(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
塩化ナトリウム、塩化カリウム、及びアルカリ土類金属ハロゲン化物からなる群から選択される１又は２以上のハロゲン化物を含有し、当該ハロゲン化物の終濃度が０．５Ｍ〜０．８Ｍとなる状態で血液又はこれに由来する試料と接触させることを特徴とする、リムルス測定に付される前記試料の前処理剤。
【請求項２】
アルカリ土類金属が、マグネシウム及び／又はカルシウムであることを特徴とする、請求項１に記載の前処理剤。
【請求項３】
アルカリ土類金属ハロゲン化物が、フッ化物及び／又は塩化物であることを特徴とする、請求項１又は２に記載の前処理剤。
【請求項４】
リムルス測定の対象が、（１→３）−β−Ｄ−グルカンであることを特徴とする、請求項１〜３のいずれか１項に記載の前処理剤。
【請求項５】
血液が、高Ｉｇ血症の動物に由来する血液、溶血した血液、高ビリルビン血症の動物に由来する血液及び高乳び血症の動物に由来する血液からなる群から選ばれる１又は２以上の血液であることを特徴とする、請求項１〜４のいずれか１項に記載の前処理剤。
【請求項６】
血液に由来する試料が血漿又は血清であることを特徴とする、請求項１〜５のいずれか１項に記載の前処理剤。
【請求項７】
請求項１〜６のいずれか１項に記載の前処理剤を構成物品として含有する、リムルス試薬キット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、リムルス測定用前処理剤及びこれを構成物品として含有するリムルス試薬キット等に関する。
【背景技術】
【０００２】
本願の出願書類においては、以下の略号を使用する。
ＢＧ：（１→３）−β−Ｄ−グルカン
ＥＤＴＡ：エチレンジアミン四酢酸
ＰＢＳ：リン酸緩衝生理食塩水
以下、本発明の背景技術について説明する。
特許文献１には、三重らせん構造を主体とするＢＧを含み得る試料を、強アルカリ性条件下で前処理し、反応妨害因子として試料中に含まれる可能性のある、エンドトキシン単独またはエンドトキシンとＧ因子系反応妨害因子とを破壊もしくは不活性化した後、リムルス試薬によるリムルス反応に付すことを特徴とするＢＧの測定方法が記載されている。そして当該文献の「実施例３」には、リムルス測定の前に、ＰＢＳ（＋）やハンクス液に１００％三重らせん構造からなるシゾフィランを添加することが記載されており、当該ＰＢＳ（＋）やハンクス液には、それぞれ０．４９２ｍＭのＭｇＳＯ４及び０．８１２ｍＭのＭｇＳＯ４が含有されている旨記載されている。
【０００３】
また特許文献２には、エンドトキシン測定用前処理剤中のアルカリ土類金属ハロゲン化物を０．００５〜０．０５モル／ｌの範囲としたり、当該処理剤中のアルカリ金属ハロゲン化物を０．０５〜０．５モル／ｌの範囲とすることが記載されている。しかし、ここで開示されている濃度はあくまで「前処理剤中の」濃度であって、試料と接触させる際の終濃度ではない。
【０００４】
これらのいずれの文献にも、アルカリ金属硫酸塩及び／又はアルカリ土類金属硫酸塩を、その終濃度が２０ｍＭ以上となる状態でリムルス測定に付される試料と接触させて前処理することについては記載も示唆もない。
【０００５】
さらに、アルカリ金属ハロゲン化物及び／又はアルカリ土類金属ハロゲン化物を、その終濃度が０．４Ｍ超１．２Ｍ以下となる状態でリムルス測定に付される試料と接触させて前処理することについても記載も示唆もない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特開平７−１２８３３７号公報
【特許文献２】特開平６−７０７９６号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、リムルス測定における非特異反応を効果的に抑制する手段を提供することを課題とする。ここにいう「リムルス測定における非特異反応」とは、リムルス測定の対象物質（エンドトキシンやＢＧ等）以外の要因によって引き起こされ、かつ、リムルス測定の結果に影響を与えるあらゆる反応を意味する。したがって、例えばリムルス測定に付される試料中の成分、前処理剤中の成分、リムルス試薬中の成分等自体の不溶化や、これらの相互作用による不溶化等の反応も、それがリムルス測定の結果に影響を与える限りにおいて「リムルス測定における非特異反応」に包含される。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
発明者は上記課題を解決すべく鋭意検討した結果、アルカリ金属硫酸塩及び／又はアルカリ土類金属硫酸塩を、その終濃度が２０ｍＭ以上となる状態でリムルス測定に付される試料と接触させて前処理することにより、又は、アルカリ金属ハロゲン化物及び／又はアルカリ土類金属ハロゲン化物を、その終濃度が０．４Ｍ超１．２Ｍ以下となる状態でリムルス測定に付される試料と接触させて前処理することにより、リムルス測定において非特異的な反応を効果的に抑制することができることを見い出し、本発明を完成するに至った。
【０００９】
すなわち本発明は、アルカリ金属硫酸塩及び／又はアルカリ土類金属硫酸塩を含有し、当該硫酸塩の終濃度が２０ｍＭ以上となる状態で試料と接触させることを特徴とする、又は、アルカリ金属ハロゲン化物及び／又はアルカリ土類金属ハロゲン化物を含有し、当該ハロゲン化物の終濃度が０．４Ｍ超１．２Ｍ以下となる状態で試料と接触させることを特徴とする、リムルス測定に付される試料の前処理剤（以下、「本発明前処理剤」という。）を提供する。前記アルカリ金属は、リチウム、ナトリウム及びカリウムからなる群から選択される１又は２以上のアルカリ金属であることが好ましい。また前記アルカリ土類金属は、マグネシウム及び／又はカルシウムであることが好ましい。また、前記硫酸塩の終濃度は、２０ｍＭ〜５００ｍＭであることが好ましい。また前記ハロゲン化物は、フッ化物及び／又は塩化物であることが好ましい。また前記リムルス測定の対象は、ＢＧであることが好ましい。また前記試料は、生体に由来する試料であることが好ましい。この生体に由来する試料は、体液又はこれに由来するものであることが好ましい。この体液は、血液であることが好ましい。この血液は、高Ｉｇ血症の動物に由来する血液、溶血した血液、高ビリルビン血症の動物に由来する血液及び高乳び血症の動物に由来する血液からなる群から選ばれる１又は２以上の血液であることが好ましい。
【００１０】
また本発明は、本発明前処理剤を構成物品として含有する、リムルス試薬キット（以下、「本発明キット」という。）、リムルス測定に付される試料を、終濃度が２０ｍＭ以上のアルカリ金属硫酸塩及び／又はアルカリ土類金属硫酸塩で前処理することを特徴とする、又は、終濃度が０．４Ｍ超１．２Ｍ以下のアルカリ金属ハロゲン化物及び／又はアルカリ土類金属ハロゲン化物で前処理することを特徴とする、試料の前処理方法（以下、「本発明前処理方法」という。）、及びリムルス測定に付される試料を、終濃度が２０ｍＭ以上のアルカリ金属硫酸塩及び／又はアルカリ土類金属硫酸塩で前処理するステップを含むことを特徴とする、又は、終濃度が０．４Ｍ超１．２Ｍ以下のアルカリ金属ハロゲン化物及び／又はアルカリ土類金属ハロゲン化物で前処理するステップを含むことを特徴とする、リムルス測定方法（以下、「本発明測定方法」という。）も併せて提供する。
【発明の効果】
【００１１】
本発明前処理剤は、これを用いてリムルス測定に付される試料を前処理することにより、リムルス反応における非特異反応を簡便、迅速、安価かつ効果的に抑制し、リムルス測定の精度をより高めることができることから極めて有用である。また本発明キットは、これを用いることによって非特異反応が抑制されたより高い精度のリムルス測定を迅速に行うことができ、極めて有用である。また本発明前処理方法や本発明測定方法も、これらによってリムルス反応における非特異反応を効果的に抑制でき、より高い精度のリムルス測定を簡便、迅速かつ安価に行うことができることから、極めて有用である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１２】
以下、発明を実施するための最良の形態により本発明を詳説する。
＜１＞本発明前処理剤
本発明前処理剤は、アルカリ金属硫酸塩及び／又はアルカリ土類金属硫酸塩を含有し、当該硫酸塩の終濃度が２０ｍＭ以上となる状態で試料と接触させることを特徴とする、リムルス測定に付される試料の前処理剤（以下、「本発明第一の前処理剤」ともいう）、及び、アルカリ金属ハロゲン化物及び／又はアルカリ土類金属ハロゲン化物を含有し、当該ハロゲン化物の終濃度が０．４Ｍ超１．２Ｍ以下となる状態で試料と接触させることを特徴とする、リムルス測定に付される試料の前処理剤（以下、「本発明第二の前処理剤」ともいう）である。また、以下、「本発明前処理剤」は、「本発明第一の前処理剤」と「本発明第二の前処理剤」のいずれも含むものとする。
【００１３】
ここにいう「アルカリ金属」は、当技術分野においてアルカリ金属として認識される金属である限り特に限定されないが、なかでもリチウム、ナトリウム及びカリウムからなる群から選択される１又は２以上のアルカリ金属であることが好ましい。
【００１４】
また、ここにいう「アルカリ土類金属」も、当技術分野においてアルカリ土類金属として認識される金属である限り特に限定されないが、なかでもマグネシウム及び／又はカルシウムであることが好ましい。
【００１５】
また、ここにいう「ハロゲン化物」も、当技術分野においてハロゲン化物として認識されるものである限り特に限定されないが、なかでもフッ化物及び／又は塩化物であることが好ましい。
【００１６】
本発明第一の前処理剤は、このようなアルカリ金属の硫酸塩やアルカリ土類金属の硫酸塩を少なくとも一種類含有していればよい。したがって本発明第一の前処理剤は、アルカリ金属硫酸塩やアルカリ土類金属硫酸塩として例えば「硫酸ナトリウム」のみを含有していても良く、さらに他の硫酸塩（例えば、硫酸リチウム、硫酸カリウム、硫酸マグネシウム、硫酸カルシウムなど）を１種類又はそれ以上含有していてもよい。
【００１７】
また、リムルス測定に付される試料と接触させる際の、アルカリ金属硫酸塩及び／又はアルカリ土類金属硫酸塩の終濃度は、２０ｍＭ以上である限りにおいて特に限定されないが、２０ｍＭ〜５００ｍＭであることが好ましく、３０ｍＭ〜４５０ｍＭであることがより好ましく、３５ｍＭ〜４５０ｍＭであることがさらに好ましく、３５ｍＭ〜４００ｍＭであることが特に好ましい。
【００１８】
なお、本発明第一の前処理剤に２種類以上のアルカリ金属硫酸塩やアルカリ土類金属硫酸塩が含有されている場合には、この「終濃度」は、これら硫酸塩のトータルとしての終濃度を意味する。
【００１９】
本発明第二の前処理剤は、このようなアルカリ金属のハロゲン化物やアルカリ土類金属のハロゲン化物を少なくとも一種類含有していればよい。したがって本発明第二の前処理剤は、アルカリ金属ハロゲン化物やアルカリ土類金属ハロゲン化物として例えば「塩化カリウム」のみを含有していても良く、さらに他のアルカリ金属ハロゲン化物やアルカリ土類金属ハロゲン化物（例えば、塩化リチウム、塩化ナトリウム、塩化マグネシウム、塩化カルシウム、フッ化リチウム、フッ化ナトリウム、フッ化カリウム、フッ化マグネシウム、フッ化カルシウムなど）を１種類又はそれ以上含有していてもよい。
【００２０】
また、リムルス測定に付される試料と接触させる際の、アルカリ金属ハロゲン化物及び／又はアルカリ土類金属ハロゲン化物の終濃度は、０．４Ｍ超１．２Ｍ以下である限りにおいて特に限定されないが、０．４Ｍ超１．０Ｍ以下であることが好ましく、０．４Ｍ超０．８Ｍ以下であることが好ましく、０．５Ｍ〜０．８Ｍであることがより好ましく、０．５Ｍ〜０．７Ｍであることがさらに好ましい。
【００２１】
なお、本発明第二の前処理剤に２種類以上のアルカリ金属ハロゲン化物やアルカリ土類金属ハロゲン化物が含有されている場合には、この「終濃度」は、これらハロゲン化物のトータルとしての終濃度を意味する。
【００２２】
また、本発明前処理剤の接触の対象となる「リムルス測定に付される試料」は、リムルス測定に供される試料である限りにおいて特に限定されないが、ＢＧ又はエンドトキシンの測定のためにリムルス測定に付される試料であることが好ましく、ＢＧの測定のためにリムルス測定に付される試料であることがより好ましい。
【００２３】
またこの試料の種類も、リムルス測定に供しうるものである限り特に限定されないが、生体に由来する試料であることが好ましい。
【００２４】
この「生体に由来する試料」は、ヒトを含む動物の生体から採取されるものである限り特に限定されないが、体液又はこれに由来するものであるものが好ましい。
【００２５】
この「体液」は、ヒトを含む動物の生体内に存在する液体である限り特に限定されないが、血液であることが好ましい。
【００２６】
体液として「血液」を選択する場合、この血液の由来等も特に限定されず、あらゆる状況にある、あらゆる動物（ヒトを含む）の血液を用いることができる。なかでも、高Ｉｇ血症の動物に由来する血液、溶血した血液、高ビリルビン血症の動物に由来する血液及び高乳び血症の動物に由来する血液からなる群から選ばれる１又は２以上の血液であることが好ましい。これらの血液のなかでも、ヒト由来の血液であることが最も好ましい。
【００２７】
また、「体液に由来するもの」とは、生体内に存在する体液そのものではなく、体液から何らかの処理を経て得られるものを意味する。従って、この「体液に由来するもの」は、体液の種類等によって種々のものを採用することができる。例えば体液が「血液」である場合には、これに由来するものの一例として血漿、血清等が例示され、いずれもリムルス測定に付される試料（本発明前処理剤の処理の対象）として採用することができる。
【００２８】
本発明第一の前処理剤を用いた試料の前処理の方法は、本発明第一の前処理剤中に含有されるアルカリ金属硫酸塩及び／又はアルカリ土類金属硫酸塩が、リムルス測定に付される試料と接触する状況において終濃度２０ｍＭ以上に保持される限りにおいて特に限定されない。本発明第一の前処理剤中に含有されるアルカリ金属硫酸塩及び／又はアルカリ土類金属硫酸塩が最終的にこのような状態に保持される限りにおいて両者の接触の方法も特に限定されず、例えば試料に本発明第一の前処理剤を添加してもよく、本発明第一の前処理剤に試料を添加しても良く、両者を同時に添加してもよい。
【００２９】
本発明第二の前処理剤を用いた試料の前処理の方法は、本発明第二の前処理剤中に含有されるアルカリ金属ハロゲン化物及び／又はアルカリ土類金属ハロゲン化物が、リムルス測定に付される試料と接触する状況において終濃度０．４Ｍ超１．２Ｍ以下に保持される限りにおいて特に限定されない。本発明第二の前処理剤中に含有されるアルカリ金属ハロゲン化物及び／又はアルカリ土類金属ハロゲン化物が最終的にこのような状態に保持される限りにおいて両者の接触の方法も特に限定されず、例えば試料に本発明第二の前処理剤を添加してもよく、本発明第二の前処理剤に試料を添加しても良く、両者を同時に添加してもよい。
【００３０】
また、本発明前処理剤と試料とを接触させる時間や温度等も、本発明前処理剤によって非特異的なリムルス反応が所望の程度にまで低減できる限りにおいて特に限定されず、当業者において適宜設定することができる。例えば、試料として血漿を用いる場合には、３０℃〜７５℃程度で５分間〜２時間程度、好ましくは３０℃〜５０℃程度で５分間〜１時間程度、より好ましくは３０℃〜４５℃程度で５分間〜３０分間程度、特に好ましくは３５℃〜４０℃程度で５分〜２０分程度を例示することができるが、これらに限定されるものではない。
【００３１】
なお、本発明第一の前処理剤は、アルカリ金属硫酸塩及び／又はアルカリ土類金属硫酸塩を含有し、当該硫酸塩の終濃度が２０ｍＭ以上となる状態で試料と接触させるものであれば良く、その限りにおいて本発明第一の前処理剤中のアルカリ金属硫酸塩及び／又はアルカリ土類金属硫酸塩の含有量等も特に限定されない。試料と接触させる際のアルカリ金属硫酸塩及び／又はアルカリ土類金属硫酸塩の終濃度も、前記の通り２０ｍＭ以上である限りにおいて特に限定されず、２０ｍＭ〜５００ｍＭ、特に３０ｍＭ〜４５０ｍＭ、特に３５ｍＭ〜４５０ｍＭ、特に３５ｍＭ〜４００ｍＭ等が例示される。
【００３２】
また、本発明第二の前処理剤は、アルカリ金属ハロゲン化物及び／又はアルカリ土類金属ハロゲン化物を含有し、当該硫酸塩の終濃度が０．４Ｍ超１．２Ｍ以下となる状態で試料と接触させるものであれば良く、その限りにおいて本発明第二の前処理剤中のアルカリ金属ハロゲン化物及び／又はアルカリ土類金属ハロゲン化物の含有量等も特に限定されない。試料と接触させる際のアルカリ金属ハロゲン化物及び／又はアルカリ土類金属ハロゲン化物の終濃度も、前記の通り０．４Ｍ超１．２Ｍ以下である限りにおいて特に限定されず、０．４Ｍ超１．０Ｍ以下、特に０．４Ｍ超０．８Ｍ以下、特に０．５Ｍ〜０．８Ｍ、特に０．５Ｍ〜０．７Ｍ等が例示される。
【００３３】
また本発明第一の前処理剤は、少なくともアルカリ金属硫酸塩及び／又はアルカリ土類金属硫酸塩を含有している限りにおいて、他の成分をさらに含有していてもよい。このような他の成分としては、例えば非特異的なリムルス反応を抑制する成分（アルカリ金属水酸化物及び／又はアルカリ土類金属水酸化物、アルカリ金属ハロゲン化物及び／又はアルカリ土類金属ハロゲン化物など。実施例参照。）、各種添加剤等のうち、試薬・診断薬学的に許容される成分等が例示される。
【００３４】
また本発明第二の前処理剤は、少なくともアルカリ金属ハロゲン化物及び／又はアルカリ土類金属ハロゲン化物を含有している限りにおいて、他の成分をさらに含有していてもよい。このような他の成分としては、例えば非特異的なリムルス反応を抑制する成分（アルカリ金属水酸化物及び／又はアルカリ土類金属水酸化物、アルカリ金属硫酸塩及び／又はアルカリ土類金属硫酸塩など。実施例参照。）、各種添加剤等のうち、試薬・診断薬学的に許容される成分等が例示される。
【００３５】
上記添加剤としては、安定化剤、乳化剤、浸透圧調整剤、緩衝剤、等張化剤、保存剤、ｐＨ調整剤、着色剤、賦形剤、結合剤、滑沢剤、崩壊剤等が挙げられる。
【００３６】
本発明前処理剤の成分として、アルカリ金属水酸化物及び／又はアルカリ土類金属水酸化物をさらに含有させる場合には、試料と接触させる際のその終濃度を０．０３Ｍ〜０．０７Ｍ、特に０．０３Ｍ〜０．０６Ｍになるように設定することが好ましい。また、本発明第一の前処理剤の成分として、アルカリ金属ハロゲン化物及び／又はアルカリ土類金属ハロゲン化物をさらに含有させる場合には、試料と接触させる際のその終濃度を０．４Ｍ超１．２Ｍ以下、特に０．４Ｍ超１．０Ｍ以下、特に０．４Ｍ超０．８Ｍ以下、特に０．５Ｍ〜０．８Ｍ、特に０．５Ｍ〜０．７Ｍになるように設定することが好ましい。また、本発明第二の前処理剤の成分として、アルカリ金属硫酸塩及び／又はアルカリ土類金属硫酸塩をさらに含有させる場合には、試料と接触させる際のその終濃度を２０ｍＭ以上、特に２０ｍＭ〜５００ｍＭ、特に３０ｍＭ〜４５０ｍＭ、特に３５ｍＭ〜４５０ｍＭ、特に３５ｍＭ〜４００ｍＭになるように設定することが好ましい。
【００３７】
特に本発明前処理剤は、より効果的に非特異的なリムルス反応を抑制するという観点では、アルカリ金属硫酸塩及び／又はアルカリ土類金属硫酸塩、アルカリ金属水酸化物及び／又はアルカリ土類金属水酸化物、並びに、アルカリ金属ハロゲン化物及び／又はアルカリ土類金属ハロゲン化物を含有させることがより好ましい。その場合、試料と接触させる際の各成分の終濃度も特に限定されないが、一例として、各成分について前記の通り例示した終濃度の全ての組み合わせを採用することもできる。
【００３８】
すなわち、例えば、本発明第一の前処理剤を試料と接触させる際のアルカリ金属硫酸塩及び／又はアルカリ土類金属硫酸塩の終濃度を２０ｍＭ以上とし、同じくアルカリ金属水酸化物及び／又はアルカリ土類金属水酸化物の終濃度を０．０３Ｍ〜０．０７Ｍ、特に０．０３Ｍ〜０．０６Ｍとし、同じくアルカリ金属ハロゲン化物及び／又はアルカリ土類金属ハロゲン化物の終濃度を０．４Ｍ超１．２Ｍ以下、特に０．４Ｍ超１．０Ｍ以下、特に０．４Ｍ超０．８Ｍ以下、特に０．５Ｍ〜０．８Ｍ、特に０．５Ｍ〜０．７Ｍになるように設定することができる。
【００３９】
同様に、本発明第一の前処理剤を試料と接触させる際のアルカリ金属硫酸塩及び／又はアルカリ土類金属硫酸塩の終濃度を２０ｍＭ〜５００ｍＭとした場合にも、同じくアルカリ金属水酸化物及び／又はアルカリ土類金属水酸化物の終濃度を０．０３Ｍ〜０．０７Ｍ、特に０．０３Ｍ〜０．０６Ｍとし、同じくアルカリ金属ハロゲン化物及び／又はアルカリ土類金属ハロゲン化物の終濃度を０．４Ｍ超１．２Ｍ以下、特に０．４Ｍ超１．０Ｍ以下、特に０．４Ｍ超０．８Ｍ以下、特に０．５Ｍ〜０．８Ｍ、特に０．５Ｍ〜０．７Ｍになるように設定することができる。
【００４０】
同様に、本発明第一の前処理剤を試料と接触させる際のアルカリ金属硫酸塩及び／又はアルカリ土類金属硫酸塩の終濃度を３０ｍＭ〜４５０ｍＭとした場合にも、同じくアルカリ金属水酸化物及び／又はアルカリ土類金属水酸化物の終濃度を０．０３Ｍ〜０．０７Ｍ、特に０．０３Ｍ〜０．０６Ｍとし、同じくアルカリ金属ハロゲン化物及び／又はアルカリ土類金属ハロゲン化物の終濃度を０．４Ｍ超１．２Ｍ以下、特に０．４Ｍ超１．０Ｍ以下、特に０．４Ｍ超０．８Ｍ以下、特に０．５Ｍ〜０．８Ｍ、特に０．５Ｍ〜０．７Ｍになるように設定することができる。
【００４１】
同様に、本発明第一の前処理剤を試料と接触させる際のアルカリ金属硫酸塩及び／又はアルカリ土類金属硫酸塩の終濃度を３５ｍＭ〜４５０ｍＭとした場合にも、同じくアルカリ金属水酸化物及び／又はアルカリ土類金属水酸化物の終濃度を０．０３Ｍ〜０．０７Ｍ、特に０．０３Ｍ〜０．０６Ｍとし、同じくアルカリ金属ハロゲン化物及び／又はアルカリ土類金属ハロゲン化物の終濃度を０．４Ｍ超１．２Ｍ以下、特に０．４Ｍ超１．０Ｍ以下、特に０．４Ｍ超０．８Ｍ以下、特に０．５Ｍ〜０．８Ｍ、特に０．５Ｍ〜０．７Ｍになるように設定することができる。
【００４２】
同様に、本発明第一の前処理剤を試料と接触させる際のアルカリ金属硫酸塩及び／又はアルカリ土類金属硫酸塩の終濃度を３５ｍＭ〜４００ｍＭとした場合にも、同じくアルカリ金属水酸化物及び／又はアルカリ土類金属水酸化物の終濃度を０．０３Ｍ〜０．０７Ｍ、特に０．０３Ｍ〜０．０６Ｍとし、同じくアルカリ金属ハロゲン化物及び／又はアルカリ土類金属ハロゲン化物の終濃度を０．４Ｍ超１．２Ｍ以下、特に０．４Ｍ超１．０Ｍ以下、特に０．４Ｍ超０．８Ｍ以下、特に０．５Ｍ〜０．８Ｍ、特に０．５Ｍ〜０．７Ｍになるように設定することができる。
【００４３】
また、例えば、本発明第二の前処理剤を試料と接触させる際のアルカリ金属ハロゲン化物及び／又はアルカリ土類金属ハロゲン化物の終濃度を０．４Ｍ超１．２Ｍ以下とし、同じくアルカリ金属水酸化物及び／又はアルカリ土類金属水酸化物の終濃度を０．０３Ｍ〜０．０７Ｍ、特に０．０３Ｍ〜０．０６Ｍとし、同じくアルカリ金属硫酸塩及び／又はアルカリ土類金属硫酸塩の終濃度を２０ｍＭ以上、特に２０ｍＭ〜５００ｍＭ、特に３０ｍＭ〜４５０ｍＭ、特に３５ｍＭ〜４５０ｍＭ、特に３５ｍＭ〜４００ｍＭになるように設定することができる。
【００４４】
同様に、本発明第二の前処理剤を試料と接触させる際のアルカリ金属ハロゲン化物及び／又はアルカリ土類金属ハロゲン化物の終濃度を０．４Ｍ超１．０Ｍ以下とした場合にも、同じくアルカリ金属水酸化物及び／又はアルカリ土類金属水酸化物の終濃度を０．０３Ｍ〜０．０７Ｍ、特に０．０３Ｍ〜０．０６Ｍとし、同じくアルカリ金属硫酸塩及び／又はアルカリ土類金属硫酸塩の終濃度を２０ｍＭ以上、特に２０ｍＭ〜５００ｍＭ、特に３０ｍＭ〜４５０ｍＭ、特に３５ｍＭ〜４５０ｍＭ、特に３５ｍＭ〜４００ｍＭになるように設定することができる。
【００４５】
同様に、本発明第二の前処理剤を試料と接触させる際のアルカリ金属ハロゲン化物及び／又はアルカリ土類金属ハロゲン化物の終濃度を０．４Ｍ超０．８Ｍ以下とした場合にも、同じくアルカリ金属水酸化物及び／又はアルカリ土類金属水酸化物の終濃度を０．０３Ｍ〜０．０７Ｍ、特に０．０３Ｍ〜０．０６Ｍとし、同じくアルカリ金属硫酸塩及び／又はアルカリ土類金属硫酸塩の終濃度を２０ｍＭ以上、特に２０ｍＭ〜５００ｍＭ、特に３０ｍＭ〜４５０ｍＭ、特に３５ｍＭ〜４５０ｍＭ、特に３５ｍＭ〜４００ｍＭになるように設定することができる。
【００４６】
同様に、本発明第二の前処理剤を試料と接触させる際のアルカリ金属ハロゲン化物及び／又はアルカリ土類金属ハロゲン化物の終濃度を０．５Ｍ〜０．８Ｍとした場合にも、同じくアルカリ金属水酸化物及び／又はアルカリ土類金属水酸化物の終濃度を０．０３Ｍ〜０．０７Ｍ、特に０．０３Ｍ〜０．０６Ｍとし、同じくアルカリ金属硫酸塩及び／又はアルカリ土類金属硫酸塩の終濃度を２０ｍＭ以上、特に２０ｍＭ〜５００ｍＭ、特に３０ｍＭ〜４５０ｍＭ、特に３５ｍＭ〜４５０ｍＭ、特に３５ｍＭ〜４００ｍＭになるように設定することができる。
【００４７】
同様に、本発明第二の前処理剤を試料と接触させる際のアルカリ金属ハロゲン化物及び／又はアルカリ土類金属ハロゲン化物の終濃度を０．５Ｍ〜０．７Ｍとした場合にも、同じくアルカリ金属水酸化物及び／又はアルカリ土類金属水酸化物の終濃度を０．０３Ｍ〜０．０７Ｍ、特に０．０３Ｍ〜０．０６Ｍとし、同じくアルカリ金属硫酸塩及び／又はアルカリ土類金属硫酸塩の終濃度を２０ｍＭ以上、特に２０ｍＭ〜５００ｍＭ、特に３０ｍＭ〜４５０ｍＭ、特に３５ｍＭ〜４５０ｍＭ、特に３５ｍＭ〜４００ｍＭになるように設定することができる。
【００４８】
なお、これらの物質のなかには、温度、溶媒、他の溶質その他の条件によって前記の濃度において完全に溶解しないものもありうるが、その場合には、その物質が溶解しうる最大の濃度を採用すればよい。
【００４９】
また本発明前処理剤の剤形も、本発明第一の前処理剤に含有されるアルカリ金属硫酸塩及び／又はアルカリ土類金属硫酸塩が試料と接触する際の終濃度を、２０ｍＭ以上とすることができるものである限り、又は、本発明第二の前処理剤に含有されるアルカリ金属ハロゲン化物及び／又はアルカリ土類金属ハロゲン化物が試料と接触する際の終濃度を、０．４Ｍ超１．２Ｍ以下とすることができるものである限りにおいて特に限定されない。本発明前処理剤は、例えばアルカリ金属硫酸塩及び／又はアルカリ土類金属硫酸塩、又は、アルカリ金属ハロゲン化物及び／又はアルカリ土類金属ハロゲン化物を含有する溶液状態の剤としてもよく、用時溶解用の粉末、顆粒その他の固形剤等としても良い。また、例えば溶液状態の剤として提供する場合は、凍結状態で提供されてもよく、溶液のまま提供されてもよい。
【００５０】
本発明前処理剤は、以上のような特徴を有する剤となるようにして、試薬・診断薬等の通常の生産手法により生産することができる。
【００５１】
このような本発明前処理剤を用いてリムルス測定に付される試料を前処理することにより、リムルス測定における非特異的な反応を簡便、迅速、安価かつ効果的に抑制し、リムルス測定の精度をより高めることができる。
＜２＞本発明キット
本発明キットは、本発明前処理剤を構成物品として含有する、リムルス試薬キットである。本発明前処理剤については前記を参照されたい。
【００５２】
本発明キットは、少なくとも本発明前処理剤を構成物品として含有している限りにおいて、他の構成物品を含有していても良い。このような他の構成物品としては、例えばリムルス試薬（カブトガニ・アメボサイト・ライセート）、発色合成基質、これらの混合物、緩衝液、蒸留水、標準物質（エンドトキシンや、ＢＧなど）、マイクロプレート等を例示することができるが、これらに限定されるものではない。
【００５３】
本発明キットの構成物品である本発明前処理剤は、前記の通り生産し、使用することができる。また本発明キットの他の構成物品については、公知のリムルス試薬及びその関連試薬の生産方法・使用方法等に従って生産し、使用することができる。
【００５４】
本発明キットを用いることにより、非特異反応が抑制されたより高い精度のリムルス測定を迅速に行うことができる。
＜３＞本発明前処理方法
本発明前処理方法は、リムルス測定に付される試料を、終濃度が２０ｍＭ以上のアルカリ金属硫酸塩及び／又はアルカリ土類金属硫酸塩で前処理する、又は、終濃度が０．４Ｍ超１．２Ｍ以下のアルカリ金属ハロゲン化物及び／又はアルカリ土類金属ハロゲン化物で前処理することを特徴とすることを特徴とする、試料の前処理方法である。ここにいう「リムルス測定に付される試料」、「終濃度（２０ｍＭ以上）」、「アルカリ金属硫酸塩及び／又はアルカリ土類金属硫酸塩」、「終濃度（０．４Ｍ超１．２Ｍ以下）」、「アルカリ金属ハロゲン化物及び／又はアルカリ土類金属ハロゲン化物」、「前処理」その他の用語の意義、好ましい範囲、前処理の際に許容される他の物質、処理その他の方法等については、全て前記の本発明処理剤における説明と同様である。
＜４＞本発明測定方法
本発明測定方法は、リムルス測定に付される試料を、終濃度が２０ｍＭ以上のアルカリ金属硫酸塩及び／又はアルカリ土類金属硫酸塩で前処理するステップを含むことを特徴とする、又は、終濃度が０．４Ｍ超１．２Ｍ以下のアルカリ金属ハロゲン化物及び／又はアルカリ土類金属ハロゲン化物で前処理するステップを含むことを特徴とする、リムルス測定方法である。ここにいう「リムルス測定に付される試料」、「終濃度（２０ｍＭ以上）」、「アルカリ金属硫酸塩及び／又はアルカリ土類金属硫酸塩」、「終濃度（０．４Ｍ超１．２Ｍ以下）」、「アルカリ金属ハロゲン化物及び／又はアルカリ土類金属ハロゲン化物」、「前処理」その他の用語の意義、好ましい範囲、前処理の際に許容される他の物質、処理その他の方法等については、全て前記の本発明処理剤における説明と同様である。
【００５５】
また本発明測定方法は、リムルス測定に付される試料を、終濃度が２０ｍＭ以上のアルカリ金属硫酸塩及び／又はアルカリ土類金属硫酸塩で前処理するステップを少なくとも含むリムルス測定方法である限りにおいて、又は、終濃度が０．４Ｍ超１．２Ｍ以下のアルカリ金属ハロゲン化物及び／又はアルカリ土類金属ハロゲン化物で前処理するステップを少なくとも含むリムルス測定方法である限りにおいて、他のステップ等を含んでいてもよい。例えば、試料を前処理する前に何らかの加工をするステップや、リムルス測定によって得られたデータを他のデータに換算するステップ、その他のステップを含んでいてもよい。また、リムルス測定は、終濃度が２０ｍＭ以上のアルカリ金属硫酸塩及び／又はアルカリ土類金属硫酸塩でリムルス測定に付される試料を前処理する、又は、終濃度が０．４Ｍ超１．２Ｍ以下のアルカリ金属ハロゲン化物及び／又はアルカリ土類金属ハロゲン化物でリムルス測定に付される試料を前処理する点以外は、通常の公知の方法により実施することができる。
【００５６】
このような本発明前処理方法や本発明測定方法よって、リムルス反応における非特異反応を効果的に抑制でき、より高い精度のリムルス測定を簡便、迅速かつ安価に行うことができる。
【実施例】
【００５７】
以下、本発明を実施例によりさらに具体的に説明するが、これらにより本発明の技術的範囲は限定されるものではない。本実施例は、前処理剤中のアルカリ金属硫酸塩及び／又はアルカリ土類金属硫酸塩の一例として硫酸ナトリウム（Ｎａ２ＳＯ４）又はアルカリ金属ハロゲン化物（ＫＣｌ）を用い、リムルス測定の対象をＢＧとした例である。また参考例として、前処理剤中にアルカリ金属水酸化物（ＫＯＨ）を含有させた場合の濃度による影響も併せて示した。
【００５８】
（１）材料・方法等
（１−１）モデル血漿・血清、及び溶血した血液の血漿の作成
種々の状態の血液の血漿等のモデルとして、以下の通りモデル血漿等を作製した。また、溶血した血液の血漿の作製方法も併せて以下に示す。
・高Ｉｇ血症動物のモデル血漿：健常人のボランティアから採取した血漿に、γグロブリン（献血グロベニン−Ｉ−ニチヤク；日本製薬株式会社）を６０００ｍｇ／ｄＬとなるように添加して作製した。
・溶血した血液のモデル血漿：健常人のボランティアから採取した血漿に、ヘモグロビン（Ｈｅｍｏｇｌｏｂｉｎ，ｆｒｏｍ  Ｈｕｍａｎ；和光純薬工業株式会社）を添加して作製した。
・高ビリルビン血症動物のモデル血漿：健常人のボランティアから採取した血漿に、ビリルビン（Ｂｉｌｉｒｕｂｉｎ；和光純薬工業株式会社）を添加して作製した。
・高乳び血症動物のモデル血漿：健常人のボランティアから採取した血漿に、静脈注射用脂肪乳剤（商品名：イントラリピッド；Ｆｒｅｓｅｎｉｕｓ  Ｋａｂｉ  ＡＢ）を添加して作製した。
また、健常人のボランティアから採取した「血清」を使用して、上記と同様に各種のモデル血清を作製した。
・溶血した血液の血漿：健常人のボランティアからヘパリン採血した血液を１回凍結融解し、遠心分離して、その上清を採取することにより作製した。
【００５９】
（１−２）リムルス測定
被験溶液（０．０２５ｍＬ）をＢＧフリーのマイクロプレート（トキシペットプレート９６Ｆ；生化学工業株式会社）に入れ、これにＢＧ測定試薬（ファンギテック（登録商標）ＧテストＭＫ  主反応試薬セット；生化学工業株式会社）を０．１ｍＬ添加した。これを恒温槽機能を有するマイクロプレートリーダー（ウェルリーダーＳＫ６０３；生化学工業株式会社）を用いて３７℃で３０分間インキュベートした後、４０５ｎｍの吸光度（対照波長：４９２ｎｍ）を測定することにより被験溶液中のＢＧを定量した。
【００６０】
（１−３）非特異反応の検出
ＢＧに起因しない非特異的なリムルス反応は、前記（１−２）におけるＢＧ測定試薬として、これにＷＯ９０／０２９５１に記載の方法で調製したカードランのギ酸水解物又はＬａｍｉｎａｒｉａ  ｄｉｇｉｔａｔａラミナラン由来のＧ因子活性化阻害剤（以下、これらをまとめて「ＧＩ」という。）を終濃度１０μｇ／ｍＬ以上となるように添加したもの（リムルス反応の惹起が阻害されたＢＧ測定試薬）を用いることにより検出し、標準ＢＧ（パキマン）濃度に換算した値（後述の表１、３、４及び９中では、単に「ＢＧ濃度」と表示する。）で示した。
【００６１】
（１−４）添加回収率の算出
健常人のボランティアから採取した血漿０．１ｍＬに、所定の終濃度となるようにＢＧを添加し、これを試料として用いた。ＢＧの添加回収率は、コントロール（所定の終濃度のＢＧを含有する水）から回収されたＢＧ量を１００％とした場合における、被験溶液から回収されたＢＧ量を、百分率で算出した。
【００６２】
（２）結果等
（２−１）参考例１
前処理剤中にアルカリ金属水酸化物（ＫＯＨ）を含有させた場合の濃度による影響を調べた。前記のモデル血漿（高Ｉｇ血症動物のモデル血漿）０．００５ｍＬに、前処理剤０．０２ｍＬを添加した。前処理剤の組成は、種々の濃度（０．１５Ｍ、０．１Ｍ、０．０８Ｍ、０．０７Ｍ、０．０５Ｍ又は０Ｍ）のＫＯＨ、０．３Ｍ  ＫＣｌ、２０ｍＭ  ＥＤＴＡ、０．１％  ポリブレンとした。その後、恒温槽機能を有するマイクロプレートリーダー（ウェルリーダーＳＫ６０３；生化学工業株式会社）を用いて３７℃で１０分間インキュベートして被験溶液とした。なお、被験溶液（試料と前処理剤との混合物）中における前処理剤の各成分の終濃度は、ＫＯＨが０．１２Ｍ、０．０８Ｍ、０．０６４Ｍ、０．０５６Ｍ、０．０４Ｍ又は０Ｍ、ＫＣｌが０．２４Ｍ、ＥＤＴＡが１６ｍＭ、ポリブレンが０．０８％である。
【００６３】
この被験溶液について、リムルス測定を行った。また、前処理を行わないコントロールとして、水及び５００ｐｇ／ｍＬ  ＢＧ水溶液について同様にリムルス測定を行った。結果を表１に示す。
【００６４】
【表１】
0005483632.tif 000002
【００６５】
表１より、モデル血漿を用いた場合における非特異反応は、被験液中のアルカリ金属水酸化物（ＫＯＨ）濃度の微妙な違いによって大きく変化することが示された。非特異的反応は、アルカリ金属水酸化物（ＫＯＨ）の濃度が高すぎても、０Ｍであってもあまり抑制されないが、終濃度が０．０４Ｍや０．０５６Ｍの付近において顕著に抑制された。この結果から、アルカリ金属水酸化物を終濃度が０．０３Ｍ〜０．０７Ｍ、特に０．０３Ｍ〜０．０６Ｍになるように試料に接触させて前処理することによって、モデル血漿をリムルス測定の試料とした場合の非特異反応を効果的に抑制できることが示された。
【００６６】
また前記の処理において、前処理剤中のアルカリ金属水酸化物（ＫＯＨ）の濃度を０．１５Ｍ又は０．０５Ｍ（被験溶液中の終濃度はそれぞれ０．１２Ｍ、０．０４Ｍ）とした場合における添加回収率を算出した。ＢＧは、終濃度２０ｐｇ／ｍｌとなるように添加した。結果を表２に示す。
【００６７】
【表２】
0005483632.tif 000003
【００６８】
表２より、アルカリ金属水酸化物（ＫＯＨ）の終濃度を０．１２Ｍ又は０．０４Ｍとなるように試料に接触させて前処理しても、添加回収率に影響なく、良好な回収率が得られた。
【００６９】
（２−２）実施例１
前処理剤中にアルカリ金属ハロゲン化物（ＫＣｌ）を含有させた場合の濃度による影響を調べた。前処理剤の組成を、０．１５Ｍ  ＫＯＨ、種々の濃度（０．３Ｍ、０．６Ｍ、０．９Ｍ）のＫＣｌ、２０ｍＭ  ＥＤＴＡ、０．１％  ポリブレンとした以外は、前記の参考例１と同様に測定を行った。なお、被験溶液（試料と前処理剤との混合物）中における前処理剤の各成分の終濃度は、ＫＯＨが０．１２Ｍ、ＫＣｌが０．２４Ｍ、０．４８Ｍ又は０．７２Ｍ、ＥＤＴＡが１６ｍＭ、ポリブレンが０．０８％である。結果を表３に示す。
【００７０】
【表３】
0005483632.tif 000004
【００７１】
表３より、モデル血漿を用いた場合における非特異反応は、被験液中のアルカリ金属ハロゲン化物（ＫＣｌ）濃度の違いによって大きく変化することが示された。非特異的反応は、アルカリ金属ハロゲン化物（ＫＣｌ）の濃度が高い方が顕著に抑制された。
【００７２】
また前記の処理において、前処理剤中のアルカリ金属水酸化物（ＫＯＨ）の濃度を０．０５Ｍ（被験溶液中の終濃度は０．０４Ｍ）として同様に測定した結果を表４に示す。
【００７３】
【表４】
0005483632.tif 000005
【００７４】
表４からも、アルカリ金属ハロゲン化物（ＫＣｌ）によって、モデル血漿における非特異的反応が顕著に抑制されることが示された。
【００７５】
一方で、アルカリ金属ハロゲン化物の濃度があまりにも高いとリムルス反応自体に悪影響を及ぼした。したがって、表３及び表４より、アルカリ金属ハロゲン化物を終濃度が０．４Ｍ超１．２Ｍ以下、特に０．４Ｍ超１．０Ｍ以下、特に０．４Ｍ超０．８Ｍ以下、特に０．５Ｍ〜０．８Ｍ、特に０．５Ｍ〜０．７Ｍになるように試料に接触させて前処理することによって、リムルス反応に実質的な悪影響を与えることなく、モデル血漿をリムルス測定の試料とした場合の非特異反応を効果的に抑制できることが示唆された。
【００７６】
また前記の処理において、前処理剤中のアルカリ金属水酸化物（ＫＯＨ）の濃度を０．０５Ｍ（被験溶液中の終濃度は０．０４Ｍ）とした場合における添加回収率を算出した。また、ＢＧは、終濃度２０ｐｇ／ｍｌとなるように添加した。結果を表５に示す。
【００７７】
【表５】
0005483632.tif 000006
【００７８】
表５より、アルカリ金属ハロゲン化物（ＫＣｌ）の終濃度を０．７２Ｍまで上げて試料に接触させて前処理しても、添加回収率に大きな影響がなく、良好な回収率が得られた。
【００７９】
また前記の処理において、前処理剤中のアルカリ金属ハロゲン化物（ＫＣｌ）の濃度を０．６Ｍ（被験溶液中の終濃度は０．４８Ｍ）とし、アルカリ金属水酸化物（ＫＯＨ）の濃度を０．０５Ｍ、０．０４Ｍ、０．０３Ｍ、０．０２Ｍ又は０Ｍ（被験溶液中の終濃度はそれぞれ０．０４Ｍ、０．０３２Ｍ、０．０２４Ｍ、０．０１６Ｍ及び０Ｍ）とした場合における添加回収率を算出した。また、ＢＧは、終濃度１００ｐｇ／ｍｌとなるように添加した。結果を表６に示す。
【００８０】
【表６】
0005483632.tif 000007
【００８１】
表６より、アルカリ金属ハロゲン化物（ＫＣｌ）の終濃度を０．４８Ｍまで上げた場合には、アルカリ金属水酸化物（ＫＯＨ）の終濃度を０．０３２Ｍまで下げて試料に接触させて前処理しても、添加回収率に大きな影響がなく、良好な回収率が得られた。
【００８２】
（２−３）実施例２（モデル血漿を用いた試験）
前処理剤中にアルカリ金属硫酸塩（Ｎａ２ＳＯ４）を含有させた場合の濃度による影響を調べた。前処理剤の組成を、０．１５Ｍ  ＫＯＨ、０．３Ｍ  ＫＣｌ、２０ｍＭ  ＥＤＴＡ、０．１％  ポリブレン及び種々の濃度のＮａ２ＳＯ４（０ｍＭ、５０ｍＭ、１００ｍＭ、２００ｍＭ、４００ｍＭ又は５００ｍＭ）とした以外は、前記の参考例１と同様に測定を行った。なお、被験溶液（試料と前処理剤との混合物）中における前処理剤の各成分の終濃度は、ＫＯＨが０．１２Ｍ、ＫＣｌが０．２４Ｍ、ＥＤＴＡが１６ｍＭ、ポリブレンが０．０８％、Ｎａ２ＳＯ４が０ｍＭ、４０ｍＭ、８０ｍＭ、１６０ｍＭ、３２０ｍＭ又は４００ｍＭである。結果を表７に示す。なお表７は、リムルス反応開始時の吸光度（Ａ４０４／４９２）で示した。
【００８３】
【表７】
0005483632.tif 000008
【００８４】
表７より、モデル血漿を用いた場合における非特異反応は、被験液中のアルカリ金属硫酸塩（Ｎａ２ＳＯ４）によって抑制されることが示された。非特異的反応は、アルカリ金属硫酸塩（Ｎａ２ＳＯ４）の濃度に依存して抑制され、終濃度１６０ｍＭにおいてほぼプラトーに達した。表７より、アルカリ金属硫酸塩を終濃度が２０ｍＭ以上、特に２０ｍＭ〜５００ｍＭ、特に３０ｍＭ〜４５０ｍＭ、特に３５ｍＭ〜４５０ｍＭ、特に３５ｍＭ〜４００ｍＭになるように試料に接触させて前処理することによって、リムルス反応に実質的な悪影響を与えることなく、モデル血漿をリムルス測定の試料とした場合の非特異反応を効果的に抑制できることが示唆された。
【００８５】
また前記の処理において、前処理剤中のアルカリ金属水酸化物（ＫＯＨ）の濃度を０．０５Ｍ（被験溶液中の終濃度は０．０４Ｍ）、アルカリ金属ハロゲン化物（ＫＣｌ）の濃度を０．６Ｍ（被験溶液中の終濃度は０．４８Ｍ）とした場合における添加回収率を算出した。また、ＢＧは、終濃度２０ｐｇ／ｍｌとなるように添加した。結果を表８に示す。
【００８６】
【表８】
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【００８７】
表８より、アルカリ金属硫酸塩（Ｎａ２ＳＯ４）の終濃度を上げて試料に接触させて前処理しても、少なくとも終濃度３２０ｍＭまでは添加回収率に大きな影響がなく、良好な回収率が得られた。
【００８８】
（２−４）実施例３（臨床検体を用いた試験）
前記の処理において、非特異反応を強く呈する臨床検体（２４検体）を試料として用い、組成を以下の通りとしたそれぞれの前処理剤で処理した以外は、前記の参考例１と同様に測定を行った。
・前処理剤１：０．１５Ｍ  ＫＯＨ、０．３Ｍ  ＫＣｌ、２０ｍＭ  ＥＤＴＡ、０．１％ポリブレン（被験溶液（試料と前処理剤との混合物）中における各成分の終濃度：０．１２Ｍ  ＫＯＨ、０．２４Ｍ  ＫＣｌ、１６ｍＭ  ＥＤＴＡ、０．０８％  ポリブレン）
・前処理剤２：０．０５Ｍ  ＫＯＨ、０．３Ｍ  ＫＣｌ、２０ｍＭ  ＥＤＴＡ、０．１％ポリブレン（被験溶液（試料と前処理剤との混合物）中における各成分の終濃度：０．０４Ｍ  ＫＯＨ、０．２４Ｍ  ＫＣｌ、１６ｍＭ  ＥＤＴＡ、０．０８％  ポリブレン）
・前処理剤３：０．０５Ｍ  ＫＯＨ、０．６Ｍ  ＫＣｌ、２０ｍＭ  ＥＤＴＡ、０．１％ポリブレン（被験溶液（試料と前処理剤との混合物）中における各成分の終濃度：０．０４Ｍ  ＫＯＨ、０．４８Ｍ  ＫＣｌ、１６ｍＭ  ＥＤＴＡ、０．０８％  ポリブレン）
・前処理剤４：０．０５Ｍ  ＫＯＨ、０．６Ｍ  ＫＣｌ、２０ｍＭ  ＥＤＴＡ、０．１％ポリブレン、５０ｍＭ  Ｎａ２ＳＯ４（被験溶液（試料と前処理剤との混合物）中における各成分の終濃度：０．０４Ｍ  ＫＯＨ、０．４８Ｍ  ＫＣｌ、１６ｍＭ  ＥＤＴＡ、０．０８％  ポリブレン、４０ｍＭ  Ｎａ２ＳＯ４）
・前処理剤５：０．０５Ｍ  ＫＯＨ、０．６Ｍ  ＫＣｌ、２０ｍＭ  ＥＤＴＡ、０．１％ポリブレン、２００ｍＭ  Ｎａ２ＳＯ４（被験溶液（試料と前処理剤との混合物）中における各成分の終濃度：０．０４Ｍ  ＫＯＨ、０．４８Ｍ  ＫＣｌ、１６ｍＭ  ＥＤＴＡ、０．０８％  ポリブレン、１６０ｍＭ  Ｎａ２ＳＯ４）
結果を表９に示す。なお表９中の「否定」とは、その検体が由来する患者が医師により真菌症ではないと診断されたこと、「疑診」は同じく真菌症が疑われると診断されたことを示す。また、表９中の「ＣＡ」はカンジダ感染症を、「ＭＭ」は多発性骨髄腫を、「ＬＣ」は肺癌を、「ＣＤ」は膠原病を、「ＦＨ」は劇症肝炎を、「ＭＤＳ」は骨髄異形成症候群を、「ＩＴＰ」は突発性血小板減少性紫斑病をそれぞれ意味する。
【００８９】
【表９】
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【００９０】
表９より、アルカリ金属水酸化物（ＫＯＨ）濃度が高く、アルカリ金属ハロゲン化物（ＫＣｌ）濃度が低く、アルカリ金属硫酸塩（Ｎａ２ＳＯ４）を含有しない前処理剤（前処理剤１）で処理した場合には、高い非特異反応が検出された。一方、アルカリ金属水酸化物（ＫＯＨ）濃度を低減させ（前処理剤２）、さらにアルカリ金属ハロゲン化物（ＫＣｌ）濃度を高め（前処理剤３）、さらにアルカリ金属硫酸塩（Ｎａ２ＳＯ４）を添加することにより（前処理剤４及び５）、その非特異反応が大きく低減されることが示された。
（２−５）実施例４（種々の血漿・血清を用いた試験）
前記の処理において、高Ｉｇ血症動物のモデル血漿若しくはモデル血清、溶血した血液のモデル血漿若しくはモデル血清、高ビリルビン血症動物のモデル血漿若しくはモデル血清、高乳び血症動物のモデル血漿若しくはモデル血清、又は溶血した血液の血漿を試料として用い、前記の前処理剤１又は前処理剤４で処理した以外は、前記の参考例１と同様に測定を行った。
【００９１】
その結果、いずれの試料を用いた場合においても、前処理剤１に比して前処理剤４（本発明に包含される組成）を用いた方が非特異反応が大きく低減された。
【００９２】
以上の結果から、アルカリ金属水酸化物及び／又はアルカリ土類金属水酸化物の終濃度を０．０３Ｍ〜０．０７Ｍ、特に０．０３Ｍ〜０．０６Ｍになるように試料に接触させて前処理すること、アルカリ金属ハロゲン化物及び／又はアルカリ土類金属ハロゲン化物の終濃度を０．４Ｍ超１．２Ｍ以下、特に０．４Ｍ超１．０Ｍ以下、特に０．４Ｍ超０．８Ｍ以下、特に０．５Ｍ〜０．８Ｍ、特に０．５Ｍ〜０．７Ｍになるように試料に接触させて前処理すること、及びアルカリ金属硫酸塩及び／又はアルカリ土類金属硫酸塩の終濃度を２０ｍＭ以上、特に２０ｍＭ〜５００ｍＭ、特に３０ｍＭ〜４５０ｍＭ、特に３５ｍＭ〜４５０ｍＭ、特に３５ｍＭ〜４００ｍＭになるように試料に接触させて前処理することのいずれによっても、前記のようなモデル血漿や、前記のような疾患動物の血液を試料とした場合の非特異的なリムルス反応を効果的に抑制できることが示された。さらに、これら３つの処理を一度に行うことによって、さらに効果的に非特異的なリムルス反応を抑制できることが示された。
【００９３】
本発明を詳細にまた特定の実施態様を参照して説明したが、本発明の精神と範囲を逸脱すること無く様々な変更や修正を加えることができることは当業者にとって明らかである。
【００９４】
本出願は、２００５年１月２７日出願の日本特許出願（特願２００５−２０４４４）及び２００５年１月２７日出願の日本特許出願（特願２００５−２０４４５）に基づくものであり、その内容はここに参照として取り込まれる。ここに引用されるすべての参照は全体として取り込まれる。
【産業上の利用可能性】
【００９５】
本発明前処理剤は、本発明キット、本発明前処理方法及び本発明測定方法は、いずれもリムルス試薬によるエンドトキシンやＢＧの測定に用いることができる。