(57)【要約】  本発明は、ＷＴ１蛋白に対するＷＴ１特異的細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）のＴ細胞レセプター（ＴＣＲ）遺伝子のＣＤＲ３領域のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列を提供する。また本発明は、これらのヌクレオチド配列、アミノ酸配列を用いる癌の検査や癌治療の方法、これらのヌクレオチド配列、アミノ酸配列を含む癌の検査のためのチップ、プライマーセット、キット、装置等も提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＷＴ１特異的細胞障害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）のＴ細胞レセプター（ＴＣＲ）のＶβ鎖のＣＤＲ３をコードするヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチドであって、配列番号：１〜１６９５に示すいずれかのＣＤＲ３ヌクレオチド配列を有するＤＮＡ、またはその相補的ＲＮＡ、またはそれらの相補配列を有するポリヌクレオチド。
【請求項２】
配列番号：１〜１６９５に示すいずれかのＣＤＲ３ヌクレオチド配列からなるＤＮＡ、またはその相補的ＲＮＡ、またはそれらの相補配列からなる請求項１記載のポリヌクレオチド。
【請求項３】
ＷＴ１特異的細胞障害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）のＴ細胞レセプター（ＴＣＲ）のＶβ鎖のＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するペプチドであって、配列番号：１６９６〜３３８９に示すいずれかのＣＤＲ３アミノ酸配列を有するペプチド。
【請求項４】
配列番号：１６９６〜３３８９に示すいずれかのＣＤＲ３アミノ酸配列からなる請求項３記載のペプチド。
【請求項５】
請求項１または２記載のポリヌクレオチドあるいは請求項３または４記載のペプチドの、癌マーカーとしての使用。
【請求項６】
治療前にＨＬＡ−Ａ＊２４０２陽性患者から得られた試料中の、請求項１または２記載のいずれかのポリヌクレオチドあるいは請求項３または４記載のいずれかのペプチドを有するＷＴ１特異的ＣＴＬのクロナリティーを調べることを特徴とする、癌の診断方法であって、該クロナリティーが複数のＷＴ１特異的ＣＴＬが存在する場合に、該患者が癌にかかっている可能性があると判定する方法。
【請求項７】
治療前の患者におけるいずれかのＣＤＲ３ポリヌクレオチドまたはいずれかのＣＤＲ３ペプチドを有する３以上のクロナリティーを有するＷＴ１特異的ＣＴＬのクロナリティーが大きいほど、あるいは３以上のクロナリティーを有するＷＴ１特異的ＣＴＬの種類が多いほど、該患者が癌にかかっている可能性が高いと判定する請求項６記載の方法。
【請求項８】
治療前においてＨＬＡ−Ａ＊２４０２陽性患者から得られた試料中の、請求項１または２記載のいずれかのポリヌクレオチドあるいは請求項３または４記載のいずれかのペプチドを有するＷＴ１特異的ＣＴＬの種類およびクロナリティーを調べることを特徴とする、ＷＴ１ペプチド免疫療法に対する患者の感受性を調べる方法であって、該患者におけるクロナリティーが複数であるＷＴ１特異的ＣＴＬの種類が、ＷＴ１ペプチド免疫療法に対する無応答者のそれよりも多い場合に、ＷＴ１ペプチド免疫療法に対する該患者の感受性があると判定する方法。
【請求項９】
治療前の患者におけるクロナリティーが複数であるＷＴ１特異的ＣＴＬクローンの種類が多いほど、あるいはクロナリティーが大きいほど、ＷＴ１ペプチド免疫療法に対する該患者の感受性が高いと判定する請求項８記載の方法。
【請求項１０】
ＷＴ１ペプチド免疫療法の前後において、ＨＬＡ−Ａ＊２４０２陽性患者から得られた試料中の、請求項１または２記載のいずれかのポリヌクレオチドあるいは請求項３または４記載のいずれかのペプチドを有するＷＴ１特異的ＣＴＬクローンのクロナリティーを調べることを特徴とする、該患者におけるＷＴ１ペプチド免疫療法のモニタリング方法であって、いずれかのクローンに関してＷＴ１ペプチド免疫療法前よりもＷＴ１ペプチド免疫療法後において該ＷＴ１特異的ＣＴＬのクロナリティーが増加した場合に、該患者がＷＴ１ペプチド免疫療法に応答したと判定する方法。
【請求項１１】
ＷＴ１ペプチド免疫療法後において、クロナリティーの増加の割合が大きいほど、あるいはクロナリティーが増加したクローンの種類が多いほど、ＷＴ１ペプチド免疫療法に対する応答性が高いと判定する請求項１０記載の方法。
【請求項１２】
請求項３または４記載のペプチドに対する抗体。
【請求項１３】
請求項１または２記載のポリヌクレオチド、請求項３または４記載のペプチド、あるいは請求項１２記載の抗体を含むチップ。
【請求項１４】
配列番号：３３８９〜３４１６に示す配列から選択される配列を有するＣＤＲ３ポリペプチド増幅用プライマー。
【請求項１５】
請求項１または２記載のポリヌクレオチドあるいは請求項３または４記載のペプチドを有するＷＴ１特異的ＣＴＬを検出するための手段を含む、癌の診断キット、ＷＴ１ペプチド免疫療法に対する癌患者の感受性を調べるためのキット、またはＷＴ１ペプチド免疫療法のモニタリング用キット。
【請求項１６】
請求項１または２記載のポリヌクレオチドあるいは請求項３または４記載のペプチドを有するＷＴ１特異的ＣＴＬを検出するための手段を含む、癌の診断装置、ＷＴ１ペプチド免疫療法に対する癌患者の感受性を調べるための装置、またはＷＴ１ペプチド免疫療法のモニタリング用装置。
【請求項１７】
請求項１３記載のチップまたは請求項１４記載のプライマーを含む請求項１５記載のキット。
【請求項１８】
請求項１３記載のチップまたは請求項１４記載のプライマーが用いられる請求項１６記載の装置。
【請求項１９】
請求項１または２記載のポリヌクレオチド配列を含むＴ細胞レセプター遺伝子を導入したＨＬＡ−Ａ＊２４０２陽性癌患者のリンパ球。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、癌抗原特異的Ｔ細胞のレセプター遺伝子に含まれるポリヌクレオチドおよびそれによりコードされるペプチド、ならびにそれらを用いる癌の検査（診断、予後、治療モニタリング等）や癌の治療等に関する。
【背景技術】
【０００２】
癌の治療には手術による切除、放射線治療、抗癌剤による治療、そして免疫療法がある。このうち、免疫療法は癌に対する選択性・特異性が高く、副作用もほとんどないので、近年、特に注目されている。なかでも、多くの癌細胞や白血病細胞に豊富に存在するＷＴ１蛋白を標的とした癌や白血病の治療の試みがさかんに行われている。このようなＷＴ１を標的とした抗癌治療のメカニズムを研究し、さらに治療効果を高めるためには、ＷＴ１特異的細胞障害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）のＴ細胞レセプター（ＴＣＲ）遺伝子のヌクレオチド配列およびそれによりコードされるレセプターペプチドのアミノ酸配列を同定する必要がある。しかしながら、現在に至るまでいくつかの研究（非特許文献１−５等参照）がなされたにもかかわらず、かかるレセプター遺伝子およびレセプターペプチドの配列はほとんど知られていない。ましてやそれらを有効利用することについては記載されていない。
【非特許文献１】Valmori D. et al., J. Immunol. 168:4231-4240, 2002
【非特許文献２】Dietrich PY. et al., Cancer Res. 61:2047-2054, 2001
【非特許文献３】Coulie PG. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 98:10290-10295, 2001
【非特許文献４】Godelaine D. et al. J. Immunol. 171:4893-4897, 2003
【非特許文献５】Mandruzzato S. et al., J. Immunol. 169:4017-4024, 2002
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
本発明の課題は、ＷＴ１蛋白に対するＷＴ１特異的細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）のＴ細胞レセプター（ＴＣＲ）のアミノ酸配列およびそれをコードする遺伝子のヌクレオチド配列、特にそのＣＤＲ３領域のアミノ酸配列およびヌクレオチド配列を明らかにし、これらを癌の検査（診断、予後、治療モニタリング等）や癌治療に利用することであった。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
本発明者は、上記課題を解決せんと鋭意研究を重ね、健常人およびＨＬＡ−Ａ＊２４０２陽性患者のＷＴ１特異的細胞障害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）のＴ細胞レセプター（ＴＣＲ）のＶβ鎖のＣＤＲ３のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列を初めて決定し、本発明を完成するに至った。
すなわち、本発明は以下のものを提供する。
（１）ＷＴ１特異的細胞障害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）のＴ細胞レセプター（ＴＣＲ）のＶβ鎖のＣＤＲ３をコードするヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチドであって、配列番号：１〜１６９５に示すいずれかのＣＤＲ３ヌクレオチド配列を有するＤＮＡ、またはその相補的ＲＮＡ、またはそれらの相補配列を有するポリヌクレオチド；
（２）配列番号：１〜１６９５に示すいずれかのＣＤＲ３ヌクレオチド配列からなるＤＮＡ、またはその相補的ＲＮＡ、またはそれらの相補配列からなる（１）記載のポリヌクレオチド；
（３）ＷＴ１特異的細胞障害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）のＴ細胞レセプター（ＴＣＲ）のＶβ鎖のＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するペプチドであって、配列番号：１６９６〜３３８９に示すいずれかのＣＤＲ３アミノ酸配列を有するペプチド；
（４）配列番号：１６９６〜３３８９に示すいずれかのＣＤＲ３アミノ酸配列からなる（３）記載のペプチド；
（５）（１）または（２）記載のポリヌクレオチドあるいは（３）または（４）記載のペプチドの、癌マーカーとしての使用；
（６）治療前にＨＬＡ−Ａ＊２４０２陽性患者から得られた試料中の、（１）または（２）記載のいずれかのポリヌクレオチドあるいは（３）または（４）記載のいずれかのペプチドを有するＷＴ１特異的ＣＴＬのクロナリティーを調べることを特徴とする、癌の診断方法であって、該クロナリティーが複数のＷＴ１特異的ＣＴＬが存在する場合に、該患者が癌にかかっている可能性があると判定する方法；
（７）治療前の患者におけるいずれかのＣＤＲ３ポリヌクレオチドまたはいずれかのＣＤＲ３ペプチドを有する３以上のクロナリティーを有するＷＴ１特異的ＣＴＬのクロナリティーが大きいほど、あるいは３以上のクロナリティーを有するＷＴ１特異的ＣＴＬの種類が多いほど、該患者が癌にかかっている可能性が高いと判定する（６）記載の方法；
（８）治療前においてＨＬＡ−Ａ＊２４０２陽性患者から得られた試料中の、（１）または（２）記載のいずれかのポリヌクレオチドあるいは（３）または（４）記載のいずれかのペプチドを有するＷＴ１特異的ＣＴＬの種類およびクロナリティーを調べることを特徴とする、ＷＴ１ペプチド免疫療法に対する患者の感受性を調べる方法であって、該患者におけるクロナリティーが複数であるＷＴ１特異的ＣＴＬの種類が、ＷＴ１ペプチド免疫療法に対する無応答者のそれよりも多い場合に、ＷＴ１ペプチド免疫療法に対する該患者の感受性があると判定する方法；
（９）治療前の患者におけるクロナリティーが複数であるＷＴ１特異的ＣＴＬクローンの種類が多いほど、あるいはクロナリティーが大きいほど、ＷＴ１ペプチド免疫療法に対する該患者の感受性が高いと判定する（８）記載の方法；
（１０）ＷＴ１ペプチド免疫療法の前後において、ＨＬＡ−Ａ＊２４０２陽性患者から得られた試料中の、（１）または（２）記載のいずれかのポリヌクレオチドあるいは（３）または（４）記載のいずれかのペプチドを有するＷＴ１特異的ＣＴＬクローンのクロナリティーを調べることを特徴とする、該患者におけるＷＴ１ペプチド免疫療法のモニタリング方法であって、いずれかのクローンに関してＷＴ１ペプチド免疫療法前よりもＷＴ１ペプチド免疫療法後において該ＷＴ１特異的ＣＴＬのクロナリティーが増加した場合に、該患者がＷＴ１ペプチド免疫療法に応答したと判定する方法；
（１１）ＷＴ１ペプチド免疫療法後において、クロナリティーの増加の割合が大きいほど、あるいはクロナリティーが増加したクローンの種類が多いほど、ＷＴ１ペプチド免疫療法に対する応答性が高いと判定する（１０）記載の方法；
（１２）（３）または（４）記載のペプチドに対する抗体；
（１３）（１）または（２）記載のポリヌクレオチド、（３）または（４）記載のペプチド、あるいは（１２）記載の抗体を含むチップ；
（１４）配列番号：３３８９〜３４１６に示す配列から選択される配列を有するＣＤＲ３ポリペプチド増幅用プライマー；
（１５）（１）または（２）記載のポリヌクレオチドあるいは（３）または（４）記載のペプチドを有するＷＴ１特異的ＣＴＬを検出するための手段を含む、癌の診断キット、ＷＴ１ペプチド免疫療法に対する癌患者の感受性を調べるためのキット、またはＷＴ１ペプチド免疫療法のモニタリング用キット；
（１６）（１）または（２）記載のポリヌクレオチドあるいは（３）または（４）記載のペプチドを有するＷＴ１特異的ＣＴＬを検出するための手段を含む、癌の診断装置、ＷＴ１ペプチド免疫療法に対する癌患者の感受性を調べるための装置、またはＷＴ１ペプチド免疫療法のモニタリング用装置；
（１７）（１３）記載のチップまたは（１４）記載のプライマーを含む（１５）記載のキット；
（１８）（１３）記載のチップまたは（１４）記載のプライマーが用いられる（１６）記載の装置；
（１９）（１）または（２）記載のポリヌクレオチド配列を含むＴ細胞レセプター遺伝子を導入したＨＬＡ−Ａ＊２４０２陽性癌患者のリンパ球。【０００５】
さらに本発明は、ＣＤＲ３ポリヌクレオチドを含むＴ細胞レセプター遺伝子を導入したＨＬＡ−Ａ＊２４０２陽性癌患者のリンパ球を用いた癌治療も提供する。【０００６】
さらに本発明は、ＣＤＲ３ペプチドに対する抗体およびその使用も提供する。
【発明の効果】
【０００７】
本発明によれば、ＷＴ１特異的ＣＴＬのＴＣＲのＶβ鎖遺伝子に含まれるヌクレオチド配列およびそれらによりコードされるペプチドのアミノ酸配列、詳細には、ＣＤＲ３のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列が明らかとなり、これらのポリヌクレオチドまたはペプチドを用いて、広範な癌の検査（診断、予後、治療モニタリング等）、癌の治療等を行うことができる。
【図面の簡単な説明】
【０００８】
【図１−１】図１−１は、本発明において同定された健常人およびＨＬＡ−Ａ＊２４０２陽性患者のＷＴ１特異的細胞障害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）のＴ細胞レセプター（ＴＣＲ）のＶβ鎖のＣＤＲ３のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列を示す。図中、ｃｌｏｎｅ＃はクローン番号であり、ドットの左の数字はＶβ鎖のファミリー番号、ドットの右の数字は整理番号である。Ｖｎａｍｅ、ＪｎａｍｅおよびＤｎａｍｅはＶ領域、Ｊ領域およびＤ領域がどのようなものかを示す。ヌクレオチド配列の上のＶ−ＲＥＧＩＯＮ・・・Ｎ１・・・Ｄ−ＲＥＧＩＯＮ・・・（Ｐ）Ｎ２・・・Ｊ−ＲＥＧＩＯＮはヌクレオチド配列の各部分の由来を示す。
【図１−２】図１−２は、本発明において同定された健常人およびＨＬＡ−Ａ＊２４０２陽性患者のＷＴ１特異的細胞障害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）のＴ細胞レセプター（ＴＣＲ）のＶβ鎖のＣＤＲ３のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列を示す。図中、ｃｌｏｎｅ＃はクローン番号であり、ドットの左の数字はＶβ鎖のファミリー番号、ドットの右の数字は整理番号である。Ｖｎａｍｅ、ＪｎａｍｅおよびＤｎａｍｅはＶ領域、Ｊ領域およびＤ領域がどのようなものかを示す。ヌクレオチド配列の上のＶ−ＲＥＧＩＯＮ・・・Ｎ１・・・Ｄ−ＲＥＧＩＯＮ・・・（Ｐ）Ｎ２・・・Ｊ−ＲＥＧＩＯＮはヌクレオチド配列の各部分の由来を示す。
【図１−３】図１−３は、本発明において同定された健常人およびＨＬＡ−Ａ＊２４０２陽性患者のＷＴ１特異的細胞障害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）のＴ細胞レセプター（ＴＣＲ）のＶβ鎖のＣＤＲ３のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列を示す。図中、ｃｌｏｎｅ＃はクローン番号であり、ドットの左の数字はＶβ鎖のファミリー番号、ドットの右の数字は整理番号である。Ｖｎａｍｅ、ＪｎａｍｅおよびＤｎａｍｅはＶ領域、Ｊ領域およびＤ領域がどのようなものかを示す。ヌクレオチド配列の上のＶ−ＲＥＧＩＯＮ・・・Ｎ１・・・Ｄ−ＲＥＧＩＯＮ・・・（Ｐ）Ｎ２・・・Ｊ−ＲＥＧＩＯＮはヌクレオチド配列の各部分の由来を示す。
【図１−４】図１−４は、本発明において同定された健常人およびＨＬＡ−Ａ＊２４０２陽性患者のＷＴ１特異的細胞障害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）のＴ細胞レセプター（ＴＣＲ）のＶβ鎖のＣＤＲ３のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列を示す。図中、ｃｌｏｎｅ＃はクローン番号であり、ドットの左の数字はＶβ鎖のファミリー番号、ドットの右の数字は整理番号である。Ｖｎａｍｅ、ＪｎａｍｅおよびＤｎａｍｅはＶ領域、Ｊ領域およびＤ領域がどのようなものかを示す。ヌクレオチド配列の上のＶ−ＲＥＧＩＯＮ・・・Ｎ１・・・Ｄ−ＲＥＧＩＯＮ・・・（Ｐ）Ｎ２・・・Ｊ−ＲＥＧＩＯＮはヌクレオチド配列の各部分の由来を示す。
【図１−５】図１−５は、本発明において同定された健常人およびＨＬＡ−Ａ＊２４０２陽性患者のＷＴ１特異的細胞障害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）のＴ細胞レセプター（ＴＣＲ）のＶβ鎖のＣＤＲ３のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列を示す。図中、ｃｌｏｎｅ＃はクローン番号であり、ドットの左の数字はＶβ鎖のファミリー番号、ドットの右の数字は整理番号である。Ｖｎａｍｅ、ＪｎａｍｅおよびＤｎａｍｅはＶ領域、Ｊ領域およびＤ領域がどのようなものかを示す。ヌクレオチド配列の上のＶ−ＲＥＧＩＯＮ・・・Ｎ１・・・Ｄ−ＲＥＧＩＯＮ・・・（Ｐ）Ｎ２・・・Ｊ−ＲＥＧＩＯＮはヌクレオチド配列の各部分の由来を示す。
【図１−６】図１−６は、本発明において同定された健常人およびＨＬＡ−Ａ＊２４０２陽性患者のＷＴ１特異的細胞障害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）のＴ細胞レセプター（ＴＣＲ）のＶβ鎖のＣＤＲ３のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列を示す。図中、ｃｌｏｎｅ＃はクローン番号であり、ドットの左の数字はＶβ鎖のファミリー番号、ドットの右の数字は整理番号である。Ｖｎａｍｅ、ＪｎａｍｅおよびＤｎａｍｅはＶ領域、Ｊ領域およびＤ領域がどのようなものかを示す。ヌクレオチド配列の上のＶ−ＲＥＧＩＯＮ・・・Ｎ１・・・Ｄ−ＲＥＧＩＯＮ・・・（Ｐ）Ｎ２・・・Ｊ−ＲＥＧＩＯＮはヌクレオチド配列の各部分の由来を示す。
【図１−７】図１−７は、本発明において同定された健常人およびＨＬＡ−Ａ＊２４０２陽性患者のＷＴ１特異的細胞障害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）のＴ細胞レセプター（ＴＣＲ）のＶβ鎖のＣＤＲ３のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列を示す。図中、ｃｌｏｎｅ＃はクローン番号であり、ドットの左の数字はＶβ鎖のファミリー番号、ドットの右の数字は整理番号である。Ｖｎａｍｅ、ＪｎａｍｅおよびＤｎａｍｅはＶ領域、Ｊ領域およびＤ領域がどのようなものかを示す。ヌクレオチド配列の上のＶ−ＲＥＧＩＯＮ・・・Ｎ１・・・Ｄ−ＲＥＧＩＯＮ・・・（Ｐ）Ｎ２・・・Ｊ−ＲＥＧＩＯＮはヌクレオチド配列の各部分の由来を示す。
【図１−８】図１−８は、本発明において同定された健常人およびＨＬＡ−Ａ＊２４０２陽性患者のＷＴ１特異的細胞障害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）のＴ細胞レセプター（ＴＣＲ）のＶβ鎖のＣＤＲ３のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列を示す。図中、ｃｌｏｎｅ＃はクローン番号であり、ドットの左の数字はＶβ鎖のファミリー番号、ドットの右の数字は整理番号である。Ｖｎａｍｅ、ＪｎａｍｅおよびＤｎａｍｅはＶ領域、Ｊ領域およびＤ領域がどのようなものかを示す。ヌクレオチド配列の上のＶ−ＲＥＧＩＯＮ・・・Ｎ１・・・Ｄ−ＲＥＧＩＯＮ・・・（Ｐ）Ｎ２・・・Ｊ−ＲＥＧＩＯＮはヌクレオチド配列の各部分の由来を示す。
【図１−９】図１−９は、本発明において同定された健常人およびＨＬＡ−Ａ＊２４０２陽性患者のＷＴ１特異的細胞障害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）のＴ細胞レセプター（ＴＣＲ）のＶβ鎖のＣＤＲ３のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列を示す。図中、ｃｌｏｎｅ＃はクローン番号であり、ドットの左の数字はＶβ鎖のファミリー番号、ドットの右の数字は整理番号である。Ｖｎａｍｅ、ＪｎａｍｅおよびＤｎａｍｅはＶ領域、Ｊ領域およびＤ領域がどのようなものかを示す。ヌクレオチド配列の上のＶ−ＲＥＧＩＯＮ・・・Ｎ１・・・Ｄ−ＲＥＧＩＯＮ・・・（Ｐ）Ｎ２・・・Ｊ−ＲＥＧＩＯＮはヌクレオチド配列の各部分の由来を示す。
【図１−１０】図１−１０は、本発明において同定された健常人およびＨＬＡ−Ａ＊２４０２陽性患者のＷＴ１特異的細胞障害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）のＴ細胞レセプター（ＴＣＲ）のＶβ鎖のＣＤＲ３のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列を示す。図中、ｃｌｏｎｅ＃はクローン番号であり、ドットの左の数字はＶβ鎖のファミリー番号、ドットの右の数字は整理番号である。Ｖｎａｍｅ、ＪｎａｍｅおよびＤｎａｍｅはＶ領域、Ｊ領域およびＤ領域がどのようなものかを示す。ヌクレオチド配列の上のＶ−ＲＥＧＩＯＮ・・・Ｎ１・・・Ｄ−ＲＥＧＩＯＮ・・・（Ｐ）Ｎ２・・・Ｊ−ＲＥＧＩＯＮはヌクレオチド配列の各部分の由来を示す。
【図１−１１】図１−１１は、本発明において同定された健常人およびＨＬＡ−Ａ＊２４０２陽性患者のＷＴ１特異的細胞障害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）のＴ細胞レセプター（ＴＣＲ）のＶβ鎖のＣＤＲ３のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列を示す。図中、ｃｌｏｎｅ＃はクローン番号であり、ドットの左の数字はＶβ鎖のファミリー番号、ドットの右の数字は整理番号である。Ｖｎａｍｅ、ＪｎａｍｅおよびＤｎａｍｅはＶ領域、Ｊ領域およびＤ領域がどのようなものかを示す。ヌクレオチド配列の上のＶ−ＲＥＧＩＯＮ・・・Ｎ１・・・Ｄ−ＲＥＧＩＯＮ・・・（Ｐ）Ｎ２・・・Ｊ−ＲＥＧＩＯＮはヌクレオチド配列の各部分の由来を示す。
【図１−１２】図１−１２は、本発明において同定された健常人およびＨＬＡ−Ａ＊２４０２陽性患者のＷＴ１特異的細胞障害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）のＴ細胞レセプター（ＴＣＲ）のＶβ鎖のＣＤＲ３のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列を示す。図中、ｃｌｏｎｅ＃はクローン番号であり、ドットの左の数字はＶβ鎖のファミリー番号、ドットの右の数字は整理番号である。Ｖｎａｍｅ、ＪｎａｍｅおよびＤｎａｍｅはＶ領域、Ｊ領域およびＤ領域がどのようなものかを示す。ヌクレオチド配列の上のＶ−ＲＥＧＩＯＮ・・・Ｎ１・・・Ｄ−ＲＥＧＩＯＮ・・・（Ｐ）Ｎ２・・・Ｊ−ＲＥＧＩＯＮはヌクレオチド配列の各部分の由来を示す。
【図１−１３】図１−１３は、本発明において同定された健常人およびＨＬＡ−Ａ＊２４０２陽性患者のＷＴ１特異的細胞障害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）のＴ細胞レセプター（ＴＣＲ）のＶβ鎖のＣＤＲ３のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列を示す。図中、ｃｌｏｎｅ＃はクローン番号であり、ドットの左の数字はＶβ鎖のファミリー番号、ドットの右の数字は整理番号である。Ｖｎａｍｅ、ＪｎａｍｅおよびＤｎａｍｅはＶ領域、Ｊ領域およびＤ領域がどのようなものかを示す。ヌクレオチド配列の上のＶ−ＲＥＧＩＯＮ・・・Ｎ１・・・Ｄ−ＲＥＧＩＯＮ・・・（Ｐ）Ｎ２・・・Ｊ−ＲＥＧＩＯＮはヌクレオチド配列の各部分の由来を示す。
【図１−１４】図１−１４は、本発明において同定された健常人およびＨＬＡ−Ａ＊２４０２陽性患者のＷＴ１特異的細胞障害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）のＴ細胞レセプター（ＴＣＲ）のＶβ鎖のＣＤＲ３のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列を示す。図中、ｃｌｏｎｅ＃はクローン番号であり、ドットの左の数字はＶβ鎖のファミリー番号、ドットの右の数字は整理番号である。Ｖｎａｍｅ、ＪｎａｍｅおよびＤｎａｍｅはＶ領域、Ｊ領域およびＤ領域がどのようなものかを示す。ヌクレオチド配列の上のＶ−ＲＥＧＩＯＮ・・・Ｎ１・・・Ｄ−ＲＥＧＩＯＮ・・・（Ｐ）Ｎ２・・・Ｊ−ＲＥＧＩＯＮはヌクレオチド配列の各部分の由来を示す。
【図１−１５】図１−１５は、本発明において同定された健常人およびＨＬＡ−Ａ＊２４０２陽性患者のＷＴ１特異的細胞障害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）のＴ細胞レセプター（ＴＣＲ）のＶβ鎖のＣＤＲ３のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列を示す。図中、ｃｌｏｎｅ＃はクローン番号であり、ドットの左の数字はＶβ鎖のファミリー番号、ドットの右の数字は整理番号である。Ｖｎａｍｅ、ＪｎａｍｅおよびＤｎａｍｅはＶ領域、Ｊ領域およびＤ領域がどのようなものかを示す。ヌクレオチド配列の上のＶ−ＲＥＧＩＯＮ・・・Ｎ１・・・Ｄ−ＲＥＧＩＯＮ・・・（Ｐ）Ｎ２・・・Ｊ−ＲＥＧＩＯＮはヌクレオチド配列の各部分の由来を示す。
【図１−１６】図１−１６は、本発明において同定された健常人およびＨＬＡ−Ａ＊２４０２陽性患者のＷＴ１特異的細胞障害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）のＴ細胞レセプター（ＴＣＲ）のＶβ鎖のＣＤＲ３のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列を示す。図中、ｃｌｏｎｅ＃はクローン番号であり、ドットの左の数字はＶβ鎖のファミリー番号、ドットの右の数字は整理番号である。Ｖｎａｍｅ、ＪｎａｍｅおよびＤｎａｍｅはＶ領域、Ｊ領域およびＤ領域がどのようなものかを示す。ヌクレオチド配列の上のＶ−ＲＥＧＩＯＮ・・・Ｎ１・・・Ｄ−ＲＥＧＩＯＮ・・・（Ｐ）Ｎ２・・・Ｊ−ＲＥＧＩＯＮはヌクレオチド配列の各部分の由来を示す。
【図１−１７】図１−１７は、本発明において同定された健常人およびＨＬＡ−Ａ＊２４０２陽性患者のＷＴ１特異的細胞障害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）のＴ細胞レセプター（ＴＣＲ）のＶβ鎖のＣＤＲ３のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列を示す。図中、ｃｌｏｎｅ＃はクローン番号であり、ドットの左の数字はＶβ鎖のファミリー番号、ドットの右の数字は整理番号である。Ｖｎａｍｅ、ＪｎａｍｅおよびＤｎａｍｅはＶ領域、Ｊ領域およびＤ領域がどのようなものかを示す。ヌクレオチド配列の上のＶ−ＲＥＧＩＯＮ・・・Ｎ１・・・Ｄ−ＲＥＧＩＯＮ・・・（Ｐ）Ｎ２・・・Ｊ−ＲＥＧＩＯＮはヌクレオチド配列の各部分の由来を示す。
【図１−１８】図１−１８は、本発明において同定された健常人およびＨＬＡ−Ａ＊２４０２陽性患者のＷＴ１特異的細胞障害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）のＴ細胞レセプター（ＴＣＲ）のＶβ鎖のＣＤＲ３のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列を示す。図中、ｃｌｏｎｅ＃はクローン番号であり、ドットの左の数字はＶβ鎖のファミリー番号、ドットの右の数字は整理番号である。Ｖｎａｍｅ、ＪｎａｍｅおよびＤｎａｍｅはＶ領域、Ｊ領域およびＤ領域がどのようなものかを示す。ヌクレオチド配列の上のＶ−ＲＥＧＩＯＮ・・・Ｎ１・・・Ｄ−ＲＥＧＩＯＮ・・・（Ｐ）Ｎ２・・・Ｊ−ＲＥＧＩＯＮはヌクレオチド配列の各部分の由来を示す。
【図１−１９】図１−１９は、本発明において同定された健常人およびＨＬＡ−Ａ＊２４０２陽性患者のＷＴ１特異的細胞障害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）のＴ細胞レセプター（ＴＣＲ）のＶβ鎖のＣＤＲ３のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列を示す。図中、ｃｌｏｎｅ＃はクローン番号であり、ドットの左の数字はＶβ鎖のファミリー番号、ドットの右の数字は整理番号である。Ｖｎａｍｅ、ＪｎａｍｅおよびＤｎａｍｅはＶ領域、Ｊ領域およびＤ領域がどのようなものかを示す。ヌクレオチド配列の上のＶ−ＲＥＧＩＯＮ・・・Ｎ１・・・Ｄ−ＲＥＧＩＯＮ・・・（Ｐ）Ｎ２・・・Ｊ−ＲＥＧＩＯＮはヌクレオチド配列の各部分の由来を示す。
【図１−２０】図１−２０は、本発明において同定された健常人およびＨＬＡ−Ａ＊２４０２陽性患者のＷＴ１特異的細胞障害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）のＴ細胞レセプター（ＴＣＲ）のＶβ鎖のＣＤＲ３のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列を示す。図中、ｃｌｏｎｅ＃はクローン番号であり、ドットの左の数字はＶβ鎖のファミリー番号、ドットの右の数字は整理番号である。Ｖｎａｍｅ、ＪｎａｍｅおよびＤｎａｍｅはＶ領域、Ｊ領域およびＤ領域がどのようなものかを示す。ヌクレオチド配列の上のＶ−ＲＥＧＩＯＮ・・・Ｎ１・・・Ｄ−ＲＥＧＩＯＮ・・・（Ｐ）Ｎ２・・・Ｊ−ＲＥＧＩＯＮはヌクレオチド配列の各部分の由来を示す。
【図１−２１】図１−２１は、本発明において同定された健常人およびＨＬＡ−Ａ＊２４０２陽性患者のＷＴ１特異的細胞障害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）のＴ細胞レセプター（ＴＣＲ）のＶβ鎖のＣＤＲ３のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列を示す。図中、ｃｌｏｎｅ＃はクローン番号であり、ドットの左の数字はＶβ鎖のファミリー番号、ドットの右の数字は整理番号である。Ｖｎａｍｅ、ＪｎａｍｅおよびＤｎａｍｅはＶ領域、Ｊ領域およびＤ領域がどのようなものかを示す。ヌクレオチド配列の上のＶ−ＲＥＧＩＯＮ・・・Ｎ１・・・Ｄ−ＲＥＧＩＯＮ・・・（Ｐ）Ｎ２・・・Ｊ−ＲＥＧＩＯＮはヌクレオチド配列の各部分の由来を示す。
【図１−２２】図１−２２は、本発明において同定された健常人およびＨＬＡ−Ａ＊２４０２陽性患者のＷＴ１特異的細胞障害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）のＴ細胞レセプター（ＴＣＲ）のＶβ鎖のＣＤＲ３のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列を示す。図中、ｃｌｏｎｅ＃はクローン番号であり、ドットの左の数字はＶβ鎖のファミリー番号、ドットの右の数字は整理番号である。Ｖｎａｍｅ、ＪｎａｍｅおよびＤｎａｍｅはＶ領域、Ｊ領域およびＤ領域がどのようなものかを示す。ヌクレオチド配列の上のＶ−ＲＥＧＩＯＮ・・・Ｎ１・・・Ｄ−ＲＥＧＩＯＮ・・・（Ｐ）Ｎ２・・・Ｊ−ＲＥＧＩＯＮはヌクレオチド配列の各部分の由来を示す。
【図１−２３】図１−２３は、本発明において同定された健常人およびＨＬＡ−Ａ＊２４０２陽性患者のＷＴ１特異的細胞障害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）のＴ細胞レセプター（ＴＣＲ）のＶβ鎖のＣＤＲ３のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列を示す。図中、ｃｌｏｎｅ＃はクローン番号であり、ドットの左の数字はＶβ鎖のファミリー番号、ドットの右の数字は整理番号である。Ｖｎａｍｅ、ＪｎａｍｅおよびＤｎａｍｅはＶ領域、Ｊ領域およびＤ領域がどのようなものかを示す。ヌクレオチド配列の上のＶ−ＲＥＧＩＯＮ・・・Ｎ１・・・Ｄ−ＲＥＧＩＯＮ・・・（Ｐ）Ｎ２・・・Ｊ−ＲＥＧＩＯＮはヌクレオチド配列の各部分の由来を示す。
【図１−２４】図１−２４は、本発明において同定された健常人およびＨＬＡ−Ａ＊２４０２陽性患者のＷＴ１特異的細胞障害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）のＴ細胞レセプター（ＴＣＲ）のＶβ鎖のＣＤＲ３のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列を示す。図中、ｃｌｏｎｅ＃はクローン番号であり、ドットの左の数字はＶβ鎖のファミリー番号、ドットの右の数字は整理番号である。Ｖｎａｍｅ、ＪｎａｍｅおよびＤｎａｍｅはＶ領域、Ｊ領域およびＤ領域がどのようなものかを示す。ヌクレオチド配列の上のＶ−ＲＥＧＩＯＮ・・・Ｎ１・・・Ｄ−ＲＥＧＩＯＮ・・・（Ｐ）Ｎ２・・・Ｊ−ＲＥＧＩＯＮはヌクレオチド配列の各部分の由来を示す。
【図１−２５】図１−２５は、本発明において同定された健常人およびＨＬＡ−Ａ＊２４０２陽性患者のＷＴ１特異的細胞障害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）のＴ細胞レセプター（ＴＣＲ）のＶβ鎖のＣＤＲ３のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列を示す。図中、ｃｌｏｎｅ＃はクローン番号であり、ドットの左の数字はＶβ鎖のファミリー番号、ドットの右の数字は整理番号である。Ｖｎａｍｅ、ＪｎａｍｅおよびＤｎａｍｅはＶ領域、Ｊ領域およびＤ領域がどのようなものかを示す。ヌクレオチド配列の上のＶ−ＲＥＧＩＯＮ・・・Ｎ１・・・Ｄ−ＲＥＧＩＯＮ・・・（Ｐ）Ｎ２・・・Ｊ−ＲＥＧＩＯＮはヌクレオチド配列の各部分の由来を示す。
【図１−２６】図１−２６は、本発明において同定された健常人およびＨＬＡ−Ａ＊２４０２陽性患者のＷＴ１特異的細胞障害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）のＴ細胞レセプター（ＴＣＲ）のＶβ鎖のＣＤＲ３のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列を示す。図中、ｃｌｏｎｅ＃はクローン番号であり、ドットの左の数字はＶβ鎖のファミリー番号、ドットの右の数字は整理番号である。Ｖｎａｍｅ、ＪｎａｍｅおよびＤｎａｍｅはＶ領域、Ｊ領域およびＤ領域がどのようなものかを示す。ヌクレオチド配列の上のＶ−ＲＥＧＩＯＮ・・・Ｎ１・・・Ｄ−ＲＥＧＩＯＮ・・・（Ｐ）Ｎ２・・・Ｊ−ＲＥＧＩＯＮはヌクレオチド配列の各部分の由来を示す。
【図１−２７】図１−２７は、本発明において同定された健常人およびＨＬＡ−Ａ＊２４０２陽性患者のＷＴ１特異的細胞障害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）のＴ細胞レセプター（ＴＣＲ）のＶβ鎖のＣＤＲ３のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列を示す。図中、ｃｌｏｎｅ＃はクローン番号であり、ドットの左の数字はＶβ鎖のファミリー番号、ドットの右の数字は整理番号である。Ｖｎａｍｅ、ＪｎａｍｅおよびＤｎａｍｅはＶ領域、Ｊ領域およびＤ領域がどのようなものかを示す。ヌクレオチド配列の上のＶ−ＲＥＧＩＯＮ・・・Ｎ１・・・Ｄ−ＲＥＧＩＯＮ・・・（Ｐ）Ｎ２・・・Ｊ−ＲＥＧＩＯＮはヌクレオチド配列の各部分の由来を示す。
【図１−２８】図１−２８は、本発明において同定された健常人およびＨＬＡ−Ａ＊２４０２陽性患者のＷＴ１特異的細胞障害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）のＴ細胞レセプター（ＴＣＲ）のＶβ鎖のＣＤＲ３のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列を示す。図中、ｃｌｏｎｅ＃はクローン番号であり、ドットの左の数字はＶβ鎖のファミリー番号、ドットの右の数字は整理番号である。Ｖｎａｍｅ、ＪｎａｍｅおよびＤｎａｍｅはＶ領域、Ｊ領域およびＤ領域がどのようなものかを示す。ヌクレオチド配列の上のＶ−ＲＥＧＩＯＮ・・・Ｎ１・・・Ｄ−ＲＥＧＩＯＮ・・・（Ｐ）Ｎ２・・・Ｊ−ＲＥＧＩＯＮはヌクレオチド配列の各部分の由来を示す。
【図１−２９】図１−２９は、本発明において同定された健常人およびＨＬＡ−Ａ＊２４０２陽性患者のＷＴ１特異的細胞障害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）のＴ細胞レセプター（ＴＣＲ）のＶβ鎖のＣＤＲ３のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列を示す。図中、ｃｌｏｎｅ＃はクローン番号であり、ドットの左の数字はＶβ鎖のファミリー番号、ドットの右の数字は整理番号である。Ｖｎａｍｅ、ＪｎａｍｅおよびＤｎａｍｅはＶ領域、Ｊ領域およびＤ領域がどのようなものかを示す。ヌクレオチド配列の上のＶ−ＲＥＧＩＯＮ・・・Ｎ１・・・Ｄ−ＲＥＧＩＯＮ・・・（Ｐ）Ｎ２・・・Ｊ−ＲＥＧＩＯＮはヌクレオチド配列の各部分の由来を示す。
【図１−３０】図１−３０は、本発明において同定された健常人およびＨＬＡ−Ａ＊２４０２陽性患者のＷＴ１特異的細胞障害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）のＴ細胞レセプター（ＴＣＲ）のＶβ鎖のＣＤＲ３のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列を示す。図中、ｃｌｏｎｅ＃はクローン番号であり、ドットの左の数字はＶβ鎖のファミリー番号、ドットの右の数字は整理番号である。Ｖｎａｍｅ、ＪｎａｍｅおよびＤｎａｍｅはＶ領域、Ｊ領域およびＤ領域がどのようなものかを示す。ヌクレオチド配列の上のＶ−ＲＥＧＩＯＮ・・・Ｎ１・・・Ｄ−ＲＥＧＩＯＮ・・・（Ｐ）Ｎ２・・・Ｊ−ＲＥＧＩＯＮはヌクレオチド配列の各部分の由来を示す。
【図１−３１】図１−３１は、本発明において同定された健常人およびＨＬＡ−Ａ＊２４０２陽性患者のＷＴ１特異的細胞障害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）のＴ細胞レセプター（ＴＣＲ）のＶβ鎖のＣＤＲ３のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列を示す。図中、ｃｌｏｎｅ＃はクローン番号であり、ドットの左の数字はＶβ鎖のファミリー番号、ドットの右の数字は整理番号である。Ｖｎａｍｅ、ＪｎａｍｅおよびＤｎａｍｅはＶ領域、Ｊ領域およびＤ領域がどのようなものかを示す。ヌクレオチド配列の上のＶ−ＲＥＧＩＯＮ・・・Ｎ１・・・Ｄ−ＲＥＧＩＯＮ・・・（Ｐ）Ｎ２・・・Ｊ−ＲＥＧＩＯＮはヌクレオチド配列の各部分の由来を示す。
【図１−３２】図１−３２は、本発明において同定された健常人およびＨＬＡ−Ａ＊２４０２陽性患者のＷＴ１特異的細胞障害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）のＴ細胞レセプター（ＴＣＲ）のＶβ鎖のＣＤＲ３のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列を示す。図中、ｃｌｏｎｅ＃はクローン番号であり、ドットの左の数字はＶβ鎖のファミリー番号、ドットの右の数字は整理番号である。Ｖｎａｍｅ、ＪｎａｍｅおよびＤｎａｍｅはＶ領域、Ｊ領域およびＤ領域がどのようなものかを示す。ヌクレオチド配列の上のＶ−ＲＥＧＩＯＮ・・・Ｎ１・・・Ｄ−ＲＥＧＩＯＮ・・・（Ｐ）Ｎ２・・・Ｊ−ＲＥＧＩＯＮはヌクレオチド配列の各部分の由来を示す。
【図１−３３】図１−３３は、本発明において同定された健常人およびＨＬＡ−Ａ＊２４０２陽性患者のＷＴ１特異的細胞障害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）のＴ細胞レセプター（ＴＣＲ）のＶβ鎖のＣＤＲ３のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列を示す。図中、ｃｌｏｎｅ＃はクローン番号であり、ドットの左の数字はＶβ鎖のファミリー番号、ドットの右の数字は整理番号である。Ｖｎａｍｅ、ＪｎａｍｅおよびＤｎａｍｅはＶ領域、Ｊ領域およびＤ領域がどのようなものかを示す。ヌクレオチド配列の上のＶ−ＲＥＧＩＯＮ・・・Ｎ１・・・Ｄ−ＲＥＧＩＯＮ・・・（Ｐ）Ｎ２・・・Ｊ−ＲＥＧＩＯＮはヌクレオチド配列の各部分の由来を示す。
【図１−３４】図１−３４は、本発明において同定された健常人およびＨＬＡ−Ａ＊２４０２陽性患者のＷＴ１特異的細胞障害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）のＴ細胞レセプター（ＴＣＲ）のＶβ鎖のＣＤＲ３のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列を示す。図中、ｃｌｏｎｅ＃はクローン番号であり、ドットの左の数字はＶβ鎖のファミリー番号、ドットの右の数字は整理番号である。Ｖｎａｍｅ、ＪｎａｍｅおよびＤｎａｍｅはＶ領域、Ｊ領域およびＤ領域がどのようなものかを示す。ヌクレオチド配列の上のＶ−ＲＥＧＩＯＮ・・・Ｎ１・・・Ｄ−ＲＥＧＩＯＮ・・・（Ｐ）Ｎ２・・・Ｊ−ＲＥＧＩＯＮはヌクレオチド配列の各部分の由来を示す。
【図１−３５】図１−３５は、本発明において同定された健常人およびＨＬＡ−Ａ＊２４０２陽性患者のＷＴ１特異的細胞障害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）のＴ細胞レセプター（ＴＣＲ）のＶβ鎖のＣＤＲ３のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列を示す。図中、ｃｌｏｎｅ＃はクローン番号であり、ドットの左の数字はＶβ鎖のファミリー番号、ドットの右の数字は整理番号である。Ｖｎａｍｅ、ＪｎａｍｅおよびＤｎａｍｅはＶ領域、Ｊ領域およびＤ領域がどのようなものかを示す。ヌクレオチド配列の上のＶ−ＲＥＧＩＯＮ・・・Ｎ１・・・Ｄ−ＲＥＧＩＯＮ・・・（Ｐ）Ｎ２・・・Ｊ−ＲＥＧＩＯＮはヌクレオチド配列の各部分の由来を示す。
【図１−３６】図１−３６は、本発明において同定された健常人およびＨＬＡ−Ａ＊２４０２陽性患者のＷＴ１特異的細胞障害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）のＴ細胞レセプター（ＴＣＲ）のＶβ鎖のＣＤＲ３のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列を示す。図中、ｃｌｏｎｅ＃はクローン番号であり、ドットの左の数字はＶβ鎖のファミリー番号、ドットの右の数字は整理番号である。Ｖｎａｍｅ、ＪｎａｍｅおよびＤｎａｍｅはＶ領域、Ｊ領域およびＤ領域がどのようなものかを示す。ヌクレオチド配列の上のＶ−ＲＥＧＩＯＮ・・・Ｎ１・・・Ｄ−ＲＥＧＩＯＮ・・・（Ｐ）Ｎ２・・・Ｊ−ＲＥＧＩＯＮはヌクレオチド配列の各部分の由来を示す。
【図２−１】図２−１は、本発明において同定された健常人およびＨＬＡ−Ａ＊２４０２陽性患者のＷＴ１特異的細胞障害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）のそれぞれのクローンのクロナリティーを示す。ｃｌｏｎｅ＃はクローン番号であり、ドットの左の数字はＶβ鎖のファミリー番号、ドットの右の数字は整理番号である。ＨＶは健常人、ＡＭＬは急性骨髄性白血病患者、ＭＤＳは骨髄異形成症候群患者を示す。これらの略号に付した数字は健常人番号および患者番号である。ＨＶは健常人、ＡＭＬは急性骨髄性白血病患者、ＭＤＳは骨髄異形成症候群患者を示す。これらの略号に付した数字は健常人番号および患者番号である。Ｒｅｓは治療応答者、ｎｏｎＲｅｓは治療に応答しなかった者であることを示す。ｐｒｅは治療前、４ｗは治療４週目、８ｗは治療８週目、１２ｗは治療１２週目、４２ｗは治療４２週目であることを示す。Ｐｈａｓｅ１は第１相臨床試験を示す。ＰＢ（ｐｒｅ）は治療前の末梢血であることを示す。ＢＭ（ｐｒｅ）は治療前の骨髄であることを示す。
【図２−２】図２−２は、本発明において同定された健常人およびＨＬＡ−Ａ＊２４０２陽性患者のＷＴ１特異的細胞障害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）のそれぞれのクローンのクロナリティーを示す。ｃｌｏｎｅ＃はクローン番号であり、ドットの左の数字はＶβ鎖のファミリー番号、ドットの右の数字は整理番号である。ＨＶは健常人、ＡＭＬは急性骨髄性白血病患者、ＭＤＳは骨髄異形成症候群患者を示す。これらの略号に付した数字は健常人番号および患者番号である。ＨＶは健常人、ＡＭＬは急性骨髄性白血病患者、ＭＤＳは骨髄異形成症候群患者を示す。これらの略号に付した数字は健常人番号および患者番号である。Ｒｅｓは治療応答者、ｎｏｎＲｅｓは治療に応答しなかった者であることを示す。ｐｒｅは治療前、４ｗは治療４週目、８ｗは治療８週目、１２ｗは治療１２週目、４２ｗは治療４２週目であることを示す。Ｐｈａｓｅ１は第１相臨床試験を示す。ＰＢ（ｐｒｅ）は治療前の末梢血であることを示す。ＢＭ（ｐｒｅ）は治療前の骨髄であることを示す。
【図２−３】図２−３は、本発明において同定された健常人およびＨＬＡ−Ａ＊２４０２陽性患者のＷＴ１特異的細胞障害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）のそれぞれのクローンのクロナリティーを示す。ｃｌｏｎｅ＃はクローン番号であり、ドットの左の数字はＶβ鎖のファミリー番号、ドットの右の数字は整理番号である。ＨＶは健常人、ＡＭＬは急性骨髄性白血病患者、ＭＤＳは骨髄異形成症候群患者を示す。これらの略号に付した数字は健常人番号および患者番号である。ＨＶは健常人、ＡＭＬは急性骨髄性白血病患者、ＭＤＳは骨髄異形成症候群患者を示す。これらの略号に付した数字は健常人番号および患者番号である。Ｒｅｓは治療応答者、ｎｏｎＲｅｓは治療に応答しなかった者であることを示す。ｐｒｅは治療前、４ｗは治療４週目、８ｗは治療８週目、１２ｗは治療１２週目、４２ｗは治療４２週目であることを示す。Ｐｈａｓｅ１は第１相臨床試験を示す。ＰＢ（ｐｒｅ）は治療前の末梢血であることを示す。ＢＭ（ｐｒｅ）は治療前の骨髄であることを示す。
【図２−４】図２−４は、本発明において同定された健常人およびＨＬＡ−Ａ＊２４０２陽性患者のＷＴ１特異的細胞障害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）のそれぞれのクローンのクロナリティーを示す。ｃｌｏｎｅ＃はクローン番号であり、ドットの左の数字はＶβ鎖のファミリー番号、ドットの右の数字は整理番号である。ＨＶは健常人、ＡＭＬは急性骨髄性白血病患者、ＭＤＳは骨髄異形成症候群患者を示す。これらの略号に付した数字は健常人番号および患者番号である。ＨＶは健常人、ＡＭＬは急性骨髄性白血病患者、ＭＤＳは骨髄異形成症候群患者を示す。これらの略号に付した数字は健常人番号および患者番号である。Ｒｅｓは治療応答者、ｎｏｎＲｅｓは治療に応答しなかった者であることを示す。ｐｒｅは治療前、４ｗは治療４週目、８ｗは治療８週目、１２ｗは治療１２週目、４２ｗは治療４２週目であることを示す。Ｐｈａｓｅ１は第１相臨床試験を示す。ＰＢ（ｐｒｅ）は治療前の末梢血であることを示す。ＢＭ（ｐｒｅ）は治療前の骨髄であることを示す。
【図２−５】図２−５は、本発明において同定された健常人およびＨＬＡ−Ａ＊２４０２陽性患者のＷＴ１特異的細胞障害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）のそれぞれのクローンのクロナリティーを示す。ｃｌｏｎｅ＃はクローン番号であり、ドットの左の数字はＶβ鎖のファミリー番号、ドットの右の数字は整理番号である。ＨＶは健常人、ＡＭＬは急性骨髄性白血病患者、ＭＤＳは骨髄異形成症候群患者を示す。これらの略号に付した数字は健常人番号および患者番号である。ＨＶは健常人、ＡＭＬは急性骨髄性白血病患者、ＭＤＳは骨髄異形成症候群患者を示す。これらの略号に付した数字は健常人番号および患者番号である。Ｒｅｓは治療応答者、ｎｏｎＲｅｓは治療に応答しなかった者であることを示す。ｐｒｅは治療前、４ｗは治療４週目、８ｗは治療８週目、１２ｗは治療１２週目、４２ｗは治療４２週目であることを示す。Ｐｈａｓｅ１は第１相臨床試験を示す。ＰＢ（ｐｒｅ）は治療前の末梢血であることを示す。ＢＭ（ｐｒｅ）は治療前の骨髄であることを示す。
【図２−６】図２−６は、本発明において同定された健常人およびＨＬＡ−Ａ＊２４０２陽性患者のＷＴ１特異的細胞障害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）のそれぞれのクローンのクロナリティーを示す。ｃｌｏｎｅ＃はクローン番号であり、ドットの左の数字はＶβ鎖のファミリー番号、ドットの右の数字は整理番号である。ＨＶは健常人、ＡＭＬは急性骨髄性白血病患者、ＭＤＳは骨髄異形成症候群患者を示す。これらの略号に付した数字は健常人番号および患者番号である。ＨＶは健常人、ＡＭＬは急性骨髄性白血病患者、ＭＤＳは骨髄異形成症候群患者を示す。これらの略号に付した数字は健常人番号および患者番号である。Ｒｅｓは治療応答者、ｎｏｎＲｅｓは治療に応答しなかった者であることを示す。ｐｒｅは治療前、４ｗは治療４週目、８ｗは治療８週目、１２ｗは治療１２週目、４２ｗは治療４２週目であることを示す。Ｐｈａｓｅ１は第１相臨床試験を示す。ＰＢ（ｐｒｅ）は治療前の末梢血であることを示す。ＢＭ（ｐｒｅ）は治療前の骨髄であることを示す。
【図２−７】図２−７は、本発明において同定された健常人およびＨＬＡ−Ａ＊２４０２陽性患者のＷＴ１特異的細胞障害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）のそれぞれのクローンのクロナリティーを示す。ｃｌｏｎｅ＃はクローン番号であり、ドットの左の数字はＶβ鎖のファミリー番号、ドットの右の数字は整理番号である。ＨＶは健常人、ＡＭＬは急性骨髄性白血病患者、ＭＤＳは骨髄異形成症候群患者を示す。これらの略号に付した数字は健常人番号および患者番号である。ＨＶは健常人、ＡＭＬは急性骨髄性白血病患者、ＭＤＳは骨髄異形成症候群患者を示す。これらの略号に付した数字は健常人番号および患者番号である。Ｒｅｓは治療応答者、ｎｏｎＲｅｓは治療に応答しなかった者であることを示す。ｐｒｅは治療前、４ｗは治療４週目、８ｗは治療８週目、１２ｗは治療１２週目、４２ｗは治療４２週目であることを示す。Ｐｈａｓｅ１は第１相臨床試験を示す。ＰＢ（ｐｒｅ）は治療前の末梢血であることを示す。ＢＭ（ｐｒｅ）は治療前の骨髄であることを示す。
【図２−８】図２−８は、本発明において同定された健常人およびＨＬＡ−Ａ＊２４０２陽性患者のＷＴ１特異的細胞障害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）のそれぞれのクローンのクロナリティーを示す。ｃｌｏｎｅ＃はクローン番号であり、ドットの左の数字はＶβ鎖のファミリー番号、ドットの右の数字は整理番号である。ＨＶは健常人、ＡＭＬは急性骨髄性白血病患者、ＭＤＳは骨髄異形成症候群患者を示す。これらの略号に付した数字は健常人番号および患者番号である。ＨＶは健常人、ＡＭＬは急性骨髄性白血病患者、ＭＤＳは骨髄異形成症候群患者を示す。これらの略号に付した数字は健常人番号および患者番号である。Ｒｅｓは治療応答者、ｎｏｎＲｅｓは治療に応答しなかった者であることを示す。ｐｒｅは治療前、４ｗは治療４週目、８ｗは治療８週目、１２ｗは治療１２週目、４２ｗは治療４２週目であることを示す。Ｐｈａｓｅ１は第１相臨床試験を示す。ＰＢ（ｐｒｅ）は治療前の末梢血であることを示す。ＢＭ（ｐｒｅ）は治療前の骨髄であることを示す。
【図２−９】図２−９は、本発明において同定された健常人およびＨＬＡ−Ａ＊２４０２陽性患者のＷＴ１特異的細胞障害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）のそれぞれのクローンのクロナリティーを示す。ｃｌｏｎｅ＃はクローン番号であり、ドットの左の数字はＶβ鎖のファミリー番号、ドットの右の数字は整理番号である。ＨＶは健常人、ＡＭＬは急性骨髄性白血病患者、ＭＤＳは骨髄異形成症候群患者を示す。これらの略号に付した数字は健常人番号および患者番号である。ＨＶは健常人、ＡＭＬは急性骨髄性白血病患者、ＭＤＳは骨髄異形成症候群患者を示す。これらの略号に付した数字は健常人番号および患者番号である。Ｒｅｓは治療応答者、ｎｏｎＲｅｓは治療に応答しなかった者であることを示す。ｐｒｅは治療前、４ｗは治療４週目、８ｗは治療８週目、１２ｗは治療１２週目、４２ｗは治療４２週目であることを示す。Ｐｈａｓｅ１は第１相臨床試験を示す。ＰＢ（ｐｒｅ）は治療前の末梢血であることを示す。ＢＭ（ｐｒｅ）は治療前の骨髄であることを示す。
【図２−１０】図２−１０は、本発明において同定された健常人およびＨＬＡ−Ａ＊２４０２陽性患者のＷＴ１特異的細胞障害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）のそれぞれのクローンのクロナリティーを示す。ｃｌｏｎｅ＃はクローン番号であり、ドットの左の数字はＶβ鎖のファミリー番号、ドットの右の数字は整理番号である。ＨＶは健常人、ＡＭＬは急性骨髄性白血病患者、ＭＤＳは骨髄異形成症候群患者を示す。これらの略号に付した数字は健常人番号および患者番号である。ＨＶは健常人、ＡＭＬは急性骨髄性白血病患者、ＭＤＳは骨髄異形成症候群患者を示す。これらの略号に付した数字は健常人番号および患者番号である。Ｒｅｓは治療応答者、ｎｏｎＲｅｓは治療に応答しなかった者であることを示す。ｐｒｅは治療前、４ｗは治療４週目、８ｗは治療８週目、１２ｗは治療１２週目、４２ｗは治療４２週目であることを示す。Ｐｈａｓｅ１は第１相臨床試験を示す。ＰＢ（ｐｒｅ）は治療前の末梢血であることを示す。ＢＭ（ｐｒｅ）は治療前の骨髄であることを示す。
【図２−１１】図２−１１は、本発明において同定された健常人およびＨＬＡ−Ａ＊２４０２陽性患者のＷＴ１特異的細胞障害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）のそれぞれのクローンのクロナリティーを示す。ｃｌｏｎｅ＃はクローン番号であり、ドットの左の数字はＶβ鎖のファミリー番号、ドットの右の数字は整理番号である。ＨＶは健常人、ＡＭＬは急性骨髄性白血病患者、ＭＤＳは骨髄異形成症候群患者を示す。これらの略号に付した数字は健常人番号および患者番号である。ＨＶは健常人、ＡＭＬは急性骨髄性白血病患者、ＭＤＳは骨髄異形成症候群患者を示す。これらの略号に付した数字は健常人番号および患者番号である。Ｒｅｓは治療応答者、ｎｏｎＲｅｓは治療に応答しなかった者であることを示す。ｐｒｅは治療前、４ｗは治療４週目、８ｗは治療８週目、１２ｗは治療１２週目、４２ｗは治療４２週目であることを示す。Ｐｈａｓｅ１は第１相臨床試験を示す。ＰＢ（ｐｒｅ）は治療前の末梢血であることを示す。ＢＭ（ｐｒｅ）は治療前の骨髄であることを示す。
【図２−１２】図２−１２は、本発明において同定された健常人およびＨＬＡ−Ａ＊２４０２陽性患者のＷＴ１特異的細胞障害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）のそれぞれのクローンのクロナリティーを示す。ｃｌｏｎｅ＃はクローン番号であり、ドットの左の数字はＶβ鎖のファミリー番号、ドットの右の数字は整理番号である。ＨＶは健常人、ＡＭＬは急性骨髄性白血病患者、ＭＤＳは骨髄異形成症候群患者を示す。これらの略号に付した数字は健常人番号および患者番号である。ＨＶは健常人、ＡＭＬは急性骨髄性白血病患者、ＭＤＳは骨髄異形成症候群患者を示す。これらの略号に付した数字は健常人番号および患者番号である。Ｒｅｓは治療応答者、ｎｏｎＲｅｓは治療に応答しなかった者であることを示す。ｐｒｅは治療前、４ｗは治療４週目、８ｗは治療８週目、１２ｗは治療１２週目、４２ｗは治療４２週目であることを示す。Ｐｈａｓｅ１は第１相臨床試験を示す。ＰＢ（ｐｒｅ）は治療前の末梢血であることを示す。ＢＭ（ｐｒｅ）は治療前の骨髄であることを示す。
【図２−１３】図２−１３は、本発明において同定された健常人およびＨＬＡ−Ａ＊２４０２陽性患者のＷＴ１特異的細胞障害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）のそれぞれのクローンのクロナリティーを示す。ｃｌｏｎｅ＃はクローン番号であり、ドットの左の数字はＶβ鎖のファミリー番号、ドットの右の数字は整理番号である。ＨＶは健常人、ＡＭＬは急性骨髄性白血病患者、ＭＤＳは骨髄異形成症候群患者を示す。これらの略号に付した数字は健常人番号および患者番号である。ＨＶは健常人、ＡＭＬは急性骨髄性白血病患者、ＭＤＳは骨髄異形成症候群患者を示す。これらの略号に付した数字は健常人番号および患者番号である。Ｒｅｓは治療応答者、ｎｏｎＲｅｓは治療に応答しなかった者であることを示す。ｐｒｅは治療前、４ｗは治療４週目、８ｗは治療８週目、１２ｗは治療１２週目、４２ｗは治療４２週目であることを示す。Ｐｈａｓｅ１は第１相臨床試験を示す。ＰＢ（ｐｒｅ）は治療前の末梢血であることを示す。ＢＭ（ｐｒｅ）は治療前の骨髄であることを示す。
【図２−１４】図２−１４は、本発明において同定された健常人およびＨＬＡ−Ａ＊２４０２陽性患者のＷＴ１特異的細胞障害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）のそれぞれのクローンのクロナリティーを示す。ｃｌｏｎｅ＃はクローン番号であり、ドットの左の数字はＶβ鎖のファミリー番号、ドットの右の数字は整理番号である。ＨＶは健常人、ＡＭＬは急性骨髄性白血病患者、ＭＤＳは骨髄異形成症候群患者を示す。これらの略号に付した数字は健常人番号および患者番号である。ＨＶは健常人、ＡＭＬは急性骨髄性白血病患者、ＭＤＳは骨髄異形成症候群患者を示す。これらの略号に付した数字は健常人番号および患者番号である。Ｒｅｓは治療応答者、ｎｏｎＲｅｓは治療に応答しなかった者であることを示す。ｐｒｅは治療前、４ｗは治療４週目、８ｗは治療８週目、１２ｗは治療１２週目、４２ｗは治療４２週目であることを示す。Ｐｈａｓｅ１は第１相臨床試験を示す。ＰＢ（ｐｒｅ）は治療前の末梢血であることを示す。ＢＭ（ｐｒｅ）は治療前の骨髄であることを示す。
【図２−１５】図２−１５は、本発明において同定された健常人およびＨＬＡ−Ａ＊２４０２陽性患者のＷＴ１特異的細胞障害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）のそれぞれのクローンのクロナリティーを示す。ｃｌｏｎｅ＃はクローン番号であり、ドットの左の数字はＶβ鎖のファミリー番号、ドットの右の数字は整理番号である。ＨＶは健常人、ＡＭＬは急性骨髄性白血病患者、ＭＤＳは骨髄異形成症候群患者を示す。これらの略号に付した数字は健常人番号および患者番号である。ＨＶは健常人、ＡＭＬは急性骨髄性白血病患者、ＭＤＳは骨髄異形成症候群患者を示す。これらの略号に付した数字は健常人番号および患者番号である。Ｒｅｓは治療応答者、ｎｏｎＲｅｓは治療に応答しなかった者であることを示す。ｐｒｅは治療前、４ｗは治療４週目、８ｗは治療８週目、１２ｗは治療１２週目、４２ｗは治療４２週目であることを示す。Ｐｈａｓｅ１は第１相臨床試験を示す。ＰＢ（ｐｒｅ）は治療前の末梢血であることを示す。ＢＭ（ｐｒｅ）は治療前の骨髄であることを示す。
【図２−１６】図２−１６は、本発明において同定された健常人およびＨＬＡ−Ａ＊２４０２陽性患者のＷＴ１特異的細胞障害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）のそれぞれのクローンのクロナリティーを示す。ｃｌｏｎｅ＃はクローン番号であり、ドットの左の数字はＶβ鎖のファミリー番号、ドットの右の数字は整理番号である。ＨＶは健常人、ＡＭＬは急性骨髄性白血病患者、ＭＤＳは骨髄異形成症候群患者を示す。これらの略号に付した数字は健常人番号および患者番号である。ＨＶは健常人、ＡＭＬは急性骨髄性白血病患者、ＭＤＳは骨髄異形成症候群患者を示す。これらの略号に付した数字は健常人番号および患者番号である。Ｒｅｓは治療応答者、ｎｏｎＲｅｓは治療に応答しなかった者であることを示す。ｐｒｅは治療前、４ｗは治療４週目、８ｗは治療８週目、１２ｗは治療１２週目、４２ｗは治療４２週目であることを示す。Ｐｈａｓｅ１は第１相臨床試験を示す。ＰＢ（ｐｒｅ）は治療前の末梢血であることを示す。ＢＭ（ｐｒｅ）は治療前の骨髄であることを示す。
【図２−１７】図２−１７は、本発明において同定された健常人およびＨＬＡ−Ａ＊２４０２陽性患者のＷＴ１特異的細胞障害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）のそれぞれのクローンのクロナリティーを示す。ｃｌｏｎｅ＃はクローン番号であり、ドットの左の数字はＶβ鎖のファミリー番号、ドットの右の数字は整理番号である。ＨＶは健常人、ＡＭＬは急性骨髄性白血病患者、ＭＤＳは骨髄異形成症候群患者を示す。これらの略号に付した数字は健常人番号および患者番号である。ＨＶは健常人、ＡＭＬは急性骨髄性白血病患者、ＭＤＳは骨髄異形成症候群患者を示す。これらの略号に付した数字は健常人番号および患者番号である。Ｒｅｓは治療応答者、ｎｏｎＲｅｓは治療に応答しなかった者であることを示す。ｐｒｅは治療前、４ｗは治療４週目、８ｗは治療８週目、１２ｗは治療１２週目、４２ｗは治療４２週目であることを示す。Ｐｈａｓｅ１は第１相臨床試験を示す。ＰＢ（ｐｒｅ）は治療前の末梢血であることを示す。ＢＭ（ｐｒｅ）は治療前の骨髄であることを示す。
【図２−１８】図２−１８は、本発明において同定された健常人およびＨＬＡ−Ａ＊２４０２陽性患者のＷＴ１特異的細胞障害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）のそれぞれのクローンのクロナリティーを示す。ｃｌｏｎｅ＃はクローン番号であり、ドットの左の数字はＶβ鎖のファミリー番号、ドットの右の数字は整理番号である。ＨＶは健常人、ＡＭＬは急性骨髄性白血病患者、ＭＤＳは骨髄異形成症候群患者を示す。これらの略号に付した数字は健常人番号および患者番号である。ＨＶは健常人、ＡＭＬは急性骨髄性白血病患者、ＭＤＳは骨髄異形成症候群患者を示す。これらの略号に付した数字は健常人番号および患者番号である。Ｒｅｓは治療応答者、ｎｏｎＲｅｓは治療に応答しなかった者であることを示す。ｐｒｅは治療前、４ｗは治療４週目、８ｗは治療８週目、１２ｗは治療１２週目、４２ｗは治療４２週目であることを示す。Ｐｈａｓｅ１は第１相臨床試験を示す。ＰＢ（ｐｒｅ）は治療前の末梢血であることを示す。ＢＭ（ｐｒｅ）は治療前の骨髄であることを示す。
【図２−１９】図２−１９は、本発明において同定された健常人およびＨＬＡ−Ａ＊２４０２陽性患者のＷＴ１特異的細胞障害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）のそれぞれのクローンのクロナリティーを示す。ｃｌｏｎｅ＃はクローン番号であり、ドットの左の数字はＶβ鎖のファミリー番号、ドットの右の数字は整理番号である。ＨＶは健常人、ＡＭＬは急性骨髄性白血病患者、ＭＤＳは骨髄異形成症候群患者を示す。これらの略号に付した数字は健常人番号および患者番号である。ＨＶは健常人、ＡＭＬは急性骨髄性白血病患者、ＭＤＳは骨髄異形成症候群患者を示す。これらの略号に付した数字は健常人番号および患者番号である。Ｒｅｓは治療応答者、ｎｏｎＲｅｓは治療に応答しなかった者であることを示す。ｐｒｅは治療前、４ｗは治療４週目、８ｗは治療８週目、１２ｗは治療１２週目、４２ｗは治療４２週目であることを示す。Ｐｈａｓｅ１は第１相臨床試験を示す。ＰＢ（ｐｒｅ）は治療前の末梢血であることを示す。ＢＭ（ｐｒｅ）は治療前の骨髄であることを示す。
【図２−２０】図２−２０は、本発明において同定された健常人およびＨＬＡ−Ａ＊２４０２陽性患者のＷＴ１特異的細胞障害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）のそれぞれのクローンのクロナリティーを示す。ｃｌｏｎｅ＃はクローン番号であり、ドットの左の数字はＶβ鎖のファミリー番号、ドットの右の数字は整理番号である。ＨＶは健常人、ＡＭＬは急性骨髄性白血病患者、ＭＤＳは骨髄異形成症候群患者を示す。これらの略号に付した数字は健常人番号および患者番号である。ＨＶは健常人、ＡＭＬは急性骨髄性白血病患者、ＭＤＳは骨髄異形成症候群患者を示す。これらの略号に付した数字は健常人番号および患者番号である。Ｒｅｓは治療応答者、ｎｏｎＲｅｓは治療に応答しなかった者であることを示す。ｐｒｅは治療前、４ｗは治療４週目、８ｗは治療８週目、１２ｗは治療１２週目、４２ｗは治療４２週目であることを示す。Ｐｈａｓｅ１は第１相臨床試験を示す。ＰＢ（ｐｒｅ）は治療前の末梢血であることを示す。ＢＭ（ｐｒｅ）は治療前の骨髄であることを示す。
【図２−２１】図２−２１は、本発明において同定された健常人およびＨＬＡ−Ａ＊２４０２陽性患者のＷＴ１特異的細胞障害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）のそれぞれのクローンのクロナリティーを示す。ｃｌｏｎｅ＃はクローン番号であり、ドットの左の数字はＶβ鎖のファミリー番号、ドットの右の数字は整理番号である。ＨＶは健常人、ＡＭＬは急性骨髄性白血病患者、ＭＤＳは骨髄異形成症候群患者を示す。これらの略号に付した数字は健常人番号および患者番号である。ＨＶは健常人、ＡＭＬは急性骨髄性白血病患者、ＭＤＳは骨髄異形成症候群患者を示す。これらの略号に付した数字は健常人番号および患者番号である。Ｒｅｓは治療応答者、ｎｏｎＲｅｓは治療に応答しなかった者であることを示す。ｐｒｅは治療前、４ｗは治療４週目、８ｗは治療８週目、１２ｗは治療１２週目、４２ｗは治療４２週目であることを示す。Ｐｈａｓｅ１は第１相臨床試験を示す。ＰＢ（ｐｒｅ）は治療前の末梢血であることを示す。ＢＭ（ｐｒｅ）は治療前の骨髄であることを示す。
【図２−２２】図２−２２は、本発明において同定された健常人およびＨＬＡ−Ａ＊２４０２陽性患者のＷＴ１特異的細胞障害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）のそれぞれのクローンのクロナリティーを示す。ｃｌｏｎｅ＃はクローン番号であり、ドットの左の数字はＶβ鎖のファミリー番号、ドットの右の数字は整理番号である。ＨＶは健常人、ＡＭＬは急性骨髄性白血病患者、ＭＤＳは骨髄異形成症候群患者を示す。これらの略号に付した数字は健常人番号および患者番号である。ＨＶは健常人、ＡＭＬは急性骨髄性白血病患者、ＭＤＳは骨髄異形成症候群患者を示す。これらの略号に付した数字は健常人番号および患者番号である。Ｒｅｓは治療応答者、ｎｏｎＲｅｓは治療に応答しなかった者であることを示す。ｐｒｅは治療前、４ｗは治療４週目、８ｗは治療８週目、１２ｗは治療１２週目、４２ｗは治療４２週目であることを示す。Ｐｈａｓｅ１は第１相臨床試験を示す。ＰＢ（ｐｒｅ）は治療前の末梢血であることを示す。ＢＭ（ｐｒｅ）は治療前の骨髄であることを示す。
【図２−２３】図２−２３は、本発明において同定された健常人およびＨＬＡ−Ａ＊２４０２陽性患者のＷＴ１特異的細胞障害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）のそれぞれのクローンのクロナリティーを示す。ｃｌｏｎｅ＃はクローン番号であり、ドットの左の数字はＶβ鎖のファミリー番号、ドットの右の数字は整理番号である。ＨＶは健常人、ＡＭＬは急性骨髄性白血病患者、ＭＤＳは骨髄異形成症候群患者を示す。これらの略号に付した数字は健常人番号および患者番号である。ＨＶは健常人、ＡＭＬは急性骨髄性白血病患者、ＭＤＳは骨髄異形成症候群患者を示す。これらの略号に付した数字は健常人番号および患者番号である。Ｒｅｓは治療応答者、ｎｏｎＲｅｓは治療に応答しなかった者であることを示す。ｐｒｅは治療前、４ｗは治療４週目、８ｗは治療８週目、１２ｗは治療１２週目、４２ｗは治療４２週目であることを示す。Ｐｈａｓｅ１は第１相臨床試験を示す。ＰＢ（ｐｒｅ）は治療前の末梢血であることを示す。ＢＭ（ｐｒｅ）は治療前の骨髄であることを示す。
【図２−２４】図２−２４は、本発明において同定された健常人およびＨＬＡ−Ａ＊２４０２陽性患者のＷＴ１特異的細胞障害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）のそれぞれのクローンのクロナリティーを示す。ｃｌｏｎｅ＃はクローン番号であり、ドットの左の数字はＶβ鎖のファミリー番号、ドットの右の数字は整理番号である。ＨＶは健常人、ＡＭＬは急性骨髄性白血病患者、ＭＤＳは骨髄異形成症候群患者を示す。これらの略号に付した数字は健常人番号および患者番号である。ＨＶは健常人、ＡＭＬは急性骨髄性白血病患者、ＭＤＳは骨髄異形成症候群患者を示す。これらの略号に付した数字は健常人番号および患者番号である。Ｒｅｓは治療応答者、ｎｏｎＲｅｓは治療に応答しなかった者であることを示す。ｐｒｅは治療前、４ｗは治療４週目、８ｗは治療８週目、１２ｗは治療１２週目、４２ｗは治療４２週目であることを示す。Ｐｈａｓｅ１は第１相臨床試験を示す。ＰＢ（ｐｒｅ）は治療前の末梢血であることを示す。ＢＭ（ｐｒｅ）は治療前の骨髄であることを示す。
【図２−２５】図２−２５は、本発明において同定された健常人およびＨＬＡ−Ａ＊２４０２陽性患者のＷＴ１特異的細胞障害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）のそれぞれのクローンのクロナリティーを示す。ｃｌｏｎｅ＃はクローン番号であり、ドットの左の数字はＶβ鎖のファミリー番号、ドットの右の数字は整理番号である。ＨＶは健常人、ＡＭＬは急性骨髄性白血病患者、ＭＤＳは骨髄異形成症候群患者を示す。これらの略号に付した数字は健常人番号および患者番号である。ＨＶは健常人、ＡＭＬは急性骨髄性白血病患者、ＭＤＳは骨髄異形成症候群患者を示す。これらの略号に付した数字は健常人番号および患者番号である。Ｒｅｓは治療応答者、ｎｏｎＲｅｓは治療に応答しなかった者であることを示す。ｐｒｅは治療前、４ｗは治療４週目、８ｗは治療８週目、１２ｗは治療１２週目、４２ｗは治療４２週目であることを示す。Ｐｈａｓｅ１は第１相臨床試験を示す。ＰＢ（ｐｒｅ）は治療前の末梢血であることを示す。ＢＭ（ｐｒｅ）は治療前の骨髄であることを示す。
【図２−２６】図２−２６は、本発明において同定された健常人およびＨＬＡ−Ａ＊２４０２陽性患者のＷＴ１特異的細胞障害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）のそれぞれのクローンのクロナリティーを示す。ｃｌｏｎｅ＃はクローン番号であり、ドットの左の数字はＶβ鎖のファミリー番号、ドットの右の数字は整理番号である。ＨＶは健常人、ＡＭＬは急性骨髄性白血病患者、ＭＤＳは骨髄異形成症候群患者を示す。これらの略号に付した数字は健常人番号および患者番号である。ＨＶは健常人、ＡＭＬは急性骨髄性白血病患者、ＭＤＳは骨髄異形成症候群患者を示す。これらの略号に付した数字は健常人番号および患者番号である。Ｒｅｓは治療応答者、ｎｏｎＲｅｓは治療に応答しなかった者であることを示す。ｐｒｅは治療前、４ｗは治療４週目、８ｗは治療８週目、１２ｗは治療１２週目、４２ｗは治療４２週目であることを示す。Ｐｈａｓｅ１は第１相臨床試験を示す。ＰＢ（ｐｒｅ）は治療前の末梢血であることを示す。ＢＭ（ｐｒｅ）は治療前の骨髄であることを示す。
【図２−２７】図２−２７は、本発明において同定された健常人およびＨＬＡ−Ａ＊２４０２陽性患者のＷＴ１特異的細胞障害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）のそれぞれのクローンのクロナリティーを示す。ｃｌｏｎｅ＃はクローン番号であり、ドットの左の数字はＶβ鎖のファミリー番号、ドットの右の数字は整理番号である。ＨＶは健常人、ＡＭＬは急性骨髄性白血病患者、ＭＤＳは骨髄異形成症候群患者を示す。これらの略号に付した数字は健常人番号および患者番号である。ＨＶは健常人、ＡＭＬは急性骨髄性白血病患者、ＭＤＳは骨髄異形成症候群患者を示す。これらの略号に付した数字は健常人番号および患者番号である。Ｒｅｓは治療応答者、ｎｏｎＲｅｓは治療に応答しなかった者であることを示す。ｐｒｅは治療前、４ｗは治療４週目、８ｗは治療８週目、１２ｗは治療１２週目、４２ｗは治療４２週目であることを示す。Ｐｈａｓｅ１は第１相臨床試験を示す。ＰＢ（ｐｒｅ）は治療前の末梢血であることを示す。ＢＭ（ｐｒｅ）は治療前の骨髄であることを示す。
【図２−２８】図２−２８は、本発明において同定された健常人およびＨＬＡ−Ａ＊２４０２陽性患者のＷＴ１特異的細胞障害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）のそれぞれのクローンのクロナリティーを示す。ｃｌｏｎｅ＃はクローン番号であり、ドットの左の数字はＶβ鎖のファミリー番号、ドットの右の数字は整理番号である。ＨＶは健常人、ＡＭＬは急性骨髄性白血病患者、ＭＤＳは骨髄異形成症候群患者を示す。これらの略号に付した数字は健常人番号および患者番号である。ＨＶは健常人、ＡＭＬは急性骨髄性白血病患者、ＭＤＳは骨髄異形成症候群患者を示す。これらの略号に付した数字は健常人番号および患者番号である。Ｒｅｓは治療応答者、ｎｏｎＲｅｓは治療に応答しなかった者であることを示す。ｐｒｅは治療前、４ｗは治療４週目、８ｗは治療８週目、１２ｗは治療１２週目、４２ｗは治療４２週目であることを示す。Ｐｈａｓｅ１は第１相臨床試験を示す。ＰＢ（ｐｒｅ）は治療前の末梢血であることを示す。ＢＭ（ｐｒｅ）は治療前の骨髄であることを示す。
【図２−２９】図２−２９は、本発明において同定された健常人およびＨＬＡ−Ａ＊２４０２陽性患者のＷＴ１特異的細胞障害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）のそれぞれのクローンのクロナリティーを示す。ｃｌｏｎｅ＃はクローン番号であり、ドットの左の数字はＶβ鎖のファミリー番号、ドットの右の数字は整理番号である。ＨＶは健常人、ＡＭＬは急性骨髄性白血病患者、ＭＤＳは骨髄異形成症候群患者を示す。これらの略号に付した数字は健常人番号および患者番号である。ＨＶは健常人、ＡＭＬは急性骨髄性白血病患者、ＭＤＳは骨髄異形成症候群患者を示す。これらの略号に付した数字は健常人番号および患者番号である。Ｒｅｓは治療応答者、ｎｏｎＲｅｓは治療に応答しなかった者であることを示す。ｐｒｅは治療前、４ｗは治療４週目、８ｗは治療８週目、１２ｗは治療１２週目、４２ｗは治療４２週目であることを示す。Ｐｈａｓｅ１は第１相臨床試験を示す。ＰＢ（ｐｒｅ）は治療前の末梢血であることを示す。ＢＭ（ｐｒｅ）は治療前の骨髄であることを示す。
【図２−３０】図２−３０は、本発明において同定された健常人およびＨＬＡ−Ａ＊２４０２陽性患者のＷＴ１特異的細胞障害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）のそれぞれのクローンのクロナリティーを示す。ｃｌｏｎｅ＃はクローン番号であり、ドットの左の数字はＶβ鎖のファミリー番号、ドットの右の数字は整理番号である。ＨＶは健常人、ＡＭＬは急性骨髄性白血病患者、ＭＤＳは骨髄異形成症候群患者を示す。これらの略号に付した数字は健常人番号および患者番号である。ＨＶは健常人、ＡＭＬは急性骨髄性白血病患者、ＭＤＳは骨髄異形成症候群患者を示す。これらの略号に付した数字は健常人番号および患者番号である。Ｒｅｓは治療応答者、ｎｏｎＲｅｓは治療に応答しなかった者であることを示す。ｐｒｅは治療前、４ｗは治療４週目、８ｗは治療８週目、１２ｗは治療１２週目、４２ｗは治療４２週目であることを示す。Ｐｈａｓｅ１は第１相臨床試験を示す。ＰＢ（ｐｒｅ）は治療前の末梢血であることを示す。ＢＭ（ｐｒｅ）は治療前の骨髄であることを示す。
【図２−３１】図２−３１は、本発明において同定された健常人およびＨＬＡ−Ａ＊２４０２陽性患者のＷＴ１特異的細胞障害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）のそれぞれのクローンのクロナリティーを示す。ｃｌｏｎｅ＃はクローン番号であり、ドットの左の数字はＶβ鎖のファミリー番号、ドットの右の数字は整理番号である。ＨＶは健常人、ＡＭＬは急性骨髄性白血病患者、ＭＤＳは骨髄異形成症候群患者を示す。これらの略号に付した数字は健常人番号および患者番号である。ＨＶは健常人、ＡＭＬは急性骨髄性白血病患者、ＭＤＳは骨髄異形成症候群患者を示す。これらの略号に付した数字は健常人番号および患者番号である。Ｒｅｓは治療応答者、ｎｏｎＲｅｓは治療に応答しなかった者であることを示す。ｐｒｅは治療前、４ｗは治療４週目、８ｗは治療８週目、１２ｗは治療１２週目、４２ｗは治療４２週目であることを示す。Ｐｈａｓｅ１は第１相臨床試験を示す。ＰＢ（ｐｒｅ）は治療前の末梢血であることを示す。ＢＭ（ｐｒｅ）は治療前の骨髄であることを示す。
【図２−３２】図２−３２は、本発明において同定された健常人およびＨＬＡ−Ａ＊２４０２陽性患者のＷＴ１特異的細胞障害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）のそれぞれのクローンのクロナリティーを示す。ｃｌｏｎｅ＃はクローン番号であり、ドットの左の数字はＶβ鎖のファミリー番号、ドットの右の数字は整理番号である。ＨＶは健常人、ＡＭＬは急性骨髄性白血病患者、ＭＤＳは骨髄異形成症候群患者を示す。これらの略号に付した数字は健常人番号および患者番号である。ＨＶは健常人、ＡＭＬは急性骨髄性白血病患者、ＭＤＳは骨髄異形成症候群患者を示す。これらの略号に付した数字は健常人番号および患者番号である。Ｒｅｓは治療応答者、ｎｏｎＲｅｓは治療に応答しなかった者であることを示す。ｐｒｅは治療前、４ｗは治療４週目、８ｗは治療８週目、１２ｗは治療１２週目、４２ｗは治療４２週目であることを示す。Ｐｈａｓｅ１は第１相臨床試験を示す。ＰＢ（ｐｒｅ）は治療前の末梢血であることを示す。ＢＭ（ｐｒｅ）は治療前の骨髄であることを示す。
【図２−３３】図２−３３は、本発明において同定された健常人およびＨＬＡ−Ａ＊２４０２陽性患者のＷＴ１特異的細胞障害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）のそれぞれのクローンのクロナリティーを示す。ｃｌｏｎｅ＃はクローン番号であり、ドットの左の数字はＶβ鎖のファミリー番号、ドットの右の数字は整理番号である。ＨＶは健常人、ＡＭＬは急性骨髄性白血病患者、ＭＤＳは骨髄異形成症候群患者を示す。これらの略号に付した数字は健常人番号および患者番号である。ＨＶは健常人、ＡＭＬは急性骨髄性白血病患者、ＭＤＳは骨髄異形成症候群患者を示す。これらの略号に付した数字は健常人番号および患者番号である。Ｒｅｓは治療応答者、ｎｏｎＲｅｓは治療に応答しなかった者であることを示す。ｐｒｅは治療前、４ｗは治療４週目、８ｗは治療８週目、１２ｗは治療１２週目、４２ｗは治療４２週目であることを示す。Ｐｈａｓｅ１は第１相臨床試験を示す。ＰＢ（ｐｒｅ）は治療前の末梢血であることを示す。ＢＭ（ｐｒｅ）は治療前の骨髄であることを示す。
【図２−３４】図２−３４は、本発明において同定された健常人およびＨＬＡ−Ａ＊２４０２陽性患者のＷＴ１特異的細胞障害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）のそれぞれのクローンのクロナリティーを示す。ｃｌｏｎｅ＃はクローン番号であり、ドットの左の数字はＶβ鎖のファミリー番号、ドットの右の数字は整理番号である。ＨＶは健常人、ＡＭＬは急性骨髄性白血病患者、ＭＤＳは骨髄異形成症候群患者を示す。これらの略号に付した数字は健常人番号および患者番号である。ＨＶは健常人、ＡＭＬは急性骨髄性白血病患者、ＭＤＳは骨髄異形成症候群患者を示す。これらの略号に付した数字は健常人番号および患者番号である。Ｒｅｓは治療応答者、ｎｏｎＲｅｓは治療に応答しなかった者であることを示す。ｐｒｅは治療前、４ｗは治療４週目、８ｗは治療８週目、１２ｗは治療１２週目、４２ｗは治療４２週目であることを示す。Ｐｈａｓｅ１は第１相臨床試験を示す。ＰＢ（ｐｒｅ）は治療前の末梢血であることを示す。ＢＭ（ｐｒｅ）は治療前の骨髄であることを示す。
【図２−３５】図２−３５は、本発明において同定された健常人およびＨＬＡ−Ａ＊２４０２陽性患者のＷＴ１特異的細胞障害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）のそれぞれのクローンのクロナリティーを示す。ｃｌｏｎｅ＃はクローン番号であり、ドットの左の数字はＶβ鎖のファミリー番号、ドットの右の数字は整理番号である。ＨＶは健常人、ＡＭＬは急性骨髄性白血病患者、ＭＤＳは骨髄異形成症候群患者を示す。これらの略号に付した数字は健常人番号および患者番号である。ＨＶは健常人、ＡＭＬは急性骨髄性白血病患者、ＭＤＳは骨髄異形成症候群患者を示す。これらの略号に付した数字は健常人番号および患者番号である。Ｒｅｓは治療応答者、ｎｏｎＲｅｓは治療に応答しなかった者であることを示す。ｐｒｅは治療前、４ｗは治療４週目、８ｗは治療８週目、１２ｗは治療１２週目、４２ｗは治療４２週目であることを示す。Ｐｈａｓｅ１は第１相臨床試験を示す。ＰＢ（ｐｒｅ）は治療前の末梢血であることを示す。ＢＭ（ｐｒｅ）は治療前の骨髄であることを示す。
【図２−３６】図２−３６は、本発明において同定された健常人およびＨＬＡ−Ａ＊２４０２陽性患者のＷＴ１特異的細胞障害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）のそれぞれのクローンのクロナリティーを示す。ｃｌｏｎｅ＃はクローン番号であり、ドットの左の数字はＶβ鎖のファミリー番号、ドットの右の数字は整理番号である。ＨＶは健常人、ＡＭＬは急性骨髄性白血病患者、ＭＤＳは骨髄異形成症候群患者を示す。これらの略号に付した数字は健常人番号および患者番号である。ＨＶは健常人、ＡＭＬは急性骨髄性白血病患者、ＭＤＳは骨髄異形成症候群患者を示す。これらの略号に付した数字は健常人番号および患者番号である。Ｒｅｓは治療応答者、ｎｏｎＲｅｓは治療に応答しなかった者であることを示す。ｐｒｅは治療前、４ｗは治療４週目、８ｗは治療８週目、１２ｗは治療１２週目、４２ｗは治療４２週目であることを示す。Ｐｈａｓｅ１は第１相臨床試験を示す。ＰＢ（ｐｒｅ）は治療前の末梢血であることを示す。ＢＭ（ｐｒｅ）は治療前の骨髄であることを示す。
【発明を実施するための好ましい形態】
【０００９】
本発明者は、ＷＴ１ペプチド／ＨＬＡ−Ａ＊２４０２の複合体からなるＷＴ１テトラマーで癌患者の末梢血リンパ球を染色し、ＦＡＣＳを用いてＷＴ１テトラマー陽性細胞を１個ずつ分離し、各細胞からｃＤＮＡを作成し、ＰＣＲ法を適用することによってＷＴ１特異的細胞障害性Ｔ細胞（以下において「ＷＴ１特異的ＣＴＬ」ということがある）のＴ細胞レセプター（以下において「ＴＣＲ」ということがある）のＶβ鎖に含まれるＣＤＲ３をコードするヌクレオチド配列を決定した（図１−１〜図１−３６）。これらの結果から該ＣＤＲ３のアミノ酸配列も決定した（図１−１〜図１−３６、配列番号：１６９６〜３３８９）。これらの配列は本発明により初めて同定されたものである。
【００１０】
したがって、本発明は、１の態様において、健常人およびＨＬＡ−Ａ＊２４０２陽性患者のＷＴ１特異的細胞障害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）のＴ細胞レセプター（ＴＣＲ）のＶβ鎖のＣＤＲ３をコードするヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチドであって、配列番号：１〜１６９５に示すいずれかのＣＤＲ３ヌクレオチド配列を有するＤＮＡ、またはその相補的ＲＮＡ、またはそれらの相補配列を有するポリヌクレオチドを提供するものである。本明細書において、これらのＤＮＡ、ＲＮＡ、それらの相補的ポリヌクレオチドをまとめて「ＣＤＲ３ポリヌクレオチド」という。例えば、ＣＤＲ３ポリヌクレオチドは、配列番号：１〜１６９５に示すヌクレオチド配列からなるＤＮＡのみならず、これらの配列を含むＤＮＡも包含する。また例えば、ＣＤＲ３ポリヌクレオチドは、配列番号：１〜１６９５に示すヌクレオチド配列からなるＤＮＡに相補的なＲＮＡのみならず、これらの配列を含むＲＮＡも包含する。さらに例えば、ＣＤＲ３ポリヌクレオチドは、上記ＤＮＡまたはＲＮＡおよびＲＮＡに相補的な配列を有するポリヌクレオチドも包含する。また、「ＣＤＲポリヌクレオチド」には、「ＣＤＲ３ペプチド」をコードする縮重配列を有するものも包含される。
【００１１】
また本発明は、別の態様において、ＷＴ１特異的細胞障害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）のＴ細胞レセプター（ＴＣＲ）のＶβ鎖のＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するペプチドであって、配列番号：１６９６〜３３８９に示すいずれかのＣＤＲ３アミノ酸配列を有するペプチドを提供するものである。本明細書において、これらのペプチドをまとめて「ＣＤＲ３ペプチド」という。例えば、ＣＤＲ３ペプチドは、配列番号：１６９６〜３３８９に示すいずれかのＣＤＲ３アミノ酸配列からなるペプチドのみならず、これらのＣＤＲ３アミノ酸配列を含むペプチドも包含する（例えば、Ｖβ鎖ペプチドまたはその一部分など）。さらに、配列番号：１６９６〜３３８９に示すアミノ酸配列において、１個ないし数個、好ましくは１個ないし３個、１個ないし２個、あるいは１個のアミノ酸が置換、付加、欠失しているアミノ酸配列からなる、あるいは含むペプチドも「ＣＤＲ３ペプチド」に包含される。ただし、これらのペプチドが本来のペプチドと同等の機能を有することが条件となる。これらのＣＤＲ３ペプチドは上記のＣＤＲ３ポリヌクレオチドによってコードされるものである。
【００１２】
ＣＤＲ３は最も多様性に富む領域であり、抗原認識の特異性に最も強く関与する部分である。それゆえ、本発明のＣＤＲ３ポリヌクレオチドの配列および本発明のＣＤＲ３ペプチドの配列は、ＨＬＡ−Ａ＊２４０２陽性患者におけるＷＴ１特異的ＣＴＬに特有の配列であると考えられる。したがって、あるＴ細胞のＴＣＲのＶβ鎖遺伝子のＣＤＲ３領域をコードするポリヌクレオチドまたはそのＣＤＲ３領域のペプチドが本発明のポリヌクレオチドまたは本発明のペプチドの配列を有していれば、そのＴ細胞はＷＴ１特異的であると考えられる。したがって、本発明のＣＤＲ３ポリヌクレオチドおよびＣＤＲ３ペプチドは、広範な癌のマーカーとして、癌の診断、ＷＴ１ペプチド免疫療法に対する該患者の感受性の診断、ＷＴ１ペプチド免疫療法に対する該患者の応答性の検査などに使用することができる。
【００１３】
本発明のＣＤＲ３ポリヌクレオチドおよびＣＤＲ３ペプチドは、ＷＴ１を有する細胞に起因する癌であればいずれの種類の癌患者のリンパ球においても出現し得る。ＷＴ１は多くの種類の癌や血液悪性腫瘍において癌抗原となっていることが知られている。従って、本発明のＣＤＲ３ポリヌクレオチドおよびＣＤＲ３ペプチド、ならびに以下に説明する本発明の方法は、殆どあらゆる種類の癌に適用することができ、例えば、急性骨髄性白血病、急性リンパ性白血病、悪性リンパ腫、多発性骨髄腫、慢性骨髄性白血病、骨髄異形成症候群、同種造血幹細胞移植後再発などの血液悪性疾患；舌癌、歯肉癌、口腔底癌、咽頭癌、喉頭癌、唾液腺癌、甲状腺癌などの固形癌；乳癌、肺癌、胸腺癌などの胸部の癌；大腸癌、小腸癌、胃癌、膵臓癌、肝癌、胆管癌、消化器内分泌腫瘍、消化管カルチノイドなどの消化器の癌；腎癌、尿路上皮癌、胚細胞腫、ウイルムス腫瘍、前立腺癌、子宮体癌、子宮頚癌、子宮肉腫、卵巣悪性腫瘍などの尿路生殖器系の癌；骨原発性悪性腫瘍（骨肉種、Ewing肉腫など）、軟部肉腫などの筋・骨格系の悪性腫瘍；その他皮膚癌、神経芽細胞腫、悪性神経膠腫（グリオブラストーマ）、中枢神経原発悪性リンパ腫、髄芽腫・ＰＮＥＴなどに適用できるが、これらの癌や腫瘍に限定されない。
【００１４】
ＣＤＲ３ポリヌクレオチドあるいはＣＤＲ３ペプチドを製造する場合には、通常の遺伝子工学的手法および／または化学合成法を用いることができる。例えば、ＣＤＲ３ポリヌクレオチドを細胞から単離してもよく、あるいは化学合成してもよい。ＣＤＲ３ポリヌクレオチドをＰＣＲ法などの公知方法にて増幅することもできる。また例えば、ＣＤＲ３ポリヌクレオチド（公知方法にて適当量まで増幅しておいてもよい）を適当なベクターに組み込んで適当な細胞に導入し、あるいは遺伝子銃やエレクトロポレーションなどによって適当な細胞に導入し、次いで、ＣＤＲ３ポリヌクレオチドを導入された細胞を培養して、発現させることにより、ＣＤＲ３ポリヌクレオチドおよびＣＤＲ３ペプチドを得ることができる。使用可能なベクターや細胞、遺伝子導入条件、培養条件、遺伝子やペプチドの単離方法などは当業者に公知であり、適宜選択して用いることができる。ＣＤＲ３ポリヌクレオチドあるいはＣＤＲ３ペプチドを製造するために化学合成法を用いてもよい。これらの化学合成法は公知であり、遺伝子の化学合成法としてはアミダイト法によるＤＮＡの固相合成や１−４ホスホネート法などがあり、ペプチドの化学合成法としてはＦｍｏｃ法などがある。
【００１５】
したがって、本発明は、さらなる態様において、治療前のＨＬＡ−Ａ＊２４０２陽性患者から得られた試料中の、いずれかのＣＤＲ３ポリヌクレオチドまたはいずれかのＣＤＲ３ペプチドを有するＷＴ１特異的ＣＴＬのクロナリティーを調べることを特徴とする該患者における癌の診断方法であって、該クロナリティーが複数のものが存在する場合に、該患者が癌にかかっている可能性があると判定する方法を提供する。本明細書において「クロナリティー」とは、同一のヌクレオチド配列またはアミノ酸配列を有する細胞が検出される頻度をいう。クロナリティーを調べるためには、細胞１個１個を識別することのできるセルソーターを用いるのが一般的である。「患者」とは、癌の疑いのあるヒト、癌にかかっているヒトの両方を包含する。
【００１６】
本発明者は、患者におけるいずれかのＣＤＲ３ポリヌクレオチドあるいはいずれかのＣＤＲ３ペプチドを有するＷＴ１特異的ＣＴＬのクロナリティーを調べることにより、該患者が癌にかかっているかどうかを判定できることを見出した。図２−１〜図２−３６からわかるように、健常人（ＨＶ１〜ＨＶ４）では、いずれかのＣＤＲ３ポリヌクレオチドまたはいずれかのＣＤＲ３ペプチドを有するＷＴ１特異的ＣＴＬのクロナリティーはほとんどのクローンに関して１、希に２または３であるものが見られるのに対し、治療前におけるすべての癌患者（ＡＭＬ（急性骨髄性白血病）１〜４、ＭＤＳ（骨髄異形成症候群）１〜５）では、いずれかのＣＤＲ３ポリヌクレオチドまたはいずれかのＣＤＲ３ペプチドを有するＷＴ１特異的ＣＴＬのクロナリティーが複数のものが必ず存在しており、そのクロナリティー数およびそのような細胞の種類も健常人よりも多い。治療前における患者におけるクロナリティーの増加またはクロナリティーが複数である細胞の種類の増加は、患者において癌細胞に対する防御・攻撃が既に開始されている可能性を示すものである。
【００１７】
これらのことより、被験者試料を調べた場合に、いずれかのＣＤＲ３ポリヌクレオチドまたはいずれかのＣＤＲ３ペプチドを有するＷＴ１特異的ＣＴＬのなかにクロナリティーが複数のものが存在すれば、該被験者は癌にかかっている可能性があると判定することができる。さらに、治療前の被験者におけるいずれかのＣＤＲ３ポリヌクレオチドまたはいずれかのＣＤＲ３ペプチドを有するＷＴ１特異的ＣＴＬのクロナリティーが大きいほど、あるいは複数のクロナリティーを有するＷＴ１特異的ＣＴＬの種類が多いほど、被験者が癌にかかっている可能性が高いと判定することができる。また、上記判定方法において、治療前の患者におけるいずれかのＣＤＲ３ポリヌクレオチドまたはいずれかのＣＤＲ３ペプチドを有する３以上のクロナリティーを有するＷＴ１特異的ＣＴＬのクロナリティーが大きいほど、あるいは３以上のクロナリティーを有するＷＴ１特異的ＣＴＬの種類が多いほど、患者が癌にかかっている可能性が高いと判定してもよい。
【００１８】
本発明は、さらなる態様において、治療前においてＨＬＡ−Ａ＊２４０２陽性患者から得られた試料中の、請求項１記載のいずれかのポリヌクレオチドまたは請求項２記載のいずれかのペプチドを有するＷＴ１特異的ＣＴＬクローンの種類の数およびクロナリティーを調べることを特徴とする、ＷＴ１ペプチド免疫療法に対する患者の感受性を調べる方法であって、該患者におけるクロナリティーが複数であるＷＴ１特異的ＣＴＬクローンの種類が、ＷＴ１ペプチド免疫療法に対する無応答者のそれよりも多い場合に、ＷＴ１ペプチド免疫療法に対する該患者の感受性があると判定する方法を提供する。
【００１９】
患者における癌細胞に対抗して、いずれかのＣＤＲ３ポリヌクレオチドまたはいずれかのＣＤＲ３ペプチドを有するＷＴ１特異的ＣＴＬが作用する。その際、治療前において既にクロナリティーが複数であるクローンは、ＷＴ１ペプチド免疫療法によってクロナリティーをさらに増加させるか、あるいはそのクロナリティーを維持する傾向がある。また、できるだけ多種類のクローンが存在したほうが、全体として有効なＷＴ１特異的ＣＴＬクローンの数および種類が増加することとなり、ＷＴ１免疫療法の成功の可能性が高いと考えられる。より厳密には、患者におけるクロナリティーが複数であるＷＴ１特異的ＣＴＬクローンの種類が無応答者におけるそれよりも多い場合に、ＷＴ１ペプチド免疫療法に対する患者の感受性が高いと判定することができる。
【００２０】
図２−１〜図２−３６からわかるように、ＷＴ１ペプチド免疫療法に応答したＡＭＬ患者において、治療前のクロナリティーが複数であるクローンの種類の数が健常人および無応答者よりも多かった。ＡＭＬ１（応答者）：１０種（これらのクロナリティー合計５８）、ＡＭＬ２（応答者）：１２種（これらのクロナリティー合計９３）、ＡＭＬ３（無応答者）：９種（これらのクロナリティー合計２７）、ＡＭＬ４（無応答者）：３種（これらのクロナリティー合計１０）。なお、健常人ＨＶ１〜５においてはクロナリティーが複数であるクローンの種類は０〜２種の範囲であった。
【００２１】
本発明は、さらなる態様において、ＷＴ１ペプチド免疫療法の前後において、ＨＬＡ−Ａ＊２４０２陽性患者から得られた試料中の、請求項１記載のいずれかのポリヌクレオチドまたは請求項２記載のいずれかのペプチドを有するＷＴ１特異的ＣＴＬクローンのクロナリティーを調べることを特徴とする、該患者におけるＷＴ１ペプチド免疫療法のモニタリング方法であって、いずれかのクローンに関してＷＴ１ペプチド免疫療法前よりもＷＴ１ペプチド免疫療法後において該ＷＴ１特異的ＣＴＬのクロナリティーが増加した場合に、該患者がＷＴ１ペプチド免疫療法に応答したと判定する方法を提供する。
【００２２】
図２−１〜図２−３６からわかるように、ＡＭＬ患者においてＷＴ１ペプチド免疫療法期間中にクロナリティーが増加した（クロナリティー０から１以上になったものも含む）ＷＴ１特異的ＣＴＬが見られる。かかる挙動を示した典型例としては、ＡＭＬ（Ｐｔ１）におけるＣｌｏｎｅ＃０２．２８、＃０５．０３４、＃０５．１３５、＃０５．２１９、＃０９．６５、＃１２．０４、＃１３．１３、＃２７．０１６、＃２８．８３など、ならびにＡＭＬ（Ｐｔ２）におけるＣｌｏｎｅ＃０２．２７、＃０５．０３５、＃０５．１４１、＃０５．２１９、＃０６．００９、＃１２．０４、＃１２．２０、＃１５．４４、＃２０．０６８、＃２７．０３２などが挙げられる。ＷＴ１ペプチド免疫療法によりクロナリティーが増えるクローンが存在することは、ＷＴ１ペプチド免疫療法に対する応答を示すものである。すなわち、クロナリティーが増加したことは、ＷＴ１ペプチド免疫療法が一定期間奏功したことを示すと考えられる。これらのクロナリティーの増加は一時的なものであってもよく、持続的なものであってもよい。あるクローンのクロナリティーが一時的に増加し、その後減少しても、他のＷＴ１特異的ＣＴＬのクロナリティーが増加して、効果を補填するものと考えられる。癌細胞に対する効果からすると、クロナリティーの増加の割合が大きいほど望ましいと考えられる。したがって、ＷＴ１ペプチド免疫療法後において、クロナリティーの増加の割合が大きいほど、あるいはクロナリティーが増加したクローンの種類が多いほど、ＷＴ１ペプチド免疫療法に対する応答性が高いと判定することができる。癌の種類、部位などに応じて適切な方法を用いて癌細胞の数や性質を調べることができる。
【００２３】
上記治療モニタリング方法において、ＷＴ１ペプチド免疫療法の前後でクロナリティーを比較するのであるが、該前後の時間間隔は任意であってよい。例えば、数日間、１週間、２週間、３週間、４週間、２ヶ月、３ヶ月またはそれ以上であってもよい。
【００２４】
上で説明した本発明の方法において、クロナリティーを調べるための手段・方法、クローンの種類を調べる（すなわち、ＣＤＲ３ペプチドのアミノ酸配列あるいはそれをコードするヌクレオチド配列を決定する）ための手段・方法は、当業者に公知であり、当業者は適宜これらの作業を行うことができる。例えば、本明細書の実施例に示すように、ＦＡＣＳＡｒｉａ装置などの公知のソーティング装置、および例えばＰＣＲ法などの公知の遺伝子増幅方法（例えばプライマーセットとして表１に記載のものを使用する）などを用いることができる。本発明のＣＤＲ３ポリヌクレオチドあるいはＣＤＲペプチドの解析を、より厳密に、あるいはより確定的に行うためには、Ｖβ鎖遺伝子中のＣＤＲ３ヌクレオチド配列、ＩＭＧＴ、Ｊ領域およびＤ領域が図１−１〜図１−３６に示すものであるかどうかを確認すればよい。かかる確認は当業者の通常行い得るところである。
【００２５】
ＷＴ１ペプチド免疫療法も公知である。例えば、ＨＬＡ−Ａ＊２４０２陽性患者に対しては、ＨＬＡ−Ａ＊２４０２拘束性ＷＴ１ペプチド天然型（アミノ酸配列：ＣＭＴＷＮＱＭＮＬ）あるいは改変型（アミノ酸配列：ＣＹＴＷＮＱＭＮＬ）を、例えば経皮的に投与することにより行うことができる。通常、１回の投与量はμｇ／ｂｏｄｙ〜ｍｇ／ｂｏｄｙのオーダーであり、１週間〜数週間間隔で投与することができる。
【００２６】
本発明は、さらなる態様において、ＣＤＲ３ポリヌクレオチドまたはその相補的ポリヌクレオチドを含むチップ、あるいはＣＤＲ３ペプチドを含むチップ、ＣＤＲ３ペプチドに対する抗体を含むチップを提供する。これらのチップはマイクロチップ、マイクロアレイなどの形態であってもよい。これらのチップの作製は常法に従って行うことができ、例えば、ガラス基盤上にＣＤＲ３ポリヌクレオチドあるいはＣＤＲ３ペプチドに対する抗体を固定することができる。チップ上に固定されるＣＤＲ３ポリヌクレオチド、その相補的ポリヌクレオチド、ＣＤＲ３ペプチド、ＣＤＲ３ペプチドに対する抗体の種類は１種〜全種類であり、好ましくは全種類を固定して網羅的に解析する。例えば、配列番号：１〜１６９５に示すヌクレオチド配列に相補的なヌクレオチド配列からなる全種類のポリヌクレオチドをチップ上に固定してもよく、また例えば、配列番号：１６９６〜３３８９に示すアミノ酸配列からなる全種類のペプチドを特異的に認識して結合する抗体をチップ上に固定してもよい。チップ上のＣＤＲ３ポリヌクレオチド、その相補的ポリヌクレオチド、ＣＤＲ３ペプチド、ＣＤＲ３ペプチドに対する抗体の配置は任意である。
【００２７】
これらのチップは、上記の癌の診断方法などにおいて使用することができる。試料としては、患部組織、血液、リンパ液などの体液、粘膜などであってよいが、好ましくは末梢血である。例えば、分析対象がＣＤＲ３ポリヌクレオチドである場合、常法に従って細胞から核酸を抽出し、配列番号：１〜１６９５に示すヌクレオチド配列に相補的なヌクレオチド配列からなる全種類のポリヌクレオチドを固定したチップを用いて、ハイブリダイゼーションした試料中のＤＮＡの種類および量を調べることができる。また例えば、分析対象がＣＤＲ３ペプチドである場合には、配列番号：１６９６〜３３８９に示すアミノ酸配列からなる全種類のペプチドを特異的に認識して結合する抗体を固定したチップを用いて、特異的結合した試料中のペプチドの種類および量を調べることができる。
【００２８】
この点において、本発明は、ＣＤＲ３ペプチドを特異的に認識してこれに結合する抗体を提供する。好ましくは、かかる抗体は、配列番号：１６９６〜３３８９に示すいずれかのアミノ酸配列を特異的に認識するものである。かかる抗体の作成方法は当業者に公知である。
【００２９】
通常は、試料中のＤＮＡあるいはチップ上のＤＮＡ配列に、ハイブリダイゼーションの有無およびハイブリダイゼーション量を示すことのできる標識を付しておく。また例えば、配列番号：１６９６〜３３８９のＣＤＲ３ペプチドに対する各抗体をチップ上に配列させ、試料中のＣＤＲ３ペプチドとの特異的結合を調べることにより、試料中のＣＤＲ３ペプチドの存在、および種類を同定することができる。通常は、試料中のペプチドあるいはチップ上の抗体に、特異的結合の有無を判別できる標識を付しておく。ハイブリダイゼーションや特異的結合の有無および量を示すことのできる標識は公知であり、例えば、蛍光標識、放射性標識、酵素標識、発色基を含むものなどがあり、適宜選択して用いることができる。上記のチップを用いることにより、同時に多検体を分析することが可能となる。
【００３０】
本発明のＣＤＲ３ポリヌクレオチドおよびＣＤＲペプチドはこれらのチップを用いるほか、例えば、サザンブロット、ノーザンブロット、コロニーハイブリダイゼーション、ＥＬＩＳＡなどの公知の方法を用いて分析し同定することができる。
【００３１】
上述のごとく、本発明のＣＤＲ３  ＤＮＡは実施例に示すプライマー、特に、表１に示すプライマーセットを用いて同定されたものである。したがって、本発明は、ＣＤＲポリヌクレオチドを増幅するための配列番号：３３８９〜３４１６に示す配列から選択される配列を有するプライマーを提供するものである。例えば、ＣＤＲ３ポリヌクレオチドの増幅に配列番号：３３９１〜３４１５に示されるプライマーを含むプライマーセットを用いてもよい。
【００３２】
また本発明は、ＣＤＲ３ポリヌクレオチドあるいはＣＤＲ３ペプチドを有するＷＴ１特異的ＣＴＬを検出するための手段を含む、癌の診断キット、ＷＴ１ペプチド免疫療法に対する癌患者の感受性を調べるためのキット、またはＷＴ１ペプチド免疫療法のモニタリング用キットを提供する。さらに本発明は、ＣＤＲ３ポリヌクレオチドあるいはＣＤＲ３ペプチドを有するＷＴ１特異的ＣＴＬを検出するための手段を含む、癌の診断装置、ＷＴ１ペプチド免疫療法に対する癌患者の感受性を調べるための装置、またはＷＴ１ペプチド免疫療法のモニタリング用装置も提供する。上述のプライマーセットなどの遺伝子増幅手段、上述のチップ、あるいはチップから得られる情報の解析手段などをかかるキットの構成成分とすることができ、あるいはかかる装置に用いることができる。
【００３３】
本発明は、さらにもう１つの態様において、ＣＤＲ３ポリヌクレオチド配列を含むＴ細胞レセプター遺伝子を導入したＨＬＡ−Ａ＊２４０２陽性癌患者のリンパ球に関するものである。好ましくは、かかるリンパ球は、本発明のポリヌクレオチドであってＣＤＲ３ポリヌクレオチドを含むＷＴ１特異的ＣＴＬのＴＣＲのＶβ鎖遺伝子と、ＷＴ１特異的ＣＴＬのＴＣＲのＶα鎖遺伝子とを導入された癌患者の末梢血リンパ球である。このような末梢血リンパ球の調製にあたり、これらのＷＴ１特異的ＣＴＬのＴＣＲのＶβ鎖遺伝子１種類を用いて複数種類の末梢リンパ球を得て、それらを患者に導入してもよいが、ＷＴ１特異的ＣＴＬのＴＣＲのＶβ鎖遺伝子を複数種類用いて複数種類の末梢リンパ球を得て、それらを患者に導入することが、治療効果の向上の点から好ましい。あるいはまた、患者や癌の種類等によっては、治療に有効な遺伝子中のヌクレオチド配列が異なることもあり、個々の状況に応じて導入する遺伝子のヌクレオチド配列を選択することも好ましい。
【００３４】
導入すべき遺伝子の調製方法、ならびに末梢血リンパ球への遺伝子導入方法は当業者に公知である。例えば、導入すべき遺伝子を適当なベクターに組み込んで適当な細胞に導入してもよく、あるいは遺伝子銃やエレクトロポレーションなどによって適当な細胞に導入してもよい。その他の遺伝子導入条件や細胞の培養条件などは当業者が適宜選択しうるものである。
【００３５】
上記のように遺伝子を導入されたリンパ球を患者体外で培養して大量のＷＴ１特異的ＣＴＬを得ることができる。そして、得られたＣＴＬを癌患者に導入することにより、ＷＴ１を発現している癌を傷害させることができ、癌治療を行うことができる。得られたＣＴＬを導入する好ましい患者は、末梢血リンパ球を得た患者と同一人である。
【００３６】
上記の癌治療は、抗ガン剤や放射線療法などの他の癌治療と併用することもできる。上記癌治療は広範な癌に適用することができ、それらは上で例示してあるが、これらに限らない。
【００３７】
本発明は、さらにもう１つの態様において、ＣＤＲ３ペプチドに対する抗体ならびにその使用方法を提供する。かかる抗体の作成方法は当業者に公知である。かかる抗体を用いて、例えば、対象試料中の本発明のＣＤＲ３ペプチドのアミノ酸配列あるいはそれを有するアミノ酸配列をＶβ鎖中に有するリンパ球を検出あるいは同定することができる。例えば、配列番号：１６９６〜３３８９のいずれかのアミノ酸配列からなるペプチドに対する抗体を用いて、癌特異的なリンパ球を検出または同定することができる。またこれらの抗体を用いて、上記の本発明の方法、例えば癌の診断などを行うことができる。
【００３８】
また、かかる抗体を、それに対する本発明のＣＤＲ３アミノ酸配列を有するリンパ球と接触させて、活性化することもできる。このようにして活性化されたリンパ球を癌の治療に使用することができる。好ましくは、癌患者から得たリンパ球を活性化して、必要ならば増殖させて、当該患者に戻すことにより癌治療を行うことができる。また、かかる抗体を用いて、目的とするＷＴ１特異的Ｔ細胞を豊富化させることもできる。例えば、かかる抗体を用いて癌患者においてＷＴ１特異的Ｔ細胞を豊富化させ、癌治療に資することが出来る。
【００３９】
さらなる態様において、本発明は、上で説明した本発明の末梢血リンパ球に検出可能な標識を付して患者に投与し、次いで、標識の存在位置および量を調べることを特徴とする、固形癌の位置および大きさの特定方法を提供する。標識はテクネシウム９９のごとき放射性標識、蛍光標識など公知のものを用いることができる。細胞の標識化方法も公知である。標識の検出およびシグナルの定量もまた当業者に公知であり、放射線カウンター、蛍光測定、あるいは生検による組織の採取などにより行うことができる。
【００４０】
以下に実施例を示して本発明をさらに詳細かつ具体的に説明するが、実施例は本発明を限定するものと解してはならない。
【実施例１】
【００４１】
Ａ．実験方法および使用材料
（１）細胞
５人の健康ボランティア（ＨＶ１〜ＨＶ５）ならびに４人のＨＬＡ−Ａ＊２４０２陽性ＡＭＬ患者（ＡＭＬ１〜ＡＭＬ４）から末梢血試料を得た。５人のＨＬＡ−Ａ＊２４０２陽性ＭＤＳ患者（ＭＤＳ１〜ＭＤＳ５）から骨髄試料または末梢血試料を得た。すなわち、ＡＭＬ１からは、治療前、治療開始から４、８、１２、４２週目に末梢血を得た。ＡＭＬ２からは、治療前、治療開始から４週目、８週目、１２週目および４２週目に末梢血を得た。ＡＭＬ３からは、治療前、治療開始から４週目、８週目に末梢血を得た。ＡＭＬ４からは、治療前、治療開始から４週目に末梢血を得た。ＭＤＳ１からは、治療前の骨髄、治療前の末梢血、治療開始から４週目、８週目および１２週目に末梢血を得た。ＭＤＳ２〜５からは、治療前の末梢血および治療前の骨髄を得た。得られた末梢血試料をFicoll-Hypaque（Pharmacia, Uppsala, Sweden）を用いる密度勾配遠心分離に供して末梢血単核細胞（ＰＢＭＣｓ）を分離し、使用するまで−１７０℃にて冷凍した。上記患者に対する治療は、ＷＴ１ペプチド免疫療法にて行った。治療に使用したＷＴ１ペプチドのアミノ酸配列はＣｙｓ−Ｔｙｒ−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ａｓｎ−Ｇｌｎ−Ｍｅｔ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ（配列番号：３３９０）であり、２週間間隔で皮内注射により投与した。【００４２】
（２）フローサイトメトリー分析およびソーティング
先ず、１試料あたり２ｘ１０６個のＰＢＭＣｓを、ＦＡＣＳバッファー（２％ウシ胎児血清含有ＰＢＳ）中にて３７℃で３０分、ＰＥ抱合ＨＬＡ−Ａ＊２４０２−ＷＴ１  ２３５−２４３テトラマー（MBL, Tokyo, Japan）にて染色した。次いで、下記の５色の蛍光標識モノクローナル抗体にて、暗所かつ氷上で２５分染色した：ＦＩＴＣ−標識抗−ＣＤ４、ＣＤ１４、ＣＤ１６、ＣＤ１９およびＣＤ５６、抗−ＣＤ３−ＰｅｒＣＰ、抗−ＣＤ８−ＡＰＣ−Ｃｙ７（BD Bioscience, San Jose, CA）、抗−ＣＤ４５ＲＡ−ＡＰＣおよび抗−ＣＣＲ７−ＰＥ−Ｃｙ７（BD Pharmingen, San Diego, CA）。染色された細胞をＦＡＣＳバッファーにて２回洗浄した。FACSAria装置（BD Biosciences）を用いてソーティングを行い、FACSDivaソフトウェア（BD Biosciences）にてデータ解析を行って、ＣＤ４−ＣＤ１４−ＣＤ１６−ＣＤ１９−ＣＤ５６−細胞フラクション中の単一のＨＬＡ−Ａ＊２４０２−ＷＴ１  ２３５−２４３テトラマー＋ＣＤ３＋ＣＤ８＋細胞を得て、ＷＴ１−Ｔｅｔ＋細胞と定義した。【００４３】
（３）ソーティングされた単一細胞からのＴＣＲ−β鎖のｃＤＮＡの合成
ＤＮＡのコンタミネーションをなくし、十分な単一細胞のＲＴ−ＰＣＲを行うために、ｃＤＮＡ合成を行い、すべてのＰＣＲ工程を別個のクリーンベンチ内で行った。単一ＷＴ１−Ｔｅｔ＋細胞を、１５μｌのｃＤＮＡ反応ミックスを入れたＰＣＲチューブ中に直接ソーティングした。このｃＤＮＡ反応ミックスは、下記のものを溶解バッファー（０．５％  Triton X-100を含有する１ＸｃＤＮＡバッファー）中に含むものであった：逆転写酵素（SuperScript III, Invitrogen, Carlsbad, CA）、０．５ｍＭ  ｄＮＴＰｓ（Invitrogen）、２０ユニット（Ｕ）のＲｎａｓｅインヒビター（Invitrogen）、１００μｇ／ｍｌのゼラチン（Roche, Indianapolis, IN）、１００μｇ／ｍｌのｔＲＮＡ（Roche）および２００ｎＭのＴＣＲ−β鎖不変領域特異的プライマー（5’-CACCAGTGTGGCCTTTTG-3’（配列番号：３３９１））。ソーティング後、ｃＤＮＡ合成のために試料を５０℃で９０分インキュベーションし、次いで、反応を停止させるために９５℃で５分インキュベーションした。【００４４】
（４）セミ−ネステッドマルチプルＰＣＲ反応
上記手順により得た１０μｌの合成ｃＤＮＡ生成物を、４０μｌの反応ミックス中に添加した。この反応ミッックスは、１ＸＰＣＲバッファー、２ｍＭ  ＭｇＣｌ２、０．２５ｍＭ  ｄＮＴＰｓ、１．２５Ｕ  ＤＮＡポリメラーゼ（Platinum Taq DNA Polymerase, Invitrogen）、５ｎＭの２４種のＶβファミリー特異的フォワードプライマーの混合物（表１に示す）および５ｎＭの３’Ｃβリバースプライマー（５’−GCTTCTGATGGCTCAAACACAGC−３’（配列番号：３３９２））を含んでいた。ＰＣＲ手順は以下のとおりであった：プレ−ＰＣＲ加熱工程を９５℃で２分、次いで、９５℃で４５秒の変性工程、５７℃で４５秒のアニーリング工程および７２℃で５０秒の伸長工程からなるサイクルを４０サイクル。
【表１】
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【００４５】
次いで、上記ＰＣＲの生成物をスクリーニングＰＣＲに供した。上記ＰＣＲ生成物１μｌを各々８本の別個のチューブに入れ、各チューブに２４μｌの反応ミックスを入れた。この反応ミックスは、１ＸＰＣＲバッファー、２ｍＭ  ＭｇＣｌ２、０．２ｍＭ  ｄＮＴＰｓ、１．０Ｕ  Platinum Taq ＤＮＡポリメラーゼ、表１に示すＳ１〜Ｓ８の８つのスクリーニングセットのうち１セットのフォワードプライマーおよび５’Ｃβリバースプライマー（５’−GGAACACGTTTTTCAGGTCCT−３’（配列番号：３４１８））（各１５０ｎＭ）を含んでいた。ＰＣＲ手順は以下のとおりであった：プレ−ＰＣＲ加熱工程を９５℃で２分、次いで、９４℃で４５秒の変性工程、５７℃で４５秒のアニーリング工程および７２℃で４０秒の伸長工程からなるサイクルを３５サイクル。【００４６】
当該８つのスクリーニングＰＣＲにおける陽性反応を確認するために、５μｌの各スクリーニングＰＣＲ生成物を２％アガロースゲル電気泳動に供した。次いで、さらなるＰＣＲを行った。このＰＣＲは、陽性と確認されたスクリーニングセットのＶβ特異的フォワードプライマー各１５０ｎＭを用いて３５サイクル行った。２％アガロースゲル電気泳動にて陽性反応を確認した。陰性対照として、細胞を含まない系を用いて上と同様に３つのウェルを調製し、同じ手順で実験を行った。【００４７】
（５）ＴＣＲ−β相補性決定領域３（ＣＤＲ３）の配列決定分析
増幅されたＴＣＲ−β遺伝子フラグメントを、PCR Purification Kit（Qiagen, Valencia, CA）により精製した。対応するＴＣＲ  Ｖβ特異的フォワードプライマーを用いて配列決定を行った。配列決定にはABI PRIAM BigDye Terminator v 3.1 Cycle Sequencing kit（Applied Biosystems, Foster City, CA, USA）を用い、ABI PRISM 3100 Genetic Analyzer（Applied Biosystems）にて分析を行った。ＩＭＧＴヒトＴＣＲ遺伝子データベースのサイト（http://imgt.cines.fr）と比較することによりＣＤＲ３の配列データを分析した。【００４８】
Ｂ．結果
健常人および癌患者（ＡＭＬ１〜４、ＭＤＳ１〜５）由来のＷＴ１特異的ＣＴＬのＶβ鎖遺伝子の配列、Ｊ領域の配列、Ｄ領域の配列、Ｎ領域の配列、ＣＤＲ３ヌクレオチド配列およびＣＤＲ３アミノ酸配列を図１−１〜図１−３６に示す。個々のＷＴ１特異的ＣＴＬのクロナリティーを図２−１〜図２−３６に示す。また、ＣＤＲ３ヌクレオチド配列を配列番号：１〜１６９５に示し（クローン＃２４．２９と＃２８．９２のＣＤＲ３ヌクレオチド配列は同じものとなるのでクローン＃２４．２９のほうを配列表に記載）、ＣＤＲ３アミノ酸配列を配列番号：１６９６〜３３８９に示した（クローン＃２．５３と＃２８．５８のＣＤＲ３アミノ酸配列は同じものであり、クローン＃２４．２９と＃２８．９２のＣＤＲ３アミノ酸配列も同じものであるので、クローン＃２．５３、クローン＃２４．１９を配列表に記載）。なお、ＡＭＬ患者のうち、ＡＭＬ１およびＡＭＬ２は治療に対して応答し、ＡＭＬ３およびＡＭＬ４は応答しなかった。ＭＤＳ患者については治療に対する応答を判定していない。【００４９】
図２−１〜図２−３６からわかるように、健常人（ＨＶ１〜ＨＶ４）では、いずれかのＣＤＲ３ポリヌクレオチドまたはいずれかのＣＤＲ３ペプチドを有するＷＴ１特異的ＣＴＬのクロナリティーはほとんどのクローンに関して１、希に２または３であるものが見られるのに対し、治療前におけるすべての癌患者（ＡＭＬおよびＭＤＳ）においては、いずれかのＣＤＲ３ポリヌクレオチドまたはいずれかのＣＤＲ３ペプチドを有するＷＴ１特異的ＣＴＬのクロナリティーが複数のものが必ず存在しており、そのクロナリティー数およびそのような細胞の種類も健常人よりも多かった。【００５０】
治療前における患者におけるクロナリティーの増加またはクロナリ
ティーが複数である細胞の種類の増加は、患者において癌細胞に対する防御・攻撃が既に開始されている可能性を示すものであり、既に癌細胞が患者に存在する可能性があると考えられる。【００５１】
また、図２−１〜図２−３６からわかるように、ＷＴ１ペプチド免疫療法に応答したＡＭＬ患者において、治療前のクロナリティーが複数であるクローンの種類の数が健常人および無応答者よりも多かった。ＡＭＬ１（応答者）：１０種（これらのクロナリティー合計５８）、ＡＭＬ２（応答者）：１２種（これらのクロナリティー合計９３）、ＡＭＬ３（無応答者）：９種（これらのクロナリティー合計２７）、ＡＭＬ４（無応答者）：３種（これらのクロナリティー合計１０）。なお、健常人ＨＶ１〜５においてはクロナリティーが複数であるクローンの種類は０〜２種の範囲であった。【００５２】
治療前において既にクロナリティーが複数であるクローンは、ＷＴ１ペプチド免疫療法によってクロナリティーをさらに増加させるか、あるいはそのクロナリティーを維持する傾向がある。また、できるだけ多種類のクローンが存在したほうが、全体として有効なＷＴ１特異的ＣＴＬクローンの数および種類が増加することとなり、ＷＴ１免疫療法の成功の可能性が高いと考えられる。【００５３】
図２−１〜図２−３６からわかるように、ＡＭＬ患者においてＷＴ１ペプチド免疫療法期間中に一時的あるいは継続的にクロナリティーが増加したＷＴ１特異的ＣＴＬ（クロナリティー０から１以上になったものも含む）が見られた。かかる挙動を示した典型例としては、ＡＭＬ（患者１−応答者）におけるＣｌｏｎｅ＃０２．２８、＃０５．０３４、＃０５．１３５、＃０５．２１９、＃０９．６５、＃１２．０４、＃１３．１３、＃２７．０１６、＃２８．８３など、ならびにＡＭＬ（患者２−応答者）におけるＣｌｏｎｅ＃０２．２７、＃０５．０３５、＃０５．１４１、＃０５．２１９、＃０６．００９、＃１２．０４、＃１２．２０、＃１５．４４、＃２０．０６８、＃２７．０３２などが挙げられる。例えば、ＡＭＬ患者１のクローン＃０２．２８のクロナリティーの変動を見れば、治療開始時および４週目の治療の効果が大きかったことがわかる。【００５４】
あるクローンのクロナリティーが増加したことは、ＷＴ１ペプチド免疫療法が一定期間奏功したことを示すと考えられる。あるクローンのクロナリティーが一時的に増加し、その後減少しても、他のクローンのクロナリティーが増加して、効果を補填するものと考えられる。癌細胞に対する効果からすると、クロナリティーの増加の割合が大きいほど望ましいと考えられる。したがって、ＷＴ１ペプチド免疫療法後において、クロナリティーの増加の割合が大きいほど、あるいはクロナリティーが増加したクローンの種類が多いほど、ＷＴ１ペプチド免疫療法に対する応答性が高かったと考えられる。
【産業上の利用可能性】
【００５５】
本発明は、有用な抗癌治療用医薬、癌検査用キットまたは試薬、癌の研究試薬等が提供される。したがって、本発明は、癌の治療のための医薬品の分野、癌の検査用キットおよび試薬の分野、ならびに癌研究の分野などにおいて利用されうる。
【図１−１】
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【図１−２】
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【図１−３】
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【図１−４】
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【図１−５】
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【図１−６】
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【図１−７】
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【図１−８】
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【図１−９】
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【図１−１０】
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【図１−１１】
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【図１−１２】
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【図１−１３】
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【図１−１４】
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【図１−１５】
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【図１−１６】
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【図１−１７】
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【図１−１８】
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【図１−１９】
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【図１−２０】
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【図１−２１】
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【図１−２２】
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【図１−２３】
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【図１−２４】
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【図１−２５】
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【図１−２６】
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【図１−２７】
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【図１−２８】
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【図１−２９】
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【図１−３０】
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【図１−３１】
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【図１−３２】
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【図１−３３】
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【図１−３４】
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【図１−３５】
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【図１−３６】
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【図２−１】
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【図２−２】
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【図２−３】
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【図２−４】
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【図２−５】
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【図２−６】
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【図２−７】
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【図２−９】
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【図２−１０】
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【図２−１１】
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【図２−１２】
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【図２−１３】
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【図２−１４】
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【図２−１５】
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【図２−１６】
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【図２−１７】
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【図２−１８】
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【図２−１９】
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【図２−２０】
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【図２−２１】
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【図２−２２】
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【図２−２３】
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【図２−２４】
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【図２−２５】
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【図２−２６】
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【図２−２７】
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【図２−２８】
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【図２−２９】
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【図２−３０】
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【図２−３１】
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【図２−３２】
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【図２−３３】
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【図２−３４】
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【図２−３５】
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【図２−３６】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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