(57)【要約】  本願発明による抗ヒスタミン物質の製造方法は、乾燥したステビア植物組織に酵母及び水を加えて発酵させる工程と、該発酵工程により得られた発酵ステビアをエタノール水溶液を用いて抽出する工程と、該抽出工程により得られた抽出液を濃縮する工程と、該濃縮工程により得られた濃縮液を分画して90％エタノール可溶画分を取り出す工程とを有することを特徴とする。
2008126638.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
抗ヒスタミン物質の製造方法であって、
乾燥したステビア植物組織に酵母及び水を加えて発酵させる工程と、
前記発酵工程により得られた発酵ステビアをエタノール水溶液を用いて抽出する工程と、
前記抽出工程により得られた抽出液を濃縮する工程と、
前記濃縮工程により得られた濃縮液を分画して90％エタノール可溶画分を取り出す工程と、
を有することを特徴とする、製造方法。
【請求項２】
前記発酵工程において、ステビア植物組織を完全に発酵させることを特徴とする、請求項１に記載の製造方法。
【請求項３】
乾燥したステビア植物組織に酵母及び水を加えて発酵させることにより得られる発酵ステビアをエタノール水溶液を用いて抽出し、その抽出液を濃縮して得られる濃縮液の90％エタノール可溶画分を含むことを特徴とする、抗ヒスタミン物質。
【請求項４】
請求項１又は２に記載の製造方法により製造された抗ヒスタミン物質、又は、請求項３に記載の抗ヒスタミン物質を含む、化粧料。
【請求項５】
請求項１又は２に記載の製造方法により製造された抗ヒスタミン物質、又は、請求項３に記載の抗ヒスタミン物質を含む、医薬品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、花粉症、蕁麻疹、気管支喘息、アトピー症等の病因とされるアレルギー症状改善物質及びその製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
アレルギーとは、免疫反応が特定の抗原に対して過剰に起こることをいう。アレルギーは、その発生機序により大きくＩ型からＶ型に分類されるが、花粉症や蕁麻疹、気管支喘息はＩ型に分類される。またアトピー症もＩ型アレルギーに近いとされている。Ｉ型アレルギーは、ＩｇＥ抗体が肥満細胞あるいは好塩基球に結合することによりこれらの細胞から放出されるヒスタミンやロイコトリエンが全身に遊離されるために発生すると考えられている。【０００３】
アトピー症皮膚炎等に有効とされる外用皮膚病治療剤として、あるいは胃炎、胃カイヨウ等に有効とされる消化器系疾患治療用内服薬として、ステビア茎部の発酵濃縮液を有効成分とするものが知られている。さらに、花粉症等のアレルギー症状に有効とされる抗ヒスタミン作用を有する物質として、ステビアの植物組織の抽出液を発酵させたものが知られている。【０００４】
さらに本願発明者は、上述の技術においてはステビア植物組織の発酵に９０日以上の長期の期間が必要であるという課題に鑑み、ステビアエキスの発酵に要する期間を短縮しつつアレルギー症状を改善させる物質を得ることを可能にするため、ステビアの植物組織を粉砕、混合し精製水に入れて加熱、攪拌、冷却、ろ過してろ液を得、このろ液を減圧濃縮してステビアエキスを得て、このステビアエキスにイースト菌を加えて発酵させてることを特徴とする、アレルギー症状改善物質の製造方法を以前に提案している（特開２００５−３５８８８号公報参照）。【０００５】
このように、花粉症やアトピー症などの改善物質は既に多くのものが提案され市販されているが、アレルギー症状の改善の程度を今よりも向上させたいとは、多くの罹患者が共通に願うところである。かかる状況の中、従来よりも優れたアレルギー症状改善物質を求め、研究開発が精力的に進められている。
【発明の摘要】
【０００６】
本願発明は、特にＩ型アレルギー症状の改善に資すべく、従来よりも優れた抗ヒスタミン作用を呈する物質を提供することを目的とする。
【０００７】
かかる課題を解決すべく研究を重ねた末、本願発明者は、ステビア植物組織を原料として、従来よりも格段に優れた抗ヒスタミン作用を呈する物質を作り出すことに成功した。かかる効果を有する本願発明による抗ヒスタミン物質の製造方法は、乾燥したステビア植物組織に酵母及び水を加えて発酵させる工程と、該発酵工程により得られた発酵ステビアをエタノール水溶液を用いて抽出する工程と、該抽出工程により得られた抽出液を濃縮する工程と、該濃縮工程により得られた濃縮液を分画して90％エタノール可溶画分を取り出す工程とを有することを特徴とする。
【０００８】
本願発明者は、かかる製造方法を経て得られた物質に、強い抗ヒスタミン作用が認められることを発見した。従ってこの物質は、特にＩ型アレルギー症状を呈する者に好適な、化粧料や外用剤、内服剤などに幅広い応用が可能である。
【０００９】
さらに、上述の製造方法により得られる物質は、不快な匂いを全く生じない。これに対して上掲特許文献１に記載の製造方法により得られる抗ヒスタミン物質には、不快な匂いを伴う場合があるという問題があった。本願発明により得られる物質にはそのような問題がないため、外用剤や、特に化粧料に配合する場合に従来物質よりも使いやすいという更なる利点を有する。従って本願発明は、その範囲に、上述の製造方法により得られた物質を含む化粧料や医薬品（外用剤・内用剤）を含む。
【好適な実施形態の詳細な説明】
【００１０】
以下、添付図面を用いて本願発明の実施形態を詳細に説明する。
【００１１】
はじめに、図１のフローチャートに従って、本願発明による抗ヒスタミン物質の製造方法を詳細に説明する。
【００１２】
工程１は、原料となるステビアの植物組織を乾燥・粉砕する工程である。本願発明の原料の一つであるステビア植物は、南米パラグアイを原産とするキク科の多年生植物で、学名をステビア・レバウディアナ・ベルトニー（Stevia Rebaudiana Bertoni）といわれるものである。日本で栽培する場合、２月から５月にかけて、種、株苗あるいは挿し木苗を定植し、栽培を開始することが多い。収穫は、ステビア植物が十分に成熟する、１０月から１１月上旬頃にかけて行われることが多い。
【００１３】
本願発明による抗ヒスタミン物質は、このステビアの植物組織をよく乾燥させ、それを細かく粉砕して作った乾燥ステビア粉末を原料として用いる。粉末といっても、各片の大きさが概ね１cm以下になるように粉砕してあれば十分である。また、ステビア植物の葉部及び茎部を選別して使用することが好ましい。
【００１４】
ステビア植物の葉部及び茎部の乾燥には、できるだけ換気の行き届いた室内にて、常温にて行うことが望ましく、急激な熱をかけたりすることは、好ましくない。
【００１５】
工程２は、工程１で得られた乾燥ステビア粉末を発酵させる工程である。このように、本願発明による抗ヒスタミン物質の製造方法は、乾燥ステビア粉末を直接発酵させることを特徴の１つとする。これに対して上掲特開２００５−３５８８８号公報に開示される製造方法においては、乾燥ステビア粉末からまずエキスを抽出し、その抽出エキスを発酵させるという順序を踏む。しかし本願発明者によるその後の研究結果によれば、乾燥ステビア粉末を直接発酵させた方が、抗ヒスタミン効果が強い物質を製造することができることが判明した。
【００１６】
乾燥ステビア粉末の発酵は、乾燥ステビア粉末に水と酵母を加えて撹拌し、放置することにより行うことができる。加える水の量は、発酵に必要なだけの量があれば良く、全体が湿る程度の量で十分である。酵母としては、サッカロマイセス（Saccharomyces）類を用いることが好ましい。
【００１７】
乾燥ステビア粉末の発酵は、「完全に」行うことが好ましい。発酵していないステビア粉末を舐めてみると甘い味がするが、完全に発酵したステビア粉末には甘さが認められない。従って、完全に甘さが感じられなくなるまで発酵を進めることが望ましい。完全に発酵させるには、常温の場合でおよそ２〜３週間の放置期間が必要である。
【００１８】
酵母の種類は、サッカロマイセス（Saccharomyces）類を用いる。発酵の工程においては、まず乾燥ステビア粉末に水分を含ませ、その上にて、上記酵母を加え、常温にて２〜3週間、水分を補給しながら発酵を継続させる。ステビア粉末の発酵が「完全」に行われたか否かの判断は、例えば、ステビア粉末を口に含み、その甘味を感じなくなった時を「完全」発酵終了とみなすことで行うことができる。
【００１９】
工程３は、工程２で得られた発酵ステビア粉末の抽出・濃縮を行う工程であるが、抽出にはエタノールを用いることが重要である。これは、後の工程４において、90％エタノール可溶画分を取り出すことが本願発明の特徴の一つだからである。
【００２０】
エタノール抽出は、30％程度のエタノール水溶液を準備し、これに発酵ステビア粉末を加え、穏やかに撹拌しながら数時間〜数日、常温にて浸潤させ、行うことができる。これを、140メッシュ程度の大きさで濾過して得られた濾液を抽出液とする。本願発明による製造方法では、この抽出液をさらに60℃ほどの温度で減圧濃縮することにより、抽出液を濃縮する。
【００２１】
工程４は、工程３で得られた濃縮抽出液を分画して、90％エタノール可溶画分を取り出す工程である。分画には、DIAION（登録商標）HP-20などのイオン交換樹脂のカラムに濃縮抽出液を通すことで行うことができる。分画された90％エタノール可溶画分に、強い抗ヒスタミン作用が認められる。
【００２２】
保存・運搬に便利なように、分画された90％エタノール可溶画分を凍結・乾燥してもよい（工程５）。これにより本願発明の好適な実施形態における抗ヒスタミン物質の製造工程が終了する。
＜試験例＞
【００２３】
図１に示した工程１〜５を経て得られた本発明物質について、モルモット摘出回腸標本を用いて抗ヒスタミン作用に関する薬理学的実験を行った。実験は、モルモットより回腸を摘出し、マグヌス法によりヒスタミンによって誘発される等尺性収縮を測定することにより行われた。
【００２４】
ヒスタミン10-6Ｍ（histamine10-6M）をモルモット摘出回腸標本に適用すると収縮が誘発される。そこで、上記製法にて得られた本発明物質の適用の前後においてヒスタミン10-6 Ｍを適用し、収縮反応の差を見ることにより、収縮反応に及ぼす本発明物質の影響を調べた。収縮は張力トランスジューサー（BG-10, Kulite Semiconductor, U.S.A）を介して直流増幅器（ユニパルス株式会社製AM20）にて記録した。ヒスタミンは和光純薬工業株式会社製のものを使用した。
【００２５】
本発明物質の適用のために、栄養液であるロックリンガー液（Lock-Ringer液）に本発明物質を溶解させた試液を作成した。本発明物質の濃度が異なる３種類の試液を作成し、それぞれ本発明物質の濃度がそれぞれ10-5g/ml、10-4g/ml、10-3g/mlになるように調整した。試液はマグヌス管に直接適用した。
【００２６】
ロックリンガー液の組成はNaCl＝154、KCl＝5.6、CaCl2＝2.2、MgCl2＝2.1、NaHCO3＝5.9、Glucose＝2.8（pH＝7.4）であった。栄養液は95%O2と5%CO2の混合ガスを通気した。
【００２７】
実験は室温（23〜24℃）で行なわれた。
【００２８】
実験結果を図２A〜図２Cに示す。図２Aは、本発明物質濃度10-5g/mlの試液についての実験結果である。６時２２分に10-6モルのヒスタミンをモルモット摘出回腸標本に適用して収縮反応を測定し、これをコントロールとする。標本の収縮が収まった後、６時３０分に本発明物質濃度10-5g/mlの試液を標本に適用し、さらに６時３３分に再びヒスタミン10-6モルを標本に適用した。この測定におけるユニパルス株式会社製AM20による記録グラフは図２Aのようになった。
【００２９】
図２Aのグラフの横軸は時間を表し、１マスで２分を表す。縦軸は電圧を表し、回腸標本の収縮の大きさに略比例する（図２Ｂ，図２Ｃも同様）。１回目のヒスタミン適用時の収縮の大きさを１００としたとき、２回目のヒスタミン適用時の収縮の大きさは、グラフ上８９．７と読み取ることができた。２回目のヒスタミン適用時に収縮の大きさが小さくなっているのは、試液の抗ヒスタミン効果によるものと考えられる。
【００３０】
図２Bは、本発明物質濃度10-4g/ml の試液についての実験結果であり、同様にユニパルス株式会社製AM20による記録グラフである。４時４７分に10-6モルのヒスタミンをモルモット摘出回腸標本に適用して収縮反応を測定し、これをコントロールとする。標本の収縮が収まった後、４時５５分に本発明物質濃度10-4/mlの試液を標本に適用し、さらに４時５８分に再びヒスタミン10-6モルを標本に適用した。
【００３１】
試液の本発明物質濃度が10-4/mlの場合、１回目のヒスタミン適用時の収縮の大きさ（直流増幅器の電圧値）を１００としたときの２回目のヒスタミン適用時の収縮の大きさは、グラフ上６０と読み取ることができた。従って、本発明物質濃度が10-5/mlの場合に比べ、強い抗ヒスタミン効果が発揮されていることが分かる。
【００３２】
図２Ｃは、本発明物質濃度10-3g/ml の試液についての実験結果を示す記録グラフである。６時４０分に10-6モルのヒスタミンをモルモット摘出回腸標本に適用して収縮反応を測定し、これをコントロールとする。標本の収縮が収まった後、６時５０分に本発明物質濃度10-3/mlの試液を標本に適用し、さらに６時５２分に再びヒスタミン10-6モルを標本に適用した。
【００３３】
図２Ｃを見ると分かるように、試液の本発明物質濃度が10-3/mlの場合、２回目のヒスタミン適用時において、標本の収縮反応が全く示されない。これは、本願発明者にとっても全く予想しなかった驚くべき結果であった。この結果を鑑みれば、本発明物質の抗ヒスタミン効果は、従来の常識を遙かに越えて強いものであると理解することができる。
【００３４】
図３は図２Ａ〜Ｃの実験結果をグラフにまとめたものであり、横軸は試液中の本発明物質濃度の対数を、縦軸は試液適用後の収縮反応測定値とコントロールとの比を表している。試液中の本発明物質濃度が大きくなるにつれ、収縮反応が激減することが分かりやすく示されている。
【００３５】
以上、本発明による抗ヒスタミン物質の製造方法の詳細と、その製造方法により製造される抗ヒスタミン物質の効果を照明する実験結果を示した。実験結果から、本発明による抗ヒスタミン物質が驚くべき抗ヒスタミン効果を有することが示された。従って、本発明による抗ヒスタミン物質は、化粧料や医薬品に幅広い応用が可能なものであり、特に、花粉症やアトピー症などＩ型アレルギー又はそれに近い症状を呈する者に好適な化粧料や医薬品に応用が期待できる。さらに、本発明による抗ヒスタミン物質は、不快な匂いを全く生じないという特長があり、これが匂いの問題に敏感な化粧料への適用を容易にしている。従って本発明による抗ヒスタミン物質は、花粉症やアトピー症などの症状を呈する者のための化粧品に配合する成分として、非常に大きな期待がかけられている。
【００３６】
本発明による抗ヒスタミン物質は、化粧料においては、頭髪用化粧品、整髪料、養毛料、頭皮料、毛髪着色料、洗髪料、ヘアリンス、皮膚用化粧品・化粧水、化粧液、クリーム、乳液、日焼け、日焼け止め、洗浄料、ひげそり、むだ毛そり、フェイシャルリンス、パック、化粧用油、ボディリンス、マッサージ料、仕上用化粧品・ファンデーション、化粧下地、おしろい、口紅、アイメークアップ、頬化粧料、ボディメークアップ、オーデコロン・香水、浴用化粧料、爪化粧料、ボディパウダー等、また医薬品においては、散剤・細粒剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、丸剤、桿剤、ペンシル剤、内容液剤、外用液剤、エキス剤、硬膏剤、坐剤、エアゾール、ガス剤、薬品吸着剤、眼科用剤、注射剤、絆創膏剤等幅広く使用可能である。
【図面の簡単な説明】
【００３７】
【図１】本願発明による抗ヒスタミン物質の製造方法の流れを示すフローチャートである。
【図２Ａ】本願発明物質の抗ヒスタミン効果を調べた実験結果の一つを示す図である。
【図２Ｂ】本願発明物質の抗ヒスタミン効果を調べた実験結果の一つを示す図である。
【図２Ｃ】本願発明物質の抗ヒスタミン効果を調べた実験結果の一つを示す図である。
【図３】本願発明物質の抗ヒスタミン効果を調べた実験結果の一つを示す図である。
【図１】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図２Ｃ】
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【図３】
2008126638.tif 000007
【手続補正書】
【提出日】平成20年11月21日(2008.11.21)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
抗ヒスタミン物質の製造方法であって、
乾燥したステビア植物組織に酵母及び水を加えて放置することにより、前記乾燥ステビア植物組織を直接発酵させる工程と、
前記発酵工程により得られた発酵ステビアをエタノール水溶液を用いて抽出する工程と、
前記抽出工程により得られた抽出液を濃縮する工程と、
前記濃縮工程により得られた濃縮液を分画して９０％エタノール可溶画分を取り出す工程と、
を有することを特徴とする、製造方法。
【請求項２】
前記発酵工程において、ステビア植物組織を完全に発酵させることを特徴とする、請求項１に記載の製造方法。
【請求項３】
乾燥したステビア植物組織に酵母及び水を加えて放置することにより、前記乾燥ステビア植物組織を直接発酵させ、得られた発酵ステビアをエタノール水溶液を用いて抽出し、その抽出液を濃縮して得られる濃縮液の９０％エタノール可溶画分を含むことを特徴とする、抗ヒスタミン物質。
【請求項４】
請求項１又は２に記載の製造方法により製造された抗ヒスタミン物質、又は、請求項３に記載の抗ヒスタミン物質を含む、化粧料。
【請求項５】
請求項１又は２に記載の製造方法により製造された抗ヒスタミン物質、又は、請求項３に記載の抗ヒスタミン物質を含む、医薬品。
【国際調査報告】
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