(57)【要約】  炎症性腸疾患の治療又は予防に有効な手段を提供することを課題とする。生体内でオリゴ糖を生成する能力を有する酵素を用いた、炎症性腸疾患の治療又は予防用の酵素組成物が提供される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
生体内でオリゴ糖を生成する能力を有する酵素を含むことを特徴とする、炎症性腸疾患の治療又は予防用の酵素組成物。
【請求項２】
前記酵素は胃内で作用することを特徴とする、請求項１記載の酵素組成物。
【請求項３】
前記酵素は糖転移反応を触媒することを特徴とする、請求項１又は２記載の酵素組成物。
【請求項４】
前記酵素は、グルコシルトランスフェラーゼ、フルクトシルトランスフェラーゼ及びレバンシュークラーゼからなる群より選択される１種以上の酵素であることを特徴とする、請求項１〜３のいずれかに記載の酵素組成物。
【請求項５】
アミラーゼ及びインベルターゼからなる群より選択される１種以上の酵素を更に含むことを特徴とする、請求項１〜４のいずれかに記載の酵素組成物。
【請求項６】
請求項１〜５のいずれかに記載の酵素組成物を含有する食品。
【請求項７】
炎症性腸疾患を罹患した又は罹患するおそれのある対象に、生体内においてオリゴ糖を生成する能力を有する酵素を含む酵素組成物を摂取させることを特徴とする、炎症性腸疾患の治療又は予防法。
【請求項８】
前記酵素は胃内で作用することを特徴とする、請求項７記載の治療又は予防法。
【請求項９】
前記酵素は糖転移反応を触媒することを特徴とする、請求項７又は８記載の治療又は予防法。
【請求項１０】
前記酵素は、グルコシルトランスフェラーゼ、フルクトシルトランスフェラーゼ及びレバンシュークラーゼからなる群より選択される１種以上の酵素であることを特徴とする、請求項７〜９のいずれかに記載の治療又は予防法。
【請求項１１】
前記酵素組成物は食前、食間又は食後に摂取されることを特徴とする、請求項７〜１０のいずれかに記載の治療又は予防法。
【請求項１２】
前記酵素組成物は食物と同時に摂取されることを特徴とする、請求項７〜１０のいずれかに記載の治療又は予防法。
【請求項１３】
前記酵素組成物が、アミラーゼ及びインベルターゼからなる群より選択される１種以上の酵素を更に含むことを特徴とする、請求項７〜１２のいずれかに記載の治療又は予防法。
【請求項１４】
炎症性腸疾患の予防又は治療用の酵素組成物を製造するための、生体内においてオリゴ糖を生成する能力を有する酵素の使用。
【請求項１５】
前記酵素は胃内で作用することを特徴とする、請求項１４記載の使用。
【請求項１６】
前記酵素は糖転移反応を触媒することを特徴とする、請求項１４又は１５記載の使用。
【請求項１７】
前記酵素は、グルコシルトランスフェラーゼ、フルクトシルトランスフェラーゼ及びレバンシュークラーゼからなる群より選択される１種以上の酵素であることを特徴とする、請求項１４〜１６のいずれかに記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は酵素組成物及びその用途に関する。詳しくは、炎症性腸疾患の治療又は予防に利用される酵素組成物、及びそれを用いた治療法などに関する。
【背景技術】
【０００２】
炎症性腸疾患（IBD:Inflamatory Bowel Disease）とは原因不明の消化管（おもに小腸、大腸）の炎症性疾患であり、具体的には潰瘍性大腸炎（UC：Ulcerative Colitis）とクローン病（CD：Crohn's Disease）をいう。UCは大腸に限局して、粘膜に浅い潰瘍と炎症が起きる病気で、直腸から口側に連続性の病変が認められる。症状としては下痢、粘血便、腹痛や発熱などの症状を呈する。一方CDは小腸、大腸を中心に全消化管に非連続性の敷石上外観を伴う深い縦走潰瘍と全層性の炎症を呈し、非乾燥性肉芽腫を特徴とする。症状としては腸内炎症を伴う腹痛や下痢、発熱、体重減少などが主症状である。わが国ではIBD患者数は欧米に比べ10〜20％と少ないが、近年になり患者数が毎年約10％ずつ増加を続けており問題となっている。その原因の一つが、高脂肪食、低食物繊維、砂糖の高摂取といった食の欧米化であると考えられている。【０００３】
現在IBD治療法は確立されておらず、多くの研究が進行中である。IBDの腸内炎症は腸内細菌が関与していることが明らかになってきており、腸内細菌叢の状態とIBDの病状には密接な関係があると考えられている。IBDの疾患モデル動物に乳酸菌などプロバイオティックを与えた幾つかの試験報告では、IBDの症状の改善が認められている。したがって腸内細菌叢における乳酸菌の増加がIBDの症状改善につながる可能性がある。腸内細菌叢の改善には乳酸菌を経口投与するプロバイオティック製剤の他に、乳酸菌の増殖を促進するプレバイオティックと呼ばれる成分を経口投与する方法も考えられている。プレバイオティックに関する報告は少ないが、IBDモデル動物を用いた実験においてラクツロースに症状軽減効果が認められている（非特許文献１）。またプレバイオティックとしてよく知られているオリゴ糖のIBDの症状軽減についての研究も少なく、オリゴ糖の経口投与がIBDの症状軽減に有効かどうかは不明である。【０００４】
ところで、プロバイオティック製剤又はプレバイオティック製剤を経口投与する場合には以下の問題が生ずる。プロバイオティック製剤の場合、経口投与される菌の種類によってはヒトの腸内への定着率が異なり、菌種を選ぶ必要がある。更に、腸内に定着する菌種については個人差もあるといわれ、それぞれの腸内環境に応じた菌種の選択が必要であるが、これは容易なことではない。他方のプレバイオティック製剤の場合、腸内細菌叢の改善には相当量（５〜１０g）のオリゴ糖を経口摂取する必要があり、摂取時に困難を伴うことが予想される。また、必要量を一度に摂取した場合、下痢、膨満感を伴うことがあり、IBDの症状を悪化させる危険も考えられる。
【非特許文献１】K. L. Madsen et al: Lactobacillus species prevents colitis in interleukin 10-gene-deficient mice. Gastroenterology 116:1107-1114, 1999
【特許文献１】特開２０００−３２５０４５号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明は、炎症性腸疾患（IBD）の治療又は予防に有効な手段を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
以上の目的に鑑みて検討を進める中で本発明者らは、オリゴ糖生成酵素を利用して生体内でオリゴ糖を生成させる方法、即ちオリゴ糖生成酵素の働きによって、摂取された食物より体内でオリゴ糖を生成させ、そして生成したオリゴ糖によって元々各人の腸内に定着している乳酸菌の増殖を活性化する方法に注目した。そして、当該方法がIBDの治療又は予防に有効であるとの仮定の下、動物モデルを用いた実験を施行した。その結果、オリゴ糖生成酵素摂取群において有意にIBDの症状軽減が認められ、当該方法のIBDに対する有効性が確認された。尚、オリゴ糖生成酵素を利用して腸内細菌叢の改善を図ること（及びそれに使用される酵素組成物）ついては特開２０００−３２５０４５号公報（特許文献１）において詳細に記載されているが、そこではオリゴ糖生成酵素のIBDへの適用は全く予定されていない。
本発明は以上の成果に基づくものであって、以下に列挙する酵素組成物、治療法などを提供する。
［１］生体内でオリゴ糖を生成する能力を有する酵素を含むことを特徴とする、炎症性腸疾患の治療又は予防用の酵素組成物。
［２］前記酵素は胃内で作用することを特徴とする、［１］記載の酵素組成物。
［３］前記酵素は糖転移反応を触媒することを特徴とする、［１］又は［２］記載の酵素組成物。
［４］前記酵素は、グルコシルトランスフェラーゼ、フルクトシルトランスフェラーゼ及びレバンシュークラーゼからなる群より選択される１種以上の酵素であることを特徴とする、［１］〜［３］のいずれかに記載の酵素組成物。
［５］アミラーゼ及びインベルターゼからなる群より選択される１種以上の酵素を更に含むことを特徴とする、［１］〜［４］のいずれかに記載の酵素組成物。
［６］［１］〜［５］のいずれかに記載の酵素組成物を含有する食品。
［７］炎症性腸疾患を罹患する又は罹患するおそれのある対象に、生体内においてオリゴ糖を生成する能力を有する酵素を含む酵素組成物を摂取させることを特徴とする、炎症性腸疾患の治療又は予防法。
［８］前記酵素は胃内で作用することを特徴とする、［７］記載の治療又は予防法。
［９］前記酵素は糖転移反応を触媒することを特徴とする、［７］又は［８］記載の治療又は予防法。
［１０］前記酵素は、グルコシルトランスフェラーゼ、フルクトシルトランスフェラーゼ及びレバンシュークラーゼからなる群より選択される１種以上の酵素であることを特徴とする、［７］〜［９］のいずれかに記載の治療又は予防法。
［１１］前記酵素組成物は食前、食間又は食後に摂取されることを特徴とする、［７］〜［１０］のいずれかに記載の治療又は予防法。
［１２］前記酵素組成物は食物と同時に摂取されることを特徴とする、［７］〜［１０］のいずれかに記載の治療又は予防法。
［１３］前記酵素組成物が、アミラーゼ及びインベルターゼからなる群より選択される１種以上の酵素を更に含むことを特徴とする、［７］〜［１２］のいずれかに記載の治療又は予防法。
［１４］炎症性腸疾患の予防又は治療用の酵素組成物を製造するための、生体内においてオリゴ糖を生成する能力を有する酵素の使用。
［１５］前記酵素は胃内で作用することを特徴とする、［１４］記載の使用。
［１６］前記酵素は糖転移反応を触媒することを特徴とする、［１４］又は［１５］記載の使用。
［１７］前記酵素は、グルコシルトランスフェラーゼ、フルクトシルトランスフェラーゼ及びレバンシュークラーゼからなる群より選択される１種以上の酵素であることを特徴とする、［１４］〜［１６］のいずれかに記載の使用。
【図面の簡単な説明】
【０００７】
【図１】IBD動物モデルを用いた実験のスキーム。
【図２】グルコシルトランスフェラーゼ投与群と非投与群の体重の経時的変化を示すグラフ。
【図３】グルコシルトランスフェラーゼ投与群と非投与群の活動性指標（Disease activity index (DAI)）の経時的変化を示すグラフ。
【図４】グルコシルトランスフェラーゼ投与群と非投与群の糞便1g中の嫌気性細菌数及び乳酸菌数の比較（3％DSS投与0日目）。（ａ）嫌気性細菌数を比較したグラフ。（ｂ）乳酸菌（ビフィズス菌）を比較したグラフ。CFU=colony forming unit
【図５】グルコシルトランスフェラーゼ投与群と非投与群の糞便1g中の嫌気性細菌数及び乳酸菌数の比較（3％DSS投与5日目）。（ａ）嫌気性細菌数を比較したグラフ。（ｂ）乳酸菌（ビフィズス菌）を比較したグラフ。
【図６】グルコシルトランスフェラーゼ投与群と非投与群の大腸についての組織学的検討。左：正常組織、中央：非投与群（3％DSS投与5日目）、右：グルコシルトランスフェラーゼ投与群（3％DSS投与5日目）。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００８】
本発明の第１の局面は炎症性腸疾患（IBD）の治療又は予防用の酵素組成物に関する。本発明の酵素組成物は、生体内でオリゴ糖を生成する能力を有する酵素（以下、「オリゴ糖生成酵素」ともいう）を含むことを特徴とする。摂取された食物中の成分を基質として生体内で作用し、オリゴ糖を生成する酵素が使用される。このような性質を備える酵素である限り、使用する酵素の種類は特に限定されない。また、酵素の由来も限定されず、細菌由来、カビ由来、酵母由来、放線菌由来、担子菌由来、植物由来、又は動物由来の酵素を使用可能である。但し、本発明の酵素組成物が生体内で効果を発揮するものであることから、生体内の環境で作用する酵素が採用される。特に、胃内においても安定であって良好に作用する酵素（つまり低ｐＨでも十分に作用する酵素）を使用することが好ましい。【０００９】
本発明の酵素組成物の作用によって生成するオリゴ糖の種類は特に限定されず、フラクトオリゴ糖（ショ糖のフラクトース残基に１〜３分子のフラクトースがＣ２とＣ１との位置でβ結合したもの）、分岐オリゴ糖（α−1,6結合を有するオリゴ糖）、ガラクトオリゴ糖（ラフィノースやスタキオースなど）、ゲンチオオリゴ糖（β−1,6−グルコシド結合を有するオリゴ糖）等を例示することができる。より具体的には、４−α−グルコシル−キシロース、３−α−グルコシル−ソルボース、４−α−グルコシル−シュークロース、４−α−グルコシル−マンノース、４−α−グルコシル−グルコサミン、４−α−グルコシル−Ｎ−アセチル−グルコサミン、３−，６−α−グルコシル−マンノース、３−，４−α−グルコシル−キシロース、１−，３−，４−α−グルコシル−フラクトース、α−グルコシル−グリセリン、リボフラビン−α−グルコシド、６−α−ガラクトシル−フラクトース、６−α−ガラクトシル−ガラクトース、α−ガラクトシル−グリセリン、３−，４−，６−β−ガラクトシル−ラクトース、β−ガラクトシル−グリセリン、４−β−ガラクトシル−グルコース、４−β−ガラクトシル−マンノース、β−ガラクトシル−グリセリン、キシロシル−フラクトシド、ガラクトシル−フラクトシド、イソマルトシル−フラクトシド、ラクトシル−フラクドシド、１−ケストース、ニストース（フラクトオリゴ糖）、ネオケストース、イヌロビオース、ジフラクトフラノシル1,2':2,1':2,3':2,6':2',6−ジアンハイドライド、ラクトシュークロースなどを例示することができる。
これらのヘテロオリゴ糖は糖転移酵素によるグルコシル基転移反応、ガラクトシル基転移反応、フラクトシル基転移反応等を利用して生成させることができる。グルコシル基転移反応にはグルコシルトランスフェラーゼ、サイクロデキストリン合成酵素、アミロマルターゼ、α−グルコシダーゼ、β−グルコシダーゼ等を、ガラクトシル基転移反応にはα−ガラクトシダーゼ、β−ガラクトシダーゼ、α−ガラクタナーゼなどを、フラクトシル基転移反応にはフルクトシルトランスフェラーゼ、レバンシュークラーゼ、β−フルクトフラノシダーゼ、環状２糖合成酵素などをそれぞれ利用することができる。【００１０】
好ましくは、グルコシルトランスフェラーゼ、フルクトシルトランスフェラーゼ、及びレバンシュークラーゼのいずれか又はこれらの中から選択される２種以上の酵素を用いて本発明の酵素組成物を構成する。グルコシルトランスフェラーゼはグルコースを転移し、イソマルトース、パノースや他のオリゴ糖を生成する作用を有する酵素である。ストレプトコッカス属、バチルス属、アスペルギルス属、オーレオバシヂウム属、クエブシエラ属などの微生物由来やタマネギ由来のグルコシルトランスフェラーゼが知られており、例えばAspergillus niger由来のグルコシルトランスフェラーゼ（商品名：トランスグルコシダーゼＬ「アマノ」、αグルコシダーゼ「アマノ」天野エンザイム製）を本発明の酵素組成物に使用することができる。【００１１】
フルクトシルトランスフェラーゼは主としてシュークロースに作用して、フラクトースとグルコースとのα−1,β−2結合を切断した後、そのフラクトースをシュークロースに転移させオリゴ糖を生成する作用を有する酵素である。バチルス属、アースルバクター属、アスペルギルス属、フザリウム属、グレオスポリウム属、サッカロミセス属、ロドトルラ属、ピヒア属、ハンゼヌラ属、キャンディダ属などの微生物由来やアスパラガス、キクイモ由来のフルクトシルトランスフェラーゼが知られており、例えば納豆菌（バチルス・ナットウ）由来のフルクトシルトランスフェラーゼ（澱粉化学、38巻、２号、217-222(1991)）を本発明の酵素組成物に使用することができる。【００１２】
レバンシュークラーゼは、シュークロースのフラクトースを転移し、様々なオリゴ糖、高分子多糖レバン等を生成する酵素である。例えばZymomonas mobilis IFO-13756由来のレバンシュークラーゼ（Journal of Fermentation and Bioengineering, 79巻, 4号, 367-369(1995)）、Rahnella aquatilis JCM-1683由来のレバンシュークラーゼ等を本発明の酵素組成物に使用することができる。【００１３】
酵素組成物全体として作用可能な基質の種類を増やし、食物からのオリゴ糖の生成率を向上させるために、基質特異性が相違する複数の酵素を組み合わせて使用することが好ましい。このような好ましい酵素組成物の例として、グルコシルトランスフェラーゼとフルクトシルトランスフェラーゼを含有する酵素組成物、グルコシルトランスフェラーゼとレバンシュークラーゼを含有する酵素組成物、フルクトシルトランスフェラーゼとレバンシュークラーゼを含有する酵素組成物、及びグルコシルトランスフェラーゼとフルクトシルトランスフェラーゼとレバンシュークラーゼを含有する酵素組成物を挙げることができる。【００１４】
ところで、摂取される食物の種類によっては、本発明の酵素組成物が含有するオリゴ糖生成酵素の基質を十分に含まないものもある。このような場合には、摂取された食物中の成分よりオリゴ糖生成酵素の基質を生成することが望まれる。そこで本発明の酵素組成物の好ましい一態様は、オリゴ糖生成酵素に加えて、摂取された食物に作用してオリゴ糖生成酵素の基質を生成する酵素であるアミラーゼ、インベルターゼ等を含有する。ここで、アミラーゼは、澱粉に作用し、糖転移酵素の基質となる２糖、３糖、オリゴ糖を生成する酵素である。例えば、Aspergillus oryzae由来のアミラーゼ（商品名：ビオヂアスターゼ2000、天野エンザイム製）を用いることができる。一方、インベルターゼはショ糖を果糖とブドウ糖に転化する酵素である。例えばS.cerevisiae由来のインベルターゼを用いることができる。【００１５】
配合禁忌の問題を考慮した上で、本発明の酵素組成物に他の任意の成分（例えば、制酸剤やＨ2 ブロッカーなどの消化管作用薬）を含有させてもよい。【００１６】
本発明の酵素組成物の製剤化は常法に従って行うことができる。製剤化する場合には、製剤上許容される他の成分（例えば、担体、賦形剤、崩壊剤、緩衝剤、乳化剤、懸濁剤、安定剤、保存剤、防腐剤、生理食塩水など）を含有させることができる。賦形剤としては乳糖、デンプン、ソルビトール、D-マンニトール、白糖等を用いることができる。崩壊剤としてはデンプン、カルボキシメチルセルロース、炭酸カルシウム等を用いることができる。緩衝剤としてはリン酸塩、クエン酸塩、酢酸塩等を用いることができる。乳化剤としてはアラビアゴム、アルギン酸ナトリウム、トラガント等を用いることができる。懸濁剤としてはモノステアリン酸グリセリン、モノステアリン酸アルミニウム、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、ラウリル硫酸ナトリウム等を用いることができる。安定剤としてはプロピレングリコール、ジエチリン亜硫酸塩、アスコルビン酸等を用いることができる。保存剤としてはフェノール、塩化ベンザルコニウム、ベンジルアルコール、クロロブタノール、メチルパラベン等を用いることができる。防腐剤としては塩化ベンザルコニウム、パラオキシ安息香酸、クロロブタノール等と用いることができる。
製剤化する場合の剤型も特に限定されず、例えば錠剤、散剤、細粒剤、顆粒剤、カプセル剤、シロップ剤などの剤型を採用することができる。【００１７】
本発明の酵素組成物は食前、食間又は食後、或いは食物と同時に摂取される。酵素組成物が含有する酵素と食物中の基質成分とが生体内で共存する状態が形成されることが必要であり且つ重要であることから、食前、食後、又は食物と同時に本発明の酵素組成物が摂取されることが好ましい。【００１８】
摂取された食物より効率的にオリゴ糖を生成させるためには、消化の初期段階にある食物に対して本発明の酵素組成物が作用することが望まれる。かかる観点より、胃内の酸性環境下で十分に作用する性質の酵素を用いて本発明の酵素組成物を構成することが好ましいといえる。上記のAspergillus niger由来のグルコシルトランスフェラーゼ（商品名：トランスグルコシダーゼＬ「アマノ」、αグルコシダーゼ「アマノ」天野エンザイム製）、Zymomonas mobilis IFO-13756由来のレバンシュークラーゼ、Aspergillus oryzae由来のアミラーゼ（商品名：ビオヂアスターゼ2000、天野エンザイム製）等は酸性環境下においても良好に作用するものであり、好ましい成分である。【００１９】
本発明の酵素組成物を適用する「対象（患者）」は特に限定されず、ヒト及びヒト以外の哺乳動物（ペット動物、家畜、実験動物を含む。具体的には例えばマウス、ラット、モルモット、ハムスター、サル、ウシ、ブタ、ヤギ、ヒツジ、イヌ、ネコ、ニワトリ、ウズラ等である）を含む。好ましい一態様では本発明の酵素組成物はヒトに対して適用される。【００２０】
酵素組成物の摂取量（投与量）は、生体内でオリゴ糖を生成する作用を発揮することを条件として任意に設定できる。使用する酵素の性質や純度、或いは対象（患者）の症状、年齢、性別、及び体重等を考慮して適当な摂取量を設定することができる。当業者であればこれらの事項を考慮して適当な投与量を設定することが可能である。例えば、上述したグルコシルトランスフェラーゼを含有する酵素組成物の場合、グルコシルトランスフェラーゼの量が10000〜5000000単位／回となるように酵素組成物の摂取量を設定する。同様に、レバンシュークラーゼであれば2〜50000単位／回、アミラーゼであれば10〜5000単位／回となるように酵素組成物の摂取量を設定することができる。
摂取スケジュールとしては例えば１日１回〜５回、２日に１回、或いは３日に１回などを採用できる。【００２１】
本発明は更に、上記の酵素組成物を含有する食品を提供する。本発明での「食品」の例として一般食品（穀類、野菜、食肉、各種加工食品、菓子類、清涼飲料水、アルコール飲料等）、栄養補助食品（サプリメント）を挙げることができる。栄養補助食品の場合、粉末、顆粒末、タブレット、ペースト、液体等の形状で提供することができる。酵素組成物の基質となる成分を含む食品、又は当該成分が同時に摂取されることになる食品であるシリアルやふりかけ等は本発明における食品の好ましい例である。【００２２】
尚、本明細書において特に明記しない限り、酵素活性の計算は以下の方法に従った。
＜グルコシルトランスフェラーゼ活性＞
α−メチル−Ｄ−グルコシドを基質として、４０℃、ｐＨ５．０の条件で酵素溶液を作用させ、６０分間に１μｇのグルコースを生成する酵素量を１単位とする。【００２３】
＜レバンシュークラーゼ活性＞
Ｆキット（Ｄ−Glucose／Ｄ−Fructose）（ベーリンガー・マンハイム社製）を用いて測定する。シュークロースを基質として反応液中に１mg/mlのグルコースを生成する酵素量を１単位とする。【００２４】
＜アミラーゼ活性＞
日本薬局方（一般試験法）に収載された、消化力試験法のでんぷん糖化力試験法に従って測定した（３７℃、ｐＨ５）。１分間に１mgのブドウ糖に相当する還元力の増加をもたらす酵素量を１単位とする。
【実施例】
【００２５】
１．グルコシルトランスフェラーゼの入手
Aspergillus niger由来のグルコシルトランスフェラーゼ（αグルコシダーゼ「アマノ」、天野エンザイム）を使用した。使用した酵素のグルコシルトランスフェラーゼ活性は3,000 u/mgであった。【００２６】
２．IBD動物モデルへのグルコシルトランスフェラーゼの投与
IBD動物モデルとしてDSS腸炎モデルマウス（Sasaki M, et al. J Pharmacol Exp Ther.2003; 305(1); 78-85）を使用した。このマウスは、DSS（デキストラン硫酸ナトリウム）の投与によって大腸に炎症を生じ、IBD様の症状を呈することから、IBDモデルとして利用される。
実験は以下のように行った。8週齢の8匹の雄C57BL/6マウス（購入先：中部科学資材株式会社（名古屋））を24℃、自由摂食状態で７日間、12時間ごとに室内の明暗を繰り返し馴化させた。馴化後、マウスを4匹ずつの2つのグループに分け、一方のグループにはグルコシルトランスフェラーゼを餌とともに900mg(2,700,000u)/60kg/dayで経口摂取させ、もう一方のグループには餌のみを経口摂取させた。餌としては実験動物用MF（オリエンタル酵母工業）に10%(wt/wt）の澱粉（和光純薬工業）を混合したものを使用した。酵素経口摂取開始後2日目にデキストラン硫酸ナトリウム（Dextran sulfate sodium (DSS) MW: 44 kDa, TdB Consultancy AB, Uppsala, Sweden ）3% (wt/vol)を含む水を両グループに与え続け、さらに5日間飼育した（図１）。【００２７】
３．IBD発症による体重減少抑制効果の検証
3％DSS水を与えてから0、3、5日目にグルコシルトランスフェラーゼ投与群と非投与群の体重を調べて比較した。非投与群ではIBDによるマウスの体重減少が見られた。一方、グルコシルトランスフェラーゼ投与群では体重減少の抑制効果が見られ、3％DSS水投与5日目では体重減少抑制に有意差が認められた（図２）。このように、グルコシルトランスフェラーゼの摂取によって、IBDによる体重減少に対する抑制効果がもたらされたことが示された。【００２８】
４．活動性指標によるIBD発症予防効果の検証
3％DSS水を与えてから0、3、5日目にグルコシルトランスフェラーゼ投与群と非投与群の活動性指標（Disease activity index (DAI)）を算出して比較した。DAIは体重減少、糞便の状態、出血状態を元に算出される（Sasaki M, et al. J Pharmacol Exp Ther.2003; 305(1); 78-85）ものである。グルコシルトランスフェラーゼ投与群と非投与群の間でDAIを比較すると3％DSS水を与えてから5日目でDAIに有意差が認められ（図３）、グルコシルトランスフェラーゼ投与群でDAIの減少、すなわちIBDの症状が軽減されていることが明らかとなった。【００２９】
５．腸内細菌叢の改善効果
3％DSS水を投与してから0日目と5日目にグルコシルトランスフェラーゼ投与群と非投与群の糞便を回収し、糞便中の微生物を培養して糞便1g中の嫌気性細菌、乳酸菌としてビフィズス菌の生菌数を調べた。0日目ではグルコシルトランスフェラーゼ投与群の糞便あたりの嫌気性細菌数は非投与群に比べ有意に多かった（図４（ａ））。乳酸菌であるビフィズス菌については、有意差は認められないもののグルコシルトランスフェラーゼ投与群で糞便重量あたりのビフィズス菌数が多かった（図４（ｂ））。
5日目においても、グルコシルトランスフェラーゼ投与群の糞便あたりの嫌気性細菌数は非投与群に比べ有意差はないものの多かった（図５（ａ））。乳酸菌であるビフィズス菌についてはグルコシルトランスフェラーゼ投与群で糞便重量あたりのビフィズス菌数が有意に多かった（図５（ｂ））。これらの結果は、グルコシルトランスフェラーゼ投与群では嫌気性細菌やビフィズス菌などの乳酸菌が増加した結果としてIBDの症状が軽減したことを示すものである。【００３０】
６．解剖学的所見から見たIBD改善効果の検証
3％DSS水を投与してから5日目のグルコシルトランスフェラーゼ投与群と非投与群の大腸を摘出して組織学的検討を行った。その結果、非投与群では炎症による組織の破壊が観察されたが（図６中央）、グルコシルトランスフェラーゼ投与群では組織の破壊が抑制されていることが観察された（図６右）。グルコシルトランスフェラーゼ投与群で大腸の内皮組織の炎症による破壊の抑制が観察されたことより、グルコシルトランスフェラーゼ投与によるIBD発症の抑制、並びに症状の軽減が示された。
【産業上の利用可能性】
【００３１】
本発明の酵素組成物は腸内菌叢の改善を通してIBDに対する治療的又は予防的効果を発揮する。本発明の酵素組成物によれば、プロバイオティックのように乳酸菌の定着性を考慮する必要がなく、またプレバイオティックの場合に比較して必要量を摂取することが容易であり、しかもオリゴ糖の過剰摂取に起因する副作用の惹起の心配もない。このように本発明の酵素組成物は従来の技術に比較して数多くの優れた特徴を有するものであり、IBDの治療又は予防において多大な貢献が期待される。【００３２】
この発明は、上記発明の実施の形態及び実施例の説明に何ら限定されるものではない。特許請求の範囲の記載を逸脱せず、当業者が容易に想到できる範囲で種々の変形態様もこの発明に含まれる。
本明細書の中で明示した論文、公開特許公報、及び特許公報などの内容は、その全ての内容を援用によって引用することとする。
【図１】
2008090831.tif 000002
【図２】
2008090831.tif 000003
【図３】
2008090831.tif 000004
【図４】
2008090831.tif 000005
【図５】
2008090831.tif 000006
【図６】
2008090831.tif 000007
【国際調査報告】
2008090831.tif 000008
2008090831.tif 000009
2008090831.tif 000010
2008090831.tif 000011
2008090831.tif 000012
2008090831.tif 000013
2008090831.tif 000014
2008090831.tif 000015