(57)【要約】  ローヤルゼリーの有用な生理活性が保持されており、且つ、アレルギー症状を引き起こす懸念の少ないローヤルゼリー分画物を提供することを第一の課題とし、その製造方法の確立を第二の課題とし、当該分画物を配合してなる飲食物、飼料、餌料、ペットフード又は化粧品をはじめとする皮膚外用剤などの各種組成物への用途を提供することを第三の課題とする。１０−ヒドロキシ−２−デセン酸１質量部に対して、ローヤルゼリー由来の蛋白質を０．０５質量部未満の比率で含有し、ローヤルゼリーの有用な生理活性を有し、且つ、１０−ヒドロキシ−２−デセン酸を４５μｇ含有する量のローヤルゼリー分画物で免疫したマウス血清を、ラットを使用した受身皮膚アナフィラキシーにより判定したとき当該ローヤルゼリー分画物に対するアレルゲン性が検出されないローヤルゼリー分画物とその製造方法並びに用途により解決する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ローヤルゼリー分画物であって、１０−ヒドロキシ−２−デセン酸１質量部に対して、ローヤルゼリー由来の蛋白質を０．０５質量部未満の比率で含有し、ローヤルゼリーの持つ有用な生理活性を有し、且つ、１０−ヒドロキシ−２−デセン酸を４５μｇ含有する量の当該ローヤルゼリー分画物で免疫したマウスの血清を、ラットを使用した受身皮膚アナフィラキシーにより判定したとき当該ローヤルゼリー分画物に対するアレルゲン性が検出されないローヤルゼリー分画物。
【請求項２】
ローヤルゼリーの持つ生理活性がコラーゲン産生増強作用、ＩＬ−４産生抑制活性及び／又は、精巣機能活性化作用である請求項１記載のローヤルゼリー分画物。
【請求項３】
１０−ヒドロキシ−２−デセン酸を、固形物換算で５ｍｇ／ｇ以上含有する請求項１又は２記載のローヤルゼリー分画物。
【請求項４】
１０−ヒドロキシ−２−デセン酸１質量部に対して窒素量が０．３質量部以下の比率である請求項１乃至３のいずれかに記載のローヤルゼリー分画物。
【請求項５】
１０−ヒドロキシ−２−デセン酸を３０μｇ含有する量のローヤルゼリー分画物をＳＤＳ−ＰＡＧＥに供したとき、クマーシーブリリアントブルー染色による肉眼観察で蛋白質バンドが検出されない請求項１乃至４のいずれかに記載のローヤルゼリー分画物。
【請求項６】
ローヤルゼリー分画物を、それに含まれる１０−ヒドロキシ−２−デセン酸が０．０５ｍｇ／ｍＬ以上となるように脱イオン水に溶解又は脱イオン水で希釈したときのｐＨが５．０以上である請求項１乃至５のいずれかに記載のローヤルゼリー分画物。
【請求項７】
生ローヤルゼリーを水で希釈した後、生ローヤルゼリー由来の分子量１０，０００ダルトン以上の高分子画分を低減せしめ、これを濃縮することを特徴とする、請求項１乃至６のいずれかに記載のローヤルゼリー分画物の製造方法。
【請求項８】
生ローヤルゼリー由来の分子量１０，０００ダルトン以上の高分子画分を低減せしめる前に、生ローヤルゼリーを水で希釈した溶液のｐＨを、５．０以上に調整する請求項７記載のローヤルゼリー分画物の製造方法。
【請求項９】
請求項７又は８の方法により製造されたローヤルゼリー分画物に糖質を添加して乾燥し、粉末化するローヤルゼリー分画物粉末の製造方法。
【請求項１０】
請求項１乃至６のいずれかに記載のローヤルゼリー分画物、或いは、請求項７乃至９のいずれかに記載の製造方法で得られたローヤルゼリー分画物を含んでなる組成物。
【請求項１１】
組成物が、飲食物、飼料、餌料、ペットフード、化粧品、医薬品、医薬部外品又は雑貨組成物のいずれかである請求項１０記載の組成物。
【請求項１２】
アレルゲン性が低減されていることを標榜してなる請求項１乃至６のいずれかに記載のローヤルゼリー分画物、或いは、請求項１０又は１１記載の組成物。
【請求項１３】
組成物が固状である請求項１０乃至１２のいずれかに記載の組成物。
【請求項１４】
ローヤルゼリー分画物とともに非還元性の糖質を含む請求項１３記載の組成物。
【請求項１５】
請求項１乃至６のいずれかに記載のローヤルゼリー分画物の美白剤としての使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ローヤルゼリーの持つ生理活性、例えば、コラーゲン産生増強作用、ＩＬ−４産生抑制作用や精巣機能活性化作用などのローヤルゼリーの有用な生理活性を有し、且つ、生ローヤルゼリー中のアレルゲン性を低減させた新規ローヤルゼリー分画物とその製造方法並びに用途、詳細には、１０−ヒドロキシ−２−デセン酸（以下、本明細書では、単に「ヒドロキシデセン酸」と略記する場合がある。）１質量部に対して、ローヤルゼリー由来の蛋白質を０．０５質量部未満の比率で含有するローヤルゼリー分画物であり、ローヤルゼリーの持つコラーゲン産生増強作用、ＩＬ−４産生抑制作用、精巣機能活性化作用などの有用な生理活性を有し、且つ、ヒドロキシデセン酸を４５μｇ含有する量の当該ローヤルゼリー分画物で免疫したマウス血清を、ラットを使用した受身皮膚アナフィラキシー（ｐａｓｓｉｖｅ  ｃｕｔａｎｅｏｕｓ  ａｎａｐｈｙｌａｘｉｓ：以下、「ＰＣＡ」という。）により判定したとき、当該ローヤルゼリー分画物に対するアレルゲン性が検出されないローヤルゼリー分画物とその製造方法並びに用途に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
ローヤルゼリーは、ミツバチの巣における王台（女王バチの房）に蓄積された、働きバチの外分泌腺からの乳白色の分泌物であり、女王バチとなるべき幼虫に餌として与えられるゼリー状物質である。その化学的組成は産地や季節などにより、多少の差違はあるものの、水分６５乃至７５質量％、蛋白質１５乃至２０質量％、炭水化物１０乃至１５質量％、脂質１．７乃至６質量％、灰分０．７乃至２質量％（以下、本明細書では、特にことわらない限り、質量％を単に「％」と略記する。）とされており、ヒドロキシデセン酸をはじめとする有機酸類、各種ビタミン類、各種ミネラル類も含んでいる。【０００３】
ローヤルゼリーは古くからヒトの健康食品として広く利用されており、最近では、人体に対して有用な生理活性、例えば抗菌作用、免疫増強作用、抗腫瘍作用、抗炎症作用、寿命延長作用などを有するという報告が数多くなされている。しかしながら、ローヤルゼリーにはアレルゲン性を示す物質が含まれているため、摂取することにより、個人差はあるもののアレルギー症状が引き起こされる場合があり、場合によっては重篤なアナフィラキシーショックを引き起こすこともある。このようなローヤルゼリーの問題点を解消する目的で、特開２００２−１１２７１５号公報にはローヤルゼリーに糖分解酵素処理及び蛋白質分解酵素処理を施して低アレルゲン化する方法が開示されている。また、国際公開ＷＯ２００４／２１８０３号明細書には、水溶性蛋白質量が、総蛋白質量に対して５０％未満に低減しているローヤルゼリーが開示されている。しかしながら、これらのローヤルゼリーは、アレルゲン性を示す水溶性蛋白質が残存したり、糖分解酵素処理及び蛋白質分解酵素処理をしたこのローヤルゼリーは、アレルゲン性物質の分解が不十分であったり、添加した酵素自体が新たなアレルゲン性を示す物質となる可能性もあり、健康維持を目的に摂取するローヤルゼリーとして好ましくないという問題点が依然としてあった。また、特開平４−３１１３５７号公報などに記載のとおり、ローヤルゼリー抽出物中のヒドロキシデセン酸量を増やすためにエタノールなどの疎水性溶媒を含む溶媒で抽出した場合には、蛋白質を除去した場合でも、組成物によってはその配合量が制限されるなどの問題がある。
【発明の開示】
【０００４】
本発明は、斯かる状況に鑑みなされたものであり、ローヤルゼリーの有用な生理活性が保持されており、且つ、アレルゲン性が低減された、アレルギー症状を引き起こす懸念の少ないローヤルゼリー分画物を提供することを第一の課題とし、その製造方法の確立を第二の課題とし、当該分画物を配合してなる飲食物、飼料、餌料、ペットフード又は化粧品をはじめとする皮膚外用剤などの各種組成物への用途を提供することを第三の課題とする。
【０００５】
本発明者らは、上記の課題を解決するため、アレルゲン性が低減され、且つ、ローヤルゼリー本来の有用な生理活性が保持された、アレルギー症状を引き起こす懸念の少ない高品質のローヤルゼリー分画物とその製造方法について、鋭意研究を重ねてきた。その結果、ミツバチの王台に蓄積されたものを採取したローヤルゼリー（以下、本明細書では単に「生ローヤルゼリー」という場合がある。）を原料として、これのｐＨを調べたところ、通常、ｐＨ３．５乃至４．５の範囲にあることが判明した。一方、生ローヤルゼリーに含まれるヒドロキシデセン酸は、ｐＨを変化させることにより溶解度が変化し、ｐＨを高めることによって、溶解度が向上すること、併せて、高分子画分を低減するための精製工程でｐＨを高めて処理することによりヒドロキシデセン酸の収率を向上できることを見出した。具体的には、この生ローヤルゼリーに、水を加えて希釈し、望ましくは、さらにアルカリ剤を加えてｐＨを、５．０以上、望ましくは５．５以上、より望ましくは５．５乃至１２．０、さらに望ましくは、６．０乃至９．５、特に望ましくは６．０乃至８．５に調整した後、限外濾過膜による濾過やゲル濾過等の方法により、高分子画分を除去、望ましくは分子量３０，０００ダルトン以上の画分、さらに望ましくは、分子量が１０，０００ダルトン以上の画分、特に望ましくは分子量が６，０００ダルトン以上の画分を除去することにより得られる、ヒドロキシデセン酸１質量部に対して、ローヤルゼリー由来の蛋白質が０．０５質量部未満の比率で含有されたローヤルゼリー分画物（以下、単に「ローヤルゼリー分画物」という。）が、生ローヤルゼリー或いは国際公開ＷＯ２００４／２１８０３号明細書に開示された水溶性蛋白質が、総蛋白質量に対して５０％以下に低減された既存の精製ローヤルゼリー（以下、本明細書では単に「既存精製ローヤルゼリー」という場合がある。）などに比して、そのアレルゲン性が著しく低減することを見出した。また、上記ローヤルゼリー分画物には、生ローヤルゼリーが本来有する有用な生理活性を保持し、且つ、飲料などに配合しても濁りや沈殿の発生し難いという効果もあることを見出して、本発明を完成した。すなわち、本発明は、ローヤルゼリー分画物中のヒドロキシデセン酸１質量部に対して、ローヤルゼリー由来の蛋白質を０．０５質量部未満の比率で含有するローヤルゼリー分画物であり、ローヤルゼリーの本来有する有用な生理活性を有し、且つ、アレルゲン性が低減されたローヤルゼリー分画物、さらには、この分画物を配合してなる飲食物、飼料、餌料、ペットフード、化粧品、医薬品、医薬部外品、又雑貨組成物などへの用途を提供することにより上記の課題を解決するものである。
【０００６】
本発明のローヤルゼリー分画物は、ローヤルゼリー本来の有用な生理作用が保持されており、且つ、生ローヤルゼリーや既存の精製ローヤルゼリーに比してアレルゲン性が低減されているので、当該ローヤルゼリー分画物、及び、これを含有する飲食物、飼料、餌料、ペットフード、化粧品、医薬品、医薬部外品、又は雑貨等の組成物は、生ローヤルゼリーと同様の健康維持増進効果や美容効果を有し、且つ、生ローヤルゼリーや既存の精製ローヤルゼリーに較べてアレルギーを発症するリスクが低減されているので安心して使用することができる。また、当該ローヤルゼリー分画物は、飲料などの液状の組成物に配合しても、濁りや沈殿が生ローヤルゼリーに比して発生し難いという特長を有している。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００７】
本発明のローヤルゼリー分画物を調製するための原料として用いる生ローヤルゼリーは、分泌するハチの種類やその産地、及び供給形態（生または冷凍）に特に限定はない。分泌するハチの種としては、セイヨウミツバチ（Ａｐｉｓ  ｍｅｌｌｉｆｅｒａ）、トウヨウミツバチ（Ａｐｉｓ  ｃｅｒａｎａ）、オオミツバチ（Ａｐｉｓ  ｄｏｒｓａｔａ）、コミツバチ（Ａｐｉｓ  ｆｌｏｒｅａ）などが挙げられる。産地としては、日本、南米、北米、豪州、中国を初めとするアジア地域、欧州などが挙げられる。これらのローヤルゼリーは何れも本発明のローヤルゼリー分画物の原料として有利に用いることができ、できるだけ新鮮な、又は、低温保存された生ローヤルゼリーを用いるのがより望ましい。【０００８】
本発明のローヤルゼリー分画物の調製には、原料となる生ローヤルゼリーをそのまま使用してもよいが、限外膜濾過やゲル濾過を行う場合には、ヒドロキシデセン酸の溶解性や濾過効率などの点からは、予め希釈して使用することが望ましい。希釈倍率については、本発明の所期の効果が達成できる倍率であれば制限はなく、通常、等量以上、望ましくは２倍以上、特に望ましくは４倍量以上の水で希釈すればよい。希釈に使用する水としては特に限定されず、必要に応じて、例えば、超純水、イオン交換水、蒸留水、磁化水、クラスター水、ミネラルウォーター、水道水、海洋深層水の何れも有利に利用できる。これらの水に生ローヤルゼリーを懸濁、溶解した水溶液はそのまま、後述の高分子画分を低減するための膜濾過などの精製工程に供することができる。また、生ローヤルゼリーに、アルカリ剤などを加えて、ｐＨを、通常５．０以上、望ましくは５．５以上、より望ましくは５．５乃至１２．０、さらに望ましくは６．０乃至９．５、特に望ましくは６．０乃至８．５の範囲に調整することにより、ローヤルゼリー分画物中のヒドロキシデセン酸の溶解性を向上させて精製することも有利に実施できる。このｐＨは、後述の膜濾過工程後もほぼ同一のｐＨが維持されるので、ｐＨが５．０よりも低い場合には、例えば、膜濾過時のヒドロキシデセン酸の回収率が低下したり、冷水で希釈したりした際に濁りや沈殿が発生する場合がある。また、ｐＨ６．０以上の場合には、ヒドロキシデセン酸の回収率は安定化するものの、ｐＨの上昇に比例して、ローヤルゼリー分画物の着色度（褐色度）が上昇するため、着色を望まない白色系や無色系の組成物の製造に使用する場合或いは濾過膜の耐性等を勘案するとｐＨを１２．０以下に調整するのが望ましく、９．５以下に調整するのがより望ましく、８．５以下が特に望ましい。なお、本発明のローヤルゼリー分画物の調製の際の、水による希釈とアルカリ処理とは、どちらを先に行ってもよく、通常、操作性及びｐＨ保持性の点からは、希釈を先に行う方が望ましい。必要に応じてアルカリ水で希釈することも随意である。また、これとは別に、必要に応じて、精製工程中で、或いは、精製後にｐＨを調整してもよい。【０００９】
生ローヤルゼリーのｐＨの調整に使用するアルカリ剤（ｐＨ調整剤）は、飲食品や化粧品など、当該分画物の用途分野で使用されている、組成物の製造に使用可能な成分であれば、特に制限はない。また、溶液のｐＨを安定に保持する目的で、当該組成物が使用される分野で使用可能な緩衝剤を使用することも随意である。具体的には、例えば、アルカリ剤としては、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化カルシウムなどを挙げることができ、化粧品の場合には、前記に加えて、エタノールアミン類などを使用することもできる。また、緩衝剤として、例えば、リン酸緩衝液、酢酸緩衝液などを使用することも随意である。また、これらのアルカリ剤や緩衝剤の添加は、一度に行ってもよく、数回に分けて行ってもよいし、希釈と交互に行ってもよい。【００１０】
これらのｐＨ調整に使用するアルカリ剤や緩衝剤の添加量については、本発明のローヤルゼリー分画物において、所期のｐＨが維持できる量であれば特に制限はないが、飲食品として利用する際の味質の低下や、組成物に配合した際にその物性に影響をきたさない範囲で使用するのが望ましい。具体的には、本発明のローヤルゼリー分画物に含まれるヒドロキシデセン酸が０．０５ｍｇ／ｍＬとなるように、脱イオン水で希釈又はイオン水に溶解してｐＨを測定したとき、そのｐＨが５．０以上、望ましくは５．５以上、より望ましくは５．５乃至１２．０、さらに望ましくは６．０乃至９．５、特に望ましくは６．０乃至８．５に調整できる添加量が望ましい。このような条件でｐＨを調整した生ローヤルゼリーから調製されるローヤルゼリー分画物は、アレルゲン性が低減すると同時に、ｐＨを調整しない場合に比して、ローヤルゼリーの有用な生理活性に関与する成分とされているヒドロキシデセン酸の水に対する溶解度が向上するので、当該分画物を２５℃の脱イオン水に、ヒドロキシデセン酸濃度が５ｍｇ／ｍＬとなるように溶解して４℃に冷却しても、生ローヤルゼリーや精製ローヤルゼリーの場合に発生する濁りや沈殿が発生しにくく、溶液の清澄性も向上するという特長を有している。【００１１】
本発明のローヤルゼリー分画物を調製するための精製方法は、ローヤルゼリーが本来有する有用な生理活性（以下、単に「有用な生理活性」という場合がある）を実質的に失うことなく、アレルゲン性を除去できる方法であればよく、具体的には、蛋白質量を、所期の量以下に低減できるものであればよい。具体的な精製方法としては、例えば、水希釈、遠心分離、膜濾過、濾過、濃縮、分別沈殿、塩析、透析、イオン交換クロマトグラフィー、ゲル濾過クロマトグラフィー、吸着クロマトグラフィー、等電点クロマトグラフィー、疎水性クロマトグラフィー、逆相クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー、ゲル電気泳動、等電点電気泳動など蛋白質含有物質を精製するために斯界で汎用される方法の１又は複数を適宜用いることができる。とりわけ、限外濾過膜による分画は、高分子画分をほぼ完全に除去できるだけでなく、有用な生理活性を有する低分子画分のロスがほとんどないことから、特に好ましい。なお、本発明でいうローヤルゼリーの有用な生理活性とは、ローヤルゼリーの有するコラーゲン産生増強作用、ＩＬ−４産生抑制作用、精巣機能活性化作用などに代表される健康の維持・増進や美肌、アレルギーやそれに伴う炎症の抑制、免疫増強作用、細胞の賦活作用などに関与するヒトや動物にとって有用な生理活性全てを意味し、上記以外にも、例えば、ＴＮＦ−α産生抑制作用、ＩｇＥ産生抑制作用、抗アトピー作用、接触過敏性抑制作用、寿命延長作用、滋養・強壮作用、抗疲労作用などを例示することができ、本発明のローヤルゼリー分画物は、これらの有用な生理活性の１種以上を具備しておればよく、２種以上が望ましく、３種以上が特に望ましい。【００１２】
上記、生ローヤルゼリーの水希釈液或いはそのｐＨ調整を行った水希釈液の高分子画分の除去に利用するために好適な限外濾過膜のポアサイズとしては、膜分離により高分子画分、望ましくは分子量３０，０００ダルトン以上の画分、さらに望ましくは分子量１０，０００ダルトン以上の画分、特に望ましくは分子量６，０００ダルトン以上の画分を効果的に除去することができるものであれば、特に制限はなく、例えば、分画分子量が１，０００乃至３０，０００ダルトン、望ましく２，０００乃至１０，０００ダルトン、さらに望ましくは分画分子量が２，０００乃至６，０００ダルトンから選ばれる限外濾過膜を使用するのが好ましい。限外濾過膜の分画分子量が２，０００ダルトン未満では、有用な低分子物質までが除去される懸念があり、分画分子量が３０，０００ダルトンよりも大きい膜では濾液に、アレルゲン性を有する蛋白質の混入率が上昇してアレルゲン性が高くなる場合がある。この高分子画分の除去は、ゲル濾過クロマトグラフィーなどによっても可能であり、このような方法を本発明のローヤルゼリー分画物を調製するための高分子画分の除去に用いてもよいが、作業の効率や産業上の応用性を考慮すると限外濾過膜を用いるのが好ましい。【００１３】
上記限外濾過などによって得られた、高分子を除去した画分はそのままで、本発明のローヤルゼリー分画物として使用してもよい。通常、限外濾過又はゲル濾過により得られる低分子物質は原料中の本来の濃度よりもかなり希釈される場合が多く、そのような場合には、必要に応じて濃縮して使用することもできる。濃縮は必要に応じて加熱濃縮、減圧濃縮（フリーズドライを含む）などの濃縮方法が適宜採用される。これらのなかでは比較的低温で行える減圧濃縮がローヤルゼリーに含まれる有用な生理活性に関与する成分の熱変性などの懸念が少なくて好ましい。【００１４】
以上の方法で得られる本発明のローヤルゼリー分画物は、生ローヤルゼリーに含まれていたヒドロキシデセン酸を実質的にロスすることなく保持しており、ヒドロキシデセン酸１質量部に対して、ローヤルゼリー由来の蛋白質を０．０５質量部未満の比率で含有するローヤルゼリー分画物であり、ローヤルゼリーの持つコラーゲン産生増強作用やＩＬ−４産生抑制作用などの生理活性を有し、且つ、ヒドロキシデセン酸を４５μｇ含有する量の当該ローヤルゼリー分画物を用いてマウスを免疫したマウス血清を、ラットを使用した受身皮膚アナフィラキシー法で判定したとき当該ローヤルゼリー分画物に対するアレルゲン性が検出されない。【００１５】
本発明のローヤルゼリー分画物は、アレルゲン性の原因となる高分子物質である蛋白質を低減させているものであり、その理化学的指標としては、ヒドロキシデセン酸と蛋白質との質量比が挙げられ、本発明のローヤルゼリー分画物はこの比が、１：０．０５よりも蛋白質量が少ないものが望ましく、１：０．０２或いはこれよりも蛋白質量が少ないものがさらに望ましい。このヒドロキシデセン酸と蛋白質との質量比は、生ローヤルゼリーの場合、通常、１：２乃至１０の範囲にあり、国際公開ＷＯ２００４／２１８０３号明細書記載の既存精製ローヤルゼリーでは、１：０．３乃至１の範囲にあるので、本発明のローヤルゼリー分画物は、さらに精製されたものであり、それと明瞭に区別することができる。なお、ヒドロキシデセン酸と蛋白質との質量比が、１：０．０５以上となって蛋白質の割合が増加した場合には、その摂取量にもよるが、当該分画物或いはそれを含む組成物を、ローヤルゼリーとして、通常摂取する程度と同量程度経口摂取した場合、アレルギーを引き起こす場合がある。【００１６】
本発明のローヤルゼリー分画物に含まれるヒドロキシデセン酸量は、当該ローヤルゼリー分画物をそのまま摂取する場合があること及びヒドロキシデセン酸が有用な生理活性を有することを勘案すると、通常、１ｍｇ／ｇ以上が望ましく、５ｍｇ／ｇ以上がより望ましく、２０ｍｇ／ｇ以上が特に望ましい。ヒドロキシデセン酸量が１ｍｇ／ｇより少ない場合には、ヒドロキシデセン酸をローヤルゼリーとして、通常摂取する程度と同量程度経口摂取するための摂取量が多くなり過ぎて、利用に支障をきたす場合がある。【００１７】
本発明における蛋白質の定量は、ブラッドフォード法により、ヒト又はウシ血清アルブミンを標準蛋白質として用いて測定し、窒素量の測定は、アルカリ性ペルオキソ二硫酸カリウム分解−紫外線吸光光度法で測定する。また、ローヤルゼリーの有する有用な生理活性、ヒドロキシデセン酸量及びアレルゲン性は、後記実験例で示す測定法により測定・確認することができる。また、本明細書で生ローヤルゼリー換算という場合は、該当する既存の精製ローヤルゼリー及びローヤルゼリー分画物の量を、その製造に要した始発原料の生ローヤルゼリーの質量に換算することを意味し、それらの量が、生ローヤルゼリー（水分を含む総質量）１ｇを始発原料として用い、これを精製して調製したものであれば生ローヤルゼリー換算で１ｇと表記する。【００１８】
本発明のローヤルゼリー分画物は、高分子の蛋白質が低減されているので、固形分中の窒素量が減少し、ヒドロキシデセン酸と窒素との質量の比率が１：０．３或いはこれよりも窒素の含有比率が低くなるので、ヒドロキシデセン酸と窒素との質量比がほぼ１：１の生ローヤルゼリーやそれを酵素処理したローヤルゼリー、その質量比が１：０．５以上となる既存精製ローヤルゼリーとも容易に区別することができる。また、本発明のローヤルゼリー分画物は、ヒドロキシデセン酸を３０μｇ含有する量の当該ローヤルゼリー分画物をＳＤＳ−ＰＡＧＥに供したときクマーシーブリリアントブルー（以下、「ＣＢＢ」と略記する場合がある。）染色による肉眼観察で蛋白質のバンドを検出しない。【００１９】
上記のごとき特長を有する本発明のローヤルゼリー分画物は、ローヤルゼリーが本来有する、コラーゲン産生増強作用、抗炎症作用、精巣機能活性化作用に代表される細胞賦活作用、寿命延長作用などの有用な生理活性を実質的に保持し、美白作用も増強されているので、健康の維持、増進、美白、美容、美肌、抗シワ、アンチエイジングなどを目的とした健康補助食品をはじめとする飲食品や、化粧品、医薬部外品、医薬品、皮膚外用雑貨などの皮膚外用剤として有利に利用できる。【００２０】
また、本発明のローヤルゼリー分画物は、それ自体で有用である一方、他の成分に配合してなる組成物の形態としても有利に利用できる。本発明は斯かる組成物を提供するものでもある。本発明による組成物は、通常、ヒトを含む哺乳類への経口的又は経皮的適用ないしは皮膚外用が許容される成分の１種又は２種以上を当該ローヤルゼリー分画物と共に含んでなり、例えば、食品分野、飲料分野、飼料・餌料・ペットフード分野、化粧品分野をはじめとする皮膚外用剤の分野、医薬品の分野などで有利に利用することができる。本発明で用いる、ヒトを含む哺乳類への経口的又は経皮的適用許容される成分としては、本発明の組成物の個々の利用分野で通常使用される、例えば、水、アルコール、澱粉質、蛋白質、アミノ酸、繊維質、糖質、脂質、脂肪酸、ビタミン、ミネラル、着香料、着色料、甘味料、調味料、香辛料、防腐剤、乳化剤、界面活性剤、生理活性物質などが挙げられる。以上のような成分を含む本発明の組成物の形態には特に制限はなく、粉末、顆粒、錠剤、ペースト、乳液、クリーム、溶液などの所望の形態で提供される。【００２１】
本発明のローヤルゼリー分画物を配合してなる組成物は、ローヤルゼリー分画物と、サイクロデキストリン類、無水糖質或いはデキストリンとを配合し、乾燥させることにより固状の形態とすることもでき、さらに、粉末、顆粒、錠剤等とすることもできる。サイクロデキストリン類としては、α−サイクロデキストリン、β−サイクロデキストリン、γ−サイクロデキストリンなどを挙げることができる。また、無水糖質としては例えば、無水α，α−トレハロース、無水マルトース、無水環状四糖などが挙げられる。特に、無水α，α−トレハロースは特許第３１６８５５０号に開示されている方法で市販のトレハロース２含水結晶（例えば、株式会社林原商事販売、商品名「トレハ」）から容易に調製でき、上記目的に用いることができるので望ましい。また、無水マルトースとしては市販の無水結晶マルトース（例えば、株式会社林原商事販売、商品名「ファイントース」）が有利に利用できる。さらに、国際公開ＷＯ０２／１０３６１号明細書などで開示したサイクロ｛→６）−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→３）−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→６）−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→３）−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→｝の構造を有する環状四糖（シクロニゲロシルニゲロース：Ｃｙｃｌｏｎｉｇｅｒｏｓｙｌｎｉｇｅｌｏｓｅ）、特開平２００５−９５１４８号公報などに記載されたサイクロ｛→６）−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→６）−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→｝の構造を有する環状四糖（シクロマルトシルマルトース：Ｃｙｃｌｏｍａｌｔｏｓｙｌｍａｌｔｏｓｅ）、特開２００５−９５１４８号公報に開示されたサイクロ｛→６）−［α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）］ｎ−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→｝（ｎは４又は５を意味する）の構造を有する環状五糖や環状六糖などの無水環状糖質を用いることも随意である。なかでも、非還元性の糖質やデキストリンは、ローヤルゼリー由来の成分と褐変反応などを起こしにくいので好ましく、とりわけ、α，α−トレハロース、環状四糖類及びこれらの糖質誘導体は、ローヤルゼリー分画組成物の生理活性を増強する作用も有するので、その点からも併用が望ましい。さらに、デキストリンとしては、比較的低ＤＥ（デキストロースイクイバレント）のものが、ローヤルゼリー分画物の褐変を抑制する作用が強いことから望ましく、デキストリン自体の水への溶解性も考慮すると、通常、ＤＥが６．１乃至１６．７程度のものが使用され、７．１乃至１１．５のものが望ましい。とりわけ、同じ出願人が、国際特許出願番号ＰＣＴ／ＪＰ２００８／５７８７９号パンフレットで開示した、澱粉部分分解物に、バチラス  サーキュランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃｉｒｃｕｌａｎｓ）ＰＰ７１０（独立行政法人産業技術研究所  微生物寄託センター、寄託番号ＦＥＲＭ  ＢＰ−１０７７１）などの産生するα−グルコシル転移酵素類を作用させてα−１，６結合やα−１，３結合などのα−１，４結合以外の結合からなる分岐構造の占有比率を増加させた多分岐グルカン類が特に望ましい。具体的には、グルコースを構成糖とするα―グルカンであって、���チル化分析において、２，３，６−トリメチル−１，４，５−トリアセチルグルシトールと２，３，４−トリメチル−１，５，６−トリアセチルグルシトールの比が１：０．６乃至１：４の範囲にあり、２，３，６−トリメチル−１，４，５−トリアセチルグルシトールと２，３，４−トリメチル−１，５，６−トリアセチルグルシトールとの合計が部分メチル化グルシトールアセテートの６０％以上を占め、２，４，６−トリメチル−１，３，５−トリアセチルグルシトールが部分メチル化グルシトールアセテートの０．５％以上１０％未満で、且つ、２，４−ジメチル−１，３，５，６−テトラアセチルグルシトールが部分メチル化グルシトールアセテートの０．５％以上の構造を有する分岐α―グルカンが、食物繊維成分も豊富で、水溶性が高い点からも特に望ましい。【００２２】
本発明のローヤルゼリー分画物に無水糖質を配合してなる組成物は、例えば、ローヤルゼリー分画物と、無水糖質とを混合し、必要に応じて他の成分をさらに混合した後、該混合物を脱水乾燥するか、必要に応じて、さらに、減圧乾燥、真空乾燥、凍結乾燥、流動乾燥、加熱乾燥等の通常の乾燥工程に供することにより得ることができる。より具体的には、無水糖質を使用する場合、当該無水糖質が水を取り込んで含水結晶に変換する性質を有する場合、結晶又は非結晶の無水糖質を、ローヤルゼリー分画物に、ローヤルゼリー分画物の質量（水を含む）に対して、通常、４倍量以上、さらに望ましくは８倍量以上混合し、必要に応じて他の成分をさらに混合した後、該混合物を、６０℃以下、望ましくは、４０℃以下で、通常、４時間以上、望ましくは８時間以上、より望ましくは１２時間以上静置して、脱水乾燥して固状のローヤルゼリー分画物を調製すればよい。また、本発明のローヤルゼリー分画物に上記糖質、その含水物或いはデキストリンを、通常、ローヤルゼリー分画物の固形分の質量に対して、無水物換算で等倍量以上、望ましくは２倍量以上混合し、６０℃以下、望ましくは４０℃以下、より望ましくは３０℃以下で、減圧乾燥、真空乾燥、凍結乾燥、流動乾燥、噴霧乾燥などの方法により、固状のローヤルゼリー分画物を調製することも随意である。斯くして調製される固状の形態の当該ローヤルゼリー分画物は、必要に応じて、さらに乾燥工程を経た後、粉砕機、分級機、造粒機、打錠機などを用いて、粉末、顆粒、錠剤など所望の形態にしたり、さらに必要に応じて、例えば、該粉末又は該顆粒をカプセルに充填して利用することも有利に実施できる。【００２３】
以上のような本発明の組成物に、さらに、必要に応じて、市販の糖転移ビタミンＣ（Ｌ−アスコルビン酸２−グルコシド）を配合することもできる。Ｌ−アスコルビン酸が生体内でコラーゲンの産生を増強する作用を有することはよく知られているものの、Ｌ−アスコルビン酸は不安定で酸化分解を受け易いという欠点がある。一方、糖転移ビタミンＣは化学的に安定な物質であり、且つ、生体内ではじめて分解されてＬ−アスコルビン酸を遊離し、ローヤルゼリー分画物の持つ有用な生理活性を効果的に増強することができる。この糖転移ビタミンＣを本発明の組成物に配合する時期は、原料の配合から製品の完成するまでに、または、完成した製品に配合すればよい。【００２４】
また、本発明の組成物に、さらに、必要に応じて、抗酸化成分を添加すると、ローヤルゼリー分画物に含まれる有用な生理活性に関与する成分のさらなる安定化を達成することができ、且つ、これらの生理活性を相加的或いは相乗的に増強することができる。従って、当該組成物の適用対象や適用地域などに応じて、例えば、温度制御することなく船舶などで当該組成物を輸送したり、高温の地域で利用する場合などに有利に実施できる。本発明で用いる抗酸化剤は特定の種類に限定されないけれども、当該組成物を、ヒトを含む哺乳類のための食用として利用する場合には、食品分野で通常用いられるものから適宜選択するのが望ましい。食品分野で通常用いられる抗酸化成分としては、具体的には、フラボノイド、ポリフェノール、ビタミンＥ、カロテン、ビタミンＣやこれらの誘導体などが挙げられる。フラボノイドとしては、より詳細には、ルチン、ヘスペリジン、ナリンジン、ケルセチンや、それらのそれぞれにグルコース又はその重合体などの糖類が結合してなる、糖転移ルチン、糖転移ヘスペリジン、糖転移ナリンジン、糖転移ケルセチンなどが挙げられる。ポリフェノールとしては、より詳細には、カテキン、没食子酸、レズベラトロールなどが挙げられる。さらに、植物抽出物である、エンジュ抽出物、ローズマリー抽出物、ユーカリ抽出物、ブドウ種子抽出物なども、本発明においては抗酸化成分として有利に利用できる。これらの抗酸化成分の当該組成物における含量は特に制限がないけれども、当該組成物を食用として用いる場合には、呈味への影響を考慮して、食品分野で通常用いられる配合割合に従うか、またはそれ以下で用いるのが望ましい。また、これらの成分を強化する目的で使用する場合には、所期の効果の期待できる量を添加することも随意である。【００２５】
上記に加えて、中国パセリ、パフィア、ガラナ、藍抽出物、シソ抽出物、プロポリスエキス、コタラヒムエキス、松エキス、ササエキス、バイニクエキス、ロッカクレイシ抽出物、コラーゲン、ヒアルロン酸、グルコサミン、コンドロイチン、コラーゲン、ラクトスクロース、コエンザイムＱ１０、α−リポ酸、カルニチン、プルラン、同じ出願人が特願２００８−１０７３１３号明細書や国際公開ＷＯ２００８／０４７７５８号パンフレット（国際出願番号ＰＣＴ／ＪＰ２００７／７００７７号）で開示した２−アミノフェノール及びその誘導体などの生理活性を有する成分を併用することも有利に実施できる。【００２６】
本発明の組成物の望ましい食品の形態としては、例えば、アイスクリーム、アイスキャンディー、シャーベットなどの氷菓、氷蜜などのシロップ、バタークリーム、カスタードクリーム、フラワーペースト、ピーナッツペースト、フルーツペーストなどのスプレッド及びペースト、チョコレート、ゼリー、キャンディー、グミゼリー、キャラメル、チューインガム、プリン、シュークリーム、スポンジケーキなどの洋菓子、ジャム、マーマレード、シロップ漬、糖菓などの加工果実ないしは加工野菜、まんじゅう、ういろう、あん、羊羹、水羊羹、カステラ、飴玉などの和菓子、醤油、粉末醤油、味噌、粉末味噌、マヨネーズ、ドレッシング、食酢、三杯酢、テーブルシュガー、コーヒーシュガーなどの調味料などが挙げられる。望ましい飲料の形態としては、例えば、合成酒、醸造酒、果実酒、洋酒などの酒類、ジュース、ミネラル飲料、炭酸飲料、乳酸飲料、乳酸菌飲料、スポーツドリンク、ドリンク剤、茶、紅茶、ウーロン茶、コーヒー、ココアなどの清涼飲料などが挙げられる。【００２７】
本発明のローヤルゼリー分画物はそのままで、又は、他の成分を配合した組成物の形態で、例えば、家畜、家禽、ペット、その他ミツバチ、蚕、昆虫、魚などの飼育動物のための飼料、餌料、ペットフードなどとしても有利に利用できる。このような形態を有する組成物に配合できる他の成分としては、それぞれの分野で通常利用される、例えば、穀類、澱粉類、糟糖類、糖類、油脂類、種実類、豆類、魚介類、肉類、卵類、乳類、植物蛋白エキス、果実類、きのこ類、藻類、ビタミン類、ミネラル類、アミノ酸類、その他として酵母、牧草、バガス、コーンコブ、稲藁、干し草、油粕類、ふすま、大豆糟、各種発酵糟など、飼料・餌料・ペットフード成分の１種又は２種以上が挙げられる。組成物の形態としては、粉末、顆粒、錠剤、ペースト、グミなどの固状、又は乳液、ドリンク剤、清涼飲料などの液状の形態で有利に利用できる。また、当該ローヤルゼリー又は当該組成物を動物に摂取させる場合は、そのまま摂取させてもよく、濃厚飼料、粗飼料、ペットフードなどの飼料・餌料に添加したり、飲料水に溶解して摂取させることも随意である。【００２８】
本発明の組成物の望ましい皮膚外用組成物（化粧品、医薬品、医薬部外品を含む）の形態としては、例えば水溶液系、可溶化系、乳化系、粉末分散系、固形スティック系、水−油２層系、水−油−粉末３層系など、種々の剤型で本発明を適用することが可能である。また、その具体的な形態にも、特に限定はなく、基礎化粧品、洗浄用化粧品、入浴用化粧品、頭髪化粧品、日焼け・日焼け止め化粧品、メイクアップ化粧品、歯磨などの口腔用化粧品、発毛剤、育毛剤、石けんなどとして、皮膚，口唇や頭皮などの外皮及び口内に適用されるもので、これらの形態を有する医薬部外品、医薬品、皮膚外用雑貨を含む。より具体的には、軟膏、クレンジングクリームを含むクリーム、乳液、ローション、エッセンス、ゼリー、ジェル、パック、シャンプー、リンス、ヘアトリートメント、マスク、マスカラ、アイライナー、育毛剤、リップスティック（口紅）、リップグロス、ファンデーション、頬紅、アイシャドウ、パウダー、マニキュア、石けん、ボディーソープ、浴用剤、粉歯磨、潤性歯磨、練歯磨、水歯磨、薬用歯磨、口中清涼剤、口中清涼フィルム、マウスウオッシュ、うがい薬などを例示することができる。【００２９】
また、本発明のローヤルゼリー分画物を含有する皮膚外用組成物には、その具体的な形態に応じて、公知の成分を配合することが可能である。すなわち、皮膚外用剤の形態の場合には、通常、皮膚外用剤に用いられ得る成分や上記食品に使用できる成分の１種又は２種以上を、本発明の所期の効果を損なわない範囲で配合することができる。例えば、油成分、界面活性剤、防腐剤（抗菌剤）、香料、美白剤、保湿剤、増粘剤、抗酸化剤、キレート剤、紫外線吸収・散乱剤、ビタミン類、アミノ酸類、抗炎症剤、血行促進剤、海藻抽出物、収斂剤、抗シワ剤、細胞賦活剤、抗老化防止剤、育毛・発毛剤、経皮吸収促進剤、水、アルコール類、水溶性高分子、ｐＨ調整剤、発泡剤、粉体、医薬品・医薬部外品・化粧品・食品用の添加剤、医薬用・医薬部外品用の有効成分などを適宜配合して、目的とする剤型に応じて常法により製造すればよい。【００３０】
具体的には、油成分としては、マカデミアナッツ油、ヒマシ油、オリーブ油、カカオ油、椿油、ヤシ油、木ロウ、ホホバ油、グレープシード油、アボガド油などの植物油脂類、ミンク油、卵黄油などの動物油脂類、蜜ロウ、鯨ロウ、ラノリン、カルナウバロウ、キャンデリラロウなどのロウ類、流動パラフィン、スクワラン、マイクロクリスタリンワックス、セレシンワックス、パラフィンワックス、ワセリンなどの炭化水素類、カプリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、ベヘニン酸、ラノリン脂肪酸、リノール酸、リノレン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、オレイン酸、イソステアリン酸などの天然及び合成脂肪酸類、セタノール、ステアリルアルコール、ヘキシルデカノール、オクチルドデカノール、ラウリルアルコール、カプリルアルコール、ミリスチルアルコール、セチルアルコール、コレステロール、フィトステロールなどの天然及び合成高級アルコール類、ミリスチン酸イソプロピル、パルミチン酸イソプロピル、ミリスチン酸オクチルドデシル、オレイン酸オクチルドデシル、コレステロールオレートなどのエステル類などを例示することができる。【００３１】
界面活性剤としては、モノラウリン酸ソルビタン、モノパルミチン酸ソルビタン、セスキオレイン酸ソルビタン、トリオレイン酸ソルビタン、モノラウリン酸ポリオキシエチレンソルビタン、モノステアリン酸ポリオキセチレンソルビタン、ポリエチレングリコールモノオレート、ポリエチレングリコールアルキレート、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリグリコールジエーテル、ラウロイルジエタノールアマイド、脂肪酸イソプロパノールアマイド、マルチトールヒドロキシ脂肪酸エーテル、アルキル化多糖、アルキルグルコシド、シュガーエステルなどの非イオン性界面活性剤、親油型グリセリンモノステアレート、自己乳化型グリセリンモノステアレート、ポリグリセリンモノステアレート、ポリグリセリンアルキレート、ソルビタンモノオレート、ポリエチレングリコールモノステアレート、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレート、ポリオキシエチレンセチルエーテル、ポリオキシエチレン化ステロール、ポリオキシエチレン化ラノリン、ポリオキシエチレン化蜜ロウ、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油などのノニオン界面活性剤、ステアリン酸ナトリウム、パルミチン酸カリウム、セチル硫酸ナトリウム、ラウリルリン酸ナトリウム、パルミチン酸トリエタノールアミン、ポリオキシエチレンラウリルリン酸ナトリウム、Ｎ−アシルグルタミン酸ナトリウム、パルミチン酸ナトリウム、ラウリン酸ナトリウム、ラウリル酸ナトリウム、ラウリル硫酸カリウム、アルキル硫酸トリエタノールアミンエーテル、ロート油、リニアドデシルベンゼン硫酸、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油マレイン酸、アシルメチルタウリンなどのアニオン界面活性剤、塩化ステアリルジメチルベンジルアンモニウム、塩化ステアリルトリメチルアンモニウム、ステアリルトリメチルアンモニウムクロライド、塩化ベンザルコニウム、ラウリルアミンオキサイドなどのカチオン界面活性剤、塩酸アルキルアミノエチルグリシン液、レシチンなどの両性界面活性剤などを例示することができる。【００３２】
防腐剤（抗菌剤）としては、安息香酸及びその塩類、サリチル酸及びその塩類、ソルビン酸及びその塩類、デヒドロ酢酸及びその塩類、パラオキシ安息香酸アルキルエステルをはじめとするパラオキシ安息香酸エステル、２，４，４´−トリクロロ−２´−ヒドロキシジフェニルエーテル、３，４，４´−トリクロロカルバニリド、ヘキサクロロフェン、塩化ベンザルコニウム、フェノキシエタノール、ヒノキチオール、レゾルシン、エタノール、１，３−ブチレングリコール、感光素２０１号などを例示することができる。【００３３】
香料としては、ベンズアルデヒド、ベンジルベンゾエート、フェニル酢酸、サンダロール、オイゲノール、リリアール、リラール、リナロール、２−メチル−３−（４−メチルフェニル）−プロパナール、ムスクケトン、シンナミックアルデヒド、ベルトフィックス、メチルイオノン、ゲラニルホーメート、イソＥスーパー、γ−ウンデカラクトン、ヘキシルサリシレート、シス−３−ヘキセニルサリシレート、メチルジヒドロジャスモネート、テトラヒドロフルフリル３−メルカプトプロピオネート、コバノール、バニリン、バニラール、ゼラニウムオイル、ペニロイヤルオイル、バーチオイル、アルモイゼオイルなどを例示することができる。【００３４】
美白剤としては、Ｌ−アスコルビン酸やその誘導体及びそれらの塩類、アルコキシサリチル酸類及びその塩類、ハイドロキノンやその配糖体などのハイドロキノンの誘導体、トラネキサム酸やその誘導体及びそれらの塩類、レゾルシンの誘導体、コウジ酸やその誘導体及びそれらの塩類、エラグ酸やリノール酸及びそれらの塩類、カミツレ抽出物、テトラヒドロクルクミノイド、藍草抽出物、２−アミノフェノール及びその誘導体などを挙げることができる。【００３５】
保湿剤としては、エリスリトール、キシリトール、ソルビトール、マルチトール、グリセリン、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、ポリグリセリン、ポリエチレングリコール、ジプロピレングリコール、１，２−ペンタンジオール、イソプレングリコールなどの多価アルコール類、グルコース、マルトース、トレハロース、トレハロースの糖質誘導体、デキストリン、サイクロデキストリン、国際公開ＷＯ  ０２／１０３６１号パンフレットで開示したサイクロ｛→６）−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→３）−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→６）−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→３）−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→｝の構造を有する環状四糖（シクロニゲロシルニゲロース：Ｃｙｃｌｏｎｉｇｅｒｏｓｙｌｎｉｇｅｌｏｓｅ）、特開平２００５−９５１４８号公報に記載したサイクロ｛→６）−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→６）−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→｝の構造を有する環状四糖（シクロマルトシルマルトース：Ｃｙｃｌｏｍａｌｔｏｓｙｌｍａｌｔｏｓｅ）などの糖類、アミノ酸、乳酸ナトリウム、ピロリドンカルボン酸ナトリウムなどのＮＭＦ成分（天然保湿成分）、グリコーゲン、ローカストビーンガム、キシログルカン、クインスシード、カラギーナン、ペクチン、マンナン、カードラン、サクシノグルカン、ガラクタン、デルマタン硫酸、ケラタン硫酸、コンドロイチン、コンドロイチン硫酸、ムコイチン硫酸、ケラト硫酸、キチン、ヘパラン硫酸、ヒアルロン酸などのムコ多糖類やこれらムコ多糖類の加水分解物、シルクやコラーゲンなどの蛋白質・ペプチドやこれらの加水分解物などの水溶性高分子物質、これらの塩類、ジメチルポリシロキサン、メチルフェニルシロキサンなどのシリコン類、乳酸菌・ビフィズス菌などの培養上清などを例示することができる。なかでも、保湿効果などの強い、トレハロース、トレハロースの糖質誘導体、環状四糖、ヒアルロン酸やコンドロイチン硫酸、その塩類や加水分解物から選ばれる１種又は２種以上を組み合わせて使用するのが望ましい。【００３６】
増粘剤としては、アルギン酸ナトリウム、キサンタンガム、ケイ酸アルミニウム、マルメロ種子抽出物、アラビアガム、ヒドロキシエチルグアガム、カルボキシメチルグアガム、グアガム、デキストラン、トラガントガム、澱粉、プルラン、キチン、キトサン、寒天、セルロース、などの天然高分子物質、ヒドロキシプロピルセルロース、メチルヒドロキシプロピルセルロース、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、可溶性澱粉、カチオン化セルロース、カルボキシメチルキチンなどの半合成高分子物質、カルボキシビニルポリマー、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ビニルアルコール・酢酸ビニル共重合体などの合成高分子物質などを例示することができる。【００３７】
抗酸化剤としては、ジブチルヒドロキシトルエン、ブチルヒドロキシアニソール、没食子酸プロピル、Ｌ−アスコルビン酸、ビタミンＥ、カテキン類、フラボノイド類やこれらの誘導体などを例示することができる。【００３８】
キレート剤としては、エデト酸二ナトリウム、エチレンジアミン四酢酸塩、ピロリン酸塩、ヘキサメタリン酸塩、クエン酸、酒石酸、グルコン酸などを例示することができる。【００３９】
ｐＨ調整剤としては、水酸化ナトリウム、トリエタノールアミン、ニトリロトリエタノール、クエン酸、クエン酸ナトリウム、ホウ酸、ホウ砂、リン酸水素カリウムなどを例示することができる。【００４０】
紫外線吸収・散乱剤としては、パラアミノ安息香酸系紫外線吸収剤、アントラニル酸系紫外線吸収剤、サリチル酸系紫外線吸収剤、ケイ皮酸系紫外線吸収剤、ベンゾフェノン系紫外線吸収剤、糖系紫外線吸収剤、３−（４´−メチルベンジリデン）−ｄ−カンファー、３−ベンジリデン−ｄ，１−カンファー、ウロカニン酸、ウロカニン酸エチルエステル、２−フェニル−５−メチルベンゾキサゾール、２，２´−ヒドロキシ−５−メチルフェニルベンゾトリアゾール、２−（２´−ヒドロキシ−５´−ｔ−オクチルフェニル）ベンゾトリアゾール、２−（２´−ヒドロキシ−５´−メチルフェニルベンゾトリアゾール、ジベンザラジン、ジアニソイルメタン、４−メトキシ−４´−ｔ−ブチルジベンゾイルメタン、５−（３，３−ジメチル−２−ノルボルニリデン）−３−ペンタン−２−オン、２−ヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノン、オクチルジメチルパラアミノベンゾエート、エチルヘキシルパラメトキシサイナメート、酸化チタン、カオリン、タルクなどを例示することができる。【００４１】
ビタミン類としては、ビタミンＡ及びその誘導体、ビタミンＢ１及びその誘導体、ビタミンＢ２及びその誘導体、ビタミンＢ６塩酸塩、ビタミンＢ６トリパルミテート、ビタミンＢ６ジオクタノエート、ビタミンＢ１２、ビタミンＢ１５及びその誘導体などのビタミンＢ類、Ｌ−アスコルビン酸及びその誘導体、α−トコフェロール、β−トコフェロール、γ−トコフェロール、ビタミンＥアセテートなどのビタミンＥ類、ビタミンＤ類、ビタミンＨ、パントテン酸、パンテチン、ビタミンＦ、ビタミンＫ、ビタミンＰなどのフラボノイド類やその誘導体、ビタミンＵ、フェルラ酸、γ−オリザノール、α−リポ酸、オロット酸、コエンザイムＱ１０などやそれらの誘導体などを例示することができ、それらの塩類であってもよい。なかでも、Ｌ−アスコルビン酸やその誘導体は、ローヤルゼリー分画物の持つ生理作用を増強する作用や、皮膚のシワの発生の抑制に強く関与するコラーゲン産生を増強する作用が強いので望ましく、効果の強さの点ではＬ−アスコルビン酸の配糖体が望ましく、Ｌ−アスコルビン酸−２−グルコシドが特に望ましい。【００４２】
アミノ酸類としては、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、セリン、トレオニン、フェニルアラニン、チロシン、アスパラギン、グルタミン、タウリン、トリプトファン、シスチン、システイン、メチオニン、プロリン、ヒドロキシプロリン、アスパラギン酸、グルタミン酸、アルギニン、ヒスチジン、リジン、カルニチン及びそれらの誘導体などを例示することができ、それらの塩類であってもよい。【００４３】
抗炎症剤としては、アラントイン又はその誘導体であるアラントイン、アラントインアセチル−ｄｌ−メチオニン、アラントインクロルヒドロキシアルミニウム、アラントインジヒドロキシアルミニウム、アラントインポリガラクツロン酸など、グリチルレチン又はその誘導体であるグリチルレチン酸、グリチルリチン酸、グリチルレチン酸アラントイン、グリチルレチン酸グリセリン、グリチルレチン酸ステアリル、ステアリン酸グリチルレチニル、３−サクシニルオキシグリチルレチン酸二ナトリウム、グリチルリチン酸ジカリウム、グリチルリチン酸モノアンモニウムなど、パントテン酸、パントテニルアルコール、パントテニルエチルエーテル、アセチルパントテニルエチルエーテル、ベンゾイルパントテニルエチルエーテル、パントテン酸カルシウム、パントテン酸ナトリウム、アセチルパントテニルエチルエーテル、安息香酸パントテニルエチルエーテルエステル、パンテチンなどのパントテン酸の誘導体、ビタミンＥ、ｄ−δ−トコフェロール、ｄｌ−α−トコフェロール、酢酸ｄｌ−α−トコフェロール、リノール酸ｄｌ−α−トコフェロール、ニコチン酸ｄｌ−α−トコフェロール、コハク酸ｄｌ−α−トコフェロールなどのビタミンＥ誘導体、Ｌ−アスコルビン酸、Ｌ−アスコルビン酸−２−グルコシドなどのＬ−アスコルビン酸グルコシド、Ｌ−アスコルビン酸グルコシドのアシル化誘導体、テトラヘキシルデカン酸アスコルビン酸、Ｌ−アスコルビン酸とトコフェロールがリン酸基を介して結合したアスコルビン酸−トコフェロールリン酸ジエステルＬ−アスコルビン酸硫酸エステル、ジパルミチン酸アスコルビル、パルミチン酸アスコルビル、Ｌ−アスコルビン酸ステアリル、リン酸Ｌ−アスコルビル、Ｌ−アスコルビン酸エチルやそれらのアシル化誘導体などのＬ−アスコルビン酸の誘導体及び／又はそれらのアルカリ金属或いはアルカリ土類金属の塩、２−アミノフェノール及びその誘導体、塩酸ピリドキシン、メントール、ビオチン、カンフル、テレピン油、酸化亜鉛、アズレン、グアイアズレン及びその誘導体、メフェナム酸及びその誘導体、フェニルブタゾン及びその誘導体、インドメタシン及びその誘導体、イブプロフェン及びその誘導体、ケトプロフェン及びその誘導体、ε−アミノカプロン酸、ジクロフェナクナトリウム、ジフェンヒドラミン、トラネキサム酸及びその誘導体、デキサメタゾン、コルチゾン及びそのエステル、ヒドロコルチゾン及びそのエステル、プレドニゾン、プレドニゾロンなどの副腎皮質ホルモン、抗ヒスタミン剤、藍草、アセンヤク、アマチャ、アルテア、アルニカ、アロエ、イブトラノオ、イラクサ、エイジツ、エチナシ、エンメイソウ、ウコン、オウバク、オウゴン、オウバク、オオムギ、オトギリソウ、オレンジ、カノコソウ、カミツレ、カロット、カワラヨモギ、カンゾウ、キュウリ、キンギンカ、クチナシ、クマザサ、クレソン、ゲンチアナ、ゲンノショウコウ、ゴボウ、コンフリー、ゴカヒ、サルビア、サンショウ、シアントロ、シコン、シソ、シャクヤク、シラカバ、セージ、セイヨウオトギリソウ、セイヨウキズタ、セイヨウネズ、セイヨウノコギリソウ、セイヨウハッカ、センキュウ、センブリ、ソハクヒ、タイソウ、タイム、チャイニーズパセ���、トウガシ、トウキ、トウキンセンカ、トウニン、ドクダミ、トルメンチラ、タデアイ、チャ、トウキ、トウキンセンカ、ニワトコ、ニンジン、パセリ、ハッカ、ビャクダン、ビワ、ブッチャーブルーム、ブドウ、ブロッコリー、ベニバナ、ホオウ、ボダイジュ、ボタン、マロニエ、ムクロジ、モモ、ヤグルマソウ、ユーカリ、ヨモギ、ヨウバイヒ、ラベンダー、ローマカミツレ、ローズマリーなどの植物又は植物に由来する抽出物などの成分を例示することができる。【００４４】
海藻抽出物としては、褐藻、紅藻、緑藻、藍藻などからの抽出液があり、具体的にはコンブ、マコンブ、ワカメ、ヒジキ、テングサ、サンゴモ、パルマリア、ツノマタ、ノリ、アオサ、アナアオサ、アスコフィラム、ヒバマタ、モズク、オキナワモズク、ヒマンタリアなどからの抽出物を例示することができる。アマモなどの水性植物からの抽出物もこれに含まれる。【００４５】
上記以外にも、プロポリス、ハーブ類などの植物や動物の成分や、それらに由来する抽出物などの成分、海洋深層水、苦汁、苦汁成分などのミネラル類、抗生物質、リン酸水素カルシウム、有機変性モンモリロナイト、ケイ酸、無水ケイ酸、ケイ酸マグネシウム、雲母、ベントナイト、チタン被覆雲母、オキシ塩化ビスマス、酸化ジルコニウム、酸化マグネシウム、酸化亜鉛、炭酸カルシウム、炭酸マグネシウム、酸化鉄、群青、紺青、酸化クロム、カラミン、ゼオライト及びカーボンブラックなどの無機粉末、ポリアミド、ポリエステル、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリスチレン、ポリウレタン、ビニル樹脂、尿素樹脂、フェノール樹脂、フッソ樹脂、ケイ素樹脂、アクリル酸樹脂、メラミン樹脂、エポキシ樹脂、ポリカーボネイト樹脂、ジビニルベンゼン・スチレン共重合体、上記化合物の単量体の二種以上からなる共重合体、セルロースなどの有機粉末、ベニバナ色素、クチナシ色素、シコン色素、コチニール色素をはじめとする、アントラキノン系、アントシアニン系、カルコン系、カロテノイド系の色素などの天然着色料、感光素１０１号、感光素２０１号、感光素３０１号、感光素４０１号などの感光素、赤色２０１号、赤色２０２号、赤色２０４号、赤色２０５号、赤色２２０号、赤色２２６号、赤色２２８号、赤色４０５号、橙色２０３号、橙色２０４号、黄色２０４号、黄色４０１号及び青色４０４号などの有機顔料粉末、赤色３号、赤色１０４号、赤色１０６号、赤色２２７号、赤色２３０号、赤色４０１号、赤色５０５号、橙色２０５号、黄色４号、黄色５号、黄色２０２号、黄色２０３号、緑色３号及び青色１号のジルコニウム、バリウム又はアルミニウムレーキなどの有機顔料粉末、上記有機粉末にシコン色素、ベニバナ色素などの天然着色料や有機合成色素などの着色料、ビタミン類やその誘導体、糖転移グリチルリチン、グリチルリチンなどの機能性成分を担持せしめた粉体などを挙げることができる。【００４６】
本発明のローヤルゼリー分画物を配合してなる組成物を製造するには、以上に示したような成分と個々の含量に基づいて、本発明のローヤルゼリー分画物をその目的に応じて、すなわち、対象とする哺乳類の種類やその摂取方法などに応じて選ばれる適宜の組成に従って、目的の組成物が完成するまでの工程で、或いは、完成品に対して、含有せしめればよい。その処理方法としては、例えば、希釈、濃縮、乾燥、濾過、遠心分離、混和、混捏、溶解、融解、分散、懸濁、乳化、逆ミセル化、浸透、晶出、散布、塗布、付着、噴霧、被覆（コーティング）、注入、浸漬、固化、担持、封入などの公知の処理方法を適宜に選択して、さらに、必要に応じて所望の形状に成形すればよい。各成分を配合する順序や、種々の処理を施す時期は、ローヤルゼリー分画物の品質劣化をもたらさないものであれば何れでもよく、例えば、できるだけ調製直後の、又は、調製後低温保存されたローヤルゼリー分画物を使用し、その後、必要に応じて種々の処理を適宜施せばよい。また、製造過程でのローヤルゼリー分画物の品質の劣化を防ぐためには、上記の工程は何れも６０℃以下、望ましく４０℃以下、特に望ましくは３０℃以下の条件下で行うことにより、製造工程での有用な生理活性の減衰を防ぐことができる。以上のような本発明のローヤルゼリー分画物を含有する組成物は、当該ローヤルゼリー分画物を、製品質量あたり、通常、固形物換算で、０．０００１％乃至２０％、望ましくは、０．００１％乃至１０％含有する。また、ローヤルゼリーの摂取を目的と健康補助食品などの場合には、組成物中の含有量をさらに増やすことも随意である。【００４７】
以上のような本発明による組成物は、生ローヤルゼリーの持つ各種の有用な生理活性が安定に保持されているので、利用した生体において有用な生理活性が効果的に発揮され、その生体の抵抗力の増強や、体調不良の改善の早期化、健康な状態の維持・増進、美容、美肌などが達成される。また、とりわけ、繁殖用の動物の雄の精巣機能増進にも著効を発揮することができる。しかも、本発明のローヤルゼリー分画物は、アレルゲン性が低減されているので、安心して使用することができる。従って、本発明のローヤルゼリー分画物を含有する組成物は、健康の維持・増進や、美白、美容のための食品、飲料、飼料、餌料、ペットフード、皮膚外用組成物などとして極めて有用である。【００４８】
本発明のローヤルゼリー分画物或いは当該分画物配合してなる組成物の摂取量と摂取方法は、上記ローヤルゼリーの有用な生理活性が発揮できる量及び方法であれば制限はなく、通常は、ヒドロキシデセン酸として、１日体重１ｋｇ当たり、０．００１乃至１００ｍｇ、望ましくは０．０１乃至１０ｍｇ、特に望ましくは０．１乃至２ｍｇであればよい。また、摂取方法としては、１日当たりの所要量を、一度に摂取してもよく、数回に分けて摂取してもよい。また、２乃至３日ごとに１度摂取してもよい。【００４９】
以下、実験に基づいて、より詳細に本発明を説明する。【００５０】
＜実験１：ローヤルゼリーのアレルゲン性に及ぼす限外濾過の影響１＞
後述のごとく、国際公開ＷＯ２００４／２１８０３号明細書の方法により調製した既存精製ローヤルゼリーには、生ローヤルゼリーよりは弱いものの、依然として、アレルゲン性が残存していることが確認されたので、ヒドロキシデセン酸などの有用な生理活性に関与する成分を低減することなく、アレルギーの原因と考えられる蛋白質をさらに除去するために、生ローヤルゼリーのアレルゲン性に及ぼす限外濾過の影響を調べる試験を以下のように行った。すなわち、生ローヤルゼリー（台湾産、ヒドロキシデセン酸３０ｍｇ／ｇ、蛋白質１１３ｍｇ／ｇを含有）５０ｇを精製水２００ｇに懸濁した。この水希釈溶液を、表１に示す各種分画分子量を有する限外濾過膜（日本ジェネティクス株式会社或いはアドバンテック東洋株式会社販売）を用いた限外濾過に供して、限外濾過液を回収して試験試料とし、そのアレルゲン性を測定した結果を表１に併せて示す。なお、濾液のアレルゲン性は、その評価にあたり、これらの試験試料（限外濾過液）は、全て等量のヒドロキシデセン酸を含有する量を使用した。各試験試料のアレルゲン性試験、コラーゲン産生増強作用及びＩＬ−４産生抑制作用の有無を、下記方法により測定し、その結果を表１に併せて示す。【００５１】
＜アレルゲン性試験の方法＞
アレルゲン性試験はマウスを使用した抗原性試験を萩田らの方法（萩田忠厚、水島裕、「医学のあゆみ」、第１００巻、８１４頁、１９７７年）に従って行った。すなわち、各試験群あたり５匹の雌性ＢＡＬＢ／ｃマウス（９週齢、日本チャールスリバー株式会社販売）を使用して、一週間おきに３回、各ヒドロキシデセン酸を４５μｇ含有する量の試験試料及びアジュバントとして水酸化アルミニウムゲル（Ａｌｕｍ、以下、「アラムアジュバント」という）２．５ｍｇ／匹を腹腔内投与して、免疫を行った。３回目の免疫から一週間後に各マウスの尾動脈より採血し、マイクロテナーを用いて血清を採取し、ラットを用いたＰＣＡに供した。すなわち、正常ＳＤラット（１１週齢、日本チャールスリバー株式会社販売）の除毛した背中に、生理食塩水を用いて希釈（１０倍）した各マウスの血清を０．１ｍＬずつ皮内注射し、２４時間経過後にマウスに免疫した試験試料と同一のものの５倍量を、１ｍＬの０．５％エバンスブルー色素溶液とともに静脈内投与した。【００５２】
＜アレルゲン性の有無の判定方法＞
マウス血清投与部位に観察される青いスポットの大きさを測定して、平均直径５ｍｍ以上のスポットを示すものを陽性と判定し、平均直径５ｍｍ未満のスポットを示すものを陰性と判定した。試験群５匹とも陽性であったものを５プラス（＋＋＋＋＋）乃至５匹とも陰性であったものをマイナス（−）としてアレルゲン性の強さを６段階で評価した。【００５３】
＜コラーゲン産生増強作用の測定方法＞
コラーゲン産生増強作用の測定は、国際公開ＷＯ２００５／０３４９３８号明細書に記載の方法に準じて、ヒト線維芽細胞を使用したコラーゲン産生量の測定方法を用いて行った。すなわち、ヒト線維芽細胞（倉敷紡績株式会社販売、細胞名「ＮＨＤＦ細胞」）を細胞濃度２．５×１０４個／ウエルとなるように１０％（ｖ／ｖ）ウシ胎児血清と適量のペニシリンを添加したダルベッコ変法イーグル培地（株式会社日水販売、以下、ウシ胎児血清と適量のペニシリンを添加したダルベッコ変法イーグル培地を「ＤＭＥＭ培地」と略記する。）（ｐＨ７．１〜７．４）を含む９６ウエルマイクロプレート（ベクトン・ディッキンソン社販売）に播種し、５％（ｖ／ｖ）ＣＯ２条件下、３７℃で２４時間培養した。その後、培養上清を除去し、各々の試験試料をヒドロキシデセン酸濃度が１００μｇ／ｍＬとなるように添加した、５０μＭのＬ−アスコルビン酸を含有するＤＭＥＭ培地２００μＬで交換して５日間培養した。その後、前記マイクロプレートにおける各ウエル当たりの細胞によるコラーゲン産生量をサーコル・コラーゲン・アッセイ・キット（バイオカラー社販売）にて定量した。測定には、各試験標品につき３ウエルを使用した。【００５４】
＜コラーゲン産生増強作用の有無の判定方法＞
コラーゲン産生増強作用の有無の判定は、当該細胞を５０μＭのＬ−アスコルビン酸を含有するＤＭＥＭ培地のみで培養した場合に比して、コラーゲン量が２０％以上増加した場合を活性がある（○）、又は、２０％未満しか増加がない場合を活性がない（×）とした。【００５５】
＜ＩＬ−４産生抑制作用の測定方法＞
ＩＬ−４産生抑制作用の測定は、国際公開ＷＯ２００４／０１９９７１号明細書の実験２に記載された、アラムアジュバントを含む卵白アルブミンで免疫したＢＡＬＢ／ｃマウスの脾臓細胞を使用したＩＬ−４産生系を使用しておこなった。すなわち、ＯＶＡを抗原とし、アラムアジュバントと共に３回免疫したＢＡＬＢ／ｃマウスから、常法により、脾臓細胞を採取して、５×１０６個／ｍＬとなるよう培地浮遊させた。この細胞浮遊液を、予め抗ＣＤ３抗体（５μｇ／ｍＬ）を固相化した９６ウエルのマイクロプレートに、１００μＬずつ播きこんだ。次いで、試験試料を、ヒドロキシデセン酸濃度が４００μｇ／ｍＬとなるようにリン酸緩衝生理食塩水で希釈して、これを５０μＬずつ添加した。さらに、各ウエルに培地を５０μＬ添加し、総液量２００μＬとした。４０時間培養した後に培養上清液を回収し、ＩＬ−４の量を固相酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ法）にて測定した。試験試料の代わりにリン酸緩衝生理食塩水を添加して同様に培養したものを対照とした。【００５６】
＜ＩＬ−４産生抑制作用の有無の判定方法＞
ＩＬ−４産生抑制作用の有無の判定は、対照と比較してＩＬ−４の産生量が２０％以上抑制された場合を活性がある（○）、又は、２０％未満しか抑制されなかった場合を活性がない（×）とした。【００５７】
【表１】
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【００５８】
表１から明らかなように、限外濾過に使用した膜の分画分子量が小さくなるのに比例して、試験試料（限外濾過液）のアレルゲン性が低減し、分画分子量が３０，０００ダルトン以下で著しく低減し、１０，０００ダルトン或いはそれ以下の限外濾過膜で分画した試験試料では、アレルゲン性が認められなかった。また、コラーゲン産生増強作用は、何れの分画分子量の限外濾過膜を使用した試験試料の場合にも確認された。この結果は、分画分子量が、３０，０００ダルトン以下、望ましくは１０，０００ダルトン以下から選ばれる限外濾過膜で、生ローヤルゼリーの水希釈溶液を分画して高分子画分を除去することにより、ローヤルゼリーの持つ生理活性を維持しつつ、アレルゲン性を低減したローヤルゼリー分画物を調製できることを物語っている。また、コラーゲン増強作用などに関与する低分子の成分の収率や処理の容易さを勘案すると、本発明のローヤルゼリー分画物の調製に使用する限外濾過膜は、分画分子量が２，０００乃至１０，０００ダルトンから選ばれるものの使用がさらに望ましく、２，０００乃至６，０００ダルトンから選ばれるものが特に望ましいと判断した。なお、分画分子量が、３０，０００ダルトン以下の限外濾過膜で分画した試験試料で免疫したマウスの血清は、何れの場合も２００倍希釈した場合には、ＰＣＡ反応は認められなかった。【００５９】
＜実験２：ローヤルゼリーのアレルゲン性に及ぼす限外濾過の影響２＞
実験１により、ローヤルゼリーを分画分子量２，０００乃至１０，０００ダルトンから選ばれる限外濾過膜で除去することにより、アレルゲン性が効果的に低減されることが確認されたので、当該方法で調製したローヤルゼリー分画物の特性を調べる試験を以下のように行った。すなわち、生ローヤルゼリー（台湾産、ヒドロキシデセン酸３０ｍｇ／ｇ、蛋白質１１３ｍｇ／ｇを含有）５００ｇを精製水２，０００ｇに懸濁し、限外濾過膜（旭化成株式会社販売、商品名「マイクローザーＡＩＰ１０１３」、分画分子量６，０００）を用いた限外濾過に供した。限外濾過は、限外濾過濃縮液（内液：生ローヤルゼリー水希釈物）に、精製水を添加しながら通液し、限外濾過液（濾液）４，０００ｍＬを回収し試験試料１を調製した。また、国際公開ＷＯ２００４／２１８０３号明細書の実験例３の方法に基づき、上記生ローヤルゼリー６０ｇを原料とし、これに４℃の脱イオン水を２４０ｇ加えて攪拌し、均一に分散させた。次いで、この懸濁液を遠心分離（５，０００×ｇ、１０分間）し、上清と沈殿とに分離した。得られた沈殿に再度４℃の脱イオン水を２４０ｇ加えて同様に処理し、沈殿を得た。水分画１回目と２回目の上清を併せて水分画上清液とし、前記限外濾過膜を用いた限外濾過に供した。少量の水にて水押しし、限外濾過液（濾液）と限外濾過濃縮液（内液）とに分離した。限外濾過で得られた濾液をエバポレーターで２倍に濃縮し、最終的に前述の沈殿と合わせて既存精製ローヤルゼリーを調製し試験試料２とした。さらに、前記生ローヤルゼリー１２ｇに脱イオン水を４８ｇ加えて６０ｇとし、上記と同様に攪拌分散させて生ローヤルゼリー水希釈溶液を調製して、試験試料３とした。これらの試験試料１乃至３の有用な生理活性に関与する成分の指標としてローヤルゼリー特有の成分であり、糖代謝や老化防止に関与するといわれているヒドロキシデセン酸の質量、蛋白質量及び窒素質量を測定し、蛋白質とヒドロキシデセン酸の質量比、ヒドロキシデセン酸と窒素の質量比及び、蛋白質量の指標としてＳＤＳ−ＰＡＧＥの結果を表２に示す。さらに、これらの試験試料について、実験１と同じ方法で、アレルゲン性、コラーゲン産生増強作用及びＩＬ−４産生抑制作用の有無について測定した結果を、併せて表２に示す。なお、蛋白質量はヒト血清アルブミンを標準蛋白質としたブラッドフォード法にて測定し、始発の生ローヤルゼリーに含まれる蛋白質量を１００として、各試料中に含まれる蛋白質量の相対値（％）を求め蛋白質量（％）として表２に示す。また、ヒドロキシデセン酸は下記の条件によるＨＰＬＣ法にて測定し、予め調製したヒドロキシデセン酸標準溶液（２０μｇ／ｍＬ、５０μｇ／ｍＬ、１００μｇ／ｍＬ）を用いて作成した検量線により定量し、始発の生ローヤルゼリーに含まれるヒドロキシデセン酸量を１００として、各試料中に含まれるヒドロキシデセン酸量の相対値（％）を求めて、ヒドロキシデセン酸量（％）として表２に示す。窒素質量は、アルカリ性ペリオキソ二硫酸カリウム分解−紫外線吸光光度法により求めた。ＳＤＳ−ＰＡＧＥは、ヒドロキシデセン酸３０μｇを含有する量の各試験試料を、それぞれ、市販のＳＤＳ−ＰＡＧＥ用のゲル（第一化学薬品株式会社販��、商品名「ＰＡＧミニ『第一』１０／２０」）にチャージし、常法により、電気泳動後、クマーシーブリリアントブルー（ＣＢＢ）で染色し、肉眼観察により染色バンドの有無を確認し、複数のバンドが明瞭に確認される（＋＋＋＋）、複数のバンドが確認され、且つ、５２．８キロダルトン付近のローヤルゼリー主要蛋白１のバンドが明瞭に確認される（＋＋＋）、５２．８キロダルトン付近のローヤルゼリー主要蛋白１のバンドのみが明瞭に確認される（＋＋）、薄いながら５２．８キロダルトン付近のローヤルゼリー主要蛋白１のバンドのみが確認される（＋）、バンドが認められない（−）の５段階で評価した。【００６０】
＜ヒドロキシデセン酸のＨＰＬＣ分析条件＞
標準液：市販のヒドロキシデセン酸（アルフレッサファーマ株式会社社販売）を希釈して使用
カラム：逆相系カラム（ＹＭＣ−Ｐａｃｋ  ＡＱ３０３−ＯＤＳ
（φ４．６ｍｍ×２５０ｍｍ、株式会社ワイエムシィ販売））
カラム温度：４０℃
検出器：ＵＶ２１０ｎｍ  移動相：６０％メタノール（リン酸でｐＨを２．２に調整したもの）
流速：０．７ｍＬ／分、サンプル量：２０μＬ【００６１】
【表２】
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【００６２】
表２から明らかなように、試験試料１（ローヤルゼリー分画物）では、精製の始発原料として使用した試験試料３（生ローヤルゼリー水希釈溶液）と較べて、ヒドロキシデセン酸量は、約７０％回収され、蛋白質量は０．０３％にまで減少した。これに対して、試験試料２（既存精製ローヤルゼリー）では、試験試料３（生ローヤルゼリー水希釈溶液）と較べて、ヒドロキシデセン酸量が、約６０％に減少するとともに、蛋白質量は８％にまで減少した。また、ＳＤＳ−ＰＡＧＥの結果は、蛋白質量の測定結果と相関し、試験試料２（既存精製ローヤルゼリー）では蛋白質バンドは（＋）と判定され、５２．８キロダルトン付近にローヤルゼリー主要蛋白１のバンドのみがわずかに確認された。試験試料１（ローヤルゼリー分画物）では、蛋白質のバンドは認められず（−）と判定された。ヒドロキシデセン酸と窒素の質量比は、試験試料１では、１：０．１５であったのに対し、試験試料２では１：０．５６、試験試料３では１：０．９１であった。また、試験試料１では、アレルゲン性が認められずマイナス（−）と判定されたのに対して、試験試料２では３プラス（＋＋＋）、試験試料３では５プラス（＋＋＋＋＋）と判定された。また、コラーゲン産生増強作用及びＩＬ−４産生抑制作用は、何れの試験試料でも確認された。【００６３】
これらの結果は、試験試料１では、アレルゲン性が認められず、且つ、生ローヤルゼリーの有用な生理活性に関与する成分であるヒドロキシデセン酸量があまり減少することなく、蛋白質量が低減されていることを示している。また、ヒドロキシデセン酸に対する窒素の質量率は、試験試料中の蛋白質量の減少に比例して低下し、試験試料１で最も低くなった。なお、生ローヤルゼリー水希釈溶液を分画分子量が６，０００の限外濾過膜で濾過した限外濾過液（試験試料ｌ：ローヤルゼリー分画物）は、コラーゲン産生増強作用及びＩＬ−４産生抑制作用を有していることから、生ローヤルゼリーの持つ生理活性は保持されていると判断した。【００６４】
＜実験３：ｐＨ調整ローヤルゼリー分画物中のヒドロキシデセン酸の溶解性と着色＞【００６５】
＜ヒドロキシデセン酸の溶解性に及ぼすｐＨの影響＞
ローヤルゼリーに含まれる有機酸の一つであるヒドロキシデセン酸を指標にして、ｐＨの及ぼす影響を調べる試験を以下のように行った。すなわち、実験２で使用した、試験試料１（ローヤルゼリー分画物）を常法により凍結乾燥して、その粉末品を調製した。この粉末品を過剰量（水に溶解してｐＨ処理した後もヒドロキシデセン酸が完全に溶解しない量）を、定量の脱イオン水（２５℃）に加えて、３０分間スターラーで攪拌溶解した後、６規定（Ｎ）の水酸化ナトリウム溶液加えて、表３に示すｐＨに調整し、さらに、３０分間スターラーで攪拌し、１５，０００ｒｐｍ、３０分間遠心して、上清を回収し、その上清のｐＨを測定後、上清中のヒドロキシデセン酸量を測定して、当該ローヤルゼリー分画物におけるヒドロキシデセン酸の溶解度として表３に併せて示す。また、回収した上清の着色（褐変の程度）の有無を、肉眼で確認した結果を表３に併せて示す。なお、ヒドロキシデセン酸量は、実験１と同様の方法で測定した。上清の着色の程度は、径が１２ｍｍの円筒形のキャップ付きのガラス瓶に入れ、真横からの肉眼観察により、着色がない（−）、薄い着色が認められる（＋）、溶液の褐変がはっきりと確認できる（＋＋）、着色が顕著（＋＋＋）の４段階で評価した。さらに、ヒドロキシデセン酸の溶解度の測定に使用したｐＨ５．０或いはこれより高いｐＨの試料（回収した上清）を２５℃に加温し、ヒドロキシデセン酸の濃度が５ｍｇ／ｍＬとなるように２５℃の脱イオン水でそれぞれ希釈して、これらを、ガラス製のキャップ付きガラス瓶に入れたものを、４℃に冷却した状態で２時間静置後、沈殿の発生の有無を肉眼観察により確認した。その結果も併せて表３に示す。また、実験１と同じ方法で、そのアレルゲン性及びコラーゲン産生増強作用の有無を測定し、併せて表３に示す。【００６６】
【表３】
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【００６７】
表３から明らかなように、２５℃におけるローヤルゼリー分画物のヒドロキシデセン酸の溶解度は、ｐＨ５．０以上で上昇し、ｐＨ５．５以上で急激に上昇し、ｐＨ６．０以上で顕著な上昇が認められた。また、ローヤルゼリー分画物は、ｐＨ９．０以上で着色が認められた。着色の程度は、ローヤルゼリー分画物がｐＨ１０．０乃至１２．０で＋＋と判定され、ｐＨ１３．０では＋＋＋と判定された。また、溶液を冷却した際の沈殿の発生は、試験試料のｐＨを、５．０以上、望ましくは５．５以上に調整すると抑制され、その効果はｐＨ６．０以上で顕著となった。この結果は、ローヤルゼリー分画物は、そのｐＨを、５．０以上、望ましくは５．５以上、さらに望ましくは６．０以上とすることにより、ヒドロキシデセン酸の溶解度を、顕著に上げることができることを物語っている。また、着色の点からは、ｐＨ１０．０乃至１２．０では、着色がはっきりと確認でき、ｐＨ１３．０では特に顕著となったので、白色系や無色系の組成物の調製に使用するためには、ローヤルゼリー分画物のｐＨが、５．０乃至９．５が望ましく、６．０乃至８．５が特に望ましいと判断した。なお、着色を除けば、ローヤルゼリー分画物のｐＨの上限に特に制限はないものの、限外濾過膜の耐性の点を考慮すれば、通常、ｐＨは１２．０以下が望ましい。また、この結果は、限外濾過前に、予め生ローヤルゼリーのｐＨを調整することによって、限外濾過液中のヒドロキシデセン酸の溶解度を上げることができるので、ローヤルゼリー分画物を調製する際に、生ローヤルゼリーからのヒドロキシデセン酸等の溶解度の低い有機酸の回収率を改善することができることを物語っている。【００６８】
＜実験４：ローヤルゼリー分画物のアレルゲン性試験＞
実験３で、生ローヤルゼリーのｐＨを調整するとヒドロキシデセン酸等の回収率が改善することが示されたことから、予めｐＨ調整した生ローヤルゼリーを限外濾過して調製したローヤルゼリー分画物のアレルゲン性を調べる試験を以下のように行った。すなわち、実験２使用したものと同じ生ローヤルゼリーを、水で５倍に希釈し、６Ｎの水酸化ナトリウムでｐＨを７．２に調整した後、実験２の試験試料１と同じ調製方法で、限外濾過膜を使用して分画した試験試料（以下、「ｐＨ調整試験試料」という。）（ｐＨ調整ローヤルゼリー分画物）を調製し、このｐＨ調整試験試料に加え、実験２で調製した試験試料１（ｐＨ未調整ローヤルゼリー分画物）、試験試料２（既存精製ローヤルゼリー）及び試験試料３（生ローヤルゼリー水希釈溶液）を用いて、ヒドロキシデセン酸が表４に示す量の試料を使用した以外は、実験１と同じ方法で調べた。なお、ラットを使用したＰＣＡには、これらの試料を免疫したマウスの血清を、１０倍、２０倍、１００倍及び２００倍に希釈して評価を行い、その結果を表４に示す。ｐＨ調整試験試料又は試験試料１で免疫したマウスの血清については、アレルゲン性が認められなかったので、１０倍希釈及び２０倍希釈した場合の結果のみを、試験試料２又は試験試料３で免疫したマウス血清については、強いアレルゲン性が認められたので、１００倍希釈及び２００倍希釈した場合の結果のみを示す。また、免疫に使用した各試験試料中のヒドロキシデセン酸量及びヒドロキシデセン酸と蛋白質との質量比を表４に併せて示す。【００６９】
【表４】
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【００７０】
表４から明らかなように、ローヤルゼリーのアレルゲン性は、４５μｇのヒドロキシデセン酸を含有する量のｐＨ調整試験試料（ｐＨ調整ローヤルゼリー分画物）又は３０μｇのヒドロキシデセン酸を含有する量の試験試料１（ｐＨ未調整ローヤルゼリー分画物）で免疫したマウスでは、その１０倍希釈及び２０倍希釈した血清を使用した場合でも、ＰＣＡ反応陽性を示す血清を有するマウス個体は１匹も認められなかった。これらに対して、３０μｇのヒドロキシデセン酸を含有する量の試験試料２（既存精製ローヤルゼリー）を免疫した場合には、４５μｇのヒドロキシデセン酸を含有する量のその１００倍希釈及び２００倍希釈した血清で、それぞれ３プラス（＋＋＋）、１プラス（＋）と判定され、試験試料３（生ローヤルゼリー水希釈溶液）で免疫した場合には、その１００倍希釈及び２００倍希釈した血清で、それぞれ４プラス（＋＋＋＋＋）、３プラス（＋＋＋）と判定された。この結果は、生ローヤルゼリー（試験試料３）と比較して、国際公開ＷＯ２００４／２１８０３号明細書記載の既存精製ローヤルゼリー（試験試料２）のアレルゲン性は低下しているものの、依然として、かなり強いアレルゲン性を有していることを物語っている。これに対して、予めｐＨを調整して限外濾過を行った生ローヤルゼリーの限外濾過液（ｐＨ調整試験試料）は、ｐＨ未調整ローヤルゼリー分画物（試験試料１）と同様に、アレルゲン性が低減されていることが判明した。【００７１】
＜実験５：ローヤルゼリー中の蛋白質濃度が及ぼすアレルゲン性への影響＞
実験２及び実験４の結果から、ローヤルゼリーに含まれる蛋白質にアレルゲン性のあることがうかがえるので、生ローヤルゼリー中の蛋白質の濃度の及ぼすアレルゲン性への影響を調べる実験を以下のように行った。すなわち、実験４で調製したｐＨ調整試験試料に、その調製の際に生成した、限外濾過膜の内液を加えて、生ローヤルゼリー由来のヒドロキシデセン酸と蛋白質とが、表５に記載された質量比率となるように試験試料を調製した。これらの試験試料のアレルゲン性を、実験１と同じ方法で、４５μｇのヒドロキシデセン酸を含有する量の各試験試料をマウスに免疫し、ラットを使用したＰＣＡにより評価して、その結果を表５に併せて示す。なお、ラットを使用したＰＣＡでは、ヒドロキシデセン酸と蛋白質の質量比が、１：０．０５或いはそれよりも蛋白質量が少ない試験試料で免疫したマウスの血清については、何れも１００倍又は２００倍希釈の血清ではＰＣＡ陽性反応は認められなかったので、その１０倍希釈及び２０倍希釈した場合の結果のみを示す。また、ヒドロキシデセン酸と蛋白質との質量比が、１：０．２或いはそれよりも蛋白質量が多い試験試料で免疫したマウス血清については、何れも１０倍希釈及び２０倍希釈の血清では３プラス（＋＋＋）以上の強いＰＣＡ陽性反応が認められたので、その１００倍希釈及び２００倍希釈したものを使用した場合の結果のみを示す。【００７２】
【表５】
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【００７３】
表５から明らかなように、４５μｇのヒドロキシデセン酸を含有する試験試料で免疫したとき、当該試験試料のヒドロキシデセン酸と蛋白質との質量比が、１：０．２或いはそれよりも蛋白質量が多い比率の試験試料で免疫したマウスの血清では、２００倍希釈の血清でもＰＣＡ陽性となり試験試料に強いアレルゲン性が確認され、１：０．０５の試験試料で免疫したマウスの血清では、１０倍希釈の血清でのみＰＣＡ陽性となり、弱いながら試験試料にアレルゲン性が確認された。これらの試験試料に対して、ヒドロキシデセン酸と蛋白質との質量比が、１：０．０２或いはそれよりも蛋白質量が少ない比率の試験試料で免疫したマウスの血清では、１０倍希釈の血清でもＰＣＡ陰性となりアレルゲン性は全く認められなかった。この結果は、生ローヤルゼリーに含まれるヒドロキシデセン酸と蛋白質との比率を、ヒドロキシデセン酸１質量部に対して蛋白質を０．０５質量部未満、望ましくは、ヒドロキシデセン酸１質量部に対して蛋白質を０．０２質量部以下含有するまでに低減することにより、ローヤルゼリーのアレルゲン性を効果的に低減できることを物語っている。【００７４】
＜実験６：ローヤルゼリー分画物、既存精製ローヤルゼリー及び生ローヤルゼリーの持つ生理活性の比較＞
実験１乃至３において、限外濾過膜で分画したローヤルゼリー分画物に、生ローヤルゼリーの持つコラーゲン産生増強作用が保持されていることが確認されたので、生ローヤルゼリーの持つその他の生理活性についても保持されているかどうかを確認する試験を以下のように行った、すなわち、実験４で使用したｐＨ調整試験試料及び試験試料１乃至３の生理活性について、表６に示す生理活性の有無と、その程度について調べて、その結果を表６に併せて示した。なお、各試験は、何れの試験試料も、その試験試料の調製に使用した、生ローヤルゼリーに換算して等量となる量を使用した。各生理活性の有無は、試験試料３（生ローヤルゼリー水希釈溶液）の場合の活性（○）、これと同等の活性（○）、活性はあるが試験試料３より弱い活性（△）、活性がない（×）の３段階で評価した。なお、表６に示す生理活性の測定方法は、コラーゲン産生増強作用及びＩＬ−４産生抑制作用の測定は、試験試料として、その試験試料の調製に使用した、生ローヤルゼリーに換算して等量となる量を使用した以外、実験１と同じ方法で実施した。また、ＴＮＦ−αは、国際公開ＷＯ２００４／０１９９７１号明細書の実験５−２に記載されたＩＦＮ−γ及びリポポリサッカライドで刺激したＢＡＬＢ／ｃマウス腹腔内細胞によるＴＮＦ−α産生系を使用した方法で、血清ＩｇＥ抑制作用は、『Ｎａｔｕｒａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅｓ』、第５５巻、第１７４乃至１８０頁（２００１年）の第１７５乃至１７６頁の材料と方法の項に記載の方法に基づき、アレルゲンとして卵白アルブミンに代えてスギ花粉アレルゲン（株式会社林原生物化学研究所調製）を使用して行った。また、抗アトピー作用は、『Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ』、第３巻、第１３１３乃至１３２４頁（２００３年）の第１３１４乃至１３１８頁の材料と方法（Ｍａｔｅｒｉａｌｓ  ａｎｄ  Ｍｅｔｈｏｄｓ）の項に記載の方法で、接触過敏症抑制作用は、『Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ』、第４１０巻、第９３乃至１００頁（２０００年）の第９４乃至９５頁の材料と方法（Ｍａｔｅｒｉａｌｓ  ａｎｄ  Ｍｅｔｈｏｄｓ）の項に記載の方法で判定した。また、精巣機能活性化作用の有無は、国際公開ＷＯ０１／０６０３８８号明細書の実験３に記載された方法に準じて、ハムスターを使用して下記に示す方法で行った。【００７５】
＜精巣機能活性化作用の測定方法＞
生ローヤルゼリーとしての質量換算で、飼料の総質量あたりの添加量が５０ｐｐｍとなるように、ｐＨ調整した試験試料又は試験試料１乃至３を添加して粉末飼料を調製した。また、ｐＨ調整した試験試料に代えて、同質量の、無水トレハロース（後述の実施例５に記載の方法で調製）を添加した対照粉末飼料を調製した。５０匹の２６週齢の雄性ハムスターを対照粉末飼料で１週間飼育した後、無作為に、１０匹ずつ５群に分け、各群に試験試料の何れかを添加した粉末飼料或いは対照粉末飼料を、粉末飼料用の市販の給餌器を介して自由摂取させつつ１２週間飼育した。この飼育期間の終了後、各個体の精巣機能を、以下のとおり精巣標本を解析することにより調べた。すなわち、先ず、全ての個体より１個の精巣（右側）を摘出し、常法に従って、１５％中性緩衝ホルマリン液で固定して精巣組織標本を作製した。この標本の切片を作製し、ヘマトキシリン−エオシン（イオシン）染色した後、顕微鏡観察下、精細管を組織学的に解析した。各標本において、任意の５箇所を１００倍の倍率で目視し、１視野内の精細管の数を計測するとともに、計測された精細管を、退行性変化を示すもの（精細胞の変性・消失、精細管の空洞など）と、組織構造が堅持された、造精の活発なものとに分類した。各群について、全精細管に対する造精の活発な精細管の占有率（％）を計算して、その占有率が、対照粉末飼料で飼育した場合と比較して、試験試料３を含有する餌を摂取させた場合の上昇（○）、これと同等の上昇（○）、上昇はあるが試験試料３を含有する餌を摂取させた場合よりも低い上昇（△）、又は、上昇がない（×）の３段階で判定した。【００７６】
【表６】
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【００７７】
表６から明らかなように、ｐＨ調整試験試料（ｐＨ調整ローヤルゼリー分画物）は、表６に示す何れの生理活性についても、試験試料３（生ローヤルゼリー水希釈溶液）と、同等の活性が保持されていた。また、試験試料１（ｐＨ未調整ローヤルゼリー分画物）は、測定した７種類の生理活性のうちＴＮＦ−α産生抑制作用、抗アトピー作用及びハムスター精巣機能活性化作用については、試験試料３（生ローヤルゼリー水希釈溶液）よりも活性が低下していたものの他の４種類の活性は試験試料３と同等の活性が保持されていた。これに対して、試験試料２（既存精製ローヤルゼリー）を使用した場合には、表６に示す何れの生理活性についても試験試料３（生ローヤルゼリー水希釈溶液）よりも弱い活性しか保持されていなかった。この結果は、生ローヤルゼリーを限外濾過膜で分画した限外濾過液（ｐＨ調整試験試料及び試験試料１）は、試験試料２（既存精製ローヤルゼリー）に比して、生ローヤルゼリーの持つ生理活性の保持の点で優れており、その保持性の高さからは、生ローヤルゼリーを予めｐＨを調整して限外濾過した限外濾過液（ｐＨ調整試験試料）が特に優れていることが判明した。【００７８】
＜実験７：ローヤルゼリー分画物、既存精製ローヤルゼリー及び生ローヤルゼリーの持つ美白作用の比較＞
ローヤルゼリーに含まれているヒドロキシデセン酸などのカルボン酸にはチロシナーゼ活阻害作用があるといわれている（例えば、特開平９−３１５９２８号公報参照）。そこで、ローヤルゼリー分画物及び生ローヤルゼリーの持つ美白作用を比較する試験を以下のように行った。すなわち、６穴プレート（ベクトンディッキンソン社販売）に、１０％ＦＣＳ（ｖ／ｖ）含むＲＰＭＩ−１６４０培地（シグマ  アルドリッチ社販売）に浮遊させたＢ１６メラノーマ細胞を４．０×１０４個／２ｍＬ／ウエルとなるように播種して細胞をプレートに付着させた。培養上清を除去後、実験４で使用したｐＨ調整試験試料及び試験試料１乃至３を、１０％ＦＣＳ（ｖ／ｖ）含むＲＰＭＩ−１６４０培地で希釈して、これらの試料に含まれるヒドロキシデセン酸の終濃度が表７に示す濃度となるように希釈して、４ｍＬ／ウエルで添加した。また、陽性対照として、Ｂ１６メラノーマ細胞のメラニン産生を抑制することが知られているコウジ酸、Ｌ−アスコルビン酸２−グルコシド（株式会社林原生物化学研究所販売、商品名「ＡＡ２Ｇ」、以下「ＡＡ−２Ｇ」と略記する。）及びヒドロキシデセン酸（アルフレッサファーマ株式会社販売）を１０％ＦＣＳ（ｖ／ｖ）含むＲＰＭＩ−１６４０培地で終濃度が表７に示す濃度となるように希釈して、４ｍＬ／ウエルで添加した。陰性対照として１０％ＦＣＳ（ｖ／ｖ）含むＲＰＭＩ−１６４０培地を加えて培養した。培養は、３７℃、５％（ｖ／ｖ）ＣＯ２下で４日間培養し、何れのウエルも、培養２日目に最初に添加した試料又は陽性対照と同じ濃度の培地で培地交換を行った。培養開始４日後に、トリプシン−ＥＤＴＡ（トリプシン濃度０．０５％、ギブコ  インビトロジェン社販売）を５００μＬ／ウエルで添加してＢ１６メラノーマ細胞をハーベスト後、１．５ｍＬ容のエッペンドルフチューブに回収した。この細胞を回収したチューブを、５分間遠心（６０００ｒｐｍ）して、上清を除去し、ダルベッコの生理食塩水（ＰＢＳ（−））を加えて、細胞を１回洗浄した。再度、５分間遠心（６０００ｒｐｍ）後、上清を除去し、１ＮのＮａＯＨを２５０μＬ／チューブで添加し、細胞を可溶化して、実験２と同様にブラッドフォード法にて蛋白質量を定量し、各ウエル中の総蛋白質量を求めた。上記ＮａＯＨ可溶化物のうち、蛋白質の定量に使用した残部を、３０分間煮沸して、４５０ｎｍの吸光度を測定した（Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  ６５０ｎｍ）した。既知濃度のメラニン（シグマ社）を適宜希釈して、同様にアルカリ処理し、吸光度を測定して検量線を作成し、試験試料、陽性対照又は陰性対照を加えて培養したＢ１６メラノーマ細胞中の総メラニン量を求めた。試験試料又は陽性対照を添加して培養したときの総蛋白質量又は総メラニン量を、各々、陰性対照を添加して培養したときの総蛋白質量又は総メラニン量で除し、１００倍して、陰性対照を添加して培養したときの総蛋白質量又は総メラニン量を１００％とする相対値を求めて、表７に併せて示す。【００７９】
【表７】
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【００８０】
表７から明らかなように、試験試料及び陽性対照を添加した培地で培養した場合には、何れもその濃度に依存したメラニン生成の抑制が認められた。メラニン生成の抑制の強さの点からは、ｐＨ調整試験試料及び試験試料１が最も強く、陽性対照として使用したコウジ酸にも強い活性が認められた。ヒドロキシデセン酸やＡＡ−２Ｇは、試験に使用した濃度では弱いメラニンの生成抑制作用しか示さなかった。また、試験試料２及び試験試料３を添加した場合には、ｐＨ調整試験試料及び試験料１を添加した場合よりもメラニン生成の抑制作用が弱く、しかも、総蛋白量も低いことが判明した。この結果は、ローヤルゼリー分画物のメラニン生成抑制作用がヒドロキシデセン酸以外の成分に由来することを物語っている。さらに、試験試料１と２とは、ヒドロキシデセン酸の濃度が同一の場合で比較しても試験試料１の方が試験試料２よりも強いメラニン生成抑制活性を示し、逆に、総蛋白量は高かったことから、限外濾過などにより、高分子画分を除去することにより、生ローヤルゼリー中のメラニン生成抑制活性を抑制していた成分や細胞の代謝を阻害する成分が除去乃至低減されて、ローヤルゼリーのもつメラニン生成抑制活性が増強されると共に、代謝の阻害は低減したことを物語っている。また、ＡＡ−２ＧとｐＨ調整試験試料とを、培地に同時に添加した場合には、その各々を単独で添加した場合よりも強くメラニンの生成が抑制されたことから、本発明のローヤルゼリー分画物とＡＡ−２Ｇとは、相加的にメラニン生成を抑制することができると判断した。【００８１】
＜実験８：ローヤルゼリー分画物の粉末化に及ぼす粉末化基剤の影響＞
ローヤルゼリー分画物には、糖質及びアミノ酸類が多量に含まれているので、その水溶液をそのまま噴霧乾燥などにより乾燥すると、褐変が著しく、吸湿性にも問題があるので、これらの問題を解決するためにローヤルゼリー分画物の粉末化に及ぼす粉末化基剤の影響を調べる試験を以下のように行った。すなわち、表８に示す、デキストロースイクイバレント（ＤＥ）の異なる７種類のデキストリン及びグルコースの何れか３７質量部（固形物換算）と、実験２で調製したローヤルゼリー分画物３質量（固形分換算）とを混合し、常法により、凍結乾燥して、ローヤルゼリー分画物の粉末標品を各々調製した。この粉末０．５ｇを５ｍＬの精製水に溶解し、４２０ｎｍの吸光度を測定した。また、残りのローヤルゼリー分画物の粉末を、粉末化に使用した個々の粉末基剤ごとにそれぞれ４個のアルミピロー容器に封入し、６０℃、相対湿度８５％の条件で４週間保存した。保存開始１週間から１週間ごとに、個々の粉末化基剤について、それぞれ１個の容器を開封して、保存開始時と同様に精製水に溶解して４２０ｎｍの吸光度を測定した。その結果を表８に併せて示す。また、別途、粉末化基剤として使用した個々のデキストリン及びグルコース自体の水への溶解性併せて確認した。すなわち、２０ｍＬビーカー（直径３０ｍｍ）に、表８に示すデキストリン又はグルコースの何れか１０ｇとイオン交換水５ｇを入れて、スターラーで攪拌して、目視により、デキストリンが完全に溶解したかどうかを確認した。不溶物が残っている場合には、目視で確認しながら、さらにイオン交換水を少しずつ添加して攪拌を続け、デキストリンが完全に溶解するために必要な最少のイオン交換水量を計測して、その結果を表８に併せて示す。なお、試験には市販のデキストリン（松谷化学株式会社販売、商品名「パインデックス  ＃１」、三和澱粉株式会社販売、商品名「サンデック  ＃７０、＃１００、＃１５０、＃２５０及び＃３００」：各々表８の試料１乃至６に対応）を使用した。【００８２】
【表８】
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【００８３】
表８から明らかなように、グルコースを粉末化基剤として使用した場合には、保存１週間で褐変が発生した。また、ＤＥ２８．２またはＤＥ２１．３のデキストリンを使用した場合には、保存２週間で、吸光度が０．３以上となり強い褐変が発生した。これに対して、ＤＥが１６．７以下のデキストリンを使用した場合には、保存４週間でも、ＤＥ０．３以下と低く、ＤＥが２１．３以上のデキストリンやグルコースを粉末化基剤として使用した場合に比して、褐変の進行は抑制された。また、粉末化基剤そのもの水へ溶解性は、ＤＥが小さくなるにつれて低下した。この結果は、本発明のローヤルゼリー分画物の粉末化には、粉末化基剤としてＤＥが１６．７以下のデキストリンが望ましく、１１．５以下のデキストリンが特に望ましいことを物語っている。また、本発明のローヤルゼリー分画物の粉末の水への溶解性を考慮すると、ＤＥが６．１のデキストリンよりも、ＤＥが７．１以上のデキストリンが望ましいと判断した。【００８４】
以下に、具体的な実施例を挙げて本発明をさらに詳しく説明するが、本発明はこれらの実施例によって何ら限定されるものではない。
【実施例１】
【００８５】
＜ローヤルゼリー分画物の調製＞
生ローヤルゼリー（ブラジル産）１０ｋｇに、４℃の脱イオン水４０ｋｇを加えて攪拌し、均一に分散させた。次いで、この懸濁液を連続遠心分離機（株式会社久保田製作所製、モデルＫＴ−２０００Ｇ）を用いて、１０，０００×ｇ、流速１０Ｌ／ｈｒの条件で遠心分離し、上清と沈殿とに分離した。得られた上清に６Ｎの水酸化ナトリウムを添加して、ｐＨを７．２に調整した後、分画分子量６，０００ダルトンの限外濾過膜（旭化成販売、商品名「ＡＩＰ２０１３」で濾過した。少量の脱イオン水にて水押しし、限外濾過液と限外濾過濃縮液とに分離した。この限外濾過液約４０Ｌを減圧濃縮法により約５ｋｇまで濃縮して、ローヤルゼリー分画物を調製した。本品は、生ローヤルゼリーのもつコラーゲン産生増強作用、ＩＬ−４産生抑制作用、精巣機能活性化作用などの有用な生理活性が保持されていることに加えて、その溶解性が生ローヤルゼリーに比して向上している。また、本品はローヤルゼリーの有用な生理活性が保持されており、且つ、アレルゲン性が生ローヤルゼリーや既存精製ローヤルゼリーの場合に比して低減されているので、そのままで、粉末化して、或いは、この粉末を造粒又は打錠して、健康補助食品として使用することができる。また、本品は、飲食物、飼料、餌料、ペットフード、化粧品、医薬品、医薬部外品、又雑貨組成物などの組成物の調製に有利に利用できる。【００８６】
本品を、実験２の方法により、分析したところ、ｐＨ７．０、蛋白質の回収率０．００３％となり、ＳＤＳ−ＰＡＧＥによる蛋白質バンドは認められず、アレルゲン性（本品で免疫したマウス血清を１０倍希釈して分析）は認められなかった。ヒドロキシデセン酸と蛋白質との質量比は１：０．０００１、ヒドロキシデセン酸と窒素量の質量比は１：０．１５であった。
【実施例２】
【００８７】
＜ローヤルゼリー分画物の調製＞
生ローヤルゼリー（中国産、ヒドロキシデセン酸２２．８ｍｇ／ｇ、蛋白質１２０ｍｇ／ｇを含有）２０ｋｇに、４℃の脱イオン水８０ｋｇを加えて攪拌し、均一に分散させた。次いで、この懸濁液に、６Ｎの水酸化ナトリウムを加えてｐＨを７．５に調整し、分画分子量６，０００ダルトンの限外濾過膜（旭化成販売、商品名「ＡＩＰ２０１３」で濾過した。少量の脱イオン水にて水押しし、限外濾過液と限外濾過濃縮液とに分離した。この限外濾過液約１６０Ｌを減圧濃縮法により、４０℃で約４０ｋｇまで濃縮して、ローヤルゼリー分画物を調製した。本品は、生ローヤルゼリーのもつコラーゲン産生増強作用、ＩＬ−４産生抑制作用、精巣機能活性化作用などの有用な生理活性が保持されていることに加えて、生ローヤルゼリーに含まれるヒドロキシデセン酸の回収率は９６％とほとんどロスもなく、しかも、ヒドロキシデセン酸の溶解性が生ローヤルゼリーに比して向上している。また、本品はローヤルゼリーの有用な生理活性が保持されており、且つ、アレルゲン性が生ローヤルゼリーや既存精製ローヤルゼリーの場合に比して低減されているので、そのままで、粉末化して、或いは、この粉末を造粒又は打錠して、健康補助食品として使用することができる。また、本品は、飲食物、飼料、餌料、ペットフード、化粧品、医薬品、医薬部外品、又雑貨組成物などの組成物の調製に有利に利用できる。さらに、本品又は本品を含有する組成物は、そのままで、或いは、濃厚飼料、粗飼料、ペットフードなどの飼料・餌料に添加したり、飲料水に溶解して経口的に、種馬、種牛、種豚などの繁殖用動物の雄に摂取させることにより、これら動物の精巣機能を活性化して、繁殖率を向上させることができる。【００８８】
本品を、実験２の方法により、分析したところ、ｐＨ７．０、蛋白質の回収率０．００５％となり、ＳＤＳ−ＰＡＧＥによる蛋白質バンドは認められず、アレルゲン性（本品で免疫したマウス血清を１０倍希釈して分析）は認められなかった。ヒドロキシデセン酸と蛋白質との質量比は１：０．０００１、ヒドロキシデセン酸と窒素量の質量比は１：０．１１であった。
【実施例３】
【００８９】
＜ローヤルゼリー分画物の調製＞
生ローヤルゼリー（中国産）０．５ｋｇに、４℃の脱イオン水２ｋｇを加えて攪拌し、均一に分散させた。次いで、この懸濁液に６Ｎの水酸化ナトリウムを加えて、ｐＨを６．５に調整後、１０，０００×ｇで遠心分離し、上清と沈殿に分離した。得られた上清２．４Ｌを減圧濃縮法により約０．５ｋｇまで濃縮し、これをトーヨーパールＨＷ−４０Ｆゲル（株式会社東ソー販売）を用いたゲル濾過クロマトグラフィーに供した。脱イオン水にて溶出し、分子量６，０００以下の低分子画分を回収し、減圧エバポレーター（柴田科学株式会社製、ＲＥ−１０Ｅ−１００型）を用いて４０℃で０．２５ｋｇにまで濃縮して、ローヤルゼリー分画物（ｐＨ６．７）を調製した。本品は、ヒドロキシデセン酸の溶解性が生ローヤルゼリーに比して向上している。また、本品は、生ローヤルゼリーのもつコラーゲン産生増強作用、ＩＬ−４産生抑制作用、精巣機能活性化作用などの有用な生理活性が保持されており、且つ、アレルゲン性が生ローヤルゼリーや既存精製ローヤルゼリーの場合に比して低減されているので、そのままで、粉末化して、或いは、この粉末を造粒又は打錠して、健康補助食品として使用することができる。また、本品は、飲食物、飼料、餌料、ペットフード、化粧品、医薬品、医薬部外品、又雑貨組成物などの組成物の調製に有利に利用できる。さらに、本品又は本品を含有する組成物は、そのままで、或いは、濃厚飼料、粗飼料、ペットフードなどの飼料・餌料に添加したり、飲料水に溶解して経口的に、種馬、種牛、種豚などの繁殖用動物の雄に摂取させることにより、これら動物の精巣機能を活性化して、繁殖率を向上させることができる。
【実施例４】
【００９０】
＜ローヤルゼリー分画物の調製＞
生ローヤルゼリー（台湾産）０．５ｋｇに、４℃の脱イオン水４ｋｇを加えて攪拌し、均一に分散させた。次いで、１０，０００×ｇで遠心分離し、上清と沈殿に分離した。得られた上清約４．４Ｌを減圧濃縮法により約０．５ｋｇまで濃縮し、１０，０００×ｇで遠心分離し、上清と沈殿に分離した。この上清をトーヨーパールＨＷ−４０Ｆゲル（株式会社東ソー販売）を用いたゲル濾過クロマトグラフィーに供した。脱イオン水にて溶出し、分子量６，０００以下の低分子画分を回収し、減圧エバポレーター（柴田科学株式会社製、ＲＥ−１０Ｅ−１００型）を用いて４０℃で０．５ｋｇにまで濃縮して、ローヤルゼリー分画物（ｐＨ６．７）を調製した。本品は、生ローヤルゼリーのもつコラーゲン産生増強作用、ＩＬ−４産生抑制作用、精巣機能活性化作用などの有用な生理活性が保持されており、且つ、アレルゲン性が生ローヤルゼリーや既存の精製ローヤルゼリーに比して低減されているので、そのままで、粉末化して、或いは、この粉末を造粒又は打錠して、健康補助食品として使用することができる。また、本品は、飲食物、飼料、餌料、ペットフード、化粧品、医薬品、医薬部外品、又雑貨組成物などの組成物の調製に有利に利用できる。
【実施例５】
【００９１】
＜ローヤルゼリー分画物粉末の製造＞
市販のα，α−トレハロースの含水結晶（株式会社林原商事販売、商品名「トレハ」）を、ジャケット付き回転式真空乾燥機を用いて、温度９０℃、気圧３００乃至３５０ｍｍＨｇの条件で約７時間減圧乾燥した。その後、温度を常温に、気圧を常圧に戻して、製品を回収し、無水α，α−トレハロースを得た。この無水α，α−トレハロース８ｋｇを流動層造粒機（不二パウダル株式会社販売、型番「２０Ｆ（Ｇ）」）に入れ、実施例２の方法で調製したローヤルゼリー分画物９ｋｇを噴霧して、ローヤルゼリー分画物の乾燥物９ｋｇを調製した。さらにこれを万能混合機（ダルトン社販売、型番「６０ＭＤ−ｒｒｓ」）で粉砕して、ローヤルゼリー分画物含有粉末を調製した。本品は、生ローヤルゼリーのもつコラーゲン産生増強作用、ＩＬ−４産生抑制作用、精巣機能活性化作用などの生理活性が保持されており、且つ、アレルゲン性が生ローヤルゼリーや既存の精製ローヤルゼリーに比して低減されているので、そのままで、造粒して、或いは、打錠して健康補助食品として使用することができる。また、本品は、飲食物、飼料、餌料、ペットフード、化粧品、医薬品、医薬部外品、又雑貨組成物などの組成物の調製に有利に利用できる。さらに、本品又は本品を含有する組成物は、そのままで、或いは、濃厚飼料、粗飼料、ペットフードなどの飼料・餌料に添加したり、飲料水に溶解して経口的に、種馬、種牛、種豚などの繁殖用動物の雄に摂取させることにより、これら動物の精巣機能を活性化して、繁殖率を向上させることができる。
【実施例６】
【００９２】
＜ローヤルゼリー分画物粉末の製造＞
α，α−トレハロースの含水結晶（株式会社林原商事販売、商品名「トレハ」）８ｋｇを流動層造粒機（不二パウダル株式会社販売、型番「２０Ｆ（Ｇ）」）に入れ、実施例２の方法で調製したローヤルゼリー分画物９ｋｇを噴霧して、ローヤルゼリー分画物の乾燥物９ｋｇを調製した。さらにこれを万能混合機（ダルトン社販売、型番「６０ＭＤ−ｒｒｓ」）で粉砕して、ローヤルゼリー分画物含有粉末を調製した。本品は、生ローヤルゼリーのもつコラーゲン産生増強作用、ＩＬ−４産生抑制作用、精巣機能活性化作用などの有用な生理活性が保持されており、且つ、アレルゲン性が生ローヤルゼリーや既存の精製ローヤルゼリーに比して低減されているので、そのままで、造粒して、或いは、打錠して健康補助食品として使用することができる。また、本品は、飲食物、飼料、餌料、ペットフード、化粧品、医薬品、医薬部外品、又雑貨組成物などの組成物の調製に有利に利用できる。さらに、本品又は本品を含有する組成物は、そのままで、或いは、濃厚飼料、粗飼料、ペットフードなどの飼料・餌料に添加したり、飲料水に溶解して経口的に、種馬、種牛、種豚などの繁殖用動物の雄に摂取させることにより、これら動物の精巣機能を活性化して、繁殖率を向上させることができる。
【実施例７】
【００９３】
＜ローヤルゼリー分画物粉末の製造＞
固形物換算で、実施例２の方法で調製したローヤルゼリー分画物１質量部に対して、α，α−トレハロースの糖質誘導体含有糖質（株式会社林原生物化学研究所販売、商品名「トルナーレ」）５質量部を添加して、常法により、噴霧乾燥して、ローヤルゼリー分画物粉末を調製した。本品は、生ローヤルゼリーのもつコラーゲン産生増強作用、ＩＬ−４産生抑制作用、精巣機能活性化作用などの有用な生理活性が保持されており、且つ、アレルゲン性が生ローヤルゼリーや既存の精製ローヤルゼリーに比して低減されているので、そのままで、造粒して、或いは、打錠して健康補助食品として使用することができる。また、本品は、飲食物、飼料、餌料、ペットフード、化粧品、医薬品、医薬部外品、又雑貨組成物などの組成物の調製に有利に利用できる。さらに、本品又は本品を含有する組成物は、そのままで、或いは、濃厚飼料、粗飼料、ペットフードなどの飼料・餌料に添加したり、飲料水に溶解して経口的に、種馬、種牛、種豚などの繁殖用動物の雄に摂取させることにより、これら動物の精巣機能を活性化して、繁殖率を向上させることができる。
【実施例８】
【００９４】
＜ローヤルゼリー分画物粉末の製造＞
実施例１で調製したローヤルゼリー分画物１質量部（固形物換算）に、市販のデキストリン（株式会社三和澱粉工業株式会社販売、商品名「サンデック  ＃１００」）１２質量部を加えて、攪拌溶解して、常法により、凍結乾燥して、ローヤルゼリー分画物粉末を調製した。本品は、生ローヤルゼリーのもつコラーゲン産生増強作用、ＩＬ−４産生抑制作用、精巣機能活性化作用などの生理活性が保持されており、且つ、アレルゲン性が生ローヤルゼリーや既存の精製ローヤルゼリーに比して低減されているので、そのままで、造粒して、或いは、打錠して健康補助食品として使用することができる。また、本品は、飲食物、飼料、餌料、ペットフード、化粧品、医薬品、医薬部外品、又雑貨組成物などの組成物の調製に有利に利用できる。さらに、本品又は本品を含有する組成物は、そのままで、或いは、濃厚飼料、粗飼料、ペットフードなどの飼料・餌料に添加したり、飲料水に溶解して経口的に、種馬、種牛、種豚などの繁殖用動物の雄に摂取させることにより、これら動物の精巣機能を活性化して、繁殖率を向上させることができる。
【実施例９】
【００９５】
＜健康補助食品＞
実施例８で調製したローヤルゼリー分画物粉末９８質量部にショ糖脂肪酸エステル２質量部を加えて均質に混合し、打錠機を用いて１錠当たり約２００ｍｇの錠剤に成形した。本品は、簡便に利用でき且つ著効を示す組成物である。本品は、生ローヤルゼリーのもつコラーゲン産生増強作用、ＩＬ−４産生抑制作用、精巣機能活性化作用などの有用な生理活性が保持され、美白作用も増強されている。また、本品は、アレルゲン性が生ローヤルゼリーや既存の精製ローヤルゼリーに比して低減されており、まろやかな甘味を示すので、日常的に利用する、健康の維持、増進、美白、美肌、美容、抗シワ、アンチエイジングなどのための健康補助食品として有用である。
【実施例１０】
【００９６】
＜健康補助食品＞
実施例５の方法に準じて、無水α，α−トレハロース８．５質量部に対して実施例２の方法で得たローヤルゼリー分画物０．５質量部を加え、室温で攪拌・混合してローヤルゼリー分画物粉末を調製した。この粉末９質量部、糖転移ヘスペリジン（林原商事販売、商品名「林原ヘスペリジンＳ」）０．５質量部、プルラン（株式会社林原商事販売、商品名食品添加物「プルラン」）０．５質量部を均質に混合してローヤルゼリー分画物配合組成物を調製した。このローヤルゼリー分画物配合組成物を、打錠機を用いて１錠当たり約３００ｍｇの錠剤に成形した。本品は、ローヤルゼリーの有用な生理活性が保持されており、美白作用も増強されている。また、本品は、アレルゲン性が低減しており、簡便に利用でき且つ著効を示す組成物である。本品は、まろやかな甘味と適度な酸味により良好な呈味を示すので、日常的に利用する、健康の維持、増進、美白、美肌、美容、抗シワ、アンチエイジングなどのための健康補助食品として有用である。
【実施例１１】
【００９７】
＜健康補助食品＞
実施例６の方法に準じて、含水結晶α，α−トレハロース７．５質量部に対して実験１の方法で得たローヤルゼリー分画物１質量部を含むローヤルゼリー分画物粉末を調製した。この粉末８．５質量部、マルチトール１．３質量部、Ｌ−トリプトファン０．２質量部を均質に混合してローヤルゼリー分画物配合組成物を調製した。本品は、ローヤルゼリーの有用な生理活性が保持されており、美白作用も増強されている。また、本品は、アレルゲン性が低減しており、簡便に利用でき且つ著効を示すローヤルゼリー分画物組成物である。本品は、まろやかな甘味と適度な酸味により良好な呈味を示すので、日常的に利用する、健康の維持、増進、美白、美肌、美容、抗シワ、アンチエイジングなどのための健康補助食品として有用である。
【実施例１２】
【００９８】
＜アイスクリーム＞
生クリーム（油脂含量約４６質量％）１８質量部、脱脂粉乳７質量部、全乳５１質量部、砂糖１０質量部、ラクトスクロース含有粉末（商品名「乳果オリゴ」）４質量部、プルラン２質量部、及びアラビアガム２質量部の混合物を溶解し、７０℃で３０分間保持して殺菌した後、ホモゲナイザーで乳化分散させ、次いで、３乃至４℃にまで急冷し、これに、実施例２の方法で得たローヤルゼリー分画物４質量部を加えてさらに混合し、一夜熟成した後、フリーザーで凍結させてアイスクリームを得た。本品は、適度な甘味と上品な風味を示すとともに、ローヤルゼリーの有用な生理活性が保持されており、美白作用も増強されている。また、本品は、アレルゲン性が低減されたローヤルゼリー分画物が配合されているので健康の維持・増進、美白、美肌、美容、抗シワ、アンチエイジングなどに奏効するアイスクリームである。
【実施例１３】
【００９９】
＜甘酒＞
白米１０質量部を、常法に従って水を加えて炊き上げ、次いで、得られた飯米を冷却して５５℃とし、常法により調製した麹３０質量部と食塩０．１質量部を混合して５０乃至５５℃で８時間保ち、これをミキサーにかけ、さらに約２５℃にまで冷却した時点で、実施例１の方法で得たローヤルゼリー分画物２質量部を加えて混合した後、小包に充填し、甘酒を得た。本品は、色調もよく、風味豊かな高品質の甘酒である上、健康の維持・増進、美白、美肌、美容、抗シワ、アンチエイジングのための飲料として有用である。
【実施例１４】
【０１００】
＜健康補助飲料＞
無水結晶マルトース（林原商事販売、商品名「ファイントース」）５００質量部、実施例１の方法で得たローヤルゼリー分画物１００質量部、粉末卵黄１９０質量部、脱脂粉乳２００質量部、糖転移ビタミンＣ（株式会社林原商事販売、商品名「アスコフレッシュ」）２質量部、塩化ナトリウム４．４質量部、塩化カリウム１．８５質量部、硫酸マグネシウム４質量部、チアミン０．０１質量部、アスコルビン酸ナトリウム０．１質量部、ビタミンＥアセテート０．６質量部及びニコチン酸アミド０．０４質量部からなる配合物を調製した。この配合物２５質量部を精製水１５０質量部に均一に分散・溶解させ、１５０ｇずつ褐色ガラス瓶に封入した。本品は、ローヤルゼリーの有用な生理活性が保持されており、アレルゲン性が低減されている上、栄養源が補足されているので、健康維持、成長促進、病気の予防、治療の促進、スポーツ後の疲労回復促進、美白、美肌、美容、抗シワ、アンチエイジングなどを目的とする健康補助飲料として有利に利用できる。なお、本品は、ヒトのみならず、家畜などの動物のための経口摂取又は経管投与用組成物としても有利に利用できる。
【実施例１５】
【０１０１】
＜健康補助食品＞
下記成分を練混合して、押し出し造粒し、流動層乾燥して、バスケット顆粒を調製した。この顆粒を１．５グラムずつ分包した。
実施例８で調製したローヤルゼリー分画物含有粉末            ３０質量部
エリスリトール                                            ５０質量部
アスコルビン酸２−グルコシド                            ７．５質量部
ショ糖（フロストシュガー）                                  ６質量部
コエンザイムＱ１０                                            ５質量部
ビタミンＢ１                                              ０．１質量部
ビタミンＢ２                                              ０．１質量部
ビタミンＢ６                                              ０．１質量部
パイナップルパウダー                                    ０．５質量部
オレンジパウダー                                        ０．２質量部
ピーチ香料                                              ０．５質量部【０１０２】
本品は、ローヤルゼリーの有用な生理活性が保持されており、アレルゲン性が低減されている上、ビタミン類が補足されているので、健康維持、成長促進、病気の予防、治療の促進、スポーツ後の疲労回復促進、美白、美肌、美容、抗シワ、アンチエイジングなどを目的とする健康補助食品として有利に利用できる。なお、本品は、ヒトのみならず、家畜などの動物にも有利に利用できる。
【実施例１６】
【０１０３】
＜ペットフード（グミ）＞
砂糖３０質量部に水８質量部を加え加熱溶解し、これに水飴５０質量部を加えブリックス糖度８５乃至９０°に煮詰めた後、８０℃以下まで冷却した。次いで、この糖液に、水１０質量部の水にゼラチン７質量部を加熱溶解したものを加え、さらにビーフエキス２質量部、５０質量％クエン酸溶液３質量部、実施例１の方法で得たローヤルゼリー分画物１質量部、香料を適量加えて均一に混合した。得られた配合物をスターチモールドに分注し、一晩放置してグミ状のペットフードを調製した。本品は、ローヤルゼリーの有用な生理活性が保持されており、且つ、アレルゲン性が低減されたローヤルゼリー分画物を配合している上、栄養源が補足されているので、ペットの健康維持、成長促進、病気の予防、治療の促進などを目的とするペットフードとして有利に利用できる。なお、本品は、イヌ、ネコのみならず、各種ペット及び家畜などの動物のための経口摂取用組成物としても有利に利用できる。また、本品は、種馬、種牛、種豚などの繁殖用動物の雄に、経口的に摂取させることにより、これら動物の精巣機能を活性化して、繁殖率を向上させることができる。
【実施例１７】
【０１０４】
＜皮膚外用クリーム＞
以下の配合処方に基づき、常法により、皮膚外用クリームを調製した。
（処方）                                                      （％）
モノステアリン酸ポリオキシエチレングリセリン                    ２
自己乳化型モノステアリン酸グリセリン                            ５
ベヘニン酸エイコサニル                                          １
流動パラフィン                                              １．９
トリオクタン酸トリメチロールプロパン                            １
１，３−ブチレングリコール                                      ５
乳酸ナトリウム液                                              １０
パラオキシ安息香酸メチル                                    ０．１
モモ葉エキス                                                １．５
精製水                                                    ６２．２
実施例１の方法で調製したローヤルゼリー分画物                    ２【０１０５】
本品は、優れた保湿性を示す上、ローヤルゼリーのもつコラーゲン産生増強作用やＩＬ−４産生抑制作用などの有用な生理活性が保持されており、美白作用も増強され、且つ、アレルゲン性も低減されているので、アレルギー症状を引き起こす懸念なく、皮膚のみずみずしさを保つ、美白、美容、抗シワ、アンチエイジングなどを目的とする基礎化粧品として有用である。
【実施例１８】
【０１０６】
＜乳液＞
以下の配合処方に基づき、常法により、乳液を調製した。
（処方）                                                      （％）
ポリオキシエチレン（２０Ｅ．Ｏ．）ポリオキシプロピ
レン（２Ｅ．Ｏ．）セチルアルコール                          １
シリコンＫＦ９６（２０ｃｓ）（信越化学工業株式会社販売）        ２
流動パラフィン（中粘度）                                        ３
１，３−ブチレングリコール                                      ５
４−ｎ−ブチルレゾルシノール                                ０．３
グリセリン                                                      ２
エチルアルコール                                                １
カルボキシビニルポリマー                                    ０．３
ヒドロキシプロピルセルロース                                ０．１
２−アミノメチルプロパノール                                ０．１
糖転移ナリンジン（株式会社林原生物化学研究所製造、
グルコシルナリンジンの純度９６％）                      ０．５
Ｌ−アスコルビン酸−２−グルコシド（株式会社林原生
物化学研究所販売、商品名「ＡＡ２Ｇ」）                      １
実験２の方法で調製したローヤルゼリー分画物                      １
酸化防止剤                                                    適量
防腐剤                                                        適量
ｐＨ調整用の緩衝剤                                            適量
精製水を加えて全量を１００％とする。【０１０７】
本品は、優れた保湿性を示す上、ローヤルゼリーのもつコラーゲン産生増強作用やＩＬ−４産生抑制作用などの有用な生理活性が保持されており、美白作用も増強され、且つ、アレルゲン性も低減されているので、アレルギー症状を引き起こす懸念なく、皮膚のみずみずしさを保つ、美白、美容、抗シワ、アンチエイジングなどを目的とする基礎化粧品として有用である。
【実施例１９】
【０１０８】
＜ローション＞
以下の配合処方に基づき、常法により、ローションを調製した。
（処方）                                                      （％）
ヒアルロン酸ナトリウム（１％水溶液）                          ２０
α，α−トレハロースの糖質誘導体                                ２
ソルビトール液（６０％水溶液）                              ２．１
実験４の方法で調製したｐＨ調整ローヤルゼリー分画物              １
カンゾエキス                                                ０．５
カミツレエキス                                            ０．０５
セージエキス                                                    １
アロエ液汁末                                            ０．００１
クエン酸                                                  ０．０２
クエン酸ナトリウム                                        ０．１８
パラオキシ安息香酸メチル                                  ０．０５
没食子酸プロピル                                          ０．０２
精製水を加えて、全量を１００％とする。【０１０９】
本品は、優れた保湿性を示す上、ローヤルゼリーのもつコラーゲン産生増強作用やＩＬ−４産生抑制作用などの有用な生理活性が保持されており、美白作用も増強され、且つ、アレルゲン性も低減されているので、アレルギー症状を引き起こす懸念なく、皮膚のみずみずしさを保つ、美白、美容、抗シワ、アンチエイジングなどを目的とする基礎化粧品として有用である。
【実施例２０】
【０１１０】
＜化粧水＞
以下の配合処方に基づき、常法により、化粧水を調製した。
（処方）                                                      （％）
グリチルリチン酸ジカリウム                                  ０．２
クエン酸                                                    ０．１
クエン酸ナトリウム                                          ０．３
α，α−トレハロースの糖質誘導体含有シラップ（株式会社
林原生物化学研究所販売、商品名「トルナーレ」）              ２
エタノール                                                      ５
実験４の方法で調製したｐＨ調製ローヤルゼリー分画物              ２
感光素２０１号                                        ０．０００１
エチルパラベン                                              ０．１
精製水を加えて全量を１００％とする。【０１１１】
本品は、優れた保湿性を示す上、ローヤルゼリーのもつコラーゲン産生増強作用やＩＬ−４産生抑制作用などの有用な生理活性が保持されており、美白作用も増強され、且つ、アレルゲン性も低減されているので、アレルギー症状を引き起こす懸念なく、皮膚のみずみずしさを保つ、美白、美容、抗シワ、アンチエイジングなどを目的とする基礎化粧品として有用である。
【実施例２１】
【０１１２】
＜育毛剤＞
以下の配合処方に基づき、常法により、育毛剤を調製した。
（処方）                                                      （％）
グリチルリチン酸ジカリウム                                  ０．１
感光素３０１号                                          ０．００５
含水結晶α，α−トレハロース                              ０．２５
グリセリン                                                      ２
α，α−トレハロースの糖質誘導体含有糖質、株式会社
林原生物化学研究所販売、商品名「トルナーレ」）        ０．０１
実施例２の方法で調製したローヤルゼリー分画物                ０．５
糖転移ヘスペリジン（株式会社林原生物化学研究所販売、
商品名「アルファグルコシルヘスペリジン」）            ０．０１
糖転移ナリンジン（株式会社林原生物化学研究所製造、
グルコシルナリンジンの純度６５％）                      ０．１
糖転移ルチン（株式会社林原生物化学研究所販売、
商品名「アルファグルコシルルチン」）                  ０．０１
藍草抽出物（株式会社林原生物化学研究所販売、
商品名「藍ルーロス」）                                  ０．５
海藻エキス                                                ０．０２
センブリエキス                                                  ３
ボタンエキス                                                ０．１
エタノール                                                    ４５
精製水を加えて全量を１００％とする。【０１１３】
本品は、優れた保湿性を示す上、ローヤルゼリーのもつコラーゲン産生増強作用やＩＬ−４産生抑制作用などの有用な生理活性が保持されており、且つ、アレルゲン性も低減されているので、アレルギー症状を引き起こす懸念なく、頭皮の炎症や老化防止効果を有し、抗菌性も強いので、育毛効果に優れ、ふけの発生や脱毛を抑制し、頭皮を清潔に保つことのできるヘアトニック形態の皮膚外用剤として有用である。
【実施例２２】
【０１１４】
＜シャンプー＞
以下の配合処方に基づき、常法により、シャンプーを調製した。
（処方）                                                      （％）
ピロクトンオラミン                                          ０．５
エデト酸二ナトリウム                                        ０．３
感光素２０１号                                          ０．００２
クエン酸                                                    ０．３
サリチル酸ナトリウム                                        ０．２
１，３−ブチレングリコール                                      ３
ポリオキシエチレンラウリルエーテル硫酸ナトリウム          ６．７５
ヤシ油脂肪酸ジエタノールアミド                                  ２
ラウリル硫酸トリエタノールアミン                              １０
ポリオキシエチレンラノリン酸（８０Ｅ．Ｏ．）                ０．５
２−アルキル−Ｎ−カルボキシメチル−Ｎ−ヒドロキシエチル
イミダゾリニウムベタイン                                    １０
ヒドロキシエチルセルロースヒドロキシプロピルトリメチル
アンモニウムクロリドエーテル                              ０．８
実施例２の方法で調製したローヤルゼリー分画物                    ３
藍草抽出物（株式会社林原生物化学研究所販売、商品名
「藍ルーロス」、１，３−ブチレングリコールを３０
％含有する藍草の水抽出物）                                  ２
香料                                                        ０．２
精製水を加えて全量を１００％とする。【０１１５】
本品は、優れた保湿性を示す上、ローヤルゼリーのもつコラーゲン産生増強作用やＩＬ−４産生抑制作用などの有用な生理活性が保持されており、美白作用も増強され、且つ、アレルゲン性も低減されているので、アレルギー症状を引き起こす懸念なく、皮膚のみずみずしさを保つ、美白、美容、抗シワ、アンチエイジングなどの効果を有するシャンプーである。
【実施例２３】
【０１１６】
＜リンス＞
以下の配合処方に基づき、Ａ成分を熱混合したものに、Ｂ成分を加熱混合したものを混合し、常法により、乳化してリンスを調製した。
（処方）                                                      （％）
＜Ａ成分＞
流動パラフィン                                              ２．５
ミリスチン酸                                                ０．５
セタノール                                                  １．５
モノステアリン酸グリセリン                                      ３
ラウロイルグルタミン酸ポリオキシエチレンオクチルドデシル
エーテルジエステル                                          １
ピログルタミン酸イソステアリン酸ポリオキシエチレン
グリセリル                                              ０．５
＜Ｂ成分＞
α，α−トレハロースの糖質誘導体含有シラップ（株式会社
林原生物化学研究所販売、商品名「トルナーレ」）              ３
１，３−ブチレングリコール                                      ３
実施例１の方法で調製したローヤルゼリー分画物                    ３
感光色素３０１号                                          ０．０１
ラウロイル−Ｌ−リジン                                      ２．５
脂肪酸ｌ−アルギニンエチルピロリドンカルボン酸塩            ０．５
塩化ステアリルトリメチルアンモニウム                        ０．５
糖転移ルチン（林原生物化学研究所株式会社販売、商品名
「αＧルチン」）                                        ０．１
ピロリドンカルボン酸ナトリウム                                  １
センブリエキス                                                  １
Ａ成分とＢ成分の合計が１００％となるように精製水を加える。【０１１７】
本品は、優れた保湿性を示す上、ローヤルゼリーのもつコラーゲン産生増強作用やＩＬ−４産生抑制作用などの有用な生理活性が保持されており、美白作用も増強され、且つ、アレルゲン性も低減されているので、アレルギー症状を引き起こす懸念なく、頭皮のみずみずしさを保つ、美白、美容、抗シワ、アンチエイジングなどの効果を有するリンスである。
【実施例２４】
【０１１８】
＜化粧用石けん＞
以下の配合処方に基づき、常法により、化粧用石けんを調製した。
（処方）                                                      （％）
質量比４対１の牛脂及びヤシ油を通常のけん化・塩析法に
供して得られるニートソープ                            ９４．５
実施例８の方法で調製したローヤルゼリー分画物粉末                ２
マルチトール                                                    １
含水結晶α，α−トレハロース                                ０．５
Ｌ−アスコルビン酸２−グルコシド（林原生物化学研究所株
式会社販売、商標「ＡＡ２Ｇ」）                          ０．５
白糖                                                        ０．５
糖転移ルチン（林原生物化学研究所株式会社販売、商品名
「αＧルチン」）                                        ０．５
感光素２０１号                                        ０．０００１
香料                                                          適量
全量を１００％とする。【０１１９】
本品は、優れた保湿性を示す上、ローヤルゼリーのもつコラーゲン産生増強作用やＩＬ−４産生抑制作用などの有用な生理活性が保持されており、且つ、アレルゲン性も低減されているので、アレルギー症状を引き起こす懸念なく、皮膚のみずみずしさを保つ、美白、美容、抗シワ、アンチエイジングなどの効果を有する石けんである。
【実施例２５】
【０１２０】
＜浴用剤＞
以下の配合処方に基づき、常法により、浴用剤を調製した。
（処方）                                                      （％）
含水結晶α，α−トレハロース（株式会社林原生物化学研究所
販売、化粧品用）                                        ７４．４
炭酸水素ナトリウム                                        １２．５
藍草抽出物（株式会社林原生物化学研究所販売、１，３−
ブチレングリコールを含まず）                                ４
実施例２の方法で調製したローヤルゼリー分画物                ３．５
国際公開ＷＯ  ２００３／０１６３２５号明細書の実施例９に
記載の方法により調製したα，α−トレハロースと苦汁と
を質量比で１４４：２０２の割合で含有する粉末              ５．５
感光素２０１号                                        ０．００１５
香料                                                          適量
色素                                                          適量
全量を１００％とする。【０１２１】
本品は、優れた保湿性を示す上、ローヤルゼリーのもつコラーゲン産生増強作用やＩＬ−４産生抑制作用などの有用な生理活性が保持されており、且つ、アレルゲン性も低減されているので、アレルギー症状を引き起こす懸念なく、皮膚のみずみずしさを保つ、美白、美容、抗シワ、アンチエイジングなどの効果を有する浴用剤である。
【実施例２６】
【０１２２】
＜練歯磨＞
以下の配合処方に基づき、常法により、練り歯磨を調製した。
（処方）                                                      （％）
第二リン酸カルシウム                                          ３０
ハイドロキシアパタイト                                        １０
炭酸カルシウム                                                  ５
α，α−トレハロースの糖質誘導体含有シラップ（株式会社
林原生物化学研究所販売、商品名「トルナーレ」）            ２８
実施例１の方法で調製したローヤルゼリー分画物                    ３
ラウリル硫酸ナトリウム                                      １．５
モノフルオロリン酸ナトリウム                                ０．７
ポリオキシエチレンソルビタンラウレート                      ０．５
塩酸ジフェンヒドラミン                                      ０．５
防腐剤                                                    ０．０５
精製水を加えて全量を１００％とする。【０１２３】
本品は、ローヤルゼリーのもつコラーゲン産生増強作用やＩＬ−４産生抑制作用などの有用な生理活性が保持されており、且つ、アレルゲン性も低減されているので、アレルギー症状を引き起こす懸念なく、口腔内の炎症や味覚障害、歯槽膿漏等による歯茎の腫れ、炎症、出血などの予防や治療に好適であり、しかも、使用感のよい練歯磨である
【実施例２７】
【０１２４】
＜フェイシャルティッシュ＞
実施例７の方法で調製したローヤルゼリー分画物粉末３質量部、グリセリン１質量部に、水６質量部を混合した溶液を調製し、処理剤を調製した。この処理剤を、固形分換算で、ティッシュペーパーの総質量の１％となるように、柔軟処理を施していないフェイシャルティッシュに、均一に噴霧し、乾燥した。本品は、ローヤルゼリーの有用な生理活性が保持されており、且つ、アレルゲン性が低減されたローヤルゼリー分画物が配合されているので、皮膚の炎症を抑制するとともに、α，α−トレハロースの糖質誘導体により、柔軟処理を施していないものに較べて、ティッシュペーパーの柔軟性、吸水性が格段に向上することから、肌に優しく、使用感に優れている。また、当該、処理剤を使用して、フェイシャルティッシュの場合と同様に、ペーパータオル、トイレットペーパー、ティッシュペーパー、不織布などを処理することにより、これらの紙類を使用した際の、肌への刺激を低減し、吸水性、柔軟性を向上することができるので、これらの紙類の使用感をよくするために利用することも随意である。
【産業上の利用可能性】
【０１２５】
以上説明したように、本発明は、ヒドロキシデセン酸１質量部に対して、ローヤルゼリー由来の蛋白質を０．０５質量部或いはそれ未満の比率で含有するローヤルゼリー分画物であり、コラーゲン産生増強作用、ＩＬ−４産生抑制作用、精巣機能活性化作用などのローヤルゼリーの有用な生理活性を有し、且つ、ヒドロキシデセン酸を４５μｇ含有する量の当該ローヤルゼリー分画物を用いてマウスを免疫したマウス血清を、ラットを使用したＰＣＡにより判定したとき当該ローヤルゼリー分画物に対するアレルゲン性が検出されないローヤルゼリー分画物が、ヒトを含む哺乳類に対するアレルゲン性が顕著に低減している上に、水に対する溶解性が高く、しかも、ローヤルゼリー本来の有用な生理活性を保持していることに加えて美白作用も増強されるという全く独自の知見に基づくものである。また、当該ローヤルゼリー分画物は、重篤なアレルギー症状を引き起こす懸念がないので、ヒトを含む哺乳類が簡便且つ快適に、健康の維持・増進、美白・美肌のために利用することができる。また、以上のような特長を有する本発明のローヤルゼリー分画物は、他の成分と配合することにより、飲食物、飼料、餌料、ペットフード、化粧品、医薬品、医薬部外品、又雑貨など各種組成物として利用することも有利に実施できる。本発明は、斯くも顕著な作用効果を奏する発明であり、斯界に貢献すること誠に多大な意義のある発明である。
【国際調査報告】
2008149838.tif 000010
2008149838.tif 000011
2008149838.tif 000012
2008149838.tif 000013