(57)【要約】  本発明は、甘茶の新規用途の開発を目的とする。  有効成分としての甘茶の水あるいは低級アルコールまたはそれらの混液抽出により得られる抽出物あるいはその処理物と、医薬的に受容な賦形剤または担体とからなる抗糖尿病用組成物を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
有効成分として、甘茶を水あるいは低級アルコールまたはそれらの混液で抽出することにより得られる抽出物あるいはその処理物と、医薬的に受容な賦形剤または担体とを含む抗糖尿病用組成物。
【請求項２】
前記甘茶が、アジサイ属アマチャまたはアマギアマチャの葉部の発酵工程を含む製茶工程に付されて加工調製されている請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記抽出物が、一般式(Ｉ)：
【化１】
2008075528.tif 000019
［式中、Ｒ1は、一般式(ＩＩ)：
【化２】
2008075528.tif 000020
（式中、Ｒ5およびＲ6は、互いに独立し、同一または異なり水素原子、ヒドロキシ基もしくはメトキシ基を表す）
で表されるフェネチル基であるか、または一般式(ＩＩＩ)：
【化３】
2008075528.tif 000021
（式中、Ｒ5およびＲ6は上記一般式(ＩＩ)で定義したとおりである）
で表されるスチリル基であり、
Ｒ2はカルボキシ基であるか、あるいは該カルボキシ基は上記フェネチル基またはスチリル基のα位もしくはβ位と結合してラクトン環を形成しており、
Ｒ3はヒドロキシ基であるか、またはグルコピラノシルオキシ基であり、
Ｒ4は水素元素またはヒドロキシ基である］
で表される化合物またはその塩を有効成分として含む請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
前記抽出物が、前記一般式(Ｉ)の化合物において、
Ｒ1は、Ｒ5がメトキシ基であり、Ｒ6がヒドロキシ基であるフェネチル基であり、Ｒ2がカルボキシ基で、このフェネチル基のβ位とラクトン環を形成しており、Ｒ3がヒドロキシ基であり、Ｒ4が水素原子である、式（１）：
【化４】
2008075528.tif 000022
で表されるフィロズルシン(化合物(１))か、
Ｒ1は、Ｒ5がヒドロキシ基であり、Ｒ6が水素原子であるフェネチル基であり、Ｒ2がカルボキシ基で、このフェネチル基のβ位とラクトン環を形成しており、Ｒ3がヒドロキシ基であり、Ｒ4が水素原子である、式（２）：
【化５】
2008075528.tif 000023
で表されるヒドランゲノール(化合物(２))か、
Ｒ1は、Ｒ5およびＲ6が共にヒドロキシ基であるスチリル基であり、Ｒ2がカルボキシ基で、このスチリル基のβ位とラクトン環を形成しており、Ｒ3がヒドロキシ基であり、Ｒ4が水素原子である、式（３）：
【化６】
2008075528.tif 000024
で表されるツンベルジノールＡ(化合物(３))か、
Ｒ1は、Ｒ5およびＲ6が共にヒドロキシ基であるスチリル基であり、Ｒ2がカルボキシ基で、このスチリル基のβ位とラクトン環を形成しており、Ｒ3およびＲ4が共にヒドロキシ基である、式（４）：
【化７】
2008075528.tif 000025
で表されるツンベルジノールＢ(化合物(４))か、
Ｒ1は、Ｒ5およびＲ6が共にヒドロキシ基であるスチリル基であり、Ｒ2がカルボキシ基で、このスチリル基のα位とラクトン環を形成しており、Ｒ3がヒドロキシ基であり。Ｒ4が水素原子である、式（５）：
【化８】
2008075528.tif 000026
で表されるツンベルジノールＦ(化合物(５))か、
Ｒ1は、Ｒ5がメトキシ基であり、Ｒ6がヒドロキシ基であるフェネチル基であり、Ｒ2がカルボキシ基で、このフェネチル基のβ位とラクトン環を形成しており、Ｒ3がグルコピラノシルオキシ基であり、Ｒ4が水素原子である、式（６）：
【化９】
2008075528.tif 000027
で表される８-Ｏ-Ｇｌｃ-フィロズルシン(化合物(６))またはその塩か、あるいは
Ｒ1は、Ｒ5がヒドロキシ基であり、Ｒ6が水素原子であるスチリル基であり、Ｒ2がカルボキシ基であり、Ｒ3がヒドロキシ基であり、Ｒ4が水素原子である、式（７）：
【化１０】
2008075528.tif 000028
で表されるヒドランゲア酸(化合物(７))またはその塩
からなる化合物群から選択される少なくとも１以上の化合物を有効成分として含む請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
請求項１〜４のいずれか一つに記載の組成物を含むヒトまたは動物用健康食品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、甘茶を水あるいは低級アルコールまたはそれらの混液で抽出することによって得られる抽出物を有効成分として含有する抗糖尿病用組成物に関するものである。【０００２】
より詳細には、本発明は、ユキノシタ科アジサイ属のアマチャまたはアマギアマチャを、発酵工程を含む製茶工程に付し加工調製した甘茶に含有される化合物またはそれらの塩を有効成分として含有する抗糖尿病用組成物に関するものである。
【背景技術】
【０００３】
最近、日本では、食事の欧米化、生活習慣の変化、交通機関の発達および交通手段の多様化に伴い、高カロリー食事の摂取、過食、不規則な食生活および運動不足が習慣的になっているヒトが急増している。このような習慣は、脂肪蓄積および肥満を介して、インスリン抵抗性糖尿病、高脂血症、高血圧動脈硬化症といった、いわゆる生活習慣病やメタボリックシンドロームを引き起こすといわれている。【０００４】
近年、脂肪組織から分泌されるホルモンとしてアディポネクチンが見出され、該ホルモンは正常な場合、動脈硬化を予防したり、インスリン感受性を亢進させる主要な効果を有するが、過度の肥満など、異常に内臓脂肪が蓄積した場合、このアディポネクチンの分泌が抑制され、メタボリックシンドロームや心血管病および２型糖尿病の発症の重要な原因になるといわれている（例えば、非特許文献１）。【０００５】
なかでも、糖尿病は、老若男女を問わず発症し、その患者数および糖尿病の可能性が否定できない人が急激に増加している。
したがって、上記のメタボリックシンドロームの治療が急務となっている今、アディポネクチン受容体を活性化する薬剤や、抗糖尿病作用を有し、抗肥満にもなるγ型ＰＰＡＲ(以下、ＰＰＡＲγともいう)アゴニストなどのような薬の開発が所望されている。【０００６】
一方、糖尿病薬として用いられているトログリタゾン(trogritazone)やピオグリタゾン(pioglitazone)などのチアゾリジン誘導体は、核内受容体ＰＰＡＲγの強力なアゴニストであり、主に脂肪細胞におけるＰＰＡＲγに作用することによって、インスリン抵抗性を改善すると考えられている。特に、これらの薬剤は、血中アディポネクチン濃度を上昇させ、これが糖代謝異常の改善につながっていることが明らかとなっている（例えば、非特許文献２）。【０００７】
他方、ユキノシタ科（Saxifragaceae）アジサイ属の植物であるアマチャ（Hydrangea macrophylla Seringe var. thumbergii Makino）およびアマギアマチャ（Hydrangea macrophylla Ser. var. amgiana Makino）は、アジサイ（ヤマアジサイ）の変異種であるが、植物体が甘味を呈する系統であり、従来、発酵工程を含む製茶工程により加工調製され甘茶として利用されている。【０００８】
また、上記の甘茶は、毎年４月８日に各寺院で催される潅仏会(甘茶供養)において、誕生仏にこの甘茶湯が注がれることでも広く知られている。
さらに、上記の甘茶は甘味成分としてフィロズルシン(phyllodulcin)を含むことも知られており（例えば、非特許文献３）、医薬品の矯味剤、口腔清涼剤および糖尿病患者の甘味料としても用いられている（非特許文献４）。【０００９】
また、上記の甘茶のメタノール抽出エキスが、抗潰瘍作用、抗アレルギー作用および利胆作用を有することも報告されている（例えば、非特許文献５）。
しかしながら、甘茶の抗糖尿病作用に関しては、これまで報告されていない。【００１０】
なお、甘茶が含有する成分に関しては、上記のフィロズルシン(化合物(１))以外にも、例えば、ヒドランゲノール(hydrangenol)(化合物(２))、ツンベルジノールＡ(thunberginol A)(化合物(３))、ツンベルジノールＢ(thunberginol B)(化合物(４))、ツンベルジノールＦ(thunberginol F)(化合物(５))、８-Ｏ-Ｇｌｃ フィロズルシン(phyllodulcin 8-O-Glc)(化合物(６))、ヒドランゲア酸(hydrangeaic acid)(化合物(７))などが含有されることが報告されている（例えば、非特許文献６〜９）。【００１１】
【非特許文献１】Kadowaki T. & Yamauchi T.、Endocrine Reviews 2005、26、439
【非特許文献２】門脇孝編、糖尿病  病態の分子生物学、（株）南山堂、東京、2004年
【非特許文献３】朝比奈ら、薬学雑誌、54巻、314頁(1934)
【非特許文献４】吉川、食品と科学、1999、11、第38〜43頁
【非特許文献５】吉川ら、薬学雑誌、114巻、176〜181頁
【非特許文献６】Y. Asahinaら、Chem. Pharm. Bull.、63、429〜442頁(1930)
【非特許文献７】M. Yoshikawaら、Chem. Pharm. Bull.、42、2225〜2230頁(1994)
【非特許文献８】M. Yoshikawaら、Heterocycles、50、411〜418頁(1999)
【非特許文献９】A. Yagiら、Chem. Pharm. Bull.、20、1755〜1761頁(1972)
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
本発明は、甘茶の新規用途の開発を課題とする。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明者は、ＰＰＡＲγアゴニストが脂肪前駆細胞３Ｔ３−Ｌ１の脂肪細胞への分化を促進し、アディポネクチンの産生を増加させることに着目し、従来、糖尿病患者の甘味料としても用いられている甘茶の新規用途の開発に着手した。
すなわち、本発明者は、甘茶の含有成分であるフィロズルシン(１)、ヒドランゲノール(２)、ツンベルジノールＡ(３)、ツンベルジノールＢ(４)、ツンベルジノールＦ(５)、８-Ｏ-Ｇｌｃ-フィロズルシン(６)またはヒドランゲア酸(７)の抗糖尿病作用に関して、３Ｔ３−Ｌ１細胞における細胞内の中性脂質(ＴＧ)の蓄積を分化の指標として検討した。【００１４】
その結果、甘茶が含有する上記化合物(１)〜(７)のいずれもが、さらに特に、上記主要成分フィロズルシン(１)およびヒドランゲノール(２)が優れた抗糖尿病活性を有することを見出した。その上、特に強い活性を見出したヒドランゲノール(２)が、ミディアム中のアディポネクチン濃度や関連遺伝子発現および２型糖尿病マウス(KK-Ayマウス)における血糖降下作用を有することを見出し、本発明を完成した。【００１５】
かくして、本発明によれば、有効成分としての甘茶の水あるいは低級アルコールまたはそれらの混液抽出により得られる抽出物あるいはその処理物と、医薬的に受容な賦形剤または担体とからなる抗糖尿病用組成物が提供される。
【発明の効果】
【００１６】
本発明によれば、抗糖尿病の有効成分として、甘茶の抽出物またはその処理物が提供され、安全に使用できる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１７】
本発明における甘茶とは、ユキノシタ科（Saxifragaceae）アジサイ属の植物であり、前記フィロズルシンを甘味成分として含有するアマチャ（Hydrangea macrophylla Seringe var. thumbergii Makino）およびアマギアマチャ（Hydrangea macrophylla Ser. var. amgiana Makino）の発酵工程を含む製茶工程に付し加工調製された、いわゆる飲料用として供される甘茶を意味する。【００１８】
しかしながら、甘茶の原材料である植物としては、上記のフィロズルシンまたはその配糖体を含むアマチャおよびアマギアマチャに限定されることなく、植物体が甘味を呈するこれらの変種または品種改良により得られた品種である植物をも含むものである。【００１９】
上記の発酵工程を含む製茶工程としては、いわゆる甘茶の製造において広く用いられている周知の方法が採用される。
本発明では、上記の甘茶をそのまままたは細断もしくは粉砕して用いることができる。【００２０】
本発明による甘茶の抽出物あるいはその処理物の調製に用いられる溶媒としては、水または低級脂肪族アルコールもしくはそれらの混液が挙げられる。
水以外の上記の低級アルコールとしては、炭素数１〜４のアルコール類が挙げられる。具体的には、メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノール、ｎ−ブタノール、イソブタノールもしくはｔ−ブタノールまたはこれらの混液が挙げられる。【００２１】
水と低級アルコールの混液としては、それらの任意の割合における混液が挙げられるが、好ましくは含水率が３０容量％までの上記アルコール類が挙げられる。なかでもメタノールまたはエタノールあるいはこれらアルコールと水の上記割合の混液が好適に用いられる。
しかしながら、水だけを用いて甘茶から抽出できるのも本願発明の１つの特徴である。【００２２】
これらの抽出用溶媒は、抽出材料に対して１〜５０倍(容量／重量)程度、好ましくは３〜３０倍(容量／重量)程度用いられる。【００２３】
なお、抽出温度は、室温から溶媒の沸点の間で任意に設定できる。例えば、上記の抽出材料を上記の抽出溶媒に浸漬し、５０℃から抽出溶媒の沸点の温度で振盪下もしくは非振盪下で抽出するか、または抽出溶媒の還流下に抽出するのが適当である。【００２４】
抽出材料を振盪下に浸漬する場合には、３０分間〜１０時間程度行うのが適当であり、非振盪下に浸漬する場合には、１時間〜２０日間程度行うのが適当である。また、抽出溶媒の還流下に抽出するときは、３０分間〜数時間加熱還流するのが好ましい。【００２５】
なお、５０℃より低い温度で浸漬して抽出することも可能であるが、その場合には、上記の時間よりも長時間浸漬するのが好ましい。抽出操作は、同一材料について１回だけ行ってもよいが、複数回、例えば２〜５回程度繰り返すのが、抽出効率の観点から好ましい。【００２６】
抽出後に固形物をろ別して得られる抽出液は、常法により濃縮して抽出エキスとしてもよい。濃縮は、減圧下に行うのが好ましい。濃縮は抽出液が乾固するまで行ってもよい。【００２７】
抽出物は、そのまま本発明の組成物を調製するのに用いてもよいが、粉末状または凍結乾燥品等として用いてもよい。これらの固形物とする方法は、当該分野で公知の方法を採用することができる。【００２８】
したがって、本発明における抽出物あるいはその処理物とは、抽出液、抽出エキス、濃縮乾固物または凍結乾燥物のいずれも意味するが、本発明による抽出物は、精製せずにそのまま用いることもでき、本発明の一部を構成している。【００２９】
しかしながら、本発明では、抽出液を濃縮した抽出物を、その処理物として溶媒による分配抽出、すなわち、水および水と非混和性有機溶媒とを用いる分配抽出に単回または複数回付し、有機溶媒可溶画分と水溶性画分として分離して用いることもできる。【００３０】
なお、上記の抽出物あるいはその処理物は、上記のいずれの段階においても、減圧濃縮処理またはその前後に精製処理に付すことができる。
精製処理としては、上記の溶媒による分配抽出以外に、当業者に公知の各種クロマトグラフ法を単独で、または組み合わせて採用することができる。【００３１】
例えば、上記のクロマトグラフ法の例としては、アルミナ、順相もしくは逆相シリカゲル担体またはイオン交換樹脂を用いるカラムクロマトグラフィー、薄層クロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィーまたは遠心液体クロマトグラフィー等のいずれかを単独で、またはそれらを組み合わせて行う方法などが挙げられる。この際の担体および溶出溶媒等の精製条件は、各種クロマトグラフィーに対応して適宜選択することができる。【００３２】
なお、本発明者は、前記フィロズルシン(１)、ヒドランゲノール(２)、ツンベルジノールＡ(３)、ツンベルジノールＢ(４)、ツンベルジノールＦ(５)、８-Ｏ-Ｇｌｃフィロズルシン(６)およびヒドランゲア酸(７)は、いずれも前記非特許文献６〜９に記載の方法により単離したものを、以下の薬理試験に用いてこれらの抗糖尿病活性を見出して本発明を完成したものである。【００３３】
したがって、本発明によれば、本発明の抽出物が、一般式(Ｉ)：
【化１】
2008075528.tif 000002
［式中、Ｒ1は、一般式(ＩＩ)：【００３４】
【化２】
2008075528.tif 000003
（式中、Ｒ5およびＲ6は、互いに独立し、同一または異なり水素原子、ヒドロキシ基もしくはメトキシ基を表す）
で表されるフェネチル基であるか、または一般式(ＩＩＩ)：【００３５】
【化３】
2008075528.tif 000004
（式中、Ｒ5およびＲ6は上記一般式(ＩＩ)で定義したとおりである）
で表されるスチリル基であり、【００３６】
Ｒ2はカルボキシ基であるか、あるいは該カルボキシ基は上記フェネチル基またはスチリル基のα位もしくはβ位と結合してラクトン環を形成しており、
Ｒ3はヒドロキシ基であるか、またはグルコピラノシルオキシ基であり、
Ｒ4は水素元素またはヒドロキシ基である］
で表される化合物またはその塩を有効成分として含む抗糖尿病用組成物が提供される。【００３７】
さらに詳細には、本発明によれば、前記抽出物が、前記一般式(Ｉ)の化合物において、
Ｒ1は、Ｒ5がメトキシ基であり、Ｒ6がヒドロキシ基であるフェネチル基であり、Ｒ2がカルボキシ基で、このフェネチル基のβ位とラクトン環を形成しており、Ｒ3がヒドロキシ基であり、Ｒ4が水素原子である、式（１）：【００３８】
【化４】
2008075528.tif 000005
で表されるフィロズルシン(化合物(１))またはその塩か、
Ｒ1は、Ｒ5がヒドロキシ基であり、Ｒ6が水素原子であるフェネチル基であり、Ｒ2がカルボキシ基で、このフェネチル基のβ位とラクトン環を形成しており、Ｒ3がヒドロキシ基であり、Ｒ4が水素原子である、式（２）：【００３９】
【化５】
2008075528.tif 000006
で表されるヒドランゲノール(化合物(２))またはその塩か、
Ｒ1は、Ｒ5およびＲ6が共にヒドロキシ基であるスチリル基であり、Ｒ2がカルボキシ基で、このスチリル基のβ位とラクトン環を形成しており、Ｒ3がヒドロキシ基であり、Ｒ4が水素原子である、式（３）：【００４０】
【化６】
2008075528.tif 000007
で表されるツンベルジノールＡ(化合物(３))またはその塩か、
Ｒ1は、Ｒ5およびＲ6が共にヒドロキシ基であるスチリル基であり、Ｒ2がカルボキシ基で、このスチリル基のβ位とラクトン環を形成しており、Ｒ3およびＲ4が共にヒドロキシ基である、式（４）：【００４１】
【化７】
2008075528.tif 000008
で表されるツンベルジノールＢ(化合物(４))またはその塩か、
Ｒ1は、Ｒ5およびＲ6が共にヒドロキシ基であるスチリル基であり、Ｒ2がカルボキシ基で、このスチリル基のα位とラクトン環を形成しており、Ｒ3がヒドロキシ基であり。Ｒ4が水素原子である、式（５）：【００４２】
【化８】
2008075528.tif 000009
で表されるツンベルジノールＦ(化合物(５))またはその塩か、
Ｒ1は、Ｒ5がメトキシ基であり、Ｒ6がヒドロキシ基であるフェネチル基であり、Ｒ2がカルボキシ基で、このフェネチル基のβ位とラクトン環を形成しており、Ｒ3がグルコピラノシルオキシ基であり、Ｒ4が水素原子である、式（６）：【００４３】
【化９】
2008075528.tif 000010
で表される８-Ｏ-Ｇｌｃフィロズルシン(化合物(６))またはその塩か、あるいは
Ｒ1は、Ｒ5がヒドロキシ基であり、Ｒ6が水素原子であるスチリル基であり、Ｒ2がカルボキシ基であり、Ｒ3がヒドロキシ基であり、Ｒ4が水素原子である、式（７）：【００４４】
【化１０】
2008075528.tif 000011
で表されるヒドランゲア酸(化合物(７))またはその塩
からなる群から選択される少なくとも１以上の化合物を有効成分として含む抗糖尿病用組成物が提供される。【００４５】
上記の化合物（１）〜（７）の塩としては、常法によって形成される当該化合物が有しているフェノール性ヒドロキシ基もしくはカルボキシ基とナトリウムまたはカリウムのようなアルカリ金属との塩が挙げられる。【００４６】
本発明者は、ＰＰＡＲγアゴニストが脂肪前駆細胞３Ｔ３-Ｌ１の脂肪細胞への分化を
促進し、アディポネクチンの産生を増加させることに着目し、３Ｔ３-Ｌ１細胞における
細胞内の中性脂質(ＴＧ)の蓄積を分化の指標として抗糖尿病物質の探索を行ったところ、驚くべきことに、糖尿病患者の甘味料として用いられてきた甘茶が含有する上記の化合物（１）〜（７）の殆んどが、抗糖尿病作用を有することを見出した。【００４７】
特に、甘茶の主要成分であり甘味成分であるフィロズルシン(化合物(１))、およびヒドランゲノール(化合物(２))が３Ｔ３-Ｌ１の脂肪細胞への分化に対して活性を有すること
を見出した。【００４８】
したがって、本発明によれば、上記の式(１)〜(７)の化合物(以下、化合物(１)〜(７)
ともいう)からなる群から選択される１以上の化合物を有効成分として含む甘茶の抽出物あるいはその処理物と医薬的に受容な賦形剤または担体とからなる前記組成物を含むヒトまたは動物用医薬または健康食品が提供される。【００４９】
上記のような抽出物あるいはその処理物または化合物(１)〜(７)は、それぞれそのままの状態または単独もしくは混合物として、あるいは適当な媒体で希釈して、医薬品等の製造分野において公知の方法によって、散剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤または液剤等の種々の医薬品の形態に製剤化して使用することができる。【００５０】
これらの形態においては、適当な媒体を添加してもよい。そのような媒体としては、医薬的に許容される賦形剤、例えば結合剤(例えばシロップ、アラビアゴム、ゼラチン、ソルビトール、トラガントまたはポリビニルピロリドン)、充填剤(例えば乳糖、砂糖、トウモロコシ澱粉、リン酸カルシウム、ソルビトールまたはグリシン)、錠剤用滑剤(例えばステアリン酸マグネシウム、タルク、ポリエチレングリコールまたはシリカ)、崩壊剤(例えば馬鈴薯澱粉)または湿潤剤(例えばラウリル硫酸ナトリウム)等が挙げられる。【００５１】
錠剤は、通常の製薬の実際に周知の方法でコートしてもよい。液体製剤は、例えば水性または油性の懸濁液、溶液、エマルジョン、シロップまたはエリキシルの形態であってもよく、使用前に水または他の適切な賦形剤と混合する乾燥製品として提供してもよい。【００５２】
こうした液体製剤は、通常の添加剤、例えば懸濁化剤(例えばソルビトール、シロップ、メチルセルロース、グルコースシロップ、ゼラチン、水添加食用脂)、食用脂を含んでもよい乳化剤(例えばレシチン、ソルビタンモノオレエートまたはアラビアゴム)、非水性賦形剤(例えばアーモンド油、分画ココヤシ油またはグリセリン、プロピレングリコールまたはエチレングリコールのような油性エステル)、保存剤(例えばｐ−ヒドロキシ安息香酸メチルまたはプロピルまたはソルビン酸)、および所望により着色剤または香料等を含んでもよい。【００５３】
前記の健康食品とは、通常の食品よりも積極的な意味で、保健、健康維持・増進等を目的とした食品を意味し、例えば、液体または半固形、固形の製品、具体的には散剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤または液剤等のほか、クッキー、せんべい、ゼリー、ようかん、ヨーグルト、まんじゅう等の菓子類、清涼飲料、お茶類、栄養飲料、スープ等の形態が挙げられる。【００５４】
これらの食品の製造工程において、あるいは最終製品に、上記の抽出物あるいはその処理物または前記化合物(１)〜(７)を混合または塗布、噴霧などにより添加して、健康食品とすることができる。【００５５】
特に、本願発明による組成物は、糖尿病患者メタボリックシンドロームに該当するヒトに対して砂糖の代替え品として有効に利用できる。【００５６】
上記抽出物あるいはその処理物または化合物(１)〜(７)の使用量は、濃縮、精製の程度、活性の強さ等、使用目的、対象疾患や自覚症状の程度、使用者の体重、年齢等によって適宣調整することができる。例えば、成人１回につき抽出液または抽出エキスでは精製度や水分含量等に応じて、０.０１ｇ〜５ｇ程度が挙げられ、化合物では０.０１ｍｇ〜１ｇ程度が挙げられる。【００５７】
また、健康食品としての使用時には、食品の味が外観に悪影響を及ぼさない量、例えば、対象となる食品１ｋｇに対して、上記の抽出物あるいはその処理物を用いる場合には１ｇ〜４０ｇを、また、化合物(１)〜(７)を単独でもしくは混合物として用いる場合には０.５ｇ〜５ｇ程度の範囲で添加することが適当である。しかしながら、これらの使用量は用いる食品に応じて適宜変更できる。【００５８】
さらに、本発明者は、特に上記化合物(２)に対して、ミディアム(medium)中のアディポネクチンの放出、関連遺伝子発現および２型糖尿病マウス(ＫＫ-Ａyマウス)における血糖降下作用について以下に示すように検討した。
【実施例】
【００５９】
以下、本発明による化合物(１)〜(７)の抗糖尿病作用について、実施例により具体的に説明するが、以下の実施例および試験例は、本発明を説明するためのものであり、本発明を何ら限定するものではない。【００６０】
なお、本実施例で用いたフィロズルシン(化合物(１))、ヒドランゲノール(化合物(２))、ツンベルジノールＡ(化合物(３))、ツンベルジノールＢ(化合物(４))、ツンベルジノールＦ(化合物(５))、８-Ｏ-Ｇｌｃ-フィロズルシン(化合物(６))およびヒドランゲア酸(化合物(７))は、いずれも前記非特許文献６〜９に記載の方法に従って単離した。これらの化合物は、その各種スペクトルを測定し、標品のものと比較し、一致することを確認して、以下の試験に用いた。【００６１】
調製例１
マウス繊維芽細胞３Ｔ３-Ｌ１の培養
４８-ウェルプレート（スミロンセルタイト Ｃ−１プレート４８Ｆ、住友ベークライト株式会社）に播種したマウス繊維芽細胞３Ｔ３-Ｌ１(５×１０4細胞/１５０μＬ/ウェル)を、１０％牛胎児血清(ＦＣＳ)を含むＤＭＥＭ培地で２４時間培養（３７℃、５％ＣＯ2/空気）した。【００６２】
次ぎに、１μＭデキサメタゾン、０.５ｍＭ ３-イソブチル-１-メチルキサンチン、５
μｇ/ｍＬ インスリンおよび被験サンプル(化合物(１)〜(７))を含むＤＭＥＭ(高グルコ
ース)培地(分化培地(differentiation medium))で培養することによって脂肪細胞へ分化誘導させた。【００６３】
３日後に、１０％ＦＣＳ、５μｇ/ｍＬ インスリンおよび被験サンプル(化合物(１)〜(７))を含むＤＭＥＭ(高グルコース)培地(維持培地(maintain medium))に交換し、培養した。【００６４】
試験例１
３Ｔ３-Ｌ１細胞における細胞内中性脂肪(トリグリセライド：ＴＧ)に対する化合物(１)
〜(７)の作用
４日後（その間、２日毎に培養液を交換）に上記の培養細胞の培地を除き、精製水２００μＬを加えて細胞を超音波破砕し、破砕液中のＴＧ濃度を酵素法(トリグリセライドＥ test Wako)で測定した結果を以下の表に示す。【００６５】
【表１】
2008075528.tif 000012
【００６６】
上記の結果から明らかなように、化合物(１)〜(３)および(５)〜(７)はいずれも３Ｔ３-Ｌ１細胞における細胞内中性脂肪(ＴＧ)の増加に対して活性を有することが判明した。
すなわち、化合物(１)〜(３)および(５)〜(７)はいずれも３Ｔ３-Ｌ１細胞の分化を促
進することが見出された。【００６７】
試験例２
３Ｔ３-Ｌ１細胞の培養細胞を用いた化合物(２)のアディポネクチンの培地中への放出作用
次いで、上記の試験において、特に強い活性を示した化合物(２)について、前記の３Ｔ３-Ｌ１細胞の培養細胞を用い、アディポネクチンの培地中への放出に対する効果を調べた。
前記調製例１の３Ｔ３-Ｌ１細胞の培養細胞の培地を維持培地と交換し、その４８時間後に培地中に遊離したアジポネクチン濃度を市販のＥＬＩＳＡキット(Ｒ＆Ｄ社)を用いて測定した結果を以下の表に示す。なお、以下の実験において対照としてチアゾリン誘導体でインスリン抵抗性改善薬であるトログリタゾンを用いた。【００６８】
【表２】
2008075528.tif 000013
上記の結果から、化合物(２)は濃度依存的に３Ｔ３-Ｌ１細胞の分化細胞からのアディポネクチンの産生および放出を有意に促進することが判明した。【００６９】
試験例３
アディポネクチン、ＰＰＡＲγ２、ＩＬ-６およびＧＬＵＴ４の遺伝子発現に対する化合
物(２)の作用
さらに、化合物(２)の抗糖尿病およびインスリン抵抗性改善の関連遺伝子発現について検討した。
遺伝子発現解析には定量ＲＴ-ＰＣＲ装置(ＭｉｎｉＯｐｔｉｃｏ、Ｂｉｏ-Ｒａｄ社)を用いて実施した。すなわち、３Ｔ３-Ｌ１(１０6細胞/２ｍＬ/ウェル)を６-ウェルプレートに播種し、２４時間後に分化培地に変え３日間培養した。この培地を保持培地と交換し、その４８時間後に全ＲＮＡを抽出した。【００７０】
全ＲＮＡはＲＮｅａｓｙ Ｍｉｎｉ(Ｑｉａｇｅｎ社)を用いて抽出し、ｉＳｃｒｉｐｔ ｃＤＮＡ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ Ｋｉｔ(Ｂｉｏ-Ｒａｄ社)を用いてｍＲＮＡからｃＤＮＡを合成した。
以下の表に前記関連遺伝子のプライマー ペアー(primer pair)示す。【００７１】
【表３】
2008075528.tif 000014
【００７２】
なお、上記表に記載のプライマー ペアーに関して、アディポネクチンについてはＧＥＮＥＢＡＮＫのアクセッション番号ＮＭ００９６０５に基づき決定し、ＰＰＡＲγ２についてはTontonoz Pら、Genes Dev.、1994、5月15日；8 (10)、1224-1234頁に基づき決定し、ＩＬ-６およびβ-アクチンについてはAjuon KMら、Am. J. Physiol. Regul. Integr. Comp. Physiol.、2005、5月；288 (5)、R1220-R1225に基づき決定し、ＧＬＵＴ４についてはMcClain DAら、Am. J. Physiol. Endocrinol Metab.、2005、5月；288 (5)、E973-E979に基づいて決定した。【００７３】
上記の表に示すプライマー ペアー(primer pair)およびｉＱ ＳＹＢＲ Ｇｒｅｅｎ Ｓｕｐｅｒｍｉｘ Ｋｉｔ(Ｂｉｏ-Ｒａｄ社)を用いて、定量的逆転写ＰＣＲ(ＲＴ-ＰＣＲ)を９５℃で２分間、その後９５℃で３０秒、５８℃で３０秒および７２℃で３０秒を４０サイクル行うことにより実施した。それぞれの結果をβ-アクチン ｍＲＮＡに対する比率を求め、さらにコントロール群との比率で以下の表に示す。【００７４】
【表４】
2008075528.tif 000015
【００７５】
上記の結果から化合物(２)は、アディポネクチン ｍＲＮＡおよびＰＰＡＲγ２ ｍＲＮＡの発現を増加させ、アディポサイトカインの一つであるＩＬ-６ ｍＲＮＡの発現を減少させることが判明した。
また、化合物(２)は、インスリン受容体ＧＬＵＴ４の発現を増加させる傾向を有することも判明した。
また、化合物(２)はＰＰＡＲγアゴニストであるトログリタゾンとは異なる遺伝子発現パターンを示したことから、該アゴニストとは異なる作用機序を有すると推察される。【００７６】
試験例４〜６
２型糖尿病マウス(ＫＫ-Ａyマウス)における血糖値、血中中性脂肪(トリグリセライド(ＴＧ))および血中遊離脂肪酸(ＦＦＡ)濃度に対する化合物(２)の作用
次いで、さらに、化合物(２)の２型糖尿病マウス(ＫＫ-Ａyマウス)における血糖効果作用、すなわち血糖値、血中中性脂肪(トリグリセライド(ＴＧ))および血中遊離脂肪酸(Ｆ
ＦＡ)濃度に対する化合物(２)の作用について検討した。
イン ビボ試験として日本クレア株式会社から購入した５週齢、体重２７〜３０ｇのＫＫ-Ａyマウスに化合物(２)を１日１回２週間投与し、１週間毎にエーテル麻酔下、眼窩静脈から毛細管を用いて採血し、非絶食時における血糖値、血中中性脂肪および血中遊離脂肪酸濃度を測定した。【００７７】
なお、血糖値の測定には、グルコースＣＩＩ−テストワコー（和光純薬株式会社）を用い、血中中性脂肪濃度の測定には、トリグリセライドＥ−テストワコー（和光純薬株式会社）を用い、血中遊離脂肪酸濃度の測定には、ＮＥＦＡＣ−テストワコー（和光純薬株式会社）を用いた。
測定結果を以下の表に示す。【００７８】
【表５】
2008075528.tif 000016
上記の結果から、化合物(２)は、１週目および２週目において共に、有意に血糖値を低下させることが判明した。【００７９】
【表６】
2008075528.tif 000017
上記の結果から、化合物(２)は、１週目および２週目において共に、血中中性脂肪を低下させることが判明した。【００８０】
【表７】
2008075528.tif 000018
上記の結果から、化合物(２)は、２週目において濃度依存的に、有意に血中遊離脂肪酸濃度を低下させることが判明した。【００８１】
以上の結果から、前記化合物(１)〜(７)を有効成分として含む本願発明による甘茶の抽出物あるいはその処理物は、抗糖尿病作用を有し、メタボリックシンドロームに対しても効果をすることが判明した。【００８２】
実施例１
当該分野で公知の方法に従って得られた甘茶の水抽出物１重量部を乳糖３重量部と混合して混合物１００ｇを得、ゼラチンカプセルに充填し、１カプセル中に抽出物が５００ｍｇ含有されるゼラチンカプセル剤を得た。【００８３】
実施例２
実施例１に記載の水抽出物１重量部を乳糖３重量部と混合し、当該分野で公知の方法に従って顆粒剤１００ｇを得た。【００８４】
実施例３
実施例２に記載の乳糖に替えてデキストリンを用いて、実施例２と同様にして顆粒剤１００ｇを得た。【００８５】
実施例４
実施例２に記載の乳糖に替えて結晶性セルロースを用いて、実施例２と同様にして顆粒剤１００ｇを得た。【００８６】
実施例５
実施例２に記載の乳糖に替えて無水ブドウ糖を用いて、実施例２と同様にして顆粒剤１００ｇを得た。【００８７】
実施例６
実施例１に記載の水抽出物を常法に従って凍結乾燥して甘茶の抽出物の凍結乾燥物を得た。【００８８】
実施例７
実施例５で得られた顆粒１ｇを飲料用水５００ｍｌに溶解して飲料水を得た。
【産業上の利用可能性】
【００８９】
本発明によれば、有効成分としての甘茶の水あるいは低級アルコールまたはそれらの混液抽出により得られる抽出物あるいはその処理物と、医薬的に受容な賦形剤または担体とからなる抗糖尿病用組成物が提供され、安全に使用できる。
【配列表】
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【国際調査報告】
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