(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の式（ＩＩ）の化合物：
【化１】
0005646495.tif 000037
［式中、
各ｕは０、１より独立に選択され；
各Ｒ２およびＲ４は、カルボキシ、カルボキシアルキル、アルコキシカルボニルアルキル、アミノアルキル、（アミノ）（カルボキシ）アルキル、（アミノ）（カルボキシ）アルコキシより独立に選択され；
ここで、任意のアルキル部分は、Ｃ１−Ｃ６アルキルである］
またはその医薬的に許容される塩を含む、医薬組成物。
【請求項２】
各Ｒ２が、カルボキシアルキル、アルコキシカルボニルアルキル、アミノアルキル、（アミノ）（カルボキシ）アルキルおよび（アミノ）（カルボキシ）アルコキシより独立に選択される、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
各Ｒ４がカルボキシである、請求項２に記載の医薬組成物。
【請求項４】
各ｕが１である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項５】
以下の化合物：
【化２】
0005646495.tif 000038
またはその医薬的に許容される塩を含む、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項６】
以下の化合物：
【化３】
0005646495.tif 000039
またはその医薬的に許容される塩を含む、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項７】
以下の化合物：
【化４】
0005646495.tif 000040
またはその医薬的に許容される塩を含む、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項８】
以下の化合物：
【化５】
0005646495.tif 000041
またはその医薬的に許容される塩を含む、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項９】
疾患を患うヒトまたは動物被験体の療法的治療において使用するための、請求項１〜８のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
前記疾患がアミロイドーシスである、請求項９に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
前記疾患が、原発性アミロイドーシス、続発性アミロイドーシス、臓器特異的アミロイドーシスおよび医原性インスリンアミロイドーシスからなる群より選択される、請求項１０に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
前記臓器特異的アミロイドーシスが、脳特異的アミロイドーシスより選択される、請求項１１に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
前記疾患が、原発性アミロイドーシス、続発性アミロイドーシス、家族性または遺伝性アミロイドーシス、２型糖尿病、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病、伝染性海綿状脳症、心臓アミロイドーシス、ならびに医原性状態からなる群より選択される、請求項９に記載の医薬組成物。
【請求項１４】
前記伝染性海綿状脳症が、クロイツフェルト・ヤコブ病、クールー、致死性家族性不眠症、封入体筋炎、ウシ海綿状脳症およびコンゴーレッド親和性血管障害からなる群より選択される、請求項１３に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
前記医原性状態が、インスリンアミロイドーシスからなる群より選択される、請求項１３に記載の医薬組成物。
【請求項１６】
医薬的に許容される緩衝剤、希釈剤、賦形剤および／またはキャリアーをさらに含む、請求項１〜９のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、療法、特にタンパク質のミスフォールド（ｍｉｓｆｏｌｄｅｄ）型または凝集型が関与する疾患を患う哺乳動物の療法において有用な新規置換チオフェン誘導体に関する。
【背景技術】
【０００２】
タンパク質などの天然バイオポリマーは、しばしば、アルファヘリックスおよびベータシートなどの秩序だったコンホメーションを有し、これが、バイオポリマーの三次元の秩序だった構造および特定の機能に寄与する。タンパク質の構造は、タンパク質の機能に必須であり、多くの科学者らによって、アンフォールドタンパク質が機能しない可能性もあることが示されてきている。より重要なことに、最近数年で、タンパク質が例えばアミロイドおよび他の病変型にミスフォールディングし、そして誤って集合すると危険であることがますます認識されてきている。ミスフォールディングは、タンパク質を有用なものから、機能しないか、有毒であるか、または毒性でさえあるものに変化させうる。ヒトの健康は、適切にフォールディングされたタンパク質に依存し、そしてアミロイド原線維のｉｎ  ｖｉｖｏ沈着は、タンパク質コンホメーションに関連する多くの疾患に関連しており、こうした疾患には、アルツハイマー病、ハンチントン病、全身性アミロイドーシス、およびプリオン疾患が含まれる。動物におけるプリオン疾患、すなわち伝染性海綿状脳症（ＴＳＥ）［例えば、ウシ海綿状脳症（ＢＳＥ）、スクレイピーおよび慢性消耗病（ＣＷＤ）］、およびヒトにおけるもの［クロイツフェルト・ヤコブ病（ＣＪＤ）、ゲルストマン・シュトロイスラー・シャインカー病（ＧＳＳ）、クールー］は、正常細胞性プリオンタンパク質（ＰｒＰＣ）が、ＰｒＰＳｃと称される感染性病原性疾患関連アイソフォームにコンホメーション変換することに関連する。タンパク質は、しばしば、異なる外部刺激によってそのコンホメーションを改変し、そして病原性状態を導くタンパク質のコンホメーション変化が重要であることがよく立証されてきている。特に、天然状態を不安定化する条件下で、タンパク質は、アミロイド原線維として知られる、特徴的な線維状集合体に凝集しうる。ベータシート豊富なこれらのタンパク質集合体は、天然状態のものに比較して、明らかに異なるコンホメーションを有する。ミスフォールドしたプリオンタンパク質は、自己増殖性（感染性）でさえあり、この特性は、ミスフォールドしたコンホメーション内に完全にコードされる。
【０００３】
慢性ヒト疾患は、医療制度に深刻な影響を及ぼす。早期介入および療法を提供するために、迅速でそして正確な診断ツールが必要であることがよく認識されている。例えばアルツハイマー病におけるように、対症療法のみが利用可能であり、そしてこれらは限定された療法有効性しか持たない。現在、アルツハイマー病または伝染性海綿状脳症（ＴＳＥ）の生前分子診断試験はなく、そして行われる臨床診断は、疾患進行が重度であることを必要とする。さらに、効果的な治療はまだ利用可能でなく、そして例えばアルツハイマー病における免疫療法は非常に有望である。しかし、ミスフォールドタンパク質を捕捉して、治療および疾患進行の両方を監視する、信頼性の高い方法がないことが、大部分のタンパク質ミスフォールディング関連疾患の治療における重大な欠点である。
【０００４】
アミロイド斑、アミロイド原線維およびアミロイド様原線維中のミスフォールドタンパク質と、イオン性または極性側鎖を持つホモおよびヘテロオリゴマーおよびポリマー中の、チオフェン、エチレンジオキシチオフェン（ＥＤＯＴ）、ベンゾチアジゾール、フルオレンおよびフェニルの繰り返しユニットを含んで構成される共役分子との間にアフィニティがあることが、いくつかのｉｎ  ｖｉｔｒｏ研究で立証されてきている。インスリンのアミロイド様原線維と、アニオン性、双性イオン性およびカチオン性ポリおよびオリゴチオフェンとの間の相互作用が、［ＷＯ２００５／１０９００５］に示された。言及したオリゴマーおよびポリマーのいくつかは、組織学的切片中のアミロイド、αβおよびＰｒＰ沈着物に結合することが示されてきている［ＷＯ２００７／０９１９７３］。アニオン性、より具体的には、アルコキシスルホネート誘導体である、ＥＤＯＴのポリマーは、アミロイド様原線維に高いアフィニティを示した［Ｈａｍｅｄｉ，Ｍ．ら；Ｎａｎｏ  Ｌｅｔｔ．；（２００８）；８，１７３６−１７４０］。さらに、置換ポリフルオレン、および酸化ポリエチレンと交互のポリフルオレンは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでアミロイド様原線維と強く会合することが立証された［Ｔａｎａｋａ，Ｈ．ら；Ｎａｎｏ  Ｌｅｔｔ．；（２００８）８，２８５８−２８６１］。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】ＷＯ２００５／１０９００５
【特許文献２】ＷＯ２００７／０９１９７３
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Ｈａｍｅｄｉ，Ｍ．ら；Ｎａｎｏ  Ｌｅｔｔ．；（２００８）；８，１７３６−１７４０
【非特許文献２】Ｔａｎａｋａ，Ｈ．ら；Ｎａｎｏ  Ｌｅｔｔ．；（２００８）８，２８５８−２８６１
【発明の概要】
【０００７】
第一の側面において、本発明は、タンパク質のミスフォールド型または凝集型が関与する疾患を患う哺乳動物の治療のための、以下の式（Ｉ）の単分散化合物またはその医薬的に許容される塩に関する：
【０００８】
【化１】
0005646495.tif 000002
【０００９】
［式中、
ｎは１、２、３または４であり；
各ｐは独立に０、１、２であり；
各Ａは、チエニレン、フェニレン、フルオレニレン、ベンゾチエニレン、エチレンジオキシチエニレン、ベンゾチアジアゾリレンおよびビニレンより独立に選択される部分であり、該部分は、１または２のＲ３基で置換されていてもよく；
各Ｒ１は、１〜３のＲ４基で置換されていてもよい、Ｈ、フェニルおよびチエニルより独立に選択され；
各Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は、ハロゲン、ヒドロキシ、ヒドロキシアルキル、ヒドロキシアルコキシ、ヒドロキシアルコキシアルキル、ヒドロキシポリオキシアルキレン、アルコキシ、アルコキシアルキル、ポリオキシアルキレン、カルボキシ、カルボキシアルキル、カルボキシアルコキシ、カルボキシアルコキシアルキル、カルボキシポリオキシアルキレン、アルコキシカルボニル、アルコキシカルボニルアルキル、アルコキシカルボニルアルコキシ、アルコキシカルボニルアルコキシアルキル、アルコキシカルボニルポリオキシアルキレン、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アミノアルキル、アルキルアミノアルキル、ジアルキルアミノアルキル、アミノアルコキシ、アルキルアミノアルコキシ、ジアルキルアミノアルコキシ、アミノポリオキシアルキレン、アルキルアミノポリオキシアルキレン、ジアルキルアミノポリオキシアルキレン、アミノアルコキシアルキル、アルキルアミノアルコキシアルキル、ジアルキルアミノアルコキシアルキル、（アミノ）（カルボキシ）アルキル、（アルキルアミノ）（カルボキシ）アルキル、（ジアルキルアミノ）（カルボキシ）アルキル、（アミノ）（カルボキシ）アルコキシ、（アルキルアミノ）（カルボキシ）アルコキシ、（ジアルキルアミノ）（カルボキシ）アルコキシ、（アミノ）（カルボキシ）アルコキシアルキル、（アルキルアミノ）（カルボキシ）アルコキシアルキル、（ジアルキルアミノ）（カルボキシ）アルコキシアルキル、（アミノ）（カルボキシ）ポリオキシアルキレン、（アルキルアミノ）（カルボキシ）ポリオキシアルキレン、（ジアルキルアミノ）（カルボキシ）ポリオキシアルキレン、（アルコキシカルボニル）（アミノ）アルキル、（アルコキシカルボニル）（アルキルアミノ）アルキル、（アルコキシカルボニル）（ジアルキルアミノ）アルキル、（アルコキシカルボニル）（アミノ）アルコキシ、（アルコキシカルボニル）（アルキルアミノ）アルコキシ、（アルコキシカルボニル）（ジアルキルアミノ）アルコキシ、（アルコキシカルボニル）（アミノ）アルコキシアルキル、（アルコキシカルボニル）（アルキルアミノ）アルコキシアルキル、（アルコキシカルボニル）（ジアルキルアミノ）アルコキシアルキル、（アルコキシカルボニル）（アミノ）ポリオキシアルキレン、（アルコキシカルボニル）（アルキルアミノ）ポリオキシアルキレン、（アルコキシカルボニル）（ジアルキルアミノ）ポリオキシアルキレン、アシルアミノ、アシルアミノアルキル、アシルアミノアルコキシ、アシルアミノアルコキシアルキル、アシルアミノポリオキシアルキレン、アシルアルキルアミノ、アシルアルキルアミノアルキル、アシルアルキルアミノアルコキシ、アシルアルキルアミノアルコキシアルキル、アシルアルキルアミノポリオキシアルキレン、ヒドラジノカルボニル、ヒドラジノカルボニルアルキル、ヒドラジノカルボニルアルコキシ、ヒドラジノカルボニルアルコキシアルキル、ヒドラジノカルボニルポリオキシアルキレン、ニトロ、ニトロアルキル、ニトロアルコキシ、ニトロアルコキシアルキル、ニトロポリオキシアルキレン、シアノ、シアノアルキル、シアノアルコキシ、シアノアルコキシアルキル、シアノポリオキシアルキレン、スルホ、スルホアルキル、スルホアルコキシ、スルホアルコキシアルキルおよびスルホポリオキシアルキレンより独立に選択されるか、あるいは同じチオフェン環に結合した任意の２つのＲ２は一緒に、スルホアルキル、スルホアルコキシ、スルホアルコキシアルキルまたはスルホポリオキシアルキレンで置換されていてもよいアルキレンジオキシであり、
任意のＮＨ２基は、ｔｅｒｔ−ブチルカルバメート、ベンジルカルバメートまたは９−フルオレニルメチルカルバメートとして保護されるか、あるいはビオチニル部分で置換されていてもよく；そして
任意のアルキルまたはアルキレン部分は、Ｃ１−Ｃ６アルキルまたはアルキレンである］。
【００１０】
１つの側面において、本発明は、以下の式（ＩＩ）の単分散新規化合物またはその医薬的に許容される塩に関する：
【００１１】
【化２】
0005646495.tif 000003
【００１２】
［式中、
各ｐは０、１、２より独立に選択され；
ｖは０、１、２であり；
各ｕは０、１、２、３より独立に選択され；
但し、すべてのｐ、ｖ、ｕが０であることはなく；
各Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は、ハロゲン、ヒドロキシ、ヒドロキシアルキル、ヒドロキシアルコキシ、ヒドロキシアルコキシアルキル、ヒドロキシポリオキシアルキレン、アルコキシ、アルコキシアルキル、ポリオキシアルキレン、カルボキシ、カルボキシアルキル、カルボキシアルコキシ、カルボキシアルコキシアルキル、カルボキシポリオキシアルキレン、アルコキシカルボニル、アルコキシカルボニルアルキル、アルコキシカルボニルアルコキシ、アルコキシカルボニルアルコキシアルキル、アルコキシカルボニルポリオキシアルキレン、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アミノアルキル、アルキルアミノアルキル、ジアルキルアミノアルキル、アミノアルコキシ、アルキルアミノアルコキシ、ジアルキルアミノアルコキシ、アミノポリオキシアルキレン、アルキルアミノポリオキシアルキレン、ジアルキルアミノポリオキシアルキレン、アミノアルコキシアルキル、アルキルアミノアルコキシアルキル、ジアルキルアミノアルコキシアルキル、（アミノ）（カルボキシ）アルキル、（アルキルアミノ）（カルボキシ）アルキル、（ジアルキルアミノ）（カルボキシ）アルキル、（アミノ）（カルボキシ）アルコキシ、（アルキルアミノ）（カルボキシ）アルコキシ、（ジアルキルアミノ）（カルボキシ）アルコキシ、（アミノ）（カルボキシ）アルコキシアルキル、（アルキルアミノ）（カルボキシ）アルコキシアルキル、（ジアルキルアミノ）（カルボキシ）アルコキシアルキル、（アミノ）（カルボキシ）ポリオキシアルキレン、（アルキルアミノ）（カルボキシ）ポリオキシアルキレン、（ジアルキルアミノ）（カルボキシ）ポリオキシアルキレン、（アルコキシカルボニル）（アミノ）アルキル、（アルコキシカルボニル）（アルキルアミノ）アルキル、（アルコキシカルボニル）（ジアルキルアミノ）アルキル、（アルコキシカルボニル）（アミノ）アルコキシ、（アルコキシカルボニル）（アルキルアミノ）アルコキシ、（アルコキシカルボニル）（ジアルキルアミノ）アルコキシ、（アルコキシカルボニル）（アミノ）アルコキシアルキル、（アルコキシカルボニル）（アルキルアミノ）アルコキシアルキル、（アルコキシカルボニル）（ジアルキルアミノ）アルコキシアルキル、（アルコキシカルボニル）（アミノ）ポリオキシアルキレン、（アルコキシカルボニル）（アルキルアミノ）ポリオキシアルキレン、（アルコキシカルボニル）（ジアルキルアミノ）ポリオキシアルキレン、アシルアミノ、アシルアミノアルキル、アシルアミノアルコキシ、アシルアミノアルコキシアルキル、アシルアミノポリオキシアルキレン、アシルアルキルアミノ、アシルアルキルアミノアルキル、アシルアルキルアミノアルコキシ、アシルアルキルアミノアルコキシアルキル、アシルアルキルアミノポリオキシアルキレン、ヒドラジノカルボニル、ヒドラジノカルボニルアルキル、ヒドラジノカルボニルアルコキシ、ヒドラジノカルボニルアルコキシアルキル、ヒドラジノカルボニルポリオキシアルキレン、ニトロ、ニトロアルキル、ニトロアルコキシ、ニトロアルコキシアルキル、ニトロポリオキシアルキレン、シアノ、シアノアルキル、シアノアルコキシ、シアノアルコキシアルキル、シアノポリオキシアルキレン、スルホ、スルホアルキル、スルホアルコキシ、スルホアルコキシアルキルおよびスルホポリオキシアルキレンより独立に選択されるか、あるいは同じチオフェン環に結合した任意の２つのＲ２は一緒に、スルホアルキル、スルホアルコキシ、スルホアルコキシアルキルまたはスルホポリオキシアルキレンで置換されていてもよいアルキレンジオキシであり、
任意のＮＨ２基は、ｔｅｒｔ−ブチルカルバメート、ベンジルカルバメートまたは９−フルオレニルメチルカルバメートとして保護されるか、あるいはビオチニル部分で置換されていてもよく；そして
任意のアルキルまたはアルキレン部分は、Ｃ１−Ｃ６アルキルまたはアルキレンである］。
【００１３】
さらに別の側面において、本発明は、療法において使用するための、式（ＩＩ）記載の化合物に関する。
さらなる側面において、本発明は、タンパク質のミスフォールド型または凝集型が関与する疾患の療法のための方法、およびこうした方法における本発明の化合物の使用に関する。
【００１４】
さらなる側面において、本発明は、本発明記載の少なくとも２つの単分散化合物の混合物を含む。
さらなる側面において、本発明は、第一の側面記載の少なくとも１つの化合物、および場合によって、医薬的に許容される緩衝剤、希釈剤、賦形剤および／またはキャリアーを含む、医薬組成物に関する。
【００１５】
本発明記載の化合物は、画像化法における使用のために標識してはならない。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】２０時間インキュベーションした参照試料、どちらのスケールバーも０．２μｍを表す。シート状凝集物中の分離した原線維を白い矢印で示す。
【図２】２０時間インキュベーションした参照試料、スケールバーは０．２μｍを表す。シート状凝集物中の分離した原線維が白い矢印のすぐ前に見える。
【図３】６６時間インキュベーションした参照試料、どちらのスケールバーも０．２μｍを表す。白い矢印は、原線維シートから離れた可視原線維を指す。
【図４】１００μＭの本発明の化合物Ｆと６６時間インキュベーションした試料。スケールバーは０．２μｍを表し、どちらの画像も同じ倍率である。白い矢印は、原線維がまったく見えない、密な凝集物を指す。
【図５】１００μＭの本発明の化合物Ｇと２０時間インキュベーションした上部試料。スケールバーは０．２μｍを表す。１０μＭの本発明の化合物Ｇと２０時間インキュベーションした下部試料。スケールバーは１００ｎｍを表す。短い分枝原線維が白い矢印で左側に示され、一方、オリゴマー構造が右側に示される。
【図６】１００μＭの本発明の化合物Ｇと６６時間インキュベーションした試料。スケールバーは０．２μｍを表し、どちらの画像も同じ倍率である。短いプロト原線維が白い矢印で左側に示され、一方、典型的な形態の非常に密な凝集物が右側に示される。
【図７】本発明の化合物（左は化合物Ｇおよび右は化合物Ｆ）は、注射１週間後、生存マウス脳において、Ａβ沈着物に結合した。
【図８】（Ａ）ＣＳＦ中のＡβ３８、Ａβ４０およびＡβ４２に対する、ｐ−ＦＴＡＡ治療の効果：グラフは、ビヒクルまたは３つの投薬量のｐ−ＦＴＡＡで治療したｈＡＰＰ  ＴｇマウスのＣＳＦにおける、ヒトＡβ３８（左）、Ａβ４０（中央）、およびＡβ４２（右）を示す。データは、個々の値およびＳＤを含む群平均を伴う、スキャッタードットプロットとして表される。有意な群相違をアステリスクで示す：＊はｐ＜０．０５を示し、＊＊はｐ＜０．０１を示し、＊＊＊はｐ＜０．００１を示す。
【００１７】
（Ｂ）脳ホモジネート中のＡβ３８、Ａβ４０およびＡβ４２に対する、ｐ−ＦＴＡＡ治療の効果：グラフは、ビヒクルまたは３つの投薬量のｐ−ＦＴＡＡで治療したｈＡＰＰ  Ｔｇマウスの４つの異なる脳ホモジネート分画における、ヒトＡβ３８（左）、Ａβ４０（中央）、およびＡβ４２（右）を示す。データは、個々の値およびＳＤを含む群平均を伴う、スキャッタードットプロットとして表される。有意な群相違をアステリスクで示す：＊はｐ＜０．０５を示し、＊＊はｐ＜０．０１を示し、＊＊＊はｐ＜０．００１を示す。
【図９】ＭＷＭ中の行動に対するｐ−ＦＴＡＡ治療の効果：グラフは、ビヒクル（□）、１０ｍｇ／ｋｇ／日  ｐ−ＦＴＡＡ（◇）を投与されたＴｇマウス、およびビヒクルを投与されたｎＴｇマウス（○）が第１〜４日にＭＷＭ中のプラットホーム位置に到達するまでの水泳速度（上部）および泳路長（下部）を示す。データを１日あたり３回の試験すべての群平均＋ＳＥＭとして示す。有意な群相違をアステリスクで示す：＊は、ｎＴｇ対照対Ｔｇ対照に関するｐ＜０．０５を示し、＊＊はｐ＜０．０１を示し、＊＊＊はｐ＜０．００１を示す。
【図１０】チオフラビンＳ染色によって視覚化される斑面積に対するｐ−ＦＴＡＡ治療の効果：グラフは、ビヒクル（Ｎ＝６）、０．１ｍｇ／ｋｇ／日  ｐ−ＦＴＡＡ（Ｎ＝６）、１ｍｇ／ｋｇ／日  ｐ−ＦＴＡＡ（Ｎ＝６）、１０ｍｇ／ｋｇ／日  ｐ−ＦＴＡＡ（Ｎ＝６）を投与されたＴｇマウスの皮質および海馬におけるチオフラビンＳ染色面積を示す。データを平均＋ＳＥＭとして示す。スキャッターバーは、対応のない両側ｔ検定における有意な相違を示す。１ｍｇ／ｋｇならびに１０ｍｇ／ｋｇ  ｐ−ＦＴＡＡ治療は、海馬における有意により低い斑負荷量（ｐｌａｑｕｅ  ｌｏａｄ）を導き、一方チオフラビン陽性斑負荷量は、皮質において、群間で同等であった。
【図１１】ｐ−ＨＴＡＡおよびＰＯＷＴ−１３はどちらも、１０μＭ  Ａβ１−４２のみに比較して、よりよい生存度を生じる。Ｔ．Ｉ．対１０μＭ  Ａβ１−４２の化学量論比をグラフ下部に示す。
【図１２】ｐ−ＨＴＡＡおよびＰＯＷＴ−１３はどちらも、１０μＭ  Ａβ１−４２のみに比較して、よりよい生存度を生じる。Ｔ．Ｉ．対１０μＭ  Ａβ１−４２の化学量論比をグラフ下部に示す。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
定義
本出願で用いるすべての単語および略語は、別に示さない限り、当該技術分野において通常与えられる意味を有すると見なされるものとする。しかし、明確にするために、いくつかの用語を特に以下に定義する。
【００１９】
本明細書において、用語アルキルまたはアルキレン部分は、Ｃ１−Ｃ６アルキルまたはアルキレン部分、例えばＣ１−Ｃ４アルキルまたはアルキレン部分であり、そしてまた、任意の官能基、例えばアルコキシ、アルキルアミノまたはカルボキシポリオキシアルキレン基のアルキルまたはアルキレン部分も含むよう意図される。したがって、例えば、本発明記載のアルコキシまたはアルキルアミノ基中の任意のアルキルは、Ｃ１−Ｃ６アルキル基、例えばＣ１−Ｃ４アルキル基である。
【００２０】
また、本発明記載の任意のアルキルまたはアルキレン基は分枝していてもまたは分枝していなくてもよい。
用語「アルキル」には、分枝または非分枝Ｃ１−Ｃ６アルカン、またはＣ１−Ｃ４アルカン由来の１つの基が含まれる。アルキル基の例は、メチル（ＣＨ３−）、エチル（ＣＨ３ＣＨ２−）、プロピル（−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−）およびイソプロピル（（ＣＨ３）２ＣＨ−）である。
【００２１】
用語「アルキレン」には、分枝または非分枝Ｃ１−Ｃ６アルカン、またはＣ１−Ｃ４アルカン由来の２つの基が含まれる。アルキレン基の例は、メチレン（−ＣＨ２−）、エチレン（−ＣＨ２ＣＨ２−）、プロピレン（−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−）およびイソプロピレン（−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２−）である。
【００２２】
用語「チエニレン」、「フェニレン」、「フルオレニレン」、「ベンゾチエニレン」、「エチレンジオキシチエニレン」、「ベンゾチアジアゾリレン」、「ビニレン」には、それぞれ、チオフェン、ベンゼン、フルオレン、３，４−エチレンジオキシチオフェン、２−ベンゾチオフェン（またはベンゾ［ｃ］チオフェン）、２，１，３−ベンゾチアジアゾール、およびエチレンに由来する２つの基が含まれる。
【００２３】
用語「ヒドロキシアルキル」、「ヒドロキシアルコキシ」、「ヒドロキシアルコキシアルキル」および「ヒドロキシポリオキシアルキレン」には、それぞれ、ヒドロキシ官能基を所持する、アルキル、アルコキシ、アルコキシアルキルおよびポリオキシアルキレン基が含まれる。
【００２４】
用語「アルコキシ」には、Ｒ−Ｏ−基（式中、Ｒはアルキルである）が含まれる。
用語「アルコキシアルキル」には、アルコキシ官能基を所持するアルキル基が含まれる。
【００２５】
用語「ポリオキシアルキレン」には、一般式ＲＯ−（Ｒ’Ｏ）ｎ−（式中、ｎは１〜６の整数、例えば１〜４の整数、あるいは１または２であり；Ｒはアルキル基であり、そして各Ｒ’はアルキレン基より独立に選択される）の基が含まれる。
【００２６】
用語「カルボキシアルキル」、「カルボキシアルコキシ」、「カルボキシアルコキシアルキル」および「カルボキシポリオキシアルキレン」には、それぞれ、カルボキシ官能基を所持する、アルキル、アルコキシ、アルコキシアルキルおよびポリオキシアルキレン基が含まれる。
【００２７】
用語「アルコキシカルボニル」には、基−ＣＯＯＲ、すなわちカルボン酸官能基のアルキルエステルが含まれる。
用語「アルコキシカルボニルアルキル」、「アルコキシカルボニルアルコキシ」、「アルコキシカルボニルアルコキシアルキル」、「アルコキシカルボニルポリオキシアルキレン」には、それぞれ、アルコキシカルボニル官能基を所持する、アルキル、アルコキシ、アルコキシアルキルおよびポリオキシアルキレン基が含まれる。
【００２８】
用語「アルキルアミノ」には、−ＮＨＲ（式中、Ｒはアルキルである）が含まれる。
用語「ジアルキルアミノ」には、−ＮＲＲ’（式中、ＲおよびＲ’はアルキル基より独立に選択される）が含まれる。
【００２９】
用語「アミノアルキル」、「アルキルアミノアルキル」、および「ジアルキルアミノアルキル」には、それぞれ、アミノ、アルキルアミノまたはジアルキルアミノ官能基を所持するアルキル基が含まれる。
【００３０】
用語「アミノアルコキシ」、「アルキルアミノアルコキシ」、および「ジアルキルアミノアルコキシ」には、それぞれ、アミノ、アルキルアミノまたはジアルキルアミノ官能基を所持するアルコキシ基が含まれる。
【００３１】
用語「アミノアルコキシアルキル」、「アルキルアミノアルコキシアルキル」、および「ジアルキルアミノアルコキシアルキル」には、それぞれ、アミノ、アルキルアミノまたはジアルキルアミノ官能基を所持するアルコキシアルキル基が含まれる。
【００３２】
用語「アミノポリオキシアルキレン」、「アルキルアミノポリオキシアルキレン」、および「ジアルキルアミノポリオキシアルキレン」には、それぞれ、アミノ、アルキルアミノまたはジアルキルアミノ官能基を所持するポリオキシアルキレン基が含まれる。
【００３３】
用語「アシルアミノ」には、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−アルキル部分が含まれる。
用語「アシルアミノアルキル」、「アシルアミノアルコキシ」、「アシルアミノアルコキシアルキル」および「アシルアミノポリオキシアルキレン」には、それぞれ、アシルアミノ官能基を所持する、アルキル、アルコキシ、アルコキシアルキルおよびポリオキシアルキレン基が含まれる。
【００３４】
用語「アシルアルキルアミノ」には、−ＮＲ−Ｃ（Ｏ）−アルキル部分（式中、Ｒはアルキルである）が含まれる。
用語「アシルアルキルアミノアルキル」、「アシルアルキルアミノアルコキシ」、「アシルアルキルアミノアルコキシアルキル」および「アシルアルキルアミノポリオキシアルキレン」には、それぞれ、アシルアルキルアミノ官能基を所持する、アルキル、アルコキシ、アルコキシアルキルおよびポリオキシアルキレン基が含まれる。
【００３５】
用語「ヒドラジノカルボニル」には、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−ＮＨ２部分が含まれる。
用語「ヒドラジノカルボニルアルキル」、「ヒドラジノカルボニルアルコキシ」、「ヒドラジノカルボニルアルコキシアルキル」および「ヒドラジノカルボニルポリオキシアルキレン」には、それぞれ、ヒドラジノカルボニル官能基を所持する、アルキル、アルコキシ、アルコキシアルキルおよびポリオキシアルキレン基が含まれる。
【００３６】
用語「（アミノ）（カルボキシ）アルキル」、「（アミノ）（カルボキシ）アルコキシ」、「（アミノ）（カルボキシ）アルコキシアルキル」および「（アミノ）（カルボキシ）ポリオキシアルキレン」には、それぞれ、好ましくは同じ炭素原子に結合したカルボキシおよびアミノ官能基を所持する、アルキル、アルコキシ、アルコキシアルキルおよびポリオキシアルキレン基が含まれる。
【００３７】
用語「（アルキルアミノ）（カルボキシ）アルキル」、「（アルキルアミノ）（カルボキシ）アルコキシ」、「（アルキルアミノ）（カルボキシ）アルコキシアルキル」および「（アルキルアミノ）（カルボキシ）ポリオキシアルキレン」には、それぞれ、好ましくは同じ炭素原子に結合したカルボキシおよびアルキルアミノ官能基を所持する、アルキル、アルコキシ、アルコキシアルキルおよびポリオキシアルキレン基が含まれる。
【００３８】
用語「（ジアルキルアミノ）（カルボキシ）アルキル」、「（ジアルキルアミノ）（カルボキシ）アルコキシ」、「（ジアルキルアミノ）（カルボキシ）アルコキシアルキル」および「（ジアルキルアミノ）（カルボキシ）ポリオキシアルキレン」には、それぞれ、好ましくは同じ炭素原子に結合したカルボキシおよびジアルキルアミノ官能基を所持する、アルキル、アルコキシ、アルコキシアルキルおよびポリオキシアルキレン基が含まれる。
【００３９】
用語「（アルコキシカルボニル）（アミノ）アルキル」、「（アルコキシカルボニル）（アミノ）アルコキシ」、「（アルコキシカルボニル）（アミノ）アルコキシアルキル」および「（アルコキシカルボニル）（アミノ）ポリオキシアルキレン」には、それぞれ、好ましくは同じ炭素原子に結合したアルコキシカルボニルおよびアミノ官能基を所持する、アルキル、アルコキシ、アルコキシアルキルおよびポリオキシアルキレン基が含まれる。
【００４０】
用語「（アルコキシカルボニル）（アルキルアミノ）アルキル」、「（アルコキシカルボニル）（アルキルアミノ）アルコキシ」、「（アルコキシカルボニル）（アルキルアミノ）アルコキシアルキル」および「（アルコキシカルボニル）（アルキルアミノ）−ポリオキシアルキレン」には、それぞれ、好ましくは同じ炭素原子に結合したアルコキシカルボニルおよびアルキルアミノ官能基を所持する、アルキル、アルコキシ、アルコキシアルキルおよびポリオキシアルキレン基が含まれる。
【００４１】
用語「（アルコキシカルボニル）（ジアルキルアミノ）アルキル」、「（アルコキシカルボニル）（ジアルキルアミノ）アルコキシ」、「（アルコキシカルボニル）（ジアルキルアミノ）アルコキシアルキル」および「（アルコキシカルボニル）（ジアルキルアミノ）ポリオキシアルキレン」には、それぞれ、好ましくは同じ炭素原子に結合したアルコキシカルボニルおよびジアルキルアミノ官能基を所持する、アルキル、アルコキシ、アルコキシアルキルおよび「ポリオキシアルキレン」基が含まれる。
【００４２】
用語「ニトロアルキル」、「ニトロアルコキシ」、「ニトロアルコキシアルキル」、「ニトロポリオキシアルキレン」には、それぞれ、ニトロ官能基を所持する、アルキル、アルコキシ、アルコキシアルキルおよびポリオキシアルキレン基が含まれる。
【００４３】
用語「シアノアルキル」、「シアノアルコキシ」、「シアノアルコキシアルキル」、「シアノポリオキシアルキレン」には、それぞれ、シアノ官能基を所持する、アルキル、アルコキシ、アルコキシアルキルおよびポリオキシアルキレン基が含まれる。
【００４４】
用語「スルホアルキル」、「スルホアルコキシ」、「スルホアルコキシアルキル」、「スルホポリオキシアルキレン」には、それぞれ、スルホ官能基を所持する、アルキル、アルコキシ、アルコキシアルキルおよびポリオキシアルキレン基が含まれる。
【００４５】
本明細書において、用語「単分散」は、当業者に一般的に知られるように、非常に狭いサイズ分布として解釈されなければならず、すなわち多分散性指数（ＰＤＩ）は１に近くなければならない。
【００４６】
本発明には、すべてのありうる幾何学的または立体的（ｓｔｅｒｅｏｍｅｒｉｃ）形の本明細書記載の化合物が含まれることに注目しなければならない。本発明の範囲内には、言及する化合物のシスおよびトランス異性体、ＲおよびＳ鏡像異性体、ジアステレオマー、ならびにラセミ混合物がある。
【００４７】
新規医学的使用
上述のように、第一の側面において、本発明は、哺乳動物、特に、タンパク質のミスフォールド型または凝集型が関与する疾患を患うヒトなどの哺乳動物の治療のための、式（Ｉ）の単分散化合物またはその医薬的に許容される塩に関する。
【００４８】
本発明の化合物は、単量体のオリゴマーまたはポリマーと見なされてもよい。先行技術において、単量体のいくつかのオリゴマーまたはポリマーを産生して、本発明記載の化合物の基礎が形成されることが示唆されてきている。しかし、単分散化合物に比較して、多分散ポリマーを製造する方が容易であり、そしてコストが低いため、ポリマーは非常にしばしば多分散である。本発明記載の化合物は、その主な用途が薬剤であることが見出され、そしてしたがって、よく定義されている必要がある。したがって、本発明の化合物は単分散である。
【００４９】
本発明のいくつかの態様において、ｎは１〜４；例えば１〜３、例えば１または２であり；そして各ｐは独立に０〜２；例えば０または１であり；各Ａは、チエニレン、フェニレン、フルオレニレン、ベンゾチエニレン、エチレンジオキシチエニレン、ベンゾチアジアゾリレンおよびビニレン；例えば、チエニレン、フェニレン、およびエチレンジオキシチエニレンより独立に選択される部分であり、ここで各Ａは、１または２の、本明細書において上に定義するようなＲ３基で置換され；各Ｒ１は、Ｈ、フェニルおよびチエニル、例えばＨおよびチエニルより独立に選択され；１〜３の、上に定義するようなＲ４基；例えば１または２の基、あるいは１のＲ４基で置換される。
【００５０】
本発明のいくつかの態様において、各Ａは非置換である。
Ａが、チエニレン、エチレンジオキシチエニレンまたはベンゾチエニレンである場合、Ａは好ましくは２位と５位に２つの基を有する：
【００５１】
【化３】
0005646495.tif 000004
【００５２】
すなわち、環イオウ原子に隣接する炭素原子で、隣接するチオフェン環に結合している。
Ａがフェニレンである場合、Ａは好ましくは１位と４位に２つの基を有する：
【００５３】
【化４】
0005646495.tif 000005
【００５４】
すなわち、パラ位で、隣接するチオフェン環に結合している。
Ａがベンゾチアジアゾリレンである場合、Ａは好ましくは４位と７位に２つの基を有する。
【００５５】
【化５】
0005646495.tif 000006
【００５６】
Ａがフルオレニルである場合、Ａは好ましくは２位と７位に２つの基を有する。
【００５７】
【化６】
0005646495.tif 000007
【００５８】
Ａがビニレンである場合、チオフェン環は好ましくはトランス立体配置である。
【００５９】
【化７】
0005646495.tif 000008
【００６０】
いくつかの態様において、例えばｎが１である場合、Ｒ１の少なくとも１つはＨでなく；いくつかの態様において、どちらのＲ１もＨではない。
本明細書に定義するようないずれかの式（Ｉ）記載の化合物において、各Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は、ハロゲン、ヒドロキシ、ヒドロキシアルキル、ヒドロキシアルコキシ、ヒドロキシアルコキシアルキル、ヒドロキシポリオキシアルキレン、アルコキシ、アルコキシアルキル、ポリオキシアルキレン、カルボキシ、カルボキシアルキル、カルボキシアルコキシ、カルボキシアルコキシアルキル、カルボキシポリオキシアルキレン、アルコキシカルボニル、アルコキシカルボニルアルキル、アルコキシカルボニルアルコキシ、アルコキシカルボニルアルコキシアルキル、アルコキシカルボニルポリオキシアルキレン、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アミノアルキル、アルキルアミノアルキル、ジアルキルアミノアルキル、アミノアルコキシ、アルキルアミノアルコキシ、ジアルキルアミノアルコキシ、アミノポリオキシアルキレン、アルキルアミノポリオキシアルキレン、ジアルキルアミノポリオキシアルキレン、アミノアルコキシアルキル、アルキルアミノアルコキシアルキル、ジアルキルアミノアルコキシアルキル、（アミノ）（カルボキシ）アルキル、（アルキルアミノ）（カルボキシ）アルキル、（ジアルキルアミノ）（カルボキシ）アルキル、（アミノ）（カルボキシ）アルコキシ、（アルキルアミノ）（カルボキシ）アルコキシ、（ジアルキルアミノ）（カルボキシ）アルコキシ、（アミノ）（カルボキシ）アルコキシアルキル、（アルキルアミノ）（カルボキシ）アルコキシアルキル、（ジアルキルアミノ）（カルボキシ）アルコキシアルキル、（アミノ）（カルボキシ）ポリオキシアルキレン、（アルキルアミノ）（カルボキシ）ポリオキシアルキレン、（ジアルキルアミノ）（カルボキシ）ポリオキシアルキレン、（アルコキシカルボニル）（アミノ）アルキル、（アルコキシカルボニル）（アルキルアミノ）アルキル、（アルコキシカルボニル）（ジアルキルアミノ）アルキル、（アルコキシカルボニル）（アミノ）アルコキシ、（アルコキシカルボニル）（アルキルアミノ）アルコキシ、（アルコキシカルボニル）（ジアルキルアミノ）アルコキシ、（アルコキシカルボニル）（アミノ）アルコキシアルキル、（アルコキシカルボニル）（アルキルアミノ）アルコキシアルキル、（アルコキシカルボニル）（ジアルキルアミノ）アルコキシアルキル、（アルコキシカルボニル）（アミノ）ポリオキシアルキレン、（アルコキシカルボニル）（アルキルアミノ）ポリオキシアルキレン、（アルコキシカルボニル）（ジアルキルアミノ）ポリオキシアルキレン、アシルアミノ、アシルアミノアルキル、アシルアミノアルコキシ、アシルアミノアルコキシアルキル、アシルアミノポリオキシアルキレン、アシルアルキルアミノ、アシルアルキルアミノアルキル、アシルアルキルアミノアルコキシ、アシルアルキルアミノアルコキシアルキル、アシルアルキルアミノポリオキシアルキレン、ヒドラジノカルボニル、ヒドラジノカルボニルアルキル、ヒドラジノカルボニルアルコキシ、ヒドラジノカルボニルアルコキシアルキル、ヒドラジノカルボニルポリオキシアルキレン、ニトロ、ニトロアルキル、ニトロアルコキシ、ニトロアルコキシアルキル、ニトロポリオキシアルキレン、シアノ、シアノアルキル、シアノアルコキシ、シアノアルコキシアルキル、シアノポリオキシアルキレン、スルホ、スルホアルキル、スルホアルコキシ、スルホアルコキシアルキルおよびスルホポリオキシアルキレンより独立に選択されるか、あるいは同じチオフェン環に結合した任意の２つのＲ２は一緒に、スルホアルキル、スルホアルコキシ、スルホアルコキシアルキルまたはスルホポリオキシアルキレンで置換されていてもよいアルキレンジオキシであり、そして
任意のＮＨ２基は、ｔｅｒｔ−ブチルカルバメート、ベンジルカルバメートまたは９−フルオレニルメチルカルバメートとして保護されるか、あるいはビオチニル部分で置換されていてもよい。
【００６１】
いくつかの態様において、各Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は、ハロゲン、アルコキシ、アルコキシアルキル、ポリオキシアルキレン、カルボキシ、カルボキシアルキル、カルボキシアルコキシ、カルボキシポリオキシアルキレン、アルコキシカルボニル、アルコキシカルボニルアルキル、アルコキシカルボニルアルコキシ、アルコキシカルボニルポリオキシアルキレン、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アミノアルキル、アルキルアミノアルキル、ジアルキルアミノアルキル、アミノアルコキシ、アルキルアミノアルコキシ、ジアルキルアミノアルコキシ、アミノポリオキシアルキレン、アルキルアミノポリオキシアルキレン、ジアルキルアミノポリオキシアルキレン、（アミノ）（カルボキシ）アルキル、（アルキルアミノ）（カルボキシ）アルキル、（ジアルキルアミノ）（カルボキシ）アルキル、（アミノ）（カルボキシ）アルコキシ、（アルキルアミノ）（カルボキシ）アルコキシ、（ジアルキルアミノ）（カルボキシ）アルコキシ、（アミノ）（カルボキシ）ポリオキシアルキレン、（アルキルアミノ）（カルボキシ）ポリオキシアルキレン、（ジアルキルアミノ）（カルボキシ）ポリオキシアルキレン、（アルコキシカルボニル）（アミノ）アルキル、（アルコキシカルボニル）（アルキルアミノ）アルキル、（アルコキシカルボニル）（ジアルキルアミノ）アルキル、（アルコキシカルボニル）（アミノ）アルコキシ、（アルコキシカルボニル）（アルキルアミノ）アルコキシ、（アルコキシカルボニル）（ジアルキルアミノ）アルコキシ、（アルコキシカルボニル）（アミノ）ポリオキシアルキレン、（アルコキシカルボニル）（アルキルアミノ）ポリオキシアルキレン、（アルコキシカルボニル）（ジアルキルアミノ）ポリオキシアルキレン、（アルコキシカルボニル）（アルキルアミノ）アルコキシ、（アルコキシカルボニル）（ジアルキルアミノ）アルコキシ、ならびにスルホアルキル、スルホアルコキシアルキルおよびスルホポリオキシアルキレンより独立に選択されるか、あるいは同じチオフェン環に結合した任意の２つのＲ２は一緒に、スルホアルキル、スルホアルコキシアルキルまたはスルホポリオキシアルキレンで置換されていてもよいアルキレンジオキシであり、
任意のＮＨ２基は、ｔｅｒｔ−ブチルカルバメート、ベンジルカルバメートまたは９−フルオレニルメチルカルバメートとして保護されるか、あるいはビオチニル部分で置換されていてもよい。
【００６２】
本発明のいくつかの態様において、各Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は、ハロゲン、アルコキシ、カルボキシ、カルボキシアルキル、アルコキシカルボニルアルキル、アミノアルキル、ジアミノアルコキシ、（アミノ）（カルボキシ）アルコキシアルキル、（アルキルアミノ）（カルボキシ）アルコキシアルキル、（ジアルキルアミノ）（カルボキシ）アルコキシアルキル、（アルコキシカルボニル）（アミノ）アルコキシアルキル、（アルコキシカルボニル）（アルキルアミノ）アルコキシアルキル、（アルコキシカルボニル）（ジアルキルアミノ）アルコキシアルキル、およびスルホアルコキシアルキルより独立に選択されるか、あるいは同じチオフェン環に結合した任意の２つのＲ２は一緒に、スルホアルキル、スルホアルコキシ、スルホアルコキシアルキルまたはスルホポリオキシアルキレンで置換されていてもよいアルキレンジオキシであり、
任意の一級アミノ基は、ｔｅｒｔ−ブチルカルバメート、ベンジルカルバメートまたは９−フルオレニルメチルカルバメートとして保護されていてもよく；そして
任意のアルキルまたはアルキレン部分は、Ｃ１−Ｃ６アルキルまたはアルキレン、例えばＣ１−Ｃ４アルキルまたはアルキレン部分である。
【００６３】
いくつかの態様において、本発明の化合物は、以下の式（Ｉ’）によって示されうる：
【００６４】
【化８】
0005646495.tif 000009
【００６５】
［式中、
ｎは１〜４；例えば１〜３、あるいは１または２；例えば１であり；
各Ｒ２は、カルボキシ、カルボキシアルキル、アルコキシカルボニルアルキル、アミノアルキル、（アミノ）（カルボキシ）アルコキシアルキル、（ジアルキルアミノ）（カルボキシ）アルコキシアルキル、（アミノ）（アルコキシカルボニル）アルコキシアルキルおよび（アミノ）（フェノキシカルボニル）アルコキシアルキルより独立に選択され；そして
各Ｒ４は、水素、ハロゲン、カルボキシ、カルボキシアルキル、アルコキシカルボニルアルキル、アミノアルキル、（アミノ）（カルボキシ）アルコキシアルキル、（ジアルキルアミノ）（カルボキシ）アルコキシアルキル、（アミノ）（アルコキシカルボニル）アルコキシアルキル、（アミノ）（フェノキシカルボニル）アルコキシアルキル、アシルアミノ、アシルアミノアルキル、アシルアルキルアミノおよびアシルアルキルアミノアルキルより独立に選択される］。
【００６６】
例えば、各Ｒ２は、カルボキシ、カルボキシメチル、メトキシカルボニルメチル、アミノメチル、（アミノ）（カルボキシ）エトキシエチル、（ジメチルアミノ）（カルボキシ）エトキシエチル、（アミノ）（メトキシカルボニル）エトキシエチルおよび（アミノ）（フェノキシカルボニル）エトキシエチルより独立に選択されてもよく；そして
各Ｒ４は、水素、ハロゲン、カルボキシ、カルボキシメチル、メトキシカルボニルメチル、アミノメチル、（アミノ）（カルボキシ）エトキシエチル、（ジメチルアミノ）（カルボキシ）エトキシエチル、（アミノ）（メトキシカルボニル）エトキシエチル、（アミノ）（フェノキシカルボニル）エトキシエチルより独立に選択されてもよい。
【００６７】
いくつかの態様において、すべてのＲ２基は同じである。他の態様において、すべてのＲ４基は同じである。さらに他の態様において、すべてのＲ２基およびＲ４基は同じである。
【００６８】
いくつかの態様において、化合物は、式（Ｉ’’）：
【００６９】
【化９】
0005646495.tif 000010
【００７０】
または式（Ｉ’’’）：
【００７１】
【化１０】
0005646495.tif 000011
【００７２】
または式（Ｉ’’’’）：
【００７３】
【化１１】
0005646495.tif 000012
【００７４】
［式中、ｎ、Ｒ２およびＲ４は上に定義する通りである］によって示されうる。
化合物のさらなる例を、以下に、化合物Ｔ１〜Ｔ１８として提供し、式中、ｎ＝２〜３、ｍ＝５〜１４およびｋ＝２〜５である。すべての化合物は、１つまたはいくつかのＲ基を有してもよく、式中、それぞれの位のＲ基は、上に定義する通りである。
【００７５】
【化１２】
0005646495.tif 000013
【００７６】
新規化合物
１つの側面において、本発明は、以下の式（ＩＩ）の新規化合物に関する：
【００７７】
【化１３】
0005646495.tif 000014
【００７８】
［式中、
各ｐは０〜２より独立に選択され；例えば０または１、そして特に１であり
各ｖは０〜２より独立に選択され；例えば０または１、そして特に０であり
各ｕは０〜３より独立に選択され；例えば０〜２、そして特に０または１であり
但し、すべてのｐ、ｖ、ｕが０であることはなく；
各Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は、ハロゲン、ヒドロキシ、ヒドロキシアルキル、ヒドロキシアルコキシ、ヒドロキシアルコキシアルキル、ヒドロキシポリオキシアルキレン、アルコキシ、アルコキシアルキル、ポリオキシアルキレン、カルボキシ、カルボキシアルキル、カルボキシアルコキシ、カルボキシアルコキシアルキル、カルボキシポリオキシアルキレン、アルコキシカルボニル、アルコキシカルボニルアルキル、アルコキシカルボニルアルコキシ、アルコキシカルボニルアルコキシアルキル、アルコキシカルボニルポリオキシアルキレン、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アミノアルキル、アルキルアミノアルキル、ジアルキルアミノアルキル、アミノアルコキシ、アルキルアミノアルコキシ、ジアルキルアミノアルコキシ、アミノポリオキシアルキレン、アルキルアミノポリオキシアルキレン、ジアルキルアミノポリオキシアルキレン、アミノアルコキシアルキル、アルキルアミノアルコキシアルキル、ジアルキルアミノアルコキシアルキル、（アミノ）（カルボキシ）アルキル、（アルキルアミノ）（カルボキシ）アルキル、（ジアルキルアミノ）（カルボキシ）アルキル、（アミノ）（カルボキシ）アルコキシ、（アルキルアミノ）（カルボキシ）アルコキシ、（ジアルキルアミノ）（カルボキシ）アルコキシ、（アミノ）（カルボキシ）アルコキシアルキル、（アルキルアミノ）（カルボキシ）アルコキシアルキル、（ジアルキルアミノ）（カルボキシ）アルコキシアルキル、（アミノ）（カルボキシ）ポリオキシアルキレン、（アルキルアミノ）（カルボキシ）ポリオキシアルキレン、（ジアルキルアミノ）（カルボキシ）ポリオキシアルキレン、（アルコキシカルボニル）（アミノ）アルキル、（アルコキシカルボニル）（アルキルアミノ）アルキル、（アルコキシカルボニル）（ジアルキルアミノ）アルキル、（アルコキシカルボニル）（アミノ）アルコキシ、（アルコキシカルボニル）（アルキルアミノ）アルコキシ、（アルコキシカルボニル）（ジアルキルアミノ）アルコキシ、（アルコキシカルボニル）（アミノ）アルコキシアルキル、（アルコキシカルボニル）（アルキルアミノ）アルコキシアルキル、（アルコキシカルボニル）（ジアルキルアミノ）アルコキシアルキル、（アルコキシカルボニル）（アミノ）ポリオキシアルキレン、（アルコキシカルボニル）（アルキルアミノ）ポリオキシアルキレン、（アルコキシカルボニル）（ジアルキルアミノ）ポリオキシアルキレン、アシルアミノ、アシルアミノアルキル、アシルアミノアルコキシ、アシルアミノアルコキシアルキル、アシルアミノポリオキシアルキレン、アシルアルキルアミノ、アシルアルキルアミノアルキル、アシルアルキルアミノアルコキシ、アシルアルキルアミノアルコキシアルキル、アシルアルキルアミノポリオキシアルキレン、ヒドラジノカルボニル、ヒドラジノカルボニルアルキル、ヒドラジノカルボニルアルコキシ、ヒドラジノカルボニルアルコキシアルキル、ヒドラジノカルボニルポリオキシアルキレン、ニトロ、ニトロアルキル、ニトロアルコキシ、ニトロアルコキシアルキル、ニトロポリオキシアルキレン、シアノ、シアノアルキル、シアノアルコキシ、シアノアルコキシアルキル、シアノポリオキシアルキレン、スルホ、スルホアルキル、スルホアルコキシ、スルホアルコキシアルキルおよびスルホポリオキシアルキレンより独立に選択されるか、あるいは同じチオフェン環に結合した任意の２つのＲ２は一緒に、スルホアルキル、スルホアルコキシ、スルホアルコキシアルキルまたはスルホポリオキシアルキレンで置換されていてもよいアルキレンジオキシであり；
任意のＮＨ２基は、ｔｅｒｔ−ブチルカルバメート、ベンジルカルバメートまたは９−フルオレニルメチルカルバメートとして保護されるか、あるいはビオチニル部分で置換されていてもよく；ここで
任意のアルキルまたはアルキレン部分は、Ｃ１−Ｃ６アルキルまたはアルキレンである］。
【００７９】
いくつかの態様において、各Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は、ハロゲン、カルボキシ、カルボキシアルキル、カルボキシアルコキシ、カルボキシポリオキシアルキレン、アルコキシカルボニル、アルコキシカルボニルアルキル、アルコキシカルボニルアルコキシ、アルコキシカルボニルポリオキシアルキレン、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アミノアルキル、アルキルアミノアルキル、ジアルキルアミノアルキル、アミノアルコキシ、アルキルアミノアルコキシ、ジアルキルアミノアルコキシ、アミノポリオキシアルキレン、アルキルアミノポリオキシアルキレン、ジアルキルアミノポリオキシアルキレン、（アミノ）（カルボキシ）アルキル、（アミノ）（カルボキシ）アルコキシより独立に選択され、任意のアルキルまたはアルキレン部分は、Ｃ１−Ｃ６アルキルまたはアルキレン、例えばＣ１−Ｃ４アルキルまたはアルキレン、より具体的にはＣ１−Ｃ３アルキルまたはアルキレン、例えばメチルまたはエチルである。
【００８０】
いくつかの態様において、各Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は、ハロゲン、カルボキシ、カルボキシアルキル、カルボキシアルコキシ、カルボキシポリオキシアルキレン、アルコキシカルボニル、アルコキシカルボニルアルキル、アルコキシカルボニルアルコキシ、アルコキシカルボニルポリオキシアルキレン、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アミノアルキル、アルキルアミノアルキル、ジアルキルアミノアルキル、アミノアルコキシ、アルキルアミノアルコキシ、ジアルキルアミノアルコキシ、アミノポリオキシアルキレン、アルキルアミノポリオキシアルキレン、ジアルキルアミノポリオキシアルキレンより独立に選択される。
【００８１】
いくつかの態様において、各Ｒ２は、ハロゲン、カルボキシ、カルボキシアルキル、アルコキシカルボニル、アルコキシカルボニルアルキル、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アミノアルキル、アルキルアミノアルキルおよびジアルキルアミノアルキルより、例えばカルボキシ、カルボキシアルキル、アルコキシカルボニル、アルコキシカルボニルアルキル、アミノ、アミノアルキルより、またはカルボキシ、カルボキシアルキル、アルコキシカルボニルアルキルおよびアミノアルキルより独立に選択される。
【００８２】
いくつかの態様において、各Ｒ４は、ハロゲン、カルボキシ、カルボキシアルキル、アルコキシカルボニル、アルコキシカルボニルアルキル、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アミノアルキル、アルキルアミノアルキルおよびジアルキルアミノアルキルより、例えばハロゲン、カルボキシ、カルボキシアルキル、アルコキシカルボニルおよびアルコキシカルボニルアルキルより、またはハロゲン、カルボキシおよびカルボキシアルキルより、またはハロゲンおよびカルボキシより独立に選択される。
【００８３】
例えば、各Ｒ２、Ｒ３およびＲ４、特に各Ｒ２およびＲ４は、フルオロ、ヨード、ＣＯＯＨ、−ＣＨ２ＣＯＯＨ、−Ｃ２Ｈ４ＣＯＯＨ、−ＣＨ２ＣＯＯＣＨ３、−ＣＨ２ＮＨ２、−Ｃ２Ｈ４ＮＨ２、−ＯＣＨ２ＣＨ（ＮＨ２）（ＣＯＯＨ）、および−ＣＨ２ＣＨ（ＮＨ２）（ＣＯＯＨ）より独立に選択されてもよい。
【００８４】
いくつかの態様において、すべてのＲ２基は同じである。他の態様において、すべてのＲ４基は同じである。さらに他の態様において、すべてのＲ２基およびＲ４基は同じである。
【００８５】
中央のチエニレン環は好ましくは非置換であり、すなわちｖは好ましくは０である。非中央チエニレンまたはチエニル環は置換されてもまたは置換されなくてもよい。しかし、少なくとも１つの環は、好ましくは置換されるべきである。言い換えると、少なくとも１つのｐ、ｕおよびｖは、好ましくは０とは異なるべきであり；そして好ましくは、ｐおよびｕの少なくとも１つは０とは異なるべきである。
【００８６】
いくつかの態様において、化合物は、式（ＩＩ’）：
【００８７】
【化１４】
0005646495.tif 000015
【００８８】
［式中、Ｒ２およびＲ４は、本明細書において上に定義する通りである］
または式（ＩＩ’’）：
【００８９】
【化１５】
0005646495.tif 000016
【００９０】
［式中、Ｒ２は、本明細書において上に定義する通りである］
によって示されうる。
本発明記載の化合物のいくつかの例は以下の通りである。
【００９１】
【化１６−１】
0005646495.tif 000017
【００９２】
【化１６−２】
0005646495.tif 000018
【００９３】
本発明記載の化合物の他の例は以下の通りである。
【００９４】
【化１７−１】
0005646495.tif 000019
【００９５】
【化１７−２】
0005646495.tif 000020
【００９６】
【化１７−３】
0005646495.tif 000021
【００９７】
調製法
本発明の化合物は、本明細書の一般的な説明および特定の例示的実施例を考慮して、一般の当業者によって調製可能である。
【００９８】
本発明にしたがって化合物を調製する方法の一例は以下の通りである：
第一の工程において、式（ＩＶ）記載の化合物（商業的に入手可能であるし、または例えば鈴木カップリングを用いることによって合成される；式中、Ａ、Ｒ２およびｐは本明細書において上に定義する通りである）をヨード化して、式（Ｖ）の化合物を得る：
【００９９】
【化１８】
0005646495.tif 000022
【０１００】
次いで、式（Ｖ）の化合物を、鈴木カップリング条件下で、２−チオフェンボロン酸と反応させて、化合物（ＩＩ）を得る。
【０１０１】
【化１９】
0005646495.tif 000023
【０１０２】
また、実施例４中の化合物Ｊに関して記載する反応順序に一般的にしたがうことによって、本発明の化合物を調製してもよい。
一般的に、環構造、すなわちチオフェン、ベンゼン、フルオレン、ベンゾチオフェン、エチレンジオキシチオフェン、ベンゾチアジアゾール；およびビニルは、本発明の化合物において、単量体の基本ユニットとして働く。有機合成の当業者に周知であり、そして有機合成の教科書に記載され、そして以下の合成例に例示される、慣用的な化学反応を通じて、言及する環構造の置換を得てもよい。
【０１０３】
本発明の化合物において開示される多分散ホモおよびコポリマーを調製するため、例えば塩化鉄（ＩＩＩ）を用いて、言及する環構造のランダム酸化重合を行ってもよい。こうしたポリマーは、限定されるわけではないが、透析およびサイズ排除クロマトグラフィーを含む、周知の分離法を通じてサイズ分離されうる。
【０１０４】
言及する環構造の二量体、三量体、四量体、五量体等の構造を生成するため、当業者にはいくつかの方法が知られ、本発明者らはここで、鈴木およびスティルカップリングの限定されない例に言及する。共役系のポリマーおよびオリゴマー、ならびに本明細書に記載する本発明の化合物のいくつかを生成する、別の周知の方法は、ＭｃＣｕｌｌｏｕｇｈによってよく記載される、いわゆるグリニャール・メタセシス反応である［Ｌｏｅｗｅ，Ｒ．Ｓ．；Ｋｈｅｒｓｏｎｓｋｙ，Ｓ．Ｍ．；ＭｃＣｕｌｌｏｕｇｈ，Ｒ．Ｄ．Ａｄｖ．Ｍａｔｅｒ．１９９９，１１，２５０−２５３］。
【０１０５】
スティルカップリングは、パラジウムによって触媒される、有機スズ化合物とｓｐ２混成有機ハロゲン化物とのカップリングを利用し、３つの環ユニットから三量体ブロックへの以下の反応スキームによって例示される：
【０１０６】
【化２０】
0005646495.tif 000024
【０１０７】
［式中、Ｂｕ３Ｓｎは、トリブチルスズであり、ＭおよびＭ＊は、任意の環構造を表す］。
鈴木カップリングは、パラジウム錯体によって触媒される、アリール−またはビニル−ボロン酸またはホウ酸エステルとビニル−またはアリール−ハロゲン化物間の反応を利用し、以下の反応スキームによって例示される：
【０１０８】
【化２１】
0005646495.tif 000025
【０１０９】
［式中、ＰｉＢはホウ酸エステルである］。
また、トリフレートなどの擬ハロゲン化物で反応を行ってもよい。
上記の例は、対称化合物の調製を記載する。非対称化合物を調製するため、例えば化学量論アプローチを用いてもよく、この場合、誘導体化しようとする化合物がいくつかの反応部位を有するならば、添加する試薬の量をこの化合物と等モルにする。当業者に周知であるように、対称および／または非対称化合物の任意の混合物から、化学的分離法によって、個々の化合物を分離可能である。分離の限定されない例には、フラッシュカラムクロマトグラフィーおよび蒸留が含まれる。
【０１１０】
特定の側面において、本発明の化合物を、開示する化合物の誘導体を指す「医薬的に許容される塩」の形で用いてもよく、この場合、記載する化合物は、その酸および塩基塩を作製することによって修飾される。医薬的に許容される塩の限定されない例には、言及するＲ基の塩基性誘導体の無機塩または有機塩が含まれ、例えばカルボン酸などの言及するＲ基の酸性誘導体のアミンおよび有機または無機の塩、例えばアルカリ塩が含まれる。慣用的な非毒性塩および四級アンモニウム塩が医薬的に許容される塩に含まれる。
【０１１１】
慣用的な化学法によって、本発明に開示する医薬的に許容される塩を、塩基性または酸性要素を含有する、本明細書記載の本発明の化合物から調製してもよい。
疾患
本発明記載の化合物で治療すべき疾患は、ミスフォールドタンパク質および凝集タンパク質に関連する疾患である。こうした疾患はまた、タンパク質病（ｐｒｏｔｅｏｐａｔｈｙ）とも称されてきている（ＷａｌｋｅｒおよびＬｅｖｉｎｅ，Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇ  Ｄｒｕｇｓ．２００２  Ｍａｙ；３（５）：７８２−７）。アミロイドタンパク質を特徴とする疾患は、ミスフォールティングタンパク質および凝集タンパク質に関連する疾患の説明に適切な例であり、ここで、アミロイドーシスは疾患として知られ、そして遺伝または獲得されうる。アミロイドーシスは、当初、通常、ＡＡアミロイドーシスと称されたが、アミロイド沈着を示す、アミロイドタンパク質に関連する疾患はいずれもアミロイドーシスであることに注目されたい。例えば、ＣＪＤ、ｖＣＪＤ、アルツハイマー病および糖尿病は、アミロイドーシスと呼ばれたことはほとんどない。
【０１１２】
本段落では、本発明と関連するアミロイドーシスのいくつかの例を列挙する。原発性アミロイドーシスには、リゾチーム、トランスサイレチン、アポリポタンパク質Ｂ、フィブリノーゲンにおける突然変異、およびＡＬアミロイドーシス（多発性硬化症に見られるような免疫グロブリン軽鎖）が含まれる。続発性アミロイドーシスには、ＡＡアミロイドーシス（慢性炎症による急性期タンパク質である、血清アミロイドＡタンパク質）およびゲルゾリン・アミロイドーシス（血漿ゲルゾリン断片）が含まれる。家族性または遺伝性アミロイドーシスは、最も一般的にはトランスサイレチンタンパク質における突然変異によって引き起こされるが、稀な場合、アポリポタンパク質Ａ１、ゲルゾリン、フィブリノーゲン、およびリゾチーム突然変異によって引き起こされることも可能であり、これらは主に遺伝によって引き起こされ、常染色体優性であると考えられ、子孫に伝わる確率が高く、アパラチア型アミロイドーシスおよびシャーペイにおけるアミロイドーシスによるシャーペイ熱がある。臓器特異的アミロイドーシスの例は、２型糖尿病（アミリン、ＩＡＰＰとしてもまた知られる）、アルツハイマー病（Ａβ３９−４２）、パーキンソン病（アルファ−シヌクレイン）、ハンチントン病（ハンチンチン）、伝染性海綿状脳症（プリオンタンパク質、ＰｒＰ）であり、このいくつかの例は、クロイツフェルト・ヤコブ病（大脳におけるＰｒＰ）、クールー（脳におけるびまん性ＰｒＰ沈着）、致死性家族性不眠症（視床におけるＰｒＰ）、封入体筋炎およびウシ海綿状脳症（ウシの大脳におけるＰｒＰ）、コンゴーレッド親和性血管傷害（アミロイドベータ）である。心臓アミロイドーシスには、いくつかの場合、鬱血性心不全（心臓におけるＰｒＰまたはトランスサイレチン）が含まれる。別の重要な例は、注射投与されたインスリンによって引き起こされると考えられる、インスリン・アミロイドーシスのような医原性状態である。
【０１１３】
いくつかの非疾患アミロイドは、生物における天然アミロイド、Ｃｕｒｌｉ大腸菌（Ｅ．  ｃｏｌｉ）タンパク質（カーリン）、酵母プリオン［Ｓｕｐ３５］、ポドスポラ・アンセリナ（Ｐｏｄｏｓｐｏｒａ  Ａｎｓｅｒｉｎａ）プリオンＨｅｔ−ｓ、マラリア・コートタンパク質、クモの糸、哺乳動物メラノソーム（ｐＭｅｌ）、組織型プラスミノーゲン活性化因子（ｔＰＡ）（血行動態因子）、カルシトニン、ならびにアミロイドを作製するように操作されたタンパク質およびペプチドである。
【０１１４】
プリオン病［例えばウシ海綿状脳症（ＢＳＥ）、およびクロイツフェルト・ヤコブ病（ＣＪＤ）］は、ＰｒＰＳｃと称される感染性疾患関連アイソフォームへの、正常細胞性プリオンタンパク質（ＰｃＰＣ）のコンホメーション変換と関連する。タンパク質のミスフォールド感染型、ＰｒＰＳｃは、ヒトおよび哺乳動物に影響を及ぼす、プリオン疾患と呼ばれる稀な致死性脳疾患群の原因である。プリオン疾患はまた、伝染性海綿状脳症（ＴＳＥ）としても知られ、そしてこれらには、ウシにおけるウシ海綿状脳症（ＢＳＥ、または「狂牛」病）；ヒツジにおけるスクレイピー；シカおよびエルクにおける慢性消耗病；ならびにヒトにおけるもの［クロイツフェルト・ヤコブ病（ＣＪＤ）、ゲルストマン・シュトロイスラー・シャインカー病（ＧＳＳ）、クールー］が含まれる。
【０１１５】
本発明の化合物は、上記疾患の療法のために用いられるよう意図される。
療法における化合物の使用
本発明はまた、新規療法剤としてのチオフェン誘導体の使用にも関する。チオフェン誘導体は、生物への投与に際してアミロイド病変を改変し、すなわち療法剤として作用する。必要がある被験体（ｓｕｂｊｅｃｔ）に投与することによって、本発明記載の化合物で治療すべき状態および疾患は、本発明記載の化合物の療法的有効量を、上に論じるようなミスフォールドタンパク質の凝集に関連する状態および疾患である。
【０１１６】
血液脳関門を横断し、そしてそれによって脳に影響を及ぼす疾患に効果を持つように、本発明のチオフェン誘導体を設計してもよく、こうした疾患には、限定されるわけではないが、生存生物におけるＡベータアミロイド病変が含まれ、すなわち療法剤として作用することによって、アルツハイマー病の病因に影響を及ぼしてもよい。
【０１１７】
チオフェン誘導体は、他の体液、例えば脳脊髄液（ＣＳＦ）またはリンパに分布させるため、血流内への注射、経口摂取、吸入、皮膚または粘膜を通じた取り込みに適応した、薬学的調製物中に含まれてもよい。
【０１１８】
したがって、１つの側面において、本発明は、ミスフォールドタンパク質種に関連する疾患の療法に適した、少なくとも１つのチオフェン誘導体を含む、療法組成物、および該療法組成物を調製しそして使用する方法であって、少なくとも１つのチオフェン誘導体変異体、および場合による医薬的に許容される賦形剤、緩衝剤および／またはキャリアーを含有する医薬組成物を、必要がある被験体に投与する工程を含む、上記方法に関する。
【０１１９】
本発明の化合物を、一般の当業者に知られる任意の手段によって投与してもよい。本発明には、患者の有効な治療に必要な量の本発明の化合物とともに、１以上の薬学的キャリアー、例えば添加剤および／または希釈剤に基づく「医薬的に許容される」組成物が含まれる。本発明の化合物を、他の療法剤とともに配合し、そして投与してもよい。投与手段によって、本発明の化合物の配合を決定してもよい。本発明の化合物の投与のための配合物は、固体、液体またはエアロゾル型であってもよい。動物またはヒトへの本発明の化合物の投与は、非経口、経口、吸入によって、直腸、鼻、頬側、膣でまたは移植された容器を通じて、局所または全身で達成されてもよい。用語「非経口」は、消化管外の投与を指し、注射または注入による、皮下、静脈内、筋内、動脈内、脊髄内、頭蓋内、真皮下、皮内が含まれる。
【０１２０】
生存生物における所望の分布および許容を達成するため、薬学的チオフェン誘導体組成物にキャリアー剤を投与してもよい。こうした剤には、限定されるわけではないが、脂質、リン脂質、セルロース膜、糖コーティング、ヒアルロン酸、界面活性剤、ペプチド、タンパク質、イオン、塩、キレート剤および溶媒が含まれる。
【０１２１】
化合物の投与される用量は、特定の患者の治療に有効な用量でなければならない。本発明の化合物（単数または複数）の特定の用量レベルは、いくつかの要因に依存し、これには、用いる特定の化合物の活性およびありうる毒性；被験体または患者の全身健康状態、年齢、性別、体重および食餌、薬剤組み合わせ、投与時間および投与型、ならびに排出速度が含まれる。投与される用量は、典型的には、０．００１ｍｇ／ｋｇ／日〜５０ｍｇ／ｋｇ／日の間、好ましくは０．００５ｍｇ／ｋｇ／日〜１０ｍｇ／ｋｇ／日の間であってもよい。
【実施例】
【０１２２】
本発明の化合物の療法効果
本発明は、本明細書記載の本発明の化合物に基づく新規抗アミロイド疾患修飾治療を示す。現在の対症療法は、アルツハイマー病および凝集タンパク質に関連する他の疾患の、可能性のある療法的転帰が連続したものの反対の端に相当する。本発明の化合物を抗アミロイド疾患修飾剤として用いてもよく、そして理論によって束縛されることなく、これらは、凝集タンパク質またはＡβの産生を減少させることによって；現存する凝集タンパク質またはＡβに結合することによって；新規凝集タンパク質またはＡβの形成を阻害することによって；あるいはアミロイド、凝集タンパク質またはＡβクリアランスを増加させ、それによってすべての下流病理学的プロセスを防止することによって、初期病理学的事象を中断すると示唆される。神経学的疾患に関連する１つのもっともらしい機構は、本発明の化合物を用いて、生存ニューロンを救出して、ある度合いの症状緩和を達成するか、または疾患の完全な逆転を達成することである。他の治療は、疾患のいくつかの側面に影響を及ぼす凝集タンパク質またはＡβの産生の下流で起こる事象を遮断しうる。
【０１２３】
本明細書で言及する例は、アルツハイマー病などのミスフォールディング疾患に対する本発明の化合物の療法効果を示す最初の工程を記載する（スキーム２）。ｉｎ  ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏ例の両方が、これらの効果をさらに検証するであろう。
【０１２４】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏ原線維形成（ｆｉｂｒｉｌｌａｔｉｏｎ）阻害例
１つの限定されない例がＡβペプチドである、ペプチドおよびタンパク質に関連する疾患のｉｎ  ｖｉｔｒｏ原線維形成を、本発明の化合物の存在下で行ってもよく、そして凝集種の分子量分布の効果を評価して、阻害効果を示してもよい。凝集種の分子量は、ゲル電気泳動、サイズ排除クロマトグラフィーおよび当該技術分野に周知の他の方法で決定可能である。
【０１２５】
ｉｎ  ｖｉｖｏ  Ａβアッセイ例
本発明の化合物シリーズは細胞浸透性であってもよいが、そうである必要はない。アルツハイマー病のモデルとして、Ａβペプチドの凝集種に神経細胞を曝露するのが特に適切であり、この場合、その後、細胞反応および細胞生存を調べる。神経細胞をＡβペプチドの凝集種に曝露し、そして本発明の化合物を同時に、その前にまたはその後、添加し、その際、化合物の防御効果を評価することによって、この系において本発明の化合物の療法効果を調べてもよい。本発明の化合物の唯一ではないが１つの機能は、ニューロン内のＡｂオリゴマー（ＡｂＯ）のレベルを減少させることによって、またはその毒性を単に減少させることによって、細胞内ＡｂＯ毒性からニューロンを防御することであることが立証可能である。
【０１２６】
ＡｂＯは、細胞外から適用された際、毒性を誘導しうる。毒性の１つの様式は、シナプスに対する強いＡｂＯ結合を介して、重度のシナプス損傷を生じる。こうした結合活性はまた、標識ＡｂＯまたは本発明の化合物の変異体を用いて視覚化可能である。本発明の化合物の活性を示すため、ニューロン培養または他の細胞培養にＡｂＯを適用する前または適用した後に、本発明の化合物を添加する。また、細胞培養にＡｂＯを適用するのと同時に、一緒に、本発明の化合物を添加して、その活性をさらに示す。
【０１２７】
ｉｎ  ｖｉｖｏプリオンアッセイ例
療法効果を示すのに特に適したｉｎ  ｖｉｔｒｏ例は、ミスフォールディング疾患の細胞培養または器官型培養スライドモデルである。プリオン疾患の場合、少なくとも５年間、スクレイピー細胞アッセイ（ＳＣＡ）がモデル系として知られており、該アッセイでは、細胞生存およびプリオンタンパク質の定量化を通じて、プリオン感染が調査可能である。培地中にこれらを一定に添加することによるか、あるいは適切な培地中で短期間曝露することによって、本発明の化合物の療法効果を立証してもよく、この際、細胞生存およびプリオンタンパク質レベルを測定する。別のよりｉｎ  ｖｉｖｏ様のモデル系は、Ａｇｕｚｚｉ（ＦａｌｓｉｇおよびＡｇｕｚｚｉ，Ｎａｔ  Ｐｒｏｔ，２００８，３（４），５５５−５６２）によって最近記載されたプリオン器官型スライス培養アッセイ（ＰＯＳＣＡ）である。脳培養スライドを最長８週間培養し、そしてプリオン感染の進行を監視してもよい。ＳＣＡと同様の方式で、培養スライドを本発明の化合物に一定に曝露するかまたはより短期間の用量で曝露し、その後すぐ、プリオン感染の進行を調べる。
【０１２８】
ｉｎ  ｖｉｖｏでの有効性の立証
本発明者らは、ＡＤマウスにおいて、本発明の化合物の静脈内注射が、血液脳関門を迅速に通過し、そして脳に浸透して、蛍光的に強調されたアミロイド斑を産生することを立証した。ミスフォールディング疾患のいくつかの動物モデルがあり、本発明の化合物の療法効果を評価するため、トランスジェニックマウスが特に適切である。マウスモデルの限定されない例は、ＰＳ−ＡＰＰおよび５ｘＦＡＤモデルである。本発明は、本発明の化合物が、トランスジェニックマウスにおいて、ＡｂＯおよびアミロイド原線維中のアミロイドコンホメーションを認識することを立証している。この結合をさらに、ヒト化マウスおよびヒトにおいて立証することも可能である。ヒト生物に適合するならば、前記化合物はヒト用の療法剤であってもよい。最初の研究には、限定されるわけではないが、脳におけるまたは体の他の部分における、アミロイド病変量の有意な減少を立証するための、ＡＤ−病理モデルマウス、ヒト化マウス、そしてその後、ヒトにおいて、本発明の化合物を毎日、腹腔内注射する２週間のコースが含まれてもよい。見かけの毒性はまったく観察されないはずである。本発明の化合物によるタンパク質またはＡｂ凝集物の脳レベルの減少はまた、必ずではないが、ウェスタンブロットによって確認される可能性もある。さらに、本発明の化合物への曝露の応答として、行動変化、例えば認知改善が調査されうる。既知のアミロイドリガンド、例えばＰＩＢならびにコンゴーレッドおよびチオフラビンの他の誘導体の療法的使用は、本発明の発明者らが知る限り、これらを合成的に修飾する能力が限定されていることから制限されている。本発明の化合物シリーズのユニークな利点は、これらが、チエニルライブラリー由来のアミロイドリガンドの最初の例であり、そしてこれらをオリゴマー化し、そしてポリマー化して、さらなる別個の特性を達成可能であることである。オリゴマーまたはポリマー構造は、さらなる修飾をコア化学構造上に置く場合、非常に好適でありうる。本発明の化合物シリーズは、３つプラス２つのチエニル、または本発明に記載するような他の基を持つコア構造を含有する。これらは、新規ライブラリーを生成し、そして凝集タンパク質によって引き起こされる疾患に関連する療法効果を達成するのに完全に適した化学実体である。
【０１２９】
実施例１：化合物Ｇ（ｐ−ＨＴＡＡ）
先に報告されるプロトコル（Ａｓｌｕｎｄ  Ａら，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．，２００７，１８（６），１８６０−１８６８）で合成された三量体ビルディングブロック（スキーム１中の１）をヨード化した後、鈴木カップリング様条件下で、２−チオフェンボロン酸とカップリングして、ｐ−ＨＴＡＡ（スキーム１中の３）を得た。３（０．２００ｇ、０．３５９ｍｍｏｌ）をさらに、ジオキサン／ＮａＯＨの溶液（１Ｍ、水性）（１：１、２ｍＬ）に添加した。１時間後、溶液をＨＣｌ（１Ｍ、水性）で中和し、そして遠心分離によって沈殿物を収集した。Ｈ２Ｏで沈殿物を洗浄して、定量的な収量（１９０ｍｇ）でｐ−ＨＴＡＡの非塩型（ｕｎｓａｌｔｅｄ  ｆｏｒｍ）を得て、これをＨ２Ｏ（３ｍＬ）およびＮａＯＨ（２９ｍｇ、０．７２５ｍｍｏｌ）中に溶解することによって、対応するナトリウム塩に変換して、そして凍結乾燥して、生成物ｐ−ＨＴＡＡ（４、０．２０５ｇ）を得た。
【０１３０】
【化２２】
0005646495.tif 000026
【０１３１】
実施例２：化合物Ｈ（ｐ−ＦＴＡＭ）
先に報告されるプロトコル（Ａｓｌｕｎｄ  Ａら，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．，２００７，１８（６），１８６０−１８６８（２００７））で合成された三量体ビルディングブロック（スキーム１中の１）をヨード化した（スキーム１中の２）。ヨウ化物（２、０．０６８ｇ、０．１０６ｍｍｏｌ）、５−（ジヒドロキシボリル）−２−チオフェンカルボン酸（０．０７２ｇ、０．４１９ｍｍｏｌ）およびＫ２ＣＯ３（０．０９０ｇ、０．６５１ｍｍｏｌ）をトルエン／メタノール（１：１、５ｍＬ）中に溶解し、そして１０分間、アルゴンをバブリングした。ＰＥＰＰＳＩＴＭ−ＩＰｒ（［１，３−ビス（２，６−ジイソプロピルフェニル）イミダゾール−２−イリデン］（３−クロロピリジル）−パラジウム（ＩＩ）二塩化物）（０．００３ｇ，０．００４ｍｍｏｌ）を添加した後、反応容器をマイクロ波条件（１０分間、８０℃）に供した。混合物をＨＣｌ（１Ｍ、水性）で希釈し、そして赤色の沈殿物を収集し、そして沸騰ジオキサン中に溶解し、セライト上でろ過し、そしてＨ２Ｏを添加することによって沈殿させて、８５％収量（０．０９０ｇ）で、赤色粉末として、ｐ−ＦＴＡＭ（５）を得た。
【０１３２】
【化２３】
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【０１３３】
実施例３：化合物Ｆ（ｐ−ＦＴＡＡ）
化合物Ｈ（ｐ−ＦＴＡＭ、０．２００ｇ、０．３１０ｍｍｏｌ、スキーム１中の５）をジオキサン／ＮａＯＨの溶液（１Ｍ、水性）（１：１、２ｍＬ）に添加した。１時間後、溶液をＨＣｌ（１Ｍ、水性）で中和し、そして遠心分離によって沈殿物を収集した。沈殿物をＨ２Ｏで洗浄して、定量的な収量（１９１ｍｇ）でｐ−ＦＴＡＡの非塩型を得て、これをＨ２Ｏ（３ｍＬ）およびＮａＯＨ（２９ｍｇ、０．７２０ｍｍｏｌ）中に溶解することによって、対応するナトリウム塩に変換して、そして凍結乾燥して、生成物ｐ−ＦＴＡＡ（６、０．２０７ｇ）を得た。
【０１３４】
【化２４】
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【０１３５】
【化２５】
0005646495.tif 000029
【０１３６】
実施例４：化合物Ｊ（ｐ−ＰＡＭＴ）
３−チオフェン−エタノールを０℃でＣＨＣｌ３／ＨＯＡｃ（１：１）中に溶解し、そして攪拌し、そしてＮ−ヨード−スクシンイミドを少しずつ２０分間添加した。１９時間後、２０ｍＬの水で反応を停止し、そして有機層を２＊５０ｍＬの飽和Ｎａ２Ｓ２Ｏ３溶液、２＊５０ｍＬの水で洗浄し、乾燥させ、ろ過し、濃縮し、そしてフラッシュカラムクロマトグラフィー（トルエン／ＥｇＯＡｃ  １８：１）によって精製して、１（スキーム２）を得た。１を０℃でＣＨＣｌ３／ピリジン（７：１）中に溶解し、そしてｐ−トルエンスルホニルクロリドを５分間添加した。１９時間後、反応を１５ｍＬの水で停止し、そして４０ｍＬジエチルエーテルで希釈した。有機層を２＊４０ｍＬの２Ｍ  ＨＣｌ、２＊５０ｍＬの飽和ＮａＨＣＯ３溶液、２＊５０ｍＬの水で洗浄し、乾燥させ、ろ過し、濃縮し、そしてフラッシュカラムクロマトグラフィー（トルエン）によって精製して２を得た。ジ−ｔｅｒｔ−イミノジカルボキシレートである２およびＫ２ＣＯ３をＤＭＦ（乾燥）中に溶解し、そして油槽中、７５℃で加熱した。４時間後、ＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）および水（３０ｍＬ）を添加した。有機層を２＊２０ｍＬの２Ｍ  ＨＣｌ、２＊１５ｍＬの水、２＊１５ｍＬの塩水で洗浄し、乾燥させ、ろ過し、濃縮し、そしてフラッシュカラムクロマトグラフィー（トルエン）によって精製して３を得た。チオフェン−ジボロン酸エステルである３およびＫ２ＣＯ３を室温でトルエン／ＭｅＯＨ（１：１）の脱気溶液中に溶解し、そしてアルゴン下で処理した。１０分後、ＰＥＰＰＳＩＴＭ−ＩＰｒを添加し、そしてマイクロ波オーブン中、８０℃で１０分間、反応を行った。溶液をトルエン（２０ｍＬ）で希釈し、２Ｍ  ＨＣｌ（１０ｍＬ）、水（１５ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ、ろ過し、濃縮し、そしてフラッシュカラムクロマトグラフィー（トルエン／ＥｔＯＡｃ  １８：１）によって精製して４を得た。４を０℃でＣＨＣｌ３（１５ｍＬ）中に溶解し、そしてまずＨＯＡｃ（１５ｍＬ）を、そして最後にＮ−ヨードスクシンイミドを添加した。１７時間後、反応を水（１０ｍＬ）で停止し、そして有機層を２＊５０ｍＬの飽和Ｎａ２Ｓ２Ｏ３溶液、２＊５０ｍＬの水で洗浄し、乾燥させ、ろ過し、濃縮し、そしてフラッシュカラムクロマトグラフィー（トルエン／ＥｔＯＡｃ  １８：１）によって精製して５を得た。２−カルボキシチオフェン−５−ボロン酸である５およびＫ２ＣＯ３を室温でＴ／ＭｅＯＨ（１：１）の脱気溶液中に溶解し、そしてアルゴン下で処理した。１０分後、ＰＥＰＰＳＩを添加し、そしてマイクロ波オーブン中、８０℃で１０分間、反応を行った。溶液を１Ｍ  ＨＣｌ（１０ｍＬ）で処理し、そして赤色沈殿を得た。赤片、すなわち未精製生成物を収集し、そしてフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ  １０：１＞＞ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ  １０：１＋１％ＨＯＡｃ）によって精製して６を得た。６を室温でＣＨＣｌ３中に溶解し、そして次いでＴＦＡを添加した。溶液を室温で３時間攪拌した。３時間後、反応をＭｅＯＨで停止し、そして蒸発させて、赤片として最終生成物を得た（スキーム２中の７）。
ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ  ＭＳ計算値：５８６，６５。観測値：５８６，７９
【０１３７】
【化２６】
0005646495.tif 000030
【０１３８】
実施例５：化合物ＩａおよびＩｂ
１（スキーム３）を室温でＣＨＣｌ３中に溶解した。ＨＯＡｃを１：１比で添加し、そして混合物を０℃に冷却した後、直ちにＮ−ヨード−スクシンイミドを添加した。１９時間暗所に置いた後、反応を３ｍＬの水で停止し、そして有機層を２＊３０ｍＬの飽和Ｎａ２Ｓ２Ｏ３溶液、２＊３０ｍＬの水で洗浄し、乾燥させ、ろ過し、濃縮し、そしてフラッシュカラムクロマトグラフィー（トルエン／ＥｔＯＡｃ  １８：１）によって精製して、２および３の混合物を得た（スキーム５）。混合物２および３を室温でジオキサンに溶解し、１Ｍ  ＮａＯＨを添加し、そして７時間後、反応を１Ｍ  ＨＣｌで中和した。生成化合物ＩａおよびＩｂ（４および５）を遠心分離によって沈殿物として収集した。
【０１３９】
【化２７】
0005646495.tif 000031
【０１４０】
５に関するＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ  ＭＳ計算値［Ｍ−Ｈ］＋計算値：６５５．６０、観測値：６５６．００、［Ｍ＋Ｋ］＋計算値：６９３．６０、観測値：６９２．９０。６に関するＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ  ＭＳ計算値［Ｍ＋Ｋ］＋計算値：８１９．５０、観測値：８１９．７９。
【０１４１】
２および３の混合物に対するさらなるフラッシュカラムクロマトグラフィーを行い、その後、上述と同じ脱保護法を行って、４および５の間の分離を得てもよい。
【０１４２】
【化２８】
0005646495.tif 000032
【０１４３】
実施例６：Ａβ沈着を持つトランスジェニックマウスにおける本発明の化合物ＦおよびＧの長期ｉｎ  ｖｉｖｏ効果
ＡＤ様病変を持つトランスジェニックマウスを用いて、アミロイド斑に対する長期ｉｎ  ｖｉｖｏ効果に関して、化合物Ｇ（ｐ−ＨＴＡＡ）およびＦ（ｐ−ＦＴＡＡ）を評価した。頭蓋窓を持つマウスを用意して、多光子分光法で脳表面の直接監視を可能にした。化合物ＧおよびＦを水性ＰＢＳ溶液中に５ｍｇ／ｍｌに溶解した。両方の化合物を１０ｍｇ／ｋｇの用量でマウス尾静脈内に注射した。上述のように、化合物は、容易に血液脳関門を横断して、そしてＡβ沈着に結合する。注射１週間後、Ａβ沈着物への本発明の化合物の結合は、なお観察可能であった（図７）。斑へのこの長期に持続する結合は、本発明の化合物の長期療法効果に好適である。
【０１４４】
実施例７．  本発明の化合物ＦおよびＧによるβ−アミロイド凝集／原線維形成に対する主な効果の例
本発明は、ミスフォールディングタンパク質が関与する疾患をターゲットとする、本発明の化合物ＦおよびＧの療法効果を記載する。
【０１４５】
Ａβペプチド１−４２をヘキサフルオロイソプロパノール中に１ｍｇ／ｍＬの濃度まで溶解し、そしてさらにＴｒｉｓ−ＨＣｌ  ５ｍＭ、７５ｍＭ  ＮａＣｌ中、２０μＭにさらに希釈した。本発明の化合物ＦおよびＧを１０〜１００μＭの濃度に添加し、そして本発明の化合物を含まない参照を含めた試料を３７℃でインキュベーションして原線維形成を開始した。０時間、２０時間、および６６時間後、アリコットを抜き取り、ｆｏｒｍｖａｒ−カーボンをコーティングしたＴＥＭグリッド上に沈着させ、そして酢酸ウラニルを用いて陰性染色した。２００ｋＶで作動させたＰｈｉｌｌｉｐｓ  ＣＭ２００を用いて、異なる試料における原線維形成の進行を調べた。
【０１４６】
参照試料および本発明の化合物を含む試料は、３７℃でのインキュベーション前（０時間）には、原線維または凝集種をまったく示さなかった。２０時間インキュベーションした後、参照試料は、集合してシートになった高含量の原線維を示し、この場合、別個の原線維が視覚化可能であった（図１および２を参照されたい）。これらの凝集物は、ＴＥＭグリッドの大部分を覆い、そしてより小さい原線維またはオリゴマー様構造は見えなかった。６６時間インキュベーションした後、２０時間の試料と比較して形態の大きな変化は見えず、典型的な形態を図３に例示する、別個の可視原線維を含むシートが、高密度でグリッド上に見られた。
【０１４７】
１００μＭの本発明の化合物Ｆとインキュベーションした試料は、特徴的に異なる原線維形成プロセスを示した。２０時間後、参照試料中のものと似た密な凝集物（図１および２）は、試料中にまったく見られなかった。６６時間後、参照試料に見られうるような別個の原線維（図３）は、試料中にはまったく見られなかった。しかし、典型的な形態を図４に例示する、区別可能な原線維を持たない非常に密な凝集物は存在した。より長いインキュベーション時間後に、試料中に原線維が存在しないことは、Ａβペプチド１−４２の原線維形成に対する化合物Ｆの効果が大きいことに関して重要である。
【０１４８】
１００μＭおよび１０μＭの本発明の化合物Ｇとインキュベーションした試料は、特徴的に異なる原線維プロセスを示した。２０時間後、参照試料中のものと似た密な凝集物（図１および２）は、１００μＭおよび１０μＭの本発明の化合物Ｇを含む試料中にまったく見られなかった。図５に例示する、非常に低いコントラストで、低密度の短い分枝原線維が、１００μＭ  Ｇを含む試料中に存在した。１０μＭの本発明の化合物Ｇを含む試料では、図５に例示する、低密度のオリゴマー様構造が見られた。６６時間後、図６に例示する、非常にわずかな別個の短いプロト原線維が１００μＭ  Ｇを含む試料中に見られた。より頻繁に、図６に例示する典型的な形態を持つ非常に密な凝集物が存在した。２０時間および６６時間のインキュベーション時間の両方の後に、密な原線維凝集物が存在しないことは、Ａβペプチド１−４２の原線維形成に対する化合物Ｇの効果が大きいことに関して重要である。
【０１４９】
実施例８
８．１  ４ヶ月齢の雌ｈＡＰＰＳＬトランスジェニックマウスにおける、ｐ−ＦＴＡＡ化合物で１４日間治療した効果：全身観察、化合物に対する寛容（毒性）
ビヒクル：  リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ；６．７ｍＭ  ＰＯ４、１５５ｍＭ  ＮａＣｌ、ｐＨ＝７．３〜７．５）（ＬｏｎｚａのＢｉｏＷｈｉｔｔａｋｅｒ  ＰＢＳ）。
【０１５０】
Ｔ：Ｉ：  ｐ−ＦＴＡＡ、Ｍｗ＝６１７ｇ／ｍｏｌ、脱イオン水中のストック溶液（１０ｍｇ／ｍｌ）から、ビヒクル中に希釈。
Ｔｇ  ｈＡＰＰＳＬ：  Ｃ５７ＢＬ／６ｘＤＢＡバックグラウンドで、ネズミＴｈｙ−１プロモーターの調節下、ｈＡＰＰ（７５１）を過剰発現するトランスジェニックｈＡＰＰＳＬマウス。
【０１５１】
４ヶ月齢から始めて、雌ｈＡＰＰＳＬマウスをビヒクルのみでまたは３つの投薬量のｐ−ＦＴＡＡで１４日間治療した。４つの異なる治療群に割り当てた４０匹のｈＡＰＰ  Ｔｇマウスに加えて４匹の予備を、ビヒクルのみ（対照）、あるいは０．１ｍｇ／ｋｇ／日、１ｍｇ／ｋｇ／日、または１０ｍｇ／ｋｇ／日の投薬量のｐ−ＦＴＡＡのいずれかで治療した。ビヒクルおよびＴ．Ｉ．を腹腔内（ｉｐ）で１日２回、１４日間投与した。
【０１５２】
４つの治療群に割り当てた総数４４の動物が研究に用いられた。４匹の動物が未知の理由のため、早期に死亡した：１ｍｇ／ｋｇおよび１０ｍｇ／ｋｇ  Ｔ．Ｉ．群の各１匹の動物、ならびに対照群の２匹の動物。ビヒクル群で最多の死亡が見られたため、死亡した動物は、ｐ−ＦＴＡＡに起因した可能性はない。
【０１５３】
８．２  ４ヶ月齢の雌ｈＡＰＰＳＬトランスジェニックマウスにおける、ｐ−ＦＴＡＡ化合物で１４日間治療した効果：生体分布
ビヒクル：  リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ；６．７ｍＭ  ＰＯ４、１５５ｍＭ  ＮａＣｌ、ｐＨ＝７．３〜７．５）（ＬｏｎｚａのＢｉｏＷｈｉｔｔａｋｅｒ  ＰＢＳ）。
【０１５４】
Ｔ：Ｉ：  ｐ−ＦＴＡＡ、Ｍｗ＝６１７ｇ／ｍｏｌ、脱イオン水中のストック溶液（１０ｍｇ／ｍｌ）から、ビヒクル中に希釈。
Ｔｇ  ｈＡＰＰＳＬ：  Ｃ５７ＢＬ／６ｘＤＢＡバックグラウンドで、ネズミＴｈｙ−１プロモーターの調節下、ｈＡＰＰ（７５１）を過剰発現するトランスジェニックｈＡＰＰＳＬマウス。
【０１５５】
４ヶ月齢から始めて、雌ｈＡＰＰＳＬマウスをビヒクルのみでまたは３つの投薬量のｐ−ＦＴＡＡで１４日間治療した。４つの異なる治療群に割り当てた４０匹のｈＡＰＰ  Ｔｇマウスに加えて４匹の予備を、ビヒクルのみ（対照群）、あるいは０．１ｍｇ／ｋｇ／日、１ｍｇ／ｋｇ／日、または１０ｍｇ／ｋｇ／日の投薬量のｐ−ＦＴＡＡのいずれかで治療した。ビヒクルおよびＴ．Ｉ．を腹腔内（ｉｐ）で１日２回、１４日間投与した。
【０１５６】
治療動物の右脳半球（小脳を含まない）、肝臓、腎臓、および血漿中の親化合物を測定することによって、マウスにおけるｐ−ＦＴＡＡの生体分布を評価した。ＨＰＬＣ−ＭＳ／ＭＳを伴う異なる生体分析法によって、すべてのマトリックスにおいて、ｐ−ＦＴＡＡを測定した。信頼性がある結果を生じるため、特異性、直線性、確度および精度に関して、各方法を特徴付けた。
【０１５７】
組織試料採取：  最後の治療の後、動物を屠殺した。各治療群を３つの試料採取点で分けて、群あたり試料採取点あたり３〜４匹の動物を生じた（以下の時点はＣＳＦ試料採取時点を指す）；
１）第１４日の最後の投薬直前（投薬前）
２）第１４日の最後の投薬の０．５時間後
３）第１４日の最後の投薬の３時間後
各動物から、ＣＳＦ、血液、脳、肝臓、および腎臓を収集した。したがって、標準的吸入麻酔薬（イソフルラン、Ｂａｘｔｅｒ）によってマウスを鎮静させた。
【０１５８】
結果によって、すべての用量レベルで、動物がｐ−ＦＴＡＡに全身曝露されたことが示された。脳のｐ−ＦＴＡＡレベルによって、ｐ−ＦＴＡＡがｉｐ投与後に血液脳関門を横断することが示された。ｐ−ＦＴＡＡへの有意な曝露はまた、肝臓および腎臓でも観察され、後者の臓器で最高レベルが定量化された。腎臓および肝臓に薬剤が存在することから、肝臓酸化プロセスおよび腎臓クリアランスの両方が、該薬剤の全身クリアランスに関与することが示唆された。また、腎臓に高濃度の該薬剤があることから、尿排出が全身ｐ−ＦＴＡＡの主な除去経路であることも示唆された。ｐ−ＦＴＡＡのレベルは肝臓に比較して腎臓においてより高く、このことから、腎臓クリアランスがこの薬剤の主な除去経路であることが示唆された。肝臓に薬剤が存在することから、肝臓代謝プロセス（Ｉ期およびＩＩ期）もまた、該化合物の総全身クリアランスに有意に寄与することが示唆される。
【０１５９】
８．３  ８ヶ月齢の雌ｈＡＰＰＳＬトランスジェニックマウスにおける、ｐ−ＦＴＡＡ化合物で３０日間治療した効果：脳試料におけるヒトＡβ測定の結果
ビヒクル：  リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ；  ６．７ｍＭ  ＰＯ４、１５５ｍＭ  ＮａＣｌ、ｐＨ＝７．３〜７．５）（ＬｏｎｚａのＢｉｏＷｈｉｔｔａｋｅｒ  ＰＢＳ）。
【０１６０】
Ｔ：Ｉ：  ｐ−ＦＴＡＡ、Ｍｗ＝６１７ｇ／ｍｏｌ、脱イオン水中のストック溶液（１０ｍｇ／ｍｌ）から、ビヒクル中に希釈。
Ｔｇ  ｈＡＰＰＳＬ：  Ｃ５７ＢＬ／６ｘＤＢＡバックグラウンドで、ネズミＴｈｙ−１プロモーターの調節下、ｈＡＰＰ（７５１）を過剰発現するトランスジェニックｈＡＰＰＳＬマウス。
【０１６１】
８ヶ月齢から始めて、雌ｈＡＰＰＳＬマウスをビヒクルのみでまたは３つの投薬量のｐ−ＦＴＡＡで３０日間治療した。試験物品（Ｔ．Ｉ．）ｐ−ＦＴＡＡをビヒクル中、３つの投薬量で投与した。４つの異なる治療群に割り当てた４８匹のｈＡＰＰ  Ｔｇマウスに加えて４匹の予備を、ビヒクルのみ（対照）、あるいは０．１ｍｇ／ｋｇ／日、１ｍｇ／ｋｇ／日、または１０ｍｇ／ｋｇ／日の投薬量のｐ−ＦＴＡＡのいずれかで治療した。さらなる対照として、ｈＡＰＰＳＬマウスの１２ｎのＴｇ同腹仔（加えて、１匹の予備）をビヒクルのみで治療した。ビヒクルおよびＴ．Ｉ．を腹腔内（ｉ．ｐ．）で１日２回、３０日間投与した。
【０１６２】
Ｍｅｓｏｓｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙの免疫吸着アッセイによって、ヒトＡβ３８、Ａβ４０およびＡβ４２を、すべてのＴｇ動物の左脳半球のホモジネート中およびＣＳＦ試料中で測定した。
【０１６３】
最高用量（１０ｍｇ／ｋｇ／日）でのｐ−ＦＴＡＡ治療によって、ＣＳＦならびにＳＤＳ脳ホモジネート分画において、Ａβ３８、Ａβ４０およびＡβ４２レベルの有意な減少が導かれた。
【０１６４】
治療
４つの異なる治療群に割り当てた４８匹のｈＡＰＰ  Ｔｇマウスに加えて４匹の予備を、ビヒクルのみ（対照）またはｐ−ＦＴＡＡのいずれかで治療した。さらなる対照として、ｈＡＰＰＳＬマウスの１２ｎのＴｇ同腹仔（加えて、１匹の予備）をビヒクルのみで治療した。化合物およびビヒクルを、以下の表に示すように、ｉ．ｐ．で１日２回、３０日間投与した。８ヶ月齢（±２週齢）のＣ５７ＢＬ／６ｘＤＢＡバックグラウンドを持つＴｇ  ｈＡＰＰＳＬマウスおよび対応するｎＴｇ同腹仔を治療群にランダムに割り当てた。
【０１６５】
【表１】
0005646495.tif 000033
【０１６６】
脳タンパク質抽出
Ｔｇ動物の左半球脳試料（小脳を含まない）をホモジナイズし、そして分離した。ＳＤＳ分画を調製し、融解した後、ホモジナイザー「Ｕｌｔｒａ  Ｔｕｒｒａｘ  Ｔ８」を用いて半球を最高速度でＴＢＳ（２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ、１３７ｍＭ  ＮａＣｌ、ｐＨ＝７．６；プロテアーゼ阻害剤カクテルを含有する；１ｍｌ  ＴＢＳあたり１００ｍｇの脳湿重量）中でホモジナイズした。１つのアリコット（１ｍｌ）を遠心分離した（７４，２００ｘｇ、４℃で１時間）。１ｍｌ  ＳＤＳ（Ａｑｕａ  ｂｉｄｅｓｔ中、２％  ＳＤＳ）中にペレットを懸濁し、上述のように遠心分離し、そして上清を−２０℃に維持した（ＳＤＳ分画）。
【０１６７】
Ａβ種の測定
各Ｔｇマウスの脳ホモジネートＳＤＳ分画において、そしてＣＳＦにおいて、ヒトＡβ３８、Ａβ４０およびＡβ４２レベルをＭｅｓｏｓｃａｌｅ  ＤｉｓｃｏｖｅｒｙのＡβキットで測定した。Ａβレベルをペプチド標準に比較して、ｐｇ／ｍｇ脳（湿重量）またはｐｇ／ｍｌ  ＣＳＦとして評価した。
【０１６８】
生化学パラメーターに関する統計
すべての評価したパラメーターに対して、記述統計分析を行った。平均±標準偏差（ＳＤ）として、データを示した。グラブス検定を用いて、異常値を検出した。コルモゴルフ・スミルノフ正常値分布検定を用いて、値の正常値分布を試験した。パラメトリックＡＮＯＶＡ後のボンフェローニ事後検定によって、すべてのＴｇ群間の群相違を計算した。
【０１６９】
ＣＳＦ試料におけるＡβレベル
免疫吸着アッセイで、各ＴｇマウスのＣＳＦ試料におけるヒトＡβ３８、Ａβ４０およびＡβ４２レベルを測定した。ｈＡＰＰＳＬマウスにおいて、Ａβ４０のＣＳＦレベルは、典型的には、Ａβ４２およびＡβ３８のレベルを超える。３つの分析物はすべて、ｐ−ＦＴＡＡ治療によって影響を受けた。平均Ａβ３８、Ａβ４０およびＡβ４２レベルは、ビヒクル治療群で最高であり、そして１０ｍｇ／ｋｇ／日で治療した動物で最低であった。ビヒクル群に比較して、１０ｍｇ／ｋｇ／日のｐ−ＦＴＡＡ治療のＣＳＦ  Ａβ低下効果は、ワンウェイＡＮＯＶＡで非常に有意であった（Ａβ３８に関してｐ＜０．００１、そしてＡβ４０およびＡβ４２に関してｐ＜０．０１）。０．１ｍｇ／ｋｇ／日で治療した動物もまた、より低い平均Ａβレベルを示したが、統計的有意性は、Ａβ３８に関してのみ観察された。１ｍｇ／ｋｇ／日のｐ−ＦＴＡＡを投与された群は、ビヒクル対照と有意には異ならなかった（図８（Ａ））。
【０１７０】
脳試料におけるＡβレベル
増加する強度の溶媒：ＳＤＳで、脳からＡβを連続的に抽出した。免疫吸着アッセイで、各ＴｇマウスのＳＤＳ分画において、ヒトＡβ３８、Ａβ４０、およびＡβ４２レベルを測定した（図８（Ｂ））。
【０１７１】
ＳＤＳ分画中のＡβレベルに関して、有意な群相違が観察された：平均Ａβレベルは、ビヒクル治療群で最高であり、そして１０ｍｇ／ｋｇ／日で治療した動物で最低であった。ビヒクル対照群および１０ｍｇ／ｋｇ／日の群間の平均Ａβ３８、Ａβ４０およびＡβ４２レベルの相違は非常に有意であった（ｐ＜０．００１）。平均がより低いことに加えて、１０ｍｇ／ｋｇ／日の群の群内変動は非常に低く、これはＴ．Ｉ．有効性（ａｆｆｅｃｔｉｖｉｔｙ）の別の証拠と解釈されうる。
【０１７２】
ｐ−ＦＴＡＡの最高投薬量（１０ｍｇ／ｋｇ／日）での治療は、ＣＳＦにおいて、およびＳＤＳ脳ホモジネート分画において、Ａβ３８、Ａβ４０およびＡβ４２レベルを有意に減少させた。
【０１７３】
データは示さないが、本発明者らはまた、４ヶ月齢雌ｈＡＰＰＳＬトランスジェニックマウスにおいて、１４日間のｐ−ＦＴＡＡ治療を行うと、脳ホモジネート由来の［可溶性］アミロイドベータのＤＥＡ抽出におけるＡβ３８、Ａβ４０またはＡβ４２レベルの減少につながることにも注目した。この効果は１０ｍｇ／ｋｇ／日の群で最強であった。
【０１７４】
８．４  ８ヶ月齢の雌ｈＡＰＰＳＬトランスジェニックマウスにおける、ｐ−ＦＴＡＡ化合物で３０日間治療した効果：モリスの水迷路（ＭＷＭ）試験
ビヒクル：  リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ；６．７ｍＭ  ＰＯ４、１５５ｍＭ  ＮａＣｌ、ｐＨ＝７．３〜７．５）（ＬｏｎｚａのＢｉｏＷｈｉｔｔａｋｅｒ  ＰＢＳ）。
【０１７５】
Ｔ：Ｉ：  ｐ−ＦＴＡＡ、Ｍｗ＝６１７ｇ／ｍｏｌ、脱イオン水中のストック溶液（１０ｍｇ／ｍｌ）から、ビヒクル中に希釈。
Ｔｇ  ｈＡＰＰＳＬ：  Ｃ５７ＢＬ／６ｘＤＢＡバックグラウンドで、ネズミＴｈｙ−１プロモーターの調節下、ｈＡＰＰ（７５１）を過剰発現するトランスジェニックｈＡＰＰＳＬマウス。
【０１７６】
８ヶ月齢から始めて、雌ｈＡＰＰＳＬマウスをビヒクルのみでまたは３つの投薬量のｐ−ＦＴＡＡで３０日間治療した。試験物品（Ｔ．Ｉ．）ｐ−ＦＴＡＡをビヒクル中、３つの投薬量で投与した。４つの異なる治療群に割り当てた４８匹のｈＡＰＰ  Ｔｇマウスに加えて４匹の予備を、ビヒクルのみ（対照）、あるいは０．１ｍｇ／ｋｇ／日、１ｍｇ／ｋｇ／日、または１０ｍｇ／ｋｇ／日の投薬量のｐ−ＦＴＡＡのいずれかで治療した。さらなる対照として、ｈＡＰＰＳＬマウスの１２ｎのＴｇ同腹仔（加えて、１匹の予備）をビヒクルのみで治療した。ビヒクルおよびＴ．Ｉ．を腹腔内（ｉ．ｐ．）で１日２回、３０日間投与した。
【０１７７】
治療期間の終了時の４日間（治療第２４〜２７日）、ＭＷＭを行った。２１±２℃の温度の水道水を満たした循環プール（１００ｃｍ直径）を実質的に四分円に分けた。透明なプラットホーム（直径８ｃｍ）を水面の約０．５ｃｍ下に置いた。全試験セッション中、プローブ試験を除いて、プラットホームはプールの南東四分円に位置した。
【０１７８】
各マウスは、連続４日間、毎日３回の水泳試験を行わなければならなかった。単一の試験は最長１分間続いた。この期間中、マウスには、隠れた透明なターゲットを見つけ出す機会があった。動物が水から抜け出す「道」を見出さなかった場合、試験者がマウスをプラットホームに誘導するかまたはプラットホーム上に置いた。各試験の後、マウスをプラットホーム上で１０〜１５秒間休ませて、環境に適応させた。プールの周囲の壁には、黒く太い幾何学的模様（例えば円および正方形）を含むポスターを固定して、これを、マウスが空間適応のための目印として使用可能であった。
【０１７９】
逃避潜時（隠れたプラットホームを発見するのに必要な時間、すなわち水から逃れるのに必要な時間）、泳路（ターゲットに到達するまでの長さ）、水泳速度および調査試験においては以前のプラットホーム位置の横断、およびターゲット四分円における滞在を評価した。測定には、プール中央上のカメラを用いたコンピュータによるトラッキングシステムを用いた。
【０１８０】
試験の１つにおいて、０．０８ｍ／ｓ未満の水泳速度である動物は、浮遊個体（ｆｌｏａｒｔｅｒ）と同定し、すべての試験の統計分析からは排除し、そしてグラフ中には示さなかった。
【０１８１】
ＭＷＭパラメーターに関する統計
すべての評価したパラメーターに対して、記述統計分析を行った。平均±標準誤差（ＳＥＭ）として、データを示した。グラブス検定を用いて、異常値を検出した。コルモゴルフ・スミルノフ正常値分布検定を用いて、値の正常値分布を試験した。パラメトリックＡＮＯＶＡ後のボンフェローニ事後検定によって、またはガウス分布が失われている場合、ノンパラメトリック・クラスカル・ワリスＡＮＯＶＡ後のダン事後検定によって、群相違を計算した。ツーウェイＡＮＯＶＡ後のボンフェローニ事後検定によって、学習曲線を評価した。ビヒクル治療Ｔｇ動物（Ａ群）を対照群として用いた。
【０１８２】
１０ｍｇ／ｋｇ  ｐ−ＦＴＡＡで治療したマウスは、泳路に関しては、いかなる他のＴｇ群よりも優れた成績を示した（図９）。
８．５  ８ヶ月齢の雌ｈＡＰＰＳＬトランスジェニックマウスにおける、ｐ−ＦＴＡＡ化合物で３０日間治療した効果：斑負荷量
ビヒクル：  リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ；６．７ｍＭ  ＰＯ４、１５５ｍＭ  ＮａＣｌ、ｐＨ＝７．３〜７．５）（ＬｏｎｚａのＢｉｏＷｈｉｔｔａｋｅｒ  ＰＢＳ）。
【０１８３】
Ｔ：Ｉ：  ｐ−ＦＴＡＡ、Ｍｗ＝６１７ｇ／ｍｏｌ、脱イオン水中のストック溶液（１０ｍｇ／ｍｌ）から、ビヒクル中に希釈。
Ｔｇ  ｈＡＰＰＳＬ：  Ｃ５７ＢＬ／６ｘＤＢＡバックグラウンドで、ネズミＴｈｙ−１プロモーターの調節下、ｈＡＰＰ（７５１）を過剰発現するトランスジェニックｈＡＰＰＳＬマウス。
【０１８４】
８ヶ月齢から始めて、雌ｈＡＰＰＳＬマウスをビヒクルのみでまたは３つの投薬量のｐ−ＦＴＡＡで３０日間治療した。試験物品（Ｔ．Ｉ．）ｐ−ＦＴＡＡをビヒクル中、３つの投薬量で投与した。４つの異なる治療群に割り当てた４８匹のｈＡＰＰ  Ｔｇマウスに加えて４匹の予備を、ビヒクルのみ（対照）、あるいは０．１ｍｇ／ｋｇ／日、１ｍｇ／ｋｇ／日、または１０ｍｇ／ｋｇ／日の投薬量のｐ−ＦＴＡＡのいずれかで治療した。さらなる対照として、ｈＡＰＰＳＬマウスの１２ｎのＴｇ同腹仔（加えて、１匹の予備）をビヒクルのみで治療した。ビヒクルおよびＴ．Ｉ．を腹腔内（ｉ．ｐ．）で１日２回、３０日間投与した。
【０１８５】
血液試料採取後、マウスを生理学的（０．９％）生理食塩水で経心的に灌流した。頭蓋から脳を除去し、そして小脳を切り落とし、ドライアイス上で直ちに凍結し、そして−８０℃で保存した。残りの脳を半切除し、そして左半球の重量を測定し、ドライアイス上で直ちに凍結し、そしてＡβ分析まで−８０℃で保存した。セクション４．３．１に記載するように、右半球をパラホルムアルデヒドで固定した。
【０１８６】
新鮮に調製した４％パラホルムアルデヒド／ＰＢＳ（ｐＨ７．４）中に室温で１時間浸すことによって、すべてのＴｇマウスの右半球を固定した。その後、脳を１５％スクロースＰＢＳ溶液に２４時間移して、凍結保護を確実にした。翌日、イソペンタン中で脳を凍結し、そして組織学的分析に用いるまで、−８０℃で保存した。
【０１８７】
Ｔｇ群あたり６匹の動物から、層あたり１５の（全部で５層）、各々１０μｍ厚の凍結切片（Ｌｅｉｃａ  ＣＭ  ３０５０Ｓ）を矢状方向に切った。ＰａｘｉｎｏｓおよびＦｒａｎｋｌｉｎの形態学アトラス“Ｔｈｅ  Ｍｏｕｓｅ  Ｂｒａｉｎ”（第２版）にしたがって、脳レベルを選択した。図１０５（歯状回の全体概観）に対応するランダムスライスで出発して、５つのレベルで切り、次いで、試料採取を連続して、均一に、そして体系的に行い、常に、シリーズ中のレベルあたり１５片のスライスを維持し、そしてレベル間の１００μｍは廃棄した。
【０１８８】
二重インキュベーションにおいて、ヒト・アミロイドペプチドのＡＡ１−１７に対して向けられる６Ｅ１０  ＩＨＣでの染色およびベータシート構造に対するチオフラビンＳ染色によって、斑負荷量を定量化した。すべての調べた動物の組織を均一に扱った。
【０１８９】
組織学的パラメーターに関する統計
すべての評価したパラメーターに対して、記述統計分析を行った。平均±標準誤差（ＳＥＭ）として、データを示した。グラブス検定によって異常値を検出し、そして統計分析から排除した。動物あたり５回の単一測定（各カットレベルから１つ）の値を、動物あたり１つの値に統合した（個体平均）。これらの統合値を用いて、群平均を計算した。コルモゴルフ・スミルノフ正常値分布検定後、パラメトリックＡＮＯＶＡ後のニューマン・クールズ多重比較事後検定によって、またはガウス分布が失われている場合、ノンパラメトリック・クラスカル・ワリスＡＮＯＶＡ後のダン多重比較検定によって、相違を計算した。
【０１９０】
図１０は、海馬においてｐ−ＦＴＡＡ治療の効果が大きく、皮質においては有意な変化がないことを示す。このマウスモデルの皮質および海馬における斑負荷量発展が異なることに関しては、完全に、凝集阻害化合物の概念に適合する。ｐ−ＦＴＡＡ治療マウスにおける海馬斑面積パーセントは、ビヒクル対照に比較して減少する（図１０）。平均斑サイズの減少によるこの効果に関する統計的有意性は、ｔ検定によって、１ｍｇ／ｋｇおよび１０ｍｇ／ｋｇ  ｐ−ＦＴＡＡ治療マウスに関して立証された。治療期間はわずか３０日であったが、１ｍｇ／ｋｇ治療動物に関して、斑面積の４０％の減少が達成された。
【０１９１】
ＳＤＳ脳ホモジネート分画におけるＡβレベル減少と一致して、ｐ−ＦＴＡＡでの治療は、斑負荷量の減少を導いた。これは、主に、海馬で可視であり、海馬では、皮質より斑がより成熟しない。この効果は、ヒト・アミロイドに対する６Ｅ１０  ＩＨＣで、ならびに斑中央に位置するベータシートコアのチオフラビン染色で観察された。斑コア周囲のより拡散した６Ｅ１０  ＩＲの減少は、１０ｍｇ／ｋｇ  ｐ−ＦＴＡＡ治療で最強であり、一方、ベータシートコアに対する最強の効果は、１ｍｇ／ｋｇ  ｐ−ＦＴＡＡ治療で観察された。
【０１９２】
８．６  初代ニワトリニューロンにおいてＡβ１−４２が誘導する病変に対する２つの物質の効果：神経保護性
Ｔ：Ｉ＿１：  ｐ−ＨＴＡＡ、Ｍｗ＝５２９ｇ／ｍｏｌ、ＰＢＳ＋１．３３％ＤＭＳＯ中のストック溶液（１０ｍｇ／ｍｌ）から、ビヒクル中に希釈。
【０１９３】
Ｔ：Ｉ＿２：  ＰＯＷＴ−１３、Ｍｗ＝２７８２ｇ／ｍｏｌ、脱イオン水中のストック溶液（４０ｍｇ／ｍｌ）から、ビヒクル中に希釈。
細胞供給源：  ８週齢のニワトリ胚（Ｌｏｈｍａｎ  Ｂｒｏｗｎハイブリッド）由来の終脳ニューロン
栄養培地：  ４．５ｇグルコース／ｌ、５％  Ｎｕ血清、０．０１％ゲンタマイシン、２ｍＭ  Ｌ−グルタミンを含むＤＭＥＭ
群サイズ：  実験あたりの各Ｔ．Ｉ．およびＲ．Ｉ．濃度に関して、ｎ＝６
病変：  １０μＭ  Ａβ１−４２（４８時間プレ凝集）をＤＩＶ８で４８時間
効果の評価：  ＤＩＶ１０に対するＭＴＴ
１回の単一実験の期間：  ９日間
アッセイあたりの独立実験の数：  ｎ＝２
ニワトリ終脳ニューロンの調製
１日齢の受精卵を飼育開始まで、適切な条件下で保存する。胚第０日、卵を飼育インキュベーターに移し、そして胚第８日まで、回転させながら、３７．８℃および５５％湿度に維持した。すべての細胞培養実験を無菌条件下で行い、すなわちすべての処置は、特別な細胞培養装置を用い、細胞培養設備中で行う。ガラス製品、ピンセットまたははさみなどの必要な物品は、実験前に滅菌する。購入するストック溶液はすでに無菌であり、そして培地などの最終懸濁物は、ラミナエアフローキャビネット中で新鮮に調製される。ニューロン調製は、簡潔には、胚をプラスチックディッシュに移し、そして断頭する。両半球を取り除き、収集し、そしてほぐれた組織はいずれもきれいに取る。半球を機械的に分離し、そして１６０μｌの体積中、各ウェル中に、４．８ｘ１０４細胞をプレーティングする。ニワトリ終脳ニューロンに関する細胞培地は、４．５ｇグルコース／ｌ、５％  Ｎｕ血清、０．０１％ゲンタマイシンおよび２ｍＭ  Ｌ−グルタミンを含むＤＭＥＭからなる。培養を３７℃、９５％湿度および５％ＣＯ２で維持する。
【０１９４】
Ａβ１−４２の凝集
Ａβ１−４２ペプチドを０．２５％ＮＨ３中に溶解して最終濃度を１ｍＭとする。次いで、溶解したＡβ１−４２ペプチドをＰＢＳで希釈して、最終濃度２５５μＭとし、そして３７℃で４８時間インキュベーションする。４８時間凝集させた後、Ａβ１−４２ペプチドを超音波水槽中で１分間、超音波処理する（どちらの場合も、Ａβ１−４２ペプチドが、試験物品とともにまたは別個に凝集する）。
【０１９５】
ＭＴＴ生存度アッセイ
記載されるようにプレート読み取り装置（５７０ｎｍ）を用いて、例えばＳＯＰ  ＭＥＴ００４において、培養の生存度をＭＴＴアッセイで決定する。ＭＴＴアッセイは、ミトコンドリア・デヒドロゲナーゼ（コハク酸デヒドロゲナーゼ）による、黄色ＭＴＴ（３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−２，５，ジフェニルテトラゾリウムブロミド）の、濃青色ホルマザン結晶への還元に基づく。この反応は、生存細胞のみで触媒されるため、細胞生存度の定量化のために、このアッセイを用いてもよい。細胞生存度の決定のため、最終濃度０．５ｍｇ／ｍｌまで、ＭＴＴ溶液を各ウェルに添加する。２時間後、ＭＴＴ含有培地を吸引する。細胞を３％ＳＤＳで溶解し、そしてホルマザン結晶をイソプロパノール／ＨＣｌに溶解する。光学密度を概算するため、プレート読み取り装置（Ａｎｔｈｏｓ  ＨＴＩＩまたはμｑｕａｎｔ）を波長５７０ｎｍで用いる。細胞生存度を光学密度（ＯＤ）で表す。
【０１９６】
Ａβ１−４２病変における試験物品および参照物品の適用
ＤＩＶ８で、プレ凝集させたＡβ１−４２を最終濃度１０μＭで４８時間適用する。Ｔ．Ｉ．を以下のように適用する：
１）ＰＢＳ中、凝集開始時（ＤＩＶ６）に、Ａβ１−４２に直接適用；凝集４８時間後、ＤＩＶ８に、試験物品の存在下でプレ凝集させたＡβ１−４２を細胞に４８時間適用するか、または
２）ニワトリニューロンに対して、プレ凝集させたＡβ１−４２とともに（ＤＩＶ８）４８時間適用。
【０１９７】
参照物品は、プレ凝集させたＡβ１−４２とともに（ポイント２）のみ培養に適用し、凝集開始時（ポイント１）にＡβ１−４２に直接は添加しない。
細胞上でＴ．Ｉ．およびＡβ１−４２を４８時間インキュベーションした後（ＤＩＶ１０）、ニューロン生存度をＭＴＴアッセイによって分析する。
【０１９８】
対照
以下の対照を用いた：
１）ビヒクル対照（各試験物品および参照物品に関して）
２）試験物品および参照物品を伴わないＡβ１−４２
３）１０μＭ  Ｔ．Ｉ．のみ（未提示）
結果
試験物品（Ｔ．Ｉ．）およびすでにプレ凝集させたＡβ１−４２をニューロンに同時に適用すると、図１１に示すような結果が生じる。どちらの化合物も、１０μＭ  Ａβ１−４２のみに比較して、より優れた生存度を生じる。Ｔ．Ｉ．の１０μＭ  Ａβ１−４２に対する化学量論比をグラフの下に示す。
【０１９９】
凝集中にＡβ１−４２に試験物品（Ｔ．Ｉ．）を添加すると、図１２に示す結果が生じる。どちらの化合物も、１０μＭ  Ａβ１−４２のみに比較して、より優れた生存度を生じる。Ｔ．Ｉ．の１０μＭ  Ａβ１−４２に対する化学量論比をグラフの下に示す。
これらに限定されるものではないが、本発明は以下の態様の発明を包含する。
［１］ヒトまたは動物被験体の療法的治療のための、以下の式（Ｉ）の単分散化合物またはその医薬的に許容される塩：
【化２９】
0005646495.tif 000034
［式中、
ｎは１、２、３または４であり；
各ｐは独立に０、１、２であり；
各Ａは、チエニレン、フェニレン、フルオレニレン、ベンゾチエニレン、エチレンジオキシチエニレン、ベンゾチアジアゾリレンおよびビニレンより独立に選択される部分であり、該部分は、１または２のＲ３基で置換されていてもよく；
各Ｒ１は、１〜３のＲ４基で置換されていてもよい、Ｈおよびチエニルより独立に選択され；
各Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は、ヒドロキシ、ヒドロキシアルキル、ヒドロキシアルコキシ、ヒドロキシアルコキシアルキル、ヒドロキシポリオキシアルキレン、アルコキシ、アルコキシアルキル、ポリオキシアルキレン、カルボキシ、カルボキシアルキル、カルボキシアルコキシ、カルボキシアルコキシアルキル、カルボキシポリオキシアルキレン、アルコキシカルボニル、アルコキシカルボニルアルキル、アルコキシカルボニルアルコキシ、アルコキシカルボニルアルコキシアルキル、アルコキシカルボニルポリオキシアルキレン、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アミノアルキル、アルキルアミノアルキル、ジアルキルアミノアルキル、アミノアルコキシ、アルキルアミノアルコキシ、ジアルキルアミノアルコキシ、アミノポリオキシアルキレン、アルキルアミノポリオキシアルキレン、ジアルキルアミノポリオキシアルキレン、アミノアルコキシアルキル、アルキルアミノアルコキシアルキル、ジアルキルアミノアルコキシアルキル、（アミノ）（カルボキシ）アルキル、（アルキルアミノ）（カルボキシ）アルキル、（ジアルキルアミノ）（カルボキシ）アルキル、（アミノ）（カルボキシ）アルコキシ、（アルキルアミノ）（カルボキシ）アルコキシ、（ジアルキルアミノ）（カルボキシ）アルコキシ、（アミノ）（カルボキシ）アルコキシアルキル、（アルキルアミノ）（カルボキシ）アルコキシアルキル、（ジアルキルアミノ）（カルボキシ）アルコキシアルキル、（アミノ）（カルボキシ）ポリオキシアルキレン、（アルキルアミノ）（カルボキシ）ポリオキシアルキレン、（ジアルキルアミノ）（カルボキシ）ポリオキシアルキレン、（アルコキシカルボニル）（アミノ）アルキル、（アルコキシカルボニル）（アルキルアミノ）アルキル、（アルコキシカルボニル）（ジアルキルアミノ）アルキル、（アルコキシカルボニル）（アミノ）アルコキシ、（アルコキシカルボニル）（アルキルアミノ）アルコキシ、（アルコキシカルボニル）（ジアルキルアミノ）アルコキシ、（アルコキシカルボニル）（アミノ）アルコキシアルキル、（アルコキシカルボニル）（アルキルアミノ）アルコキシアルキル、（アルコキシカルボニル）（ジアルキルアミノ）アルコキシアルキル、（アルコキシカルボニル）（アミノ）ポリオキシアルキレン、（アルコキシカルボニル）（アルキルアミノ）ポリオキシアルキレン、（アルコキシカルボニル）（ジアルキルアミノ）ポリオキシアルキレン、アシルアミノ、アシルアミノアルキル、アシルアミノアルコキシ、アシルアミノアルコキシアルキル、アシルアミノポリオキシアルキレン、アシルアルキルアミノ、アシルアルキルアミノアルキル、アシルアルキルアミノアルコキシ、アシルアルキルアミノアルコキシアルキル、アシルアルキルアミノポリオキシアルキレン、ヒドラジノカルボニル、ヒドラジノカルボニルアルキル、ヒドラジノカルボニルアルコキシ、ヒドラジノカルボニルアルコキシアルキル、ヒドラジノカルボニルポリオキシアルキレン、ニトロ、ニトロアルキル、ニトロアルコキシ、ニトロアルコキシアルキル、ニトロポリオキシアルキレン、シアノ、シアノアルキル、シアノアルコキシ、シアノアルコキシアルキル、シアノポリオキシアルキレン、スルホ、スルホアルキル、スルホアルコキシ、スルホアルコキシアルキルおよびスルホポリオキシアルキレンより独立に選択されるか、あるいは同じチオフェン環に結合した任意の２つのＲ２は一緒に、スルホアルキル、スルホアルコキシ、スルホアルコキシアルキルまたはスルホポリオキシアルキレンで置換されていてもよいアルキレンジオキシであり、
任意のＮＨ２基は、ｔｅｒｔ−ブチルカルバメート、ベンジルカルバメートまたは９−フルオレニルメチルカルバメートとして保護されるか、あるいはビオチニル部分で置換されていてもよく；そして
任意のアルキルまたはアルキレン部分は、Ｃ１−Ｃ６アルキルまたはアルキレンである］。
［２］各Ａが、チエニレン、フェニレン、およびエチレンジオキシチエニレンより独立に選択される部分であり、該部分が、１または２のＲ３基で置換されていてもよい、［１］に記載の化合物。
［３］ｐが０または１である、［１］または［２］に記載の化合物。
［４］以下の式（ＩＩ）の単分散化合物またはその医薬的に許容される塩：
【化３０】
0005646495.tif 000035
［式中、
各ｐは０、１、２より独立に選択され；
ｖは０、１、２であり；
各ｕは０、１、２、３より独立に選択され；
但し、すべてのｐ、ｖ、ｕが０であることはなく；
各Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は、ヒドロキシ、ヒドロキシアルキル、ヒドロキシアルコキシ、ヒドロキシアルコキシアルキル、ヒドロキシポリオキシアルキレン、アルコキシ、アルコキシアルキル、ポリオキシアルキレン、カルボキシ、カルボキシアルキル、カルボキシアルコキシ、カルボキシアルコキシアルキル、カルボキシポリオキシアルキレン、アルコキシカルボニル、アルコキシカルボニルアルキル、アルコキシカルボニルアルコキシ、アルコキシカルボニルアルコキシアルキル、アルコキシカルボニルポリオキシアルキレン、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アミノアルキル、アルキルアミノアルキル、ジアルキルアミノアルキル、アミノアルコキシ、アルキルアミノアルコキシ、ジアルキルアミノアルコキシ、アミノポリオキシアルキレン、アルキルアミノポリオキシアルキレン、ジアルキルアミノポリオキシアルキレン、アミノアルコキシアルキル、アルキルアミノアルコキシアルキル、ジアルキルアミノアルコキシアルキル、（アミノ）（カルボキシ）アルキル、（アルキルアミノ）（カルボキシ）アルキル、（ジアルキルアミノ）（カルボキシ）アルキル、（アミノ）（カルボキシ）アルコキシ、（アルキルアミノ）（カルボキシ）アルコキシ、（ジアルキルアミノ）（カルボキシ）アルコキシ、（アミノ）（カルボキシ）アルコキシアルキル、（アルキルアミノ）（カルボキシ）アルコキシアルキル、（ジアルキルアミノ）（カルボキシ）アルコキシアルキル、（アミノ）（カルボキシ）ポリオキシアルキレン、（アルキルアミノ）（カルボキシ）ポリオキシアルキレン、（ジアルキルアミノ）（カルボキシ）ポリオキシアルキレン、（アルコキシカルボニル）（アミノ）アルキル、（アルコキシカルボニル）（アルキルアミノ）アルキル、（アルコキシカルボニル）（ジアルキルアミノ）アルキル、（アルコキシカルボニル）（アミノ）アルコキシ、（アルコキシカルボニル）（アルキルアミノ）アルコキシ、（アルコキシカルボニル）（ジアルキルアミノ）アルコキシ、（アルコキシカルボニル）（アミノ）アルコキシアルキル、（アルコキシカルボニル）（アルキルアミノ）アルコキシアルキル、（アルコキシカルボニル）（ジアルキルアミノ）アルコキシアルキル、（アルコキシカルボニル）（アミノ）ポリオキシアルキレン、（アルコキシカルボニル）（アルキルアミノ）ポリオキシアルキレン、（アルコキシカルボニル）（ジアルキルアミノ）ポリオキシアルキレン、アシルアミノ、アシルアミノアルキル、アシルアミノアルコキシ、アシルアミノアルコキシアルキル、アシルアミノポリオキシアルキレン、アシルアルキルアミノ、アシルアルキルアミノアルキル、アシルアルキルアミノアルコキシ、アシルアルキルアミノアルコキシアルキル、アシルアルキルアミノポリオキシアルキレン、ヒドラジノカルボニル、ヒドラジノカルボニルアルキル、ヒドラジノカルボニルアルコキシ、ヒドラジノカルボニルアルコキシアルキル、ヒドラジノカルボニルポリオキシアルキレン、ニトロ、ニトロアルキル、ニトロアルコキシ、ニトロアルコキシアルキル、ニトロポリオキシアルキレン、シアノ、シアノアルキル、シアノアルコキシ、シアノアルコキシアルキル、シアノポリオキシアルキレン、スルホ、スルホアルキル、スルホアルコキシ、スルホアルコキシアルキルおよびスルホポリオキシアルキレンより独立に選択されるか、あるいは同じチオフェン環に結合した任意の２つのＲ２は一緒に、スルホアルキル、スルホアルコキシ、スルホアルコキシアルキルまたはスルホポリオキシアルキレンで置換されていてもよいアルキレンジオキシであり、
任意のＮＨ２基は、ｔｅｒｔ−ブチルカルバメート、ベンジルカルバメートまたは９−フルオレニルメチルカルバメートとして保護されるか、あるいはビオチニル部分で置換されていてもよく；そして
任意のアルキルまたはアルキレン部分は、Ｃ１−Ｃ６アルキルまたはアルキレンである］。
［５］各Ｒ２、Ｒ３およびＲ４が、カルボキシ、カルボキシアルキル、カルボキシアルコキシ、カルボキシアルコキシアルキル、カルボキシポリオキシアルキレン、アルコキシカルボニル、アルコキシカルボニルアルキル、アルコキシカルボニルアルコキシ、アルコキシカルボニルアルコキシアルキル、アルコキシカルボニルポリオキシアルキレン、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アミノアルキル、アルキルアミノアルキル、ジアルキルアミノアルキル、アミノアルコキシ、アルキルアミノアルコキシ、ジアルキルアミノアルコキシ、アミノアルコキシアルキル、アルキルアミノアルコキシアルキル、ジアルキルアミノアルコキシアルキル、アミノポリオキシアルキレン、アルキルアミノポリオキシアルキレン、ジアルキルアミノポリオキシアルキレン、（アミノ）（カルボキシ）アルキル、（アミノ）（カルボキシ）アルコキシ、（アミノ）（カルボキシ）アルコキシアルキル、（アミノ）（カルボキシ）ポリアルコキシアルキレンより独立に選択される、［４］に記載の化合物。
［６］各Ｒ２、Ｒ３およびＲ４が、カルボキシ、カルボキシアルキル、アルコキシカルボニル、アルコキシカルボニルアルキル、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アミノアルキル、アルキルアミノアルキル、ジアルキルアミノアルキル、（アミノ）（カルボキシ）アルキルおよび（アミノ）（カルボキシ）アルコキシより独立に選択される、［４］に記載の化合物。
［７］各Ｒ２、Ｒ３およびＲ４が、カルボキシ、カルボキシアルキル、アルコキシカルボニルアルキル、アミノアルキル、（アミノ）（カルボキシ）アルキルおよび（アミノ）（カルボキシ）アルコキシより独立に選択される、［４］に記載の化合物。
［８］各Ｒ２が、カルボキシアルキル、アルコキシカルボニルアルキル、アミノアルキル、（アミノ）（カルボキシ）アルキルおよび（アミノ）（カルボキシ）アルコキシより独立に選択される、［４］に記載の化合物。
［９］各Ｒ４がカルボキシである、［４］〜［８］のいずれかに記載の化合物。
［１０］ｖが０である、［４］〜［９］のいずれかに記載の化合物。
［１１］各ｐが独立に０または１である、［４］〜［１０］のいずれかに記載の化合物。
［１２］各ｕが独立に０または１である、［４］〜［１１］のいずれかに記載の化合物。
［１３］ｕ＝ｖ＝０およびｐ＝２である場合、Ｒ２がカルボキシエチルでなく、好ましくはカルボキシアルキルでない、［４］〜［１２］のいずれかに記載の化合物。
［１４］
【化３１】
0005646495.tif 000036
より選択される、［４］に記載の化合物またはその医薬的に許容される塩。
［１５］ヒトまたは動物被験体の療法的治療において使用するための、［４］〜［１４］のいずれか１項に記載の化合物またはその医薬的に許容される塩。
［１６］哺乳動物におけるタンパク質のミスフォールド型または凝集型が関与する疾患を患う哺乳動物の治療のための、［１］〜［１４］のいずれか１項に記載の化合物またはその医薬的に許容される塩。
［１７］前記疾患がアミロイドーシスである、［１６］に記載の化合物。
［１８］前記疾患が、原発性アミロイドーシス、続発性アミロイドーシス、臓器特異的アミロイドーシスおよび医原性インスリンアミロイドーシスからなる群より選択される、［１６］に記載の化合物。
［１９］前記臓器特異的アミロイドーシスが、脳特異的アミロイドーシスより選択される、［１６］に記載の化合物。
［２０］前記疾患が、原発性アミロイドーシス、続発性アミロイドーシス、家族性または遺伝性アミロイドーシス、２型糖尿病、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病、伝染性海綿状脳症（クロイツフェルト・ヤコブ病、クールー、致死性家族性不眠症、封入体筋炎、ウシ海綿状脳症およびコンゴーレッド親和性血管障害など）、心臓アミロイドーシス、ならびに医原性状態（インスリンアミロイドーシスなど）からなる群より選択される、［１６］に記載の化合物。
［２１］［１］〜［１５］のいずれかに記載の化合物、および場合によって、医薬的に許容される緩衝剤、希釈剤、賦形剤および／またはキャリアーを含む、医薬組成物。
［２２］［１］〜［１５］のいずれかに記載の２以上の単分散化合物の混合物を含む、［２１］に記載の化合物。
［２３］タンパク質のミスフォールド型または凝集型が関与する疾患を患う哺乳動物の治療法であって、［１］〜［１６］のいずれかに記載の化合物を該哺乳動物に投与する工程を含む、上記方法。
［２４］タンパク質のミスフォールド型または凝集型が関与する疾患を患う哺乳動物の治療法であって、［１］〜［１６］のいずれかに記載の少なくとも２つの化合物の混合物を該哺乳動物に投与する工程を含む、上記方法。
［２５］前記疾患がアミロイドーシスである、［２３］または［２４］に記載の方法。
［２６］前記疾患が、原発性アミロイドーシス、続発性アミロイドーシス、臓器特異的アミロイドーシスおよび医原性インスリンアミロイドーシスからなる群より選択される、［２３］または［２４］に記載の方法。
［２７］前記臓器特異的アミロイドーシスが、脳特異的アミロイドーシスより選択される、［２３］または［２４］に記載の方法。
［２８］前記疾患が、原発性アミロイドーシス、続発性アミロイドーシス、家族性または遺伝性アミロイドーシス、２型糖尿病、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病、伝染性海綿状脳症（クロイツフェルト・ヤコブ病、クールー、致死性家族性不眠症、封入体筋炎、ウシ海綿状脳症およびコンゴーレッド親和性血管障害など）、心臓アミロイドーシス、ならびに医原性状態（インスリンアミロイドーシスなど）からなる群より選択される、［２３］または［２４］に記載の方法。
【図１】
0005646495.tif 000042
【図２】
0005646495.tif 000043
【図３】
0005646495.tif 000044
【図４】
0005646495.tif 000045
【図５】
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【図６】
0005646495.tif 000047
【図７】
0005646495.tif 000048
【図８】
0005646495.tif 000049
【図９】
0005646495.tif 000050
【図１０】
0005646495.tif 000051
【図１１】
0005646495.tif 000052
【図１２】
0005646495.tif 000053