【手続補正書】
【提出日】平成16年2月3日(2004.2.3)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】請求項１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【請求項１】
親水性の多孔性シートの片面の一部に撥水性の絶縁膜が形成され、この絶縁膜上から多孔性シート上に延在するようにカソードおよびカソードが外部との電気コンタクトをとるためのパッドを有するカソードパターンが形成され、また該多孔性シートの反対側の面の一部に撥水性の絶縁膜が形成され、この絶縁膜上から多孔性シート上に延在するようにアノードおよびアノードが外部との電気コンタクトをとるためのパッドを有するアノードパターンが形成され、バイオセンサのチップ側面およびカソードの形成された面がパッド部分を残して酸素透過性材料で被覆され、アノードの形成された面がパッド部分を残して酸素透過性材料またはプラスチックシートで被覆され、感応部に生体関連物質固定層が形成され、該親水性の多孔性シート中に電解液がしみこまされていることを特徴とする小型バイオセンサ。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】請求項２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【請求項２】
親水性の多孔性シートの片面の一部に撥水性の絶縁膜が形成され、この絶縁膜上から多孔性シート上に延在するようにカソードおよびカソードが外部との電気コンタクトをとるためのパッドを有するカソードパターンならびにアノードおよびアノードが外部との電気コンタクトをとるためのパッドを有するアノードパターンが形成され、また該多孔性シートの反対側の面は全面に撥水性の絶縁膜が形成されるかプラスチックシートで被覆されており、バイオセンサのチップ側面ならびにカソードおよびアノードの形成された面がそれぞれのパッド部分を残して酸素透過性材料で被覆され、感応部に生体関連物質固定層が形成され、該親水性の多孔性シート中に電解液がしみこまされていることを特徴とする小型バイオセンサ。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】請求項１８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【請求項１８】
以下の工程を含む小型バイオセンサの製造方法。
（１）親水性の多孔性シートの両面に、該多孔性シートの一部が露出するようにして撥水性の絶縁膜を形成する。
（２）前記絶縁膜から前記多孔性シート上に延在するように、カソードおよびカソードが外部との電気コンタクトをとるためのパッドを有するカソードパターンを片面に、アノードとアノードが外部との電気コンタクトをとるためのパッドを有するアノードパターンをその反対側の面に形成する。
（３）カソードパターンの形成された面を前記パッド部分を除いて酸素透過性材料で被覆するとともに、アノードパターンが形成された面を前記パッド部分を除いて酸素透過性材料またはプラスチックシートで被覆し、その際、微生物の懸濁液をメンブランフィルターにより濾過し、該微生物を該メンブランフィルター上に吸着固定した後、これを自然乾燥して得たメンブランフィルターの該微生物の吸着固定されている面を、酸素透過性材料の塗布直後かつ硬化前に酸素透過性材料上に接着することにより感応部に生体関連物質固定層を形成する。
（４）多孔性シートからチップを切り出し、チップの側面を酸素透過性材料で被覆する。
（５）電解液をチップの一部から前記多孔性シートにしみこませる。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００７】
すなわち、本発明の第１の態様のバイオセンサは、親水性の多孔性シートの片面の一部に撥水性の絶縁膜が形成され、この絶縁膜上から多孔性シート上に延在するようにカソードおよびカソードが外部との電気コンタクトをとるためのパッドを有するカソードパターンが形成され、また該多孔性シートの反対側の面の一部に撥水性の絶縁膜が形成され、この絶縁膜上から多孔性シート上に延在するようにアノードおよびアノードが外部との電気コンタクトをとるためのパッドを有するアノードパターンが形成され、バイオセンサのチップ側面およびカソードの形成された面がパッド部分を残して酸素透過性材料で被覆され、アノードの形成された面がパッド部分を残して酸素透過性材料またはプラスチックシートで被覆され、感応部に生体関連物質固定層が形成され、該親水性の多孔性シート中に電解液がしみこまされていることを特徴とする小型バイオセンサである。


【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００８】
また、本発明の第２の態様のバイオセンサは、親水性の多孔性シートの片面の一部に撥水性の絶縁膜が形成され、この絶縁膜上から多孔性シート上に延在するようにカソードおよびカソードが外部との電気コンタクトをとるためのパッドを有するカソードパターンならびにアノードおよびアノードが外部との電気コンタクトをとるためのパッドを有するアノードパターンが形成され、また該多孔性シートの反対側の面は全面に撥水性の絶縁膜が形成されるかプラスチックシートで被覆されており、バイオセンサのチップ側面ならびにカソードおよびアノードの形成された面がそれぞれのパッド部分を残して酸素透過性材料で被覆され、感応部に生体関連物質固定層が形成され、該親水性の多孔性シート中に電解液がしみこまされていることを特徴とする小型バイオセンサである。


【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２５】
（ａ）以下の工程を含む小型バイオセンサの製造方法。
（１）親水性の多孔性シートの両面に、該多孔性シートの一部が露出するようにして撥水性の絶縁膜を形成する。
（２）前記絶縁膜から前記多孔性シート上に延在するように、カソードおよびカソードが外部との電気コンタクトをとるためのパッドを有するカソードパターンを片面に、アノードとアノードが外部との電気コンタクトをとるためのパッドを有するアノードパターンをその反対側の面に形成する。
（３）カソードパターンの形成された面を前記パッド部分を除いて酸素透過性材料で被覆するとともに、アノードパターンが形成された面を前記パッド部分を除いて酸素透過性材料またはプラスチックシートで被覆し、その際、微生物の懸濁液をメンブランフィルターにより濾過し、該微生物を該メンブランフィルター上に吸着固定した後、これを自然乾燥して得たメンブランフィルターの該微生物の吸着固定されている面を、酸素透過性材料の塗布直後かつ硬化前に酸素透過性材料上に接着することにより感応部に生体関連物質固定層を形成する。
（４）多孔性シートからチップを切り出し、チップの側面を酸素透過性材料で被覆する。
（５）電解液をチップの一部から前記多孔性シートにしみこませる。


【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４１】
上記バイオセンサの変形例として、差動型センサを作製することができる。すなわち、トランスデューサとなるべき酸素電極を２個並列的にならべ、一方の感応部に生体関連物質を固定し、他方には生体関連物質を固定しない（第３の態様のバイオセンサ）（図７）。これにより、測定溶液の溶存酸素濃度の変動の影響を減らすことができる。なお、固定に光硬化性樹脂などの担体を使用する場合には、生体関連物質のない方にも担体の層を形成しておくと、２個の感応部の特性がそろいやすくなり、センサの精度が向上する。また、トランスデューサとして２個の独立した酸素電極を使用するのではなく、１個のチップ内にカソード３を２個有し、１個のアノード６を共有する構造とすることもできる（第５の態様のバイオセンサ）（図８）。また、これらのカソードとアノードを同じ面に形成することもできる（第４および第６のバイオセンサ）。


【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６７】
（６）菌体の分離
培養した酵母を1500 rpmで１５分間遠心分離した後、リン酸緩衝液（100 mM、pH 7.0)で２回洗浄し、再度遠心分離を行った。


【手続補正９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００７４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００７４】
（４）酸素透過膜の形成および酵母の固定
カソード３を形成した面にシリコーンゴム（信越化学製、KE4895）を塗布し、その直後に、（３）で得られたメンブランフィルターを適当な形に切断し、酵母の吸着固定された面をシリコーンゴム上に貼り付け、酵母を固定した。シリコーンゴムの硬化は、水蒸気を飽和させた雰囲気下で常温で行った。メンブランフィルターを貼り付けないこと以外は同様にして、アノード６が形成された面にもシリコーンゴムを塗布し、硬化させた。なお、それぞれの膜形成にあたっては、測定器に接続する際のコンタクトを取るパッドの部分は、実施例１と同様にしてシリコーンゴムがつかないように保護した。


【手続補正１０】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図６】
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