基礎とすることが出来る。当該オイルは乳化剤と組み合わせて用いてエマルジョンを形成する。乳化剤は、非イオン性界面活性剤、特に、エトキシ化されていてもよい、ソルビタンのエステル、マンニド（ｍａｎｎｉｄｅ）（例えば、無水マンニトールオレアート）のエステル、グリコールのエステル、ポリグリセロールのエステル、プロピレングリコールのエステル、及びオレイン酸、イソステアリン酸、リシノール酸若しくはヒドロキシステアリン酸のエステル、並びに、ポリオキシプロピレン−ポリオキシエチレン共重合体ブロック、特に、プルロニック（Ｐｌｕｒｏｎｉｃ）製品、特にはＬ１２１が好ましい。Ｈｕｎｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｈｅ  Ｔｈｅｏｒｙ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ａｄｊｕｖａｎｔｓ（Ｅｄ．Ｓｔｅｗａｒｔ−Ｔｕｌｌ，Ｄ．Ｅ．Ｓ．）、ＪｏｈｎＷｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，ＮＹ，ｐｐ５１−９４（１９９５）、及びＴｏｄｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｖａｃｃｉｎｅ  １５：５６４−５７０（１９９７）を参照することが出来る。
【００５１】
例えば、Ｍ．Ｐｏｗｅｌｌ及びＭ．Ｎｅｗｍａｎ，Ｐｌｅｎｕｍ  Ｐｒｅｓｓ，１９９５による「Ｖａｃｃｉｎｅ  Ｄｅｓｉｇｎ，Ｔｈｅ  Ｓｕｂｕｎｉｔ  ａｎｄ  Ａｄｊｕｖａｎｔ  Ａｐｐｒｏａｃｈ」の第１４７ページに記載されているＳＰＴエマルジョンや、同じくこの本の第１８３ページに記載されているエマルジョンＭＦ５９を用いることが出来る。
【００５２】
補助剤の別例は、アクリル酸又はメタクリル酸のポリマー、及び無水マレイン酸とアルケニル誘導体との共重合体から選択される化合物である。有利なアジュバント化合物は、特には糖類のポリアルケニルエーテル若しくはポリアルコールで架橋されたアクリル酸又はメタクリル酸のポリマーである。これらの化合物は、カルボマー（ｃａｒｂｏｍｅｒ）という名称で知られている（Ｐｈａｍｅｕｒｏｐａ  Ｖｏｌ．８，Ｎｏ．２，Ｊｕｎｅ  １９９６）。当業者であれば、少なくとも３個のヒドロキシ基、好ましくは８以下のヒドロキシ基を有するポリヒドロキシ化合物であって、該少なくとも３個のヒドロキシル基の水素原子が少なくとも２個の炭素原子を有する不飽和脂肪族基に取って換えられたポリヒドロキシ化化合物で架橋されたアクリル系ポリマーについて述べたＵ．Ｓ．Ｐａｔｅｎｔ  Ｎｏ．２，９０９，４６２にも言及することが出来る。好ましい基（不飽和脂肪族基）は炭素数２〜４のものであり、例えば、ビニル基、アリル基、及び他のエチレン性不飽和基である。該不飽和基は、それ自体メチル基などの他の置換基を有していてもよい。カルボポル（Ｃａｒｂｏｐｏｌ（ＢＦ  Ｇｏｏｄｒｉｃｈ，Ｏｈｉｏ，ＵＳＡ））という名称で売られている製品が特に適当である。これらはアリルスクロース又はアリルペンタエリスリトールで架橋されている。これらの中で、カルボポル９７４Ｐ、９３４Ｐ及び９７１Ｐが挙げられる。カルボポル、特に、カルボポル９７１Ｐを、好ましくは１投与当たり約５００μｇ〜約５ｍｇの量で、より好ましくは１投与当たり約７５０μｇ〜約２．５ｍｇの量で、最も好ましくは１投与当たり約１ｍｇの量で用いることが最も好ましい。
【００５３】
さらに適した補助剤としては、特に、ＲＩＢＩアジュバントシステム（Ｒｉｂｉ  Ｉｎｃ．）、ブロックコポリマー（Ｂｌｏｃｋ  ｃｏ−ｐｏｌｙｍｅｒ（ＣｙｔＲｘ，Ａｔｌａｎｔａ  ＧＡ））、ＳＡＦ−Ｍ（Ｃｈｉｒｏｎ，Ｅｍｅｒｙｖｉｌｌｅ  ＣＡ）、モノホスホリルリピドＡ、Ａｖｒｉｄｉｎｅ脂質−アミン補助剤（Ａｖｒｉｄｉｎｅ  ｌｉｐｉｄ−ａｍｉｎｅ  ａｄｊｕｖａｎｔ）、Ｅ．ｃｏｌｉ由来の熱不安定エンテロトキシン（組み換え若しくはその他）、コレラトキシン、ＩＭＳ１３１４、又はムラミルジペプチドが挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【００５４】
当該補助剤は、１投与当たり約１００μｇ〜約１０ｍｇの量で加えられることが好ましい。当該補助剤は、１投与当たり約１００μｇ〜約１０ｍｇの量で加えられることがより好ましい。当該補助剤は、１投与当たり約５００μｇ〜約５ｍｇの量で加えられることがさらにより好ましい。当該補助剤は、１投与当たり約７５０μｇ〜約２．５ｍｇの量で加えられることがさらにより好ましい。当該補助剤は、１投与当たり約１ｍｇの量で加えられることが最も好ましい。
【００５５】
また、当該組成物は、１又は複数の製薬学的に許容できる担体を含むことが出来る。本明細書で用いられる「製薬学的に許容できる担体」には、あらゆる溶媒、分散媒、被覆剤、補助剤、安定剤、希釈剤、防腐剤、抗細菌及び抗真菌剤、等張剤、吸着遅延剤（ａｄｓｏｒｐｔｉｏｎ  ｄｅｌａｙｉｎｇ  ａｇｅｎｔｓ）などが含まれる。本明細書で提供される組成物は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ培養細胞の上清から回収したＰＣＶ２のＯＲＦ−２タンパク質を有しており；前記細胞がＰＣＶ２のＯＲＦ−２のＤＮＡを有しＰＣＶ２のＯＲＦ−２タンパク質を発現する組み換えウイルスベクターに感染しており；前記細胞培養がウイルスベクターを不活性化するために約２〜約８ｍＭのＢＥＩ、好ましくは約５ｍＭのＢＥＩで処理され；約２〜約８ｍＭ、好ましくは約５ｍＭの最終濃度に相当する濃度の中和剤、好ましくはチオ硫酸ナトリウム溶液で処理されることが最も好ましい。
【００５６】
別の実施態様によれば、本発明は、豚若しくは豚の群れにおける、ＰＣＶ２以外の１又は複数の病原体によって引き起こされる随伴感染を減少させる免疫原性組成物を製造するためのＰＣＶ２抗原の使用であって、前記免疫原性組成物が、ｉ）好ましくは前記の濃度で前記いずれかのＰＣＶ２のＯＲＦ−２タンパク質、ｉｉ）前記ＰＣＶ２のＯＲＦ−２タンパク質を発現するウイルスベクターの少なくとも一部、ｉｉｉ）細胞培養の一部、ｉｖ）組み換えウイルスベクターを不活性化する不活性化剤、好ましくはＢＥＩ、及び、ｖ）前記不活性化剤を介して行われる不活性化を停止する中和剤、好ましくはＢＥＩと等量のチオ硫酸ナトリウム、及び、ｖｉ）適した補助剤、好ましくは上記量のカルボポル９７１を含有し、前記ｉ）〜ｉｉｉ）の成分の約９０％が１μｍ未満のサイズを有することを特徴とする、ＰＣＶ２抗原の使用にも関する。前記豚は、上記に定義するようにＰＣＶ２に重感染しているか、ＰＣＶ２にさらされているか、又は、ＰＣＶ２に感染する危険にさらされ若しくは感染しやすいことが好ましい。非ワクチン接種のコントロール群と比較すると、サーコウイルス以外の前記病原体に感染した豚の数が、１又は複数の前記病原体に関し、１０％を超えて、好ましくは２０％を超えて、より好ましくは３０％を超えて、さらにより好ましくは４０％を超えて、さらにより好ましくは５０％を超えて、さらにより好ましくは６０％を超えて、さらにより好ましくは８０％を超えて、さらにより好ましくは１００％を超えて減少することがより好ましい。
【００５７】
他の態様によれば、この免疫原性組成物は、さらに製薬学的に許容できる塩、好ましくはリン酸塩を、生理学的に許容できる濃度で有する。前記免疫原性組成物のｐＨは、生理的ｐＨ、すなわち、約６．５〜７．５の間に調節されることが好ましい。
【００５８】
本明細書で用いられる免疫原性組成物は、１ｍＬ当たり、ｉ）少なくとも１．６μｇの上記ＰＣＶ２のＯＲＦ−２タンパク質、ｉｉ）前記ＰＣＶ２のＯＲＦ−２タンパク質を発現するバキュロウイルスの少なくとも一部、ｉｉｉ）細胞培養の一部、ｉｖ）約２〜８ｍＭのＢＥＩ、ｖ）ＢＥＩと等量のチオ硫酸ナトリウム；及び、ｖｉ）約１ｍｇのカルボポル９７１、及び、ｖｉｉ）生理学的に許容できる濃度のリン酸塩を含有し、前記ｉ）〜ｉｉｉ）の成分の約９０％が１μｍ未満のサイズを有し、且つ、前記免疫原性組成物のｐＨが約６．５〜７．５に調節されている、組成物をも意味する。
【００５９】
当該免疫原性組成物は、例えば、インターロイキン、インターフェロン、若しくは他のサイトカインなどの、１又は複数の他の免疫調節剤をさらに含むことが出来る。当該免疫原性組成物は、ゲンタマイシン及びメルチオラートを含むことも出来る。本発明の状況下で有益な補助剤及び添加剤の量及び濃度は、熟練者であれば容易に決定することが出来るが、本発明は、ワクチン組成物の投与量１ｍＬ当たり約５０μｇ〜約２０００μｇ、好ましくは約２５０μｇの補助剤を有する組成物を意図する。従って、本明細書で用いられる免疫原性組成物は、約１μｇ／ｍＬ〜約６０μｇ／ｍＬの抗生物質、より好ましくは約３０μｇ／ｍＬ未満の抗生物質を有する組成物をも意味する。
【００６０】
本明細書で用いられる免疫原性組成物は、ｉ）好ましくは前記濃度で、前記いずれかのＰＣＶ２のＯＲＦ−２タンパク質、ｉｉ）前記ＰＣＶ２のＯＲＦ−２タンパク質を発現するウイルスベクターの少なくとも一部、ｉｉｉ）細胞培養の一部、ｉｖ）組み換えウイルスベクターを不活性化する不活性化剤、好ましくはＢＥＩ、及びｖ）不活性化剤を介して行われる不活性化を停止する中和剤、好ましくはＢＥＩと等量のチオ硫酸ナトリウム；ｖｉ）適した補助剤、好ましくは前記量のカルボポル９７１；ｖｉｉ）製薬学的に許容できる濃度の緩衝生理食塩水、好ましくはリン酸塩、及び、ｖｉｉｉ）抗微生物活性剤を含有する組成物であって、前記ｉ）〜ｉｉｉ）の成分の約９０％が１μｍ未満のサイズを有する、組成物をも意味する。
【００６１】
本明細書で用いられる免疫原性組成物はインゲルバックサーコフレックス（Ｉｎｇｅｌｖａｃ（登録商標）ＣｉｒｃｏＦＬＥＸTM（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ  Ｖｅｔｍｅｄｉｃａ  Ｉｎｃ，Ｓｔ  Ｊｏｓｅｐｈ，ＭＯ，ＵＳＡ）），サーコバック（ＣｉｒｃｏＶａｃ（登録商標）（Ｍｅｒｉａｌ  ＳＡＳ，Ｌｙｏｎ，Ｆｒａｎｃｅ））、サーコベント（ＣｉｒｃｏＶｅｎｔ（Ｉｎｔｅｒｖｅｔ  Ｉｎｃ．，Ｍｉｌｌｓｂｏｒｏ，ＤＥ，ＵＳＡ））、又は、スバキシンＰＣＶ−２ワンドース（Ｓｕｖａｘｙｎ  ＰＣＶ−２  Ｏｎｅ  Ｄｏｓｅ（登録商標）（Ｆｏｒｔ  Ｄｏｄｇｅ  Ａｎｉｍａｌ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｋａｎｓａｓ  Ｃｉｔｙ，ＫＡ，ＵＳＡ））をも意味する。従って、他の態様によると、本発明は、豚若しくは豚の群れにおけるＰＣＶ２以外の１又は複数の病原体によって引き起こされる随伴感染の割合を減少させる方法であって、前記豚に有効量のＰＣＶ２抗原又はＰＣＶ抗原を有する免疫原性組成物を投与する工程を有し、且つ、前記ＰＣＶ２抗原を有する免疫原性組成物がインゲルバックサーコフレックス、サーコバック、サーコベント及び／又はスバキシンＰＣＶ−２ワンドースであり、好ましくはインゲルバックサーコフレックスであることを特徴とする方法に関する。前記感染した豚は、上記に定義するようにＰＣＶ２に重感染しているか、ＰＣＶ２にさらされているか、又は、ＰＣＶ２に感染する危険にさらされ若しくは感染しやすいことが好ましい。非ワクチン接種のコントロール群と比較すると、サーコウィルス以外の前記病原体に感染した豚の数が、１又は複数の前記病原体に関し、１０％を超えて、好ましくは２０％を超えて、より好ましくは３０％を超えて、さらにより好ましくは４０％を超えて、さらにより好ましくは５０％を超えて、さらにより好ましくは６０％を超えて、さらにより好ましくは８０％を超えて、さらにより好ましくは１００％を超えて減少することがより好ましい。
【００６２】
本明細書で用いられる「有効量のＰＣＶ２抗原」とは、前記有効量のＰＣＶ２抗原を投与する動物において免疫応答を引き起こすか引き起こし得る量のＰＣＶ２抗原を意味するが、これに限定されるものではない。
【００６３】
有効量は、ワクチンの成分や投与スケジュールに依存する。一般的には、不活性化ウイルス又は改変された生存ウイルス製剤が組み合わせワクチン中で用いられる場合、ワクチンの量は１投与当たり約１０2.0〜約１０9.0ＴＣＩＤ50、好ましくは１投与当たり約１０3.0〜約１０8.0ＴＣＩＤ50、より好ましくは１投与当たり約１０4.0〜約１０8.0ＴＣＩＤ50を有する。特に、改変された生存ＰＣＶ２がワクチン中で用いられる場合、感染しやすい動物への推奨投与量は、１投与当たり約１０3.0ＴＣＩＤ50（組織培養感染量５０％終点）〜約１０6.0ＴＣＩＤ50が好ましく、１投与当たり１０4.0ＴＣＩＤ50〜１０5.0ＴＣＩＤ50がより好ましい。精製した抗原を用いた場合には、一般的に、抗原の量は、０．２〜５０００μｇの間且つ１０2.0〜１０9.0ＴＣＩＤ50の間であり、好ましくは１０3.0〜１０6.0ＴＣＩＤ50の間であり、より好ましくは１０4.0〜１０5.0ＴＣＩＤ50の間である。
【００６４】
サブユニットワクチンは通常、１投与当たり少なくとも０．２μｇの抗原の抗原含有レベルで、好ましくは１投与当たり約０．２〜約４００μｇで、より好ましくは１投与当たり約０．３〜約２００μｇで、さらにより好ましくは１投与当たり約０．３５〜約１００μｇで、さらにより好ましくは１投与当たり約０．４〜約５０μｇで、さらにより好ましくは１投与当たり約０．４５〜約３０μｇで、さらにより好ましくは１投与当たり約０．６〜約１６μｇで、さらにより好ましくは１投与当たり約０．７５〜約８μｇで、さらにより好ましくは１投与当たり約１．０〜約６μｇで、さらにより好ましくは１投与当たり約１．３〜約３．０μｇで投与される。
【００６５】
豚にＰＣＶ２抗原を投与することは、サーコウイルス以外、特にＰＣＶ２以外の病原体によって引き起こされる随伴感染の割合の減少をもたらすのみならず、健康の全体的な改善、特にそのような随伴感染に対する耐性をももたらす。従って、他の態様によれば、本発明は、ＰＣＶ２以外の１又は複数の病原体への随伴感染に対する豚の抵抗性を向上させる方法であって、前記豚に有効量のＰＣＶ２抗原又はＰＣＶ抗原を有する免疫原性組成物を投与する工程を有することを特徴とする方法にも関する。前記豚は、上記に定義するようにＰＣＶ２に重感染しているか、ＰＣＶ２にさらされているか、又は、ＰＣＶ２に感染する危険にさらされ若しくは感染しやすいことが好ましい。
【００６６】
本明細書で用いられる「随伴感染に対する豚の耐性の向上」とは、非ワクチン接種のコントロール群と比較すると、サーコウイルス以外の病原体に感染した豚の数が、前記病原体に関して１０％を超えて、好ましくは２０％を超えて、より好ましくは３０％を超えて、さらにより好ましくは４０％を超えて、さらにより好ましくは５０％を超えて、さらにより好ましくは６０％を超えて、さらにより好ましくは８０％を超えて、さらにより好ましくは１００％を超えて減少する方法を意味するが、これに限定されるものではない。従って、他の態様によれば、本発明は、ＰＣＶ２以外の１又は複数の病原体によって引き起こされる随伴感染に対する豚の抵抗性を向上させる方法であって、前記豚に有効量のＰＣＶ２抗原又はＰＣＶ２抗原を含む免疫原性組成物を投与する工程を有し、且つ、非ワクチン接種のコントロール群と比較して、サーコウイルス以外の前記病原体に感染した豚の数が、前記病原体に関して１０％を超えて、好ましくは２０％を超えて、より好ましくは３０％を超えて、さらにより好ましくは４０％を超えて、さらにより好ましくは５０％を超えて、さらにより好ましくは６０％を超えて、さらにより好ましくは８０％を超えて、さらにより好ましくは１００％を超えて減少する方法にも関する。前記豚は、上記に定義するようにＰＣＶ２に重感染しているか、ＰＣＶ２にさらされているか、又は、ＰＣＶ２に感染する危険にさらされ若しくは感染しやすいことが好ましい。
【００６７】
［好ましい実施態様の詳細な説明］
以下の実施例では、本発明に従って好ましい材料と手順を説明する。本明細書に記載した方法及び材料に類似又は相当するどのような方法及び材料も、本発明を実施及びテストするのに用いることが出来るが、好ましい方法、装置及び材料をここに記載する。しかしながら、これらの実施例は実証のためだけに提供されるものであり、実施例中のいかなるものも本発明の範囲を限定するものではない。
【実施例】
【００６８】
＜＜実施例１＞＞
＜ＰＣＶ２感染した動物における随伴感染の検出＞
［調査対象母集団］
本調査はドイツの南側で行われた。商業的品種交雑の雑種豚（Ｌａｎｄｒａｃｅ  ｏｒ  Ｅｄｅｌｓｃｈｗｅｉｎ  （ｆ）  ｘ  Ｐｉｅｔｒａｉｎ  （ｍ））を、「豚生産者団体（ｐｉｇ−ｐｒｏｄｕｃｅｒ  ｃｏｍｍｕｎｉｔｙ）」の一部である１５の異なる飼育場で観察した。当該飼育場は、サイズ（５０〜３００雌豚）、管理及び健康状態の点で異なっていた。全飼育場における子豚の日常の予防手段には、鉄注射、切歯及び断尾、並びに、虚勢が含まれていた。約４週齢で離乳した後、異なる飼育場の子豚をオールインオールアウト生産システムを有する生育農場に移した。その子豚を、１囲い当たり６０〜１２０豚入るに設計された囲いを持つ３つの家畜小屋の中に入り混ぜて収容した。生育場での日常の予防手段には、到着後最初の１０日間、テトラサイクリン塩酸塩での予防処置が含まれていた。生育期間に食料組成の変更を４回行った。該動物に与える餌は、オオムギ及びミネラルをベースに生育農場が自ら用意した。約１２週齢で、豚をオールインオールアウト生産システムを有する肥育農場に移した。その子豚を、１囲い当たり１０〜３０豚が入るように設計された囲いを持つ２つの家畜小屋の中に入り混ぜて収容した。肥育期間に食料組成の変更を３回行った。与えられる餌は、オオムギ、小麦、コーン及び乳清濃縮物をベースに肥育農場が自ら用意した。１３〜１８週間、豚を肥育農場に留めた。
【００６９】
［病歴］
ＰＭＷＳの病型は、２００２年１１月の調査開始より約３年前に臨床的に明らかとなり、２００２年１２月に血清学的に確認された。生育の最後／肥育の最初に、動物は消耗、呼吸兆候、及び死亡率の顕著な上昇などのＰＭＷＳの典型的な兆候を示し始めた。その病気はＰＲＲＳＶへの重感染を伴っていた。生育中（４〜１２週齢）の死亡率は通常３．５〜４．８％であったが、死亡率最大１０％のピーク水準も時々報告された。肥育の中期から後期の間に、呼吸兆候及び成長遅延がＰＣＶ２感染動物において優位を占めた。肥育中（１２〜２６週齢）の死亡率は約１．７〜２．４％であり、除外数は１％であった。一日の平均体重増加はわずかであった（７１９〜７３１ｇ／日）。調査開始の３ヶ月前、動物が約９〜１３週齢のときに起こる臨床兆候とＰＣＶ２ウイルス血症に基づいてＰＭＷＳの診断結果が検証された。ＰＲＲＳＶ及びマイコプラズマ・ハイオリニスが、ＰＣＶ２感染動物の肺洗浄サンプルにおいて重感染病原体として同定された。
【００７０】
［被験品］
ＰＣＶ２に対する有効なワクチン接種として、不活性化サブユニットワクチン（Ｉｎｇｅｌｖａｃ（登録商標）  ＣｉｒｃｏＦＬＥＸTM，Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ  Ｖｅｔｍｅｄｉｃａ  ＧｍｂＨ）を投与した。当該ワクチンは、活性成分としてＰＣＶ２のＯＲＦ２カプシドタンパク質、補助剤としてカルボマーを含んでいた。当該ＯＲＦ２配列は、ＰＭＷＳの兆候を有する２頭の豚の扁桃腺及び肝臓のサンプルから単離されたノースアメリカンＰＣＶ２分離株（Ｎｏｒｔｈ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  ＰＣＶ２  ｉｓｏｌａｔｅ）に由来した。次に、ヨトウムシ／スポドプテラ・フルギペルダの卵巣由来の昆虫細胞株（ＳＦ＋細胞）を宿主として用いて、当該ＯＲＦ２配列をバキュロウイルス発現系に挿入した。
ＰＣＶ２カプシドタンパク質フリーの細胞培養上清、及び補助剤としてのカルボマーを含むプラセボを対照品とした。
【００７１】
［実験計画］
「臨床試験実施に関する基準（ＧＣＰ）」の原理に従い、無作為選択で、負の対照品を用いて、二重盲式で、並行の試験方法により、実地実験を行った。最初の体重及び同腹の子の割り当てに関し、合計１５１９頭の健康な子豚を２つの治療グループに等しく分配した。離乳１週間前に、１方のグループの子豚（ｎ＝７５４）にインゲルバックサーコフレックス（Ｉｎｇｅｌｖａｃ（登録商標）  ＣｉｒｃｏＦＬＥＸTM）をワクチン接種し、もう一方のグループ（ｎ＝７６５）にはプラセボ接種を行った。子豚が２５．４±３．１８日（ｍｅａｎ±Ｓ．Ｄ．）齢のときに、右首領域に筋肉注射で投与量１ｍＬで１回被験品を投与した。離乳後、両方の治療グループは、最大限等しく病原体にさらされるために、仕上げ期の最後まで混合グループ中に保たれた。
【００７２】
［ポリメラーゼ連鎖反応］
肺組織サンプル中のＰＲＲＳＶ（Ｍａｒｄａｓｓｉ  Ｈ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ  １９９４；３２（９）：２１９７−２０３）、マイコプラズマ・ハイオリニス（Ｃａｒｏｎ  Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ  ２０００；３８（４）：１３９０−６）、マイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｃａｌｓａｍｉｇｌｉａ  Ｍ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｖｅｔ  Ｄｉａｇｎ  Ｉｎｖｅｓｔ  １９９９  Ｍａｙ；１１（３）：２４６−５１）、ストレプトコッカス・スイス（Ｗｉｓｓｅｌｉｎｋ  ＨＪ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ  ２００２  Ａｕｇ；４０（８）：２９２２−９）、パスツレラ・ムルトシダ（Ｔｏｗｎｓｅｎｄ  ＫＭ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ  １９９８  Ａｐｒ；３６（４）：１０９６−１００）、アクチノバチルス・プルロニューモニア（Ｓｃｈａｌｌｅｒ  Ａ，ｅｔ  ａｌ．，Ａｐｘ  ｔｏｘｉｎｓ  ｉｎ  Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａｃｅａｅ  ｓｐｅｃｉｅｓ  ｆｒｏｍ  ａｎｉｍａｌｓ．Ｖｅｔ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ  ２０００  Ｊｕｎ  １２；７４（４）：３６５−７６）、ボルデテラ・ブロンキセプティカ（（Ｈｏｚｂｏｒ  Ｄ，ｅｔ  ａｌ．，Ｒｅｓ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ  １９９９  Ｊｕｎ；１５０（５）：３３３−４１））、及びヘモフィルス・パラスイス（Ｃａｌｓａｍｉｇｌｉａ  Ｍ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｖｅｔ  Ｄｉａｇｎ  Ｉｎｖｅｓｔ  １９９９  Ｍａｒ；１１（２）：１４０−５）に特異的な核酸を検出するために、ポリメラーゼ連鎖反応アッセイを用いた。
血清中のＰＣＶ２ウイルス負荷の定量化のため、Ｂｒｕｎｂｏｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，２００４；Ｊ．Ｖｉｒｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  １２２：１７１−１７８に記載の方法に従ってＰＣＶ２ゲノム相当物を定量化した。ＰＣＶ２の増幅のため、ＰＣＶ２−８４−１２６５Ｕ２１プライマーとＰＣＶ２−８４−１３１９Ｌ２１プライマーを用いた／用いる。陽性サンプルのカットオフレベルは、検証実験に基づき血清１ｍＬ当たり１０4テンプレートコピーに設定した。バイオスクリーン社（ミュンスター、ドイツ）（ｂｉｏＳｃｒｅｅｎ  ＧｍｂＨ，Ｍuｎｓｔｅｒ，Ｇｅｒｍａｎｙ）により、全てのＰＣＶ２ＤＮＡ定量化アッセイは行われた。
【００７３】
＜結果＞
［ＰＣＶ２ウイルス血症］
観察されたＰＭＷＳ特有の臨床兆候及び病変の発症及び重症度が、事前に選択した「サンプル動物」の血液中のＰＣＶ２ウイルス血症の発症と関連するか否かを調査した。図１に示すように、ＰＣＶ２ウイルス血症の発症は、動物が約９〜１０週齢のときに、プラセボ治療のグループ内で始まった。動物が約１１〜１４週齢のときに、ＰＣＶ２陽性動物が最大８５％のピークレベルに到達した。１４週齢から肥育の最後まで、再度ベースラインレベルに到達することなく、ＰＣＶ２ウイルス血症動物の割合は減少していった。個々のウイルス血症持続期間は、平均して５６日間続いた（データ未掲載）。
ワクチン接種したグループ中のＰＣＶ２陽性動物の割合は、プラセボ治療グループと比較して有意に減少しており（ｐ＜０．０００１）、ウイルス血症のピークで陽性動物３５％以下であった（図１Ｂ）。ワクチン接種した動物におけるウイルス血症の平均持続期間は３１日減少した（ｐ＜０．０００１；データ未掲載）。
【００７４】
動物におけるウイルス負荷試験に、他の焦点を置いた。この調査において、臨床的関連性のあるウイルス負荷（血清１ｍＬ当たり、＞１０6ｇＥ）は、動物が約１０〜１５週齢のウイルス血症の初期段階において、主にプラセボ治療動物に見られた（図１Ａ）。１１週齢では、臨床的関連性のあるウイルス負荷を有する動物の割合（４０％）は、亜臨床的関連性のあるウイルス負荷を有する動物の割合（３７％）よりも高かった。この割合は、臨床的関連性を有する感染の著しい減少のために、ウイルス血症の後期（１７〜２５週齢）に劇的に変化していった。ＰＣＶ２に陽性のワクチン接種した動物では、全ての分析時点で亜臨床的感染が優勢であった（図１Ｂ）。
要約すると、調査期間中の選択された調査場所におけるＰＣＶ２分析結果は、以下のように特徴づけられた：ａ）ＰＭＷＳの臨床兆候及び病変の発症と一致する、調査９〜１０週でのＰＣＶ２ウイルス血症の発症；ｂ）ＰＣＶ２ウイルス血症の初期でのプラセボ治療動物における高ウイルス負荷；ｃ）プラセボ治療動物と比較した場合の、ワクチン接種した動物におけるウイルス血症の持続期間、並びに臨床的及び亜臨床的関連性のあるウイルス負荷を有する動物の割合の著しい減少。
【００７５】
［プラセボ治療動物における随伴感染の存在］
上記で得られた結果により、分析された調査対象母集団におけるＰＭＷＳの診断結果が確認され、ＰＣＶ２に対するワクチン接種によって動物をＰＭＷＳから大幅に保護出来ることが示される。従って、このプラセボ制御の予防接種実験により、ＰＭＷＳが動物における基礎免疫抑制（ｕｎｄｅｒｌｙｉｎｇ  ｉｍｍｕｎｏｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ）を引き起こすという仮説を検証することが出来た。ＰＣＶ２関連性免疫不全の場合には、ＰＣＶ２ウイルス血症の発症後、重感染の頻度がワクチン接種の動物よりもプラセボ治療の動物で高くなると推測された。従って、第１段階で、調査動物の日和見菌への暴露をより詳細に分析した。臨床兆候をモニタリングしたところ、動物は主に呼吸兆候から影響を受けることが示されたため、ＰＣＲによる個々の病原体スクリーニング用に死亡した動物の肺サンプルを選択することにした。プラセボ治療の動物は最も近似的に自然界の条件を反映していると考えられるため、プラセボ治療の動物のみの結果を表３に示す。
【００７６】
ＰＣＶ２ウイルス血症の発症前に（３〜８週齢）、プラセボ治療動物の肺サンプル５個中２個で検出された唯一の病原体は、ストレプトコッカス・スイスであった。ＰＣＶ２ウイルス血症の発症時に（９〜１０週齢）、プラセボ治療動物の肺サンプル８個中１個がＰＣＶ２に陽性であり、分析された肺サンプル８個中４個がＰＲＲＳＶに陽性反応を示した。単独で又はこれら２つの病原体と組み合わせて少数検出された他の病原体は、マイコプラズマ・ハイオリニス、マイコプラズマ・ハイオニューモニエ、及びストレプトコッカス・スイスであった。最も大量の重感染病原体が、ＰＣＶ２ウイルス血症の急性期（１１〜１６週齢）の間にプラセボ治療動物の肺サンプルで検出された。ＰＣＶ２に陽性反応を示した肺サンプル１７個のうち、１２個はＰＲＲＳＶに対しても陽性であり、１３個はマイコプラズマ・ハイオリニスに対しても陽性であった。また、ストレプトコッカス・スイス又はパスツレラ・ムルトシダへの重感染が散発的に検出された。最後に、ウイルス血症の後期では（１７〜２６週齢）、マイコプラズマ・ハイオニューモニエへの重感染が優勢であったが（ＰＣＶ２陽性の肺サンプル７個中６個）、マイコプラズマ・ハイオリニス、アクチノバチルス・プルロニューモニア及びストレプトコッカス・スイスへの重感染も見られた。ウイルス血症の発症後の全期間（生後９〜２６週）、ＰＣＶ２のみに対して陽性反応を示したのは、プラセボ治療動物の肺サンプル２２個中たった２個であった。ＰＣＶ２に陽性の肺サンプルの大半では、２又は３の日和見菌の組み合わせが検出された。それ故、この調査期間中、ＰＣＶ２感染がいくつかの呼吸器随伴感染と関連して見られた。ＰＣＶ２ウイルス血症の発症及びピークはＰＲＲＳＶ及びマイコプラズマ・ハイオリニス重感染の発症及びピークと一致し、ＰＣＶ２ウイルス血症の後期にはマイコプラズマ・ハイオニューモニエ感染の発症を伴った。
【００７７】
［ＰＣＶ２に対するワクチン接種による随伴感染の減少］
肺サンプルで検出された呼吸器病原体の頻度を比較したところ、ＰＣＶ２ウイルス血症の発症前の期間では両治療グループの間で大きな違いは見られなかった（データ未掲載）。ＰＣＶ２ウイルス血症の発症後（１０〜２６週齢）、マイコプラズマ・ハイオリニス及びＰＲＲＳＶに陽性反応を示すワクチン接種した動物の肺サンプルの割合は、それぞれ７１％（ｐ＝０．０２９３）及び４６％（０．２８４７）減少した（表１）。
【００７８】
【表１】
0005559052.tif 000002
【００７９】
また、プラセボ治療動物の肺サンプルは、散発的にアクチノバチルス・プルロニューモニアに陽性であった。マイコプラズマ・ハイオニューモニエ、ストレプトコッカス・スイス、又はパスツレラ・ムルトシダに陽性の肺サンプル数のわずかな違いが、両治療グループにおける第２調査で観察された。表２に示すように、これらの病原体は、低頻度でのみ存在するか（ストレプトコッカス・スイス、パスツレラ・ムルトシダ）、ＰＣＶ２感染のかなり後期に現れた（マイコプラズマ・ハイオニューモニエ）。
【００８０】
別の調査（調査Ｂ０５ＢＩＶＩ０１３）において、表２に示すように、随伴病原体に対する類似した抵抗性がワクチン接種した動物において観察された。
【００８１】
【表２】
0005559052.tif 000003
【００８２】
上記の通り、ＰＣＶ２に対するワクチン接種の影響下で、ＰＣＶ２感染の頻度、並びに、アクチノバチルス・プルロニューモニア、ヘモフィルス・パラスイス、マイコプラズマ・ハイオリニス、パスツレラ・ムルトシダ、ＰＲＲＳＶ、サルモネラ属、ストレプトコッカス・スイス重感染の頻度は顕著に減少した。
【００８３】
別の調査において、マイコプラズマ・ハイオニューモニエに対する類似した抵抗性も、ワクチン接種した動物において観察された。
【００８４】
［参照文献］
[1] Clark T. Pathology of the Postweaning Multisystemic Wasting Syndrome of Pigs. 1996 p. 22-5.
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【図１】
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【配列表】
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