(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヘパリンとドパミンを１：１．２〜１．５のモル数比で混合した溶液に、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミドヒドロクロリド（１−ｅｔｈｙｌ−３−（３−ｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏｐｒｏｐｙｌ）ｃａｒｂｏｄｉｉｍｉｄｅ  ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ、ＥＤＣ）、１−エチル−３−（３−（トリメチルアンモニオ）プロピル）カルボジイミド（１−ｅｔｈｙｌ−３−（３−ｔｒｉｍｅｔｈｙｌａｍｍｏｎｉｏ）ｐｒｏｐｙｌ）ｃａｒｂｏｄｉｉｍｉｄｅ、ＥＴＣ）、または１−シクロヘキシル−３−（２−モルホリノエチル）カルボジイミド（１−ｃｙｃｌｏｈｅｘｙｌ−３−（２−ｍｏｒｐｈｏｌｉｎｏｅｔｈｙｌ）ｃａｒｂｏｄｉｉｍｉｄｅ、ＣＭＣ）から選択された何れか一つの架橋活性化剤、及びＮ−ヒドロキシスクシンイミド（Ｎ−ｈｙｄｒｏｘｙｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｅ、ＮＨＳ）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（１−ｈｙｄｒｏｘｙｂｅｎｚｏｔｒｉａｚｏｌｅ、ＨＯＢｔ）、３，４−ジヒドロ−３−ヒドロキシ−４−オキソ−１，２，３−ベンゾトリアジン（３，４−ｄｉｈｙｄｒｏ−３−ｈｙｄｒｏｘｙ−４−ｏｘｏ−１，２，３−ｂｅｎｚｏｔｒｉａｚｉｎｅ、ＨＯＯＢｔ）、１−ヒドロキシ−７−アザベンゾトリアゾール（１−ｈｙｄｒｏｘｙ−７−ａｚａｂｅｎｚｏｔｒｉａｚｏｌ、ＨＯＡｔ）、またはＮ−ヒドロキシスルホスクシンイミド（Ｎ−ｈｙｄｒｏｘｙｓｕｌｆｏｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｅ、Ｓｕｌｆｏ−ＮＨＳ）から選択された何れか一つの架橋活性補助剤を含むコーティング溶液を酸化処理されていない金属材質のステント表面に噴射したり、または前記溶液にステントを浸漬させることにより、ヘパリンをステント表面にコーティングすることを特徴とする単層ヘパリンコーティングステントの製造方法。
【請求項２】
前記金属材質のステントは、ステンレス鋼、コバルト−クロム合金、タンタル、ニチノール及び金からなる群から選択される生体適合性金属であることを特徴とする請求項１に記載の単層ヘパリンコーティングステントの製造方法。
【請求項３】
前記ステントは、チューブ構造、螺旋構造または網状構造を有することを特徴とする請求項２に記載の単層ヘパリンコーティングステントの製造方法。
【請求項４】
請求項１から３の何れか一項に記載の製造方法により製造された、単層ヘパリンコーティングステント。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ステント表面のヘパリンコーティング方法に関し、より詳細には、血液凝固の防止効果を持続させることができるステント表面のヘパリンコーティング方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
アテローム性動脈狭窄症（Ａｔｈｅｒｏｇｅｎｉｃ  ａｒｔｅｒｉａｌ  ｎａｒｒｏｗｉｎｇ）と血栓症は、互いに関連された疾患であり、毎年多くの人命を奪っている最も危険な疾患の一つとして、米国を含む世界中の様々な保健機関によって特定されている。再狭窄（ｓｔｅｎｏｓｉｓ）とは、人体の血管に脂肪、コレステロールまたは他の物質が沈積することによる血管の狭小化または収縮を言う。重度の場合、再狭窄により血管が完全に詰まった状態（ｃｌｏｇｇｅｄ）になることもある。血栓症は、血管内または心臓の腔（ｃａｖｉｔｙ）内に血栓が発生または存在する場合である。血栓は、細胞成分が吸着される際に血小板やフィブリン（ｆｉｂｒｉｎ）が主である血液要素が凝固されて生じるものであり、血栓症も再狭窄と同様に、発生する部位に血管狭窄を誘発させる。
【０００３】
再狭窄によって狭窄されたり詰まった血管を治療するための一つの方法として、バルーン冠動脈形成術（ｃｏｒｏｎａｒｙ  ａｎｇｉｏｐｌａｓｔｙ）とも言う経皮的冠動脈形成術（ｐｅｒｃｕｔａｎｅｏｕｓ  ｔｒａｎｓｌｕｍｉｎａｌ  ｃｏｒｏｎａｒｙ  ａｎｇｉｏｐｌａｓｔｙ、ＰＴＣＡ）が挙げられる。これは、バルーンカテーテルを血管の狭窄された部分に挿入した後、血管の大きさだけ膨脹させて、詰まった血流の流れを円滑にさせる方法である。しかし、ＰＴＣＡ施術を受けた患者の約１／３は、施術後６ヶ月以内に、拡張された血管が再び狭くなる再狭窄現象が発生して、血管形成術を再び受けなければならない。
【０００４】
このような血管の再狭窄を防止するために、再狭窄された部分に血管形成術を行うことに代えて、通常の方法として、図１に図示されたようなステント（ｓｔｅｎｔ）を挿入したり、または施術する際にステントをともに挿入する方法を行うことができる。ステントとは、金属またはプラスチック材質のチューブであり、網からなるものと管からなるものがある。現在用いられているステントの殆どは、金属で製造されたものであり、自動的に膨脹されたりバルーンによって膨脹される。ステントの挿入可否は、血管の大きさや再狭窄の位置などの再狭窄の特徴によって決まる。ステントの役割は、最近施術した血管形成術によって広げられた血管を補強したり、血管形成術を行わなかった場合には、血管がもとの状態に戻ること（ｅｌａｓｔｉｃ  ｒｅｃｏｉｌ）を防止することができる。ステントは、通常、カテーテルを用いて移植する。この方法は、まず、ステントを小さくなるように折りたたみ、バルーンカテーテル上に装着する。次に、カテーテルが患者の血管を通じて病変部位または最近確張した部位に到達されるようにした後、ステントを拡張させてその部位に固定させる。
【０００５】
このような方法により、ステントは血管に永久に存在するようになり、血管を開くことによって血流を円滑にし、心血管障害によって発生する疾患の症状（主に胸痛）を除去することができる。
【０００６】
通常、動脈遮断などの人体内の通路の遮断は、動脈切開術と特定の遮断物質を溶解させる薬物を用いて治療してきたが、近年、バルーンカテーテル（ｂａｌｌｏｎ  ｃａｔｈｅｔｅｒ）を用いて冠状動脈の血管狭窄を除去する施術が普遍化されている。
【０００７】
しかし、上記のように網状のステンレス鋼やチタン素材からなるステントで施術して血管内の遮断物を圧搾する場合、血管内の血液がステント表面に凝固されるため、血管が再狭窄される場合が多いという問題点が発生した。
【０００８】
従って、最近は、抗凝固能を有していると知られているヘパリンをステント表面にコーティングして用いる方法が公知されている。ヘパリンをステント表面にコーティングする従来の方法として、特許文献１には、表面変調工程を経たステント表面を、ジアミノシクロヘキサン（ｄｉａｍｉｎｏｃｙｃｌｏｈｅｘａｎｅ；ＤＡＣＨ）プラズマにアミン（ａｍｉｎｅ）群を有するようにした後、２５〜５０℃のヘパリン溶液に５〜８０分間浸漬した後、弱く結合されたヘパリンを除去するために、脱イオン水（ｄｅｉｏｎｉｚｅｄ  ｗａｔｅｒ）で洗浄することによりステント表面にヘパリンをコーティングする方法（以下、「ＤＡＣＨ方法」という）が開示されている。
【０００９】
しかし、上記のＤＡＣＨ方法によりヘパリンが付着されたステントの場合、血液の凝固を防止し、施術後の再狭窄率を著しく低めることはできるが、ヘパリンとステント表面との結合が弱いため、ヘパリンが溶出されやすく、時間が経過するにつれてその活性が次第に減少するという短所を有する。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１０】
【特許文献１】韓国特許出願公開第２０００−００５９６８０号明細書
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
本発明は上記のような問題点に鑑みてなされたものであり、本発明者らは、ドパミンを用いて金属材質のステント表面にヘパリンをコーティングすることにより、ドパミンとヘパリンとの化学的結合によってヘパリンの付着安定性が向上され、血液凝固の防止効果を持続させることができるということを確認し、本発明を成すに至った。
【００１２】
本発明の目的は、血液凝固の防止効果を持続させることができるヘパリンとドパミンを含むコーティング溶液を提供することにある。
【００１３】
本発明の他の目的は、前記コーティング溶液を金属材質のステント表面に噴射したり、または前記コーティング溶液にステントを浸漬させる、ヘパリンコーティングステントの製造方法及び前記製造方法により製造されたヘパリンコーティングステントを提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
上記のような目的を果たすための本発明によると、血液凝固の防止効果を持続させることができるヘパリンとドパミンを含むコーティング溶液が提供される。
【００１５】
本発明によると、前記ヘパリンとドパミンを含むコーティング溶液を金属材質のステント表面に噴射したり、または前記溶液にステントを浸漬させてヘパリンをステント表面にコーティングすることにより製造されるヘパリンコーティングステント及びその製造方法が提供される。
【００１６】
以下、本発明について詳細に説明する。
【００１７】
本発明における「ステント」とは、血管や導管に挿入され、管腔を開いた状態を維持しながら、流体の流れを円滑にするために用いられる金属またはプラスチック材質のチューブであり、その管が外部から加えられる圧力や狭窄によって閉鎖されることを防止するための医療用具である。
【００１８】
本発明によると、ヘパリンとドパミンのコーティング溶液を金属材質のステント表面に噴射したり、または前記溶液にステントを浸漬させることにより、ヘパリンをステント表面にコーティングすることを特徴とするヘパリンコーティングステントの製造方法が提供される。
【００１９】
本発明における前記コーティング溶液は、血液凝固の防止効果を持続させることができるヘパリンとドパミンを含んで製造することができ、架橋活性化剤、架橋活性補助剤、またはこれらの混合物をさらに含むことができる。
【００２０】
本発明における前記架橋活性化剤は、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミドヒドロクロリド（１−ｅｔｈｙｌ−３−（３−ｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏｐｒｏｐｙｌ）ｃａｒｂｏｄｉｉｍｉｄｅ  ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ、ＥＤＣ）、１−エチル−３−（３−（トリメチルアンモニオ）プロピル）カルボジイミド（１−ｅｔｈｙｌ−３−（３−ｔｒｉｍｅｔｈｙｌａｍｍｏｎｉｏ）ｐｒｏｐｙｌ）ｃａｒｂｏｄｉｉｍｉｄｅ、ＥＴＣ）、または１−シクロヘキシル−３−（２−モルホリノエチル）カルボジイミド（１−ｃｙｃｌｏｈｅｘｙｌ−３−（２−ｍｏｒｐｈｏｌｉｎｏｅｔｈｙｌ）ｃａｒｂｏｄｉｉｍｉｄｅ、ＣＭＣ）から選択された何れか一つを含むことができ、好ましくは、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミドヒドロクロリド（１−ｅｔｈｙｌ−３−（３−ｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏｐｒｏｐｙｌ）ｃａｒｂｏｄｉｉｍｉｄｅ  ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ、ＥＤＣ）を用いることができるが、これに限定されるものではない。
【００２１】
前記架橋活性補助剤は、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（Ｎ−ｈｙｄｒｏｘｙｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｅ、ＮＨＳ）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（１−ｈｙｄｒｏｘｙｂｅｎｚｏｔｒｉａｚｏｌｅ、ＨＯＢｔ）、３，４−ジヒドロ−３−ヒドロキシ−４−オキソ−１，２，３−ベンゾトリアジン（３，４−ｄｉｈｙｄｒｏ−３−ｈｙｄｒｏｘｙ−４−ｏｘｏ−１，２，３−ｂｅｎｚｏｔｒｉａｚｉｎｅ、ＨＯＯＢｔ）、１−ヒドロキシ−７−アザベンゾトリアゾール（１−ｈｙｄｒｏｘｙ−７−ａｚａｂｅｎｚｏｔｒｉａｚｏｌ、ＨＯＡｔ）、またはＮ−ヒドロキシスルホスクシンイミド（Ｎ−ｈｙｄｒｏｘｙｓｕｌｆｏｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｅ、Ｓｕｌｆｏ−ＮＨＳ）から選択された何れか一つを含むことができ、好ましくは、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（Ｎ−ｈｙｄｒｏｘｙｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｅ、ＮＨＳ）を用いることができるが、これに限定されるものではない。
【００２２】
本発明によるコーティング溶液は、ヘパリンとドパミンの混合溶液にＥＤＣ（１−Ｅｔｈｙｌ−３−［３−ｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏｐｒｏｐｙｌ］ｃａｒｂｏｄｉｉｍｉｄｅ  ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）及びＮＨＳ（Ｎ−ｈｙｄｒｏｘｙｓｕｌｆｏｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｅ）を追加して反応させたコーティング溶液であることを特徴とする。
【００２３】
本発明において、前記ドパミン、ＥＤＣ（１−Ｅｔｈｙｌ−３−［３−ｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏｐｒｏｐｙｌ］ｃａｒｂｏｄｉｉｍｉｄｅ  ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）、ＮＨＳ（Ｎ−ｈｙｄｒｏｘｙｓｕｌｆｏｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｅ）、ヘパリンを反応させて製造するコーティング溶液は、ドパミンの−ＮＨ基とヘパリンの−ＣＯＯＨ基の化学的結合によってヘパリンのステント付着安定性を向上させ、その結果、ヘパリンの溶出速度を制御することにより、血液凝固の防止効果を持続させることができるという長所がある。
【００２４】
本発明によると、ヘパリンとドパミンの混合溶液にＥＤＣ（１−Ｅｔｈｙｌ−３−［３−ｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏｐｒｏｐｙｌ］ｃａｒｂｏｄｉｉｍｉｄｅ  ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）及びＮＨＳ（Ｎ−ｈｙｄｒｏｘｙｓｕｌｆｏｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｅ）を追加して反応させたコーティング溶液を製造した後、前記コーティング溶液を金属材質のステント表面に噴射したり、または前記溶液にステントを浸漬させることによりヘパリンをステント表面にコーティングすることを特徴とする、ヘパリンコーティングステントの製造方法が提供される。
【００２５】
本発明によると、ヘパリンとドパミンを１：１〜３のモル数比で混合した溶液にＥＤＣ（１−Ｅｔｈｙｌ−３−［３−ｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏｐｒｏｐｙｌ］ｃａｒｂｏｄｉｉｍｉｄｅ  ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）及びＮＨＳ（Ｎ−ｈｙｄｒｏｘｙｓｕｌｆｏｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｅ）を追加して反応させたコーティング溶液を製造する段階と、前記コーティング溶液に金属材質のステントを浸漬させる段階と、を含む、ヘパリンコーティングステントの製造方法が提供される。
【００２６】
本発明によると、ヘパリンとドパミンを１：１．２〜１．５のモル数比で混合した溶液にＥＤＣ（１−Ｅｔｈｙｌ−３−［３−ｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏｐｒｏｐｙｌ］ｃａｒｂｏｄｉｉｍｉｄｅ  ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）及びＮＨＳ（Ｎ−ｈｙｄｒｏｘｙｓｕｌｆｏｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｅ）を追加して反応させたコーティング溶液を製造する段階と、前記コーティング溶液に金属材質のステントを浸漬させる段階と、を含む、ヘパリンコーティングステントの製造方法が提供される。
【００２７】
本発明によるコーティング溶液は、ヘパリンとドパミンを１：１〜３のモル数比で混合して製造されるものであり、より好ましくは、ヘパリンとドパミンを１：１．２〜１．５のモル数比で混合して製造されることを特徴とする。
【００２８】
前記ヘパリンとドパミンの混合比は、溶血現象及び血栓形成の抑制効果において重要な意味を有する。ヘパリン１モル（ｍｏｌ）に対して、１モル未満または３モルを超過するドパミンを混合した場合の溶血現象を調査した結果、時間が経過するにつれて溶血量を制御することができなくなり、その結果、安全なステント施術ができなくなるという問題があった。
【００２９】
また、血栓形成の抑制効果を調査した結果、時間が経過するにつれて安定した抗凝固剤の活性が維持できなくなり、その結果、施術されたステントの再狭窄率を増加させて、血管が再狭窄されるという問題があった。
【００３０】
本発明において、前記金属材質のステントは、ステンレス鋼、コバルト−クロム合金、タンタル、ニチノール及び金からなる群から選択される生体適合性金属であり、ステントの構造は、チューブ構造、螺旋構造または網状構造を有するものを用いることができる。
【００３１】
本発明において、前記ヘパリンのコーティング過程は、金属材質のステント表面に前記コーティング溶液を加えてヘパリンをステント表面にコーティングする過程であり、合成物溶液にステントを浸漬する方法（ｄｉｐｐｉｎｇ  ｃｏａｔｉｎｇ  ｍｅｔｈｏｄ）、またはステント表面に合成物溶液を噴霧する方法（空気噴射コーティング法、ｓｐｒａｙ−ｃｏａｔｉｎｇ  ｍｅｔｈｏｄ）などによりコーティングすることができる。
【００３２】
前記コーティング溶液がステントにコーティングされた後、ステントを乾燥する過程がさらに含まれることができる。ステントを乾燥する過程で溶媒は蒸発されて除去され、ヘパリン高分子が表面に残って薄い膜（ｆｉｌｍ）が形成される。
【００３３】
本発明によると、前記製造方法により製造されたヘパリンコーティングステントが提供される。
【００３４】
本発明によるヘパリンコーティングステントは、ステントの種類に応じて適した施術方法を用いて、冠状動脈に係る心血管疾患のある血管内に、経皮的バルーン血管形成術により挿入されて固定される。血管内に固定されたステントは、血管内の再狭窄を防止して、血管が拡張された状態を長期間維持することができる。
【００３５】
本発明によるヘパリンコーティングステントは、ドパミンとＥＤＣ（１−Ｅｔｈｙｌ−３−［３−ｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏｐｒｏｐｙｌ］ｃａｒｂｏｄｉｉｍｉｄｅ  ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）及びＮＨＳ（Ｎ−ｈｙｄｒｏｘｙｓｕｌｆｏｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｅ）を追加して反応させたコーティング溶液を用いて金属材質のステント表面にヘパリンをコーティングすることにより、金属ステントのヘパリン付着安定性を向上させ、これにより、ヘパリンの溶出速度を制御することができるため、血液凝固の防止効果を持続させることができるという長所がある。
【発明の効果】
【００３６】
本発明によるヘパリンコーティングステントは、ドパミンを用いて金属材質のステント表面にヘパリンをコーティングすることにより、ドパミンとヘパリンの化学的結合によってヘパリン付着安定性が向上されて、既存のヘパリンコーティングステントに比べ血液凝固の防止効果を持続させることができるという長所を有する。
【図面の簡単な説明】
【００３７】
【図１】通常のステントを図示した図面である。
【図２】本発明によるヘパリンコーティングステントの時間経過によるステント表面上のヘパリン残存量を図示したグラフである。
【図３】本発明によるヘパリンコーティングステントの時間経過による溶血率を図示したグラフである。
【図４】本発明によるヘパリンコーティングステントの時間経過による抗凝固剤（Ａｎｔｉｃｏａｇｕｌａｎｔ）の活性化程度を図示したグラフである。
【図５】本発明によるヘパリンコーティングステントの時間経過による血小板の付着状態を図示した写真である。
【発明を実施するための形態】
【００３８】
以下、具体的な実施例を用いて本発明をより詳細に説明する。しかし、本発明は下記実施例によって限定されるものではなく、本発明の思想と範囲内で様々な変形または修正がありえることは、この分野に属する者において明らかである。
【００３９】
この際、用いられる技術用語及び科学用語は、他に定義されない限り、この発明が属する技術分野で通常の知識を有する者が一般的に理解する意味を有する。
【００４０】
また、従来と同一の技術的構成及び作用についての重複説明は省略する。
【００４１】
［実施例］ヘパリンコーティング
本発明に従って、ドパミンを用いてヘパリンを次のような過程によりステント表面にコーティングした。
【００４２】
ヘパリン２００ｍｇとドパミン３６ｍｇを緩衝溶液（ＭＥＳ、ｐＨ５．５）に混合して、３７℃の温度で１１時間反応させた。反応過程は、ヘパリンの−ＣＯＯＨ基の活性化のために、ＥＤＣ（１−Ｅｔｈｙ１−３−（３−ｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏｐｒｏｐｙ１）ｃａｒｂｏｄｉｉｍｉｄｅ  ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）４０５ｍｇとＮＨＳ（Ｎ−ｈｙｄｒｏｘｙｓｕｌｆｏｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｅ）１２１ｍｇを添加してなされた。不純物（ＥＤＣ、ＮＨＳ）を除去するために透析（３日）と凍結乾燥（３日）過程を経た後、これをｐＨ８．５、５０ｍＭのＴＢＳ（Ｔｒｉｓ  Ｂｕｆｆｅｒｅｄ  Ｓａｌｉｎｅ）に溶かしてコーティング溶液を製造した後、その溶液にコバルト−クロム合金のステントを１２時間浸漬させることにより、ステント表面にヘパリンをコーティングした。
【００４３】
一方、比較のための比較例として、韓国特許出願公開第２０００−００５９６８０号明細書に開示されたＤＡＣＨ方法を用いて、ヘパリンをコバルト−クロム合金のステント表面にコーティングした。
【００４４】
［試験例１］ヘパリンコーティングステントのヘパリンコーティング安定性の試験
前記実施例の製造方法により製造されたヘパリンコーティングステントにおいて、ステント表面にヘパリンが付着された時のヘパリンコーティング安定性を確認するために、時間経過によるステント表面上のヘパリン残存量をトルイジンブルー（ｔｏｌｕｉｄｉｎｅ  ｂｌｕｅ）法を用いて確認した。
【００４５】
ＰＢＳ（ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  Ｂｕｆｆｅｒｄ  Ｓａｌｉｎｅ）緩衝液に溶けている０．００５％のトルイジンブルー（ｔｏｌｕｉｄｉｎｅ  ｂｌｕｅ）をヘパリンコーティングステントの表面に処理した。常温で緩やかに振りながら反応させた後、時間帯毎に２００μｌの反応液を採取し、分光計を用いて吸光度５４０ｎｍでその数値を確認した。
【００４６】
図２はヘパリンコーティングステントの時間経過によるステント表面上のヘパリン残存量を図示したグラフである。図２からも確認できるように、ステント表面でのヘパリンコーティング安定性は、本発明による実施例のドパミンを用いてヘパリンをコーティングしたステントの場合、時間が経過するにつれて少し減少したが、その量は微小であった。その反面、既存のＤＡＣＨ方法を用いてヘパリンをコーティングした比較例のステントの場合、時間が経過するにつれてヘパリンが減少し、２８日目には残存量が初期付着量の５０％程度であって、多くの量が減少したことを確認することができた。
【００４７】
上記の結果から、本発明によるドパミンを用いてヘパリンをコーティングしたステントは、ドパミンとヘパリンの化学的結合によってヘパリンの付着安定性が向上されることを確認することができた。
【００４８】
［試験例２］ヘパリンコーティングステントの溶血実験
ヘパリンがコーティングされたステントと体内の血液との相互作用を確認するために、溶血実験を行った。ステントのような金属移植体が体内に植立されると、溶血作用は増加するようになる。従って、前記実施例のドパミンを用いてヘパリンが付着されたステント（Ｈｅｐａｎｉｍｅ）と既存のＤＡＣＨ方法によってヘパリンが付着された比較例のステント、及び対照群としてヘパリンがコーティングされていないステント（Ｂａｒｅ  Ｍｅｔａｌ  Ｓｔｎｅｔ；ＢＭＳ）を用いて、それぞれに対して溶血程度を比較した。
【００４９】
健康なブタから新鮮な血液を採取した後、凝固を防止するために血液量の１０％のＮａ−ｃｉｔｒａｔｅ（３．２％）を添加した。実験のために、次の３群に分けて実験を行った。
【００５０】
実験群：１０ｍｌのＮａＣｌ
（−）対照群：２０ｍｌのＮａＣｌ
（＋）対照群：１０ｍｌのＮａＣｌ＋１０ｍｌの蒸溜水
【００５１】
ＮａＣｌは、浸透圧による赤血球の溶血のために用いた。常温で３０分間反応させた後、予め準備しておいた０．２ｍｌの血液を各群に処理し、６０分間さらに反応させた。その後、７５０ｒｐｍで５分間遠心分離した後、０．２ｍｌの上澄液を取って、分光計を用いて吸光度５４０ｎｍでその数値を確認した。
【００５２】
溶血率は、下記式１のように定義した。
【００５３】
［式１］
Ｒ＝（Ａ−Ｃ１）／（Ｃ２−Ｃ１）×１００
（Ｒ：溶血率、Ａ：実験群の吸光度、Ｃ１：（−）対照群の吸光度、Ｃ２：（＋）対照群の吸光度）
【００５４】
図３は本発明によるヘパリンコーティングステントの時間経過による溶血率を図示したグラフである。図３からも確認できるように、ヘパリンがコーティングされていない無処理ステント（対照群）に比べ、ヘパリンがコーティングされたステント（実施例及び比較例）で溶血作用が著しく少なく発生することが確認された。特に、前記実施例のドパミンを用いてヘパリンがコーティングされたステントの場合、溶血率の変化が殆どなかったが、既存のＤＡＣＨ方法でヘパリンをコーティングした比較例のステントの場合、時間が経過するにつれて溶血量が徐々に増加し、２８日目にはドパミンを用いてヘパリンがコーティングされたステントと有意な差を示すことを確認することができた。
【００５５】
従って、上記の結果から、本発明によるドパミンを用いてヘパリンがコーティングされたステントの場合、既存のＤＡＣＨ方法によってヘパリンがコーティングされたステントに比べ、ドパミンとヘパリンの化学的結合によってヘパリン安定性に優れると思われる。
【００５６】
［試験例３］ヘパリンコーティングステントのトロンビンの不活性化実験
血液の凝固過程は、プロトロンビンがトロンビンに転換されながら開始される。アンチトロンビン３（Ａｎｔｉｔｈｒｏｍｂｉｎ  ＩＩＩ）という物質がこの過程を抑制する。また、ヘパリンがアンチトロンビン３の活性を増加させると知られている。従って、ヘパリンがコーティングされたステントが、血液の凝固過程でトロンビンをどれくらい不活性化させるかを確認した。本実験は、トロンビンに特化された基質を用いて行った。
【００５７】
０．２ｍｇ／ｍｌのトロンビン基質であるＳ−２２３８と７０ｍＵ／ｍｌのアンチトロンビン３をＴｒｉｓ−緩衝液［５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ（ｐＨ８．４）、１ｇ／１  ＰＥＯ６０００、１ｇ／１  ＢＳＡ、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ］に混合した後、ヘパリンがコーティングされたステントに処理した。その後、１５０μｌのトロンビン（１．２Ｕ／ｍｌ）を添加した。常温で１０分間反応させて、５０μｌのアセト酸（４０％）を添加して反応を停止させた。２００μｌの反応液を採取し、分光計を用いて吸光度４０５ｎｍでその数値を確認した。
【００５８】
図４は本発明によるヘパリンコーティングステントの時間経過による抗凝固剤（Ａｎｔｉｃｏａｇｕｌａｎｔ）の活性化程度を図示したグラフである。図４からも確認できるように、前記実施例のドパミンを用いてヘパリンがコーティングされたステントの場合、時間経過に関らず、抗凝固剤の安定した活性を示すが、既存のＤＡＣＨ方法でヘパリンがコーティングされた比較例のステントの場合、その活性が次第に減少することを確認することができた。
【００５９】
［試験例４］ヘパリンコーティングステントの血小板付着実験
血栓が生じる初期現象は、血小板が集まることである。血小板がステント表面に付着することが抑制されれば、血栓の予防に大きく資することができるであろう。従って、ヘパリンがコーティングされていない無処理ステント（対照群）に比べ、ヘパリンがコーティングされたステント（実施例及び比較例）の表面に血小板に富む血漿を処理した際に、ヘパリンによる血小板付着の様相を観察した。
【００６０】
実験は下記の方法により行われた。健康なブタから新鮮な血液を採取した後、凝固を防止するために血液量の１０％のＮａ−ｃｉｔｒａｔｅ（３．２％）を添加した。血小板に富む血漿（ｐｌａｔｅｌｅｔ  ｒｉｃｈ  ｐｌａｓｍａ、ＰＲＰ）を準備するために、採取した血液を１５０ｒｐｍで１５分間遠心分離した。上澄液のみを集めて５００ｒｐｍで２０分間さらに遠心分離し、沈殿物を得た。３×１０７個の血小板をヘパリンが付着された各血小板に処理した後、常温で３時間反応させた。走査型電子顕微鏡を用いて付着様相を確認するために、試験片を２．５％グルタールアルデヒドに２時間固定させた後、４０、６０、８０、９０％のエタノールで順に脱水した。
【００６１】
図５は本発明によるヘパリンコーティングステントの時間経過による血小板の付着状態を図示した写真である。図５からも確認できるように、ヘパリンが付着されていない無処理の対照群のステントでは、多数の血小板が観察される。その反面、前記実施例のドパミンを用いてヘパリンをコーティングしたステントと既存のＤＡＣＨ方法によってヘパリンをコーティングしたステントでは、無処理ステントに比べ著しく少ない数の血小板が観察された。
【００６２】
上記の結果から、本発明によるドパミンを用いたヘパリンコーティングステントで、ヘパリン安定性が無処理のステント及び既存のＤＡＣＨ方法によってヘパリンをコーティングしたステントに比べ、著しく少ない数の血小板付着程度を観察することができた。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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