(57)【要約】  一般式（Ｉ）【化１】2008068974.tif 000020〔式中、ＸはＯなどを示し、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ８、Ｒ９は水素原子などを示し、Ｒ２はハロゲン原子などを示し、Ｒ７はジメチルアミノ基などを示す。〕で表される化合物若しくは前記化合物を放射性核種で標識した化合物、又はこれらの化合物の医薬上許容される塩を含有するアミロイド関連疾患診断用組成物を提供する。一般式（Ｉ）で表される化合物は、アミロイドβ蛋白に対する高い結合特異性、高い血液脳関門の透過性、脳内老人斑以外の部位からの速やかな消失性を併せ持つ。
2008068974.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式（Ｉ）
【化１】
2008068974.tif 000019
〔式中、ＸはＯ又はＮＨを示し、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４は同一又は異なって、水素原子、ハロゲン原子、式：−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−Ｆ [式中、ｎは１〜１０の整数を表す。] で表される基、又は式：−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−ＯＨ [式中、ｎは１〜１０の整数を表す。] で表される基を示し、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９は同一又は異なって、水素原子、ハロゲン原子、ジメチルアミノ基、メチルアミノ基、アミノ基、メトキシ基、水酸基、式：−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−Ｆ [式中、ｎは１〜１０の整数を表す。] で表される基、又は式：−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−ＯＨ [式中、ｎは１〜１０の整数を表す。] で表される基を示す。〕
で表される化合物若しくは前記化合物を放射性核種で標識した化合物、又はこれらの化合物の医薬上許容される塩を含有するアミロイド関連疾患診断用組成物。
【請求項２】
一般式（Ｉ）におけるＸがＯである請求項１に記載のアミロイド関連疾患診断用組成物。
【請求項３】
一般式（Ｉ）におけるＲ２がフッ素原子、ヨウ素原子、又は式：−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−Ｆ [式中、ｎは１〜１０の整数を表す。] で表される基である請求項１又は２に記載のアミロイド関連疾患診断用組成物。
【請求項４】
一般式（Ｉ）におけるＲ２がフッ素原子、ヨウ素原子、又は式：−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−Ｆ [式中、ｎは１〜１０の整数を表す。] で表される基であり、Ｒ１、Ｒ３、及びＲ４が水素原子である請求項１又は２に記載のアミロイド関連疾患診断用組成物。
【請求項５】
一般式（Ｉ）におけるＲ７がフッ素原子、ヨウ素原子、ジメチルアミノ基、メチルアミノ基、アミノ基、メトキシ基、水酸基、式：−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−Ｆ [式中、ｎは１〜１０の整数を表す。] で表される基、又は式：−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−ＯＨ [式中、ｎは１〜１０の整数を表す。] で表される基である請求項１乃至４のいずれか一項に記載のアミロイド関連疾患診断用組成物。
【請求項６】
一般式（Ｉ）におけるＲ７がフッ素原子、ヨウ素原子、ジメチルアミノ基、メチルアミノ基、アミノ基、メトキシ基、水酸基、式：−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−Ｆ [式中、ｎは１〜１０の整数を表す。] で表される基、又は式：−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−ＯＨ [式中、ｎは１〜１０の整数を表す。] で表される基であり、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ８、及びＲ９が水素原子である請求項１乃至４のいずれか一項に記載のアミロイド関連疾患診断用組成物。
【請求項７】
放射性核種が、陽電子放出核種である請求項１乃至６のいずれか一項に記載のアミロイド関連疾患診断用組成物。
【請求項８】
放射性核種が、γ線放出核種である請求項１乃至６のいずれか一項に記載のアミロイド関連疾患診断用組成物。
【請求項９】
アミロイド関連疾患が、アルツハイマー病である請求項１乃至８のいずれか一項に記載のアミロイド関連疾患診断用組成物。
【請求項１０】
アミロイド関連疾患のモデル動物に被験物質を投与する工程、前記モデル動物に請求項１乃至９のいずれか一項に記載のアミロイド関連疾患診断用組成物を投与する工程、及び前記モデル動物の脳中に含まれる一般式（Ｉ）で表される化合物の分布又は量を調べる工程を含むアミロイド関連疾患の治療薬又は予防薬のスクリーニング方法。
【請求項１１】
アミロイド関連疾患のモデル動物に前記疾患の治療薬又は予防薬を投与する工程、前記モデル動物に請求項１乃至９のいずれか一項に記載のアミロイド関連疾患診断用組成物を投与する工程、及び前記モデル動物の脳中に含まれる一般式（Ｉ）で表される化合物の分布又は量を調べる工程を含むアミロイド関連疾患の治療薬又は予防薬の評価方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、オーロン誘導体を含有する診断用組成物に関する。本発明の組成物は、アルツハイマー病などのアミロイド関連疾患の診断に用いることができる。
【背景技術】
【０００２】
近年の急速な高齢化に伴い、アルツハイマー病(AD)をはじめとする痴呆性疾患の増加が大きな社会問題のひとつになっている。現在、ADの臨床診断法には、長谷川式、ADAS、MMSEがあり、いずれもADが疑われる個体の認知機能の低下を定量的に評価する方法が一般的に用いられる。この他画像診断法（MRI, CT等）が補助的に用いられるが、これらの診断法ではADを確定診断するには不十分であり、確定診断には生前における脳の生検、死後脳の病理組織学的検査において、老人斑と神経原繊維の出現を確認することが必要である。したがって、現在の診断方法では、広範な脳障害が生じる前の早期段階でADを診断するのは困難である。これまでにADの生物学的診断マーカーとしていくつかの報告があるが、臨床上実用的なものはいまだ開発されていない。このような状況下、ADの早期診断に対する社会的要求は高く、その早急な開発が強く望まれている。【０００３】
老人斑はADの最も特徴的な脳病変であり、その主構成成分はβシート構造をとったアミロイドβ蛋白である。体外からの老人斑の画像化はADの有効な診断法の確立につながると考えられるが、画像化には、アミロイドβ蛋白と特異的に結合するプローブ化合物が必要である。これまでに、プローブ化合物としてコンゴーレッドおよびチオフラビンTを母体構造とする誘導体が、いくつか報告されているが（特開2004-250407号公報、特開2004-250411号公報、W.E.Klunk et al., Annals of Neurology Vol55 No.3 March 2004 306-319）、アミロイドβ蛋白に対する結合特異性が低いこと、血液脳関門の透過性が低いこと、脳内での非特異的結合によりクリアランスが遅いことなど問題が少なくない。それゆえ、報告されたこれらの化合物は未だアミロイドが蓄積する疾患の診断において実用化されていないのが現状である。また、本発明者らは、フラボン誘導体、カルコン誘導体、スチリルクロモン誘導体、クマリン誘導体などがアミロイドβ蛋白と特異的に結合することを見出し、先に出願を行っている（特許文献１）。【０００４】
【特許文献１】国際公開第2006/057323号パンフレット
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明は、以上のような技術的背景のもとになされたものであり、アミロイドβ蛋白に対する高い結合特異性、高い血液脳関門の透過性、脳内老人斑以外の部位からの速やかな消失性を併せ持つ化合物を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者は、上記課題を解決するため鋭意検討を重ねた結果、オーロンの誘導体が、アミロイドβ蛋白を画像化するためのプローブ化合物としてきわめて優れた性質を持つことを見出し、この知見から本発明を完成するに至った。
即ち、本発明は、以下の（１）〜（１１）を提供するものである。【０００７】
（１）一般式（Ｉ）
【化１】
2008068974.tif 000003
〔式中、ＸはＯ又はＮＨを示し、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４は同一又は異なって、水素原子、ハロゲン原子、式：−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−Ｆ [式中、ｎは１〜１０の整数を表す。] で表される基、又は式：−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−ＯＨ [式中、ｎは１〜１０の整数を表す。] で表される基を示し、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９は同一又は異なって、水素原子、ハロゲン原子、ジメチルアミノ基、メチルアミノ基、アミノ基、メトキシ基、水酸基、式：−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−Ｆ [式中、ｎは１〜１０の整数を表す。] で表される基、又は式：−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−ＯＨ [式中、ｎは１〜１０の整数を表す。] で表される基を示す。〕
で表される化合物若しくは前記化合物を放射性核種で標識した化合物、又はこれらの化合物の医薬上許容される塩を含有するアミロイド関連疾患診断用組成物。【０００８】
（２）一般式（Ｉ）におけるＸがＯである（１）に記載のアミロイド関連疾患診断用組成物。
（３）一般式（Ｉ）におけるＲ２がフッ素原子、ヨウ素原子、又は式：−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−Ｆ [式中、ｎは１〜１０の整数を表す。] で表される基である（１）又は（２）に記載のアミロイド関連疾患診断用組成物。
（４）一般式（Ｉ）におけるＲ２がフッ素原子、ヨウ素原子、又は式：−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−Ｆ [式中、ｎは１〜１０の整数を表す。] で表される基であり、Ｒ１、Ｒ３、及びＲ４が水素原子である（１）又は（２）に記載のアミロイド関連疾患診断用組成物。【０００９】
（５）一般式（Ｉ）におけるＲ７がフッ素原子、ヨウ素原子、ジメチルアミノ基、メチルアミノ基、アミノ基、メトキシ基、水酸基、式：−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−Ｆ [式中、ｎは１〜１０の整数を表す。] で表される基、又は式：−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−ＯＨ [式中、ｎは１〜１０の整数を表す。] で表される基である（１）乃至（４）のいずれかに記載のアミロイド関連疾患診断用組成物。【００１０】
（６）一般式（Ｉ）におけるＲ７がフッ素原子、ヨウ素原子、ジメチルアミノ基、メチルアミノ基、アミノ基、メトキシ基、水酸基、式：−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−Ｆ [式中、ｎは１〜１０の整数を表す。] で表される基、又は式：−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−ＯＨ [式中、ｎは１〜１０の整数を表す。] で表される基であり、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ８、及びＲ９が水素原子である（１）乃至（４）のいずれかに記載のアミロイド関連疾患診断用組成物。【００１１】
（７）放射性核種が、陽電子放出核種である（１）乃至（６）のいずれかに記載のアミロイド関連疾患診断用組成物。
（８）放射性核種が、γ線放出核種である（１）乃至（６）のいずれかに記載のアミロイド関連疾患診断用組成物。
（９）アミロイド関連疾患が、アルツハイマー病である（１）乃至（８）のいずれかに記載のアミロイド関連疾患診断用組成物。【００１２】
（１０）アミロイド関連疾患のモデル動物に被験物質を投与する工程、前記モデル動物に（１）乃至（９）のいずれかに記載のアミロイド関連疾患診断用組成物を投与する工程、及び前記モデル動物の脳中に含まれる一般式（Ｉ）で表される化合物の分布又は量を調べる工程を含むアミロイド関連疾患の治療薬又は予防薬のスクリーニング方法。【００１３】
（１１）アミロイド関連疾患のモデル動物に前記疾患の治療薬又は予防薬を投与する工程、前記モデル動物に（１）乃至（９）のいずれかに記載のアミロイド関連疾患診断用組成物を投与する工程、及び前記モデル動物の脳中に含まれる一般式（Ｉ）で表される化合物の分布又は量を調べる工程を含むアミロイド関連疾患の治療薬又は予防薬の評価方法。
【発明の効果】
【００１４】
一般式（Ｉ）で表される化合物は、アミロイドβ蛋白に対し高い結合特異性を持ち、また、脳内老人斑以外の部位からの速やかに消失する性質を持つので、アルツハイマー病の診断に有用である。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】ジメチルアミノ基等を持つオーロン誘導体の合成法を示す図（１）。図中の番号は化合物の番号を示す。
【図２】ジメチルアミノ基等を持つオーロン誘導体の合成法を示す図（２）。図中の番号は化合物の番号を示す。
【図３】ジメチルアミノ基等を持つオーロン誘導体の合成法を示す図（３）。図中の番号は化合物の番号を示す。
【図４】[125I]標識オーロン誘導体のAb(1-42)凝集体への結合性を示す図（１）。
【図５】[125I]標識オーロン誘導体のAb(1-42)凝集体への結合性を示す図（２）。
【図６】アルツハイマー病患者海馬脳切片を用いたオートラジオグラフィー及び免疫染色の結果を示す図。
【図７】ヒドロキシエトキシ基等を持つオーロン誘導体の合成法を示す図（１）。図中の番号は化合物の番号を示す。
【図８】ヒドロキシエトキシ基等を持つオーロン誘導体の合成法を示す図（２）。図中の番号は化合物の番号を示す。
【図９】アルツハイマー病モデルマウスの脳切片を用いた免疫染色の結果を示す図（１：化合物２６，２：チオフラビンS，３:抗アミロイド抗体）。
【図１０】アルツハイマー病患者海馬脳切片を用いたオートラジオグラフィー及び免疫染色の結果を示す図（Ａ：[125I]２６のオートラジオグラフィー、Ｂ：抗アミロイドβ(1-42)抗体による免疫染色陽性部位、Ｃ：抗アミロイドβ(1-42)抗体による免疫染色陰性部位）。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１６】
以下、本発明を詳細に説明する。
本発明において、「ハロゲン原子」とは、例えば、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子である。
式：−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−Ｆにおいてｎは、好適には１〜３である。
式：−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−ＯＨにおいてｎは、好適には１〜３である。【００１７】
一般式（Ｉ）においてＸは、好適には、Ｏである。
一般式（Ｉ）においてＲ１は、好適には、水素原子である。
一般式（Ｉ）においてＲ２は、好適には、フッ素原子、ヨウ素原子、又は式：−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−Ｆ [式中、ｎは１〜１０の整数を表す。] で表される基であり、より好適には、フッ素原子、ヨウ素原子、２−フルオロエトキシ基、２−（２−フルオロエトキシ）エトキシ基、又は２−｛２−（２−フルオロエトキシ）エトキシ｝エトキシ基である。【００１８】
一般式（Ｉ）においてＲ３は、好適には、水素原子である。
一般式（Ｉ）においてＲ４は、好適には、水素原子である。
一般式（Ｉ）においてＲ５は、好適には、水素原子である。
一般式（Ｉ）においてＲ６は、好適には、水素原子である。【００１９】
一般式（Ｉ）においてＲ７は、フッ素原子、ヨウ素原子、ジメチルアミノ基、メチルアミノ基、アミノ基、メトキシ基、水酸基、式：−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−Ｆ [式中、ｎは１〜１０の整数を表す。] で表される基、又は式：−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−ＯＨ [式中、ｎは１〜１０の整数を表す。] で表される基であり、より好適には、フッ素原子、ヨウ素原子、ジメチルアミノ基、メチルアミノ基、アミノ基、メトキシ基、水酸基、２−フルオロエトキシ基、２−（２−フルオロエトキシ）エトキシ基、２−｛２−（２−フルオロエトキシ）エトキシ｝エトキシ基、２−ヒドロキシエトキシ基、２−（２−ヒドロキシエトキシ）エトキシ基、又は２−｛２−（２−ヒドロキシエトキシ）エトキシ｝エトキシ基であり、より好適には、ジメチルアミノ基、メチルアミノ基、２−ヒドロキシエトキシ基、２−（２−ヒドロキシエトキシ）エトキシ基、又は２−｛２−（２−ヒドロキシエトキシ）エトキシ｝エトキシ基である。【００２０】
一般式（Ｉ）においてＲ８は、好適には、水素原子である。
一般式（Ｉ）においてＲ９は、好適には、水素原子である。
一般式（Ｉ）で表される化合物のうち代表的なものを下表に示す。なお、表中の「Me」はメチル基を表し、「FX」は２−フルオロエトキシ基を表し、「FX2」は２−（２−フルオロエトキシ）エトキシ基を表し、「FX3」は２−｛２−（２−フルオロエトキシ）エトキシ｝エトキシ基を表し、「HOX」は２−ヒドロキシエトキシ基を表し、「HOX2」は２−（２−ヒドロキシエトキシ）エトキシ基を表し、「HOX3」は２−｛２−（２−ヒドロキシエトキシ）エトキシ｝エトキシ基を表す。【００２１】
【表１】
2008068974.tif 000004
【表２】
2008068974.tif 000005
【表３】
2008068974.tif 000006
【表４】
2008068974.tif 000007
【表５】
2008068974.tif 000008
【表６】
2008068974.tif 000009
【表７】
2008068974.tif 000010
【表８】
2008068974.tif 000011
【表９】
2008068974.tif 000012
【表１０】
2008068974.tif 000013
【表１１】
2008068974.tif 000014
【表１２】
2008068974.tif 000015
【００２２】
上記化合物のうちで、好ましい化合物として、I-6（化合物１４）、I-7（化合物１７）、I-8（化合物２０）、I-86（化合物７）、I-106（化合物１２）、I-741（化合物２６）、I-742（化合物２７）、I-743（化合物２８）を挙げることができ、より好ましい化合物としてI-86、I-106を挙げることができる。
一般式（Ｉ）で表される化合物は、後述する実施例の記載、及びVarma RS et al, Tetrahedron Letters, 33(40), 5937-40, 1992などの記載に従って合成することができる。【００２３】
一般式（Ｉ）で表される化合物は、標識物質によって標識されていることが好ましい。標識物質としては、蛍光物質、アフィニティー物質などを使用してもよいが、放射性核種を使用するのが好しい。標識に用いる放射性核種の種類は特に限定されず、使用の態様によって適宜決めることができる。例えば、一般式（Ｉ）で表される化合物をコンピューター断層撮影法（SPECT）による診断に使用する場合、放射性核種は９９ｍＴｃ、１１１Ｉｎ、６７Ｇａ、２０１Ｔｌ、１２３Ｉ、１３３Ｘｅ（好適には、９９ｍＴｃ、１２３Ｉ）などのγ線放出核種を使用することができる。また、陽電子断層撮影法（PET）による診断に使用する場合には、１１Ｃ、１３Ｎ、１５Ｏ、１８Ｆ、６２Ｃｕ、６８Ｇａ、７６Ｂｒ（好適には、１１Ｃ、１３Ｎ、１５Ｏ、１８Ｆ）などの陽電子放出核種を使用することができる。また、一般式（Ｉ）で表される化合物をヒト以外の動物に投与する場合には、より半減期の長い放射性核種、例えば、１２５Ｉなどを使用してもよい。放射性核種は、一般式（Ｉ）で表される化合物の分子中に含まれる形でもよく、また、一般式（Ｉ）で表される化合物に結合する形であってもよい。【００２４】
一般式（Ｉ）で表される化合物に放射性核種を結合させる方法は、各放射性核種において一般的に用いられている方法でよい。また、一般式（Ｉ）で表される化合物に放射性核種を結合させる場合、放射性核種のみを結合させてもよいが、他の物質と結合した状態の放射性核種を結合させてもよい。前述した９９ｍＴｃは、通常、錯体の形で被標識化合物に結合させるので、一般式（Ｉ）で表される化合物に結合させる場合も、９９ｍＴｃを含む錯体を結合させてもよい。９９ｍＴｃを含む錯体としては、２−ヒドラジノピリジンを含む錯体（Liu S et al, Bioconjug Chem. 1996 Jan-Feb;7(1):63-71.）、Ｎ−（２−メルカプトエチル）−２−〔（２−メルカプトエチル）アミノ〕−アセトアミドを含む錯体（Zhen W et al, J Med Chem. 1999 Jul 29;42(15):2805-15.）、２，２’−（１，２−エタンジイルジイミノ）ビスエタンチオールを含む錯体（Oya S et al, Nucl Med Biol. 1998 Feb;25(2):135-40.）、トリカルボニル錯体（Schibli R et al, Bioconjug Chem. 2000 May-Jun;11(3):345-51）などを例示できる。【００２５】
一般式（Ｉ）で表される化合物の代わりに、医薬上許容される塩を使用することも可能である。医薬上許容される塩としては、アルカリ金属塩（ナトリウム塩、カリウム塩、リチウム塩）、アルカリ土類金属塩（カルシウム塩、マグネシウム塩）、硫酸塩、塩酸塩、硝酸塩、リン酸塩などを例示できる。【００２６】
本発明の組成物はアミロイド関連疾患の診断に用いられる。ここで、「アミロイド関連疾患」とは、アミロイドβ蛋白の蓄積によって起きる疾患をいい、主にアルツハイマー病を意味するが、ダウン症候群、オランダ型アミロイドーシスを伴う遺伝性脳出血症（hereditary cerebral hemorrhage with amyloidosis─Dutch type: HCHWA-D）などの疾患も含まれる。また、一般には「疾患」と認識されない疾患の前駆症状も、本発明における「アミロイド関連疾患」に含まれる。このような疾患の前駆症状としては、アルツハイマー病の発症前にみられる軽度認知障害（MCI）などを例示できる。【００２７】
本発明の組成物によるアミロイド関連疾患の診断は、通常、本発明の組成物を診断対象者又は実験動物などに投与し、その後、脳の画像を撮影し、画像における一般式（Ｉ）で表される化合物の状態（量、分布等）に基づいて行う。本発明の組成物の投与方法は特に限定されず、化合物の種類、標識物質の種類などに応じて適宜決めることができるが、通常は、皮内、腹腔内、静脈、動脈、又は脊髄液への注射又は点滴等によって投与する。本発明の組成物の投与量は特に限定されず、化合物の種類、標識物質の種類などに応じて適宜決めることができるが、成人の場合、一般式（Ｉ）で表される化合物を１日当たり10-10〜10-3mg投与するのが好ましく、10-8〜10-5 mg投与するのが更に好ましい。【００２８】
上記のように本発明の組成物は、通常、注射又は点滴によって投与するので、注射液や点滴液に通常含まれる成分を含んでいてもよい。このような成分としては、液体担体（例えば、リン酸カリウム緩衝液、生理食塩水、リンゲル液、蒸留水、ポリエチレングリコール、植物性油脂、エタノール、グリセリン、ジメチルスルホキサイド、プロピレングリコールなど）、抗菌剤、局所麻酔剤（例えば、塩酸プロカイン、塩酸ジブカインなど）、緩衝液（例えば、トリス−塩酸緩衝液、ヘペス緩衝液など）、浸透圧調節剤（例えば、グルコース、ソルビトール、塩化ナトリウムなど）を例示できる。【００２９】
本発明のアミロイド関連疾患診断用組成物は、アミロイド関連疾患の治療薬や予防薬のスクリーニングにも利用できる。例えば、アルツハイマー病などの「疾患」のモデル動物に被験物質を投与した後、前記モデル動物に本発明のアミロイド関連疾患診断用組成物を投与し、その後、前記モデル動物の脳中に含まれる一般式（Ｉ）で表される化合物の分布又は量を調べ、その結果、コントロール（被験物質を投与していないモデル動物）との間に有意な差異（例えば、分布部位の縮小、量の減少など）が検出されれば、被験物質はアミロイド関連疾患の治療薬の候補となり得る。また、軽度認知障害などの「疾患の前駆症状」のモデル動物に被験物質を投与した後、前記モデル動物に本発明のアミロイド関連疾患診断用組成物を投与し、その後、前記モデル動物の脳中に含まれる一般式（Ｉ）で表される化合物の分布又は量を調べ、その結果、コントロールとの間に有意な差異（例えば、分布部位の縮小又は拡大の鈍化、量の減少又は増大の鈍化など）が検出されれば、被験物質はアミロイド関連疾患の予防薬の候補となり得る。【００３０】
また、本発明のアミロイド関連疾患診断用組成物は、既に効果が確認されているアミロイド関連疾患の治療薬や予防薬の評価にも利用できる。即ち、アミロイド関連疾患のモデル動物に前記疾患の治療薬又は予防薬を投与した後、前記モデル動物に本発明のアミロイド関連疾患診断用組成物を投与し、その後、前記モデル動物の脳中に含まれる一般式（Ｉ）で表される化合物の分布又は量を調べ、これにより、前記治療薬や予防薬の評価（具体的には、有効な投与量、有効な投与方法など）を行う。
【実施例】
【００３１】
以下、実施例により本発明を更に詳細に説明する。
〔実施例１〕
〔実験方法〕
（１）試薬・機器
放射性ヨウ素-125 (125I)はアマシャムバイオサイエンス株式会社IODINE-125 (185 MBq)を用いた。逆相HPLCはナカライテスク社製Cosmosil 5C18-ARカラム(4.6 x 150 mm)を用いて、超純水(A)とアセトニトリル(B)をA:B = 30 : 70を溶出溶媒とし、流速1.0 mL/minで分析した。質量分析は、JEOL IMS-DX300を用いて測定した。Amyloid βProtein (Human, 1-42) [TFA form]はペプチド研究所より購入し、その他の試薬は特級試薬を用いた。1H-NMRは、Varian Gemini 300を用い、テトラメチルシランを内部標準物質として測定した。
（２）オーロン誘導体の合成 【００３２】
2-(2-メトキシ-2-オキソエトキシ)-5-ブロモ安息香酸メチルエステル（化合物１）の合成
2-ヒドロキシ-5-ブロモ安息香酸メチルエステル（1.5 g, 6.49 mmol）をアセトン（10 mL）に溶かし、K2CO3 （2.7 g）を加えた。続いて撹拌下、臭化酢酸エチル（1.3 mL）を滴下していき、3時間加熱還流した。反応終了後、溶媒を減圧留去し、精製水100 mLを加え、酢酸エチル100 mLで抽出した。無水硫酸ナトリウムで脱水後、溶媒を減圧留去し、目的物である化合物１を得た。収量1.60 g（収率77.7 %） 1H NMR (300 MHz, CDCl3) d 1.29 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 3.91 (s, 3H), 4.24 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 4.69 (s, 2H), 6.78 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 7.54 (d, J = 6.3 Hz, 1H), 7.96 (s, 1H) .【００３３】
2-(カルボキシメトキシ)-5-ブロモ安息香酸（化合物２）の合成
化合物１（1.60 g, 5.04 mmol）をメタノール（10 mL）に溶かし、続いて10% NaOH（3.0 mL）を加え2時間反応させた。反応終了後、冷却下1N HClを加え、析出した結晶を吸引瀘取し、目的物である化合物２を得た。収量1.10 g（収率 79.4 %）. 【００３４】
5-ブロモ-3-アセトキシベンゾフラン（化合物３）の合成
無水酢酸（20 mL）と酢酸（4 mL）の混液に化合物２（1.10 g, 4.00 mmol）を溶解させた。続いて、酢酸ナトリウム（1.0 g）を加え5時間加熱還流した。反応終了後、反応液に精製水100 mLを加え、クロロホルム100 mLで抽出し、目的物である化合物３を得た。収量0.70 g (収率 68.4 %) 1H NMR (300 MHz, CDCl3) d 2.37 (s, 3H), 7.33 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 7.43 (dd, J = 3.6, 2.1 Hz, 1H), 4.69 (s, 2H), 7.71 (s, 1H), 8.02 (s, 1H).【００３５】
5-ブロモ-3(2H)-ベンゾフラノン（化合物４）の合成
化合物３をメタノール（10 mL）に溶解させ、精製水（5 mL）、1N HCl（2 mL）を加え、撹拌下3時間加熱還流した。反応終了後、反応液を冷却し、精製水（100 mL）を加えた。析出した結晶を吸引瀘取し、目的物である化合物４を得た。収量0.50 g（収率 86.9 %） 1H NMR (300 MHz, CDCl3) d 4.67 (s, 2H), 7.06 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 7.69 (dd, J = 2.1, 2.1 Hz, 1H), 7.79 (d, J = 2.1 Hz, 1H).【００３６】
5-ブロモ-4’-ジメチルアミノオーロン（化合物５）の合成
化合物４（50 mg, 0.23 mmol）と4-ジメチルアミノベンズアルデヒド（35 mg, 0.235 mmol）のクロロホルム溶液に酸化アルミナ (1.6 g)を加え、20分撹拌した。反応終了後、クロロホルム（100 mL）で抽出した後、溶媒を減圧留去し、目的物である化合物５を得た。収量42 mg（収率 51.9 %） 1H NMR (300 MHz, CDCl3) d 3.09 (s, 6H), 6.70 (d, J = 11.4 Hz, 2H), 6.95 (s, 1H), 7.22 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 7.67 (d, J =9.6Hz, 1H), 7.83 (d, J =9.0 Hz, 2H), 7.92 (d, J =2.1 Hz, 1H).【００３７】
5-トリブチルスズ-4’-ジメチルアミノオーロン（化合物６）の合成
化合物５（12 mg, 0.035 mmol）のジオキサン溶液（5 mL）に、ビス（トリブチルスズ）（0.3 mL）、テトラトリフェニルホスフィンパラジウム（50 mg, 0.043 mmol）、トリエチルアミン（5 mL）を加え、90℃で3時間加熱した。反応溶媒を減圧留去し、残渣を酢酸エチル/ヘキサン（1/4）を溶出溶媒とするシリカゲルカラムクロマトグラフィに付し、目的物である化合物６を得た。収量7.0 mg（収率35.2 %）1H NMR (300 MHz, CDCl3) d 0.86-1.57 (m, 27H), 3.07 (s, 6H), 6.75 (d, J = 9.0 Hz, 2H), 6.92 (s, 1H), 7.29 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.67 (dd, J =1.2, 0.9 Hz, 1H), 7.86 (d, J =9.0 Hz, 2H), 7.95 (s, 1H).【００３８】
5-ヨード-4’-ジメチルアミノオーロン（化合物７）の合成
化合物６（7 mg, 0.35 mmol）をクロロホルム3 mLに溶解し、撹拌下ヨウ素のクロロホルム溶液（0.7 mL, 0.25 M）を室温で加えた。室温で10分間反応させた後、飽和亜硫酸水素ナトリウム水溶液（15 mL）を加え、反応を終了させた。クロロホルム層を分液し、硫酸ナトリウムで乾燥、溶媒を減圧留去後、残渣を酢酸エチル/ヘキサン(1/4)を溶出溶媒とするシリカゲルクロマトグラフィに付し、目的物である化合物７を得た。収量3.0 mg（収率63.9 %） 1H NMR (300 MHz, CDCl3) d 3.08 (s, 6H), 6.74 (d, J = 9.0 Hz, 2H), 6.95 (s, 1H), 7.12 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 7.82-7.88 (m, 3H), 8.12 (s, 1H). MS m/z 391 (M+).【００３９】
5-ブロモ-4’-ニトロオーロン（化合物８）の合成
化合物４（100 mg, 0.47 mmol）と4-ニトロベンズアルデヒド（80 mg, 0.53 mmol）のクロロホルム溶液に酸化アルミナ(3.0 g)を加え、20分間撹拌した。反応終了後、クロロホルム（100 mL）で抽出した後、溶媒を減圧留去し、目的物である化合物８を得た。収量100 mg（収率 61.6 %）.【００４０】
5-ブロモ-4’-アミノオーロン（化合物９）の合成
化合物８（10 mg, 0.028 mmol）のエタノール（10 mL）溶液に、撹拌下塩化スズ(II)（0.64 mg, 2.37 mmol）を徐々に加え、2時間加熱還流した。反応終了後、反応溶液に1N 水酸化ナトリウム水溶液（100 mL）を加え、酢酸エチル（100 mL）で抽出した。無水酢酸ナトリウムで脱水後、溶媒を減圧留去し、目的物である化合物９を得た。収量7.0 mg (収率79.1 %) 1H NMR (300 MHz, CDCl3) d 4.11 (s, 2H), 6.72 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 6.90 (s, 1H), 7.23 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.70 (dd, J =2.1, 2.1 Hz, 1H), 7.76 (d, J =8.4 Hz, 2H), 7.92 (d, J =1.8 Hz, 1H).【００４１】
5-ブロモ-4’-メチルアミノオーロン（化合物１０）の合成
化合物９（100 mg, 0.316 mmol）をDMSO（7 mL）に溶解させた。続いて、反応溶液にK2CO3（380 mg）とCH3I（0.15 mL）を加え、50℃で３時間撹拌した。反応終了後、反応液に精製水100 mLを加え、酢酸エチル100 mLで抽出した。溶媒を減圧留去し、残渣を酢酸エチル/ヘキサン（1/2）を溶出溶媒とするシリカゲルカラムクロマトグラフィに付し、目的物である化合物１０を得た。収量49 mg（収率47.5%） 1H NMR (300 MHz, CDCl3) d 2.92 (s, 3H), 4.21 (s, 1H), 6.59 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 6.92 (s, 1H), 7.25 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 7.68 (dd, J =2.1, 2.1 Hz, 1H), 7.78 (d, J =8.7 Hz, 2H), 7.91 (d, J =2.1 Hz, 1H).【００４２】
5-トリブチルスズ-4’-メチルアミノオーロン（化合物１１）の合成
化合物１０（49 mg, 0.15 mmol）のジオキサン溶液（5 mL）に、ビス（トリブチルスズ）（0.4 mL）、テトラトリフェニルホスフィンパラジウム（50 mg, 0.043 mmol）、トリエチルアミン（5 mL）を加え、90℃で5時間加熱した。反応溶媒を減圧留去し、残渣を酢酸エチル/ヘキサン（1/2）を溶出溶媒とするシリカゲルカラムクロマトグラフィに付し、目的物である化合物１１を得た。収量28 mg（収率34.6 %）1H NMR (300 MHz, CDCl3) d 1.06-1.57 (m, 27H), 3.12 (s, 3H), 4.42 (s, 1H), 6.73 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 7.10 (s, 1H), 7.49 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.88 (dd, J =1.2, 1.2 Hz, 1H), 8.01 (d, J =8.7 Hz, 2H), 8.09 (s, 1H).【００４３】
5-ヨード-4’-メチルアミノオーロン（化合物１２）の合成
化合物１１（30 mg, 0.055 mmol）をクロロホルム3 mLに溶解し、撹拌下ヨウ素のクロロホルム溶液（1 mL, 0.25 M）を室温で加えた。室温で10分間反応させた後、飽和亜硫酸水素ナトリウム水溶液（15 mL）を加え、反応を終了させた。クロロホルム層を分液し、硫酸ナトリウムで乾燥、溶媒を減圧留去後、残渣を酢酸エチル/ヘキサン(1/2)を溶出溶媒とするシリカゲルクロマトグラフィに付し、目的物である化合物１２を得た。収量10 mg（収率48.2 %） 1H NMR (300 MHz, CDCl3) d 2.92 (s, 3H), 4.27 (s, 1H), 6.64 (d, J = 9.0 Hz, 2H), 6.90 (s, 1H), 7.12 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.79 (d, J =8.7 Hz, 2H), 7.86 (dd, J =2.1, 2.1 Hz, 1H), 8.11 (d, J =2.1 Hz, 1H).【００４４】
5-トリブチルスズ-4’-アミノオーロン（化合物１３）の合成
化合物９（78 mg, 0.25 mmol）のジオキサン溶液（7 mL）に、ビス（トリブチルスズ）（0.4 mL）、テトラトリフェニルホスフィンパラジウム（50 mg, 0.043 mmol）、トリエチルアミン（5 mL）を加え、90℃で4時間加熱した。反応溶媒を減圧留去し、残渣を酢酸エチル/ヘキサン（1/2）を溶出溶媒とするシリカゲルカラムクロマトグラフィに付し、目的物である化合物１３を得た。収量30 mg（収率23.1 %）1H NMR (300 MHz, CDCl3) d 0.86-1.57 (m, 27H), 4.05 (s, 2H), 6.73 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 6.87 (s, 1H), 7.30 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.69 (dd, J =0.6, 0.9 Hz, 1H), 7.78 (d, J =8.4 Hz, 2H), 7.89 (s, 1H).【００４５】
5-ヨード-4’-アミノオーロン（化合物１４）の合成
化合物１３（30 mg, 0.057 mmol）をクロロホルム3 mLに溶解し、撹拌下ヨウ素のクロロホルム溶液（1 mL, 0.25 M）を室温で加えた。室温で10分間反応させた後、飽和亜硫酸水素ナトリウム水溶液（15 mL）を加え、反応を終了させた。クロロホルム層を分液し、硫酸ナトリウムで乾燥、溶媒を減圧留去後、残渣を酢酸エチル/ヘキサン(1/2)を溶出溶媒とするシリカゲルクロマトグラフィに付し、目的物である化合物１４を得た。収量14 mg（収率67.6 %） 1H NMR (300 MHz, CDCl3) d 4.10 (s, 2H), 6.72 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 6.90 (s, 1H), 7.13 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 7.76 (d, J =8.4 Hz, 2H), 7.87 (d, J =10.5 Hz, 1H), 8.11 (s, 1H) .【００４６】
5-ブロモ-4’-メトキシオーロン（化合物１５）の合成
化合物４（300 mg, 1.41 mmol）と4-メトキシベンズアルデヒド（192 mg, 1.41 mmol）のクロロホルム溶液に酸化アルミナ(5.0 g)を加え、20分撹拌した。反応終了後、クロロホルム（100 mL）で抽出した後、溶媒を減圧留去し、目的物である化合物１５を得た。収量410 mg（収率 85.7 %） 1H NMR (300 MHz, CDCl3) d 3.88 (s, 3H), 6.91 (s, 1H), 6.99 (d, J = 9.0 Hz, 2H), 7.24 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.73 (dd, J =2.1, 2.1 Hz, 1H), 7.88 (d, J =8.7 Hz, 2H), 7.92 (d, J =1.8 Hz, 1H).【００４７】
5-トリブチルスズ-4’-メトキシオーロン（化合物１６）の合成
化合物９（200 mg, 0.60 mmol）のジオキサン溶液（5 mL）に、ビス（トリブチルスズ）（0.4 mL）、テトラトリフェニルホスフィンパラジウム（50 mg, 0.043 mmol）、トリエチルアミン（5 mL）を加え、90℃で24時間加熱した。反応溶媒を減圧留去し、残渣はクロロホルムを溶出溶媒とするシリカゲルカラムクロマトグラフィに付し、目的物である化合物１６を得た。収量50 mg（収率15.3 %）1H NMR (300 MHz, CDCl3) d 0.89-1.64 (m, 27H), 3.87 (s, 3H), 6.89 (s, 1H), 6.99 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 7.31 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.71 (dd, J =0.9, 0.9 Hz, 1H), 7.86 (d, J =9.0 Hz, 2H), 7.90 (d, J =8.7 Hz 1H).【００４８】
5-ヨード-4’-メトキシオーロン（化合物１７）の合成
化合物１６（10 mg, 0.35 mmol）をクロロホルム3 mLに溶解し、撹拌下ヨウ素のクロロホルム溶液（1 mL, 0.25 M）を室温で加えた。室温で10分間反応させた後、飽和亜硫酸水素ナトリウム水溶液（15 mL）を加え、反応を終了させた。クロロホルム層を分液し、硫酸ナトリウムで乾燥、溶媒を減圧留去後、残渣はクロロホルムを溶出溶媒とするシリカゲルクロマトグラフィに付し、目的物である化合物１７を得た。収量7 mg（収率71.5 %） 1H NMR (300 MHz, CDCl3) d 3.88 (s, 3H), 6.91 (s, 1H), 6.98 (d, J = 6.9 Hz, 2H), 7.14 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.87-7.91 (m, 3H), 8.12 (d, J =2.1 Hz, 1H).【００４９】
5-ブロモ-4’-ヒドロキシオーロン（化合物１８）の合成
化合物１５（300 mg, 0.91 mmol）をジクロロメタン（25 mL）に溶解させ、氷冷下三臭化ホウ素ジクロロメタン溶液（3.0 mL）を徐々に加えていった。氷上で時間反応させた後、反応液を少量ずつ氷水に加え、ジクロロメタン層と水層で分液抽出した。溶媒を減圧留去し、残渣を酢酸エチル/ヘキサン（3/2）を溶出溶媒とするシリカゲルカラムクロマトグラフィに付し、目的物である化合物１８を得た。収量15 mg（収率5.2%）.【００５０】
5-トリブチルスズ-4’-ヒドロキシオーロン（化合物１９）の合成
化合物１８（50 mg, 0.16 mmol）のジオキサン溶液（5 mL）に、ビス（トリブチルスズ）（0.4 mL）、テトラトリフェニルホスフィンパラジウム（50 mg, 0.043 mmol）、トリエチルアミン（5 mL）を加え、90℃で10時間加熱した。反応溶媒を減圧留去し、残渣を酢酸エチル/ヘキサン（3/2）を溶出溶媒とするシリカゲルカラムクロマトグラフィに付し、目的物である化合物１９を得た。収量10 mg（収率12.0 %）1H NMR (300 MHz, CDCl3) d 0.86-1.60 (m, 27H), 6.74 (d, J = 9.0 Hz, 2H), 6.90 (s, 1H), 7.30 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.69 (d, J =8.1 Hz, 1H), 7.80 (d, J =8.4 Hz, 2H), 7.89 (s, 1H).【００５１】
5-ヨード-4’-ヒドロキシオーロン（化合物２０）の合成
化合物１９（10 mg, 0.027 mmol）をクロロホルム3 mLに溶解し、撹拌下ヨウ素のクロロホルム溶液（1 mL, 0.25 M）を室温で加えた。室温で10分間反応させた後、飽和亜硫酸水素ナトリウム水溶液（15 mL）を加え、反応を終了させた。クロロホルム層を分液し、硫酸ナトリウムで乾燥、溶媒を減圧留去後、残渣を酢酸エチル/ヘキサン(3/2)を溶出溶媒とするシリカゲルクロマトグラフィに付し、目的物である化合物２０を得た。収量6 mg（収率84.0 %）.【００５２】
（３）Aβ(1-42)凝集体を用いたインビトロ結合実験
Aβ(1-42)凝集体は、10 mM sodium phosphateと1 mM EDTAを含んだ緩衝液(pH 7.4)に0.5 mg/mLの濃度に溶解し、37 ℃で42時間インキュベートすることにより調製した。結合実験は12×75 mm borosilicate glass tubesを用いて行った。比較に用いた[125I]IMPYは既報*の方法に従い作製した(*Zhuang ZP, Kung MP, Wilson A, Lee CW, Plossl K, Hou C, Holzman DM, Kung HF. Structure-activity relationship of imidazo[1,2-a]pyridines as ligands for detecting b-amyloid plaques in the brain. J. Med. Chem. 2003, 46(2): 237-43)。10%エタノール溶液 900 μL、種々の濃度の[125I]標識オーロン誘導体 50 μL (10%エタノール水溶液)あるいは[125I]IMPY 50 μL、Aβ(1-42)凝集体溶液50 μL (29 nM)を混和し、室温で3時間放置した。Aβ凝集体と結合したオーロン誘導体と結合していないオーロン誘導体とはWhatman GF/B filtersを用いてBrandel M-24R cell harvesterによって分離した。濾過したフィルターに残存した物質の放射能はγカウンタで測定した。【００５３】
（４）正常マウスにおける体内放射能分布実験
125I標識体（化合物）は、10%エタノールを含む生理食塩水を用いて希釈した。１群５匹の５週齢ddY系雄性マウスに、それぞれの標識体100μL (0.3-0.5 μCi)を静脈内投与２、１０、３０、６０分後に断頭、採血した後、臓器を摘出し、重量と放射能を測定した。【００５４】
（５）アルツハイマー病患者脳組織切片を用いたオートラジオグラフィー
アルツハイマー病患者脳組織切片（海馬、パラフィン切片、5 μm）はBioChain社より購入した。切片の脱パラフィンは、キシレン洗浄（5分間で２回）、100%エタノール、100%エタノール、95%エタノール、85%エタノール、70%エタノール洗浄（各１分間で１回）で行った。オートラジオグラフィーは、あらかじめ作製しておいた125I標識オーロン化合物（5-ヨード-4’-アミノオーロン、化合物１４） (0.2 nM)と1時間反応することにより行った。反応後、飽和炭酸リチウムの４０％エタノール水溶液で洗浄(２分間で２回)、４０％エタノール(２分間で１回)、水(３０秒間で１回)で洗浄した。風乾後、イメージングプレート（富士フィルム社）に４８時間固定した後、BAS5000（富士フィルム社）で分析した。老人斑アミロイドの免疫染色は、オートラジオグラフィーに用いた脳切片の隣接切片を用いて、アミロイドβ免疫染色キット（和光純薬株式会社）に記載の手法に従い行った。【００５５】
〔実験結果〕
（１）オーロン誘導体の合成
図１、２、３にオーロン誘導体の合成経路を示す。オーロン骨格の形成は、既報の方法に従い合成したベンゾフラノンとアルデヒドとのアルドール縮合反応により行った。化合物５、９、１０、１５、１８は、パラジウムを触媒とするビス（トリブチルスズ）との反応により、トリブチルスズ体に変換した。トリブチルスズ体化合物６、１１、１３、１６、１９は、ヨウ素との反応により化合物７、１２、１４、１７、２０へと変換した。さらにトリブチルスズ化合物は、従来のトリブチルスズーヨウ素の交換反応により、125I標識を行った。すなわち、トリブチルスズ化合物 50 μL (1.0 mg/mLのエタノール溶液)をガラスバイアルに入れ、[125I]NaI 1-2 μL (3700-7400 kBq)、1 N塩酸 50 μL、3%過酸化水素水 50 μLを加えた。１−３分間室温で放置した後、飽和亜硫酸水素ナトリウム水溶液 100 μL、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液 100 μLを加え反応を終了した。酢酸エチル (1 mL)を加えた後、硫酸ナトリウムを充填したパスツールピペットに通し、脱水を行った。酢酸エチルを窒素気流下蒸発させ、残渣をエタノール100 μLに溶解し、水：アセトニトリル（３：７）を溶出溶媒とする逆相HPLCにより分離精製を行い、目的とする125I標識オーロン誘導体を得た。【００５６】
（２）オーロン誘導体のAb(1-42)凝集体への結合実験
図４及び図５には、オーロン誘導体をAb凝集体の存在下、Ab凝集体の非存在下で反応を行い、セルハーベスタで濾過後、濾紙に残存した放射能を測定した結果を示す。Ab凝集体が存在しない場合、濾紙に残存した放射能はいずれも低値を示したのに対して、Ab凝集体の存在下で反応を行った場合、125I標識オーロン誘導体は顕著に高い値を示した（図５）。この結果より、オーロン誘導体は、側鎖に導入した置換基の種類による差はあるが、いずれもAb凝集体への高い結合性を有することが示された。その結合性は、[125I]化合物７ > [125I]化合物12 = [125I]IMPY > [125I]化合物14 = [125I]化合物17 > [125I]化合物20の順で増加した（図４）。また、側鎖にNH2-, OMe-, OH基を有する化合物のAb凝集体への結合性は、[125I]IMPYに比べ低い値を示したが、NHMe-, NMe2基を有する化合物は、[125I]IMPYに比べAb凝集体への同等あるいはそれ以上の高い結合性を示した。今回試験を行った、５種類のオーロン誘導体はいずれもAb凝集体への非常に高い結合性を示し、なかでも化合物７のAb凝集体への結合性は、現在臨床試験中の[125I]IMPYと同等以上であったことから、アミロイドβのイメージングプローブとしての一つの重要な要件を満たす化合物であることが明らかとなった。【００５７】
（３）マウス体内放射能分布実験
表１３にオーロン誘導体を正常マウスに投与後の体内放射能分布の結果を示した。いずれのオーロン誘導体も脳内アミロイドの画像化を行うのに十分な放射能が投与初期から脳へ移行した（1.7-4.6%ID/g）。その後、経時的に速やかな放射能の消失が観察され、投与３０分後に脳内に残存した放射能は、投与２分後に残存した放射能の7-12％、投与６０分後に脳内に残存した放射能は、投与２分後に残存した放射能の2-8％であった。この結果から、オーロン誘導体をアルツハイマー病モデルマウス、あるいはアルツハイマー病患者に応用した場合、アミロイド沈着部位には高い結合性を示す一方で、アルツハイマー病脳内の正常部位からは速やかな放射能消失を示し、高いS/N比を達成可能であることが示唆された。また、体内放射能挙動はいずれのオーロン誘導体も主に肝臓から胆管、腸管への排泄されることが示された。
【表１３】
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【００５８】
（４）アルツハイマー病患者脳組織切片を用いたオートラジオグラフィー
アルツハイマー病患者海馬脳切片を用いたオートラジオグラフィー及び免疫染色の結果を図６に示した。図中画像Aには、オーロン誘導体によるオートラジオグラフィーの結果を、B、C、D、Eには抗Aβ42抗体を用いた免疫染色の結果を示した。放射能の集積が観察されなかったEの部分においては免疫染色による老人斑の沈着は認められなかった。一方、オートラジオグラフィーで放射能が強く観察されたB、C、Dの部分においては免疫染色による老人斑の沈着が認められた。これらの結果より、オーロン誘導体はアルツハイマー病患者切片上の老人斑に対し選択的結合性を有することが示された。【００５９】
〔実施例２〕
〔実験方法〕
（１）試薬・機器
試薬及び機器は、実施例１と同様のものを使用した。
（２）オーロン誘導体の合成【００６０】
2-((エトキシカルボニル)メトキシ)-5-ヨード安息香酸メチルエステル（化合物２１）の合成
2-ヒドロキシ-5-ヨード安息香酸メチルエステル（2.0 g, 7.19 mmol）をアセトン（10 mL）に溶かし、そこにK2CO3 （2.7 g）を加えた。続いて撹拌下、臭化酢酸エチル（2.0 mL）を滴下していき、3時間加熱還流した。反応終了後、溶媒を減圧留去し、精製水100 mLを加え、酢酸エチル100 mLで抽出した。無水硫酸ナトリウムで脱水後、溶媒を減圧留去し、目的物である化合物２１を得た。収量2.62 g（収率99 %） 1H NMR (300 MHz, CDCl3) ・ 1.29 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 3.90 (s, 3H), 4.25 (q, J = 6.0 Hz, 2H), 4.69 (s, 2H), 6.66 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 7.71 (dd, J = 2.4, 2.4 Hz, 1H), 8.12 (d, J = 2.1 Hz, 1H) .【００６１】
2-(カルボキシメトキシ)-5-ヨード安息香酸（化合物２２）の合成
化合物２１（2.62 g, 7.19 mmol）をメタノール（2 mL）に溶かし、続いて10% KOH（3.0 mL）を加えていき2時間反応させた。反応終了後、冷却下1N HClを加えていき、析出した結晶を吸引瀘取し、目的物である化合物２２を得た。収量2.02 g（収率 87.2 %）. 【００６２】
5-ヨードベンゾフラン-3-イルアセテート（化合物２３）の合成
無水酢酸（30 mL）と酢酸（6 mL）の混液に化合物２２（2.02 g, 6.27 mmol）を溶解させた。続いて、酢酸ナトリウム（1.5 g）を加え24時間加熱還流した。反応終了後、反応液に精製水100 mLを加え、酢酸エチル200 mLで抽出し、目的物である化合物２３を得た。収量1.45 g(収率 76.6 %) 1H NMR (300 MHz, CDCl3) ・ 2.37 (s, 3H), 7.23 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.59 (dd, J = 1.5, 1.8 Hz, 1H), 7.90 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 7.98 (s, 1H).【００６３】
5-ヨードベンゾフラン-3(2H)-オン（化合物２４）の合成
化合物２３（1.45 g, 4.80 mmol）をメタノール（18 mL）に溶解させ、精製水（10 mL）、1N HCl（4 mL）を加えてき、撹拌下3時間加熱還流した。反応終了後、反応液を冷却し、精製水（100 mL）を加えていった。析出した結晶を吸引瀘取し、目的物である化合物２４を得た。収量1.17 g（収率 93.8 %） 1H NMR (300 MHz, CDCl3) ・ 4.65 (s, 2H), 6.96 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 7.85 (dd, J = 1.8, 1.8 Hz, 1H), 7.99 (d, J = 1.8 Hz, 1H).【００６４】
(Z)-2-(4-ヒドロキシベンジリデン)-5-ヨードベンゾフラン-3(2H)-オン（化合物２５）の合成
化合物２４（50 mg, 0.1922 mmol）と4-ヒドロキシベンズアルデヒド（30 mg, 0.246 mmol）のクロロホルム溶液にアルミナ1.7 g加え、10時間撹拌した。反応終了後メタノール（100 mL）で抽出した後、溶媒を減圧留去し、目的物である化合物２５を得た。収量78 mg（収率 87.0 %） 1H NMR (300 MHz, CDCl3) ・ 6.91 (s, 1H), 6.99 (d, J = 6.9 Hz, 2H), 7.14 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.85-7.90 (m, 3H), 8.11 (d, J =2.1 Hz, 1H).【００６５】
(Z)-2-(4-(2-ヒドロキシエトキシ)ベンジリデン)-5-ヨードベンゾフラン-3(2H)-オン（化合物２６）の合成
化合物２５（194 mg, 0.533 mmol）とエチレンクロロヒドリン（0.1 mL, 1.43 mmol）のジメチルスルホオキシド溶液（7 mL）に炭酸カリウム3.7 g加え、15 時間加熱撹拌した。反応終了後、酢酸エチル（100 mL）で抽出した。溶媒を減圧留去し、残査を酢酸エチルを溶出溶媒とするシリカゲルカラムクロマトグラフィに付し、目的物である化合物２６を得た。収量123 mg（収率 56.5 %） 1H NMR (300 MHz, CDCl3) ・ 2.01 (s, 1H), 4.02 (s, 2H), 4.18 (t, J = 3.9 Hz, 2H), 6.89 (s, 1H), 7.00 (d, J = 7.5 Hz, 2H), 7.14 (d, J =8.4 Hz, 1H), 7.80-7.92 (m, 3H), 8.12 (d, J =1.8 Hz, 1H).【００６６】
(Z)-2-(4-(2-(2-ヒドロキシエトキシ)エトキシ)ベンジリデン)-5-ヨードベンゾフラン-3(2H)-オン（化合物２７）の合成
化合物２５（150 mg, 0.412 mmol）とエチレングリコールモノ-2-クロロエチルエーテル（0.15 mL, 1.42 mmol）のジメチルスルホオキシド溶液（7 mL）に炭酸カリウム3.7 g加え、5時間加熱撹拌した。反応終了後、酢酸エチル（200 mL）で抽出した。溶媒を減圧留去し、残査を酢酸エチルを溶出溶媒とするシリカゲルカラムクロマトグラフィに付し、目的物である化合物２７を得た。収量56 mg（収率 30.2 %） 1H NMR (300 MHz, CDCl3) ・ 2.17 (s, 1H), 3.70 (d, J = 4.8 Hz, 2H), 3.78 (d, J = 4.8 Hz, 2H), 3.92 (t, J = 4.8 Hz, 2H), 4.21 (t, J =4.5Hz, 2H), 6.89 (s, 1H), 7.00 (d, J = 11.4 Hz, 2H), 7.13 (d, J =8.7 Hz, 1H), 7.84-7.91 (m, 3H), 8.11 (d, J =2.1 Hz, 1H).【００６７】
(Z)-2-(4-(2-(2-(2-ヒドロキシエトキシ)エトキシ)エトキシ)ベンジリデン)-5-ヨードベンゾフラン-3(2H)-オン（化合物２８）の合成
化合物２５（150 mg, 0.412 mmol）と2-[2-(2-クロロエトキシ)エトキシ]エタノール（0.1 mL, 0.69 mmol）のジメチルスルホオキシド溶液（7 mL）に炭酸カリウム3.7 g加え、6 時間加熱撹拌した。反応終了後、酢酸エチル（200 mL）で抽出した。溶媒を減圧留去し、残査を酢酸エチルを溶出溶媒とするシリカゲルカラムクロマトグラフィに付し、目的物である化合物２８を得た。収量140 mg（収率 67.9 %）.【００６８】
(Z)-2-(4-(2-ヒドロキシエトキシ)ベンジリデン)-5-(トリブチルスズ)ベンゾフラン-3(2H)-オン（化合物２９）の合成
化合物２６（20 mg, 0.048 mmol）のジオキサン溶液（3 mL）に、ビス（トリブチルスズ）（0.4 mL）、テトラトリフェニルホスフィンパラジウム（50 mg, 0.043 mmol）、トリエチルアミン（3 mL）を加え、90℃で5時間加熱した。反応溶媒を減圧留去し、残査を酢酸エチル/ヘキサン（1/1）を溶出溶媒とするシリカゲルカラムクロマトグラフィに付し、目的物である化合物２９を得た。収量7.0 mg（収率25.0 %）1H NMR (300 MHz, CDCl3) ・ 0.86-1.61 (m, 27H), 2.06 (s, 1H), 4.02 (s, 2H), 4.16 (t, J = 3.6 Hz, 2H), 6.88 (s, 1H), 6.99 (d, J = 9.0 Hz, 2H), 7.30 (d, J =12.3 Hz, 1H), 7.73 (d, J =9.0 Hz, 1H), 7.90-7.92 (m, 3H).【００６９】
(Z)-2-(4-(2-(2-ヒドロキシエトキシ)エトキシ)ベンジリデン)-5-(トリブチルスズ)ベンゾフラン-3(2H)-オン（化合物３０）の合成
化合物２７（40 mg, 0.089 mmol）のジオキサン溶液（7 mL）に、ビス（トリブチルスズ）（0.4 mL）、テトラトリフェニルホスフィンパラジウム（50 mg, 0.043 mmol）、トリエチルアミン（4 mL）を加え、90℃で7時間加熱した。反応溶媒を減圧留去し、残査を酢酸エチルを溶出溶媒とするシリカゲルカラムクロマトグラフィに付し、目的物である化合物３０を得た。収量17 mg（収率31.4 %）1H NMR (300 MHz, CDCl3) ・ 0.86-1.32 (m, 27H), 2.11 (s, 1H), 3.70 (t, J = 4.8 Hz, 2H), 3.78 (t, J = 4.8 Hz, 2H), 3.91 (t, J = 4.5 Hz, 2H), 4.22 (t, J =5.1 Hz, 2H), 6.89 (s, 1H), 7.00 (d, J = 7.2 Hz, 2H), 7.31 (d, J =8.1 Hz, 1H), 7.71 (d, J =9.0 Hz, 1H), 7.88-7.91 (m, 3H).【００７０】
(Z)-2-(4-(2-(2-(2-ヒドロキシエトキシ)エトキシ)エトキシ)ベンジリデン)-5-(トリブチルスズ)ベンゾフラン-3(2H)-オン（化合物３１）の合成
化合物２８（10 mg, 0.02 mmol）のジオキサン溶液（5 mL）に、ビス（トリブチルスズ）（0.3 mL）、テトラトリフェニルホスフィンパラジウム（40 mg, 0.034 mmol）、トリエチルアミン（4 mL）を加え、90℃で10時間加熱した。反応溶媒を減圧留去し、残査を酢酸エチルを溶出溶媒とするシリカゲルカラムクロマトグラフィに付し、目的物である化合物３１を得た。収量4 mg（収率30.3 %）1H NMR (300 MHz, CDCl3) ・ 0.86-1.59 (m, 27H), 2.11 (s, 1H), 3.63 (t, J = 3.3 Hz, 2H), 3.73-3.75 (m, 4H), 3.90 (t, J = 4.2 Hz, 2H), 4.21 (t, J =4.2 Hz, 2H), 6.88 (s, 1H), 7.10 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 7.31 (d, J =8.1 Hz, 1H), 7.64-7.70 (m, 3H), 7.90 (d, J =4.8 Hz, 1H).【００７１】
（３）オーロン誘導体の125I標識
種々のトリブチルスズ化合物（化合物２９、化合物３０、化合物３１）のエタノール溶液(1 mg/mL, 50 mL) に[125I]NaI (1-5 mCi)、1 N塩酸 (50 mL) を加え、最後に3% w/v 過酸化水素水 (50 mL) を加えた。1分間室温放置後、飽和亜硫酸水素ナトリウム水溶液 (100 mL) を加え反応を停止させ、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液 (100 mL) を加えて反応溶液を中和した。酢酸エチルで抽出し、硫酸ナトリウムを入れたパスツールピペットに通して脱水した後、逆相HPLC (水 : アセトニトリル = 3 : 7) で精製した。非放射性化合物を標品として254 nmにおける吸光度をHPLCで分析し、それと一致する目的物を分取し、酢酸エチルで抽出し、窒素気流下酢酸エチルを留去した。【００７２】
（４）Ab(1-42)凝集体の調製
Ab(1-42)を、1 mM EDTAを含んだ10 mM リン酸緩衝液 (pH 7.4) に0.25 mg/mLの濃度になるよう溶解し、37 ℃で42時間インキュベートすることにより、Ab(1-42)凝集体を調製した。【００７３】
（５）Ab(1-42)凝集体を用いた結合阻害実験による阻害定数：Ki値の算出
10%EtOH溶液 850 mL、[125I] (Z)-2-(4-アミノベンジリデン)-5-ヨードベンゾフラン-3(2H)-オンの10％エタノール溶液 50 mL、種々の濃度のサンプル溶液 50 mL (0-20 mM) を混和し、最後にAb(1-42)凝集体溶液 50 mLを加え、室温で3時間放置した。Ab(1-42)凝集体と結合した化合物と結合していない化合物とはWhatman GF/B filterを用いてBrandel M-24R cell harvesterによって分離した。濾過したフィルターに残った放射能をγ-カウンターで計測し、GraphPad Prism 4.0を用いて阻害曲線を作成し、阻害定数：Kiを算出した。【００７４】
（６）正常マウスにおける体内放射能分布実験
125I標識体（化合物２６、化合物２７、化合物２８）は、10%エタノールを含む生理食塩水を用いて希釈した。１群５匹の５週齢ddY系雄性マウスに、それぞれの標識体100 μL (0.3-0.5 μCi)を静脈内投与２、１０、３０、６０分後に断頭、採血した後、臓器を摘出し、重量と放射能を測定した。【００７５】
（７）トランスジェニックマウス脳切片を用いた蛍光染色および免疫染色
アルツハイマー病モデルマウスとしてTg2576 mice（20 ヶ月齢）を用いた。脳組織を取り出し、カルボキシメチルセルロース（4%）に入れ凍結させ、厚さ10 μmの連続切片を作製した。作製した切片とリガンド(化合物２６およびチオフラビンSの50% EtOH溶液)を3 min反応させた。50% EtOHで1 min×2回洗浄後、蛍光顕微鏡で観察した。さらに隣接切片を用い、抗アミロイドβ(1-42)抗体を使用した免疫染色を常法に従い行った。【００７６】
（８）アルツハイマー病患者脳切片を用いたインビトロオートラジオグラフィーおよび免疫染色
アルツハイマー病患者海馬由来切片（厚さ5 μm）の脱パラフィン処理を、キシレン洗浄（5 min × 2）、100%EtOH、100%EtOH、95%EtOH、85%EtOH、70%EtOH洗浄（1 min × 1）することで行った。風乾後、リガンド（40% EtOH溶液）と一時間反応させた。飽和炭酸リチウム40%EtOH水溶液（2 min × 2）、40%EtOH（2 min × 2）、水（30 sec × 1）で洗浄後、イメージングプレートに24 時間固定した。その後、BAS2500で分析を行った。さらに隣接切片を用い、抗アミロイドβ(1-42)抗体を使用した免疫染色を常法に従い行った。【００７７】
〔実験結果〕
（１）オーロン誘導体の合成
図７にオーロン誘導体の合成経路を示す。オーロン骨格の形成はアルドール縮合反応を用いて行った。それぞれのヨウ素化合物はパラジウムを触媒とするビス(トリブチルスズ)との反応によりトリブチルスズ体へと変換した。これらのトリブチルスズ体は放射性ヨウ素との標識前駆化合物として用いた。【００７８】
（２）オーロン誘導体の125I標識実験
図８にオーロン誘導体の125I標識経路を示す。125I標識は、過酸化水素を酸化剤として用い、スズ-ヨウ素交換反応により目的とする125I標識体を得た。あらかじめ254 nmにおける非放射能化合物の吸光度を逆相HPLCで分析しておき、その保持時間と一致する化合物を分離精製することにより、目的とする125I標識体を95%以上の放射化学的純度で得た。【００７９】
（３）オーロン誘導体のAb(1-42)凝集体との結合親和性に関する検討
合成した種々のオーロン誘導体について、阻害定数Kiを算出するため、[125I] (Z) (Z)-2-(4-アミノベンジリデン)-5-ヨードベンゾフラン-3(2H)-オンを放射性リガンドとして用いた結合阻害実験を行った。実験の結果得られたKiを表１４に示す。オーロン誘導体におけるAb(1-42)凝集体に対する結合親和性は、Ki値が1.05から3.36 nMの範囲でアミロイド凝集体への高い結合性を示した。導入したエチレンオキシ鎖の長さによる結合性の相違は観察されなかった。
【表１４】
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【００８０】
（４） 125I標識オーロン誘導体の正常マウスにおける体内放射能分布実験
5週齢正常マウスを用いて125I標識オーロン誘導体の体内放射能分布実験を行った。[125I]化合物２６、[125I]化合物２７、[125I]化合物２８をマウスに尾静注後の体内放射能分布の結果を表１５に示す。[125I]化合物２６、[125I]化合物２７、[125I]化合物２８はいずれも投与２分後に脳への高い移行性を示した (2.8-4.5%ID/g) 。また、投与３０分後に脳に残留した放射能はわずか0.08-0.16%ID/gであったことから、これら3種類のオーロン誘導体は正常脳からの速やかな放射能消失を示すことが明らかとなった。また、血液中における顕著な放射能滞留性は観察されなかった。
【表１５】
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【００８１】
（５）トランスジェニックマウス脳切片を用いた蛍光染色および免疫染色
化合物２６の蛍光特性を利用し、アルツハイマー病モデルマウス(Tg2576)の脳切片を用いた蛍光染色を行った（図９）。その結果、脳切片上の化合物２６の蛍光像は、隣接切片のチオフラビンSによる蛍光像と抗アミロイド抗体による免疫染色像と一致した。この結果より、化合物２６はインビトロ結合実験における合成アミロイドβ42凝集体だけではなく、マウスの老人斑への結合性を有することが示された。【００８２】
（６）アルツハイマー病患者脳切片を用いたインビトロオートラジオグラフィーおよび免疫染色
アルツハイマー病患者脳切片を用いて、[125I]２６によるオートラジオグラフィーを行った（図１０）。抗アミロイド抗体を用いた免疫染色で陽性の部位に、[125I]２６の放射能は観察されたが、老人斑の存在しない部位への放射能集積は観察されなかった。この結果より、[125I]２６は、アルツハイマー病患者脳に蓄積する老人斑アミロイドへの結合性を有することが示唆された。【００８３】
本明細書は、本願の優先権の基礎である日本国特許出願（特願2006-328131号及び特願2007-081602号）の明細書および／または図面に記載されている内容を包含する。また、本発明で引用した全ての刊行物、特許および特許出願をそのまま参考として本明細書にとり入れるものとする。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図７】
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【図８】
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【図６】
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【図９】
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【図１０】
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【国際調査報告】
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