(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
鼻腔吸引液、鼻腔拭い液および咽頭ぬぐい液から選択される一の検体を、非イオン性界面活性剤を含有する水溶液である一の検体処理液で処理することにより、インフルエンザＡ型およびＢ型ウイルス検査とＲＳウイルス検査、またはインフルエンザＡ型およびＢ型ウイルス検査とアデノウイルス検査に適した一の検査試料を調製し、
前記調製された検査試料の一部を、インフルエンザＡ型およびＢ型ウイルス検査用のイムノクロマトグラフィー法によるラテラルフロータイプの試験具を用いて検査し、さらに前記調製された検査試料の一部を、ＲＳウイルス検査用のイムノクロマトグラフィー法によるラテラルフロータイプの試験具またはアデノウイルス検査用のイムノクロマトグラフィー法によるラテラルフロータイプの試験具を用いて検査することを特徴とする、呼吸器感染症の検査方法。
【請求項２】
前記インフルエンザＡ型およびＢ型ウイルス検査用の試験具による検査結果が陰性の場合に、前記ＲＳウイルス検査用の試験具または前記アデノウイルス検査用の試験具による検査を実施する請求項１記載の呼吸器感染症の検査方法。
【請求項３】
前記調製された検査試料を、前記インフルエンザＡ型およびＢ型ウイルス検査用の試験具で検査し、さらに前記調製された検査試料を、前記ＲＳウイルス検査用の試験具で検査する請求項１又は２に記載の呼吸器感染症の検査方法。
【請求項４】
検体処理液が、塩化ナトリウムを含有する水溶液である請求項１〜３の何れか１項記載の呼吸器感染症の検査方法。
【請求項５】
検体処理液が還元剤を含有する請求項１〜４の何れか１項に記載の呼吸器感染症の検査方法。
【請求項６】
検体処理液がチオシアン酸化合物を含有する請求項１〜５の何れか１項に記載の呼吸器感染症の検査方法。
【請求項７】
検体処理液がキレート剤を含有する請求項１〜６の何れか１項に記載の呼吸器感染症の検査方法。
【請求項８】
検体処理液がGood緩衝剤を含有する請求項１〜７の何れか１項に記載の呼吸器感染症の検査方法。
【請求項９】
検体が被験者からめん棒を用いて採取された鼻腔拭い液または咽頭ぬぐい液である請求項１〜８の何れか１項に記載の呼吸器感染症の検査方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、イムノクロマトグラフィー法による試験具を用いた呼吸器感染症の検査方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
かぜ症候群はすべての人々が罹患する疾患で、その患者背景も感染因子も多様である。かぜ症候群の病原因子はウイルスの亜型も含めると200種類を超え、臨床医が検索できる範囲も限られている。したがって、その病態把握と病原診断は容易ではない。近年インフルエンザの抗ウイルス薬が開発されたことをきっかけに、根拠に基づいた感染管理が求められる状況となり、感染症発生時からウイルス感染症を念頭に置くことが必要となりつつある。また、特に冬場のインフルエンザシーズンにおいて、インフルエンザ様症状を示す他の呼吸器感染症（アデノウイルス、Respiratory Syncytial Virus（以下、ＲＳウイルス））との区別が、患者とその周囲のリスクマネジメントをおこなうために重要であると考えられている。
【０００３】
現在、インフルエンザ、アデノウイルス、RSウイルスなどの検査は、項目ごとに個別の検査キットを用いて行われている。このため、例えば、インフルエンザ様症状を示した患者のインフルエンザの検査が陰性であった場合、アデノウイルスあるいはRSウイルスの検査を行うために、再度、患者から検体を採取する必要がある。検体は、鼻腔や咽頭から綿棒等を用いて採取するが、患者にとっては苦痛を伴い、負担を強いられることになる。これは特に小児科の診療において顕著である。
【０００４】
一方、ラテラルフロータイプのイムノアッセイ法による試験具において、複数のウイルスを検出する技術が知られている（特許文献１）。この試験具は、図1に示されるように色素結合ラテックス標識抗体として、抗ロタウイルス抗体、抗カルシウイルス抗体、抗コロナウイルス抗体、抗アデノウイルス抗体、抗エンテロウイルス抗体を使用し、抗ロタウイルス抗体固定部位１、抗カルシウイルス抗体固定部位２、抗コロナウイルス抗体固定部位３、抗アデノウイルス抗体固定部位４、抗エンテロウイルス抗体固定部位５を有している。そして患者の糞便から調製した測定試料を試料注入口に添加することにより、上記５種類のウイルス感染の検査を行うことができる。
【特許文献１】特開２０００−２９２４２７号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
特許文献１記載の技術を呼吸器感染症に適用すれば、複数回の検体採取に伴う患者の負担の問題は軽減されるが、特許文献１記載の試験具においては、複数種類のウイルスに対する抗体が使用されているため試験具の単価が高くなるという問題がある。呼吸器感染症の場合、例えば、インフルエンザは１２月から３月にかけて流行することが多く、ＲＳウイルスは１０月から１月に流行することが多い。このように流行する期間に重複はあるものの、医者が検査を行う際にインフルエンザの疑いが強いと感じていても特許文献１記載の試験具を用いると、常に複数種類のウイルスに対する検査を常に実施せざるを得ず、検査費用のコストが高くなってしまう。さらに、特許文献１には糞便を検体とした場合の検査試料の調製については記載されているが、呼吸器感染症を検査する際の検体（鼻腔吸引液、鼻腔拭い液、咽頭ぬぐい液）のように高粘性物質であるムチンを含む検体に対する検査試料の調製については何も記載されていない。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本願発明の第１の局面による呼吸器感染症の検査方法は、鼻腔吸引液、鼻腔拭い液および咽頭ぬぐい液から選択される一の検体を、非イオン性界面活性剤を含有する水溶液である一の検体処理液で処理することにより、インフルエンザＡ型およびＢ型ウイルス検査とＲＳウイルス検査、またはインフルエンザＡ型およびＢ型ウイルス検査とアデノウイルス検査に適した一の検査試料を調製し、前記調製された検査試料の一部を、インフルエンザＡ型ウイルス及びインフルエンザＢ型ウイルス検査用のイムノクロマトグラフィー法によるラテラルフロータイプの試験具を用いて検査し、さらに前記調製された検査試料の一部を、ＲＳウイルス検査用のイムノクロマトグラフィー法によるラテラルフロータイプの試験具またはアデノウイルス検査用のイムノクロマトグラフィー法によるラテラルフロータイプの試験具を用いて検査することを特徴としている。
【発明の効果】
【０００７】
本発明の呼吸器感染症の検査方法によれば、医師の診断によりインフルエンザウイルス検査から順に疑いの高い検査を行うことができ検査コストの上昇を最低限に抑えることができる。また、複数種類のウイルスに対する検査が必要な場合に、検体採取に伴う患者の負担が増加する問題を解消することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００８】
本発明の実施形態の呼吸器感染症検査方法において、検査対象となる感染症は、患者から採取した鼻腔吸引液、鼻腔拭い液、咽頭ぬぐい液等により検査可能な感染症である。このような感染症の原因病原体は、冬季を中心にウイルス感染が発生するものでは、Ａ型インフルエンザウイルス、Ｂ型インフルエンザウイルス、ＲＳウイルス（ＲＳＶ）、ライノウイルスなどがあり、また、小児の感染性胃腸炎の原因病原体となるロタウイルス、ノロウイルス、アデノウイルス、アストロウイルスなどが挙げられる。
【０００９】
以下、本実施形態の呼吸器感染症検査方法に用いる試験具を、図面を用いて説明する。図面や以下の記述中で示す構成は、例示であって、本発明の範囲は、図面や以下の記述中で示すものに限定されない。
【００１０】
図１は、ラテラルフロータイプのイムノクロマトグラフィー用試験具の断面図であり、（ａ）はインフルエンザウイルス感染検査用の試験具３１を、（ｂ）はＲＳウイルス感染検査用のイムノクロマトグラフィー用試験具３２を、（ｃ）はアデノウイルス感染検査用のイムノクロマトグラフィー用試験具３３である。
【００１１】
図１（ａ）に示すようにインフルエンザウイルス感染検査用試験具３１は、表面に粘着層を有するプラスチック板からなる基材５上に、レーヨンの不織布からなる試料添加用部材７と、グラスファイバーの不織布からなる標識保持部材９と、ニトロセルロースの多孔体からなるクロマト用膜担体１１と、セルロースの不織布からなる吸収部材１３と、試料添加用部材７及び吸収部材１３をそれぞれ図示のように覆う透明シール１４とを備える。試料添加用部材７は、試験容器１に収容された試料に浸漬される試料添加部として機能する。標識保持部材９は、試料添加用部材７に接触して配置され、試料中の被検出物質と抗原抗体反応によって結合する標識物質を保持する標識保持部として機能する。クロマト用膜担体１１は、標識保持部材９に接触して配置され、被検出物質と抗原抗体反応によって結合する固定化用物質が固定された判定部を有する。吸収部材１３は、クロマト用膜担体１１と接触するように配置されている。
【００１２】
試料添加用部材７が試料に浸漬すると、試料は毛細管現象によって標識保持部材９及びクロマト用膜担体１１を流れて吸収部材１３まで展開される。クロマト用膜担体１１には、試料展開方向の上流側から順に、ライン状の第１判定部１１Ａ、第２判定部１１Ｂ及び対照部１１Ｃが形成されている。標識保持部材９には、第１標識物質、第２標識物質及び対照用標識物質が保持されている。第１判定部１１Ａ、第２判定部１１Ｂ及び対照部１１Ｃには、固定化用物質として、それぞれ、抗インフルエンザＡ抗体、抗インフルエンザＢ抗体（以下、それぞれ「抗ＦｌｕＡ抗体」、「抗ＦｌｕＢ抗体」とする。）、ビオチンが固定されている。第１標識物質及び第２標識物質は、それぞれ、青色ラテックス粒子で標識された抗ＦｌｕＡ抗体及び抗ＦｌｕＢ抗体であり、対照用標識物質は、赤色ラテックス粒子で標識されたアビジンである。抗ＦｌｕＡ抗体及び抗ＦｌｕＢ抗体は、それぞれ、第１被検出物質であるインフルエンザＡ型ウイルス及び第２被検出物質であるインフルエンザＢ型ウイルス（以下、それぞれ「ＦｌｕＡウイルス」、「ＦｌｕＢウイルス」とする。）と抗原抗体反応により結合する。
【００１３】
例えば、試料中にＦｌｕＡウイルスが含まれていると、標識保持部材９にある標識された抗ＦｌｕＡ抗体は、ＦｌｕＡウイルスの所定部位を認識して、抗原抗体反応により結合して複合体を形成する。次に、クロマト用膜担体１１にある抗ＦｌｕＡ抗体は、ＦｌｕＡウイルスの別の部位を認識して複合体を捕捉する。この複合体は標識として青色ラテックス粒子を含むので、複合体が捕捉されると、第１判定部１１Ａには青色のラインが現れ、ＦｌｕＡウイルスが目視により検出される。
【００１４】
また、アビジンは、クロマト用膜担体１１にある抗ＦｌｕＡ抗体、抗ＦｌｕＢ抗体には捕捉されないが、ビオチンと特異的に結合するので、対照部１１Ｃに固定されたビオチンに捕捉される。アビジンは赤色ラテックス粒子により標識されているので、アビジンが捕捉されると、対照部１１Ｃには赤色のラインが現れ、アビジンが対照部１１Ｃに到達したことが目視される。対照部１１Ｃは、第１判定部１１Ａ及び第２判定部１１Ｂの下流に設けられるので、赤色のラインを確認することにより、試料が第１判定部１１Ａ及び第２判定部１１Ｂを通過したことが確認される。
【００１５】
図１（ｂ）に示すＲＳウイルス感染検査用試験具３２は、上述したインフルエンザウイルス感染検査用試験具３１と、判定部および標識保持部材９に保持された標識物質が異なる以外は略同様の構成である。図１（ｂ）において、判定部１１Ｄには固定化用物質として、抗ＲＳウイルス抗体が固定されている。また、標識保持部材９に保持された標識物質は、青色ラテックス粒子で標識された抗ＲＳウイルス抗体と対照用標識物質（赤色ラテックス粒子で標識されたアビジン）である。また、対照部１１Ｃは、試験具３１と同様にビオチンが固定されている。抗ＲＳウイルス抗体は被検出物質であるＲＳウイルスと抗原抗体反応により結合する。
【００１６】
図１（ｃ）に示すアデノウイルス感染検査用試験具３３は、上述したＲＳウイルス感染検査用試験具３２と、判定部および標識保持部材９に保持された標識物質が異なる以外は略同様の構成である。図１（ｃ）において、判定部１１Ｅには固定化用物質として、抗アデノウイルス抗体が固定されている。また、標識保持部材９に保持された標識物質は、青色ラテックス粒子で標識された抗アデノウイルス抗体と対照用標識物質（赤色ラテックス粒子で標識されたアビジン）である。抗アデノウイルス抗体は被検出物質であるアデノウイルスと抗原抗体反応により結合する。
【００１７】
次に、本実施形態の検査方法に用いる試験容器について説明する。
図２（ａ）〜（ｃ）は、それぞれ、試験容器１の正面図、平面図及び側面図であり、図２（ｄ）は、図２（ａ）のＩ−Ｉ断面図である。図２（ｅ）、（ｆ）は、それぞれ、図２（ｂ）のＩＩ−ＩＩ断面図、ＩＩＩ−ＩＩＩ断面図である。
【００１８】
試験容器１は、開口１ａを有する受け入れ部１５と、底部１ｂに試料を収容する試料収容部１７と、受け入れ部１５と試料収容部１７との間に位置する中間部１８とを有する。
【００１９】
受け入れ部１５は、試験容器１の長手方向（試験容器１の底部１ｂから開口１ａに向かう方向、図２（ａ）の直線Ｉ−Ｉ方向）に対して垂直な面の内断面の面積が、開口１ａに近づくにつれて大きくなる形状を有する。本明細書では、「内断面」とは、試験容器１の内部の空間の断面を意味する。また、特に断りがない限り、「内断面」とは、試験容器１の長手方向に対して垂直な面の内断面を意味する。受け入れ部１５がこのような形状を有しているので、試料を試験容器１内に入れやすく、また、試験容器１が転倒した時に試験容器１の長手方向が水平よりも上向きになって試料が試験容器１外に飛び出しにくくなっている。試料が試験容器１外に飛び出しにくくなる点については、後で詳述する。
一例では、受け入れ部１５の内断面の面積が開口１ａに近づくにつれて大きくなるように、受け入れ部１５の側壁２１が、テーパー状になっている。
【００２０】
図２（ｅ）、（ｆ）に示すように、中間部１８は、試験容器１の長手方向に対して垂直な面の内断面１８ａの面積が試料収容部１７の長手方向に対して垂直な面の内断面１７ａよりも小さく、中間部１８の内断面１８ａは、例えば、試験具３１が試験容器１に挿入されたときに試験具３１の反転を防止する細長い形状を有する。中間部１８の内断面１８ａは、好ましくは、試験具３１が試験容器１に挿入されたときに試験具３１の回転可能な範囲を＋／−４５度以下（さらに好ましくは＋／−３０度以下）にする細長い形状を有する。なお、「＋／−」とは、「時計周りと反時計周りのそれぞれについて」という意味である。従って、例えば、「＋／−４５度以下」とは、ある配置を基準にして、時計回りの回転可能な範囲が４５度以下であり、かつ反時計周りの回転可能な範囲が４５度以下であることを示している。
【００２１】
中間部１８は、第１平面部１９ａと、第１平面部１９ａに対向する第２平面部１９ｂを有する。第１平面部１９ａは、試験具３１を試験容器１に挿入した際の試験具３１の第１及び第２判定部１１Ａ、１１Ｂに対応する位置に設けられる。試験容器１が透明である場合、第１及び第２判定部１１Ａ、１１Ｂは、平面である第１平面部１９ａを間に挟んで観察されるので、第１及び第２判定部１１Ａ、１１Ｂの像の歪みがなく、第１及び第２判定部１１Ａ、１１Ｂの観察が容易である。第１及び第２平面部１９ａ、１９ｂ間の距離は、試験具３１の幅よりも短く、試験容器１での試験具３１の反転は、第１及び第２平面部１９ａ、１９ｂによって防止される。
【００２２】
中間部１８の内断面１８ａは、第１及び第２平面部１９ａ、１９ｂに垂直な方向（図２（ｅ）の直線ＩＶ−ＩＶ方向）では、試料収容部１７の内断面１７ａよりも幅が狭くなっている。このため、試料収容部１７と中間部１８との間に段差部２０が形成されている。この段差部２０は、試験容器１が転倒したときに試料が外部に飛び出すのを防ぐ機能を有する。中間部１８の内断面１８ａは、第１及び第２平面部１９ａ、１９ｂに平行で、かつ試験容器１の長手方向に垂直な方向（図２（ｅ）の直線Ｖ−Ｖ方向）では、試料収容部１７の内断面１７ａと幅が同じなっている。なお、この方向においても、中間部１８の内断面１８ａの幅を試料収容部１７の内断面１７ａよりも狭くして段差部２０が形成されるようにしてもよい。
【００２３】
上記の試験容器１では、中間部１８は、その長手方向の全体に渡って、内断面１８ａの面積が試料収容部１７の内断面１７ａよりも小さくなっているが、その長手方向の一部において内断面１８ａの面積が試料収容部１７の内断面１７ａよりも小さくなっていてもよい。
【００２４】
試験容器１の内面には、試験具３１の主面（すなわち、前面（第１及び第２判定部１１Ａ、１１Ｂ等が形成された面）、又は背面（基材５が露出している面））が試験容器１内面に付着することを防止する突起部２３が設けられている。突起部２３の形状は、図２（ａ）〜（ｆ）には先端が丸みを帯びた円錐状のものを示したが、これ以外の形状、例えば球状、円柱状、多角錐状又は多角柱状などであってもよい。突起部２３の先端は、尖っていても、丸みを帯びていてもよい。試験容器１においては、突起部２３は、第１及び第２平面部１９ａ、１９ｂの受け入れ部１５に近い位置に１つずつ設けているが、突起部２３は、これ以外の位置に設けてもよく、２つ以上設けてもよい。
【００２５】
試験容器１は、試験具３１を試験容器１に挿入した際の試験具３１の第１及び第２判定部１１Ａ、１１Ｂに対応する位置に、試験具３１の第１及び第２判定部１１Ａ、１１Ｂを示す表示２４ａ、２４ｂを有している。表示２４ａ、２４ｂは、この試験容器１では、それぞれ、「Ａ」、「Ｂ」である。また、試験容器１は、試験具３１を試験容器１に挿入した際の試験具３１の対照部１１Ｃに対応する位置に、試験具３１の対照部１１Ｃを示す表示２４ｃを有している。表示２４ｃは、この試験容器１では、「！」である。表示２４ａ〜ｃは、第１及び第２判定部１１Ａ、１１Ｂ、及び対照部１１Ｃの種別を示している。
【００２６】
なお、上述した試験容器１は、インフルエンザウイルス検査用試験具３１に対応した表示を行っているが、ＲＳウイルス検査用試験具３２用の試験容器１は、ＲＳウイルス検査用試験具３２の判定部に対応した表示を行い、また、アデノウイルス検査用試験具３３用の試験容器１は、アデノウイルス検査用試験具３３の判定部に対応した表示を行うようにする。
【００２７】
本実施形態の検査方法に用いる検体処理容器４０について説明する。図３に示される検体処理容器４０は、プラスチックボトル４１、ノズル４２及びキャップ４３とから構成される。また、ノズル４２は先端に試料排出口を備えており、内側はろ過部材が装着されている。
【００２８】
検体処理容器４０は、未使用の場合、ボトル４１内に検体処理液を収容し、キャップ４３によりボトル４１の開口を封じた状態で保存されている。使用に際し、キャップ４３を開け、採取した検体をボトル４１内に加え、検体処理液と混和する。その後、キャップ４３の代わりにノズル４２をボトル４１の開口部に装着し、検体処理液と混和した試料（測定試料）を、ろ過部材４４を介して試料排出口４６から試験容器１に供給する。測定試料を収容した試験容器１に、試験具３１を試料添加用部材７側から挿入し、インフルエンザウイルスの検査が行われる。
【００２９】
ノズル４２の内側に装着されたろ過部材は、膜孔径１．５μｍおよび厚さ０．４ｍｍの第１ガラス繊維濾紙、膜孔径２３μｍおよび厚さ０．４ｍｍの第２ガラス繊維濾紙、厚さ０．７ｍｍの不織布状のガラスフィルターがこの順に積層されたものである。また、このろ過部材は、ガラスフィルターがノズル４２のボトル４１との装着部側に、第１ガラス繊維濾紙が試料排出口側になるようにノズル４２に装着されている。なお、ろ過部材は、この構成に限定されるものではないが、検体中の粘性成分を除去するために不織布状のガラスフィルターを用いることが好ましく、この不織布状のガラスフィルターにガラス繊維濾紙を１枚もしくは２枚組み合わせて用いることが好ましい。
【００３０】
次に、本実施形態の呼吸器感染症検査方法に用いる検体の検体処理液について説明する。  検体処理液は、界面活性剤を含有する水溶液が好ましい。これはインフルエンザウイルスが外皮を有しているため、界面活性剤により外皮に孔をあけて内部の抗原タンパク質を検体処理液中に移行させるためである。界面活性剤としては、非イオン性界面活性剤や両性界面活性剤を使用することができる。
【００３１】
非イオン性界面活性剤は、特に限定されないが、好ましくはポリオキシエチレン系のものを使用することができより好ましくはエーテル型のものを使用することができる。具体的には、ポリオキシエチレン（９）オクチルフェニルエーテル、ポリオキシエチレン（１０）オクチルフェニルエーテル、ポリオキシエチレン（９）ノニルフェニルエーテル等のポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテル、ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート等のポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン／ポリオキシプロピレン共重合体、ポリオキシエチレンアルキルエーテルからなる群より選ばれる一種又は二種以上の混合物が好ましく用いられる。
【００３２】
両性界面活性剤は、特に限定されないが、3-〔（3-コラミドプロピル）ジメチルアンモニオ〕-1-プロパンスルホネート（CHAPS）等が好ましく用いられる。また、非イオン性界面活性剤の検体処理液への添加量を多くする場合には、その溶解性を向上させて検体処理液の保存安定性を高めるために両性界面活性剤を併用するようにしてもよい。
【００３３】
検体処理液は、非特異反応を防止するためにチオシアン酸系化合物を含有することが好ましい。チオシアン酸系化合物は、チオシアン酸（ＨＮＣＳ）の他、チオシアン酸エステルやチオシアン酸塩等水溶性であれば、特に制限はない。チオシアン酸を構成する塩としては、ナトリウム、カリウム等の金属を含む無機塩基、あるいは有機塩基アンモニウム塩等が挙げられる。さらに、その塩の水和物や溶媒和物をも包含する。具体的には、チオシアン酸ナトリウム、チオシアン酸カリウム、チオシアン酸アンモニウム、チオシアン酸グアニジン等が挙げられる。好ましくはチオシアン酸カリウム、チオシアン酸グアニジンが適用される。
【００３４】
また、検体処理液は、検体である鼻汁（鼻腔吸引液、鼻腔拭い液）や咽頭ぬぐい液中に存在する高粘性物質の粘性を低下させるために、還元剤を含有することが好ましい。また、還元剤としては含硫還元性化合物が好ましく、例えば、メルカプトエチルアミン、メルカプトエチルアミン塩酸塩、メルカプトエタノール、ジチオスレイトール、システイン、Ｎ−アセチル−Ｌシステイン、二臭化水素酸Ｓ−２アミノエチルイソチオ尿素、トリス（２−カルボキシエチル）ホスフィン、ハイドロサルファイト塩、亜硫酸塩等が挙げられる。
【００３５】
また、検体処理液は、抗原タンパクを分解する酵素活性を抑えたり、非特異反応を低下させるためにキレート剤を含有しても良い。キレート剤としては、例えば、エチレンジアミン４酢酸、１，２−シクロヘキサンジアミン４酢酸、ヘキサメチレンジアミン４酢酸、イミノ２酢酸、ヒドロキシエチルイミノ２酢酸、１，３−ジアミノプロパン−２−オール４酢酸、ジエチレントリアミン５酢酸、エチレンジアミン２酢酸、エチレンジアミン２酢酸２プロピオン酸、エチレンビス（オキシエチレンニトリロ）４酢酸、エチレンジアミン−テトラキス（メチレンホスホン酸）、エチレンジアミン２プロピオン酸、ヒドロキシエチルエチレンジアミン３酢酸、Ｎ−（２−ヒドロキシルエチル）エチレンジアミン３酢酸、ニトリロ３酢酸、ニトリロ３プロピオン酸、ニトリロトリス（メチレンホスホン酸）、２（ヒドロキシエチル）グリシンおよび１，２−ジアミノプロパン４酢酸、およびこれらの塩を挙げることができる。
【００３６】
また、検体処理液にアルカリ金属イオン含有させるようにしてもよい。アルカリ金属イオンとしては、リチウム＋（Ｌｉ＋）、ナトリウム＋（Ｎａ＋）、カリウム＋（Ｋ＋）、ルビジウム＋（Ｒｂ＋）、セシウム＋（Ｃｓ＋）、フランシウム＋（Ｆｒ＋）等が例示されるが、好ましくはナトリウム、カリウムを使用することができる。又アルカリ金属イオンは一種又は二種以上使用することができる。このようなアルカリ金属イオンを生じうる化合物は特に限定されないが、例えば塩化ナトリウム、塩化カリウム、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、ＥＤＴＡナトリウム塩、アジ化ナトリウムからなる群より選ばれる一種又は二種以上の混合物を使用することができる。アルカリ金属イオンの添加により非特異反応を抑制することができる。アルカリ金属イオンの含有量は、０．３Ｍ〜２．０Ｍ、好ましくは０．４Ｍ〜１．５Ｍ、より好ましくは０．４５Ｍ〜１．０Ｍである。
【００３７】
また、検体処理液は、緩衝剤を含有することが好ましく、例えば、MES、Bis-Tris、ADA、PIPES、ACES、MOPSO、BES、MOPS、TES、HEPES、DIPSO、TAPSO、POPSO、HEPPSO、EPPS、Tricine、Bicine、TAPS、CHES、CAPSO、CAPSなどのGood緩衝剤を挙げることができ、ADA、PIPES、ACES、MOPSO、BES、MOPS、TES、HEPES、DIPSO、TAPSO、POPSO、HEPPSO、EPPSが好ましく、PIPES、ACES、MOPSO、BES、MOPS、TES、HEPESがより好ましい。検体処理液のｐHは５〜１０、好ましくは５．５〜９．０、より好ましくは６．０〜８．０である。
【００３８】
上述した検体処理液で鼻腔吸引液、鼻腔拭い液、咽頭ぬぐい液等の検体を前処理することによって調製された測定試料は、複数種の呼吸器感染症用の試験具で好適に検査することが可能になる。このため流行している時期によって疑わしいウイルス感染の検査から順に検査を行うことが可能になり、検査コストの上昇を抑えることが可能になる。また、最初のウイルス感染検査が陰性となり、別のウイルス感染検査を行う場合であっても、先のウイルス感染検査の際に採取した検体から調製した測定試料を使用することができるので、患者への負担を増やすことなく複数種のウイルス感染検査を実施することができる。
【００３９】
上述した実施形態では、１２月から３月にかけて流行することが多いインフルエンザ、１０月から１月に流行することが多いＲＳウイルス、流行に季節性のないアデノウイルスを検査するための試験具を例示したが、これに限定されるものではない。上述した検体処理液で調製した測定試料を、流行している他の呼吸器感染症用の試験具を用いて適宜検査することができる。また、例えば、インフルエンザとRSウイルスの両方が流行している時期であれば、図４に示したように、インフルエンザA型、インフルエンザB型およびRSウイルスを同時に検査できる試験具３４を用いて検査を行い、この試験具３４で陰性の場合に、例えばアデノウイルス等の他の感染症の検査用の試験具を用いて検査をするようにしてもよい。
【００４０】
上述した実施形態においては、試験具３１〜３３と、試験容器１とを用いて検査を行うようにしたが、図５に示されるケース５０に試験具３１、３２または３３を収容して用いるようにしてもよい。この場合には試験容器１を検査に用いる必要がなくなり、検体処理容器４０から直接測定試料をケース５０の試料添加部に滴下するようにすればよい。また、上記実施形態の試験具として、図６に示す構造の試験具を使用しても良い。また、上記実施形態においては、ラテラルフロータイプの試験具を例示したが、フロースルータイプの試験具も使用可能である。また、呼吸器感染症毎に異なる種類の試験具を用いることも可能である。
【００４１】
また、上記実施形態の試験具３１〜３４において、基材５は、試料添加用部材７や標識保持部材９などの上記部材を適切に配置するためのものであり、プラスチック以外にも紙やガラスなど種々の材質のものを用いることができる。試料添加用部材７は，レーヨン以外にも、コットン、グラスファイバー又はセルロースファイバーなどの種々の素材で形成することができる。標識保持部材９は、グラスファイバー以外にも、セルロースファイバーなどの種々の素材で形成することができる。クロマト用膜担体１１は、ニトロセルロース以外にも、ナイロン（例えば、カルボキシル基やアルキル基を置換基として有してもよいアミノ基が導入された修飾ナイロン）、ポリビニリデンジフルオリド（ＰＶＤＦ）、セルロースアセテートなどの種々の素材で形成することができる。吸収部材１３は、セルロース以外にも、グラスファイバーなどの種々の素材で形成することができる。試料添加用部材７、標識保持部材９、クロマト用膜担体１１及び吸収部材１３には、不織布又は多孔体以外にも、毛管現象により試料を展開可能な種々の構造のものを用いることができる。
【実施例】
【００４２】
以下、本発明を実施例に基づいて具体的に説明する。なお、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。
【００４３】
１：インフルエンザウイルス検査用試験具３１の作成
以下の方法に従って、クロマト用膜担体１１、標識保持部材９を調製し、さらにこれらを用いて、インフルエンザウイルス検査用試験具３１を調製した。
【００４４】
１−１．クロマト用膜担体１１の調製試料
図１（ａ）に示すように、ニトロセルロースメンブレンからなるクロマト用膜担体１１の第１判定部１１Ａ、第２判定部１１Ｂ及び対照部１１Ｃに、抗体塗布機（ＢｉｏＤｏｔ社）を用いて、それぞれ、リン酸緩衝液（ｐＨ７．０）で２．０ｍｇ／ｍＬの濃度になるように希釈した抗インフルエンザＡ型モノクローナル抗体、リン酸緩衝液（ｐＨ７．０）で１．５ｍｇ／ｍＬの濃度になるように希釈した抗インフルエンザＢ型モノクローナル抗体、及びリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）で１．０ｍｇ／ｍＬの濃度になるように希釈したビオチン結合ＢＳＡ（ウシ血清アルブミン）を塗布し、５０℃で３０分間乾燥させた。
【００４５】
乾燥後のクロマト用膜担体１１をブロッキング液（ＢＳＡを含有するリン酸緩衝液（ｐＨ７．０））に浸漬し、ブロッキングを行った。ブロッキング後、洗浄液（ＳＤＳを含有するリン酸緩衝液（ｐＨ７．０））で洗浄し、４０℃、１２０分間乾燥させ、クロマト用膜担体１１を調製した。
【００４６】
１−２．標識保持部材９の調製
抗インフルエンザＡ型モノクローナル抗体を青色着色ポリスチレンラテックス粒子（粒径０．３μｍ）に感作し、分散用緩衝液（ＢＳＡ及びシュークロースを含有するリン酸緩衝液（ｐＨ７．０））に懸濁し、抗インフルエンザＡ型モノクローナル抗体感作ラテックス粒子を調製した。
【００４７】
抗インフルエンザＢ型モノクローナル抗体を青色着色ポリスチレンラテックス粒子（粒径０．３μｍ）に感作し、分散用緩衝液（ＢＳＡ及びシュークロースを含有するリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）に懸濁し、抗インフルエンザＢ型モノクローナル抗体感作ラテックス粒子を調製した。
【００４８】
ストレプトアビジンを赤色ポリスチレンラテックス粒子（粒径０．１９μｍ）に感作し、分散用緩衝液（ＢＳＡ及びシュークロースを含有するリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）に懸濁し、ストレプトアビジン感作ラテックス粒子を調製した。
【００４９】
上記抗インフルエンザＡ型モノクローナル抗体感作ラテックス粒子、抗インフルエンザＢ型モノクローナル抗体感作ラテックス粒子及びストレプトアビジン感作ラテックス粒子を混合し、混合ラテックスをグラスファイバー製パッドに添加（８３２μＬ／３００ｍｍ×５ｍｍ）後、真空乾燥機にて乾燥させ、標識保持部材９を調製した。
【００５０】
１−３．各部材の基材への貼り付け、裁断
まず、バッキングシートからなる基材５に、図１（ａ）に示すように、上記１−１で調製したクロマト用膜担体１１、上記１−２で調製した標識保持部材９、不織布（レーヨン）からなる試料添加用部材７、不織布（セルロース）からなる吸収部材１３を貼り合せた。次に、試料添加用部材７と吸収部材１３をそれぞれ図示のように覆う透明シール１４を貼った。最後に、裁断機（ＢｉｏＤｏｔ社）にて５ｍｍ幅に裁断し、インフルエンザウイルス検査用試験具３１を調製した。
【００５１】
２．ＲＳウイルス検査用試験具３２の作成
２−１．クロマト用膜担体１１の調製試料
図１（ｂ）に示すように、ニトロセルロースメンブレンからなるクロマト用膜担体１１の判定部１１Ｄ及び対照部１１Ｃに、抗体塗布機（ＢｉｏＤｏｔ社）を用いて、それぞれ、リン酸緩衝液（ｐＨ７．０）で２．０ｍｇ／ｍＬの濃度になるように希釈した抗ＲＳウイルスモノクローナル抗体（ＲＳウイルスのF蛋白と反応）、及びリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）で１．０ｍｇ／ｍＬの濃度になるように希釈したビオチン結合ＢＳＡ（ウシ血清アルブミン）を塗布し、５０℃で３０分間乾燥させた。
【００５２】
乾燥後のクロマト用膜担体１１をブロッキング液（ＢＳＡを含有するリン酸緩衝液（ｐＨ７．０））に浸漬し、ブロッキングを行った。ブロッキング後、洗浄液（ＳＤＳを含有するリン酸緩衝液（ｐＨ７．０））で洗浄し、４０℃、１２０分間乾燥させ、クロマト用膜担体１１を調製した。
【００５３】
２−２．標識保持部材９の調製
抗ＲＳウイルスモノクローナル抗体（ＲＳウイルスＡ及びＢ型両方と反応）を青色着色ポリスチレンラテックス粒子（粒径０．３μｍ）に感作し、分散用緩衝液（ＢＳＡ及びシュークロースを含有するリン酸緩衝液（ｐＨ７．０））に懸濁し、抗ＲＳウイルスモノクローナル抗体感作ラテックス粒子を調製した。
【００５４】
ストレプトアビジン感作ラテックス粒子を上述した１−２と同様にして調製した。
【００５５】
上記抗ＲＳウイルスモノクローナル抗体感作ラテックス粒子及びストレプトアビジン感作ラテックス粒子を混合し、混合ラテックスをグラスファイバー製パッドに添加（８３２μＬ／３００ｍｍ×５ｍｍ）後、真空乾燥機にて乾燥させ、標識保持部材９を調製した。
【００５６】
２−３．各部材の基材への貼り付け、裁断
まず、バッキングシートからなる基材５に、図１（ｂ）に示すように、上記２−１で調製したクロマト用膜担体１１、上記２−２で調製した標識保持部材９、不織布（レーヨン）からなる試料添加用部材７、不織布（セルロース）からなる吸収部材１３を貼り合せた。次に、試料添加用部材７と吸収部材１３をそれぞれ図示のように覆う透明シール１４を貼った。最後に、裁断機（ＢｉｏＤｏｔ社）にて５ｍｍ幅に裁断し、ＲＳウイルス検査用試験具３２を調製した。
【００５７】
３．アデノウイルス検査用試験具３３の作成
３−１．クロマト用膜担体１１の調製試料
図１（ｃ）に示すように、ニトロセルロースメンブレンからなるクロマト用膜担体１１の判定部１１Ｅ及び対照部１１Ｃに、抗体塗布機（ＢｉｏＤｏｔ社）を用いて、それぞれ、リン酸緩衝液（ｐＨ７．０）で２．０ｍｇ／ｍＬの濃度になるように希釈した抗アデノウイルスモノクローナル抗体（マウスＩｇＧモノクローナル抗体）、及びリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）で１．０ｍｇ／ｍＬの濃度になるように希釈したビオチン結合ＢＳＡ（ウシ血清アルブミン）を塗布し、５０℃で３０分間乾燥させた。
【００５８】
乾燥後のクロマト用膜担体１１をブロッキング液（ＢＳＡを含有するリン酸緩衝液（ｐＨ７．０））に浸漬し、ブロッキングを行った。ブロッキング後、洗浄液（ＳＤＳを含有するリン酸緩衝液（ｐＨ７．０））で洗浄し、４０℃、１２０分間乾燥させ、クロマト用膜担体１１を調製した。
【００５９】
３−２．標識保持部材９の調製
抗アデノウイルスモノクローナル抗体（マウスＩｇＧモノクローナル抗体、判定部１１Ｅに用いたものとは異なる部位でアデノウイルスを認識する）を青色着色ポリスチレンラテックス粒子（粒径０．３μｍ）に感作し、分散用緩衝液（ＢＳＡ及びシュークロースを含有するリン酸緩衝液（ｐＨ７．０））に懸濁し、抗アデノウイルスモノクローナル抗体感作ラテックス粒子を調製した。
【００６０】
ストレプトアビジン感作ラテックス粒子を上述した１−２と同様にして調製した。
【００６１】
上記抗アデノウイルスモノクローナル抗体感作ラテックス粒子及びストレプトアビジン感作ラテックス粒子を混合し、混合ラテックスをグラスファイバー製パッドに添加（８３２μＬ／３００ｍｍ×５ｍｍ）後、真空乾燥機にて乾燥させ、標識保持部材９を調製した。
【００６２】
３−３．各部材の基材への貼り付け、裁断
まず、バッキングシートからなる基材５に、図１（ｃ）に示すように、上記３−１で調製したクロマト用膜担体１１、上記３−２で調製した標識保持部材９、不織布（レーヨン）からなる試料添加用部材７、不織布（セルロース）からなる吸収部材１３を貼り合せた。次に、試料添加用部材７と吸収部材１３をそれぞれ図示のように覆う透明シール１４を貼った。最後に、裁断機（ＢｉｏＤｏｔ社）にて５ｍｍ幅に裁断し、アデノウイルス検査用試験具３３を調製した。
【００６３】
４．検体処理液
非イオン性界面活性剤ＮＰ４０（ポリオキシエチレン（９）オクチルフェニルエーテル）を０．１ｖ／ｖ％、チオシアン酸カリウムを０．０３ｗ／ｖ％、２−メルカプトエチルアミン塩酸塩を０．０３ｗ／ｖ％、ＥＤＴＡ２Ｎａを０．５ｗ／ｖ％および塩化ナトリウムを１．３ｗ／ｖを含む０．０５ｍｏｌのPIPES緩衝液（ｐH７．８）を検体処理液として調製した。この検体処理液２．４ｍｌを図３に示すプラスチックボトル４１に収容した。
【００６４】
５．検査
５−１：インフルエンザ疑い患者の検査
２００５年１０月から２００６年３月の期間に医院１を受診した患者のうち、インフルエンザが疑われ、最高体温が３８℃以上で、発症から７２時間以内という条件に当てはまる患者１３３名（平均年齢６．７歳、０．４〜２２歳）からトラップ付吸引カテーテルを用いて鼻腔吸引液を採取して検体とした。
【００６５】
採取した検体に浸した綿棒を、上記検体処理液を収容したプラスチックボトル４１に入れてボトル４１を指で揉んで検体を検体処理液中に抽出して測定試料を調製した後、プラスチックボトル４１の開口にノズル４２を装着し、測定試料を試験容器１に入れた。測定試料を収納した試験容器１にインフルエンザウイルス検査試験具３１を入れてインフルエンザウイルス検査を実施した。また、採取した鼻腔吸引液を使用し抽出したRNAを用いてRT-PCR法によりA型インフルエンザウイルス遺伝子、B型インフルエンザ遺伝子およびRSウイルス遺伝子の検出を実施し、感染起因ウイルスを同定した。試験具３１による検査結果とRT-PCR法による検出結果との一致率を表１に示す。
【００６６】
（表１）
0005431644.tif 000002
【００６７】
インフルエンザ疑い検体において、RT-PCR法によりインフルエンザ陰性、RSウイルス陽性が確認された３検体について、５−１で調製された測定試料を用いてRSウイルス感染検査用試験具３２を用いて検査を行ったところ３検体とも陽性が確認された。また、インフルエンザ疑い検体において、試験具３１によりインフルエンザ陰性、試験具３２によりRSウイルス陰性が確認された１１検体について、５−１で調製された測定試料を用いてアデノウイルス感染検査用試験具３３を用いて検査を行ったところ１１検体とも陽性が確認された。
【００６８】
５−２：RSウイルス疑い患者の検査
２００５年１０月から２００６年３月の期間に医院１を受診した患者のうち、３７．５℃以上の発熱もしくは鼻汁などの上気道症状、咳きや肺聴診異常などの下気道症状などからRSウイルス感染が疑われた患者１０２名（平均年齢１．０歳、０．２〜９歳）からトラップ付吸引カテーテルを用いて鼻腔吸引液を採取して検体とした。
また、２００５年１０月から２００６年１月の期間に医院２を受診した患者のうち、３７．５℃以上の発熱もしくは鼻汁などの上気道症状、咳きや肺聴診異常などの下気道症状などからRSウイルス感染が疑われた患者１０５名（平均年齢１．５歳、０．２〜５歳）から綿棒を用いて鼻腔拭い液を採取して検体とした。
【００６９】
採取した検体を吸収した綿棒を、上記検体処理液を収容したプラスチックボトル４１に入れてボトル４１を指で揉んで検体を検体処理液中に抽出して測定試料を調製した後、プラスチックボトル４１の開口にノズル４２を装着し、測定試料を試験容器１に入れた。測定試料を収納した試験容器１にRSウイルス検査用試験具３２を入れてRSウイルス検査を実施した。また、採取した鼻腔吸引液および鼻腔拭い液を使用し抽出したRNAを用いてRT-PCR法によりA型インフルエンザウイルス遺伝子、B型インフルエンザ遺伝子およびRSウイルス遺伝子の検出を実施し、感染起因ウイルスを同定した。試験具３２による検査結果とRT-PCR法による検出結果との一致率を表２に示す。
【００７０】
（表２）
0005431644.tif 000003
【００７１】
RSウイルス疑い検体において、RT-PCR法によりRSウイルス陰性が確認された３検体について、５−２で調製された測定試料を用いてインフルエンザウイルス感染検査用試験具３１を用いて検査を行ったところ３検体とも陽性が確認された。
【図面の簡単な説明】
【００７２】
【図１】本発明の実施形態に使用される試験具の一例を示す図であり、（ａ）はインフルエンザウイルス感染症検査用試験具、（ｂ）はRSウイルス感染症検査用試験具、（ｃ）はアデノウイルス感染症検査用試験具を示す図である。
【図２】本発明の実施形態に使用される試験容器の一例を示す図であり、（ａ）は試験容器の正面図、（ｂ）は試験容器の平面図、（ｃ）は試験容器の側面図、（ｄ）は（ａ）のＩ−Ｉ断面図、（ｅ）は（ｂ）のＩＩ−ＩＩ断面図、（ｆ）は（ｂ）のＩＩＩ−ＩＩＩ断面図である。
【図３】本発明の実施形態に使用される検体処理容器の一例を示す図である。
【図４】本発明の他の実施形態で用いられる試験具の一例を示す図である。
【図５】本発明の他の実施形態で用いられる試験具の一例を示す図である。
【図６】本発明の他の実施形態で用いられる試験具の一例を示す図である。
【符号の説明】
【００７３】
１；試験容器
５；基材
７；試料添加用部材
９；標識保持部材
１１；クロマト用膜担体
１１A；A型インフルエンザ判定部
１１B；B型インフルエンザ判定部
１１C；対照部
１１D；RSウイルス判定部
１１E；アデノウイルス判定部
１３；吸収部材
１４；透明シール
１５：受入れ部
１７；試料収容部
１８；中間部
２０；段差部
２３；突起部
３１；インフルエンザウイルス検査用試験具
３２；RSウイルス検査用試験具
３３；アデノウイルス検査用試験具
３４；インフルエンザ・アデノウイルス検査用試験具
４０；検体処理容器
４１；プラスチックボトル
４２；ノズル
４３；キャップ
５０；ケース
【図１】
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【図２】
0005431644.tif 000005
【図３】
0005431644.tif 000006
【図４】
0005431644.tif 000007
【図５】
0005431644.tif 000008
【図６】
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