【手続補正書】
【提出日】平成17年4月18日(2005.4.18)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下のものからなる群より選択される核酸配列を含む単離された核酸分子：
a. タンパク質がアセト乳酸シンターゼである、配列番号：15、配列番号：19、配列番号：22および配列番号：24からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するタンパク質をコードする核酸配列；
b. タンパク質がアセト乳酸シンターゼである、(a)のアミノ酸配列と少なくとも約75 %同一であるアミノ酸配列を有するタンパク質をコードする核酸配列；および、
c. (a)または(b)の核酸配列と完全に相補的である核酸配列。
【請求項２】
核酸配列が(a)のアミノ酸配列と少なくとも約85 %同一であるアミノ酸配列を有するタンパク質をコードし、かつ該タンパク質がアセト乳酸シンターゼである、請求項1記載の単離された核酸分子。
【請求項３】
核酸配列が(a)のアミノ酸配列と少なくとも約95 %同一であるアミノ酸配列を有するタンパク質をコードし、かつ該タンパク質がアセト乳酸シンターゼである、請求項1記載の単離された核酸分子。
【請求項４】
核酸配列が116G、117A、192P、200A、251K、358M、383D、592V、595W、および599Fからなる群より選択されるアミノ酸位置におけるアミノ酸の欠失、挿入、または置換により配列番号：15と異なるアミノ酸配列を有するタンパク質をコードする、請求項1記載の単離された核酸分子。
【請求項５】
核酸配列が配列番号：15、配列番号：19、配列番号：22および配列番号：24からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するタンパク質をコードし、かつ該タンパク質がアセト乳酸シンターゼである、請求項1記載の単離された核酸分子。
【請求項６】
(a)または(b)のタンパク質の発現が核酸分子で形質転換されるトラウストチトリアレス目の微生物に、以下からなる群より選択される化合物に対する低下した感受性を与える、請求項1記載の単離された核酸分子：
スルホニル尿素化合物、イミダゾリノン類阻害剤、およびピリミジニルオキシ安息香酸。
【請求項７】
核酸配列が配列番号：19、配列番号：22および配列番号：24からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するタンパク質をコードする、請求項6記載の単離された核酸分子。
【請求項８】
転写制御配列へ実施可能に連結された、請求項1〜7のいずれか一項記載の単離された核酸分子を含む組換え核酸分子。
【請求項９】
請求項8記載の組換え核酸分子で形質転換されるトラウストチトリアレス目の組換え微生物。
【請求項１０】
トラウストチトリアレス目の微生物に、スルホニル尿素化合物、イミダゾリノン類阻害剤、およびピリミジニルオキシ安息香酸からなる群より選択される化合物に対する低下した感受性を与えるアセト乳酸シンターゼをコードする核酸配列を含み、該アセト乳酸シンターゼが以下のものからなる群より選択されるアミノ酸配列を有し、アセト乳酸シンターゼをコードする該核酸配列が転写制御配列へ実施可能に連結されている、トラウストチトリアレス目の微生物の形質転換のための組換えベクター：
a. 配列番号：19、配列番号：22および配列番号：24からなる群より選択されるアミノ酸配列；および
b. (a)のアミノ酸配列と少なくとも約75 %同一であるアミノ酸配列。
【請求項１１】
核酸配列が116G、117A、192P、200A、251K、358M、383D、592V、595W、および599Fからなる群より選択されるアミノ酸位置におけるアミノ酸の欠失、挿入、または置換により配列番号：15と異なるアミノ酸配列を有するタンパク質をコードする、請求項10記載の組換えベクター。
【請求項１２】
アセト乳酸シンターゼが配列番号：19、配列番号：22および配列番号：24からなる群より選択されるアミノ酸配列を有する、請求項10記載の組換えベクター。
【請求項１３】
転写制御配列がトラウストチトリアレスのα-チューブリンプロモーター、トラウストチトリアレスのアセト乳酸シンターゼプロモーター、トラウストチトリアレスのポリケチドシンターゼ(PKS)系由来のプロモーター、およびトラウストチトリアレスの脂肪酸デサチュラーゼプロモーターからなる群より選択される、請求項10記載の組換えベクター。
【請求項１４】
ベクターが配列番号：18、配列番号：21、および配列番号：23からなる群より選択される核酸配列を含む、請求項10記載の組換えベクター。
【請求項１５】
請求項10〜14のいずれか一項記載の組換えベクターで形質転換された、トラウストチトリアレス目の組換え微生物。
【請求項１６】
方法が以下の段階を含む、トラウストチトリアレス目の微生物の細胞を形質転換する方法：
a. 請求項10〜14のいずれか一項記載の組換えベクターを、トラウストチトリアレス目の組換え微生物の細胞に導入する段階：
b. 化合物がスルホニル尿素化合物、イミダゾリノン類阻害剤、およびピリミジニルオキシ安息香酸からなる群より選択される、形質転換されていない細胞に対して阻害性がある少なくとも1つの化合物を含む培地において(a)の該細胞を培養することにより該組換えベクターで成功裡に形質転換された細胞を選択する段階。
【請求項１７】
組換えベクターが細胞により産生されうるタンパク質をコードする核酸配列をさらに含み、該タンパク質をコードする該核酸配列が転写制御配列へ実施可能に連結されている、請求項16記載の方法。
【請求項１８】
タンパク質が、ドコサヘキサエン酸(DHA)、ドコサペンタエン酸(DPA)、エイコサペンタエン酸(EPA)およびアラキドン酸(ARA)からなる群より選択される脂肪酸の合成に関係する、請求項17記載の方法。
【請求項１９】
段階(a)における組換えベクターが、ターゲット核酸配列を含む遺伝子が第二の核酸配列との相同的組換えにより突然変異されるまたは不活化されるように、微生物においてターゲット核酸配列とハイブリダイズする核酸配列をさらに含む、請求項16記載の方法。
【請求項２０】
発現されうるタンパク質をコードする核酸配列を含む少なくとも1つの追加の組換え核酸分子を細胞へ導入する段階をさらに含み、該核酸配列が転写制御配列へ実施可能に連結されている、請求項16記載の方法。
【請求項２１】
ターゲット核酸配列を含む遺伝子が第二の核酸配列との相同的組換えにより突然変異されるまたは不活化されるように微生物においてターゲット核酸配列とハイブリダイズする第二の核酸配列を含む少なくとも1つの追加の組換え核酸分子を細胞へ導入する段階をさらに含む、請求項16記載の方法。
【請求項２２】
追加の組換え核酸分子がブレオマイシン結合タンパク質をコードする核酸配列を含む、請求項20または21記載の方法。
【請求項２３】
以下のものからなる群より選択される核酸配列を含む単離された核酸分子：
a. 配列番号：9のヌクレオチド441位〜894位；
b. 核酸配列が少なくとも基礎的なα-チューブリンプロモーター転写活性をもっている、完全長である配列番号：9のヌクレオチド441位〜894位にわたり配列番号：9のヌクレオチド441位〜894位と少なくとも約95 %同一である核酸配列；および
c. (a)または(b)のポリヌクレオチドと完全に相補的である核酸配列を含む単離されたポリヌクレオチド。
【請求項２４】
単離された核酸分子が配列番号：4および配列番号：9のヌクレオチド441位〜894位からなる群より選択される核酸配列を含む、請求項23記載の単離された核酸分子。
【請求項２５】
トラウストチトリアレスのα-チューブリンプロモーター、トラウストチトリアレスのアセト乳酸シンターゼプロモーター、トラウストチトリアレスのポリケチドシンターゼ(PKS)系由来のプロモーター、およびトラウストチトリアレスの脂肪酸デサチュラーゼプロモーターからなる群より選択されるプロモーターへ実施可能に連結されているブレオマイシン結合タンパク質をコードする核酸配列を含む、トラウストチトリアレス目の微生物の形質転換のための組換えベクター。
【請求項２６】
トラウストチトリアレスのアセト乳酸シンターゼプロモーターが配列番号：14のヌクレオチド1位〜1259位を含む、請求項25記載の組換えベクター。
【請求項２７】
α-チューブリンプロモーターが配列番号：9のヌクレオチド441位〜894位および配列番号：9のヌクレオチド441位〜894位の完全長に対して配列番号：9のヌクレオチド441位〜894位と少なくとも約95 %同一である核酸配列からなる群より選択される核酸配列を含み、該核酸配列が少なくとも基礎的なα-チューブリンプロモーター転写活性をもっている、請求項25記載の組換えベクター。
【請求項２８】
組換えベクターが配列番号：8および配列番号：9からなる群より選択される核酸配列を含む、請求項25記載の組換えベクター。
【請求項２９】
トラウストチトリアレスのポリケチドシンターゼ(PKS)系由来のプロモーターが配列番号：34または少なくとも基礎的なPKSプロモーター転写活性を有するその断片を含む、請求項25記載の組換えベクター。