(57)【要約】  式（Ｉ）2008120708.tif 000011を有効成分として用いることで、一人のレシピエントに対して一人のドナーで十分であるような組織移植法を確立して、現在の組織移植の大きな問題点の１つであるドナー不足を解消するために、移植組織の生体内での生着率を増強又は増殖率を増強するための手段を提供する。
2008120708.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式（Ｉ）
【化１】
2008120708.tif 000008
（式中、Ｒ1は水素原子、アリール、炭素数１〜５のアルキル又は総炭素数３〜６のアルコキシカルボニルアルキルを表し、Ｒ2は、水素原子、アリールオキシ、アリールメルカプト、炭素数１〜５のアルキル又は炭素数１〜３のヒドロキシアルキルを表し、あるいは、Ｒ1及びＲ2は、共同して炭素数３〜５のアルキレンを表し、Ｒ3は水素原子、炭素数１〜５のアルキル、炭素数５〜７のシクロアルキル、炭素数１〜３のヒドロキシアルキル、ベンジル、ナフチル又はフェニル、又は炭素数１〜５のアルコキシ、炭素数１〜３のヒドロキシアルキル、総炭素数２〜５のアルコキシカルボニル、炭素数１〜３のアルキルメルカプト、炭素数１〜４のアルキルアミノ、総炭素数２〜８のジアルキルアミノ、ハロゲン原子、トリフルオロメチル、カルボキシル、シアノ、水酸基、ニトロ、アミノ、及びアセトアミドからなる群から選ばれる同一若しくは異なる１〜３個の置換基で置換されたフェニルを表す。）で表されるピラゾロン誘導体若しくはその生理的に許容される塩、又はそれらの水和物若しくは溶媒和物を有効成分とする組織移植における移植組織の生着増強剤又は増殖増強剤。
【請求項２】
式（Ｉ）で示される化合物が３−メチル−１−フェニル−２−ピラゾリン−５−オンである請求項１に記載の生着増強剤又は増殖増強剤。
【請求項３】
移植組織が膵島細胞である請求項１又は２に記載の生着増強剤又は増殖増強剤。
【請求項４】
下記式（Ｉ）
【化２】
2008120708.tif 000009
（式中、Ｒ1は水素原子、アリール、炭素数１〜５のアルキル又は総炭素数３〜６のアルコキシカルボニルアルキルを表し、Ｒ2は、水素原子、アリールオキシ、アリールメルカプト、炭素数１〜５のアルキル又は炭素数１〜３のヒドロキシアルキルを表し、あるいは、Ｒ1及びＲ2は、共同して炭素数３〜５のアルキレンを表し、Ｒ3は水素原子、炭素数１〜５のアルキル、炭素数５〜７のシクロアルキル、炭素数１〜３のヒドロキシアルキル、ベンジル、ナフチル又はフェニル、又は炭素数１〜５のアルコキシ、炭素数１〜３のヒドロキシアルキル、総炭素数２〜５のアルコキシカルボニル、炭素数１〜３のアルキルメルカプト、炭素数１〜４のアルキルアミノ、総炭素数２〜８のジアルキルアミノ、ハロゲン原子、トリフルオロメチル、カルボキシル、シアノ、水酸基、ニトロ、アミノ、及びアセトアミドからなる群から選ばれる同一若しくは異なる１〜３個の置換基で置換されたフェニルを表す。）で表されるピラゾロン誘導体若しくはその生理的に許容される塩、又はそれらの水和物若しくは溶媒和物の有効量をヒトを含む哺乳動物に投与する工程を含む、組織移植における移植組織の生着増強方法又は増殖増強方法。
【請求項５】
式（Ｉ）で示される化合物が３−メチル−１−フェニル−２−ピラゾリン−５−オンである請求項４に記載の生着増強方法又は増殖増強方法。
【請求項６】
移植組織が膵島細胞である請求項４又は５に記載の生着増強方法又は増殖増強方法。
【請求項７】
組織移植における移植組織の生着増強剤又は増殖増強剤の製造のための、下記式（Ｉ）
【化３】
2008120708.tif 000010
（式中、Ｒ1は水素原子、アリール、炭素数１〜５のアルキル又は総炭素数３〜６のアルコキシカルボニルアルキルを表し、Ｒ2は、水素原子、アリールオキシ、アリールメルカプト、炭素数１〜５のアルキル又は炭素数１〜３のヒドロキシアルキルを表し、あるいは、Ｒ1及びＲ2は、共同して炭素数３〜５のアルキレンを表し、Ｒ3は水素原子、炭素数１〜５のアルキル、炭素数５〜７のシクロアルキル、炭素数１〜３のヒドロキシアルキル、ベンジル、ナフチル又はフェニル、又は炭素数１〜５のアルコキシ、炭素数１〜３のヒドロキシアルキル、総炭素数２〜５のアルコキシカルボニル、炭素数１〜３のアルキルメルカプト、炭素数１〜４のアルキルアミノ、総炭素数２〜８のジアルキルアミノ、ハロゲン原子、トリフルオロメチル、カルボキシル、シアノ、水酸基、ニトロ、アミノ、及びアセトアミドからなる群から選ばれる同一若しくは異なる１〜３個の置換基で置換されたフェニルを表す。）で表されるピラゾロン誘導体若しくはその生理的に許容される塩、又はそれらの水和物若しくは溶媒和物の使用。
【請求項８】
式（Ｉ）で示される化合物が３−メチル−１−フェニル−２−ピラゾリン−５−オンである請求項７に記載の使用。
【請求項９】
移植組織が膵島細胞である請求項７又は８に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、組織移植における、移植した組織の生着増強又は増殖増強のための医薬及び方法に関する。より具体的には、膵島移植における膵島細胞の生着増強又は増殖増強のための医薬及び方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
糖尿病とは、主に膵臓のインスリン産生能低下に起因するインスリンの絶対的又は相対的不足によって引き起こされる、持続的な高血糖状態である。原因としては、遺伝的因子及び環境的因子の両方が挙げられる。多因子遺伝疾患であり、現在多数の候補遺伝子が報告されている。環境因子としては、肥満、過食、ストレス、薬剤、ウイルス感染などが挙げられる。自己免疫的機序によって発症する１型糖尿病と、それ以外の原因により２型糖尿病との２種類に大別され、後者がその大半を占めている。糖尿病は、病状の進行又は長期の罹病期間によって、糖尿病性網膜症、糖尿病性腎症、糖尿病性精神障害などの合併症を併発する。【０００３】
糖尿病の治療としては、主に、食事療法又は運動療法を中心として、各種経口血糖降下薬（α−グルコシダーゼ阻害薬、スルホニル尿素阻害薬、スルホニル尿素剤、ビグアナイド剤、インスリン感受性改善薬など）又はインスリン療法が行われている。しかしながら、これらは糖尿病の原因である膵臓のインスリン産生能低下に対してアプローチするものではなく、根治的な治療ではない。日本における糖尿病患者数は７００万人、潜在的な患者数は１９００万人にのぼると推定され、かつその数は現在急増している。これらの状況から、根治的治療の確立が求められている。【０００４】
膵島移植は、その根治的治療として２０００年にＥｄｍｏｎｔｏｎグループが画期的な成績を報告して以来、その機運が一気に加速している。日本でも２００４年の膵島移植第一例目以来、２年間で３０回以上の膵島移植が実施され、良好な成績が報告されている。年々膵島移植症例数は増加しており、今後の発展が期待されている。【０００５】
膵島移植における現状の大きな問題点の１つは、一人のレシピエントに対して一人のドナーからの膵島の移植では十分な効果を得ることができない点にある。したがって、数人のドナーから移植を繰り返し実施することが必要とされる。それによって深刻なドナー不足に陥っており、根治的治療である膵島移植が満足に実施されていない。【０００６】
特許文献１は、膵島移植に十分な量の膵島細胞をインビトロで増殖させるための培養法を開示している。しかしながら、特許文献１に開示される発明では、インビトロでの培養の過程で異物混入の可能性が高いという問題が当然に存在し、残念ながらヒトにおける実用化には程遠い。【０００７】
一方、下記式（Ｉ）
【化１】
2008120708.tif 000003
（式中、Ｒ1は水素原子、アリール、炭素数１〜５のアルキル又は総炭素数３〜６のアルコキシカルボニルアルキルを表し、Ｒ2は、水素原子、アリールオキシ、アリールメルカプト、炭素数１〜５のアルキル又は炭素数１〜３のヒドロキシアルキルを表し、あるいは、Ｒ1及びＲ2は、共同して炭素数３〜５のアルキレンを表し、Ｒ3は水素原子、炭素数１〜５のアルキル、炭素数５〜７のシクロアルキル、炭素数１〜３のヒドロキシアルキル、ベンジル、ナフチル又はフェニル、又は炭素数１〜５のアルコキシ、炭素数１〜３のヒドロキシアルキル、総炭素数２〜５のアルコキシカルボニル、炭素数１〜３のアルキルメルカプト、炭素数１〜４のアルキルアミノ、総炭素数２〜８のジアルキルアミノ、ハロゲン原子、トリフルオロメチル、カルボキシル、シアノ、水酸基、ニトロ、アミノ、及びアセトアミドからなる群から選ばれる同一若しくは異なる１〜３個の置換基で置換されたフェニルを表す。）で表されるピラゾロン誘導体については、医薬の用途として、脳機能正常化作用（特許文献２；特公平５−３１５２３号公報）、過酸化脂質生成抑制作用（特許文献３；特公平５−３５１２８号公報、例１の化合物）、抗潰瘍作用（特許文献４；特開平３−２１５４２５号公報）が知られている。しかしながら、これらの各刊行物には、この化合物が組織移植における、移植した組織の生着増強作用又は増殖増強作用を有すること、示唆ないし教示されていない。【０００８】
【特許文献１】特開２０００−１３９４５５号公報
【特許文献２】特公平５−３１５２３号公報
【特許文献３】特公平５−３５１２８号公報
【特許文献４】特開平３−２１５４２５号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
一人のレシピエントに対して一人のドナーで十分であるような膵島移植法を確立して、現在の膵島移植の大きな問題点の１つであるドナー不足を解消するために、移植膵島細胞の生体内での生着率を増強するための薬剤又は増殖を増強するための薬剤及び方法を提供することが、本発明の課題である。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明者らは、前記式（Ｉ）で示される化合物が、生体内における移植膵島細胞の生着率及び／又は増殖を増強することを発見し、上記課題を解決した。以下の実施例に示すように、前記式（Ｉ）で示される化合物が移植膵島細胞の生体内での生着率を増強する又は増殖を増強することに起因して、１個体のドナー由来の膵島細胞による膵島移植によって、１個体のレシピエントにおける高血糖状態を有意に改善することが実証された。以上のことから、本発明は、現在の膵島移植の大きな問題点の１つであるドナー不足を解消し、より効率的な糖尿病（１型糖尿病及び２型糖尿病を含む）の処置のための薬学的組成物を提供する。本発明によって、１型糖尿病及び２型糖尿病を含む全ての糖尿病のための、画期的な治療が提供される。【００１１】
すなわち、本発明の要旨は以下の通りである。
（１）下記式（Ｉ）
【化２】
2008120708.tif 000004
（式中、Ｒ1は水素原子、アリール、炭素数１〜５のアルキル又は総炭素数３〜６のアルコキシカルボニルアルキルを表し、Ｒ2は、水素原子、アリールオキシ、アリールメルカプト、炭素数１〜５のアルキル又は炭素数１〜３のヒドロキシアルキルを表し、あるいは、Ｒ1及びＲ2は、共同して炭素数３〜５のアルキレンを表し、Ｒ3は水素原子、炭素数１〜５のアルキル、炭素数５〜７のシクロアルキル、炭素数１〜３のヒドロキシアルキル、ベンジル、ナフチル又はフェニル、又は炭素数１〜５のアルコキシ、炭素数１〜３のヒドロキシアルキル、総炭素数２〜５のアルコキシカルボニル、炭素数１〜３のアルキルメルカプト、炭素数１〜４のアルキルアミノ、総炭素数２〜８のジアルキルアミノ、ハロゲン原子、トリフルオロメチル、カルボキシル、シアノ、水酸基、ニトロ、アミノ、及びアセトアミドからなる群から選ばれる同一若しくは異なる１〜３個の置換基で置換されたフェニルを表す。）で表されるピラゾロン誘導体若しくはその生理的に許容される塩、又はそれらの水和物若しくは溶媒和物を有効成分とする組織移植における移植組織の生着増強剤又は増殖増強剤。【００１２】
（２）式（Ｉ）で示される化合物が３−メチル−１−フェニル−２−ピラゾリン−５−オンである請求項１に記載の生着増強剤又は増殖増強剤。
（３）移植組織が膵島細胞である請求項１又は２に記載の生着増強剤又は増殖増強剤。
（４）下記式（Ｉ）
【化３】
2008120708.tif 000005
（式中、Ｒ1は水素原子、アリール、炭素数１〜５のアルキル又は総炭素数３〜６のアルコキシカルボニルアルキルを表し、Ｒ2は、水素原子、アリールオキシ、アリールメルカプト、炭素数１〜５のアルキル又は炭素数１〜３のヒドロキシアルキルを表し、あるいは、Ｒ1及びＲ2は、共同して炭素数３〜５のアルキレンを表し、Ｒ3は水素原子、炭素数１〜５のアルキル、炭素数５〜７のシクロアルキル、炭素数１〜３のヒドロキシアルキル、ベンジル、ナフチル又はフェニル、又は炭素数１〜５のアルコキシ、炭素数１〜３のヒドロキシアルキル、総炭素数２〜５のアルコキシカルボニル、炭素数１〜３のアルキルメルカプト、炭素数１〜４のアルキルアミノ、総炭素数２〜８のジアルキルアミノ、ハロゲン原子、トリフルオロメチル、カルボキシル、シアノ、水酸基、ニトロ、アミノ、及びアセトアミドからなる群から選ばれる同一若しくは異なる１〜３個の置換基で置換されたフェニルを表す。）で表されるピラゾロン誘導体若しくはその生理的に許容される塩、又はそれらの水和物若しくは溶媒和物の有効量をヒトを含む哺乳動物に投与する工程を含む、組織移植における移植組織の生着増強方法又は増殖増強方法。
（５）式（Ｉ）で示される化合物が３−メチル−１−フェニル−２−ピラゾリン−５−オンである請求項４に記載の生着増強方法又は増殖増強方法。【００１３】
（６）移植組織が膵島細胞である請求項４又は５に記載の生着増強方法又は増殖増強方法。
（７）組織移植における移植組織の生着増強剤又は増殖増強剤の製造のための、下記式（Ｉ）
【化４】
2008120708.tif 000006
（式中、Ｒ1は水素原子、アリール、炭素数１〜５のアルキル又は総炭素数３〜６のアルコキシカルボニルアルキルを表し、Ｒ2は、水素原子、アリールオキシ、アリールメルカプト、炭素数１〜５のアルキル又は炭素数１〜３のヒドロキシアルキルを表し、あるいは、Ｒ1及びＲ2は、共同して炭素数３〜５のアルキレンを表し、Ｒ3は水素原子、炭素数１〜５のアルキル、炭素数５〜７のシクロアルキル、炭素数１〜３のヒドロキシアルキル、ベンジル、ナフチル又はフェニル、又は炭素数１〜５のアルコキシ、炭素数１〜３のヒドロキシアルキル、総炭素数２〜５のアルコキシカルボニル、炭素数１〜３のアルキルメルカプト、炭素数１〜４のアルキルアミノ、総炭素数２〜８のジアルキルアミノ、ハロゲン原子、トリフルオロメチル、カルボキシル、シアノ、水酸基、ニトロ、アミノ、及びアセトアミドからなる群から選ばれる同一若しくは異なる１〜３個の置換基で置換されたフェニルを表す。）で表されるピラゾロン誘導体若しくはその生理的に許容される塩、又はそれらの水和物若しくは溶媒和物の使用。【００１４】
（８）式（Ｉ）で示される化合物が３−メチル−１−フェニル−２−ピラゾリン−５−オンである請求項７に記載の使用。
（９）移植組織が膵島細胞である請求項７又は８に記載の使用。【００１５】
本発明の組織移植における移植組織の生着増強剤又は増殖増強剤に含有される前記式（Ｉ）のピラゾロン誘導体は、合目的な任意の方法により合成することができ、好ましい合成方法の例としては特開昭６２−１０８８１４号公報に記載されている方法が挙げられる。【００１６】
本発明の組織移植における移植組織の生着増強又は増殖増強のために用いる有効成分としては、遊離形態の前記式（Ｉ）のピラゾロン誘導体を用いてもよいが、任意の水和物又は溶媒和物、あるいは、前記式（Ｉ）のピラゾロン誘導体又はその任意の水和物若しくは溶媒和物の生理的に許容される塩を用いることもできる。なお、該ピラゾロン誘導体には特公平５−３１５２３号公報第５欄上段の化学構造式に示されるような互変異性体（下式（Ｉ’）又は（Ｉ’’））が存在するが、本発明の医薬の有効成分には、これらの異性体のすべてが包含されることはいうまでもない。【００１７】
【化５】
2008120708.tif 000007
【００１８】
前記式（Ｉ）において、Ｒ1の定義におけるアリール基としては、フェニル基並びにメチル基、ブチル基、メトキシ基、ブトキシ基、塩素原子及び水酸基等の置換基で置換されたフェニル基等が挙げられる。
Ｒ1、Ｒ2及びＲ3の定義における炭素数１〜５のアルキル基としては、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、イソブチル基、sec−ブチル基、tert−ブチル基、ペンチル基等が挙げられる。【００１９】
Ｒ1の定義における総炭素数３〜６のアルコキシカルボニルアルキル基としては、メトキシカルボニルメチル基、エトキシカルボニルメチル基、プロポキシカルボニルメチル基、メトキシカルボニルエチル基、メトキシカルボニルプロピル基等が挙げられる。
Ｒ2の定義におけるアリールオキシ基としては、フエノキシ基、ｐ−メチルフエノキシ基、ｐ−メトキシフエノキシ基、ｐ−クロロフエノキシ基、ｐ−ヒドロキシフエノキシ基等が挙げられ、アリールメルカプト基としては、フェニルメルカプト基、ｐ−メチルフェニルメルカプト基、ｐ−メトキシフェニルメルカプト基、ｐ−クロロフェニルメルカプト基、ｐ−ヒドロキシフェニルメルカプト基等が挙げられる。【００２０】
Ｒ1及びＲ2の定義における炭素数３〜５のアルキレン基としては、トリメチレン基、テトラメチレン基、ペンタメチレン基、メチルトリメチレン基、エチルトリメチレン基、ジメチルトリメチレン基、メチルテトラメチレン基等が挙げられる。
Ｒ2及びＲ3の定義における炭素数１〜３のヒドロキシアルキル基としては、ヒドロキシメチル基、２−ヒドロキシエチル基、３−ヒドロキシプロピル基等が挙げられる。Ｒ3の定義における炭素数５〜７のシクロアルキル基としては、シクロペンチル基、シクロヘキシル基、シクロヘプチル基等が挙げられる。【００２１】
Ｒ3の定義において、フェニル基の置換基における炭素数１〜５のアルコキシ基としては、メトキシ基、エトキシ基、プロポキシ基、イソプロポキシ基、ブトキシ基、ペンチルオキシ基等が挙げられ、総炭素数２〜５のアルコキシカルボニル基としては、メトキシカルボニル基、エトキシカルボニル基、プロポキシカルボニル基、ブトキシカルボニル基等が挙げられ、炭素数１〜３のアルキルメルカプト基としては、メチルメルカプト基、エチルメルカプト基、プロピルメルカプト基等が挙げられ、炭素数１〜４のアルキルアミノ基としては、メチルアミノ基、エチルアミノ基、プロピルアミノ基、ブチルアミノ基等が挙げられ、総炭素数２〜８のジアルキルアミノ基としては、ジメチルアミノ基、ジエチルアミノ基、ジプロピルアミノ基、ジブチルアミノ基等が挙げられる。【００２２】
本発明で用いる式（Ｉ）の化合物の好ましい例としては、例えば、３−メチル−１−フェニル−２−ピラゾリン−５−オン若しくはその生理的に許容される塩、又はそれらの水和物若しくは溶媒和物が挙げられる。【００２３】
前記式（Ｉ）のピラゾロン誘導体の生理的に許容される塩としては、酸付加塩又は塩基付加塩を用いることができる。例えば、塩酸塩、硫酸塩、臭化水素酸塩、若しくはリン酸塩などの鉱酸塩；メタンスルホン酸塩、パラトルエンスルホン酸塩、酢酸塩、シュウ酸塩、クエン酸塩、リンゴ酸塩、若しくはフマル酸塩などの有機酸塩；ナトリウム塩、カリウム塩、若しくはマグネシウム塩などの金属塩；アンモニウム塩；又は、エタノールアミン若しくは２−アミノ−２−メチル−１−プロパノールなどの有機アミン塩などを用いることができるが、生理的に許容されるものであれば塩の種類は特に限定されることはない。【００２４】
本発明において、組織移植における移植組織の生着増強又は増殖増強のために用いる有効成分である前記式（Ｉ）の化合物若しくはその生理的に許容される塩、又はそれらの水和物若しくは溶媒和物の１種又は２種以上をそのまま患者に投与してもよいが、好ましくは、有効成分と薬理学的及び製剤学的に許容しうる添加物を加え、当業者に周知な形態の製剤として提供されるべきである。【００２５】
薬理学的及び製剤学的に許容しうる添加物としては、例えば、賦形剤、崩壊剤ないし崩壊補助剤、結合剤、滑沢剤、コーティング剤、色素、希釈剤、基剤、溶解剤ないし溶解補助剤、等張化剤、ｐＨ調節剤、安定化剤、噴射剤、及び粘着剤等を用いることができる。経口投与に適する製剤の例としては、例えば、錠剤、カプセル剤、散剤、細粒剤、顆粒剤、液剤、又はシロップ剤等を挙げることができ、非経口投与に適する製剤としては、例えば、注射剤、点滴剤、又は坐剤などを挙げることができる。【００２６】
経口投与に適する製剤には、添加物として、例えば、ブドウ糖、乳糖、Ｄ−マンニトール、デンプン、又は結晶セルロース等の賦形剤；カルボキシメチルセルロース、デンプン、又はカルボキシメチルセルロースカルシウム等の崩壊剤又は崩壊補助剤；ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、又はゼラチン等の結合剤；ステアリン酸マグネシウム又はタルク等の滑沢剤；ヒドロキシプロピルメチルセルロース、白糖、ポリエチレングリコール又は酸化チタン等のコーティング剤；ワセリン、流動パラフィン、ポリエチレングリコール、ゼラチン、カオリン、グリセリン、精製水、又はハードファット等の基剤を用いることができる。【００２７】
注射あるいは点滴用に適する製剤には、注射用蒸留水、生理食塩水、プロピレングリコール等の水性あるいは用時溶解型注射剤を構成しうる溶解剤又は溶解補助剤；ブドウ糖、塩化ナトリウム、Ｄ−マンニトール、グリセリン等の等張化剤；無機酸、有機酸、無機塩基又は有機塩基等のｐＨ調節剤等の製剤用添加物を用いることができる。【００２８】
なお、上記の式（Ｉ）の化合物を有効成分とする脳保護剤（点滴剤）が、すでに臨床において使用されているので（一般名「エダラボン」、商品名「ラジカット（登録商標）」：田辺三菱製薬株式会社製造・販売）、本発明の組織移植における移植組織の生着増強又は増殖増強に用いる製剤として、上記市販製剤をそのまま用いることができる。
上記の式（Ｉ）の化合物を投与するに際しては、例えば免疫抑制剤等の他の薬剤と共に投与することも可能である。【００２９】
本発明の医薬は、例えば、膵島移植の直後、６時間後、１２時間後、２４時間後、３６時間後、４８時間後またはそれ以上後などに、計１回、計２回、計３回、計４回またはそれ以上の回数、投与され得る。好ましくは、膵島移植の直後およびその２４時間後の計２回投与されるか、または膵島移植の直後、その１２時間後およびその２４時間後の計３回投与される。最も好ましくは、本発明の薬学的組成物は、膵島移植の直後およびその２４時間後の計２回投与される。本明細書中において、膵島移植の「直後」とは、膵島移植手術中（閉腹まで）を含む。【００３０】
本発明の医薬の投与経路は特に限定されず、経口的又は非経口的に投与することができる。
本発明の医薬の投与量は患者の年齢や状態などの条件に応じて適宜選択可能であるが、一般的には、成人に対して０．１〜１００ｍｇ／ｋｇ程度を注射又は点滴により投与するか、０．１〜１００ｍｇ／ｋｇ程度を経口的に投与することが好ましい。具体的には、被験体の体重１ｋｇ当たり、約０．１ｍｇ／日〜約１００ｍｇ／日であり、より好ましくは、約０．１ｍｇ／日〜約５０ｍｇ／日であり、さらにより好ましくは、約１ｍｇ／日〜約１０ｍｇ／日であり、最も好ましくは、約３ｍｇ／日である。注射により投与する場合には、例えば、特開昭６３−１３２８３３号公報に記載された注射剤などを用いることが好適である。【００３１】
本明細書において使用される「膵島細胞」とは、ランゲルハンス島ともいわれ、膵臓の内分泌機能を司る細胞集合体をいう。膵島細胞は、膵Ａ細胞、膵Ｂ細胞及び膵Ｄ細胞の３種類の細胞から構成される。細胞集団を構成する主要な細胞は、膵Ｂ細胞であり、膵臓の中心部を占めている。この膵Ｂ細胞によってインスリンが分泌される。１型糖尿病では、発症から間もない時期にリンパ球を主体とする細胞浸潤が認められる。やがて膵Ｂ細胞が選択的に消失するとともに、膵島はその容積が減少し、膵Ａ細胞が主体となる。膵島のインスリン分泌には予備能があり、９０〜９５％の膵Ａ細胞が消失した場合に１型糖尿病が発症する。２型糖尿病では膵島に形態学的な変化は基本的には認められず、ただ膵島によるインスリン分泌能が低下する。【００３２】
本明細書において使用される「移植」とは、自己移植、同系移植及び同種移植を包含する。本明細書において、自己移植とは、自家移植ともいい、同一個体間で行われる移植をいう。遺伝的背景が全く同一であるため、移植片拒絶反応は起こらない。本明細書において、同系移植とは、移植片のドナーとレシピエントとが異なる個体に属するが、遺伝的背景が同一である場合の移植をいう。具体的には、一卵性双生児又は純系（同系）動物間の移植が挙げられる。この移植においても、移植片拒絶反応は起こらない。本明細書において、同種移植とは、臨床医学的な血縁間又は非血縁間での移植である。ドナーの移植片の中にはレシピエントには存在しない抗原が存在するため、免疫抑制的処置がなければレシピエントの免疫系が応答し、数日〜数週のうちに移植片を拒絶及び排除する。本発明の一実施形態において、膵島移植は自己移植で行われる。本発明の別の実施形態において、膵島移植は同系移植で行われる。本発明のなお別の実施形態において、膵島移植は同種移植で行われる。
【発明の効果】
【００３３】
組織移植における移植組織の生体内での生着増強剤又は増殖増強剤を提供する。これによって、一人のレシピエントに対して一人のドナーで十分であるような組織移植法を確立して、現在の大きな問題点の１つであるドナー不足を解消することが可能である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３４】
以下、本発明を実施例によりさらに具体的に説明するが、本発明の範囲は下記の実施例に限定されることはない。
【実施例】
【００３５】
（糖尿病ラットの作製）
（１）レシピエントラットはＦ３４４  ラット６〜８週齢オス１００〜１５０ｇ程度を使用した。ラットをエーテル麻酔下でＳｔｒｅｐｔｏｚｏｔｏｃｉｎ（Ｓｉｇｍａ）７０ｍｇ／ｋｇを腹腔内注入し、糖尿病ラットを作製した。
（２）ＳＴＺ注入２日目以降に血糖を測定し、連続４００ｍｇ／ｄｌ以上をもって糖尿病ラットであることを確認し、レシピエントラットとした。【００３６】
（膵島分離）
（１）ドナーラットはＦ３４４  ラット８〜１２週齢オス１５０〜２００ｇ程度を使用した。
（２）コラゲナーゼＳ−１／１０ｍｇ  をＨＢＳＳ（１％ＢＳＡ）２０ｍｌに溶解しコラゲナーゼＨＢＳＳ液（１００Ｕ／ｍｌ以上）を作製し氷中に保存した。１匹につき２０ｍｌを必要とする。
（３）ラットをエーテル麻酔下に断頸、瀉血し、開腹して腹腔内臓器を全摘出した。
（４）総胆管を肝管合流部付近で露出した。２４Ｇエラスターを左肝管からカニュレーションし（膵胆管合流部が上流のことがあるため深く挿入しない）、４−０絹糸で結さつ固定した。総胆管十二指腸側を４−０絹糸で結さつした。
（５）２４ＧエラスターからコラゲナーゼＨＢＳＳ液１５ｍｌをゆっくり注入し、膵臓を尾部まで充分に膨張させた。
（６）膨潤した膵臓を摘出した。腸液と膵液が酵素反応するため、腸管を傷つけないように注意しつつ、付着している脂肪組織をできるだけ除去した。
（７）残りのコラゲナーゼＨＢＳＳ液５ｍｌと混和し、氷上の５０ｍｌ試験管に移した。
（８）膵組織を含むコラゲナーゼＨＢＳＳ液にＣＯ2ガスを加えて３７℃高温槽に入れ、２０分間インキュベートし、酵素消化させた。
（９）２０分後、試験管を氷上に移し酵素消化を止め、氷冷ＨＢＳＳ４０ｍｌで混和し、優しくピペッティング撹拌した。
（１０）遠心分離（２０００ｒｐｍ，１分，４℃）し、上清をデカント除去した。
（１１）氷冷ＨＢＳＳ４０ｍｌを加え、ピペッティング撹拌した。
（１２）遠心分離（２０００ｒｐｍ，１分，４℃）し、上清を除去し、氷冷ＨＢＳＳ４０ｍｌを加えてピペッティング撹拌し、金属メッシュを通して５０ｍｌ試験管に移した。【００３７】
（１３）遠心分離（２０００ｒｐｍ，１分，４℃）、上清を除去し、水分を充分に拭き取った。
（１４）沈殿した組織に常温のＦｉｃｏｌｌ−Ｃｏｎｒａｙ・Ａ液４ｍｌを加え、ピペッティング撹拌し、１５ｍｌ試験管に移した。
（１５）Ｆｉｃｏｌｌ−Ｃｏｎｒａｙ・Ｃ液３ｍｌとＤ液２ｍｌを順に丁寧に重層した。
（１６）遠心分離（２２００ｒｐｍ，１０分，１５℃）した。
（１７）Ｂ液とＣ液の間層に膵島が集まるが、Ｂ液とＣ液の２層をすべて抽出した。
（１８）氷冷ＲＰＭＩ／１０％ＦＢＳ１０ｍｌで撹拌し、遠心分離（２０００ｒｐｍ，１分，４℃）した。
（１９）上清を除去し、氷冷ＲＰＭＩ／１０％ＦＢＳ１０ｍｌで撹拌し、遠心分離（２０００ｒｐｍ，１分，４℃）した。
（２０）上清を除去し、ＲＰＭＩ／１０％ＦＢＳ１０ｍｌで撹拌し、黒シャーレに移した。
（２１）黒シャーレに市販品のラジカット（登録商標）注３０ｍｇの０．１１６ｍｌ（エダラボンとして１００μｍｏｌ）を入れた。
（２２）シャーレを回転させながら揺らして膵島を中央に集めながら、膵島が沈殿するのを待った。
（２３）中央に沈殿した膵島を、ピペットでカウントしながら回収した。
（２４）再び膵島を中央に集め、回収した。ゆっくり時間をかけて膵島が沈殿するのを待ち、３回程で回収した。ドナーラット１匹で約２００〜２５０個の膵島が回収できた。【００３８】
（実施例１：膵島移植及びエダラボン投与による、糖尿病ラット血糖値の推移）
（膵島移植）
上述の方法で調製した１０匹糖尿病ラットを、ネンブタール２０ｍｇ／ｋｇ（１０倍希釈４ｍｇ／ｋｇＢＷ）腹腔内麻酔下に開腹し、分離した膵島約２００〜２５０個（ドナーラット１匹分）を門脈から２６Ｇ針で注入した。タココンブ綿棒で圧迫止血した。【００３９】
（エダラボン投与）
止血確認後、尾静脈より、市販品のラジカット（登録商標）注３０ｍｇを用いて、エダラボン３ｍｇ／ｋｇを全身投与したのち、閉腹した。移植２４時間後に、尾静脈より、市販品のラジカット（登録商標）注３０ｍｇを用いて、エダラボン３ｍｇ／ｋｇを全身投与した。このラットの血糖値の推移を図１に示す。同量の一匹分のラットの膵島細胞を移植し、エダラボンを投与しなかったコントロールラットにおける血糖値の推移を図２に示す。図１と図２との比較から、移植直後及び移植２４時間後にエダラボンを投与したラットでは、顕著に血糖値が低下したのに対して、コントロールラットでは血糖値の低下は見られなかった。この結果から、本発明の医薬を使用することで、１個体のドナー由来の膵島細胞による膵島移植によって１個体のレシピエントにおける高血糖状態を改善し得ることが実証された。この結果は、エダラボンがレシピエントの体内において、膵島細胞の生着又は増殖を増強させているものと考えられる。
また、エダラボンには血糖上昇抑制作用が認められている（日本公開特許公報  特開平３−２１５４２６号公報）が、ラットに３ｍｇ／ｋｇのエダラボンを投与したときの血中濃度半減期は１時間未満であり（薬理と治療  vol.25 Supplement 1997 pp.255-281）、投与翌日にはエダラボン自体の血糖上昇抑制効果は消失するものと考えられる。一方で、図１の結果によれば、移植後７日以降（２回目のエダラボン投与後６日以降）でも血糖値はコントロールラットに比べて低値を示している。よって、今回の結果はエダラボン自体の血糖上昇抑制効果によるものではなく、エダラボンが膵島細胞の生着又は増殖を増強させた結果として高血糖状態を改善しているものと考えられる。
【図面の簡単な説明】
【００４０】
【図１】図１は、１匹分の膵島細胞を移植し、移植直後及び移植から２４時間後に３ｍｇのエダラボンを投与した糖尿病ラットにおける、血糖値の推移を示す。
【図２】図２は、１匹分の膵島細胞を移植した糖尿病ラットにおける血糖値の推移を示す。
【図１】
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【図２】
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【国際調査報告】
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