【事件の表示】
　特願２０１２−１６６１９８「微分干渉熱レンズ顕微鏡」拒絶査定不服審判事件〔平成２６年　２月　６日出願公開、特開２０１４−　２６１１１〕について、次のとおり審決する。
【結　論】
　本件審判の請求は、成り立たない。
【理　由】
第１　手続の経緯
　本願は、特許法第３０条第２項の新規性喪失の例外適用の申請を伴うものであり、平成２４年７月２６日の出願であって、平成２８年９月５日付け、及び平成２９年３月２１日付けで手続補正書が提出され、同年９月４日付けで拒絶の査定がなされ、これに対し、同年１２月１２日付けで拒絶査定に対する不服審判請求がなされたものである。
第２　本願発明
　本願の請求項１に係る発明は、上記平成２９年３月２１日付けの手続補正によって補正された特許請求の範囲の記載からみて、その特許請求の範囲の請求項１に記載された次のとおりのものと認められる。（以下「本願発明」という。）
「マイクロあるいはナノスケールの微細空間内の試料溶液中の分子を定性あるいは定量するための微分干渉熱レンズ顕微鏡であって、
　入射したレーザー光の励起光及びプローブ光を複屈折させ、前記プローブ光を前記励起光と同光路の一方のプローブ光と、他光路の他方のプローブ光とに分離するとともに、所定の光線分離角となるように前記一方のプローブ光及び前記励起光と前記他方のプローブとを出射させる第１プリズムと、
　複数のレンズを組み合わせてなり、前記第１プリズムから入射した前記一方のプローブ光及び前記励起光と前記他方のプローブ光とを、所定の分離幅で平行にしつつ前記試料溶液中に絞り込んで出射させる第１レンズ体と、
　複数のレンズを組み合わせてなり、前記試料溶液を通過して入射した前記一方のプローブ光及び前記励起光と前記他方のプローブ光とを前記光線分離角と同角の光線交差角で交差するように出射させる第２レンズ体と、
　前記第２レンズ体から入射した前記一方のプローブ光と前記他方のプローブ光を複屈折させるとともに合成干渉させる第２プリズムと、
　前記第２プリズムから出射した前記一方のプローブ光と前記他方のプローブ光の合成干渉波を検出する検出器とを備えており、
　前記微細空間を境に一方の側に設けられた前記第１プリズムと前記第１レンズ体と、他方の側に設けられた前記第２プリズムと前記第２レンズ体とのプリズム同士、レンズ体同士が同じ光学特性を備え、前記微細空間を境に一方の側と他方の側の光学系を対称にし、
　且つ前記一方のプローブと前記他方のプローブ光の位相差に応じた合成干渉波の強度の値が、前記微細空間を境に一方の側と他方の側の光学系を非対称にした微分干渉熱レンズ顕微鏡を用い分離幅を５．３μｍとしたときの合成干渉波の強度に対して１／２以上となるように構成されていることを特徴とする微分干渉熱レンズ顕微鏡。」
第３　引用刊行物
１．刊行物１
　原査定の拒絶理由で引用された、H.Shimizu，K.Mawatari，T.Kitamori，Development of a Differential Interference Contrast Thermal Lens Microscope for Sensitive Individual Nanoparticle Detection in Liquid，Analytical Chemistry，American Chemical Society，2009年12月1日，Vol.81,No.23，9802-9806（以下「刊行物１」という。）には、次の事項が記載されている。（なお、括弧内の訳文は、当審が作成した。また、下線は当審で付した。以下同じ。）
（１）「A thermal lens microscope (TLM) with a new principle was developed to improve the detection limit of conventional TLM. The detection limit was decreased by introducing a differential interference contrast (DIC) method which realizes background-free photodetection. The new differential interference contrast thermal lens microscope (DIC-TLM) exploits phase contrast resulting from a photothermal effect instead of refraction used in conventional TLM. In order to produce high phase contrast, we fabricated a pair of DIC prisms with a large shear value of 5 μm which is in accordance with the thermal diffusion length. First, we verified the principle of DIC-TLM. The background of TLM measurement was reduced to 1/100 by differential interference, and the signal-to-background (S/B) ratio was improved by 1 order of magnitude. The signal was confirmed to originate from phase contrast, and the expansion of the shear value was effective. Furthermore, we demonstrated counting of individual gold nanoparticles (5 nm) using DIC-TLM. The particles were counted with high signal-to-noise (S/N) ratio, and the S/N ratio was improved by 1 order of magnitude. Finally, we discuss the possibility of single molecule counting in a liquid.」（９８０２頁左欄１〜２３行）
（従来のＴＬＭの検出限界を改善するために、新しい原理を備えた熱レンズ顕微鏡（ＴＬＭ）が開発された。バックグラウンドのない光検出を実現する微分干渉コントラスト（ＤＩＣ）法を導入することにより、検出限界を減少させた。新しい
微分干渉コントラスト熱レンズ顕微鏡
単一分子の計数
（２）「In this decade, the scale of analysis has been rapidly miniaturized, as represented by single cells and micro/nano chips. Analysis in micro- and nanospace has various merits such as small sample volumes, short analysis time, and low costs, whereas detection becomes quite difficult. One reason for this is that the number of analyte molecules decreases due to extremely small detection volumes. For example, provided a 1 nM solution is contained in a 1 μm cube, there are 0.6 molecules on average in the cube, which means that single molecule detection is essential for analysis in micro- and nanospace. The most popular method for single molecule detection is laser induced fluorescence (LIF). Single molecule detection by LIF was performed for the first time in 1990, and the method has been widely applied for analyses on microchips. However, LIF has the disadvantage that it can detect only fluorescent molecules. As most molecules are nonfluorescent, detection methods for these molecules are required for further applications of microchips. In particular, troublesome fluorescent labeling is necessary for the detection of nonfluorescent proteins and DNAs, and precise labeling of a single molecule is quite difficult. Hence, detection of nonfluorescent molecules will contribute to future bioanalyses on micro/nano chips.」（９８０２頁左欄２４行〜右欄８行）
（この１０年間では、単一セルとマイクロ／ナノチップに代表されるように、分析の規模が急速に縮小されてきた。
マイクロおよびナノスペースの解析
（３）「One of the most promising methods of nonlabeled detection is thermal lens spectrometry (TLS). TLS is a kind of photothermal spectroscopy that measures absorption and thermal relaxation and has been reported to be more sensitive than absorption spectrometry. By combining TLS with a microscope, we have developed a thermal lens microscope (TLM) and applied it to various analytical systems on microchips. Notably, we succeeded in the determination of a concentration corresponding to 0.4 molecules in a detection volume of 7 fL. In addition, we developed a new method to detect individual particles moving in a liquid for the first time and succeeded in counting metallic nanoparticles one by one. However, counting of individual nonfluorescent molecules has not been achieved so far.」（９８０２頁右欄９〜２２行）
（非標識検出の最も有望な方法の１つは、熱レンズ分光法（ＴＬＳ）である。ＴＬＳは、吸収と熱緩和を測定する一種の光熱分光法であり、吸収分光法よりも感度が高いことが報告されている。ＴＬＳと顕微鏡を組み合わせることにより、熱レンズ顕微鏡（ＴＬＭ）を開発し、これをマイクロチップ上の様々な分析システムに適用した。注目すべきことに、検出容積７ｆｌ中の０．４分子に対応する濃度の決定に成功した。さらに、液体中を移動する個々の粒子を初めて検出する新しい方法を開発し、金属ナノ粒子を１つずつ計数することに成功した。しかしながら、これまで個々の非蛍光分子の計数は達成されていない。）
（４）「This is attributed to the high detection limit of conventional TLM resulting from a high background in photodetection. This background does not originate from the solvent or fluorescent sources but is an effect of the detection principle applied in a TLM. In a conventional TLM, an excitation beam is intensity modulated at around 1 kHz and tightly focused on an analyte solution in a microchip. Following absorption and thermal relaxation of the analyte, the refractive index of the solution changes and a thermal lens effect is induced. Subsequently, a probe beam is refracted (converged or diverged) by the thermal lens effect, and the intensity of the probe beam transmitted through a pinhole changes slightly. Although this change of the probe beam is the signal in conventional TLM, its signal-to-backgound (S/B) ratio is only in the order of 10-3. Therefore, a lock-in amplifier is used for signal recovery. The lock-in amplifier removes a large DC component of the background. However, it cannot remove the low frequency fluctuation around 1 kHz caused by the background. The effect of this fluctuation is greater than the background signals originating from the solvent, fluorescence, or other sources. In other words, the background of the photodetection determines the detection limit of the conventional TLM.」（９８０３頁左欄１〜２２行）
（これは、光検出のバックグラウンドが高いことに起因する従来のＴＬＭの高い検出限界に起因する。このバックグラウンドは、溶媒または蛍光源に起因するものではなく、ＴＬＭに適用される検出原理の効果である。従来のＴＬＭでは、励起ビームは約１ｋＨｚで強度変調され、マイクロチップ内の検体溶液に密接に集束される。分析物の吸収および熱緩和の後、溶液の屈折率が変化し、熱レンズ効果が誘発される。その後、熱レンズ効果によりプローブ光を屈折（収束または発散）させ、ピンホールを透過したプローブ光の強度を少し変化させる。プローブビームのこの変化は従来のＴＬＭの信号であるが、その信号対バックグラウンド（Ｓ／Ｂ）比はたった１０−３である。そのため、ロックインアンプが信号回復に使用される。そのロックインアンプは、バックグラウンドの大きなＤＣ成分を除去する。しかしながら、バックグラウンドに起因する１ｋＨｚ前後の低周波変動を除去することはできない。この変動の影響は、溶媒、蛍光、または他の発生源に由来するバックグラウンドシグナルよりも大きい。換言すれば、光検出のバックグラウンドは、従来のＴＬＭの検出限界を決定する。）
（５）「For this reason, a new principle realizing background-free photodetection is required to improve the detection limit. Some background-free methods such as dark field, phase contrast, and differential interference contrast (DIC) are well-known as microscope observation modes. In particular, photothermal spectroscopy using DIC has been implemented for detecting individual nanoparticles fixed in a solid or polymer phase, though there is no example of the detection in a liquid. The difficulty of the detection in a liquid is due to the rapid Brownian motion of the particles and short residence time (several ms) in the focus area of the excitation beam (scale around 1 μm). In fact, signal integration to improve the detection limit is restricted. Furthermore, the potential of DIC for background-free photothermal spectroscopy has not been discussed.」（９８０３頁左欄２３〜３６行）
（この理由により、検出限界を向上させるために、バックグラウンドフリーの光検出を実現する新しい原理が必要とされる。暗視野、位相コントラスト、微分干渉コントラスト（ＤＩＣ）などのバックグラウンドフリーの方法は、顕微鏡観察モードとしてよく知られている。特に、ＤＩＣを用いた光熱分光法は、固体またはポリマー相に固定された個々のナノ粒子を検出するために利用されているが、液体中での検出の例はない。液体中での検出の難しさは、粒子の急速なブラウン運動と、励起ビームの焦点領域（約１μｍスケール）における短い滞留時間（数ｍｓ）によるものである。事実、検出限界を改善するためのシグナルインテグレーションは制限されている。さらに、バックグラウンドフリーの光熱分光法のためのＤＩＣの可能性については議論されていない。）
（６）「In this paper, we introduce the DIC method into TLM and show the development of a differential interference contrast thermal lens microscope (DIC-TLM). In DIC-TLM, the probe beam is separated and interfered by a pair of DIC prisms, which realizes background-free photodetection. The change of refractive index induced by the excitation beam is detected through phase contrast between the two probe beams. In order to produce high phase contrast in a liquid, the distance between the two probe beam spots (shear value) is expanded to 5 μm, considering the thermal diffusion length. First, we verify the principle with respect to the background-free detection, phase contrast, and thermal diffusion length. Afterward, we demonstrate the counting of gold nanoparticles (5 nm in diameter) and compare the performance to conventional TLM. Finally, we discuss the possibility of single molecule counting using DIC-TLM.」（９８０３頁左欄３７〜５１行）
（本論文では、ＤＩＣ法をＴＬＭに導入し、微分干渉式熱レンズ顕微鏡（ＤＩＣ−ＴＬＭ）の開発を示す。ＤＩＣ−ＴＬＭでは、プローブビームが一対のＤＩＣプリズムによって分離され干渉されるため、バックグラウンドフリーの光検出が実現される。励起ビームによって誘導される屈折率の変化は、２つのプローブビーム間の位相コントラストによって検出される。液体中で高い位相コントラストを得るために、２つのプローブビームスポット間の距離（シア値）は、熱拡散長を考慮して５μｍに拡大される。まず、バックグラウンドフリーの検出、位相コントラスト、熱拡散長に関する原理を検証する。その後、金ナノ粒子（直径５ｎｍ）の計数を実証し、性能を従来のＴＬＭと比較する。最後に、ＤＩＣ−ＴＬＭを用いた単一分子カウントの可能性について考察する。）
（７）「EXPERIMENTAL SECTION
Principle of DIC-TLM. Figure 1a shows the principle of DIC-TLM. The probe beam is separated by a DIC prism into two beams with perpendicular polarization. On the other hand, the excitation beam is not separated, as its polarization plane is rotated at an angle of 45 deg. The excitation beam is absorbed by an analyte, and a thermal lens effect is induced. Then, phase contrast appears between the two probe beams due to the difference in refractive index. In the next step, the probe beams are combined again by another DIC prism, which results in a new polarization component. Finally, only this new component is detected as signal by removing the initial polarization component using a polarization filter. When no analyte is in the focus area of the excitation beam, the intensity of the transmitted probe beam is zero. Thus, the background-free photodetection is achieved. In this principle, the relationship between the size of the thermal lens and the distance between the two probe beams is important. The radius of the thermal lens is assumed to be one thermal diffusion length. The thermal diffusion length μ is expressed as
μ＝√（κ／πＣρｆ） (1) 
where κ is the thermal conductivity, C is the specific heat, ρ is the density of the solvent, and f is the modulation frequency. The value of μ is 7 μm when f is 1 kHz and water is applied as solvent. The distance between the two probe beam spots, which is called the shear value, is determined by the design of the DIC prisms. A typical shear value of DIC prisms for a commercial microscope is approximately 0.5 μm. For this case, however, the thermal lens is overlapping with the two probe beam spots. This leads to low phase contrast and sensitive detection of the photothermal effect becomes impossible. In order to produce high phase contrast, the thermal diffusion length and the shear value must be adjusted. One solution for this is a high modulation frequency. If f is adjusted in order to realize μ = 0.5 μm, f becomes higher than 180 kHz. However, the intensity of the photothermal signal generally decreases for higher modulation frequencies, as the generated thermal energy is inversely proportional to f. The limit at lower frequencies is determined by the residence time of the analyte in the focused area of the excitation beam. As particles pass through the focus area in several milliseconds, f should be higher than 1 kHz to realize synchronous signal processing with a lock-in amplifier. Therefore, a modulation frequency of 1 kHz will be almost the optimum frequency, and an expansion of the shear value is the better solution to realize sensitive detection of individual particles in liquid. Here, we fabricated a pair of DIC prisms with a shear value of 5 μm. The shear value was confirmed by observing the focused probe beams directly using a CCD camera with an objective lens (magnification: 20×). The distance of the two probe beam spots was approximately 5 μm as designed. The configuration of the spots and the thermal lens is illustrated in Figure 1b.」（９８０３頁左欄５２行〜９８０４頁左欄２４行）
（実験セクション
　ＤＩＣ−ＴＬＭの原理。図１ａは、ＤＩＣ−ＴＬＭの原理を示している。
プローブビームは、ＤＩＣプリズムによって垂直偏光を有する２つのビームに分離される。一方、励起ビームは、その偏光面が４５°の角度で回転されるので、分離されない。励起ビームは検体によって吸収され、熱レンズ効果が誘発される。そして、屈折率の違いにより、２つのプローブビームの間に位相差が現れる。次のステップでは、プローブビームはもうひとつのＤＩＣプリズムによって再び結合され、新しい偏光成分が得られる
 μ＝√（κ／πＣρｆ）（１）
 κは熱伝導率、Ｃは比熱、ρは溶媒の密度、ｆは変調周波数である。ｆの値が１ｋＨｚで、溶媒として水が用いられる場合には、μの値は７μｍである。シア値と呼ばれる２つのプローブビームスポット間の距離は、ＤＩＣプリズムの設計によって決定される。市販の顕微鏡用のＤＩＣプリズムの典型的なシア値は約０．５μｍである。しかしながら、この場合、熱レンズは２つのプローブビームスポットと重なり合っている。これは低い位相コントラストをもたらし、光熱効果の高感度検出が不可能になる。高い位相コントラストを生成するためには、熱拡散長さおよびシア値を調整しなければならない。これに対する１つの解決策は、高い変調周波数である。μ＝０．５μｍを実現するためにｆを調整すると、ｆは１８０ｋＨｚより高くなる。しかし、光熱信号の強度は、発生した熱エネルギーがｆに反比例するので、変調周波数が高いほど一般に低下する。低側の周波数限界は、励起ビームの集束領域における分析物の滞留時間によって決定される。粒子が数ミリ秒で焦点領域を通過するとき、ロックイン増幅器を用いた同期信号処理を実現するためには、ｆは１ｋＨｚより高くなければならない。したがって、１ｋＨｚの変調周波数がほぼ最適な周波数であり、液体中の個々の粒子の高感度検出を実現するためには、シア値の拡張がより良い解決策である。ここでは、５μｍのシア値を有する一対のＤＩＣプリズムを製作した。シア値は、対物レンズ付きＣＣＤカメラ（倍率２０倍）を用いて、集束したプローブビームを直接観察することによって確認した。
２つのプローブビームスポットの距離は約５μｍ
（８）「Setup. Figure 2 shows a schematic diagram of the DIC-TLM. A 488 nm argon ion laser was used as an excitation beam. The excitation beam was chopped by a light chopper at a modulation frequency of 1 kHz. A 633 nm He-Ne laser was applied as a probe beam. Both beams were linearly polarized by Glan-Thomson prisms, and their polarization planes were rotated by half-wave plates. The polarization plane of the excitation beam was adjusted to 45 degrees, and its extinction ratio was 10:1. The polarization plane of the probe beam was adjusted to 0 degrees, and its extinction ratio was 1000:1. As a result of this polarization control, the probe beam was separated 1:1 by an upper DIC prism installed in a microscope (Eclipse 80i, Nicon Corporation, Japan), while the excitation beam was separated in a ratio of 10:1, which was enough to produce phase contrast. After this, both beams were focused on a sample in a microchip by an objective lens (magnification: 40×, NA = 0.75). The microchip was made of fused-silica, and the applied microchannel was 500 μm wide and 100 μm deep. After passing through the sample, the probe beams were interfered by a lower DIC prism and a polarization filter. Finally, the excitation beam was cut by a filter, and the remaining probe beam was detected by an avalanche photodiode. Its electric signal was fed into a lock-in amplifier (5610B, NF Corporation, Japan), and the component synchronized to the chopper frequency was extracted. The signal amplitude was recorded by a PC.」（９８０４頁左欄２５行〜右欄４行。「Nicon」は「Nikon」の誤記と思われる。訳文で訂正する。）
（セットアップ。図２は、
ＤＩＣ−ＴＬＭ
４８８ｎｍのアルゴンイオンレーザーを励起ビームとして使用した
起ビームは、１ｋＨｚの変調周波数で光チョッパによりチョップされた
６３３ｎｍのＨｅ−Ｎｅレーザーをプローブビームとして適用した
両方のビームはグラン−トムソンプリズムによって直線偏光され
励起光の偏光面は４５度に調整され
プローブビームの偏光面は０度に調整され
この偏光制御の結果、プローブビームは、顕微鏡
に設置された上部ＤＩＣプリズムによって１：１に分離され、励起ビームは１０：１の比率で分離され
対物レンズ
を用いてマイクロチップ内の試料に両者を集束させた
サンプルを通過した後、プローブビームは下部ＤＩＣプリズムと偏光フィルタによって干渉された
励起ビームをフィルタでカットし、残りのプローブビームをアバランシェフォトダイオードで検出した
その電気信号をロックイン増幅器
に供給し、チョッパ周波数に同期した成分を抽出した
（９）「Here, two measurement modes were utilized for DIC-TLM. One was a concentration determination mode, and the other was a counting mode. In the concentration determination mode, the time constant of the lock-in amplifier was set to 1 s. In addition, the number of analyte molecules passing the focus area of the excitation beam was set to more than 1. In this case, the average thermal energy generated from many molecules that enter and leave the focused area contributes to the signal which is almost constant. In the counting mode, the time constant was set to 1 ms and the number of particles in the detection volume was as low as 0.1 by diluting the solution. As particles pass through the focus area in several milliseconds, pulse signals were observed with each passage of individual particles.」（９８０４頁右欄５〜１７行）
（ここでは、ＤＩＣ−ＴＬＭに２つの測定モードを利用された。１つは濃度決定モードであり、もう１つは計数モードであった。濃度判定モードでは、ロックインアンプの時定数を１ｓとした。さらに、励起ビームの焦点領域を通過する検体分子の数は１より多くに設定された。この場合、集束領域を出入りする多くの分子から生成された平均熱エネルギーは、ほぼ一定の信号に寄与する。計数モードでは、時定数は１ミリ秒に設定され、溶液を希釈することによって検出体積中の粒子の数は０．１と少なかった。粒子が数ミリ秒で焦点領域を通過するにつれて、個々の粒子の通過ごとにパルス信号が観察された。）
（１０）「RESULTS AND DISCUSSION
 Verification of Principle (Concentration Determination Mode). At the start, we verified the principle of DIC-TLM. The concentration determination mode was utilized for measuring a Sunset Yellow solution (10-5 M). First, we investigated the background reduction effect. The intensity of the probe beam in front of the detector was compared before and after inserting the polarization filter. As a result, the intensity was reduced by 2 orders (from 20 to 0.2 μW), and a clear background reduction was observed. The signal-to-background (S/B) ratio was compared to that of conventional TLM. The S/B ratios were 4.9 × 10-2 for DIC-TLM and 5.1 × 10-3 for conventional TLM. The S/B ratio was improved by 1 order of magnitude, and the background reduction was effective for TLM measurement.」（９８０４頁右欄１８〜３２行）
（結果と考察
 原理の検証（濃度測定モード）。当初、ＤＩＣ−ＴＬＭの原理を検証した。濃度決定モードをサンセットイエロー溶液（１０−５Ｍ）の測定に利用した。まず、バックグラウンド削減効果について検討した。偏光フィルタを挿入する前と後で、検出器の前のプローブビームの強度を比較した。その結果、強度は２桁（２０から０．２μＷ）減少し、明確なバックグラウンド低下が観察された。シグナル対バックグラウンド（Ｓ／Ｂ）比を従来のＴＬＭの比と比較した。Ｓ／Ｂ比はＤＩＣ−ＴＬＭでは４．９×１０−２であり、従来のＴＬＭでは５．１×１０−３であった。Ｓ／Ｂ比は１桁改善され、バックグラウンド低減はＴＬＭ測定に有効であった。）
（１１）「Subsequently, we verified the signal generation mechanism by rotating the polarization plane of the excitation beam. The result is shown in Figure 3. The signal changed periodically with rotating the polarization plane. A polarization of +45 and -45 degrees produced the highest phase contrast and maximum signals. Interestingly, +45 and -45 degree signals had different peak heights, which might be caused by a different shear value for the excitation wavelength. The polarization at 0 degrees produced the lowest phase contrast and a signal of almost zero as the same phase change was induced for the two probe beam spot. This result proves that the signals were generated only by phase contrast and refraction of the probe beam applied in conventional TLM was negligible. This is due to the low intensity of the probe beam at the detector. This result is also the first direct verification of the DIC-TLM effect in a liquid.」（９８０４頁右欄３３行〜９８０５頁左欄８行）
（次に、励起光の偏波面を回転させて信号生成機構を検証した。結果を図３に示す。信号は、偏波面を回転させると周期的に変化した。＋４５および−４５度の偏光は、最高位相コントラストおよび最大信号を生じた。興味深いことに、＋４５度および−４５度信号は、励起波長の異なるせん断値によって引き起こされる異なるピーク高さを有していた。０度の偏光は、２つのプローブビームスポットに対して同じ位相変化が誘起されたときに、最も低い位相コントラストとほぼゼロの信号を生成した。この結果は、信号が位相コントラストのみによって生成され、従来のＴＬＭで適用されたプローブビームの屈折が無視できることを証明する。これは、検出器でのプローブビームの強度が低いためである。この結果は、液体中でのＤＩＣ−ＴＬＭ効果の最初の直接検証でもある。）
（１２)「In a follow-up experiment, we examined the effect of the thermal diffusion length on the signal by changing the modulation frequency. The result is shown in Figure 4. The signal had maximum value at a modulation frequency of 1 kHz. This modulation frequency corresponded to a thermal diffusion length of 7 μm. This result indicates the combination of a modulation frequency of 1 kHz and a shear value of 5 μm produced the highest contrast. A higher frequency than 1 kHz led to lower sensitivity due to lower thermal energy. A lower frequency also resulted in lower sensitivity due to lower phase contrast caused by a longer thermal diffusion length.」（９８０５頁左欄９〜１９行）
（フォローアップ実験では、変調周波数を変化させることにより、熱拡散長が信号に及ぼす影響を調べた。結果を図４に示す。信号は１ｋＨｚの変調周波数で最大値を示す。この変調周波数は、７μｍの熱拡散長に相当する。この結果は、１ｋＨｚの変調周波数と５μｍのシア値の組み合わせが最も高いコントラストを生じたことを示している。１ｋＨｚよりも高い周波数は、より低い熱エネルギーに起因してより低い感度をもたらした。より低い周波数はまた、より長い熱拡散長によって引き起こされる低い位相コントラストに起因して、より低い感度をもたらした。）
（１３）「From the three experiments, the principle of DIC-TLM was verified for the first time in a liquid. The background reduction by interference improved the S/B ratio. The signal was generated only from phase contrast. The expansion of the shear value (from 0.5 to 5 μm) was essential to realize high sensitivity.」（９８０５頁左欄２０〜２４行）
（３つの実験から、ＤＩＣ−ＴＬＭの原理が液体中で初めて検証された。干渉によるバックグラウンド低減はＳ／Ｂ比を改善した。信号は位相差のみから生成された。高い感度を実現するためには、シア値の拡大（０．５μｍから５μｍに）が不可欠でした。）
（１４）「Spatial resolution is briefly discussed. Previously, we determined in-plane resolution of conventional TLM in a scanning measurement. According to this study, the in-plane resolution of TLM is determined by the spot size of the excitation beam and is independent of thermal diffusion length. This is because that thermal lens signal is dominated by absorbance of sample in the focal volume in a scanning measurement. The same will be true about DIC-TLM. A thermal diffusion length and the shear value would not affect in-plane resolution. On the other hand, z-axis resolution of DIC-TLM is more complicated. The resolution might be determined by the overlap of the thermal diffusion area and the spot of the probe beam which is completely different with TLM. Shear value will affect the z-axis resolution.」（９８０５頁左欄２５〜３７行）
（空間分解能について簡単に説明する。以前は、スキャン測定における従来のＴＬＭの面内分解能を測定した。この研究では、ＴＬＭの面内分解能は励起光のスポットサイズによって決まり、熱拡散長とは無関係である。これは、熱レンズ信号が焦点体積内のサンプルの吸光度によって支配されるためである走査測定で測定する。ＤＩＣ−ＴＬＭについても同様である。熱拡散長さおよびシア値は面内分解能に影響しない。他方、ＤＩＣ−ＴＬＭのｚ軸分解能はより複雑である。分解能は、ＴＬＭと全く異なる熱拡散領域とプローブビームのスポットとの重なりによって決定される。シア値はｚ軸の分解能に影響する。）
（１５）「Nanoparticle Counting (Counting Mode)
Figure 5 shows the result of gold nanoparticle (5 nm in diameter) counting by conventional TLM and DIC-TLM. In the result, many pulse signals were observed. In order to verify that the pulse signals were generated by the photothermal effect, we confirmed that the pulse signals were detected only when both excitation and probe beam were irradiated. Figure 6 shows the calibration curve for pulse numbers obtained with DIC-TLM. It shows good linearity in relation to the concentration of particles. These results show that the pulse signals were photothermal signals resulting from the passage of individual particles. The important point of these measurements is that signal-to-noise (S/N) ratio for the detection of pulse signals was improved by 1 order (from 7 to 70) in DIC-TLM. This is due to the background-free photodetection and the resulting low fluctuation of the probe beam at the modulation frequency. No other method has shown such high sensitivity for the detection of metallic nanoparticles. Hence, this method is expected to be applied in single molecule detection of nonfluorescent molecules. As an example, we discuss the case of molecules with a molar absorption coefficient of 105 M-1 cm-1. The absorption cross section is 2 orders of magnitude smaller compared to that of gold nanoparticles. In addition, molecules have optical saturation effects due to the long thermal relaxation time. According to our investigation, the photothermal signal of a molecule decreases by 1 order of magnitude by this effect. The decreased sensitivity can be recovered by an organic solvent to some extent. Chloroform, for example, enhances the photothermal effect 30-fold, owing to its low thermal conductivity and high temperature gradient of refractive index. Considering all these factors, the S/N ratio for single molecule counting with DIC-TLM is estimated to be 2 to 3. Following the above discussion, the performance of DIC-TLM reaches to a single molecule.」（９８０５頁左欄３８行〜９８０６頁左欄２５行）
（図５は、従来のＴＬＭおよびＤＩＣ−ＴＬＭによって計数された金ナノ粒子（直径５ｎｍ）の結果を示す。その結果において、多くのパルス信号が観測された。光熱効果によりパルス信号が生成されたことを確認するために、励起光とプローブ光の両方を照射した場合にのみパルス信号が検出されることを確認した。図６に、ＤＩＣ−ＴＬＭで得られたパルス数の検量線を示す。それは粒子の濃度に関して良好な直線性を示す。これらの結果は、パルス信号が、個々の粒子の通過によって生じる光熱信号であることを示している。これらの測定の重要な点は、パルス信号の検出のための信号対雑音比（Ｓ／Ｎ）がＤＩＣ−ＴＬＭで１オーダー（７から７０に）改善されたことである。これはバックグラウンドのない光検出とその結果変調周波数でのプローブビームの低い変動に起因する。他の方法は、金属ナノ粒子の検出のためのそのような高感度を示していない。したがって、この方法は、非蛍光分子の単一分子検出に適用されることが期待される。一例として、モル吸光係数が１０５Ｍ−１ｃｍ−１の分子の場合について考察する。吸収断面積は、金ナノ粒子のそれに比べて２桁小さい。さらに、分子は、長い熱緩和時間のために光飽和効果を有する。我々の研究によれば、この効果によって、分子の光熱信号は１桁減少する。感度の低下は有機溶媒によってある程度回復することができる。例えば、クロロホルムは、熱伝導率が低く、屈折率の温度勾配が大きいため、光熱効果を３０倍に高めることができる。ＤＩＣ−ＴＬＭによる単分子カウントのＳ／Ｎ比上記の議論に従って、ＤＩＣ−ＴＬＭの性能は単一の分子に達する。）
（１６）「CONCLUSION
 A DIC-TLM was developed to realize background-free photodetection in a liquid. A pair of DIC prisms with a large shear value of 5 μm was fabricated to produce high phase contrast. The principle of DIC-TLM was verified by three experiments. First, the background was reduced to 1/100 by interference, and the S/B ratio was improved by 1 order of magnitude. Following this, the signal was proven to originate solely from phase contrast. In the third experiment, the signal reached a maximum value at a modulation frequency of 1 kHz, which indicated that the expansion of the shear value was effective. Subsequently, we demonstrated counting of gold nanoparticles (5 nm in diameter) in a liquid. Pulse signals of individual particles were detected, and the S/N ratio was improved by 1 order of magnitude compared to conventional TLM. The sensitivity of the DIC-TLM was estimated to be high enough to detect individual molecules, considering the molecule’s absorption cross section and an enhancement of the photothermal signal by an organic solvent.
 In the near future, DIC-TLM will become an innovative tool for the detection of individual molecules in liquid. For example, DIC-TLM will contribute to proteomics by detecting individual proteins without degrading their functionality by labeling.」（９８０６頁左欄２６行〜右欄１９行）
（結論
　ＤＩＣ−ＴＬＭは、液中でバックグラウンドのない光検出を実現するために開発された。高位相コントラストを得るために、５μｍの大きなシア値を有する一対のＤＩＣプリズムを製作した。３つの実験によってＤＩＣ−ＴＬＭの原理を検証した。まず、干渉によってバックグラウンドが１／１００に減少し、Ｓ／Ｂ比が１桁改善された。これに続いて、信号は位相差のみから生じることが証明された。第３の実験では、信号は１ｋＨｚの変調周波数で最大値に達し、これはシア値の拡大が有効であることを示した。続いて、液体中の金ナノ粒子（直径５ｎｍ）の計数を実証した。個々の粒子のパルス信号が検出され、Ｓ／Ｎ比は従来のＴＬＭと比較して１桁改善された。ＤＩＣ−ＴＬＭの感度は、分子の吸収断面積および有機溶媒による光熱信号の増強を考慮して、個々の分子を検出するのに十分高いと推定された。
　近い将来、ＤＩＣ−ＴＬＭは、液体中の個々の分子の検出のための革新的なツールになるでしょう。例えば、ＤＩＣ−ＴＬＭは、個々のタンパク質を標識することによってその機能を低下させることなく検出することによって、プロテオミクスに寄与する。）
（１７）上記（８）、及びＦｉｇｕｒｅ１．（ａ）より、０度に偏光されたプローブビームが１：１に分離されていることから、分離されたプローブビームの一方と４５度に偏光された励起ビームとは同光路のものとなることは明らかであるから、
プローブビームを励起ビームと同光路の一方のプローブビームと、他光路の他方のプローブビームとに分離するとともに、所定の光線分離角となるように前記一方のプローブビーム及び前記励起ビームと前記他方のプローブビームとを出射させるＤＩＣプリズム
（１８）上記（８）、及びＦｉｇｕｒｅ１．（ａ）より、
サンプルを通過した一方のプローブビーム及び励起ビームと他方のプローブビームとを、下部ＤＩＣプリズムで干渉するよう出射させるコンデンサレンズ
　上記（１）乃至（１８）から、刊行物１には、次の発明（以下「引用発明１」という。）が記載されているものと認められる。
「マイクロおよびナノスペースの単一分子の計数のための微分干渉コントラスト熱レンズ顕微鏡（ＤＩＣ−ＴＬＭ）であって、４８８ｎｍのアルゴンイオンレーザーを励起ビームとして使用し、励起ビームは、１ｋＨｚの変調周波数で光チョッパによりチョップされ、６３３ｎｍのＨｅ−Ｎｅレーザーをプローブビームとして適用し、両方のビームはグラン−トムソンプリズムによって直線偏光され、励起光の偏光面は４５度に調整され、プローブビームの偏光面は０度に調整され、この偏光制御の結果、プローブビームは、顕微鏡に設置された上部ＤＩＣプリズムによって、プローブビームを励起ビームと同光路の一方のプローブビームと、他光路の他方のプローブビームとに１：１に分離されるとともに、励起ビームは１０：１の比率で分離され、所定の光線分離角となるように前記一方のプローブビーム及び前記励起ビームと前記他方のプローブビームとを出射させ、その後、対物レンズを用いてマイクロチップ内の試料に両者を集束させ、サンプルを通過した後、コンデンサレンズは、サンプルを通過した一方のプローブビーム及び励起ビームと他方のプローブビームとを、下部ＤＩＣプリズムで干渉するよう出射し、プローブビームは下部ＤＩＣプリズムと偏光フィルタによって干渉し、最後に、励起ビームをフィルタでカットし、残りのプローブビームをアバランシェフォトダイオードで検出し、その電気信号をロックイン増幅器に供給し、チョッパ周波数に同期した成分を抽出し、
　２つのプローブビームスポットの距離（シア値）は約５μｍである、微分干渉コントラスト熱レンズ顕微鏡（ＤＩＣ−ＴＬＭ）。」
２．刊行物２
　原査定の拒絶理由で引用された、特開平７−２５３５４５号公報（以下「刊行物２」という。）には、次の事項が記載されている。
（１）「【特許請求の範囲】
【請求項１】
照明光束を供給する光源部と該光源部からの照明光束を集光して被検物を照明するコンデンサーレンズとを持つ照明光学系と、該照明光学系により照明された前記被検物からの光束を集光して前記被検物の拡大像を形成する対物レンズを持つ観察光学系とを有し、
前記照明光学系は、前記照明光束の偏光方向を揃える第１偏光部材と、該第１偏光部材を介した光束に基づいて、前記照明光学系の光軸を含む第１面と平行な方向で直線偏光する第１光束と該第１面と垂直な方向で直線偏光する第２光束とを分離生成し、前記第１及び第２光束を前記コンデンサーレンズを介して前記被検物へ導くための第１複屈折光学部材とを有し、
前記観察光学系は、前記第１複屈折光学部材により分離された前記第１及び第２光束を前記対物レンズを介して同一光路上に導くための第２複屈折光学部材と、該第２複屈折光学部材を介した前記第１及び第２光束を干渉させる第２偏光部材とを有する微分干渉顕微鏡において、
前記第１及び第２複屈折光学部材はそれぞれ偏光分離面を有し、
前記第１複屈折光学部材の偏光分離面と前記第２複屈折光学部材の偏光分離面とは、前記被検物面に対して面対称に配置されることを特徴とする微分干渉顕微鏡
…
【請求項４】
前記コンデンサーレンズは前記対物レンズと同一なレンズ構成を持ち、前記コンデンサーレンズの各レンズ面と前記対物レンズとの各レンズ面とは、前記被検物面に対して面対称に配置されることを特徴とする請求項１乃至請求項３記載の微分干渉顕微鏡
（２）「【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、透過照明型の微分干渉顕微鏡に関するものであり、特に生物等の透明位相物体を試料とした時に好適な微分干渉顕微鏡に関する。」
（３）「【００１２】そこで、本発明は、以上の課題を解消するために、生物等の透明位相物体を高いコントラストのもとで観察することができる高性能な微分干渉顕微鏡を提供することを目的としている。」
（４）「【００１６】
【作　用】本発明は、透過型の微分干渉顕微鏡において、照明側の複屈折光学部材の見掛け上の偏光分離面の像をコンデンサーレンズと対物レンズとにより観察側の複屈折光学部材中に再結像する際に、照明側の複屈折光学部材の見掛け上の偏光分離面の像を観察側の複屈折光学部材の見掛け上の偏光分離面に対して光路長差が少なくなるようするという事に着目し、照明側の複屈折光学部材の見掛け上の偏光分離面と観察側の複屈折光学部材の見掛け上の偏光分離面とを被検物面に対して面対称に配置、換言すれば、照明側の複屈折光学部材の偏光分離面と観察側の複屈折光学部材の偏光分離面とを被検物面に対して面対称に配置したものである。これにより、生物等の透明位相物体を従来の透過型の微分干渉顕微鏡に比べて格段に高いコントラストのもとで観察することができる。」
（５）「【００１９】また、照明系側のコンデンサーレンズを観察側の対物レンズと同一なレンズ構成とすれば、照明系側のコンデンサーレンズの各レンズと観察側の対物レンズの各レンズ面とは、被検物面に対して面対称に配置される事となり、被検物面を挟んでコンデンサーレンズと対物レンズとが対称な光学系を構成する。このため、従来では、通常、コンデンサーレンズは対物レンズよりも簡素な構成である事による瞳に関する収差が補正されていないという問題があるが、被検物面を挟んでコンデンサーレンズと対物レンズとが対称な光学系を構成する事で、瞳に関する収差がコンデンサーレンズと対物レンズとでバランス良く相殺され、微分干渉像を格段に良くし得るという利点がある。」
（６）「【００２３】図２には、第１のウオラストンプリズムＷ1 から第２のウオラストンプリズムＷ2 までの構成を拡大した時の様子を示しており、本実施例では、コンデンサーレンズ３は対物レンズ５と同一の焦点距離並びに同一のレンズ構成を有している。従って、コンデンサーレンズ３の各レンズ面と対物レンズ５との各レンズ面とは、生物標本４の面に対して面対称に配置されている。
【００２４】また、図２に示す如く、第１及び第２ウオラストンプリズム（Ｗ1 ，Ｗ2 ）は、光軸に垂直な面内で光学軸が互いに直交するように２つの楔状の複屈折素子が接合されて構成されており、各ウオラストンプリズム（Ｗ1 ，Ｗ2 ）とも生物標本４側での複屈折素子の光学軸は図２の紙面に垂直である。そして、第１及び第２ウオラストンプリズム（Ｗ1 ，Ｗ2 ）は、これらの各偏光分離面（Ｄ１，Ｄ２）が生物標本４の面に対して面対称となるように配置されている。このため、第１のウオラストンプリズムＷ1 をコンデンサーレンズ３側から見た時の見掛け上の偏光分離面Ｄ１’と、観察側のウオラストンプリズムＷ２を対物レンズ５側から見た時の見掛け上の偏光分離面Ｄ２’とが生物標本４の面に対して面対称となる。」
　上記（１）から、刊行物２には、次の発明（以下「引用発明２」という。）が記載されているものと認められる。
「照明光束を供給する光源部と該光源部からの照明光束を集光して被検物を照明するコンデンサーレンズとを持つ照明光学系と、該照明光学系により照明された前記被検物からの光束を集光して前記被検物の拡大像を形成する対物レンズを持つ観察光学系とを有し、
前記照明光学系は、前記照明光束の偏光方向を揃える第１偏光部材と、該第１偏光部材を介した光束に基づいて、前記照明光学系の光軸を含む第１面と平行な方向で直線偏光する第１光束と該第１面と垂直な方向で直線偏光する第２光束とを分離生成し、前記第１及び第２光束を前記コンデンサーレンズを介して前記被検物へ導くための第１複屈折光学部材とを有し、
前記観察光学系は、前記第１複屈折光学部材により分離された前記第１及び第２光束を前記対物レンズを介して同一光路上に導くための第２複屈折光学部材と、該第２複屈折光学部材を介した前記第１及び第２光束を干渉させる第２偏光部材とを有する微分干渉顕微鏡において、
前記第１及び第２複屈折光学部材はそれぞれ偏光分離面を有し、
前記第１複屈折光学部材の偏光分離面と前記第２複屈折光学部材の偏光分離面とは、前記被検物面に対して面対称に配置され、
前記コンデンサーレンズは前記対物レンズと同一なレンズ構成を持ち、前記コンデンサーレンズの各レンズ面と前記対物レンズとの各レンズ面とは、前記被検物面に対して面対称に配置される、微分干渉顕微鏡。」
３．刊行物３
　原査定の拒絶理由で引用された、特開２００４−７７６０９号公報（以下「刊行物３」という。）には、次の事項が記載されている。
（１）「【請求項６】
光源と、
この光源からの光束を直線偏光の光束にする分離側偏光素子と、
この直線偏光の光束を、振動方向が互いに直交する２つの直線偏光の光束に分離する偏光分離素子と、
この偏光分離素子にて分離された２つの直線偏光の光束を複屈折させる分離側複屈折素子と、
この分離側複屈折素子にて複屈折し、観察物体を透過した又は観察物体で反射した２つの直線偏光の光束を複屈折させる重畳側複屈折素子と、
この重畳側複屈折素子にて複屈折した２つの直線偏光の光束を重ね合わせる重畳素子と、
この重畳素子により重ね合わされた２つの直線偏光の光束を干渉させる重畳側偏光素子と、
前記分離側複屈折素子と前記重畳側複屈折素子との少なくとも一方の複屈折素子に設けられていて、この少なくとも一方の複屈折素子に入射した２つの直線偏光の光束を複屈折させる電気光学部材と、
前記電気光学部材に入射した２つの直線偏光の光束の一方に対するこの電気光学部材の屈折率を電気的に変化させて、電気光学部材が設けられている複屈折素子から出射する２つの直線偏光の光束の間隔と、これら２つの光束のなす角との少なくとも一方を変化させる屈折率変化部と、
を備えており、
前記偏光分離素子、前記重畳素子及び前記電気光学部材の内の少なくとも１つは、互いに平行な入射面と出射面とを有していることを特徴とする微分干渉顕微鏡装置。」
（２）「【０００１】
【発明の属する技術分野】
この発明は、複数の光束を動かす光束制御装置、この光束制御装置を有する干渉装置及び、この干渉装置を用いて、位相物体である例えば細胞やバクテリア等の微細胞物体の位相分布、あるいは金属などの結晶構造の位相分布を取得する微分干渉顕微鏡装置に関する。」
（３）「【００８０】
次に、図９〜図１１を参照して本発明の第３の実施の形態の
微分干渉顕微鏡装置
【００８１】
図１０は分離部３０１の概略図である。
分離部３０１は、複屈折材料、好ましくは複屈折結晶で形成されている偏光分離素子３３０と分離側複屈折素子３４０とを有している
【００８２】
第１の実施の形態では、偏光分離素子２３０と接する入射側光透過部材２４１の接触表面２４２は、入射側光透過部材２４１の入射側表面２４５に平行である。一方、本実施の形態では、偏光分離素子３３０と接する入射側光透過部材３４１の接触表面３４２は、入射側光透過部材３４１の入射側表面３４５に対して傾斜している。入射側光透過部材３４１の形状は楔形である。
【００８３】
本実施の形態の分離部３０１は第１の実施の形態の分離部２０１と同様の作用をもっている。分離部３０１に導かれた直線偏光の光束Ｉは、偏光分離素子３３０の入射面３３１に入射し、２つ直線偏光の光束Ｏ，Ｅ（光束Ｏは常光線　光束Ｅは異常光線）に分離される。図１０では、入射面３３１は紙面に垂直に向けられている。光束Ｉは紙面に平行に進む。入射面３３１の法線は光束Ｉと所定の角度をなしている。偏光分離素子３３０の光学軸の方向は入射面３３１に平行である。光束Ｉの偏光方向は紙面に対して４５°傾いている。光束Ｏ，Ｅの偏光方向は互いに直交しており、一方の光束の偏光方向は紙面に平行である。光束Ｏ，Ｅは紙面に平行に進む。
【００８４】
分離された光束Ｏ，Ｅは、入射側光透過部材３４１、電気光学部材３４４及び出射側光透過部材３４７を順に通過し、出射側光透過部材３４７から出射する。出射側光透過部材３４７から出射した、即ち分離部３０１から出射した光束Ｏ，Ｅは、第１の実施の形態の分離部２０１から出射した光束Ｏ，Ｅと同様に、互いに平行である。
【００８５】
光束Ｅに対する電気光学部材３４４の屈折率は、分離側屈折率変化部３１４により電気的に変化させられる。光束Ｅに対する屈折率が変化するとき、光束Ｏに対する屈折率はほとんど変化しない。屈折率の変化に応じて、分離部３０１から出射した光束Ｏ，Ｅの間隔が変化する。屈折率を変化させるために、分離側屈折率変化部３１４は電気光学部材３４４に電圧を印加する。分離側屈折率変化部３１４には制御部１７が接続されている。制御部１７は、分離部３０１から出射する、互いに平行な光束Ｏ，Ｅの間隔が所望の間隔Δになるよう分離側屈折率変化部３１４を制御する。
【００８６】
次に、光束Ｏ，Ｅは間隔Δを保ちながら観察物体５を透過する。間隔Δは微分干渉顕微鏡装置のシア量である。観察物体５を透過した光束Ｏ，Ｅは平行なまま重畳部３０２に導かれる。」
（４）「【００９６】
表７（中心波長４９０ｎｍ）
偏光分離素子３３０：
傾き角度（度）　　　　　　　　　　６
（入射面３３１の法線と入射面３３１に入射する光束Ｉとのなす角。図１０では、反時計回りが正。）
屈折率（常光線）　　　　　　　　　１．５４４３
屈折率（異常光線）　　　　　　　　１．５５３４
厚さ（ｍｍ）　　　　　　　　　　　３
入射側光透過部材３４１（楔形）：
屈折率　　　　　　　　　　　　　　１．４６９１４９
厚さ（ｍｍ）　　　　　　　　　　　１．１
頂角　　　　　　　　　　　　　　　７
（接触表面３４２と入射側表面３４５のなす角）
電気光学部材３４４：
光束Ｅに対する屈折率の変化範囲　　１．５〜１．７
光束Ｏに対する屈折率　　　　　　　１．７
厚さ（ｍｍ）　　　　　　　　　　　０．０５
出射側光透過部材３４７：
屈折率　　　　　　　　　　　　　　１．４６９１４９
厚さ（ｍｍ）　　　　　　　　　　　１．１
上記数値を用いれば、
分離部３０１から出射した光束Ｏ，Ｅの間隔、即ちシア量の値は、０．０４μｍ〜１．１μｍの範囲をとり得る
（４）「【０１２７】
対物レンズ１１の焦点距離、分解能はそれぞれ１０ｍｍ、０．８μｍである。結像レンズ１２の焦点距離は２００ｍｍである。分離重畳複屈折素子６４０を出射し、対物レンズ１１を通過して観察物体５に照射される光束Ｏ，Ｅを考えると、シア量Δは約０．１９〜約１．７９μｍの範囲をとり得る。即ち、シア量Δは対物レンズ１１の分解能の０．２１倍〜１．７倍の値をとり得る。」
　上記（１）乃至（４）から、刊行物３には、次の技術事項（以下「技術事項１」という。）が記載されているものと認められる。
「複屈折材料、好ましくは複屈折結晶で形成されている偏光分離素子と分離側複屈折素子とを有する分離部から出射した光束の間隔、即ちシア量の値が、０．０４μｍ〜１．１μｍの範囲をとり得る、微分干渉顕微鏡装置。
」
４．刊行物４
　原査定の拒絶理由で引用された、特開平１０−１６１０３１号公報（以下「刊行物４」という。）には、次の事項が記載されている。
（１）「【０００１】
【発明の属する技術分野】この発明は、細胞やバクテリア等の透明な試料を観察したり、半導体やシリコンウエハの表面の凹凸を観察するのに好適な微分干渉顕微鏡、およびこれを用いる顕微鏡画像処理システムに関するものである。」
（２）「【００１１】この発明は、上記の点に鑑みてなされたもので、その第１の目的は、簡単な構成でシェア量を変えることができるようにした透過型微分干渉顕微鏡を提供しようとするものである。
【００１２】この発明の第２の目的は、同様に、簡単な構成で
シェア量を変えることができるようにした反射型微分干渉顕微鏡
【００１３】さらに、この発明の第３の目的は、シェア量可変の顕微鏡画像処理システムを提供しようとするものである。」
（３）「【００７６】図９は、この発明の第２実施形態を示すものである。この実施形態は、図７に示した透過型微分干渉顕微鏡を用いる顕微鏡画像処理システムを示すもので、図７に示す透過型微分干渉顕微鏡の結像面に電子撮像手段を構成する電子撮像素子１０１を配置し、この電子撮像素子１０１からの画像信号を画像処理手段１０２に供給して選択的にコントラスト強調を行い、この画像処理手段１０２の出力をモニタ等の出力手段１０３に供給するようにしたものである。
【００７７】ここで、被観察物体６６上でのシア量は、偏光分離手段６３および偏光合成手段６９における分離量を連動して調整して、画像処理手段１０２でコントラスト強調処理を行わない場合には、シア量を大きくして目視観察におけるコントラストを良好にし、コントラスト強調処理を行う場合には、シア量を小さくして解像力を上げるようにする。」
　上記（１）乃至（３）から、刊行物４には、次の技術事項発明（以下「技術事項２」という。）が記載されているものと認められる。
「シェア量を変えることができるようにした反射型微分干渉顕微鏡。」
５．刊行物５
　原査定の拒絶理由で引用された、特開号公報（以下「刊行物５」という。）には、次の事項が記載されている。
（１）「【０００１】
【産業上の利用分野】この発明は、例えば細胞やバクテリア等の微細物体、あるいは金属等の結晶構造を高解像力で観察するのに好適な微分干渉顕微鏡に関するものである。」
（２）「【０００７】これに対し、通常の
微分干渉顕微鏡においては、観察物体面上での常光と異常光との分離幅、すなわちシェア量が解像力やコントラストを決める重要なパラメータとなり、このシェア量を顕微鏡の分解能程度に設定する
　上記（１）及び（２）から、刊行物５には、次の技術事項（以下「技術事項３」という。）が記載されているものと認められる。
「観察物体面上での常光と異常光との分離幅、すなわちシェア量を顕微鏡の分解能程度に設定した、微分干渉顕微鏡。」
第４　対比
　本願発明と引用発明１とを対比すると、
　後者の「微分干渉コントラスト熱レンズ顕微鏡（ＤＩＣ−ＴＬＭ）」は、前者の「微分干渉熱レンズ顕微鏡」に相当する。
　後者の「微分干渉コントラスト熱レンズ顕微鏡（ＤＩＣ−ＴＬＭ）」は、マイクロおよびナノスペースの単一分子の計数のためのものであるから、前者の「微分干渉熱レンズ顕微鏡」と、「マイクロあるいはナノスケールの微細空間内の試料溶液中の分子を定量するための」との概念で共通する。
　後者の後者の「励起ビーム」は、４８８ｎｍのアルゴンイオンレーザーを励起ビームとして使用したものであるから、前者の「入射したレーザー光の励起光」に相当する。
　後者の「プローブビーム」は、６３３ｎｍのＨｅ−Ｎｅレーザーを使用したものであるから、前者の「プローブ光」に相当する。
　後者の「上部ＤＩＣプリズム」は、前者の「第１プリズム」に相当し、顕微鏡に設置された上部ＤＩＣプリズムによって、プローブビームは、プローブビームを励起ビームと同光路の一方のプローブビームと、他光路の他方のプローブビームとに１：１に分離されるとともに、励起ビームは１０：１の比率で分離され、所定の光線分離角となるように前記一方のプローブビーム及び前記励起ビームと前記他方のプローブビームとを出射させるものであるから、前者の「第１プリズム」と、「入射したレーザー光の励起光及びプローブ光を複屈折させ、前記プローブ光を前記励起光と同光路の一方のプローブ光と、他光路の他方のプローブ光とに分離するとともに、所定の光線分離角となるように前記一方のプローブ光及び前記励起光と前記他方のプローブとを出射させる」との概念で共通する。
　後者の「対物レンズ」は、マイクロチップ内の試料に分離されたプローブビームおよび分離された励起ビームをマイクロチップ内の試料に集束させるものであって、２つのプローブビームスポットは約５μｍの距離を取る平行なものといえるから、前者の「第１プリズムから入射した前記一方のプローブ光及び前記励起光と前記他方のプローブ光とを、所定の分離幅で平行にしつつ前記試料溶液中に絞り込んで出射させる第１レンズ体」に相当する。
　後者の「コンデンサレンズ」は、サンプルを通過した一方のプローブビーム及び励起ビームと他方のプローブビームとを、下部ＤＩＣプリズムで干渉するよう出射するものであって、２つのプローブビームスポットは約５μｍの距離を取る平行なものといえるから、前者の「前記試料溶液を通過して入射した前記一方のプローブ光及び前記励起光と前記他方のプローブ光とを交差するように出射させる第２レンズ体」に相当する。
　後者の「下部ＤＩＣプリズム」は、前者の「第２プリズム」に相当し、サンプルを通過し、コンデンサレンズを通過した一方のプローブビーム及び励起ビームと他方のプローブビームとを干渉させるものであるから、前者の「第２プリズム」と、「第２レンズ体から入射した一方のプローブ光と他方のプローブ光を複屈折させるとともに合成干渉させる」との概念で共通する。
　後者の「アバランシェフォトダイオード」は、前者の「検出器」に相当し、ＤＩＣプリズム及び偏光フィルタによって干渉したプローブビームを検出するものであるから、前者の「検出器」と、「第２プリズムから出射した一方のプローブ光と他方のプローブ光の合成干渉波を検出する」との概念で共通する。
　したがって、両者は、　
「マイクロあるいはナノスケールの微細空間内の試料溶液中の分子を定量するための微分干渉熱レンズ顕微鏡であって、
　入射したレーザー光の励起光及びプローブ光を複屈折させ、前記プローブ光を前記励起光と同光路の一方のプローブ光と、他光路の他方のプローブ光とに分離するとともに、所定の光線分離角となるように前記一方のプローブ光及び前記励起光と前記他方のプローブとを出射させる第１プリズムと、
　前記第１プリズムから入射した前記一方のプローブ光及び前記励起光と前記他方のプローブ光とを、所定の分離幅で平行にしつつ前記試料溶液中に絞り込んで出射させる第１レンズ体と、
　前記試料溶液を通過して入射した前記一方のプローブ光及び前記励起光と前記他方のプローブ光とを交差するように出射させる第２レンズ体と、
　前記第２レンズ体から入射した前記一方のプローブ光と前記他方のプローブ光を複屈折させるとともに合成干渉させる第２プリズムと、
　前記第２プリズムから出射した前記一方のプローブ光と前記他方のプローブ光の合成干渉波を検出する検出器とを備えている、微分干渉熱レンズ顕微鏡。」　
の点で一致し、以下の点で相違する。　
［相違点１］　
　本願発明の「第１レンズ体」が、「複数のレンズを組み合わせて」なるものであるのに対し、引用発明１は、その点が明らかでない点。
［相違点２］　
　本願発明の「第２レンズ体」が、「複数のレンズを組み合わせて」なるものであるのに対し、引用発明１は、その点が明らかでない点。
［相違点３］　
　本願発明の「第２レンズ体」が、試料溶液を通過して入射した一方のプローブ光及び励起光と他方のプローブ光とを「光線分離角と同角の光線交差角で」交差するように出射させるものであって、本願発明が、「微細空間を境に一方の側に設けられた第１プリズムと第１レンズ体と、他方の側に設けられた第２プリズムと第２レンズ体とのプリズム同士、レンズ体同士が同じ光学特性を備え、前記微細空間を境に一方の側と他方の側の光学系を対称にし」ているのに対し、引用発明１は、そのようなものでない点。
［相違点４］　
　本願発明が、「前記一方のプローブと前記他方のプローブ光の位相差に応じた合成干渉波の強度の値が、前記微細空間を境に一方の側と他方の側の光学系を非対称にした微分干渉熱レンズ顕微鏡を用い分離幅を５．３μｍとしたときの合成干渉波の強度に対して１／２以上となるように構成されている」ているのに対し、引用発明１は、２つのプローブビームスポットの距離（シア値）を約５μｍとし、合成干渉波の強度は定かでない点。
第５　判断　
　上記相違点について以下検討する。
１．［相違点１］及び［相違点２］について
　上記相違点１に係る本願発明の発明特定事項である「『複数のレンズを組み合わせてな』る『第１レンズ体』」、及び上記相違点２に係る本願発明の発明特定事項である「『複数のレンズを組み合わせてな』る『第２レンズ体』」について、一般に、所望の光学特性を得るために、複数のレンズを組み合わせて設計することは常套手段にすぎず、本願明細書をみても、レンズ体を複数のレンズを組み合わせてなるものとすることについて、単体のレンズからなるレンズ体と比較して、設計的事項の域を超えるほどの格別な技術的意義は認められないから、引用発明１において、上記相違点１に係る本願補正発明の発明特定事項とすること、及び上記相違点２に係る本願補正発明の発明特定事項とすることは、当業者が容易に想到し得るものである。
２．［相違点３］について
　引用発明２の「被検物」は、その一方の側には、「第１複屈折光学部材」と「『対物レンズと同一焦点距離を有する』『コンデンサーレンズ』」が設けられ、他方の側には、「第２複屈折光学部材」と「対物レンズ」とが設けられ、微分干渉顕微鏡の被検対象であるから、本願発明の「微細空間」に相当する。
　そして、引用発明１と引用発明２とは、微分干渉顕微鏡という技術分野に属する点で共通し、高いコントラストで観察のできる微分干渉顕微鏡を提供するという課題の点で共通するものであるから、引用発明１において、引用発明２を適用することは、当業者が容易に想到し得るものである。
　ここで、引用発明１に、引用発明２を適用するに際し、引用発明２の「第１及び第２複屈折光学部材はそれぞれ偏光分離面を有し、前記第１複屈折光学部材の偏光分離面と前記第２複屈折光学部材の偏光分離面とは、前記被検物面に対して面対称に配置され、前記コンデンサーレンズは前記対物レンズと同一なレンズ構成を持ち、前記コンデンサーレンズの各レンズ面と前記対物レンズとの各レンズ面とは、前記被検物面に対して面対称に配置される」を踏まえれば、微細空間を境に一方の側と他方の側の光学系が対称となるのであるから、引用発明１に、引用発明２を適用することにより、上記相違点３に係る本願発明の発明特定事項である「『第２レンズ体』が、試料溶液を通過して入射した一方のプローブ光及び励起光と他方のプローブ光とを『光線分離角と同角の光線交差角で』交差するように出射させるもの」とすること、及び「微細空間を境に一方の側に設けられた第１プリズムと第１レンズ体と、他方の側に設けられた第２プリズムと第２レンズ体とのプリズム同士、レンズ体同士が同じ光学特性を備え、前記微細空間を境に一方の側と他方の側の光学系を対称に」することは、当業者が容易に想到し得るものである。
　そうすると、上記相違点３に係る本願補正発明の発明特定事項とすることは、当業者が容易に想到し得るものである。
３．［相違点４］について
　引用発明１の「微分干渉コントラスト熱レンズ顕微鏡（ＤＩＣ−ＴＬＭ）」は、サンプルを境に対物レンズとコンデンサレンズをそれぞれ設けたものであるから、上記相違点４に係る本願発明の発明特定事項における「微細空間を境に一方の側と他方の側の光学系を非対称にした微分干渉熱レンズ顕微鏡」に相当する。そして、２つのプローブビームスポットの距離（シア量）、すなわち、分離幅を約５μｍに設定した引用発明１の「微分干渉コントラスト熱レンズ顕微鏡（ＤＩＣ−ＴＬＭ）」における合成干渉波の強度は、上記相違点４に係る本願発明の発明特定事項における「微細空間を境に一方の側と他方の側の光学系を非対称にした微分干渉熱レンズ顕微鏡を用い分離幅を５．３μｍとしたとき」に較べて、弱まりはするものの、半減（１／２）するほど弱まるものでないことは、当業者にとって明らかな事項である。
　そして、上記２．のとおり、引用発明１において、引用発明２を適用することは、当業者が容易に想到し得るものである。
　ここで、引用発明１に、引用発明２を適用するに際し、引用発明２が、「生物等の透明位相物体を高いコントラストのもとで観察することができる高性能な微分干渉顕微鏡を提供すること」（【００１２】参照。）を目的として、「『照明側の複屈折光学部材の偏光分離面と観察側の複屈折光学部材の偏光分離面とを被検物面に対して面対称に配置』することにより、『生物等の透明位相物体を従来の透過型の微分干渉顕微鏡に比べて格段に高いコントラストのもとで観察することができる』」（【００１６】参照。）、及び「…被検物面を挟んでコンデンサーレンズと対物レンズとが対称な光学系を構成する事で、瞳に関する収差がコンデンサーレンズと対物レンズとでバランス良く相殺され、微分干渉像を格段に良くし得るという利点がある。」（【００１９】参照。）という作用を奏するものであることを踏まえれば、引用発明１に、引用発明２を適用することにより、より高いコントラストで観察できるものとなることは明らかであって、微細空間を境に一方の側と他方の側の光学系が非対称な微分干渉熱レンズ顕微鏡である引用発明１の合成干渉波の強度が弱まるという特段の事情はなく、また、上記技術事項１乃至３に示されているように、微分干渉顕微鏡において、分離した一方のプローブ光と他方のプローブ光との分離幅（シア量）は、対物レンズの分解能や、目的にしたがって、適宜、調節すべきパラメータであることを踏まえれば、引用発明１に、引用発明２を適用することにより、上記相違点４に係る本願発明の発明特定事項である「前記一方のプローブと前記他方のプローブ光の位相差に応じた合成干渉波の強度の値が、前記微細空間を境に一方の側と他方の側の光学系を非対称にした微分干渉熱レンズ顕微鏡を用い分離幅を５．３μｍとしたときの合成干渉波の強度に対して１／２以上となるように構成されている」ようにすることは、当業者が容易になし得ることである。
　そうすると、上記相違点４に係る本願発明の発明特定事項は、引用発明１、及び上記技術事項１乃至３より、当業者が容易になし得るものである。
　そして、本願発明の発明特定事項によって奏される効果も、引用発明１、、引用発明２、及び上記技術事項１乃至３から、当業者が予測しうる範囲内のものである。
　よって、本願発明は、引用発明１、引用発明２、及び上記技術事項１乃至３に基づいて、当業者が容易に発明をすることができたものである。
第６　むすび　
　以上のとおりであるから、本願発明は、引用発明１、、引用発明２、及び上記技術事項１乃至３に基づいて、当業者が容易に発明をすることができたものであるから、特許法第２９条第２項に該当し、特許を受けることができない。
よって、結論のとおり審決する。