(57)【要約】  本発明は、主として眼科用の医薬組成物の分野に属する。  具体的には、本発明は、従来眼内灌流液や角膜上皮損傷治療剤等における成分として使用されていた３−ヒドロキシ酪酸、特にＤ−３−ヒドロキシ酪酸、及び／又はその塩を、眼等のアレルギー症状の治療のための有効成分として採用した点を特徴とする、アレルギー治療用組成物を提供するものである。  かかるＤ−３−ヒドロキシ酪酸含有組成物をラットの眼に投与することにより、眼の掻痒感の抑制、結膜への好酸球浸潤の抑制、結膜炎症状の抑制、結膜の毛細血管透過性の亢進といった作用が奏され、アレルギー性諸症状の改善に有用であることが示された。  また、Ｄ−３−ヒドロキシ酪酸は生体成分であるため、本発明の組成物は安全なものである。【特許請求の範囲】
【請求項１】
３−ヒドロキシ酪酸および／またはその塩を含有することを特徴とするアレルギー治療用組成物。
【請求項２】
ヒドロキシ酪酸がＤ体である請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
眼で発症したアレルギーを対象とする請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
アレルギーの症状が掻痒感である請求項３に記載の組成物。
【請求項５】
剤型が点眼剤または眼軟膏である請求項４に記載の組成物。
【請求項６】
３−ヒドロキシ酪酸および／またはその塩の抗アレルギー剤としての使用。
【請求項７】
アレルギー治療用組成物中に、３−ヒドロキシ酪酸および／またはその塩を抗アレルギー剤として含有させる請求項６に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、３−ヒドロキシ酪酸またはその塩を含有するアレルギー治療用組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
アレルギーを引き起こす原因として、花粉やほこり、ダニ、カビ、薬品等が挙げられる。特に、日本においては花粉症が社会問題となっており、日本人の１５％以上がスギ花粉症との報告がある（２００２年版鼻アレルギー診療ガイドライン、Ｐ３）。
花粉症の代表的な症状として眼の痒みがあげられる。花粉症患者の眼の結膜には、花粉に対するＩｇＥ抗体を持った肥満細胞がある。このＩｇＥ抗体が花粉の抗原成分を捕らえて結合し肥満細胞が活性化する。その結果、放出されたヒスタミンが結膜表面の神経を介して痒みを生じ、反射的に涙の分泌が増え、神経の過敏によって異物感が強くなる。また、掻痒は「掻く」ことによって症状の悪化を招くことがある。このような症状に対する治療の第一選択は、抗アレルギー薬であり、ケミカルメディエーター遊離抑制薬やヒスタミンＨ１受容体拮抗薬が用いられる。
本発明において有効成分として用いられるＤ−３−ヒドロキシ酪酸は、生体成分であり、肝臓で脂肪酸が酸化されることにより生成され、末梢組織においてエネルギー源として用いられることが知られている（山科郁男監修、「レーニンジャーの新生化学（上）」、第２版、廣川書店、１９９３年、ｐ６２５−ｐ６２６参照）。また、Ｄ−３−ヒドロキシ酪酸は長鎖脂肪酸やグルコースに優先して利用されることが明らかにされており、Ｄ−３−ヒドロキシ酪酸は優れたエネルギー基質と考えられる。Ｄ−３−ヒドロキシ酪酸の、このような性質を利用して、生体蛋白異化作用亢進状態や身体に侵襲の加わった患者に対する栄養補給のための輸液配合成分として利用する技術（特開平２−１９１２１２号公報）や、心筋の代謝保護用の薬剤組成物（特開昭５８−２０１７４６号公報）および脳機能改善剤（特開平１０−９５７３０号公報）として利用する技術が報告されている。しかしながら、これらの文献では、ヒドロキシ酪酸および／またはその塩類を有効成分とする組成物のアレルギーに対する作用は、全く検討されていない。
これまで出願人は３−ヒドロキシ酪酸および／またはその塩類を含む組成物として、眼内灌流液（特開平１０−２２６７０４号公報）や角膜上皮損傷治療剤（特開平１０−２６５３７８号公報参照）、アポトーシスによる眼の障害を予防又は治療する組成物（特開２００３−３１３１２３号公報参照）、涙液異常の治療剤（ＷＯ２００５／０３２５３４Ａ１国際公開パンフレット参照）および炎症性サイトカインの産生を抑制する為の眼科用組成物（特開２００５−２４７８２１号公報参照）を提案している。これらのうち、特開２００５−２４７８２１号公報には、炎症性サイトカインが関与する疾患として、アレルギー性結膜炎が示されている。しかし、炎症性サイトカインの抑制が、アレルギー症状、例えば掻痒感を軽減する等の記述はなく、具体的な例も示されていない
【発明の開示】
【０００３】
先に述べたとおり、３−ヒドロキシ酪酸は生体成分であり、また、医薬として種々の薬理効果を有する。そこで、この発明の目的は、さらに３−ヒドロキシ酪酸のアレルギーに対する効果を検証し、安全なアレルギー治療用の組成物を提供することである。
本発明者らは、鋭意研究を行ったところ、ラットの慢性アレルギー性結膜炎モデルや痒み物質（ヒスタミン）点眼ラットにおいて、Ｄ−３−ヒドロキシ酪酸ナトリウム塩が、優れた掻痒抑制効果を有することを見出した。
すなわち、本発明の目的は、本発明によれば、
３−ヒドロキシ酪酸および／またはその塩を含有することを特徴とするアレルギー治療用組成物により達成される。
上記３−ヒドロキシ酪酸はＤ体であることが好ましい。
また、上記組成物は、眼で発症したアレルギーを対象とするのが好ましく、また剤型は点眼剤または眼軟膏であるのが好ましい。
さらに、上記対象とするアレルギーの症状は掻痒感であることが好ましい。
【図面の簡単な説明】
【０００４】
図１は、ラット慢性アレルギー性結膜炎モデルにおけるＨＢＡ点眼と痒み行動回数との関係である。
図２は、図１の関係での点眼日数８日間の累積痒み行動回数とＨＢＡ点眼濃度との関係である。
図３は、結膜への好酸球浸潤数とＨＢＡ点眼濃度との関係である。
図４は、各種薬剤による掻き行動回数の抑制効果を示す図である。
図５は、各種薬剤による結膜への好酸球浸潤数の関係である。
図６は、各種薬剤による結膜炎症状（充血）の抑制を示している。
図７は、各種薬剤による結膜炎症状（浮腫）の抑制を示している。
図８は、各種薬剤による結膜毛細血管透過性の抑制を示している。
図９は、各種薬剤による肥満細胞の脱顆粒抑制作用を示している。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００５】
本発明において、有効成分である３−ヒドロキシ酪酸の水酸基の立体配置に関しては、Ｄ−体、Ｄ，Ｌ−ラセミ体およびＬ−体が知られている。本発明においては、これら全てを使用することができる。また３−ヒドロキシ酪酸の塩類としては、好ましくは、ナトリウム塩、カリウム塩、Ｌ−リジン塩、Ｌ−ヒスチジン塩およびＬ−アルギニン塩よりなる群から少なくとも１種が適宜選択される。これら３−ヒドロキシ酪酸および／またはその塩類は、適宜単独であるいは２種類以上併用することができる。本発明の点眼剤における３−ヒドロキシ酪酸および／またはその塩類の濃度は、患者の年齢や症状等に応じて、好ましくは０．０１〜１０．０ｗ／ｖ％、より好ましくは０．０５〜５．０ｗ／ｖ％、特に好ましくは０．１〜３．０ｗ／ｖ％の範囲にある。
本発明の組成物は、必要に応じて、医薬として許容される添加剤を加え、製剤化することができる。
また、本発明の組成物は、非経口的に、また、経口的にも投与できる。経口剤としては、例えば、内服用液剤（例えば、エリキシル剤やシロップ剤等）や内服用固形剤（例えば、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、トローチ剤等）等が挙げられる。非経口剤としては、例えば、注射剤、点眼剤、外用剤（例えば、眼軟膏等の軟膏剤、クリーム剤、貼付剤等）、点鼻剤、吸入剤等が挙げられる。これらの製剤は、例えば、日本薬局方に記載の方法によって製造することができる。
眼で発症したアレルギーを対象とする組成物の好ましい剤型は、例えば点眼剤、眼軟膏、錠剤等が挙げられるが、より好ましくは点眼剤である。点眼剤には、例えば等張化剤、緩衝剤、安定化剤、粘稠剤、ｐＨ調整剤、保存剤等の各種添加物及びその他の成分を配合することができる。
上記等張化剤は、該点眼剤の浸透圧を調整する目的等で配合することができる。該等張化剤としては、一般に点眼剤として用いられているものであれば特に差し支えなく、例えば、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、塩化マグネシウムおよび硫酸マグネシウム等からなるアルカリまたはアルカリ土類金属塩の如き無機塩、およびグルコース、マンニトール、ソルビトール、キシリトール、デキストランおよびグリセリン等の糖質等が挙げられる。これらは単独で使用してもよく、２種類以上併用することもできる。これら等張化剤の濃度は、好ましくは０．００１〜５ｗ／ｖ％であり、より好ましくは、０．０１〜３．０ｗ／ｖ％である。
上記緩衝剤は、該点眼剤のｐＨを安定化する目的等で配合することができる。該緩衝剤としては、一般に点眼剤として用いられているものであれば特に差し支えなく、例えば、ホウ酸、クエン酸、リン酸、酒石酸、グルコン酸、酢酸、炭酸およびそれらの塩等が挙げられる。これらは単独で使用してもよく、２種類以上併用することもできる。これら緩衝剤の濃度は、０．００１〜５ｗ／ｖ％が好ましく、０．０１〜１ｗ／ｖ％がより好ましい。
上記安定化剤は、該点眼剤の有効成分を安定化する目的等で配合することができる。該安定化剤としては、一般に点眼剤として用いられているものであれば特に差し支えなく、例えば、エデト酸ナトリウム、シクロデキストリン、亜硫酸塩、クエン酸／塩、およびジブチルヒドロキシトルエン等が挙げられる。これらは単独で使用してもよく、２種類以上併用することもできる。これら安定化剤の濃度は、０．００１〜５ｗ／ｖ％が好ましく、０．０１〜１ｗ／ｖ％がより好ましい。
上記粘稠化剤は、該点眼剤の粘度を調整する目的等で配合することができる。該粘稠化剤としては、一般に点眼剤として用いられているものであれば特に差し支えなく、例えば、グリセリン、エチレングリコール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールおよびポリビニルアルコールなどのポリオール類、トレハロース、シュクロース、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースおよびシクロデキストリン等の糖質類、カルボキシビニルポリマー、クエン酸塩およびエデト酸塩等のポリカルボン酸／塩等ならびにその他キサンタンガム、ローカーストビーンガム、ゲランガムおよびカラギーナン類等の多糖類、ヒアルロン酸／塩、ポビドンおよびヒマシ油等を挙げることができる。これらは単独で使用してもよく、２種類以上併用することもできる。これら粘稠化剤の濃度は、０．００１〜１０ｗ／ｖ％が好ましく、０．０１〜５ｗ／ｖ％がより好ましい。
上記ｐＨ調整剤は、該点眼剤のｐＨを調整する目的等で配合することができる。該ｐＨ調整剤としては、一般に点眼剤として用いられているものであれば特に差し支えなく、例えば、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、炭酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、塩酸、クエン酸、ホウ酸、リン酸、酢酸、酒石酸およびそれらの塩等が挙げられる。これらは単独で使用してもよく、２種類以上併用することもできる。本発明の眼科用組成物は、これらｐＨ調整剤を適量添加し、目的のｐＨに調整する。
上記保存剤は、該点眼剤に保存効力を付与する目的等で配合することができる。該保存剤としては、一般に点眼剤として用いられているものであれば特に差し支えなく、例えば、塩化ベンザルコニウムや塩化ベンゼトニウム、ポリコウタニウム等の４級アンモニウム類、グルコンサンクロルヘキシジンやポリヘキサメチレンバイグアナイド等のバイグアナイド類、メチルパラベン等の安息香酸エステル類、クロロブタノール、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム等が挙げられる。これらは単独で使用してもよく、２種類以上併用することもできる。これら保存剤の濃度は、０．０００１〜０．１ｗ／ｖ％が好ましく、０．００１〜０．０５ｗ／ｖ％がより好ましい。
上記その他の成分は、各成分に応じた効果を付与する目的等で配合することができる。その他の成分としては、一般に眼科用剤として用いられているものであれば特に差し支えなく、例えば、充血除去剤、消炎・収斂剤、局所麻酔剤、ビタミン類、アミノ酸類、清涼化剤等が挙げられる。これらは単独で使用してもよく、２種類以上併用することもできる。なお、これらの成分を含有する際には、患者の年齢や症状等に応じて、本発明の有効成分である３−ヒドロキシ酪酸および／またはその塩類の、アレルギー治療効果に影響がでない成分・濃度であることを確認して使用するのが好ましい。
また、本発明の組成物を点眼剤とする場合には、各種配合成分を組み合わせた後、ｐＨを調整することが好ましい。ｐＨの範囲としては、点眼剤として許容される範囲であれば特に制限はなく、例えば、ｐＨ４〜１０とするのが好ましく、ｐＨ６〜８．５がより好ましい。ｐＨ４未満の酸性およびｐＨ１０を超えるとアルカリ性領域では眼刺激や眼障害を生じる可能性があるので好ましくない。
また、本発明の組成物を点眼剤とする場合、該組成物の浸透圧としては、点眼剤として許容される範囲であれば特に制限はなく、例えば、１００〜６００ｍＯｓｍ．が好ましく、１５０〜５００ｍＯｓｍ．がより好ましい。
本発明の組成物を点眼剤とする場合、眼科的に許容される範囲であれば投与量が特に制限されるものではない。例えば、上記の如き点眼剤の形態で用いる場合には、通常１回につき１〜３滴を１日１回〜２０回、特には１回〜１０回投与することが好ましい。
以上のとおり、本発明によれば、３−ヒドロキシ酪酸またはその塩を抗アレルギー剤として使用する有用な提案がなされている。この提案は、例えばアレルギー治療用組成物中に、３−ヒドロキシ酪酸および／またはその塩を抗アレルギー剤として含有させることにより実現される。
【実施例】
【０００６】
以下、本発明を実施例により具体的に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
実施例１
ラット慢性アレルギー性結膜炎モデルを用いて、Ｄ−３−ヒドロキシ酪酸を有効成分とする本発明の組成物の、痒みの抑制効果及び結膜への好酸球浸潤抑制効果を調査した。
試験製剤の調製方法
試験製剤Ｎｏ．１〜Ｎｏ．５を、表１に示す成分を精製水に溶かし希塩酸又は希水酸化ナトリウム水溶液でｐＨを７．０〜７．５に調整後、無菌ろ過して調製した。
【表１】
2008053982.tif 000002
ラット慢性アレルギー性結膜炎モデルの作成
一次感作用試薬（２０ｍｇ卵白アルブミン、４０ｍｇ水酸化アルミニウムゲル及び２×１０１１単位不活性化百日咳抗原を生理食塩水に溶解したもの）０．６ｍＬをラット両手足のｆｏｏｔｐａｄに２４Ｇ注射針を用いて投与した。一次感作用試薬の投与から５日後に、二次感作用試薬（５０ｍｇ卵白アルブミンを１００ｍＬを生理食塩水に溶解したもの）１ｍＬを、２７Ｇ注射針を用いて背部に皮下注射した。一次感作用試薬の投与後、１４日目から４２日目までは局部感作用試薬（５００ｍｇ卵白アルブミンを生理食塩水５０ｍＬに溶解したもの）を両眼に５μＬ点眼し、点眼直後から２０分間，ラットを観察用ケージに入れ「掻き動作」を観察した。この動作を２０分間に１０回以上示したラットを「実験的アレルギー性結膜炎発症ラット」として実験に用いた。「掻き動作」の観察は局部感作用試薬の点眼後，毎日行い，感作したラット全てが実験的アレルギー性結膜炎を発症してから掻痒抑制効果の評価試験を行った。掻痒抑制効果の評価試験は，一次感作試薬の投与後４２日目までに行った。
掻痒抑制効果の評価試験
実験的アレルギー発症ラットの両眼に、試験製剤をそれぞれ５μＬ点眼し、その５分後に局部感作用試薬５μＬを点眼した。局部感作用試薬点眼後、２０分間のラットの掻き動作を観察した。この操作を８日間繰り返した。１日毎の掻き動作回数を図１に、８日間の累積掻き動作回数を図２にまとめた。Ｄ−３−ヒドロキシ酪酸ナトリウムは容量依存的に実験的アレルギー発症ラットの掻き動作を抑制し、Ｄ−３−ヒドロキシ酪酸ナトリウム濃度０．２％ｗ／ｖ以上である試験製剤Ｎｏ．３とＮｏ．４が、Ｎｏ．１に対して有意であった（図２、有意水準５％、ｔ検定）。この結果から、Ｄ−３−ヒドロキシ酪酸ナトリウムは、アレルギー性炎症反応の即時相を阻害する効果があると考えられた。
結膜への好酸球浸潤抑制効果
「掻痒抑制効果の評価試験」後、ラットより眼球を摘出し、ＰＢＳにて洗浄した。視神経部位周辺付近から眼球を半分に割り、角結膜側をホルマリン溶液にて室温で一晩固定した。固定した眼球より、結膜を切り出し、０．１ｍｏｌ／Ｌのリン酸緩衝溶液で洗浄後、エタノールにて浸漬した。その後キシレン、パラフィンにてそれぞれ３回ずつ浸漬し、最後にパラフィンにて包埋した。包埋した組織を４μｍの厚さに薄切し、２日間乾燥させ、最後にライトギムザ染色を施した。この方法にて作製した切片を組織標本とし、顕微鏡にて観察した。標本毎の好酸球浸潤数を数えたところ、Ｄ−３−ヒドロキシ酪酸ナトリウム濃度１．０％ｗ／ｖである試験製剤Ｎｏ．４がＮｏ．１に対して有意に好酸球の結膜組織への浸潤を抑制していた（図３、有意水準５％、ｔ検定）。この結果から、Ｄ−３−ヒドロキシ酪酸ナトリウムは、アレルギー性炎症反応の遅発相も阻害する効果があると考えられた。
実施例２
３−ヒドロキシ酪酸を有効成分とする本発明の組成物の、ヒスタミン点眼により惹起したラット眼掻痒感に対する抑制効果及び好酸球浸潤抑制効果を調査した。
試験製剤
ヒスタミン惹起掻痒感の抑制効果の評価実験では、表１に示す試験製剤Ｎｏ．１（Ｄ−３−ヒドロキシ酪酸ナトリウム  ０％、図４ではＰＢＳと略）及び試験製剤Ｎｏ．４（Ｄ−３−ヒドロキシ酪酸ナトリウム  １．０％、図４では１％ＨＢＡと略）と、比較例としてインタール（クロモグリク酸ナトリウム  ２％）及びリボスチン（塩酸レボカバスチン  ０．０２５％）を使用した。
また、結膜への好酸球浸潤抑制効果の評価実験では、表１に示す試験製剤Ｎｏ．１（Ｄ−３−ヒドロキシ酪酸ナトリウム  ０％、図５ではＰＢＳと略）及び試験製剤Ｎｏ．４（Ｄ−３−ヒドロキシ酪酸ナトリウム  １．０％、図５ではＨＢＡと略）と、比較例としてリボスチン（塩酸リボカバスチン  ０．０２５％）を使用した。
ヒスタミン惹起掻痒感の抑制効果
試験製剤または比較例を、各ラットの両眼に５μＬずつ点眼した。この５分後に片眼１０μｍｏｌ／５μＬずつヒスタミンを点眼し、ラットに眼掻痒を誘発させた。ヒスタミン点眼直後２０分間の「掻き動作」を観察したところ、試験製剤Ｎｏ．４（Ｄ−３−ヒドロキシ酪酸ナトリウム１％ｗ／ｖ）はヒスタミンＨ１受容体拮抗阻害剤であるリボスチンと同程度の掻き動作抑制効果を示した。一方、ケミカルメディエーター遊離抑制剤であるインタールは効果的ではなかった（図４）。この結果から、Ｄ−３−ヒドロキシ酪酸ナトリウムは抗ヒスタミン作用を持つことが示唆された。
結膜への好酸球浸潤抑制効果
試験製剤または比較例を、各ラットの両眼に５μＬずつ点眼した。この５分後に片眼１０μｍｏｌ／５μＬずつヒスタミンを点眼し、ラットに眼掻痒を誘発させた。ヒスタミン点眼後、２４時間後にラットより眼球を摘出し、ＰＢＳにて洗浄した。洗浄後のラットの視神経部位周辺に割を入れ、眼球ごとホルマリン溶液にて室温で一晩固定した。固定した眼球より、結膜を切り出し、０．１ｍｏｌ／Ｌのリン酸緩衝溶液で洗浄後、エタノールにて浸漬した。その後キシレン、パラフィンにてそれぞれ３回ずつ浸漬し、最後にパラフィンにて包埋した。包埋した組織を４μｍの厚さに薄切し、２日間乾燥させ、最後にライトギムザ染色を施した。この方法にて作製した切片を組織標本とし、顕微鏡にて観察した。標本毎の好酸球浸潤数を数えたところ、Ｄ−３−ヒドロキシ酪酸ナトリウム濃度１．０％ｗ／ｖである試験製剤Ｎｏ．４がＮｏ．１に対して有意に好酸球の結膜組織への浸潤を抑制していた（図５、有意水準５％，Ｄｕｎｎｅｔｔ  ｔｅｓｔ）。リボスチン点眼群についても、ＰＢＳ点眼群に比べて結膜好酸球浸潤数は有意に減少した（図５、有意水準１％、Ｄｕｎｎｅｔｔ  ｔｅｓｔ）。この結果から、Ｄ−３−ヒドロキシ酪酸ナトリウムは、アレルギー性炎症反応の遅発相も阻害する効果があると考えられた。
実施例３
３−ヒドロキシ酪酸を有効成分とする本発明の組成物の、ラットｃｏｍｐｏｕｎｄ４８／８０誘発結膜炎モデルを用いた結膜炎症状の抑制効果、血管透過性の亢進の抑制効果及び好酸球浸潤抑制効果を調査した。
試験製剤
結膜炎症状抑制効果と好酸球浸潤抑制効果の評価実験では、表１に示す試験製剤Ｎｏ．１（図６，７，８，９ではＰＢＳと略）及び試験製剤Ｎｏ．５（図６，７，８，９ではＨＢＡと略）と比較例としてインタール（クロモグリク酸ナトリウム  ２％）を使用した。
また、血管透過性の亢進効果の評価実験では、比較例としてリボスチン（塩酸レボカバスチン  ０．０２５％）を使用した。
結膜炎症状抑制効果
試験製剤または比較薬を、各ラットの両眼に５μＬずつ点眼した。この５分後に片眼２ｍｇ／５μＬずつｃｏｍｐｏｕｎｄ  ４８／８０を点眼し、ラットに結膜炎を発症させた。ｃｏｍｐｏｕｎｄ  ４８／８０点眼２０分後及び２４時間後の結膜炎症状を評価した。充血・浮腫は、表２の評点により判定した。その結果、ＨＢＡ点眼群では２０分後の浮腫及び２４時間後の充血で、ＰＢＳ点眼群に比べて評点が低い傾向が見られた。ケミカルメディエーター遊離抑制剤であるインタール点眼群では、２０分後の浮腫及び充血がＰＢＳ点眼群に比べて抑制される傾向が見られた（図６，７）。
【表２】
2008053982.tif 000003
ｃｏｍｐｏｕｎｄ  ４８／８０は肥満細胞の脱顆粒を促進することで充血や浮腫などの結膜炎症状を惹起させる。ケミカルメディエーター遊離抑制剤であるインタールは、肥満細胞の脱顆粒を抑制することで、Ｃｏｍｐｏｕｎｄ  ４８／８０点眼時の結膜炎症状を抑制すると考えられる。ＨＢＡについても、肥満細胞の脱顆粒を抑制することで、結膜炎症状を抑制する可能性が示唆された。
血管透過性の亢進効果
試験製剤Ｎｏ．１、Ｎｏ．５または比較例を投与したラットに対して、２％エバンスブルー溶液を投与した。それぞれの投与は尾静脈注射により行った。投与５分後に片眼２ｍｇ／５μＬずつｃｏｍｐｏｕｎｄ  ４８／８０を点眼し、ラットに結膜炎を発症させた。ｃｏｍｐｏｕｎｄ  ４８／８０点眼２０分後に、ラットを放血致死させ、結膜を採取した。採取した結膜はアセトン＋硫酸ナトリウム混合液に入れ、結膜に漏出した色素の抽出を行った。抽出後６２０ｎｍの吸光度値を測定し、結膜への漏出色素量を定量評価した。その結果、ＨＢＡ投与群ではＰＢＳ投与群に比べて漏出色素量は減少した。リボスチン投与群についてもＰＢＳ投与群に比べて漏出色素量は減少した（図８）。
ｃｏｍｐｏｕｎｄ  ４８／８０によって脱顆粒した肥満細胞から放出されるヒスタミンなどのケミカルメディエーターは結膜の毛細血管透過性を亢進させることが知られている。ＨＢＡはヒスタミンと競合することで、ｃｏｍｐｏｕｎｄ  ４８／８０投与による毛細血管透過性の亢進を抑制する可能性が示唆された。
結膜への好酸球浸潤抑制効果
試験製剤または比較例を、各ラットの両眼に５μＬずつ点眼した。この５分後に片眼２ｍｇ／５μＬずつｃｏｍｐｏｕｎｄ  ４８／８０を点眼し、ラットに結膜炎を発症させた。ｃｏｍｐｏｕｎｄ  ４８／８０点眼２４時間後にラットより眼球を摘出し、ＰＢＳにて洗浄した。視神経部位周辺付近から眼球を半分に割り、角結膜側をホルマリン溶液にて室温で一晩固定した。固定した眼球より、結膜を切り出し、０．１ｍｏｌ／Ｌのリン酸緩衝溶液で洗浄後、エタノールにて浸漬した。その後キシレン、パラフィンにてそれぞれ３回ずつ浸漬し、最後にパラフィンにて包埋した。包埋した組織を４μｍの厚さに薄切し、２日間乾燥させ、最後にライトギムザ染色を施した。この方法にて作製した切片を組織標本とし、顕微鏡にて観察した。ＰＢＳ点眼群に比べてＨＢＡ点眼群の結膜好酸球浸潤数は有意に減少した（図９、有意水準１％、Ｄｕｎｎｅｔｔ  ｔｅｓｔ）。インタール点眼群についても、ＰＢＳ点眼群に比べて結膜好酸球浸潤数は有意に減少した（図９、有意水準５％、Ｄｕｎｎｅｔｔ  ｔｅｓｔ）。
ｃｏｍｐｏｕｎｄ  ４８／８０によって脱顆粒した肥満細胞からは好酸球走化性因子（ｅｏｓｉｎｏｐｈｉｌ  ｃｈｅｍｏｔａｃｔｉｃ  ｆａｃｔｏｒ）などの好酸球浸潤誘導物質が放出される。ケミカルメディエーター遊離抑制剤であるインタールは、肥満細胞の膜安定化作用によって脱顆粒を抑制し、その結果好酸球の浸潤を抑制したと考えられる。ＨＢＡについても、同様に肥満細胞の脱顆粒抑制作用を持つ可能性が示唆された。
以上のとおり、本発明の組成物は、アレルギー反応によって起こる症状、例えば掻痒を抑制することができる。特に眼に生じる痒みに対して効果がある。また、本組成物の有効成分であるヒドロキシ酪酸及びその塩類は、水に溶けやすく、かつ、水溶液中で安定であるので、眼に適用する点眼剤（洗眼剤やコンタクトレンズ装着液も含む）として用いるのに適している。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【国際調査報告】
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