(57)【要約】経皮吸収される活性成分を全体として疎水性の領域および親水性の領域を有するブロックコポリマーにより内包したポリマーミセルを含有する経皮組成物、並びに経皮吸収される医薬用活性成分を含むポリマーミセルを含有する経皮医薬品組成物、および経皮吸収される化粧用活性成分を含むポリマーミセルを含有する経皮化粧品組成物が提供される。
2008026776.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
経皮吸収される活性成分を、全体として疎水性の領域および親水性の領域を有するブロックコポリマーにより内包させた、ポリマーミセルを含有する、経皮組成物。
【請求項２】
前記親水性の領域がポリエチレングリコールからなる、請求項１に記載の経皮組成物。
【請求項３】
前記疎水性の領域がポリアミノ酸および／またはその誘導体からなる、請求項１または２に記載の経皮組成物。
【請求項４】
前記ポリアミノ酸および／またはその誘導体が、グルタミン酸、アスパラギン酸、リジンおよびそれらの誘導体からなる群より選択されるもの、或いはそれらの混合物である、請求項３に記載の経皮組成物。
【請求項５】
前記ブロックコポリマーが下記式（Ｉ）又は下記式（ＩＩ）で表されるものである、請求項１〜４の何れかに記載の経皮組成物。
2008026776.tif 000010
［各式中、Ｒ１およびＲ３は、それぞれ独立して、水素原子または保護されていてもよい官能基が置換したもしくは未置換の低級アルキル基を表し、Ｒ２は水素原子、飽和もしくは不飽和のＣ１〜Ｃ２９脂肪族カルボニル基またはアリールカルボニル基を表し、Ｒ４は水酸基、飽和もしくは不飽和のＣ１〜Ｃ３０脂肪族オキシ基またはアリール−低級アルキルオキシ基を表し、Ｒ５は水素原子またはフェニル基、Ｃ１〜Ｃ８アルキル基およびベンジル基からなる群より選択される疎水性基を表し（但し、Ｒ５は１つのブロックコポリマー内の各アミノ酸ユニットにおいて任意に選択可能であるが、水素原子はアミノ酸ユニット数全体に対して０％〜７０％を占め、かつ存在する場合はランダムに存在する）、Ｌ１およびＬ２は、それぞれ独立して連結基を表し、ｎは１０〜２５００の整数であり、ｘは１０〜３００となる整数であり、ｙは１又は２の整数を表す。］
【請求項６】
前記ブロックコポリマーが下記式（ＩＩＩ）又は下記式（ＩＶ）で表されるものである、請求項１〜４の何れかに記載の経皮組成物。
2008026776.tif 000011
［各式中、Ｒ１およびＲ３は、それぞれ独立して、水素原子または保護されていてもよい官能基が置換したもしくは未置換の低級アルキル基を表し、Ｒ２は水素原子、飽和もしくは不飽和のＣ１〜Ｃ２９脂肪族カルボニル基またはアリールカルボニル基を表し、Ｒ４は水酸基、飽和もしくは不飽和のＣ１〜Ｃ３０脂肪族オキシ基またはアリール−低級アルキルオキシ基を表し、Ｒ６はフェニル基、ベンジル基、ベンゾイル基、Ｃ１〜Ｃ８アルキル基およびＣ１〜Ｃ８アルキルカルボン酸からなる群より選択される疎水性基又は水素原子を意味し、Ｌ１およびＬ２は、それぞれ独立して連結基を表し、ｎは１０〜２５００の整数であり、ｍは１０〜２５００の整数であり、但し、水素原子はｍ個のうちの０％〜７０％を占め、かつ存在する場合はランダムに存在する。］
【請求項７】
前記活性成分が、美白原料、発毛剤、育毛剤、養毛剤、消炎または鎮痛剤、免疫抑制剤、副腎皮質ホルモン、ビタミンＣ類、ビタミンＡ類、ビタミンＤ類、ビタミンＥ類、抗菌剤、抗真菌剤、抗ヒスタミン剤、高分子薬物、抗癌剤、抗生物質、麻酔薬からなる群より選択されるものである、請求項１〜６の何れかに記載の経皮組成物。
【請求項８】
前記活性成分が、ヒノキチオール、ビタミンＣ誘導体、ビタミンＤ誘導体、アゼライン酸、フィナステリド、クエン酸シルデナフィルからなる群より選択されるものである、請求項１〜６の何れかに記載の経皮組成物。
【請求項９】
前記活性成分がヒノキチオールである、請求項８に記載の経皮組成物。
【請求項１０】
前記ポリマーミセルの平均粒子径が３０〜２５０ｎｍの範囲内にある、請求項１〜９の何れかに記載の経皮組成物。
【請求項１１】
前記ポリマーミセルが水性媒体中に溶解もしくは分散された状態で含有される、請求項１〜１０の何れかに記載の経皮組成物。
【請求項１２】
前記活性成分が０．００００１％〜７．５％（ｗｔ／ｗｔ）の濃度範囲にある、請求項１〜１１の何れかに記載の経皮組成物。
【請求項１３】
経皮吸収される医薬用活性成分を、全体として疎水性の領域および親水性の領域を有するブロックコポリマーにより内包させたポリマーミセルを含有する、経皮医薬品組成物。
【請求項１４】
前記ポリマーミセルが水性媒体中に溶解もしくは分散された状態で含有される、請求項１３に記載の経皮医薬品組成物。
【請求項１５】
前記医薬用活性成分が０．００００１％〜７．５％（ｗｔ／ｗｔ）の濃度範囲にある、請求項１４に記載の経皮医薬品組成物。
【請求項１６】
経皮吸収される化粧用活性成分を、全体として疎水性の領域および親水性の領域を有するブロックコポリマーにより内包させたポリマーミセルを含有する、経皮化粧品組成物。
【請求項１７】
前記ポリマーミセルが水性媒体中に溶解もしくは分散された状態で含有される、請求項１６に記載の経皮化粧品組成物。
【請求項１８】
前記化粧用活性成分が０．００００１％〜７．５％（ｗｔ／ｗｔ）の濃度範囲にある、請求項１６に記載の経皮化粧品組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、経皮吸収される活性成分を内包したポリマーミセルを含有する経皮組成物、並びに経皮医薬品組成物および経皮化粧品組成物に関するものである。更に詳細には、本発明は、経皮吸収される活性成分が水性媒体中でも安定に存在し得て、皮膚組織への活性成分の送達を可能にし得る、ナノメータオーダーのキャリアーとして有用なポリマーミセルを含有する経皮組成物、並びに経皮吸収される医薬用活性成分を含むポリマーミセルを含有する経皮医薬品組成物、および経皮吸収される化粧用活性成分を含むポリマーミセルを含有する経皮化粧品組成物を提供するものである。
【背景技術】
【０００２】
人間の皮膚の構造は、大別すると親油性の高い角質層と、親水性の高い表皮および真皮の層の２つに分類される。したがって、経皮吸収剤等における親油性の高い活性成分は比較的容易に角質層に分布し拡散するが、親水性の高い活性成分は角質層にはほとんど分配も拡散もされず、結果的にその活性成分の経皮吸収が低くなる。しかし、親油性が非常に高い活性成分では、角質層には容易に分布するが、親水性が高い表皮や真皮には分配及び拡散が行われず、角質層に活性成分が留まる“貯留現象”が現れる。従って、経皮吸収を有効に実施するには、活性成分における親水性と親油性の適当なバランスが必要となる。また、皮膚透過が全く行われていないように見える活性成分でも、実際には皮膚蛋白と結合して角質層や表皮および真皮の層に大量に貯留する現象も多く見られる（Ｏｈｔｏｒｉ  Ａ．，Ｙａｍａｍｏｔｏ  Ｙ．，Ｔｏｊｏ  Ｋ．，Ｉｎｖ．Ｏｐｈｔｈａｌ．＆  Ｖｉｓｕａｌ  Ｓｃｉ．，Ｖｏｌ．３２（１），１８９−１９３（１９９１））。さらに、皮膚中に存在する酵素によっても、経皮吸収は変化することが知られている（Ｂａｎｄｏ  Ｈ．，Ｍｏｈｒｉ  Ｓ．，Ｙａｍａｓｈｉｔａ  Ｆ．，Ｔａｋａｋｕｒａ  Ｙ．，Ｈａｓｈｉｄａ  Ｍ．，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．，Ｖｏｌ．８６（６），７５９−７６１（１９９７）およびＴｏｊｏ  Ｋ．，Ｙａｍａｄａ  Ｋ．，Ｈｉｋｉｍａ  Ｔ．，Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．，Ｖｏｌ．１１（３），３９３−３９７（１９９４））。
活性成分の経皮吸収性を高めるための方法として、物理的方法（例えば角質の剥離、角質の水和、熱エネルギーの利用、イオントフォレイシス、フォノフォレイシスなど）、化学的方法（例えば活性成分の脂溶性の向上、角質層の脱脂、経皮吸収促進剤の添加など）および生物学的方法（例えばプロドラッグ、代謝阻害物質の添加など）があるが、経皮吸収促進剤を添加する方法が最も一般的で、広く活用されている。経皮吸収促進剤としては、例えば水、低級アルコール、ジメチルスルフォキシドなどのアルキルメチルスルフォキシド、ラウロカプラム、イオン性および非イオン性の界面活性剤、脂肪酸、脂肪酸エステル、尿素などのさまざまなものがあるが、それらの経皮吸収促進のメカニズムは明らかにされてはいない。
そこで、上記の物理的、化学的または生物学的方法によって、皮膚に物理的、化学的ダメージを与えることなく活性成分を皮膚へ浸透させるために、表面活性剤の単分子層によるエマルジョンを用いた場合、このエマルジョンは皮膚に適用されると直ちに破壊されるため、脂肪酸のモノラメラ層またはオリゴラメラ層による被覆（特開平７−１６５５３０号公報）や、シリコーン界面活性剤による被覆（特許第３００１８２１号公報）など、煩雑な作業が必要となる。また、生体内分解性ポリマーを構成成分とするナノ粒子およびナノスフェアは、水中で加水分解され短期間に粒子としての運搬能が失われるため、粉末として保存し、使用直前に乳液と混合できるような容器が必要となり（特開２００３−２７５２８１号公報，特開２００５−２１３１７０号公報）、さらに、粉末化されたナノスフェアを再溶解する際の分散性や活性成分の初期放出を改善するために、ポリビニールアルコールのような保護コロイドが必要となる（特開平９−１１０６７８号公報）。また、生理活性成分を含有した乳化によるナノメータサイズの粒子が溶媒に分散された経皮吸収剤は、調製の際にドデシル硫酸ナトリウムやジクロロメタンを必要とし、最終的にはこれらを透析や蒸発という煩雑な作業で除去しなければならない（特開２００２−３０８７２８号公報）。
【発明の開示】
【０００３】
本発明の課題は、経皮吸収される活性成分を内包した状態で水性媒体中に安定に存在し、そして活性成分を皮膚内へ分配、拡散および蓄積させ、皮膚組織内でその活性成分の効果が発揮されることを可能にするポリマーミセルを含有する経皮組成物、並びに経皮吸収される医薬用活性成分を含むポリマーミセルを含有する経皮医薬品組成物、および経皮吸収される化粧用活性成分を含むポリマーミセルを含有する経皮化粧品組成物を提供することである。
本願発明は、以下の態様を含む。
［１］  経皮吸収される活性成分を、全体として疎水性の領域および親水性の領域を有するブロックコポリマーにより内包させた、ポリマーミセルを含有する、経皮組成物。
その好ましい態様として以下のものが含まれる。
［２］  前記親水性の領域がポリエチレングリコールからなる、態様［１］の経皮組成物。
［３］  前記疎水性の領域がポリアミノ酸および／またはその誘導体からなる、態様［１］または［２］の経皮組成物。
［４］  前記ポリアミノ酸および／またはその誘導体が、グルタミン酸、アスパラギン酸、リジンおよびそれらの誘導体からなる群より選択されるもの、或いはそれらの混合物である、態様［３］の経皮組成物。
［５］  前記ブロックコポリマーが下記式（Ｉ）又は下記式（ＩＩ）で表されるものである、態様［１］〜［４］の何れかの経皮組成物。
2008026776.tif 000003
［各式中、Ｒ１およびＲ３は、それぞれ独立して、水素原子または保護されていてもよい官能基が置換したもしくは未置換の低級アルキル基を表し、Ｒ２は水素原子、飽和もしくは不飽和のＣ１〜Ｃ２９脂肪族カルボニル基またはアリールカルボニル基を表し、Ｒ４は水酸基、飽和もしくは不飽和のＣ１〜Ｃ３０脂肪族オキシ基またはアリール−低級アルキルオキシ基を表し、Ｒ５は水素原子またはフェニル基、Ｃ１〜Ｃ８アルキル基およびベンジル基からなる群より選択される疎水性基を表し（但し、Ｒ５は１つのブロックコポリマー内の各アミノ酸ユニットにおいて任意に選択可能であるが、水素原子はアミノ酸ユニット数全体に対して０％〜７０％を占め、かつ存在する場合はランダムに存在する）、Ｌ１およびＬ２は、それぞれ独立して連結基を表し、ｎは１０〜２５００の整数であり、ｘは１０〜３００となる整数であり、ｙは１又は２の整数を表す。］
［６］  前記ブロックコポリマーが下記式（ＩＩＩ）又は下記式（ＩＶ）で表されるものである、態様［１］〜［４］の何れかの経皮組成物。
2008026776.tif 000004
［各式中、Ｒ１およびＲ３は、それぞれ独立して、水素原子または保護されていてもよい官能基が置換したもしくは未置換の低級アルキル基を表し、Ｒ２は水素原子、飽和もしくは不飽和のＣ１〜Ｃ２９脂肪族カルボニル基またはアリールカルボニル基を表し、Ｒ４は水酸基、飽和もしくは不飽和のＣ１〜Ｃ３０脂肪族オキシ基またはアリール−低級アルキルオキシ基を表し、Ｒ６はフェニル基、ベンジル基、ベンゾイル基、Ｃ１〜Ｃ８アルキル基およびＣ１〜Ｃ８アルキルカルボン酸からなる群より選択される疎水性基又は水素原子を意味し、Ｌ１およびＬ２は、それぞれ独立して連結基を表し、ｎは１０〜２５００の整数であり、ｍは１０〜２５００の整数であり、但し、水素原子はｍ個のうちの０％〜７０％を占め、かつ存在する場合はランダムに存在する。］
［７］  前記活性成分が、美白原料、発毛剤、育毛剤、養毛剤、消炎または鎮痛剤、免疫抑制剤、副腎皮質ホルモン、ビタミンＣ類、ビタミンＡ類、ビタミンＤ類、ビタミンＥ類、抗菌剤、抗真菌剤、抗ヒスタミン剤、高分子薬物、抗癌剤、抗生物質、麻酔薬からなる群より選択されるものである、態様［１］〜［６］の何れかの経皮組成物。
［８］  前記活性成分が、ヒノキチオール、ビタミンＣ誘導体、ビタミンＤ誘導体、アゼライン酸、フィナステリド、クエン酸シルデナフィルからなる群より選択されるものである、態様［１］〜［６］の何れかの経皮組成物。
［９］  前記活性成分がヒノキチオールである、態様［８］の経皮組成物。
［１０］  前記ポリマーミセルの平均粒子径が３０〜２５０ｎｍの範囲内にある、態様［１］〜［９］の何れかの経皮組成物。
［１１］  前記ポリマーミセルが水性媒体中に溶解もしくは分散された状態で含有される、態様［１］〜［１０］の何れかの経皮組成物。
［１２］  前記活性成分が０．００００１％〜７．５％（ｗｔ／ｗｔ）の濃度範囲にある、態様［１］〜［１１］の何れかの経皮組成物。
本願発明は、さらに以下の態様を含む。
［１３］  経皮吸収される医薬用活性成分を、全体として疎水性の領域および親水性の領域を有するブロックコポリマーにより内包させたポリマーミセルを含有する、経皮医薬品組成物。
その好ましい態様として以下のものが含まれる。
［１４］  前記ポリマーミセルが水性媒体中に溶解もしくは分散された状態で含有される、態様［１３］の経皮医薬品組成物。
［１５］  前記医薬用活性成分が０．００００１％〜７．５％（ｗｔ／ｗｔ）の濃度範囲にある、態様［１３］の経皮医薬品組成物。
本願発明は、さらに以下の態様を含む。
［１６］  経皮吸収される化粧用活性成分を、全体として疎水性の領域および親水性の領域を有するブロックコポリマーにより内包させたポリマーミセルを含有する、経皮化粧品組成物。
その好ましい態様として以下のものが含まれる。
［１７］  前記ポリマーミセルが水性媒体中に溶解もしくは分散された状態で含有される、態様［１６］の経皮化粧品組成物。
［１８］  前記化粧用活性成分が０．００００１％〜７．５％（ｗｔ／ｗｔ）の濃度範囲にある、態様［１６］の経皮化粧品組成物。
本発明の特有のポリマーミセルを含有する経皮組成物、並びに同様のポリマーミセルを含有する経皮医薬品組成物および経皮化粧品組成物は、経皮吸収される活性成分を、特に経皮吸収される医薬用または化粧用の活性成分を、ポリマーミセルに内包した状態で水性媒体中に安定に存在し、そして活性成分を皮膚内へ分配、拡散および蓄積させ、皮膚組織内でその活性成分の効果が発揮されることを可能にするものである。
【図面の簡単な説明】
【０００４】
図１は、ミセル化ヒノキチオールによるメラニン合成抑制効果の濃度依存性を示す図である。
図２は、ヒノキチオール量に換算して２．５μｇ／皮膚モデルカップのミセル化ヒノキチオールとフリーのヒノキチオールを使用した場合のメラニン合成に及ぼす影響を示す図である。
図３は、ヒノキチオール量に換算して５μｇ／皮膚モデルカップのミセル化ヒノキチオールとフリーのヒノキチオールを使用した場合のメラニン合成に及ぼす影響を示す図である。
図４は、ヒノキチオール量に換算して１０μｇ／皮膚モデルカップのミセル化ヒノキチオールとフリーのヒノキチオールを使用した場合のメラニン合成に及ぼす影響を示す図である。
図５は、空ミセルを使用した場合のメラニン合成に及ぼす影響を示す図である。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００５】
本発明は、第１の側面として、経皮吸収される活性成分を全体として疎水性の領域および親水性の領域を有するブロックコポリマーにより内包させたポリマーミセルを含有する経皮組成物を提供する。その好ましい態様として、本発明に係る経皮組成物におけるポリマーミセルは、ヒノキチオール、ビタミンＣ誘導体、ビタミンＤ誘導体、アゼライン酸、フィナステリド、クエン酸シルデナフィルからなる群より選択される活性成分を内包して、水性媒体中に安定に存在し、経皮吸収されて皮膚組織内でその活性成分の効果を発揮し得る。
本発明の経皮組成物における活性成分内包ポリマーミセルを形成するのに用いることのできるポリマーは、親水性領域と全体として疎水性の領域からなるブロックコポリマーであり、これらのブロックコポリマーは、本発明の目的に沿うものであれば、いかなる親水性領域といかなる疎水性領域とを含むものであってもよい。
「全体として疎水性の領域」とは、ブロックコポリマーからなるポリマーミセルのコアを形成するために必要となる疎水性をその領域全体として有しており、その疎水性は、領域内に存在する該疎水性の基に起因しており、且つ、その領域内に、正または負の電荷を有する基も存在することができる領域を意味する。ブロックコポリマーがミセルを形成し得る限り特に限定されないが、該領域内における疎水性基は、３０％〜１００％、好ましくは５０％〜１００％、より好ましくは５５％〜１００％、更に好ましくは６０％〜１００％を占める。
本発明の経皮組成物中のポリマーミセルにおいて有用なブロックコポリマーの具体例には次のようなものが包含される。限定されるものでないが、親水性領域としては、ポリ（エチレングリコール）［またはポリ（エチレンオキシド）］、ポリサッカライド、ポリ（ビニルピロリドン）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリ（アクリルアミド）、ポリ（アクリル酸）、ポリ（メタクリルアミド）、ポリ（メタクリル酸）、ポリ（メタクリル酸エステル）、ポリ（アクリル酸エステル）、ポリアミノ酸あるいはこれらの誘導体由来の領域が挙げられる。ここでポリサッカライドとしては、デンプン、デキストラン、フルクタン、ガラクタン等が挙げられる。これらのうち、ポリ（エチレングリコール）セグメントは片末端に種々の官能基を有するものが提供されており、また、領域の大きさも制御されたものが容易に利用できることから、好ましい。
他方、限定されるものでないが全体として、疎水性の領域としては、ポリ［（メタ）アクリル酸アルキル−コ−（メタ）アクリル酸］、ポリ（アスパラギン酸）及び／又はその誘導体、ポリ（グルタミン酸）及び／又はその誘導体、例えばポリ（β−ベンジルアスパルテート）、ポリ（β−ベンジルアスパルテート−コ−アスパラギン酸）、ポリ（β−アルキルアスパルテート−コ−アスパラギン酸）、ポリ（β−アリルアスパルテート−コ−アスパラギン酸）、ポリ（β−アラルキルアスパルテート−コ−アスパラギン酸）、ポリ（γ−ベンジルグルタメート）、ポリ（γ−ベンジルグルタメート−コ−グルタミン酸）、ポリ（γ−アルキルグルタメート−コ−グルタミン酸）、ポリ（γ−アラルキルグルタメート−コ−グルタミン酸）、ポリ（β−アルキルアスパルタミド−コ−アスパラギン酸）、ポリ（γ−アラルキルグルタミド−コ−グルタミン酸）並びにポリ（リジン）及び／又はその誘導体などのポリ（アミノ酸誘導体）を挙げることができる。
本発明の経皮組成物中のポリマーミセルで用いることのできるブロックコポリマーは、上記の親水性領域と全体として疎水性の領域からなり、水性媒体（例えば、水または緩衝化された水もしくは水混和性溶媒、メタノール、ポリエチレングリコール、糖類、等を含有する水性溶液）中でポリマーミセルを形成し得る、それぞれの分子量を有する領域の組み合わせからなるすべてを挙げることができるが、好ましくは、親水性領域がポリ（エチレングリコール）からなり、全体として疎水性の領域が上記のポリ（アミノ酸）及び／又はその誘導体からなるものである。
任意的に、このようなポリ（アミノ酸誘導体）領域は、それ自体公知の、例えば、ポリ（β−ベンジル−Ｌ−アスパラギン酸）またはポリ（γ−ベンジル−Ｌ−グルタミン酸）をそのまま用いるか、またはそのベンジル基を、加水分解によって脱保護した後に相当するアルコールまたはアミンによるエステルまたはアミドに交換し、所望の割合でカルボキシル基を側鎖にもつ疎水性領域にすることができる。アスパラギン酸、グルタミン酸は、いずれかの光学活性型のものであるか、それらの混合物であることができる。尚、ポリ（β−ベンジル−Ｌ−アスパラギン酸）は加水分解によってβ転位を起こすことが知られているが、β転位を起こしたポリ（アミノ酸誘導体）も本願発明に包含されることは言うまでもない。以上の親水性領域と全体として疎水性の領域は、それ自体既知の連結基、例えば、エステル結合、アミド結合、イミノ基、炭素−炭素結合、エーテル結合等を介して連結され得る。
特に、製造容易であり、本発明の経皮組成物中のポリマーミセルで都合よく使用できるブロックコポリマーとしては、下記式（Ｉ）および（ＩＩ）で示すことのできるものを挙げることができる。
2008026776.tif 000005
上記各式中Ｒ１およびＲ３は、それぞれ独立して、水素原子または保護されていてもよい官能基が置換したもしくは未置換低級アルキル基を表し、Ｒ２は水素原子、飽和もしくは不飽和のＣ１〜Ｃ２９脂肪族カルボニル基またはアリールカルボニル基を表し、Ｒ４は水酸基、飽和もしくは不飽和のＣ１〜Ｃ３０脂肪族オキシ基またはアリール−低級アルキルオキシ基を表し、Ｒ５は水素原子またはフェニル基、Ｃ１〜Ｃ８アルキル基およびベンジル基からなる群より選択される疎水性基を表す。（但し、Ｒ５は１つのブロックコポリマー内の各アミノ酸ユニットにおいて任意に選択可能であるが、水素原子はアミノ酸ユニット数全体に対して０％〜７０％、好ましくは０％〜５０％、より好ましくは０％〜４５％、更に好ましくは０％〜４０％を占め、かつ存在する場合はランダムに存在する。）Ｌ１およびＬ２は、それぞれ独立して連結基を表し、ｎは１０〜２５００の整数であり、ｘは１０〜３００となる整数であり、ｙは１又は２の整数を表す。保護されていてもよい官能基としては、ヒドロキシル基、アセタール、ケタール、アルデヒド、糖残基等が挙げられる。Ｒ１およびＲ３が保護されていてもよい官能基が置換した低級アルキル基を表す場合の親水性セグメントは、例えば、ＷＯ９６／３３２３３、ＷＯ９６／３２４３４、ＷＯ９７／０６２０２に記載の方法に従うことができる。低級アルキルとは炭素数が例えば７個以下、好ましくは４個以下の直鎖又は分枝鎖アルキル基を意味し、例えばメチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、イソブチル基などが含まれる。
また、本発明の経皮組成物中のポリマーミセルに係るブロックコポリマーは、下記の式（ＩＩＩ）または（ＩＶ）を有するものものであってもよい。
2008026776.tif 000006
上記式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｌ１、Ｌ２、ｎは上記式（Ｉ）又は（ＩＩ）と同義であり、ｍは１０〜２５００の整数であり、Ｒ６はフェニル基、ベンジル基、ベンゾイル基、Ｃ１〜Ｃ８アルキル基およびＣ１〜Ｃ８アルキルカルボン酸からなる群より選択される疎水性基又は水素原子を意味する。但し、水素原子はｍ個のうちの０％〜７０％、好ましくは０％〜５０％、より好ましくは０％〜４５％、更に好ましくは０％〜４０％を占め、かつ存在する場合はランダムに存在する。
上記式（Ｉ）〜（ＩＶ）における連結基は、主として、ブロックコポリマーの製造方法により変化し得るので限定されるものでないが、具体的なものとしては、Ｌ１が−ＮＨ−、−Ｏ−、−Ｏ−Ｚ−ＮＨ−、−ＣＨ２−、−Ｏ−Ｚ−Ｓ−Ｚ−および−ＯＣＯ−Ｚ−ＮＨ−（ここで、Ｚは独立してＣ１〜Ｃ４アルキレン基である。）からなる群より選ばれ、Ｌ２が−ＣＯ−、−ＯＣＯ−Ｚ−ＣＯ−および−ＮＨＣＯ−Ｚ−ＣＯ−（ここで、ＺはＣ１〜Ｃ４アルキレン基である。）からなる群より選ばれる基を挙げることができる。
本発明の経皮組成物中のポリマーミセルにおける経皮吸収される活性成分の好ましいものとしては、美白原料、発毛剤、育毛剤、養毛剤、消炎または鎮痛剤、免疫抑制剤、副腎皮質ホルモン、ビタミンＣ類、ビタミンＡ類、ビタミンＤ類、ビタミンＥ類、抗菌剤、抗真菌剤、抗生物質、抗ウイルス剤、抗ヒスタミン剤、高分子薬物、抗癌剤、麻酔薬が挙げられる。
美白原料の例としてヒノキチオール、アゼライン酸等が、発毛剤の例としてフィナステリド等が挙げられる。消炎または鎮痛剤の例としてリドカイン、インドメタシン、フェンタニル、ケトプロフェン等が挙げられる。免疫抑制剤の例としてタクロリムス水和物、シクロスポリン等が挙げられる。副腎皮質ホルモンの例として吉草酸ジフルコルトロン、吉草酸ベタメタゾン、吉草酸デキサメタゾン等が挙げられる。ビタミンＤ類の例としてタカルシトール、カルシポトリオール、エルゴカルシフェロール等のビタミンＤ誘導体が挙げられる。ビタミンＡ類の例としてレチノイド、トコフェロール等のビタミンＡ誘導体が挙げられる。ビタミンＣ類の例としてビタミンＣ誘導体等が挙げられる。ビタミンＥ類の例としてビタミンＥ誘導体等が挙げられる。抗真菌剤の例として硝酸オキシコナゾール、リラナフタート、ビホナゾール、塩酸アモロルフィン、クロトリマゾール等が挙げられる。抗ヒスタミン剤の例として塩酸フェキソフェナジン、ロラタジン、塩酸アゼラスチン、オキサトミド等が挙げられる。抗癌剤の例としては、５‐ＦＵ、硫酸ブレオマイシン等が挙げられる。高分子薬物の例として核酸（デコイオリゴ、アンチセンスオリゴ、ｓｉＲＮＡなど）、タンパク質（サイトカインや抗体など）等が挙げられる。
本発明の経皮組成物中のポリマーミセルにおける活性成分としては、ヒノキチオール、ビタミンＣ誘導体、ビタミンＤ誘導体、アゼライン酸、フィナステリドまたはクエン酸シルデナフィルが好ましく、特にヒノキチオールが好適である。
本発明の経皮組成物におけるポリマーミセルの粒子径は、用途により特に限定されないが、皮膚において活性成分の効果を発揮させる場合には、好ましくは３０〜２５０ｎｍであり、より好ましくは５０〜２００ｎｍ、特に好ましくは５０〜１５０ｎｍである。毛細血管から血中へ化合物を移行させたい場合、５０ｎｍよりも小さいサイズであることが好ましく、より好ましくは３５〜４５ｎｍである。
本発明の経皮組成物におけるポリマーミセルでは、活性成分の量は特に制限されないが、一般的にはブロックコポリマーと活性成分の総重量に対して、０．１〜５０重量％、好ましくは１〜３０重量％、より好ましくは５〜２５重量％で含有される。
かかる本発明の経皮組成物は、好ましくは、そのポリマーミセルが水性媒体中に溶解もしくは分散された状態で含有される。その水性媒体は、通常純水の他、食塩水、水性の緩衝液、少量の低級アルコール類、酸化防止剤、防腐剤等も必要に応じて添加されてもよい。
また、本発明の経皮組成物の剤型は、ポリマーミセルが崩壊しない限り特に限定されないが、例えば軟膏剤、塗布剤、噴霧剤等を挙げることができ、特にローションが好ましい。また、その用途に応じて、経皮吸収剤として通常使用される他の成分も含有され得る。その経皮組成物中には、好ましくは０．０１％〜１５％（ｗｔ／ｗｔ）の濃度範囲で本発明のポリマーミセルが含まれる。また、経皮組成物中には、好ましくは０．００００１％〜７．５％（ｗｔ／ｗｔ）、更に好ましくは０．００００５％〜３％（ｗｔ／ｗｔ）の濃度範囲で活性成分が含まれる。
本発明の経皮組成物におけるポリマーミセルの製造方法としては特に制限されないが、例えば、ブロックコポリマーと疎水性活性成分を揮散性の有機溶媒に分散溶解して溶液を形成した後、有機溶媒を除去し、得られた残存物を水と一緒にし、所定の温度で十分な時間撹拌することで、制御された粒子径の活性成分内包ポリマーミセルを製造する、いわゆる乾固法によっても良い（特開２００３‐３４２１６８号公報参照）。また、ブロックコポリマーを含む水溶性媒体と活性成分を含む水非混和性の有機溶媒を混合し、攪拌しながら有機溶媒を揮散させることによって、活性成分内包ポリマーミセルを製造する、いわゆる分散法によっても良い（特開２００３‐２６８１２号公報参照）。
本発明のもう一つの側面である、経皮吸収される医薬用活性成分を全体として疎水性の領域および親水性の領域を有するブロックコポリマーにより内包させたポリマーミセルを含有する経皮医薬品組成物に関しては、好ましくは、そのポリマーミセルが水性媒体中に溶解もしくは分散された状態で含有される。その水性媒体は、通常純水の他、食塩水、水性の緩衝液、少量の低級アルコール類、酸化防止剤、防腐剤等も必要に応じて添加されてもよい。
かかる経皮医薬品組成物の剤型は、ポリマーミセルが崩壊しない限り特に限定されないが、例えば軟膏剤、塗布剤、噴霧剤等を挙げることができ、特にローションが好ましい。また、その用途に応じて、経皮吸収剤として通常使用される他の成分も含有され得る。その経皮医薬品組成物中には、好ましくは０．０１％〜１５％（ｗｔ／ｗｔ）の濃度範囲で本発明のポリマーミセルが含まれる。また、経皮医薬品組成物中には、好ましくは０．００００１％〜７．５％（ｗｔ／ｗｔ）、更に好ましくは０．００００５％〜３％（ｗｔ／ｗｔ）の濃度範囲で医薬用活性成分が含まれる。その医薬用活性成分の具体例としては、前記の如き医薬用の活性成分が挙げられるが、抗がん剤、抗菌剤、抗ウイルス剤、抗生物質、麻酔薬、鎮痛剤等が好適であり、さらにアゼライン酸、フィナステリド、ビタミンＤ誘導体、クエン酸シルデナフィルも好適である。
本発明のさらにもう一つの側面である、経皮吸収される化粧用活性成分を全体として疎水性の領域および親水性の領域を有するブロックコポリマーにより内包させたポリマーミセルを含有する経皮化粧品組成物に関しては、好ましくは、そのポリマーミセルが水性媒体中に溶解もしくは分散された状態で含有される。その水性媒体は、通常純水の他、食塩水や水性の緩衝液、少量の低級アルコール類、酸化防止剤、防腐剤、保湿剤等も必要に応じて添加され得る。
かかる経皮化粧品組成物の形態は、ポリマーミセルが崩壊しない限り特に限定されないが、例えば軟膏剤、塗布剤、噴霧剤等を挙げることができ、特にローションが好ましい。また、その用途に応じて、経皮化粧品として通常使用される他の成分も含有され得る。その経皮化粧品組成物中には、好ましくは０．０１％〜１５％（ｗｔ／ｗｔ）の濃度範囲で本発明のポリマーミセルが含まれる。また、経皮化粧品組成物中には、好ましくは０．００００１％〜７．５％（ｗｔ／ｗｔ）、更に好ましくは０．００００５％〜３％（ｗｔ／ｗｔ）の濃度範囲で化粧用活性成分が含まれる。その化粧用活性成分の具体例としては、前記の如き活性成分が挙げられ、好適なものとして、美白用のヒノキチオール、ビタミンＣ誘導体等が挙げられ、特にヒノキチオールが好ましい。
【実施例】
【０００６】
以下に比較例、実施例を示し、本発明を具体的に示す。
以下においては、ポリエチレングリコール−ポリ（β−ベンジル−Ｌ−アスパラギン酸）ブロックコポリマーをＰＥＧ−ＰＢＬＡと略す。また、例えばブロックコポリマーのポリエチレングリコール（ＰＥＧ）鎖の平均分子量１２，０００、ポリアミノ酸の重合度が４０、ポリアミノ酸側鎖のベンジル基の導入率が５０％の場合、ブロックコポリマーの後に、１２−４０−５０と表記する。
実施例１ ブロックコポリマーによるヒノキチオールのミセル化
ブロックコポリマーとして、ＰＥＧ−ＰＢＬＡ−１２−５０−６０（ＰＥＧの分子量が１２，０００、アスパラギン酸の重合度が５０、ベンジル化率が６０％）、ＰＥＧ−ＰＢＬＡ−５−２０−１００（ＰＥＧの分子量が５，０００、アスパラギン酸の重合度が２０、ベンジル化率が１００％）なるポリエチレングリコール（ＰＥＧ）−ポリ（β−ベンジル−Ｌ−アスパラギン酸）ブロックコポリマーを用いた。
２ｇのＰＥＧ−ＰＢＬＡ−１２−５０−６０またはＰＥＧ−ＰＢＬＡ−５−２０−１００を２００ｍＬの超純水に攪拌懸濁後、超高圧ホモジナイザー（マイクロフルイダイザー、Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃｓ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、マサチューセッツ州、米国）に入れて圧力１０００ｂａｒ、流速１５０ｍＬ／分の条件でポリマーミセルを作成した。このポリマーミセル溶液をＰＥＧ−ＰＢＬＡ−１２−５０−６０またはＰＥＧ−ＰＢＬＡ−５−２０−１００の濃度として５ｍｇ／ｍＬとなるように超純水で希釈し、この希釈液３ｍＬにヒノキチオール（和光純薬工業（株）、大阪府）３ｍｇを溶解したエタノール溶液０．３ｍＬを加え（ポリマー／ヒノキチオールが１５ｍｇ／３ｍｇ）、遮光下、室温で１２時間攪拌した。得られたポリマーミセル溶液は、ゲルろ過（ＰＤ−１０  ｃｏｌｕｍｎｓ，ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，Ｕｐｐｓａｌａ、スエーデン）で処理し、ポリマーミセルとミセルに取り込まれなかったヒノキチオールとを分離した。ヒノキチオールは、水中で３３０ｎｍ付近に吸収を示すが、ブロックコポリマーミセルに封入されたヒノキチオールは３２４ｎｍと３７２ｎｍに吸収極大を示す。得られたポリマーミセルにおけるヒノキチオールの取り込み率（ポリマーミセルに取り込まれた活性成分量の出発量に対する割合、ｗｔ／ｗｔ％）、封入率（ポリマーの出発量に対するポリマーミセルに取り込まれた活性成分量の割合、ｗｔ／ｗｔ％）、ポリマーミセルのサイズを以下の表１に示す。なお、活性成分の取り込み率は、取り込まれなかった活性成分量をモル吸光係数から求め、この値を活性成分の出発量から差し引いた値をポリマーミセルに取り込まれた活性成分量として求めた。ポリマーミセルの粒子径は当業者に周知の方法により測定することができ、例えば動的光散乱光度計（ＤＬＳ−７０００ＤＨ，大塚電子（株）、大阪府）を用い、その説明書に従って行うことができる。
出発物質として用いるヒノキチオールの量を３ｍｇ（０．３ｍＬエタノール溶液）とし、ＰＥＧ−ＰＢＬＡ−１２０−５０−６０またはＰＥＧ−ＰＢＬＡ−５−２０−１００の出発量を３ｍｇ（ポリマー／ヒノキチオールが３ｍｇ／３ｍｇ）または１．５ｍｇ（ポリマー／ヒノキチオールが１．５ｍｇ／３ｍｇ）とした場合も、ヒノキチオールはミセル化され、封入率が高くなり、ポリマーミセルのサイズが大きくなった。結果を表１に示す。
【表１】
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実施例２ ブロックコポリマーによるミセル化ヒノキチオールの皮膚透過性（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ）
正常ヒト表皮角化細胞から構成され、多層化かつ高度に分化した皮膚３次元モデル（ＥＰＩ−２００、倉敷紡績（株）、大阪府／ＥｐｉＤｅｒｍ，ＭａｔＴｅｋ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，マサチューセッツ州、米国）を用い、その説明書に従ってミセル化ヒノキチオールの皮膚透過性を検討した。具体的には、実施例１で調製した各種ミセル化ヒノキチオールを超純水でヒノキチオールの量に換算して１５０μｇ／ｍＬとなるように希釈し、その１００μＬをＥＰＩ−２００皮膚モデルカップの内部に直接添加し、経時的に皮膚表面、皮膚組織内、および培養液中に存在するヒノキチオール量を３２４ｎｍにおける吸光度を用いて定量した。一定時間後カップ内のポリマーミセル溶液を回収し、そこに超純水で皮膚表面を洗浄した洗浄液を加えて全量を１ｍＬとし、ＥＰＩ−２００皮膚モデルカップに添加する前のミセル化ヒノキチオールの３２４ｎｍにおける吸収強度と比較して、皮膚表面に残存するヒノキチオールの割合（％）を求めた。皮膚表面のミセル化ヒノキチオールを取り出して洗浄した後、ＥＰＩ−２００皮膚モデルカップを２ｍＬのＤＭＳＯに１２時間浸し、抽出されたヒノキチオール量を測定し皮膚組織内に存在するヒノキチオール量とした。培養液は直接測定し、この中に含まれるヒノキチオール量を培養液中に出てきたヒノキチオール量とした。皮膚組織内および培養液中のヒノキチオールは、コントロールとして超純水１００μＬを用いて同様の処理をしたコントロールサンプルとの３２４ｎｍにおける吸光度の差を用いて定量した。実施例１で用いたミセル化ヒノキチオールについて行った皮膚透過性実験の結果を表２に示す。
【表２】
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ミセル化ヒノキチオールを皮膚モデルカップの内部に直接添加後、１２時間と４０時間におけるヒノキチオールの分布を比較すると、皮膚表面のヒノキチオール量は時間の経過とともに減少し、培養液中のヒノキチオール量は時間の経過とともに増加している。このことから、ミセル化ヒノキチオールは、ゆっくりと皮膚を透過し、組織内に安定に留まり、徐々にヒノキチオールを放出しているものと考えられる。
実施例３ ブロックコポリマーによるミセル化ヒノキチオールのメラニン合成抑制効果（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ）
正常ヒト表皮メラニン細胞と表皮角化細胞から構成され、多層化かつ高度に分化した皮膚３次元モデル（ＭＥＬ−３００−Ｂ、倉敷紡績（株）、大阪府／ＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ，ＭａｔＴｅｋ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、マサチューセッツ州、米国）を用い、その説明書に従ってミセル化ヒノキチオールのメラニン合成抑制効果を検討した。具体的には、実施例１と同様の方法で調製したミセル化ヒノキチオールを超純水で、ヒノキチオールの量に換算して２５μｇ／ｍＬ、５０μｇ／ｍＬおよび１００μｇ／ｍＬとなるように希釈し、それぞれの１００μＬをＭＥＬ−３００−Ｂ皮膚モデルカップの内部に直接添加し、１週間、２週間、および３週間後に生成するメラニン量を定量した。一定時間ミセル化ヒノキチオールに曝露したＭＥＬ−３００−Ｂ皮膚モデルカップはマイナス２０℃で保存し、すべての実験終了後解凍して超純水で洗浄し、皮膚組織をカップから取り出して２５０μＬのＳｏｌｖａｂｌｅ（商標）（Ｐａｃｋａｒｄ  ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅ  Ｃｏ．，マサチューセッツ州、米国）中、６０℃で１２時間インキュベートして組織を分解した。サンプルを室温に冷やした後、組織分解物を遠心（５，２００Ｘｇ、５分、室温）で除き、上清中のメラニン量を４９０ｎｍにおける吸光度を用いて定量した。メラニンの検量線は、２５０μＬのＳｏｌｖａｂｌｅ（商標）に０μｇから２５０μｇのメラニン（Ｓｉｇｍａ、ミシガン州、米国）を含む溶液を用いて作成した。１ｍｇ／ｍＬのブロックコポリマーＰＥＧ−ＰＢＬＡ−１２−５０−６０水溶液３ｍＬと１０ｍｇ／ｍＬのヒノキチオールエタノール溶液０．３ｍＬから作成したポリマーミセルを用いて行った実験結果を図１に示す。ミセル化ヒノキチオールは、ヒノキチオールの濃度が高くなるに従ってメラニン合成を効率よく抑制し、１０μｇ／１００μＬ（０．０１重量％）でほぼ１００％のメラニン合成抑制が見られた。このことから、ミセル化ヒノキチオールが組織内に留まり、ポリマーミセルから放出されたヒノキチオールがメラニン細胞に働きかけ、培地に含まれているβ−ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒとα−ｍｅｌａｎｏｃｙｔｅ  ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ  ｈｏｒｍｏｎｅの作用を抑え、メラニン合成が抑制されるものと考えられる。
実施例４ ブロックコポリマーによるミセル化ヒノキチオールの皮膚毒性（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ）
ＭＴＴ（３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウムブロミド）アッセイキット（倉敷紡績（株）、大阪府／ＭＴＴ−１００，ＭａｔＴｅｋ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，マサチューセッツ州、米国）を用い、その説明書に従って、ミセル化ヒノキチオールに一定時間曝露したＭＥＬ−３００−Ｂ皮膚モデルの細胞生存率を求めた。具体的には、実施例３と同様のミセル化ヒノキチオールをＭＥＬ−３００−Ｂ皮膚モデルカップの内部に直接添加し、１週間、２週間、および３週間後の細胞生存率を求めた。一定期間ミセル化ヒノキチオールに曝露したＭＥＬ−３００−Ｂ皮膚モデルカップをＭＴＴ溶液（１ｍｇ／ｍＬ）３００μＬ中、３７℃、５％ＣＯ２で３時間インキュベートした後、このＭＥＬ−３００−Ｂ皮膚モデルカップを２ｍＬの抽出液中に２時間浸漬させ、抽出されたホルマザンを５７０ｎｍにおける吸光度を用いて定量した。細胞生存率は、１００μＬの超純水に曝露した場合に抽出されたホルマザン量に対する割合（％）として求めた。結果を表３に示す。どの場合も３週間後の細胞生存率は９０％以上で、使用した濃度範囲におけるミセル化ヒノキチオールの細胞毒性は無いと判断される。
【表３】
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比較例１ フリーのヒノキチオールの皮膚透過性（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ）
１００μＬのフリーのヒノキチオール（１５０μｇ／ｍＬ）水溶液をＥＰＩ−２００皮膚モデルカップの内部に直接添加し、実施例２と同様の方法でフリーのヒノキチオールの皮膚透過性を検討した。フリーのヒノキチオールは速やかに皮膚を透過し、皮膚モデルカップの内部に直接添加後６時間で皮膚表面のヒノキチオールは消失し、９１％のヒノキチオールが培養液中で検出され、組織内に残るヒノキチオール量は僅か９％であった。結果を上記の表２に合わせて示す。
比較例２ フリーのヒノキチオールのメラニン合成抑制効果（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ）
フリーのヒノキチオール２５μｇ／ｍＬ、５０μｇ／ｍＬおよび１００μｇ／ｍＬの水溶液１００μＬをそれぞれＭＥＬ−３００−Ｂ皮膚モデルカップの内部に直接添加し、実施例３と同様の方法でフリーのヒノキチオールのメラニン合成抑制効果を検討した。図２〜図４に示したように、フリーのヒノキチオールの濃度が高くなるに従ってメラニン合成抑制効果は高くなるが、どの濃度においてもミセル化ヒノキチオールのほうがより高いメラニン合成抑制効果を示している。これは比較例１の結果から明らかなように、フリーのヒノキチオールは組織に留まることなく速やかに培養液中へ浸透するため、組織内のメラニン細胞に作用することができないためと考えられる。
比較例３ 空ミセルのメラニン合成への影響
１ｍｇ／ｍＬのＰＥＧ−ＰＢＬＡ−１２−５０−６０水溶液３ｍＬから作成した空ミセル溶液１００μＬをＭＥＬ−３００−Ｂ皮膚モデルカップの内部に直接添加し、実施例３と同様の方法で空ミセルのメラニン合成への影響を検討した。図５に示したように、空ミセルにはメラニン合成抑制効果は見られなかった。
比較例４ フリーのヒノキチオールの皮膚毒性（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ）
比較例２と同様のフリーのヒノキチオールを用いて、実施例４と同様の方法でフリーのヒノキチオールの皮膚毒性を検討した。使用したフリーのヒノキチオールの濃度範囲では、細胞毒性は無いと判断される（表３参照）。
比較例５ 空ミセルの皮膚毒性（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ）
比較例３と同様の空ミセルを用いて、実施例４と同様の方法で空ミセルの皮膚毒性を検討した。空ミセルの細胞毒性は無いと判断される（表３参照）。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【国際調査報告】
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