(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
リンホトキシン−βレセプター（ＬＴβＲ）−Ｉｇ融合タンパク質を含む、被験体における自己免疫疾患の処置における使用のための組成物であって、該ＬＴβＲ−Ｉｇ融合タンパク質は、配列番号５または配列番号８に記載のアミノ酸配列を含む、組成物。
【請求項２】
請求項１に記載の組成物であって、前記ＬＴβＲ−Ｉｇ融合タンパク質は、配列番号５のＬＴβＲ細胞外ドメインにおけるＮ結合型グリコシル化部位の一方または両方においてＮ→Ｑの変異を含み、ここで、Ｎ結合型グリコシル化部位は、配列番号１１のアミノ酸１〜１９４を参照した場合のＮ１３およびＮ１５０に対応する、組成物。
【請求項３】
ＬＴβＲ−Ｉｇ融合タンパク質を含む、被験体における自己免疫疾患の処置における使用のための組成物であって、該ＬＴβＲ−Ｉｇ融合タンパク質はＬＴβＲ細胞外ドメインを含み、該ＬＴβＲ細胞外ドメインは、配列番号１０のアミノ酸１〜１９４を含む、組成物。
【請求項４】
請求項１〜３のいずれか１項に記載の組成物であって、前記ＬＴβＲ−Ｉｇ融合タンパク質のＩｇ部分は、配列番号５のＬＴβＲ  ＩｇドメインのＮ結合型グリコシル化部位においてＮ→Ｑ変異を含み、ここでＮ結合型グリコシル化部位は、配列番号１１を参照した場合のＮ２７６に対応する、組成物。
【請求項５】
請求項１〜３のいずれか１項に記載の組成物であって、前記ＬＴβＲ−Ｉｇ融合タンパク質の前記細胞外ドメインおよびＩｇ部分は、グリコシル化されていない、組成物。
【請求項６】
配列番号５に記載のアミノ酸配列からなるリンホトキシン−βレセプター（ＬＴβＲ）−Ｉｇ融合タンパク質を含む、薬学的組成物。
【請求項７】
多発性硬化症の処置における使用のための、請求項１〜６のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項８】
関節リウマチの処置における使用のための、請求項１〜６のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項９】
配列番号１１と比較して１または複数の変異を含むＬＴβＲ−Ｉｇ融合タンパク質を含む薬学的組成物であって、該１または複数の変異は、Ｎ１３Ｑ、Ｎ１５０Ｑ、およびＮ２７６Ｑからなる群より選択される、薬学的組成物。
【請求項１０】
前記ＬＴβＲ−Ｉｇ融合タンパク質は、Ｎ１３Ｑ変異を含む、請求項９に記載の組成物。
【請求項１１】
前記ＬＴβＲ−Ｉｇ融合タンパク質は、Ｎ１３Ｑ変異およびＮ１５０Ｑ変異を含む、請求項９に記載の組成物。
【請求項１２】
前記ＬＴβＲ−Ｉｇ融合タンパク質は、Ｎ１３Ｑ変異、Ｎ１５０Ｑ変異、およびＮ２７６Ｑ変異を含む、請求項９に記載の組成物。
【請求項１３】
請求項１〜６および９〜１２のいずれか１項に記載の組成物であって、前記ＬＴβＲ−Ｉｇ融合タンパク質は、該ＬＴβＲ−Ｉｇ融合タンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む核酸分子を、哺乳動物細胞中で発現させることによって作製される、組成物。
【請求項１４】
前記ＬＴβＲ−Ｉｇ融合タンパク質のＩｇ部分は、改変Ｆｃ領域を含む、請求項１〜６および９〜１２のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１５】
前記改変Ｉｇ部分は、ＩｇＧ１アイソタイプのＦｃ領域を含む、請求項１４に記載の組成物。
【請求項１６】
前記改変Ｉｇ部分は、ヒンジ領域に変異を含む、請求項１４に記載の組成物。
【請求項１７】
前記ＬＴβＲ−Ｉｇ融合タンパク質のＩｇ部分は、グリコシル化されていない、請求項１３に記載の組成物。
【請求項１８】
前記発現が、製造スケールで行われる、請求項１３に記載の組成物。
【請求項１９】
請求項１〜６および９〜１２のいずれか１項に記載の組成物および薬学的に受容可能なキャリアを含む、薬学的組成物。
【請求項２０】
患者における自己免疫疾患の処置における使用のための、請求項１９に記載の薬学的組成物。
【請求項２１】
前記自己免疫疾患が、多発性硬化症または関節リウマチである、請求項２０に記載の薬学的組成物。
【請求項２２】
配列番号１１と比較して１または複数の変異を含むＬＴβＲ−Ｉｇ融合タンパク質を含む単離ポリペプチドであって、該１または複数の変異は、Ｎ１３Ｑ、Ｎ１５０ＱおよびＮ２７６Ｑからなる群より選択される、単離ポリペプチド。
【請求項２３】
請求項２２に記載のポリペプチドをコードする、単離核酸分子。
【請求項２４】
請求項２３に記載の核酸分子を含む、ベクター。
【請求項２５】
請求項２４に記載のベクターを発現する、単離宿主細胞または培養宿主細胞。
【請求項２６】
チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞である、請求項２５に記載の細胞。
【請求項２７】
配列番号５と比較して１または複数の変異を含むＬＴβＲ−Ｉｇ融合タンパク質を含む単離ポリペプチドであって、該１または複数の変異は、配列番号１１を参照した場合のＮ１３Ｑ、Ｎ１５０ＱおよびＮ２７６Ｑからなる群より選択される、単離ポリペプチド。
【請求項２８】
請求項２７に記載のポリペプチドをコードする、単離核酸分子。
【請求項２９】
請求項２８に記載の核酸分子を含む、ベクター。
【請求項３０】
請求項２９に記載のベクターを発現する、単離宿主細胞または培養宿主細胞。
【請求項３１】
チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞である、請求項３０に記載の細胞。
【請求項３２】
請求項１に記載の組成物におけるリンホトキシン−βレセプター（ＬＴβＲ）−Ｉｇ融合タンパク質のアミノ酸配列をコードする、単離核酸分子。
【請求項３３】
前記核酸分子は、配列番号７に記載されるものである、請求項３２に記載の単離核酸分子。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
（関連出願）
本出願は、２００７年９月１５日に出願された米国仮特許出願第６０／９１８，５１８号に対する優先権を主張する。
【０００２】
（背景）
タンパク質不均一性は、ある範囲の翻訳後修飾によって引き起こされ得る。タンパク質不均一性は、しばしば、種々のタイプの翻訳後修飾（カルボキシル化、ヒドロキシル化、タンパク質分解プロセシング、硫酸化（ｓｕｆｌａｔｉｏｎ）、およびグリコシル化が挙げられる）から生じ、そのうちグリコシル化は、最も一般的な修飾である（非特許文献１）。翻訳後修飾は、潜在的に、生成物生成（例えば、適切なタンパク質折りたたみの程度に影響を及ぼすことによって）、安定性、ならびにある範囲の薬物動態学的パラメーターおよび薬力学的パラメーター、ならびに安全性および免疫原性に影響を及ぼし得る。上記治療用生物製剤の翻訳後修飾、もしくはタンパク質ベースの生物医薬品は、それらの治療適用に関してタンパク質特性に影響を及ぼし得る。
【０００３】
Ｎ末端および／もしくはＣ末端の不均一性は、タンパク質ベースの生物医薬品の製造において考慮されなければならないタンパク質不均一性の例である。Ｎ末端不均一性は、上記タンパク質のアミノ末端部分におけるタンパク質分解プロセシングから生じ、ここでこのようなプロセシングは、種々のサイズを有するタンパク質の集団を生じ得る。Ｎ末端タンパク質分解におけるバリエーションは、単一の配列を含むタンパク質において生じ得る。さらに、Ｎ末端グルタミン残基は、自発的環化を受けて、ピログルタミン酸を形成し得る。従って、治療目的で使用され得る均一なタンパク質集団を得ることは、しばしば、難題を示す。
【０００４】
リンホトキシンβレセプター（ＬＴＢＲ）は、腫瘍壊死因子レセプター（ＴＮＦＲ）ファミリーのメンバーである。上記レセプターは、大部分のリンパ器官の実質および間質における細胞表面に発現されるが、Ｔリンパ球およびＢリンパ球上には存在しない。ＬＴα／βヘテロトリマー（ＬＴ）によるＬＴＢＲを介するシグナル伝達は、リンパ系分化の間に重要である、ＬＴＢＲはまた、リガンドＬＩＧＨＴ（ｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓ  ｔｏ  Ｌｙｍｐｈｏｔｏｘｉｎｓ，  ｅｘｈｉｂｉｔｓ  ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，  ａｎｄ  ｃｏｍｐｅｔｅｓ  ｗｉｔｈ  ｈｅｒｐｅｓ  ｓｉｍｐｌｅｘ  ｖｉｒｕｓ  ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄ  ｆｏｒ  ＨＶＥＭ，  ａ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ  ｂｙ  Ｔ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ）を結合することが公知であり、このことは、Ｔ細胞駆動事象において（末梢および胸腺の両方において）影響を及ぼした。ＬＴおよびＬＩＧＨＴは、活性化リンパ球の表面上で発現される。ＬＴ経路を可溶性デコイＬＴＢＲでブロックすることは、種々の動物モデルにおいて自己免疫疾患を処置するために有効であることが示された。
【０００５】
低下した不均一性を有する可溶性形態のＬＴＢＲおよび最適なこれら分子の投与のための投与レジメンの開発は、非常に有益である。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Ｗａｌｓｈ  ａｎｄ  Ｊｅｆｆｅｒｉｓ（２００６）Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈ  ２４（１０）：１２４１
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００７】
（発明の要旨）
一局面において、本発明は、長さが１９３アミノ酸もしくは１９４アミノ酸の改変ＬＴ−β−Ｒ細胞外ドメインおよび長さが２２７アミノ酸の改変Ｉｇ部分を含むリンホトキシン−βレセプター（ＬＴ−β−Ｒ）−Ｉｇ−融合タンパク質の集団を含む組成物に関し、ここで上記ＬＴ−β−Ｒ−Ｉｇ−融合タンパク質のうちの少なくとも９０％は、配列番号２１に示される野生型ＬＴ−β−Ｒ細胞外ドメインの成熟形態のＮ末端からわずか５アミノ酸だけ失っており、上記ＬＴ−β−Ｒ−Ｉｇ−融合タンパク質は、Ｎ末端ピログルタミン酸を欠いている。
【０００８】
一実施形態において、上記改変ＬＴ−β−Ｒ−Ｉｇ融合タンパク質のＮ末端アミノ酸は、非極性アミノ酸である。
【０００９】
一実施形態において、上記非極性アミノ酸は、バリン（配列番号２１の野生型ＬＴ−β−Ｒ細胞外ドメインの成熟形態のアミノ酸６）もしくはアラニン（配列番号２１の野生型ＬＴ−β−Ｒ細胞外ドメインの成熟形態のアミノ酸５）のいずれかである。
【００１０】
一実施形態において、上記Ｎ末端アミノ酸ＬＴ−β−Ｒ−Ｉｇ−融合タンパク質のうちの少なくとも９５％は、バリン（配列番号２１の野生型ＬＴ−β−Ｒ細胞外ドメインの成熟形態のアミノ酸６）もしくはアラニン（配列番号２１の野生型ＬＴ−β−Ｒ細胞外ドメインの成熟形態のアミノ酸５）のいずれかである。
【００１１】
一実施形態において、上記組成物は、哺乳動物細胞において、配列番号４に示されるＬＴＢＲの細胞外ドメインをコードするヌクレオチド配列を含む核酸分子を発現することによって作製される。
【００１２】
一実施形態において、上記核酸分子は、配列番号３に示される配列を含む。
【００１３】
一実施形態において、改変Ｉｇ部分は、ＩｇＧ１アイソタイプのＦｃ領域を含む。
【００１４】
一実施形態において、上記改変Ｉｇ部分は、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含む。
【００１５】
一実施形態において、上記Ｉｇ部分は、グリコシル化されていない。
【００１６】
一実施形態において、上記組成物は、哺乳動物細胞において、配列番号５に示されるＬＴ−β−Ｒ−Ｉｇ融合タンパク質をコードする核酸分子を発現することによって作製される。
【００１７】
一実施形態において、上記核酸分子は、配列番号７に示される配列を含む。
【００１８】
一実施形態において、上記発現する工程は、製造スケールにおいて行われる。
【００１９】
一局面において、本発明は、改変ＬＴ−β−Ｒ細胞外ドメインおよび改変Ｉｇ部分を含むリンホトキシン−βレセプター−免疫グロブリン（ＬＴ−β−Ｒ−Ｉｇ）−融合タンパク質の集団を含む組成物に関し、ここで上記改変ＬＴ−β−Ｒ細胞外ドメインは、グリコシル化されていない。
【００２０】
一実施形態において、上記ＬＴＢＲのグリコシル化されていない細胞外ドメインは、配列番号１０のアミノ酸１〜１９４を含む。
【００２１】
別の局面において、本発明は、リンホトキシン−βレセプター−免疫グロブリン（ＬＴ−β−Ｒ−Ｉｇ）−融合タンパク質の集団を含む組成物に関し、上記融合タンパク質は、長さが１９３アミノ酸もしくは１９４アミノ酸の改変ＬＴ−β−Ｒ細胞外ドメインおよび改変Ｉｇ部分を含み、ここで上記集団は、野生型ＬＴ−β−Ｒ−Ｉｇ融合タンパク質と比較して、低下したＮ末端ピログルタミン酸形成および低下したＣ末端不均一性を有する。
【００２２】
一実施形態において、上記ＬＴ−β−Ｒ−Ｉｇ−融合タンパク質のうちの少なくとも９０％は、配列番号４もしくは配列番号２３のアミノ酸配列を示す改変ＬＴ−β−Ｒ細胞外ドメインを含む。
【００２３】
一実施形態において、上記改変Ｉｇ部分は、ヒンジ領域における変異を含む。
【００２４】
一局面において、本発明は、長さが１９３アミノ酸もしくは１９４アミノ酸の改変ＬＴ−β−Ｒ細胞外ドメインおよび長さが２２７アミノ酸の改変Ｉｇ部分を含むリンホトキシン−βレセプター（ＬＴ−β−Ｒ）−Ｉｇ−融合タンパク質の集団ならびに薬学的に受容可能なキャリアを含む薬学的組成物に関し、ここで上記ＬＴ−β−Ｒ−Ｉｇ−融合タンパク質のうちの少なくとも９０％は、配列番号２１に示される野生型ＬＴ−β−Ｒ細胞外ドメインの成熟形態のＮ末端からわずか５アミノ酸だけ失っており、そして上記ＬＴ−β−Ｒ−Ｉｇ−融合タンパク質は、Ｎ末端ピログルタミン酸を欠いている。
【００２５】
一実施形態において、上記改変ＬＴ−β−Ｒ−Ｉｇ融合タンパク質のＮ末端アミノ酸は、非極性アミノ酸である。
【００２６】
一実施形態において、上記非極性アミノ酸は、バリン（配列番号２１の野生型ＬＴ−β−Ｒ細胞外ドメインの成熟形態のアミノ酸６）もしくはアラニン（配列番号２１の野生型ＬＴ−β−Ｒ細胞外ドメインの成熟形態のアミノ酸５）のいずれかである。
【００２７】
一実施形態において、上記ＬＴ−β−Ｒ−Ｉｇ−融合タンパク質のうちの少なくとも９５％のＮ末端アミノ酸は、バリン（配列番号２１の野生型ＬＴ−β−Ｒ細胞外ドメインの成熟形態のアミノ酸６）もしくはアラニン（配列番号２１の野生型ＬＴ−β−Ｒ細胞外ドメインの成熟形態のアミノ酸５）のいずれかである。
【００２８】
一実施形態において、上記組成物は、哺乳動物細胞において、配列番号４に示されるＬＴＢＲの細胞外ドメインをコードするヌクレオチド配列を含む核酸分子を発現することによって、作製される。
【００２９】
一局面において、本発明は、請求項２３に記載の薬学的組成物を被験体に投与する工程を包含する、自己免疫障害を処置するための方法に関する。
【００３０】
一実施形態において、上記自己免疫障害は、関節リウマチ、クローン病、もしくは全身エリテマトーデス（ＳＬＥ）からなる群より選択される。
【００３１】
一実施形態において、本発明は、リンホトキシン−βレセプター−免疫グロブリン（ＬＴ−β−Ｒ−Ｉｇ）−融合タンパク質の集団および薬学的に受容可能なキャリアを含む薬学的組成物に関し、上記融合タンパク質は、長さが１９３アミノ酸もしくは１９４アミノ酸の改変ＬＴ−β−Ｒ細胞外ドメインおよび改変Ｉｇ部分を含み、ここで上記集団は、野生型ＬＴ−β−Ｒ−Ｉｇ融合タンパク質と比較して、低下したＮ末端ピログルタミン酸形成および低下したＣ末端不均一性を有する。
【００３２】
一実施形態において、上記ＬＴ−β−Ｒ−Ｉｇ−融合タンパク質のうちの少なくとも９０％は、配列番号４もしくは配列番号２３のアミノ酸配列を示す改変ＬＴ−β−Ｒ  細胞外ドメインを含む。
【００３３】
一実施形態において、上記改変Ｉｇ部分は、ヒンジ領域における変異を含む。
【００３４】
一実施形態において、上記アミノ酸配列は、配列番号５に示される。
【００３５】
一局面において、本発明は、請求項２９に記載の薬学的組成物を被験体に投与する工程を包含する、自己免疫障害を処置するための方法に関する。
【００３６】
一実施形態において、上記自己免疫障害は、関節リウマチ、クローン病、もしくは全身エリテマトーデス（ＳＬＥ）からなる群より選択される。
【００３７】
一実施形態において、上記自己免疫障害は関節リウマチである。
【００３８】
一実施形態において、上記薬学的組成物は、２週間に１回、約０．６〜３ｍｇ／ｋｇの用量において上記被験体に投与される。
【００３９】
一実施形態において、上記薬学的組成物は、皮下投与される。
【００４０】
一局面において、本発明は、長さが１９３アミノ酸もしくは１９４アミノ酸の改変ＬＴ−β−Ｒ細胞外ドメインおよび長さが２２７アミノ酸の改変Ｉｇ部分を含む単離されたポリペプチドに関し、ここで上記ポリペプチドは、配列番号２１に示される野生型ＬＴ−β−Ｒ細胞外ドメインの成熟形態のＮ末端からわずか５アミノ酸だけ失っており、そして上記ポリペプチドは、Ｎ末端ピログルタミン酸を欠いている。
【００４１】
一実施形態において、上記Ｎ末端アミノ酸は非極性アミノ酸である。
【００４２】
一実施形態において、上記非極性アミノ酸は、バリン（配列番号２１の野生型ＬＴ−β−Ｒ細胞外ドメインの成熟形態のアミノ酸６）もしくはアラニン（配列番号２１の野生型ＬＴ−β−Ｒ細胞外ドメインの成熟形態のアミノ酸５）のいずれかである。
【００４３】
一実施形態において、上記ポリペプチドは、哺乳動物細胞において、配列番号４に示されるＬＴＢＲの細胞外ドメインをコードするヌクレオチド配列を含む核酸分子を発現することによって作製される。
【００４４】
一実施形態において、本発明は、本発明のポリペプチドをコードする単離された核酸分子に関する。
【００４５】
一実施形態において、上記核酸分子は、配列番号７に示されるヌクレオチド配列から構成される。
【００４６】
一実施形態において、本発明は、本発明の核酸分子を含むベクターに関する。
【００４７】
一実施形態において、本発明は、本発明のベクターを発現する宿主細胞に関する。
【００４８】
一実施形態において、上記細胞は、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞である。
【００４９】
一実施形態において、本発明は、改変ＬＴ−β−Ｒ細胞外ドメインおよび改変Ｉｇ部分を含むリンホトキシン−βレセプター（ＬＴ−β−Ｒ）−Ｉｇ−融合タンパク質の集団を含む組成物を作製するためのプロセスに関し、ここで上記ＬＴ−β−Ｒ−Ｉｇ−融合タンパク質のうちの少なくとも９０％は、配列番号２１に示される野生型ＬＴ−β−Ｒ細胞外ドメインの成熟形態のＮ末端からわずか５アミノ酸だけ失っており、上記プロセスは、哺乳動物細胞において、配列番号８に示されるＬＴ−β−Ｒ−Ｉｇ融合タンパク質をコードする核酸分子を発現する工程、上記集団を、上記培養上清から得る工程、および必要に応じて、上記上清を精製して、それによって、改変ＬＴ−β−Ｒ細胞外ドメインおよび改変Ｉｇ部分を含むリンホトキシン−βレセプター（ＬＴ−β−Ｒ）−Ｉｇ−融合タンパク質の集団を含む組成物を得る工程を包含し、ここで上記ＬＴ−β−Ｒ−Ｉｇ−融合タンパク質のうちの少なくとも９０％は、配列番号２１に示される野生型ＬＴ−β−Ｒ部分の成熟形態のＮ末端からわずか５アミノ酸だけ失っている。
【００５０】
一実施形態において、上記核酸分子は、配列番号７に示されるヌクレオチド配列を含む。
【００５１】
一実施形態において、上記核酸分子は、配列番号７に示されるヌクレオチド配列からなる。
【００５２】
一実施形態において、本発明は、ヒト被験体における関節リウマチを処置するための方法に関し、上記方法は、上記被験体に、ある用量のＬＴ−β−Ｒ−Ｉｇ融合タンパク質を投与する工程を包含し、ここで上記用量は、上記被験体の血清において、約０．１４μｇ／ｍｌ〜約３．５μｇ／ｍｌの平均濃度を維持するために十分である。
【００５３】
別の局面において、本発明は、ヒト被験体における関節リウマチを処置するための方法に関し、上記方法は、上記被験体に、ある用量のＬＴ−β−Ｒ−Ｉｇ融合タンパク質を投与する工程を包含し、ここで上記用量は、上記被験体の血清において、約０．６μｇ／ｍｌの最小平均濃度（ａｎ  ａｖｅｒａｇｅ  ａ  ｍｉｎｉｍａｌ  ａｖｅｒａｇｅ  ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ）を維持するために十分である。
【００５４】
一実施形態において、上記ＬＴＢＲ−Ｉｇ融合タンパク質は、配列番号５に示されるアミノ酸配列を含む。
【００５５】
一実施形態において、上記濃度は、ＬＴ−β−Ｒ−Ｉｇ融合タンパク質を、７〜６０日ごとに１回、約０．０１〜約５ｍｇ／ｋｇの用量で投与することによって達成される。
【００５６】
一実施形態において、本発明は、ヒト被験体における関節リウマチを処置するための方法に関し、上記方法は、上記被験体に、７〜３０日ごとに多くて２回、約０．６〜３ｍｇ／ｋｇの用量のＬＴ−β−Ｒ−Ｉｇ融合タンパク質を投与する工程を包含する。
【００５７】
一実施形態において、上記方法は、上記被験体に、７〜１４日ごとに１回、約０．６〜３ｍｇ／ｋｇの用量のＬＴ−β−Ｒ−Ｉｇ融合タンパク質を投与する工程を包含する。
【００５８】
一実施形態において、投与は、１４〜３０日ごとに１回である。
【００５９】
一実施形態において、投与は、２８〜６０日ごとに１回である。
【００６０】
一実施形態において、投与は、７〜３０日ごとに１回である。
【００６１】
一実施形態において、本発明は、ヒト被験体における自己免疫障害を処置するための方法に関し、上記方法は、長さが１９３アミノ酸もしくは１９４アミノ酸の改変ＬＴ−β−Ｒ細胞外ドメインを含むＬＴ−β−Ｒ−Ｉｇ融合タンパク質の集団を含むある用量の薬学的組成物を上記被験体に投与する工程を包含し、ここで上記ＬＴ−β−Ｒ−Ｉｇ−融合タンパク質のうちの少なくとも９０％は、配列番号２１に示される野生型ＬＴ−β−Ｒ細胞外ドメインの成熟形態のＮ末端からわずか５アミノ酸だけ失っており、そして上記用量は、上記被験体に血清において、約０．６μｇ／ｍｌの最小平均濃度を維持するために十分である。
【００６２】
一実施形態において、上記ＬＴ−β−Ｒ−Ｉｇ融合タンパク質は、改変Ｉｇ部分をさらに含む。
【００６３】
一実施形態において、上記自己免疫障害は、関節リウマチ、クローン病、もしくは全身エリテマトーデス（ＳＬＥ）からなる群より選択される。
【００６４】
一実施形態において、上記薬学的組成物は、配列番号５に示されるアミノ酸配列を含む。
【００６５】
一実施形態において、投与は１ヶ月に２回である。
【００６６】
一実施形態において、投与は１ヶ月に１回である。
【００６７】
一実施形態において、投与は皮下である。
【００６８】
一実施形態において、上記用量は、約１ｍｇ／ｋｇである。
【００６９】
一実施形態において、上記用量は、約３ｍｇ／ｋｇである。
【００７０】
一実施形態において、上記用量は、約７〜２０日ごとに約１ｍｇ／ｋｇ投与される。
【００７１】
一実施形態において、上記用量は、約１４〜３０日ごとに約３ｍｇ／ｋｇ投与される。
【００７２】
一実施形態において、上記用量は、約１４日ごとに約１ｍｇ／ｋｇ投与される。
【００７３】
一実施形態において、上記自己免疫障害は関節リウマチであり、上記被験体は、関節リウマチと診断された後であって、上記ＬＴ−β−Ｒ−Ｉｇ融合タンパク質の投与の前に、関節リウマチ用薬物で処置されている。
【００７４】
一実施形態において、上記関節リウマチ用薬物は、ＤＭＡＲＤ、ＮＳＡＩＤ、およびコルチコステロイドからなる群より選択される。
【００７５】
一実施形態において、上記ヒトは、ＤＭＡＲＤ不十分応答者である
一実施形態において、上記関節リウマチ用薬物は、ＴＮＦインヒビターである。
【００７６】
一実施形態において、上記関節リウマチ用薬物は、アダリムマブ（Ｈｕｍｉｒａ（登録商標））、エタネルセプト（Ｅｎｂｒｅｌ（登録商標））、もしくはインフリキシマブ（Ｒｅｍｉｃａｄｅ（登録商標））である。
【００７７】
一実施形態において、ＬＴ−β−Ｒ−Ｉｇは、関節リウマチ用薬物と組み合わせて投与される。
【００７８】
一実施形態において、上記ヒトは、上記関節リウマチ用薬物に対する応答が、ＬＴ−β−Ｒ−Ｉｇの投与前に不十分であるか否かを決定するために評価される。
【００７９】
一実施形態において、上記ヒトは、上記関節リウマチ用薬物に対する不十分応答を有することが決定され、次いで、上記ヒトは、ＬＴ−β−Ｒ−Ｉｇを投与される。
【００８０】
一実施形態において、上記ヒトは、関節リウマチの第１の発現に関して無症候性であり、関節リウマチの第２の発現に関して症候性である。
【００８１】
一実施形態において、ＬＴ−β−Ｒ−Ｉｇは、上記関節リウマチ用薬物の代わりに投与される。
【００８２】
一実施形態において、投与は、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）インヒビターとの組み合わせにおいてである。
【００８３】
一実施形態において、上記ＴＮＦインヒビターは、アダリムマブ（Ｈｕｍｉｒａ（登録商標））、エタネルセプト（Ｅｎｂｒｅｌ（登録商標））、もしくはインフリキシマブ（Ｒｅｍｉｃａｄｅ（登録商標））である。
【００８４】
一実施形態において、上記ヒトは、抗ＴＮＦ不十分応答者である。
【００８５】
一実施形態において、投与は、非ステロイド性抗炎症剤（ＮＳＡＩＤ）、コルチコステロイド、もしくは疾患改変抗リウマチ薬（ＤＭＡＲＤ）との組み合わせにおいてである。
【００８６】
一実施形態において、投与は、メトトレキサートとの組み合わせにおいてである。
【００８７】
一実施形態において、上記ヒトは、ＤＭＡＲＤ不十分応答者である。
本発明はまた、以下の項目を提供する。
（項目１）
リンホトキシン−βレセプター（ＬＴ−β−Ｒ）−Ｉｇ−融合タンパク質の集団を含む組成物であって、該組成物は、長さが１９３アミノ酸もしくは１９４アミノ酸の改変ＬＴ−β−Ｒ細胞外ドメインおよび長さが２２７アミノ酸の改変Ｉｇ部分を含み、ここで該ＬＴ−β−Ｒ−Ｉｇ−融合タンパク質のうちの少なくとも９０％は、配列番号２１に示される野生型ＬＴ−β−Ｒ細胞外ドメインの成熟形態のＮ末端からわずか５アミノ酸だけを失っており、そして該ＬＴ−β−Ｒ−Ｉｇ−融合タンパク質は、Ｎ末端のピログルタミン酸を欠いている、組成物。
（項目２）
上記改変ＬＴ−β−Ｒ−Ｉｇ融合タンパク質のＮ末端アミノ酸は、非極性アミノ酸である、項目１に記載の組成物。
（項目３）
上記非極性アミノ酸は、バリン（配列番号２１の野生型ＬＴ−β−Ｒ細胞外ドメインの成熟形態のアミノ酸６）もしくはアラニン（配列番号２１の野生型ＬＴ−β−Ｒ細胞外ドメインの成熟形態のアミノ酸５）のいずれかである、項目２に記載の組成物。
（項目４）
上記ＬＴ−β−Ｒ−Ｉｇ−融合タンパク質のうちの少なくとも９５％のＮ末端アミノ酸は、バリン（配列番号２１の野生型ＬＴ−β−Ｒ細胞外ドメインの成熟形態のアミノ酸６）もしくはアラニン（配列番号２１の野生型ＬＴ−β−Ｒ細胞外ドメインの成熟形態のアミノ酸５）のいずれかである、項目１に記載の組成物。
（項目５）
哺乳動物細胞において、配列番号４に示されるＬＴＢＲの細胞外ドメインをコードするヌクレオチド配列を含む核酸分子を発現することによって作製される、項目１、３もしくは４のいずれか１項に記載の組成物。
（項目６）
上記核酸分子は、配列番号３に示される配列を含む、項目５に記載の組成物。
（項目７）
改変Ｉｇ部分は、ＩｇＧ１アイソタイプのＦｃ領域を含む、項目５に記載の組成物。
（項目８）
上記改変Ｉｇ部分は、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含む、項目５に記載の組成物。
（項目９）
上記Ｉｇ部分は、グリコシル化されていない、項目５に記載の組成物。
（項目１０）
哺乳動物細胞において、配列番号５に示されるＬＴ−β−Ｒ−Ｉｇ融合タンパク質をコードする核酸分子を発現することによって作製される、項目５に記載の組成物。
（項目１１）
上記核酸分子は、配列番号７に示される配列を含む、項目１０に記載の組成物。
（項目１２）
上記発現する工程は、製造スケールにおいて行われる、項目１１に記載の組成物。
（項目１３）
改変ＬＴ−β−Ｒ細胞外ドメインおよび改変Ｉｇ部分を含むリンホトキシン−βレセプター−免疫グロブリン（ＬＴ−β−Ｒ−Ｉｇ）−融合タンパク質の集団を含む組成物であって、ここで該改変ＬＴ−β−Ｒ細胞外ドメインはグリコシル化されていない、組成物。
（項目１４）
上記ＬＴＢＲのグリコシル化されていない細胞外ドメインは、配列番号１０のアミノ酸１〜１９４を含む、項目１３に記載の組成物。
（項目１５）
リンホトキシン−βレセプター−免疫グロブリン（ＬＴ−β−Ｒ−Ｉｇ）−融合タンパク質の集団を含む組成物であって、該融合タンパク質は、長さが１９３アミノ酸もしくは１９４アミノ酸の改変ＬＴ−β−Ｒ細胞外ドメインおよび改変Ｉｇ部分を含み、ここで該集団は、野生型ＬＴ−β−Ｒ−Ｉｇ融合タンパク質と比較して、低下したＮ末端ピログルタミン酸形成および低下したＣ末端不均一性を有する、組成物。
（項目１６）
上記ＬＴ−β−Ｒ−Ｉｇ−融合タンパク質のうちの少なくとも９０％は、配列番号４もしくは配列番号２３のアミノ酸配列を示す改変ＬＴ−β−Ｒ細胞外ドメインを含む、項目１５に記載の組成物。
（項目１７）
上記改変Ｉｇ部分は、ヒンジ領域において変異を含む、項目１５に記載の組成物。
（項目１９）
長さが１９３アミノ酸もしくは１９４アミノ酸の改変ＬＴ−β−Ｒ細胞外ドメインおよび長さが２２７アミノ酸の改変Ｉｇ部分を含むリンホトキシン−βレセプター（ＬＴ−β−Ｒ）−Ｉｇ−融合タンパク質の集団、および薬学的に受容可能なキャリアを含む薬学的組成物であって、ここで該ＬＴ−β−Ｒ−Ｉｇ−融合タンパク質のうちの少なくとも９０％は、配列番号２１に示される野生型ＬＴ−β−Ｒ細胞外ドメインの成熟形態のＮ末端からわずか５アミノ酸だけ失っており、そして該ＬＴ−β−Ｒ−Ｉｇ−融合タンパク質は、Ｎ末端ピログルタミン酸を欠いている、組成物。
（項目２０）
上記改変ＬＴ−β−Ｒ−Ｉｇ融合タンパク質のＮ末端アミノ酸は、非極性アミノ酸である、項目１９に記載の組成物。
（項目２１）
上記非極性アミノ酸は、バリン（配列番号２１の野生型ＬＴ−β−Ｒ細胞外ドメインの成熟形態のアミノ酸６）もしくはアラニン（配列番号２１の野生型ＬＴ−β−Ｒ細胞外ドメインの成熟形態のアミノ酸５）のいずれかである、項目２０に記載の組成物。
（項目２２）
上記ＬＴ−β−Ｒ−Ｉｇ−融合タンパク質のうちの少なくとも９５％のＮ末端アミノ酸は、バリン（配列番号２１の野生型ＬＴ−β−Ｒ細胞外ドメインの成熟形態のアミノ酸６）もしくはアラニン（配列番号２１の野生型ＬＴ−β−Ｒ細胞外ドメインの成熟形態のアミノ酸５）のいずれかである、項目１９に記載の組成物。
（項目２３）
哺乳動物細胞において、配列番号４に示されるＬＴＢＲの細胞外ドメインをコードするヌクレオチド配列を含む核酸分子を発現することによって作製される、項目１９、２１もしくは２２のいずれかに記載の組成物。
（項目２４）
項目２３に記載の薬学的組成物を、被験体に投与する工程を包含する、自己免疫障害を処置するための方法。
（項目２５）
上記自己免疫障害は、関節リウマチ、クローン病、もしくは全身エリテマトーデス（ＳＬＥ）からなる群より選択される、項目２４に記載の方法。
（項目２６）
リンホトキシン−βレセプター−免疫グロブリン（ＬＴ−β−Ｒ−Ｉｇ）−融合タンパク質の集団および薬学的に受容可能なキャリアを含む薬学的組成物であって、該融合タンパク質は、長さが１９３アミノ酸もしくは１９４アミノ酸の改変ＬＴ−β−Ｒ細胞外ドメインおよび改変Ｉｇ部分を含み、ここで該集団は、野生型ＬＴ−β−Ｒ−Ｉｇ融合タンパク質と比較して、低下したＮ末端ピログルタミン酸形成および低下したＣ末端不均一性を有する、薬学的組成物。
（項目２７）
上記ＬＴ−β−Ｒ−Ｉｇ−融合タンパク質のうちの少なくとも９０％は、配列番号４もしくは配列番号２３のアミノ酸配列を示す改変ＬＴ−β−Ｒ細胞外ドメインを含む、項目２６に記載の薬学的組成物。
（項目２８）
上記改変Ｉｇ部分は、ヒンジ領域における変異を含む、項目２６に記載の薬学的組成物。
（項目２９）
配列番号５に示されるアミノ酸配列を含む、薬学的組成物。
（項目３０）
項目２９に記載の薬学的組成物を被験体に投与する工程を包含する、自己免疫障害を処置する方法。
（項目３１）
上記自己免疫障害は、関節リウマチ、クローン病、もしくは全身エリテマトーデス（ＳＬＥ）からなる群より選択される、項目３０に記載の方法。
（項目３２）
上記自己免疫障害は関節リウマチである、項目３０に記載の方法。
（項目３３）
上記薬学的組成物は、２週間に１回、約０．６〜３ｍｇ／ｋｇの用量において上記被験体に投与される、項目３２に記載の方法。
（項目３４）
上記薬学的組成物は、皮下投与される、項目３０に記載の方法。
（項目３５）
長さが１９３アミノ酸もしくは１９４アミノ酸の改変ＬＴ−β−Ｒ細胞外ドメインおよび長さが２２７アミノ酸の改変Ｉｇ部分を含む単離されたポリペプチドであって、ここで該ポリペプチドは、配列番号２１に示される野生型ＬＴ−β−Ｒ細胞外ドメインの成熟形態のＮ末端からわずか５アミノ酸だけ失っており、該ポリペプチドは、Ｎ末端ピログルタミン酸を欠いている、単離されたポリペプチド。
（項目３６）
上記Ｎ末端アミノ酸は、非極性アミノ酸である、項目３５に記載の単離されたポリペプチド。
（項目３７）
上記非極性アミノ酸は、バリン（配列番号２１の野生型ＬＴ−β−Ｒ細胞外ドメインの成熟形態のアミノ酸６）もしくはアラニン（配列番号２１の野生型ＬＴ−β−Ｒ細胞外ドメインの成熟形態のアミノ酸５）のいずれかである、項目３６に記載の単離されたポリペプチド。
（項目３８）
哺乳動物細胞において、配列番号４に示されるＬＴＢＲの細胞外ドメインをコードするヌクレオチド配列を含む核酸分子を発現することによって作製される、項目３５に記載の単離されたポリペプチド。
（項目３９）
項目３５〜３９のいずれか１項に記載のポリペプチドをコードする、単離された核酸分子。
（項目４０）
上記核酸分子は、配列番号７に示されるヌクレオチド配列から構成される、項目３９に記載の単離された核酸分子。
（項目４１）
項目４０に記載の核酸分子を含む、ベクター。
（項目４２）
項目４１に記載のベクターを発現する、宿主細胞。
（項目４３）
上記細胞は、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞である、項目４２に記載の細胞。
（項目４４）
改変ＬＴ−β−Ｒ細胞外ドメインおよび改変Ｉｇ部分を含むリンホトキシン−βレセプター（ＬＴ−β−Ｒ）−Ｉｇ−融合タンパク質の集団を含む組成物を作製するためのプロセスであって、ここで該ＬＴ−β−Ｒ−Ｉｇ−融合タンパク質のうちの少なくとも９０％は、配列番号２１に示される野生型ＬＴ−β−Ｒ細胞外ドメインの成熟形態のＮ末端からわずか５アミノ酸だけ失っており、該プロセスは、哺乳動物細胞において、配列番号８に示されるＬＴ−β−Ｒ−Ｉｇ融合タンパク質をコードする核酸分子を発現する工程、該集団を、該培養上清から得る工程、および必要に応じて、該上清を精製して、それによって、改変ＬＴ−β−Ｒ細胞外ドメインおよび改変Ｉｇ部分を含むリンホトキシン−βレセプター（ＬＴ−Β−Ｒ）−Ｉｇ−融合タンパク質の集団を含む組成物を得る工程を包含し、ここで該ＬＴ−β−Ｒ−Ｉｇ−融合タンパク質のうちの少なくとも９０％は、配列番号２１に示される野生型ＬＴ−β−Ｒ部分の成熟形態のＮ末端からわずか５アミノ酸だけ失っている、プロセス。
（項目４５）
上記核酸分子は、配列番号７に示されるヌクレオチド配列を含む、項目４４に記載のプロセス。
（項目４６）
上記核酸分子は、配列番号７に示されるヌクレオチド配列からなる、項目４４に記載のプロセス。
（項目４７）
ヒト被験体における関節リウマチを処置するための方法であって、該方法は、該被験体にある用量のＬＴ−β−Ｒ−Ｉｇ融合タンパク質を投与する工程を包含し、ここで該用量は、該被験体の血清において約０．１４μｇ／ｍｌ〜約３．５μｇ／ｍｌの平均濃度を維持するために十分である、方法。
（項目４８）
ヒト被験体における関節リウマチを処置するための方法であって、該方法は、該被験体にある用量のＬＴ−β−Ｒ−Ｉｇ融合タンパク質を投与する工程を包含し、ここで該用量は、該被験体の血清において約０．６μｇ／ｍｌの最小平均濃度を維持するために十分である、方法。
（項目４９）
上記ＬＴＢＲ−Ｉｇ融合タンパク質は、配列番号５に示されるアミノ酸配列を含む、項目４８に記載の方法。
（項目５０）
上記濃度は、７〜６０日毎に１回、ＬＴ−β−Ｒ−Ｉｇ融合タンパク質を約０．０１〜約５ｍｇ／ｋｇの用量において投与することによって達成される、項目４８に記載の方法。
（項目５１）
ヒト被験体における関節リウマチを処置するための方法であって、該方法は、該被験体に、７〜３０日ごとに多くて２回、約０．６〜３ｍｇ／ｋｇの用量のＬＴ−β−Ｒ−Ｉｇ融合タンパク質を投与する工程を包含する、方法。
（項目５２）
７〜１４日ごとに１回、約０．６〜３ｍｇ／ｋｇの用量のＬＴ−β−Ｒ−Ｉｇ融合タンパク質を投与する工程を包含する、項目５１に記載の方法。
（項目５３）
投与は、１４〜３０日ごとに１回である、項目５１に記載の方法。
（項目５４）
投与は、２８〜６０日ごとに１回である、項目５１に記載の方法。
（項目５５）
投与は、７〜３０日ごとに１回である、項目５１に記載の方法。
（項目５６）
ヒト被験体における自己免疫障害を処置するための方法であって、該方法は、該被験体に、長さが１９３アミノ酸もしくは１９４アミノ酸の改変ＬＴ−β−Ｒ細胞外ドメインを含むＬＴ−β−Ｒ−Ｉｇ融合タンパク質の集団を含むある用量の薬学的組成物を投与する工程を包含し、ここで該ＬＴ−β−Ｒ−Ｉｇ−融合タンパク質のうちの少なくとも９０％は、配列番号２１に示される野生型ＬＴ−β−Ｒ細胞外ドメインの成熟形態のＮ末端からわずか５アミノ酸だけ失っており、該用量は、該被験体の血清において約０．６μｇ／ｍｌの最小平均濃度を維持するために十分である、方法。
（項目５７）
上記ＬＴ−β−Ｒ−Ｉｇ融合タンパク質は、改変Ｉｇ部分をさらに含む、項目５６に記載の方法。
（項目５８）
上記自己免疫障害は、関節リウマチ、クローン病、もしくは全身エリテマトーデス（ＳＬＥ）からなる群より選択される、項目５６に記載の方法。
（項目５９）
上記薬学的組成物は、配列番号５に示されるアミノ酸配列を含む、項目５６に記載の方法。
（項目６０）
投与は１ヶ月に２回である、項目５９に記載の方法。
（項目６１）
投与は１ヶ月に１回である、項目５９に記載の方法。
（項目６２）
投与は皮下である、項目５９に記載の方法。
（項目６３）
上記用量は約１ｍｇ／ｋｇである、項目５９に記載の方法。
（項目６４）
上記用量は約３ｍｇ／ｋｇである、項目５９に記載の方法。
（項目６５）
上記用量は、約７〜２０日ごとに約１ｍｇ／ｋｇ投与される、項目５９に記載の方法。
（項目６６）
上記用量は、約１４〜３０日ごとに約３ｍｇ／ｋｇ投与される、項目５９に記載の方法。
（項目６７）
上記用量は、約１４日ごとに約１ｍｇ／ｋｇ投与される、項目５９に記載の方法。
（項目６８）
上記自己免疫障害は関節リウマチであり、上記被験体は、関節リウマチと診断された後でかつ上記ＬＴ−β−Ｒ−Ｉｇ融合タンパク質の投与前に、関節リウマチ用薬物で処置されている、項目５９に記載の方法。
（項目６９）
上記関節リウマチ用薬物は、ＤＭＡＲＤ、ＮＳＡＩＤ、およびコルチコステロイドからなる群より選択される、項目６８に記載の方法。
（項目７０）
上記ヒトは、ＤＭＡＲＤ不十分応答者である、項目６８に記載の方法。
（項目７１）
上記関節リウマチ用薬物は、ＴＮＦインヒビターである、項目６８に記載の方法。
（項目７２）
上記関節リウマチ用薬物は、アダリムマブ（Ｈｕｍｉｒａ（登録商標））、エタネルセプト（Ｅｎｂｒｅｌ（登録商標））、もしくはインフリキシマブ（Ｒｅｍｉｃａｄｅ（登録商標））である、項目６８に記載の方法。
（項目７３）
ＬＴ−β−Ｒ−Ｉｇは、上記関節リウマチ用薬物と組み合わせて投与される、項目６８に記載の方法。
（項目７４）
上記ヒトは、上記関節リウマチ用薬物に対する応答がＬＴ−β−Ｒ−Ｉｇの投与前に不十分であるか否かを決定するために評価される、項目６８に記載の方法。
（項目７５）
上記ヒトは、上記関節リウマチ用薬物に対する不十分な応答を有することが決定され、次いで、該ヒトは、ＬＴ−β−Ｒ−Ｉｇを投与される、項目７４に記載の方法。
（項目７６）
上記ヒトは、関節リウマチの第１の発現に関して無症候性であり、そして関節リウマチの第２の発現に関して症候性である、項目６８に記載の方法。
（項目７７）
ＬＴ−β−Ｒ−Ｉｇは、上記関節リウマチ用薬物の代わりに投与される、項目６８に記載の方法。
（項目７８）
投与は、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）インヒビターとの組み合わせにおいてである、項目６８に記載の方法。
（項目７９）
上記ＴＮＦインヒビターは、アダリムマブ（Ｈｕｍｉｒａ（登録商標））、エタネルセプト（Ｅｎｂｒｅｌ（登録商標））、もしくはインフリキシマブ  （Ｒｅｍｉｃａｄｅ（登録商標））である、項目７８に記載の方法。
（項目８０）
上記ヒトは、抗ＴＮＦ不十分応答者である、項目６８に記載の方法。
（項目８１）
投与は、非ステロイド性抗炎症剤（ＮＳＡＩＤ）、コルチコステロイド、もしくは疾患改変抗リウマチ薬（ＤＭＡＲＤ）との組み合わせにおいてである、項目６８に記載の方法。
（項目８２）
投与は、メトトレキサートとの組み合わせにおいてである、項目６８に記載の方法。
（項目８３）
上記ヒトは、ＤＭＡＲＤ不十分応答者である、項目８１に記載の方法。
【図面の簡単な説明】
【００８８】
【図１】図１は、不均一性を改善するために、ＬＴＢＲ０１からＬＴＢＲ０６へなされた変化を記載する。太字は、分泌配列を示し、斜体／下線が付された文字は、ＬＴＢＲ０１に対してＬＴＢＲ０６において除去されるアミノ酸（すなわち、アミノ酸１〜４および最後のアミノ酸（リジン））を示す。Ｎ結合型グリコシル化のための３つのコンセンサス部位は、Ａｓｎ１３、１５０および２７６に位置する。アミノ酸位置とは、全長ＬＴＢＲをいい、すなわち、アミノ酸１〜４は、ＬＴＢＲ０６において除去されるものである。
【図２−１】図２は、ＬＴＢＲ０１（配列番号１１）、ＬＴＢＲ０５（配列番号９）、ＬＴＢＲ０６（配列番号５）、およびＬＴＢＲ０９（配列番号１２）のアラインメントを提供する。分泌配列は、ＬＴＢＲ配列から省かれる。
【図２−２】図２は、ＬＴＢＲ０１（配列番号１１）、ＬＴＢＲ０５（配列番号９）、ＬＴＢＲ０６（配列番号５）、およびＬＴＢＲ０９（配列番号１２）のアラインメントを提供する。分泌配列は、ＬＴＢＲ配列から省かれる。
【図３】図３は、野生型（配列番号１１−Ｎ末端、残基１〜７およびＣ末端、残基４２１〜４２６）と比較したＬＴＢＲ０６（Ｃ末端、配列番号５の残基４１７〜４２１）を記載し、上記タンパク質の模式図を提供する。
【図４】図４は、ＬＴＢＲ０６構築物のアミノ酸配列（配列番号５に示されるＬＴＢＲ０６の成熟形態）を記載する。ＬＴＢＲ０６は、ジスルフィド結合され、グリコシル化されたダイマータンパク質である。２８個のシステイン残基および６個のグリコシル化部位が存在し、後者のグリコシル化部位は、太字で示される。
【図５】図５は、グリコシル化されていないｈＬＴβＲ  ｈＩｇＧ１（成熟形態のタンパク質）である。ＬＴβＲ細胞外ドメインにおけるアスパラギンからグルタミンへの変異は、太字で示される。上記ｈｕＬＴβＲは、残基１〜２０４であり、上記ｈｕＩｇＧ１  Ｆｃは、上記の残基２０５〜４３１である（上記Ｆｃのグリコシル化部位は、インタクトである）。
【図６】図６は、本発明のＬＴＢＲ  ＩｇＧ融合タンパク質において使用され得るヒンジ（配列番号１３〜２０）を記載する。
【図７】図７は、ヒンジ発現分析からの結果のまとめを記載する表を記載する。
【図８】図８は、ＬＴＢＲ−Ｆｃで処置した後の患者におけるＲＡ症状スコア（さわると痛い関節数（ｔｅｎｄｅｒ  ｊｏｉｎｔ  ｃｏｕｎｔ）（ＴＪＣ）および腫脹関節数（ｓｗｏｌｌｅｎ  ｊｏｉｎｔ  ｃｏｕｎｔ）（ＳＪＣ））の置換％を示すグラフである。
【図９】図９は、ＬＴＢＲ−Ｆｃ（ＬＴＢＲ０６）での処置後の患者において、さわると痛い関節数（ＴＪＣ）の減少を示すグラフを提供する。
【図１０】図１０は、ＬＴＢＲ−Ｆｃ（ＬＴＢＲ０６）での処置後の患者において、腫脹関節数（ＳＪＣ）ｎの減少を示すグラフを提供する。
【図１１】図１１は、ＬＴＢＲ−Ｆｃ（ＬＴＢＲ０６）での処置後の患者において、腫脹関節数ｎ（ＳＪＣ）におけるメジアン％変化を示すグラフを提供する。
【図１２】図１２は、ＬＴＢＲ−Ｆｃ（ＬＴＢＲ０６）での処置後の患者において、ＡＣＲ２０改善を示すグラフを提供する。
【図１３】図１３は、１００μｇ／動物での投与の２４時間後に、マウスにおける種々にシアル化されたＬＦＡ３ＴＩＰおよびｈｕ−ＬＴＢＲ−Ｉｇ（ＬＴＢＲ０５）の血清レベルをグラフに示す。
【図１４】図１４は、ＬＴＢＲ−Ｆｃおよび代表的な抗体の比較を図示し、同一の投与において、有効性の顕著な差異が、長期の時間枠にわたって認められることを示す。矢印Ａおよび矢印Ｂは、それぞれ、抗体もしくはＦｃ−融合タンパク質の代表的なα相およびβ相を示す。抗体について、矢印Ｃによって示される灰色の線は、効力のための代表的な下限濃度を示すのに対して、矢印Ｄは、顕著に低い濃度において、ＬＴＢＲ−Ｆｃが効力を有することを示す。
【発明を実施するための形態】
【００８９】
本発明がより容易に理解されるために、特定の用語がまず定義される。
【００９０】
用語「融合タンパク質」とは、個々のペプチド骨格を介して共有結合によって連結される２つ以上のタンパク質もしくはそのフラグメントを含む分子、最も好ましくは、それらタンパク質をコードするポリヌクレオチド分枝の遺伝子発現を介して生成される分子をいう。好ましい実施形態において、上記融合タンパク質は、免疫グロブリンドメインを含む。
【００９１】
一般的用語「免疫グロブリン」とは、生化学的に区別され得る抗体の５つの別個のクラスを含む。抗体の５つのクラス全ては、明らかに本発明の範囲内であり、以下の議論は、一般に、免疫グロブリン分子のＩｇＧクラスに関する。
【００９２】
用語「免疫グロブリン融合タンパク質」とは、ポリペプチドの機能的部分（一般に、細胞表面タンパク質の細胞外ドメインを含む）と、免疫グロブリン定常領域（例えば、ヒンジ、ＣＨ１、ＣＨ２もしくはＣＨ３ドメインまたはその一部もしくは組み合わせ）のうちの１種以上との融合をいう。一実施形態において、上記ポリペプチドは、レセプターのＴＮＦファミリーのメンバーである。上記Ｉｇ分子の一部は、種々の免疫グロブリンアイソタイプ（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＭ、ＩｇＡなどを含む）のうちのいずれかから得られ得る。免疫グロブリン融合タンパク質は、Ｆｃ融合タンパク質のためのＩｇとして、本明細書において言及される。
【００９３】
好ましい実施形態において、本発明の方法および組成物において使用されるタンパク質は、免疫グロブリン融合タンパク質である。例えば、上記融合タンパク質は、レセプター、もしくはそのリガンド結合部分、およびダイマー化ドメイン（例えば、Ｆｃドメイン）を含み得る。
【００９４】
本明細書において使用される場合、用語「改変ＬＴＢＲ細胞外ドメイン」とは、１つ以上のアミノ酸位置において、配列番号１および配列番号２１（野生型ｈＬＴＢＲ）において示される配列とは異なるアミノ酸配列を有するポリペプチド（もしくはタンパク質）の成熟形態をいう。
【００９５】
本明細書において使用される場合、用語「改変Ｉｇ部分」とは、１種以上のアミノ酸位置において、当該分野で公知のＦｃ領域（配列番号２２として本明細書で提供される配列を含む）とは異なるアミノ酸配列を有するポリペプチド（もしくはタンパク質）をいう。
【００９６】
用語「低下したＮ末端不均一性」とは、コントロールタンパク質集団に対して、異なる形態で存在する種々のＮ末端アミノ酸残基を有する集団におけるタンパク質数の減少をいう。例えば、コントロールタンパク質の発現は、（推定翻訳タンパク質に対して）１個のアミノ酸〜３個のアミノ酸の範囲でＮ末端アミノ酸残基が失われた（Ｎ−１、Ｎ−２、およびＮ−３として記載される）タンパク質を含むタンパク質集団を生じる。この場合、上記タンパク質の集団は、３つの異なるタイプ（すなわち、Ｎ−１、Ｎ−２、およびＮ−３）を含む。従って、低下したＮ末端不均一性を有するタンパク質の集団は、タンパク質の３個未満の異なるＮ末端アミノ酸残基（例えば、Ｎ−１とＮ−２、Ｎ−２とＮ−３、もしくはＮ−１とＮ−３タイプ）を有するタンパク質の集団、または改変分子のこれらタイプのうちの１種以上の低下した割合を有するタンパク質の集団を含む。Ｎ末端アミノ酸自体は、異なっていなくてもよい（例えば、野生型形態に対してＮ−１のＮ末端を有するタンパク質に対して、上記Ｎ末端アミノ酸はアラニンであり得、そして野生型形態に対してＮ−３のＮ末端を有するタンパク質については、上記Ｎ末端アミノ酸はまた、アラニンであり得る）ことに注意すべきである。従って、一実施形態において、Ｎ末端不均一性は、集団（推定翻訳タンパク質に対して発現される）内でタンパク質の中で長さの全体的な差異を扱わなければならない。よって、用語「Ｎ−＃」とは、野生型の翻訳されたタンパク質のアミノ末端から欠失されたアミノ酸数をいう。例えば、野生型の推定タンパク質配列がＡＡＧＴＹ（配列番号２４）であった場合、Ｎ−１タンパク質は、最初のＡが含まれず、代わりにＡＧＴＹ（配列番号２５）で始まるが、両方のタンパク質がＡで始まる。同様に、Ｎ−２タンパク質は、ＧＴＹで始まる。
【００９７】
別の実施形態において、Ｎ末端不均一性は、タンパク質集団中の改変形態の潜在的な数を減少させることによって、低下させられ得る。例えば、Ｎ末端グルタミン残基は、自発的環化を受けて、ピログルタミン酸を形成し得る。このことは、さらなる不均一性をもたらし得る。一実施形態において、ピログルタミン酸の形成は、野生型タンパク質に存在するものと比較して、低下させられるかもしくは除去され得る。
【００９８】
用語「低下したＣ末端不均一性」とは、同様に、コントロールタンパク質集団に対して、異なるＣ末端アミノ酸残基を有する集団において、タンパク質の数の減少をいう。さらに、用語「Ｃ−＃」とは、タンパク質のカルボキシ末端から欠失されたアミノ酸数をいう。
【００９９】
用語「グリコシル化」とは、１種以上の炭水化物をポリペプチドに共有結合することをいう。代表的には、グリコシル化は、細胞の細胞内環境もしくはその抽出物内に存在し得る翻訳後事象である。上記用語グリコシル化としては、例えば、Ｎ結合型グリコシル化（ここで１種以上の糖が、アスパラギン残基に結合される）および／もしくはＯ結合型グリコシル化（ここで１種以上の糖が、ヒドロキシル基を有するアミノ酸残基（例えば、セリンもしくはスレオニン）に結合される）が挙げられる。
【０１００】
語句「ＴＮＦファミリーのレセプター」とは、天然において膜結合していようと分泌されようと（オステオプロテゲリンの場合のように）、正式なＴＮＦファミリーシステイン架橋パターンを有する任意のレセプター、またはＴＮＦファミリーのリガンドの規定されたメンバーに結合する任意のレセプターをいう（例えば、Ｂａｎｎｅｒら  １９９３）。本願発明は、他の実施形態において、本明細書において議論された方法によって得られるＴＮＦファミリーレセプター−Ｉｇ融合物、および上記を含む薬学的調製物に関する。
【０１０１】
「シグナルペプチド」もしくは「シグナル配列」は、上記シグナルペプチドがさらなる翻訳後プロセシングおよび分布のために小胞体（ＥＲ）に結合される新たに合成されたポリペプチドを指向するペプチド配列である。タンパク質の成熟形態とは、シグナル配列なしのタンパク質をいう。
【０１０２】
本明細書において使用される場合、「可溶性ＬＴＢＲ」とは、ヒトＬＴＢＲの細胞外ドメインの全てもしくは一部を含むポリペプチド（例えば、ＬＴＢＲ免疫グロブリン融合物）である。好ましい可溶性ＬＴＢＲは、リガンド（例えば、ＬＴもしくはＬＩＧＨＴ）に、配列番号１の分子の親和性の少なくとも１０％で、および好ましくは、少なくとも５０％で結合し得るＬＴＢＲの細胞外領域からの十分な配列を含む可溶性分子をいう。
【０１０３】
用語「リガンド結合ドメイン」もしくは「リガンド結合部分」とは、本明細書において使用される場合、任意のネイティブレセプター（例えば、細胞表面レセプター）、または少なくとも定性的なリガンド結合能、および好ましくは、対応するネイティブレセプターの生物学的活性を保持する任意の領域もしくはその誘導体をいう。
【０１０４】
用語「約（ａｐｐｒｏｘｉｍａｔｅｌｙ）」および「約（ａｂｏｕｔ）」とは、数値を参照して本明細書において使用される場合、一般に、別段示されない限りもしくは文脈から明らかでなければ（そのような数値が考えられる値の１００％を超える場合を除く）、その数値のいずれの方向においても（その数より大きいもしくは小さい）１０％の範囲内に入る数を含む。
【０１０５】
本明細書において定義される場合、用語「保存的置換」とは、あるアミノ酸残基を、別の生物学的に類似の残基で置換することを示す。例えば、保存的アミノ酸置換は、特に、保存的アミノ酸置換が上記ポリペプチドもしくはタンパク質における残基の総数の１０％未満を示す場合、その生物学的活性にほとんどもしくは全く影響を及ぼさないことが予期される。好ましくは、保存的アミノ酸置換は、上記ポリペプチドもしくはタンパク質のうちの５％未満、最も好ましくは、上記ポリペプチドもしくはタンパク質のうちの２％未満の変化を示す（例えば、配列番号５に従って計算した場合、最も好ましい保存的置換は、野生型アミノ酸配列において９個未満のアミノ酸置換を示す）。特に好ましい実施形態において、上記配列には、単一アミノ酸置換が存在し、ここで置換されるアミノ酸かつ置換アミノ酸はともに、非環式である。
【０１０６】
特に、保存的置換の他の例としては、１つの疎水性残基（例えば、イソロイシン、バリン、ロイシンもしくはメチオニン）の代わりに、１つの別の残基を使用すること、または１つの極性残基の代わりに、別の残基を使用すること（例えば、リジンの代わりにアルギニン、アスパラギン酸の代わりにグルタミン酸、もしくはアスパラギンの代わりにグルタミンなど）が挙げられる。
【０１０７】
遺伝的にコードされたアミノ酸は、一般に、４つのファミリーに分けられ得る：（１）酸性：アスパラギン酸、グルタミン酸；（２）塩基性：リジン、アルギニン、ヒスチジン；（３）非極性：アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン；および（４）非荷電性極性：グリシン、アスパラギン、グルタミン、システイン、セリン、スレオニン、チロシン。フェニルアラニン、トリプトファン、およびチロシンは、芳香族アミノ酸として合わせて分類され得る。一実施形態において、本発明のポリペプチドのＮ末端におけるアミノ酸は、イミノ酸（すなわち、プロリン）を除いて、非極性のアミノ酸（すなわち、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン、グリシン、およびシステイン）である。
【０１０８】
用語「処置」とは、ある障害と関連する状態、症状、もしくはパラメーターを改善もしくは予防するために、または統計学的に有意な程度、もしくは当業者に検出可能な程度のいずれかまで、上記障害の開始、進行、もしくは悪化（上記障害によって引き起こされる二次的損傷を含む）を予防するために、有効な量、様式および／もしくは態様において治療を施すことをいう。従って、処置は、治療的および／もしくは予防的利益を達成し得る。有効な量、様式、もしくは態様は、上記被験体に依存して変動し得、そして上記被験体に合わせて調整され得る。
【０１０９】
用語「不十分な応答」、「不十分応答者」もしくは「−ＩＲ」とは、患者もしくは通常の技術を有する医師によって評価される場合、特定の処置に対すて不十分な効力または耐えられないもしくは許容できない毒性を示す患者をいう。不十分な効力は、処置に対する応答の所定のレベルを満たすことができないことを意味し得る。関節リウマチ（ＲＡ）の場合において、例えば、不十分な効力は、ＲＡの臨床パラメーター（例えば、さわると痛い関節数（ＴＪＣ）、腫脹関節数（ＳＪＣ）、疾患活動性の患者の包括的評価［ＰＧＡ視覚的アナログスケール（ＶＡＳ）０〜１０ｃｍ］、医師の疾患活動性の包括的評価（ＭＤＧＡ  ＶＡＳ  ０〜１０ｃｍ）およびＣ反応性タンパク質（ＣＲＰ（ｍｇ／ｄｌ））において、少なくとも１０％、２０％、２５％、３０％、４０％、５０％もしくはそれ以上の減少を示すことができないとして定義され得る。耐えられない毒性は、第１の薬剤の使用を中断する医療的必要性もしくは推奨を生じる、薬剤に対する有害な反応であり得る。耐えられないもしくは許容できない毒性の例としては、肝傷害もしくは肝機能障害、重篤なアレルギー反応、重篤な鬱病もしくは自殺の観念化、アナフィラキシー、または注射部位反応が挙げられ得る。
【０１１０】
本明細書において使用される場合、「組み合わせにおいて投与される」とは、２種以上の薬剤（例えば、可溶性ＬＴＢＲおよび第２の薬剤）が、同時にもしくは一定間隔内で被験体に投与され、その結果、上記患者に対する各薬剤の効果の重複が存在することを意味する。好ましくは、上記第１の薬剤および第２の薬剤の投与は、組み合わせの効果（例えば、付加的もしくは相乗的効果）が達成されるように、互いに十分に近い間隔である。上記間隔は、数時間、数日もしくは数週間の間隔であり得る。上記薬剤は、被験体において、同時に生物的に利用可能（例えば、検出可能）であり得る。好ましい実施形態において、上記薬剤のうちの１つ（例えば、上記第１の薬剤）の少なくとも１回の投与は、他の薬剤（例えば、上記可溶性ＬＴＢＲ）が、上記被験体における治療的レベルにおいてさらに存在する間に行われる。
【０１１１】
用語「１週間に１回」とは、特定の６〜８日の期間内に多くて１回（例えば、７日ごとに１回）を意味する。
【０１１２】
用語「２週間に１回」とは、特定の１２〜１６日の期間内に多くて１回（例えば、１４日ごとに１回）を意味する。用語「１ヶ月に１回」とは、１ヶ月につき１回（例えば、２８〜３１日ごとに１回）を意味する。上記被験体は、代表的には、哺乳動物（例えば、ヒト、非ヒト霊長類（例えば、サル（ｍｏｎｋｅｙ）もしくはサル（ａｐｅ））、イヌ、ネコ、ウサギ、もしくは家畜（ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ  ｍａｍｍａｌ）（例えば、ウマ、ウシ、ブタなど）である。例えば、上記被験体は、ヒト（例えば、ヒト男性もしくは女性）である。上記被験体は、少なくとも約１８歳、２５歳、３０歳、４５歳、５０歳、５５歳、６０歳、もしくは７０歳であり得る。
【０１１３】
本明細書において使用される場合、用語「最小平均濃度」とは、被験体の循環もしくは血清中に存在する薬物の平均最小濃度をいう。
【０１１４】
本発明の種々の局面は、以下の小節においてさらに詳細に記載される。
【０１１５】
（Ｉ．ＬＴＢＲ−Ｉｇ融合タンパク質およびその組成物）
本発明は、ＬＴＢＲ−Ｉｇ融合タンパク質の集団が低下した分子不均一性を有するという点において、治療的使用について改善されているＬＢＴＲ−Ｉｇ融合タンパク質を含む組成物に関する。本発明は、ＬＴＢＲ−Ｉｇ融合タンパク質を含む組成物（薬学的組成物を含む）、ならびにタンパク質、核酸、ベクター、宿主細胞、およびこれらの作製法を提供する。
【０１１６】
リンホトキシン−βレセプター−免疫グロブリン（ＬＴβＲ−Ｉｇ）融合タンパク質は、濾胞性樹状細胞の機能的状態に対する結果とともに、上記表面ＬＴリガンドと、レセプターとの間のシグナル伝達をブロックし得る（Ｍａｃｋａｙ  ａｎｄ  Ｂｒｏｗｎｉｎｇ  １９９８）。このブロックは、齧歯類モデルにおける低下した自己免疫疾患をさらにもたらし得る（Ｍａｃｋａｙら，１９９８，米国特許出願第０８／５０５，６０６号（１９９５年７月２１日出願）および米国特許出願第６０／０２９，０６０号（１９９６年１０月２６日出願））。
【０１１７】
一般には、本発明の好ましい可溶性ＬＴＢＲは、融合タンパク質である。可溶性ＬＴＢＲは、本明細書において定義される場合、ＬＴＢＲの細胞外ドメインのＬＴ結合フラグメントを含む分子である。例えば、可溶性ＬＴＢＲは、ＬＴＢＲの細胞外ドメインの全てもしくは実質的部分を含み得る（例えば、これは、配列番号１の残基４０〜２００、３５〜２００、４０〜２１０；３５〜２２０、３２〜２２５、もしくは２８〜２２５を含み得る）。一実施形態において、可溶性ＬＴＢＲは、配列番号１の残基３２〜２２５を含む。いくつかの実施形態において、可溶性ＬＴＢＲは、ある部分（例えば、異種ポリペプチド（例えば、ＬＴＢＲ融合タンパク質を作製するために）もしくは非ポリペプチド部分の共有結合によって改変され得る。いくつかの場合、このような部分は、薬物動態学的パラメーターおよび薬力学的パラメーター（例えば、溶解度もしくは半減期）を改善し得る。ＬＴＢＲ融合タンパク質は、抗体の定常領域（例えば、Ｆｃドメイン）、トランスフェリン、もしくはアルブミン（例えば、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）もしくはウシ血清アルブミン（ＢＳＡ））の全てもしくは一部を含み得る。上記融合タンパク質は、上記ＬＴＢＲ配列と、上記非ＬＴＢＲタンパク質ドメインとの間にリンカー領域を含み得る。いくつかの実施形態において、可溶性ＬＴＢＲは、ポリマー（例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ））への共有結合によって改変される。理論にも機構にも結合されることは望まないが、このような可溶性ＬＴＢＲは、ＬＴＢＲ活性を減少させる（ブロックする）ためにデコイレセプターとして作用し得る。例示的なＬＴＢＲ−Ｆｃは、配列番号５、６、８、９、もしくは１０のアミノ酸配列を有する。
【０１１８】
上記可溶性ＬＴＢＲは、１種以上の異種タンパク質ドメインに融合されたＬＴＢＲの全てもしくはフラグメント（例えば、ＬＴＢＲの可溶性フラグメント）を含み得る（どのドメインが血中の溶解度もしくは寿命を増大し得るか）。例示的なＬＴＢＲ部分は、配列番号１のＬＴＢＲ配列、または上記配列からわずか１個、２個、３個、５個、もしくは１０個のアミノ酸残基だけ異なる配列である。上記差異は、任意の差異（例えば、置換、欠失もしくは挿入）であり得るが、好ましくは、置換（例えば、保存的置換）である。保存的置換は、通常、１つのアミノ酸と、類似の極性、立体的配置、もしくは同じクラス（例えば、疎水性、酸性もしくは塩基性）の別のものとの交換である。非ＬＴＢＲタンパク質もしくはドメインの例は、抗体の定常領域（例えば、Ｆｃドメイン）、トランスフェリン、もしくはアルブミン（例えば、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）もしくはウシ血清アルブミン（ＢＳＡ））の全てもしくは一部を含む。
【０１１９】
好ましい実施形態において、本発明のポリペプチドは、ポリペプチド（例えば、抗体）、好ましくは、ＩｇＧ免疫グロブリン（例えば、サブタイプＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、もしくはＩｇＧ４）、および好ましくは、サブタイプＩｇＧ１もしくはＩｇＧ４を含むＦｃ融合タンパク質である。好ましい実施形態において、上記ポリペプチドは、ＬＴＢＲのリガンドに結合する。ポリペプチドのＦｃ領域の一部についての本明細書におけるアミノ酸番号付けは、例えば、Ｋａｂａｔら，「Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ」，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐｔ．  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，１９８３  ａｎｄ  １９８７によって記載されるＫａｂａｔ番号付けシステムに対応する。いくつかの実施形態において、一連のアミノ酸番号付け（例えば、配列表において示される配列について）が提供される。
【０１２０】
一実施形態において、本発明の融合タンパク質は、ヒンジ領域（免疫グロブリンのＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３領域）の少なくとも一部を含む。
【０１２１】
タンパク質集団内の不均一性は、翻訳後修飾（例えば、変動性のグリコシル化パターン、Ｎ末端タンパク質分解、Ｃ末端タンパク質分解、およびピログルタミン酸形成（本明細書においてｐｙｒｏｇｌｕ形成ともいわれる））から生じ得る。本発明は、低下した不均一性（低下したＮ末端不均一性（例えば、分子の大きさにおけるバリエーションもしくは分子の形態におけるバリエーション（例えば、ピログルタミン酸含有タンパク質）に関して））、もしくは低下したＣ末端不均一性、ならびにこれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない）を有するリンホトキシン−βレセプター−免疫グロブリン（ＬＴ−β−Ｒ−Ｉｇ）−融合タンパク質の集団を含む組成物を提供する。不均一性の低下は、上記ＬＴＢＲ−Ｉｇタンパク質の配列内で作製された欠失および／もしくは変異に帰し得る。その結果、不均一性は、野生型ＬＴＢＲ−Ｉｇ融合タンパク質（すなわち、変異されていないおよび／もしくは欠失されていないＬＴＢＲ−Ｉｇ）に関して減少される。野生型ＬＴＢＲ−Ｉｇ融合タンパク質の例は、ＬＴＢＲ０１ともいわれる配列番号１１（タンパク質の成熟形態）に記載される。用語ＬＴβＲ−ＩｇおよびＬＴＢＲ−Ｆｃは、本明細書において交換可能に使用されることに注意すべきである。
【０１２２】
好ましい実施形態において、ＬＴβＲ−Ｉｇ融合タンパク質は、改変ＬＴＢＲ細胞外ドメインおよび／もしくは改変Ｉｇ部分（例えば、ＩｇのＦｃ部分）を含む。本発明の一実施形態において、上記ＬＴＢＲ−Ｉｇ融合タンパク質は、ＬＴＢＲ細胞外ドメイン改変体、改変Ｉｇ部分、もしくはこれらの組み合わせのいずれかを含む。
【０１２３】
野生型ＬＴＢＲのアミノ酸配列もしくは核酸配列は、ＮＣＢＩデータベースにおいて、ＡＡＨ２６２６２およびＰ３６９４１として記載される。ＬＴＢＲの上記野生型ヒトアミノ酸配列はまた、配列番号１として記載される。可溶性ＬＴＢＲは、配列番号１の配列、好ましくはその改変体を有するＬＴＢＲ−Ｆｃポリペプチドであり得る。好ましい実施形態において、上記可溶性ＬＴＢＲは、配列番号１の配列からわずか１個、２個、３個、５個、もしくは１０個のアミノ酸残基だけ異なるＬＴＢＲ−Ｆｃポリペプチドである。
【０１２４】
（ヒトＬＴＢＲ配列（ＧｅｎＰｅｐｔ  ＩＤ  Ｎｏ．Ｐ３６９４１））
配列番号１は、非成熟もしくはプロセシングされていないヒトＬＴＢＲ配列であり、すなわち、シグナル配列を含む。斜体のアミノ酸は、シグナル配列を示す。アミノ酸２８〜２２５は、ＬＴＢＲの細胞外領域である。
【０１２５】
【数１】
0005431171.tif 000002
用語「野生型ＬＴＢＲ−Ｉｇ」とは、本明細書において使用される場合、ヒト野生型ＬＴＢＲの細胞外ドメイン（例えば、配列番号１に示されるＬＴＢＲ配列の細胞外ドメイン）、および当該分野で公知の、例えば、変異、欠失などによって改変されていない任意の免疫グロブリン配列を含む融合タンパク質をいう。例示的な野生型Ｉｇアミノ酸配列は、配列番号２２に提供される。改変を有さない野生型ＬＴＢＲ−Ｉｇ融合タンパク質の例は、配列番号６に記載される。
【０１２６】
一局面において、本発明は、改変ＬＴＢＲ細胞外ドメインを含むＬＴＢＲ−Ｉｇ融合タンパク質に関する。例えば、アミノ酸「ＳＱＰＱ」（配列番号２６）は、配列番号４に示されるような野生型ＬＴＢＲタンパク質（成熟形態）（ＬＴＢＲ０６のＬＴＢＲ細胞外ドメインのアミノ酸配列）のアミノ末端から欠失され得る。以下に提供される実施例において実証されるように、ＬＴＢＲのアミノ末端からの「ＳＱＰＱ」（配列番号２６）の欠失は、ＬＴＢＲ−Ｉｇタンパク質集団内の全体的な不均一性（Ｎ末端不均一性を含む）を改善する。実施例に記載されるように、ＬＴＢＲ０６の発現は、上記ＬＴ−β−Ｒ−Ｉｇ−融合タンパク質のうちの少なくとも９０％が配列番号２１に示される野生型ＬＴ−β−Ｒ細胞外ドメインの成熟形態のＮ末端からわずか５アミノ酸だけ失っている、ＬＴＢＲ−Ｉｇ融合タンパク質の集団を提供する。従って、ＬＴＢＲ０６の発現は、上記タンパク質のうちの９０％がＮ−４もしくはＮ−５のいずれかであるＬＴＢＲ−Ｉｇタンパク質の集団を生じる。さらに、ＬＴＢＲ０６は、低下したピログルタミン酸形成を有する。
【０１２７】
別の実施形態において、本発明のＬＴＢＲ−Ｉｇは、Ｆｃ部分のｃ末端アミノ酸（すなわち、「Ｋ」）において欠失を有する改変Ｉｇ部分を含み得る。以下の実施例に記載されるように、ＬＴＢＲ−Ｉｇ融合タンパク質のＦｃ部分の最後のアミノ酸の欠失は、Ｃ末端不均一性を減少させる。最後のアミノ酸が欠失されて、Ｃ末端不均一性を改善する（すなわち、低下させる）改変Ｉｇ部分の例は、配列番号２に記載される。最後のアミノ酸（すなわち、最後のリジン）が欠失した改変Ｉｇ部分を有するＬＴＢＲ−Ｉｇ融合タンパク質の例は、配列番号５、８、９、および１２に記載される。上記改変Ｉｇ部分は、ＩｇＧアイソタイプ（ＩｇＧ１アイソタイプが挙げられるが、これに限定されない）のＦｃ領域を含み得る。
【０１２８】
本発明はまた、改変ＬＴＢＲ細胞外ドメインおよび改変Ｉｇ部分の両方を有するＬＴＢＲ−Ｉｇ融合タンパク質を含む。ＬＴＢＲ０６は、最初の４アミノ酸が除去されかつ改変Ｉｇ部分を有する、改変ＬＴＢＲ細胞外ドメインを含むＬＴＢＲ−Ｉｇ融合タンパク質である。ここで最後のアミノ酸（Ｋ）は欠失されている。ＬＴＢＲ０６の上記Ｎ末端およびＣ末端は、Ｎ末端およびＣ末端両方の不均一性を低下させる。以下の配列番号８は、シグナル配列を含む、ＬＴＢＲ０６のアミノ酸配列を記載する。以下の配列における斜体のアミノ酸は、シグナル配列を示す；下線を付したアミノ酸は、ＬＴＢＲの細胞外領域から得られる配列を示す；太字のアミノ酸は、ＩｇＧ  Ｆｃ配列を示す。
【０１２９】
一実施形態において、本発明のＩｇ融合タンパク質の免疫グロブリン部分は、免疫グロブリンヒンジ領域の少なくとも一部を含む。一実施形態において、改変Ｆｃ部分は、Ｉｇ上側ヒンジ（ｕｐｐｅｒ  ｈｉｎｇｅ）の少なくとも１つのヒンジ領域におけるバリンへの変異（例えば、システインの変異（  配列番号２２のアミノ酸位置１としても示されるアミノ酸位置２２０（Ｋａｂａｔ番号付け）において）を含み得る。主題のバリンは、以下に太字／下線／斜体である。下線を付した配列は、ＬＴＢＲの細胞外ドメインの実質的な部分であり、配列番号１（上記）のアミノ酸３２〜２２５に対応する。タンパク質分解プロセシングの間に、上記ＬＴＢＲタンパク質のシグナル配列は、切断される。従って、ＬＴＢＲ０６の最終ＬＴＢＲタンパク質生成物は、配列番号５に記載される。
【０１３０】
【数２】
0005431171.tif 000003
配列番号８に記載されるバリン変異に加えて、他の適切なアミノ酸は、使用され得る。例えば、セリン、スレオニン、アラニン、ロイシン、グリシンもしくはイソロイシンを含むアミノ酸は、ＬＴＢＲ０６のバリンの代わりに、および本明細書に記載される他のＬＴＢＲ−Ｉｇ融合タンパク質において使用され得る。
【０１３１】
任意の実施形態において、免疫グロブリンヒンジは、ＬＴＢＲ細胞外ドメインを、例えば、免疫グロブリン分子のＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３ドメインに連結するために使用され得る。例えば、配列ＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰ（配列番号２７）を有するＩｇＧヒンジ領域が、使用され得る。一実施形態において、配列ＶＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰ（配列番号２８）を有するヒンジ領域が使用され得る。他の例示的上側ヒンジおよび中央ヒンジ構築物は、図６〜８において、および配列番号１３〜２０において示される。従って、ＬＴＢＲ−Ｉｇ融合タンパク質の改変Ｉｇ部分は、配列番号１３〜２０に記載されるヒンジに対して少なくとも９０％〜９５％の同一性を含む上側および中央ヒンジ領域を含み得る。配列番号１３に示される上側および中央ヒンジ領域を、本明細書において例示される改変ＬＴＢＲ−Ｉｇ融合タンパク質において使用した。従って、改変ヒンジ（例えば、配列番号１４〜２１に記載されるもの）を含むＬＴＢＲ−Ｉｇ融合タンパク質は、配列番号１３に示される配列を、改変ヒンジで置換することによって構築される。必要に応じて、ＬＴＢＲ細胞外ドメインを、例えば、上記免疫グロブリン分子のＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３ドメインに連結するために使用され得る他の改変ヒンジ分子は、２００５０１６３７８２Ａ１に開示され、その内容は、本明細書に参考として援用される。
【０１３２】
ＬＴＢＲ−Ｉｇ融合タンパク質（例えば、ＬＴＢＲ０６）が発現される場合、生じるタンパク質の集団は、少なくとも部分的に、Ｎ末端および／もしくはＣ末端のタンパク質分解、およびｐｙｒｏｇｌｕ形成の不均一性に起因して、種々の長さ全体を含む。本発明の重要な局面は、上記ＬＴＢＲ−Ｉｇ融合タンパク質の最初の４アミノ酸（特に、上記ＬＴＢＲ細胞外ドメインの最初の４アミノ酸）を欠失させることによって、不均一性（Ｎ末端不均一性を含む）が低下され得るという発見である。従って、一実施形態において、本発明は、長さが１９３アミノ酸もしくは１９４アミノ酸の改変ＬＴ−β−Ｒ細胞外ドメインおよび長さが２２７アミノ酸の改変Ｉｇ部分を含むＬＴβＲ−Ｉｇ−融合タンパク質の集団を含む組成物を特徴とし、ここで上記ＬＴ−β−Ｒ−Ｉｇ−融合タンパク質のうちの少なくとも９０％は、配列番号２１に示される野生型ＬＴ−β−Ｒ細胞外ドメインの成熟形態のＮ末端からわずか５アミノ酸だけ失っており、そして上記ＬＴ−β−Ｒ−Ｉｇ−融合タンパク質は、ピログルタミン酸を欠いている。本発明はまた、長さが１９３アミノ酸もしくは１９４アミノ酸の改変ＬＴ−β−Ｒ細胞外ドメインおよび改変Ｉｇ部分を含むＬＴ−β−Ｒ−Ｉｇ融合タンパク質の集団を含む組成物を特徴とし、ここで上記集団は、野生型ＬＴ−β−Ｒ−Ｉｇ融合タンパク質と比較して、低下したＮ末端ピログルタミン酸形成、および低下したＣ末端不均一性を有する。
【０１３３】
上記改変ＬＴＢＲ−Ｉｇ融合タンパク質のアミノ末端アミノ酸は、配列番号５および１２に示されるように、アラニンであってもよいし、代わりに、非極性アミノ酸であってもよい。上記ＬＴＢＲ−Ｉｇ融合タンパク質の最初のアミノ酸として使用され得る非極性アミノ酸の例としては、バリン（配列番号１に示される野生型ＬＴ−β−Ｒ部分の成熟形態のアミノ酸６）もしくはアラニン（配列番号１に示される野生型ＬＴ−β−Ｒ部分の成熟形態のアミノ酸５）が挙げられる。非極性アミノ酸に加えて、セリンもしくはスレオニンが使用され得る。一実施形態において、本発明の組成物は、上記ＬＴ−β−Ｒ−Ｉｇ−融合タンパク質のうちの少なくとも９５％のＮ末端がバリン（野生型ＬＴ−β−Ｒの成熟形態のアミノ酸６）もしくはアラニン（野生型ＬＴ−β−Ｒの成熟形態のアミノ酸５）のいずれかであり得るＬＴＢＲ−Ｉｇ融合タンパク質の集団を含む。
【０１３４】
Ｎ末端および／もしくはＣ末端の不均一性に加えて、不均一性はまた、種々のグリコシル化から生じ得る。ＬＴＢＲ−Ｉｇ融合タンパク質のタンパク質集団内のグリコシル化バリエーションから生じる不均一性を最小にするために、上記ＬＴＢＲおよび／もしくは上記Ｉｇは、グリコシル化の量を低下させるために変化させられ得る。一実施形態において、上記ＬＴＢＲ−Ｉｇ融合タンパク質のＩｇ部分は、グリコシル化されていない。
【０１３５】
本発明はまた、改変ＬＴ−β−Ｒ細胞外ドメインおよび改変Ｉｇ部分を含むＬＴβＲ−Ｉｇ融合タンパク質の集団を含む組成物を企図し、ここで改変ＬＴ−β−Ｒ細胞外ドメインは、グリコシル化されていない。ＬＴＢＲのグリコシル化されていない細胞外ドメインの例は、実施例中に提供され、そしてまた、配列番号１０に記載される（配列番号１０のアミノ酸１〜１９４を参照のこと）。
【０１３６】
従って、本明細書に記載される方法および組成物を使用して低下させられ得る翻訳後修飾の不均一性の例としては、Ｎ末端不均一性、Ｃ末端不均一性、およびグリコシル化不均一性が挙げられる。これらパラメーターの各々における低下した不均一性、およびこれらの組み合わせを有するＬＴＢＲ−Ｉｇ融合タンパク質を提供することは、本発明の範囲内である。例えば、本発明は、ＬＴ−β−Ｒ−Ｉｇ融合タンパク質の集団を含む組成物を包含し、ここで上記集団は、野生型ＬＴ−β−Ｒ−Ｉｇ融合タンパク質の集団と比較して、低下したＮ末端不均一性および低下したＣ末端不均一性を有する。
【０１３７】
上記の組成物およびＬＴＢＲ−Ｉｇ融合タンパク質、ならびにこれを含む薬学的組成物を使用して、自己免疫障害を処置するための方法は、以下の第ＩＩ節およびＩＩＩ節においてより詳細に記載される。
【０１３８】
本発明のＬＴＢＲ−Ｉｇ融合ポリペプチドは、ＬＴＢＲのリガンド結合活性を保持しており、配列番号５、６、８、９、１０、１１、１２、および２３に示されるＬＴＢＲ−Ｉｇポリペプチドに対して少なくとも７０％の相同性を有するアミノ酸配列を有するポリペプチドならびに上記の各々の改変体および誘導体を含む。本発明はまた、配列番号３、４、および７に記載される単離されたポリペプチドを提供し、これらは、本発明のＬＴＢＲ細胞外ドメインもしくは本発明のＩｇ改変体のいずれかを提供する。好ましくは、上記ＬＴＢＲ−Ｉｇポリペプチド（またはその一部）は、前述の配列に対して、８５％より高い相同性、より好ましくは、９０％より高い相同性、より好ましくは、９５％より高い相同性、最も好ましくは、９９％より高い相同性のアミノ酸配列を有する。
【０１３９】
一実施形態において、本発明は、配列番号８もしくは配列番号２３の成熟形態の全長に対して少なくとも９０％であるアミノ酸配列を含む単離されたポリペプチドを特徴とし、ここで上記リガンド結合ドメインのアミノ酸配列は変化しておらず、上記ポリペプチドは、短縮されたＦｃ領域をさらに含む。一実施形態において、本発明のポリペプチドは、配列番号８に示されるポリペプチドに成熟形態の全長に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む。一実施形態において、本発明のポリペプチドは、配列番号８に示されるポリペプチドの成熟形態のアミノ酸配列を含む。一実施形態において、本発明のポリペプチドは、配列番号５に示されるアミノ酸配列を含む。
【０１４０】
本明細書に記載されるポリペプチドの改変体はまた、本発明によって企図される。従って、１つ以上のアミノ酸位置において配列番号５、配列番号６、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、および配列番号２３に示される配列とは異なるアミノ酸配列を有するポリペプチドの改変体、ならびに配列番号３、配列番号４、および配列番号７に記載されるその部分は、本発明に含まれる。このような改変ポリペプチドは、上記の改変ポリペプチド、ならびに保存的置換、スプライス改変体、アイソフォーム、他の種に由来するホモログ、および多型を含む。
【０１４１】
ＬＴＢＲ−Ｉｇ一次アミノ酸配列の改変は、未改変の対応する（ｃｏｕｎｔｅｒｐａｒｔ）ポリペプチドと比較して、実質的に等価な活性を有するタンパク質を生じ得、従って、親タンパク質に対して機能的に類似であると考えられ得る。このような改変は、例えば、部位指向性変異誘発によるように故意であってもよいし、自発的に生じてもよく、そしてスプライス改変体、アイソフォーム、他の種由来のホモログ、および多型を含む。このような機能的アナログはまた、本発明に従うことが企図される。
【０１４２】
さらに、一次アミノ酸配列の改変は、ドミナントネガティブ形態などを含む親タンパク質の生物学的活性を保持しないタンパク質を生じ得る。ドミナントネガティブタンパク質は、上記ポリペプチドと機能的に正常に相互作用する調節剤（例えば、上流成分もしくは下流成分）に結合するか、または別の方法で隔離することによって、野生型タンパク質を妨害し得る。このようなドミナントネガティブ形態はまた、本発明に従うことが企図される。
【０１４３】
本発明のＬＴＢＲ−Ｉｇタンパク質は、当該分野で公知の標準的方法に従って作製され得る。ＬＴＢＲ−Ｉｇをコードする核酸分子は、ＬＴＢＲ−Ｉｇポリペプチドをインビボで発現するか、またはＬＴＢＲ−Ｉｇをコードする核酸分子を、インビボでの発現のために動物に投与することによって、ＬＴＢＲ−Ｉｇポリペプチドを発現するために使用され得る。ＬＴＢＲ−Ｉｇをコードする核酸分子は、核酸ベクター（例えば、発現ベクターもしくはクローニングベクター）内に含まれ得る。ＬＴＢＲ−Ｉｇをコードする核酸分子は、核酸ベクターの一部として維持され得るか、再生され得るか、移入され得るか、または発現され得るが、かならずしも必要ではない。従って、本発明の別の局面は、本明細書に記載される本発明のＬＴＢＲ−Ｉｇタンパク質をコードする、単離された核酸分子である。本発明は、配列番号７（ＬＴＢＲ０６の成熟形態）に示されるヌクレオチド配列を含む核酸分子を含む。
【０１４４】
ＬＴＢＲ−Ｉｇポリヌクレオチド配列を含む組換え発現ベクターは、細胞内に導入および／もしくは維持され得る。ＬＴＢＲ−Ｉｇベクターの宿主となる細胞は、原核生物細胞であり得る。あるいは、ＬＴＢＲ−Ｉｇ核酸は、真核生物細胞（例えば、成熟タンパク質へと、ポリペプチドの翻訳後プロセシングに適切な装置および／もしくは上記細胞の細胞外環境へとポリペプチドを分泌するための適切な装置を含む真核生物細胞）に導入され得る。本発明のＬＴＢＲ−Ｉｇ融合タンパク質をコードする核酸分子を含むベクターは、本発明の範囲内に包含される。
【０１４５】
本発明のＬＴＢＲ−Ｉｇタンパク質を作製するために適切な方法は、当該分野で公知であり、例えば、ＷＯ  ９７／０３６８７、ＷＯ  ９８／１７３１３、ＷＯ  ００／２１５５８、ＷＯ  ９９／３８５２５、ＷＯ  ００／３６０９２に記載される。例えば、ＬＴＢＲ  免疫グロブリン融合タンパク質は、例えば、適切に折りたたまれた融合タンパク質の増大した量を生成するために、低温で、細胞培養物（例えば、哺乳動物細胞培養物（例えば、サルｃｏｓ細胞もしくはチャイニーズハムスター卵巣細胞）もしくは酵母細胞培養物）において発現され得る。本発明のＬＴＢＲ−Ｉｇ融合タンパク質を発現する宿主細胞は、本発明の範囲内に含まれ、ここで上記宿主細胞は、ＬＴＢＲ−Ｉｇ融合タンパク質をコードする核酸を含むベクターを含む。一実施形態において、上記宿主細胞は、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞である。その発現される融合タンパク質は、例えば、親和性クロマトグラフィー技術もしくは従来のクロマトグラフィー技術によって精製され得る。ＷＯ  ００／３６０９２を参照のこと。上記ＬＴＢＲ−Ｉｇ融合タンパク質の発現は、製造スケールを含むスケールの範囲に及び得る。
【０１４６】
本発明は、改変ＬＴ−β−Ｒ細胞外ドメインおよび改変Ｉｇ部分を含むＬＴβＲ−Ｉｇ−融合タンパク質の集団を含む組成物を作製するためのプロセスをさらに提供し、ここで上記ＬＴβＲ−Ｉｇ−融合タンパク質のうちの少なくとも９０％は、配列番号１に示される野生型ＬＴ−β−Ｒ部分の成熟形態のＮ末端からわずか５アミノ酸だけ失っており、上記プロセスは、哺乳動物細胞において、配列番号８に示されるＬＴ−β−Ｒ−Ｉｇ融合タンパク質をコードする核酸分子を発現させる工程、上記集団を、上記培養上清から得る工程、および必要に応じて、上記上清を精製して、それによって、改変ＬＴ−β−Ｒ細胞外ドメインおよび改変Ｉｇ部分を含むＬＴβＲ−Ｉｇ−融合タンパク質の集団を含む組成物を得る工程を包含し、ここで上記ＬＴ−β−Ｒ−Ｉｇ−融合タンパク質のうちの少なくとも９０％は、配列番号１に示される野生型ＬＴ−β−Ｒ部分の成熟形態のＮ末端からわずか５アミノ酸だけ失っている。一実施形態において、上記プロセスは、哺乳動物細胞において配列番号７に示される核酸分子を発現させる工程を包含する。一実施形態において、上記プロセスは、哺乳動物細胞において、配列番号７に示される核酸分子を発現させる工程を包含する。本発明はまた、哺乳動物細胞において、配列番号４に示されるＬＴＢＲの細胞外ドメインをコードするヌクレオチド配列を含む核酸分子、または配列番号３に示される核酸配列を発現させることを特徴とする。本発明は、哺乳動物細胞において、配列番号８に示されるＬＴβ−Ｒ−Ｉｇ融合タンパク質をコードする核酸分子、または配列番号７に示される核酸配列を発現することによって作製される組成物をさらに特徴とする。
【０１４７】
（ＩＩ．自己免疫障害を処置するための本発明のＬＴＢＲ−ＩｇＧの使用）
可溶性ＬＴＢＲは、自己免疫障害を処置するために有用なリンホトキシン（ＬＴ）経路インヒビターである。自己免疫障害としては、例えば、自己免疫関節炎（関節リウマチ（ＲＡ）およびシェーグレン症候群を含む）、乾癬、多発性硬化症、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）（潰瘍性大腸炎およびクローン病を含む）、インスリン依存性糖尿病、ブドウ膜炎、全身エリテマトーデス（ＳＬＥ、もしくは狼瘡）、多発性軟骨炎、および移植片拒絶が挙げられる。本明細書に記載される薬剤および方法は、ＲＡの処置に特に適している。
【０１４８】
関節リウマチは、関節における鋭敏さ（ｔｅｎｄｅｒｎｅｓｓ）によって示される。滑膜肥厚化は、最も変化がもたらされた関節において最終的に生じる。朝もしくは長期間動かさなかった後に生じる際の＞３０分を超えるこわばり（ｓｔｉｆｆｎｅｓｓ）は、午後早くの疲労および倦怠感と同様に、一般的である。変形、特に、屈曲痙縮が、急速に生じ得る。手根管症候群は、手関節滑膜炎から生じ得る。Ｘ線によって、疾患の最初の月において軟組織腫脹が明らかになり得、その後、関節周囲の骨粗鬆症（ｐｅｒａｒｔｉｃｕｌａｒ  ｏｓｔｅｏｐｏｒｏｓｉｓ）、関節腔の狭小化（ｊｏｉｎｔ  ｓｐａｃｅ  ｎａｒｒｏｗｉｎｇ）、および周縁の糜爛（ｍａｒｇｉｎａｌ  ｅｒｏｓｉｏｎ）が存在し得る。
【０１４９】
種々の試験が、自己免疫障害を処置するための可溶性ＬＴＢＲの効力をアッセイするために使用され得る。関節リウマチ（ＲＡ）の場合において、例えば、不十分な効力は、ＲＡの臨床パラメーター（例えば、さわると痛い関節数（ＴＪＣ）、腫脹関節数（ＳＪＣ）、疾患活動性の患者の包括的評価［疼痛の尺度のためのＰＧＡ視覚的アナログスケール（ＶＡＳ）０〜１０ｃｍ］、疾患活動性の医師の包括的評価（ＭＤＧＡ  ＶＡＳ  ０〜１０ｃｍ）、Ｃ反応性タンパク質のレベル（ＣＲＰ（ｍｇ／ｄｌ））、および赤血球沈降速度（ＥＳＲ））において少なくとも１０％、２０％、２５％、３０％、４０％、５０％以上の低下を示すことができないとして定義され得る。Ｃ反応性タンパク質は、急性炎症もしくは感染のエピソードの間に肝臓によって生成され得る。血液血清中のＣＲＰレベルは、ＲＡの重篤度の指標である。ＣＲＰレベルの低下（例えば、５％、１０％、１５％、２０％以上の低下）は、可溶性ＬＴＢＲ（例えば、ＬＴＢＲ−Ｆｃ）での処置に応答した、自己免疫障害（例えば、ＲＡ）の有効な処置を示し得る。赤血球沈降速度（ＥＳＲ）はまた、ＲＡ症例のうちの９０％において上昇する。従って、可溶性ＬＴＢＲによる処置後のＥＳＲの低下はまた、有効な処置を示し得る。
【０１５０】
本明細書において実証される可溶性ＬＴＢＲの高い潜在能力は、低投与量レジメンが、他の自己免疫状態の処置に等しく有効であることを示す。可溶性ＬＴＢＲ（例えば、ＬＴＢＲ−Ｆｃ）による、本明細書に記載されるような処置に適した自己免疫状態としては、例えば、自己免疫関節炎症（関節リウマチおよびシェーグレン症候群を含む）、乾癬、多発性硬化症、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）（潰瘍性大腸炎およびクローン病を含む）、インスリン依存性糖尿病、ブドウ膜炎、全身エリテマトーデス（ＳＬＥもしくは狼瘡）、多発性軟骨炎、および移植片拒絶が挙げられる。
【０１５１】
（例示的投与レジメン）
本発明は、ＬＴＢＲ（例えば、ＬＴＢＲ−Ｆｃ）の可溶性形態の低投与量もしくは頻度レジメンが、自己免疫障害、特に、関節リウマチ（ＲＡ）の症状を効率的に処置し得るという発見に一部基づく。従って、一局面において、本発明は、患者における自己免疫疾患を処置する方法を提供する。上記方法は、低容量および／もしくは低頻度において、ＬＴＢＲ遮断剤（例えば、可溶性ＬＴＢＲ融合タンパク質、例えば、ＬＴＢＲ−Ｆｃ）を上記被験体に投与する工程を包含する。
【０１５２】
図１４に示されるように、ＬＴＢＲ−Ｆｃと代表的な抗体との比較は、同一の投与において、長期の時間枠にわたって顕著な効力の差異が認められる。このことは、抗体様薬物動態に加えて、ｒＬＴＢＲ−Ｆｃが標的リガンドに対して高い親和性を有するので、従って、非常に低用量で有効であることを生じる。矢印ＡおよびＢは、それぞれ、Ｆｃ融合タンパク質の抗体について代表的なα相およびβ相を示す。上記抗体について、矢印Ｃによって示される灰色の線は、効力のための代表的な下限濃度を示すのに対して、矢印Ｄは、ＬＴＢＲ−Ｆｃが、顕著に低い濃度における有効性を示す。
【０１５３】
一実施形態において、可溶性ＬＴＢＲ融合タンパク質は、約０．１４μｇ／ｍｌ〜約３．５μｇ／ｍｌの間の平均濃度を達成するために投与される。一実施形態において、可溶性ＬＴＢＲ融合タンパク質は、約０．３〜約１．０μｇ／ｍｌ、例えば、約０．６〜０．７μｇ／ｍｌの最小平均濃度を達成するために投与される。別の実施形態において、より高い用量の上記融合タンパク質が投与され得る。例えば、上記融合タンパク質は、約５〜１５μｇ／ｍｌの平均濃度を達成するために投与され得る。
【０１５４】
別の実施形態において、可溶性ＬＴＢＲ融合タンパク質は、約７５ｋｇ体重の平均的な被験体に対して、約７０〜約２００ｍｇ／月の間の用量において投与される。別の実施形態において、可溶性ＬＴＢＲ融合タンパク質は、約７５ｋｇ体重の平均的な被験体に対して、約１００ｍｇ／月、約１５０ｍｇ／月、もしくは約１７５ｍｇ／月の用量において投与される。
【０１５５】
本発明の実施形態は、自己免疫関節炎症（関節リウマチおよびシェーグレン症候群を含む）、乾癬、多発性硬化症、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）（潰瘍性大腸炎およびクローン病を含む）、インスリン依存性糖尿病、ブドウ膜炎、全身エリテマトーデス（ＳＬＥ、もしくは狼瘡）、多発性軟骨炎、および移植片拒絶の処置のための、ＬＴＢＲ遮断剤（例えば、ＬＴＢＲ融合タンパク質（例えば、ＬＴＢＲ−Ｉｇ）のような可溶性ＬＴＢＲ）のレジメンの投与を包含し得る。
【０１５６】
一実施形態において、上記被験体は、可溶性ＬＴＢＲ（例えば、ＬＴＢＲ免疫グロブリン融合物）で処置される。例示的なＬＴＢＲ−Ｉｇ融合タンパク質は、本明細書に記載される。
【０１５７】
一実施形態において、上記被験体は、ＲＡの１種以上の症状（例えば、関節腫脹、関節痛、関節のこわばり、もしくは動かすのが困難なこと）を有する。例えば、上記被験体は、活動性ＲＡ疾患（例えば、さわると痛い関節数（ＴＪＣ）もしくは腫脹関節数（ＳＪＣ）≧５または滑膜炎）を有する。別の実施形態において、上記被験体は、ＲＡを発症する危険性（例えば、家族歴、もしくは自己免疫疾患）がある。
【０１５８】
一実施形態において、上記可溶性ＬＴＢＲは、ＲＡと関連する症状を軽減するのに十分な量でおよび／もしくは時間にわたって投与され得る。
【０１５９】
別の実施形態において、上記可溶性ＬＴＢＲ（例えば、ＬＴＢＲ−Ｆｃ）は、１種以上のＲＡ評価基準（例えば、本明細書に記載される基準）における症状を改善するのに十分な量で投与される。例えば、上記可溶性ＬＴＢＲは、症状スコアを少なくとも約１０％、２０％、２５％、３０％、４０％、５０％以上改善するのに十分な量で投与される。症状スコアとは、例えば、ＴＪＣ、ＳＪＣ、疾患活動性の患者の包括的評価［ＰＧＡ視覚的アナログスケール（ＶＡＳ）０〜１０ｃｍ］、医師の疾患活動性の包括的評価（ＭＤＧＡ  ＶＡＳ  ０〜１０ｃｍ）、Ｃ反応性タンパク質の量（ＣＲＰ（ｍｇ／ｄｌ））、もしくは疾患活動性スコア、２８関節バージョン（ＤＡＳ２８）をいう。症状スコアは、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｏｌｌｅｇｅ  ｏｆ  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ（ＡＣＲ）によって示される基準に従って報告され得る。ＡＣＲスコアは、ＲＡ症状における臨床的改善％の指標である。例えば、ＡＣＲ２０は、ＴＪＣおよびＳＪＣにおいて２０％の臨床的改善、および以下の５つのパラメーターのうちの３つにおける２０％の改善の指標である：（ｉ）患者の包括的評価、（ｉｉ）医師の包括的評価、（ｉｉｉ）患者の疼痛評価、（ｉｖ）障害（ｄｉｓａｂｉｌｉｔｙ）の程度、および（ｖ）急性相反応物のレベル。ＡＣＲ５０およびＡＣＲ７０というＡＣＲスコアはまた、それぞれ、５０％改善、もしくは７０％改善を示すために使用され得る。
【０１６０】
一実施形態において、上記可溶性ＬＴＢＲ（例えば、ＬＴＢＲ−Ｆｃ）は、例えば、１週間に、２週間に、もしくは１ヶ月に１回より多く投与される。処置の過程は、一定期間（例えば、１週間もしくは２週間以上）；１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、もしくは６ヶ月以上にわたって；１年；またはそれ以上にわたって維持される。特定の実施形態において、上記可溶性ＬＴＢＲは、投与１回につき、約０．０３〜３ｍｇ／ｋｇ体重（例えば、投与１回につき、約０．６〜約１．４ｍｇ／ｋｇ）の投与量において投与される。別の実施形態において、上記可溶性ＬＴＢＲは、約０．３〜３（例えば、投与１回につき１ｍｇ／ｋｇ体重（例えば、投与１回につき約０．６〜約１．４ｍｇ／ｋｇ）の投与量において投与される。他の実施形態において、上記可溶性ＬＴＢＲは、投与１回あたり、約２．５〜３．５ｍｇ／ｋｇ体重（例えば、投与１回あたり約２．８〜３ｍｇ／ｋｇ）の投与量において投与される。さらに他の実施形態において、上記可溶性ＬＴＢＲは、投与１回あたり約０．０１〜３ｍｇ／ｋｇ体重（例えば、投与１回あたり約０．０１〜約０．０５ｍｇ／ｋｇ、投与１回あたり約０．０１〜約０．３ｍｇ／ｋｇ、投与１回あたり約０．０１〜０．２ｍｇ／ｋｇ、もしくは投与１回あたり約０．０１〜約０．１ｍｇ／ｋｇ）の投与量において投与される。いくつかの実施形態において、上記可溶性ＬＴＢＲは、投与１回あたり約０．０３ｍｇ／ｋｇ、投与１回あたり約０．０５ｍｇ／ｋｇ、投与１回あたり約０．０７ｍｇ／ｋｇ、投与１回あたり約０．１ｍｇ／ｋｇ、もしくは投与１回あたり約０．２ｍｇ／ｋｇにおいて投与される。いくつかの実施形態において、上記可溶性ＬＴＢＲは、表１に示される投与量において投与される。
【０１６１】
表１：LTBR-Fcの例示的投与量(投与１回あたりmg/kg被験体体重)
【０１６２】
【表１−１】
0005431171.tif 000004
【０１６３】
【表１−２】
0005431171.tif 000005
一般に、本明細書に開示される低い方の単位用量は、より高い頻度の投与（例えば、１週間に１回）で投与され得る一方で、本明細書に開示される高い方（相対的標準ではなお低いが）の単位用量は、より低い頻度（例えば、１ヶ月に１回）の投与で投与され得る。いくつかの実施形態において、上記可溶性ＬＴＢＲ（例えば、ＬＴＢＲ−Ｆｃ）は、約０．３ｍｇ／ｋｇ／投与〜約３ｍｇ／ｋｇ／投与（例えば、約０．６ｍｇ／ｋｇ／日〜約１．４ｍｇ／ｋｇ／日）の投与量において投与される。例えば、上記用量は、約１ｍｇ／ｋｇ、もしくは約３ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態において、上記用量は、１４〜２０日ごとに１回、１ヶ月に１回もしくは２回（例えば、２８〜３１日ごとに１回もしくは２回）において投与される。例えば、上記用量は、１４〜２０日ごとに、例えば、１２〜１６日ごとに、もしくは約２週間ごとに、約１ｍｇ／ｋｇもしくは約３ｍｇ／ｋｇ投与される。あるいは、上記用量は、１ヶ月に１回、例えば、約２８〜３１日ごとに、約１ｍｇ／ｋｇもしくは約３ｍｇ／ｋｇ投与される。
【０１６４】
他の実施形態において、上記可溶性ＬＴＢＲ（例えば、ＬＴＢＲ−Ｆｃ）は、２０〜４０日ごとに多くて２回、例えば、２５〜３５日ごとに多くて２回、または２８〜３１日ごとに多くて２回、約０．６ｍｇ／ｋｇ／投与〜約１．４ｍｇ／ｋｇ／投与の投与量において投与される。他の実施形態において、上記可溶性ＬＴＢＲ（例えば、ＬＴＢＲ−Ｆｃ）は、２０〜４０日ごとに多くて２回（例えば、２５〜３５日ごとに多くて２回、もしくは２８〜３１日ごとに多くて２回）、約２．５ｍｇ／ｋｇ／投与〜約３．５ｍｇ／ｋｇ／投与の投与量において投与される。
【０１６５】
なお他の実施形態において、上記可溶性ＬＴＢＲ（例えば、ＬＴＢＲ−Ｆｃ）は、例えば、１週間に１回、もしくは３〜１０日ごとに、少なくとも２回反復して、約０．０１ｍｇ／ｋｇ／投与〜約０．３ｍｇ／ｋｇ／投与（例えば、約０．０１ｍｇ／ｋｇ／日〜約０．２５ｍｇ／ｋｇ／日の投与量において投与される。例えば、上記可溶性ＬＴＢＲは、約０．０２ｍｇ／ｋｇ、０．０３ｍｇ／ｋｇ、０．０４ｍｇ／ｋｇ、０．０５ｍｇ／ｋｇ、０．０６ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ、もしくは０．２ｍｇ／ｋｇの投与量において投与されるか、１週間に１回もしくは３〜１０日ごとに（例えば、４日ごとに、５日ごとに、６日ごとに、７日ごとに、８日ごとに、もしくは９日ごとに）投与される。いくつかの実施形態において、上記可溶性ＬＴＢＲは、表１に示される投与量において投与される。
【０１６６】
別の実施形態において、上記可溶性ＬＴＢＲは、例えば、２週間に１回、もしくは５〜２０日ごとに、少なくとも２回反復して、約０．０１ｍｇ／ｋｇ／日〜約０．３ｍｇ／ｋｇ／日（例えば、０．０２ｍｇ／ｋｇ／日〜約０．２５ｍｇ／ｋｇ／日）の投与量において投与される。例えば、上記可溶性ＬＴＢＲは、約０．０３ｍｇ／ｋｇ、０．０５ｍｇ／ｋｇ、０．０８ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ、もしくは０．２ｍｇ／ｋｇの投与量において投与され、２週間に１回、もしくは５〜２０日ごとに（例えば、６日ごとに、８日ごとに、１０日ごとに、１２日ごとに、１４日ごとに、１６日ごとに、もしくは１８日ごとに）投与される。いくつかの実施形態において、上記可溶性ＬＴＢＲは、表１に示される投与量において投与される。
【０１６７】
別の実施形態において、上記可溶性ＬＴＢＲは、例えば、２週間に１回、もしくは５〜２０日ごとに、少なくとも２回反復して、約０．３ｍｇ／ｋｇ／日〜約３ｍｇ／ｋｇ／日（例えば、１ｍｇ／ｋｇ／日）の投与量において投与される。いくつかの実施形態において、上記可溶性ＬＴＢＲは、表１に示される投与量において投与される。
【０１６８】
別の実施形態において、上記可溶性ＬＴＢＲは、例えば、１ヶ月に１回、もしくは１５〜４５日ごとに少なくとも２回反復して、約０．３ｍｇ／ｋｇ／日〜約３ｍｇ／ｋｇ／日（例えば、０．４ｍｇ／ｋｇ／日〜約３ｍｇ／ｋｇ／日）の投与量において投与される。例えば、上記可溶性ＬＴＢＲは、約０．５ｍｇ／ｋｇ、０．８ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ、もしくは２ｍｇ／ｋｇの投与量において投与され、１ヶ月に１回、もしくは１５〜４５日ごとに（例えば、１６日ごとに、１８日ごとに、２０日ごとに、２５日ごとに、３０日ごとに、３５日ごとにもしくは４０日ごとに）投与される。いくつかの実施形態において、上記可溶性ＬＴＢＲは、表１に示される投与量において投与される。
【０１６９】
特定の実施形態において、可溶性ＬＴＢＲ（例えば、ＬＴＢＲ−Ｆｃ）の用量は、約０．４ｍｇ〜約３７５ｍｇ、約０．４ｍｇ〜約６．２５ｍｇ、約２ｍｇ〜約６．２５ｍｇ、もしくは約４ｍｇ〜約１２．５ｍｇである。
【０１７０】
特定の実施形態において、本発明は、自己免疫障害（例えば、ＲＡ）の処置のための、特に低用量の可溶性ＬＴＢＲ（例えば、ＬＴＢＲ−Ｆｃ）の投与を提供する。
【０１７１】
特定の実施形態において、上記可溶性ＬＴＢＲは、静脈内投与されるかもしくは非経口投与され、例えば、皮下投与もしくは筋肉内投与される。
【０１７２】
別の実施形態において、上記可溶性ＬＴＢＲは、単一療法（ｍｏｎｏｔｈｅｒａｐｙ）として投与される。
【０１７３】
一局面において、本発明は、被験体（例えば、ヒト）における自己免疫状態（例えば、ＲＡ）を処置するための方法を提供する。上記方法は、上記ヒトに、一定用量の可溶性ＬＴＢＲ（例えば、ＬＴＢＲ−Ｆｃを投与する工程を包含し、ここで上記用量は、約０．０１ｍｇ〜約３ｍｇＬＴＢＲ−Ｆｃ／ｋｇ体重ヒト（ｍｇ／ｋｇ）の間、例えば、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約０．０５ｍｇ／ｋｇの間である。一実施形態において、上記ヒトは、少なくとも２週間の過程にわたって、可溶性ＬＴＢＲ（例えば、ＬＴＢＲ−Ｆｃ）の１週間に１回の用量において投与され、ここで上記用量は、１週間に１回（例えば、３〜１０日ごとに）、約０．０１ｍｇ／ｋｇ／日〜約０．３ｍｇ／ｋｇ／日（例えば、約０．０１ｍｇ／ｋｇ／日〜約０．２５ｍｇ／ｋｇ／日）投与される。例えば、上記可溶性ＬＴＢＲは、例えば、４日ごとに、５日ごとに、６日ごとに、７日ごとに、８日ごとに、もしくは９日ごとに、約０．０２ｍｇ／ｋｇ／日、０．０３ｍｇ／ｋｇ／日、０．０４ｍｇ／ｋｇ／日、０．０５ｍｇ／ｋｇ／日、０．０６ｍｇ／ｋｇ／日、０．１ｍｇ／ｋｇ／日、もしくは０．２ｍｇ／ｋｇ／日の投与量において投与される。いくつかの実施形態において、上記可溶性ＬＴＢＲは、表１に示される投与量において投与される。
【０１７４】
別の実施形態において、上記ヒトは、２週間に１回の用量の可溶性ＬＴＢＲ（例えば、ＬＴＢＲ−Ｆｃ）を、少なくとも４週間の過程にわたって投与され、ここで上記用量は、５〜２０日ごとに反復して、約０．０１ｍｇ／ｋｇ／日〜約０．５ｍｇ／ｋｇ／日（例えば、約０．０１ｍｇ／ｋｇ／日〜約０．３ｍｇ／ｋｇ／日）である。例えば、上記可溶性ＬＴＢＲは、例えば、６日ごとに、８日ごとに、１０日ごとに、１２日ごとに、１４日ごとに、１６日ごとに、もしくは１８日ごとに、約０．０３ｍｇ／ｋｇ、０．０５ｍｇ／ｋｇ、０．０８ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．２ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、もしくは０．４ｍｇ／ｋｇの投与量において投与される。いくつかの実施形態において、上記可溶性ＬＴＢＲは、表１に示される投与量において投与される。
【０１７５】
別の実施形態において、上記ヒトは、少なくとも２ヶ月の過程にわたって、１ヶ月に１回の用量の可溶性ＬＴＢＲ（例えば、ＬＴＢＲ−Ｆｃ）を投与され、ここで上記用量は、約０．１ｍｇ〜約３ｍｇの可溶性ＬＴＢＲ／ｋｇヒト体重／日である。一実施形態において、上記用量は、１ヶ月に１回（例えば、１５〜４５日ごとに）投与される約０．３ｍｇ／ｋｇ／日〜約３ｍｇ／ｋｇである。例えば、上記可溶性ＬＴＢＲは、例えば、１６日ごとに、１８日ごとに、２０日ごとに、２５日ごとに、３０日ごとに、３５日ごとに、もしくは４０日ごとに、約０．５ｍｇ／ｋｇ／日、０．８ｍｇ／ｋｇ／日、１ｍｇ／ｋｇ／日、１．５ｍｇ／ｋｇ／日、もしくは２ｍｇ／ｋｇ／日の投与量において投与される。いくつかの実施形態において、上記可溶性ＬＴＢＲは、表１に示される投与量において投与される。
【０１７６】
いくつかの実施形態において、治療に対して不十分応答を示す患者は、上記治療に応答して臨床的に受容可能なもしくは顕著な改善を示さなかった。他の実施形態において、上記患者は、最初は治療に応答して改善を示したが、上記特定の障害についての標準臨床尺度によって評価される場合、もはや改善を示さない。ＤＭＡＲＤ−ＩＲ被験体は、疾患改変抗リウマチ薬（ｄｉｓｅａｓｅ  ｍｏｄｉｆｙｉｎｇ  ａｎｔｉｒｈｅｕｍａｔｉｃ  ｄｒｕｇ）（ＤＭＡＲＤ）（例えば、メトトレキサート、レフルノミド（Ａｒａｖａ（登録商標））、アナキンラ（Ｋｉｎｅｒｅｔ（登録商標））、ヒドロキシクロロキノン（ｈｙｄｒｏｘｙｃｈｏｌｏｑｕｉｎｅ）スルフェート（Ｐｌａｑｕｅｎｉｌ（登録商標））、抗マラリア剤、金の塩（ｇｏｌｄ  ｓａｌｔ）、スルファサラジン（Ａｚｕｌｆｉｄｉｎｅ（登録商標））、ミノサイクリン（Ｍｉｎｏｃｉｎ（登録商標））、ｄ−ペニシラミン、シクロスポリンＡ、シクロスポリン（Ｎｅｏｒａｌ（登録商標））、シクロホスファミドおよびアザチオプリン（Ｉｍｕｒａｎ（登録商標）））に対する不十分応答を有した被験体である。
【０１７７】
一局面において、本発明は、皮下投与もしくは筋肉内投与のために設計された送達デバイス（例えば、経皮的送達デバイス（例えば、シリンジ））を特徴とし、ここで上記デバイスは、可溶性ＬＴＢＲ（例えば、ＬＴＢＲ−Ｆｃ）の少なくとも１単位用量とともにパッケージされるかもしくはこれを含み、その結果、適切に低量の上記薬剤が、ヒトに投与される。一実施形態において、上記デバイスは、単位用量のＬＴＢＲ−Ｆｃを含むかまたはこれとともにパッケージされ、その結果、ヒトへの投与は、上記ヒトへ約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜３ｍｇ／ｋｇの間のＬＴＢＲ−Ｆｃ（例えば、約０．０１〜約０．０５ｍｇ／ｋｇのＬＴＢＲ−Ｆｃ、もしくは約０．６ｍｇ／ｋｇ〜１．４ｍｇ／ｋｇの間のＬＴＢＲ−Ｆｃを送達する。別の実施形態において、上記デバイスは、単位用量のＬＴＢＲ−Ｆｃを含むかまたはこれとともにパッケージされ、その結果、ヒトへの投与は、上記ヒトに、約２．５ｍｇ／ｋｇ〜３．５ｍｇ／ｋｇの間のＬＴＢＲ−Ｆｃを送達する。特定の実施形態において、上記送達デバイスは、約１ｍｇ／ｋｇもしくは約３ｍｇ／ｋｇのＬＴＢＲ−Ｆｃを上記ヒトに送達する。種々の体重のヒトに適切な例示的単位用量は、表２に提供される。
【０１７８】
一実施形態において、その第２の区画における液体は、水もしくは緩衝液である。上記液体は、例えば、薬学的に受容可能なキャリア（例えば、溶媒、分散媒体、抗菌剤もしくは抗真菌剤、または等張剤もしくは吸収遅延剤）を含み得る。上記液体はまた、薬学的に受容可能な塩を含み得る。
表２．ヒトの体重による、ＬＴＢＲ−Ｆｃの例示的用量（ｍｇ）
【０１７９】
【表２−１】
0005431171.tif 000006
【０１８０】
【表２−２】
0005431171.tif 000007
特定の実施形態において、送達デバイス中に含まれる上記可溶性ＬＴＢＲ（例えば、ＬＴＢＲ−Ｆｃ）の単位用量は、約０．４ｍｇ〜約３７５ｍｇ、約０．４ｍｇ〜約６．２５ｍｇ、約２ｍｇ〜約６．２５ｍｇ、もしくは約４ｍｇ〜約１２．５ｍｇである。一実施形態において、上記デバイスは、凍結乾燥ＬＴＢＲ−Ｆｃを含む。
【０１８１】
一局面において、本発明は、約０．４ｍｇ〜約３７５ｍｇの間の２つ以上の単位用量のＬＴＢＲ−Ｆｃを含むキットを特徴とする。上記単位用量は、ヒトの体重によって決定される場合、適切に低い量がヒトに投与されるようになる。種々の重量のヒトに適した例示的単位用量は、表２に提供される。
【０１８２】
別の局面において、本発明は、デバイス、例えば、経皮的送達デバイス（例えば、少なくとも２つの区画を有し、第１の区画は、凍結乾燥ＬＴＢＲ−Ｆｃの単位用量を含み、そして第２  の区画は、被験体に投与する前に上記ＬＴＢＲ−Ｆｃを再構成するための液体を含むシリンジ）を特徴とする。例えば、上記単位用量は、上記ＬＴＢＲ−Ｆｃの投与が約０．０１〜３ｍｇ／ｋｇの間（例えば、１．０ｍｇ／ｋｇの）ＬＴＢＲ−Ｆｃをヒトに送達するようにされる。例えば、いくつかの実施形態において、ＬＴＢＲ−Ｆｃの上記単位用量は、約０．４ｍｇ〜約３７５ｍｇの間のＬＴＢＲ−Ｆｃ（例えば、約０．４ｍｇ〜約６．２５ｍｇの間のＬＴＢＲ−Ｆｃ）である。上記単位用量は、ヒトの体重によって決定される場合、適切に低い量が上記ヒトに投与されるようにされる。種々の体重のヒトに適した例示的単位用量は、表２に提供される。
【０１８３】
別の局面において、本発明は、（ｉ）上記患者に少なくとも２つの単位用量のＬＴＢＲ−Ｆｃを提供すること；および（ｉｉ）上記単位用量を、１度に１用量、例えば、皮下に自己投与するように、上記患者に指示すること、によって上記ＲＡを処置するために、関節リウマチを有する患者を指示するための方法を特徴とする。特定の実施形態において、上記送達される用量は、約０．０１ｍｇ〜３ｍｇのＬＴＢＲ−Ｆｃ／ｋｇ患者体重（ｍｇ／ｋｇ）の間であり、例えば、約０．６ｍｇ／ｋｇ〜１．４ｍｇ／ｋｇの間、もしくは約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜０．０５ｍｇ／ｋｇの間である。一実施形態において、上記送達される用量は、上記患者の体重１ｋｇあたり、約２．５〜３．５ｍｇ／ｋｇの間のＬＴＢＲ−Ｆｃ（ｍｇ／ｋｇ）である。特定の実施形態において、上記患者は、１週間に１回、少なくとも２週間の過程にわたって；２週間に１回、少なくとも４週間の過程にわたって；もしくは１ヶ月、少なくとも２ヶ月の過程にわたって、上記用量を自己投与するように指示される。特定の実施形態において、上記単位用量は、約０．０１〜約３．０ｍｇ／ｋｇのＬＴＢＲ−Ｆｃ／投与である。特定の実施形態において、上記単位用量は、約０．０１〜約２．５ｍｇ／ｋｇ／投与、約０．０２〜約０．５ｍｇ／ｋｇ／投与、約０．０１〜約０．３ｍｇ／ｋｇ／投与、約０．０１〜約０．２ｍｇ／ｋｇ／投与、約０．０１〜約０．１ｍｇ／ｋｇ／投与、もしくは約０．０１〜約０．０５ｍｇ／ｋｇ／投与である。特定の実施形態において、上記単位用量は、約０．０３ｍｇ／ｋｇ、約０．０５ｍｇ／ｋｇ、約０．０７ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ、もしくは約０．２ ｍｇ／ｋｇ／投与である。
【０１８４】
一実施形態において、上記患者は、上記用量を１週間に１回、少なくとも２週間の過程にわたって、自己投与するように指示され、ここで上記単位用量は、投与１回あたり約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約３．０ｍｇ／ｋｇのＬＴＢＲ−Ｆｃ（例えば、１回の投与あたり、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約０．２５ｍｇ／ｋｇ、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約０．０５ｍｇ／ｋｇのＬＴＢＲ−Ｆｃ）である。例えば、上記単位用量は、約０．０２ｍｇ／ｋｇ／投与、０．０３ｍｇ／ｋｇ／投与、０．０４ｍｇ／ｋｇ／投与、０．０５ｍｇ／ｋｇ／投与、０．０６ｍｇ／ｋｇ／投与、０．１ｍｇ／ｋｇ／投与、もしくは０．２ｍｇ／ｋｇ／投与である。
【０１８５】
一実施形態において、上記患者は、上記用量を２週間に１回、少なくとも４週間の過程にわたって自己投与するように指示され、ここで上記単位用量は、約０．０１〜１．５ｍｇ／ｋｇの間（例えば、約０．０１〜約０．３ｍｇ／ｋｇ、もしくは約０．０２ｍｇ／ｋｇ〜約０．３ｍｇ／ｋｇもしくは約０．５〜１．２５ｍｇ／ｋｇのＬＴＢＲ−Ｆｃ）である。例えば、上記単位用量は、約０．０３ｍｇ／ｋｇ／投与、０．０５ｍｇ／ｋｇ／投与、０．０８ｍｇ／ｋｇ／投与、０．１ｍｇ／ｋｇ／投与、０．２ｍｇ／ｋｇ／投与、０．３ｍｇ／ｋｇ／投与、０．４ｍｇ／ｋｇ／投与、０．５ｍｇ／ｋｇ／投与、０．７５ｍｇ／ｋｇ／投与、もしくは１．０ｍｇ／ｋｇ／投与である。
【０１８６】
一実施形態において、上記患者は、上記用量を１ヶ月に１回、少なくとも２ヶ月の過程にわたって自己投与するように指示され、ここで上記単位用量は、上記患者の体重１ｋｇあたり約０．０３〜約３ｍｇの間のＬＴＢＲ−Ｆｃ（ｍｇ／ｋｇ）である。例えば、上記単位用量は、約０．２ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ、０．８ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ、もしくは２ｍｇ／ｋｇである。
【０１８７】
別の局面において、本発明は、（ｉ）ＲＡを処置するために治療を行うのをやめるように患者を指示する工程、および（ｉｉ）上記患者に単位用量のＬＴＢＲ−Ｆｃを投与する工程、を含む患者におけるＲＡを管理するための方法を特徴とする。一実施形態において、上記単位用量は、約０．０３〜約３ｍｇ／ｋｇの間のＬＴＢＲ−Ｆｃ、例えば、約０．６〜約１．４ｍｇ／ｋｇ  ＬＴＢＲ−Ｆｃである。別の実施形態において、上記単位用量は、約２．５〜約３．５ｍｇ／ｋｇのＬＴＢＲ−Ｆｃである。他の実施形態において、上記単位用量は、約０．０１〜約０．０５ｍｇ／ｋｇの間のＬＴＢＲ−Ｆｃである。
【０１８８】
別の実施形態において、上記単位用量は、約０．３ｍｇ／ｋｇ〜３ｍｇ／ｋｇの間のＬＴＢＲ−Ｆｃであり、上記単位用量は、２０〜４０日ごとに（例えば、２５〜３５日ごと、もしくは２８〜３１日ごとに）、多くて２回投与される。別の実施形態において、上記単位用量は、約０．６ｍｇ／ｋｇ〜約１．４ｍｇ／ｋｇのＬＴＢＲ−Ｆｃの間であり、２０〜４０日ごとに（例えば、２５〜２５日ごと、もしくは２８〜３１日ごとに）、多くて２回投与される。
【０１８９】
別の実施形態において、上記単位用量は、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜０．３ｍｇ／ｋｇの間のＬＴＢＲ−Ｆｃであり、上記単位用量は、３〜１０日ごと（例えば、１週間に１回）、多くて１回投与される。別の実施形態において、上記単位用量は、５〜２０日ごとに（例えば、２週間に１回）、多くて１回、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約０．３ｍｇ／ｋｇ  ＬＴＢＲ−Ｆｃ投与される。別の実施形態において、上記単位用量は、２８〜３１日ごとに（例えば、１ヶ月に１回）、多くて１回約０．３ｍｇ／ｋｇ〜約３ｍｇ／ｋｇ  ＬＴＢＲ−Ｆｃ投与される。
【０１９０】
一実施形態において、上記単位用量は、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約０．２５ｍｇ／ｋｇの間のＬＴＢＲ−Ｆｃであり、上記単位用量は、少なくとも２週間の過程にわたって１週間に１回投与される。例えば、上記単位用量は、約０．０２ｍｇ／ｋｇ／投与、０．０３ｍｇ／ｋｇ／投与、０．０４ｍｇ／ｋｇ／投与、０．０５ｍｇ／ｋｇ／投与、０．０６ｍｇ／ｋｇ／投与、０．１ｍｇ／ｋｇ／投与、もしくは０．２ｍｇ／ｋｇ／投与である。
【０１９１】
別の実施形態において、上記単位用量は、約０．０２ｍｇ／ｋｇ〜約０．５ｍｇ／ｋｇ  ＬＴＢＲ−Ｆｃであり、上記単位用量は、少なくとも４週間の過程にわたって２週間に１回投与される。例えば、上記単位用量は、約０．０３ｍｇ／ｋｇ／投与、０．０５ｍｇ／ｋｇ／投与、０．０８ｍｇ／ｋｇ／投与、０．１ｍｇ／ｋｇ／投与、０．２ｍｇ／ｋｇ／投与、０．３ｍｇ／ｋｇ／投与、もしくは０．４ｍｇ／ｋｇ／投与である。
【０１９２】
別の実施形態において、上記単位用量は、約０．０３〜約３ｍｇ  ＬＴＢＲ−Ｆｃであり、上記単位用量は、少なくとも２ヶ月の過程にわたって１ヶ月に１回投与される。例えば、上記単位用量は、約０．２ｍｇ／ｋｇ／投与、０．５ｍｇ／ｋｇ／投与、０．８ｍｇ／ｋｇ／投与、１ｍｇ／ｋｇ／投与、１．５ｍｇ／ｋｇ／投与、もしくは２ｍｇ／ｋｇ／投与である。
【０１９３】
一実施形態において、上記患者は、ＮＳＡＩＤ、コルチコステロイド、もしくはＤＭＡＲＤ治療をやめるように指示される。
【０１９４】
一局面において、本発明は、単位用量の可溶性ＬＴＢＲ（例えば、ＬＴＢＲ−Ｆｃ）を患者に投与する工程を包含する、患者におけるＲＡを管理するための方法を特徴都市、ここで（ｉ）上記単位用量は、患者の体重１ｋｇあたり約０．０１ｍｇ〜約０．０５ｍｇの間の上記可溶性ＬＴＢＲであり（ｍｇ／ｋｇ）；（ｉｉ）上記単位用量は、３〜１０日ごとに多くて１回（例えば、１週間に１回）、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜０．３ｍｇ／ｋｇ  ＬＴＢＲ−Ｆｃ投与される；（ｉｉｉ）上記単位用量は、５〜２０日ごとに（例えば、２週間に１回）多くて１回、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜１ｍｇ／ｋｇ  ＬＴＢＲ−Ｆｃ投与される；（ｉｖ）上記単位用量は、２０〜４０日ごとに（例えば、２５〜３５日ごとに、もしくは２８〜３１日ごとに）多くて２回、約０．３ｍｇ／ｋｇ〜３ｍｇ／ｋｇ  ＬＴＢＲ−Ｆｃ投与される（例えば、約０．６〜１．４ｍｇ／ｋｇ  ＬＴＢＲ−Ｆｃ投与される）、または（ｖ）上記単位用量は、２０〜４０日ごとに（例えば、２５〜３５日ごとに、もしくは２８〜３１日ごとに）、多くて１回、約２．５ｍｇ／ｋｇ〜３．５ｍｇ／ｋｇ  ＬＴＢＲ−Ｆｃ投与される。この方法によって、上記患者は、上記可溶性ＬＴＢＲの投与前に、ＲＡを処置するために、第１の治療（例えば、ＮＳＡＩＤ、コルチコステロイド、もしくはＤＭＡＲＤ治療）を受け、そして上記第１の治療のレベルは、少なくとも上記可溶性ＬＴＢＲの第１の単位用量が上記患者に投与されるときに、上記患者に維持される。一実施形態において、上記第１の治療のレベルは、上記可溶性ＬＴＢＲの第１および第２の単位用量の後に、上記患者において維持されない。例えば、上記第１の治療剤のレベルは、例えば、低用量の上記第１の治療剤を投与することによって、もしくは投与を中止し、上記第１の治療剤のレベルを身体から消失させることによって、減少させられる。別の実施形態において、上記患者は、上記可溶性ＬＴＢＲの投与の間に、上記第１の治療を受け続ける。
【０１９５】
（組み合わせ治療）
本明細書に記載される方法および組成物は、他の治療（例えば、非ステロイド性抗炎症剤（ＮＳＡＩＤ）、コルチコステロイド、およびＤＭＡＲＤ）と組み合わせて使用され得る。
【０１９６】
ＮＳＡＩＤは、代表的には、炎症を低下することによって疼痛を緩和する。適切なＮＳＡＩＤとしては、例えば、アスピリン、イブプロフェン、ナプロキセン、およびケトプロフェンが挙げられる。ＣＯＸ−２インヒビターは、自己免疫障害の処置のために、可溶性ＬＴＢＲと組み合わせて使用され得る薬物の類似のクラスである。
【０１９７】
ＤＭＡＲＤは、代表的には、関節リウマチの進行を遅らせる。適切なＤＭＡＲＤＳとしては、メトトレキサート、レフルノミド（Ａｒａｖａ（登録商標））、アナキンラ（Ｋｉｎｅｒｅｔ（登録商標））、ヒドロキシクロロキンスルフェート（Ｐｌａｑｕｅｎｉｌ（登録商標））、抗マラリア剤、金の塩、スルファサラジン（Ａｚｕｌｆｉｄｉｎｅ（登録商標））、ミノサイクリン（Ｍｉｎｏｃｉｎ（登録商標））、ｄ−ペニシラミン、シクロスポリンＡ、シクロスポリン（Ｎｅｏｒａｌ（登録商標））、シクロホスファミドおよびアザチオプリン（Ｉｍｕｒａｎ（登録商標））が挙げられる。ＤＭＡＲＤとしてはまた、ＴＮＦインヒビターが挙げられる。腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ−α）は、マクロファージおよびリンパ球によって生成される炎症促進性サイトカインである。ＴＮＦインヒビターは、この分子の炎症促進効果を軽減するのを助ける。ＴＮＦインヒビターとしては、エタネルセプト（Ｅｎｂｒｅｌ（登録商標））、インフリキシマブ（Ｒｅｍｉｃａｄｅ（登録商標））、およびアダリムマブ（Ｈｕｍｉｒａ（登録商標））が挙げられる。
【０１９８】
コルチコステロイドは、代表的には、抗炎症剤として機能し、また、可溶性ＬＴＢＲとの組み合わせ治療において使用され得る。
【０１９９】
特定の実施形態において、可溶性ＬＴＢＲは、第２の方針の治療として使用される。例えば、ＤＭＡＲＤ−ＩＲであると決定されている患者は、ＤＭＡＲＤによる処置を受けるのを停止し、可溶性ＬＴＢＲ（例えば、ＬＴＢＲ−Ｆｃ）での処置を始める。いくつかの実施形態において、ＮＳＡＩＤおよびＤＭＡＲＤの組み合わせ治療を受けている患者は、上記ＤＭＡＲＤを受けるのを停止し、上記ＮＳＡＩＤと組み合わせて、可溶性ＬＴＢＲを受け始める。上記可溶性ＬＴＢＲは、ＮＳＡＩＤと組み合わせて、または別個に投与され得る。例えば、ＮＳＡＩＤの一日用量を受けている患者は、１週間に１回、もしくは２週間に１回、もしくは１ヶ月に１回の用量の可溶性ＬＴＢＲを受けるのみであり得る。あるいは、上記患者は、上記可溶性ＬＴＢＲでの処置を受け続けながら、上記ＤＭＡＲＤおよび／もしくはＮＳＡＩＤ治療を受け続ける。
【０２００】
別の実施形態において、上記可溶性ＬＴＢＲは、ＲＡのための第２の処置と組み合わせて投与される。例えば、上記組み合わせ治療は、ＲＡを有するかもしくはその危険性のある患者に治療的利益を提供する第２の薬剤を投与する工程を包含する。例示的な第２の薬剤としては、例えば、非ステロイド性抗炎症剤（ＮＳＡＩＤ）、コルチコステロイド、もしくは疾患改変抗リウマチ薬（ＤＭＡＲＤ）が挙げられる。
【０２０１】
一実施形態において、上記被験体は、ＲＡと診断された後でかつ可溶性ＬＴＢＲの投与前にＲＡ薬で処置されている。上記ＲＡ薬は、例えば、ＮＳＡＩＤ、コルチコステロイド、もしくはＤＭＡＲＤであり得る。別の実施形態において、上記被験体は、上記ＲＡ薬に対する応答が上記可溶性ＬＴＢＲの投与前に不十分であるか否かを決定するために、評価される。特定の実施形態において、上記被験体は上記ＲＡ薬に対する不十分応答を有すると決定される場合、上記被験体は、可溶性ＬＴＢＲを投与される。一実施形態において、上記被験体は、ＲＡの最初の発現（例えば、ＴＪＣもしくはＳＪＣ）について、無症候性であるか、もしくは十分応答者であると決定される。別の実施形態において、上記被験体は、ＲＡの最初の発現（例えば、ＴＪＣもしくはＳＪＣ）について無症候性であるか、もしくは十分応答者でありかつ症候性であるか、または関節リウマチの第２の発現（滑膜炎）についての不十分応答者であるかを決定される。滑膜炎は、当該分野で公知の任意の方法（例えば、磁気共鳴画像（ＭＲＩ）が挙げられる）によって検出され得る。
【０２０２】
一実施形態において、上記可溶性ＬＴＢＲおよび第２の薬剤は、同時に投与される。別の実施形態において、上記可溶性ＬＴＢＲは、ちょうど良いときに最初に投与され、上記第２の薬剤は、ちょうど良いときに第２に投与される。別の実施形態において、上記第２の薬剤は、ちょうど良いときに最初に投与され、そして上記可溶性ＬＴＢＲは、ちょうど良いときに第２に投与される。上記可溶性ＬＴＢＲは、以前にまたは現在施されている治療を置換もしくは増大し得る。例えば、ＬＴＢＲによる処置の際に、上記第２の薬剤の投与は、中止もしくは減少し得る（例えば、低レベルで投与され得る）。他の実施形態において、上記以前の治療の投与は、維持される。いくつかの実施形態において、以前の治療は、ＬＴＢＲのレベルが治療効果を提供するのに十分なレベルを達成するまで維持される。上記２つの薬物は、組み合わせて投与され得る。
【０２０３】
一実施形態において、ＲＡのための第１の治療（例えば、ＮＳＡＩＤ、コルチコステロイド、もしくはＤＭＡＲＤ）を受けているヒトはまた、可溶性ＬＴＢＲ（例えば、ＬＴＢＲ−Ｆｃ）を投与され得る。一実施形態において、上記ヒトが上記可溶性ＬＴＢＲを投与される場合、上記第１の治療が停止される。別の実施形態において、上記ヒトは、第１の予め選択された結果（例えば、ＲＡ症状における改善（例えば、１０％、２０％、３０％、もしくはそれ以上のＴＪＣもしくはＳＪＣの低下））についてモニターされる。一実施形態において、上記第１の予め選択された結果が認められる場合、可溶性ＬＴＢＲによる処置は、減少されるかもしくは中止される。一実施形態において、次いで、上記ヒトは、上記可溶性ＬＴＢＲによる処置が中止された後に、第２の予め選択された結果（例えば、ＲＡ症状についての悪化（例えば、ＴＪＣもしくはＳＪＣにおける１０％、２０％、３０％以上の増加））についてモニターされる。上記第２の予め選択された結果が認められる場合、上記ヒトへの上記可溶性ＬＴＢＲの投与は、元通りにされるかまたは増大され、または上記第１の治療の投与は、元通りにされるか、または上記ヒトは、可溶性ＬＴＢＲ、もしくは可溶性ＬＴＢＲの増大した量、および上記第１の治療レジメンの両方を投与される。
【０２０４】
一実施形態において、ＲＡについての第１の治療を受けており、次いで、可溶性ＬＴＢＲ（例えば、ＬＴＢＲ−Ｆｃ）で処置されるヒトは、同量もしくは低下した量で、上記第１の治療を受け続ける。別の実施形態において、上記第１の治療による処置は、上記可溶性ＬＴＢＲによる処置と一定期間重なるが、上記第１の治療による処置は、その後中止される。
【０２０５】
一実施形態において、上記被験体は、ＤＭＡＲＤ不十分応答者（ＤＭＡＲＤ−ＩＲ）である。例えば、上記被験体は、抗ＴＮＦ不十分応答者である。
【０２０６】
一実施形態において、上記方法は、ＲＡ症状における改善について、上記被験体を評価する工程を包含する。いくつかの実施形態において、上記評価は、上記可溶性ＬＴＢＲの投与後に、少なくとも１時間（例えば、少なくとも２時間、４時間、６時間、８時間、１２時間、２４時間、もしくは４８時間、または少なくとも１日、２日、４日、１０日、１３日、２０日以上、または少なくとも１週間、２週間、４週間、１０週間、１３週間、２０週間以上、行われる。上記被験体は、以下の期間のうちの１つ以上において評価され得る：処置を始める前に；処置の間に；または処置のうちの１種以上の要素が投与された後に。評価する工程は、同じ可溶性ＬＴＢＲによるさらなる処置もしくはさらなる薬剤によるさらなる処置についての必要性を評価する工程を包含し得る。好ましい実施形態において、上記評価の予め選択された結果が得られる場合、さらなる工程が採用され、例えば、上記被験体は、別の処置を投与されるか、または別の評価もしくは試験が行われる。
【０２０７】
（ＩＩＩ．本発明の薬学的組成物および薬学的投与）
可溶性ＬＴＢＲ（例えば、ＬＴＢＲ−Ｆｃ）は、例えば、自己免疫障害（例えば、ＲＡ）を処置するために被験体に投与するために、薬学的組成物として処方され得る。代表的には、薬学的組成物は、薬学的に受容可能なキャリアを含む。本明細書において使用される場合、「薬学的に受容可能なキャリア」としては、生理学的に適合性である任意および全ての溶媒、分散媒体、コーティング、抗細菌剤および抗真菌剤、等張剤および吸収遅延剤などが挙げられる。上記組成物は、ｃａｎ  ｉｎｃｌｕｄｅ  ａ  薬学的に受容可能な塩（例えば、酸付加塩もしくは塩基付加塩（例えば、Ｂｅｒｇｅら，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．６６：１−１９，１９７７を参照のこと））。
【０２０８】
上記可溶性ＬＴＢＲは、標準的方法に従って処方され得る。薬学的処方物は、十分に確立された技術であり、そして例えば、Ｇｅｎｎａｒｏ（編），Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，第２０版，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ（２０００）（ＩＳＢＮ：  ０６８３３０６４７２）；Ａｎｓｅｌら，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，第７版，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ（１９９９）（ＩＳＢＮ：０６８３３０５７２７）；およびＫｉｂｂｅ（編），Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ，第３版．（２０００）（ＩＳＢＮ：０９１７３３０９６Ｘ）においてさらに記載される。
【０２０９】
一実施形態において、可溶性ＬＴＢＲ（例えば、ＬＴＢＲ−Ｆｃ）は、賦形剤物質（例えば、塩化ナトリウム、二塩基性リン酸ナトリウム七水和物、一塩基性リン酸ナトリウム、および安定化剤）とともに処方され得る。上記可溶性ＬＴＢＲ（例えば、ＬＴＢＲ−Ｆｃ）は、例えば、適切な濃度の緩衝化溶液中に提供され、そして２〜８℃で保存され得る。
【０２１０】
上記薬学的組成物は、種々の形態で存在し得る。これらとしては、例えば、液体、半固体、および固体の投与形態（例えば、液体溶液（例えば、注射用溶液および注入用溶液）、分散物もしくは懸濁物、錠剤、丸剤、散剤、リポソームおよび坐剤）が挙げられる。好ましい形態は、投与適用および治療適用の意図された態様に依存し得る。代表的には、本明細書に記載される薬剤の組成物は、注射用溶液もしくは注入用溶液の形態で存在する。
【０２１１】
このような組成物は、非経口態様（例えば、静脈内注射、皮下注射、腹腔内昼夜、もしくは筋肉内注射）によって投与され得る。語句「非経口投与」および「非経口投与される」とは、本明細書において使用される場合、腸管投与および局所投与以外の投与態様（通常は、注射による）を意味し、静脈内、筋肉内、動脈内、鞘内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内、被膜下、クモ膜下、脊椎内、硬膜外、脳内、頭蓋内、頸動脈内および胸骨内の注射および注入が挙げられるが、これらに限定されない。
【０２１２】
上記組成物は、溶液、マイクロエマルジョン、分散物、リポソーム、もしくは高濃度での安定な貯蔵に適した他の秩序立てられた構造として処方され得る。滅菌注射用溶液は、適切な溶媒中の必要な量の本明細書に記載される薬剤を、上記に列挙された成分のうちの１つもしくは組み合わせとともに組み合わせ、必要である場合、その後の濾過滅菌によって、調製され得る。一般に、分散物は、本明細書に記載される薬剤を、上記に列挙されたものの中から基本的な分散媒体および必要とされる他の成分を含む滅菌ビヒクルに組み込むことによって調製される。滅菌注射用溶液の調製のための滅菌粉末の場合、好ましい調製法は、真空乾燥および凍結乾燥であり、このことによって、予め滅菌調製された溶液から、本明細書に記載される薬剤およびさらなる所望の成分の粉末を得る。溶液の適切な流動性は、例えば、コーティング（例えば、レシチン）の使用によって、分散物の場合には、必要とされる粒径の維持によって、および界面活性剤の使用によって、維持され得る。注射用組成物の長期間の吸収は、吸収を遅延させる薬剤（例えば、モノステアリン酸塩およびゼラチン）を上記組成物中に含めることによって、もたらされ得る。
【０２１３】
特定の実施形態において、上記可溶性ＬＴＢＲは、急激な放出に対して上記化合物を保護するキャリアとともに調製され得る（例えば、制御放出処方物（インプラントを含む）およびマイクロカプセル化送達系）。エチレンビニルアセテート、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、およびポリ乳酸のような生分解性生体適合性ポリマーが、使用され得る。このような処方物の多くの調製法は、特許化されているか、一般に公知である。例えば、Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ  ａｎｄ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｊ．Ｒ．Ｒｏｂｉｎｓｏｎ，編，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９７８を参照のこと。
【０２１４】
可溶性ＬＴＢＲ（例えば、ＬＴＢＲ−Ｆｃ）は、例えば、その安定化および／もしくは例えば、少なくとも１．５倍、２倍、５倍、１０倍、もしくは５０倍まで循環中（例えば、血液中、血清中、もしくは他の組織中）での保持を改善する部分で改変され得る。上記改変された薬剤は、（例えば、上記薬剤の標識形態を使用することによって）自己免疫障害（例えば、ＲＡ）において生じるような炎症部位に達し得るか否かを査定するために評価され得る。
【０２１５】
例えば、上記可溶性ＬＴＢＲは、ポリマー（例えば、実質的に非抗原性のポリマー（例えば、ポリアルキレンオキシドもしくはポリエチレンオキシド））と会合され得る。適切なポリマーは、実質的に重量によって変動する。約２００〜約３５，０００ダルトン（もしくは約１，０００〜約１５，０００、および２，０００〜約１２，５００）の範囲に及ぶ数平均分子量を有するポリマーが、使用され得る。
【０２１６】
例えば、可溶性ＬＴＢＲは、水溶性ポリマー（例えば、親水性ポリビニルポリマー（例えば、ポリビニルアルコールもしくはポリビニルピロリドン））に結合体化され得る。このようなポリマーの非限定的リストとしては、ポリアルキレンオキシドホモポリマー（例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）もしくはポリプロピレングリコール）、ポリオキシエチレン化ポリオール、これらのコポリマーおよびブロックコポリマーが挙げられ、ただし、上記ブロックコポリマーの水溶性は、維持される。さらなる有用なポリマーとしては、ポリオキシアルキレン（例えば、ポリオキシエチレン、ポリオキシプロピレン、およびポリオキシエチレンとポリオキシプロピレンとのブロックコポリマー（Ｐｌｕｒｏｎｉｃｓ））；ポリメタクリレート；カルボマー；および分枝状もしくは非分枝状のポリサッカリドが挙げられる。
【０２１７】
上記可溶性ＬＴＢＲ（例えば、ＬＴＢＲ−Ｆｃ）は、第２の薬剤（例えば、ＤＭＡＲＤ）と組み合わせて使用される場合、上記２つの薬剤は、別個にもしくは一緒に処方され得る。例えば、上記それぞれの薬学的組成物は、例えば、投与の直前に混合され得、そして一緒に投与され得るか、または例えば、同時もしくは異なるときに、別個に投与され得る。
【０２１８】
一実施形態において、薬学的組成物は、長さが１９３アミノ酸もしくは１９４アミノ酸の改変ＬＴ−β−Ｒ細胞外ドメインおよび長さが２２７アミノ酸の改変Ｉｇ部分を含むリンホトキシン−βレセプター（ＬＴ−β−Ｒ）−Ｉｇ−融合タンパク質の集団、ならびに薬学的に受容可能なキャリアを含み、ここで上記ＬＴ−β−Ｒ−Ｉｇ−融合タンパク質のうちの少なくとも９０％は、配列番号２１に示される野生型ＬＴ−β−Ｒ細胞外ドメインの成熟形態のＮ末端からわずか５アミノ酸だけ失っており、上記ＬＴ−β−Ｒ−Ｉｇ−融合タンパク質は、Ｎ末端ピログルタミン酸を欠いている。
【０２１９】
別の実施形態において、薬学的組成物は、リンホトキシン−βレセプター−免疫グロブリン（ＬＴ−β−Ｒ−Ｉｇ）−融合タンパク質の集団ならびに薬学的に受容可能なキャリアを含み、上記融合タンパク質は、長さが１９３アミノ酸もしくは１９４アミノ酸の改変ＬＴ−β−Ｒ細胞外ドメインおよび改変Ｉｇ部分を含み、ここで上記集団は、野生型ＬＴ−β−Ｒ−Ｉｇ融合タンパク質と比較して、低下したＮ末端ピログルタミン酸形成および低下したＣ末端不均一性を有する。
【０２２０】
別の実施形態において、本発明の薬学的組成物は、配列番号５に示されるアミノ酸配列を含む。
【０２２１】
（投与）
可溶性ＬＴＢＲ（例えば、ＬＴＢＲ−Ｆｃ）は、被験体（例えば、ヒト被験体）に、種々の方法によって投与され得る。多くの適用のために、投与経路は、以下の内の１つである：静脈内注射もしくは静脈内注入（ＩＶ）、皮下注射（ＳＣ）、腹腔内注射（ＩＰ）、または筋肉内注射。いくつかの倍、投与は、ＣＮＳに直接（例えば、鞘内、脳室内（ＩＣＶ）、脳内もしくは頭蓋内）であり得る。上記薬剤は、固定用量として、またはｍｇ／ｋｇ用量において投与され得る。
【０２２２】
上記用量はまた、上記薬剤に対する抗体の生成を低下もしくは回避するために、選択され得る。
【０２２３】
上記可溶性ＬＴＢＲの投与経路および／もしくは投与態様はまた、個々の場合のために、例えば、上記被験体をモニターすることによって（例えば、ＴＪＣ、ＳＪＣ、ＣＲＰレベルおよびＲＡもしくは他の自己免疫疾患と関連する標準的パラメーター（例えば、本明細書に記載される評価基準）を使用して）、あつらえられ得る。
【０２２４】
投与レジメンは、所望の応答（例えば、治療的応答もしくは組み合わせ治療効果）を提供するために調節され得る。一般に、必要に応じて、適切な用量の第２の治療剤と別個にもしくは一緒に処方される低用量の可溶性ＬＴＢＲ（例えば、ＬＴＢＲ−Ｆｃ）は、被験体に上記可溶性ＬＴＢＲを提供するために使用され得る。上記可溶性ＬＴＢＲの例示的用量は、本明細書に記載される。
【０２２５】
投与単位形態もしくは「固定用量（ｆｉｘｅｄ  ｄｏｓｅ）」とは、本明細書において使用される場合、処置されるべき被験体のための単位投与量として適した、物理的に別個の量をいう；各単位は、必要とされる薬学的キャリアと合わせて、および必要に応じて、他の薬剤と合わせて、所望の治療効果を生じるように計算された活性化合物の予め決定された量を含む。適切な投与頻度は、本明細書の他の箇所で記載される。
【０２２６】
薬学的組成物は、本明細書に記載される可溶性ＬＴＢＲの治療上有効な量を含み得る。このような有効な量は、上記投与された薬剤の効果、もしくは薬剤の組み合わせ効果、および１種より多い薬剤が使用される場合には第２の薬剤の効果に基づいて決定され得る。薬剤の治療上有効な量は、要因（例えば、個体の疾患状態、年齢、性別、および体重、ならびに上記化合物が上記個体において所望の応答を誘発する能力（例えば、少なくとも１つの障害パラメーター（例えば、ＲＡパラメーター）の緩和）、もしくは上記障害（例えば、ＲＡ）の少なくとも１種の症状の緩和）に従って変動し得る。治療上有効な量はまた、上記組成物の治療上有益な効果が、上記組成物の任意の毒性効果もしくは有害な効果より勝るものである。代表的には、治療上有効な量は、本明細書の他の箇所で記載されるような低用量である。
【０２２７】
（デバイスおよびキット）
可溶性ＬＴＢＲ（例えば、ＬＴＢＲ−Ｆｃ）を含む薬学的組成物は、医療用デバイスで投与され得る。上記デバイスは、携帯性、室温での保管、および使用しやすさのような特徴とともに設計され得る。その結果、上記デバイスは、緊急の状況において、例えば、訓練されていない被験体によって、もしくは現場で救急救命要員によって、使用され得、医療機関および他の医療装備に移され得る。上記デバイスは、例えば、可溶性ＬＴＢＲを含む薬学的調製物を貯蔵するための１つ以上のハウジングを含み得、そして上記薬剤の１つ以上の単位用量を送達するように構成され得る。
【０２２８】
例えば、上記薬学的組成物は、経皮的送達デバイス（例えば、シリンジ（皮下シリンジもしくはマルチチャンバーシリンジを含む））で投与され得る。他の適切な送達デバイスとしては、ステント、カテーテル、経皮パッチ、マイクロニードル、および移植可能な制御放出デバイスが挙げられる。
【０２２９】
他の例において、上記薬学的組成物は、針無しの皮下注射デバイス（例えば、米国特許第５，３９９，１６３号；同第５，３８３，８５１号；同第５，３１２，３３５号；同第５，０６４，４１３号；同第４，９４１，８８０号；同第４，７９０，８２４号；もしくは同第４，５９６，５５６号に開示されるデバイス）で投与され得る。周知の移植物およびモジュールの例としては、以下が挙げられる：米国特許第４，４８７，６０３号（これは、制御された速度で薬物を分与するための移植可能なマイクロ注入ポンプを開示する）；同第４，４８６，１９４号（これは、皮膚を通じて薬物を投与するための治療用デバイスを開示する）；米国特許第４，４４７，２３３号（これは、精密注入速度で薬物を送達するための薬物注入ポンプを開示する）；同第４，４４７，２２４号（これは、連続薬物送達のための流れを変動可能な注入装置を開示する）；同第４，４３９，１９６号（これは、マルチチャンバ区画を有する浸透性薬物送達システムを開示する）；および同第４，４７５，１９６号（これは、浸透性薬物送達システムを開示する）。多くの他のデバイス、インプラント、送達システム、およびモジュールはまた、公知である。
【０２３０】
可溶性ＬＴＢＲ（例えば、ＬＴＢＲ−Ｆｃ）は、キット中に提供され得る。一実施形態において、上記キットは、（ａ）可溶性ＬＴＢＲを含む組成物を含む容器、および必要に応じて、（ｂ）情報資料を含む。上記情報資料は、記述的資料、指示的資料、マーケティング用資料または本明細書に記載される方法および／もしくは治療利益の薬剤の使用に関する他の資料であり得る。一実施形態において、上記キットはまた、自己免疫障害を処置するための第２の薬剤（例えば、ＲＡの処置のためのＤＭＡＲＤ）を含む。例えば、上記キットは、上記可溶性ＬＴＢＲを含む組成物を含む第１の容器、および上記第２の薬剤を含む第２の容器を含む。
【０２３１】
上記キットの情報資料は、その形態において制限されない。一実施形態において、上記情報資料は、上記化合物の製造、上記化合物の分子量、濃度、使用期限日、バッチもしくは製造場所情報などについての情報を含み得る。一実施形態において、上記情報資料は、自己免疫障害を有するか、または自己免疫障害と関連したエピソードを経験する危険性がある被験体を処置するために、例えば、適切な用量、投与形態、もしくは投与態様（例えば、本明細書に記載される用量、投与形態、もしくは投与態様）で、上記可溶性ＬＴＢＲ（例えば、ＬＴＢＲ−Ｆｃ）を投与するための方法に関する。上記情報は、種々の様式（印刷された文書、コンピューター読み取り可能な物質、ビデオ記録、もしくはオーディオ記録、または実質的な資料に対するリンクもしくは対処を提供する情報を含む）において提供され得る。
【０２３２】
上記薬剤に加えて、上記キット中の組成物は、他の成分（例えば、溶媒もしくは緩衝液、安定化剤、もしくは保存剤）を含み得る。上記薬剤は、任意の形態（例えば、液体、乾燥形態もしくは凍結乾燥形態）、好ましくは、実質的に純粋なおよび／もしくは滅菌した形態で提供され得る。上記薬剤が液体溶液中で提供される場合、上記液体溶液は、好ましくは、水溶液である。上記薬剤が乾燥形態として提供される場合、再構成は、一般に、適切な溶媒の添加によってである。上記溶媒（例えば、滅菌水もしくは緩衝液）は、必要に応じて、上記キット中に提供され得る。
【０２３３】
上記キットは、上記組成物もしくは上記薬剤を含む組成物のための１つ以上の容器を含み得る。いくつかの実施形態において、上記キットは、別個の容器、分割器（ｄｉｖｉｄｅｒ）、もしくは上記組成物および情報資料のための区画を含む。例えば、上記組成物は、ボトル、バイアル、もしくはシリンジ中に含められ得、そして上記情報資料は、プラスチックスリーブもしくはパケット中に含められ得る。他の実施形態において、上記キットの別個の要素は、単一の分割されていない容器内に含められる。例えば、上記組成物は、ラベルの形態で、上記情報資料を貼付されたボトル、バイアルもしくはシリンジ中に含められる。いくつかの実施形態において、上記キットは、複数の（例えば、一組の）個々の容器を含み、各々は、上記薬剤の１つ以上の単位投与形態（例えば、本明細書に記載される投与形態）を含む。上記容器は、例えば、望ましい比率で、組み合わせ単位投与量（例えば、上記可溶性ＬＴＢＲおよび上記第２の薬剤の両方を含む単位）を含み得る。例えば、上記キットは、複数のシリンジ、アンプル、ホイルパッケージ、ブリスターパック、もしくは医療用デバイスを含み、例えば、各々は、単一の組み合わせ単位用量を含む。上記キットの容器は、気密式、防水性（例えば、水分もしくは上記中における変化に不浸透性）、および／もしくは遮光性であり得る。
【０２３４】
上記キットは、必要に応じて、上記組成物の投与に適したデバイス（例えば、シリンジもしくは他の適切な送達デバイス）を含む。上記デバイスは、上記薬剤のうちの１つもしくは両方が予め装填されて提供され得るか、または空であり得るが、装填に適切であり得る。
【実施例】
【０２３５】
（実施例１：不均一性を低下させるためのＬＴＢＲ−ＩｇＧ構築物の構築および特徴）
以下の実施例は、ＬＴＢＲＩｇＧの発現において見いだされた分子不均一性（Ｎ末端不均一性、Ｃ末端不均一性、ピログルタミン酸形成、およびシアル化が挙げられる）を解決するために作り出された多くの種々のＬＴＢＲ免疫グロブリン融合タンパク質の特徴を記載する。
【０２３６】
（Ｎ末端不均一性）
ＬＴＢＲの全長ｍＲＮＡ（ＮＰ＿００２３３３）によってコードされるＮ末端の推定を、真核生物細胞に対して訓練された神経ネットワーク（ＮＮ）予測モデルもしくは隠れＭａｒｋｏｖモデル（ｈｉｄｄｅｎ  Ｍａｒｋｏｖ  ｍｏｄｅｌ）（ＨＭＭ）のいずれかを使用して、ＳｉｇｎａｌＰのようなプログラムによって行った。これら２つのＮＮおよびＨＭＭ予測モデルは、上記タンパク質の示唆されたＮ末端に関する異なる結果を与え、これは、それぞれ、Ｓ２８もしくはＰ３０およびＱ３１を示唆した（アミノ酸数は、シグナル配列を含む番号付けをいう）。従って、多くのＮ末端配列予測が可能であり、上記タンパク質を発現し、その翻訳後修飾を評価することによってのみ、制限された変動性を有する最適なＮ末端が決定され得る。
【０２３７】
ＬＴＢＲ０１（ＬＴＢＲ−ＩｇＧ融合タンパク質バージョン０１）は、クローニングされた最初の分子であった。ＬＴＢＲ０１のＮ末端は、インタクトなＬＴＢＲ番号付け（すなわち、シグナル配列を含む）に基づいて、Ｓ２８で始まった。上記ＬＴＢＲ  Ｃ末端に、Ｍ２２５において、ＩｇＧ重鎖のＣ２２０（Ｋａｂａｔ番号付け）で始まるＩｇＧ１のヒンジＦｃを融合した。上記ＩｇＧ１ヒンジの抗体由来システイン（Ｃ２２０）を、構造的に類似のアミノ酸バリン（ＬＴＢＲ０１におけるＶ１９９）に変異させることによって、ＬＴＢＲＩｇＧを含めた。この変異は、上記ＬＴＢＲＩｇＧにおいて遊離の無対チオールの問題となりかつ所望されない形成を排除し、上記ＩｇＧ１において、上記重鎖のＣ２２０は、通常、上記軽鎖のＣ１０７とのジスルフィド結合であり、上記軽鎖を欠くことで、上記システイン（Ｃ２２０）は、最初から、ＬＴＢＲＩｇＧにおいて無対のままであり、ＬＴＢＲ内の上記ＣＲＤの所望されない無秩序形成（ｓｃｒａｍｂｌｉｎｇ）もしくは上記ＬＴＢＲＩｇＧの凝集のいずれかを引き起こす。
【０２３８】
記載される各ＬＴＢＲＩｇＧ分子に関して、その遺伝子を構築し、発現させ、精製し、Ｎ末端配列およびＣ末端配列における変動性について評価した。結果は、ＬＴＢＲのＳ２８  Ｎ末端を有するＬＴＢＲ０１は、Ｎ−１、Ｎ−３およびＮ−４における複数切断部位（ｃｌｉｐｐｉｎｇ  ｓｉｔｅ）、ならびにＱ３１において精製したピログルタミン酸に対して異種（ｈｅｔｅｒｏｇｅｎｅｏｕｓ）であり（番号付けは、図１に記載される全長ＬＴＢＲ配列に基づき、シグナル配列を含む）、上記ＦｃドメインからＣ末端  Ｋ４２６を欠いていることを示した。
【０２３９】
これらの所見に基づいて、２つの異なる構築物（ＬＴＢＲ０５およびＬＴＢＲ０６と称した）を作り出して、特に、Ｎ末端タンパク質分解およびＣ末端タンパク質分解に関して、発現されたＬＴＢＲＩｇＧ融合タンパク質の間の不均一性を改善した。
【０２４０】
ＬＴＢＲ０５を、Ｃ末端欠失変異を有するように構築して、タンパク質分解を受け得るＣ末端リジンを有することを裂けた。質量分析（ＭＳ）によるＬＴＢＲ０５の分析は、Ｃ末端リジンの排除の際に、さらなるＣ末端短縮は確認しなかったが、ＬＴＢＲ０１に対する匹敵するＮ末端変動性を確認した。
【０２４１】
従って、Ｎ末端不均一性を改善するために、ＬＴＢＲ０６を構築した。ＬＴＢＲ０６を、そのＮ末端から４つのアミノ酸を欠失するように設計した。この欠失は、表１に記載されるように、Ｎ末端配列変動性を劇的に低下させた。ＬＴＢＲ０６は、所望されるＮ末端（野生型に対してＮ−４およびＮ−５）およびＮ−１  Ｎ末端のうちの９０％超を有した。ＬＴＢＲ０６の欠失はまた、図１および図３に記載した。
【０２４２】
表３は、ＬＴＢＲのＮ末端およびＣ末端の部分を欠失させることによって作り出した異なる構築物の概観、ならびにこのような欠失による結果を提供する。ＬＴＢＲ０５は、ＬＴＢＲ０１のカルボキシ末端から除去された単一のアミノ酸を有し（Ｃ−１）、ＬＴＢＲ０６は、単一のＣ−１アミノ酸欠失およびアミノ末端から欠失された４アミノ酸を有した（シグナル配列の後−Ｎ−４と言われる）。従って、ＬＴＢＲ０６を操作して、Ｎ末端不均一性およびＣ末端不均一性の両方を低下させた。上記異なる構築物の成熟形態の比較を、図２に示す。
表３：ＬＴＢＲ０５およびＬＴＢＲ０６  対  ＬＴＢＲ０１の比較
【０２４３】
【表３】
0005431171.tif 000008
ＬＴＢＲ０５を、Ｎ末端不均一性（結果を表４にまとめる）を含め、生化学的に特徴づけた。ＬＴＢＲ０５のアミノ末端は、大部分はピログルタミン酸に変換された（＜Ｑ）Ｎ−１およびＮ−３形態とともに、Ｎ、Ｎ−１、およびＮ−３として存在することが見いだされた。
表４：ＬＴＢＲ０５の生化学的特徴付けのまとめ
【０２４４】
【表４】
0005431171.tif 000009
ＬＴＢＲ０６を、Ｎ末端不均一性およびＣ末端不均一性が、アミノ酸置換に基づいて改善されたか否かを含め、不均一性を改善したか否かを決定するために生化学的に特徴づけた（結果を表５にまとめる）。
表５：ＬＴＢＲ０６の生化学的特徴付けのまとめ
【０２４５】
【表５】
0005431171.tif 000010
エドマン分解を、ＬＴＢＲ０６発現細胞由来のＬＴＢＲ０６に対して行った。表５に記載されるように、ＬＴＢＲ０６タンパク質の集団のうちの５６％が、Ｎ−５であり、４０％がＮ−４であり、約４％がＮ−１１であることが見いだされた。ＬＴＢＲＩｇのＮ−５種の配列は、配列番号２３に記載される。Ｎ−４およびＣ−１欠失を使用して、上記タンパク質集団の不均一性は、ＬＴＢＲ０５（改変体に融合されたＬＴＢＲの非改変細胞外ドメインを示す）と比較して、低下していた。
【０２４６】
（実施例２：ＬＴＢＲＩｇＧ構築物のグリコシル化研究）
グリコシル化はまた、タンパク質不均一性、および活性に対して影響を有し得る。従って、不均一性をさらに低下させるために、グリコシル化変異体を、変動性のＬＴＢＲドメイングリコシル化が結合親和性、発現レベル、および折りたたみに影響を及ぼしたか否かを決定するために調査した。ＬＴＢＲ０９は、さらなるＮ２７５Ｑ変異（アミノ酸位置は、成熟タンパク質に言及する−種々の構築物の間の配列および変化の比較のために、図２を参照のこと）を有するＬＴＢＲ０６に基づく構築物であった。
【０２４７】
表６は、Ａｓｎ１３およびＡｓｎ１５０における、３つのＬＴＢＲ構築物の各々についてのグリコシル化保有を記載する。
表６：グリコシル化保有
【０２４８】
【表６】
0005431171.tif 000011
＊インタクトなＮ末端、Ｎ−１  ＜ＱおよびＮ−３  ＜Ｑの平均として計算された。
＊＊Ｎ−４およびＮ−５の平均として計算された。
【０２４９】
表６に示されるように、グリコシル化保有は、Ａｓｎ１３およびＡｓｎ１５０についての異なる構築物内で比較的不変であった。
【０２５０】
不均一性をさらに低下させるために、ＬＴＢＲＩｇＧのＮ末端グリコシル化を上記タンパク質のＬＴＢＲ細胞外ドメインもしくはＦｃ部分のいずれかにおいて除去したグリコシル化変異体を、調査した。上記ＬＴＢＲドメインにおけるグリコシル化部位の除去は、成功裏にグリコシル化を低下させ、そしてまた、このタンパク質の発現を約１０倍低下させた。表７は、種々の変異体の概観およびグリコシル化部位の欠失の効果を特徴づけた研究からの結果を提供する。
表７：さらなるグリコシル化変異体
【０２５１】
【表７】
0005431171.tif 000012
ＬＴＢＲ０３は、図５および配列番号１０に示される。グリコシル化されていないＬＴＢＲ０３は、競合ＦＡＣＳアッセイにおいて野生型ＬＴＢＲＩｇＧ（非改変ＬＴＢＲ細胞外ドメインおよび非改変Ｆｃ領域）に対する結合等価性を示した。
【０２５２】
可溶性のグリコシル化ＬＴＢＲＩｇＧはまた、プロテインＡ（初期捕捉）を使用してタンパク質を最初に捕捉することによって生成した。次いで、上記捕捉したタンパク質を、フェニルカラムに対して流して、誤って折りたたみされたタンパク質および凝集したタンパク質を除去した。フェニルクロマトグラフィーの後に、グリコシル化されていないＬＴＢＲＩｇＧを、セファクリルＳ−２００を使用して均一な集団へと精製した。次いで、可溶性ＬＴＢＲを、Ａｓｐ  Ｎ消化を使用して生成した。ここで上記消化物を、その後、プロテインＡに対して再度曝して、上記融合タンパク質のＦｃ部分を除去した。次いで、上記ｓＬＴＢＲを、ＤＥＡＥ（これは、Ａｓｐ  Ｎを除去した）、およびゲル濾過／特徴付けを使用して精製し、そのうちの特徴付けは、最適な洗練工程である。最終的に、主な結晶スクリーンを行った。
【０２５３】
（実施例３：ＬＴＢＲＩｇＧ薬物動態に対するシアル化の効果）
ＬＴＢＲＩｇＧ薬物動態に対するシアル化の効果を研究するために、ＬＴＢＲＩｇＧのシアル化を、ラット肝臓由来のα−２，６−シアリルトランスフェラーゼ（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｍａｎｎｈｅｉｍ）を使用して行った。α−２，６−シアリルトランスフェラーゼは、Ｇａβ１→４ＧｌｃＮＡｃに対して特異的であり、そして末端Ｎ結合型ガラクトース残基のうちの７５〜１００％をシアル化する。ＬＴＢＲＩｇＧのシアル化は、シアル化タンパク質の種々のレベルを達成し、次いで、これらタンパク質を、薬物動態について評価した。低、中、および高度にシアル化されたＬＴＢＲＩｇ（バージョンＬＴＢＲ０５）の薬物動態データを、マウス血清で分析した。結果を、以下の表８および９に記載する。
表８：ＬＴＢＲ−Ｉｇ  ＰＫデータ（濃度（μｇ／ｍｌ）のシアル化（ＳＡ））
【０２５４】
【表８】
0005431171.tif 000013
blq=定量限界未満
＊表８に記載される平均中に含められない
表９：表８からの平均ＳＡ
【０２５５】
【表９】
0005431171.tif 000014
図１３は、ｈｕＬＴＢＲＩｇＧとＬＦＡ３ＴＩＰ（ヒトＩｇＧ１のＦｃ（ヒンジ、ＣＨ２およびＣＨ３ドメイン）部分に連結されたヒト白血球機能抗原−３（ＬＦＡ−３）の細胞外ＣＤ２結合部分からなるダイマー性融合タンパク質）との間の薬物動態における差異を記載する。図１３に示されるように、ＬＴＢＲＩｇＧは、ＬＦＡ３ＴＩＰとの比較において、シアル化に拘わらず、増大した血清レベルを有した。
【０２５６】
（実施例４：ＬＴＢＲＩｇＧのドメイン短縮の効果）
上記ＴＮＦＲＩｇＧ生成物ｅｎｔａｎｅｒｃｅｐｔは、上記タンパク質内で顕著な誤った折りたたみ不均一性（ＬＴＢＲＩｇＧに類似の状況）を有する。ＴＮＦＲ／ＴＮＦの共結晶構造において示される摂食量域に基づいて、上記ＴＮＦＲ部分内の誤った折りたたみの程度の減少を補助するために、ＴＮＦＲＦｃの短縮化バージョンを、ＴＮＦＲの２．６ドメインを使用して作り出した。上記短縮化ＴＮＦレセプター分子は、ＴＮＦａリガンドに対する完全な結合活性を維持した。ＬＴＢＲドメインおよびＴＮＦＲドメイン４ならびにドメイン３のＣ末端半分、ならびにいくつかの他のバリエーションのＣＲＤ構造アラインメントに基づいて、ＬＴＢＲＩｇＧの短縮化バージョンを発現させ、それらのＬＴａ１ｂ２に対する親和性について評価した（上記の表２を参照のこと）。
【０２５７】
種々の短縮（Ｄ  ３−１、Ｄ  ２−１（ｗｔ＝Ｄ１−４）を含む）の結合親和性を、決定した。上記精製した短縮化ＬＴＢＲＩｇＧ分子はいずれも、ＬＴａ１ｂ２に対する高い親和性を保持しておらず、このことは、ＬＴＢＲ／ＬＴａ１ｂ２間の接触を表すことを示す。従って、ＴＮＦＲ／ＴＮＦａは、ＬＴＢＲとＬＴａ１ｂ２との間の接触残基の乏しい予測因子であった。
【０２５８】
（実施例５：ＬＴＢＲＩｇＧのためのヒンジの設計）
ＬＴＢＲおよびＩｇＧを接続するために使用され得る多くの異なるヒンジ構築物を作り出した。上記異なるヒンジの説明は、次に続くヒンジ配列を含め、図６に記載される。使用される場合、以下の配列は、上記ＬＴＢＲ細胞外ドメインのＣ末端アミノ酸（すなわち、Ｍ）の後ろに位置する。
ＬＴＢＲ０６  ヒンジ：    ＶＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰ（配列番号１３）
ヒンジ  ２２１１（Ｄ１６９Ｎ）：    ＶＮＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰ（配列番号１４）
ヒンジ  ２２１２（Ｔ１９８Ｎ）：    ＶＤＫＮＨＴＣＰＰＣＰＡＰ（配列番号１５）
ヒンジ  ２２２１（バリン欠失）：    ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰ（配列番号１６）
ヒンジ  ２２１７（全長）：    ＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰ（配列番号１７）
ヒンジ  ２２１９（Ｇ４−ヒンジ−Ｇ４Ｆｃ）：    ＥＳＣＤＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰ（配列番号１８）
ヒンジ  ２２１８（Ｇ２−ヒンジ−Ｇ２Ｆｃ）：    ＣＣＶＥＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡＧＰ（配列番号１９）
ヒンジ  ２２２０（短いヒンジ−Ｇ１Ｆｃ）：  ＣＰＰＣＰＡＰ（配列番号２０）。
【０２５９】
ＬＴＢＲ０６との比較において、ＬＴＢＲＩｇＧにおけるヒンジの各々についての発現の分析を、図７に記載する。
【０２６０】
実施例６〜８は、自己免疫障害の処置のためのＬＴＢＲＩｇＧ（より具体的には、ＬＴＢＲ０６）の効力を示す臨床研究を記載する。
【０２６１】
（実施例６：低用量のＬＴＢＲ−Ｆｃは、関節リウマチを処置するために有効である）
０．０５ｍｇ／ｋｇ  ＬＴＢＲ−Ｆｃ（バージョンＬＴＢＲ０６）の用量を、ＲＡ患者におけるＬＴＢＲ−Ｆｃの複数用量の安全性、寛容性および薬物動態を評価するために、無作為化した盲検プラセボ制御薬物上昇臨床試験において５つの用量コホートの最低として選択した。０．０５ｍｇ／ｋｇを、安全性および薬物動態の所見に関して、効果無しの用量であると予測したことから、最低用量コホートとして選択した。実際に、これは、初期研究における急性相応答に関して効果なし用量であった。効力を評価することは、上記研究の一時的な目的でも、二次的な目的でもなかった。投与を、４週間にわたって１週間に１回行った。上記コホートの全てのメンバーは、ＤＭＡＲＤ−ＩＲであった。上記患者は、メトトレキサート治療を受けた一方で、上記研究のＬＴＢＲ−Ｆｃを受けた。
【０２６２】
例示的結果を、図８に示す。この図は、プラセボコホート（ｎ＝４）；０．０５ｍｇ／ｋｇ  ＬＴＢＲ−Ｆｃを受けているコホート（ｎ＝６）；および０．１ｍｇ／ｋｇ  ＬＴＢＲ−Ｆｃを受けているコホート（ｎ＝３）についてのデータを示す。さわると痛い関節数（ＴＪＣ）および腫脹関節数（ＳＪＣ）を、各被験体について評価した。
【０２６３】
顕著なことには、上記０．０５ｍｇ／ｋｇコホートは、プラセボと比較して、ＴＪＣおよびＳＪＣにおいて劇的な（５０〜７０％）改善を示した。類似の改善はまた、次のより高い用量のコホート（０．１ｍｇ／ｋｇ）で認められた。この驚くべき観察は、上記研究の完全な再設計をもたらし、このことは、０．０５ｍｇ／ｋｇより低いさらなる用量コホートの追加を必要とし（その結果、低い方の投与量範囲が試験され得、そして直線的な用量応答が認められ得、そして低い方の用量応答を決定した）、そして上記研究から最も高い用量コホート（３ｍｇ／ｋｇ）の解除を生じた。
【０２６４】
（実施例７：ＲＡの処置のためのＬＴＢＲ−Ｆｃ（ＬＴＢＲ０６）の臨床研究（ＩＩＡ相データ）
以下の実施例は、ＬＴＢＲ−Ｆｃ（バージョンＬＴＢＲ０６）の用量の範囲の効力を試験し、関節リウマチ（ＲＡ）の処置のための患者を投与したＩＩａ相臨床研究からの結果を記載する。
【０２６５】
この研究は、４７名のＤＭＡＲＤ−ＩＲ  ＲＡ患者における盲検化した、無作為のプラセボコントロールされた用量範囲研究であった。上記研究のためのスクリーニングは、活動性ＲＡを有する、メトトレキサート（ｍｔｘ）−ＩＲであった患者を同定する工程を包含した。コホート用量は、以下の群を含んでいた：０．０１ｍｇ／ｋｇ、０．０５ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、１．０ｍｇ／ｋｇもしくは３．０ｍｇ／ｋｇ。ＬＴＢＲ−Ｆｃを、ｍｔｘと組み合わせて投与した。ＬＴＢＲ−Ｆｃもしくはプラセボに無作為化した比率は、３：１であった。４週間にわたって１週間に１回の皮下注射の後に、観察を８週間行った。ベースライン個体群統計学（ｄｅｍｏｇｒａｐｈｉｃ）および疾患特徴は、上記プラセボ群および実験群全体を通して類似であった（１１名のプラセボ患者、３６名のＬＴＢＲ０６患者）。上記患者のうちの全てを含むＲＡの平均持続時間は、３．１年であった。上記患者のうちの３９名（８３％）は、事前のＤＭＡＲＤ処置を行っており、６％のうちの３名（３  ｏｆ  ６％）は、事前の抗ＴＮＦ処置を受けていた。ベースラインにおけるメトトレキサート（ｍｔｘ）のメジアン用量は、１５ｍｇ／週であった。患者の総数に関しては、測定値のＡＣＲ中心セット（ｃｏｒｅ  ｓｅｔ）のメジアンは、１６  ＳＪＣ、２１  ＴＪＣ、および１．３３  ＨＡＱであった。
【０２６６】
ＬＴＢＲ−Ｆｃは、患者においてＲＡを処置するにあたって有効であることが判明した。その結果は、用量依存性様式において、ＡＣＲ中心セット測定値の大部分において実質的な改善を示した。３５日目（最終投与から２週間後）において、平均改善は、ＳＪＣ  ６０％  対  ４．６  ％（ＬＴＢＲ−Ｆｃ  ｖｓ  ｐｌａｃｅｂｏ）およびＴＪＣ  ４７％  対  ６．７％（ＬＴＢＲ−Ｆｃ  対  プラセボ）であった（図１０〜図１２を参照のこと）。図９〜１１に示されるように、ＳＪＣおよびＴＪＣにおける改善は、持続性があり、最後ＬＴＢＲ−Ｆｃ投与から８週間後から７７日目まで持続した。最も大きな改善は、ＬＴＢＲ−Ｆｃ  １．０ｍｇ／ｋｇ群および３．０ｍｇ／ｋｇ群において報告され、これら２つの投与群についてのＡＣＲ２０応答速度は、それぞれ、７７日目において６５％および８５％であった。上記ＡＣＲ２０応答における改善はまた、図１２および表１０に示されるように、全ての用量群についてプラセボより大きかった。
表１０：７７日目におけるＡＣＲ２０／５０／７０応答速度（患者の％）
【０２６７】
【表１０−１】
0005431171.tif 000015
【０２６８】
【表１０−２】
0005431171.tif 000016
ＡＣＲ２０（ＡＣＲ５０、ＡＣＲ７０）応答は、ＳＪＣおよびＴＪＣにおける２０％（５０％、７０％）改善として定義され、以下の指標のうちの少なくとも３つにおいて２０％（５０％、７０％）の改善を有する：ＩＧＡ、ＰＧＡ、疼痛−ＶＡＳ、ＨＡＱ、ＣＲＰ（ＣＲＰが見いだされないのであれば、ＥＳＲ）。
【０２６９】
全体としては、ＬＴＢＲ−Ｆｃは、処置を受けた患者において安全であることが判明した。プラセボを受けた患者のうちの５５％（６／１１）およびＬＴＢＲ−Ｆｃ（ＬＴＢＲ０６）を受けた患者のうちの６７％（２４／３６）は、有害事象（ＡＥ）（例えば、頭痛、悪寒、疲労）を経験したが、いずれも重篤ではなかった。ＬＴＢＲ−Ｆｃ（ＬＴＢＲ０６）を受けた患者における最も一般的なＡＥは、頭痛であり、患者のうちの１９％  対  プラセボを受けた患者のうちの９％において報告された。薬物関連の重篤な感染も、薬物関連の重篤なＡＥも、この研究期間の間に報告されなかった。１つの重篤な感染は、３．０ｍｇ／ｋｇ群において９１日目に報告された（急性気管支炎であり、処置には関連はないようである）。一時的な軽度から中程度のインフルエンザ様症状は、ＬＴＢＲ−Ｆｃの最初の投与の後２４時間以内に、患者の内うちの２５％において認められた。これら症状は、アセトアミノフェンに対して十分に応答し、その後の用量の後に通常は再発しなかった（その後の用量に対して低下した−上記第２、第３、および第４の用量の後に患者のうちのそれぞれ８％、９％および６％において報告された）。低下した免疫原性は、増大した用量で認められ、ＰＫに対しても、ＡＥに対しても、有効性に対しても影響がなかった。
【０２７０】
全体としては、その結果は、０．０１ｍｇ／ｋｇ〜３ｍｇ／ｋｇの範囲に及ぶ用量において、ＬＴＢＲ−ＦｃがＲＡを処置するにあたって有効であることを示した。
【０２７１】
（実施例８：ＲＡの処置のためのＬＴＢＲ−Ｆｃ（ＬＴＢＲ０６）の臨床研究）
長期間の研究を使用して、ＲＡを有する被験体において、ＬＴＢＲ−Ｆｃ（ＬＴＢＲ０６）の安全性、寛容性および効力を評価した。以前の研究（例えば、実施例７に記載される研究）からの患者は、上記研究において含められ得る。上記研究設計は、ＬＴＢＲ−Ｆｃ（ＬＴＢＲ０６）を以下の用量のうちの１つにおいて、ＲＡ患者に皮下に投与する工程を包含する：２週間ごとに１回７０ｍｇ；２週間ごとに１回２００ｍｇ；１ヶ月に１回７０ｍｇ；１ヶ月に１回２００ｍｇ；もしくはプラセボ用量。患者を、患者を上記応答において改善について評価し／以下の効力パラメーターのスコアを決定する：Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｏｌｌｅｇｅ  ｏｆ  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ（ＡＣＲ）  Ｃｏｒｅ  Ｓｅｔ  ｏｆ  ｍａｅａｓｕｒｅｍｅｎｔｓ、ＤＡＳ２８、Ｓｈｏｒｔ  Ｆｏｒｍ  （ＳＦ−３６）、Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｃｈｒｏｎｉｃ  Ｉｌｌｎｅｓｓ  Ｔｈｅｒａｐｙ  （ＦＡＣＩＴ）  ｑｕｅｓｔｉｏｎｎａｉｒｅｓ、Ｓｊｏｇｒｅｎ’ｓ  Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ。プラセボコントロール群と比較した場合のこのようなパラメーターにおける統計学的に有意な改善は、効力を示す。
（等価物）
全ての特許、特許出願、および参考文献は、その全体が本明細書に参考として援用される。矛盾する場合、本願が優先する。
【０２７２】
本発明の限定の各々は、本発明の種々の実施形態を包含し得る。従って、任意の１つの要素もしくは要素の組み合わせを含む本発明の限定の各々が、本発明の各局面において含められ得ることを認識する。
【０２７３】
添付の配列表は、本開示の一部を形成し、その内容は、以下の表にまとめられる。
【０２７４】
【表１１】
0005431171.tif 000017
（配列表）
配列表
<110>  バイオジェン・アイデック・エムエイ・インコーポレイテッド
<120>  自己免疫障害の処置
<130>  BGN-717PC
<140>  割り当て未
<141>  出願と同時
<150>  60/918,518
<151>  2007-03-15
配列番号1
GenPept  ID  No.  P36941に対応する全長ヒト野生型ＬＴＢＲアミノ酸配列（非成熟形態）
1  MLLPWATSAP  GLAWGPLVLG  LFGLLAASQP  QAVPPYASEN  QTCRDQEKEY  YEPQHRICCS
61  RCPPGTYVSA  KCSRIRDTVC  ATCAENSYNE  HWNYLTICQL  CRPCDPVMGL  EEIAPCTSKR
121  KTQCRCQPGM  FCAAWALECT  HCELLSDCPP  GTEAELKDEV  GKGNNHCVPC  KAGHFQNTSS
181  PSARCQPHTR  CENQGLVEAA  PGTAQSDTTC  KNPLEPLPPE  MSGTMLMLAV  LLPLAFFLLL
241  ATVFSCIWKS  HPSLCRKLGS  LLKRRPQGEG  PNPVAGSWEP  PKAHPYFPDL  VQPLLPISGD
301  VSPVSTGLPA  APVLEAGVPQ  QQSPLDLTRE  PQLEPGEQSQ  VAHGTNGIHV  TGGSMTITGN
361  IYIYNGPVLG  GPPGPGDLPA  TPEPPYPIPE  EGDPGPPGLS  TPHQEDGKAW  HLAETEHCGA
421  TPSNRGPRNQ  FITHD  (配列番号1)
配列番号2
バリン変異アミノ酸を含むLTBR06のＦｃ部分
V  D  K  T  H  T  C  P  P  C  P  A  P  E  L  L  G  G  P  S  V  F  L  F  P  P  K  P  K  D  T  L  M  I  S  R  T  P  E  V  T  C  V  V  V  D  V  S  H  E  D  P  E  V  K  F  N  W  Y  V  D  G  V  E  V  H  N  A  K  T  K  P  R  E  E  Q  Y  N  S  T  Y  R  V  V  S  V  L  T  V  L  H  Q  D  W  L  N  G  K  E  Y  K  C  K  V  S  N  K  A  L  P  A  P  I  E  K  T  I  S  K  A  K  G  Q  P  R  E  P  Q  V  Y  T  L  P  P  S  R  D  E  L  T  K  N  Q  V  S  L  T  C  L  V  K  G  F  Y  P  S  D  I  A  V  E  W  E  S  N  G  Q  P  E  N  N  Y  K  T  T  P  P  V  L  D  S  D  G  S  F  F  L  Y  S  K  L  T  V  D  K  S  R  W  Q  Q  G  N  V  F  S  C  S  V  M  H  E  A  L  H  N  H  Y  T  Q  K  S  L  S  L  S  P  G
配列番号3
LTBR06の細胞外ドメイン−核酸配列
1  ATGCTCCTGC  CTTGGGCCAC  CTCTGCCCCC  GGCCTGGCCT  GGGGGCCTCT  
51  GGTGCTGGGC  CTCTTCGGGC  TCCTGGCAGC  AGCGGTGCCT  CCATATGCGT  
101  CGGAGAACCA  GACCTGCAGG  GACCAGGAAA  AGGAATACTA  TGAGCCCCAG  
151  CACCGCATCT  GCTGCTCCCG  CTGCCCGCCA  GGCACCTATG  TCTCAGCTAA  
201  ATGTAGCCGC  ATCCGGGACA  CAGTTTGTGC  CACATGTGCC  GAGAATTCCT  
251  ACAACGAGCA  CTGGAACTAC  CTGACCATCT  GCCAGCTGTG  CCGCCCCTGT  
301  GACCCAGTGA  TGGGCCTCGA  GGAGATTGCC  CCCTGCACAA  GCAAACGGAA  
351  GACCCAGTGC  CGCTGCCAGC  CGGGAATGTT  CTGTGCTGCC  TGGGCCCTCG  
401  AGTGTACACA  CTGCGAGCTA  CTTTCTGACT  GCCCGCCTGG  CACTGAAGCC  
451  GAGCTCAAAG  ATGAAGTTGG  GAAGGGTAAC  AACCACTGCG  TCCCCTGCAA  
501  GGCAGGGCAC  TTCCAGAATA  CCTCCTCCCC  CAGCGCCCGC  TGCCAGCCCC  
551  ACACCAGGTG  TGAGAACCAA  GGTCTGGTGG  AGGCAGCTCC  AGGCACTGCC  
601  CAGTCCGACA  CAACCTGCAA  AAATCCATTA  GAGCCACTGC  CCCCAGAGAT  
651  GTCAGGAACC  ATG  
配列番号4
LTBR06の細胞外ドメイン−アミノ酸配列
A  V  P  P  Y  A  S  E  N  Q  T  C  R  D  Q  E  K  E  Y  Y  E  P  Q  H  R  I  C  C  S  R  C  P  P  G  T  Y  V  S  A  K  C  S  R  I  R  D  T  V  C  A  T  C  A  E  N  S  Y  N  E  H  W  N  Y  L  T  I  C  Q  L  C  R  P  C  D  P  V  M  G  L  E  E  I  A  P  C  T  S  K  R  K  T  Q  C  R  C  Q  P  G  M  F  C  A  A  W  A  L  E  C  T  H  C  E  L  L  S  D  C  P  P  G  T  E  A  E  L  K  D  E  V  G  K  G  N  N  H  C  V  P  C  K  A  G  H  F  Q  N  T  S  S  P  S  A  R  C  Q  P  H  T  R  C  E  N  Q  G  L  V  E  A  A  P  G  T  A  Q  S  D  T  T  C  K  N  P  L  E  P  L  P  P  E  M  S  G  T  M
配列番号5
LTBR06の成熟形態のアミノ酸配列
AVP  PYASENQTCR  DQEKEYYEPQ  HRICCSRCPP  GTYVSAKCSR  IRDTVCATCA  ENSYNEHWNY  LTICQLCRPC  DPVMGLEEIA  PCTSKRKTQC  RCQPGMFCAA  WALECTHCEL  LSDCPPGTEA  
ELKDEVGKGN  NHCVPCKAGH  FQNTSSPSAR  CQPHTRCENQ  GLVEAAPGTA  QSDTTCKNPL  EPLPPEMSGT  MVDKTHTCPP  CPAPELLGGP  SVFLFPPKPK  DTLMISRTPE  VTCVVVDVSH  EDPEVKFNWY  VDGVEVHNAK  TKPREEQYNS  TYRVVSVLTV  LHQDWLNGKE  YKCKVSNKAL  PAPIEKTISK  AKGQPREPQV  YTLPPSRDEL  TKNQVSLTCL  VKGFYPSDIA  VEWESNGQPE  NNYKTTPPVL  DSDGSFFLYS  KLTVDKSRWQ  QGNVFSCSVM  HEALHNHYTQ  KSLSLSPG
配列番号6
LTBR01-アミノ酸
MLLPWATSAP  GLAWGPLVLG  LFGLLAASQPQAVP  PYASENQTCR  DQEKEYYEPQ  
HRICCSRCPP  GTYVSAKCSR  IRDTVCATCA  ENSYNEHWNY    LTICQLCRPC  
DPVMGLEEIA  PCTSKRKTQC  RCQPGMFCAA  WALECTHCEL  LSDCPPGTEA  
ELKDEVGKGN  NHCVPCKAGH  FQNTSSPSAR  CQPHTRCENQ  GLVEAAPGTA  
QSDTTCKNPL  EPLPPEMSGT  MVDKTHTCPP  CPAPELLGGP  SVFLFPPKPK  
DTLMISRTPE  VTCVVVDVSH  EDPEVKFNWY  VDGVEVHNAK  TKPREEQYNS  
TYRVVSVLTV  LHQDWLNGKE  YKCKVSNKAL  PAPIEKTISK  AKGQPREPQV  
YTLPPSRDEL  TKNQVSLTCL  VKGFYPSDIA  VEWESNGQPE  NNYKTTPPVL  
DSDGSFFLYS  KLTVDKSRWQ  QGNVFSCSVM  HEALHNHYTQ  KSLSLSPGK    
配列番号7
LTBR06-核酸
1  ATGCTCCTGC  CTTGGGCCAC  CTCTGCCCCC  GGCCTGGCCT  GGGGGCCTCT  
51  GGTGCTGGGC  CTCTTCGGGC  TCCTGGCAGC  AGCGGTGCCT  CCATATGCGT  
101  CGGAGAACCA  GACCTGCAGG  GACCAGGAAA  AGGAATACTA  TGAGCCCCAG  
151  CACCGCATCT  GCTGCTCCCG  CTGCCCGCCA  GGCACCTATG  TCTCAGCTAA  
201  ATGTAGCCGC  ATCCGGGACA  CAGTTTGTGC  CACATGTGCC  GAGAATTCCT  
251  ACAACGAGCA  CTGGAACTAC  CTGACCATCT  GCCAGCTGTG  CCGCCCCTGT  
301  GACCCAGTGA  TGGGCCTCGA  GGAGATTGCC  CCCTGCACAA  GCAAACGGAA  
351  GACCCAGTGC  CGCTGCCAGC  CGGGAATGTT  CTGTGCTGCC  TGGGCCCTCG  
401  AGTGTACACA  CTGCGAGCTA  CTTTCTGACT  GCCCGCCTGG  CACTGAAGCC  
451  GAGCTCAAAG  ATGAAGTTGG  GAAGGGTAAC  AACCACTGCG  TCCCCTGCAA  
501  GGCAGGGCAC  TTCCAGAATA  CCTCCTCCCC  CAGCGCCCGC  TGCCAGCCCC  
551  ACACCAGGTG  TGAGAACCAA  GGTCTGGTGG  AGGCAGCTCC  AGGCACTGCC  
601  CAGTCCGACA  CAACCTGCAA  AAATCCATTA  GAGCCACTGC  CCCCAGAGAT  
651  GTCAGGAACC  ATGGTCGACA  AAACTCACAC  ATGCCCACCG  TGCCCAGCAC  
701  CTGAACTCCT  GGGGGGACCG  TCAGTCTTCC  TCTTCCCCCC  AAAACCCAAG  
751  GACACCCTCA  TGATCTCCCG  GACCCCTGAG  GTCACATGCG  TGGTGGTGGA  
801  CGTGAGCCAC  GAAGACCCTG  AGGTCAAGTT  CAACTGGTAC  GTGGACGGCG  
851  TGGAGGTGCA  TAATGCCAAG  ACAAAGCCGC  GGGAGGAGCA  GTACAACAGC  
901  ACGTACCGTG  TGGTCAGCGT  CCTCACCGTC  CTGCACCAGG  ACTGGCTGAA  
951  TGGCAAGGAG  TACAAGTGCA  AGGTCTCCAA  CAAAGCCCTC  CCAGCCCCCA  
1001  TCGAGAAAAC  CATCTCCAAA  GCCAAAGGGC  AGCCCCGAGA  ACCACAGGTG  
1051  TACACCCTGC  CCCCATCCCG  GGATGAGCTG  ACCAAGAACC  AGGTCAGCCT  
1101  GACCTGCCTG  GTCAAAGGCT  TCTATCCCAG  CGACATCGCC  GTGGAGTGGG  
1151  AGAGCAATGG  GCAGCCGGAG  AACAACTACA  AGACCACGCC  TCCCGTGTTG  
1201  GACTCCGACG  GCTCCTTCTT  CCTCTACAGC  AAGCTCACCG  TGGACAAGAG  
1251  CAGGTGGCAG  CAGGGGAACG  TCTTCTCATG  CTCCGTGATG  CATGAGGCTC  
1301  TGCACAACCA  CTACACGCAG  AAGAGCCTCT  CCCTGTCTCC  GGGT
配列番号8
シグナル配列を含むLTBR06アミノ酸配列
1  MLLPWATSAP  GLAWGPLVLG  LFGLLAAAVP  PYASENQTCR  DQEKEYYEPQ  
51  HRICCSRCPP  GTYVSAKCSR  IRDTVCATCA  ENSYNEHWNY  LTICQLCRPC  
101  DPVMGLEEIA  PCTSKRKTQC  RCQPGMFCAA  WALECTHCEL  LSDCPPGTEA  
151  ELKDEVGKGN  NHCVPCKAGH  FQNTSSPSAR  CQPHTRCENQ  GLVEAAPGTA  
201  QSDTTCKNPL  EPLPPEMSGT  MVDKTHTCPP  CPAPELLGGP  SVFLFPPKPK  
251  DTLMISRTPE  VTCVVVDVSH  EDPEVKFNWY  VDGVEVHNAK  TKPREEQYNS  
301  TYRVVSVLTV  LHQDWLNGKE  YKCKVSNKAL  PAPIEKTISK  AKGQPREPQV  
351  YTLPPSRDEL  TKNQVSLTCL  VKGFYPSDIA  VEWESNGQPE  NNYKTTPPVL  
401  DSDGSFFLYS  KLTVDKSRWQ  QGNVFSCSVM  HEALHNHYTQ  KSLSLSPG
配列番号9
LTBR05,アミノ酸配列の成熟形態
SQPQAVP  PYASENQTCR  DQEKEYYEPQ  HRICCSRCPP  GTYVSAKCSR  IRDTVCATCA  ENSYNEHWNY  LTICQLCRPC  DPVMGLEEIA  PCTSKRKTQC  RCQPGMFCAA  WALECTHCEL  LSDCPPGTEA  ELKDEVGKGN  NHCVPCKAGH  FQNTSSPSAR  CQPHTRCENQ  GLVEAAPGTA  QSDTTCKNPL  EPLPPEMSGT  MVDKTHTCPP  CPAPELLGGP  SVFLFPPKPK  DTLMISRTPE  VTCVVVDVSH  EDPEVKFNWY  VDGVEVHNAK  TKPREEQYNS  TYRVVSVLTV  LHQDWLNGKE  YKCKVSNKAL  PAPIEKTISK  AKGQPREPQV  YTLPPSRDEL  TKNQVSLTCL  VKGFYPSDIA  VEWESNGQPE  NNYKTTPPVL  DSDGSFFLYS  KLTVDKSRWQ  QGNVFSCSVM  HEALHNHYTQ  KSLSLSPG
配列番号10
グリコシル化されていないLTBRIgG
1  AVPPYASEQQ  TCRDQEKEYY  EPQHRICCSR  CPPGTYVSAK  CSRIRDTVCA  
51  TCAENSYNEH  WNYLTICQLC  RPCDPVMGLE  EIAPCTSKRK  TQCRCQPGMF  
101  CAAWALECTH  CELLSDCPPG  TEAELKDEVG  KGNNHCVPCK  AGHFQQTSSP  
151  SARCQPHTRC  ENQGLVEAAP  GTAQSDTTCK  NPLEPLPPEM  SGTMVDKTHT  
201  CPPCPAPELL  GGPSVFLFPP  KPKDTLMISR  TPEVTCVVVD  VSHEDPEVKF  
251  NWYVDGVEVH  NAKTKPREEQ  YNSTYRVVSV  LTVLHQDWLN  GKEYKCKVSN  
301  KALPAPIEKT  ISKAKGQPRE  PQVYTLPPSR  DELTKNQVSL  TCLVKGFYPS  
351  DIAVEWESNG  QPENNYKTTP  PVLDSDGSFF  LYSKLTVDKS  RWQQGNVFSC  
401  SVMHEALHNH  YTQKSLSLSP  G  
配列番号11
LTBR01,成熟形態アミノ酸配列
SQPQAVP  PYASENQTCR  DQEKEYYEPQ  HRICCSRCPP  GTYVSAKCSR  IRDTVCATCA  ENSYNEHWNY    LTICQLCRPC  DPVMGLEEIA  PCTSKRKTQC  RCQPGMFCAA  WALECTHCEL  LSDCPPGTEA  ELKDEVGKGN  NHCVPCKAGH  FQNTSSPSAR  CQPHTRCENQ  GLVEAAPGTA  
QSDTTCKNPL  EPLPPEMSGT  MVDKTHTCPP  CPAPELLGGP  SVFLFPPKPK  
DTLMISRTPE  VTCVVVDVSH  EDPEVKFNWY  VDGVEVHNAK  TKPREEQYNS  
TYRVVSVLTV  LHQDWLNGKE  YKCKVSNKAL  PAPIEKTISK  AKGQPREPQV  
YTLPPSRDEL  TKNQVSLTCL  VKGFYPSDIA  VEWESNGQPE  NNYKTTPPVL  
DSDGSFFLYS  KLTVDKSRWQ  QGNVFSCSVM  HEALHNHYTQ  KSLSLSPGK    
配列番号12
LTBR09,成熟形態アミノ酸配列
AVP  PYASENQTCR  DQEKEYYEPQ  HRICCSRCPP  GTYVSAKCSR  IRDTVCATCA  ENSYNEHWNY  LTICQLCRPC  DPVMGLEEIA  PCTSKRKTQC  RCQPGMFCAA  WALECTHCEL  LSDCPPGTEA  ELKDEVGKGN  NHCVPCKAGH  FQNTSSPSAR  CQPHTRCENQ  GLVEAAPGTA  QSDTTCKNPL  EPLPPEMSGT  MVDKTHTCPP  CPAPELLGGP  SVFLFPPKPK  DTLMISRTPE  VTCVVVDVSH  EDPEVKFNWY  VDGVEVHNAK  TKPREEQYQS  TYRVVSVLTV  LHQDWLNGKE  YKCKVSNKAL  PAPIEKTISK  AKGQPREPQV  YTLPPSRDEL  TKNQVSLTCL  VKGFYPSDIA  VEWESNGQPE  NNYKTTPPVL  DSDGSFFLYS  KLTVDKSRWQ  QGNVFSCSVM  HEALHNHYTQ  KSLSLSPG
配列番号13
LTBR06ヒンジ
VDKTHTCPPCPAP  
配列番号14
ヒンジ2211  (D169N)  
VNKTHTCPPCPAP  
配列番号15
ヒンジ2212  (T198N)
VDKNHTCPPCPAP  
配列番号16
ヒンジ2221  (バリン欠失)
DKTHTCPPCPAP  
配列番号17
ヒンジ2217  (全長)  
EPKSCDKTHTCPPCPAP  
配列番号18
ヒンジ2219  (G4-ヒンジ-G4Fc)
ESCDKYGPPCPPCPAP  
配列番号19
ヒンジ2218  (G2-ヒンジ-G2Fc)
CCVECPPCPAPPVAGP  
配列番号20
ヒンジ2220  (短いヒンジ  -  G1Fc)
CPPCPAP  (配列番号20)
配列番号21
GenPept  ID  No.  P36941に対応するヒト野生型LTBRアミノ酸配列の細胞外ドメイン（非成熟形態）
1    MLLPWATSAP  GLAWGPLVLG  LFGLLAASQP  QAVPPYASEN  QTCRDQEKEY  YEPQHRICCS
61  RCPPGTYVSA  KCSRIRDTVC  ATCAENSYNE  HWNYLTICQL  CRPCDPVMGL  EEIAPCTSKR
121  KTQCRCQPGM  FCAAWALECT  HCELLSDCPP  GTEAELKDEV  GKGNNHCVPC  KAGHFQNTSS
181  PSARCQPHTR  CENQGLVEAA  PGTAQSDTTC  KNPLEPLPPE  MSGTM
配列番号22
Fcドメイン-アミノ酸
C  D  K  T  H  T  C  P  P  C  P  A  P  E  L  L  G  G  P  S  V  F  L  F  P  P  K  P  K  D  T  L  M  I  S  R  T  P  E  V  T  C  V  V  V  D  V  S  H  E  D  P  E  V  K  F  N  W  Y  V  D  G  V  E  V  H  N  A  K  T  K  P  R  E  E  Q  Y  N  S  T  Y  R  V  V  S  V  L  T  V  L  H  Q  D  W  L  N  G  K  E  Y  K  C  K  V  S  N  K  A  L  P  A  P  I  E  K  T  I  S  K  A  K  G  Q  P  R  E  P  Q  V  Y  T  L  P  P  S  R  D  E  L  T  K  N  Q  V  S  L  T  C  L  V  K  G  F  Y  P  S  D  I  A  V  E  W  E  S  N  G  Q  P  E  N  N  Y  K  T  T  P  P  V  L  D  S  D  G  S  F  F  L  Y  S  K  L  T  V  D  K  S  R  W  Q  Q  G  N  V  F  S  C  S  V  M  H  E  A  L  H  N  H  Y  T  Q  K  S  L  S  L  S  P  G
配列番号23
LTBR06のＮ−５細胞外ドメイン-アミノ酸配列
A  V  P  P  Y  A  S  E  N  Q  T  C  R  D  Q  E  K  E  Y  Y  E  P  Q  H  R  I  C  C  S  R  C  P  P  G  T  Y  V  S  A  K  C  S  R  I  R  D  T  V  C  A  T  C  A  E  N  S  Y  N  E  H  W  N  Y  L  T  I  C  Q  L  C  R  P  C  D  P  V  M  G  L  E  E  I  A  P  C  T  S  K  R  K  T  Q  C  R  C  Q  P  G  M  F  C  A  A  W  A  L  E  C  T  H  C  E  L  L  S  D  C  P  P  G  T  E  A  E  L  K  D  E  V  G  K  G  N  N  H  C  V  P  C  K  A  G  H  F  Q  N  T  S  S  P  S  A  R  C  Q  P  H  T  R  C  E  N  Q  G  L  V  E  A  A  P  G  T  A  Q  S  D  T  T  C  K  N  P  L  E  P  L  P  P  E  M  S  G  T  
【図１】
0005431171.tif 000018
【図２−１】
0005431171.tif 000019
【図２−２】
0005431171.tif 000020
【図３】
0005431171.tif 000021
【図４】
0005431171.tif 000022
【図５】
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【図６】
0005431171.tif 000024
【図７】
0005431171.tif 000025
【図８】
0005431171.tif 000026
【図９】
0005431171.tif 000027
【図１０】
0005431171.tif 000028
【図１１】
0005431171.tif 000029
【図１２】
0005431171.tif 000030
【図１３】
0005431171.tif 000031
【図１４】
0005431171.tif 000032
【配列表】
0005431171000001.app