(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
複数の流路が形成され、前記流路の内面に、光を照射することによって細胞が接着可能な光応答性材料からなる光応答性材料層が形成されたマイクロアレイチップの複数の流路の光応答性材料層に、それぞれ複数の細胞が接着しており、
前記複数の細胞は、前記流路の光応答性材料層に、前記流路の長さ方向に位置を違えて接着され、
前記流路のうち少なくとも１つにおいて、この流路に保持された前記複数の細胞のうち２以上が互いに異なることを特徴とする細胞アレイ。
【請求項２】
前記光応答性材料は、主剤ポリマーの側鎖または末端に、光照射によって構造と荷電状態が変化するスピロベンゾピランが担持されていることを特徴とする請求項１に記載の細胞アレイ。
【請求項３】
前記複数の流路が、互いにほぼ平行に形成されていることを特徴とする請求項１または２に記載の細胞アレイ。
【請求項４】
前記複数の流路において、前記細胞の配列順が互いに同じであることを特徴とする請求項３に記載の細胞アレイ。
【請求項５】
請求項１〜４のうちいずれか１項に記載の細胞アレイを製造する方法であって、
前記流路の光応答性材料層の一部に光を照射し、この照射部分に細胞を接着させる工程と、
前記光応答性材料層の、前記照射部分とは長さ方向の位置が異なる位置に光を照射し、この照射部分に、前記細胞とは異なる細胞を接着させる工程とを含むことを特徴とする細胞アレイの製造方法。
【請求項６】
前記流路に細胞を接着させるにあたっては、前記流路の一部に光を照射した状態で、この流路に前記細胞を供給することによって、この細胞を前記流路に接着させることを特徴とする請求項５に記載の細胞アレイの製造方法。
【請求項７】
請求項１〜４のうちいずれか１項記載の細胞アレイを用いて、前記細胞に対する薬剤の作用を検査する方法であって、
前記流路のうち少なくとも２つに、それぞれ互いに異なる薬剤を含む液を流すことによって、これら薬剤を前記細胞に接触させ、これら細胞に対する前記薬剤の作用を検出することを特徴とする検査方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、薬剤スクリーニングなどに用いられるマイクロアレイチップ、これを用いた細胞アレイ、およびその製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
生体に対する薬剤の影響を確認するための薬剤スクリーニングは、新薬の開発に欠くことができない技術である。薬剤スクリーニングには、チップ上に細胞がアレイ状に保持された細胞アレイが用いられる（例えば特許文献１を参照）。
細胞をチップ上に配置する技術としては、目的とする細胞と特異的に結合する抗体を用いて細胞を接着する手法がある。
【特許文献１】特開２００５−４６１２１号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
しかしながら、従来技術では、細胞をチップ上に配置するのに手間がかかるという問題がある。
また、抗体を用いて細胞を接着する技術では、抗体が細胞の生理状態に影響を与えるおそれがあるため、細胞の状態が一定でなくなり、細胞に対する薬剤の作用を正確に測定するのが難しくなることがあった。
本発明は上記事情に鑑みてなされたもので、細胞を容易にチップ上に保持させることができ、しかも細胞に対する薬剤の作用を検査するにあたって、正確な測定が可能となるマイクロアレイチップ、これを用いた細胞アレイ、およびその製造方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
本発明の構成は以下の通りである。
（１）複数の流路が形成され、前記流路の内面に、光を照射することによって細胞が接着可能な光応答性材料からなる光応答性材料層が形成されたマイクロアレイチップの複数の流路の光応答性材料層に、それぞれ複数の細胞が接着しており、前記複数の細胞は、前記流路の光応答性材料層に、前記流路の長さ方向に位置を違えて接着され、
前記流路のうち少なくとも１つにおいて、この流路に保持された前記複数の細胞のうち２以上が互いに異なることを特徴とする細胞アレイ。
（２）前記光応答性材料は、主剤ポリマーの側鎖または末端に、光照射によって構造と荷電状態が変化するスピロベンゾピランが担持されている（１）に記載の細胞アレイ。
（３）前記複数の流路が、互いにほぼ平行に形成されている（１）または（２）に記載の細胞アレイ。
（４）前記複数の流路において、前記細胞の配列順が互いに同じである（３）に記載の細胞アレイ。
（５）（１）〜（４）のうちいずれか１つに記載の細胞アレイを製造する方法であって、前記流路の光応答性材料層の一部に光を照射し、この照射部分に細胞を接着させる工程と、前記光応答性材料層の、前記照射部分とは長さ方向の位置が異なる位置に光を照射し、この照射部分に、前記細胞とは異なる細胞を接着させる工程とを含む細胞アレイの製造方法。
（６）前記流路に細胞を接着させるにあたって、前記流路の一部に光を照射した状態で、この流路に前記細胞を供給することによって、この細胞を前記流路に接着させる（５）に記載の細胞アレイの製造方法。
（７）（１）〜（４）のうちいずれか１つ記載の細胞アレイを用いて、前記細胞に対する薬剤の作用を検査する方法であって、前記流路のうち少なくとも２つに、それぞれ互いに異なる薬剤を含む液を流すことによって、これら薬剤を前記細胞に接触させ、これら細胞に対する前記薬剤の作用を検出する検査方法。
【発明の効果】
【０００５】
本発明のマイクロアレイチップでは、流路に光応答性材料層が形成されているので、光応答性材料層に光を照射することによって、照射部分を細胞接着可能とすることができる。
このため、細胞を、接着用の物質（抗体など）を介在させずに、直接、流路内面の光応答性材料層に接着させることができる。従って、細胞を容易な操作で流路に保持させることができる。
抗体などの生理活性物質を介して細胞を接着する場合には、この生理活性物質が細胞の生理状態に何らかの影響を与えるおそれがあるのに対し、本発明では、光応答性材料が細胞に与える生理的な影響が小さいため、細胞の生理状態を一定とし、細胞に対する薬剤の作用を正確に測定することができる。
また、複数の流路に複数種類の細胞を保持させることによって、多種類のアッセイを効率よく行うことができる。このため、多種類の薬剤の作用を、容易かつ低コストで調べることができる。
従って、ユーザー個人の細胞を用いて細胞アレイを作製することによって、ユーザー個人の特性に応じた対応が可能となる。例えば、医療において、患者個人の特性に応じた治療が可能となる。
【図面の簡単な説明】
【０００６】
【図１】本発明の細胞アレイの一例を示す構成図である。
【図２】図１に示す細胞アレイの製造方法を示す工程図である。
【図３】前図に続く工程図である。
【図４】前図に続く工程図である。
【図５】前図に続く工程図である。
【図６】図１に示す細胞アレイを使用する方法の一例を示す説明図である。
【図７】図１に示す細胞アレイを用いて、細胞と薬剤との反応を検出する方法を示す説明図である。
【図８】同一流路内の異なる所定の領域に、局所光照射による固定化に基づいて、それぞれ独立に担持されたCHO-K1細胞とMDCK細胞の蛍光顕微鏡観察像。
【図９】PDMSのパターン塗布によって予めドット状に細胞接着領域が限局された同一流路内の異なる所定の領域に、局所光照射による固定化に基づいて、それぞれ独立に担持されたCHO-K1細胞とMDCK細胞の蛍光顕微鏡観察像。
【符号の説明】
【０００７】
１…細胞アレイ、２…マイクロアレイチップ、３ａ〜３ｄ…第１〜第４流路、４ａ〜４ｄ…第１〜第４細胞、５…光応答性材料層、６ａ〜６ｄ、７ａ〜７ｄ、８ａ〜８ｄ、９ａ〜９ｄ…照射部分、１１ａ〜１１ｄ…第１〜第４薬剤含有液、１２…検出系。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００８】
図１は、本発明の細胞アレイの一例を示すものである。
ここに示す細胞アレイ１は、マイクロアレイチップ２に形成された第１〜第４流路３ａ〜３ｄに、第１〜第４細胞４ａ〜４ｄが保持されている。
マイクロアレイチップ２の構成材料として好適なものとしては、シリコーン系樹脂（例えばポリジメチルシロキサン樹脂）、アクリル系樹脂（例えばポリメタクリル酸メチル樹脂）、ポリスチレン系樹脂、ポリエチレン系樹脂、ポリプロピレン系樹脂、ポリカーボネート系樹脂、エポキシ系樹脂、ガラス、シリコンなどを挙げることができる。
第１〜第４流路３ａ〜３ｄの形状は特に限定されず、例えばその断面形状を矩形、三角形、台形、円形、半円形、楕円形などとすることができる。
流路３ａ〜３ｄは、平面視形状が直線状とされ、互いにほぼ平行に形成されている。
流路３ａ〜３ｄは、例えば、溝が形成された基材の上にカバー材を配置することなどによって形成された閉鎖系の流路であることが好ましい。【０００９】
流路３ａ〜３ｄの内面には、光応答性材料層５が形成されている。
光応答性材料層５は、主剤ポリマーの側鎖または末端に、光照射によって構造と荷電状態が変化するスピロベンゾピランが担持された光応答性材料からなる。
主剤ポリマーは、特に限定されないが、非イオン性で水和性が中程度のポリマーが好ましく、このようなポリマーとしては、Ｎ置換アクリルアミドの重合体が好適である。
Ｎ置換アクリルアミドとしては、Ｎ−アルキルアクリルアミド、Ｎ−アルキレンアクリルアミドを挙げることができる。
Ｎ−アルキルアクリルアミドとしては、Ｎ−イソプロピルアクリルアミド、Ｎ−エチルアクリルアミド、Ｎ，Ｎ−ジエチルアクリルアミド、Ｎ−ｎ−プロピルアクリルアミドを挙げることができる。【００１０】
スピロベンゾピランは、フォトクロミック分子である。フォトクロミック分子とは、特定波長の光の照射により分子構造が変化し、分子内の双極子モーメント、荷電などの性質が異なる異性体を可逆的に生成するものをいう。
本発明で使用できるスピロベンゾピランとしては、次の式（１）に示すものがある。【００１１】
【化１】
0005403311.tif 000002
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３は水素原子、アルキル基、アリール基、または複素環基を示す。
Ｘとしては水素原子、または置換基として電子供与性基を導入することが好ましい。電子供与性基の例としては、アルキル基、アリール基、アルコキシ基、フェニル基、アミノ基、（アルキル置換）アミノ基、（ジアルキル置換）アミノ基などが挙げられる。
Ｙとしては水素原子、または置換基として電子吸引性基を導入することが好ましい。電子吸引性基の例としては、−Ｃ（＝Ｏ）−で表わされるカルボニル基を連結基として、その一方に置換基が結合して形成される置換カルボニル基や、ホルミル基、ニトロ基、ハロゲン化アルキル基、シアノ基、ハロゲン原子、アルケニル基、アルキニル基等が挙げられる。【００１２】
スピロベンゾピランは、光の照射によって荷電、もしくは分子内の双極子モーメントが異なる異性体を可逆的に生成する。
なお、本発明では、例示したものに限らず、上記式（１）に示すものの誘導体も使用できる。
スピロベンゾピランの濃度は、低すぎる場合、および高すぎる場合のいずれにおいても光応答性材料の光応答性が小さくなるため、主剤ポリマーを構成する重合性モノマーに対して、０．５〜２０ｍｏｌ％（例えば２〜１０ｍｏｌ％）が好ましい。
上記光応答性材料は、架橋がない（すなわち直鎖状）ポリマーであることが好ましい。【００１３】
光応答性材料には、重合開始剤として、過酸化ベンゾイルなどの有機過酸化物や、２，２’−アゾビス（イソブチロニトリル）などのアゾ重合開始剤を用いることができる。また、光重合開始剤として、２，２−ジメトキシ−２−フェニルアセトフェノン（ＤＭＰＡ）を添加するのが好ましい。【００１４】
上記光応答性材料は、特定波長の光を照射すると、スピロベンゾピランが荷電の異なる異性体を生成し、細胞表面に吸着しやすくなる。
光応答性材料の具体的な例を以下に示す。【００１５】
【化２】
0005403311.tif 000003
【００１６】
上記式（２）に示す光応答性材料は、主剤ポリマー（ポリ（Ｎ−イソプロピルアクリルアミド））の側鎖に、２つのアミド結合を含むリンカーを介してスピロベンゾピランが担持されている。スピロベンゾピランには、置換基としてニトロ基が導入されている。
上記光応答性材料は、波長３５０〜３８０ｎｍの光（近紫外線）を照射することによって開環し、波長４５０〜６００ｎｍの光（可視光）を照射することによって閉環する。【００１７】
図１に示すように、第１流路３ａ内の光応答性材料層５表面には、第１〜第４細胞４ａ〜４ｄが、流路長さ方向に並んで配置されている。第２〜第４流路３ｂ〜３ｄの内面にも、第１流路３ａと同様に、第１〜第４細胞４ａ〜４ｄが配置されている。【００１８】
次に、細胞アレイ１を製造する方法を説明する。
図２に示すように、マイクロアレイチップ２の流路３ａ〜３ｄ内面に、光応答性材料層５を形成する。
光応答性材料層５を形成するには、例えば次の方法が可能である。
光応答性材料の原料（例えばＮ−イソプロピルアクリルアミド、スピロベンゾピラン、および光重合開始剤）を調製する。上記原料には、アルコール、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、アセトン、テトラヒドロフランなどの有機溶媒を添加することができる。上記原料を流路３ａ〜３ｄの内面に塗布することによって光応答性材料層５を形成することができる。【００１９】
次いで、図３に示すように、流路３ａ〜３ｄの一部に、特定波長の光１０を局所的に照射する。図示例では、流路３ａ〜３ｄに対し垂直な方向に沿う直線状の光１０を照射する。
流路３ａ〜３ｄに照射する光１０としては、光応答性材料が細胞表面に吸着可能となる波長のものを使用する。例えば、波長３５０〜３８０ｎｍの光が使用できる。
光１０が照射された部分の流路３ａ〜３ｄ（以下、第１照射部分６ａ〜６ｄという）では、光応答性材料層５を構成する光応答性材料の荷電が変化し、細胞表面に吸着可能となる。【００２０】
次いで、図４に示すように、第１細胞４ａを含む液を流路３ａ〜３ｄに流す。
これによって、図５に示すように、第１細胞４ａは、第１照射部分６ａ〜６ｄに接着する。【００２１】
次いで、流路３ａ〜３ｄの一部であり第１照射部分６ａ〜６ｄとは異なる位置に、特定波長の光を照射する。図示例では、照射部分６ａ〜６ｄよりも薬剤流れ方向（後述）の上流側に光を照射する。
光が照射された部分の流路３ａ〜３ｄ（以下、第２照射部分７ａ〜７ｄという）では、光応答性材料の荷電が変化し、細胞表面に吸着可能となる（図１参照）。
第２細胞４ｂを含む液を流路３ａ〜３ｄに流し、第２細胞４ｂを第２照射部分７ａ〜７ｄに接着させる。【００２２】
次いで、流路３ａ〜３ｄの一部であり照射部分６ａ〜６ｄ、７ａ〜７ｄとは異なる位置（図示例では照射部分７ａ〜７ｄよりもやや上流側）に特定波長の光を照射する（以下、第３照射部分８ａ〜８ｄという。図１参照）。
第３細胞４ｃを含む液を流路３ａ〜３ｄに流し、第３細胞４ｃを第３照射部分８ａ〜８ｄに接着させる。【００２３】
次いで、流路３ａ〜３ｄの一部であり照射部分６ａ〜６ｄ、７ａ〜７ｄ、８ａ〜８ｄとは異なる位置（図示例では照射部分８ａ〜８ｄよりもやや上流側）に特定波長の光を照射する（以下、第４照射部分９ａ〜９ｄという。図１参照）。
第４細胞４ｄを含む液を流路３ａ〜３ｄに流し、第４細胞４ｄを第４照射部分９ａ〜９ｄに接着させる。
第１〜第４細胞４ａ〜４ｄとしては、互いに異なるものを用いることができる。【００２４】
図１に示すように、以上の操作によって、４つの流路３ａ〜３ｄに、いずれも細胞４ａ〜４ｄが接着された細胞アレイ１が得られる。【００２５】
次に、細胞アレイ１を用いて、細胞４ａ〜４ｄに対する薬剤の作用を検査する方法の一例を説明する。
図６に示すように、第１〜第４薬剤含有液１１ａ〜１１ｄを、それぞれ流路３ａ〜３ｄに流す。薬剤含有液１１ａ〜１１ｄは、互いに異なる薬剤を含む液が好ましい。
これによって、第１〜第４薬剤含有液１１ａ〜１１ｄは、いずれも第１〜第４細胞４ａ〜４ｄに接触することになる。すなわち、４種の薬剤と４種の細胞のすべての組み合わせである１６通りのアッセイを同時に行うことができる。【００２６】
次いで、図７に示すように、薬剤含有液１１ａ〜１１ｄと細胞４ａ〜４ｄとの反応を、検出系１２を用いて検出する。
検出方法は特に限定されないが、例えば、蛍光色素や放射性物質で標識した薬剤含有液１１ａ〜１１ｄを使用し、これらが細胞４ａ〜４ｄに取り込まれた量を、蛍光等の強度により検出する方法が採用できる。
このほか、細胞４ａ〜４ｄにＧＦＰ（Green Fluorescent Protein）遺伝子を導入し、産生したＧＦＰ量を蛍光強度に基いて検出する方法、エステラーゼなどの酵素活性に基いて蛍光を発する標識を用い、蛍光強度によって細胞の生存率（バイアビリティ）を検出する方法、細胞が産生した生理活性物質を抗体染色することにより細胞の生理活性を検出する方法なども採用できる。【００２７】
マイクロアレイチップ２では、流路３ａ〜３ｄに光応答性材料層５が形成されているので、光応答性材料層５に光を照射することによって、照射部分を細胞接着可能とすることができる。
このため、細胞４ａ〜４ｄを、接着用の物質（抗体など）を介在させずに、直接、流路３ａ〜３ｄ内面の光応答性材料層５に接着させることができる。従って、細胞４ａ〜４ｄを容易な操作で流路３ａ〜３ｄに接着させることができる。【００２８】
細胞を選抜、分離する方法としては、目的とする細胞と特異的に結合する抗体を用いて細胞を接着する方法があるが、この方法は、抗体が得られている細胞にしか適用できない。
これに対し、細胞アレイ１を用いる方法は、細胞の種類によらず適用できるという利点がある。【００２９】
また、抗体などの生理活性物質を介して細胞を接着する方法では、この生理活性物質が細胞の生理状態に何らかの影響を与えるおそれがある。
これに対し、細胞アレイ１を用いる方法では、光応答性材料が細胞４ａ〜４ｄに与える生理的な影響が小さいため、細胞４ａ〜４ｄの生理状態を一定とし、薬剤含有液１１ａ〜１１ｄの細胞４ａ〜４ｄに対する作用を正確に測定することができる。【００３０】
また、細胞アレイ１を用いる方法では、抗体などの細胞接着用の物質を必要としないため、コスト面でも有利である。
さらには、細胞４ａ〜４ｄを、直接、流路３ａ〜３ｄ内に接着するので、抗体などを介在させる場合に比べ、コンタミネーションが起こりにくい。【００３１】
従来の細胞アレイでは、細胞に対する薬剤の作用を調べる場合には、細胞が全て同じ環境下に置かれることが多い。
これに対し、本発明の一例である細胞アレイ１を用いる方法では、複数の流路３ａ〜３ｄに複数種類の細胞４ａ〜４ｄを保持させることによって、細胞４ａ〜４ｄと薬剤含有液１１ａ〜１１ｄの全ての組み合わせに関するアッセイを同時に行うことができるため、多種類のアッセイを効率よく行うことができる。
このため、多種類の薬剤含有液１１ａ〜１１ｄの作用を、容易かつ低コストで調べることができる。
従って、ユーザー個人の細胞４ａ〜４ｄを用いて細胞アレイ１を作製することによって、ユーザー個人の特性に応じた対応が可能となる。例えば、医療において、患者個人の特性に応じた治療が可能となる。【００３２】
また、従来技術では、細胞をマイクロアレイチップ上に配置する操作は、開放系でスポッティングにより行われることが多く、コンタミネーションを防止するのが難しいが、細胞アレイ１を用いる方法では、一連の操作を、すべて閉鎖系の流路３ａ〜３ｄ内で行うことができる。
従って、コンタミネーションを防ぎ、無菌環境下で正確なアッセイが可能である。【００３３】
上記検査方法では、各流路３ａ〜３ｄに、互いに異なる細胞４ａ〜４ｄを接着させたが、本発明では、複数の流路のうち少なくとも１つにおいて、この流路に配置された複数の細胞のうち２以上が互いに異なっていればよい。
また、上記検査方法では、流路３ａ〜３ｄにそれぞれ異なる薬剤含有液１１ａ〜１１ｄを流したが、本発明では、流路のうち少なくとも２つに、それぞれ互いに異なる薬剤含有液を流せばよい。
【実施例１】
【００３４】
図１に示す細胞アレイ１を次のようにして作製した。
ポリジメチルシロキサン樹脂からなるマイクロアレイチップ２を用意した。流路３ａ〜３ｄは、幅６００μｍ、深さ２００μｍの断面矩形に形成した。
上述の式（２）に示すように、ポリ（Ｎ−イソプロピルアクリルアミド）の側鎖にニトロスピロベンゾピランを担持させて得られた光応答性材料を用いて、マイクロアレイチップ２の流路３ａ〜３ｄ内面に光応答性材料層５を形成した。
細胞懸濁液を流路３ａ〜３ｄ内に満たし、近紫外線（波長３６５ｎｍ）を流路３ａ〜３ｄの一部に局所的に２．５分間照射した。照射量は２６０ｍＷ／ｃｍ２とした。これによって、第１照射部分６ａ〜６ｄに第１細胞４ａを接着させた。
リン酸緩衝液を用いて流路３ａ〜３ｄを洗浄した後、同様の操作により、第２〜第４細胞４ｂ〜４ｄを、それぞれ照射部分７ａ〜７ｄ、８ａ〜８ｄ、９ａ〜９ｄに接着させた。
以上の操作によって、４つの流路３ａ〜３ｄに細胞４ａ〜４ｄが接着された細胞アレイ１を得た。
光応答性材料層５の表面を、生きた細胞のみを染色できる蛍光色素であるＣＭＦＤＡ（5-chloromethylfluorescein diacetate）で処理した。
観察の結果、流路３ａ〜３ｄに、生細胞である細胞４ａ〜４ｄが接着されたことが確認された。
【実施例２】
【００３５】
シリコンウェハ上にフォトリソグラフィー法を用いて作製した鋳型を用いて、流路構造を有するポリジメチルシロキサン (PDMS)基板を作製し、このPDMS 基板を、光応答性を有するニトロスピロスピラン担持ポリ(N-イソプロピルアクリルアミド)修飾基板表面に圧着することで流路型チップを構築した。この流路型チップ内にCHO-K1 細胞の懸濁液を注入し、適当時間インキュベーター内で静置培養を行った。その後、所定の細胞存在部位に光照射を行い照射部位のCHO-K1 細胞を捕捉し、リン酸緩衝溶液で流路内の未接着細胞を除去した。続いて捕捉したCHO-K1 細胞を緑色蛍光色素CMFDAで染色した後、赤色蛍光色素CMTPX で予め染色したMDCK 細胞を均一に播種して培養を行い所定の位置に対し光照射を行った後、洗浄を行った。なお、細胞捕捉のための光照射条件は、波長365 nm, 260 mW/cm2、2.5分とした。
各実験操作後の細胞培養表面の顕微鏡観察像を図８に示す。微小空間における細胞培養は困難を伴うが、チップ構造と培養条件を検討した結果、微小空間内で細胞を均一に播種・培養することが可能となった (a)。また細胞播種後に所定の細胞接着部位に紫外光照射を行った結果、非照射部位では洗浄操作により細胞が剥離したのに対して照射部位では光応答性細胞培養基板上に細胞が残存、エステラーゼ活性に基づいて蛍光を発するCMFDAで染色されたCHO-K1細胞は、光照射後も蛍光を発しておりviability を損なうことなく光照射により細胞が捕捉されていることが確認された  (b)。さらにMDCK細胞を導入し(c)、同様の方法で光照射および洗浄を行い、MDCK細胞とCHO-K1細胞を同一微小流路内の異なる位置に配置できることが示さされた(d,e)。
【実施例３】
【００３６】
所定の領域を越えて細胞が移動・増殖することを防ぎ、細胞配列を安定に保つことを目的として、特定のパターンに沿って細胞接着を阻害するPDMSをマイクロコンタクトプリント法により塗布した培養基材を底面とする実施例２と同様の微小流路を作製し、実施例２と同様の手順でCHO-K1細胞とMDCK細胞を配列した。細胞担持流路の蛍光顕微鏡観察像を図９に示す。流路内で各細胞は互いに十分離れた培養状態を約１日間、安定に保つことが確認された。
【図１】
0005403311.tif 000004
【図２】
0005403311.tif 000005
【図３】
0005403311.tif 000006
【図４】
0005403311.tif 000007
【図５】
0005403311.tif 000008
【図６】
0005403311.tif 000009
【図７】
0005403311.tif 000010
【図８】
0005403311.tif 000011
【図９】
0005403311.tif 000012