(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
藻類ネオクロリス・オレオアブンダンスのバイオマスの抽出物を活性作用物質として含有し、前記活性作用物質が局所適用に適合する、化粧品に許容される賦形剤と混合しており、前記抽出物は、アルコール又はアルコール水溶液からなる第一溶媒で前記バイオマスを抽出して第一抽出物を得る工程を少なくとも実施することによって得られるものである、化粧品組成物。
【請求項２】
前記バイオマスを、１０ｇ／ｌから３０ｇ／ｌの塩化ナトリウム含量を有する海水又は汽水に基づく、任意に栄養素も含有する培養液で、藻類ネオクロリス・オレオアブンダンスを培養することにより得る、請求項１記載の組成物。
【請求項３】
前記培養液中の塩化ナトリウム含有量が１６ｇ／ｌから２０ｇ／ｌである、請求項２記載の組成物。
【請求項４】
前記培養液中の塩化ナトリウム含有量が１８ｇ／ｌである、請求項３記載の組成物。
【請求項５】
前記培養液が汽水を含む、請求項２から４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項６】
前記第一溶媒のアルコールが、Ｃ１〜Ｃ５モノアルコール類、Ｃ２〜Ｃ６グリコール類、及びその混合物からなる群より選択されるアルコールである、請求項１から５のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項７】
前記アルコールが、メタノール、エタノール又はブチレングリコールである、請求項６に記載の組成物。
【請求項８】
前記第一溶媒が、体積比で１００％〜４０％のエタノール及び０％〜６０％の水である、請求項１から７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項９】
前記バイオマスの抽出物は、液体−液体抽出による、第一抽出物の、水性又はアルコール水溶液からなる第二溶媒と、第二溶媒と非混和性であって極性係数Ｐ’によって定義する極性が０から４．７である第三溶媒との分離工程をさらに実施することによって得られるものであり、前記分離工程により第二抽出物と呼称される第一抽出物の第一画分を含むアルコール水溶液相、及び第三抽出物と呼称される第一抽出物の第二画分を含む第三溶媒からなる相が生成する、請求項１から８のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１０】
前記第二溶媒はアルコール水溶液溶媒であって、この第二溶媒のアルコールが、Ｃ１〜Ｃ５モノアルコール類、Ｃ２〜Ｃ６グリコール類及びそれらの混合物からなる群より選択される、請求項９に記載の組成物。
【請求項１１】
前記第二溶媒のアルコールがメタノール、エタノール又はブチレングリコールである、請求項１０に記載の組成物。
【請求項１２】
前記第二溶媒のアルコールがエタノールであって、体積比で少なくとも２０％の比率にて存在する、請求項１０又は１１に記載の組成物。
【請求項１３】
第三溶媒がクロロホルム、酢酸エチル、ジエチルエーテル及びその混合物からなる群より選択される、請求項９から１２のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１４】
前記抽出物が請求項１から８のいずれか１項で定義した第一抽出物である、請求項１から８のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１５】
前記抽出物が請求項９から１３のいずれか１項で定義した第二抽出物である、請求項１から８のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１６】
前記抽出物が請求項９から１３のいずれか１項で定義した第三抽出物である、請求項１から８のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１７】
請求項１から１３で定義した、第一抽出物、及び／又は第二抽出物、及び／又は第三抽出物の少なくとも一つを含む、請求項１から８のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１８】
ネオクロリス・オレオアブンダンスのバイオマスの抽出物を、組成物の総重量に基づき、固体状態で、０．０００３から２重量％含む、請求項１から１７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１９】
ネオクロリス・オレオアブンダンスのバイオマスの抽出物を、組成物の総重量に基づき、固体状態で、０．００３から０．３重量％含む、請求項１８に記載の組成物。
【請求項２０】
局所適用に適した、ゲル、クリーム、エマルション又はローションとして製剤化されている、請求項１から１９のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２１】
藻類ネオクロリス・オレオアブンダンスのバイオマスの抽出物を有効成分として含有し、前記抽出物は、アルコール又はアルコール水溶液からなる第一溶媒で前記バイオマスを抽出して第一抽出物を得る工程を少なくとも実施することによって得られるものである、痩身用化粧料。
【請求項２２】
前記バイオマスの抽出物は請求項２から１７のいずれか１項で定義した抽出物である、請求項２１に記載の化粧料。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、藻類ネオクロリス・オレオアブンダンス（Ｎｅｏｃｈｌｏｒｉｓ  ｏｌｅｏａｂｕｎｄａｎｓ）のバイオマスの抽出物の、化粧品分野における、さらに詳細には化粧料組成物に添加する痩身剤としての使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
化粧料又は皮膚用組成物における微生物の多くの用途が知られている。
【０００３】
藻類ネオクロリス・オレオアブンダンスに関する分類学的情報を以下に示す。
【０００４】
門：Ｃｈｌｏｒｏｐｈｙｔａ
綱：Ｃｈｌｏｒｏｐｈｙｃｅａｅ
目：Ｃｈｌｏｒｏｃｏｃｃａｌｅｓ
科：Ｃｈｌｏｒｏｃｏｃｃａｃｅａｅ
属：Ｎｅｏｃｈｌｏｒｉｓ
種：ｏｌｅｏａｂｕｎｄａｎｓ
【０００５】
この藻類は、国際公開第２００６／００８４０１号（特許文献１）において言及される多くの微生物及び藻類の一部をなしている微細藻類であり、当該文献には、少なくとも１種の光合成海洋及び／又は淡水微生物の清澄化した培養液の調製方法、並びにこれらの清澄化した培養液の使用、特に化粧品の分野における使用が記載されている。
【特許文献１】国際公開第２００６／００８４０１号パンフレット
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
前記文献は、バイオマス自体の使用に関するものではなく、清澄化した培養液の使用を課題としているにすぎない。
【０００７】
従来の文献には、化粧料組成物の活性物質としての藻類ネオクロリス・オレオアブンダンスのバイオマスの抽出物の使用は全く示唆していない。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
この藻類のバイオマスの異なる抽出物について本発明の発明者らが行った実験によって、それらが化粧品の分野における極めて特有な有用性、特に痩身剤としての有用性があることが示された。
【０００９】
さらに詳細には、極性及び／又は無極性溶媒を用いて得られる藻類ネオクロリス・オレオアブンダンスのバイオマスの抽出物を皮膚に局所適用した場合、特に化粧料組成物において非常に有用性のある痩身効果を呈することを発明者らは明らかにした。
【００１０】
しかし、この藻類の特定の抽出物の場合においてそれらの痩身効果に特に有効であることが明らかに示された。すなわち極性溶媒を用いて得られる抽出物、特にアルコール又はアルコール水溶液抽出物の場合である。さらに、極性溶媒を用いて得られたこれらの抽出物、特にアルコール又はアルコール水溶液抽出物はその後、特に新規の抽出物の取得を可能にする様々な分画操作に供することができ、当該抽出物もそれ自体、有用性のある痩身効果を呈し、同時にアルコール又はアルコール水溶液を含む第一抽出物と比較して感覚刺激性又は呈色が明確に改善されていることも明らかとなった。
【００１１】
すなわち、第一の実施態様によれば、本発明は藻類ネオクロリス・オレオアブンダンスのバイオマスの抽出物を含む化粧料組成物に関する。
【００１２】
第二の実施態様によれば、本発明は本発明を実施するのに有用な抽出物の調製方法に関する。
【００１３】
第三の実施態様によれば、本発明は化粧品の分野における、これら同じ抽出物の痩身剤としての適用に関する。
【発明の効果】
【００１４】
本発明により、極性及び／又は無極性溶媒を用いて得られる藻類ネオクロリス・オレオアブンダンスのバイオマスの抽出物から、皮膚に局所に適用した場合、特に化粧料組成物において非常に有用性のある痩身効果組成物を提供することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１５】
その第一の実施態様の本質的な特性として、本発明は藻類ネオクロリス・オレオアブンダンスのバイオマスの抽出物を活性物質として含む化粧料組成物に関し、当該活性物質は、局所適用に適合する、化粧品に許容される賦形剤を混合している。
【００１６】
前述のとおり、藻類ネオクロリス・オレオアブンダンスのバイオマスの抽出物は、皮膚に適用される場合に有用性のある痩身効果を有する。
【００１７】
本発明で使用するバイオマスの生産に、様々な培養条件が使用できる。しかし、藻類ネオクロリス・オレオアブンダンスは、１０ｇ／ｌから３０ｇ／ｌ、好ましくは１６ｇ／ｌから２０ｇ／ｌの塩化ナトリウム含量を有する海水又は汽水を基本とする培養液で培養するのが好ましく、この培養液は任意に、通例使用される栄養素を含有してもよい。
【００１８】
塩化ナトリウム含有量は１８ｇ／ｌとするのが特に好ましい。
【００１９】
培養液は、汽水、すなわち海水と淡水の混合物を含むのが好ましい。
【００２０】
使用する海水は、ブルターニュの北部沿岸に沿ったイギリス海峡から、特にロスコフ地域（フランス国フィニステール）で採取するのが好ましい。
【００２１】
前述のとおり、本発明の化粧料組成物を調製するのに使用する抽出物は、アルコール若しくはアルコール水溶液抽出物、又は後者の分画により得られる抽出物であるのが有利であろう。
【００２２】
以下の記載において、第一抽出物とは、アルコール又はアルコール水溶液からなる第一溶媒でバイオマスを処理することによって得られるアルコール又はアルコール水溶液抽出物を意味するものとする。
【００２３】
本発明の好ましい別の一態様おいて、有効な痩身効果を有するこの第一抽出物は、本発明の組成物の痩身剤として使用される。
【００２４】
さらに別の態様において、本発明の化粧料組成物において使用する活性物質は、この第一抽出物を分画することによって得られる画分である。さらに別の態様において、前記定義の第一抽出物と、その分画によって得られるこの第一抽出物の少なくとも一つの画分との混合物を、本発明の組成物において用いてもよい。
【００２５】
第一抽出物は、アルコール又はアルコール水溶液からなる第一溶媒（ここでアルコールは、Ｃ１〜Ｃ５モノアルコール類、Ｃ２〜Ｃ６グリコール類、及びその混合物からなる群より選択される）を用いて調製するのが有利であろう。
【００２６】
メタノール、エタノール、及びブチレングリコールが、これらのアルコールの例として特に挙げられる。
【００２７】
前記第一溶媒の組成は、水とアルコールを非常に広い範囲内で変動させることができる。しかし、エタノールと水の混合物の場合、これら２種の構成成分のそれぞれの比率は、体積で１００％〜４０％のエタノール、及び０％〜６０％の水の範囲から選択してもよい。
【００２８】
前述のとおり、アルコール又はアルコール水溶液溶媒でバイオマスを抽出することによって得られる第一抽出物は、特に有効な痩身効果を有しており、これにより本発明の観点からの活性物質として特に有用性のある抽出物になっている。
【００２９】
やはり前述のとおり、特に抽出物の感覚刺激性の改善及び／又は脱色を目的として第一抽出物を様々な分画操作に供し、特性が改善された、特に感覚刺激性が改善し、且つ／又は脱色された新規抽出物を得てもよい。
【００３０】
本発明の一つの好ましい別の態様において、第二の水性又はアルコール水溶液溶媒と、第二溶媒とは非混和性であってその極性係数Ｐ’によって定義する極性が０から４．７までである第三溶媒との間の液体−液体抽出による分画工程に第一抽出物を供して、第一抽出物の第一画分を含むアルコール水溶液相（第二抽出物と称する）、及び第一抽出物の第二画分を含む第三溶媒からなる相（第三抽出物と称する）を得る。
【００３１】
極性係数Ｐ’の定義については、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ、９２（１９７４）２２３−２３０の「Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｓｏｌｖｅｎｔ  ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ  ｏｆ  ｃｏｍｍｏｎ  ｌｉｑｕｉｄｓ」という表題のＬ．Ｒ．  ＳＮＹＤＥＲによる刊行物を参照するとよい。
【００３２】
この分画工程に関し、第二溶媒は、水と、Ｃ１〜Ｃ５モノアルコール類、及びＣ２〜Ｃ６グリコール類からなる群より選択されるアルコールとの混合物からなることが好ましい。
【００３３】
メタノール、エタノール、ブチレングリコール、及びその混合物が、好ましいアルコールとして選択してよい。
【００３４】
当業者であれば、水とアルコールの比率は、アルコールの性質、さらに第三溶媒の性質により規定されることを理解するであろう。
【００３５】
第二溶媒がアルコール水溶液であってエタノールを含む場合、エタノールは体積比で少なくとも２０％の比率にて存在することが好ましい。
【００３６】
第二溶媒とは非混和性であって極性係数Ｐ’が０から４．７である第三溶媒は、クロロホルム、酢酸エチル、ジエチルエーテル、及びその混合物からなる群より選択することが好ましい。
【００３７】
前述のとおり、本発明の観点からの活性物質を構成する抽出物として、前記定義の第二及び／又は第三抽出物を選択することが有利であろう。
【００３８】
本発明の組成物に含まれる一つ以上の抽出物の比率は、非常に広い範囲内で変動可能である。
【００３９】
しかしながら、これらの比率は、組成物の総重量に対して０．０００３から２重量％（この百分率は一つ以上の乾燥抽出物として表される）であることが有利である。
【００４０】
これらの比率は、０．００３から０．３重量％までであることが好ましい。
【００４１】
さらに、特に好ましい一実施形態において、抽出物がブチレングリコールでの抽出によって得られない場合でも、それを水とブチレングリコールの混合物の溶液形態、特に水／ブチレングリコール混合物の重量に基づき０．０５〜５重量％、好ましくは０．１〜１重量％の乾燥抽出物を含有する溶液形態にある本発明の組成物に導入するのが有益であることを見出した。
【００４２】
これは、体積比で５０／５０の水とブチレングリコールとの混合物を用いて行うのが有利である。
【００４３】
第二の実施態様によれば、本発明は、前記定義の組成物の調製を特に意図したネオクロリス・オレオアブンダンスの抽出物の調製方法に関する。この方法は、前記定義のアルコール又はアルコール水溶液からなる第一溶媒でバイオマスを抽出して第一抽出物を得るための少なくとも一つの工程を含む。
【００４４】
この方法は、この第一抽出物の分画のための少なくとも一つの工程をさらに含むことが好ましい。
【００４５】
一つの好ましい別の態様において、第一抽出物のこの分画は、第二のアルコール水溶液溶媒と、第二溶媒とは非混和性であって極性Ｐ’が０から４．７である第三溶媒とで第一抽出物を分画する工程からなり、かかる分画により、第二及び第三溶媒で形成される各々の相にそれぞれ含有される第二及び第三抽出物を得る。
【００４６】
最後に、本発明の方法は、異なる抽出物を精製し、それらの感覚刺激性又は呈色を改善するためのさらなる慣用工程を含んでもよい。
【００４７】
このような工程の例としては、ＸＣＶ木炭などの活性炭を用いた脱色工程、又は４０から０．２０μｍのカットオフのフィルターなどを用いた濾過工程が挙げられる。
【００４８】
本発明はさらに、前記定義の抽出物若しくは抽出物の混合物、又は前記定義の方法によって得られる抽出物若しくは抽出物の混合物の、化粧料組成物に添加する痩身剤としての、又は化粧料組成物の製造のための使用に関する。
【００４９】
以下の実施例で得られた結果は、ｉｎ  ｓｉｔｕでの皮膚外植片からの脂肪酸遊離をモニターすることによって、本発明に係る抽出物の脂肪分解活性を明瞭に例証するものである。
【００５０】
最後に、本発明の最後の実施態様は、痩身効果を得るために人体を化粧品でケアする方法に関する。この方法は、それを必要とする身体の部分への前記定義の組成物の適用を含む。
【００５１】
このような方法は、痩身処置が必要な身体の部分を選択し、身体のこの部分に本発明の組成物を適用することを含む。
【００５２】
以下の実施例によって本発明を例証するが、これらによって本発明を限定するものではない。
【実施例】
【００５３】
Ｉ．藻類ネオクロリス・オレオアブンダンスの培養、及びそのバイオマスの回収
使用した株は、ＵＴＥＸ  ａｌｇｏｔｈｅｑｕｅ（オースチンのテキサス大学（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｔｅｘａｓ）の藻類コレクション）に由来するものであり、参照番号はＵＴＥＸ１１８５である。この株は、サウジアラビアで単離された。
【００５４】
実施例において、培養は、１８ｇ／ｌの塩を含有する汽水を充填し、以下の組成の栄養培地を添加した２０ｍ３の水槽においてバッチ式で行った。
【００５５】
Ｎａ２ＥＤＴＡ：  ４．３６×１０−３  ｇ／ｌ
ＦｅＣｌ３・６Ｈ２Ｏ：  １．５８×１０−３  ｇ／ｌ
ＮａＨＣＯ３：  ０．６×１０−３  ｇ／ｌ
ＭｎＣｌ２・４Ｈ２Ｏ：  ０．３６×１０−３  ｇ／ｌ
ＣｕＳＯ４・５Ｈ２Ｏ：  １×１０−５  ｇ／ｌ
ＺｎＳＯ４・７Ｈ２Ｏ：  ２．２×１０−５  ｇ／ｌ
ＣｏＣｌ２・６Ｈ２Ｏ：  １×１０−５  ｇ／ｌ
ＭｇＳＯ４：  ４．９５×１０−２  ｇ／ｌ
ＮａＮＯ３：  ０．１７  ｇ／ｌ
Ｈ３ＢＯ３：  ２．４７×１０−３  ｇ／ｌ
ＮａＨＣＯ３：  ４．２３×１０−３  ｇ／ｌ
Ｋ２ＨＰＯ４：  ３．４７５×１０−２  ｇ／ｌ
ＣａＣｌ２：  ２．９４×１０−２  ｇ／ｌ
ビタミン  Ｂ１：  １×１０−４  ｇ／ｌ
ビタミン  Ｂ１２：  ５×１０−７  ｇ／ｌ
ビタミン  Ｈ：  ５×１０−７  ｇ／ｌ
【００５６】
半連続培養で行うことも可能である。使用した水槽の型の場合、培養は１２〜１５日後に成熟期に達した。
【００５７】
この期間の終わりに、藻類の懸濁液の全体又は一部のいずれかを回収した。
【００５８】
バイオマスは次いで、１４０００Ｇ（１Ｇ＝９．１８ｍ／ｓ２）の加速度での遠心分離によって濃縮した。
【００５９】
ＩＩ．本発明の抽出物の調製
１．メタノールを用いた第一次抽出からの抽出物の調製
ａ．  ５００ｍｌの丸底フラスコにおいて、２６％の乾燥抽出物を含む藻類バイオマス１００ｇに２５０ｍｌのメタノールを添加した。混合物を、６５°Ｃで窒素下に３０分間加熱した。全体を４００ｒｐｍで１０分間遠心分離した。液相を固体残渣から分離して廃棄した。濾過残渣は次いで、２５０ｍｌの丸底フラスコに写し、同じ条件下に２５０ｍｌのメタノールで再抽出した。この操作を、もう一度繰り返した。３つの液相を集め、次いでロータリーエバポレータにて蒸発乾固させた。得られた固体を１００ｍｌの水に再溶解させ、次いで凍結して凍結乾燥させた。この抽出物は最終的に粉末形態となり、以下、抽出物Ａと称した。
【００６０】
ａ．１．  項目ａ）に記載したと同様の調製計画に従い、液相を再度集めたものをロータリーエバポレータにて蒸発乾固させ、次いで再溶解させるが、今回は２００ｍｌのヘプタンを用いる。全体を超音波で処理し、次いで４０００ｒｐｍで３０分間遠心分離した。上清を回収し、ロータリーエバポレータにて蒸発乾固させ、次いで１００ｍｌの蒸留水を添加することにより再溶解させて、凍結し、次いで凍結乾燥させて抽出物を得、これを以下、Ａ１と称した。
【００６１】
ａ．２．  項目１．ａ）で抽出物の調製について記載したと同様の抽出計画に従い、メタノールでの抽出によって得た濾過残渣を、この場合は１００ｍｌのクロロホルムに再溶解させて、９５ｍｌの水と５ｍｌのメタノールを添加した。液体−液体分画が２相間で生じた。有機相を廃棄して、水相を５０ｍｌのクロロホルムで２回再洗浄し、次いでそれを以下の項目ａ．３）に記載の抽出物の調製のために処理した。有機相を集め、次いでロータリーエバポレータにて蒸発乾固させ、５０ｍｌの水に再溶解させて凍結乾燥した。得られた抽出物は、以下Ａ２と称した。
【００６２】
ａ．３．  項目ａ．２）に定義した水相をロータリーエバポレータにて蒸発させて、５０ｍｌの水に再溶解させ、凍結乾燥して抽出物を得、これを以下、Ａ３と称した。
【００６３】
２．第一次水性エタノール抽出による抽出物Ｂの調製、及びこの抽出物の分画
ａ．  水性エタノール抽出物Ｂの調製
５００ｍｌの丸底フラスコ中、２５０ｍｌのエタノール／水混合物（９４／４体積／体積、以下ｖ／ｖ）を、１４．６％の乾燥抽出物を含有する１００ｇの藻類バイオマスに添加した。混合物を３０分間、還流した。冷却後、抽出物を４０００ｒｐｍで２０分間遠心分離し、遠心残渣を次いで２５０ｍｌのアルコール水溶液溶液で合計３回、再抽出した。
【００６４】
引き続き上清を集めて、０．４０μｍのフィルター（ＧＦ／Ｆ、Ｗｈａｔｍａｎ）を用いてブフナー漏斗にて濾過し、その後ロータリーエバポレータにて蒸発乾固させた。
【００６５】
得られた抽出物Ｂは次いで、生物学的試験用に５％（重量／体積、以下ｗ／ｖ）の濃度でＤＭＳＯに溶解させる。
【００６６】
ｂ．  抽出物Ｂ１及び抽出物Ｂ２を調製するための、液体−液体分画による抽出物Ｂの分画
２ｇの前記抽出物Ｂを約８０ｍｌのエタノール／水混合物（２０／４０、ｖ／ｖ）で希釈して、２．５％溶液を得る。５３ｍｌの酢酸エチルを添加して二相系を形成させた。第一有機相を回収するために、２相を分離させた。水相を５３ｍｌの酢酸エチルで再洗浄して、これを合計４回繰り返した。４つの有機相を集め、次いでロータリーエバポレータにて蒸発させて抽出物を得、これを以下、抽出物Ｂ１と称した。
【００６７】
水相もロータリーエバポレータにて乾燥させて乾燥抽出物を得、これを以下、抽出物Ｂ２と称した。
【００６８】
抽出物Ｂ１を５％（ｗ／ｖ）の濃度でＤＭＳＯに溶解させ、抽出物Ｂ２は生物学的試験用に５％（ｗ／ｖ）の濃度で水に溶解させた。
【００６９】
３．第一次水性エタノール抽出による抽出物Ｃの調製
【００７０】
５００ｍｌの丸底フラスコ中、２５０ｍｌのエタノール／水混合物（９６／４、ｖ／ｖ）を、１２％の乾燥抽出物を含有する１００ｇの藻類バイオマスに添加した。混合物を３０分間、還流した。冷却後、抽出物を４００ｒｐｍで２０分間遠心分離し、遠心残渣を次いで２５０ｍｌのアルコール水溶液溶液で合計３回、再抽出した。
【００７１】
引き続き上清を集めて、ブフナー漏斗（ＧＦ／Ｆフィルター、Ｗｈａｔｍａｎ、４０μｍ）にて濾過し、その後ロータリーエバポレータにて蒸発乾固させた。得られた乾燥抽出物は抽出物Ｃである。これを次いで、生物学的試験用に５％（ｗ／ｖ）の濃度でＤＭＳＯに溶解させた。
【００７２】
ＩＩＩ．本発明の抽出物の脂肪分解活性の評価
ＩＩＩ  １．評価の原理
本発明に係るネオクロリス・オレオアブンダンスの抽出物の脂肪分解活性を、生存状態を維持している脂肪組織の外植片について評価することを目的とした。
【００７３】
異なる抽出物を、下記の条件下に培養液中に入れる。
【００７４】
８日間の接触時間後、培養液への脂肪酸の遊離を分析することにより活性を評価した。
【００７５】
ＩＩＩ  ２．手順
−外植片：
脂肪組織の９つの外植片を調製し、それらをＢＥＭ（ＢＩＯ−ＥＣ´の外植片培地）において生存状態で維持した。
その外植片を３つの外植片の３バッチに分割
−培養液の存在下の対照バッチ
−陽性対照として、カフェインで処理したバッチ
−本発明に係る抽出物で処理したバッチ
【００７６】
−試験手順：
−陽性対照：カフェインは、生存培地中、０．１％（１ｍｇ／ｍｌ）の最終濃度、すなわち、本発明に係る抽出物の濃度の１０倍で用いるが、カフェインは０．０１％（１００μｇ／ｍｌ）の濃度では脂肪分解効果を示さない。
−本発明に係るＮｅｏｃｈｌｏｒｉｓの抽出物：抽出物は、乾燥粉末の形態にあり、これを５０％の濃度でＤＭＳＯに可溶化し、その後０．０１％（１００μｇ／ｍｌ）の最終濃度での試験用に外植片培養液で１／５００に希釈した。
【００７７】
−抽出物の適用：
第０日に、試験抽出物が入っている２ｍｌの培養液の中で外植片を生存状態に維持した。
この処理を第２日、第４日及び第６日に繰り返す。
【００７８】
−サンプリング：
第２日、第４日、第６日、及び第８日に、培養液をサンプリングした。各外植片につき、第２日、第４日、第６日、及び第８日にサンプリングした培地を同じチューブに合わせて、培地中に存在する脂肪酸のアッセイ用に−２０℃で貯蔵した。
【００７９】
−培地中に存在する遊離脂肪酸の評価：
培養液の抽出後に、その中に存在する遊離脂肪酸を分取して、高性能薄層クロマトグラフィーによって評価した。
【００８０】
ＩＩＩ  ３．結果
【００８１】
脂肪細胞の生存度及び形態を、組織像によってモニターした。８日間生存状態を維持した後、対照及び被処理外植片は視認可能な分解も細胞壊死も呈しない。
【００８２】
脂肪分解活性は、培養液に遊離された遊離脂肪酸の比率を定量することによって評価した。
【００８３】
得られた結果を以下の表に示すが、８日間の処理の間に培養液へ遊離した脂肪酸の重量に対応させて、μｇで表す。
【００８４】
ａ．  本発明に係る抽出物Ｂを用いて得た結果
遊離した脂肪酸（μｇ）
【表１】
0005483661.tif 000002
【００８５】
ｂ．  抽出物Ｂ１を用いて得た結果（酢酸エチル画分）
遊離した脂肪酸（μｇ）
【表２】
0005483661.tif 000003
【００８６】
ｃ．  抽出物Ｂ２を用いて得た結果（エタノール水溶液画分）
遊離した脂肪酸（μｇ）
【表３】
0005483661.tif 000004
【００８７】
ＩＩＩ  ４．結論
【００８８】
本発明に係る試験抽出物ではすべて、培地に相当量の脂肪酸が遊離されているので、有意な脂肪分解活性を有することがわかる。本発明に係る抽出物に対して用いた０．０１％の用量では、その脂肪分解活性が良く知られている陽性対照のカフェインは活性でないので、この脂肪分解活性、特に抽出物Ｂ１の活性は非常に有意であると考えることもできる。
【００８９】
ＩＶ．製剤例
【００９０】
下記の局所用化粧料組成物を、以下の組成（重量％で表す）で従来の方法で調製した。
【００９１】
痩身用ゲル
脱イオン水  ７３．５％
９６．２体積％アルコール  ２１％
ＡＭＰＳポリマー（Ｓｅｐｉｇｅｌ  ３０５）  ３％
保存料  ０．３％
濃縮香料  ０．１％
ネオクロリス・オレオアブンダンス抽出物（３％抽出物Ｂ１溶液（水／ブチレングリコール：５０／５０）  ２％
ヒアルロン酸ナトリウム（高分子量）  ０．１％
【００９２】
痩身用クリーム
ステアリン酸グリセリル＋ＰＥＧ１００ステアリン酸誘導体  ６．０％
水素化ポリイソブテン  ３．０％
スクアレン  ３．０％
カプリル酸／カプリン酸グリセリル  トリグリセリド類  ３．０％
グリセロール  ２．０％
メトキシケイ皮酸オクチル  ２．０％
オクタン酸セチルステアリル  １．５％
蜜蝋  １．５％
セチルアルコール  １．０％
ステアリルアルコール  １．０％
ジメチコーン（Ｄｉｍｅｔｈｉｃｏｎｅ）  １．０％
キサンタンゴム  ０．２％
ネオクロリス・オレオアブンダンス抽出物（３％抽出物Ｂ２溶液（水／ブチレングリコール：５０／５０）  ２％
保存料、香料、着色料  ０．２％
水  十分量
【００９３】
液体痩身用エマルション
パルミチン酸オクチル  ７．０％
カプリル酸／カプリン酸グリセリル  トリグリセリド類  ３．０％
オクタン酸オクチル  ２．０％
フェニルトリメチコン（Ｐｈｅｎｙｌ  ｔｒｉｍｅｔｈｉｃｏｎｅ）  ２．０％
グリセロール  ２．０％
ステアリン酸  １．０％
ソルビタン  １．０％
セチルアルコール  ０．５％
ステアリルアルコール  ０．５％
ネオクロリス・オレオアブンダンス抽出物Ｃ  １％
保存料、香料、着色料、中和剤  ０．１％
水  十分量
【００９４】
痩身用ローション
ブチレングリコール  ３％
ＥＤＴＡ  ０．１％
可溶化剤  １％
濃縮香料  ０．１％
アルコール  ５．２％
ネオクロリス・オレオアブンダンス抽出物Ａ  ０．５％
ベンゾフェノン−４  ０．１３％
保存料、香料、着色料、中和剤  ０．１％
水  十分量