(57)【要約】  ラソフォキシフェンあるいはナフォキシジンに比較し生産効率に優れた化学構造を有するジヒドロナフタレン化合物として以下の式（Ｉ）で表される化合物を提供する。この化合物は、プロテアソーム阻害剤及び／又は抗ガン剤として有効である。2009035020.tif 000079（但し、式中、２つの−（ＣＨ２）ｌ−Ｎ（Ｒ１）（Ｒ２）基は同一の置換基を表し、Ｒ１及びＲ２は、水素原子、又はそれぞれ同一若しくは異なるアルキル基を表し、Ｒ１及びＲ２は、一緒になってそれらを有する窒素原子とともに、又はさらに酸素原子、硫黄原子、及び窒素原子のいずれか１種以上とともに、単環式複素環を形成してもよい。また、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５は、それぞれ水素原子、アルキル基、アシル基、脂環式基、芳香族基、ハロゲン原子、アシルオキシ基、シアノ基、及びニトロ基から選ばれた１種以上の置換基を表し、ｌは２〜５の整数、ｎは１〜４の整数、ｍは１〜５の整数、ｑは１〜３の整数をそれぞれ表す。）
2009035020.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の式（Ｉ）で表される化合物。
【化１】
2009035020.tif 000070
（但し、式中、２つの
【化２】
2009035020.tif 000071
は同一の置換基を表し、Ｒ１及びＲ２は、水素原子、又はそれぞれ同一若しくは異なるアルキル基を表し、Ｒ１及びＲ２は、一緒になってそれらを有する窒素原子とともに、又はさらに酸素原子、硫黄原子、及び窒素原子のいずれか１種以上とともに、単環式複素環を形成してもよい。また、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５は、それぞれ水素原子、アルキル基、アシル基、脂環式基、芳香族基、ハロゲン原子、アシルオキシ基、シアノ基、及びニトロ基から選ばれた１種以上の置換基を表し、ｌは２〜５の整数、ｎは１〜４の整数、ｍは１〜５の整数、ｑは１〜３の整数をそれぞれ表す。）
【請求項２】
以下の式（ＩＩ）で表される化合物。
【化３】
2009035020.tif 000072
【請求項３】
以下の式（ＩＩＩ）で表される化合物。
【化４】
2009035020.tif 000073
【請求項４】
以下の式（ＩＶ）で表される化合物。
【化５】
2009035020.tif 000074
【請求項５】
以下の式（Ｖ）で表される化合物。
【化６】
2009035020.tif 000075
【請求項６】
以下の式（ＶＩ）で表される化合物。
【化７】
2009035020.tif 000076
【請求項７】
以下の式（ＶＩＩ）で表される化合物。
【化８】
2009035020.tif 000077
【請求項８】
以下の式（ＶＩＩＩ）で表される化合物。
【化９】
2009035020.tif 000078
【請求項９】
請求項２，３，５〜７のいずれかに記載の化合物を有効成分として含有することを特徴とするプロテアソーム阻害剤。
【請求項１０】
請求項２，４〜８のいずれかに記載の化合物を有効成分として含有することを特徴とする抗ガン剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規ジヒドロナフタレン化合物、並びに該化合物を有効成分として含有するプロテアソーム阻害剤及び抗ガン剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
ラソフォキシフェン、ナフォキシジン等の化合物は、選択的エストロゲン受容体モジュレーター（ＳＥＲＭ；ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ｅｓｔｒｏｇｅｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｍｏｄｕｌａｔｏｒ）として知られている。選択的エストロゲン受容体モジュレーターは、臓器あるいは組織によってエストロゲン作用を示したり抗エストロゲン作用を示したりする薬剤の総称である。該薬剤は、例えば、子宮、乳腺等に対しては抗エストロゲン作用を示す一方、閉経後骨粗鬆症や血清コレステロール、心血管系等に対してはエストロゲン作用を示す。これら薬剤としては、ラソフォキシフェン、ナフォキシジンの他にも、例えばタモキシフェン、ラロキシフェン等が知られている。【０００３】
この中でラソフォキシフェンは、閉経後骨粗鬆症の予防、治療薬剤として有望視され、現在、大規模な臨床試験が進められているものである。このラソフォキシフェン；シス−６−フェニル−５−〔４−（２−ピロリジン−１−イルエトキシフェニル〕−５，６，７，８−テトラヒドロナフタレン−２−オールの化学構造は以下の式（３０）で表される。【０００４】
【化１】
2009035020.tif 000003
【０００５】
しかし、このラソフォキシフェンは、テトラヒドロナフタレン骨格を有し、幾何異性体が存在するが、シス体のみが効力を有するため、その分離工程が必要であった。【０００６】
また、ナフォキシジンの化学構造は以下の式（３１）で表される。【０００７】
【化２】
2009035020.tif 000004
【０００８】
このナフォキシジンは、１，２−ジヒドロナフタレン骨格を有し、２つの２重結合炭素に置換基が結合するため幾何異性体を有してはいないが、２つの水酸基の一方はメチル基により置換され、他方は１−ピロリジニルエチル基により置換されていることにより、位置異性が生じるため、生産効率が低いものであった。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明の課題は、ラソフォキフェンやナフォキシジンに比較し生産効率に優れた化学構造を有するジヒドロナフタレン化合物を新たに合成するとともに、該新規ジヒドロナフタレン化合物の新規な医薬用途を探索し、有用で新規な化合物を見出すとともに、該化合物を有効成分とする新規薬剤を提供しようとする点にある。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明者等は、鋭意研究の結果、その生産工程において幾何異性や位置異性が生じず、生産効率の極めて高い新規ジヒドロナフタレン化合物を合成した。さらに、このジヒドロナフタレン化合物の新規作用を探索中、該化合物の中には、ラソフォキシフェンあるいはナフォキシジン類縁体の薬効として現在まで全く知られていない、プロテアソーム阻害作用を示すものが存在するとの知見を得た。【００１１】
ここで、細胞内の選択的タンパク分解系として重要な役割を果たしているものとして、ユビキチン−プロテアソームシステムがあり、該システムは、細胞周期、転写、シグナル伝達、アポトーシス、代謝、抗原提示等の様々な生命活動に関与していることが明らかになってきている。このプロテアソームは、ユビキチンが数個連なって付加された標的タンパク質をＡＴＰ依存的に分解する作用を有し、トリプシン様、キモトリプシン様、及びカスパーゼ様の３種類の活性部位を有する。近年、プロテアソームのガン細胞内での働きを抑制することにより、ガン細胞内で異常タンパク質を蓄積させることによりガン細胞を死滅させる抗ガン剤の開発が行われており、アメリカにおいて、プロテアソーム阻害剤の一種であるＢｏｒｔｅｚｏｍｉｂ（Ｖｅｌｃａｄｅ；登録商標）が、難治性多発性骨髄腫治療薬として認可されている（２００３年）。
そこで、上記ジヒドロナフタレン化合物についても同様に抗ガン作用を確認したところ、殆どの化合物が抗ガン作用を示すとの知見を得た。【００１２】
また、このようなプロテアソーム阻害剤は、ガンばかりでなく、種々の炎症あるいは免疫疾患の治療薬としても期待されているものである。
さらに、上記細胞内での異常タンパク質の蓄積は、アルツハイマー病、パーキンソン病、プリオン病等の様々な神経変性疾患の共通な発症機構としても提唱されており、このような神経変性疾患の原因解明あるいはその治療薬の開発研究においても、プロテアソーム阻害剤は有用である。【００１３】
また、本発明者等は、ジヒドロナフタレン化合物の新規作用を探索中、該化合物の中には、明確なプロテアソーム阻害作用を示さない一方で、抗ガン作用を示すものが存在するとの知見を得た。【００１４】
すなわち、本発明者等によって合成された上記ジヒドロナフタレン化合物は、新規化合物であり、しかも、その構造上の特徴により合成に極めて有利であるとともに、既存のプロテアソーム阻害剤や抗ガン剤に類似構造のものが無く、このためプロテアソーム阻害剤や抗ガン剤としてリード化合物になりうると確信して、本発明を完成するに至ったものである。【００１５】
具体的に、本発明は以下に示されるとおりのものである。
（１）以下の式（Ｉ）で表される化合物。
【化３】
2009035020.tif 000005
（但し、式中、２つの
【化４】
2009035020.tif 000006
は同一の置換基を表し、Ｒ１及びＲ２は、水素原子、又はそれぞれ同一若しくは異なるアルキル基を表し、Ｒ１及びＲ２は、一緒になってそれらを有する窒素原子とともに、又はさらに酸素原子、硫黄原子、及び窒素原子のいずれか１種以上とともに、単環式複素環を形成してもよい。また、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５は、それぞれ水素原子、アルキル基、アシル基、脂環式基、芳香族基、ハロゲン原子、アシルオキシ基、シアノ基、及びニトロ基から選ばれた１種以上の置換基を表し、ｌは２〜５の整数、ｎは１〜４の整数、ｍは１〜５の整数、ｑは１〜３の整数をそれぞれ表す。）【００１６】
（２）以下の式（ＩＩ）で表される化合物。
【化５】
2009035020.tif 000007
【００１７】
（３）以下の式（ＩＩＩ）で表される化合物。
【化６】
2009035020.tif 000008
【００１８】
（４）以下の式（ＩＶ）で表される化合物。
【化７】
2009035020.tif 000009
【００１９】
（５）以下の式（Ｖ）で表される化合物。
【化８】
2009035020.tif 000010
【００２０】
（６）以下の式（ＶＩ）で表される化合物。
【化９】
2009035020.tif 000011
【００２１】
（７）以下の式（ＶＩＩ）で表される化合物。
【化１０】
2009035020.tif 000012
【００２２】
（８）以下の式（ＶＩＩＩ）で表される化合物。
【化１１】
2009035020.tif 000013
【００２３】
（４）上記（２），（３），（５）〜（７）のいずれかに記載の化合物を有効成分として含有することを特徴とするプロテアソーム阻害剤。【００２４】
（５）上記（２），（４）〜（８）のいずれかに記載の化合物を有効成分として含有することを特徴とする抗ガン剤。
【発明の効果】
【００２５】
本発明の新規ジヒドロナフタレン化合物は、プロテアソーム阻害作用及び／又は抗ガン作用を示す。これに対して、従来のラソフォキシフェン類縁体あるいはナフォキシジン類縁体にはそのような作用についての報告はない。一方、従来のラソフォキシフェンには、幾何異性体としてシス、トランス体が存在し、このうちシス体のみが有効であるため、シス体を分離する必要があったが、本発明のジヒドロナフタレン化合物には幾何異性体が存在しないため、このような分離操作は必要が無い。また、ナフォキシジンには、上記式（３１）から明らかなように、幾何異性体は存在しないが、ナフォキシジン骨格上の２つの水酸基はそれぞれ異なるアルキル基により置換されているため、その生産工程において位置異性が生じてしまい、生産効率が劣る。これに対して本発明のジヒドロナフタレン化合物は、ナフォキシジン骨格を有するが、その二つの水酸基は同じ側鎖部位により置換されているため、このような位置異性体を生じることがない。【００２６】
しかも、プロテアソーム阻害剤や抗ガン剤として知られている従来の化合物の生産手段には多工程を必要とするものが多く、このためやはり合成上の問題がある。これに対して、本発明のジヒドロナフタレン化合物は、異性体が存在せず合成が容易かつ効率的であるとともに、従来のプロテアソーム阻害剤や抗ガン剤においても類似する構造を有するものはない。したがって、本発明のジヒドロナフタレン化合物はプロテアソーム阻害剤や抗ガン剤としてそれ自体有用であるというばかりでなく、プロテアソーム阻害剤や抗ガン剤の新規開発のためのリード化合物となり得るものである。また、抗ガン剤としてばかりでなく、炎症あるいは免疫疾患に対する治療、あるいはアルツハイマー病、パーキンソン病、プリオン病等の様々な神経変性疾患についての研究開発に大いに資するものである。
【図面の簡単な説明】
【００２７】
【図１】本発明のジヒドロナフタレン化合物の製造法における各工程を示す模式図である。
【発明を実施するための形態】
【００２８】
本発明においてプロテアソーム阻害剤及び／又は抗ガン剤として使用するジヒドロナフタレン化合物は、以下の式（Ｉ）で表される。
【００２９】
【化１２】
2009035020.tif 000014
（但し、式中、２つの
【化１３】
2009035020.tif 000015
は同一の置換基を表し、Ｒ１及びＲ２は、水素原子、又はそれぞれ同一若しくは異なるアルキル基を表し、Ｒ１及びＲ２は、一緒になってそれらを有する窒素原子とともに、又はさらに酸素原子、硫黄原子、及び窒素原子のいずれか１種以上とともに、単環式複素環を形成してもよい。また、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５は、それぞれ水素原子、アルキル基、アシル基、脂環式基、芳香族基、ハロゲン原子、アシルオキシ基、シアノ基、及びニトロ基から選ばれた１種以上の置換基を表し、ｌは２〜５の整数、ｎは１〜４の整数、ｍは１〜５の整数、ｑは１〜３の整数をそれぞれ表す。）
【００３０】
上記式（Ｉ）の化合物において、Ｒ１及びＲ２が形成する単環式複素環式基としては、５〜７員環が望ましく、例えばピロリジニル基、ピペリジニル基、ピペラジニル基、モルフォリニル基、チオモルフォリニル基、ジアザシクロヘキシル基等が挙げられる。
【００３１】
その化学構造上の特徴は、ラソフォキシフェンのような１，２，３，４テトラヒドロナフタリン環ではなく、１，２−ジヒドロナフタリン環を有し、該１，２位における２重結合の炭素原子にそれぞれフェニル基が置換しており、ラソフォキシフェンのような幾何異性体が存在せず、また、１，２−ジヒドロナフタレン環の７位、及び同１位のフェニル基はともに同一の側鎖部位により置換されている点にある。
また、従来、プロテアソーム阻害剤として知られている化合物の代表例として、Ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ、Ｌａｃｔａｃｙｓｔｉｎ、Ｍｇ１３２等を挙げることができるが、これらはオリゴペプチド型の化合物でありしかも異性体が存在するものである。
【００３２】
これに対して、本発明の式（Ｉ）で表されるジヒドロナフタレン化合物は、オリゴペプチド型とは全く化学構造を異にするほか、その製法において異性体分離手段を有せず製造できる。
本発明の式（Ｉ）で表される具体的化合物としては、例えば、以下のものが挙げられる。
【００３３】
【化１４】
2009035020.tif 000016
【００３４】
【化１５】
2009035020.tif 000017
【００３５】
【化１６】
2009035020.tif 000018
【００３６】
【化１７】
2009035020.tif 000019
【００３７】
【化１８】
2009035020.tif 000020
【００３８】
【化１９】
2009035020.tif 000021
【００３９】
【化２０】
2009035020.tif 000022
【００４０】
これらの本発明の化合物（Ｉ）〜（ＶＩＩＩ）は、いずれも文献未記載の新規化合物である。
【００４１】
以下、この式（Ｉ）で表されるジヒドロナフタレン化合物の製法について、図１を参照して説明する。
【００４２】
≪製造方法（図１）≫
＜工程１〔３成分カップリング工程〕＞
本発明においては、まず、以下の式（１）で表される化合物、式（２）で表される化合物、及び式（３）で表される化合物を原料化合物として用いて、１段階で、式（４）で表される化合物を合成する。
【００４３】
【化２１】
2009035020.tif 000023
（但し、式中、Ｒ６は、水素原子、アルキル基、アシル基、脂環式基、又は芳香族基を表し、Ｒ３は、水素原子、アルキル基、アシル基、脂環式基、芳香族基、ハロゲン原子、水酸基、アルキルオキシ基、アシルオキシ基、シアノ基、及びニトロ基から選ばれた１種以上の置換基を表し、ｎは１〜４の整数を表す。）
【００４４】
【化２２】
2009035020.tif 000024
（但し、式中、Ｒ’は、水素原子、アルキル基、アシル基、脂環式基、芳香族基、ハロゲン原子、水酸基、アルキルオキシ基、アシルオキシ基、及びシアノ基から選ばれた１種以上の置換基を表し、Ｍは、珪素原子、ホウ素原子、スズ原子、亜鉛原子、又はマグネシウム原子を表し、Ｒ４は、水素原子、アルキル基、アシル基、脂環式基、芳香族基、ハロゲン原子、水酸基、アルキルオキシ基、アシルオキシ基、シアノ基、及びニトロ基から選ばれた１種以上の置換基を表し、ｍは１〜５の整数を表し、ｐは１〜４の整数を表す。）
【００４５】
【化２３】
2009035020.tif 000025
（但し、式中、Ｒ７は、水素原子、アルキル基、アシル基、脂環式基、又は芳香族基を表し、Ｒ５は、水素原子、アルキル基、アシル基、脂環式基、芳香族基、ハロゲン原子、水酸基、アルキルオキシ基、及びアシルオキシ基から選ばれた１種以上の置換基を表し、ｑは１〜３の整数を表す。）
【００４６】
【化２４】
2009035020.tif 000026
（但し、式中、Ｒ３〜Ｒ７、並びにｎ、ｍ、及びｑは、それぞれ上記と同様であり、波線はＲ配置又はＳ配置の結合を表す。）
【００４７】
式（１）で表される化合物として好ましいものは、例えば、４−アセトキシベンズアルデヒド、４−ビバロイルオキシベンズアルデヒド、４−プロパノイルオキシベンズアルデヒド、４−エトキシカルボニルオキシベンズアルデヒド、４−ベンジルオキシカルボニルオキシベンズアルデヒド、４−シリルオキシベンズアルデヒド等が挙げられる。また、式（２）で表される化合物として好ましいものは、例えば、トリメチルシンナミルシラン、トリブチルシンナミルスズ、ジメチルシンナミルホウ素等が挙げられる。式（３）の化合物としては、例えば、メトキシベンゼン、エトキシベンゼン、ベンジルオキシベンゼン等が好ましい。
【００４８】
この反応工程においては、例えば、ＨｆＣｌ４等のルイス酸あるいはプロトン酸等の酸触媒、及び共触媒としてトリメチルシリルトリフルオロメタンスルホネート（ＴＭＳＯＴｆ）等を使用する。共触媒としては、上記ＴＭＳＯＴｆのほか、トリメチルシリルクロリド等も使用でき、ルイス酸としては上記のほか、Ｈｆ（ＯＴｆ）４，ＴｉＣｌ４，ＴｉＣｌ２（ＯＴｆ）２等の第４属金属塩、ＡｌＣｌ３，ＢＣｌ３，Ｓｃ（ＯＴｆ）３等の第３属金属塩、ＳｎＣｌ２，Ｓｎ（ＯＴｆ）２等の第２属金属塩等が使用できる。またプロトン酸としては塩酸、硫酸、硝酸、臭化水素酸、トリフルオロ酢酸、トリフルオロメタンスルホン酸等も使用可能である。これらは１種単独で使用してもよく、また２種以上併用してもよい。また、反応温度は、０〜４０℃であり、室温でもよい。反応時間は１〜１０時間である。
【００４９】
＜工程２〔環化反応工程〕＞
次いで、上記工程で得られた異性体混合物を、Ｎ−クロロコハク酸イミド、Ｎ−ブロモコハク酸イミド、Ｎ−ヨードコハク酸イミド、Ｉ（Ｐｙ）２ＢＦ４等のハロゲン化剤と、ＨＢＦ４、ＢＦ３・ＯＥｔ２、ＣＦ３ＳＯ３Ｈ等の酸を用いて、ジエチルエーテル、塩化メチレン等の溶媒の存在下で、ハロゲン誘導炭素環形成反応を行い、式（５）で表される化合物の異性体混合物を得る。
【００５０】
【化２５】
2009035020.tif 000027
（但し、式中、Ｒ３〜Ｒ７、並びにｎ、ｍ、及びｑは、それぞれ上記と同様である。また、Ｘはハロゲン原子であり、波線はＲ配置又はＳ配置の結合を表す。）
【００５１】
この反応温度は−７８℃〜室温である。
この異性体混合物は、上記式（５）で表される化合物の混合物であるが、具体的には以下の式（２１）〜（２４）で表される化合物のそれぞれのエナンチオマーを含む合計８種の化合物の混合物である。
【００５２】
【化２６】
2009035020.tif 000028
【００５３】
【化２７】
2009035020.tif 000029
【００５４】
【化２８】
2009035020.tif 000030
【００５５】
【化２９】
2009035020.tif 000031
（但し、式（２１）〜（２４）における、Ｒ３〜Ｒ７、Ｘ、ｎ、ｍ、及びｑは、上記と同様である。）
【００５６】
＜工程３〔アシル基除去、ヨウ素除去工程〕＞
上記工程で得られた異性体混合物は、それぞれの化合物を分離し、あるいは分離することなく、ｔ−ブチラート、メチラート、エチラート等のアルコラート、あるいは該アルコラートとＤＢＵ、ＤＢＮ、ＤＡＢＣＯ等のアミン系塩基を作用させて、脱ハロゲン化水素、二重結合の転位、及びＲ１基脱離反応を行うことにより、式（７）の化合物が得られる。これらの反応は順次行ってもよいが、同時に行うこともできる。
これらの反応中、ＤＢＵ等のアミン系塩基を用いる場合においては、下記式（２５）で表される化合物を含む中間生成物が生成するが、本工程においてはこの中間生成物を特に分離しなくてもよく、１つの反応容器で上記複数の反応工程を進めることができる。反応温度は０〜８０℃であり、好ましくは室温〜５０℃である。
【００５７】
【化３０】
2009035020.tif 000032
（但し、式中、Ｒ３〜Ｒ７、ｎ、ｍ、及びｑ、並びに波線は、上記と同様である。）
【００５８】
【化３１】
2009035020.tif 000033
（但し、式中、Ｒ３〜Ｒ７、ｎ、ｍ、及びｑは、上記と同様である。）
【００５９】
＜工程４〔鍵中間体の製造工程〕＞
上記式（７）の化合物を、ジクロロメタン、クロロホルム、１，２−ジクロロエタン等の溶媒中で、臭素化硼素（ＢＢｒ３）、ＡｌＢｒ３、ＴＭＳＩ等のルイス酸あるいはチオール等の求核剤の存在下、反応温度−７８℃〜室温で反応させ、ジヒドロナフタレン環の７位におけるＲ７Ｏ−基のＲ７基を除去して、式（８）の化合物を得る。
【００６０】
【化３２】
2009035020.tif 000034
【００６１】
＜工程５〔側鎖導入工程〕＞
上記工程で得られた式（８）の化合物をジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）等の溶媒中で、水素化ナトリウム等の塩基性化合物の存在下、以下の式（９）で表される化合物と反応温度０〜８０℃で反応させ、式（Ｉ）で表される本発明のジヒドロナフタレン化合物を得る。得られる化合物は、上記鍵中間体の２つの水酸基が同じ置換又は非置換アミノアルキル基で置換された化合物である。
【００６２】
【化３３】
2009035020.tif 000035
（但し、式中、Ｒ１、Ｒ２は上記と同様であり、Ｘはハロゲンを表し、ｌは２〜５の整数を表す。）
【００６３】
【化３４】
2009035020.tif 000036
（但し、式中、置換基等の定義は前述したとおりである。）
【００６４】
本発明の式（Ｉ）で表される化合物のうち、少なくとも式（ＩＩ），（ＩＩＩ），（Ｖ）〜（ＶＩＩ）で表される化合物はプロテアソーム阻害作用を示し、本発明の式（Ｉ）で表される化合物のうち、少なくとも式（ＩＩ），（ＩＶ）〜（ＶＩＩＩ）で表される化合物は抗ガン作用を示す。本発明のようなジヒドロナフタレン化合物において、プロテアソーム阻害作用又は抗ガン作用が認められたのは本発明において初めてであり、上記合成の容易さ及び効率性を加味すれば、本発明の技術的意義は極めて高い。
【実施例】
【００６５】
以下に本発明の実施例を示すが、本発明はこれら実施例により限定されるものではない。【００６６】
＜実施例１＞
（１）三成分連結反応によるトリアリールブテン骨格の構築
１−（４−メトキシフェニル）−２−フェニル−１−（４−ピバロイルオキシフェニル）−３−ブテン（４）【００６７】
【化３５】
2009035020.tif 000037
【００６８】
アルゴン雰囲気下、塩化ハフニウム（３９．２ｍｇ、０．１２２ｍｍｏｌ）をアニソール（３、０．０２ｍＬ）に懸濁し、氷冷下、４−（ピバロイルオキシ）ベンズアルデヒド（１、２５ｍｇ、０．１２１ｍｍｏｌ）とトリメチルシンナミルシラン（２、４６．７ｍｇ、０．２４５ｍｍｏｌ）とのアニソール溶液（０．２２ｍＬ）をゆっくり滴下した。室温で一夜攪拌した後、反応混合物に飽和重曹水（５ｍＬ）を注いで激しく攪拌し、ジエチルエーテル（１０ｍＬ）を加えて抽出した。さらにジエチルエーテル（１０ｍＬ）で２回抽出し、有機層を集合して、飽和塩化ナトリウム水溶液（５ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した後、これを濃縮した。残渣を薄層クロマトグラフィー（ヘキサン：塩化メチレン：ジエチルエーテル＝４：１：１）で精製すると、無色の油状物として標題化合物（４、３７．７ｍｇ）が得られた（収率７５％、シン・アンチ混合物）。【００６９】
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、テトラメチルシラン）  δ（ｐｐｍ）：１．２０及び１．２６（ｓ、９Ｈ）、３．５９及び３．７０（ｓ、３Ｈ）、４．０１（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝７．８、１１．３Ｈｚ）、４．１９（ｄ、１Ｈ、１１．３Ｈｚ）、４．７−４．９（ｍ、２Ｈ）、５．８−５．９（ｍ、１Ｈ）、６．６−７．３（ｍ、１３Ｈ）．
赤外吸収スペクトル（液膜法）ｃｍ−１：２９７４、１７４９、１６１０、１５１１、１４６２、１２５２、１２０３、１１６７、１１２０、１０３２、７５３、７００．
質量スペクトル  ｍ／ｅ：計算値（Ｃ２８Ｈ３０Ｏ３＋Ｈ）＋として４１５．２３、実験値４１５．２３．【００７０】
（２）環化反応によるテトラヒドロナフタレン骨格の構築
２−ヨード−７−メトキシ−３−フェニル−４−（４−ピバロイルオキシフェニル）−１，２，３，４−テトラヒドロナフタレン（５）【００７１】
【化３６】
2009035020.tif 000038
【００７２】
ビス（ピリジン）ヨードニウム  テトラフルオロボレート（６５．８ｍｇ、０．１７７ｍｍｏｌ）を塩化メチレン（３．４ｍＬ）に懸濁し、ドライアイスアセトン浴で−７８℃に冷却した。これに１−（４−メトキシフェニル）−２−フェニル−１−（４−ピバロイルオキシフェニル）−３−ブテン（４、５６．０ｍｇ、０．１３５ｍｍｏｌ）の塩化メチレン（１．８ｍＬ）溶液を加え、さらに三臭化ホウ素ジエチルエーテル錯体（０．０１５ｍＬ、０．１１８ｍｍｏｌ）を３回に分けて添加した。その後、−７８℃で１時間攪拌した後、飽和塩化アンモニウム水溶液（５ｍＬ）を加えて反応を停止し、室温に戻した後、ジエチルエーテル（１０ｍＬ）で３回抽出した。有機層を集合して飽和塩化ナトリウム水溶液（１０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮した。残渣を薄層クロマトグラフィー（トルエン）で精製すると、微黄色油状物として標題化合物（５、５１．６ｍｇ）が得られた（収率７１％）。【００７３】
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、テトラメチルシラン）  δ（ｐｐｍ）：１．３２、１．３５及び１．３２（ｓ、９Ｈ）、３．３（ｍ、１Ｈ）、３．７−３．９（ｍ、５Ｈ）、４．２（ｄ、１Ｈ，Ｊ＝１０．６Ｈｚ）、４．７−４．８（ｍ、１Ｈ）、６．６−７．２（ｍ、１２Ｈ）．
赤外吸収スペクトル（液膜法）ｃｍ−１：２９７２、１７５１、１６１０、１５１０、１５０３、１１２２、１０３１．
質量スペクトル  ｍ／ｅ：計算値（Ｃ２８Ｈ２９ＩＯ３＋Ｈ）＋として５４１．１２、実験値５４１．１２．【００７４】
（３）脱ハロゲン化水素反応によるジヒドロナフタレン骨格の構築
７−メトキシ−３−フェニル−４−（４−ピバロイルオキシフェニル）−３，４−ジヒドロナフタレン（６）【００７５】
【化３７】
2009035020.tif 000039
【００７６】
２−ヨード−７−メトキシ−３−フェニル−４−（４−ピバロイルオキシフェニル）−１，２，３，４−テトラヒドロナフタレン（５、３９．４ｍｇ、０．０７２９ｍｍｏｌ）をトルエン（１．５ｍＬ）に溶解し、１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデセン−７（ＤＢＵ、０．０３５ｍＬ、０．２３４ｍｍｏｌ）を加えて、８０℃で１５分加熱攪拌した。放冷後、氷冷下で飽和塩化アンモニウム水溶液（１０ｍＬ）を加え、激しく攪拌し、次にジエチルエーテル（１０ｍＬ）を加えて抽出した。さらにジエチルエーテル（１０ｍＬ）で２回抽出し、有機層を集合して飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した後、これを濃縮した。残渣を薄層クロマトグラフィー（ベンゼン：ヘキサン＝１０：１）で精製すると、無色油状物として標題化合物（６、２２．７ｍｇ）が得られた（収率７５％）。【００７７】
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、テトラメチルシラン）  δ（ｐｐｍ）：１．３４及び１．３６（ｓ、９Ｈ）、３．７６及び３．８０（ｓ、３Ｈ）、３．８４（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝４．２、７．５Ｈｚ）、４．１７（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝７．５Ｈｚ）、５．９８（ｄｄ、１Ｈ、４．２、９．６Ｈｚ）、６．６−７．２（ｍ、１２Ｈ）．【００７８】
（４）二重結合の転位反応
４−（４−ヒドロキシフェニル）−７−メトキシ−３−フェニル−１，２−ジヒドロナフタレン（７）【００７９】
【化３８】
2009035020.tif 000040
【００８０】
第三級ブトキシカリウム（４０．３ｍｇ、０．３５９ｍｍｏｌ）のジメチルスルホキシド（０．６ｍＬ）溶液に、７−メトキシ−３−フェニル−４−（４−ピバロイルオキシフェニル）−３，４−ジヒドロナフタレン（６、２９．３ｍｇ、０．０７１０ｍｍｏｌ）のジメチルスルホキシド（０．８ｍＬ）溶液を加え、室温で一昼夜攪拌した。反応混合物に飽和塩化アンモニウム水溶液（１０ｍＬ）を加えよく攪拌した後、ジエチルエーテル（１０ｍＬ）で３回抽出した。有機層を集合し、飽和塩化ナトリウム水溶液（１０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した後、これを濃縮した。残渣を薄層クロマトグラフィー（トルエン：酢酸エチル＝１０：１）で精製すると、標題化合物（７、１６．０ｍｇ）が得られた（収率６９％）。【００８１】
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、テトラメチルシラン）  δ（ｐｐｍ）：２．９１（ｄｄｄ、２Ｈ）、２．７５（ｄｄｄ、２Ｈ）、３．７９（ｓ、３Ｈ）、６．６−７．２（ｍ、１２Ｈ）．【００８２】
（５）脱メチル化反応
４−（４−ヒドロキシフェニル）−７−ヒドロキシ−３−フェニル−１，２−ジヒドロナフタレン（８）【００８３】
【化３９】
2009035020.tif 000041
【００８４】
反応容器中、上記工程（４）で得られた４−（４−ヒドロキシフェニル）−７−メトキシ−３−フェニル−１，２−ジヒドロナフタレン（７、２９．７ｍｇ、０．０９０ｍＭ）にジクロロメタン２．３ｍｌを加え、反応系を０℃に冷却した。次いで臭素化硼素（ＢＢｒ３）５当量を含むヘプタン１Ｍ溶液０．４５ｍｌを加えた。１．５時間経過後、反応生成物の一部に対し、薄層クロマトグラフィー（ｎ−ヘキサン：酢酸エチル＝３：１）を行って、上記４−（４−ヒドロキシフェニル）−７−メトキシ−３−フェニル−１，２−ジヒドロナフタレンに対応するスポットが検出されなくなったことを確認した後、ＮａＨＣＯ３水溶液を加え、反応を終了させた。反応生成物をジクロロメタン及び酢酸エチルで抽出した後、有機層を水及び飽和食塩水で洗浄し、有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥した。有機層を濃縮後、薄層クロマトグラフィー（ｎ−ヘキサン：酢酸エチル＝３：１）を行い、４−（４−ヒドロキシフェニル）−７−ヒドロキシ−３−フェニル−１，２−ジヒドロナフタレン（８）２７．９ｍｇを得た。収率は定量的であった。【００８５】
１Ｈ  ＮＭＲ  （ＣＤ３ＯＤ）  δ（ｐｐｍ）：７．２３−７．０７（ｍ、５Ｈ、Ａｒ）、６．９３−６．８６（ｍ、２Ｈ、Ａｒ）、６．７９−６．６６（ｍ、４Ｈ、Ａｒ）、６．５７（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝２．４、８．４Ｈｚ、Ａｒ）、３．０３−２．９２（ｍ、２Ｈ、１−Ｈ）、２．８７−２．７６（ｍ、２Ｈ、２−Ｈ）．【００８６】
（６）側鎖導入反応
（ｉ）４−［４−（２−ピロリジン−１−イル−エトキシ）フェニル］−７−（２−ピロリジン−１−イル−エトキシ）−３−フェニル−１，２−ジヒドロナフタレン（９）【００８７】
【化４０】
2009035020.tif 000042
【００８８】
反応容器に、６０重量％水素化ナトリウム（ＮａＨ）含有オイル２１．６ｍｇ（水素化ナトリウム６．０当量）を加え、これを石油エーテルで洗浄した後、乾燥させた。次に、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）０．９ｍｌ（０．１Ｍ）を投入し、０℃に保った。上記工程（５）で得られた、４−（４−ヒドロキシフェニル）−７−ヒドロキシ−３−フェニル−１，２−ジヒドロナフタレン２９．０ｍｇ（０．０９０ｍＭ）を反応容器に加え、室温で１５分維持した後、０℃に冷却し、１−（２−クロロエチル）−ピロリジン塩酸塩５１．０ｍｇ（３．３当量）を加え、５０℃で４時間反応させた後、反応系を０℃に冷却するとともに、塩化アンモニウム水溶液を加え、反応を終了させた。反応生成物をジクロロメタンで抽出し、有機層を水及び飽和食塩水で洗浄し、有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥した。有機層を濃縮後、薄層クロマトグラフィー（クロロホルム：メタノール：アンモニア水＝８０：１：１）を行い、さらに薄層クロマトグラフィー（クロロホルム：メタノール＝９：１）で精製することにより、４−［４−（２−ピロリジン−１−イル−エトキシ）フェニル］−７−（２−ピロリジン−１−イル−エトキシ）−３−フェニル−１，２−ジヒドロナフタレン（（９）、以下、ナフォリダイフェンＢという場合がある。）２５．２ｍｇを得た。収率は５５％であった。【００８９】
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）  δ（ｐｐｍ）：７．１４−６．９０（ｍ、７Ｈ、Ａｒ）、６．８２−６．６８（ｍ、４Ｈ、Ａｒ）、６．６０（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝３．０、８．７Ｈｚ、Ａｒ）、４．１３（ｔ、２Ｈ、Ｊ＝６．０Ｈｚ、ＯＣＨ２）、４．０９（ｔ、２Ｈ、Ｊ＝６．０Ｈｚ、ＯＣＨ２）、３．０１−２．８６（ｍ、６Ｈ、１−Ｈ、ＮＣＨ２）、２．８２−２．５８（ｍ、１０Ｈ、２−Ｈ、ピロリジニル  ２−Ｈ）、１．８５−１．７６（ｍ、８Ｈ、ピロリジニル  ３−Ｈ）．【００９０】
（ｉｉ）４−［４−（２−モルフォリン−１−イル−エトキシ）フェニル］−７−（２−モルフォリン−１−イル−エトキシ）−３−フェニル−１，２−ジヒドロナフタレン（１０）【００９１】
【化４１】
2009035020.tif 000043
【００９２】
１−（２−クロロエチル）−モルフォリン塩酸塩を使用するほかは上記（ｉ）と同様にして、４−［４−（２−モルフォリン−１−イル−エトキシ）フェニル］−７−（２−モルフォリン−１−イル−エトキシ）−３−フェニル−１，２−ジヒドロナフタレン（（１０）、以下、ナフォリダイフェンＤという場合がある。）９４．３ｍｇを得た。収率は７９％であった。【００９３】
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）  δ（ｐｐｍ）：７．１９−６．９３（ｍ、７Ｈ、Ａｒ）、６．８５−６．７１（ｍ、４Ｈ、Ａｒ）、６．６１（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝２．７、８．４Ｈｚ、Ａｒ）、４．２０−４．０６（ｍ、４Ｈ、ＯＣＨ２）、３．８７−３．６７（ｍ、８Ｈ、モルフォリニル  ３−Ｈ）、３．０５−２．７３（ｍ、８Ｈ、１−Ｈ、２−Ｈ、ＮＣＨ２）、２．７１−２．５３（ｍ、８Ｈ、モルフォリニル  ２−Ｈ）．【００９４】
（ｉｉｉ）４−［４−（２−ジメチルアミノ−１−イル−エトキシ）フェニル］−７−（２−ジメチルアミノ−１−イル−エトキシ）−３−フェニル−１，２−ジヒドロナフタレン（１１）【００９５】
【化４２】
2009035020.tif 000044
【００９６】
２−ジメチルアミノエチルクロリド塩酸塩を使用するほかは上記（ｉ）と同様にして、４−［４−（２−ジメチルアミノ−１−イル−エトキシ）フェニル］−７−（２−ジメチルアミノ−１−イル−エトキシ）−３−フェニル−１，２−ジヒドロナフタレン（（１１）、以下、ナフォリダイフェンＡという場合がある。）９５．９ｍｇを得た。収率は９２％であった。【００９７】
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）  δ（ｐｐｍ）：７．２１−６．９３（ｍ、７Ｈ、Ａｒ）、６．８０−６．７１（ｍ、４Ｈ、Ａｒ）、６．６０（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝８．６、２．６Ｈｚ、Ａｒ）、４．０７（ｔ、２Ｈ、Ｊ＝５．７Ｈｚ、ＯＣＨ２）、４．０３（ｔ、２Ｈ、Ｊ＝５．７Ｈｚ、ＯＣＨ２）、２．９５−２．８９（ｍ、２Ｈ、１−Ｈ）、２．８０−２．７０（ｍ、２Ｈ、２−Ｈ）、２．７３（ｔ、２Ｈ、Ｊ＝５．７Ｈｚ、ＮＣＨ２）、２．７２（ｔ、２Ｈ、Ｊ＝５．７Ｈｚ、ＮＣＨ２）、２．３４（ｓ、３Ｈ×４、ＮＭｅ）．【００９８】
（ｉｖ）４−［４−（２−ピペリジン−１−イル−エトキシ）フェニル］−７−（２−ピペリジン−１−イル−エトキシ）−３−フェニル−１，２−ジヒドロナフタレン（１２）【００９９】
【化４３】
2009035020.tif 000045
【０１００】
１−（２−クロロエチル）ピペリジン塩酸塩を使用するほかは上記（ｉ）と同様にして、４−［４−（２−ピペリジン−１−イル−エトキシ）フェニル］−７−（２−ピペリジン−１−イル−エトキシ）−３−フェニル−１，２−ジヒドロナフタレン（（１２）、以下、ナフォリダイフェンＣという場合がある。）９０．２ｍｇを得た。収率は７６％であった。【０１０１】
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）  δ（ｐｐｍ）：７．１２−６．９３（ｍ、７Ｈ、Ａｒ）、６．７８−６．７０（ｍ、４Ｈ、Ａｒ）、６．５８（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝８．５、２．４Ｈｚ、Ａｒ）、４．１１（ｔ、２Ｈ、Ｊ＝６．５Ｈｚ、ＯＣＨ２）、４．０７（ｔ、２Ｈ、Ｊ＝５．５Ｈｚ、ＯＣＨ２）、２．９５−２．８９（ｍ、２Ｈ、１−Ｈ）、２．８０−２．７２（ｍ、６Ｈ、２−Ｈ、ＮＣＨ２×２）、２．５７−２．４２（ｍ、２Ｈ×４、ピペリジニル  ２’−Ｈ）、１．６３−１．５９（ｍ、２Ｈ×４、ピペリジニル  ３’−Ｈ）、１．４９−１．３９（ｍ、２Ｈ×２、ピペリジニル  ４’−Ｈ）．【０１０２】
（ｖ）４−［４−（２−ジエチルアミノ−１−イル−エトキシ）フェニル］−７−（２−ジエチルアミノ−１−イル−エトキシ）−３−フェニル−１，２−ジヒドロナフタレン（１３）【０１０３】
【化４４】
2009035020.tif 000046
【０１０４】
２−ジエチルアミノエチルクロリド塩酸塩を使用するほかは上記（ｉ）と同様にして、４−［４−（２−ジエチルアミノ−１−イル−エトキシ）フェニル］−７−（２−ジエチルアミノ−１−イル−エトキシ）−３−フェニル−１，２−ジヒドロナフタレン（（１３）、以下、ナフォリダイフェンＥという場合がある。）４０ｍｇを得た。収率は４１％であった。【０１０５】
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）  δ（ｐｐｍ）：７．１３−６．９３（ｍ、７Ｈ、Ａｒ）、６．７８−６．７０（ｍ、４Ｈ、Ａｒ）、６．５８（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝８．６、２．６Ｈｚ、Ａｒ）、４．０５（ｔ、２Ｈ、Ｊ＝６．３Ｈｚ、ＯＣＨ２）、４．０１（ｔ、２Ｈ、Ｊ＝６．３Ｈｚ、ＯＣＨ２）、２．９６−２．８４（ｍ、６Ｈ、１−Ｈ、ＮＣＨ２×２）、２．７９−２．７５（ｍ、２Ｈ、２−Ｈ）、２．６４（ｑ、２Ｈ×４、Ｊ＝７．０Ｈｚ、ＮＥｔ）、１．０７（ｔ、３Ｈ×４、Ｊ＝７．０Ｈｚ、ＮＥｔ）．【０１０６】
（ｖｉ）４−［４−（２−ヘキサヒドロ−１Ｈ−アゼピン−１−イル−エトキシ）フェニル］−７−（２−ヘキサヒドロ−１Ｈ−アゼピン−１−イル−エトキシ）−３−フェニル−１，２−ジヒドロナフタレン（１４）【０１０７】
【化４５】
2009035020.tif 000047
【０１０８】
Ｎ−（２−クロロエチル）−ヘキサヒドロ−１Ｈ−アゼピン塩酸塩を使用するほかは上記（ｉ）と同様にして、４−［４−（２−ヘキサヒドロ−１Ｈ−アゼピン−１−イル−エトキシ）フェニル］−７−（２−ヘキサヒドロ−１Ｈ−アゼピン−１−イル−エトキシ）−３−フェニル−１，２−ジヒドロナフタレン（（１４）、以下、ナフォリダイフェンＦという場合がある。）４６．０ｍｇを得た。収率は５９％であった。【０１０９】
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）  δ（ｐｐｍ）：７．１０−６．９２（ｍ、７Ｈ、Ａｒ）、６．７８−６．７０（ｍ、４Ｈ、Ａｒ）、６．５９（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝８．６、２．８Ｈｚ、Ａｒ）、４．０７（ｔ、２Ｈ、Ｊ＝４．５Ｈｚ、ＯＣＨ２）、４．０３（ｔ、２Ｈ、Ｊ＝６．３Ｈｚ、ＯＣＨ２）、２．９７−２．８９（ｍ、６Ｈ、１−Ｈ、ＮＣＨ２×２）、２．８１−２．７３（ｍ、２Ｈ、２−Ｈ、アゼピニル  ２’−Ｈ）、１．７９−１．５３（ｍ、１６Ｈ、アゼピニル  ３’−Ｈ、４’−Ｈ）．【０１１０】
（ｖｉｉ）４−［４−（３−ジメチルアミノ−１−イル−プロポキシ）フェニル］−７−（３−ジメチルアミノ−１−イル−プロポキシ）−３−フェニル−１，２−ジヒドロナフタレン（１５）【０１１１】
【化４６】
2009035020.tif 000048
【０１１２】
３−ジメチルアミノプロピルクロリド塩酸塩を使用するほかは上記（ｉ）と同様にして、４−［４−（３−ジメチルアミノ−１−イル−プロポキシ）フェニル］−７−（３−ジメチルアミノ−１−イル−プロポキシ）−３−フェニル−１，２−ジヒドロナフタレン（（１５）、以下、ナフォリダイフェンＧという場合がある。）１０３．９ｍｇを得た。収率は８６％であった。【０１１３】
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）  δ（ｐｐｍ）：７．１３−６．９２（ｍ、７Ｈ、Ａｒ）、６．７８−６．７０（ｍ、４Ｈ、Ａｒ）、６．５８（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝８．６、２．８Ｈｚ、Ａｒ）、４．０２（ｔ、２Ｈ、Ｊ＝６．３Ｈｚ、ＯＣＨ２）、３．９８（ｔ、２Ｈ、Ｊ＝５．７Ｈｚ、ＯＣＨ２）、２．９５−２．９０（ｍ、２Ｈ、１−Ｈ）、２．７９−２．７２（ｍ、２Ｈ、２−Ｈ）、２．４５（ｔ、２Ｈ×２、Ｊ＝７．５Ｈｚ、ＮＣＨ２）、２．２６（ｓ、３Ｈ×４、ＮＭｅ）、２．０７−１．８８（ｍ、２Ｈ×２、ＣＨ２）．【０１１４】
＜実施例２＞
以下の実験は、本発明者が、文部科学省がん特定研究領域  化学療法基盤情報支援班に依頼した結果に基づく。【０１１５】
４−［４−（２−ピロリジン−１−イル−エトキシ）フェニル］−７−（２−ピロリジン−１−イル−エトキシ）−３−フェニル−１，２−ジヒドロナフタレン（以下、ナフォリダイフェンＢという。）のプロテアソーム阻害活性を以下のように測定した。【０１１６】
〔キモトリプシン様活性阻害試験〕
１）２０Ｓプロテアソームに１０μＭの濃度に調製したナフォリダイフェンＢを添加し、３０℃で１０分間インキュベートした。
２）上記試験系に２０Ｓプロテアソーム切断配列を含む蛍光標識化したキモトリプシンを加え、３０℃で１時間反応させた。
３）上記反応により遊離した蛍光物質（ＡＭＣ）を３６０ｎｍ光で励起し４６０ｎｍ光で定量した。
４）ナフォリダイフェンＢを添加しない試験系を（１）〜（３）と同様に測定し、ナフォリダイフェンＢを用いた際の酵素活性を測定した。
５）ナフォリダイフェンＢを含む段階的な希釈溶液を調整し、（１）〜（４）と同様な評価を行った後に５０％阻害濃度（ＩＣ５０）を決定した。
６）阻害活性の陽性対照として既知のプロテアソーム阻害剤Ｃｌａｓｔｏ−Ｌａｃｔａｃｙｓｔｉｎ  β−Ｌａｃｔｏｎｅ（Ｌａｃｔａｃｙｓｔｉｎ活性体）及びＭＧＩ３２を（１）〜（５）の工程に付し評価した。【０１１７】
〔カスパーゼ様活性阻害試験〕
１）２０Ｓプロテアソームに１０μＭの濃度に調製したナフォリダイフェンＢを添加し、３０℃で１０分間インキュベートした。
２）上記試験系に２０Ｓプロテアソーム切断配列を含む蛍光標識化したカスパーゼを加え、３０℃で１時間反応させた。
３）上記反応により遊離した蛍光物質（ＡＭＣ）を３６０ｎｍ光で励起し４６０ｎｍ光で定量した。
４）ナフォリダイフェンＢを添加しない試験系を（１）〜（３）と同様に測定し、ナフォリダイフェンＢを用いた際の酵素活性を測定した。
５）ナフォリダイフェンＢを含む段階的な希釈溶液を調整し、（１）〜（４）と同様な評価を行った後に５０％阻害濃度（ＩＣ５０）を決定した。
６）阻害活性の陽性対照として既知のプロテアソーム阻害剤Ｃｌａｓｔｏ−Ｌａｃｔａｃｙｓｔｉｎ  β−Ｌａｃｔｏｎｅ（Ｌａｃｔａｃｙｓｔｉｎ活性体）及びＭＧＩ３２を（１）〜（５）の工程に付し評価した。【０１１８】
〔トリプシン様活性阻害試験〕
１）２０Ｓプロテアソームに１０μＭの濃度に調製したナフォリダイフェンＢを添加し、３０℃で１０分間インキュベートした。
２）上記試験系に２０Ｓプロテアソーム切断配列を含む蛍光標識化したトリプシンを加え、３０℃で１時間反応させた。
３）上記反応により遊離した蛍光物質（ＡＭＣ）を３６０ｎｍ光で励起し４６０ｎｍ光で定量した。
４）ナフォリダイフェンＢを添加しない試験系を（１）〜（３）と同様に測定し、ナフォリダイフェンＢを用いた際の酵素活性を測定した。
５）ナフォリダイフェンＢを含む段階的な希釈溶液を調整し、（１）〜（４）と同様な評価を行った後に５０％阻害濃度（ＩＣ５０）を決定した。
６）阻害活性の陽性対照として既知のプロテアソーム阻害剤Ｃｌａｓｔｏ−Ｌａｃｔａｃｙｓｔｉｎ  β−Ｌａｃｔｏｎｅ（Ｌａｃｔａｃｙｓｔｉｎ活性体）及びＭＧＩ３２を（１）〜（５）の工程に付し評価した。【０１１９】
〔カテプシン様活性阻害試験〕
１）２０Ｓプロテアソームに１０μＭの濃度に調製したナフォリダイフェンＢを添加し、３０℃で１０分間インキュベートした。
２）上記試験系に２０Ｓプロテアソーム切断配列を含む蛍光標識化したカテプシンＢを加え、３０℃で１時間反応させた。
３）上記反応により遊離した蛍光物質（ＡＭＣ）を３６０ｎｍ光で励起し４６０ｎｍ光で定量した。
４）ナフォリダイフェンＢを添加しない試験系を（１）〜（３）と同様に測定し、ナフォリダイフェンＢを用いた際の酵素活性を測定した。
５）ナフォリダイフェンＢを含む段階的な希釈溶液を調整し、（１）〜（４）と同様な評価を行った後に５０％阻害濃度（ＩＣ５０）を決定した。
６）阻害活性の陽性対照として既知のプロテアソーム阻害剤Ｃｌａｓｔｏ−Ｌａｃｔａｃｙｓｔｉｎ  β−Ｌａｃｔｏｎｅ（Ｌａｃｔａｃｙｓｔｉｎ活性体）及びＭＧＩ３２を（１）〜（５）の工程に付し評価した。【０１２０】
〔α−キモトリプシン様活性阻害試験〕
１）２０Ｓプロテアソームに１０μＭの濃度に調製したナフォリダイフェンＢを添加し、３０℃で１０分間インキュベートした。
２）上記試験系に２０Ｓプロテアソーム切断配列を含む蛍光標識化したα−キモトリプシンを加え、３０℃で１時間反応させた。
３）上記反応により遊離した蛍光物質（ＡＭＣ）を３６０ｎｍ光で励起し４６０ｎｍ光で定量した。
４）ナフォリダイフェンＢを添加しない試験系を（１）〜（３）と同様に測定し、ナフォリダイフェンＢを用いた際の酵素活性を測定した。
５）ナフォリダイフェンＢを含む段階的な希釈溶液を調整し、（１）〜（４）と同様な評価を行った後に５０％阻害濃度（ＩＣ５０）を決定した。
６）阻害活性の陽性対照として既知のプロテアソーム阻害剤Ｃｌａｓｔｏ−Ｌａｃｔａｃｙｓｔｉｎ  β−Ｌａｃｔｏｎｅ（Ｌａｃｔａｃｙｓｔｉｎ活性体）及びＭＧＩ３２を（１）〜（５）の工程に付し評価した。【０１２１】
結果を以下に示す。
［判定基準］
ＩＣ５０＜０．１μＭ：    ＋＋＋（非常に強い活性）
ＩＣ５０＝０．１〜１μＭ：＋＋（強い活性）
ＩＣ５０＝１〜１０μＭ：  ＋（比較的強い活性）
ＩＣ５０＞１０μＭ：      ±（弱い活性、あるいは活性無し）
［結果］
・一次評価
【表１】
2009035020.tif 000049
・二次評価
【表２】
2009035020.tif 000050
【表３】
2009035020.tif 000051
カテプシンＢの阻害：（無）
α−キモトリプシンの阻害：（無）
［判定］
キモトリプシン様活性：（ＩＣ５０＝４．６）
カスパーゼ様活性：（ＩＣ５０＝２．５）
トリプシン様活性：（ＩＣ５０＝８．６）
プロテアソーム選択性：（有）
評価はポジティブであり、ナフォリダイフェンＢは、２０Ｓプロテオソームキモトリプシン様活性、同カスパーゼ様活性、及び同トリプシン様活性のいずれに対しても阻害活性を示し、特に２０Ｓプロテアソームカスパーゼ様活性のＩＣ５０が比較的強い活性を示した。【０１２２】
＜実施例３＞
実施例２と同様にして、４−［４−（２−モルフォリン−１−イル−エトキシ）フェニル］−７−（２−モルフォリン−１−イル−エトキシ）−３−フェニル−１，２−ジヒドロナフタレン（以下、ナフォリダイフェンＤという。）のプロテアソーム阻害活性を測定した。結果を以下に示す。【０１２３】
［判定基準］
ＩＣ５０＜０．１μＭ：    ＋＋＋（非常に強い活性）
ＩＣ５０＝０．１〜１μＭ：＋＋（強い活性）
ＩＣ５０＝１〜１０μＭ：  ＋（比較的強い活性）
ＩＣ５０＞１０μＭ：      ±（弱い活性、あるいは活性無し）
［結果］
・一次評価
【表４】
2009035020.tif 000052
・二次評価
【表５】
2009035020.tif 000053
【表６】
2009035020.tif 000054
カテプシンＢの阻害：（無）
α−キモトリプシンの阻害：（無）
［判定］
キモトリプシン様活性：（ＩＣ５０＝６．８）
カスパーゼ様活性：（ＩＣ５０＝４．６）
トリプシン様活性：（ＩＣ５０＝４．１）
プロテアソーム選択性：（有）
評価はポジティブであり、ナフォリダイフェンＤは、２０Ｓプロテオソームキモトリプシン様活性、同カスパーゼ様活性、及び同トリプシン様活性のいずれに対しても阻害活性を示し、特に２０Ｓプロテアソームトリプシン様活性のＩＣ５０が比較的強い活性を示した。【０１２４】
＜実施例４＞
実施例２と同様にして、４−［４−（２−ジメチルアミノ−１−イル−エトキシ）フェニル］−７−（２−ジメチルアミノ−１−イル−エトキシ）−３−フェニル−１，２−ジヒドロナフタレン（以下、ナフォリダイフェンＡという。）のプロテアソーム阻害活性を測定した。結果を以下に示す。なお、この実施例４では、キモトリプシン様活性阻害試験のみを行った。【０１２５】
［判定基準］
ＩＣ５０＜０．１μＭ：    ＋＋＋（非常に強い活性）
ＩＣ５０＝０．１〜１μＭ：＋＋（強い活性）
ＩＣ５０＝１〜１０μＭ：  ＋（比較的強い活性）
ＩＣ５０＞１０μＭ：      ±（弱い活性、あるいは活性無し）
［結果］
・一次評価
【表７】
2009035020.tif 000055
［判定］
キモトリプシン様活性：（ＩＣ５０＞１０）
評価はネガティブであり、ナフォリダイフェンＡは、２０Ｓプロテオソームキモトリプシン様活性のＩＣ５０が＞１０μＭであった。【０１２６】
＜実施例５＞
実施例２と同様にして、４−［４−（２−ピペリジン−１−イル−エトキシ）フェニル］−７−（２−ピペリジン−１−イル−エトキシ）−３−フェニル−１，２−ジヒドロナフタレン（以下、ナフォリダイフェンＣという。）のプロテアソーム阻害活性を測定した。結果を以下に示す。【０１２７】
［判定基準］
ＩＣ５０＜０．１μＭ：    ＋＋＋（非常に強い活性）
ＩＣ５０＝０．１〜１μＭ：＋＋（強い活性）
ＩＣ５０＝１〜１０μＭ：  ＋（比較的強い活性）
ＩＣ５０＞１０μＭ：      ±（弱い活性、あるいは活性無し）
［結果］
・一次評価
【表８】
2009035020.tif 000056
・二次評価
【表９】
2009035020.tif 000057
【表１０】
2009035020.tif 000058
カテプシンＢの阻害：（無）
α−キモトリプシンの阻害：（無）
［判定］
キモトリプシン様活性：（ＩＣ５０＝３．２）
カスパーゼ様活性：（ＩＣ５０＝５．１）
トリプシン様活性：（ＩＣ５０＞１０）
プロテアソーム選択性：（有）
評価はポジティブであり、ナフォリダイフェンＣは、２０Ｓプロテオソームキモトリプシン様活性及び同カスパーゼ様活性に対して阻害活性を示し、特に２０Ｓプロテアソームキモトリプシン様活性のＩＣ５０が比較的強い活性を示した。【０１２８】
＜実施例６＞
実施例２と同様にして、４−［４−（２−ジエチルアミノ−１−イル−エトキシ）フェニル］−７−（２−ジエチルアミノ−１−イル−エトキシ）−３−フェニル−１，２−ジヒドロナフタレン（以下、ナフォリダイフェンＥという。）のプロテアソーム阻害活性を測定した。結果を以下に示す。【０１２９】
［判定基準］
ＩＣ５０＜０．１μＭ：    ＋＋＋（非常に強い活性）
ＩＣ５０＝０．１〜１μＭ：＋＋（強い活性）
ＩＣ５０＝１〜１０μＭ：  ＋（比較的強い活性）
ＩＣ５０＞１０μＭ：      ±（弱い活性、あるいは活性無し）
［結果］
・一次評価
【表１１】
2009035020.tif 000059
・二次評価
【表１２】
2009035020.tif 000060
【表１３】
2009035020.tif 000061
カテプシンＢの阻害：（無）
α−キモトリプシンの阻害：（無）
［判定］
キモトリプシン様活性：（ＩＣ５０＝９．９）
カスパーゼ様活性：（ＩＣ５０＞１０）
トリプシン様活性：（ＩＣ５０＞１０）
プロテアソーム選択性：（有）
評価はポジティブであり、ナフォリダイフェンＥは、２０Ｓプロテオソームキモトリプシン様活性に対して阻害活性を示した。【０１３０】
＜実施例７＞
実施例２と同様にして、４−［４−（２−ヘキサヒドロ−１Ｈ−アゼピン−１−イル−エトキシ）フェニル］−７−（２−ヘキサヒドロ−１Ｈ−アゼピン−１−イル−エトキシ）−３−フェニル−１，２−ジヒドロナフタレン（以下、ナフォリダイフェンＦという。）のプロテアソーム阻害活性を測定した。結果を以下に示す。【０１３１】
［判定基準］
ＩＣ５０＜０．１μＭ：    ＋＋＋（非常に強い活性）
ＩＣ５０＝０．１〜１μＭ：＋＋（強い活性）
ＩＣ５０＝１〜１０μＭ：  ＋（比較的強い活性）
ＩＣ５０＞１０μＭ：      ±（弱い活性、あるいは活性無し）
［結果］
・一次評価
【表１４】
2009035020.tif 000062
・二次評価
【表１５】
2009035020.tif 000063
【表１６】
2009035020.tif 000064
カテプシンＢの阻害：（無）
α−キモトリプシンの阻害：（無）
［判定］
キモトリプシン様活性：（ＩＣ５０＝４．３）
カスパーゼ様活性：（ＩＣ５０＝５．１）
トリプシン様活性：（ＩＣ５０＞１０）
プロテアソーム選択性：（有）
評価はポジティブであり、ナフォリダイフェンＦは、２０Ｓプロテオソームキモトリプシン様活性及び同カスパーゼ様活性に対して阻害活性を示し、特に２０Ｓプロテアソームキモトリプシン様活性のＩＣ５０が比較的強い活性を示した。【０１３２】
＜実施例８＞
実施例２と同様にして、４−［４−（３−ジメチルアミノ−１−イル−プロポキシ）フェニル］−７−（３−ジメチルアミノ−１−イル−プロポキシ）−３−フェニル−１，２−ジヒドロナフタレン（以下、ナフォリダイフェンＧという。）のプロテアソーム阻害活性を測定した。結果を以下に示す。なお、この実施例８では、キモトリプシン様活性阻害試験のみを行った。【０１３３】
［判定基準］
ＩＣ５０＜０．１μＭ：    ＋＋＋（非常に強い活性）
ＩＣ５０＝０．１〜１μＭ：＋＋（強い活性）
ＩＣ５０＝１〜１０μＭ：  ＋（比較的強い活性）
ＩＣ５０＞１０μＭ：      ±（弱い活性、あるいは活性無し）
［結果］
・一次評価
【表１７】
2009035020.tif 000065
［判定］
キモトリプシン様活性：（ＩＣ５０＞１０）
評価はネガティブであり、ナフォリダイフェンＧは、２０Ｓプロテオソームキモトリプシン様活性のＩＣ５０が＞１０μＭであった。【０１３４】
＜実施例９＞
実施例１で合成したナフォリダイフェンＡ〜Ｇについて、中枢神経系ガン細胞に対する増殖阻害活性を以下のように測定した。【０１３５】
〔中枢神経系ガン細胞増殖阻害試験〕
中枢神経系ガン細胞６種（Ｕ２５１、ＳＦ−２６８、ＳＦ−２９５、ＳＦ−５３９、ＳＮＢ−７５、ＳＮＢ−７８）を９６ウェルプレートに播き、翌日、サンプル溶液（１０−４、１０−５、１０−６、１０−７、１０−８Ｍの５濃度）を添加し、２日間培養後、細胞増殖をスルホローダミンＢによる比色定量で測定した。披験物質を添加する直前の細胞数を基準として、有効濃度ＧＩ５０（陰性対照に比べて細胞増殖を５０％抑制する濃度）をコンピューターにより算出した。阻害活性の比較対照としては、クエン酸タモキシフェン（ＴＡＭ）を用いた。結果を以下の表１８に示す。なお、表中の濃度単位はμＭである。【０１３６】
【表１８】
2009035020.tif 000066
【０１３７】
表１８から分かるように、ナフォリダイフェンＤを除く全てのナフォリダイフェン類で中枢神経系ガン細胞に対する強い増殖阻害活性（殺細胞活性）が見られた。特に、ナフォリダイフェンＡ、Ｃ、Ｇは、多種の細胞に対して総じて比較的良好な殺細胞活性（１．４〜１．９μＭ程度）を示すことが分かった。ナフォリダイフェンＦは、Ｕ２５１、ＳＦ−２９５、ＳＮＢ−７８の各細胞株に対して第２順位の活性であった。【０１３８】
＜実施例１０＞
実施例９と同様にして、ナフォリダイフェンＡ〜Ｇについて、大腸ガン細胞５種（ＨＣＣ２９９８、ＫＭ−１２、ＨＴ−２９、ＨＣＴ−１５、ＨＣＴ−１１６）に対する増殖阻害活性を測定した。結果を以下の表１９に示す。なお、表中の濃度単位はμＭである。【０１３９】
【表１９】
2009035020.tif 000067
【０１４０】
表１９から分かるように、ナフォリダイフェンＤを除く全てのナフォリダイフェン類で大腸ガン細胞に対する強い増殖阻害活性（殺細胞活性）が見られた。特に、ナフォリダイフェンＦは総じて高活性であり、５種の大腸ガン細胞株全てに対して０．５〜１．５μＭ程度の有効濃度が観測された。また、ＨＴ−２９細胞株及びＨＣＴ−１１６細胞株については、ナフォリダイフェンＡ、Ｃ、Ｇが比較的良好な殺細胞活性を示すことが分かった。【０１４１】
＜実施例１１＞
実施例９と同様にして、ナフォリダイフェンＡ〜Ｇについて、卵巣ガン細胞５種（ＯＶＣＡＲ−３、ＯＶＣＡＲ−４、ＯＶＣＡＲ−５、ＯＶＣＡＲ−８、ＳＫ−ＯＶ−３）に対する増殖阻害活性を測定した。結果を以下の表２０に示す。なお、表中の濃度単位はμＭである。【０１４２】
【表２０】
2009035020.tif 000068
【０１４３】
表２０から分かるように、ナフォリダイフェンＤを除く全てのナフォリダイフェン類で卵巣ガン細胞に対する強い増殖阻害活性（殺細胞活性）が見られた。特に、ナフォリダイフェンＦ、Ｇは総じて高活性であり、５種の卵巣ガン細胞株全てに対して１．２〜１．９μＭ程度の有効濃度が観測された。また、ＯＶＣＡＲ−４細胞株についてはナフォリダイフェンＢが最も高い殺細胞活性を示し、ＯＶＣＡＲ−５細胞株についてはナフォリダイフェンＣが最も高い殺細胞活性を示すことが分かった。【０１４４】
＜実施例１２＞
実施例９と同様にして、ナフォリダイフェンＡ〜Ｇについて、胃ガン細胞６種（Ｓｔ−４、ＭＫＮ１、ＭＫＮ７、ＭＫＮ２８、ＭＫＮ４５、ＭＫＮ７４）に対する増殖阻害活性を測定した。結果を以下の表２１に示す。なお、表中の濃度単位はμＭである。【０１４５】
【表２１】
2009035020.tif 000069
【０１４６】
表２１から分かるように、ナフォリダイフェンＤを除く全てのナフォリダイフェン類で卵巣ガン細胞に対する強い増殖阻害活性（殺細胞活性）が見られた。特に、ナフォリダイフェンＦ、Ｇは総じて高活性であり、６種の胃ガン細胞株全てに対して１．１〜１．８μＭ程度の有効濃度が観測された。また、Ｓｔ−４細胞株についてはナフォリダイフェンＡ、Ｇが最も高い殺細胞活性を示し、ＭＫＮ１細胞株についてはナフォリダイフェンＥが最も高い殺細胞活性を示すことが分かった。
【図１】
2009035020.tif 000080
【国際調査報告】
2009035020.tif 000081
2009035020.tif 000082
2009035020.tif 000083
2009035020.tif 000084