(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下を含む空洞をその中に有する、実質的に平らな筐体、
平面床と、該床に平行でありかつ該床から間隙で隔てられた透明平面天井とに囲まれている細胞計数部であって、該間隙が、細胞懸濁液を収容しかつ該天井を通じて該間隙内のすべての細胞の個々の観察を可能にするほど十分に浅い、細胞計数部と、
該細胞計数部の縁部の長さに沿って延伸しかつ該間隙を実質的に超える深さを有するリザーバであって、該平面床の下方に延伸しかつ該長さ全体に沿って該細胞計数部に開口している、リザーバ、
該リザーバに開口している、該天井内の入口、および
該リザーバから該細胞計数部への細胞懸濁液の流れを遅くするように配置された、該リザーバ内のダム
を含む、細胞計数スライド。
【請求項２】
前記空洞が、前記細胞計数部の対向縁部の長さに沿って延伸する第1および第2の前記リザーバと、各々が各リザーバに開口している第1および第2の前記入口とを含む、請求項1記載の細胞計数スライド。
【請求項３】
前記間隙がある高さを有し、かつ前記リザーバが該高さの少なくとも2倍の深さを有する、請求項1記載の細胞計数スライド。
【請求項４】
前記細胞計数部が、2つの長手方向縁部といずれも該長手方向縁部よりも短い2つの横方向縁部とを有する長方形であり、かつ前記リザーバが該横方向縁部の一方の長さに沿って延伸する、請求項1記載の細胞計数スライド。
【請求項５】
前記細胞計数部が、2つの長手方向縁部といずれも該長手方向縁部よりも短い2つの横方向縁部とを有する長方形であり、前記リザーバの各々が各横方向縁部の長さに沿って延伸する、請求項2記載の細胞計数スライド。
【請求項６】
前記筐体が上方板および下方板からなり、これらの板を積層する際に、該上方板が前記天井を形成し、該下方板が前記床と前記リザーバとを形成する、請求項1記載の細胞計数スライド。
【請求項７】
前記リザーバが床を有し、前記ダムが、前記細胞計数部の縁部に平行でありかつ隣接した、該リザーバ床内の隆起である、請求項1記載の細胞計数スライド。
【請求項８】
前記細胞計数部の対向縁部の一方に平行でありかつ隣接するようにそれぞれ配置された、前記第1のリザーバ内の第1のダムと前記第2のリザーバ内の第2のダムとをさらに含む、請求項2記載の細胞計数スライド。
【請求項９】
以下の段階を含む、細胞懸濁液中の細胞を計数するための方法:
(a)  以下を含む空洞をその中に有する、実質的に平らな筐体、
平面床と、該床に平行でありかつ該床から間隙で隔てられた透明平面天井とに囲まれている細胞計数部であって、該間隙が、細胞懸濁液を収容しかつ該天井を通じて該間隙内のすべての細胞の個々の観察を可能にするほど十分に浅い、細胞計数部、
該細胞計数部の縁部の長さに沿って延伸しかつ該間隙を実質的に超える深さを有するリザーバであって、該平面床の下方に延伸しかつ該長さ全体に沿って該細胞計数部に開口している、リザーバ、
該リザーバに開口している、該天井内の入口、および
該リザーバ内のダム
を含む細胞計数スライド内に、該懸濁液を配置することを、
該入口を通じて該リザーバに該懸濁液を供給して、該リザーバを満たし、かつ該懸濁液を該ダムを超えて該リザーバから溢れさせて該細胞計数部に入れることによって行う段階、ならびに
(b)  該透明平面天井を通じて該細胞計数部を調査して、該細胞計数部の少なくとも一部における細胞を計数する段階。
【請求項１０】
前記空洞が、前記細胞計数部の対向縁部の長さに沿って延伸する第1および第2の前記リザーバと、それぞれが各リザーバに開口している第1および第2の前記入口とを含み、段階(a)が、該第2の入口を通じて前記空洞から空気を通気させながら、該第1の入口を通じて該第1のリザーバに前記懸濁液を供給することを含む、請求項9記載の方法。
【請求項１１】
前記細胞計数部が、2つの長手方向縁部といずれも該長手方向縁部より短い2つの横方向縁部とを有する長方形であり、前記リザーバが該横方向縁部の一方の長さに沿って延伸する、請求項9記載の方法。
【請求項１２】
前記細胞計数部が、2つの長手方向縁部といずれも該長手方向縁部よりも短い2つの横方向縁部とを有する長方形であり、前記第1のリザーバが該横方向縁部の一方の長さに沿って延伸し、かつ前記第2のリザーバが該横方向縁部の他方の長さに沿って延伸する、請求項10記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、2010年1月12日出願の米国仮特許出願第61/294,373号の恩典を主張し、その内容は参照により本明細書に組み入れられる。
【０００２】
1. 発明の分野
本発明は、生物学実験室および生化学実験室用の実験室装置、特に細胞計数用装置の分野に属する。
【背景技術】
【０００３】
2. 先行技術の説明
一般的な血液細胞、細菌、および生体細胞の懸濁液中での細胞計数は、臨床実験室および研究実験室において一般的に使用される手順である。懸濁液の単位体積当たりの細胞数の細胞計数による測定は、生体機能および生体活性ならびに細胞生存率および細胞成長などの性質を評価する上で有用である。細胞計数は血球計数器上で一般的に行われ、血球計数器は、懸濁液を保持する顕微鏡スライドと、手動計数のために観察者によるスライドの観察を直接的にまたはスライドの画像から可能にする顕微鏡ビューアとを利用する。懸濁液中の細胞を計数するために、懸濁液の液滴をスライド内に配置し、第2のスライドまたは任意の薄い透明なカバーガラスで覆う。スライドとカバーガラスとの間の間隙(「チャンバ」とも呼ぶ)は通常約100ミクロンである。カバーガラスの底面のグリッドは計数用の区域の輪郭を示し、その区域と間隙の深さとの両方を知ることで、観察者は単位体積当たりの細胞数を決定することが可能になる。グリッドによって観察者は、スライドの寸法に比べて面積が小さいグリッドの部分を選択することが可能になり、これにより使用者は、相対的に容易および迅速に、かつ誤差の危険性を最小限にして、細胞を計数することが可能になる。したがって、スライドとカバーガラスとの組み合わせの1つの決定的な特徴は、それらの間の距離であり、別の決定的な特徴は、スライドの幅にわたる細胞の分布の均一性である。距離が均一でないかまたは細胞が均一に分布していない場合、選択された区域から計算される濃度は懸濁液全体中の濃度と異なりうる。
【０００４】
細胞計数スライドのチャンバ内に懸濁液を配置する従来の手段は、カバーシート内の切込みまたは同様の開口部を通じてチャンバの一辺に懸濁液を導入するためのピペットの使用を包含する。次に懸濁液を切込みからチャンバに流入させる。この種類のスライドおよびそれらの使用の開示の例は、1979年10月23日発行のTolles, W.の米国特許第4,171,866号（特許文献1）および1994年9月20日発行のFisch, H.の米国特許第5,349,436号（特許文献2）に見出される。しかし、この手順の結果として、チャンバ内の地点が異なると懸濁液の流れの方向および流速が異なることに起因して、多くの場合細胞の分布は不均一となり、切込みの中心に近い区域よりも切込み側の区域の方が、濃度が相対的に高くなる。したがって、通常は計数が行われる場所であるチャンバの中心での細胞の濃度は、懸濁液全体での濃度と異なる(ほとんどの場合それよりも低い)。本発明はこの問題に対処する。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】米国特許第4,171,866号
【特許文献２】米国特許第5,349,436号
【発明の概要】
【０００６】
本発明は、計数チャンバと、計数チャンバの周辺に沿った1つまたは複数のリザーバとを含む、細胞計数スライドに関する。計数チャンバは本明細書において細胞計数部とも呼び、それとリザーバとが一緒に、細胞計数スライドの内側に空洞を形成する。多くの場合、スライドは2枚の板の組み合わせであり、一方は底部を形成し、他方は従来の細胞計数スライドにおけるカバーガラスを代替する。2枚の板は、一緒に積層されて使用される個々の構成部品であってもよく、あるいは、一緒に融合されて単位として販売、輸送、または使用されてもよい。あるいは、単一の(一体の)材料片として成形(鋳造または機械加工)してもよい。いずれの場合でも、計数中の細胞懸濁液の深さを規定する細胞計数部の深さ(または高さ)は、対向しかつ平行である2つの平らな表面であるこの部分の床および天井によって設定される。上方板は上からの計数を可能にするほど透明であり、多くの態様では、スライド全体が透明である。
【０００７】
リザーバはチャンバの一辺の全長に沿って延伸することが好ましい。多くの場合、チャンバは長方形であり、リザーバは長方形のより短い(横方向の)辺の一方の全長に沿って延伸し、これらの場合の多くは、2つのリザーバが含まれ、それぞれ長方形の2つの対向する各辺にある。いずれの場合でも、リザーバは細胞計数部の床の下方に延伸し、細胞計数部の床と天井との間の間隙よりも深さが好ましくは少なくとも2倍大きい。スライドの上方板内の入口を通じて、例えばピペットによって、懸濁液をリザーバに供給することができる。懸濁液をこのように加えると、リザーバが懸濁液で満たされた後、懸濁液が計数チャンバに入る。リザーバが満たされた後にのみ、懸濁液が細胞計数部に入り、リザーバが一辺の全長に沿って延伸する場合、細胞計数部への細胞の流路がその辺の長さに沿って実質的に均一に生じる。
【０００８】
計数チャンバおよびリザーバの両方の深さを変動させることができる。例えば、深さが100ミクロンである細胞計数部では、ほとんどの場合、最良の結果は、深さが300ミクロン〜1ミリリットル(1,000ミクロン)、最も好ましくは約500ミクロンであるリザーバで得られる。リザーバは均一な深さを必要としない。長方形の計数区域では、長方形の2つの対向する各辺の長さに沿って延伸するリザーバが有用であり、使用者は2つのリザーバ間で選択できる。単一のリザーバを通じて懸濁液を加えることができ、対向リザーバは、細胞計数部から空気を逃がすための通気孔として使用される。
[本発明1001]
平面床と、該床に平行でありかつ該床から間隙で隔てられた透明平面天井とに囲まれている、細胞計数部であって、該間隙が、細胞懸濁液を収容しかつ該天井を通じて該間隙内のすべての細胞の個々の観察を可能にするほど十分に浅い、細胞計数部と、
該細胞計数部の縁部の長さに沿って延伸しかつ該間隙を実質的に超える深さを有する、リザーバであって、該平面床の下方に延伸しかつ該長さ全体に沿って該細胞計数部に開口している、リザーバと、
該リザーバに開口している、該天井内の入口と
を含む空洞をその中に有する、実質的に平らな筐体
を含む、細胞計数スライド。
[本発明1002]
前記空洞が、前記細胞計数部の対向縁部の長さに沿って延伸する第1および第2の前記リザーバと、各々が各リザーバに開口している第1および第2の前記入口とを含む、本発明1001の細胞計数スライド。
[本発明1003]
前記間隙がある高さを有し、かつ前記リザーバが該高さの少なくとも2倍の深さを有する、本発明1001の細胞計数スライド。
[本発明1004]
前記細胞計数部が、2つの長手方向縁部といずれも該長手方向縁部よりも短い2つの横方向縁部とを有する長方形であり、かつ前記リザーバが該横方向縁部の一方の長さに沿って延伸する、本発明1001の細胞計数スライド。
[本発明1005]
前記細胞計数部が、2つの長手方向縁部といずれも該長手方向縁部よりも短い2つの横方向縁部とを有する長方形であり、前記リザーバの各々が各横方向縁部の長さに沿って延伸する、本発明1002の細胞計数スライド。
[本発明1006]
前記筐体が上方板および下方板からなり、これらの板を積層する際に、該上方板が前記天井を形成し、該下方板が前記床と前記リザーバとを形成する、本発明1001の細胞計数スライド。
[本発明1007]
前記リザーバから前記細胞計数部への細胞懸濁液の流れを遅くするように配置された、該リザーバ内のダムをさらに含む、本発明1001の細胞計数スライド。
[本発明1008]
前記リザーバが床を有し、前記ダムが、前記細胞計数部の縁部に平行でありかつ隣接した、該リザーバ床内の隆起である、本発明1007の細胞計数スライド。
[本発明1009]
前記細胞計数部の対向縁部の一方に平行でありかつ隣接するようにそれぞれ配置された、前記第1のリザーバ内の第1のダムと前記第2のリザーバ内の第2のダムとをさらに含む、本発明1002の細胞計数スライド。
[本発明1010]
以下の段階を含む、細胞懸濁液中の細胞を計数するための方法:
（a）平面床と、該床に平行でありかつ該床から間隙で隔てられた透明平面天井とに囲まれている、細胞計数部であって、該間隙が、細胞懸濁液を収容しかつ該天井を通じて該間隙内のすべての細胞の個々の観察を可能にするほど十分に浅い、細胞計数部、
該細胞計数部の縁部の長さに沿って延伸しかつ該間隙を実質的に超える深さを有する、リザーバであって、該平面床の下方に延伸しかつ該長さ全体に沿って該細胞計数部に開口している、リザーバと、
該リザーバに開口している、該天井内の入口と
を含む空洞をその中に有する、実質的に平らな筐体
を含む細胞計数スライド内に、該懸濁液を配置することを、
該入口を通じて該リザーバに該懸濁液を供給して、該入口を満たし、かつ該懸濁液を該入口から溢れさせて該細胞計数部に入れることによって行う段階、ならびに
（b）該透明平面天井を通じて該細胞計数部を調査して、該細胞計数部の少なくとも一部における細胞を計数する段階。
[本発明1011]
前記空洞が、前記細胞計数部の対向縁部の長さに沿って延伸する第1および第2の前記リザーバと、それぞれが各リザーバに開口している第1および第2の前記入口とを含み、段階(a)が、該第2の入口を通じて前記空洞から空気を通気させながら、該第1の入口を通じて該第1のリザーバに前記懸濁液を供給することを含む、本発明1010の方法。
[本発明1012]
前記細胞計数部が、2つの長手方向縁部といずれも該長手方向縁部より短い2つの横方向縁部とを有する長方形であり、前記リザーバが該横方向縁部の一方の長さに沿って延伸する、本発明1010の方法。
[本発明1013]
前記細胞計数部が、2つの長手方向縁部といずれも該長手方向縁部よりも短い2つの横方向縁部とを有する長方形であり、前記第1のリザーバが該横方向縁部の一方の長さに沿って延伸し、かつ前記第2のリザーバが該横方向縁部の他方の長さに沿って延伸する、本発明1011の方法。
[本発明1014]
前記細胞計数スライドが、前記リザーバ内にダムをさらに含み、かつ段階(a)が、該ダムを超えて前記懸濁液を前記細胞計数部に流入させることをさらに含む、本発明1010の方法。
[本発明1015]
前記細胞計数スライドが、前記第1のリザーバ内にダムをさらに含み、かつ段階(a)が、該ダムを超えて前記懸濁液を前記細胞計数部に流入させることをさらに含む、本発明1011の方法。
【図面の簡単な説明】
【０００９】
【図１】本発明の一態様の上面図である。
【図２】図1の2-2線に沿った図1の態様の断面図である。
【図３】図1の態様の上方部分の複写図である。
【図４】本発明の第2の態様の上面図である。
【図５】図4の5-5線に沿った図4の態様の断面図である。
【図６】先行技術の細胞計数スライド内の細胞の画像である。
【図７】本発明の細胞計数スライド内の細胞の画像である。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
例示的態様の説明
本明細書に添付された図面は、本発明の例示的態様を表す。これらの各態様において、スライドは2枚の板、すなわち上部板および下部板として構築される。
【００１１】
一態様を図1の積層板の上面図、図1の2-2線に沿った図2の積層板の垂直断面図、および図3の上部板の上面図に示す。積層板11のうち、下部板12は細胞計数部の床およびリザーバの床として役立ち、上部板13は細胞計数部の天井として役立つ。上部板を通じた直接目視観察により細胞計数部内の細胞の画像を得ることで、細胞計数を行う。上述のように、上部板13は透明であり、好ましい態様では、上部板および下部板12、13はいずれも透明である。
【００１２】
図2の断面図においてわかるように、下部板12は陥凹のある2つの平行な長方形部14、15を有する板であり、長方形部は、細胞計数部の床を形成する足場16で隔てられている。足場16の高さは、陥凹のある2つの長方形部14、15と足場とを取り囲む板の周辺17の高さよりも低い。上部板13は、下部板の周辺17の上方に延伸しかつそれに支えられ、これにより足場16と上方部分13の中心部との間に空隙18ができる。したがって、陥凹のある長方形部14、15はリザーバを形成し、空隙18は細胞計数部を形成し、リザーバおよび細胞計数部は一緒にスライドの空洞を構成する。図3の上面図に別に示す上部板13は、2つの開口部21、22(図1)を除いて連続的である平らな板であり、開口部は概してU字形であって、下方板12の2つのリザーバ14、15の外縁に整列した外縁23、24を有する。したがって、これらの開口部は、スライドに装入するための入口として役立つ。使用時に、ピペット25によって一方の入口22を通じて下にあるリザーバ15に細胞懸濁液を適用して最初にこのリザーバを満たす。リザーバが満たされると、さらなる懸濁液がピペットを通じて供給され、このリザーバから懸濁液が溢れて細胞計数部18に流入する。
【００１３】
代替構造では、足場16は下部板12の周辺17と同一の高さであることがあり、一方、足場の上方の上部板13の中心部は上部板の残りよりも薄いことがあり、これにより図1、図2および図3に示す構造と同一の幅の間隙が形成される。
【００１４】
第2の態様を図4の上面図、および図4の5-5線に沿った図5の垂直断面図に示す。ここでもやはり、スライド31は2つの部分、すなわち、チャンバ(すなわち細胞計数部)およびリザーバの両方の床として役立つ下部板32、ならびにチャンバの天井として役立ち、それを通じて計数が行われる、上部板33で示される。図1、図2および図3のスライドと同様に、図4および図5のスライド31は、2つのリザーバ34、35およびそれらの間の足場36、ならびに、細胞計数用チャンバとして役立つ、足場36と上部板33との間の間隙37を含む。図2のピペットと同一の様式で使用されるピペット38が示される。図4および図5の態様において追加される特徴は、一対のダム41、42であり、各リザーバ34、35内の1つのダムは、足場に最も近いリザーバの側面に沿いかつ平行であり、リザーバの長さに沿って延伸する。ダム41、42は、足場に向かう懸濁液の流れを遅くするために、かつ、足場の縁部に沿った懸濁液の分布を、縁部を通過してスライド空洞の細胞計数部に入る前に改善するために役立つ。したがってダムは、細胞計数区域内の細胞のいっそう均一な分布を生成する。さらに大きな制御のために、単一のリザーバは、例えば足場36の縁部に平行に延伸する2つ以上のダムを含みうる。
【００１５】
先行技術のスライド(リザーバを欠く)に対する本発明のスライドの細胞分布の比較が、先行技術(リザーバおよびダムを欠く)を表す図6ならびに本発明(リザーバおよびダムの両方を含む)を表す図7に見られる。画像は、先行技術の細胞スライド(図6)がチャンバの中心においてより低い細胞濃度を有し、したがってコントラストがより明るく見える一方で、本発明の細胞スライド(図7)がスライドの長さおよび幅にわたって均一な細胞分布を有することを示す。
【００１６】
本明細書に添付される特許請求の範囲において、「ある（a）」または「ある（an）」という用語は「1つまたは複数」を意味するように意図される。「含む（comprise）」という用語、ならびに「含む（comprises）」および「含む（comprising）」などのその変形は、段階または要素の列挙に先行する場合、さらなる段階または要素の追加が任意的であり、排除されないことを意味するように意図される。本明細書において引用されるすべての特許、特許出願および他の刊行された参考資料はその全体が参照により本明細書に組み入れられる。本明細書において引用される任意の参考資料または一般的な任意の先行技術と、本明細書の明確な教示との間の任意の矛盾は、本明細書における教示を優先して解決されるように意図される。これは、当技術分野で理解されるある用語または語句の定義と、本明細書において明確に示される同一の用語または語句の定義との間の任意の矛盾を含む。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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