(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ベヘン酸、リグノセリン酸及びアラキドン酸から選ばれる炭素数２０以上の超長鎖脂肪酸又はその塩を有効成分とするＧＩＰ上昇抑制剤。
【請求項２】
ＧＩＰ上昇を抑制する脂肪酸含有組成物の製造方法であって、脂肪酸含有組成物の成分の少なくとも一部に、長鎖脂肪酸又はその塩の代わりにベヘン酸、リグノセリン酸及びアラキドン酸から選ばれる炭素数２０以上の超長鎖脂肪酸又はその塩を使用する脂肪酸含有組成物の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＧＩＰ上昇抑制剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
ＧＩＰ（ガストリックインヒビトリーポリペプチド又はグルコースディペンデントインスリノトロピックポリペプチド）は、グルカゴン・セクレチンファミリーに属する消化管ホルモンの１つである。ＧＩＰはＧＬＰ−１（グルカゴン様ペプチド１）と共にインクレチンと称され、脂質や糖質の摂食時に小腸に存在するＫ細胞より分泌され、膵β細胞においてグルコースによるインスリン分泌を促進することや、脂肪組織において糖質や脂質の取り込みを亢進することが報告されている。そのため、ＧＩＰの上昇を抑制することは肥満の予防もしくは改善に有効であると考えられる。また、ＧＩＰは、胃酸分泌抑制作用や胃運動抑制作用を有することが知られている（非特許文献１〜３）ことから、ＧＩＰの上昇抑制は、食後の消化促進や胃もたれの改善に有効であると考えられる。
【０００３】
これまでの研究によって、ＧＩＰの機能を阻害する物質として、３−ブロモ−５−メチル−２−フェニルピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−オール（ＢＭＰＰ）が知られ、食後ＧＩＰの分泌を抑制するものとして、グアガム等が知られている（特許文献１、非特許文献４〜９）。また、近年では、ＧＩＰ受容体アンタゴニストである（Ｐｒｏ３）ＧＩＰが知られている。しかし、これらの物質は、安全性や効果の面で十分とはいえない。
【０００４】
一方、炭素数２０以上の超長鎖脂肪酸は、動物の脳に多く見られ、また、植物では種子油中のトリグリセリドの構成成分として存在する。従来、ＧＴ０１ポリペプチドに対するＧＴ０１アゴニスト及びアンタゴニストである炭素数１０〜２４の遊離脂肪酸が、ＣＣＫ放出を調節し摂食障害及びそれに伴う疾患等の症状の改善すること（特許文献２）、また、ＧＴ０１アゴニスト及びアンタゴニストが、ＧＬＰ−１を分泌し、血糖値の上昇を抑制することが報告されている（特許文献３）。
しかしながら、超長鎖脂肪酸とＧＩＰ分泌との関係については何ら報告されていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】国際公開第０１／８７３４１号パンフレット
【特許文献２】特開２００５−１５３５８号公報
【特許文献３】特表平０５−８３０７０号公報
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Ｂｒｏｗｎ  ＪＣら、Ｃａｎａｄｉａｎ  Ｊ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ. １９６９，４７：１１３−１１４
【非特許文献２】Ｆａｌｋｏ  ＪＭら、Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  Ｍｅｔａｂ．１９７５，４１：２６０−２６５
【非特許文献３】織田敏次ら、消化管  機能と病態、１９８１年、中外医学社、Ｐ２０５−２１６
【非特許文献４】Ｇａｔｅｎｂｙ  ＳＪら、Ｄｉａｂｅｔ  Ｍｅｄ.  １９９６，１３：３５８−３６４
【非特許文献５】Ｅｌｌｉｓ  ＰＲら、Ｂｒ  Ｊ  Ｎｕｔｒ.  １９９５，７４：５３９−５５６
【非特許文献６】Ｓｉｍｏｅｓ  Ｎｕｎｅｓ  Ｃら、Ｒｅｐｒｏｄ  Ｎｕｔｒ  Ｄｅｖ.  １９９２，３２：１１−２０
【非特許文献７】Ｍｏｒｇａｎ  ＬＭら、Ｂｒ  Ｊ  Ｎｕｔｒ．  １９９０，６４：１０３−１１０
【非特許文献８】Ｒｅｑｕｅｊｏ  Ｆら、Ｄｉａｂｅｔ  Ｍｅｄ．  １９９０，７：５１５−５２０
【非特許文献９】Ｍｏｒｇａｎ  ＬＭら、Ｂｒ  Ｊ  Ｎｕｔｒ.  １９８５，５３：４６７−４７５
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、医薬品、食品等に利用することのできるＧＩＰ上昇抑制剤を提供することに関する。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者らは、ＧＩＰの上昇をコントロールできる素材について検討したところ、パルミチン酸やオレイン酸等の脂肪酸は血中ＧＩＰ分泌を促すのに対し、全く意外にも、炭素数２０以上の超長鎖脂肪酸ではＧＩＰの上昇を著しく抑制することを見出した。
【０００９】
すなわち、本発明は、炭素数２０以上の超長鎖脂肪酸又はその塩を有効成分とするＧＩＰ上昇抑制剤を提供するものである。
【発明の効果】
【００１０】
本発明のＧＩＰ上昇抑制剤は、ＧＩＰの上昇を抑制することができ、肥満の発症可能性の低下、予防もしくは改善、食後の消化促進や胃もたれの改善をするための素材として有用である。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
本発明において「ＧＩＰ上昇抑制」とは、脂質及び糖質を含む食事、特に脂質を多く含む食事、そのなかでもトリアシルグリセロールを多く含む食事を摂取することにより、小腸に存在するＫ細胞から分泌されたＧＩＰの上昇を抑制することをいう。すなわち、「ＧＩＰ上昇抑制」とは、主として、食後に生じるＧＩＰ上昇を抑制することをいう。そして、本発明における「ＧＩＰ上昇抑制作用」は、Ｋ細胞からのＧＩＰ分泌を抑制することでＧＩＰ上昇を抑制するＧＩＰ分泌抑制作用、及び血中ＧＩＰ濃度を低下させることによりＧＩＰ上昇を抑制するＧＩＰ低下作用のいずれをも含む概念である。
【００１２】
本発明に用いられる超長鎖脂肪酸は、炭素数２０以上の直鎖又は分岐鎖の飽和又は不飽和脂肪酸である。脂肪酸の炭素数は、ＧＩＰ上昇抑制効果の点から、炭素数２０〜３２が好ましく、更に炭素数２０〜２６、特に炭素数２０〜２４が好ましい。
【００１３】
飽和脂肪酸の具体例としては、例えば、アラキジン酸、ベヘン酸、リグノセリン酸、セロチン酸、モンタン酸、メリシン酸、ラクセル酸等が挙げられる。
【００１４】
また、不飽和脂肪酸は、１価不飽和脂肪酸、多価不飽和脂肪酸のいずれでもよく、例えば、ガドレイン酸、ジホモ−γ−リノレン酸、アラキドン酸、エイコサペンタエン酸、エルカ酸、ドコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸、ネルボン酸、ヘキサコセン酸、オクタコセン酸等が挙げられる。
【００１５】
本発明の超長鎖脂肪酸の塩としては、医薬又は食品等において使用できるものならば特に制限されず、例えば、ナトリウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属塩；マグネシウム塩、カルシウム塩等のアルカリ土類金属塩；アンモニウム塩、エタノールアミン塩、塩基性アミノ酸塩などが挙げられる。
本発明の超長鎖脂肪酸又はその塩は、公知の化学合成法により得てもよく、これらを含有する天然物等からの抽出、又はこれらを組み合わせることにより得ることができる。また、市販品を用いてもよい。
【００１６】
後記実施例に示すように、本発明の超長鎖脂肪酸は、トリアシルグリセロール摂取による血中ＧＩＰ濃度を有意に低下させる作用を示した。従って、超長鎖脂肪酸又はその塩は、ＧＩＰ上昇抑制剤として使用することができる。また、オレイン酸等の炭素数１８以下の長鎖脂肪酸はＧＩＰ上昇効果が高いことが知られているが、本発明の超長鎖脂肪酸は、これらの長鎖脂肪酸に比べてＧＩＰ上昇効果が低いか、もしくはＧＩＰ上昇を抑制できることから、例えば、超長鎖脂肪酸又はその塩をＧＩＰ上昇を抑制できる素材として、脂肪酸を含む組成物の成分の少なくとも一部に長鎖脂肪酸の代わりに用いることができる。これにより、長鎖脂肪酸を含む組成物に比してＧＩＰ上昇を抑制できる組成物が得られる。当該組成物中の超長鎖脂肪酸又はその塩の含有量は、組成物中の脂肪酸含有量の０．０１〜１００質量％であるのが好ましく、１〜１００質量％であるのがさらに好ましい。
ＧＩＰ上昇を抑制することは、肥満の発症可能性の低下、予防又は改善に有効である。また、ＧＩＰの上昇抑制は、胃酸分泌の抑制及び胃運動の抑制を軽減させることから、超長鎖脂肪酸又はその塩は、肥満の発症可能性の低下、予防又は改善剤、更には消化促進剤及び胃もたれ改善剤（以下、「ＧＩＰ上昇抑制剤等）とする）ともなり得、さらにこれらの剤を製造するために使用することができる。このとき、当該ＧＩＰ上昇抑制剤等には、当該超長鎖脂肪酸又はその塩を単独で、又はこれ以外に、必要に応じて適宜選択した担体等の、配合すべき後述の対象物において許容されるものを使用してもよい。なお、当該製剤は配合すべき対象物に応じて常法により製造することができる。
【００１７】
当該ＧＩＰ上昇抑制剤等は、肥満の発症可能性の低下、予防又は改善、食後の消化促進や胃もたれ改善等の各効果を発揮する、ヒト若しくは動物用の医薬品、医薬部外品、食品、又は飼料の有効成分として配合して使用することができる。また、ＧＩＰ上昇抑制剤等は、例えば肥満の発症可能性の低下、予防又は改善、食後の消化促進や胃もたれ改善をコンセプトとし、必要に応じてその旨を表示した食品、機能性食品、病者用食品、特定保健用食品に応用できる。
【００１８】
本発明のＧＩＰ上昇抑制剤等を医薬品の有効成分として用いる場合、当該医薬品は任意の投与形態で投与され得る。投与形態としては、経口、経腸、経粘膜、注射等が挙げられる。経口投与のための製剤の剤型としては、例えば錠剤、被覆錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、粉剤、徐放性製剤、懸濁液、エマルジョン剤、内服液、糖衣錠、丸剤、細粒剤、シロップ剤、エリキシル剤等が挙げられる。非経口投与としては、静脈内注射、筋肉注射剤、吸入、輸液、坐剤、吸入薬、経皮吸収剤、点眼剤、点鼻剤等が挙げられる。
【００１９】
また、斯かる製剤では、本発明のＧＩＰ上昇抑制剤等を単独で、又は他の薬学的に許容される担体と組み合わせて使用してもよい。斯かる担体としては、例えば、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、希釈剤、浸透圧調整剤、流動性促進剤、吸収助剤、ｐＨ調整剤、乳化剤、防腐剤、安定化剤、酸化防止剤、着色剤、紫外線吸収剤、保湿剤、増粘剤、光沢剤、活性増強剤、抗炎症剤、殺菌剤、矯味剤、矯臭剤、増量剤、界面活性剤、分散剤、緩衝剤、保存剤、香料、被膜剤等が挙げられる。
【００２０】
これらの投与形態のうち、経口投与が好ましく、ＧＩＰ上昇抑制剤等を含む経口投与用製剤中の超長鎖脂肪酸又はその塩の含有量は、通常、製剤全質量の０．００１〜１００質量％であり、０．０１〜５０質量％であるのが好ましく、０．０１〜１０質量％であるのがより好ましい。
【００２１】
また、本発明のＧＩＰ上昇抑制剤等を食品の有効成分として配合して用いる場合、一般食品のほか、肥満の発症可能性の低下、予防や改善、食後の消化促進や胃もたれの改善をコンセプトとし、必要に応じてその旨表示した美容食品、病者用食品、栄養機能食品又は特定保健用食品等の機能性食品に応用できる。
【００２２】
本発明のＧＩＰ上昇抑制剤等を食品の有効成分として用いる場合、当該食品の形態は、固形、半固形または液状であり得る。食品の例としては、パン類、麺類、クッキー等の菓子類、ゼリー類、乳製品、冷凍食品、インスタント食品、でんぷん加工製品、加工肉製品、その他加工食品、コーヒー飲料等の飲料、スープ類、調味料、栄養補助食品等、及びそれらの原料が挙げられる。また、上記の経口投与製剤と同様、錠剤形態、丸剤形態、カプセル形態、液剤形態、シロップ形態、粉末形態、顆粒形態等であってもよい。
【００２３】
種々の形態の食品を調製するには、ＧＩＰ上昇抑制剤等を単独で、又は他の食品材料や、溶剤、軟化剤、油、乳化剤、防腐剤、香科、安定剤、着色剤、紫外線吸収剤、酸化防止剤、保湿剤、増粘剤等を適宜組み合わせて用いることができる。
【００２４】
また、ＧＩＰ上昇抑制剤等を含む食品中における超長鎖脂肪酸又はその塩の含有量は、その使用形態により異なるが、通常、飲料の形態では、通常０．００１〜５０質量％であり、０．０１〜２０質量％が好ましく、０．０１〜１０質量％がより好ましい。また、錠剤や加工食品などの固形食品形態では、通常０．００１〜１００質量％であり、０．０１〜５０質量％が好ましく、０．０１〜１０質量％がより好ましい。
【００２５】
上記製剤等の投与又は摂取量は、患者の状態、体重、性別、年齢又はその他の要因に従って変動し得るが、経口投与又は摂取の場合、通常、成人１人１日あたり当たり超長鎖脂肪酸として０．１〜２０ｇが好ましい。また、上記製剤は、任意の投与計画に従って投与又は摂取され得るが、１日１回〜数回に分けて投与又は摂取することが好ましい。
また、本発明のＧＩＰ上昇抑制剤を配合した製剤等は、摂食・摂餌時或いは摂食・摂餌前に投与又は摂取するのが好ましく、特に摂食・摂餌前５分から３０分以内に投与又は摂取するのが好ましい。
【実施例】
【００２６】
実施例１  超長鎖脂肪酸のＧＩＰ上昇抑制作用
評価には、オレイン酸（Ｃ１８：１）（シグマ）、パルミチン酸（Ｃ１６：０）（シグマ）、ベヘン酸（Ｃ２２：０）（シグマ）、リグノセリン酸（Ｃ２４：０）（シグマ）、アラキドン酸（Ｃ２０：４）（シグマ）を用いた。脂肪酸負荷量が１．１３μｍｏｌ／ｇ体重になるように、脂肪酸、０．２％卵黄レシチン（和光純薬工業）及び蒸留水を表１に示すような組成で混合し、７０℃にて加熱した後に、超音波処理し、各乳剤を作製した。
【００２７】
７週齢雄性Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウス（日本クレア）を標準粉末飼料ＣＥ−２（日本クレア）において１週間予備飼育した。飼育環境は室温を２２±２℃、湿度を５５±１０％とし、照明時間を７時から１９時とした。１群８〜１０匹として体重がほぼ同一になるように群分けした。その後、１７時間絶食し、ジエチルエーテル麻酔下、初期採血を眼窩静脈叢より行った（ヘパリン処理ヘマトクリット微量採血管、ＶＩＴＲＥＸ製）後、各乳剤を胃内投与後１０、３０、６０、１２０分後にジエチルエーテル麻酔下、眼窩静脈叢より採血を行った。採血した血液は氷中保存した後、１１０００ｒｐｍ、６分間、遠心分離し、血漿を得た。得られた血漿は測定まで−８０℃で保管した。また、血漿中のＧＩＰ濃度をＥＬＩＳＡ法（Ｒａｔ／Ｍｏｕｓｅ  ＧＩＰ（Ｔｏｔａｌ）ＥＬＩＳＡ  Ｋｉｔ、Ｌｉｎｃｏ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ／Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  ｃｏ．）より定量し、グラフの曲線下面積（ＡＵＣ）を算出した。
【００２８】
【表１】
0005576699.tif 000002
【００２９】
オレイン酸投与６０分後までのＧＩＰ上昇ＡＵＣを１００とした場合の、各脂肪酸投与６０分後までのＧＩＰ上昇ＡＵＣ（相対値）を表２に示す。群間の統計学的有意差については、Ｔｕｋｅｙ−Ｋｒａｍｅｒによる検定を行い、両側検定でｐ値が０．０５以下の場合を有意差ありとし、表に＊（ｖｓオレイン酸）あるいは♯（ｖｓパルミチン酸）を示した。
【００３０】
【表２】
0005576699.tif 000003
【００３１】
血中ＧＩＰ濃度は、オレイン酸群及びパルミチン酸群で上昇が認められたが、ベヘン酸群、リグノセリン酸群及びアラキドン酸群ではオレイン酸群あるいはパルミチン酸群と比べて有意に低下し、ＧＩＰ上昇抑制効果が認められた。
【００３２】
実施例２  超長鎖脂肪酸のＧＩＰ上昇抑制作用
評価には、オレイン酸（Ｃ１８：１）（シグマ）、ドコサヘキサエン酸（Ｃ２２：６）（シグマ）、エイコサペンタエン酸（Ｃ２０：５）（シグマ）を用いた。脂肪酸負荷量が１．１３μｍｏｌ／ｇ体重になるように、脂肪酸、０．２％卵黄レシチン（和光純薬工業）及び蒸留水を表３に示すような組成で混合し、７０℃にて加熱した後に、超音波処理し、各乳剤を作製した。
【００３３】
７週齢雄性Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウス（日本クレア）を標準粉末飼料ＣＥ−２（日本クレア）において１週間予備飼育した。飼育環境は室温を２２±２℃、湿度を５５±１０％とし、照明時間を７時から１９時とした。１群８〜１０匹として体重がほぼ同一になるように群分けした。その後、１７時間絶食し、ジエチルエーテル麻酔下、初期採血を眼窩静脈叢より行った（ヘパリン処理ヘマトクリット微量採血管、ＶＩＴＲＥＸ製）後、各乳剤を胃内投与後１０、３０、６０、１２０分後にジエチルエーテル麻酔下、眼窩静脈叢より採血を行った。採血した血液は氷中保存した後、１１０００ｒｐｍ、６分間、遠心分離し、血漿を得た。得られた血漿は測定まで−８０℃で保管した。また、血漿中のＧＩＰ濃度をＥＬＩＳＡ法（Ｒａｔ／Ｍｏｕｓｅ  ＧＩＰ（Ｔｏｔａｌ）ＥＬＩＳＡ  Ｋｉｔ、Ｌｉｎｃｏ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ／Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  ｃｏ．）より定量した。
【００３４】
【表３】
0005576699.tif 000004
【００３５】
ドコサヘキサエン酸投与群、エイコサペンタエン酸投与群のＧＩＰ濃度は、初期値に対して有意な上昇が見られなかった。血中ＧＩＰ濃度が最大となる各脂肪酸投与１０分後のＧＩＰ上昇を表４に示す。群間の統計学的有意差についてはＴｕｋｅｙ−Ｋｒａｍｅｒによる検定を行い、両側検定でｐ値が０．０５以下の場合を有意差ありとし、表に＊（ｖｓオレイン酸）を示した。
【００３６】
【表４】
0005576699.tif 000005
【００３７】
脂肪酸投与１０分後のＧＩＰ上昇は、ドコサヘキサエン酸群、エイコサペンタエン酸群ではオレイン酸群と比べて有意に低く、ＧＩＰ上昇抑制効果が認められた。
【００３８】
実施例３  超長鎖脂肪酸のＧＩＰ上昇抑制作用
評価には、トリオレイン（シグマ）、アラキドン酸（シグマ）を用いた。トリオレイン負荷量が２ｍｇ／ｇ体重、あるいはトリオレイン負荷量２ｍｇ／ｇ体重＋アラキドン酸負荷量０．４ｍｇ／ｇ体重になるように、０．２％卵黄レシチン（和光純薬工業）及び蒸留水と表５に示すような組成で混合し、７０℃にて加熱した後に、超音波処理し、各種乳剤を作製した。
【００３９】
７週齢雄性Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウス（日本クレア）を標準粉末飼料ＣＥ−２（日本クレア）において１週間予備飼育した。飼育環境は室温を２２±２℃、湿度を５５±１０％とし、照明時間を７時から１９時とした。１群３〜４匹として体重がほぼ同一になるように群分けした。その後、１７時間絶食し、ジエチルエーテル麻酔下、初期採血を眼窩静脈叢より行った（ヘパリン処理ヘマトクリット微量採血管、ＶＩＴＲＥＸ製）後、各乳剤を胃内投与後１０、３０、６０、１２０分後にジエチルエーテル麻酔下、眼窩静脈叢より採血を行った。採血した血液は氷中保存した後、１１０００ｒｐｍ、６分間、遠心分離し、血漿を得た。得られた血漿は測定まで−８０℃で保管した。また、血漿中のＧＩＰ濃度をＥＬＩＳＡ法（Ｒａｔ／Ｍｏｕｓｅ  ＧＩＰ（Ｔｏｔａｌ）ＥＬＩＳＡ  Ｋｉｔ、Ｌｉｎｃｏ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ／Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  ｃｏ．）より定量し、グラフの曲線下面積（ＡＵＣ）を算出した。
【００４０】
【表５】
0005576699.tif 000006
【００４１】
トリオレイン投与６０分後までのＧＩＰ上昇ＡＵＣを１００とした場合の、トリオレイン+アラキドン酸投与６０分後までのＧＩＰ上昇ＡＵＣ（相対値）を表６に示す。群間の統計学的有意差については、ｔ検定を行ない、両側検定でｐ値が０．０５以下の場合には、表上に＊を示した。
【００４２】
【表６】
0005576699.tif 000007
【００４３】
投与６０分後までのＧＩＰ上昇ＡＵＣは、トリオレイン群に比べて、トリオレイン+アラキドン酸群において有意に低下し、ＧＩＰ上昇抑制効果が認められた。