(57)【要約】  プロスタグランジンを有効成分とする脂肪乳剤は、ホスファチジルコリン（ＰＣ）およびホスファチジルグリセロール（ＰＧ）を含むリン脂質を含有し、該リン脂質中のＰＣとＰＧの比（ＰＣ：ＰＧ）が８５：１５〜９９．７：０．３である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ホスファチジルコリン（ＰＣ）およびホスファチジルグリセロール（ＰＧ）を含むリン脂質を含有し、該リン脂質中のＰＣとＰＧの比（ＰＣ：ＰＧ）が８５：１５〜９９．７：０．３である、プロスタグランジンを有効成分として含有する脂肪乳剤。
【請求項２】
ＰＣ：ＰＧが９５：５〜９９．７：０．３である、請求項１記載の脂肪乳剤。
【請求項３】
ＰＣ：ＰＧが９７：３〜９９．５：０．５である、請求項２記載の脂肪乳剤。
【請求項４】
ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）を実質的に含有しない、請求項１乃至３のいずれか１項に記載の脂肪乳剤。
【請求項５】
ＰＧの脂肪酸残基中に、直鎖状の炭素数１２−１８個の飽和または不飽和脂肪酸残基が含まれる、請求項１乃至４のいずれか１項に記載の脂肪乳剤。
【請求項６】
ＰＧが卵黄由来である、請求項１乃至５のいずれか１項に記載の脂肪乳剤。
【請求項７】
遊離高級脂肪酸又はその塩を実質的に含有しない、請求項１乃至６のいずれか１項に記載の脂肪乳剤。
【請求項８】
遊離オレイン酸を実質的に含有しない、請求項１乃至６のいずれか１項に記載の脂肪乳剤。
【請求項９】
前記リン脂質１質量部に対して、０．０１５質量部以下の遊離高級脂肪酸又はその塩を含有する、請求項１乃至６のいずれか１項に記載の脂肪乳剤。
【請求項１０】
前記リン脂質１質量部に対して、０．１５質量部以下の遊離高級脂肪酸又はその塩を含有する、請求項９に記載の脂肪乳剤。
【請求項１１】
前記遊離高級脂肪酸が遊離オレイン酸である、請求項９または１０に記載の脂肪乳剤。
【請求項１２】
前記リン脂質中のＰＣの含有量およびＰＧの含有量の合計が９５％以上である、請求項１乃至１１のいずれか１項に記載の脂肪乳剤。
【請求項１３】
静脈内注射用である、請求項１乃至１２のいずれか１項に記載の脂肪乳剤。
【請求項１４】
プロスタグランジンがプロスタグランジンＥ１またはその誘導体である、請求項１乃至１３のいずれか１項に記載の脂肪乳剤。
【請求項１５】
プロスタグランジンがプロスタグランジンＥ１である請求項１乃至１４のいずれか１項に記載の脂肪乳剤。
【請求項１６】
平均粒子径が３００ｎｍ以下であり、かつ、４０℃にて７日間保存した後のプロスタグランジンＥ１の残存率が７０％以上である、請求項１５記載の脂肪乳剤。
【請求項１７】
平均粒子径が３００ｎｍ以下であり、かつ、４０℃にて７日間保存した後のプロスタグランジンＥ１の残存率が８０％以上である、請求項１５記載の脂肪乳剤。
【請求項１８】
平均粒子径が３００ｎｍ以下であり、かつ、４０℃にて７日間保存した後のプロスタグランジンＥ１の残存率が８５％以上である、請求項１５記載の脂肪乳剤。
【請求項１９】
平均粒子径が３００ｎｍ以下であり、かつ、２０℃にて２ヵ月保存した後のプロスタグランジンＥ１の残存率が８０％以上である、請求項１５記載の脂肪乳剤。
【請求項２０】
平均粒子径が３００ｎｍ以下であり、かつ、５℃にて１年間保存した後のプロスタグランジンＥ１の残存率が８０％以上である、請求項１５記載の脂肪乳剤。
【請求項２１】
ホスファチジルコリン（ＰＣ）およびホスファチジルグリセロール（ＰＧ）を含むリン脂質を含有し、該リン脂質中のＰＣとＰＧの比（ＰＣ：ＰＧ）が８５：１５〜９９．７：０．３である、プロスタグランジンを有効成分として含有する脂肪乳剤を調製する工程を含む、請求項１乃至２１のいずれか１項に記載の脂肪乳剤の製造方法。
【請求項２２】
前記調整する工程において、上記脂肪乳剤のｐＨを４〜７に調整する、請求項２２記載の脂肪乳剤の製造方法。
【請求項２３】
前記調整する工程において、上記脂肪乳剤のｐＨを４．５〜６．５に調整する、請求項２２記載の脂肪乳剤の製造方法。
【請求項２４】
プロスタグランジンを有効成分として含有する脂肪乳剤において、ＰＣ：ＰＧが８５：１５〜９９．７：０．３であり、かつ、ＰＥを実質的に含有しないリン脂質を使用することを含む、プロスタグランジンの安定化方法。
【請求項２５】
プロスタグランジンを有効成分として含有する脂肪乳剤において、ＰＣ：ＰＧが８５：１５〜９９．７：０．３であり、かつ、ＰＥを実質的に含有しないリン脂質を使用することを含む、脂肪粒子の安定化方法。
【請求項２６】
ＰＣ：ＰＧが８５：１５〜９９．７：０．３であり、かつ、ＰＥを実質的に含有しないリン脂質よりなる、プロスタグランジンを有効成分として含有する脂肪乳剤に用いる乳化剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、有効成分の安定性および乳化安定性に優れたプロスタグランジン脂肪乳剤およびその製造方法、ならびにその安定化方法および該安定化方法で使用される乳化剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
プロスタグランジンは、二重結合を３−５個有する必須脂肪酸から合成される生理活性物質であり、炎症・痛み・腫れの調整、血圧機能・心機能・胃腸機能の調整、消化酵素の分泌調整、腎機能調節、血液凝固、血小板凝集、アレルギー反応、神経伝達、各種ホルモンの産生等に関与している。【０００３】
プロスタグランジンＥ１（ＰＧＥ１）製剤の一形態として、静脈注射用の脂肪乳剤が開発され（例えば、特公平１−５７０９４号公報、特公平１−５７０９６号公報、特開２００１−１０９５８号公報参照）、市販されているものもある。【０００４】
しかしながら、現在市販されているＰＧＥ１脂肪乳剤は低温（例えば５℃以下）で遮光して保存しなければならず、また、低温で保存したとしても品質保証期間が短い（例えば５℃×１年間）。その理由としては、有効成分であるＰＧＥ１が化学的に不安定であることが挙げられる。例えば、ＰＧＥ１脂肪乳剤は、保存時に凍結しないよう留意する必要があるため、５℃で保存する場合、厳密な温度管理が必要である。このように、現在市販されているＰＧＥ１脂肪乳剤は、厳密な温度管理下で保存する必要があり、保存中の品質管理が難しい。そこで、ＰＧＥ１の安定性を高める検討が種々なされてきたが（例えば、特公平８−１８９８９号公報、特開平４−３３８３３３号公報参照）、その効果は充分なものとは言い難かった。また、脂肪乳剤の安定性を高めるための検討についても行われているが（例えば、特表２００５−５００３６６号公報、ＷＯ２００４／５２３５４号公報参照）、プロスタグランジン脂肪乳剤についての記載は一切なされていない。【０００５】
このような状況に鑑みて、有効成分（プロスタグランジン）の安定性および乳化安定性に優れたプロスタグランジン脂肪乳剤の開発が求められている。
【発明の開示】
【０００６】
本発明は、有効成分の安定性および乳化安定性に優れた、プロスタグランジンを有効成分として含有する脂肪乳剤およびその製造方法、ならびにその安定化方法および該安定化方法で使用される乳化剤を提供する。
【０００７】
本発明の一態様に係るプロスタグランジンを有効成分として含有する脂肪乳剤は、
ホスファチジルコリン（ＰＣ）およびホスファチジルグリセロール（ＰＧ）を含むリン脂質を含有し、該リン脂質中のＰＣとＰＧの比（ＰＣ：ＰＧ）が８５：１５〜９９．７：０．３である。
【０００８】
上記脂肪乳剤において、ＰＣ：ＰＧが９５：５〜９９．７：０．３であることができる。この場合、ＰＣ：ＰＧが９７：３〜９９．５：０．５であることができる。
【０００９】
上記脂肪乳剤において、ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）を実質的に含有しないことができる。
【００１０】
上記脂肪乳剤において、ＰＧの脂肪酸残基中に、直鎖状の炭素数１２−１８個の飽和または不飽和脂肪酸残基が含まれることができる。
【００１１】
上記脂肪乳剤において、ＰＧが卵黄由来であることができる。
【００１２】
上記脂肪乳剤において、遊離高級脂肪酸又はその塩を実質的に含有しないことができる。
【００１３】
上記脂肪乳剤において、遊離オレイン酸を実質的に含有しないことができる。
【００１４】
上記脂肪乳剤において、前記リン脂質１質量部に対して、０．０１５質量部以下の遊離高級脂肪酸又はその塩をさらに含有することができる。また、上記脂肪乳剤において、前記リン脂質１質量部に対して、０．１５質量部以下の遊離高級脂肪酸又はその塩を含有することができる。この場合、前記遊離高級脂肪酸が遊離オレイン酸であることができる。
【００１５】
上記脂肪乳剤において、前記リン脂質中のＰＣの含有量およびＰＧの含有量の合計が９５％以上であることができる。
【００１６】
上記脂肪乳剤において、静脈内注射用であることができる。
【００１７】
上記脂肪乳剤において、プロスタグランジンがプロスタグランジンＥ１またはその誘導体であることができる。
【００１８】
上記脂肪乳剤において、プロスタグランジンがプロスタグランジンＥ１であることができる。
【００１９】
この場合、平均粒子径が３００ｎｍ以下であり、かつ、４０℃にて７日間保存した後のプロスタグランジンＥ１の残存率が７０％以上であることができる。
【００２０】
また、この場合、平均粒子径が３００ｎｍ以下であり、かつ、４０℃にて７日間保存した後のプロスタグランジンＥ１の残存率が８０％以上であることができる。
【００２１】
また、この場合、平均粒子径が３００ｎｍ以下であり、かつ、４０℃にて７日間保存した後のプロスタグランジンＥ１の残存率が８５％以上であることができる。
【００２２】
また、この場合、平均粒子径が３００ｎｍ以下であり、かつ、２０℃にて２ヵ月保存した後のプロスタグランジンＥ１の残存率が８０％以上であることができる。
【００２３】
また、この場合、平均粒子径が３００ｎｍ以下であり、かつ、５℃にて１年間保存した後のプロスタグランジンＥ１の残存率が８０％以上であることができる。
【００２４】
本発明の一態様に係る脂肪乳剤の製造方法は、
ホスファチジルコリン（ＰＣ）およびホスファチジルグリセロール（ＰＧ）を含むリン脂質を含有し、該リン脂質中のＰＣとＰＧの比（ＰＣ：ＰＧ）が８５：１５〜９９．７：０．３である、プロスタグランジンを有効成分として含有する脂肪乳剤を調製する工程を含む。
【００２５】
上記脂肪乳剤の製造方法では、前記調整する工程において、上記脂肪乳剤のｐＨを４〜７に調整することができる。
【００２６】
上記脂肪乳剤の製造方法では、前記調整する工程において、上記脂肪乳剤のｐＨを４．５〜６．５に調整することができる。
【００２７】
本発明の一態様に係るプロスタグランジンの安定化方法は、
プロスタグランジンを有効成分として含有する脂肪乳剤において、ＰＣ：ＰＧが８５：１５〜９９．７：０．３であり、かつ、ＰＥを実質的に含有しない乳化剤を使用することを含む。
【００２８】
本発明の一態様に係る脂肪粒子の安定化方法は、
プロスタグランジンを有効成分として含有する脂肪乳剤において、ＰＣ：ＰＧが８５：１５〜９９．７：０．３であり、かつ、ＰＥを実質的に含有しない乳化剤を使用することを含む。
【００２９】
本発明の一態様に係る乳化剤は、ＰＣ：ＰＧが８５：１５〜９９．７：０．３であり、かつ、ＰＥを実質的に含有しないリン脂質よりなり、プロスタグランジンを有効成分として含有する脂肪乳剤に用いる。
【００３０】
上記脂肪乳剤によれば、ホスファチジルコリン（ＰＣ）およびホスファチジルグリセロール（ＰＧ）を含むリン脂質を含有し、該リン脂質中のＰＣとＰＧの比（ＰＣ：ＰＧ）が８５：１５〜９９．７：０．３であることにより、有効成分（プロスタグランジン）の安定性および乳化安定性の両方に優れている。このため、市販のプロスタグランジン脂肪乳剤と比較して、保存期間の延長および／または保存温度範囲の拡大が可能である。例えば、後述する実施例の結果より、ＰＧＥ１脂肪乳剤の品質保証期間（５℃×１年）を２年程度に延長したり、保存温度範囲を１０℃程度に拡大できる可能性がある。これにより、保存中の品質管理がより容易である。また、上記脂肪乳剤によれば、従来技術と同様に、脂肪粒子の粒子径が小さくかつ均一であることにより、病変部位に効率よく薬剤を集積できるため、少量でも優れた有効性を発揮することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３１】
以下、本発明の一実施形態に係るプロスタグランジンを有効成分として含有する脂肪乳剤（以下、「プロスタグランジン脂肪乳剤」または単に「脂肪乳剤」ともいう。）およびその製造方法、ならびにその安定化方法および該安定化方法で使用される乳化剤について説明する。なお、本実施形態において、「％」は「質量％」を、「部」は「質量部」を意味する。【００３２】
１．脂肪乳剤
本実施形態に係るプロスタグランジン脂肪乳剤は、プロスタグランジン（有効成分）、リン脂質（乳化剤）、油基材、および水を含む乳化物（水中油型乳剤）である。すなわち、本実施形態に係るプロスタグランジン脂肪乳剤は、脂肪粒子が水中に分散された乳化物であり、該脂肪粒子においては、リン脂質を含む膜の内側にプロスタグランジンおよび油基材が主に包含されている。【００３３】
本実施形態に係るプロスタグランジン脂肪乳剤における各成分の含有量は、プロスタグランジンが０．２〜１００μｇ／ｍＬ、油基材が脂肪乳剤の全量に対して５〜５０％であり、また、リン脂質が油基材に対し１〜５０％である。【００３４】
また、本実施形態に係るプロスタグランジン脂肪乳剤は、必要に応じて、高級脂肪酸、等張化剤、抗酸化剤、ｐＨ調整剤をさらに含有することができる。【００３５】
さらに、本実施形態に係る脂肪乳剤のｐＨは４〜７であることが好ましく、ｐＨが４．５〜６．５であることがより好ましい。本実施形態に係る脂肪乳剤において、ｐＨが４未満であると乳化安定性が低下することがあり、一方、ｐＨが７を超えると、有効成分の安定性が低下することがある。【００３６】
以下、本実施形態に係る脂肪乳剤を構成する各成分について説明する。【００３７】
１．１．プロスタグランジン
プロスタグランジンは、プロスタン酸を基本骨格として有する化合物の総称であり、その環構造により、Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ等に分類されている。上述したように、プロスタグランジンは生理活性物質であり、例えば、平滑筋刺激、炎症、アレルギー、細胞の分泌・凝集・遊走、細胞増殖、神経伝達などにおいて細胞情報伝達物質として機能する。より具体的には、プロスタグランジンはその種類によって、子宮筋および摘出小腸等の平滑筋収縮作用、降圧作用、昇圧作用、抗脂肪分解作用、胃液分泌の阻止作用、中枢神経系への作用、血小板粘着性の減少作用、血小板凝集抑制作用、血栓作成阻止作用、表皮増殖作用、角質化刺激作用等の生理学的作用を有する。【００３８】
本実施形態に係る脂肪乳剤に含まれるプロスタグランジンとしては、ＰＧＡ１、ＰＧＢ１、ＰＧＤ２、ＰＧＥ１、ＰＧＥ２、ＰＧＦ１α、ＰＧＦ２α、ＰＧＩ２およびこれらの誘導体が挙げられ、ＰＧＥ１およびその誘導体であることが好ましい。ここで、誘導体としてはアルキルエステルが好適である（例えば特許第２６０２９６４号参照）。【００３９】
中でもＰＧＥ１は例えば、血管拡張、血圧降下、腎血流量増大、ナトリウム利尿、レニン分泌促進、エリスロポエチン分泌促進、血小板凝集阻害、気管支拡張、子宮収縮、腸管運動亢進、胃・腸の縦走筋収縮、胃・腸の輪状筋弛緩、胃酸分泌抑制、胃粘膜保護作用、免疫抑制作用、末梢交感神経終末からのノルエピネフリン遊離抑制等の作用を有する。したがって、本実施形態に係るＰＧＥ１を含有する脂肪乳剤は例えば、慢性動脈閉塞症における四肢潰瘍ならびに安静時疼痛の改善、進行性全身性硬化症および全身性エリテマトーデスにおける皮膚潰瘍の改善、糖尿病における皮膚潰瘍の改善、振動病における末梢血行障害に伴う自覚症状の改善ならびに末梢循環・神経・運動機能障害の回復、動脈管依存性先天性心疾患における動脈管の開存および経上腸間膜動脈性門脈造影における造影能の改善に用いることができる。【００４０】
１．２．リン脂質
本実施形態に係る脂肪乳剤で使用されるリン脂質は、ホスファチジルコリン（ＰＣ）およびホスファチジルグリセロール（ＰＧ）を含む。また、リン脂質は、例えば、ナトリウム塩、カリウム塩、アンモニウム塩などの薬学的に許容しうる塩であってもよい。【００４１】
ＰＣとしては、卵黄レシチン、大豆レシチン、あるいは公知の方法にて合成、半合成により得られたレシチン等が挙げられる。中でも卵黄レシチンが好ましく、リン脂質含量が高められた精製卵黄レシチン、さらには、ＰＥを実質的に含有しない高度精製卵黄レシチンが好ましい。【００４２】
尚、精製卵黄レシチンは医薬品添加物規格に、高度精製卵黄レシチンは医薬品添加物事典（日本医薬品添加剤協会編）に準ずる。精製卵黄レシチン中には、通常１２〜１８％程度のＰＥが含まれる。【００４３】
本実施形態に係る脂肪乳剤は、ＰＥを実質的に含有しないことが好ましい。ＰＥを実質的に含有しない脂肪乳剤は、高度精製卵黄レシチン、または合成、半合成により得られたレシチンをリン脂質として使用することにより製造することができる。【００４４】
リン脂質がＰＥを実質的に含有しないことは、例えば、以下の方法により確認することができる。すなわち、リン脂質を１０％（ｗ／ｖ）となるよう、クロロホルム・メタノール混合溶液に溶解させた溶液を、シリカゲル薄層板の下端部に１０μＬチャージする。この薄層板を展開溶剤（クロロホルム：メタノール：水＝６５：２５：４）を用いて展開し、乾燥させる。その後、ニンヒドリン試薬を噴霧し、１２０℃で約１０分間加熱した時、同様にチャージしたＰＥ標準液で検出されるスポットの部位に発色を認めない場合、リン脂質がＰＥを実質的に含有しないと判定する。【００４５】
ＰＧは、化学合成により製造されたものであってもよいし、植物または細菌から抽出されたものであってもよいし、あるいは、公知の方法（生化学実験講座３  脂質の化学、２９４−２９５頁、東京化学同人、１９７４年）にしたがって、大豆や卵黄由来のレシチンを原料としてグリセロールの存在下でホスホリパーゼＤを作用させることにより調製されたものであってもよい。【００４６】
ＰＧの脂肪酸残基には、一般的に、直鎖状または分岐状の炭素数１２−２２個の飽和または不飽和脂肪酸残基が存在するが、本実施形態に係る脂肪乳剤においては、ＰＧの脂肪酸残基中に、直鎖状の炭素数１２−１８個の飽和または不飽和脂肪酸残基が含まれることが好ましく、直鎖状の炭素数１６−１８個の飽和または不飽和脂肪酸残基が含まれることがより好ましい。【００４７】
上記範囲の炭素数を有する脂肪酸残基を含むＰＧを使用することにより、特に、卵黄レシチン由来のＰＣを使用する場合、ＰＣの脂肪酸の鎖長とＰＧの脂肪酸の鎖長とが同程度となり、より安定化された脂肪乳剤が得られると推察される。【００４８】
化学合成のＰＧは例えば、ジパルミトイルホスファチジルグリセロール、ジオレオイルホスファチジルグリセロール、ジラウロイルホスファチジルグリセロール、ジミリストイルホスファチジルグリセロール、ジステアロイルホスファチジグリセロール、およびパルミトイルオレオイルホスファチジルグリセロールのうち少なくとも１種であることができる。また、天然由来のＰＧにおいては、由来物質特有の脂肪酸残基を有するＰＧを用いることができる。中でも、ジパルミトイルホスファチジルグリセロール、大豆レシチン由来のＰＧまたは卵黄レシチン由来のＰＧが好ましく、有効成分の安定性の向上および生体適合性の面から、卵黄レシチン由来のＰＧがさらに好ましい。【００４９】
本実施形態に係る脂肪乳剤においては、リン脂質中のＰＣとＰＧの比（ＰＣ：ＰＧ）が８５：１５〜９９．７：０．３である。ＰＣ：ＰＧが上記範囲にあることにより、有効成分の安定性および乳化安定性の両方を向上させることができる。ＰＧが上記範囲を超えると、保存中のＰＧＥ１の安定性に悪影響を及ぼすため、好ましくない。また、ＰＣ：ＰＧは９０：１０〜９９．７：０．３であるのが好ましく、９５：５〜９９．７：０．３であるのがより好ましく、９７：３〜９９．５：０．５であるのがさらに好ましい。【００５０】
また、有効成分の化学的安定性を向上させる点において、リン脂質中のＰＣの含有量およびＰＧの含有量の合計は９５％以上であるのが好ましく、９８％以上であることがより好ましい。【００５１】
リン脂質としては、上述のＰＣおよびＰＧ以外のリン脂質（例えば、スフィンゴミエリン、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルポリグリセロール、ホスファチジルエチレングリコール、およびホスファチジルポリエチレングリコール並びにこれらのリゾ体、リゾＰＣ、リゾＰＧの内の少なくとも１種）を５％未満含んでいてもよい。また、天然由来のリン脂質には、リン脂質以外に、トリグリセロール、コレステロール等の成分を５％未満含んでいてもよい。【００５２】
１．３．油基材
本実施形態に係る脂肪乳剤で使用される油基材としては、例えば、大豆油、ゴマ油、ナタネ油、サフラワー油、オリーブ油、ヒマシ油、コーン油、綿実油、米油、ヒマワリ油、グレープシード油、小麦胚芽油などの植物油や、中鎖脂肪酸トリグリセリド（ＭＣＴ）が挙げられる。植物油は精製植物油であることが好ましい。【００５３】
１．４．高級脂肪酸
本実施形態に係る脂肪乳剤において、遊離高級脂肪酸は乳化補助剤としての機能を有する。すなわち、本実施形態に係る脂肪乳剤において、遊離高級脂肪酸を含有することにより、乳化安定性を高めることができる。本発明において、「遊離高級脂肪酸」とは、カルボン酸をいい、「遊離高級脂肪酸の塩」とは、遊離高級脂肪酸の薬学的に許容しうる塩（例えば、ナトリウム塩、カリウム塩などのアルカリ金属塩、カルシウム塩などのアルカリ土類金属塩）の形態の高級脂肪酸をいう。「遊離高級脂肪酸又はその塩」には、油基材である植物油やリン脂質を構成する脂肪酸エステルの形態のものを含まない。また、ここで、含有される遊離高級脂肪酸は、油基材である植物油やリン脂質に含まれる遊離高級脂肪酸を含まないものとする。【００５４】
高級脂肪酸は、直鎖状または分岐状の炭素数６−２２個（好ましくは１２−２０個）の飽和または不飽和脂肪酸である。高級脂肪酸としては、例えば、オレイン酸、ステアリン酸、リノール酸、パルミチン酸、リノレン酸、ミリスチン酸が挙げられ、オレイン酸が好ましい。【００５５】
本実施形態に係る脂肪乳剤は、有効成分の安定性および乳化安定性に優れているため、遊離の高級脂肪酸又はその塩（例えば遊離オレイン酸）が実質的に含有されていなくてもよい。高級脂肪酸又はその塩を含有する場合、リン脂質１部に対して０．１５部以下であることが好ましく、０．０１５部以下であることがより好ましい。高級脂肪酸の含有量がリン脂質１部に対して０．１５部を超えると、有効成分の安定性が低下する場合がある。高級脂肪酸の含有量がリン脂質１部に対して０．０１５部以下である場合、有効成分の安定性を維持しつつ、優れた乳化安定性を得ることができる。なお、「遊離高級脂肪酸を実質的に含有しない」とは、あくまでも配合目的で添加されることがないことをいい、例えば、油基材である植物油またはリン脂質の分解により生じた遊離高級脂肪酸や、意図しない混入により含有される遊離高級脂肪酸を除くものとする。【００５６】
脂肪乳剤が遊離オレイン酸を実質的に含有しないことは、例えば、以下の方法により確認することができる。【００５７】
脂肪乳剤１ｍＬに対し、エタノール１ｍＬ、ジエチルエーテル０．５ｍＬ、および石油エーテル０．５ｍＬを加えて攪拌する。これを遠心分離した上層を採取し、窒素により溶媒を留去する。得られた油相成分を１０％（ｗ／ｖ）となるように溶解したクロロホルム・メタノール混合溶液２μＬを、シリカゲル薄層板の下端部にチャージする。この薄層板を展開溶剤（クロロホルム：メタノール：水＝６５：２５：４）を用いて展開し、乾燥させる。その後、５０％（ｗ／ｗ）硫酸を噴霧し、約１２０℃で３０分間加熱した後、同様にチャージしたオレイン酸標準液で検出されるスポットの部位に発色を認めない場合、脂肪乳剤が遊離オレイン酸を実質的に含有しないと判定する。【００５８】
本実施形態に係る脂肪乳剤が、ＰＥおよび／または遊離の高級脂肪酸（例えば遊離オレイン酸）を実質的に含有しないことにより、該脂肪乳剤に含まれる成分の数を少なくすることができ、かつ、有効成分の安定性をより高めることができる。【００５９】
１．５．その他の成分
本実施形態に係る脂肪乳剤では必要に応じて、等張化剤（例えば、グリセリン、ブドウ糖、塩化ナトリウム）、抗酸化剤（例えば、アスコルビン酸およびその塩、安息香酸、クエン酸およびその塩、ジブチルヒドロキシアニソール、ジブチルヒドロキシトルエン、α−トコフェロール、Ｄ−ソルビトール）、ｐＨ調整剤（水酸化ナトリウム、塩酸、各種リン酸塩）を含有していてもよい。【００６０】
１．６．製造方法
本発明の一実施形態に係るプロスタグランジン脂肪乳剤の製造方法は、ホスファチジルコリン（ＰＣ）およびホスファチジルグリセロール（ＰＧ）を含むリン脂質を含有し、ＰＣ：ＰＧが８５：１５〜９９．７：０．３、好ましくは９０：１０〜９９．７：０．３、より好ましくは９５：５〜９９．７：０．３、さらに好ましくは９７：３〜９９．５：０．５であるリン脂質を配合して脂肪乳剤を調製する工程を含む。上記脂肪乳剤を調製する工程は、より具体的には、プロスタグランジン（有効成分）、上記リン脂質（乳化剤）、油基材、および水を乳化させる工程を含む。【００６１】
ＰＣとＰＧの配合方法としては、ＰＣとＰＧを油基材または水に混合および均質化しておき、そこへ水または油基材を加えて乳剤を調製すればよく、油基材中で均質化することが好ましい。【００６２】
例えば、所定量の油基材（例えば大豆油）に、リン脂質（ＰＣおよびＰＧ）、プロスタグランジン（例えばＰＧＥ１）、およびその他の添加剤（例えばグリセリン）などを常用のホモジナイザーにて混合および均質化し、次いで、これに必要量の水を加えた後、前記ホモジナイザーで再び均質化を行って水中油型乳剤に変換することにより、本実施形態に係る脂肪乳剤を製造することができる。【００６３】
ＰＣとＰＧは別々に配合しても、同時に配合してもよい。また、ＰＣの一部を酵素反応によってＰＧとし、これを使用してもよく、ＰＣまたはＰＧの精製工程中に、ＰＧまたはＰＣを含有する粗精製物やこれらの精製品等を添加し、ＰＣ：ＰＧが８５：１５〜９９．７：０．３の比率になるように混合したものから精製して得られたリン脂質を使用してもよい。卵黄由来のＰＣとＰＧを使用する場合、卵黄中のＰＣを酵素反応によりＰＧとし、ＰＣとＰＧとが８５：１５〜９９．７：０．３の比率になるように卵黄液を混合してからリン脂質の精製を行い、これを使用してもよい。【００６４】
製造上の都合によっては、本実施形態に係る脂肪乳剤に安定化剤、等張化剤、ｐＨ調整剤などの添加剤を加えてもよい。また、得られた脂肪乳剤にろ過処理、加熱処理（高温加熱処理など）をさらに施してもよい。【００６５】
また、本実施形態に係るプロスタグランジン脂肪乳剤の製造方法において、ｐＨを好ましくは４〜７（より好ましくは４．５〜６．５）に調整する工程を含むことができる。本実施形態に係る脂肪乳剤において、ｐＨが４未満であると乳化安定性が低下することがあり、一方、ｐＨが７を超えると、有効成分の安定性が低下することがある。【００６６】
さらに、本発明の一実施形態に係る脂肪乳剤の製造方法は、上記脂肪乳剤のｐＨを４〜７に調整した後、該脂肪乳剤を気密または密封容器に入れて、所定温度にて高温加熱処理を所定時間行う工程をさらに含むことができる。上記高温加熱処理によって、有効成分（プロスタグランジン）の分解を抑制しつつ、上記脂肪乳剤の滅菌を行うことができる。ここで、上記高温加熱処理は高圧蒸気加熱滅菌処理またはスプレー式加熱滅菌処理であるのが好ましい。【００６７】
上記高圧蒸気加熱滅菌処理またはスプレー式加熱滅菌処理の温度および時間はそれぞれ、１１０〜１４０℃および０．５〜３０分間であることが好ましい。例えば、上記高圧蒸気加熱処理を１２７℃で１分間相当行うことができる。１２７℃、１分間相当とは、Ｆ０値に換算すると約９〜１０となり、微生物の死滅を目的とした加熱条件の一例である。【００６８】
上記製造方法にて得られた脂肪乳剤は、乳化安定性のみならず、有効成分（プロスタグランジン）の安定性に優れている。例えば、上記高温加熱処理後の脂肪乳剤は、上記高温加熱処理前の脂肪乳剤と比較して、プロスタグランジンの残存率が７０％以上であり、好ましくは８０％以上であり、より好ましくは８５％以上である。【００６９】
１．７．安定化方法および乳化剤
本発明の一実施形態に係るプロスタグランジン脂肪乳剤の安定化方法は、プロスタグランジンを有効成分として含有する脂肪乳剤において、ＰＣ：ＰＧが８５：１５〜９９．７：０．３であり、かつ、ＰＥを実質的に含有しないリン脂質を使用することを含む。さらに、本発明の一実施形態に係る乳化剤は、プロスタグランジン脂肪乳剤に使用され、ＰＣ：ＰＧが８５：１５〜９９．７：０．３であり、かつＰＥを実質的に含有しないリン脂質よりなる。このような乳化剤としては、例えば、上記ＰＣ：ＰＧの比率でＰＧを含有させた、上述した高度精製卵黄レシチンが挙げられる。【００７０】
１．８．用途および特性
本実施形態に係る脂肪乳剤によれば、ホスファチジルコリン（ＰＣ）およびホスファチジルグリセロール（ＰＧ）を含むリン脂質を含有し、該リン脂質中のＰＣとＰＧの比（ＰＣ：ＰＧ）が８５：１５〜９９．７：０．３であることにより、例えばオレイン酸などの遊離脂肪酸が実質的に含有されていなくても、乳化安定性を維持しつつ、有効成分（プロスタグランジン）の安定性を高めることができる。さらに、本実施形態に係る脂肪乳剤によれば、ＰＥを実質的に含有しないことにより、有効成分（プロスタグランジン）の安定性をさらに高めることができる。【００７１】
本実施形態に係る脂肪乳剤は、静脈内注射用として使用することができる。この場合、本実施形態により得られた脂肪乳剤のｐＨを調整した後、アンプルやバイアル、プレフィルドシリンジ容器などの気密または密封容器に充填し、高温加熱処理などを施すことができる。【００７２】
また、本実施形態に係る脂肪乳剤の平均粒子径は３００ｎｍ以下であることが好ましく、１５０〜２５０ｎｍの範囲内であることがより好ましい。平均粒子径がこれより大きい場合、脂肪乳剤の乳化系が不安定となることがある。また、特に静脈内に投与した場合には、１５０ｎｍより小さい場合は、炎症部位（特に末梢血管内壁）やマクロファージに集積する速度が遅延し、投与後の生理活性の発揮が不十分となる可能性がある。【００７３】
また、本実施形態に係る脂肪乳剤は、平均粒子径は３００ｎｍ以下であり、プロスタグランジンがＰＧＥ１であって、かつ、４０℃にて７日間保存した後のＰＧＥ１の残存率が７０％以上であることが好ましく、８０％以上であることがより好ましく、８５％以上であることがさらに好ましい。さらに２０℃にて２カ月間保存した後のプロスタグランジンＥ１の残存率が７０％以上であることが好ましく、８０％以上であることがより好ましく、８５％以上であることがさらに好ましい。さらに５℃にて１年間保存した後のプロスタグランジンＥ１の残存率が８０％以上であることが好ましく、８５％以上であることがより好ましく、９０％以上であることがさらに好ましい。本発明において、脂肪乳剤の４０℃×７日間の保存は、脂肪乳剤の長期保存安定性を評価するための試験である（例えば特開平４−３３８３３３号公報参照）。また、２０℃×２カ月間の保存も同様に、本実施形態に係る脂肪乳剤の長期保存安定性を評価するための試験である（例えばＩＣＨガイドラインＱ１Ａ参照）。【００７４】
本実施形態に係る脂肪乳剤によれば、ＰＣおよびＰＧを含むリン脂質を含有し、該リン脂質中のＰＣとＰＧの比（ＰＣ：ＰＧ）を８５：１５〜９９．７：０．３であることにより、有効成分であるＰＧＥ１の保存安定性が優れており、かつ、配合される他の添加剤を制限したり、脂肪乳剤中の脂肪粒子の平均粒子径を増大させたり、脂肪乳剤中の脂肪粒子の粒度分布のばらつきを生じさせたりすることがない。また、本実施形態に係る脂肪乳剤によれば、従来技術と同様に、脂肪粒子の粒子径が小さくかつ均一であることにより、病変部位に効率よく薬剤が集積し、少量でも優れた有効性を発揮する。【００７５】
ここで、保存後の脂肪乳剤中のＰＧＥ１の残存率（％）は、ＨＰＬＣ（高速液体クロマトグラフ）法にて、高温加熱処理直後の脂肪乳剤中のＰＧＥ１の含有量と、保存後の該脂肪乳剤中のＰＧＥ１の含有量とを測定し、得られた高温加熱処理直後の脂肪乳剤中のＰＧＥ１の含有量と、保存した後の該脂肪乳剤中のＰＧＥ１の含有量とに基づいて、以下の式（１）により算出される。また、ＨＰＬＣ法による脂肪乳剤中のＰＧＥ１の含有量の詳しい測定方法は、後述する実施例に記載された通りである。【００７６】
【数１】
2008029763.tif 000002
・・・・・（１）【００７７】
１．９．投与形態
本実施形態に係る脂肪乳剤は、非経口の投与経路にてヒトまたはヒト以外の哺乳類に投与されるのが好ましく、静脈内注射（点滴静脈内注射を含む）により投与されることがより好ましい。例えば、０．２〜１００μｇ／ｍＬのプロスタグランジンを含む本実施形態に係る脂肪乳剤をそのまま、または輸液に混和して、静脈内注射により投与することができる。【００７８】
２．実施例
以下、実施例によって本発明をさらに詳細に説明するが、本発明は実施例に限定されない。【００７９】
２．１．評価方法
本実施例において、脂肪乳剤中のＰＧＥ１の含有量および脂肪乳剤中の脂肪粒子の平均粒子径は以下の方法によって測定された。【００８０】
２．１．１．ＰＧＥ１の含有量
脂肪乳剤中のＰＧＥ１の含有量は、脂肪乳剤をＳＥＰ−ＰＡＫＣ１８カートリッジ（ウォーターズ社製）で前処理し、ポストカラム法によるＨＰＬＣ法により測定された。操作条件は以下の通りとした。
検出器：紫外部吸光光度計（測定波長：２７８ｎｍ）
カラム：オクタデシルシリル化シリカゲル（内径４ｍｍ、長さ１５ｃｍ）
カラム温度：約６０℃
移動相：ｐＨ６．３の１／１５０ｍｏｌ／Ｌ  リン酸塩緩衝液・アセトニトリル混液（３：１）
移動相の流量：１ｍＬ／ｍｉｎ
（ポストカラム反応条件）
反応液：１ｍｏｌ／Ｌ  水酸化カリウム溶液
流量：０．５ｍＬ／ｍｉｎ
反応コイル：内径約０．５ｍｍ、長さ約１０ｍのテフロン（商標名）チューブ
反応温度：約６０℃【００８１】
２．１．２．脂肪粒子の平均粒子径
脂肪乳剤中の脂肪粒子の平均粒子径は、Ｎ４ＰＬＵＳサブミクロン粒度分布測定装置（ベックマン・コールター（株）製）にて測定された。【００８２】
２．１．３．脂肪乳剤中のＰＥの検出
脂肪乳剤１ｍＬに対し、エタノール１ｍＬ、ジエチルエーテル０．５ｍＬ、石油エーテル０．５ｍＬを加えて攪拌する。これを遠心分離した上層を採取し、窒素により溶媒を留去する。得られた油相成分を２０％（ｗ／ｖ）となるように溶解したクロロホルム・メタノール混合溶液２０μＬを、シリカゲル薄層板の下端部にチャージする。この薄層板を展開溶剤（クロロホルム：メタノール：水=６５：２５：４）を用いて展開し、乾燥させる。その後、ニンヒドリン試薬を噴霧し、約１２０℃で１０分間加熱した時、同様にチャージしたＰＥ標準液で検出されるスポットの部位に、発色を認めない場合、脂肪乳剤がＰＥを実質的に含有しないと判定する。【００８３】
２．２．実施例１
油基材として大豆油５０ｇ、リン脂質として卵黄レシチンＰＣ−９８Ｎ（キユーピー（株）製，ホスファチジルコリンの純度９８．８％，前述のリン脂質中のＰＥ検出方法にてＰＥが検出されなかったもの）８．８２ｇおよびジパルミトイルホスファチジルグリセロール（日本油脂（株）製）０．１８ｇをホモミキサーにて分散し、均質化した。これにプロスタグランジンＥ１  ３．５ｍｇを添加した後、日本薬局方濃グリセリン１１．０５ｇを溶解させた注射用水を添加して混合し、全量を５００ｇとして粗乳化液を得た。次に、上記粗乳化液をマントン−ガウリン型ホモジナイザー（ＡＰＶ社製）にて６００ｋｇｆ／ｃｍ２の加圧下で１５回通液して、実施例１の脂肪乳剤（平均粒子径１９３ｎｍ、２１３ｎｍ）を得た。この脂肪乳剤中の脂肪粒子の平均粒子径を測定し、かつ、脂肪乳剤中のＰＧＥ１の含有量を算出した。【００８４】
得られた脂肪乳剤中のＰＧＥ１の含有量（調製直後の脂肪乳剤中のＰＧＥ１の含有量）を表１および表２に、脂肪乳剤の脂肪粒子の平均粒子径（調製直後の脂肪乳剤中の脂肪粒子の平均粒子径）を表３および表４にそれぞれ示す。【００８５】
次に、得られた脂肪乳剤を孔径０．４５μｍのメンブレンフィルターにてろ過し、水酸化ナトリウム水溶液にてｐＨ５．０、５．５（２サンプル）、６．０に調整して２ｍＬアンプルに分注した後、高温加熱処理として１１０℃で５分間スプレー式加熱滅菌処理を行った。次いで、該アンプルを開封して、この脂肪乳剤中のＰＧＥ１の残存率（加熱直後の脂肪乳剤中のＰＧＥ１の残存率）を算出し、かつ、脂肪乳剤中の脂肪粒子の平均粒子径（加熱直後の脂肪乳剤中の脂肪粒子の平均粒子径）を測定した。その結果を表１ないし表４にそれぞれ示す。【００８６】
なお、高温加熱処理直後の脂肪乳剤中のＰＧＥ１の残存率は、上述した脂肪乳剤中のＰＧＥ１の含有量の測定方法にしたがって、高温加熱処理直後の脂肪乳剤中のＰＧＥ１の含有量を測定し、調製直後の脂肪乳剤中のＰＧＥ１の含有量に対する高温加熱処理直後の脂肪乳剤中のＰＧＥ１の含有量の比（％）として算出した。【００８７】
さらに、高温加熱処理後のアンプルを４０℃にて７日間保存した後、該アンプルを開封して、４０℃×７日間保存後の脂肪乳剤中のＰＧＥ１の含有量を測定し、式（１）に基づいて、４０℃×７日間保存後の脂肪乳剤中のＰＧＥ１の残存率を算出した。また、４０℃×７日間保存後の脂肪乳剤中の脂肪粒子の平均粒子径を測定した。その結果を表１ないし表４にそれぞれ示す。また、実施例１の脂肪乳剤中から、ＰＥは検出されなかった。【００８８】
なお、実施例１、２、４−６および比較例２、３、６においては、ｐＨを５．０に調整した場合、実施例１、２、４、７、９、１０、１２および比較例１−４、６、７においては、ｐＨを５．５に調整した場合、ならびに、実施例１、３、７、８、１１および比較例３、５においては、ｐＨを６．０に調整した場合の結果を示している（表１ないし表４参照）。【００８９】
また、実施例１−１２および比較例１−７において、ＰＣの使用量は、リン脂質（卵黄レシチン）の使用量にＰＣの純度（０．９８８＝９８．８％）を乗じて算出したものである。【００９０】
さらに、表１および表２において、「オレイン酸（質量部）」は、リン脂質１質量部に対するオレイン酸の含有量（質量部）を示している。【００９１】
２．３．実施例２
実施例１の脂肪乳剤において、卵黄レシチンＰＣ−９８Ｎの配合量を８．５５ｇとし、ジパルミトイルホスファチジルグリセロールの配合量を０．４５ｇとした以外は、実施例１と同様の方法により、実施例２の脂肪乳剤（平均粒子径２２２ｎｍ）を得た。ｐＨは、希塩酸にて５．０および５．５に調整した。【００９２】
実施例２および後述する実施例３−１２および比較例１−７の脂肪乳剤について、実施例１の脂肪乳剤と同様の方法にて、高温加熱処理および４０℃×７日間の保存を行い、それぞれの場合における脂肪乳剤中のＰＧＥ１の残存率および脂肪粒子の平均粒子径をそれぞれ測定した。その結果を表１ないし表４に示す。実施例２の脂肪乳剤中から、ＰＥは検出されなかった。【００９３】
２．４．実施例３
実施例１の脂肪乳剤において、卵黄レシチンＰＣ−９８Ｎの配合量を７．６５ｇとし、ジパルミトイルホスファチジルグリセロールの代わりに、卵黄リン脂質を精製し得られたＰＣをグリセロールの存在下でホスホリパーゼＤ処理して調製されたＰＧ（以下卵黄由来ＰＧ）を１．３５ｇ用い、さらにアンプル分注後の高温加熱処理条件を１２７℃、１分間とした以外は、実施例１と同様の方法により、実施例３の脂肪乳剤（平均粒子径２２９ｎｍ）を得た。この卵黄由来ＰＧの脂肪酸残基の組成中、炭素数１６が３５％、炭素数１８が５７％であった。ｐＨは、水酸化ナトリウム水溶液にて６．０に調整した。実施例３の脂肪乳剤中から、ＰＥは検出されなかった。また、実施例３で得られた脂肪乳剤は、例えば後述する実施例８，１１で得られた脂肪乳剤と比較して、加熱直後の有効成分（ＰＧＥ１）の残存率が低いことから、ＰＧの添加量が増加すると、加熱後の有効成分の安定性に悪影響を及ぼす傾向があると考えられる。【００９４】
２．５．実施例４
実施例１の脂肪乳剤において、大豆油にオレイン酸０．６ｇを加える以外は、実施例１と同様の方法により、実施例４の脂肪乳剤（平均粒子径２２６ｎｍ）を得た。ｐＨは、希塩酸にて５．０に、水酸化ナトリウム水溶液にて５．５に調整した。実施例４の脂肪乳剤中から、ＰＥは検出されなかった。【００９５】
２．６．実施例５
実施例１の脂肪乳剤において、大豆油にオレイン酸１．２ｇを加える以外は、実施例１と同様の方法により、実施例５の脂肪乳剤（平均粒子径２１０ｎｍ）を得た。得られた脂肪乳剤のｐＨは５．０であった。実施例５の脂肪乳剤中から、ＰＥは検出されなかった。【００９６】
２．７．実施例６
実施例２の脂肪乳剤において、大豆油にオレイン酸１．２ｇを加える以外は、実施例２と同様の方法により、実施例６の脂肪乳剤（平均粒子径２３０ｎｍ）を得た。ｐＨは、希塩酸にて５．０に調整した。実施例６の脂肪乳剤中から、ＰＥは検出されなかった。【００９７】
２．８．実施例７
実施例３の脂肪乳剤において、卵黄レシチンＰＣ−９８Ｎの配合量を８．８２ｇとし、卵黄由来ＰＧの配合量を０．１８ｇとし、さらにアンプル分注後の高温加熱処理条件を１１０℃、５分間とした以外は、実施例３と同様の方法により、実施例７の脂肪乳剤（平均粒子径２１８ｎｍ）を得た。ｐＨは、希塩酸にて５．５に、水酸化ナトリウム水溶液にて６．０に調整した。実施例７の脂肪乳剤中から、ＰＥは検出されなかった。【００９８】
２．９．実施例８
実施例３の脂肪乳剤において、卵黄レシチンＰＣ−９８Ｎの配合量を８．９１ｇとし、卵黄由来ＰＧの配合量を０．０９ｇとした以外は、実施例３と同様の方法により、実施例８の脂肪乳剤（平均粒子径１９７ｎｍ）を得た。ｐＨは、水酸化ナトリウム水溶液にて６．０に調整した。実施例８の脂肪乳剤中から、ＰＥは検出されなかった。【００９９】
２．１０．実施例９
実施例８の脂肪乳剤において、大豆油にオレイン酸０．１２ｇを加える以外は、実施例８と同様の方法により、実施例９の脂肪乳剤（平均粒子径２１７ｎｍ）を得た。ｐＨは、水酸化ナトリウム水溶液にて５．５に調整した。実施例９の脂肪乳剤中から、ＰＥは検出されなかった。【０１００】
２．１１．実施例１０
実施例８の脂肪乳剤において、卵黄レシチンＰＣ−９８Ｎの配合量を８．９５５ｇとし、卵黄由来ＰＧの配合量を０．０４５ｇとした以外は、実施例８と同様の方法により、実施例１０の脂肪乳剤（平均粒子径１９８ｎｍ）を得た。ｐＨは、希塩酸にて５．５に調整した。実施例１０の脂肪乳剤中から、ＰＥは検出されなかった。【０１０１】
２．１２．実施例１１
実施例８の脂肪乳剤において、卵黄レシチンＰＣ−９８Ｎの配合量を８．９７３ｇとし、卵黄由来ＰＧの配合量を０．０２７ｇとした以外は、実施例８と同様の方法により、実施例１１の脂肪乳剤（平均粒子径１９５ｎｍ）を得た。ｐＨは、水酸化ナトリウム水溶液にて６．０に調整した。実施例１１の脂肪乳剤中から、ＰＥは検出されなかった。実施例１１で得られた脂肪乳剤は、加熱後の平均粒子径が約５０ｎｍ程度増大していることから、加熱安定性に若干劣ると考えられるが、油相の分離は確認されず、有効成分（ＰＧＥ１）の安定性にも優れていた。【０１０２】
２．１３．実施例１２
実施例２の脂肪乳剤において、ジパルミトイルホスファチジルグリセロールの代わりに、大豆リン脂質をグリセロールの存在下でホスホリパーゼＤ処理して調製されたＰＧ（以下大豆由来ＰＧ）を用い、さらにアンプル分注後の高温加熱処理条件を１２７℃、１分間とした以外は、実施例２と同様の方法により、実施例１２の脂肪乳剤（平均粒子径２２７ｎｍ）を得た。この大豆由来ＰＧの脂肪酸残基の組成中、炭素数１６が１４％、炭素数１８が７８％であった。ｐＨは、希塩酸にて５．５に調整した。実施例１２の脂肪乳剤中から、ＰＥは検出されなかった。【０１０３】
２．１４．比較例１
実施例５の脂肪乳剤において、卵黄レシチンＰＣ−９８Ｎの配合量を９．０ｇとし、ジパルミトイルホスファチジルグリセロールの配合量を０ｇとした以外は、実施例５と同様の方法により、比較例１の脂肪乳剤（平均粒子径２１４ｎｍ）を得た。ｐＨは、水酸化ナトリウム水溶液にて５．５に調整した。比較例１の脂肪乳剤中から、ＰＥは検出されなかった。【０１０４】
２．１５．比較例２
実施例１の脂肪乳剤において、卵黄レシチンＰＣ−９８Ｎの配合量を９．０ｇとし、ジパルミトイルホスファチジルグリセロールの配合量を０ｇとした以外は、実施例１と同様の方法により、比較例２の脂肪乳剤（平均粒子径１８９ｎｍ）を得た。ｐＨは、希塩酸で５．０に、水酸化ナトリウム水溶液で５．５に調整した。比較例２の脂肪乳剤中から、ＰＥは検出されなかった。【０１０５】
２．１６．比較例３
比較例１の脂肪乳剤において、アンプル分注後の高温加熱処理条件を１２７℃、１分間とした以外は、比較例１と同様の方法により、比較例３の脂肪乳剤（平均粒子径２１６ｎｍ）を得た。ｐＨは、希塩酸にて５．０に、水酸化ナトリウム水溶液にて５．５および６．０に調整した。比較例３の脂肪乳剤中から、ＰＥは検出されなかった。【０１０６】
２．１７．比較例４
実施例１２の脂肪乳剤において、大豆由来ＰＧの代わりに、卵黄リン脂質を精製し得られたＰＣをＬ−セリンの存在下でホスホリパーゼＤ処理して調製された卵黄ホスファチジルセリン（以下卵黄由来ＰＳ）を用いる以外は、実施例１２と同様の方法により、比較例４の脂肪乳剤（平均粒子径２２１ｎｍ）を得た。ｐＨは、水酸化ナトリウム水溶液にて５．５に調整した。比較例４の脂肪乳剤中から、ＰＥは検出されなかった。【０１０７】
２．１８．比較例５
実施例８の脂肪乳剤において、卵黄レシチンＰＣ−９８Ｎの配合量を８．９９１ｇとし、卵黄ＰＧの配合量を０．００９ｇとした以外は、実施例８と同様の方法により、比較例５の脂肪乳剤（平均粒子径１９２ｎｍ）を得た。ｐＨは、水酸化ナトリウム水溶液で６．０に調整した。比較例５の脂肪乳剤中から、ＰＥは検出されなかった。なお、比較例５の脂肪乳剤は、加熱後に分離が確認されたため、ＰＧＥ１の定量および保存試験を行わなかった。【０１０８】
２．１９．比較例６
比較例１の脂肪乳剤において、卵黄レシチンＰＣ−９８Ｎの配合量を７ｇとし、卵黄レシチンＰＬ−１００Ｍ（キユーピー（株）製，ＰＥ含量：１５．８％）２ｇを加える以外は、比較例１と同様の方法により、比較例６の脂肪乳剤（平均粒子径１９５ｎｍ）を得た。ｐＨは、希塩酸にて５．０に、水酸化ナトリウム水溶液にて５．５に調製した。リン脂質中のＰＥ含量は３．５％であり、比較例６の脂肪乳剤中からＰＥが検出された。【０１０９】
２．２０．比較例７
実施例１２の脂肪乳剤において、大豆由来ＰＧの代わりに、ジパルミトイルホスファチジン酸を用いる以外は、実施例１２と同様の方法により、比較例７の脂肪乳剤（平均粒子径２３８ｎｍ）を得た。ｐＨは、水酸化ナトリウム水溶液にて５．５に調整した。比較例７の脂肪乳剤中から、ＰＥは検出されなかった。【０１１０】
【表１】
2008029763.tif 000003
【０１１１】
【表２】
2008029763.tif 000004
【０１１２】
【表３】
2008029763.tif 000005
【０１１３】
【表４】
2008029763.tif 000006
なお、表１，２において、「ＰＣ：ＰＧ」は、各脂肪乳剤に配合されるリン脂質中のＰＣとＰＧとの比を示す。【０１１４】
表１ないし表４に示される結果より、実施例１−１２で得られた脂肪乳剤によれば、ＰＣおよびＰＧを含むリン脂質を含有し、該リン脂質中のＰＣとＰＧの比（ＰＣ：ＰＧ）が８５：１５〜９９．７：０．３であることにより、４０℃×７日間保存後のＰＧＥ１の残存率が７０％以上であり、さらには８０％以上、良好な条件下では８５％以上とすることができ、脂肪粒子の平均粒子径が３００ｎｍ以下であり、かつ、調製直後、加熱直後、および４０℃×７日間の保存後のいずれの場合においても脂肪粒子の平均粒子径のばらつきが小さかった。したがって、実施例１−１２で得られた脂肪乳剤によれば、有効成分（ＰＧＥ１）の安定性および乳化安定性に優れている。【０１１５】
これに対して、比較例１で得られた脂肪乳剤では、調製直後の脂肪乳剤と比較して、４０℃×７日間保存後の脂肪乳剤のＰＧＥ１の残存率が大きく低下した。また、比較例２で得られた脂肪乳剤では、調製直後の脂肪粒子と比較して、加熱直後および４０℃×７日間保存後の脂肪粒子の平均粒子径のばらつきが大きくなった。さらに、比較例２で得られた脂肪乳剤では、調製直後の脂肪粒子の平均粒子径と比較して、加熱直後および４０℃×７日間保存後の脂肪粒子の平均粒子径が著しく大きくなり、製剤の分離も確認された。また、比較例３で得られた脂肪乳剤では、ｐＨ５．０および５．５では加熱直後に脂肪粒子が大きくなり、ｐＨ６．０では４０℃×７日間保存後のＰＧＥ１の残存率が低下していた。これらの理由としては、比較例１−３、５で得られた脂肪乳剤では、リン脂質中のＰＣとＰＧの比（ＰＣ：ＰＧ）が８５：１５〜９９．７：０．３の範囲にないため、有効成分（ＰＧＥ１）の安定性および／または乳化安定性が低いためであると理解できる。【０１１６】
また、ＰＧの代わりにＰＳを使用した比較例４においては、加熱直後および４０℃×７日間保存後の乳化安定性は保たれていたが、４０℃×７日間保存後のＰＧＥ１の残存率が著しく低下していた。同様に、ＰＧの代わりにＰＡを用いた比較例７においても、加熱直後および４０℃×７日間保存後の乳化安定性は保たれていたが、４０℃×７日間保存後のＰＧＥ１の残存率が著しく低下していた。このことから、ＰＧの代わりに、ＰＳまたはＰＡを用いた場合、乳化安定性は高いが、ＰＧＥ１の消長が大きくなることが理解される。【０１１７】
比較例６についても、リン脂質中にＰＥを含有することにより乳化安定性は高くなるが、比較例１、３に対して、ＰＧＥ１の消長が大きくなっていることが確認された。【０１１８】
２．２１．２０℃にて２ヵ月間保存後の結果
実施例１、実施例７および比較例１で得られた脂肪乳剤（ｐＨ５．５）を２０℃の条件下で２ヶ月間保存した。保存後のＰＧＥ１の残存率および平均粒子径を表５および表６に示す。なお、２０℃にて２ヵ月間保存した後のＰＧＥ１の残存率については、前述の式（１）により算出した。【０１１９】
表５および表６の結果より、２０℃にて２ヵ月保存した後においても、比較例１で得られた脂肪乳剤に対して実施例１で得られた脂肪乳剤のほうが、有効成分（ＰＧＥ１）の安定性が高いことが理解される。【０１２０】
【表５】
2008029763.tif 000007
【０１２１】
【表６】
2008029763.tif 000008
【０１２２】
２．２２．５℃にて６ヵ月間保存後の結果
実施例１、実施例７および比較例１で得られた脂肪乳剤（ｐＨ５．５）を５℃の条件下で６ヵ月間保存した。保存後のＰＧＥ１の残存率および平均粒子径を表７および表８に示す。なお、なお、５℃にて６ヵ月間保存した後のＰＧＥ１の残存率については、前述の式（１）により算出した。【０１２３】
表７および表８の結果より、５℃にて６ヵ月間保存した後においても、比較例１で得られた脂肪乳剤に対して実施例１および７で得られた脂肪乳剤のほうが、有効成分（ＰＧＥ１）の安定性が高いことが理解される。【０１２４】
【表７】
2008029763.tif 000009
【０１２５】
【表８】
2008029763.tif 000010
【０１２６】
２．２３．５℃にて１年間保存後の結果
実施例１、実施例７および比較例１で得られた脂肪乳剤（ｐＨ５．５）を５℃の条件下で１年間保存した。保存後のＰＧＥ１の残存率および平均粒子径を表９および表１０に示す。なお、なお、５℃にて１年間保存した後のＰＧＥ１の残存率については、前述の式（１）により算出した。【０１２７】
表９および表１０の結果より、５℃にて１年間保存した後においても、比較例１で得られた脂肪乳剤に対して実施例１および７で得られた脂肪乳剤のほうが、有効成分（ＰＧＥ１）の安定性が高いことが理解される。【０１２８】
【表９】
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【０１２９】
【表１０】
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【国際調査報告】
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