(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
メナキノン−７及びソーヤサポゲノールを含有する組成物を有効成分とし、経皮水分蒸散抑制機能を有する皮膚機能改善剤。
【請求項２】
さらに、コラーゲン加水分解物を含有する、請求項１に記載の皮膚機能改善剤。
【請求項３】
前記コラーゲン加水分解物は、分子量２００以上３０００未満のペプチド含有率が、４０質量％以上である、請求項２に記載の皮膚機能改善剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ビタミンＫ、サポゲノール、及びコラーゲン加水分解物の少なくとも二種を含む新規な組成物に関し、より詳細には皮膚機能改善剤として有用な前記組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
皮膚は、主として表皮、真皮、及び皮下組織に分けられる。表皮は、さらに表面から順に皮脂膜、角質層、顆粒層、有棘層及び基底層に分かれている。【０００３】
皮脂膜は、皮脂腺や汗腺などから分泌された皮脂からなる。皮脂は、水分の発散を防ぐ役割を担う。経皮水分蒸散量（Ｔｒａｎｓｅｐｉｄｅｒａｍａｌ  ｗａｔｅｒ  ｌｏｓｓ、ＴＥＷＬ）は、体内から無自覚のうちに角質層を通じて揮発する水分量を意味する。皮脂の量とＴＥＷＬとは、逆相関関係にあり、例えば皮脂が多いと、ＴＥＷＬは減少する。ＴＥＷＬ値が高いことは、角質層のバリア機能が低下していることを意味する。その結果、肌にザラつきやカサつきが出て、肌荒れを起こす。皮脂の分泌が多過ぎても、肌が脂っぽくベタつき、皮脂が刺激物質に変化して肌の炎症やニキビの要因になる。皮脂膜が重要な機能を果たすためには、適度な皮脂の分泌が必要である。  【０００４】
皮脂膜の下の角質層は、硬いケラチンタンパク質でできた角質細胞が１ｍｍ程度の層状に重なっている。角質細胞間は、細胞間脂質でつなぎ合わされている。角質層の構造は、体内の水分や体液を漏れ出さない程、緻密である。角質層の最上層の角質細胞が剥がれ落ちるときに基底細胞が１回分裂するが、これを角化と呼ぶ。古い角質が剥がれ落ちて、新しい角質細胞と入れ替わることで、角質層の機能を維持するとともに、表皮の厚さが一定に保たれる。【０００５】
角質細胞が硬いケラチンタンパク質で形成されていても、肌の柔軟性をある程度維持する必要がある。そのために、角質層には、２０〜３０％の水分が含まれている。水分が失われると、角質は硬くなり、肌がカサカサになる。【０００６】
角質層の水分の保持は、天然保湿因子（Ｎａｔｕｒａｌ  Ｍｏｉｓｔｕｒｉｚｉｎｇ  Ｆａｃｔｏｒ、ＮＦＭ）が担っている。ＮＦＭは、アミノ酸、ＰＣＡ（ピロリドンカルボン酸）、乳酸塩、尿素等で構成される。高い親水性を有するＮＭＦが水分の保持に役立つ。【０００７】
細胞間脂質は、ケラチノサイトの角化で作られる脂質である。細胞間脂質は、セラミド類、コレステロール、コレステロールエステル等で構成される。セラミドとそこに含まれるリノール酸等の遊離脂肪酸が、水分の保持や角質層のバリア機能を担っている。細胞間脂質に異常が起こると、水分保持機能が失われ、肌がかさつき、炎症を起こしやすくなる。  【０００８】
真皮は、表皮の基底層の下に位置し、コラーゲン及びエラスチンからなるタンパク質繊維と基質とからなる厚さ２ｍｍの層である。コラーゲンは、皮膚にハリを与えるとともに、エラスチンを支える役目を果たす。エラスチンは、２％程であるが、皮膚に弾力を持たせる。タンパク質繊維の間を満たす基質は、プロテオグリカンやヒアルロン酸といった細胞外マトリックス成分である。細胞間脂質が真皮中のほとんどの水分を保持する。若々しさが維持されている皮膚では、細胞外マトリックス成分の産生が促進され、皮膚の弾力性、水分保持とハリが保たれている。【０００９】
加齢、疾病、ストレス、ホルモン異常等の内的要因や、乾燥、紫外線等の外的要因が、皮膚組織から水分や細胞外マトリックス（コラーゲン、ヒアルロン酸等）を減少させ、皮膚の表皮や真皮の機能を低下させる。皮膚機能の低下は、皮膚のしわ、弾力低下（たるみ）、肌荒れといった状態となって現れる。【００１０】
皮膚の老化や肌荒れといった美容に関する問題を解決するために、種々の有効成分を摂取するための機能性食品や化粧品組成物が開発及び市販されている。【００１１】
特許文献１には、ローヤルゼリー、イソフラボン、及びコラーゲンを含有することを特徴とする美肌用経口組成物が開示されている。この発明は、皮膚の柔軟性を向上させ、皮膚のキメを整える美肌効果を有する食品を提供する。【００１２】
特許文献２には、クマザサ、アマチャヅル、エゾウコギ、ベタイン、大豆サポニンのうち１種もしくは２種以上とコラーゲンペプチドを含有することを特徴とする美容食品を開示する。この発明は、肌の張り及び艶を回復し、うるおいのある若々しい素肌を保つ食品を提供する。【００１３】
特許文献３には、大豆サポニンと、この大豆サポニンにヒアルロン酸、ヒアルロン酸の塩、コラーゲン、エラスチンより選択された少なくとも１種が配合されてなる化粧料組成物が開示される。この発明は、大豆サポニン配合による、皮下過酸化脂質の生成を抑制して皮膚の老化を防止する効果と、ヒアルロン酸、ヒアルロン酸の塩、コラーゲン、エラスチンより選択された少なくとも１種を配合することによる保湿効果との相乗効果により、肌の艶やかさをより増強して、潤いのある健康で美しい肌を維持することができる。【００１４】
特許文献４には、有効成分としてダイズエキスとアズキ末を必須成分として含有してなる化粧料組成物を開示する。この発明は、過酸化脂質の体内増加に伴う皮膚の異常即ち肌のくすみ、シミ、肌荒れ等を低減する。【００１５】
特許文献５は、皮膚の美容に有効な成分とアルコールとを含有することを特徴とする飲料、及び前記飲料と大豆胚芽エキス含有外用剤からなる皮膚の老化防止・改善及び／又は肌荒れ防止・改善キットを開示する。皮膚の美容に有効な成分は、生体コラーゲン合成促進剤、異常タンパク質除去剤、女性ホルモン様作用剤、及び、保湿剤から選ばれる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１６】
【特許文献１】特開２００８−９９５６２（美肌用経口組成物）
【特許文献２】特開２０００−９３１２１（美容食品）
【特許文献３】特開平１１−３５４４５（化粧料組成物）
【特許文献４】特開平１０−２９９１１（化粧料組成物）
【特許文献５】特開２００４−２５０３７２（皮膚老化防止・改善剤及び／又は肌荒れ防止・改善剤キット）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１７】
本発明の目的は、皮膚機能の改善効果の高い新規な組成物を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１８】
本発明者らは、上記課題を鋭意検討した結果、特定の成分を二種以上併用することにより、単独使用よりも高めることに成功し、本発明を完成させた。すなわち、本発明は、ビタミンＫ、サポゲノール、及びコラーゲン加水分解物からなる群から選ばれる少なくとも二種を含有する組成物を提供する。【００１９】
従来の技術は、サポニンやコラーゲン加水分解物を含む組成物が記載されていても、本願発明のようなビタミンＫ、サポゲノール、及びコラーゲン加水分解物からなる群から選ばれる少なくとも二種を含有する組成物は記載さていない。二種以上の成分の併用により皮膚改善機能に相乗作用があることも全く知られていない。【００２０】
本発明の組成物は、前記ビタミンＫを必須に含有することが好ましい。【００２１】
前記ビタミンＫは、ビタミンＫ２であることが好ましい。【００２２】
前記ビタミンＫ２が、メナキノン−７であることが特に好ましい。【００２３】
前記サポゲノールは、例えば大豆由来である。【００２４】
前記コラーゲン加水分解物は、分子量２００以上３０００未満のペプチド含有率が、４０質量％以上であることが好ましい。【００２５】
本発明は、また、上記組成物を有効成分とする皮膚機能改善剤を提供する。【００２６】
上記皮膚機能改善剤は、前記ビタミンＫ及び前記サポゲノールを含有し、経皮水分蒸散抑制用である。【００２７】
上記皮膚機能改善剤は、前記ビタミンＫ及び前記コラーゲン加水分解物を含有し、角質層水分量保持用である。
【発明の効果】
【００２８】
上記したように、皮膚組織の各層で保持される水分が減少すると、皮膚機能が低下する。ビタミンＫ、サポゲノール、及びコラーゲン加水分解物からなる群から選ばれる少なくとも２種を必須とする本発明によれば、その理由は明解でないが、皮膚組織の水分保持に関して単独成分では達成できない相乗効果を得ることができる。【００２９】
本発明の組成物は、皮膚機能改善機能を有する。したがって、本発明の組成物は、皮膚機能改善剤として有用である。皮膚機能改善剤は、機能性食品やサプリメント、医薬及び／又は化粧品として提供される。【００３０】
上記皮膚機能剤が、前記ビタミンＫ及び前記サポゲノールを含有する場合、経皮水分蒸散抑制作用を発揮する。また、上記皮膚機能剤が、前記ビタミンＫ及び前記コラーゲン加水分解物を含有する場合、角質層水分量保持作用を発揮する。【００３１】
上記３成分は、天然の動植物に由来する成分であるため、副作用が少ない可能性が高い。本発明の組成物を長期にわたって服用又は施用することにより、優れた効果を得ることができる。
【図面の簡単な説明】
【００３２】
【図１Ａ】本発明の組成物を皮膚機能改善剤として使用した場合の効果を示す図である。実施例１（メナキノン−７＋コラーゲン加水分解物）、比較例１（メナキノン−７）及び比較例２（コラーゲン加水分解物）の皮膚水分蒸散量変動値（被験物質投与開始前日に対する投与２８日目の差）を示す。実施例１、比較例１及び比較例２を対比すると、メナキノン−７＋コラーゲン加水分解物の併用によって、皮膚水分蒸散の抑制に相乗効果が現れていることがわかる。
【図１Ｂ】図１Ａと同様に、皮膚水分蒸散量変動値を示す図である。実施例２（メナキノン−７＋ソーヤサポゲノール）は、比較例１（メナキノン−７）及び比較例３（ソーヤサポゲノール）に比べて、皮膚水分蒸散抑制に顕著な相乗効果が現れている。
【図１Ｃ】図１Ａと同様に、皮膚水分蒸散量変動値を示す図である。実施例３（コラーゲン加水分解物＋ソーヤサポゲノール）は、比較例２（コラーゲン加水分解物）及び比較例３（ソーヤサポゲノール）に比べて、皮膚水分蒸散抑制に相乗効果が現れている。
【図２Ａ】本発明の組成物を皮膚機能改善剤として使用した場合の効果を示す図である。実施例１（メナキノン−７＋コラーゲン加水分解物）、比較例１（メナキノン−７）、及び比較例２（コラーゲン加水分解物）の角質水分量変動値（被験物質投与開始前日に対する投与２８日目の差）を示す。実施例１、比較例１及び比較例２を対比すると、メナキノン−７やコラーゲン加水分解物の単独使用には角質水分保持（保湿）の機能がないが、メナキノン−７＋コラーゲン加水分解物の併用には、その機能が現れることがわかる。
【図２Ｂ】図２Ａと同様に、角質水分量の変化を示す図である。実施例２（メナキノン−７＋ソーヤサポゲノール）、比較例１（メナキノン−７）及び比較例３（ソーヤサポゲノール）を対比すると、メナキノン−７には角質層水分保持機能がないが、ソーヤサポゲノールとメナキノン−７の併用により、ソーヤサポゲノールに近い角質水分保持機能が発揮される。
【図２Ｃ】図２Ａと同様に、角質水分量の変化を示す図である。実施例３（コラーゲン加水分解物＋ソーヤサポゲノール）、比較例２（コラーゲン加水分解物）、及び比較例３（ソーヤサポゲノール）を比較すると、コラーゲン加水分解物には角質層水分保持機能がないが、ソーヤサポゲノールとコラーゲン加水分解物の併用により角質水分保持機能が発揮される。
【発明を実施するための形態】
【００３３】
以下に、本発明の組成物の一実施形態を詳細に説明する。本発明の組成物に使用可能なビタミンＫには、ビタミンＫ１〜Ｋ３がある。ビタミンＫ１（フィロキノンともいう）は、緑黄色野菜、豆類、植物油、海藻類、魚介類などに多く含まれる。ビタミンＫ２（メナキノンともいう）は、微生物が産生し、納豆や、チーズなどの乳製品に多く含まれる。ビタミンＫ２は腸管内の細菌によっても作り出される。ビタミンＫ２には、ナフトキノン骨格につく側鎖イソプレノイド基の長さに応じてメナキノン−４（ＭＫ−４）からメナキノン−１５（ＭＫ−１５）の同族体が存在する。例えばチーズにはＭＫ−６〜ＭＫ−９が、納豆にはＭＫ−７が多量に含まれている。ビタミンＫ３（メナジオンともいう）は合成物である。
【００３４】
各ビタミンＫの製造法は、特に限定されない。市販のものも制限なく使用することができる。
【００３５】
ビタミンＫ１は、青しそ、エゴマ、モロヘイヤ、パセリ、春菊、小松菜、ほうれん草、三つ葉、アルファルファ、はしばみの葉、栗の葉、大麦の若茎、からす麦の若茎、キャベツ、ブロッコリー、カリフラワー、トマト、植物油（大豆油、ナタネ油、ゴマ油、落花生油、コーン油、サフラワー油、ひまわり油、米ぬか油、オリーブ油）などから、公知の方法（例えば特開平５−１５５８０３）によって抽出及び精製される。ビタミンＫ１は、合成によっても得られる。ビタミンＫ１は、脂肪に可溶な淡黄色油状であって、熱に対し安定であるが、光に対しては不安定である。ビタミンＫ１は、酸化物であってもよい。
【００３６】
ビタミンＫ２は、例えば特開平０８−０７３３９６、特開平１１−９２４１４、特開平１０−２９５３９３、特開２００１−１３６９５９などに記載の方法に従って、納豆菌などの微生物によって発酵生産される。
【００３７】
ビタミンＫ３は、化学合成により得られる。
【００３８】
ビタミンＫ３は、多量に摂取すると副作用が心配される。よって、これまでの食経験から、野菜から抽出精製されるビタミンＫ１や納豆菌などを用いた発酵物から抽出されるビタミンＫ２が、安全性がより高い点で好ましい。さらに好ましくは、安価かつ容易に生産可能なビタミンＫ２である。食品添加物として認可されているメナキノン−４及び／又は食品素材として利用されているメナキノン−７が特に好ましい。
【００３９】
本発明の組成物のビタミンＫの含有量は、組成物の用途や形態によって変わってくるが、通常、０．００００１〜９９重量％でよく、好ましくは０．００００５％〜７０重量％、より好ましくは０．０００１〜６０重量％、さらに好ましくは０．０１〜５０重量％の範囲である。ビタミンＫの含有量が０．００００１重量％以下であると、他の成分（コラーゲン加水分解物及び／又はサポゲノール）との併用による相乗効果が得られないことがある。
【００４０】
サポニンは、大豆、小豆、オリーブ等に豊富に存在する無定形の配糖体である。サポニンは、疎水性部分と親水性部分を持ち、水と混ぜて振とうさせると持続性の泡沫を生じることから、その名称が付けられている。サポニンは、アグリコンの種類により、ステロイドサポニンとトリテルペノイドサポニンに大別される。大豆、特に大豆胚軸に多く含まれる大豆サポニンは、トリテルペノイドサポニンの一種である。サポゲノールは、大豆、小豆、オリーブ由来のサポニン配糖体から糖鎖残基の一部又は全部を除いたアグリコンを言う。本発明の組成物に使用するサポゲノールとして、大豆由来のものが好ましい。
【００４１】
大豆由来のソーヤサポゲノールには、ソーヤサポニンＡａ、Ａｂ、Ａｃ、Ａｄ、Ａｅ、Ａｆ、Ａｇ及びＡｈ（大豆サポニンＡグループ配糖体）から得られるソーヤサポゲノールＡ、並びにソーヤサポニンＩ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ及びＶ（大豆サポニンＢグループ配糖体）から得られるソーヤサポゲノールＢが存在する。
【００４２】
ソーヤサポゲノールは、大豆サポニン配糖体から一部又は全部の糖鎖を除去することにより得られる。具体的には、大豆サポニン配糖体を、グリコシダーゼによる酵素反応にかける（ＵＳ２００６／０２７５８６２）、高温高圧処理（ＷＯ２００８／１５５８９０号）、又は醗酵処理する。ソーヤサポゲノールを化学合成（特開２００５−１３７２０１号）で得てもよい。上記文献を参照のために本明細書に挿入する。
【００４３】
一部の糖鎖残基を有するソーヤサポゲノール（例えば、３−Ｏ−Ｄ−グルクロノピラノシルソーヤサポゲノールＢ、３−Ｏ−Ｄ−グルクロノピラノシルソーヤサポゲノールA）は、大豆サポニン配糖体を部分的に酸分解することによって得られる。具体的には、大豆サポニン配糖体をエタノール、メタノール、ブタノール等の有機溶媒に溶解した後、硫酸、塩酸等の酸を添加する。別法として、酸を水、エタノール、メタノール等で希釈した反応溶媒に、大豆サポニン配糖体を添加して溶解させる。酸を添加した溶液を加温することにより、酸分解を開始させる。酸分解温度は、酸の種類と濃度、部分分解の程度等に基づいて適宜選定される。部分分解の進行を適当な検出手段（例えばクロマトグラフィー）で検出し、所定の分解度になったところで、水酸化ナトリウム等の塩基を用いて、溶液を中和する。中和物を遠心分離、ろ過等により、固相を回収する。回収物には、所望のソーヤサポゲノールの他に、不純物として通常のソーヤサポゲノール、原料配糖体、蛋白質、オリゴ糖等を含有するので、適宜の精製手段（例えばカラムクロマトグラフィー）で、目的物を精製してもよい。
【００４４】
大豆サポニン配糖体自体は、大豆の子葉、胚芽又は全粒から、公知の方法によって抽出可能である。具体的には、大豆の子葉、胚芽又は全粒から、再表０３−７５９３９号公報等に記載の方法によって抽出及び精製する。大豆サポニン配糖体は、市販のものを特に制限なく使用可能である。
【００４５】
本発明の組成物のサポゲノールの含有量は、組成物の用途や形態によって変わってくるが、通常、０．００００２〜９９重量％でよく、好ましくは０．０００１％〜７０重量％、より好ましくは０．００５〜６０重量％、さらに好ましくは０．０１〜５０重量％の範囲である。サポゲノールの含有量が０．００００２重量％以下であると、他の成分（ビタミンＫ及び／又はコラーゲン加水分解物）との併用による相乗効果が得られないことがある。
【００４６】
コラーゲンは、分子量が約３０万で鋼のように強い剛性を有する繊維状のタンパク質である。コラーゲンは、哺乳類、鳥類、魚類等の動物の皮膚の真皮、腱、動脈、軟骨等に多く含まれている。コラーゲンは、上記動物の真皮を洗浄し、アルカリ処理後、中和することにより抽出することができる。
【００４７】
コラーゲン加水分解物は、コラーゲンを熱によって変成してゼラチンにした後、ゼラチンをさらに加水分解して分子量を数千〜数百まで小さくしたものである。加水分解反応には、通常、トリプシン、キモトリプシン、ズブチリシン等のタンパク質分解酵素を使用する。反応温度、反応時間、ｐＨ等の反応条件は、使用する酵素や量によって、適宜調整される。加水分解終了後、加熱して酵素を失活させ、冷却後、適宜、ろ過及び乾燥を行う。コラーゲン加水分解物は、市販品（例えば製品名：コラーゲントリペプチド、ゼライス株式会社製）を使用することも可能である。
【００４８】
コラーゲン加水分解物は、通常、１００〜１００００の範囲の分子量分布を有するペプチド混合物となる。分子量２００〜１０００のトリペプチドの含有量は、通常、５〜３０質量％である。
【００４９】
本発明に使用するコラーゲン加水分解物は、分子量２００以上３０００未満のペプチドの含有量が、好ましくは４０質量％以上であり、さらに好ましくは５０質量％以上、より好ましくは６０質量％以上である。
【００５０】
本発明の組成物のコラーゲン加水分解物の含有量は、組成物の用途や形態によって変わってくるが、通常、０．００００３〜９９重量％でよく、好ましくは０．０００３％〜９５重量％、より好ましくは０．００３〜９０重量％、さらに好ましくは０．０３〜８５重量％の範囲である。コラーゲン加水分解物の含有量が０．００００３重量％以下であると、他の成分（ビタミンＫ及び／又はサポゲノール）との併用による相乗効果が得られないことがある。
【００５１】
本発明の組成物は、上記必須３成分のうち、少なくとも二種を含有することにより、図１Ａ〜Ｃに見られるように、皮脂膜からの水分蒸散を抑制する機能（皮膚バリア機能）を発揮する。図１Ａ及びＢに見られるように、ビタミンＫ２を必須に含むことが、皮膚バリア機能が向上する点で好ましい。図１Ｂに見られるように、ビタミンＫ２及びソーヤサポゲノールを必須に含むことが、皮膚バリア機能がより一層の向上に好ましい。
【００５２】
本発明の組成物は、上記必須３成分のうち、少なくとも二種を含有することにより、図２Ａ〜Ｃに見られるように、角質層の水分を保持する機能（保湿機能）を発揮する。図２Ａに見られるように、ビタミンＫ又はコラーゲン加水分解物の単独使用では、保湿機能が発揮されないが、ビタミンＫ及びコラーゲン加水分解物の併用で、保湿機能が発揮されるようになる。
【００５３】
本発明の組成物には、適宜、機能性食品やサプリメント、医薬、及び化粧品の分野で公知の助剤又は副成分を配合することにより製造される。
【００５４】
本発明の組成物は、経皮水分蒸散抑制機能や角質層水分量保持機能を期待できる。本発明の組成物は、皮膚の保湿と、保湿に基づいて皮膚のしわやたるみ、肌荒れ等といった皮膚の状態を改善する機能性食品やサプリメントとして提供される。
【００５５】
本発明の組成物は、経口摂取することにより、皮膚の保湿や肌荒れ改善を目的とする美容作用を発揮する。これらの作用は、美容を目的とした化粧品の機能でもあり、したがって、本発明の組成物は、経口摂取による化粧品ともいえる。
【００５６】
本発明の組成物を、皮膚機能を改善する機能性食品やサプリメントとして用いる場合、必須成分に加えて、サプリメントの添加剤として汎用されるものを添加してもよい。例えば、経口投与剤の形態に応じて、汎用の賦形剤；崩壊剤；結合剤；滑沢剤；ｐＨ調整剤；清涼化剤；懸濁化剤；乳化剤；粘稠剤；溶解補助剤；抗酸化剤；コーティング剤；可塑剤；界面活性剤；矯味剤；甘味料；クエン酸等の酸味料等；水；香料；着色剤；ビタミンＡ、ビオチン、ビタミンＢ１、ビタミンＢ２、ビタミンＢ６、ビタミンＢ１２、ビタミンＣ、ビタミンＤ、ビタミンＥ、ビタミンＰ、葉酸、イノシトール、パントテン酸、ナイアシン等のビタミン類；カルシウム、カリウム、ナトリウム、リン、硫黄、鉄、亜鉛等のミネラル類；キサンチン誘導体；蛋白質；グリシン、アラニン、プロリン、アルギニン、グルコサミン等のアミノ酸；ローズエキス等の植物抽出物；オレイン酸、リノール酸、α−リノレン酸、γ−リノレン酸、アラギドン酸、エイコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸、コレステロール等の脂肪酸類；脂肪アルコール類；水溶性高分子；オリゴ糖、果糖、乳糖等の糖類；不溶性食物繊維、水溶性食物繊維、キチン・キトサン等の食物繊維類；セラミド；グルコサミン；Ｎ−アセチルグルコサミン；ヒアルロン酸；コンドロイチン硫酸；ポリフェノール；コエンザイムＱ１０等を、発明の効果を損なわない質的及び量的範囲で添加することが可能である。
【００５７】
本発明の組成物を機能性食品やサプリメントとして使用するために、例えば、粉剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤、丸剤、錠剤、チュアブル錠、ドロップ、ビスケット、ゼリー、ゲル、シロップ、液剤等のような経口投与剤に加工される。サポゲノールは粉体なので、形態は錠剤が望ましい。
【００５８】
本発明の組成物を機能性食品やサプリメントに用いる場合の摂取量は、症状や安全性を考慮して、１日あたりのビタミンＫの摂取量としては、０．０１〜５０ｍｇが好ましく、０．０１〜１ｍｇがさらに好ましい。１日あたりのサポゲノールの摂取量としては、０．１〜１００ｍｇが好ましく、５〜５０ｍｇがさらに好ましい。１日あたりのコラーゲン加水分解物の摂取量としては、０．１〜１５ｇが好ましく、１〜１０ｇがさらに好ましい。
【００５９】
本発明の組成物は、パン、米飯、スープ、総菜、菓子、キャンディ等の一般加工食品の加工時に原料に直接添加されてもよい。
【００６０】
本発明の組成物を、皮膚機能を改善する医薬として用いる場合は、必須成分に加えて、医薬の助剤として汎用されるものを添加してもよい。例えば、剤形及び投与方法に応じて、汎用の賦形剤、崩壊剤、結合剤、滑沢剤、ビタミン、キサンチン誘導体、アミノ酸、ｐＨ調整剤、清涼化剤、懸濁化剤、粘稠剤、溶解補助剤、抗酸化剤、コーティング剤、可塑剤、界面活性剤、水、アルコール類、水溶性高分子、甘味料、矯味剤、酸味料、香料、着色剤などを発明の効果を損なわない質的及び量的範囲で添加することが可能である。
【００６１】
本発明の組成物を医薬として使用するために、散剤、顆粒剤、カプセル剤、丸剤、錠剤、チュアブル錠、ドロップのような固形製剤や、ドリンク剤、水剤、懸濁剤、乳剤、シロップ、ドライシロップのような液剤などの経口投与剤、あるいは液剤、水剤、乳剤、クリームのような経皮投与剤の形態に加工される。サポゲノールは粉体なので、形態は固形製剤が望ましい。
【００６２】
本発明の組成物を医薬として使用する場合の摂取方法は、特に限定されない。例えば、経口摂取、経皮摂取等である。好ましくは、患者の負担が少ない点で、錠剤、カプセル剤等の経口摂取である。
【００６３】
本発明の組成物を医薬に用いる場合には、症状に応じて、適宜、摂取量を設定すればよいが、一般に、予防薬として用いる場合は、１日あたりのメナキノン−７の摂取量として、通常１０μｇ〜１００ｍｇでよく、２０μｇ〜１００ｍｇが好ましく、５〜５０ｍｇがさらに好ましい。治療薬として用いる場合は、１〜１５０ｍｇで使用可能である。
【００６４】
本発明の組成物を医薬に用いる場合には、症状に応じて、適宜、摂取量を設定すればよいが、一般に、予防薬として用いる場合は、１日あたりのサポゲノールの摂取量として、０．１〜１００ｍｇが好ましく、５〜５０ｍｇがさらに好ましい。治療薬として用いる場合は、５〜１２００ｍｇが好ましく、１５０〜９００ｍｇがさらに好ましい。
【００６５】
本発明の組成物を医薬に用いる場合には、症状に応じて、適宜、摂取量を設定すればよいが、一般に、予防薬として用いる場合は、１日あたりのコラーゲン加水分解物の摂取量として、０．１〜１５ｇが好ましく、１〜１０ｇがさらに好ましい。治療薬として用いる場合は、０．１〜２０ｇが好ましく、１〜１５ｇがさらに好ましい。
【００６６】
本発明の組成物を化粧料として用いる場合、必須の成分以外に、化粧品の助剤として汎用されるものを添加してもよい。例えば、エチレングリコール、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、１，４−ブチレングリコール、ジプロピレングリコール、グリセリン、ジグリセリン、ポリグリセリン、ペンチレングリコール、イソプレングリコール、グルコース、マルトース、フルクトース、キシリトール、ソルビトール、マルトトリオース、エリスリトール等の多価アルコール；メタノール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコール、ブチルアルコール、イソブチルアルコール等の低級アルコール；オレイン酸、イソステアリン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、ベヘン酸、ウンデシレン酸等の高級脂肪酸類；オリーブ油、トウモロコシ油、ツバキ油、マカデミアナッツ油、アボカド油、ナタネ油、ゴマ油、ヒマシ油、サフラワー油、綿実油、ホホバ油、ヤシ油、パーム油等の油脂；カルナバロウ、キャンデリラロウ、ミツロウ、ラノリン等のロウ類；ソルビトール、マンニトール、グルコース、ショ糖、ラクトース、トレハロース等の糖類；カラギーナン、キサンタンガム、ゼラチン、ペクチン、アガロース、アルギン酸塩、デキストリン、メチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、カルボキシビニルポリマー、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、アラビアガム、カラヤガム、トラガントガム、タマリンドガム等の増粘剤；フェノキシエタノール、メチルパラベン、エチルパラベン、プロピルパラベン、ブチルパラベン、パラオキシ安息香酸エステル、安息香酸、サリチル酸とその塩類、ソルビン酸とその塩類、デヒドロ酢酸とその塩類、クロルクレゾール、ヘキサクロロフェン等の防腐剤；ラウロイル硫酸ナトリウム、モノオレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン等の非イオン界面活性剤、アルキルサルフェート塩、ノルマルドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウム等の陰イオン界面活性剤、ポリオキシエチレンドデシルモノメチルアンモニウムクロライド等の陽イオン界面活性剤；ステロイド系及び非ステロイド系抗炎症剤；ビタミンＡ、ビタミンＤ、ビタミンＥ、ビタミンＦ、ビタミンＫ等のビタミン類やジカプリル酸ピリドキシン、ジパルミチン酸ピリドキシン、ジパルミチン酸アスコルビル、モノパルミチン酸アスコルビル、モノステアリン酸アスコルビル等のビタミン誘導体；フラボノイド、カロテノイド等の抗酸化剤；スクワラン、スクワレン、流動パラフィン等の高級脂肪族炭化水素類；セラミド、セレブロシド、スフィンゴミエリン等のスフィンゴ脂質；コレステロール、フィトステロール等のステロール類；メチルポリシロキサン、メチルフェニルポリシロキサン、メチルシクロポリシロキサン、オクタメチルシクロテトラシロキサン、オクタメチルシクロペンタシロキサン、デカメチルシクロペンタシロキサン、メチルハイドロジェンポリシロキサン等のシリコーン類；パラアミノ安息香酸、パラアミノ安息香酸モノグリセリンエステル、アントラニル酸メチル、ホモメンチル−Ｎ−アセチルアントラニレート、パラメトキシケイ皮酸オクチル、エチル−４−イソプロピルシンナメート等の紫外線吸収剤；ベントナイト、スメクタイト、バイデライト、ノントロナイト、サポナイト、ヘクトライト、ソーコナイト、スチーブンサイト等の鉱物；ベンガラ、黄酸化鉄、黒酸化鉄、酸化コバルト、群青、紺青、酸化チタン、酸化亜鉛等の無機顔料；赤色２０２号、黄色４号、青色４０４号等の着色料；香料；香油等が挙げられる。
【００６７】
本発明の組成物を化粧品として使用するために、液剤、水剤、乳剤、乳液、クリーム、粉体のような経皮投与剤、あるいは散剤、顆粒剤、カプセル剤、丸剤、錠剤、チュアブル錠、ドロップのような固形製剤やドリンク剤、水剤、懸濁剤、乳剤、シロップ、ドライシロップのような液剤などの経口投与剤の形態に加工される。
【００６８】
化粧品として使用する場合の摂取方法は、経口摂取又は経皮摂取である。化粧品としての即効性の観点から、水剤、乳剤、乳液、クリームでの経皮投与が好ましい。
【００６９】
本発明の組成物を化粧料に用いる場合の摂取量は、症状や安全性を考慮して、１日あたりのビタミンＫの摂取量としては、０．０１〜５０ｍｇが好ましく、０．０１〜１ｍｇがさらに好ましい。１日あたりのサポゲノールの摂取量としては、０．００１〜１００ｍｇが好ましく、０．０５〜５０ｍｇがさらに好ましい。１日あたりのコラーゲン加水分解物の摂取量としては、０．００１〜２０ｇが好ましく、０．０１〜１０ｇがさらに好ましい。
【００７０】
本発明の組成物の配合例を示す。しかし、本発明は、以下の配合例に限定されるものではない。
【００７１】
［配合例１］錠剤
【表１】
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【００７２】
［配合例２］カプセル
【表２】
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【００７３】
［配合例３］化粧水
【表３】
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【００７４】
［配合例４］クリーム
【表４】
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【実施例】
【００７５】
以下に、実施例を用いて本発明をより詳細に説明するが、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。【００７６】
〔実施例１〕
１．組成物（皮膚機能改善剤）の調整
メナキノン−７、コラーゲン加水分解物及びソーヤサポゲノールを用意した。メナキノン−７には、市販のメナキノン−７試薬（和光純薬工業株式会社製）をＨＰＬＣで純度検定後、純度９９．６％のものを使用した。【００７７】
コラーゲン加水分解物には、市販のコラーゲン加水分解物（製品名：コラーゲントリペプチド、ゼライス株式会社製）を使用した。コラーゲン加水分解物の分子量分布を表５に示す。【００７８】
【表５】
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【００７９】
トリペプチド（分子量２００〜１０００）の含有量は、２０％であった。【００８０】
ソーヤサポゲノールは、市販の大豆サポニン製剤（製品名：サポニンＢ−５０、（株）Ｊ−オイルミルズ製）を使用した。この製品は、サポニンＡ群２７．４％及びサポニンＢ群５２．３％を含有した。この製品７５０ｇに、２規定の硫酸含有８０％エタノール７．５Ｌを添加し、７５℃にて２５時間保温した。保温後、反応混合物に水７．５Ｌを添加し、遠心分離した。遠心分離後の残留物中に７．５Ｌの水を添加し、１規定のＫＯＨにて中和させた。さらに遠心分離を行い、遠心分離機上方からもさらに水を添加し、乾燥させ、２５１．５ｇの粉末を得た。【００８１】
粉末中のソーヤサポゲノール濃度をＲｕｐａｓｉｎｇｈｅらの方法（Ｊ．Ａｇｒｉｃ．Ｆｏｏｄ．Ｃｈｅｍ．５１．５８８８−５８９４、２００３）に基づいて測定した。その結果、ソーヤサポゲノールＡが１９．６％、及びソーヤサポゲノールＢが４５．８％であった。【００８２】
実施例及び比較例の試験群には、基準飼料に加えて、表６に示す被験物質を投与した。０．５％カルボキシメチルセルロース−ナトリウム溶液（以下、ＣＭＣ−Ｎａ溶液という）に被検物質を溶解させることにより、組成物（皮膚機能改善剤）を作製した。【００８３】
組成物への被検物質の配合量は、０．５％ＣＭＣ−Ｎａ溶液の投与量が体重１０ｇあたり０．０５ｍＬとなり、かつ、被検査物質の投与量が表１に示す値になるように調整した。【００８４】
２．投与試験
ヘアレスマウスＨｏｓ：ＨＲ１（雄性、５週齢）を４２匹用意した。一週間の馴致期間、及び、試験期間を通じて、基準飼料（製品名：ＣＲＦ−１、オリエンタル酵母株式会社製）と水をマウスに自由摂取させた。日照条件は、１２時間毎に昼夜を設定した。馴致期間後、群間の体重が均一になるように、１群あたり６匹の群分けをした。【００８５】
上記組成物をマウスへ胃ゾンデを用いて、１日１回、２８日間、連続強制胃内投与した。なお、対照群には、基準飼料、及び、体重１０ｇあたり０．０５ｍＬの０．５％ＣＭＣ−Ｎａ溶液を投与した。【００８６】
【表６】
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【００８７】
３．皮膚機能改善剤の評価
（１）経皮水分蒸散抑制機能
ＴＥＷＬの値を測定することにより、組成物（皮膚機能改善剤）の経皮水分蒸散抑制機能（すなわち、皮膚バリア機能）を評価した。ＴＥＷＬ測定には、市販のテヴァメーター（製品名：ＴＭ３００、インテグラル社製）を用いた。測定部位は、マウスの背部とした。被験物質投与開始前日、並びに投与後１４日目及び２８日目に測定を行った。【００８８】
図１Ａ〜Ｃは、被験物質投与２８日目の経皮水分蒸散量から被験物質投与開始前日の経皮水分蒸散量を差し引いた値を示す。チューキーの多重比較検定により、測定結果の有意差検定を行った。図中に、危険率（Ｐ）がＰ＜０．０５、及び、Ｐ＜０．０１で有意差がある場合を、それぞれ、＊及び＊＊で示す。【００８９】
図１Ｂにおいて、実施例２（メナキノン−７及びソーヤサポゲノール）では、経皮水分蒸散量の減少が、対照群と比較して有意に抑制されていた（Ｐ＜０．０５）。図１Ａの実施例１（メナキノン−７及びコラーゲン加水分解物）、並びに図１Ｃの実施例３（コラーゲン加水分解物及びソーヤサポゲノール）でも、経皮水分蒸散量の抑制傾向が観察された。これらのことから、本発明の皮膚機能改善剤、特にメナキノン−７及びソーヤサポゲノールを含有する皮膚機能改善剤は、皮脂膜に働く水分蒸散抑制用に有効であることがわかる。【００９０】
（２）角質層水分保持機能
角質には、水分が通常２０〜３０％含まれている。角質の水分量が低いほど、角質層の水分、もしくは水分保持に関わる天然保湿因子（ＮＭＦ）が減少して、皮膚の乾燥状態を引き起こしていると考えられる。角質水分量を測定することにより、皮膚機能改善剤の角質層水分保持機能（すなわち、皮膚の保湿機能）を評価できる。【００９１】
角質水分量の測定には、市販のコルネオメーター（製品名：ＣＭ８２５、インテグラル社製）を用いた。測定部位は、マウスの背部とした。被験物質投与開始前日、並びに投与後１４日目及び２８日目に測定を行った。【００９２】
図２Ａ〜Ｃは、被験物質投与開始前日の角質水分量を基準に、被験物質投与２８日目の角質水分量から差し引いた値を示す。チューキーの多重比較検定により、測定値の有意差検定を行った。図中に、危険率（Ｐ）がＰ＜０．０５、及び、Ｐ＜０．０１で有意差がある場合を、それぞれ、＊及び＊＊で示す。【００９３】
図２Ａを見ると、メナキノン−７又はコラーゲン加水分解物の単独使用では、角質水分保持機能が発揮されない。しかし、本発明のように、メナキノン−７及びコラーゲン加水分解物を併用すると、角質水分保持機能が現れる。これから、メナキノン−７及びコラーゲン加水分解物を含有する本発明の皮膚機能改善剤は、角質層に働く保湿用として有効であることがわかる。【００９４】
図２Ｂを見ると、メナキノン−７の単独使用には角質層水分保持機能はないが、ソーヤサポゲノールの単独使用では発揮される。本発明のように、メナキノン−７及びソーヤサポゲノールを併用しても、角質水分保持機能が現れる。
【要約】皮膚機能改善剤として有用な組成物を提供する。本発明の組成物は、ビタミンＫ、サポゲノール、及びコラーゲン加水分解物からなる群から選ばれる少なくとも２種を含有する。この組成物は、皮膚機能改善剤として使用でき、特に経皮水分蒸散抑制用及び／又は角質層水分量保持用の皮膚機能改善剤として有用である。【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図１Ｃ】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図２Ｃ】
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