【手続補正書】
【提出日】平成17年3月4日(2005.3.4)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【書類名】  明細書
【発明の名称】  卵巣癌の治療および診断のための組成物および方法
【特許請求の範囲】
【請求項１】  単離されたポリペプチドであって、以下：
（ａ）配列番号２１５、２００〜２０２、２０７および２０９に提供される配列；
（ｂ）配列番号２１５、２００〜２０２、２０７および２０９に提供される配列に対して、少なくとも７０％の同一性を有する配列；および
（ｃ）配列番号２１５、２００〜２０２、２０７および２０９に提供される配列に対して、少なくとも９０％の同一性を有する配列；
からなる群より選択される卵巣腫瘍タンパク質のアミノ配列を含む、ポリペプチド。
【請求項２】  単離されたポリヌクレオチドであって、以下：
（ａ）配列番号２１４、２０３〜２０６、２０８および２１０〜２１３に提供される配列；
（ｂ）配列番号２１４、２０３〜２０６、２０８および２１０〜２１３に提供される配列の相補体；
（ｃ）配列番号２１４、２０３〜２０６、２０８および２１０〜２１３に提供される配列の少なくとも２０連続した残基からなる配列；
（ｄ）中程度にストリンジェントな条件下で、配列番号２１４、２０３〜２０６、２０８および２１０〜２１３に提供される配列にハイブリダズする配列；
（ｅ）配列番号２１４、２０３〜２０６、２０８および２１０〜２１３に提供される配列に対して少なくとも７５％の同一性を有する配列；
（ｆ）配列番号２１４、２０３〜２０６、２０８および２１０〜２１３に提供される配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列；ならびに
（ｇ）配列番号２１４、２０３〜２０６、２０８および２１０〜２１３に提供される配列の縮重改変体；
からなる群より選択される配列を含む、ポリヌクレオチド。
【請求項３】  単離されたポリペプチドであって、以下：
（ａ）請求項２に記載のポリヌクレオチドによってコードされる配列；
（ｂ）請求項２に記載のポリヌクレオチドによってコードされる配列に対して少なくとも７０％の同一性を有する、配列；および
（ｃ）請求項２に記載のポリヌクレオチドによってコードされる配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する、配列
からなる群より選択される卵巣腫瘍タンパク質のアミノ酸配列を含む、ポリペプチド。
【請求項４】  発現制御配列に作動可能に連結される、請求項２に記載のポリヌクレオチドを含む、発現ベクター。
【請求項５】  請求項４に記載の発現ベクターで形質転換されたか、またはトランスフェクトされた、宿主細胞。
【請求項６】  請求項１または３のポリペプチドに特異的に結合する、単離された抗体、またはその抗原結合フラグメント。
【請求項７】  患者における卵巣癌の存在を検出するための方法であって、該方法は、以下の工程：
（ａ）該患者由来の生物学的サンプルを得る工程；
（ｂ）請求項１または請求項３のポリペプチドに結合する結合因子と該生物学的サンプルを接触されせる工程；
（ｃ）該サンプル中において、該結合因子に結合するポリペプチドの量を検出する工程；および
（ｄ）該ポリペプチドの量と予め決定されたカットオフ値と比較し、それによって該患者における癌の存在を決定する工程；
を包含する、方法。
【請求項８】  請求項１または請求項３に記載の少なくとも１つのポリペプチドを含む、融合タンパク質。
【請求項９】  中程度にストリンジェントな条件下で、配列番号２１４、２０３〜２０６、２０８および２１０〜２１３に提供される配列にハイブリダイズする、オリゴヌクレオチド。
【請求項１０】  腫瘍タンパク質に特異的なＴ細胞を刺激および／または拡大するための方法であって、該方法は、Ｔ細胞を刺激および／または拡大することを可能にするのに十分な条件および時間で、
以下：
（ａ）請求項１または請求項３に記載のポリペプチド；
（ｂ）請求項２に記載のポリヌクレオチド；および
（ｃ）請求項１または請求項３に記載のポリペプチドを発現する、抗原提示細胞
からなる群より選択される少なくとも１つの成分とＴ細胞を接触させる工程
を包含する、方法。
【請求項１１】  請求項１０に記載の方法で従って調製されたＴ細胞を含む、単離されたＴ細胞集団。
【請求項１２】  生理学的に受容可能なキャリアおよび免疫賦活剤からなる群より選択される第１の成分、ならびに第２の成分を含む、組成物であって、
ここで、該第２の成分は、以下：
（ａ）請求項１または請求項３に記載のポリペプチド；
（ｂ）請求項２に記載のポリヌクレオチド；
（ｃ）請求項６に記載の抗体；
（ｄ）請求項８に記載の融合タンパク質；および
（ｅ）請求項２または請求項３に記載のポリペプチドを発現する抗原提示細胞；
からなる群より選択される、組成物。
【請求項１３】  患者における免疫応答を刺激する方法であって、該方法は、
請求項１２に記載の組成物を、該患者に投与する工程を包含する、方法。
【請求項１４】  患者における癌の処置のための方法であって、該方法は、請求項１２に記載の組成物を該患者に投与する工程を包含する、方法。
【請求項１５】  患者における癌の存在を決定するための方法であって、該方法は、以下の工程：
（ａ）該患者から生物学的サンプルを得る工程；
（ｂ）請求項９に記載のオリゴヌクレオチドと該生物学的サンプルを接触させる工程；
（ｃ）該サンプル中において、該オリゴヌクレオチドにハイブリダイズするポリヌクレオチドの量を検出する工程；および
（ｄ）該オリゴヌクレオチドにハイブリダイズするオリゴヌクレオチドの量と予め決定されたカットオフ値と比較し、それによって該患者における、癌の存在を決定する工程；
を包含する、方法。
【請求項１６】  少なくとも１つの請求項９に記載のオリゴヌクレオチドを含む、診断キット。
【請求項１７】  少なくとも１つの請求項６に記載の抗体および検出試薬を含む、診断キットであって、ここで、該検出試薬は、レポーター基を含む、診断キット。
【請求項１８】  患者における癌の発生を阻害する方法であって、該方法は、以下の工程：
（ａ）（ｉ）請求項１または請求項３に記載のポリペプチド；（ｉｉ）請求項２に記載のポリヌクレオチド；および（ｉｉｉ）請求項１または請求項３に記載のポリペプチドを発現する抗原提示細胞からなる群より選択される、少なくとも１つの成分と、患者から単離された、ＣＤ４＋Ｔ細胞および／またはＣＤ８＋Ｔ細胞をインキュベートし、その結果、Ｔ細胞が増殖する工程；
（ｂ）該増殖したＴ細胞の有効量を患者に投与し、そして、それによって該患者における癌の発生を阻害する工程；
を包含する、方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
（発明の背景）
（発明の分野）
本発明は、一般に、卵巣癌の治療に関する。本発明は、より詳細には、卵巣癌腫タンパク質の少なくとも一部分を含むポリペプチド、およびこのようなポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、ならびにこのようなポリペプチドを特異的に認識する抗体および免疫系細胞に関する。このようなポリペプチド、ポリヌクレオチド、抗体および細胞は、卵巣癌の処置のためのワクチンおよび薬学的組成物において使用され得る。
【０００２】
（関連技術の説明）
卵巣癌は、米国および世界中で、女性にとって重大な健康問題である。この癌の検出および治療において、進歩が成されてきたが、予防または処置のためのワクチンまたは他の一般に成功した方法は、現在利用可能ではない。この疾患の管理は、現在のところ、早期の診断および積極的な処置の組み合わせに依存し、その処置は、外科手術、放射線治療、化学療法、およびホルモン療法のような、種々の処置のうちの１以上を含み得る。特定の癌の処置の過程は、しばしば、特異的な腫瘍マーカーの分析を含む、種々の予後のパラメーターに基づいて選択される。しかし、確立されたマーカーの使用は、しばしば、解釈が難しい結果を導き、そして多くの癌患者において高い死亡率が観察され続けている。
【０００３】
免疫療法は、癌の処置および生存を実質的に改善する可能性を有する。このような治療は、卵巣癌腫抗原に対する免疫応答の生成または増強を含み得る。しかし、これまでに、卵巣癌腫抗原は比較的ほとんど知られておらず、そしてこのような抗原に対する免疫応答の生成が治療的利点であることは示されていない。
【０００４】
従って、当該分野において、卵巣腫瘍抗原の同定のため、および卵巣癌の治療においてこのような抗原を使用するための、改善された方法の必要性が存在する。本発明は、これらの必要性を満たし、さらに他の関連する利点を提供する。
【０００５】
（発明の要旨）
簡潔に述べると、本発明は、癌（例えば、卵巣癌）の治療のための組成物および方法を提供する。
【０００６】
１つの局面において、本発明はポリヌクレオチド組成物を提供する。このポリヌクレオチド組成物は、以下からなる群より選択される配列を含む：
（ａ）配列番号（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ、ＳＥＱ  ＩＤ）１、２、５、９、１０、１３、１６、１９、２３、２７、２８、３２、３３、３５、３８、４１〜５０、５２、５３、５６、５７、６３、６５、６９〜７２、７５、７８、８０〜８２、８４、８６、８９〜９３、９５、９７〜１００、１０３、１０７、１１１、１１４、１１７、１２０、１２１、１２５、１２８、１３２〜１３４、１３６、１３７、１４０、１４３〜１４６、１４８〜１５１、１５６、１５８、１６０〜１６２、１６６〜１６８、１７１、１７４〜１８３、１８５、１９３〜１９９、２０３〜２０６および２０８に提供される配列；
（ｂ）配列番号１、２、５、９、１０、１３、１６、１９、２３、２７、２８、３２、３３、３５、３８、４１〜５０、５２、５３、５６、５７、６３、６５、６９〜７２、７５、７８、８０〜８２、８４、８６、８９〜９３、９５、９７〜１００、１０３、１０７、１１１、１１４、１１７、１２０、１２１、１２５、１２８、１３２〜１３４、１３６、１３７、１４０、１４３〜１４６、１４８〜１５１、１５６、１５８、１６０〜１６２、１６６〜１６８、１７１、１７４〜１８３、１８５、１９３〜１９９、２０３〜２０６および２０８に提供される配列の相補体；
（ｃ）配列番号１、２、５、９、１０、１３、１６、１９、２３、２７、２８、３２、３３、３５、３８、４１〜５０、５２、５３、５６、５７、６３、６５、６９〜７２、７５、７８、８０〜８２、８４、８６、８９〜９３、９５、９７〜１００、１０３、１０７、１１１、１１４、１１７、１２０、１２１、１２５、１２８、１３２〜１３４、１３６、１３７、１４０、１４３〜１４６、１４８〜１５１、１５６、１５８、１６０〜１６２、１６６〜１６８、１７１、１７４〜１８３、１８５、１９３〜１９９、２０３〜２０６および２０８に提供される配列の、少なくとも２０連続残基からなる配列；
（ｄ）配列番号１、２、５、９、１０、１３、１６、１９、２３、２７、２８、３２、３３、３５、３８、４１〜５０、５２、５３、５６、５７、６３、６５、６９〜７２、７５、７８、８０〜８２、８４、８６、８９〜９３、９５、９７〜１００、１０３、１０７、１１１、１１４、１１７、１２０、１２１、１２５、１２８、１３２〜１３４、１３６、１３７、１４０、１４３〜１４６、１４８〜１５１、１５６、１５８、１６０〜１６２、１６６〜１６８、１７１、１７４〜１８３、１８５、１９３〜１９９、２０３〜２０６および２０８に提供される配列に、中程度にストリンジェントな条件下でハイブリダイズする配列；
（ｅ）配列番号１、２、５、９、１０、１３、１６、１９、２３、２７、２８、３２、３３、３５、３８、４１〜５０、５２、５３、５６、５７、６３、６５、６９〜７２、７５、７８、８０〜８２、８４、８６、８９〜９３、９５、９７〜１００、１０３、１０７、１１１、１１４、１１７、１２０、１２１、１２５、１２８、１３２〜１３４、１３６、１３７、１４０、１４３〜１４６、１４８〜１５１、１５６、１５８、１６０〜１６２、１６６〜１６８、１７１、１７４〜１８３、１８５、１９３〜１９９、２０３〜２０６、２０８および２１０〜２１４に提供される配列に、少なくとも７５％の同一性を有する配列；
（ｆ）配列番号１、２、５、９、１０、１３、１６、１９、２３、２７、２８、３２、３３、３５、３８、４１〜５０、５２、５３、５６、５７、６３、６５、６９〜７２、７５、７８、８０〜８２、８４、８６、８９〜９３、９５、９７〜１００、１０３、１０７、１１１、１１４、１１７、１２０、１２１、１２５、１２８、１３２〜１３４、１３６、１３７、１４０、１４３〜１４６、１４８〜１５１、１５６、１５８、１６０〜１６２、１６６〜１６８、１７１、１７４〜１８３、１８５、１９３〜１９９、２０３〜２０６、２０８および２１０〜２１４に提供される配列に、少なくとも９０％の同一性を有する配列；ならびに
（ｇ）配列番号１、２、５、９、１０、１３、１６、１９、２３、２７、２８、３２、３３、３５、３８、４１〜５０、５２、５３、５６、５７、６３、６５、６９〜７２、７５、７８、８０〜８２、８４、８６、８９〜９３、９５、９７〜１００、１０３、１０７、１１１、１１４、１１７、１２０、１２１、１２５、１２８、１３２〜１３４、１３６、１３７、１４０、１４３〜１４６、１４８〜１５１、１５６、１５８、１６０〜１６２、１６６〜１６８、１７１、１７４〜１８３、１８５、１９３〜１９９、２０３〜２０６、２０８および２１０〜２１４に提供される配列の縮重改変体。
【０００７】
１つの好ましい実施形態において、本発明のポリヌクレオチド組成物は、試験された卵巣腫瘍サンプルのうちの、少なくとも約２０％、より好ましくは、少なくとも約３０％、そして最も好ましくは、少なくとも約５０％において、正常組織のレベルよりも、少なくとも約２倍、好ましくは、少なくとも約５倍、そして最も好ましくは、少なくとも約１０倍高いレベルで発現する。
【０００８】
１つの局面において、本発明は、卵巣癌腫タンパク質の免疫原性部分を含むポリペプチド、または卵巣癌腫タンパク質特異的抗血清と反応する改変体の能力が、実質的に減少しないような、１以上の置換、欠失、付加および／もしくは挿入において異なる卵巣癌腫タンパク質の改変体を提供する。特定の実施形態において、この卵巣癌腫タンパク質は、配列番号１、２、５、９、１０、１３、１６、１９、２３、２７、２８、３２、３３、３５、３８、４１〜５０、５２、５３、５６、５７、６３、６５、６９〜７２、７５、７８、８０〜８２、８４、８６、８９〜９３、９５、９７〜１００、１０３、１０７、１１１、１１４、１１７、１２０、１２１、１２５、１２８、１３２〜１３４、１３６、１３７、１４０、１４３〜１４６、１４８〜１５１、１５６、１５８、１６０〜１６２、１６６〜１６８、１７１、１７４〜１８３、１８５、１９３〜１９９、２０３〜２０５、２０８および２１０〜２１４ならびにこのようなポリヌクレオチドの相補体からなる群より選択されるポリヌクレオチド配列によってコードされる配列を含む。
【０００９】
本発明は、上記のポリペプチドまたはその一部をコードするポリヌクレオチド、このようなポリヌクレオチドを含む発現ベクター、およびこのような発現ベクターで、形質転換またはトランスフェクトされた宿主細胞をさらに提供する。
【００１０】
本発明はさらに、配列番号２００〜２０２、２０７、２０９および２１５に列挙される配列からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むポリペプチド組成物を提供する。
【００１１】
特定の好ましい実施形態において、本発明のポリペプチドは免疫原性であり、すなわち、これらは、本明細書中でさらに記載されるように、免疫応答、特に体液性免疫応答および／または細胞性免疫応答を誘発し得る。
【００１２】
本発明はさらに、開示されたポリペプチド配列の、フラグメント、改変体、および／または誘導体を提供し、ここで、これらのフラグメント、改変体、および／または誘導体は、配列番号１〜１８５、１８７〜１９９、２０３〜２０６、２０８および２１０〜２１４のいずれか１つに列挙された配列を含むポリヌクレオチドによってコードされるアミノ酸配列を含む卵巣癌腫タンパク質の免疫原性活性レベルの、少なくとも約５０％、好ましくは、少なくとも約７０％そしてより好ましくは、少なくとも約９０％である免疫原性活性のレベルを、好ましくは有する。
【００１３】
他の局面において、本発明は、上記のようなポリペプチドおよび／またはポリヌクレオチドならびに生理学的に受容可能なキャリアを含む薬学的組成物を提供する。
【００１４】
本発明の関連する局面において、薬学的組成物（例えば、ワクチン組成物）が、予防適用または治療適用のために提供される。このような組成物は一般に、本発明の免疫原性ポリペプチドまたはポリヌクレオチド、および免疫賦活薬（例えば、アジュバント）を含む。
【００１５】
本発明はさらに、以下を含む薬学的組成物を提供する：（ａ）本発明のポリペプチドまたはそのフラグメントに特異的に結合する、抗体またはその抗原結合フラグメント；および（ｂ）生理学的に受容可能なキャリア。
【００１６】
さらなる局面において、本発明は、以下を含む薬学的組成物を提供する：（ａ）上記のポリペプチドを発現する抗原提示細胞、および（ｂ）薬学的に受容可能なキャリアまたは賦形剤。例示的な抗原提示細胞としては、樹状細胞、マクロファージ、単球、線維芽細胞およびＢ細胞が挙げられる。
【００１７】
関連する局面において、以下を含む薬学的組成物が提供される：（ａ）上記のポリペプチドを発現する抗原提示細胞、および（ｂ）免疫賦活薬。
【００１８】
他の局面において、本発明はさらに、少なくとも１つの上記のポリペプチドを含む融合タンパク質ならびにこのような融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドを、代表的には生理学的に受容可能なキャリアおよび／または免疫賦活薬を含む薬学的組成物（例えば、ワクチン組成物）の形態で提供する。この融合タンパク質は、本明細書中に記載されるように、複数の免疫原性ポリペプチドまたはそれらの一部分／改変体を含み得、そしてこれらのポリペプチドの、発現、精製、および／または免疫原性を促進するための１つ以上のポリペプチドセグメントをさらに含み得る。
【００１９】
さらなる局面において、本発明は、患者における免疫応答、好ましくはヒト患者におけるＴ細胞応答を刺激するための方法を提供し、この方法は本明細書に記載の薬学的組成物を投与する工程を含む。この患者は卵巣癌に罹患し得、この場合、本方法によって、この疾患についての処置が提供されるか、またはこのような疾患に対する危険があると考えられる患者は予防的に処置され得る。
【００２０】
さらなる局面において、本発明は、患者における癌の発達を阻害するための方法を提供し、この方法は、上に列挙した薬学的組成物を患者に投与する工程を包含する。この患者は卵巣癌に罹患し得、この場合、本方法によって、この疾患についての処置が提供されるか、またはこのような疾患に対する危険があると考えられる患者は予防的に処置され得る。
【００２１】
他の局面において、本発明は、生物学的サンプルから腫瘍細胞を除去するための方法をさらに提供する。この方法は、生物学サンプルと、本発明のポリペプチドに特異的に反応するＴ細胞とを接触させる工程を包含し、ここでこの接触させる工程は、サンプルからこのタンパク質を発現する細胞を除去することを可能にするために充分な条件下および時間で実施される。
【００２２】
関連する局面において、患者の癌の発達を阻害するための方法が提供され、この方法は、上記のように処理された生物学的サンプルを患者に投与する工程を包含する。
【００２３】
他の局面において、本発明のポリペプチドに対して特異的なＴ細胞を刺激および／または増殖させるための方法がさらに提供され、この方法は、Ｔ細胞を、以下の１つ以上と、Ｔ細胞の刺激および／または増殖を可能にするために充分な条件下および時間で、接触させる工程を包含する：（ｉ）上記の卵巣癌種ポリペプチド；（ｉｉ）このようなポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；および／または（ｉｉｉ）このようなポリペプチドを発現する抗原提示細胞。上記のように調製されたＴ細胞を含む、単離されたＴ細胞集団もまた、提供される。
【００２４】
さらなる局面において、本発明は、患者の癌の発達を阻害するための方法を提供し、この方法は上記のＴ細胞集団の有効量を患者に投与する工程を包含する。
【００２５】
本発明は、患者の癌の発達を阻害するための方法をさらに提供し、この方法は、以下の工程を包含する：（ａ）患者から単離されたＣＤ４＋Ｔ細胞および／またはＣＤ８＋Ｔ細胞を以下の１つ以上と共にインキュベートする工程：（ｉ）本明細書で開示されたポリペプチドの少なくとも免疫原性部分を含むポリペプチド；（ｉｉ）このようなポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；および（ｉｉｉ）このようなポリペプチドを発現する抗原提示細胞；ならびに（ｂ）この増殖したＴ細胞の有効量を患者に投与し、それにより患者の癌の発達を阻害する工程。増殖した細胞は、患者に投与される前にクローン化され得るが、されなくてもよい。
【００２６】
さらなる局面において、本発明は、患者における癌（好ましくは卵巣癌）の存在または非存在を決定するための方法を提供する。この方法は、以下の工程を包含する：（ａ）患者から得た生物学的サンプルと、上に列挙したポリペプチドに結合する結合因子とを接触させる工程；（ｂ）サンプル中の、この結合因子に結合するポリペプチドの量を検出する工程；および（ｃ）このポリペプチドの量と予め決定したカットオフ値とを比較し、それによって患者における癌の存在または非存在を決定する工程。好ましい実施形態において、この結合因子は、抗体であり、より好ましくはモノクロナール抗体である。
【００２７】
他の局面において、本発明はまた、患者における癌の進行をモニタリングする方法を提供する。このような方法は、以下の工程を包含する：（ａ）最初の時点で患者から得た生物学的サンプルと、上に列挙したポリペプチドプチドに結合する結合因子とを接触させる工程；（ｂ）サンプル中の、この結合因子に結合するポリペプチドの量を検出する工程；（ｃ）次の時点で患者から得た生物学的サンプルを使用し、工程（ａ）および工程（ｂ）を反復する工程；ならびに（ｄ）工程（ｃ）において検出されたポリペプチドの量と、工程（ｂ）において検出された量とを比較し、それらによって、患者における癌の進行をモニタリングする工程。
【００２８】
本発明は、他の局面において、患者の癌の存在または非存在を決定するための方法をさらに提供する。この方法は以下の工程を包含する：（ａ）患者から得られた生物学的サンプルと、本発明のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドにハイブリダイズするオリゴヌクレオチドとを接触させる工程；（ｂ）このサンプル中の、このオリゴヌクレオチドとハイブリダイズするポリヌクレオチド（好ましくはｍＲＮＡ）のレベルを検出する工程；ならびに（ｃ）そのオリゴヌクレオチドとハイブリダイズするポリヌクレオチドのレベルと予め決定したカットオフ値とを比較して、それによって患者の癌の存在または非存在を検出する工程。特定の実施形態において、ｍＲＮＡの量は、例えば、上記に列挙されるようなポリペプチドをコードするポリヌクレオチドまたはこのようなポリヌクレオチドの相補体とハイブリダイズする、少なくとも１つのオリゴヌクレオチドプライマーを使用するポリメラーゼ連鎖反応によって検出される。他の実施形態において、ｍＲＮＡの量は、上記に列挙されるようなポリペプチドをコードするポリヌクレオチドまたはそのようなポリヌクレオチドの相補体とハイブリダイズするオリゴヌクレオチドプローブを使用する、ハイブリダイゼーション技術を使用して検出される。
【００２９】
関連する局面において、患者の癌の進行をモニタリングする方法が提供される。この方法は以下の工程を包含する：（ａ）患者から得られた生物学的サンプルと、本発明のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドにハイブリダイズするオリゴヌクレオチドとを接触させる工程；（ｂ）このサンプルにおいて、このオリゴヌクレオチドとハイブリダイズするポリヌクレオチドの量を検出する工程；（ｃ）その後の時点で、患者から得られた生物学的サンプルを用いて、工程（ａ）および工程（ｂ）を反復する工程；ならびに（ｄ）工程（ｃ）において検出されたポリヌクレオチドの量を、工程（ｂ）において検出された量と比較し、それによって、患者における癌の進行をモニタリングする工程。
【００３０】
さらなる局面において、本発明は、上記のようなポリペプチドに結合する抗体（例えば、モノクロナール抗体）ならびにこのような抗体を含む診断キットを提供する。上記のような１つ以上のオリゴヌレクオチドプローブまたはオリゴヌレクオチドプライマーを含む診断キットもまた、提供される。
【００３１】
本発明のこれらの局面および他の局面は、以下の詳細な説明を参照することによって明らかとなる。本明細書中に開示される全ての参考文献は、各々が個々に援用されるがごとく、参考としてその全体が本明細書によって援用される。
【００３２】
（配列識別子の簡単な説明）
配列番号１、２、５、９、１０、１３、１６、１９、２３、２７、２８、３２、３３、３５、３８、４１〜５０、５２、５３、５６、５７、６３、６５、６９〜７２、７５、７８、８０〜８２、８４、８６、８９〜９３、９５、９７〜１００、１０３、１０７、１１１、１１４、１１７、１２０、１２１、１２５、１２８、１３２〜１３４、１３６、１３７、１４０、１４３〜１４６、１４８〜１５１、１５６、１５８、１６０〜１６２、１６６〜１６８、１７１、１７４〜１８３、１８５、および１９３〜１９９は、以下の表ＩＩＩ〜ＶＩＩに記載されている。
【００３３】
配列番号２００は、配列番号１８２に示されるポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチドのアミノ酸配列である。
【００３４】
配列番号２０１は、配列番号１８２に示されるポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチドのアミノ酸配列である。
【００３５】
配列番号２０２は、配列番号１８２に示されるポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチドのアミノ酸配列である。
【００３６】
配列番号２０３は、配列番号１９７に対して決定され伸長されたｃＤＮＡ配列である。
【００３７】
配列番号２０４は、配列番号１９８に対して決定され伸長されたｃＤＮＡ配列である。
【００３８】
配列番号２０５は、配列番号１９９に対して決定され伸長されたｃＤＮＡ配列である。
【００３９】
配列番号２０６は、Ｎ末端Ｈｉｓタグに融合されたＯ５６８Ｓのコード領域に対して決定されたｃＤＮＡ配列である。
【００４０】
配列番号２０７は、配列番号２０６に示されるポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチドのアミノ酸配列である。
【００４１】
配列番号２０８は、Ｈｉｇｈ  Ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ  Ｇｅｎｏｍｉｃｓ  ＤａｔａｂａｓｅからダウンロードされたＧＰＲ３９のコード領域に対して決定されたｃＤＮＡ配列である。
【００４２】
配列番号２０９は、配列番号２０８に示されるｃＤＮＡ配列によりコードされるアミノ酸配列である。
【００４３】
配列番号２１０は、電子減算を用いて発見された卵巣特異的ＥＳＴクローンであるＯ１０３４Ｃのヌクレオチド配列である。
【００４４】
配列番号２１１は、Ｏ５９１Ｓの全長ヌクレオチド配列である。
【００４５】
配列番号２１２は、Ｏ５９１Ｓの伸長を可能にするＯ１０３４Ｃ／Ｏ５９１Ｓとの配列相同性を示す配列ＢＦ３４５１４１である。
【００４６】
配列番号２１３は、Ｏ５９１Ｓの伸長を可能にするＯ１０３４Ｃ／Ｏ５９１Ｓとの配列相同性を示す配列ＢＥ３３６６０７である。
【００４７】
配列番号２１４は、１８９７塩基対を含むＯ１０３４Ｃ／Ｏ５９１Ｓのコンセンサスヌクレオチド配列である。
【００４８】
配列番号２１５は、配列番号２１４中で同定されたオープンリーディングフレーム（ヌクレオチド２６０〜６８２）の推定翻訳物である。
【００４９】
（発明の詳細な説明）
本発明は、該して、組成物、ならびに癌（特に、卵巣癌）の治療および診断におけるその使用に関する。以下でさらに記載するように、本発明の例示的な組成物は、以下を含むがこれらに限定されない：ポリペプチド（特に免疫原性ポリペプチド）、このようなポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、抗体および他の結合因子、抗原提示細胞（ＡＰＣ）ならびに免疫系細胞（例えば、Ｔ細胞）。
【００５０】
本発明の実施は、特にそうでないことが示されない限り、当業者の範囲であるウイルス学、免疫学、微生物学、分子生物学、および組換えＤＮＡ技術の従来の方法（これらの多くは、例示目的で以下に記載される）を使用する。このような技術は、文献によって十分に説明されている。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（第２版、１９８９）；Ｍａｎｉａｔｉｓら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（１９８２）；ＤＮＡ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ、第Ｉ巻および第ＩＩ巻（Ｄ．Ｇｌｏｖｅｒ編）；Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（Ｎ．Ｇａｉｔ編、１９８４）；Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ（Ｂ．ＨａｍｅｓおよびＳ．Ｈｉｇｇｉｎｓ編、１９８５）；Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ（Ｂ．ＨａｍｅｓおよびＳ．Ｈｉｇｇｉｎｓ編、１９８４）；Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  （Ｒ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙ編、１９８６）；Ｐｅｒｂａｌ、Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ（１９８４）を参照のこと。
【００５１】
上記または下記にかかわらず、本明細書中で引用される、全ての刊行物、特許および特許出願は、本明細書によってその全体が参考として援用される。
【００５２】
本明細書中および添付の特許請求の範囲で使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、文脈によって明らかにそうでないことが示されない限り、複数の参照を含む。
【００５３】
（ポリペプチド組成物）
本明細書中で使用される場合、用語「ポリペプチド」は、その従来の意味において（すなわちアミノ酸の配列として）使用される。これらのポリペプチドは、特定の長さの生成物に限定されず；従って、ペプチド、オリゴペプチド、およびタンパク質は、このポリペプチドの定義に含まれ、そしてこのような用語は、特にそうではないことが示されない限り、本明細書中で交換可能に使用され得る。この用語はまた、このポリペプチドの発現後修飾（例えば、グリコシル化、アセチル化、リン酸化など）、ならびに当該分野で公知の他の修飾（天然に存在する修飾および天然に存在しない修飾の両方）のことを称さないかまたはこれらを排除する。ポリペプチドは、タンパク質全体でもあり、またはその部分配列でもあり得る。本発明の状況において特定の目的のポリペプチドは、エピトープ（すなわち、ポリペプチドの免疫原特性の実質的な原因となり、かつ免疫応答を誘起し得る抗原決定基）を含むアミノ酸部分配列である。
【００５４】
本発明の特に例示的なポリペプチドとしては、配列番号１、２、５、９、１０、１３、１６、１９、２３、２７、２８、３２、３３、３５、３８、４１〜５０、５２、５３、５６、５７、６３、６５、６９〜７２、７５、７８、８０〜８２、８４、８６、８９〜９３、９５、９７〜１００、１０３、１０７、１１１、１１４、１１７、１２０、１２１、１２５、１２８、１３２〜１３４、１３６、１３７、１４０、１４３〜１４６、１４８〜１５１、１５６、１５８、１６０〜１６２、１６６〜１６８、１７１、１７４〜１８３、１８５、１９３〜１９９、２０３〜２０６、２０８、および２１０〜２１４のいずれか１つに示されるポリヌクレオチド配列、あるいは中程度にストリンジェントな条件下または高度にストリンジェントな条件下で、上記のポリヌクレオチド配列にハイブリダイズする配列によってコードされるポリペプチドを含む。本発明の特定の他の例示的なポリペプチドは、配列番号２００〜２０２、２０７、２０９、および２１５のいずれか１つに示されるアミノ酸配列を含む。
【００５５】
本発明のポリペプチドは、これらの同定が少なくとも部分的に、卵巣腫瘍サンプルにおけるこれらの発現の増大したレベルに基づくことを示すので、本明細書中で時々、卵巣腫瘍タンパク質または卵巣腫瘍ポリペプチドとして言及される。従って、「卵巣腫瘍ポリペプチド」または「卵巣腫瘍タンパク質」は、一般に本発明のポリペプチド配列、またはこのようなポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列をいい、これらは、本明細書中で提供される代表的なアッセイを使用して決定される場合、正常組織での発現レベルより、少なくとも２倍大きいレベル、好ましくは５倍大きいレベルで、卵巣腫瘍サンプルに実質的に比例して（例えば、試験された卵巣腫瘍サンプルの、好ましくは約２０％より多く、より好ましくは約３０％より多く、そして最も好ましくは約５０％以上で）発現される。本発明の卵巣腫瘍ポリペプチド配列は、その腫瘍細胞での増大した発現レベルに基づき、以下にさらに記載されるように、診断マーカーならびに治療標的の両方として特定の有用性を有する。
【００５６】
特定の好ましい実施形態において、本発明のポリペプチドは免疫原性である。すなわち、これらは、卵巣癌に患った患者からの抗血清および／またはＴ細胞を用いた免疫アッセイ（例えば、ＥＬＩＳＡまたはＴ細胞刺激アッセイ）で検出可能に反応する。免疫原性活性についてのスクリーニングは、当業者に周知の技術を使用して実施され得る。例えば、このようなスクリーニングは、例えば、ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，１９８８に記載されるような方法を使用して実施され得る。１つの例示的な例において、ポリペプチドは固体支持体に固定され得、そして患者の血清と接触され得、血清中の抗体の、固定されたポリペプチドへの結合を可能にする。次いで、非結合血清は除去され、そして結合した抗体は、例えば、１２５Ｉ標識プロテインＡを用いて検出され得る。
【００５７】
当業者に認識されるように、本明細書中で開示されるポリペプチドの免疫原性部分もまた、本発明により包含される。本明細書中で用いられる場合、「免疫原性部分」は、それ自体がポリペプチドを認識するＢ細胞および／またはＴ細胞表面抗原レセプターと免疫学的に反応性である（すなわち、特異的に結合する）本発明の免疫原性ポリペプチドのフラグメントである。免疫原性部分は、一般に、周知の技術（例えば、Ｐａｕｌ、Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，第３版、２４３−２４７（Ｒａｖｅｎ  Ｐｒｅｓｓ，１９９３）およびこの文献で引用される参考文献に要約されている技術）を用いて同定され得る。このような技術は、抗原特異的抗体、抗血清、および／またはＴ細胞株もしくはクローンと反応する能力について、ポリペプチドをスクリーニングすることを包含する。本明細書中で用いられる場合、抗血清および抗体は、これらが、抗原に特異的に結合する（すなわち、これらが、ＥＬＩＳＡまたは他の免疫アッセイにおいてこのタンパク質と反応し、そして無関係のタンパク質とは検出可能に反応しない）場合に、「抗原特異的」である。このような抗血清および抗体は、本明細書中に記載されるように、そして周知技術を用いて、調製され得る。
【００５８】
１つの好ましい実施形態において、本発明のポリペプチドの免疫原性部分は、（例えば、ＥＬＩＳＡおよび／またはＴ細胞反応性アッセイにおいて）全長ポリペプチドの反応性よりも実質的に低くないレベルで、抗血清および／またはＴ細胞と反応する部分である。好ましくは、免疫原性部分の免疫原性活性のレベルは、全長ポリペプチドの免疫原性の少なくとも約５０％、好ましくは少なくとも約７０％、そしてもっとも好ましくは９０％以上より大きい。いくつかの例において、対応する全長ポリペプチドよりも大きい免疫原性活性のレベルを有する（例えば、約１００％または１５０％もしくはそれより大きい免疫原性活性を有する）好ましい免疫原性部分が同定される。
【００５９】
特定の他の実施形態において、例示的な免疫原性部分は、Ｎ末端リーダー配列および／または膜貫通ドメインが欠失されたペプチドを含み得る。他の例示的な免疫原性部分は、成熟タンパク質と比較して小さなＮ末端および／またはＣ末端の欠失（例えば、１〜３０アミノ酸、好ましくは５〜１５アミノ酸）を含む。
【００６０】
別の実施形態において、本発明のポリペプチド組成物また、Ｔ細胞および／または本発明のポリペプチド（特に、本明細書中に開示されたアミノ酸配列を有するポリペプチド）またはそれらの免疫原性フラグメントもしくは改変体に対して生成された抗体と免疫学的に反応性である１つ以上のポリペプチドを含み得る。
【００６１】
本発明の別の実施形態において、本明細書中に記載される１つ以上のポリペプチドと免疫学的に反応性であるＴ細胞および／または抗体を惹起し得る１つ以上のポリペプチド、または本明細書中で開示されるポリヌクレオチド配列に含まれる連続的な核酸配列によりコードされる１つ以上のポリペプチド、またはそれらの免疫原性フラグメントもしくは改変体、あるいは中程度から高度のストリンジェンシーの条件下で１つ以上のこれらの配列にハイブリダイズする１つ以上の核酸配列によりコードされる１つ以上のポリペプチドを含むポリペプチドが提供される。
【００６２】
別の局面において、本発明は、本明細書中に示されるポリペプチド組成物の少なくとも約５、１０、１５、２０、２５、５０、または１００連続するアミノ酸またはそれ以上（全ての中間の長さを含む）を含むポリペプチドフラグメント（例えば、配列番号２００〜２０２、２０７、２０９、および２１５に示されるポリペプチドフラグメント、または配列番号１、２、５、９、１０、１３、１６、１９、２３、２７、２８、３２、３３、３５、３８、４１〜５０、５２、５３、５６、５７、６３、６５、６９〜７２、７５、７８、８０〜８２、８４、８６、８９〜９３、９５、９７〜１００、１０３、１０７、１１１、１１４、１１７、１２０、１２１、１２５、１２８、１３２〜１３４、１３６、１３７、１４０、１４３〜１４６、１４８〜１５１、１５６、１５８、１６０〜１６２、１６６〜１６８、１７１、１７４〜１８３、１８５、１９３〜１９９、２０３〜２０６、２０８、および２１０〜２１４のいずれか１つに示されるポリヌクレオチド配列によりコードされるポリペプチドフラグメント）を提供する。
【００６３】
別の局面において、本発明は、本明細書中に記載されるポリペプチド組成物の改変体を提供する。一般的に本発明により包含されるポリペプチド改変体は、代表的に、本明細書中に示されるポリペプチド配列に対して、その長さに沿って、少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％またはそれ以上の同一性（以下に記載するように決定された）を示す。
【００６４】
１つの好ましい実施形態において、本発明により提供されるポリペプチドフラグメントおよび改変体は、本明細書中に詳細に示される全長ポリペプチドと反応する抗体および／またはＴ細胞と免疫学的に反応性である。
【００６５】
別の好ましい実施形態において、本発明により提供されるポリペプチドフラグメントおよび改変体は、本明細書中に詳細に示される全長ポリペプチド配列により示される免疫原性活性のレベルの少なくとも約５０％、好ましくは少なくとも約７０％、そして最も好ましくは少なくとも約９０％またはそれ以上の免疫原性活性のレベルを示す。
【００６６】
ポリペプチド「改変体」は、本明細書中でこの用語が使用される場合、代表的に、本明細書中で詳細に開示されるポリペプチドと１つ以上の置換、欠失、付加、および／または挿入において異なるポリペプチドである。このような改変体は、天然に生じ得るか、または例えば、本発明の１つ以上の上記のポリペプチド配列を修飾し、そして本明細書中に記載されるようにして、それらの免疫学的活性を評価することにより、ならびに／または当該分野で周知の任意の多くの技術を用いて、合成的に作製され得る。
【００６７】
例えば、本発明のポリペプチドの特定の例示的な改変体として、１つ以上の部分（例えば、Ｎ末端リーダー配列または膜貫通ドメイン）が除去された改変体が挙げられる。他の例示的な改変体として、小さな部分（例えば、１〜３０アミノ酸、好ましくは５〜１５アミノ酸）が成熟タンパク質のＮ末端および／またはＣ末端から除去された改変体が挙げられる。
【００６８】
多くの例において、改変体は、保存的置換を含む。「保存的置換」とは、アミノ酸が類似の特性を有する別のアミノ酸で置換され、その結果、ペプチド化学の当業者がポリペプチドの二次構造および疎水性親水性性質が実質的に変化していないことを期待するような置換である。上記のように、改変は、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドの構造においてなされ得、そしてなお所望の特性（例えば、免疫原性特性）を有する改変体または誘導体ポリペプチドをコードする機能的分子を獲得し得る。本発明のポリペプチドの等価物を（または本発明のポリペプチドの改善された免疫原性の改変体もしくは部分さえも）作製するようポリペプチドのアミノ酸配列が変更されることが所望される場合、当業者は、代表的に、表１に従ってコードＤＮＡ配列の１つ以上のコドンを変更する。
【００６９】
例えば、特定のアミノ酸は、例えば、抗体の抗原結合領域または基質分子上のの結合部位のような構造と相互作用する結合能を感知し得る程損失させることなく、タンパク質構造中の他のアミノ酸と、置換され得る。タンパク質の相互作用する能力および性質がタンパク質の生物学的な機能的活性を規定するので、特定のアミノ酸配列置換は、タンパク質配列、および当然ながら、その根底にあるＤＮＡコード配列においてなされ得、そしてそれにも関わらず、同様の特性を有するタンパク質が入手される。従って、種々の変化が、ペプチドの生物学的有用性または活性の感知できる程度の損失なしで、開示された組成物のペプチド配列またはそのペプチドをコードする対応するＤＮＡ配列においてなされ得ることが意図される。
【００７０】
【数１】
2004537966.tif 000001
このような変化を作製するために、アミノ酸の疎水性親水性指標が考慮され得る。タンパク質に相互作用的な生物学的機能を付与する際の疎水性親水性アミノ酸指標の重要性は、一般的に当該分野において理解されている（ＫｙｔｅおよびＤｏｏｌｉｔｔｌｅ、１９８２、本明細書中に参考として援用される）。アミノ酸の相対的な疎水性親水性的性質は、得られるタンパク質の二次構造に寄与し、これは次には、そのタンパク質の他の分子（例えば、酵素、基質、レセプター、ＤＮＡ、抗体、抗原など）との相互作用を規定することが受け入れられている。各アミノ酸は、その疎水性および電荷特性に基づいて疎水性親水性指標を割り当てられている（ＫｙｔｅおよびＤｏｏｌｉｔｔｌｅ、１９８２）。これらの値は以下である：イソロイシン（＋４．５）；バリン（＋４．２）；ロイシン（＋３．８）；フェニルアラニン（＋２．８）；システイン／シスチン（＋２．５）；メチオニン（＋１．９）；アラニン（＋１．８）；グリシン（−０．４）；スレオニン（−０．７）；セリン（−０．８）；トリプトファン（−０．９）；チロシン（−１．３）；プロリン（−１．６）；ヒスチジン（−３．２）；グルタミン酸（−３．５）；グルタミン（−３．５）；アスパラギン酸（−３．５）；アスパラギン（−３．５）；リジン（−３．９）；およびアルギニン（−４．５）。
【００７１】
特定のアミノ酸が同様の疎水性親水性指標またはスコアを有する他のアミノ酸によって置換され得、そしてなお同様の生物学的活性を有するタンパク質を生じる（すなわち、生物学的に機能的に等価なタンパク質をなお入手する）ことが、当該分野において公知である。このような変化を作製する際に、その疎水性親水性指標が±２以内であるアミノ酸の置換が好ましく、その疎水性親水性指標が±１以内であるアミノ酸の置換が特に好ましく、そしてその疎水性親水性指標が±０．５以内であるアミノ酸の置換がなおより特に好ましい。同様なアミノ酸の置換が、親水性に基づいて有効になされ得ることもまた、当該分野で理解されている。米国特許第４，５５４，１０１号（その全体が本明細書中に参考として具体的に援用される）は、タンパク質の生物学的特性と相関するその隣接するアミノ酸の親水性によって支配される、そのタンパク質の最大局所的平均親水性に言及する。
【００７２】
米国特許第４，５５４，１０１号に詳述されるように、以下の親水性値がアミノ酸残基に割り当てられた：アルギニン（＋３．０）；リジン（＋３．０）；アスパラギン酸（＋３．０±１）；グルタミン酸（＋３．０±１）；セリン（＋０．３）；アスパラギン（＋０．２）；グルタミン（＋０．２）；グリシン（０）；スレオニン（−０．４）；プロリン（−０．５±１）；アラニン（−０．５）；ヒスチジン（−０．５）；システイン（−１．０）；メチオニン（−１．３）；バリン（−１．５）；ロイシン（−１．８）；イソロイシン（−１．８）；チロシン（−２．３）；フェニルアラニン（−２．５）；トリプトファン（−３．４）。アミノ酸は、同様の親水性の値を有する別のアミノ酸に置換され得、そしてなお、生物学的に等価なタンパク質（特に、免疫学的に等価なタンパク質）を得ることが理解される。このような変化において、その親水性値が±２以内であるアミノ酸の置換が好ましく、その親水性値が±１以内であるアミノ酸の置換が特に好ましく、そしてその親水性値が±０．５以内であるアミノ酸の置換がなおより特に好ましい。
【００７３】
上記に概説したように、従って、アミノ酸置換は、一般的にアミノ酸側鎖置換基の相対的な類似性（例えば、その疎水性、親水性、電荷、サイズ、など）に基づく。前述の種々の特徴を考慮した典型的な置換は当業者に周知であり、そして以下を含む：アルギニンおよびリジン；グルタミン酸およびアスパラギン酸；セリンおよびスレオニン；グルタミンおよびアスパラギン；ならびにバリン、ロイシン、およびイソロイシン。
【００７４】
さらに、任意のポリヌクレオチドが、インビボでの安定性を増加させるためにさらに改変され得る。可能な改変には以下が挙げられるがこれらに限定されない：５’末端および／または３’末端での隣接配列の付加；バックボーンにおける、ホスホジエステル（ｐｈｏｓｐｈｏｄｉｅｓｔｅｒａｓｅ）結合ではなくホスホロチオエートまたは２’Ｏ−メチルの使用；ならびに／あるいは従来とは異なる塩基（例えば、イノシン、キュェオシン、およびワイブトシン、ならびにアデニン、シチジン、グアニン、チミン、およびウリジンのアセチル、メチル、チオ、および他の修飾形態）の含有。
【００７５】
アミノ酸置換は、さらに、残基の極性、電荷、溶解性、疎水性、親水性および／または両親媒性性質の類似性に基づいて作製され得る。例えば、負に荷電したアミノ酸としては、アスパラギン酸およびグルタミン酸；正に荷電したアミノ酸としては、リジンおよびアルギニン；および類似の親水性値を有する非荷電の極性頭部を有するアミノ酸としては、ロイシン、イソロイシンおよびバリン；グリシンおよびアラニン；アスパラギンおよびグルタミン；ならびにセリン、トレオニン、フェニルアラニンおよびチロシンが挙げられる。保存的変化を示し得るアミノ酸の他のグループとしては、（１）ａｌａ、ｐｒｏ、ｇｌｙ、ｇｌｕ、ａｓｐ、ｇｌｎ、ａｓｎ、ｓｅｒ、ｔｈｒ；（２）ｃｙｓ、ｓｅｒ、ｔｙｒ、ｔｈｒ；（３）ｖａｌ、ｉｌｅ、ｌｅｕ、ｍｅｔ、ａｌａ、ｐｈｅ；（４）ｌｙｓ、ａｒｇ、ｈｉｓ；および（５）ｐｈｅ、ｔｙｒ、ｔｒｐ、ｈｉｓが挙げられる。改変体はまた、またはあるいは、非保存的変化を含み得る。好ましい実施形態において、改変体ポリペプチドは、５個以下のアミノ酸の置換、欠失または付加によって、ネイティブの配列とは異なる。改変体はまた（またはあるいは）、例えば、ポリペプチドの免疫原性、二次構造および疎水性親水性性質に最小限の影響しか有さないアミノ酸の欠失または付加によって、改変され得る。
【００７６】
上記のように、ポリペプチドは、タンパク質のＮ末端にシグナル（または、リーダー）配列を含み得、これは、翻訳と同時に、または翻訳後に、そのタンパク質の移動を指示する。このポリペプチドはまた、このポリペプチド（例えば、ポリＨｉｓ）の合成、精製または同定を容易にするために、またはこのポリペプチドの固体支持体への結合を増強するために、リンカー配列または他の配列に結合体化され得る。例えば、ポリペプチドは、免疫グロブリンＦｃ領域に結合体化され得る。
【００７７】
ポリペプチド配列を比較する場合、２つの配列におけるアミノ酸の配列が、以下に記載されるように最大一致について整列される場合に同じときに、その２つの配列が「同一」であるといわれる。２つの配列の間の比較は、代表的には、配列類似性の局所的領域を同定および比較するために、比較ウインドウ（ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ  ｗｉｎｄｏｗ）にわたって配列を比較することによって行われる。本明細書中で使用される場合、「比較ウインドウ」は、少なくとも約２０、通常は３０〜約７５、４０〜約５０の連続した位置のセグメントをいい、ここで、２つの配列が最適に整列された後に、配列が、連続した位置の同じ数の参照配列と比較され得る。
【００７８】
比較のための配列の最適な整列は、バイオインフォマティクスソフトウエアのＬａｓｅｒｇｅｎｅパッケージリフトにおけるＭｅｇａｌｉｇｎプログラム（ＤＮＡＳＴＡＲ，Ｉｎｃ．，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）を使用して、デフォルトパラメーターを用いて行われ得る。このプログラムは、以下の参考文献に記載のいくつかの整列スキームを統合する：Ｄａｙｈｏｆｆ，Ｍ．Ｏ．（編）Ａｔｌａｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ  ＤＣ  Ｖｏｌ．５，補遺３，３４５−３５８頁におけるＤａｙｈｏｆｆ，Ｍ．Ｏ．（１９７８）Ａ  ｍｏｄｅｌ  ｏｆ  ｅｖｏｌｕｔｉｏｎａｒｙ  ｃｈａｎｇｅ  ｉｎ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ−Ｍａｔｒｉｃｅｓ  ｆｏｒ  ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ  ｄｉｓｔａｎｔ  ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓ．；Ｈｅｉｎ  Ｊ．（１９９０）Ｕｎｉｆｉｅｄ  Ａｐｐｒｏａｃｈ  ｔｏ  Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ  ａｎｄ  Ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｓ  ６２６−６４５頁  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  ｖｏｌ．１８３，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ；Ｈｉｇｇｉｎｓ，Ｄ．Ｇ．およびＳｈａｒｐ，Ｐ．Ｍ．（１９８９）ＣＡＢＩＯＳ  ５：１５１−１５３；Ｍｙｅｒｓ，Ｅ．Ｗ．およびＭｕｌｌｅｒ  Ｗ．（１９８８）ＣＡＢＩＯＳ  ４：１１−１７；Ｒｏｂｉｎｓｏｎ，Ｅ．Ｄ．（１９７１）Ｃｏｍｂ．Ｔｈｅｏｒ  １１：１０５；Ｓａｎｔｏｕ，Ｎ．Ｎｅｓ，Ｍ．（１９８７）Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．Ｅｖｏｌ．４：４０６−４２５；Ｓｎｅａｔｈ，Ｐ．Ｈ．Ａ．およびＳｏｋａｌ，Ｒ．Ｒ．（１９７３）Ｎｕｍｅｒｉｃａｌ  Ｔａｘｏｎｏｍｙ−ｔｈｅ  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｎｕｍｅｒｉｃａｌ  Ｔａｘｏｎｏｍｙ，Ｆｒｅｅｍａｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ＣＡ；Ｗｉｌｂｕｒ，Ｗ．Ｊ．およびＬｉｐｍａｎ，Ｄ．Ｊ．（１９８３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．，Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８０：７２６−７３０。
【００７９】
あるいは、比較のための配列の最適な整列は、ＳｍｉｔｈおよびＷａｔｅｒｍａｎ（１９８１）Ａｄｄ．ＡＰＬ．Ｍａｔｈ２：４８２の局所的同一性アルゴリズムによって、ＮｅｅｄｌｅｍａｎおよびＷｕｎｓｃｈ（１９７０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３の同一性整列アルゴリズムによって、ＰｅａｒｓｏｎおよびＬｉｐｍａｎ（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８５：２４４４の類似性検索方法によって、これらのアルゴリズムのコンピュータ化した実行（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ
Ｐａｃｋａｇｅ，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐ（ＧＣＧ），５７５  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｄｒ．，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩにおけるＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＢＬＡＳＴ、ＦＡＳＴＡ、およびＴＦＡＳＴＡ）によって、または目視検査によって行われ得る。
【００８０】
配列同一性および配列類似性の割合を決定するために適切なアルゴリズムの１つの好ましい例は、ＢＬＡＳＴおよびＢＬＡＳＴ２．０アルゴリズムであり、これはそれぞれＡｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．（１９７７）Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２５：３３８９−３４０２およびＡｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．（１９９０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３−４１０に記載される。ＢＬＡＳＴおよびＢＬＡＳＴ２．０は、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドについての配列同一性の割合を決定するために、例えば、本明細書中に記載のパラメータを使用して使用され得る。ＢＬＡＳＴ分析を行うためのソフトウエアは、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ
Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎを通して公に利用可能である。アミノ酸配列について、スコアリング行列は、累積スコアを算出するために使用され得る。各方向におけるワードヒットの伸長は、以下の場合に停止する：累積整列スコアが、その最大到達値から量Ｘだけ低下した場合；累積スコアが、１以上の負のスコアの残基整列の累積に起因してゼロ以下になった場合；またはいずれかの配列の末端に到達した場合。このＢＬＡＳＴアルゴリズムパラメーターＷ、ＴおよびＸは、整列の感度および速度を決定する。
【００８１】
１つの好ましいアプローチにおいて、「配列同一性のパーセンテージ」は、少なくとも２０位置の比較ウインドウにわたる２つの最適に整列した配列を比較することによって決定され、ここで比較ウインドウ中のポリペプチド配列の部分は、参照配列（これは、付加も欠失も含まない）と比較して、２つの配列の最適な整列について２０パーセント以下、通常は５〜１５パーセント、または１０〜１２パーセントの付加または欠失（すなわち、ギャップ）を含み得る。このパーセンテージは、両方の配列で同一のアミノ酸残基が生じる位置の数を決定して一致する位置の数を得、この一致する位置の数を参照配列における位置の総数（すなわち、ウインドウサイズ）で除算し、そしてこの結果に１００を掛けて配列同一性のパーセンテージを得ることによって算出される。
【００８２】
他の例示的な実施形態において、ポリペプチドは、本明細書中に記載の複数のポリペプチドを含むか、または本明細書に記載の少なくとも１つのポリペプチドおよび関連しない配列（例えば、公知の腫瘍タンパク質）を含む融合ポリペプチドであり得る。例えば、融合パートナーは、Ｔヘルパーエピトープ、好ましくはヒトによって認識されるＴヘルパーエピトープを提供する際に補助し得るか（免疫学的融合パートナー）、またはネイティブの組換えタンパク質より高い収量でタンパク質を発現する際に補助し得る（発現エンハンサー）。特定の好ましい融合パートナーは、免疫学的融合パートナーおよび発現増強融合パートナーの両方である。他の融合パートナーは、ポリペプチドの溶解性を増加するように、またはポリペプチドが所望の細胞内画分に標的化されることを可能にするように選択され得る。なおさらなる融合パートナーには、親和性タグ（これは、ポリペプチドの精製を容易にする）が挙げられる。
【００８３】
融合ポリペプチドは、一般に、標準的な技術（化学的結合体化を含む）を使用して調製され得る。好ましくは、融合ポリペプチドは、発現系において、組換えポリペプチドとして発現され、非融合ポリペプチドと比較して、増加したレベルの産生を可能にする。手短に言うと、このポリペプチド成分をコードするＤＮＡ配列を、別々にアセンブルし得、そして適切な発現ベクターに連結し得る。１つのポリペプチド成分をコードするＤＮＡ配列の３’末端は、ペプチドリンカーを用いてまたは用いずに、第２のポリペプチド成分をコードするＤＮＡ配列の５’末端に、これらの配列のリーディングフレームが同じ相にあるように連結される。このことが、両方の成分ポリペプチドの生物学的活性を保持する単一の融合ポリペプチドへの翻訳を可能にする。
【００８４】
ペプチドリンカー配列は、各ポリペプチドがその二次構造および三次構造へと折り畳まれるのを保証するために、十分な距離で第一および第二のポリペプチド構成要素を隔てるために用いられ得る。このようなペプチドリンカー配列は、当該分野で周知の標準的な技術を用いて融合タンパク質中に組み込まれる。適切なペプチドリンカー配列は、以下の因子に基づいて選択され得る：（１）フレキシブルな伸長したコンホメーションを採る能力；（２）第一および第二のポリペプチド上の機能的なエピトープと相互作用し得る二次構造を採ることができないこと；および（３）ポリペプチドの機能的なエピトープと反応し得る疎水性または荷電した残基の無いこと。好ましいペプチドリンカー配列は、Ｇｌｙ、ＡｓｎおよびＳｅｒ残基を含む。ＴｈｒおよびＡｌａのような中性に近い他のアミノ酸もまた、リンカー配列に用いられ得る。リンカーとして有用に用いられ得るアミノ酸配列は、Ｍａｒａｔｅａら、Ｇｅｎｅ  ４０：３９−４６、１９８５；Ｍｕｒｐｈｙら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８３：８２５８−８２６２、１９８６；米国特許第４，９３５，２３３号および米国特許第４，７５１，１８０号に開示されるアミノ酸配列を含む。リンカー配列は、一般的に１から約５０アミノ酸長であり得る。リンカー配列は、第一および第二のポリペプチドが、機能的ドメインを分離するため、および立体的な干渉を防ぐために用いられ得る非必須Ｎ末端アミノ酸領域を有する場合、必要とされない。
【００８５】
連結されたＤＮＡ配列は、適切な転写または翻訳調節エレメントに作動可能に連結される。ＤＮＡの発現を担う調節エレメントは、第一のポリペプチドをコードするＤＮＡ配列の５’側にのみ位置する。同様に、翻訳および転写終結シグナルを終了するために必要とされる終止コドンは、第二のポリペプチドをコードするＤＮＡ配列の３’側にのみ存在する。
【００８６】
この融合ポリペプチドは、リコール（ｒｅｃａｌｌ）応答を惹起し得る免疫原性タンパク質のような関連しない免疫原性タンパク質と共に、本明細書中に記載されるようなポリペプチドを含み得る。このようなタンパク質の例としては、破傷風タンパク質、結核タンパク質および肝炎タンパク質が挙げられる（例えば、Ｓｔｏｕｔｅら、Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．、３３６：８６−９１（１９９７）を参照のこと）。
【００８７】
１つの好ましい実施形態において、免疫学的融合パートナーは、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ由来のＲａ１２フラグメントのようにＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｓｐ．由来である。Ｒａ１２組成物ならびに異種ポリヌクレオチド／ポリペプチド配列の発現および／または免疫原性を増強する際に、Ｒａ１２を使用するための方法は、米国特許出願６０／１５８，５８５（この開示は、本明細書中でその全体が参考として援用される）に記載されている。簡単には、Ｒａ１２は、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ  ＭＴＢ３２Ａ核酸のサブ配列であるポリヌクレオチド領域をいう。ＭＴＢ３２Ａは、Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓの毒性菌株および無毒性菌株の遺伝子によってコードされる分子量３２ＫＤのセリンプロテアーゼである。ＭＴＢ３２Ａのヌクレオチド配列およびアミノ酸配列が、記載されている（例えば、米国特許出願６０／１５８，５８５；また、Ｓｋｅｉｋｙら、Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｉｍｍｕｎ．（１９９９）６７：３９９８〜４００７も参照のこと。これらは、本明細書中で参考として援用される）。ＭＴＢ３２Ａコード配列のＣ末端フラグメントは高いレベルで発現し、精製プロセス全体にわたって可溶性ポリペプチドとして残存する。さらに、Ｒａ１２は、これが融合される、異種免疫原性ポリペプチドの免疫原性を増強し得る。１つの好ましいＲａ１２融合ポリペプチドは、ＭＴＢ３２Ａのアミノ酸残基１９２〜３２３に対応する１４ＫＤのＣ末端フラグメントを含む。他の好ましいＲａ１２ポリヌクレオチドは、一般的に、Ｒａ１２ポリペプチドの一部をコードする少なくとも約１５個の連続するヌクレオチド、少なくとも約３０個のヌクレオチド、少なくとも６０個のヌクレオチド、少なくとも約１００個のヌクレオチド、少なくとも約２００個のヌクレオチド、または少なくとも約３００個のヌクレオチドを含む。Ｒａ１２ポリヌクレオチドは、ネイティブな配列（すなわち、Ｒａ１２ポリペプチドまたはその一部をコードする内因性配列）を含んでもよいし、このような配列の改変体を含んでもよい。Ｒａ１２ポリヌクレオチド改変体は、１以上の置換、付加、欠失および／または挿入を含み得、その結果、コードされた融合ポリペプチドの生物学的活性が、ネイティブなＲａ１２ポリペプチドを含む融合ポリペプチドと比較して、実質的に減少していない。好ましくは、改変体は、ネイティブなＲａ１２ポリペプチドまたはその一部をコードするポリヌクレオチド配列に、少なくとも約７０％の同一性、より好ましくは少なくとも約８０％の同一性、そして最も好ましくは少なくとも約９０％の同一性を示す。
【００８８】
好ましい他の実施形態において、免疫学的融合パートナーは、グラム陰性の細菌Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａ  Ｂの表面タンパク質である、プロテインＤ（ＷＯ  ９１／１８９２６）に由来する。好ましくは、プロテインＤ誘導体は、最初のほぼ３分の１のタンパク質（例えば、最初のＮ末端１００〜１１０アミノ酸）を含み、そしてプロテインＤ誘導体は、脂質化（ｌｉｐｉｄａｔｅｄ）され得る。特定の好ましい実施形態において、リポプロテインＤ融合パートナーの最初の１０９残基は、さらなる外因性Ｔ細胞エピトープを有するポリペプチドを提供するように、そしてＥ．ｃｏｌｉ中での発現レベルを増加するように、Ｎ末端に含まれる（従って、発現エンハンサーとして機能する）。脂質テールは、抗原提示細胞への抗原の最適な提示を保証する。他の融合パートナーは、インフルエンザウイルス由来の非構造的タンパク質、ＮＳ１（血球凝集素）を含む。代表的に、Ｎ末端の８１アミノ酸が用いられるが、Ｔヘルパーエピトープを含む異なるフラグメントが使用され得る。
【００８９】
別の実施形態において、免疫学的融合パートナーは、ＬＹＴＡとして公知のタンパク質、またはその部分（好ましくはＣ末端部分）である。ＬＹＴＡは、アミダーゼＬＹＴＡ（ＬｙｔＡ遺伝子によりコードされる；Ｇｅｎｅ  ４３：２６５〜２９２，１９８６）として公知のＮ−アセチル−Ｌ−アラニンアミダーゼを合成するＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ由来である。ＬＹＴＡは、ペプチドグリカン骨格中の特定の結合を特異的に分解する自己溶解素である。ＬＹＴＡタンパク質のＣ末端ドメインは、コリンまたはいくつかのコリンアナログ（例えば、ＤＥＡＥ）に対する親和性を担う。この性質は、融合タンパク質の発現のために有用なＥ．ｃｏｌｉ  Ｃ−ＬＹＴＡ発現プラスミドの開発のために利用されてきた。アミノ末端でＣ−ＬＹＴＡフラグメントを含むハイブリッドタンパク質の精製が、記載されている（Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １０：７９５〜７９８，１９９２を参照のこと）。好ましい実施形態において、ＬＹＴＡの反復部分は、融合ポリペプチドに組み込まれ得る。反復部分は、残基１７８で開始するＣ末端領域中に見出される。特に好ましい反復部分は、残基１８８〜３０５を組み込む。
【００９０】
なお別の例示的な実施形態は、融合ポリペプチド、およびそれらをコードするポリヌクレオチドを含み、ここでこの融合パートナーは、米国特許第５，６３３，２３４号に記載のようにポリペプチドをエンドソーム／リソソーム画分へ指向させ得る標的化シグナルを含む。本発明の免疫原性ポリペプチドは、この標的化シグナルと融合する場合、より効率的にＭＨＣクラスＩＩ分子と結合し、これによってこのポリペプチドに特異的なＣＤ４＋Ｔ細胞のインビボでの増強された刺激が提供される。
【００９１】
本発明のポリペプチドは、周知の種々の合成技術および／または組換え技術のいずれかを使用して調製される。これらの技術の後者を以下でさらに記載する。一般的に約１５０アミノ酸よりも少ないポリペプチド、部分および他の改変体は、当業者に周知の技術を使用して、合成手段により作製され得る。例示的な１つの実施例において、このようなポリペプチドは、市販される固相技術のいずれか（例えば、Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ固相合成方法）を使用して合成され、ここでアミノ酸は、成長しているアミノ酸鎖に連続的に付加される。Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．８５：２１４９−２１４６、１９６３を参照のこと。ポリペプチドの自動化された合成のための機器が、Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ／Ａｐｐｌｉｅｄ  ＢｉｏＳｙｓｔｅｍｓ  Ｄｉｖｉｓｉｏｎ（Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ，ＣＡ）などの供給業者から市販され、そして製造者の指示に従って操作され得る。
【００９２】
一般に、本発明のポリペプチド組成物（融合ポリペプチドを含む）は、単離される。「単離された」ポリペプチドは、その元来の環境から取り出されたものである。例えば、天然に存在するタンパク質またはポリペプチドは、それが天然の系において共存する物質のいくつかまたは全てから分離されている場合、単離されている。好ましくは、このようなポリペプチドはまた、精製され、例えば、少なくとも約９０％純粋、より好ましくは少なくとも約９５％純粋、そして最も好ましくは少なくとも約９９％純粋である。
【００９３】
（ポリヌクレオチド組成物）
他の局面において、本発明は、ポリヌクレオチド組成物を提供する。用語「ＤＮＡ」および「ポリヌクレオチド」は、本明細書中で実質的に交換可能に使用され、特定の種の全ゲノムＤＮＡを含まない単離されたＤＮＡ分子をいう。本明細書中で使用される場合、「単離された」は、ポリヌクレオチドが、他のコード配列から実質的に分離されており、そしてＤＮＡ分子が、無関係のコードＤＮＡの大部分（例えば、大きな染色体フラグメントまたは他の機能的遺伝子もしくはポリペプチドコード領域）を含まないことを意味する。当然のことながら、これは、もともと単離されたＤＮＡ分子をいい、後で人工的にセグメントを付加された遺伝子またはコード領域を除外しない。
【００９４】
当業者に理解されるように、本発明のポリヌクレオチド組成物は、タンパク質、ポリペプチド、ペプチドなどを発現するか、または発現するように適応され得るゲノム配列、ゲノム外配列およびプラスミドにコードされる配列、ならびにより小さな操作された遺伝子セグメントを含み得る。このようなセグメントは、自然に単離され得るか、または人の手によって合成的に改変され得る。
【００９５】
当業者にまた認識されるように、本発明のポリヌクレオチドは、一本鎖（コードもしくはアンチセンス）または二本鎖であり得、そしてＤＮＡ分子（ゲノム、ｃＤＮＡもしくは合成）またはＲＮＡ分子であり得る。ＲＮＡ分子は、ＨｎＲＮＡ分子（これはイントロンを含み、そしてＤＮＡ分子に１対１の様式で対応する）、およびｍＲＮＡ分子（これは、イントロンを含まない）を含み得る。さらなるコード配列または非コード配列は、本発明のポリヌクレオチド内に存在し得るがその必要はなく、そしてポリヌクレオチドは、他の分子および／または支持体材料に連結され得るがその必要はない。
【００９６】
ポリヌクレオチドは、ネイティブの配列（すなわち、本発明のポリペプチド／タンパク質、またはその部分をコードする内因性配列）を含み得るか、あるいはこのような配列の改変体または誘導体、そして好ましくは免疫原性改変体または誘導体をコードする配列を含み得る。
【００９７】
従って、本発明の別の局面に従い、配列番号１、２、５、９、１０、１３、１６、１９、２３、２７、２８、３２、３３、３５、３８、４１〜５０、５２、５３、５６、５７、６３、６５、６９〜７２、７５、７８、８０〜８２、８４、８６、８９〜９３、９５、９７〜１００、１０３、１０７、１１１、１１４、１１７、１２０、１２１、１２５、１２８、１３２〜１３４、１３６、１３７、１４０、１４３〜１４６、１４８〜１５１、１５６、１５８、１６０〜１６２、１６６〜１６８、１７１、１７４〜１８３、１８５、１９３〜１９９、２０３〜２０６、２０８および２１０〜２１４のいずれか１つに示されるポリヌクレオチド配列、上記のように示されるポリヌクレオチド配列の相補体、ならびに上記のように示されるポリヌクレオチド配列の縮重改変体のいくつかまたは全てを含むポリヌクレオチド組成物が提供される。特定の好ましい実施形態において、本明細書中に示されるポリヌクレオチド配列は、上記のような免疫原性ポリペプチドをコードする。
【００９８】
他の関連する実施形態において、本発明は、本明細書中で配列番号１、２、５、９、１０、１３、１６、１９、２３、２７、２８、３２、３３、３５、３８、４１〜５０、５２、５３、５６、５７、６３、６５、６９〜７２、７５、７８、８０〜８２、８４、８６、８９〜９３、９５、９７〜１００、１０３、１０７、１１１、１１４、１１７、１２０、１２１、１２５、１２８、１３２〜１３４、１３６、１３７、１４０、１４３〜１４６、１４８〜１５１、１５６、１５８、１６０〜１６２、１６６〜１６８、１７１、１７４〜１８３、１８５、１９３〜１９９、２０３〜２０６、２０８および２１０〜２１４に開示される配列に対して実質的な同一性を有するポリヌクレオチド改変体を提供する。例えば、本明細書中で記載の方法（例えば、以下に記載のような標準的なパラメーターを使用するＢＬＡＳＴ分析）を使用して、本発明のポリヌクレオチド配列と比較して、少なくとも７０％の配列同一性、好ましくは少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％より高い配列同一性を含むポリヌクレオチド改変体である。当業者は、これらの値が、コドンの縮重、アミノ酸類似性、リーディングフレームの位置付けなどを考慮することによって、２つのヌクレオチド配列によってコードされるタンパク質の対応する同一性を決定するために、適切に調整され得ることを認識する。
【００９９】
代表的には、ポリヌクレオチド改変体は、１つ以上の置換、付加、欠失および／または挿入を含み、好ましくは、その結果、改変体ポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドの免疫原性が、本明細書中に具体的に示されるポリヌクレオチド配列によってコードされるポリペプチドに対して実質的に減少されない。用語「改変体」はまた、異種起源の相同遺伝子を包含することが理解されるべきである。
【０１００】
さらなる実施形態において、本発明は、本明細書中に開示された配列の１つ以上に同一であるかまたは相補的な配列の、種々の長さの連続したストレッチを含むポリヌクレオチドフラグメントを提供する。例えば、本明細書中に開示される配列の１つ以上の、少なくとも約１０、１５、２０、３０、４０、５０、７５、１００、１５０、２００、３００、４００、５００または１０００以上連続したヌクレオチド、ならびにその間の中間の長さの連続したヌクレオチドを含むポリヌクレオチドが、本発明によって提供される。この状況において、「中間の長さ」が、示された値の間の任意の長さ（例えば、１６、１７、１８、１９など；２１、２２、２３など；３０、３１、３２など；５０、５１、５２、５３など；１００、１０１、１０２、１０３など；１５０、１５１、１５２、１５３など；２００〜５００；５００〜１，０００などの間の全ての整数を含む）を意味することが容易に理解される。
【０１０１】
本発明の別の実施形態において、本明細書において提供されるポリヌクレオチド配列もしくはそのフラグメントまたはその相補的な配列に対して、中程度〜高いストリンジェンシー条件下でハイブリダイズし得るポリヌクレオチド組成物が提供される。ハイブリダイゼーション技術は、分子生物学の当該分野において周知である。例示の目的であるが、他のポリヌクレオチドと本発明のポリヌクレオチドとのハイブリダイゼーションを試験するために適切な中程度にストリンジェントな条件は、５×ＳＳＣ、０．５％  ＳＤＳ、１．０ｍＭ  ＥＤＴＡ（ｐＨ８．０）の溶液中の事前洗浄；５０℃〜６０℃、５×ＳＳＣでの、一晩のハイブリダイゼーション；続いて、０．１％ＳＤＳを含有する２×、０．５×および０．２×ＳＳＣをそれぞれ用いた、６５℃で２０分間の２回の洗浄を含む。当業者は、ハイブリダイゼーションのストリンジェンシーが、例えば、ハイブリダイゼーション溶液の塩含量および／またはハイブリダイゼーションが実施される温度を変更することによって、容易に操作され得ることを理解する。例えば、別の実施形態において、適切な高いストリンジェントのハイブリダイゼーション条件としては、ハイブリダイゼーションの温度が、例えば、６０〜６５℃または６５〜７０℃に上昇される点を除いて、上記の条件が挙げられる。
【０１０２】
特定の好ましい実施形態において、上記のポリヌクレオチド（例えば、ポリヌクレオチド改変体、フラグメント、およびハイブリダイズする配列）は、本明細書中に具体的に示されるポリペプチド配列と免疫学的に交差反応するポリペプチドをコードする。他の好ましい実施形態において、このようなポリヌクレオチドは、本明細書中に具体的に示されるポリペプチド配列の免疫原性活性の、少なくとも約５０％、好ましくは少なくとも約７０％、そしてより好ましくは少なくとも約９０％の免疫原性活性レベルを有するポリペプチドをコードする。
【０１０３】
本発明のポリヌクレオチド、またはそのフラグメントは、そのコード配列自体の長さにかかわらず、他のＤＮＡ配列（例えば、プロモーター、ポリアデニル化シグナル、さらなる制限酵素部位、マルチクローニング部位、他のコードセグメントなど）と組合わされ得、その結果、その全体の長さは、相当変化し得る。従って、ほとんどいずれの長さの核酸フラグメントをも使用し得ることが企図され、その全長は、好ましくは意図した組換えＤＮＡプロトコルにおける調製および使用の容易さによって制限される。例えば、約１０，０００、約５０００、約３０００、約２，０００、約１，０００、約５００、約２００、約１００、約５０の塩基対長など（全ての中間の長さを含む）の全長を有する例示的なポリヌクレオチドセグメントが、本発明の多くの実行において有用であることが企図される。
【０１０４】
ポリヌクレオチド配列を比較する場合、２つの配列におけるヌクレオチドの配列が、以下に記載されるように最大一致についてアライメント（整列）される場合と同じ場合に、これら２つの配列は「同一」であるといわれる。２つの配列の間の比較は、代表的には、配列類似性の局部領域を同定および比較するために、比較ウインドウにわたって配列を比較することによって行われる。本明細書中で使用される場合、「比較ウインドウ」は、少なくとも約２０、通常は３０〜約７５、４０〜約５０連続した位置のセグメントをいい、ここで、２つの配列が最適にアライメントされた後に、配列は、同じ数の連続した位置の参照配列と比較され得る。
【０１０５】
比較のための配列の最適なアライメントは、バイオインフォマティクスソフトウエアのＬａｓｅｒｇｅｎｅ  ｓｕｉｔｅにおけるＭｅｇａｌｉｇｎプログラム（ＤＮＡＳＴＡＲ，Ｉｎｃ．，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）を使用して、デフォルトパラメーターを用いて行われ得る。このプログラムは、以下の参考文献に記載のいくつかのアライメントスキームを実現する：Ｄａｙｈｏｆｆ，Ｍ．Ｏ．（編）Ａｔｌａｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ  ＤＣ  Ｖｏｌ．５，補遺３、３４５−３５８頁におけるＤａｙｈｏｆｆ，Ｍ．Ｏ．（１９７８）Ａ  ｍｏｄｅｌ  ｏｆ
ｅｖｏｌｕｔｉｏｎａｒｙ  ｃｈａｎｇｅ  ｉｎ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ−Ｍａｔｒｉｃｅｓ  ｆｏｒ  ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ  ｄｉｓｔａｎｔ  ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓ．；Ｈｅｉｎ  Ｊ．（１９９０）Ｕｎｉｆｉｅｄ  Ａｐｐｒｏａｃｈ
ｔｏ  Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ  ａｎｄ  Ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｓ  ６２６−６４５頁  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  ｖｏｌ．１８３，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ；Ｈｉｇｇｉｎｓ，Ｄ．Ｇ．およびＳｈａｒｐ，Ｐ．Ｍ．（１９８９）ＣＡＢＩＯＳ  ５：１５１−１５３；Ｍｙｅｒｓ，Ｅ．Ｗ．およびＭｕｌｌｅｒ  Ｗ．（１９８８）ＣＡＢＩＯＳ  ４：１１−１７；Ｒｏｂｉｎｓｏｎ，Ｅ．Ｄ．（１９７１）Ｃｏｍｂ．Ｔｈｅｏｒ  １１：１０５；Ｓａｎｔｏｕ，Ｎ．Ｎｅｓ，Ｍ．（１９８７）Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．Ｅｖｏｌ．４：４０６−４２５；Ｓｎｅａｔｈ，Ｐ．Ｈ．Ａ．およびＳｏｋａｌ，Ｒ．Ｒ．（１９７３）Ｎｕｍｅｒｉｃａｌ  Ｔａｘｏｎｏｍｙ−ｔｈｅ  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｎｕｍｅｒｉｃａｌ  Ｔａｘｏｎｏｍｙ，Ｆｒｅｅｍａｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ＣＡ；Ｗｉｌｂｕｒ，Ｗ．Ｊ．およびＬｉｐｍａｎ，Ｄ．Ｊ．（１９８３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．，Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８０：７２６−７３０。
【０１０６】
あるいは、比較のための配列の最適アライメントは、ＳｍｉｔｈおよびＷａｔｅｒｍａｎ（１９８１）Ａｄｄ．ＡＰＬ．Ｍａｔｈ  ２：４８２の局所同一性アルゴリズムによって、ＮｅｅｄｌｅｍａｎおよびＷｕｎｓｃｈ（１９７０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３の同一性アライメントアルゴリズムによって、ＰｅａｒｓｏｎおよびＬｉｐｍａｎ（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８５：２４４４の類似性検索方法によって、これらのアルゴリズムのコンピュータ化されたインプリメンテーション（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｐａｃｋａｇｅ，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐ（ＧＣＧ），５７５  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｄｒ．，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩにおけるＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＢＬＡＳＴ、ＦＡＳＴＡ、およびＴＦＡＳＴＡ）によって、または検査によって行われ得る。
【０１０７】
配列同一性および配列類似性の割合を決定するために適切なアルゴリズムの１つの好ましい例は、ＢＬＡＳＴおよびＢＬＡＳＴ２．０アルゴリズムであり、これらはそれぞれ、Ａｌｔｓｃｈｕｌら（１９７７）Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２５：３３８９−３４０２およびＡｌｔｓｃｈｕｌら（１９９０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３−４１０に記載される。ＢＬＡＳＴおよびＢＬＡＳＴ２．０は、本発明のポリヌクレオチドについての配列同一性の割合を決定するために、例えば、本明細書中に記載のパラメータを用いて使用され得る。ＢＬＡＳＴ分析を行うためのソフトウエアは、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎを通して公に利用可能である。１つの例示的な例において、累積スコアは、ヌクレオチド配列について、パラメーターＭ（一致する残基の対についての報酬スコア（ｒｅｗａｒｄ
ｓｃｏｒｅ）；常に＞０）およびＮ（ミスマッチ残基についてのペナルティスコア；常に＜０）を使用して算出され得る。各方向におけるワードヒットの拡大は、以下の場合に停止する：累積アライメントスコアが、その最大到達値から量Ｘだけ低下した場合；累積スコアが、１以上の負のスコアの残基アライメントの累積に起因してゼロ以下になった場合；またはいずれかの配列の末端に到達した場合。このＢＬＡＳＴアルゴリズムパラメーターＷ、ＴおよびＸは、アライメントの感度および速度を決定する。ＢＬＡＳＴＮプログラム（ヌクレオチド配列について）は、ワード長（Ｗ）１１、および期待値（Ｅ）１０をデフォルトとして使用し、そしてＢＬＯＳＵＭ６２スコアリングマトリックス（ＨｅｎｉｋｏｆｆおよびＨｅｎｉｋｏｆｆ（１９８９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８９：１０９１５を参照のこと）アラインメントは、（Ｂ）５０、期待値（Ｅ）１０、Ｍ＝５、Ｎ＝−４、および両方の鎖の比較を使用する。
【０１０８】
好ましくは、「配列同一性のパーセンテージ」は、少なくとも２０の位置の比較ウインドウにわたって２つの最適にアライメントした配列を比較することによって決定され、ここで比較ウインドウ中のポリヌクレオチド配列の一部は、参照配列（これは、付加または欠失を含まない）と比較して、２つの配列の最適なアライメントについて２０パーセント以下、通常は５〜１５パーセント、または１０〜１２パーセントの付加または欠失（すなわち、ギャップ）を含み得る。このパーセンテージは、両方の配列で同一の核酸塩基が生じる位置の数を決定して一致する位置の数を得、この一致する位置の数を参照配列中の位置の総数（すなわち、ウインドウサイズ）で除算し、そしてこの結果に１００を掛けて配列同一性のパーセンテージを得ることによって算出される。
【０１０９】
遺伝コードの縮重の結果として、本明細書中に記載されるようなポリペプチドをコードする多くのヌクレオチド配列が存在することが、当業者に理解される。これらのポリヌクレオチドのうちいくつかは、任意のネイティブな遺伝子のヌクレオチド配列に対して最小の相同性を有する。それにもかかわらず、コドンの用法における差異に起因して変化するポリヌクレオチドは、本発明によって具体的に意図される。さらに、本明細書中に提供されるポリヌクレオチド配列を含む遺伝子の対立遺伝子は、本発明の範囲内である。対立遺伝子は、１以上の変異（例えば、ヌクレオチドの欠失、付加および／または置換）の結果として変化する内因性遺伝子である。得られたｍＲＮＡおよびタンパク質は、変化した構造または機能を有し得るが、有さなくてもよい。対立遺伝子は、標準的な技術（例えば、ハイブリダイゼーション、増幅および／またはデータベース配列比較）を用いて、同定され得る。
【０１１０】
従って、本発明の別の実施形態において、変異誘発アプローチ（例えば、部位特異的変異誘発）は、本明細書中に記載のポリペプチドの免疫原性改変体および／または誘導体の調製のために使用される。このアプローチによって、ポリペプチド配列における特定の改変が、これらをコードする、基礎となるポリヌクレオチドの変異誘発を介してなされ得る。これらの技術は、例えば、ポリヌクレオチド中に１つ以上のヌクレオチド配列変化を導入することによって先の考慮の１つ以上を具体化する、配列改変体を調製および試験するための直接的なアプローチを提供する。
【０１１１】
部位特異的変異誘発は、所望の変異のＤＮＡ配列をコードする特定のオリゴヌクレオチド配列ならびに十分な数の隣接ヌクレオチドの使用を介して変異体の生成を可能にし、相対する欠失連結部の両側に安定な二重鎖を形成するために、十分なサイズのプライマー配列および配列複雑性を提供する。変異は、ポリヌクレオチド自体の特性を改善するか、変更するか、減少させるか、改変するか、さもなくば変化させるため、そして／またはコードされたポリペプチドの特性、活性、組成、安定性または一次配列を変更するために、選択されたポリヌクレオチド配列において使用され得る。
【０１１２】
本発明の特定の実施形態において、本発明者らは、コードされたポリペプチドの１つ以上の特性（例えば、ポリペプチドワクチンの免疫原性）を変更するために、開示されたポリヌクレオチド配列の変異誘発を意図する。部位特異的変異誘発の技術は、当該分野で周知であり、ポリペプチドおよびポリヌクレオチドの両方の改変体を作製するために広範に使用される。例えば、部位特異的変異誘発は、しばしば、ＤＮＡ分子の特定部分を変更するために使用される。このような実施形態において、代表的に約１４ヌクレオチド長〜約２５ヌクレオチド長程度の長さを含むプライマーが使用され、配列の連結部の両側にある、約５残基〜約１０残基が変更される。
【０１１３】
当業者によって理解されるように、部位特異的変異誘発技術は、しばしば、一本鎖形態および二本鎖形態の両方で存在するファージベクターを使用してきた。部位特異的変異誘発において有用である代表的なベクターとしては、例えば、Ｍ１３ファージのようなベクターが挙げられる。これらのファージは、容易に商業的に入手可能であり、そしてそれらの使用は、一般的に当業者に周知である。二本鎖プラスミドもまた、目的の遺伝子をプラスミドからファージに転移する工程を排除する部位特異的変異誘発において慣用的に使用される。
【０１１４】
一般的に、本明細書に従う部位特異的変異誘発は、所望のペプチドをコードするＤＮＡ配列をその配列中に含む一本鎖ベクターを最初に入手する工程、またはこの配列を含む二本鎖ベクターの２本の鎖を融解して分ける工程によって実行される。所望の変異配列を保有するオリゴヌクレオチドプライマーは、一般的に、合成的に調製される。次いで、このプライマーは、一本鎖ベクターとアニーリングされ、そして変異を保有する鎖の合成を完了するために、ＤＮＡ重合酵素（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉポリメラーゼＩ  Ｋｌｅｎｏｗフラグメント）に供される。このようにヘテロ二重鎖が形成され、ここで一方の鎖が変異を有さないもともとの鎖をコードし、そして２つめの鎖は所望の変異を保有する。次いで、このヘテロ二重鎖ベクターは、適切な細胞（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ細胞）を形質転換するために使用され、そして、変異した配列配置を保有する組換えベクターを含むクローンが選択される。
【０１１５】
部位特異的変異誘発を使用する、選択されたペプチドコードＤＮＡセグメントの配列改変体の調製は、潜在的に有用な種を産生する手段を提供し、そしてこれは、限定を意味するものではない。なぜなら、ペプチドの配列改変体およびそれらをコードするＤＮＡ配列を入手し得る他の方法が存在するからである。例えば、所望のペプチド配列をコードする組換えベクターは、変異誘発剤（例えば、ヒドロキシルアミン）で処理されて、配列改変体を入手し得る。これらの方法およびプロトコルに関する具体的な詳細は、Ｍａｌｏｙら、１９９４；Ｓｅｇａｌ、１９７６；ＰｒｏｋｏｐおよびＢａｊｐａｉ、１９９１；Ｋｕｂｙ、１９９４；ならびにＭａｎｉａｔｉｓら、１９８２（各々がその目的のために本明細書中に参考として援用される）の教示において見出される。
【０１１６】
本明細書中で使用される場合、用語「オリゴヌクレオチド特異的変異誘発手順」とは、鋳型依存的プロセスおよびベクター媒介性増殖をいい、これは、その初期の濃度と比較して、特定の核酸分子の濃度の増加を生じるか、または検出可能なシグナルの濃度の増加（例えば、増幅）を生じる。本明細書中で使用される場合、用語「オリゴヌクレオチド特異的変異誘発手順」は、プライマー分子の鋳型依存的な伸長を含むプロセスをいうことが意図される。用語、鋳型依存的プロセスとは、ＲＮＡ分子またはＤＮＡ分子の核酸合成をいい、ここで新規に合成された核酸の鎖の配列は、相補的塩基対形成の周知の規則によって指示される（例えば、Ｗａｔｓｏｎ、１９８７を参照のこと）。代表的には、ベクター媒介性の方法論は、ＤＮＡまたはＲＮＡベクターへの核酸フラグメントの導入、ベクターのクローン性増幅、および増幅した核酸フラグメントの回収を包含する。これらの方法論の例は、その全体が具体的に参考として本明細書中に援用される、米国特許第４，２３７，２２４号によって提供される。
【０１１７】
本発明のポリペプチド改変体の生成のための別のアプローチにおいて、米国特許第５，８３７，４５８号に記載のような、再帰的な配列組換えが使用され得る。このアプローチにおいて、組換えおよびスクリーニングまたは選択の反復性のサイクルが実施されて、例えば、増強された免疫原性活性を有する本発明の個々のポリヌクレオチド改変体を「展開させる」。
【０１１８】
本発明の他の実施形態において、本明細書中に提供されるポリヌクレオチド配列は、核酸ハイブリダイゼーションのためのプローブまたはプライマーとして、有利に使用され得る。このように、本明細書中に開示される１５ヌクレオチド長の連続配列と同じ配列か、またはこれに相補的な配列を有する、少なくとも約１５ヌクレオチド長の連続配列の配列領域を含む核酸セグメントが特定の有用性を見出すことが、意図される。例えば、約２０、３０、４０、５０、１００、２００、５００、１０００（全ての中間の長さを含む）およびまさに全長配列までの、より長い連続した同一配列または相補的な配列がまた、特定の実施形態において使用される。
【０１１９】
このような核酸プローブが目的の配列に特異的にハイブリダイズする能力は、所定のサンプル中の相補的配列の存在を検出する際にこれらが使用されることを可能にする。しかし、他の用途（例えば、変異種プライマーまたは他の遺伝的構築物の調製の際の使用のためのプライマーを調製するための配列情報の使用）がまた意図される。
【０１２０】
１０〜１４、１５〜２０、３０、５０、または１００〜２００ヌクレオチド程度（同様に中間の長さを含む）の連続したヌクレオチドストレッチからなる配列領域を有し、本明細書中に開示されるポリヌクレオチド配列と同一または相補的なポリヌクレオチド分子は、例えばサザンブロッティングまたはノーザンブロッティングにおける使用のためのハイブリダイゼーションプローブとして特に意図される。これは、遺伝子産物またはそのフラグメントの、多様な細胞型およびまた種々の細菌細胞の両方における分析を可能とする。フラグメントの全サイズ、ならびに相補的ストレッチのサイズは、最終的には、特定の核酸セグメントの意図される用途または適用に依存する。より小さなフラグメントは、一般にハイブリダイゼーション実施形態における用途を見出し、ここで連続した相補領域の長さが変化され得る（例えば、約１５ヌクレオチドと約１００ヌクレオチドとの間）が、検出を望む相補配列の長さに従って、より長い連続した相補ストレッチが使用され得る。
【０１２１】
約１５〜２５ヌクレオチド長のハイブリダイゼーションプローブの使用は、安定で選択的な二重鎖分子の形成を可能にする。しかし、１５塩基長より長いストレッチの連続した相補配列を有する分子が、ハイブリッドの安定性および選択性を増加するために一般に好ましく、それによって、得られる特異的ハイブリッド分子の質および程度が改善される。１５〜２５の連続したヌクレオチド、または望まれる場合にはより長い遺伝子相補的ストレッチを有する核酸分子を設計するのが一般には好ましい。
【０１２２】
ハイブリダイゼーションプローブは、本明細書中に開示される配列のいずれかの、任意の部分から選択され得る。必要とされることの全ては、本明細書中に記載の配列、あるいはプローブまたはプライマーとしての利用を望む、約１５〜２５ヌクレオチド長から全長配列まで、および全長配列を含む配列の任意の連続した部分までを再検討することである。プローブおよびプライマー配列の選択は、種々の要因によって支配され得る。例えば、全配列の末端に向かってプライマーを使用することが望まれ得る。
【０１２３】
小さなポリヌクレオチドセグメントまたはフラグメントは、例えば化学的手段（これは、通常は自動オリゴヌクレオチド合成機を使用して行われるので）によってフラグメントを直接合成することによって、容易に調製され得る。また、フラグメントは、核酸複製技術（例えば、米国特許第４，６８３，２０２号（本明細書中に参考として援用される）のＰＣＲＴＭ技術）の適用によって、組換え産物のために選択配列を組換えベクターに導入することによって、および一般に分子生物学の分野の当業者に公知の他の組換えＤＮＡ技術によって、得られ得る。
【０１２４】
本発明のヌクレオチド配列は、目的の完全遺伝子または遺伝子フラグメントのいずれかの相補的ストレッチと、二重鎖分子を選択的に形成するその能力のために使用され得る。想定される適用に依存して、代表的には、標的配列に対するプローブの選択性の種々の程度を達成するために、ハイブリダイゼーションの種々の条件を使用することが望ましい。高い選択性を必要とする適用について、代表的には、ハイブリッドを形成するための比較的ストリンジェントな条件を使用することが望ましい。例えば、比較的低濃度の塩、および／または高温の条件（例えば、約５０℃〜約７０℃の温度で、約０．０２Ｍ〜約０．１５Ｍの塩の塩濃度によって提供されるような）が選択される。このような選択条件は、存在する場合、プローブとテンプレートまたは標的鎖との間のミスマッチにほとんど許容性がなく、そして関連する配列の単離のために特に適切である。
【０１２５】
当然のことながら、いくつかの適用（例えば、下敷きとなるテンプレートにハイブリダイズする変異体プライマー鎖を使用して、変異体を調製することが望ましい場合）について、より低いストリンジェント（減少したストリンジェンシー）のハイブリダイゼーション条件は、ヘテロ二重鎖の形成を可能にするために代表的に必要とされる。これらの状況において、約２０℃〜約５５℃の温度範囲で約０．１５Ｍ〜約０．９Ｍの塩の条件のような塩条件を使用することが望ましくあり得る。これによって、交差ハイブリダイズ種は、コントロールハイブリダイゼーションに関して、陽性ハイブリダイズシグナルとして容易に同定され得る。任意の場合において、ホルムアミド（これは、上昇した温度と同じ様式で、ハイブリッド二重鎖を不安定化するように作用する）の増加した量の添加によって、条件がよりストリンジェントになり得ることが一般に理解される。従って、ハイブリダイゼーション条件は、容易に操作され得、従って、一般に、所望の結果に依存する選択方法である。
【０１２６】
本発明の別の実施形態に従って、アンチセンスオリゴヌクレオチドを含むポリヌクレオチド組成物が、提供される。アンチセンスオリゴヌクレオチドは、タンパク質合成の効果的かつ標的化されたインヒビターであることが実証され、疾患が、疾患に寄与するタンパク質の合成を阻害することによって処置され得る治療的なアプローチを結果的に提供する。タンパク質合成を阻害するためのアンチセンスオリゴヌクレオチドの効力は、よく確立されている。例えば、ポリガラクタウロナーゼ（ｐｏｌｙｇａｌａｃｔａｕｒｏｎａｓｅ）およびムスカリン２型アセチルコリンレセプターの合成は、そのそれぞれのｍＲＮＡ配列に特異的なアンチセンスオリゴヌクレオチドによって阻害される（米国特許第５，７３９，１１９号および米国特許第５，７５９，８２９号）。さらに、アンチセンス阻害の例が、核タンパク質サイクリン、多剤耐性遺伝子（ＭＤＧ１）、ＩＣＡＭ−１、Ｅ−セレクチン、ＳＴＫ−１、線条体ＧＡＢＡＡレセプターおよびヒトＥＧＦを用いて示されている（Ｊａｓｋｕｌｓｋｉら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  １９８８  Ｊｕｎ
１０；２４０（４８５８）：１５４４−６；ＶａｓａｎｔｈａｋｕｍａｒおよびＡｈｍｅｄ、Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｏｍｍｕｎ．１９８９；１（４）：２２５−３２；Ｐｅｒｉｓら、Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓ  Ｍｏｌ  Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓ．１９９８  Ｊｕｎ  １５；５７（２）３１０−２０；米国特許第５，８０１，１５４号；同第５，７８９，５７３号；同第５，７１８，７０９号および同第５，６１０，２８８号）。種々の異常な細胞増殖（例えば、癌）を阻害しそして処置するために使用され得る、アンチセンス構築物もまた、記載されている（米国特許第５，７４７，４７０号；同第５，５９１，３１７号および同第５，７８３，６８３号）。
【０１２７】
従って、特定の実施形態において、本発明は、本明細書中に記載されるポリヌクレオチド配列に特異的に結合し得る任意の配列もしくはその相補体のすべてまたは一部を含む、オリゴヌクレオチド配列を提供する。１つの実施形態において、そのアンチセンスオリゴヌクレオチドは、ＤＮＡまたはその誘導体を含む。別の実施形態において、そのオリゴヌクレオチドは、ＲＮＡまたはその誘導体を含む。第３の実施形態において、そのオリゴヌクレオチドは、ホスホロチオエート改変骨格を含む、改変ＤＮＡである。第４の実施形態において、そのオリゴヌクレオチド配列は、ペプチド核酸またはその誘導体を含む。各場合において、好ましい組成物は、本明細書中に開示されるポリヌクレオチドのうちの１つ以上の部分に相補的な、より好ましくは実質的に相補的な、そしてさらにより好ましくは完全に相補的な、配列領域を含む。所定の遺伝子配列に特異的なアンチセンス組成物の選択は、選択された標的配列の分析に基づき、そして二次構造、Ｔｍ、結合エネルギー、および相対的安定性の決定に基づく。アンチセンス組成物は、二量体、ヘアピン、または宿主細胞において標的ｍＲＮＡへの特異的結合を減少または妨げる他の二次構造をそれらが相対的に形成できない能力に基づいて選択され得る。ｍＲＮＡの非常に好ましい標的領域は、ＡＵＧ翻訳開始コドンの領域またはその付近の領域、およびｍＲＮＡの５’領域と実質的に相補的な配列である。これらの二次構造分析および標的部位選択の考慮は、例えば、ＯＬＩＧＯプライマー分析ソフトウェアのｖ．４および／またはＢＬＡＳＴＮ  ２．０．５アルゴリズムソフトウェア（Ａｌｔｓｃｈｕｌら、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１９９７，２５（１７）：３３８９−４０２）を使用して実施され得た。
【０１２８】
短いペプチドベクター（ＭＰＧ（２７残基）と称する）を使用するアンチセンス送達法の使用もまた意図される。このＭＰＧペプチドは、ＨＩＶ  ｇｐ４１の融合配列由来の疎水性ドメインと、ＳＶ４０  Ｔ抗原の核局在化配列由来の親水性ドメインとを含む（Ｍｏｒｒｉｓら、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１９９７  Ｊｕｌ  １５；２５（１４）：２７３０−６）。このＭＰＧペプチドのいくつかの分子がアンチセンスオリゴヌクレオチドをコートし、そして比較的高効率（９０％）で１時間以内に培養哺乳動物細胞へと送達され得ることが示された。さらに、ＭＰＧとの相互作用は、ヌクレアーゼに対するそのオリゴヌクレオチドの安定性および形質膜を横切る能力の両方を強力に増加させる。
【０１２９】
本発明の別の実施形態に従って、本明細書中に記載されるポリヌクレオチド組成物は、腫瘍細胞における本発明の腫瘍ポリペプチドおよびタンパク質の発現を阻害するためのリボンザイム分子の設計および調製に使用される。リボザイムは、部位特異的様式で核酸を切断するＲＮＡ−タンパク質複合体である。リボザイムは、エンドヌクレアーゼ活性を保有する特異的触媒ドメインを有する（ＫｉｍおよびＣｅｃｈ、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ．１９８７  Ｄｅｃ；８４（２４）：８７８８−９２；ＦｏｒｓｔｅｒおよびＳｙｍｏｎｓ、Ｃｅｌｌ．１９８７  Ａｐｒ  ２４；４９（２）２１１−２０）。例えば、多数のリボザイムが、高い程度の特異性でリン酸エステル転移反応を促進し、しばしば、オリゴヌクレオチド基質中の数個のリン酸エステルのうちの１つだけを切断する（Ｃｅｃｈら、Ｃｅｌｌ．１９８１  Ｄｅｃ；２７（３  Ｐｔ  ２）：４８７−９６；ＭｉｃｈｅｌおよびＷｅｓｔｈｏｆ、Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ．１９９０  Ｄｅｃ  ５；２１６（３）：５８５−６１０；Ｒｅｉｎｈｏｌｄ−ＨｕｒｅｋおよびＳｈｕｂ、Ｎａｔｕｒｅ．１９９２  Ｍａｙ  １４；３５７（６３７４）：１７３−６）。この特異性は、この基質が、化学反応の前にリボザイムの内部ガイド配列（「ＩＧＳ」）との特異的塩基対形成相互作用を介して結合するという要件に起因した。
【０１３０】
天然に存在する酵素的ＲＮＡの６つの基本的変種が、現在公知である。各々は、生理学的条件下で、ＲＮＡホスホジエステル結合の加水分解をトランスで触媒し得る（従って、他のＲＮＡ分子を切断し得る）。一般に、酵素的核酸は、標的ＲＮＡへの最初の結合によって作用する。このような結合は、標的ＲＮＡを切断するように作用する分子の酵素的部分に近接して保持される、酵素的核酸の標的結合部分を介して生じる。従って、その酵素的核酸は、まず、標的ＲＮＡを認識し、次いで相補的塩基対形成を介してその標的ＲＮＡに結合し、そして一旦正確な部位に結合すると、その標的ＲＮＡを酵素的に切断するように作用する。このような標的ＲＮＡの戦略的切断は、コードされるタンパク質を直接合成する標的ＲＮＡの能力を破壊する。酵素的核酸がそのＲＮＡ標的に結合しそして切断した後、その酵素的核酸は、別の標的を探索するためにそのＲＮＡから離れ、そして繰り返し、新しい標的に結合しそして切断し得る。
【０１３１】
リボザイムの酵素特性は、多くの技術（例えば、アンチセンス技術（ここで、核酸分子は、単に核酸標的に結合して、翻訳をブロックする））を超えて有利である。なぜなら、治療的処置に影響を与えるのに必要であるリボザイムの濃度は、アンチセンスオリゴヌクレオチの濃度よりも低いからである。この利点は、酵素的に作用するリボザイムの能力を反映する。従って、単一のリボザイム分子は、標的ＲＮＡの多くの分子を切断し得る。さらに、このリボザイムは、高度に特異的なインヒビターであり、この阻害の特異性は、標的ＲＮＡに結合する塩基対形成の機構に依存するだけでなく、標的ＲＮＡの切断の機構にも依存する。切断部位付近の１個のミスマッチまたは塩基置換により、リボザイムの触媒活性が完全になくなり得る。アンチセンス分子内の同様のミスマッチでは、それらの作用は妨げられない（Ｗｏｏｌｆら、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ．１９９２  Ａｕｇ  １５；８９（１６）：７３０５−９）。従って、リボザイムの作用の特異性は、同じＲＮＡ部位に結合するアンチセンスオリゴヌクレオチドの作用の特異性よりも高い。
【０１３２】
この酵素的核酸分子は、ハンマーヘッド（ｈａｍｍｅｒｈｅａｄ）モチーフ、ヘアピンモチーフ、δ型肝炎ウイルスモチーフ、Ｉ群イントロンモチーフまたはＲＮａｓｅＰ  ＲＮＡモチーフ（ＲＮＡガイド配列に関連する）あるいはＮｅｕｒｏｓｐｏｒａ  ＶＳ  ＲＮＡモチーフに形成され得る。ハンマーヘッドモチーフの例は、Ｒｏｓｓｉら，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１９９２  Ｓｅｐ  １１；２０（１７）：４５５９−６５に記載される。ヘアピンモチーフの例は、Ｈａｍｐｅｌら（欧州特許出願公開番号ＥＰ  ０３６０２５７）、ＨａｍｐｅｌおよびＴｒｉｔｚ（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  １９８９  Ｊｕｎ  １３；２８（１２）：４９２９−３３）、Ｈａｍｐｅｌら，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１９９０  Ｊａｎ  ２５；１８（２）：２９９−３０４および米国特許第５，６３１，３５９号に記載される。δ型肝炎ウイルスモチーフの例は、ＰｅｒｒｏｔｔａおよびＢｅｅｎ，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．１９９２  Ｄｅｃ  １；３１（４７）：１１８４３−５２に記載される；ＲＮａｓｅＰモチーフの例は、Ｇｕｅｒｒｉｅｒ−Ｔａｋａｄａら，Ｃｅｌｌ．１９８３  Ｄｅｃ；３５（３  Ｐｔ  ２）：８４９−５７に記載される；Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ  ＶＳ  ＲＮＡリボザイムモチーフは、Ｃｏｌｌｉｎｓ（ＳａｖｉｌｌｅおよびＣｏｌｌｉｎｓ，Ｃｅｌｌ．１９９０  Ｍａｙ  １８；６１（４）：６８５−９６；ＳａｖｉｌｌｅおよびＣｏｌｌｉｎｓ，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ
Ｕ  Ｓ  Ａ．１９９１  Ｏｃｔ  １；８８（１９）：８８２６−３０；ＣｏｌｌｉｎｓおよびＯｌｉｖｅ，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．１９９３  Ｍａｒ  ２３；３２（１１）：２７９５−９）に記載される；そしてＩ群イントロンの例は、米国特許第４，９８７，０７１号に記載される。本発明の酵素的核酸分子において重要であることは、１以上の標的遺伝子ＲＮＡ領域に相補的である特定の基質結合部位を有すること、およびこの分子に対するＲＮＡ切断活性を付与する、基質結合部位内のヌクレオチド配列またはこの基質結合部位の周囲のヌクレオチド配列を有することだけである。従って、リボザイム構築物は、本明細書中に記載される特定のモチーフに必ずしも限定されない。
【０１３３】
リボザイムは、国際特許出願公開番号ＷＯ  ９３／２３５６９および国際特許出願公開番号ＷＯ  ９４／０２５９５（各々は、本明細書中で参考として詳細に援用される）に記載されるように設計され得、そして記載されるように、インビトロおよびインビボにおいて試験するために合成され得る。このようなリボザイムはまた、送達するために最適化され得る。特定の例が提供されるが、当業者は、他の種において等価なＲＮＡ標的が、必要な場合に利用され得ることを認識する。
【０１３４】
リボザイムの活性は、リボザイムの結合アームの長さを変更することにより、または血清リボヌクレアーゼによる分解を防ぐ改変（例えば、国際特許出願公開番号ＷＯ  ９２／０７０６５；国際特許出願公開番号ＷＯ  ９３／１５１８７；国際特許出願公開番号ＷＯ  ９１／０３１６２；欧州特許出願公開番号９２１１０２９８．４；米国特許第５，３３４，７１１号、および国際特許出願公開番号ＷＯ  ９４／１３６８８（これらは、酵素的ＲＮＡ分子の糖部分に対して成され得る、種々の化学的修飾を記載する）を参照のこと）、細胞中でのリボザイムの効力を増強する改変、ならびにＲＮＡの合成時間を短縮化しそして化学的要件を減少させるためのステム（ｓｔｅｍ）ＩＩ塩基の除去によって、リボザイムを化学的に合成することによって最適化され得る。
【０１３５】
Ｓｕｌｌｉｖａｎら（国際特許出願公開番号ＷＯ  ９４／０２５９５）は、酵素的ＲＮＡ分子の送達のための一般的な方法を記載する。リボザイムは、当業者に公知の種々の方法によって細胞に投与され得、これらには、リポソームへのカプセル化、イオン泳動法、あるいは、他のビヒクル（例えば、ヒドロゲル、シクロデキストリン、生分解性ナノカプセルおよび生体接着性ミクロスフィア）への取り込みによるもの、が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの指針のために、リボザイムは、エキソビボで細胞または組織に、上記のビヒクルを使用してか、または使用せずに、直接送達され得る。あるいは、ＲＮＡ／ビヒクルの組み合わせは、直接的な吸入、直接的な注射、あるいはカテーテル、注入ポンプまたはステントの使用により、局所的に送達され得る。他の送達経路としては、血管内注射、筋内注射、皮下注射または関節注射、エアロゾル吸入、経口送達（錠形態または丸薬形態）、局所送達、全身送達、眼送達、腹腔内送達および／または髄腔内送達が挙げられるが、これらに限定されない。リボザイムの送達および投与のより詳細な記載は、国際特許出願公開番号ＷＯ  ９４／０２５９５および国際特許出願公開番号ＷＯ  ９３／２３５６９（各々は、本明細書中で参考として詳細に援用される）に提供される。
【０１３６】
高濃度のリボザイムを細胞内に蓄積する別の手段は、リボザイムコード配列をＤＮＡ発現ベクターに組み込むことである。リボザイム配列の転写は、真核生物ＲＮＡポリメラーゼＩ（ｐｏｌ  Ｉ）、ＲＮＡポリメラーゼＩＩ（ｐｏｌ  ＩＩ）、またはＲＮＡポリメラーゼＩＩＩ（ｐｏｌ  ＩＩＩ）のためのプロモーターにより駆動される。ｐｏｌ  ＩＩプロモーターまたはｐｏｌ  ＩＩＩプロモーターからの転写物は、全ての細胞内で高レベルで発現され；所定の細胞型における所定のｐｏｌ  ＩＩプロモーターのレベルは、近くに存在する遺伝子調節配列（エンハンサー、サイレンサーなど）の性質に依存する。原核生物ＲＮＡポリメラーゼ酵素が、適切な細胞において発現される場合、原核生物のＲＮＡポリメラーゼプロモーターもまた使用され得る。このようなプロモーターから発現するリボザイムは、哺乳動物細胞において機能することが示されている。このような転写単位は、哺乳動物細胞内への導入のための種々のベクター（プラスミドＤＮＡベクター、ウイルスＤＮＡベクター（例えば、アデノウイルスベクターまたはアデノ随伴ベクター）、またはウイルスＲＮＡベクター（例えば、レトロウイルスベクター、セムリキ森林ウイルスベクター、シンドビスウイルスベクター）が挙げられるが、これらに限定されない）に組み込まれ得る。
【０１３７】
本発明の別の実施形態において、ペプチド核酸（ＰＮＡ）組成物が提供される。ＰＮＡは、ＤＮＡ模倣物であり、ここで、核酸塩基は、偽ペプチド骨格に結合される（ＧｏｏｄおよびＮｉｅｌｓｅｎ、Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  Ｎｕｃｌｅｉｃ
Ａｃｉｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｖ．１９９７  ７（４）４３１−３７）。ＰＮＡは、ＲＮＡまたはＤＮＡを従来的に使用した多くの方法において利用され得る。しばしば、ＰＮＡ配列は、対応するＲＮＡ配列またはＤＮＡ配列よりも技術的により良好に実施され、そしてＲＮＡにもＤＮＡにも存在しない有用性を有する。産生方法、特徴、および使用方法を含むＰＮＡの総説は、Ｃｏｒｅｙ（Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  １９９７  Ｊｕｎ；１５（６）：２２４−９）によって提供される。このように、特定の実施形態において、ＡＣＥ  ｍＲＮＡ配列の１以上の部分に相補的であるＰＮＡ配列を調製し得、そしてこのようなＰＮＡ組成物は、ＡＣＥ−特異的ｍＲＮＡの翻訳を調節、変更、減少、または低下させるために使用され得、これにより、このようなＰＮＡ組成物が投与された宿主細胞におけるＡＣＥ活性のレベルを変更する。
【０１３８】
ＰＮＡは、ＤＮＡの通常のホスホジエステル骨格を置換する２−アミノエチル−グリシン連結を有する（Ｎｉｅｌｓｅｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  １９９１  Ｄｅｃ  ６；２５４（５０３７）：１４９７−５００；Ｈａｎｖｅｙら、Ｓｃｉｅｎｃｅ．１９９２  Ｎｏｖ  ２７；２５８（５０８７）：１４８１−５；ＨｙｒｕｐおよびＮｉｅｌｓｅｎ，Ｂｉｏｏｒｇ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ．１９９６  Ｊａｎ；４（１）：５−２３）。この化学は、３つの重要な結果を有する。第１に、ＤＮＡまたはホスホロチオエートオリゴヌクレオチドとは対照的に、ＰＮＡは、中性の分子であり；第２に、ＰＮＡは、アキラルであり（このことは、立体選択的な合成を開発する必要性を避ける）；そして第３に、ＰＮＡ合成は、標準的なＢｏｃプロトコルまたはＦｍｏｃプロトコルを、固相ペプチド合成に使用する。一方、改良型Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ法を含む他の方法が使用されている。
【０１３９】
ＰＮＡモノマーまたは既製のオリゴマーは、ＰｅｒＳｅｐｔｉｖｅ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ（Ｆｒａｍｉｎｇｈａｍ，ＭＡ）から市販されている。ＢｏｃプロトコルまたはＦｍｏｃプロトコルのいずれかによるＰＮＡの合成は、手動プロトコルまたは自動プロトコルを使用して簡単に実施される（Ｎｏｒｔｏｎら、Ｂｉｏｏｒｇ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ．１９９５  Ａｐｒ；３（４）：４３７−４５）。この手動プロトコルは、それ自体で、化学的に修飾されたＰＮＡの産生または密接に関係するＰＮＡのファミリーの同時合成を導く。
【０１４０】
ペプチドの合成に関して、特定のＰＮＡ合成の成功は、選択された配列の特性に依存する。例えば、理論上、ＰＮＡは、ヌクレオチド塩基の任意の組合せを取り込み得るが、隣接するプリンの存在は、その産物中に１以上の残基の欠失を導き得る。この困難性を予測して、隣接するプリンを有するＰＮＡを産生する際に、非効率的に付加されるような残基のカップリングは、繰り返されるべきであることを提案する。この後、逆相高圧液体クロマトグラフィーによってＰＮＡを精製し、ペプチド合成の間に観察される収率および純度に類似する産物の収率および純度を提供する。
【０１４１】
所定の適用のためのＰＮＡの修飾は、固相合成の間にアミノ酸をカップリングすることによってか、または露出されたＮ末端アミンにカルボン酸基を含む化合物を付加することによって達成され得る。あるいは、ＰＮＡは、導入されたリジンまたはシステインにカップリングすることによって、合成後に修飾され得る。ＰＮＡが修飾され得る簡便さは、より良好な溶解度または特定の機能的要件の最適化を容易にする。一旦合成されると、ＰＮＡおよびそれらの誘導体の同定は、質量分析法によって確認され得る。いくつかの研究が、ＰＮＡの修飾物を作製および利用している（例えば、Ｎｏｒｔｏｎら、Ｂｉｏｏｒｇ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ．１９９５  Ａｐｒ；３（４）：４３７−４５；Ｐｅｔｅｒｓｅｎら、Ｊ  Ｐｅｐｔ  Ｓｃｉ．１９９５  Ｍａｙ−Ｊｕｎ；１（３）１７５−８３；Ｏｒｕｍら、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ．１９９５  Ｓｅｐ；１９（３）：４７２−８０；Ｆｏｏｔｅｒら、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．１９９６  Ａｕｇ  ２０；３５（３３）：１０６７３−９；Ｇｒｉｆｆｉｔｈら、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｒｅｓ．１９９５  Ａｕｇ  １１；２３（１５）：３００３−８；Ｐａｒｄｒｉｄｇｅら、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  １９９５  Ｊｕｎ
６；９２（１２）：５５９２−６；Ｂｏｆｆａら、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  １９９５  Ｍａｒ  １４；９２（６）：１９０１−５；Ｇａｍｂａｃｏｒｔｉ−Ｐａｓｓｅｒｉｎｉら、Ｂｌｏｏｄ、１９９６  Ａｕｇ
１５；８８（４）：１４１１−７；Ａｒｍｉｔａｇｅら、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ
Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ、１９９７  Ｎｏｖ  １１；９４（２３）：１２３２０−５；Ｓｅｅｇｅｒら、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ、１９９７  Ｓｅｐ；２３（３）：５１２−７）。米国特許第５，７００，９２２号は、ＰＮＡ−ＤＮＡ−ＰＮＡキメラ分子および診断におけるその分子の使用、生物におけるタンパク質の調節、ならびに治療に対して感受性の状態の処置について議論する。
【０１４２】
ＰＮＡのアンチセンス結合特性を特徴付ける方法は、Ｒｏｓｅ（Ａｎａｌ  Ｃｈｅｍ、１９９３  Ｄｅｃ  １５；６５（２４）：３５４５−９）およびＪｅｎｓｅｎら（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、１９９７  Ａｐｒ  ２２；３６（１６）：５０７２−７）において議論される。Ｒｏｓｅは、キャピラリーゲル電気泳動を使用して、相対的な結合速度論および化学量論を測定することで、ＰＮＡのそれらの相補的オリゴヌクレオチドに対する結合を決定する。同様のタイプの測定が、ＢＩＡｃｏｒｅＴＭ  技術を使用してＪｅｎｓｅｎらによってなされている。
【０１４３】
記載されそして当業者に明らかであるＰＮＡの他の適用には、ＤＮＡ鎖の侵入、アンチセンス阻害、変異分析、転写のエンハンサー、核酸の精製、転写活性遺伝子の単離、転写因子結合のブロック、ゲノムの切断、バイオセンサー、インサイチュハイブリダイゼーションなどにおける使用が挙げられる。
【０１４４】
（ポリヌクレオチドの同定、特徴付けおよび発現）
本発明のポリヌクレオチド組成物は、種々の十分に確立された技術のいずれかを使用して、同定、調製および／または操作され得る（一般に、Ｓａｍｂｒｏｏｋら，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ，１９８９、および他の類似の参考文献を参照のこと）。例えば、ポリヌクレオチドは、以下に詳細に記載されるように、腫瘍に関連する発現（すなわち、本明細書中で提供される代表的なアッセイを使用して決定する場合、正常な組織における発現よりも、腫瘍において少なくとも２倍高い発現）についてｃＤＮＡのマイクロアレイをスクリーニングすることによって、同定され得る。このようなスクリーニングは、例えば、製造者の指示に従って、Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ，Ｉｎｃ．（Ｓａｎｔａ  Ｃｌａｒａ、ＣＡ）のマイクロアレイ技術を使用して（そして本質的にＳｃｈｅｎａら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９３：１０６１４−１０６１９，１９９６およびＨｅｌｌｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９４：２１５０−２１５５，１９９７に記載されるように）行われ得る。あるいは、ポリヌクレオチドは、本明細書中に記載されるタンパク質を発現する細胞（例えば、腫瘍細胞）から調製されるｃＤＮＡから増幅され得る。
【０１４５】
多数のテンプレート依存性プロセスが、サンプル中に存在する目的の標的配列を増幅するために利用可能である。最もよく知られた増幅方法の１つは、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲＴＭ）であり、これは、米国特許第４，６８３，１９５号、同第４，６８３，２０２号、および同第４，８００，１５９号に詳細に記載され、これらの各々は、その全体が本明細書中に参考として援用される。手短に言えば、ＰＣＲＴＭにおいては、標的配列の向かい合った相補鎖上の領域に対して相補的な、２つのプライマー配列が調製される。過剰のデオキシヌクレオシド三リン酸を、ＤＮＡポリメラーゼ（例えば、Ｔａｑポリメラーゼ）と共に反応混合液に添加する。標的配列がサンプル中に存在する場合、プライマーはその標的に結合し、そしてポリメラーゼは、ヌクレオチドを付加することによって標的配列に沿ってプライマーを伸長させる。反応混合液の温度を上昇および下降させることによって、伸長したプライマーは、標的から解離して反応生成物を形成し、過剰のプライマーは標的および反応生成物に結合し、そしてこのプロセスが反復される。好ましくは、逆転写およびＰＣＲＴＭ増幅手順が、増幅されたｍＲＮＡの量を定量するために実行され得る。ポリメラーゼ連鎖反応方法論は、当該分野で周知である。
【０１４６】
任意の多くの他のテンプレート依存性プロセス（この多くは、ＰＣＲＴＭ増幅技術のバリエーションである）は、当該分野で容易に知られており、そして利用可能である。例示として、いくつかのこのような方法としては、リガーゼ連鎖反応（ＬＣＲともいわれる）（例えば、欧州特許出願公開番号３２０，３０８号、および米国特許第４，８８３，７５０号において記載される）；Ｑβレプリカーゼ（ＰＣＴ国際特許出願公開番号ＰＣＴ／ＵＳ８７／００８８０に記載される）；鎖置換増幅（Ｓｔｒａｎｄ  Ｄｉｓｐｌａｃｅｍｅｎｔ  Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ）（ＳＤＡ）および修復鎖反応（Ｒｅｐａｉｒ  Ｃｈａｉｎ  Ｒｅａｃｔｉｏｎ）（ＲＣＲ）が挙げられる。なお他の増幅法は、英国特許出願番号２  ２０２  ３２８号およびＰＣＴ国際特許出願公開番号ＰＣＴ／ＵＳ８９／０１０２５において記載される。他の核酸増幅手順には、転写に基づく増幅系（ＴＡＳ）（ＰＣＴ国際特許出願公開番号ＷＯ  ８８／１０３１５）が挙げられ、これには、核酸配列に基づく増幅（ＮＡＳＢＡ）および３ＳＲが含まれる。欧州特許出願公開番号３２９，８２２は、一本鎖ＲＮＡ（「ｓｓＲＮＡ」）、ｓｓＤＮＡ、および二本鎖ＤＮＡ（ｄｓＤＮＡ）をサイクル的に合成する工程を包含する、核酸増殖プロセスを記載する。ＰＣＴ国際特許出願公開番号ＷＯ  ８９／０６７００は、標的一本鎖ＤＮＡ（「ｓｓＤＮＡ」）へのプロモーター／プライマー配列のハイブリダイゼーションに基づく核酸配列増幅スキーム、引き続くこの配列の多くのＲＮＡコピーの転写を記載する。「ＲＡＣＥ」（Ｆｒｏｈｍａｎ、１９９０）および「片側（ｏｎｅ−ｓｉｄｅｄ）ＰＣＲ」（Ｏｈａｒａ、１９８９）のような他の増幅方法もまた、当業者に周知である。
【０１４７】
本発明のポリヌクレオチドの増幅した部分を使用して、適切なライブラリー（例えば、腫瘍ｃＤＮＡライブラリー）から周知の技術を使用して全長遺伝子を単離し得る。このような技術において、増幅に適した１以上のポリヌクレオチドプローブまたはプライマーを使用して、ライブラリー（ｃＤＮＡライブラリーまたはゲノムライブラリー）をスクリーニングする。好ましくは、ライブラリーはより大きな分子を含むようにサイズが選択される。無作為に準備されたライブラリー（ｒａｎｄｏｍ  ｐｒｉｍｅｄ  ｌｉｂｒａｒｙ）もまた、遺伝子の５’領域および上流領域の同定ために好ましくあり得る。ゲノムライブラリーは、イントロンを入手することおよび５’配列を伸長させることについて好ましい。
【０１４８】
ハイブリダイゼーション技術に関して、部分配列は、周知の技術を使用して標識（例えば、ニックトランスレーションまたは３２Ｐでの末端標識）され得る。次いで、細菌ライブラリーまたはバクテリオファージライブラリーは、一般に、標識プローブと、変性した細菌コロニー（またはファージプラークを含む菌叢）を含むフィルターとをハイブリダイズすることによってスクリーニングされる（Ｓａｍｂｒｏｏｋら，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ，１９８９を参照のこと）。ハイブリダイズするコロニーまたはプラークを選択し、伸長させ、そしてそのＤＮＡをさらなる分析のために単離する。ｃＤＮＡクローンを、付加配列の量を決定するために、例えば、部分配列由来のプライマーおよびそのベクター由来のプライマーを使用するＰＣＲによって分析し得る。制限地図および部分配列を作成して、１以上の重複クローンを同定し得る。次いで、標準的な技術（これは、一連の欠失クローンを作製することを包含し得る）を使用して完全配列を決定し得る。次いで、得られた重複配列を１つの連続配列中に構築し得る。周知の技術を使用して、適切なフラグメントに連結することにより全長ｃＤＮＡ分子を生成し得る。
【０１４９】
あるいは、上記のような増幅技術は、部分的なｃＤＮＡ配列から全長コード配列を得るために有用であり得る。このような増幅技術の１つは、インバースＰＣＲである（Ｔｒｉｇｌｉａら，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１６：８１８６，１９８８を参照のこと）。この技術は、制限酵素を使用して、その遺伝子の既知の領域内のフラグメントを生成する。次いで、このフラグメントを分子内連結により環状化し、そして既知の領域に由来する多岐したプライマーを用いたＰＣＲのための鋳型として使用する。代替のアプローチにおいて、部分配列に隣接した配列を、リンカー配列に対するプライマーおよび既知の領域に特異的なプライマーを使用する増幅により取り出し得る。この増幅した配列を、代表的に、同じリンカープライマーおよび既知の領域に特異的な第２のプライマーを使用する２回目の増幅に供する。既知の配列から反対方向に伸長を開始する２つのプライマーを使用するこの手順についての改変は、ＷＯ  ９６／３８５９１に記載される。そのような別の技術は、「迅速なｃＤＮＡ末端の増幅」またはＲＡＣＥとして公知である。この技術は、公知配列の５’および３’である配列を同定するために、内側プライマーおよび外側プライマー（これらは、ポリＡ領域またはベクター配列にハイブリダイズする）の使用に関連する。さらなる技術としては、キャプチャーＰＣＲ（Ｌａｇｅｒｓｔｒｏｍら，ＰＣＲ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ａｐｐｌｉｃ．１：１１１〜１９，１９９１）およびウォーキングＰＣＲ（Ｐａｒｋｅｒら、Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ．Ｒｅｓ．１９：３０５５〜６０，１９９１）が挙げられる。増幅を利用する他の方法もまた使用して、全長ｃＤＮＡ配列を入手し得る。
【０１５０】
特定の場合において、発現配列タグ（ＥＳＴ）データベース（例えば、ＧｅｎＢａｎｋより入手可能のもの）に提供される配列の分析により、全長ｃＤＮＡ配列を入手することが可能である。重複ＥＳＴの検索は、一般に、周知のプログラム（例えば、ＮＣＢＩ  ＢＬＡＳＴ検索）を使用して行われ得、そしてこのようなＥＳＴを使用して連続した全長配列を生成し得る。全長ＤＮＡ配列はまた、ゲノムフラグメントの分析により入手され得る。
【０１５１】
本発明の他の実施形態において、本発明のポリペプチドまたはその融合タンパク質もしくは機能的等価物をコードするポリヌクレオチド配列またはそのフラグメントは、適切な宿主細胞におけるポリペプチドの発現に方向付けるように組換えＤＮＡ分子において使用され得る。遺伝コードの固有の縮重に起因して、実質的に同じか、または機能的に等価なアミノ酸配列をコードする他のＤＮＡ配列が産生され得、そしてこれらの配列を使用して所定のポリペプチドをクローン化し、そして発現させ得る。
【０１５２】
当業者によって理解されるように、いくつかの場合において、天然に存在しないコドンを所有するポリペプチドコードヌクレオチド配列を作製することが有利であり得る。例えば、特定の原核生物宿主または真核生物宿主に好まれるコドンは、タンパク質発現の速度を増加させるためか、または所望の特性（例えば、天然に存在する配列から生成される転写物の半減期よりも長い半減期）を有する組換えＲＮＡ転写物を産生するように選択され得る。
【０１５３】
さらに、本発明のポリヌクレオチド配列は、種々の理由（遺伝子産物のクローニング、プロセシング、および／または発現を変更する改変が挙げられるが、それらに限定されない）のためにポリペプチドコード配列を変更するために、当該分野において一般的に公知の方法を使用して操作され得る。例えば、無作為切断によるＤＮＡシャッフリングならびに遺伝子フラグメントおよび合成オリゴヌクレオチドのＰＣＲ再アセンブリを使用して、ヌクレオチド配列を操作し得る。さらに、部位指向性変異誘発（ｓｉｔｅ−ｄｉｒｅｃｔｅｄ  ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ）を使用して、新たな制限部位を挿入し得るか、グリコシル化パターンを改変し得るか、コドン優先（ｐｒｅｆｅｒｅｎｃｅ）を変化させ得るか、スプライス改変体を作製し得るか、または変異を導入したりなどし得る。
【０１５４】
本発明の別の実施形態において、天然の核酸配列、改変された核酸配列、または組換え核酸配列は、異種配列に連結されて融合タンパク質をコードし得る。例えば、ポリペプチド活性のインヒビターについてペプチドライブラリーをスクリーニングするために、市販の抗体により認識され得るキメラタンパク質をコードすることが有用であり得る。融合タンパク質はまた、ポリペプチドコード配列と異種タンパク質配列との間に位置する切断部位を含むように操作され得、その結果そのポリペプチドは、切断されて、そして異種部分から取り出されて精製され得る。
【０１５５】
所望のポリペプチドをコードする配列が、当該分野において周知の化学的方法を使用して、全体または部分的に合成され得る（Ｃａｒｕｔｈｅｒｓ，Ｍ．Ｈ．ら、（１９８０）Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．Ｓｙｍｐ．Ｓｅｒ．２１５〜２２３、Ｈｏｒｎ，Ｔ．ら、（１９８０）Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．Ｓｙｍｐ．Ｓｅｒ．２２５〜２３２を参照のこと）。あるいは、タンパク質自体は、ポリペプチドまたはその一部のアミノ酸配列を合成するための化学的方法を使用して産生され得る。例えば、ペプチド合成は、種々の固相技術を使用して実施され得（Ｒｏｂｅｒｇｅ，Ｊ．Ｙ．ら、（１９９５）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２６９：２０２〜２０４）、そして自動化合成は、例えば、ＡＢＩ  ４３１Ａ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ，Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ，ＣＡ）を使用して達成され得る。
【０１５６】
新たに合成されたペプチドは、分取用高速液体クロマトグラフィー（例えば、Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ，Ｔ．（１９８３）Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ  ａｎｄ  Ｍｏｌｃｕｌａｒ  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ，ＷＨ  Ｆｒｅｅｍａｎ
ａｎｄ  Ｃｏ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．）または当該分野において利用可能な他の同等技術により実質的に精製され得る。合成ペプチドの組成は、アミノ酸分析または配列決定（例えば、エドマン分解手順）により確認され得る。さらに、ポリペプチドまたはその任意の部分のアミノ酸配列は、直接合成の間改変されて、そして／または化学的方法を使用して、他のタンパク質もしくはその任意の部分に由来する配列と組み合わせられて、改変体ポリペプチドを産生し得る。
【０１５７】
所望のポリペプチドを発現させるために、ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列または機能的等価物は、適切な発現ベクター（すなわち、挿入されたコード配列の転写および翻訳のために必要なエレメントを含むベクター）内に挿入され得る。当業者に周知である方法を使用して、目的のポリペプチドをコードする配列ならびに適切な転写制御エレメントおよび翻訳制御エレメントを含む発現ベクターを構築し得る。これらの方法としては、インビトロ組換えＤＮＡ技術、合成技術、およびインビボ遺伝子組換えが挙げられる。そのような技術は、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｊ．ら、（１９８９）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ，Ｐｌａｉｎｖｉｅｗ，Ｎ．Ｙ．，およびＡｕｓｕｂｅｌ，Ｆ．Ｍ．ら、（１９８９）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ．Ｎ．Ｙ．に記載される。
【０１５８】
種々の発現ベクター／宿主系が、ポリヌクレオチド配列を含み、そして発現させるように利用され得る。これらとしては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：微生物（例えば、組換えバクテリオファージ、プラスミド、またはコスミドＤＮＡ発現ベクターで形質転換した細菌）；酵母発現ベクターで形質転換した酵母；ウイルス発現ベクター（例えば、バキュロウイルス）で感染させた昆虫細胞系；ウイルス発現ベクター（例えば、カリフラワーモザイクウイルス、ＣａＭＶ；タバコモザイクウイルス、ＴＭＶ）または細菌発現ベクター（例えば、ＴｉもしくはｐＢＲ３２２プラスミド）で形質転換した植物細胞系；あるいは動物細胞系。
【０１５９】
発現ベクター内に存在する「制御エレメント」または「調節配列」は、転写および翻訳を実行するように宿主細胞タンパク質と相互作用する、それらのベクターの非翻訳領域（エンハンサー、プロモーター、５’および３’非翻訳領域）である。そのようなエレメントは、その強さおよび特異性を変更し得る。利用されるベクター系および宿主に依存して、多数の適切な転写エレメントおよび翻訳エレメント（構成的プロモーターおよび誘導性プロモーターを含む）が使用され得る。例えば、細菌系においてクローニングする場合、誘導性プロモーター（例えば、ＰＢＬＵＥＳＣＲＩＰＴファージミド（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ，Ｌａ  Ｊｏｌｌａ，Ｃａｌｉｆ．）またはＰＳＰＯＲＴ１プラスミド（Ｇｉｂｃｏ  ＢＲＬ，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ）などのハイブリッドｌａｃＺプロモーターが使用され得る。哺乳動物細胞系において、哺乳動物遺伝子または哺乳動物ウイルスに由来するプロモーターが、一般的に好ましい。ポリペプチドをコードする配列の複数のコピーを含む細胞株を生成することが必要とされる場合、ＳＶ４０またはＥＢＶベースのベクターが、適切な選択マーカーと共に有利に使用され得る。
【０１６０】
細菌系において、多数の発現ベクターのいずれかが、発現されるポリペプチドに対して意図される使用に依存して選択され得る。例えば、大量に必要とされる場合（例えば、抗体の誘導のために）、容易に精製される融合タンパク質の高レベルの発現を指向するベクターが使用され得る。そのようなベクターとしては、以下が挙げられるがそれらに限定されない：多機能性Ｅ．ｃｏｌｉクローニングベクターおよび発現ベクター（例えば、ＢＬＵＥＳＣＲＩＰＴ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）、ここでは目的のポリペプチドをコードする配列が、β−ガラクトシダーゼのアミノ末端Ｍｅｔおよびそれに引続く７残基についての配列とインフレームでベクター内に連結され得、その結果、ハイブリッドタンパク質が産生される）；ｐＩＮベクター（Ｖａｎ  Ｈｅｅｋｅ，Ｇ．およびＳ．Ｍ．Ｓｃｈｕｓｔｅｒ（１９８９）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６４：５５０３〜５５０９）など。ｐＧＥＸベクター（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓ．）もまた、グルタチオンＳトランスフェラーゼ（ＧＳＴ）との融合タンパク質として外来ポリペプチドを発現させるために使用され得る。一般的に、そのような融合タンパク質は、可溶性であり、そしてグルタチオン−アガロースビーズに吸着させ、次に遊離のグルタチオンの存在下において溶出させることによって、溶解した細胞から容易に精製され得る。そのような系において作製されたタンパク質は、ヘパリン、トロンビン、または第ＸＡ因子プロテアーゼ切断部位を含むように設計され得、その結果、クローニングされた目的のポリペプチドが、随意にＧＳＴ部分から放出され得る。
【０１６１】
酵母（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）において、構成的プロモーターまたは誘導性プロモーター（例えば、α因子、アルコールオキシダーゼおよびＰＧＨ）を含む多数のベクターが使用され得る。概説については、Ａｕｓｕｂｅｌら、（前出）およびＧｒａｎｔら、（１９８７）Ｍｅｔｈｏｄｓ
Ｅｎｚｙｍｏｌ．１５３：５１６〜５４４を参照のこと。
【０１６２】
植物発現ベクターを使用する場合において、ポリペプチドをコードする配列の発現は、多数のプロモーターのいずれかにより駆動され得る。例えば、ウイルスプロモーター（例えば、ＣａＭＶの３５Ｓプロモーターおよび１９Ｓプロモーター）は、単独でか、またはＴＭＶに由来するωリーダー配列と組み合わせて使用され得る（Ｔａｋａｍａｔｓｕ，Ｎ．（１９８７）ＥＭＢＯ  Ｊ．６：３０７〜３１１）。あるいは、植物プロモーター（例えば、ＲＵＢＩＳＣＯの小サブユニットまたは熱ショックプロモーター）を使用し得る（Ｃｏｒｕｚｚｉ，Ｇ．ら、（１９８４）ＥＭＢＯ  Ｊ．３：１６７１〜１６８０；Ｂｒｏｇｌｉｅ，Ｒ．ら、（１９８４）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２４：８３８〜８４３；およびＷｉｎｔｅｒ，Ｊら、（１９９１）Ｒｅｓｕｌｔｓ  Ｐｒｏｂｌ．Ｃｅｌｌ  Ｄｉｆｆｅｒ．１７：８５〜１０５）。これらの構築物は、直接的ＤＮＡ形質転換または病原体媒介性トランスフェクションによって植物細胞内に導入され得る。そのような技術は、多数の一般的に入手可能な概説に記載されている（例えば、Ｈｏｂｂｓ，Ｓ．またはＭｕｒｒｙ，Ｌ．Ｅ．，ＭｃＧｒａｗ  Ｈｉｌｌ  Ｙｅａｒｂｏｏｋ
ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（１９９２）ＭｃＧｒａｗ  Ｈｉｌｌ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．；１９１〜１９６頁を参照のこと）。
【０１６３】
昆虫系はまた、目的のポリペプチドを発現させるために使用され得る。例えば、そのような１つの系において、オートグラファカリフォルニア核発汗病ウイルス（Ａｕｔｏｇｒａｐｈａ  ｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａ  ｎｕｃｌｅａｒ  ｐｏｌｙｈｅｄｒｏｓｉｓ  ｖｉｒｕｓ）（ＡｃＮＰＶ）は、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ  ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ細胞またはＴｒｉｃｈｏｐｌｕｓｉａ  ｌａｒｖａｅにおいて外来遺伝子を発現させるベクターとして使用される。ポリペプチドをコードする配列は、ウイルスの非必須領域内（例えば、ポリへドリン（ｐｏｌｙｈｅｄｒｉｎ）遺伝子）にクローニングされ得て、ポリへドリンプロモーターの制御下に置かれ得る。ポリペプチドコード配列の首尾良い挿入は、ポリへドリン遺伝子を不活性化し、そしてコートタンパク質を欠損している組換えウイルスを産生する。次いで、この組換えウイルスを使用して、例えば、目的のポリペプチドが発現され得る、Ｓ．ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ細胞またはＴｒｉｃｈｏｐｌｕｓｉａ  ｌａｒｖａｅに感染させ得る（Ｅｎｇｅｌｈａｒｄ，Ｅ．Ｋ．ら、（１９９４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．９１：３２２４〜３２２７）。
【０１６４】
哺乳動物宿主細胞において、多数のウイルスベースの発現系が一般的に利用可能である。例えば、アデノウイルスが、発現ベクターとして使用される場合において、目的のポリペプチドをコードする配列は、後期プロモーターおよび３連からなるリーダー配列から構成されるアデノウイルス転写／翻訳複合体内に連結され得る。ウイルスゲノムの非必須Ｅ１またはＥ３領域における挿入を使用して、感染した宿主細胞においてポリペプチドを発現し得る、生存可能ウイルスを入手し得る（Ｌｏｇａｎ，Ｊ．およびＳｈｅｎｋ，Ｔ．（１９８４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８１：３６５５〜３６５９）。さらに、転写エンハンサー（例えば、ラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）エンハンサー）を使用して、哺乳動物宿主細胞における発現を増加させ得る。
【０１６５】
特定の開始シグナルはまた、目的のポリペプチドをコードする配列のより効率的な翻訳を達成するために使用され得る。そのようなシグナルとしては、ＡＴＧ開始コドンおよび隣接配列が挙げられる。ポリペプチドをコードする配列、その開始コドンおよび上流配列が適切な発現ベクター内に挿入される場合において、さらなる転写制御シグナルまたは翻訳制御シグナルは必要とされなくとも良い。しかし、コード配列のみ、またはその一部のみが挿入される場合、ＡＴＧ開始コドンを含む外因性翻訳制御シグナルが提供されるべきである。さらに、開始コドンは、インサート全体の翻訳を確実にするために正確なリーディングフレーム内にあるべきである。外因性翻訳エレメントおよび開始コドンは、種々の起源（天然および合成の両方）に由来し得る。発現の効率は、使用される特定の細胞系に適切なエンハンサー（例えば、文献（Ｓｃｈａｒｆ，Ｄ．ら、（１９９４）Ｒｅｓｕｌｔｓ  Ｐｒｏｂｌ．Ｃｅｌｌ  Ｄｉｆｆｅｒ．２０：１２５〜１６２）に記載されるエンハンサー）の封入によって増大され得る。
【０１６６】
さらに、宿主細胞株は、挿入された配列の発現を調節するか、または所望の様式において発現されたタンパク質をプロセシングするその能力について選択され得る。ポリペプチドのそのような改変としては、アセチル化、カルボキシル化、グリコシル化、リン酸化、リピデーション（ｌｉｐｉｄａｔｉｏｎ）およびアシル化が挙げられるが、これらに限定されない。タンパク質の「プレプロ」形態を切断する翻訳後プロセシングはまた、正確な挿入、折り畳みおよび／または機能を促進させるために使用され得る。異なる宿主細胞（例えば、ＣＨＯ、ＣＯＳ、ＨｅＬａ、ＭＤＣＫ、ＨＥＫ２９３およびＷＩ３８）（これらは、そのような翻訳後活性についての特定の細胞機構（ｍａｃｈｉｎｅｒｙ）および特徴的機構（ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ）を有する）は、正確な改変および外来タンパク質のプロセシングを確実にするように選択され得る。
【０１６７】
長期間の組換えタンパク質の高収率の産生のために、安定な発現が一般的に好ましい。例えば、目的のポリヌクレオチドを安定に発現する細胞株が、ウイルス複製起点および／または内因性発現エレメントならびに同じかもしくは別個のベクター上の選択マーカー遺伝子を含み得る、発現ベクターを使用して形質転換され得る。そのベクターの導入後、細胞は、それらが選択培地に切換えられる前に、富化（ｅｎｒｉｃｈｅｄ）培地において１〜２日間増殖され得る。選択マーカーの目的は、選択に対する耐性を与えることであり、そしてその存在は、導入された配列を首尾良く発現する細胞の増殖および回収を可能とする。安定に形質転換された細胞の耐性クローンは、その細胞型に適切な組織培養技術を使用して、増殖され得る。
【０１６８】
多数の選択系を使用して、形質転換細胞株を回収し得る。これらの選択系としては、それぞれ、ｔｋ−細胞またはａｐｒｔ−細胞において使用され得る、単純疱疹ウイルスチミジンキナーゼ（Ｗｉｇｌｅｒ，Ｍ．ら、（１９７７）Ｃｅｌｌ
１１：２２３〜３２）およびアデニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（Ｌｏｗｙ，Ｉ．ら、（１９９０）Ｃｅｌｌ  ２２：８１７〜２３）遺伝子が挙げられるが、これらに限定されない。また、代謝拮抗剤耐性、抗生物質耐性または除草剤耐性は、選択のための基礎として使用され得る；例えば、ｄｈｆｒ（これは、メトトレキセートに対する耐性を与える（Ｗｉｇｌｅｒ，Ｍ．ら、（１９８０）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．７７：３５６７〜７０））；ｎｐｔ（これは、アミノグリコシド、ネオマイシンおよびＧ〜４１８に対する耐性を与える（Ｃｏｌｂｅｒｅ−Ｇａｒａｐｉｎ，Ｆ．ら、（１９８１）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１５０：１〜１４））；ならびにａｌｓまたはｐａｔ（これらは、それぞれ、クロルスルフロンおよびホスフィノスリシンアセチルトランスフェラーゼに対する耐性を与える（Ｍｕｒｒｙ、前出））。さらなる選択遺伝子が記載されている。例えば、ｔｒｐＢ（これは、細胞がトリプトファンの代わりにインドールを利用することを可能にする）またはｈｉｓＤ（これは、細胞がヒスチジンの代わりにヒスチノールを利用することを可能にする）（Ｈａｒｔｍａｎ，Ｓ．Ｃ．およびＲ．Ｃ．Ｍｕｌｌｉｇａｎ（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８５：８０４７−５１）。可視マーカーの使用の人気が高くなっており、アントシアニン、β−グルクロニダーゼおよびその基質のＧＵＳ、ならびにルシフェラーゼおよびその基質のルシフェリンのようなマーカーが、形質転換体を同定するためのみならず、特定のベクター系に起因し得る一過性のタンパク質発現または安定なタンパク質発現の量を定量するためにもまた広範に使用されている（Ｒｈｏｄｅｓ，Ｃ．Ａ．ら、（１９９５）Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．５５：１２１−１３１）。
【０１６９】
マーカー遺伝子発現の存在／非存在は、目的の遺伝子もまた存在するということを示唆しているが、その存在および発現は、確認されることを必要とし得る。例えば、ポリペプチドをコードする配列が、マーカー遺伝子配列内に挿入される場合、配列を含む組換え細胞は、マーカー遺伝子機能の非存在により同定され得る。あるいは、マーカー遺伝子は、１つのプロモーターの制御下でポリペプチドコード配列と縦列に配置され得る。誘導または選択に応じたマーカー遺伝子の発現は、通常、その縦列遺伝子の発現も同様に示す。
【０１７０】
あるいは、所望のポリヌクレオチド配列を含み、かつこれを発現する宿主細胞は、当業者に公知の種々の手順によって同定され得る。これらの手順としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：核酸またはタンパク質の検出および／または定量のための、例えば、膜ベースの技術、溶液ベースの技術、またはチップベースの技術を含む、ＤＮＡ−ＤＮＡハイブリダイゼーションもしくはＤＮＡ−ＲＮＡハイブリダイゼーションおよびタンパク質バイオアッセイ技術またはイムノアッセイ技術。
【０１７１】
ポリヌクレオチドにコードされた産物に特異的なポリクローナル抗体もしくはモノクローナル抗体のいずれかを使用して、その産物の発現を検出および測定するための種々のプロトコルは、当該分野において公知である。例としては、酵素結合免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）および蛍光活性化セルソーティング（ＦＡＣＳ）が挙げられる。所定のポリペプチド上の２つの非干渉性エピトープに対して反応性であるモノクローナル抗体を利用する２つの部位の、モノクローナルベースのイムノアッセイが、いくつかの適用のために好まれ得るが、競合的結合アッセイもまた、利用され得る。これらのアッセイおよび他のアッセイは、とりわけＨａｍｐｔｏｎ，Ｒ．ら、（１９９０；Ｓｅｒｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ，ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，ＡＰＳ  Ｐｒｅｓｓ，Ｓｔ  Ｐａｕｌ．Ｍｉｎｎ．）およびＭａｄｄｏｘ，Ｄ．Ｅ．ら、（１９８３；Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１５８：１２１１−１２１６）に記載される。
【０１７２】
広範な種々の標識技術および結合体化技術は、当業者に公知であり、そして種々の核酸アッセイおよびアミノ酸アッセイにおいて使用され得る。ポリヌクレオチドに関連する配列を検出するための標識されたハイブリダイゼーションプローブまたはＰＣＲプローブを作製するための手段としては、オリゴ標識、ニックトランスレーション、末端標識または標識されたヌクレオチドを使用するＰＣＲ増幅が挙げられる。あるいは、ｍＲＮＡプローブの産生のために、配列またはその任意の部分が、ベクター内にクローニングされ得る。そのようなベクターは、当該分野において公知であり、市販されており、そして適切なＲＮＡポリメラーゼ（例えば、Ｔ７、Ｔ３、またはＳＰ６）および標識されたヌクレオチドを添加することにより、ＲＮＡプローブをインビトロで合成するために使用され得る。これらの手順は、種々の市販キットを使用して実施され得る。使用され得る適切なレポーター分子または標識としては、放射性核種、酵素、蛍光剤、化学発光剤、または色素形成剤ならびに基質、コファクター（補因子）、インヒビター、磁気粒子などが挙げられる。
【０１７３】
目的のポリヌクレオチド配列で形質転換された宿主細胞は、発現および細胞培養からタンパク質を回収するのに適した条件下で培養され得る。組換え細胞により産生されたタンパク質は、使用された配列および／またはベクターに依存して、細胞内に分泌または含まれ得る。当業者によって理解されるように、本発明のポリヌクレオチドを含む発現ベクターは、原核生物細胞膜または真核生物細胞膜を介して、コードされたポリペプチドの分泌を指向するシグナル配列を含むように設計され得る。他の組換え構築物を使用して、目的のポリペプチドをコードする配列を、可溶性タンパク質の精製を促進するポリペプチドドメインをコードするヌクレオチド配列に結合させ得る。そのような精製促進ドメインとしては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：固定された金属上での精製を可能にする金属キレート化ペプチド（例えば、ヒスチジン−トリプトファンモジュール）、固定された免疫グロブリン上での精製を可能にするプロテインＡドメイン、およびＦＬＡＧＳ伸長／アフィニティー精製システム（Ｉｍｍｕｎｅｘ  Ｃｏｒｐ．，Ｓｅａｔｔｌｅ，Ｗａｓｈ．）において利用されるドメイン。精製ドメインとコードされるポリペプチドとの間に切断可能なリンカー配列（例えば、第ＸＡ因子またはエンテロキナーゼに対して特異的な配列（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ．Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．））を含めることを使用して、精製を促進させ得る。そのような発現ベクターの１つは、目的のポリペプチドおよびチオレドキシンまたはエンテロキナーゼ切断部位の前に６つのヒスチジン残基をコードする核酸を含む融合タンパク質の発現を提供する。ヒスチジン残基は、Ｐｏｒａｔｈ，Ｊ．ら、（１９９２、Ｐｒｏｔ．Ｅｘｐ．Ｐｕｒｉｆ．３：２６３−２８１）に記載されるように、ＩＭＩＡＣ（固定化金属イオンアフィニティークロマトグラフィー）上での精製を促進し、一方エンテロキナーゼ切断部位は、融合タンパク質から所望のポリペプチドを精製するための手段を提供する。融合タンパク質を含むベクターの考察は、Ｋｒｏｌｌ，Ｄ．Ｊ．ら、（１９９３；ＤＮＡ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．１２：４４１−４５３）に提供される。
【０１７４】
組換え産生方法に加えて、本発明のポリペプチドおよびそのフラグメントは、固相技術（Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ  Ｊ．（１９６３）Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．８５：２１４９−２１５４）を使用する、直接的ペプチド合成によって産生され得る。タンパク質合成は、手動技術を使用してか、または自動化によって実施され得る。自動化合成は、例えば、Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ  ４３１Ａペプチド合成装置（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）を使用して、達成され得る。あるいは、種々のフラグメントは、別々に化学的に合成されて、そして全長分子を生成するために化学的方法を使用して合わせられ得る。
【０１７５】
（抗体組成物、そのフラグメントおよび他の結合因子）
別の局面に従って、本発明はさらに、本明細書中に開示される腫瘍ポリペプチド、またはその一部、改変体もしくは誘導体への免疫学的結合を示す、結合因子（例えば、抗体およびその抗原結合フラグメント）を提供する。抗体またはその抗原結合フラグメントは、それが本発明のポリペプチドと検出可能なレベルで（例えば、ＥＬＩＳＡアッセイにおいて）反応し、そして類似の条件下で無関係のポリペプチドと検出可能に反応しない場合、本発明のポリペプチドに「特異的に結合する」、「免疫学的に結合する」および／または「免疫学的に反応性である」と言われる。
【０１７６】
この文脈で使用される場合、免疫学的結合は、一般に、免疫グロブリン分子と、この免疫グロブリンが特異的な抗原との間で起こるタイプの非共有結合的な相互作用をいう。免疫学的結合相互作用の強度または親和性は、相互作用の解離定数（Ｋｄ）の観点から表現され得、ここで、より小さいＫｄは、より大きな親和性を示す。選択されたポリペプチドの免疫学的結合特性は、当該分野で周知の方法を使用して、定量され得る。１つのこのような方法は、抗原結合部位／抗原複合体の形成および解離の速度を測定する工程を必要とし、ここで、これらの速度は、複合体パートナーの濃度、相互作用の親和性、および両方向の速度に等しく影響を与える幾何学的パラメータに依存する。従って、「会合速度定数（ｏｎ  ｒａｔｅ  ｃｏｎｓｔａｎｔ）」（Ｋｏｎ）および「解離速度定数（ｏｆｆ  ｒａｔｅ  ｃｏｎｓｔａｎｔ）」（Ｋｏｆｆ）の両方が、濃度ならびに会合および解離の実際の速度を計算することによって決定され得る。Ｋｏｆｆ／Ｋｏｎの比は、親和性に関係しない全てのパラメータの排除を可能にし、そして従って、解離定数Ｋｄに等しい。一般的には、Ｄａｖｉｅｓら（１９９０）Ａｎｎｕａｌ  Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．５９：４３９−４７３を参照のこと。
【０１７７】
抗体の「抗原結合部位」または「結合部分」は、抗原結合に関係する免疫グロブリン分子の一部分をいう。この抗原結合部位は、重鎖（「Ｈ」）および軽鎖（「Ｌ」）のＮ末端可変（「Ｖ」）領域のアミノ酸残基によって形成される。重鎖および軽鎖のＶ領域内の３つの高度に分岐したストレッチが、「超可変領域」といわれ、これは、「フレームワーク領域」、すなわち「ＦＲ」として公知のより保存された隣接ストレッチの間に挿入される。従って、用語「ＦＲ」は、免疫グロブリンの超可変領域の間であり、かつそれに隣接して天然に見出されるアミノ酸配列をいう。抗体分子において、軽鎖の３つの超可変領域および重鎖の３つの超可変領域が、３次元空間において互いに相対的に配置されて、抗原結合表面を形成する。この抗原結合表面は、結合した抗原の３次元表面に相補的であり、そして重鎖および軽鎖の各々の３つの超可変領域は、「相補性決定領域」、すなわち「ＣＤＲ」といわれる。
【０１７８】
結合因子は、本明細書中に提供される代表的なアッセイを使用して、癌（例えば、卵巣癌）を有する患者と有さない患者との間をさらに区別し得る。例えば、腫瘍タンパク質に結合する抗体または他の結合因子は、好ましくは、この疾患を有する患者の少なくとも約２０％、より好ましくは患者の少なくとも約３０％において、癌の存在を示すシグナルを生成する。あるいは、または加えて、この抗体は、癌を有さない個体の少なくとも約９０％において、この疾患の非存在を示す陰性シグナルを生成する。結合因子が、この要求を満たすか否かを決定するために、癌（標準的な臨床試験によって決定されるような）を有する患者および有さない患者からの生物学的サンプル（例えば、血液、血清、痰、尿および／または腫瘍生検）が、この結合因子に結合するポリペプチドの存在について、本明細書に記載されるようにアッセイされ得る。好ましくは、疾患を有するサンプルおよび有さないサンプルの統計的に有意な数が、アッセイされる。各結合因子は、上記の基準を満足すべきである；しかし、当業者は、結合因子が、組合せて使用されて、感度を改善し得ることを認識する。
【０１７９】
上記の要求を満足する任意の因子が、結合因子であり得る。例えば、結合因子は、ペプチド成分を含むか含まないリボソーム、ＲＮＡ分子またはポリペプチドであり得る。好ましい実施形態において、結合因子は、抗体またはその抗原結合フラグメントである。抗体は、当業者に公知の種々の技術のいずれかによって、調製され得る。例えば、ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，１９８８を参照のこと。一般に、抗体は、細胞培養技術（本明細書に記載されるようなモノクローナル抗体の生成を含む）によって、または組換え抗体の生成を可能にするために、適切な細菌細胞宿主または哺乳動物細胞宿主への抗体遺伝子のトランスフェクションを介して、生成され得る。１つの技術において、このポリペプチドを含む免疫原が、最初に、広範な種々の哺乳動物（例えば、マウス、ラット、ウサギ、ヒツジまたはヤギ）のいずれかに注射される。この工程において、本発明のポリペプチドは、改変を有さない免疫原として機能し得る。あるいは、特に、比較的短いポリペプチドについて、優れた免疫応答は、このポリペプチドがキャリアタンパク質（例えば、ウシ血清アルブミンまたはキーホールリンペットヘモシアニン）に結合される場合に、惹起され得る。この免疫原は、好ましくは、１回以上のブースト免疫を組み込む所定のスケジュールに従って、動物宿主に注射され、そしてこれらの動物が、定期的に採血される。このポリペプチドに特異的なポリクローナル抗体は、次いで、例えば、適切な固体支持体に結合されたポリペプチドを使用するアフィニティークロマトグラフィーによって、このような抗血清から精製され得る。
【０１８０】
目的の抗原性ポリペプチドに特定なモノクローナル抗体が、例えば、ＫｏｈｌｅｒおよびＭｉｌｓｔｅｉｎ，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．６：５１１−５１９，１９７６の技術およびその改良型を使用して、調製され得る。簡潔には、これらの方法は、所望の特異性（すなわち、目的のポリペプチドとの反応性）を有する抗体を生成し得る不死細胞株の調製を含む。このような細胞株は、例えば、上記のように免疫された動物から得られる脾細胞から生成され得る。次いで、この脾細胞が、例えば、骨髄腫細胞融合パートナー（好ましくは、免疫された動物と同系であるもの）との融合によって不死化される。種々の融合技術が使用され得る。例えば、脾細胞および骨髄腫細胞は、数分間、非イオン性界面活性剤とあわされ得、次いで、ハイブリッド細胞の増殖は支持するが、骨髄腫細胞の増殖は支持しない選択培地に低密度でプレートされ得る。好ましい選択技術は、ＨＡＴ（ヒポキサンチン、アミノプテリン、チミジン）選択を使用する。十分な時間の後、通常、約１〜２週間の後、ハイブリッドのコロニーが観察される。単一コロニーを選択し、そしてそれらの培養上清を、このポリペプチドに対する結合活性について試験する。高い反応性および特異性を有するハイブリドーマが好ましい。
【０１８１】
モノクローナル抗体は、増殖ハイブリドーマコロニーの上清から単離され得る。さらに、種々の技術が、収量を増加させるために使用され得、この技術は、例えば、適切な脊椎動物宿主（例えば、マウス）の腹腔へのハイブリドーマ細胞株の注入である。次いで、モノクローナル抗体が、腹水または血液から回収され得る。夾雑物が、従来の技術（例えば、クロマトグラフィー、ゲル濾過、沈澱、および抽出）によって抗体から除去され得る。本発明のポリペプチドは、例えば、アフィニティートクロマトグラフィー工程における精製プロセスにおいて使用され得る。
【０１８２】
抗体分子の免疫学的結合特性を示し得る抗原結合部位を含む多くの治療的に有効な分子が、当該分野で公知である。このタンパク質分解性酵素パパインは、優先的に、ＩｇＧ分子を切断して、いくつかのフラグメントを生じさせ、これら（「Ｆ（ａｂ）フラグメント」）のうちの２つの各々は、インタクトな抗原結合部位を含む共有結合ヘテロダイマーを含む。酵素ペプシンは、ＩｇＧ分子を切断して、いくつかのフラグメント（両方の抗原結合部位を含む「Ｆ（ａｂ’）２」フラグメントを含む）を提供し得る。「Ｆｖ」フラグメントは、ＩｇＭ、および稀有な場合にはＩｇＧまたはＩｇＡ免疫グロブリン分子の優先的なタンパク質分解的切断によって生成され得る。しかし、Ｆｖフラグメントは、当該分野で公知の組換え技術を使用して、より一般的に誘導される。Ｆｖフラグメントは、非共有結合的なＶＨ：：ＶＬヘテロダイマーを含み、このへテロダイマーは、ネイティブな抗体分子の抗原認識能力および抗原結合能力のほとんどを保持する抗原結合部位を含む。Ｉｎｂａｒら（１９７２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ６９：２６５９−２６６２；Ｈｏｃｈｍａｎら（１９７６）Ｂｉｏｃｈｅｍ  １５：２７０６−２７１０；およびＥｈｒｌｉｃｈら（１９８０）Ｂｉｏｃｈｅｍ  １９：４０９１−４０９６。
【０１８３】
単鎖Ｆｖ（「ｓＦｖ」）ポリペプチドは、共有結合されたＶＨ：：ＶＬヘテロダイマーであり、このヘテロダイマーは、ペプチドをコードするリンカーによって連結されたＶＨをコードする遺伝子およびＶＬをコードする遺伝子を含む遺伝子融合物から発現される。Ｈｕｓｔｏｎら（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８５（１６）：５８７９−５８８３。抗体Ｖ領域からの天然に凝集する（しかし、化学的には分離された）軽鎖ポリペプチドおよび重鎖ポリペプチドを、ｓＦｖ分子に転換するための化学構造を識別するための多くの方法が記述され、このｓＦｖ分子は、抗原結合部位の構造に実質的に類似する３次元構造に折り畳まれる。例えば、米国特許第５，０９１，５１３号および同第５，１３２，４０５号（Ｈｕｓｔｏｎら）；ならびに米国特許第４，９４６，７７８号（Ｌａｄｎｅｒら）を参照のこと。
【０１８４】
上記分子の各々は、重鎖および軽鎖のＣＤＲセットを含み、これらは、ＣＤＲに対する支持を提供し、そしてお互いついてＣＤＲの空間的関係を規定する、重鎖および軽鎖のＦＲセットの間にそれぞれ挿入される。本明細書中で使用される場合、用語「ＣＤＲセット」は、重鎖または軽鎖のＶ領域の３つの超可変領域をいう。重鎖または軽鎖のＮ末端から進んで、これらの領域は、各々、「ＣＤＲ１」、「ＣＤＲ２」および「ＣＤＲ３」と表記される。従って、抗原結合部位は、６つのＣＤＲを含み、この６つのＣＤＲは、重鎖および軽鎖のＶ領域の各々に由来のＣＤＲセットを含む。単一ＣＤＲ（例えば、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、またはＣＤＲ３）を含むポリペプチドは、本明細書中で「分子認識ユニット」といわれる。多数の抗原−抗体複合体の結晶学的分析により、ＣＤＲのアミノ酸残基は、結合した抗原との広範な接触を形成することが実証されており、ここで、最も広範な抗原接触は、重鎖ＣＤＲ３との接触である。従って、分子認識ユニットは、抗原結合部位の特異性の主な原因である。
【０１８５】
本明細書中で使用される場合、用語「ＦＲセット」は、重鎖または軽鎖のＶ領域のＣＤＲセットのＣＤＲを構成する、４つの隣接アミノ酸配列をいう。いくつかのＦＲ残基は、結合抗原と接触し得る；しかし、ＦＲは、Ｖ領域を、抗原結合部位（特にＣＤＲに直接隣接するＦＲ残基）に折り畳む、主な原因となる。ＦＲにおいて、特定のアミノ酸残基および特定の構造特徴は、非常に高度に保存される。この点において、全てのＶ領域配列は、約９０アミノ酸残基の内部ジスルフィドループを含む。Ｖ領域が、結合部位に折り畳まれる場合、このＣＤＲは、抗原結合表面を形成する突出したループモチーフとして表示される。正確なＣＤＲアミノ酸配列に関わらず、特定の「限界（ｃａｎｏｎｉｃａｌ）」構造に折り畳まれるＣＤＲループの形状に影響を与えるＦＲの保存された構造領域が存在することが一般的に認識される。さらに、特定のＦＲ残基は、抗体の重鎖と軽鎖との相互作用を安定化する非共有結合的なドメイン間接触に関与することが知られている。
【０１８６】
非ヒト免疫ブログリン由来の抗原結合部位を含む、多数の「ヒト化」抗体分子が記載されており、この抗体分子としては、げっ歯類Ｖ領域、およびヒト定常ドメインに融合された、げっ歯類Ｖ領域の会合ＣＤＲ（Ｗｉｎｔｅｒら（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ  ３４９：２９３−２９９；Ｌｏｂｕｇｌｉｏら（１９８９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８６：４２２０−４２２４；Ｓｈａｗら（１９８７）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３８：４５３４−４５３８；およびＢｒｏｗｎら（１９８７）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．４７：３５７７−３５８３）、適切なヒト抗体定常ドメインとの融合の前に、ヒト支持ＦＲに移植されたげっ歯類ＣＤＲ（Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら（１９８８）Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３−３２７；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎら（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３９：１５３４−１５３６；およびＪｏｎｅｓら（１９８６）Ｎａｔｕｒｅ  ３２１：５２２−５２５）、ならびに組換えベニアリングされた（ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｌｙ
ｖｅｎｅｅｒｅｄ）げっ歯類ＦＲによって支持されるげっ歯類ＣＤＲ（欧州特許公開番号５１９，５９６（１９９２年１２月２３日公開）を有するキメラ抗体が挙げられる。これらの「ヒト化」分子は、ヒトレシピエントにおけるこれらの部分の治療的適用の持続期間および有効性を制限する、げっ歯類抗ヒト抗体分子に対する所望されない免疫学的応答を、最小限にするように設計される。
【０１８７】
本明細書中で使用される場合、用語「ベニアリングされたＦＲ」および「組換えベニアリングされたＦＲ」は、ネイティブのＦＲポリペプチド折り畳み構造の実質的に全てを保持する抗原結合部位を含む異種分子を提供するための、例えば、げっ歯類重鎖または軽鎖のＶ領域由来のＦＲ残基の、ヒトＦＲ残基との選択的置換をいう。ベニアリング技術は、抗原結合部位のリガンド結合特徴が、抗原結合表面内の重鎖および軽鎖のＣＤＲセットの構造および相対的な配置によって、主に決定されるという理解に基づく。Ｄａｖｉｅｓら（１９９０）Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．５９：４３９−４７３。従って、抗原結合特異性は、ＣＤＲ構造、お互いの相互作用、およびＶ領域ドメインの残りとの相互作用が慎重に維持されるヒト化抗体のみにおいて保存され得る。ベニアリング技術を使用することによって、外部（例えば、溶媒が接近可能な）ＦＲ残基（これは、免疫系に容易に遭遇する）は、ヒト残基と選択的に置換されて、弱い免疫原性ベニアリング表面または実質的に非免疫原性のベニアリング表面のいずれかを含むハイブリッド分子を提供する。
【０１８８】
ベニアリングの処理は、Ｋａｂａｔら（Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，第４版（Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐｔ．ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，Ｕ．Ｓ．Ｇｏｖｅｒｎｍｅｎｔ  Ｐｒｉｎｔｉｎｇ  Ｏｆｆｉｃｅ，１９８７））によって編集された、ヒト抗体可変ドメインについての利用可能な配列データを使用し、Ｋａｂａｔデータベースおよび他の米国および海外のアクセス可能なデータベース（核酸およびタンパク質の両方）に更新する。Ｖ領域アミノ酸の溶媒接近性は、ヒトおよびマウス抗体フラグメントについての既知の三次元構造から推定され得る。マウス抗原結合部位をベニアリングする際に、２つの一般的な工程が存在する。最初に、目的の抗体分子の可変ドメインのＦＲを、上記の供給源から得られたヒト可変ドメインの対応するＦＲ配列と比較する。次いで、最も相同的なヒトＶ領域を、対応するマウスアミノ酸と、残基ごとに比較する。ヒト対応物とは異なるマウスＦＲにおける残基は、当該分野において周知の組換え技術を使用して、ヒト部分に存在する残基によって置換される。残基スイッチング（ｓｗｉｔｃｈｉｎｇ）は、少なくとも部分的に露出した（溶媒が接近可能である）部分を用いてのみ実施され、そしてＶ領域ドメインの三次構造に対する有意な効果を有し得るアミノ酸残基（例えば、プロリン、グリシンおよび荷電したアミノ酸）の置換には、注意が払われる。
【０１８９】
従って、この様式において、得られた「ベニヤ化された（ｖｅｎｅｅｒｅｄ）」マウス抗原結合部位は、以下を保持するように設計される：マウスＣＤＲ残基、ＣＤＲに実質的に隣接する残基、埋もれているまたは殆ど埋もれている（溶媒接近不可能）と同定された残基、重鎖ドメインと軽鎖ドメインとの間の非共有（例えば、静電気的および疎水的）接触に関与すると考えられる残基、ならびにＣＤＲループの「限界（ｃａｎｏｎｉｃａｌ）」三次構造に影響すると考えられる、ＦＲの保存された構造領域由来の残基。次いで、これらの設計基準を用いて、マウス抗原結合部位の重鎖および軽鎖の両方のＣＤＲを、ヒト様ＦＲ（マウス抗体分子の抗原特異性を示す組み換えヒト抗体の発現のために哺乳動物細胞をトランスフェクトするために用いられ得る）に組合わせた、組み換えヌクレオチド配列を調製する。
【０１９０】
本発明の別の実施形態において、本発明のモノクローナル抗体は、１つ以上の治療薬剤に結合され得る。これに関して適切な薬剤としては、放射性核種、分化誘導剤、薬物、毒素、およびそれらの誘導体が挙げられる。好ましい放射性核種としては、９０Ｙ、１２３Ｉ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、２１１Ａｔ、および２１２Ｂｉが挙げられる。好ましい薬物としては、メトトレキセート、ならびにピリミジンアナログおよびプリンアナログが挙げられる。好ましい分化誘導剤としては、ホルボールエステルおよび酪酸が挙げられる。好ましい毒素としては、リシン、アブリン、ジフテリア毒素、コレラ毒素、ゲロニン（ｇｅｌｏｎｉｎ）、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ外毒素、Ｓｈｉｇｅｌｌａ毒素、およびアメリカヤマゴボウ抗ウイルスタンパク質が挙げられる。
【０１９１】
治療剤は、直接的かまたは間接的に（例えば、リンカー基を介して）のいずれかで、適切なモノクローナル抗体にカップリング（例えば、共有結合）され得る。薬剤と抗体との間の直接的な反応は、各々が互いに反応し得る置換基を有する場合に可能である。例えば、求核基（例えば、アミノ基またはスルフヒドリル基）は、一方で、カルボニル含有基（例えば、無水物もしくは酸ハロゲン化物）と反応し得るか、あるいは、他方で、良好な脱離基（例えば、ハロゲン化物）を含むアルキル基と反応し得る。
【０１９２】
あるいは、リンカー基を介して治療剤と抗体とをカップリングさせることが所望され得る。リンカー基は、抗体を薬剤から隔てるためのスペーサーとして機能して、結合の可能性を妨げることを回避し得る。リンカー基はまた、薬剤または抗体上の置換基の化学的反応性を増加させるように働き得、従ってカップリング効率を増大させる。化学的反応性の増大はまた、他の方法では可能ではない、薬剤または薬剤上の官能基の使用を容易にし得る。
【０１９３】
種々の二官能性試薬または多官能性試薬（ホモ官能性とヘテロ官能性との両方（例えば、Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬのカタログ中に記載されるもの））が、リンカー基として使用され得ることが当業者には明らかである。カップリングは、例えば、アミノ基、カルボキシル基、スルフヒドリル基、または酸化された炭水化物残基を介してもたらされ得る。このような方法論を記載する多数の参考文献（例えば、Ｒｏｄｗｅｌｌらへの米国特許第４，６７１，９５８号）が存在する。
【０１９４】
本発明の免疫結合体の抗体部分がないときに治療剤がより強力である場合、細胞中へのインターナリゼーションの間に、または細胞中へのインターナリゼーションの際に切断可能である、リンカー基を使用することが好適であり得る。多数の異なる切断可能なリンカー基が記載されてきた。これらのリンカー基からの薬剤の細胞内放出についての機構としては、ジスルフィド結合の還元（例えば、Ｓｐｉｔｌｅｒへの米国特許第４，４８９，７１０号）、感光性（Ｐｈｏｔｏｌａｂｉｌｅ）結合の照射（例えば、Ｓｅｎｔｅｒらへの米国特許第４，６２５，０１４号）、誘導体化されたアミノ酸側鎖の加水分解（例えば、Ｋｏｈｎらへの米国特許第４，６３８，０４５号）、血清補体媒介性加水分解（例えば、Ｒｏｄｗｅｌｌらへの米国特許第４，６７１，９５８号）、および酸触媒加水分解（例えば、Ｂｌａｔｔｌｅｒらへの米国特許第４，５６９，７８９号）による切断が挙げられる。
【０１９５】
１つより多い薬剤を抗体にカップリングさせることが好適であり得る。１つの実施形態において、薬剤の複数の分子が、１つの抗体分子にカップリングされる。別の実施形態において、１つより多い型の薬剤が、１つの抗体にカップリングされ得る。特定の実施形態に関わらず、１つより多い薬剤を有する免疫結合体は、種々の方法で調製され得る。例えば、１つより多い薬剤は、抗体分子に直接的にカップリングされ得るか、または付着のための複数の部位を提供するリンカーが使用され得る。あるいは、キャリアが使用され得る。
【０１９６】
キャリアは、種々の方法（直接的にかまたはリンカー基を介するかのいずれかでの共有結合を含む）で、薬剤を保有し得る。適切なキャリアとしては、アルブミンのようなタンパク質（例えば、Ｋａｔｏらへの米国特許第４，５０７，２３４号）、ペプチドおよびアミノデキストランのような多糖類（例えば、Ｓｈｉｈらへの米国特許第４，６９９，７８４号）が挙げられる。キャリアはまた、例えばリポソームベシクル内に、非共有結合によってかまたはカプセル化によって、薬剤を保有し得る（例えば、米国特許第４，４２９，００８号および同第４，８７３，０８８号）。放射性核種薬剤に特異的なキャリアとしては、放射性ハロゲン化低分子およびキレート化合物が挙げられる。例えば、米国特許第４，７３５，７９２号は、代表的な放射性ハロゲン化低分子およびそれらの合成を開示する。放射性核種キレートは、金属、または金属酸化物、放射性核種を結合するためのドナー原子として窒素原子および硫黄原子を含むキレート化合物から形成され得る。例えば、Ｄａｖｉｓｏｎらへの米国特許第４，６７３，５６２号は、代表的なキレート化合物およびそれらの合成を開示する。
【０１９７】
（Ｔ細胞組成物）
本発明は、別の局面において、本明細書に開示される腫瘍ポリペプチド、またはその改変体もしくは誘導体に特異的なＴ細胞を提供する。このような細胞は、一般的に、標準的手順を使用して、インビトロまたはエキソビボで調製され得る。例えば、Ｔ細胞は、市販の細胞分離システム（例えば、ＩｓｏｌｅｘＴＭシステム（Ｎｅｘｅｌｌ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｉｎｃ．（Ｉｒｖｉｎｅ，ＣＡ）から入手可能；米国特許第５，２４０，８５６号；米国特許第５，２１５，９２６号；ＷＯ８９／０６２８０；ＷＯ９１／１６１１６およびＷＯ９２／０７２４３もまた参照のこと）を使用して、患者の、骨髄、末梢血、または骨髄の画分もしくは末梢血の画分から単離され得る。あるいは、Ｔ細胞は、関連または無関連の、ヒト、非ヒト哺乳動物、細胞株または培養物に由来し得る。
【０１９８】
Ｔ細胞は、ポリペプチド、ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、および／またはそのようなポリペプチドを発現する抗原提示細胞（ＡＰＣ）を用いて刺激され得る。このような刺激は、目的のポリペプチドに特異的であるＴ細胞の生成を可能にするのに十分な条件下および時間で行われる。好ましくは、本発明の腫瘍ポリペプチドまたはポリヌクレオチドは、送達ビヒクル（例えば、ミクロスフェア）中に存在して、特定のＴ細胞の生成を容易にする。
【０１９９】
Ｔ細胞は、このＴ細胞が、特異的に増殖するか、サイトカインを分泌するか、またはこのポリペプチドで被覆されるかもしくはこのポリペプチドをコードする遺伝子を発現する標的細胞を殺傷する場合に、本発明のポリペプチドに特異的であるとみなされる。Ｔ細胞特異性は、種々の標準的技術のいずれかを使用して評価され得る。例えば、クロム放出アッセイまたは増殖アッセイにおいて、ネガティブコントロールと比較した、溶解および／または増殖における２倍を超える増加の刺激指標は、Ｔ細胞特異性を示す。このようなアッセイは、例えば、Ｃｈｅｎら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５４：１０６５−１０７０，１９９４に記載されるように実行され得る。あるいは、Ｔ細胞の増殖の検出は、種々の公知の技術によって達成され得る。例えば、Ｔ細胞増殖は、ＤＮＡ合成増加率を測定することによって（例えば、トリチウム化チミジンでＴ細胞の培養物をパルス標識し、そしてＤＮＡに取り込まれたトリチウム化チミジンの量を測定することによって）検出され得る。３〜７日間の腫瘍ポリペプチド（１００ｎｇ／ｍｌ〜１００μｇ／ｍｌ、好ましくは、２００ｎｇ／ｍｌ〜２５μｇ／ｍｌ）との接触によって、代表的には、Ｔ細胞の増殖において少なくとも２倍の増加が生じる。２〜３時間の上記のような接触によって、標準的なサイトカインアッセイを使用して測定されるように、Ｔ細胞の活性化を生じるはずである。このアッセイにおいて、サイトカイン（例えば、ＴＮＦまたはＩＦＮ−γ）放出のレベルの２倍の増加は、Ｔ細胞の活性化を示す（Ｃｏｌｉｇａｎら、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ
ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，第１巻、Ｗｉｌｅｙ  Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ（Ｇｒｅｅｎｅ  １９９８）を参照のこと）。腫瘍ポリペプチド、ポリヌクレオチドまたはポリペプチド発現ＡＰＣに応答して活性化されたＴ細胞は、ＣＤ４＋および／またはＣＤ８＋であり得る。腫瘍ポリペプチド特異的Ｔ細胞は、標準的な技術を使用して増殖され得る。好ましい実施形態において、Ｔ細胞は、患者、関連するドナーまたは無関連のドナーに由来し、そして刺激および増殖後にその患者に投与される。
【０２００】
治療目的で、腫瘍のポリペプチド、ポリヌクレオチドまたはＡＰＣに応答して増殖するＣＤ４＋Ｔ細胞またはＣＤ８＋Ｔ細胞は、インビトロまたはインビボのいずれかで大量に増殖され得る。このようなＴ細胞のインビトロでの増殖は、種々の方法で達成され得る。例えば、Ｔ細胞は、Ｔ細胞増殖因子（例えば、インターロイキン−２）の添加を伴ってまたは伴わずに、腫瘍ポリペプチド、またはこのようなポリペプチドの免疫原性部分に対応する短いペプチド、および／または腫瘍ポリペプチドを合成する刺激細胞に再曝露され得る。あるいは、腫瘍ポリペプチドの存在下で増殖する１つ以上のＴ細胞は、クローニングによって大量に増殖され得る。細胞をクローニングするための方法は、当該分野で周知であり、そしてこれらとしては、限界希釈が挙げられる。
【０２０１】
（薬学的組成物）
さらなる実施形態において、本発明は、細胞または動物に、単独か、または１つ以上の他の様式の療法との組み合わせのいずれかで投与するための、薬学的に受容可能なキャリア中の、本明細書中に開示される１つ以上のポリヌクレオチド、ポリペプチド、Ｔ細胞、および／または抗体組成物の処方物に関する。
【０２０２】
所望ならば、本明細書に開示される組成物は、他の薬剤（例えば、他のタンパク質もしくはポリペプチド、または種々の薬学的に活性な薬剤）と組み合わせて投与され得ることもまた理解される。事実、さらなる薬剤が標的細胞または宿主組織との接触の際に、有意に有害な作用を引き起こさない場合、同様に含まれ得る他の成分に実質的に制限はない。従って、これらの組成物は、特定の場合に必要とされる種々の他の薬剤とともに送達され得る。このような組成物は、宿主細胞または他の生物学的供給源から精製され得るか、あるいは本明細書中に記載されるように化学的に合成され得る。同様に、このような組成物は、置換もしくは誘導体化されたＲＮＡ組成物またはＤＮＡ組成物をさらに含み得る。
【０２０３】
従って、本発明の別の局面では、本明細書中に記載される１つ以上のポリヌクレオチド、ポリペプチド、抗体、および／またはＴ細胞組成物を、生理的に受容可能なキャリアと組み合せて含む、薬学的組成物が提供される。特定の好ましい実施形態において、本発明の薬学的組成物は、予防的または治療的なワクチン適用における使用のために、本発明の免疫原性ポリヌクレオチド組成物および／またはポリペプチド組成物を含む。ワクチン調製物は、一般的に、例えば、Ｍ．Ｆ．ＰｏｗｅｌｌおよびＭ．Ｊ．Ｎｅｗｍａｎ編、「Ｖａｃｃｉｎｅ  Ｄｅｓｉｇｎ（ｔｈｅ  ｓｕｂｕｎｉｔ  ａｎｄ  ａｄｊｕｖａｎｔ  ａｐｐｒｏａｃｈ）」、Ｐｌｅｎｕｍ  Ｐｒｅｓｓ（ＮＹ、１９９５）に記載されている。一般的に、このような組成物は、本発明の１つ以上のポリヌクレオチド組成物および／またはポリペプチド組成物を、１つ以上の免疫刺激剤と組み合せて含む。
【０２０４】
本明細書に記載の任意の薬学的組成物は、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドの薬学的に受容可能な塩を含み得ることが明白である。このような塩は、例えば、有機塩基（例えば、１級、２級、および３級のアミンならびに基本（ｂａｓｉｃ）アミノ酸の塩）および無機塩基（例えば、ナトリウム、カリウム、リチウム、アンモニウム、カルシウム、およびマグネシウムの塩）を含む、薬学的に受容可能な非毒性塩基から調製され得る。
【０２０５】
別の実施形態において、本発明の例示的な免疫原性組成物（例えば、ワクチン組成物）は、上記のようなポリペプチドのうちの１つ以上をコードするＤＮＡを、そのポリペプチドがインサイチュで生成されるように含む。上記のように、このポリヌクレオチドは、当業者に公知の任意の種々の送達系で投与され得る。実際、多数の遺伝子送達技術が当該分野で周知である（例えば、Ｒｏｌｌａｎｄ、Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｔｈｅｒａｐ．Ｄｒｕｇ  Ｃａｒｒｉｅｒ  Ｓｙｓｔｅｍｓ
１５：１４３〜１９８、１９９８、およびその中に引用される参考文献により記載される技術）。適切なポリヌクレオチド発現系は、当然ながら、患者における発現に必要な調節ＤＮＡ調節配列（例えば、適切なプロモーターおよび終結シグナル）を含む。あるいは、細菌送達系は、その細胞表面上にそのポリペプチドの免疫原性部分を発現するかまたはそのようなエピトープを分泌する、細菌（例えば、Ｂａｃｉｌｌｕｓ−Ｃａｌｍｅｔｔｅ−Ｇｕｅｒｒｉｎ）の投与を包含し得る。
【０２０６】
従って、特定の実施形態において、本明細書中に記載される免疫原性ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、多数の公知のウイルスに基づく系のうちのいずれかを用いて、発現のために適切な哺乳動物宿主細胞に導入される。１つの例示的な実施形態において、レトロウイルスが、遺伝子送達系のための簡便かつ有効な基盤を提供する。本発明のポリペプチドをコードする選択されたヌクレオチド配列は、当該分野で公知の技術を用いて、ベクターに挿入され得、そしてレトロウイルス粒子にパッケージングされ得る。次いで、組換えウイルスが、単離され得、そして被験体に送達され得る。多数の例示的なレトロウイルス系が、記載されている（例えば、米国特許第５，２１９，７４０号；ＭｉｌｌｅｒおよびＲｏｓｍａｎ（１９８９）ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ７：９８０−９９０；Ｍｉｌｌｅｒ，Ａ．Ｄ．（１９９０）Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ
１：５−１４；Ｓｃａｒｐａら（１９９１）Ｖｉｒｏｌｏｇｙ  １８０：８４９−８５２；Ｂｕｒｎｓら（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：８０３３−８０３７；ならびにＢｏｒｉｓ−ＬａｗｒｉｅおよびＴｅｍｉｎ（１９９３）Ｃｕｒ．Ｏｐｉｎ．Ｇｅｎｅｔ．Ｄｅｖｅｌｏｐ．３：１０２−１０９）。
【０２０７】
さらに、多数の例示的なアデノウイルスに基づく系もまた、記載されている。宿主ゲノムに組込むレトロウイルスとは異なり、アデノウイルスは、染色体外に残り、このようにして、挿入変異誘発に付随する危険性を最小化する（Ｈａｊ−ＡｈｍａｄおよびＧｒａｈａｍ（１９８６）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．５７：２６７−２７４；Ｂｅｔｔら（１９９３）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６７：５９１１−５９２１；Ｍｉｔｔｅｒｅｄｅｒら（１９９４）Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ５：７１７−７２９；Ｓｅｔｈら（１９９４）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６８：９３３−９４０；Ｂａｒｒら（１９９４）Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ  １：５１−５８；Ｂｅｒｋｎｅｒ，Ｋ．Ｌ．（１９８８）ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ６：６１６−６２９；ならびにＲｉｃｈら（１９９３）Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ４：４６１−４７６）。
【０２０８】
種々のアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター系もまた、ポリヌクレオチド送達に関して開発されている。ＡＡＶベクターは、当該分野で周知の技術を用いて容易に構築され得る。例えば、米国特許第５，１７３，４１４号および同第５，１３９，９４１号；国際公開番号ＷＯ  ９２／０１０７０およびＷＯ  ９３／０３７６９；Ｌｅｂｋｏｗｓｋｉら（１９８８）Ｍｏｌｅｃ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．８：３９８８−３９９６；Ｖｉｎｃｅｎｔら（１９９０）Ｖａｃｃｉｎｅｓ  ９０（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ）；Ｃａｒｔｅｒ，Ｂ．Ｊ．（１９９２）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ
ｉｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ３：５３３−５３９；Ｍｕｚｙｃｚｋａ，Ｎ．（１９９２）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｔｏｐｉｃｓ  ｉｎ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．ａｎｄ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５８：９７−１２９；Ｋｏｔｉｎ，Ｒ．Ｍ．（１９９４）Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ５：７９３−８０１；ＳｈｅｌｌｉｎｇおよびＳｍｉｔｈ（１９９４）Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ  １：１６５−１６９；ならびにＺｈｏｕら（１９９４）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７９：１８６７−１８７５を参照のこと。
【０２０９】
遺伝子移入によって、本発明のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを送達するのに有用なさらなるウイルスベクターとしては、ポックスウイルスのファミリー（例えば、ワクシニアウイルスおよび鳥類ポックスウイルス）から誘導されるものが挙げられる。例として、新規分子を発現するワクシニアウイルスの組換え体は、以下のように構築され得る。ポリペプチドをコードするＤＮＡを最初に、ワクシニアプロモーターおよび隣接ワクシニアＤＮＡ配列（例えば、チミジンキナーゼ（ＴＫ）をコードする配列）に隣接するように適切なベクターに挿入する。次いで、このベクターを使用して、ワクシニアと同時に感染させる細胞にトランスフェクトする。相同組換えによって、ワクシニアプロモーターおよび目的のポリペプチドをコードする遺伝子を、ウイルスゲノムに挿入する。生じるＴＫ．ｓｕｐ．（−）組換え体を、５−ブロモデオキシウリジンの存在下でこの細胞を培養し、そして５−ブロモデオキシウリジンに耐性のウイルスプラークを拾い上げることによって、選択し得る。
【０２１０】
ワクシニアに基づく感染／トランスフェクション系は、生物の宿主細胞において、本明細書中に記載される１つ以上のポリペプチドの誘導可能な一過性発現または同時発現を提供するために、好都合に使用され得る。この特定の系において、細胞を最初に、インビトロで、バクテリオファージＴ７  ＲＮＡポリメラーゼをコードするワクシニアウイルスの組換え体に感染させる。このポリメラーゼは、それがＴ７プロモーターを保有する鋳型のみを転写するという点で、精巧な特異性を示す。感染後、細胞に、Ｔ７プロモーターによって駆動される目的のポリヌクレオチドでトランスフェクトさせる。ワクシニアウイルスの組換え体から細胞質中で発現されるポリメラーゼは、トランスフェクトされたＤＮＡをＲＮＡに転写し、このＲＮＡは次いで、宿主の翻訳機構によってポリペプチドに翻訳される。この方法は、大量のＲＮＡおよびその翻訳産物の、高レベルで一過性の細胞質産生を提供する。例えば、Ｅｌｒｏｙ−ＳｔｅｉｎおよびＭｏｓｓ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ（１９９０）８７：６７４３−６７４７；Ｆｕｅｒｓｔら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ（１９８６）８３：８１２２−８１２６を参照のこと。
【０２１１】
あるいは、アビポックスウイルス（ａｖｉｐｏｘｖｉｒｕｓ）（例えば、鶏痘ウイルスおよびカナリア痘ウイルス）もまた使用されて、目的のコード配列を送達し得る。哺乳動物病原体由来の免疫原を発現する組換えアビポックスウイルスは、非鳥類種に投与された場合に、防御免疫を与えることが公知である。アビポックスベクターの使用は、ヒトおよび他の哺乳動物種において特に望ましい。なぜなら、アビポックス属のメンバーは、感受性の鳥類種においてのみ生産的に複製し得、故に、哺乳動物細胞において感染性ではないからである。組換えアビポックスウイルスを産生するための方法は、当該分野で公知であり、そしてワクシニアウイルスの産生に関して上記のように、遺伝子組換えを使用する。例えば、ＷＯ  ９１／１２８８２；ＷＯ  ８９／０３４２９；およびＷＯ  ９２／０３５４５を参照のこと。
【０２１２】
多数の任意のアルファウイルスベクターもまた、本発明のポリヌクレオチド組成物の送達のために使用され得、これらとしては、米国特許第５，８４３，７２３号；同第６，０１５，６８６号；同第６，００８，０３５号および同第６，０１５，６９４号に記載されるベクターが挙げられる。ベネズエラウマ脳脊髄炎（ＶＥＥ）に基づく特定のベクターもまた使用され得、この例示的な例は、米国特許第５，５０５，９４７号および同第５，６４３，５７６号に見出され得る。
【０２１３】
さらに、分子結合体化ベクター（例えば、Ｍｉｃｈａｅｌら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．（１９９３）２６８：６８６６〜６８６９およびＷａｇｎｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ（１９９２）８９：６０９９〜６１０３に記載のアデノウイルスキメラベクター）もまた、本発明における遺伝子送達に用いられ得る。
【０２１４】
これらおよび他の公知のウイルスに基づく送達系に関するさらなる例示的情報は、例えば、以下に見出され得る：Ｆｉｓｈｅｒ−Ｈｏｃｈら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８６：３１７〜３２１、１９８９；Ｆｌｅｘｎｅｒら、Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．５６９：８６〜１０３、１９８９；Ｆｌｅｘｎｅｒら、Ｖａｃｃｉｎｅ  ８：１７〜２１、１９９０；米国特許第４，６０３，１１２号、同第４，７６９，３３０号および同第５，０１７，４８７号；ＷＯ８９／０１９７３；米国特許第４，７７７，１２７号；ＧＢ  ２，２００，６５１：ＥＰ  ０，３４５，２４２号；ＷＯ  ９１／０２８０５；Ｂｅｒｋｎｅｒ、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ６：６１６〜６２７、１９８８；Ｒｏｓｅｎｆｅｌｄら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５２：４３１〜４３４、１９９１；Ｋｏｌｌｓら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９１：２１５〜２１９、１９９４；Ｋａｓｓ−Ｅｉｓｌｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：１１４９８〜１１５０２、１９９３；Ｇｕｚｍａｎら、Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  ８８：２８３８〜２８４８、１９９３；ならびにＧｕｚｍａｎら、Ｃｉｒ．Ｒｅｓ．７３：１２０２〜１２０７、１９９３。
【０２１５】
特定の実施形態において、ポリヌクレオチドを標的細胞のゲノムに組み込み得る。この組み込みは、相同組み換え（遺伝子置換）を介して特定の位置および方向であり得るか、または無作為な非特異的位置に組み込まれ得る（遺伝子添加（ａｕｇｍｅｎｔａｔｉｏｎ））。なおさらなる実施形態において、ポリヌクレオチドはＤＮＡの別のエピソームセグメントとして細胞において安定に維持され得る。このようなポリヌクレオチドセグメントすなわち「エピソーム」は、宿主細胞の周期と独立してまたは同調して維持および複製されるのに十分な配列をコードする。発現構築物が細胞に送達される様式、および、この細胞中にこのポリヌクレオチドが残る様式は、使用される発現構築物のタイプに依存する。
【０２１６】
本発明の別の実施形態において、例えば、Ｕｌｍｅｒら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５９：１７４５〜１７４９、１９９３に記載され、そしてＣｏｈｅｎ、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５９：１６９１〜１６９２、１９９３によって概説されるように、ポリヌクレオチドは、「裸の」ＤＮＡとして投与／送達される。裸のＤＮＡの取り込みは、生分解性ビーズ（これは、細胞に効率的に輸送される）上にそのＤＮＡをコーティングすることによって増加され得る。
【０２１７】
なお別の実施形態において、本発明の組成物は、微粒子銃アプローチ（その多くが記載されている）を介して送達され得る。１つの代表的な例において、ガス駆動粒子加速（ｇａｓ−ｄｒｉｖｅｎ  ｐａｒｔｉｃｌｅ  ａｃｃｅｌｅｒａｔｉｏｎ）は、Ｐｏｗｄｅｒｊｅｃｔ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  ＰＬＣ（Ｏｘｆｏｒｄ，ＵＫ）およびＰｏｗｄｅｒｊｅｃｔ  Ｖａｃｃｉｎｅｓ  Ｉｎｃ．（Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）によって製造されるようなデバイス（装置）で達成され得る。そのいくつかの例は、米国特許第５，８４６，７９６号；同第６，０１０，４７８号；同第５，８６５，７９６号；同第５，５８４，８０７号；およびＥＰ特許第０５００  ７９９号に記載されている。このアプローチは、無注射針（ニードルフリー）送達アプローチを提供する。ここでは、顕微鏡的な粒子（例えば、ポリヌクレオチド粒子、またはポリペプチド粒子）の乾燥粉末処方物を、手持ちデバイスによって生成されたヘリウムガスジェット内で高速に加速し、目的の標的組織内へ粒子を噴射する。
【０２１８】
関連の実施形態において、本発明の組成物のガス駆動型無注射針注入に有用であり得る他のデバイスおよび方法は、Ｂｉｏｊｅｃｔ，Ｉｎｃ．（Ｐｏｒｔｌａｎｄ，ＯＲ）によって提供されるものが挙げられ、そのいくつかの例は、米国特許第４，７９０，８２４号；同第５，０６４，４１３号；同第５，３１２，３３５号；同第５，３８３，８５１号；同第５，３９９，１６３号；同第５，５２０，６３９号；および同第５，９９３，４１２号に記載されている。
【０２１９】
別の実施形態に従って、本明細書に記載される薬学的組成物は、本発明の免疫原性ポリヌクレオチド、ポリペプチド、抗体、Ｔ細胞および／またはＡＰＣ組成物に加えて、１つ以上の免疫賦活剤を含む。免疫賦活剤とは、本質的に、外因性抗原に対する免疫応答（抗体および／または細胞媒介性）を増大または増強する任意の物質をいう。免疫賦活剤の１つの好ましい型は、アジュバントを含む。多くのアジュバントは、迅速な異化作用から抗原を保護するように設計された物質（例えば、水酸化アルミニウムまたは鉱油）および免疫応答の刺激物質（例えば、リピドＡ、Ｂｏｒｔａｄｅｌｌａ  ｐｅｒｔｕｓｓｉｓまたはＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ由来のタンパク質）を含む。特定のアジュバント、例えば、フロイント不完全アジュバントおよびフロイント完全アジュバント（Ｄｉｆｃｏ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｄｅｔｒｏｉｔ，ＭＩ）；Ｍｅｒｃｋ  Ａｄｊｕｖａｎｔ  ６５（Ｍｅｒｃｋ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｉｎｃ．，Ｒａｈｗａｙ，ＮＪ）；ＡＳ−２（ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ  Ｂｅｅｃｈａｍ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，ＰＡ）；アルミニウム塩（例えば、水酸化アルミニウムゲル（ミョウバン）またはリン酸アルミニウム）；カルシウム，鉄または亜鉛の塩；アシル化チロシンの不溶性懸濁物；アセチル化糖；カチオン性誘導化多糖またはアニオン性誘導化多糖；ポリフォスファーゼン（ｐｏｌｙｐｈｏｓｐｈａｚｅｎｅ）；生分解性ミクロスフェア：モノホスホリルリピドＡおよびモノホスホリルクイル（ｑｕｉｌ）Ａが、市販されている。サイトカイン（例えば、ＧＭ−ＣＳＦ、インターロイキン−２、インターロイキン−７、インターロイキン−１２および成長因子のような他のもの）もまた、アジュバントとして使用され得る。
【０２２０】
本発明の特定の実施形態において、アジュバント組成物は、Ｔｈ１型の免疫応答を優勢に誘導するものが好ましい。高レベルのＴｈ１型サイトカイン（例えば、ＩＦＮ−γ、ＴＮＦα、ＩＬ−２およびＩＬ−１２）は、投与される抗原に対する細胞媒介性免疫応答の誘導を支持する傾向がある。対照的に、高レベルのＴｈ２型サイトカイン（例えば、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６およびＩＬ−１０）は、体液性免疫応答の誘導を支持する傾向がある。本明細書中に提供されるようなワクチンの適用の後、患者は、Ｔｈ１型応答およびＴｈ２型応答を含む免疫応答を支持する。応答が優勢にＴｈ１型である好ましい実施形態において、Ｔｈ１型サイトカインのレベルは、Ｔｈ２型サイトカインのレベルより高い程度まで増加する。これらのサイトカインのレベルは、標準的アッセイを使用して容易に評価され得る。サイトカインのファミリーの概説については、ＭｏｓｍａｎｎおよびＣｏｆｆｍａｎ、Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．７：１４５〜１７３、１９８９を参照のこと。
【０２２１】
Ｔｈ１型優勢の応答を誘発するための特定の好ましいアジュバンドは、例えば、モノホスホリルリピドＡ、好ましくは３−デ−Ｏ−アシル化モノホスホリルリピドＡとアルミニウム塩との組み合わせを含む。ＭＰＬ（登録商標）アジュバンドは、Ｃｏｒｉｘａ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（Ｓｅａｔｔｌｅ，ＷＡ；例えば、米国特許第４，４３６，７２７号；同第４，８７７，６１１号；同第４，８６６，０３４号および同第４，９１２，０９４号を参照のこと）から入手可能である。ＣｐＧ含有オリゴヌクレオチド（ここで、ＣｐＧジヌクレオチドはメチル化されていない）はまた、Ｔｈ１優勢の応答を誘導する。このようなオリゴヌクレオチドは周知であり、そして例えばＷＯ９６／０２５５５、ＷＯ９９／３３４８８ならびに米国特許第６，００８，２００号および同第５，８５６，４６２号に記載される。免疫賦活性ＤＮＡ配列がまた、例えば、Ｓａｔｏら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２７３：３５２，１９９６によって記載される。別の好ましいアジュバンドは、サポニン（例えば、Ｑｕｉｌ  Ａ）、またはその誘導体（ＱＳ２１およびＱＳ７（Ａｑｕｉｌａ  Ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  Ｉｎｃ．，Ｆｒａｍｉｎｇｈａｍ，ＭＡ）を含む）；Ｅｓｃｉｎ；Ｄｉｇｉｔｏｎｉｎ；またはＧｙｐｓｏｐｈｉｌａまたはＣｈｅｎｏｐｏｄｉｕｍ  ｑｕｉｎｏａサポニンを含む。他の好ましい処方物としては、本発明のアジュバントの組み合わせ（例えば、以下のＱＳ２１、ＱＳ７、Ｑｕｉｌ  Ａ、β−エスシン（ｅｓｃｉｎ）、またはジギトニンを含む群のうち少なくとも２つの組み合わせ）において１つより多いサポニンを含む。
【０２２２】
あるいは、このサポニン処方物は、キトサン、または他のポリカチオン性ポリマーから構成されるワクチンビヒクル、ポリラクチドおよびポリラクチド−コ−グリコリド粒子、ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミンベースのポリマーマトリックス、ポリサッカライドまたは化学的に改変されたポリサッカライドから構成される粒子、リポソームおよび脂質ベースの粒子、グリセロールモノエステルから構成される粒子、などと組み合わせられ得る。サポニンはまた、コレステロールの存在下で処方されて、リポソームまたはＩＳＣＯＭのような粒子構造を形成し得る。さらに、サポニンは、非粒子的溶液もしくは懸濁液で、または小数層リポソームもしくはＩＳＣＯＭのような粒子状構造のいずれかで、ポリオキシエチレンエーテルまたはエステルと一緒に処方され得る。サポニンはまた、Ｃａｒｂｏｐｏｌ（登録商標）のような賦形剤と共に処方されて、粘度を増大され得るか、またはラクトースのような粉末賦形剤とともに乾燥粉末形態に処方され得る。
【０２２３】
１つの好ましい実施形態において、アジュバント系は、モノホスホリルリピドＡとサポニン誘導体との組み合わせ（例えば、ＷＯ９４／００１５３に記載されるような、ＱＳ２１と３Ｄ−ＭＰＬ（登録商標）アジュバントとの組み合わせ、またはＷＯ９６／３３７３９に記載されるような、ＱＳ２１がコレステロールでクエンチ（ｑｕｅｎｃｈ）される、低反応原性組成物）を含む。他の好ましい処方物は、水中油型エマルジョンおよびトコフェロールを含む。水中油型エマルジョン中にＱＳ２１、３Ｄ−ＭＰＬ（登録商標）アジュバントおよびトコフェロールを利用した、別の特に好ましいアジュバンド処方物は、ＷＯ９５／１７２１０に記載されている。
【０２２４】
別の強化されたアジュバント系は、ＣｐＧ含有オリゴヌクレオチドとサポニン誘導体の組み合わせを含み、特にＣｐＧとＱＳ２１の組み合わせがＷＯ００／０９１５９に開示されている。好ましくは、この処方物は、さらに、水中油型エマルジョンおよびトコフェノールを含む。
【０２２５】
本発明の薬学的組成物における使用のためのさらなる代表的アジュバンドとしては、Ｍｏｎｔａｎｉｄｅ  ＩＳＡ  ７２０（Ｓｅｐｐｉｃ，Ｆｒａｎｃｅ）、ＳＡＦ（Ｃｈｉｒｏｎ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ，Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ）、ＩＳＣＯＭＳ（ＣＳＬ）、ＭＦ−５９（Ｃｈｉｒｏｎ）、アジュバンドのＳＢＡＳシリーズ（例えば、ＳＢＡＳ−２またはＳＢＡＳ−４（ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ  Ｂｅｅｃｈａｍ、Ｒｉｘｅｎｓａｒｔ、Ｂｅｌｇｉｕｍから入手可能））、Ｄｅｔｏｘ（Ｅｎｈａｎｚｙｎ（登録商標））（Ｃｏｒｉｘａ，Ｈａｍｉｌｔｏｎ，ＭＴ）、ＲＣ−５２９（Ｃｏｒｉｘａ，Ｈａｍｉｌｔｏｎ，ＭＴ）および他のアミノアルキルグルコサミニド４−ホスフェート（ＡＧＰ）（例えば、係属中の米国出願登録番号０８／８５３，８２６および０９／０７４，７２０（これらの開示は、その全体が本明細書中に参考として援用される）に記載されるアジュバント）、ならびにＷＯ  ９９／５２５４９Ａ１に記載のポリオキシエチレンエーテルアジュバントのようなアジュバントが挙げられる。
【０２２６】
他の好ましいアジュバントは、一般式
（Ｉ）：ＨＯ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−Ａ−Ｒ
のアジュバント分子を含み、
ここで、ｎは、１〜５０であり、Ａは、結合または−Ｃ（Ｏ）−であり、Ｒは、Ｃ１〜５０アルキルまたはフェニルＣ１〜５０アルキルである。
【０２２７】
本発明の１つの実施形態は、一般式（Ｉ）のポリオキシエチレンエーテルを含むワクチン処方物からなり、ここで、ｎは、１と５０との間、好ましくは４〜２４、最も好もしくは９であり、このＲ成分は、Ｃ１〜５０、好ましくはＣ４〜Ｃ２０アルキル、そして最も好ましくはＣ１２アルキルであり、そしてＡは、結合である。ポリオキシエチレンエーテルの濃度は、０．１〜２０％の範囲、好ましくは０．１〜１０％、そして最も好ましくは０．１〜１％の範囲にあるべきである。好ましいポリオキシエチレンエーテルは、以下の群から選択される：ポリオキシエチレン−９−ラウリルエーテル、ポリオキシエチレン−９−ステアリル（ｓｔｅｏｒｙｌ）エーテル、ポリオキシエチレン−８−ステアリル（ｓｔｅｏｒｙｌ）エーテル、ポリオキシエチレン−４−ラウリルエーテル、ポリオキシエチレン−３５−ラウリルエーテルおよびポリオキシエチレン−２３−ラウリルエーテル。ポリオキシエチレンラウリルエーテルのようなポリオキシエチレンエーテルは、Ｍｅｒｃｋインデックス（第１２版、７７１７項目）に記載される。これらのアジュバント分子は、ＷＯ９９／５２５４９に記載される。
【０２２８】
上記の一般式（Ｉ）に従うポリオキシエチレンエーテルは、所望の場合、別のアジュバントと組み合わせられ得る。例えば、好ましいアジュバントの組み合わせは、好ましくは、係属中の英国特許出願第ＧＢ９８２０９５６．２号に記載されるようなＣｐＧとの組み合わせである。
【０２２９】
本発明の別の実施形態に従って、本明細書に記載される免疫原性組成物は、抗原提示細胞（ＡＰＣ）（例えば、樹状細胞、マクロファージ、Ｂ細胞、単球、および有効なＡＰＣであるように操作され得る他の細胞）を介して宿主に送達される。このような細胞は、抗原を提示する能力を増大するように、Ｔ細胞応答の活性化および／または維持を改良するように、それ自体で抗腫瘍効果を有するように、そして／あるいは受け手と免疫学的に適合性（すなわち、一致するＨＬＡハプロタイプ）であるように遺伝学的に改変されてもよいが、改変される必要はない。ＡＰＣは、一般に、種々の生物学的な流体および器官（腫瘍および腫瘍周辺組織を含む）のいずれかから単離されてもよいし、そして自己細胞、同種異系細胞、同系細胞、または異種細胞であってもよい。
【０２３０】
本発明の特定の好ましい実施形態は、抗原提示細胞として、樹状細胞またはその前駆細胞を使用する。樹状細胞は、高度に強力なＡＰＣであり（ＢａｎｃｈｅｒｅａｕおよびＳｔｅｉｎｍａｎ、Ｎａｔｕｒｅ  ３９２：２４５−２５１、１９９８）、そして予防的または治療的な抗腫瘍免疫性を誘発するための生理学的アジュバンドとして有効であることが示されてきた（ＴｉｍｍｅｒｍａｎおよびＬｅｖｙ、Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｍｅｄ．５０：５０７−５２９、１９９９を参照のこと）。一般に、樹状細胞は、それらの代表的な形状（インサイチュでは星状、インビトロでは目に見える顕著な細胞質プロセス（樹枝状結晶）を有する）、高い効率で抗原を取り込み、プロセシングし、そして提示するそれらの能力、およびナイーブなＴ細胞応答を活性化するそれらの能力に基づいて同定され得る。もちろん樹状細胞は、インビボまたはエキソビボで樹状細胞上に通常見出されない特定の細胞表面レセプターまたはリガンドを発現するように操作され得、このような改変樹状細胞は本発明によって意図される。樹状細胞の代替として、分泌小胞抗原装荷樹状細胞（ｓｅｃｒｅｔｅｄ  ｖｅｓｉｃｌｅｓ  ａｎｔｉｇｅｎ−ｌｏａｄｅｄ  ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ  ｃｅｌｌ）（エキソソーム（ｅｘｏｓｏｍｅ）と呼ばれる）がワクチン内で使用され得る（Ｚｉｔｖｏｇｅｌら、Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄ．４：５９４−６００，１９９８を参照のこと）。
【０２３１】
樹状細胞および前駆体は、末梢血、骨髄、腫瘍浸潤細胞、腫瘍周辺組織浸潤細胞、リンパ節、脾臓、皮膚、臍帯血、または任意の他の適切な組織もしくは流体から得られ得る。例えば、樹状細胞は、末梢血から収集された単球の培養物に、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−４、ＩＬ−１３および／またはＴＮＦαのようなサイトカインの組み合わせを添加することによってエキソビボで分化され得る。あるいは、末梢血、臍帯血または骨髄から収集されたＣＤ３４陽性細胞は、培養培地にＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−３、ＴＮＦα、ＣＤ４０リガンド、ＬＰＳ、ｆｌｔ３リガンドならびに／または樹状細胞の分化、成熟、および増殖を誘導する他の化合物の組み合わせを添加することによって、樹状細胞に分化され得る。
【０２３２】
樹状細胞は、「未熟」細胞および「成熟」細胞として都合良く分類され、このことは、２つの充分に特徴付けられた表現型の間を区別する単純な方法を与える。しかしこの名称は、あらゆる可能な分化の中間段階を排除するように解釈されるべきではない。未熟な樹状細胞は、抗原の取り込みおよび処理の高い能力を有するＡＰＣとして特徴付けられ、この能力は、Ｆｃγレセプターおよびマンノースレセプターの高度な発現と相関する。成熟表現型は、代表的に、これらのマーカーのより低い発現によって特徴付けられ、クラスＩ  ＭＨＣおよびクラスＩＩ
ＭＨＣ、接着分子（例えば、ＣＤ５４およびＣＤ１１）ならびに同時刺激性分子（例えば、ＣＤ４０、ＣＤ８０、ＣＤ８６および４−１ＢＢ）のようなＴ細胞活性化の原因である細胞表面分子の高度な発現によって特徴付けられる。
【０２３３】
ＡＰＣは、一般に、本発明のポリヌクレオチド（またはその部分もしくは他の改変体）を用いてトランスフェクトされ得、その結果、コードされたポリペプチドまたはその免疫原性部分が、細胞表面上に発現される。このようなトランスフェクションはエキソビボで生じ得、次いでこのようなトランスフェクトされた細胞を含む薬学的組成物は、本明細書中に記載されるように、治療目的のために使用され得る。あるいは、樹状細胞または他の抗原提示細胞を標的とする遺伝子送達ビヒクルが、患者に投与され得、インビボで起こるトランスフェクションを生じる。樹状細胞のインビボおよびエキソビボでのトランスフェクションは、例えば、ＷＯ９７／２４４４７に記載される方法、またはＭａｈｖｉら、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ７５：４５６−４６０、１９９７によって記載される遺伝子銃アプローチのような当該分野で公知の任意の方法を使用して一般に実施され得る。樹状細胞の抗原装荷は、樹状細胞または前駆細胞を、腫瘍ポリペプチド、ＤＮＡ（裸のもしくはプラスミドベクター中の）またはＲＮＡ；あるいは抗原発現性組換え細菌またはウイルス（例えば、牛痘、鶏痘、アデノウイルスまたはレンチウイルスのベクター）とインキュベートすることによって達成され得る。装荷の前に、ポリペプチドは、Ｔ細胞補助を提供する免疫学的パートナー（例えば、キャリア分子）に共有結合され得る。あるいは、樹状細胞は、単独でかまたはポリペプチドの存在下で、結合していない免疫学的パートナーでパルス（ｐｕｌｓｅ）され得る。
【０２３４】
当業者に公知の任意の適切なキャリアが本発明の薬学的組成物において用いられ得るが、キャリアのタイプは、代表的に、投与の様式に基づいて変わる。本発明の組成物は、任意の適切な投与様式（例えば、局所投与、経口投与、鼻腔投与、経粘膜投与、静脈内投与、頭蓋内投与、腹腔内投与、皮下投与および筋肉内投与を含む）のために処方され得る。
【０２３５】
このような薬学的処方物における使用のためのキャリアは、生体適合性であり、そしてまた生分解性であり得る。特定の実施形態において、好ましくは、この処方物は比較的一定レベルの活性成分の放出を提供する。しかし、他の実施形態において、投与直後のより迅速な放出速度が所望され得る。このような組成物の処方は十分に、公知の技術を使用する当業者のレベル内である。この点に関して有用な例示的なキャリアとしては、ポリ（ラクチド−ｃｏ−グルコリド）、ポリアクリレート、ラテックス、デンプン、セルロース、デキストランなどの微粒子が挙げられる。他の例示的な遅延放出型キャリアとしては、非液性（ｎｏｎ−ｌｉｑｕｉｄ）親水性コア（例えば、架橋ポリサッカリドまたはオリゴサッカリド）を含む超分子バイオベクター、ならびに必要に応じて、両親媒性化合物を含む外部層（例えば、リン脂質）（例えば、米国特許第５，１５１，２５４号およびＰＣＴ出願ＷＯ９４／２００７８、ＷＯ／９４／２３７０１およびＷＯ９６／０６６３８を参照のこと）を含む超分子バイオベクターが挙げられる。徐放性処方物内に含まれる活性化合物の量は、移植の部位、放出の速度および予期される持続期間、ならびに処置または予防されるべき状態の性質に依存する。
【０２３６】
別の例示的な実施形態において、生分解性ミクロスフェア（例えば、ポリ乳酸ポリグリコレート）は、本発明の組成物のためのキャリアとして使用される。適切な生分解性ミクロスフェアは、例えば、米国特許第４，８９７，２６８号；同第５，０７５，１０９号；同第５，９２８，６４７号；同第５，８１１，１２８号；同第５，８２０，８８３号；同第５，８５３，７６３号；同第５，８１４，３４４号；同第５，４０７，６０９号および同第５，９４２，２５２号に開示される。改変Ｂ型肝炎コアタンパク質キャリア系（例えば、ＷＯ／９９  ４０９３４およびそこで引用される参考文献に記載されるような系）もまた、多くの用途に有用である。別の例示的なキャリア／送達系は、キャリア含有粒子−タンパク質複合体（例えば、米国特許第５，９２８，６４７号に記載される複合体）を使用し、これは、宿主においてクラスＩ拘束細胞傷害性Ｔリンパ球応答を誘導し得る。
【０２３７】
本発明の薬学的組成物はしばしば、１つ以上の、緩衝剤（例えば、中性の緩衝化生理食塩水またはリン酸緩衝化生理食塩水）、糖質（例えば、グルコース、マンノース、スクロースまたはデキストラン）、マンニトール、タンパク質、ポリペプチドまたはアミノ酸（例えば、グリシン）、抗酸化剤、静菌剤、キレート剤（例えば、ＥＤＴＡまたはグルタチオン）、アジュバント（例えば、水酸化アルミニウム）、処方物をレシピエントの血液に対して等張性、低張性または弱く高張性にする溶質、懸濁剤、濃化剤および／または保存剤をさらに含む。あるいは、本発明の組成物は、凍結乾燥物として処方され得る。
【０２３８】
本明細書中に記載される薬学的組成物は、単回用量容器または多用量容器（例えば、密閉アンプルまたはバイアル）中に存在し得る。このような容器は、代表的に、使用まで処方物の無菌性および安定性を維持するために、密封される。一般に、処方物は、油性ビヒクルまたは水性ビヒクル中の、懸濁液、溶液またはエマルジョンとして保存され得る。あるいは、薬学的組成物は、使用の直前に無菌水性キャリアの添加のみを必要とする、凍結乾燥状態で保存され得る。
【０２３９】
様々な処置レジメンにおいて本明細書中で記載される特定の組成物を使用するための適切な投薬レジメンおよび処置レジメン（例えば、経口、非経口、静脈内、鼻腔内、および筋肉内の投与および処方物を含む）の開発は、当該分野で周知であり、これらのいくつかは、一般的な例示目的のために以下で簡単に考察される。
【０２４０】
特定の用途において、本明細書中で開示される薬学的組成物は、経口投与によって動物に送達され得る。このように、これらの組成物は、不活性希釈剤と共にかまたは同化可能食用キャリアと共に処方され得るか、あるいはこれらの組成物は、硬質または軟質殻ゼラチンカプセルに入れられ得るか、あるいはこれらの組成物は錠剤に圧縮され得るか、あるいはこれらの組成物は食餌の食品に直接組み込まれ得る。
【０２４１】
活性化合物は、さらに賦形剤に組み込まれ得、そして経口摂取錠剤、バッカル錠、トローチ、カプセル剤、エリキシル、懸濁液、シロップ、カシェ剤などの形態で使用される（例えば、Ｍａｔｈｉｏｗｉｔｚら、Ｎａｔｕｒｅ  １９９７  Ｍａｒ  ２７；３８６（６６２３）：４１０−４；Ｈｗａｎｇら、Ｃｒｉｔ  Ｒｅｖ  Ｔｈｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｃａｒｒｉｅｒ  Ｓｙｓｔ  １９９８；１５（３）：２４３−８４；米国特許第５，６４１，５１５号；米国特許第５，５８０，５７９号および米国特許第５，７９２，４５１号を参照のこと）。錠剤、トローチ、丸剤、カプセル剤などはまた、任意の種々のさらなる成分を含み得、例えば、結合剤（例えば、トラガカントゴム、アラビアゴム、コーンスターチまたはゼラチン）；賦形剤（例えば、リン酸二カルシウム）；崩壊剤（例えば、コーンスターチ、ポテトデンプン、アルギン酸など）；滑沢剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム）；および甘味料（例えば、スクロース、ラクトースまたはサッカリン）または香料（例えば、ペパーミント、冬緑油、またはチェリー香料）が添加され得る。投薬量単位形態がカプセル剤である場合、これは上記のタイプの材料に加えて液体キャリアを含み得る。様々な他の材料が、コーティングとして存在し得るか、またはそうでなければ物理的形態の投薬量単位を改変し得る。例えば、錠剤、丸剤またはカプセル剤は、セラック、糖またはその両方でコーティングされ得る。もちろん、任意の投薬単位形態を調製する際に使用される任意の材料は、薬学的に純粋でありかつ用いられる量で実質的に非毒性でなければならない。さらに、活性化合物が、徐放性調製物および処方物に組み込まれ得る。
【０２４２】
代表的に、これらの処方物は、少なくとも約０．１％またはそれよりも多い活性化合物を含むが、活性成分の割合は、もちろん、変化し得、そして好都合に、全処方物の重量または体積の約１または２％と、約６０％または７０％以上のとの間であり得る。当然、治療的に有用な組成物の各々の中の活性化合物の量は、適切な投薬量が、化合物の任意の所定の単位用量において得られるような様式で、調製され得る。溶解度、バイオアベイラビリティー、生物学的半減期、投与の経路、製品の有効期限のような因子、および他の薬理学的考慮が、このような薬学的処方物を調製する分野の当業者によって企図され、そして、種々の投薬量および処置レジメンはそれ自体が、望ましくあり得る。
【０２４３】
経口投与について、本発明の組成物は、あるいは、うがい薬、歯みがき剤、バッカル錠、経口スプレー、または舌下経口投与処方物の形態で、１つ以上の賦形剤と共に組み込まれ得る。あるいは、活性成分は、経口溶液（例えば、ホウ酸ナトリウム、グリセリンおよび炭酸水素カリウムを含む溶液）に組み込まれ得るか、または歯みがき剤に分散され得るか、または治療的有効量で、水、結合剤、研磨剤、香料、発泡剤、および湿潤剤を含み得る組成物に添加され得る。あるいは、これらの組成物は、舌下に置かれ得るか、そうでなければ口の中で溶解され得る錠剤形態または溶液形態に成形され得る。
【０２４４】
特定の状況において、本明細書中で開示される薬学的組成物を、非経口送達、静脈内送達、筋肉内送達またはさらに腹腔内送達することが望ましい。このようなアプローチは、当業者に周知であり、これらのいくつかは例えば、例えば、米国特許第５，５４３，１５８号；米国特許第５，６４１，５１５号および米国特許第５，３９９，３６３号にさらに記載される。特定の実施形態において、遊離塩基または薬理学的に受容可能な塩としての活性化合物の溶液は、界面活性剤（例えば、ヒドロキシプロピルセルロース）と適切に混合された水中で調製され得る。分散物もまた、グリセロール、液体ポリエチレングリコール、およびそれらの混合物中で、ならびにオイル中で調製され得る。保存および使用の通常の条件下で、これらの調製物は一般に、微生物の増殖を防止するために、防腐剤を含む。
【０２４５】
注入可能用途のために適切な例示的な薬学的形態として、滅菌水性液剤または分散物および滅菌注射用液剤または分散物の即時調製のための滅菌散剤が挙げられる（例えば、米国特許第５，４６６，４６８号を参照のこと）。全ての場合において、その形態は、滅菌でなけらばならず、そして容易に注射することができる程度に、流動性でなければならない。それは、製造および保存の条件下で安定でなければならず、そして微生物（例えば、細菌および真菌）の汚染作用に対して保存されなければならない。キャリアは、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、および液体ポリエチレングリコールなど）、それらの適切な混合物、および／もしくは植物油を含む溶媒または分散媒体であり得る。適切な流動性は、例えば、コーティング（例えば、レシチン）の使用によって、分散物の場合には必要とされる粒子サイズの維持によって、そして／または界面活性剤の使用によって、維持され得る。微生物の作用の防止は、種々の抗菌剤および抗真菌剤（例えば、パラベン（ｐａｒａｂｅｎ）、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸、チメロサールなど）によって促進され得る。多くの場合において、等張剤（例えば、糖または塩化ナトリウム）を含めることが、好ましい。注射可能な組成物の長期にわたる吸収は、吸収を遅延させる薬剤（例えば、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチン）の組成物中での使用によって、もたらされ得る。
【０２４６】
一実施形態において、水溶液の非経口投与のために、必要ならばその溶液は、適切に緩衝化されるべきであり、そして液体希釈剤が、最初に、十分な生理食塩水またはグルコースで等張にされる。これらの特定の水溶液は、特に、静脈内投与、筋肉内投与、皮下投与、および腹腔内投与に適切である。これに関連して、使用され得る滅菌水性媒体は、本開示の観点から当業者に公知である。例えば、一投与量は、１ｍｌの等張性ＮａＣｌ溶液に溶解され得、そして１０００ｍｌの皮下注入流体に添加され得るか、または注入予定部位で注入され得るかのいずれかである（例えば、「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ
Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」、第１５版、１０３５〜１０３８頁および１５７０〜１５８０頁を参照のこと）。投薬量におけるいくらかの変化が、処置される被験体の状態に依存して、必然的に発生する。さらに、ヒト投与について、調製物は、もちろん、好ましくは、ＦＤＡ  Ｏｆｆｉｃｅ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ  ｓｔａｎｄａｒｄｓによって要求されるような、無菌性、発熱性、ならびに一般的な安全性標準および純度標準を満たす。
【０２４７】
本発明の別の実施形態において、本明細書中で開示される組成物は、中性形態または塩形態で処方され得る。例示的な薬学的に受容可能な塩としては、酸付加塩（タンパク質の遊離アミノ基とともに形成される）が挙げられ、そしてこれらの塩は、無機酸（例えば、塩酸またはリン酸）、または酢酸、シュウ酸、酒石酸、マンデル酸などの有機酸とともに形成される。遊離カルボキシル基とともに形成される塩もまた、無機塩基（例えば、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化アンモニウム、水酸化カルシウム、または水酸化鉄）、およびイソプロピルアミン、トリメチルアミン、ヒスチジン、プロカインなどの有機塩基から誘導され得る。処方の際に、溶液は、投薬処方物と適合する様式でかつ治療的に有効な量で投与される。
【０２４８】
キャリアは、任意および全ての溶媒、分散媒体、ビヒクル、コーティング、希釈剤、抗菌剤および抗真菌剤、等張剤および吸収を遅延させる薬剤、緩衝液、キャリア溶液、懸濁液、コロイドなどをさらに含み得る。薬学的活性物質のためのこのような媒体および薬剤の使用は、当該分野で周知である。任意の従来の媒体または薬剤が、活性成分と不適合である場合を除いては、治療組成物におけるその使用が、企図される。補助的活性成分もまた、これらの組成物に組み込まれ得る。句「薬学的に受容可能な」とは、ヒトに投与される場合に、アレルギー反応または類似の厄介な反応を生成しない分子実体および組成物をいう。
【０２４９】
特定の実施形態において、薬学的組成物は、鼻腔内スプレー、吸入、および／または他のエアロゾル送達ビヒクルによって送達され得る。遺伝子、核酸およびペプチド組成物を、経鼻エアロゾルスプレーを介して肺に直接送達するための方法は、例えば、米国特許第５，７５６，３５３号および米国特許第５，８０４，２１２号に記載されている。同様に、鼻腔内微粒子樹脂（Ｔａｋｅｎａｇａら、Ｊ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  １９９８  Ｍａｒ  ２；５２（１−２）：８１−７）およびリゾホスファチジル−グリセロール化合物（米国特許第５，７２５，８７１号）を使用する薬物の送達はまた、薬学分野で周知である。同様に、ポリテトラフルオロエチレン支持マトリックスの形態で代表的な経粘膜薬物送達は、米国特許第５，７８０，０４５号に記載される。
【０２５０】
特定の実施形態において、リポソーム、ナノカプセル、微粒子、脂質粒子、小胞などを、適切な宿主細胞／生物への本発明の組成物の導入のために使用する。特に、本発明の組成物は、脂質粒子、リポソーム、小胞、ナノスフィア、またはナノ粒子などのいずれかにカプセル化して送達するために処方され得る。あるいは、本発明の組成物は、このようなキャリアビヒクルの表面に、共有結合または非共有結合のいずれかで結合され得る。
【０２５１】
潜在的な薬物キャリアとしてのリポソームおよびリポソーム様調製物の形成および使用は一般に、当業者に公知である（例えば、Ｌａｓｉｃ，Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  １９９８  Ｊｕｌ；１６（７）：３０７−２１；Ｔａｋａｋｕｒａ，Ｎｉｐｐｏｎ  Ｒｉｎｓｈｏ  １９９８  Ｍａｒ；５６（３）：６９１−５；Ｃｈａｎｄｒａｎら、Ｉｎｄｉａｎ  Ｊ  Ｅｘｐ  Ｂｉｏｌ．１９９７  Ａｕｇ；３５（８）：８０１−９；Ｍａｒｇａｌｉｔ，Ｃｒｉｔ  Ｒｅｖ  Ｔｈｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｃａｒｒｉｅｒ  Ｓｙｓｔ．１９９５；１２（２−３）：２３３−６１；米国特許第５，５６７，４３４号；米国特許第５，５５２，１５７号；米国特許第５，５６５，２１３号；米国特許第５，７３８，８６８号および米国特許第５，７９５，５８７号（これらの各々は、その全体が本明細書中で参考として詳細に援用される）を参照のこと）。
【０２５２】
リポソームは、Ｔ細胞懸濁液、初代肝細胞培養物およびＰＣ１２細胞を含む他の手順によるトランスフェクションが通常困難である多くの細胞型とともに、首尾よく使用されている（Ｒｅｎｎｅｉｓｅｎら、Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．１９９０  Ｓｅｐ  ２５；２６５（２７）：１６３３７−４２；Ｍｕｌｌｅｒら、ＤＮＡ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．１９９０  Ａｐｒ；９（３）：２２１−９）。さらに、リポソームは、ウイルスベースの送達系に典型的なＤＮＡ長の制限がない。リポソームは、遺伝子、種々の薬物、放射線治療剤、酵素、ウイルス、転写因子およびアロステリックエフェクターなどを、種々の培養細胞株および動物に導入するために効果的に使用されている。さらに、リポソームの使用は、全身送達後の、自己免疫応答にも受容不可能な毒性にも関連しないようである。
【０２５３】
特定の実施形態において、リポソームは、水性媒体中に分散したリン脂質から形成され、そして多層同心性二重層小胞（多層小胞（ＭＬＶ）とも呼ばれる）を自発的に形成する。
【０２５４】
あるいは、他の実施形態において、本発明は、本発明の組成物の薬学的に受容可能なナノカプセル処方物を提供する。ナノカプセルは一般に、化合物を安定かつ再現可能な様式で補足し得る（例えば、Ｑｕｉｎｔａｎａｒ−Ｇｕｅｒｒｅｒｏら、Ｄｒｕｇ  Ｄｅｖ  Ｉｎｄ  Ｐｈａｒｍ．１９９８  Ｄｅｃ；２４（１２）：１１１３−２８を参照のこと）。細胞内ポリマー過負荷に起因する副作用を回避するために、このような超微粒子（約０．１μｍのサイズ）は、インビボで分解され得るポリマーを使用して設計され得る。このような粒子は、例えば、Ｃｏｕｖｒｅｕｒら、Ｃｒｉｔ  Ｒｅｖ  Ｔｈｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｃａｒｒｉｅｒ  Ｓｙｓｔ．１９８８；５（１）：１−２０；ｚｕｒ  Ｍｕｈｌｅｎら、Ｅｕｒ  Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｂｉｏｐｈａｒｍ．１９９８  Ｍａｒ；４５（２）：１４９−５５；Ｚａｍｂａｕｘら、Ｊ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ．１９９８  Ｊａｎ  ２；５０（１−３）：３１−４０；および米国特許第５，１４５，６８４号に記載されるようにして作製され得る。
【０２５５】
（癌治療法）
本発明のさらなる局面において、本明細書に記載される薬学的組成物は、癌の処置、特に、卵巣癌の免疫治療のために使用され得る。このような方法において、本明細書中に記載される薬学的組成物は、患者、代表的には、温血動物、好ましくはヒトに投与される。患者は、癌に罹患していてもしていなくてもよい。従って、上記の薬学的組成物を使用して、癌の発症を予防し得るか、または癌を罹患した患者を処置し得る。薬学的組成物およびワクチンは、原発性腫瘍の外科的除去および／または放射線治療剤もしくは従来の化学療法剤の投与のような処置の前、あるいはその後のいずれかに投与され得る。上記のように、薬学的組成物の投与は、任意の適切な方法（静脈内、腹腔内、筋肉内、皮下、鼻腔内、皮内、肛門、膣、局所的および経口経路による投与を含む）によってであり得る。
【０２５６】
特定の実施形態において、免疫療法は、能動的免疫療法であり得、この療法において処置は、免疫応答改変剤（例えば、本明細書中で提供されるポリペプチドおよびポリヌクレオチド）の投与を用いる、腫瘍に対して反応する内因性宿主免疫系のインビボ刺激に依存する。
【０２５７】
他の実施形態において、免疫療法は、受動的免疫療法であり得、この療法において処置は、確立された腫瘍免疫反応性を有する因子（例えば、エフェクター細胞または抗体）（これらは、抗腫瘍効果を直接的または間接的に媒介し得、そして必ずしもインタクトな宿主免疫系に依存しない）の送達を含む。エフェクター細胞の例としては、上記のようなＴ細胞、本明細書中に提供されるポリペプチドを発現する、Ｔリンパ球（例えば、ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔリンパ球およびＣＤ４＋Ｔヘルパー腫瘍浸潤性リンパ球）、キラー細胞（例えば、ナチュラルキラー細胞およびリンホカイン活性化キラー細胞）、Ｂ細胞および抗原提示細胞（例えば、樹状細胞およびマクロファージ）が挙げられる。本明細書中に列挙されるポリペプチドに特異的なＴ細胞レセプターおよび抗体レセプターは、養子免疫療法のために他のベクターまたはエフェクター細胞中にクローニングされ、発現され、そして移入され得る。本明細書に提供されるポリペプチドはまた、受動免疫療法のための抗体または抗イディオタイプ抗体（上記および米国特許第４，９１８，１６４号に記載される）を生成するために用いられ得る。
【０２５８】
エフェクター細胞は、一般に、本明細書中に記載されるように、インビトロでの増殖により養子免疫治療のために十分な量で得られ得る。単一の抗原特異的エフェクター細胞を、インビボでの抗原認識を保持しながら数十億まで増殖させるための培養条件は当該分野で周知である。このようなインビトロの培養条件は代表的に、しばしばサイトカイン（例えば、ＩＬ−２）および分裂しない支持細胞の存在下で、抗原での間欠刺激を用いる。上で述べたように、本明細書中で提供される免疫反応性ポリペプチドを使用して、免疫治療に十分な数の細胞を生成するために、抗原特異的Ｔ細胞培養物を急速に増殖し得る。詳細には、抗原提示細胞（例えば、樹状細胞、マクロファージ、単球、繊維芽細胞、および／またはＢ細胞）は、当該分野で周知の標準的技術を用いて、免疫反応性ポリペプチドでパルスされ得るか、または１つ以上のポリヌクレオチドでトランスフェクトされ得る。例えば、抗原提示細胞は、組換えウイルスまたは他の発現系における発現を増大するのに適切なプロモーターを有するポリヌクレオチドでトランスフェクトされ得る。治療において使用するための培養されたエフェクター細胞は、インビボで増殖し、かつ広範に分布し得、そして長期間生存し得なければならない。培養されたエフェクター細胞が、インビボで増殖し、そしてＩＬ−２を補充された抗原での反復刺激によって、長期間、多数生存するように誘導され得ることが研究で示されている（例えば、Ｃｈｅｅｖｅｒら、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  １５７：１７７、１９９７を参照のこと）。
【０２５９】
あるいは、本明細書において列挙されるポリペプチドを発現するベクターは、患者から得られた抗原提示細胞に導入され得、そして同じ患者に戻す移植のためにエキソビボでクローン的に増殖され得る。トランスフェクトされた細胞は、当該分野で公知の任意の手段（好ましくは、静脈投与、腔内投与、腹腔内投与、または腫瘍内投与による滅菌形態）を用いて患者に再導入され得る。
【０２６０】
本明細書中に記載される治療的組成物の投与の経路および頻度、ならびに投薬量は、個々人で異なり、そして標準的技術を用いて容易に確立され得る。概して、薬学的組成物およびワクチンは、注射（例えば、皮内、筋肉内、静脈内、または皮下）により、経鼻的に（例えば、吸引により）または経口的に、投与され得る。好ましくは、５２週間にわたって１〜１０用量の間が投与され得る。好ましくは、１ヶ月の間隔で６用量が投与され、そしてブースター（追加）ワクチン接種がその後、定期的に与えられ得る。代わりのプロトコールが個々の患者に適切であり得る。適切な用量は、上記のように投与された場合、抗腫瘍免疫応答を促進し得、そして基底（すなわち、未処置）レベルより少なくとも１０〜５０％上である、化合物の量である。このような応答は、患者内の抗腫瘍抗体を測定することによってか、または患者の腫瘍細胞を殺傷し得る細胞溶解エフェクター細胞のワクチン依存性のインビトロでの生成によってモニターされ得る。このようなワクチンはまた、非ワクチン接種患者と比較すると、ワクチン接種患者において、改善された臨床的結果（例えば、より頻繁な症状の軽減、完全もしくは部分的に疾患を有さないか、またはより長く疾患を有さない生存）を導く免疫応答を生じ得るはずである。一般に、１つ以上のポリペプチドを含む薬学的組成物およびワクチンについて、１用量中に存在する各ポリペプチドの量は、宿主の体重（１ｋｇ）あたり、約２５μｇ〜５ｍｇにわたる。適切な用量サイズは、患者の大きさで変化するが、代表的には約０．１ｍＬ〜約５ｍＬの範囲である。
【０２６１】
一般に、適切な投薬量および処置レジメンは、治療的および／または予防的利点を提供するのに十分な量の活性化合物を提供する。このような応答は、処置されていない患者に比較して、処置された患者において、改善された臨床的結果（例えば、より頻繁な寛解、完全なまたは部分的な、あるいはより長い疾患なしでの生存）を確立することによってモニターされ得る。腫瘍タンパク質に対する既存の免疫応答における増加は、一般的に、改善された臨床的結果と関連する。このような免疫応答は、一般的に、標準的な増殖アッセイ、細胞障害性アッセイまたはサイトカインアッセイを使用して評価され得、これは、処置の前および後に患者から得られるサンプルを使用して行われ得る。
【０２６２】
（癌の検出および診断用の組成物、方法およびキット）
一般的に、癌は、患者から得られた生物学的サンプル（例えば、血液、血清、痰、尿、および／または腫瘍生検）における１つ以上の卵巣腫瘍タンパク質および／またはこのようなタンパク質をコードするポリヌクレオチドの存在に基づいて患者において検出され得る。言い換えると、このようなタンパク質は、卵巣癌のような癌の存在または非存在を示すためのマーカーとして使用され得る。さらに、このようなタンパク質は、他の癌の検出に有用であり得る。本明細書に提供される結合剤が、一般的に、生物学的サンプル中の薬剤に結合する抗原のレベルの検出を可能にする。ポリヌクレオチドプライマーおよびプローブは、卵巣腫瘍タンパク質をコードするｍＲＮＡのレベルを検出するために使用され得、これもまた、癌の存在または非存在を示す。一般に、卵巣腫瘍の配列は、正常な組織におけるよりも、腫瘍組織において少なくとも３倍高いレベルで存在する。
【０２６３】
サンプル中のポリペプチドマーカーを検出するために結合剤を使用するための、当業者に公知の種々のアッセイ型式が存在する。例えば、ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，１９８８を参照のこと。一般的に、患者における癌の存在または非存在は、（ａ）患者から得られた生物学的サンプルを結合剤と接触させる工程；（ｂ）結合剤に結合するポリペプチドのレベルをサンプルにおいて検出する工程；および（ｃ）ポリペプチドのレベルと所定のカットオフ値とを比較する工程によって決定され得る。
【０２６４】
好ましい実施形態において、このアッセイは、結合するためおよびサンプルの残りからポリペプチドを除くために固体支持体上に固定化された結合剤の使用を含む。次いで、結合されたポリペプチドは、レポーター基を含み、かつ結合剤／ポリペプチド複合体に特異的に結合する検出試薬を使用して検出され得る。このような検出試薬は、例えば、ポリペプチドまたは抗体に特異的に結合する結合剤、あるいは結合剤に特異的に結合する他の薬剤（例えば、抗免疫グロブリン、プロテインＧ、プロテインＡまたはレクチン）を含み得る。あるいは、競合アッセイが、使用され得、ここで、ポリペプチドは、レポーター基で標識され、そしてサンプルと結合剤のインキュベーション後にその固定化結合剤に結合し得る。サンプルの成分が、標識ポリペプチドの結合剤への結合を阻害する程度は、サンプルの固定化結合剤との反応性を示す。このようなアッセイにおける使用に適切なポリペプチドは、上記のような、結合剤が結合する全長卵巣腫瘍タンパク質およびそのポリペプチドの部分を含む。
【０２６５】
固体支持体は、腫瘍タンパク質が付着され得る当業者に公知の任意の物質であり得る。例えば、固体支持体は、マイクロタイタープレートにおける試験ウェルあるいはニトロセルロースまたは他の適切な膜であり得る。あるいは、その支持体は、ビーズまたはディスク（例えば、ガラス、ファイバーグラス、ラテックス、またはプラスチック物質（例えば、ポリスチレン、またはポリ塩化ビニル））であり得る。その支持体はまた、磁気粒子または光ファイバーセンサー（例えば、米国特許第５，３５９，６８１号に開示されるような）であり得る。結合剤は、当業者に公知の種々の技術を使用して固体支持体上に固定化され得、これは特許および科学文献に十分に記載されている。本発明の状況において、用語「固定化」とは、非共有結合的な会合（例えば、吸着）および共有結合的な付着（これは、薬剤と支持体上の官能基との間で直接連結され得るかまたは架橋剤を用いる連結であり得る）の両方をいう。マイクロタイタープレートのウェル、または膜への吸着による固定化は好ましい。このような場合、吸着は、適切な緩衝液中で固体支持体に適切な時間で結合剤を接触させることによって達成され得る。接触時間は、温度によって変化するが、代表的には、約１時間から約１日の間である。一般的には、約１０ｎｇ〜約１０μｇ、そして好ましくは約１００ｎｇ〜約１μｇの範囲の量の結合剤とプラスチックマイクロタイタープレート（例えば、ポリスチレンまたはポリ塩化ビニル）のウェルを接触させることは、適切な量の結合剤を固定化するのに十分である。
【０２６６】
固体支持体への結合剤の共有結合的付着は、一般に、支持体および結合剤上の官能基（例えば、水酸基またはアミノ基）の両方と反応する二官能性試薬と支持体を最初に反応させることによって達成され得る。例えば、この結合剤は、ベンゾキノンを用いるかまたは結合パートナー上のアミンおよび活性水素と支持体上のアルデヒド基との縮合によって、適切なポリマーコーティングを有する支持体に、共有結合的に付着され得る（例えば、Ｐｉｅｒｃｅ  Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｃａｔａｌｏｇ  ａｎｄ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ、１９９１、Ａ１２−Ａ１３を参照のこと）。
【０２６７】
特定の実施形態において、このアッセイは、２抗体サンドイッチアッセイである。本アッセイは、最初に、固体支持体（通常、マイクロタイタープレートのウェル）上で固定化されている抗体をサンプルと接触させて、サンプル内のポリペプチドを固定化抗体に結合させることによって実施され得る。次いで、非結合サンプルは固定化ポリペプチド−抗体複合体から除去され、そして検出試薬（好ましくは、そのポリペプチド上の異なる部位に結合し得る第２の抗体）（レポーター基を含む）が添加される。次いで、固体支持体に結合したままである検出試薬の量が、特定のレポーター基に関して適切な方法を用いて決定される。
【０２６８】
より詳細には、一旦抗体が上記のように支持体上に固定化されると、支持体上の残りのタンパク質結合部位は、代表的にはブロックされる。任意の適切なブロック剤（例えば、ウシ血清アルブミンまたはＴｗｅｅｎ２０ＴＭ（Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ））は、当業者に公知である。固定化抗体は次いで、サンプルとインキュベートされ、そしてポリペプチドをこの抗体に結合させる。インキュベーションの前に、このサンプルは適切な希釈液（例えば、リン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ））で希釈され得る。概して、適切な接触時間（すなわち、インキュベーション時間）は、卵巣腫瘍を有する個体から得られたサンプル内のポリペプチドの存在を検出するのに十分な時間である。好ましくは、この接触時間は、結合ポリペプチドと非結合ポリペプチドとの間の平衡で達成されたレベルの少なくとも約９５％である結合レベルを達成するのに十分な時間である。当業者は、ある時間にわたって起こる結合レベルをアッセイすることによって、平衡に達するまでに必要な時間が容易に決定され得ることを認識する。室温では、一般に、約３０分間のインキュベーション時間で十分である。
【０２６９】
次いで、非結合サンプルが、適切な緩衝液（例えば、０．１％Ｔｗｅｅｎ２０ＴＭを含むＰＢＳ）を用いて固体支持体を洗浄することによって除去され得る。レポーター基を含む第２の抗体が次いで、固体支持体に添加され得る。好ましいレポーター基は、上記の基を含む。
【０２７０】
次いで、検出試薬が、結合されたポリペプチドを検出するのに十分な量の時間、固定化抗体−ポリペプチド複合体とインキュベートされる。適切な量の時間は、一般に、ある時間にわたって起こる結合のレベルをアッセイすることによって決定され得る。次いで、非結合の検出試薬は除去され、そして結合した検出試薬は、レポーター基を用いて検出される。レポーター基を検出するために使用される方法は、レポーター基の性質に依存する。放射性基について、一般的には、シンチレーション計数法またはオートラジオグラフィー法が適切である。分光法は、色素、発光基および蛍光基を検出するために使用され得る。ビオチンは、異なるレポーター基（一般に、放射性もしくは蛍光基または酵素）に結合されたアビジンを使用して検出され得る。酵素レポーター基は、一般に、基質の添加（一般には、特定の時間の間）、続いて反応産物の分光分析または他の分析により検出され得る。
【０２７１】
癌（例えば、卵巣癌）の存在または非存在を決定するために、固体支持体に結合したままのレポーター基から検出されるシグナルが、一般に、所定のカットオフ値と対応するシグナルと比較される。１つの好ましい実施形態において、癌の検出のためのカットオフ値は、固定化抗体を、癌を有さない患者由来のサンプルとインキュベートした際に得られた平均シグナル値である。概して、所定のカットオフ値を３標準偏差上回るシグナルを生じるサンプルが、癌に対して陽性とみなされる。代わりの好ましい実施形態において、このカットオフ値は、Ｓａｃｋｅｔｔら、Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｙ：Ａ  Ｂａｓｉｃ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ｆｏｒ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｌｉｔｔｌｅ  Ｂｒｏｗｎ  ａｎｄ  Ｃｏ．，１９８５，１０６〜７頁の方法に従って、レシーバーオペレーターカーブ（Ｒｅｃｅｉｖｅｒ  Ｏｐｅｒａｔｏｒ  Ｃｕｒｖｅ）を使用して決定される。簡単に言うと、本実施形態において、このカットオフ値は、診断試験結果について各可能なカットオフ値に対応する真の陽性割合（すなわち、感度）および偽陽性割合（１００％−特異性）の対のプロットから決定され得る。プロット上の上方左手角に最も近いカットオフ値（すなわち、最大領域を囲む値）が、最も正確なカットオフ値であり、そして本方法によって決定されたカットオフ値より高いシグナルを生ずるサンプルが陽性と見なされ得る。あるいは、カットオフ値は、偽陽性割合を最小にするためにプロットに沿って左へシフトされ得るか、または偽陰性割合を最小にするために右へシフトされ得る。概して、本方法によって決定されたカットオフ値より高いシグナルを生じるサンプルが、癌に対して陽性と見なされる。
【０２７２】
関連の実施形態において、このアッセイは、フロースルー試験形式またはストリップ試験形式で実行される（ここで、結合剤は、ニトロセルロースのような膜上で固定化される）。フロースルー試験では、サンプル内のポリペプチドは、サンプルが膜を通過するにつれて固定化結合剤に結合する。次いで、第２の標識化された結合剤が、この第２の結合剤を含む溶液がその膜を介して流れるにつれて、結合剤−ポリペプチド複合体と結合する。次いで、結合した第２の結合剤の検出は、上記のように実行され得る。ストリップ試験形式では、結合剤が結合される膜の一端を、サンプルを含む溶液中に浸す。このサンプルは、膜に沿って、第２の結合剤を含む領域を通って、そして固定化結合剤の領域まで移動する。固定化抗体の領域での第２の結合剤の濃度が、癌の存在を示す。代表的には、その部位での第２の結合剤の濃度は、視覚的に読みとられ得るパターン（例えば、線）を生成する。このようなパターンを示さないことは、陰性の結果を示す。概して、この膜上に固定化される結合剤の量は、生物学的サンプルが、上で議論される形式において、２抗体サンドイッチアッセイにおいて陽性シグナルを生じるのに十分であるレベルのポリペプチドを含む場合、視覚的に識別可能なパターンを生じるように選択される。このようなアッセイにおける使用に好ましい結合剤は、抗体およびその抗原結合フラグメントである。好ましくは、膜上に固定化される抗体の量は、約２５ｎｇ〜約１μｇの範囲であり、そしてより好ましくは、約５０ｎｇ〜約５００ｎｇの範囲である。このような試験は、代表的には、非常に少ない量の生物学的サンプルを用いて実行され得る。
【０２７３】
もちろん、本発明の腫瘍タンパク質または結合剤との使用に適する多数の他のアッセイプロトコルが存在する。上記の記載は、例示であることを意図するにすぎない。例えば、上記プロトコルが、腫瘍ポリペプチドを使用するために容易に改変され得て、生物学的サンプル内でこのようなポリペプチドに結合する抗体を検出し得ることは当業者に明かである。このような腫瘍タンパク質特異的抗体の検出は、癌の存在と相関し得る。
【０２７４】
癌もまた、あるいは癌が、生物学的サンプル中の腫瘍タンパク質と特異的に反応するＴ細胞の存在に基づいて検出され得る。特定の方法では、患者から単離されたＣＤ４＋Ｔ細胞および／またはＣＤ８＋Ｔ細胞を含む生物学的サンプルは、腫瘍ポリペプチド、このようなポリペプチドをコードするポリヌクレオチドおよび／またはこのようなポリペプチドの少なくとも免疫原性部分を発現するＡＰＣとともにインキュベートされ、そしてＴ細胞の特異的活性化の存在または非存在が検出される。適切な生物学的サンプルとしては、単離されたＴ細胞が挙げられるがこれらに限定されない。例えば、Ｔ細胞は、慣用的技術によって（例えば、末梢血リンパ球のＦｉｃｏｌｌ／Ｈｙｐａｑｕｅ密度勾配遠心分離法によって）患者から単離され得る。Ｔ細胞は、２〜９日間（代表的に４日間）、３７℃にてポリペプチド（例えば、５〜２５μｇ／ｍｌ）とともにインビトロでインキュベートされ得る。Ｔ細胞サンプルの別のアリコートを、コントロールとして役立てるために、腫瘍ポリペプチドの非存在下でインキュベートすることが所望され得る。ＣＤ４＋Ｔ細胞に関して、活性化は好ましくは、Ｔ細胞の増殖を評価することによって検出される。ＣＤ８＋Ｔ細胞に関しては、活性化は好ましくは、細胞溶解活性を評価することによって検出される。疾患のない患者におけるよりも少なくとも２倍高い増殖レベルおよび／または少なくとも２０％高い細胞溶解活性レベルは、患者における癌の存在を示す。
【０２７５】
上記のように、癌もまた、あるいは癌が、生物学的サンプル中の腫瘍タンパク質をコードするｍＲＮＡレベルに基づいて検出され得る。例えば、少なくとも２つのオリゴヌクレオチドプライマーを、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）に基づくアッセイにおいて使用し、生物学的サンプルに由来する腫瘍ｃＤＮＡの一部を増幅し得、ここで、オリゴヌクレオチドプライマーのうちの少なくとも１つは、腫瘍タンパク質をコードするポリヌクレオチドに特異的である（すなわち、ハイブリダイズする）。次いで、増幅されたｃＤＮＡが、当該分野で周知の技術（例えば、ゲル電気泳動）を用いて分離され、そして検出される。同様に、腫瘍タンパク質をコードするポリヌクレオチドに特異的にハイブリダイズするオリゴヌクレオチドプローブを、ハイブリダイゼーションアッセイにおいて使用し、生物学的サンプル中でこの腫瘍タンパク質をコードするポリヌクレオチドの存在を検出し得る。
【０２７６】
アッセイ条件下でのハイブリダイゼーションを可能にするために、オリゴヌクレオチドのプライマーおよびプローブは、少なくとも１０ヌクレオチド、そして好ましくは少なくとも２０ヌクレオチドの長さの、本発明の腫瘍タンパク質をコードするポリヌクレオチドの一部に対して、少なくとも約６０％、好ましくは、少なくとも約７５％、そしてより好ましくは、少なくとも約９０％の同一性を有するオリゴヌクレオチド配列を含むべきである。好ましくは、オリゴヌクレオチドのプライマーおよび／またはプローブは、上記に規定されるような、中程度にストリンジェントな条件下で、本明細書中に記載されるポリペプチドをコードするポリヌクレオチドにハイブリダイズする。本明細書中に記載される診断方法において、有用に使用され得るオリゴヌクレオチドのプライマーおよび／またはプローブは、好ましくは、少なくとも１０〜４０ヌクレオチドの長さである。好ましい実施形態において、オリゴヌクレオチドプライマーは、本明細書中に開示されるような配列を有するＤＮＡ分子の少なくとも１０の連続するヌクレオチド、より好ましくは、少なくとも１５の連続するヌクレオチドを含む。ＰＣＲに基づくアッセイおよびハイブリダイゼーションアッセイの両方についての技術は、当該分野で周知である（例えば、Ｍｕｌｌｉｓら，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｓｙｍｐ．Ｑｕａｎｔ．Ｂｉｏｌ．，５１：２６３，１９８７；Ｅｒｌｉｃｈ編、ＰＣＲ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｓｔｏｃｋｔｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ，１９８９を参照のこと）。
【０２７７】
１つの好ましいアッセイはＲＴ−ＰＣＲを用い、ここで、ＰＣＲは、逆転写と組み合わせて適用される。代表的に、ＲＮＡは生物学的サンプル（例えば、生検組織）から抽出され、そして逆転写されてｃＤＮＡ分子を生成する。少なくとも１つの特異的プライマーを用いるＰＣＲ増幅は、ｃＤＮＡ分子を生成し、このｃＤＮＡ分子は、例えば、ゲル電気泳動を用いて分離および可視化され得る。増幅は、試験患者および癌に罹患していない個体から採取された生物学的サンプルにおいて行われ得る。増幅反応は、２桁の大きさに及ぶいくつかのｃＤＮＡ希釈物において行われ得る。試験患者サンプルのいくつかの希釈物における発現の増加が、癌のないサンプルの同一希釈の物と比較して２倍以上である場合、これは、代表的に、陽性とみなされる。
【０２７８】
別の実施形態において、本明細書中に記載される組成物は、癌の進行についてのマーカーとして使用され得る。この実施形態において、癌の診断についての上記のようなアッセイは、経時的に実行され得、そして反応性ポリペプチドまたはポリヌクレオチドのレベルの変化を評価し得る。例えば、このアッセイは、６ケ月〜１年の期間にわたって２４〜７２時間毎に実行され得、そしてその後、必要に応じて実行され得る。一般に、癌は、検出されるポリペプチドまたはポリヌクレオチドのレベルが経時的に増大する患者において進行している。対照的に、癌は、反応性ポリペプチドまたはポリヌクレオチドのレベルが一定のままであるか、または時間とともに減少するかのいずれかである場合、進行していない。
【０２７９】
特定のインビボ診断アッセイは、腫瘍に対して直接実施され得る。１つのこのようなアッセイは、腫瘍細胞を結合剤と接触させる工程を包含する。次いで、結合された結合剤は、レポーター基を介して直接的または間接的に検出され得る。このような結合剤はまた、組織学的な適用において使用され得る。あるいは、ポリヌクレオチドプローブは、このような適用において使用され得る。
【０２８０】
上記のように、感度を改善するために、複数の腫瘍タンパク質マーカーは、所定のサンプル内でアッセイされ得る。本明細書中に提供される種々のタンパク質に特異的な結合剤が単一のアッセイにおいて組み合わせられ得ることは明らかである。さらに、複数のプライマーまたはプローブが同時に用いられ得る。腫瘍タンパク質マーカーの選択は、最適な感度をもたらす組み合わせを決定する慣用的実験に基づき得る。さらに、または代替として、本明細書中に提供される腫瘍タンパク質についてのアッセイは、他の公知の腫瘍抗原に対するアッセイと組み合わせられ得る。
【０２８１】
本発明はさらに、上記の診断方法のうちのいずれかにおいて使用するためのキットを提供する。このようなキットは代表的に、診断アッセイを行うに必要な２つ以上の構成要素を備える。構成要素は、化合物、試薬、容器および／または器具であり得る。例えば、キット内の１つの容器は、腫瘍タンパク質に特異的に結合するモノクローナル抗体またはそのフラグメントを含み得る。このような抗体またはフラグメントは、上記のような支持体材料に付着されて提供され得る。１つ以上のさらなる容器は、アッセイにおいて使用される要素（例えば、試薬または緩衝液）を含み得る。このようなキットはまた、あるいは、抗体結合の直接的または間接的な検出に適切なレポーター基を含む、上記のような検出試薬を備え得る。
【０２８２】
あるいは、キットは、生物学的サンプル中の腫瘍タンパク質をコードするｍＲＮＡレベルを検出するように設計され得る。このようなキットは一般に、腫瘍タンパク質をコードするポリヌクレオチドにハイブリダイズする、上記のような少なくとも１つのオリゴヌクレオチドのプローブまたはプライマーを備える。このようなオリゴヌクレオチドは、例えば、ＰＣＲまたはハイブリダイゼーションアッセイにおいて用いられ得る。このようなキット内に存在し得る、さらなる構成要素としては、腫瘍タンパク質をコードするポリヌクレオチドの検出を容易にする、第２のオリゴヌクレオチドおよび／または診断試薬もしくは容器が挙げられる。
【０２８３】
以下の実施例は、例示のために提供され、そして限定のためには提供されない。
【０２８４】
（実施例）
（実施例１：代表的卵巣癌ｃＤＮＡ配列の同定）
原発性卵巣腫瘍および転移性卵巣腫瘍のｃＤＮＡライブラリーを、異なる３つの卵巣腫瘍ＲＮＡサンプルのプールから各々カナマイシン耐性ｐＺＥｒＯＴＭ−２ベクター（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中に構築した。原発性卵巣腫瘍ライブラリーについて、以下のＲＮＡサンプルを使用した：（１）４１歳の人の中程度に分化した乳頭漿液性癌、（２）ＩＩＩＣ期の卵巣腫瘍、および（３）５０歳の白人の乳頭漿液性腺癌。転移性卵巣腫瘍ライブラリーについて、使用したＲＮＡサンプルは、以下由来の網組織であった：（１）７３歳の人の、砂腫体を有するほとんど分化していない転移性乳頭腺癌、（２）７４歳の人の、ほとんど分化していない転移性腺癌、および（３）６８歳の人の、ほとんど分化していない転移性乳頭腺癌。
【０２８５】
各ライブラリー中のクローンの数を、未増幅ライブラリーの連続希釈物をプレートすることによって見積もった。挿入物データを、３２個の原発性卵巣腫瘍クローンおよび３２個の転移性卵巣腫瘍クローンから決定した。ライブラリー特徴付けの結果を、表Ｉに示す。
【０２８６】
【表１】
2004537966.tif 000002
４つのサブトラクションライブラリーを、アンピシリン耐性ｐｃＤＮＡ３．１ベクター（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中に構築した。２つのライブラリーは、原発性卵巣腫瘍由来であり、そして２つは、転移性卵巣腫瘍由来である。各々の場合、挿入物内の制限酵素切片の数を最小化して、全長サブトラクションライブラリーを生成した。サブトラクションを、以下により詳細に記載されるように、わずかに異なるプロトコルを用いて各々行った。
【０２８７】
（Ａ．ＰＯＴＳ  ２ライブラリー：原発性卵巣腫瘍サブトラクションライブラリー）
トレーサー：原発性卵巣腫瘍ライブラリー１０μｇ、Ｎｏｔ  Ｉで消化した
ドライバー：ｐｃＤＮＡ３．１（＋）中の正常膵臓３５μｇ
ｐｃＤＮＡ３．１（＋）中の正常ＰＢＭＣ２０μｇ
ｐｃＤＮＡ３．１（＋）中の正常皮膚１０μｇ
ｐＺＥｒＯＴＭ−２中の正常骨髄３５μｇ
Ｂａｍ  ＨＩ／Ｘｈｏ  Ｉ／Ｓｃａ  Ｉで消化した。
【０２８８】
２回のハイブリダイゼーションを実施し、そしてＮｏｔ  Ｉ切断ｐｃＤＮＡ３．１（＋）は、サブトラクションされたライブラリーのためのクローニングベクターであった。サブトラクションされたライブラリーからランダムに拾い上げられたこれまで未同定であったクローンについての配列結果を、表ＩＩに示す。
【０２８９】
【表２】
2004537966.tif 000003
2004537966.tif 000004
（Ｂ．ＰＯＴＳ  ７ライブラリー：原発性卵巣腫瘍サブトラクションライブラリー）
トレーサー：原発性卵巣腫瘍ライブラリー１０μｇ、Ｎｏｔ  Ｉで消化した
ドライバー：ｐｃＤＮＡ３．１（＋）中の正常膵臓３５μｇ
ｐｃＤＮＡ３．１（＋）中の正常ＰＢＭＣ２０μｇ
ｐｃＤＮＡ３．１（＋）中の正常皮膚１０μｇ
ｐＺＥｒＯＴＭ−２中の正常骨髄３５μｇ
Ｂａｍ  ＨＩ／Ｘｈｏ  Ｉ／Ｓｃａ  Ｉで消化した
約２５μｇのｐＺＥｒＯＴＭ−２、Ｂａｍ  ＨＩおよびＸｈｏ  Ｉ
で消化した。
【０２９０】
２回のハイブリダイゼーションを実施し、そしてＮｏｔ  Ｉ切断ｐｃＤＮＡ３．１（＋）は、サブトラクションされたライブラリーのためのクローニングベクターであった。サブトラクションされたライブラリーからランダムに拾い上げられたこれまで未同定であったクローンについての配列結果を、表ＩＩＩに示す。
【０２９１】
【表３】
2004537966.tif 000005
2004537966.tif 000006
（Ｃ．ＯＳ１Ｄライブラリー：転移性卵巣腫瘍サブトラクションライブラリー）
トレーサー：ｐＺＥｒＯＴＭ−２中の転移性卵巣ライブラリー１０μｇ、
Ｎｏｔ  Ｉで消化した
ドライバー：ｐｃＤＮＡ３．１中の正常膵臓２４．５μｇ
ｐｃＤＮＡ３．１中の正常ＰＢＭＣ１４μｇ
ｐｃＤＮＡ３．１中の正常皮膚１４μｇ
ｐＺＥｒＯＴＭ−２中の正常骨髄２４．５μｇ
ｐＺＥｒＯＴＭ−２  ５０μｇ、Ｂａｍ  ＨＩ／Ｘｈｏ  Ｉ／
Ｓｆｕ  Ｉで消化した。
【０２９２】
３回のハイブリダイゼーションを実施し、最後の２回のハイブリダイゼーションを、夾雑するｐＺＥｒＯＴＭ−２ベクターを除くためにさらなる１５μｇのビオチン化ｐＺＥｒＯＴＭ−２を用いて行った。サブトラクションされたライブラリーのためのクローニングベクターは、ｐｃＤＮＡ３．１／Ｎｏｔ  Ｉ切断であった。サブトラクションされたライブラリーからランダムに拾い上げられたこれまで未同定であったクローンについての配列結果を、表ＩＶに示す。
【０２９３】
【表４】
2004537966.tif 000007
（Ｄ．ＯＳ１Ｆライブラリー：転移性卵巣腫瘍サブトラクションライブラリー）
トレーサー：転移性卵巣腫瘍ライブラリー１０μｇ、Ｎｏｔ  Ｉで消化した
ドライバー：ｐｃＤＮＡ３．１中の正常膵臓１２．８μｇ
ｐｃＤＮＡ３．１中の正常ＰＢＭＣ７．３μｇ
ｐｃＤＮＡ３．１中の正常皮膚７．３μｇ
ｐＺＥｒＯＴＭ−２中の正常骨髄１２．８μｇ
ｐＺＥｒＯＴＭ−２  ２５μｇ、Ｂａｍ  ＨＩ／Ｘｈｏ  Ｉ／
Ｓｆｕ  Ｉで消化した。
【０２９４】
１回のハイブリダイゼーションを実施した。サブトラクションされたライブラリーのためのクローニングベクターは、ｐｃＤＮＡ３．１／Ｎｏｔ  Ｉ切断であった。サブトラクションされたライブラリーからランダムに拾い上げられたこれまで未同定であったクローンについての配列結果を、表Ｖに示す。
【０２９５】
【表５】
2004537966.tif 000008
2004537966.tif 000009
公知の配列に対応する表ＶＩ中の配列もまた、上記ライブラリー中で同定された。
【０２９６】
【表６】
2004537966.tif 000010
2004537966.tif 000011
2004537966.tif 000012
2004537966.tif 000013
上記ライブラリーより同定されたなおさらなる卵巣癌のポリヌクレオチドおよび／またはポリペプチドの配列を、以下の表ＶＩＩに提供する。配列Ｏ５７４Ｓ（配列番号１８３および１８５）、Ｏ５８４Ｓ（配列番号１９３）およびＯ５８５Ｓ（配列番号１９４）は、新規配列を示す。残りの配列は、既知のゲノム配列および／またはＥＳＴ配列と少なくともいくらかの相同性を示した。
【０２９７】
【表７】
2004537966.tif 000014
配列番号１８２（Ｏ５７３Ｓともいわれる）のクローンに対するさらなる研究は、配列番号２００〜２０２のアミノ酸配列をコードする複数のオープンリーディングフレームの同定を導いた。
【０２９８】
（実施例２：マイクロアレイ技術を用いるｃＤＮＡ発現の分析）
さらなる研究において、マイクロアレイ分析によって決定したところ、本明細書中に開示される配列が、特定の腫瘍組織において過剰発現されていることを見出した。このアプローチを用いて、ｃＤＮＡ配列をＰＣＲ増幅し、そして腫瘍組織および正常組織におけるこれらのｍＲＮＡ発現プロフィールを、本質的に記載される（Ｓｈｅｎａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５）ようなｃＤＮＡマイクロアレイ技術を使用して試験する。簡単には、クローンを、独特のｃＤＮＡクローンに対応する各々の位置で、複数のレプリカとしてガラススライド上に整列させる（５５００個という多くのクローンを、単一のスライドまたはチップ上に整列させ得る）。各チップを、それぞれＣｙ３およびＣｙ５で蛍光標識した１対のｃＤＮＡプローブとハイブリダイズさせる。典型的には、１μｇのポリＡ＋ＲＮＡを使用して、各ｃＤＮＡプローブを生成する。ハイブリダイゼーション後、チップを走査し、そして蛍光強度を、Ｃｙ３チャネルおよびＣｙ５チャネルの両方について記録する。複数のビルトイン品質管理工程が存在する。最初に、プローブの品質を、遍在的に発現する遺伝子のパネルを使用してモニターする。第２に、コントロールプレートはまた、酵母ＤＮＡフラグメントを含み得、この酵母ＤＮＡフラグメントの相補的ＲＮＡは、プローブの品質および分析の感度を測定するためにプローブ合成にスパイクされ得る。現在、この技術は、１００，０００コピーのｍＲＮＡ中１の感度を示す。最終的に、この技術の再現性を、異なる位置で２連のコントロールｃＤＮＡエレメントを含ませることによって確認し得る。
【０２９９】
クローン５７８８５（配列番号１９７）、５７８８６（配列番号：１９８）および５７８８７（配列番号１９９）についてのマイクロアレイの結果は、以下の通りである。
【０３００】
クローン５７８８５：１６／３８（４２％）の卵巣腫瘍は、＞０．４の発現シグナル値を示した。全ての卵巣腫瘍に対する平均値は、０．６６２であり（全ての正常組織に対する平均値は、０．１８７である）、必須の正常な組織と比較して卵巣腫瘍において３．６４倍の過剰発現レベルをもたらす。正常組織発現は、腹膜、皮膚および胸腺において上昇した（＞０．４）。
【０３０１】
クローン５７８８６：１６／３８（４２％）の卵巣腫瘍は、＞０．４の発現シグナル値を示した。全ての卵巣腫瘍に対する平均値は、０．５７４であり（全ての正常組織に対する平均値は、０．１６６である）、必須の正常な組織と比較して卵巣腫瘍において３．４６倍の過剰発現レベルをもたらす。正常組織発現は、心臓、膵臓および小腸において上昇した（＞０．４）。
【０３０２】
クローン５７８８７：１７／３８（４４％）の卵巣腫瘍は、＞０．４の発現シグナル値を示した。全ての卵巣腫瘍に対する平均値は、０．７４４であり（全ての正常組織に対する平均値は、０．１８４である）、必須の正常な組織と比較して卵巣腫瘍において４．０４倍の過剰発現レベルをもたらす。正常組織発現は、食道において上昇した（＞０．４）。
【０３０３】
（実施例３：Ｅ．ｃｏｌｉにおける組換え抗原Ｏ５６８Ｓの発現）
本実施例は、Ｅ．ｃｏｌｉにおける組換え抗原Ｏ５６８Ｓ（配列番号１７７）の発現を記載する。この配列を、トレーサーとして原発性卵巣腫瘍ｃＤＮＡを使用してＰＯＴＳ  ７サブトラクションライブラリーより実施例１において同定した。Ｏ５６８Ｓのオープンリーディングフレームに特異的なＰＣＲプライマーを設計し、そしてＯ５６８Ｓの特異的増幅において使用した。ＰＣＲ産物を、ＥｃｏＲＩで酵素的に消化し、そして制限酵素ＥｃｏＲＩおよびＥｃｏ７２Ｉで切断されている、改変型ｐＥＴ２８ベクターであるｐＰＤＭ中に連結した。この構築物の配列および方向を、配列分析を介して確認した。この配列を、配列番号２０６中に示す。次いで、このベクターを、発現宿主であるＢＬＲ（ＤＥ３）およびＨＭＳ１７４（ＤＥ３）のｐＬｙｓＳ中に形質転換した。タンパク質発現が確認された。この配列を、配列番号２０７に提供する。
【０３０４】
（実施例４：クローンＯ５９１Ｓについて得られたさらなる配列）
Ｏ５９１Ｓ（クローン識別子５７８８７）の配列を使用して、公的な配列データベースを検索した。逆鎖が、ＧＰＲ３９のＣ末端にいくらかの程度の同一性を示したことを見出した。ＧＰＲ３９のコード領域についてのｃＤＮＡを配列番号２０８に、そして対応するアミノ酸配列を配列番号２０９に開示する。ＧＰＲ３９コード領域は、２つのエキソンを含む。Ｏ５９１Ｓ、およびＯ５９１Ｓの相補鎖によってコードされるＧＰＲ３９の両方が、第２染色体上に位置する。
【０３０５】
（実施例５：Ｏ５９１Ｓのさらなる特徴付けおよび延長された配列の同定）
Ｏ１０３４Ｃは、電子的サブトラクション（ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃ  ｓｕｂｔｒａｃｔｉｏｎ）によって同定された卵巣特異的遺伝子である。手短に述べると、電子的サブトラクションは、ＥＳＴデータベース配列を分析して卵巣特異的遺伝子を同定することを含む。Ｏ１０３４Ｃを同定するために用いられる電子的サブトラクション方法では、卵巣ライブラリー（正常および腫瘍）から誘導されたＥＳＴクローンの配列を、ＧｅｎＢａｎｋ公開ヒトＥＳＴデータベースから入手した。各卵巣配列を、シード配列と配列を共有する他のＥＳＴクローン（同じｍＲＮＡから潜在的に由来するクローン）を同定するために、総ヒトＥＳＴデータベースのＢＬＡＳＴＮ検索において「シード」問合せとして用いた。共有される配列を有するＥＳＴクローンを、クラスターにグループ分けし、そして他のクラスターと配列を共有するクラスターをスーパークラスターへとグループ分けした。各スーパークラスター内の各ＥＳＴの組織供給源を注記し、そしてスーパークラスターを、ＥＳＴが由来する組織分布に基づいてランク分けした。卵巣ライブラリー由来のＥＳＴクローンを主に、または単独で含むスーパークラスターを、他の全ての正常成体組織と比較して、卵巣組織において示差的に発現された遺伝子を表すとみなした。
【０３０６】
このクローンを、公開ＥＳＴデータベースから、Ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  Ｇｅｎｏｍｉｃｓ  ａｎｄ  ｔｈｅｉｒ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ（ＩＭＡＧＥ）クローン番号５９５４４９（ＩＭＡＧＥ協会は、ＥＳＴクローンおよびｃＤＮＡクローンの寄託機関である）として同定した。そしてこのクローンを、配列番号２１０として開示する。登録番号ＡＡ１７３７３９および登録番号ＡＡ１７３３８３は、Ｇｅｎｅｂａｎｋにおいて同定されたＥＳＴの配列を表す。このクローンは、ＵｎｉｇｅｎｅクラスターＨＳ．８５３３９の一部である（Ｕｎｉｇｅｎｅは、Ｇｅｎｂａｎｋ配列を、遺伝子が方向付けられたクラスターの非重複セットへと自動的に分配するための実験系である）。そしてこのクローンは、ニューロテンシン様Ｇタンパク質共役レセプター（ＧＲＰ３９）をコードすると注釈を付けられていた。しかし、本発明者らは、ＩＭＡＧＥ＃５９５４４９が、潜在的ＧＰＲ３９をコードする鎖に対する相補鎖から誘導される新規タンパク質をコードすることを見出した。
【０３０７】
一連の卵巣腫瘍特異的プローブを用いた、クローンのマイクロアレイ分析は、このクローンが、必須の正常組織サンプルの群と比較して、卵巣腫瘍サンプルおよび正常卵巣サンプルの群において４．９５倍過剰発現されることを示した。
【０３０８】
ＩＭＡＧＥ＃５９４４９を、ＥＳＴデータベースおよびＧｅｎｂａｎｋのＢｌａｓｔ  Ａ検索に供し、そしてＩＭＡＧＥ＃５９５４４９およびその得られるコンティグを完了するまで伸長させることによって電子的全長クローンコンティグ（Ｏ１０３４Ｃ）を作成した。このプロセスを繰り返して、さらなるＥＳＴ配列が、コンセンサス配列を伸長させると同定されなくなったら完了とした。この電子的に誘導されたクローンを、以前に記載されたクローンＯ５９１Ｓをコードすると同定した（この配列を配列番号２１１に開示する）。この卵巣特異的候補の発見を、実施例４に、より詳細に記載する。
【０３０９】
Ｏ１０３４Ｃについてのコンセンサス配列は、２つのＥＳＴクローン（登録番号ＢＦ３４５１４１および登録番号ＢＥ３３６６０７）から誘導されたさらなる配列に起因して、Ｏ５９１Ｓよりもさらに５’に伸長した。この２つのＥＳＴクローンについての配列を、それぞれ、配列番号２１２および配列番号２１３に開示する。ＢＦ３４５１４１は、Ｏ１０３４Ｃ／Ｏ５９１Ｓコンセンサスとはその３’末端で（おそらく、異なるスプライス形態を表す）、そしてＢＥ３３６６０７とはその５’末端のいくつかの塩基で異なるが、この２つのＥＳＴを、利用可能な、一致する染色体配列に対して比較した。これらは、ヒト第２染色体のクローンＲＰ１１−１５９Ｎ２０：ｈｔｇｓデータベース登録番号ＡＣ０１０９７４に見出された。これらの配列を用いてＯ１０３４Ｃ／Ｏ５９１Ｓを伸長させて、Ｏ１０３４Ｃ／Ｏ５９１Ｓについての１８９７塩基対の最終的なコンセンサス配列（配列番号２１４に開示する）を形成した。
【０３１０】
オープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）は、Ｏ１０３４Ｃ／Ｏ５９１Ｓコンセンサス配列（ヌクレオチド２６０〜６８２）内に同定された。この推定翻訳物を配列番号２１５に開示する。Ｇｅｎｂａｎｋデータベースに対するＢＬＡＳＴｘデータベース検索は、このＯＲＦが、あらゆる既知のヒトタンパク質と同一性を有さない（Ｅ値＜１ｅ−２５）ことを示した。唯一の一致は、本発明者らによって、相補鎖においてＯ１０３４Ｃ／Ｏ５９１Ｓの３’末端でコードされることが示されたＧタンパク質共役レセプター（ＧＰＲ３９を含む）とであった。しかし、このＯＲＦは、無名のマウス産物（登録＃ＢＡＡ９５１０１）と９３％類似性（１３１／１４１アミノ酸）および９１％同一性（１２９／１４１アミノ酸）を有するタンパク質をコードし、このことは、これが、新規ヒト卵巣特異的抗原を表す本物の翻訳産物であることを示唆した。
【０３１１】
Ｏ１０３４Ｃ／Ｏ５９１Ｓの新規性を、ＧＲＰ３９またはＯ１０３４Ｃ／Ｏ５９１Ｓのいずれかと相補する一本鎖プローブを用いたノーザンブロット分析によって確認した。鎖特異的Ｏ１０３４Ｃ／Ｏ５９１Ｓプローブは、ノーザンブロット上にプローブされた卵巣腫瘍サンプルに特異的にハイブリダイズし、一方、全てのサンプルは、ＧＰＲ３９でプローブした場合ネガティブであった。さらに、リアルタイムＰＣＲを、ＧＰＲ３９またはＯ１０３４Ｃ／Ｏ５９１Ｓのいずれかに特異的なプライマーを用いて行った。これらの結果は、これらの２つの配列の示差的な発現プロファイルをさらに実証した。このタンパク質は、ＣｏｒｉｘａのＴｍｐｒｅｄタンパク質推定アルゴリズムによって決定したところ、推定膜タンパク質である。
【０３１２】
（実施例６：卵巣配列Ｏ５６８Ｓの発現分析およびさらなる特徴付け）
卵巣配列Ｏ５６８Ｓは、ｃＤＮＡクローン２４７４２（配列番号１１８）として最初に同定された。クローン２４７４２を、公開配列データベースを検索する問合せ配列として使用して、この配列は、ＫＩＡＡ０７６２（配列番号１７７）およびＶＳＧＦと高度の相同性を有することが見出された。ＶＳＧＦについてのＤＮＡ配列を配列番号１８４に提供し、そしてＶＳＧＦタンパク質配列を配列番号１８６に提供する。
【０３１３】
リアルタイムＰＣＲ（Ｇｉｂｓｏｎら，Ｇｅｎｏｍｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ６：９９５−１００１，１９９６；Ｈｅｉｄら，Ｇｅｎｏｍｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ
６：９８６−９９４，１９９６を参照のこと）は、増幅の間のＰＣＲ産物の蓄積レベルを評価する技術である。この技術は、複数のサンプルにおけるｍＲＮＡレベルの定量的評価を可能にする。手短に述べると、ｍＲＮＡを、腫瘍組織および正常組織から抽出し、そして標準的技術を用いてｃＤＮＡを調製する。リアルタイムＰＣＲを、例えば、Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ／Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ（Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ，ＣＡ）７７００  Ｐｒｉｓｍ機器を用いて実施する。一致するプライマーおよび蛍光プローブを、例えば、プライマー発現プログラム（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ／Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ（Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ，ＣＡ）によって提供される）を用いて、目的の遺伝子について設計する。プライマーおよびプローブの最適濃度は、当業者によって最初に決定され、そしてコントロール（例えば、β−アクチン）プライマーおよびプローブは、例えば、Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ／Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ（Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ，ＣＡ）から市販される。サンプル中の特異的ＲＮＡの量を定量するために、目的の遺伝子を含むプラスミドを用いて標準曲線を作成する。標準曲線を、リアルタイムＰＣＲにおいて決定したＣｔ値を用いて作成する。Ｃｔ値は、このアッセイにおいて用いた最初のｃＤＮＡ濃度に関連する。１０コピー〜１０６コピーの範囲にわたる目的の遺伝子の標準希釈物は、一般的に充分である。さらに、標準曲線をコントロール配列について作成する。このことは、比較目的のために、コントロールの量に対する、組織サンプルの最初のＲＮＡ含量の標準化を可能にする。
【０３１４】
リアルタイムＰＣＲ分析によって、Ｏ５６８は、正常な卵巣組織と比較しておよび多数の正常組織パネルと比較して試験された卵巣腫瘍および卵巣腫瘍転移物の大多数において高度に過剰発現された。発現は、正常な食道、脊髄、膀胱、結腸、肝臓、ＰＢＭＣ（活性化または休止）、肺、皮膚、小腸、胃、骨格筋、膵臓、樹状細胞、心臓、脾臓、骨髄、甲状腺、気管、胸腺、気管支、小脳、尿管、子宮および腹膜上皮においてはほとんどまたはまったく観察されなかった。いくらかの低レベルの発現は、正常な乳房、脳、骨、腎臓、副腎および唾液腺において観察されたが、これらの正常組織における発現レベルは一般に、Ｏ５６８Ｓを過剰発現する卵巣腫瘍において観察されたレベルよりも少なくとも数倍低かった。
【０３１５】
さらに、一連のノーザンブロットを行い、これはまた、Ｏ５６８ＳのＯＲＦ領域が卵巣腫瘍において特異的に過剰発現されることを実証した。最初のブロットは、一連の正常な組織由来のＲＮＡならびに卵巣腫瘍由来のＲＮＡを含んでいた。このブロットを、配列番号１８４に開示されるＶＳＧＦ配列の３’ＵＴＲに対応するＯ５６８Ｓ由来のＤＮＡを標識プローブとして用いてプローブした。このブロットによって、卵巣腫瘍特異的な５．０Ｋｂのメッセージならびに潜在的な３．５Ｋｂの脳特異的メッセージおよび遍在して発現される１．３５Ｋｂのメッセージが明らかになった。
【０３１６】
別のノーザンブロットを、多数の異なる脳組織由来のＲＮＡを用いて行い、そして上記の３’ＵＴＲ領域を用いてプローブした。１１のうちの５つの脳サンプルは、３．５Ｋｂのメッセージの過剰発現を示した。Ｏ５６８ＳのＯＲＦ領域が卵巣腫瘍において特異的に過剰発現されるか否かを決定するために、一連の３つのブロットを、Ｏ５６８ＳのＶＳＧＦ  ＯＲＦ内から設計した３つの別個のプローブを用いて行った。これらの実験からの結果は、５．０Ｋｂのメッセージのみが卵巣腫瘍において発現されることを明らかに示した。
【０３１７】
（実施例７：ポリペプチドの合成）
ポリペプチドを、ＨＰＴＵ（Ｏ−ベンゾトリアゾール−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート）活性化を用いるＦＭＯＣ化学を用いて、Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ／Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ  Ｄｉｖｉｓｉｏｎ  ４３０Ａペプチド合成機で合成する。Ｇｌｙ−Ｃｙｓ−Ｇｌｙ配列をペプチドのアミノ末端に結合して、結合体化方法、固定化表面へのペプチドの結合方法またはペプチドの標識方法を提供する。固体支持体からのペプチドの切断は、以下の切断混合物を用いて実施される：トリフルオロ酢酸：エタンジチオール：チオアニソール：水：フェノール（４０：１：２：２：３）。２時間にわたる切断の後、ペプチドを冷メチル−ｔ−ブチル−エーテル中で沈澱させる。次いで、ペプチドペレットを、０．１％トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）を含有する水中に溶解し、そして凍結乾燥させてからＣ１８逆相ＨＰＬＣによって精製する。水（０．１％  ＴＦＡを含有する）中の０％〜６０％のアセトニトリル（０．１％  ＴＦＡを含有する）の勾配を用いて、ペプチドを溶出する。純粋な画分の凍結乾燥後、ペプチドを、エレクトロスプレー型または他の型の質量分析を用いて、およびアミノ酸分析によって特徴付ける。
【０３１８】
（実施例８：Ｏ５６８Ｓのノーザンブロット分析）
実施例６に記載するように、ノーザンブロット分析によって、Ｏ５６８ＳのＯＲＦ領域が卵巣腫瘍において特異的に過剰発現されることが実証された。用いた元々のプローブは、配列番号１８４に開示されるＶＳＧＦ配列の３’ＵＴＲに対応した。これらのノーザンブロットからの結果は、卵巣腫瘍特異的な５．０Ｋｂのメッセージならびに潜在的な３．５Ｋｂの脳特異的メッセージを明らかにした。ＯＲＦによってカバーされる領域全体が単一の５．０Ｋｂの卵巣腫瘍特異的メッセージを生じることを確認するために、２つのさらなるプローブを設計した。これらのプローブは、このＯＲＦの５’領域および３’領域に位置した。これらの２つのプローブを用いたノーザンブロット分析によって、両方のプローブが、卵巣腫瘍サンプルにのみ存在する５．０Ｋｂの産物にハイブリダイズすることが実証された。両方のプローブは、複数の脳サンプルから誘導されたＲＮＡにハイブリダイズしなかった。
【０３１９】
（実施例９：Ｏ５９０ＳのリアルタイムＰＣＲおよびノーザンブロット分析）
卵巣腫瘍抗原Ｏ５９０ＳのリアルタイムＰＣＲ分析を、本質的に実施例６に記載されるとおりに行った。Ｏ５９０Ｓ特異的プライマーおよびプローブを設計し、そして定量的リアルタイムＰＣＲを、卵巣腫瘍サンプルを含む種々の組織から調製されたｃＤＮＡのパネルおよび正常組織のパネルについて行った。この分析によって、Ｏ５９０Ｓ特異的ｍＲＮＡが、正常な卵巣組織と比較した場合、試験した卵巣腫瘍サンプルのほぼ６５％、ＳＣＩＤマウスから誘導された腫瘍サンプルの１００％の、および試験した卵巣腫瘍細胞株の１００％において過剰発現されることが明らかにされた。検出可能な発現は、正常組織において観察されなかった。
【０３２０】
リアルタイムＰＣＲに加えて、ノーザンブロット分析を行って、Ｏ５９０Ｓの転写物のサイズを決定した。ノーザンブロットを、Ｏ５９０Ｓに特異的な５３７ｂｐのＰＣＲ産物を用いてプローブした。このＰＣＲ産物は、反復配列の領域を回避するように設計された。このプローブによって、サイズが約９．０Ｋｂの不鮮明なバンドが明らかにされた。このバンドは、試験した卵巣腫瘍サンプルの大多数に存在した。
【０３２１】
本発明の特定の実施形態が、例示の目的のために本明細書中に記載されてきたが、本発明の趣旨および範囲から逸脱することなく、種々の改変が行われ得ることが上記から認識される。従って、本発明は、特許請求の範囲によって以外は限定されない。
【０３２２】
【配列表】
SEQUENCE LISTING
<110> Corixa Corporation
<120> COMPOSITIONS AND METHODS FOR THE THERAPY
AND DIAGNOSIS OF OVARIAN CANCER
<130> F1-03G47A64
<140> JP 2004-542263
<141> 2001-11-13
<150> US 09/713,550
<151> 2000-11-14
<150> US 09/825,294
<151> 2001-04-03
<150> US 09/970,966
<151> 2001-10-02
<160> 215
<170> FastSEQ for Windows Version 4.0
<210> 1
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 303, 370, 377, 382
<223> n = A,T,C or G
<400> 1
caacctcact agtaaatgaa agaaatattg taatttgtat ttgatctgct gggtctttgg 60
agtcagaact ggttttatca gcagtttgat cttctgaggt ctggtatgta gtttgctggc 120
ccacagaacc ttcacgtgta ttcacagcct caatgccata aggaaactct tttagaagtt 180
ctgacagctg gtcatgtagg tataagacag gtgccttatc actgtggatt tcatttcttg 240
caggatcttg gggagtatag ttgctggatg catctatttc ctgagggtaa atatcctcct 300
ggncgacgcg gccgctcgag tctagagggc ccgtttaaac ccgctgatca gcctcgactg 360
tgccttctan ttgccancca tntgttgttt gcccct                           396
<210> 2
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 2
cgaccaaaaa gtaaactcca agtgaacatc aaatcaaatc taatcctttt ggccacatga 60
ctggttgttc tttatctcat agttacaatg aatcatataa actgtagact gccactacca 120
cgatacttct gtgacacaga aggaatgtcc tatttgccta tctatctgag gaatgttaaa 180
tagagaaaaa tagattataa aacaacctgg aggtcacagg attctgagat aatccctctg 240
ttaaaaaaca tctgaacagc aaatgtccaa tctgtaataa aatagttaaa ggtccaagtc 300
aagtccactt ctacttggct ggcccagcac aagaaatcta acagcacttt gtaatcattt 360
tgcttttcta attttcccgg aggacatggg ccattg                           396
<210> 3
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 22, 28, 29, 30, 33, 36, 41, 43, 45, 46, 53, 56, 58, 61, 64,
69, 70, 74, 75, 78, 83, 84, 85, 102, 143, 335
<223> n = A,T,C or G
<400> 3
cgcccttttt tttttttttt tnattggnnn aantcncttt nantnnaaaa acntgnangg 60
naancccann cccnnggnac cannnccagg agttgggtgg anactgagtg gggtttgtgt 120
gggtgagggg gcatctactc ctnttgcaac aagccaaaag tagaacagcc taaggaaaag 180
tgacctgcct tggagcctta gtccctccct tagggccccc tcagcctacc ctatccaagt 240
ctgaggctat ggaagtctcc ctcctagttc actagcaggt tccccatctt ttccaggctg 300
cccctagcac tccacgtttt tctgaaaaaa tctanacagg ccctttttgg gtacctaaaa 360
cccagctgag gttgtgagct tgtaaggtaa agcaag                           396
<210> 4
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 13, 15, 21, 27, 34, 37, 41, 57, 58, 59, 63, 64, 71, 72, 77,
78, 83, 87, 93, 170, 207, 210, 308, 379, 382, 389, 391,
392, 393, 395
<223> n = A,T,C or G
<400> 4
gaccaatcct tgncncacta ncaaaangac cccnctnacc nccaggaact gaacctnnnt 60
gtnnacctcc nnctgcnnag ccntatntcc aanatcaccc accgtatcca ctgggaatct 120
gccagcctcc tgcgatcaga agagaccaat cgaaaatgag ggtttcacan tcacagctga 180
aggaaaaggc caaggcacct tgtcggnggn gacaatgtac catgctaagg ccaaagatca 240
actcacctgt aataaattcg acctcaaggt caccataaaa ccagcaccgg aacagaaaaa 300
gaggcctnag gatgcccaag aaacactttt gatcctttga aaactgtacc aaggtaccgg 360
ggggagaccc aggaaaggnc cnttatgtnt nnntnt                           396
<210> 5
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 135, 172, 343, 348, 354, 395
<223> n = A,T,C or G
<400> 5
gacgccggag ctgccgcgcc agtcgcctag caggtcctct accggcttat tcctgtgccg 60
gatcttcatc ggcacagggg ccactgagac gtttctgcct ccctctttct tcctccgctc 120
tttctcttcc ctctngttta gtttgcctgg gagcttgaaa ggagaaagca cnggggtcgc 180
cccaaaccct ttctgcttct gcccatcaca agtgccacta ccgccatggg cctcactatc 240
tcctccctct tctcccgact atttggcaag aagcagatgc gcattttgat ggttggattg 300
gatgctgctg gcaagacaac cattcttgat aaactgaaag tanggganat aagnaccacc 360
atttctacca ttgggtttaa tgggggaaac agtana                           396
<210> 6
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 212
<223> n = A,T,C or G
<400> 6
acgggaggcg ccgggaagtc gacggcgccg gcggctcctg caggaggcca ctgtctgcag 60
ctcccgtgaa gatgtccact ccagacccac ccctgggcgg aactcctcgg ccaggtcctt 120
ccccgggccc tgcccttccc ctggagccat gctgggccct agcccgggtc cctcgccggg 180
ctccgcccac agcatgatgg ggcccagccc angggccgcc ctcagcagga caccccatcc 240
ccacccaggg gcctggaggg taccctcagg acaacatgca ccagatgcac aagcccatgg 300
agtccatgca tgagaagggc atgtcggacg acccgcgcta caaccagatg aaaggaatgg 360
ggatgcggtc agggggccat gctgggatgg ggcccc                           396
<210> 7
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 7
acccgagagt cgtcggggtt tcctgcttca acagtgcttg gacggaaccc ggcgctcgtt 60
ccccaccccg gccggccgcc catagccagc cctccgtcac ctcttcaccg caccctcgga 120
ctgccccaag gcccccgccg ccgctccagc gccgcgcagc caccgccgcc gccgccgcct 180
ctccttagtc gccgccatga cgaccgcgtc cacctcgcag gtgcgccaga actaccacca 240
ggactcagag gccgccatca accgccagat caacctggag ctctacgcct cctacgttta 300
cctgtccatg tcttactact ttgaccgcga tgatgtggct ttgaagaact ttgccaaata 360
ctttcttcac caatctcatg aggagaggga acatgc                           396
<210> 8
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 8
cgacaacaag gttaatacct tagttcttaa catttttttt ctttatgtgt agtgttttca 60
tgctaccttg gtaggaaact tatttacaaa ccatattaaa aggctaattt aaatataaat 120
aatataaagt gctctgaata aagcagaaat atattacagt tcattccaca gaaagcatcc 180
aaaccaccca aatgaccaag gcatatatag tatttggagg aatcaggggt ttggaaggag 240
tagggaggag aatgaaggaa aatgcaacca gcatgattat agtgtgttca tttagataaa 300
agtagaaggc acaggagagg tagcaaaggc caggcttttc tttggttttc ttcaaacata 360
ggtgaaaaaa acactgccat tcacaagtca aggaac                           396
<210> 9
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 321, 344
<223> n = A,T,C or G
<400> 9
tcgacatcgc ggcaactttt tgcggattgt tcttgcttcc aggctttgcg ctgcaaatcc 60
agtgctacca gtgtgaagaa ttccagctga acaacgactg ctcctccccc gagttcattg 120
tgaattgcac ggtgaacgtt caagacatgt gtcagaaaga agtgatggag caaagtgccg 180
ggatcatgta ccgcaagtcc tgtgcatcat cagcggcctg tctcatcgcc tctgccgggt 240
accagtcctt ctgctcccca gggaaactga actcagtttg catcagctgc tgcaacaccc 300
ctctttgtaa cgggccaagg nccaaaaaaa ggggaaagtt ctgncctcgg ccctcaggcc 360
agggctccgc accaccatcc tgttcctcaa attagc                           396
<210> 10
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 115, 116, 117, 130, 138, 142, 143, 144, 145, 146, 153, 157,
158, 159, 160, 164, 175, 176, 177, 178, 179, 183, 187, 197,
198, 202, 203, 204, 205, 206, 211, 212, 213, 215, 216, 217,
220, 221, 222, 226, 231, 234, 236, 237, 245, 246, 247
<223> n = A,T,C or G
<221> misc_feature
<222> 250, 255, 264, 266, 267, 268, 269, 270, 271, 272, 279, 284,
297, 303, 304, 305, 308, 315, 317, 318, 319, 320, 321, 322,
323, 333, 334, 337, 338, 342, 343, 368, 372, 374, 380, 381,
391, 395
<223> n = A,T,C or G
<400> 10
cctttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt 60
tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt ttttaaaaaa aaaannnttt 120
tttttttttn aaaaaaangg gnnnnntttt ttncccnnnn gggngggggg ggggnnnnnt 180
ttnaaanaaa aaaaccnnaa annnnngggg nnnannnaan nncccncccc naancnntaa 240
aaaannnggn aaaanagggg gggnannnnn nnggggggna aaantttttt ttttttnaag 300
ggnnnggnaa aaaantnnnn nnnttttttt ttnnaanngg gnnaaaaaaa aaaaaaaaaa 360
attttttngg gntnaggggn ngggggaaaa ncccna                           396
<210> 11
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 11
agaacacagg tgtcgtgaaa actaccccta aaagccaaaa tgggaaagga aaagactcat 60
atcaacattg tcgtcattgg acacgtagat tcgggcaagt ccaccactac tggccatctg 120
atctataaat gcggtggcat cgacaaaaga accattgaaa aatttgagaa ggaggctgct 180
gagatgggaa agggctcctt caagtatgcc tgggtcttgg ataaactgaa agctgagcgt 240
gaacgtggta tcaccattga tatctccttg tggaaatttg agaccagcaa gtactatgtg 300
actatcattg atgccccagg acacagagac tttatcaaaa acatgattac agggacatct 360
caggctgact gtgctgtcct gattgttgct gctggt                           396
<210> 12
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 12
cgaaaacctt taaaccccgg tcatccggac atcccaacgc atgctcctgg agctcacagc 60
cttctgtggt gtcatttctg aaacaagggc gtggatccct caaccaagaa gaatgtttat 120
gtcttcaagt gacctgtact gcttggggac tattggagaa aataaggtgg agtcctactt 180
gtttaaaaaa tatgtatcta agaatgttct agggcactct gggaacctat aaaggcaggt 240
atttcgggcc ctcctcttca ggaatcttcc tgaagacatg gcccagtcga aggcccagga 300
tggcttttgc tgcggccccg tggggtagga gggacagaga gacagggaga gtcagcctcc 360
acattcagag gcatcacaag taatggcaca attctt                           396
<210> 13
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 13
accacaggct ggccacaaga agcgctggag tgtgctggcg gctgcaggcc tacggggcct 60
ggtccggctg ctgcacgtgc gtgccggctt ctgctgcggg gtcatccgag cccacaagaa 120
ggccatcgcc accctgtgct tcagccccgc ccacgagacc catctcttca cggcctccta 180
tgacaagcgg atcatcctct gggacatcgg ggtgcccaac caggactacg aattccaggc 240
cagccagctg ctcacactgg acaccacctc tatccccctg cgcctctgcc ctgtcgcctc 300
ctgcccggac gcccgcctgc tggccggctg cgagggcggc tgctgctgct gggacgtgcg 360
gctggaccag ccccaaaaga ggagggtgtg tgaagt                           396
<210> 14
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 14
acggcgtcct cgtggaagtg acatcgtctt taaaccctgc gtggcaatcc ctgacgcacc 60
gccgtgatgc ccagggaaga cagggcgacc tggaagtcca actacttcct taagatcatc 120
caactattgg atgattatcc gaaatgtttc attgtgggag cagacaatgt gggctccaag 180
cagatgcagc agatccgcat gtcccttcgc gggaaggctg tggtgctgat gggcaagaac 240
accatgatgc gcaaggccat ccgagggcac ctggaaaaca acccagctct ggagaaactg 300
ctgcctcata tccgggggaa tgtgggcttt gtgttcacca aggaggacct cactgagatc 360
agggacatgt tgctggccaa taaggtgcca gctgct                           396
<210> 15
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 333
<223> n = A,T,C or G
<400> 15
accgcgcggg cacagggtgc cgctgaccga ggcgtgcaaa gactccagaa ttggaggcat 60
gatgaagact ctgctgctgt ttgtggggct gctgctgacc tgggagagtg ggcaggtcct 120
gggggaccag acggtctcag acaatgagct ccaggaaatg tccaatcagg gaagtaagta 180
cgtcaataag gaaattcaaa atgcttgtca acggggtgaa acagataaag actctcatag 240
aaaaaacaaa cgaagagcgc aagacactgc tcagcaacct agaagaagcc aagaagaaga 300
aagaggatgc cctaaatgag accagggaat canagacaaa gctgaaggag ctcccaggag 360
tgtgcaatga gaccatgatg gccctctggg aagagt                           396
<210> 16
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 114, 121, 122, 123, 127, 134, 136, 138, 140, 141, 142, 143,
144, 148, 163, 166, 172, 173, 174, 176, 177, 183, 184, 185,
187, 195, 196, 198, 199, 202, 203, 206, 213, 214, 215, 216,
217, 218, 219, 223, 225, 226, 227, 229, 230, 236, 238
<223> n = A,T,C or G
<221> misc_feature
<222> 239, 252, 256, 257, 261, 262, 268, 269, 273, 278, 280, 288,
289, 290, 292, 293, 303, 312, 325, 327, 333, 335, 336, 341,
342, 347, 354, 359, 365, 371, 383, 384, 386, 388, 391
<223> n = A,T,C or G
<400> 16
tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt 60
tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttngggggg 120
nnnaaanttt tttntnanan nnnngggnaa aaaaaaaaaa aanaangggg gnnntnnggc 180
ccnnnanaaa aaaanngnna annaancccc ccnnnnnnnc ccncnnntnn ggaaananna 240
aaaccccccc cngggnnggg nnaaaaannc ccnggggnan tttttatnnn annccccccc 300
ccnggggggg gnggaaaaaa aaaantnccc ccnannaaaa nnggggnccc cccnttttnc 360
aaaanggggg nccgggcccc ccnnantntt nggggg                           396
<210> 17
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 17
accacactaa ccatatacca atgatggcgc gatgtaacac gagaaagcac ataccaaggc 60
caccacacac cacctgtcca aaaaggcctt cgatacggga taatcctatt tattacctca 120
gaagtttttt tcttcgcagg atttttctga gccttttacc actccagcct agcccctacc 180
ccccaactag gagggcactg gcccccaaca ggcatcaccc cgctaaatcc cctagaagtc 240
ccactcctaa acacatccgt attactcgca tcaggagtat caatcacctg agctcaccat 300
agtctaatag aaaacaaccg aaaccaaata attcaagcac tgcttattac aattttactg 360
ggtctctatt ttaccctcct acaagcctca gagtac                           396
<210> 18
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 51, 54, 66, 81, 86, 98, 106, 111, 117, 124, 129, 133, 135,
150, 151, 154, 159, 161, 172, 179, 181, 183, 185, 220, 223,
229, 238, 258, 259, 264, 282, 289, 292, 294, 299, 303, 311,
315, 329, 343, 349, 351, 353, 361, 369, 370, 389, 392
<223> n = A,T,C or G
<221> misc_feature
<222> 396
<223> n = A,T,C or G
<400> 18
tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt ttttttttta ntcnaaaggg 60
gaaggnccct ttttattaaa nttggncatt ttactttnct tttttnaaaa ngctaanaaa 120
aaanttttnt ttntncttaa aaaaaccctn natntcacna ncaaaaaaaa cnattcccnc 180
ntncnttttg tgataaaaaa aaaggcaatg gaattcaacn tancctaana aaactttncc 240
tgggaggaaa aaaaattnnt ccgngggaaa cacttggggc tntccaaant gnanccatnc 300
tangaggacc ntctntaaga tttccaaang aaaccccttc ctnccaaang nantaccccg 360
ntgcctacnn cccataaaaa aaacctcanc cntaan                           396
<210> 19
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 47, 69, 75, 80, 83, 87, 88, 90, 92, 102, 104, 108, 116, 121,
130, 138, 139, 142, 153, 156, 158, 162, 165, 166, 180, 192,
193, 195, 201, 224, 226, 232, 235, 237, 241, 248, 251, 253,
256, 269, 272, 274, 277, 284, 287, 290, 292, 297
<223> n = A,T,C or G
<221> misc_feature
<222> 299, 305, 306, 315, 323, 324, 326, 332, 351, 368, 377, 380,
383, 387, 392
<223> n = A,T,C or G
<400> 19
tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt ttttttntgg tctgggcttt 60
tattttacna aaaanctaan ggnaaanntn cnttaaacta antngaanac aaagtnttaa 120
ngaaaaaggn ctgggggnnt cntttacaaa aanggncngg gncanntttg ggcttaaaan 180
ttcaaaaagg gnncntcaaa ngggtttgca tttgcatgtt tcancnctaa ancgnangaa 240
naaacccngg ngnccnctgg gaaaagttnt tnanctncca aaanatnaan tntttgnanc 300
agggnntttt tgggnaaaaa aannanttcc anaaactttc catcccctgg ntttgggttc 360
ggccttgngt tttcggnatn atntccntta angggg                           396
<210> 20
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 29, 43, 49, 53, 55, 75, 81, 100, 110, 111, 125, 129, 160,
162, 168, 246, 277
<223> n = A,T,C or G
<400> 20
tttttttttt tttttttttt ttttttctna acaaaccctg ttnttgggng ggngngggta 60
taatactaag ttganatgat ntcatttacg ggggaaggcn ctttgtgaan naggccttat 120
ttctnttgnc ctttcgtaca gggaggaatt tgaagtaaan anaaaccnac ctggattact 180
ccggtctgaa ctcaaatcac gtaggacttt aatcgttgaa caaacaaacc tttaatagcg 240
gctgcnccat tgggatgtcc tgatccaaca tcgaggncgt aaaccctatt gttgatatgg 300
actctaaaaa taggattgcg ctgttatccc tagggtaact tgttcccgtg gtcaaagtta 360
ttggatcaat tgagtataag tagttcgctt tgactg                           396
<210> 21
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 6, 9, 18, 23, 37, 43, 48, 55, 65, 73, 75, 103, 110, 117,
123, 125, 134, 153, 182, 195, 202, 205, 213, 216, 223, 239,
249, 276, 293, 294, 302, 307, 344, 356, 359, 369, 374, 381,
392
<223> n = A,T,C or G
<400> 21
acatanatnt tatactanca ttnaccatct cacttgnagg aanactanta tatcnctcac 60
acctnatatc ctncntacta tgcctagaag gaataatact atngctgttn attatancta 120
ctntnataac cctnaacacc cactccctct tanccaatat tgtgcctatt gccatactag 180
tntttgccgc ctgcnaagca gnggngggcc tanccntact agnctcaatc tccaacacnt 240
atggcctana ctacgtacat aacctaaacc tactcnaatg ctaaaactaa tcnncccaac 300
anttatntta ctaccactga catgactttc caaaaaacac atantttgaa tcaacncanc 360
cacccacanc ctanttatta ncatcatccc cntact                           396
<210> 22
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 17, 244
<223> n = A,T,C or G
<400> 22
tttttttttt ttttganaaa agccggcata aagcactttt attgcaataa taaaacttga 60
gactcataaa tggtgctggg ggaagggtgc agcaacgatt tctcaccaaa tcactacaca 120
ggacagcaaa ggggtgagaa ggggctgagg gaggaaaagc caggaaactg agatcagcag 180
agggagccaa gcatcaaaaa acaggagatg ctgaagctgc gatgaccagc atcattttct 240
taanagaaca ttcaaggatt tgtcatgatg gctgggcttt cactgggtgt taagtctaca 300
aacagcacct tcaattgaaa ctgtcaatta aagttcttaa gatttaggaa gtggtggagc 360
ttggaaagtt atgagattac aaaattcctg aaagtc                           396
<210> 23
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 23
acaaaggcgg ttccaagcta aggaattcca tcagtgcttt tttcgcagcc accaaattta 60
gcaggcctgt gaggttttca tatcctgaag agatgtattt taaagctttt tttttttaat 120
gaaaaaatgt cagacacaca caaaagtaga atagtaccat ggagtcccca cgtacccagc 180
ctgcagcttc aacagttacc acatttgcca accggagaga ctgccaaggc aggaaaaagc 240
cctggaaagc ccacggcccc tttttccctt gggtcagagg ccttagagct ggctgccaaa 300
gcagccaacc aaaggggcag ctcagctcct tcgtggcacc agcagtgttc ctgatgcagt 360
tgaagagttg atgtctttga caacatacgg acactg                           396
<210> 24
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 313, 337, 340, 350, 351, 352, 353, 354, 355, 356, 366, 376,
377, 378, 382, 384, 385, 387, 389, 390, 392, 393, 396
<223> n = A,T,C or G
<400> 24
cgactatcct ctcagattct tatctggcac taatttataa ctattatatt atcagagact 60
atgtagcaat atatcagtgc acaggcgcat cccaggcctg tacagatgta tgtctacacg 120
taagtataaa tgaatttgca taccaggttt tacacttgca tctctaatag agattaaaaa 180
caacaaattg gcctcttcct aagtatatta atatcattta tccttacatt ttatgcctcc 240
ccctaaatta atgactgagt tggtggaaag cggctaggtt ttattcatac tgttttttgt 300
tctcaacttc aanagtaatc tacctctgaa aaatttntan tttaatattn nnnnnnagga 360
atttgngcca ctttannnct tncnntntnn tnnccn                           396
<210> 25
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 90, 125, 136, 278, 299, 301, 305, 344, 347, 353, 355, 356,
357, 359, 360, 361, 365, 369, 378, 380, 381, 382, 383, 384,
385, 386, 391, 392, 393, 395, 396
<223> n = A,T,C or G
<400> 25
tttttttttt tttttttttt gtcttttaaa aaatataaaa gtgttattat tttaaaacat 60
caagcattac agactgtaaa atcaattaan aactttctgt atatgaggac aaaaatacat 120
ttaanacata tacaanaaga tgctttttcc tgagtagaat gcaaactttt atattaagct 180
tctttgaatt ttcaaaatgt aaaataccaa ggctttttca catcagacaa aaatcaggaa 240
tgttcacctt cacatccaaa aagaaaaaaa aaaaaaancc aattttcaag ttgaagttna 300
ncaanaatga tgtaaaatct gaaaaaagtg gccaaaattt taanttncaa canannngnn 360
ncagntttna tggatctntn nnnnnncttc nnntnn                           396
<210> 26
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 313, 314, 316, 318, 321, 343, 344, 352, 353, 356, 363, 366,
370, 372, 373, 374, 375, 377, 378, 379, 383, 384, 385, 386,
387, 391, 393, 394, 395, 396
<223> n = A,T,C or G
<400> 26
gacgctcccc cctccccccg agcgccgctc cggctgcacc gcgctcgctc cgagtttcag 60
gctcgtgcta agctagcgcc gtcgtcgtct cccttcagtc gccatcatga ttatctaccg 120
ggacctcatc agccacgatg agatgttctc cgacatctac aagatccggg agatcgcgga 180
cgggttgtgc ctggaggtgg aggggaagat ggtcagtagg acagaaggta acattgatga 240
ctcgctcatt ggtggaaatg cctccgctga aggccccgag ggcgaaggta cccgaaagca 300
cagtaatcac tgnngncnat nttgtcatga accatcacct gcnngaaaca annttnacaa 360
aanaancctn cnnnnannnc ctnnnnnatt ncnnnn                           396
<210> 27
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 49, 61, 66, 73, 75, 99, 102, 103, 105, 107, 120, 124, 126,
129, 138, 139, 141, 147, 155, 157, 162, 165, 175, 187, 191,
193, 198, 207, 217, 218, 220, 221, 223, 226, 231, 232, 245,
257, 259, 260, 263, 266, 271, 287, 305, 306, 307, 308
<223> n = A,T,C or G
<221> misc_feature
<222> 321, 330, 332, 335, 342, 343, 344, 345, 349, 350, 351, 352,
354, 355, 356, 357, 365, 366, 367, 370, 371, 372, 373, 374,
375, 376, 377, 378, 379, 380, 381, 382, 383, 386, 387, 388,
389, 391, 392, 393, 394, 395, 396
<223> n = A,T,C or G
<400> 27
tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tggctaaant ttatgtatac 60
nggttnttca aangnggggg aggggggggg gcatccatnt anncncncca ggtttatggn 120
gggntnttnt actattanna nttttcnctt caaancnaag gnttntcaaa tcatnaaaat 180
tattaanatt ncngctgnta aaaaaangaa tgaaccnncn nanganagga nntttcatgg 240
ggggnatgca tcggggnann ccnaanaacc ncggggccat tcccganagg cccaaaaaat 300
gtttnnnnaa aaagggtaaa nttacccccn tnaantttat annnnaaann nnannnnagc 360
ccaannnttn nnnnnnnnnn nnnccnnnna nnnnnn                           396
<210> 28
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 278, 283, 298, 309, 326, 331, 338, 351, 355, 356, 357, 358,
360, 371, 377, 378, 383, 386, 387, 391, 393, 394, 395
<223> n = A,T,C or G
<400> 28
cgaccttttt tttttttttt atagatgaaa gagggtttat ttattaatat atgatagcct 60
tggctcaaaa aagacaaatg agggctcaaa aaggaattac agtaacttta aaaaatatat 120
taaacatatc caagatccta aatatattat tctccccaaa agctagctgc ttccaaactt 180
gatttgatat tttgcatgtt ttccctacgt tgcttggtaa atatatttgc ttctcctttc 240
tgcaatcgac gtctgacagc tgatttttgc tgttttgnca acntgacgtt tcaccttntg 300
tttcaccant tctggaggaa ttgttnaaca ncttacanca ctgccttgaa naaannnnan 360
gcctcaaaag ntcttgnnct atnctnnttc ntnnnt                           396
<210> 29
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 329, 334, 361, 386, 390
<223> n = A,T,C or G
<400> 29
gacttgctca tttagagttt gcaggaggct ccatactagg ttcagtctga aagaaatctc 60
ctaatggtgc tatagagagg gaggtaacag aaagactctt ttagggcatt tttctgactc 120
atgaaaagag cacagaaaag gatgtttggc aatttgtctt ttaagtctta accttgctaa 180
tgtgaatact gggaaagtga tttttttctc actcgttttt gttgctccat tgtaaagggc 240
ggaggtcagt cttagtggcc ttgagagttg cttttggcat ttaaatattc taagagaatt 300
aactgtattt cctgtcacct attcactant gcangaaata tacttgctcc aaataagtca 360
ntatgagaag tcactgtcaa tgaaanttgn tttgtt                           396
<210> 30
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 28, 83, 126, 138, 254, 275, 298, 310, 311, 353, 363, 374,
379, 393
<223> n = A,T,C or G
<400> 30
tttttttttt tttttttttg aaatttanaa acaaatttta tttaagatct gaaatacaat 60
tcctaaaata tcaacttttc canaaaaccg tggctacaca ataatgcatt gcctctatca 120
tgttanaacg tgcattanac tcaaatacaa aaaccatgaa acaaatcacc atccttcaac 180
aatttgagca aagatagaat gcctaagaac aacatagatg gacttgcaga ggatgggctg 240
ttttacttca agcnccataa aaaaaaaaaa gagcncaaat gcattgggtt ttcaggtnta 300
tacattaagn ngaacctttg gcactaggaa tcagggcgtt ttgtcacata gcnttaacac 360
atnttaaaaa attntgtant gtcaaaggga tangaa                           396
<210> 31
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 285, 287, 350, 362, 365, 377, 378, 382, 388, 390, 393
<223> n = A,T,C or G
<400> 31
gacgggccag ggccatctgg aaagggaact cggcttttcc agaacgtggt ggatcatctg 60
tcgggtgtgt ggtgaacacg ttcagttcat cagggcctac gctccgggaa ggggccccca 120
gctgtggctc tgccatgccg ggctgtgttt gcagctgtcc gagtctccat ccgcctttag 180
aaaaccagcc acttcttttc ataagcactg acagggccca gcccacagcc acaggtgcga 240
tcagtgcctc acgcaggcaa atgcactgaa acccaggggc acacncncgc agagtgaaca 300
gtgagttccc ccgacagccc acgacagcca ggactgccct ccccaccccn ccccgacccc 360
angancacgg cacacanntc ancctctnan ctngct                           396
<210> 32
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 341
<223> n = A,T,C or G
<400> 32
cgactggcct cataccttgt ctacacagtc cctgcacagg gttcctaacc tgtggttagt 60
aaagaatgtc actttctaac aggtctggaa gctccgagtt tatcttggga actcaagagg 120
agaggatcac ccagttcaca ggtatttgag gatacaaacc cattgctggg ctcggcttta 180
aaagtcttat ctgaaattcc ttgtgaaaca gagtttcatc aaagccaatc caaaaggcct 240
atgtaaaaat aaccattctt gctgcacttt atgcaaataa tcaggccaaa tataagacta 300
cagtttattt acaatttgtt tttaccaaaa atgaggacta nagagaaaaa tggtgctcca 360
aagcttatca tacatttgtc attaagtcct agtctc                           396
<210> 33
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 121, 122, 124, 125, 126, 128, 130, 131, 132, 133, 134, 136,
137, 153, 154, 155, 156, 157, 158, 159, 168, 169, 170, 171,
172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 184, 185, 192, 197,
199, 200, 202, 204, 205, 208, 209, 210, 211, 214, 215
<223> n = A,T,C or G
<221> misc_feature
<222> 216, 217, 218, 222, 227, 228, 229, 233, 234, 241, 242, 244,
245, 246, 247, 248, 249, 252, 260, 261, 262, 263, 264, 265,
270, 272, 273, 274, 275, 279, 282, 284, 288, 290, 291, 292,
293, 294, 299, 300, 301, 302, 303, 306, 313, 314, 319
<223> n = A,T,C or G
<221> misc_feature
<222> 327, 328, 330, 331, 332, 333, 334, 335, 343, 349, 350, 351,
352, 355, 360, 369, 370, 371, 375, 379, 387, 388, 390, 391,
392, 393, 394, 395, 396
<223> n = A,T,C or G
<400> 33
cctttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt 60
tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt 120
nngnnntntn nnnnannaaa aaaaaaaaaa aannnnnnna aaaaaaannn nnnnnnnnnt 180
tttnnggggg gnttttnann gnannttnnn nttnnnnnaa anccccnnng ggnngggggg 240
nntnnnnnng gnaaaaaaan nnnnnggggn cnnnngggnc cncncccnan nnnnaaaann 300
nnnggntttt ttnnttttna aaaaaanngn nnnnnaacaa aantttttnn nnaanttttn 360
gggggaaann ncccntttnt ttttttnnan nnnnnn                           396
<210> 34
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 8, 60, 72, 123, 128, 155, 172, 198, 207, 246, 305, 325, 348,
349, 369, 371, 380, 393, 394
<223> n = A,T,C or G
<400> 34
acggaccnag ctggaggagc tgggtgtggg gtgcgttggg ctggtgggga ggcctagttn 60
gggtgcaagt angtctgatt gagcttgtgt tgtgctgaag ggacagccct gggtctaggg 120
ganagagncc ctgagtgtga gacccacctt ccccngtccc agcccctccc anttccccca 180
gggacggcca cttcctgntc cccgacncaa ccatggctga agaacaaccg caggtcgaat 240
tgttcntgaa ggctggcagt gatggggcca agattgggaa ctgcccattc tcccacagac 300
tgttnatggt actgtggctc aaggnagtca ccttcaatgt taccaccnnt gacaccaaaa 360
ggcggaccna nacagtgcan aagctgtgcc canngg                           396
<210> 35
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 35
tcgaccaaaa tcaaatctgg cactcacaag ccctggccga cccccaatgg gttttaccac 60
tccccctcta gaccctgtct tgcaaaatcc tctccctagc cagctagtat tttctgggct 120
aaagactgta caaccagttc ctccatttta tagaagttta ctcactccag gggaaatggt 180
gagtcctcca acctcccttt caaccagtcc catcattcca accagtggta ccatagagca 240
gcaccccccg ccaccctctg agccagtagt gccagcagtg atgatggcca cccatgagcc 300
cagtgctgac ctggcaccca agaaaaagcc caggaagtca agcatgcctg tgaagattga 360
gaaggaaatt attgataccg ccgatgagtt tgatga                           396
<210> 36
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 36
tcgacgggaa gagcctgcta cggtggactg tgagactcag tgcactgtcc tcctcccagc 60
gaccccacgc tggaccccct gccggaccct ccacccttcg gcccccaagc ttcccagggg 120
cttcctttgg actggactgt ccctgctcat ccattctcct gccaccccca gacctcctca 180
gctccaggtt gccacctcct ctcgccagag tgatgaggtc ccggcttctg ctctccgtgg 240
cccatctgcc cacaattcgg gagaccacgg aggagatgct gcttgggggt cctggacagg 300
agcccccacc ctctcctagc ctggatgact acgtgaggtc tatatctcga ctggcacagc 360
ccacctctgt gctggacaag gccacggccc agggcc                           396
<210> 37
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 376
<223> n = A,T,C or G
<400> 37
cgacggtgtc agcaactggc catgccacag cacataaaga ttacagtgac aagaaaaaca 60
ttgtttgagg attcctttca acagataatg agcttcagtc cccaagatct gcgaagacgt 120
ttgtgggtga tttttccagg agaagaaggt ttagattatg gaggtgtagc aagagaatgg 180
ttctttcttt tgtcacatga agtgttgaac ccaatgtatt gcctgtttga atatgcaggg 240
aaggataact actgcttgca gataaacccc gcttcttaca tcaatccaga tcacctgaaa 300
tattttcgtt ttattggcag atttattgcc atggctctgt tccatgggaa aattcataga 360
cacgggtttt tctttnccat tctataagcg tatctt                           396
<210> 38
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 38
cgaccaaaat gataaatagc tttaagaatg tgctaatgat aaatgattac atgtcaattt 60
aatgtactta atgtttaata ccttatttga ataattacct gaagaatata ttttttagta 120
ctgcatttca ttgattctaa gttgcacttt ttacccccat actgttaaca tatctgaaat 180
cagaatgtgt cttacaatca gtgatcgttt aacattgtga caaagtttaa tggacagttt 240
tttcccatat gtatatataa aataatgtgt tttacaatca gtggcttaga ttcagtgaaa 300
tacagtaatt cattcaatta tgatagtatc tttacagaca ttttaaaaat aagttatttt 360
tatatgctaa tattctatgt tcaagtggaa tttgga                           396
<210> 39
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 39
tcgaccaaga atagatgctg actgtactcc tcccaggcgc cccttccccc tccaatccca 60
ccaaccctca gagccacccc taaagagata ctttgatatt ttcaacgcag ccctgctttg 120
ggctgccctg gtgctgccac acttcaggct cttctccttt cacaaccttc tgtggctcac 180
agaacccttg gagccaatgg agactgtctc aagagggcac tggtggcccg acagcctggc 240
acagggcaag tgggacaggg catggccagg tggccactcc agacccctgg cttttcactg 300
ctggctgcct tagaaccttt cttacattag cagtttgctt tgtatgcact ttgttttttt 360
ctttgggtct tgtttttttt ttccacttag aaattg                           396
<210> 40
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 200, 375
<223> n = A,T,C or G
<400> 40
tttttttttt ttttgttatt tagtttttat ttcataatca taaacttaac tctgcaatcc 60
agctaggcat gggagggaac aaggaaaaca tggaacccaa agggaactgc agcgagagca 120
caaagattct aggatactgc gagcaaatgg ggtggagggg tgctctcctg agctacagaa 180
ggaatgatct ggtggttaan ataaaacaca agtcaaactt attcgagttg tccacagtca 240
gcaatggtga tcttcttgct ggtcttgcca ttcctggacc caaagcgctc catggcctcc 300
acaatattca tgccttcttt cactttgcca aacaccacat gcttgccatc caaccactca 360
gtcttggcag tgcanatgaa aaactgggaa ccattt                           396
<210> 41
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 288
<223> n = A,T,C or G
<400> 41
tcgacctctt gtgtagtcac ttctgattct gacaatcaat caatcaatgg cctagagcac 60
tgactgttaa cacaaacgtc actagcaaag tagcaacagc tttaagtcta aatacaaagc 120
tgttctgtgt gagaattttt taaaaggcta cttgtataat aacccttgtc atttttaatg 180
tacaaaacgc tattaagtgg cttagaattt gaacatttgt ggtctttatt tactttgctt 240
cgtgtgtggg caaagcaaca tcttccctaa atatatatta cccaaagnaa aagcaagaag 300
ccagattagg tttttgacaa aacaaacagg ccaaaagggg gctgacctgg agcagagcat 360
ggtgagaggc aaggcatgag agggcaagtt tgttgt                           396
<210> 42
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 65, 68, 69, 71, 72, 75, 77, 79, 82, 85, 86, 87, 89, 90, 97,
98, 105, 107, 109, 112, 117, 121, 122, 124, 126, 149, 152,
153, 155, 157, 161, 163, 167, 168, 169, 174, 177, 178, 179,
180, 186, 188, 192, 201, 202, 207, 208, 215, 217, 220
<223> n = A,T,C or G
<221> misc_feature
<222> 225, 230, 242, 243, 247, 250, 259, 263, 271, 272, 279, 284,
295, 298, 299, 308, 309, 312, 323, 342, 348, 351, 363, 366,
370, 386, 390, 392
<223> n = A,T,C or G
<400> 42
cttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt 60
aaaanccnna nnaananang gnaannnann aaaaaannca aaccncntnt anaaaangcc 120
nntntnaggg ggggggttca aaaccaaang gnngntngga ngnaaannna aaanttnnnn 180
gggggnanaa anaaaaaggg nngaaanntg acccnanaan gaccngaaan cccgggaaac 240
cnngggntan aaaaaaagnt ganccctaaa nncccccgna aaanggggga agggnaannc 300
caaatccnnt gngggttggg ggnggggaaa aaaaaaaccc cnaaaaantg naaaaaaccg 360
ggnttnaaan atttgggttc gggggntttn tnttaa                           396
<210> 43
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 108, 195, 213, 279, 287, 349
<223> n = A,T,C or G
<400> 43
tttttttttt ttttgcttca ctgctttatt tttgaaatca caagcaattc aaagtgatca 60
tcattgaggc ttctgttaaa agttcttcca aagttgccca gttttaanat taaacaatat 120
tgcactttaa gatgaactaa cttttgggat tctcttcaaa gaaggaaagt attgctccat 180
ctgtgctttt cttanactaa aagcatactg canaaaactc tattttaaaa atcaacactg 240
cagggtacag taacatagta aagtacctgc ctattttana atcctanaga acatttcatt 300
gtaagaaact agcccattat ttaagtgtcc acagtatttt tcatttcant ggtccaagat 360
gccaaggttt ccaaacacaa tcttgttctc taatac                           396
<210> 44
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 44
gacctagttt tacctcttaa atatctctgt tcccttctaa gttgtttgct gtgttttctt 60
cagagcaaga aggttatatt ttttaaaatt tacttagtaa tgcacattca aaacacacat 120
caagtcttca ggataaagtt caaaaccgct gtcatggccc catgtgatct ctccctcccc 180
tacccctcta tcatttagtt tcttctgcgc aagccactct ggcttccttt cagttttgtg 240
gttcccgttt ttagctagtt cagtggtttt caatgggcat ttcttgcctt tttttttcta 300
aacgacaaat agaaatacat cttctttatt atcctccaaa tccaattcag aggtaatatg 360
ctccacctac acacaatttt agaaataaat taaaaa                           396
<210> 45
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 18, 19, 22, 39, 40, 43, 62, 84, 90, 99, 103, 104, 105, 117,
120, 123, 128, 134, 139, 141, 142, 143, 144, 145, 182, 187,
207, 218, 219, 242, 247, 257, 260, 263, 272, 276, 277, 279,
284, 288, 294, 296, 297, 305, 310, 314, 319, 320, 322
<223> n = A,T,C or G
<221> misc_feature
<222> 364, 366, 376, 378, 381, 387, 388, 396
<223> n = A,T,C or G
<400> 45
tttttttttt ttttaaannt tntaaatttt taatgaaann ganttagaac aatgtattat 60
tnacatgtaa ataaaaaaag agancataan ccccatatnc tcnnnaaagg aaggganacn 120
gcnggccntt tatnagaana nnnnncatat aagaccccat taagaagaat ctggatctaa 180
anacttncaa acaggagttc acagtangtg aacagcannc cctaatccca ctgatgtgat 240
gnttcanata aaatcancan cgntgatcgg gnatcnnanc aatntgancg gaanannact 300
gctcnatatn tttnaggann cngatgtggt cattttttac aaagataatg gccacaccct 360
tccngnccga atcgancnga nctcccnntt ctgtgn                           396
<210> 46
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 24, 105, 144, 188, 190, 214, 317, 369, 371, 378
<223> n = A,T,C or G
<400> 46
tttttttttt tttttttttc tganacagag tctcattctg ttgcctaggc tggattgcag 60
tggtgccatc tcggctcact gcaacctccg cctcctgggt tccanaaatt ctcctgcctc 120
agcctcccgg gtagctggga ctanaggcac acgccaccac gccaggctaa tttttatatt 180
tttagtanan atggcgtttc accatgttga ccanactgat ctcgaactcc cgacctcgtg 240
atccacccac ctcggcctcc caaagtgctg ggattacagg cgtgaaacca ccaggcccgg 300
cctgaaatat ctatttnttt tcagattatt tttaaaattc catttgatga atcttttaaa 360
gtgagctana naaagtgngt gtgtacatgc acacac                           396
<210> 47
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 290
<223> n = A,T,C or G
<400> 47
tttttttttt tttttttgct gttgccaact gtttattcag ggccctgaac gggtggtgcg 60
tggacatgca acacactcgg gcccacagca gcgtgaccgg ccgctcccaa gccccgggcg 120
cacaaccaca gccaggagca gcccctgcca ccactgggcc accgtccagg gccccacagg 180
accagccgaa ggtgccccgg gccgaggcca gctgggtcag gtgtacccct agcctggggt 240
tgagtgagga gcggcacccc cagtatcctg tgtaccccaa gttgcccagn aggccgaggg 300
ggccttgggc tccatctgca ctggccaccc cgtgccaagc atcacagctg cgtgagcagg 360
tttgtgtgtg agcgtgtggc ggggcctggt tgtccc                           396
<210> 48
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 393, 396
<223> n = A,T,C or G
<400> 48
ctgggcctgt gccgaagggt ctgggcagat cttccaaaga tgtacaaaat gtagaaattg 60
ccctcaagca aatgcaaaga tgctcaacac ccttagtcat caagaaaatg caaatggaat 120
ccacagagag atactgcaca ctgacaaaga tggtcgtatt actaaaggtg aataaccagc 180
gcggggggca cgtggagtca ctggaacatt tgtgcaatgc tggtgggaat gtcaacccgt 240
gcggccctct ggaataagcc tggcagctcc tccaagagtt acccgtgtga cccagcaatt 300
ccactcctag ctccacccac aggaattgaa agcaaagacg caaacagatg cctgtgcacc 360
aaagttcacg gcagcatcct tcgccatagt ggnaan                           396
<210> 49
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 32, 40, 44, 64, 70, 83, 87, 92, 104, 115, 118, 125, 127,
130, 137, 155, 168, 171, 173, 175, 192, 201, 206, 208, 218,
219, 235, 247, 249, 256, 259, 260, 269, 297, 306, 310, 320,
321, 328, 331, 345, 356, 381, 389, 395
<223> n = A,T,C or G
<400> 49
accccaaaat gggaaaggaa aagactcata tnaacattgn cgtnattgga cacgtacatt 60
cggncaagtn caccactact ggncatntga tntataaatg cggnggcatc gacanaanaa 120
ccatngnaan atttganaag gaggctgctg atatnggaaa gggctccntc nantntgcct 180
gggtcttgga tnaactgaaa nctgancntg aacgtggnnt caccattgat atctncttgt 240
ggaaatntna gaccancann tactatgtna ctatcattga tgccccagga cacaganact 300
ttatcnaaan catgattacn nggacatnta nagctgactg tgctngcctg attgtngctg 360
ctggtgttgg tgaatttgaa nctggtatnt ccaana                           396
<210> 50
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 50
cgacttcttg ctggtgggtg gggcagtttg gtttagtgtt atactttggt ctaagtattt 60
gagttaaact gcttttttgc taatgagtgg gctggttgtt agcaggtttg tttttcctgc 120
tgttgattgt tactagtggc attaactttt agaatttggg ctggtgagat taattttttt 180
taatatccca gctagagata tggcctttaa ctgacctaaa gaggtgtgtt gtgatttaat 240
tttttcccgt tcctttttct tcagtaaacc caacaatagt ctaaccttaa aaattgagtt 300
gatgtcctta taggtcacta cccctaaata aacctgaagc aggtgttttc tcttggacat 360
actaaaaaat acctaaaagg aagcttagat gggctg                           396
<210> 51
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 18, 52, 59, 148, 267, 321, 332
<223> n = A,T,C or G
<400> 51
tttttttttt ttcagcgngg atttatttta tttcattttt tactctcaag anaaagaana 60
gttactattg caggaacaga cattttttta aaaagcgaaa ctcctgacac ccttaaaaca 120
gaaaacattg ttattcacat aataatgngg ggctctgtct ctgccgacag gggctgggtt 180
cgggcattag ctgtgccgtc gacaatagcc ccattcaccc cattcataaa tgctgctgct 240
acaggaaggg aacagcggct ctcccanaga gggatccacc ctggaacacg agtcacctcc 300
aaagagctgc gactgtttga naatctgcca anaggaaaac cactcaatgg gacctggata 360
acccaggccc gggagtcata gcaggatgtg gtactt                           396
<210> 52
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 81, 189
<223> n = A,T,C or G
<400> 52
acctcgctaa gtgttcgcta cgcggggcta ccggatcggt cggaaatggc agaggtggag 60
gagacactga agcgactgca nagccagaag ggagtgcagg gaatcatcgt cgtgaacaca 120
gaaggcattc ccatcaagag caccatggac aaccccacca ccacccagta tgccagcctc 180
atgcacagnt tcatcctgaa ggcacggagc accgtgcgtg acatcgaccc ccagaacgat 240
ctcaccttcc ttcgaattcg ctccaagaaa aatgaaatta tggttgcacc agataaagac 300
tatttcctga ttgtgattca gaatccaacc gaataagcca ctctcttggc tccctgtgtc 360
attccttaat ttaatgcccc ccaagaatgt taatgt                           396
<210> 53
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 224, 225, 228, 235, 240, 246, 257, 266, 274, 279, 281, 282,
283, 285, 287, 288, 290, 291, 292, 293, 294, 295, 296, 297,
300, 301, 303, 307, 311, 313, 314, 317, 318, 319, 320, 321,
323, 324, 328, 329, 330, 336, 337, 338, 339, 340, 341
<223> n = A,T,C or G
<221> misc_feature
<222> 342, 343, 344, 345, 346, 347, 348, 349, 350, 351, 352, 356,
357, 358, 359, 362, 363, 364, 365, 366, 367, 373, 380, 381,
382, 385, 387, 388, 389, 390, 392
<223> n = A,T,C or G
<400> 53
tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt 60
tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt 120
tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt 180
tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt ttannttntt ttttnttttn 240
cctttntttt aattcanaaa aagaanaaga aaanataana nnnancnnan nnnnnnnatn 300
ntncttnata ntnnttnnnn nanngggnnn gcgagnnnnn nnnnnnnnnn nntctnnnnt 360
tnnnnnnctt gcnccccttn nnttngnnnn angcaa                           396
<210> 54
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 367
<223> n = A,T,C or G
<400> 54
ctcttggggc tgctgggact cgcgtcggtt ggcgactccc ggacgtaggt agtttgttgg 60
gccgggttct gaggccttgc ttctctttac ttttccactc taggccacga tgccgcagta 120
ccagacctgg gaggagttca gccgcgctgc cgagaagctt tacctcgctg accctatgaa 180
ggcacgtgtg gttctcaaat ataggcattc tgatgggaac ttgtgtgtta aagtaacaga 240
tgatttagtt tgtttggtgt ataaaacaga ccaagctcaa gatgtaaaga agattgagaa 300
attccacagt caactaatgc gacttatggt agccaaggaa gcccgcaatg ttaccatgga 360
aactgantga atggtttgaa atgaagactt tgtcgt                           396
<210> 55
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 55
cgacggtttg ccgccagaac acaggtgtcg tgaaaactac ccctaaaagc caaaatggga 60
aaggaaaaga ctcatatcaa cattgtcgtc attggacacg tagattcggg caagtccacc 120
actactggcc atctgatcta taaatgcggt ggcatcgaca aaagaaccat tgaaaaattt 180
gagaaggagg ctgctgagat gggaaagggc tccttcaagt atgcctgggt cttggataaa 240
ctgaaagctg agcgtgaacg tggtatcacc attgatatct ccttgtggaa atttgagacc 300
agcaagtact atgtgactat cattgatgcc ccaggacaca gagactttat caaaaacatg 360
attacaggga catctcaggc tgactgtgct gtcctg                           396
<210> 56
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 134, 145, 255, 279, 337, 344, 369
<223> n = A,T,C or G
<400> 56
tttttttttt ttttttctca tttaactttt ttaatgggtc tcaaaattct gtgacaaatt 60
tttggtcaag ttgtttccat taaaaagtac tgattttaaa aactaataac ttaaaactgc 120
cacacgcaaa aaanaaaacc aaagnggtcc acaaaacatt ctcctttcct tctgaaggtt 180
ttacgatgca ttgttatcat taaccagtct tttactacta aacttaaatg gccaattgaa 240
acaaacagtt ctganaccgt tcttccacca ctgattaana gtggggtggc aggtattagg 300
gataatattc atttagcctt ctgagctttc tgggcanact tggngacctt gccagctcca 360
gcagccttnt tgtccactgc tttgatgaca cccacc                           396
<210> 57
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 52, 57, 58, 61, 72, 75, 77, 84, 87, 88, 93, 100, 101, 111,
117, 119, 121, 131, 132, 133, 134, 142, 143, 154, 156, 159,
167, 168, 170, 175, 176, 182, 183, 185, 186, 190, 192, 194,
198, 199, 200, 209, 212, 217, 218, 220, 232, 235, 253
<223> n = A,T,C or G
<221> misc_feature
<222> 255, 257, 258, 260, 262, 263, 270, 271, 273, 277, 280, 281,
284, 285, 289, 296, 297, 298, 303, 305, 307, 309, 310, 317,
322, 324, 337, 338, 342, 344, 346, 347, 349, 351, 356, 358,
366, 368, 371, 377, 380, 388, 389, 393, 396
<223> n = A,T,C or G
<400> 57
cctttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tnaaaanntt 60
ntttttgcaa anccnancaa aaanggnngg aangaaaaan nggaaaaatt ntttttncnt 120
ntttgggaac nnnnagccct tnntttgaaa aaangnggnc ttaaaanngn tgaannaaag 180
gnnanncccn gntncttnnn tttaaaaana anggggnngn ttttttttaa anaanatttt 240
ttttttccct aanancnncn anntgaaacn ngncccnacn nctnncttna aagggnnnaa 300
atnanangnn aaaaaanccc tnancccccc cccttanntt tncnannana naaagncntt 360
ttgggncntg naaaaanaan cctttttnnt gcnttn                           396
<210> 58
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 58
cgacctcaaa tatgccttat tttgcacaaa agactgccaa ggacatgacc agcagctggc 60
tacagcctcg atttatattt ctgtttgtgg tgaactgatt ttttttaaac caaagtttag 120
aaagaggttt ttgaaatgcc tatggtttct ttgaatggta aacttgagca tcttttcact 180
ttccagtagt cagcaaagag cagtttgaat tttcttgtcg cttcctatca aaatattcag 240
agactcgagc acagcaccca gacttcatgc gcccgtggaa tgctcaccac atgttggtcg 300
aagcggccga ccactgactt tgtgacttag gcggctgtgt tgcctatgta gagaacacgc 360
ttcaccccca ctccccgtac agtgcgcaca ggcttt                           396
<210> 59
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 25, 45, 116, 178, 198, 211, 225, 235, 253, 266, 281, 324,
367, 377, 389
<223> n = A,T,C or G
<400> 59
cttttttttt tttttttttt tcagnggaaa ataactttta ttganacccc accaactgca 60
aaatctgttc ctggcattaa gctccttctt cctttgcaat tcggtctttc ttcagnggtc 120
ccatgaatgc tttcttctcc tccatggtct ggaagcggcc atggccaaac ttggaggngg 180
tgtcaatgaa cttaaggnca atcttctcca nagcccgccg cttcntctgc accancaagg 240
acttgcggag ggngagcacc cgcttnttgg ttcccaccac ncagcctttc agcatgacaa 300
agtcattggt cacttcacca tagnggacaa agccacccaa agggttgatg ctccttggca 360
aataggncat agtcacngga ggcattgtnc ttgatc                           396
<210> 60
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 60
acctcagctc tcggcgcacg gcccagcttc cttcaaaatg tctactgttc acgaaatcct 60
gtgcaagctc agcttggagg gtgatcactc tacaccccca agtgcatatg ggtctgtcaa 120
agcctatact aactttgatg ctgagcggga tgctttgaac attgaaacag ccatcaagac 180
caaaggtgtg gatgaggtca ccattgtcaa cattttgacc aaccgcagca atgcacagag 240
acaggatatt gccttcgcct accagagaag gaccaaaaag gaacttgcat cagcactgaa 300
gtcagcctta tctggccacc tggagacggt gattttgggc ctattgaaga cacctgctca 360
gtatgacgct tctgagctaa aagcttccat gaaggg                           396
<210> 61
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 61
tagcttgtcg gggacggtaa ccgggacccg gtgtctgctc ctgtcgcctt cgcctcctaa 60
tccctagcca ctatgcgtga gtgcatctcc atccacgttg gccaggctgg tgtccagatt 120
ggcaatgcct gctgggagct ctactgcctg gaacacggca tccagcccga tggccagatg 180
ccaagtgaca agaccattgg gggaggagat gactccttca acaccttctt cagtgagacg 240
ggcgctggca agcacgtgcc ccgggctgtg tttgtagact tggaacccac agtcattgat 300
gaagttcgca ctggcaccta ccgccagctc ttccaccctg agcagctcat cacaggcaag 360
gaagatgctg ccaataacta tgcccgaggg cactac                           396
<210> 62
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 261, 269, 313, 333, 346, 354, 359, 390, 394, 395, 396
<223> n = A,T,C or G
<400> 62
tcgacgtttc ctaaagaaaa ccactctttg atcatggctc tctctgccag aattgtgtgc 60
actctgtaac atctttgtgg tagtcctgtt ttcctaataa ctttgttact gtgctgtgaa 120
agattacaga tttgaacatg tagtgtacgt gctgttgagt tgtgaactgg tgggccgtat 180
gtaacagctg accaacgtga agatactggt acttgatagc ctcttaagga aaatttgctt 240
ccaaatttta agctggaaag ncactggant aactttaaaa aagaattaca atacatggct 300
ttttagaatt tcnttacgta tgttaagatt tgngtacaaa ttgaantgtc tgtnctganc 360
ctcaaccaat aaaatctcag tttatgaaan aaannn                           396
<210> 63
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 3, 11, 16, 18, 23, 26, 30, 34, 37, 50, 51, 60, 61, 62, 63,
64, 75, 82, 83, 84, 85, 87, 89, 93, 94, 97, 98, 99, 118,
119, 120, 122, 134, 136, 138, 139, 141, 144, 145, 147, 152,
156, 187, 188, 193, 195, 204, 211, 214, 216, 222, 226
<223> n = A,T,C or G
<221> misc_feature
<222> 228, 235, 242, 258, 264, 265, 269, 275, 294, 298, 301, 307,
316, 326, 334, 335, 339, 340, 343, 350, 351, 355, 373, 378,
390
<223> n = A,T,C or G
<400> 63
ttnttttttt nttttntntt ttntcnttgn ttgnacngaa cccggcgctn nttccccacn 60
nnnnacggcc gcccntattc annnntncnt canntannna ccgcaccctc ggactgcnnn 120
tngggccccg ccgncnannc nccnncnccc anttcnccgc cgccgccgcc gccttttttt 180
attggcnncc atnanaaccg gggncacctc ncangngcgc cnaaantngg ggcangactc 240
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nccatgnggg tagggnttta cccgcnatga tgannatgnn aanaactttn ncaanccctt 360
tattaaccaa tgnggtgngg agacggaacn tggtta                           396
<210> 64
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 175, 177, 340, 393
<223> n = A,T,C or G
<400> 64
tcgacgtcgg ggtttcctgc ttcaacagtg cttggacgga acccggcgct cgttccccac 60
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agtcgccgcc atgacgaccg cgtccacctc gcaggtgcgc cagaactacc accaggactc 240
agaggccgcc atcaaccgcc agatcaacct ggagctctac gcctcctacg tttacctgtc 300
catgtcttac tactttgacc gcgatgatgt ggctttgaan aactttgcca aatactttct 360
tcccaatctc atgaggagaa ggaacatgct ganaaa                           396
<210> 65
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 26, 56, 103, 122, 145, 151, 154, 187, 189, 203, 224, 256,
273, 305, 344
<223> n = A,T,C or G
<400> 65
tttttttttt tttttttttt tttttnacca ataatgcttt tattttccac atcaanatta 60
atttatatgt tagttttagt acaagtacta aaatgtatac ttnttgccct aatagctaag 120
gnatacataa gcttcaccat acatnttgca nccncctgtc tgtcctatgt cattgttata 180
aatgtanana ttttaggaaa ctnttttatt caacctggga catntatact gtaggagtta 240
gcactgacct gatgtnttat ttaaaagtaa tgnatattac ctttacatat attccttata 300
tattnaaacg tatttccatg ttatccagct taaaatcaca tggnggttaa aagcatgagt 360
tctgagtcaa atctggactg aaatcctgat gctccc                           396
<210> 66
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 66
tcgacttttt tttttccagg acattgtcat aattttttat tatgtatcaa attgtcttca 60
atataagtta caacttgatt aaagttgata gacatttgta tctatttaaa gacaaaaaaa 120
ttcttttatg tacaatatct tgtctagagt ctagcaaata tagtaccttt cattgcagga 180
tttctgctta atataacaag caaaaacaaa caactgaaaa aatataaacc aaagcaaacc 240
aaaccccccg ctcaactaca aatgtcaata ttgaatgaag cattaaaaga caaacataaa 300
gtaacttcag cttttatcta gcaatgcaga atgaatacta aaattagtgg caaaaaaaca 360
aacaacaaac aacaaacaaa acaaaacaaa caaaca                           396
<210> 67
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 67
acgcttttgt ccttcatttt aactgttatg tcatactgtt atgttgacat atttctttat 60
aagagaatag aggcaaaagt atagaactga ggatcatttg tatttttgag ttggaaatta 120
tgaaacttca ccatattatg atcatacata ttttgaagaa cagactgacc aaagctcacc 180
tgttttttgt gttaggtgct ttggctgaac ttgattccag cccccttttc cctttggtgt 240
tgtgtatgtc tcttcatttc ctctcaaatc ttcaactctt gccccatgtc tccttggcag 300
caggatgctg gcatctgtgt agtcctcata ctgtttactg ataacccaca aattcatttt 360
catggcagac ctaagctcag accctgcctt gtcctg                           396
<210> 68
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 68
acctgagtcc tgtcctttct ctctccccgg acagcatgag cttcaccact cgctccacct 60
tctccaccaa ctaccggtcc ctgggctctg tccaggcgcc cagctacggc gcccggccgg 120
tcagcagcgc ggccagcgtc tatgcaggcg ctgggggctc tggttcccgg atctccgtgt 180
cccgctccac cagcttcagg ggcggcatgg ggtccggggg cctggccacc gggatagccg 240
ggggtctggc aggaatggga ggcatccaga acgagaagga gaccatgcaa agcctgaacg 300
accgcctggc ctcttacctg gacagagtga ggagcctgga gaccgagaac cggaggctgg 360
agagcaaaat ccgggagcac ttggagaaga agggac                           396
<210> 69
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 1, 4, 6, 8, 9, 11, 18, 19, 36, 53, 60, 64, 79, 84, 92, 94,
97, 105, 114, 120, 123, 127, 129, 134, 137, 138, 139, 142,
143, 147, 149, 151, 152, 156, 158, 167, 170, 172, 180, 182,
184, 187, 188, 189, 194, 197, 201, 209, 212, 218, 219
<223> n = A,T,C or G
<221> misc_feature
<222> 220, 222, 223, 225, 228, 229, 230, 232, 233, 236, 242, 244,
247, 250, 251, 253, 256, 257, 259, 261, 270, 271, 274, 277,
278, 279, 282, 284, 288, 289, 296, 298, 300, 310, 315, 316,
320, 321, 324, 328, 330, 331, 334, 336, 340, 347, 350
<223> n = A,T,C or G
<221> misc_feature
<222> 352, 353, 355, 359, 361, 362, 364, 367, 370, 372, 374, 376,
382, 388, 390, 394, 396
<223> n = A,T,C or G
<400> 69
ntcncngnng ntgtggtnnt ttttttaatt tttatntttt cttttttttt ctngctagcn 60
cttncttttt ttggaattnc ggtncctttt tntntcnatt ttttngacaa aaanaacctn 120
ttntttnana ccanagnnng gnncacncnt nnaatntncc ccttttncgn tngggagctn 180
cncnttnnnc gccnacntca ntcgagacng tncttttnnn tnnancannn tnngtncgtt 240
gncngcnttn ntncannant nttccctatn nacntgnnnt cncncatnnt tggacnancn 300
cctagccttn ccatnntttn nttntttntn natnancctn gaaaacntcn gnntnttcnc 360
nncnttnccn cncncncctt cntatgtncn atgncn                           396
<210> 70
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 15, 38, 57, 59, 63, 64, 65, 66, 68, 78, 79, 84, 87, 90, 97,
114, 115, 127, 128, 141, 143, 145, 151, 159, 168, 169, 172,
173, 176, 178, 197, 198, 207, 209, 211, 215, 220, 221, 223,
225, 228, 240, 248, 249, 260, 262, 263, 273, 283, 287
<223> n = A,T,C or G
<221> misc_feature
<222> 294, 304, 314, 334, 339, 340, 348, 362, 367, 376, 382, 384,
386, 395
<223> n = A,T,C or G
<400> 70
tttttttttt ttttnttttt tttttttttt tttttttntt tttttttttt ttttttntnc 60
aannnntnaa cttttaanng gccnccngcn ccccaanggg gaccctgctt ttgnnggcta 120
aatgccnnaa aactttgggg nantnggtat naaaccccnc tttgcccnnc annttncngg 180
gggggggggg tttttgnngg ggaacangna naacnttttn ncnanggnat caccaaaaan 240
aaagcccnnc cctttttccn annggggggg ggngggggga aantcanccc ccanattgac 300
cttnatttca aaanggggct tataatcctg ggcntggann cttccctnta cccgggggtt 360
gnccacnttt tattanaggg gnangnggat ccccnt                           396
<210> 71
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 15, 21, 30, 33, 35, 36, 42, 43, 44, 45, 46, 51, 56, 58, 59,
63, 70, 77, 81, 88, 94, 95, 96, 97, 101, 102, 109, 114,
118, 119, 120, 124, 131, 132, 133, 134, 135, 141, 142, 143,
144, 145, 146, 148, 149, 154, 158, 162, 164, 166, 172
<223> n = A,T,C or G
<221> misc_feature
<222> 177, 179, 181, 184, 185, 213, 216, 218, 219, 222, 223, 224,
230, 231, 240, 241, 242, 245, 247, 251, 252, 255, 258, 259,
261, 264, 268, 269, 272, 276, 285, 288, 289, 291, 292, 293,
297, 299, 300, 307, 312, 315, 316, 317, 325, 329, 334
<223> n = A,T,C or G
<221> misc_feature
<222> 340, 341, 347, 350, 354, 355, 357, 360, 361, 367, 368, 370,
371, 376, 377, 378, 387, 393, 394
<223> n = A,T,C or G
<400> 71
gcatctagag ggccngttta ntctagaggn ccngnntaaa cnnnnncatc nacctncnnt 60
gcncctgctn gttgccnccc ntctgtgnct tgcnnnnccc nngagcgtnc cttnaccnnn 120
gaangtgcct nnnnnactga nnnnnncnna taanatgngg anantncgtc gncattntnt 180
natnnggggt gatgctattc tggggggtgg ggnggngnna tnnnatactn nggggacgtn 240
nnatnangag nnatntcnng nttntctnnt gntttntggg gggcnatnng nnntctntnn 300
ggactcntcg cncannnatc aatancttna ttcngtgtan ngtccgnccn tagnncngcn 360
ngtactnnan ngttgnnntc attactnttc gtnngg                           396
<210> 72
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 2, 23, 27, 34, 35, 36, 37, 39, 41, 45, 55, 56, 59, 61, 88,
92, 96, 97, 98, 101, 103, 104, 106, 108, 111, 114, 115,
121, 128, 129, 131, 159, 170, 191, 202, 227, 233, 235, 240,
262, 268, 271, 272, 280, 281, 303, 304, 305, 311, 316, 317
<223> n = A,T,C or G
<221> misc_feature
<222> 321, 324, 336, 344, 345, 353, 360, 362, 363, 364, 365, 366,
370, 373, 389, 391, 392, 394, 395
<223> n = A,T,C or G
<400> 72
tntttttttt tttctaaaac atnactnttt attnnnnang ntttntgaac ctctnngcnt 60
natggtgaga gtttgtctga ttaataanaa tnggannntt nannanangc ntgnncgcaa 120
ngatggcnnc nctgtatatc ccaccatccc attacactnt gaaccttttn tttgattaat 180
aaaaggaagg natgcgggga anggggaaag agaatgcttg aacattncca tgngnccttn 240
gacaaacttt ccaatggagg cnggaacnaa nnaccaccan ncaactcccc tttttgtaat 300
ttnnnaactt ncaacnncta nctntttatt ttggcntccc tggnngaaac agnctgtatn 360
annnnnaagn ccntgagaac atccctggnt nncnna                           396
<210> 73
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 1, 7, 9, 14, 23, 35, 38, 44, 48, 50, 61, 74, 76, 79, 80,
85, 86, 91, 95, 101, 109, 112, 113, 117, 118, 121, 122,
127, 129, 132, 137, 141, 146, 214, 234, 243, 251, 266, 296,
305, 306, 336
<223> n = A,T,C or G
<400> 73
ntcaacntng actnctgtga ggnatggtgc tgggngcnta tgcngtgngn ttttggatac 60
naccttatgg acantngcnn tcccnnggaa ngatnataat ncttactgna gnnactnnaa 120
nnttccntnt cnaaaangtt naaaancatt ggatgtgcca caatgatgac agtttatttg 180
ctactcttga gtgctataat gatgaagatc ttanccacca ttatcttaac tgangcaccc 240
aanatggtga nttggggaac atatanagta cacctaagtt cacatgaagt tgtttnttcc 300
caggnnctaa agagcaagcc taactcaagc cattgncaca caggtgagac acctctattt 360
tgtacttctc acttttaagg gattagaaaa tagcca                           396
<210> 74
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 22, 118
<223> n = A,T,C or G
<400> 74
cctttttttt tttttttact gngaatatat actttttatt tagtcatttt tgtttacaat 60
tgaaactctg ggaattcaaa attaacatcc ttgcccgtga gcttcttata gacaccanaa 120
aaagtttcaa ccttgtgttc cacattgttc tgctgtgctt tgtccaaatg aacctttatg 180
agccggctgc catctagttt gacgcggatt ctcttgccca caatttcgct tgggaagacc 240
aagtcctcaa ggatggcatc gtgcacagct gtcagagtac ggctcctggg acgcttttgc 300
ttattttttg tacggctttt tcgagttggc ttaggcagaa ttctcctctg agcgataaag 360
acgacatgct tcccactgaa ctttttctcc aattcg                           396
<210> 75
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 14, 38, 41, 43, 47, 53, 73, 75, 78, 83, 96, 112, 113, 117,
124, 127, 146, 160, 167, 169, 176, 177, 178, 179, 194, 197,
198, 209, 210, 220, 222, 226, 227, 231, 238, 241, 244, 258,
259, 260, 270, 271, 274, 288, 301, 302, 305, 307, 316
<223> n = A,T,C or G
<221> misc_feature
<222> 319, 328, 339, 344, 347, 354, 359, 364, 367, 369, 370, 371,
373, 374, 381, 384, 387, 388
<223> n = A,T,C or G
<400> 75
tttttttttt tttntttttt tttttttttt tttttttnaa ntntaanggg ganggcccct 60
tttttttaaa ctngnccntt ttnctttcct tttttnaaaa ggaaaaaaaa anntttnttt 120
ttcnttnaaa aacccttttt cccacnaaca aaaaaaaccn ttccccntnc cttttnnnna 180
aaaaaaaggg gctnggnntt tccccttann caaaaaaccn tntccnnggg naaaaaantt 240
ntcnccgggg gggaaacnnn tgggggtgtn nccnaaattt gggggccntc ggaagggggg 300
nnccncncct aaagangtnt ttcaaaanaa aaacccccnt cctnttntaa aaanaaaana 360
aaanaangnn ngnntttttt ntcnttnncc ccccaa                           396
<210> 76
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 87, 94, 102, 108, 138, 139, 143, 144, 145, 146, 151, 152,
158, 168, 170, 171, 187, 204, 206, 224, 261, 262, 267, 268,
270, 287, 305, 306, 313, 315, 319, 320, 330, 331, 333, 342,
344, 348, 349, 356, 358, 360, 362, 368, 374, 376, 381
<223> n = A,T,C or G
<221> misc_feature
<222> 390
<223> n = A,T,C or G
<400> 76
acattcttca gaaatacagt gatgaaaatt cattttgaaa ctcaaatatt ttcattttgg 60
atattctcct gtttttatta aaccagngat tacncctggc cntccctnta aatgttctag 120
gaaggcatgt ctgttgtnnt ttnnnnaaaa nnaaattntt tttttttngn naaaccccaa 180
atcccanttt atcaggaagt tagncnaatg aaatggaaat tggntaatgg acaaaagcta 240
gcttgtaaaa aggaccaccc nnccacnngn ctttaccccc ttggttngtt gggggaaaaa 300
ccatnnttaa ccntntggnn aaaattgggn ncntaaagtt tncntggnna acagtncntn 360
cngtattnaa ttgncnttat nggaaaatcn gggatt                           396
<210> 77
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 63, 66, 81, 83, 89, 107, 115, 118, 147, 151, 190, 232, 275,
288, 294, 304, 323, 332, 369, 392
<223> n = A,T,C or G
<400> 77
tttttttttt tttttttttt tttttttttt tatcaacatt tatatgcttt attgaaagtt 60
ganaanggca acagttaaat ncngggacnc cttacaattg tgtaaanaac atgcncanaa 120
acatatgcat ataactacta tacaggngat ntgcaaaaac ccctactggg aaatccattt 180
cattagttan aactgagcat ttttcaaagt attcaaccag ctcaattgaa anacttcagt 240
gaacaaggat ttacttcagc gtattcagca gctanatttc aaattacnca aagngagtaa 300
ctgngccaaa ttcttaaaat ttntttaggg gnggtttttg gcatgtacca gtttttatgt 360
aaatctatnt ataaaagtcc acacctcctc anacag                           396
<210> 78
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 8, 14, 16, 20, 26, 28, 36, 38, 39, 40, 51, 52, 55, 57, 58,
67, 71, 114, 120, 132, 138, 142, 159, 165, 169, 172, 174,
175, 183, 187, 195, 197, 198, 200, 202, 206, 209, 243, 259,
260, 267, 283, 292, 305, 311, 315, 317, 319, 323, 324
<223> n = A,T,C or G
<221> misc_feature
<222> 331, 333, 334, 338, 343, 348, 353, 355, 357, 366, 376, 388
<223> n = A,T,C or G
<400> 78
agctggcnaa aggngnatgn gctgcnangc gattangnnn ggtaacgtca nnggntnncc 60
agtgcangac nttgtaaaac gacggccaca tgaattgtaa tacgactcac tatngggcgn 120
attgggccgt gnaggatngt gntcacactc gaatgtatnc tggcngatnc ananngcttt 180
atngctnttg acggngnntn anccanctng ggctttaggg ggtatcccct cgcccctgct 240
tcnttgattt gcacgggcnn ctccganttc cttcataata ccngacgctt cnatccccta 300
gctcngacct ntcantntnt tcnntgggtt ntnnccgntc acngcttncc cgnangntat 360
aatctnggct cctttnggga tccattantc tttact                           396
<210> 79
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 116, 153, 189, 194, 210, 218, 241, 270, 272, 288, 291, 304,
324, 325, 329, 333, 334, 338, 340, 342, 366, 372, 377, 384,
396
<223> n = A,T,C or G
<400> 79
caccaaccaa aacctggcgc cgttggcatc gtagagtgaa cacaacccaa aaacgatacg 60
ccatctgttc tgccctggct gcctcagccc taccagcact ggtcatgtct aaaggncatc 120
gtattgagga agttcctgaa cttcctttgg tangttgaag ataaagctga aggctacaag 180
aagaccaang aagntgtttt gctccttaan aaacttanac gcctggaatg atatcaaaaa 240
ngctatgcct ctcagcgaat gagactggan angcaaaatg agaaaccntc nccgcatcca 300
gcgnaggggc cgtgcatctc tatnntgang atnntggnan cnttcaaggc cttcagaacc 360
tccctngaaa tnctctnctt taangaacca aactgn                           396
<210> 80
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 312, 319, 353, 383
<223> n = A,T,C or G
<400> 80
tgtacatagg catcttattc actgcaccct gtcacaccca gcaccccccg ccccgcacat 60
tatttgaaag actgggaatt taatggttag ggacagtaaa tctacttctt tttccaggga 120
cgactgtccc ctctaaagtt aaagtcaata caagaaaact gtctattttt agcctaaagt 180
aaaggctgtg aagaaaattc attttacatt gggtagacag taaaaaacaa gtaaaataac 240
ttgacatgag cacctttaga tccttccctt catggggctt tgggcccaga atgacctttg 300
aggcctgtaa anggattgna atttcctata agctgtatag tggagggatt ggngggtcat 360
ttgagtaagc cctccaagat acnttcaata cctggg                           396
<210> 81
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 240, 286, 361, 364, 374, 375, 379, 380, 381, 387
<223> n = A,T,C or G
<400> 81
gcagctgaag ttcagcaggt gctgaatcga ttctcctcgg cccctctcat tccacttcca 60
acccctccca ttattccagt actacctcag caatttgtgc cccctacaaa tgttagagac 120
tgtatacgcc ttcgaggtct tccctatgca gccacaattg aggacatcct gcatttcctg 180
ggggagttcg ccacagatat tcgtactcat ggggttcaca tggttttgaa tcaccagggn 240
ccgccatcag gagatgcctt tatccagatg aagtctgcgg acagancatt tatggctgca 300
cagaagtggc ataaaaaaaa catgaaggac agatatgttg aagttttcag tgtcagctga 360
nganagaaca ttgnngtann ngggggnact ttaaat                           396
<210> 82
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 220, 251, 297, 301, 309, 349, 395
<223> n = A,T,C or G
<400> 82
gactcagaaa tgtcagtctc atgaagttca aaagatcgag aatgtttgct atcttggtgg 60
agcagccgca gccaagcaag taacttgtaa aatgaggaat gccatcaccc ctcgagtgtc 120
catcccacat aacttggggt tagagcacaa gcgttcccag gaactactca ccttaccatc 180
ttggccgttt catttgcttc caccagttct ggaaagagan ggcctagaag ttcaaaaaaa 240
aagtaggaaa ngtgcttttg gagaaaatca cctgctcctc agaactgggc ttacaanctg 300
ngaagtacnc tatgtgccac ctaatcctca tatatgacct caagagacnc caataagcat 360
atttccacca cggaatgacc agtgctttgg gtaana                           396
<210> 83
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 13, 372, 379, 393
<223> n = A,T,C or G
<400> 83
tttgatttaa ganatttatt atttttttaa aaaaagcaac ttccagggtt gtcattgtac 60
aggttttgcc cagtctccta tagcatggta tagtgataac tgatttttta taacaatgac 120
tcagaggcat tgaagatcca taactatctt ctgaattatc acagaaagaa gaaagttaga 180
agagtttaat gttaagtgta ttaaaaatca tattctaatt cttttaattt ggttatctga 240
gtatgataat ataggagagc tcagataaca aggaaaaggc attggggtaa gaacactcct 300
tcccacagga tggcattaac agactttttc tgcatatgct ttatatagtt gccaactaat 360
tcacctttta cncagcttna ttttttttta ctnggg                           396
<210> 84
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 61, 232, 254, 270, 271, 286, 354, 356, 368, 374, 389, 394
<223> n = A,T,C or G
<400> 84
tttttacagc aatttttttt tattgatgtt taacctgtat acaaccatac ccattttaag 60
ngtacagaca aatgaatttt gacaaattca ttcactcatc taatcatcac tataaccatg 120
atacagattt ttatcactcc aaaagtccat cctgtgctct tttcaagtcc atcctcctca 180
tctgataccc caagccacca ttgttttgct ttctggaact acagttttgg gnttttagaa 240
tttcatatat ggtngaatca taccatttgn natttggggc tgacgncttt cctccaataa 300
tggatttgag aattatctac attttgcatg gatcctgggt tatttatacc aacnangggt 360
tattatgnaa aatnggacca caatttggng gcanta                           396
<210> 85
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 293, 305, 306, 317, 347, 357, 372, 377, 386, 391
<223> n = A,T,C or G
<400> 85
cagtgaccgt gctcctaccc agctctgctc cacagcgccc acctgtctcc gcccctcggc 60
ccctcgcccg gctttgccta accgccacga tgatgttctc gggcttcaac gcagactacg 120
aggcgtcatc ctcccgctgc agcagcgcgt ccccggccgg ggatagcctc tcttactacc 180
actcacccgc agactccttc tccagcatgg gctcgcctgc aacgcgcagg acttctgcac 240
ggacctggcc gctccagtgc caacttcatt ccacggcact gcatctcgac canccggact 300
tgcannggtt ggggaanccg cccttgtttc tccgtggccc atctaanacc aaacccntca 360
ccttttcgga gnccccnccc ctccgntggg nttact                           396
<210> 86
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 5, 6, 28, 50, 58, 90, 108, 110, 118, 145, 154, 194, 244,
285, 292, 300, 312, 315, 342, 344, 346, 359, 374, 378, 380,
396
<223> n = A,T,C or G
<400> 86
ttttnnactg aatgtttaat acatttgnag gaacagaaga aatgcagtan ggattaanat 60
tttataatta gacattaatg taacagatgn ttcatttttc aaagaagntn cccccttntc 120
cctatctttt tttaatcttc cttanagcaa taantagtaa ttactatatt tgtggacaag 180
ctgctccact gtgntggaca gtaattatta aatctttatg tttcacatca ttattacctt 240
ccanaattct accttcattt ccctgcacag gttcactgga ctggntcaca ancaaattgn 300
actccactca antanaagag cccaaagaaa ttagagtaac gncnantcct atgaattana 360
gacccaaaga tttnaggngn tgattagaaa cataan                           396
<210> 87
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 231, 277, 285, 296, 341, 351, 372, 377, 380
<223> n = A,T,C or G
<400> 87
atggaggcgc tggggaagct gaagcagttc gatgcctacc ccaagacttt ggaggacttc 60
cgggtcaaga cctgcggggg cgccaccgtg accattgtca gtggccttct catgctgcta 120
ctgttcctgt ccgagctgca gtattacctc accacggagg tgcatcctga gctctacgtg 180
gacaagtcgc ggggagataa actgaagatc aacatcgatg tactttttcc ncacatgcct 240
tgtgcctatc tgagtattga tgccatggat gtggccngag aacancagct ggatgnggaa 300
cacaacctgt ttaagccacc actagataaa gatgcatccc ngtgagctca nagctgagcg 360
gcatgagctt gngaaantcn aggtgaccgg gtttga                           396
<210> 88
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 246, 266, 301, 328, 347, 349, 368, 370, 371, 374, 379, 387,
391
<223> n = A,T,C or G
<400> 88
tccagagcag agtcagccag catgaccgag cgccgcgtcc ccttctcgct cctgcggggc 60
cccagctggg accccttccg cgactggtac ccgcatagcc gctcttcgac caggccttcg 120
ggctgccccg gctgccggag gagtggtcgc agtggttagg cggcagcagc tggccaggct 180
acgtgcgccc cctgcccccc gccgcatcga gagccccgca gtggccgcgc ccgctacagc 240
cgcgcngctc agccggcaac tcacancggg gctcggagat ccgggacact gcggaccgct 300
ngcgcgtgcc ctggatgtca ccactttngc ccggacaact gacggtnana caaggatggg 360
gggtgganan nccngtaanc caagaanggg naggac                           396
<210> 89
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 37, 76, 230, 295, 306, 333, 346, 370, 376, 377, 395
<223> n = A,T,C or G
<400> 89
gagagaacag taaacatcca gccttagcat ctctcangag tactgcagat cttcattagc 60
tatattcaca tggagnaatg ctattcaacc tatttctctt atcaaaacta attttgtatt 120
ctttgaccaa tgttcctaaa ttcactctgc ttctctatct caatcttttt cccctttctc 180
atctttcctc cttttttcag tttctaactt tcactggttc tttggaatgn tttttctttc 240
atctcttttc ttttacattt tggggtgtcc cctctctttt cttaccctct ttctncatcc 300
ttcttnttct tttgaattgg ctgcccttta tcntctcatc tgctgncatc ttcatttctc 360
ctccctcctn tttccnntca ttctactctc tcccnt                           396
<210> 90
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 82, 110, 115, 120, 121, 125, 126, 129, 131, 140, 141, 144,
145, 146, 148, 149, 150, 153, 154, 157, 158, 160, 161, 163,
164, 166, 170, 172, 173, 174, 175, 179, 182, 184, 189, 193,
194, 195, 200, 206, 213, 215, 217, 218, 219, 220, 227
<223> n = A,T,C or G
<221> misc_feature
<222> 228, 231, 233, 236, 241, 247, 248, 249, 250, 254, 259, 262,
269, 273, 274, 275, 280, 281, 282, 286, 287, 289, 293, 294,
301, 302, 304, 309, 311, 318, 319, 324, 325, 330, 331, 333,
334, 336, 337, 341, 342, 343, 344, 349, 352, 353, 358
<223> n = A,T,C or G
<221> misc_feature
<222> 361, 365, 367, 373, 377, 381, 385, 386, 387, 392
<223> n = A,T,C or G
<400> 90
gggcgccggc gcgccccccc acccccgccc cacgtctcgt cgcgcgcgcg tccgctgggg 60
gcggggagcg gtcgggccgg cngcggtcgg ccggcggcag ggtggtgcgn tttcnttttn 120
nattnnccnc nttcttcttn nttnnncnnn ctnntanncn ntnncnttcn cnnnntttnc 180
tntntcttna ccnnnttttn taatcntctt ctncntnnnn tctcttnnat ntnttnctta 240
nttcctnnnn tttnttctnt cntttctcnc ctnnntctcn nnctcnncnc tcnncatttt 300
nntnttttnt nccttctnnt cttnnttctn ntnntnnttt nnnnttctnt tnntcatntt 360
ncctntntta ctntcanctt ntatnnncct cntttt                           396
<210> 91
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 1, 3, 8, 9, 16, 17, 18, 21, 22, 32, 33, 45, 50, 63, 64, 68,
75, 82, 92, 95, 98, 102, 106, 108, 110, 111, 116, 121, 135,
151, 154, 158, 162, 167, 170, 176, 181, 185, 187, 209, 212,
215, 225, 231, 245, 257, 278, 283, 288, 290, 292, 293
<223> n = A,T,C or G
<221> misc_feature
<222> 312, 324, 326, 330, 331, 333, 334, 344, 345, 349, 351, 352,
357, 358, 382, 384, 390, 392
<223> n = A,T,C or G
<400> 91
ntntcctnna tttttnnntc nncttttttt tnnaattttt ctttnttttn tttataaaaa 60
tcnncacnta aaacngcgga anaggggatt tnttnttngg gngtancncn nggccncaaa 120
naaccccaaa aatancccaa aatgcacagg nccngggnaa angaccnacn tgggtntttt 180
ntttntnaac aaggggggtt ttaaagggna tnggnatcaa agggnataaa ntttaaacct 240
ttganaaatt ttttaanagg cttgcccccc actttggncc ccnccccncn gnngggatcc 300
aatttttttt cnttggggct cccngncccn nannttccgg gttnntggnc nntcctnntt 360
tttttttttt tgccttcacc cntnccattn cntttt                           396
<210> 92
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 3, 7, 8, 9, 11, 31, 149, 152, 221, 233, 259, 263, 264, 265,
266, 274, 278, 279, 283, 286, 294, 302, 307, 309, 310, 311,
314, 316, 320, 343, 351, 363, 372, 377, 386, 393
<223> n = A,T,C or G
<400> 92
ctntttnnnt ntttttttcc ccatcatcca naaatgggtt ttattctcag ccgagggaca 60
gcaggactgg taaaaactgt caggccacac ggttgcctgc acagcacccc catgcttggt 120
agggggtggg agggatggcg ggggctggnt gnccacaggc cgggcatgac aaggaggctc 180
actggaggtg gcacactttg gagtgggatg tcgggggaca ncttctttgg tanttgggcc 240
acaagattcc caaggatanc acnnnnactg attnccannc tanagncaag cggntggcca 300
tntgtangnn nttntntatn tgactattta tagattttta tanaacaggg naagggcata 360
ccncaaaagg gnccaanttt ttaccnccgg gcnccc                           396
<210> 93
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 290, 304, 313, 320, 325, 333, 337, 348, 351
<223> n = A,T,C or G
<400> 93
gctgccacag atctgttcct ttgtccgttt ttgggatcca caggccctat gtatttgaag 60
ggaaatgtgt atggctcaga tcctttttga aacatatcat acaggttgca gtcctgaccc 120
aagaacagtt ttaatggacc actatgagcc cagttacata aagaaaaagg agtgctaccc 180
atgttctcat ccttcagaag aatcctgcga acggagcttc agtaatatat cgtggcttca 240
catgtgagga agctacttaa cactagttac tctcacaatg aaggacctgn aatgaaaaat 300
ctgnttctaa ccnagtcctn tttanatttt agngcanatc cagaccancg ncggtgctcg 360
agtaattctt tcatgggacc tttggaaaac tttcag                           396
<210> 94
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 115, 204, 205, 243, 266, 276, 316, 319, 355, 357, 364
<223> n = A,T,C or G
<400> 94
tgccttaacc agtctctcaa gtgatgagac agtgaagtaa aattgagtgc actaaacgaa 60
taagattctg aggaagtctt atcttctgca gtgagtatgg cccaatgctt tctgnggcta 120
aacagatgta atgggaagaa ataaaagcct acgtgttggt aaatccaaca gcaagggaga 180
tttttgaatc ataataactc atanngtgct atctgtcagt gatgccctca gagctcttgc 240
tgntagctgg cagctgacgc ttctangata gttagnttgg aaatggtctt cataataact 300
acacaaggaa agtcanccnc cgggcttatg aggaattgga cttaataaat ttagngngct 360
tccnacctaa aatatatctt ttggaagtaa aattta                           396
<210> 95
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 11, 16, 31, 36, 42, 49, 53, 56, 57, 60, 67, 70, 84, 89, 91,
92, 99, 105, 106, 112, 120, 121, 125, 127, 128, 133, 137,
141, 151, 152, 153, 154, 155, 162, 166, 167, 168, 174, 177,
179, 186, 188, 194, 195, 199, 203, 205, 213, 217, 221
<223> n = A,T,C or G
<221> misc_feature
<222> 227, 232, 235, 236, 240, 242, 260, 261, 265, 266, 291, 297,
318, 325, 330, 339, 348, 351, 352, 354, 356, 362, 364, 372,
380, 392, 395, 396
<223> n = A,T,C or G
<400> 95
cctcccaccc ncttanttca tgagattcga naatgncact tntgtgctnt ttnctnnttn 60
tattctnacn atttctttct tggngcggna nnaatcccnt ttttnngggc gnctctcccn 120
ncttntnntt tcntggngct ntcccttttc nnnnnaaact tntacnnngt ttanaantnt 180
ttctgnangg gggnntccna aananttttt ccncctncct nattccnctc tnaannctcn 240
cnaattgttt cccccccccn ntagnntatt ttttctaaaa aattaactcc nacgganaaa 300
attttcccta aaatttcncc tccanatttn gaaaaaacnc gcccgganct nntntncgaa 360
tntnaatttt tnaaaaaaan ttattttcat cnggnn                           396
<210> 96
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 161, 193, 253, 259, 281, 288, 299, 309, 318, 319, 335, 340,
344, 352, 355, 356, 387, 396
<223> n = A,T,C or G
<400> 96
cctgggtacc aaatttcttt atttgaagga atggtacaaa tcaaagaact taagtggatg 60
ttttggacaa cttatagaaa aggtaaagga aaccccaaca tgcatgcact gccttggcga 120
ccagggaagt caccccacgg ctatggggaa attagcccga ngcttaactt tcattatcac 180
tgcttccaag ggngtgcttg gcaaaaaaat attccgccaa ccaaatcggg cgctccatct 240
tgcccagttg gtnccgggnc cccaattctt ggatgctttc ncctcttntt ccggaatgng 300
ctcatgaant cccccaanng gggcattttg ccagnggccn tttngccatt cnagnnggcc 360
tgatccattt tttccaatgt aatgccnctt cattgn                           396
<210> 97
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 13, 15, 16, 19, 23, 31, 38, 39, 41, 45, 68, 94, 95, 100,
119, 131, 133, 141, 144, 164, 171, 182, 186, 190, 191, 195,
196, 198, 213, 229, 231, 235, 239, 247, 257, 265, 269, 272,
278, 279, 286, 289, 291, 306, 309, 310, 312, 317, 320
<223> n = A,T,C or G
<221> misc_feature
<222> 321, 327, 328, 337, 340, 343, 351, 360, 361, 368, 375, 381,
385, 386, 387, 388
<223> n = A,T,C or G
<400> 97
ctcaccctcc tcntnnttnt canaatattg ngaacttnnt nctgntcgaa tcactggcat 60
taaagganca ctagctaatg gcactaaatt tacnnactan ggaaactttt ttataatant 120
gcaaaaacat ntnaaaaaga ntgnagttcg cccatttctg cttnggaaga nctcttcact 180
tntaancccn natgnngncc tttgggtcaa aanctccgcg attattacng ngttncccnc 240
tatttgncct tcctttntcc ccaangccnc anatttcnna actttnccnt naaatgcctt 300
tatttnatnn cntttcnacn ncttaanntt ccctttnaan aangatccct ncttcaaatn 360
ntttcccngt tcctngcatt ncccnnnnat ttctct                           396
<210> 98
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 130, 202, 285, 296, 299, 308, 314, 321, 322, 336, 373
<223> n = A,T,C or G
<400> 98
acagggacaa tgaagccttt gaagtgccag tctatgaaga ggccgtggtg ggactagaat 60
cccagtgccg cccccaagag ttggaccaac caccccctac agcactgttg tgataccccc 120
agcacctgan gaggaacaac ctaccatcca gaggggccag gaaaagccaa actggaacag 180
aggcgaatgg ctcagagggg tncatggcca agaaggaagc cctggaagaa cttcaatcac 240
cttcggtttc gggaccaccg gcttgtgtcc ctgttctgac tgcanaactt ggcgcngtnc 300
cccattanaa cctntgactc nncccttgct ataagnctgt tttggcccct gatgatgata 360
gggtttttat gangacactt gggcaccccc ttaatg                           396
<210> 99
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 1, 4, 13, 15, 26, 31, 43, 46, 48, 52, 54, 55, 60, 62, 68,
72, 93, 112, 118, 119, 122, 131, 132, 133, 134, 145, 147,
152, 157, 163, 164, 186, 190, 225, 231, 239, 246, 247, 250,
255, 262, 285, 314, 316, 319, 325, 332, 339, 343, 345
<223> n = A,T,C or G
<221> misc_feature
<222> 348, 351, 352, 355, 357, 361, 370, 387
<223> n = A,T,C or G
<400> 99
nttntttttc cgncnaaagg gcaagngttt ncatctttcc tgnccncnca ananngggtn 60
tntgtgcntt tnttttttcc caaaacccgg gtnggggaca ccttttgagg anccactnnt 120
cntccggggc nnnnttttag aaggngncta anaagcntct tgnnggggga aaaacatctt 180
tttgcncccn acataccccc aagggggggg ggtgtctggg agganactaa ngacttttnt 240
tttttnnccn caaanaactg anggccccca ttgctccccc cccantcttt aaaaaacccc 300
ttcaatttcc ttgncnggna aaaanggttg gnaaaaaang agngngcntc nnttncnttt 360
natggaaggn aaaaggtttt tggttgnaaa accccg                           396
<210> 100
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 229, 286, 303, 312, 334, 335, 348, 350, 357, 364, 371, 395
<223> n = A,T,C or G
<400> 100
ctaacacggt gaaaccctgt ctctactaaa aatacaaaaa aattagccag gcgtggtggc 60
gggcacctgt agtcccagct gctcaggaag ctgaggcagg agaatggcgt gaacccagaa 120
ggcggagctt gcagtgagct gagatcgtgt cagtgcactc cagcctgggc gacagagcga 180
gactcccgct caaaaaaaaa aaaaaaaaga gaaaagaaaa agctgcagng agctgggaat 240
gggccctatc ccctccttgg ggatcaatga gacccctttt caaaanaaaa aaaaaaataa 300
tgngattttg gnaacatatg gcactggtgc ttcnnggaat tctgtttntn ggcatgnccc 360
cctntgactg nggaaaaatc cagcaggagg cccana                           396
<210> 101
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 93, 99, 100, 111, 168, 172, 174, 199, 209, 216, 218, 219,
227, 242, 243, 269, 272, 297, 300, 301, 308, 315, 317, 323,
331, 341, 344, 348, 357, 359, 363, 364, 366, 376, 379, 386,
389, 392
<223> n = A,T,C or G
<400> 101
agttataact caacagttca tttatatgct gttcatttaa cagttcattt aaacagttca 60
ttataactgt ttaaaaatat atatgcttat agncaaaann tgttgtggcg nagttgttgc 120
cgcttatagc tgagcattat ttcttaaatt cttgaatgtt cttttggngg gntnctaaaa 180
ccgtatatga tccattttna tgggaaacng aattcntnnc attatcncac cttggaaata 240
cnnaacgtgg gggaaaaaaa tcattcccnc cntccaaaac tatacttctt ttatctngan 300
nttcttgntc ctgcncnggt ttngaatata nctgggcaaa nggntttncc aaatccntnt 360
acnntncttt gggaantanc ggcaantcnt cncttt                           396
<210> 102
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 17, 93, 136, 183, 317
<223> n = A,T,C or G
<400> 102
actatacata agaacangct cacatgggag gctggaggtg ggtacccagc tgctgtggaa 60
cgggtatgga caggtcataa acctagagtc agngtcctgt tggcctagcc catttcagca 120
ccctgccact tggagnggac ccctctactc ttcttagcgc ctaccctcat acctatctcc 180
ctnctcccat ctcctacgga ctggcgccaa atggctttcc tgccaatttt gggatcttct 240
ctggctctcc agcctgctta ctcctctatt tttaaagggc caaacaaatc ccttctcttt 300
ctcaaacaca gtaatgnggc actgacccta ccacacctca tgaagggggc ttgttgcttt 360
tatttgggcc cgatctgggg ggggcaaaat attttg                           396
<210> 103
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 91, 174, 176, 188, 201, 214, 254, 277, 299, 325, 349, 355,
365, 372, 390
<223> n = A,T,C or G
<400> 103
ttgtgttggg actgctgata ggaagatgtc ttcaggaaat gctaaaattg ggcaccctgc 60
cccaacttca aagccacagc tggtatgcca natggtcagg ttaaagatat caacctgctg 120
actacaaagg aaaatatggt ggggtcttct tttaccctct tgacttccct ttgngngccc 180
cccgaganca ttgctttccg ngatagggca aaanaaatta aaaaacttaa ctggccagtg 240
aatggggctt ctgnggatct ccttctggca ttacatnggc aatccctaaa aaacaagang 300
actgggaccc ataacattct tttgnatcaa ccgaagcccc cattgttang atatngggct 360
taaangctga tnaagcatct cgtccgggcn ttttat                           396
<210> 104
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 32, 53, 86, 141, 154, 156, 181, 182, 197, 204, 219, 224,
226, 229, 232, 245, 253, 260, 262, 271, 273, 276, 292, 301,
303, 305, 321, 325, 332, 343, 352, 382, 392
<223> n = A,T,C or G
<400> 104
aagggagggc gcgccaagac cttcccactc gngcacactg ggggcgccga cangacgcaa 60
cccagtccaa cttggatacc cttggnttta gttctcggac acttctttta tctctccgtc 120
gcaacttgtc aagttctcaa nactgtctct ctgngntatc ttttttcttc gctgctcttc 180
nncccccgac gtatttntca aaangtctgc aattgttgna tacntnganc tncaccactg 240
ttacnaggtc atnaatttcn cntcaactct ntnccncttg ttccctgata tntcggccgg 300
ngncnccaat tctgtatttt nctcntcaac gntctcactt ttncctcctc cnggccactt 360
tctccccttc cttattccgg cnttgtttgc cnccat                           396
<210> 105
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 57, 306, 356, 388, 391
<223> n = A,T,C or G
<400> 105
tcaatagcca gccagtgttc atttttatcc ttgagctttt agtaaaaact tcctggnttt 60
atttttagtc attgggtcat acagcactaa agtctgctat ttatggaaac taactttttt 120
gtttttaatc caggccaaca tgtatgtaaa ttaaattttt agataattga ttatctcttt 180
gtactacttg agatttgatt atgagatgtg catattgctt tgggaagagc tcgaggaagg 240
aaataattct ctcctttggt ttgaacctca actagataaa ccctaggaat tgttaactgc 300
acaagnattt tcattccaca aaacctgagg cagctctttt gccagagcgt tcctgnaccc 360
ccccacccca cttgccttgg gtctttanaa ngagcc                           396
<210> 106
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 106
gctgtgtagc acactgagtg acgcaatcaa tgtttactcg aacagaatgc atttcttcac 60
tccgaagcca aatgacaaat aaagtccaaa ggcattttct cctgtgctga ccaaccaaat 120
aatatgtata gacacacaca catatgcaca cacacacaca cacacccaca gagagagagc 180
tgcaagagca tggaattcat gtgtttaaag ataatccttt ccatgtgaag tttaaaatta 240
ctatatattt gctgatggct agattgagag aataaaagac agtaaccttt ctcttcaaag 300
ataaaatgaa aagcaattgc tcttttcttc ctaaaaaatg caaaagattt acattgctgc 360
caaatcattt caactgaaaa gaacagtatt gctttg                           396
<210> 107
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 12, 210, 257, 261, 271, 302, 311, 314, 318, 368, 374, 385,
389, 396
<223> n = A,T,C or G
<400> 107
ttcacagaac anggtggttt attatttcaa tagcaaagag ctgaaaaatg tcgggtccca 60
taaaggagca gaacctgacc cagagcctgc agtacatttc caccccacag gggtgcaggc 120
tgggccaggc agggccaaag gcagcagaaa tgggagtaag agactgtgcc cactgagaag 180
ctctgctggg tgtgggcagg tgggcatgan atgatgatga tgtagtgtaa ggaccaggta 240
ggcaaaacct gtcaggnttg ntgaatgtca nagtggatcc aaaaggctga gggggtcgtc 300
anaaggccgg nggncccncc cttgcccgta tgggccttca aaaagtatgc ttgctcatcc 360
gttgtttncc ccanggagct gccanggana aggctn                           396
<210> 108
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 280, 281, 286, 305, 311, 313, 323, 326, 327, 340, 352, 356,
363, 369, 378, 388, 392
<223> n = A,T,C or G
<400> 108
gcctgctttt gatgatgtct acagaaaatg ctggctgagc tgaacacatt tgcccaattc 60
caggtgtgca cagaaaaccg agaatattca aaattccaaa tttttttctt aggagcaaga 120
agaaaatgtg gccctaaagg gggttagttg aggggtaggg ggtagtgagg atcttgattt 180
ggatctcttt ttatttaaat gtgaatttca acttttgaca atcaaagaaa agacttttgt 240
tgaaatagct ttactgcttc tcacgtgttt tggagaaaan natcanccct gcaatcactt 300
tttgnaactg ncnttgattt tcngcnncca agctatatcn aatatcgtct gngtanaaaa 360
tgncctggnc ttttgaanga atacatgngt gntgct                           396
<210> 109
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 237, 279, 284, 291, 305, 307, 308, 313, 326, 343, 351, 366,
376, 392, 394, 395
<223> n = A,T,C or G
<400> 109
ggccgtaggc agccatggcg cccagcccgg aatggcatgg tcttgaagcc ccacttccac 60
aaggactggc agcggcgcgt ggccacgtgg ttcaaccagc cggcccggaa gatccgcaga 120
cgtaaggccc ggcaagccaa ggcgcgccgc atcgctccgc gccccgcgtc gggtcccatc 180
cggcccatcg tgcgctgccc acggttcggt accacacgaa gggcgcgccg gcgcggnttc 240
agcctggagg agctcagggt ggccggattt acaagaagng gccngacatc ngtattcttg 300
ggatncnnga agnggaacaa gtcacngagt ccttgcagcc acntcagcgg ntgatgacac 360
cgttcnaact catctnttcc caagaaacct cngnnc                           396
<210> 110
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 1, 2, 12, 13, 16, 18, 29, 39, 60, 66, 70, 86, 90, 104, 121,
122, 127, 128, 146, 165, 171, 172, 173, 176, 188, 189, 193,
195, 205, 210, 211, 224, 226, 227, 231, 233, 240, 243, 244,
248, 249, 255, 257, 258, 260, 266, 268, 272, 273, 275
<223> n = A,T,C or G
<221> misc_feature
<222> 278, 280, 287, 292, 294, 303, 308, 312, 315, 320, 322, 332,
333, 334, 335, 345, 347, 351, 363, 364, 369, 371, 372, 379,
381, 382, 386, 391, 393
<223> n = A,T,C or G
<400> 110
nntgggctcc tnncantnat aataaaccng actcatacnc cacaaggaga tgaacaggan 60
tatgtncatn ctgacgcgga aacagngcan ggagctgagg aggngccaag atgagaccta 120
nnggccnngg tgggcgcatt cccggnggag ggggccacta aggantacga nnntcnagcg 180
gctcttgnng gcngncctcc tcacncctgn ntattcgatt gtcncnnatg ncntcctatn 240
atnntcanna ttctntnntn atctcntnta cnncntcncn ttcatgntta cngntccctc 300
tcnttctnac cnttntctgn anctcctttc tnnnnctttc atctntnttc ngctttcttt 360
ctnnaatcnt nntttaacnt nntctncttt ntnatt                           396
<210> 111
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 4, 7, 11, 16, 19, 25, 26, 30, 33, 39, 54, 60, 69, 75, 81,
99, 102, 130, 132, 143, 154, 156, 166, 180, 182, 188, 190,
192, 194, 198, 201, 226, 242, 253, 261, 264, 295, 305, 313,
315, 320, 323, 325, 330, 334, 337, 340, 344, 348, 349
<223> n = A,T,C or G
<221> misc_feature
<222> 351, 352, 357, 358, 359, 361, 362, 381, 387, 388, 389, 394
<223> n = A,T,C or G
<400> 111
taangancat nctggnttnt gcctnnccgn ctnattgant gttaaaggca attntgtggn 60
tgtcccagng aatgncggct nattttcttt ccacattgng cncattcact cctcccactc 120
ttggcatgtn gngacataag canggtacat aatngnaaaa atctgnattt ctgatgccan 180
angggtanan cntnttgnat ntcattccat tgatatacag ccactntttt atttttgatc 240
ancggccttc ggntcactgc ncanggtact tgacctcagt gtcactatta tgggntttgg 300
tttcnctctt ttncnggccn ttntntttcn cacnttncan cttncttnnt nnaaaannna 360
nncactctct cttgctctct ngatacnnng tctnaa                           396
<210> 112
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 172, 186, 378, 380, 382, 388
<223> n = A,T,C or G
<400> 112
tcaacgtcac caattactgc catttagccc acgagctgcg tctcagctgc atggagagga 60
aaaaggtcca gattcgaagc atggatccct ccgccttggc aagcgaccga tttaacctca 120
tactggcaga taccaacagt gaccggctct tcacagtgaa cgatgttaaa gntggaggct 180
ccaagnatgg tatcatcaac ctgcaaagtc tgaagacccc tacgctcaag gtgttcatgc 240
acgaaaacct ctacttcacc aaccggaagg tgaattcggg gggctgggcc tcgctgaatc 300
acttggattc cacattctgc tatgcctcat gggactcgca gaacttcagg ctggccaccc 360
tgctcccacc atcactgntn gncaatantc acccag                           396
<210> 113
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 1, 2, 3, 4, 7, 8, 9, 10, 11, 65, 273, 279, 280, 289, 321,
338, 380
<223> n = A,T,C or G
<400> 113
nnnnttnnnn nggagcctta atttcagagt tttattgtat tgcactaaag gaacagcagg 60
atggntatac aattttctct cattcagttt tgaaaatctg tagtacctgc aaattcttaa 120
gaataccttt accaccagat tagaacagta agcataataa ccaatttctt aataagtaat 180
gtcttacaaa taaaaacaca tttaaaatag ctttaaatgc attcttcaca agtaattcag 240
catatatttt atatcatggt tacttatgct tangaattnn agcaggatnt ttattctttt 300
gatggaaata tgggaaaact ntattcatgc atatacangg ataatattca gcgaagggaa 360
aatcccgttt ttattttggn aatgattcat atataa                           396
<210> 114
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 40, 82, 114, 116, 146, 164, 166, 174, 185, 212, 215, 219,
224, 236, 242, 254, 258, 263, 270, 286, 299, 308, 327, 328,
329, 345, 363, 378, 382, 385
<223> n = A,T,C or G
<400> 114
aaatgggaca acgtgattct tttgttttaa ataaatactn agaacacgga cttggctcct 60
acaagcattt ggactctaag gnttagaact ggagagtctt acccatgggc cccncncagg 120
gacgccacgg ttccctccca ccccgngatc aagacacgga atcngntggc gatngttgga 180
tcgcnatgtg ccccttatct atagccttcc cnggncatnt acangcagga tgcggntggg 240
anaactacaa ctgnaatntc tcnaacggtn atggtcccca ccgatnaaga ttctacctng 300
tcttttcntc ccctggagtg tgagtgnnng aggaagaagc ccttncctta catcaccttt 360
tgnacttctg aacaaganca anacnatggc cccccc                           396
<210> 115
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 277, 297, 321, 341, 381, 391
<223> n = A,T,C or G
<400> 115
ccgcctggtt cggcccgcct gcctccactc ctgcctctac catgtccatc agggtgaccc 60
agaagtccta caaggtgtcc acctctggcc cccgggcctt cagcagccgc tcctacacga 120
gtgggcccgg ttcccgcatc agctcctcga gcttctcccg agtgggcagc agcaactttc 180
gcggtggcct ggcggcggct atggtggggc cagcggcatg ggaggcatca cccgcagtta 240
cggcaaccag agcctgctga gccccttgcc tggaggngga ccccaacatc aagccgngcg 300
cacccaggaa aaggagcaga ncaagaccct caacaacaag nttgcttctt catagacaag 360
ggaccggtcc ttgaacagca naacaagatg ntggag                           396
<210> 116
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 267, 290, 343, 351, 376
<223> n = A,T,C or G
<400> 116
atctcagttt actagctaag tgactttggg caagggattt aacctctcgt ccctcagttt 60
cctcctatgt aaaatgacaa ggataatagt accaacccaa tgtagattaa atgagtttac 120
gaagtgttag aatagtgctt ggcacattag tgctttacaa ctgctatttt gattgttgtt 180
gtgggctctc tcaaatgcat tgtctctaga tgccagtgac ccaggtcaaa atttaccttt 240
aaccaagctg catgtttccc agactgntgc acagtcctct accctgagan aaagcttcca 300
cccaaggata cttttacttt ctgctggaaa actgatgagc aanggcaaca ngggacactt 360
atcgccaact ggaaangaga aattcttcct tttgct                           396
<210> 117
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 228, 267, 318, 331, 357, 368, 376
<223> n = A,T,C or G
<400> 117
aaacattttt taataaaatt cctatagaaa gctcagtcat agggcaaata ctcagttctc 60
tttcccatat caccgaggat tgagagctcc caatattctt tggagaataa gcagtagttt 120
tgctggatgt tgccaggact cagagagatc acccatttac acattcaaac cagtagttcc 180
tattgcacat attaacatta cttgccccta gcaccctaaa tatatggnac ctcaacaaat 240
aacttaaaga tttccgtggg gcgcganacc atttcaattt gaactaatat ccttgaaaaa 300
aatcacatta ttacaagntt taataaatac nggaagaaga gctggcattt ttctaanatc 360
tgaattcnga cttggnttta ttccataaat acggtt                           396
<210> 118
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 4, 5, 12, 14, 15, 16, 24, 59, 80, 87, 225, 280, 286, 287,
295, 297, 298, 337, 349, 362, 375, 387, 394
<223> n = A,T,C or G
<400> 118
accnncacct gntnnntttt aacnattaca acttctttat atggcagttt ttactgggng 60
cctaacactc tctttactgn ctcaagngga agtccaaaca aatttcattt ttgtagtaaa 120
aaatctttat ttccaaaatg atttgttagc caaaagaact ataaaccacc taacaagact 180
ttggaagaaa gagacttgat gcttcttata aattccccat tgcanacaaa aaataacaat 240
ccaacaagag catggtaccc attcttacca ttaacctggn tttaannctc caaancnnga 300
tttaaaaatg accccactgg gcccaatcca acatganacc taggggggnt tgccttgatt 360
angaatcccc cttanggact ttatctnggc tganaa                           396
<210> 119
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 251, 281, 298, 301, 308, 326, 332, 337, 351, 358, 362, 388,
394
<223> n = A,T,C or G
<400> 119
atggccagct cactttaaat accacctcaa gactcatcga aatgaccgct ccttcatctg 60
tcctgcagaa ggttgtggga aaagcttcta tgtgctgcag aggctgaagg tgcacatgag 120
gacccacaat ggagagaagc cctttatgtg ccatgagtct ggctgtggta agcagtttac 180
tacagctgga aacctgaaga accaccggcg catccacaca ggagagaaac ctttcctttg 240
tgaagcccaa ngatgtggcc gtcctttgct gagtattcta ncttcgaaaa catctggngg 300
ntactcanga gagaaagcct cattantgcc antctgnggg aaaaccttct ntcagagngg 360
angcaggaat gtgcatatta aaaagctncc ttgnac                           396
<210> 120
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 261, 263, 265, 272, 273, 288, 308, 310, 330, 379
<223> n = A,T,C or G
<400> 120
catgggtcag tcggtcctga gagttcgaag agggcacatt cccaaagaca ttcccagtca 60
tgaaatgtag aagactggaa aattaagaca ttatgtaaag gtagatatgg cttttagagt 120
tacattatgc ttggcatgaa taaggtgcca ggaaaacagt ttaaaattat acatcagcat 180
acagactgct gttagaaggt atgggatcat attaagataa tctgcagctc tactacgcat 240
ttattgttaa ttgagttaca nangncattc annactgagt ttatagancc atattgctct 300
atctctgngn agaacatttg attccattgn gaagaatgca gtttaaaata tctgaatgcc 360
atctagatgt attgtaccna aaggggaaaa ataaca                           396
<210> 121
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 77, 125, 130, 142, 155, 162, 166, 176, 204, 227, 242, 243,
245, 246, 249, 251, 252, 265, 279, 306, 310, 314, 336, 341,
354, 367, 382, 385, 390, 395
<223> n = A,T,C or G
<400> 121
tttttttttt ttttttttaa aatcaagtta tgtttaataa acattaataa atgtttactt 60
aaaagggtta ataaacnttt actacatggc aaattatttt agctagaatg cttttggctt 120
caagncatan aaaccagatt cnaatgccct taaanaattt tnaaanatcc attgangggg 180
ataactgtaa tccccaaggg gaanagggtt gggtatgaca ggtacanggg gccagcccag 240
tnntnncana nncagactct taccntcttt ctgctgtgnc accctcaggc attggctcca 300
ttctcngggn tgcncatggg aagatggctt tggacntaac nacacccttt tgtncacgta 360
aaggccngat gcagggtcaa anagnttccn ccatnt                           396
<210> 122
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 122
gtcgacatgg ctgccctctg ggctcccaga acccacaaca tgaaagaaat ggtgctaccc 60
agctcaagcc tgggcctttg aatccggaca caaaaccctc tagcttggaa atgaatatgc 120
tgcactttac aaccactgca ctacctgact caggaatcgg ctctggaagg tgaagctaga 180
ggaaccagac ctcatcagcc caacatcaaa gacaccatcg gaacagcagc gcccgcagca 240
cccaccccgc accggcgact ccatcttcat ggccaccccc tgcggtggac ggttgaccac 300
cagccaccac atcatcccag agctgagctc ctccagcggg atgacgccgt ccccaccacc 360
tccctcttct tctttttcat ccttctgtct ctttgt                           396
<210> 123
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 74, 94, 142, 149, 194, 219, 233, 279, 316, 335, 368
<223> n = A,T,C or G
<400> 123
gccctttttt tttttttttt tttcctagtg ccaggtttat tccctcacat gggtggttca 60
catacacagc acanaggcac gggcaccatg gganagggca gcactcctgc cttctgaggg 120
gatcttggcc tcacggtgta anaagggana ggatggtttc tcttctgccc tcactagggc 180
ctagggaacc cagnagcaaa tcccaccacg ccttccatnt ctcagccaag ganaagccac 240
cttggtgacg tttagttcca accattatag taagtggana agggattggc ctggtcccaa 300
ccattacagg gtgaanatat aaacagtaaa ggaanataca gtttggatga ggccacagga 360
aggagcanat gacaccatca aaagcatatg caggga                           396
<210> 124
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 124
gaccattgcc ccagacctgg aagatataac attcagttcc caccatctga ttaaaacaac 60
ttcctccctt acagagcata caacagaggg ggcacccggg gaggagagca catactgtgt 120
tccaatttca cgcttttaat tctcatttgt tctcacacca acagtgtgaa gtgcgtggta 180
taatctccat ttcaaaacca aggaagcagc ctcagagtgg tcgagtgaca cacctcacgc 240
aggctgagtc cagagcttgt gctcctcttg attcctggtt tgactcagtt ccaggcctga 300
tcttgcctgt ctggctcagg gtcaaagaca gaatggtgga gtgtagcctc cacctgatat 360
tcaggctact cattcagtcc caaatatgta ttttcc                           396
<210> 125
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 43, 88, 91, 94, 139, 141, 150, 163, 193, 202, 212, 215, 222,
238, 253, 256, 286, 297, 331, 343, 350, 360, 376, 385, 396
<223> n = A,T,C or G
<400> 125
cccttttttt tttttttttt tttttttttt ttttttactt tgnaacaaaa atttattagg 60
attaagtcaa attaaaaaac ttcatgcncc nccncttgtc atatttacct gaaatgacaa 120
agttatactt agcttgagng naaaacttgn gccccaaaaa ttntgtttgg aaagcaaaaa 180
aataattgat gcncatagca gngggcctga tnccnccaca gngaatgttg tttaaggnct 240
aacaaacagg ggncancaaa gcatacatta cttttaagct ttgggnccaa ggaaaangtc 300
attccctacc tccttcaaaa gcaaactcat natagcctgg gcncctaggn ctggagcctn 360
ttttttcgag tctaanatga acatntggat ttcaan                           396
<210> 126
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 126
cgcgtcgact cgcaagtgga atgtgacgtc cctggagacc ctgaaggctt tgcttgaagt 60
caacaaaggg cacgaaatga gtcctcaggt ggccaccctg atcgaccgct ttgtgaaggg 120
aaggggccag ctagacaaag acaccctaga caccctgacc gccttctacc ctgggtacct 180
gtgctccctc agccccgagg agctgagctc cgtgcccccc agcagcatct gggcggtcag 240
gccccacgac ctggacacgc tggggctacg gctacagggc ggcatcccca acggctacct 300
ggtcctagac ctcagcatgc aagaggccct ctcggggacg ccctgcctcc taggacctgg 360
acctgttctc accgtcctgg cactgctcct agcctc                           396
<210> 127
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 15
<223> n = A,T,C or G
<400> 127
tttttttttt ttggnggtaa aatgcaaatg ttttaaaata tgtttatttt gtatgtttta 60
caatgaatac ttcagcaaag aaaataatta taatttcaaa atgcaatccc tggatttgat 120
aaatatcctt tataatcgat tacactaatc aatatctaga aatatacata gacaaagtta 180
gctaatgaat aaaataagta aaatgactac ataaactcaa tttcagggat gagggatcat 240
gcatgatcag ttaagtcact ctgccacttt ttaaaataat acgattcaca tttgcttcaa 300
tcacataaac attcattgca ggagttacac ggctaatcat tgaaaattat gatctttgtt 360
agcttaaaag aaaattcagt ttaatacaaa gacatt                           396
<210> 128
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 220, 244, 351, 384
<223> n = A,T,C or G
<400> 128
gccctttttt ttttttttta aaggcaaata aaataagttt attgggatgt aaccccatca 60
taaattgagg agcatccata caggcaagct ataaaatctg gaaaatttaa atcaaattaa 120
attctgcttt taaaaaggtg ccttaagtta accaagcatt ttgataacac attcaaattt 180
aatatataaa aatagatgta tcctggaaga tataatgaan aacatgccat gtgtataaat 240
tcanaatacg ctttttacac aaagaactac aaaaagttac aaagacagcc ttcaggaacc 300
acacttagga aaagtgagcc gagcagcctt cacgcaaagc ctccttcaaa naagtctcac 360
aaagactcca gaaccagccg agtntgtgaa aaagga                           396
<210> 129
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 104, 164, 177, 204, 217, 234, 273, 312, 350, 353, 370
<223> n = A,T,C or G
<400> 129
gccctttttt tttttttttt ttttactcag acaggcaata tttgctcaca tttattctct 60
tgcatcgtaa atagtagcca actcacaaaa ataaagtata caanaatgta atatttttta 120
aaataagatt aacagtgtaa gaaggaaaat ctcaaaaaaa gcanatagac aatgtanaaa 180
attgaaatga aatcccacag taanaaaaaa aaaacanaaa agtgcctatt taanaattat 240
gctacatgtg gaacttaact agaccatttt aanaaagacc aatttctaat gcaaattttc 300
tgaggttttc anattttatt tttaaaatat gttatagcta catgttgtcn acncggccgc 360
tcgagtctan agggcccgtt taaacccgct gatcag                           396
<210> 130
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 23, 24, 26, 32, 56, 191, 286, 355
<223> n = A,T,C or G
<400> 130
cgcccttttt tttttttttt tanngnacgt gnctttattt ctggatgata taaaanaaaa 60
aacttaaaaa acaccccaaa ccaaacacca atggatcccc aaagcgatgt gactccctct 120
tcccacccgg ataaatagag acttctgtat gtcagtctac cctcccgccc ccataacccc 180
ctctgctata nacatactct gggtatatat tactctactc ggcaatagac atctcccgaa 240
aatagaattc ctgccctgac acctgactct tccctggccg catcanacca cccgccactg 300
tagcacactg gtgtccttgc cccctgtggt cagggccatg ctgtcatccc acaanaaggc 360
cacatttgtc acatggctgc tgtgtccacc gtactt                           396
<210> 131
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 49, 68, 69, 83, 88, 93, 136, 140, 154, 158, 166, 167, 168,
170, 172, 173, 187, 226, 239, 241, 247, 257, 259, 271, 293,
301, 318, 334, 336, 342, 344, 357, 377, 384
<223> n = A,T,C or G
<400> 131
gccctttttt tttttttttt tttttttttt ttcagtttac acaaaaacnc tttaattgac 60
agtatacnnt tttccaaaat atnttttngt aanaaaatgc aataattatt aactatagtt 120
tttacaaaca agtttntcan taaattccag tgtncttnaa accccnnncn annaaaacat 180
atatganccc ccagttcctg ggcaaactgt tgaacattca ctgcanacaa aaagaccanc 240
nccaaanagt catctgngnc ctccatgctg ngtttgcacc aaacctgagg gancagctag 300
ngaccgtgac aaaagctntg ctacagtttt actntngccc tntntgcctc ccccatnatg 360
tttccttggt ccctcantcc tgtnggagta agttcc                           396
<210> 132
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 69
<223> n = A,T,C or G
<400> 132
cgcgtcgacc gcggccgtag cagccgggct ggtcctgctg cgagccggcg gcccggagtg 60
gggcggcgnt atgtaccttc cacattgagt attcagaaag aagtgatctg aactctgacc 120
attctttatg gatacattaa gtcaaatata agagtctgac tacttgacac actggctcgg 180
tgagttctgc tttttctttt taatataaat ttattatgtt ggtaaattta gcttttggct 240
tttcactttg ctctcatgat ataagaaaat gtaggttttc tctttcagtt tgaattttcc 300
tattcagtaa aacaacatgc tagaaaacaa acttttggaa aggcattgta actatttttt 360
caaatagaac cataataaca agtcttgtct taccct                           396
<210> 133
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 1, 17, 18, 20, 21, 25, 26, 30, 31, 40, 44, 45, 46, 51, 52,
66, 67, 68, 74, 89, 109, 122, 166, 193, 214, 218, 266, 269,
291, 307, 315, 348, 375, 378, 379, 386, 393
<223> n = A,T,C or G
<400> 133
ntattacccc tcctggnnan ntggnnatan nctgcaaggn gatnnncccg nngaacttca 60
ctgatnnncc aatnaaaact gctttaaanc tgactgcaca tatgaattnt aatacttact 120
tngcgggagg ggtggggcag ggacagcaag ggggaggatt gggaanacaa tagacaggca 180
tgctggggat gcngcgggct ctatggcttc tgangcgnaa agaaccagct ggggctctag 240
ggggtatccc cacgcgccct gtagcngcnc attaaacgcg gcgggtgtgg nggttacttc 300
gcaaagngac cgatncactt gccagcgccc tagctgcccg ctcctttngc tttcttccct 360
tcctttctcg ccacnttnnc cggctntccc cgncaa                           396
<210> 134
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 133, 144, 221, 229, 302, 358
<223> n = A,T,C or G
<400> 134
tttttttttt ttctgctttt tatatgttta aaaatctctc attctattgc tgctttattt 60
aaagaaagat tactttcttc cctacaagat ctttattaat tgtaaaggga aaatgaataa 120
ctttacaatg ganacacctg gcanacacca tcttaaccaa agcttgaagt taacataacc 180
agtaatagaa ctgatcaata tcttgtgcct cctgatatgg ngtactaana aaaacacaac 240
atcatgccat gatagtcttg ccaaaagtgc ataacctaaa tctaatcata aggaaacatt 300
anacaaactc aaattgaagg acattctaca aagtgccctg tattaaggaa ttattcanag 360
taaaggagac ttaaaagaca tggcaacaat gcagta                           396
<210> 135
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 135
gcgtcgacgc tggcagagcc acaccccaag tgcctgtgcc cagagggctt cagtcagctg 60
ctcactcctc cagggcactt ttaggaaagg gtttttagct agtgtttttc ctcgctttta 120
atgacctcag ccccgcctgc agtggctaga agccagcagg tgcccatgtg ctactgacaa 180
gtgcctcagc ttccccccgg cccgggtcag gccgtgggag ccgctattat ctgcgttctc 240
tgccaaagac tcgtgggggc catcacacct gccctgtgca gcggagccgg accaggctct 300
tgtgtcctca ctcaggtttg cttcccctgt gcccactgct gtatgatctg ggggccacca 360
ccctgtgccg gtggcctctg ggctgcctcc cgtggt                           396
<210> 136
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 18, 185, 188, 191, 193, 396
<223> n = A,T,C or G
<400> 136
ttatgcttcc ggctcgtntg ttgtgtggaa ttgtgagcgg ataacaattt cacacaggaa 60
acagctatga ccatgattac gccaagctat ttaggtgaca ctatagaata ctcaagctat 120
gcatcaagct tggtaccgag ctcggatcca ctagtaacgg ccgccagtgt gctggaattc 180
gcggncgntc nantctagag ggcccgttta aacccgctga tcagcctcga ctgtgccttc 240
tagttgccag ccatctgttg tttgcccctc ccccgtgcct tccttgaccc tggaaggtgc 300
cactcccact gtcctttcct aataaaatga ggaaattgca tcgcattgtc tgagtaggtg 360
tcattctatt ctggggggtg gggtggggca ggacan                           396
<210> 137
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 156, 216
<223> n = A,T,C or G
<400> 137
tttttttttt ttctgctttg tacttgagtt tatttcacaa aaccacggag aaagatactg 60
aaatggagct ctttccagcc tccaagcaag gaggccccag cagccagtct ccagcccctt 120
gagccctttt tgttaggccc acacccaaaa gagganaacc agtgtgtgcg cgaaggtaca 180
tggcaaggca cttttgaaaa catcccagtt taccgnggtg aaattgaact tactctgaaa 240
cagatgaaaa gggacatgca aaattgctga gcacatggag gtgtttgtta gtaggtgaaa 300
atcatgtcct gggtataacc cagcttctcc aggttagggt gagccgccgt ctggatcagt 360
ggtggcgggc cacacaccag gatgagcgtg gacttc                           396
<210> 138
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 69, 136, 265, 272
<223> n = A,T,C or G
<400> 138
cccttttttt ttttttttac aaatgagaaa aatgtttatt aagaaaacaa tttagcagct 60
ctcctttana attttacaga ctaaagcaca acccgaaggc aattacagtt tcaatcatta 120
acacactact taaggngctt gcttactcta caactggaaa gttgctgaag tttgtgacat 180
gccactgtaa atgtaagtat tattaaaaat tacaaattgt ttggtgatta ttttgatgac 240
ctcttgagca gcagctcccc ccaanaatgc ancaatggta tgtggctcac cagctccata 300
tcggcaaaat tcgtggacat aatcatcttt caccattaca gataaaccat attcctgaag 360
gaagccagtg agacaagact tcaactttcc tatatc                           396
<210> 139
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 51, 105, 126, 147, 210, 212, 236, 241, 258, 263, 348
<223> n = A,T,C or G
<400> 139
ccgccctttt tttttttttt ttcacaaaag cactttttat ttgaggcaaa nagaagtctt 60
gctgaaagga ttccagttcc aagcagtcaa aactcaaccg ttagnggcac tattttgacc 120
tggtanattt tgcttctctt tggtcanaaa agggtattca ggttgtactt tccccagcag 180
ggtaaaaaga agggcaaagc aaactggaan anacttctac tctactgaca gggctnttga 240
natccaacat caagctanac acnccctcgc tggccactct acaggttgct gtcccactgc 300
tgagtgacac aggccatact acatttgcaa ggaaaaaaat gaggcaanaa acacaggtat 360
aggtcacttg gggacgagca ggcaaccaca gcttca                           396
<210> 140
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<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 50, 60, 63, 100, 133, 135, 172, 183, 190, 196, 220, 240,
262, 266, 273, 278, 293, 327, 332, 341, 348, 355, 380, 391
<223> n = A,T,C or G
<400> 140
tttttttttt tttttttttt tttttttctc atttaacttt tttaatgggn ctcaaaattn 60
tgngacaaat ttttggtcaa gttgtttcca ttaaaaagtn ctgattttaa aaactaataa 120
cttaaaactg ccncncccaa aaaaaaaaac caaaggggtc cacaaaacat tntcctttcc 180
ttntgaaggn tttacnatgc attgttatca ttaaccagtn ttttactact aaacttaaan 240
ggccaattga aacaaacagt tntganaccg ttnttccncc actgattaaa agnggggggg 300
caggtattag ggataatatt catttancct tntgagcttt ntgggcanac ttggngacct 360
tgccagctcc agcagccttn ttgtccactg ntttga                           396
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<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 141
acgccgagcc acatcgctca gacaccatgg ggaaggtgaa ggtcggagtc aacggatttg 60
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ccatcaatga ccccttcatt gacctcaact acatggttta catgttccaa tatgattcca 180
cccatggcaa attccatggc accgtcaagg ctgagaacgg gaagcttgtc atcaatggaa 240
atcccatcac catcttccag gagcgagatc cctccaaaat caagtggggc gatgctggcg 300
ctgagtacgt cgtggagtcc actggcgtct tcaccaccat ggagaaggct ggggctcatt 360
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<210> 142
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 142
acgcaggaga ggaagcccag cctgttctac cagagaactt gcccaggtca gaggtctgcg 60
tagaagccct tttctgagca tcctctcctc tcctcacacc tgccactgtc ctctgcgttg 120
ctgtcgaatt aaatcttgca tcaccatggt gcacttctgt ggcctactca ccctccaccg 180
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tgtgtctgca actttgaact acgagaatga ggagaaagtt cctttggagg ccttctttgt 300
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<210> 143
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<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 19, 48, 69, 122, 183, 227, 332, 390
<223> n = A,T,C or G
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tttttttttt tttccatana aaataggatt tattttcaca tttaaggnga acacaaatcc 60
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anaaaaatca aagcctacca ggaaatgctt ccctccggag cacaggagct tacaggccac 180
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aggttcaact gctcctaccc ccatgggccc tcctcaaaaa cgacagcagc aaaccaacag 300
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<212> DNA
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<220>
<221> misc_feature
<222> 221, 331
<223> n = A,T,C or G
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tttttttttt tttcgctctt tggtctgaca agaaaagagt tttaggtgtg tgaagtaggg 60
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acaaagggga agagtagaca ctgcttttag taaacg                           396
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<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
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<223> n = A,T,C or G
<400> 145
tttttttttt tttttttcaa tggatccgtt agctttacta ctaanatctt gctganatca 60
nanaagggct tctgggcagg ctgagcactg ggggtgtgca acatggtaac tctgaataan 120
anaaaccctg agttttactg ggcaaanaaa naacaagngg taggtatgat ttctgaacct 180
ggaaatagcg aaaatgaagg aaattccaaa agcgcgtatt tccaaataat gacaggccag 240
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catcccacag gcacattcct ttggccttca ggatcttana tgcanatgtg ganagtcaag 360
aggtaggctg actctgagtc ttcagctaaa ttcttt                           396
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<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 120, 130, 176, 180, 185, 208, 238, 254, 259, 261, 275, 285,
296, 347
<223> n = A,T,C or G
<400> 146
tttttttttt ttttcattag caaggaagga tttatttttt cttttgaggg gagggcggaa 60
cagccgggat ttttggaaca ctacctttgt ctttcacttt gttgtttgtg tgttaacacn 120
aataaatcan aagcgacttt aaatctccct tcgcaggact gtcttcacgt atcagngcan 180
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gtgaggcaca ctgngggana nacaaggtcc cctgnaacca gaggngggaa ggacanagct 300
ggctgactcc ctgctctccc gcattctctc ctccatgtgt tttgaanagg gaagcaacat 360
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<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 147
acggggaagc caagtgaccg tagtctcatc agacatgagg gaatgggtgg ctccagagaa 60
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cacttccttt ctggctccca tctcttcctc caagctgtac aatgaggtcc gagcctgtag 240
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cttccaccag ctctctgcac cccagccctg tttcaccttc agccatccca acagagatcc 360
tatgattgac aacaaccgct attgcacctt ggaatt                           396
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<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 148
acgtcccatg attgttccag accatgactc ttcctggttg tgggtttgtt acagagcagg 60
agaagcagag gttatgacag ttatgcagac tttccccctc ctttttctct tttctcttcc 120
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<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 214, 295
<223> n = A,T,C or G
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tttttttttt tttaaagagt cacattttat tcaatgccta tttgtacatg ttactagcaa 60
taaactcttt tatctttaat tttgagaagt tttacaaata cagcaaagca gaatgactaa 120
tagagccggt aaccaggaca cagatttgga aaaataggtc taattggttg ttacactgtg 180
tttatgtcat acatttcgct tatttttatc aaanaaaaat cagaatttat aaaatgttaa 240
ttaaaaggaa aacattctga gtaaatttag tcccgtgttt cttcctccaa atctntttgt 300
tctacactaa caggtcagga taagtatgga tggggaggct ggaaaaaggg catccttccc 360
catgcggtcc ccagagccac cctctccaag caggac                           396
<210> 150
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 150
acgcctctct tcagttggca cccaaacatc tggattggca aatcagtggc aagaagttcc 60
agcatctgga cttttcagaa ttgatcttaa gtctactgtc atttccagat gcattatttt 120
acaactgtat ccttggaaat atatttctag ggagaatatt attgaagaaa atgttaatag 180
cctgagtcaa atttcagcag acttaccagc atttgtatca gtggtagcaa atgaagccaa 240
actgtatctt gaaaaacctg ttgttccttt aaatatgatg ttgccacaag ctgcattgga 300
gactcattgc agtaatattt ccaatgtgcc acctacaaga gagatacttc aagtctttct 360
tactgatgta cacatgaagg aagtaattca gcagtt                           396
<210> 151
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<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 146, 299, 332
<223> n = A,T,C or G
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acaaaatgcc cagcctacag agtctgagaa ggaaatttat aatcaggtga atgtagtatt 60
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acgagaggca atccagcatc cagcanatga gaagttgcaa gagaaggcat ggggtgcagt 180
tgttccacta gtaggcaaat taaagaaatt ttacgaattt tctcagaggt tagaagcagc 240
attaagaggt cttctgggag ccttaacaag taccccatat tctcccaccc agcatctana 300
gcgagagcag gctcttgcta aacagtttgc anaaattctt catttcacac tccggtttga 360
tgaactcaag atgacaaatc ctgccataca gaatga                           396
<210> 152
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<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 249
<223> n = A,T,C or G
<400> 152
acgcagcgct cggcttcctg gtaattcttc acctcttttc tcagctccct gcagcatggg 60
tgctgggccc tccttgctgc tcgccgccct cctgctgctt ctctccggcg acggcgccgt 120
gcgctgcgac acacctgcca actgcaccta tcttgacctg ctgggcacct gggtcttcca 180
ggtgggctcc agcggttccc agcgcgatgt caactgctcg gttatgggac cacaagaaaa 240
aaaagtagng gtgtaccttc agaagctgga tacagcatat gatgaccttg gcaattctgg 300
ccatttcacc atcatttaca accaaggctt tgagattgtg ttgaatgact acaagtggtt 360
tgcctttttt aagtataaag aagagggcag caaggt                           396
<210> 153
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 153
ccagagacaa cttcgcggtg tggtgaactc tctgaggaaa aacacgtgcg tggcaacaag 60
tgactgagac ctagaaatcc aagcgttgga ggtcctgagg ccagcctaag tcgcttcaaa 120
atggaacgaa ggcgtttgcg gggttccatt cagagccgat acatcagcat gagtgtgtgg 180
acaagcccac ggagacttgt ggagctggca gggcagagcc tgctgaagga tgaggccctg 240
gccattgccg ccctggagtt gctgcccagg gagctcttcc cgccactctt catggcagcc 300
tttgacggga gacacagcca gaccctgaag gcaatggtgc aggcctggcc cttcacctgc 360
ctccctctgg gagtgctgat gaagggacaa catctt                           396
<210> 154
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<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 42, 45, 59, 82
<223> n = A,T,C or G
<400> 154
acagcaaacc tcctcacagc ccactggtcc tcaagagggg cnacntcttc acacatcanc 60
acaactacgc attgcctccc tncactcgga aggactatcc tgctgccaag agggtcaagt 120
tggacagtgt cagagtcctg agacagatca gcaacaaccg aaaatgcacc agccccaggt 180
cctcggacac cgaggagaat gtcaagaggc gaacacacaa cgtcttggag cgccagagga 240
ggaacgagct aaaacggagc ttttttgccc tgcgtgacca gatcccggag ttggaaaaca 300
atgaaaaggc ccccaaggta gttatcctta aaaaagccac agcatacatc ctgtccgtcc 360
aagcagagga gcaaaagctc atttctgaag aggact                           396
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<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 15, 17, 202, 280, 339
<223> n = A,T,C or G
<400> 155
tttttttttt tgaananaca ggtctttaat gtacggagtc tcacaaggca caaacaccct 60
caccaggacc aaataaataa ctccacggtt gcaggaaggc gcggtctggg gaggatgcgg 120
catctgagct ctcccagggc tggtgggcga gccgggggtc tgcagtctgt gaggggcctc 180
ctgggtgtgt ccgggcctct anagcgggtc cagtctccag gatggggatc gctcactcac 240
tctccgagtc ggagtagtcc gccacgaggg aggagccgan actgcagggg tgccgcgtgt 300
cgggggtgtc agctgcctcc tgggaggagc ctgctggcna caggggcttg tcctgacggc 360
tcccttcctg ccccctcggg ctgctgcact tggggg                           396
<210> 156
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 11, 30, 32, 37, 309, 332
<223> n = A,T,C or G
<400> 156
gaaggggggc ngggcagggg cggaatgtan anattantgc catgattgaa gatttaagaa 60
acgtgagatt caggattttc accacatccc catttagtta gcttgctcgt ttggctggtg 120
caaatgccag atggattatg aacaatgaca gtaaattaat gcaacataat caggtaatga 180
tgccaagcgt atctggtgtt ccaggtattg tacctttacc ggaacaaatc agtaaatcca 240
caatccctgg cacctgttag gcagctatta acctagtaaa tgctccccca tcccatctca 300
atcagcaang acaatcaaaa acatttgctt tnagtggcag gaacactggt acatttttac 360
ttgctccaag ggctgtgcca acgctccctc tctctg                           396
<210> 157
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 121, 202, 204, 255, 314, 332, 368
<223> n = A,T,C or G
<400> 157
tttttttttt tttttgggga atgtaaatct tttattaaaa cagttgtctt tccacagtag 60
taaagctttg gcacatacag tataaaaaat aatcacccac cataattata ccaaattcct 120
nttatcaact gcatactaag tgttttcaat acaatttttt ccgtataaaa atactgggaa 180
aaattgataa ataacaggta ananaaagat atttctaggc aattactagg atcatttgga 240
aaaagtgagt actgnggata tttaaaatat cacagtaaca agatcatgct tgttcctaca 300
gtattgcggg ccanacactt aagtgaaagc anaagtgttt gggtgacttt cctacttaaa 360
attttggnca tatcatttca aaacatttgc atcttg                           396
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<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 158
tttccgaaga cgggcagctt cagagaagag gattattcgg gagattgctg gtgtggccca 60
tagactcttt ggcatagact ctttcgcagg cagccactct gagtgtggcc agttctataa 120
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<210> 159
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 159
tccgcgcgtt gggaggtgta gcgcggctct gaacgcgctg agggccgttg agtgtcgcag 60
gcggcgaggg cgcgagtgag gagcagaccc aggcatcgcg cgccgagaag gccgggcgtc 120
cccacactga aggtccggaa aggcgacttc cgggggcttt ggcacctggc ggaccctccc 180
ggagcgtcgg cacctgaacg cgaggcgctc cattgcgcgt gcgcgttgag gggcttcccg 240
cacctgatcg cgagacccca acggctggtg gcgtcgcctg cgcgtctcgg ctgagctggc 300
catggcgcag ctgtgcgggc tgaggcggag ccgggcgttt ctcgccctgc tgggatcgct 360
gctcctctct ggggtcctgg cggccgaccg agaacg                           396
<210> 160
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 96, 102, 122, 124, 129, 146, 148, 184, 189, 196, 205, 208,
229, 246, 259, 261, 269, 272, 281, 297, 305, 308, 327, 331,
337, 338, 339, 343, 346, 354, 366, 367, 369, 378, 379, 380,
381, 391, 395
<223> n = A,T,C or G
<400> 160
ggaaaccttc tcaactaaga gaacatcatt tctggcaaac tatttttgtt agctcacaat 60
atatgtcgta cactctacaa tgtaaatagc actganccac ancttacaga aggtaaaaag 120
angnataana acttccttta caaaanantt cctgttgttc ttaatactcc ccattgctta 180
tganaattnt ctatangtct ctcangantg ttcgcaccca tttcttttnt aacttctact 240
aaaaanccat ttacattgna nagtgtacna cntatatttg ngagctaaca aaaaatngtt 300
ttccnganat gatgttcttt tagtttnaga nggttcnnnc aanttnctac tccngcccgc 360
cactgnncnc cacatttnnn naattacacc ncacng                           396
<210> 161
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 271, 273, 325, 364
<223> n = A,T,C or G
<400> 161
tttttgtttg attattttta ttataatgaa attaaactta tgactattac agtatgctca 60
gcttaaaaca tttatgagta ctgcaaggac taacagaaac aggaaaaatc ctactaaaaa 120
tatttgttga tgggaaatca ttgtgaaagc aaacctccaa atattcattt gtaagccata 180
agaggataag cacaaccata tgggaggaga taaccagtct ctcccttcat atatattctt 240
ttttatttct tggtatacct tcccaaaaca nanacattca acagtagtta gaatggccat 300
ctcccaacat tttaaaaaaa ctgcnccccc caatgggtga acaaagtaaa gagtagtaac 360
ctanagttca gctgagtaag ccactgtgga gcctta                           396
<210> 162
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 33, 38, 51, 62, 71, 72, 88, 97, 98, 100, 106, 142, 155, 160,
161, 163, 168, 170, 174, 183, 190, 194, 203, 214, 216, 231,
232, 241, 242, 252, 258, 260, 264, 265, 267, 276, 278, 282,
287, 289, 292, 295, 297, 301, 311, 319, 322, 325
<223> n = A,T,C or G
<221> misc_feature
<222> 330, 337, 341, 342, 347, 348, 354, 356, 361, 367, 368, 375,
379, 385, 391, 394, 395
<223> n = A,T,C or G
<400> 162
tttttttttt tttttttttt tttttttttt ttnggggncc aaattttttt ntttgaagga 60
angggacaaa nnaaaaaact taaggggntg ttttggnncn acttanaaaa aagggaaagg 120
aaaccccaac atgcatgccc tnccttgggg accanggaan ncnccccncn ggtntgggga 180
aantaacccn aggnttaact ttnattatca ctgncnccca gggggggctt nnaaaaaaaa 240
nnttccccca anccaaantn gggnncnccc attttncnca anttggncnc cnggncnccc 300
nattttttga ngggtttcnc cngcncattn agggaanggg nntcaannaa accncncaaa 360
ngggggnnat ttttntcang ggccnatttg ngcnnt                           396
<210> 163
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 163
cactgtccgg ctctaacaca gctattaagt gctacctgcc tctcaggcac tctcctcgcc 60
cagtttctga ggtcagacga gtgtctgcga tgtcttcccg cactctattc ccccagcctc 120
tttctgcttt catgctcagc acatcatctt cctaggcagt ctcttcccca aagtctcacc 180
ttttcttcca atagaaaatt ccgcttgacc tttggtgcac tgcccacttc ccagctccac 240
tggcccaagt ctgagccgga ggcccttgtt ttgggggcgg ggggagagtt ggatgtgatt 300
gcccttgaag aacaaggctg acctgagagg ttcctggcgc cctgaggtgg ctcagcacct 360
gcccagggta ggcctggcat gaggggttag gtcagc                           396
<210> 164
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 164
gacacgcggc ggtgtcctgt gttggccatg gccgactacc tgattagtgg gggcacgtcc 60
tacgtgccag acgacggact cacagcacag cagctcttca actgcggaga cggcctcacc 120
tacaatgact ttctcattct ccctgggtac atcgacttca ctgcagacca ggtggacctg 180
acttctgctc tgaccaagaa aatcactctt aagaccccac tggtttcctc tcccatggac 240
acagtcacag aggctgggat ggccatagca atggcgctta caggcggtat tggcttcatc 300
caccacaact gtacacctga attccaggcc aatgaagttc ggaaagtgaa gaaatatgaa 360
cagggattca tcacagaccc tgtggtcctc agcccc                           396
<210> 165
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 29, 33, 55, 57, 65, 77, 82, 87, 98, 101, 103, 114, 118, 124,
169, 171, 173, 183, 186, 188, 216, 219, 227, 230, 242, 243,
245, 252, 265, 273, 290, 296, 321, 324, 332, 338, 340, 342,
345, 359, 372, 380
<223> n = A,T,C or G
<400> 165
tttttttttt tttttttttt ttttttcang ggncactgag gctttttatt ttgancncaa 60
aaccnccggg gatctancct gnggccnccc cggaaatnac ncnaggctca catnactnta 120
aacncttggg ggaaagggag gcaaaaaaaa caatgacttg ggccaattnc ncnactgcaa 180
agntananct gccaacaggg ctccagggag cttggnttnt gtaaaanttn taaggaagcg 240
gnncnaactc cncggggggg gggcnctaac tancagggac ccctgcaagn gttggncggg 300
ggcctcaacc tgcctgagct nacncaaggg gnggggtntn tntanccaac aggggaccna 360
agggcttgcc tncccacagn ttacttggcc aagggg                           396
<210> 166
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 151, 255
<223> n = A,T,C or G
<400> 166
ttttttcaaa ttcagagcat ttttattaaa agaacaaaat attaaggcac aaaatacatc 60
aatttttcaa atgaaaaccc ttcaaacggt tatgtcctac attcaacgaa acttcttcca 120
aattacggaa taatttaact ttttaaaata naaaaataca agttcttaaa tgcctaaaat 180
ttctccccaa ataaatgttt tcttagtttt aatgaagtct cttcatgcag tactgagctc 240
caatattata atgtncactt ccttaaaaat ctagttttgc cacttatata cattcaatat 300
gtttaaccag tatattaacc agtatattaa ccaatatgtt aaacttcttt taagtataag 360
gcttggtatt ttgtattgct tattgcatgc tttgat                           396
<210> 167
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 167
tggcggcagc ggcggtggcg gtggctgagc agaggacccg gcgggcggcc tcgcgggtca 60
ggacacaatg tttgcacgag gactgaagag gaaatgtgtt ggccacgagg aagacgtgga 120
gggagccctg gccggcttga agacagtgtc ctcatacagc ctgcagcggc agtcgctcct 180
ggacatgtct ctggtgaagt tgcagctttg ccacatgctt gtggagccca atctgtgccg 240
ctcagtcctc attgccaaca cggtccggca gatccaagag gagatgacgc aggatgggac 300
gtggcgcaca gtggcacccc aggctgcaga gcgggcgccg ctcgaccgct tggtctccac 360
ggagatcctg tgccgtgcag cgtgggggca agaggg                           396
<210> 168
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 168
taggatggta agagtattat aaggattggt acaaggcatg atgagtcctt ttgcttttag 60
gcttttgact tctggtttta gactttcttt agcttctgtt gttagacaac attgtgcaag 120
cttggttttt ataagtttgc atggattaaa ctgaacttaa tgaaattgtc cctcccccca 180
aattctcagc acaattttta ggcccacaag gagtcaagca cctcaaggag atcttcagtt 240
tgaacttggt gtagacacag ggatactgat gaatcaatat tcaaattagc tgttacctac 300
ttaagaaaga gaggagacct tggggatttc gaggaagggt tcataaggga gattttagct 360
gagaaatacc atttgcacag tcaatcactt ctgacc                           396
<210> 169
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 16, 58, 76, 84, 99, 111, 114, 124, 136, 140, 161, 167, 184,
189, 204, 206, 210, 228, 230, 232, 243, 275, 277, 289, 301,
303, 312, 319, 321, 323, 325, 333, 345, 349, 355, 359, 364,
365, 372, 375, 377, 379, 383, 387, 389, 394, 396
<223> n = A,T,C or G
<400> 169
tttttttttt tttcanaatt aaattcttta atacaaaatg cttttttttt tttaaaanat 60
atctgtattt ctttgncgtt gttnaaaaat aaatatgtnc tacggaatat ntcnaaaaac 120
tgcnctaaaa acaaanacgn gatgttaata tcttttcccc ncaattntta cggataaaca 180
gtanccccna taaataaatg atancnaatn ttaaaattaa aaaagganan anatttagta 240
tgnaaaattc tctatttttt cttggtttgg ttttncntat aaaaaacana atagcaatgt 300
ntnttttatc anaatcccnt ntntncctaa acnttttttt ttttntttnc ccccnaatnc 360
aagnngccaa anatntntnt agnatgnana tgtntn                           396
<210> 170
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 170
tgagaagtac catgccgctt ctgcagagga acaggcaacc atcgaacgca acccctacac 60
catcttccat caagcactga aaaactgtga gcctatgatt gggctggtac ccatcctcaa 120
gggaggccgt ttctaccagg tccctgtacc cctacccgac cggcgtcgcc gcttcctagc 180
catgaagtgg atgatcactg agtgccggga taaaaagcac cagcggacac tgatgccgga 240
gaagctgtca cacaagctgc tggaggcttt ccataaccag ggccccgtga tcaagaggaa 300
gcatgacttg cacaagatgg cagaggccaa ccgtgccctg gcccactacc gctggtggta 360
gagtctccag gaggagccca gggccctctg cgcaag                           396
<210> 171
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 133, 224, 260, 264, 268, 279, 283, 317, 322, 338, 360, 370,
371, 378
<223> n = A,T,C or G
<400> 171
ggtcctcgtc gtggtgagcg cagccactca ggctggtcct gggggtgggg ctgtagggga 60
aagtgctaaa gccgctgagt gaagtaagaa ctctgctaga gaggaaaatg ggcttgcttt 120
catcatcatc ctnctcagct ggtggggtca agtgggaagt tctgtcactg ggatctggtt 180
cagtgtctca agaccttgcc ccaccacgga aagccttttt cacntacccc aaaggacttg 240
gagagatgtt agaagatggn tctnaaanat tcctctgcna atntgttttt agctatcaag 300
tggcttcccc ccttaancag gnaaaacatg atcagcangt tgctcggatg gaaaaactan 360
cttggtttgn naaaaaanct ggaggcttga caatgg                           396
<210> 172
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 239, 242, 244, 246, 249, 257, 260, 314, 329, 355, 372, 378,
385, 387, 388, 395
<223> n = A,T,C or G
<400> 172
agccttgggc caccctcttg gagcatctgg ctgtcgaatt cttgtgaccc tgttacacac 60
actggagaga atgggcagaa gtcgtggtgt tgcagccctg tgcattgggg gtgggatggg 120
aatagcaatg tgtgttcaga gagaatgaat tgcttaaact ttgaacaacc tcaatttctt 180
tttaaactaa taaagtacta ggttgcaata tgtgaaaaaa aaaaaaaaag ggcggccgnt 240
cnantntana gggcccnttn aaacccgttg atcaacctcg actgtgcctt ctagttgcca 300
gccatctgtt gttngcccct cccccgtgnc tttcttgacc ttgaaagggg ccccncccct 360
gtctttccta anaaaaanga agaantnncc ttccnt                           396
<210> 173
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 209, 210, 232, 244, 270, 275, 284, 341, 343, 349, 359, 364,
368, 376, 380, 382, 388, 389, 390, 392
<223> n = A,T,C or G
<400> 173
aagcatgtgg atatgtttag ctacgtttac tcacagccag cgaactgaca ttaaaataac 60
taacaaacag attcttttat gtgatgctgg aactcttgac agctataatt attattcaga 120
aatgactttt tgaaagtaaa agcagcataa agaatttgtc acaggaaggc tgtctcagat 180
aaattatggt aaaattttgc aggggacann ctttttaaga cttgcacaat tnccggatcc 240
tgcnctgact ttggaaaagg catatatgtn ctagnggcat gganaatgcc ccatactcat 300
gcatgcaaat taaacaacca agtttgaatc tttttggggg ngngctatnc tttaacccng 360
tacnggcntt attatntaan gnccctgnnn cntgtg                           396
<210> 174
<211> 924
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 174
cctgacgacc cggcgacggc gacgtctctt ttgactaaaa gacagtgtcc agtgctccag 60
cctaggagtc tacggggacc gcctcccgcg ccgccaccat gcccaacttc tctggcaact 120
ggaaaatcat ccgatcggaa aacttcgagg aattgctcaa agtgctgggg gtgaatgtga 180
tgctgaggaa gattgctgtg gctgcagcgt ccaagccagc agtggagatc aaacaggagg 240
gagacacttt ctacatcaaa acctccacca ccgtgcgcac cacagagatt aacttcaagg 300
ttggggagga gtttgaggag cagactgtgg atgggaggcc ctgtaagagc ctggtgaaat 360
gggagagtga gaataaaatg gtctgtgagc agaagctcct gaagggagag ggccccaaga 420
cctcgtggac cagagaactg accaacgatg gggaactgat cctgaccatg acggcggatg 480
acgttgtgtg caccagggtc tacgtccgag agtgagtggc cacaggtaga accgcggccg 540
aagcccacca ctggccatgc tcaccgccct gcttcactgc cccctccgtc ccaccccctc 600
cttctaggat agcgctcccc ttaccccagt cacttctggg ggtcactggg atgcctcttg 660
cagggtcttg ctttctttga cctcttctct cctcccctac accaacaaag aggaatggct 720
gcaagagccc agatcaccca ttccgggttc actccccgcc tccccaagtc agcagtccta 780
gccccaaacc agcccagagc agggtctctc taaaggggac ttgagggcct gagcaggaaa 840
gactggccct ctagcttcta ccctttgtcc ctgtagccta tacagtttag aatatttatt 900
tgttaatttt attaaaatgc ttta                                        924
<210> 175
<211> 3321
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 175
atgaagattt tgatacttgg tatttttctg tttttatgta gtaccccagc ctgggcgaaa 60
gaaaagcatt attacattgg aattattgaa acgacttggg attatgcctc tgaccatggg 120
gaaaagaaac ttatttctgt tgacacggaa cattccaata tctatcttca aaatggccca 180
gatagaattg ggagactata taagaaggcc ctttatcttc agtacacaga tgaaaccttt 240
aggacaacta tagaaaaacc ggtctggctt gggtttttag gccctattat caaagctgaa 300
actggagata aagtttatgt acacttaaaa aaccttgcct ctaggcccta cacctttcat 360
tcacatggaa taacttacta taaggaacat gagggggcca tctaccctga taacaccaca 420
gattttcaaa gagcagatga caaagtatat ccaggagagc agtatacata catgttgctt 480
gccactgaag aacaaagtcc tggggaagga gatggcaatt gtgtgactag gatttaccat 540
tcccacattg atgctccaaa agatattgcc tcaggactca tcggaccttt aataatctgt 600
aaaaaagatt ctctagataa agaaaaagaa aaacatattg accgagaatt tgtggtgatg 660
ttttctgtgg tggatgaaaa tttcagctgg tacctagaag acaacattaa aacctactgc 720
tcagaaccag agaaagttga caaagacaac gaagacttcc aggagagtaa cagaatgtat 780
tctgtgaatg gatacacttt tggaagtctc ccaggactct ccatgtgtgc tgaagacaga 840
gtaaaatggt acctttttgg tatgggtaat gaagttgatg tgcacgcagc tttctttcac 900
gggcaagcac tgactaacaa gaactaccgt attgacacaa tcaacctctt tcctgctacc 960
ctgtttgatg cttatatggt ggcccagaac cctggagaat ggatgctcag ctgtcagaat 1020
ctaaaccatc tgaaagccgg tttgcaagcc tttttccagg tccaggagtg taacaagtct 1080
tcatcaaagg ataatatccg tgggaagcat gttagacact actacattgc cgctgaggaa 1140
atcatctgga actatgctcc ctctggtata gacatcttca ctaaagaaaa cttaacagca 1200
cctggaagtg actcagcggt gttttttgaa caaggtacca caagaattgg aggctcttat 1260
aaaaagctgg tttatcgtga gtacacagat gcctccttca caaatcgaaa ggagagaggc 1320
cctgaagaag agcatcttgg catcctgggt cctgtcattt gggcagaggt gggagacacc 1380
atcagagtaa ccttccataa caaaggagca tatcccctca gtattgagcc gattggggtg 1440
agattcaata agaacaacga gggcacatac tattccccaa attacaaccc ccagagcaga 1500
agtgtgcctc cttcagcctc ccatgtggca cccacagaaa cattcaccta tgaatggact 1560
gtccccaaag aagtaggacc cactaatgca gatcctgtgt gtctagctaa gatgtattat 1620
tctgctgtgg atcccactaa agatatattc actgggctta ttgggccaat gaaaatatgc 1680
aagaaaggaa gtttacatgc aaatgggaga cagaaagatg tagacaagga attctatttg 1740
tttcctacag tatttgatga gaatgagagt ttactcctgg aagataatat tagaatgttt 1800
acaactgcac ctgatcaggt ggataaggaa gatgaagact ttcaggaatc taataaaatg 1860
cactccatga atggattcat gtatgggaat cagccgggtc tcactatgtg caaaggagat 1920
tcggtcgtgt ggtacttatt cagcgccgga aatgaggccg atgtacatgg aatatacttt 1980
tcaggaaaca catatctgtg gagaggagaa cggagagaca cagcaaacct cttccctcaa 2040
acaagtctta cgctccacat gtggcctgac acagagggga cttttaatgt tgaatgcctt 2100
acaactgatc attacacagg cggcatgaag caaaaatata ctgtgaacca atgcaggcgg 2160
cagtctgagg attccacctt ctacctggga gagaggacat actatatcgc agcagtggag 2220
gtggaatggg attattcccc acaaagggag tgggaaaagg agctgcatca tttacaagag 2280
cagaatgttt caaatgcatt tttagataag ggagagtttt acataggctc aaagtacaag 2340
aaagttgtgt atcggcagta tactgatagc acattccgtg ttccagtgga gagaaaagct 2400
gaagaagaac atctgggaat tctaggtcca caacttcatg cagatgttgg agacaaagtc 2460
aaaattatct ttaaaaacat ggccacaagg ccctactcaa tacatgccca tggggtacaa 2520
acagagagtt ctacagttac tccaacatta ccaggtgaaa ctctcactta cgtatggaaa 2580
atcccagaaa gatctggagc tggaacagag gattctgctt gtattccatg ggcttattat 2640
tcaactgtgg atcaagttaa ggacctctac agtggattaa ttggccccct gattgtttgt 2700
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cattaaaaga gactggagca t                                           3321
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<210> 177
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<212> DNA
<213> Homo sapiens
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gagtaataag tcatgccaag ctctctctgc tatatcccaa agtctctgcg ggtcagcccc 1080
caagggccat gcagcttctg tctcccaaca ctaagttcac ttcgtgtctc tcacggcaga 1140
gaggaaactt agtattcctt ggagacctga agggatgcag tgagcttaag aattttcaag 1200
agcttatcaa tcagtcagcc cttgttcatc cccgagtgga tgtgtggtgg tattgtggtg 1260
gacctttact gggcactctg ccaaataact agtgtggcac ttgtgcttta gtccatttgg 1320
ctatcccttt caccctggca tttcatcaac caaaaaaaaa aaaaaaaaaa            1370
<210> 183
<211> 2060
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 2003
<223> n = A,T,C or G
<400> 183
gtttcagggg aggagacaag gtttcttgtt tgccgtatat gctcctgcag agaagaggaa 60
gtgaccgtgg aggccatctg gccctgtgtt ttgatatggc aaaattaatg aatgcaatca 120
gaagaccttt gagcaagaaa gtaccctgga acaacccaat ttggactgca agtattagtt 180
gggtcttcca ggtgcctctc acagcagcag tcatggcagc agtgactcta gccatgtcca 240
tgaccaactg ctgcataaca aatagccccg agactcagca gcttacaaca gggtccccag 300
cccacagact ggcactggtc catggcttgt taggaacctg actgcgcagc agaaggtgag 360
tgagcattac tgcctgagct ctgcctcctg tcagatcatc aggggcatta gattctcata 420
ggagcgtgaa ccctattgca aaccgcgcat gcgaaggatg tacgttgcgt gctccttatg 480
agaatctaac taatgcctga tgatttgagg tggggcagtt tcatccccaa accatctctc 540
tcccttcatg tccatggaaa aattgtcttc tacaaaacca gtccgtggtg ccaaaaaggt 600
tggagactgc tggtttacaa ccgcaatgaa cattcatcat cccacacagt gtcagagggt 660
cgggaacacg ggtgccctgc ctgtgtgctt ccggttccag atttctcagt gggttgtgat 720
caaggtatca gcggaggccg tattcatctg caagcttgac caggaataga agagccactt 780
catgggtggc tcactcagat gccagcaggt cagtgctggt ggctggcagg cagcctcagc 840
tcctcacctc atggatctct cctgagcaca gttttcctgt ccttacaacc tggtagctgg 900
cttctccaga gcaggtgact caggagagga caaggtgaga gcccagcacc ttatggtcta 960
gtctcagaag tcacacgcca tcatttctgc aatgtcattt tggggttcca ggtcagctgt 1020
atcactgtgg gaggtgagta tatagatgtc ctagaccatt caggctgcta tgacagaaca 1080
ccatgaactg agtggctcat gaacaacaga aatttcccac agttctgtag gctgggaaat 1140
ccaagatcaa ggtggcagca ggttcagcgt ctgctaagct cctgcttttc atggattgca 1200
tcttctcact gtgtcctcac gtgatggaca gagcaaatga gctctcaggc actagtccca 1260
gccatgagga ctctgctttc atgactcatc actccgcaaa ggcccacctc catcagaaga 1320
cagctgctaa ctgcagctgc catcctccaa gacgggagac acagaattgg gggacatata 1380
cattgagatc tgaaaggcct ggacagcaac aggtggggat cgtgggggca tcttggaggg 1440
tggctgccgc agtaacattt ctgacccatg ctttctgctt gcactcatct cctgcctttg 1500
atcttcatta tctcargcag tccccacaac gactgtatct aggagttcat tttaccctca 1560
ttttacagat gaaacgtctc agagggtaat gtgcttgccc agtgtctcac aaatgcaaag 1620
tcactgaggt aggatttcaa cctaggtcca atcatctctg cagcattagg ggttcaccat 1680
tgccatagac ttaactgtgt cccccaaaat ttgtatgttg aagccctacc agcctccccc 1740
ccccaatgtg ctgatgtttg gagaaagggc ctttgggagg taattaggtt tagatgagat 1800
catgagggtg ggactctcat aatggcatta atgccatcag gtgaagagat accagagacc 1860
ttgtgtcctc tctctctgca atgtgaggac acagtgagaa ggcagctgtc tgcaagctgg 1920
gaagagagta ctgaccagga acttaatcag agggcatctt gatcttggac ttcccagcct 1980
ccagaactct gaaaagttaa tgnctattat ttaagccacg cagtctatgg aattttgtta 2040
gagccaaccc caagcttact                                             2060
<210> 184
<211> 3079
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 184
ggcacaaagt tgggggccgc gaagatgagg ctgtccccgg cgcccctgaa gctgagccgg 60
actccggcac tgctggccct ggcgctgccc ctggccgcgg cgctggcctt ctccgacgag 120
accctggaca aagtgcccaa gtcagagggc tactgtagcc gtatcctgcg cgcccagggc 180
acgcggcgcg agggctacac cgagttcagc ctccgcgtgg agggcgaccc cgacttctac 240
aagccgggaa ccagctaccg cgtaacactt tcagctgctc ctccctccta cttcagagga 300
ttcacattaa ttgccctcag agagaacaga gagggtgata aggaagaaga ccatgctggg 360
accttccaga tcatagacga agaagaaact cagtttatga gcaattgccc tgttgcagtc 420
actgaaagca ctccacggag gaggacccgg atccaggtgt tttggatagc accaccagcg 480
ggaacaggct gcgtgattct gaaggccagc atcgtacaaa aacgcattat ttattttcaa 540
gatgagggct ctctgaccaa gaaactttgt gaacaagatt ccacatttga tggggtgact 600
gacaaaccca tcttagactg ctgtgcctgc ggaactgcca agtacagact cacattttat 660
gggaattggt ccgagaagac acacccaaag gattaccctc gtcgggccaa ccactggtct 720
gcgatcatcg gaggatccca ctccaagaat tatgtactgt gggaatatgg aggatatgcc 780
agcgaaggcg tcaaacaagt tgcagaattg ggctcacccg tgaaaatgga ggaagaaatt 840
cgacaacaga gtgatgaggt cctcaccgtc atcaaagcca aagcccaatg gccagcctgg 900
cagcctctca acgtgagagc agcaccttca gctgaatttt ccgtggacag aacgcgccat 960
ttaatgtcct tcctgaccat gatgggccct agtcccgact ggaacgtagg cttatctgca 1020
gaagatctgt gcaccaagga atgtggctgg gtccagaagg tggtgcaaga cctgattccc 1080
tgggacgctg gcaccgacag cggggtgacc tatgagtcac ccaacaaacc caccattccc 1140
caggagaaaa tccggcccct gaccagcctg gaccatcctc agagtccttt ctatgaccca 1200
gagggtgggt ccatcactca agtagccaga gttgtcatcg agagaatcgc acggaagggt 1260
gaacaatgca atattgtacc tgacaatgtc gatgatattg tagctgacct ggctccagaa 1320
gagaaagatg aagatgacac ccctgaaacc tgcatctact ccaactggtc cccatggtcc 1380
gcctgcagct cctccacctg tgacaaaggc aagaggatgc gacagcgcat gctgaaagca 1440
cagctggacc tcagcgtccc ctgccctgac acccaggact tccagccctg catgggccct 1500
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tgcagcatct cctgcggcat gggcatgagg tcccgggaga ggtatgtgaa gcagttcccg 1620
gaggacggct ccgtgtgcac gctgcccact gaggaaatgg agaagtgcac ggtcaacgag 1680
gagtgctctc ccagcagctg cctgatgacc gagtggggcg agtgggacga gtgcagcgcc 1740
acctgcggca tgggcatgaa gaagcggcac cgcatgatca agatgaaccc cgcagatggc 1800
tccatgtgca aagccgagac atcacaggca gagaagtgca tgatgccaga gtgccacacc 1860
atcccatgct tgctgtcccc atggtccgag tggagtgact gcagcgtgac ctgcgggaag 1920
ggcatgcgaa cccgacagcg gatgctcaag tctctggcag aacttggaga ctgcaatgag 1980
gatctggagc aggtggagaa gtgcatgctc cctgaatgcc ccattgactg tgagctcacc 2040
gagtggtccc agtggtcgga atgtaacaag tcatgtggga aaggccacgt gattcgaacc 2100
cggatgatcc aaatggagcc tcagtttgga ggtgcaccct gcccagagac tgtgcagcga 2160
aaaaagtgcc gcatccgaaa atgccttcga aatccatcca tccaaaagcc acgctggagg 2220
gaggcccgag agagccggcg gagtgagcag ctgaaggaag agtctgaagg ggagcagttc 2280
ccaggttgta ggatgcgccc atggacggcc tggtcagaat gcaccaaact gtgcggaggt 2340
ggaattcagg aacgttacat gactgtaaag aagagattca aaagctccca gtttaccagc 2400
tgcaaagaca agaaggagat cagagcatgc aatgttcatc cttgttagca agggtacgag 2460
ttccccaggg ctgcactcta gattccagag tcaccaatgg ctggattatt tgcttgttta 2520
agacaattta aattgtgtac gctagttttc atttttgcag tgtggttcgc ccagtagtct 2580
tgtggatgcc agagacatcc tttctgaata cttcttgatg ggtacaggct gagtggggcg 2640
ccctcacctc cagccagcct cttcctgcag aggagtagtg tcagccacct tgtactaagc 2700
tgaaacatgt ccctctggag cttccacctg gccagggagg acggagactt tgacctactc 2760
cacatggaga ggcaaccatg tctggaagtg actatgcctg agtcccaggg tgcggcaggt 2820
aggaaacatt cacagatgaa gacagcagat tccccacatt ctcatctttg gcctgttcaa 2880
tgaaaccatt gtttgcccat ctcttcttag tggaacttta ggtctctttt caagtctcct 2940
cagtcatcaa tagttcctgg ggaaaaacag agctggtaga cttgaagagg agcattgatg 3000
ttgggtggct tttgttcttt cactgagaaa ttcggaatac atttgtctca cccctgatat 3060
tggttcctga tgccccagc                                              3079
<210> 185
<211> 3000
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 185
gtttcagggg aggagacaag gtttcttgtt tgccgtatat gctcctgcag agaagaggaa 60
gtgaccgtgg aggccatctg gccctgtgtt ttgatatggc aaaattaatg aatgcaatca 120
gaagaccttt gagcaagaaa gtaccctgga acaacccaat ttggactgca agtattagtt 180
gggtcttcca ggtgcctctc acagcagcag tcatggcagc agtgactcta gccatgtcca 240
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cccacagact ggcactggtc catggcttgt taggaacctg actgcgcagc agaaggtgag 360
tgagcattac tgcctgagct ctgcctcctg tcagatcatc aggggcatta gattctcata 420
ggagcgtgaa ccctattgca aaccgcgcat gcgaaggatg tacgttgcgt gctccttatg 480
agaatctaac taatgcctga tgatttgagg tggggcagtt tcatccccaa accatctctc 540
tcccttcatg tccatggaaa aattgtcttc tacaaaacca gtccgtggtg ccaaaaaggt 600
tggagactgc tggtttacaa ccgcaatgaa cattcatcat cccacacagt gtcagagggt 660
cgggaacacg ggtgccctgc ctgtgtgctt ccggttccag atttctcagt gggttgtgat 720
caaggtatca gcggaggccg tattcatctg caagcttgac caggaataga agagccactt 780
catgggtggc tcactcagat gccagcaggt cagtgctggt ggctggcagg cagcctcagc 840
tcctcacctc atggatctct cctgagcaca gttttcctgt ccttacaacc tggtagctgg 900
cttctccaga gcaggtgact caggagagga caaggtgaga gccacagcac cttatggtct 960
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acagctgcta actgcagctg ccatcctcca agacgggaga cacagaattg ggggacatat 1380
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gatcttcatt atctcaggca gtccccacaa cgactgtatc taggagttca ttttaccctc 1560
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tatctaatag agacatagtg tctgtggtct gatgttaatt ttaggaatta gccgtcactg 2280
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tctttgctaa cccataacca actattgtat caggactatt atgccactac agatgatgca 2400
gtttgggttt actgtttctc accatttaga caatacttca tcaaatatat ttctgtatga 2460
ctttagtgat atcagttttt gattcattcc tgcatagatc tgggcaaatt gtagacctta 2520
ggaggtgtat tcaccatcca gttctctgga actgcttatg acatttttct ctgagctttc 2580
ttgtcccaaa aggagccttc ctaaaatagt ctttaagtgc ctttaaaaag agaaagagaa 2640
attaagagaa aaaaaacccc aaactcattc ctttactctg atgtgacagt cctcccagga 2700
cactgcagtg gcctgagttt tgctgttaat ttcattcact tatgtttggg ctatgtaaat 2760
tctgcctaga gctggaatgt cattatgtaa agaaatattt tttgtttata ttctttaata 2820
gtaccagtaa tgtatatctt attcagcttc gagaatataa ttgggttgtt tataaaaacc 2880
acacatcatc aaactcacat tgtaacgatt atttcacttt tcaaaaaaaa tggcattaga 2940
aaaacttgaa tgatgttagt tatcttaaag aagtgtgtac tatgtttaaa aaaaaaaaaa 3000
<210> 186
<211> 807
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 186
Met Arg Leu Ser Pro Ala Pro Leu Lys Leu Ser Arg Thr Pro Ala Leu
1               5                  10                  15
Leu Ala Leu Ala Leu Pro Leu Ala Ala Ala Leu Ala Phe Ser Asp Glu
20                  25                  30
Thr Leu Asp Lys Val Pro Lys Ser Glu Gly Tyr Cys Ser Arg Ile Leu
35                  40                  45
Arg Ala Gln Gly Thr Arg Arg Glu Gly Tyr Thr Glu Phe Ser Leu Arg
50                  55                  60
Val Glu Gly Asp Pro Asp Phe Tyr Lys Pro Gly Thr Ser Tyr Arg Val
65                  70                  75                  80
Thr Leu Ser Ala Ala Pro Pro Ser Tyr Phe Arg Gly Phe Thr Leu Ile
85                  90                  95
Ala Leu Arg Glu Asn Arg Glu Gly Asp Lys Glu Glu Asp His Ala Gly
100                 105                 110
Thr Phe Gln Ile Ile Asp Glu Glu Glu Thr Gln Phe Met Ser Asn Cys
115                 120                 125
Pro Val Ala Val Thr Glu Ser Thr Pro Arg Arg Arg Thr Arg Ile Gln
130                 135                 140
Val Phe Trp Ile Ala Pro Pro Ala Gly Thr Gly Cys Val Ile Leu Lys
145                 150                 155                 160
Ala Ser Ile Val Gln Lys Arg Ile Ile Tyr Phe Gln Asp Glu Gly Ser
165                 170                 175
Leu Thr Lys Lys Leu Cys Glu Gln Asp Ser Thr Phe Asp Gly Val Thr
180                 185                 190
Asp Lys Pro Ile Leu Asp Cys Cys Ala Cys Gly Thr Ala Lys Tyr Arg
195                 200                 205
Leu Thr Phe Tyr Gly Asn Trp Ser Glu Lys Thr His Pro Lys Asp Tyr
210                 215                 220
Pro Arg Arg Ala Asn His Trp Ser Ala Ile Ile Gly Gly Ser His Ser
225                 230                 235                 240
Lys Asn Tyr Val Leu Trp Glu Tyr Gly Gly Tyr Ala Ser Glu Gly Val
245                 250                 255
Lys Gln Val Ala Glu Leu Gly Ser Pro Val Lys Met Glu Glu Glu Ile
260                 265                 270
Arg Gln Gln Ser Asp Glu Val Leu Thr Val Ile Lys Ala Lys Ala Gln
275                 280                 285
Trp Pro Ala Trp Gln Pro Leu Asn Val Arg Ala Ala Pro Ser Ala Glu
290                 295                 300
Phe Ser Val Asp Arg Thr Arg His Leu Met Ser Phe Leu Thr Met Met
305                 310                 315                 320
Gly Pro Ser Pro Asp Trp Asn Val Gly Leu Ser Ala Glu Asp Leu Cys
325                 330                 335
Thr Lys Glu Cys Gly Trp Val Gln Lys Val Val Gln Asp Leu Ile Pro
340                 345                 350
Trp Asp Ala Gly Thr Asp Ser Gly Val Thr Tyr Glu Ser Pro Asn Lys
355                 360                 365
Pro Thr Ile Pro Gln Glu Lys Ile Arg Pro Leu Thr Ser Leu Asp His
370                 375                 380
Pro Gln Ser Pro Phe Tyr Asp Pro Glu Gly Gly Ser Ile Thr Gln Val
385                 390                 395                 400
Ala Arg Val Val Ile Glu Arg Ile Ala Arg Lys Gly Glu Gln Cys Asn
405                 410                 415
Ile Val Pro Asp Asn Val Asp Asp Ile Val Ala Asp Leu Ala Pro Glu
420                 425                 430
Glu Lys Asp Glu Asp Asp Thr Pro Glu Thr Cys Ile Tyr Ser Asn Trp
435                 440                 445
Ser Pro Trp Ser Ala Cys Ser Ser Ser Thr Cys Asp Lys Gly Lys Arg
450                 455                 460
Met Arg Gln Arg Met Leu Lys Ala Gln Leu Asp Leu Ser Val Pro Cys
465                 470                 475                 480
Pro Asp Thr Gln Asp Phe Gln Pro Cys Met Gly Pro Gly Cys Ser Asp
485                 490                 495
Glu Asp Gly Ser Thr Cys Thr Met Ser Glu Trp Ile Thr Trp Ser Pro
500                 505                 510
Cys Ser Ile Ser Cys Gly Met Gly Met Arg Ser Arg Glu Arg Tyr Val
515                 520                 525
Lys Gln Phe Pro Glu Asp Gly Ser Val Cys Thr Leu Pro Thr Glu Glu
530                 535                 540
Met Glu Lys Cys Thr Val Asn Glu Glu Cys Ser Pro Ser Ser Cys Leu
545                 550                 555                 560
Met Thr Glu Trp Gly Glu Trp Asp Glu Cys Ser Ala Thr Cys Gly Met
565                 570                 575
Gly Met Lys Lys Arg His Arg Met Ile Lys Met Asn Pro Ala Asp Gly
580                 585                 590
Ser Met Cys Lys Ala Glu Thr Ser Gln Ala Glu Lys Cys Met Met Pro
595                 600                 605
Glu Cys His Thr Ile Pro Cys Leu Leu Ser Pro Trp Ser Glu Trp Ser
610                 615                 620
Asp Cys Ser Val Thr Cys Gly Lys Gly Met Arg Thr Arg Gln Arg Met
625                 630                 635                 640
Leu Lys Ser Leu Ala Glu Leu Gly Asp Cys Asn Glu Asp Leu Glu Gln
645                 650                 655
Val Glu Lys Cys Met Leu Pro Glu Cys Pro Ile Asp Cys Glu Leu Thr
660                 665                 670
Glu Trp Ser Gln Trp Ser Glu Cys Asn Lys Ser Cys Gly Lys Gly His
675                 680                 685
Val Ile Arg Thr Arg Met Ile Gln Met Glu Pro Gln Phe Gly Gly Ala
690                 695                 700
Pro Cys Pro Glu Thr Val Gln Arg Lys Lys Cys Arg Ile Arg Lys Cys
705                 710                 715                 720
Leu Arg Asn Pro Ser Ile Gln Lys Pro Arg Trp Arg Glu Ala Arg Glu
725                 730                 735
Ser Arg Arg Ser Glu Gln Leu Lys Glu Glu Ser Glu Gly Glu Gln Phe
740                 745                 750
Pro Gly Cys Arg Met Arg Pro Trp Thr Ala Trp Ser Glu Cys Thr Lys
755                 760                 765
Leu Cys Gly Gly Gly Ile Gln Glu Arg Tyr Met Thr Val Lys Lys Arg
770                 775                 780
Phe Lys Ser Ser Gln Phe Thr Ser Cys Lys Asp Lys Lys Glu Ile Arg
785                 790                 795                 800
Ala Cys Asn Val His Pro Cys
805
<210> 187
<211> 892
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 187
tttattgatg tttcaacagg cacttattca aataagttat atatttgaaa acagccatgg 60
taagcatcct tggcttctca cccattcctc atgtggcatg ctttctagac tttaaaatga 120
ggtaccctga atagcactaa gtgctctgta agctcaagga atctgtgcag tgctacaaag 180
cccacaggca gagaaagaac tcctcaagtg cttgtggtca gagactaggt tccatatgag 240
gcacacctat gatgaaggtc ttcacctcca gaaggtgaca ctgttcagag atcctcattt 300
cctggagagt gggagaaaat ccctcctttg ggaaatccct tttcccagca gcagagccca 360
cctcattgct tagtgatcat ttggaaggca ctgagagcct tcaggggctg acagcagaga 420
aatgaaaatg agtacagttc agatggtgga agaagcatgg cagtgacatc ttccatgctc 480
tttttctcag tgtctgcaac tccaaagatc aaggccataa cccaggagac catcaacgga 540
agattagttc tttgtcaagt gaatgaaatc caaaagcacg catgagacca atgaaagttt 600
ccgcctgttg taaaatctat tttcccccaa ggaaagtcct tgcacagaca ccagtgagtg 660
agttctaaaa gatacccttg gaattatcag actcagaaac ttttattttt tttttctgta 720
acagtctcac cagacttctc ataatgctct taatatattg cacttttcta atcaaagtgc 780
gagtttatga gggtaaagct ctactttcct actgcagcct tcagattctc atcattttgc 840
atctattttg tagccaataa aactccgcac tagcaaaaaa aaaaaaaaaa aa         892
<210> 188
<211> 1448
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 1124
<223> n = A,T,C or G
<400> 188
tgtgactcac atttctttta ctgtgacaca ataatgtgat cctaaaactg gcttatcctt 60
gagtgtttac aactcaaaca actttttgaa tgcagtagtt tttttttttt aaaaacaaac 120
ttttatgtca aatttttttt cttagaagta gtcttcatta ttataaattt gtacaccaaa 180
aggccatggg gaactttgtg caagtacctc atcgctgagc aaatggagct tgctatgttt 240
taatttcaga aaatttcctc atatacgtag tgtgtagaat caagtctttt aataattcat 300
tttttcttca taatatttac tcaaagttaa gcttaaaaat aagttttatc ttaaaatcat 360
atttgaagac agtaagacag taaactattt taggaagtca acccccattg cactctgtgg 420
cagttattct ggtaaaaata ggcaaaagtg acctgaatct acaatggtgt cccaaagtaa 480
ccaagtaaga gagattgtaa atgataaacc gagctttaaa ggataaagtg ttaataaaga 540
aaggaagctg ggcacatgtc aaaaagggag atcgaaatgt taggtaatca tttagaaagg 600
acagaaaata tttaaagtgg ctcataggta atgaatattt ctgacttaga tgtaaatcca 660
tctggaatct ttacatcctt tgccagctga aacaagaaag tgaagggaca atgatatttc 720
atggtcagtt tattttgtaa gagacagaag aaattatatc tatacattac cttgtagcag 780
cagtacctgg aagccccagc ccgtcacaga agtgtggagg ggggctcctg actagacaat 840
ttccctagcc cttgtgattt gaagcatgaa agttctggca ggttatgagc agcactaggg 900
ataaagtatg gttttatttt ggtgtaattt aggtttttca acaaagccct tgtctaaaat 960
aaaaggcatt attggaaata tttgaaaact agaaaatgat ggataaaagg gctgataaga 1020
aaatttctga ctgtcagtag aagtgagata agatcctcag aggaaacagt aagaagggat 1080
aatcattaag atagtaaaac aggcaaagca gaatcacatg tgcncacaca catacacatg 1140
taaacattgg aatgcataag ttttaatatt ttagcgctat cagtttctaa atgcattaat 1200
tactaactgc cctctcccaa gattcattta gttcaaacag tatccgtaaa ctaggaataa 1260
tgccacatgc attcaatggg atcttttaag tactcttcag tttgttccaa gaaatgtgcc 1320
tactgaaatc aaattaattt gtattcaatg tgtacttcaa gactgctaat tgtttcatct 1380
gaaagcctac aatgaatcat tgttcamcct tgaaaaataa aattttgtaa atcaaaaaaa 1440
aaaaaaaa                                                          1448
<210> 189
<211> 460
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 189
ttttgggagc acggactgtc agttctctgg gaagtggtca gcgcatcctg cagggcttct 60
cctcctctgt cttttggaga accagggctc ttctcagggg ctctagggac tgccaggctg 120
tttcagccag gaaggccaaa atcaagagtg agatgtagaa agttgtaaaa tagaaaaagt 180
ggagttggtg aatcggttgt tctttcctca catttggatg attgtcataa ggtttttagc 240
atgttcctcc ttttcttcac cctccccttt tttcttctat taatcaagag aaacttcaaa 300
gttaatggga tggtcggatc tcacaggctg agaactcgtt cacctccaag catttcatga 360
aaaagctgct tcttattaat catacaaact ctcaccatga tgtgaagagt ttcacaaatc 420
cttcaaaata aaaagtaatg acttaaaaaa aaaaaaaaaa                       460
<210> 190
<211> 481
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 190
aggtggtgga agaaactgtg gcacgaggtg actgaggtat ctgtgggagc taatcctgtc 60
caggtggaag taggagaatt tgatgatggt gcagaggaaa ccgaagagga ggtggtggcg 120
gaaaatccct gccagaacca ccactgcaaa cacggcaagg tgtgcgagct ggatgagaac 180
aacaccccca tgtgcgtgtg ccaggacccc accagctgcc cagcccccat tggcgagttt 240
gagaaggtgt gcagcaatga caacaagacc ttcgactctt cctgccactt ctttgccaca 300
aagtgcaccc tggagggcac caagaagggc cacaagctcc acctggacta catcgggcct 360
tgcaaataca tccccccttg cctggactct gagctgaccg aattccccct gcgcatgcgg 420
gactggctca agaacgtcct ggtcaccctg tatgagaggg atgaggacaa caaccttctg 480
a                                                                 481
<210> 191
<211> 489
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 312, 455
<223> n = A,T,C or G
<400> 191
atataaatta gactaagtgt tttcaaataa atctaaatct tcagcatgat gtgttgtgta 60
taattggagt agatattaat taagtcccct gtataatgtt ttgtaatttt gcaaaacata 120
tcttgagttg tttaaacagt caaaatgttt gatattttat accagcttat gagctcaaag 180
tactacagca aagcctagcc tgcatatcat tcacccaaaa caaagtaata gcgcctcttt 240
tattattttg actgaatgtt ttatggaatt gaaagaaaca tacgttcttt tcaagacttc 300
ctcatgaatc tntcaattat aggaaaagtt attgtgataa aataggaaca gctgaaagat 360
tgattaatga actattgtta attcttccta ttttaatgaa tgacattgaa ctgaattttt 420
tgtctgttaa atgaacttga tagctaataa aaagncaact agccatcaaa aaaaaaaaaa 480
aaaaaaaaa                                                         489
<210> 192
<211> 516
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 192
acttcaaagc cagctgaagg aaagaggaag tgctagagag agcccccttc agtgtgcttc 60
tgacttttac ggacttggct tgttagaagg ctgaaagatg atggcaggaa tgaaaatcca 120
gcttgtatgc atgctactcc tggctttcag ctcctggagt ctgtgctcag attcagaaga 180
ggaaatgaaa gcattagaag cagatttctt gaccaatatg catacatcaa agattagtaa 240
agcacatgtt ccctcttgga agatgactct gctaaatgtt tgcagtcttg taaataattt 300
gaacagccca gctgaggaaa caggagaagt tcatgaagag gagcttgttg caagaaggaa 360
cttcttactg ctttagatgg ctttagcttg gaagcaatgt tgacaatata ccagctccac 420
aaaatctgtc acagcagggc ttttcaacac tgggagttaa tccaggaaga tattcttgat 480
actggaaatg acaaaaatgg aaaggaagaa gtcata                           516
<210> 193
<211> 1409
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 193
tgattctttt ccaaaacttt tagccatagg gtcttttata gacagggata gtaaaatgaa 60
aattgagaaa tataagatga aaaggaatgg taaaaatatc ttttaggggg cttttaattg 120
gtgatctgaa atcttgggag aagctgttct tttcaggcct gaggtgctct tgactgtcgc 180
ctgcgcactg tgtaccccga gcaacattct aagggtgtgc tttcgccttg gctaactcct 240
ttgacctcat tcttcatata gtagtctagg aaaaagttgc aggtaattta aactgtctag 300
tggtacatag taactgaatt tctattccta tgagaaatga gaattattta tttgccatca 360
acacatttta tactttgcat ctccaaattt attgcggcga gacttgtcca ttgtgaaagt 420
tagagaacat tatgtttgta tcatttcttt cataaaacct caagagcatt tttaagccct 480
tttcatcaga cccagtgaaa actaaggata gatgtttttt aactggaggt ctcctgataa 540
ggagaacaca atccaccatt gtcatttaag taataagaca ggaaattgac cttgacgctt 600
tcttgttaaa tagatttaac aggaacatct gcacatcttt tttccttgtg cactatttgt 660
ttaattgcag tggattaata cagcaagagt gccacattat aactaggcaa ttatccattc 720
ttcaagactt agttattgtc acactaattg atcgtttaag gcataagatg gtctagcatt 780
aggaacatgt gaagctaatc tgctcaaaaa gatcaacaaa ttaatattgt tgctgatatt 840
tgcataattg gctgcaatta tttaatgttt aattgggttg atcaaatgag attcagcaat 900
tcacaagtgc attaatataa acagaactgg ggcacttaaa atgataatga ttaacttata 960
ttgcatgttc tcttcctttc acttttttca gtgtctacat ttcagaccga gtttgtcagc 1020
ttttttgaaa acacatcagt agaaaccaag attttaaaat gaagtgtcaa gacgaaggca 1080
aaacctgagc agttcctaaa aagatttgct gttagaaatt ttctttgtgg cagtcattta 1140
ttaaggattc aactcgtgat acaccaaaag aagagttgac ttcagagatg tgttccatgc 1200
tctctagcac aggaatgaat aaatttataa cacctgcttt agcctttgtt ttcaaaagca 1260
caaaggaaaa gtgaaaggga aagagaaaca agtgactgag aagtcttgtt aaggaatcag 1320
gttttttcta cctggtaaac attctctatt cttttctcaa aagattgttg taagaaaaaa 1380
tgtaagmcaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaa                                   1409
<210> 194
<211> 441
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 194
cagatttcgg tagccatctc cctccaaata tgtctctttc tgctttctta gtgcccatta 60
tttccccttc tcctttcttc tgtcactgcc atctccttct tggtcttccc attgttcttt 120
aactggccgt aatgtggaat tgatatttac attttgatac ggtttttttc ttggcctgtg 180
tacgggattg cctcatttcc tgctctgaat tttaaaatta gatattaaag ctgtcatatg 240
gtttcctcac aaaagtcaac aaagtccaaa caaaaatagt ttgccgtttt actttcatcc 300
attgaaaaag gaaattgtgc ctcttgcagc ctaggcaaag gacatttagt actatcgatt 360
ctttccaccc tcacgatgac ttgcggttct ctctgtagaa aagggatggc ctaagaaata 420
caactaaaaa aaaaaaaaaa a                                           441
<210> 195
<211> 707
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 195
cagaaaaata tttggaaaaa atataccact tcatagctaa gtcttacaga gaagaggatt 60
tgctaataaa acttaagttt tgaaaattaa gatgcaggta gagcttctga actaatgccc 120
acagctccaa ggaagacatg tcctatttag ttattcaaat acaagttgag ggcattgtga 180
ttaagcaaac aatatatttg ttagaacttt gtttttaaat tactgttcct tgacattact 240
tataaagagt ctctaacttt cgatttctaa aactatgtaa tacaaaagta tagtttcccc 300
atttgataaa aggccaatga tactgagtag gatatatgcg tatcatgcta cttcattcag 360
tgtgtctgtt tttaatacta ataaggcagt ttgacagaaa ttatttcttt gggactaagg 420
tgattatcat ttttttcccc ttcaaaattg tgctttaagt gctgataacc acaggcagat 480
tgcaaagaac tgataaggca acaaaagtag agaattttag gatcaaaggc atgtaactga 540
aaggtaacaa cagtacataa gcgacaactg gggaaggcag cagtgaaaca tgtttgtggg 600
gttaagtgag tcattgtaaa taaggaattt gcacatttat tttctgtcga cgcggccgcc 660
actgtgctgg atatctgcag aattccacca cactggacta gtggatc               707
<210> 196
<211> 552
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 61, 129, 189, 222, 241, 278, 324, 338, 363, 408, 415, 463,
483
<223> n = A,T,C or G
<400> 196
tggccagcca gcctgatgtg gatggcttcc ttggggtggt gcttccctca agcccgaatt 60
ngtggacatc atcaatgcca aacaatgagc cccatccatt ttccctaccc ttcctgccaa 120
gccagggant aagcagccca gaagcccagt aactgccctt tccctgcata tgcttttgat 180
ggtgtcatnt gctccttcct gtggcctcat ccaaactgta tnttccttta ctgtttatat 240
nttcaccctg taatggttgg gaccaggcca atcccttntc cacttactat aatggttgga 300
actaaacgtc accaaggtgg cttntccttg gctgaganat ggaaggcgtg gtgggatttg 360
ctnctgggtt ccctaggccc tagtgagggc agaagagaaa ccatcctntc ccttnttaca 420
ccgtgaggcc aagatcccct cagaaggcag gagtgctgcc ctntcccatg gtgcccgtgc 480
ctntgtgctg tgtatgtgaa ccacccatgt gagggaataa acctggcact aggaaaaaaa 540
aaaaaaaaaa aa                                                     552
<210> 197
<211> 449
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 56, 58, 76
<223> n = A,T,C or G
<400> 197
ctccagagac aacttcgcgg tgtggtgaac tctctgagga aaaacacgtg cgtggnanca 60
agtgactgag acctanaaat ccaagcgttg gaggtcctga ggccagccta agtcgcttca 120
aaatggaacg aaggcgtttg cggggttcca ttcagagccg atacatcagc atgagtgtgt 180
ggacaagccc acggagactt gtggagctgg cagggcagag cctgctgaag gatgaggccc 240
tggccattgc ccgccctgga gttgctgccc agggagctct tcccgccact cttcatggca 300
gcctttgacg ggagacacag ccagaccctg aaggcaatgg tgcaggcctg gcccttcacc 360
tgcctccctc tgggagtgct gatgaaggga caacatcttc acctggagac cttcaaagct 420
gtgcttgatg gacttgatgt gctccttgc                                   449
<210> 198
<211> 606
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 198
tgagtttgcc cccttacccc catcccagtg aatatttgca attcctaaag acgtgttttg 60
attgtcacac ctgggtgggg aacatgctac tggcatctaa tgcatagagg gcagtaatgc 120
tgctaaacat ctttcaacgc acaggacaga gccccacaaa agagaattat ctagccccaa 180
atgtccataa cactgctgtt gagaaaacct accgcaggat cttactgggc ttcataggta 240
agcttgcctt tgttctggct tctgtagata tataaaataa agacactgcc cagtccctcc 300
ctcaacgtcc cgagccaggg ctcaaggcaa ttccaataac agtagaatga acactaaata 360
ttgatttcaa aatctcagca actagaagaa tgaccaacca tcctggttgg cctgggactg 420
tcctagtttt agcattgaaa gtttcaggtt ccaggaaagc cctcaggcct gggctgctgg 480
tcaccctagc agctgaggga ctcttcaata cagaattagt ctttgtgcac tggagatgaa 540
tatactttaa tttgtaacat gtgaaaacat ctataaacat ctactgaagc ctgttcttgt 600
ctgcac                                                            606
<210> 199
<211> 369
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 29, 345
<223> n = A,T,C or G
<400> 199
ggcaactttt tgcggattgt tcttgcttnc aggctttgcg ctgcaaatcc agtgctacca 60
gtgtgaagaa ttccagctga acaacgactg ctcctccccc gagttcattg tgaattgcac 120
ggtgaacgtt caagacatgt gtcagaaaga agtgatggag caaagtgccg ggatcatgta 180
ccgcaagtcc tgtgcatcat cagcggcctg tctcatcgcc tctgccgggt accagtcctt 240
ctgctcccca gggaaactga actcagtttg catcagctgc tgcaacaccc ctctttgtaa 300
cgggccaagg cccaagaaaa ggggaagttc tgcctcggcc ctcangccat ggctccgcac 360
caccatcct                                                         369
<210> 200
<211> 55
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 200
Met Tyr Arg Asn Trp Ser Gly Cys Phe Gly Leu Gln Val Thr Leu Cys
1               5                  10                  15
His Thr Phe Glu Thr Arg Asp Leu Ser Arg Leu Ser Ser Asp Ser Gln
20                  25                  30
Pro Thr Ser Asn Val Ser Gln Ser Ile Ser His Lys Val Leu Ser Phe
35                  40                  45
Ser Gly Val Ile Val Thr Pro
50                  55
<210> 201
<211> 67
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 201
Met Gln Leu Leu Ser Pro Asn Thr Lys Phe Thr Ser Cys Leu Ser Arg
1               5                  10                  15
Gln Arg Gly Asn Leu Val Phe Leu Gly Asp Leu Lys Gly Cys Ser Glu
20                  25                  30
Leu Lys Asn Phe Gln Glu Leu Ile Asn Gln Ser Ala Leu Val His Pro
35                  40                  45
Arg Val Asp Val Trp Trp Tyr Cys Gly Gly Pro Leu Leu Gly Thr Leu
50                  55                  60
Pro Asn Asn
65
<210> 202
<211> 73
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 202
Met Thr Pro Glu Lys Leu Arg Thr Leu Cys Glu Ile Asp Trp Leu Thr
1               5                  10                  15
Leu Glu Val Gly Trp Leu Ser Glu Glu Ser Leu Glu Arg Ser Leu Val
20                  25                  30
Ser Lys Val Trp His Lys Val Thr Cys Lys Pro Lys His Pro Asp Gln
35                  40                  45
Phe Leu Tyr Ile Asp Ser Tyr Ser Trp Phe Arg Pro Leu Pro Pro Leu
50                  55                  60
Pro Thr Val Val Lys Arg Thr Ala Ala
65                  70
<210> 203
<211> 2008
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 203
ctccagagac aacttcgcgg tgtggtgaac tctctgagga aaaacacgtg cgtggtaaca 60
agtgactgag acctagaaat ccaagcgttg gaggtcctga ggccagccta agtcgcttca 120
aaatggaacg aaggcgtttg cggggttcca ttcagagccg atacatcagc atgagtgtgt 180
ggacaagccc acggagactt gtggagctgg cagggcagag cctgctgaag gatgaggccc 240
tggccattgc ccgccctgga gttgctgccc agggagctct tcccgccact cttcatggca 300
gcctttgacg ggagacacag ccagaccctg aaggcaatgg tgcaggcctg gcccttcacc 360
tgcctccctc tgggagtgct gatgaaggga caacatcttc acctggagac cttcaaagct 420
gtgcttgatg gacttgatgt gctccttgcc caggaggttc gccccaggag gtggaaactt 480
caagtgctgg atttacggaa gaactctcat caggacttct ggactgtatg gtctggaaac 540
agggccagtc tgtactcatt tccagagcca gaagcagctc agcccatgac aaagaagcga 600
aaagtagatg gtttgagcac agaggcagag cagcccttca ttccagtaga ggtgctcgta 660
gacctgttcc tcaaggaagg tgcctgtgat gaattgttct cctacctcat tgagaaagtg 720
aagcgaaaga aaaatgtact acgcctgtgc tgtaagaagc tgaagatttt tgcaatgccc 780
atgcaggata tcaagatgat cctgaaaatg gtgcagctgg actctattga agatttggaa 840
gtgacttgta cctggaagct acccaccttg gcgaaatttt ctccttacct gggccagatg 900
attaatctgc gtagactcct cctctcccac atccatgcat cttcctacat ttccccggag 960
aaggaagagc agtatatcgc ccagttcacc tctcagttcc tcagtctgca gtgcctgcag 1020
gctctctatg tggactcttt atttttcctt agaggccgcc tggatcagtt gctcaggcac 1080
gtgatgaacc ccttggaaac cctctcaata actaactgcc ggctttcgga aggggatgtg 1140
atgcatctgt cccagagtcc cagcgtcagt cagctaagtg tcctgagtct aagtggggtc 1200
atgctgaccg atgtaagtcc cgagcccctc caagctctgc tggagagagc ctctgccacc 1260
ctccaggacc tggtctttga tgagtgtggg atcacggatg atcagctcct tgccctcctg 1320
ccttccctga gccactgctc ccagcttaca accttaagct tctacgggaa ttccatctcc 1380
atatctgcct tgcagagtct cctgcagcac ctcatcgggc tgagcaatct gacccacgtg 1440
ctgtatcctg tccccctgga gagttatgag gacatccatg gtaccctcca cctggagagg 1500
cttgcctatc tgcatgccag gctcagggag ttgctgtgtg agttggggcg gcccagcatg 1560
gtctggctta gtgccaaccc ctgtcctcac tgtggggaca gaaccttcta tgacccggag 1620
cccatcctgt gcccctgttt catgcctaac tagctgggtg cacatatcaa atgcttcatt 1680
ctgcatactt ggacactaaa gccaggatgt gcatgcatct tgaagcaaca aagcagccac 1740
agtttcagac aaatgttcag tgtgagtgag gaaaacatgt tcagtgagga aaaaacattc 1800
agacaaatgt tcagtgagga aaaaaagggg aagttgggga taggcagatg ttgacttgag 1860
gagttaatgt gatctttggg gagatacatc ttatagagtt agaaatagaa tctgaatttc 1920
taaagggaga ttctggcttg ggaagtacat gtaggagtta atccctgtgt agactgttgt 1980
aaagaaactg ttgaaaaaaa aaaaaaaa                                    2008
<210> 204
<211> 923
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 204
tgagtttgcc cccttacccc catcccagtg aatatttgca attcctaaag acgtgttttg 60
attgtcacac ctgggtgggg aacatgctac tggcatctaa tgcatagagg gcagtaatgc 120
tgctaaacat ctttcaacgc acaggacaga gccccacaaa agagaattat ctagccccaa 180
atgtccataa cactgctgtt gagaaaacct accgcaggat cttactgggc ttcataggta 240
agcttgcctt tgttctggct tctgtagata tataaaataa agacactgcc cagtccctcc 300
ctcaacgtcc cgagccaggg ctcaaggcaa ttccaataac agtagaatga acactaaata 360
ttgatttcaa aatctcagca actagaagaa tgaccaacca tcctggttgg cctgggactg 420
tcctagtttt agcattgaaa gtttcaggtt ccaggaaagc cctcaggcct gggctgctgg 480
tcaccctagc agctgaggga ctcttcaata cagaattagt ctttgtgcac tggagatgaa 540
tatactttaa tttgtaacat gtgaaaacat ctataaacat ctactgaagc ctgttctgtc 600
tgcaccgaca ttttcattga gtacggattc ttcctaccag atacagctgc tctacaactt 660
tcgagggctg gtataaaact agcttttacc tatttttaaa aattacatga atagtaaaaa 720
cttggattaa cccagtattc gggtattttc aatttccttg ggagcttaga ggacggacaa 780
ataaaaagat tatttcaaca tcaaatatat gctattgttt acatatgaag ataaccacat 840
atatgtataa attcaccgtt actttttagc aatactataa aatccaacag aaaaaaatag 900
catttactaa aaaaaaaaaa aaa                                         923
<210> 205
<211> 1619
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 205
ggcaactttt tgcggattgt tcttgcttcc aggctttgcg ctgcaaatcc agtgctacca 60
gtgtgaagaa ttccagctga acaacgactg ctcctccccc gagttcattg tgaattgcac 120
ggtgaacgtt caagacatgt gtcagaaaga agtgatggag caaagtgccg ggatcatgta 180
ccgcaagtcc tgtgcatcat cagcggcctg tctcatcgcc tctgccgggt accagtcctt 240
ctgctcccca gggaaactga actcagtttg catcagctgc tgcaacaccc ctctttgtaa 300
cgggccaagg cccaagaaaa ggggaagttc tgcctcggcc ctcaggccag ggctccgcac 360
caccatcctg ttcctcaaat tagccctctt ctcggcacac tgctgaagct gaaggagatg 420
ccaccccctc ctgcattgtt cttccagccc tcgcccccaa ccccccacct ccctgagtga 480
gtttcttctg ggtgtccttt tattctgggt agggagcggg agtccgtgtt ctcttttgtt 540
cctgtgcaaa taatgaaaga gctcggtaaa gcattctgaa taaattcagc ctgactgaat 600
tttcagtatg tacttgaagg aaggaggtgg agtgaaagtt cacccccatg tctgtgtaac 660
cggagtcaag gccaggctgg cagagtcagt ccttagaagt cactgaggtg ggcatctgcc 720
ttttgtaaag cctccagtgt ccattccatc cctgatgggg gcatagtttg agactgcaga 780
gtgagagtga cgttttctta gggctggagg gccagttccc actcaaggct ccctcgcttg 840
acattcaaac ttcatgctcc tgaaaaccat tctctgcagc agaattggct ggtttcgcgc 900
ctgagttggg ctctagtgac tcgagactca atgactggga cttagactgg ggctcggcct 960
cgctctgaaa agtgcttaag aaaatcttct cagttctcct tgcagaggac tggcgccggg 1020
acgcgaagag caacgggcgc tgcacaaagc gggcgctgtc ggtggtggag tgcgcatgta 1080
cgcgcaggcg cttctcgtgg ttggcgtgct gcagcgacag gcggcagcac agcaccttgc 1140
acgaacaccc gccgaaactg ctgcgaggac accgtgtaca ggagcgggtt gatgaccgag 1200
ctgaggtaga aaaacgtctc cgagaagggg aggaggatca tgtacgcccg gaagtaggac 1260
ctcgtccagt cgtgcttggg tttggccgca gccatgatcc tccgaatctg gttgggcatc 1320
cagcatacgg ccaatgtcac aacaatcagc cctgggcaga cacgagcagg agggagagac 1380
agagaaaaga aaaacacagc atgagaacac agtaaatgaa taaaaccata aaatatttag 1440
cccctctgtt ctgtgcttac tggccaggaa atggtaccaa tttttcagtg ttggacttga 1500
cagcttcttt tgccacaagc aagagagaat ttaacactgt ttcaaacccg ggggagttgg 1560
ctgtgttaaa gaaagaccat taaatgcttt agacagtgta aaaaaaaaaa aaaaaaaaa  1619
<210> 206
<211> 2364
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 206
atgcagcatc accaccatca ccacttctcc gacgagaccc tggacaaagt gcccaagtca 60
gagggctact gtagccgtat cctgcgcgcc cagggcacgc ggcgcgaggg ctacaccgag 120
ttcagcctcc gcgtggaggg cgaccccgac ttctacaagc cgggaaccag ctaccgcgta 180
acactttcag ctgctcctcc ctcctacttc agaggattca cattaattgc cctcagagag 240
aacagagagg gtgataagga agaagaccat gctgggacct tccagatcat agacgaagaa 300
gaaactcagt ttatgagcaa ttgccctgtt gcagtcactg aaagcactcc acggaggagg 360
acccggatcc aggtgttttg gatagcacca ccagcgggaa caggctgcgt gattctgaag 420
gccagcatcg tacaaaaacg cattatttat tttcaagatg agggctctct gaccaagaaa 480
ctttgtgaac aagattccac atttgatggg gtgactgaca aacccatctt agactgctgt 540
gcctgcggaa ctgccaagta cagactcaca ttttatggga attggtccga gaagacacac 600
ccaaaggatt accctcgtcg ggccaaccac tggtctgcga tcatcggagg atcccactcc 660
aagaattatg tactgtggga atatggagga tatgccagcg aaggcgtcaa acaagttgca 720
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tccgagtgga gtgactgcag cgtgacctgc gggaagggca tgcgaacccg acagcggatg 1860
ctcaagtctc tggcagaact tggagactgc aatgaggatc tggagcaggt ggagaagtgc 1920
atgctccctg aatgccccat tgactgtgag ctcaccgagt ggtcccagtg gtcggaatgt 1980
aacaagtcat gtgggaaagg ccacgtgatt cgaacccgga tgatccaaat ggagcctcag 2040
tttggaggtg caccctgccc agagactgtg cagcgaaaaa agtgccgcat ccgaaaatgc 2100
cttcgaaatc catccatcca aaagctacgc tggagggagg cccgagagag ccggcggagt 2160
gagcagctga aggaagagtc tgaaggggag cagttcccag gttgtaggat gcgcccatgg 2220
acggcctggt cagaatgcac caaactgtgc ggaggtggaa ttcaggaacg ttacatgact 2280
gtaaagaaga gattcaaaag ctcccagttt accagctgca aagacaagaa ggagatcaga 2340
gcatgcaatg ttcatccttg ttag                                        2364
<210> 207
<211> 787
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 207
Met Gln His His His His His His Phe Ser Asp Glu Thr Leu Asp Lys
1               5                  10                  15
Val Pro Lys Ser Glu Gly Tyr Cys Ser Arg Ile Leu Arg Ala Gln Gly
20                  25                  30
Thr Arg Arg Glu Gly Tyr Thr Glu Phe Ser Leu Arg Val Glu Gly Asp
35                  40                  45
Pro Asp Phe Tyr Lys Pro Gly Thr Ser Tyr Arg Val Thr Leu Ser Ala
50                  55                  60
Ala Pro Pro Ser Tyr Phe Arg Gly Phe Thr Leu Ile Ala Leu Arg Glu
65                  70                  75                  80
Asn Arg Glu Gly Asp Lys Glu Glu Asp His Ala Gly Thr Phe Gln Ile
85                  90                  95
Ile Asp Glu Glu Glu Thr Gln Phe Met Ser Asn Cys Pro Val Ala Val
100                 105                 110
Thr Glu Ser Thr Pro Arg Arg Arg Thr Arg Ile Gln Val Phe Trp Ile
115                 120                 125
Ala Pro Pro Ala Gly Thr Gly Cys Val Ile Leu Lys Ala Ser Ile Val
130                 135                 140
Gln Lys Arg Ile Ile Tyr Phe Gln Asp Glu Gly Ser Leu Thr Lys Lys
145                 150                 155                 160
Leu Cys Glu Gln Asp Ser Thr Phe Asp Gly Val Thr Asp Lys Pro Ile
165                 170                 175
Leu Asp Cys Cys Ala Cys Gly Thr Ala Lys Tyr Arg Leu Thr Phe Tyr
180                 185                 190
Gly Asn Trp Ser Glu Lys Thr His Pro Lys Asp Tyr Pro Arg Arg Ala
195                 200                 205
Asn His Trp Ser Ala Ile Ile Gly Gly Ser His Ser Lys Asn Tyr Val
210                 215                 220
Leu Trp Glu Tyr Gly Gly Tyr Ala Ser Glu Gly Val Lys Gln Val Ala
225                 230                 235                 240
Glu Leu Gly Ser Pro Val Lys Met Glu Glu Glu Ile Arg Gln Gln Ser
245                 250                 255
Asp Glu Val Leu Thr Val Ile Lys Ala Lys Ala Gln Trp Pro Ala Trp
260                 265                 270
Gln Pro Leu Asn Val Arg Ala Ala Pro Ser Ala Glu Phe Ser Val Asp
275                 280                 285
Arg Thr Arg His Leu Met Ser Phe Leu Thr Met Met Gly Pro Ser Pro
290                 295                 300
Asp Trp Asn Val Gly Leu Ser Ala Glu Asp Leu Cys Thr Lys Glu Cys
305                 310                 315                 320
Gly Trp Val Gln Lys Val Val Gln Asp Leu Ile Pro Trp Asp Ala Gly
325                 330                 335
Thr Asp Ser Gly Val Thr Tyr Glu Ser Pro Asn Lys Pro Thr Ile Pro
340                 345                 350
Gln Glu Lys Ile Arg Pro Leu Thr Ser Leu Asp His Pro Gln Ser Pro
355                 360                 365
Phe Tyr Asp Pro Glu Gly Gly Ser Ile Thr Gln Val Ala Arg Val Val
370                 375                 380
Ile Glu Arg Ile Ala Arg Lys Gly Glu Gln Cys Asn Ile Val Pro Asp
385                 390                 395                 400
Asn Val Asp Asp Ile Val Ala Asp Leu Ala Pro Glu Glu Lys Asp Glu
405                 410                 415
Asp Asp Thr Pro Glu Thr Cys Ile Tyr Ser Asn Trp Ser Pro Trp Ser
420                 425                 430
Ala Cys Ser Ser Ser Thr Cys Asp Lys Gly Lys Arg Met Arg Gln Arg
435                 440                 445
Met Leu Lys Ala Gln Leu Asp Leu Ser Val Pro Cys Pro Asp Thr Gln
450                 455                 460
Asp Phe Gln Pro Cys Met Gly Pro Gly Cys Ser Asp Glu Asp Gly Ser
465                 470                 475                 480
Thr Cys Thr Met Ser Glu Trp Ile Thr Trp Ser Pro Cys Ser Ile Ser
485                 490                 495
Cys Gly Met Gly Met Arg Ser Arg Glu Arg Tyr Val Lys Gln Phe Pro
500                 505                 510
Glu Asp Gly Ser Val Cys Thr Leu Pro Thr Glu Glu Thr Glu Lys Cys
515                 520                 525
Thr Val Asn Glu Glu Cys Ser Pro Ser Ser Cys Leu Met Thr Glu Trp
530                 535                 540
Gly Glu Trp Asp Glu Cys Ser Ala Thr Cys Gly Met Gly Met Lys Lys
545                 550                 555                 560
Arg His Arg Met Ile Lys Met Asn Pro Ala Asp Gly Ser Met Cys Lys
565                 570                 575
Ala Glu Thr Ser Gln Ala Glu Lys Cys Met Met Pro Glu Cys His Thr
580                 585                 590
Ile Pro Cys Leu Leu Ser Pro Trp Ser Glu Trp Ser Asp Cys Ser Val
595                 600                 605
Thr Cys Gly Lys Gly Met Arg Thr Arg Gln Arg Met Leu Lys Ser Leu
610                 615                 620
Ala Glu Leu Gly Asp Cys Asn Glu Asp Leu Glu Gln Val Glu Lys Cys
625                 630                 635                 640
Met Leu Pro Glu Cys Pro Ile Asp Cys Glu Leu Thr Glu Trp Ser Gln
645                 650                 655
Trp Ser Glu Cys Asn Lys Ser Cys Gly Lys Gly His Val Ile Arg Thr
660                 665                 670
Arg Met Ile Gln Met Glu Pro Gln Phe Gly Gly Ala Pro Cys Pro Glu
675                 680                 685
Thr Val Gln Arg Lys Lys Cys Arg Ile Arg Lys Cys Leu Arg Asn Pro
690                 695                 700
Ser Ile Gln Lys Leu Arg Trp Arg Glu Ala Arg Glu Ser Arg Arg Ser
705                 710                 715                 720
Glu Gln Leu Lys Glu Glu Ser Glu Gly Glu Gln Phe Pro Gly Cys Arg
725                 730                 735
Met Arg Pro Trp Thr Ala Trp Ser Glu Cys Thr Lys Leu Cys Gly Gly
740                 745                 750
Gly Ile Gln Glu Arg Tyr Met Thr Val Lys Lys Arg Phe Lys Ser Ser
755                 760                 765
Gln Phe Thr Ser Cys Lys Asp Lys Lys Glu Ile Arg Ala Cys Asn Val
770                 775                 780
His Pro Cys
785
<210> 208
<211> 1362
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 208
atggcttcac ccagcctccc gggcagtgac tgctcccaaa tcattgatca cagtcatgtc 60
cccgagtttg aggtggccac ctggatcaaa atcaccctta ttctggtgta cctgatcatc 120
ttcgtgatgg gccttctggg gaacagcgcc accattcggg tcacccaggt gctgcagaag 180
aaaggatact tgcagaagga ggtgacagac cacatggtga gtttggcttg ctcggacatc 240
ttggtgttcc tcatcggcat gcccatggag ttctacagca tcatctggaa tcccctgacc 300
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gtcacctccg ccctggtggc actgcccttg ctgtttgcca tgggtactga gtaccccctg 540
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cagcccgaga cctccaatat gtccatctgt accaacctct ccagccgctg gaccgtgttc 660
cagtccagca tcttcggcgc cttcgtggtc tacctcgtgg tcctgctctc cgtagccttc 720
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acgcggcctc cgcagctgag gaagtccgag agcgaagaga gcaggaccgc caggaggcag 840
accatcatct tcctgaggct gattgttgtg acattggccg tatgctggat gcccaaccag 900
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<210> 209
<211> 453
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 209
Met Ala Ser Pro Ser Leu Pro Gly Ser Asp Cys Ser Gln Ile Ile Asp
1               5                  10                  15
His Ser His Val Pro Glu Phe Glu Val Ala Thr Trp Ile Lys Ile Thr
20                  25                  30
Leu Ile Leu Val Tyr Leu Ile Ile Phe Val Met Gly Leu Leu Gly Asn
35                  40                  45
Ser Ala Thr Ile Arg Val Thr Gln Val Leu Gln Lys Lys Gly Tyr Leu
50                  55                  60
Gln Lys Glu Val Thr Asp His Met Val Ser Leu Ala Cys Ser Asp Ile
65                  70                  75                  80
Leu Val Phe Leu Ile Gly Met Pro Met Glu Phe Tyr Ser Ile Ile Trp
85                  90                  95
Asn Pro Leu Thr Thr Ser Ser Tyr Thr Leu Ser Cys Lys Leu His Thr
100                 105                 110
Phe Leu Phe Glu Ala Cys Ser Tyr Ala Thr Leu Leu His Val Leu Thr
115                 120                 125
Leu Ser Phe Glu Arg Tyr Ile Ala Ile Cys His Pro Phe Arg Tyr Lys
130                 135                 140
Ala Val Ser Gly Pro Cys Gln Val Lys Leu Leu Ile Gly Phe Val Trp
145                 150                 155                 160
Val Thr Ser Ala Leu Val Ala Leu Pro Leu Leu Phe Ala Met Gly Thr
165                 170                 175
Glu Tyr Pro Leu Val Asn Val Pro Ser His Arg Gly Leu Thr Cys Asn
180                 185                 190
Arg Ser Ser Thr Arg His His Glu Gln Pro Glu Thr Ser Asn Met Ser
195                 200                 205
Ile Cys Thr Asn Leu Ser Ser Arg Trp Thr Val Phe Gln Ser Ser Ile
210                 215                 220
Phe Gly Ala Phe Val Val Tyr Leu Val Val Leu Leu Ser Val Ala Phe
225                 230                 235                 240
Met Cys Trp Asn Met Met Gln Val Leu Met Lys Ser Gln Lys Gly Ser
245                 250                 255
Leu Ala Gly Gly Thr Arg Pro Pro Gln Leu Arg Lys Ser Glu Ser Glu
260                 265                 270
Glu Ser Arg Thr Ala Arg Arg Gln Thr Ile Ile Phe Leu Arg Leu Ile
275                 280                 285
Val Val Thr Leu Ala Val Cys Trp Met Pro Asn Gln Ile Arg Arg Ile
290                 295                 300
Met Ala Ala Ala Lys Pro Lys His Asp Trp Thr Arg Ser Tyr Phe Arg
305                 310                 315                 320
Ala Tyr Met Ile Leu Leu Pro Phe Ser Glu Thr Phe Phe Tyr Leu Ser
325                 330                 335
Ser Val Ile Asn Pro Leu Leu Tyr Thr Val Ser Ser Gln Gln Phe Arg
340                 345                 350
Arg Val Phe Val Gln Val Leu Cys Cys Arg Leu Ser Leu Gln His Ala
355                 360                 365
Asn His Glu Lys Arg Leu Arg Val His Ala His Ser Thr Thr Asp Ser
370                 375                 380
Ala Arg Phe Val Gln Arg Pro Leu Leu Phe Ala Ser Arg Arg Gln Ser
385                 390                 395                 400
Ser Ala Arg Arg Thr Glu Lys Ile Phe Leu Ser Thr Phe Gln Ser Glu
405                 410                 415
Ala Glu Pro Gln Ser Lys Ser Gln Ser Leu Ser Leu Glu Ser Leu Glu
420                 425                 430
Pro Asn Ser Gly Ala Lys Pro Ala Asn Ser Ala Ala Glu Asn Gly Phe
435                 440                 445
Gln Glu His Glu Val
450
<210> 210
<211> 625
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> 607
<223> n = A,T,C or G
<400> 210
agttctcctt gcagaggact ggcgccggga cgcgaagagc aacgggcgct gcacaaagcg 60
ggcgctgtcg gtggtggagt gcgcatgtac gcgcaggcgc ttctcgtggt tggcgtgctg 120
cagcgacagg cggcagcaca gcacctgcac gaacacccgc cgaaactgct gcgaggacac 180
cgtgtacagg agcgggttga tgaccgagct gaggtagaaa aacgtctccg agaaggggag 240
gaggatcatg tacgcccgga agtaggacct cgtccagtcg tgcttgggtt tggccgcagc 300
catgatcctc cgaatctggt tgggcatcca gcatacggcc aatgtcacaa caatcagccc 360
tgggcagaca cgagcaggag ggagagacag agaaaagaaa aacacagcat gagaacacag 420
taaatgaata aaaccataaa atatttagcc cctctgttct gtgcttactg gccaggaaat 480
ggtaccaatt tttcagtgtt ggacttgaca gcttcttttg ccacaagcaa gagagaattt 540
aacactgttt caaacccggg ggagttggct gtgttaaaga aagaccatta aatgctttag 600
acagtgnaaa aaaaaaaaaa aaaaa                                       625
<210> 211
<211> 1619
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 211
ggcaactttt tgcggattgt tcttgcttcc aggctttgcg ctgcaaatcc agtgctacca 60
gtgtgaagaa ttccagctga acaacgactg ctcctccccc gagttcattg tgaattgcac 120
ggtgaacgtt caagacatgt gtcagaaaga agtgatggag caaagtgccg ggatcatgta 180
ccgcaagtcc tgtgcatcat cagcggcctg tctcatcgcc tctgccgggt accagtcctt 240
ctgctcccca gggaaactga actcagtttg catcagctgc tgcaacaccc ctctttgtaa 300
cgggccaagg cccaagaaaa ggggaagttc tgcctcggcc ctcaggccag ggctccgcac 360
caccatcctg ttcctcaaat tagccctctt ctcggcacac tgctgaagct gaaggagatg 420
ccaccccctc ctgcattgtt cttccagccc tcgcccccaa ccccccacct ccctgagtga 480
gtttcttctg ggtgtccttt tattctgggt agggagcggg agtccgtgtt ctcttttgtt 540
cctgtgcaaa taatgaaaga gctcggtaaa gcattctgaa taaattcagc ctgactgaat 600
tttcagtatg tacttgaagg aaggaggtgg agtgaaagtt cacccccatg tctgtgtaac 660
cggagtcaag gccaggctgg cagagtcagt ccttagaagt cactgaggtg ggcatctgcc 720
ttttgtaaag cctccagtgt ccattccatc cctgatgggg gcatagtttg agactgcaga 780
gtgagagtga cgttttctta gggctggagg gccagttccc actcaaggct ccctcgcttg 840
acattcaaac ttcatgctcc tgaaaaccat tctctgcagc agaattggct ggtttcgcgc 900
ctgagttggg ctctagtgac tcgagactca atgactggga cttagactgg ggctcggcct 960
cgctctgaaa agtgcttaag aaaatcttct cagttctcct tgcagaggac tggcgccggg 1020
acgcgaagag caacgggcgc tgcacaaagc gggcgctgtc ggtggtggag tgcgcatgta 1080
cgcgcaggcg cttctcgtgg ttggcgtgct gcagcgacag gcggcagcac agcaccttgc 1140
acgaacaccc gccgaaactg ctgcgaggac accgtgtaca ggagcgggtt gatgaccgag 1200
ctgaggtaga aaaacgtctc cgagaagggg aggaggatca tgtacgcccg gaagtaggac 1260
ctcgtccagt cgtgcttggg tttggccgca gccatgatcc tccgaatctg gttgggcatc 1320
cagcatacgg ccaatgtcac aacaatcagc cctgggcaga cacgagcagg agggagagac 1380
agagaaaaga aaaacacagc atgagaacac agtaaatgaa taaaaccata aaatatttag 1440
cccctctgtt ctgtgcttac tggccaggaa atggtaccaa tttttcagtg ttggacttga 1500
cagcttcttt tgccacaagc aagagagaat ttaacactgt ttcaaacccg ggggagttgg 1560
ctgtgttaaa gaaagaccat taaatgcttt agacagtgta aaaaaaaaaa aaaaaaaaa  1619
<210> 212
<211> 1010
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 212
ccgcagccgg gagcccgagc gcgggcgatg caggctccgc gagcggcacc tgcggctcct 60
ctaagctacg accgtcgtct ccgctggcag cagctgcggg ccccagcagc ctcggcagcc 120
acagccgctg cagcctgggg cagcctccgc tgctgtcgcc tcctctgatg cgcttgccct 180
ctccctggcc ccgggactcc gggagaatgt gggtcctagg catcgcggca actttttgcg 240
gattgttctt gcttccaagg ctttgcgctg caaatccagt gctaccagtg tgaagaattc 300
cagctgaaca acgactgctc ctcccccgag ttcattgtga attgcacggt gaacgttcaa 360
gacatgtgtc agaaagaagt gatggagcaa agtgccggga tcatgtaccg caagtcctgt 420
gcatcatcag cggcctgtct catcgcctct gccgggtacc agtccttctg ctccccaggg 480
aaactgaact cagtttgcat cagctgctgc aacacccctc tttgtaaccg ggccaaggcc 540
caagaaaagg ggaagttctg cctcggccct caggccaggg ctccgaacca ccatcctgtc 600
cctcaaatta agccctactt ctcggcacac tgctggaagc ttgaagggag aaggcaccca 660
ctcctgcata gtccatccag gcctcgcccc acacacccca ctccctgaga gagcacgccc 720
agggagacca aaaaccggga taggcaacgg acccccagac accacaaggg acccgaggac 780
aaagacgcag acaactcgcg aaagccaccc acgaatacaa cggcccgaac acagatataa 840
cgcacgagcc ccgaccgaca agagaagaag cagaagaaac acccacagac agaaacagac 900
accagcaaca agcgaaaaca gcaaaacgac actagcgaga caccacctgc acacaacacc 960
acagcccaac acagaggaca cgacaacaaa gagacagcac caacgacgaa            1010
<210> 213
<211> 480
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 213
gccaactccg gaggctctgg tgctcggccc gggagcgcga gcgggaggag cagagacccg 60
cagccgggag cccgagcgcg ggcgatgcag gctccgcgag cggcacctgc ggctcctcta 120
agctacgacc gtcgtctccg cggcagcagc gcgggcccca gcagcctcgg cagccacagc 180
cgctgcagcc ggggcagcct ccgctgctgt cgcctcctct gatgcgcttg ccctctcccg 240
gccccgggac tccgggagaa tgtgggtcct aggcatcgcg gcaacttttt gcggattgtt 300
cttgcttcca ggctttgcgc tgcaaatcca gtgctaccag tgtgaagaat tccagctgaa 360
caacgactgc tcctcccccg agttcattgt gaattgcacg gtgaacgttc aagacatgtg 420
tgagaaagaa gtgatggagc aaagtgccgg gatcatgtac cgcaagtcct gtgcatgatc 480
<210> 214
<211> 1897
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 214
gccaactccg gaggctctgg tgctcggccc gggagcgcga gcgggaggag cagagacccg 60
cagccgggag cccgagcgcg ggcgatgcag gctccgcgag cggcacctgc ggctcctcta 120
agctacgacc gtcgtctccg cggcagcagc gcgggcccca gcagcctcgg cagccacagc 180
cgctgcagcc ggggcagcct ccgctgctgt cgcctcctct gatgcgcttg ccctctcccg 240
gccccgggac tccgggagaa tgtgggtcct aggcatcgcg gcaacttttt gcggattgtt 300
cttgcttcca ggctttgcgc tgcaaatcca gtgctaccag tgtgaagaat tccagctgaa 360
caacgactgc tcctcccccg agttcattgt gaattgcacg gtgaacgttc aagacatgtg 420
tcagaaagaa gtgatggagc aaagtgccgg gatcatgtac cgcaagtcct gtgcatcatc 480
agcggcctgt ctcatcgcct ctgccgggta ccagtccttc tgctccccag ggaaactgaa 540
ctcagtttgc atcagctgct gcaacacccc tctttgtaac gggccaaggc ccaagaaaag 600
gggaagttct gcctcggccc tcaggccagg gctccgcacc accatcctgt tcctcaaatt 660
agccctcttc tcggcacact gctgaagctg aaggagatgc caccccctcc tgcattgttc 720
ttccagccct cgcccccaac cccccacctc cctgagtgag tttcttctgg gtgtcctttt 780
attctgggta gggagcggga gtccgtgttc tcttttgttc ctgtgcaaat aatgaaagag 840
ctcggtaaag cattctgaat aaattcagcy tgactgaatt ttcagtatgt acttgaagga 900
aggaggtgga gtgaaagttc acccccatgt ctgtgtaacc ggagtcaagg ccaggctggc 960
agagtcwgtc cttagaagtc actgaggtgg gcatctgcct tttgtaaagc ctccagtgtc 1020
cattccatcc ctgatggggg catagtttga gactgcagag tgagagtgac gttttcttag 1080
ggctggaggg ccagttccca ctcaaggctc cctcgcttga cattcaaact tcatgctcct 1140
gaaaaccatt ctctgcagca gaattggctg gtttcgcgcc tgagttgggc tctagtgact 1200
cgagactcaa tgactgggac ttagactggg gctcggcctc gctctgaaaa gtgcttaaga 1260
aaatcttctc agttctcctt gcagaggact ggcgccggga cgcgaagagc aacgggcgct 1320
gcacaaagcg ggcgctgtcg gtggtggagt gcgcatgtac gcgcaggcgc ttctcgtggt 1380
tggcgtgctg cagcgacagg cggcagcaca gcacctgcac gaacacccgc cgaaactgct 1440
gcgaggacac cgtgtacagg agcgggttga tgaccgagct gaggtagaaa aacgtctccg 1500
agaaggggag gaggatcatg tacgcccgga agtaggacct cgtccagtcg tgcttgggtt 1560
tggccgcagc catgatcctc cgaatctggt tgggcatcca gcatacggcc aatgtcacaa 1620
caatcagccc tgggcagaca cgagcaggag ggagagacag agaaaagaaa aacacagcat 1680
gagaacacag taaatgaata aaaccataaa atatttagcc cctctgttct gtgcttactg 1740
gccaggaaat ggtaccaatt tttcagtgtt ggacttgaca gcttcttttg ccacaagcaa 1800
gagagaattt aacactgttt caaacccggg ggagttggct gtgttaaaga aagaccatta 1860
aatgctttag acagtgtaaa aaaaaaaaaa aaaaaaa                          1897
<210> 215
<211> 141
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 215
Met Trp Val Leu Gly Ile Ala Ala Thr Phe Cys Gly Leu Phe Leu Leu
1               5                  10                  15
Pro Gly Phe Ala Leu Gln Ile Gln Cys Tyr Gln Cys Glu Glu Phe Gln
20                  25                  30
Leu Asn Asn Asp Cys Ser Ser Pro Glu Phe Ile Val Asn Cys Thr Val
35                  40                  45
Asn Val Gln Asp Met Cys Gln Lys Glu Val Met Glu Gln Ser Ala Gly
50                  55                  60
Ile Met Tyr Arg Lys Ser Cys Ala Ser Ser Ala Ala Cys Leu Ile Ala
65                  70                  75                  80
Ser Ala Gly Tyr Gln Ser Phe Cys Ser Pro Gly Lys Leu Asn Ser Val
85                  90                  95
Cys Ile Ser Cys Cys Asn Thr Pro Leu Cys Asn Gly Pro Arg Pro Lys
100                 105                 110
Lys Arg Gly Ser Ser Ala Ser Ala Leu Arg Pro Gly Leu Arg Thr Thr
115                 120                 125
Ile Leu Phe Leu Lys Leu Ala Leu Phe Ser Ala His Cys
130                 135                 140