(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）のアミロイド結合性化合物または製薬上許容されるその塩：
【化１】
0005557449.tif 000016
[式中
ＹがＨ、ＮＯ２、−ＮＲ''３＋、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、Ｏ−（ＣＲ''２）ｎ−Ｘ、または−（ＣＲ''２）ｎ−Ｘであり；
（ここで
ＸがＦ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩであり；
ｎが１〜５である）；
Ｒ'がＨまたはＣ１〜Ｃ８アルキル基であり；
Ｒ''がＨまたはＣ１〜Ｃ８アルキル基であり；
Ｒ３〜Ｒ１０がＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、Ｃ１〜Ｃ５アルキル、(ＣＨ２)１〜３−ＯＲ１１、ＣＦ３、−(ＣＨ２)１〜３−Ｘ、−Ｏ−(ＣＨ２)１〜３−Ｘ、ＣＮ、−ＣＯ−Ｒ１１、−Ｎ(Ｒ１１)２、−ＮＲ''３＋、−ＮＯ２、−ＣＯ−Ｎ(Ｒ１１)２、−Ｏ−(ＣＯ)−Ｒ１１、ＯＲ１１、ＳＲ１１、ＣＯＯＲ１１、Ｒｐｈ、−ＣＲ１１＝ＣＲ１１−Ｒｐｈおよび−Ｃ(Ｒ１１)２−Ｃ(Ｒ１１)２−Ｒｐｈからなる群より独立して選択され、
（ここで
ＸがＦ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩであり；ならびに
Ｒｐｈが、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、Ｃ１〜Ｃ５アルキル、（ＣＨ２）１〜３−ＯＲ１１、ＣＦ３、−（ＣＨ２）１〜３−Ｘ、−Ｏ−（ＣＨ２）１〜３−Ｘ、ＣＮ、−ＣＯ−Ｒ１１、−Ｎ（Ｒ１１）２、−ＣＯ−Ｎ（Ｒ１１）２、−Ｏ−（ＣＯ）−Ｒ１１、ＯＲ１１、ＳＲ１１、およびＣＯＯＲ１１からなる群より選択される１以上の置換基で置換されていてもよいフェニルであり、ここで各Ｒ１１が独立してＨまたはＣ１〜Ｃ５アルキルである）；ならびに
ＹまたはＲ３〜Ｒ１０が、１３１Ｉ、１２３Ｉ、１２４Ｉ、１２５Ｉ、７６Ｂｒ、７５Ｂｒ、１８Ｆ、１９Ｆ、１１Ｃ、１３Ｃ、１４Ｃおよび３Ｈからなる群より選択される少なくとも１つの検出可能な標識を含む]。
【請求項２】
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、およびＲ１０の各々がＨであり、Ｒ８およびＲ９が独立してＯＲ１１である、請求項１に記載のアミロイド結合性化合物。
【請求項３】
Ｙが少なくとも１つの検出可能な標識を含む、請求項２に記載のアミロイド結合性化合物。
【請求項４】
下記式：
【化２】
0005557449.tif 000017
を有する、請求項２に記載のアミロイド結合性化合物。
【請求項５】
（ｉ）請求項１〜４のいずれか１項に記載の有効な量のアミロイド結合性化合物；および
（ｉｉ）製薬上許容される担体
を含む、医薬組成物。
【請求項６】
以下のステップ：
（ｉ）哺乳動物中のアミロイド沈着物と結合する、請求項１〜４のいずれか１項に記載の有効な量のアミロイド結合性化合物を哺乳動物に投与するステップ；および
（ｉｉ）哺乳動物中のアミロイド沈着物への化合物の結合を検出するステップ
を含む、インビボにおいてアミロイド沈着を検出する方法に使用するための請求項１〜４のいずれか１項に記載のアミロイド結合性化合物。
【請求項７】
以下のステップ：
（ｉ）組織中のアミロイド沈着物と結合する、請求項１〜４のいずれか１項に記載の有効な量のアミロイド結合性化合物と身体組織を接触させるステップ；および
（ｉｉ）組織中のアミロイド沈着物への化合物の結合を検出するステップ
を含む、インビトロにおいてアミロイド沈着を検出する方法。
【請求項８】
以下のステップ：
（ｉｉｉ）化合物と結合したアミロイド沈着物を組織から分離するステップ；および
（ｉｖ）化合物と結合したアミロイド沈着物を定量するステップ
をさらに含む、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
以下のステップ：
（ｉ）健常哺乳動物およびアルツハイマー病を有する疑いのある哺乳動物の、(i)小脳および(ii)同じ脳の別の領域から組織を得るステップ；
（ｉｉ）請求項１〜４のいずれか１項に記載のアミロイド結合性化合物と組織を接触させるステップ；
（ｉｉｉ）化合物と結合したアミロイドを定量するステップ；
（ｉｖ）小脳以外の脳領域中のアミロイドの量（ａ）の、小脳中のアミロイドの量（ｂ）に対する比を計算するステップ；ならびに
（ｖ）健常哺乳動物についての比を、アルツハイマー病を有する疑いのある哺乳動物についての比と比較するステップ
を含む、アルツハイマー病脳を正常な脳と識別する方法に使用するための請求項１〜４のいずれか１項に記載のアミロイド結合性化合物。
【請求項１０】
被験体における、（ｉ）小脳以外の脳領域への化合物の結合の、（ｉｉ）小脳への化合物の結合に対する比を健常被験体における比と比較する、アルツハイマー病脳を正常な脳と識別する方法に使用するための請求項９に記載のアミロイド結合性化合物。
【請求項１１】
以下のステップ：
（ａ）ホルマリン固定または新鮮凍結された組織を、請求項１〜４のいずれか１項に記載のアミロイド結合性化合物または製薬上許容されるその塩の溶液とインキュベートして、標識された沈着を形成させるステップ；および
（ｂ）標識された沈着を検出するステップ
を含む、生検または死後のヒトもしくは動物組織中のアミロイド沈着を検出する方法。
【請求項１２】
以下のステップ：
ａ）化合物中の置換基の少なくとも１つが１２５Ｉ、３Ｈ、および少なくとも１つの炭素が１４Ｃである炭素含有置換基からなる群より選択される放射性標識で標識されている、請求項１〜４のいずれか１項に記載のアミロイド結合性化合物の放射性標識誘導体または製薬上許容されるその塩を、生検または死後組織のホモジネートとインキュベートするステップ；
ｂ）組織に結合した化合物の放射性標識誘導体を、組織に結合していないものから分離するステップ、
ｃ）組織に結合した化合物の放射性標識誘導体を定量するステップ、ならびに
ｄ）組織に結合した化合物の放射性標識誘導体の単位を標準物質との比較により、組織１００ｍｇあたりのアミロイドμｇの単位に変換するステップ
を含む、生検または死後組織中のアミロイドの量を定量する方法。
【請求項１３】
請求項１〜４のいずれか１項に記載のアミロイド結合性化合物または製薬上許容されるその塩を神経原線維変化ではなくアミロイド斑に、この両者を含有する脳組織において、選択的に結合させる方法であって、インビトロ結合または染色アッセイにおいてアミロイド斑を約１０ｎＭ未満の濃度の請求項１〜４のいずれか１項に記載の化合物と接触させるステップを含む、上記方法。
【請求項１４】
アミロイド結合性化合物または製薬上許容されるその塩を神経原線維変化ではなくアミロイド斑に、この両者を含有する脳組織において、インビボで選択的に結合させる方法に使用するための請求項１〜４のいずれか１項に記載のアミロイド結合性化合物であって、上記方法が投与された化合物の血中濃度がインビボにおいて約１０ｎＭ未満に維持されるように、請求項１〜４のいずれか１項に記載の化合物または製薬上許容されるその塩の有効な量を投与するステップを含む、上記アミロイド結合性化合物。
【請求項１５】
以下のステップ：
（ａ）アミロイド症と関連する疾患に罹患している被験体に、少なくとも１つの請求項１〜４のいずれか１項に記載のアミロイド結合性化合物または製薬上許容されるその塩および製薬上許容される担体を含む医薬組成物の検出可能な量を投与するステップ；および
（ｂ）少なくとも１つのアミロイド生成性タンパク質を含むアミロイド沈着への化合物の結合を検出するステップ
を含む、少なくとも１つのアミロイド生成性タンパク質を含む少なくとも１つのアミロイド沈着を被験体において検出するためのインビボまたはインビトロの方法に使用するための請求項１〜４のいずれか１項に記載のアミロイド結合性化合物。
【請求項１６】
以下のステップ：
（Ａ）請求項１〜４のいずれか１項に記載のアミロイド結合性化合物または製薬上許容されるその塩を、臨床的認知症の兆候または軽度の認知障害の臨床的兆候を呈している患者に投与するステップ；
その後
（Ｂ）データを得るために該患者を造影するステップ；
ならびに
（Ｃ）規範となるレベルを基準にして該患者におけるアミロイドレベルを確認するために該データを分析し、それによって該患者をアミロイド沈着と関連する疾患の前駆症状と特定するステップ
を含む、患者をアミロイド沈着と関連する疾患の前駆症状と特定する方法に使用するための請求項１〜４のいずれか１項に記載のアミロイド結合性化合物。
【請求項１７】
以下のステップ：
（Ａ）請求項１〜４のいずれか１項に記載のアミロイド結合性化合物または製薬上許容されるその塩の有効な量を、その必要性がある患者に投与するステップ；
（Ｂ）該患者を造影するステップ；その後
（Ｃ）少なくとも１つの抗アミロイド剤を、その必要性がある該患者に投与するステップ；
（Ｄ）請求項１〜４のいずれか１項に記載の化合物の有効な量を、その必要性がある該患者にその後投与するステップ；
（Ｅ）該患者を造影するステップ；ならびに
（Ｆ）該少なくとも１つの抗アミロイド剤による処置前の該患者でのアミロイド沈着のレベルを、該少なくとも１つの抗アミロイド剤による処置後の該患者でのアミロイド沈着のレベルと比較するステップ
を含む、アミロイド症の処置での治療の有効性を判定する方法に使用するための請求項１〜４のいずれか１項に記載のアミロイド結合性化合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は全体として、アミロイド生成性タンパク質、例えば、その脳沈着がアルツハイマー病と関連しているアミロイドタンパク質Ａβ１−４２の基質である同位体標識ベンゾフラン化合物の分野に関する。
【背景技術】
【０００２】
Ｉ．脳アミロイド症
アルツハイマー病（「ＡＤ」）は、記憶喪失および他の認知障害によって特徴付けられる神経変性疾患である（非特許文献１）。それは米国で最もよく見られる認知症の原因である。ＡＤは年齢わずか４０〜５０歳の者を襲うこともあるが、しかし、危険な脳生検なしでは疾患の存在を判定することが困難であるため、その発症の時期は不明である。ＡＤの有病率は年齢とともに増大し、罹患集団の推定値は８５〜９０歳で４０〜５０％と高い（非特許文献２）。
【０００３】
研究から、アルツハイマー病（ＡＤ）の発病機序において、脳におけるアミロイド沈着は初期の原因となる事象であることが示唆されている。アミロイド沈着の進行により、学習および記憶に関与する脳の領域に老人斑および神経原線維変化の形成が引き起こされる。典型的なアルツハイマーの老人斑は、アミロイド物質のコアを包囲するジストロフィーの神経突起を含む。アミロイドコアの主成分は、アミロイドβ（Ａβ）と呼ばれるタンパク質である。
【０００４】
実際に、ＡＤは、通常は剖検時に、脳組織の検査を通じて最終的に診断される（非特許文献３）；（非特許文献４）。神経病理学的には、この疾患は老人斑（ＮＰ）の存在、神経原線維変化（ＮＦＴ）、およびニューロン喪失に加えて、さまざまな他の所見によって特徴付けられる（非特許文献５）。アルツハイマー病の犠牲者の脳組織の解剖スライスは、ＡＤに特徴的である老人斑のタンパク質性細胞外コアの形態のアミロイドの存在を示す。
【０００５】
これらの老人斑のアミロイドコアは、主にβプリーツシート構造で配置されているβアミロイド（Ａβ）と呼ばれるタンパク質から構成される（非特許文献６）；（非特許文献７）。老人斑はこの疾患の初期かつ不変の様相である（非特許文献８）；（非特許文献９）；（非特許文献１０）。
【０００６】
Ａβの初期の沈着はおそらく、臨床症状が顕著になるよりずっと前に起きていると思われる。ＡＤの診断向けに現在推奨されている「最小顕微鏡基準」は脳に見られる老人斑の数に基づいている（非特許文献３）。しかしながら、老人斑の計数評価は死後まで延期されなければならない。
【０００７】
アミロイドを含有する老人斑は、ＡＤおよびダウン症候群での、ならびにＡＤを発症する可能性が非常に高いアポリポタンパク質Ｅ４対立遺伝子のホモ接合体であるヒトでの脳の選択的領域の際立った特徴である（非特許文献１１）；（非特許文献１２）；（非特許文献１３）。
【０００８】
脳アミロイドは、脳切片をチオフラビンＳまたはコンゴレッドで染色することによって容易に実証される（非特許文献１４）。コンゴレッド染色アミロイドは、黄緑色の偏光色を示す二色性の外観によって特徴付けられる。二色性結合は、アミロイドタンパク質のβプリーツシート構造の結果である（非特許文献１５）。アミロイドの生化学および組織化学の詳述は、非特許文献１６のなかで見出すことができる。
【０００９】
これまで、ＡＤの診断はほとんど、臨床基準評価、脳生検および剖検組織研究によって行われてきた。インビボにおいてアルツハイマー病を診断するための方法を開発する研究努力には遺伝子検査、免疫アッセイ法、および造影法が含まれる。
【００１０】
Ａβ代謝の異常がＡＤの発症に必要かつ十分である証拠は、ＡＤの常染色体優性型を有するいくつかの稀な家族におけるＡβ前駆体タンパク質中の点突然変異の発見に基づく（非特許文献１７）；（非特許文献１８）。これらの突然変異はＡβの、その前駆体タンパク質からの作出に必要なＮ末端およびＣ末端の切断点近傍に生じる（非特許文献１９）；（非特許文献２０）；（特許文献１）。しかしながら、多数のＡＤ家族の遺伝子分析により、ＡＤが遺伝的に異質であることが実証されている（非特許文献２１）。第２１染色体マーカーとの連鎖は、早発性ＡＤを有する一部の家族でしか見られず、遅発性ＡＤを有する家族では全く見られない。最近になって、その産物が多数の膜貫通ドメインを含有すると予測されかつ内在性膜タンパク質に類似している、第１４染色体上の遺伝子が非特許文献２２によって同定されている。この遺伝子は、早発性常染色体優性ＡＤの７０％までの割合を占めうる。予備的なデータから、この第１４染色体の突然変異がＡβ産生の増大を引き起こすことが示唆されている（非特許文献２３）。非常に類似性の高い遺伝子の突然変異が、早発性ＡＤを有するボルガ・ドイツ人家系の第１染色体上に同定されている（非特許文献２４）。
【００１１】
ＡＤ診断の補助としてアポリポタンパク質Ｅ遺伝子型のスクリーニングが提案されている（非特許文献２５）；（非特許文献２６）。しかしながら、アポリポタンパク質Ｅ４対立遺伝子は疾患マーカーではなく、ＡＤの単なる危険因子にすぎないので、この技術には難点がある。それは多くのＡＤ患者には存在せず、多くの認知症ではない高齢者に存在する（非特許文献２７）。
【００１２】
ＡＤ患者での神経化学的マーカーの存在を検出するために、および脳脊髄液中のＡＤ関連アミロイドタンパク質を検出するために免疫アッセイ法が開発されている（非特許文献２８）；（特許文献１）；（特許文献２）。ＡＤを診断するためのこれらの方法は、全ての患者、特に疾患の早期段階においてＡＤを検出することが証明されておらず、比較的侵襲性であり、脊椎穿刺を必要とする。また、Ａβの造影用のプローブとしてモノクローナル抗体を開発する試みが行われている（非特許文献２９）；（特許文献３）；（特許文献４）。抗体プローブの主な欠点は、これらの大きな分子に血液脳関門を横断させるのが難しいことである。ＡＤのインビボ診断用の抗体を用いるには、脳へのアクセスを得るために血液脳関門の著しい異常が必要であろう。血液脳関門の異常がＡＤにおいて確実に存在するという説得力のある機能的証拠は存在しない（非特許文献３０）。
【００１３】
放射性標識Ａβペプチドは、ＡＤ脳切片中の散在型、密集型、および神経突起型の斑を標識するために用いられている。特許文献５を参照されたい。しかしながら、これらのペプチドは、抗体の不利点を全て共有している。具体的には、ペプチドは通常、造影に必要な量が血液脳関門を通過せず、これらのプローブはびまん性老人斑(diffuse plaque)と反応するので、これらはＡＤに特異的ではないかもしれない。
【００１４】
老人斑および神経原線維変化は、ＡＤの最も特徴的な２つの病理学的特質である（非特許文献３１）。斑は最も初期には新皮質に生じ、そこでは比較的均一に分布している（非特許文献３２）。濃縮体はまず初め、トランス嗅内皮質（transentorhinal cortex）などの辺縁領域に見られ、予測可能な組織分布的パターンで新皮質へと進行する（非特許文献３３）。Arnoldらは、ＡＤ患者の脳においてＮＦＴおよび老人斑の分布をマッピングした（非特許文献３４）。ＮＦＴと比較して、老人斑は概ね、辺縁の不等皮質周縁（periallocortex）および不等皮質（ＮＦＴの密度が最も高い領域）での顕著に少ない老人斑を除いては、皮質全体にわたってより均一に分布していた。チオフラビン−Ｓ染色によれば、老人斑の密度は側頭葉および後頭葉で最も高く、辺縁葉および前頭葉では最も低く、頭頂葉はその中間であった（非特許文献３５）。Arriagadaらは、認知症ではないと推定される高齢者の脳におけるＡＤ型病理学的変化の組織分布を調べた。彼らの知見から、５５歳を超えるほとんどの個体が少なくとも数個のＮＦＴおよび斑を有することが示唆される。ＳＰの免疫組織化学的に定義されるサブタイプは、異なる分布パターンを有しており、新皮質領域では辺縁領域よりもずっと多くのＡβ免疫反応性の斑が存在し、Ａｌｚ−５０免疫反応性の斑は少なく、Ａｌｚ−５０陽性ニューロンおよびＮＦＴを含む領域に限られていた。これらのパターンから、高齢者およびＡＤの両者においてＮＦＴおよびＳＰを引き起こす病理学的プロセスの共通点が示唆された。
【００１５】
斑および濃縮体がＡＤにおいて見られる神経変性プロセスの副産物であるか否か、またはそれらが神経細胞死の原因であるのか否かに関して議論が続いている（非特許文献３６）；（非特許文献３７）；（非特許文献３８）。新皮質および海馬のシナプスの喪失が発病前の認知状態と十分に関連していることは、明らかに証明されている。研究者の中には、微小管関連タンパク質であるタウの過リン酸化により引き起こされる微小管の構造および機能の破壊が、特にシナプス喪失において、概してはＡＤにおいて、重要な病因的役割を担っていることを示唆している人もいる（非特許文献３９）；（非特許文献４０）。酸化による損傷および膜の分解は、ＡＤにおいて重要な役割を担っていることが提唱されている（非特許文献４１）；（非特許文献４２）。僅かな慢性の脳低灌流を含む血管要因もＡＤの発病機序に関与している（非特許文献４３）；（非特許文献４４）。これらの要因の全てがＡＤの発病機序にある程度役割を担っていると思われるが、凝集して原線維性のβプリーツシート構造を形成する４ｋＤのペプチドであるアミロイドβ（Ａβ）ペプチドのプロセッシングの異常を指摘する証拠が増えている（非特許文献４５）。Ａβは次の幾つかの理由から、ＡＤの発病機序において重要な役割を担っていることが提唱されている：１）Ａβ沈着は、ダウン症候群のＡＤの最も早期に顕れる神経病理学的マーカーであり、ＮＦＴ形成よりも数十年も前から起こっている可能性がある（非特許文献４６）；（非特許文献４７）；２）β−アミロイド症は、ＡＤおよび密接に関連する障害に比較的特異的である（非特許文献４８）；３）Ａβは培養ニューロンに対して毒性であり（非特許文献４９）；（非特許文献５０）；（非特許文献５１）、その毒性はβシート二次構造および少なくともオリゴマーへの凝集に依存すると思われる（非特許文献５２）；（非特許文献５３）；（非特許文献５４）。Ａβはモノマー、オリゴマーおよび原線維／斑の画分全体に平衡分布して確実に存在するが、Ａβのオリゴマー形態は重要な神経毒性成分として大きく関与している（非特許文献５５）；（非特許文献５６）。オリゴマー型Ａβの有害作用の認識は、ＡＤの「アミロイドカスケード仮説」に対する幾つかの反対意見との妥協策の基礎をなしている（非特許文献５７）。おそらく、ＡＤの発病機序におけるＡβの役割についての最も強力な証拠は、若年発症型家族性ＡＤの幾つかの形態を引き起こすアミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）遺伝子において突然変異が見られたことである（非特許文献５８）。さらに、常染色体優性ＡＤの全ての家族性形態では、共通して、Ａβのより迅速に凝集する４２アミノ酸形態のレベルが増大している（非特許文献５９）。これに対して、タウタンパク質で突然変異が見られなければ、ＡＤが起こることが示されている。タウ（第１７染色体）における別の突然変異が、パーキンソン症候群を伴う前頭側頭型認知症に関連している（非特許文献６０）。近年の証拠から、ＡＤにおいて脳におけるＡβレベルと認知低下とがよく相関することが示されており、アミロイドの沈着は、認知障害の前に起こる、ＡＤの発病機序の非常に早期の、おそらく最初の事象であると思われる（非特許文献６１）。��ミロイド沈着の存在は、さらに他のタンパク質の沈着、アストログリアおよびミクログリアの活性化、そして最終的には神経細胞死および結果として起こる認知障害に至る多くの生化学的経路を調節する可能性がある。
【００１６】
ＩＩ．限局性および全身性アミロイド症
アミロイド症は緩徐進行性の状態であり、これは顕著な病的状態および死亡につながりうる。多様な疾患過程群が「アミロイド症」の見出しの分類に入っており、これは正常機能を損なうのに十分な量で、「アミロイド」と総称される種々の不溶性線維状タンパク質の、１つのまたは多くの器官における、細胞外組織沈着によって特徴付けられる。
【００１７】
アミロイド沈着は細胞外にあり、身体によって代謝または除去されない。アミロイドはヨウ素とのデンプン様染色反応により肉眼的に識別することができる；それ故にその名はアミロイドである。微視的には、アミロイドはその細胞外分布により、コンゴレッドを用いた染色時のその着色および光学特性により、ならびにそのタンパク質原線維構造により区別される。したがって、光学顕微鏡下においてアミロイドは、固定組織標本でもインビボでもコンゴレッド色素に親和性の高い均質な、きわめて屈折性の高い物質である。電子顕微鏡下では、アミロイドは１００Å（１０ｎｍ）の直線状の分枝しない原線維からなり、Ｘ線回折下では、それはクロスβパターンを示す。
【００１８】
アミロイド症と関連する疾患は全て、蓄積アミロイドの沈着という特色を示す。アミロイド沈着は、異常な構造を有するかまたは血清中に異常に増加しているかのいずれかの前駆体タンパク質に由来する、１以上のアミロイド生成性タンパク質の存在によって特徴付けられる。
【００１９】
アミロイドの産生とその組織内への沈着の原因は分かっていない。生化学的に異なった種類のアミロイド症では、発症機序も様々のようである。続発性アミロイド症では、例えば、前駆体タンパク質（急性期反応物質：血清アミロイドＡ）の代謝障害が存在するが、遺伝性アミロイド症では、遺伝的な変異タンパク質が出現する。原発性アミロイド症では、モノクローナルな骨髄細胞集団が、異常にプロセッシングされてアミロイドを形成しうる軽鎖全体またはその断片を産生する。
【００２０】
主要なアミロイド３種類と、あまり一般的でないアミロイド数種類が生化学的に定義されている。１番目のタイプは、免疫グロブリン軽鎖の可変領域の部分に対して相同性のあるＮ末端配列を有するアミロイドで、ＡＬと呼ばれ、原発性アミロイド症および多発性骨髄腫と関連するアミロイド症で認められる。２番目のタイプは、ＡＡタンパク質と呼ばれ、免疫グロブリンタンパク質とは異なる特殊なＮ末端配列をもつアミロイドで、続発性アミロイド症の患者にみられる。３番目のタイプのアミロイドは家族性アミロイド多発性神経障害と関連するもので、通常、１個のアミノ酸が置換したトランスサイレチン（プレアルブミン）分子である。その他の遺伝性アミロイドは、ある家族では変異ゲルゾリン、いくつかの他の家族では変異アポリポタンパク質Ａ−Ｉ、および遺伝性大脳動脈性アミロイドでは他の変異タンパク質からなることが見出されている。慢性血液透析と関連するアミロイドでは、２−ミクログロブリンがアミロイドタンパク質を構成している。皮膚の老化および内分泌器官と関連するアミロイドは、他の生化学的形態を示すアミロイド症である。アルツハイマー病の組織病理学的病変で見られるアミロイドは、タンパク質によって構成されている。アミロイド症の様々な形態に関する化学的分析によって、さらに詳細な分類ができる。ＡＰ（または血清ＡＰ）と呼ばれる独特なタンパク質ペントラキシンは、全ての形態のアミロイドと広く関連しており、診断検査の基礎となる。
【００２１】
３種類の主要な全身性の臨床形態が現在のところ認められている。アミロイド症は、関連疾患のない場合には原発性または特発性（ＡＬ形態）と分類され、感染性（結核、気管支拡張症、骨髄炎、ハンセン病）もしくは炎症性（リウマチ性関節炎、肉芽腫性回腸炎）のいずれかの慢性疾患と関連する場合には続発性、後天性、または反応性（ＡＡ形態）と分類される。アミロイドは同様に、多発性骨髄腫（ＡＬ）、ホジキン病（ＡＡ）、その他の腫瘍、および家族性地中海熱（ＡＡ）と関連している。アミロイド症は老化に付随して起こることがある。第３の主要なタイプは家族性であり、他の疾患とは関連せず、しばしば特徴的な神経障害、腎障害、心臓障害を伴う。
【００２２】
原発性（ＡＬ）アミロイド症では、心臓、肺、皮膚、舌、甲状腺、および腸管が侵されうる。限局性のアミロイド「腫瘍」が気道または他の部位に見られることがある。実質器官（肝臓、脾臓、腎臓）および脈管系、特に心臓もしばしば侵される。
【００２３】
続発性（ＡＡ）アミロイド症は脾臓、肝臓、腎臓、副腎、およびリンパ節が好発部位である。しかしながら、病変の生じない器官系はなく、脈血管系の病変は広範に広がっている。ただし、心臓に臨床的に意義のある病変がみられるのはまれである。肝臓および脾臓はしばしば肥大し、堅く、ゴム状となる。腎は通常肥大する。脾臓の断面は、正常のマルピーギ小体が青白いアミロイドに置換した大きな、半透明のワックス状の領域を示し、サゴ脾を呈する。
【００２４】
遺伝性アミロイド症は、末梢性感覚および運動神経障害、しばしばみられる自律神経障害、ならびに心血管系および腎アミロイドが特徴である。手根管症候群および硝子体異常も起こりうる。
【００２５】
ある種の悪性腫瘍（例えば、多発性骨髄腫）と関連するアミロイドは、特発性（ＡＬ）アミロイドと同様の分布を示すが、他の悪性腫瘍（例えば、甲状腺髄様癌）では、アミロイドは限局性で、腫瘍部位または転移腫瘍のあるところにしか起こらない。アミロイドは成人発症糖尿病患者の膵臓に頻繁に見られる。
【００２６】
アミロイド症は特定の臨床症状および兆候をもとに疑われるが、生検によってのみ確定診断が可能である。現在は、腹部の皮下脂肪の吸引および直腸粘膜生検が最良のスクリーニング検査である。その他の有用な生検部位は歯肉、皮膚、神経、腎臓、および肝臓である。組織切片をコンゴレッドで染色し、偏光顕微鏡下にて、アミロイドに特徴的な緑色複屈折を観察しなければならない。アミロイド症の診断を確認するためのシンチグラフィー検査には、同位体で標識した血清ＡＰが用いられている。早期診断をもたらし、それによって有効な処置を可能とするために、より良い方法論が開発される必要がある。
【００２７】
アミロイド沈着の阻害と糖尿病療法の関連性が推測されている。例えば、特許文献６を参照されたい。糖尿病を診断するための膵臓の造影は、膵臓中のアミロイドレベルを確定的に測定するのに適した方法論の１つであり、その関連性は糖尿病の診断の指標になるものと思われる。
【００２８】
ＩＩＩ．代用マーカー
ＡＤは、約４００万人のアメリカ人および世界中ではおそらく２０００〜３０００万人を苦しめていると考えられている。ＡＤは、先進国では主要な公衆衛生上の問題と認められている。ＡＤの分子基盤の進行中の解明から、いくつかの治療標的が浮かび上がっている。例えば、ＡＤ患者の対症療法には４種のコリンエステラーゼ阻害剤のタクリン（Cognex, Warner-Lambert, Morris Plains, New Jersey）、ドネペジル（Aricept, Eisai, Inc., Teaneck, New Jersey、およびPfizer, Inc., New York, New York）、リバスチグミン（Exelon, Novartis, Basel, Switzerland）、ならびにガランタミン（Reminyl, Janssen, Titusville, New Jersey）が認可されている。現在開発中の潜在的な新しいＡＤ療法は、免疫療法、セクレターゼ阻害剤または抗炎症薬を伴う。しかしながら、現在までに、認識衰退の経過を変えることが証明されている薬物は存在していない。
【００２９】
抗アミロイド療法の開発に対する主な障害は、抗アミロイド療法として免疫療法の使用を対象にしている非特許文献６２からの以下の引用によって例示される：「我々は、脳のＡβアミロイド負荷が我々の試験患者で低減したか否かが分からない；この疑問に答えるにはインビボ造影法が必要であろう」。処置前のアミロイド負荷を定量し、次いで処置の効果を追跡する能力は、このクラスの薬物の効率的な開発には極めて重要である。
【００３０】
ＩＶ．アミロイド症の前駆症状形態の診断
アルツハイマー病（ＡＤ）に密接に関連している状態は、単独の記憶障害または幾つかの認知領域での障害によって特徴付けられるが、アルツハイマー病の診断基準を満たすほど重症でない。この状態は軽度の認知障害（ＭＣＩ）と呼ばれており、ＡＤの前駆期に相当しうる。軽度の認知障害は、正常な認知状態から認知症への中間または移行状態と定義されている。軽度の認知障害（ＭＣＩ）を有する被験体は、通常、年齢および教育についての予測を超える記憶障害を有しているが、まだ認知症になっていない。
【００３１】
軽度の認知障害と診断された患者がＡＤに進行するという徴候がいくらか見られる。軽度の認知障害が複雑な異質状態に相当することがあり、軽度の認知障害を有する一部の患者はＡＤにも他の認知性障害にもならないという徴候も見られる。
【００３２】
認知症とＡＤの境界を見分けることはかなり興味深い。興味の多くは正常な老化と認知症、または具体的には、アルツハイマー病（ＡＤ）との間の境界または移行状態に向けられている。いくつかの研究の再検討から、これらの個体がＡＤを発症する危険性は１年あたり１％〜２５％と高いことが示唆された。これらの割合の変動は診断基準、測定装置、および小さいサンプルサイズの違いを反映している可能性が高い。非特許文献６３を参照されたい。
【００３３】
ＭＣＩと診断された患者も処置試験の関心対象になっている。アルツハイマー病研究グループの国立老化研究所コンソーシアムであるアルツハイマー病共同研究は、ＭＣＩ患者のＡＤへの進行を変化させるよう意図された薬剤の多施設試験に着手している。非特許文献６４を参照されたい。
【００３４】
ＭＣＩの診断基準に関して疑問が生じていることがある。研究者のなかには、軽度の疾患を有するこれらの患者の実質的に全てが神経病理学的にＡＤを有しており、したがって、これが有用な区別ではないと確信しているものもいる。非特許文献６５を参照されたい。他の研究者のなかには、これらの患者の多くがＡＤに進行するが、全てがそうなるわけではなく、結果的に、両者を区別することは重要であると指摘するものもいる。非特許文献６６；非特許文献６７を参照されたい。
【００３５】
Ｖ．アミロイド生成性タンパク質に対する基質−放射性標識ベンゾフラン
アミロイド生成性タンパク質に対する潜在的な基質が想定されており、コンゴレッドおよびクリサミンＧ誘導体（例えば、特許文献７参照）のような、色素物質から不溶性Ａβを造影する目的で標識されている配列特異的ペプチドにまで及ぶ。これらのペプチドには、標識Ａβペプチド自体、プトレシン−ガドリニウム−Ａβペプチド、放射性標識Ａβ、［１１１Ｉｎ］Ａβ、［１２５Ｉ］Ａβ、γ線を放射する放射性同位体で標識されたＡβ、Ａβ−ＤＴＰＡ誘導体、放射性標識プトレシン、ＫＶＬＦＦに基づくリガンドおよびその誘導体（例えば、特許文献６および特許文献８参照）が含まれる。
【００３６】
アルツハイマー病の診断に用いるという主旨の数個の非放射性標識ベンゾフランが特許文献９に記述されている。しかしながら、開示されているベンゾフラン化合物のどれもが放射性標識されておらず、生きている患者においてアルツハイマー病を造影するのに有効であることは全く開示されていない。
【００３７】
いくつかの標識ベンゾフランが知られているが、どれもアルツハイマー病の診断に使用されていない。重水素化ベンゾフラン誘導体を開示している非特許文献６８を参照されたい；Givensらは非特許文献６９のなかで２−フェニル−ベンゾフラン−ｄを開示しており、Daviesらは非特許文献７０のなかで１４Ｃ標識２−フェニル−ベンゾフランを開示している。
【特許文献１】Potter WO 92/17152
【特許文献２】Glennerら 米国特許第4,666,829号
【特許文献３】Majochaら WO 89/06242
【特許文献４】Majochaら 米国特許第5,231,000号
【特許文献５】Maggioら WO 93/04194
【特許文献６】WO 02/16333
【特許文献７】米国特許第6,168,776号
【特許文献８】米国特許第6,331,440号
【特許文献９】米国特許第6,696,039号
【非特許文献１】McKhann et al., Neurology 34: 939 (1984)
【非特許文献２】Evans et al., JAMA 262: 2551 (1989); Katzman, Neurology 43: 13 (1993)
【非特許文献３】Khachaturian, Arch. Neurol. 42: 1097 (1985)
【非特許文献４】McKhann et al., Neurology 34: 939 (1984)
【非特許文献５】Mann, Mech. Ageing Dev. 31: 213 (1985)
【非特許文献６】Mori et al., Journal of Biological Chemistry 267: 17082 (1992)
【非特許文献７】Kirschner et al., PNAS 83: 503 (1986)
【非特許文献８】Mann et al., J. Neurol. Sci. 89: 169
【非特許文献９】Mann, Mech. Ageing Dev. 31 : 213 (1985)
【非特許文献１０】Terry et al., J. Neuropathol. Exp. Neurol 46: 262 (1987)
【非特許文献１１】Corder et al., Science 261 : 921 (1993)
【非特許文献１２】Divry, P., J. Neurol. Psych. 27: 643-657 (1927)
【非特許文献１３】Wisniewski et al., Zimmerman, H.M. (ed.): PROGRESS IN NEUROPATHOLOGY (Grune and Stratton, N. Y. 1973) pp. 1〜26
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【非特許文献１６】Glenner, N. Eng. J. Med., 302: 1333 (1980)
【非特許文献１７】Hardy, Nature Genetics 1 : 233 (1992)
【非特許文献１８】Hardy et al., Science 256: 184 (1992)
【非特許文献１９】St. George-Hyslop et al., Science 235: 885 (1987)
【非特許文献２０】Kang et al., Nature 325: 733 (1987)
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【非特許文献５３】Pike et al., J. Neuroscience 13:1676-1687 (1993)
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【非特許文献５７】Terry, Ann. Neurol. 49:684 (2001)
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【非特許文献６４】Grundman et al., Neurology, 1996, A403
【非特許文献６５】Morris et al., Neurology 41 : 469 (1991)
【非特許文献６６】Grundman, ibid; Petersen et al., JAMA 273: 1274 (1995)
【非特許文献６７】Petersen et al., Ann N Y Acad. Sci. 802: 58 (1996)
【非特許文献６８】Aitken et al., Journal of the Chemical Society, Perkin Transactions 1: Organic and Bio-Organic Chemistry (1998), (23), 3937-3942
【非特許文献６９】Journal of the American Chemical Society (1993) 115(14), 6001-12
【非特許文献７０】Journal of the Chemical Society (1959) 3544-7
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００３８】
したがって、血液脳関門を横断可能なかつアルツハイマー病の診断で造影のために不溶性アミロイド沈着物に結合可能な同位体標識ベンゾフランが必要とされている。
【課題を解決するための手段】
【００３９】
本発明は、１つの実施形態において、式（Ｉ）のアミロイド結合性化合物または製薬上許容されるその塩を提供することによりこの必要性およびその他のものを満たす：
【化１】
0005557449.tif 000002
【００４０】
式（Ｉ）中、ＹがＨ、ＮＯ２、−ＮＲ''３＋、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、−Ｏ−（ＣＲ''２）ｎ−Ｘ、または−（ＣＲ''２）ｎ−Ｘであり、ここでＸがＦ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩである。変数ｎが、１〜５から選択される整数である。
【００４１】
Ｒ'がＨまたは低級アルキル基である。また、Ｒ''がＨまたは低級アルキル基である。
【００４２】
Ｒ３〜Ｒ１０がＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、Ｃ１〜Ｃ５アルキル、(ＣＨ２)１〜３−ＯＲ１１、ＣＦ３、−(ＣＨ２)１〜３−Ｘ、−Ｏ−(ＣＨ２)１〜３−Ｘ、ＣＮ、−ＣＯ−Ｒ１１、−Ｎ(Ｒ１１)２、−ＮＲ''３＋、−ＮＯ２、−ＣＯ−Ｎ(Ｒ１１)２、−Ｏ−(ＣＯ)−Ｒ１１、ＯＲ１１、ＳＲ１１、ＣＯＯＲ１１、Ｒｐｈ、−ＣＲ１１＝ＣＲ１１−Ｒｐｈおよび−Ｃ(Ｒ１１)２−Ｃ(Ｒ１１)２−Ｒｐｈからなる群より独立して選択される。上記のように、ＸがＦ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩである。Ｒｐｈが、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、Ｃ１〜Ｃ５アルキル、（ＣＨ２）１〜３−ＯＲ１１、ＣＦ３、−（ＣＨ２）１〜３−Ｘ、−Ｏ−（ＣＨ２）１〜３−Ｘ、ＣＮ、−ＣＯ−Ｒ１１、−Ｎ（Ｒ１１）２、−ＣＯ−Ｎ（Ｒ１１）２、−Ｏ−（ＣＯ）−Ｒ１１、ＯＲ１１、ＳＲ１１、およびＣＯＯＲ１１からなる群より選択される１以上の置換基で置換されていてもよいフェニルであり、ここで各Ｒ１１が独立してＨまたはＣ１〜Ｃ５アルキルである。
【００４３】
さらに、置換基ＹまたはＲ３〜Ｒ１０が、１３１Ｉ、１２３Ｉ、１２４Ｉ、１２５Ｉ、７６Ｂｒ、７５Ｂｒ、１８Ｆ、１９Ｆ、１１Ｃ、１３Ｃ、１４Ｃおよび３Ｈからなる群より選択される少なくとも１つの検出可能な標識を含む。
【００４４】
別の実施形態において、上記の式（Ｉ）によるアミロイド結合性化合物の有効な量および製薬上許容される担体を含む医薬組成物が提供される。
【００４５】
さらに別の実施形態はインビボにおいてアミロイド沈着を検出する方法である。この方法は（ｉ）哺乳動物中のアミロイド沈着物と結合する、式（Ｉ）によるアミロイド結合性化合物の有効な量を哺乳動物に投与するステップ；および（ｉｉ）哺乳動物中のアミロイド沈着物への化合物の結合を検出するステップを含む。
【００４６】
さらに、単独でまたは本明細書において記述されるその他任意の実施形態との併用で、本発明は哺乳動物においてインビボでアミロイド沈着を検出するための、本明細書において定義した、式（Ｉ）による化合物の使用を包含する。関連する実施形態において、本発明はさらに、そのような被験体においてインビボでのアミロイド沈着の検出に用いられる医薬の調製における式（Ｉ）の化合物の使用を提供する。
【００４７】
さらに別の実施形態はインビトロにおいてアミロイド沈着を検出する方法である。この方法は（ｉ）組織中のアミロイド沈着物と結合する、式（Ｉ）によるアミロイド結合性化合物の有効な量と身体組織を接触させるステップ；および（ｉｉ）組織中のアミロイド沈着物への化合物の結合を検出するステップを含む。
【００４８】
単独でまたは本明細書において記述されるその他任意の実施形態との併用で、別の実施形態はインビトロにおいてアミロイド沈着を検出するための、本明細書において定義した、式（Ｉ）による化合物の使用である。別の実施形態において、本発明はインビトロでのアミロイド沈着の検出に用いられる医薬の調製における式（Ｉ）の化合物の使用を提供する。
【００４９】
さらなる実施形態はアルツハイマー病脳を正常な脳と識別する方法である。この方法は（ｉ）健常哺乳動物のおよびアルツハイマー病を有する疑いのある哺乳動物の、(i)小脳および(ii)同じ脳の別の領域から組織を得るステップ；
（ｉｉ）請求項１に記載のアミロイド結合性化合物と組織を接触させるステップ；
（ｉｉｉ）化合物と結合したアミロイドを定量するステップ；
（ｉｖ）小脳以外の脳領域中のアミロイドの量（ａ）の、小脳中のアミロイドの量（ｂ）に対する比を計算するステップ；ならびに
（ｖ）健常哺乳動物についての比を、アルツハイマー病を有する疑いのある哺乳動物についての比と比較するステップ
を含む。
【００５０】
別の実施形態において、単独でまたは本明細書において記述されるその他任意の実施形態との併用で、本発明はアルツハイマー病脳を正常な脳と識別するための、本明細書において定義した、式（Ｉ）による化合物の使用を提供する。別の実施形態は、アルツハイマー病脳を正常な脳と識別するのに用いられる医薬の調製における式（Ｉ）の化合物の使用である。
【００５１】
さらに別の実施形態は、生検または死後のヒトもしくは動物組織中のアミロイド沈着を検出する方法である。この方法は（ａ）ホルマリン固定または新鮮凍結された組織を式（Ｉ）のアミロイド結合性化合物または製薬上許容されるその塩の溶液とインキュベートして、標識された沈着を形成させるステップおよび（ｂ）標識された沈着を検出するステップを含む。
【００５２】
別の実施形態において、単独でまたは本明細書において記述されるその他任意の実施形態との併用で、本発明は生検または死後のヒトもしくは動物組織中のアミロイド沈着を検出するための、本明細書において定義した、式（Ｉ）による化合物の使用を提供する。別の実施形態は、生検または死後のヒトもしくは動物組織においてアミロイド沈着を検出するのに用いられる医薬の調製における式（Ｉ）の化合物の使用である。
【００５３】
さらに別の実施形態において、生検または死後組織中のアミロイドの量を定量する方法が提供される。この方法は以下のステップ：
ａ）化合物中の置換基の少なくとも１つが１２５Ｉ、３Ｈ、および少なくとも１つの炭素が１４Ｃである炭素含有置換基からなる群より選択される放射性標識で標識されている、式（Ｉ）のアミロイド結合性化合物または製薬上許容されるその塩の放射性標識誘導体を、生検または死後組織のホモジネートとインキュベートするステップ；
ｂ）組織に結合した式（Ｉ）の化合物の放射性標識誘導体を、組織に結合していないものから分離するステップ、
ｃ）組織に結合した式（Ｉ）の化合物の放射性標識誘導体を定量するステップ、ならびに
ｄ）組織に結合した式（Ｉ）の化合物の放射性標識誘導体の単位を標準物質との比較により、組織１００ｍｇあたりのアミロイドμｇの単位に変換するステップ
を含む。
【００５４】
別の実施形態において、単独でまたは本明細書において記述されるその他任意の実施形態との併用で、本発明は生検または死後組織中のアミロイドの量を定量するための、本明細書において定義した、式（Ｉ）による化合物の使用を提供する。別の実施形態は、生検または死後組織中のアミロイドの量を定量するのに用いられる医薬の調製における式（Ｉ）の化合物の使用である。
【００５５】
別の実施形態において、式（Ｉ）のアミロイド結合性化合物または製薬上許容されるその塩を神経原線維変化ではなくアミロイド斑に、この両者を含有する脳組織において、選択的に結合させる方法が提供される。この方法はインビトロ結合または染色アッセイにおいてアミロイド斑を約１０ｎＭ未満の濃度の式（Ｉ）の化合物と接触させるステップを含む。
【００５６】
さらに別の実施形態において、単独でまたは本明細書において記述されるその他任意の実施形態との併用で、本発明は式（Ｉ）のアミロイド結合性化合物または製薬上許容されるその塩を神経原線維変化ではなくアミロイド斑に、この両者を含有する脳組織において、選択的に結合させるための、本明細書において定義した、式（Ｉ）による化合物の使用を提供する。別の実施形態は、式（Ｉ）のアミロイド結合性化合物または製薬上許容されるその塩を神経原線維変化ではなくアミロイド斑に、この両者を含有する脳組織において、選択的に結合させるのに用いられる医薬の調製における式（Ｉ）の化合物の使用である。
【００５７】
さらに別の実施形態において、式（Ｉ）のアミロイド結合性化合物または製薬上許容されるその塩を神経原線維変化ではなくアミロイド斑に、この両者を含有する脳組織において、インビボで選択的に結合させる方法が提供される。この方法は、投与された化合物の血中濃度がインビボにおいて約１０ｎＭ未満に維持されるように、式（Ｉ）の化合物または製薬上許容されるその塩の有効な量を投与するステップを含む。
【００５８】
さらに別の実施形態は、少なくとも１つのアミロイド生成性タンパク質を含む少なくとも１つのアミロイド沈着を被験体において検出するためのインビボまたはインビトロの方法である。この方法は以下のステップ：
（ａ）アミロイド症と関連する疾患に罹患している被験体に、少なくとも１つの式Ｉのアミロイド結合性化合物または製薬上許容されるその塩および製薬上許容される担体を含む医薬組成物の検出可能な量を投与するステップ、ならびに
（ｂ）少なくとも１つのアミロイド生成性タンパク質を含むアミロイド沈着への化合物の結合を検出するステップ
を含む。
【００５９】
さらに別の実施形態において、単独でまたは本明細書において記述されるその他任意の実施形態との併用で、本発明は少なくとも１つのアミロイド生成性タンパク質を含む少なくとも１つのアミロイド沈着の被験体におけるインビトロまたはインビボでの検出のための、本明細書において定義した、式（Ｉ）による化合物の使用を提供する。別の実施形態は、少なくとも１つのアミロイド生成性タンパク質を含む少なくとも１つのアミロイド沈着の被験体におけるインビトロまたはインビボでの検出のための医薬の調製における式（Ｉ）の化合物の使用である。
【００６０】
さらに別の実施形態において、以下のステップ：
（Ａ）式（Ｉ）のアミロイド結合性化合物または製薬上許容されるその塩を、臨床的認知症の兆候または軽度の認知障害の臨床的兆候を呈している患者に投与するステップ；その後
（Ｂ）データを得るために該患者を造影するステップ；および
（Ｃ）規範となるレベルを基準にして該患者におけるアミロイドレベルを確認するために該データを分析し、それによって該患者をアミロイド沈着と関連する疾患の前駆症状と特定するステップ
を含む、患者をアミロイド沈着と関連する疾患の前駆症状と特定する方法が提供される。
【００６１】
さらに別の実施形態において、単独でまたは本明細書において記述されるその他任意の実施形態との併用で、本発明は患者をアミロイド沈着と関連する疾患の前駆症状と特定するための、本明細書において定義した、式（Ｉ）による化合物の使用を提供する。別の実施形態は、患者をアミロイド沈着と関連する疾患の前駆症状と特定するための医薬の調製における式（Ｉ）の化合物の使用である。
【００６２】
別の実施形態において、アミロイド症の処置での治療の有効性を判定する方法が提供される。この方法は
（Ａ）式（Ｉ）のアミロイド結合性化合物または製薬上許容されるその塩の有効な量を、その必要性がある患者に投与するステップ；
（Ｂ）該患者を造影するステップ；その後
（Ｃ）少なくとも１つの抗アミロイド剤を、その必要性がある該患者に投与するステップ；
（Ｄ）式（Ｉ）の化合物の有効な量を、その必要性がある該患者にその後投与するステップ；
（Ｅ）該患者を造影するステップ；および
（Ｆ）該少なくとも１つの抗アミロイド剤による処置前の該患者でのアミロイド沈着のレベルを、該少なくとも１つの抗アミロイド剤による処置後の該患者でのアミロイド沈着のレベルと比較するステップ
を含む。
【００６３】
さらに別の実施形態において、単独でまたは本明細書において記述されるその他任意の実施形態との併用で、本発明はアミロイド症の処置での治療の有効性を判定するための、本明細書において定義した、式（Ｉ）による化合物の使用を提供する。別の実施形態は、アミロイド症の処置での治療の有効性を判定するための医薬の調製における式（Ｉ）の化合物の使用である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００６４】
本発明は同位体で標識されたベンゾフラン誘導体の、インビボにおいて血液脳関門を横断し、アミロイド生成性タンパク質に結合する能力を利用する。
【００６５】
そのような結合の1例はベンゾフラン化合物の、老人斑（但し、びまん性老人斑でない）に沈着したＡβに、脳血管のアミロイドに沈着したＡβに、およびＮＦＴに沈着したタンパク質からなるアミロイドに結合する能力である。
【００６６】
Ａβ合成ペプチドに対する特異的結合の特徴付け：親和性、動態、最大結合
ベンゾフラン誘導体の結合の特徴を既報のように、リン酸緩衝生理食塩水（ｐＨ７．４）中の合成Ａβ（１−４０）および２−（４'−［３Ｈ］メチルアミノ−フェニル）−ベンゾチアゾール（［３Ｈ］ＢＴＡ−１）により分析した。Klunk et al., Life Sci. 69:1471 (2001); Mathis et al., Bioorg. Med. Chem. Lett., 12:295 (2002)。
【００６７】
Ａβ（１−４０）のアミノ酸配列は次のとおりである：
【表１】
0005557449.tif 000003
【００６８】
定義
「アルキル」とは、飽和直鎖または分枝鎖の炭化水素基をいう。例としては限定するものではないが、メチル、エチル、プロピル、イソ−プロピル、ブチル、イソ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ｎ−ペンチルおよびｎ−ヘキシルが挙げられる。
【００６９】
「アルケニル」とは、少なくとも１つの炭素間二重結合を含んだ、不飽和直鎖または分枝鎖の炭化水素基をいう。例としては限定するものではないが、エテニル、プロペニル、イソ−プロペニル、ブテニル、イソ−ブテニル、ｔｅｒｔ−ブテニル、ｎ−ペンテニルおよびｎ−ヘキセニルが挙げられる。
【００７０】
「アルキニル」とは、少なくとも１つの炭素間三重結合を含んだ、不飽和直鎖または分枝鎖の炭化水素基をいう。例としては限定するものではないが、エチニル、プロピニル、イソ−プロピニル、ブチニル、イソ−ブチニル、ｔｅｒｔ−ブチニル、ペンチニルおよびヘキシニルが挙げられる。
【００７１】
「アルコキシ」とは、酸素結合を通じて結合されたアルキル基をいう。
【００７２】
アルキル、アルケニル、アルキニルまたはアルコキシと組み合わせて使用される「低級」とは、Ｃ１〜Ｃ８部分をいう。
【００７３】
「ハロ」とは、フルオロ、クロロ、ブロモまたはヨード基をいう。
【００７４】
「放射性ハロ」とは、放射性ハロ、すなわち放射性フルオロ、放射性クロロ、放射性ブロモまたは放射性ヨードをいう。
【００７５】
「有効な量」とは、所望の効果をもたらすのに必要な量をいう。「有効な量」の例としてはインビボもしくはインビトロでのアミロイド沈着の検出および造影を可能にし、製薬学的用途に対して許容される毒性および生物学的利用能レベルをもたらす、ならびに／または細胞変性および線維形成に関連する毒性を阻止する量が挙げられる。
【００７６】
「製薬上許容される担体」とは、ある器官または身体部分から他の器官または身体部分に本化合物を運搬するのにまたは輸送するのに関与する、液体もしくは固体の充填剤、希釈剤、賦形剤、または溶媒封入材料のような、製薬上許容される材料、組成物または媒体をいう。各担体は、配合物の他の成分と相溶性であり、かつ患者で用いるのに適しているという意味で「許容」される。製薬上許容される担体として機能できる材料の例としては、限定するものではないが（１）ラクトース、グルコースおよびスクロースのような、糖類；（２）トウモロコシデンプンおよびジャガイモデンプンのような、デンプン；（３）カルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロースおよび酢酸セルロースのような、セルロースおよびその誘導体；（４）粉末トラガカント；（５）麦芽；（６）ゼラチン；（７）タルク；（８）ココアバターおよび坐薬ワックスのような、賦形剤；（９）落花生油、綿実油、紅花油、ゴマ油、オリーブ油、トウモロコシ油および大豆油のような、油；（１０）プロピレングリコールのような、グリコール；（１１）グリセリン、ソルビトール、マンニトールおよびポリエチレングリコールのような、ポリオール；（１２）オレイン酸エチルおよびラウリン酸エチルのような、エステル；（１３）寒天；（１４）水酸化マグネシウムおよび水酸化アルミニウムのような、緩衝剤；（１５）アルギン酸；（１６）発熱物質を含まない水；（１７）等張生理食塩水；（１８）リンゲル溶液；（１９）エチルアルコール；（２０）ｐＨ緩衝液；（２１）ポリエステル、ポリカーボネートおよび／またはポリ酸無水物；ならびに（２２）例えば、REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCES, 第15版(Mack Publishing Co., 1975)中、1405〜1412頁および1461〜1487頁に、ならびにTHE NATIONAL FORMULARY XIV, 第14版(American Pharmaceutical Association, 1975)に規定の製剤配合物に利用されている他の無毒な相溶性物質が挙げられる。
【００７７】
「製薬上許容される塩」とは本発明の化合物の酸または塩基塩であって、所望の薬理学的活性を保有しかつ生物学的にもその他の点でも望ましくないことのないその塩をいう。塩は酸とともに形成することができ、これには限定するものではないが酢酸塩、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、重硫酸塩、酪酸塩、クエン酸塩、ショウノウ酸塩、ショウノウスルホン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ジグルコン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、フマル酸塩、グルコヘプタン酸塩、グリセロリン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、２−ヒドロキシエタンスルホン酸塩、乳酸塩、マレイン酸塩、メタンスルホン酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、シュウ酸塩、チオシアン酸塩、トシル酸塩およびウンデカン酸塩が含まれる。塩基塩の例としては限定するものではないが、アンモニウム塩、ナトリウム塩およびカリウム塩のようなアルカリ金属塩、カルシウム塩およびマグネシウム塩のようなアルカリ土類金属塩、ジシクロヘキシルアミン塩のような有機塩基との塩、Ｎ−メチル−Ｄ−グルカミン、ならびにアルギニンおよびリジンのようなアミノ酸との塩が挙げられる。いくつかの実施形態において、塩基性窒素含有基は、塩化、臭化およびヨウ化メチル、エチル、プロピルおよびブチルのような低級アルキルハライド；硫酸ジメチル、ジエチル、ジブチルおよびジアミルのような硫酸ジアルキル；塩化、臭化およびヨウ化デシル、ラウリル、ミリスチルおよびステアリルのような長鎖ハライド；ならびに臭化フェネチルのようなアラルキルハライドを含む作用物質で四級化することができる。
【００７８】
「プロドラッグ」とは、その薬理学的効果を示す前に、代謝のような、生体内変換を受ける本発明の化合物の誘導体をいう。プロドラッグは、化学的安定性の改善、患者の承諾および服薬順守の改善、生物学的利用能の改善、作用持続時間の延長、器官選択性の改善、配合の改善（例えば、水溶解性の増大）、および／または副作用（例えば、毒性）の低減を目的として配合される。プロドラッグは、BURGER'S MEDICINAL CHEMISTRY AND DRUG CHEMISTRY, 第5版, 第1巻(1995), 172〜178頁および949〜982頁に記述されているものなどの、従来法を用いて、本発明の化合物から容易に調製することができる。
【００７９】
本明細書において用いられる「非経口」という用語は、皮下、静脈内、動脈内、筋肉内、腹腔内、髄腔内、脳室内、胸骨内、頭蓋内、および骨内の注射および注入技術を含む。
【００８０】
「動物」とは、感覚および随意運動能力を有し、かつその生存に酸素および有機食物を必要とする生物をいう。例としては限定するものではないが、ヒト、ウマ、ブタ、ウシ、マウス、イヌおよびネコの種が挙げられる。ヒトの場合、「動物」は「患者」ということもできる。
【００８１】
「哺乳動物」とは、温血脊椎動物をいう。
【００８２】
「被験体」とは、例えば、ヒトのような、哺乳動物である。具体例は、認知症を有する疑いのあるヒトである。
【００８３】
「処置する」とは、以下をいう：
（ｉ）疾患、障害および／もしくは病気の素因を持ちうるが、それに罹患しているとはまだ診断されていない動物において疾患、障害もしくは病気が発生するのを予防すること；
（ｉｉ）疾患、障害もしくは病気を阻害すること、すなわち、その進行を止めること；ならびに／または
（ｉｉｉ）疾患、障害もしくは病気を軽減すること、すなわち、疾患、障害および／もしくは病気の退行を引き起こすこと。
【００８４】
「治療」という用語は、疾患の処置および／または予防を含む。
【００８５】
「処置する」または「処置」という用語は、必ずしも完全な治癒を意味しない。疾患の任意の望ましくない徴候もしくは病理学的影響を多少なりとも軽減させること、または疾患の進行を減速させることは処置とみなすことができる。さらに、処置は患者の全体的な幸福感または外観を悪化させうる行為を含んでもよい。例えば、がん患者において患者の感覚を「いっそう加減の悪い」ままにしうる化学療法の施行もやはり処置とみなすことができる。
【００８６】
「予防する」という用語は、生物が、アミロイド沈着と関連する疾患にかかるまたは該疾患を発現する可能性を減らすことをいう。例えば、「予防する」という用語は、抗アミロイド剤の投与を受けていない対照群と比べて疾患を発現する個体の割合を低減することをいう。
【００８７】
「検出可能な量」とは、投与される検出可能な化合物の量が、アミロイドへの化合物の結合の検出を可能とするのに十分であることを意味する。
【００８８】
「造影に有効な量」とは、投与される検出可能な化合物の量が、アミロイドへの化合物の結合の造影を可能とするのに十分であることを意味する。
【００８９】
「インビボ造影」という用語は、本明細書に記述の標識ベンゾフラン化合物の検出を可能にする任意の方法をいう。
【００９０】
「インビボまたはインビトロの検出方法」という用語は、式（Ｉ）の標識チオフラビン誘導体の検出を可能にする任意の方法をいう。
【００９１】
「ベースライン」という用語は、抗アミロイド療法の開始前の患者のアミロイド沈着の量および分布をいう。
【００９２】
文脈上明らかに他の記述がない限り、単数用語の定義は、それらが本出願に見られる場合、その複数用語に適用するように当てはめることができ；同様に、複数用語の定義は、それらが本出願に見られる場合、その単数用語に適用するように当てはめることができる。
【００９３】
アミロイド造影剤
本発明のアミロイド造影剤は、式（Ｉ）の任意の化合物または製薬上許容されるその塩である：
【化２】
0005557449.tif 000004
【００９４】
式中Ｒ'、Ｒ３〜Ｒ１０、およびＹは上記に定義の通りである。
【００９５】
本明細書において「ベンゾフラン化合物」、「ベンゾフラン誘導体」、または「アミロイド造影剤」ともいわれる式（Ｉ）の化合物は、以下の：（１）インビトロにおける合成Ａβへの特異的結合、（２）インビボにおける損なわれていない血液脳関門を横断する能力、（３）ＡＬ、ＡＨ、ＡＴＴＲ、Ａβ２Ｍ、ＡＡ、ＡＡｐｏＡＩ、ＡＡｐｏＡＩＩ、ＡＧｅｌ、ＡＬｙｓ、ＡＦｉｂ、ＡＣｙｓ、ＡＢｒｉ、ＡＤａｎ、ＡＰｒＰ、ＡＣａｌ、ＡｌＡＰＰ、ＡＡＮＦ、ＡＰｒｏ、ＡＩｎｓ、ＡＭｅｄ、ＡＫｅｒ、Ａ（ｔｂｎ）、およびＡＬａｃからなる群より選択される少なくとも１つのアミロイド生成性タンパク質を含むアミロイド沈着物を特異的に結合する、（４）老人斑（但し、びまん性老人斑でない）に沈着したＡβに、脳血管のアミロイドに沈着したＡβに、およびＮＦＴに沈着したタンパク質からなるアミロイドに結合する、ならびに（５）適切な投与量レベルで無毒性でもありかつ満足な作用持続時間を有する、という特徴の各々を有する。
【００９６】
１つの実施形態において、任意により本明細書に記述のその他任意の実施形態と組み合わせて、ＹはＨ、ＮＯ２、−ＮＲ''３＋、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、または−（ＣＲ''２）ｎ−Ｘとすることができる。
【００９７】
１つの実施形態において、Ｒ３〜Ｒ１０はＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、−Ｎ（Ｒ１１）２、およびＯＲ１１からなる群より独立して選択することができる。これまたは本明細書に記述のその他任意の実施形態と組み合わせて、Ｒ８およびＲ９は独立してＯＲ１１とすることができる。
【００９８】
別の実施形態において、任意により本明細書に記述のその他の実施形態と組み合わせて、Ｒ７およびＲ１０の各々はＨとすることができる。別の実施形態において、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、およびＲ６の各々はＨとすることができる。
【００９９】
本発明のその他の実施形態において、ＹはＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、または−ＮＯ２とすることができる。Ｙの具体例はＦである。
【０１００】
別の実施形態において、式（Ｉ）のアミロイド結合性化合物は、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、およびＲ１０の各々がＨであること、かつＲ８およびＲ９が独立してＯＲ１１であることを規定する。
【０１０１】
別の実施形態では、Ｙが少なくとも１つの検出可能な標識を含むことを規定する。
【０１０２】
式（Ｉ）の実例となる化合物は、以下を含むがそれに限定されるものではない：
【表２】
0005557449.tif 000005
【０１０３】
0005557449.tif 000006
【０１０４】
使用方法
本発明の化合物は動物の、脳を含む、器官または身体領域における１以上のアミロイド沈着の存在、位置および／または量を判定するために使用することができる。アミロイド沈着は、限定するものではないが、Ａβの沈着を含む。アミロイド沈着の時系列の追跡を可能にするうえで、本発明の化合物はさらに、疾患、障害または病気と関連する臨床症状の発症とアミロイド沈着を関連付けるのに使用することができる。本発明の化合物は最終的には、ＡＤ、家族性ＡＤ、ダウン症、アミロイド症、ＩＩ型糖尿病、軽度認識障害およびアポリポタンパク質Ｅ４対立遺伝子のホモ接合体のような、アミロイド沈着によって特徴付けられる疾患、障害または病気を診断するのに使用することができる。本発明の化合物は同様に、抗アミロイド療法を評価するための代理マーカーとして使用することができる。
【０１０５】
造影法
本発明の１つの方法では、患者の、脳のような、器官または身体領域におけるアミロイド沈着の存在および位置を判定する。この方法は「検出可能な化合物」と呼ばれる本発明のアミロイド結合性化合物、または製薬上許容されるその水溶性塩を含有する医薬組成物の検出可能な量の、患者への投与を含む。「検出可能な量」とは、投与される検出可能な化合物の量が、アミロイドへの化合物の結合の検出を可能とするのに十分であることを意味する。「造影に有効な量」とは、投与される検出可能な化合物の量が、アミロイドへの化合物の結合の造影を可能とするのに十分であることを意味する。
【０１０６】
本発明は、磁気共鳴分光法（ＭＲＳ）もしくは磁気共鳴映像法（ＭＲＩ）のような非侵襲性神経造影法、または陽電子放出断層撮影法（ＰＥＴ）もしくは単一光子放出型コンピュータ断層撮影法（ＳＰＥＣＴ）のようなγ線造影法とともに、インビボでアミロイド沈着を定量するのに使用されるアミロイド造影剤を利用する。この方法では、アミロイド沈着のベースラインを確立するために患者を造影することが必要になる。γ線造影法の場合、検査対象の器官または領域から放出される放射線を測定し、全結合量として、またはある組織での全結合量を同一のインビボ造影手順の間の同一被験体の別の組織での全結合量で規準化した（例えば、割った）比のいずれかとして表す。インビボにおける全結合量は、同じ量の標識化合物を大過剰の未標識の、しかしそれ以外には化学的に同一の化合物とともに２回目の注射をすることでの補正の必要のない、インビボ造影法により組織中にて検出される全シグナルと定義される。この方法はさらに、抗アミロイド療法の施行後の患者の少なくとも１回の造影時間を含むことができる。この方法は同様に、少なくとも１つの抗アミロイド剤による処置前および後の患者の造影を含むことができる。造影は処置の間の任意の時点で行うことができる。
【０１０７】
インビボ造影のためには、利用可能な検出機器のタイプは、所与の標識を選択するうえで重要な要因である。例えば、放射性同位体および１９Ｆを本発明の方法におけるインビボ造影に使用することができる。使用される機器のタイプは、放射性核種または安定同位体の選択の指針となる。例えば、選択される放射性核種は、所与のタイプの機器により検出可能な崩壊型を持っていなければならない。別の検討材料は放射性核種の半減期に関する。半減期は、標的による最大取込みの時点でも検出可能であるように十分に長く、しかし宿主が有害な放射線を被らないように十分短くあるべきである。本発明の放射性標識化合物は、適切な波長の放出γ線照射が検出されるγ線造影法を用いて検出することができる。γ線造影法はＳＰＥＣＴおよびＰＥＴを含むが、これらに限定されるものではない。ＳＰＥＣＴ検出の場合などの、１つの実施形態において、選択される放射性標識は微粒子の放出を欠くが、１４０〜２００ｋｅＶの範囲で多数の光子を発生するであろう。ＰＥＴ検出の場合、放射性標識は、崩壊して、ＰＥＴカメラにより検出できる２つの５１１ｋｅＶのγ線を形成しうる１９Ｆなどの陽電子放出放射性核種であろう。
【０１０８】
本発明では、アミロイド沈着のインビボ造影および定量に有用なアミロイド結合性化合物／造影剤が作出される。これらの化合物は磁気共鳴分光法（ＭＲＳ）または磁気共鳴映像法（ＭＲＩ）のような非侵襲性神経造影法、陽電子放出断層撮影法（ＰＥＴ）、および単一光子放出型コンピュータ断層撮影法（ＳＰＥＣＴ）とともに使用することができる。本発明によれば、ベンゾフラン化合物を当技術分野において公知の一般的な有機化学技術によってＭＲＳ／ＭＲＩのために１９Ｆまたは１３Ｃで標識することができる。例えば、ADVANCED ORGANIC CHEMISTRY: REACTION, MECHANISMS, AND STRUCTURE, 第3版(1985)を参照されたい。ベンゾフラン化合物を同様に、当技術分野において周知の技術によってＰＥＴのために１８Ｆ、１１Ｃ、７５Ｂｒ、または７６Ｂｒで放射性標識することができ、これはFowler, J. and Wolf, A.によりPOSITRON EMISSION TOMOGRAPHY AND AUTORADIOGRAPHY 391-450 (Raven Press, 1986)のなかで記述されている。ベンゾフラン化合物を同様に、当技術分野において公知のいくつかの技術のいずれかによってＳＰＥＣＴのために１２３Ｉで放射性標識することができる。例えば、Kulkarni, Int. J. Rad. Appl. & Inst. (Part B) 18: 647 (1991)を参照されたい。さらに、ベンゾフラン化合物を、ヨウ化ジアゾニウムを介したジアゾ化アミノ誘導体の直接的ヨウ化により(Greenbaum, F. Am. J. Pharm. 108: 17 (1936)参照)、または安定なトリアゼンへの不安定なジアゾ化アミンの変換により、または当技術分野において周知のいくつかの方法によってヨウ化化合物に変換できる安定なトリアルキルスズ誘導体への非放射性ハロゲン化前駆体の変換により、以下に限定されないが１３１Ｉ、１２５Ｉ、または１２３Ｉのような、任意の適当な放射性ヨウ素同位体で標識することができる。Satyamurthy and Barrio, J. Org. Chem. 48: 4394 (1983), Goodman et al, J. Org. Chem. 49: 2322 (1984), およびMathis et al., J. Labell. Comp. and Radiopharm. 1994: 905; Chumpradit et al., J. Med. Chem. 34: 877 (1991); Zhuang et al., J. Med. Chem. 37: 1406 (1994); Chumpradit et al., J. Med. Chem. 37: 4245 (1994)を参照されたい。例えば、ベンゾフランの安定なトリアゼンまたはトリアルキルスズ誘導体を１３１Ｉ、１２５Ｉ、１２３Ｉ、７６Ｂｒ、７５Ｂｒ、１８Ｆまたは１９Ｆ含有のハロゲン化剤と反応させる。すなわち、ベンゾフランの安定なトリアルキルスズ誘導体は、本発明の範囲内の放射性標識化合物の多くの合成に有用な新規の前駆体である。したがって、これらのトリアルキルスズ誘導体は、本発明の１つの実施形態と企図される。
【０１０９】
ベンゾフラン化合物を同様に、例えば、テクネチウム−９９ｍ（９９ｍＴｃ）のような、公知の金属放射性標識で放射性標識することができる。このような金属イオンを結合するリガンドを導入するように置換基を修飾することは、放射性標識分野の当業者が過度の実験を行わなくても達成することができる。次いで、金属放射性標識ベンゾフランを使用して、アミロイド沈着を検出することができる。Ｔｃ９９ｍの放射性標識誘導体の調製は当技術分野において周知である。例えば、Zhuang et al., 「Neutral and stereospecific Tc-99m complexes: [99mTc]N-benzyl-3,4-di-(N-2-mercaptoethyl)-amino-pyrrolidines (P-BAT)」Nuclear Medicine & Biology 26(2):217-24, (1999); Oya et al.,「Small and neutral Tc(v)O BAT, bisaminoethanethiol (N2S2) complexes for developing new brain imaging agents」Nuclear Medicine & Biology 25(2):135-40, (1998); およびHom et al.,「Technetium-99m-labeled receptor-specific small-molecule radiopharmaceuticals: recent developments and encouraging results」 Nuclear Medicine & Biology 24(6) :485-98, (1997)を参照されたい。
【０１１０】
本発明の方法は、インビボ造影法および分光法の目的で核磁気共鳴分光法によって検出可能な同位体を使用することができる。磁気共鳴分光法において有用な元素は１９Ｆおよび１３Ｃを含むが、これらに限定されるものではない。
【０１１１】
本発明の目的に適した放射性同位体はβ線放射体、γ線放射体、陽電子放射体、およびＸ線放射体とすることができる。これらの放射性同位体は１３１Ｉ、１２３Ｉ、１８Ｆ、１１Ｃ、７５Ｂｒ、および７６Ｂｒを含む。本発明により、磁気共鳴映像法（ＭＲＩ）または磁気共鳴分光法（ＭＲＳ）で用いるのに適した安定な同位体は、１９Ｆおよび１３Ｃを含む。生検または死後組織のホモジネート中のアミロイドのインビトロでの定量に適した放射性同位体は、１２５Ｉ、１４Ｃ、および３Ｈを含む。例示的な放射性標識は、インビボ造影法におけるＰＥＴでの使用には１１Ｃまたは１８Ｆであり、ＳＰＥＣＴ造影法での使用には１２３Ｉであり、ＭＲＳ／ＭＲＩには１９Ｆであり、およびインビトロでの研究には３Ｈまたは１４Ｃである。しかしながら、診断用造影剤を視覚化するための任意の従来法を本発明によって利用することができる。
【０１１２】
生検または死後組織中のアミロイド沈着を検出する方法に関する本発明の１つの実施形態によれば、該方法では、本発明のベンゾフランアミロイド結合性化合物の溶液とのホルマリン固定組織のインキュベートが必要になる。１つの実施形態において、この溶液は、本発明によるベンゾフランアミロイド結合性化合物で飽和した２５〜１００％エタノールである（残りは水である）。インキュベーションによって、該化合物が組織中のアミロイド沈着を染色または標識し、染色または標識された沈着を任意の標準的な方法により検出または視覚化することができる。このような検出手段は、明視野顕微鏡検査、蛍光顕微鏡検査、レーザー共焦点顕微鏡検査および交差偏光顕微鏡検査のような顕微鏡技術を含む。
【０１１３】
生検または死後組織中のアミロイドの量を定量する方法では、生検または死後組織のホモジネートとの、本発明による標識ベンゾフラン誘導体、またはその水溶性無毒塩のインキュベートが必要になる。当技術分野において周知の方法により、組織を得て、ホモジネートする。１つの実施形態において、標識は放射性標識であるが、酵素、化学発光化合物および免疫蛍光化合物のような他の標識が当業者に周知である。例示的な放射性標識は、本明細書に記述されている本発明の式の化合物の１つに置換された置換基に含有される１２５Ｉ、１４Ｃおよび３Ｈを含むが、これらに限定されるものではない。アミロイド沈着を含有する組織は、本発明のベンゾフランアミロイド結合性化合物の標識誘導体に結合するであろう。結合した組織をその後、ろ過のような、当業者に公知の任意の機序によって未結合の組織から分離する。結合した組織を次に、当業者に公知の任意の手段によって定量することができる。組織に結合した放射性標識ベンゾフラン誘導体の単位を次いで、既知量のアミロイドを放射性標識ベンゾフラン誘導体とインキュベートすることで得られる標準曲線との比較により、組織１００ｍｇあたりのアミロイドμｇの単位に変換することができる。
【０１１４】
アルツハイマー病脳を正常な脳と識別する方法は、健常な被験体由来のおよびアルツハイマー病を有する疑いのある被験体由来の、（ａ）小脳および（ｂ）同じ脳の、小脳以外の別の領域から組織を得るステップを含む。このような組織を当業者に周知の方法により個別のホモジネートにし、次いで式（Ｉ）の放射性標識ベンゾフランアミロイド結合性化合物とインキュベートする。次いで、放射性標識ベンゾフランアミロイド結合性化合物に結合する組織の量を各組織型（例えば、小脳、小脳以外、正常、異常）について計算し、小脳組織に対する小脳以外の組織の結合比を健常者由来の組織についておよびアルツハイマー病を有する疑いのある患者由来の組織について計算する。次いで、これらの比を比較する。アルツハイマー病を有する疑いのある脳由来の比が、正常な脳から得られる比の９０％を超えるなら、アルツハイマー病の診断が下される。正常な比は先に得たデータから得られてもよく、あるいは、疑いのある脳組織の研究と同時に再計算されてもよい。
【０１１５】
アミロイド斑よりも神経原線維変化に特異的に結合する本発明の化合物の能力は、ＰＥＴ放射性追跡子のインビボ濃度範囲を含んだ、１０ｎＭ未満の濃度で特に明白である。濃縮体だけを含有し、斑を含有しないこれらの低濃度では、斑も濃縮体も含有しない対照の脳組織と比べた場合、有意な結合は生じない。しかしながら、本明細書に記述されている式の放射性標識化合物との、主に斑と若干の濃縮体とを含有する脳組織のホモジネートのインキュベーションにより、斑も濃縮体も含まない対照組織と比べた場合、結合の有意な増大が生じる。このデータから、これらの化合物の利点の１つが１０ｎＭ未満の濃度でのＡβ沈着に対するその特異性であることが示唆される。これらの低濃度はＰＥＴ検査で検出可能であり、Ａβ沈着に特異的な、本明細書に記述されている式の放射性標識化合物を用いたＰＥＴ検出を可能にする。このような化合物の使用により、斑および脳血管アミロイドに見出されるものなどの、Ａβ沈着でのＰＥＴ検出が可能になる。前頭皮質におけるＡβレベルは濃縮体形成の前に増大することが報告されているので、このことから、ＰＥＴ放射性追跡子として使われる、本発明の放射性標識化合物がＡＤ皮質での最も初期の変化に特異的であることが示唆されよう。Naslund et al., JAMA 283: 1571 (2000)。
【０１１６】
インビボにおいてアミロイド沈着を検出する方法および用途
上記のように、本発明はさらに、１つの実施形態において、以下のステップ：
（ｉ）動物中のアミロイド沈着物と結合する、式（Ｉ）による化合物の有効な量を動物に投与するステップ；および
（ｉｉ）動物中のアミロイド沈着物への化合物の結合を検出するステップ
を含む、インビボにおいてアミロイド沈着を検出する方法を提供する。
【０１１７】
化合物がアミロイド沈着物と結合するのに十分な時間が経過した後に、例えば、投与から３０分〜４８時間後に、その結合を当技術分野において公知の任意の手段により検出することができる。検出手段の例としては、限定するものではないが、アッセイ（免疫定量アッセイ、熱量測定アッセイ、濃度測定アッセイ、分光学的アッセイおよびクロマトグラフィーアッセイなど）、非侵襲性神経造影法（磁気共鳴分光法（ＭＲＳ）、磁気共鳴映像法（ＭＲＩ）など）、ならびに単一光子放出型コンピュータ断層撮影法（ＳＰＥＣＴ）および陽電子放出断層撮影法（ＰＥＴ）のようなγ線造影法が挙げられる。γ線造影法の場合、検査対象の器官または領域から放出される放射線を測定し、全結合量として、またはある組織での全結合量を同一のインビボ造影手順の間の同一被験体の別の組織での全結合量で規準化した（例えば、割った）比のいずれかとして表す。インビボにおける全結合量は、同じ量の標識化合物を大過剰の未標識の、しかしそれ以外には化学的に同一の化合物とともに２回目の注射をすることでの補正の必要のない、インビボ造影法により組織中にて検出される全シグナルと定義される。
【０１１８】
利用可能な検出機器のタイプは、放射性ハロまたは炭素同位体を選択するうえで１つの要因となりうる。例えば、選択される放射性同位体は、所与の機器により検出可能な崩壊型を持っているべきである。別の検討材料は放射性同位体の半減期に関する。半減期は、標的による最大取込みの時点でも放射性同位体を検出可能であるように十分に長く、しかし宿主が有害な放射線を被らないように十分短くあるべきである。ＳＰＥＣＴ検出の場合、選択される放射性同位体は微粒子の放出を欠きうるが、１４０〜２００ｋｅＶの範囲で多数の光子を発生しうる。ＰＥＴ検出の場合、選択される放射性同位体は、崩壊して、ＰＥＴカメラにより検出可能な２つの５１１ｋｅＶのγ線を形成する陽電子放出放射性同位体とすることができる。
【０１１９】
有用な放射性同位体としては、限定するものではないが、生検または死後組織のホモジネート中のアミロイドのインビトロでの定量では１２５Ｉ、１４Ｃ、および３Ｈ；インビボ造影法におけるＰＥＴでは１１Ｃおよび１８Ｆ；ＳＰＥＣＴ造影法では１２３Ｉ；ＭＲＳ／ＭＲＩでは１８Ｆ；インビトロでの研究では３Ｈまたは１４Ｃ；ならびに磁気共鳴分光法では１８Ｆおよび１３Ｃが挙げられる。１つの実施形態において、検出はγ線造影法、磁気共鳴映像法または磁気共鳴分光法により行われる。別の実施形態において、γ線造影法はＰＥＴまたはＳＰＥＣＴである。
【０１２０】
インビトロにおいてアミロイド沈着を検出する方法および用途
本発明はさらに、以下のステップ：
（ｉ）組織中のアミロイド沈着物と結合する、式（Ｉ）による化合物の有効な量と身体組織を接触させるステップ；および
（ｉｉ）組織中のアミロイド沈着物への化合物の結合を検出するステップ
を含む、インビトロにおいてアミロイド沈着を検出する方法を提供する。
【０１２１】
結合は当技術分野において公知の任意の手段によって検出することができる。検出手段の例としては、限定するものではないが、明視野顕微鏡検査、蛍光顕微鏡検査、レーザー共焦点顕微鏡検査および交差偏光顕微鏡検査のような、顕微鏡技術が挙げられる。
【０１２２】
１つの実施形態において、組織は、ホルマリン固定または新鮮凍結された生検または死後組織である。別の実施形態において、組織はホモジナイズされる。さらに別の実施形態において、本発明の化合物は、２５〜９９％のエタノールをさらに含む溶液中にあり、溶液の残りの部分は水である。さらに別の実施形態において、溶液は０〜５０％のエタノールおよび０．０００１〜１００μＭの化合物を含む。さらに別の実施形態において、この方法はさらに（ｉｉｉ）化合物に結合されたアミロイド沈着物を組織から分離するステップ；および（ｉｖ）本発明の化合物に結合されたアミロイド沈着物を定量するステップを含む。結合されたアミロイド沈着物は、ろ過のような、当技術分野において公知の任意の手段により組織から分離することができる。結合されたアミロイド沈着物の量は、既知量のアミロイドを本発明の化合物または薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物もしくはプロドラッグとインキュベートすることで得られる標準曲線との比較により、組織１００ｍｇあたりのアミロイド沈着物μｇの単位に変換することができる。
【０１２３】
アルツハイマー病脳を正常な脳と識別する方法および用途
本発明はさらに、以下のステップ：
（ｉ）健常動物のおよびアルツハイマー病を有する疑いのある動物の、（ａ）小脳および（ｂ）同じ脳の別の領域から組織を得るステップ；
（ｉｉ）式（Ｉ）による化合物と組織を接触させるステップ；
（ｉｉｉ）化合物と結合したアミロイドを定量するステップ；
（ｉｖ）小脳以外の脳領域中のアミロイドの量の、小脳中のアミロイドの量に対する比を計算するステップ；
（ｖ）健常動物についての比を、アルツハイマー病を有する疑いのある動物についての比と比較するステップ
を含む、アルツハイマー病脳を正常な脳と識別する方法を提供する。
【０１２４】
アルツハイマー病を有する疑いのある動物についての比が、例えば、健常動物についての比の９０％を超えるなら、アルツハイマー病の診断を下すことができる。この方法の場合、「健常」動物とは、アルツハイマー病に罹患していないものである。
【０１２５】
投与および医薬組成物
本発明によれば、式（Ｉ）のアミロイド造影剤を含む医薬組成物を、アミロイドまたはアミロイド原線維形成が予想される被験体、例えば、アルツハイマー病またはアミロイド沈着と関連する別の疾患と臨床的に診断された患者に投与することができる。
【０１２６】
被験体への投与は、局所的でも全身的でもよく、例えば、静脈内、動脈内、髄腔内（脊髄液を介して）などに行われてもよい。投与は同様に、検査される身体部位に応じて、皮内または腔内であってもよい。化合物がアミロイドと結合するのに十分な時間、例えば、３０分間〜４８時間が経過した後に、調査される被験体の領域を日常の造影技術、例えばＭＲＳ／ＭＲＩ、ＳＰＥＣＴ、平面シンチレーション造影法、ＰＥＴ、および同様に、任意の新しい造影技術によって検査する。正確なプロトコルは、上記のように、患者に特異的な要因に応じて、ならびに検査される身体部位、投与方法、および使用される標識のタイプに応じて必然的に異なるはずであり、特有の手順の決定は当業者には日常的であろう。１例として、脳の造影の場合、本発明の、結合された放射性標識ベンゾフラン化合物または類似体の量（全体的または特異的な結合）を測定し、患者の小脳に結合された標識ベンゾフラン化合物の量と（比として）比較する。この比を次いで、同年齢の正常脳でのその同じ比と比較する。別の例として、器官の造影の場合、本発明の、結合された放射性標識チオフラビン誘導体または類似体の量（全体的または特異的な結合）を測定し、患者の器官に結合された標識チオフラビン誘導体の量と（比として）比較する。この比を次いで、同年齢の正常器官でのその同じ比と比較する。
【０１２７】
本発明のアミロイド造影剤は、上記のように、注射用組成物の形態で投与されうるが、周知の薬物送達系（例えば、経口、直腸、非経口（静脈内、筋肉内、もしくは皮下）、嚢内、膣内、腹腔内、局所（散剤、軟膏剤もしくは滴剤）、または口腔もしくは鼻内スプレーとして）に配合されてもよい。このような目的のための典型的な組成物は、製薬上許容される担体を含む。例えば、組成物は、ＮａＣｌ含有のリン酸緩衝液１ｍｌあたり約１０ｍｇのヒト血清アルブミンおよび約０．５〜５００μｇの標識ベンゾフラン化合物を含有することができる。その他の製薬上許容される担体は、例えば、REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCES, 第15版 Easton: Mack Publishing Co. pp. 1405〜1412および1461〜1487 (1975)ならびにTHE NATIONAL FORMULARY XIV., 第14版 Washington: American Pharmaceutical Association (1975)に記述されているように、塩、保存剤、緩衝液などを含めて、水溶液、無毒性の賦形剤を含む。
【０１２８】
非水性溶媒の例はプロピレングリコール、ポリエチレングリコール、植物油およびオレイン酸エチルのような注射用有機エステルである。水性担体は水、アルコール性／水溶液、生理食塩水、非経口媒体、例えば塩化ナトリウム、リンゲルデキストロースなどを含む。静脈内媒体は流体および栄養補充液を含む。保存剤は抗菌剤、抗酸化剤、キレート剤および不活性ガスを含む。医薬組成物中の各種成分のｐＨおよび正確な濃度は、当業者によって調整される。Goodman and Gilman's THE PHARMACOLOGICAL BASIS FOR THERAPEUTICS (第7版)を参照されたい。
【０１２９】
ＰＥＴ走査プロトコルは、放射性医薬品の注射から１５〜６０分後に完了する標準的な全身走査（頭部から骨盤までを網羅する）または特定の身体部位（例えば、心臓、肺、肝臓、腎臓）に対する走査を含むことができる。この走査プロトコルは、［Ｆ−１８］２−フルオロ−２−デオキシグルコース（ＦＤＧ）を用いて行われる全身のまたは集中的な身体部位のＰＥＴ腫瘍走査に類似している。すなわち、アミロイドに特異的な放射性医薬品を静脈内に注射し、放射性追跡子の全身分布、関心対象の器官における放射性追跡子の取込み、ならびに血液およびアミロイドが存在しない他の器官からのクリアランスのための時間を割り当て、２０〜４０分の走査を全身に対しまたは特定の身体部位に対し行って、アミロイドに結合した放射性追跡子を撮像する。さらに、撮像走査を使って、走査された組織の生検サンプリングを引き続き行うことができる。
【０１３０】
一般に、検出可能に標識された式（Ｉ）によるベンゾフラン化合物の投与量は、患者の年齢、状態、性別、および疾患の程度、禁忌、もしあれば、併用療法ならびにその他の不確定要素のような、検討事項に応じて異なり、当技術分野に精通している医師によって調整される。本発明の化合物およそ約０．００１μｇ／ｋｇ／日〜約１０，０００ｍｇ／ｋｇ／日の用量レベルが本発明の方法に有用である。１つの実施形態において、用量レベルは約０．００１μｇ／ｋｇ／日〜約１０μｇ／ｋｇ／日である。別の実施形態において、用量レベルは約０．０１μｇ／ｋｇ／日〜約１．０μｇ／ｋｇ／日である。さらに別の実施形態において、用量レベルは約０．１ｍｇ／ｋｇ／日〜約１００ｍｇ／ｋｇ／日である。
【０１３１】
任意の特定の患者に対する具体的な用量レベルは、利用される特異的化合物の活性および考えられる毒性；患者の年齢、体重、全体的健康状態、性別および食事；投与の時間；排泄速度；薬物の組合せ；ならびに投与の形態を含め、種々の要因に応じて異なるであろう。典型的には、インビトロでの量的効果の結果から、患者への投与に適した用量に関する有用な指針が得られる。動物モデルでの研究も役に立つ。適切な用量レベルの判定に関する検討は、当技術分野において周知であり、通常の医師の技量の範囲内である。
【０１３２】
薬物送達のタイミングおよび順序を調節するためのいずれか公知の投薬計画を使用し、必要に応じ繰り返して、本発明の方法における処置を行うことができる。この計画は、さらなる治療剤による前処置および／またはその同時投与を含むことができる。
【０１３３】
１つの実施形態において、式（Ｉ）による化合物は、アミロイド沈着によって特徴付けられる疾患、障害もしくは病気を有する疑いのある動物、またはそれらを発症する危険性がある動物に投与される。例えば、動物は高齢のヒトとすることができる。
【０１３４】
別の実施形態において、本発明の化合物は、合成ＡβペプチドまたはＡＤ脳組織への結合により測定した場合、約０．０００１μＭ〜約１０．０μＭの解離定数（ＫＤ）でＡβに結合する。
【０１３５】
本発明はさらに、以下：
（ｉ）少なくとも１つの本発明の化合物の有効な量；および
（ｉｉ）製薬上許容される担体
を含む医薬組成物を提供する。
【０１３６】
この組成物は、限定するものではないが、１以上の湿潤剤、緩衝剤、懸濁化剤、滑沢剤、乳化剤、崩壊剤、吸収剤、保存剤、界面活性剤、着色剤、香味剤、甘味剤および治療剤を含めて、１以上のさらなる製薬上許容される成分を含むことができる。
【０１３７】
この組成物は（１）例えば、水薬（水性もしくは非水性溶液もしくは懸濁液）、錠剤（例えば、口内、舌下もしくは全身吸収を対象）、巨丸剤、散剤、顆粒剤、舌へ適用するためのペースト剤、硬質ゼラチンカプセル剤、軟質ゼラチンカプセル剤、口腔用スプレー剤、乳剤および微細乳剤としての経口投与；（２）例えば、無菌の溶液、懸濁液もしくは徐放性配合物としての皮下、筋肉内、静脈内もしくは硬膜外注射による非経口投与；（３）例えば、クリーム、軟膏、制御放出パッチもしくは皮膚に適用されるスプレーとしての局所適用；（４）例えば、ペッサリー、クリームもしくはフォームとしての膣内もしくは直腸内投与；（５）舌下投与；（６）眼球投与；（７）経皮投与；または（８）鼻内投与を目的とする固体、液体、ゲルまたは懸濁液の形態に製剤化することができる。
【０１３８】
１つの実施形態において、この組成物は静脈内投与向けに製剤化することができ、担体は流体および／または栄養補充液を含む。別の実施形態において、この組成物はインビボでアミロイドに特異的に結合することができ、血液脳関門を横断することができ、適切な用量レベルで無毒であり、および／または十分な作用持続時間を有する。さらに別の実施形態において、この組成物はＮａＣｌ含有のリン酸緩衝液１ｍｌあたり約１０ｍｇのヒト血清アルブミンおよび約０．５〜５００ｍｇの本発明の化合物を含む。
【０１３９】
さらに、本発明のベンゾフラン化合物は、アミロイド症の処置での治療の有効性を判定する方法において使用することができる。この方法は、代用マーカーとしてアミロイド造影の使用を伴う。代用マーカーは、薬物承認の目的で臨床的エンドポイントとして臨床的測定の代わりに使用できる特別なタイプのバイオマーカーである。例えば、コレステロールレベルの測定値は現在、一般に認められた、アテローム性動脈硬化症の代用マーカーである。本発明は抗アミロイド療法の有効性の代用マーカーとしてアミロイド造影の使用を伴う。
【０１４０】
本発明の方法は抗アミロイド療法の成功を評価する手段を提供する。いくつかの実施形態において、本発明の方法は抗アミロイド療法の臨床的成功を評価する手段を提供する。いくつかの実施形態において、この方法は、引き続く臨床症状がほとんどまたは全くない、軽度に障害のある被験体での臨床的成功を評価するために使用することができる。アミロイド症の処置での治療の有効性を判定する基本的方法は、以下のステップ：
（Ａ）上記のように式（Ｉ）の化合物または製薬上許容される塩の有効な量を、その必要性がある患者に投与するステップ；
（Ｂ）該患者を造影するステップ；その後
（Ｃ）少なくとも１つの抗アミロイド剤を、その必要性がある該患者に投与するステップ；
（Ｄ）式（Ｉ）の化合物の有効な量を、その必要性がある該患者にその後投与するステップ；
（Ｅ）該患者を造影するステップ；および
（Ｆ）少なくとも１つの抗アミロイド剤による処置前の該患者でのアミロイド沈着のレベルを、少なくとも１つの抗アミロイド剤による処置後の該患者でのアミロイド沈着のレベルと比較するステップ
を含む。
【０１４１】
検出可能な標識は、当業者に公知の造影法を用いて検出できる任意の原子または部分を含む。典型的には、検出可能な標識は３Ｈ、１３１Ｉ、１２５Ｉ、１２３Ｉ、７６Ｂｒ、７５Ｂｒ、１８Ｆ、ＣＨ２−ＣＨ２−Ｘ＊、Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｘ＊、ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｘ＊、Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｘ＊（ここで、Ｘ＊＝１３１Ｉ、１２３Ｉ、７６Ｂｒ、７５Ｂｒまたは１８Ｆ）、１９Ｆ、ならびに１２５Ｉ、ならびに低級アルキル、（ＣＨ２）ｎＯＲ'、ＣＦ３、ＣＨ２−ＣＨ２Ｘ、Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２Ｘ、ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２Ｘ、Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２Ｘ（ここで、Ｘ＝Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩ）、ＣＮ、（Ｃ＝Ｏ）−Ｒ'、（Ｃ＝Ｏ）Ｎ（Ｒ'）２、Ｏ（ＣＯ）Ｒ'、ＣＯＯＲ'、ＣＲ'＝ＣＲ'−ＲｐｈおよびＣＲ２'−ＣＲ２'−Ｒｐｈからなる群より選択される炭素含有置換基（ここで、少なくとも１つの炭素が１１Ｃ、１３Ｃまたは１４Ｃである）ならびにＷ−Ｌ＊もしくはＶ−Ｗ−Ｌ＊の形態のキレート基（キレート化金属基を有する）（ここで、Ｖは−ＣＯＯ−、−ＣＯ−、−ＣＨ２Ｏ−および−ＣＨ２ＮＨ−からなる群より選択され；Ｗは−（ＣＨ２）ｎであり、ここでｎ＝０、１、２、３、４または５であり；Ｌ＊は：
【化３】
0005557449.tif 000007
【０１４２】
であり、式中、Ｍ＊は９９ｍＴｃである）からなる群より選択される。１つの実施形態において、検出可能な標識は放射性標識である。
【０１４３】
抗アミロイド療法および用途
本発明の別の実施形態はアミロイド症の処置での治療の有効性を、その必要性がある患者において判定する方法である。この方法は、式（Ｉ）の化合物を投与するステップ、その後、患者を造影するステップを含む。造影の後、少なくとも１つの抗アミロイド剤／抗アミロイド療法が患者に施行される。投与される量、投与経路、および治療期間は、患者の年齢、体重、および状態に基づいて当業者により判定される。このような判定は当業者の範囲内である。適当な量は０．０１〜１００ｍｇ／ｋｇを含むが、これらに限定されるものではない。適当な投与経路は、経口、皮下および静脈内を含むが、これらに限定されるものではない。適当な治療期間は、無期限に投与される１日あたり１回の用量から４回の用量を含むが、これらに限定されるものではない。適当な造影までの時間は、最初の投与直後から直近の投与後１０年を含むが、これらに限定されるものではない。例示的な造影までの時間は、直近の投与後７日〜６ヶ月のものを含むが、これらに限定されるものではない。
【０１４４】
「抗アミロイド剤」または「抗アミロイド療法」は、アミロイド症を処置または予防する任意の薬剤または薬剤の組合せである。アミロイド沈着と関連する疾患であるアミロイド症の例には、アルツハイマー病、ダウン症、２型糖尿病、遺伝性脳出血アミロイド症（オランダ人）、アミロイドＡ（反応性）、続発性アミロイド症、ＭＣＩ、家族性地中海熱、蕁麻疹および聴覚障害を伴う家族性アミロイド腎症（マックルウェルズ症候群）、アミロイドλＬ鎖またはアミロイドκＬ鎖（特発性、骨髄腫もしくはマクログロブリン血症に関連）Ａβ２Ｍ（慢性血液透析）、ＡＴＴＲ（家族性アミロイド多発性神経障害（ポルトガル人、日本人、スウェーデン人））、家族性アミロイド心筋障害（デンマーク人）、孤立性心臓アミロイド、全身性老人性アミロイド症、ＡＩＡＰＰもしくはアミリンインスリノーマ、心房性ナトリウム利尿因子（孤立性心房性アミロイド）、プロカルシトニン（甲状腺の髄様癌）、ゲルゾリン（家族性アミロイド症（フィンランド人））、シスタチンＣ（アミロイド症を伴う遺伝性脳出血（アイスランド人））、ＡＡｐｏ−Ａ−１（家族性アミロイド性多発性神経障害−アイオワ）、ＡＡｐｏ−Ａ−ＩＩ（マウスでの老衰促進）、フィブリノーゲン関連アミロイド；およびＡｓｏｒもしくはＰｒＰ−２７（スクレイピー、クロイツフェルト・ヤコブ病、ゲルストマン・シュトロイスラー・シャインカー症候群、ウシ海綿状脳症）またはアポリポタンパク質Ｅ４対立遺伝子のホモ接合体であるヒトの場合、およびアポリポタンパク質Ｅ４対立遺伝子のホモ接合性に関連する状態あるいはハンチントン病が含まれる。本発明はアミロイド斑沈着と関連する疾患を企図する。１つの実施形態において、アミロイド沈着と関連する疾患はＡＤである。
【０１４５】
式（Ｉ）による本発明のベンゾフランは、抗アミロイド療法に対する有効性の代用マーカーとしての役割を果たすアミロイド造影に使用することができる。アミロイド沈着のベースラインを確立するためのアミロイド造影剤の投与とその後の、抗アミロイド剤による患者の処置前および後の患者の造影により、抗アミロイド療法の有効性の判定が可能になる。この方法を用いて、任意の抗アミロイド処置の有効性を判定することができる。任意の抗アミロイド療法の前および後に、アミロイド造影剤を投与することができ、患者を造影することができるためである。この方法は、アミロイド沈着と関連する疾患を処置するのに無効である抗アミロイド療法、およびアミロイド沈着と関連する疾患を処置するのに有効な抗アミロイド療法を判定することを企図する。当業者は適切なプロトコルにより、抗アミロイド療法の条件および投薬を判定することができる。したがって、本発明は、現在公知の抗アミロイド療法、および未発見の療法の有効性を判定することを企図する。例示的な、限定するものではない抗アミロイド療法を以下に記述する。
【０１４６】
いくつかの実施形態において、アミロイド症の処置でのアセチルコリンエステラーゼ阻害剤の有効性を本発明の方法により判定することができる。アセチルコリンエステラーゼ療法は、前脳基底核におけるニューロンのグループの中でも実質的に低下することが同定されたＡＤにおける変性パターンの研究に基づいている。これらの細胞は全て伝達物質のアセチルコリンを使用し、その喪失は、皮質の前末端でアセチルコリンがあまり放出されていないことを意味する。タクリン、ドネペジル、リバスチグミンおよびガランタミンのような、いくつかの薬物がこれらの発見に基づいて開発されており、酵素のアセチルコリンエステラーゼを阻害することにより働くことが仮定されている（Ingram, V., American Scientist, 2003, 91(4):312-321）。
【０１４７】
他の実施形態において、アミロイド症の処置におけるアミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）の有害な断片の形成に関与する酵素を標的にした抗アミロイド療法の有効性を、記述の手順にしたがって本発明の化合物により判定する。いくつかの実施形態において、アミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）の有害な断片は、誤って折り畳まれたＡβペプチドである。例えば、Ａβ１−４２断片の過剰生成はＡＤの根本的原因であると考える科学者もいる。Ａβ１−４２断片はβ−セクレターゼ酵素（ＢＡＣＥ１）（アミノ末端を生成する）およびγ−セクレターゼ酵素（ＡＰＰのカルボキシル末端を切断する）によるＡＰＰの切断により形成される。これらのセクレターゼ酵素の阻害剤を抗アミロイド療法として使用することができる（Ingram, V., American Scientist, 2003, 91(4):312-321）。
【０１４８】
いくつかの実施形態において、アミロイド症の処置における免疫療法戦略の有効性を本発明の方法により判定することができる。アミロイド斑の特定とこれを破壊するために患者の免疫系を使用することによる免疫療法の研究、および多くの免疫療法戦略は、科学者らによって積極的に探求されている。免疫療法戦略は受動的でも能動的でもよい。例えば、能動的免疫療法では、患者はＡβペプチドの注射または鼻内スプレーの適用を受け、抗アミロイド免疫反応をもたらすことができる。その一方、受動的免疫療法は、βアミロイドタンパク質を避けて、その代わりにβアミロイドに反応して既に産生された抗血清を使うことを伴いうる。Ａβペプチドに対する抗体を伴う免疫療法は、ＡＤを処置するために研究されている。例えば、ＡＮ−１７９２はＱＳ−２１アジュバントとともに、予め凝集した合成アミロイドβ（Ａβ；１〜４２残基長）の調製物である（Hock, C. et al., 2003, Neuron, 38:547-554）。副作用によって臨床試験が一時中止になる前に、およそ３００人のＡＤ患者がこの調製物で処置されている（Birmingham, K. and Frantz, S., 2002, Nature Medicine, 8:199-200）。
【０１４９】
他の実施形態において、アミロイド症の処置における神経保護戦略の有効性を本発明の方法により判定する。例えば、多くの臨床医は、患者が高用量（１０００〜２０００ＩＵ／日）のビタミンＥを服用することを推奨している。アミロイド症の処置のために提案されている他のタイプの神経保護戦略は、高用量のビタミンＣ、カルシウムチャネル調節因子、フリーラジカル捕捉剤、および金属イオンキレート剤である（Selkoe, et al., Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol., 2003, 43:545-84）。
【０１５０】
いくつかの実施形態において、アミロイド症の処置における抗炎症薬（ＮＳＡＩＤｓ）戦略の有効性を本発明の方法により判定する。ＮＳＡＩＤｓを伴う処置は、Ａβペプチドの進行性の蓄積により皮質における細胞の炎症反応が誘発されるという証拠に基づくものである。例示的な抗炎症薬はプレドニソン、非特異的シクロオキシゲナーゼ阻害剤、およびシクロオキシゲナーゼ−２阻害剤である（Clark, M., et al., Annals of Internal Medicine, 2003, 138(5):400-410; およびHardy, John, Annu. Rev. Med., 2004, 55:15-25）。
【０１５１】
いくつかの実施形態において、本発明の方法は、３−ヒドロキシ−３−メチルグルタリルコエンザイムＡ還元酵素阻害剤（スタチン）を含むが、これに限定されない、コレステロール低下療法の有効性を判定することができる。コレステロール低下薬（スタチンなど）を伴う処置は、スタチンで処置した患者はＡＤの発生率が低くなり、スタチンはＡβの代謝を変えてＡβレベルを低下させることができるという疫学的証拠に基づくものである（Wolozin, B (2002) Cholesterol and Alzheimer's disease. Biochemical Society Transactions. 30:525-529）。例示的な、コレステロールを下げるスタチン薬は、ロバスタチン、プラバスタチン、ロスバスタチン、フルバスタチン、アトルバスタチンおよびシンバスタチンを含む。他のコレステロール低下薬は、ナイアシン、コレスチラミン、フェノフィブラート、コレセベラムおよびエゼチミブを含む。
【０１５２】
他の実施形態において、アミロイド症の処置における凝集したＡβ１−４２の神経毒性を取り除く小分子の有効性を、本発明の方法により判定する。このような薬物は、例えば、疾患進行の初期に投与される場合、永久的な損傷が神経に与えられる前に、徐々に蓄積するＡβペプチドを「解毒」しうる（Clark, M., et al., Annals of Internal Medicine, 2003, 138(5):400-410）。
【０１５３】
いくつかの実施形態において、アミロイド症の処置における「デコイペプチド」の有効性を本発明の方法により判定する。デコイペプチドは、凝集しているＡβ１−４２ペプチドに結合し、無毒性の構造をとらせる小分子である。例示的なデコイペプチドはタンパク質断片の広範なライブラリーから、標識されたＡβ１−４２と緊密な会合を形成するその能力によって選択される小ペプチド（５、６または９アミノ酸長）である。（Clark, M., et al., Annals of Internal Medicine, 2003, 138(5):400-410）。
【０１５４】
他の実施形態において、アミロイド症の処置におけるコレステロールの恒常性調節の有効性を、本発明の方法により判定する。コレステロール低下薬の長期使用は、最近では、ＡＤの発生率の低下と関連付けられている。同時に、高コレステロール食は動物においてＡβの病状を増大させることが示されており、コレステロール低下薬はＡＰＰトランスジェニックマウスにおいて病状を低減させることが示されている。ＡＤの処置におけるコレステロールの恒常性調節の効果を研究するために、臨床試験が進行中である（Hardy, John, Annu. Rev. Med., 2004, 55:15-25）。
【０１５５】
m266 (DeMattos, RB, Bales, KR, Cummins, DJ, Dodart, JC, Paul, SM, Holtzman, DM (2001) 「Peripheral anti-A beta antibody alters CNS and plasma A beta clearance and decreases brain A beta burden in a mouse model of Alzheimer's disease」 Proc. Natl. Acad. Sci. USA 98:8850-8855)と呼ばれるものなどのある種の抗体または抗体以外の分子(Matsuoka, Y, Saito, M, LaFrancois, J, Saito, M, Gaynor, K, Olm, V, Wang, L, Casey, E, Lu, Y, Shiratori, C, Lemere, C, Duff, K (2001) 「Novel therapeutic approach for the treatment of Alzheimer's disease by peripheral administration of agents with an affinity to beta-amyloid」 Journal of Neuroscience, 23:29-33)は、血中のＡβペプチドに結合し、それにより「末梢性シンク」を作り出し、Ａβの平衡を脳から血液に移行し、アミロイドが身体から一掃されうることにより、脳のアミロイドを低下させると考えられている。このような薬剤を本明細書では「末梢性シンク剤」という。
【０１５６】
抗アミロイド療法の有効性の評価
アミロイド症の処置における治療法の有効性を判定するために式（Ｉ）によるベンゾフランを利用する方法論は、式（Ｉ）の化合物を、その必要性がある患者に投与するステップおよび患者を造影するステップを含む。造影の後、少なくとも１つの抗アミロイド剤を患者に投与する。次いで、式（Ｉ）の化合物の有効な量を患者に投与し、患者を再び造影する。最後に、抗アミロイド剤による処置前の患者でのアミロイド沈着のベースラインレベルを、抗アミロイド剤による処置後の患者でのアミロイド沈着のレベルと比較する。このような比較は当業者の範囲内である。
【０１５７】
いくつかの実施形態において、抗アミロイド剤による処置前の患者でのアミロイド沈着のレベルは抗アミロイド剤による処置後の患者でのアミロイド沈着のレベルよりも高いであろう。このような結果は、抗アミロイド剤／抗アミロイド療法が、アミロイド沈着と関連する疾患の処置において有効であることを示すものである。
【０１５８】
例えば、ＡＮ−１７９２はＱＳ−２１アジュバントとともに、予め凝集した合成アミロイドβ（Ａβ；１〜４２残基長）の調製物である。副作用によって臨床試験が一時中止になる前に、およそ３００人のＡＤ患者がこの調製物で処置されている（Birmingham, K. and Frantz, S., 2002, Nature Medicine, 8:199-200）。この失敗にもかかわらず、２つの所見によりこの取組みに対する楽観論が生じている。第１に、ＡＮ−１７９２で処置されたＡＤ患者に関する未刊の剖検報告のみにおいて、（ｉ）ほとんどＡβ斑がない広範な新皮質領域；（ｉｉ）Ａβ斑がない皮質領域には、密度のある濃縮体、糸屑状構造物および免疫を受けていないＡＤに類似する脳アミロイド血管症（ＣＡＡ）が含まれていたものの、斑に関連した異栄養神経突起およびアストロサイトクラスターがなかったこと、（ｉｉｉ）斑がない領域によっては、Ａβの免疫反応性はミクログリアと関連していたこと、を含めて、いくつかの珍しい所見が認められた（Nicoll, J. et al., 2003, Nature Medicine 9:448-452）。第２に、３０名のＡＮ−１７９２処置患者の小集団において、組織アミロイド斑免疫反応性（ＴＡＰＩＲ）アッセイにより測定された、Ａβに対する抗体を産生した患者は、このような抗体のない患者と比較して、ミニメンタルステート検査、認知症の能力障害評価、およびウェクスラー記憶検査からの視覚性対連合テストの想起の遅延により指摘されるように、認知機能および日常生活動作の著しく遅い速度での低下を示した（Hock, C. et al., 2003, Neuron, 38:547-554）。
【０１５９】
別の実施形態において、本発明は、ＡＤの臨床診断基準を満たさない患者の脳内のアミロイド沈着を造影する方法において式（Ｉ）による化合物を患者に投与することを企図する。これらは、患者のアミロイド造影のデータによって、ある種のアミロイド沈着がＡＤまたは別のアミロイド沈着障害の前駆症状であることが明らかにされた、例えば、病因に疑問のある認知性障害を呈している患者などの、認知症の臨床的兆候を呈している患者または軽度の認知障害を有する患者を含むが、これらに限定されるものではない。
【０１６０】
本発明の別の実施形態は、患者をアミロイド沈着疾患の標準的な臨床診断の前駆症状と特定する方法である。この方法は、患者から定量的および定性的データを得るためのアミロイド造影剤の使用を含む。本発明による、定量的および定性的アミロイド造影は、アミロイド沈着疾患の迅速かつより正確な診断を可能にするはずであり、抗アミロイド療法の発達を補助するはずである。この方法論の対象となる患者は、臨床的認知症の兆候を呈している患者または軽度の認知障害の臨床的兆候を呈している患者とすることができる。
【０１６１】
慣例に合わせて、当業者は臨床的認知症の兆候の異なる判定基準を適用することができる。このような基準はDiagnostic and Statistical Manual of Mental Disorders, 第3版(DSM-III) Alzheimer's disease Diagnostic and Treatment Center (ADDTC)、International Statistical Classification of Diseases, 改訂第10版(ICD-10)、National Institute of Neurological Disorders and Stroke-Association Internationale pour la Recherche et l'Enseignment en Neurosciences (NINDS-AIREN)およびDiagnostic and Statistical Manual of Mental Disorders, 第4版(DSM-IV)を含むが、これらに限定されるものではない。Pohjasvaara et al., Stroke 31: 2952-57 (2000)を参照されたい。
【０１６２】
患者を軽度の認知障害と臨床的に特徴付けることは十分に当業者の範囲内である。このような状態を解明するための患者の検査は一連のメンタルテストの実施を含む。臨床診断の方法は広く概説されており、例えば、Petersen et al., Arch. Neurol. 56: 303-08 (1999)に論じられている。
【０１６３】
臨床検査だけに基づいて、ＭＣＩと特定された被験体は、ＡＤの診断に変わるか（１年あたり約１０〜１５％の割合）、ＭＣＩのままであるか、または「健常」との診断に戻る（１年あたり１０〜１５％）ことがある。Larrieu et al., Neurology 59: 1594-99 (1926)。このように、臨床診断に関連した予後はかなり不確かである。ＭＣＩと臨床的に診断された被験体において脳アミロイド沈着の存在または非存在を特定できれば、ＡＤへの転換に対する予後の正確さを大いに高める可能性がある。
【０１６４】
アミロイド沈着と関連する疾患の部類は、アルツハイマー病、ダウン症、２型糖尿病、遺伝性脳出血アミロイド症（オランダ人）、アミロイドＡ（反応性）、続発性アミロイド症、家族性地中海熱、蕁麻疹および聴覚障害を伴う家族性アミロイド腎症（マックルウェルズ症候群）、アミロイドλＬ鎖またはアミロイドκＬ鎖（特発性、骨髄腫もしくはマクログロブリン血症に関連）Ａβ２Ｍ（慢性血液透析）、ＡＴＴＲ（家族性アミロイド多発性神経障害（ポルトガル人、日本人、スウェーデン人））、家族性アミロイド心筋障害（デンマーク人）、孤立性心臓アミロイド、全身性老人性アミロイド症、ＡＩＡＰＰもしくはアミリンインスリノーマ、心房性ナトリウム利尿因子（孤立性心房性アミロイド）、プロカルシトニン（甲状腺の髄様癌）、ゲルゾリン（家族性アミロイド症（フィンランド人））、シスタチンＣ（アミロイド症を伴う遺伝性脳出血（アイスランド人））、ＡＡｐｏ−Ａ−１（家族性アミロイド性多発性神経障害−アイオワ）、ＡＡｐｏ−Ａ−ＩＩ（マウスでの老衰促進）、フィブリノーゲン関連アミロイド；およびＡｓｏｒもしくはＰｒＰ−２７（スクレイピー、クロイツフェルト・ヤコブ病、ゲルストマン・シュトロイスラー・シャインカー症候群、ウシ海綿状脳症）またはアポリポタンパク質Ｅ４対立遺伝子のホモ接合体であるヒトの場合、およびアポリポタンパク質Ｅ４対立遺伝子のホモ接合性に関連する状態あるいはハンチントン病を含むが、これらに限定されるものではない。１つの実施形態において、アミロイド沈着と関連する疾患は、アミロイド斑沈着疾患である。アミロイド沈着と関連する具体的疾患はＡＤである。
【０１６５】
本発明によれば、患者をアミロイド沈着疾患の前駆症状と特定する基本的な方法論は、以下のステップ：
（Ａ）上記の式Ｉの化合物または製薬上許容されるその塩の有効な量をその必要性がある、臨床的認知症の兆候を呈している患者または軽度の認知障害の臨床的兆候を呈している患者に投与するステップ；
（Ｂ）データを得るために該患者を造影するステップ、および
（Ｃ）規範となる患者を基準にして該患者におけるアミロイドレベルを確認するために該データを分析するステップ
を伴う。
【０１６６】
１つの実施形態は病因に疑問のある認知性を呈している患者を診断する方法に関する。この方法は、アミロイド沈着の所見に基づいて、病因に疑問のある認知症が、ＡＤまたは別のアミロイド沈着障害である可能性が高いかどうかを判定するステップを含む。この方法は、式（Ｉ）の化合物を患者に投与するステップ、データを得るために患者を造影するステップ、およびアミロイド沈着の所見に基づいて、病因に疑問のある認知症がＡＤであるかどうかを判定するステップを含む。
【０１６７】
「病因に疑問のある認知性障害」という用語は、（認知性障害のヒトを診断している当業者によって一般に利用される神経学的、精神医学的、医学的および神経心理学的評価から構成されうる）臨床評価を受け、その臨床評価の後、評価者が（主観的記憶愁訴の証拠、正常な機能から逸脱しているヒトを知っている情報提供者による記憶愁訴の説明、または当業者によって一般的に使用される神経心理学検査および臨床検査においての性能不足に基づいて）若干の認知性障害が存在しうるという証拠を見出すが、単一の臨床的に明確な認知性障害（ＡＤ、前頭側頭認知症、レヴィー小体認知症、血管性認知症、大うつ病が原因の偽認知症、クロイツフェルト・ヤコブ病および当業者に公知の他のものなど）に関する十分な証拠を見出すことができないか、または２つ以上の単一の認知性障害の証拠をこれら２つ（またはそれ以上）の認知性障害の区別が疑わしい程度にしか見出せないヒトの状態をいう。
【０１６８】
本発明のこの実施形態では磁気共鳴分光法（ＭＲＳ）もしくは磁気共鳴映像法（ＭＲＩ）のような非侵襲性神経造影法、または陽電子放出断層撮影法（ＰＥＴ）もしくは単一光子放出型コンピュータ断層撮影法（ＳＰＥＣＴ）のようなγ線造影法とともに、インビボでアミロイド沈着を定量するのに使用されるアミロイド造影剤を利用する。これらの造影法により、多くの脳領域のデータが得られる。「関心領域またはＲＯＩ」を描写することにより、特定領域での定量が達成される。
【０１６９】
この実施形態によれば、上記の造影法の１つを用いて患者から得られたデータを、規範となる患者からのデータと比較し、アミロイド沈着疾患の標準的な臨床診断の前駆症状と患者を識別する基準に基づいて結論を得ることができる。
【０１７０】
同じプロトコルを用いて、以下：
病因に疑問のある認知性障害がアミロイド沈着疾患によって引き起こされていると規定するために；
アルツハイマー病を前頭側頭認知症と識別するために；
アルツハイマー病の発症を判定するよう患者をモニターするために；
軽度の認知障害と臨床的に診断された患者においてアルツハイマー病を診断するために；
患者をアルツハイマー病の前駆症状と特定するために；
病因に疑問のある認知性障害を呈している患者を、アミロイド沈着障害と関連する疾患を有すると特定するために、または
病因に疑問のある認知性障害を呈している患者を、アルツハイマー病を有すると特定するために
患者に適用された造影法から得られたデータを比較することができる。
【０１７１】
アミロイド造影のデータ分析
得られたデータは、Standardized Uptake Value（ＳＵＶ）によって、または小脳などの基準組織に対するＬｏｇａｎ分布容積比（ＤＶＲ）のような薬物動態モデリングパラメーターによって定量的に表すことができる。ＳＵＶまたはＤＶＲの典型的な対照値を上回り標準偏差が１を超える被験体は、検査で「陽性」であると見なされ、ＡＤのようなアミロイド沈着疾患の臨床診断の前駆症状であると見なされるであろう。具体的には、前頭、頭頂または後帯状皮質における４０〜６０分の平均ＳＵＶが１．０を超えるならば、被験体は「陽性」と見なすことができる。この値により初期のヒト研究においてＡＤ患者と対照が明確に区別される（Klunk, et al., 2004, Ann. Neurol., 55(3):306-19）。同様に、前頭、頭頂または後帯状皮質におけるＬｏｇａｎ ＤＶＲ値が１．５を超えているならば、被験体は「陽性」と見なすことができる。これらの脳領域および正確なカットオフ値は単なる例として示されており、さらなる実験により有用な追加の脳領域を開示してもよく、カットオフ値を精緻化してもよく、その他のモデリング技術（コンパートメントモデリング、グラフ分析、基準組織モデリングまたはスペクトル分析など）を適用して、カットオフ値を判定してもよい。さらに、ＳＵＶ、Ｌｏｇａｎ ＤＶＲ、またはアミロイドの定性的な量および分布が臨床診断されたアミロイド沈着疾患の前駆相と一致していることを、ＰＥＴスキャンを解釈する当業者が判定できる他のパラメータの領域脳分布を反映する画像から、スキャンデータを定性的に解釈することができる。
【０１７２】
本発明の別の実施形態において、以下のステップ：
（ａ）アミロイド症と関連する疾患に罹患している被験体に、少なくとも１つの上記式（Ｉ）の化合物および製薬上許容されるその塩を含む医薬組成物の検出可能な量を投与するステップ；ならびに
（ｂ）ＡＬ、ＡＨ、ＡＴＴＲ、Ａβ２Ｍ、ＡＡ、ＡＡｐｏＡＩ、ＡＡｐｏＡＩＩ、ＡＧｅｌ、ＡＬｙｓ、ＡＦｉｂ、ＡＣｙｓ、ＡＢｒｉ、ＡＤａｎ、ＡＰｒＰ、ＡＣａｌ、ＡｌＡＰＰ、ＡＡＮＦ、ＡＰｒｏ、ＡＩｎｓ、ＡＭｅｄ、ＡＫｅｒ、Ａ（ｔｂｎ）、およびＡＬａｃからなる群より選択される、少なくとも１つのアミロイド生成性タンパク質を含むアミロイド沈着物への化合物の結合を検出するステップ
を伴う方法論により、少なくとも１つのアミロイド沈着（すなわち、少なくとも１つのアミロイド生成性タンパク質で構成される沈着）を有する、または有する危険性がある被験体に関して、インビボまたはインビトロでの検出が行われる。
【０１７３】
原発性全身性アミロイド症（ＡＬ）では、アミロイド生成性タンパク質は、クローン性形質細胞によって産生される異常に一致したモノクローナル免疫グロブリン軽鎖（κまたはλ）でありうる。原線維が腎臓、心臓、肝臓、および他の器官／組織中に沈着する。
【０１７４】
少数の例では、免疫グロブリン鎖のアミロイド症原線維は、軽鎖配列ではなく重鎖配列だけを含有する。その状況では、疾患は「重鎖アミロイド症」（ＡＨ）と呼ばれる。
【０１７５】
トランスサイレチンアミロイド症では、前駆体タンパク質は正常または変異配列のＴＴＲであり、肝臓および脈絡叢で合成される輸送タンパク質である。ＴＴＲは、各々が１２７アミノ酸からなる４つの同一サブユニットの四量体である。正常配列のＴＴＲは高齢（＞７０歳）の個体の心室内にアミロイド沈着を形成し；この疾患は「老人性心アミロイド症」とも呼ばれる。ＴＴＲ心アミロイド症の有病率は年齢とともに漸増し、９０歳を超える集団の２５％以上が発症している。正常配列のＡＴＴＲは偶発的な剖検所見でありうるか、またはそれは臨床症状（例えば、心不全および不整脈）を引き起こすことがある。
【０１７６】
ＴＴＲにおける点突然変異は、ＴＴＲの、アミロイドを形成する傾向を高める。アミロイド生成性のＴＴＲ変異は、さまざまな浸透度で常染色体優性疾患として遺伝する。６０を超えるアミロイド生成性のＴＴＲ変異が知られている。最も多く見られるＴＴＲ変異はＴＴＲ Ｖａｌ３０Ｍｅｔ（ポルトガル、日本およびスウェーデンにおいてよく見られる）、ならびにＴＴＲ Ｖａｌ１２２Ｉｌｅ（アフリカ系アメリカ人の３．９％が保有する）である。アミロイド生成性のＴＴＲ変異は、末梢神経、心臓、胃腸管、および硝子体において主に沈着を引き起こす。
【０１７７】
β２−ミクログロブリンアミロイド症では、前駆体タンパク質は正常なβ２−ミクログロブリン（β２Ｍ）であり、これは主要組織適合複合体の軽鎖成分である。臨床の場では、Ａβ２Ｍは透析の患者および、稀に、透析を受けていない腎不全患者と関係している。
【０１７８】
β２Ｍは通常、腎臓で分解される。腎不全患者では、このタンパク質が血清中に蓄積する。従来の透析膜ではβ２Ｍが除去されず；したがって、血清レベルは、血液透析の患者において基準範囲値の３０〜６０倍にまで達することがある。典型的な病変器官には手根靭帯や、場合により、滑膜（関節症および骨嚢胞を引き起こす）ならびに心臓、胃腸管、肝臓、肺、前立腺、副腎、および舌が含まれる。
【０１７９】
アミロイドＡ（ＡＡ）アミロイド症は、世界的に最も多く見られる全身性アミロイド症の形態である。これは感染性または非感染性の病因の慢性炎症性疾患の過程で起こる。ＡＡでは、腎臓、肝臓、および脾臓が主要な病変部位である。
【０１８０】
アポリポタンパク質ＡＩアミロイド症（ＡＡｐｏＡＩ）は、アポＡＩ遺伝子中の点突然変異によって引き起こされる常染色体優性のアミロイド症である。通常、このアミロイド症は顕著な腎アミロイドである。家系のなかには末梢神経障害または心疾患もある。アポＡＩ（正常配列の可能性が高い）も高齢者の大動脈に局在化したアミロイド斑中の原線維前駆体である。
【０１８１】
アポリポタンパク質ＡＩＩアミロイド症（ＡＡｐｏＡＩＩ）は、アポＡＩＩ遺伝子中の点突然変異によって引き起こされる常染色体優性のアミロイド症である。この障害で記述されている２つの家系では、それぞれ停止コドンの中に点突然変異を保有し、異常に長いタンパク質の産生を引き起こしている。
【０１８２】
ゲルゾリンアミロイド症（ＡＧｅＩ）における前駆体タンパク質は、アクチン調節タンパク質のゲルゾリンである。アミロイド原線維には、点突然変異を含有するゲルゾリン断片が含まれる。
【０１８３】
フィブリノーゲンアミロイド症（ＡＦｉｂ）は、フィブリノーゲンα鎖遺伝子中の点突然変異によって引き起こされる常染色体優性のアミロイド症である。
【０１８４】
リゾチームアミロイド症（ＡＬｙｓ）は、リゾチーム遺伝子中の点突然変異によって引き起こされる常染色体優性のアミロイド症である。
【０１８５】
シスタチンＣアミロイド症（ＡＣｙｓ）における前駆体タンパク質はシスタチンＣであり、これは、点突然変異を含有するシステインプロテアーゼ阻害因子である。この状態はＨＣＨＷＡ、アイスランド型と臨床的に呼ばれる。ＡＣｙｓは常染色体優性である。臨床所見には、１０歳代または２０歳代に始まる精神状態の変化および多発性脳梗塞が含まれる。この発病機序は、組織中に広く分布している変異シスタチンの１つであるが、原線維は脳血管中にしか生じず；したがって、局所的条件が原線維形成に関与していると考えられる。
【０１８６】
プリオンタンパク質アミロイド症（ＡＰｒＰ）における前駆体タンパク質はプリオンタンパク質であり、これは原形質膜糖タンパク質である。この病因は感染性（すなわち、クル）または遺伝性（すなわち、クロイツフェルト・ヤコブ病（ＣＪＤ）、ゲルストマン・シュトロイスラー・シャインカー（ＧＳＳ）症候群、致死性家族性不眠症（ＦＦＩ））のいずれかである。この感染単位はプリオンタンパク質であり、これは、宿主染色体遺伝子によってコードされる相同タンパク質の立体構造変化を誘導する。ＣＪＤ、ＧＳＳ、およびＦＦＩの患者は、プリオンタンパク質遺伝子中に常染色体優性のアミロイド生成性変異を保有し；したがって、アミロイド症は感染性の誘因のない場合でさえも生ずる。
【０１８７】
カルシトニンアミロイド（ＡＣａｌ）では、前駆体タンパク質は、甲状腺によって合成されるカルシウム調節ホルモンのカルシトニンである。甲状腺髄様癌を有する患者は、正常配列のプロカルシトニン（ＡＣａｌ）からなる、腫瘍中の限局性アミロイド沈着を発現しうる。推定される発病機序は、局所カルシトニン産生の増大であり、重合および原線維形成を引き起こすペプチドの十分に高い局所濃度をもたらす。
【０１８８】
膵島アミロイドポリペプチドアミロイド症（ＡＩＡＰＰ）では、前駆体タンパク質は、アミリンとしても公知の膵島アミロイドポリペプチド（ＩＡＰＰ）である。ＩＡＰＰは膵島β細胞によって分泌されるタンパク質であり、これは分泌顆粒中にインスリンとともに貯蔵されかつインスリンと合わせて放出される。通常、ＩＡＰＰは骨格筋においてインスリン活性を調節する。ＩＡＰＰアミロイドは、膵島細胞腫においておよび２型糖尿病を有する多くの患者の膵臓において見出される。
【０１８９】
心房性ナトリウム利尿因子アミロイド症は、心房によって合成される、前駆体タンパク質の心房性ナトリウム利尿因子（ＡＮＦ）、つまり塩および水の恒常性を制御するホルモンと関連している。アミロイド沈着は心房に局在している。この状態は高齢者に高度に蔓延している。心房性ナトリウム利尿因子アミロイド症（ＡＡＮＦ）は、おそらく持続的なＡＮＦ産生のため、長期のうっ血性心不全を有する患者において最も多く見られる。
【０１９０】
プロラクチンアミロイド（ＡＰｒｏ）では、プロラクチンまたはプロラクチン断片が下垂体アミロイドに見出される。この状態は高齢者に認められることが多く、プロラクチン産生下垂体腫瘍を有する患者でのアミロイド腫瘍でも報告されている。
【０１９１】
皮膚のアミロイドは一部の抗ケラチン抗体と反応して、限局型のアミロイド症を生み出す。しかしながら、原線維の正確な正体はケラチンアミロイドにおいて化学的に確認されていないが、それらはケラチンアミロイドタンパク質（ＡＫｅｒ）といわれる。
【０１９２】
大動脈中膜のアミロイドは６０歳を超えるほとんどのヒトで起こる。中膜のアミロイド（ＡＭｅｄ）は、乳腺上皮により発現される糖タンパク質のラクタドヘリンのタンパク質分解断片から生じる。
【０１９３】
家族性英国型認知症（ＦＢＤ）は、独特のアミロイド形成タンパク質ＡＢｒｉの沈着によって神経病理学的に特徴付けられる。それは異常型の前駆体タンパク質ＢＲＩの断片である。
【０１９４】
家族性デンマーク型認知症（ＦＤＤ）では、ＢＲＩ遺伝子の３'領域中のコドン２６５と２６６との間の十量体重複が、正常ＢＲＩ遺伝子から産生される野生型ペプチドよりも１１残基長い、ＡＤａｎと名付けられたアミロイドペプチドをもたらす。ＡＤａｎ沈着はＦＤＤ症例のＣＮＳに広く分布していることが見出されている。ＡＤａｎの沈着物は主に非線維状凝集物である。
【０１９５】
ＡＢｒｉおよびＡＤａｎペプチドは、ＢＲＩ前駆体タンパク質と呼ばれる、いっそう大きな、膜に固定された前駆体タンパク質から生じる断片であり、第１３染色体のＢＲＩ遺伝子によってコードされる。
【０１９６】
ピンドボルグ腫瘍は、大量のアミロイドの産生および石灰化した層状体の存在によって特徴付けられる。この症候群と関連するアミロイドタンパク質は、まだ名付けられていないが、一般にＡ（ｔｂｎ）といわれている。
【０１９７】
アミロイド原線維は、インスリンのような、いくつかの天然ポリペプチドから血清アミロイドＰ（ＳＡＰ）成分およびヘパリン硫酸プロテオグリカンの非存在下で形成されうる。これはアミロイドタンパク質ＡＩｎｓをもたらし、その前駆体はインスリンである。
【０１９８】
別のタンパク質ラクトフェリンは、家族性角膜上皮下アミロイド症における主要な原線維タンパク質として報告されている。構造的異常または血清中の異常に増大した濃度がアミロイドタンパク質ＡＬａｃをもたらすと推定される。
【０１９９】
アミロイド生成性タンパク質は、本発明のチオフラビン化合物により検出される。チオフラビン化合物は、免疫グロブリン軽鎖、免疫グロブリン重鎖、トランスサイレチン、β２−ミクログロブリン、（アポ）血清ＡＡ、アポリポタンパク質ＡＩ、アポリポタンパク質ＡＩＩ、ゲルゾリン、リゾチーム、フィブリノーゲンα鎖、シスタチンＣ、ＡＢｒｉＰＰ、ＡＤａｎＰＰ、プリオンタンパク質、（プロ）カルシトニン、膵島アミロイドポリペプチド、心房性ナトリウム利尿因子、プロラクチン、インスリン、ラクタドヘリン、ケラト−エピセリン、ピンドボルグ腫瘍に関連した前駆体タンパク質（ｔｂｎ）およびラクトフェリンからなる群より選択される少なくとも１つのタンパク質前駆体から生じる少なくとも１つのアミロイド生成性タンパク質を標的とする。罹患組織の異なる症候群または疾患を引き起こすのが、これらのタンパク質標的である。Buxbaum, Curr. Opin Rheumatol 16: 67-75 (2003)を参照されたい。同様に、Merlini and Westermark, J Intern Med 255: 159-178 (2004)を参照されたい。
【０２００】
本発明を説明するために、以下の実施例を示す。しかしながら、本発明はこれらの実施例に記述されている特定の条件または詳細に限定されないと理解されるべきである。
【実施例】
【０２０１】
合成実施例
実施例１ ５−メトキシ−２−（４'−フルオロフェニル）ベンゾフランの調製
【化４】
0005557449.tif 000008
【０２０２】
スキーム：ａ．４−フルオロベンジルブロマイド、Ｋ２ＣＯ３、ＣＨ３ＣＮ、４時間還流；ｂ．Ｐ４−ｔ−Ｂｕ、トルエン、１２時間還流；ｃ．ＢＢｒ３、ＣＨＣｌ３、室温、３時間。
【０２０３】
２−ベンジルオキシ−５−メトキシベンズアルデヒド（Ｉ）：
２−ヒドロキシ−５−メトキシベンズアルデヒド（０．１５２ｇ，１．０ｍｍｏｌ）の乾燥ＭｅＣＮ（５０ｍＬ）溶液に、４−フルオロベンジルブロマイド（０．１４５ｍｇ，１．０ｍｍｏｌ）、および無水Ｋ２ＣＯ３（０．２７ｇ，２．０ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を４時間撹拌しながら還流し、次に真空で蒸発させた。水（１００ｍＬ）を加え、混合物をＥｔＯＡｃで抽出した。分離された有機層をＭｇＳＯ４で乾燥し、次に真空で蒸発させた。最後に、残留物をｎ−ヘキサン／ＥｔＯＡｃ（４：１）によりシリカゲルカラムから溶出させて、白色の化合物Ｉ（０．２１ｇ，８８％）を得た。
【０２０４】
1H NMR (300 MHz, アセトン-d6): δ 10.56(s,1H, CHO), 7.35-7.48 (m, 2H), 7.12-7.19 (m, 5H), 5.20(s, 2H, OCH2), 3.90(s, 3H, OCH3)。
【０２０５】
５−メトキシ−２−（４'−フルオロフェニル）ベンゾフラン（ＩＩ）：
化合物Ｉ（５０ｍｇ，０．２ｍｍｏｌ）の乾燥トルエン（５ｍＬ）溶液に、ヘキサン中のホスファゼン塩基（Ｐ４−ｔ−Ｂｕ）溶液（０．２ｍＬ，１．０Ｍ）を加え、終夜還流した。ＣＨＣｌ２（５０ｍＬ）を加え、溶液を水で洗浄した。分離された有機層をＭｇＳＯ４で乾燥し、次に真空で蒸発させた。最後に、残留物をヘキサン／ＥｔＯＡｃ（４：１）でシリカゲルＴＣＬにより分離して、白色の化合物ＩＩ（３９ｇ，８５％）を得た。
【０２０６】
1H NMR (300 MHz, アセトン-d6): δ 7.92-7.98(m, 2H), 7.46(d, J=8.4Hz, 1H), 7.21-7.28(m, 3H), 7.15 (d, J=2.7Hz, 1H), 6.90 (dd, J=3Hz, 1H), 3.90(s, 3H, OCH3)。
【０２０７】
５−ヒドロキシ−１−（４'−フルオロフェニル）ベンゾフラン（ＩＩＩ）：
化合物ＩＩ（２４ｍｇ，０．１ｍｍｏｌ）の二塩化メチレン（５ｍＬ）溶液をＢＢｒ３の二塩化メチレン１．０Ｍ溶液２ｍＬに加え、３時間室温で撹拌した。溶媒を蒸発により除去し、粗生成物をヘキサン／ＥｔＯＡｃ（３：１）によりシリカゲルＴＬＣで精製して、白色の化合物ＩＩＩ（２１ｍｇ，８９％）を得た。
【０２０８】
1H NMR (300 MHz, アセトン-d6): δ 8.15(s, 1H), 7.92-7.95(m, 2H), 7.37(d, J=8.7Hz, 1H), 7.26(t, J1=J2=8.9Hz, 2H), 7.14(s, 1H), 7.02 (d, J=2.4Hz, 1H), 6.85 (dd, J=2.4Hz, 1H)。
【０２０９】
実施例２ ５−メトキシ−２−（４'−ニトロフェニル）ベンゾフランの調製
【化５】
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【０２１０】
スキーム：ａ．４−ニトロベンジルブロマイド、Ｋ２ＣＯ３、ＣＨ３ＣＮ、４時間還流；ｂ．Ｐ４−ｔ−Ｂｕ、トルエン、１２時間還流。
【０２１１】
３−メトキシ−２−（４'−ニトロベンジルオキシ）ベンズアルデヒド（ＩＶ）：
化合物ＩＶを収率９１％で化合物Ｉの調製と同じ手順で４−ニトロベンジル（4-nitrophenzyl）クロライドから合成した。
【０２１２】
1H NMR (300 MHz, アセトン-d6): δ 8.36(d, J =9.0Hz, 2H), 8.18(d, J=9.0Hz, 2H), 7.26-7.29 (m, 1H), 7.21-7.26 (m, 1H), 7.01(dd, J1=2.4Hz, J2=8.4Hz, 1H), 5.46(s, 2H), 3.84(s, 3H)。
【０２１３】
５−メトキシ−２−（４'−ニトロフェニル）ベンゾフラン（Ｖ）：
化合物Ｖを収率８９％で化合物ＩＩの手順と同じように化合物（ＩＶ）から合成した。
【０２１４】
1H NMR (300 MHz, アセトン-d6): δ 8.35(d, J=8.4Hz, 2H), 8.15 (d, J=8.4Hz, 2H), 7.53(d, J=8.4Hz, 1H), 7.56 (s, 1H), 7.21 (d, J=2.3Hz, 1H), 7.01(dd, J1=8.4Hz, J2=2.4Hz, 1H), 3.84(s, 3H)。
【０２１５】
実施例３〜６
実施例１および２に記述されているものに類似の手順を用いて、以下の化合物を合成した。
【０２１６】
実施例３：
【化６】
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【０２１７】
実施例４：
【化７】
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【０２１８】
実施例５：
【化８】
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【０２１９】
実施例６：
【化９】
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【０２２０】
生物学的実施例
マウス脳移行試験
エタノール中の５−メトキシ−２−（４'−フルオロフェニル）ベンゾフランを生理食塩水で希釈して、約５００μＣｉ／ｍＬを含有する溶液を作出した。野生型Ｓｗｉｓｓ Ｗｅｂｓｔｅｒ系マウスの重さを計り、外側尾静脈を介しておよそ３０μＣｉを注射し、注射後の異なる時点で殺処理した。全血サンプルを死亡時に心穿刺を介して採取し、脳を素早く取り出し、小脳および全脳（脳幹なし）に解剖した。大腿を同じく各マウスから取り出して、［１８Ｆ］フルオライドに対する代謝の程度を判定した。これらの画分を注入液の較正分とともにガンマウェルカウンタ中でアッセイし、サンプルを注入時に崩壊補正した。サンプルを秤量し、組織１ｇあたりの注入用量の割合（％ＩＤ／ｇ）を測定し、マウスの体重に対して規準化した（（％ＩＤ＊ｋｇ）／ｇ）。
【０２２１】
ヒヒ脳移行試験
４０ｋｇのヒヒを麻酔し、固定し、人工呼吸器に置いた。ヒヒをＰＥＴスキャナにセットして脳を撮像し、透過スキャンを行って減衰を補正した。ヒヒに８ｍＣｉの５−メトキシ−２−（４'−フルオロフェニル）ベンゾフラン含有の溶液を静脈注射し、注射後２時間にわたり一連の逓増的データ収集時間枠（time bins）のなかで脳を撮像した。データ収集後、これらの像を再構成し、関心領域を描画した。崩壊および減衰（attention）補正された時間−活性曲線（ＴＡＣ）を各領域に対し作成して、各脳領域における放射能の定量的経時変化を測定した。これらのＴＡＣから、放射性追跡子の優れた脳透過性および正常ヒヒ脳からの放射能の迅速なクリアランスが示される。凝集アミロイドに対するインビトロでのリガンドの比較的高い親和性と合わせて、これらのインビボでの特性から、化合物が潜在的に有用なアミロイド造影剤であることが示される。
【０２２２】
Ａβ合成ペプチドに対する結合親和性の特徴付け
ベンゾフラン誘導体結合の特徴を既報のように、リン酸緩衝生理食塩水（ｐＨ７．４）中の合成Ａβ（１−４０）および２−（４'−［３Ｈ］メチルアミノ−フェニル）−ベンゾチアゾール（［３Ｈ］ＢＴＡ−１）を用いて分析した。Klunk et al., Life Sci 69:1471 (2001); Mathis et al., Bioorg. Med. Chem. Lett., 12:295 (2002)。下記表は、合成Ａβ（１−４０）からの［３Ｈ］ＢＴＡ−１結合の競合に対して示された、４種の化合物の阻害定数（Ｋｉ）を収載している。２０ｎＭ未満のＫｉ値を有する化合物は、インビボのＰＥＴ放射性追跡子として用いるのに典型的である。
【表３】
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【０２２３】
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