【手続補正書】
【提出日】平成16年6月10日(2004.6.10)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００４】
従来、微小循環系の血流停滞や微小血栓の易発状態等を改善する薬剤としては、塩酸イソクスプリン、シンナリジン、マレイン酸シネパシド等の薬剤が用いられているが、これらの多くは、平滑筋弛緩作用により血管を拡張させて末梢血行を改善するものである。しかし、微小血管内血液循環を改善するためには、これら薬剤によって血管を拡張させるだけでなく、赤血球変形能を向上させて血液粘性を低下させる等、血液の流れの性質改善が重要となる。そこで、近年は血液のレオロジーに着目し、血液自体の流動性を改善することに焦点があてられている。血液流動性の改善の例としては、例えば、蕎麦等に含まれるルチン、イチョウ葉、生薬の混合物（特許文献１参照）、ヒドロキシメチルフルフラール誘導体（特許文献２参照）、５−ヒドロキシメチルフラン誘導体（特許文献３参照）、γ―リノレン酸単独またはγ―リノレン酸と脂溶性抗酸化剤（特許文献４参照）、カテキン（特許文献５参照）、魚類胆汁および／またはその極性溶媒抽出物（特許文献６参照）、サフランまたはサフランの組織培養物（特許文献７参照）、グルコサミン塩またはグルコサミン塩誘導体（特許文献８参照）、コラーゲンペプチド（特許文献９参照）などの報告があげられる。  
また、ラットに不飽和脂肪酸を添加した飼料を与えることにより、赤血球変形能が向上した報告（非特許文献１）、人に不飽和脂肪酸を摂取させることにより、同じく赤血球変形能が向上したという報告（非特許文献２，３，４）がある。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００５】
【特許文献１】特開平６−１７２１９６号公報
【特許文献２】特許第２９７９３０５号
【特許文献３】特開平９−２１６８２１号公報
【特許文献４】特開平１０−１４７５２３号公報
【特許文献５】特開平１０−７２４６０号公報
【特許文献６】特開平７−１３８１６８号公報
【特許文献７】特開平１０−２８７５７６号公報
【特許文献８】特開２００２−９７１４３号公報
【特許文献９】特許３１９７５４７号
【非特許文献１】Johannes M.B. et.al.; Throbosis Research, 81(2), p.283-288
【非特許文献２】T.Terano et.al.; Atherosclerosis, 46, p.321-331(1983)
【非特許文献３】I.J. Cartwright et.al.; Atherosclerosis, 55, p.267-281(1985)
【非特許文献４】J.B.Hansen et.al.; Journal of Internal Medicine, 225, Suppl.1 p.133-139(1989)
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１０】
発明者らは、高脂肪食を投与し著しく血液流動性が低下したラットを用いて、アマノリ属海藻類あるいはワカメ属海藻類を投与することにより、血液流動性が改善することを発見した。その際、赤血球の変形能の亢進や血小板の凝集低下が観察され、さらに赤血球膜中に存在する脂肪酸組成が変化していることが確認された。具体的には、ラット赤血球膜の脂肪酸組成において、リノール酸の増加、アラキドン酸の低下、エイコサペンタエン酸の増加が観察された。また、ラット血液中のミネラル成分分析より、アマノリ属海藻類あるいはワカメ属海藻類の主要なミネラル成分であるカルシウム、マグネシウム等が血液中に吸収されていることが観察された。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１１】
本発明者らは研究を重ねた結果、アマノリ属海藻類あるいはワカメ属海藻類そのものに血液流動性改善効果があるが、それらの中のリン脂質成分およびミネラル成分を取り出すことによって、さらにその効果が高まり、血液流動性の改善効果の高い健康食品として有用化することができることがわかった。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１２】
本発明で使用するアマノリ属海藻類あるいはワカメ属海藻類とは、一般的に我々が食しているものを含め、生，乾燥物，塩蔵物，乾燥粉末など、どのような形状、品種のものでも用いることができる。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１３】
これらの海藻類よりリン脂質成分を取り出すには、溶媒抽出、超臨界抽出など一般的に用いられる抽出方法が採用される。発明者等が行った実験ではエタノールなどの水溶性有機溶媒または水を含むエタノールなどの水溶性有機溶媒を用いた抽出が効率的にリン脂質成分を抽出することができた。また、ミネラル成分を取り出すには、水または水溶性溶媒で抽出する方法や灰化する方法等が採用される。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１６】
（実施例１）乾海苔からのリン脂質の調製
乾海苔を高速粉砕器にて約50メッシュに粉砕したもの５ｋｇに、６０％エタノール溶液２０リットルを添加し、常温にて３時間撹拌抽出した。遠心分離により乾海苔粉末とエタノール抽出物を分離した。エタノール抽出物は、減圧濃縮によりエタノールを除去した。  
エタノール抽出画分について、リン脂質成分の脂肪酸組成を分析した。結果を表１に示す。
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１８】
（実施例２）乾海苔からのミネラル成分の調製
実施例１で用いた海苔粉末５ｋｇを５５０℃の強熱下で灰化し、海苔のミネラル成分９８６ｇを得た。ミネラル成分については元素分析を行った。結果を表２に示す。
【手続補正９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２０】
（実施例３）乾燥ワカメからのリン脂質の調製
乾燥ワカメを高速粉砕器にて約50メッシュに粉砕したもの２０ｇに、６０％エタノール溶液２００ｍｌを添加し、常温にて３時間撹拌抽出した。遠心分離によりワカメ粉末とエタノール抽出物を分離した。エタノール抽出物は、減圧濃縮によりエタノールを除去した。  
エタノール抽出画分について、リン脂質成分の脂肪酸組成を分析した。結果を表３に示す。
【手続補正１０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２２】
（実施例４）乾燥ワカメからのミネラル成分の調製
実施例３で用いたワカメ粉末２０ｇを５５０℃の強熱下で灰化し、ワカメのミネラル成分１．９ｇを得た。ミネラル成分について元素分析を行った。その結果を表４に示す。
【手続補正１１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３０】
飼料は毎日交換し、飲料水とともに自由摂取させた。動物飼育室は室温２５℃、湿度５０±５％に保ち、１２時間ごとの明暗サイクル（午前８時点灯、午後８時消灯）に調整した。２週間飼育後、１８時間の絶食ののち、エーテル麻酔下にて開腹し、心臓から血液を最終濃度3.8％になるようにクエン酸ナトリウム液中に採血した。血液を遠心分離（1200×g、10分）後、上清を取り除き、次いでリン酸緩衝液にて赤血球を洗浄した。得られた赤血球を用いて変形能を測定し、さらに、得られた赤血球膜の脂肪酸組成を分析した。その結果を図１および表７に示す。