(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
（Ａ）生物系素材から抽出された乾燥総脂質を、脂肪族炭化水素系溶剤と水溶性ケトン系溶剤との混合溶剤で抽出処理し、スフィンゴミエリンを主体とする不溶部と、可溶部とに分離する工程、（Ｂ）前記（Ａ）工程で得られたスフィンゴミエリンを主体とする不溶部を、脂肪族炭化水素系溶剤と水溶性ケトン系溶剤との混合溶剤で洗浄処理し、粗製スフィンゴミエリンを得る工程、（Ｃ）前記（Ａ）工程で得られた可溶部を溶媒除去処理したのち、水溶性ケトン系溶剤で洗浄処理して粗製プラズマローゲン型グリセロリン脂質を得る工程、（Ｄ）前記（Ｂ）工程で得られた粗製スフィンゴミエリンに、グリセロリン脂質加水分解酵素ホスホリパーゼを作用させて混在するグリセロリン脂質群を加水分解処理したのち、溶媒分配法により、純度９０％以上のスフィンゴミエリンを取得する工程、および（Ｅ）前記（Ｃ）工程で得られた粗製プラズマローゲン型グリセロリン脂質に、グリセロリン脂質加水分解酵素ホスホリパーゼを作用させて混在する他のグリセロリン脂質群を加水分解処理したのち、溶媒分配法により、純度４０％以上のプラズマローゲン型グリセロリン脂質を取得する工程、を含むことを特徴とする高純度リン脂質の製造方法。
【請求項２】
生物系素材が、家禽類である請求項１に記載の高純度リン脂質の製造方法。
【請求項３】
家禽類が、産卵廃鶏および／または種鶏廃鶏である請求項２に記載の高純度リン脂質の製造方法。
【請求項４】
産卵廃鶏が、強制換羽処理された産卵鶏から得られたものである請求項３に記載の高純度リン脂質の製造方法。
【請求項５】
脂肪族炭化水素系溶剤が、ｎ−ヘキサンである請求項１〜４のいずれか１項に記載の高純度リン脂質の製造方法。
【請求項６】
水溶性ケトン系溶剤が、アセトンである請求項１〜５のいずれか１項に記載の高純度リン脂質の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、生物系素材、好ましくは家禽類から、機能性食品素材、医薬品素材、化粧品素材などとして有用な高純度スフィンゴミエリン、特にヒト型スフィンゴミエリンおよび高純度プラズマローゲン型グリセロリン脂質を、簡単な操作で収率よく製造する方法、並びにこの方法で得られた高純度スフィンゴミエリンおよび高純度プラズマローゲン型グリセロリン脂質に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
脂質とは、分子中に長鎖脂肪酸または類似の炭化水素鎖をもち、生体内に存在するか、生物に由来する物質を指す。この脂質は、単純脂質と複合脂質に分類することができる。単純脂質は、Ｃ、ＨおよびＯより構成され、一般にアセトンに可溶で、単純脂質のトリアシルグリセロールは動物体では、脂肪組織にエネルギーの貯蔵体として存在する。一方、複合脂質は、リン酸のＰや塩基のＮなどを含む脂質群である。したがって、複合脂質は、疎水性部分（脂肪酸部分）と親水性部分（リン酸や塩基の部分）からなり、両親媒性を示し、一般的には、前記単純脂質がアセトンに可溶であるのに対し、複合脂質はアセトンに不溶である。このような複合脂質は生体膜の構成成分となっている。【０００３】
前記複合脂質は、（１）グリセロリン脂質［ホスファチジルコリン（別名レシチン）、ホスファチジルエタノールアミンなどが属する。］、（２）スフィンゴリン脂質（スフィンゴミエリン、セラミドシリアチンなどが属する。）、（３）スフィンゴ糖脂質（セレブロシド、スルファチド、ガングリオシドなどが属する。）、および（４）グロセロ糖脂質（微生物や高等植物に存在するジアシルグリセロールに種々の糖が結合したものなどがある。）に大別することができる。なお、前記（２）スフィンゴリン脂質および（３）のスフィンゴ糖脂質を総称してスフィンゴ脂質と呼ばれる。【０００４】
前記グリセロリン脂質は、グリセロリン酸を骨格にもつリン脂質の総称で、ホスファチジルコリン（レシチン）、ホスファチジルエタノールアミン、ジホスフィチジルグリセロールなどがある。このグリセロリン脂質は、非極性部分が脂肪酸のエステルであるものが多いがビニルエーテル結合をもつプラズマローゲン型のものもある。【０００５】
このグリセロリン脂質は、生体膜の構成成分として重要であるが、中でもプラズマローゲン型のグリセロリン脂質は、ビニルエーテル結合のラジカル感受性が高いため、抗酸化性を有するリン脂質として、近年注目されている。最近、プラズマローゲン型グリセロリン脂質が、細胞膜の抗酸化性分であるα−トコフェロール（ビタミンＥ）とは異なった機構により、コレステロールを含むリン脂質膜の酸化安定性に寄与していることが報告されており（例えば、非特許文献１参照。）、またプラズマローゲン型グリセロリン脂質は、細胞膜やリポタンパク質の抗酸化性に関与するだけでなく、細胞の情報伝達システムに重要な役割を有することが指摘されている（例えば、非特許文献２参照）。【０００６】
このようなプラズマローゲン型グリセロリン脂質は、痴呆症における脳の神経細胞死を防止する作用が期待されているが、安全で大量に入手可能な供給源は見当たらないのが実状である。【０００７】
一方、スフィンゴ脂質は、スフィンゴシンなどの長鎖塩基をもつ脂質の総称で、前述したように主としてスフィンゴ糖脂質とスフィンゴリン脂質からなる。スフィンゴ糖脂質は、糖と長鎖脂肪酸の外に、長鎖塩基であるスフィンゴシンまたはフィトスフィンゴシン、その他を含むものである。最も単純なスフィンゴ糖脂質は、セレブロシドであるが、さらにそれに硫酸基のついたスルファチド、中性糖が数分子ついたセラミドオリゴヘキソシド、シアル酸のついたガングリオシドなどがある。これらの物質は、細胞表層に存在し、認識機構に関与するものと考えられている。【０００８】
スフィンゴリン脂質は、セラミド１−リン酸の誘導体とセラミド１−ホスホン酸の誘導体に分けられ、前者ではスフィンゴミエリン、後者ではセラミドシリアチン（セラミドアミノエチルホスホン酸）がよく知られている。【０００９】
これらのスフィンゴ脂質は、近年、その分解代謝物であるセラミド、スフィンゴシン、スフィンゴシン−１−リン酸などが細胞内の情報伝達に関与することが明らかにされ、注目されている。また、スフィンゴ脂質は、コレステロールなどとともに、「ラフト」と呼ばれる膜微小ドメインの形成に関与し、この微小ドメインが情報伝達の場として重要な役割を果たすことが明らかにされてきたことにより、ますます注目の度を増している。【００１０】
このようなスフィンゴ脂質は、従来牛脳から抽出され、利用されていたが、安全性の問題から、現在穀物や真菌由来のものが利用されている。しかしながら、これらの穀物や真菌由来のスフィンゴ脂質を構成するスフィンゴイド塩基組成は、哺乳動物のものとは異なるため、ヒト型のスフィンゴ脂質と比べて生体利用性が低いという問題があった。【００１１】
ところで、食品、動物組織などの総脂質から比較的多量のスフィンゴミエリンを製造するためには、ケイ酸などを使用したカラムクロマトグラフィーで段階的に溶出して製造するか、あるいは、溶媒分画法で段階的に分画して製造されている。いずれも、複雑な手順が必要である。溶媒分画法では総脂質にアセトンを加えて複合脂質（リン脂質）を沈殿させ（不溶部）、その不溶部をエーテルで洗ってグリセロリン脂質を除いたものを粗スフィンゴ脂質画分とする方法が一般的である。この画分にはスフィンゴミエリンだけでなくセレブロシドなどのスフィンゴ糖脂質も含まれる。【００１２】
一方、鶏皮のリン脂質には、ヒト型スフィンゴミエリンおよびプラズマローゲン型グリセロリン資質が多く含まれていることが知られている。【００１３】
【非特許文献１】「Ｊ．Ｌｉｐｉｄ  Ｒｅｓ．」、第４４巻、第１６４〜１７１頁（２００３年）
【非特許文献２】「Ｊ．Ｍｏｌ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．」、第１６巻、２６３〜２７２頁；ｄｉｓｃｕｓｓｉｏｎ  ２７９〜２８４頁（２００１年）
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１４】
本発明は、このような事情のもとで、生物系素材から、高純度のスフィンゴミエリン、特にヒト型スフィンゴミエリンおよび高純度プラズマローゲン型グリセロリン脂質を、簡単な操作で収率よく製造する方法を提供することを目的とするものである。
【課題を解決するための手段】
【００１５】
本発明者らは、前記目的を達成するために鋭意研究を重ねた結果、生物系素材に特定の工程を施すことにより、その目的を達成し得ることを見出し、この知見に基づいて本発明を完成するに至った。【００１６】
すなわち、本発明は、
（１）  （Ａ）生物系素材から抽出された乾燥総脂質を、脂肪族炭化水素系溶剤と水溶性ケトン系溶剤との混合溶剤で抽出処理し、スフィンゴミエリンを主体とする不溶部と、可溶部とに分離する工程、（Ｂ）前記（Ａ）工程で得られたスフィンゴミエリンを主体とする不溶部を、脂肪族炭化水素系溶剤と水溶性ケトン系溶剤との混合溶剤で洗浄処理し、粗製スフィンゴミエリンを得る工程、（Ｃ）前記（Ａ）工程で得られた可溶部を溶媒除去処理したのち、水溶性ケトン系溶剤で洗浄処理して粗製プラズマローゲン型グリセロリン脂質を得る工程、（Ｄ）前記（Ｂ）工程で得られた粗製スフィンゴミエリンに、グリセロリン脂質加水分解酵素ホスホリパーゼを作用させて混在するグリセロリン脂質群を加水分解処理したのち、溶媒分配法により、純度９０％以上のスフィンゴミエリンを取得する工程、および（Ｅ）前記（Ｃ）工程で得られた粗製プラズマローゲン型グリセロリン脂質に、グリセロリン脂質加水分解酵素ホスホリパーゼを作用させて混在する他のグリセロリン脂質群を加水分解処理したのち、溶媒分配法により、純度４０％以上のプラズマローゲン型グリセロリン脂質を取得する工程、を含むことを特徴とする高純度リン脂質の製造方法、
（２）  生物系素材が、家禽類である上記（１）項に記載の高純度リン脂質の製造方法、
（３）  家禽類が、産卵廃鶏および／または種鶏廃鶏である上記（２）項に記載の高純度リン脂質の製造方法、
（４）  産卵廃鶏が、強制換羽処理された産卵鶏から得られたものである上記（３）項に記載の高純度リン脂質の製造方法、
（５）  脂肪族炭化水素系溶剤が、ｎ−ヘキサンである上記（１）〜（４）項のいずれか１項に記載の高純度リン脂質の製造方法、
（６）  水溶性ケトン系溶剤が、アセトンである上記（１）〜（５）項のいずれか１項に記載の高純度リン脂質の製造方法、
（７）  上記（１）〜（６）項のいずれか１項に記載の製造方法で得られ、純度が９０％以上であることを特徴とする高純度スフィンゴミエリン、
（８）  上記（１）〜（６）項のいずれか１項に記載の製造方法で得られ、純度が４０％以上であることを特徴とする高純度プラズマローゲン型グリセロリン脂質、
（９）  純度が９０％以上のプラズマローゲン型ホスファチジルコリンである上記（８）項に記載の高純度プラズマローゲン型グリセロリン脂質、および
（１０）純度が９０％以上のプラズマローゲン型ホスファチジルエタノールアミンである上記（８）項に記載の高純度プラズマローゲン型グリセロリン脂質、
を提供するものである。
【発明の効果】
【００１７】
本発明によれば、生物系素材、好ましくは家禽類から、機能性食品素材、医薬品素材、化粧品素材などとして有用な高純度スフィンゴミエリン、特にヒト型スフィンゴミエリンおよび高純度プラズマローゲン型グリセロリン脂質を、簡単な操作で収率よく製造する方法、並びにこの方法で得られた高純度スフィンゴミエリンおよび高純度プラズマローゲン型グリセロリン脂質を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
【図１−１】実施例において、鶏皮から総脂質を抽出する工程図である。
【図１−２】実施例において、鶏ムネ肉から総脂質を抽出する工程図である。
【図２】実施例において、鶏皮総脂質から、粗製プラズマローゲンと粗製スフィンゴミエリンを抽出する工程図である。
【図３】実施例において、鶏皮由来リン脂質類のＨＰＬＣチャートである。
【図４】実施例において、粗製スフィンゴミエリンから、精製スフィンゴミエリンを製造する工程図である。
【図５】実施例において、鶏ムネ肉総脂質から、粗製プラズマローゲン（混合物）と粗製スフィンゴミエリンを製造する工程図である。
【図６】実施例において、粗製プラズマローゲンから、精製プラズマローゲン（混合物）を製造する工程図である。
【図７】実施例において、鶏ムネ肉由来リン脂質類のＨＰＬＣチャートである。
【図８】実施例において、精製プラズマローゲンの高純度化とその分離方法の説明図である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１９】
本発明の高純度リン脂質の製造方法は、以下に示す（Ａ）工程、（Ｂ）工程、（Ｃ）工程、（Ｄ）工程および（Ｅ）工程から構成されている。【００２０】
［（Ａ）工程］
この（Ａ）工程は、生物系素材から抽出された乾燥総脂質を、脂肪族炭化水素系溶剤と水溶性ケトン系溶剤との混合溶剤で抽出処理し、スフィンゴミエリンを主体とする不溶部と、可溶部とに分離する工程である。【００２１】
当該（Ａ）工程において、原材料として用いる生物系素材としては、スフィンゴミエリン、特にヒト型スフィンゴミエリンおよびプラズマローゲン型グリセロリン脂質を含むものであればよく、特に制限されず、種々の生物系素材を用いることができるが、入手性、目的物質の含有量、および経済性などの観点から、家禽類が好ましく、中でも産卵廃鶏やブロイラーの種鶏廃鶏（雌雄）が好ましい。部位としては、表皮やムネ肉などの外に、内臓、首、手羽先、脚、頭部、ガラなどを用いることができる。
前記産卵廃鶏は、産卵鶏が廃鶏化されたものである。例えば白色羽系統（ジユリア）や褐色羽系統（ボリスブラウン、ソニア）の産卵鶏を平均５５０日齢で間引きし、数日絶食させ、廃鶏化する。
この産卵廃鶏としては、強制換羽処理された産卵鶏から得られたものが、下記の理由により好ましい。
上記強制換羽処理は、約５００日齢過ぎの産卵効率が低下した産卵鶏を１０〜１４日間程度絶食させて、強制的に羽根を抜く操作を行うことであり、この処理により、産卵鶏の機能が再生され、さらに、２００日間程度、採卵期間を延長させることができる。この強制換羽処理された産卵鶏の廃鶏化については、上記に準ずる。
なお、上記の強制換羽処理された、約７００日齢の産卵鶏を再度強制換羽処理を施し、最大９００日齢程度まで採卵期間を延長することもある（この処理をダブル強制換羽処理という。）。
産卵鶏の好適な廃鶏化時期は、５００〜９５０日齢、より好ましくは５５０〜９００日齢、さらに好ましくは６００〜７５０日齢である。
産卵鶏、特に５００日齢以上の養鶏条件では、他の鶏と比べて高いストレスが掛かっており、その結果、産卵率向上という形で機能が再生されることからも明らかなように、加齢状態では含有率が低下する各種機能発現成分、例えばホルモン、ビタミン類、サイトカインなどの微量成分などの分泌量が亢進し、加齢に伴う含有量の低下が抑えられることが考えられる。
一方、ブロイラーの種鶏（雌雄、種類：チャンキー、コブ）廃鶏は、平均４５０日齢で廃鶏化されたものである。ブロイラーの雄は頑健さが、雌は健康が重視されて育成され、健康な受精卵を効率的に産生することが求められ、一般的に恵まれた飼育である。したがって、その廃鶏では、機能発現成分含有量が、最盛期に比べて低下傾向を示すと考えられる。
このブロイラーの種鶏（雌雄）の好適な廃鶏化時期は３００〜５５０日齢、より好ましくは３７０〜５５０日齢、さらに好ましくは４００〜４５０日齢である。【００２２】
当該（Ａ）工程においては、まず生物系素材、例えば産卵廃鶏や種鶏廃鶏の表皮、あるいはムネ肉などから、総脂質を抽出し、乾燥処理する。【００２３】
鶏皮を用いる場合には、ミンチ化や粉末化したものが好ましく、例えば必要に応じ、脱脂処理し、脂肪分をある程度除去したのち、ミンチ化や粉末化してもよい。鶏表皮の脱脂処理には、機械的方法、温水浸漬加熱方法、直接加熱方法、脂肪族炭化水素系溶媒（ｎ−ヘキサン）による方法などを採用することができる。鶏ムネ肉を用いる場合には、ムネ肉ミンチを用いることが好ましい。【００２４】
次に、前記鶏皮ミンチや粉末または鶏ムネ肉ミンチから、溶剤を用いて総脂質を抽出し、乾燥して乾燥総脂質を得る。溶剤としては特に制限はなく、種々の溶剤を用いることができるが、ｎ−ヘキサンとイソプロパノールとの混合溶剤が好ましい。ｎ−ヘキサンとイソプロパノールとの混合溶剤は、容量比で、通常８：２〜４：６、好ましくは７：３〜５：５である。【００２５】
抽出処理は、常法に従って行うことができ、また抽出液は、常法に従い、ロータリエバポレーターなどを用いて溶剤を留去させることにより、あるいは窒素ガスを導入することなどにより、乾燥総脂質が得られる。【００２６】
このようにして得られた乾燥総脂質を、脂肪族炭化水素系溶剤と水溶性ケトン系溶剤との混合溶剤で抽出処理し、スフィンゴミエリンを主体とする不溶部（以下、粗スフィンゴミエリンと称することがある。）と、可溶部とに分離する。【００２７】
当該（Ａ）工程において、乾燥総脂質の抽出処理に用いられる混合溶剤の一成分である脂肪族炭化水素系溶剤としては、例えばｎ−ペンタン、イソペンタン、ｎ−ヘキサン、イソヘキサン、ｎ−ヘプタン、イソヘプタン、シクロペンタン、シクロヘキサンなどが挙げられ、これらは１種を単独で用いてもよく、２種以上を混合して用いてもよいが、これらの中でｎ−ヘキサンが好適である。【００２８】
また、前記混合溶剤の他方の成分である水溶性ケトン系溶剤としては、例えばアセトンおよび／またはメチルエチルケトンなどを用いることができるが、これらの中でアセトンが好適である。【００２９】
混合溶剤として、ｎ−ヘキサンとアセトンとの混合物を用いる場合、その割合は、容量比で４：６〜６：４が好ましく、４．５：５．５〜５．５：４．５がより好ましい。【００３０】
また、この混合溶剤の使用量は、乾燥総脂質１ｇ当たり、通常１０〜３０ｍＬ程度である。この混合溶剤の量が１０ｍＬ未満では、抽出処理を十分に行うことができず、不溶部中のスフィンゴミエリンの純度低下や回収率の低下を招くおそれがある。一方３０ｍＬを超えると、その量の割にはスフィンゴミエリンの純度や回収率の向上効果が発揮されにくい。混合溶剤の好ましい使用量は、乾燥総脂質１ｇ当たり、１５〜２５ｍＬである。抽出処理は常法に従って行うことができる。【００３１】
抽出処理液は、遠心分離処理を施すことにより、可溶部とスフィンゴミエリンを主体とする不溶部に分離することができる。【００３２】
［（Ｂ）工程］
この（Ｂ）工程は、前記（Ａ）工程で得られたスフィンゴミエリンを主体とする不溶部を、脂肪族炭化水素系溶剤と水溶性ケトン系溶剤との混合溶剤で洗浄処理し、粗製スフィンゴミエリンを得る工程である。【００３３】
前記（Ｂ）工程において、洗浄処理に用いられる混合溶剤の成分である脂肪族炭化水素系溶剤および水溶性ケトン系溶剤については、前記（Ａ）工程で説明したとおりである。【００３４】
混合溶剤として、ｎ−ヘキサンとアセトンとの混合物を用いる場合、その割合は、容量比で４：６〜６：４が好ましく、４．５：５．５〜５．５：４．５がより好ましい。
このようにして、粗製スフィンゴミエリンが得られる。【００３５】
［（Ｃ）工程］
この（Ｃ）工程は、前記（Ａ）工程で得られた可溶部を溶媒除去処理したのち、水溶性ケトン系溶剤で洗浄処理して粗製プラズマローゲン型グリセロリン脂質を得る工程である。【００３６】
当該（Ｃ）工程における水溶性ケトン系溶剤としては、例えばアセトンおよび／またはメチルエチルケトンなどを用いることができるが、これらの中でアセトンが好適である。【００３７】
当該（Ｃ）工程においては、まず、前記（Ａ）工程で得られた可溶部中の溶媒を留去したのち、残分を前記水溶性ケトン系溶剤で洗浄処理することにより、粗製プラズマローゲン型グリセロリン脂質が得られる。【００３８】
［（Ｄ）工程］
この（Ｄ）工程は、前記（Ｂ）工程で得られた粗製スフィンゴミエリンに、グリセロリン脂質加水分解酵素ホスホリパーゼを作用させて混在するグリセロリン脂質群を加水分解処理したのち、溶媒分配法により、純度９０％以上のスフィンゴミエリンを取得する工程である。【００３９】
当該（Ｄ）工程においては、まず前記（Ｂ）工程で得られた粗製スフィンゴミエリンに酵素ホスホリパーゼを作用させ、該粗製スフィンゴミエリン中に混在するグリセロリン脂質群を加水分解処理する。この酵素反応においては、酵素ホスホリパーゼの使用量は、粗製スフィンゴミエリン１ｇに対して、通常０．１５〜０．４５ｇ程度、好ましくは０．２〜０．３ｇである。反応温度は、通常３０〜７０℃程度、好ましくは４５〜５５℃であり、ｐＨは、通常３．５〜５．５程度、好ましくは４〜５である。また、反応時間は、１〜５時間程度で充分である。【００４０】
このようにして、酵素反応を行ったのち、溶媒分配法により、スフィンゴミエリンを分離する。溶媒分配法に用いられる溶剤としては、脂肪族炭化水素系溶剤と、水溶性ケトン系溶剤との組合わせが好ましく、脂肪族炭化水素系溶剤としてはｎ−ヘキサンが、水溶性ケトン系溶剤としてはアセトンが好適である。ｎ−ヘキサンとアセトンの組合わせを用いる場合、それらの使用割合は、容量比で通常４：６〜６：４が好ましく、４．５：５．５〜５．５：４．５がより好ましい。【００４１】
溶媒分配法により分別処理後、氷冷下で１時間静置後遠心分離により固液を分離し得られた固形分を、脂肪族炭化水素系溶剤と水溶性ケトン系溶剤との混合溶剤、好ましくは容量比４：６〜６：４のｎ−ヘキサンとアセトンとの混合溶剤で洗浄処理し、氷冷下で１時間静置後遠心分離などの手段で固液分離することにより、純度９０％以上、好ましくは９５％以上、より好ましくは９９％以上の高純度スフィンゴミエリンが得られる。【００４２】
［（Ｅ）工程］
この（Ｅ）工程は、前記（Ｃ）工程で得られた粗製プラズマローゲン型グリセロリン脂質に、グリセロリン脂質加水分解酵素ホスホリパーゼを作用させて混在する他のグリセロリン脂質群を加水分解処理したのち、溶媒分配法により、純度４０％以上のプラズマローゲン型グリセロリン脂質を取得する工程である。【００４３】
当該（Ｅ）工程においては、まず、前記（Ｃ）工程で得られた粗製プラズマローゲン型グリセロリン脂質に酵素ホスホリパーゼを作用させ、該粗製プラズマローゲン型グリセロリン脂質中に混在する他のグリセロリン脂質群を加水分解処理する。この酵素反応においては、酵素ホスホリパーゼの使用量は、粗製プラズマローゲン型グリセロリン脂質１ｇに対して、通常０．１５〜０．４５ｇ程度、好まくは０．２〜０．３ｇである。反応温度は、通常３０〜７０℃程度、好ましくは４５〜５５℃であり、ｐＨは、通常３．５〜５．５程度、好ましくは４〜５である。また、反応時間は、１〜５時間程度で充分である。【００４４】
このようにして、酵素反応を行ったのち、溶媒分配法により、プラズマローゲン型グリセロリン脂質を抽出する。溶媒分配法に用いられる溶剤としては、脂肪族炭化水素系溶剤と、低級アルコール系溶剤との組合わせが好ましく、脂肪族炭化水素系溶剤としてはｎ−ヘキサンが、低級アルコール系溶剤としてはイソプロパノールが好適である。ｎ−ヘキサンとイソプロパノールの組合わせを用いる場合、これらの使用割合は、容量比で、通常８：２〜４：６、好ましくは７：３〜５：５である。【００４５】
溶媒分配法により抽出処理後、脂肪族炭化水素系溶剤層を水洗し、該溶剤を留去して得た固形分を、脂肪族炭化水素系溶剤と水溶性ケトン系溶剤との混合溶剤、好ましくは容量比４：６〜６：４のｎ−ヘキサンとアセトンとの混合溶剤で洗浄処理し、遠心分離などの手段で固液分離することにより、純度４０％以上、好ましくは９５％以上、より好ましくは９９％以上の高純度プラズマローゲン型グリセロリン脂質が得られる。
また、プラズマローゲン型ホスファチジルコリンとして、純度９５％以上、好ましくは９９．５％以上のものを得ることができ、プラズマローゲン型ホスファチジルエタノールアミンとして、純度９５％以上、好ましくは９９．５％以上のものを得ることができる。【００４６】
本発明の方法によれば、原材料として鶏皮を用いる場合、脱油濃縮鶏皮から、通常純度９０％以上の高純度スフィンゴミエリンを０．２〜０．６質量％程度、および純度４０％以上の高純度・混合プラズマローゲン型グリセロリン脂質を０．３〜２質量％の割合で得ることができる。原材料としてムネ肉を用いる場合、通常純度４０％以上の高純度・混合プラズマローゲン型グリセロリン脂質を０．２〜１質量％程度、及び純度９０％以上の高純度スフィンゴミエリンを０．０１〜０．１質量％の割合で得ることができる。【００４７】
スフィンゴミエリンは、セラミドの第一級アルコール性ヒドロキシル基とコリンリン酸がリン酸ジエステル結合したもので、下記の式（Ｉ）【００４８】
【化１】
0005430566.tif 000002
（式中、Ｒ−ＣＯは脂肪酸残基を示す。）
の構造を有し、通常動物体の脳組織のみならず、臓器組織にも広く存在する。【００４９】
本発明の方法で得られる鶏表皮由来の高純度スフィンゴミエリンを構成するスフィンゴイド塩基は、大部分が４−トランス−スフィンゲニン（スフィンゴシン）であることから、当該スフィンゴミエリンは、生体利用性の高いヒト型スフィンゴミエリンである。【００５０】
スフィンゴミエリンは、その分解代謝物であるセラミド、スフィンゴシン、スフィンゴシン−１−リン酸などが脂肪内の情報伝達に関与することが明らかにされており、またコレステロールなどとともに、「ラフト」と呼ばれる膜微小ドメインの形成に関与し、この微小ドメインが情報伝達の場として重要な役割を果たすことが明らかにされている。さらに、スフィンゴミエリンは、皮膚の保湿効果や大腸がん予防効果などが期待されている。【００５１】
一方、本発明の方法で得られる高純度プラズマローゲン型グリセロリン脂質には、主としてホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）が含まれており、一部ホスファチジルコリン（ＰＣ）が含まれている。前記ＰＥは、約８０質量％がプラズマローゲン型であり、またＰＣにも約３０質量％のプラズマローゲン型が含まれている。【００５２】
下記の式（ＩＩ）および式（ＩＩＩ）に、それぞれジアシル型グリセロリン脂質およびプラズマローゲン型グリセロリン脂質の構造を示す。【００５３】
【化２】
0005430566.tif 000003
Ｒ１、Ｒ２＝長鎖肪肪族基
0005430566.tif 000004
【００５４】
通常のグリセロリン脂質（レシチン）は、式（ＩＩ）で示されるようにグリセロールのｓｎ−１（１位）に脂肪酸アシル基とのエステル結合をもつが、プラズマローゲン型は、式（ＩＩＩ）で示されるようにグリセロールのｓｎ−１にアルケニル基をもつビニルエーテル結合を有している。【００５５】
なお、Ｘがアミノエチル基である場合、ホスファチジルエタノールアミンであり、Ｘがトリメチルアミノエチル基である場合、ホスファチジルコリンである。【００５６】
本発明においては、酵素ホスホリパーゼを作用させることにより、主として上記式（ＩＩ）で示される通常のグリセロリン脂質群を加水分解し、純度９０％以上の高純度スフィンゴミエリンおよび純度４０％以上の高純度プラズマローゲン型グリセロリン脂質を製造する。【００５７】
前記プラズマローゲン型グリセロリン脂質は、ビニルエーテル結合のラジカル感受性が高いため抗酸化性リン脂質として注目されており、コレステロールを含むリン脂質膜の酸化安定性に寄与していることが知られている。またプラズマローゲン型グリセロリン脂質は、細胞膜やリポタンパク質の抗酸化性に関与するだけでなく、細胞の情報伝達システムに重要な役割を有することが指摘されている。このようなプラズマローゲン型グリセロリン脂質は、痴呆症における脳の神経細胞死を防止する作用や、アテローム性動脈硬化症の発症予防効果などが期待されている。【００５８】
本発明はまた、前述した本発明の方法を用いて得られ、純度が９０％以上である高純度スフィンゴミエリンおよび純度が４０％以上である高純度プラズマローゲン型グリセロリン脂質をも提供する。
【実施例】
【００５９】
次に、本発明を実施例により、さらに詳細に説明するが、本発明は、これらの例によってなんら限定されるものではない。
なお、ＳＭ、ｐｌＰＣ、ｐｌＰＥの意味は下記のとおりである。
ＳＭ：スフィンゴミエリン
ｐｌＰＣ：プラズマローゲン型ホスファチジルコリン
ｐｌＰＥ：プラズマローゲン型ホスファチジルエタノールアミン【００６０】
実施例１  産卵廃鶏の皮由来のＳＭおよびｐｌＰＥの調製
（１）鶏皮ミンチの脱油とその凍結乾燥品から総脂質の抽出・分離
産卵廃鶏（ジュリア種、５５０日齢）の生皮から得られた鶏皮ミンチ（（農事組合法人）エヌチキン社（鹿児島県南九州市知覧町郡３６６９）の８ｍｍサイズ調製品）凍結品を脱油濃縮し、これを常法で凍結乾燥して、図１−１記載の総脂質の抽出に供した。２６．８％の収率で総脂質を得た。【００６１】
（２）廃鶏皮由来総脂質から粗ＳＭの抽出
図２における図２−２記載の方法で、総脂質１０ｇから粗ＳＭが０．２２ｇ（収率２．２％）得られた。該粗ＳＭを下記の条件（以下、「前記の条件」と言う。）でＨＰＬＣ解析を行って、純度が８５．６％であることを明らかにした（図３における図３−１）。【００６２】
１）使用機器名：ＨＰＬＣ  Ａｇｉｌｅｎｔ  １１００  ｓｙｓｔｅｍ（Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，  Ｔｏｋｙｏ  ）
２）カラム：Ｌｉｃｈｒｏｓｐｈｅｒｅ  １００  Ｄｉｏｌ  （２５０×４ｍｍ，５μｍ）（Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，）
３）流量：０．８ｍｌ／分
４）検出：ＥＬＳＤ
５）移動相
Ａ；  ヘキサン／イソプロパノール／酢酸（８２：１７：１、ｖ／ｖ、０．００８％ＴＥＡ）
Ｂ；  イソプロパノール／蒸留水／酢酸（８５：１４：１、ｖ／ｖ、  ０．００８％ＴＥＡ）
なお時間帯と移動相ＡとＢの液組成について表１に示す。ＴＥＡ：トリエチルアミン【００６３】
【表１】
0005430566.tif 000005
【００６４】
（３）廃鶏皮由来総脂質から粗［ｐｌＰＥ＋ｐｌＰＣ］の抽出
図２における図２−１記載の方法を用い、総脂質１０ｇから粗［ｐｌＰＥ＋ｐｌＰＣ］を０．３３ｇ（収率３．３％）分離した。該粗［ｐｌＰＥ＋ｐｌＰＣ］を前記の条件でＨＰＬＣ解析を行って、純度が３６％であることを明らかにした（図３における図３−３）。【００６５】
（４）粗ＳＭ（純度８５．６％）の酵素による精製
図４記載の方法で１ｇの粗製品から精製ＳＭ０．７５ｇ（収率７５％）が得られ、前記の条件で純度解析を行った結果、９６．２％であることが判明した（図３における図３−２）。【００６６】
（５）粗［ｐｌＰＥ＋ｐｌＰＣ］（純度３６％）の酵素による精製
図６記載と同一の酵素処理及び抽出方法で１ｇの粗製品から精製ｐｌＰＥ０．５ｇ（収率５０％）が得られ、前記の条件で純度解析を行った結果、９５％であることが判明した（図３における図３−４）。【００６７】
実施例２  産卵廃鶏ムネ肉由来の１００％ｐｌＰＥおよび１００％ｐｌＰＣの調製【００６８】
（１）産卵廃鶏（ジュリア種、５５０日齢）のムネ肉のミンチ化とその凍結乾燥品から総脂質の抽出・分離
産卵廃鶏の剥皮ムネ肉から得られたムネ肉ミンチ（（農事組合法人）エヌチキン社（鹿児島県南九州市知覧町郡３６６９）の８ｍｍサイズ調製品）凍結品を常法で凍結乾燥して、図１−２記載の総脂質の抽出に供した。３％の収率で総脂質３ｇを得た。【００６９】
（２）廃鶏ムネ肉由来総脂質から粗「ｐｌＰＣ＋ｐｌＰＥ」の抽出
図５記載の方法で、総脂質１０ｇから粗「ｐｌＰＣ＋ｐｌＰＥ」が１．３５ｇ（収率１３．５％）得られた。該粗「ｐｌＰＣ＋ｐｌＰＥ」を前記の条件でＨＰＬＣ解析を行って、純度が４０．６％であることを明らかにした（図７における図７−１）。【００７０】
（３）粗「ｐｌＰＣ＋ｐｌＰＥ」の酵素処理と抽出による精製
図６記載の方法で、粗「ｐｌＰＣ＋ｐｌＰＥ」１ｇから精製「ｐｌＰＣ＋ｐｌＰＥ」が０．６５ｇ（収率６５％）が得られ、前記の条件でＨＰＬＣ純度解析を行った結果、「ｐｌＰＣ＋ｐｌＰＥ」の純度は９５．４％であった（図７における図７−２）。【００７１】
（４）高純度「ｐｌＰＣ＋ｐｌＰＥ」から１００％ｐｌＰＣと１００％ｐｌＰＥの分離・精製
高純度「ｐｌＰＣ＋ｐｌＰＥ」１ｇから図８記載の方法でＨＰＬＣを通してｐｌＰＣとｐｌＰＥを分取精製し、前者画分０．５８６ｇと後者画分０．３６８ｇ（合計収率９５．４％）を得た。
前記の条件でＨＰＬＣ純度解析を行った結果、図７における図７−３及び図７−４に示した通り、各々の純度は１００％であった。【００７２】
実施例３  ブロイラー種鶏雄の廃鶏表皮から１００％ＳＭと高純度［ｐｌＰＥ＋ｐｌＰＣ］および１００％ｐｌＰＥと１００％ｐｌＰＣの調製【００７３】
（１）脱油ミンチ皮凍結乾燥物から総脂質の抽出・分離
チャンキー種鶏雄（４５０日齢）の廃鶏５羽（平均質量５．９ｋｇ）各々の生皮から得られた鶏皮ミンチ（（農事組合法人）エヌチキン社（鹿児島県南九州市知覧町郡３６６９）の８ｍｍサイズ調製品）凍結品を脱油濃縮し、これを常法で凍結乾燥して、各々を図１−１記載の総脂質の抽出に供した。平均５．５％の収率（凍結乾燥質量当たり）で総脂質を得た。【００７４】
（２）種鶏雄廃鶏の鶏皮由来総脂質から粗ＳＭの抽出
図２における図２−２記載の方法で、総脂質１０ｇから粗ＳＭが０．８５ｇ（収率８．５％）得られた。該粗ＳＭを前記の条件でＨＰＬＣ解析を行って、純度が８５％であることを明らかにした。【００７５】
（３）種鶏雄廃鶏の鶏皮由来の粗ＳＭ（純度８５％）の酵素による精製
図４記載の方法で１ｇの粗製品から精製ＳＭ０．７４ｇ（収率７４％）が得られ、前記の条件で純度解析を行った結果、１００％であることが判明した。【００７６】
（４）種鶏雄廃鶏の鶏皮由来総脂質から粗［ｐｌＰＥ＋ｐｌＰＣ］の抽出
図２における図２−１記載の方法で、総脂質１０ｇから粗［ｐｌＰＥ＋ｐｌＰＣ］が２．１１ｇ（収率２１．１％）得られた。該粗［ｐｌＰＥ＋ｐｌＰＣ］を前記の条件でＨＰＬＣ解析を行って、純度が４０％であることを明らかにした。【００７７】
（５）種鶏雄廃鶏の鶏皮由来粗［ｐｌＰＥ＋ｐｌＰＣ］（純度４０％）の酵素による精製
図６記載と同一の酵素処理及び抽出方法で１ｇの粗製品から精製［ｐｌＰＥ＋ｐｌＰＣ］０．３５ｇ（収率３５％）が得られ、前記の条件でＨＰＬＣ純度解析を行った結果、９６％であることが判明した。【００７８】
（６）種鶏雄廃鶏の鶏皮由来高純度「ｐｌＰＥ＋ｐｌＰＣ」から１００％ｐｌＰＥと１００％ｐｌＰＣの分離・精製
高純度「ｐｌＰＣ＋ｐｌＰＥ」１ｇから図８記載の方法でＨＰＬＣを通してｐｌＰＥと  ｐｌＰＣを分取精製し、前者画分０．７１ｇと後者画分０．２３ｇ（合計収率９４％）を得た。
前記の条件でＨＰＬＣ解析を行った結果、各々の純度は１００％であった。【００７９】
実施例４  ブロイラー種鶏雄の廃鶏ムネ肉から高純度［ｐｌＰＣ＋ｐｌＰＥ］および１００％ｐｌＰＣと１００％ｐｌＰＥの調製【００８０】
（１）種鶏雄廃鶏のムネ肉のミンチ化とその凍結乾燥品から総脂質の抽出・分離
チャンキー種鶏雄の廃鶏（４５０日齢）５羽（平均質量５．９ｋｇ）各々の剥皮ムネ肉から得られたムネ肉ミンチ（（農事組合法人）エヌチキン社（鹿児島県南九州市知覧町郡３６６９）の８ｍｍサイズ調製品）凍結品を常法で凍結乾燥して、図１−２記載の総脂質の抽出に供した。平均０．９％の収率（生ムネ肉ミンチ当たり）で総脂質を得た。【００８１】
（２）種鶏雄の廃鶏ムネ肉由来総脂質から粗［ｐｌＰＣ＋ｐｌＰＥ］の抽出
図５記載の方法で、総脂質１０ｇから粗［ｐｌＰＣ＋ｐｌＰＥ］が３．０５ｇ（収率３０．５％）得られた。該粗［ｐｌＰＣ＋ｐｌＰＥ］を前記の条件でＨＰＬＣ解析を行って、純度が３９．９％であることを明らかにした。【００８２】
（３）種鶏雄の廃鶏ムネ肉由来粗［ｐｌＰＣ＋ｐｌＰＥ］の酵素処理と抽出による精製
図６記載の方法で、粗［ｐｌＰＣ＋ｐｌＰＥ］１ｇから精製［ｐｌＰＣ＋ｐｌＰＥ］が０．４２ｇ（収率４２％）が得られ、前記の条件でのＨＰＬＣ純度解析の結果、［ｐｌＰＣ＋ｐｌＰＥ］の純度が９５％であることを明らかにした。【００８３】
（４）種鶏雄の廃鶏ムネ肉由来高純度「ｐｌＰＣ＋ｐｌＰＥ」から１００％ｐｌＰＣと１００％ｐｌＰＥの分離・精製
高純度「ｐｌＰＣ＋ｐｌＰＥ」１ｇから図８記載の方法でＨＰＬＣを通してｐｌＰＣとｐｌＰＥを分取精製し、前者画分０．６５ｇと後者画分０．２５ｇ（合計収率９０％）を得た。
前記の条件でのＨＰＬＣ純度解析の結果、各々の純度は１００％であった。【００８４】
実施例５  種鶏雌の廃鶏表皮から１００％ＳＭと高純度［ｐｌＰＥ＋ｐｌＰＣ］および１００％ｐｌＰＥと１００％ｐｌＰＣの調製【００８５】
（１）種鶏雌の廃鶏表皮ミンチから総脂質の抽出・分離
チャンキー種鶏雌（４５０日齢）の廃鶏５羽（平均質量５．９ｋｇ）各々の生皮から得られた鶏皮ミンチ（（農事組合法人）エヌチキン社（鹿児島県南九州市知覧町郡３６６９）の８ｍｍサイズ調製品）凍結品を脱油濃縮し、これを常法で凍結乾燥して、各々を図１−１記載の総脂質の抽出に供した。平均２７％の収率で総脂質を得た。【００８６】
（２）種鶏雌の廃鶏の鶏皮由来総脂質から粗ＳＭの抽出
図２における図２−２記載の方法で、総脂質１０ｇから粗ＳＭが０．３３ｇ（収率３．３％）得られた。該粗ＳＭを前記の条件でＨＰＬＣ解析を行って、純度が８３％であることを明らかにした。【００８７】
（３）種鶏雌の廃鶏皮由来粗ＳＭ（純度８３％）の酵素による精製
図４記載の方法で１ｇの粗製品から精製ＳＭ０．７５ｇ（収率７５％）が得られ、前記の条件で純度解析を行った結果、１００％であることが判明した。【００８８】
（４）種鶏雌の廃鶏皮由来総脂質から粗［ｐｌＰＥ＋ｐｌＰＣ］の抽出
図２における図２−１記載の方法で、総脂質１０ｇから粗［ｐｌＰＥ＋ｐｌＰＣ］が０．２４ｇ（収率２．４％）得られた。該粗［ｐｌＰＥ＋ｐｌＰＣ］を前記の条件でＨＰＬＣ解析を行って、純度が４０％であることを明らかにした。【００８９】
（５）種鶏雌の廃鶏皮由来粗［ｐｌＰＥ＋ｐｌＰＣ］（純度４０％）の酵素による精製
図６記載と同一の酵素処理及び抽出方法で１ｇの粗製品から精製［ｐｌＰＥ＋ｐｌＰＣ］０．３２（収率３２％）が得られ、前記の条件で純度解析を行った結果、９５％であることが判明した。【００９０】
（６）種鶏雌の廃鶏皮由来高純度［ｐｌＰＥ＋ｐｌＰＣ］から１００％ｐｌＰＥと１００％ｐｌＰＣの分離・精製
高純度［ｐｌＰＥ＋ｐｌＰＣ］１ｇから図８記載の方法でＨＰＬＣを通してｐｌＰＥと  ｐｌＰＣを分取精製し、前者画分０．８１ｇと後者画分０．１４ｇ（合計収率９５％）を得た。
前記の条件でＨＰＬＣ純度解析の結果、各々の純度は１００％であった。【００９１】
実施例６  種鶏雌の廃鶏ムネ肉から高純度［ｐｌＰＥ＋ｐｌＰＣ］と１００％ｐｌＰＥおよび１００％ｐｌＰＣの調製【００９２】
（１）種鶏雌の廃鶏のムネ肉のミンチから総脂質の抽出・分離
チャンキー種鶏雌（４５０日齢）の廃鶏５羽（平均質量３．８ｋｇ）各々の剥皮ムネ肉から得られたムネ肉ミンチ（（農事組合法人）エヌチキン社（鹿児島県南九州市知覧町郡３６６９）の８ｍｍサイズ調製品）凍結品を常法で凍結乾燥して、図１−２記載の総脂質の抽出に供した。平均２．３５％の収率（生ムネ肉ミンチ当たり）で総脂質を得た。【００９３】
（２）種鶏雌の廃鶏ムネ肉由来総脂質から粗［ｐｌＰＣ＋ｐｌＰＥ］の抽出
図５記載の方法で、総脂質１０ｇから粗［ｐｌＰＣ＋ｐｌＰＥ］が５．２ｇ（収率５２％）得られた。該粗［ｐｌＰＣ＋ｐｌＰＥ］を前記の条件でＨＰＬＣ解析を行って、純度が４９％であることを明らかにした。【００９４】
（３）種鶏雌の廃鶏ムネ肉由来粗［ｐｌＰＣ＋ｐｌＰＥ］の酵素処理と抽出による精製
図６記載の方法で、粗［ｐｌＰＣ＋ｐｌＰＥ］１ｇから精製［ｐｌＰＣ＋ｐｌＰＥ］が０．４２ｇ（収率４２％）が得られ、前記の条件によるＨＰＬＣ純度解析で［ｐｌＰＣ＋ｐｌＰＥ］の純度が９５％であることを明らかにした。【００９５】
（４）種鶏雌の廃鶏ムネ肉由来高純度［ｐｌＰＣ＋ｐｌＰＥ］から１００％ｐｌＰＣと１００％ｐｌＰＥの分離・精製
高純度［ｐｌＰＣ＋ｐｌＰＥ］１ｇから図８記載の方法でＨＰＬＣを通してｐｌＰＣとｐｌＰＥを分取精製し、前者画分０．６５ｇと後者画分０．２５ｇ（合計収率９０％）を得た。
前記の条件でのＨＰＬＣによる純度解析の結果、図７における図７−３及び図７−４に示した通り、各々の純度は１００％であった。【００９６】
実施例７  産卵廃鶏の皮由来のＳＭおよびｐｌＰＥの調製
（１）鶏皮ミンチの脱油品から総脂質の抽出・分離
産卵廃鶏（強制換羽を行った７３８日齢のジュリア種、「前記」と言う。）の生皮から得られた鶏皮ミンチ（（農事組合法人）エヌチキン社（鹿児島県南九州市知覧町郡３６６９）の８ｍｍサイズ調製品）凍結品を脱油濃縮して、図１−１記載の総脂質の抽出に供した。２３．５％の収率で総脂質を得た。【００９７】
（２）廃鶏皮由来総脂質から粗ＳＭの抽出
図２における図２−２記載の方法で、総脂質１０ｇから粗ＳＭが０．２５ｇ（収率２．５％）得られた。該粗ＳＭを前記の条件でＨＰＬＣ解析を行った結果、純度は８６．２％であった。【００９８】
（３）廃鶏皮由来総脂質から粗［ｐｌＰＥ＋ｐｌＰＣ］の抽出
図２における図２−１記載の方法を用い、総脂質１０ｇから粗［ｐｌＰＥ＋ｐｌＰＣ］を０．４ｇ（収率４．０％）分離した。該粗［ｐｌＰＥ＋ｐｌＰＣ］を前記の条件でＨＰＬＣ解析を行った結果、純度は３８％であった。【００９９】
（４）粗ＳＭ（純度８６．２％）の酵素による精製
図４記載の方法で１ｇの粗製品から精製ＳＭ０．７８ｇ（収率７８％）が得られ、前記の条件で純度解析を行った結果、９６．９％であることが判明した。【０１００】
（５）粗［ｐｌＰＥ＋ｐｌＰＣ］（純度３８％）の酵素による精製
図６記載と同一の酵素処理及び抽出方法で１ｇの粗製品から精製ｐｌＰＥ０．５５ｇ（収率５５％）が得られ、前記の条件で純度解析を行った結果、９６．２％であることが判明した。【０１０１】
実施例８  産卵廃鶏ムネ肉由来の１００％ｐｌＰＥおよび１００％ｐｌＰＣの調製
（１）産卵廃鶏のムネ肉のミンチから総脂質の抽出・分離
産卵廃鶏（前記）の剥皮ムネ肉から得られたムネ肉ミンチ（（農事組合法人）エヌチキン社（鹿児島県南九州市知覧町郡３６６９）の８ｍｍサイズ調製品）凍結品を、図１−２記載の総脂質の抽出に供した。２．６％の収率で総脂質２．６ｇを得た。【０１０２】
（２）廃鶏ムネ肉由来総脂質から粗「ｐｌＰＣ＋ｐｌＰＥ」の抽出
図５記載の方法で、総脂質１０ｇから粗「ｐｌＰＣ＋ｐｌＰＥ」が１．５１ｇ（収率１５．１％）得られた。該粗「ｐｌＰＣ＋ｐｌＰＥ」を前記の条件でＨＰＬＣ解析を行ったところ、純度は４１．２％であった。【０１０３】
（３）粗「ｐｌＰＣ＋ｐｌＰＥ」の酵素処理と抽出による精製
図６記載の方法で、粗「ｐｌＰＣ＋ｐｌＰＥ」１ｇから精製「ｐｌＰＣ＋ｐｌＰＥ」が０．７５ｇ（収率７５％）が得られ、前記の条件でＨＰＬＣ純度解析を行った結果、「ｐｌＰＣ＋ｐｌＰＥ」の純度は９６．２％であった。【０１０４】
（４）高純度「ｐｌＰＣ＋ｐｌＰＥ」から１００％ｐｌＰＣと１００％ｐｌＰＥの分離・精製
高純度「ｐｌＰＣ＋ｐｌＰＥ」１ｇから図８記載の方法でＨＰＬＣを通してｐｌＰＣとｐｌＰＥを分取精製し、前者画分０．５９ｇと後者画分０．３７ｇ（合計収率９６．０％）を得た。
前記の条件でＨＰＬＣ純度解析を行った結果、各々の純度は１００％であった。【０１０５】
産卵廃鶏の皮由来のＳＭおよびｐｌＰＥについて、実施例１と実施例７を比較すると、通常の産卵廃鶏を用いた実施例１では、精製ｐｌＰＥの収率は５０％、純度は９５％、精製ＳＭの収率は７５％、純度は９６．２％であるのに対して、強制換羽を行った産卵廃鶏を用いた実施例７では、精製ｐｌＰＥの収率は５５％、純度は９６．２％、精製ＳＭの収率は７８％、純度は９６．９％であった。
また、産卵廃鶏ムネ肉由来の「ｐｌＰＣ＋ｐｌＰＥ」について、実施例２と実施例８を比較すると、通常の産卵廃鶏を用いた実施例２では、精製「ｐｌＰＣ＋ｐｌＰＥ」の合計収率は９５．４％、純度はそれぞれ１００％であるのに対して、強制換羽を行った産卵廃鶏を用いた実施例８では、精製「ｐｌＰＣ＋ｐｌＰＥ」の合計収率は９６．０％、純度はそれぞれ１００％であった。
このように、強制換羽を行った産卵廃鶏は、通常の産卵廃鶏に比べて、精製ｐｌＰＥの収率および純度、精製ＳＭの収率および純度、並びに精製「ｐｌＰＣ＋ｐｌＰＥ」の合計収率がいずれも高いことが分かる。
【産業上の利用可能性】
【０１０６】
本発明の高純度リン脂質の製造方法によれば、家禽類などの生物系素材を原材料に用い、機能性食品素材、医薬品素材、化粧品素材などとして有用な高純度スフィンゴミエリン、特にヒト型スフィンゴミエリンおよび高純度プラズマローゲン型グリセロリン脂質を、簡単な操作で収率よく製造することができる。
【図１−１】
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【図１−２】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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