(57)【要約】  本発明の目的は、より治療効果の高いＤＩＣ治療及び／又は改善剤、またはその治療及び／又は改善方法を提供することである。本発明によれば、トロンボモジュリンを有効成分とする薬剤であって、該薬剤が、血漿中アンチトロンビン活性値が５０％未満であるアンチトロンビン低下患者に投与される播種性血管内血液凝固症候群の治療及び／又は改善剤が提供される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
トロンボモジュリンを有効成分とする薬剤であって、該薬剤が、血漿中アンチトロンビン活性値が５０％未満である播種性血管内血液凝固症候群患者に投与されるための播種性血管内血液凝固症候群の治療及び／又は改善剤。
【請求項２】
該トロンボモジュリンが可溶性トロンボモジュリンである請求項１に記載の播種性血管内血液凝固症候群の治療及び／又は改善剤。
【請求項３】
該トロンボモジュリンが、配列番号９又は配列番号１１に記載のアミノ酸配列をコードするＤＮＡを宿主細胞にトランスフェクトして調製された形質転換細胞より取得されるペプチドである、請求項１又は２に記載の播種性血管内血液凝固症候群の治療及び／又は改善剤。
【請求項４】
該トロンボモジュリンが、配列番号９もしくは配列番号１１のそれぞれにおける第１９〜５１６位の配列を有するペプチド、又は前記ペプチドのアミノ酸配列の１つ又は複数のアミノ酸が置換、欠失、又は付加されたアミノ酸配列を有しトロンボモジュリン活性を有するペプチドである請求項１〜３のいずれかに記載の播種性血管内血液凝固症候群の治療及び／又は改善剤。
【請求項５】
播種性血管内血液凝固症候群患者が、血漿中のアンチトロンビン活性値が４０％以下の患者である請求項１〜４のいずれかに記載の播種性血管内血液凝固症候群の治療及び／又は改善剤。
【請求項６】
アンチトロンビンと組み合わされて投与されないことを特徴とする請求項１〜５のいずれかに記載の播種性血管内血液凝固症候群の治療及び／又は改善剤。
【請求項７】
播種性血管内血液凝固症候群を患うヒト患者の死亡の可能性を減少させるための薬剤であって、トロンボモジュリンを有効成分とし、該薬剤が、血漿中アンチトロンビン活性値が５０％未満である播種性血管内血液凝固症候群患者に投与されるための該薬剤。
【請求項８】
トロンボモジュリンを投与すべき播種性血管内血液凝固症候群患者を選択する方法であって、播種性血管内血液凝固症候群患者の血漿中のアンチトロンビン活性値を測定しそのアンチトロンビン活性値が５０％未満である播種性血管内血液凝固症候群患者を選択し、トロンボモジュリンを投与すべき播種性血管内血液凝固症候群患者であると判断することを含む、該選択方法。
【請求項９】
血漿中のアンチトロンビン活性値が５０％未満である播種性血管内血液凝固症候群患者にトロンボモジュリンを投与することを含む、播種性血管内血液凝固症候群の治療及び／又は改善方法。
【請求項１０】
トロンボモジュリンを有効成分とする薬剤であって、該薬剤が、血漿中のアンチトロンビン活性値を測定した後に播種性血管内血液凝固症候群患者に投与されるための播種性血管内血液凝固症候群の治療及び／又は改善剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、より治療効果の高い、トロンボモジュリンを有効成分とする播種性血管内血液凝固症候群に対する治療及び／又は改善剤に関する。さらに本発明は、トロンボモジュリンを投与すべき播種性血管内血液凝固症候群患者を選択する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
播種性血管内血液凝固症候群（以下、ＤＩＣと略すことがある）は凝固疾患の一つであり、様々な疾患での組織障害によって血管凝固促進物質が大量に流出して凝固系の働きが極度に亢進し、小さな血栓が全身の血管に発生して、小さな血管を詰まらせると共に、それにより出血の制御に必要な血小板や凝固因子が消費されて不足する結果、凝固異常を起こす疾患である。ＤＩＣでは、 血液凝固因子が腎臓・肺の微小血管に蓄積して虚血を生じ、循環障害とショックを起こすことが多い。それにより呼吸速迫・呼吸困難・頻脈・徐脈四肢の冷感・乏尿・痙攣などが見られることがあり、場合によってはショックにより急死することもある。同時に凝固因子と血小板の消耗で出血傾向を生じ、皮膚の紫斑、点状出血喀血、吐血、血尿、血便、あるいは鼻出血等を引き起こす。ＤＩＣ治療剤としては、ヘパリン、アンチトロンビン（アンチトロンビンIIIと呼ばれることもある。以下、ＡＴ、又はＡＴIIIと略すことがある）等が用いられている。【０００３】
一方、トロンボモジュリンは、トロンビンと特異的に結合しトロンビンの血液凝固活性を阻害すると同時にトロンビンのプロテインＣ活性化能を著しく促進する作用を有する物質として知られ、強力な血液凝固阻害作用を有することが知られている。トロンビンによる凝固時間を延長することや、トロンビンによる血小板凝集を抑制することが知られている。プロテインＣは、血液凝固線溶系において重要な役割を演じているビタミンＫ依存性の蛋白質であり、トロンビンの作用により活性化され、活性化型プロテインＣとなる。この活性化型プロテインＣは、生体内で血液凝固系因子の活性型第Ｖ因子、および活性型第ＶＩＩＩ因子を失活させ、また血栓溶解作用を有するプラスミノーゲンアクチベーターの産生に関与していることが知られている（非特許文献１）。したがって、トロンボモジュリンは、このトロンビンによるプロテインＣの活性化を促進して抗血液凝固剤又は血栓溶解剤として有用であるとされており、凝固亢進を伴う疾患の治療、予防に有効であるという動物実験についての報告もある（非特許文献２）。【０００４】
従来、トロンボモジュリンは、ヒトをはじめとする種々の動物種の血管内皮細胞上に発現している糖蛋白質として発見取得され、その後、クローニングに成功した。即ち、遺伝子工学的手法を用いてヒト肺ｃＤＮＡライブラリーからシグナルペプチドを含むヒトトロンボモジュリン前駆体の遺伝子をクローニングし、そしてトロンボモジュリンの全遺伝子配列を解析し、シグナルペプチド（通常は、１８アミノ酸残基が例示される）を含む５７５残基のアミノ酸配列が明らかにされている（特許文献１）。シグナルペプチドが切断されたマチュアなトロンボモジュリンは、そのマチュアなペプチドのＮ末端側よりＮ末端領域（１−２２６番目：シグナルペプチドが１８アミノ酸残基であると考えた場合の位置表示、以下同じ）、６つのＥＧＦ様構造をもつ領域（２２７−４６２番目）、Ｏ型糖鎖付加領域（４６３−４９８番目）、膜貫通領域（４９９−５２１番目）、そして細胞質内領域（５２２−５５７番目）の５つの領域から構成されており、そして全長のトロンボモジュリンと同じ活性を有する部分（すなわち、最小活性単位）としては、６つのＥＧＦ様構造を持つ領域のうち、主にはＮ末端側から４，５，６番目のＥＧＦ様構造からなる部分であることが知られている（非特許文献３）。【０００５】
全長のトロンボモジュリンは界面活性剤の存在下でないと溶解し難く、製剤としては界面活性剤の添加が必須であるのに対して、界面活性剤の非存在下でもきれいに溶解することができる可溶性トロンボモジュリンが存在する。可溶性トロンボモジュリンは、少なくとも、膜貫通領域の一部又は全部を含有せしめないように調製すればよく、例えば、Ｎ末端領域と６つのＥＧＦ様構造をもつ領域とＯ型糖鎖付加領域の３つの領域のみからなる（即ち、配列番号９の第１９〜５１６位のアミノ酸配列からなる）可溶性トロンボモジュリンは、組換え技術の応用により取得できること、そしてその組換え体可溶性トロンボモジュリンは、天然のトロンボモジュリンの活性を有していることが確認されている（特許文献１）。他に可溶性トロンボモジュリンの例としていくつかの報告がある（特許文献２〜９）。あるいは天然型としてヒト尿由来の可溶性トロンボモジュリン等も例示される（特許文献１０、１１）。【０００６】
因みに、遺伝子においては、自然の変異または取得時の変異により、多くのケースで認められる通り、ヒトにおいても多型性の変異が見つけられており、上述の５７５残基のアミノ酸配列からなるヒトトロンボモジュリン前駆体の第４７３位のアミノ酸においてＶａｌであるものと、Ａｌａであるものが現在確認されている。このアミノ酸をコードする塩基配列においては、第１４１８位において、それぞれＴとＣとの変異に相当する（非特許文献４）。しかし、活性および物性においては、全く相違なく、両者は実質的に同一と判断できる。【０００７】
トロンボモジュリンはＤＩＣの治療において効果があることが報告されている（非特許文献５）。トロンボモジュリンの用途としては上述の他に、例えば、急性冠動脈症候群（ＡＣＳ）、血栓症、末梢血管閉塞症、閉塞性動脈硬化症、血管炎、心臓手術に続発する機能性障害、臓器移植の合併症、狭心症、一過性脳虚血発作、妊娠中毒症、糖尿病、肝ＶＯＤ（Ｌｉｖｅｒ ｖｅｎｏ−ｏｃｃｌｕｓｉｖｅ ｄｉｓｅａｓｅ；劇症肝炎や骨髄移植後の肝静脈閉塞症）、深部静脈血栓症（ＤＶＴ；Ｄｅｅｐ ｖｅｎｏｕｓ ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ）等や、さらには敗血症や成人呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）の疾患の治療および予防に用いられることが期待されている。【０００８】
【特許文献１】特開昭６４−６２１９号公報
【特許文献２】特開平２−２５５６９９号公報
【特許文献３】特開平３−１３３３８０号公報
【特許文献４】特開平３−２５９０８４号公報
【特許文献５】特開平４−２１０７００号公報
【特許文献６】特開平５−２１３９９８号公報
【特許文献７】ＷＯ９２／００３２５号公報
【特許文献８】ＷＯ９２／０３１４９号公報
【特許文献９】ＷＯ９３／１５７５５号公報
【特許文献１０】特開平３−８６９００号公報
【特許文献１１】特開平３−２１８３９９号公報
【非特許文献１】鈴木宏治、医学のあゆみ、第１２５巻、９０１頁（１９８３年）
【非特許文献２】Ｋ．Ｇｏｍｉら Ｂｌｏｏｄ ７５．１３９６−１３９９（１９９０）
【非特許文献３】Ｍ．Ｚｕｓｈｉら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２４６，１０３５１−１０３５３（１９８９）
【非特許文献４】Ｄ．Ｚ．Ｗｅｎら、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２６，４３５０−４３５７（１９８７）
【非特許文献５】Ｓ．Ｍ．Ｂａｔｅｓら、Ｂｒ．  Ｊ．  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，１４４，１０１７−１０２８（２００５）
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明の課題は、より治療効果の高いＤＩＣ治療及び／又は改善剤、またはその治療及び／又は改善方法を提供することにある。本発明の別の課題は、トロンボモジュリンを投与すべき播種性血管内血液凝固症候群患者を選択する方法を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
ＤＩＣの治療及び／又は改善として一般的には、抗凝固薬による抗凝固療法、又は濃厚血小板・新鮮凍結血漿による補充が実施される。ＤＩＣの本態は血液凝固系の過度な活性化であるため、それを抑制する抗凝固療法が基礎疾患に対する治療と並行して広く行われている。ＤＩＣの治療及び／又は改善においては通常ヘパリン及び／又はＡＴ製剤が使用されることが多い。ヘパリンの抗凝固作用はＡＴの凝固因子阻害速度を著しく促進することにより発現されると考えられている（Majerus PW，Tollefsen DM. 「抗凝固薬、血栓溶解薬および抗血小板薬」  In: 高折修二、福田英臣、赤池昭紀編  グッドマンギルマン薬理書  第1０版  東京：廣川書店：２００３．ｐ１９３７−６３）ため、ヘパリンは血漿中ＡＴ活性値が例えば８０％程度と比較的その値が高い患者に対し使用されている（岡嶋研二著「播種性血管内凝固症候群と多臓器不全」：医薬ジャーナル社）。また、血漿中のＡＴ活性値が例えば７０％程度以下の患者に対してはＡＴ製剤が代表的な薬剤として挙げられ（アンスロンビンＰ及びノイアート添付文書：「用法及び用量」）、血漿中のＡＴ活性値を高めて抗凝固作用を促進することによりＤＩＣの治療及び／又は改善を図る方法が主に採用されている。またこの際に必要に応じてヘパリンも併用されることがある。【００１１】
このように、ＤＩＣを治療及び／又は改善するためには、ＤＩＣ患者の血漿中のＡＴ活性値が少なくとも７０％以上に保つように補充することが望ましく、また、血漿中のＡＴ活性値を高めることがＤＩＣを治療及び／又は改善する上で常識と考えられている中、本発明者らは、意外にも血漿中ＡＴ活性値が５０％未満という血漿中ＡＴ活性値が低い患者において反って高い有効性があることを確認し、本発明を完成するに至った。この結果は、少な目に見積もっても、血漿中ＡＴ活性値が５０％未満との低いＤＩＣ患者において高い効果が認められるとの、当業者も想定できなかった意外なものであった。
仮に、ＡＴ製剤を投与するとすれば、投与するＡＴ製剤は貴重な人血液を原料として製剤化されるものであり、また、人血液を原料とすることによる感染症伝播のリスクを完全には排除することができない（アンスロンビンＰ及びノイアート添付文書：「使用上の注意」）ため懸念点があるものであり、さらには血液製剤としてのＡＴは高価であるとの問題点もあったが、本発明はこれらの問題点を払拭する好ましい薬剤又はＤＩＣ治療及び／又は改善剤を提供することができる。【００１２】
すなわち本発明としては以下のものが挙げられる。
〔１〕トロンボモジュリンを有効成分とする薬剤であって、該薬剤が、血漿中のアンチトロンビン活性値が５０％未満である播種性血管内血液凝固症候群患者に投与されるための播種性血管内血液凝固症候群の治療及び／又は改善剤；
〔２〕該トロンボモジュリンが可溶性トロンボモジュリンである前記〔１〕に記載の播種性血管内血液凝固症候群の治療及び／又は改善剤；
〔３〕該トロンボモジュリンが、配列番号１、３、５、７、９又は配列番号１１に記載のアミノ酸配列をコードするＤＮＡを宿主細胞にトランスフェクトして調製された形質転換細胞により取得されるペプチドである、前記〔１〕又は〔２〕に記載の播種性血管内血液凝固症候群の治療及び／又は改善剤；
〔３−２〕該トロンボモジュリンが、配列番号１又は配列番号３に記載のアミノ酸配列をコードするＤＮＡを宿主細胞にトランスフェクトして調製された形質転換細胞により取得されるペプチドである、前記〔１〕又は〔２〕に記載の播種性血管内血液凝固症候群の治療及び／又は改善剤；
〔３−３〕該トロンボモジュリンが、配列番号５又は配列番号７に記載のアミノ酸配列をコードするＤＮＡを宿主細胞にトランスフェクトして調製された形質転換細胞により取得されるペプチドである、前記〔１〕又は〔２〕に記載の播種性血管内血液凝固症候群の治療及び／又は改善剤；
〔３−４〕該トロンボモジュリンが、配列番号９又は配列番号１１に記載のアミノ酸配列をコードするＤＮＡを宿主細胞にトランスフェクトして調製された形質転換細胞により取得されるペプチドである、前記〔１〕又は〔２〕に記載の播種性血管内血液凝固症候群の治療及び／又は改善剤；【００１３】
〔４〕該トロンボモジュリンが、配列番号１もしくは配列番号３のそれぞれにおける第１９〜１３２位の配列を有するペプチド、上記配列の相同変異配列を有しトロンボモジュリン活性を有するペプチド、又はそれらの混合物のいずれかである前記〔１〕、〔２〕、又は〔３−２〕のいずれかに記載の播種性血管内血液凝固症候群の治療及び／又は改善剤；
〔４−２〕該トロンボモジュリンが、配列番号１もしくは配列番号３のそれぞれにおける第１９〜１３２位の配列を有するペプチド、又は上記配列の相同変異配列を有しトロンボモジュリン活性を有するペプチドである前記〔１〕、〔２〕、又は〔３−２〕のいずれかに記載の播種性血管内血液凝固症候群の治療及び／又は改善剤；
〔４−３〕該トロンボモジュリンが、配列番号１もしくは配列番号３のそれぞれにおける第１９〜１３２位の配列を有するペプチドである前記〔１〕、〔２〕、又は〔３−２〕のいずれかに記載の播種性血管内血液凝固症候群の治療及び／又は改善剤；
〔４−４〕該トロンボモジュリンが、配列番号１もしくは配列番号３のそれぞれにおける第１９〜１３２位もしくは第１７〜１３２位の配列を有するペプチド、上記配列の相同変異配列を有しトロンボモジュリン活性を有するペプチド、又はそれらの混合物のいずれかである前記〔１〕、〔２〕、又は〔３−２〕のいずれかに記載の播種性血管内血液凝固症候群の治療及び／又は改善剤；
〔４−５〕該トロンボモジュリンが、配列番号１もしくは配列番号３のそれぞれにおける第１９〜１３２位もしくは第１７〜１３２位の配列を有するペプチド又はそれらの混合物である前記〔１〕、〔２〕、又は〔３−２〕のいずれかにに記載の播種性血管内血液凝固症候群の治療及び／又は改善剤；
〔４−６〕該トロンボモジュリンが、配列番号１における第１９〜１３２位もしくは第１７〜１３２位の配列を有するペプチド又はそれらの混合物である前記〔１〕、〔２〕、又は〔３−２〕のいずれかに記載の播種性血管内血液凝固症候群の治療及び／又は改善剤；
〔４−７〕該トロンボモジュリンが、配列番号３における第１９〜１３２位もしくは第１７〜１３２位の配列を有するペプチド又はそれらの混合物である前記〔１〕、〔２〕、又は〔３−２〕のいずれかに記載の播種性血管内血液凝固症候群の治療及び／又は改善剤；
〔４−８〕該トロンボモジュリンが、配列番号１における第１９〜１３２位もしくは第１７〜１３２位の配列からなるペプチド又はそれらの混合物である前記〔１〕、〔２〕、又は〔３−２〕のいずれかに記載の播種性血管内血液凝固症候群の治療及び／又は改善剤；
〔４−９〕該トロンボモジュリンが、配列番号３における第１９〜１３２位もしくは第１７〜１３２位の配列からなるペプチド又はそれらの混合物である前記〔１〕、〔２〕、又は〔３−２〕のいずれかに記載の播種性血管内血液凝固症候群の治療及び／又は改善剤；【００１４】
〔５〕該トロンボモジュリンが、配列番号５もしくは配列番号７のそれぞれにおける第１９〜４８０位の配列を有するペプチド、上記配列の相同変異配列を有しトロンボモジュリン活性を有するペプチド、又はそれらの混合物のいずれかである前記〔１〕、〔２〕、又は〔３−３〕のいずれかに記載の播種性血管内血液凝固症候群の治療及び／又は改善剤；
〔５−２〕該トロンボモジュリンが、配列番号５もしくは配列番号７のそれぞれにおける第１９〜４８０位の配列を有するペプチド、又は上記配列の相同変異配列を有しトロンボモジュリン活性を有するペプチドである前記〔１〕、〔２〕、又は〔３−３〕のいずれかに記載の播種性血管内血液凝固症候群の治療及び／又は改善剤；
〔５−３〕該トロンボモジュリンが、配列番号５もしくは配列番号７のそれぞれにおける第１９〜４８０位の配列を有するペプチドである前記〔１〕、〔２〕、又は〔３−３〕のいずれかに記載の播種性血管内血液凝固症候群の治療及び／又は改善剤；
〔５−４〕該トロンボモジュリンが、配列番号５もしくは配列番号７のそれぞれにおける第１９〜４８０位もしくは第１７〜４８０位の配列を有するペプチド、上記配列の相同変異配列を有しトロンボモジュリン活性を有するペプチド、又はそれらの混合物のいずれかである前記〔１〕、〔２〕、又は〔３−３〕のいずれかに記載の播種性血管内血液凝固症候群の治療及び／又は改善剤；
〔５−５〕該トロンボモジュリンが、配列番号５もしくは配列番号７のそれぞれにおける第１９〜４８０位もしくは第１７〜４８０位の配列を有するペプチド又はそれらの混合物である前記〔１〕、〔２〕、又は〔３−３〕のいずれかに記載の播種性血管内血液凝固症候群の治療及び／又は改善剤；
〔５−６〕該トロンボモジュリンが、配列番号５における第１９〜４８０位もしくは第１７〜４８０位の配列を有するペプチド又はそれらの混合物である前記〔１〕、〔２〕、又は〔３−３〕のいずれかに記載の播種性血管内血液凝固症候群の治療及び／又は改善剤；
〔５−７〕該トロンボモジュリンが、配列番号７における第１９〜４８０位もしくは第１７〜４８０位の配列を有するペプチド又はそれらの混合物である前記〔１〕、〔２〕、又は〔３−３〕のいずれかにに記載の播種性血管内血液凝固症候群の治療及び／又は改善剤；
〔５−８〕該トロンボモジュリンが、配列番号５における第１９〜４８０位もしくは第１７〜４８０位の配列からなるペプチド又はそれらの混合物である前記〔１〕、〔２〕、又は〔３−３〕のいずれかに記載の播種性血管内血液凝固症候群の治療及び／又は改善剤；
〔５−９〕該トロンボモジュリンが、配列番号７における第１９〜４８０位もしくは第１７〜４８０位の配列からなるペプチド又はそれらの混合物である前記〔１〕、〔２〕、又は〔３−３〕のいずれかに記載の播種性血管内血液凝固症候群の治療及び／又は改善剤；【００１５】
〔６〕該トロンボモジュリンが、配列番号９もしくは配列番号１１のそれぞれにおける第１９〜５１６位の配列を有するペプチド、前記ペプチドのアミノ酸配列の１つ又は複数のアミノ酸が置換、欠失、又は付加されたアミノ酸配列を有しトロンボモジュリン活性を有するペプチド、又はそれらの混合物のいずれかである前記〔１〕、〔２〕、又は〔３−４〕のいずれかに記載の播種性血管内血液凝固症候群の治療及び／又は改善剤；
〔６−２〕該トロンボモジュリンが、配列番号９もしくは配列番号１１のそれぞれにおける第１９〜５１６位の配列を有するペプチド、又は前記ペプチドのアミノ酸配列の１つ又は複数のアミノ酸が置換、欠失、又は付加されたアミノ酸配列を有しトロンボモジュリン活性を有するペプチドである前記〔１〕、〔２〕、又は〔３−４〕のいずれかに記載の播種性血管内血液凝固症候群の治療及び／又は改善剤；
〔６−３〕該トロンボモジュリンが、配列番号９もしくは配列番号１１のそれぞれにおける第１９〜５１６位の配列を有するペプチドである前記〔１〕、〔２〕、又は〔３−４〕のいずれかに記載の播種性血管内血液凝固症候群の治療及び／又は改善剤；
〔６−４〕該トロンボモジュリンが、配列番号９もしくは配列番号１１のそれぞれにおける第１９〜５１６位、第１９〜５１５位、第１７〜５１６位、もしくは第１７〜５１５位の配列を有するペプチド、前記ペプチドのアミノ酸配列の１つ又は複数のアミノ酸が置換、欠失、又は付加されたアミノ酸配列を有しトロンボモジュリン活性を有するペプチド、又はそれらの混合物である前記〔１〕、〔２〕、又は〔３−４〕のいずれかに記載の播種性血管内血液凝固症候群の治療及び／又は改善剤；
〔６−５〕該トロンボモジュリンが、配列番号９もしくは配列番号１１のそれぞれにおける第１９〜５１６位、第１９〜５１５位、第１７〜５１６位、もしくは第１７〜５１５位の配列を有するペプチド、又はそれらの混合物である前記〔１〕、〔２〕、又は〔３−４〕のいずれかに記載の播種性血管内血液凝固症候群の治療及び／又は改善剤；
〔６−６〕該トロンボモジュリンが、配列番号９における第１９〜５１６位、第１９〜５１５位、第１７〜５１６位、もしくは第１７〜５１５位の配列を有するペプチド、又はそれらの混合物である前記〔１〕、〔２〕、又は〔３−４〕のいずれかに記載の播種性血管内血液凝固症候群の治療及び／又は改善剤；
〔６−７〕該トロンボモジュリンが、配列番号１１における第１９〜５１６位、第１９〜５１５位、第１７〜５１６位、もしくは第１７〜５１５位の配列を有するペプチド、又はそれらの混合物である前記〔１〕、〔２〕、又は〔３−４〕のいずれかに記載の播種性血管内血液凝固症候群の治療及び／又は改善剤；
〔６−８〕該トロンボモジュリンが、配列番号９における第１９〜５１６位、第１９〜５１５位、第１７〜５１６位、もしくは第１７〜５１５位の配列からなるペプチド、又はそれらの混合物である前記〔１〕、〔２〕、又は〔３−４〕のいずれかに記載の播種性血管内血液凝固症候群の治療及び／又は改善剤；
〔６−９〕該トロンボモジュリンが、配列番号９における第１９〜５１６位、第１９〜５１５位、第１７〜５１６位、もしくは第１７〜５１５位の配列からなるペプチドである前記〔１〕、〔２〕、又は〔３−４〕のいずれかに記載の播種性血管内血液凝固症候群の治療及び／又は改善剤；
〔６−１０〕該トロンボモジュリンが、配列番号１１における第１９〜５１６位、第１９〜５１５位、第１７〜５１６位、もしくは第１７〜５１５位の配列からなるペプチド、又はそれらの混合物である前記〔１〕、〔２〕、又は〔３−４〕のいずれかに記載の播種性血管内血液凝固症候群の治療及び／又は改善剤；
〔６−１１〕該トロンボモジュリンが、配列番号１１における第１９〜５１６位、第１９〜５１５位、第１７〜５１６位、もしくは第１７〜５１５位の配列からなるペプチドである前記〔１〕、〔２〕、又は〔３−４〕のいずれかに記載の播種性血管内血液凝固症候群の治療及び／又は改善剤；【００１６】
〔７〕播種性血管内血液凝固症候群患者が、血漿中のアンチトロンビン活性値が４０％以下の患者である前記〔１〕〜〔６−１１〕のいずれかに記載の播種性血管内血液凝固症候群の治療及び／又は改善剤；【００１７】
なお、上記〔１〕〜〔６−１１〕のように引用する項番号が範囲で示され、その範囲内に〔６−２〕等の枝番号を有する項が配置されている場合には、〔６−２〕等の枝番号を有する項も引用されることを意味する。以下においても同様である。【００１８】
〔８〕播種性血管内血液凝固症候群の治療及び／又は改善剤が非経口投与剤である前記〔１〕〜〔７〕のいずれかに記載の播種性血管内血液凝固症候群の治療及び／又は改善剤；
〔９〕播種性血管内血液凝固症候群の治療及び／又は改善剤が静脈内投与剤である前記〔１〕〜〔８〕のいずれかに記載の播種性血管内血液凝固症候群の治療及び／又は改善剤；
〔１０〕一日あたり０．０２〜０．０８ｍｇ／ｋｇ投与量を４時間以内で持続点滴静注することを特徴とする前記〔１〕〜〔９〕のいずれかに記載の播種性血管内血液凝固症候群の治療及び／又は改善剤；【００１９】
〔１１〕アンチトロンビンと組み合わされて投与されないことを特徴とする前記〔１〕〜〔１０〕のいずれかに記載の播種性血管内血液凝固症候群の治療及び／又は改善剤；
〔１２〕播種性血管内血液凝固症候群が造血器悪性腫瘍由来又は感染症由来播種性血管内血液凝固症候群である前記〔１〕〜〔１１〕のいずれかに記載の播種性血管内血液凝固症候群の治療及び／又は改善剤；
〔１２−１〕播種性血管内血液凝固症候群が造血器悪性腫瘍由来播種性血管内血液凝固症候群である前記〔１〕〜〔１１〕のいずれかに記載の播種性血管内血液凝固症候群の治療及び／又は改善剤；
〔１２−２〕播種性血管内血液凝固症候群が感染症由来播種性血管内血液凝固症候群である前記〔１〕〜〔１１〕のいずれかに記載の播種性血管内血液凝固症候群の治療及び／又は改善剤；【００２０】
〔１２−３〕播種性血管内血液凝固症候群を患うヒト患者の死亡の可能性を減少させるための薬剤であって、トロンボモジュリンを有効成分とし、該薬剤が、血漿中アンチトロンビン活性値が５０％未満である播種性血管内血液凝固症候群患者に投与されるための該薬剤；
〔１２−４〕トロンボモジュリンが、前記〔１〕〜〔６−１１〕のいずれかに記載のペプチドである、前記〔１２−３〕に記載の薬剤；
〔１２−５〕前記〔１２−３〕に記載の薬剤であって、前記〔１〕〜〔１２−２〕のいずれかに記載の特徴を有する該薬剤；
〔１３〕トロンボモジュリンを投与すべき播種性血管内血液凝固症候群患者を選択する方法であって、播種性血管内血液凝固症候群患者の血漿中のアンチトロンビン活性値を測定しそのアンチトロンビン活性値が５０％未満である播種性血管内血液凝固症候群患者を選択し、トロンボモジュリンを投与すべき播種性血管内血液凝固症候群患者であると判断することを含む、該選択方法；
〔１３−２〕トロンボモジュリンが、前記〔１〕〜〔６−１１〕のいずれかに記載のペプチドである、前記〔１３〕に記載のトロンボモジュリンを投与すべき播種性血管内血液凝固症候群患者を選択する方法；
〔１３−３〕トロンボモジュリンを有効成分とする薬剤であって、該薬剤が、血漿中のアンチトロンビン活性値を測定した後に播種性血管内血液凝固症候群患者に投与されるための播種性血管内血液凝固症候群の治療及び／又は改善剤；
〔１３−４〕トロンボモジュリンを有効成分とする薬剤であって、該薬剤が、血漿中のアンチトロンビン活性値を測定し、そのアンチトロンビン活性値が５０％未満である場合に播種性血管内血液凝固症候群患者に投与されるための播種性血管内血液凝固症候群の治療及び／又は改善剤；【００２１】
〔１４〕血漿中のアンチトロンビン活性値が５０％未満である播種性血管内血液凝固症候群患者にトロンボモジュリンを投与することを含む、播種性血管内血液凝固症候群の治療及び／又は改善方法；
〔１５〕該トロンボモジュリンが可溶性トロンボモジュリンである前記〔１４〕に記載の方法；
〔１６〕該トロンボモジュリンが、配列番号１、３、５、７、９又は配列番号１１に記載のアミノ酸配列をコードするＤＮＡを宿主細胞にトランスフェクトして調製された形質転換細胞により取得されるペプチドである、前記〔１４〕又は〔１５〕に記載の方法；
〔１６−２〕該トロンボモジュリンが、配列番号１又は配列番号３に記載のアミノ酸配列をコードするＤＮＡを宿主細胞にトランスフェクトして調製された形質転換細胞により取得されるペプチドである、前記〔１４〕又は〔１５〕に記載の方法；
〔１６−３〕該トロンボモジュリンが、配列番号５又は配列番号７に記載のアミノ酸配列をコードするＤＮＡを宿主細胞にトランスフェクトして調製された形質転換細胞により取得されるペプチドである、前記〔１４〕又は〔１５〕に記載の方法；
〔１６−４〕該トロンボモジュリンが、配列番号９又は配列番号１１に記載のアミノ酸配列をコードするＤＮＡを宿主細胞にトランスフェクトして調製された形質転換細胞により取得されるペプチドである、前記〔１４〕又は〔１５〕に記載の方法；【００２２】
〔１７〕該トロンボモジュリンが、配列番号１もしくは配列番号３のそれぞれにおける第１９〜１３２位の配列を有するペプチド、上記配列の相同変異配列を有しトロンボモジュリン活性を有するペプチド、又はそれらの混合物のいずれかである前記〔１４〕、〔１５〕、又は〔１６−２〕のいずれかに記載の方法；
〔１７−２〕該トロンボモジュリンが、配列番号１もしくは配列番号３のそれぞれにおける第１９〜１３２位の配列を有するペプチド、又は上記配列の相同変異配列を有しトロンボモジュリン活性を有するペプチドである前記〔１４〕、〔１５〕、又は〔１６−２〕のいずれかに記載の方法；
〔１７−３〕該トロンボモジュリンが、配列番号１もしくは配列番号３のそれぞれにおける第１９〜１３２位の配列を有するペプチドである前記〔１４〕、〔１５〕、又は〔１６−２〕のいずれかに記載の方法；
〔１７−４〕該トロンボモジュリンが、配列番号１もしくは配列番号３のそれぞれにおける第１９〜１３２位もしくは第１７〜１３２位の配列を有するペプチド、上記配列の相同変異配列を有しトロンボモジュリン活性を有するペプチド、又はそれらの混合物のいずれかである前記〔１４〕、〔１５〕、又は〔１６−２〕のいずれかに記載の方法；
〔１７−５〕該トロンボモジュリンが、配列番号１もしくは配列番号３のそれぞれにおける第１９〜１３２位もしくは第１７〜１３２位の配列を有するペプチド、又はそれらの混合物である前記〔１４〕、〔１５〕、又は〔１６−２〕のいずれかに記載の方法；
〔１７−６〕該トロンボモジュリンが、配列番号１における第１９〜１３２位もしくは第１７〜１３２位の配列を有するペプチド、又はそれらの混合物である前記〔１４〕、〔１５〕、又は〔１６−２〕のいずれかに記載の方法；
〔１７−７〕該トロンボモジュリンが、配列番号３における第１９〜１３２位もしくは第１７〜１３２位の配列を有するペプチド、又はそれらの混合物である前記〔１４〕、〔１５〕、又は〔１６−２〕のいずれかに記載の方法；
〔１７−８〕該トロンボモジュリンが、配列番号１における第１９〜１３２もしくは第１７〜１３２位の配列からなるペプチド又はそれらの混合物である前記〔１４〕、〔１５〕、又は〔１６−２〕のいずれかに記載の方法；
〔１７−９〕該トロンボモジュリンが、配列番号３における第１９〜１３２位もしくは第１７〜１３２位の配列からなるペプチド又はそれらの混合物である前記〔１４〕、〔１５〕、又は〔１６−２〕のいずれかに記載の方法；【００２３】
〔１８〕該トロンボモジュリンが、配列番号５もしくは配列番号７のそれぞれにおける第１９〜４８０位の配列を有するペプチド、上記配列の相同変異配列を有しトロンボモジュリン活性を有するペプチド、又はそれらの混合物のいずれかである前記〔１４〕、〔１５〕、又は〔１６−３〕のいずれかに記載の方法；
〔１８−２〕該トロンボモジュリンが、配列番号５もしくは配列番号７のそれぞれにおける第１９〜４８０位の配列を有するペプチド、又は上記配列の相同変異配列を有しトロンボモジュリン活性を有するペプチドである前記〔１４〕、〔１５〕、又は〔１６−３〕のいずれかに記載の方法；
〔１８−３〕該トロンボモジュリンが、配列番号５もしくは配列番号７のそれぞれにおける第１９〜４８０位の配列を有するペプチドである前記〔１４〕、〔１５〕、又は〔１６−３〕のいずれかに記載の方法；
〔１８−４〕該トロンボモジュリンが、配列番号５もしくは配列番号７のそれぞれにおける第１９〜４８０位もしくは第１７〜４８０位の配列を有するペプチド、上記配列の相同変異配列を有しトロンボモジュリン活性を有するペプチド、又はそれらの混合物のいずれかである前記〔１４〕、〔１５〕、又は〔１６−３〕のいずれかに記載の方法；
〔１８−５〕該トロンボモジュリンが、配列番号５もしくは配列番号７のそれぞれにおける第１９〜４８０位もしくは第１７〜４８０位の配列を有するペプチド、又はそれらの混合物である前記〔１４〕、〔１５〕、又は〔１６−３〕のいずれかに記載の方法；
〔１８−６〕該トロンボモジュリンが、配列番号５における第１９〜４８０位もしくは第１７〜４８０位の配列を有するペプチド、又はそれらの混合物である前記〔１４〕、〔１５〕、又は〔１６−３〕のいずれかに記載の方法；
〔１８−７〕該トロンボモジュリンが、配列番号７における第１９〜４８０位もしくは第１７〜４８０位の配列を有するペプチド、又はそれらの混合物である前記〔１４〕、〔１５〕、又は〔１６−３〕のいずれかに記載の方法；
〔１８−８〕該トロンボモジュリンが、配列番号５における第１９〜４８０もしくは第１７〜４８０位の配列からなるペプチド又はそれらの混合物である前記〔１４〕、〔１５〕、又は〔１６−３〕のいずれかに記載の方法；
〔１８−９〕該トロンボモジュリンが、配列番号５における第１９〜４８０位もしくは第１７〜４８０位の配列からなるペプチド又はそれらの混合物である前記〔１４〕、〔１５〕、又は〔１６−３〕のいずれかに記載の方法；【００２４】
〔１９〕該トロンボモジュリンが、配列番号９もしくは配列番号１１のそれぞれにおける第１９〜５１６位の配列を有するペプチド、上記配列の相同変異配列を有しトロンボモジュリン活性を有するペプチド、又はそれらの混合物のいずれかである前記〔１４〕、〔１５〕、又は〔１６−４〕のいずれかに記載の方法；
〔１９−２〕該トロンボモジュリンが、配列番号９もしくは配列番号１１のそれぞれにおける第１９〜５１６位の配列を有するペプチド、又は上記配列の相同変異配列を有しトロンボモジュリン活性を有するペプチドである前記〔１４〕、〔１５〕、又は〔１６−４〕のいずれかに記載の方法；
〔１９−３〕該トロンボモジュリンが、配列番号９もしくは配列番号１１のそれぞれにおける第１９〜５１６位の配列を有するペプチドである前記〔１４〕、〔１５〕、又は〔１６−４〕のいずれかに記載の方法；
〔１９−４〕該トロンボモジュリンが、配列番号９もしくは配列番号１１のそれぞれにおける第１９〜５１６位、第１９〜５１５位、第１７〜５１６位、もしくは第１７〜５１５位の配列を有するペプチド、上記配列の相同変異配列を有しトロンボモジュリン活性を有するペプチド、又はそれらの混合物のいずれかである前記〔１４〕、〔１５〕、又は〔１６−４〕のいずれかに記載の方法；
〔１９−５〕該トロンボモジュリンが、配列番号９もしくは配列番号１１のそれぞれにおける第１９〜５１６位、第１９〜５１５位、第１７〜５１６位、もしくは第１７〜５１５位の配列を有するペプチド、又はそれらの混合物である前記〔１４〕、〔１５〕、又は〔１６−４〕のいずれかに記載の方法；
〔１９−６〕該トロンボモジュリンが、配列番号９における第１９〜５１６位、第１９〜５１５位、第１７〜５１６位、もしくは第１７〜５１５位の配列を有するペプチド、又はそれらの混合物である前記〔１４〕、〔１５〕、又は〔１６−４〕のいずれかに記載の方法；
〔１９−７〕該トロンボモジュリンが、配列番号１１における第１９〜５１６位、第１９〜５１５位、第１７〜５１６位、もしくは第１７〜５１５位の配列を有するペプチド、又はそれらの混合物である前記〔１４〕、〔１５〕、又は〔１６−４〕のいずれかに記載の方法；
〔１９−８〕該トロンボモジュリンが、配列番号９における第１９〜５１６位、第１９〜５１５位、第１７〜５１６位、もしくは第１７〜５１５位の配列からなるペプチド又はそれらの混合物である前記〔１４〕、〔１５〕、又は〔１６−４〕のいずれかに記載の方法；
〔１９−９〕該トロンボモジュリンが、配列番号９における第１９〜５１６位、第１９〜５１５位、第１７〜５１６位、もしくは第１７〜５１５位の配列からなるペプチドである前記〔１４〕、〔１５〕、又は〔１６−４〕のいずれかに記載の方法；
〔１９−１０〕該トロンボモジュリンが、配列番号１１における第１９〜５１６位、第１９〜５１５位、第１７〜５１６位、もしくは第１７〜５１５位の配列からなるペプチド又はそれらの混合物である前記〔１４〕、〔１５〕、又は〔１６−４〕のいずれかに記載の方法；
〔１９−１１〕該トロンボモジュリンが、配列番号１１における第１９〜５１６位、第１９〜５１５位、第１７〜５１６位、もしくは第１７〜５１５位の配列からなるペプチドである前記〔１４〕、〔１５〕、又は〔１６−４〕のいずれかに記載の方法；【００２５】
〔２０〕血漿中のアンチトロンビン活性値が４０％以下である播種性血管内血液凝固症候群患者にトロンボモジュリンを投与する前記〔１４〕〜〔１９−１１〕のいずれかに記載の方法；【００２６】
〔２１〕トロンボモジュリンを非経口的に投与する前記〔１４〕〜〔２０〕のいずれかに記載の方法；
〔２２〕トロンボモジュリンを静脈内投与する前記〔１４〕〜〔２１〕のいずれかに記載の方法；
〔２３〕トロンボモジュリンを一日あたり０．０２〜０．０８ｍｇ／ｋｇ投与量を４時間以内で持続点滴静注する前記〔１４〕〜〔２２〕のいずれかに記載の方法；【００２７】
〔２４〕アンチトロンビンと組み合わせて投与しないことを特徴とする前記〔１４〕〜〔２３〕のいずれかに記載の方法；
〔２５〕播種性血管内血液凝固症候群が造血器悪性腫瘍由来又は感染症由来播種性血管内血液凝固症候群である前記〔１４〕〜〔２４〕のいずれかに記載の方法；
〔２５−１〕播種性血管内血液凝固症候群が造血器悪性腫瘍由来播種性血管内血液凝固症候群である前記〔１４〕〜〔２４〕のいずれかに記載の方法；
〔２５−２〕播種性血管内血液凝固症候群が感染症由来播種性血管内血液凝固症候群である前記〔１４〕〜〔２４〕のいずれかに記載の方法。
〔２６〕播種性血管内血液凝固症候群を患うヒト患者の死亡の可能性を減少させる方法であって、血漿中アンチトロンビン活性値が５０％未満である播種性血管内血液凝固症候群患者にトロンボモジュリンを投与することを含む該方法；
〔２６−２〕トロンボモジュリンが、前記〔１〕〜〔６−１１〕のいずれかに記載のペプチドである、前記〔２６〕に記載の方法；
〔２６−３〕前記〔２６〕に記載の投与方法であって、前記〔１〕〜〔２５−２〕のいずれかに記載の特徴を有する該投与方法。
〔２７〕血漿中のアンチトロンビン活性値を測定した後にトロンボモジュリンを播種性血管内血液凝固症候群患者に投与することを含む、播種性血管内血液凝固症候群の治療及び／又は改善方法；
〔２７−２〕血漿中のアンチトロンビン活性値を測定し、そのアンチトロンビン活性値が５０％未満である場合にトロンボモジュリンを播種性血管内血液凝固症候群患者に投与することを含む、播種性血管内血液凝固症候群の治療及び／又は改善方法；
【発明の効果】
【００２８】
本発明のトロンボモジュリン含有製剤を用いることにより、血漿中のＡＴ活性値が５０％未満であるＤＩＣ患者の症状を、好ましくはＡＴと組み合わせて用いることなく効果的に治療及び／又は改善することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２９】
以下、本発明を具体的に説明する。
本発明により、トロンボモジュリンを有効成分とする薬剤であって、該薬剤が、血漿中のアンチトロンビン活性値が５０％未満である播種性血管内血液凝固症候群患者に投与される播種性血管内血液凝固症候群（ＤＩＣ）の治療及び／又は改善剤が提供される。
即ち、本発明の播種性血管内血液凝固症候群の治療及び／又は改善剤は、血漿中のアンチトロンビン活性値が５０％未満である播種性血管内血液凝固症候群患者における播種性血管内血液凝固症候群の治療及び／又は改善剤である。
また同様に、播種性血管内血液凝固症候群を患うヒト患者の死亡の可能性を減少させるための薬剤が提供される。【００３０】
ＤＩＣの治療及び／又は改善としては、例えば「ＤＩＣによる患者の死亡を防ぐこと」が好ましい効果のひとつとして挙げられるし、また「ＤＩＣにより患者の全身状態が悪化するのを防ぐこと」も好ましい効果として挙げられる。
ＤＩＣは、様々な疾患での組織障害によって血管凝固促進物質が大量に流出して凝固系の働きが極度に亢進し、小さな血栓が全身の血管に発生（微小血栓形成）して、小さな血管を詰まらせると共に、それにより出血の制御に必要な血小板や凝固因子が消費されて不足する結果、止血異常を起こす疾患あるいは症候群である。具体的には血管内フィブリン形成により、消費性凝固線溶障害による出血症状や微小血栓形成による臓器不全症状が認められる。ＤＩＣは、播種性血管内凝固症候群又は汎発性血管内凝固症候群と呼ばれることもある。【００３１】
造血器悪性腫瘍・固形癌といった悪性腫瘍を基礎疾患においては、腫瘍細胞に発現している組織因子が血液と接触することにより、血液凝固系が過度に活性化されＤＩＣが引き起こされる。【００３２】
また、ＤＩＣは、感染性と非感染性を問わず重篤な臨床的侵襲によって起こる全身性炎症反応症候群（以下、ＳＩＲＳと略すことがある）の延長上に引き起こされることもある。【００３３】
ＳＩＲＳとは、重篤な組織傷害や重症感染症に伴う炎症性サイトカイン産生亢進により引き起こされる病態であり、この反応が過剰になると好中球の活性化や血管内皮細胞の活性化によりＤＩＣが引き起こされる。すなわちＤＩＣ準備段階（以下、ｐｒｅＤＩＣと略すことがある）であり、本発明のＤＩＣ治療及び／又は改善剤はｐｒｅＤＩＣにおいても効果的に使用することができ、本発明におけるＤＩＣの治療及び／又は改善剤にはｐｒｅＤＩＣの治療及び／又は改善も含まれる。【００３４】
ＤＩＣの臨床症状は基礎病態の種類に応じて様々であるが、ＤＩＣの診断方法としては出血症状、臓器症状の観察に加え、次に示すいくつかの検査値によりＤＩＣスコアをつけ、ある一定以上のスコアに達した場合にＤＩＣであると診断することが好ましい。検査値としては、例えば、血中の血小板数、プラスミンにより分解されたフィブリン並びにフィブリノゲン分解産物（以下、ＦＤＰと略すことがある）濃度、Ｄ−ダイマー濃度、フィブリノゲン濃度、又はプロトロンビン時間等が挙げられる。また、ＤＩＣスコアをつけず、血小板低下、Ｄ−ダイマー、あるいはＦＤＰ濃度上昇等からｐｒｅＤＩＣと診断することもできる（中川雅夫．「播種性血管内凝固（ＤＩＣ）診断基準の利用に関する調査報告」厚生省特定疾患血液凝固異常症調査研究班, 平成１１年度研究報告書．１９９９： ６５−７２、出口克巳．「ＤＩＣ早期治療開始基準に関する試案について」厚生省特定疾患血液凝固異常症調査研究班, 平成１１年度研究報告書．１９９９：７３−７７、中川克、辻肇．「ＤＩＣ診断の現状−アンケート調査結果報告」臨床血液．１９９９；４０：３６２−３６４）。さらには、血中の可溶性フィブリン濃度あるいはトロンビン−アンチトロンビン複合体濃度を測定することによりｐｒｅＤＩＣと診断することも可能である。ＤＩＣスコアをつける診断基準としては、例えば、Ｏｖｅｒｔ ＤＩＣの診断基準（Taylor FBら, Thromb Haemost 2001: 86: 1327-1330）、急性期ＤＩＣ診断基準（Gando Sら、Clin Appl Thromb  Hemost 2005:  11(1): 71-76）、又は厚生省のＤＩＣ診断基準（青木延雄、長谷川淳：ＤＩＣ診断基準の「診断のための補助的検査成績、所見」の項の改訂について  厚生省特定疾患血液凝固異常症調査研究班  平成４年度研究報告書  １９８８：ｐ３７−４１）が具体的に例示される。【００３５】
ＤＩＣの診断方法としては上記の診断方法であれば特に限定されないが、ＤＩＣスコアをつける診断方法が好ましい。また、治療効果、医療費、又は患者のＱＯＬの観点からＤＩＣに対する早期からの治療が必要な場合の場合には、ｐｒｅＤＩＣ診断が好ましい別の態様もある。【００３６】
ＤＩＣスコアをつける診断方法としては、上記の診断方法の他、類似のＤＩＣスコアをつける診断方法も可能である。【００３７】
本発明のＤＩＣ治療及び／又は改善剤の適用は、ＤＩＣの種類に特に限定されることはないが、造血器悪性腫瘍由来ＤＩＣ又は感染症由来ＤＩＣへの適用がより好ましく、感染症由来ＤＩＣへの適用がさらに好ましい。感染症由来ＤＩＣの具体例としては、敗血症由来ＤＩＣが好ましい例として挙げられる。また好ましい別の態様として、造血器悪性腫瘍由来ＤＩＣへの適用も挙げられる。【００３８】
本発明の治療及び／又は改善剤は敗血症に対しても使用できる場合がある。敗血症は、感染性の重篤な臨床的侵襲によって起こるＳＩＲＳとも位置付けられ、感染症を原因疾患とするＤＩＣと密接な関係にある。敗血症においてＤＩＣを併発することはしばしばあり、そのようなＤＩＣを併発した敗血症患者に対しても本発明の薬剤が使用できる場合がある。すなわち、本発明においては、ＤＩＣ又は敗血症のいずれか一方、又は両方を患った患者、又は患っていることが疑われる患者に対して使用することができる場合がある。【００３９】
敗血症は、感染症、悪性腫瘍、肝硬変、腎不全、糖尿病、異常分娩といったような疾病や、留置カテーテル、輸液器具、透析、気管切開といったようなケガや病気に対する治療が原因となって、感染巣から絶えずまたは断続的に微生物が血液に侵入してくる重傷全身性感染症として知られている。症状が進行すると、敗血性ショック、すなわち急激な血圧降下、末梢循環不全によって全身性のショックが誘発され、肺、腎臓、肝臓、心臓、消化管、さらには中枢神経系など重要臓器の障害により死亡する。また、敗血症に伴う合併症として、ＤＩＣや、好中球の活性化と肺実質への遊走集積に伴う肺毛細障害により、肺間質の浮腫、出血や急性呼吸不全を特徴とする成人呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）が誘発され、予後は非常に悪くなる。【００４０】
敗血症の診断方法としてはいくつかの方法がある。それらはＬｅｖｙ  Ｍ．ら、Ｃｒｉｔ．Ｃａｒｅ．Ｍｅｄ．、３１：１２５０−１２５６にまとめられている。例えば、医師によりその診断を行う方法、あるいは検査値等を用いる方法がある。後者の例として、１）体温＞３８℃又は＜３６℃、２）心拍数＞９０／分、３）呼吸数＞２０／分又は人工呼吸を必要とする、４）白血球数＞１２，０００／ｍｍ3または＜４，０００／ｍｍ3、又は幼弱球＞１０％、の４項目の内、２項目を満たす場合ＳＩＲＳと診断し、微生物が病因に証明されたかまたは疑われたＳＩＲＳを敗血症と診断する方法がある［ＬａＲｏｓａ  Ｓ．、Ｔｈｅ  Ｃｌｅｖｅｌａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃのホームページ］。これに近い方法がＭｅｍｂｅｒｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｏｌｌｅｇｅ  ｏｆ  Ｃｈｅｓｔ  Ｐｈｙｓｉｃｉａｎｓ／Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｏｆ  Ｃｒｉｔｉｃａｌ  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  Ｃｏｎｓｅｎｓｕｓ  Ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ：  Ｃｒｉｔ  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ、２０、８６４−８７４（１９９２）に記載されている。【００４１】
敗血症患者の状態としては、例えば菌血症、敗血症（septicemia）、全身性炎症反応症候群（ＳＩＲＳ）、敗血症（微生物が病因に証明されたか又は疑われたＳＩＲＳ）、重症敗血症、敗血症性ショック、難治性敗血症性ショック、又は多臓器機能障害（以下、ＭＯＤＳと呼ばれることがある）が例示される（ハリソン内科学  原著第１５版  １２４項  Ｐ８２８−８３３  株式会社メディカル・サイエンス・インターナショナル）。上記各状態は、本発明の治療及び／又は改善剤が効果的な症状として例示される。【００４２】
菌血症としては、血液培養陽性で証明される血液中の細菌の存在が確認される状態が例示される。
敗血症（septicemia）としては、血液中の微生物又は他の毒素の存在が確認される状態が例示される。
全身性炎症反応症候群（ＳＩＲＳ）としては、上記の通りＤＩＣ準備段階にある状態が例示される。【００４３】
重症敗血症としては、代謝性アシドーシス、急性脳症、乏尿、低酸素血症又は播種性血管内凝固などの臓器不全または低血圧の症状を１つ又は複数伴う敗血症が例示される。
敗血症性ショックとしては、低血圧（血圧９０ｍｍＨｇ以下又は通常の血圧より４０ｍｍＨｇ以下）で、補液による蘇生法にも反応せず、臓器不全を伴うものが例示される。
難治性敗血症性ショックとしては、敗血症性ショックが１時間以上持続し、補液昇圧剤に反応しないものが例示される。
多臓器機能障害（ＭＯＤＳ）としては、１臓器以上の機能不全があり、恒常性を保つため医学的介入を要するものが例示される。【００４４】
本発明のＤＩＣ治療及び／又は改善剤は、ＡＴ低下患者に効果的に使用することができる。ＡＴ低下患者とは、血漿中のＡＴ活性値が７０％以下と正常人に比べてＡＴ活性値が低下した状態にある患者をいう。ＡＴ低下患者としては、先天性ＡＴ欠乏患者又は後天性ＡＴ欠乏患者が例示される。先天性ＡＴ欠乏患者とは、生まれながらにしてＡＴ活性値が３５〜７０％程度と正常人より低値である患者であり、後天性ＡＴ欠乏患者とは、後天的にＡＴ活性値が７０％以下に低下した患者である。後天的にＡＴ活性値が低値となる原因としては、具体的には慢性肝不全等肝疾患、手術後、ショック、重症感染症、ネフローゼ症候群等腎疾患、炎症性腸疾患等の消化器疾患、ヘパリン等の薬剤性低下、高齢による低下、早産の新生児、糖尿病、ベーチェット病、又は栄養不良が例示される。もっとも、本発明においてはＡＴ低下患者であれば先天的であるか後天的であるかは特に限定されない。患者の人種は特に限定されないが、日本人が好ましい。【００４５】
その中でも、本発明のトロンボモジュリンを有効成分として含有するＤＩＣ治療及び／又は改善剤により、血漿中のＡＴ活性値が５０％未満である患者のＤＩＣの症状を効果的に治療及び／又は改善することができる。【００４６】
ＡＴ活性とはトロンビンまたは活性型Ｘ因子の凝固活性を中和する活性として定義され、ＡＴ活性値は、健康成人から得られた血漿（以下、正常血漿）で得られるＡＴ活性に対する相対値として示されることが一般的な例として挙げられる。使用する正常血漿としては当業者が通常使用する正常血漿であれば特に限定されることはないが、世界保健機関（ＷＨＯ）の生物学的検定法専門委員会（Ｅｘｐｅｒｔ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ ｏｎ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓｔａｎｄａｒｄｉｚａｔｉｏｎ（以下、ＥＣＢＳと略すことがある））によって確立され、英国国立生物学的製剤研究所（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｆｏｒ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓｔａｎｄａｒｄｓ ａｎｄ Ｃｏｎｔｒｏｌ（以下、ＮＩＢＳＣと略すことがある））が管理・配布する正常血漿の国際標準品（ＮＩＢＳＣ製）を用いることができる。また、ＮＩＢＳＣの国際標準品を用いてＡＴ活性が校正された市販の標準血漿（例えば、国際血栓止血学会の科学及び標準化委員会（Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ａｎｄ Ｓｔａｎｄａｒｄｉｚａｔｉｏｎ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ（以下、ＳＳＣと略すことがある）、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｏｎ Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ ａｎｄ Ｈａｅｍｏｓｔａｓｉｓ（以下、ＩＳＴＨと略すことがある）の標準血漿が挙げられる）を用いることも好ましい例として挙げられる。さらには、通常のＡＴ活性値測定キットに添付された正常血漿又はＡＴ活性値測定キット指定の正常血漿を用いることもできる。通常のＡＴ活性値測定キットに添付された正常血漿又はＡＴ活性値測定キット指定の正常血漿としては、正常血漿剤「第一」（第一化学薬品）が好ましい例として挙げられる。正常血漿を用いて測定した血漿検体のＡＴ活性値は、ＮＩＢＳＣの国際標準品の正常血漿を基準としたＡＴ活性値に換算することが好ましい場合がある。より好ましくは正常血漿剤「第一」（第一化学薬品）を基準としたＡＴ活性値に換算してＡＴ活性値を求めることができる。
正常血漿としてはＮＩＢＳＣの国際標準品を用いることが好ましい。また、ＮＩＢＳＣの国際標準品を用いてＡＴ活性が校正された市販の標準血漿を用いることが好ましい別の態様もある。正常血漿のより好ましい態様としては、正常血漿剤「第一」（第一化学薬品）が挙げられる。例えば、血漿中のＡＴ活性値が５０％であるという場合、上記正常血漿のＡＴ活性に対する割合が５０％であることを意味する。【００４７】
ＤＩＣの症状を効果的に治療及び／又は改善するためには、ＤＩＣ患者の血漿中のＡＴ活性値が５０％未満であれば特に限定されないが、上限としては４８％以下であることが好ましく、４６％以下であることがより好ましく、４４％以下であることがさらに好ましく、４２％以下であることが特に好ましく、４０％以下であることが最も好ましく、下限としては上述した測定方法の検出限界以上であれば特に限定されないが、０．１％以上が例示され、１０％以上であることが好ましく、１５％以上であることがより好ましく、２０％以上であることがさらに好ましく、２５％以上であることが特に好ましく、実施例における試験例１の患者群のＡＴ活性値からすれば３０％以上であることが最も好ましい。【００４８】
また、本発明によりトロンボモジュリンを有効成分とする薬剤であって、該薬剤が、血漿中のアンチトロンビン活性値を測定した後に播種性血管内血液凝固症候群患者に投与されるための播種性血管内血液凝固症候群の治療及び／又は改善剤が提供される。血漿中のアンチトロンビン活性値を測定した後に播種性血管内血液凝固症候群患者に投与されるものであれば本発明の治療及び／又は改善剤は特に限定されないが、測定したアンチトロンビン活性値が５０％未満である場合に播種性血管内血液凝固症候群患者に投与されるための播種性血管内血液凝固症候群の治療及び／又は改善剤であることが好ましい。このように血漿中のアンチトロンビン活性値を測定した後にトロンボモジュリンを播種性血管内血液凝固症候群患者に投与することは、薬剤の効果を十分に発揮させる上で好ましい。【００４９】
また、本発明のＤＩＣ治療及び／又は改善剤は、慢性肝不全等肝疾患、手術後、ショック、重度感染症等によりＡＴ低下を伴う患者への適用も可能である。【００５０】
本発明におけるトロンボモジュリンは、（１）トロンビンと選択的に結合して（２）トロンビンによるプロテインＣの活性化を促進する作用を有することが知られている。また、（３）トロンビンによる凝固時間を延長する作用、及び／又は（４）トロンビンによる血小板凝集を抑制する作用が通常認められることが好ましい。これらトロンボモジュリンの持つ作用をトロンボモジュリン活性と呼ぶことがある。【００５１】
トロンボモジュリン活性としては、上記（１）及び（２）の作用を有し、さらに上記（１）〜（４）の作用を全て備えていることが好ましい。【００５２】
トロンビンによるプロテインＣの活性化を促進する作用は、例えば、特開昭６４−６２１９号公報を初めとする各種の公知文献に明確に記載された試験方法によりプロテインＣの活性化を促進する作用の活性量やその有無を容易に確認できるものである。また、トロンビンによる凝固時間を延長する作用、及び／又はトロンビンによる血小板凝集を抑制する作用についても同様に容易に確認できる。【００５３】
本発明におけるトロンボモジュリンとしては、トロンボモジュリン活性を有していれば特に限定されないが、可溶性トロンボモジュリンであることが好ましい。可溶性トロンボモジュリンの溶解性の好ましい例示としては、水、例えば注射用蒸留水に対して（トリトンＸ−１００やポリドカノール等の界面活性剤の非存在下、通常は中性付近にて）、１ｍｇ／ｍＬ以上、または１０ｍｇ／ｍＬ以上が挙げられ、好ましくは１５ｍｇ／ｍＬ以上、または１７ｍｇ／ｍＬ以上が挙げられ、さらに好ましくは２０ｍｇ／ｍＬ以上、２５ｍｇ／ｍＬ以上、または３０ｍｇ／ｍＬ以上が例示され、特に好ましくは６０ｍｇ／ｍＬ以上が挙げられ、場合によっては、８０ｍｇ／ｍＬ以上、または１００ｍｇ／ｍＬ以上がそれぞれ挙げられる。可溶性トロンボモジュリンが溶解し得たか否かを判断するに当たっては、溶解した後に、例えば白色光源の直下、約１０００ルクスの明るさの位置で、肉眼で観察した場合に、澄明であって、明らかに認められるような程度の不溶性物質を含まないことが端的な指標となるものと理解される。また、濾過して残渣の有無を確認することもできる。【００５４】
本発明におけるトロンボモジュリンとしては、ヒト型のトロンボモジュリンにおいてトロンボモジュリン活性の中心部位として知られている配列番号１の第１９〜１３２位のアミノ酸配列を包含していることが好ましく、配列番号１の第１９〜１３２位のアミノ酸配列を包含していれば特に限定されない。該配列番号１の第１９〜１３２位のアミノ酸配列は、トロンビンによるプロテインＣの活性化を促進する作用、すなわちトロンボモジュリン活性を有する限り自然又は人工的に変異していてもよく、すなわち配列番号１の第１９〜１３２位のアミノ酸配列の１つ又は複数のアミノ酸が置換、欠失、付加していても良い。許容される変異の程度は、トロンボモジュリン活性を有すれば特に限定されないが、例えばアミノ酸配列として５０％以上の相同性が例示され、７０％以上の相同性が好ましく、８０％以上の相同性がより好ましく、９０％以上の相同性がさらに好ましく、９５％以上の相同性が特に好ましく、９８％以上の相同性が最も好ましい。これらのようなアミノ酸配列を相同変異配列という。これらの変異については後述の通り、通常の遺伝子操作技術を用いれば容易に取得可能である。【００５５】
配列番号３の配列は、配列番号１の配列の第１２５位のアミノ酸であるＶａｌがＡｌａに変異したものであるが、本発明におけるトロンボモジュリンとして、配列番号３の第１９〜１３２位のアミノ酸配列を包含していることも好ましい。【００５６】
このように本発明におけるトロンボモジュリンとしては、配列番号１もしくは配列番号３の第１９〜１３２位の配列、又はそれらの相同変異配列を少なくとも有し、少なくともトロンボモジュリン活性を有するペプチド配列を包含していれば特に限定されないが、配列番号１もしくは配列番号３のそれぞれにおける第１９〜１３２位もしくは第１７〜１３２位の配列からなるペプチド、又は上記配列の相同変異配列からなり少なくともトロンボモジュリン活性を有するペプチドが好ましい例として挙げられ、配列番号１もしくは配列番号３の第１９〜１３２位の配列からなるペプチドがより好ましい。また、配列番号１もしくは配列番号３のそれぞれにおける第１９〜１３２位もしくは第１７〜１３２位の相同変異配列からなり少なくともトロンボモジュリン活性を有するペプチドがより好ましい別の態様もある。【００５７】
また本発明におけるトロンボモジュリンの別の態様として、配列番号５の第１９〜４８０位のアミノ酸配列を包含していることが好ましく、配列番号５の第１９〜４８０位のアミノ酸配列を包含していれば特に限定されない。該配列番号５の第１９〜４８０位のアミノ酸配列は、トロンビンによるプロテインＣの活性化を促進する作用、すなわちトロンボモジュリン活性を有する限りその相同変異配列であってもよい。【００５８】
配列番号７の配列は、配列番号５の配列の第４７３位のアミノ酸であるＶａｌがＡｌａに変異したものであるが、本発明におけるトロンボモジュリンとして、配列番号７の第１９〜４８０位のアミノ酸配列を包含していることも好ましい。【００５９】
このように本発明におけるトロンボモジュリンとしては、配列番号５もしくは配列番号７の第１９〜４８０位の配列、又はそれらの相同変異配列を少なくとも有し、少なくともトロンボモジュリン活性を有するペプチド配列を包含していれば特に限定されないが、配列番号５もしくは配列番号７のそれぞれにおける第１９〜４８０位もしくは第１７〜４８０位の配列からなるペプチド、又は上記配列の相同変異配列からなり少なくともトロンボモジュリン活性を有するペプチドが好ましい例として挙げられ、配列番号５もしくは配列番号７の第１９〜４８０位の配列からなるペプチドがより好ましい。また、配列番号５もしくは配列番号７のそれぞれにおける第１９〜４８０位もしくは第１７〜４８０位の相同変異配列からなり少なくともトロンボモジュリン活性を有するペプチドがより好ましい別の態様もある。【００６０】
また本発明におけるトロンボモジュリンの別の態様として、配列番号９の第１９〜５１５位のアミノ酸配列を包含していることが好ましく、配列番号９の第１９〜５１５位のアミノ酸配列を包含していれば特に限定されない。該配列番号９の第１９〜５１５位のアミノ酸配列は、トロンビンによるプロテインＣの活性化を促進する作用、すなわちトロンボモジュリン活性を有する限りその相同変異配列であってもよい。
配列番号１１の配列は、配列番号９の配列の第４７３位のアミノ酸であるＶａｌがＡｌａに変異したものであるが、本発明におけるトロンボモジュリンとして、配列番号１１の第１９〜５１５位のアミノ酸配列を包含していることも好ましい。
このように本発明におけるトロンボモジュリンとしては、配列番号９もしくは配列番号１１の第１９〜５１５位の配列、又はそれらの相同変異配列を少なくとも有し、少なくともトロンボモジュリン活性を有するペプチド配列を包含していれば特に限定されないが、配列番号９もしくは配列番号１１のそれぞれにおける第１９〜５１６位、第１９〜５１５位、第１７〜５１６位、もしくは第１７〜５１５位の配列からなるペプチド、又は上記配列の相同変異配列からなり少なくともトロンボモジュリン活性を有するペプチドがより好ましい例として挙げられ、配列番号９における第１９〜５１６位、第１９〜５１５位、第１７〜５１６位、もしくは第１７〜５１５位の配列からなるペプチドが特に好ましい。これらの混合物も好ましい例として挙げられる。また、配列番号１１のそれぞれにおける第１９〜５１６位、第１９〜５１５位、第１７〜５１６位、もしくは第１７〜５１５位の配列からなるペプチドが特に好ましい別の態様もある。これらの混合物も好ましい例として挙げられる。さらにそれらの相同変異配列からなり、少なくともトロンボモジュリン活性を有するぺプチドも好ましい例として挙げられる。【００６１】
相同変異配列を有するペプチドとは、上述した通りであるが、対象とするペプチドのアミノ酸配列中１つ以上、すなわち１つ又は複数のアミノ酸、さらに好ましくは数個（例えば１から２０個、好ましくは１から１０個、より好ましくは１から５個、特に好ましくは１から３個）のアミノ酸が置換、欠失、付加していてもよいペプチドをも意味する。許容される変異の程度は、トロンボモジュリン活性を有すれば特に限定されないが、例えばアミノ酸配列として５０％以上の相同性が例示され、７０％以上の相同性が好ましく、８０％以上の相同性がより好ましく、９０％以上の相同性がさらに好ましく、９５％以上の相同性が特に好ましく、９８％以上の相同性が最も好ましい。【００６２】
さらに、本発明におけるトロンボモジュリンとしては、特開昭６４−６２１９における配列番号１４の配列（４６２アミノ酸残基）からなるペプチド、配列番号８の配列（２７２アミノ酸残基）からなるペプチド、又は配列番号６の配列（２３６アミノ酸残基）からなるペプチドも好ましい例として挙げられる。【００６３】
本発明におけるトロンボモジュリンとしては配列番号１又は配列番号３の第１９〜１３２位のアミノ酸配列を少なくとも有しているペプチドであれば特に限定されないが、その中でも配列番号５又は配列番号７の第１９〜４８０位のアミノ酸配列を少なくとも有しているペプチドであることが好ましく、配列番号９もしくは配列番号１１の第１９〜５１５位のアミノ酸配列を少なくとも有しているペプチドであることがより好ましい。配列番号９もしくは配列番号１１の第１９〜５１５位のアミノ酸配列を少なくとも有しているペプチドとしては、配列番号９もしくは配列番号１１のそれぞれにおける第１９〜５１６位、第１９〜５１５位、第１７〜５１６位、もしくは第１７〜５１５位の配列からなるペプチドがより好ましい例として挙げられる。また、配列番号９もしくは配列番号１１のそれぞれにおける第１９〜５１６位、第１９〜５１５位、第１７〜５１６位、もしくは第１７〜５１５位の配列からなるペプチドの、配列番号９もしくは配列番号１１それぞれについての混合物もより好ましい例として挙げられる。
上記混合物の場合、配列番号９もしくは配列番号１１のそれぞれにおける第１７位から始まるペプチドと第１９位から始まるペプチドの混合割合としては、（３０：７０）〜（５０：５０）が例示され、（３５：６５）〜（４５：５５）が好ましい例として挙げられる。
また、配列番号９もしくは配列番号１１のそれぞれにおける第５１５位で終わるペプチドと第５１６位で終わるペプチドの混合割合としては、（７０：３０）〜（９０：１０）が例示され、（７５：２５）〜（８５：１５）が好ましい例として挙げられる。
これらペプチドの混合割合は、通常の方法により求めることができる。【００６４】
なお、配列番号１の第１９〜１３２位の配列は、配列番号９の第３６７〜４８０位の配列に相当し、配列番号５の第１９〜４８０位の配列は、配列番号９の第１９〜４８０位の配列に相当する。【００６５】
また、配列番号３の第１９〜１３２位の配列は、配列番号１１の第３６７〜４８０位の配列に相当し、配列番号７の第１９〜４８０位の配列は、配列番号１１の第１９〜４８０位の配列に相当する。
さらに、配列番号１、３、５、７、９、及び１１のそれぞれにおける第１〜１８位の配列は、全て同一の配列である。【００６６】
これら本発明におけるトロンボモジュリンは後述の通り、これら配列番号１、３、５、７、９、又は１１等のペプチドをコードするＤＮＡ（具体的には、それぞれ配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、又は配列番号１２等の塩基配列）をベクターにより宿主細胞にトランスフェクトして調製された形質転換細胞より取得することができる。【００６７】
さらに、これらのペプチドは、前記のアミノ酸配列を有すればよいのであって、糖鎖が付いていても、又付いていなくともよく、この点は特に限定されるものではない。また遺伝子操作においては、使用する宿主細胞の種類により、糖鎖の種類や、付加位置や付加の程度は相違するものであり、いずれも用いることができる。糖鎖の結合位置及び種類については、特開平１１−３４１９９０に記載の事実が知られており、本発明におけるトロンボモジュリンについても同様の位置に同様の糖鎖が付加する場合がある。後述の通り、遺伝子操作により取得することに特定されるものではないが、遺伝子操作により取得する場合には、発現に際して用いることができるシグナル配列としては、上述の配列番号９の第１〜１８位のアミノ酸配列をコードする塩基配列、配列番号９の第１〜１６位のアミノ酸配列をコードする塩基配列、その他公知のシグナル配列、例えば、ヒト組織型プラスミノーゲンアクチベーターのシグナル配列を利用することができる（国際公開８８／９８１１号公報、特開平１１−３４１９９０）。【００６８】
トロンボモジュリンをコードするＤＮＡ配列を宿主細胞へ導入する場合には、好ましくはトロンボモジュリンをコードするＤＮＡ配列を、ベクター、特に好ましくは、動物細胞において発現可能な発現ベクターに組み込んで導入する方法が挙げられる。発現ベクターとは、プロモーター配列、ｍＲＮＡにリボソーム結合部位を付与する配列、発現したい蛋白をコードするＤＮＡ配列、スプライシングシグナル、転写終結のターミネーター配列、複製起源配列などで構成されるＤＮＡ分子であり、好ましい動物細胞発現ベクターの例としては、Ｒ．Ｃ．Ｍｕｌｌｉｇａｎら［Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．７８．２０７２（１９８１）］が報告しているｐＳＶ２−Ｘや、Ｐ．Ｍ．Ｈｏｗｌｅｙら［Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｍｚｙｍｏｌｏｇｙ，１０１，３８７，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ（１９８３）］が報告しているｐＢＰ６９Ｔ（６９−６）などが挙げられる。【００６９】
これらのペプチドを製造するに際して用いることのできる宿主細胞としては、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ＣＯＳ−１細胞、ＣＯＳ−７細胞、ＶＥＲＯ（ＡＴＣＣ ＣＣＬ−８１）細胞、ＢＨＫ細胞、イヌ腎由来ＭＤＣＫ細胞、ハムスターＡＶ−１２−６６４細胞等が、またヒト由来細胞としてＨｅＬａ細胞、ＷＩ３８細胞、ヒト２９３細胞が挙げられる。ＣＨＯ細胞が極めて一般的であり好ましく、ＣＨＯ細胞においては、ＤＨＦＲ−ＣＨＯ細胞がさらに好ましい。【００７０】
また、遺伝子操作の過程やペプチドの製造過程において、大腸菌等の微生物も多く使われ、それぞれに適した宿主−ベクター系を使用することが好ましく、上述の宿主細胞においても、適宜のベクター系を選択することができる。遺伝子組換え技術に用いるトロンボモジュリンの遺伝子は、クローニングされており、そしてトロンボモジュリンの遺伝子組換え技術を用いた製造例が開示されており、さらにはその精製品を得るための精製方法も知られている［特開昭６４−６２１９号公報、特開平２−２５５６９９号公報、特開平５−２１３９９８号公報、特開平５−３１０７８７号公報、特開平７−１５５１７６号公報、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２６４：１０３５１−１０３５３（１９８９）］。したがって本発明で用いるトロンボモジュリンは、上記の報告に記載されている方法を用いることにより、あるいはそれらに記載の方法に準じることにより製造することができる。例えば特開昭６４−６２１９号公報では、全長のトロンボモジュリンをコードするＤＮＡを含むプラスミドｐＳＶ２ＴＭＪ２を含む、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ Ｋ−１２ ｓｔｒａｉｎ ＤＨ５（ＡＴＣＣ寄託番号６７２８３号）が開示されている。また、この菌株を生命研（現独立行政法人 産業技術総合研究所 特許生物寄託センター）に再寄託した菌株（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ ＤＨ５／ｐＳＶ２ＴＭ Ｊ２）（ＦＥＲＭ  ＢＰ−５５７０）を用いることもできる。この全長のトロンボモジュリンをコードするＤＮＡを原料として、公知の遺伝子操作技術によって、本発明のトロンボモジュリンを調製することができる。【００７１】
本発明に用いられるトロンボモジュリンは、従来公知の方法またはそれに準じて調製すればよいが、例えば、前記山本らの方法［特開昭６４−６２１９号公報］、または特開平５−２１３９９８号公報を参考にすることができる。すなわちヒト由来のトロンボモジュリン遺伝子を遺伝子操作技術により、例えば、配列番号９のアミノ酸配列をコードするＤＮＡとなし、さらに必要に応じた改変を行うことも可能である。この改変としては、例えば、配列番号１１のアミノ酸配列をコードするＤＮＡ（具体的には、配列番号１２の塩基配列よりなる）となすために、配列番号９のアミノ酸配列の第４７３位のアミノ酸をコードするコドン（特に、第１４１８位の塩基）に、メソッド イン エンザイモロジー［Ｍｅｔｈｏｄ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，１００：４６８（１９８３年），アカデミックプレス（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ）］に記載の方法に従って、部位特異的変異を行う。例えば、配列番号１０の第１４１８位の塩基Ｔは、配列番号１３に示された塩基配列を有する変異用合成ＤＮＡを用いて塩基Ｃに変換したＤＮＡとなすことができる。【００７２】
このようにして調製したＤＮＡを、例えばチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞に組み込んで、形質転換細胞とし、適宜選択し、この細胞を培養して得た培養液から、公知の方法により精製されたトロンボモジュリンが製造できる。前述の通り配列番号９のアミノ酸配列をコードするＤＮＡ（配列番号１０）を前記宿主細胞にトランスフェクトすることが好ましい。本発明に用いられるトロンボモジュリンの生産方法は、上記の方法に限定されるものではなく、例えば、尿や血液、その他体液等から抽出精製することでも可能であるし、またトロンボモジュリンを生産する組織またはこれら組織培養液等から抽出精製することも、また必要によりさらに蛋白分解酵素により切断処理することも可能である。【００７３】
上記細胞培養方法により本発明におけるトロンボモジュリンを製造する場合、タンパク質の翻訳後修飾により、Ｎ末端アミノ酸に多様性が認められる場合がある。例えば、配列番号９における第１７位、１８位、１９位、もしくは２２位のアミノ酸がＮ末端となる場合がある。また、例えば第２２位のグルタミン酸がピログルタミン酸に変換されるように、Ｎ末端アミノ酸が修飾される場合もある。第１７位又は１９位のアミノ酸がＮ末端となることが好ましく、第１９位のアミノ酸がＮ末端となることがより好ましい。また、第１７位のアミノ酸がＮ末端となることが好ましい別の態様もある。以上の修飾や多様性等については配列番号１１についても同様な例が挙げられる。【００７４】
さらに、配列番号１０の塩基配列を有するＤＮＡを用いてトロンボモジュリンを製造する場合、Ｃ末端アミノ酸の多様性が認められることがあり、１アミノ酸残基短いペプチドが製造される場合がある。すなわち、第５１５位のアミノ酸がＣ末端となり、さらに該第５１５位がアミド化されるといったように、Ｃ末端アミノ酸が修飾される場合がある。したがって、Ｎ末端アミノ酸とＣ末端アミノ酸が多様性に富んだペプチド、又はそれらの混合物が製造されることがある。第５１５位のアミノ酸がＣ末端となることが好ましい。また、第５１６位のアミノ酸がＣ末端になることが好ましい別の態様もある。以上の修飾や多様性等については配列番号１２の塩基配列を有するＤＮＡについても同様である。
上記方法で得られるトロンボモジュリンは、Ｎ末端及びＣ末端に多様性が認められるペプチドの混合物である場合がある。具体的は、配列番号９における第１９〜５１６位、第１９〜５１５位、第１７〜５１６位、もしくは第１７〜５１５位の配列からなるペプチドの混合物が挙げられる。【００７５】
次いで上記により取得された培養上清、または培養物からのトロンボモジュリンの単離精製方法は、公知の手法［堀尾武一編集、蛋白質・酵素の基礎実験法］に準じて行うことができる。例えば、トロンボモジュリンと逆の電荷を持つ官能基を固定化したクロマトグラフィー担体と、トロンボモジュリンの間の相互作用を利用したイオン交換クロマトグラフィーや吸着クロマトグラフィーの使用も好ましい。また、トロンボモジュリンとの特異的親和性を利用したアフィニティークロマトグラフィーも好ましい例として挙げられる。吸着体の好ましい例として、トロンボモジュリンのリガンドであるトロンビンやトロンボモジュリンの抗体を利用する例が挙げられる。この抗体としては、適宜の性質、或いは適宜のエピトープを認識するトロンボモジュリンの抗体を利用することができ、例えば、特公平５−４２９２０号公報、特開昭６４−４５３９８号公報、特開平６−２０５６９２号公報などに記載された例が挙げられる。また、トロンボモジュリンの分子量サイズを利用した、ゲル濾過クロマトグラフィーや限外濾過が挙げられる。そしてまた、疎水性基を固定化したクロマトグラフィー担体と、トロンボモジュリンのもつ疎水性部位との間の疎水結合を利用した疎水性クロマトグラフィーが挙げられる。また、吸着クロマトグラフィーとしてハイドロキシアパタイトを担体として用いることも可能であり、例えば、特開平９−１１０９００号公報に記載した例が挙げられる。これらの手法は適宜組み合わせることができる。精製の程度は、使用目的等により選択できるが、例えば電気泳動、好ましくはＳＤＳ−ＰＡＧＥの結果が単一バンドとして得られるか、もしくは単離精製品のゲル濾過ＨＰＬＣまたは逆相ＨＰＬＣの結果が単一のピークになるまで純粋化することが望ましい。もちろん、複数種のトロンボモジュリンを用いる場合には、実質的にトロンボモジュリンのみのバンドになることが好ましいのであり、単一のバンドになることを求めるものではない。【００７６】
本発明における精製法を具体的に例示すれば、トロンボモジュリン活性を指標に精製する法が挙げられ、例えばイオン交換カラムのＱ−セファロースＦａｓｔ Ｆｌｏｗで培養上清または培養物を粗精製しトロンボモジュリン活性を有する画分を回収し、ついでアフィニティーカラムのＤＩＰ−トロンビン−アガロース（ｄｉｉｓｏｐｒｏｐｙｌｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌｔｈｒｏｍｂｉｎ ａｇａｒｏｓｅ）カラムで主精製しトロンボモジュリン活性が強い画分を回収し、回収画分を濃縮し、ゲルろ過にかけトロンボモジュリン活性画分を純品として取得する精製方法［Ｇｏｍｉ Ｋ．ら、Ｂｌｏｏｄ、７５：１３９６−１３９９（１９９０）］が挙げられる。指標とするトロンボモジュリン活性としては、例えばトロンビンによるプロテインＣ活性化の促進活性が挙げられる。その他に、好ましい精製法を例示すると以下の通りである。【００７７】
トロンボモジュリンと良好な吸着条件を有する適当なイオン交換樹脂を選定し、イオン交換クロマト精製を行なう。特に好ましい例としては、０．１８Ｍ ＮａＣｌを含む０．０２Ｍトリス塩酸緩衝液（ｐＨ７．４）で平衡化したＱ−セファロースＦａｓｔ Ｆｌｏｗを用いる方法である。適宜洗浄後、例えば０．３Ｍ ＮａＣｌ含む０．０２Ｍトリス塩酸緩衝液（ｐＨ７．４）で溶出し粗精製品のトロンボモジュリンを得ることができる。【００７８】
次に、例えばトロンボモジュリンと特異的親和性を持つ物質を樹脂に固定化しアフィニティークロマト精製を行うことができる。好ましい例としてＤＩＰ−トロンビン−アガロースカラムの例と、抗トロンボモジュリンモノクローナル抗体カラムの例が挙げられる。ＤＩＰ−トロンビン−アガロースカラムは、予め、例えば、１００ｍＭ ＮａＣｌおよび０．５ｍＭ塩化カルシウムを含む２０ｍＭトリス塩酸緩衝液（ｐＨ７．４）で平衡化せしめ、上記の粗精製品をチャージして、適宜の洗浄を行い、例えば、１．０Ｍ ＮａＣｌ及び０．５ｍＭ塩化カルシウムを含む２０ｍＭトリス塩酸緩衝液（ｐＨ７．４）で溶出し精製品のトロンボモジュリンを取得することができる。また抗トロンボモジュリンモノクローナル抗体カラムにおいては、予めＣＮＢｒにより活性化したセファロース４ＦＦ（ＧＥヘルスケアバイオサイエンス社）に、抗トロンボモジュリンモノクローナル抗体を溶解した０．５Ｍ ＮａＣｌ含有０．１Ｍ ＮａＨＣＯ３緩衝液（ｐＨ８．３）に接触させ、セファロース４ＦＦに抗トロンボモジュリンモノクローナル抗体をカップリングさせた樹脂を充填したカラムを、予め例えば０．３Ｍ ＮａＣｌ含む２０ｍＭリン酸塩緩衝液（ｐＨ７．３）で平衡化し、適宜の洗浄の後、例えば、０．３Ｍ ＮａＣｌ含む１００ｍＭグリシン塩酸緩衝液（ｐＨ３．０）にて溶出せしめる方法が例示される。溶出液は適当な緩衝液で中和し、精製品として取得することもできる。【００７９】
次に得られた精製品をｐＨ３．５に調整した後に、０．３Ｍ ＮａＣｌを含む１００ｍＭグリシン塩酸緩衝液（ｐＨ３．５）で平衡化した陽イオン交換体、好ましくは強陽イオン交換体であるＳＰ−セファロースＦＦ（ＧＥヘルスケアバイオサイエンス社）にチャージし、同緩衝液で洗浄して得られた非吸着画分を得る。得られた画分は適当な緩衝液で中和し、高純度精製品として取得することができる。これらは、限外濾過により濃縮することが好ましい。【００８０】
さらに、ゲル濾過による緩衝液交換を行なうことも好ましい。例えば、５０ｍＭ ＮａＣｌを含む２０ｍＭリン酸塩緩衝液（ｐＨ７．３）で平衡化せしめたＳｅｐｈａｃｒｙｌ Ｓ−３００カラムもしくはＳ−２００カラムに、限外濾過により濃縮した高純度精製品をチャージし、５０ｍＭ ＮａＣｌを含む２０ｍＭリン酸塩緩衝液（ｐＨ７．３）で展開分画し、トロンビンによるプロテインＣの活性化の促進活性の確認を行ない活性画分を回収し緩衝液交換した高純度精製品を取得することができる。このようにして得られた高純度精製品は安全性を高めるために適当なウイルス除去膜、例えばプラノバ１５Ｎ（旭化成メディカル株式会社）を用いてろ過することが好ましく、その後限外濾過により目的の濃度まで濃縮することができる。最後に無菌濾過膜により濾過することが好ましい。【００８１】
このようにして入手したトロンボモジュリンを通常の方法により凍結乾燥製剤となすことができる。すなわち、トロンボモジュリンおよび必要により添加される添加剤を含有してなる溶液を凍結し、減圧下のもとで水を昇華することにより乾燥させる方法が例示される。【００８２】
本発明において、血漿中のＡＴ活性値とは動脈由来の血漿中のＡＴ活性値であっても静脈由来の血漿中のＡＴ活性値であってもよく、静脈由来の血漿中のＡＴ活性値であることが好ましい。また、動脈由来の血漿中のＡＴ活性値であることが好ましい場合もある。通常は静脈由来の血漿中のＡＴ活性値を意味する。ＡＴ活性値の測定方法は特に限定されることはないが、例えば活性型第十因子残存量からＡＴ活性値を求める発色性合成基質法によりＡＴ活性値を測定することができる。【００８３】
具体的には、血液検体をクエン酸ナトリウム入り採血管に採取し、速やかに遠心分離を行い血漿を回収する。続いて該血漿にヘパリンを添加してＡＴ−ヘパリン複合体を形成させ、さらに、このＡＴ−ヘパリン複合体に一定過剰量の活性型第十因子を添加する。活性型第十因子は、検体中のＡＴ−ヘパリン複合体量に応じてＡＴ−ヘパリン−活性型第十因子複合体を形成し、不活性化される。該複合体形成反応後、基質液を加え、反応して遊離してきたｐ−ニトロアニリンを比色定量することにより残存した活性型第十因子活性を測定することができる。該残存した活性型第十因子活性は検体中のＡＴ活性を反映するため、別途作成した検量線によりＡＴ活性値を求めることができる。ｐ−ニトロアニリンの比色定量には自動分析装置ＢＭ１６５０（日本電子株式会社製）を用いることができる。また、検量線は標準物質を用いることにより作成することができる。【００８４】
本発明のトロンボモジュリンを有効成分として含有するＤＩＣ治療及び／又は改善剤の１日の投与量は、患者の年齢、体重、疾患の程度、投与経路などによっても異なるが、一般的にトロンボモジュリンの量として、上限としては５ｍｇ／ｋｇ以下が好ましく、２ｍｇ／ｋｇ以下がより好ましく、１ｍｇ／ｋｇ以下がさらに好ましく、０．８ｍｇ／ｋｇ以下が特に好ましく、下限としては０．００５ｍｇ／ｋｇ以上が好ましく、０．０１ｍｇ／ｋｇ以上がより好ましく、０．０２ｍｇ／ｋｇ以上がさらに好ましく、０．０５ｍｇ／ｋｇ以上が特に好ましい。【００８５】
１日あたり１回または必要に応じて数回投与する。投与間隔は毎日でも良いが、好ましくは２日から１４日間に１回、さらに好ましくは３日から１０日間に１回、さらに好ましくは４日から７日に１回とすることも可能である。【００８６】
特に、静脈内投与では１日１回投与が好ましいがこれに限定されることはない。また、皮下投与では１日１回投与又は１週間に１回投与が好ましく、投与量に合わせて投与間隔を調整することも可能である。【００８７】
本発明のトロンボモジュリンを有効成分として含有するＤＩＣ治療及び／又は改善剤の投与方法としては、一般的に使用されている投与方法、すなわち非経口投与方法、例えば静脈内投与、筋肉内投与、又は皮下投与等によって投与することができる。特に筋肉内投与又は皮下投与は血中濃度が長期間維持されることより、投与間隔を長くできる点で好ましい。また、静脈内投与が好ましい別の態様もある。その他、経口投与、直腸内投与、鼻内投与、舌下投与なども可能である。【００８８】
静脈内投与の場合、一度に所望の量を投与する方法又は点滴静脈内投与が挙げられる。
一度に所望の量を投与する方法は投与時間が短い点で好ましい。一度に投与する場合には、注射器での投与に要する時間に通常幅があるが、投与に要する時間としては、投与する液量にもよるが、通常は２分以下が好ましく、１分以下がより好ましく、３０秒以下がさらに好ましい。また下限としては特に限定されないが、１秒以上が好ましく、５秒以上がより好ましく、１０秒以上がさらに好ましい。投与量は上記の好ましい投与量であれば特に限定されない。【００８９】
点滴静脈内投与はトロンボモジュリンの血中濃度を一定に保つことが容易な点で好ましく、上記の好ましい投与量であれば特に限定されないが、１日の投与量の上限としては１ｍｇ／ｋｇ以下が好ましく、０．５ｍｇ／ｋｇ以下がより好ましく、０．１ｍｇ／ｋｇ以下がさらに好ましく、０．０８ｍｇ／ｋｇ以下が特に好ましく、０．０６ｍｇ／ｋｇ以下が最も好ましく、下限としては０．００５ｍｇ／ｋｇ以上が好ましく、０．０１ｍｇ／ｋｇ以上がより好ましく、０．０２ｍｇ／ｋｇ以上がさらに好ましく、０．０４ｍｇ／ｋｇ以上が特に好ましい。【００９０】
点滴静脈内投与の場合の投与時間は、上限としては４時間以下が好ましく、３時間以下がより好ましく、２時間以下がさらに好ましく、１時間以下が特に好ましく、３０分以下が最も好ましく、下限としては１０分以上が好ましく、１５分以上がより好ましく、２０分以上がさらに好ましい。【００９１】
凍結乾燥製剤とした場合は、用時に、水、例えば蒸留水（または、注射用水）、生理食塩水等にて溶解して患者に投与することができる。【００９２】
また、液剤とする場合は、有効量のトロンボモジュリンを、薬剤として使用可能な担体と混合することにより調製すればよい。すなわち、上記の疾患を治療するのに有効な量のトロンボモジュリンを公知の適当量の担体と混ぜて、患者に効果的に投与するのに適した製剤を調製することができる。例えば、ショ糖、グリセリン、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースなどの増粘剤、各種無機塩のｐＨ調整剤などを添加剤として加えて調製することができる。【００９３】
［配列表の説明］
配列番号１：ＴＭＥ４５６の生産に用いた遺伝子がコードするアミノ酸配列
配列番号２：配列番号１のアミノ酸配列をコードする塩基配列
配列番号３：ＴＭＥ４５６Ｍの生産に用いた遺伝子がコードするアミノ酸配列
配列番号４：配列番号３のアミノ酸配列をコードする塩基配列
配列番号５：ＴＭＤ１２の生産に用いた遺伝子がコードするアミノ酸配列
配列番号６：配列番号５のアミノ酸配列をコードする塩基配列
配列番号７：ＴＭＤ１２Ｍの生産に用いた遺伝子がコードするアミノ酸配列
配列番号８：配列番号７のアミノ酸配列をコードする塩基配列
配列番号９：ＴＭＤ１２３の生産に用いた遺伝子がコードするアミノ酸配列
配列番号１０：配列番号９のアミノ酸配列をコードする塩基配列
配列番号１１：ＴＭＤ１２３Ｍの生産に用いた遺伝子がコードするアミノ酸配列
配列番号１２：配列番号１１のアミノ酸配列をコードする塩基配列
配列番号１３：部位特異的変異を行う際に使用する変異用合成ＤＮＡ
【実施例】
【００９４】
以下、実施例及び試験例を挙げて本発明を詳細に説明するが、本発明はこれらに何ら限定されるものではない。
試験例に用いる本発明におけるトロンボモジュリンは、前記山本らの方法（特開昭６４−６２１９号に記載の方法）に従って製造した。以下にその製造例を示す。【００９５】
［製造例１］
＜トロンボモジュリンの取得＞
上記の方法、すなわち、配列番号９のアミノ酸配列をコードするＤＮＡ（具体的には、配列番号１０の塩基配列よりなる）を、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞にトランスフェクションして、この形質転換細胞の培養液より前述した定法の精製法にて、５０ｍＭ  ＮａＣｌを含む２０ｍＭリン酸塩緩衝液（ｐＨ７．３）で活性画分を回収した高純度精製品を取得した。さらに限外濾過を行って濃度が１１．２ｍｇ／ｍＬのトロンボモジュリン（以下、ＴＭＤ１２３と略すことがある）溶液を取得した。
＜添加剤溶液調製＞
１０Ｌのステンレス製容器に、塩酸アルギニン（味の素社製）４８０ｇを量り入れ、注射用水を５Ｌ加えて溶解した。１Ｍ水酸化ナトリウム溶液を添加して、ｐＨを７．３に調整した。
＜薬液調製・充填 ＞
上記添加剤溶液全量を２０Ｌのステンレス製容器に入れ、上記得られたＴＭＤ１２３溶液２３９８ｍＬ（可溶性トロンボモジュリンのたん白質量として２６.８８ｇに相当。ただし１２％過量仕込み。）加え混合攪拌した。さらに注射用水を加えて全量を１２Ｌとして均一に混合撹拌した。この薬液を、孔径が０．２２μｍのフィルター（ミリポア製ＭＣＧＬ１０Ｓ）でろ過滅菌した。ろ過液を１ｍＬずつバイアルに充填し、ゴム栓を半打栓した。
＜凍結乾燥＞
凍結乾燥→窒素充填→ゴム栓全打栓→キャップ巻締めの順で以下の条件にて凍結乾燥工程を行い、１容器中に可溶性トロンボモジュリン２ｍｇ、塩酸アルギニン４０ｍｇを含むＴＭＤ１２３含有製剤を得た。
＜凍結乾燥条件＞
予備冷却（１５分かけて室温から１５℃）→  本冷却（２時間かけて１５℃から−４５℃）→  保持（２時間 −４５℃）→  真空開始（１８時間 −４５℃）→  昇温（２０時間かけて−４５℃から２５℃）→  保持（１５時間２５℃）→  昇温（１時間かけて２５℃から４５℃）→  保持（５時間４５℃）→  室温（２時間かけて４５℃から２５℃）→  復圧窒素充填（−１００ｍｍＨｇまで）→  全打栓  →  キャップ巻締め【００９６】
［製造例２］
配列番号１１のアミノ酸配列をコードするＤＮＡ（具体的には、配列番号１２の塩基配列よりなる）を、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞にトランスフェクションして、この形質転換細胞の培養液より前述した定法の精製法にて精製されたトロンボモジュリン（以下、ＴＭＤ１２３Ｍと略すことがある）溶液を取得し、上記と同様の方法によりＴＭＤ１２３Ｍの凍結乾燥製剤を取得する。【００９７】
［製造例３］
配列番号１のアミノ酸配列をコードするＤＮＡ（具体的には、配列番号２の塩基配列よりなる）を、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞にトランスフェクションして、この形質転換細胞の培養液より前述した定法の精製法にて精製されたトロンボモジュリン（以下、ＴＭＥ４５６と略すことがある）を取得し、上記と同様の方法によりＴＭＥ４５６の凍結乾燥製剤を取得する。【００９８】
［製造例４］
配列番号３のアミノ酸配列をコードするＤＮＡ（具体的には、配列番号４の塩基配列よりなる）を、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞にトランスフェクションして、この形質転換細胞の培養液より前述した定法の精製法にて精製されたトロンボモジュリン（以下、ＴＭＥ４５６Ｍと略すことがある）を取得し、上記と同様の方法によりＴＭＥ４５６Ｍの凍結乾燥製剤を取得する。【００９９】
［製造例５］
配列番号５のアミノ酸配列をコードするＤＮＡ（具体的には、配列番号６の塩基配列よりなる）を、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞にトランスフェクションして、この形質転換細胞の培養液より前述した定法の精製法にて精製されたトロンボモジュリン（以下、ＴＭＤ１２と略すことがある）を取得し、上記と同様の方法によりＴＭＤ１２の凍結乾燥製剤を取得する。【０１００】
［製造例６］
配列番号７のアミノ酸配列をコードするＤＮＡ（具体的には、配列番号８の塩基配列よりなる）を、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞にトランスフェクションして、この形質転換細胞の培養液より前述した定法の精製法にて精製されたトロンボモジュリン（以下、ＴＭＤ１２Ｍと略すことがある）を取得し、上記と同様の方法によりＴＭＤ１２Ｍの凍結乾燥製剤を取得する。【０１０１】
［試験例１］
以下に示す、厚生省のＤＩＣ診断基準に基づきＤＩＣと診断された造血器悪性腫瘍又は感染症により症状が誘引されたＤＩＣ患者に対し、以下に示す方法により調製した本発明のＤＩＣ治療及び／又は改善剤を投与し、投与開始後２８日目の患者の生存率を調べた。
なお、本発明のＤＩＣ治療及び／又は改善剤の投与期間中は、ＡＴ製剤は併用しないこととした。【０１０２】
＜調製例１＞
製造例１に準じて得られたＴＭＤ１２３の凍結乾燥製剤に生理食塩水を加え、０．５ｍｇ／ｍｌの被検液を調製した。【０１０３】
＜ＡＴ活性値の測定＞
本発明のＤＩＣ治療及び／又は改善剤の投与開始日投与前の対象患者の血液検体４．５ｍｌを３．８％クエン酸ナトリウム０．５ｍｌ入り採血管に採取し、転倒混和・遠心後、血漿を回収し、冷凍保存した。続いて該血漿にヘパリンを添加してＡＴ−ヘパリン複合体を形成させ、さらに、このＡＴ−ヘパリン複合体に過剰量のファクターＸａを添加した。該複合体形成反応後、基質液（テストチームＳ ＡＴIII（ＣＨＲＯＭＯＧＥＮＩＸ社製））を加え、反応して遊離してきたｐ−ニトロアニリンを４１０ｎｍにて吸光度測定して比色定量することにより、残存したファクターＸａ活性を測定した（テストチームＳ ＡＴIII添付文書）。該残存したファクターＸａ活性は検体中のＡＴ活性を反映するため、別途作成した検量線を用いてＡＴ活性値を求めた。ｐ−ニトロアニリンの比色定量には自動分析装置ＢＭ１６５０（日本電子株式会社製）を用いた。また、ＡＴ活性値を求めるための正常血漿としては、正常血漿剤「第一」（第一化学薬品）を用いた。【０１０４】
＜投与量及び投与方法＞
ＤＩＣ対象患者に対し、調製例にて調製した被検液を０．１２ｍｌ／ｋｇ（０．０６ｍｇ／ｋｇに相当）の割合で採取して生理食塩液に加え１００ｍｌとした。該生理食塩液溶液を、１日１回、３０分間かけて点滴静注を行った。これを６日間繰り返した。【０１０５】
＜結果＞
上記投与方法により被検液を投与し、投与開始から２８日目の転帰を調べたところ、ＡＴ活性値が５０％以上７０％未満の患者群の生存率は６４．３％、またＡＴ活性値が７０％以上の患者群の生存率は８０％であった。一方、ＡＴ活性値が５０％未満の患者群の生存率は死亡例が１例のみであり、生存率は９２．３％と前者２群に対して優位な生存率を示した。その結果を表１に示した。
また、中でもＡＴ活性値が４０％以下の患者（５例）においては、１００％の生存率であった。【０１０６】
【表１】
2008044631.tif 000002
【０１０７】
［試験例２］
雄性Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット（体重１８０〜２４０ｇ）に、ウサギ抗ラットＡＴ抗体（２０ｍｇ／ｋｇ）を尾静脈内に投与することによりラット血漿中ＡＴ活性値を６０％未満に低下させる。抗体投与１時間後、ペントバルビタール麻酔下、組織因子（ウサギ由来トロンボプラスチン；９０ ｍｇ／ｋｇ）を１時間かけてラット尾静脈内に持続投与する。０．１〜１０ｍｇ／ｋｇの本発明における各種製造例のトロンボモジュリンを、組織因子投与直前に反対側の尾静脈内に急速投与する。組織因子投与終了後に腹部大動脈より採血し、血小板数、フィブリノゲン、又はＡＴ活性値を測定することにより、ＤＩＣの治療及び／又は改善効果を調べ本発明の効果を確認することができる。
【産業上の利用可能性】
【０１０８】
本発明のトロンボモジュリン含有製剤を用いることにより、血漿中のＡＴ活性値が５０％未満であるＤＩＣ患者の症状を、好ましくはＡＴと組み合わせて用いることなく効果的に治療及び／又は改善することができる。
【配列表】
2008044631000001.app
【国際調査報告】
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