(57)【要約】【課題】  副作用が無く継続的に摂取しやすい、血清トリグリセライド低下作用を有する薬剤ならびに食品を提供すること。【解決手段】  バチルス属に属する細菌の培養物を有効成分とする脂質代謝改善剤ならびに血清トリグリセライド値低下剤が開示される。好ましくは、バチルス属に属する細菌はバチルス・ズブチリスであり、より好ましくはバチルス・ズブチリスＣ−３１０２（FERM  BP-1096）である。本発明の脂質代謝改善剤および血清トリグリセライド値低下剤は、動脈硬化症などの疾患の治療および予防に有用である。
2008023608.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
バチルス属に属する細菌の培養物を有効成分とする脂質代謝改善剤。
【請求項２】
バチルス属に属する細菌がバチルス・ズブチリスである請求項１記載の脂質代謝改善剤。
【請求項３】
バチルス属に属する細菌がバチルス・ズブチリスＣ−３１０２（FERM  BP-1096）である請求項１または２に記載の脂質代謝改善剤。
【請求項４】
バチルス属に属する細菌の培養物を有効成分とする血清トリグリセライド値低下剤。
【請求項５】
バチルス属に属する細菌がバチルス・ズブチリスである請求項４記載の血清トリグリセライド値低下剤。
【請求項６】
バチルス属に属する細菌がバチルス・ズブチリスＣ−３１０２（FERM  BP-1096）である請求項４または５に記載の血清トリグリセライド値低下剤。
【請求項７】
バチルス属に属する細菌を有効成分とする脂質代謝改善剤。
【請求項８】
バチルス・ズブチリスに属する細菌を有効成分とする脂質代謝改善剤。
【請求項９】
バチルス・ズブチリスＣ−３１０２（FERM  BP-1096）を有効成分とする脂質代謝改善剤。
【請求項１０】
バチルス属に属する細菌を有効成分とする血清トリグリセライド値低下剤。
【請求項１１】
バチルス・ズブチリスに属する細菌を有効成分とする血清トリグリセライド値低下剤。
【請求項１２】
バチルス・ズブチリスＣ−３１０２（FERM  BP-1096）を有効成分とする血清トリグリセライド値低下剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、バチルス属の細菌、特にバチルス・ズブチリスＣ-3102株の菌体またはその培養物を有効成分とする、血清トリグリセライド値を低下させる作用を有する脂質代謝改善剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
血清のトリグリセライド値の上昇は、高脂血症、動脈硬化症、虚血性心疾患（狭心症や心筋こうそく）、また糖尿病などを発症する原因でもあり、一般的に生活習慣病の指標となっている。また食後の中性脂肪の増加やその持続が、循環器系疾患に最も影響する因子であることがわかっている。【０００３】
一般に高脂血症の治療には、薬物療法と脂質摂取量を制限した食事療法が行われる。薬物療法には、コレステロール合成経路の3-ヒドロキシ-3-メチルグルタリル補酵素Ａ（ＨＭＧ-ＣｏＡ）よりバロン酸への合成を阻害することによりコレステロール生合成を阻害するＨＭＧ-ＣｏＡリダクターゼ阻害剤（メバロスタチン等）や胆汁酸吸着剤（陰イオン交換樹脂）などの薬物が用いられている。【０００４】
しかしながらＨＭＧ-ＣｏＡリダクターゼ阻害剤は、過敏症や肝機能異常、横紋筋融解症等の副作用を有する。またコレスチラミンなどの陰イオン交換樹脂を用いると、陰イオン交換樹脂が消化管内でコレステロールを多く含む胆汁酸を吸着してその腸肝循環を遮断し、コレステロールを対外に排泄させるが、投与量が多く飲みにくくかつ便秘や消化管症状を引き起こす等の問題がある。また、食事療法は食事制限による精神的苦痛を伴うので、長期間にわたって継続的に実施することは困難である。【０００５】
したがって副作用が無く継続的に摂取しやすい、血清トリグリセライド低下作用を有する薬剤ならびに食品が求められている。
【特許文献１】特公平４−２４０２２
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明の目的は、動脈硬化症などの疾患の治療および予防に有用な脂質代謝改善剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明は、バチルス属に属する細菌の菌体または培養物を有効成分とする脂質代謝改善剤を提供する。本発明はまた、バチルス属に属する細菌の菌体または培養物を有効成分とする血清トリグリセライド値低下剤を提供する。好ましくは、バチルス属に属する細菌はバチルス・ズブチリスであり、より好ましくはバチルス・ズブチリスＣ−３１０２（FERM  BP-1096）である。
【図面の簡単な説明】
【０００８】
【図１】図１は、バチルス・ズブチリスＣ−３１０２株ゲノムＤＮＡの制限酵素ＮｏｔＩまたはＳｆｉＩ消化パターンを示す。
【図２】図２は、本発明の脂質代謝改善剤を摂取した被験者の血清トリグリセライド濃度の推移を示す。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００９】
バチルス属の菌（例えば、Bacillus  subtilis）は古くからヒトの食生活に深くかかわっており、その機能性についての情報は多いが、血清トリグリセライドの低下作用や脂質代謝改善効果があることは未だ報告されていない。【００１０】
本発明の脂質代謝改善剤および血清トリグリセライド値低下剤は、バチルス属に属する細菌の菌体またはその培養物、好ましくはバチルス・ズブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）の菌体またはその培養物を有効成分として含むことを特徴とする。バチルス・ズブチリスの菌学的性質はバージーズ・マニュアル・オブ・バクテリオロジー  Ｖｏｌ．１１（１９８６）等に記載されており、具体的には例えば以下の特徴を有する。
（１）グラム陽性
（２）卵円形の芽胞を形成
（３）桿菌
（４）運動性：あり
（５）好気性
（６）カタラーゼ：陽性
（７）５０℃における発育：＋
（８）ｐＨ５．７における発育：＋
（９）クエン酸塩の利用：＋
（１０）糖類からの酸生成の有無：アラビノース、グルコース、キシロース、マンニット：＋
（１１）ＶＰ反応：＋
（１２）デンプンの加水分解：＋
（１３）硝酸塩の還元性：＋
（１４）インドールの生成：−
（１５）ゼラチンの加水分解：＋
（１６）カゼインの加水分解：＋
（１７）液体培地での被膜形成：＋
（１８）牛乳の凝固：−
（１９）牛乳のペプトン化：＋【００１１】
本発明の脂質代謝改善剤および血清トリグリセライド値低下剤に用いるバチルス・ズブチリスとしては、例えば、バチルス・ズブチリスＣ−３１０２株（生命工学工業技術研究所寄託番号  ＦＥＲＭ  ＢＰ−１０９６、寄託日１９８５年１２月２５日）を挙げることができる。バチルス・ズブチリスC-3102株の大豆培養物は家畜に対して、腸内細菌叢改善、増体、感染防御、卵殻強化、肉質改善、便臭改善等の効果があり、添加物として利用されている（特公平４−２４０２２）。またこの株の保健効果として、整腸作用、腸内腐敗産物の減少などが知られている。（腸内細菌学会誌  第18巻  第二号  93-99（2004））。【００１２】
バチルス・ズブチリスＣ−３１０２は、下記配列１及び配列２のＰＣＲプライマーを用いてＰＣＲ反応を行うと約７００ｂｐｓの断片が増幅するという特徴を持つ。他のバチルス・ズブチリスでは、このＰＣＲプライマーによっては増幅は起こらない。バチルス・ズブチリスＣ−３１０２のゲノムをテンプレートとして増幅される約７００ｂｐｓの断片は、アミラーゼの配列と相同性を有しないという特徴をもち、この点においてＣ−３１０２株はバチルス・ズブチリスの他の株と明確に識別される。
配列１：５’−ＧＣＣＣＣＧＣＡＣＡＴＡＣＧＡＡＡＡＧＡＣＴＧＧＣＴＧＡＡＡ−３’（配列番号１）
配列２：５’−ＧＧＡＴＣＣＣＡＣＧＴＴＧＴＧＡＴＴＡＡＡＡＧＣＡＧＣＧＡＴ−３’（配列番号２）
さらに、バチルス・ズブチリスＣ−３１０２株は以下の性質を有する：
（１）プラスミドＤＮＡを有しない。
（２）ゲノムＤＮＡを調製し、制限酵素ＮｏｔＩまたはＳｆｉＩで消化してアガロース電気泳動により分離したときの消化パターンは図１に示されるとおりである。
（３）B.cerous抗菌物質を産生する。
（４）アンピシリン、クロラムフェニコール、シプロフロキサシン、エリスロマイシン、ゲンタマイシン、カナマイシン、リネゾリド、キヌプリスチン／ダルフォプリスチン、リファムピン、ストレプトマイシン、テトラサイクリン、トリメトプリム、バンコマイシンに対して耐性を有しない（いずれも最小阻害濃度０．０３〜４μｇ／ｍｌ）。【００１３】
バチルス・ズブチリスは、培地として微生物培養に通常使用される炭素源、窒素源、無機物等を含む液体培地又は固体培地を用いて培養することができる。炭素源としては、バチルス・ズブチリスが資化可能な炭素源であればよく、例えばグルコース、フルクトース、スクロース、スターチ、糖蜜等を、また窒素源としては、例えばペプトン、カゼイン加水分解物、肉エキス、硫安等を挙げることができる。更に、必要に応じて燐酸、カリウム、マグネシウム、カルシウム、ナトリウム、鉄およびマンガン等の塩類、ビタミン類、アミノ酸類、界面活性剤等を添加することもできる。また、これらの合成培地の他、大豆油かすなどの天然物由来物質を用いて培養してもよい。培養条件としては、好気的条件が好ましく、培養装置としては例えばジャーファーメンターによる通気撹拌液体培養、棚式固体培養、自動製麹培養装置等が好ましい。培養温度は２０〜５０℃、特に３０〜４５℃が好ましく、培養時間は１２時間〜７日間、培養初発ｐＨはｐＨ５〜９、特に好ましくはｐＨ６〜８である。【００１４】
このようにして得られた培養物は、バチルス・ズブチリスの菌体、培地および発酵生成物を含む。培養物は、脂質代謝改善剤またはトリグリセライド低下剤としてそのまま用いてもよく、培養物を濃縮してもよく、またはこれらに賦形剤等を加えて乾燥粉末、顆粒、錠剤等の製剤として用いてもよい。また、培養物から分離した菌体を用いてもよく、培養物から菌体を除去して用いてもよく、菌体を含む形の培養物を用いてもよい。特に好ましい態様においては、バチルス・ズブチリスは、大豆油かす、大豆煮豆、小豆煮豆、米飯、麦飯、小麦ふすま、煮とうもろこし、その他の穀類などの食用に適した天然物由来物質を用いて培養し、培養物から菌体を分離することなく、そのまま食品に配合する。【００１５】
本発明の脂質代謝改善剤および血清トリグリセライド値低下剤は、液体、粉末、造粒物、錠剤等の形で投与してもよく、食品添加物として飲食品中に配合して摂取してもよい。飲食品としては、例えば、飲料、製菓錠菓、ペースト、パン、魚肉加工製品、乳製品などが挙げられる。本発明の脂質代謝改善剤および血清トリグリセライド値低下剤をこれらの様々な食品素材に添加して、健康飲料、健康食品あるいは機能性食品として提供することができる。【００１６】
以上記述したとおり、本発明はバチルス・ズブチリスの菌体またはその培養物を有効成分とする血清トリグリセライド低下効果のある脂質代謝改善剤に関するものである。本発明の有効成分であるバチルス・ズブチリスは微量かつ短期間で有効であり、保存性と耐酸性にもすぐれ腸内に到達して増殖しやすく、持続的な血清トリグリセライドの低下作用が期待できる。【００１７】
本明細書において明示的に引用される全ての特許および参考文献の内容は全て参照により本明細書に取り込まれる。また，本出願が有する優先権主張の基礎となる出願である日本特許出願2006-224672号の明細書および図面に記載の内容は全て参照により本明細書に取り込まれる。【００１８】
以下に実施例により本発明をより詳細に説明するが，これらの実施例は本発明の範囲を制限するものではない。
【実施例１】
【００１９】
以下の実施例においては、バチルス属に属する細菌の例として、バチルス・ズブチリスＣ−３１０２株（生命工学工業技術研究所寄託番号  ＦＥＲＭ  ＢＰ−１０９６、寄託日１９８５年１２月２５日）を用いた。【００２０】
市販大豆油かす造粒品5kgに水道水5kgを加えて121℃、120分間殺菌し、予め前培養しておいたバチルス・ズブチリスC-3102株の培養液を接種し、37℃、40時間培養することにより、バチルス・ズブチリスC-3102株の大豆培養物を製造した。このようにして得られた培養物を乾燥粉砕し、下記の表に示す他の成分を配合して、１錠約500mg(3×109個のバチルス・ズブチリス胞子を含む）の錠剤を製造した。錠剤の栄養成分を表１-１、組成を表１-２に示す。【００２１】
【表１】
2008023608.tif 000003
【実施例２】
【００２２】
血清トリグリセライド上昇抑制試験（ヒト摂食試験の実施）
試験方法【００２３】
年齢が25歳から40歳までの健康な男女10名（女性5名、男性5名）を被験者とした。選定基準を表２に示す。なお、特定の薬剤または特定保健用食品を投与または摂取している者は除外した。【００２４】
【表２】
2008023608.tif 000004
【００２５】
被験者は、1日1回１錠500mg(3×109の胞子を含むBacillus  subtilis  C-3102株大豆培養物の錠剤)を、可能な限り朝食後に、４週間経口摂取した。摂食開始前、摂食1週間後、２週間後、３週間後、４週間後に、空腹時（前日の夜９時以降の飲食禁止、午前中の採血時間は定時とした）に採決し、血清トリグリセライド値を測定した。試験スケジュールを表３に示す。【００２６】
【表３】
2008023608.tif 000005
【００２７】
上記試験の結果を図２に示す。血清トリグリセライドの推移は、摂取開始時103.6±42.82mg/dl、摂取１週間後69.8±32.00mg/dl、摂取２週間後63.0±24.58  mg/dl、摂取３週間後77.0±35.63  mg/dl、摂取４週間後71.8±37.26  mg/dlであった。摂取期間による反復測定一元配置分散分析の結果、有意な差（ｐ<0.01）が認められた。多重比較（Tukey-Kraner検定）の結果、摂取開始時と摂取１週間後の間（ｐ<0.05）、摂取開始時と摂取２週間後の間（ｐ<0.05）、摂取開始時と摂取４週間後の間（ｐ<0.05）に有意な差が認められた。以上の結果から、バチルス・ズブチリスC-3102株大豆培養物は、血清トリグリセライドの低下作用を有することが明らかとなった。
【産業上の利用可能性】
【００２８】
本発明の脂質代謝改善剤は、ヒトが摂食することにより血清トリグリセライド濃度を低下させることができ、動脈硬化症の予防・改善剤として有用である。
【図１】
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【図２】
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【配列表】
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【手続補正書】
【提出日】平成20年2月15日(2008.2.15)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
バチルス・ズブチリスＣ−３１０２（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１０９６）の培養物を有効成分として含む血清トリグリセライド値低下剤。
【請求項２】
前記培養物が大豆培養物である請求項１記載の血清トリグリセライド値低下剤。
【請求項３】
前記大豆培養物が３×１０９個以上のバチルス・ズブチリスＣ−３１０２胞子を含む請求項２に記載の血清トリグリセライド値低下剤。
【請求項４】
前記大豆培養物を５％以上含む請求項２に記載の血清トリグリセライド値低下剤。
【請求項５】
バチルス・ズブチリスＣ−３１０２（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１０９６）の胞子を有効成分として含む血清トリグリセライド値低下剤。
【請求項６】
前記胞子を３×１０９個以上含む、請求項５記載の血清トリグリセライド値低下剤。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００１】
技術分野
［０００１］
本発明は、バチルス属の細菌、特にバチルス・ズブチリスＣ−３１０２株の菌体またはその培養物を有効成分とする、血清トリグリセライド値を低下させる作用を有する脂質代謝改善剤に関する。
背景技術
［０００２］
血清のトリグリセライド値の上昇は、高脂血症、動脈硬化症、虚血性心疾患（狭心症や心筋こうそく）、また糖尿病などを発症する原因でもあり、一般的に生活習慣病の指標となっている。また食後の中性脂肪の増加やその持続が、循環器系疾患に最も影響する因子であることがわかっている。
［０００３］
一般に高脂血症の治療には、薬物療法と脂質摂取量を制限した食事療法が行われる。薬物療法には、コレステロール合成経路の３−ヒドロキシ−３−メチルグルタリル補酵素Ａ（ＨＭＧ−ＣｏＡ）よりメバロン酸への合成を阻害することによりコレステロール生合成を阻害するＨＭＧ−ＣｏＡリダクターゼ阻害剤や胆汁酸吸着剤（陰イオン交換樹脂）などの薬物が用いられている。
［０００４］
しかしながらＨＭＧ−ＣｏＡリダクターゼ阻害剤は、過敏症や肝機能異常、横紋筋融解症等の副作用を有する。またコレスチラミンなどの陰イオン交換樹脂を用いると、陰イオン交換樹脂が消化管内でコレステロールを多く含む胆汁酸を吸着してその腸肝循環を遮断し、コレステロールを体外に排泄させるが、投与量が多く飲みにくくかつ便秘や消化管症状を引き起こす等の問題がある。また、食事療法は食事制限による精神的苦痛を伴うので、長期間にわたって継続的に実施することは困難である。
［０００５］
したがって副作用が無く継続的に摂取しやすい、血清トリグリセライド低下作用を有する薬剤ならびに食品が求められている。
特許文献１：特公平４−２４０２２
発明の開示
発明が解決しようとする課題
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００７】
［００２４］
［表２］
2008023608.tif 000008
［００２５］
被験者は、１日１回１錠５００ｍｇ（３×１０９の胞子を含むＢａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ  Ｃ−３１０２株大豆培養物の錠剤）を、可能な限り朝食後に、４週間経口摂取した。摂食開始前、摂食１週間後、２週間後、３週間後、４週間後に、空腹時（前日の夜９時以降の飲食禁止、午前中の採血時間は定時とした）に採血し、血清トリグリセライド値を測定した。試験スケジュールを表３に示す。
［００２６］
［表３］
【国際調査報告】
2008023608.tif 000009
2008023608.tif 000010
2008023608.tif 000011
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