(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＡＴＰ２Ｂ１遺伝子のＳＮＰ（一塩基多型）を含むＡＴＰ２Ｂ１遺伝子の１５塩基長以上の部分塩基配列若しくは全塩基配列、又はこれらのいずれかと相補的な配列からなり、前記ＳＮＰがＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３７８）、ＳＮＰ（ｒｓ２６８１４７２）、ＳＮＰ（ｒｓ１４０１９８２）、及びＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３６４）からなる群より選択される１以上であることを特徴とする高血圧の遺伝子マーカー。  
【請求項２】
前記ＳＮＰがＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３７８）及びＳＮＰ（ｒｓ２６８１４７２）からなる群より選択される１以上であることを特徴とする請求項１記載の高血圧の遺伝子マーカー。
【請求項３】
前記ＳＮＰがＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３７８）及びＳＮＰ（ｒｓ１４０１９８２）からなる群より選択される１以上であることを特徴とする請求項１記載の高血圧の遺伝子マーカー。
【請求項４】
前記ＳＮＰがＳＮＰ（ｒｓ２６８１４７２）及びＳＮＰ（ｒｓ１４０１９８２）からなる群より選択される１以上であることを特徴とする請求項１記載の高血圧の遺伝子マーカー。
【請求項５】
前記ＳＮＰがＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３７８）であることを特徴とする請求項１記載の高血圧の遺伝子マーカー。
【請求項６】
前記ＳＮＰがＳＮＰ（ｒｓ２６８１４７２）であることを特徴とする請求項１記載の高血圧の遺伝子マーカー。
【請求項７】
前記ＳＮＰがＳＮＰ（ｒｓ１４０１９８２）であることを特徴とする請求項１記載の高血圧の遺伝子マーカー。
【請求項８】
前記ＳＮＰがＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３６４）であることを特徴とする請求項１記載の高血圧の遺伝子マーカー。
【請求項９】
遺伝子マーカーを用いて、高血圧発症リスクを判定する方法であって、
（ａ）ヒト個体から採取された核酸の、ＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３７８）、ＳＮＰ（ｒｓ２６８１４７２）、ＳＮＰ（ｒｓ１４０１９８２）、及びＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３６４）からなる群より選択される１以上をタイピングする工程と、
（ｂ）前記工程（ａ）により得られたタイピング結果に基づき、前記ヒト個体の高血圧発症リスクを判定する工程と、を有することを特徴とする、高血圧発症リスク判定方法。
【請求項１０】
前記工程（ａ）が、さらにＡＧＴ遺伝子のＳＮＰであるＳＮＰ（ｒｓ６９９）及びＣＹＰ１１Ｂ２遺伝子上のＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）からなる群より選択される１以上をタイピングする工程であることを特徴とする、請求項９記載の高血圧発症リスク判定方法。
【請求項１１】
前記工程（ｂ）において、ＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３７８）がＣＣ型、ＴＣ型、ＴＴ型の順にリスクが高いと判定することを特徴とする、請求項９に記載の高血圧発症リスク判定方法。
【請求項１２】
前記工程（ｂ）において、ＳＮＰ（ｒｓ２６８１４７２）がＡＡ型、ＡＧ型、ＧＧ型の順にリスクが高いと判定することを特徴とする、請求項９に記載の高血圧発症リスク判定方法。
【請求項１３】
前記工程（ｂ）において、ＳＮＰ（ｒｓ１４０１９８２）がＧＧ型、ＡＧ型、ＡＡ型の順にリスクが高いと判定することを特徴とする、請求項９に記載の高血圧発症リスク判定方法。
【請求項１４】
前記工程（ｂ）において、ＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３６４）がＴＴ型、ＴＧ型、ＧＧ型の順にリスクが高いと判定することを特徴とする、請求項９に記載の高血圧発症リスク判定方法。
【請求項１５】
前記工程（ｂ）において、ＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３７８）がＴＴ型の場合に低リスク群であり、ＴＣ型又はＣＣ型の場合に高リスク群であると判定することを特徴とする、請求項９に記載の高血圧発症リスク判定方法。
【請求項１６】
前記工程（ｂ）において、ＳＮＰ（ｒｓ２６８１４７２）がＧＧ型又はＡＧ型の場合には低リスク群であり、ＡＡ型の場合に高リスク群であると判定することを特徴とする、請求項９に記載の高血圧発症リスク判定方法。
【請求項１７】
前記工程（ｂ）において、ＳＮＰ（ｒｓ１４０１９８２）がＡＡ型の場合には低リスク群であり、ＡＧ型又はＧＧ型の場合に高リスク群であると判定することを特徴とする、請求項９に記載の高血圧発症リスク判定方法。
【請求項１８】
前記工程（ｂ）において、ＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３６４）がＧＧ型の場合には低リスク群であり、ＴＴ型又はＴＧ型の場合に高リスク群であると判定することを特徴とする、請求項９に記載の高血圧発症リスク判定方法。
【請求項１９】
前記工程（ｂ）において、ＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）がＣＣ型又はＣＴ型の場合に低リスク群であり、ＴＴ型の場合に高リスク群であると判定することを特徴とする、請求項１０に記載の高血圧発症リスク判定方法。
【請求項２０】
前記工程（ｂ）において、ＳＮＰ（ｒｓ６９９）がＭＭ型又はＭＴ型（Ｍはメチオニン（Ｍｅｔ）であり、Ｔはトレオニン（Ｔｈｒ）を示す。）の場合に低リスク群であり、ＴＴ型の場合に高リスク群であると判定することを特徴とする、請求項１０に記載の高血圧発症リスク判定方法。
【請求項２１】
前記工程（ｂ）において、ＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３７８）がＴＴ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）がＣＣ型又はＣＴ型である場合に低リスク群であり、ＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３７８）がＴＣ型又はＣＣ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）がＴＴ型である場合に高リスク群であると判定することを特徴とする、請求項１０に記載の高血圧発症リスク判定方法。
【請求項２２】
前記工程（ｂ）において、ＳＮＰ（ｒｓ２６８１４７２）がＧＧ型又はＡＧ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）がＣＣ型又はＣＴ型である場合に低リスク群であり、ＳＮＰ（ｒｓ２６８１４７２）がＡＡ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）がＴＴ型である場合に高リスク群であると判定することを特徴とする、請求項１０に記載の高血圧発症リスク判定方法。
【請求項２３】
前記工程（ｂ）において、ＳＮＰ（ｒｓ１４０１９８２）がＡＡ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）がＣＣ型又はＣＴ型である場合に低リスク群であり、ＳＮＰ（ｒｓ１４０１９８２）がＡＧ型又はＧＧ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）がＴＴ型である場合に高リスク群であると判定することを特徴とする、請求項１０に記載の高血圧発症リスク判定方法。
【請求項２４】
前記工程（ｂ）において、ＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３７８）がＴＴ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ６９９）がＭＭ型又はＭＴ型（Ｍはメチオニン（Ｍｅｔ）であり、Ｔはトレオニン（Ｔｈｒ）を示す。）である場合に低リスク群であり、ＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３７８）がＴＣ型又はＣＣ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ６９９）がＴＴ型である場合に高リスク群であると判定することを特徴とする、請求項１０に記載の高血圧発症リスク判定方法。
【請求項２５】
前記工程（ｂ）において、ＳＮＰ（ｒｓ２６８１４７２）がＧＧ型又はＡＧ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ６９９）がＭＭ型又はＭＴ型（Ｍはメチオニン（Ｍｅｔ）であり、Ｔはトレオニン（Ｔｈｒ）を示す。）である場合に低リスク群であり、ＳＮＰ（ｒｓ２６８１４７２）がＡＡ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ６９９）がＴＴ型である場合に高リスク群であると判定することを特徴とする、請求項１０に記載の高血圧発症リスク判定方法。
【請求項２６】
前記工程（ｂ）において、ＳＮＰ（ｒｓ１４０１９８２）がＡＡ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ６９９）がＭＭ型又はＭＴ型（Ｍはメチオニン（Ｍｅｔ）であり、Ｔはトレオニン（Ｔｈｒ）を示す。）である場合に低リスク群であり、ＳＮＰ（ｒｓ１４０１９８２）がＡＧ型又はＧＧ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ６９９）がＴＴ型である場合に高リスク群であると判定することを特徴とする、請求項１０に記載の高血圧発症リスク判定方法。
【請求項２７】
前記工程（ｂ）において、ＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３７８）がＴＴ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）がＣＣ型又はＣＴ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ６９９）がＭＭ型又はＭＴ型（Ｍはメチオニン（Ｍｅｔ）であり、Ｔはトレオニン（Ｔｈｒ）を示す。）である場合に低リスク群であり、ＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３７８）がＴＣ型又はＣＣ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）がＴＴ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ６９９）がＴＴ型である場合に高リスク群であると判定することを特徴とする、請求項１０に記載の高血圧発症リスク判定方法。
【請求項２８】
前記工程（ｂ）において、ＳＮＰ（ｒｓ２６８１４７２）がＧＧ型又はＡＧ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）がＣＣ型又はＣＴ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ６９９）がＭＭ型又はＭＴ型（Ｍはメチオニン（Ｍｅｔ）であり、Ｔはトレオニン（Ｔｈｒ）を示す。）である場合に低リスク群であり、ＳＮＰ（ｒｓ２６８１４７２）がＡＡ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）がＴＴ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ６９９）がＴＴ型である場合に高リスク群であると判定することを特徴とする、請求項１０に記載の高血圧発症リスク判定方法。
【請求項２９】
前記工程（ｂ）において、ＳＮＰ（ｒｓ１４０１９８２）がＡＡ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）がＣＣ型又はＣＴ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ６９９）がＭＭ型又はＭＴ型（Ｍはメチオニン（Ｍｅｔ）であり、Ｔはトレオニン（Ｔｈｒ）を示す。）である場合に低リスク群であり、ＳＮＰ（ｒｓ１４０１９８２）がＡＧ型又はＧＧ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）がＴＴ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ６９９）がＴＴ型である場合に高リスク群であると判定することを特徴とする、請求項１０に記載の高血圧発症リスク判定方法。
【請求項３０】
ＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３７８）のＣＣ型、ＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）のＴＴ型、ＳＮＰ（ｒｓ６９９）のＴＴ型（Ｔはトレオニン（Ｔｈｒ）を示す。）をそれぞれ高リスク多型とし、前記工程（ｂ）において、前記高リスク多型の数が３個、２個、１個、０個の順にリスクが高いと判定することを特徴とする、請求項１０に記載の高血圧発症リスク判定方法。
【請求項３１】
ＳＮＰ（ｒｓ２６８１４７２）のＡＡ型、ＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）のＴＴ型、ＳＮＰ（ｒｓ６９９）のＴＴ型（Ｔはトレオニン（Ｔｈｒ）を示す。）をそれぞれ高リスク多型とし、前記工程（ｂ）において、前記高リスク多型の数が３個、２個、１個、０個の順にリスクが高いと判定することを特徴とする、請求項１０に記載の高血圧発症リスク判定方法。
【請求項３２】
ＳＮＰ（ｒｓ１４０１９８２）のＧＧ型、ＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）のＴＴ型、ＳＮＰ（ｒｓ６９９）のＴＴ型（Ｔはトレオニン（Ｔｈｒ）を示す。）をそれぞれ高リスク多型とし、前記工程（ｂ）において、前記高リスク多型の数が３個、２個、１個、０個の順にリスクが高いと判定することを特徴とする、請求項１０に記載の高血圧発症リスク判定方法。
【請求項３３】
ＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３７８）のＴＴ型、ＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）のＣＣ型、ＳＮＰ（ｒｓ６９９）のＭＭ型（Ｍはメチオニン（Ｍｅｔ）を示す。）をそれぞれ低リスク多型とし、前記工程（ｂ）において、前記低リスク多型の数が０個、１個、２個、３個の順にリスクが高いと判定することを特徴とする、請求項１０に記載の高血圧発症リスク判定方法。
【請求項３４】
ＳＮＰ（ｒｓ２６８１４７２）のＧＧ型、ＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）のＣＣ型、ＳＮＰ（ｒｓ６９９）のＭＭ型（Ｍはメチオニン（Ｍｅｔ）を示す。）をそれぞれ低リスク多型とし、前記工程（ｂ）において、前記低リスク多型の数が０個、１個、２個、３個の順にリスクが高いと判定することを特徴とする、請求項１０に記載の高血圧発症リスク判定方法。
【請求項３５】
ＳＮＰ（ｒｓ１４０１９８２）のＡＡ型、ＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）のＣＣ型、ＳＮＰ（ｒｓ６９９）のＭＭ型（Ｍはメチオニン（Ｍｅｔ）を示す。）をそれぞれ低リスク多型とし、前記工程（ｂ）において、前記低リスク多型の数が０個、１個、２個、３個の順にリスクが高いと判定することを特徴とする、請求項１０に記載の高血圧発症リスク判定方法。
【請求項３６】
ＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３７８）がＴＴ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）がＣＣ型又はＣＴ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ６９９）がＭＭ型又はＭＴ型（Ｍはメチオニン（Ｍｅｔ）であり、Ｔはトレオニン（Ｔｈｒ）を示す。）である場合を第一群とし、
ＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３７８）がＴＣ型又はＣＣ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）がＣＣ型又はＣＴ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ６９９）がＭＭ型又はＭＴ型である場合、ＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３７８）がＴＴ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）がＣＣ型又はＣＴ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ６９９）がＴＴ型である場合、又は、ＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３７８）がＴＴ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）がＴＴ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ６９９）がＭＭ型又はＭＴ型である場合を第二群とし、
ＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３７８）がＴＣ型又はＣＣ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）がＣＣ型又はＣＴ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ６９９）がＴＴ型である場合、ＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３７８）がＴＣ型又はＣＣ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）がＴＴ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ６９９）がＭＭ型又はＭＴ型である場合、又はＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３７８）がＴＴ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）がＴＴ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ６９９）がＴＴ型である場合を第三群とし、
ＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３７８）がＴＣ型又はＣＣ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）がＴＴ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ６９９）がＴＴ型である場合を第四群とし、
前記工程（ｂ）において、前記第四群、前記第三群、前記第二群、前記第一群の順にリスクが高いと判定することを特徴とする、請求項１０に記載の高血圧発症リスク判定方法。
【請求項３７】
ＳＮＰ（ｒｓ２６８１４７２）がＧＧ型又はＡＧ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）がＣＣ型又はＣＴ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ６９９）がＭＭ型又はＭＴ型（Ｍはメチオニン（Ｍｅｔ）であり、Ｔはトレオニン（Ｔｈｒ）を示す。）である場合を第一群とし、
ＳＮＰ（ｒｓ２６８１４７２）がＡＡ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）がＣＣ型又はＣＴ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ６９９）がＭＭ型又はＭＴ型である場合、ＳＮＰ（ｒｓ２６８１４７２）がＧＧ型又はＡＧ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）がＣＣ型又はＣＴ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ６９９）がＴＴ型である場合、又はＳＮＰ（ｒｓ２６８１４７２）がＧＧ型又はＡＧ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）がＴＴ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ６９９）がＭＭ型又はＭＴ型である場合を第二群とし、
ＳＮＰ（ｒｓ２６８１４７２）がＡＡ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）がＣＣ型又はＣＴ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ６９９）がＴＴ型である場合、ＳＮＰ（ｒｓ２６８１４７２）がＡＡ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）がＴＴ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ６９９）がＭＭ型又はＭＴ型である場合、又はＳＮＰ（ｒｓ２６８１４７２）がＧＧ型又はＡＧ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）がＴＴ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ６９９）がＴＴ型である場合を第三群とし、
ＳＮＰ（ｒｓ２６８１４７２）がＡＡ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）がＴＴ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ６９９）がＴＴ型である場合を第四群とし、
前記工程（ｂ）において、前記第四群、前記第三群、前記第二群、前記第一群の順にリスクが高いと判定することを特徴とする、請求項１０に記載の高血圧発症リスク判定方法。
【請求項３８】
ＳＮＰ（ｒｓ１４０１９８２）がＡＡ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）がＣＣ型又はＣＴ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ６９９）がＭＭ型又はＭＴ型（Ｍはメチオニン（Ｍｅｔ）であり、Ｔはトレオニン（Ｔｈｒ）を示す。）である場合を第一群とし、
ＳＮＰ（ｒｓ１４０１９８２）がＡＧ型又はＧＧ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）がＣＣ型又はＣＴ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ６９９）がＭＭ型又はＭＴ型である場合、ＳＮＰ（ｒｓ１４０１９８２）がＡＡ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）がＣＣ型又はＣＴ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ６９９）がＴＴ型である場合、又はＳＮＰ（ｒｓ１４０１９８２）がＡＡ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）がＴＴ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ６９９）がＭＭ型又はＭＴ型である場合を第二群とし、
ＳＮＰ（ｒｓ１４０１９８２）がＡＧ型又はＧＧ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）がＣＣ型又はＣＴ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ６９９）がＴＴ型である場合、ＳＮＰ（ｒｓ１４０１９８２）がＡＧ型又はＧＧ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）がＴＴ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ６９９）がＭＭ型又はＭＴ型である場合、又はＳＮＰ（ｒｓ１４０１９８２）がＡＡ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）がＴＴ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ６９９）がＴＴ型である場合を第三群とし、
ＳＮＰ（ｒｓ１４０１９８２）がＡＧ型又はＧＧ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）がＴＴ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ６９９）がＴＴ型である場合を第四群とし、
前記工程（ｂ）において、前記第四群、前記第三群、前記第二群、前記第一群の順にリスクが高いと判定することを特徴とする、請求項１０に記載の高血圧発症リスク判定方法。
【請求項３９】
前記ヒト個体の性別、年齢、ＢＭＩ値、脳血管疾患の有無、心疾患の有無、喫煙の有無、飲酒量、総コレステロール値、ＨＤＬコレステロール値、中性脂肪値、空腹時血糖値からなる群より選ばれる１つ以上の環境因子と、前記工程（ａ）により得られたタイピング結果を組み合わせて行うことを特徴とする、請求項９に記載の高血圧発症リスク判定方法。
【請求項４０】
下記の（１ａ）、（１ｂ）、（１ｄ）、又は（１ｅ）の何れかの塩基配列を有し、ＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３７８）を検出するためのプライマー又はプローブとして用いることができるポリヌクレオチド、下記の（２ａ）、（２ｂ）、（２ｄ）、又は（２ｅ）の何れかの塩基配列を有し、ＳＮＰ（ｒｓ２６８１４７２）を検出するためのプライマー又はプローブとして用いることができるポリヌクレオチド、及び下記の（３ａ）、（３ｂ）、（３ｄ）、又は（３ｅ）の何れかの塩基配列を有し、ＳＮＰ（ｒｓ１４０１９８２）を検出するためのプライマー又はプローブとして用いることができるポリヌクレオチドからなる群より選ばれる１以上を含むことを特徴とする高血圧発症リスク判定用ＳＮＰタイピングキット。
（１ａ）配列番号５で表される塩基配列、又は配列番号５で表される塩基配列のＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３７８）を含む１５塩基長以上の部分配列である塩基配列。
（１ｂ）前記（１ａ）の塩基配列と相補的な塩基配列。
（１ｄ）配列番号６で表される塩基配列、又は配列番号６で表される塩基配列のＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３７８）を含む１５塩基長以上の部分配列である塩基配列。
（１ｅ）前記（１ｄ）の塩基配列と相補的な塩基配列。
（２ａ）配列番号１２で表される塩基配列、又は配列番号１２で表される塩基配列のＳＮＰ（ｒｓ２６８１４７２）を含む１５塩基長以上の部分配列である塩基配列。
（２ｂ）前記（２ａ）の塩基配列と相補的な塩基配列。
（２ｄ）配列番号１３で表される塩基配列、又は配列番号１３で表される塩基配列のＳＮＰ（ｒｓ２６８１４７２）を含む１５塩基長以上の部分配列である塩基配列。
（２ｅ）前記（２ｄ）の塩基配列と相補的な塩基配列。
（３ａ）配列番号１９で表される塩基配列、又は配列番号１９で表される塩基配列のＳＮＰ（ｒｓ１４０１９８２）を含む１５塩基長以上の部分配列である塩基配列。
（３ｂ）前記（３ａ）の塩基配列と相補的な塩基配列。
（３ｄ）配列番号２０で表される塩基配列、又は配列番号２０で表される塩基配列のＳＮＰ（ｒｓ１４０１９８２）を含む１５塩基長以上の部分配列である塩基配列。
（３ｅ）前記（３ｄ）の塩基配列と相補的な塩基配列。
【請求項４１】
下記の（１ａ）、（１ｂ）、（１ｄ）、又は（１ｅ）の何れかの塩基配列を有し、ＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３７８）を検出するためのプライマー又はプローブとして用いることができるポリヌクレオチド、下記の（２ａ）、（２ｂ）、（２ｄ）、又は（２ｅ）の何れかの塩基配列を有し、ＳＮＰ（ｒｓ２６８１４７２）を検出するためのプライマー又はプローブとして用いることができるポリヌクレオチド、下記の（３ａ）、（３ｂ）、（３ｄ）、又は（３ｅ）の何れかの塩基配列を有し、ＳＮＰ（ｒｓ１４０１９８２）を検出するためのプライマー又はプローブとして用いることができるポリヌクレオチド、下記の（４ａ）、（４ｂ）、（４ｄ）、又は（４ｅ）のいずれかの塩基配列を有し、ＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）を検出するためのプライマー又はプローブとして用いることができるポリヌクレオチド、及び下記の（５ａ）、（５ｂ）、（５ｄ）、又は（５ｅ）のいずれかの塩基配列を有し、ＳＮＰ（ｒｓ６９９）を検出するためのプライマー及びプローブとして用いることができるポリヌクレオチドからなる群より選ばれる１以上を含むことを特徴とする高血圧発症リスク判定用ＳＮＰタイピングキット。
（１ａ）配列番号５で表される塩基配列、又は配列番号５で表される塩基配列のＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３７８）を含む１５塩基長以上の部分配列である塩基配列。
（１ｂ）前記（１ａ）の塩基配列と相補的な塩基配列。
（１ｄ）配列番号６で表される塩基配列、又は配列番号６で表される塩基配列のＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３７８）を含む１５塩基長以上の部分配列である塩基配列。
（１ｅ）前記（１ｄ）の塩基配列と相補的な塩基配列。
（２ａ）配列番号１２で表される塩基配列、又は配列番号１２で表される塩基配列のＳＮＰ（ｒｓ２６８１４７２）を含む１５塩基長以上の部分配列である塩基配列。
（２ｂ）前記（２ａ）の塩基配列と相補的な塩基配列。
（２ｄ）配列番号１３で表される塩基配列、又は配列番号１３で表される塩基配列のＳＮＰ（ｒｓ２６８１４７２）を含む１５塩基長以上の部分配列である塩基配列。
（２ｅ）前記（２ｄ）の塩基配列と相補的な塩基配列。
（３ａ）配列番号１９で表される塩基配列、又は配列番号１９で表される塩基配列のＳＮＰ（ｒｓ１４０１９８２）を含む１５塩基長以上の部分配列である塩基配列。
（３ｂ）前記（３ａ）の塩基配列と相補的な塩基配列。
（３ｄ）配列番号２０で表される塩基配列、又は配列番号２０で表される塩基配列のＳＮＰ（ｒｓ１４０１９８２）を含む１５塩基長以上の部分配列である塩基配列。
（３ｅ）前記（３ｄ）の塩基配列と相補的な塩基配列。
（４ａ）配列番号２６で表される塩基配列、又は配列番号２６で表される塩基配列のＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）を含む１５塩基長以上の部分配列である塩基配列。
（４ｂ）前記（４ａ）の塩基配列と相補的な塩基配列。
（４ｄ）配列番号２７で表される塩基配列、又は配列番号２７で表される塩基配列のＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）を含む１５塩基長以上の部分配列である塩基配列。
（４ｅ）前記（４ｄ）の塩基配列と相補的な塩基配列。
（５ａ）配列番号３３で表される塩基配列、又は配列番号３３で表される塩基配列のＳＮＰ（ｒｓ６９９）を含む１５塩基長以上の部分配列である塩基配列。
（５ｂ）前記（５ａ）の塩基配列と相補的な塩基配列。
（５ｄ）配列番号３４で表される塩基配列、又は配列番号３４で表される塩基配列のＳＮＰ（ｒｓ６９９）を含む１５塩基長以上の部分配列である塩基配列。
（５ｅ）前記（５ｄ）の塩基配列と相補的な塩基配列。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、高血圧発症のリスク判定に用いることができるＳＮＰからなる遺伝子マーカー、該遺伝子マーカーを検出するためのプライマー又はプローブとして用いることができる高血圧発症リスク判定用ポリヌクレオチド、該ＳＮＰを用いた高血圧発症リスク判定方法、該ＳＮＰのタイピングに用いる高血圧発症リスク判定用マイクロアレイ、及び該高血圧発症リスク判定方法に用いるキット等に関する。
本願は、２００８年２月２１日に、日本に出願された特願２００８−０４０２０８号に基づき優先権を主張し、その内容をここに援用する。
【背景技術】
【０００２】
高血圧は、例えば、冠動脈疾患、脳卒中、慢性腎疾患等の主要な発症要因であり、高血圧の予防は、社会的・公衆衛生的に重要である。高血圧は、多くの要因によって発症が誘引される多因子疾患であり、これらの高血圧を誘引する要因を危険因子（リスクファクター）という。高血圧の危険因子は、主に環境要因と遺伝要因に大別されるが、これらの相互作用が重要な役割を果たすと考えられている。【０００３】
危険因子のうち、環境要因としては、例えば、加齢、肥満、ストレス、塩分過剰摂取等が挙げられる。一方、遺伝要因としては、様々な高血圧感受性遺伝子が知られている。ここで、「高血圧感受性遺伝子」とは、前記遺伝子を保有することで高血圧を発症する危険率が上昇する遺伝子を意味する。つまり、高血圧感受性遺伝子を有するヒトは、高血圧感受性遺伝子を有さないヒトよりも高血圧に罹患し易いと判断される。そして、高血圧のような多因子疾患においては、その感受性遺伝子の多くは、一塩基多型（ＳＮＰ）等の多型の対立遺伝子（アレル）であると考えられている。【０００４】
これまで、遺伝子多型を含む高血圧感受性遺伝子としては、アンギオテンシノーゲン、α−アデューシン、Ｇタンパク質β３サブユニット、β２アドレナリン受容体、グリコプロテインＩａ（ＧＰＩａ）、ケモカイン受容体２（ＣＣＲ２）、アポリポプロテインＣ（ＡｐｏＣ−III）、Ｇ−タンパク質β３サブユニット（ＧＰβ３）、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦα）、インスリン受容体サブストレート１（ＩＲＳ−１）、グリコプロテインＩｂα（ＧＰＩｂα）、Ｃ−タイプ・ナトリウム利尿ホルモン（ＣＮＰ）、ヘム・オキシゲナーゼ１（ＨＭＯＸ−１）、ＳＣＮＮ１Ａ等の各遺伝子が報告されている（例えば、特許文献１〜４参照。）。さらに近年、ＣＹＰ１７遺伝子（ｒｓ６１６２）多型、ＥＸＯＳＣ３遺伝子（ｒｓ７１５８）多型、ＡＣＣＮ１遺伝子（ｒｓ２８９３３）多型、ＫＣＮＭＢ４遺伝子（ｒｓ７１０６５２）多型、ＫＣＮＩＰ２遺伝子（ｒｓ７５５３８１）多型、ＡＴＰ２Ａ３遺伝子（ｒｓ８８７３８７）多型、ＲＡＣ２遺伝子（ｒｓ９２９０２３）多型、ＣＤ３ＥＡＰ遺伝子（ｒｓ９６７５９１）多型、ＣＡＬＣＲ遺伝子（ｒｓ１０４２１３８）多型、ＡＴＰ１０Ｄ遺伝子（ｒｓ１０５８７９３）多型、ＧＮＡ１４遺伝子（ｒｓ１８０１２５８）多型、ＰＴＨＲ１遺伝子（ｒｓ１８６９８７２）多型、ＡＴＰ２Ｂ１遺伝子（ｒｓ２０７０７５９）多型、ＨＬＡ−ＤＭＢ遺伝子（ｒｓ２０７１５５６）多型、ＳＬＣ１３Ａ１遺伝子（ｒｓ２１４０５１６）多型、ＳＬＣ２Ａ１１遺伝子（ｒｓ２２３６６２０）多型、ＧＮＡＩ２遺伝子（ｒｓ２２３６９４３）多型、ＣＡＣＮＡ２Ｄ２遺伝子（ｒｓ２２３６９５７）多型、ＰＲＫＷＮＫ１遺伝子（ｒｓ２２５５３９０）多型、ＳＬＣ２２Ａ７遺伝子（ｒｓ２２７０８６０）多型、ＫＣＮＮ１遺伝子（ｒｓ２２７８９９３）多型、ＳＬＣ２１Ａ６遺伝子（ｒｓ２２９１０７５）多型、ＣＡＣＮＡ１Ｅ遺伝子（ｒｓ２２９３９９０）多型、ＳＬＣ２６Ａ８遺伝子（ｒｓ２２９５８５２）多型、ＥＲＣＣ１遺伝子（ｒｓ２２９８８８１）多型、ＤＬＧＡＰ２遺伝子（ｒｓ２３０１９６３）多型、ＣＯＬ４Ａ１遺伝子（ｒｓ２３０５０８０）多型、ＧＵＣＡ１Ｃ遺伝子（ｒｓ２７１５７０９）多型、ＡＴＰ１０Ｃ遺伝子（ｒｓ３７３６１８６）多型、ＨＣＮ４遺伝子（ｒｓ３７４３４９６）多型、ＰＴＰＲＴ遺伝子（ｒｓ３７４６５３９）多型、ＦＧＦ２遺伝子（ｒｓ３７４７６７６）多型、ＣＨＧＡ遺伝子（ｒｓ３７５９７１７）多型、ＰＰＰ１Ｒ１Ｂ遺伝子（ｒｓ３７６４３５２）多型、ＡＤＯＲＡ１遺伝子（ｒｓ３７６６５５４）多型、ＲＧＳ１９ＩＰ１遺伝子（ｒｓ３８１５７１５）多型、ＲＧＳ２０遺伝子（ｒｓ３８１６７７２）多型が高血圧感受性遺伝子多型として有望であると報告されている（例えば、特許文献５参照。）。【０００５】
高血圧の治療は、高血圧により誘発される冠動脈疾患等の発症を防止するために、血圧を下げることを目的とする。治療方法は、主に、食生活等の生活習慣の改善による高血圧の危険因子の軽減と、降圧治療剤の投薬療法に大別される。通常は、各患者のリスクを判定し、その判定結果と実際の血圧とに基づいて、降圧目標や治療方法が決定される。例えば、まず、収縮期血圧／拡張期血圧が、１４０〜１５９／９０〜９９ｍｍＨｇを軽症高血圧、１６０〜１７９／１００〜１０９ｍｍＨｇを中等症高血圧、≧１８０／≧１１０ｍｍＨｇを重症高血圧と分類した後、血圧以外の危険因子を考慮してリスクが判定される。例えば、軽症高血圧であり、他に危険因子を有さない患者は低リスク群、軽症高血圧であり、幾つかの危険因子を有する患者は中等リスク群、軽症高血圧であっても、糖尿病等の危険性の高い危険因子を有する患者は高リスク群と判断される。通常、低リスク群や中等リスク群の場合には、まず、一定期間の生活習慣の修正を行い、その後血圧が十分に低下しない場合に投薬療法がなされるが、高リスク群の患者に対しては、一定期間の生活習慣の修正と平行して投薬療法がなされる。つまり、血圧が同程度であったとしても、必ずしも同じ治療方法ではなく、各患者のリスクに応じて治療方法が適宜選択されている。このため、高血圧発症のリスクを適正に評価することが極めて重要である。【０００６】
大部分の危険因子は、それぞれ単独では必ずしも高血圧発症の引き金となるわけではない。特に、遺伝要因である高血圧感受性遺伝子の場合には、保有する複数の高血圧感受性遺伝子が互いに影響しあう結果、高血圧を発症すると考えられている。したがって、高血圧発症のリスク評価においては、保有する高血圧感受性遺伝子の数が多いほど、高リスク群と判断される。このため、できるだけ多くの高血圧感受性遺伝子の有無を調べることにより、より適正に高血圧発症のリスクを評価することができると考えられるが、高血圧感受性遺伝子は数多く報告されており、これらを全て検査することは、評価の迅速性及び経済性の観点から好ましくない。また、保有の有無と高血圧発症との相関性は高血圧感受性遺伝子ごとに異なるため、相関性が比較的低い高血圧感受性遺伝子をリスク評価の判断資料とした場合には、信頼性の高い評価を得ることはできない。
【特許文献１】特開２００４−２２２５０３号公報
【特許文献２】特開２００４−１１３０９４号公報
【特許文献３】特開２００４−３３０５１号公報
【特許文献４】特開２００４−２４１２５号公報
【特許文献５】特開２００７−１４３５０４号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
すなわち、適正に高血圧発症のリスクを評価するためには、高血圧感受性遺伝子高血圧発症との相関性の高い有用な高血圧感受性遺伝子を、遺伝子マーカーとして用いることが好ましく、現実的に臨床上測定可能な範囲内の数の有用な高血圧感受性遺伝子を組み合わせて遺伝子マーカーとして用いることがより好ましい。しかしながら、これまでに報告されている高血圧感受性遺伝子は、保有の有無と高血圧発症との相関性は観察されているものの、相関の程度は不十分であり、また、リスク評価の信頼性をより高めることができる高血圧感受性遺伝子の組み合わせはほとんどない。【０００８】
本発明は、保有の有無と高血圧発症との相関性が十分に高く、高血圧発症のリスク判定に用いることができるＳＮＰからなる遺伝子マーカー、該ＳＮＰを検出するためのプライマー又はプローブとして用いることができる高血圧発症リスク判定用ポリヌクレオチド、該ＳＮＰを用いた高血圧発症リスク判定方法、該ＳＮＰのタイピングに用いる高血圧発症リスク判定用マイクロアレイ、及び該ＳＮＰのタイピングに用いる高血圧発症リスク判定用キット等を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意研究した結果、８９２４人から採取されたゲノムＤＮＡを対象として、ケース（高血圧）群とコントロール（正常血圧）群におけるＳＮＰの頻度差を調べるケースコントロール相関解析を行った結果、ＡＴＰ２Ｂ１遺伝子とＣＹＰ１１Ｂ２遺伝子のＳＮＰ、特にＡＴＰ２Ｂ１遺伝子のＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３７８）、ＳＮＰ（ｒｓ２６８１４７２）、ＳＮＰ（ｒｓ１４０１９８２）、ＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３６４）、ＣＹＰ１１Ｂ２遺伝子のＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）が、高血圧の遺伝子マーカーとして非常に有用であること、さらに、これらのＳＮＰ、及びＡＧＴ遺伝子のＳＮＰ（ｒｓ６９９）からなる群より選択される２以上のＳＮＰを組み合わせることにより、個々のＳＮＰ単独よりも、より適確に高血圧発症リスクを判定し得ることを見出し、本発明を完成させた。【００１０】
すなわち、本発明の第一の発明は、ＡＴＰ２Ｂ１遺伝子のＳＮＰ（一塩基多型）を含むＡＴＰ２Ｂ１遺伝子の１５塩基長以上の部分塩基配列若しくは全塩基配列、又はこれらのいずれかと相補的な配列からなり、前記ＳＮＰがＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３７８）、ＳＮＰ（ｒｓ２６８１４７２）、ＳＮＰ（ｒｓ１４０１９８２）、及びＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３６４）からなる群より選択される１以上であることを特徴とする高血圧の遺伝子マーカーを提供するものである。
【００１１】
また、下記の（ａ）、（ｂ）、（ｄ）、（ｅ）の何れかの塩基配列を有し、ＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３７８）を検出するためのプライマー又はプローブとして用いることができることを特徴とする高血圧発症リスク判定用ポリヌクレオチドも提供し得る（以下、「第二の発明」ともいう。）；（ａ）配列番号５で表される塩基配列、又は配列番号５で表される塩基配列のＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３７８）を含む１５塩基長以上の部分配列である塩基配列；（ｂ）前記（ａ）の塩基配列と相補的な塩基配列；（ｄ）配列番号６で表される塩基配列、又は配列番号６で表される塩基配列のＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３７８）を含む１５塩基長以上の部分配列である塩基配列；（ｅ）前記（ｄ）の塩基配列と相補的な塩基配列。
【００１２】
また、下記の（ａ）、（ｂ）、（ｄ）、（ｅ）の何れかの塩基配列を有し、ＳＮＰ（ｒｓ２６８１４７２）を検出するためのプライマー又はプローブとして用いることができることを特徴とする高血圧発症リスク判定用ポリヌクレオチドも提供し得る（以下、「第三の発明」ともいう。）；（ａ）配列番号１２で表される塩基配列、又は配列番号１２で表される塩基配列のＳＮＰ（ｒｓ２６８１４７２）を含む１５塩基長以上の部分配列である塩基配列；（ｂ）前記（ａ）の塩基配列と相補的な塩基配列；（ｄ）配列番号１３で表される塩基配列、又は配列番号１３で表される塩基配列のＳＮＰ（ｒｓ２６８１４７２）を含む１５塩基長以上の部分配列である塩基配列；（ｅ）前記（ｄ）の塩基配列と相補的な塩基配列。
【００１３】
また、下記の（ａ）、（ｂ）、（ｄ）、（ｅ）の何れかの塩基配列を有し、ＳＮＰ（ｒｓ１４０１９８２）を検出するためのプライマー又はプローブとして用いることができることを特徴とする高血圧発症リスク判定用ポリヌクレオチドも提供し得る（以下、「第四の発明」ともいう。）；（ａ）配列番号１９で表される塩基配列、又は配列番号１９で表される塩基配列のＳＮＰ（ｒｓ１４０１９８２）を含む１５塩基長以上の部分配列である塩基配列；（ｂ）前記（ａ）の塩基配列と相補的な塩基配列；（ｄ）配列番号２０で表される塩基配列、又は配列番号２０で表される塩基配列のＳＮＰ（ｒｓ１４０１９８２）を含む１５塩基長以上の部分配列である塩基配列；（ｅ）前記（ｄ）の塩基配列と相補的な塩基配列。
【００１４】
また、ＣＹＰ１１Ｂ２遺伝子のＳＮＰであるＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）を含むＣＹＰ１１Ｂ２遺伝子の１５塩基長以上の部分塩基配列又は全塩基配列と、相同的又は相補的な塩基配列からなることを特徴とする高血圧の遺伝子マーカーも提供し得る（以下、「第五の発明」ともいう。）。
【００１５】
また、下記の（ａ）、（ｂ）、（ｄ）、（ｅ）のいずれかの塩基配列を有し、ＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）を検出するためのプライマー又はプローブとして用いることができることを特徴とする高血圧発症リスク判定用ポリヌクレオチドも提供し得る（以下、「第六の発明」ともいう。）；（ａ）配列番号２６で表される塩基配列、又は配列番号２６で表される塩基配列のＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）を含む１５塩基長以上の部分配列である塩基配列；（ｂ）前記（ａ）の塩基配列と相補的な塩基配列；（ｄ）配列番号２７で表される塩基配列、又は配列番号２７で表される塩基配列のＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）を含む１５塩基長以上の部分配列である塩基配列；（ｅ）前記（ｄ）の塩基配列と相補的な塩基配列。
【００１６】
また、本発明の第七の発明は、遺伝子マーカーを用いて、高血圧発症リスクを判定する方法であって、（ａ）ヒト個体から採取された核酸の、ＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３７８）、ＳＮＰ（ｒｓ２６８１４７２）、ＳＮＰ（ｒｓ１４０１９８２）、及びＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３６４）からなる群より選択される１以上をタイピングする工程と、（ｂ）前記工程（ａ）により得られたタイピング結果に基づき、前記ヒト個体の高血圧発症リスクを判定する工程と、を有することを特徴とする、高血圧発症リスク判定方法を提供するものである。
本発明の第七の発明においては、前記工程（ａ）が、さらにＡＧＴ遺伝子のＳＮＰであるＳＮＰ（ｒｓ６９９）、及びＣＹＰ１１Ｂ２遺伝子上のＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）からなる群より選択される１以上をタイピングする工程であることが好ましい。
【００１７】
また、固相担体上に、前記第二、第三、第四、及び第六の発明の高血圧発症リスク判定用ポリヌクレオチドからなる群より選択される１以上が固定されていることを特徴とする高血圧発症リスク判定用マイクロアレイも提供し得る（以下、「第八の発明」ともいう。）。
第八の発明においては、さらに、前記固相担体上に、下記の（ａ）、（ｂ）、（ｄ）、（ｅ）の何れかの塩基配列を有し、ＳＮＰ（ｒｓ６９９）を検出するためのプライマー又はプローブとして用いることができるポリヌクレオチドも固定されていることが好ましい；（ａ）配列番号３３で表される塩基配列、又は配列番号３３で表される塩基配列のＳＮＰ（ｒｓ６９９）を含む１５塩基長以上の部分配列である塩基配列；（ｂ）前記（ａ）の塩基配列と相補的な塩基配列；（ｄ）配列番号３４で表される塩基配列、又は配列番号３４で表される塩基配列のＳＮＰ（ｒｓ６９９）を含む１５塩基長以上の部分配列である塩基配列；（ｅ）前記（ｄ）の塩基配列と相補的な塩基配列。
【００１８】
また、本発明の第九の発明は、前記第二の発明の高血圧発症リスク判定用ポリヌクレオチド、前記第三の発明の高血圧発症リスク判定用ポリヌクレオチド、及び前記第四の発明の高血圧発症リスク判定用ポリヌクレオチドからなる群より選ばれる１以上を含むことを特徴とする高血圧発症リスク判定用ＳＮＰタイピングキットを提供するものである。
【００１９】
また、本発明の第十の発明は、前記第二の発明の高血圧発症リスク判定用ポリヌクレオチド、前記第三の発明の高血圧発症リスク判定用ポリヌクレオチド、前記第四の発明の高血圧発症リスク判定用ポリヌクレオチド、前記第六の発明の高血圧発症リスク判定用ポリヌクレオチド、及び、下記の（ａ）、（ｂ）、（ｄ）、（ｅ）の何れかの塩基配列を有し、ＳＮＰ（ｒｓ６９９）を検出するためのプライマー及びプローブとして用いることができるポリヌクレオチドからなる群より選ばれる１以上を含むことを特徴とする高血圧発症リスク判定用ＳＮＰタイピングキットを提供するものである；（ａ）配列番号３３で表される塩基配列、又は配列番号３３で表される塩基配列のＳＮＰ（ｒｓ６９９）を含む１５塩基長以上の部分配列である塩基配列；（ｂ）前記（ａ）の塩基配列と相補的な塩基配列；（ｄ）配列番号３４で表される塩基配列、又は配列番号３４で表される塩基配列のＳＮＰ（ｒｓ６９９）を含む１５塩基長以上の部分配列である塩基配列；（ｅ）前記（ｄ）の塩基配列と相補的な塩基配列。
【００２０】
また、ＡＴＰ２Ｂ１遺伝子の塩基配列の全部又は一部がｌｏｘＰ配列で挟まれている塩基配列を含むことを特徴とする、ＡＴＰ２Ｂ１遺伝子局所的欠損小動物作製用ｌｏｘＰ組み込みベクターも提供し得る（以下、「第十一の発明」ともいう。）。
【００２１】
また、前記第十一の発明のベクターを用いて作製されたことを特徴とする、ＡＴＰ２Ｂ１遺伝子局所的欠損小動物作製用ｌｏｘＰ組み込み小動物も提供し得る（以下、「第十二の発明」ともいう。）。
【００２２】
また、Ｔｉｅ−２プロモーター、Ｔｉｅ−１プロモーター、Ｆｌｋ−１プロモーター、ＳＭ２２プロモーター、ＳＭ−ＭＨＣプロモーター、Ｗｔ１プロモーター、Ｐ０プロモーター、Ｐａｘ３プロモーター、αＭＨＣプロモーター、Ｎｋｘ２．５プロモーター、Ｔｂｘ１プロモーター、ｔｅｔｒａｃｙｃｌｉｎｅ−ｉｎｄｕｃｉｂｌｅプロモーター、及びＣＭＶ  ｅｎｈａｎｃｅｒ−ｃｈｉｃｋｅｎ  β−ａｃｔｉｎプロモーターからなる群より選択される一のプロモーターを、Ｃｒｅ  Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｓｅの発現プロモーターとする選択的Ｃｒｅ発現トランスジェニック小動物に、前記第十二の発明であるＡＴＰ２Ｂ１遺伝子局所的欠損小動物作製用ｌｏｘＰ組み込み小動物を掛け合わせることにより作製されたことを特徴とする、ＡＴＰ２Ｂ１遺伝子局所的欠損小動物も提供し得る（以下、「第十三の発明」ともいう。）。
【００２３】
また、前記第十三の発明であるＡＴＰ２Ｂ１遺伝子局所的欠損小動物を、カルシウム拮抗薬のスクリーニングのための試験動物として使用することを特徴とする、ＡＴＰ２Ｂ１遺伝子の局所的欠損小動物の使用方法も提供し得る。
【発明の効果】
【００２４】
本発明の第一の発明及び／又は第五の発明である高血圧の遺伝子マーカーは、保有の有無と高血圧発症との相関性が十分に高いＳＮＰからなる遺伝子マーカーである。このため、本発明の高血圧の遺伝子マーカーを用いた本発明の第七の発明である高血圧発症リスク判定方法を用いることにより、より信頼性の高い判定結果を得ることができる。
また、本発明の第二〜第四の発明、又は第六の発明である高血圧発症リスク判定用ポリヌクレオチド、該高血圧発症リスク判定用ポリヌクレオチドが固定されている本発明の第八の発明である高血圧発症リスク判定用マイクロアレイ、該高血圧発症リスク判定用ポリヌクレオチド又は該高血圧発症リスク判定用マイクロアレイを有する本発明の第九の発明及び／又は第十の発明である高血圧発症リスク判定用ＳＮＰタイピングキットのいずれかを用いることにより、本発明の高血圧の遺伝子マーカーであるＳＮＰを、適確かつ簡便に検出し、高精度に効率よく高血圧発症リスクを判定することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２５】
本発明において、「高血圧」とは、循環系障害等の障害を誘発するおそれのあるレベルにまで全身の動脈圧が一過性又は持続的に高くなる状態を意味する。高血圧の具体的な定義は特に限定されないが、例えば、日本高血圧学会が定めた、「高血圧治療ガイドライン２００４」（ＪＳＨ２００４）に準拠し、収縮期血圧／拡張期血圧が１４０／９０ｍｍＨｇ以上である状態を意味する。降圧薬等を服用していない状態で、収縮期血圧が１４０ｍｍＨｇ以上であり、拡張期血圧が９０ｍｍＨｇ以上である場合に加えて、収縮期血圧が１４０ｍｍＨｇ未満であるが、拡張期血圧が９０ｍｍＨｇ以上である場合や、拡張期血圧が９０ｍｍＨｇ未満であるが、収縮期血圧が１４０ｍｍＨｇ以上である場合も含まれる。また、高血圧には主に、本態性高血圧と二次性高血圧に大別され、９０％以上は本態性高血圧に分類されるが、本発明においては、本態性高血圧であることが好ましい。【００２６】
本発明において、「高血圧の遺伝子マーカー」とは、高血圧の遺伝要因のマーカーとなる遺伝子を意味する。本発明の高血圧の遺伝子マーカーは、ＳＮＰを含み、その対立遺伝子（アレル）として、高血圧感受性遺伝子を含む。【００２７】
本発明において、「高血圧発症リスク」とは、高血圧の易罹患性（高血圧への罹りやすさ）をいう。すなわち、本発明において、あるヒト個体が高リスク群であるとは、該ヒト個体が高血圧を発症する危険率が高いと予想されることを意味し、低リスク群であるとは、該ヒト個体が高血圧を発症する危険率が低いと予想されることを意味する。【００２８】
本発明において、ＳＮＰは、好ましくは公共データベースに登録されたＳＮＰであって、そのリファレンス番号から特定可能なＳＮＰである。例えば、ＮＣＢＩ（Ｎａｔｉｏｎａｌ  ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ）のＳＮＰデータベース（ｄｂＳＮＰ  ＢＵＩＬＤ１２４）のリファレンス番号であるｒｓ番号により特定されるＳＮＰや、東京大学医科学研究所が整備した日本人のＳＮＰのデータベースＪＳＮＰ（登録商標）（ｈｔｔｐ：//ｓｎｐ．ｉｍｓ．ｕ−ｔｏｋｙｏ．ａｃ．ｊｐ/ｉｎｄｅｘ＿ｊａ.ｈｔｍｌ）のリファレンス番号であるＩＭＳ−ＪＳＴ番号により特定されるＳＮＰ等がある。【００２９】
本発明の第一の発明である高血圧の遺伝子マーカーは、ＳＮＰを含み、アレルとしてＡＴＰ２Ｂ１（ＡＴＰａｓｅ，Ｃａ２＋  ｔｒａｎｓｐｏｒｔｉｎｇ，ｐｌａｓｍａ  ｍｅｍｂｒａｎｅ  １）遺伝子を含むものである。具体的には、ＡＴＰ２Ｂ遺伝子のＳＮＰとして、ＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３７８）、ＳＮＰ（ｒｓ２６８１４７２）、ＳＮＰ（ｒｓ１４０１９８２）、ＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３６４）からなる群より選択される１以上を含むＡＴＰ２Ｂ１遺伝子の部分塩基配列又は全塩基配列と、相同的又は相補的な配列からなることを特徴とする。該遺伝子マーカーが含むＡＴＰ２Ｂ遺伝子のＳＮＰは、１種であってもよく、２種以上であってもよい。例えば、ＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３７８）のみであってもよく、ＳＮＰ（ｒｓ２６８１４７２）のみであってもよく、ＳＮＰ（ｒｓ１４０１９８２）のみであってもよく、ＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３６４）のみであってもよい。また、ＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３７８）とＳＮＰ（ｒｓ２６８１４７２）を組み合わせたものであってもよく、ＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３７８）とＳＮＰ（ｒｓ１４０１９８２）を組み合わせたものであってもよく、ＳＮＰ（ｒｓ２６８１４７２）とＳＮＰ（ｒｓ１４０１９８２）を組み合わせたものであってもよく、ＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３７８）とＳＮＰ（ｒｓ２６８１４７２）とＳＮＰ（ｒｓ１４０１９８２）とＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３６４）とを組み合わせたものであってもよい。【００３０】
ＡＴＰ２Ｂ１は、正常血圧群と高血圧群において発現量が有意に増大している酵素であり、ＡＴＰ２Ｂ１遺伝子は公知の高血圧感受性遺伝子である。ヒトのＡＴＰ２Ｂ１遺伝子（ＮＣＢＩアクセッション番号：ＮＣ＿００００１２）において、例えば、プロモーター領域に存在するＳＮＰ（ｒｓ２０７０７５９）が、各多型の高血圧発症リスクに有意差があること（例えば、特許文献５参照。）等が報告されているが、診断に用いるほど有意な結果とはなっていない。一方で、本態性高血圧患者４４名（ケース群）と正常血圧者４０名（コントロール群）において、ＡＴＰ２Ｂ１遺伝子の２２個のエキソン全てに対して、ＳＳＣＰ（Ｓｉｎｇｌｅ  Ｓｔｒａｎｄ  Ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ）解析とＨＴＸ（Ｈｅｔｅｒｏｄｕｐｌｅｘ）解析を行った結果、感度１００％であったにも関わらず、ケース群とコントロール群において有意な差異が観察されなかったという報告がある（例えば、G. R. Monteith et al.、 Biochemical and biophysical research communications、１９９７年、第２３０巻第２号、第３４４〜３４６ページ参照。）。つまり、ＡＴＰ２Ｂ１遺伝子は公知の高血圧感受性遺伝子であるが、高血圧発症リスクにはＡＴＰ２Ｂ１の発現量の多寡が重要であると考えられていたものであり、プロモーター領域以外のＳＮＰ等の遺伝子多型によって高血圧発症リスクが異なることは本発明者らが初めて明らかにした知見である。【００３１】
ここで、ＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３７８）は、Ｔ／Ｃ多型であり、後記実施例３の結果から明らかであるように、正常血圧群と比較した場合に高血圧群において、ＴアレルよりもＣアレルの頻度が有意に高く、高血圧の遺伝子マーカーとして有用である。【００３２】
また、ＳＮＰ（ｒｓ２６８１４７２）は、Ｇ／Ａ多型であり、後記実施例９の結果から明らかであるように、正常血圧群と比較した場合に高血圧群において、ＧアレルよりもＡアレルの頻度が有意に高く、高血圧の遺伝子マーカーとして有用である。【００３３】
また、ＳＮＰ（ｒｓ１４０１９８２）は、Ａ／Ｇ多型であり、後記実施例１５の結果から明らかであるように、正常血圧群と比較した場合に高血圧群において、ＡアレルよりもＧアレルの頻度が有意に高く、高血圧の遺伝子マーカーとして有用である。【００３４】
さらに、ＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３６４）は、Ｇ／Ｔ多型であり、後記実施例２１の結果から明らかであるように、正常血圧群と比較した場合に高血圧群において、ＧアレルよりもＴアレルの頻度が有意に高く、高血圧の遺伝子マーカーとして有用である。【００３５】
本発明の第五の発明である高血圧の遺伝子マーカーは、ＳＮＰを含み、アレルとしてＣＹＰ１１Ｂ２（Ｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅ  Ｐ４５０，ｓｕｂｆａｍｉｌｙ  ＸＩＢ２）遺伝子を含むものである。具体的には、ＣＹＰ１１Ｂ２遺伝子のＳＮＰであるＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）を含むＣＹＰ１１Ｂ２遺伝子の部分塩基配列又は全塩基配列と、相同的又は相補的な塩基配列からなることを特徴とする。ＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）は、Ｃ／Ｔ多型であり、後記実施例２８の結果から明らかであるように、正常血圧群と比較した場合に高血圧群において、ＣアレルよりもＴアレルの頻度が有意に高く、高血圧の遺伝子マーカーとして有用である。なお、ＣＹＰ１１Ｂ２遺伝子は、特に高血圧との関連を示す知見は報告されておらず、ＣＹＰ１１Ｂ２遺伝子が高血圧感受性遺伝子であることは、本発明者らが初めて明らかにした知見である。【００３６】
本発明の第七の発明である高血圧発症リスク判定方法は、本発明の第一の発明及び／又は第五の発明である高血圧の遺伝子マーカー（以下、「本発明の高血圧の遺伝子マーカー」ということがある。）を用いて高血圧発症のリスクを判定する方法である。具体的には、（ａ）ヒト個体から採取された核酸の、ＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３７８）、ＳＮＰ（ｒｓ２６８１４７２）、ＳＮＰ（ｒｓ１４０１９８２）、ＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３６４）、及びＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）からなる群より選択される１以上をタイピングする工程と、（ｂ）前記工程（ａ）により得られたタイピング結果に基づき、前記ヒト個体の高血圧発症リスクを判定する工程と、を有することを特徴とする。ＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３７８）、ＳＮＰ（ｒｓ２６８１４７２）、ＳＮＰ（ｒｓ１４０１９８２）、ＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３６４）、ＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）は、いずれも多型ごとに高血圧の発症し易さが統計学上有意に異なるため、同定されたＳＮＰの遺伝子型から、高血圧発症リスクを判定することができる。【００３７】
まず、工程（ａ）として、ヒト個体から採取された核酸の、ＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３７８）、ＳＮＰ（ｒｓ２６８１４７２）、ＳＮＰ（ｒｓ１４０１９８２）、ＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３６４）、及びＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）からなる群より選択される１以上をタイピングする。
本発明において、「ＳＮＰをタイピングする」とは、核酸の塩基配列を解析し、ＳＮＰを検出し、多型を同定することを意味する。例えば、判定対象である核酸のＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３７８）が、ＴＴ型、ＴＣ型、ＣＣ型のいずれであるのかを同定する。【００３８】
ＳＮＰタイピングに供される核酸は、ヒト個体から採取されたものであれば、特に限定されるものではなく、血液や体液等の生体試料（検体）中に含有される核酸や、これらの生体試料等から抽出された核酸であってもよく、これらの核酸を鋳型として増幅された核酸であってもよい。また、生体試料中に含有されるＲＮＡから逆転写酵素を用いて合成されたｃＤＮＡであってもよい。【００３９】
ＳＮＰのタイピング方法は、通常ＳＮＰの検出に用いられている方法であれば、特に限定されるものではない。例えば、Ｉｎｖａｄｅｒ（商標、Ｔｈｉｒｄ Ｗａｖｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社）法、ＴａｑＭａｎ（商標、Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社）法、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量分析法、マイクロアレイ法、シークエンス法、ＰＣＲ（Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  Ｃｈａｉｎ  Ｒｅａｃｔｉｏｎ）等の塩基配列増幅法を利用した検出法等が挙げられる。特に、ＴａｑＭａｎ法、ＰＣＲ法、マイクロアレイ法等のように、各多型に特異的にハイブリダイズするプライマーやプローブを用いてＳＮＰを検出する方法であることが好ましい。例えば、ＰＣＲ法では、野生型アレルにのみ完全に相補的なポリヌクレオチドを野生型プライマーとし、変異型アレルにのみ完全に相補的なポリヌクレオチドを変異型プライマーとした場合に、ＳＮＰを含む核酸を鋳型として各プライマーを用いてＰＣＲを行い、ＰＣＲ産物が得られるか否かによりＳＮＰの遺伝子型を同定することができる。同様に、野生型アレルにのみ完全に相補的なポリヌクレオチドを野生型プローブとし、変異型アレルにのみ完全に相補的なポリヌクレオチドを変異型プローブとした場合に、ＳＮＰを含む核酸が固定されたマイクロアレイを用いて各プローブを用いた場合にハイブリダイズするか否かによりＳＮＰの遺伝子型を同定することができる。これらの各ＳＮＰに特異的なプローブやプライマーを用いる方法は、シークエンス法等と異なり、ＳＮＰを直接識別するため、より信頼性が高く、また、ＳＮＰタイピングに要する時間が短く済み、簡便である。【００４０】
なお、各ＳＮＰに特異的なプライマーを用いてＰＣＲを行った場合に得られるＰＣＲ産物の検出は、ＰＣＲ産物を検出・定量する場合に通常用いられるいずれの方法によって行っても良い。例えば、電気泳動法により検出してもよく、ＳＹＢＲ  Ｇｒｅｅｎ等の蛍光インターカレーターを用いたリアルタイムＰＣＲにより検出してもよく、一分子蛍光分析法により検出してもよい。【００４１】
ＳＮＰを検出するためのプライマー又はプローブとして用いることができる高血圧発症リスク判定用ポリヌクレオチドは、該ＳＮＰを含む遺伝子の該ＳＮＰを含む部分領域又はその相補鎖にハイブリダイズし得るポリヌクレオチドであれば、特に限定されるものではない。また、高血圧発症リスク判定用ポリヌクレオチドの塩基長やＴｍ値等は、タイピング方法や反応条件等を考慮して、適宜決定することができるが、高血圧発症リスク判定用ポリヌクレオチドの塩基長としては、１０〜６０塩基長であることが好ましく、１５〜５０塩基長であることがより好ましい。【００４２】
このような高血圧発症リスク判定用ポリヌクレオチドの設計は、当該技術分野においてよく知られている方法のいずれを用いても行うことができる。例えば、公知のゲノム配列データと汎用されているプライマー設計ツールを用いて、簡便に設計することができる。該プライマー設計ツールとして、例えば、Ｗｅｂ上で利用可能なＰｒｉｍｅｒ３等がある。また、公知のゲノム配列データは、通常、国際的な塩基配列データベースである、ＮＣＢＩや、ＤＤＢＪ（ＤＮＡ  Ｄａｔａ  Ｂａｎｋ  ｏｆ  Ｊａｐａｎ）等において入手することができる。【００４３】
このようにして設計した高血圧発症リスク判定用ポリヌクレオチドは、当該技術分野においてよく知られている方法のいずれを用いても合成することができる。例えば、ポリ合成メーカーに合成をされ依頼してもよく、市販の合成機を用いて独自に合成してもよい。【００４４】
ＡＴＰ２Ｂ１遺伝子上のＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３７８）を検出するためのプライマー又はプローブとしては、特に、下記の（ａ）〜（ｆ）の何れかの塩基配列を有している本発明の第二の発明である高血圧発症リスク判定用ポリヌクレオチド（以下、「ＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３７８）検出用ポリヌクレオチド」という。）を用いることが好ましい。
（ａ）配列番号５で表される塩基配列、又は配列番号５で表される塩基配列のＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３７８）を含む部分配列である塩基配列。
（ｂ）前記（ａ）の塩基配列と相補的な塩基配列。
（ｃ）前記（ａ）又は（ｂ）の塩基配列において、ＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３７８）以外の１〜数個の塩基が欠失、置換又は付加されている塩基配列であって、当該塩基配列からなるポリヌクレオチドが、前記（ａ）又は（ｂ）の塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズすることができる塩基配列。
（ｄ）配列番号６で表される塩基配列、又は配列番号６で表される塩基配列のＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３７８）を含む部分配列である塩基配列。
（ｅ）前記（ｄ）の塩基配列と相補的な塩基配列。
（ｆ）前記（ｄ）又は（ｅ）の塩基配列において、ＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３７８）以外の１〜数個の塩基が欠失、置換又は付加されている塩基配列であって、当該塩基配列からなるポリヌクレオチドが、前記（ｄ）又は（ｅ）の塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズすることができる塩基配列。【００４５】
なお、上記（ａ）〜（ｃ）の何れかの塩基配列を有しているＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３７８）検出用ポリヌクレオチドは、ＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３７８）のＣアレルを検出し得るポリヌクレオチドであり、上記（ｄ）〜（ｆ）の何れかの塩基配列を有しているＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３７８）検出用ポリヌクレオチドは、ＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３７８）のＴアレルを検出し得るポリヌクレオチドである。【００４６】
ＡＴＰ２Ｂ１遺伝子上のＳＮＰ（ｒｓ２６８１４７２）を検出するためのプライマー又はプローブとしては、特に、下記の（ａ）〜（ｆ）の何れかの塩基配列を有している本発明の第三の発明である高血圧発症リスク判定用ポリヌクレオチド（以下、「ＳＮＰ（ｒｓ２６８１４７２）検出用ポリヌクレオチド」という。）を用いることが好ましい。
（ａ）配列番号１２で表される塩基配列、又は配列番号１２で表される塩基配列のＳＮＰ（ｒｓ２６８１４７２）を含む部分配列である塩基配列。
（ｂ）前記（ａ）の塩基配列と相補的な塩基配列。
（ｃ）前記（ａ）又は（ｂ）の塩基配列において、ＳＮＰ（ｒｓ２６８１４７２）以外の１〜数個の塩基が欠失、置換又は付加されている塩基配列であって、当該塩基配列からなるポリヌクレオチドが、前記（ａ）又は（ｂ）の塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズすることができる塩基配列。
（ｄ）配列番号１３で表される塩基配列、又は配列番号１３で表される塩基配列のＳＮＰ（ｒｓ２６８１４７２）を含む部分配列である塩基配列。
（ｅ）前記（ｄ）の塩基配列と相補的な塩基配列。
（ｆ）前記（ｄ）又は（ｅ）の塩基配列において、ＳＮＰ（ｒｓ２６８１４７２）以外の１〜数個の塩基が欠失、置換又は付加されている塩基配列であって、当該塩基配列からなるポリヌクレオチドが、前記（ｄ）又は（ｅ）の塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズすることができる塩基配列。【００４７】
なお、上記（ａ）〜（ｃ）の何れかの塩基配列を有しているＳＮＰ（ｒｓ２６８１４７２）検出用ポリヌクレオチドは、ＳＮＰ（ｒｓ２６８１４７２）のＡアレルを検出し得るポリヌクレオチドであり、上記（ｄ）〜（ｆ）の何れかの塩基配列を有しているＳＮＰ（ｒｓ２６８１４７２）検出用ポリヌクレオチドは、ＳＮＰ（ｒｓ２６８１４７２）のＧアレルを検出し得るポリヌクレオチドである。【００４８】
ＡＴＰ２Ｂ１遺伝子上のＳＮＰ（ｒｓ１４０１９８２）を検出するためのプライマー又はプローブとしては、特に、下記の（ａ）〜（ｆ）の何れかの塩基配列を有している本発明の第四の発明である高血圧発症リスク判定用ポリヌクレオチド（以下、「ＳＮＰ（ｒｓ１４０１９８２）検出用ポリヌクレオチド」という。）を用いることが好ましい。
（ａ）配列番号１９で表される塩基配列、又は配列番号１９で表される塩基配列のＳＮＰ（ｒｓ１４０１９８２）を含む部分配列である塩基配列。
（ｂ）前記（ａ）の塩基配列と相補的な塩基配列。
（ｃ）前記（ａ）又は（ｂ）の塩基配列において、ＳＮＰ（ｒｓ１４０１９８２）以外の１〜数個の塩基が欠失、置換又は付加されている塩基配列であって、当該塩基配列からなるポリヌクレオチドが、前記（ａ）又は（ｂ）の塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズすることができる塩基配列。
（ｄ）配列番号２０で表される塩基配列、又は配列番号２０で表される塩基配列のＳＮＰ（ｒｓ１４０１９８２）を含む部分配列である塩基配列。
（ｅ）前記（ｄ）の塩基配列と相補的な塩基配列。
（ｆ）前記（ｄ）又は（ｅ）の塩基配列において、ＳＮＰ（ｒｓ１４０１９８２）以外の１〜数個の塩基が欠失、置換又は付加されている塩基配列であって、当該塩基配列からなるポリヌクレオチドが、前記（ｄ）又は（ｅ）の塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズすることができる塩基配列。【００４９】
なお、上記（ａ）〜（ｃ）の何れかの塩基配列を有しているＳＮＰ（ｒｓ１４０１９８２）検出用ポリヌクレオチドは、ＳＮＰ（ｒｓ１４０１９８２）のＧアレルを検出し得るポリヌクレオチドであり、上記（ｄ）〜（ｆ）の何れかの塩基配列を有しているＳＮＰ（ｒｓ１４０１９８２）検出用ポリヌクレオチドは、ＳＮＰ（ｒｓ１４０１９８２）のＡアレルを検出し得るポリヌクレオチドである。【００５０】
また、ＣＹＰ１１Ｂ２遺伝子上のＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）を検出するためのプライマー又はプローブとしては、特に、下記の（ａ）〜（ｆ）の何れかの塩基配列を有している本発明の第五の発明である高血圧発症リスク判定用ポリヌクレオチド（以下、「ＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）検出用ポリヌクレオチド」という。）であることが好ましい。
（ａ）配列番号２６で表される塩基配列、又は配列番号２６で表される塩基配列のＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）を含む部分配列である塩基配列。
（ｂ）前記（ａ）の塩基配列と相補的な塩基配列。
（ｃ）前記（ａ）又は（ｂ）の塩基配列において、ＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）以外の１〜数個の塩基が欠失、置換又は付加されている塩基配列であって、当該塩基配列からなるポリヌクレオチドが、前記（ａ）又は（ｂ）の塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズすることができる塩基配列。
（ｄ）配列番号２７で表される塩基配列、又は配列番号２７で表される塩基配列のＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）を含む部分配列である塩基配列。
（ｅ）前記（ｄ）の塩基配列と相補的な塩基配列。
（ｆ）前記（ｄ）又は（ｅ）の塩基配列において、ＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）以外の１〜数個の塩基が欠失、置換又は付加されている塩基配列であって、当該塩基配列からなるポリヌクレオチドが、前記（ｄ）又は（ｅ）の塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズすることができる塩基配列。【００５１】
なお、上記（ａ）〜（ｃ）の何れかの塩基配列を有しているＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）検出用ポリヌクレオチドは、ＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）のＴアレルを検出し得るポリヌクレオチドであり、上記（ｄ）〜（ｆ）の何れかの塩基配列を有しているＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）検出用ポリヌクレオチドは、ＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）のＣアレルを検出し得るポリヌクレオチドである。【００５２】
なお、本発明において、「ストリンジェントな条件下」とは、例えば、５×ＳＳＣ（１５０ｍＭ塩化ナトリウム、１５ｍＭクエン酸ナトリウム、ｐＨ７．４）＋０．３％ＳＤＳ（ドデシル硫酸ナトリウム）中で熱変性した後、６５℃で４〜１６時間のハイブリダイゼーションし、常温の２×ＳＳＣ＋０．１％ＳＤＳ、及び、２×ＳＳＣでそれぞれ５分間洗浄し、０．０５×ＳＳＣでリンスすること等が挙げられる。【００５３】
その他、工程（ａ）において用いられる高血圧発症リスク判定用ポリヌクレオチドは、検出対象の遺伝子の塩基配列と相補的又は相同的な配列以外にも、ＳＮＰタイピングを阻害しない程度において、付加的な配列を有することができる。該付加的な配列として、例えば、制限酵素認識配列や、核酸の標識に供される配列等がある。また、各高血圧発症リスク判定用ポリヌクレオチドは、ＳＮＰタイピング結果の検出や解析を容易にするために、ＳＮＰタイピングを阻害しない程度において、標識物質を付加することができる。該標識物質は、通常ポリヌクレオチドの標識に用いられる化合物であれば特に限定されるものではない。該標識物質として、例えば、放射性同位体、蛍光物質、化学発光物質、ビオチン等の低分子化合物等がある。【００５４】
また、ヒト個体から採取された核酸、高血圧発症リスク判定用ポリヌクレオチド等の、ＳＮＰタイピングにおいて用いられる量は、特に限定されるものではなく、通常用いられる量で用いることができる。また、ポリメラーゼ等の酵素や、ヌクレオチド、反応用バッファー等は、特に限定されるものではなく、通常ＳＮＰタイピングを行う場合に用いられるものを、通常用いられる量で用いることができる。  【００５５】
次に、工程（ｂ）として、工程（ａ）により得られたタイピング結果に基づき、前記ヒト個体の高血圧発症リスクを判定する。例えば、高血圧発症リスクは、下記表２、８、１４、２０、２５等のオッズ比を利用して判定してもよい。その他、本発明の高血圧の遺伝子マーカーについてメタアナリシスを行って得られるオッズ比を利用して判定してもよく、本発明の高血圧の遺伝子マーカーについてコホート研究を行って得られる相対危険度（リスク比）を利用して判定してもよく、他の従来公知の統計手法を用いて統計学的に処理した値を利用して判定してもよい。【００５６】
具体的には、ＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３７８）のタイピング結果を用いる場合には、ＣＣ型、ＴＣ型、ＴＴ型の順にリスクが高いと判定することができる。その他、ＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３７８）がＴＴ型の場合に低リスク群であり、ＴＣ型又はＣＣ型の場合に高リスク群であると判定することもできる。【００５７】
ＳＮＰ（ｒｓ２６８１４７２）のタイピング結果を用いる場合には、ＡＡ型、ＡＧ型、ＧＧ型の順にリスクが高いと判定することができる。その他、ＳＮＰ（ｒｓ２６８１４７２）がＧＧ型又はＡＧ型の場合には低リスク群であり、ＡＡ型の場合に高リスク群であると判定することもできる。【００５８】
ＳＮＰ（ｒｓ１４０１９８２）のタイピング結果を用いる場合には、ＧＧ型、ＡＧ型、ＡＡ型の順にリスクが高いと判定することもできる。その他、ＳＮＰ（ｒｓ１４０１９８２）がＡＡ型の場合には低リスク群であり、ＡＧ型又はＧＧ型の場合に高リスク群であると判定することもできる。【００５９】
ＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３６４）のタイピング結果を用いる場合には、ＴＴ型、ＴＧ型、ＧＧ型の順にリスクが高いと判定することもできる。その他、ＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３６４）がＧＧ型の場合には低リスク群であり、ＴＴ型又はＴＧ型の場合に高リスク群であると判定することもできる。【００６０】
一方、ＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）のタイピング結果を用いる場合には、ＴＴ型、ＣＴ型、ＣＣ型の順にリスクが高いと判定することができる。その他、ＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）がＣＣ型又はＣＴ型の場合に低リスク群であり、ＴＴ型の場合に高リスク群であると判定することができる。【００６１】
また、本発明の遺伝子マーカーは、単独よりも組み合わせることにより、より適確に高血圧発症リスクを判定することができる。例えば、ＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３７８）がＴＴ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）がＣＣ型又はＣＴ型である場合に低リスク群であり；ＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３７８）がＴＣ型又はＣＣ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）がＴＴ型である場合に高リスク群であると判定することができる。また、ＳＮＰ（ｒｓ２６８１４７２）がＧＧ型又はＡＧ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）がＣＣ型又はＣＴ型である場合に低リスク群であり；ＳＮＰ（ｒｓ２６８１４７２）がＡＡ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）がＴＴ型である場合に高リスク群であると判定することができる。ＳＮＰ（ｒｓ１４０１９８２）がＡＡ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）がＣＣ型又はＣＴ型である場合に低リスク群であり；ＳＮＰ（ｒｓ１４０１９８２）がＡＧ型又はＧＧ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）がＴＴ型である場合に高リスク群であると判定することができる。ＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３６４）がＧＧ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）がＣＣ型又はＣＴ型である場合に低リスク群であり；ＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３６４）がＴＴ型又はＴＧ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）がＴＴ型である場合に高リスク群であると判定することもできる。【００６２】
その他、本発明の遺伝子マーカーは、他の高血圧の遺伝子マーカーと組み合わせて使用することもできる。組み合わせる遺伝子マーカーは、特に限定されるものではなく、公知の高血圧の遺伝子マーカーを組み合わせてもよい。特に、ＡＧＴ（Ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎｏｇｅｎ）遺伝子のＳＮＰであるＳＮＰ（ｒｓ６９９）を含むＡＧＴ遺伝子の部分塩基配列又は全塩基配列と、相同的又は相補的な配列からなることを特徴とする高血圧の遺伝子マーカーと組み合わせることが好ましい。【００６３】
ＡＧＴ遺伝子は、複数のＳＮＰを有する公知の高血圧感受性遺伝子である。ＳＮＰ（ｒｓ６９９）は、Ｍ／Ｔ多型であり、後記実施例２８の結果から明らかであるように、正常血圧群と比較した場合に高血圧群において、ＭアレルよりもＴアレルの頻度が有意に高く、高血圧の遺伝子マーカーとして有用である。このため、例えば、ＳＮＰ（ｒｓ６９９）がＭＭ型又はＭＴ型の場合に低リスク群であり、ＴＴ型の場合に高リスク群であると判定することができる。なお、本願明細書において、Ｍはメチオニン（Ｍｅｔ）であり、Ｔはトレオニン（Ｔｈｒ）を示す。ここで、塩基配列としては、ＭＭ型はＴＴ型として、ＭＴ型はＴＣ型として、ＴＴ型はＣＣ型として、それぞれ表される多型である。【００６４】
ＳＮＰ（ｒｓ６９９）のタイピングは、ＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３７８）やＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）と同様に公知のＳＮＰタイピング法を用いて行うことができるが、ＳＮＰ（ｒｓ６９９）を含むＡＧＴ遺伝子の部分塩基配列又は全塩基配列と、相同的又は相補的な配列からなるポリヌクレオチドをプライマー又はプローブとして用いるＳＮＰタイピング法によりＳＮＰを同定することが好ましい。ＡＧＴ遺伝子上のＳＮＰ（ｒｓ６９９）を検出するためのプライマー又はプローブとして用いることができるポリヌクレオチドとしては、下記の（ａ）〜（ｆ）の何れかの塩基配列を有しているもの（以下、「ＳＮＰ（ｒｓ６９９）検出用ポリヌクレオチド」という。）であることが好ましい。
（ａ）配列番号３３で表される塩基配列、又は配列番号３３で表される塩基配列のＳＮＰ（ｒｓ６９９）を含む部分配列である塩基配列。
（ｂ）前記（ａ）の塩基配列と相補的な塩基配列。
（ｃ）前記（ａ）又は（ｂ）の塩基配列において、ＳＮＰ（ｒｓ６９９）以外の１〜数個の塩基が欠失、置換又は付加されている塩基配列であって、当該塩基配列からなるポリヌクレオチドが、前記（ａ）又は（ｂ）の塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズすることができる塩基配列。
（ｄ）配列番号３４で表される塩基配列、又は配列番号３４で表される塩基配列のＳＮＰ（ｒｓ６９９）を含む部分配列である塩基配列。
（ｅ）前記（ｄ）の塩基配列と相補的な塩基配列。
（ｆ）前記（ｄ）又は（ｅ）の塩基配列において、ＳＮＰ（ｒｓ６９９）以外の１〜数個の塩基が欠失、置換又は付加されている塩基配列であって、当該塩基配列からなるポリヌクレオチドが、前記（ｄ）又は（ｅ）の塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズすることができる塩基配列。【００６５】
なお、上記（ａ）〜（ｃ）の何れかの塩基配列を有しているＳＮＰ（ｒｓ６９９）検出用ポリヌクレオチドは、ＳＮＰ（ｒｓ６９９）のＴアレルを検出し得るポリヌクレオチドであり、上記（ｄ）〜（ｆ）の何れかの塩基配列を有しているＳＮＰ（ｒｓ６９９）検出用ポリヌクレオチドは、ＳＮＰ（ｒｓ６９９）のＭアレルを検出し得るポリヌクレオチドである。【００６６】
例えば、ＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３７８）とＳＮＰ（ｒｓ６９９）のタイピング結果に基づき、ＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３７８）がＴＴ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ６９９）がＭＭ型又はＭＴ型である場合に低リスク群であり；ＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３７８）がＴＣ型又はＣＣ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ６９９）がＴＴ型である場合に高リスク群であると判定することができる。また、ＳＮＰ（ｒｓ２６８１４７２）とＳＮＰ（ｒｓ６９９）のタイピング結果に基づき、ＳＮＰ（ｒｓ２６８１４７２）がＧＧ型又はＡＧ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ６９９）がＭＭ型又はＭＴ型である場合に低リスク群であり；ＳＮＰ（ｒｓ２６８１４７２）がＡＡ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ６９９）がＴＴ型である場合に高リスク群であると判定することができる。また、ＳＮＰ（ｒｓ１４０１９８２）とＳＮＰ（ｒｓ６９９）のタイピング結果に基づき、ＳＮＰ（ｒｓ１４０１９８２）がＡＡ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ６９９）がＭＭ型又はＭＴ型である場合に低リスク群であり；ＳＮＰ（ｒｓ１４０１９８２）がＡＧ型又はＧＧ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ６９９）がＴＴ型である場合に高リスク群であると判定することもできる。さらに、ＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３６４）とＳＮＰ（ｒｓ６９９）のタイピング結果に基づき、ＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３６４）がＧＧ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ６９９）がＭＭ型又はＭＴ型である場合に低リスク群であり；ＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３６４）がＴＴ型又はＴＧ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ６９９）がＴＴ型である場合に高リスク群であると判定することもできる。その他、ＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）とＳＮＰ（ｒｓ６９９）のタイピング結果に基づき、ＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）がＣＣ型又はＣＴ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ６９９）がＭＭ型又はＭＴ型である場合に低リスク群であり；ＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）がＴＴ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ６９９）がＴＴ型である場合に高リスク群であると判定することができる。【００６７】
さらに、本発明の第一の発明である高血圧の遺伝子マーカーと、本発明の第五の発明である高血圧の遺伝子マーカーと、ＳＮＰ（ｒｓ６９９）を含むＡＧＴ遺伝子からなる高血圧の遺伝子マーカーとの、３種の遺伝子マーカーを組み合わせることにより、非常に信頼性の高いリスク評価を得ることができる。例えば、ＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３７８）がＴＴ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）がＣＣ型又はＣＴ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ６９９）がＭＭ型又はＭＴ型である場合に低リスク群であり；ＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３７８）がＴＣ型又はＣＣ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）がＴＴ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ６９９）がＴＴ型である場合に高リスク群であると判定することができる。また、ＳＮＰ（ｒｓ２６８１４７２）がＧＧ型又はＡＧ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）がＣＣ型又はＣＴ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ６９９）がＭＭ型又はＭＴ型である場合に低リスク群であり；ＳＮＰ（ｒｓ２６８１４７２）がＡＡ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）がＴＴ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ６９９）がＴＴ型である場合に高リスク群であると判定することができる。さらに、ＳＮＰ（ｒｓ１４０１９８２）がＡＡ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）がＣＣ型又はＣＴ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ６９９）がＭＭ型又はＭＴ型である場合に低リスク群であり；ＳＮＰ（ｒｓ１４０１９８２）がＡＧ型又はＧＧ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）がＴＴ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ６９９）がＴＴ型である場合に高リスク群であると判定することもできる。【００６８】
また、これら３種の遺伝子マーカーを組み合わせ、高リスク多型の数、低リスク多型の数等に基づいて、より細かいリスク評価を行うこともできる。例えば、高リスク多型の数が多いほど高血圧発症リスクが高いと判定することができる。また、低リスク多型の数が少ないほど、高血圧発症リスクが高いと判定することができる。その他、高リスク多型の数が少ないほど高血圧発症リスクが低いと判定することもでき、低リスク多型の数が多いほど高血圧発症リスクが低いと判定することもできる。【００６９】
具体的には、ＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３７８）のＣＣ型、ＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）のＴＴ型、ＳＮＰ（ｒｓ６９９）のＴＴ型をそれぞれ高リスク多型とし、これらの高リスク多型の数が３個、２個、１個、０個の順にリスクが高いと判定することができる。また、ＳＮＰ（ｒｓ２６８１４７２）のＡＡ型、ＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）のＴＴ型、ＳＮＰ（ｒｓ６９９）のＴＴ型をそれぞれ高リスク多型とし、これらの高リスク多型の数が３個、２個、１個、０個の順にリスクが高いと判定することができる。さらに、ＳＮＰ（ｒｓ１４０１９８２）のＧＧ型、ＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）のＴＴ型、ＳＮＰ（ｒｓ６９９）のＴＴ型をそれぞれ高リスク多型とし、これらの高リスク多型の数が３個、２個、１個、０個の順にリスクが高いと判定することもできる。【００７０】
また、ＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３７８）のＴＴ型、ＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）のＣＣ型、ＳＮＰ（ｒｓ６９９）のＭＭ型をそれぞれ低リスク多型とし、これらの低リスク多型の数が０個、１個、２個、３個の順にリスクが高いと判定することができる。また、ＳＮＰ（ｒｓ２６８１４７２）のＧＧ型、ＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）のＣＣ型、ＳＮＰ（ｒｓ６９９）のＭＭ型をそれぞれ低リスク多型とし、これらの低リスク多型の数が０個、１個、２個、３個の順にリスクが高いと判定することができる。さらに、ＳＮＰ（ｒｓ１４０１９８２）のＡＡ型、ＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）のＣＣ型、ＳＮＰ（ｒｓ６９９）のＭＭ型をそれぞれ低リスク多型とし、これらの低リスク多型の数が０個、１個、２個、３個の順にリスクが高いと判定することもできる。【００７１】
その他、例えば、ＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３７８）がＴＴ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）がＣＣ型又はＣＴ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ６９９）がＭＭ型又はＭＴ型である場合を第一群とし；ＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３７８）がＴＣ型又はＣＣ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）がＣＣ型又はＣＴ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ６９９）がＭＭ型又はＭＴ型である場合、ＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３７８）がＴＴ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）がＣＣ型又はＣＴ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ６９９）がＴＴ型である場合、又は、ＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３７８）がＴＴ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）がＴＴ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ６９９）がＭＭ型又はＭＴ型である場合を第二群とし；ＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３７８）がＴＣ型又はＣＣ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）がＣＣ型又はＣＴ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ６９９）がＴＴ型である場合、ＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３７８）がＴＣ型又はＣＣ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）がＴＴ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ６９９）がＭＭ型又はＭＴ型である場合、又はＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３７８）がＴＴ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）がＴＴ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ６９９）がＴＴ型である場合を第三群とし；ＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３７８）がＴＣ型又はＣＣ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）がＴＴ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ６９９）がＴＴ型である場合を第四群とし；前記工程（ｂ）において、前記第四群、前記第三群、前記第二群、前記第一群の順にリスクが高いと判定することができる。【００７２】
また、ＳＮＰ（ｒｓ２６８１４７２）がＧＧ型又はＡＧ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）がＣＣ型又はＣＴ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ６９９）がＭＭ型又はＭＴ型である場合を第一群とし；ＳＮＰ（ｒｓ２６８１４７２）がＡＡ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）がＣＣ型又はＣＴ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ６９９）がＭＭ型又はＭＴ型である場合、ＳＮＰ（ｒｓ２６８１４７２）がＧＧ型又はＡＧ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）がＣＣ型又はＣＴ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ６９９）がＴＴ型である場合、又はＳＮＰ（ｒｓ２６８１４７２）がＧＧ型又はＡＧ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）がＴＴ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ６９９）がＭＭ型又はＭＴ型である場合を第二群とし；ＳＮＰ（ｒｓ２６８１４７２）がＡＡ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）がＣＣ型又はＣＴ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ６９９）がＴＴ型である場合、ＳＮＰ（ｒｓ２６８１４７２）がＡＡ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）がＴＴ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ６９９）がＭＭ型又はＭＴ型である場合、又はＳＮＰ（ｒｓ２６８１４７２）がＧＧ型又はＡＧ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）がＴＴ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ６９９）がＴＴ型である場合を第三群とし；ＳＮＰ（ｒｓ２６８１４７２）がＡＡ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）がＴＴ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ６９９）がＴＴ型である場合を第四群とし；前記工程（ｂ）において、前記第四群、前記第三群、前記第二群、前記第一群の順にリスクが高いと判定することができる。【００７３】
さらに、ＳＮＰ（ｒｓ１４０１９８２）がＡＡ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）がＣＣ型又はＣＴ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ６９９）がＭＭ型又はＭＴ型である場合を第一群とし；ＳＮＰ（ｒｓ１４０１９８２）がＡＧ型又はＧＧ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）がＣＣ型又はＣＴ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ６９９）がＭＭ型又はＭＴ型である場合、ＳＮＰ（ｒｓ１４０１９８２）がＡＡ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）がＣＣ型又はＣＴ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ６９９）がＴＴ型である場合、又はＳＮＰ（ｒｓ１４０１９８２）がＡＡ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）がＴＴ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ６９９）がＭＭ型又はＭＴ型である場合を第二群とし；ＳＮＰ（ｒｓ１４０１９８２）がＡＧ型又はＧＧ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）がＣＣ型又はＣＴ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ６９９）がＴＴ型である場合、ＳＮＰ（ｒｓ１４０１９８２）がＡＧ型又はＧＧ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）がＴＴ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ６９９）がＭＭ型又はＭＴ型である場合、又はＳＮＰ（ｒｓ１４０１９８２）がＡＡ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）がＴＴ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ６９９）がＴＴ型である場合を第三群とし；ＳＮＰ（ｒｓ１４０１９８２）がＡＧ型又はＧＧ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）がＴＴ型であり、ＳＮＰ（ｒｓ６９９）がＴＴ型である場合を第四群とし；前記工程（ｂ）において、前記第四群、前記第三群、前記第二群、前記第一群の順にリスクが高いと判定することもできる。【００７４】
その他、工程（ｂ）における高血圧発症リスクの判定は、工程（ａ）により得られたタイピング結果と、遺伝子マーカー以外の１以上の高血圧の危険因子を組み合わせて行ってもよい。遺伝子マーカー以外の危険因子として、例えば、ヒト個体の性別、年齢、ＢＭＩ値、脳血管疾患の有無、心疾患の有無、喫煙の有無、飲酒量、総コレステロール値、ＨＤＬコレステロール値、中性脂肪値、空腹時血糖値等がある。【００７５】
工程（ａ）におけるＳＮＰタイピングを、マイクロアレイ法を用いて行う場合には、固相担体上に、ＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３７８）検出用ポリヌクレオチドと、ＳＮＰ（ｒｓ２６８１４７２）検出用ポリヌクレオチドと、ＳＮＰ（ｒｓ１４０１９８２）検出用ポリヌクレオチドと、ＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３６４）検出用ポリヌクレオチドと、ＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）検出用ポリヌクレオチドとの少なくとも１が固定されている本発明の第八の発明である高血圧発症リスク判定用マイクロアレイを用いることが好ましい。本発明の第八の発明である高血圧発症リスク判定用マイクロアレイとしては、ＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３７８）検出用ポリヌクレオチドと、ＳＮＰ（ｒｓ２６８１４７２）検出用ポリヌクレオチドと、ＳＮＰ（ｒｓ１４０１９８２）検出用ポリヌクレオチドの少なくとも１と、ＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）検出用ポリヌクレオチドとが固定されているマイクロアレイであることが好ましく；ＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３７８）検出用ポリヌクレオチドと、ＳＮＰ（ｒｓ２６８１４７２）検出用ポリヌクレオチドと、ＳＮＰ（ｒｓ１４０１９８２）検出用ポリヌクレオチドと、ＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）検出用ポリヌクレオチドのいずれも固定されているマイクロアレイであることがより好ましい。【００７６】
また、本発明の第八の発明である高血圧発症リスク判定用マイクロアレイとしては、さらに、固相担体上に、ＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３７８）検出用ポリヌクレオチドと、ＳＮＰ（ｒｓ２６８１４７２）検出用ポリヌクレオチドと、ＳＮＰ（ｒｓ１４０１９８２）検出用ポリヌクレオチドと、ＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３６４）検出用ポリヌクレオチドと、ＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）検出用ポリヌクレオチドと、ＳＮＰ（ｒｓ６９９）検出用ポリヌクレオチドとの少なくとも１が固定されているマイクロアレイであることが好ましく；ＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３７８）検出用ポリヌクレオチドと、ＳＮＰ（ｒｓ２６８１４７２）検出用ポリヌクレオチドと、ＳＮＰ（ｒｓ１４０１９８２）検出用ポリヌクレオチドと、ＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）検出用ポリヌクレオチドの少なくとも１と、ＳＮＰ（ｒｓ６９９）検出用ポリヌクレオチドが固定されているマイクロアレイであることがより好ましい。ＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３７８）検出用ポリヌクレオチドと、ＳＮＰ（ｒｓ２６８１４７２）検出用ポリヌクレオチドと、ＳＮＰ（ｒｓ１４０１９８２）検出用ポリヌクレオチドの少なくとも１と、ＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）検出用ポリヌクレオチドと、ＳＮＰ（ｒｓ６９９）検出用ポリヌクレオチドが固定されているマイクロアレイであることがさらに好ましく；ＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３７８）検出用ポリヌクレオチドと、ＳＮＰ（ｒｓ２６８１４７２）検出用ポリヌクレオチドと、ＳＮＰ（ｒｓ１４０１９８２）検出用ポリヌクレオチドと、ＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）検出用ポリヌクレオチドと、ＳＮＰ（ｒｓ６９９）検出用ポリヌクレオチドのいずれも固定されているマイクロアレイであることが特に好ましい。【００７７】
なお、本発明においてマイクロアレイとは、固相担体上にプローブとなるポリヌクレオチドが、位置を特定できるように固定された検出デバイスのことを言い、プローブ（ポリヌクレオチ）が固相化された担体自体は分散性であってもよく、検出時に位置が特定できるように２次元的な固相担体上に固定化できる状態であればよい。【００７８】
また、工程（ａ）におけるＳＮＰタイピングに用いる高血圧発症リスク判定用ポリヌクレオチド等をキット化することにより、より簡便に工程（ａ）のＳＮＰタイピングを行うことが可能となる。例えば、ＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３７８）、ＳＮＰ（ｒｓ２６８１４７２）、ＳＮＰ（ｒｓ１４０１９８２）、ＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３６４）、及びＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）からなる群より選択される１以上のＳＮＰのタイピングに用いられるＳＮＰタイピングキットとして、本発明の第九の発明である高血圧発症リスク判定用ＳＮＰタイピングキットのように、ＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３７８）検出用ポリヌクレオチドと、ＳＮＰ（ｒｓ２６８１４７２）検出用ポリヌクレオチドと、ＳＮＰ（ｒｓ１４０１９８２）検出用ポリヌクレオチドと、ＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３６４）検出用ポリヌクレオチドと、ＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）検出用ポリヌクレオチドと、及び固相担体上に、ＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３７８）検出用ポリヌクレオチド、ＳＮＰ（ｒｓ２６８１４７２）検出用ポリヌクレオチド、ＳＮＰ（ｒｓ１４０１９８２）検出用ポリヌクレオチド、ＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３６４）検出用ポリヌクレオチドと、ＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）検出用ポリヌクレオチドの少なくとも１が固定されているマイクロアレイと、からなる群より選ばれる１以上を含むものであることが好ましい。その他、ＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３７８）、ＳＮＰ（ｒｓ２６８１４７２）、ＳＮＰ（ｒｓ１４０１９８２）、及びＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）からなる群より選択される１以上のＳＮＰと、ＳＮＰ（ｒｓ６９９）とのタイピングに用いられるＳＮＰタイピングキットとして、本発明の第十の発明であるＳＮＰタイピングキットのように、ＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３７８）検出用ポリヌクレオチド、ＳＮＰ（ｒｓ２６８１４７２）検出用ポリヌクレオチド、ＳＮＰ（ｒｓ１４０１９８２）検出用ポリヌクレオチド、ＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３６４）検出用ポリヌクレオチド、ＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）検出用ポリヌクレオチド、ＳＮＰ（ｒｓ６９９）検出用ポリヌクレオチド、固相担体上に、ＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３７８）検出用ポリヌクレオチド、ＳＮＰ（ｒｓ２６８１４７２）検出用ポリヌクレオチド、ＳＮＰ（ｒｓ１４０１９８２）検出用ポリヌクレオチド、ＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３６４）検出用ポリヌクレオチド、ＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）検出用ポリヌクレオチドが固定されているマイクロアレイ、及び固相担体上に、ＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３７８）検出用ポリヌクレオチド、ＳＮＰ（ｒｓ２６８１４７２）検出用ポリヌクレオチド、ＳＮＰ（ｒｓ１４０１９８２）検出用ポリヌクレオチド、ＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３６４）検出用ポリヌクレオチド、ＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）検出用ポリヌクレオチド並びにＳＮＰ（ｒｓ６９９）検出用ポリヌクレオチドが固定されているマイクロアレイからなる群より選ばれる１以上を含むものであることが好ましい。【００７９】
その他、ＡＴＰ２Ｂ１遺伝子の塩基配列の全部又は一部がｌｏｘＰ配列で挟まれている塩基配列を含むことを特徴とする、ＡＴＰ２Ｂ１遺伝子局所的欠損小動物作製用ｌｏｘＰ組み込みベクターを用いて、ＡＴＰ２Ｂ１遺伝子局所的欠損小動物作製用ｌｏｘＰ組み込み小動物を作製することができる。特に、ＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３７８）、ＳＮＰ（ｒｓ２６８１４７２）、ＳＮＰ（１４０１９８２）、ＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３６４）からなる群より選択される１以上のＳＮＰを含むＡＴＰ２Ｂ１遺伝子領域をｌｏｘＰ配列で挟まれている塩基配列を含むＡＴＰ２Ｂ１遺伝子局所的欠損小動物作製用ｌｏｘＰ組み込みベクターを用いて、ＡＴＰ２Ｂ１遺伝子局所的欠損小動物作製用ｌｏｘＰ組み込み小動物を作製することが好ましい。【００８０】
さらに、該ＡＴＰ２Ｂ１遺伝子局所的欠損小動物作製用ｌｏｘＰ組み込み小動物を、適当なプロモーターをＣｒｅ  Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｓｅの発現プロモーターとする選択的Ｃｒｅ発現トランスジェニック小動物に掛け合わせることによりＡＴＰ２Ｂ１遺伝子局所的欠損小動物を作製することができる。Ｃｒｅ  Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｓｅの発現プロモーターとして、例えば、Ｔｉｅ−２プロモーター、Ｔｉｅ−１プロモーター、Ｆｌｋ−１プロモーター、ＳＭ２２プロモーター、ＳＭ−ＭＨＣプロモーター、Ｗｔ１プロモーター、Ｐ０プロモーター、Ｐａｘ３プロモーター、αＭＨＣプロモーター、Ｎｋｘ２．５プロモーター、Ｔｂｘ１プロモーター、ｔｅｔｒａｃｙｃｌｉｎｅ−ｉｎｄｕｃｉｂｌｅプロモーター、及びＣＭＶ  ｅｎｈａｎｃｅｒ−ｃｈｉｃｋｅｎ  β−ａｃｔｉｎプロモーターからなる群より選択される一のプロモーターであることが好ましい。【００８１】
このようにして作製されたＡＴＰ２Ｂ１遺伝子局所的欠損小動物は、高血圧症状を呈するものであることが好ましい。また、該ＡＴＰ２Ｂ１遺伝子局所的欠損小動物は、カルシウム拮抗薬のスクリーニングのための試験動物として使用することができ、ＡＴＰ２Ｂ１遺伝子の遺伝子多型及び発現異常を有する疾患のモデル小動物として使用することもできる。
【実施例】
【００８２】
次に実施例を示して本発明をさらに詳細に説明するが、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。【００８３】
[実施例１]  ＳＮＰタイピングに供される核酸の調製
８９２４人の一般地域住民を対象とし、ＳＮＰの遺伝子型と高血圧との関連を調べるための後向きコホート研究を行った。これらの対象者は、横浜（１８１１人）、滋賀（３７３０人）、愛媛（３３８３人）で集められた。
まず、対象者から採取した末梢血中の白血球からＤＮＡ抽出キットであるＱＩＡａｍｐ  ＤＮＡ  Ｂｌｏｏｄ  Ｋｉｔ（キアゲン社製）を用いて、それぞれのゲノムＤＮＡを抽出した。得られたゲノムＤＮＡを、ＧｅｎｏｍｉＰｈｉ  ＤＮＡ  Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｋｉｔ（ＧＥヘルスケアバイオサイエンス社製）を用いて増幅した。増幅したＤＮＡをｂｕｆｆｅｒ  ＡＥ（キアゲン社製）を用いて５０倍に希釈したものを、ＳＮＰタイピングに供した。【００８４】
[実施例２]  ＡＴＰ２Ｂ１遺伝子上のＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３７８）のタイピング  
各対象者の増幅済みゲノムＤＮＡを鋳型として、ＡＴＰ２Ｂ１遺伝子上のＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３７８）をＴａｑＭａｎプローブ法で解析した。具体的には、実施例１で得られたＤＮＡ溶液２．０μＬに、２．５μＬのＴａｑＭａｎ  Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ  Ｍａｓｔｅｒ  Ｍｉｘ（アプライドバイオシステムズ社製）、０．０５μＬのｒｓ１１１０５３７８の各多型に特異的なＴａｑＭａｎ  Ｐｒｅ−Ｄｅｓｉｇｎｅｄ  ＳＮＰ Ｇｅｎｏｔｙｐｉｎｇ  Ａｓｓａｙ (Ａｓｓａｙ  ＩＤ;Ｃ＿＿３２１７４４４８＿１０、アプライドバイオシステムズ社製）、０．４５μＬの蒸留水を加えて反応溶液を調整した後、ＰＣＲ法による伸長反応に供した。伸長反応は、５２℃で２分間、ついで９５℃で１０分間の加温の後、９５℃で１５秒間、６０℃で１分間の加温を６０回繰り返した。伸長反応後に、７９００ＨＴ  Ｆａｓｔ  リアルタイムＰＣＲシステム（アプライドバイオシステムズ社製）を用いて蛍光強度を測定することにより、遺伝子多型をタイピングした。【００８５】
[実施例３]  ｒｓ１１１０５３７８多型と高血圧との相関
実施例２において同定されたＳＮＰの遺伝子型と高血圧との相関を、一般地域住民を対象に相関解析（アソシエーション法）により解析した。【００８６】
【表１】
0005608944.tif 000002
【００８７】
表１は、解析対象とした８９２４人の臨床背景を示したものである。これらの対象者を、高血圧群（収縮期血圧１４０ｍｍＨｇ以上、及び／又は拡張期血圧９０ｍｍＨｇ以上、及び／又は降圧薬服用）と正常血圧群（高血圧群以外）とに分類し、実施例２において同定された多型の頻度を解析した。統計学的な解析手法としてはχ二乗検定を用いた。解析結果を表２に示す。【００８８】
【表２】
0005608944.tif 000003
【００８９】
表２の結果より、高血圧群と正常血圧群において、実施例２において同定されたｒｓ１１１０５３７８多型における各遺伝子型の頻度が統計学的に有意に異なることが示された。具体的には、オッズ比から、正常血圧群と比較した場合に、高血圧群において、ＴアレルよりもＣアレルの頻度が有意に高いことが分かった。
該結果から、ＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３７８）の遺伝子型を調べることにより、遺伝子多型高血圧を発症する相対危険度を判定出来ることが明らかである。【００９０】
[実施例４]  ｒｓ１１１０５３７８多型と高血圧との相関のロジスティック回帰分析
実施例２において同定されたｒｓ１１１０５３７８多型と高血圧との相関を、他の関連する環境因子を含めた回帰分析により解析した。
表１に示した対象者を実施例３と同様に高血圧群と正常血圧群とに分類した。ここで分類された高血圧の有無を従属変数としたロジスティック回帰分析を、実施例２において同定されたｒｓ１１１０５３７８多型に加えて、性別、年齢、ｂｏｄｙ  ｍａｓｓ  ｉｎｄｅｘ、循環器疾患の既往、喫煙、飲酒量、ＨＤＬコレステロール、中性脂肪、血糖を独立変数として実施した。解析結果を表３に示す。【００９１】
【表３】
0005608944.tif 000004
【００９２】
表３の結果より、性別、年齢、ｂｏｄｙ  ｍａｓｓ  ｉｎｄｅｘ、循環器疾患の既往、喫煙、飲酒量、ＨＤＬコレステロール、中性脂肪、血糖等の環境因子を調整した上でも、実施例２において同定されたｒｓ１１１０５３７８多型が高血圧の独立した危険因子であることが示された。また、その相対危険度（オッズ比）は、当該遺伝子型がＴＴ型である場合に比べて、ＴＣ型で１．２４４倍、ＣＣ型で１．４０４倍であった。
該結果から、ｒｓ１１１０５３７８多型を調べることにより、高血圧を発症する相対危険度を、他の環境因子の影響を調整した上で判定出来ることが明らかである。さらに、ＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３７８）がＴＴ型の場合に低リスク群であり、ＴＣ型又はＣＣ型の場合に高リスク群であると判定し得ることも、該結果から明らかである。【００９３】
[実施例５]  ｒｓ１１１０５３７８多型ごとの粗平均血圧値の算出
実施例２において同定された多型ごとの収縮期血圧および拡張期血圧の粗平均値を求め、その差を一元配置の分散分析により統計学的に解析した。解析結果を表４に示す。【００９４】
【表４】
0005608944.tif 000005
【００９５】
表４の結果より、ｒｓ１１１０５３７８多型ごとに収縮期血圧と拡張期血圧のいずれの粗平均血圧値も、統計学的に有意に異なることが示された。
該結果から、ｒｓ１１１０５３７８多型を調べることにより、遺伝子多型ごとの血圧上昇の程度を推定し得ることが明らかである。【００９６】
[実施例６]   ｒｓ１１１０５３７８多型と血圧値との相関の重回帰分析
実施例２において同定されたｒｓ１１１０５３７８多型と血圧値との相関を、他の関連する環境因子を含めた回帰分析により解析した。
収縮期血圧又は拡張期血圧を従属変数とした重回帰分析を、実施例２において同定されたｒｓ１１１０５３７８多型に加えて、性別、年齢、ｂｏｄｙ  ｍａｓｓ  ｉｎｄｅｘ、循環器疾患の既往、喫煙、飲酒量、降圧薬の有無、ＨＤＬコレステロール、中性脂肪、血糖、コホート変数を独立変数として実施した。解析結果を表５に示す。【００９７】
【表５】
0005608944.tif 000006
【００９８】
表５の結果より、性別、年齢、ｂｏｄｙ  ｍａｓｓ  ｉｎｄｅｘ、循環器疾患の既往、喫煙、飲酒量、降圧薬の有無、ＨＤＬコレステロール、中性脂肪、血糖、コホート変数等の環境因子を調整した上でも、実施例２において同定されたｒｓ１１１０５３７８多型が収縮期血圧、拡張期血圧の独立した危険因子であることが示された。
該結果から、ｒｓ１１１０５３７８多型を調べることにより、他の環境因子の影響を調整した上でも、遺伝子多型ごとの血圧上昇の程度を推定し得ることが明らかである。【００９９】
[実施例７]   ｒｓ１１１０５３７８多型ごとの調整済平均血圧値の算出
実施例６において示された、実施例２において同定されたｒｓ１１１０５３７８多型と血圧値との回帰分析から、性別、年齢、ｂｏｄｙ  ｍａｓｓ  ｉｎｄｅｘ、循環器疾患の既往、喫煙、飲酒量、降圧薬の有無、ＨＤＬコレステロール、中性脂肪、血糖、コホート変数を調整した上でのｒｓ１１１０５３７８多型ごとの平均収縮期血圧および拡張期血圧（調整済み平均血圧値）を算出した。解析結果を表６に示す。【０１００】
【表６】
0005608944.tif 000007
【０１０１】
表６の結果より、ｒｓ１１１０５３７８多型ごとに調整済平均収縮期血圧、拡張期血圧が、統計学的に有意に異なることが示された。
該結果から、ｒｓ１１１０５３７８多型を調べることにより、他の環境因子の影響を調整した上でも、遺伝子多型ごとの血圧上昇の程度を推定し得ることが明らかである。【０１０２】
[実施例８]   ＡＴＰ２Ｂ１遺伝子上のＳＮＰ（ｒｓ２６８１４７２）のタイピング
９４５２人の一般地域住民を対象とし、ＳＮＰの遺伝子型と高血圧との関連を調べるための後向きコホート研究を行った。これらの対象者は、横浜（１８７１人）、滋賀（４０２１人）、愛媛（３５６０人）で集められた。
まず、対象者から採取した末梢血中の白血球から、実施例１と同様にして、それぞれのゲノムＤＮＡを抽出し、増幅することにより、ＳＮＰタイピングに供するＤＮＡ溶液を得た。
このようにして得られた各対象者の増幅済みゲノムＤＮＡを鋳型として、ＡＴＰ２Ｂ１遺伝子上のＳＮＰ（ｒｓ２６８１４７２）をＴａｑＭａｎプローブ法で解析した。具体的には、ｒｓ１１１０５３７８の各多型に特異的なＴａｑＭａｎ  Ｐｒｅ−Ｄｅｓｉｇｎｅｄ  ＳＮＰ Ｇｅｎｏｔｙｐｉｎｇ  Ａｓｓａｙに代えて、ｒｓ２６８１４７２の各多型に特異的なＴａｑＭａｎ  Ｐｒｅ−Ｄｅｓｉｇｎｅｄ  ＳＮＰ Ｇｅｎｏｔｙｐｉｎｇ  Ａｓｓａｙ (Ａｓｓａｙ  ＩＤ;Ｃ＿＿１６０５７０７１＿１０、アプライドバイオシステムズ社製）を用いた以外は実施例２と同様にして遺伝子多型をタイピングした。【０１０３】
[実施例９]   ｒｓ２６８１４７２多型と高血圧との相関
実施例８において同定されたＳＮＰの遺伝子型と高血圧との相関を、一般地域住民を対象に相関解析（アソシエーション法）により解析した。【０１０４】
【表７】
0005608944.tif 000008
【０１０５】
表７は、解析対象とした９４５２人の臨床背景を示したものである。これらの対象者を、高血圧群（収縮期血圧１４０ｍｍＨｇ以上、及び／又は拡張期血圧９０ｍｍＨｇ以上、及び／又は降圧薬服用）と正常血圧群（高血圧群以外）とに分類し、実施例８において同定された多型の頻度を解析した。統計学的な解析手法としてはχ二乗検定を用いた。解析結果を表８に示す。【０１０６】
【表８】
0005608944.tif 000009
【０１０７】
表８の結果より、高血圧群と正常血圧群において、実施例８において同定されたｒｓ２６８１４７２多型における各遺伝子型の頻度が統計学的に有意に異なることが示された。具体的には、オッズ比から、正常血圧群と比較した場合に、高血圧群において、ＧアレルよりもＡアレルの頻度が有意に高いことが分かった。
該結果から、ＳＮＰ（ｒｓ２６８１４７２）の遺伝子型を調べることにより、遺伝子多型高血圧を発症する相対危険度を判定出来ることが明らかである。【０１０８】
[実施例１０]  ｒｓ２６８１４７２多型と高血圧との相関のロジスティック回帰分析
実施例８において同定されたｒｓ２６８１４７２多型と高血圧との相関を、他の関連する環境因子を含めた回帰分析により解析した。
表７に示した対象者を実施例９と同様に高血圧群と正常血圧群とに分類した。ここで分類された高血圧の有無を従属変数としたロジスティック回帰分析を、実施例８において同定されたｒｓ２６８１４７２多型に加えて、性別、年齢、ｂｏｄｙ  ｍａｓｓ  ｉｎｄｅｘ、循環器疾患の既往、喫煙、飲酒量、ＨＤＬコレステロール、中性脂肪、血糖、コホート変数を独立変数として実施した。解析結果を表９に示す。【０１０９】
【表９】
0005608944.tif 000010
【０１１０】
表９の結果より、性別、年齢、ｂｏｄｙ  ｍａｓｓ  ｉｎｄｅｘ、循環器疾患の既往、喫煙、飲酒量、ＨＤＬコレステロール、中性脂肪、血糖、コホート変数等の環境因子を調整した上でも、実施例８において同定されたｒｓ２６８１４７２多型が高血圧の独立した危険因子であることが示された。また、その相対危険度（オッズ比）は、当該遺伝子型がＧＧ型である場合に比べて、ＡＧ型で１．１７９倍、ＡＡ型で１．３４８倍であった。
該結果から、ｒｓ２６８１４７２多型を調べることにより、高血圧を発症する相対危険度を、他の環境因子の影響を調整した上で判定出来ることが明らかである。さらに、ＳＮＰ（ｒｓ２６８１４７２）がＧＧ型又はＡＧ型の場合に低リスク群であり、ＡＡ型の場合に高リスク群であると判定し得ることも、該結果から明らかである。【０１１１】
[実施例１１]  ｒｓ２６８１４７２多型ごとの粗平均血圧値の算出
実施例８において同定された多型ごとの収縮期血圧および拡張期血圧の粗平均値を求め、その差を一元配置の分散分析により統計学的に解析した。解析結果を表１０に示す。【０１１２】
【表１０】
0005608944.tif 000011
【０１１３】
表１０の結果より、ｒｓ２６８１４７２多型ごとに収縮期血圧と拡張期血圧のいずれの粗平均血圧値も、統計学的に有意に異なることが示された。
該結果から、ｒｓ２６８１４７２多型を調べることにより、遺伝子多型ごとの血圧上昇の程度を推定し得ることが明らかである。【０１１４】
[実施例１２]   ｒｓ２６８１４７２多型と血圧値との相関の重回帰分析
実施例８において同定されたｒｓ２６８１４７２多型と血圧値との相関を、他の関連する環境因子を含めた回帰分析により解析した。
収縮期血圧又は拡張期血圧を従属変数とした重回帰分析を、実施例８において同定されたｒｓ２６８１４７２多型に加えて、性別、年齢、ｂｏｄｙ  ｍａｓｓ  ｉｎｄｅｘ、循環器疾患の既往、喫煙、飲酒量、降圧薬の有無、ＨＤＬコレステロール、中性脂肪、血糖、コホート変数を独立変数として実施した。解析結果を表１１に示す。【０１１５】
【表１１】
0005608944.tif 000012
【０１１６】
表１１の結果より、性別、年齢、ｂｏｄｙ  ｍａｓｓ  ｉｎｄｅｘ、循環器疾患の既往、喫煙、飲酒量、降圧薬の有無、ＨＤＬコレステロール、中性脂肪、血糖、コホート変数等の環境因子を調整した上でも、実施例８において同定されたｒｓ２６８１４７２多型が収縮期血圧、拡張期血圧の独立した危険因子であることが示された。
該結果から、ｒｓ２６８１４７２多型を調べることにより、他の環境因子の影響を調整した上でも、遺伝子多型ごとの血圧上昇の程度を推定し得ることが明らかである。【０１１７】
[実施例１３]   ｒｓ２６８１４７２多型ごとの調整済平均血圧値の算出
実施例１２において示された、実施例８において同定されたｒｓ２６８１４７２多型と血圧値との回帰分析から、性別、年齢、ｂｏｄｙ  ｍａｓｓ  ｉｎｄｅｘ、循環器疾患の既往、喫煙、飲酒量、降圧薬の有無、ＨＤＬコレステロール、中性脂肪、血糖、コホート変数を調整した上でのｒｓ２６８１４７２多型ごとの平均収縮期血圧および拡張期血圧（調整済み平均血圧値）を算出した。解析結果を表１２に示す。【０１１８】
【表１２】
0005608944.tif 000013
【０１１９】
表１２の結果より、ｒｓ２６８１４７２多型ごとに調整済平均収縮期血圧、拡張期血圧が、統計学的に有意に異なることが示された。
該結果から、ｒｓｒｓ２６８１４７２多型を調べることにより、他の環境因子の影響を調整した上でも、遺伝子多型ごとの血圧上昇の程度を推定し得ることが明らかである。【０１２０】
[実施例１４]   ＡＴＰ２Ｂ１遺伝子上のＳＮＰ（ｒｓ１４０１９８２）のタイピング
９３８８人の一般地域住民を対象とし、ＳＮＰの遺伝子型と高血圧との関連を調べるための後向きコホート研究を行った。これらの対象者は、横浜（１８６９人）、滋賀（３９５０人）、愛媛（３５６９人）で集められた。
まず、対象者から採取した末梢血中の白血球から、実施例１と同様にして、それぞれのゲノムＤＮＡを抽出し、増幅することにより、ＳＮＰタイピングに供するＤＮＡ溶液を得た。
このようにして得られた各対象者の増幅済みゲノムＤＮＡを鋳型として、ＡＴＰ２Ｂ１遺伝子上のＳＮＰ（ｒｓ１４０１９８２）をＴａｑＭａｎプローブ法で解析した。具体的には、ｒｓ１１１０５３７８の各多型に特異的なＴａｑＭａｎ  Ｐｒｅ−Ｄｅｓｉｇｎｅｄ  ＳＮＰ Ｇｅｎｏｔｙｐｉｎｇ  Ａｓｓａｙに代えて、ｒｓ１４０１９８２の各多型に特異的なＴａｑＭａｎ  Ｐｒｅ−Ｄｅｓｉｇｎｅｄ  ＳＮＰ Ｇｅｎｏｔｙｐｉｎｇ  Ａｓｓａｙ (Ａｓｓａｙ  ＩＤ;Ｃ＿＿２７７５５０３＿１０、アプライドバイオシステムズ社製）を用いた以外は実施例２と同様にして遺伝子多型をタイピングした。【０１２１】
[実施例１５]   ｒｓ１４０１９８２多型と高血圧との相関
実施例１４において同定されたＳＮＰの遺伝子型と高血圧との相関を、一般地域住民を対象に相関解析（アソシエーション法）により解析した。【０１２２】
【表１３】
0005608944.tif 000014
【０１２３】
表１３は、解析対象とした９３８８人の臨床背景を示したものである。これらの対象者を、高血圧群（収縮期血圧１４０ｍｍＨｇ以上、及び／又は拡張期血圧９０ｍｍＨｇ以上、及び／又は降圧薬服用）と正常血圧群（高血圧群以外）とに分類し、実施例１４において同定された多型の頻度を解析した。統計学的な解析手法としてはχ二乗検定を用いた。解析結果を表１４に示す。【０１２４】
【表１４】
0005608944.tif 000015
【０１２５】
表１４の結果より、高血圧群と正常血圧群において、実施例１４において同定されたｒｓ１４０１９８２多型における各遺伝子型の頻度が統計学的に有意に異なることが示された。具体的には、オッズ比から、正常血圧群と比較した場合に、高血圧群において、ＡアレルよりもＧアレルの頻度が有意に高いことが分かった。
該結果から、ＳＮＰ（ｒｓ１４０１９８２）の遺伝子型を調べることにより、遺伝子多型高血圧を発症する相対危険度を判定出来ることが明らかである。【０１２６】
[実施例１６]  ｒｓ１４０１９８２多型と高血圧との相関のロジスティック回帰分析
実施例１４において同定されたｒｓ１４０１９８２多型と高血圧との相関を、他の関連する環境因子を含めた回帰分析により解析した。
表１３に示した対象者を実施例１５と同様に高血圧群と正常血圧群とに分類した。ここで分類された高血圧の有無を従属変数としたロジスティック回帰分析を、実施例１４において同定されたｒｓ１４０１９８２多型に加えて、性別、年齢、ｂｏｄｙ  ｍａｓｓ  ｉｎｄｅｘ、循環器疾患の既往、喫煙、飲酒量、ＨＤＬコレステロール、中性脂肪、血糖、コホート変数を独立変数として実施した。解析結果を表１５に示す。【０１２７】
【表１５】
0005608944.tif 000016
【０１２８】
表１５の結果より、性別、年齢、ｂｏｄｙ  ｍａｓｓ  ｉｎｄｅｘ、循環器疾患の既往、喫煙、飲酒量、ＨＤＬコレステロール、中性脂肪、血糖、コホート変数等の環境因子を調整した上でも、実施例１４において同定されたｒｓ１４０１９８２多型が高血圧の独立した危険因子であることが示された。また、その相対危険度（オッズ比）は、当該遺伝子型がＧＧ型である場合に比べて、ＡＧ型で１．１７９倍、ＡＡ型で１．３４８倍であった。
該結果から、ｒｓ１４０１９８２多型を調べることにより、高血圧を発症する相対危険度を、他の環境因子の影響を調整した上で判定出来ることが明らかである。さらに、ＳＮＰ（ｒｓ１４０１９８２）がＧＧ型又はＡＧ型の場合に低リスク群であり、ＡＡ型の場合に高リスク群であると判定し得ることも、該結果から明らかである。【０１２９】
[実施例１７]  ｒｓ１４０１９８２多型ごとの粗平均血圧値の算出
実施例１４において同定された多型ごとの収縮期血圧および拡張期血圧の粗平均値を求め、その差を一元配置の分散分析により統計学的に解析した。解析結果を表１６に示す。【０１３０】
【表１６】
0005608944.tif 000017
【０１３１】
表１６の結果より、ｒｓ１４０１９８２多型ごとに収縮期血圧と拡張期血圧のいずれの粗平均血圧値も、統計学的に有意に異なることが示された。
該結果から、ｒｓ１４０１９８２多型を調べることにより、遺伝子多型ごとの血圧上昇の程度を推定し得ることが明らかである。【０１３２】
[実施例１８]   ｒｓ１４０１９８２多型と血圧値との相関の重回帰分析
実施例１４において同定されたｒｓ１４０１９８２多型と血圧値との相関を、他の関連する環境因子を含めた回帰分析により解析した。
収縮期血圧又は拡張期血圧を従属変数とした重回帰分析を、実施例１４において同定されたｒｓ１４０１９８２多型に加えて、性別、年齢、ｂｏｄｙ  ｍａｓｓ  ｉｎｄｅｘ、循環器疾患の既往、喫煙、飲酒量、降圧薬の有無、ＨＤＬコレステロール、中性脂肪、血糖、コホート変数を独立変数として実施した。解析結果を表１７に示す。【０１３３】
【表１７】
0005608944.tif 000018
【０１３４】
表１７の結果より、性別、年齢、ｂｏｄｙ  ｍａｓｓ  ｉｎｄｅｘ、循環器疾患の既往、喫煙、飲酒量、降圧薬の有無、ＨＤＬコレステロール、中性脂肪、血糖、コホート変数等の環境因子を調整した上でも、実施例１４において同定されたｒｓ１４０１９８２多型が収縮期血圧、拡張期血圧の独立した危険因子であることが示された。
該結果から、ｒｓ１４０１９８２多型を調べることにより、他の環境因子の影響を調整した上でも、遺伝子多型ごとの血圧上昇の程度を推定し得ることが明らかである。【０１３５】
[実施例１９]   ｒｓ１４０１９８２多型ごとの調整済平均血圧値の算出
実施例１８において示された、実施例１４において同定されたｒｓ１４０１９８２多型と血圧値との回帰分析から、性別、年齢、ｂｏｄｙ  ｍａｓｓ  ｉｎｄｅｘ、循環器疾患の既往、喫煙、飲酒量、降圧薬の有無、ＨＤＬコレステロール、中性脂肪、血糖、コホート変数を調整した上でのｒｓ１４０１９８２多型ごとの平均収縮期血圧および拡張期血圧（調整済み平均血圧値）を算出した。解析結果を表１８に示す。【０１３６】
【表１８】
0005608944.tif 000019
【０１３７】
表１８の結果より、ｒｓ１４０１９８２多型ごとに調整済平均収縮期血圧、拡張期血圧が、統計学的に有意に異なることが示された。
該結果から、ｒｓｒｓ１４０１９８２多型を調べることにより、他の環境因子の影響を調整した上でも、遺伝子多型ごとの血圧上昇の程度を推定し得ることが明らかである。【０１３８】
[実施例２０］ＡＴＰ２Ｂ１遺伝子上のＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３６４）のタイピング
実施例２で得られた各対象者の増幅済みゲノムＤＮＡを鋳型として、ＡＴＰ２Ｂ１遺伝子上の多型部位（ｒｓ１１１０５３６４）をＴａｑＭａｎプローブ法で解析した。具体的には、実施例２で得られたＤＮＡ溶液２．０ｕｌに、２．５ｕｌのＴａｑＭａｎ  Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ  Ｍａｓｔｅｒ  Ｍｉｘ（アプライドバイオシステムズ社製）、０．０５ｕｌのｒｓ１１１０５３６４多型に特異的なＴａｑＭａｎ  Ｐｒｅ−Ｄｅｓｉｇｎｅｄ  ＳＮＰ  Ｇｅｎｏｔｙｐｉｎｇ  Ａｓｓａｙ  （Ａｓｓａｙ  ＩＤ；  Ｃ＿＿３２１７４４４８＿１０、アプライドバイオシステムズ社製）、０．４５ｕｌの蒸留水を加えて反応溶液を調整した後にｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  ｃｈａｉｎ  ｒｅａｃｔｉｏｎ法による伸長反応に供した。伸長反応は、５２℃で２分間、ついで９５℃で１０分間の加温の後、９５℃で１５秒間、６０℃で１分間の加温を６０回繰り返した。伸長反応後に、蛍光強度を７９００ＨＴ  Ｆａｓｔ  リアルタイムＰＣＲシステム（アプライドバイオシステムズ社製）で測定することにより、遺伝子多型をタイピングした。【０１３９】
[実施例２１］ｒｓ１１１０５３６４多型と高血圧との相関
実施例２０で同定された多型と高血圧との相関を、一般地域住民を対象に相関解析（アソシエーション法）で解析した。解析対象とした８９２４人の臨床背景を表１９に示す。これらのサンプルは、横浜（１８６０人）、滋賀（３９５３人）、愛媛（３５３９人）で集められた。【０１４０】
【表１９】
0005608944.tif 000020
【０１４１】
表１９に示した対象者を高血圧群（収縮期血圧１４０ｍｍＨｇ以上、及び／又は拡張期血圧９０ｍｍＨｇ以上、及び／又は降圧薬服用）と正常血圧群（高血圧群以外）とに分類し、実施例２０で同定された多型の頻度を解析した。統計学的な解析手法としてはχ二乗検定を用いた。解析結果を表２０に示す。【０１４２】
【表２０】
0005608944.tif 000021
【０１４３】
表２０の結果より、高血圧者と正常血圧者において、実施例２０で同定されたｒｓ１１１０５３６４多型における各遺伝子型の頻度が統計学的に有意に異なることが示された。このことは、当該遺伝子多型を調べることにより、高血圧を発症する相対危険度を判定出来ることを示すものである。【０１４４】
[実施例２２］ｒｓ１１１０５３６４多型と高血圧との相関のロジスティック回帰分析
実施例２０で同定された多型と高血圧との相関を、一般地域住民を対象に他の関連する環境因子を含めた回帰分析により解析した。
表１９に示した対象者を高血圧群（収縮期血圧１４０ｍｍＨｇ以上、及び／又は拡張期血圧９０ｍｍＨｇ以上、及び／又は降圧薬服用）と正常血圧群（高血圧群以外）とに分類した。ここで分類された高血圧の有無を従属変数としたロジスティック回帰分析を、実施例３で同定された多型に加えて性別、年齢、ｂｏｄｙ  ｍａｓｓ  ｉｎｄｅｘ、循環器疾患の既往、喫煙、飲酒量、ＨＤＬコレステロール、中性脂肪、血糖、コホートを独立変数として実施した。解析結果を表２１に示す。【０１４５】
【表２１】
0005608944.tif 000022
【０１４６】
表２１の結果より、性別、年齢、ｂｏｄｙ  ｍａｓｓ  ｉｎｄｅｘ、循環器疾患の既往、喫煙、飲酒量、ＨＤＬコレステロール、中性脂肪、血糖、コホートなどの環境因子を調整した上でも、実施例３で同定された遺伝子多型が高血圧の独立した危険因子であることが示された。また、その相対危険度（オッズ比）は、当該遺伝子型がＧＧである場合に比し、ＴＧ型で１．１８９倍、ＴＴ型で１．３４１倍であった。このことは、当該遺伝子多型を調べることにより、高血圧を発症する相対危険度を、他の環境因子の影響を調整した上で判定出来ることを示すものである。【０１４７】
[実施例２３］ｒｓ１１１０５３６４多型ごとの粗平均血圧値の算出
実施例２０で同定された多型ごとの収縮期血圧および拡張期血圧の粗平均値を求め、その差を一元配置の分散分析により統計学的に解析した。解析結果を表２２に示す。【０１４８】
【表２２】
0005608944.tif 000023
【０１４９】
表２２の結果より、当該遺伝子多型ごとに粗平均収縮期血圧、拡張期血圧が有意に異なることが示された。このことは、当該遺伝子多型を調べることにより、遺伝子多型ごとの血圧上昇の程度を推定できることを示すものである。【０１５０】
[実施例２４］ｒｓ１１１０５３６４多型と血圧値との相関の重回帰分析
実施例２０で同定された多型と血圧値との相関を、一般地域住民を対象に他の関連する環境因子を含めた回帰分析により解析した。
収縮期血圧または拡張期血圧を従属変数とした重回帰分析を、実施例２０で同定された多型に加えて性別、年齢、ｂｏｄｙ  ｍａｓｓ  ｉｎｄｅｘ、循環器疾患の既往、喫煙、飲酒量、降圧薬の有無、ＨＤＬコレステロール、中性脂肪、血糖、コホート変数を独立変数として実施した。解析結果を表２３に示す。【０１５１】
【表２３】
0005608944.tif 000024
【０１５２】
表２３の結果より、性別、年齢、ｂｏｄｙ  ｍａｓｓ  ｉｎｄｅｘ、循環器疾患の既往、喫煙、飲酒量、降圧薬の有無、ＨＤＬコレステロール、中性脂肪、血糖、コホートなどの環境因子を調整した上でも、実施例２０で同定された遺伝子多型が収縮期血圧、拡張期血圧の独立した危険因子であることが示された。
このことは、当該遺伝子多型を調べることにより、表２３に示した関連する環境因子を調整した上でも、遺伝子多型ごとの血圧上昇の程度を推定できることを示すものである。【０１５３】
[実施例２５］ｒｓ１１１０５３６４多型ごとの調整済平均血圧値の算出
実施例２４に示した実施例２０で同定された多型と血圧値との回帰分析から、性別、年齢、ｂｏｄｙ  ｍａｓｓ  ｉｎｄｅｘ、循環器疾患の既往、喫煙、飲酒量、降圧薬の有無、ＨＤＬコレステロール、中性脂肪、血糖、コホートを調整した上での遺伝子多型ごとの平均収縮期血圧および拡張期血圧（調整済み平均血圧値）を算出した。解析結果を表２４に示す。【０１５４】
【表２４】
0005608944.tif 000025
【０１５５】
表２４の結果より、当該遺伝子多型ごとに調整済平均収縮期血圧、拡張期血圧が有意に異なることが示された。
このことは、当該遺伝子多型を調べることにより、表２３に示した関連する環境因子を調整した上でも、遺伝子多型ごとの血圧上昇の程度を推定できることを示すものである。【０１５６】
[実施例２６]  ＣＹＰ１１Ｂ２遺伝子上のＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）のタイピング
各対象者の増幅済みゲノムＤＮＡを鋳型として、ＣＹＰ１１Ｂ２遺伝子上のＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）をＴａｑＭａｎプローブ法で解析した。具体的には、実施例１で得られたＤＮＡ溶液２．０μＬに、２．５μＬのＴａｑＭａｎ  Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ  Ｍａｓｔｅｒ  Ｍｉｘ（アプライドバイオシステムズ社製）、０．０５μＬのｒｓ１７９９９９８の各多型に特異的なＴａｑＭａｎ  Ｐｒｅ−Ｄｅｓｉｇｎｅｄ  ＳＮＰ Ｇｅｎｏｔｙｐｉｎｇ  Ａｓｓａｙ (Ａｓｓａｙ  ＩＤ;Ｃ＿＿８８９６４８４＿１０、アプライドバイオシステムズ社製）、０．４５μＬの蒸留水を加えて反応溶液を調整した後、ＰＣＲ法による伸長反応に供した。伸長反応は、５２℃で２分間、ついで９５℃で１０分間の加温の後、９５℃で１５秒間、６０℃で１分間の加温を６０回繰り返した。伸長反応後に、７９００ＨＴ  Ｆａｓｔ  リアルタイムＰＣＲシステム（アプライドバイオシステムズ社製）を用いて蛍光強度を測定することにより、遺伝子多型をタイピングした。【０１５７】
[実施例２７]  ＡＧＴ遺伝子上のＳＮＰ（ｒｓ６９９）のタイピング
各対象者の増幅済みゲノムＤＮＡを鋳型として、ＡＧＴ遺伝子上のＳＮＰ（ｒｓ６９９）をＴａｑＭａｎプローブ法で解析した。具体的には、実施例１で得られたＤＮＡ溶液２．０μＬに、２．５μＬのＴａｑＭａｎ  Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ  Ｍａｓｔｅｒ  Ｍｉｘ（アプライドバイオシステムズ社製）、０．０５μＬのｒｓ６９９の各多型に特異的なＴａｑＭａｎ  Ｐｒｅ−Ｄｅｓｉｇｎｅｄ  ＳＮＰ Ｇｅｎｏｔｙｐｉｎｇ  Ａｓｓａｙ (Ａｓｓａｙ  ＩＤ;Ｃ＿＿１９８５４８１＿２０、アプライドバイオシステムズ社製）、０．４５μＬの蒸留水を加えて反応溶液を調整した後、ＰＣＲ法による伸長反応に供した。伸長反応は、５２℃で２分間、ついで９５℃で１０分間の加温の後、９５℃で１５秒間、６０℃で１分間の加温を６０回繰り返した。伸長反応後に、７９００ＨＴ  Ｆａｓｔ  リアルタイムＰＣＲシステム（アプライドバイオシステムズ社製）を用いて蛍光強度を測定することにより、遺伝子多型をタイピングした。【０１５８】
[実施例２８]   ｒｓ１１１０５３７８多型、ｒｓ１７９９９９８多型、及びｒｓ６９９多型と高血圧とのロジスティック回帰分析１
実施例２において同定されたｒｓ１１１０５３７８多型と、実施例２６において同定されたｒｓ１７９９９９８多型と、実施例２７において同定されたｒｓ６９９多型と、高血圧との相関を、他の関連する環境因子を含めた回帰分析により解析した。
表１に示した対象者を実施例３と同様に高血圧群と正常血圧群とに分類した。ここで分類された高血圧の有無を従属変数としたロジスティック回帰分析を、実施例２、２６、及び２７において同定された各遺伝子多型に加えて、性別、年齢、ｂｏｄｙ  ｍａｓｓ  ｉｎｄｅｘ、循環器疾患の既往、喫煙、飲酒量、ＨＤＬコレステロール、中性脂肪、血糖、コホート変数を独立変数として実施した。解析結果を表２５に示す。【０１５９】
【表２５】
0005608944.tif 000026
【０１６０】
表２５の結果より、性別、年齢、ｂｏｄｙ  ｍａｓｓ  ｉｎｄｅｘ、循環器疾患の既往、喫煙、飲酒量、ＨＤＬコレステロール、中性脂肪、血糖、コホート変数等の環境因子を調整した上でも、実施例２６において同定されたｒｓ１７９９９９８多型及び実施例２７において同定されたｒｓ６９９多型が、高血圧の独立した危険因子であることが示された。また、その相対危険度（オッズ比）は、ｒｓ１７９９９９８多型のＴＴ型がＣＣ型に比して１．２６８倍であり、ｒｓ６９９多型のＴＴ型がＭＭ型に比して１．３７２倍であった。
該結果から、ｒｓ１７９９９９８多型又はｒｓ６９９多型を調べることにより、高血圧を発症する相対危険度を、他の環境因子の影響を調整した上で判定出来ることが明らかである。さらに、ＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）がＣＣ型又はＣＴ型の場合に低リスク群であり、ＴＴ型の場合に高リスク群であると判定し得ること、及びＳＮＰ（ｒｓ６９９）がＭＭ型又はＭＴ型の場合に低リスク群であり、ＴＴ型の場合に高リスク群であると判定し得ることも、該結果から明らかである。【０１６１】
[実施例２９]   ｒｓ１１１０５３７８多型、ｒｓ１７９９９９８多型、及びｒｓ６９９多型と高血圧とのロジスティック回帰分析２
ｒｓ１１１０５３７８多型のＴＣ型を１、ＣＣ型を２、ｒｓ１７９９９９８多型のＴＴ型を１、ｒｓ６９９多型のＴＴ型を１として、各対象者におけるリスク遺伝子多型の保有数を算出し、高血圧との相関を、他の関連する環境因子を含めた回帰分析により解析した。
具体的には、実施例２、２６、及び２７において同定された各遺伝子多型に代えて、前記リスク遺伝子多型の保有数を従属変数として用いた以外は、実施例２８と同様にしてロジスティック回帰分析を実施した。解析結果を表２６に示す。【０１６２】
【表２６】
0005608944.tif 000027
【０１６３】
表２６の結果より、性別、年齢、ｂｏｄｙ  ｍａｓｓ  ｉｎｄｅｘ、循環器疾患の既往、喫煙、飲酒量、ＨＤＬコレステロール、中性脂肪、血糖、コホート変数等の環境因子を調整した上でも、実施例２、２６、及び２７において同定された各遺伝子多型の組み合わせが、高血圧の独立した危険因子であること、及び、遺伝子多型ごとに解析するよりも高い相対危険度（オッズ比）を示すことが分かった。
該結果から、他の環境因子の影響を調整した上での高血圧発症に対する相対危険度を、ｒｓ１１１０５３７８多型、ｒｓ１７９９９９８多型、及びｒｓ６９９多型の組み合わせを調べることにより、個々の遺伝子多型単独での評価より適確に評価し得ることが明らかである。【０１６４】
[実施例３０]  ＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３７８）検出用ポリヌクレオチドを用いたＳＮＰタイピング
実施例１において対象者から採取した末梢血中の白血球から抽出したゲノムＤＮＡを増幅したものを鋳型とし、表２７記載の塩基配列を有するプライマーを用いてＳＮＰタイピングを行った。【０１６５】
【表２７】
0005608944.tif 000028
【０１６６】
まず、対象者から抽出されたゲノムＤＮＡを鋳型とし、配列番号１の塩基配列を有する第一段階増幅用フォワードプライマー（ＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３７８）＿１ｓｔ＿Ｆｗ  Ｐｒｉｍｅｒ）と、配列番号２の塩基配列を有する第一段階増幅用リバースプライマー（ＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３７８）＿１ｓｔ＿Ｒｖ  Ｐｒｉｍｅｒ）とを用いて、ゲノムＤＮＡを増幅した。次に、得られた増幅済みゲノムＤＮＡを鋳型とし、ＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３７８）のＣアレルを特異的に検出し得る配列番号５の塩基配列を有するフォワードプライマー（ＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３７８）＿ＡＳＰｒｉｍｅｒ＿Ｆｗ(Ｃ)）又はＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３７８）のＴアレルを特異的に検出し得る配列番号６の塩基配列を有するフォワードプライマー（ＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３７８）＿ＡＳＰｒｉｍｅｒ＿Ｆｗ(Ｔ)）、及び配列番号７の塩基配列を有するリバースプライマー（ＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３７８）＿Ｒｖ）を用いてＰＣＲを行い、ＰＣＲ産物の有無を一分子蛍光分析法により調べた。なお、ＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３７８）＿ＡＳＰｒｉｍｅｒ＿Ｆｗ(Ｃ)及びＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３７８）＿ＡＳＰｒｉｍｅｒ＿Ｆｗ(Ｔ)は、プライマーの３’末端から２番目にＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３７８）を配置し、３’末端から３番目にミスマッチを導入した塩基配列を有するポリヌクレオチドである。
具体的には、１０μＬの２×ＡｍｐｌｉＴａｑ  Ｇｏｌｄ  Ｍａｓｔｅｒ  Ｍｉｘ（アプライドバイオシステムズ社製）に、２．０μＬのＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３７８）＿１ｓｔ＿Ｆｗ  Ｐｒｉｍｅｒ（５μＭ）、２．０μＬのＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３７８）＿１ｓｔ＿Ｒｖ  Ｐｒｉｍｅｒ（５μＭ）、１μＬの抽出されたゲノムＤＮＡ（５ｎｇ／μＬ）、５μＬの滅菌水をそれぞれ添加し、２０μＬの一次ＰＣＲ反応溶液を調製した。その後、該反応溶液を、９５℃で１０分間処理した後、９５℃で３０秒間、５７．５℃で３０秒間、７２℃で１分間の熱サイクルを４０サイクル行い、さらに７２℃で１０分間処理することにより、ゲノムＤＮＡを増幅した。
その後、２μＬの１０×Ｓｔｏｆｆｅｌ  Ｂｕｆｆｅｒ（アプライドバイオシステムズ社製）、１．６μＬのｄＮＴＰ（１０ｍＭ）、２．０μＬの塩化マグネシウム溶液（２５ｍＭ）、１．０μＬの増幅済みゲノムＤＮＡ、２．０μＬのＴＡＭＲＡ標識ＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３７８）＿ＡＳＰｒｉｍｅｒ＿Ｆｗ(Ｃ)（２００ｎＭ）、２．０μＬのＣｙ５標識ＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３７８）＿ＡＳＰｒｉｍｅｒ＿Ｆｗ(Ｔ)（２００ｎＭ）、２．０μＬのＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３７８）＿Ｒｖ（２００ｎＭ）、０．１μＬのＳｔｏｆｆｅｌ  ｆｒａｇｍｅｎｔ(１０ｕｎｉｔｓ／μＬ、アプライドバイオシステムズ社製)、及び適当量の滅菌水をそれぞれ添加し、２０μＬの二次ＰＣＲ反応溶液を調製した。その後、該反応溶液を、９５℃で２分間処理した後、９５℃で３０秒間、６３．２℃で３０秒間、７２℃で３０秒間の熱サイクルを４０サイクル行い、さらに７２℃で１０分間処することにより、二次ＰＣＲを行った。なお、ＰＣＲ装置は、旧ＭＪ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ社（現Ｂｉｏ  Ｒａｄ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社）のＧｒａｄｉｅｎｔ  Ｔｈｅｒｍａｌ  Ｃｙｃｌｅｒ  ＰＴＣ−２００を用いて行った。
二次ＰＣＲ後の反応溶液を、一分子蛍光分析装置ＭＦ２０（オリンパス社製）専用のガラスプレートに分注し、５４３ｎｍと６３３ｎｍを測定波長とし、２波長同時測定を行い、ＰＣＲ産物の有無を測定し、ＳＮＰタイピングを行った。得られたＳＮＰタイピング結果は、実施例３と同じ結果であった。
また、ＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３７８）＿ＡＳＰｒｉｍｅｒ＿Ｆｗ(Ｃ)に代えて、プライマーの３’末端にＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３７８）を配置した配列番号３の塩基配列を有するフォワードプライマー（ＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３７８）＿ＳＳＰｒｉｍｅｒ＿Ｆｗ(Ｃ)）を、ＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３７８）＿ＡＳＰｒｉｍｅｒ＿Ｆｗ(Ｔ) に代えて、プライマーの３’末端にＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３７８）を配置した配列番号４の塩基配列を有するフォワードプライマー（ＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３７８）＿ＳＳＰｒｉｍｅｒ＿Ｆｗ(Ｔ)）を、それぞれ用いて、同様にＳＮＰタイピングを行ったところ、やはり、実施例３と同じ結果となった。
これらの結果から、本発明の第二の発明である高血圧発症リスク判定用ポリヌクレオチドを用いることにより、ＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３７８）ＳＮＰタイピングが高精度に行い得ることが明らかである。【０１６７】
[実施例３１]  ＳＮＰ（ｒｓ２６８１４７２）検出用ポリヌクレオチドを用いたＳＮＰタイピング
実施例８において対象者から採取した末梢血中の白血球から抽出したゲノムＤＮＡを増幅したものを鋳型とし、表２８記載の塩基配列を有するプライマーを用いてＳＮＰタイピングを行った。【０１６８】
【表２８】
0005608944.tif 000029
【０１６９】
まず、対象者から抽出されたゲノムＤＮＡを鋳型とし、配列番号８の塩基配列を有する第一段階増幅用フォワードプライマー（ＳＮＰ（ｒｓ２６８１４７２）＿１ｓｔ＿Ｆｗ  Ｐｒｉｍｅｒ）と、配列番号９の塩基配列を有する第一段階増幅用リバースプライマー（ＳＮＰ（ｒｓ２６８１４７２）＿１ｓｔ＿Ｒｖ  Ｐｒｉｍｅｒ）とを用いて、実施例３０と同様にしてゲノムＤＮＡを増幅した。次に、得られた増幅済みゲノムＤＮＡを鋳型とし、ＳＮＰ（ｒｓ２６８１４７２）のＡアレルを特異的に検出し得る配列番号１２の塩基配列を有するフォワードプライマー（ＳＮＰ（ｒｓ２６８１４７２）＿ＡＳＰｒｉｍｅｒ＿Ｆｗ(Ａ)）又はＳＮＰ（ｒｓ２６８１４７２）のＧアレルを特異的に検出し得る配列番号１３の塩基配列を有するフォワードプライマー（ＳＮＰ（ｒｓ２６８１４７２）＿ＡＳＰｒｉｍｅｒ＿Ｆｗ(Ｇ)）、及び配列番号１４の塩基配列を有するリバースプライマー（ＳＮＰ（ｒｓ２６８１４７２）＿Ｒｖ）を用いて、実施例３０と同様にしてＰＣＲを行い、ＰＣＲ産物の有無を一分子蛍光分析法により調べた。得られたＳＮＰタイピング結果は、実施例８と同じ結果であった。なお、ＳＮＰ（ｒｓ２６８１４７２）＿ＡＳＰｒｉｍｅｒ＿Ｆｗ(Ａ)及びＳＮＰ（ｒｓ２６８１４７２）＿ＡＳＰｒｉｍｅｒ＿Ｆｗ(Ｇ)は、プライマーの３’末端から２番目にＳＮＰ（ｒｓ２６８１４７２）を配置し、３’末端から３番目にミスマッチを導入した塩基配列を有するポリヌクレオチドである。
また、ＳＮＰ（ｒｓ２６８１４７２）＿ＡＳＰｒｉｍｅｒ＿Ｆｗ(Ａ)に代えて、プライマーの３’末端にＳＮＰ（ｒｓ２６８１４７２）を配置した配列番号１０の塩基配列を有するフォワードプライマー（ＳＮＰ（ｒｓ２６８１４７２）＿ＳＳＰｒｉｍｅｒ＿Ｆｗ(Ａ)）を、ＳＮＰ（ｒｓ２６８１４７２）＿ＡＳＰｒｉｍｅｒ＿Ｆｗ(Ｇ) に代えて、プライマーの３’末端にＳＮＰ（ｒｓ２６８１４７２）を配置した配列番号１１の塩基配列を有するフォワードプライマー（ＳＮＰ（ｒｓ２６８１４７２）＿ＳＳＰｒｉｍｅｒ＿Ｆｗ(Ｇ)）を、それぞれ用いて、同様にＳＮＰタイピングを行ったところ、やはり、実施例８と同じ結果となった。
これらの結果から、本発明の第三の発明である高血圧発症リスク判定用ポリヌクレオチドを用いることにより、ＳＮＰ（ｒｓ２６８１４７２）ＳＮＰタイピングが高精度に行い得ることが明らかである。【０１７０】
[実施例３２]  ＳＮＰ（ｒｓ１４０１９８２）検出用ポリヌクレオチドを用いたＳＮＰタイピング
実施例１４において対象者から採取した末梢血中の白血球から抽出したゲノムＤＮＡを増幅したものを鋳型とし、表２９記載の塩基配列を有するプライマーを用いてＳＮＰタイピングを行った。【０１７１】
【表２９】
0005608944.tif 000030
【０１７２】
まず、対象者から抽出されたゲノムＤＮＡを鋳型とし、配列番号１５の塩基配列を有する第一段階増幅用フォワードプライマー（ＳＮＰ（ｒｓ１４０１９８２）＿１ｓｔ＿Ｆｗ  Ｐｒｉｍｅｒ）と、配列番号１６の塩基配列を有する第一段階増幅用リバースプライマー（ＳＮＰ（ｒｓ１４０１９８２）＿１ｓｔ＿Ｒｖ  Ｐｒｉｍｅｒ）とを用いて、実施例３０と同様にしてゲノムＤＮＡを増幅した。次に、得られた増幅済みゲノムＤＮＡを鋳型とし、ＳＮＰ（ｒｓ１４０１９８２）のＧアレルを特異的に検出し得る配列番号１９の塩基配列を有するフォワードプライマー（ＳＮＰ（ｒｓ１４０１９８２）＿ＡＳＰｒｉｍｅｒ＿Ｆｗ(Ｇ)）又はＳＮＰ（ｒｓ１４０１９８２）のＡアレルを特異的に検出し得る配列番号２０の塩基配列を有するフォワードプライマー（ＳＮＰ（ｒｓ１４０１９８２）＿ＡＳＰｒｉｍｅｒ＿Ｆｗ(Ａ)）、及び配列番号２１の塩基配列を有するリバースプライマー（ＳＮＰ（ｒｓ１４０１９８２）＿Ｒｖ）を用いて、実施例３０と同様にしてＰＣＲを行い、ＰＣＲ産物の有無を一分子蛍光分析法により調べた。得られたＳＮＰタイピング結果は、実施例１４と同じ結果であった。なお、ＳＮＰ（ｒｓ１４０１９８２）＿ＡＳＰｒｉｍｅｒ＿Ｆｗ(Ｇ)及びＳＮＰ（ｒｓ１４０１９８２）＿ＡＳＰｒｉｍｅｒ＿Ｆｗ(Ａ)は、プライマーの３’末端から２番目にＳＮＰ（ｒｓ１４０１９８２）を配置し、３’末端から３番目にミスマッチを導入した塩基配列を有するポリヌクレオチドである。
また、ＳＮＰ（ｒｓ１４０１９８２）＿ＡＳＰｒｉｍｅｒ＿Ｆｗ(Ｇ)に代えて、プライマーの３’末端にＳＮＰ（ｒｓ１４０１９８２）を配置した配列番号１７の塩基配列を有するフォワードプライマー（ＳＮＰ（ｒｓ１４０１９８２）＿ＳＳＰｒｉｍｅｒ＿Ｆｗ(Ｇ)）を、ＳＮＰ（ｒｓ１４０１９８２）＿ＡＳＰｒｉｍｅｒ＿Ｆｗ(Ａ) に代えて、プライマーの３’末端にＳＮＰ（ｒｓ１４０１９８２）を配置した配列番号１８の塩基配列を有するフォワードプライマー（ＳＮＰ（ｒｓ１４０１９８２）＿ＳＳＰｒｉｍｅｒ＿Ｆｗ(Ａ)）を、それぞれ用いて、同様にＳＮＰタイピングを行ったところ、やはり、実施例１４と同じ結果となった。
これらの結果から、本発明の第四の発明である高血圧発症リスク判定用ポリヌクレオチドを用いることにより、ＳＮＰ（ｒｓ１４０１９８２）ＳＮＰタイピングが高精度に行い得ることが明らかである。【０１７３】
[実施例３３]  ＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）検出用ポリヌクレオチドを用いたＳＮＰタイピング
実施例２において対象者から採取した末梢血中の白血球から抽出したゲノムＤＮＡを増幅したものを鋳型とし、表３０記載の塩基配列を有するプライマーを用いてＳＮＰタイピングを行った。【０１７４】
【表３０】
0005608944.tif 000031
【０１７５】
まず、対象者から抽出されたゲノムＤＮＡを鋳型とし、配列番号２２の塩基配列を有する第一段階増幅用フォワードプライマー（ＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）＿１ｓｔ＿Ｆｗ  Ｐｒｉｍｅｒ）と、配列番号２３の塩基配列を有する第一段階増幅用リバースプライマー（ＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）＿１ｓｔ＿Ｒｖ  Ｐｒｉｍｅｒ）とを用いて、実施例３０と同様にしてゲノムＤＮＡを増幅した。次に、得られた増幅済みゲノムＤＮＡを鋳型とし、ＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）のＴアレルを特異的に検出し得る配列番号２６の塩基配列を有するフォワードプライマー（ＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）＿ＡＳＰｒｉｍｅｒ＿Ｆｗ(Ｔ)）又はＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）のＣアレルを特異的に検出し得る配列番号２７の塩基配列を有するフォワードプライマー（ＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）＿ＡＳＰｒｉｍｅｒ＿Ｆｗ(Ｃ)）、及び配列番号２８の塩基配列を有するリバースプライマー（ＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）＿Ｒｖ）を用いて、実施例３０と同様にしてＰＣＲを行い、ＰＣＲ産物の有無を一分子蛍光分析法により調べた。得られたＳＮＰタイピング結果は、実施例２６と同じ結果であった。なお、ＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）＿ＡＳＰｒｉｍｅｒ＿Ｆｗ(Ｔ)及びＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）＿ＡＳＰｒｉｍｅｒ＿Ｆｗ(Ｃ)は、プライマーの３’末端から２番目にＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）を配置し、３’末端から３番目にミスマッチを導入した塩基配列を有するポリヌクレオチドである。
また、ＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）＿ＡＳＰｒｉｍｅｒ＿Ｆｗ(Ｔ)に代えて、プライマーの３’末端にＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）を配置した配列番号２４の塩基配列を有するフォワードプライマー（ＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）＿ＳＳＰｒｉｍｅｒ＿Ｆｗ(Ｔ)）を、ＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）＿ＡＳＰｒｉｍｅｒ＿Ｆｗ(Ｃ) に代えて、プライマーの３’末端にＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）を配置した配列番号２５の塩基配列を有するフォワードプライマー（ＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）＿ＳＳＰｒｉｍｅｒ＿Ｆｗ(Ｃ)）を、それぞれ用いて、同様にＳＮＰタイピングを行ったところ、やはり、実施例２６と同じ結果となった。
これらの結果から、本発明の第六の発明である高血圧発症リスク判定用ポリヌクレオチドを用いることにより、ＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）ＳＮＰタイピングが高精度に行い得ることが明らかである。【０１７６】
[実施例３４]  ＳＮＰ（ｒｓ６９９）検出用ポリヌクレオチドを用いたＳＮＰタイピング
実施例２において対象者から採取した末梢血中の白血球から抽出したゲノムＤＮＡを増幅したものを鋳型とし、表３１記載の塩基配列を有するプライマーを用いてＳＮＰタイピングを行った。【０１７７】
【表３１】
0005608944.tif 000032
【０１７８】
まず、対象者から抽出されたゲノムＤＮＡを鋳型とし、配列番号２９の塩基配列を有する第一段階増幅用フォワードプライマー（ＳＮＰ（ｒｓ６９９）＿１ｓｔ＿Ｆｗ  Ｐｒｉｍｅｒ）と、配列番号３０の塩基配列を有する第一段階増幅用リバースプライマー（ＳＮＰ（ｒｓ６９９）＿１ｓｔ＿Ｒｖ  Ｐｒｉｍｅｒ）とを用いて、実施例３０と同様にしてゲノムＤＮＡを増幅した。次に、得られた増幅済みゲノムＤＮＡを鋳型とし、ＳＮＰ（ｒｓ６９９）のＴアレルを特異的に検出し得る配列番号３３の塩基配列を有するフォワードプライマー（ＳＮＰ（ｒｓ６９９）＿ＡＳＰｒｉｍｅｒ＿Ｆｗ(Ｔ)）又はＳＮＰ（ｒｓ６９９）のＭアレルを特異的に検出し得る配列番号３４の塩基配列を有するフォワードプライマー（ＳＮＰ（ｒｓ６９９）＿ＡＳＰｒｉｍｅｒ＿Ｆｗ(Ｍ)）、及び配列番号３５の塩基配列を有するリバースプライマー（ＳＮＰ（ｒｓ６９９）＿Ｒｖ）を用いて、実施例３０と同様にしてＰＣＲを行い、ＰＣＲ産物の有無を一分子蛍光分析法により調べた。得られたＳＮＰタイピング結果は、実施例２７と同じ結果であった。なお、ＳＮＰ（ｒｓ６９９）＿ＡＳＰｒｉｍｅｒ＿Ｆｗ(Ｔ)及びＳＮＰ（ｒｓ６９９）＿ＡＳＰｒｉｍｅｒ＿Ｆｗ(Ｍ)は、プライマーの３’末端から２番目にＳＮＰ（ｒｓ６９９）を配置し、３’末端から３番目にミスマッチを導入した塩基配列を有するポリヌクレオチドである。
また、ＳＮＰ（ｒｓ６９９）＿ＡＳＰｒｉｍｅｒ＿Ｆｗ(Ｔ)に代えて、プライマーの３’末端にＳＮＰ（ｒｓ６９９）を配置した配列番号３１の塩基配列を有するフォワードプライマー（ＳＮＰ（ｒｓ６９９）＿ＳＳＰｒｉｍｅｒ＿Ｆｗ(Ｔ)）を、ＳＮＰ（ｒｓ６９９）＿ＡＳＰｒｉｍｅｒ＿Ｆｗ(Ｍ) に代えて、プライマーの３’末端にＳＮＰ（ｒｓ６９９）を配置した配列番号３２の塩基配列を有するフォワードプライマー（ＳＮＰ（ｒｓ６９９）＿ＳＳＰｒｉｍｅｒ＿Ｆｗ(Ｍ)）を、それぞれ用いて、同様にＳＮＰタイピングを行ったところ、やはり、実施例２７と同じ結果となった。
これらの結果から、本発明の第六の発明である高血圧発症リスク判定用ポリヌクレオチドを用いることにより、ＳＮＰ（ｒｓ６９９）ＳＮＰタイピングが高精度に行い得ることが明らかである。【０１７９】
[実施例３４]  その他のＳＮＰの評価方法
高血圧との相関性が高い前記ＡＴＰ２Ｂ１遺伝子のＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３７８）、ＳＮＰ（ｒｓ２６８１４７２）、ＳＮＰ（ｒｓ１４０１９８２）、ＳＮＰ（ｒｓ１１１０５３６４）、ＣＹＰ１１Ｂ２遺伝子のＳＮＰ（ｒｓ１７９９９９８）及びＡＧＴ遺伝子のＳＮＰ（ｒｓ６９９）の以外に、高血圧との相関性が低いＳＮＰを複数集めてリスクをスコア化することで、高血圧とスコアの相関を解析し、高血圧のリスク判定を行うことも可能である。
その手法は、下記の通りである。
１．高血圧リスクＳＮＰをリスクタイプを３点、ヘテロタイプを２点、非リスクタイプを１点としてスコア化する。
２．複数の高血圧リスクＳＮＰを１．の手法でスコア化し、足し合わせてリスク値とする。
３．サンプル集団のそれぞれの人に対して、２．のリスク値を求め、頻度×リスク値のヒストグラムを作る。
４．ヒストグラムを高リスク群、中リスク群、低リスク群にわける。
５．被験者のＳＮＰを検査して、スコアがヒストグラムのどこに当てはまるかで、被験者を高リスク群、中リスク群、低リスク群に割り当てる。【０１８０】
本実施例では、高血圧との相関性が低いＳＮＰとして、上記特許文献５で挙げられている３８種類のＳＮＰのうち、ＡＴＰ２Ｂ１遺伝子のＳＮＰ（ｒｓ２０７０７５９）と他の遺伝子１１種類のＳＮＰを用いて評価を行った。１２種類のＳＮＰを表３２に示す。【０１８１】
【表３２】
0005608944.tif 000033
【０１８２】
８４６７人を対象に、リスクタイプ（リスク遺伝子型）を３点、ヘテロタイプを２点、非リスクタイプを１点として積算して、表３３のヒストグラムに示す。【０１８３】
【表３３】
0005608944.tif 000034
【０１８４】
表３３において、２６点以上を高リスク群、２０点以下を低リスク群、２１〜２５点を中リスク群とする。
上記対象者の８４６７人のうち、高血圧群（１６０／９０ｍｍＨｇ以上、及び／又は降圧薬服用；１６５５人）と正常血圧群（１２０／９０ｍｍＨｇ未満、及び／又は降圧薬服用なし；１７８６人）との２群で高リスク群／中リスク群／低リスク群の頻度を比較した。比較結果を表３４に示す。  【０１８５】
【表３４】
0005608944.tif 000035
【０１８６】
表３４において、対象者（正常血圧群１７８６人、高血圧群１６５５人）の内、全てのＳＮＰのタイピングが可能だったケースは、正常血圧群１４９７人、高血圧群１４０１人であった。ここで、ｐ＝０．０００２であった。これは高血圧群と正常血圧群で高リスク群／中リスク群／低リスク群の頻度が同じという帰無仮説を立てて検定したときのものであり、高血圧群と正常血圧群で低リスク群／中リスク群／高リスク群の頻度が９９．９９９８％の確率で異なることを意味する。【０１８７】
前記１２種類のＳＮＰと高血圧との相関を他の関連する環境因子を含めた回帰分析より解析した。対象者を高リスク群と中リスク群と低リスク群とに分類した。ここで分類されたリスクの程度を従属変数としたロジスティック回帰分析を、性別、年齢、ｂｏｄｙ  ｍａｓｓ  ｉｎｄｅｘを独立変数として実施した。解析結果を表３５に示す。【０１８８】
【表３５】
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【０１８９】
表３５の結果より、性別、年齢、ｂｏｄｙ  ｍａｓｓ  ｉｎｄｅｘ等の環境因子を調整した上でも、ＡＴＰ２Ｂ１遺伝子のＳＮＰ（ｒｓ２０７０７５９）と他の遺伝子１１種類のＳＮＰとの重積により、高血圧のリスクを判定できることが示された。また、その相対危険度（オッズ比）は、低リスク群に比し、中リスク群で１．２７５、高リスク群で１．６７５倍であった。ＡＴＰ２Ｂ１遺伝子の以外は高血圧と相関性が低いため多型の重積が重要である。高血圧群と正常血圧群での対象者のタイプを表３６に示す。【０１９０】
【表３６】
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【０１９１】
表３６において、ＡＡ、Ａａ、ａａの値は表３２と同様である。また、ｐ値は、表３４と同様に高血圧群／正常血圧群でＡＡ、Ａａ、ａａの頻度を比較したものである。
【産業上の利用可能性】
【０１９２】
本発明の高血圧の遺伝子マーカーを用いることにより、高血圧発症のリスクをより適確に判定し得るため、医療機関等における検体の遺伝子解析等の分野において利用が可能である。