(57)【要約】本発明により、新規なモノガラクトシルジアシルグリセロール化合物およびジガラクトシルジアシルグリセロール化合物、ならびにそれらの誘導体；ならびにそれらの製造方法が提供される。本発明によれば、これらの化合物を含む食品もまた提供される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の構造式を有するモノガラクトシルジアシルグリセロール化合物であって、
2008108001.tif 000008
ここで、
Ｒ１がパルミチン酸アシル鎖であり、そしてＲ２がα−リノレン酸アシル鎖であるか；
Ｒ１がα−リノレン酸アシル鎖であり、そしてＲ２が９，１２−ノナデカジエン酸アシル鎖であるか；
Ｒ１が９，１２−ノナデカジエン酸アシル鎖であり、そしてＲ２がα−リノレン酸アシル鎖であるか；
Ｒ１がアラキジン酸アシル鎖であり、そしてＲ２がオレイン酸アシル鎖であるか；
Ｒ１がアラキジン酸アシル鎖であり、そしてＲ２がリノール酸アシル鎖であるか；
Ｒ１が１１−エイコセン酸アシル鎖であり、そしてＲ２がリノール酸アシル鎖であるか；
Ｒ１が１１−エイコセン酸アシル鎖であり、そしてＲ２がα−リノレン酸アシル鎖であるか；
Ｒ１が１１−エイコセン酸アシル鎖であり、そしてＲ２が９，１２−ノナデカジエン酸アシル鎖であるか；
Ｒ１が１１−エイコセン酸アシル鎖であり、そしてＲ２が１１−エイコセン酸アシル鎖であるか；または
Ｒ１がヘンエイコサン酸アシル鎖であり、そしてＲ２がα−リノレン酸アシル鎖である、化合物
あるいはその誘導体。
【請求項２】
請求項１に記載のモノガラクトシルジアシルグリセロール化合物あるいはその誘導体から選択される少なくとも１つを含有する、食品。
【請求項３】
さらに、麦若葉およびケールからなる群から選択される少なくとも１つを含有する、請求項２に記載の食品。
【請求項４】
さらに、難消化性デキストリン、オリゴ糖、および乳酸菌からなる群から選択される少なくとも１つを含有する、請求項２または３に記載の食品。
【請求項５】
請求項１に記載のモノガラクトシルジアシルグリセロール化合物あるいはその誘導体を製造する方法であって、
（１）サツマイモ葉をメタノール抽出に供する工程、
（２）固相抽出によって低極性画分を分離する工程、および
（３）高速液体クロマトグラフィーを用いて分離する工程
を含む、方法。
【請求項６】
以下の構造式を有するジガラクトシルジアシルグリセロール化合物であって、
2008108001.tif 000009
ここで、
Ｒ１がパルミチン酸アシル鎖であり、そしてＲ２が９，１２−ノナデカジエン酸アシル鎖であるか；
Ｒ１が９，１２−ノナデカジエン酸アシル鎖であり、そしてＲ２がα−リノレン酸アシル鎖であるか；
Ｒ１が１１−エイコセン酸アシル鎖であり、そしてＲ２がパルミチン酸アシル鎖であるか；
Ｒ１が１１−エイコセン酸アシル鎖であり、そしてＲ２がα−リノレン酸アシル鎖であるか；
Ｒ１が１１−エイコセン酸アシル鎖であり、そしてＲ２が９，１２−ノナデカジエン酸アシル鎖であるか；または
Ｒ１が１１−エイコセン酸アシル鎖であり、そしてＲ２が１１−エイコセン酸アシル鎖である、化合物
あるいはその誘導体。
【請求項７】
請求項６に記載のジガラクトシルジアシルグリセロール化合物あるいはその誘導体から選択される少なくとも１つを含有する、食品。
【請求項８】
さらに、麦若葉およびケールからなる群から選択される少なくとも１つを含有する、請求項７に記載の食品。
【請求項９】
さらに、難消化性デキストリン、オリゴ糖、および乳酸菌からなる群から選択される少なくとも１つを含有する、請求項７または８に記載の食品。
【請求項１０】
請求項６に記載のジガラクトシルジアシルグリセロール化合物あるいはその誘導体を製造する方法であって、
（１）サツマイモ葉をメタノール抽出に供する工程、
（２）固相抽出によって低極性画分を分離する工程、および
（３）高速液体クロマトグラフィーを用いて分離する工程
を含む、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ガラクト脂質に関する。より詳細には、モノガラクトシルジアシルグリセロール（ＭＧＤＧ）およびジガラクトシルジアシルグリセロール（ＤＧＤＧ）化合物に関する。
【背景技術】
【０００２】
Ｉｐｏｍｏｅａ  ｂａｔａｔａｓ  Ｌ．（サツマイモ）は、多くの国で栽培されている塊根多年生植物であり、その食用根は、生のまま、または種々の様式で調理された後に食されている。
上部は、草本であり、世界の多くの地域で生鮮野菜として消費されている。サツマイモ葉は、生物活性を有するアントシアニン成分およびポリフェノール成分の優れた供給源である。１５の異なるアントシアニン化合物および６の異なるポリフェノール化合物が同定され、定量された。野菜、茶として、麺、パン、菓子中で使用される場合のサツマイモ葉の栄養組成および生理学的機能に関する近年の研究は、それらが、有益なポリフェノール化合物のための有益な食物供給源になり得ることを示唆した。さらに、それらは、ビタミンＢ、鉄、カルシウム、亜鉛、およびタンパク質に富む。
特に、サツマイモの種々の部分（すなわち、葉、蔓、茎、および地下茎）から、制癌剤、または癌の予防のための食物および飲料のための原料を生産する可能性を記載した特許文献における報告がある（特開平７−２５８１００号公報）。この公報には、この活性が、癌細胞の増殖を抑制し、分化を促進し得る糖脂質画分に起因することが記載されている。この画分がどのような糖脂質を含むかは確認されていなかった。
糖脂質の構造決定に関して、グリセロ糖脂質の脂肪酸アシル基の構造を決定するために、質量分析に基づく分析アプローチが使用されている。詳細には、Ｇ．Ｇ．Ｏｒｇａｍｂｉｄｅら（Ｌｉｐｉｄｓ，第２８巻，１９９３年，第９７５頁より）は、グリセロ脂質混合物のメタノリシス後、続く脂肪酸メチルエステル誘導体のＧＣ／ＭＳ分析で、市販標準品との保持時間および質量スペクトルの比較によって脂肪酸を同定した。別の分析ストラテジーでは、グリセロ脂質の負イオン高速原子衝撃質量分析（ＦＡＢ／ＭＳ）で生じたカルボキシイオン（ＲＣＯＯ−）の衝突解離（ＣＩＤ）スペクトルパターンを正規標準品のパターンと比較して脂肪酸の構造を決定した（Ｎ．Ｊ．Ｊａｎｓｅｎら，Ｌｉｐｉｄｓ，第２１巻，１９８６年，第５８０頁より、およびＮ．Ｊ．Ｊａｎｓｅｎら，Ｌｉｐｉｄｓ，第２２巻，１９８７年，第４８０頁より）。いずれの場合とも、その脂肪酸メチルエステル誘導体または遊離カルボキシイオンが、グリセロ脂質混合物のどの成分から、およびそれらのグリセロール骨格のどの位置から生じるのかを見出すことはできなかった。
グリセロ脂質に含まれる小麦粉由来のモノガラクトシルジアシルグリセロール（ＭＧＤＧ）およびジガラクトシルジアシルグリセロール（ＤＧＤＧ）の構造決定が、ＦＡＢイオン化で生じた、ガラクト脂質にナトリウムが付加した分子（［Ｍ＋Ｎａ］＋）の正イオンＣＩＤスペクトルによって推定された（Ｙ．Ｈ．Ｋｉｍら，Ｊ．Ｍａｓｓ  Ｓｐｅｃｔｒｏｍ．，第３２巻，１９８７年，第９６８頁より、およびＹ．Ｈ．Ｋｉｍら，Ｍｉｃｒｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ，第６８巻，２００１年，第１４３頁より）。この場合、アシル鎖中の二重結合の位置を決定することはできたが、この実験は、純粋な化合物について行われたので、これは、混合物分析に信頼性のある技術を表すというわけではない。
ＭＧＤＧおよびＤＧＤＧ化合物クラスのグリセロール骨格上のアシル鎖の結合位置決定のために、ＨＰＬＣ連結エレクトロスプレーイオン化四重極イオントラップタンデム質量分析（ｅｌｅｃｔｒｏｓｐｒａｙ  ｉｏｎｉｚａｔｉｏｎ−ｑｕａｄｒｕｐｏｌｅ  ｉｏｎ  ｔｒａｐ  ｔａｎｄｅｍ  ｍａｓｓ  ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ  ｃｏｕｐｌｅｄ  ｗｉｔｈ  ＨＰＬＣ：ＨＰＬＣ−ＥＳＩ／ＱＩＴＭＳ／ＭＳ）が採用されたが、このアプローチは、アシル鎖中の二重結合の位置を解明するのに有用ではなかった（Ｇ．Ｇｕｅｌｌａら，Ｒａｐｉｄ  Ｃｏｍｍｕｎ．Ｍａｓｓ  Ｓｐｅｃｔｒｏｍ．，第１７巻，２００３年，第１９８２頁より、およびＷ．Ｗａｎｇら，Ｒａｐｉｄ  Ｃｏｍｍｕｎ．Ｍａｓｓ  Ｓｐｅｃｔｒｏｍ．，第１３巻，１９９９年，第１１８９頁より）。
ＭＧＤＧおよびＤＧＤＧのようなガラクトシルグリセロールは、その生理活性もまた注目されている。例えば、抗炎症性（Ａ．Ｂｒｕｎｏら，Ｅｕｒ．Ｊ．ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，第５２４巻，２００５年，第１５９頁より）および発癌抑制作用が知られている。
【発明の開示】
【０００３】
本発明者らは、サツマイモ葉の低極性画分の画分から、いくつかの新規なガラクト脂質、モノガラクトシルジアシルグリセロール（ＭＧＤＧ）およびジガラクトシルジアシルグリセロール（ＤＧＤＧ）化合物を見出した。
本発明は、以下の構造式（Ｉ）を有するモノガラクトシルジアシルグリセロール化合物あるいはその誘導体を提供する：
2008108001.tif 000002
ここで、
Ｒ１はパルミチン酸アシル鎖であり、そしてＲ２はα−リノレン酸アシル鎖であるか；
Ｒ１はα−リノレン酸アシル鎖であり、そしてＲ２は９，１２−ノナデカジエン酸アシル鎖であるか；
Ｒ１は９，１２−ノナデカジエン酸アシル鎖であり、そしてＲ２はα−リノレン酸アシル鎖であるか；
Ｒ１はアラキジン酸アシル鎖であり、そしてＲ２はオレイン酸アシル鎖であるか；
Ｒ１はアラキジン酸アシル鎖であり、そしてＲ２はリノール酸アシル鎖であるか；
Ｒ１は１１−エイコセン酸アシル鎖であり、そしてＲ２はリノール酸アシル鎖であるか；
Ｒ１は１１−エイコセン酸アシル鎖であり、そしてＲ２はα−リノレン酸アシル鎖であるか；
Ｒ１は１１−エイコセン酸アシル鎖であり、そしてＲ２は９，１２−ノナデカジエン酸アシル鎖であるか；
Ｒ１は１１−エイコセン酸アシル鎖であり、そしてＲ２は１１−エイコセン酸アシル鎖であるか；または
Ｒ１はヘンエイコサン酸アシル鎖であり、そしてＲ２はα−リノレン酸アシル鎖である。
本発明はまた、以下の構造式（ＩＩ）を有するジガラクトシルジアシルグリセロール化合物あるいはその誘導体を提供する：
2008108001.tif 000003
ここで、
Ｒ１はパルミチン酸アシル鎖であり、そしてＲ２は９，１２−ノナデカジエン酸アシル鎖であるか；
Ｒ１は９，１２−ノナデカジエン酸アシル鎖であり、そしてＲ２はα−リノレン酸アシル鎖であるか；
Ｒ１は１１−エイコセン酸アシル鎖であり、そしてＲ２はパルミチン酸アシル鎖であるか；
Ｒ１は１１−エイコセン酸アシル鎖であり、そしてＲ２はα−リノレン酸アシル鎖であるか；
Ｒ１は１１−エイコセン酸アシル鎖であり、そしてＲ２は９，１２−ノナデカジエン酸アシル鎖であるか；または
Ｒ１は１１−エイコセン酸アシル鎖であり、そしてＲ２は１１−エイコセン酸アシル鎖である。
本発明はまた、上記モノガラクトシルジアシルグリセロール化合物あるいはその誘導体から選択される少なくとも１つを含有する食品を提供する。また、上記ジガラクトシルジアシルグリセロール化合物あるいはその誘導体からなる群から選択される少なくとも１つを含有する食品を提供する。
１つの実施態様では、上記食品は、さらに、麦若葉およびケールからなる群から選択される少なくとも１つを含有する。
さらなる実施態様では、上記食品は、さらに、難消化性デキストリン、オリゴ糖、および乳酸菌からなる群から選択される少なくとも１つを含有する。
本発明はまた、上記モノガラクトシルジアシルグリセロール化合物あるいはその誘導体を製造する方法を提供し、この方法は、
（１）サツマイモ葉をメタノール抽出に供する工程、
（２）固相抽出によって低極性画分を分離する工程、および
（３）高速液体クロマトグラフィーを用いて分離する工程
を含む。
本発明はまた、上記ジガラクトシルジアシルグリセロール化合物あるいはその誘導体を製造する方法を提供し、この方法は、
（１）サツマイモ葉をメタノール抽出に供する工程、
（２）固相抽出によって低極性画分を分離する工程、および
（３）高速液体クロマトグラフィーを用いて分離する工程
を含む。
【図面の簡単な説明】
【０００４】
図１は、［Ｍ＋Ｎａ］＋イオンがｍ／ｚ  ８２９．９であるＭＧＤＧ化合物（１１）のＬＣ−ＥＳＩ／ＭＳ／ＭＳスペクトルを示すグラフである。（ａ）は全体スペクトルであり、（ｂ）は高分子量領域であり、そして（ｃ）は低分子量領域である。
図２は、［Ｍ＋Ｎａ］＋イオンがｍ／ｚ  ９９１．９であるＤＧＤＧ化合物（２４）のＬＣ−ＥＳＩ／ＭＳ／ＭＳスペクトルを示すグラフである。（ａ）は全体スペクトルであり、（ｂ）は高分子量領域であり、そして（ｃ）は低分子量領域である。
図３は、［Ｍ＋Ｎａ］＋イオンがｍ／ｚ  ８１３．９であるＭＧＤＧ化合物（７）のＬＣ−ＥＳＩ／ＭＳ／ＭＳスペクトルを示すグラフである。（ａ）は全体スペクトルであり、そして（ｂ）は高分子量領域である。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００５】
本発明者らは、固相抽出を用いてサツマイモ葉のメタノール抽出物の低極性画分を分離し、そして液体クロマトグラフィー連結エレクトロスプレーイオン化四重極飛行時間タンデム質量分析（ｌｉｑｕｉｄ  ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ  ｃｏｕｐｌｅｄ  ｔｏ  ｅｌｅｃｔｒｏｓｐｒａｙ  ｉｏｎｉｚａｔｉｏｎ−ｑｕａｄｒｕｐｏｌｅ  ｔｉｍｅ  ｏｆ  ｆｌｉｇｈｔ  ｔａｎｄｅｍ  ｍａｓｓ  ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ：ＨＰＬＣ−ＥＳＩ／ＱＴｏＦＭＳ／ＭＳ）に基づく分析法を開発し、サツマイモ葉に含まれる糖脂質の構造を解明した。
本発明者らは、上記分析法により、糖脂質中の脂肪酸アシル基の組成および結合位置を決定し、そしてアシル鎖中の二重結合の位置を解明できた。糖の組成およびコンフォメーションを、一次元および二次元ＮＭＲ（核磁気共鳴）を用いて決めた。さらに、グリセロール骨格の２つの炭素に結合している脂肪酸の不飽和二重結合の位置の決定を確認し、そしていくつかの場合には、誘導体化した脂肪酸のガスクロマトグラフィー質量分析（ＧＣ／ＭＳ）によって立体構造も決定した。
このストラテジーにより、１６の新規および１０の既知のガラクト脂質を単離および特徴づけできた。本発明者らの知る限り、これは、サツマイモ葉におけるガラクト脂質組成の最初の報告である。
ガラクト脂質は、グリセロ脂質の１種である。ガラクト脂質には、モノガラクトシルジアシルグリセロール（ＭＧＤＧ）およびジガラクトシルジアシルグリセロール（ＤＧＤＧ）が含まれる。ＭＧＤＧは、グリセロール骨格のｓｎ−１位およびｓｎ−２位に２つの脂肪酸アシル基が結合し、およびグリセロールのｓｎ−３位に１つのガラクトースがエーテル結合している構造を有する。ＤＧＤＧは、グリセロール骨格のｓｎ−１位およびｓｎ−２位に２つの脂肪酸アシル基が結合し、およびグリセロールのｓｎ−３位に２つのガラクトースがエーテル結合している構造を有する。以下、本明細書中で単に「ガラクト脂質」という場合、ＭＧＤＧおよびＤＧＤＧの両方共に言及している。
本発明は、以下に説明するような新規なガラクト脂質を提供する。
より詳細には、本発明は、以下の構造式（Ｉ）を有するモノガラクトシルジアシルグリセロール化合物あるいはその誘導体を提供する：
2008108001.tif 000004
ここで、
Ｒ１はパルミチン酸アシル鎖であり、そしてＲ２はα−リノレン酸アシル鎖であるか；
Ｒ１はα−リノレン酸アシル鎖であり、そしてＲ２は９，１２−ノナデカジエン酸アシル鎖であるか；
Ｒ１は９，１２−ノナデカジエン酸アシル鎖であり、そしてＲ２はα−リノレン酸アシル鎖であるか；
Ｒ１はアラキジン酸アシル鎖であり、そしてＲ２はオレイン酸アシル鎖であるか；
Ｒ１はアラキジン酸アシル鎖であり、そしてＲ２はリノール酸アシル鎖であるか；
Ｒ１は１１−エイコセン酸アシル鎖であり、そしてＲ２はリノール酸アシル鎖であるか；
Ｒ１は１１−エイコセン酸アシル鎖であり、そしてＲ２はα−リノレン酸アシル鎖であるか；
Ｒ１は１１−エイコセン酸アシル鎖であり、そしてＲ２は９，１２−ノナデカジエン酸アシル鎖であるか；
Ｒ１は１１−エイコセン酸アシル鎖であり、そしてＲ２は１１−エイコセン酸アシル鎖であるか；または
Ｒ１はヘンエイコサン酸アシル鎖であり、そしてＲ２はα−リノレン酸アシル鎖である。
本発明はまた、以下の構造式（ＩＩ）を有するジガラクトシルジアシルグリセロール化合物あるいはその誘導体を提供する：
2008108001.tif 000005
ここで、
Ｒ１はパルミチン酸アシル鎖であり、そしてＲ２は９，１２−ノナデカジエン酸アシル鎖であるか；
Ｒ１は９，１２−ノナデカジエン酸アシル鎖であり、そしてＲ２はα−リノレン酸アシル鎖であるか；
Ｒ１は１１−エイコセン酸アシル鎖であり、そしてＲ２はパルミチン酸アシル鎖であるか；
Ｒ１は１１−エイコセン酸アシル鎖であり、そしてＲ２はα−リノレン酸アシル鎖であるか；
Ｒ１は１１−エイコセン酸アシル鎖であり、そしてＲ２は９，１２−ノナデカジエン酸アシル鎖であるか；または
Ｒ１は１１−エイコセン酸アシル鎖であり、そしてＲ２は１１−エイコセン酸アシル鎖である。
本発明のガラクト脂質中のアシル鎖の脂肪酸としては、以下が挙げられる：パルミチン酸（Ｃ１６：０）；ステアリン酸（Ｃ１８：０）；オレイン酸（Ｃ１８：１  ｎ−９）；リノール酸（Ｃ１８：２  ｎ−６）；α−リノレン酸（Ｃ１８：３  ｎ−３）；ノナデカジエン酸（Ｃ１９：２）、特に９位および１２位に二重結合を有する；アラキジン酸（Ｃ２０：０）；１１−エイコセン酸（Ｃ２０：１  ｎ−９）；およびヘンエイコサン酸（Ｃ２１：０）。不飽和脂肪酸の場合、二重結合はシス型またはトランス型であり得る。リノール酸およびα−リノレン酸は、通常、シス型の二重結合を有する。ノナデカジエン酸または１１−エイコセン酸では、二重結合は、シス型またはトランス型であり得る。
本発明のガラクト脂質は、サツマイモ葉から製造され得る。サツマイモの品種は、特に限定されない。例えば、ジョイホワイト、コガネセンガン、シロユタカ、サツマスターチ、アヤムラサキ、すいおうなどの品種のサツマイモ茎葉が用いられ得る。
本発明に用いられるサツマイモ葉としては、サツマイモの栽培時に、地上部に出ている苗条の葉が好ましい。地上から、好ましくは１０ｃｍ以上、より好ましくは３０ｃｍ以上、さらに好ましくは６０ｃｍ以上に成長した苗条の葉が用いられる。また、サツマイモの茎が地中から外に出ている位置から先端までの長さを測定した場合に、その長さが、好ましくは３００ｃｍ以内、より好ましくは２００ｃｍ以内、さらに好ましくは１５０ｃｍ以内である苗条の葉が用いられる。３００ｃｍを超えると、苗条の先端部が地面についてしまい、害虫などの害を受けやすくなるので、十分な量の葉が得られなくなる場合がある。
特に、本発明においては、緑色を保持している状態の苗条、すなわちサツマイモ苗条の若葉を用いることが好ましい。本明細書において「サツマイモ苗条の若葉」とは、サツマイモ苗条の先端部から６０ｃｍ以内の葉をいう。
上述したようなサツマイモ葉は、好ましくは付着した泥などを水で洗浄した後に、後述する加工が施されてもよい。
（１）加熱処理
加熱処理は、サツマイモ葉中の酵素の失活による品質の安定化、およびサツマイモ葉の褪色を防ぐ目的で行われる。加熱処理としては、例えば、ブランチング処理（例えば、湯通し）、乾熱処理、マイクロウェーブ処理、赤外線または遠赤外線処理、水蒸気処理などが挙げられる。これらの加熱処理のうち、ブランチング処理が好ましく用いられる。さらに、処理工程の便宜上、必要に応じて、サツマイモ葉を長径１０〜３０ｃｍ程度に裁断してから、各処理を行ってもよい。
ブランチング処理を行う場合、サツマイモ葉の色、すなわち緑色植物の色素であるクロロフィルの色が褪色しないようにするために、当業者が通常用いる方法でブランチング処理を行なえばよい。そのようなブランチング処理としては、例えば、湯通しが挙げられる。ブランチング処理は、用いる植物体によって、最適条件が大きく異なる。場合によっては、ブランチング処理によって、風味および栄養素が損なわれ、有用成分の生理活性が失活することもある。したがって、本発明では、好ましくはｐＨが５．４以上、より好ましくは５．６〜８．４、さらに好ましくは５．６〜８．０、最も好ましくは５．６〜７．６の熱水でブランチング処理を行う。このようなブランチング処理によって、抗酸化活性などの活性が高く、かつポリフェノールなどの成分の含有量が高いサツマイモ葉を効率よく得ることができる。
ブランチング処理を行なう場合、風味を改善する点から、熱水の量に対して食塩を０．０１〜５質量％、好ましくは０．２〜３質量％の割合で添加することが好ましい。このように食塩を添加することにより、さらに緑色が鮮やかになり、かつ風味がよいサツマイモ葉を得ることができる。
乾熱処理、マイクロウェーブ処理、赤外線または遠赤外線処理、および水蒸気処理を行う場合は、ｐＨが調整された溶液をサツマイモ葉に噴霧するなどのｐＨ調整処理を行った後、これらの処理を行うことが好ましい。ｐＨ調整処理は、当業者が通常用いる方法で行なわれる。例えば、塩基性条件下に調整する場合は、水酸化ナトリウム、重曹、炭酸カルシウム（卵殻カルシウム、ホタテ貝殻カルシウム、サンゴカルシウムなど）、これらの炭酸カルシウムを焼成して得られる酸化カルシウムなどの溶液を用いて処理すればよい。さらに、アルカリイオン水などを用いてもよい。一方、酸性条件下に調整するには、酢酸、クエン酸、アスコルビン酸、酒石酸、リンゴ酸、フマル酸などの有機酸の溶液を用いればよい。これらのｐＨ調整剤の量は、用いる調整剤によって適宜調整すればよい。
加熱処理における加熱温度は、８０℃より高い温度、好ましくは９０℃以上の温度とするのがよい。加熱時間は、５分以下、好ましくは３分以下、最も好ましくは１０秒〜３分とするのがよい。
加熱処理後のサツマイモ葉は、緑色および風味を維持する上で、直ちに冷却することが好ましい。冷却は、加熱処理後のサツマイモ葉を冷却水中に浸漬する、冷風を当てて急冷するなど、当業者が通常用いる方法で行えばよい。例えば、冷却水に浸漬して冷却する場合、３０℃以下の水、好ましくは２０℃以下の水を用いればよい。冷却の温度が低いほど、サツマイモ葉は鮮やかな緑色になり、見た目に美しい。冷却時間は、サツマイモ葉の処理量に応じた任意の時間であるが、サツマイモ葉自身が冷却温度と同等の温度になるまで行うことが好ましい。
（２）乾燥処理および粉末化処理
乾燥は、加工前のサツマイモ葉の品質保持が可能となるために、好ましく用いられる。乾燥は、当業者が通常用いる任意の乾燥方法を用いて行われる。乾燥処理は、乾燥方法に応じた乾燥機、例えば、熱風乾燥機、高圧蒸気乾燥機、電磁波乾燥機、直火式加熱機、回転式通風乾燥機、凍結乾燥機、減圧濃縮機などを用いて行われる。これらの中でも、コストおよび乾燥効率の面から、熱風乾燥機、直火式乾燥機、および回転式通風乾燥機が好ましい。
乾燥は、乾燥物中の水分含量が５質量％以下となるように行うことが好ましい。
乾燥処理は、常圧下では、６０〜１５０℃程度の温度で行うことにより、風味がよく、色鮮やかなサツマイモ葉の乾燥粉末を得ることができる。減圧下では、６０℃以下、好ましくはサツマイモ葉が凍結する温度以上でかつ６０℃以下で行えば、栄養成分の損失を少なくしつつ、乾燥を行うことが可能である。
サツマイモ葉をそのまま乾燥する場合は、２段階で乾燥を行うことが好ましい。２段階乾燥は、例えば、熱風乾燥機などを用いて行うことができる。２段階乾燥は、まず、水分含有量が２５質量％以下となるまで、６０〜８０℃の温度で一次乾燥する。次いで、一次乾燥したサツマイモ葉の水分含有量が５質量％以下となるまで、一次乾燥よりも高い温度で二次乾燥する。
このとき、一次乾燥の乾燥温度が６０℃未満の場合は、乾燥速度が遅くなり、二次乾燥の乾燥温度が１００℃を超える場合は、焦げを生じることがある。したがって、二次乾燥の温度は、好ましくは７０〜９０℃であり、より好ましくは８０℃前後に調整することでポリフェノールの含有量が高く色鮮やかなサツマイモ葉粉末を得ることができる。
一次乾燥と二次乾燥との温度差は、約５〜１５℃であることが好ましく、約１０℃であることがより好ましい。例えば、９０℃で二次乾燥する場合、一次乾燥の温度は、７５〜８５℃であることが好ましく、約８０℃であることがより好ましい。
このような２段階の乾燥工程を行うことにより、乾燥時間が短縮されると同時に、サツマイモ葉の緑色および風味が維持される。温度差を上記のように一定範囲に設定することにより、乾燥工程における緑葉の水分管理が容易になり、効率的に乾燥が行われる。
このようにして乾燥されたサツマイモ葉は、さらに粉末化処理を施して乾燥粉末としてもよい。サツマイモ葉の乾燥粉末を得るためには、製造上のコストおよび乾燥の効率の点から、熱風乾燥機、直火式加熱機、および回転式通風乾燥機が好ましく用いられる。サツマイモ葉の乾燥粉末は、さらに粒径を小さくかつ均一にするために微粉末化処理を行ってもよい。サツマイモ葉は、茎部、葉部、および葉柄部と異なる部位を持つので、粉砕の効率を上げる観点からは、粗粉砕工程または微粉砕工程を経ることが好ましい。
粗粉砕工程は、乾燥したサツマイモ葉をカッター、スライサー、ダイサーなどの当業者に公知の任意の機械または装置により、乾燥した緑葉をカットする工程である。カットされた緑葉の大きさは、好ましくは長径が２０ｍｍ以下であり、より好ましくは０．１〜１０ｍｍである。
微粉砕工程は、この粗粉砕されたサツマイモ葉を微粉砕し、微粉砕粉末を得る工程である。微粉砕工程では、９０質量％が２００メッシュ区分を通過するように、微粉砕される。微粉砕は、例えば、クラッシャー、ミル、ブレンダー、石臼などの当業者が通常用いる機械または装置を用いて行われる。
加熱殺菌処理を行う場合は、微粉砕工程の前に行われる。この加熱殺菌処理を施すことにより、粗粉砕されたサツマイモ葉を均一に加熱することができ、緑葉の香味を良好にし、効率のよい殺菌を行うことができる。この加熱処理は、１１０℃以上で行い、高圧殺菌機、加熱殺菌機、加圧蒸気殺菌機などを用いることができる。
例えば、加圧蒸気殺菌による加熱処理の場合、粗粉砕されたサツマイモ葉は、例えば、０．５〜１０ｋｇ／ｃｍ２の加圧下、１１０〜２００℃の飽和水蒸気により、２〜１０秒間加熱殺菌処理される。必要に応じて、飽和水蒸気による加熱時に含んだ水分をさらに乾燥する。
このように微粉砕することにより食感がよくなり、好ましくは、粗粉砕、加熱処理、および微粉砕の工程を順に経ることにより、さらに食感がよくなり、食品などに添加した場合、均一に混ざりやすくなる。
乾燥処理前のサツマイモ葉を粗粉砕して細片状、ペースト状などにしてから、上記の乾燥処理を行い、乾燥粉末を調製してもよい。すなわち、粉末化処理は、乾燥処理を施されたサツマイモ葉を用いて行ってもよく、未乾燥（例えば、生葉、湯通しされたサツマイモ葉など）のサツマイモ葉を用いて行ってもよい。
サツマイモ葉に後述の圧搾処理などを施して得た搾汁に、上記の乾燥機を用いて乾燥処理を施してもよい。サツマイモ葉の搾汁を用いて乾燥処理を行う場合は、製造上のコストや乾燥の効率の面から、減圧濃縮機が好ましい。このように乾燥処理を行うことによって、搾汁の粉末（以下、「エキス末」という場合がある）が得られる。
さらに、サツマイモ葉の搾汁をエキス末とする場合、スプレードライヤーなどの噴霧乾燥機を用いて粉末化してもよい。噴霧乾燥機を用いる場合には、回収率を上げるために、必要に応じてデキストリン、シクロデキストリン、デンプン、およびマルトースのような賦形剤を添加して行われる。好ましくはデキストリンが用いられる。例えば、デキストリンの添加によって粉末化を容易にするために、搾汁とデキストリンとの質量比は、１：１０〜５：１が好ましい。
エキス末を得るための乾燥は、エキス末中の水分含量が５質量％以下となるように行うことが好ましい。
（３）圧搾処理
圧搾処理は、例えば、圧搾機などを用いて行われる。これによってサツマイモ葉の搾汁が得られる。得られた搾汁に上述のような乾燥処理などを施さずそのまま用いる場合は、８０℃〜１３０℃で加熱殺菌を行うことが好ましい。
したがって、以下、「サツマイモ葉」という場合は、単に生鮮葉だけでなく、上記（１）〜（３）のような加工が施されたサツマイモ葉も包含する。
本発明のガラクト脂質は、例えば、以下の実施例に記載するように、上記サツマイモ葉のメタノール抽出物をメタノール／水／アセトニトリルを移動相として使用する固相抽出法に供することにより、分離および回収され得る。以下の実施例は、本発明のガラクト脂質の分離手順を詳述しているが、本発明のガラクト脂質の入手方法はこれに限定されない。
本発明のガラクト脂質あるいはその誘導体を製造する方法もまた提供され、この方法は、（１）サツマイモ葉をメタノール抽出に供する工程、（２）固相抽出によって低極性画分を分離する工程、および（３）高速液体クロマトグラフィーを用いて分離する工程を含む。
抽出処理は、サツマイモ葉（生葉、乾燥粉末、エキス末など）にメタノール（含水メタノールも含む）を加えることによって行われる。
低極性画分は、例えば、上記抽出物をＣ−１８  ｓｅｐ−ｐａｋカートリッジ（Ｗａｔｅｒｓ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｍｉｌｆｏｒｄ，Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ，ＵＳＡ）を通過させることにより分離され得る。このカートリッジは、メタノール、水、および０．２％蟻酸で予め調整され得、０．２％蟻酸および０．２％蟻酸／メタノール（５０：５０、ｖ／ｖ）で洗浄され得、その後低極性画分は、メタノールで溶出され得る。溶出された低極性画分は、例えば、メタノール／水／アセトニトリル（９０．５：７：２．５）の移動相（溶出法Ａ）によって分離され得る。さらに、低極性画分の分離のために、メタノール／水／アセトニトリル（８２．５：１５：２．５）の移動相（溶出法Ｂ）もまた用いられ得る。それにより個々のガラクト脂質が得られ得る。サツマイモ葉から分離および回収されたガラクト脂質は、必要に応じて、合成吸着剤（ダイアイオンＨＰ２０、セファビースＳＰ８２５、アンバーライトＸＡＤ４、ＭＣＩｇｅｌＣＨＰ２０Ｐなど）、デキストラン樹脂（セファデックスＬＨ−２０など）などを用いて、当業者が通常用いる方法で精製されてもよい。
本発明のガラクト脂質は、誘導体の形態でもあり得る。天然に存在する形態で見られ得る任意の誘導体、例えば、ガラクトース残基のアルコール性ＯＨが種々の置換基で置換されている誘導体、および食物または薬学的に受容可能である任意の誘導体が含まれ得る。
本発明のガラクト脂質あるいはその誘導体は、その生物学的活性に基づいて、医薬品、食物および飲料、ならびに化粧品への利用が考えられる。上記生物学的活性としては、例えば、抗腫瘍作用、抗炎症作用、抗酸化作用などが挙げられる。本発明のガラクト脂質は、抗コレステロール作用、血流改善作用などを有する機能性食品、サプリメント、ならびに肌質改善効果、美容効果、および保湿効果を有する化粧料の製造に用いられ得る。食品原料、医薬品原料、賦形剤、増量剤、結合剤、増粘剤、乳化剤、着色料、香料、または調味料のような添加成分とともに用いられ得る。
本発明のガラクト脂質あるいはその誘導体は、以下に説明するように、食品に配合され得る。例えば、ローヤルゼリー、プロポリス、ビタミン類（Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｋ、葉酸、パントテン酸、ビオチン、これらの誘導体など）、ミネラル（鉄、マグネシウム、カルシウム、亜鉛、セレンなど）、α−リポ酸、レシチン、ポリフェノール（フラボノイド類、これらの誘導体など）、カロテノイド（リコピン、アスタキサンチン、ゼアキサンチン、ルテインなど）、キサンチン誘導体（カフェインなど）、脂肪酸、タンパク質（コラーゲン、エラスチンなど）、ムコ多糖類（ヒアルロン酸など）、アミノ糖（グルコサミン、アセチルグルコサミン、ガラクトサミン、アセチルガラクトサミン、ノイラミン酸、アセチルノイラミン酸、ヘキソサミン、それらの塩など）、オリゴ糖（イソマルトオリゴ糖、環状オリゴ糖など）、リン脂質およびその誘導体（ホスファチジルコリン、スフィンゴミエリン、セラミドなど）、含硫化合物（アリイン、セパエン、タウリン、グルタチオン、メチルスルホニルメタンなど）、糖アルコール、リグナン類（セサミンなど）、これらを含有する動植物抽出物、根菜類（ウコン、ショウガなど）、麦若葉末などのイネ科植物の緑葉、ケールなどのアブラナ科植物の緑葉、難消化性デキストリン（例えば、とうもろこし、芋などの澱粉より製造され、市販されている）、乳酸菌（特に腸内への到達効率の高い乳酸菌、例えば、有胞子性の乳酸菌、腸溶性物質をコーティングする方法などによって調製された乳酸菌、腸内への到達率が高い特定株の乳酸菌、ビフィドバクテリウム・ロンガム、ラクトバチルス・カゼイ、ラクトバチルス・アシドフィルス、ラクトバチルス・ヘルベチカス、ラクトバチルス・デルブロイキ、ストレプトコッカス・サーモフィラスなどの亜種）などとともに食品に配合され得る。
粉末形態の食品は、水などに分散させて青汁の形態として利用し得る。特に、従来の青汁の原料である麦若葉、ケール、明日葉、桑葉などの緑葉、好ましくは、麦若葉またはケールの粉末と混合し得る。さらに、食品は、植物発酵ジュース、野菜ジュース（例えば、人参ジュース）、植物抽出物、果汁などの飲料形態とすることも可能である。難消化性デキストリン、オリゴ糖、および乳酸菌のような素材もまた、食品に好適に配合され得る。
食品は、用途に応じて、顆粒、錠剤、カプセル剤（ハードカプセル、ソフトカプセルなど）、丸剤、粉末状、液状、ティーバッグ状、飴状などの形態に加工される。このような加工食品は、そのまま食してもよく、あるいは水、湯、牛乳などに溶いて飲んでもよい。粉末などをティーバッグの形態で提供すれば、湯などに浸漬して得られる抽出液を飲料として利用し得る。
【実施例】
【０００６】
１．実験手法
１．１．材料
ＨＰＬＣ用メタノール（ＭｅＯＨ）をＪ．Ｔ．Ｂａｋｅｒ（Ｂａｋｅｒ  Ｍａｌｌｉｎｃｋｒｏｄｔ，Ｐｈｉｌｌｉｐｓｂｕｒｇ，ＮＪ，ＵＳＡ）から購入した。アセトニトリル（ＡＣＮ）および蟻酸をＣａｒｌｏ  Ｅｒｂａ（Ｍｉｌａｎ，Ｉｔａｌｙ）から入手した。ＨＰＬＣ用水（１８ｍΩ）を、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｍｉｌｌｉ−Ｑ浄水装置（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｃｏｒｐ．，Ｂｅｄｆｏｒｄ，ＭＡ，ＵＳＡ）を用いて調製した。
１．２．試料の調製
風乾粉末化したサツマイモ葉の試料（３ｇ）を６０ｍＭのＭｅＯＨで室温にて８日間抽出した。抽出物を濾過し、収量３１３．１３ｍｇを得た。ポリフェノールおよびアントシアニンから低極性成分を分離するために、メタノール抽出物を、Ｃ−１８  ｓｅｐ−ｐａｋカートリッジ（Ｗａｔｅｒｓ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｍｉｌｆｏｒｄ，Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ，ＵＳＡ）を通過させた。このカートリッジは、メタノール、水、および０．２％蟻酸で予め調整しておいた。０．２％蟻酸および０．２％蟻酸／メタノール（５０：５０、ｖ／ｖ）で洗浄した後、低極性成分をメタノールで溶出させ、そしてクロマトグラフィー分析に用いた。
１．３．ＨＰＬＣ−ＵＶ分析
Ｃ−１８  ｓｅｐ−ｐａｋカートリッジ分離からのメタノール画分を、デュアルラムダ吸光度検出器（Ｗａｔｅｒｓ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｍｉｌｆｏｒｄ，Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ，ＵＳＡ）を備えたＡｌｌｉａｎｃｅ  ＨＰＬＣを用いて、ＨＰＬＣによって分析した。個々のガラクト脂質を、１ｍｌ／分の流速のメタノール／水／アセトニトリル（９０．５：７：２．５）の移動相（溶出法Ａ）によって、Ｈｙｐｅｒｓｉｌ  ＢＤＳ  Ｃ１８カラム（２５０ｍｍ×４．６ｍｍ、５μｍ）（Ｔｈｅｒｍｏ，Ｂｅｌｌｅｆｏｎｔｅ，ＰＡ，ＵＳＡ）上で無勾配溶出した。検出は２０５ｎｍで実施した。
より極性の高いガラクト脂質の分離性を向上させるために、メタノール／水／アセトニトリル（８２．５：１５：２．５）の移動相（溶出法Ｂ）もまた用いた。
１．４．ＮＭＲ分析
１Ｈおよび１３Ｃ  ＮＭＲスペクトルを、Ｂｒｕｋｅｒ  ＤＲＸ−６００ＭＨｚスペクトロメーターにてＴ＝３００Ｋで記録した。ＮＭＲ試料を調製し、この試料をＣＤ３ＯＤ（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ，９９．９６％Ｄ）中に溶解した。スペクトルの基準合わせのために、溶媒のシグナルを内部基準として、補正した（１Ｈ、δ＝３．３４ｐｐｍ；１３Ｃ＝４９．０ｐｐｍ）。
１．５．液体クロマトグラフィー／エレクトロスプレー質量分析（ＬＣ−ＥＳＩ／ＭＳおよびＬＣ−ＥＳＩ／ＭＳ／ＭＳ）
Ｃ−１８ｓｅｐ−ｐａｋカートリッジ分離からのメタノール画分を、オンライン型ＬＣ−ＥＳＩ／ＭＳにより分析した。この分析には、Ａｌｌｉａｎｃｅ  ＨＰＬＣに連結され、そして直交Ｚスプレー供給源と面したＷａｔｅｒｓ  Ｑ−Ｔｏｆ  Ｍｉｃｒｏハイブリッド四極子直交加速飛行時間型質量分析計（Ｗａｔｅｒｓ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｍｉｌｆｏｒｄ，Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ，ＵＳＡ）を用いた。個々のガラクト脂質を、上記クロマトグラフィー条件を用いて分離した。酸性溶媒を用いた場合のイオン化への寄与を検証するために、蟻酸０．２％を溶離剤に添加した両クロマトグラフィー法もまた行った。溶出物をエレクトロスプレーイオン源に直接注入し、そしてＭＳ１スペクトルおよびＭＳ／ＭＳスペクトルを正イオンモードで得、製造者により提供されるソフトウェア（Ｗａｔｅｒｓ  Ｍａｓｓ  Ｌｙｎｘ  ４．０ソフトウェア）を用いて解明した。脱溶媒和および供給源の温度はそれぞれ、１８０℃および１００℃であった。ガラクト脂質の検出のために至適化した操作条件は、以下の通りであった：キャピラリー電圧３４００Ｖ、試料コーン電圧４０Ｖ、抽出電圧１．５Ｖ、衝撃セル電圧７Ｖ。３０〜４５Ｖの範囲の衝撃エネルギーを用いて、測定走査モードでＭＳ／ＭＳスペクトルを得た。ＭＳ／ＭＳスペクトルは、５０〜１５００ｍ／ｚ領域で記録した。
１．６．脂肪酸メチルエステルの調製
ＨＰＬＣで分離したガラクト脂質を、２％硫酸を含むメタノール溶液２．５ｍｌに８０℃にて４時間曝露し、エステル交換反応に供した。反応終了後、反応管を冷却した。次いで、水２．０ｍｌおよびヘキサン１．０ｍｌを各反応管に添加し、密封後、ボルテックスにより１０分間混合した。反応管を４０００ｒｐｍにて１分間遠心して相分離を促進し、そしてヘキサン相をＧＣ測定用バイアルに移した。残った水相にヘキサン１．０ｍｌを添加し、そして抽出を上記のように行った。この工程を２回繰り返した。
１．７．ガスクロマトグラフィー質量分析（ＧＣ／ＭＳ）
脂肪酸メチルエステル分析を、キャピラリーカラム（３０ｍ×０．２５ｍｍ内径、０．２５μｍフィルム厚）ＤＢ−１（Ｊ＆Ｗ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｆｏｌｓｏｍ，ＣＡ，ＵＳＡ）と適合したガスクロマトグラフＧＣ  Ｓｙｓｔｅｍ  ６８９０  Ｓｅｒｉｅｓ（Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ，ＣＡ，ＵＳＡ）を備えたＧＣＴＴＭ直交加速飛行時間型（ｏａ−ＴＯＦ）ＧＣ質量分析計（Ｗａｔｅｒｓ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｍｉｌｆｏｒｄ，Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ，ＵＳＡ）を用いて行った。
分析を、以下の分析条件を用いて行った：注入は、スプリットレスモードであり、注入器温度は２８０℃であり、イオン源温度は２００℃であり、そしてＧＣ／ＭＳインターフェース温度は３００℃であった。初期オーブン温度は４０℃（５分）であり、４℃／分で６０℃にまで上げるようプログラムし、次いで１５℃／分で１５０℃に、そして３℃／分で２８０℃に加熱し、続いて２０℃／分で３００℃にまで加熱した。総実行時間は６０分であった。ヘリウムがキャリアガスであり、そして１ｍｌ／分がカラム流であった。
質量分析を、７０ｅＶイオン化エネルギーで行い、５０〜５００質量範囲を走査時間０．５秒で分析した。
２．結果
２．１．紫外分光およびＨＰＬＣ分析
ＮＭＲ分析およびＧＣ／ＭＳ分析のクロマトグラフィー条件を至適化し、純粋な化合物を単離するために、Ｃ−１８  ｓｅｐ−ｐａｋカートリッジ分離からのメタノール画分でＨＰＬＣ−ＵＶ予備分析を行った。上記溶出法Ａは、極性の低い化合物は良好に分離したが、より極性の高い化合物を分析するには適していなかった。この理由のため、有機溶剤と水との比が異なる別の溶出法Ｂを設定した。これらの溶出法を用いて、全部で２６の化合物を分離および回収した。詳細には、溶出法Ａで１６、そして溶出法Ｂで１０の化合物を分離および回収した（表１および表２）。以下の表１および表２中に、ａの上付き文字を有する化合物は溶出法Ａで、ｂの上付き文字を有する化合物は溶出法Ｂで分離および回収されたことを示す。
２．２．ＮＭＲ分析
単離された純粋な化合物について１Ｈ  ＮＭＲを測定したデータの分析により、グリセロ脂質の存在が確認された。このことは、Ｄ−グリセロール単位のプロトンシグナルＨ−２が、Ｄ−グリセロール単位のＣ−２位にＯ−アシル基が結合している場合に特徴的なδ５．２９の吸収を示したことから確認された（Ｇ．Ｌ．Ｓａｓｓａｋｉら，Ｊ．Ｎａｔ．Ｐｒｏｄ．，第６２巻，１９９９年，第８４４頁より）。糖に特徴的な吸収帯をさらに調べることにより、これらの化合物がガラクト脂質であり、そして２つの分子群があることを同定した。これらの分子群は、ジ−Ｏ−アシルグリセロール骨格にＯ−結合しているガラクトピラノースの数が異なることにより分類された。
第一の分子群について、１Ｈ  ＮＭＲと選択的一次元ＴＯＣＳＹ（全相関分光法）スペクトルとを組み合わせた分析により、１単位のβ−Ｄ−ガラクトピラノシルの存在が突き止められた。実際、グリセロールへのβ−グリコシド化が、アノメリックカーボン（Ｃ１’位）が低磁場シフトしていること（δ１０５）およびプロトン（Ｈ１’位）が高磁場シフトしていること（δ４．２６）によって、ならびに３ＪＨ１’−Ｈ２’のカップリング定数が大きな値であること（Ｊ＞７Ｈｚ）によって確認された。さらに、３ＪＨ２’−Ｈ３’のカップリング定数が大きな値であること（Ｊ＞９Ｈｚ）と共に、糖部に含まれるＨ４’位のプロトンのカップリング定数が小さな値であること（δ３．８６、Ｊ＜３Ｈｚ）により、構成糖がガラクトースであることが判明した。
第二の分子群について、アノマー領域のＨＳＱＣ（Ｈｅｔｅｒｏｎｕｃｌｅａｒ  Ｓｉｎｇｌｅ  Ｑｕａｎｔｕｍ  Ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ：異種核一量子相関）スペクトルを調べることにより、糖部分が二糖からなることが分かった。選択的一次元ＴＯＣＳＹスペクトルにより、１単位のα−Ｄ−ガラクトピラノシルおよび１単位のβ−Ｄ−ガラクトピラノシルの存在が確認された。Ｈ４’がδ３．９１（Ｊ＜３Ｈｚ）およびＨ３’がδ３．５３の（Ｊ＞９Ｈｚ）のプロトンシグナルと共にδ４．２８（Ｊ＝７．３Ｈｚ）のアノマーシグナルから、Ｄ−グリセロール部分とβ−ガラクトピラノース糖とが結合していることが確認できた。Ｈ２”がδ３．８２（３ＪＨ１″−Ｈ２″＝３．６Ｈｚ、３ＪＨ２″−Ｈ３″＝９．５Ｈｚ）およびＨ４”がδ３．９４（Ｊ＜３Ｈｚ）のプロトンシグナルと共にδ４．９０（Ｊ＝３．６Ｈｚ）のアノマーシグナルから、α−ガラクトピラノース糖の存在が確認された。
最終的に、ＨＭＢＣ（異種核多結合相関：Ｈｅｔｅｒｏｎｕｃｌｅａｒ  Ｍｕｌｔｉｐｌｅ  Ｂｏｎｄ  Ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ）スペクトルにより、外側に位置するα−ガラクトースのＣ１″とβ−ガラクトピラノースのＨ−６’のプロトン対との間に有意な相関が見られたことから、（１″→６’）−Ｏ−グリコシド結合が明らかとなった。
これらの結果により、糖部分の糖単位数によってガラクト脂質に２つの群（モノガラクトシルジアシルグリセロール（ＭＧＤＧ）およびジガラクトシルジアシルグリセロール（ＤＧＤＧ））があること、およびそれらの脂肪酸の飽和度およびアシル鎖長が異なることが判明した。
２．３．ＬＣ−ＥＳＩ／ＭＳおよびＬＣ−ＥＳＩ／ＭＳ／ＭＳ分析
２．３．１．ＬＣ−ＥＳＩ／ＭＳ分析
ガラクト脂質の構造をさらに解明するために、Ｃ−１８  ｓｅｐ−ｐａｋカートリッジで分離したメタノール画分を、異なる移動相を用いてＬＣ−ＥＳＩ／ＭＳ分析に供した。詳細には、異なる極性を有するガラクト脂質の分離を向上させるため、有機相率が異なる２つの溶出システムを用いた（すなわち、有機溶媒の含有割合を変更させた）。さらに、移動相に０．２％蟻酸を含むまたは含まずに分析を行い、ガラクト脂質の分離および電子スプレーされた場合の挙動への影響を調べた。実際に、ガラクト脂質含量に富むメタノール画分のＭＳ分析の際の挙動は、溶媒として用いた蟻酸の酸強度にしたがって異なった。
酸性溶媒を用いた溶出条件下で、質量スペクトルは、［Ｍ＋Ｎａ］＋イオンに加えて、ガラクトシル部分からの消失が優先的に生じることから、［Ｍ＋Ｈ−１６２］＋および［Ｍ＋Ｈ−１８０］＋のイオンを生じた。さらに、これらの分子種がＬＣ−ＥＳＩ／ＭＳの装置内で衝突および崩壊を起こすことから、ジアシルグリセロール構造から脂肪酸アシル基が遊離脂肪酸として消失して、他のフラグメントイオンを生じた。これは、一般に［ＲｘＣＯ＋７４］＋イオンフラグメントとして観測される。
これらの実験条件では、［ＲｘＣＯ］＋イオンもまた存在した。ここでＸ＝１または２であり、これは、Ｘ＝１の場合はグリセロール骨格のｓｎ−１位、そして、Ｘ＝２の場合はｓｎ−２位から遊離し生じたものである。
逆に、非酸性溶出条件では、装置内での自発的なフラグメント化は生じにくく、質量スペクトルは、［Ｍ＋Ｎａ］＋イオンのみを示し、［Ｍ＋Ｈ−１６２］＋および［Ｍ＋Ｈ−１８０］＋のフラグメントはわずかも存在しなかった。
これらの結果により、各ガラクト脂質の脂肪酸組成を決定することができた。すなわち、Ｃ１６：０  パルミチン酸（またはヘキサデカン酸）；Ｃ１８：０  ステアリン酸（またはオクタデカン酸）；Ｃ１８：１  オクタデセン酸；Ｃ１８：２  オクタデカジエン酸；Ｃ１８：３  オクタデカトリエン酸；Ｃ１９：２  ノナデカジエン酸；Ｃ２０：０  アラキジン酸（またはエイコサン酸）；Ｃ２０：１  エイコセン酸；およびＣ２１：０  ヘンエイコサン酸の中の１つまたは２つの脂肪酸が、ガラクト脂質中の脂肪酸として存在することが分かったが、立体構造については決定できなかった。
２．３．２．ＬＣ−ＥＳＩ／ＭＳ／ＭＳ分析
ＬＣ−ＥＳＩ／ＭＳ／ＭＳ実験では、［Ｍ＋Ｎａ］＋前駆イオンにより生じる［Ｍ＋Ｎａ−Ｒ１ＣＯ２Ｈ］＋および［Ｍ＋Ｎａ−Ｒ２ＣＯ２Ｈ］＋のフラグメントの相対強度を算出することによって、アシル鎖の立体構造を決め、そして混合物中に存在するガラクト脂質を同定した。
溶出溶媒の酸強度は、ＭＳ／ＭＳスペクトルの断片化パターンにも影響した。実際、ＭＧＤＧ化合物について酸性条件下で測定したＬＣ−ＥＳＩ／ＭＳ／ＭＳのデータは、ガラクトース部分の開裂により生じたフラグメントイオンに加え、［Ｍ＋Ｈ−１６２］＋イオン形成を伴う断片化を検出しやすいことを示した。
ＤＧＤＧ化合物は２つのガラクトシル単位を有するので、そのＭＳ／ＭＳスペクトルでは、二番目の糖（すなわち外側に位置する糖）の消失により［Ｍ＋Ｈ−１６２］＋ＭＧＤＧイオン誘導体から得られた生成物のフラグメントイオンもまた、検出可能であった。
一方、これまでに言及したフラグメントに加えて、いずれの種類のガラクト脂質（ＭＧＤＧおよびＤＧＤＧ）についても、グリコシド結合の開裂（これは、主に中性条件で促進される）によって得られる中性脂肪酸の消失は、［Ｍ＋Ｎａ−Ｒ１ＣＯ２Ｈ］＋および［Ｍ＋Ｎａ−Ｒ２ＣＯ２Ｈ］＋のフラグメントを生じた。この知見により、これが、脂肪酸組成およびそれらの結合の配置に関する情報を簡便に提供する電子的な分析方法であることが示唆された。
ガラクト脂質アシル鎖中の脂肪酸の不飽和度および二重結合の位置の決定は、ＭＳ／ＭＳスペクトルの高分子量領域を分析することによって達成された。
２．４．脂肪酸ＧＣ／ＭＳ分析
グリセロール骨格の２つの炭素に結合している脂肪酸が何であるかを確認するために、ＨＰＬＣにより分離された純粋なガラクト脂質をエステル交換反応に供し、得られた脂肪酸メチルエステルをＧＣ／ＭＳにより分析した。純粋なガラクト脂質の脂肪酸組成は、ＭＳ／ＭＳスペクトルから推定したものと一致し、そしていくつかの場合、ポリ不飽和脂肪酸二重結合の正確な構造形態も決めることができた。脂肪酸メチルエステルのＧＣ／ＭＳ分析により、以下の脂肪酸の存在が確実に立証された：パルミチン酸（Ｃ１６：０）、ステアリン酸（Ｃ１８：０）、オレイン酸（Ｃ１８：１  ｎ−９  シス）、リノール酸（Ｃ１８：２  ｎ−６  シス）、α−リノレン酸（Ｃ１８：３  ｎ−３  シス）、ノナデカジエン酸（Ｃ１９：２）、アラキジン酸（Ｃ２０：０）、１１−エイコセン酸（Ｃ２０：１  ｎ−９  シス）、およびヘンエイコサン酸（Ｃ２１：０）。
（実施例１）
ＭＳ／ＭＳスペクトルは、ＭＧＤＧおよびＤＧＤＧの中で、Ｃの数が大きい上位シリーズ（すなわち、グリセロール骨格の２つの炭素に、少なくとも１つはＣ２０：０、Ｃ２０：１、およびＣ２１：０である脂肪酸が結合している）の化合物について、とりわけ高分子量領域において、より複雑なスペクトルを生じ、既に記載したフラグメントに加えて、種々の強いフラグメントイオンを生じた。
ＬＣ−ＥＳＩ／ＭＳクロマトグラムにおいて、溶出法Ｂにて７１．５９分の保持時間で、質量スペクトルがｍ／ｚ  ８２９．９のピークを示した化合物（表１中の化合物１１）が存在した。それは、グリセロール骨格の２つの炭素にエイコセン酸（Ｃ２０：１）およびリノレン酸（Ｃ１８：３）が結合しているＭＧＤＧにナトリウムが付加している分子に相当した。
図１は、化合物（１１）のＬＣ−ＥＳＩ／ＭＳ／ＭＳスペクトルを示す。（ａ）は全体スペクトルであり、（ｂ）は高分子量領域であり、そして（ｃ）は低分子量領域である。図１（ａ）では、ｍ／ｚ  ５１９．６および５５１．５の２つのフラグメントイオンピークが顕著に検出された。これらはそれぞれ、エイコセン酸（Ｃ２０：１）およびリノレン酸（Ｃ１８：３）の２つの脂肪酸が消失した結果であると考えられ、それにより、脂肪酸組成を決定できた。ＭＧＤＧ分子における各脂肪酸アシル鎖の結合位置を、［Ｍ＋Ｎａ−ＲｘＣＯ２Ｈ］＋イオンの相対強度により決定した。具体的には、ｓｎ−１位にエイコセン酸（２０：１）、およびｓｎ−２位にリノレン酸（１８：３）の脂肪酸アシル鎖が存在すると確認された。
文献値によれば、低分子量領域は、糖部に関連したフラグメントイオンを示す。以下、図１（ｃ）に言及して説明する。グリコシド結合の開裂によって、ｍ／ｚ  １８５．１およびｍ／ｚ  ２０３．１のフラグメントイオンピークを生じ、これらは、糖環からヒドロキシル基が脱離したもの（ｍ／ｚ  １８５．１）と保持されたもの（ｍ／ｚ  ２０３．１）にナトリウムが付加したイオンであると判断された。
また、ｍ／ｚ  ２４３．２のフラグメントイオンピークは、ガラクトシルグリセロール骨格から２つの中性脂肪酸が同時に開裂したものである。
さらに、このスペクトル領域では、ｍ／ｚ  ２６１．３、２９３．２、および３３５．４のピークも見られ、これらは、既に説明した［Ｒ１ＣＯ］＋、［Ｒ２ＣＯ］＋、および［Ｒ２ＣＯ＋７４］＋のフラグメントイオンに対応した。
また、ｍ／ｚ  ３０１．３および３１５．３のナトリウム結合イオンはそれぞれ、一方の脂肪酸が消失すると共に、他方の脂肪酸のアシル鎖の一部分が脱離したことによって形成された。この脱離は、上記他方の脂肪酸のアシル鎖のカルボニル炭素から２つまたは３つ離れた位置の炭素までの部分で生じた。
脂肪酸アシル鎖中の二重結合の位置に関する情報は、以下に説明するように、ＭＳ／ＭＳスペクトルの高分子量領域の分析で得られた。
飽和脂肪酸アシル鎖の典型的な断片化では、親イオンからのＣｎＨ２ｎの消失に起因するフラグメントイオンのみが検出可能であった。さらに、不飽和脂肪酸アシル鎖が存在する場合では、ＣｎＨ２ｎ−２およびＣｎＨ２ｎ＋２の消失もまた報告されている（Ｙ．Ｈ．Ｋｉｍら，前出）。
そこで、ｍ／ｚ  ８２９．９の［Ｍ＋Ｎａ］＋イオンのＭＳ／ＭＳスペクトルの高分子量領域を細かく分析した（図１（ｂ））。この分析により、［Ｍ＋Ｎａ−１８］＋イオンに起因するｍ／ｚ  ８１１．９のピークが観察された。これらの後者の２つのピークにより、ｓｎ−２脂肪酸アシル鎖のカルボニル炭素から１５個離れた位置の炭素に第一の二重結合が位置することが突き止められた。
代わりに、フラグメントイオンの起点がｍ／ｚ  ７７１．８からｍ／ｚ  ５５１．５までの範囲の間にあることを説明する、２つの異なる断片化経路が仮定され得た。それらのうち第一の経路は、２つの脂肪酸アシル鎖のもっぱら一方でのフラグメント化に関係するが、それは、エネルギー的に優位ではなく、そこで生じるフラグメントイオンは強度がやや弱い。
それに対して、２つの脂肪酸アシル基が同時に断片化し、検出されると、より多くのフラグメントイオンのピークについて説明することができる。例えば、ｍ／ｚ  ８１１．９のイオンから始まって、ｍ／ｚ  ７５５．８のフラグメントイオンは、ｓｎ−２脂肪酸アシル基のＣ３Ｈ４およびｓｎ−１脂肪酸アシル基のＣＨ４のそれぞれの消失、または両アシル鎖の２つのＣ２Ｈ４の消失のいずれかによって形成され得た。
そこで、７７１．８−５５１．５の分子量範囲のＭＳ／ＭＳスペクトルを分析した。その結果、ｓｎ−２アシル基の二重結合が９番目および１２番目の炭素に位置し、そしてｓｎ−１アシル基の二重結合が１１番目の炭素に位置していることを突き止め、前者は、９，１２，１５−オクタデカトリエン酸であることが確認され、および後者は、１１−エイコセン酸に起因することが分かった。
Ｃ２グリセロール位置に結合している脂肪酸アシル鎖中の二重結合の位置を立証するには、ｍ／ｚ  ５１９．６の［Ｍ＋Ｎａ−Ｒ１ＣＯ２Ｈ］＋イオンの断片化経路の分析によるＣｎＨ２ｎ、ＣｎＨ２ｎ−２、およびＣｎＨ２ｎ＋２の消失の算定もまた有用であった。
明らかに、ＭＳ／ＭＳスペクトルの高分子量領域には、［Ｍ＋Ｎａ−１８０］＋イオンによるｍ／ｚ  ６４９．７のフラグメントイオンのピークもまた生じていた。
（実施例２）
上記実施例１と同じＬＣ−ＥＳＩ／ＭＳクロマトグラムに、質量スペクトルでｍ／ｚ  ９９１．９のピークを呈示した、溶出法Ｂにて保持時間５３．０８分の化合物（２４）が存在した。このピークは、ＤＧＤＧにナトリウムが付加された分子のイオンに相当した。このＤＧＤＧは、グリセロール骨格のＳｎ−３位に２単位のガラクトシルが結合していることを除いて、実施例１のＭＧＤＧ分子と同じ脂肪酸パターンを提示している。
図２は、化合物（２４）のＬＣ−ＥＳＩ／ＭＳ／ＭＳスペクトルを示す。（ａ）は全体スペクトルであり、（ｂ）は高分子量領域であり、そして（ｃ）は低分子量領域である。ＭＳ／ＭＳスペクトル（図２）は、上記実施例１の化合物１１のＭＧＤＧ分子に非常に類似したフラグメント化パターンを示した。
図２（ａ）に示されるように、［Ｍ＋Ｎａ−Ｒ１ＣＯ２Ｈ］＋イオンおよび［Ｍ＋Ｎａ−Ｒ２ＣＯ２Ｈ］＋イオンに関連したｍ／ｚ  ６８１．７および７１３．７の２つのフラグメントイオンピークが顕著に検出された。これらは、分析している分子中の２つの脂肪酸の立体構造および組成に関して有益であった。このＤＧＤＧは、Ｃ１グリセロール位置にＣ２０：１アシル鎖を、そしてＣ２位置にＣ１８：３アシル鎖をそれぞれ提示すると結論した。
この場合、２つの脂肪酸アシル鎖の断片化は、その際に１つの鎖でのみ関与した。ｍ／ｚ  ９９１．９の［Ｍ＋Ｎａ］＋イオンで始まり、ｓｎ−２アシル鎖での断片化が進行して、最終的に関連プロピル誘導体を生じた（ｍ／ｚ  ７６９．８；図２（ｂ））。
ｓｎ−１アシル鎖での断片化についても同じである。この場合、先にｓｎ−２アシル鎖の不完全な断片化で、そして引き続いてｓｎ−１アシル鎖が関与することにより、より強いパターンもまた検出可能であった。
ｓｎ−２アシル鎖では、ｍ／ｚ  ９７３．９で［Ｍ＋Ｎａ−１８］＋イオンから始まって、Ｃ２Ｈ４の消失により生じたｍ／ｚ  ９４５．９のフラグメントイオンピークが顕著に検出され、他方、Ｃ５Ｈ８の消失により生じたｍ／ｚ  ９０５．９のフラグメントイオンピークが検出された。さらに、Ｃ８Ｈ１２およびＣ９Ｈ１２の消失により、ｍ／ｚ  ８６５．９および８５３．８のイオンピークが生じた。このプロフィールによっても、分析したフラグメント配列への１つ、２つ、および３つそれぞれの二重結合の存在の関与が説明できた。考慮したフラグメント配列の質量範囲に含まれる生じたフラグメントイオンを、より詳細に分析した。この分析により、ＣｎＨ２ｎおよびＣｎＨ２ｎ−２から１つの炭素が抜けた（ｎ＝１の単位が抜けた）と評価され、それらのそれぞれのフラグメントイオンピークが、分子量１４または１２に相当し、二重結合の位置の指標となる。このようにして、ｓｎ−２アシル鎖の二重結合の正確な位置が９番目、１２番目、および１５番目の炭素にあると決定し、Ｃ２グリセロール位置に連結している脂肪酸は、９，１２，１５−オクタデカトリエン酸であることが確認された。
同様にして、ｓｎ−１脂肪酸アシル鎖では、その１つの二重結合がカルボニル炭素から１１個離れた炭素に位置していたことが分かった。これにより、Ｃ１グリセロール位置に１１−エイコセン酸が存在すると結論付けた。
ＭＳ／ＭＳスペクトルにｍ／ｚ  ８２９．９および６６７．７の２つのフラグメントイオンが存在した。これらのイオンは、各々がガラクトース部分に対応する、２つの連続した分子量１６２の消失により生じた。このことにより、この糖が、実施例１のＭＧＤＧ化合物よりも分子量の高い同族化合物であると確認された。
実施例１と同様にして、２つの中性脂肪酸が同時に開裂されることによって、ｍ／ｚ  ４０５．５のナトリウム結合イオンが生成し、他方、一方の脂肪酸アシル鎖の消失、および他方の脂肪酸のアシル鎖の一部分の脱離によって、ｍ／ｚ  ４６３．５および４７７．５のナトリウム結合イオンが生じた。ｍ／ｚ  ５３３．７および５５１．７の［Ｍ＋Ｎａ−Ｒ１ＣＯ２Ｈ］＋イオンおよび［Ｍ＋Ｎａ−Ｒ２ＣＯ２Ｈ］＋イオンが検出されたことから、代わりに、上記一方の脂肪酸アシル鎖が、外側のガラクトースを欠くＤＧＤＧ分子から消失されたことが説明された。
さらに、ＭＳ／ＭＳスペクトルでは、ｍ／ｚ  ２９３．３、３３５．５、および３６７．１の［Ｒ１ＣＯ］＋、［Ｒ２ＣＯ＋７４］＋および［Ｒ１ＣＯ＋７４］＋フラグメントイオンもまた、示された。
（実施例３）
Ｃの数が小さい下位シリーズに属するガラクト脂質（すなわち、グリセロール骨格の２つの炭素に、Ｃ１６：０、１８：０、１８：１、１８：２、１８：３、１９：２の脂肪酸が結合している構造を有するＭＧＤＧおよびＤＧＤＧ）については、ＭＳ／ＭＳスペクトルは、上位シリーズから得られる情報ほど有益ではないようであった。それにも関わらず、上位シリーズに属するガラクト脂質の質量スペクトルとの比較により、これらの化合物についてもまた、精密な構造決定を実施することができた。
これらのスペクトルでは、［Ｍ＋Ｎａ−ＲｘＣＯ２Ｈ］＋フラグメントイオンが最も顕著に検出され、さらに［Ｍ＋Ｎａ−１６２］＋、［Ｍ＋Ｎａ−１８０］＋、および［ＲｘＣＯ＋７４］＋フラグメントイオンも共に検出された。他に生じたフラグメントイオンはほとんどなかった。
質量スペクトルでｍ／ｚ  ８１３．９の［Ｍ＋Ｎａ］＋イオンを呈示する、ＬＣ−ＥＳＩ／ＭＳクロマトグラムで溶出法Ｂにて６７．４７分の保持時間の化合物（７）を例に挙げる。図３は、化合物（７）のＭＳ／ＭＳスペクトルを示す。（ａ）は全体スペクトルであり、そして（ｂ）は高分子量領域である。図３（ａ）に示されるように、ＭＳ／ＭＳスペクトルは、ｍ／ｚ  ５１９．５および５３５．５の２つの強いイオンを示した。これらは、［Ｍ＋Ｎａ−Ｒ１ＣＯ２Ｈ］＋フラグメントイオンおよび［Ｍ＋Ｎａ−Ｒ２ＣＯ２Ｈ］＋フラグメントイオンに相当する。この質量差は、ノナデカジエン酸（Ｃ１９：２）およびリノレン酸（Ｃ１８：３）のそれぞれの消失と考えられる。さらに、これらの２つのフラグメントイオン間の強度の差により、ノナデカジエノイル鎖（Ｃ１９：２）が、ｓｎ−１位に結合し、そして他方のアシル鎖が、ｓｎ−２位に結合していることが明らかになった。
スペクトルの高分子量領域（図３（ｂ））は、それぞれ［Ｍ＋Ｎａ−１６２］＋および［Ｍ＋Ｎａ−１８０］＋によるｍ／ｚ  ６５１．８および６３３．８の２つの生じたフラグメントイオンの存在を示した。さらに、スペクトルの低分子量領域では、ｍ／ｚ  ２６１．３および３３５．４の［Ｒ２ＣＯ］＋フラグメントイオンおよび［Ｒ２ＣＯ＋７４］＋フラグメントイオンと共に、ｍ／ｚ  １８５．１および２０３．２の既に記載したフラグメントイオンピークが見られた。
実施例１または２に記載するように、アシル鎖中の二重結合の位置は、スペクトルの高分子量領域の断片化パターンの分析により決定した。
この下位シリーズに属するガラクト脂質のＭＳ／ＭＳスペクトルでは、脂肪酸アシル鎖の断片化は、その際に１つの鎖でのみ関与した。これは、Ｋｉｍら（前出）により報告されたように、両アシル鎖に共通のフラグメントイオンをしばしば生じ、そしてアルキル末端からのＣＨ４の消失から常に始まる。
ｓｎ−１アシル鎖では、ＣｎＨ２ｎが連続して消失し、ｍ／ｚ  ７５５．８および７２７．７のフラグメントイオンが生じた。一方、ｍ／ｚ  ７１５．９のフラグメントイオンが生じたことにより、１２番目の炭素にω−二重位置があることがマークされた。二番目の二重結合の位置は、ＣｎＨ２ｎおよびＣｎＨ２ｎ−２の消失に関連したｍ／ｚ  ７０１．９、６８７．８、および６７５．８のイオンにしたがって、９番目の炭素であると立証された。これらの結果により、９，１２−ノナデカジエン酸がｓｎ−１グリセロール位置にあると立証された。
ｓｎ−２アシル鎖に関する断片化パターンでは、上記のようにＣＨ４がまず消失することによりｍ／ｚ  ７９７．８のフラグメントイオンが生じ、そしてＣｎＨ２ｎ−２の消失によってｍ／ｚ  ７５７．８のフラグメントイオンが生じていた。ＣｎＨ２ｎ−２はｎ＝３であり、そして鎖の１５番目の炭素に二重結合があることが示唆される。
引き続き、ｓｎ−２アシル鎖ではＣｎＨ２ｎおよびＣｎＨ２ｎ−２が、そしてｓｎ−１アシル鎖ではＣＨ４が消失したことが、ｍ／ｚ  ７４３．８、７２７．７、７１５．９、６８７．８、および６７５．８のフラグメントイオンピークが検出されたことにより説明された。これにより、９番目および１２番目の炭素に別に２つの二重結合があることを突き止め、そしてｓｎ−２グリセロール位置に９，１２，１５−オクタデカトリエン酸があることを確認した。
二重結合の位置の決定が正確であることを検証するために、ＨＰＬＣでの分離により回収した試料をメタノール抽出し、そしてこの化合物をＧＣ／ＭＳ分析に供した。保持時間および質量スペクトルに関して脂肪酸メチルエステルの正規標準品と比較したところ、上記の結果と一致した。これにより、この化合物に９，１２−ノナデカジエン酸およびα−リノレン酸が存在することが確認できた。
これらの２つの脂肪酸はまた、別のＭＧＤＧ化合物の脂肪酸の組成分析においても観察された。その化合物は、ＬＣ−ＥＳＩ／ＭＳクロマトグラムで溶出法Ｂにて７３．３５分の保持時間で溶出され、そしてＭＳ／ＭＳスペクトルにおいて、ｍ／ｚ  ８１３．５５の［Ｍ＋Ｎａ］＋イオンを呈示した（表１中の化合物６）。この結果を説明するために、アシル鎖の結合位置が異なると考えた。この化合物におけるＭＳ／ＭＳスペクトルのｍ／ｚ  ５３５．５および５１９．５の［Ｍ＋Ｎａ−Ｒ１ＣＯ２Ｈ］＋フラグメントイオンおよび［Ｍ＋Ｎａ−Ｒ２ＣＯ２Ｈ］＋の２つのフラグメントイオンの相対強度を算定し、ｓｎ−１グリセロール位にリノレン酸が、そしてｓｎ−２グリセロール位にノナデカジエン酸が位置していたことを確認した。ＭＳ／ＭＳスペクトル研究により、両アシル鎖の二重結合の位置を決め、α−リノレン酸および９，１２−ノナデカジエン酸であることが確認された。
（実施例４）
同様に、異なる極性度を有するガラクト脂質の分離を向上させるために２つの溶出法（ＡおよびＢ）を用いて溶出した化合物のアシル鎖に対する脂肪酸組成、立体構造、および二重結合の位置によって、混合物中に存在する全てのガラクト脂質を決定した。この結果は、下記の表１および表２に記載したとおりである。したがって、実施例１〜３に記載した化合物（化合物１１、２４、７および６）に加えて、表１および表２中の化合物１、８〜１０、１２〜１４、１７、２２、２３、２５、２６により示される新規なガラクト脂質を得ることができた。
以下の表１および表２に、同定されたガラクト脂質の種々の化合物を示す。表１は、構造式（Ｉ）を有するＭＧＤＧを示し、そして表２は、構造式（ＩＩ）を有するＤＧＤＧを示す。表１および表２中、Ｒ１およびＲ２はそれぞれ、グリセロール骨格のｓｎ−１位に結合している脂肪酸アシル基およびｓｎ−２位に結合している脂肪酸アシル基を示す。脂肪酸アシル基の表記は、生合成を論ずる場合の表記に従う。二重結合の位置は、カルボニル基と反対側から番号を付して記載しているので、例えば、９位、１２位、および１５位にシス二重結合を有するα−リノレン酸は、「Ｃ１８：３  ｎ−６  シス」と表記した。
【表１】
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【表２】
2008108001.tif 000007
（実施例５）
サツマイモの種芋を植え込み、茎の長さ（地面から外に出ている部分の長さ）が１５０ｃｍ程度となるまで栽培した。次いで、サツマイモ苗条の先端部から６０ｃｍの部分（苗条の若葉）を刈り取り、水で２回洗浄して１ｋｇのサツマイモ葉を得た。
得られたサツマイモ葉を５ｍｍ程度にカットし、ｐＨ８．０に調整した２Ｌの熱水（９０℃）へサツマイモ葉を１分間浸漬した。次いで、２５℃の水で冷却し、冷却したサツマイモ葉を３０秒間遠心分離してある程度まで脱水した。脱水後、水分量が約２０質量％となるまで、乾燥機中７０℃で２時間温風乾燥（一次乾燥）し、さらに最終水分量が３質量％となるように、８０℃で４時間温風乾燥（二次乾燥）した。次いで、１５０℃の飽和水蒸気を用いて、３秒間加圧蒸気殺菌した。次いで、サツマイモ葉に含まれている水を温風乾燥で乾燥した後、２００メッシュ区分を９０質量％が通過するようにハンマーミルを用いて微粉砕し、サツマイモ葉の乾燥粉末（８０ｇ）を得た。
上記粉末を用いて、下記の配合量で食品（錠剤；２００ｍｇ／錠）を製造し得る。
＜原料＞                                        配合量（質量％）
サツマイモ葉乾燥粉末                                  ５
大麦若葉末                                          １１
アスコルビン酸                                      １０
結晶セルロース                                      １４
ショ糖エステル                                        ４
還元麦芽糖                                          ３０
二酸化ケイ素                                          １
トレハロース                                          ２５
（実施例６）
上記実施例５の乾燥粉末を用いて、下記の配合量で食品（顆粒）を製造し得る。
＜原料＞                                      配合量（質量％）
サツマイモ葉乾燥粉末                                ２
ケール乾燥粉末                                    ３３
茶カテキン                                        １０
結晶セルロース                                    ２０
還元麦芽糖                                        ３５
（実施例７）
上記実施例５の乾燥粉末および難消化性デキストリンを用いて、食品を製造し得る。
（実施例８）
上記実施例５の乾燥粉末およびオリゴ糖を用いて、食品を製造し得る。
（実施例９）
上記実施例５の乾燥粉末および乳酸菌を用いて、食品を製造し得る。
【産業上の利用可能性】
【０００７】
本発明のガラクト脂質は、その生物学的活性に基づいて、医薬品、食物および飲料、ならびに化粧品への利用が考えられる。上記生物学的活性としては、例えば、抗腫瘍作用、抗炎症作用、抗酸化作用などが挙げられる。本発明のガラクト脂質は、抗コレステロール作用、血流改善作用などを有する機能性食品、サプリメント、ならびに肌質改善効果、美容効果、および保湿効果を有する化粧料の製造に用いられ得る。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【国際調査報告】
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