【手続補正書】
【提出日】平成16年5月6日(2004.5.6)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】請求項１６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【請求項１６】
単離されたガラニン遺伝子アンプリコンであって、以下のポリヌクレオチドからなる群から選択されるものの複数のコピーを含んでなる、アンプリコン：
ａ）配列番号６または配列番号７に記載されているポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
ｂ）配列番号５に記載のポリヌクレオチド；および
ｃ）前記ａ）またはｂ）のポリヌクレオチドと少なくとも約９０％の配列同一性を有するポリヌクレオチド。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１０３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１０３】
「ガラニン」という用語は、ガラニン核酸（ＤＮＡおよびＲＮＡ）、タンパク質（またはポリペプチド）、それらの多型変異体、対立遺伝子、突然変異体および種間ホモログ（（ｉ）ＧｅｎＢａｎｋ寄託番号Ａ２８０２５、ヒトプレプロガラニンｃＤＮＡ配列である配列番号５［ＵｎｉｇｅｎｅクラスターＩＤ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ＵｎｉＧｅｎｅ／）：Ｈｓ．１９０７，Ｈｕｍａｎ  Ｇａｌａｎｉｎ．］のヌクレオチド配列と実質的なヌクレオチド配列の相同性；または（ｉｉ）コードするアミノ酸配列ＧｅｎＢａｎｋ寄託番号ＣＡＡ０１９０７、ヒトプレプロガラニンアミノ酸配列である配列番号６と実質的な配列の相同性；または（ｉｉｉ）コードしているアミノ酸配列ＧｅｎＢａｎｋ寄託番号ＡＡＢ２０７４０、ヒトガラニンペプチド配列である配列番号７と実質的な配列の相同性を有する）を意味する。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２４１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２４１】
本発明の別の態様によれば、ガラニン、ＧＡＬＲ２またはＧＡＬＲ３のアミノ酸配列（例えば、配列番号６、配列番号４または配列番号２）に由来のペプチドが提供される。この態様から、当業者は、本発明によるペプチドまたはその類似体は、種々の製造業者により販売されている自動機器により合成でき、商業的に特注および作製されることができ、または上記したような好適な発現ベクターから発現できることを認識するであろう。「アミノ酸類似体」という用語は、すでに本明細書中で説明した。本発明によるペプチドを説明する目的では、類似体は、さらに分岐または非線状ペプチドをも含むことができる。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０３０１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０３０１】
例ＩＸ：小干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）：
センスおよびアンチセンスｓｉＲＮＡ二本鎖は、本明細書に開示されているＤＮＡ配列の標的領域（例えば、配列番号１、配列番号３、配列番号５またはそのフラグメント）に基づいて作製され、典型的には長さおよびコンスティチュエンシーが１００塩基対（「ｂｐ」）未満であり、好ましくは約３０ｂｐ以下であり、相補的ＤＮＡ鎖を使用することを含む当技術分野において公知の方法または合成方法により作製する。ペプチド核酸等のポリ核酸修飾法を用いたｓｉＲＮＡ誘導体も、本発明により用いることができる。ｓｉＲＮＡは、妨害を生じることができ、細胞、例えば、哺乳動物細胞（ヒト細胞を含む）中および体内、例えば、哺乳動物（ヒトを含む）の体内において、特定遺伝子の後転写抑制を生じることがある。本発明による典型的なｓｉＲＮＡは、最大で２９ｂｐ、２５ｂｐ、２２ｂｐ、２１ｂｐ、２０ｂｐ、１５ｂｐ、１０ｂｐ、５ｂｐまたはこれらの付近もしくは間のいずれかの整数のｂｐを有する。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０３０２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０３０２】
標的領域は、ＤＮＡ配列（例えば、配列番号１、配列番号３、配列番号５またはそのフラグメント）から選択される。標的領域の選択およびｓｉＲＮＡオリゴ、例えば、５’または３’ＵＴＲの設計に、種々の方法を利用でき、開始コドンの近くの領域は、これらが調節タンパク質結合部位においてより含量が多い場合があるので、避けなければならない。設計された配列は、好ましくはＡＡ−（Ｎ２７以下のヌクレオチド）−ＴＴを含み、Ｇ／Ｃ含量が約３０％〜７０％である。好適な配列がみられない場合には、フラグメントサイズを、配列ＡＡ（Ｎ２９ヌクレオチド）に延長する。センスｓｉＲＮＡの配列は、それぞれ例えば、（Ｎ２７ヌクレオチド）−ＴＴまたはＮ２９ヌクレオチドに相当する。後者の場合、センスｓｉＲＮＡの３’端を、ＴＴに転化する。この配列を転化する理由は、センスおよびアンチセンス３’オーバーハングの配列組成に関して対称的な二本鎖を生成することにある。対称的３’オーバーハングにより、センスとアンチセンスの標的ＲＮＡ切断ｓｉＲＮＰがほぼ等しい比で形成される、小干渉リボヌクレオタンパク質粒子（ｓｉＲＮＰ)が確実に形成されやすくなると思われる(Ｅｌｂａｓｈｉｒ等、Ｇｅｎｅｓ＆Ｄｅｖ．１５：１８８−２００，２００１)。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０３０４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０３０４】
標的領域（塩基位置番号２〜３０、配列番号８）
５’−ＴＧＧＣＴＧＡＴＧＣＣＣＡＧＡＡＣＡＴＴＴＣＡＣＴＧＧＡＣ−３’および
対応センスｓｉＲＮＡ（配列番号９）
５’−ＵＧＧＣＵＧＡＵＧＣＣＣＡＧＡＡＣＡＵＵＵＣＡＣＵＧＧＡＣ−３’；
標的領域（塩基位置番号３〜３１、配列番号１０）
５’−ＧＧＣＴＧＡＴＧＣＣＣＡＧＡＡＣＡＴＴＴＣＡＣＴＧＧＡＣＡ−３’および
対応センスｓｉＲＮＡ（配列番号１１）
５’−ＧＧＣＵＧＡＵＧＣＣＣＡＧＡＡＣＡＵＵＵＣＡＣＵＧＧＡＣＡ−３’；
標的領域（塩基位置番号４〜３２、配列番号１２）
５’−ＧＣＴＧＡＴＧＣＣＣＡＧＡＡＣＡＴＴＴＣＡＣＴＧＧＡＣＡＧ−３’および
対応センスｓｉＲＮＡ（配列番号１３）
５’−ＧＣＵＧＡＵＧＣＣＣＡＧＡＡＣＡＵＵＵＣＡＣＵＧＧＡＣＡＧ−３’；およびこの連鎖で、ＧＡＬＲ３コード配列の終わりまで継続する、例えば、
標的領域（塩基位置番号１０７１〜１０９９、配列番号１４）
５’−ＣＧＴＣＣＡＣＧＧＣＧＧＡＧＡＧＧＣＴＧＣＣＣＧＡＧＧＡＣ−３’および
対応センスｓｉＲＮＡ（配列番号１５）
５’−ＣＧＵＣＣＡＣＧＧＣＧＧＡＧＡＧＧＣＵＧＣＣＣＧＡＧＧＡＣ−３’；並びに本明細書に記載されているもの等
が含まれる。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０３０６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０３０６】
標的領域（塩基位置番号２〜３０、配列番号１６）
５’−ＴＧＡＡＣＧＴＣＴＣＧＧＧＣＴＧＣＣＣＡＧＧＧＧＣＣＧＧＧ−３’および
対応センスｓｉＲＮＡ（配列番号１７）
５’−ＵＧＡＡＣＧＵＣＵＣＧＧＧＣＵＧＣＣＣＡＧＧＧＧＣＣＧＧＧ−３’；
標的領域（塩基位置番号３〜３１、配列番号１８）
５’−ＧＡＡＣＧＴＣＴＣＧＧＧＣＴＧＣＣＣＡＧＧＧＧＣＣＧＧＧＡ−３’および
対応センスｓｉＲＮＡ（配列番号１９）
５’−ＧＡＡＣＧＵＣＵＣＧＧＧＣＵＧＣＣＣＡＧＧＧＧＣＣＧＧＧＡ−３’；
標的領域（塩基位置番号４〜３２、配列番号２０）
５’−ＡＡＣＧＴＣＴＣＧＧＧＣＴＧＣＣＣＡＧＧＧＧＣＣＧＧＧＡＡ−３’および
対応センスｓｉＲＮＡ（配列番号２１）
５’−ＡＡＣＧＵＣＵＣＧＧＧＣＵＧＣＣＣＡＧＧＧＧＣＣＧＧＧＡＡ−３’；およびこの連鎖で、ＧＡＬＲ２コード配列の終わりまで継続する、例えば、
標的領域（塩基位置番号１１３２〜１１６０、配列番号２２）
５’−ＧＧＣＧＡＣＡＧＣＡＴＣＣＴＧＡＣＧＧＴＴＧＡＴＧＴＧＧＣ−３’および
対応センスｓｉＲＮＡ（配列番号２３）
５’−ＧＧＣＧＡＣＡＧＣＡＵＣＣＵＧＡＣＧＧＵＵＧＡＵＧＵＧＧＣ−３’；並びに本明細書に記載されているもの等
が含まれる。
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０３０７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０３０７】
ガラニンｓｉＲＮＡ：センスまたはアンチセンスｓｉＲＮＡを、本明細書に開示されているＤＮＡ配列（配列番号５参照）の標的領域に基づいて合成する。これらのｓｉＲＮＡは、最大で２９ｂｐ、２５ｂｐ、２２ｂｐ、２１ｂｐ、２０ｂｐ、１５ｂｐ、１０ｂｐ、５ｂｐまたはこれらの付近もしくは間のいずれかの整数のｂｐのフラグメントを含む。例えば、２９ｂｐのｓｉＲＮＡには、
【手続補正９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０３０８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０３０８】
標的領域（塩基位置番号１５〜４３、配列番号２４）
５’−ＴＧＧＣＣＣＧＡＧＧＣＡＧＣＧＣＣＣＴＣＣＴＧＣＴＣＧＣＣ−３’および
対応センスｓｉＲＮＡ（配列番号２５）
５’−ＵＧＧＣＣＣＧＡＧＧＣＡＧＣＧＣＣＣＵＣＣＵＧＣＵＣＧＣＣ−３’；
標的領域（塩基位置番号１６〜４４、配列番号２６）
５’−ＧＧＣＣＣＧＡＧＧＣＡＧＣＧＣＣＣＴＣＣＴＧＣＴＣＧＣＣＴ−３’および
対応センスｓｉＲＮＡ（配列番号２７）
５’−ＧＧＣＣＣＧＡＧＧＣＡＧＣＧＣＣＣＵＣＣＵＧＣＵＣＧＣＣＵ−３’；
標的領域（塩基位置番号１７〜４５、配列番号２８）
５’−ＧＣＣＣＧＡＧＧＣＡＧＣＧＣＣＣＴＣＣＴＧＣＴＣＧＣＣＴＣ−３’および
対応センスｓｉＲＮＡ（配列番号２９）
５’−ＧＣＣＣＧＡＧＧＣＡＧＣＧＣＣＣＵＣＣＵＧＣＵＣＧＣＣＵＣ−３’；およびこの連鎖で、ガラニンコード配列の終わりまで継続する、例えば、
標的領域（塩基位置番号３５３〜３８１、配列番号３０）
５’−ＧＣＡＧＣＣＴＣＣＴＣＡＧＡＡＧＡＣＡＴＣＧＡＧＣＧＧＴＣ−３’および
対応センスｓｉＲＮＡ（配列番号３１）
５’−ＧＣＡＧＣＣＵＣＣＵＣＡＧＡＡＧＡＣＡＵＣＧＡＧＣＧＧＵＣ−３’；並びに本明細書に記載されているもの等
が含まれる。
【手続補正１０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０３０９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０３０９】
本明細書に記載されているように、ＧＡＬＲ３、ＧＡＬＲ２およびガラニンのオリゴは、設定基準に基づいて設計することもできる。３’端に「Ｃ」を含む２９ｂｐ「センス」配列（例えば、ＧＡＬＲ３コード配列の塩基位置番号２で開始する標的領域）は、ＧＡＬＲ３コード配列（配列番号１）から選択されることができる。終止配列（例えば、ＡＡＡＡＡＡ、配列番号３２）、ＧＡＬＲ３アンチセンス配列、ループ（例えば、ＧＡＡＧＣＴＴＧ、配列番号３３）および逆プライマー（例えば、Ｕ６逆プライマー、ＧＧＴＧＴＴＴＣＧＴＣＣＴＴＴＣＣＡＣＡＡ、配列番号３４）を、続いて２９ｂｐセンス鎖に付加してＧＡＬＲ３  ＰＣＲプライマーを構築することができる（例えば、Ｐａｄｄｉｓｏｎ等、Ｇｅｎｅｓ＆Ｄｅｖ．１６：９４８−９５８，２００２参照）。勿論、他のセンスおよびアンチセンス配列を、標的分子から選択してその分子についてのｓｉＲＮＡを構築できる。