【手続補正書】
【提出日】平成15年2月17日(2003.2.17)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
核酸分子を含む細胞であって、該核酸分子が：
ａ）該細胞内で発現される嚢胞性線維症膜貫通伝導レギュレータープレ−ｍＲＮＡへの該核酸分子の結合をターゲットとする、一又はそれ以上のターゲット結合ドメイン；
ｂ）ブランチポイント、ピリミジン域及び３’スプライス受容部位を含む、３’スプライス領域；
ｃ）該３’スプライス領域を該ターゲット結合ドメインから隔離するスペーサー領域；及び
ｄ）該ターゲットプレ−ｍＲＮＡへトランス−スプライスされるヌクレオチド配列；
を含み、
該核酸分子が該細胞内の核スプライシング成分により認識される、
上記細胞。
【請求項２】
核酸分子を含む細胞であって、該核酸分子が：
ａ）該細胞内で発現される嚢胞性線維症膜貫通伝導レギュレータープレ−ｍＲＮＡへの該核酸分子の結合をターゲットとする、一又はそれ以上のターゲット結合ドメイン；
ｂ）３’スプライス受容部位；
ｃ）該３’スプライス受容部位をターゲット結合ドメインから隔離するスペーサー領域；及び
ｄ）ターゲットプレ−ｍＲＮＡへトランス−スプライスされるヌクレオチド配列、
を含み、
該核酸分子が該細胞内の核スプライシング成分により認識される、
上記細胞。
【請求項３】
核酸分子を含む細胞であって、該核酸分子が：
ａ）該細胞内で発現される嚢胞性線維症膜貫通伝導レギュレータープレ−ｍＲＮＡへの該核酸分子の結合をターゲットとする、一又はそれ以上のターゲット結合ドメイン；
ｂ）５’スプライス部位；
ｃ）該５’スプライス部位をターゲット結合ドメインから隔離するスペーサー領域；及び
ｄ）ターゲットプレ−ｍＲＮＡへトランス−スプライスされるヌクレオチド配列、
を含み、
該核酸分子が該細胞内の核スプライシング成分により認識される、
上記細胞。
【請求項４】
該核酸分子が５’供与部位をさらに含む、請求項１に記載の細胞。
【請求項５】
該核酸分子が３’スプライス領域の一又はそれ以上の面に結合する一又はそれ以上の相補的な配列を含む安全ヌクレオチド配列をさらに含む、請求項１に記載の細胞。
【請求項６】
該ターゲットプレ−ｍＲＮＡへの該核酸分子の結合が相補的な、三重らせん形成の、又はタンパク質−核酸の、相互作用によって介される、請求項１に記載の細胞。
【請求項７】
該ターゲットプレ−ｍＲＮＡへトランス−スプライスされるヌクレオチド配列が翻訳可能な嚢胞性線維症膜貫通伝導レギュレーターポリペプチドをコードする、請求項１に記載の細胞。
【請求項８】
該ターゲットプレ−ｍＲＮＡへトランス−スプライスされるヌクレオチド配列が嚢胞性線維症膜貫通伝導レギュレータータンパク質のエキソン１０をコードする、請求項１に記載の細胞。
【請求項９】
組換えベクターを含む細胞であって、該ベクターが、
ａ）該細胞内で発現される嚢胞性線維症膜貫通伝導レギュレータープレ−ｍＲＮＡへの核酸分子の結合をターゲットとする、一又はそれ以上のターゲット結合ドメイン；
ｂ）ブランチポイント、ピリミジン域及び３’スプライス受容部位を含む、３’スプライス領域；
ｃ）該３’スプライス領域を該ターゲット結合ドメインから隔離するスペーサー領域；及び
ｄ）該ターゲットプレ−ｍＲＮＡへトランス−スプライスされるヌクレオチド配列；
を含む核酸分子を発現し、
該核酸分子が該細胞内の核スプライシング成分により認識される、
上記細胞。
【請求項１０】
組換えベクターを含む細胞であって、該ベクターが
ａ）該細胞内で発現される嚢胞性線維症膜貫通伝導レギュレータープレ−ｍＲＮＡへの核酸分子の結合をターゲットとする、一又はそれ以上のターゲット結合ドメイン；
ｂ）３’スプライス受容部位；
ｃ）３’スプライス受容部位をターゲット結合ドメインから隔離するスペーサー領域；及び
ｄ）ターゲットプレ−ｍＲＮＡへトランス−スプライスされるヌクレオチド配列、
を含む核酸分子を発現し、
該核酸分子が該細胞内の核スプライシング成分により認識される、
上記細胞。
【請求項１１】
組換えベクターを含む細胞であって、該ベクターが、
ａ）該細胞内で発現される嚢胞性線維症膜貫通伝導レギュレータープレ−ｍＲＮＡへの核酸分子の結合をターゲットとする、一又はそれ以上のターゲット結合ドメイン；
ｂ）５’スプライス部位；
ｃ）該５’スプライス部位をターゲット結合ドメインから隔離するスペーサー領域；及び
ｄ）ターゲットプレ−ｍＲＮＡへトランス−スプライスされるヌクレオチド配列、
を含む核酸分子を発現し、
該核酸分子が該細胞内の核スプライシング成分により認識される、
上記細胞。
【請求項１２】
核酸分子が５’供与部位をさらに含む、請求項９に記載の細胞。
【請求項１３】
キメラＲＮＡ分子を細胞中で製造する方法であって：
該細胞中で発現されるターゲットプレ−ｍＲＮＡを、
核スプライシング成分により認識される核酸分子と、
該核酸分子の一部がターゲットプレ−ｍＲＮＡの一部へトランス−スプライスされて該細胞内にキメラＲＮＡを生成する条件下で、
接触させることを含み、
該核酸分子が、
ａ）該細胞内で発現される嚢胞性線維症膜貫通伝導レギュレータープレ−ｍＲＮＡへの核酸分子の結合をターゲットとする、一又はそれ以上のターゲット結合ドメイン；
ｂ）ブランチポイント、ピリミジン域及び３’スプライス受容部位を含む、３’スプライス領域；
ｃ）該３’スプライス領域を該ターゲット結合ドメインから隔離するスペーサー領域；及び
ｄ）該ターゲットプレ−ｍＲＮＡへトランス−スプライスされるヌクレオチド配列；
を含む、上記方法。
【請求項１４】
キメラＲＮＡ分子を細胞中で製造する方法であって：
該細胞中で発現されるターゲットプレ−ｍＲＮＡを、
核スプライシング成分により認識される核酸分子と、
該核酸分子の一部がターゲットプレ−ｍＲＮＡの一部へトランス−スプライスされて該細胞内にキメラＲＮＡを生成する条件下で、
接触させることを含み、
該核酸分子が、
ａ）該細胞内で発現される嚢胞性線維症膜貫通伝導レギュレータープレ−ｍＲＮＡへの核酸分子の結合をターゲットとする、一又はそれ以上のターゲット結合ドメイン；
ｂ）３’スプライス受容部位；
ｃ）３’スプライス受容部位をターゲット結合ドメインから隔離するスペーサー領域；及び
ｄ）ターゲットプレ−ｍＲＮＡへトランス−スプライスされるヌクレオチド配列、
を含む、上記方法。
【請求項１５】
キメラＲＮＡ分子を細胞中で製造する方法であって：
該細胞内で発現されるターゲットプレ−ｍＲＮＡを、
核スプライシング成分により認識される核酸分子と、
該核酸分子の一部がターゲットプレ−ｍＲＮＡの一部へとトランス−スプライスされて該細胞内にキメラＲＮＡを生成する条件下で、
接触させることを含み、
該核酸分子が、
ａ）該細胞内で発現される嚢胞性線維症膜貫通伝導レギュレータープレ−ｍＲＮＡへの核酸分子の結合をターゲットとする、一又はそれ以上のターゲット結合ドメイン；
ｂ）５’スプライス部位；
ｃ）該５’スプライス部位をターゲット結合ドメインから隔離するスペーサー領域；及び
ｄ）ターゲットプレ−ｍＲＮＡへトランス−スプライスされるヌクレオチド配列、
を含む、
上記方法。
【請求項１６】
核酸分子が５’供与部位をさらに含む、請求項１３に記載の細胞。
【請求項１７】
キメラＲＮＡ分子が翻訳可能なタンパク質をコードする配列を含む、請求項１３に記載の方法。
【請求項１８】
ａ）細胞内で発現される嚢胞性線維症膜貫通伝導レギュレータープレ−ｍＲＮＡへの該核酸分子の結合をターゲットとする、一又はそれ以上のターゲット結合ドメイン；
ｂ）ブランチポイント、ピリミジン域及び３’スプライス受容部位を含む、３’スプライス領域；
ｃ）該３’スプライス領域を該ターゲット結合ドメインから隔離するスペーサー領域；及び
ｄ）該３’スプライス部位の一の面又は両面に結合する一又はそれ以上の相補的な配列を含む安全配列；
ｅ）ターゲットプレ−ｍＲＮＡへトランス−スプライスされるヌクレオチド配列；
を含み、
該細胞内の核スプライシング成分によって認識される、
核酸分子。
【請求項１９】
ａ）細胞内で発現される嚢胞性線維症膜貫通伝導レギュレータープレ−ｍＲＮＡへの該核酸分子の結合をターゲットとする、一又はそれ以上のターゲット結合ドメイン；
ｂ）３’スプライス受容部位；
ｃ）３’スプライス受容部位をターゲット結合ドメインから隔離するスペーサー領域；
ｄ）該３’スプライス部位の一の面又は両面に結合する一又はそれ以上の相補的な配列を含む安全配列；及び
ｅ）ターゲットプレ−ｍＲＮＡへトランス−スプライスされるヌクレオチド配列、を含み、
該細胞内の核スプライシング成分によって認識される、
核酸分子。
【請求項２０】
ａ）細胞内で発現される嚢胞性線維症膜貫通伝導レギュレータープレ−ｍＲＮＡへの該核酸分子の結合をターゲットとする、一又はそれ以上のターゲット結合ドメイン；
ｂ）５’スプライス部位；
ｃ）該５’スプライス部位をターゲット結合ドメインから隔離するスペーサー領域；
ｄ）該５’スプライス部位の一の面又は両面に結合する一又はそれ以上の相補的な配列を含む安全配列；及び
ｅ）ターゲットプレ−ｍＲＮＡへトランス−スプライスされるヌクレオチド配列、
を含み、
該細胞内の核スプライス成分によって認識される、
核酸分子。
【請求項２１】
核酸分子が５’供与部位をさらに含む、請求項１８に記載の核酸分子。
【請求項２２】
該ターゲットプレ−ｍＲＮＡへの該核酸分子の結合が相補性、三重らせん形成、又はタンパク質−核酸相互作用によって介される、請求項１８に記載の核酸分子。
【請求項２３】
該ターゲットプレ−ｍＲＮＡへトランス−スプライスされるヌクレオチド配列が翻訳可能な嚢胞性線維症膜貫通伝導レギュレーターポリペプチドをコードする、請求項１８に記載の核酸分子。
【請求項２４】
該ターゲットプレ−ｍＲＮＡへトランス−スプライスされるヌクレオチド配列が嚢胞性線維症膜貫通伝導レギュレータータンパク質のエキソン１０をコードする、請求項１８に記載の核酸分子。
【請求項２５】
該ターゲットプレ−ｍＲＮＡへの該核酸分子の結合が相補性、三重らせん形成、又はタンパク質−核酸相互作用によって介される、請求項２０に記載の核酸分子。
【請求項２６】
該ターゲットプレ−ｍＲＮＡへトランス−スプライスされるヌクレオチド配列が翻訳可能な嚢胞性線維症膜貫通伝導レギュレーターポリペプチドをコードする、請求項２０に記載の核酸分子。
【請求項２７】
該ターゲットプレ−ｍＲＮＡへトランス−スプライスされるヌクレオチド配列が嚢胞性線維症膜貫通伝導レギュレータータンパク質のエキソン１０をコードする、請求項２０に記載の核酸分子。
【請求項２８】
真核発現ベクターであって、該ベクターが
ａ）細胞内で発現される嚢胞性線維症膜貫通伝導レギュレータータンパク質プレ−ｍＲＮＡへの該核酸分子の結合をターゲットとする、一又はそれ以上のターゲット結合ドメイン；
ｂ）ブランチポイント、ピリミジン域及び３’スプライス受容部位を含む、３’スプライス領域；
ｃ）該３’スプライス領域を該ターゲット結合ドメインから隔離するスペーサー領域；及び
ｄ）該ターゲットプレ−ｍＲＮＡへトランス−スプライスされるヌクレオチド配列；
を含む核酸分子を発現し、
該核酸分子が該細胞内の核スプライシング成分により認識される、
上記ベクター。
【請求項２９】
真核発現ベクターであって、該ベクターが
ａ）細胞内で発現される嚢胞性線維症膜貫通伝導レギュレータータンパク質プレ−ｍＲＮＡへの該核酸分子の結合をターゲットとする、一又はそれ以上のターゲット結合ドメイン；
ｂ）３’スプライス受容部位；
ｃ）３’スプライス受容部位をターゲット結合ドメインから隔離するスペーサー領域；及び
ｄ）ターゲットプレ−ｍＲＮＡへトランス−スプライスされるヌクレオチド配列、
を含む核酸分子を発現し、
該核酸分子が該細胞内の核スプライシング成分により認識される、
上記ベクター。
【請求項３０】
真核発現ベクターであって、該ベクターが、
ａ）細胞内で発現される嚢胞性線維症膜貫通伝導レギュレータータンパク質プレ−ｍＲＮＡへの該核酸分子の結合をターゲットとする、一又はそれ以上のターゲット結合ドメイン；
ｂ）５’スプライス部位；
ｃ）該５’スプライス部位をターゲット結合ドメインから隔離するスペーサー領域；及び
ｄ）ターゲットプレ−ｍＲＮＡへトランス−スプライスされるヌクレオチド配列、
を含む核酸分子を発現し、
該核酸分子が該細胞内の核スプライシング成分により認識される、
上記ベクター。
【請求項３１】
該核酸分子が５’供与部位をさらに含む、請求項２８に記載の細胞。
【請求項３２】
生理学的に許容される担体及び請求項２８〜３１のいずれか一項に記載の核酸分子を含む組成物。
【請求項３３】
核酸分子を含む細胞であって、該核酸分子が：
ａ）一又はそれ以上のターゲット結合ドメイン；ここで該ターゲット結合ドメインは該細胞内で発現されるプレ−ｍＲＮＡへの結合をターゲットとするランダムヌクレオチド配列である；
ｂ）ブランチポイント、ピリミジン域及び３’スプライス受容部位を含む、３’スプライス領域；
ｃ）該３’スプライス領域を該ターゲット結合ドメインから隔離するスペーサー領域；及び
ｄ）該ターゲットプレ−ｍＲＮＡへトランス−スプライスされるヌクレオチド配列；
を含み、
該核酸分子が該細胞内の核スプライシング成分により認識される、
上記細胞。
【請求項３４】
核酸分子を含む細胞であって、該核酸分子が：
ａ）一又はそれ以上のターゲット結合ドメイン；ここで該ターゲット結合ドメインは該細胞内で発現されるプレ−ｍＲＮＡへの結合をターゲットとするランダムヌクレオチド配列である；
ｂ）５’スプライス部位；
ｃ）該５’スプライス部位をターゲット結合ドメインから隔離するスペーサー領域；及び
ｄ）ターゲットプレ−ｍＲＮＡへトランス−スプライスされるヌクレオチド配列、
を含み、
該核酸分子が該細胞内の核スプライシング成分により認識される、
上記細胞。
【請求項３５】
該核酸分子が５’供与部位をさらに含む、請求項３３に記載の細胞。
【請求項３６】
該核酸分子が３’スプライス領域の一又はそれ以上の面に結合する一又はそれ以上の相補的な配列を含む安全ヌクレオチド配列をさらに含む、請求項３３に記載の細胞。
【請求項３７】
該ターゲットプレ−ｍＲＮＡへの該核酸分子の結合が相補性、三重らせん形成、又はタンパク質−核酸相互作用によって介される、請求項３３に記載の細胞。
【請求項３８】
該ターゲットプレ−ｍＲＮＡへトランス−スプライスされるヌクレオチド配列が翻訳可能なポリペプチドタグをコードする配列を含む、請求項３３に記載の細胞。
【請求項３９】
該ターゲットプレ−ｍＲＮＡへトランス−スプライスされるヌクレオチド配列がヌクレオチド配列タグを含む、請求項３３に記載の細胞。
【請求項４０】
組換えベクターを含む細胞であって、該ベクターが、
ａ）一又はそれ以上のターゲット結合ドメイン；ここで該ターゲット結合ドメインは該細胞内で発現されるプレ−ｍＲＮＡへの結合をターゲットとするランダムヌクレオチド配列である；
ｂ）ブランチポイント、ピリミジン域及び３’スプライス受容部位を含む、３’スプライス領域；
ｃ）該３’スプライス領域を該ターゲット結合ドメインから隔離するスペーサー領域；及び
ｄ）該ターゲットプレ−ｍＲＮＡへトランス−スプライスされるヌクレオチド配列；
を含む核酸分子を発現し、
該核酸分子が該細胞内の核スプライシング成分により認識される、
上記細胞。
【請求項４１】
組換えベクターを含む細胞であって、該ベクターが、
ａ）一又はそれ以上のターゲット結合ドメイン；ここで該ターゲット結合ドメインは該細胞内で発現されるプレ−ｍＲＮＡへの結合をターゲットとするランダムヌクレオチド配列である；
ｂ）５’スプライス部位；
ｃ）該５’スプライス部位をターゲット結合ドメインから隔離するスペーサー領域；及び
ｄ）ターゲットプレ−ｍＲＮＡへトランス−スプライスされるヌクレオチド配列、
を含む核酸分子を発現し、
該核酸分子が該細胞内の核スプライシング成分により認識される、
上記細胞。
【請求項４２】
核酸分子が５’供与部位をさらに含む、請求項４０に記載の細胞。
【請求項４３】
キメラＲＮＡ分子を細胞中で製造する方法であって：
該細胞内で発現されるターゲットプレ−ｍＲＮＡを、
核スプライシング成分により認識される核酸分子と、
該核酸分子の一部がターゲットプレ−ｍＲＮＡの一部へとトランス−スプライスされて該細胞内にキメラＲＮＡを生成する条件下で、
接触させることを含み、
該核酸分子が、
ａ）一又はそれ以上のターゲット結合ドメイン；ここで該ターゲット結合ドメインは該細胞内で発現されるプレ−ｍＲＮＡへの結合をターゲットとするランダムヌクレオチド配列である；
ｂ）ブランチポイント、ピリミジン域及び３’スプライス受容部位を含む、３’スプライス領域；
ｃ）該３’スプライス領域を該ターゲット結合ドメインから隔離するスペーサー領域；及び
ｄ）該ターゲットプレ−ｍＲＮＡへトランス−スプライスされるヌクレオチド配列；
を含む、上記方法。
【請求項４４】
キメラＲＮＡ分子を細胞中で製造する方法であって：
該細胞内で発現されるターゲットプレ−ｍＲＮＡを、
核スプライシング成分により認識される核酸分子と、
該核酸分子の一部がターゲットプレ−ｍＲＮＡの一部へとトランス−スプライスされて該細胞内にキメラＲＮＡを生成する条件下で、
接触させることを含み、
該核酸分子が、
ａ）一又はそれ以上のターゲット結合ドメイン；ここで該ターゲット結合ドメインは該細胞内で発現されるプレ−ｍＲＮＡへの結合をターゲットとするランダムヌクレオチド配列である；
ｂ）５’スプライス部位；
ｃ）該５’スプライス部位をターゲット結合ドメインから隔離するスペーサー領域；及び
ｄ）ターゲットプレ−ｍＲＮＡへトランス−スプライスされるヌクレオチド配列、
を含む、
上記方法。
【請求項４５】
核酸分子が５’供与部位をさらに含む、請求項４３に記載の細胞。
【請求項４６】
キメラＲＮＡ分子が翻訳可能なポリペプチドタグをコードする配列を含む、請求項５４に記載の方法。
【請求項４７】
キメラＲＮＡ分子がヌクレオチド配列タグを含む、請求項４３に記載の方法。
【請求項４８】
ａ）一又はそれ以上のターゲット結合ドメイン；ここで該ターゲット結合ドメインは該細胞内で発現されるプレ−ｍＲＮＡへの結合をターゲットとするランダムヌクレオチド配列である；
ｂ）ブランチポイント、ピリミジン域及び３’スプライス受容部位を含む、３’スプライス領域；
ｃ）該３’スプライス領域を該ターゲット結合ドメインから隔離するスペーサー領域；及び
ｄ）該３’スプライス部位の一の面又は両面に結合する一又はそれ以上の相補的な配列を含む安全配列；
ｅ）ターゲットプレ−ｍＲＮＡへトランス−スプライスされるヌクレオチド配列；
を含み、
細胞内の核スプライシング成分によって認識される、
核酸分子。
【請求項４９】
ａ）一又はそれ以上のターゲット結合ドメイン；ここで該ターゲット結合ドメインは該細胞内で発現されるプレ−ｍＲＮＡへの結合をターゲットとするランダムヌクレオチド配列である；
ｂ）５’スプライス部位；
ｃ）該５’スプライス部位をターゲット結合ドメインから隔離するスペーサー領域；及び
ｄ）該５’スプライス部位の一の面又は両面に結合する一又はそれ以上の相補的な配列を含む安全配列；
ｅ）ターゲットプレ−ｍＲＮＡへトランス−スプライスされるヌクレオチド配列、
を含み、
細胞内の核スプライシング成分によって認識される、
核酸分子。
【請求項５０】
核酸分子が５’供与部位をさらに含む、請求項４８又は４９に記載の核酸分子。
【請求項５１】
該ターゲットプレ−ｍＲＮＡへの該核酸分子の結合が相補性、三重らせん形成、又はタンパク質−核酸相互作用によって介される、請求項４８又は４９に記載の核酸分子。
【請求項５２】
該ターゲットプレ−ｍＲＮＡへトランス−スプライスされるヌクレオチド配列が翻訳可能なポリペプチドタグをコードする配列を含む、請求項４８又は４９に記載の核酸分子。
【請求項５３】
該ターゲットプレ−ｍＲＮＡへトランス−スプライスされるヌクレオチド配列がヌクレオチド配列タグを含む、請求項４８又は４９に記載の核酸分子。
【請求項５４】
該ターゲットプレ−ｍＲＮＡへの該核酸分子の結合が相補性、三重らせん形成、又はタンパク質−核酸相互作用によって介される、請求項５０に記載の核酸分子。
【請求項５５】
該ターゲットプレ−ｍＲＮＡへトランス−スプライスされるヌクレオチド配列が翻訳可能なポリペプチドタグをコードする配列を含む、請求項５０に記載の核酸分子。
【請求項５６】
該ターゲットプレ−ｍＲＮＡへトランス−スプライスされるヌクレオチド配列がヌクレオチド配列タグを含む、請求項５０に記載の核酸分子。
【請求項５７】
真核発現ベクターであって、該ベクターが
ａ）一又はそれ以上のターゲット結合ドメイン；ここで該ターゲット結合ドメインは細胞内で発現されるプレ−ｍＲＮＡへの結合をターゲットとするランダムヌクレオチド配列である；
ｂ）ブランチポイント、ピリミジン域及び３’スプライス受容部位を含む、３’スプライス領域；
ｃ）該３’スプライス領域を該ターゲット結合ドメインから隔離するスペーサー領域；及び
ｄ）該ターゲットプレ−ｍＲＮＡへトランス−スプライスされるヌクレオチド配列；
を含む核酸分子を発現し、
該核酸分子が該細胞内の核スプライシング成分により認識される、
上記ベクター。
【請求項５８】
真核ベクターであって、該ベクターが、
ａ）一又はそれ以上のターゲット結合ドメイン；ここで該ターゲット結合ドメインは該細胞内で発現されるプレ−ｍＲＮＡへの結合をターゲットとするランダムヌクレオチド配列である；
ｂ）５’スプライス部位；
ｃ）該５’スプライス部位をターゲット結合ドメインから隔離するスペーサー領域；及び
ｄ）ターゲットプレ−ｍＲＮＡへトランス−スプライスされるヌクレオチド配列、
を含む核酸分子を発現する、
上記ベクター。
【請求項５９】
該核酸分子が５’供与部位をさらに含む、請求項５７に記載のベクター。
【請求項６０】
組換え発現ベクターを含む発現ライブラリーであって、
該ベクターが、
ａ）一又はそれ以上のターゲット結合ドメイン；ここで該ターゲット結合ドメインは該細胞内で発現されるプレ−ｍＲＮＡへの結合をターゲットとするランダムヌクレオチド配列である；
ｂ）ブランチポイント、ピリミジン域及び３’スプライス受容部位を含む、３’スプライス領域；
ｃ）該３’スプライス領域を該ターゲット結合ドメインから隔離するスペーサー領域；及び
ｄ）該ターゲットプレ−ｍＲＮＡへトランス−スプライスされるヌクレオチド配列；
を含む核酸分子を発現し、
該核酸分子が該細胞内の核スプライシング成分により認識される、
上記ベクター。
【請求項６１】
組換え発現ベクターを含む発現ライブラリーであって、
該ベクターが、
ａ）一又はそれ以上のターゲット結合ドメイン；ここで該ターゲット結合ドメインは該細胞内で発現されるプレ−ｍＲＮＡへの結合をターゲットとするランダムヌクレオチド配列である；
ｂ）５’スプライス部位；
ｃ）該５’スプライス部位をターゲット結合ドメインから隔離するスペーサー領域；及び
ｄ）ターゲットプレ−ｍＲＮＡへトランス−スプライスされるヌクレオチド配列、
を含む核酸分子を発現し、
該核酸分子が該細胞内の核スプライシング成分により認識される、
上記ベクター。
【請求項６２】
核酸分子が５’供与部位をさらに含む、請求項６０に記載の発現ライブラリー。
【請求項６３】
該ターゲットプレ−ｍＲＮＡへスプライスされるヌクレオチド配列がヌクレオチド配列タグを含む、請求項５８又は５９に記載の発現ライブラリー。
【請求項６４】
該ターゲットプレ−ｍＲＮＡへスプライスされるヌクレオチド配列が翻訳可能なポリペプチドタグをコードする配列を含む、請求項５８又は５９に記載の発現ライブラリー。
【請求項６５】
ａ）ターゲット結合ドメインを含む核酸分子を、
該核酸分子の一部がターゲットプレ−ｍＲＮＡの一部へトランス−スプライスされ、キメラｍＲＮＡを生成する条件下で、接触させ；ここで該ターゲット結合ドメインはターゲットプレ−ｍＲＮＡ分子への結合をターゲットとするランダムヌクレオチド配列である；
ｂ）該キメラｍＲＮＡ分子を増幅させ；
ｃ）増幅された分子を選択的に精製し；そして、
ｄ）増幅された分子のヌクレオチド配列を決定し、それによりイントロン−エキソン境界を同定すること、
を含むプレ−ｍＲＮＡ分子中のエキソン−イントロン境界をマッピングする方法。
【請求項６６】
ａ）ペプチドタグ又はマーカーをコードする配列及びターゲット結合ドメインを含む核酸分子を、
プレ−ｍＲＮＡ分子と、
該プレ−トランス−スプライシング分子の一部が該ターゲットプレ−ｍＲＮＡの一部へとトランス−スプライスされ、キメラｍＲＮＡを生成する条件下で、
接触させ；
ここで該ターゲット結合ドメインはランダムヌクレオチド配列である；
ｂ）融合ポリペプチドをアフィニティー精製し；そして、
ｃ）融合タンパク質のペプチド配列を決定すること、
を含む、細胞中に発現されるタンパク質を同定する方法。
【請求項６７】
融合ポリペプチドＨＩＳポリペプチドである、請求項６６に記載の方法。
【請求項６８】
融合ポリペプチドがＦＬＡＧポリペプチドである、請求項６６に記載の方法。
【請求項６９】
融合ポリペプチドがグルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼポリペプチドである、請求項６６に記載の方法。