(57)【要約】本発明は、ブドウ樹液を有効成分として含有するセラミド合成促進剤、ブドウ樹液およびセリンを有効成分として含有するセラミド合成促進剤、これらのセラミド合成促進剤を含有する化粧料および皮膚外用剤ならびにそれらの使用方法に関する。本発明によれば、皮膚バリア機能を安全かつ効果的に改善し得る手段を提供することができる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ブドウ樹液を有効成分として含有するセラミド合成促進剤。
【請求項２】
ブドウ樹液およびセリンを有効成分として含有するセラミド合成促進剤。
【請求項３】
請求項１または２に記載のセラミド合成促進剤を含有する化粧料。
【請求項４】
ブドウ樹液を１質量％以上含有する請求項３に記載の化粧料。
【請求項５】
ブドウ樹液を１質量％以上およびセリンを０．１質量％以上含有する請求項３に記載の化粧料。
【請求項６】
セリンを０．１〜５質量％含有する請求項５に記載の化粧料。
【請求項７】
皮膚老化防止用化粧料である請求項３〜６のいずれか１項に記載の化粧料。
【請求項８】
しわ改善用化粧料である請求項３〜６のいずれか１項に記載の化粧料。
【請求項９】
請求項１または２に記載のセラミド合成促進剤を含有する皮膚外用剤。
【請求項１０】
ブドウ樹液を１質量％以上含有する請求項９に記載の皮膚外用剤。
【請求項１１】
ブドウ樹液を１質量％以上およびセリンを０．１質量％以上含有する請求項９に記載の皮膚外用剤。
【請求項１２】
セリンを０．１〜５質量％含有する請求項１１に記載の皮膚外用剤。
【請求項１３】
皮膚老化防止のために使用される請求項９〜１２のいずれか１項に記載の皮膚外用剤。
【請求項１４】
しわ改善のために使用される請求項９〜１２のいずれか１項に記載の皮膚外用剤。
【請求項１５】
請求項１または２に記載のセラミド合成促進剤を使用する皮膚老化防止方法。
【請求項１６】
請求項１または２に記載のセラミド合成促進剤を使用するしわ改善方法。
【発明の詳細な説明】
【関連出願の相互参照】
【０００１】
本出願は、２００６年１１月２日出願の日本特願２００６−２９９４０１号の優先権を主張し、その全記載は、ここに特に開示として援用される。
【技術分野】
【０００２】
本発明は、皮膚のバリア機能維持に重要なセラミドの合成を促進し得るセラミド合成促進剤、ならびに、セラミド合成を促進することにより皮膚のバリア機能を高め得る化粧料および皮膚外用剤に関する。
更に本発明は、上記セラミド合成促進剤を使用する皮膚老化防止方法およびしわ改善方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
乾燥肌、老人性乾皮症、アトピー性皮膚炎などは皮膚のバリア機能異常に起因する皮膚障害である。近年、これら皮膚障害を改善するための保湿成分としてセラミドが注目されている。セラミドは人の肌表面(角質層)で細胞と細胞をつなぎ止めている細胞間脂質で、角質層の全脂質の４０〜６５％を占めている。このセラミドが加齢やある種の原因で減少すると、肌の水分保持ができなくなり乾燥するだけでなく、バリア機能が低下し、様々な皮膚障害を起すことになる。そこでセラミドを化粧料に配合し外部から与える化粧料が多く提案されている（特開平７−１６５６９０号公報（以下、「文献１」という）ならびにその英語ファミリーメンバー米国特許第５，６６５，７７８号および米国特許第５，９５９，１２７号、特開平７−１８７９８７号公報（以下、「文献２」という）、特開平９−２４１１４３号公報（以下、「文献３」という）参照、それらの全記載は、ここに特に開示として援用される）。【０００４】
上記皮膚化粧料以外に、皮膚の保湿性に優れた化粧料として、ブドウの樹液を含有する化粧料が知られている（特開平１０−４５５６４号公報（以下、「文献４」という）、その全記載は、ここに特に開示として援用される）。
【発明の開示】
【０００５】
上記文献１〜３に記載の皮膚化粧料等においては、セラミドは水に不溶性で分子量も大きいため肌に浸透し難く、肌自身のセラミド合成能力を高める成分が期待されていた。しかし、これらの皮膚化粧料等の効果は十分ではなく、また合成品を使用する場合には安全性に対する懸念もあった。また、文献４に記載のブドウの樹液を含有する化粧料は、一定の保湿効果や肌荒れ改善効果を有しているがより優れた効果をもつ化粧料を期待する市場のニーズがある。
【０００６】
かかる状況下、本発明は、皮膚バリア機能を安全かつ効果的に改善し得る手段を提供することを目的としてなされたものである。
【０００７】
本発明者らは、上記目的を達成するために鋭意検討を重ねた結果、驚くべきことに、ブドウの樹から採取される樹液が、皮膚のバリア機能維持に最も重要なセラミド合成酵素系を亢進することによってセラミド合成を高めることを見出し、本発明を完成するに至った。
【０００８】
本発明は、ブドウ樹液を有効成分として含有するセラミド合成促進剤に関する。
【０００９】
本発明の別の態様は、ブドウ樹液およびセリンを有効成分として含有するセラミド合成促進剤に関する。
【００１０】
本発明の別の態様は、上記セラミド合成促進剤を含有する化粧料に関する。
【００１１】
一態様によれば、上記化粧料は、ブドウ樹液を１質量％以上含有する。
【００１２】
一態様によれば、上記化粧料は、ブドウ樹液を１質量％以上およびセリンを０．１質量％以上含有する。
【００１３】
一態様によれば、上記化粧料は、セリンを０．１〜５質量％含有する。
【００１４】
一態様によれば、上記化粧料は、皮膚老化防止用化粧料である。
【００１５】
一態様によれば、上記化粧料は、しわ改善用化粧料である。
【００１６】
本発明の別の態様は、上記記載のセラミド合成促進剤を含有する皮膚外用剤に関する。
【００１７】
一態様によれば、上記皮膚外用剤は、ブドウ樹液を１質量％以上含有する。
【００１８】
一態様によれば、上記皮膚外用剤は、ブドウ樹液を１質量％以上およびセリンを０．１質量％以上含有する。
【００１９】
一態様によれば、上記皮膚外用剤は、セリンを０．１〜５質量％含有する。
【００２０】
一態様によれば、上記皮膚外用剤は、皮膚老化防止のために使用される。
【００２１】
一態様によれば、上記皮膚外用剤は、しわ改善のために使用される。
【００２２】
本発明の別の態様は、上記セラミド合成促進剤を使用する皮膚老化防止方法に関する。
【００２３】
本発明の別の態様は、上記セラミド合成促進剤を使用するしわ改善方法に関する。
【００２４】
本発明のセラミド合成促進剤及びこれを含有する化粧料及び皮膚外用剤は、皮膚のバリア機能維持に最も重要なセラミド合成酵素系を亢進する効果が高い。本発明のセラミド合成促進剤及びこれを含有する化粧料及び皮膚外用剤は、保湿性に優れ、肌荒れを防ぎ、また、しわを目立ちにくくする改善効果を与えるものである。
【００２５】
発明を実施するための最良の形態
以下に、本発明について詳細に説明する。
【００２６】
ブドウ樹液は、ブドウ(Vitis科)の木の生体内を流れる植物導管水である。本発明において用いられるブドウ樹液は、ブドウに属する植物の樹液であれば特にその種属は限定されないが、ブドウ、ヤマブドウ等の樹液を利用できる。例えば、ブドウとしては、巨峰、甲州、甲斐路、マスカット・ベリーＡ、デラウェア、キャンベル・アーリー、ピオーネ、ネオ・マスカット、ナイアガラ、コンコード、スチューベン、カベルネ・ソーヴィニヨン、ピノ・ノワール、メルロー、セミヨン、リースリング、シャルドネ等の品種を挙げることができる。また、栽培されている地域、栽培方法等も限定されないが、中でも、春先の発芽期前に、剪定されたブドウの枝より溢出する樹液であることが好ましい。特に、ブドウの木から春先の２週間ほど採取されるブドウ樹液が特に有効で効果が高い。
【００２７】
ブドウ樹液は、ブドウの茎を切って流出する樹液を採取して得ることができる。樹液の採取方法は、特に限定されず、例えば、小さな容器等を樹液が流れるよう剪定された箇所に取り付けて流れ出てくる樹液を採取し、これを防腐剤等が投入された大きめの保存容器に集めることによって行うことができる。一度に種々の位置から樹液を採取できる装置、例えば、特開平10-295207号公報記載の採取装置、特開2005-118035号公報に記載の受液器を用いて採取することが、作業効率が高く、また、品質劣化を防ぐことができ好ましい。
【００２８】
採取したブドウ樹液は、必要に応じて防腐剤等と混合して液状物質として用いることができ、または、凍結乾燥品として用いることができる。また、採取したブドウ樹液には、必要に応じて加熱処理、清澄処理を施してもよい。これにより、樹液の白濁や褐変を防止することができる。加熱処理は、ブドウ樹液を、例えば６０〜１００℃、好ましくは８０〜９０℃で、例えば１０分以上加熱することによって行うことができる。なお、加熱処理は、採取後のブドウ樹液に対して行ってもよく、または製品とした後に行ってもよい。また、清澄処理は、公知の清澄剤、例えば、活性炭、ベントナイト、シリカゲル、シリカゾル、PVPP(polyvinyl polypyrrolidone)等を用いて行うことができる。
【００２９】
本発明のセラミド合成促進剤は、ブドウ樹液を有効成分として含有するものであるが、セラミド合成促進効果を有効に得るという観点から、ブドウ樹液は、未調整樹液換算で１質量％以上、より好ましくは３質量％〜１００質量％、さらに好ましくは５質量％〜８０質量％含むことができる。本発明では、ブドウ樹液そのものを、セラミド合成促進剤として用いることもできる。
【００３０】
本発明のセラミド合成促進剤は、ブドウ樹液を液体のまま含むことができ、または、凍結乾燥物として含むこともできる。剤型は特に限定されず、ローション剤、乳剤、ゲル剤、クリーム剤、軟膏剤、粉末剤、顆粒剤等の種々の剤型で提供することができる。
【００３１】
本発明のセラミド合成促進剤は、ブドウ樹液に加えて、セリンを有効成分として含有することもできる。セリンをさらに含有することで、ブドウ樹液が有するセラミド合成促進効果を向上させることができる。セリンの含有量は、ブドウ樹液の含有量を考慮して決定され、ブドウ樹液（未調整樹液換算）の質量の０．１〜１倍程度とすることが、ブドウ樹液が有するセラミド合成促進効果を向上させるという観点から適当である。
【００３２】
本発明のセラミド合成促進剤は、ブドウ樹液またはその凍結乾燥物に、必要に応じて、通常医薬品、医薬部外品、皮膚化粧料等に配合される油性成分、界面活性剤、保湿剤、顔料、紫外線吸収剤、酸化防止剤、香料、色素、抗菌剤、防黴剤、アルコール、水等を適宜配合することができる。また、本発明の効果を損なわない範囲において、他のセラミド合成促進剤と併用することもできる。
【００３３】
本発明のセラミド合成促進剤を粉末剤、顆粒剤等の経口投与薬として用いることもでき、その場合の投与量は、被投与者の年齢、肌状態等の条件に応じて適宜選択することができる。投与量は、例えば、成人１人当たり１００〜１０００ｍｇ（有効成分量（凍結乾燥品の重量換算）として）の範囲である。ただし、上記の投与量は、上記の条件に応じて適宜増減することができる。
【００３４】
本発明のセラミド合成促進剤は、化粧料及び皮膚外用剤に適用することができる。更に、肌の乾燥やはりを改善することにより皮膚の老化を防止するために使用することができ、しわ改善のために使用することもできる。
特に、本発明のセラミド合成促進剤は、優れたセラミド合成促進効果を有することから、従来の単なる化粧料としての用途以外に、乾燥肌、老人性乾皮症、アトピー性皮膚炎などの皮膚のバリア機能異常に起因する皮膚障害を改善するために用いられる、皮膚外用剤としての新たな用途にも適用できる。
【００３５】
本発明は、セラミド合成促進効果が高いブドウ樹液とセリンを組み合わせて使用することで、肌の保湿効果を高め、肌荒れを改善し、しわを目立ちにくくする効果がより優れた化粧料及び皮膚外用剤を提供できる。尚、ブドウ樹液には、天然成分としてセリンが微量（例えば、１０〜３０ｐｐｍ程度）含まれている場合がある。しかし、本発明では、ブドウ樹液に天然成分として本来含まれているセリン含有量に比べて、格段に多い量のセリンを添加し、それによりブドウ樹液が有するセラミド合成促進効果を補強するものでる。
【００３６】
ブドウ樹液を含む本発明のセラミド合成促進剤を化粧料または皮膚外用剤とする場合のブドウ樹液配合量は、セリンを加える場合も加えない場合も、未調整樹液換算で1質量％以上が好ましい。ブドウ樹液配合量は、好ましくは、未調整樹液換算で２質量％〜８０質量％、より好ましくは３〜５０質量％の範囲とする。
【００３７】
ブドウ樹液およびセリンを含む本発明のセラミド合成促進剤を化粧料または皮膚外用剤とする場合のセリン配合量は、０．１質量％以上が好ましい。セリンの含有量は、セラミド合成促進剤の場合と同様に、ブドウ樹液の含有量を考慮して決定され、ブドウ樹液（未調整樹液換算）の質量の０．１〜１倍程度とすることが、ブドウ樹液が有するセラミド合成促進効果を向上させるという観点から適当である。セリンの配合効果は漸次増加するので明確な上限はないが、０．１〜５質量％が常用の範囲であり、好ましくは０．３〜３質量％、より好ましくは０．５〜２質量％の範囲とすることが適当である。ブドウ樹液およびセリン配合量は、化粧料または皮膚外用剤の全成分の合計を１００質量％としたときの割合である。
【００３８】
本発明のセラミド合成促進剤の皮膚外用剤としての適用方法は、外用剤の種類に応じて適宜選択することができる。一般に、ローション剤、乳剤、ゲル剤、クリーム剤、軟膏剤として調製された外用剤として適用する場合には、顔等の皮膚に対し、１日１〜２回程度塗布することが好ましい。本発明のセラミド合成促進剤は、化粧料としても利用でき、ローション、乳液、美容液、クリーム、リキッドファンデーション、パウダーファンデーション、口紅などに応用できる。
【実施例】
【００３９】
以下、本発明の実施例について説明する。本発明はこれらに限定されるものではない。【００４０】
実施例１
ブドウ樹液のセラミド合成促進効果を検証する目的で、ヒト表皮細胞を用いたセラミド合成律速酵素(セリンパルミトリルトランスフェラーゼ (SPT)) mRNA発現量を測定した。SPTはL-セリンとパルミトイルCoAから3-ケトスフィンガニンを生じる縮合反応を触媒する酵素で、この物質がセラミドに変化する。つまりこのSPTの量が多いほどセラミド合成が促進される。そこでこのSPT量を、SPTmRNA発現量で評価した。【００４１】
表皮細胞におけるセラミド合成律速酵素 (SPT)mRNAの発現量変化はRT-PCR法によって評価した。コントロールのハウスキーピング遺伝子としてシクロフィリンを用いた。【００４２】
正常ヒト表皮細胞をHuMedia KG2培地を用いて6 穴プレートに5.0 × 104 cells /wellの細胞密度にて播種した。4 日間培養後、所定の濃度の試料を含むウシ脳下垂体抽出物未含有HuMeia-KG2培地 に交換し、48 時間培養した。細胞はPBS (-)にて洗浄したのち、500 μLのTRIzol(登録商標) reagent（invitrogen社）を用いて細胞を破砕した。100 μLのクロロホルムを添加して、十分に混和したのち、遠心操作によって上清の水層を得、2-プロパノール沈殿法にてTotal RNAを得た。RNAは冷75 %エタノールで洗浄したのち、DEPC（ジエチルピロカルボネート）水に溶解してRT-PCRに供した。【００４３】
逆転写反応は、Super Script First-Strand Synthesisキット (Invitrogen社)のプロトコールに準じ、Total RNA 1 μgを用いて実施した。またPCR反応は、逆転写にて得られたcDNAを鋳型として、Taq DNA Polymerase (Roche社)を用い、下記に示すプライマーとその反応条件下にて実施した。【００４４】
【表１】
2008053960.tif 000002
【００４５】
PCR産物はアガロースゲルにて電気泳動後、SYBR Gold(登録商標) （invitrogen社）により染色して泳動画像を得た。得られた泳動画像の各バンドの輝度を CS Analyzer Version 2.0（アトー社）を用いて定量し、各遺伝子の発現量とした。SPTをシクロフィリン遺伝子の発現量にて除することにより補正した後、無添加培養細胞 (コントロール)の補正値を100とした百分率、Index (%)で表した。それぞれの遺伝子発現量はStudent t検定を用いて有意差検定を行い、コントロールとの差を評価した。結果を表2に示す。ブドウ樹液凍結乾燥物500μg/ｍL以上で試料濃度に依存した有意なSPT mRNAの発現増加が認められた。なお、ブドウ樹液1000ｍLを凍結乾燥処理すると凍結乾燥物3.6gが得られた。【００４６】
【表２】
2008053960.tif 000003
【００４７】
表２に示す結果から、ブドウ樹液には、セラミド合成促進効果があることが分かり、本発明のブドウ樹液を有効成分として含有するセラミド合成促進剤は、セラミド合成促進に有用であることが分かる。そして、本発明のセラミド合成促進剤は、セラミド合成促進効果があることから、従来の単なる化粧料としての用途以外に、乾燥肌、老人性乾皮症、アトピー性皮膚炎などの皮膚のバリア機能異常に起因する皮膚障害を改善するために用いられる、皮膚外用剤としての新たな用途にも適用できることが分かる。【００４８】
実施例２
セリン配合効果
［試験サンプルの調製］
本発明のセラミド合成促進剤を含有する組成物の効果を確認するため、表３に示す処方のクリーム組成物を調製し、下記に示す官能評価試験及び小じわ評価試験に供した。表３に示す組成物の配合量は全て％で示す。【００４９】
【表３】
2008053960.tif 000004
【００５０】
［官能評価試験］
肌の乾燥やはりのなさを訴える３０代から５０代の６０人の女性を被験者として、年齢が偏らないように１５名ずつ４群に分け、表3に示した比較例１、例１〜３の４種類の処方例のクリームをそれぞれの群の被験者に、朝夜1日2回、連続30日間使用してもらい、使用感：しっとり感（湿潤性）、はり感（弾力性）、すべすべ感（潤滑性）についての官能評価試験を行った。評価基準は表４にする。さらに、官能試験の評価結果を表５に示す。【００５１】
【表４】
2008053960.tif 000005
【００５２】
【表５】
2008053960.tif 000006
【００５３】
［小じわ改善評価試験］
肌のしわ（特に目じりの小じわ）が気になる４０代から６０代の４０人の女性を被験者として、年齢が偏らないように１０名ずつ４群に分け、表３で示した比較例１及び例１〜３の４種類の処方例のクリームをそれぞれの群の被験者に、朝夜1日2回、しわができやすい目の周りを中心に連続30日間使用してもらい、塗布前後の目じりの小じわを２次元画像解析法により測定し、小じわ率を比較した。その結果を表６に示す。２次元画像解析法は、以下の文献に記載の方法に従って実施した［武田克之他  監修「化粧品の有用性-評価技術の進歩と将来展望-」薬事日報社p170  (2001)］【００５４】
【表６】
2008053960.tif 000007
【００５５】
［試験結果］
表５に示す官能評価試験結果においても、表６に示す小じわ評価試験結果においても、セリンのみを含有する処方のクリーム（比較例１）に比べてブドウ樹液を含有する処方のクリーム（例１）は、乾燥、はり、しわ等に対する改善効果が高く、さらに、ブドウ樹液とセリンを組み合わせた処方のクリーム（例２及び３）は、それぞれを単独で用いる場合より、乾燥、はり、しわ等に対する改善効果はさらに高かった。【００５６】
本発明は、化粧料や皮膚外用剤等の分野に有用である。
【配列表】
2008053960000001.app
【国際調査報告】
2008053960.tif 000008
2008053960.tif 000009
2008053960.tif 000010
2008053960.tif 000011