(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
蟻酸ネリルを含み、粉末状又は乾燥時に粉末状となる、チリダニを誘引するための組成物。
【請求項２】
さらにダニに対して毒性を有する化合物を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
蟻酸ネリルとダニ駆除剤とを含むか、又は蟻酸ネリルとリモネンとダニ駆除剤とを含む、チリダニを誘引し殺傷するための組成物。
【請求項４】
前記リモネンがＲ−（＋）−リモネン光学異性体の形状である、請求項３に記載の組成物。
【請求項５】
１または２以上の追加の誘引物質を含む、請求項１から４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項６】
蟻酸ネリルの供給手段とダニ駆除剤の供給手段とを含むか、又は蟻酸ネリル及びリモネンの供給手段とダニ駆除剤の供給手段とを含む、チリダニを誘引し殺傷するためのキット。
【請求項７】
チリダニに対するおとり又は誘引物質としての蟻酸ネリルの使用又は蟻酸ネリル及びリモネンの使用。
【請求項８】
チリダニに対する誘引−殺傷組成物を産生するための、蟻酸ネリルとダニ駆除剤の使用又は蟻酸ネリルとリモネンとダニ駆除剤の使用。
【請求項９】
チリダニを蟻酸ネリル、又は蟻酸ネリルとリモネンに暴露することを含む、チリダニを誘引する方法。
【請求項１０】
さらに、チリダニをダニ駆除剤に暴露する段階を含む、請求項９に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明はチリダニを罠で捕らえるのに有用な組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
アレルギー誘発物質と関連性のある喘息といったアトピー性疾患は公衆衛生の問題となりつつあり、英国における喘息に費やされる現在の経済的コストは、ほぼ１０億５千万ポンドと試算される（ＷＨＯ、２００６）。ヤケヒョウヒダニ（Ｔｒｏｕｅｓｓａｒｔ）（ヨーロッパチリダニ）及びコナヒョウヒダニ（Ｈｕｇｈｅｓ）（アメリカチリダニ）は先進諸国を通じて見出されており（Ｆａｉｎ  ｅｔ  ａｌ．  １９９０；  Ｈａｒｔ，  １９９５；  Ａｒｌｉａｎ  ａｎｄ  Ｍｏｒｇａｎ  ２００３）、アトピー性疾患を引き起こすアレルギー誘発物質を排出することが知られている（Ｖｏｏｒｈｏｒｓｔ  ｅｔ  ａｌ．  １９６４；  Ｔｏｖｅｙ  ｅｔ  ａｌ．  １９８１；  Ｒｏｂｉｎｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．  １９９７）  。世界的な研究により、英国や、オーストラリア、ニュージーランド及び米国といったその他の先進国で喘息の高い罹患率を示すことを結論付けている（ＩＳＳＡＣ，  １９９８）。
【０００３】
チリダニ個体数を制御し、減少するための多くの異なる方法が存在する：環境要因によるもの、生育環境を操作するもの、毒性を伴う作用形態によって作用する化学物質を直接投与するもの、アレルギー誘発物質を除去するもの、そして不透過性のベッドカバーといった物理的な障害物を利用するもの、等である。相対湿度はチリダニのライフサイクルに影響することが知られている（Ｃｏｌｌｏｆｆ，  １９８７；  Ａｒｌｉａｎ，  １９９２；  Ｏｒｉｂｅ  ａｎｄ  Ｍｉｙａｚａｋｉ，  ２０００）。このため、湿度を５１％以下に下げることにより、実験においては、ダニ及びアレルギー誘発物質レベルの有意な減少が認められた（Ａｒｌｉａｎ  ｅｔ  ａｌ．  ２００１）。近年、ヤケヒョウヒダニの個体数を制御するために温度及び湿度を制御することが発展してきた（Ｃｒｏｗｔｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００６）。ダニの個体数を減少することを目的として、すでに実験的試行が実施されている環境による方法には、下地床の暖房（ｄｅ  Ｂｏｅｒ，  ２００３）、蒸気洗浄（Ｃｏｌｏｆｆ    ｅｔ  ａｌ．，  １９９５）、５５度以上での衣服及びベッドリネンの洗濯（ＭｃＤｏｎａｌｄ  ａｎｄ  Ｔｏｖｅｙ，  １９９２）及びぬいぐるみ類の凍結（Ｎａｇａｋｕｒａ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９６）が挙げられる。商業的な市販品に見られる安息香酸ベンジルやピレスロイド（ペルメトリン及びδ−フェノスリン）といった化学合成のダニ駆除剤はまた、これらをチリダニの生息環境（絨毯、マットレス、カーテン）に投与することによって、チリダニを制御するのに使用することができる（Ｃｏｌｌｏｆｆ，  １９９０；  Ｆａｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，  ９９０；  Ｃｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９６；  Ｈｅｉｄｅ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９７）。ペルメトリンはまた、マットレスの裏地にしみ込ませることができ、臨床試験において、少なくとも２７カ月間、チリダニ駆除に成功したとの報告がある（Ｃａｍｅｒｏｎ  ａｎｄ  Ｈｉｌｌ，  ２００２）。通常の掃除機による清掃によって、ベッドや絨毯上に蓄積したアレルギー誘発物質を、週一回の清掃により減じることができ、これは月一回の清掃に比べ、より大きな効果があった（Ｂｅｌｌａｎｔｉ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０００）。報告によると、通常の掃除機よりも、直径１ミクロン以上の漏れを防ぐ超高性能（ＨＥＰＡ）フィルターシステムを備えた、推奨されている医療用掃除機の方がよりよく機能する（Ｃｏｌｌｏｆｆ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９５）。しかしながら、ＨＥＰＡフィルター装備の掃除機の機種間でも効果の差は甚だしく、あるモデルでは通常の掃除機と遜色がない（Ｈｉｌｌ  ａｎｄ  Ｃａｍｅｒｏｎ，  １９９９）。ウエットタイプの吸引方式の方が、ヤケヒョウヒダニのアレルギー誘発物質であるＤｅｒ  ｐ１をより多く除去でき、これはＤｅｒ  ｐ１が高い水溶性の性質を持っているからであるが、その他のダニのアレルギー誘発物質では、より溶けにくい場合もある（Ｃｏｌｌｏｆｆ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９５）。現行におけるより好ましいやり方としては、アレルギー誘発物質非透過性のベッドカバーを用いることにより、ベッドでのアレルギー誘発物質の露出を軽減する、というものであるが、試験結果は、臨床的な効能にばらつきがあることを��している。例えば、ある研究においては、有意なアレルギー誘発物質レベルの減少が見出されたが、患者のアレルギー性鼻炎に有意な改善は認められなかった（Ｔｅｒｒｅｅｃｈｏｒｓｔ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００３）。一方で、別の研究では、また、有意なアレルギー誘発物質レベルの減少と共に、喘息症状の改善が確認された（ｖａｎ  ｄｅｎ  Ｂｅｍｔ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００４）。しかしながら、Ｌｕｃｚｙｎｓｋａ  ｅｔ  ａｌ．，（２００３）は、アレルギー誘発物質非透過性カバーがアレルギー誘発物質レベルの減少も喘息症状を軽減もしないことを見出している。
【０００４】
チリダニを駆除する多くの方法があるが、これらで何ら制限が無いものは無い。環境により制御する方法はきちんと維持しなければならず、さもなければ、ダニの個体数は再び戻ってしまう。また、家庭がダニ駆除のための環境制御に関する知識を得たとしても、これは必ずしも本方法が実践されるということを意味しない（Ｃａｌｌａｈａｎ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００３）。化学的に制御するには、ダニ駆除剤を定期的に投与する必要があり、さもなければ、殺卵性の活性が不足するためか（Ｃｏｌｌｏｆｆ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９２）、家具の奥深くへの薬剤処理の浸透が足らなくなることにより（ｄｅ  Ｂｏｅｒ，  １９９８）、ダニの再増殖が生じてしまう。さらに喘息患者の多くはこうした化合物の使用を、特に共同寝室エリアで、嫌がる（Ｃｏｌｌｏｆｆ，  １９９０）。掃除機は定期的にかける必要があり、こうした掃除機は、掃除機から大気中にチリダニのアレルギー誘発物質をまき散らすため、問題を生じる（ｋａｌｒａ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９０）。臨床試験は、非透過性ベッドカバーを用いることによるアトピー性疾患の症状の軽減効果の程度に幅があり、ある患者においては、居心地の悪さを感じうることを示している。最後に、全ての駆除方法に当てはまる問題として、チリダニがイヌ（Ｊａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００５）、車のシート（Ａｒｌｉａｎ  ａｎｄ  Ｍｏｒｇａｎ，  ２００３）、病院（Ｃｕｓｔｏｖｉｃ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９８）及び旅客列車（Ｕｅｈａｒａ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０００）といった外部因子から補充されてしまう点がある。
【０００５】
現行のよく用いられている方法とともに、これに代わる方法が研究され、試されている。例えば、チリダニ駆除方法におとりを導入することは、ダニを家具やマットレスの深部からおびき出し、天然合成のダニ駆除剤に晒した後、掃除機で吸い取るといったことができる可能性を有している。誘引物質（行動調整化合物）はチリダニの行動を操作し、こうした医学的に重要な節足動物を駆除する既存の方法に代わる自然な方法を提供しうる可能性を有している。しかしながら、チリダニの化学生態学はほとんど注目されておらず、成功例も限られている。研究にはコナヒョウヒダニ及びヤケヒョウヒダニの化学特性（Ｋｕｗａｈａｒａ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９０；  Ｋｕｗａｈａｒａ，  １９９７；  Ｋｕｗａｈａｒａ，２００４）やコナヒョウヒダニの性フェロモン（Ｔａｔａｍｉ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００１）の同定、及び集合行動を誘起する化学物質の同定は無いものの該物質による集合行動の観察（Ｒｅｋａ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９２；  Ｇｌａｓｓ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００１）がある。本出願の発明者はチリダニの誘引物質を同定し、ダニ駆除に対する誘引−殺傷戦略を開発した。
【発明の概要】
【０００６】
本発明においては、蟻酸ネリルを含むチリダニの誘引組成物で粉末状のものを提供する。また、これに代わるものとして、乾燥させると該粉末となる液状のものであってもよい。
また、その大部分がＲ−（＋）−リモネン光学異性体からなるリモネンを含むチリダニの誘引組成物も提供する。
該誘引組成物は蟻酸ネリル及びリモネンの両方を含むものでもよい。
【０００７】
ダニはいかなるダニでもよく、特にはチリダニ又はコナダニである。
チリダニはヒトの住居にある絨毯および椅子の座面で一般に見出される有害な節足動物である。本明細書で用いられている該用語はいかなるチリダニをも含むが、特にはヤケヒョウヒダニ、ヨーロッパチリダニ及びコナヒョウヒダニ、アメリカチリダニが該当する。
コナダニもまた、有害な節足動物であり、通常は貯蔵穀物やカビ臭い環境に見出される。
【０００８】
蟻酸ネリルはチリダニから得られた誘引物質である。これはまた（Ｚ）−３，７−ジメチル−２，６−オクタジエニル蟻酸としても知られており、以下の化学式で表わされる：
【化１】
0005430581.tif 000002
リモネンは２つの光学異性体であるＲ−（＋）−リモネンとＳ−（−）−リモネンを伴うキラル分子である。リモネンのラセミ体（両光学異性体を同量含むもの）はジペンテンとして知られている。リモネンはテルペンであり、当業者にはよく知られている。誘引組成物に含まれるリモネンは、好ましくは、その大部分がＲ−（＋）−光学異性体であり、すなわち、好ましくは、少なくとも６５％のリモネンがＲ−（＋）−光学異性体であり、より好ましくは、少なくとも７５％、さらに好ましくは、少なくとも８５％、さらに好ましくは、少なくとも９５％である。最も好ましくは、該組成物にＳ−（−）−リモネンを含んでいないものである。本明細書において、リモネンなる用語を使用しているが、これは、好ましくは、Ｒ−（＋）−光学異性体（エナンチオマー）を指すものとして使用されている。
【０００９】
本誘引組成物は、好ましくは、粉末状である。この形状であれば、チリダニが隠れている絨毯や家具に容易にまぶしたり、振りかけたりすることができる。該チリダニは該組成物に誘引され、絨毯や家具の表面に引き寄せられることにより、容易に除去することが可能である。普段は、チリダニは、例えば、絨毯、マットレス及び枕の中になる線維にしがみついており、容易に除去することはできない。しかしながら、チリダニを表面に引き寄せることにより、該チリダニを掃除機によって容易に除去することが可能である。
【００１０】
ある環境においては、蟻酸ネリル又はリモネンが噴霧したり、まぶしたりするのに適当な粉末産物に処方されることが望ましい。これは、少量の蟻酸ネリル（例えば、数％重量／上量）と適当な不活性粉末、例えば、鉱物粘土、Ｆｕｌｌｅｒ’ｓ土類、タルク、硫酸カルシウム及び／又はデンプンといった、噴霧／散布しうる性質を損なわない程度に凝集化しない不活性粉末とを単純に混合することにより作成しうる。別の方法として、蟻酸ネリルは、水溶性媒質に両親媒性担体（例えば、修飾デンプン）と共にあることで、懸濁液／乳濁液に処方されうる。該懸濁液／乳濁液は噴霧乾燥することもでき、この産物は部分的又は完全に担体内に被包された蟻酸ネリルを含んだ散布可能な粉末である。多くの例において、粉末に処方する好ましい方法は、顆粒を調製することである。これらは、例えば、蟻酸ネリルを希釈用粉末（例として、硫酸カルシウム、リン酸カルシウム、炭酸カルシウム、デンプン又は微晶性セルロース（この全ては不溶性である）、そして好ましくは、例えばラクトース、マンニトール、スクロース、ソルビトール又はブドウ糖）及び少量の結合剤（例えば、コーンスターチ、ゼラチン、スクロース、アラビアゴム、ポリビニルピロリドン、メチルセルロース、マルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリビニルアルコール又はポリエチレングリコールの水溶液、アルコール溶液、水アルコール溶液）と混合し、そうすることで湿り気のある塊を作成、該塊を粗く選別し、結果として得られた湿り気のある顆粒を乾燥させ、乾燥した顆粒を選別し、オプションとして滑剤（例えば、タルク、エアレイテッドシリカ又はステアリン酸マグネシウム）と混合することにより調製されうる。
【００１１】
特に、本組成物は、例えば、蟻酸ネリル及び／又はリモネンをワックスに処方し、その後粒状化することによって、粉末状に製造してもよい。特に、ケイ酸塩による粒子に処方するのでもよい。
【００１２】
別の処方としては、本組成物は液体状であってもよく、特にそれが乾燥すると、粉末状となるように調製されている溶液でもよい。特に、該組成物は噴霧用又はエアゾール用ノズルといったノズルを備えた容器に入れて提供されるのでもよく、該ノズルを通して、該組成物を散布することができる。本組成物は、ポンプ又はその他のいかなる適当な方法によって、ノズルを通じて散布されうる。
【００１３】
本組成物は、さらに、ダニ駆除剤のようなチリダニに対して毒性のある化合物を含んでいてもよい。ダニ駆除剤とは、ダニを殺傷するのに使用される試薬である。本明細書で用いられているダニ駆除剤は、天然ピレスロイドやエッセンシャルオイルといった、いかなるタイプのダニ駆除剤を含む。使用される中で、ある特定のダニ駆除剤としては除虫菊粉がある。その他のダニ駆除剤の使用についても想定することができ、特に想定されるのが植物由来のダニ駆除剤である。
【００１４】
蟻酸ネリル及び／又はリモネンとダニ駆除剤を含む、ダニを誘引し、かつ殺傷する組成物もまた、本発明によって提供される。
本組成物は粉末又はその他の形状を有しうる。該組成物は、これに加えて、適当な担体を含んでいてもよい。
本発明の組成物は、好ましくは、蟻酸ネリル及びリモネン、特にリモネンのＲ−（＋）−鏡像異性体を含んでいる。
【００１５】
本発明における組成物は、好ましくは、有効な用量の、蟻酸ネリル及び／又はリモネン及び／又はダニ駆除剤を含んでいる。すなわち、本組成物は、好ましくは、該組成物を投与する対象の表面にチリダニを誘い出すのに十分量の蟻酸ネリル及び／又はリモネンを含んでいる。本組成物は、好ましくは、表面に誘引したチリダニの少なくとも５０％を殺傷するのに十分なダニ駆除剤を含んでいる。該組成物は、好ましくは、少なくとも０．０１％の蟻酸ネリルを含み、より好ましくは、少なくとも０．０５％、さらに好ましくは、少なくとも０．５％、さらに好ましくは、少なくとも１％の蟻酸ネリルを含む。
【００１６】
本組成物は、また、１または２以上のその他のダニ誘引物質を含んでいてもよく、特に、１または２以上のその他の誘引剤を含んでいてもよい。
本発明はさらに蟻酸ネリル及び／またはリモネンのチリダニに対する誘引物質または誘引剤としての使用を提供する。
チリダニに対する誘引物質または誘引剤とは、チリダニを引きつける組成物のことである。
【００１７】
また、チリダニに対する誘引−殺傷組成物を製造するための、蟻酸ネリル及び／またはリモネン及びダニ駆除剤の使用も提供する。誘引−殺傷組成物とは、チリダニを誘引した後、これらを殺傷する組成物のことである。誘引−殺傷という用語は当業者にとって周知である。
さらに、チリダニを蟻酸ネリル及び／またはリモネンに暴露することからなるチリダニの誘引方法も提供する。
チリダニの蟻酸ネリル及び／またはリモネンへの暴露とは、好ましくは、蟻酸ネリル及び／またはリモネンをチリダニのそばに置くことを意味する。特に、蟻酸ネリル及び／またはリモネンをダニから５センチ以内においてもよく、より好ましくは、ダニから４センチ以内においてもよく、さらに好ましくは、ダニから３センチ以内においてもよい。
【００１８】
これに加えて、本方法は、チリダニをダニ駆除剤に暴露する段階を含んでいてもよい。好ましくは、チリダニは、蟻酸ネリル及び／またはリモネンへの暴露と同時またはその後にダニ駆除剤に暴露される。
本発明は、例示のみとしてであるが、以下に示す図を参照するにより更に詳細に説明される。
【図面の簡単な説明】
【００１９】
【図１】時間経過に伴う誘引領域（２０ミリ径の円盤状絨毯）中のコナヒョウヒダニの捕獲量の割合を示すグラフである。
【図２】時間経過に伴う誘引領域（２０ミリ径の円盤状絨毯）中のヤケヒョウヒダニの捕獲量の割合を示すグラフである。
【図３】３種の処方における放出速度を示すグラフである。
【図４】０．０５％蟻酸ネリル処方に暴露後の“散布領域”中で回収されるコナヒョウヒダニの全数を示すグラフである。
【図５】Ａ）（Ｒ）−リモネン＋ヤケヒョウヒダニ、Ｂ）リモネンラセミ体及びＣ）（Ｒ）−リモネンのＧＣトレースを示すグラフである。
【図６】除虫菊粉暴露後のコナヒョウヒダニの死亡率データを示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００２０】
実施例１−蟻酸ネリル
材料と方法
チリダニ：コナヒョウヒダニは既に報じられた方法に従い（Ｓｋｅｌｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００７）飼育した。ヤケヒョウヒダニには細かく砕いた酵母細胞（Ａｌｌｉｓｏｎ）と魚肉フレーク（ＴｅｔｒａＭｉｎ）の混合物をエサとして与え、２３−２５℃及び７０−７５％相対湿度にて飼育し（Ｓｐｉｅｋｓｍａ，  １９６７；  Ａｒｌｉａｎ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９０）、行動学上のバイオアッセイ及び化学分析に必要になるまで、該条件下にて維持した。
【００２１】
チリダニ抽出物の調製。培養コナヒョウヒダニ及びヤケヒョウヒダニ（０．１ｇ）を別々に飽和ＮａＣｌ溶液（８０ｍｌ）で満たしたガラス製計量シリンダー（１００ｍｌ）の上層に置いた（Ｈａｒｔ  ａｎｄ  Ｆａｉｎ，  １９８７；  Ｆａｉｎ  ａｎｄ  Ｈａｒｔ，  １９８６）。１０−１５分後、浮遊し続けているダニをピペットにてガラス製バイアルに回収した。蒸留ヘキサン（１０ｍｌ）を加え、４℃にて一晩静置した。各抽出物の溶媒層を清浄なバイアルに移し、無水硫酸マグネシウムを用いて乾燥した。該抽出物をフィルター処理し、窒素の緩やかな噴射により５０μｌまたは１００μｌになるまで濃縮した。コナヒョウヒダニ抽出物は液体クロマトグラフィーによりＦｌｏｒｉｓｉｌR（６０−１００メッシュ、Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙ，  Ｇｉｌｌｉｎｇｈａｍ，  ＵＫ）に蒸留ヘキサン（１００％）、ヘキサン：ジエチルエーテル（５，  １０，  ２０，  ５０％）、ジエチルエーテル（１００％）及びジクロロメタン（１００％）を溶出液として用いることにより分画した。
【００２２】
チリダニ揮発成分の回収。コナヒョウヒダニ及びヤケヒョウヒダニをガラス製ピペットチップにて優しく吸引し、ペトリ皿からＰＴＦＥチューブに移した。シラン処理したガラスウールをＰＴＦＥチューブの両端に充填し、一端をＴｅｎａｘ  ＴＡチューブに装着し、もう一端をＳｗａｇｅｌｏｋコネクタにより密閉した。対照として、空か魚肉フレークを含んだ別のＰＴＦＥチューブをガラスウールで充填し、同時に評価に供した。加湿した正方向の気流を該ＰＴＦＥチューブに１００ｍｌ／分の速度で流入させ、コンタミを軽減するべくチャコールフィルターを通した。一方で、ＰＴＦＥチューブを通る気流の速度を表示するべく、負方向の気流を１００ｍｌ／分で同時にＰＴＦＥチューブに流した。大気への同調化は２４時間続け、その後、Ｔｅｎａｘ  ＴＡチューブを外した。
【００２３】
ガスクロマトグラフィー（ＧＣ）。ダニ抽出物及びクロマトグラフィー画分は、クールオンカラムインジェクター及び水素炎イオン化型検出器（ＦＩＤ）を装備し、架橋メチルシリコンキャピラリーカラム（５０ｍ，  ０．３２ｍｍ  ｉ．ｄ，  ０．５２μｍフィルム厚）を装着したＨｅｗｌｅｔｔ  Ｐａｃｋａｒｄ  ６８９０  ＧＣを用いて分析した。本ＧＣの加熱装置は３０℃から２３０℃まで１０℃／分にて加熱し、２３０℃で３０分維持するようプログラムした。キャリアガスは水素であった。Ｔｅｎａｘ  ＴＡサンプルは、架橋メチルシリコンキャピラリーカラム（５０ｍ，  ０．３２ｍｍ  ｉ．ｄ，  ０．８２μｍフィルム厚）及びＦＩＤを装着したＨｅｗｌｅｔｔ  Ｐａｃｋａｒｄ  ６８９０  ＧＣ機を用いて分析した。熱による脱離は温度設定式気化ユニット（ＰＴＶ）内で行い、３０℃から２２０℃まで急速に（１６℃／秒）加熱するようプログラムした。本ＧＣの加熱装置は３０℃にて３０秒維持した後、５℃／分の速度で１２０℃まで上昇するようプログラムされ、その後、１０℃／分にて２４０℃まで上昇した。キャリアガスは水素を用いた。
【００２４】
ガスクロマトグラフィー−質量分析（ＧＣ−ＭＳ）。ダニ抽出物及び画分はクールオンカラムインジェクターを装備したＨｅｗｌｅｔｔ  Ｐａｃｋａｒｄ  ５８９０  ＧＣと組み合わせたＶＧ  ＡｕｔｏＳｐｅｃ質量分析機（Ｆｉｓｏｎｓ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，  Ｍａｎｃｈｅｓｔｅｒ，  ＵＫ）を用いて分析した。イオン化は電子衝突（７０ｅＶ，  ２５０℃）により行った。本ＧＣの加熱装置は３０℃で５分加熱後、５℃／分にて２５０℃に達するようにプログラムされた。キャリアガスはヘリウムを用いた。ダニ特異的なピークについての予備的な同定は最新のＭＳデータベース（ＮＩＳＴ，  ２００５）または文献として刊行されているＭＳデータにある既知のマススペクトルとの比較に基づいた。該同定は基準試料を用いたピーク増大により確認された（Ｐｉｃｋｅｔｔ，  １９９０）。
【００２５】
蟻酸ネリルの合成及び定量。蟻酸ネリルは市販のネロール（ＧＣによる純度＞９７％、Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙ，  Ｇｉｌｌｉｎｇｈａｍ，  ＵＫ）から蟻酸及び１，３−ジクロロヘキシルカルボジイミドを用いて１段階にて合成した。ダニ抽出物に存在する蟻酸ネリルの定量には、既知のＧＣトレースからのピーク領域データを用いて、一点外部標準定量方法（Ａｌｌｔｅｃｈ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ，  １９９８）を利用した。能力解析は、能力８０％、有意性９５％を基準として実施した。
【００２６】
チリダニの行動。以前記載した方法（Ｓｋｅｌｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  印刷中）に従い、チリダニによる行動反応を観察するために、Ｙ−チューブオルファクトメーターを使用した。各実験において、処置刺激及び対照刺激（１μｌ）を別々の円盤状のフィルターペーパー（１．５センチ径）に加え、１分間乾燥した後、オルファクトメーターの各アームに設置した。効果において４０％の差異（処理刺激に対して７０％）を見るのに適当なサンプルサイズを計算するために、能力解析は能力８０％、有意性９５％にて実施した（ＳＴＡＴＡ  ８．２ソフトウエア）。そのため、選択することのできた２０匹のダニも出来なかったダニも、各処理群での実験ごとに、記録を取った。処理群には以下のものを含まれる：（１）コナヒョウヒダニ抽出物由来のクロマトグラフィー画分  対  ヘキサン、（２）蟻酸ネリル（１０及び１００ｎｇ／μｌ）  対  ヘキサン、（３）メスのコナヒョウヒダニ抽出物  対  蟻酸ネリル、（４）オスのコナヒョウヒダニ抽出物  対  蟻酸ネリル、（５）メスのヤケヒョウヒダニ抽出物  対  蟻酸ネリル。
【００２７】
統計解析。Ｙ−チューブオルファクトメーターによるバイオアッセイの分類別データは適合性を判断すべく、イエイツの修正因子（特定のアームに対する選好）を伴うカイ二乗検定にて評価した（Ｆｏｗｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９８）。時間データは、パラメトリックデータ解析を行う前にｌｏｇ１０への変換を行った。処理群（蟻酸ネリル）のアームにおける判断決定までの対数時間が蟻酸ネリル濃度、性別及び検討したチリダニの種による影響を受けるかを解析するべく、３要因の分散分析（Ｗｉｎｄｏｗｓ版のＭｉｎｉｔａｂ  １１）を行った。
【００２８】
結果
蟻酸ネリルの確認及び定量。コナヒョウヒダニ画分の連結ＧＣ−ＭＳ分析により、蟻酸ネリルは画分４に見出された。その同定は画分４と蟻酸ネリルの標準サンプルを極性の異なる２つのカラムに同時投与することにより確認された。一点外部標準定量方法を用いて、コナヒョウヒダニ１匹当たりの蟻酸ネリル量を計算したところ、オス及びメスでそれぞれ１．３２±０．２ｎｇ及び３．３±０．３ｎｇであった。ヤケヒョウヒダニ１匹当たりの蟻酸ネリル量はオス及びメスでそれぞれ０．５±０．０１ｎｇ及び１．１３±０．１１ｎｇであった。大気で同調化したサンプルの定量分析により、蟻酸ネリルはコナヒョウヒダニ及びヤケヒョウヒダニ抽出物のどちらにも含まれていることが明らかとなった。
【００２９】
チリダニ由来画分の行動に対する活性。処理群のアームにおける全体的な反応（コナヒョウヒダニのオス及びメス）は、画分４を検定した場合にのみ有意であった（χ２＝４．０５、ｄｆ＝１、Ｐ＜０．０５、ｎ＝２０）。評価したその他の画分には有意な差異は見いだせなかった。
【００３０】
蟻酸ネリルに対するチリダニの嗅覚反応。１０ｎｇ（χ２＝９．０２５、ｄｆ＝１、Ｐ＜０．０１、ｎ＝４０）及び１００ｎｇ（χ２＝４．２２５、ｄｆ＝１、Ｐ＜０．０５、ｎ＝４０）蟻酸ネリルに暴露した時のオス及びメスのコナヒョウヒダニの全体的な反応は蟻酸ネリルに対して有意なものであった。１０ｎｇ（χ２＝１１．０２５、ｄｆ＝１、Ｐ＜０．０１、ｎ＝４０）及び１００ｎｇ（χ２＝１１．０２５、ｄｆ＝１、Ｐ＜０．０１、ｎ＝４０）蟻酸ネリルに暴露した時の全体的な反応（オス及びメスのヤケヒョウヒダニ）もまた蟻酸ネリルを含むアームに対して有意であった。しかしながら、反応に対してオスメス間で明らかな差異が認められた。コナヒョウヒダニのオスは１００ｎｇ（χ２＝６．０５、ｄｆ＝１、Ｐ＜０．０５、ｎ＝２０）蟻酸ネリルにのみ有意な反応を示し、メスは１０ｎｇ（χ２＝６．０５、ｄｆ＝１、Ｐ＜０．０５、ｎ＝２０）にのみ有意な反応を示した。ヤケヒョウヒダニのオスは１０ｎｇ（χ２＝６．０５、ｄｆ＝１、Ｐ＜０．０５、ｎ＝２０）蟻酸ネリルにのみ有意な反応を示したのに対し、ヤケヒョウヒダニのメスは１０ｎｇ（χ２＝４．０５、ｄｆ＝１、Ｐ＜０．０５、ｎ＝２０）及び１００ｎｇ（χ２＝８．４５、ｄｆ＝１、Ｐ＜０．０１、ｎ＝２０）の両方で有意な反応を示した。濃度（蟻酸ネリルの１００ｎｇに対する１０ｎｇ）  （Ｆ＝２．３８、ｄｆ＝１、Ｐ＝０．１２５）又は性差の影響（Ｆ＝１．６０、ｄｆ＝１、Ｐ＝０．２０８）を分析したところ、コナヒョウヒダニ及びヤケヒョウヒダニが、蟻酸ネリルを含んだアームに沿って、１センチの印をつけた場所を通過するのに要する対数時間には有意な差はなかった。しかしながら、コナヒョウヒダニとヤケヒョウヒダニの間で、蟻酸ネリルを含んだアームの１センチの印をつけた場所を通過するのに要する対数時間に有意な差が認められた（Ｆ＝１０．３０、ｄｆ＝１、Ｐ＜０．０２）。
【００３１】
合成蟻酸ネリル対同種の抽出物由来の蟻酸ネリルに対するチリダニの臭覚反応。コナヒョウヒダニのオスにおいて、合成蟻酸ネリル又は天然産生蟻酸ネリルを含むオスのコナヒョウヒダニ抽出物に対する反応には有意な差はなかった（χ２＝０．１０、ｄｆ＝１、Ｐ＝０．７５、ｎ＝１４）。同様に、コナヒョウヒダニのメスにおいても、蟻酸ネリル又はメスのコナヒョウヒダニ抽出物に対する反応に有意な差はなかった（χ２＝１．３８、ｄｆ＝１、Ｐ＝０．２４、ｎ＝１８）。合成ネリル又はメスのヤケヒョウヒダニ抽出物に対するヤケヒョウヒダニのメスによる反応は有意な差が無かった（χ２＝０．０６、ｄｆ＝１、Ｐ＝０．８０、ｎ＝１６）。
【００３２】
議論
コナヒョウヒダニは、コナヒョウヒダニ抽出物由来の画分１、２、３、５及び６に対して有意な行動活性を示さなかったが、画分４に対し有意に反応した。ＧＣ−ＭＳを用いることにより、画分４中に蟻酸ネリルを予備的に同定し、ＨＰ−１及びＤＢワックスカラムの両方を用いたピーク増強反応により蟻酸ネリルであることを確認した。これまでに蟻酸ネリルはコナヒョウヒダニ及びヤケヒョウヒダニ抽出物両方の因子として予備的にのみ同定されているが（Ｋｕｗａｈａｒａ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９０；  Ｔａｔａｍｉ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００１）、ピーク増強反応は実施されていない。本研究において、蟻酸ネリルは、濃度１０ｎｇ及び１００ｎｇで、コナヒョウヒダニ及びヤケヒョウヒダニのオス及びメスによる有意な志向性反応を誘起した。その他のコナダニ類の集合フェロモンもこれらの濃度で活性がある：例えば、ゴミコナダニは１０ｎｇのβ−ａｃａｒｉｄｉａｌに対し有意に反応し（Ｓｈｉｍｉｚｕ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００１）、コオノホシカダニは１０ｐｐｍ（１０ｎｇ／μｌ）の（１Ｒ，３Ｒ，５Ｒ，７Ｒ）  ｌａｒｄｏｌｕｒｅに対し有意に反応する（Ｋｕｗａｈａｒａ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９１）。合成蟻酸ネリルを、これと同程度の濃度で含んでいる同種の抽出物に対して、行動反応につき評価したところ、ヤケヒョウヒダニにおいても、コナヒョウヒダニにおいても、いずれのアームに対しても有意な優位性は示されなかった。この結果より、最初の画分を用いた実験で観察された行動を引き起こした化学物質は、蟻酸ネリルの存在により誘発されたことが確認された。時間データの解析により、ヤケヒョウヒダニ及びコナヒョウヒダニは、蟻酸ネリルに暴露した場合、有意に異なる時間でアームに沿って移動したことが示されたが、ダニが移動する軌跡を測定していないので、このことからヤケヒョウヒダニがより速く歩いているとは結論付けることはできない。
【００３３】
両チリダニ種とも蟻酸ネリルに反応したため、定義からすると、該化学物質は集合フェロモンとして作用しているのではないが、誘引物質は近縁種において類似の行動を誘発することが知られている。例としては、蟻酸ネリル及びシトラールは４種のネダニにおいて同一の行動反応を惹起する（Ａｋｉｙａｍａ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９７）。しかしながら、蟻酸ネリルのチリダニ行動における役割は不明なままである。コナヒョウヒダニでは実験室においてクラスタリングが観察されており（Ｇｌａｓｓ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９８；  Ｒｅｋ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９２）、本研究においても、コナヒョウヒダニ及びヤケヒョウヒダニの両方においてクラスタリングが観察された（Ａ．  Ｓｋｅｌｔｏｎ，  個人的観察による）。クラスタリング行動は、チリダニの糞中にある定着物質−集合フェロモンによって開始されることが示唆されているが、この行動を観察した研究においては、これに関連する化学物質（群）を同定はしていない（Ｒｅｋａ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９２）。このため、チリダニ揮発成分の収集物中に蟻酸ネリルが存在することに加えて、蟻酸ネリルで観察される行動反応より、チリダニのクラスタリング行動に蟻酸ネリルが関与している可能性が示唆される。チリダニによるクラスタリングの生態学的な利点としては、乾燥から身を守ることや防御機構としての点が想定しうる。ダニは、共にクラスターを形成することで、より乾燥した環境に晒されている体表部分を減らし、それによって乾燥を防いでいるのかもしれない。節足動物が集合体を作ることで、“超生命体”を形成し、それによって個々の節足動物の体表部分を減らすことにより、水分消失を減らしていることを示唆する証拠が存在し、こうした行動はＳｔｅｎｏｔａｒｕｓ  ｒｏｔｕｎｄｕｓという熱帯性食菌甲虫において観察されている（Ｙｏｄｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９２）。しかしながら、オスのコナヒョウヒダニのコロニーにおいて、乾燥条件でクラスタリングが観察された（７５％  ＲＴ）。このことから、温度及び湿度はクラスタリング行動反応及び示唆されている誘引物質を誘導する因子としては除外しうる（Ｇｌａｓｓ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９８）。これに代わるものとして、集まってクラスターを形成することは、潜在的な捕食者から身を守る防衛機構として役立つのかもしれず、例としては、ツメダニ（Ｃｏｌｌｏｆｆ，  １９９１）やチリダニが巣で巨大なクラスターを形成することにより、捕食者が個々のダニの位置を認識することを混乱させることができる（Ｆｒａｎｚ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００１）。しかしながら、蟻酸ネリルはダニのクラスタリングに何の役割も果たしていないかもしれない。該化学物質は一般にチリダニに見出されており（Ｋｕｗａｈａｒａ，  ２００４）、最近では、ネダニの集合フェロモンとして発見された（Ｋｕｗａｈａｒａ，  ２００６）  。蟻酸ネリルは集団の存在を認識するのに関与し、その後、例えば、オスのコナヒョウヒダニにおいて交尾行動を開始させる２−ヒドロキシ−６−メチルベンドアルデヒドのように（Ｔａｔａｍｉ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００１）、つがいの一方を見出すのに利用される種族特異的な誘引物質となる可能性がある。
【００３４】
生息地に関する研究を含め、チリダニの行動に関する研究は不足しており、このことが、チリダニ制御に関する問題に影響している。しかしながら、本研究は、チリダニの個体数を制御する方法を見出し、最終的にはアトピー性疾患に付随する症状を緩和することへの一助となりえるものである。
【００３５】
実施例２−蟻酸ネリル
誘引物質評価のための現場に準じたバイオアッセイ系の開発
まず、バイオアッセイ系は、蟻酸ネリルが絨毯断片からアメリカチリダニであるコナヒョウヒダニ及びヨーロッパチリダニであるヤケヒョウヒダニの集団を誘引する効力を評価するべく設計された。該バイオアッセイ系は、コナヒョウヒダニ及びヤケヒョウヒダニを、湿度を保つべくガラス製ペトリ皿の下に敷いた、円盤状にカットした絨毯（５センチ径）の上に放つ過程を含む。２種類の絨毯（どちらもＨｅｕｇａ  Ｈｏｍｅ  Ｇｌｏｏｒｉｎｇ    ＢＶより入手）を評価した：すなわち、カットパイル（Ｓｉｍｐｌｙ  Ｓｏｆｔ  Ａｑｕａｒｉｕｓ）及びループパイル（Ｗｏｒｋｉｎｇ  Ｗｅｅｋ  Ｂｏｕｃｌｅ  Ｉｎｋ  Ｐａｄ）である。１０ｎｇ／１０μｌ蟻酸ネリル溶液（ヘキサンに溶解）を分取し、誘引処理に用い、ヘキサン単独を対照として用いた。両溶液を円盤状のろ紙（２センチ径）に染み込ませ、円盤状の絨毯の中央に置いた。規定した時間後（１、５、１０、２０又は４０分）、絨毯の上に接着力のあるトラップを押し付け、ダニを捕獲、続いて顕微鏡下にてダニの数と位置を記録することで、ダニが初めにいた場所から移動しているかを確認した。データは、二項分布を前提とし、ロジットの連結及び分散パラメーターを１．０とする一般化線形モデルを用いて解析した（表１参照）。２つの反応間のずれの解析は、ＧｅｎＳｔａｔ  ８．０（Ｒｏｔｈａｍｓｔｅｄ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ）にて実行されるＭＯＤＥＬプロシージャーを用いて得られた。
【００３６】
【表１】
0005430581.tif 000003
【００３７】
本データより、蟻酸ネリルがあることで、粘着性のあるトラップに回収されるダニ数が有意に増加し、この誘引因子がループパイル絨毯よりもカットパイル絨毯にてより効果的に働くことが示唆された（図１及び２参照）。実際にトラップを用いることの実用性を、これらの実験後に評価した。その結果、蟻酸ネリルを徐放性のある剤形に処方し、これを絨毯上に散布することで、ダニを表面に誘導し、その後掃除機でダニを除去することがより実現可能でユーザーフレンドリーなコンセプトであると提案される。
【００３８】
蟻酸ネリルの徐放性粉末剤形の開発
蟻酸ネリルをワックスに調製し、その後、ケイ酸製の粒子（１００μｍ径）に処方した。５％、０．５％及び０．０５％という３通りの剤形を開発した。それぞれの剤形からの蟻酸ネリルの放出速度を決定するために、少量（１ｍｇ）を、吸収剤としてＴＥＮＡＸ  ＴＡを用いた大気への同調化に供した。サンプリングの時間間隔は１、２０そして４０分とした。割り振られた時間後、ＴＥＮＡＸ  ＴＡチューブを外し、そこに吸着された揮発成分を、架橋メチルシリコンキャピラリーカラム（５０ｍ、０．２５ｍｍ  ｉ．ｄ、０．３２μｍフィルム厚）及びＦＩＤを装備したＨｅｗｌｅｔｔ  Ｐａｃｋａｒｄ  ６８９０  ＧＣにて分析した。化合物は、３０℃から２２０℃まで急速に熱する（１６℃／秒）ようにプログラムされたＰＴＶユニットを用いた熱による脱離によって、チューブからＧＣカラム上に移動した。ＧＣの加熱装置は３０℃にて３０秒維持した後、５℃／分の速度で１２０℃まで上昇するようプログラムされ、その後、１０℃／分にて２４０℃まで上昇した。キャリアガスは水素を用いた。３種類の剤形の放出速度を以下に示す（図３）。
【００３９】
蟻酸ネリル０．０５％の剤形を更なる検討に選んだ。上記したバイオアッセイを用いてこの剤形を評価する上で、何も含んでいない剤形を対照とし、評価する２時点としては２０及び４０分を選択した。
【００４０】
【表１】
0005430581.tif 000004
【００４１】
本データより、４０分よりも２０分で、コナヒョウヒダニが有意により多く、散布領域中で回収されたことが示唆された（図４）。
【００４２】
実施例３−リモネン
チリダニ。
ヤケヒョウヒダニには細かく砕いた酵母細胞（Ａｌｌｉｓｏｎ）と魚肉フレーク（ＴｅｔｒａＭｉｎ）の混合物をエサとして与え、２３−２５℃及び７０−７５％相対湿度にて飼育し（Ｓｐｉｅｋｓｍａ，  １９６７；  Ａｒｌｉａｎ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９０）、行動学上のバイオアッセイ及び化学分析に必要になるまで、該条件下にて維持した。
【００４３】
チリダニ抽出物の調製。
培養ヤケヒョウヒダニ（０．１ｇ）を別々に飽和ＮａＣｌ溶液（８０ｍｌ）で満たしたガラス製計量シリンダー（１００ｍｌ）の上層に置いた（Ｈａｒｔ  ａｎｄ  Ｆａｉｎ，  １９８７；  Ｆａｉｎ  ａｎｄ  Ｈａｒｔ，  １９８６）。１０−１５分後、浮遊し続けているダニをピペットにてガラス製バイアルに回収した。蒸留ヘキサン（１０ｍｌ）を加え、４℃にて一晩静置した。各抽出物の溶媒層を清浄なバイアルに移し、無水硫酸マグネシウムを用いて乾燥した。該抽出物をフィルター処理し、窒素の緩やかな噴射により５０μｌまたは１００μｌになるまで濃縮した。ヤケヒョウヒダニ抽出物は液体クロマトグラフィーによりＦｌｏｒｉｓｉｌR（６０−１００メッシュ、Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙ，  Ｇｉｌｌｉｎｇｈａｍ，  ＵＫ）に蒸留ヘキサン（１００％）、ヘキサン：ジエチルエーテル（５，  １０，  ２０，  ５０％）、ジエチルエーテル（１００％）及びジクロロメタン（１００％）を溶出液として用いることにより分画した。
【００４４】
チリダニ揮発成分の回収。
ヤケヒョウヒダニをガラス製ピペットチップにて優しく吸引し、ペトリ皿からＰＴＦＥチューブに移した。シラン処理したガラスウールをＰＴＦＥチューブの両端に充填し、一端をＴｅｎａｘ  ＴＡチューブに装着し、もう一端をＳｗａｇｅｌｏｋコネクタにより密閉した。対照として、空か魚肉フレークを含んだ別のＰＴＦＥチューブをガラスウールで充填し、同時に評価に供した。加湿した正方向の気流を該ＰＴＦＥチューブに１００ｍｌ／分の速度で流入させ、コンタミを軽減するべくチャコールフィルターを通した。一方で、ＰＴＦＥチューブを通る気流の速度を表示するべく、負方向の気流を１００ｍｌ／分で同時にＰＴＦＥチューブに流した。大気への同調化は２４時間続け、その後、Ｔｅｎａｘ  ＴＡチューブを外した。
【００４５】
ガスクロマトグラフィー（ＧＣ）。
ダニ抽出物及びクロマトグラフィー画分は、クールオンカラムインジェクター及び水素炎イオン化型検出器（ＦＩＤ）を装備し、架橋メチルシリコンキャピラリーカラム（５０ｍ，  ０．３２ｍｍ  ｉ．ｄ，  ０．５２μｍフィルム厚）を装着したＨｅｗｌｅｔｔ  Ｐａｃｋａｒｄ  ６８９０  ＧＣを用いて分析した。本ＧＣの加熱装置は３０℃から２３０℃まで１０℃／分にて加熱し、２３０℃で３０分維持するようプログラムした。キャリアガスは水素であった。Ｔｅｎａｘ  ＴＡサンプルは、架橋メチルシリコンキャピラリーカラム（５０ｍ，  ０．３２ｍｍ  ｉ．ｄ，  ０．８２μｍフィルム厚）及びＦＩＤを装着したＨｅｗｌｅｔｔ  Ｐａｃｋａｒｄ  ６８９０  ＧＣ機を用いて分析した。熱による脱離は温度設定式気化ユニット（ＰＴＶ）内で行い、３０℃から２２０℃まで急速に（１６℃／秒）加熱するようプログラムした。本ＧＣの加熱装置は３０℃にて３０秒維持した後、５℃／分の速度で１２０℃まで上昇するようプログラムされ、その後、１０℃／分にて２４０℃まで上昇した。キャリアガスは水素を用いた。
【００４６】
ガスクロマトグラフィー−質量分析（ＧＣ−ＭＳ）。
ダニ抽出物及び画分はクールオンカラムインジェクターを装備したＨｅｗｌｅｔｔ  Ｐａｃｋａｒｄ  ５８９０  ＧＣと組み合わせたＶＧ  ＡｕｔｏＳｐｅｃ質量分析機（Ｆｉｓｏｎｓ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，  Ｍａｎｃｈｅｓｔｅｒ，  ＵＫ）を用いて分析した。イオン化は電子衝突（７０ｅＶ，  ２５０℃）により行った。本ＧＣの加熱装置は３０℃で５分加熱後、５℃／分にて２５０℃に達する様プログラムされた。キャリアガスはヘリウムを用いた。ダニ特異的なピークについての予備的な同定は最新のＭＳデータベース（ＮＩＳＴ，  ２００５）または文献として刊行されているＭＳデータにある既知のマススペクトルとの比較に基づいた。該同定は基準試料を用いたピーク増大により確認された（Ｐｉｃｋｅｔｔ，  １９９０）。
【００４７】
ヤケヒョウヒダニ抽出物中のリモネンの確認。
リモネンはＧＣ−ＭＳによってヤケヒョウヒダニ抽出物中に予備的に同定されたが、ピーク増強を用いた確認が必要であった。
材料と方法
装置
Ｒ（＋）リモネン９７％（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ）
Ｓ（−）リモネン９８％（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ）
ヤケヒョウヒダニ抽出物
手順
リモネンのラセミ混合物は、クールオンカラムインジェクター及びＦＩＤを装備したＨＰ５８９０  ＧＣ（Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，  ＵＫ）を用いて、β−シクロデクストランキラルキャピラリーカラム（３０ｍ×０．２５ｍｍ  ＩＤ  ×０．２５μｍフィルム厚）上で分析した。本ＧＣの加熱装置の温度は、サンプル投与後、３０℃で１分間維持し、その後、０．５℃／分ずつ４０℃まで上昇させ、そのまま２０分維持した。キャリアガスは水素を用いた。
結果
図５のグラフに示した通り、Ｒ−（＋）−リモネンはヤケヒョウヒダニ抽出物中に存在する光学異性体であった。Ｒ−（＋）−リモネンはまたニワトリのダニであるワクモの抽出物にも見出されている。
Ｒ−（＋）−リモネンはヤケヒョウヒダニに特異的であり、溶媒にも、大気に同調化したものの抽出物でも同定されたが、コナヒョウヒダニ抽出物中には見いだせなかった。
【００４８】
実施例４−ダニ駆除剤
誘引−殺傷システムに組み込むことが可能なダニ駆除剤の同定
既に確立しているバイオアッセイを用いて、殺虫剤としての特徴が知られている天然の除虫菊やインドセンダンの活性成分であるアザジラクチンの致死量を評価した。除虫菊はアザジラクチンよりも効果的であり、アザジラクチンでは死亡例はほとんど見られなかった。暴露後１、２、３時間後の除虫菊のＬＤ５０値はそれぞれ、３８４．５３ｐｐｍ、２０．８２９ｐｐｍ及び０．２１９ｐｐｍであった（図６参照）。暴露後２及び３時間後の除虫菊のＬＤ９０値はそれぞれ、２６６３．９ｐｐｍ及び２２５．８６ｐｐｍであった。
【００４９】
参考文献
AKIYAMA, M., SAKATA, T., MORI5 N., KATO, T., AMANO, H., and KUWAHARA, Y. 1997. Chemical ecology of astigmatid mites .46. Neryl formate, the alarm pheromone of Rhizoglyphus setosus Manson (Acarina: Acaridae) and the common pheromone component among four Rhizoglyphus mites. Appl Entomol Zool 32: 75-79.
ALLTECH ASSOCIATION, 1998. Quantitation methods in gas chromatography, www. alltechweb. com/productinfo/technical/edu/edu399. 
ARLIAN, L. G., RAPP, C. M. and AHMED5 S. G. 1990. Development of Dermatophagoides pteronyssinus (Acari, Pyroglyphidae). JMedEntomol 27: 1035-1040.
ARLIAN, L. G. 1992. Water-Balance and Humidity Requirements of House Dust Mites. Exp Appl Acarol 6: 15-35. 
ARLIAN, L. G., NEAL, J. S., MORGAN, M. S., VYSZENSKI-MOHER, D.L., RAPP, C. M., and ALEXANDER, A. K. 2001. Reducing relative humidity is a practical way to control dust mites and their allergens in homes in temperate climates. J Allergy Clin Immunol 107: 99-104. 
ARLIAN, L. G. and MORGAN, S. M. 2003. Biology, ecology, and prevalence of dust mites. Immunol Allergy Clin 23: 443+
BELLANTI, J. A., ZELIGS, B. J., MacDOWELL-CARNEIRO, A. L., ABACI, A. S., and GENUARDI. J. A. 2000. Study of the effects of vacuuming on the concentration of dust mite antigen and endotoxin. Ann Allergy Asthma Immunol 4: 249-254.
CALLAHAN, K. A., EGGLESTON, P. A., RAND, C. S., KANCHANARAKSA, S., SWARTZ, L. J., and WOOD, R. A. 2003. Knowledge and practice of dust mite control by specialty care. Ann Allergy Asthma Immunol 90: 302-307.
CAMERON, M. M. and HILL, N. 2002. Permethrin-impregnated mattress liners: a novel and effective intervention against house dust mites (Acari : Pyroglyphididae). JMedEntomol 39: 755-762.
CHANG, J. H., BECKER5 A., FERGUSON5 A., MANFREDA5 J., SIMONS, E., CHAN, H., NOERTJOJO, K., and CHANYEUNG5 M. 1996. Effect of application of benzyl benzoate on house dust mite allergen levels. Ann Allergy Asthma Immunol 11: 187-190.
COLLOFF, M. J. 1987. Effects of temperature and relative humidity on development times and mortality of eggs from laboratory and wild populations of the European house dust mite Dermatophagoides pteronyssinus (Acari, Pyroglyphidae). Exp Appl Acarol 3 : 279-289.
COLLOFF, M. J. 1990. House Dust Mites-Part II Chemical control. Pesticide Outlook I: 3-8
COLLOFF, M. J. 1991. Practical and theoretical aspects of the ecology of house dust mites (Acari: Pyroglyphidae) in relation to the study of mite mediated allergy. Rev Med Vet Entomol 79: 611-630.
COLLOFF, M. J., AYRES5 J. CARSWELL, F., HOWARTH, P. H., MERRETT, T. G., MITCHELL, E. B., WALSHAW, M. J., WARNER, J. O., WARNER, J. A., and WOODCOCK, A. A. 1992. The control of allergens of dust mites and domestic pets - a position paper. Clin Exp Allergy 22: 1 -28. 
COLLOFF, M. J., TAYLOR, C, and MERRETT, T. G. 1995. The use of domestic steam cleaning for the control of house dust mites. Clin Exp Allergy 25: 1061-1066.
CROWTHER, D., WILKINSON, T., BIDDULPH, P., ORESZCZYN, T., PRETLOVE, S., and RIDLEY, I. 2006. A simple model for predicting the effect of hygrothermal conditions on populations of house dust mite Dermatophagoides pteronyssinus (Acari: Pyroglyphidae).  Exp Appl Acarol 39: 127-148.
CUSTOVIC, A. and CHAPMAN, M. 1998. Risk levels for mite allergens. Are they meaningful? Allergy 53: 71-76.
CUSTOVIC, A., FLETCHER, A., PICKERING, C. A. C, FRANCIS, H. C, GREEN5 R., SMITH, A., CHAPMAN, M., and WOODCOCK, A.1998. Domestic allergens in public places III: house dust mite, cat, dog and cockroach allergens in British hospitals. Clin Exp Allergy 28: 53-59.
de BOER, R. 1998. Reflections on the control of mites and mite allergens. Allergy 53: 41-46. de BOER, R. 2003. The effect of sub-floor heating on house-dust-mite populations on floors and in furniture. Exp Appl Acarol 29: 315-330.
FAIN, A. and HART, B. J. 1986. A new simple technique for extraction of mites, using the difference in density between ethanol and saturated NaCl (Preliminary Note). Acarologia 27: 255-256.
FAIN, A., GUERIN, B., and HART, B. J. 1990. Mites and Allergic Disease. Allerbio, France.
FOWLER, J., COHEN, L., and JARVIS, P.1998. Practical statistics for field biology. John Wiley & Sons, Chichester.
FRANZ, J., SCHULTZ, S., FUHLENDORFF, J., WEGENER, R., MASUCH, G., BERGMANN, K., and MUSKEN, H. 2001. Language of astigmatic mites: Pheromones-an evaluation from a biological viewpoint, European Association of Acarologists 5th Symposium., Berlin.
GLASS, E. V., YODER, J. A., and NEEDHAM, G. R. 1998. Clustering reduces water loss by adult American house dust mites Dermatophagoides farinae (Acari : Pyroglyphidae). Exp Appl Acarol 22: 31-37.
GLASS, E. V., YODER, J. A., and NEEDHAM, G. R. 2001. Evaluation of possible arrestant- aggregation pheromones in the American House Dust Mite, Dermatophagoides farinae Hughes (Astigmata: Pyroglyphidae). Int J Acarol 27: 63-66.
HART, B. J. and Fain, A. 1987. A new technique for isolation of mites exploiting the difference in density between ethanol and saturated NaCl - qualitative and quantitative studies. Acarologia 28: 251-254.
HART, B. J. 1995. The biology of allergenic domestic mites - an update. Clin Rev Allergy Immunol 13: 115-133.
HEIDE, S., KAUFFMAN, H. F., DUBOIS, A., and MONCHY, J. 1997. Allergen-avoidance measures in homes of house dust mite allergic asthmatic patients: effects of acaricides and mattress encasings. Allergy 52: 921-927.
HILL, N., and CAMERON, M.M. (1999). A novel method to compare house dust mite allergen removal and retention by different vacuum cleaners, pp. 644, Proceedings of the 3rd International Conference on Urban Pests, Czech University of Agriculture, Prague, Czech. ISSAC. 1998. Worldwide variation in prevalence of symptoms of asthma, allergic rhinoconjunctivitis, and atopic eczema. Lancet 351 : 1225-32.
JACKSON, A. P., FOSTER, A.P., HART, B. J., HELPS, C. R., and SHAW, S. E. 2005. Prevalence of house dust mites and Dermatophagoides group 1 antigens collected from bedding, skin and hair coat of dogs in south-west England. Vet Dermatol 16: 32-38.
KUWAHARA, Y., LEAL, W. S., and SUZUKI, T. 1990. Pheromone study on astigmatid mites XXVI. Comparison of volatile components between Dermatophagoides farinae and D. pteronyssinus (Astigmata, Pyroglyphidae). Jpn JSanit Zool 41 : 23-28.
KUWAHARA, Y., MATSUMOTO, K., WADA, Y., and SUZUKI, T. 1991. Chemical ecology on astigmatid Mites. XXEX. Aggregation pheromone and kairomone activity of synthetic lardolure (IR, 3R, 5R, 7R)-l,3,5,7-tetramethyldecyl formate and its optical isomers to Lardoglyphus konoi and Carpoglyphus lactis (Acari: Astigmata) Appl Ent Zool 26: 85-89 KUWAHARA, Y. 1997. Volatile compounds produced by two species of Dermatophagoides mites. Skin Res 39: 52-55.
KUWAHARA, Y. 2004. Chemical ecology of astigmatid mites. In R. Carde and J. G. Millar [eds.], Advances in Insect Chemical Ecology. Cambridge University Press, Cambridge.
KUWAHARA, Y. 2006. How mites (Astigmata) control the emission of three types of pheromones from the same gland, depending upon environmental cues and the functional characteristics of active compounds. ABSTRACT. 12th International Congress of Acarology, Amsterdam, 2006.
LUCZYNSKA, C, KARLA ARRUDA, L., PLATTS-MILLS, T. A. E., MILLER, J., LOPEZ, M., and CHAPMAN, M. 1989. A two-site monoclonal antibody ELISA for the quantification of the major Dermatophagoides spp. allergens, Der p 1 and Der f 1. J Immunol Meth 118: 227-235.
LUCZYNSKA, C, TREDWELL, T., SMEETON, N., and BURNEY, P. 2003. A randomized controlled trial of mite allergen-impermeable bed covers in adult mite-sensitized asthmatics. CHn Exp Allergy 33: 1648-1653
McDONALD, L. G. and TOVEY, E. R. 1992. The role of water temperature and laundry procedures in reducing house dust mite populations and allergen content of bedding. J Allergy CHn Immunol 90: 599-608.
NAGAKURA, T., YASUEDA, H., OBATA, T., KANMURI, M., MASAKI, T., IHARA, N., and MAEKAWA, K. 1996. Major Dermatophagoides mite allergen, Der 1, in soft toys. Clin Exp Allergy 26: 585-589.
NIST, 2002. Standard Referece Data Base (Version 3.0.1). Gaithersburg, Maryland.
ORIBE, Y. and MIYAZAKI, Y. 2000. Effects of relative humidity on the population growth of house dust mites. J Physiol Anthropol Appl Hum Sd 19: 201-203.
PLATTS-MILLS, T. A. E., WARD, G. W. SPORIK, R., GELBER, L. E., CHAPMAN, M., and. HEYMANN, P. W. 1991. Epidemiology of the relationship between exposure to indoor allergens and asthma. IntArch Allergy Appl Immunol 94: 339-345.
REKA, S., SUTO, C, and YAMAGUCHI, M. 1992. Evidence of aggregation pheromone in the faeces of house dust mite Dermatophagoides farinae. Jpn JSanit Zool 43: 339-341.
ROBINSON, C3 KALSHEKER, N. A., SRINIVASAN, N., KING, C. M., GARROD, D. R., THOMPSON, P. J., and STEWART, G. A. 1997. On the potential significance of the enzymatic activity of mite allergens to immunogenicity. Clues to structure and function revealed by molecular characterization. CHn Exp Allergy 27: 10-21.
SKELTON, A.C., BIRKETT, M.A., PICKETT, J.A., and CAMERON, M.M 2007. Olfactory responses of medically and economically important mites (Acari: Pyroglyphidae and Acaridae) to volatile chemicals. JMedEntomol 44 (2) 367-371
SHIMIZU, N., MORI, N., and KUWAHARA, Y. 2001. Aggregation pheromone activity of the female sex pheromone, β-acaridial, in Caloglyphus polyphyllae (Acari: Acaridae). Biosci Biotechnol Biochem 65: 1724-1728.
SPIEKSMA, F. T. M. 1967. The house dust mite Dermatophagoides pteronyssinus (Trouessart, 1897) producer of the house dust allergen (Acari: Psoroptidae). PhD thesis.
Leiden N. V. Drukkerij. Battelje & Terpstra, Leiden. 
TATAMI, K., MORI, N., NISHIDA3 R., and KUWAHARA, Y. 2001. 2-Hydroxy-6- methylbenzaldehydeithe female sex pheromone of the house dust mite Dermatophagoid.es farinae (Astigmata: Pyroglyphidae). MedEntomol Zool 52: 279-286.
THIND, B. 2005. A new versatile and robust mite trap for detection and monitoring of storage mites in cereal and allied industries. Exp Appl Acarol 35: 1-15.
TREEHORST, L, HAK, E., OOSTUBF, A. J., TEMPELS-P AVLICA, Z., dE MONCHY, J. G. R., BRUIJNZEEL-KOOMEN, C.A., AALBERSE, R.C., and GERTH van WIJK, R. 2003 Evaluation of impermeable covers for bedding in patients with allergic rhinitis. New Eng J Med 349: 237-246
TOVEY, E., CHAPMAN5 M., and PLATTS-MILLS, T. A. E. 1981. Mite faeces are a major source of house dust allergens. Nature 289: 592-593.
UEHARA, K., TOYODA, Y., and KONISHI, E. 2000. Contamination of passenger trains with Dermatophagoides (Acari: Pyroglyphidae) mite antigen in Japan. Exp Appl Acarol 24: 727-734.
van den BEMT, L., van KNAPEN, L., de VRIES, M. P., JANSEN, M., CLOOSTERMAN, S., van SCHAYCK, CP. 2004. Clinical effectiveness of a mite allergen-impermeable bed- covering system in asthmatic mite-sensitive patients. J Allergy Clin Immunol 114: 858-862.
VOORHORST, R., SPIEKSMA, M. I. A., and SPIEKSMA5 F. T. M. 1964. Is a mite {Dermatophagoides sp.) the producer of the house-dust allergen? Allergie and Asthma 10: 329-334.
WHO5 2006. Bronchial asthma. Fact sheet No 206.
www.who.int/mediacentre/factsheets/fs206/en/print.html.
YODER, J. A., DENLINGER5 D. L., and WOLDA, H. 1992. Aggregation promotes water conservation during diapause in the tropical fungus beetle, Stenotarsus rotundus. Entomol Exp Appl 63 : 203-205. 
【図１】
0005430581.tif 000005
【図２】
0005430581.tif 000006
【図３】
0005430581.tif 000007
【図４】
0005430581.tif 000008
【図５】
0005430581.tif 000009
【図６】
0005430581.tif 000010