(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
容器に収容されている、ゲラニルゲラニルアセトンを含む網膜疾患の予防、改善、又は治療用眼粘膜適用剤。
【請求項２】
眼粘膜適用剤が、点眼剤、洗眼剤、コンタクトレンズ装着液、又は眼軟膏である請求項１に記載の剤。
【請求項３】
網膜疾患が、緑内障、網膜色素変性、加齢黄斑変性、糖尿病性網膜症、網膜剥離、糖尿病性黄斑症、高血圧性網膜症、網膜血管閉塞、網膜動脈硬化症、網膜裂孔、網膜円孔、黄斑円孔、眼底出血、後部硝子体剥離、色素性傍静脈網脈絡膜萎縮、脳回状網脈絡膜萎縮、コロイデレミア、クリスタリン網膜症、白点状網膜症、錐体ジストロフィー、中心性輪紋状脈絡膜ジストロフィー、ドインハチの巣状網膜ジストロフィー、卵黄状黄斑ジストロフィー、嚢腫状組織黄斑浮腫、オカルト黄斑ジストロフィー、スターガルト病、網膜分離症、中心性しょう液性網脈絡膜症、脊椎小脳変性症7型、家族性滲出性硝子体網膜症、Ｓ錐
体増強症候群、網膜色素線条、常染色体優性視神経萎縮、常染色体優性ドルーゼン、急性帯状潜在性網膜外層症、癌関連網膜症、光損傷、及び虚血性網膜症からなる群より選ばれる少なくとも１種の疾患である請求項１又は２に記載の剤。
【請求項４】
ゲラニルゲラニルアセトンを、製剤の全量に対して、０．００００１〜１０重量％含む請求項１〜３の何れかに記載の剤。
【請求項５】
水性組成物又は油性組成物である請求項１〜４の何れかに記載の剤。
【請求項６】
液体状、流動状、ゲル状、又は半固形状である請求項１〜５の何れかに記載の剤。
【請求項７】
下記(a)及び／又は(b)を満たす部分を有する容器に収容されている請求項１〜６の何れかに記載の剤。
(a)  波長２４５〜２５５ｎｍの光の透過率の平均値が３５％以下である
(b)  波長３００〜３３０ｎｍの光の透過率の平均値が５０％以下である
【請求項８】
上記(a)及び(b)を満たす部分を有する容器に収容されている請求項７に記載の剤。
【請求項９】
容器に収容されている、ゲラニルゲラニルアセトンを含む網膜細胞保護用眼粘膜適用剤。
【請求項１０】
眼粘膜適用剤が、点眼剤、洗眼剤、コンタクトレンズ装着液、又は眼軟膏である請求項９に記載の剤。
【請求項１１】
網膜細胞が、網膜神経節細胞、アマクリン細胞、水平細胞、ミュラーグリア細胞、双極細胞、網膜視細胞、及び網膜色素上皮細胞からなる群より選ばれる少なくとも１種の細胞である請求項９または１０に記載の剤。
【請求項１２】
ゲラニルゲラニルアセトンを、製剤の全量に対して、０．００００１〜１０重量％含む請求項９〜１１の何れかに記載の剤。
【請求項１３】
水性組成物又は油性組成物である請求項９〜１２の何れかに記載の剤。
【請求項１４】
液体状、流動状、ゲル状、又は半固形状である請求項９〜１３の何れかに記載の剤。
【請求項１５】
下記(a)及び／又は(b)を満たす部分を有する容器に収容されている請求項９〜１４の何れかに記載の剤。
(a)  波長２４５〜２５５ｎｍの光の透過率の平均値が３５％以下である
(b)  波長３００〜３３０ｎｍの光の透過率の平均値が５０％以下である
【請求項１６】
上記(a)及び(b)を満たす部分を有する容器に収容されている請求項１５に記載の剤。
【請求項１７】
容器に収容されている、ゲラニルゲラニルアセトンを含む網膜細胞の変性、障害、又は死滅の抑制用眼粘膜適用剤。
【請求項１８】
眼粘膜適用剤が、点眼剤、洗眼剤、コンタクトレンズ装着液、又は眼軟膏である請求項１７に記載の剤。
【請求項１９】
網膜細胞が、網膜神経節細胞、アマクリン細胞、水平細胞、ミュラーグリア細胞、双極細胞、網膜視細胞、及び網膜色素上皮細胞からなる群より選ばれる少なくとも１種の細胞である請求項１７又は１８に記載の剤。
【請求項２０】
ゲラニルゲラニルアセトンを、製剤の全量に対して、０．００００１〜１０重量％含む請求項１７〜１９の何れかに記載の剤。
【請求項２１】
水性組成物又は油性組成物である請求項１７〜２０の何れかに記載の剤。
【請求項２２】
液体状、流動状、ゲル状、又は半固形状である請求項１７〜２１の何れかに記載の剤。
【請求項２３】
下記(a)及び／又は(b)を満たす部分を有する容器に収容されている請求項１７〜２２の何れかに記載の剤。
(a)  波長２４５〜２５５ｎｍの光の透過率の平均値が３５％以下である
(b)  波長３００〜３３０ｎｍの光の透過率の平均値が５０％以下である
【請求項２４】
上記(a)及び(b)を満たす部分を有する容器に収容されている請求項２３に記載の剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、網膜疾患の予防、改善、又は治療用の粘膜適用剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
ゲラニルゲラニルアセトンは、5E,9E,13Eゲラニルゲラニルアセトンと5Z,9E,13Eゲラニルゲラニルアセトンとを重量比３：２で含む混合物が、経口投与用の消化性潰瘍治療剤として広く使用されている。
【０００３】
また、シス−トランス異性体比を特定していないゲラニルゲラニルアセトン（エーザイ社）を、眼科領域で使用することも提案されている。例えば、ゲラニルゲラニルアセトンを網膜疾患の治療剤の有効成分として使用することが提案されている。
例えば、特許文献１は、糖尿病性網膜症、又は緑内障などの眼性疾患患者にゲラニルゲラニルアセトンを投与して眼組織で熱ショックタンパク質の発現又は活性を上昇させ、その眼組織に幹細胞を補充することで眼性疾患を改善する方法を教えている。
また、非特許文献１は、網膜剥離を導入した動物にゲラニルゲラニルアセトンを腹腔内投与したところ、ヒートショックタンパク質７０の発現が誘導され、視細胞のアポトーシスが有意に減少したことを教えている。
また、非特許文献２は、緑内障モデルラットにゲラニルゲラニルアセトンを腹腔内投与したところ、ヒートショックタンパク質７２の発現が誘導され、網膜神経節細胞死が減少し、視神経障害が改善されたことを教えている。
また、非特許文献３は、光照射により視細胞に損傷を与えたマウスにゲラニルゲラニルアセトンを経口投与したところ、網膜色素上皮においてチオレドキシン及びヒートショックタンパク質７２を誘導したことを教えている。また、網膜色素上皮からのチオレドキシンの放出が視細胞を維持するのに重要な役割を果たしていることを教えており、ゲラニルゲラニルアセトンが光損傷からの視細胞の保護に役立つことを示している。
また、非特許文献４は、虚血による網膜損傷を与えたマウスにゲラニルゲラニルアセトンを経口投与したところ、網膜神経の生存数が有意に増加したこと、及びゲラニルゲラニルアセトンが虚血を伴う網膜障害疾患の治療に有用であることを教えている。
また、非特許文献５は、多発性硬化症モデルマウスにゲラニルゲラニルアセトンを経口投与したところ、視覚機能を改善し、視神経の障害軸索数を減少させ、神経節の細胞数の減少を抑制したことを教えている。
【０００４】
エーザイ社から市販されているテプレノンは、5E,9E,13Eゲラニルゲラニルアセトンと5Z,9E,13Eゲラニルゲラニルアセトンとを、重量比３：２で含むものである（WO2004/047822、特開平9-169639、特許第4621326、特開2006-89393、第16改正日本薬局方、セルベックス添付文書）。従って、特許文献１及び非特許文献１〜５に記載のゲラニルゲラニルアセトンは、5E,9E,13Eゲラニルゲラニルアセトンと5Z,9E,13Eゲラニルゲラニルアセトンとを、重量比３：２で含むものである。なお、エーザイ社以外から市販されているテプレノンも、5E,9E,13Eゲラニルゲラニルアセトンと5Z,9E,13Eゲラニルゲラニルアセトンとを、重量比３：２で含むものである（例えば、試薬MSDS（202-15733）；和光純薬）。
【０００５】
また、上記各文献は、ゲラニルゲラニルアセトンを全身投与した場合の網膜疾患の改善を示唆しているに過ぎない。
【０００６】
一方、5E,9E,13Eゲラニルゲラニルアセトンと5Z,9E,13Eゲラニルゲラニルアセトンとを重量比３：２で含む混合物であるテプレノンを含む点眼剤を、ドライアイ、疲れ目、又は乾き目の予防若しくは治療剤として使用することが提案されている（特許文献２）。
また、特許文献３は、テプレノン、リン脂質、合成界面活性剤、及び水からなる澄明な点眼剤を開示している。
【０００７】
ドライアイ治療用点眼剤等の従来の点眼剤は、角膜のような前眼部への薬剤の効果を期待して製剤化されている。角膜から前房部に薬剤を移行させるに当たっては、角膜上皮のタイトジャンクションがバリアになっている。しかし、一般に、前眼部の疾患、特に角膜表面付近が治療標的となる疾患などに対しては、有効な点眼剤が多数存在する。
また、緑内障治療薬は、網膜、視神経乳頭などの後眼部が治療標的ではあるが、前房中に移行した薬剤が繊維柱帯、毛様体などの前眼部に作用することで眼圧低下作用を発揮し、間接的に後眼部に作用している。
【０００８】
点眼により薬剤を網膜のような後眼部に移行させることは、極めて困難である。これは、角膜上皮のタイトジャンクションがバリアになっていることに加えて、前房部から硝子体内及び脈絡膜への薬剤の拡散が少ないこと、網膜血管には血液網膜関門と呼ばれるバリアがあるため、結膜などから薬剤が血中に吸収されても血液中から網膜には移行し難いことなどが原因となっている。
従って、後眼部の重篤な疾患に対しては、従来、薬剤の内服、静脈注射、硝子体内注射、Ｔｅｎｏｎ嚢下注射などの複数経路で、高濃度の薬剤を後眼部の病変に移行させている。
しかし、内服の場合、眼での有効濃度を遥かに超える高濃度の薬剤が全身の血中に入るため、薬剤によっては副作用が懸念される。また、注射は患者への侵襲が大きい等の問題が懸念される。従って、後眼部の疾患に対して有効な点眼剤の開発が望まれている。(非特許文献６の1132頁左欄16-19行,1133頁左欄19-20行)
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００９】
【特許文献１】特開２００９−５０７７７０
【特許文献２】特開平８−１３３９６７
【特許文献３】特開２０００−３１９１７０
【特許文献４】特開２００９−１６７１９７
【非特許文献】
【００１０】
【非特許文献１】The American Journal of Pathology, Vol.178, No.3, March 2011, 1080-1090
【非特許文献２】Investigative Ophthalmology & Visual Science, May 2003, Vol.44, No.5, 1982-1992
【非特許文献３】The Journal of Neuroscience, March 2, 2005, 25(9), 2396-2404
【非特許文献４】Molecular vision, 2007, 13, 1601-1607
【非特許文献５】Neuroscience Letters, 462, 2009, 281-285
【非特許文献６】Advanced Drug Delivery Reviews 58(2006)1131-1135
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
本発明は、実用上十分に網膜疾患を予防、改善、又は治療できる粘膜投与剤を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明者は上記課題を解決するために研究を重ね、ゲラニルゲラニルアセトンを眼又は鼻などの粘膜に投与した場合、ゲラニルゲラニルアセトンの網膜への移行性に優れ、各種網膜疾患を効果的に予防、改善、又は治療できるという予想外の知見を得た。
また、本発明者は、製剤にゲラニルゲラニルアセトンを配合することにより、製剤の点眼容器からの滴下量、及び点鼻容器からの噴霧量のバラツキが少なくなること、さらに、噴霧による点鼻容器からの製剤の飛距離が増大することを見出した。
また、本発明者は、本発明の剤を、波長２４５〜２５５ｎｍ、及び／又は波長３００〜３３０ｎｍの光の透過が抑制された容器に収容することにより、ＧＧＡの分解が効果的に抑制されることを見出した。
【００１３】
本発明は、上記知見に基づき完成されたものであり、下記の網膜疾患の予防、改善、又は治療用粘膜適用剤を提供する。
項１．  ゲラニルゲラニルアセトンを含む網膜疾患の予防、改善、又は治療用粘膜適用剤。
項２．  粘膜適用剤が、眼科用製剤、耳鼻科用製剤、又は口腔咽頭用製剤である項１に記載の剤。
項３．  粘膜適用剤が、点眼剤、洗眼剤、コンタクトレンズ装着液、眼軟膏、点鼻剤、洗鼻剤、鼻軟膏、点耳剤、耳軟膏、口腔咽頭軟膏、又は吸入剤である項１又は２に記載の剤。
項４．  網膜疾患が、緑内障、網膜色素変性、加齢黄斑変性、糖尿病性網膜症、網膜剥離、糖尿病性黄斑症、高血圧性網膜症、網膜血管閉塞、網膜動脈硬化症、網膜裂孔、網膜円孔、黄斑円孔、眼底出血、後部硝子体剥離、色素性傍静脈網脈絡膜萎縮、脳回状網脈絡膜萎縮、コロイデレミア、クリスタリン網膜症、白点状網膜症、錐体ジストロフィー、中心性輪紋状脈絡膜ジストロフィー、ドインハチの巣状網膜ジストロフィー、卵黄状黄斑ジストロフィー、嚢腫状組織黄斑浮腫、オカルト黄斑ジストロフィー、スターガルト病、網膜分離症、中心性しょう液性網脈絡膜症、脊椎小脳変性症7型、家族性滲出性硝子体網膜症、Ｓ錐体増強症候群、網膜色素線条、常染色体優性視神経萎縮、常染色体優性ドルーゼン、急性帯状潜在性網膜外層症、癌関連網膜症、光損傷、及び虚血性網膜症からなる群より選ばれる少なくとも１種の疾患である項１〜３の何れかに記載の剤。
項５．  ゲラニルゲラニルアセトンを、製剤の全量に対して、０．００００１〜１０重量％含む項１〜４の何れかに記載の剤。
項６．  水性組成物又は油性組成物である項１〜５の何れかに記載の剤。
項７．  液体状、流動状、ゲル状、又は半固形状である項１〜６の何れかに記載の剤。
項８．  下記(a)又は(b)を満たす部分を有する容器に収容されている項１〜７の何れかに記載の剤。
(a)  波長２４５〜２５５ｎｍの光の透過率の平均値が３５％以下である
(b)  波長３００〜３３０ｎｍの光の透過率の平均値が５０％以下である
項９．  上記(a)及び(b)を満たす部分を有する容器に収容されている項８に記載の剤。
項１０．  ゲラニルゲラニルアセトンを含む網膜細胞保護用粘膜適用剤。
項１１．  粘膜適用剤が、眼科用製剤、耳鼻科用製剤、又は口腔咽頭用製剤である項１０に記載の剤。
項１２．  粘膜適用剤が、点眼剤、洗眼剤、コンタクトレンズ装着液、眼軟膏、点鼻剤、洗鼻剤、鼻軟膏、点耳剤、耳軟膏、口腔咽頭軟膏、又は吸入剤である項１０又は１１に記載の剤。
項１３．  網膜細胞が、網膜神経節細胞、アマクリン細胞、水平細胞、ミュラーグリア細胞、双極細胞、網膜視細胞、及び網膜色素上皮細胞からなる群より選ばれる少なくとも１種の細胞である項１０〜１２の何れかに記載の剤。
項１４．  ゲラニルゲラニルアセトンを、製剤の全量に対して、０．００００１〜１０重量％含む項１０〜１３の何れかに記載の剤。
項１５．  水性組成物又は油性組成物である項１０〜１４の何れかに記載の剤。
項１６．  液体状、流動状、ゲル状、又は半固形状である項１０〜１５の何れかに記載の剤。
項１７．  下記(a)又は(b)を満たす部分を有する容器に収容されている項１０〜１６の何れかに記載の剤。
(a)  波長２４５〜２５５ｎｍの光の透過率の平均値が３５％以下である
(b)  波長３００〜３３０ｎｍの光の透過率の平均値が５０％以下である
項１８．  上記(a)及び(b)を満たす部分を有する容器に収容されている項１７に記載の剤。
項１９．  ゲラニルゲラニルアセトンを含む網膜細胞の変性、障害、又は死滅の抑制用粘膜適用剤。
項２０．  粘膜適用剤が、眼科用製剤、耳鼻科用製剤、又は口腔咽頭用製剤である項１９に記載の剤。
項２１．  粘膜適用剤が、点眼剤、洗眼剤、コンタクトレンズ装着液、眼軟膏、点鼻剤、洗鼻剤、鼻軟膏、点耳剤、耳軟膏、口腔咽頭軟膏、又は吸入剤である項１９又は２０に記載の剤。
項２２．  網膜細胞が、網膜神経節細胞、アマクリン細胞、水平細胞、ミュラーグリア細胞、双極細胞、網膜視細胞、及び網膜色素上皮細胞からなる群より選ばれる少なくとも１種の細胞である項１９〜２１の何れかに記載の剤。
項２３．  ゲラニルゲラニルアセトンを、製剤の全量に対して、０．００００１〜１０重量％含む項１９〜２２の何れかに記載の剤。
項２４．  水性組成物又は油性組成物である項１９〜２３の何れかに記載の剤。
項２５．  液体状、流動状、ゲル状、又は半固形状である項１９〜２４の何れかに記載の剤。
項２６．  下記(a)又は(b)を満たす部分を有する容器に収容されている項１９〜２５の何れかに記載の剤。
(a)  波長２４５〜２５５ｎｍの光の透過率の平均値が３５％以下である
(b)  波長３００〜３３０ｎｍの光の透過率の平均値が５０％以下である
項２７．  上記(a)及び(b)を満たす部分を有する容器に収容されている項２６に記載の剤。
【発明の効果】
【００１４】
一般に、点眼剤の有効成分の有効量を網膜に移行させるのは極めて困難である。例えばドライアイ治療剤のように角膜などの前眼部を標的とする薬剤は、後眼部には殆ど移行しないことが知られている。
このような状況下で、ゲラニルゲラニルアセトン（以下、「ＧＧＡ」と略称することがある）を含む本発明の粘膜適用剤は、ＧＧＡの眼や鼻などの粘膜の細胞の透過性に優れており、粘膜に適用することにより、ＧＧＡを効率よく網膜に移行させることができる。粘膜適用剤は、内服剤や注射剤などと異なり、薬剤の全身への移行が抑えられている点で優れた製剤である。
また、ＧＧＡは、広く使用され、安全性が確立されている薬物である。
従って、本発明の剤は、緑内障をはじめとする進行の遅い網膜疾患など、通常長期にわたり投薬が行われる疾患の治療に特に有用であり、且つ安全に用いることができる。
【００１５】
また、従来の網膜疾患治療剤が、例えば、房水の量等を調節することで眼圧を低下させ、眼圧上昇による網膜神経細胞死を抑制する等、間接的に網膜細胞を保護するのに対して、本発明の粘膜適用剤は、ＧＧＡが網膜細胞の細胞死を直接抑制し、また網膜神経突起の伸長を促進して細胞機能を向上させるため、網膜疾患を根本的に予防、改善、又は治療することができる。これに加えて、本発明の剤は、粘膜への適用により、網膜へのＧＧＡの移行性が極めて高いため、網膜疾患の予防、改善、また治療効果が一層優れたものとなる。従って、網膜疾患の予防、改善、又は治療剤として極めて有用なものである。
【００１６】
また、ＧＧＡは水に難溶性の化合物であるため、高濃度ＧＧＡを含む澄明な製剤は調製し難い。しかし、ＧＧＡを有効成分とする本発明の粘膜適用剤は、ＧＧＡの網膜移行性に優れるため、製剤中のＧＧＡ濃度を極端に高くする必要がなく、澄明な製剤を調製し易い。
【００１７】
また、本発明の剤は、ＧＧＡを含むことにより、点眼又は点鼻容器からの１回の点眼量又は1噴霧あたりの点鼻量のバラツキが抑制されている。点眼剤は通常１回１〜３滴点眼されるものであり、１回の使用量が少ないため、１回の点眼量のバラツキが少ないことは、点眼剤として優れた特性である。また、点鼻剤においても点眼剤と同様の理由で優れた特性であるといえる。本発明の剤は、１回の点眼量又は１噴霧あたりの点鼻量のバラツキが少ないため、所期の量を投与し易い。
【００１８】
また、本発明の剤は、ＧＧＡを含むことにより、点鼻容器から噴霧したときの飛距離が長くなっている。点鼻剤は鼻腔の奥の方に適用する方が吸収され易いため、点鼻容器からの噴霧の飛距離が長いことは、点鼻剤として優れた特性である。
【００１９】
さらに、本発明の剤を、波長２４５〜２５５ｎｍ、及び／又は波長３００〜３３０ｎｍの光の透過が抑制された容器に収容する場合に、ＧＧＡの分解が効果的に抑制される。これにより、本発明の剤の流通、保存などの管理が容易になる。
【図面の簡単な説明】
【００２０】
【図１】ＧＧＡを含む点眼剤による、ＮＭＤＡ誘発緑内障モデルラットの眼の神経保護作用を示す図である。
【図２】ＧＧＡの各種細胞の透過性を示す図である。
【図３】点鼻薬の噴霧距離の試験方法を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００２１】
以下、本発明を詳細に説明する。
本発明の網膜疾患の予防、改善、又は治療用粘膜適用剤はＧＧＡを含む。特に、ＧＧＡを有効成分として含むことができる。
ゲラニルゲラニルアセトン
(1)幾何異性体の種類
ＧＧＡには、８種類の幾何異性体が存在する。具体的には、(5E,9E,13E)-6,10,14,18-テトラメチル-5,9,13,17-ノナデカテトラエン-2-オン（5E,9E,13EＧＧＡ）（オールトランス体）、
(5Z,9E,13E)-6,10,14,18-テトラメチル-5,9,13,17-ノナデカテトラエン-2-オン（5Z,9E,13EＧＧＡ）（5Zモノシス体）、
(5Z,9Z,13E)-6,10,14,18-テトラメチル-5,9,13,17-ノナデカテトラエン-2-オン（5Z,9Z,13EＧＧＡ）（13Eモノトランス体）
(5Z,9Z,13Z)-6,10,14,18-テトラメチル-5,9,13,17-ノナデカテトラエン-2-オン（5Z,9Z,13ZＧＧＡ）（オールシス体）、
(5E,9Z,13E)-6,10,14,18-テトラメチル-5,9,13,17-ノナデカテトラエン-2-オン（5E,9Z,13EＧＧＡ）（9Zモノシス体）、
(5E,9Z,13Z)-6,10,14,18-テトラメチル-5,9,13,17-ノナデカテトラエン-2-オン（5E,9Z,13ZＧＧＡ）（5Eモノトランス体）
(5E,9E,13Z)-6,10,14,18-テトラメチル-5,9,13,17-ノナデカテトラエン-2-オン（5E,9E,13ZＧＧＡ）（13Zモノシス体）、及び
(5Z,9E,13Z)-6,10,14,18-テトラメチル-5,9,13,17-ノナデカテトラエン-2-オン（5Z,9E,13ZＧＧＡ）（9Eモノトランス体）の８種である。
なお、5Zモノシス体、9Zモノシス体、及び13Zモノシス体をまとめて、モノシス体と記載することもある。
【００２２】
本発明において、ＧＧＡの種類は限定されず、１種を単独で、又は２種以上を任意に組み合わせて使用することができる。
中でも、本願の効果をより顕著に発揮する点から、オールトランス体、オールトランス体を８０重量％以上含むＧＧＡ幾何異性体混合物（特に、オールトランス体とモノシス体（特に、5Zモノシス体）を含み、オールトランス体の比率が８０重量％以上である混合物）、モノシス体、及びモノシス体を８０重量％以上含むＧＧＡ幾何異性体混合物（特に、モノシス体（特に、5Zモノシス体）とオールトランス体を含み、モノシス体の比率が８０重量％以上である混合物）、オールトランス体と5Zモノシス体とを重量比３：２で含む汎用の幾何異性体混合物が好ましい。
【００２３】
オールトランス体を８０重量％以上含むＧＧＡ幾何異性体混合物において、オールトランス体の比率は８２重量％以上が好ましく、８４重量％以上がより好ましく、８６重量％以上がさらにより好ましく、８８重量％以上がさらにより好ましく、９０重量％以上がさらにより好ましく、９２重量％以上がさらにより好ましく、９４重量％以上がさらにより好ましく、９６重量％以上がさらにより好ましく、９８重量％以上がさらにより好ましい。上記範囲であれば、網膜疾患の予防、改善、又は治療に著効を示すようになる。
【００２４】
また、モノシス体を８０重量％以上含むＧＧＡ幾何異性体混合物において、モノシス体の比率は８２重量％以上が好ましく、８４重量％以上がより好ましく、８６重量％以上がさらにより好ましく、８８重量％以上がさらにより好ましく、９０重量％以上がさらにより好ましく、９２重量％以上がさらにより好ましく、９４重量％以上がさらにより好ましく、９６重量％以上がさらにより好ましく、９８重量％以上がさらにより好ましい。上記範囲であれば、網膜疾患の予防、改善、又は治療に著効を示すようになる。
【００２５】
(2)ＧＧＡ幾何異性体の製造方法
＜オールトランス体＞
5E,9E,13EＧＧＡ（オールトランス体）は、以下の構造式
【化１】
0005483513.tif 000002
で表される化合物である。
オールトランス体は、例えば、Ｒｉｏｎｌｏｎ社から購入できる。
また、市販テプレノン（エーザイ社、和光純薬、陽進堂）を、例えば、ｎ−ヘキサン：酢酸エチル＝９：１の移動相を用いたシリカゲルクロマトグラフィーにより5Zモノシス体と分離することによっても得られる。市販テプレノンの5Zモノシス体とオールトランス体との分離は、例えば、神戸天然物化学社に依頼して行うこともできる。
【００２６】
さらに、オールトランス体は、例えば、Bull. Korean Chem. Soc., 2009, Vol.30, No.9, 215-217に記載の方法で合成できる。同文献には、例えば、下記合成スキームに示す方法が記載されている。
【化２】
0005483513.tif 000003
具体的には、上記反応式において、ゲラニルリナロール1と化合物2とアルミニウムイソプロポキシドとを混合し、この混合物を徐々に130℃まで昇温して反応させる。反応終了後、残渣の化合物2を除去し、反応混合物を5%炭酸ナトリウムで希釈して、残渣のアルミニウムプロポキシドをクエンチングする。これにより、オールトランス体が得られる。さらに、ジクロロメタンを溶出液として用いたシリカゲルクロマトグラフィー等でオールトランス体を精製すればよい。
【００２７】
＜モノシス体＞
5Z,9E,13EＧＧＡ（5Zモノシス体）は、以下の構造式
【化３】
0005483513.tif 000004
で表される化合物である。
5Zモノシス体は、市販テプレノンの分離により得ることができる。
【００２８】
＜その他＞
その他のＧＧＡ幾何異性体も、上記方法を参考にして当業者が製造することができる。
また、ＧＧＡの幾何異性体混合物については、例えば、オールトランス体と5Zモノシス体との混合物であって、オールトランス体を６０重量％を超えて含むものは、市販テプレノンに、オールトランス体を添加することにより得ることができる。また、5Zモノシス体とオールトランス体との混合物であって、5Zモノシス体を４０重量％を超えて含むものは、市販テプレノンに、5Zモノシス体を添加することにより得ることができる。
【００２９】
製剤中のＧＧＡの含有量
粘膜適用剤中のＧＧＡの含有量は、製剤の全体量に対して、０．００００１重量％以上が好ましく、０．０００１重量％以上がより好ましく、０．００１重量％以上がさらにより好ましい。また、０．０１重量％以上であってもよく、０．１重量％以上であってもよく、１重量％以上であってもよい。
また、粘膜適用剤中のＧＧＡの含有量は、製剤の全体量に対して、９５重量％以下が好ましく、９０重量％以下がより好ましく、８０重量％以下がさらにより好ましい。
特に、製剤が、固形製剤以外の、例えば、液体状、流動状、ゲル状、又は半固形状などの製剤である場合、製剤中のＧＧＡの含有量は、製剤の全体量に対して、１０重量％以下が好ましく、５重量％以下がより好ましく、３重量％以下がさらにより好ましい。
【００３０】
粘膜適用剤中のＧＧＡの含有量としては、組成物の全体量に対して、約０．００００１〜９５重量％、約０．００００１〜９０重量％、約０．００００１〜８０重量％、約０．０００１〜９５重量％、約０．０００１〜９０重量％、約０．０００１〜８０重量％、約０．００１〜９５重量％、約０．００１〜９０重量％、約０．００１〜８０重量％、約０．０１〜９５重量％、約０．０１〜９０重量％、約０．０１〜８０重量％、約０．１〜９５重量％、約０．１〜９０重量％、約０．１〜８０重量％、約１〜９５重量％、約１〜９０重量％、約１〜８０重量％が挙げられる。
粘膜適用剤が、固形製剤以外の、例えば、液体状、流動状、ゲル状、又は半固形状などの製剤である場合のＧＧＡの含有量としては、組成物の全体量に対して、約０．００００１〜１０重量％、約０．００００１〜５重量％、約０．００００１〜３重量％、約０．０００１〜１０重量％、約０．０００１〜５重量％、約０．０００１〜３重量％、約０．００１〜１０重量％、約０．００１〜５重量％、約０．００１〜３重量％、約０．０１〜１０重量％、約０．０１〜５重量％、約０．０１〜３重量％、約０．１〜１０重量％、約０．１〜５重量％、約０．１〜３重量％、約１〜１０重量％、約１〜５重量％、約１〜３重量％が挙げられる。
【００３１】
また、粘膜適用剤が固形製剤である場合の製剤中のＧＧＡの含有量は、製剤の全量に対して、０．００１mｇ以上が好ましく、０．０１mｇ以上がより好ましく、０．１mｇ以上がさらにより好ましい。また、１０００mｇ以下が好ましく、１００mｇ以下がより好ましく、１０mｇ以下がさらにより好ましい。
固形製剤中のＧＧＡの含有量としては、製剤の全量に対して、約０．００１〜１０００mｇ、約０．００１〜１００mｇ、約０．００１〜１０mｇ、約０．０１〜１０００mｇ、約０．０１〜１００mｇ、約０．０１〜１０mｇ、約０．１〜１０００mｇ、約０．１〜１００mｇ、約０．１〜１０mｇが挙げられる。
【００３２】
上記範囲であれば、網膜疾患の予防、改善、又は治療効果が十分に得られ、また、点眼量や点鼻量のバラツキが抑制される等、本願の効果が顕著に発揮される。
【００３３】
製剤
粘膜適用剤の性状は特に限定されず、例えば、液体状、流動状、ゲル状、又は、半固形状などの何れの性状であってもよい。また、用時調製により、液体状、流動状、ゲル状、半固形状になったものも含まれる。半固形状は、例えば軟膏剤のように、力を加えることにより変形させ得る塑性を有する性状をいう。粘膜適用剤は、固体状であってもよい。
【００３４】
また、眼科用剤は、水性組成物（基剤又は担体として水性ないしは親水性のものを主に含む）であってもよく、油性組成物（基剤又は担体として油性ないしは疎水性のものを主に含む）であっても良い。
水性組成物の場合の水の含有量は、製剤の全量に対して、５０重量％以上が好ましく、７５重量％以上がより好ましく、９０重量％以上がさらにより好ましい。また、基剤又は担体が水のみからなっていてもよい。
油性組成物の場合の水の含有量は、製剤の全量に対して、５０重量％未満が好ましく、３０重量％以下がより好ましく、２０重量％以下がさらにより好ましい。
【００３５】
粘膜適用剤としては、眼に適用又は投与される眼科用製剤（点眼剤、洗眼剤、コンタクトレンズ装着液、眼軟膏（水溶性眼軟膏、油溶性眼軟膏）など）、鼻又は耳に適用又は投与される耳鼻科用製剤（点鼻剤、洗鼻剤、点耳剤、耳鼻科用軟膏（鼻軟膏、耳軟膏）など）、口腔又は咽頭に適用又は投与される口腔咽頭用製剤（口腔咽頭軟膏、吸入剤など）などが挙げられる。
中でも、患者が簡単に使用でき、網膜への移行性が良好な点で、眼科用製剤、耳鼻科用製剤が好ましく、点眼剤、点鼻剤がより好ましく、点眼剤がより好ましい。
【００３６】
粘膜適用剤は、ＧＧＡを、薬学的に許容される基剤又は担体、必要に応じて、薬学的に許容される粘膜適用剤用の添加剤、及びその他の有効成分（ＧＧＡ以外の生理活性成分又は薬理活性成分）と混合することにより、例えば第１６改正日本薬局方解説書に記載の慣用の方法で調製できる。
【００３７】
＜基剤又は担体＞
基剤又は担体として、例えば、水；極性溶媒のような水性溶媒；多価アルコール；植物油；油性基剤などが挙げられる。基剤又は担体は、１種を単独で、又は２種以上を組み合わせて使用できる。
【００３８】
＜添加剤＞
添加剤としては、例えば、界面活性剤、香料又は清涼化剤、防腐剤、殺菌剤又は抗菌剤、ｐＨ調節剤、等張化剤、キレート剤、緩衝剤、安定化剤、抗酸化剤、及び粘稠化剤などが挙げられる。
添加剤は、１種を単独で、又は２種以上を組み合わせて使用できる。
【００３９】
添加剤の具体例を以下に例示する。
界面活性剤：例えば、ポリオキシエチレン（以下、「ＰＯＥ」ということもある）−ポリオキシプロピレン（以下、「ＰＯＰ」ということもある）ブロックコポリマー(例えば、ポロクサマー４０７、ポロクサマー２３５、ポロクサマー１８８)、エチレンジアミンのＰＯＥ-ＰＯＰブロックコポリマー付加物（例えば、ポロキサミン）、ＰＯＥソルビタン脂肪酸エステル（例えば、ポリソルベート２０、ポリソルベート６０、ポリソルベート８０（ＴＯ−１０等））、ＰＯＥ硬化ヒマシ油（例えば、ＰＯＥ(６０)硬化ヒマシ油（ＨＣＯ−６０等））、ＰＯＥヒマシ油、ＰＯＥアルキルエーテル（例えば、ポリオキシエチレン（９）ラウリルエーテル、ポリオキシエチレン（２０）ポリオキシプロピレン（４）セチルエーテル）、及びステアリン酸ポリオキシルのような非イオン性界面活性剤；
グリシン型両性界面活性剤（例えば、アルキルジアミノエチルグリシン、アルキルポリアミノエチルグリシン)、及びベタイン型両性界面活性剤（例えば、ラウリルジメチルアミノ酢酸ベタイン、イミダゾリニウムベタイン）のような両性界面活性剤；並びに
アルキル４級アンモニウム塩（例えば、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム）のような陽イオン界面活性剤など。
なお、括弧内の数字は付加モル数を示す。
香料又は清涼化剤：例えば、カンフル、ボルネオール、テルペン類（これらはｄ体、ｌ体又はｄｌ体のいずれでもよい）、ハッカ水、ユーカリ油、ベルガモット油、アネトール、オイゲノール、ゲラニオール、メントール、リモネン、ハッカ油、ペパーミント油、及びローズ油のような精油など。
【００４０】
防腐剤、殺菌剤又は抗菌剤：例えば、塩化ポリドロニウム、塩酸アルキルジアミノエチルグリシン、安息香酸ナトリウム、エタノール、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、グルコン酸クロルヘキシジン、クロロブタノール、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、デヒドロ酢酸ナトリウム、パラオキシ安息香酸メチル、パラオキシ安息香酸エチル、パラオキシ安息香酸プロピル、パラオキシ安息香酸ブチル、硫酸オキシキノリン、フェネチルアルコール、ベンジルアルコール、ビグアニド化合物（具体的には、ポリヘキサメチレンビグアニド又はその塩酸塩など）、及びグローキル（ローディア社製）など。
【００４１】
ｐＨ調節剤：例えば、塩酸、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化カルシウム、水酸化マグネシウム、トリエタノールアミン、モノエタノールアミン、ジイソプロパノールアミン、硫酸、及びリン酸など。
【００４２】
等張化剤：例えば、亜硫酸水素ナトリウム、亜硫酸ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、塩化ナトリウム、塩化マグネシウム、酢酸カリウム、酢酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、炭酸ナトリウム、チオ硫酸ナトリウム、硫酸マグネシウム、リン酸水素二ナトリウム、リン酸二水素ナトリウム、リン酸二水素カリウム、グリセリン、及びプロピレングリコールなど。
【００４３】
キレート剤：例えば、アスコルビン酸、エデト酸四ナトリウム、エデト酸ナトリウム、及びクエン酸など。
【００４４】
緩衝剤：例えば、リン酸緩衝剤；クエン酸、クエン酸ナトリウムのようなクエン酸緩衝剤；酢酸、酢酸カリウム、酢酸ナトリウムのような酢酸緩衝剤；炭酸水素ナトリウム、炭酸ナトリウムのような炭酸緩衝剤；ホウ酸、ホウ砂のようなホウ酸緩衝剤；タウリン、アスパラギン酸及びその塩類（カリウム塩など）、イプシロン−アミノカプロン酸のようなアミノ酸緩衝剤など。
【００４５】
中でも、リン酸緩衝剤を用いてｐＨを調整するのが好ましく、それにより、容器壁へのＧＧＡの吸着、ひいては点眼剤中のＧＧＡの含有率の低下が抑制される。また、低温保存時の白濁が抑制され、コンタクトレンズへのＧＧＡの吸着が抑制され、熱及び光に対する安定性が良好なものとなるという効果も得られる。
【００４６】
安定化剤：トロメタモール、ナトリウムホルムアルデヒドスルホキシレート（ロンガリット）、トコフェロール、ピロ亜硫酸ナトリウム、モノエタノールアミン、モノステアリン酸アルミニウム、及びモノステアリン酸グリセリンなど。
【００４７】
抗酸化剤：アスコルビン酸、アスコルビン酸誘導体（アスコルビン酸-2-硫酸2ナトリウム、アスコルビン酸ナトリウム、アスコルビン酸-2-リン酸マグネシウム、アスコルビン酸-2-リン酸ナトリウムなど）、亜硫酸水素ナトリウム、亜硫酸ナトリウム、チオ硫酸ナトリウムなどの水溶性抗酸化剤など。
【００４８】
粘膜適用剤には、脂溶性抗酸化剤が含まれていてもよく、これにより、容器壁へのＧＧＡの吸着、ひいては粘膜適用剤中のＧＧＡの含有率の低下が抑制される。また、コンタクトレンズへのＧＧＡの吸着が抑制され、ＧＧＡの熱及び光に対する安定性も向上する。
脂溶性抗酸化剤としては、例えば、ブチルヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、ブチルヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）のようなブチル基含有フェノール；ノルジヒドログアヤレチック酸（ＮＤＧＡ）；アスコルビン酸パルミテート、アスコルビン酸ステアレート、アスコルビン酸リン酸アミノプロピル、アスコルビン酸リン酸トコフェロール、アスコルビン酸トリリン酸、アスコルビン酸リン酸パルミテートのようなアスコルビン酸エステル；α−トコフェロール、β−トコフェロール、γ−トコフェロール、δ−トコフェロールのようなトコフェロール；酢酸トコフェロール、ニコチン酸トコフェロール、コハク酸トコフェロールのようなトコフェロール誘導体；没食子酸エチル、没食子酸プロピル、没食子酸オクチル、没食子酸ドデシルのような没食子酸エステル；プロピルガラート; 3-ブチル-4-ヒドロキシキノリン-2オン；大豆油、菜種油、オリーブ油、ゴマ油のような植物油；ルテイン、アスタキサンチンのようなカロテノイド類；アントシアニン類、カテキン、タンニン、クルクミンなどのポリフェノール類；レチノール、レチノールエステル（酢酸レチノール、プロピオン酸レチノール、酪酸レチノール、オクチル酸レチノール、ラウリル酸レチノール、ステアリン酸レチノール、ミリスチン酸レチノール、オレイン酸レチノール、リノレン酸レチノール、リノール酸レチノール、パルミチン酸レチノールなど）、レチナール、レチナールエステル（酢酸レチナール、プロピオン酸レチナール、パルミチン酸レチナールなど）、レチノイン酸、レチノイン酸エステル（レチノイン酸メチル、レチノイン酸エチル、レチノイン酸レチノール、レチノイン酸トコフェロールなど）、レチノールデヒドロ体、レチナールデヒドロ体、レチノイン酸デヒドロ体、プロビタミンＡ（α-カロチン、β-カロチン、γ-カロチン、δ-カロチン、リコピン、ゼアキサンチン、β-クリプトキサンチン、エキネノンなど）、ビタミンＡなどのビタミンＡ類；ＣｏＱ１０などが挙げられる。これらの化合物は市販されている。
【００４９】
粘稠化剤：グアーガム、ヒドロキシプロピルグアーガム、メチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウムのようなセルロース系高分子化合物、アラビアゴム、カラヤガム、キサンタンガム、寒天、アルギン酸、α−シクロデキストリン、デキストリン、デキストラン、ヘパリン、ヘパリノイド、ヘパリン硫酸、ヘパラン硫酸、ヒアルロン酸、ヒアルロン酸塩（ナトリウム塩など）、コンドロイチン硫酸ナトリウム、デンプン、キチン及びその誘導体、キトサン及びその誘導体、カラギーナン、ソルビトール、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、ポリビニルメタアクリレートのようなポリビニル系高分子化合物、ポリアクリル酸のアルカリ金属塩（ナトリウム塩、及びカリウム塩など）、ポリアクリル酸のアミン塩（モノエタノールアミン塩、ジエタノールアミン塩、トリエタノールアミン塩など）、ポリアクリル酸のアンモニウム塩のようなカルボキシビニルポリマー、カゼイン、ゼラチン、コラーゲン、ペクチン、エラスチン、セラミド、流動パラフィン、グリセリン、ポリエチレングリコール、マクロゴール、ポリエチレンイミンアルギン酸塩（ナトリウム塩など）、アルギン酸エステル（プロピレングリコールエステルなど）、トラガント末、並びにトリイソプロパノールアミンなど。
【００５０】
＜その他の網膜疾患の予防、改善、又は治療成分＞
粘膜適用剤は、ＧＧＡに加えて、ＧＧＡとは異なる作用機序で網膜疾患を予防、改善、又は治療する成分を含むことが好ましい。即ち、本発明の粘膜適用剤は、網膜疾患の予防、改善、又は治療の有効成分として、ＧＧＡとその他の成分との組み合わせを含むことが好ましい。ＧＧＡとは異なる網膜疾患の予防、改善、又は治療成分は、１種を単独で、又は２種以上を組み合わせて使用できる。
このような組み合わせとして、それには限定されないが、例えば、ＧＧＡとプロスト系薬剤との組み合わせ（ＧＧＡとラタノプロスト、ＧＧＡとトラボプロスト、ＧＧＡとタフルプロスト、ＧＧＡとビマトプロストなど）、ＧＧＡとプロストン系薬剤との組み合わせ（ＧＧＡとイソプロピルウノプロストン）のようなＧＧＡとプロスタグランジンＦ２α誘導体との組み合わせ；ＧＧＡとβ遮断薬との組み合わせ（ＧＧＡとマレイン酸チモロール、ＧＧＡとゲル化チモロール、ＧＧＡと塩酸カルテオロール、ＧＧＡとゲル化カルテオロールなど）、ＧＧＡとβ１遮断薬との組み合わせ（ＧＧＡと塩酸ベタキソロールなど）、ＧＧＡとαβ遮断薬との組み合わせ（ＧＧＡと塩酸レボブノロール、ＧＧＡとニプラジロールなど）、ＧＧＡとα１遮断薬との組み合わせ（ＧＧＡと塩酸ブナゾシンなど）のようなＧＧＡと交感神経遮断薬との組み合わせ；ＧＧＡと塩酸ピロカルピン、ＧＧＡと臭化ジスチグミンのようなＧＧＡと副交感神経作動薬との組み合わせ；ＧＧＡとエピネフリン、ＧＧＡと酒石酸水素エピネフリン、ＧＧＡと塩酸ジピベフィリン、ＧＧＡとα２作動薬との組み合わせ（ＧＧＡとブリモニジン酒石酸塩）のようなＧＧＡと交感神経作動薬との組み合わせ；ＧＧＡとアセタゾラミド、ＧＧＡとドルゾラミド塩酸塩、ＧＧＡとブリンゾラミドのようなＧＧＡと炭酸脱水酵素阻害剤との組み合わせ；ＧＧＡと塩酸ファスジル、ＧＧＡとY-27632、ＧＧＡとAR-12286、ＧＧＡとINS-117548、ＧＧＡとSNJ-1656、ＧＧＡとK-115のようなＧＧＡとROCK(Rho-associated coiled coil forming protein kinase)の特異的阻害剤との組み合わせ；ＧＧＡとロメリジン塩酸塩のようなＧＧＡとカルシウム拮抗剤との組み合わせ；ＧＧＡとDE-117のようなＧＧＡとEP2アゴニストとの組み合わせ；ＧＧＡとOPA-6566のようなＧＧＡとアデノシンA2a受容体作動薬との組み合わせ；ＧＧＡとVEGFアプタマーとの組み合わせ（ＧＧＡとペガプタニブナトリウム）、ＧＧＡとVEGF阻害剤との組み合わせ（ＧＧＡとラニビズマブ、ＧＧＡとベバシズマブ）のようなＧＧＡと加齢黄斑変性症治療剤との組み合わせなどが挙げられる。
中でも、網膜疾患の予防、改善、治療効果が非常に高くなる点で、ＧＧＡとプロスタグランジンＦ２α誘導体との組み合わせ、ＧＧＡと交感神経遮断薬との組み合わせ（特に、ＧＧＡとβ遮断薬との組み合わせ）、ＧＧＡとＲＯＣＫ阻害剤との組み合わせ、及びＧＧＡと炭酸脱水酵素阻害剤との組み合わせが好ましい。
【００５１】
＜その他の薬理活性成分又は生理活性成分＞
また、粘膜適用剤には、網膜疾患の予防、改善、又は治療成分以外の薬理活性成分又は生理活性成分を配合することができる。このような薬理活性成分又は生理活性成分は、１種を単独で、又は２種以上を組み合わせて使用できる。
このような薬理活性成分や生理活性成分として、例えば、神経栄養因子、充血除去成分、眼筋調節薬成分、抗炎症薬成分又は収斂薬成分、抗ヒスタミン薬成分又は抗アレルギー薬成分、ビタミン類、アミノ酸類、抗菌薬成分又は殺菌薬成分、糖類、高分子化合物、セルロース又はその誘導体、局所麻酔薬成分、無痛化剤などが挙げられる。これらの薬剤の具体例を以下に例示する。
【００５２】
神経栄養因子：神経栄養因子（ＮＧＦ：Nerve growth factor）、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ：brain-derived neurotrophic factor）、及びグリア細胞由来神経栄養因子（ＧＤＮＦ：glial cell line-derived neurotrophic factor）など。
また、血清は神経栄養因子を始めとする栄養因子を含むため、患者から採取した血清を添加してその患者に用いる製剤にすることもできる。
【００５３】
充血除去成分：例えば、α−アドレナリン作動薬、具体的にはエピネフリン、塩酸エピネフリン、塩酸エフェドリン、塩酸オキシメタゾリン、塩酸テトラヒドロゾリン、塩酸ナファゾリン、塩酸フェニレフリン、塩酸メチルエフェドリン、酒石酸水素エピネフリン、及び硝酸ナファゾリンなど。これらはｄ体、ｌ体又はｄｌ体のいずれでもよい。
【００５４】
眼筋調節薬成分：例えば、アセチルコリンと類似した活性中心を有するコリンエステラーゼ阻害剤、具体的にはメチル硫酸ネオスチグミン、トロピカミド、ヘレニエン、及び硫酸アトロピンなど。
【００５５】
抗炎症薬成分又は収斂薬成分：例えば、硫酸亜鉛、乳酸亜鉛、アラントイン、イプシロン−アミノカプロン酸、インドメタシン、塩化リゾチーム、硝酸銀、プラノプロフェン、アズレンスルホン酸ナトリウム、グリチルリチン酸二カリウム、グリチルリチン酸二アンモニウム、ジクロフェナクナトリウム、ブロムフェナクナトリウム、塩化ベルベリン、及び硫酸ベルベリンなど。
【００５６】
抗ヒスタミン薬成分又は抗アレルギー薬成分：例えば、アシタザノラスト、ジフェンヒドラミン又はその塩酸塩などの塩、マレイン酸クロルフェニラミン、フマル酸ケトチフェン、レボカバスチン又はその塩酸塩など、アンレキサノクス、イブジラスト、タザノラスト、トラニラスト、オキサトミド、スプラタスト又はそのトシル酸塩などの塩、クロモグリク酸ナトリウム、及びペミロラストカリウムなど。
【００５７】
ビタミン類：例えば、酢酸レチノール、パルミチン酸レチノール、塩酸ピリドキシン、フラビンアデニンジヌクレオチドナトリウム、リン酸ピリドキサール、シアノコバラミン、パンテノール、パントテン酸カルシウム、パントテン酸ナトリウム、アスコルビン酸、酢酸トコフェロール、ニコチン酸トコフェロール、コハク酸トコフェロール、コハク酸トコフェロールカルシウム、及びユビキノン誘導体など。
【００５８】
アミノ酸類：例えば、アミノエチルスルホン酸（タウリン）、グルタミン酸、クレアチニン、アスパラギン酸ナトリウム、アスパラギン酸カリウム、アスパラギン酸マグネシウム、アスパラギン酸マグネシウム・カリウム混合物、グルタミン酸ナトリウム、グルタミン酸マグネシウム、イプシロン−アミノカプロン酸、グリシン、アラニン、アルギニン、リジン、γ−アミノ酪酸、γ−アミノ吉草酸、及びコンドロイチン硫酸ナトリウムなど。これらはｄ体、ｌ体又はｄｌ体のいずれでもよい。
【００５９】
抗菌薬成分又は殺菌薬成分：例えば、アルキルポリアミノエチルグリシン、クロラムフェニコール、スルファメトキサゾール、スルフイソキサゾール、スルファメトキサゾールナトリウム、スルフイソキサゾールジエタノールアミン、スルフイソキサゾールモノエタノールアミン、スルフイソメゾールナトリウム、スルフイソミジンナトリウム、オフロキサシン、ノルフロキサシン、レボフロキサシン、塩酸ロメフロキサシン、及びアシクロビルなど。
【００６０】
糖類：例えば、単糖類、二糖類、具体的にはグルコース、マルトース、トレハロース、スクロース、シクロデキストリン、キシリトール、ソルビトール、マンニトールなど。
【００６１】
高分子化合物：例えば、アルギン酸、アルギン酸ナトリウム、デキストリン、デキストラン、ペクチン、ヒアルロン酸、コンドロイチン硫酸、ポリビニルアルコール(完全、または部分ケン化物)、ポリビニルピロリドン、カルボキシビニルポリマー、マクロゴールおよびその薬学的に許容される塩類など。
【００６２】
セルロース又はその誘導体：例えば、エチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、カルボキシエチルセルロース、ニトロセルロースなど。
【００６３】
局所麻酔薬成分：例えば、クロロブタノール、塩酸プロカイン、塩酸リドカインなど。
無痛化剤：塩化ベンザルコニウム、塩酸プロカインなど。
【００６４】
ｐＨ
本発明の粘膜適用剤のｐＨは、４以上が好ましく、５．５以上がより好ましく、６以上がさらにより好ましく、６．５以上がさらにより好ましい。上記範囲であれば、ＧＧＡの熱及び光に対する安定性が良好な製剤になる。
また、９以下が好ましく、８．５以下がより好ましく、８以下がさらにより好ましく、７．５以下がさらにより好ましい。上記範囲であれば、粘膜への刺激が抑えられる。
【００６５】
キット
本発明の粘膜適用剤は、全成分を含む１剤型の組成物からなるものであってもよく、２剤型、又は３剤型など任意のタイプのキットであってもよい。キットとしては、ＧＧＡを含む組成物と、ＧＧＡ以外の薬理活性成分又は生理活性成分を含む組成物とを別々に備えるキット、特定の添加剤を含む組成物を、ＧＧＡを含む組成物とは別に備えるキットなどが挙げられる。キットである場合、各組成物は別容器に充填されていてもよく、又は用時混合できる容器に充填されている用時調製型組成物であってもよい。
【００６６】
本発明の粘膜適用剤がＧＧＡを含む組成物とその他の成分を含む組成物とのキットであるときは、各組成物が別容器に充填されたキットの場合も、用時調製型のキットの場合も、上記説明した各製剤のＧＧＡ含有量は、各組成物を混合した後の全体量に対する比率である。
【００６７】
容器
本発明の粘膜投与剤は、通常、容器に収容ないしは充填される。容器の種類は特に限定されないが、例えば、プラスチック製容器、金属製容器、ガラス製容器などが挙げられる。また、少なくとも製剤との接触面の一部又は全部が、プラスチック（例えば、ポリオレフィン、アクリル酸樹脂、テレフタル酸エステル、２，６−ナフタレンジカルボン酸エステル、ポリカーボネート、ポリメチルテルペン、フッ素樹脂、ポリ塩化ビニル、ポリアミド、ＡＢＳ樹脂、ＡＳ樹脂、ポリアセタール、変性ポリフェニレンエテル、ポリアリレート、ポリスルホン、ポリイミド、セルロースアセテート、ハロゲン原子で置換されていてよい炭化水素）、金属（アルミニウム）、及びガラスからなる群より選ばれる少なくとも１種の材料で構成されている容器が挙げられる。なお、上記の材料で構成されている容器とは、上記材料を容器（本体）１個分の重量あたり、５０重量％以上、好ましくは６０重量％以上、さらに好ましくは７０重量％以上の割合で含む容器である。また、上記材料の混合物や、共重合体を用いても良い。
【００６８】
ポリオレフィンとしては、ポリエチレン（高密度ポリエチレン、低密度ポリエチレン、超低密度ポリエチレン、直鎖状低密度ポリエチレン、超高分子量ポリエチレンなどを含む）、ポリプロピレン（アイソタクチックポリプロピレン、シンジオタクチックポリプロピレン、アタクチックポリプロピレンなどを含む）、及びエチレン・プロピレンコポリマーなどが挙げられる。
【００６９】
アクリル酸樹脂としては、アクリル酸メチルのようなアクリル酸エステル、メタクリル酸メチル、メタクリル酸シクロヘキシル、メタクリル酸ｔ−ブチルシクロヘキシルのようなメタクリル酸エステルなどが挙げられる。
【００７０】
テレフタル酸エステルとしては、ポリエチレンテレフタレート、ポリトリメチレンテレフタレート、ポリブチレンテレフタレートなどが挙げられる。
【００７１】
２，６−ナフタレンジカルボン酸エステルとしては、ポリエチレンナフタレート、ポリブチレンナフタレートなどが挙げられる。
【００７２】
フッ素樹脂としては、フッ素置換ポリエチレン（ポリテトラフルオロエチレン、ポリクロロトリフルオロエチレンなど）、ポリフッ化ビニリデン、ポリフッ化ビニル、パーフルオロアルコキシフッ素樹脂、四フッ化エチレン・六フッ化プロピレンコポリマー、エチレン・四フッ化エチレンコポリマー、エチレン・クロロトリフルオロエチレンコポリマーなどが挙げられる。
【００７３】
ポリアミドとしては、ナイロンなどが挙げられる。
【００７４】
ポリアセタールとしては、オキシメチレン単位のみからなるものの他、一部にオキシエチレン単位を含むものが挙げられる。
【００７５】
変性ポリフェニレンエテルとしては、ポリスチレン変性ポリフェニレンエテルなどが挙げられる。
【００７６】
ポリアリレートとしては、非晶質ポリアリレートなどが挙げられる。
【００７７】
ポリイミドとしては、芳香族ポリイミド、例えばピロメリット酸二無水物と４，４’−ジアミノジフェニルエーテルとを重合させたものが挙げられる。
【００７８】
セルロースアセテートとしては、セルロースジアセテート、セルローストリアセテートなどが挙げられる。
【００７９】
ハロゲン原子で置換されていてよい炭化水素としては、メタン、エタン、プロパン、ブタン、エチレン、プロピレン、１−ブテン、2−ブテン、1,3-ブタジエン等の炭化水素；フルオロメタン、ジフルオロメタン、フルオロホルム、テトラフルオロメタン、1,1−ジフルオロエタン、1,2−ジフルオロエタン、1−フルオロプロパン、2−フルオロプロパン、1,2−フルオロロプロパン、1,3−フルオロプロパン、1−フルオロブタン、2−フルオロブタン、フッ化ビニル、1,1−ジフルオロエチレン、1,2−ジフルオロエチレン、トリフルオロエチレン、テトラフルオロエチレン、3−フルオロプロペン、1,3−フルオロプロペン、1,1,4,4−テトラフルオロブタジエン、ペルフルオロブタジエン等のフッ素原子で置換された炭化水素；クロロメタン、ジクロロメタン、クロロホルム、テトラクロロメタン、1,1−ジクロロエタン、1,2−ジクロロエタン、1−クロロプロパン、2−クロロプロパン、1,2−クロロプロパン、1,3−クロロプロパン、1−クロロブタン、2−クロロブタン、塩化ビニル、1,1−ジクロロエチレン、1,2−ジクロロエチレン、トリクロロエチレン、テトラクロロエチレン、3−クロロプロペン、1,3−クロロプロペン、1,1,4,4−テトラクロロブタジエン、ペルクロロブタジエン等の塩素原子で置換された炭化水素；ブロモメタン、ジブロモメタン、ブロモホルム、テトラブロモメタン、1,1−ジブロモエタン、1,2−ジブロモエタン、1−ブロモプロパン、2−ブロモプロパン、1,2−ブロモロプロパン、1,3−ブロモプロパン、1−ブロモブタン、2−ブロモブタン、臭化ビニル、1,1−ジブロモエチレン、1,2−ジブロモエチレン、トリブロモエチレン、テトラブロモエチレン、3−ブロモプロペン、1,3−ブロモプロペン、1,1,4,4−テトラブロモブタジエン、ペルブロモブタジエン等の臭素原子で置換された炭化水素；ヨードメタン、ジヨードメタン、ヨードホルム、テトラヨードメタン、1,1−ジヨードエタン、1,2−ジヨードエタン、1−ヨードプロパン、2−ヨードプロパン、1,2−ヨードロプロパン、1,3−ヨードプロパン、1−ヨードブタン、2−ヨードブタン、ヨウ化ビニル、1,1−ジヨードエチレン、1,2−ジヨードエチレン、トリヨードエチレン、テトラヨードエチレン、3−ヨードプロペン、1,3−ヨードプロペン、1,1,4,4−テトラヨードブタジエン、ペルヨードブタジエン等のヨウ素原子で置換された炭化水素等が例示される。
【００８０】
容器材料は、テレフタル酸エステル（特に、ポリエチレンテレフタレート）、ポリカーボネート、ポリメチルテルペン、フッ素置換ポリエチレン（特に、ポリテトラフルオロエチレン）、２，６−ナフタレンジカルボン酸エステル（特に、ポリエチレンナフタレート、ポリブチレンナフタレート）、ポリオレフィン（特に、ポリエチレン、ポリプロピレン）、メタクリル酸エステル（特に、メタクリル酸メチル）からなる群より選ばれる少なくとも１種であるのが好ましい。
【００８１】
容器は、容器内面に上記材料で構成された層又はフィルムが形成されていてもよく、容器自体が上記材料で成型されていてもよい。また、製剤と接触する面の少なくとも一部が上記材料で構成されていればよいが、接触面の全部が上記材料で構成されているのが好ましい。
【００８２】
また、容器は、一体成型されていてもよく、または２種以上の部品から構成される容器であってもよい。２種以上の部品から構成される容器の場合には、部品のうち１種のみ又は２種以上が上記材料で構成されていてもよく、上記材料のうち部品ごとに異なる種類の材料が用いられてもよい。例えば点眼剤容器、洗眼剤容器、点鼻剤容器、軟膏剤容器のように、注出口又はノズルを有する容器では、注出口又はノズルを含む全部分が上記材料で成型されていてもよく、注出口又はノズル以外の本体部分だけ上記材料で成型されていてもよい。また、全部分の内面に上記材料で構成された層又はフィルムが形成されていてもよく、本体部分の内面にだけ上記材料で構成された層又はフィルムが形成されていてもよい。
【００８３】
容器の形状、容量、容器壁の厚みなどは特に限定されない。容器の種類に応じて、通常使用されている形状、容量、容器壁の厚みを採用できる。
また、容器内壁に上記材料からなる層又はフィルムが形成されている場合、成型された層又はフィルムを本体に積層したものであってもよく、蒸着、プラズマＣＶＤ、プラズマ重合、スパッタリング等により層又はフィルムが形成されたものであってもよい。上記材料からなる層又はフィルムの厚みは、特に限定されず、例えば、約１０ｎｍ〜５ｍｍとすることができる。
【００８４】
本発明の粘膜投与剤は、下記(a)又は(b)を満たす部分を有する容器に収容することが好ましく、下記(a)及び(b)を満たす部分を有することがより好ましい。これにより、ＧＧＡの分解が効果的に抑制される。
(a)  波長２４５〜２５５ｎｍの光の透過率の平均値が、３５％以下、中でも３３％以下、特に３０％以下である。
(b)  波長３００〜３３０ｎｍの光の透過率の平均値が、５０％以下、中でも４５％以下、特に４０％以下である。
容器は、このような透過率の平均値を有する部分を一部でも有していれば良く、このような部分が好ましくは容器壁面積の１％以上、中でも５％以上、中でも１０％以上であることが望ましい。これにより、製剤中のＧＧＡの分解が効果的に抑制される。
容器の透過率を測定する際には、分光光度計の光路をすべて覆うことができるように切り取った容器断片について透過率を測定する。
なお、上記(a)を満たす容器、好ましくは上記(a)及び(b)を満たす容器に収容されたＧＧＡ含有粘膜適用剤は、網膜疾患の予防、改善、又は治療用に限られない。
【００８５】
対象疾患
本発明が対象とする網膜疾患は、網膜を構成する細胞の変性、障害、若しくは細胞死が生じる疾患、又は網膜を構成する細胞の変性、障害、若しくは細胞死に起因する疾患であればよく、例えば、緑内障、網膜色素変性、加齢黄斑変性、糖尿病性網膜症、網膜剥離、糖尿病性黄斑症、高血圧性網膜症、網膜血管閉塞（網膜動脈閉塞；網膜中心静脈閉塞、網膜中心静脈分枝閉塞のような網膜静脈閉塞等）、網膜動脈硬化症、網膜裂孔、網膜円孔、黄斑円孔、眼底出血、後部硝子体剥離、色素性傍静脈網脈絡膜萎縮、脳回状網脈絡膜萎縮、コロイデレミア、クリスタリン網膜症、白点状網膜症、錐体ジストロフィー、中心性輪紋状脈絡膜ジストロフィー、ドインハチの巣状網膜ジストロフィー、卵黄状黄斑ジストロフィー、嚢腫状組織黄斑浮腫、オカルト黄斑ジストロフィー、スターガルト病、網膜分離症、中心性しょう液性網脈絡膜症（中心性網膜症）、脊髄小脳変性症７型、家族性滲出性硝子体網膜症、Ｓ錐体増強症候群、網膜色素線条、常染色体優性視神経萎縮、常染色体優性ドルーゼン、家族性ドルーゼン、急性帯状潜在性網膜外層症、癌関連網膜症、光損傷、及び虚血性網膜症などが挙げられる。
中でも、緑内障、網膜色素変性、加齢黄斑変性、糖尿病性網膜症が好適な対象疾患であり、緑内障がより好適な対象疾患である。
【００８６】
また、本発明は、網膜を構成する何れの細胞が障害を受けている疾患、又は網膜を構成する何れの細胞の障害が原因となる疾患でも対象となる。網膜構成細胞としては、網膜神経節細胞、アマクリン細胞、水平細胞、ミュラーグリア細胞、双極細胞、網膜視細胞（錐体、桿体）、及び網膜色素上皮細胞などが挙げられる。特に網膜神経節細胞、若しくは網膜色素上皮細胞の障害が認められる、又はこれらの細胞の障害に起因する疾患が好適である。
また、本発明は、網膜を構成する層、即ち、内境界膜、神経線維層、神経節細胞層、内網状膜、内顆粒層、外網状層、外顆粒層、外境界膜、視細胞層、及び網膜色素上皮層の何れが障害を受けている疾患、又はこれらの何れの層の障害が原因となる疾患でも対象となる。特に、神経節細胞層、内顆粒層、又は外顆粒層の障害疾患が好適な対象となる。
網膜疾患は、１種、又は２種以上であり得る。
本発明の対象となる好適な患者は、上記網膜疾患の患者である。
【００８７】
前述した通り、本発明の粘膜適用剤では、ＧＧＡが網膜細胞を保護する。即ち、ＧＧＡが網膜細胞の生存を促進し、又は網膜細胞の変性、障害、若しくは死滅を抑制することにより、網膜疾患を予防、改善、又は治療する。従って、本発明の粘膜適用剤は、ＧＧＡを含む網膜細胞保護用、網膜細胞生存促進用、又は網膜細胞の変性、障害、若しくは死滅の抑制用の粘膜投与剤とすることができる。また、ＧＧＡが網膜などの細胞の神経突起の伸長を誘導する作用を有することから、本発明の粘膜適用剤は、ＧＧＡを含む（網膜）神経突起伸長促進ないしは誘導用、（網膜）細胞機能向上用、又は網膜細胞の生存状態の向上ないしは改善用の粘膜適用剤とすることもできる。
これらの剤において、好適な網膜細胞の種類は前述した通りである。また、製剤中の成分、その含有量、製剤の性状などは、本発明の網膜疾患の予防、改善、又は治療用粘膜適用剤について説明した通りである。
【００８８】
本発明において、「予防」は、発症の回避、遅延、又は発症率の低下を包含し、「改善」及び「治療」は、症状の軽快、症状の進行抑制、及び治癒ないしは完快を包含する。
【００８９】
使用方法
本発明の製剤が点眼剤である場合、上記濃度でＧＧＡを含む点眼剤を、例えば、１回当たり、約１〜２滴、１日約１〜５回、好ましくは約１〜３回点眼すればよい。
本発明の製剤が洗眼剤である場合、上記濃度でＧＧＡを含む洗眼剤を、例えば、１回当たり、約１〜２０ｍＬ用いて、１日約１〜１０回、好ましくは約１〜５回洗眼すればよい。
本発明の製剤が眼軟膏である場合、上記濃度でＧＧＡを含む眼軟膏を、例えば、１回当たり、約０．００１〜５ｇ、１日約１〜５回、好ましくは約１〜３回眼に塗布すればよい。
本発明の製剤が点鼻剤である場合、上記濃度でＧＧＡを含む点鼻剤を、例えば、１回当たり、約０．０００５〜５ｍＬ、１日約１〜５回、好ましくは約１〜３回、噴霧などの方法で点鼻すればよい。
本発明の製剤が洗鼻剤である場合、上記濃度でＧＧＡを含む洗鼻剤を、例えば、１回当たり、約１〜２０ｍＬ用いて、１日約１〜１０回、好ましくは約１〜５回洗鼻すればよい。
本発明の製剤が点耳剤である場合、上記濃度でＧＧＡを含む点耳剤を、例えば、１回当たり、約１〜２滴、１日約１〜５回、好ましくは約１〜３回点耳すればよい。
本発明の製剤が口腔咽頭用の噴霧製剤（吸入剤）である場合、上記濃度でＧＧＡを含む製剤を、例えば、１回当たり、約０．０００５〜５ｍＬ、１日約１〜５回、好ましくは約１〜３回、噴霧すればよい。
本発明の製剤が鼻、耳、又は口腔咽頭用の軟膏である場合、上記濃度でＧＧＡを含む軟膏を、例えば、１回当たり、約０．００１〜５ｇ、１日約１〜５回、好ましくは約１〜３回鼻、耳、又は口腔咽頭に塗布すればよい。
【００９０】
何れの製剤の場合も、ＧＧＡの１日投与量は、５０ｎｇ以上が好ましく、５００ｎｇ以上がより好ましく、５μｇ以上がさらにより好ましい。また、ＧＧＡの１日投与量は、５０ｍｇ以下が好ましく、２０ｍｇ以下がより好ましく、１０ｍｇ以下がさらにより好ましい。
何れの製剤の場合も、ＧＧＡの１日投与量としては、約５０ｎｇ〜５０ｍｇ、約５０ｎｇ〜２０ｍｇ、約５０ｎｇ〜１０ｍｇ、約５００ｎｇ〜５０ｍｇ、約５００ｎｇ〜２０ｍｇ、約５００ｎｇ〜１０ｍｇ、約５μｇ〜５０ｍｇ、約５μｇ〜２０ｍｇ、約５μｇ〜１０ｍｇが挙げられる。
【００９１】
投与期間は、疾患の種類やステージ、年齢、体重、性別などによって異なるが、例えば、約１日〜３０年の範囲で適宜選択できる。例えば、緑内障、網膜色素変性、加齢黄斑変性、及び糖尿病性網膜症などの網膜疾患であるとき、約１〜２０年、特に約１〜１０年という短い投与期間で、網膜疾患を予防、改善、又は治療できる場合がある。本発明の粘膜適用剤が、網膜保護作用により網膜疾患の進行を抑制するときは、投与し続ける場合もある。
【００９２】
さらに、本発明は、ＧＧＡを含む粘膜適用剤を、ＧＧＡの有効量が投与されるように、網膜疾患患者の粘膜に適用（滴下、塗布、噴霧など）する網膜細胞保護方法、網膜細胞生存促進方法、網膜細胞の変性、障害、若しくは死滅の抑制方法、（網膜）神経突起伸長促進ないしは誘導方法、（網膜）細胞機能向上方法、又は網膜細胞の生存状態の向上ないしは改善方法などを包含する。
本発明方法において、ＧＧＡを含む粘膜適用剤は、上記説明した本発明の粘膜適用剤である。また、本発明方法において、用法及び用量、網膜疾患の種類、網膜細胞の種類、障害を受けている網膜層、対象患者、「予防」「改善」「治療」の用語の意味などは、前述した通りである。
【実施例】
【００９３】
以下、本発明を実施例を挙げてより詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。なお、以下の実施例中で、成分の含有量をｗ／ｖ％で表示することがあるが、これらの各試料の組成を考慮すれば、ｗ／ｖ％で表した成分含有量は重量％で表示した成分含有量と実質的に同じ値になる。
（１）ゲラニルゲラニルアセトンの調製
市販のテプレノン（オールトランス体：5Zモノシス体＝重量比３：２）（和光純薬工業）を入手して、シリカゲルクロマトグラフィーによりオールトランス体を精製した。
具体的な条件としては、シリカゲル（ＰＳＱ６０Ｂ  富士シリシア化学）をガラス製管に充てんして、移動相（ｎ−ヘキサン：酢酸エチル＝９：１）により分取精製を行った。分取後、各フラクションを濃縮及び減圧乾燥して、さらにオールトランス体の精製度及び構造をそれぞれＧＣ及び１Ｈ−ＮＭＲ（溶媒：重クロロホルム、内部標準：テトラメチルシラン）で確認した（収率約２０％）。
【００９４】
＜ＧＣ測定条件＞
カラム：ＤＢ−１（Ｊ＆Ｗｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、０．５３ｍｍ×３０ｍ、膜厚１．５μｍ）
カラム温度：２００℃→５℃／ｍｉｎ→３００℃（１０分間）
気化室温度：２８０℃
検出器温度：２８０℃
キャリアーガス：ヘリウム
水素圧：６０ｋＰａ
Ａｉｒ圧：５０ｋＰａ
メイクアップガス圧：７５ｋＰａ（窒素ガス）
全流量：４１ｍＬ／ｍｉｎ
カラム流量：６．５２ｍＬ／ｍｉｎ
線速度：５８．３ｃｍ／ｓｅｃ
スプリット比：５：１
注入量：０．１ｇ／１００ｍＬ（エタノール溶液）の試料を１μＬ注入
【００９５】
（２）ＮＭＤＡによる神経障害誘発作用からの網膜神経節細胞の保護効果の評価
近年、グルタミン酸の類似物質であるＮＭＤＡ（N−メチル−D−アスパラギン酸）がアルツハイマー病を始めとする神経変性疾患の原因物質の一つであるという報告が多くされている。眼科領域では、ＮＭＤＡは緑内障で認められる視神経障害に関与していると考えられている（Brain Research Bulletin, 81 (2010) 349-358）。そこで今回、ＮＭＤＡ誘発緑内障モデルラットを用いて、ＧＧＡの神経保護効果を評価した。
【００９６】
試験方法
Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ（ＳＤ）ラット（ｎ＝８）に対し、点眼にて１日２回ずつ５日間、1%(w/v)ＧＧＡ（オールトランス体）を含む点眼剤、及びＧＧＡを含まないコントロール点眼剤を、それぞれ前投与した後、4 mM ＮＭＤＡを硝子体内に5 μL投与することで、神経障害を誘発させた（試験１）。
同様に、Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ（ＳＤ）ラット（ｎ＝１０）に対し、点眼にて１日２回ずつ５日間、メマンチン１％液、及び基剤（ＰＢＳ）を、それぞれ前投与した後、４ｍＭ ＮＭＤＡを硝子体内に５μＬ投与することで、神経障害を誘発させた。メマンチン１％液はメマリー２０ｍｇ錠（第一三共）を破砕後、メマンチンの濃度が１ｗ／ｖ％となるようＰＢＳに懸濁して調製した（試験２）。
ＮＭＤＡの投与３日後に眼球を摘出し、Ｈａｌｆ  Ｋａｒｎｏｖｓｋｙ固定液にて２４時間固定後、パラフィン包埋、薄切し、ヘマトキシリン−エオジン（ＨＥ）で染色した病理組織切片を作製した。組織切片を光学顕微鏡で観察して網膜の内網状層（ＩＰＬ）の厚み(μｍ)を測定し、被験点眼剤による神経保護効果を、網膜の内網状層（ＩＰＬ）の厚みを指標に評価した。
【００９７】
試験１で用いた点眼剤の組成を表１に示す。
【表１】
0005483513.tif 000005
【００９８】
結果
結果を図１に示す。ＧＧＡ含有点眼剤は、ＮＭＤＡによる神経障害に対し、コントロール点眼剤と比較して、有意な神経保護効果（*p<0.05、t検定による）を示した（試験１）。
一方、メマンチンとコントロール群との間に有意差は認めず、ＧＧＡのような神経保護効果は認められなかった（試験２）。メマンチンは、アルツハイマー治療用の内服剤であるが、網膜神経の保護作用を有することが報告されている。本試験により、一般に内服で網膜保護作用を有する薬剤を眼などの粘膜に投与しても網膜保護作用は得られないが、ＧＧＡは粘膜投与により網膜神経を保護することが示された。
【００９９】
（３）細胞透過性の評価
試験方法
ヒト角膜上皮細胞（ＨＣＥＴ）、ヒト鼻中隔扁平上皮癌細胞（ＲＰＭＩ−２６５０）、及び消化管の透過性試験モデルとして頻用されるイヌ腎臓尿細管上皮細胞（ＭＤＣＫ−Ｉ）の３種類の細胞を用いて以下の試験を実施した。各細胞の培養に用いた培地を次に示す。
ＨＣＥＴ：０．５％ＤＭＳＯ（和光純薬工業）、１０ｎｇ／ｍＬ 上皮成長栄養因子（Ｒ＆Ｄ）、5 μｇ／ｍＬ インスリン（Invitrogen）、及び５％（ｖ／ｖ）牛胎仔血清（第一化学薬品）を添加したダルベッコ改変イーグル基礎培地／ハムＦ１２等比混合液体培地（ＤＭＥＭ／F−１２、Invitrogen製）
ＲＰＭＩ−２６５０：１０％（ｖ／ｖ）牛胎仔血清（第一化学薬品）を添加した最小必須培地（ＭＥＭ、Invitrogen製)
ＭＤＣＫ−Ｉ：１０％（ｖ／ｖ）牛胎仔血清（第一化学薬品）を添加したピルビン酸・高グルコース（４．５ｇ／L）含有のダルベッコ改変イーグル基礎培地（ＤＭＥＭ、Invitrogen製）
【０１００】
被検物質としては、オールトランス体：5Zモノシス体の重量比が６：４のＧＧＡ（和光純薬工業）を用いた。ＧＧＡを１００ｍｇ、抗酸化物質としてα−トコフェロール（和光純薬工業）を０．２５ｍｇ秤量し、１００％のエタノール７８９ｍｇに溶解した。エタノールに溶解したＧＧＡは、最終濃度が０．１ｗ／ｖ％となるよう各細胞の無血清培地で希釈溶解した。
【０１０１】
各細胞は、トランズウェル・２４穴マイクロプレート（CORNING）に、１ウェルあたり５.０×１０４cellsになるように細胞を播種し、３７℃、５％ＣＯ２の条件で培養した。トランズウェルの下には各細胞の培養に用いたのと同じ培地を６００μLずつ添加した。培養５日後、培養上清を吸引除去し、上記の０．１％ＧＧＡ溶液を１００μLずつ加え、３７℃、５％CO２の条件で３０分または４時間培養した。培養後、トランズウェルの培養上清を回収し、上清中に残存しているＧＧＡを測定した。ＧＧＡの残存率（％）を１００から引き、これを細胞が播種されたトランズウェルに対するＧＧＡの透過率（％）とした。
【０１０２】
＜ＧＧＡ濃度の測定方法＞
ＧＧＡの濃度は以下の方法で測定した。
日本薬局方「テプレノン標準品（オールトランス体：5Zモノシス体＝重量比約６：４、一般財団法人 医薬品医療機器レギュラトリーサイエンス財団製）」、又はテプレノン（和光純薬工業）を標準品として、薬食審査発第０４１２００７号「テプレノン１００ｍｇ／ｇ細粒」に記載された溶出試験の測定条件に準じて、以下のＨＰＬＣ測定条件にて、5Zモノシス体の面積値（Ａｃ）、及びオールトランス体の面積値（Ａｔ）から、各点眼剤に含まれるＧＧＡの濃度を測定した。
【０１０３】
＜ＨＰＬＣ測定条件＞
検出器：紫外吸光光度計（測定波長：２１０ｎｍ）
カラム：ＹＭＣ−Ｐａｃｋ  ＯＤＳ-Ａ（内径４．６ｍｍ、長さ１５ｃｍ、粒径３μｍ）
カラム温度：３０℃
移動相：９０％アセトニトリル溶液
流量：１．２〜１．３ｍＬ／ｍｉｎ（5Zモノシス体、オールトランス体の順に溶出される）
注入量：０．０５ｇ／１００ｍＬの試料を５μＬ注入
【０１０４】
結果
結果を図２に示す。ＧＧＡは、ＭＤＣＫ−Ｉに比べて、ＨＣＥＴ及びＲＰＭＩ−２６５０に対する透過率が高かった。これより、ＧＧＡは消化管粘膜に比べて角膜や鼻粘膜を透過し易く、点眼や点鼻による投与経路は、経口投与よりも、多くのGGAを網膜組織中に移行できることが分かる。
【０１０５】
（４）点鼻容器からの噴霧距離の評価
テプレノン（和光純薬工業）を用いて、表２に組成を示す各試験製剤を調製した。実施例の製剤は、６５℃に加温した界面活性剤（ポリソルベート８０及びＰＯＥヒマシ油）に、テプレノンを投入して６５℃の湯浴中で２分間撹拌溶解させ、さらに６５℃の水を加えた後、メチルセルロース）又はヒドロキシエチルセルロース、ウラニン（和光純薬工業株式会社、製造元コード216-00102）を添加した各緩衝液を混和撹拌して均一溶液とし、塩酸又は水酸化ナトリウムによりｐＨ及び浸透圧を調整した。比較例の製剤は、ＧＧＡを配合しない他は実施例の製剤と同様にして調製した。
【０１０６】
各製剤をスプレー式点鼻容器（ロート製薬  ロートアルガードST鼻炎スプレー（商品名）用容器）に５ｍＬずつガラス製ホールピペットで分注後、噴霧口部品を取り付けた。噴霧口が水平になるように点鼻容器を置き、噴霧口から50cm離れた位置にキムタオル（日本製紙クレシア株式会社）を設置した。次いで、点鼻容器を50回噴霧した（図３参照)。その後、キムタオルを回収、精製水100mlに浸漬、混和撹拌した。混和撹拌した精製水について、96wellプレート（平底、ポリスチレン製）に0.2ｍＬずつガラス製メスピペットで分注、マイクロプレートリーダー装置（モレキュラーデバイス社製ＶｅｒｓａＭａｘ）にて、ウラニン量を示す450ｎｍ（装置内温度20〜25℃）の吸光度を測定した。４５０ｎｍの吸光度が高いほど噴霧口から50cm離れた位置まで噴霧された製剤量が多いことを示す。
【表２】
0005483513.tif 000006
何れの増粘剤を用いる場合も、ＧＧＡを配合することにより、噴霧による点鼻容器からの製剤の飛距離が明らかに長くなった。噴霧式の点鼻剤は、鼻腔の奥の方に適用する方が薬剤の吸収が良いため、製剤の飛距離が長いことは点鼻剤として優れた性質である。
【０１０７】
（５）点鼻容器からの噴霧量のバラツキの評価
テプレノン（和光純薬工業）を用いて、表３に組成を示す各試験製剤を調製した。具体的には、実施例の製剤は、６５℃に加温した界面活性剤（ポリソルベート８０及びＰＯＥヒマシ油）に、テプレノンを投入して６５℃の湯浴中で２分間撹拌溶解させ、さらに６５℃の水を加えた後、メチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、アルギン酸、ジェランガム、又はポリビニルピロリドンを添加した各緩衝液を混和撹拌して均一溶液とし、塩酸又は水酸化ナトリウムによりｐＨ及び浸透圧を調整した。比較例の製剤は、ＧＧＡを配合しない他は実施例製剤と同様にして調製した。
【０１０８】
各製剤をスプレー式点鼻容器（ロート製薬  ロートアルガードST鼻炎スプレー（商品名）用容器）に５ｍＬずつガラス製ホールピペットで分注後、噴霧口部品を取り付けた。点鼻容器を10回噴霧して噴出した製剤を回収し、製剤重量を測定した。
この試験を3回実施して、10回噴霧した製剤重量の平均値、標準偏差を算出した後、製剤重量の変動係数（ＣＶ）を計算した。標準偏差は、Microsoft(R) Excel2000、ＳＴＤＥＶＰワークシート関数により算出した。平均値は、Microsoft(R) Excel2000、ＡＶＥＲＡＧＥワークシート関数により算出した。さらに、標準偏差を平均値で割って、製剤重量のＣＶ（変動係数）を求めた。
結果を表３に示す。
【０１０９】
【表３】
0005483513.tif 000007
ＧＧＡを配合することにより、製剤噴霧量のバラツキが明らかに少なくなった。
【０１１０】
（６）点眼容器からの製剤滴下量のバラツキの評価
テプレノン（和光純薬工業）を用いて、表４に組成を示す各試験製剤を調製した。具体的には、実施例製剤は、６５℃に加温した界面活性剤（ポリソルベート８０及びＰＯＥヒマシ油）に、テプレノンを投入して６５℃の湯浴中で２分間撹拌溶解させ、さらに６５℃の水を加えた後、ヒドロキシエチルセルロース、ジェランガム、又はポリビニルピロリドンを添加した各緩衝液を混和撹拌して均一溶液とし、塩酸又は水酸化ナトリウムによりｐＨ及び浸透圧を調整した。比較例の製剤は、ＧＧＡを配合しない他は実施例製剤と同様にして調製した。これらの液を孔径０．２μｍのメンブレンフィルター（サーモフィッシャーサイエンティフィック社製ボトルトップフィルター）でろ過して、澄明な無菌点眼剤とした。
【０１１１】
各点眼剤を点眼容器（ロート製薬、ロートドライエイドEX用容器）に８ｍＬずつガラス製ホールピペットで分注した。次いで、１滴毎の製剤重量を測定した。
この試験を10回実施して、1滴の製剤重量の平均値、標準偏差を算出した後、製剤重量の変動係数（ＣＶ）を計算した。標準偏差は、Microsoft(R) Excel2000、ＳＴＤＥＶＰワークシート関数により算出した。平均値は、Microsoft(R) Excel2000、ＡＶＥＲＡＧＥワークシート関数により算出した。さらに、標準偏差を平均値で割って、製剤重量のＣＶ（変動係数）を求めた。
結果を表４に示す。
【０１１２】
【表４】
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ＧＧＡを配合することにより、１滴の点眼量のバラツキが明らかに少なくなった。点眼剤は通常１回１〜３滴を点眼するものであるため、１回の点眼量のバラツキが少ないことは点眼剤として非常に優れた性質である。
【０１１３】
（７）容器の光透過性の評価
テプレノンを含む点眼剤を調製した。各点眼剤の組成を後掲の表５に示す。
具体的には、６５℃に加温した界面活性剤（ポリソルベート８０及びＰＯＥヒマシ油）に、テプレノンを投入して６５℃の湯浴中で２分間撹拌溶解させ、さらに６５℃の水を加えた後、各緩衝液を混和撹拌して均一溶液とし、塩酸又は水酸化ナトリウムによりｐＨ及び浸透圧を調整した。この液を孔径０．２μｍのメンブレンフィルター（サーモフィッシャーサイエンティフィック社製ボトルトップフィルター）でろ過して、澄明な無菌点眼剤とした。なお各操作において、テプレノンが器具などに吸着して含量低下しないことを、ＨＰＬＣにより予め確認した後に無菌点眼剤を調製した。
【０１１４】
各点眼剤を１０ｍＬ〜１５ｍＬ容量のプラスチック製容器又はガラス製容器に５ｍＬずつガラス製ホールピペットで分注し、密栓した。これらを試験管立てに正立静置させた状態で、直射日光に２４時間照射した（試験品とする）。対照品として、試験品と同様に調製、容器に分注した点眼剤をアルミホイルにより完全に覆い遮光したサンプルを準備して試験を実施した（対照品とする）。
ＨＰＬＣにより、試験品及び対照品、それぞれの点眼剤中のテプレノンを定量して、光照射による分解量(mg/100ml)を算出した。光照射による分解量の求め方を以下に示す。
光照射による分解量(mg/100ml)
＝（対照品のテプレノン量）−（試験品中のテプレノン量）
【０１１５】
【表５】
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【０１１６】
＜容器の光線透過率の測定＞
プラスチック製容器又はガラス製容器の光線透過率を定量した。
具体的には、プラスチック製容器又はガラス製容器から１cm×５cmの断片を切り取り、これを検体としてを分光光度計(紫外可視分光光度計  UV-２４５０、島津製作所製)の試料室に立てかけ、各波長における光線透過率を定量した。容器から切り取った断片は、分光光度計の光路が全て覆えるような面積を有するものである。
分光光度計の測定条件を以下に示す。
機器：UV-2450(株式会社島津製作所)
波長範囲(nm)：開始800、終了200
スキャンスピード：中速
サンプリングピッチ（nm）：1.0
測定モード：シングル
測光値の種類：透過率
スリット幅（nm）：1.0
光源切替波長(393-282nm)：282
S/R切り替え：標準
次いで、245〜255nm、300〜330nm、350〜380nmにおける光線透過率の平均値を、平均透過率(%)として算出した。結果を表６に示し、各容器を表７に説明する。
【０１１７】
【表６】
0005483513.tif 000010
【０１１８】
【表７】
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【０１１９】
現実の流通、保存、使用時に、容器に収容された点眼液や点鼻液などに照射され得る最も強い光と考えられるのは日光である。本試験では、広い波長域を含む日光下で、各容器がどの程度ＧＧＡの分解を抑制するかを評価した。
直射日光の照射下で、容器Ｃは、容器Ａ、及び容器Ｂに比べて、ＧＧＡの分解を顕著に抑制した。
試験に用いた容器Ｃは、無色で、材質としてはポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）製であり、２４５〜２５５ｎｍの光の平均透過率が３５％以下、かつ、３００〜３３０ｎｍの光の平均透過率が５０％以下の容器であった。これに対して、試験に用いた容器Ａは、無色で、材質としてはポリメチルテルペン製であり、２４５〜２５５ｎｍの光の平均透過率が３５％を超え、かつ、３００〜３３０ｎｍの光の平均透過率が５０％を超える容器であった。試験に用いた容器Ｂは、無色で、材質としてはガラス製であり、２４５〜２５５ｎｍの光の平均透過率は３５％以下であるが、３００〜３３０ｎｍの光の平均透過率が５０％を超える容器であった。
従って、２４５〜２５５ｎｍの光の平均透過率も３５％以下であるか、又は３００〜３３０ｎｍの光の平均透過率が５０％以下である部分を有する容器に、ＧＧＡを含有する粘膜適用剤を収容することにより、現実の流通、保存、使用時におけるＧＧＡの分解が効果的に抑制されることが分かる。
また、それ以外の例えば３５０〜３８０ｎｍの光の平均透過率は、容器Ａ、Ｂ、及びＣの間に大差はないことから、３００〜３３０ｎｍ、及び２４５〜２５５ｎｍの波長域の光の平均透過率がＧＧＡの分解抑制に重要であることが分かる。
【産業上の利用可能性】
【０１２０】
本発明の剤は、一般に重篤である網膜疾患の予防、改善、又は治療剤でありながら、粘膜に投与することで薬剤の全身への移行が抑えられているので、患者に好まれる優れた剤である。
【要約】      （修正有）【課題】実用上十分に網膜疾患を予防、改善、又は治療できる粘膜適用剤、特に、後眼部の疾患に対して有効な点眼剤を提供する。【解決手段】ゲラニルゲラニルアセトンを含む網膜疾患の予防、改善、又は治療用粘膜適用剤。好適な網膜疾患は、緑内障、網膜色素変性、加齢黄斑変性、及び糖尿病性網膜症などである。【選択図】図１【図１】
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【図２】
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【図３】
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