(57)【要約】  シワ形成抑制効果に優れ、安全性に優れるシワ形成抑制剤の提供。  ストレプトコッカス・サーモフィルスに属する乳酸菌の培養上清を有効成分として含有するシワ形成抑制剤。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ストレプトコッカス・サーモフィルスに属する乳酸菌の培養上清を有効成分として含有するシワ形成抑制剤。
【請求項２】
ストレプトコッカス・サーモフィルスに属する乳酸菌が、ストレプトコッカス・サーモフィルスＹＩＴ２０２１株（ＦＥＲＭ  ＢＰ−７５３７）、ストレプトコッカス・サーモフィルスＹＩＴ２００１株（ＦＥＲＭ  ＢＰ−７５３８）、ストレプトコッカス・サーモフィルスＹＩＴ２０８５株（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１０８８０）、ストレプトコッカス・サーモフィルスＹＩＴ２０８４株（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１０８７９）及びストレプトコッカス・サーモフィルスＹＩＴ２０５９株（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１０８７８）からなる群から選ばれる１種又は２種以上である請求項１記載のシワ形成抑制剤。
【請求項３】
ストレプトコッカス・サーモフィルスに属する乳酸菌の培養上清を含有する組成物を皮膚に塗布することを特徴とするシワの形成抑制方法。
【請求項４】
前記ストレプトコッカス・サーモフィルスに属する乳酸菌が、ストレプトコッカス・サーモフィルスＹＩＴ２０２１株（ＦＥＲＭ  ＢＰ−７５３７）、ストレプトコッカス・サーモフィルスＹＩＴ２００１株（ＦＥＲＭ  ＢＰ−７５３８）、ストレプトコッカス・サーモフィルスＹＩＴ２０８５株（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１０８８０）、ストレプトコッカス・サーモフィルスＹＩＴ２０８４株（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１０８７９）及びストレプトコッカス・サーモフィルスＹＩＴ２０５９株（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１０８７８）からなる群から選ばれる１種又は２種以上である請求項３記載のシワの形成抑制方法。
【請求項５】
ストレプトコッカス・サーモフィルスに属する乳酸菌の培養上清を含有する組成物のシワ形成抑制剤としての使用。
【請求項６】
前記ストレプトコッカス・サーモフィルスに属する乳酸菌が、ストレプトコッカス・サーモフィルスＹＩＴ２０２１株（ＦＥＲＭ  ＢＰ−７５３７）、ストレプトコッカス・サーモフィルスＹＩＴ２００１株（ＦＥＲＭ  ＢＰ−７５３８）、ストレプトコッカス・サーモフィルスＹＩＴ２０８５株（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１０８８０）、ストレプトコッカス・サーモフィルスＹＩＴ２０８４株（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１０８７９）及びストレプトコッカス・サーモフィルスＹＩＴ２０５９株（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１０８７８）からなる群から選ばれる１種又は２種以上である請求項５記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、シワ形成抑制剤に関し、更に詳細には、紫外線照射下における皮膚表面のシワの形成を抑制する効果に優れたシワ形成抑制剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
肌は、加齢や温度、湿度、紫外線等の外来ストレスの影響を受け、シワや肌荒れ等の症状を誘発する。これまでの研究からシワ等の発症には、皮膚真皮の線維芽細胞の機能低下やマトリックス線維の減少又は分解が寄与しているものと考えられ、このような症状を改善する目的で様々な手段が提案されている。例えば、このような手段として、ビワ抽出物（特許文献１）や酸化型コエンザイムＡ（特許文献２）、アガリクス茸（特許文献３及び４）等を利用する方法を挙げることができる。しかし、未だシワ形成抑制効果と安全性の両面から充分満足できるものではなかった。【０００３】
一方で、乳酸菌の培養上清、すなわち主に乳を主成分とする培地に乳酸菌を接種して得られた培養物が、皮膚外用剤としての効果を有することが報告されている。例えば、乳酸菌の培養上清が、保湿作用（非特許文献１）、抗酸化作用（非特許文献２）、光防御作用（非特許文献３）、皮膚菌叢のコントロール作用、皮膚ｐＨコントロール作用（非特許文献４）を有することが報告されている。【０００４】
また、近年では、乳酸菌の培養上清中に含まれる成分として、乳酸菌の代謝により細胞外に産生される多糖類に関する研究も盛んに進められるようになり、各乳酸菌が産生する細胞外多糖類を有効成分として利用する皮膚外用剤に関する技術も数多く報告されている。
このような技術としては、例えば、ストレプトコッカス・ラクチス、ラクトコッカス・ラクチスなどが産生するリン酸化多糖類を保湿剤や美白剤として利用する方法（特許文献５及び６）、ラクトバチルス属に属する乳酸菌が産生する多糖類を抗炎症剤として利用する方法（特許文献７）などを挙げることができる。【０００５】
しかしながら、これらの乳酸菌培養上清（或いは乳酸菌産生細胞外多糖類）は、保湿作用や抗酸化作用を期待する皮膚外用剤として利用されるものであって、シワの形成を抑制する効果に優れたものは見出されていなかった。
【特許文献１】特公平５−１７２０６号公報
【特許文献２】特開平８−１７５９６１号公報
【特許文献３】特開平１１−２２８４３８号公報
【特許文献４】特開平１１−２２８４３９号公報
【特許文献５】特開平１０−２５１１４０号公報
【特許文献６】特開平９−２４９５２４号公報
【特許文献７】特開平７−７０２０９号公報
【非特許文献１】日本香粧品科学会誌，６（４），ｐ２３８，１９８２
【非特許文献２】日本香粧品科学会誌第７回学術学会講演要旨，５９，１９８２
【非特許文献３】日本香粧品学会第８回学術学会講演要旨，２１０，１９８３
【非特許文献４】日本香粧品学会第９回学術学会講演要旨，１３２，１９８４
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明の目的は、肌におけるシワの形成、具体的には、紫外線照射による皮膚表面のシワの形成を特異的に抑制する効果を有し、安全性に優れた新規な皮膚外用剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは上記課題を解決するために鋭意研究を行った結果、数多くの乳酸菌の中で、ストレプトコッカス・サーモフィルスに属する乳酸菌を培養して得られる培養上清に、シワの形成を特異的に抑制する優れた効果があることを見出し、本発明を完成した。【０００８】
すなわち、本発明は、ストレプトコッカス・サーモフィルスに属する乳酸菌の培養上清を有効成分として含有するシワ形成抑制剤を提供するものである。
また、本発明は、ストレプトコッカス・サーモフィルスに属する乳酸菌の培養上清を含有する組成物を皮膚に塗布することを特徴とするシワの形成抑制方法を提供するものである。
さらに、本発明は、ストレプトコッカス・サーモフィルスに属する乳酸菌の培養上清を含有する組成物のシワ形成抑制剤としての使用を提供するものである。
【発明の効果】
【０００９】
本発明のシワ形成抑制剤は、天然の乳酸菌を用いて得られる培養上清を有効成分とするので、安全性に優れており、各種皮膚外用剤組成物として使用が可能である。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】実施例１のシワ面積比率を示す図面である。
【図２】シワ深さ別面積率の測定を示す概略図である。
【図３】実施例２のシワ深さ別面積比率を示す図面である。
【図４】実施例２のマウス背部皮膚レプリカ写真である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１１】
本発明のシワ形成抑制剤の有効成分である乳酸菌培養上清は、ストレプトコッカス・サーモフィルスに属する乳酸菌を、乳を主成分とする培地で培養し、得られた培養物から固形物を除去することにより製造される。【００１２】
ここで用いられるストレプトコッカス・サーモフィルスに属する乳酸菌としては、特に限定されるものではないが、得られる培養上清のシワ形成に対する充分な抑制効果を得る観点から、ストレプトコッカス・サーモフィルスＹＩＴ２０２１株（ＦＥＲＭ  ＢＰ−７５３７、寄託日：平成８年（１９９６年）１１月１日）、ストレプトコッカス・サーモフィルスＹＩＴ２００１株（ＦＥＲＭ  ＢＰ−７５３８、寄託日：平成１３年（２００１年）１月３１日）、ストレプトコッカス・サーモフィルスＹＩＴ２０８５株（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１０８８０、寄託日：２００６年８月１８日）、ストレプトコッカス・サーモフィルスＹＩＴ２０８４株（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１０８７９、寄託日：２００６年８月１８日）及びストレプトコッカス・サーモフィルスＹＩＴ２０５９株（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１０８７８、寄託日：２００６年８月１８日）からなる群から選ばれる１種又は２種以上を使用することが好ましい。なお、これらのストレプトコッカス・サーモフィルスに属する乳酸菌株は、独立行政法人産業技術総合研究所  特許生物寄託センター（日本国  茨城県つくば市東１丁目１番地１  中央第６（郵便番号３０５−８５６６））に寄託されている。【００１３】
ストレプトコッカス・サーモフィルスに属する乳酸菌を培養する培地としては、人乳、牛乳、山羊乳等の獣乳や、脱脂乳、粉乳や脱脂粉乳からの還元乳、クリーム等の乳製品が好適なものとして挙げられ、また、豆乳等の大豆加工品を用いることも可能である。なお、これらは、そのまま培地として使用してもよく、また、必要に応じて適当な濃度に希釈して使用しても良い。【００１４】
更に、これらの培地には、乳酸菌の培養において栄養源を補う目的で、一般的に用いられる成分を別途配合してもよい。このようなものとしては、酵母エキス、クロレラエキス、ビタミンＡ、ビタミンＢ類、ビタミンＣ、ビタミンＥ等のビタミン類や、各種ペプチド類を含むタンパク分解物、アミノ酸類、カルシウム、マグネシウム等の塩類が挙げられる。【００１５】
前記培地を用いたストレプトコッカス・サーモフィルスに属する乳酸菌の培養は、常法に従って行えばよいが、培養温度や時間をある範囲に設定すれば、得られる培養上清のシワ形成に対する顕著な抑制効果が得られるので好ましい。すなわち、培養温度を３０℃〜４５℃、より好ましくは３７℃〜４２℃とし、培養時間を、１時間〜４８時間、より好ましくは、４時間〜２４時間とすれば、シワ形成に対する顕著な抑制効果を有する培養上清が得られる。なお、このときの他の培養条件としては、静置、攪拌、振盪、通気等が挙げられ、これらから培養に適した方法を適宜選択して行えばよい。【００１６】
本発明に用いる乳酸菌培養上清は、上記の如くして得られた乳酸菌培養物から、ろ過等常法に従って処理することにより得ることができる。ここで、本発明者等は、従来から皮膚外用剤に関し、各種乳酸菌が産生する細胞外多糖類に関する技術的知見が数多く報告されていることに鑑み、前記のようにして得られたストレプトコッカス・サーモフィルスに属する特定の乳酸菌の培養上清に含まれる多糖類についても分析を行ったところ、グルコース、ガラクトース、Ｎ−アセチルグルコサミンおよびグルクロン酸を含むことが確認され、既知の乳酸菌が産生する多糖類とは異なる特異的な多糖類であることが示唆された。【００１７】
乳酸菌が産生する多糖類については、代表的な効果として、保湿効果に優れたヒアルロン酸を挙げることができるが、ヒアルロン酸は、シワ形成を特異的に抑制する効果を有することは知られておらず、また、他の乳酸菌産生多糖類についても同様にこのような知見は報告されていない。本発明のシワ形成抑制剤は、前記のとおり、従来から報告されている乳酸菌が産生する多糖類とは異なる特異的な構造を有することが示唆される多糖類を含む乳酸菌培養上清を有効成分として含有するため、シワの形成に対する特異的な抑制効果が得られるものと考えられる。従って、本発明のシワ形成抑制剤の有効成分である乳酸菌培養上清は、公知の乳酸菌産生多糖類を含む乳酸菌培養上清とは明確に区別されるものである。【００１８】
本発明のシワ形成抑制剤は、ストレプトコッカス・サーモフィルスに属する乳酸菌の培養上清を有効成分として含有するものであれば、その使用方法、使用形態は特に限定されることはない。即ち、ストレプトコッカス・サーモフィルスに属する乳酸菌の培養上清をそのまま或いは、濃縮または希釈して、さらには、噴霧乾燥や凍結乾燥等の手段により乾燥した粉末として使用することができる。また、当該培養上清を含有する成分として、乳酸菌培養物をそのまま使用することもできる。【００１９】
本発明のシワ形成抑制剤は、化粧品、医薬品、医薬部外品等の皮膚外用剤組成物に配合することができ、例えば、化粧水、乳液、各種クリーム、パック、美容液等の基礎化粧料、シャンプー、リンス、トリートメント、ヘアトニック、ヘアリキッド、ヘアクリーム、ヘアミルク等の頭髪用製品、入浴剤等の浴用化粧品、ファンデーション、口紅、マスカラ、アイシャドウ等のメーキャップ化粧品、日焼け止め等の特殊化粧品等とすることができる。本発明のシワ形成抑制剤としての乳酸菌培養上清の配合量は、特に限定されるわけではなく、皮膚外用剤組成物の形態等によって適宜設定すればよく、好ましくは０．０１重量％〜１００重量％、特に好ましくは０．１重量％〜９０重量％、さらに好ましくは１重量％〜３０重量％である。【００２０】
前記した本発明のシワ形成抑制剤を含有する皮膚外用剤組成物は、常法に従って製造することができ、特に限定されるものではない。例えば、精製水や化粧水基剤、クリーム基剤、乳液基剤等に本発明のシワ形成抑制剤を所望の作用効果を発揮できる程度に適量溶解若しくは分散させればよい。【００２１】
また、皮膚外用剤組成物には、必須成分である本発明のシワ形成抑制剤の他に、通常、皮膚外用剤に配合される副素材を配合することができる。このような副素材としては、界面活性剤、油分、アルコール類、保湿剤、増粘剤、防腐剤、酸化防止剤、キレート剤、ｐＨ調整剤、香料、色素、紫外線吸収・散乱剤、粉体、ビタミン類、アミノ酸類、水溶性高分子、発泡剤、顔料、植物抽出物、動物由来成分、海藻抽出物、各種薬剤、添加剤、水等を挙げることができる。【００２２】
また更に、本発明のシワ形成抑制剤は、食経験のある乳酸菌が産生する多糖類を有効成分としていることから、各種飲食品にも配合することもできる。ここでいう飲食品とは、前記のシワ形成抑制剤をそのまま、またはそれを含む乳酸菌培養物もしくはこれらを飲食品中に含有せしめて、シワ形成の予防に有用な機能性食品又は食品素材として食されるものである。例えば、前記シワ形成抑制剤に、適当な助剤を添加した後、慣用の手段を用いて食用に適した形態、例えば、顆粒状、粒状、錠剤、カプセル、ペーストなどに成形して食用に供してもよく、また各種の食品、例えば、ハム、ソーセージなどの食肉加工食品、かまぼこ、ちくわなどの水産加工食品、パン、菓子などに添加して使用したり、水、果汁、牛乳、清涼飲料などの飲料に添加して使用しても良い。また、本発明のシワ形成抑制剤を含有する乳酸菌培養物をそのまま発酵乳製品とすることもできる。
【実施例】
【００２３】
以下に、実施例及び試験例を挙げて本発明を更に詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例等になんら制約されるものではない。【００２４】
製造例１
シワ形成抑制剤の調製
１０％  Ｓｋｉｍｍｅｄ  ｍｉｌｋ培地（Ｄｉｆｃｏ社製）１ｍＬ  に、ストレプトコッカス・サーモフィルスＹＩＴ２０８５株（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１０８８０）、ストレプトコッカス・サーモフィルスＹＩＴ２０２１株（ＦＥＲＭ  ＢＰ−７５３７）、ストレプトコッカス・サーモフィルスＹＩＴ２００１株（ＦＥＲＭ  ＢＰ−７５３８）、ストレプトコッカス・サーモフィルスＹＩＴ２０８４株（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１０８７９）またはストレプトコッカス・サーモフィルスＹＩＴ２０５９株（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１０８７８）を１％植菌し、４２℃で４時間培養した。次いで、氷中で冷却後、終濃度が１０％ｗ／ｖになるようにトリクロロ酢酸（ＴＣＡ）を加え、４℃で２時間静置した。これを１１，０００×ｇで３０分間遠心して、上澄み液に等量の９９％冷エタノールを加え、更に４℃で一晩静置した。
これをＳｐｅｃｔｒａ／Ｐｏｒ  Ｍｅｍｂｒａｎｅ（ＭＷ３５００）にて透析し、常法に従って凍結乾燥して５種類の培養上清（以下、使用菌株に応じて、それぞれ２０８５ＥＰＳ、２０２１ＥＰＳ、２００１ＥＰＳ、２０８４ＥＰＳ及び２０５９ＥＰＳという。）を得た。これらの培養上清は、ＮａＯＨでｐＨを７に調整した１％超純水溶液として、次に挙げる検証に供した。【００２５】
実施例１
ヘアレスマウスを用いた皮膚性状に対する検証１
ＨＯＳ：ＨＲ−１へアレスマウス、雌９週令を用意し、６匹ずつ以下に示すとおり８群に分け、製造例で調製した各乳酸菌培養上清を試験系に従って塗布した。乳酸菌培養上清（ＥＰＳ）は、ＵＶＢ照射装置（Ｖｉｌｂｅｒ  ｌｏｕｕｍａｔ，  Ｆｒａｎｃｅ）により一日３０ｍＪ／ｃｍ２の紫外線を照射したマウスの背部に、綿棒を用いて４日間１００μＬ塗布した。また、培養上清の代わりに、Ｃｏｎｔ群には同量の滅菌水を、ＨＡ群には同量の１％ヒアルロン酸溶液を塗布した。
なお、前日に塗布した試料の残留により、各群での紫外線照射量に影響がでないよう、紫外線照射前に滅菌水で湿らせた脱脂綿によりマウスの背部をぬぐっておいた。【００２６】
試験終了後、皮膚表面の形態を観察するため、まず、マウスを台に固定し、背部皮膚から不透明の即乾性シリコンゴム（ＳＩＬＦＬＯ，  Ｆｌｅｘｉｃｏ  Ｄｖｅｌｏｐｍｅｎｔｓ）を塗布してネガティブレプリカを台紙に固定して作製した。次いで、常法に従って、ネガティブレプリカを３０度の角度で落射照明して画像を入力し、二値化後、画像解析を行ない、面積比率を求めた。その結果を図１に示す。なお、面積比率とは一定面積当りにシワが何％存在するかを示すものである。【００２７】
試験系
Ｉ；Ｃｏｎｔ群（ＵＶ＋、水）
ＩＩ；  ＨＡ群（ＵＶ＋、１％ＨＡ溶液）
ＩＩＩ；２０５９群（ＵＶ＋、２０５９ＥＰＳ）
ＩＶ；２０２１群（ＵＶ＋、２０２１ＥＰＳ）
Ｖ；２０８４群（ＵＶ＋、２０８４ＥＰＳ）
ＶＩ；２０８５群（ＵＶ＋、２０８５ＥＰＳ）
ＶＩＩ；２００１群（ＵＶ＋、２００１ＥＰＳ）
ＶＩＩＩ；ＵＶ−群（ＵＶ−、水）【００２８】
図１に示すとおり、乳酸菌培養上清（ＥＰＳ）を塗布した群では、Ｃｏｎｔ群に比べて紫外線照射によって生じるシワを減少させる効果が認められた。また一方で、皮膚に対して優れた保湿作用を有し、乳酸菌が産生する多糖類として既知のヒアルロン酸を塗布した群では、紫外線によるシワの形成を抑制する効果は認められなかったことから、本発明のシワ形成抑制剤の有効成分はヒアルロン酸ではないことが示唆された。【００２９】
実施例２
ヘアレスマウスを用いた皮膚性状に対する検証２
へアレスマウスにおける皮膚性状を更に検証するため、実施例１のＣｏｎｔ群、ＵＶ−群及び２０８５群について、シワ深さ別面積率を求めた。なお、シワ深さ別面積率は、図２に示すとおり、実施例１の画像処理においてシワと認識された部分について、照射落射方向の長さｄにｔａｎθをかけてものをシワ深さと定義し、その深さ別の面積比率とした。
その結果をマウス背部の皮膚レプリカ写真（図４）と併せ、図３に示す。【００３０】
まず、図３に示すとおり、Ｃｏｎｔ群では、深いシワが多く認められるのに対し、２０８５群では、深いシワの形成が顕著に少なくなっていた。また、このような傾向は、図４からも明らかに示された。【００３１】
実施例３  化粧水の調製
下記組成で、化粧水を調製した。なお、調製方法は、（７）に（６）を溶解して、これに（１）〜（５）を加えて十分に攪拌して化粧水を得た。【００３２】
【表１】
2008026318.tif 000002
【００３３】
実施例４  乳液の調製
下記組成で、乳液を調製した。なお、調製方法は、（１１）に（７）、（８）及び（１０）を加えて加温し、８０℃で（１）〜（６）を加えて乳化し、その後、（９）を加えて攪拌し、室温まで冷却して乳液を得た。【００３４】
【表２】
2008026318.tif 000003
【００３５】
実施例５  クリームの調製
下記組成で、クリームを調製した。なお、調製方法は、（１４）に（９）、（１０）、（１２）及び（１３）を加えて加温し、８０℃で（１）〜（８）を加えて乳化し、その後、（１１）を加えて攪拌し、室温まで冷却してクリームを得た。【００３６】
【表３】
2008026318.tif 000004
【産業上の利用可能性】
【００３７】
本発明のストレプトコッカス・サーモフィルスに属する乳酸菌の培養上清を有効成分として含有するシワ形成抑制剤は、シワ形成抑制効果に優れ、かつ天然の乳酸菌を用いて得られる培養上清を有効成分とするので、安全性に優れており、各種外用剤組成物として使用が可能である。
【図１】
2008026318.tif 000005
【図２】
2008026318.tif 000006
【図３】
2008026318.tif 000007
【図４】
2008026318.tif 000008
【国際調査報告】
2008026318.tif 000009
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