【手続補正書】
【提出日】平成14年11月21日(2002.11.21)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
精子からオシロゲニンを単離する方法であって、
（Ａ）精子細胞質フラクションを調製し；
（Ｂ）この精子細胞質フラクションを、ＨｉＴｒａｐブルーアフィニティＦＰＬＣクロマトグラフィーカラム、ヒドロキシアパタイトＦＰＬＣカラム、およびスーペローズ１２ＦＰＬＣクロマトグラフィーカラムに通して引き続き処理することによってオシロゲニンを単離し；次いで
（Ｃ）［Ｃａ２＋］ｉ放出活性を有するフラクションを得る；
ことを包含する上記方法。
【請求項２】
卵母細胞活性を増強する方法であって、
（ａ）精子またはその他の細胞核を卵母細胞に注入するか、または卵母細胞と融合させる前に、または同時的に、または直後に、卵母細胞中にオシロゲニンを導入する工程を包含し、ここで上記卵母細胞はオシロゲニン注入前または注入後に、その外因性核を除去または不活性化するために処理されているものである上記方法。
【請求項３】
卵母細胞が哺乳動物卵母細胞である、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
哺乳動物卵母細胞がヒト卵母細胞である、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
Ｃａ２＋含有培地において注入された卵母細胞をインキュベートすることをさらに包含する、請求項２に記載の方法。
【請求項６】
精子が哺乳動物精子である、請求項２に記載の方法。
【請求項７】
哺乳動物精子が、霊長類、ウシ、ブタ、ヒツジ、ウマ、ネコ、イヌ、ネズミおよびヤギからなる群から選択される、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
少なくとも１種の二価カチオン放出をさらに増強させる薬剤またはこのような薬剤の組合せを卵母細胞に注入する工程をさらに包含する、請求項２に記載の方法。
【請求項９】
この薬剤が、カルシウムイオノホア、たんぱく質キナーゼインヒビターおよびホスファターゼからなる群から選択される、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
カルシウムイオノホアが、イオノマイシンおよびＡ２３１８７からなる群から選択される、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
たんぱく質キナーゼインヒビターが、６−ジメチルアミノプリン（ＤＭＡＰ）、スタウロスポリン、ブチロラクトン、ロスコビチン、ｐ３４（ｃｄｃ２）インヒビター、２−アミノプリンおよびスフィンゴシンからなる群から選択される、請求項９に記載の方法。
【請求項１２】
ホスファターゼが、ホスファターゼ２Ａおよびホスファターゼ２Ｂからなる群から選択される、請求項９に記載の方法。
【請求項１３】
上記活性化した卵母細胞を胚に発育させることを可能にすることをさらに包含する、請求項２に記載の方法。
【請求項１４】
上記胚が非ヒトであり、また代理母に移植される、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
上記移植された胚を、生存している非ヒト子孫に発育させることを可能にする，請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
上記活性化した卵母細胞を培養し、ブラストシストを生成する、請求項２に記載の方法。
【請求項１７】
上記ブラストシストの内部細胞塊の一部または全部をフィーダー層上で培養し、培養された内部細胞塊を生成することをさらに包含する、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
上記培養された内部細胞塊を相違するフィーダー層上に移動し、上記培養された内部細胞塊の分化を防止する、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
上記培養された内部細胞塊を培養し、培養された内部細胞塊細胞系を生成する、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
細胞質内精子注入（ＩＣＳＩ）の増強方法であって、精子または精子核を卵母細胞中に挿入する前または挿入後に、卵母細胞にオシロゲニンを注入する工程を包含する上記方法。
【請求項２１】
注入された卵母細胞をＣａ２＋含有培地においてインキュベートすることをさらに包含する、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
卵母細胞および精子が哺乳動物の卵母細胞および精子である、請求項２０に記載の方法。
【請求項２３】
卵母細胞が、霊長類、ウシ、ブタ、ヒツジ、ウマ、ネコ、イヌ、ネズミおよびヤギからなる群から選択される、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
精子が、霊長類、ウシ、ブタ、ヒツジ、ウマ、ネコ、イヌ、ネズミおよびヤギからなる群から選択される、請求項２２に記載の方法。
【請求項２５】
少なくとも１種の二価カチオン放出増強剤を卵母細胞に注入する工程をさらに包含する、請求項２０に記載の方法。
【請求項２６】
上記増強剤が、カルシウムイオノホア、たんぱく質キナーゼインヒビターおよびホスファターゼからなる群から選択される、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
カルシウムイオノホアが、イオノマイシンおよびＡ２３１８７からなる群から選択される、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
たんぱく質キナーゼインヒビターが、６−ジメチルアミノプリン（ＤＭＡＰ）、スタウロスポリン、ブチロラクトン、ロスコビチン、ｐ３４（ｃｄｃ２）インヒビター、２−アミノプリンおよびスフィンゴシンからなる群から選択される、請求項２６に記載の方法。
【請求項２９】
ホスファターゼが、ホスファターゼ２Ａおよびホスファターゼ２Ｂからなる群から選択される、請求項２６に記載の方法。
【請求項３０】
卵母細胞の単為生殖活性化方法であって、オシロゲニンを卵母細胞中に注入する工程を包含する上記方法。
【請求項３１】
卵母細胞が、哺乳動物卵母細胞である、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
哺乳動物卵母細胞が、ヒト、霊長類、ウシ、ブタ、ヒツジ、ウマ、ネコ、イヌ、ネズミおよびヤギからなる哺乳動物の群から選択される、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
精子［Ｃａ２＋］ｉ放出活性を予測する方法であって、精子試料中のオシロゲニン濃度を測定することを包含する上記方法。
【請求項３４】
精子［Ｃａ２＋］ｉ放出活性を予測するためのキットであって、オシロゲニンまたはオシロゲニンをコードする核酸を認識し及び結合する、標識した薬剤を包含する上記キット。
【請求項３５】
上記薬剤が、抗−オシロゲニン抗体である、請求項３４に記載のキット。
【請求項３６】
上記薬剤が、オシロゲニンｍＲＮＡに結合する核酸プローブである、請求項３１に記載のキット。
【請求項３７】
オシロゲニンをコードする核酸。
【請求項３８】
請求項３７に記載の核酸を包含するベクター。
【請求項３９】
オシロゲニンが哺乳動物オシロゲニンである、請求項３７に記載の核酸。
【請求項４０】
哺乳動物オシロゲニンが、ヒト、ウシ、ブタ、ヒツジ、ウマ、ネコ、イヌ、ネズミおよびヤギからなるリストから選択される、請求項３９に記載の核酸。
【請求項４１】
請求項３７に記載の核酸によってコードされるオシロゲニンたんぱく質。
【請求項４２】
請求項１に記載の方法によって得られる単離オシロゲニン。
【請求項４３】
組換オシロゲニンたんぱく質であって、
（Ａ）請求項３８に記載のベクターを適当なホストに挿入し；
（Ｂ）このホストを適当な条件下にインキュベートし、オシロゲニンを生成させ；次いで
（Ｃ）上記ホストからオシロゲニンたんぱく質を単離する；
ことによって得られる組換オシロゲニンたんぱく質。
【請求項４４】
オシロゲニンたんぱく質および医薬上で許容される担体を含有する卵母細胞活性化用組成物。
【請求項４５】
少なくとも１種のホスファターゼ、カルシウムイオノホアまたはたんぱく質キナーゼインヒビターをさらに含有する、請求項４４に記載の組成物。
【請求項４６】
オシロゲニンを認識し及び結合する抗体またはその免疫原性フラグメント。
【請求項４７】
上記抗体がモノクローナル抗体である、請求項４６に記載の抗体。
【請求項４８】
上記免疫原性フラグメントが、Ｆａｂ、ｓｃＦｖ、Ｆ（ａｂ’）２およびＦａｂ’からなる群から選択される、請求項４６に記載の抗体または免疫原性フラグメント。
【請求項４９】
上記抗体または免疫原性フラグメントが、標識された抗体である、請求項４６に記載の抗体または免疫原性フラグメント。
【請求項５０】
抗体または免疫原性フラグメントが、同位元素または蛍光ラベルにより標識されている、請求項４８に記載の抗体または免疫原性フラグメント。
【請求項５１】
蛍光ラベルが、ローダミン、フルオレセインまたはローダミングリーンＯである、請求項４９に記載の抗体。
【請求項５２】
精子受精能力を抑制する方法であって、精子におけるオシロゲニン活性を阻害する薬剤を投与する工程を包含する、上記方法。