(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
タウエラ・エスピー（Ｔｈａｕｅｒａ ｓｐ．）ＪＰＣＣ  Ｓｅ７−１株（ＮＩＴＥ  Ｐ−１４６５）、及びクロストリジウム・アミロリティカム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ａｍｙｌｏｌｙｔｉｃｕｍ）ＪＰＣＣ  Ｓｅ７−２株（ＮＩＴＥ  Ｐ−１４２２）を、セレン酸化合物共存下において共培養する工程を有するセレン酸化合物の還元方法。
【請求項２】
請求項１に記載の還元方法でセレン酸化合物を還元した後、タウエラ・エスピー（Ｔｈａｕｅｒａ ｓｐ．）ＪＰＣＣ  Ｓｅ７−１株（ＮＩＴＥ  Ｐ−１４６５）、及びクロストリジウム・アミロリティカム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ａｍｙｌｏｌｙｔｉｃｕｍ）ＪＰＣＣ  Ｓｅ７−２株（ＮＩＴＥ  Ｐ−１４２２）を、培養物から除去する工程を有するセレン酸化合物の除去方法。
【請求項３】
請求項２に記載の除去方法で除去した微生物から金属セレンを取り出す工程を有する金属セレンの製造方法。
【請求項４】
タウエラ・エスピー（Ｔｈａｕｅｒａ ｓｐ．）ＪＰＣＣ  Ｓｅ７−１株（ＮＩＴＥ  Ｐ−１４６５）、及びクロストリジウム・アミロリティカム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ａｍｙｌｏｌｙｔｉｃｕｍ）ＪＰＣＣ  Ｓｅ７−２株（ＮＩＴＥ  Ｐ−１４２２）を含有するセレン酸化合物還元製剤。
【請求項５】
タウエラ・エスピー（Ｔｈａｕｅｒａ ｓｐ．）ＪＰＣＣ  Ｓｅ７−１株（ＮＩＴＥ  Ｐ−１４６５）。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規微生物、セレン酸化合物還元製剤、セレン酸化合物の還元方法、セレン酸化合物の除去方法、及び金属セレンの製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
セレンは、半導体材料や感光性材料として有用であることが知られているほか、ガラスの着色剤、脱色剤としても利用されるなど、産業界において利用価値の高い元素である。
その一方で、セレンは人体にとって必須元素であり、微量の摂取が必要とされるが、必要量以上に摂取すると毒性を示すことが知られている。そこで、水質汚濁及び土壌汚染を防止するために、環境基準の指定項目となっている。
このような中、上記のような産業界においては、工場排水中にセレンが混入する可能性があり、また、セレンは石炭中にも微量含まれていることから、火力発電所等の排水にも混入する可能性があるため、このような排水中のセレンの除去は重要な課題となっている。
【０００３】
工場排水中などで問題となるセレンは、セレン（６価）の化合物であるセレン酸（Ｈ２ＳｅＯ４）又はその塩、セレン（４価）の化合物である亜セレン酸（Ｈ２ＳｅＯ３）又はその塩である。通常これらセレン酸化合物は、工場排水などの水溶液中では、セレン酸イオン（ＳｅＯ４２−）の形態で、ごく一部は亜セレン酸（ＳｅＯ３２−）イオンの形態で存在していると考えられる。これらセレン酸化合物は、還元されると０価の金属セレンとなる。
【０００４】
ところで、自然界の微生物には、これらセレンオキシアニオンを体内に取り込んで還元処理するものがあることが知られている。具体的には、特定の微生物をセレンオキシアニオンと栄養源の存在下で生育させると、微生物はこれらアニオンを体内に取り込み、生育と共にセレン酸イオンを亜セレン酸イオンに還元し、さらに亜セレン酸イオンを粒子状の金属セレンにまで還元するのである（例えば、特許文献１及び非特許文献１参照）。この現象はバイオミネラリゼーションとして知られており、この現象を利用すれば、溶液中からセレンオキシアニオンを粒子化しながら除去できる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開平９−２４８５９５号公報
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Ａｐｐｌｉｅｄ  ａｎｄ  Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．６３，Ｎｏ．８，ｐ３０７９−３０８４．
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
しかし、特許文献１及び非特許文献１に記載のものをはじめとする、従来のバイオミネラリゼーションによるセレンオキシアニオンの除去方法は、亜セレン酸イオンを金属セレンに還元する速度が遅いため、必ずしも除去能が十分ではないという問題点があった。そこで、セレンオキシアニオン等のセレン酸化合物をより効率的に除去できる方法の開発が望まれている。
【０００８】
本発明は、上記事情に鑑みてなされたものであり、セレン酸化合物の還元能に優れる新規微生物、並びに該微生物を用いたセレン酸化合物還元製剤、セレン酸化合物の還元方法、セレン酸化合物の除去方法、及び金属セレンの製造方法を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
上記課題を解決するため、
本発明は、タウエラ・エスピー（Ｔｈａｕｅｒａ ｓｐ．）ＪＰＣＣ  Ｓｅ７−１株（ＮＩＴＥ  Ｐ−１４６５）、及びクロストリジウム・アミロリティカム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ａｍｙｌｏｌｙｔｉｃｕｍ）ＪＰＣＣ  Ｓｅ７−２株（ＮＩＴＥ  Ｐ−１４２２）を、セレン酸化合物共存下において共培養する工程を有するセレン酸化合物の還元方法を提供する。
【００１０】
また、本発明は、前記還元方法でセレン酸化合物を還元した後、タウエラ・エスピー（Ｔｈａｕｅｒａ ｓｐ．）ＪＰＣＣ  Ｓｅ７−１株（ＮＩＴＥ  Ｐ−１４６５）、及びクロストリジウム・アミロリティカム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ａｍｙｌｏｌｙｔｉｃｕｍ）ＪＰＣＣ  Ｓｅ７−２株（ＮＩＴＥ  Ｐ−１４２２）を、培養物から除去する工程を有するセレン酸化合物の除去方法を提供する。
また、本発明は、前記除去方法で除去した微生物から金属セレンを取り出す工程を有する金属セレンの製造方法を提供する。
【００１１】
また、本発明は、タウエラ・エスピー（Ｔｈａｕｅｒａ ｓｐ．）ＪＰＣＣ  Ｓｅ７−１株（ＮＩＴＥ  Ｐ−１４６５）、及びクロストリジウム・アミロリティカム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ａｍｙｌｏｌｙｔｉｃｕｍ）ＪＰＣＣ  Ｓｅ７−２株（ＮＩＴＥ  Ｐ−１４２２）を含有するセレン酸化合物還元製剤を提供する。
また、本発明は、タウエラ・エスピー（Ｔｈａｕｅｒａ ｓｐ．）ＪＰＣＣ  Ｓｅ７−１株（ＮＩＴＥ  Ｐ−１４６５）を提供する。
【発明の効果】
【００１２】
本発明によれば、セレン酸化合物の還元能に優れる新規微生物、並びに該微生物を用いたセレン酸化合物還元製剤、セレン酸化合物の還元方法、セレン酸化合物の除去方法、及び金属セレンの製造方法が提供される。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】タウエラ・エスピー（Ｔｈａｕｅｒａ ｓｐ．）ＪＰＣＣ  Ｓｅ７−１株の１６ＳｒＤＮＡについての分子系統解析の結果を示す分子系統樹である。
【図２】クロストリジウム・アミロリティカム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ａｍｙｌｏｌｙｔｉｃｕｍ）ＪＰＣＣ  Ｓｅ７−２株の１６ＳｒＤＮＡについての分子系統解析の結果を示す分子系統樹である。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
以下、本明細書において、「タウエラ・エスピー（Ｔｈａｕｅｒａ  ｓｐ．）ＪＰＣＣ  Ｓｅ７−１株」を「Ｓｅ７−１株」、「クロストリジウム・アミロリティカム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ａｍｙｌｏｌｙｔｉｃｕｍ）ＪＰＣＣ  Ｓｅ７−２株」を「Ｓｅ７−２株」と、それぞれ略記することがある。
また、本明細書において「セレン酸化合物」とは、セレン酸（Ｈ２ＳｅＯ４）、亜セレン酸（Ｈ２ＳｅＯ３）及びこれらの塩並びにこれらのイオンを意味する。
【００１５】
＜Ｓｅ７−１株の取得＞
Ｓｅ７−１株の取得には、日本国内の火力発電所の生物処理槽から採取した活性汚泥をサンプルとして用いた。
活性汚泥からのＳｅ７−１株の分離には、下記組成のＭＥ培地を使用した。
（ＭＥ培地の組成）
硝酸０．１ｇ、乳酸０．５ｇ、リン酸二水素カリウム０．５ｇ、塩化アンモニウム０．２ｇ、システイン０．０５ｇ、酵母エキス０．２ｇ、蒸留水１Ｌ、ミネラル液４ｍｌ
なお、ミネラル液の組成は以下の通りである。
（ミネラル液の組成）
ニトリロ三酢酸１．８ｇ、塩化マグネシウム・六水和物２．５ｇ、塩化マンガン（ＩＩ）・四水和物０．６ｇ、塩化ナトリウム１．０ｇ、塩化鉄（ＩＩ）・四水和物０．１３６ｇ、塩化コバルト（ＩＩ）・六水和物０．１ｇ、塩化カルシウム・二水和物０．１３ｇ、硫酸銅（ＩＩ）・五水和物０．０１４６ｇ、塩化亜鉛０．０１ｇ、ホウ酸（Ｈ３ＢＯ３）０．０１ｇ、塩化ニッケル（ＩＩ）・六水和物０．０１ｇ、モリブテン（ＶＩ）酸二ナトリウム・二水和物０．０１ｇ、塩化銅（ＩＩ）・二水和物０．０１ｇ、蒸留水１Ｌ
【００１６】
上記組成のＭＥ培地を、オートクレーブにより１２１℃で１５分間滅菌処理を行った。
次いで、クリーンベンチ内において、３３ｍｌ容積のバイアル瓶にこのＭＥ培地を３０ｍｌ添加し、さらにセレン濃度が５０ｐｐｍとなるように、このＭＥ培地にセレン酸溶液を添加し、活性汚泥を１％植菌した。
次いで、バイアル瓶に対してブチル栓、アルミキャップの順で蓋をし、３７℃の恒温槽で、無菌操作系で２日間静置培養した。
次いで、上記組成に加えてさらに２％の寒天を含むＭＥ培地でシャーレを作製し、２日間静置培養後の前記ＭＥ培地の培養液をこのシャーレ上に塗付し、角型ジャー（三菱ガス化学社製）及びアネロパック・ケンキ（三菱ガス化学社製）を使用して嫌気的な条件を設定し、３７℃の恒温槽で２日間静置培養して、シャーレ上で生育したコロニーからＳｅ７−１株を得た。
【００１７】
＜Ｓｅ７−２株の取得＞
Ｓｅ７−２株の取得には、日本国内の火力発電所の生物処理槽から採取した活性汚泥をサンプルとして用いた。
活性汚泥からのＳｅ７−２株の分離には、上記のＳｅ７−１株の場合と同じ組成のＭＥ培地を使用した。
このＭＥ培地を、オートクレーブにより１２１℃で１５分間滅菌処理を行った。
次いで、クリーンベンチ内において、３３ｍｌ容積のバイアル瓶にこのＭＥ培地を３０ｍｌ添加し、さらにセレン濃度が５０ｐｐｍとなるように、このＭＥ培地にセレン酸溶液を添加し、活性汚泥を１％植菌した。
次いで、バイアル瓶に対してブチル栓、アルミキャップの順で蓋をし、３７℃の恒温槽で、無菌操作系で２日間静置培養した。
次いで、２％の寒天をさらに含む下記組成の７２６培地でシャーレを作製し、２日間静置培養後の前記ＭＥ培地の培養液をこのシャーレ上に塗付し、角型ジャー（三菱ガス化学社製）及びアネロパック・ケンキ（三菱ガス化学社製）を使用して嫌気的な条件を設定し、３７℃の恒温槽で２日間静置培養して、シャーレ上で生育したコロニーからＳｅ７−２株を得た。
（７２６培地の組成）
酵母エキス：５ｇ／ｌ、ポリペプトン：５ｇ／ｌ、硫酸マグネシウム・七水和物：０．２ｇ／ｌ、リン酸二水素カリウム：２ｇ／ｌ、リン酸水素二ナトリウム・十二水和物：１ｇ／ｌ、乳酸ナトリウム（７０％）：３．６ｇ／ｌ 、酢酸ナトリウム：１．４ｇ／ｌ
【００１８】
Ｓｅ７−１株及びＳｅ７−２株の生育の有無は、例えば、セレン酸化合物共存下で培養した場合、コロニーの赤色又はオレンジ色等の着色の有無で確認できる。この着色は、これら微生物の体内中の金属セレンに由来するものである。
【００１９】
＜Ｓｅ７−１株の同定＞
Ｓｅ７−１株の同定は、株式会社テクノスルガ・ラボに委託して実施し、取得した検体を用いて、形態観察及び生理・生化学試験、塩基配列の同定、帰属分類を行った。形態観察及び生理・生化学試験は、二段階（第一段階試験、第二段階試験）で行った。結果を以下に示す。
【００２０】
（第一段階試験）
光学顕微鏡を用いた形態観察と、ＢＡＲＲＯＷらの方法（「Ｃｏｗａｎ  ａｎｄ  Ｓｔｅｅｌ’ｓ  Ｍａｎｕａｌ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｂａｃｔｅｒｉａ．  ３ｒｄ  ｅｄｉｔｉｏｎ．  １９９３，  Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ．」）に基づくカタラーゼ反応、オキシダーゼ反応、グルコースからの酸／ガス産生、グルコースの酸化／発酵（Ｏ／Ｆ）についての試験を行った。グラム染色はフェイバーＧ「ニッスイ」（日水製薬社製）を用いて行い、顕微鏡としては光学顕微鏡ＢＸ５０Ｆ４（オリンパス社製）を用いた。結果を表１に示す。
【００２１】
（第二段階試験）
細菌同定キット「ＡＰＩ２０ＮＥ（ｂｉｏＭｅｒｉｅｕｘ，Ｌｙｏｎ，Ｆｒａｎｃｅ）」を用いて、生化学試験、資化性試験を行った。具体的には、寒天入りニュートリエント培地を用いて、Ｓｅ７−１株を４８時間培養した後、ＡＰＩ２０ＮＥの標準の操作方法に従って、生理食塩水で菌液を調製し、各項目の試験を行った。結果を表２に示す。
【００２２】
さらに、追加試験として生化学試験、資化性試験を行った。結果を表３に示す。
Ｒ２Ａ培地での生育試験は、Ｒ２Ａ寒天培地を用いて、３７℃で培養を行うことにより行った。生育（１０、１５、４０℃）試験は、培地としてニュートリエント  アガー（Ｎｕｔｒｉｅｎｔ  ａｇａｒ）を用いて行った。カゼイン及びデンプンの加水分解試験、単一炭素源の利用試験は、Ｍ７０培地（坂崎利一他、新細菌培地学講座、下Ｉ、第二版、近代出版（１９９５）参照）を用いて、３７℃で培養することにより行った。
【００２３】
【表１】
0005608725.tif 000002
【００２４】
【表２】
0005608725.tif 000003
【００２５】
【表３】
0005608725.tif 000004
【００２６】
（塩基配列）
Ｓｅ７−１株の１６ＳｒＤＮＡを、公知の方法により同定した結果、配列番号１に示す塩基配列であることが判った。
【００２７】
解析ソフトウェアとしてアポロン２．０（テクノスルガ・ラボ社製）を用い、得られた１６ＳｒＤＮＡ塩基配列を、アポロンＤＢ−ＢＡ７．０（テクノスルガ・ラボ社製）、国際塩基配列データベース（ＧｅｎＢａｎｋ／ＤＤＢＪ／ＥＭＢＬ）から取得した塩基配列情報と照合して、分子系統解析を行った。
ＢＬＡＳＴ（「ＡＬＴＳＣＨＵＬ，（Ｓ．Ｆ．），ＭＡＤＤＥＮ，（Ｔ．Ｆ．），ＳＣＨＡＦＦＥＲ，（Ａ．Ａ．），ＺＨＡＮＧ，（Ｊ．），ＺＨＡＮＧ，（Ｚ．），ＭＩＬＬＥＲ，（Ｗ．），ａｎｄ  ＬＩＰＭＡＮ，（Ｄ．Ｊ．），Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１９９７，２５：３３８９−３４０２．」参照）を用いたアポロンＤＢ−ＢＡ７．０に対する相同性検索の結果、Ｓｅ７−１株の１６ＳｒＤＮＡの塩基配列は、タウエラ（Ｔｈａｕｅｒａ）属の１６ＳｒＤＮＡの塩基配列に対し高い相同性を示し、タウエラ・フェニルアセチカ（Ｔｈａｕｅｒａ  ｐｈｅｎｙｌａｃｅｔｉｃａ）Ｂ４Ｐ株及びタウエラ・アミノアロマティカ（Ｔｈａｕｅｒａ  ａｍｉｎｏａｒｏｍａｔｉｃａ）Ｓ２株の１６ＳｒＤＮＡの塩基配列に対し、相同率９８．６％の最も高い相同性を示した。国際塩基配列データベース（ＧｅｎＢａｎｋ／ＤＤＢＪ／ＥＭＢＬ）に対する相同性検索の結果においても、Ｓｅ７−１株の１６ＳｒＤＮＡの塩基配列は、タウエラ属の１６ＳｒＤＮＡの塩基配列に対し高い相同性を示したが、基準株に由来する１６ＳｒＤＮＡの塩基配列は検索されなかった。
Ｓｅ７−１株とアポロンＤＢ−ＢＡ７．０に対する相同性検索上位１５株の１６ＳｒＤＮＡの塩基配列に基づく簡易分子系統解析を行った。このときの解析の結果を示す簡易分子系統樹を図１に示す。図１中、左下の線はスケールバーを示し、系統枝の分岐に位置する数字はブートストラップ値を示し、株名の末尾の「Ｔ」はその種の基準株（Ｔｙｐｅ  ｓｔｒａｉｎ）であることを示す。その結果、Ｓｅ７−１株は、タウエラ属の種で形成されるクラスター内に含まれた。また、Ｓｅ７−１株は、タウエラ属のクラスターにおいて、いずれの既知種とも異なり、独立した分子系統学的位置を示した。
以上より、Ｓｅ７−１株は、タウエラ属に帰属すると考えられた。一方、一般的に１６ＳｒＤＮＡの塩基配列に基づく解析では、その菌株と比較した菌株との相同率が９８．７％以上を示す場合、同種である可能性を考慮する必要がある（「ＳＴＡＣＫＥＢＲＡＮＤＴ（Ｅ．）ａｎｄ  ＥＢＥＲＳ（Ｊ．）：  Ｔａｘｏｎｏｍｉｃ  ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ  ｒｅｖｉｓｉｔｅｄ：  ｔａｒｎｉｓｈｅｄ  ｇｏｌｄ  ｓｔａｎｄａｒｄｓ．  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ  Ｔｏｄａｙ，２００６，３３，１５２−１５５．」参照）が、Ｓｅ７−１株に９８．７％以上の相同性を示す既知種の基準株に由来する１６ＳｒＤＮＡの塩基配列は、検索されなかった。また、上記の簡易分子系統樹において、Ｓｅ７−１株は、タウエラ属のいずれの既知種とも独立した分子系統学的位置を示した。よって、１６ＳｒＤＮＡの塩基配列の解析結果から、Ｓｅ７−１株は、種レベルでの帰属分類群を推定することができず、タウエラ属の新種と推定された。
【００２８】
一方、上記の形態観察及び生理・生化学試験の第一段階試験の結果、Ｓｅ７−１株は、運動性を有するグラム陰性桿菌で、好気条件下でのセレン酸ナトリウムを含むＭＥ寒天培地では、コロニーが金属セレンに由来すると考えられるオレンジ色を呈し、普通寒天（Ｎｕｔｒｉｅｎｔ  ａｇａｒ）培地、及びＲ２Ａ寒天培地では、金属セレンの影響を受けず、コロニーが淡黄色を呈した。また、カタラーゼ反応及びオキシダーゼ反応は、ともに陽性を示した。
一方、細菌同定キット「ＡＰＩ２０ＮＥ」を用いた第二段階試験の結果、Ｓｅ７−１株はオキシダーゼ活性を示したが、その他の項目では反応を示さなかった。そして、追加試験の結果、Ｓｅ７−１株は、Ｒ２Ａ寒天培地で生育し、１０℃で生育せず、１５℃及び４０℃で生育し、カゼイン及びデンプンを分解せず、グルコースを資化し、その他の基質を資化しなかった。これらの性状は、Ｓｅ７−１株がタウエラ属に帰属すると推定した１６ＳｒＤＮＡの塩基配列の解析結果を支持したが、Ｓｅ７−１株の性状と一致する既知種は見当たらなかった。
【００２９】
以上のように、１６ＳｒＤＮＡの塩基配列の解析結果と、生理・生化学（性状）試験の結果は、共にＳｅ７−１株のタウエラ属への帰属を支持するものの、Ｓｅ７−１株は、タウエラ属のいずれの既知種とも異なることが示唆され、タウエラ属の新種と推定された。
【００３０】
なお、表２及び３から明らかなように、例えば、グルコースについては資化性（反応性）が一方では陽性となり、他方では陰性となるなど、異なる結果を示したが、これは、Ｓｅ７−１株が、培地の種類に応じて資化性が変化することを示唆している。例えば、硝酸塩還元も、表２では陰性となっているが、本発明者らは、異なる培地を用いた場合には陽性となることを確認している。例えば、以下のとおりである。
すなわち、以下に示す組成のＭＥ培地をオートクレーブにより１２１℃で１５分間滅菌処理を行った後、クリーンベンチ内において、３３ｍｌ容積のバイアル瓶にこのＭＥ培地を３０ｍｌ添加し、ここにＳｅ７−１株を、植菌量が１．０×１０８ｃｅｌｌｓ／ｍｌ程度となるように植菌した。次いで、バイアル瓶に対してブチル栓、アルミキャップの順で蓋をし、３７℃の恒温槽で静置培養した後、東ソー社製イオンクロマトグラフを用いて、硝酸濃度を定量したところ、Ｓｅ７−１株が硝酸還元能を有することを確認した。
【００３１】
（ＭＥ培地の組成）
硝酸０．１ｇ、乳酸０．５ｇ、リン酸二水素カリウム０．５ｇ、塩化アンモニウム０．２ｇ、システイン０．０５ｇ、酵母エキス０．２ｇ、蒸留水１Ｌ、ミネラル液４ｍｌ
なお、ミネラル液の組成は以下の通りである。
（ミネラル液の組成）
ニトリロ三酢酸１．８ｇ、塩化マグネシウム・六水和物２．５ｇ、塩化マンガン（ＩＩ）・四水和物０．６ｇ、塩化ナトリウム１．０ｇ、塩化鉄（ＩＩ）・四水和物０．１３６ｇ、塩化コバルト（ＩＩ）・六水和物０．１ｇ、塩化カルシウム・二水和物０．１３ｇ、硫酸銅（ＩＩ）・五水和物０．０１４６ｇ、塩化亜鉛０．０１ｇ、ホウ酸（Ｈ３ＢＯ３）０．０１ｇ、塩化ニッケル（ＩＩ）・六水和物０．０１ｇ、モリブテン（ＶＩ）酸二ナトリウム・二水和物０．０１ｇ、塩化銅（ＩＩ）・二水和物０．０１ｇ、蒸留水１Ｌ
【００３２】
本発明者らは、別途検討の結果、Ｓｅ７−１株は通常、嫌気条件下でも良好に生育することを確認している。
【００３３】
＜Ｓｅ７−２株の同定＞
Ｓｅ７−２株の同定は、株式会社テクノスルガ・ラボに委託して実施し、取得した検体を用いて、形態観察及び生理・生化学試験、塩基配列の同定、帰属分類を行った。形態観察及び生理・生化学試験は、二段階（第一段階試験、第二段階試験）で行った。これら試験は、上記のＳｅ７−１株の場合と同様の方法で行った。ただし、第一段階試験では、ＭＥ寒天培地に代えて７２６培地を用いた。また、第二段階試験では、細菌同定キット「ＡＰＩ２０ＮＥ」に代えて、細菌同定キット「ＡＰＩ２０Ａ（ｂｉｏＭｅｒｉｅｕｘ，Ｌｙｏｎ，Ｆｒａｎｃｅ）」を用いた。具体的には、寒天入り７２６培地を用いて、Ｓｅ７−２株を４８時間培養した後、ＡＰＩ２０Ａの標準の操作方法に従って、生理食塩水で菌液を調製し、各項目の試験を行った。また、追加試験としては、リトマスミルク反応のみ行った。第一段階試験の結果を表４に、第二段階試験の結果を表５に、それぞれ示す。
【００３４】
【表４】
0005608725.tif 000005
【００３５】
【表５】
0005608725.tif 000006
【００３６】
なお、Ｓｅ７−２株は、追加試験のリトマスミルク反応で凝固した。
【００３７】
（塩基配列）
Ｓｅ７−２株の１６ＳｒＤＮＡを、公知の方法により同定した結果、配列番号２に示す塩基配列であることが判った。
【００３８】
解析ソフトウェアとしてアポロン２．０（テクノスルガ・ラボ社製）を用い、得られた１６ＳｒＤＮＡ塩基配列を、アポロンＤＢ−ＢＡ７．０（テクノスルガ・ラボ社製）、国際塩基配列データベース（ＧｅｎＢａｎｋ／ＤＤＢＪ／ＥＭＢＬ）から取得した塩基配列情報と照合して、分子系統解析を行った。
ＢＬＡＳＴ（「ＡＬＴＳＣＨＵＬ，（Ｓ．Ｆ．），ＭＡＤＤＥＮ，（Ｔ．Ｆ．），ＳＣＨＡＦＦＥＲ，（Ａ．Ａ．），ＺＨＡＮＧ，（Ｊ．），ＺＨＡＮＧ，（Ｚ．），ＭＩＬＬＥＲ，（Ｗ．），ａｎｄ  ＬＩＰＭＡＮ，（Ｄ．Ｊ．），Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１９９７，２５：３３８９−３４０２．」参照）を用いたアポロンＤＢ−ＢＡ７．０に対する相同性検索の結果、Ｓｅ７−２株の１６ＳｒＤＮＡの塩基配列は、クロストリジウム・アミロリティカム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ａｍｙｌｏｌｙｔｉｃｕｍ）ＳＷ４０８株の１６ＳｒＤＮＡの塩基配列に対し、相同率１００％の最も高い相同性を示した。国際塩基配列データベース（ＧｅｎＢａｎｋ／ＤＤＢＪ／ＥＭＢＬ）に対する相同性検索の結果においても、Ｓｅ７−２株の１６ＳｒＤＮＡの塩基配列は、クロストリジウム属の１６ＳｒＤＮＡの塩基配列に対し高い相同性を示し、基準株では、クロストリジウム・アミロリティカムＳＷ４０８株の１６ＳｒＤＮＡの塩基配列に対し、相同率１００％の高い相同性を示した。
Ｓｅ７−２株とアポロンＤＢ−ＢＡ７．０に対する相同性検索上位１０株の１６ＳｒＤＮＡの塩基配列に基づく簡易分子系統解析を行った。このときの解析の結果を示す簡易分子系統樹を図２に示す。図２中、左下の線はスケールバーを示し、系統枝の分岐に位置する数字はブートストラップ値を示し、株名の末尾の「Ｔ」はその種の基準株（Ｔｙｐｅ  ｓｔｒａｉｎ）であることを示す。その結果、Ｓｅ７−２株は、クロストリジウム属の種で形成されるクラスター内に含まれた。また、Ｓｅ７−２株は、クロストリジウム・アミロリティカムとクラスターを形成し、両者は同一の分子系統学的位置を示した。
以上より、Ｓｅ７−２株は、クロストリジウム属に含まれ、クロストリジウム・アミロリティカムに帰属する可能性が高いと考えられた。
【００３９】
一方、上記の形態観察及び生理・生化学試験の第一段階試験の結果、Ｓｅ７−２株は、運動性を有するグラム陽性桿菌で、嫌気条件下で生育し、芽胞の形成が確認されず、カタラーゼ反応及びオキシダーゼ反応は、ともに陰性を示した。
また、細菌同定キット「ＡＰＩ２０Ａ」を用いた第二段階試験の結果、Ｓｅ７−２株はインドールを産生せず、ウレアーゼ活性を示さず、グルコース、ラクトース、サッカロース等を発酵し、Ｄ−マンニトール、Ｄ−キシロース等を発酵せず、ゼラチンを加水分解せず、エスクリンを加水分解した。また、追加試験の結果、Ｓｅ７−２株はミルクを凝固させた。これらの性状は、１６ＳｒＤＮＡの塩基配列の解析結果において帰属が示唆されたクロストリジウム・アミロリティカムの性状に一致する点が多かった。特に、多くのクロストリジウム属は、芽胞を形成することが属の特徴として知られているのに対し、第一段階試験においてＳｅ７−２株の芽胞形成が確認されない点は、クロストリジウム・アミロリティカムの性状と一致した。これに対して、Ｓｅ７−２株がミルクを凝固させる点は、クロストリジウム・アミロリティカムの性状とは異なっていた。そこで、Ｓｅ７−２株は、クロストリジウム・アミロリティカムの株レベルで新規の微生物である可能性を示唆していた。
生理・生化学試験の結果は、１６ＳｒＤＮＡの塩基配列の解析結果を支持するものと考えられた。
【００４０】
以上のように、１６ＳｒＤＮＡの塩基配列の解析結果と、生理・生化学（性状）試験の結果は、共にＳｅ７−２株のクロストリジウム・アミロリティカムへの帰属を支持しており、Ｓｅ７−２株は、クロストリジウム・アミロリティカムと推定された。
【００４１】
なお、本発明者らは、別途検討の結果、Ｓｅ７−２株は、好気条件下でも生育することを確認している。一般的にクロストリジウム属の微生物は、偏性嫌気性であり、好気条件下では生育しないものと考えられているが、クロストリジウム属の微生物で酸素耐性を有する種の存在が報告されており（「Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ  ａｎｄ  Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎａｒｙ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ（２００４），５４，２０４３−２０４７」参照）、Ｓｅ７−２株もこのような酸素耐性を有する数少ないものの一つであると考えられる。
【００４２】
Ｓｅ７−１株は、２０１２年１１月１６日付けで、受託番号ＮＩＴＥ  Ｐ−１４６５として、独立行政法人製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センターに受託されている。
また、Ｓｅ７−２株は、２０１２年１０月２日付けで、受託番号ＮＩＴＥ  Ｐ−１４２２として、独立行政法人製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センターに受託されている。
【００４３】
＜セレン酸化合物の還元方法＞
本発明に係るセレン酸化合物の還元方法は、Ｓｅ７−１株が属する種に属する微生物（Ｓｅ７−１株、Ｓｅ７−１株以外のＳｅ７−１株と同種の微生物）、及びクロストリジウム・アミロリティカムに属する微生物（Ｓｅ７−２株、Ｓｅ７−２株以外のＳｅ７−２株と同種の微生物）を、セレン酸化合物共存下において共培養する工程を有する。
以下、「Ｓｅ７−１株が属する種に属する微生物」を「第一の微生物」、「クロストリジウム・アミロリティカムに属する微生物」を「第二の微生物」と、それぞれ略記することがある。
【００４４】
前記共培養する工程は、例えば、セレン酸化合物の除去対象である培地へ、後述するセレン酸化合物還元製剤を添加するなど、第一の微生物及び第二の微生物を植菌し、これら微生物を共培養することで行うことができる。
なお、本明細書において、「微生物を共培養する」とは、異なる種類の微生物を、これら微生物が混在した状態で同一の培地中で共に培養することを意味する。
【００４５】
Ｓｅ７−１株は、セレン酸化合物の還元能を有し、特に、セレン酸、セレン酸塩又はセレン酸イオン（以下、これらを包括して「６価のセレン」と略記することがある）を亜セレン酸、亜セレン酸塩又は亜セレン酸イオン（以下、これらを包括して「４価のセレン」と略記することがある）へ還元する能力が高い。Ｓｅ７−１株と分類学的性質が類似する、Ｓｅ７−１株以外のＳｅ７−１株と同種の微生物も、同様の性質を有すると考えられる。
また、Ｓｅ７−２株は、セレン酸化合物の還元能を有し、特に、亜セレン酸、亜セレン酸塩又は亜セレン酸イオンを金属セレン（以下、「０価のセレン」と記載することがある）へ還元する能力が高い。Ｓｅ７−２株と分類学的性質が類似する、Ｓｅ７−２株以外のＳｅ７−２株と同種の微生物も、同様の性質を有すると考えられる。
本発明は、これらの性質を利用したものであり、Ｓｅ７−１株等の第一の微生物、及びＳｅ７−２株等の第二の微生物を組み合わせることで、上記のセレン酸化合物を効率的に金属セレンにまで還元するものである。
Ｓｅ７−１株はタウエラ属の新種の微生物であり、Ｓｅ７−２株と同属であるクロストリジウム属の微生物でセレン酸化合物の還元能を有する種としては、これまでに特定されたものがない。したがって、第一の微生物及び第二の微生物の組み合わせを選択することにより、セレン酸化合物の還元を効率的に行うことができるという本発明の効果は、全く意外なものであるといえる。
【００４６】
第一の微生物は、６価のセレンを４価のセレンへ還元する能力を有していればよく、４価のセレンを０価のセレンへ還元する能力を有していてもよい。そして、第一の微生物は、４価のセレンが存在せず、６価のセレンが存在する培地において単独で培養したときに、下記式（Ｉ）で算出される６価のセレンの除去率が、８５％以上であるものが好ましく、９０％以上であるものがより好ましい。そして、このときの培養時間は、６０〜８４時間であることが好ましい。
{［培養開始前における培地中の６価のセレンの濃度（ｐｐｍ）］−［培養後における培地中の６価のセレンの濃度（ｐｐｍ）］}／［培養開始前における培地中の６価のセレンの濃度（ｐｐｍ）］×１００  ・・・・（Ｉ）
【００４７】
第二の微生物は、４価のセレンを０価のセレンへ還元する能力を有していればよく、６価のセレンを４価のセレンへ還元する能力を有していてもよい。そして、第二の微生物は、６価のセレンが存在せず、４価のセレンが存在する培地において単独で培養したときに、下記式（ＩＩ）で算出される４価のセレンの除去率が、５０％以上であるものが好ましく、６０％以上であるものがより好ましい。そして、このときの培養時間は、６０〜８４時間であることが好ましい。
{［培養開始前における培地中の４価のセレンの濃度（ｐｐｍ）］−［培養後における培地中の４価のセレンの濃度（ｐｐｍ）］}／［培養開始前における培地中の４価のセレンの濃度（ｐｐｍ）］×１００  ・・・・（ＩＩ）
【００４８】
共培養する第一の微生物及び第二の微生物は、それぞれ一種のみでもよいし、二種以上でもよい。
【００４９】
共培養の条件は、特に限定されず、第一の微生物及び第二の微生物が共に良好に生育するように、適宜調節すればよい。通常は、以下のように設定することが好ましい。
【００５０】
培地は、例えば、排水、土壌、汚泥、地下水、貯水池の水等の、セレン酸化合物の還元対象物自体でもよいし、前記還元対象物に第一の微生物及び第二の微生物の少なくとも一方の生育に有用な成分を適宜添加したものでもよく、Ｓｅ７−１株又はＳｅ７−２株の取得で用いた前記培地に、前記還元対象物を添加したものでもよい。
【００５１】
共培養を行う培地中のセレン酸化合物の濃度は、目的に応じて任意に設定できるが、０．１〜１００ｐｐｍであることが好ましく、０．５〜５０ｐｐｍであることがより好ましい。なお、本明細書において、濃度単位「ｐｐｍ」は、特に断りの無い限り、質量比を意味するものとする。
【００５２】
共培養時の温度は、１５〜４０℃であることが好ましい。
共培養の時間は、培地中のセレン酸化合物の濃度、培地への第一の微生物及び第二の微生物の総植菌量等を考慮して適宜調節すればよく、例えば、１０分〜１２０時間とすることが好ましい。
【００５３】
共培養時の、培地への第一の微生物及び第二の微生物の総植菌量は、培地中のセレン酸化合物の濃度等を考慮して適宜調節すればよく、特に限定されないが、例えば、培地中における第一の微生物及び第二の微生物の合計濃度が、セレン酸化合物１ｐｐｍあたり１．０×１０７〜１．０×１０９ｃｅｌｌｓ／ｍｌとなるように調節することが好ましい。
そして、培地中における第一の微生物及び第二の微生物の数の比（［第一の微生物の数］：［第二の微生物の数］）は、８０：２０〜２０：８０であることが好ましく、４０：６０〜６０：４０であることがより好ましい。
【００５４】
共培養を嫌気条件下及び好気条件下のいずれで行うかは、併用する微生物の組合せを考慮して選択すればよい。例えば、Ｓｅ７−１株は、通常、嫌気条件下で良好に生育するが、培地の種類を選択することで、好気条件下でも良好に生育する。そして、Ｓｅ７−２株は、通常、嫌気条件下で良好に生育する。したがって、これら二種を併用する場合には、嫌気条件下で共培養することが好ましい。
【００５５】
第一の微生物及び第二の微生物は、本培養である共培養の前に前培養したものが好ましい。そして、前培養においては、第一の微生物及び第二の微生物をそれぞれ別々に培養してもよいが、第一の微生物及び第二の微生物を共培養することが好ましい。前培養においても共培養することで、本培養でのセレン酸化合物の還元能がさらに向上する。その理由は定かではないが、前培養においても共培養することで、第一の微生物及び第二の微生物が本培養でより良好に生育すると推測される。
なお、本明細書においては、特に断りの無い限り、「共培養」とは、目的とするセレン酸化合物の還元を行う本培養時のものを意味するものとする。
【００５６】
前培養では、本培養の場合と同様の培地を用いることができるが、セレン酸化合物は必ずしも必要ではない。そして、培地以外は、上記の本培養の場合と同様の条件で前培養を行うことができる。
【００５７】
本発明においては、第一の微生物及び第二の微生物以外に、その他の微生物を共培養してもよい。
前記その他の微生物は、特に限定されないが、セレン酸、セレン酸塩又はセレン酸イオン（６価のセレン）を亜セレン酸、亜セレン酸塩又は亜セレン酸イオン（４価のセレン）へ還元する能力を有するもの、及び亜セレン酸、亜セレン酸塩又は亜セレン酸イオンを金属セレン（０価のセレン）へ還元する能力を有するもの、の少なくとも一方であることが好ましい。
【００５８】
＜セレン酸化合物還元製剤＞
本発明に係るセレン酸化合物還元製剤は、前記第一の微生物及び第二の微生物を含有するものである。
【００５９】
前記還元製剤が含有する第一の微生物及び第二の微生物は、それぞれ一種のみでもよいし、二種以上でもよい。
【００６０】
前記還元製剤中の第一の微生物及び第二の微生物の数の比（［第一の微生物の数］：［第二の微生物の数］）は、８０：２０〜２０：８０であることが好ましく、４０：６０〜６０：４０であることがより好ましい。
【００６１】
前記還元製剤としては、第二の微生物非共存下で第一の微生物を培養して得られた培養物をさらにろ過して得られたろ過物と、第一の微生物非共存下で第二の微生物を培養して得られた培養物をさらにろ過して得られたろ過物と、を混合して得られたろ過混合物；前記ろ過混合物の乾燥物；第一の微生物及び第二の微生物を共培養して得られた培養物をさらにろ過して得られた共培養ろ過物；前記共培養ろ過物の乾燥物；第二の微生物非共存下で培養し、精製処理して得られた第一の微生物と、第一の微生物非共存下で培養し、精製処理して得られた第二の微生物と、を混合して得られた単独培養微生物の混合物；共培養し、精製処理して得られた第一の微生物及び第二の微生物の共培養微生物等が例示できる。
そして、これら還元製剤は、本発明の効果を損なわない範囲内で、必要に応じて各種添加剤を含有してもよい。
さらに第一の微生物及び第二の微生物を、例えば、寒天、ゲランガム等の天然物高分子ゲル；アクリルアミド；紫外線硬化樹脂等の高分子樹脂；炭素繊維、中空子膜、不織布等の繊維等に固定化して用いてもよい。固定化は内包及び表面固定のいずれでもよい。
【００６２】
＜セレン酸化合物の除去方法＞
本発明に係るセレン酸化合物の除去方法は、前記還元方法でセレン酸化合物を還元した後、前記第一の微生物及び第二の微生物を、培養物から除去する工程を有する。
前記還元方法により、培地中のセレン酸化合物が第一の微生物及び第二の微生物に取り込まれつつ、取り込まれたセレン酸化合物が還元されるので、次いでこれら微生物を培養物から除去することで、除去対象物から効率的にセレン酸化合物を除去できる。
【００６３】
第一の微生物及び第二の微生物は、他の成分と共に培養物から除去してもよい。
第一の微生物及び第二の微生物は、例えば、フィルターを用いて培養物をろ過することで固形分を分離する方法、培養物を遠心分離することで固形分を分離する方法等により、単独で、又は他の成分と共に、固形分（ろ過物）として培養物から除去できる。
【００６４】
＜金属セレンの製造方法＞
本発明に係る金属セレンの製造方法は、前記除去方法で除去した微生物から金属セレンを取り出す工程を有する。
前記除去方法により除去された、第一の微生物及び第二の微生物のいずれかの微生物は、その体内に金属セレンを有しているので、この金属セレンを体内から回収することで、金属セレンが得られる。
【００６５】
金属セレンの回収方法は、金属セレンが反応しない方法であれば特に限定されず、微生物の破壊を伴う公知の方法が例示でき、好ましい方法として、微生物を熱分解させた後、金属セレンを回収する方法が例示できる。微生物は主として有機物から構成され、有機物は加熱によってＣＯ２にまで分解して、残渣が生じるので、この残渣の中から金属セレンを回収することが可能となる。
【実施例】
【００６６】
以下、具体的実施例により、本発明についてさらに詳しく説明する。ただし、本発明は、以下に示す実施例に何ら限定されるものではない。
【００６７】
［実施例１〜４、比較例１〜１１］
（セレン酸イオンの還元）
以下に示す四種の微生物を、それぞれ一種を単独で培養するか、又は二〜四種を組み合わせて共培養することで、培地中のセレン酸イオンの還元を試みた。
・Ｓｅ７−１株（表中、略号「Ｔ」で示す。）
・Ｓｅ７−２株（表中、略号「Ｃ」で示す。）
・アエロモナス（Ａｅｒｏｍｏｎａｓ）属ＪＰＣＣ  ＳＥＰ  ＪＰ−１株（ＮＩＴＥ  ＢＰ−３４５）（以下、「ＳＥＰ  ＪＰ−１株」と略記することがある。また、表中、略号「Ａ」で示す。）
・クレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌａ）属ＪＰＣＣ  ＳＥＰ  ＪＰ−２株（ＮＩＴＥ  ＢＰ−３４６）（以下、「ＳＥＰ  ＪＰ−２株」と略記することがある。また、表中、略号「Ｋ」で示す。）
なお、ＳＥＰ  ＪＰ−１株は、平成１９年３月２３日付けで、受託番号ＮＩＴＥ−ＢＰ３４５として、独立行政法人製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センターに受託されている。
また、ＳＥＰ  ＪＰ−２株は、平成１９年３月２３日付けで、受託番号ＮＩＴＥ−ＢＰ３４６として、独立行政法人製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センターに受託されている。
ＳＥＰ  ＪＰ−１株及びＳＥＰ  ＪＰ−２株は、いずれもセレン酸イオンの還元能及び亜セレン酸イオンの還元能を有し、ＳＥＰ  ＪＰ−１株は、亜セレン酸イオンの還元能の方が高い。
【００６８】
微生物はいずれも前培養したものを用いた。具体的には、Ｓｅ７−１株はＭＥ培地を使用し、Ｓｅ７−２株は７２６培地を使用し、ＳＥＰ  ＪＰ−１株はニュートリエント培地を使用し、ＳＥＰ  ＪＰ−２株は７２６培地を使用して、それぞれの培地中にセレン酸イオンを含まないこと以外は、後述するセレン酸イオンの還元時と同じ培養条件で、それぞれ前培養した。
【００６９】
セレン酸イオンの還元は、以下のように試みた。
塩素を１２５５ｐｐｍ、カルシウムを６８ｐｐｍ、硫酸を７３９７ｐｐｍ、ナトリウムを３３４９ｐｐｍ、セレン酸イオンを２ｐｐｍ、乳酸を６ｐｐｍの濃度でそれぞれ含む培地を調製し、３３ｍｌ容積のバイアル瓶にこの培地を３０ｍｌ添加した。また、上記の微生物を含む前培養液の濁度をそれぞれ測定し、この前培養液を前記バイアル瓶中の培地に添加して、得られた本培養液の濁度が前培養液の濁度と同程度の値となるように植菌した。
次いで、植菌後の培地上の気相部分を窒素ガスで置換して嫌気条件としたバイアル瓶に対して、ブチル栓、アルミキャップの順で蓋をし、３７℃の恒温槽で７２時間静置培養した。
【００７０】
培養終了後、島津製作所社製の原子吸光分光光度計を用いて、原子吸光法により培地中の６価のセレン（ＳｅＯ４２−）及び４価のセレン（ＳｅＯ３２−）の濃度を測定した。そして、このときの６価のセレンの濃度測定値をｘ、４価のセレンの濃度測定値をｙ、６価のセレンの濃度測定値及び４価のセレンの濃度測定値の合計をｚ（＝ｘ＋ｙ）として、６価のセレンの除去率Ｘを下記式（ｉ）により算出し、４価のセレンの除去率Ｙを下記式（ｉｉ）により算出し、６価のセレン及び４価のセレンの合計除去率Ｚを下記式（ｉｉｉ）により算出した。結果を表６に示す。なお、ｘ及びｚがそれぞれ２を越えた場合には、Ｘ及びＺはそれぞれ「０％」として表６に記載し、ｘが２を越えた場合には、Ｙは算出不能のため「−」として表６に記載した。表中、ｘ、ｙ又はｚで「２」を超えている場合、その値は、微小な測定誤差を含んでいるためにそのような値となっているのであり、実質的に「２」であると見做すことができる。
Ｘ（％）＝{２−ｘ（ｐｐｍ）}／２×１００  ・・・・（ｉ）
Ｙ（％）＝［{２−ｘ（ｐｐｍ）}−ｙ（ｐｐｍ）］／{２−ｘ（ｐｐｍ）}×１００  ・・・・（ｉｉ）
Ｚ（％）＝{２−ｚ（ｐｐｍ）}／２×１００  ・・・・（ｉｉｉ）
【００７１】
【表６】
0005608725.tif 000007
【００７２】
上記結果から明らかなように、Ｓｅ７−１株（Ｔ）及びＳｅ７−２株（Ｃ）を共培養した実施例１では、セレン酸イオン及び亜セレン酸イオンの還元能がいずれも高く、６価のセレン及び４価のセレンの合計除去率Ｚが高かった。そして、Ｓｅ７−１株（Ｔ）及びＳｅ７−２株（Ｃ）以外に、さらに、ＳＥＰ  ＪＰ−１株（Ａ）及びＳＥＰ  ＪＰ−２株（Ｋ）の少なくとも一方を共培養した実施例２〜４でも、同様に、セレン酸イオン及び亜セレン酸イオンの還元能がいずれも高く、６価のセレン及び４価のセレンの合計除去率Ｚが高かった。このように、共培養する微生物として、Ｓｅ７−１株（Ｔ）及びＳｅ７−２株（Ｃ）を含有してさえいれば、さらに他の微生物を含有していても、セレン酸化合物を効率的に金属セレンにまで還元できることを確認できた。
【００７３】
これに対して、Ｓｅ７−１株（Ｔ）を単独で培養した比較例４では、セレン酸イオンの還元能が高かったが、亜セレン酸イオンの還元能が低く、６価のセレン及び４価のセレンの合計除去率Ｚが低かった。亜セレン酸イオンは、培養を延長すれば還元が進行すると考えられるが、この時点では還元が不十分であった。
また、Ｓｅ７−２株（Ｃ）を単独で培養した比較例３では、セレン酸イオンの還元能が低く、亜セレン酸イオンの還元能を確認することはできず、６価のセレン及び４価のセレンの合計除去率Ｚが低かった。この場合も、セレン酸イオンは、培養を延長すれば還元が進行すると考えられるが、この時点では還元が不十分であった。
そして、Ｓｅ７−１株（Ｔ）及びＳｅ７−２株（Ｃ）を共培養していないその他の比較例でも、セレン酸イオンの還元能及び亜セレン酸イオンの還元能の少なくとも一方が低く、６価のセレン及び４価のセレンの合計除去率Ｚが低かった。比較例７、９及び１１は、セレン酸イオンの還元能が高かったが、これは、比較例４に示すように、セレン酸イオンの還元能が高いＳｅ７−１株（Ｔ）を培養したことによるものと推測される。さらに、比較例７、９及び１１は、亜セレン酸イオンの還元能が比較的高かったが、これは、亜セレン酸イオンの還元能を有する、ＳＥＰ  ＪＰ−１株（Ａ）及びＳＥＰ  ＪＰ−２株（Ｋ）の少なくとも一方を培養したことによるものと推測される。
このように、セレン酸化合物の還元能を有する二種以上の微生物を共培養した場合には、Ｓｅ７−１株（Ｔ）及びＳｅ７−２株（Ｃ）を共培養した場合のみ、６価のセレン及び４価のセレンの合計除去率Ｚが特異的に高かった。
【００７４】
［実施例５〜８、比較例１２〜２２］
（亜セレン酸イオンの還元）
セレン酸イオンに代えて亜セレン酸イオンを２ｐｐｍの濃度で含む前記培地を用いたこと以外は、実施例１〜４、比較例１〜１１と同様に、培地中の亜セレン酸イオンの還元を試みた。
そして、このときの４価のセレンの濃度測定値をｙ’として、４価のセレンの除去率Ｙ’を下記式（ｉｖ）により算出した。結果を表７に示す。なお、ｙ’が２を越えた場合には、Ｙ’は「０％」として表７に記載した。
Ｙ’（％）＝{２−ｙ’（ｐｐｍ）}／２×１００  ・・・・（ｉｖ）
【００７５】
【表７】
0005608725.tif 000008
【００７６】
上記結果から明らかなように、Ｓｅ７−１株（Ｔ）及びＳｅ７−２株（Ｃ）を共培養した実施例５では、亜セレン酸イオンの還元能が高く、４価のセレンの除去率Ｙ’が高かった。そして、Ｓｅ７−１株（Ｔ）及びＳｅ７−２株（Ｃ）以外に、さらに、ＳＥＰ  ＪＰ−１株（Ａ）及びＳＥＰ  ＪＰ−２株（Ｋ）の少なくとも一方を共培養した実施例６〜８でも、同様に、亜セレン酸イオンの還元能が高く、４価のセレンの除去率Ｙ’が高かった。このように、共培養する微生物として、Ｓｅ７−１株（Ｔ）及びＳｅ７−２株（Ｃ）を含有してさえいれば、さらに他の微生物を含有していても、亜セレン酸イオンを効率的に金属セレンにまで還元できることを確認できた。
【００７７】
これに対して、Ｓｅ７−１株（Ｔ）を単独で培養した比較例１５では、亜セレン酸イオンを還元できず、上記の比較例４の結果と整合していた。
また、Ｓｅ７−２株（Ｃ）を単独で培養した比較例１４では、亜セレン酸イオンの還元能が高かったが、Ｓｅ７−１株（Ｔ）及びＳｅ７−２株（Ｃ）を共培養した場合よりも低かった。
このように、実施例５〜８と、比較例１４及び１５との結果から、亜セレン酸イオンの還元能を有するＳｅ７−２株（Ｃ）は、単独で培養した場合よりも、亜セレン酸イオンの還元能が低いＳｅ７−１株（Ｔ）と共培養した方が、亜セレン酸イオンの還元能が顕著に高くなることを確認できた。これは、亜セレン酸イオンの還元能を有するＳｅ７−２株（Ｃ）を、このＳｅ７−２株（Ｃ）よりも亜セレン酸イオンの還元能が顕著に低いＳｅ７−１株（Ｔ）と共培養することにより、亜セレン酸イオンの還元能が顕著に向上するという相乗効果を発現することを意味しており、かかる効果は全く意外なものであるといえる。
【００７８】
Ｓｅ７−１株（Ｔ）及びＳｅ７−２株（Ｃ）を共培養していないその他の比較例でも、亜セレン酸イオンの還元能が低く、４価のセレンの除去率Ｙ’が低かった。比較例１７、２１及び２２は、亜セレン酸イオンの還元能が比較的高かったが、これは、亜セレン酸イオンの還元能を有する、Ｓｅ７−２株（Ｃ）、ＳＥＰ  ＪＰ−１株（Ａ）及びＳＥＰ  ＪＰ−２株（Ｋ）のうち、二種以上を共培養したことによるものと推測される。
このように、セレン酸化合物の還元能を有する二種以上の微生物を共培養した場合には、Ｓｅ７−１株（Ｔ）及びＳｅ７−２株（Ｃ）を共培養した場合のみ、４価のセレンの除去率Ｙ’が特異的に高かった。
【産業上の利用可能性】
【００７９】
本発明は、排水、土壌及び汚泥中等のセレン酸化合物の除去に利用可能である。
【図１】
0005608725.tif 000009
【図２】
0005608725.tif 000010
【配列表】
0005608725000001.app