(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
酸化還元酵素及び電子メディエータを用いて液体試料内の分析物の濃度を測定する際の温度による電流値のバラつきを抑えるバイオセンサシステムであって、
液体試料が導入され、その高さが、バイオセンサシステムの測定保障温度の上限温度における前記分析物の拡散距離及び前記電子メディエータの拡散距離の合計の最大値より小さいキャピラリと、
前記キャピラリ内に配置された複数の電極と、
前記キャピラリ内に配置され、前記酸化還元酵素および前記電子メディエータを含む試薬層と、
を備えるセンサチップと；
前記複数の電極に第１電圧を印加する第１電圧印加部と；
前記第１電圧印加時に前記液体試料中に流れる電流値に基づいて、前記分析物の濃度を測定する濃度測定部と；
前記濃度測定部での測定結果における前記液体試料の温度の影響が小さくなるように、前記第１電圧の印加前に、前記複数の電極に第２電圧を所定の時間以上印加する第２電圧印加部と；
を備え、
前記センサチップのキャピラリの高さは、下記式（ｉ）でそれぞれ表される前記分析物及び前記電子メディエータの拡散距離に基づいて設定される、
バイオセンサシステム。
【数１】
0005608259.tif 000022
（ただし、ｄ：拡散距離、
ｚ：任意に選択される定数、
Ｄ：拡散係数、
ｔ：時間
を表す。）
なお、定数ｚは、１≦ｚ≦４を満たす。
【請求項２】
前記所定の時間は、１．５秒または２秒である、
請求項１に記載のバイオセンサシステム。
【請求項３】
前記センサチップのキャピラリの高さが、バイオセンサシステムの測定保障温度の下限温度で求められる、前記分析物の拡散距離及び前記電子メディエータの拡散距離の合計の最大値より小さい
請求項１または２に記載のバイオセンサシステム。
【請求項４】
前記第２電圧印加部は、前記第２電圧を印加することで、前記電子メディエータに電子を蓄積する
請求項１から３のいずれかに記載のバイオセンサシステム。
【請求項５】
前記第２電圧印加部は、前記第２電圧として、開回路電圧を印加する
請求項１から４のいずれかに記載のバイオセンサシステム。
【請求項６】
前記第１電圧印加部は、前記第１電圧として正極性の電圧を印加し、
前記第２電圧印加部は、前記第２電圧として、前記第１電圧よりも低い電圧を印加する
請求項１から５のいずれかに記載のバイオセンサシステム。
【請求項７】
前記濃度測定部は、前記電流値と前記分析物の濃度とを対応付ける検量線又はテーブルを有し、かつ、前記液体試料の温度が変動しても、同一の前記検量線又はテーブルに基づいて、前記分析物の濃度を算出する
請求項１から６のいずれかに記載のバイオセンサシステム。
【請求項８】
前記電極は、前記キャピラリの高さ方向において向かい合う２つの面にそれぞれ配置される
請求項１から７のいずれかに記載のバイオセンサシステム。
【請求項９】
酸化還元酵素及び電子メディエータを用いて液体試料内の分析物の濃度を測定する際の温度による電流値のバラつきを抑える方法であって、
液体試料が導入され、その高さがバイオセンサシステムの測定保障温度の上限温度における前記分析物の拡散距離及び前記電子メディエータの拡散距離の合計の最大値より小さいキャピラリと、前記キャピラリ内に配置された複数の電極と、前記キャピラリ内に配置され、前記酸化還元酵素および前記電子メディエータを含む試薬層と、を備えるセンサチップを有するバイオセンサシステムで実行され、
前記複数の電極に第１電圧を印加する第１電圧印加ステップと、
前記第１電圧の印加時に前記液体試料中に流れる電流値を検出する電流検出ステップと、
前記電流値に基づいて前記分析物の濃度を測定する濃度測定ステップと、
前記濃度測定部での測定結果における前記液体試料の温度の影響が小さくなるように、前記電流値の検出前に、前記複数の電極に第２電圧を所定の時間以上印加する第２電圧印加ステップと、
を含む測定方法。
【請求項１０】
前記所定の時間は、１．５秒または２秒である、
請求項９に記載の測定方法。
【請求項１１】
前記第２電圧は、前記第２電圧の印加によって前記電子メディエータに電子が蓄積されるように設定される
請求項９または１０に記載の測定方法。
【請求項１２】
前記第２電圧は、開回路電圧である
請求項９から１１のいずれかに記載の測定方法。
【請求項１３】
前記第１電圧は、正極性の電圧であり、
前記第２電圧は、前記第１電圧よりも低い電圧である
請求項９から１２のいずれかに記載の測定方法。
【請求項１４】
前記濃度測定ステップは、前記電流値と前記分析物の濃度とを対応付ける検量線又はテーブルを用い、前記液体試料の温度が変動しても、同一の前記検量線又はテーブルに基づいて、前記分析物の濃度を算出する算出ステップを含む
請求項９から１３のいずれかに記載の測定方法。
【請求項１５】
前記センサチップのキャピラリの高さが、バイオセンサシステムの測定保障温度の下限温度で求められる、前記分析物の拡散距離及び前記電子メディエータの拡散距離の合計の最大値より小さくなるように設定されている、
請求項９に記載の測定方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、バイオセンサシステム及び分析物の濃度測定方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
従来、血液試料中の分析物の濃度、例えば、血中グルコース濃度（血糖値）を測定するために、演算部を有する測定器と、測定器に着脱自在のセンサチップとを備えた携帯型バイオセンサシステムが用いられている。分析物の濃度は、分析物を基質とする酸化還元酵素を介した酵素サイクリング反応によって生じる、酸化物（oxidized product）または還元物（reduced product）の量に基づいて算出される。酵素サイクリング反応の速度は、反応が進行する環境の温度（反応温度）に依存する。このため、反応温度に基づいて分析物の濃度を補正する機能を備えたバイオセンサシステムが提案されている。反応温度は、例えば、測定器に配置された温度センサによって測定される（特許文献１）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
【特許文献１】特開２００３‐１５６４６９号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
特許文献１のバイオセンサシステムでは、温度センサによって、測定器の内部温度が測定される。よって、測定される温度は、血液試料の温度を正確に反映しない。このため、分析物濃度の測定に、誤差が生じる場合がある。
【０００５】
本発明は、温度変化による誤差が生じにくいバイオセンサシステム及び濃度の測定方法の提供を目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明の第１観点に係るバイオセンサシステムは、酸化還元酵素及び電子メディエータを用いて液体試料内の分析物の濃度を測定する際の温度による電流値のバラつきを抑えるバイオセンサシステムであって、キャピラリと複数の電極と試薬層とを備えるセンサチップと、第１電圧印加部と、濃度測定部と、第２電圧印加部と、を備えている。キャピラリは、液体試料が導入され、その高さが、バイオセンサシステムの測定保障温度の上限温度における分析物の拡散距離及び電子メディエータの拡散距離の合計の最大値より小さい。複数の電極は、キャピラリ内に配置されている。試薬層は、キャピラリ内に配置され、酸化還元酵素および電子メディエータを含む。第１電圧印加部は、複数の電極に第１電圧を印加する。濃度測定部は、第１電圧印加時に液体試料中に流れる電流値に基づいて、分析物の濃度を測定する。第２電圧印加部は、濃度測定部での測定結果における液体試料の温度の影響が小さくなるように、第１電圧の印加前に、複数の電極に第２電圧を所定の時間以上印加する。
【０００７】
また、本発明の第２観点に係る測定方法は、酸化還元酵素及び電子メディエータを用いて液体試料内の分析物の濃度を測定する際の温度による電流値のバラつきを抑える方法であって、液体試料が導入され、その高さがバイオセンサシステムの測定保障温度の上限温度における分析物の拡散距離及び電子メディエータの拡散距離の合計の最大値より小さいキャピラリと、キャピラリ内に配置された複数の電極と、キャピラリ内に配置され、酸化還元酵素および電子メディエータを含む試薬層と、を備えるセンサチップを有するバイオセンサシステムで実行され、第１電圧印加ステップと、電流検出ステップと、濃度測定ステップと、第２電圧印加ステップと、を含む。第１電圧印加ステップは、複数の電極に第１電圧を印加する。電流検出ステップは、第１電圧の印加時に液体試料中に流れる電流値を検出する。濃度測定ステップは、電流値に基づいて分析物の濃度を測定する。第２電圧印加ステップは、濃度測定部での測定結果における液体試料の温度の影響が小さくなるように、電流値の検出前に、複数の電極に第２電圧を所定の時間以上印加する。
【発明の効果】
【０００８】
本発明に係るバイオセンサシステム及び測定方法では、キャピラリによって、液体試料中の分析物が拡散によって移動できる距離が制限される。さらに、第１電圧が印加される前に、電極に第２電圧が印加されることで、温度による測定結果のばらつきが低減される。
【図面の簡単な説明】
【０００９】
【図１】本発明の一実施形態に係るバイオセンサシステムの構成を示す斜視図。
【図２】図１のバイオセンサシステムに含まれるセンサチップの分解斜視図。
【図３】図２のセンサチップの平面図。
【図４】分析物及びメディエータの拡散距離を示す模式図。
【図５Ａ】実施形態に係るセンサチップにおけるキャピラリの高さを説明する図。
【図５Ｂ】他の実施形態に係るセンサチップにおけるキャピラリの高さを説明する図。
【図６】図１のバイオセンサシステムにおける測定器１０１の内部構成を示す図。
【図７】図１のバイオセンサシステムにおける血液試料の濃度測定方法の流れの一例を示すフローチャート。
【図８】血液試料の濃度測定方法の流れの他の例を示すフローチャート。
【図９】血液試料のさらに濃度測定方法の流れの他の例を示すフローチャート。
【図１０Ａ】センサチップに対する電圧印加パターンの一例を示す図。
【図１０Ｂ】センサチップに対する電圧印加パターンの他の例を示す図。
【図１０Ｃ】センサチップに対する電圧印加パターンのさらに他の例を示す図。
【図１０Ｄ】センサチップに対する電圧印加パターンのさらに他の例を示す図。
【図１１Ａ】試料のグルコース濃度が１００ｍｇ／ｄＬ（milligram per deciliter）であり、開回路電圧の印加及び低電圧の印加のいずれも実行されず、印加電圧は２５０ｍＶであり、キャピラリの高さが１５０μｍであるときの応答電流値を示すグラフ。
【図１１Ｂ】キャピラリの高さが１００μｍである以外は図１１Ａと同条件における応答電流値を示すグラフ。
【図１１Ｃ】キャピラリの高さが５９μｍである以外は図１１Ａと同条件における応答電流値を示すグラフ。
【図１１Ｄ】キャピラリの高さが３３μｍである以外は図１１Ａと同条件における応答電流値を示すグラフ。
【図１２Ａ】図１１Ａ〜図１１Ｄにおける８秒経過時の応答電流値を示すグラフ。
【図１２Ｂ】図１２Ａにおける各温度条件下での応答電流値の、２１℃における応答電流値を基準としたときのばらつきを示すグラフ。
【図１３Ａ】試料のグルコース濃度が４００ｍｇ／ｄＬであり、開回路電圧の印加及び低電圧の印加のいずれも実行されず、印加電圧は２５０ｍＶであり、キャピラリの高さが１５０μｍであるときの応答電流値を示すグラフ。
【図１３Ｂ】キャピラリの高さが１００μｍである以外は図１３Ａと同条件における応答電流値を示すグラフ。
【図１３Ｃ】キャピラリの高さが５９μｍである以外は図１３Ａと同条件における応答電流値を示すグラフ。
【図１３Ｄ】キャピラリの高さが３３μｍである以外は図１３Ａと同条件における応答電流値を示すグラフ。
【図１４Ａ】図１３Ａ〜図１３Ｄの８秒経過時の応答電流値を示すグラフ。
【図１４Ｂ】図１４Ａにおける各温度条件下での応答電流値の、２１℃における応答電流値を基準値としたときのばらつきを示すグラフ。
【図１５Ａ】図１１Ａにおける応答電流値の測定結果を０．１秒毎に積算することで得られた電荷量を示すグラフ。
【図１５Ｂ】図１１Ｂにおける応答電流値の測定結果を０．１秒毎に積算することで得られた電荷量を示すグラフ。
【図１５Ｃ】図１１Ｃにおける応答電流値の測定結果を０．１秒毎に積算することで得られた電荷量を示すグラフ。
【図１５Ｄ】図１１Ｄにおける応答電流値の測定結果を０．１秒毎に積算することで得られた電荷量を示すグラフ。
【図１６Ａ】図１５Ａ〜図１５Ｄにおける８秒経過時の電荷量を示すグラフ。
【図１６Ｂ】図１６Ａにおける各温度条件下での電荷量の、２１℃における電荷量を基準としたときのばらつきを示すグラフ。
【図１７Ａ】図１３Ａにおける応答電流値の測定結果を０．１秒毎に積算することで得られた電荷量を示すグラフ。
【図１７Ｂ】図１３Ｂにおける応答電流値の測定結果を０．１秒毎に積算することで得られた電荷量を示すグラフ。
【図１７Ｃ】図１３Ｃにおける応答電流値の測定結果を０．１秒毎に積算することで得られた電荷量を示すグラフ。
【図１７Ｄ】図１３Ｄにおける応答電流値の測定結果を０．１秒毎に積算することで得られた電荷量を示すグラフ。
【図１８Ａ】図１７Ａ〜図１７Ｄにおける８秒経過時の電荷量を表すグラフ。
【図１８Ｂ】図１８Ａにおける各温度条件下での電荷量の、２１℃における電荷量を基準としたときのばらつきを示すグラフ。
【図１９Ａ】試料のグルコース濃度が１００ｍｇ／ｄＬであり、電圧の印加条件がｏｐｅｎ（５秒）‐２５０ｍＶであり、キャピラリの高さが１５０μｍであるときの応答電流値を示すグラフ。
【図１９Ｂ】キャピラリの高さが１００μｍである以外は図１９Ａと同条件における応答電流値を示すグラフ。
【図１９Ｃ】キャピラリの高さが５９μｍである以外は図１９Ａと同条件における応答電流値を示すグラフ。
【図１９Ｄ】キャピラリの高さが３３μｍである以外は図１９Ａと同条件における応答電流値を示すグラフ。
【図２０Ａ】図１９Ａ〜図１９Ｄの８秒経過時の応答電流値を示すグラフ。
【図２０Ｂ】図２０Ａにおける各温度条件下での応答電流値の、２１℃における応答電流値を基準としたときのばらつきを示すグラフ。
【図２１Ａ】試料のグルコース濃度が４００ｍｇ／ｄＬであり、電圧の印加条件がｏｐｅｎ（５秒）‐２５０ｍＶであり、キャピラリの高さが１５０μｍであるときの応答電流値を示すグラフ。
【図２１Ｂ】キャピラリの高さが１００μｍである以外は図２１Ａと同条件における応答電流値を示すグラフ。
【図２１Ｃ】キャピラリの高さが５９μｍである以外は図２１Ａと同条件における応答電流値を示すグラフ。
【図２１Ｄ】キャピラリの高さが３３μｍである以外は図２１Ａと同条件における応答電流値を示すグラフ。
【図２２Ａ】図２１Ａ〜図２１Ｄの８秒経過時の応答電流値を示すグラフ。
【図２２Ｂ】図２２Ａにおける各温度条件下での応答電流値の、２１℃における応答電流値を基準としたときのばらつきを示すグラフ。
【図２３Ａ】試料のグルコース濃度が４０ｍｇ／ｄＬであり、電圧の印加条件がｏｐｅｎ（１．５秒）‐２５０ｍＶであり、キャピラリの高さが１５０μｍであるときの応答電流値を示すグラフ。
【図２３Ｂ】キャピラリの高さが１００μｍである以外は図２３Ａと同条件における応答電流値を示すグラフ。
【図２３Ｃ】キャピラリの高さが５９μｍである以外は図２３Ａと同条件における応答電流値を示すグラフ。
【図２３Ｄ】キャピラリの高さが３３μｍである以外は図２３Ａと同条件における応答電流値を示すグラフ。
【図２４Ａ】試料のグルコース濃度が１５５ｍｇ／ｄＬである以外は図２３Ａと同条件における応答電流値を示すグラフ。
【図２４Ｂ】キャピラリの高さが１００μｍである以外は図２４Ａと同条件における応答電流値を示すグラフ。
【図２４Ｃ】キャピラリの高さが５９μｍである以外は図２４Ａと同条件における応答電流値を示すグラフ。
【図２４Ｄ】キャピラリの高さが３３μｍである以外は図２４Ａと同条件における応答電流値を示すグラフ。
【図２５Ａ】試料のグルコース濃度が３４５ｍｇ／ｄＬである以外は図２３Ａと同条件における応答電流値を示すグラフ。
【図２５Ｂ】キャピラリの高さが１００μｍである以外は図２５Ａと同条件における応答電流値を示すグラフ。
【図２５Ｃ】キャピラリの高さが５９μｍである以外は図２５Ａと同条件における応答電流値を示すグラフ。
【図２５Ｄ】キャピラリの高さが３３μｍである以外は図２５Ａと同条件における応答電流値を示すグラフ。
【図２６Ａ】試料のグルコース濃度が６００ｍｇ／ｄＬである以外は図２３Ａと同条件における応答電流値を示すグラフ。
【図２６Ｂ】キャピラリの高さが１００μｍである以外は図２６Ａと同条件における応答電流値を示すグラフ。
【図２６Ｃ】キャピラリの高さが５９μｍである以外は図２６Ａと同条件における応答電流値を示すグラフ。
【図２６Ｄ】キャピラリの高さが３３μｍである以外は図２６Ａと同条件における応答電流値を示すグラフ。
【図２７Ａ】図２３Ａ、図２４Ａ、図２５Ａ、及び図２６Ａに基づき、キャピラリの高さが１５０μｍであるときの、温度、グルコース濃度、及び５．５秒経過時（２５０ｍＶの電圧の印加を開始してから４秒後）の電流値の関係を示すグラフ。
【図２７Ｂ】図２３Ｂ、図２４Ｂ、図２５Ｂ、及び図２６Ｂに基づき、キャピラリの高さが１００μｍであるときの、温度、グルコース濃度、及び５．５秒経過時（２５０ｍＶの電圧の印加を開始してから４秒後）の電流値の関係を示すグラフ。
【図２７Ｃ】図２３Ｃ、図２４Ｃ、図２５Ｃ、及び図２６Ｃに基づき、キャピラリの高さが５９μｍであるときの、温度、グルコース濃度、及び５．５秒経過時（２５０ｍＶの電圧の印加を開始してから４秒後）の電流値の関係を示すグラフ。
【図２７Ｄ】図２３Ｄ、図２４Ｄ、図２５Ｄ、及び図２６Ｄに基づき、キャピラリの高さが３３μｍであるときの、温度、グルコース濃度、及び５．５秒経過時（２５０ｍＶの電圧の印加を開始してから４秒後）の電流値の関係を示すグラフ。
【図２８Ａ】試料のグルコース濃度が４０ｍｇ／ｄＬであり、電圧の印加条件がｏｐｅｎ（３秒）‐２５０ｍＶであり、キャピラリの高さが１５０μｍであるときの応答電流値を示すグラフ。
【図２８Ｂ】キャピラリの高さが１００μｍである以外は図２８Ａと同条件における応答電流値を示すグラフ。
【図２８Ｃ】キャピラリの高さが５９μｍである以外は図２８Ａと同条件における応答電流値を示すグラフ。
【図２８Ｄ】キャピラリの高さが３３μｍである以外は図２８Ａと同条件における応答電流値を示すグラフ。
【図２９Ａ】試料のグルコース濃度が１５５ｍｇ／ｄＬである以外は図２８Ａと同条件（電圧の印加条件がｏｐｅｎ（３秒）‐２５０ｍＶであり、キャピラリの高さが１５０μｍである）における応答電流値を示すグラフ。
【図２９Ｂ】キャピラリの高さが１００μｍである以外は図２９Ａと同条件における応答電流値を示すグラフ。
【図２９Ｃ】キャピラリの高さが５９μｍである以外は図２９Ａと同条件における応答電流値を示すグラフ。
【図２９Ｄ】キャピラリの高さが３３μｍである以外は図２９Ａと同条件における応答電流値を示すグラフ。
【図３０Ａ】試料のグルコース濃度が３４５ｍｇ／ｄＬである以外は図２８Ａと同条件（電圧の印加条件がｏｐｅｎ（３秒）‐２５０ｍＶであり、キャピラリの高さが１５０μｍである）における応答電流値を示すグラフ。
【図３０Ｂ】キャピラリの高さが１００μｍである以外は図３０Ａと同条件における応答電流値を示すグラフ。
【図３０Ｃ】キャピラリの高さが５９μｍである以外は図３０Ａと同条件における応答電流値を示すグラフ。
【図３０Ｄ】キャピラリの高さが３３μｍである以外は図３０Ａと同条件における応答電流値を示すグラフ。
【図３１Ａ】試料のグルコース濃度が６００ｍｇ／ｄＬである以外は、図２８Ａと同条件（電圧の印加条件がｏｐｅｎ（３秒）‐２５０ｍＶであり、キャピラリの高さが１５０μｍである）における応答電流値を示すグラフ。
【図３１Ｂ】キャピラリの高さが１００μｍである以外は図３１Ａと同条件における応答電流値を示すグラフ。
【図３１Ｃ】キャピラリの高さが５９μｍである以外は図３１Ａと同条件における応答電流値を示すグラフ。
【図３１Ｄ】キャピラリの高さが３３μｍである以外は図３１Ａと同条件における応答電流値を示すグラフ。
【図３２Ａ】図２８Ａ、図２９Ａ、図３０Ａ、及び図３１Ａに基づき、キャピラリの高さが１５０μｍであるときの、温度、グルコース濃度、及び７秒経過時（２５０ｍＶの電圧の印加を開始してから４秒後）電流値の関係を示すグラフ。
【図３２Ｂ】図２８Ｂ、図２９Ｂ、図３０Ｂ、及び図３１Ｂに基づき、キャピラリの高さが１００μｍであるときの、温度、グルコース濃度、及び７秒経過時（２５０ｍＶの電圧の印加を開始してから４秒後）電流値の関係を示すグラフ。
【図３２Ｃ】図２８Ｃ、図２９Ｃ、図３０Ｃ、及び図３１Ｃに基づき、キャピラリの高さが５９μｍであるときの、温度、グルコース濃度、及び７秒経過時（２５０ｍＶの電圧の印加を開始してから４秒後）電流値の関係を示すグラフ。
【図３２Ｄ】図２８Ｄ、図２９Ｄ、図３０Ｄ、及び図３１Ｄに基づき、キャピラリの高さが３３μｍであるときの、温度、グルコース濃度、及び７秒経過時（２５０ｍＶの電圧の印加を開始してから４秒後）電流値の関係を示すグラフ。
【図３３Ａ】試料のグルコース濃度が１００ｍｇ／ｄＬであり、開回路電圧の印加及び低電圧の印加のいずれも実行されず、印加電圧が２５０ｍＶであり、キャピラリの高さが１５０μｍであるときの応答電流値を示すグラフ。
【図３３Ｂ】キャピラリの高さが１０４μｍである以外は図３３Ａと同条件における応答電流値を示すグラフ。
【図３３Ｃ】キャピラリの高さが９０μｍである以外は図３３Ａと同条件における応答電流値を示すグラフ。
【図３３Ｄ】キャピラリの高さが８２μｍである以外は図３３Ａと同条件における応答電流値を示すグラフ。
【図３４Ａ】キャピラリの高さが６９μｍである以外は図３３Ａと同条件における応答電流値を示すグラフ。
【図３４Ｂ】キャピラリの高さが５９μｍである以外は図３３Ａと同条件における応答電流値を示すグラフ。
【図３４Ｃ】キャピラリの高さが４９μｍである以外は図３３Ａと同条件における応答電流値を示すグラフ。
【図３４Ｄ】キャピラリの高さが３３μｍである以外は図３３Ａと同条件における応答電流値を示すグラフ。
【図３５Ａ】電圧の印加条件がｏｐｅｎ（１秒）‐２５０ｍＶである以外は、図３３Ａと同条件における応答電流値を示すグラフ。
【図３５Ｂ】キャピラリの高さが１０４μｍである以外は図３５Ａと同条件における応答電流値を示すグラフ。
【図３５Ｃ】キャピラリの高さが９０μｍである以外は図３５Ａと同条件における応答電流値を示すグラフ。
【図３５Ｄ】キャピラリの高さが８２μｍである以外は図３５Ａと同条件における応答電流値を示すグラフ。
【図３６Ａ】キャピラリの高さが６９μｍである以外は図３５Ａと同条件における応答電流値を示すグラフ。
【図３６Ｂ】キャピラリの高さが５９μｍである以外は図３５Ａと同条件における応答電流値を示すグラフ。
【図３６Ｃ】キャピラリの高さが４９μｍである以外は図３５Ａと同条件における応答電流値を示すグラフ。
【図３６Ｄ】キャピラリの高さが３３μｍである以外は図３５Ａと同条件における応答電流値を示すグラフ。
【図３７Ａ】電圧の印加条件がｏｐｅｎ（１．５秒）‐２５０ｍＶである以外は図３３Ａと同条件における応答電流値を示すグラフ。
【図３７Ｂ】キャピラリの高さが１０４μｍである以外は図３７Ａと同条件における応答電流値を示すグラフ。
【図３７Ｃ】キャピラリの高さが９０μｍである以外は図３７Ａと同条件における応答電流値を示すグラフ。
【図３７Ｄ】キャピラリの高さが８２μｍである以外は図３７Ａと同条件における応答電流値を示すグラフ。
【図３８Ａ】キャピラリの高さが６９μｍである以外は図３７Ａと同条件における応答電流値を示すグラフ。
【図３８Ｂ】キャピラリの高さが５９μｍである以外は図３７Ａと同条件における応答電流値を示すグラフ。
【図３８Ｃ】キャピラリの高さが４９μｍである以外は図３７Ａと同条件における応答電流値を示すグラフ。
【図３８Ｄ】キャピラリの高さが３３μｍである以外は図３７Ａと同条件における応答電流値を示すグラフ。
【図３９Ａ】電圧の印加条件がｏｐｅｎ（２秒）‐２５０ｍＶである以外は図３３Ａと同条件における応答電流値を示すグラフ。
【図３９Ｂ】キャピラリの高さが１０４μｍである以外は図３９Ａと同条件における応答電流値を示すグラフ。
【図３９Ｃ】キャピラリの高さが９０μｍである以外は図３９Ａと同条件における応答電流値を示すグラフ。
【図３９Ｄ】キャピラリの高さが８２μｍである以外は図３９Ａと同条件における応答電流値を示すグラフ。
【図４０Ａ】キャピラリの高さが６９μｍである以外は図３９Ａと同条件における応答電流値を示すグラフ。
【図４０Ｂ】キャピラリの高さが５９μｍである以外は図３９Ａと同条件における応答電流値を示すグラフ。
【図４０Ｃ】キャピラリの高さが４９μｍである以外は図３９Ａと同条件における応答電流値を示すグラフ。
【図４０Ｄ】キャピラリの高さが３３μｍである以外は図３９Ａと同条件における応答電流値を示すグラフ。
【図４１Ａ】電圧の印加条件がｏｐｅｎ（３秒）‐２５０ｍＶである以外は図３３Ａと同条件における応答電流値を示すグラフ。
【図４１Ｂ】キャピラリの高さが１０４μｍである以外は図４１Ａと同条件における応答電流値を示すグラフ。
【図４１Ｃ】キャピラリの高さが９０μｍである以外は図４１Ａと同条件における応答電流値を示すグラフ。
【図４１Ｄ】キャピラリの高さが８２μｍである以外は図４１Ａと同条件における応答電流値を示すグラフ。
【図４２Ａ】キャピラリの高さが６９μｍである以外は図４１Ａと同条件における応答電流値を示すグラフ。
【図４２Ｂ】キャピラリの高さが５９μｍである以外は図４１Ａと同条件における応答電流値を示すグラフ。
【図４２Ｃ】キャピラリの高さが４９μｍである以外は図４１Ａと同条件における応答電流値を示すグラフ。
【図４２Ｄ】キャピラリの高さが３３μｍである以外は図４１Ａと同条件における応答電流値を示すグラフ。
【図４３Ａ】電圧の印加条件がｏｐｅｎ（４秒）‐２５０ｍＶである以外は図３３Ａと同条件における応答電流値を示すグラフ。
【図４３Ｂ】キャピラリの高さが１０４μｍである以外は図４３Ａと同条件における応答電流値を示すグラフ。
【図４３Ｃ】キャピラリの高さが９０μｍである以外は図４３Ａと同条件における応答電流値を示すグラフ。
【図４３Ｄ】キャピラリの高さが８２μｍである以外は図４３Ａと同条件における応答電流値を示すグラフ。
【図４４Ａ】キャピラリの高さが６９μｍである以外は図４３Ａと同条件における応答電流値を示すグラフ。
【図４４Ｂ】キャピラリの高さが５９μｍである以外は図４３Ａと同条件における応答電流値を示すグラフ。
【図４４Ｃ】キャピラリの高さが４９μｍである以外は図４３Ａと同条件における応答電流値を示すグラフ。
【図４４Ｄ】キャピラリの高さが３３μｍである以外は図４３Ａと同条件における応答電流値を示すグラフ。
【図４５Ａ】電圧の印加条件がｏｐｅｎ（５秒）‐２５０ｍＶである以外は図３３Ａと同条件における応答電流値を示すグラフ。
【図４５Ｂ】キャピラリの高さが１０４μｍである以外は図４５Ａと同条件における応答電流値を示すグラフ。
【図４５Ｃ】キャピラリの高さが９０μｍである以外は図４５Ａと同条件における応答電流値を示すグラフ。
【図４５Ｄ】キャピラリの高さが８２μｍである以外は図４５Ａと同条件における応答電流値を示すグラフ。
【図４６Ａ】キャピラリの高さが６９μｍである以外は図４５Ａと同条件における応答電流値を示すグラフ。
【図４６Ｂ】キャピラリの高さが５９μｍである以外は図４５Ａと同条件における応答電流値を示すグラフ。
【図４６Ｃ】キャピラリの高さが４９μｍである以外は図４５Ａと同条件における応答電流値を示すグラフ。
【図４６Ｄ】キャピラリの高さが３３μｍである以外は図４５Ａと同条件における応答電流値を示すグラフ。
【図４７Ａ】試料のグルコース濃度が１００ｍｇ／ｄＬであり、開回路電圧の印加及び低電圧の印加のいずれも実行されず、印加電圧が２５０ｍＶであり、キャピラリの高さが１０４μｍであり、５℃、１４℃、３０℃、及び３８℃で測定された各応答電流値の、２１℃における応答電流値を基準としたときのばらつきを示すグラフ。比較対照として、キャピラリの高さが１５０μｍである以外は同条件で得られたばらつきが示される。
【図４７Ｂ】キャピラリの高さが９０μｍである以外は図４７Ａと同条件における応答電流値のばらつきを示すグラフ。比較対照として、キャピラリの高さが１５０μｍである以外は同条件で得られたばらつきが示される。
【図４７Ｃ】キャピラリの高さが８２μｍである以外は図４７Ａと同条件における応答電流値のばらつきを示すグラフ。比較対照として、キャピラリの高さが１５０μｍである以外は同条件で得られたばらつきが示される。
【図４７Ｄ】キャピラリの高さが６９μｍである以外は図４７Ａと同条件における応答電流値のばらつきを示すグラフ。比較対照として、キャピラリの高さが１５０μｍである以外は同条件で得られたばらつきが示される。
【図４８Ａ】キャピラリの高さが５９μｍである以外は図４７Ａと同条件における応答電流値のばらつきを示すグラフ。比較対照として、キャピラリの高さが１５０μｍである以外は同条件で得られたばらつきが示される。
【図４８Ｂ】キャピラリの高さが４９μｍである以外は図４７Ａと同条件における応答電流値のばらつきを示すグラフ。比較対照として、キャピラリの高さが１５０μｍである以外は同条件で得られたばらつきが示される。
【図４８Ｃ】キャピラリの高さが３３μｍである以外は図４７Ａと同条件における応答電流値のばらつきを示すグラフ。比較対照として、キャピラリの高さが１５０μｍである以外は同条件で得られたばらつきが示される。
【図４９Ａ】試料のグルコース濃度が１００ｍｇ／ｄＬであり、電圧の印加条件がｏｐｅｎ（２秒）‐２５０ｍＶであり、キャピラリの高さが１０４μｍであり、５℃、１４℃、３０℃、及び３８℃で測定された各応答電流値の、２１℃における応答電流値を基準としたばらつきを示すグラフ。比較対照として、キャピラリの高さが１５０μｍである以外は同条件で得られたばらつきが示される。
【図４９Ｂ】キャピラリの高さが９０μｍである以外は図４９Ａと同条件における応答電流値のばらつきを示すグラフ。比較対照として、キャピラリの高さが１５０μｍである以外は同条件で得られたばらつきが示される。
【図４９Ｃ】キャピラリの高さが８２μｍである以外は図４９Ａと同条件における応答電流値のばらつきを示すグラフ。比較対照として、キャピラリの高さが１５０μｍである以外は同条件で得られたばらつきが示される。
【図４９Ｄ】キャピラリの高さが６９μｍである以外は図４９Ａと同条件における応答電流値のばらつきを示すグラフ。比較対照として、キャピラリの高さが１５０μｍである以外は同条件で得られたばらつきが示される。
【図５０Ａ】キャピラリの高さが５９μｍである以外は図４９Ａと同条件における応答電流値のばらつきを示すグラフ。比較対照として、キャピラリの高さが１５０μｍである以外は同条件で得られたばらつきが示される。
【図５０Ｂ】キャピラリの高さが４９μｍである以外は図４９Ａと同条件における応答電流値のばらつきを示すグラフ。比較対照として、キャピラリの高さが１５０μｍである以外は同条件で得られたばらつきが示される。
【図５０Ｃ】キャピラリの高さが３３μｍである以外は図４９Ａと同条件における応答電流値のばらつきを示すグラフ。比較対照として、キャピラリの高さが１５０μｍである以外は同条件で得られたばらつきが示される。
【図５１Ａ】試料のグルコース濃度が１００ｍｇ／ｄＬであり、電圧の印加条件がｏｐｅｎ（３秒）‐２５０ｍＶであり、キャピラリの高さが１５０μｍであるときの応答電流値を示すグラフ。
【図５１Ｂ】キャピラリの高さが１０４μｍである以外は図５１Ａと同条件における応答電流値を示すグラフ。
【図５１Ｃ】キャピラリの高さが９０μｍである以外は図５１Ａと同条件における応答電流値を示すグラフ。
【図５１Ｄ】キャピラリの高さが８２μｍである以外は図５１Ａと同条件における応答電流値を示すグラフ。
【図５２Ａ】キャピラリの高さが６９μｍである以外は図５１Ａと同条件における応答電流値を示すグラフ。
【図５２Ｂ】キャピラリの高さが５９μｍである以外は図５１Ａと同条件における応答電流値を示すグラフ。
【図５２Ｃ】キャピラリの高さが４９μｍである以外は図５１Ａと同条件における応答電流値を示すグラフ。
【図５２Ｄ】キャピラリの高さが３３μｍである以外は図５１Ａと同条件における応答電流値を示すグラフ。
【図５３Ａ】試料のグルコース濃度が１００ｍｇ／ｄＬであり、電圧の印加条件が０ｍＶ（３秒）‐２５０ｍＶであり、キャピラリの高さが１５０μｍであるときの応答電流値を示すグラフ。
【図５３Ｂ】キャピラリの高さが１０４μｍである以外は図５３Ａと同条件における応答電流値を示すグラフ。
【図５３Ｃ】キャピラリの高さが９０μｍである以外は図５３Ａと同条件における応答電流値を示すグラフ。
【図５３Ｄ】キャピラリの高さが８２μｍである以外は図５３Ａと同条件における応答電流値を示すグラフ。
【図５４Ａ】キャピラリの高さが６９μｍである以外は図５３Ａと同条件における応答電流値を示すグラフ。
【図５４Ｂ】キャピラリの高さが５９μｍである以外は図５３Ａと同条件における応答電流値を示すグラフ。
【図５４Ｃ】キャピラリの高さが４９μｍである以外は図５３Ａと同条件における応答電流値を示すグラフ。
【図５４Ｄ】キャピラリの高さが３３μｍである以外は図５３Ａと同条件における応答電流値を示すグラフ。
【図５５Ａ】試料のグルコース濃度が１００ｍｇ／ｄＬであり、電圧の印加条件が２５０ｍＶ（１秒）‐ｏｐｅｎ（２秒）‐２５０ｍＶであり、キャピラリの高さが１５０μｍであるときの応答電流値を示すグラフ。
【図５５Ｂ】キャピラリの高さが１０４μｍである以外は図５５Ａと同条件における応答電流値を示すグラフ。
【図５５Ｃ】キャピラリの高さが９０μｍである以外は図５５Ａと同条件における応答電流値を示すグラフ。
【図５５Ｄ】キャピラリの高さが８２μｍである以外は図５５Ａと同条件における応答電流値を示すグラフ。
【図５６Ａ】キャピラリの高さが６９μｍである以外は図５５Ａと同条件における応答電流値を示すグラフ。
【図５６Ｂ】キャピラリの高さが５９μｍである以外は図５５Ａと同条件における応答電流値を示すグラフ。
【図５６Ｃ】キャピラリの高さが４９μｍである以外は図５５Ａと同条件における応答電流値を示すグラフ。
【図５６Ｄ】キャピラリの高さが３３μｍである以外は図５５Ａと同条件における応答電流値を示すグラフ。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
本発明の一実施形態に係るセンサチップ２００を用いたバイオセンサシステム１００について、以下に説明する。
【００１１】
１．バイオセンサシステムの構成
本実施形態に係るバイオセンサシステム１００は、液体料中に含まれる分析物の濃度測定を行うセンサを含むシステムである。図１に示すように、バイオセンサシステム１００は、測定器１０１と、センサチップ２００とを有している。
【００１２】
液体試料とは、特定の試料に限定されるものではなく、血液、汗、尿等の生体由来の液体試料（生体試料）；川、海、湖等の環境由来の液体試料；及び食品由来の液体試料等、種々の試料が用いられる。バイオセンサシステム１００は、生体試料、特に血液に好ましく適用される。
【００１３】
また、分析物（測定の対象となる物質）も、特定の物質に限定されるものではなく、センサチップ２００における後述の試薬層２０中の酵素等を変更することによって、種々の物質に対応可能である。血液試料における分析物としては、血球を除く物質、例えば、グルコース、アルブミン、乳酸、ビリルビン及びコレステロールが挙げられる。
【００１４】
測定器１０１は、その側壁面に矩形状の孔である装着口１０２を有している。装着口１０２には、センサチップ２００が着脱自在な状態で接続される。測定器１０１の一方の主面の略中央部には、測定結果を表示する表示部１０３が配置されている。なお、測定器１０１の構成については、後段にて詳述する。
【００１５】
２．センサチップ
２−１．センサチップの構成
センサチップ２００は、１回の使用ごとに廃棄される使い捨てのセンサチップである。図２及び図３に示すように、センサチップ２００は、絶縁基板２０１、スペーサ２０２、及びカバー２０３を備える。カバー２０３は、絶縁基板２０１上に、スペーサ２０２を介して配置されている。絶縁基板２０１、スペーサ２０２及びカバー２０３は、例えば、接着または熱溶着等によって一体化されている。
【００１６】
絶縁基板２０１、スペーサ２０２及びカバー２０３の材料としては、ポリエチレンテレフタレート、ポリカーボネート、ポリイミド、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリスチレン、ポリ塩化ビニル、ポリオキシメチレン、モノマーキャストナイロン、ポリブチレンテレフタレート、メタクリル樹脂及びＡＢＳ樹脂といった樹脂、さらにはガラスを用いることができる。
【００１７】
センサチップ２００は、キャピラリ４０をさらに備える（図３）。キャピラリ４０は、液体試料を保持する。キャピラリ４０は、スペーサ２０２の切欠部２０４によって構成される。キャピラリ４０は、センサチップ２００の長辺方向に長い形状である。キャピラリ４０は、スペーサ２０２の一方の端部（図２、図３における左側の端部）において、センサチップ２００の外部に通じている。言い換えると、センサチップ２００は外部に向かって開口する導入口１７を備え、連通キャピラリ４０は導入口１７と接続されている。キャピラリ４０に導入される液体試料の体積は、例えば１μｌ以下である。
【００１８】
絶縁基板２０１の表面上には、３つの電極１１〜１３が設けられている。電極１１は作用電極、電極１２は対電極、電極１３は検知電極と呼ばれることがある。電極１１〜１３のそれぞれの一部分は、キャピラリ４０に内に配置される。電極１１〜１３は、導入口１７からキャピラリ４０の奥に向かって、対電極１２、作用電極１１、対電極１２、検知電極１３の順に並ぶように配置されている。つまり、図５Ａでは、各電極は、絶縁基板２０１の平面方向において、互いに対向するように配置されている。
【００１９】
ただし、図５Ｂに示すように、作用電極１１、対電極１２、及び検知電極１３は、立体的に配置されていてもよい。例えば、対電極１２が、カバー２０３の下面で、キャピラリ４０に対向した位置に設けられ、作用電極１１及び検知電極１３が、絶縁基板２０１上に配置されていてもよい。
【００２０】
なお、センサチップ２００において、電極１１〜１３の数は、特に限定されるものではない。各電極の数は、２個以上であってもよい。
【００２１】
電極１１〜１３の材料は、パラジウム、白金、金、銀、チタン、銅、ニッケル及び炭素等の公知の導電性材料であってもよい。
【００２２】
また、電極１１、１２、及び１３は、それぞれリード１１０、１２０、及び１３０と連結されている。リード１１０、１２０、及び１３０は、絶縁基板２０１上に設けられる。絶縁基板２０１の一端は、スペーサ２０２及びカバー２０３で覆われていない。リード１１０、１２０、及び１３０の一端は、絶縁基板２０１における覆われていない一端で、センサチップ２００の外部に露出している。測定器１０１は、リード１１０、１２０、及び１３０を介して、電極１１、１２、及び１３に電圧を印加する。
【００２３】
カバー２０３には、キャピラリ４０を形成する切欠部２０４の奥側（導入口１７とは反対側）に対向する位置に空気抜き口１６が設けられている。空気抜き口１６が設けられていることで、キャピラリ４０に導入された液体試料は、毛細管現象により、電極１１〜１３及び試薬層２０で構成される検出部に律速で流れる。こうして、空気抜き口１６は、生体試料である血液試料の点着を確実にするとともに、測定の安定性を向上させている。
【００２４】
また、キャピラリ４０の内部の面は、親水性の処理または親水性材料で形成されていてもよい。これにより、液体試料の点着（取り込み）が容易になり、確実性がより向上する。
【００２５】
絶縁基板２０１とスペーサ２０２との間で、電極１１〜１３の上には、試薬層２０が載置される。
【００２６】
試薬層２０は、電解質を含む試薬が絶縁基板２０１上に予め塗布されることで形成される。試薬層２０は、絶縁基板２０１上における電極１１、１２、及び１３が重なった部分を覆うように形成されている。試薬層２０は、液体試料中の分析物を基質とする酸化還元酵素と電子メディエータ（以下、単に「メディエータ」と称することがある）とを含有している。
【００２７】
酵素としては、分析物を基質とする酸化還元酵素が好適に用いられる。このような酵素の例として、分析物がグルコースである場合は、グルコースオキダーゼ、又はグルコースデヒドロゲナーゼが、分析物が乳酸である場合には、乳酸オキシダーゼ、又は乳酸デヒドロゲナーゼが、分析物がコレステロールである場合には、コレステロールエステラーゼ、又はコレステロールオキシダーゼが、分析物がアルコールである場合には、アルコールオキシダーゼが、分析物がビリルビンである場合にはビリルビンオキシダーゼ等が挙げられる。酵素は、これらに限定されるものではなく、分析物に応じて適宜選択される。なお、分析物としてはこれら以外に、トリグリセリド、尿酸等が挙げられる。
【００２８】
メディエータは、酵素反応にて生じた電子を電極に受け渡す機能を有する物質である。メディエータとしては、例えば、フェリシアン化カリウム、ｐ‐ベンゾキノン、ｐ‐ベンゾキノン誘導体、酸化型フェナジンメトサルフェート、メチレンブルー、フェリシニウム及びフェリシニウム誘導体等からなる群より選択される少なくとも１つが好適に用いられる。
【００２９】
試薬層中の酸化還元酵素の量は、酵素の種類等によって異なるが、一般的には、好ましくは０．０１〜１００ユニット（Ｕ）、より好ましくは０．０５〜１０Ｕ、さらに好ましくは０．１〜５Ｕである。
【００３０】
試薬層２０は、試薬層の成形性を高めるために、水溶性高分子化合物を含有してもよい。水溶性高分子化合物は、カルボキシメチルセルロース及びその塩；ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、メチルセルロース、エチルセルロース、エチルヒドロキシエチルセルロース、カルボキシエチルセルロース及びその塩；ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリリジン等のポリアミノ酸；ポリスチレンスルホン酸及びその塩；ゼラチン及びその誘導体；ポリアクリル酸及びその塩；ポリメタクリル酸及びその塩；スターチ及びその誘導体；無水マレイン酸重合体及びその塩；アガロースゲル及びその誘導体；から選ばれる少なくとも１種であってもよい。
【００３１】
２−２．キャピラリ４０の高さ
液体試料が導入されたキャピラリ４０内の系は、液体と、液体中で拡散する拡散物（分析物及びメディエータ等）を含む拡散系となる。液体は、拡散媒又は分散媒と言い換えられる。
【００３２】
液体中の各拡散物の拡散距離ｄは、下記式（１）で表される。
【００３３】
【数１】
0005608259.tif 000002
ｚ：定数
Ｄ：拡散係数
ｔ：時間
【００３４】
定数ｚとしては、任意の値が選択される。定数ｚは、実験条件に応じて変更可能であり、また、定数ｚは、拡散物が拡散する距離の分布の定義に応じて、変更可能である。一般的に、定数ｚは１≦ｚ≦４の範囲で設定されることが多い。より具体的には、定数ｚは、１，２，π，又は４として定義されてもよい。電気化学の分野では、一例としてｚ＝πとして用いられる場合があるため、以下では、ｚ＝πであるものとして説明する。
【００３５】
また、拡散係数Ｄは、ストークス‐アインシュタインの関係式（下記式（２））によって表される。
【００３６】
【数２】
0005608259.tif 000003
ｋ：ボルツマン定数
Ｔ：絶対温度
μ：粘度
ｒ：拡散分子の半径
よって、式（１）及び（２）より、拡散距離ｄは、下記式（３）で表される。
【００３７】
【数３】
0005608259.tif 000004
つまり、一般的に、温度が上昇すると、拡散距離ｄは増大する。
さらに、粘度μが温度に依存する系においては、粘度μは、アンドレードの式（４）で表される。
【００３８】
【数４】
0005608259.tif 000005
Ａ：比例定数
Ｅ：流体活性化エネルギー
Ｒ：気体定数
Ｔ：絶対温度
上記式（４）を上記式（３）に代入すると、下記式（５）が得られる。
【００３９】
【数５】
0005608259.tif 000006
ここで、
【数６】
0005608259.tif 000007
Ｂ：定数項
とすると、拡散距離ｄは、下記式（７）で表される。
【００４０】
【数７】
0005608259.tif 000008
【００４１】
上記式（７）において、温度Ｔが上昇すると、分母におけるｅｘｐ（Ｅ／ＲＴ）が減少するので、拡散距離ｄはさらに増大する。
【００４２】
一般的に、高粘度な液体においては、流動活性化エネルギーＥが大きいので、粘度μは温度Ｔの影響を受けやすい。その結果、液体試料の粘度が高いほど、拡散係数Ｄ及び拡散距離ｄも、温度Ｔの影響を受けやすい。例えば、温度Ｔが増大すると、粘度μは減少し、拡散係数Ｄ及び拡散距離ｄは増大する。
【００４３】
図４に示すように、分析物５１は、試薬層２０の内部まで拡散し、酵素反応を介して、電子をメディエータ５４に渡す。メディエータ５４は、作用電極１１まで拡散する。
【００４４】
分析物５１の拡散係数をＤA、分析物がメディエータに電子を渡すまでの拡散時間をｔAとすると、分析物５１の拡散距離ｄAは下記式（８）で表される。なお、拡散時間ｔAは、任意に設定される数値である。
【００４５】
【数８】
0005608259.tif 000009
【００４６】
同様に、メディエータ５４の拡散係数をＤM、メディエータ５４が作用電極１１に電子を渡すまでの拡散時間をｔMとすると、メディエータ５４の拡散距離ｄMは下記式（９）で表される。なお、拡散時間ｔMも、任意に設定される数値である。
【００４７】
【数９】
0005608259.tif 000010
【００４８】
上記式（８）及び（９）より、分析物５１が電流応答として検出されるまでの総拡散距離ｄTは、下記式（１０）で表される。
【００４９】
【数１０】
0005608259.tif 000011
【００５０】
また、分析物５１が電流応答として検出されるまでの時間は（ｔA＋ｔM）で表すことができる。よって、測定時間ｔmesとすると、測定時間ｔmesが
ｔmes≧ｔA＋ｔM
を満たすことにより、分析物５１が測定時間ｔmes中に検出される。つまり、この場合、（ｔA＋ｔM）の最大値はｔmesとなる。
【００５１】
メディエータ５４の拡散時間ｔMが分析物５１の拡散時間ｔAに対して十分に短い場合は、拡散系は、分析物５１のみが１相を移動する系とみなすことができる。このとき、総拡散距離ｄTの最大値ｄLは、次式（１１）で表される。
【００５２】
【数１１】
0005608259.tif 000012
【００５３】
ここで、分析物５１とメディエータ５４間の電子授受には酵素が必要であるため、電子を受け取ったメディエータ５４の拡散距離ｄMは、酵素が作用電極１１から拡散した距離に等しい。一般的に、酵素の拡散係数は、分析物５１の拡散係数ＤA及びメディエータ５４の拡散係数ＤMよりも、著しく小さい。そのため、酵素は作用電極１１近傍に留まった状態にあるとみなされることができる。また、メディエータ５４の拡散距離ｄMも、極めて短いため、一般的にメディエータの拡散時間ｔMは無視できる場合が多い。
【００５４】
一方、メディエータの拡散時間ｔMが長い場合は、拡散系は、２種類の拡散物が１相を移動する系とみなされるので、上記式（１０）において  ｔmes＝ｔA＋ｔM  の式が満たされるときに、総拡散距離ｄTの最大値ｄLが導かれる。
【００５５】
さらに、液体試料が複数相に分離している場合、例えば試薬層２０の上にメンブレンフィルターを設けた場合など、キャピラリ４０内の拡散系は、拡散物が複数相（ｎ個の相）を移動する系となる。よって、メディエータ５４の拡散時間ｔMが分析物５１の拡散時間ｔAに対して十分に短い場合、各相について分析物５１の拡散係数と拡散時間を定義し、総拡散距離ｄTは次式（１２）で表される。
【００５６】
【数１２】
0005608259.tif 000013
【００５７】
（ただしｎは２以上の整数）
このとき、次式（１３）が満たされるとき、
【００５８】
【数１３】
0005608259.tif 000014
【００５９】
総拡散距離ｄTの最大値ｄLを導くことができる。
【００６０】
一方、メディエータの拡散時間ｔMが長い場合は、拡散系は、２種類の拡散物が複数相（ｎ個の相）を移動する系とみなされるので、各相について分析物５１とディエータ５４の拡散係数と拡散時間をそれぞれ定義し、総拡散距離ｄTは次式（１４）で表される。
【００６１】
【数１４】
0005608259.tif 000015
【００６２】
（ただしｎは２以上の整数）
このとき、次式（１５）が満たされることで、
【００６３】
【数１５】
0005608259.tif 000016
【００６４】
総拡散距離ｄTの最大値ｄLが導かれる。
【００６５】
以上に述べた式は、無限拡散の系に適用される式である。無限拡散の系とは、キャピラリ４０の高さＨが十分に大きく設定されている場合に相当する。一方、高さＨが低く設定されている場合は、キャピラリ４０内の拡散系は有限拡散の系となる。この場合、分析物５１の拡散できる範囲は、高さＨによって制限される。
【００６６】
高さＨが、総拡散距離ｄTの最大値ｄLより大きいか否かが、キャピラリ４０内の拡散系が有限拡散となるか無限拡散となるかの境界となる。すなわち、メディエータ５４の拡散時間ｔMが分析物５１の拡散時間ｔAに対して充分に短いときには、高さＨが下記式（１６）を満たすときに、キャピラリ４０内は有限拡散の系となる。
【００６７】
【数１６】
0005608259.tif 000017
【００６８】
一方、メディエータ５４の拡散時間ｔMが長く、キャピラリ４０内の拡散系が、２種類の拡散物が１相を移動する系である場合は、ｔmes＝ｔA＋ｔMの条件下において、高さＨが下記式（１７）を満たすときに、キャピラリ４０内の拡散系は、有限拡散の系となる。
【００６９】
【数１７】
0005608259.tif 000018
【００７０】
また、キャピラリ４０内の系が、メディエータ５４の拡散時間ｔMが分析物５１の拡散時間ｔAに対して十分に短く、分析物５１が複数の相（ｎ個の相）を移動する系である場合は、上記式（１３）の条件下において、高さＨが下記式（１８）を満たすときに、キャピラリ４０内の拡散系は、有限拡散の系となる。
【００７１】
【数１８】
0005608259.tif 000019
【００７２】
さらに、キャピラリ４０内の系が、メディエータ５４の拡散時間ｔMが長く、２種類の拡散物が複数の相（ｎ個の相）を移動する系である場合は、上記式（１５）の条件下において、高さＨが下記式（１９）を満たすときに、キャピラリ４０内の拡散系は、有限拡散の系となる。
【００７３】
【数１９】
0005608259.tif 000020
【００７４】
なお、拡散係数Ｄは、電気化学の分野においては、ポーラグラフィー法、回転ディスク電極法、ポテンシャルスイープ法、ポテンシャルステップ法などにより、実験変数及び電流値によって求められる。また、拡散係数Ｄは、電気化学以外に基づく測定法、例えばテイラーディスパージョン法、核磁気共鳴法-傾斜磁場法などの方法でも求められる。一般的に分析物の拡散係数は１×１０-5ｃｍ2・ｓ-1以下、メディエータの拡散係数は１×１０-5ｃｍ2・ｓ-1以下である。
【００７５】
図５Ａに示すように、キャピラリ４０の高さＨとは、具体的には、作用電極１１からカバー２０３の内面（作用電極１１との対向面）までの距離である。つまり、高さＨは、スペーサ２０２の厚みであってもよいし、試薬層２０の厚みとスペーサ２０２の厚みとを足して得られる値であってもよい。
【００７６】
高さＨは、キャピラリ４０内の拡散系が、有限拡散の系であるように設定される。このときの高さＨの範囲については、上記式（１６）〜（１９）を参照して説明した通りである。前述の通り、拡散距離ｄは温度に依存する。よって、高さＨは、好ましくは、バイオセンサシステム１００の測定保障温度の上限温度で求められる総拡散距離ｄTの最大値ｄLより小さく設定される。高さＨがこのように設定されることで、バイオセンサシステム１００において、高温における測定結果のばらつきが小さく抑えられるという効果が実現される。また、さらに好ましくは、高さＨは、バイオセンサシステム１００の測定保障温度の下限温度で求められる総拡散距離ｄTの最大値ｄLより小さく設定される。高さＨがこのように設定されることで、バイオセンサシステム１００において、１つの検量線を用いて、幅広い温度における濃度の測定が可能となるという利点がある。
【００７７】
作用電極１１及び対電極１２の配置は、図５Ａのように絶縁基板２０１の面方向において対向する形態には限定されない。例えば、作用電極１１と対電極１２とが、キャピラリ４０の高さＨ方向において対向するように配置されていてもよい。図５Ｂに具体的な構成を示す。図５Ｂに示す例では、作用電極１１は絶縁基板２０１上に配置されており、対電極１２はカバー２０３の絶縁基板２０１との対向面に配置されている。このような配置では、高さＨは、作用電極１１と対電極１２との距離である。図５Ｂの配置においても、高さＨは、上述の範囲であることが好ましい。
【００７８】
なお、図５Ａ及び図５Ｂのいずれの構成においても、キャピラリ４０全体の高さが、上述の範囲である必要はなく、作用電極１１から、作用電極１１に対向する部分（図５Ａであればカバー２０３、図５Ｂであれば対電極１２）までの距離が、上述の範囲であればよい。
【００７９】
３．測定器１０１
測定器１０１は、図６に示すように、上述した構成の他に、制御回路３００を有する。制御回路３００は、センサチップ２００の電極１１〜１３（図２及び図３参照）のうち、選択された少なくとも２つの電極間に電圧を印加する。
【００８０】
具体的には、制御回路３００は、図６に示すように、３つのコネクタ３０１ａ，３０１ｂ、及び３０１ｃと、切換回路３０２と、電流／電圧変換回路３０３と、アナログ／デジタル変換回路（以下、Ａ／Ｄ変換回路と称する）３０４と、基準電圧源３０５と、演算部３０６とを有している。制御回路３００は、切換回路３０２を介して、１つの電極を正極または負極として使用できるように、当該電極に印加する電圧を切り換えることができる。
【００８１】
図６に示すように、コネクタ３０１ａ、３０１ｂ、及び３０１ｃは、センサチップ２００が装着口１０２に挿入された状態で、それぞれ対電極１２、検知電極１３、及び作用電極１１に接続される。
【００８２】
切替回路３０２は、基準電圧源３０５に接続する電極を切り替えること、及び各電極に印加される電圧値を切り替えることができる。
【００８３】
電流／電圧変換回路３０３は、電流値の取得を指示する信号を演算部３０６から与えられることによって、電流／電圧変換回路３０３に接続された２つの電極間に流れた電流量を、電圧値に変換する。変換された電圧値は、Ａ／Ｄ変換回路３０４によりデジタル値に変換され演算部３０６に入力され、演算部３０６のメモリに格納される。
【００８４】
演算部３０６は、公知の中央演算装置（ＣＰＵ）と、記憶装置を備える。記憶装置としては、例えばＨＤＤ（Hard Disk Drive）、ＲＯＭ（Read Only Memory）、ＲＡＭ（Random Access Memory）等が挙げられる。記憶装置には、作用電極１１と対電極１２との間の電流値と血液試料中の分析物濃度とを対応付けた検量線が記憶される。そして、演算部３０６は、検量線を参照することによって、血液試料中の分析物の濃度を算出することができる。
【００８５】
また、演算部３０６では、上述した分析物の濃度を算出する機能以外に、切換回路３０２の切替制御、Ａ／Ｄ変換回路３０４からの入力、基準電圧源３０５の電圧制御、濃度測定時の電圧印加タイミングや印加時間等の測定（タイマ機能）、表示部１０３への表示データ出力及び外部機器との通信機能を有し、測定器全体のコントロールも行っている。
【００８６】
演算部３０６の各種機能は、ＣＰＵが記憶装置内に格納されたプログラムを読み出して実行することにより実現される。
【００８７】
４．分析物濃度の測定
センサチップ２００を使用するとき、ユーザは、導入口１７に液体試料を点着させればよい。例えば、バイオセンサシステム１００を血糖値測定に用いる場合、ユーザは、自身の指、掌、又は腕等を穿刺して、少量の血液を搾り出し、この血液を液体試料として測定に供することができる。
【００８８】
導入口１７に点着した液体試料は、毛細管現象によって、キャピラリ４０内をセンサチップ２００の奥へと進行し、電極１１〜１３に到達する。
【００８９】
バイオセンサシステム１００が行う分析物濃度の測定について説明する。
【００９０】
センサチップ２００が測定器１０１の装着口１０２に装着されると、図７に示す動作が開始される。まず、演算部３０６のＣＰＵの指令を受けた切替回路３０２によって、検知電極１３がコネクタ３０１ｂを介して電流／電圧変換回路３０３に接続され、対電極１２がコネクタ３０１ａを介して基準電圧源３０５に接続される。その後、ＣＰＵの指令により、両電極間に一定の電圧が印加される（ステップＳ１１）。この電圧は、検知電極１３を正極、対電極１２を負極としたときには、好ましくは０．０１〜２．０Ｖ、より好ましくは０．１〜１．０Ｖ、さらに好ましくは０．２〜０．５Ｖである。この電圧は、センサチップが測定器１０１に挿入されてから、血液試料がキャピラリ４０の奥まで導入されるまでの間、印加される。
【００９１】
センサチップ２００の導入口１７からキャピラリ４０に血液試料が導入されると、検知電極１３と対電極１２との間に電流が流れる。ＣＰＵは、血液試料が導入される前後における単位時間当たりの電流の増加量を識別することによって、キャピラリ４０が血液試料にて満たされたことを検知する。この電流の値は、電流／電圧変換回路３０３により電圧値に変換された後にＡ／Ｄ変換回路３０４によりデジタル値に変換されＣＰＵに入力される。ＣＰＵは、このデジタル値に基づいて血液試料がキャピラリの奥にまで導入されたことを検知する。
【００９２】
こうして試料が検知されると（ステップＳ１２でＹｅｓ）、ステップＳ１３が実行される。すなわち、演算部３０６のＣＰＵの指令を受けた切替回路３０２によって、検知電極１３の電流／電圧変換回路３０３への接続が解除され、作用電極１１と基準電圧源３０５とが接続され、対電極１２と電流／電圧変換回路３０３とが接続される。具体的には、作用電極１１がコネクタ３０１ｃを介して電流／電圧変換回路３０３に接続され、対電極１２がコネクタ３０１ａを介して基準電圧源３０５に接続される。そして、作用電極１１と対電極１２との間に、開回路電圧が印加される。「開回路電圧を印加する」とは、「電圧印加をＯＦＦにする」と言い換えてもよい。
【００９３】
図１０Ａに示すように、ステップＳ１３における開回路電圧の印加時間Ｔ1は、濃度測定結果における温度の影響を低減することができるものであればよく、具体的な値に限定されるものではない。時間Ｔ1は、例えば０．５〜１５秒、好ましくは１〜１０秒、より好ましくは１〜５秒、さらに好ましくは２〜３秒程度に設定される。
【００９４】
次に、演算部３０６の制御の下、作用電極１１と対電極１２との間に、測定電圧Ｖmesが印加される（ステップＳ１４）。このとき印加される測定電圧Ｖmesの大きさは、測定の分析物の種類やメディエータの種類に応じて変更可能である。
【００９５】
測定電圧Ｖmesが印加されているときに、作用電極１１と対電極１２との間に流れる電流値が取得される（ステップＳ１５）。電流／電圧変換回路３０３には、電流値の取得を指示する信号が、演算部３０６のＣＰＵから与えられる。測定電圧Ｖmesの印加によって両電極間に流れた電流値は、電流／電圧変換回路３０３により、電圧値に変換される。その後、変換された電圧値は、Ａ／Ｄ変換回路３０４によりデジタル値に変換されＣＰＵに入力され、演算部３０６のメモリに格納される。こうして、測定電圧Ｖmes印加時の電流値が、デジタルの電圧値に変換された状態で取得される。
【００９６】
演算部３０６は、こうして格納されたデジタル値及び上述の検量線に基づいて、分析物の濃度を算出する（ステップＳ１６）。
【００９７】
このように、測定電圧Ｖmesの印加の前に、開回路電圧を印加することによって、濃度測定の結果が温度の影響を受けにくいという効果が得られる。
【００９８】
なお、以上の実施形態では、濃度算出に検量線が用いられるものとしたが、検量線に代えて電圧値と濃度とが対応付けられたテーブルが用いられてもよい。
【００９９】
５．他の形態‐１
図７のステップＳ１３は、濃度測定結果における温度の影響を低減する処理の一例に過ぎない。よって、ステップＳ１３は、他の処理に置き換え可能である。開回路電圧は、メディエータに電子を蓄積させることができる電圧の一例である。開回路電圧に代えて、電子蓄積の効果が得られる他の電圧が印加されてもよい。
【０１００】
例えば、図８に示すように、ステップＳ１３に代えて、ステップＳ２３が実行されてもよい。ステップＳ２３では、作用電極１１と対電極１２との間に、測定電圧Ｖmesよりも低い電圧が印加される。
【０１０１】
なお、「測定電圧Ｖmesよりも低い電圧」とは、メディエータに電子を蓄積させることができる電圧であればよい。例えば、測定電圧Ｖmesが正極性の電圧である場合、ステップＳ２３で印加される電圧は、正極性の電圧であってもよいし（図１０Ｂ）、０Ｖであってもよいし（図１０Ｃ）、逆極性つまり負極性の電圧であってもよい（図１０Ｄ）。より具体的には、測定電圧Ｖmesが２５０ｍＶである場合、ステップＳ２３で印加される電圧は、−２００〜１５０ｍＶ程度に設定されてもよい。
【０１０２】
なお、「メディエータに電子が蓄積される」状態とは、メディエータから電極に電子が伝達されない、又は伝達されにくい状態を意味する。
【０１０３】
６．他の形態‐２
ステップＳ１３及びＳ２３は、電流値の取得（ステップＳ１５及びＳ２５）の前に実行されればよい。ステップＳ１３及びＳ２３の前後に、さらなる電圧印加ステップが実行されてもよい。
【０１０４】
例えば、図９に示すように、上述のステップＳ２３に相当するステップＳ３４の前に、他の閉回路電圧印加ステップＳ３３が実行されてもよい。このステップＳ３３（いわば第３の電圧印加ステップ）における印加電圧の大きさは、特に限定されるものではなく、測定電圧Ｖmesよりも大きくてもよい。
【０１０５】
図９に示した形態の他にも、以下のような組み合わせ及び順序で電圧が印加されてもよい。
（１）第３の電圧印加ステップ‐開回路電圧印加ステップ‐測定電圧印加ステップ
（２）第３の電圧印加ステップ‐開回路電圧印加ステップ‐低電圧印加ステップ‐測定電圧印加ステップ
（３）開回路電圧印加ステップ‐低電圧印加ステップ‐測定電圧印加ステップ
また、いずれの組合せにおいても、低電圧印加ステップは、互いに電圧値の異なる２つ以上の電圧印加ステップを含んでいてもよい。また、いずれの組み合わせにおいても、開回路電圧印加ステップと、低電圧印加ステップとは、入れ替え可能である。
【０１０６】
なお、図１０Ａ〜図１０Ｄにおける時間“０”は、試料の導入が検知された時点であってもよいし、検知されてから所定の時間が経過した時点であってもよい。また、開回路電圧を印加する期間、低電圧を印加する期間、又はその合計期間は、好ましくは０．５〜１０秒であり、例えば１〜７秒又は２秒〜５秒程度に設定されてもよい。
【０１０７】
以上の各実施形態での説明から明らかなように、演算部３０６及び基準電圧源３０５は、作用電極１１と対電極１２との間に測定電圧Ｖmes（第１電圧）を印加する第１電圧印加部、及び第１電圧印加の前に第２電圧（開回路電圧、低電圧）を印加する第２電圧印加部として機能する。
【０１０８】
なお、以上の実施形態では、単一の基準電圧源３０５が、演算部３０６の制御の下で、異なる電圧を電極に印加するが、これ以外の構成として、測定器１０１が、２以上の電圧源を有する構成であってもよい。
【０１０９】
また、演算部３０６は、分析物の濃度を測定する濃度測定部としても機能する。
【０１１０】
７．総括
以上、異なる欄で述べた構成は、それぞれ組み合わせ可能である。すなわち、以上で述べた形態は、次のように言い換え可能である。
【０１１１】
１）
酸化還元酵素及び電子メディエータを用いて液体試料内の分析物の濃度を測定するバイオセンサシステムであって、
液体試料が導入され、その高さがバイオセンサシステムの測定保障温度の上限温度における上記分析物の拡散距離及び上記電子メディエータの拡散距離の合計の最大値より小さいキャピラリと、
上記キャピラリ内に配置された複数の電極と、
上記キャピラリ内に配置され、上記電子メディエータを含む試薬層と、
を備えるセンサチップと；
上記電極に第１電圧を印加する第１電圧印加部と；
上記第１電圧印加時に上記液体試料中に流れる電流値に基づいて、上記分析物の濃度を測定する濃度測定部と；
上記濃度測定部での測定結果における上記液体試料の温度の影響が小さくなるように、上記第１電圧の印加前に、上記電極に第２電圧を印加する第２電圧印加部と；
を備えるバイオセンサシステム。
【０１１２】
２）
上記センサチップのキャピラリの高さが、バイオセンサシステムの測定保障温度の下限温度で求められる、上記分析物の拡散距離及び上記電子メディエータの拡散距離の合計の最大値より小さい
上記１）に記載のバイオセンサシステム。
【０１１３】
３）
上記センサチップのキャピラリの高さは、下記式（ｉ）でそれぞれ表される上記分析物及び上記電子メディエータの拡散距離に基づいて設定される
【０１１４】
【数１】
0005608259.tif 000021
【０１１５】
（ただし、ｄ：拡散距離、
ｚ：任意に選択される定数、
Ｄ：拡散係数、
ｔ：時間
を表す。）
上記１）又は２）に記載のバイオセンサシステム。
【０１１６】
４）
上記式（ｉ）における定数ｚは、１≦ｚ≦４を満たす
上記３）に記載のバイオセンサシステム。
【０１１７】
５）
上記第２電圧印加部は、上記第２電圧を印加することで、上記電子メディエータに電子を蓄積する
上記１）〜４）のいずれかに記載のバイオセンサシステム。
【０１１８】
６）
上記第２電圧印加部は、上記第２電圧として、開回路電圧を印加する
上記１）〜５）のいずれかに記載のバイオセンサシステム。
【０１１９】
７）
上記第１電圧印加部は、上記第１電圧として正極性の電圧を印加し、
上記第２電圧印加部は、上記第２電圧として、上記第１電圧よりも低い電圧を印加する
上記１）〜６）のいずれかに記載のバイオセンサシステム。
【０１２０】
８）
上記濃度測定部は、上記電流値と上記分析物の濃度とを対応付ける検量線又はテーブルを有し、かつ、上記液体試料の温度が変動しても、同一の上記検量線又はテーブルに基づいて、上記分析物の濃度を算出する
上記１）〜７）のいずれかに記載のバイオセンサシステム。
【０１２１】
９）
上記濃度測定部は、上記第２電圧の印加の開始からの経過時間が１０秒以下である時点での電流値に基づいて、上記分析物の濃度を測定し、
上記センサチップの上記キャピラリの高さが９０μｍ以下である
上記１）〜８）のいずれかに記載のバイオセンサシステム。
【０１２２】
１０）
上記電極は、上記キャピラリの高さ方向において向かい合う２つの面にそれぞれ配置される
上記１）〜９）のいずれかに記載のバイオセンサシステム。
【０１２３】
１１）
酸化還元酵素及び電子メディエータを用いて液体試料内の分析物の濃度を測定する方法であって、
液体試料が導入され、その高さがバイオセンサシステムの測定保障温度の上限温度における上記分析物の拡散距離及び上記電子メディエータの拡散距離の合計の最大値より小さいキャピラリと、上記キャピラリ内に配置された複数の電極と、上記キャピラリ内に配置され、電子メディエータを含む試薬層と、を備えるセンサチップを有するバイオセンサシステムで実行され、
上記電極に第１電圧を印加する第１電圧印加ステップと、
上記第１電圧の印加時に上記液体試料中に流れる電流値を検出する電流検出ステップと、
上記電流値に基づいて上記分析物の濃度を測定する濃度測定ステップと、
上記濃度測定部での測定結果における上記液体試料の温度の影響が小さくなるように、上記電流値の検出前に、上記電極に第２電圧を印加する第２電圧印加ステップと、
を含む測定方法。
【０１２４】
１２）
上記第２電圧は、上記第２電圧の印加によって上記電子メディエータに電子が蓄積されるように設定される
上記１１）に記載の測定方法。
【０１２５】
１３）
上記第２電圧は、開回路電圧である
上記１１）又は１２）に記載の測定方法。
【０１２６】
１４）
上記第１電圧は、正極性の電圧であり、
上記第２電圧は、上記第１電圧よりも低い電圧である
上記１１）〜１３）のいずれかに記載の測定方法。
【０１２７】
１５）
上記濃度測定ステップは、上記電流値と上記分析物の濃度とを対応付ける検量線又はテーブルを用い、上記液体試料の温度が変動しても、同一の上記検量線又はテーブルに基づいて、上記分析物の濃度を算出する算出ステップを含む
上記１１）〜１４）のいずれかに記載の測定方法。
【０１２８】
１６）
上記センサチップの上記キャピラリの高さが９０μｍ以下であり、
上記濃度測定ステップにおいて、上記第２電圧の印加の開始からの経過時間が１０秒以下である時点での電流値に基づいて、上記分析物の濃度を測定する
上記１１）〜１５）のいずれかに記載の測定方法。
【０１２９】
［実験例］
以下、実験例を示して、より具体的に説明する。
【０１３０】
以下の実施例では、上述のバイオセンサシステム１００を用いた。センサチップとしては、図２、図３、及び図５Ａに示すセンサチップ２００を用いた。センサチップ２００の構成は以下の通りである。
【０１３１】
キャピラリ４０を、幅１．２ｍｍ、長さ（奥行き）４．０ｍｍ、高さ３３〜１５０μｍになるように設計した。なお、高さＨは、センサチップ２００を切断し、顕微鏡を用いて、作用電極１１からキャピラリ４０の天井（カバー２０３の内面）までの距離を測定することで確認した。
【０１３２】
絶縁基板２０１としては、ポリエチレンテレフタレートを用いた。電極１１〜１３を、絶縁基板２０１上にパラジウムを蒸着させ、キャピラリ４０内における作用電極１１の面積が１．０平方ｍｍ、キャピラリ４０内における対電極１２の面積が１．２平方ｍｍとなるように、レーザーでスリットを入れることで、各電極を形成した。
【０１３３】
試薬層２０を次のようにして形成した。グルコースデヒドロゲナーゼ、フェリシアン化カリウム（関東化学社製）及びタウリン（ナカライテスク社製）を用いた。グルコースデヒドロゲナーゼを、試薬層２０中のグルコースデヒドロゲナーゼ濃度が、２．０Ｕ／センサチップになるように、溶解させた水溶液を調製した。この水溶液に、フェリシアン化カリウム量を１．７質量％、タウリン量を１．０質量％になるように溶解させることによって、試薬液を得た。この試薬液を、絶縁基板２０１上に塗布した後、湿度４５％、温度２１℃の雰囲気下で乾燥させた。
【０１３４】
なお、以下の実施例において、特に断らない限り、グラフにおける時間の“０”は、試料の導入が検知された時点である。また、以下の実験例における温度は、測定環境の気温である。測定の対象となる試料としては、グルコース濃度を所定の値に調整した血液を用いた。
【０１３５】
（実験例１）
本実験例では、上述のバイオセンサシステム１００において、ステップＳ１３を行わない以外は、図７と同様の処理を行った。つまり、図７のステップＳ１１〜Ｓ１２及びＳ１４〜Ｓ１６の処理を行った。具体的には、ステップＳ１２の後、２５０ｍＶで一定の電圧を印加して、応答電流値（単に「電流値」と称することがある）を測定した。また、キャピラリ４０の高さＨが異なるセンサチップを用いて、各センサチップにおける電流値を測定した。具体的には、キャピラリ４０の高さを、１５０μｍ、１００μｍ、５９μｍ、３３μｍとした。
【０１３６】
図１１Ａ〜図１１Ｄに、試料として、グルコース濃度が１００ｍｇ／ｄＬ（デシリットル）の血液を用いた場合の電流値の測定結果を示す。また、図１３Ａ〜図１３Ｄに、試料として、グルコース濃度が４００ｍｇ／ｄＬ（デシリットル）の血液を用いた場合の電流値の測定結果を示す。図１２Ａは、図１１Ａ〜図１１Ｄにおける８秒経過時の電流値のグラフである。また、図１２Ｂは、キャピラリの高さ毎に、図１２Ａにおける２１℃の電流値を０％としたときの、各温度における電流値のばらつきを表すグラフである。
【０１３７】
図１１Ａ〜図１１Ｂ及び図１３Ａ〜図１３Ｂに示すように、高さＨが大きいときは、測定時間（反応開始後の経過時間）にかかわらず、高温条件下で電流値が大きく、低温条件下で電流値が小さいという結果が得られた。
【０１３８】
一方で、図１１Ｃ〜図１１Ｄ及び図１３Ｃ〜図１３Ｄに示すように、高さＨが小さいときは（５９μｍ、３３μｍ）、測定時間が短い間は高温条件下において低温条件下より大きい電流値が測定されたが、測定時間が長くなると、低温条件下において高温条件下より大きい電流値が測定された。このような逆転が起きるのは、有限拡散系では、高温条件下においては、短期間に多くの基質（グルコース）が消費されるために、時間が経過すると基質が枯渇するが、低温条件下においては、基質が残存していたためであると考えられる。
【０１３９】
このような逆転現象がおきるため、図１２Ａ及び図１２Ｂ及び図１４Ａ及び図１４Ｂに示すように、本実験例では、高さＨが３３μｍであっても、つまり高さHが小さくても、温度が変化したときの電流値のばらつきが大きかった。
【０１４０】
（実験例２）
実験例１の電流値の測定結果を、０．１秒毎に積算することで、電荷量を算出した。結果を図１５Ａ〜図１５Ｄ及び図１７Ａ〜図１７Ｄに示す。図１５Ａ〜図１５Ｄはそれぞれ図１１Ａ〜図１１Ｄに対応し、図１７Ａ〜図１７Ｄはそれぞれ図１３Ａ〜図１３Ｄに対応する。図１６Ａ及び図１８Ａはそれぞれ、図１５Ａ〜図１５Ｄ及び図１７Ａ〜図１７Ｄにおける８秒経過時の電荷量のグラフであり、図１６Ｂ及び図１８Ｂは、図１６Ａ及び図１８Ａにおける温度による電荷量のばらつきを示すグラフである。
【０１４１】
これらの図面に示すように、高さＨが小さくても、一定電圧を印加した場合には、電荷量のばらつきは大きかった。
【０１４２】
（実験例３）
図７のステップＳ１３において印加電圧を開回路電圧（ｏｐｅｎ）とする期間を５秒間とし、ステップＳ１４の測定電圧を２５０ｍＶとして、応答電流値を測定した。電圧以外の条件、すなわちキャピラリの高さＨ、温度条件、試料のグルコース濃度等は、実験例１と同条件とした。
【０１４３】
図１９Ａ〜図１９Ｄに、試料として、グルコース濃度が１００ｍｇ／ｄＬ（デシリットル）の血液を用いた場合の電流値の測定結果を示す。図１１Ａ〜図１１Ｄに示すように、キャピラリ４０の高さが小さくなるほど、環境温度よる測定結果のばらつきが小さいという結果が得られた。特に、高さＨが５９μｍ以下のときにばらつきが小さく、３３μｍのときには最もばらつきが小さかった。
【０１４４】
図２０Ａは、図１９Ａ〜図１９Ｄにおける８秒経過時（２５０ｍＶの電圧印加を開始してから３秒経過時）の電流値を示すグラフである。また、図２０Ｂは、キャピラリの高さ毎に、図２０Ａにおける２１℃の電流値を基準値（０％）としたときの、各温度における電流値のばらつきを表すグラフである。
【０１４５】
図２０Ａ及び図２０Ｂに示すように、高さＨが５９μｍのとき、温度によるばらつきは±２０％未満に抑えられた。また、高さＨが３３μｍのとき、ばらつきは±１０％未満に抑えられた。
【０１４６】
グルコース濃度が４００ｍｇ／ｄＬである試料を用いて、同様の実験を行った。図２１Ａ〜図２１Ｄ、図２２Ａ〜図２２Ｂに示すように、試料のグルコース濃度が高くても、高さＨが５９μｍ以下であるとき、特に３３μｍであるときに、ばらつきが小さく抑えられた。
【０１４７】
上述したように、単にキャピラリの高さＨを小さくしただけでは、測定時間の経過に伴って、高温下の電流値と低温下の電流値との逆転が起き、温度の違いによる電流値のばらつきは抑えられない。
【０１４８】
これに対して、本実験例では、酵素反応開始後の５秒間、印加電圧を開回路電圧とすることで、キャピラリ４０内で、メディエータが作用電極１１に電子を伝達しない状態が維持される。この間も、酵素反応は進行しているので、メディエータに電子が蓄積される。その後、電子が蓄積された時点で測定電圧Ｖmesが印加され、濃度測定が行われる。その結果、濃度測定時の電流値は、開回路電圧の印加中の反応量と、測定電圧Ｖmes印加中の反応量とが足し合わされた電流値となる。その結果として、測定時の温度環境による測定値の変動が、小さく抑えられたと考えられる。
【０１４９】
（実験例４）
本実験例では、開回路電圧の印加期間が変わっても、実験例３と同様の効果が得られることを確認した。本実験例では、開回路電圧の印加期間は１．５秒又は３秒であった。また、グルコース濃度は、４０ｍｇ／ｄＬ、１５５ｍｇ／ｄＬ、３４５ｍｇ／ｄＬ、又は６００ｍｇ／ｄＬであった。図２３Ａ〜図２３Ｄ，図２４Ａ〜図２４Ｄ、図２５Ａ〜図２５Ｄ，及び図２６Ａ〜図２６Ｄでは、開回路電圧の印加期間は１．５秒である。また、図２８Ａ〜図２８Ｄ、図２９Ａ〜図２９Ｄ、図３０Ａ〜図３０Ｄ、及び図３１Ａ〜図３１Ｄでは、開回路電圧の印加期間は３秒である。いずれの図面においても、グルコース濃度が異なる以外は、行われた操作は同じである。
【０１５０】
図２３Ａ〜図２３Ｄ，図２４Ａ〜図２４Ｄ、図２５Ａ〜図２５Ｄ，図２６Ａ〜図２６Ｄ、図２８Ａ〜図２８Ｄ、図２９Ａ〜図２９Ｄ、図３０Ａ〜図３０Ｄ、及び図３１Ａ〜図３１Ｄに示すように、グルコース濃度及び／又は開回路電圧の印加期間が変化しても、高さＨが５９μｍ以下、特に３３μｍであるときに、温度による電流値のばらつきが小さかった。
【０１５１】
また、図２７Ａ〜図２７Ｄに示すように、高さＨが５９μｍ以下であるときは、電流値が温度から受ける影響は小さかった。つまり、温度による誤差の小さい高精度な測定結果が得られた。特に、高さが３３μｍであるときは、ばらつきが非常に小さい。ばらつきが小さいことで、温度が異なっても、１つの検量線から濃度を算出することが可能である。図３２Ａ〜Ｄに示すように、図２９（開回路電圧の印加期間が３秒であり、グルコース濃度が１５５ｍｇ／ｄＬである場合の測定結果）の７秒経過時（開回路電圧印加の終了から４秒後）の電流値においても、同様の結果が観察された。
【０１５２】
（実験例５）
以下の実験例５〜９では、グルコース濃度は１００ｍｇ／ｄＬである。
【０１５３】
実験例５では、センサチップの高さＨが１５０μｍ、１０４μｍ、９０μｍ、８２μｍ、６９μｍ、５９μｍ、４９μｍ、又は３３μｍであり、開回路電圧の印加期間は、０秒、１秒、１．５秒、２秒、３秒、４秒、５秒、６秒、又は７秒であり、開回路電圧を印加した後に２５０ｍＶの測定電圧が印加されたときの応答電流値が測定された。
【０１５４】
開回路電圧を印加しなかった（印加期間が０秒であった）場合の結果を示す図３３Ａ〜図３４Ｄ）と、開回路電圧を印加した場合の結果を示す図３５Ａ〜図３６Ｄとを比較すると、開回路電圧を印加した場合の方が、温度による電流値のばらつきが小さく抑えられた。開回路電圧を１．５秒以上印加した場合、さらには２秒以上印加したときに、この効果が顕著であった。
【０１５５】
なお、図には、開回路電圧の印加時間が５秒までのデータが示されるが、印加時間を６秒又は７秒とした場合にも、同様に温度による電流値のばらつきが小さく抑えられた。
【０１５６】
（実験例６）
センサチップの高さＨは１５０μｍ、１０４μｍ、９０μｍ、８２μｍ、６９μｍ、５９μｍ、４９μｍ、又は３３μｍであった。開回路電圧の印加期間は、０秒又は２秒であった。開回路電圧を印加した後に２５０ｍＶの測定電圧を印加したときの応答電流値が測定された。
【０１５７】
各条件下において、５℃、１４℃、２１℃、３０℃、３８℃で電流値を測定し、各温度下での結果の、２１℃における測定結果からの乖離度（ばらつき）を算出した。図４７Ａ〜図５０Ｄにおいて、高さＨが１５０μｍであるときの乖離度は点線で表され、高さＨが１０４μｍ、９０μｍ、８２μｍ、６９μｍ、５９μｍ、４９μｍ、又は３３μｍであるときの乖離度は実線で表される。
【０１５８】
つまり、図４９Ａにおいて最も上方に位置する実線曲線は、高さＨが１０４μｍを有するセンサチップにおいて、３８℃で、開回路電圧が２秒間（ｏｐｅｎ期間）印加された後、測定で電圧２５０ｍＶが印加されたときの電流値が、２１℃で測定された（温度条件以外は同条件で測定された）電流値からどれだけ乖離しているかを示す。つまり、実線が０％の横軸に近づくほど、ばらつきは小さいといえる。また、同図の最も上方に位置する点線は、高さＨが１５０μｍであり、かつ３８℃において測定された電流値が、高さＨが１５０μｍであり、かつ２１℃において測定された電流値からどれだけ乖離しているかを示す。
【０１５９】
図４７Ａ〜図５０Ｃに示すように、開回路電圧の印加期間が２秒のときは、０秒のときよりも温度によるばらつきが小さく抑えられた。
【０１６０】
図４９Ａ〜図４９Ｄ及び図５０Ａ〜図５０Ｃに示すように、高さＨが１０４μｍであるときの電流値のばらつきは、高さＨが１５０μｍであるときの電流値のばらつきと比べて、大きな違いはなかった（図４９Ａ）。これに対して、高さＨが９０μｍ以下であるとき、温度による電流値のばらつきは、高さＨが１０４μｍであるときよりも小さく抑えられた（図４９Ｂ等）。すなわち、キャピラリの高さＨは９０μｍ以下であることが好ましい。
【０１６１】
なお、データの図示を省略するが、開回路電圧の印加期間が３〜５秒であっても、同様にばらつきは小さく抑えられた。
【０１６２】
（実験例７）
本実験例では、高さＨが互いに異なるセンサチップに、１００ｍＶの電圧を３秒間印加後、２５０ｍＶの測定電圧を印加した。高さＨは、１５０μｍ、１０４μｍ、９０μｍ、８２μｍ、６９μｍ、５９μｍ、４９μｍ、又は３３μｍであった。
【０１６３】
図５１Ａ〜図５１Ｄ及び図５２Ａ〜図５２Ｄに示すように、開回路電圧に代えて、測定電圧よりも低い電圧が印加された場合も、ばらつき抑制の効果があることが、本実験例によって明らかとなった。特に、高さＨが５９μｍ以下のときに、ばらつき抑制の効果が顕著であった。
【０１６４】
（実験例８）
本実験例では、高さＨが互いに異なるセンサチップに、０ｍＶの電圧を３秒間印加後、２５０ｍＶの測定電圧を印加した。高さＨは実験例７と同様であった。
【０１６５】
図５３Ａ〜図５３Ｄ及び図５４Ａ〜図５４Ｄに示すように、開回路電圧に代えて、０ｍＶを印加した場合もばらつき抑制の効果が得られた。特に、高さＨが５９μｍ以下のときに、ばらつき抑制の効果が顕著であった。
【０１６６】
（実験例９）
本実験例では、高さＨが互いに異なるセンサチップに、２５０ｍＶの電圧を１秒印加後、開回路電圧を２秒印加して、その後に２５０ｍＶの測定電圧を印加した。高さＨは、実験例７と同様であった。
【０１６７】
図５５Ａ〜図５５Ｄ及び図５６Ａ〜図５６Ｄに示すように、開回路電圧印加前に閉回路電圧を印加しても、ばらつき抑制の効果が得られた。特に、高さＨが５９μｍ以下のときに、ばらつき抑制の効果が顕著であった。
【０１６８】
なお、測定電圧よりも高い電圧が印加された後に、開回路電圧を印加すること及び／又は測定電圧よりも低い電圧を印加することで、そのさらに後に測定電圧を印加したときに得られた電流値の、温度によるばらつきが抑制されることが確認された。
【産業上の利用可能性】
【０１６９】
本発明のセンサチップ及びこれを備えたバイオセンサシステム、生体試料の温度測定方法、濃度測定方法は、温度に起因した濃度測定誤差の発生を効果的に抑制することができるという効果を奏することから、測定の高精度化が要求される各分野において広く適用可能である。
【符号の説明】
【０１７０】
１１  作用電極（電極）
１２  対電極（電極）
１３  検知電極
１６    空気抜き口
１７    導入口
２０    試薬層
４０    キャピラリ
１００    バイオセンサシステム
１０１    測定器
１０２    装着口
１０３    表示部
２００    センサチップ
２０１    絶縁基板
２０２    スペーサ
２０３    カバー
２０４    切欠部
３００    制御回路
３０１ａ，３０１ｂ，３０１ｃ  コネクタ
３０２    切換回路
３０３    電流／電圧変換回路
３０４    アナログ／デジタル（Ａ／Ｄ）変換回路
３０５    基準電圧源（第１電圧印加部、第２電圧印加部）
３０６    演算部（濃度測定部、第１電圧印加部、第２電圧印加部）
【図１】
0005608259.tif 000023
【図２】
0005608259.tif 000024
【図３】
0005608259.tif 000025
【図４】
0005608259.tif 000026
【図５Ａ】
0005608259.tif 000027
【図５Ｂ】
0005608259.tif 000028
【図６】
0005608259.tif 000029
【図７】
0005608259.tif 000030
【図８】
0005608259.tif 000031
【図９】
0005608259.tif 000032
【図１０Ａ】
0005608259.tif 000033
【図１０Ｂ】
0005608259.tif 000034
【図１０Ｃ】
0005608259.tif 000035
【図１０Ｄ】
0005608259.tif 000036
【図１１Ａ】
0005608259.tif 000037
【図１１Ｂ】
0005608259.tif 000038
【図１１Ｃ】
0005608259.tif 000039
【図１１Ｄ】
0005608259.tif 000040
【図１２Ａ】
0005608259.tif 000041
【図１２Ｂ】
0005608259.tif 000042
【図１３Ａ】
0005608259.tif 000043
【図１３Ｂ】
0005608259.tif 000044
【図１３Ｃ】
0005608259.tif 000045
【図１３Ｄ】
0005608259.tif 000046
【図１４Ａ】
0005608259.tif 000047
【図１４Ｂ】
0005608259.tif 000048
【図１５Ａ】
0005608259.tif 000049
【図１５Ｂ】
0005608259.tif 000050
【図１５Ｃ】
0005608259.tif 000051
【図１５Ｄ】
0005608259.tif 000052
【図１６Ａ】
0005608259.tif 000053
【図１６Ｂ】
0005608259.tif 000054
【図１７Ａ】
0005608259.tif 000055
【図１７Ｂ】
0005608259.tif 000056
【図１７Ｃ】
0005608259.tif 000057
【図１７Ｄ】
0005608259.tif 000058
【図１８Ａ】
0005608259.tif 000059
【図１８Ｂ】
0005608259.tif 000060
【図１９Ａ】
0005608259.tif 000061
【図１９Ｂ】
0005608259.tif 000062
【図１９Ｃ】
0005608259.tif 000063
【図１９Ｄ】
0005608259.tif 000064
【図２０Ａ】
0005608259.tif 000065
【図２０Ｂ】
0005608259.tif 000066
【図２１Ａ】
0005608259.tif 000067
【図２１Ｂ】
0005608259.tif 000068
【図２１Ｃ】
0005608259.tif 000069
【図２１Ｄ】
0005608259.tif 000070
【図２２Ａ】
0005608259.tif 000071
【図２２Ｂ】
0005608259.tif 000072
【図２３Ａ】
0005608259.tif 000073
【図２３Ｂ】
0005608259.tif 000074
【図２３Ｃ】
0005608259.tif 000075
【図２３Ｄ】
0005608259.tif 000076
【図２４Ａ】
0005608259.tif 000077
【図２４Ｂ】
0005608259.tif 000078
【図２４Ｃ】
0005608259.tif 000079
【図２４Ｄ】
0005608259.tif 000080
【図２５Ａ】
0005608259.tif 000081
【図２５Ｂ】
0005608259.tif 000082
【図２５Ｃ】
0005608259.tif 000083
【図２５Ｄ】
0005608259.tif 000084
【図２６Ａ】
0005608259.tif 000085
【図２６Ｂ】
0005608259.tif 000086
【図２６Ｃ】
0005608259.tif 000087
【図２６Ｄ】
0005608259.tif 000088
【図２７Ａ】
0005608259.tif 000089
【図２７Ｂ】
0005608259.tif 000090
【図２７Ｃ】
0005608259.tif 000091
【図２７Ｄ】
0005608259.tif 000092
【図２８Ａ】
0005608259.tif 000093
【図２８Ｂ】
0005608259.tif 000094
【図２８Ｃ】
0005608259.tif 000095
【図２８Ｄ】
0005608259.tif 000096
【図２９Ａ】
0005608259.tif 000097
【図２９Ｂ】
0005608259.tif 000098
【図２９Ｃ】
0005608259.tif 000099
【図２９Ｄ】
0005608259.tif 000100
【図３０Ａ】
0005608259.tif 000101
【図３０Ｂ】
0005608259.tif 000102
【図３０Ｃ】
0005608259.tif 000103
【図３０Ｄ】
0005608259.tif 000104
【図３１Ａ】
0005608259.tif 000105
【図３１Ｂ】
0005608259.tif 000106
【図３１Ｃ】
0005608259.tif 000107
【図３１Ｄ】
0005608259.tif 000108
【図３２Ａ】
0005608259.tif 000109
【図３２Ｂ】
0005608259.tif 000110
【図３２Ｃ】
0005608259.tif 000111
【図３２Ｄ】
0005608259.tif 000112
【図３３Ａ】
0005608259.tif 000113
【図３３Ｂ】
0005608259.tif 000114
【図３３Ｃ】
0005608259.tif 000115
【図３３Ｄ】
0005608259.tif 000116
【図３４Ａ】
0005608259.tif 000117
【図３４Ｂ】
0005608259.tif 000118
【図３４Ｃ】
0005608259.tif 000119
【図３４Ｄ】
0005608259.tif 000120
【図３５Ａ】
0005608259.tif 000121
【図３５Ｂ】
0005608259.tif 000122
【図３５Ｃ】
0005608259.tif 000123
【図３５Ｄ】
0005608259.tif 000124
【図３６Ａ】
0005608259.tif 000125
【図３６Ｂ】
0005608259.tif 000126
【図３６Ｃ】
0005608259.tif 000127
【図３６Ｄ】
0005608259.tif 000128
【図３７Ａ】
0005608259.tif 000129
【図３７Ｂ】
0005608259.tif 000130
【図３７Ｃ】
0005608259.tif 000131
【図３７Ｄ】
0005608259.tif 000132
【図３８Ａ】
0005608259.tif 000133
【図３８Ｂ】
0005608259.tif 000134
【図３８Ｃ】
0005608259.tif 000135
【図３８Ｄ】
0005608259.tif 000136
【図３９Ａ】
0005608259.tif 000137
【図３９Ｂ】
0005608259.tif 000138
【図３９Ｃ】
0005608259.tif 000139
【図３９Ｄ】
0005608259.tif 000140
【図４０Ａ】
0005608259.tif 000141
【図４０Ｂ】
0005608259.tif 000142
【図４０Ｃ】
0005608259.tif 000143
【図４０Ｄ】
0005608259.tif 000144
【図４１Ａ】
0005608259.tif 000145
【図４１Ｂ】
0005608259.tif 000146
【図４１Ｃ】
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【図４１Ｄ】
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【図４２Ａ】
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【図４２Ｂ】
0005608259.tif 000150
【図４２Ｃ】
0005608259.tif 000151
【図４２Ｄ】
0005608259.tif 000152
【図４３Ａ】
0005608259.tif 000153
【図４３Ｂ】
0005608259.tif 000154
【図４３Ｃ】
0005608259.tif 000155
【図４３Ｄ】
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【図４４Ａ】
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【図４４Ｂ】
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【図４４Ｃ】
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【図４４Ｄ】
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【図４５Ａ】
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【図４５Ｂ】
0005608259.tif 000162
【図４５Ｃ】
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【図４５Ｄ】
0005608259.tif 000164
【図４６Ａ】
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【図４６Ｂ】
0005608259.tif 000166
【図４６Ｃ】
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【図４６Ｄ】
0005608259.tif 000168
【図４７Ａ】
0005608259.tif 000169
【図４７Ｂ】
0005608259.tif 000170
【図４７Ｃ】
0005608259.tif 000171
【図４７Ｄ】
0005608259.tif 000172
【図４８Ａ】
0005608259.tif 000173
【図４８Ｂ】
0005608259.tif 000174
【図４８Ｃ】
0005608259.tif 000175
【図４９Ａ】
0005608259.tif 000176
【図４９Ｂ】
0005608259.tif 000177
【図４９Ｃ】
0005608259.tif 000178
【図４９Ｄ】
0005608259.tif 000179
【図５０Ａ】
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【図５０Ｂ】
0005608259.tif 000181
【図５０Ｃ】
0005608259.tif 000182
【図５１Ａ】
0005608259.tif 000183
【図５１Ｂ】
0005608259.tif 000184
【図５１Ｃ】
0005608259.tif 000185
【図５１Ｄ】
0005608259.tif 000186
【図５２Ａ】
0005608259.tif 000187
【図５２Ｂ】
0005608259.tif 000188
【図５２Ｃ】
0005608259.tif 000189
【図５２Ｄ】
0005608259.tif 000190
【図５３Ａ】
0005608259.tif 000191
【図５３Ｂ】
0005608259.tif 000192
【図５３Ｃ】
0005608259.tif 000193
【図５３Ｄ】
0005608259.tif 000194
【図５４Ａ】
0005608259.tif 000195
【図５４Ｂ】
0005608259.tif 000196
【図５４Ｃ】
0005608259.tif 000197
【図５４Ｄ】
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【図５５Ａ】
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【図５５Ｂ】
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【図５５Ｃ】
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【図５５Ｄ】
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【図５６Ａ】
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【図５６Ｂ】
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【図５６Ｃ】
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【図５６Ｄ】
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