(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
修飾が脂肪酸エステルおよびポリジメチルシロキサンの混合物を用いる膜の処理を含み、修飾された限外ろ過膜がヒト皮膚様透過性を含み、かつ０．１ミクロン以下の細孔径を含むことを特徴とする、修飾された限外ろ過膜。
【請求項２】
脂肪酸エステルがミリスチン酸イソプロピルであり、ならびにポリジメチルシロキサンがシリコーン油である、請求項１の膜。
【請求項３】
膜がポリエーテルスルホン膜である、請求項１または２に記載の限外ろ過膜。
【請求項４】
ヒト皮膚様透過性が、１種以上の化合物の拡散について、ヒト皮膚と高度の相関を含む、請求項１から３のいずれか一項に記載の修飾された限外ろ過膜。
【請求項５】
請求項１から４のいずれか一項に記載の膜を含むデバイス。
【請求項６】
デバイスが、複数のウェルを含むマルチウェルスクリーニングプレートであり、各ウェルが膜を含む、請求項５に記載のデバイス。
【請求項７】
（ａ）ポリエーテルスルホン限外ろ過膜を用意する段階；ならびに
（ｂ）脂肪酸エステルおよびポリジメチルシロキサンの混合物を用いて膜を被覆する段階を含み、
それにより、ヒト皮膚様透過性を含む合成膜をもたらす
ヒト皮膚様透過性を含みかつ０．１ミクロン以下の細孔径を含む合成膜を製造する方法。
【請求項８】
脂肪酸エステルがミリスチン酸イソプロピルであり、ならびにポリジメチルシロキサンがシリコーン油である、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
合成膜が、異なる物理化学的特性を有する化合物について、ヒト皮膚と類似した拡散を示す、請求項７または８に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本米国特許出願は、２０１０年４月５日に出願された米国仮特許出願第６１／３４１，８５５号および２０１０年１１月１日に出願された米国仮特許出願第６１／４０８，８６４号の優先権の利益を主張し、これらの各出願の全内容は、この全体が参照により本明細書に組み込まれている。
【０００２】
本発明は、ヒト皮膚様透過性を有する新規ポリマー膜、ならびそれを製造および使用する方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
医薬または化粧品化合物および製剤の候補は、一般に、皮膚を横切る拡散について試験される。最も好ましくは、切除されたヒト死体皮膚または美容整形外科で余ったヒト皮膚は、このような試験のために使用され、典型的には、インビトロの実験設定において使用される。理想でないにしても、切除された動物皮膚、例えばラット、マウスまたはブタの皮膚はまた、種々の化合物および製剤の経皮的拡散を調べるために使用される場合もある。しかしながら、切除された動物皮膚および動物モデルを用いて得られた結果は、ヒト皮膚に常に外挿できるとは限らない。さらに、切除されたヒトおよび動物皮膚の十分な供給を得ることは、多くの場合、難題であり、費用がかかる傾向にある。
【０００４】
さらに、Ｇｒａｆｔｓｋｉｎ（商標）ＬＳＥなどの生物工学的に作製された皮膚同等物があり、皮膚同等物も候補製剤および化合物の経皮的拡散試験に利用可能である。しかしながら、このような同等物は、多くの場合、費用がかかり、ヒト皮膚よりも種々の化合物について非常に高い拡散率を示すため、すべての化合物の試験に適切でないことが示されている。Ｓｃｈｍｏｏｋら、Ｉｎｔ  Ｊ．Ｐｈａｒｍ．２１５：５１−５６頁（２００１年）を参照されたい。
【０００５】
最後に、切除されたヒトおよび動物の皮膚、ならびに生物工学的に作製された皮膚同等物に加えて、医薬および化粧品化合物および製剤の経皮的拡散特性を調べるためにヒト皮膚モデルとして使用され得る合成膜を作成する試みがなされている。これらには、種々の修飾を有する、低密度ポリエチレン（ＬＤＰＥ）膜、酢酸セルロース膜、シリコーン膜、疎水性ポリフッ化ビニリデン（ＰＶＤＦ）膜、ポリカーボネート膜、キトサン膜、複合セロファン膜、ポリ（ジメチルシロキサン）膜および硝酸セルロース膜などの膜が挙げられる。例えば、Ｗａｎｇら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．、３１０：１１０−１１７頁（２００６年）；Ｄｉａｓら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．、１８２：４１−４７頁（１９９９年）；Ｌｅｖｅｑｕｅら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．、３１８：４９−５４頁（２００６年）；Ｏｔｔａｖｉａｎｉら、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．、４９：３９４８−３９５４頁（２００６年）；Ｏｔｔａｖｉａｎｉら、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．、５０：７４２−７４８頁（２００７年）；Ｌｅｖｅｑｕｅら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．、２６９：３２３−３２８頁（２００４年）；Ｄｕｒｅｊａら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．、２１３：１９３−１９８頁（２００１年）；Ｌｏｆｔｓｓｏｎら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．、３２６：６０−６８頁（２００６年）；Ｆｒｕｍら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｉｏｐｈａｒｍ．、６７：４３４−４３９頁（２００７年）；およびＭｕｒａら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｉｏｐｈａｒｍ．、６７：８６−９５頁（２００７年）を参照されたい。
【０００６】
しかしながら、既存の合成膜は、ヒト皮膚と比較して、低い再現性および／または高い変動性のため、広範囲の医薬および化粧品化合物および製剤の経皮的拡散特性を調べるために適切な代用皮膚を提供しない。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Ｓｃｈｍｏｏｋら、Ｉｎｔ  Ｊ．Ｐｈａｒｍ．  ２１５：５１−５６頁（２００１年）
【非特許文献２】Ｗａｎｇら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．、３１０：１１０−１１７頁（２００６年）
【非特許文献３】Ｄｉａｓら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．、１８２：４１−４７頁（１９９９年）
【非特許文献４】Ｌｅｖｅｑｕｅら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．、３１８：４９−５４頁（２００６年）
【非特許文献５】Ｏｔｔａｖｉａｎｉら、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．、４９：３９４８−３９５４頁（２００６年）
【非特許文献６】Ｏｔｔａｖｉａｎｉら、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．、５０：７４２−７４８頁（２００７年）
【非特許文献７】Ｌｅｖｅｑｕｅら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．、２６９：３２３−３２８頁（２００４年）
【非特許文献８】Ｄｕｒｅｊａら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．、２１３：１９３−１９８頁（２００１年）
【非特許文献９】Ｌｏｆｔｓｓｏｎら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．、３２６：６０−６８頁（２００６年）
【非特許文献１０】Ｆｒｕｍら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｉｏｐｈａｒｍ．、６７：４３４−４３９頁（２００７年）
【非特許文献１１】Ｍｕｒａら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｉｏｐｈａｒｍ．、６７：８６−９５頁（２００７年）
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明は、少なくとも部分的には、限外ろ過膜が、一定の方法で処理された場合、ヒト皮膚様透過性を示し、したがって、幅広い医薬および化粧品化合物および製剤の経皮的拡散特性を調べるために適切な代用皮膚を提供するという観察に基づいている。
【０００９】
本発明による合成膜は、種々の物理化学的特性を有する多種多様な化合物の経皮的拡散に関してヒト皮膚と高度の相関を示すので、従来の合成膜と比較してヒトの代用皮膚として優れている。換言すると、従来の合成膜の中には、場合によっては限られた数の化合物についてまたは類似した物理化学的特性を有する化合物について、ヒト皮膚に類似した透過性を示すようなものもあるが、それらの合成膜は、それらの物理化学的特性において非常に異なっている可能性がある化合物の経皮的拡散を調べるためのヒトの代用皮膚として信頼できるものではないようである。
【００１０】
本発明による合成膜は、それらの物理化学的特性において非常に異なっている多種多様な化合物についてヒト皮膚に類似した透過性を示し、それによって、これらを広範囲の医薬および化粧品化合物および製剤の経皮的拡散を調べるために望ましいヒトの代用皮膚にする。
【００１１】
本発明の一態様において、修飾された限外ろ過膜が提供され、ここで、修飾は、脂肪酸エステル（例えば、ミリスチン酸イソプロピル）およびポリジメチルシロキサン（例えば、シリコーン油）の混合物を用いる限外ろ過膜の処理を含み、ここで、修飾された限外ろ過膜はヒト皮膚様透過性を含む。
【００１２】
特定の実施形態において、限外ろ過膜はポリエーテルスルホン（ＰＥＳ）膜である。
【００１３】
種々の実施形態において、本発明による修飾された限外ろ過膜のヒト皮膚様透過性は、膜を横切る１種以上の化合物の拡散に関して、ヒト皮膚と高度の相関を含む。
【００１４】
本発明による別の態様において、ヒト皮膚様透過性を含む合成膜を製造する方法が提供され、ここで、方法は、（ａ）ポリエーテルスルホン限外ろ過膜を用意する段階；ならびに（ｂ）ミリスチン酸イソプロピルおよびシリコーン油の混合物を用いて膜を被覆する段階を含み、それにより、ヒト皮膚様透過性を含む合成膜をもたらす。
【００１５】
本発明のいくつかの実施形態において、本明細書に記載されている合成膜は、例えば、化合物のハイスループット分析に使用することができるマルチウェルプレートにシール（ｓｅａｌ）される。
【００１６】
また、本発明によって、本発明による合成膜を含むデバイスが包含される。特定の実施形態において、このようなデバイスは、ハイスループットスクリーニングに使用されるマルチウェルプレートである。
【００１７】
本開示がより容易に理解され得るために、一定の用語を最初に定義する。更なる定義は、詳細な説明を通して説明される。
【００１８】
Ｉ．定義
本明細書において同義で使用される用語「限界ろ過膜」または「ＵＦ膜」とは、一般に、細孔径が０．１μｍであるまたは０．１μｍより小さいポリマー膜、典型的には１０ｎｍから約１００ｎｍの範囲であるポリマー膜を指す。また、ＵＦ膜は、これらが保持し得る分析物の分子量によって定義される。本明細書において記載されるように修飾された代表的なＵＦ膜は、ポリエーテルスルホン（ＰＥＳ）ＵＦ膜、例えば、Ｂｉｏｍａｘ（登録商標）５  ＰＢＣＣ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）である。
【００１９】
用語「修飾された」、「修飾する」または「修飾」とは、本明細書で使用するとき、膜、例えば、ＵＦ膜、例えばＢｉｏｍａｘ（登録商標）５  ＰＢＣＣ膜（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）の処理を指し、それは、本明細書に記載されている１つもしくは複数のアッセイおよび／または当技術分野において知られているものを使用して測定した場合、ヒト皮膚様透過性を有する膜をもたらす。種々の実施形態において、修飾は、脂肪酸エステル（例えば、ミリスチン酸イソプロピル）およびポリジメチルシロキサン（例えば、シリコーン油）の混合物を用いるＢｉｏｍａｘ（登録商標）５  ＰＢＣＣ膜（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）などのＰＥＳ  ＵＦ膜の処理を含む。
【００２０】
用語「ヒト皮膚様透過性」とは、本明細書で使用するとき、本明細書に記載されているように、修飾されたＵＦ膜を通しての化合物の透過率または拡散率を指し、それは、ヒト皮膚を通しての同化合物の透過率と高度の相関を有する。
【００２１】
ヒト皮膚は、典型的には、３つの主要な層：（ａ）角質層（１０−１５μｍ厚）；（ｂ）表皮（約１００μｍ厚）；および（ｃ）真皮（２０００−３０００μｍ厚）から構成されている。走査電子顕微鏡（ＳＥＭ）を使用して見た場合のヒト皮膚の形態は図１に示されている。
【００２２】
ヒト皮膚の輸送特性に影響を及ぼす多数の脂質（例えば、セラミド、コレステロールおよび脂肪酸）が皮膚に存在する。多くの研究によって、角質層は、皮膚を横切る化合物の拡散に最も抵抗性を与える皮膚の層であることが報告されている；しかしながら、化合物は、一旦角質層を横切ると、他の層はより少ない抵抗性を与えるようであるため、それらの層を通して容易に拡散する。
【００２３】
代表的なＵＦ膜は、細孔径が約３０ｎｍから０．４５μｍであり、厚さが１００−３５０μｍの範囲である。ＳＥＭを使用して見た場合の代表的な膜のいくつかの形態は図２、３および４に示される。図２は、膜Ｖｉｒｅｓｏｌｖｅ（登録商標）Ｖ７０の代表的なＳＥＭ画像であり；図３は、ＵＰＥ支持体上のＰＬＣＣＣ  ５０００  ＭＷＣＯ  ＵＦ複合再生セルロース膜の代表的なＳＥＭ画像であり；図４は、Ｂｉｏｍａｘ（登録商標）５  ＰＢＣＣ  ＵＦ膜の代表的なＳＥＭ画像である。
【００２４】
Ｂｉｏｍａｘ（登録商標）５  ＰＢＣＣ膜は、少なくともＳＥＭによって観察されるように、形態において、ヒト皮膚と最も類似しているようである。膜の上層は、ＳＥＭ画像において見られるように、薄い「皮膚様」層であり、細孔がより多くよりオープンな構造がこれに続き、底層は、細孔がさらにより多くさらによりオープンな不織ポリプロピレン基部からなる。ミリスチン酸イソプロピルおよびシリコーン油を用いるこの膜の処理は、皮膚に存在する脂質をさらに模倣する。
【００２５】
用語「物理化学的特性」とは、本明細書で使用するとき、例えば、化合物の分子量、極性、疎水性、分配係数値（Ｌｏｇ  Ｐ）、分配係数値（Ｌｏｇ  Ｄ）および解離定数などの化合物の種々の物理的および／または化学的特性を指す。本発明の修飾されたＵＦ膜は、従来の合成膜と比較して、多様な物理化学的特性を有する多種多様な化合物の拡散についてヒト皮膚と高度の相関を示すので、望ましいヒトの代用皮膚を提供する。したがって、本発明による修飾されたＵＦ膜は、例えば、本明細書に記載されている実施例によって実証されているように、高極性化合物から非極性化合物に及ぶ、ヒト皮膚を横切る幅広い医薬および化粧品化合物および製剤の拡散を調べるために使用することができる。
【００２６】
用語「分配係数値」または「ｌｏｇ  Ｐ」とは、本明細書で使用するとき、例えば、水およびｎ−オクタノールなどの２つの溶媒相間の電離していない化合物の濃度の比を指す。分配係数は、化合物の極性の尺度を提供する。イオン性溶質の分配係数を測定するために、水相のｐＨは、化合物の主要形態が電離していないように調整される。溶媒中の電離していない溶質の濃度の比の対数は、ｌｏｇ  Ｐ値と呼ばれる。一般に、化合物のｌｏｇ  Ｐ値が高い程、化合物は非極性であり、化合物のｌｏｇ  Ｐ値が小さい程、化合物は極性である。本明細書に記載されている膜は、以下の表１に例証されているように、様々なｌｏｇ  Ｐ値を有する多種多様な化合物の経皮的拡散を調べるために使用することができる。
【００２７】
本明細書において同義で使用される用語「分配係数値」または「ｌｏｇ  Ｄ」は、例えば、水およびｎ−オクタノールなどの２つの溶媒相の各々における、すべての形態の化合物（電離している＋電離していない）の濃度の合計の比を指す。ｌｏｇ  Ｄは、化合物の極性の別の測定である；しかしながら、水溶液のｐＨの効果も考慮する点において、ｌｏｇ  Ｐとは異なる。例えば、分配係数の測定について、水相のｐＨは、ｐＨが化合物の導入によって大きく乱れないように、特定の値に緩衝される。１つの溶媒中の様々な形態の溶質の濃度の合計と、他の溶媒中のこれらの形態の溶質の濃度の合計との比の対数は、ｌｏｇ  Ｄ値と呼ばれる。本明細書に記載されている膜は、以下の表１によって例証されるように、様々なｌｏｇ  Ｄ値を有する多種多様な化合物の経皮的拡散を調べるために使用することができる。
【００２８】
本明細書において同義で使用される用語「解離定数」、「酸定数」、「イオン化定数」または「ｐＫａ値」は、化合物またはイオンが解離する傾向を記述するために使用される値を指す。
【００２９】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載されている合成膜は、例えば、化合物のハイスループットスクリーニングのための、複数のウェルを有するマルチウェルプレートにシールされる。理論によって束縛されるつもりはないが、マルチウェルスクリーニングプレートは、例えば、４、６、８、１６、２４、４８、９６、３８４などの任意の数のウェルを有することができることが企図される。特定の実施形態において、本発明による合成膜は、複数のウェルを含むマルチウェルプレートにシールされ、プレートは、対応する数のウェルを含むレシーバープレートに浸漬される。
【００３０】
膜は、それらに限定されないが、熱シール、超音波溶接、接着結合および圧縮シールを含む様々な方法を使用して、マルチウェルスクリーニングプレートに付着させてもよい。
【００３１】
マルチウェルプレートフォーマットにおける、本明細書に記載されている合成膜の使用は、ヒトおよび動物の皮膚をマルチウェルプレートフォーマットに取り付けることが通常は可能でないため、ヒトおよび動物の皮膚モデルと比較して大きな利点を提示する。したがって、本発明による膜は、典型的にはヒトおよび動物の皮膚モデルを用いて可能でない、化合物および製剤のハイスループットスクリーニングのための新規なツールを提供する。よって、ヒトおよび動物の皮膚モデルが順次モード（ｓｅｒｉａｌ  ｍｏｄｅ）における化合物のスクリーニングに限定される一方、本発明による合成膜は、ハイスループットモードにおける化合物のスクリーニングを可能にする。
【００３２】
以下の表Ｉは、例示的な化合物のリストを提供し、それらの経皮的拡散特性が本明細書に記載されている膜を使用して調べられた。特に、これらの化合物のうちのいくつかは、化粧品または殺虫剤／殺有害生物剤の製剤に見出され、それらの物理化学的特性の１つ以上において大きく異なる。特に、これらの化合物の大部分は、特許請求されている膜を使用して、ヒト皮膚と類似した拡散を有することが示された。
【００３３】
【表１】
0005608282.tif 000002
0005608282.tif 000003
【００３４】
さらに、本発明は、限定するように解釈されるべきではない以下の実施例によって説明される。本出願を通して引用されたすべての参考文献、特許および公開された特許出願、ならびに図の内容は、参照により本明細書に組み込まれている。
【図面の簡単な説明】
【００３５】
【図１】走査電子顕微鏡（ＳＥＭ）を使用して作製したヒト皮膚の断面の顕微鏡写真であり、皮膚の異なる層を示す。
【図２】走査電子顕微鏡（ＳＥＭ）を使用して作製したＶｉｒｅｓｏｌｖｅ  Ｖ７０（ポリフッ化ビニリデン（ｐｏｌｙｖｉｎｙｌｅｄｅｎｅｆｌｕｏｒｉｄｅ））膜の断面の顕微鏡写真である。
【図３】膜の厚さ方向の様々な多孔率および細孔径を示す、走査電子顕微鏡を使用して作製したＰＬＣＣＣ膜（再生セルロース系ＵＦ膜）の断面の顕微鏡写真である。
【図４】膜の厚さ方向の様々な細孔形態および多孔率を示す、走査電子顕微鏡を使用して作製したＢｉｏｍａｘ（登録商標）５  ＰＢＣＣ膜の断面の顕微鏡写真である。
【図５】経皮的拡散を調べるために使用される典型的な縦型Ｆｒａｎｚ  Ｃｅｌｌ拡散装置の略図である。
【図６】ヒト、ラットおよびブタの皮膚と比較して、処理済みのＢｉｏｍａｘ（登録商標）５  ＰＢＣＣ膜を通しての、極性化合物であるカフェインの累積的流量を調べるための代表的な実験の結果を概要するグラフである。Ｘ軸は、時間（時間）を示し、Ｙ軸はμｇ／ｃｍ２で測定された累積的流量を示す。データは、カフェインの拡散に関して、膜とヒト皮膚との間の高度の相関を実証し、２つの異なるロットの膜間の高い再現性および低い変動性を実証する。
【図７】ヒト、ラットおよびブタ／ミニブタの皮膚と比較して、処理済みのＢｉｏｍａｘ（登録商標）５  ＰＢＣＣ膜を通しての、中程度の極性化合物であるヒドロコルチゾンの累積的流量を調べるための代表的な実験の結果を概要するグラフである。Ｘ軸は時間（時間）を示し、Ｙ軸はμｇ／ｃｍ２で測定された累積的流量を示す。データは、ヒドロコルチゾンの拡散に関して、膜とヒト皮膚およびブタ／ミニブタ皮膚との間の高度の相関を実証する；しかしながら、経皮的拡散研究に最も一般に使用されるモデルであるラット皮膚は、ヒト皮膚と高度の相関を示すようでない。
【図８】３つの別々のヒト皮膚試料と比較して、処理済みのＢｉｏｍａｘ（登録商標）５  ＰＢＣＣ膜を通しての、非極性化合物であるｐ−ヒドロキシ安息香酸メチルの累積的流量を調べるための代表的な実験の結果を概要するグラフである。Ｘ軸は時間（時間）を示し、Ｙ軸はμｇ／ｃｍ２で測定された累積的流量を示す。データは、異なるヒト皮膚試料間の高度の変動性を実証する。
【図９】ヒト皮膚と比較して、処理済みおよび未処理のＢｉｏｍａｘ（登録商標）５  ＰＢＣＣ膜を通しての、非極性化合物であるフルフェナム酸の累積的流量を調べるための代表的な実験の結果を概要するグラフである。Ｘ軸は時間（時間）を示し、Ｙ軸はμｇ／ｃｍ２で測定された累積的流量を示す。データは、フルフェナム酸の拡散に関して、未処理の膜とヒト皮膚と間の高度の相関を実証する。
【図１０】ヒトおよびラットの皮膚と比較して、処理済みのＢｉｏｍａｘ（登録商標）５  ＰＢＣＣ膜を通しての、非極性化合物であるクロトリマゾールの累積的流量を調べるための代表的な実験の結果を概要するグラフである。Ｘ軸は時間（時間）を示し、Ｙ軸はμｇ／ｃｍ２で測定された累積的流量を示す。データは、クロトリマゾールの拡散に関して、処理済みの膜とヒト皮膚との間の高度の相関を実証する。
【図１１】ヒト、ラットおよびブタの皮膚と比較して、処理済みのＢｉｏｍａｘ（登録商標）５  ＰＢＣＣ膜を通しての、中程度の極性化合物であるデキサメタゾンの累積的流量を調べるための代表的な実験の結果を概要するグラフである。Ｘ軸は時間（時間）を示し、Ｙ軸はμｇ／ｃｍ２で測定された累積的流量を示す。データは、デキサメタゾンの拡散に関して、処理済みの膜とヒトおよびブタの皮膚との間の高度の相関を実証する。
【図１２】様々な日齢のラット皮膚試料と比較して、処理済みのＢｉｏｍａｘ（登録商標）５  ＰＢＣＣ膜を通しての、非極性化合物であるフルルビプロフェンの累積的流量を調べるための代表的な実験の結果を概要するグラフである。Ｘ軸は時間（時間）を示し、Ｙ軸はμｇ／ｃｍ２で測定された累積的流量を示す。データは、フルルビプロフェンの拡散に関して、異なるラット皮膚試料間の高度の変動性を実証する。
【図１３】ヒトおよびラットの皮膚と比較して、処理済みおよび未処理のＢｉｏｍａｘ（登録商標）５  ＰＢＣＣ膜を通しての、極性化合物であるニコチンの累積的流量を調べるための代表的な実験の結果を概要するグラフである。Ｘ軸は時間（時間）を示し、Ｙ軸はμｇ／ｃｍ２で測定された累積的流量を示す。データは、ニコチンの拡散に関して、ラット皮膚とヒト皮膚との間の変動性を示唆するようである。
【図１４】ヒト皮膚と比較して、処理済みのＢｉｏｍａｘ（登録商標）５  ＰＢＣＣ膜を通しての、非極性化合物であるジクロフェナクナトリウムの累積的流量を調べるための代表的な実験の結果を概要するグラフである。Ｘ軸は時間（時間）を示し、Ｙ軸はμｇ／ｃｍ２で測定された累積的流量を示す。データは、ジクロフェナクナトリウムの拡散に関して、異なる皮膚試料間の変動性を実証する。
【図１５】使い捨て形式であってもよく、ハイスループットスクリーニングに有用であり得る、本発明による合成膜を含むデバイス（例えば、マルチウェルプレート）の断面の概略図である。
【図１６】化合物および製剤のハイスループットスクリーニングに使用されてもよい、本発明による合成膜を含む代表的なマルチウェルプレートデバイスの写真である。
【図１７】化合物および製剤のハイスループットスクリーニングに使用されてもよい、本発明による合成膜、ならびにレシーバープレートを含む代表的なマルチウェルプレートデバイスの別の写真である。
【実施例】
【００３６】
（実施例１）
ヒト皮膚様透過性を有する修飾された限界ろ過膜の作製
代表的な実験において、限界ろ過Ｂｉｏｍａｘ（登録商標）５  ＰＢＣＣ膜は、脂肪酸エステルおよびポリジメチルシロキサンの混合物を用いて修飾されて、ヒト皮膚様透過性を有する合成膜を作製した。Ｂｉｏｍａｘ（登録商標）５  ＰＢＣＣ膜は、ローラーボトルを使用して、Ｍｉｌｌｉ−Ｑ水で２４−４８時間洗浄された。水は、２４−４８時間中に１−２回、新鮮なＭｉｌｌｉ−Ｑ水で置換されて、膜の清浄度を確保した。洗浄プロセスの終了時に、水を捨て、メタノール（Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号Ａ４５４ＳＫ−４）で置換し、洗浄を２−４時間継続した。メタノール洗浄の終了時に、メタノールを捨て、１−ブタノール（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、カタログ番号３４８６７）で置換した。１−ブタノールを用いた洗浄を２−４時間継続した。
【００３７】
膜が洗浄されている時間中に、ミリスチン酸イソプロピルおよびシリコーン油の比が３０：７０（ｖ／ｖ）となるように、脂肪酸エステル、ミリスチン酸イソプロピル（カタログ番号１７２４７２−１Ｌ）およびポリジメチルシロキサン、シリコーン油（カタログ番号３７８３６４）（両方ともＳｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈから購入された）の混合物が調製された。この混合物を「液体膜」と称する。３５体積％である液体膜は、さらに６５体積％の１−ブタノールで希釈された。
【００３８】
洗浄された限界ろ過Ｂｉｏｍａｘ（登録商標）５  ＰＢＣＣ膜は、１−ブタノールで希釈された液体膜を用いて２−４時間被覆された。次に、処理済みの膜は、ドラフト中で約２４時間乾燥され、その後、膜は、使用するまで気密容器中で室温にて保存された。
【００３９】
（実施例２）
処理済みのＢｉｏｍａｘ（登録商標）５  ＰＢＣＣ膜を横切るカフェインの拡散を調べること
代表的な実験において、処理済みおよび未処理の限界ろ過Ｂｉｏｍａｘ（登録商標）５  ＰＢＣＣ膜を横切る、高極性化合物（分子量：１９４．２、ｌｏｇ  Ｐ：−０．１３１）であるカフェインの拡散は、ヒト、ラットおよびブタの皮膚と比較して調べられた。
【００４０】
経皮的拡散実験は、図５に示されたものと類似した縦型Ｆｒａｎｚ  Ｃｅｌｌ組立品を使用して行われた。
【００４１】
カフェイン（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ、カタログ番号Ｃ０７５０）のＭｉｌｌｉ−Ｑ（登録商標）水中の飽和溶液をドナー溶液としＦｒａｎｚ  Ｃｅｌｌ機器て使用し、０．０１Ｍリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）、ｐＨ７．４溶液をレセプター溶液として使用した。これは、１袋の緩衝塩（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ、カタログ番号Ｐ３８１３）を１０００ｍｌのＭｉｌｌｉ−Ｑ水に溶解させることによって調製した。Ｆｒａｎｚ  Ｃｅｌｌ機器である、チルトを備えたＦＤＣ−６Ｔ  Ｆｒａｎｚ  Ｄｉｆｆｕｓｉｏｎ  Ｃｅｌｌ  Ｄｒｉｖｅ  Ｃｏｎｓｏｌｅ（Ｌｏｇａｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  Ｃｏｒｐ、Ｓｏｍｅｒｓｅｔ、ＮＪ）は、処理済みのＢｉｏｍａｘ（登録商標）５  ＰＢＣＣ膜を、光沢側面がドナーコンパートメントに面した状態で位置付けて、組み立てられた。レセプターコンパートメントは、レセプター溶液で完全に満たされた。ウォータージャケットを備えた組立品は、±０．１℃内に水槽の温度を調節し得る水循環槽に連結された。槽の温度を３７℃に設定した。温度が安定した後、５００μｌのドナー溶液をドナーコンパートメントに添加した。時間を記し、これをゼロ時間として記録した。サンプリングのために、５００μｌの試料が、以下の時間：０、１、２、３、４、５、６、８、１０、２４および２６時間でレセプターコンパートメントから取り出された。各時間点後、レセプターコンパートメントはレセプター溶液で補給された。試料分析は、ＵＶ検出器を用いる逆相ＨＰＬＣを使用して行われた。カフェインのＨＰＬＣについての分析条件は以下の通りであった：使用したカラム−Ｚｏｒｂａｘ  ＸＤＢ  Ｃ１８、４．６ｍｍ×１５０ｍｍ、５μｍ；および使用した移動相：２０％アセトニトリル＋８０％水。
【００４２】
代表的な実験の結果を図６に示し、これは、２つの異なるロットからの処理済みの膜が、高極性化合物であるカフェインについて、ヒト皮膚と類似した拡散を示すことを実証する。
【００４３】
（実施例３）
処理済みのＢｉｏｍａｘ（登録商標）５  ＰＢＣＣ膜を横切るヒドロコルチゾンの拡散を調べること
代表的な実験において、処理済みの限外ろ過Ｂｉｏｍａｘ（登録商標）５  ＰＢＣＣ膜を横切る中程度の極性化合物であるヒドロコルチゾン（分子量：３６２．４、ｌｏｇ  Ｐ：１．４６２）の拡散は、ヒト、ラットおよびブタ／ミニブタの皮膚と比較して調べられた。
【００４４】
経皮的拡散実験は、図５に示されるものと類似した縦型Ｆｒａｎｚ  Ｃｅｌｌ組立品を使用して行われた。
【００４５】
ヒドロコルチゾン（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ、カタログ番号Ｈ４００１）のＭｉｌｌｉ−Ｑ水中の飽和溶液をドナー溶液として使用し、０．０１Ｍリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）、ｐＨ７．４溶液をレセプター溶液として使用した。これは、１袋の緩衝塩（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ、カタログ番号Ｐ３８１３）を１０００ｍｌのＭｉｌｌｉ−Ｑ水に溶解させることによって調製された。
【００４６】
Ｆｒａｎｚ  Ｃｅｌｌ機器である、チルトを備えたＦＤＣ−６Ｔ  Ｆｒａｎｚ  Ｄｉｆｆｕｓｉｏｎ  Ｃｅｌｌ  Ｄｒｉｖｅ  Ｃｏｎｓｏｌｅ（Ｌｏｇａｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  Ｃｏｒｐ、Ｓｏｍｅｒｓｅｔ、ＮＪ）は、処理済みのＢｉｏｍａｘ（登録商標）５  ＰＢＣＣ膜を、光沢側面がドナーコンパートメントに面した状態で位置付けて、組み立てられた。レセプターコンパートメントは、レセプター溶液で完全に満たされた。ウォータージャケットを備えた組立品は、±０．１℃内に水槽の温度を調節し得る水循環槽に連結された。槽の温度を３７℃に設定した。温度が安定した後、５００μｌのドナー溶液をドナーコンパートメントに添加した。時間を記し、これをゼロ時間として記録した。サンプリングのために、５００μｌの試料が、以下の時間：０、１、２、３、４、５、６、８、１０、２４および２６時間でレセプターコンパートメントから取り出された。各時間点後、レセプターコンパートメントはレセプター溶液で補給された。試料分析は、ＵＶ検出器を用いる逆相ＨＰＬＣを使用して行われた。
【００４７】
ヒドロコルチゾンのＨＰＬＣ分析についての条件は以下の通りであった：使用したカラム：Ｚｏｒｂａｘ  ＸＤＢ  Ｃ１８、３．９ｍｍ×１５０ｍｍ、５μｍ；使用した移動相：４０％アセトニトリル＋６０％水；および２４２ｎｍの検出波長。
【００４８】
代表的な実験の結果を図７に示し、これは、特許請求されている本発明による処理済みの膜が、中程度の極性化合物であるヒドロコルチゾンについて、ヒトおよびブタ／ミニブタの皮膚と類似した拡散を示すことを実証する。
【００４９】
（実施例４）
処理済みおよび未処理のＢｉｏｍａｘ（登録商標）５  ＰＢＣＣ膜を横切るｐ−ヒドロキシ安息香酸メチルの拡散を調べること
別の代表的な実験において、処理済みおよび未処理の限外ろ過Ｂｉｏｍａｘ（登録商標）５  ＰＢＣＣ膜を横切る、中程度の極性化合物であるｐ−ヒドロキシ安息香酸メチル（分子量：１５２．１４、ｌｏｇ  Ｐ：１．９６）の拡散が調べられ、３つの別々のヒト皮膚試料と比較された。
【００５０】
経皮的拡散実験は、図５に示されるものと類似した縦型Ｆｒａｎｚ  Ｃｅｌｌ組立品を使用して行われた。
【００５１】
ｐ−ヒドロキシ安息香酸メチル（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ、カタログ番号５４７５０）のＭｉｌｌｉ−Ｑ水中の飽和溶液をドナー溶液として使用し、０．０１Ｍリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）、ｐＨ７．４溶液をレセプター溶液として使用した。これは、１袋の緩衝塩（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ、カタログ番号Ｐ３８１３）を１０００ｍｌのＭｉｌｌｉ−Ｑ水に溶解させることによって調製された。Ｆｒａｎｚ  Ｃｅｌｌ機器である、チルトを備えたＦＤＣ−６Ｔ  Ｆｒａｎｚ  Ｄｉｆｆｕｓｉｏｎ  Ｃｅｌｌ  Ｄｒｉｖｅ  Ｃｏｎｓｏｌｅ（Ｌｏｇａｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  Ｃｏｒｐ、Ｓｏｍｅｒｓｅｔ、ＮＪ）は、処理済みのＢｉｏｍａｘ（登録商標）５  ＰＢＣＣまたは未処理の膜のいずれかを、光沢側面がドナーコンパートメントに面した状態で位置付けて、組み立てられた。レセプターコンパートメントは、レセプター溶液で完全に満たされた。ウォータージャケットを備えた組立品は、±０．１℃内に水槽の温度を調節し得る水循環槽に連結された。槽の温度を３７℃に設定した。温度が安定した後、５００μｌのドナー溶液をドナーコンパートメントに添加した。時間を記し、これをゼロ時間として記録した。サンプリングのために、５００μｌの試料が、以下の時間：０、１、２、３、４、５、６、８、１０、２４および２６時間でレセプターコンパートメントから取り出された。各時間点後、レセプターコンパートメントはレセプター溶液で補給された。試料分析は、ＵＶ検出器を用いる逆相ＨＰＬＣを使用して行われた。
【００５２】
ｐ−ヒドロキシ安息香酸メチルのＨＰＬＣ分析についての条件は以下の通りであった：使用したカラム：Ｚｏｒｂａｘ  ＸＤＢ  Ｃ１８、３．９ｍｍ×１５０ｍｍ、５μｍ；使用した移動相：４０％アセトニトリル＋６０％水。
【００５３】
代表的な実験の結果を図８に示し、これは、ｐ−ヒドロキシ安息香酸メチルの拡散に関して、異なるヒト皮膚試料間の高度の変動性を実証する。
【００５４】
（実施例５）
未処理のＢｉｏｍａｘ（登録商標）５  ＰＢＣＣ膜を横切るフルフェナム酸の拡散を調べること
さらに別の実験において、処理済みおよび未処理の限外ろ過Ｂｉｏｍａｘ（登録商標）５  ＰＢＣＣ膜を横切る、非常に非極性の化合物であるフルフェナム酸（分子量：２８１．２３、ｌｏｇ  Ｐ：５．２）の拡散は、ヒト皮膚と比較して調べられた。
【００５５】
経皮的拡散実験は、図５に示されるものと類似した縦型Ｆｒａｎｚ  Ｃｅｌｌ組立品を使用して行われた。
【００５６】
フルフェナム酸（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ、カタログ番号Ｆ９００５）のＭｉｌｌｉ−Ｑ水中の飽和溶液をドナー溶液として使用し、０．１０Ｍセーレンセ（Ｓｏｒｅｎｓｅｎ）緩衝液、ｐＨ７．４溶液をレセプター溶液として使用した（Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号７９８８５）。Ｆｒａｎｚ  Ｃｅｌｌ機器である、チルトを備えたＦＤＣ−６Ｔ  Ｆｒａｎｚ  Ｄｉｆｆｕｓｉｏｎ  Ｃｅｌｌ  Ｄｒｉｖｅ  Ｃｏｎｓｏｌｅ（Ｌｏｇａｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  Ｃｏｒｐ、Ｓｏｍｅｒｓｅｔ、ＮＪ）は、処理済みのＢｉｏｍａｘ（登録商標）５  ＰＢＣＣまたは未処理の膜のいずれかを、光沢側面がドナーコンパートメントに面した状態で位置付けて、組み立てられた。レセプターコンパートメントは、レセプター溶液で完全に満たされた。ウォータージャケットを備えた組立品は、±０．１℃内に水槽の温度を調節し得る水循環槽に連結された。槽の温度を３７℃に設定した。温度が安定した後、５００μｌのドナー溶液をドナーコンパートメントに添加した。時間を記し、これをゼロ時間として記録した。サンプリングのために、５００μｌの試料が、以下の時間：０、１、２、３、４、５、６、８、１０、２４および２６時間でレセプターコンパートメントから取り出された。各時間点後、レセプターコンパートメントはレセプター溶液で補給された。試料分析は、ＵＶ検出器を用いて逆相ＨＰＬＣを使用して行われた。
【００５７】
フルフェナム酸のＨＰＬＣ分析についての条件は、以下に記す通りである：使用したカラム：Ｚｏｒｂａｘ  ＸＤＢ  Ｃ１８、３．９ｍｍ×１５０ｍｍ、５μｍ  使用した移動相：９０％メタノール＋４０ｍＭ酢酸を含有する１０％水；検出波長：２８０ｎｍ。
【００５８】
代表的な実験の結果を図９に示し、これは、非極性化合物であるフルフェナム酸について、未処理の膜は、処理済みの膜よりもヒト皮膚に対して良好な相関を有するようであることを実証する。
【００５９】
（実施例６）
処理済みのＢｉｏｍａｘ（登録商標）５  ＰＢＣＣ膜を横切るクロトリマゾールの拡散を調べること
別の実験において、処理済みおよび未処理の限外ろ過Ｂｉｏｍａｘ（登録商標）５  ＰＢＣＣ膜を横切る、非常に非極性の化合物であるクロトリマゾール（分子量：３４４．８、ｌｏｇ  Ｐ：６．１）の拡散は、ヒトおよびラットの皮膚と比較して調べられた。
【００６０】
経皮的拡散実験は、図５に示されるものと類似した縦型Ｆｒａｎｚ  Ｃｅｌｌ組立品を使用して行われた。
【００６１】
クロトリマゾール（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ、カタログ番号Ｃ６０１９）のＭｉｌｌｉ−Ｑ水中の飽和溶液をドナー溶液として使用し、０．０１Ｍリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）、ｐＨ７．４の溶液をレセプター溶液として使用した。これは、１袋の緩衝塩（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ、カタログ番号Ｐ３８１３）を１０００ｍｌのＭｉｌｌｉ−Ｑ水に溶解させることによって調製された。Ｆｒａｎｚ  Ｃｅｌｌ機器である、チルトを備えたＦＤＣ−６Ｔ  Ｆｒａｎｚ  Ｄｉｆｆｕｓｉｏｎ  Ｃｅｌｌ  Ｄｒｉｖｅ  Ｃｏｎｓｏｌｅ（Ｌｏｇａｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  Ｃｏｒｐ、Ｓｏｍｅｒｓｅｔ、ＮＪ）は、処理済みまたは未処理のＢｉｏｍａｘ（登録商標）５  ＰＢＣＣ膜のいずれかを、光沢側面がドナーコンパートメントに面した状態で位置付けて、組み立てられた。レセプターコンパートメントは、レセプター溶液で完全に満たされた。ウォータージャケットを備えた組立品は、±０．１℃内に水槽の温度を調節し得る水循環槽に連結された。槽の温度を３７℃に設定した。温度が安定した後、５００μｌのドナー溶液をドナーコンパートメントに添加した。時間を記し、これをゼロ時間として記録した。サンプリングのために、５００μｌの試料が、以下の時間：０、１、２、３、４、５、６、８、１０、２４および２６時間でレセプターコンパートメントから取り出された。各時間点後、レセプターコンパートメントはレセプター溶液で補給された。試料分析は、ＵＶ検出器を用いる逆相ＨＰＬＣを使用して行われた。
【００６２】
クロトリマゾールのＨＰＬＣ分析についての条件は以下の通りであった：使用したカラム：μＢｏｎｄａｐａｋ  Ｃ１８、４．６ｍｍ×３００ｍｍ、１０μｍ；使用した移動相：０．１％トリフルオロ酢酸を含有する６５％メタノール＋０．１％トリフルオロ酢酸を含有する３５％水；および検出波長：２６０ｎｍ。
【００６３】
代表的な実験の結果を図１０に示し、これは、処理済みの膜が、非極性化合物であるクロトリマゾールについて、ヒト皮膚と高度の相関を示すことを実証する。
【００６４】
（実施例７）
処理済みのＢｉｏｍａｘ（登録商標）５  ＰＢＣＣ膜を横切るデキサメタゾンの拡散を調べること
別の実験において、処理済みおよび未処理の限外ろ過Ｂｉｏｍａｘ（登録商標）５  ＰＢＣＣ膜を横切る、中程度の極性化合物であるデキサメタゾン（分子量：３９２．５、ｌｏｇ  Ｐ：１．８９６）の拡散は、ヒト、ブタおよびラットの皮膚と比較して調べられた。
【００６５】
経皮的拡散実験は、図５に示されるものと類似した縦型Ｆｒａｎｚ  Ｃｅｌｌ組立品を使用して行われた。
【００６６】
デキサメタゾン（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ、カタログ番号Ｄ１７５６）のＭｉｌｌｉ−Ｑ水中の飽和溶液をドナー溶液として使用し、０．０１Ｍリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）、ｐＨ７．４溶液をレセプター溶液として使用した。これは、１袋の緩衝塩（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ、カタログ番号Ｐ３８１３）を１０００ｍｌのＭｉｌｌｉ−Ｑ水に溶解させることによって調製された。Ｆｒａｎｚ  Ｃｅｌｌ機器である、チルトを備えたＦＤＣ−６Ｔ  Ｆｒａｎｚ  Ｄｉｆｆｕｓｉｏｎ  Ｃｅｌｌ  Ｄｒｉｖｅ  Ｃｏｎｓｏｌｅ（Ｌｏｇａｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  Ｃｏｒｐ、Ｓｏｍｅｒｓｅｔ、ＮＪ）は、処理済みのＢｉｏｍａｘ（登録商標）５  ＰＢＣＣ膜を、光沢側面がドナーコンパートメントに面した状態で位置付けて、組み立てられた。レセプターコンパートメントは、レセプター溶液で完全に満たされた。ウォータージャケットを備えた組立品は、±０．１℃内に水槽の温度を調節し得る水循環槽に連結された。槽の温度を３７℃に設定した。温度が安定した後、５００μｌのドナー溶液をドナーコンパートメントに添加した。時間を記し、これをゼロ時間として記録した。サンプリングのために、５００μｌの試料が、以下の時間：０、１、２、３、４、５、６、８、１０、２４および２６時間でレセプターコンパートメントから取り出された。各時間点後、レセプターコンパートメントはレセプター溶液で補給された。試料分析は、ＵＶ検出器を用いる逆相ＨＰＬＣを使用して行われた。
【００６７】
デキサメタゾンのＨＰＬＣ分析についての条件は以下の通りであった：使用したカラム：Ｚｏｒｂａｘ  ＸＤＢ  Ｃ１８、４．６ｍｍ×１５０ｍｍ、５μｍ；使用した移動相：アセトニトリル＋水および検出波長：２４０ｎｍ。
【００６８】
代表的な実験の結果を図１１に示し、これは、特許請求されている本発明による膜が、中程度の極性化合物であるデキサメタゾンについて、ヒトおよびブタの皮膚と類似した拡散を示すことを実証する。
【００６９】
（実施例８）
処理済みのＢｉｏｍａｘ（登録商標）５  ＰＢＣＣ膜を横切るフルルビプロフェンの拡散を調べること
別の実験において、処理済みおよび未処理の限外ろ過Ｂｉｏｍａｘ（登録商標）５  ＰＢＣＣ膜を横切る、非極性化合物であるフルルビプロフェン（分子量：２４４、ｌｏｇ  Ｐ：４．１１５）の拡散は、異なる日齢の３つの別々のラット皮膚試料と比較して調べられた。
【００７０】
経皮的拡散実験は、図５に示されるものと類似した縦型Ｆｒａｎｚ  Ｃｅｌｌ組立品を使用して行われた。
【００７１】
フルルビプロフェン（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ、カタログ番号Ｆ８５１４）のＭｉｌｌｉ−Ｑ水中の飽和溶液をドナー溶液として使用し、０．０１Ｍリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）、ｐＨ７．４溶液をレセプター溶液として使用した。これは、１袋の緩衝塩（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ、カタログ番号Ｐ３８１３）を１０００ｍｌのＭｉｌｌｉ−Ｑ水に溶解させることによって調製された。Ｆｒａｎｚ  Ｃｅｌｌ機器である、チルトを備えたＦＤＣ−６Ｔ  Ｆｒａｎｚ  Ｄｉｆｆｕｓｉｏｎ  Ｃｅｌｌ  Ｄｒｉｖｅ  Ｃｏｎｓｏｌｅ（Ｌｏｇａｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  Ｃｏｒｐ、Ｓｏｍｅｒｓｅｔ、ＮＪ）は、処理済みのＢｉｏｍａｘ（登録商標）５  ＰＢＣＣ膜を、光沢側面がドナーコンパートメントに面した状態で位置付けて、組み立てられた。レセプターコンパートメントは、レセプター溶液で完全に満たされた。ウォータージャケットを備えた組立品は、±０．１℃内に水槽の温度を調節し得る水循環槽に連結された。槽の温度を３７℃に設定した。温度が安定した後、５００μｌのドナー溶液をドナーコンパートメントに添加した。時間を記し、これをゼロ時間として記録した。サンプリングのために、５００μｌの試料が、以下の時間：０、１、２、３、４、５、６、８、１０、２４および２６時間でレセプターコンパートメントから取り出された。各時間点後、レセプターコンパートメントはレセプター溶液で補給された。試料分析は、ＵＶ検出器を用いる逆相ＨＰＬＣを使用して行われた。
【００７２】
フルルビプロフェンのＨＰＬＣ分析についての条件は以下の通りであった：使用したカラム：μＢｏｎｄａｐａｋ  Ｃ１８、４．６ｍｍ×３００ｍｍ、１０μｍ；使用した移動相：７０％メタノール＋０．１％ギ酸を含有する３０％水および検出波長：２６０ｎｍ。
【００７３】
代表的な実験の結果を図１２に示し、これは、フルルビプロフェンの拡散に関して、異なる日齢のラット皮膚試料間の高度の変動性を実証する。
【００７４】
（実施例９）
処理済みおよび未処理のＢｉｏｍａｘ（登録商標）５  ＰＢＣＣ膜を横切るニコチンの拡散を調べること
別の実験において、処理済みおよび未処理の限外ろ過Ｂｉｏｍａｘ（登録商標）５  ＰＢＣＣ膜を横切る、極性化合物であるニコチン（分子量：１６２．２３、ｌｏｇ  Ｐ：０．７２）の拡散は、ヒトおよびラットの皮膚と比較して調べられた。
【００７５】
経皮的拡散実験は、図５に示されるものと類似した縦型Ｆｒａｎｚ  Ｃｅｌｌ組立品を使用して行われた。
【００７６】
ニコチン（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ、カタログ番号Ｎ０２６７）のＭｉｌｌｉ−Ｑ水中の飽和溶液をドナー溶液として使用し、０．０１Ｍリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）、ｐＨ７．４溶液をレセプター溶液として使用した。これは、１袋の緩衝塩（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ、カタログ番号Ｐ３８１３）を１０００ｍｌのＭｉｌｌｉ−Ｑ水に溶解させることによって調製された。Ｆｒａｎｚ  Ｃｅｌｌ機器である、チルトを備えたＦＤＣ−６Ｔ  Ｆｒａｎｚ  Ｄｉｆｆｕｓｉｏｎ  Ｃｅｌｌ  Ｄｒｉｖｅ  Ｃｏｎｓｏｌｅ（Ｌｏｇａｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  Ｃｏｒｐ、Ｓｏｍｅｒｓｅｔ、ＮＪ）は、処理済みおよび未処理のＢｉｏｍａｘ（登録商標）５  ＰＢＣＣ膜を、光沢側面がドナーコンパートメントに面した状態で位置付けて、組み立てられた。レセプターコンパートメントは、レセプター溶液で完全に満たされた。ウォータージャケットを備えた組立品は、±０．１℃内に水槽の温度を調節し得る水循環槽に連結された。槽の温度を３７℃に設定した。温度が安定した後、５００μｌのドナー溶液をドナーコンパートメントに添加した。時間を記し、これをゼロ時間として記録した。サンプリングのために、５００μｌの試料が、以下の時間：０、１、２、３、４、５、６、８、１０、２４および２６時間でレセプターコンパートメントから取り出された。各時間点後、レセプターコンパートメントはレセプター溶液で補給された。試料分析は、ＵＶ検出器を用いる逆相ＨＰＬＣを使用して行われた。
【００７７】
ニコチンのＨＰＬＣ分析についての条件は以下の通りであった：使用したカラム：Ｚｏｒｂａｘ  ＸＤＢ  Ｃ１８、４．６ｍｍ×１５０ｍｍ、５μｍ；使用した移動相：２％アセトニトリル＋０．１％ギ酸を含有する９８％水および検出波長：２６０ｎｍ。
【００７８】
代表的な実験の結果を図１３に示し、これは、極性化合物であるニコチンの拡散に関して、ラットおよびヒトの皮膚試料間の変動性を示す。
【００７９】
（実施例１０）
処理済みのＢｉｏｍａｘ（登録商標）５  ＰＢＣＣ膜を横切るジクロフェナクナトリウムの拡散を調べること
別の実験において、処理済みの限外ろ過Ｂｉｏｍａｘ（登録商標）５  ＰＢＣＣ膜を横切る、非極性化合物であるジクロフェナクナトリウム（分子量：３１８．１３、ｌｏｇ  Ｐ：４．０５）の拡散は、２つの別々のヒト皮膚試料と比較して調べられた。
【００８０】
経皮的拡散実験は、図５に示されるものと類似した縦型Ｆｒａｎｚ  Ｃｅｌｌ組立品を使用して行われた。
【００８１】
ジクロフェナクナトリウム（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ、カタログ番号Ｄ６８９９）のＭｉｌｌｉ−Ｑ水中の飽和溶液をドナー溶液として使用し、０．０１Ｍリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）、ｐＨ７．４溶液をレセプター溶液として使用した。これは、１袋の緩衝塩（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ、カタログ番号Ｐ３８１３）を１０００ｍｌのＭｉｌｌｉ−Ｑ水に溶解させることによって調製された。Ｆｒａｎｚ  Ｃｅｌｌ機器である、チルトを備えたＦＤＣ−６Ｔ  Ｆｒａｎｚ  Ｄｉｆｆｕｓｉｏｎ  Ｃｅｌｌ  Ｄｒｉｖｅ  Ｃｏｎｓｏｌｅ（Ｌｏｇａｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  Ｃｏｒｐ、Ｓｏｍｅｒｓｅｔ、ＮＪ）は、処理済みおよび未処理のＢｉｏｍａｘ（登録商標）５  ＰＢＣＣ膜を、光沢側面がドナーコンパートメントに面した状態で位置付けて、組み立てられた。レセプターコンパートメントは、レセプター溶液で完全に満たされた。ウォータージャケットを備えた組立品は、±０．１℃内に水槽の温度を調節し得る水循環槽に連結された。槽の温度を３７℃に設定した。温度が安定した後、５００μｌのドナー溶液をドナーコンパートメントに添加した。時間を記し、これをゼロ時間として記録した。サンプリングのために、５００μｌの試料が、以下の時間：０、１、２、３、４、５、６、８、１０、２４および２６時間でレセプターコンパートメントから取り出された。各時間点後、レセプターコンパートメントはレセプター溶液で補給された。試料分析は、ＵＶ検出器を用いる逆相ＨＰＬＣを使用して行われた。
【００８２】
ジクロフェナクナトリウムのＨＰＬＣ分析についての条件は以下の通りであった：使用したカラム：Ｚｏｒｂａｘ  ＸＤＢ  Ｃ１８、３．９ｍｍ×１５０ｍｍ、５μｍ；使用した移動相：８０％メタノール＋０．１％トリフルオロ酢酸を含有する２０％水および検出波長：２８０ｎｍ。
【００８３】
代表的な実験の結果を図１４に示し、これは、ジクロフェナクナトリウムの拡散に関して、異なるヒトの皮膚試料間の高度の変動性を実証する。
【００８４】
本明細書は、参照により本明細書に組み込まれている、本明細書中に引用されている参照文献の教示を考慮に入れると、最も完全に理解される。本明細書中の実施形態は、本発明における実施形態を説明するものであり、本発明の範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。当業者は、多くの他の実施形態が本発明によって包含されることを容易に認識する。すべての刊行物および発明は、それらの全体が参照により組み込まれている。参照により組み込まれている資料が、本明細書に矛盾するまたは一致しない範囲において、本明細書は、いかなるこのような資料にも優先する。本明細書における任意の参照文献の引用は、このような参照文献が本発明に対する先行技術であることを認めるものではない。
【００８５】
他に特に記載がない限り、特許請求の範囲を含む本明細書において使用されている成分の量、細胞培養物、処理条件などを表現するすべての数は、すべての場合に、「約」という用語によって修飾されているものと理解されるべきである。したがって、他に特に逆の記載がない限り、数値パラメータは近似値であり、本発明が得ようとする所望の特性に応じて変化する可能性がある。他に特に記載がない限り、一連の要素に先行する「少なくとも」という用語は、その一連の要素中のすべての要素を指すことを理解されるべきである。当業者は、単なる通常の実験手順を使用するだけで、本明細書に記載されている本発明の特定の実施形態に対して、多くの均等物を認識しうるまたは確認することができる。このような均等物は、以下の特許請求の範囲によって包含されることを意図したものである。
【００８６】
本発明の多くの変更および改変は、当業者には明らかであるように、本発明の精神および範囲から逸脱することなく行われ得る。本明細書に記載されている特定の実施形態は、例としてのみ提示されるものであり、何らの限定も意味するものではない。本明細書および実施例は、単なる例証とみなされることを意図したものであり、本発明の真の範囲および精神は、以下の特許請求の範囲によって示されている。
【図１】
0005608282.tif 000004
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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