【誤訳訂正書】
【提出日】平成14年7月12日(2002.7.12)
【誤訳訂正１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】全文
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【書類名】明細書
【発明の名称】新しい種類の生理活性糖タンパク質
【特許請求の範囲】
【請求項１】ヒトおよび動物の各種の臓器、血清および胆汁から採取した組織の細胞間隙より、等電点電気泳動によって抽出した糖タンパク質であって、硫酸アンモニウムの飽和（１００％）溶液に可溶であり、見かけの分子量が１０〜４５ｋＤａであって、１０−１２〜１０−２９モル／リットル以下の極めて低用量で高い生物活性を有する糖タンパク質。
【請求項２】有効量の請求項１記載の糖タンパク質および製薬的に許容可能な担体を含む製薬組成物。
【請求項３】請求項１記載の糖タンパク質の薬剤としての使用。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
（概要）
本発明は調合および技術生化学に関し、生物活性化学組成物の入手について述べる。本発明は細胞生物学、医学および獣医学において使用できる。
【０００２】
（以前の技術レベル）
糖タンパク質は、タンパク質部分と、ポリペプチド鎖に共有、異極または配位結合可能であり、加水分解物中にはアミノ酸が存在する有機または無機の非タンパク質成分を含む複合タンパク質である。糖タンパク質の接合部は、天然糖類（ガラクトース、マンノースおよびフコース）またはアミノ糖類（Ｎ−アセチルグルコサミン、Ｎ−アセチルガラクトサミンまたは単糖類の酸性誘導体）によって表すことができる（Ｈ．Ｄ．Ｊａｃｕｂｋｅ，Ｘ．Ａｓｈｋｉｔｅ「アミノ酸、ペプチド、タンパク質（Ａｍｉｎｏ  ａｃｉｄｓ，ｐｅｐｔｉｄｅｓ，ｐｒｏｔｅｉｎｓ）」Ｍｏｓｃｏｗ，Ｍｉｒ  １９８５  ｐ．３４５）。
【０００３】
糖タンパク質は自然界に広く分布している。血清の主要成分（免疫グロブリン、トランスフェリンなど）、血液の群物質、各種ウィルスの抗体（インフルエンザ、麻疹など）、一部のホルモン、レクチン、酵素などが糖タンパク質に属する。
【０００４】
レクチンは糖タンパク質の大きな群を占める。それら分子のタンパク質部分は、レクチン分子の炭水化物成分をポリペプチド鎖と結合させる、セリンおよびメチオニン残存物がないことが特徴である。レクチン中の炭水化物の平均含有率は、約５％である。炭水化物の組成は基本的に、ガラクトース、マンノース、フコースおよびＮ−アセチルグルコサミンの残存物に制限される（Ｈ．Ｄ．Ｊａｃｕｂｋｅ，Ｘ．Ａｓｈｋｉｔｅ「アミノ酸、ペプチド、タンパク質（Ａｍｉｎｏ  ａｃｉｄｓ，ｐｅｐｔｉｄｅｓ，ｐｒｏｔｅｉｎｓ）」Ｍｏｓｃｏｗ，Ｍｉｒ  １９８５  ｐ．４２８−４２９）。
【０００５】
（既存方法の説明）
免疫抑制能力を持つ糖タンパク質は、ドイツ特許第２０７８２２９号（１９８２）より既知である。糖タンパク質は、ヒトまたは温血動物より採取した血清または腹水の等電点電気泳動を用いて、引き続きｐＨ間隔２．６〜３．６中での等電点（ｐｌ）による画分選択を行うことで得られる。この糖タンパク質は、異物反応を抑制するために移植を受けた患者に使用する。
【０００６】
ドイツ特許第２０９５２６０号（１９８２）に従って、生理活性物質−分子量３０００〜５０００の糖タンパク質−が得られる。これは相同性および非相同性細胞でのトキソプラズマの増殖を抑制する能力を有する。
【０００７】
ドイツ特許第２１１７３８５号（１９８２）より、抗癌活性を持つ糖タンパク質が既知である。この糖タンパク質の分子量は７０００〜９００００である；多糖類含有率は８〜４５％であり、ヘキソース６〜２８％、ヘキソサミン１〜１１％、シアル酸１〜６％を含む。これはｐＨ＝２．０、７．０または１１．０の水溶液中で４℃にて２４時間以上安定であり、ｐＨ＝７．０の水溶液中で６０℃にて３時間以上安定である。この糖タンパク質は正常細胞には影響を与えずに、癌細胞に選択的に影響を与える。
【０００８】
免疫糖タンパク質は、スイス特許第６３４３３４号（１９８３）より既知である。これは８９±４％のタンパク質部分、１１．１±２．２％の炭水化物部分、５．３±１．１％のヘキソース、２．８±０．５％のヘキソサミンのＮ−アセチル残基および２．９±０．５％のノイラミン酸Ｎ−アセチル残基を含む。この糖タンパク質の分子量は３２０００±６０００、ｐｌ＝４．３±０．３；沈降因数はＳ２０ｎ＝３．２±０．３である。
【０００９】
分子量１２．５ｋＤａの血清糖タンパク質は、ロシア特許第２１３６６９５号（１９９９）より既知である。これは低用量で生物活性であり、約５０％の炭水化物残存物を含む。等電点はｐＨ間隔４．６〜４．７にある。特許ＥＰ０００１３４（１９７８）より新しい糖タンパク質が既知である。これは７５±６％のα−アミノ酸、２４．６±５．２％の炭水化物部分、２．９±２％のヘキソサン、７．１±１．５％のヘキソサミンのＮ−アセチル残基、０．２±０．２％のフコース、８．４±１．５％のノイラミン酸Ｎ−アセチル残基を含む。この糖タンパク質の分子量は６５０００±１００００、ｐｌ＝３．４±０．４である。
【００１０】
分子量５６ｋＤａの均質糖タンパク質をＦＶＯおよびＣｅｎｅｖａ  Ｐ．ｆａｌｃｉｐａｒｕｍより抽出して研究した。その等電点はｐＨ５．５である。この糖タンパク質は、炭水化物部分にＮ−アセチルガラクトサミンおよびマンノースを含む（米国特許第４８３５２５９号、ｃｌ．Ｃ０７Ｋ１５／１５，１９８９）。
【００１１】
本所与の発明に最も近いのは、分子量５〜３００ｋＤａで、等電点がｐＨ２．５〜５．０にあり、タンパク質および炭水化物部分の重量比が５０：５０〜８０：２０であり、炭水化物部分にフコース、リボース、アラビノース、キシロース、マンノース、ガラクトース、グルコースおよびグルコサミンの残存物を含み、タンパク質部分にアスパラギン酸およびグルタミン酸、スレオニン、セリン、プロリン、グリシン、アラニン、システイン、バリン、メチオニン、シスタチオニン、イソロイシン、ロイシン、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、オルニチン、リジン、ヒスチジン、アルギニン（米国特許第４６８３４３８号、ｃｌ．Ｃ０７Ｋ１５／１４，１９８７）の残存物を含む糖タンパク質である。
【００１２】
（発明の簡単な説明）
このように本発明は、医学および製薬産業で使用可能な、極めて低用量で生物活性を有する糖タンパク質に関する。
【００１３】
他方、本発明は、極めて低用量で生物活性を有し、製薬調製物として応用される糖タンパク質を得ることに関する。
【００１４】
したがって、本発明の技術的な作業は、極めて低用量（１０−１２〜１０−２９モル／リットル以下）で生物活性を有する糖タンパク質を得ることである。
【００１５】
この規定された技術的な成果は、等電点電気泳動を用いて、脊椎動物（ヒトおよび動物）の各種臓器より採取した細胞間隙、血清、胆汁および組織から抽出された、新たな糖タンパク質によって達成される。これらは硫酸アンモニウム飽和溶液（１００％）に溶解性であり、その見かけ分子量は、１０〜４５ｋＤａであり、極めて低用量で生物活性を有する。１０−１２〜１０−１８モル／リットルの濃度の糖タンパク質溶液は、複数回の凍結および解凍を行っても、１００℃にて１０分間加熱した後にも、生物活性を完全に保っている。
【００１６】
糖タンパク質の分子量は、Ｌｅｍｌｙの方法に従ってドデシル硫酸ナトリウムを用いた、ポリアクリルアミドゲル（ＰＡＡＧ）中での電気泳動法を用いて概算されている（適用した技術を参照）。分子量マーカーとして、ＬＫＢ社が作成したセットを利用した。それは、９４ｋＤａ〜１４．４ｋＤａ分子量の、六種類のタンパク質を含んでいた。ｐｌがｐＨ間隔４．６５〜５．１（ＳＧ）にある、血清から採取した糖タンパク質の見かけの分子量は、ＰＡＡＧ−泳動によると３５〜３７ｋＤａであり、ゲルクロマトグラフィーのデータによると２５〜２７ｋＤａであった。肝臓から採取した中性糖タンパク質（ｐｌはｐＨ間隔６．８〜７．２）（ＮＧＬ）の見かけの分子量はそれぞれ、１５ｋＤａおよび２２ｋＤａであった。肝臓から採取した酸性糖タンパク質（ＡＧＬ）に関する限り、その見かけの分子量はゲル濾過法のみによって決定し、同等の１７ｋＤａであった（酸性糖タンパク質画分が着色できなかったために、ＰＡＡＧ−電気泳動によって分子量を定義することができなかった）。
【００１７】
ポリアクリルアミドゲルでの電気泳動の場合、、垂直電気泳動装置ＡＢＧＥ−１（Ｈｉｍｉｆｉｌ、ソ連）を用いた。変性条件はＬｅｍｌｙの方法に従って、洗剤ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）添加によって適用した。ゲルの厚さは０．７５ｍｍで、サイズは１１５×１１５ｍｍ、そしてストリップの最大数量は１３であった。
【００１８】
分離ゲル（１２．５％）は、以下の成分より調製した：蒸留水（６．７ｍｌ）、ｐＨ８．８の１．５Ｍ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（５．０ｍｌ）、ＳＤＳ１０％溶液（０．２ｍｌ）、アクリルアミド／Ｎ’Ｎ’−ビスーメチレン−アクリルアミド３０％溶液（８．０ｍｌ）、ＴＥＭＥＤ（１０μｌ）、過硫酸アンモニウム１０％溶液（１００μｌ）。
【００１９】
濃縮ゲル（４％）は、以下の成分より調製した：蒸留水（６．１ｍｌ）、ｐＨ６．８の０．５Ｍ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（２．５ｍｌ）、ＳＤＳ１０％溶液（０．１ｍｌ）、アクリルアミド／Ｎ’Ｎ’−ビスーメチレン−アクリルアミド３０％溶液（１．３ｍｌ）、ＴＥＭＥＤ（１０μｌ）、過硫酸アンモニウム１０％溶液（５０μｌ）。
【００２０】
電極緩衝液：ｐＨ８．３のＴｒｉｓグリシンおよび０．１％ＳＤＳ。凍結乾燥サンプルは以下の溶液に溶解させた（約０．１ｍｇ／ｍｌ）：蒸留水（４．０ｍｌ）、ｐＨ６．８の０．５Ｍ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（１．０ｍｌ）、グリセロール（０．８ｍｌ）、ＳＤＳ１０％溶液（１．６ｍｌ）、２−メルカプトエタノール（０．４ｍｌ）、ブロムフェノールダークブルー０．０５％溶液（０．２ｍｌ）。次にゲルに加える前に、サンプルを１００℃にて３〜５分間インキュベートした。１０〜１５μｌの試料を１つのストリップに加えた。電気泳動は、２００Ｖの定電圧で実施した。濃縮ゲルを通過させる場合、１００Ｖの電圧を印加した。
【００２１】
分子量マーカーとして、ＬＫＢ社が作成したセットを利用した。そのセットは、ホスホリラーゼｂ（９４ｋＤａ）、ウシ血清アルブミン（６７ｋＤａ）、ニワトリ卵アルブミン（４５ｋＤａ）、カルボニックアンヒドラーゼ（３０ｋＤａ）、トリプシンのダイズ抑制剤（２０ｋＤａ）、およびニワトリリゾチーム（１４．４ｋＤａ）を含んでいた。
【００２２】
ゲルの着色は、コロイド銀を用いて、またはＫｕｍａｓｓｙステインＧ−２５０によって行った。コロイド銀による着色の場合、ゲルは事前に蒸留水中で、次に５％エタノールおよび５％酢酸の水溶液中で３時間以上洗い流した。次いで、ゲルを蒸留水中で迅速に（５分間）洗い流し、グルタルアルデヒド１０％溶液に入れた。未反応のグルタルアルデヒドを、３〜５回洗浄して（各洗浄は３０分間）すすぎ落とした。その後、ゲルをジチオトレイトール溶液（５ｍｇ／ｌ）中で３０分間インキュベートし、次に水で完全にすすいだ。洗浄したゲルをＡｇＮＯ３溶液（０．１ｇ／ｌ）に３０分間入れ、次いで水で完全にすすいでから、顕色剤に入れると、明確なストリップが生成した。顕色剤は、３％Ｎａ２ＳＯ３中のホルマリンの３７％溶液（５０〜１００μｌのホルマリン／１００ｍｌの溶液）であった。顕色を中断させるために、３〜５ｍｌのクエン酸を加えた。
【００２３】
ＫｕｍａｓｓｙステインＧ−２５０による着色を行う場合、ゲルは以下の混合物によって固定した：トリクロロ酢酸／メタノール／水（１０：４０：５０）。着色は、３．５％過塩素酸に溶解させたＫｕｍａｓｓｙステインＧ−２５０の０．０４％溶液を用いて行った。通常、青色の銅タンパク質ストリップが５分後に現れる。バックグラウンドのステインを減少させるために、ゲルは酢酸／メタノール／水（１０：４０：５０）の溶液中に１〜３時間入れておくこともできる。糖タンパク質分子量は、ゲル浸透ＨＰＬＣ法を用いて、カラムＴＳＫ  Ｇ３０００ＳＷ（３００×７．５ｍｍ）によって決定した。溶出は、ｐＨ＝７の１００ｍＭ  ＮａＨ２ＰＯ４を実施した。校正のために、以下の証拠タンパク質を用いた：オボトランスフェリン（７８ｋＤａ）、ウシ血清アルブミン（６７ｋＤａ）、ニワトリ卵アルブミン（４５ｋＤａ）、カルボニックアンヒドラーゼ（３０ｋＤａ）、トリプシンのダイズ抑制剤（２０ｋＤａ）ミオグロビン（１７．２ｋＤａ）、およびニワトリリゾチーム（１４．３ｋＤａ）。これらの調製物は、Ｓｅｒｖａ社（ドイツ）およびＳｉｇｍａ社（米国）が作成した。
【００２４】
また、本発明により、糖タンパク質のアミノ酸組成および炭水化物組成ならびにグリコシル化の存在を決定した。
【００２５】
アミノ酸組成の定義
アミノ酸組成の定義は、Ａ．Ｎ．Ｂｅｌｏｓｅｒｓｋｉｙ物理化学生物学研究所アミノ酸分析装置Ｈｉｔａｃｈｉ８３５で実施した。分離は、２６１３マークのスルホ−ポリスチレン陽イオンを用いてクロマトグラフカラムで行った。ニンヒドリン誘導体中で分光光度により検出を行った（波長−５７０および４４０ｎｍ）。分析前に、タンパク質の加水分解は、１２ｎ．ＨＣｌ／濃トリフルオロ酢酸（２：１）混合物に０．００５％メルカプトエタノールを加えて、タンパク質の加水分解を１５５℃にて１時間行った。
【００２６】
炭水化物組成の定義
定義は、炭水化物分析装置Ｂｉｏｔｒｏｎｉｃ  ＬＣ２０００（ドイツ）により、吸収剤Ｄｕｒｒｕｍ  ＤＡＸ８−１１（米国）を用いて、ｐＨ８．０の０．４Ｍホウ酸塩緩衝液中で７０℃にて実施した。カラムのサイズは、３．７×７５ｍｍであった。検出は、銅の２，２’−ビシンコニンの溶液を用いて、５７０ｎｍで実施した。定義の前に、１ｍｌの試験物質（０．１ｍｇ／ｍｌ）の加水分解を、１０ｍｌの２Ｍトリフルオロ酢酸中で３時間、１００℃にて実施した。
【００２７】
グリコシル化存在の定義
グリコシル化の存在を定義するために、５μｌのｐＨ４．６の０．１Ｍ酢酸緩衝液を５０μｌのタンパク質水溶液（０．１ｍｇ／ｍｌ）に加えて、次に同じ緩衝液中の過ヨウ素酸ナトリウム溶液（５〜１０μｌ）を、反応混合物中の過ヨウ素酸塩濃度が１〜２ｍＭとなるように加えた。その後、溶液を室温で３０分間放置した。未反応の過ヨウ素酸塩は、色が消える前に、０．５Ｍチオ硫酸トリウム水溶液によって中和した。それから、ジニトロフェニルヒドラジン（ＤＮＰＨ）のジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）溶液を、反応混合物中のＤＮＰＨの濃度が２．５〜５ｍＭとなるように加えた。その後、溶液は室温で、３０分間放置した。
【００２８】
さらに生じたシッフ塩基は、ホウ酸ナトリウムのＤＭＳＯ溶液（０．１ｍｇ／ｍｌ）を用いて還元した。
【００２９】
生成物分析は、高圧液体クロマトグラフを用いて、カラムＴＳＫ  ２０００ＰＷ（５．６×３００ｍｍ）でゲル浸透クロマトグラフィ法によって実施した。溶出液はｐＨ４．５の５０ｍＭ酢酸緩衝液であった；流速は０．５ｍｌ／分であった；紫外線検出は、波長３６５ｎｍであった。以下の特性が推定された：（２８０ｎｍでの吸収上の）無傷糖タンパク質のＤＮＰＨおよび修飾ＤＮＰＨ糖タンパク質の滞留時間（滞留時間に関して３６５ｎｍに吸収ピークが存在する場合には、未修飾糖タンパク質の滞留時間にほぼ等しい）。
【００３０】
モデル化糖タンパク質として、以下を利用した：ニワトリ卵アルブミン、オボムコイド、Ｓ−カルボキシメチル化ムチン、卵黄によるロドプシン結合糖タンパク質。
【００３１】
本発明による糖タンパク質のグリコシル化の定義
既知構造を有するモデル化糖タンパク質への試験の後、本方法を抽出タンパク質に適用した。結果により、これらすべての物質が糖タンパク質であることが証明される。研究を行った糖タンパク質のピークはクロマトグラム上に見られ、未反応のＤＮＰＨのピークも見られる。修飾糖タンパク質の結果の時間は、未変性糖タンパク質とはわずかに異なるが、このことは予想できた。
【００３２】
例えばＳＧの精製試料の場合、炭水化物組成分析は、この所与のタンパク質が強くグリコシル化されることを示している。その重量は炭水化物の４０〜５５％を含む。炭水化物より、Ｎ−アセチルグルコサミンおよびマンノースが２：５の比で検出された。糖タンパク質合成の生物経路の知識により、ＳＧは主にマンノース中に豊富なＮ−結合オリゴ糖鎖を含むことが推定できる。
【００３３】
本発明の他の態様は、説明した糖タンパク質をさまざまな製薬組成物（ドロップ、軟膏、薬用クリーム、ゲルなど）の調製に応用することである。
【００３４】
本発明による製薬組成物は、極めて低用量で生物活性を有する、有効量の糖タンパク質を含み、本発明の１つの態様であり、製薬的に許容可能な担体である（実施例１５〜１７）。
【００３５】
製薬的に許容可能な担体は、有機担体、ポリマー（炭水化物、セルロース）および無機担体でもよい。担体の選択はまず第一に、製薬組成物の適用（処方）の方法によって決定される。
【００３６】
実施例１５は、上皮および結合組織における修復プロセスの生物調節因子である、製薬組成物について述べる。
【００３７】
本発明による糖タンパク質は、以下の組織から抽出した：肝臓、肺、胸腺、脾臓、心臓、腎臓、膵臓、乳腺および甲状腺、小腸、睾丸、卵巣、脳、骨髄、眼組織、そしてさらに、血清および胆汁。
【００３８】
本発明による規定糖タンパク質の抽出プロセスは、以下の段階：
ａ）さまざまなヒトおよび動物臓器の組織から抽出物を得ること、
ｂ）組織抽出物からタンパク質を塩析すること、
ｃ）等電点電気泳動法による糖タンパク質の抽出そのもの（分離および精製）、および
ｄ）糖タンパク質識別によって画分を収集し、生物活性および生体効果を定義することを含む。
【００３９】
我々が識別した糖タンパク質は、条件付きで３つの群：
陽極に移動する酸性タンパク質、
４．６〜８．５のｐＨ間隔にあるｐｌを有するタンパク質（弱酸性、中性および弱塩基性）、および
陰極に移動する塩基性タンパク質
に分割できる。
【００４０】
等電点電気泳動法は、バイオポリマーの抽出および精製（分離）の従来方法の１つである。本発明による糖タンパク質は、バイオポリマーに属する。この方法は、物理および分析化学において使われる。それは、以下に基づいている：外部電界は安定なｐＨ勾配を作り、ｐＨ値は陽極から陰極へ上昇する。このようなシステムでは、各タンパク質は、正電荷または負電荷によって、ｐＨ値がこのタンパク質の等電点（ｐｌ）に一致する領域に達するまで、いろいろな方向に移動する。この領域において、タンパク質はその電荷が０になるため、電界のもとでさらに移動を停止する。
【００４１】
安定なｐＨ勾配を維持する印加電界は、その区域が拡散洗浄されないようにする。安定なｐＨ勾配を作るには、アンフォリンクスと名付けられた特殊な物質を用いる。
【００４２】
等電点電気泳動は、カラムＬＫＢ−４４０（ＬＫＢ、スウェーデン）およびｐＨ範囲３．５〜１０．０のアンフォリンクス（Ｓｅｒｖａ、スウェーデン）を用いて、サッカロース勾配において、４℃にて１００時間、電圧５００〜１５００Ｖで行った。溶液の形の上清は、一般的なタンパク質の１００ｍｇ以下の量で重い勾配溶液に加えた。画分の検出は、分光測定法によって２８０ｎｍにて実施した。等電点電気泳動後の画分の透析は、蒸留水に対してセルロースフィルム製の袋で実施した。以下の画分を収集した：
１．正に荷電した電極に移動する酸性糖タンパク質、
２．ｐＨ間隔が４．６〜８．５にあるｐｌを有する糖タンパク質（弱酸性、中性および弱塩基性）、
３．負に荷電した電極に移動する塩基性糖タンパク質。
【００４３】
３種類の規定された群の糖タンパク質は、以下の臓器の組織から抽出した：肝臓、肺、胸腺、脾臓、心臓、腎臓、膵臓、乳腺および甲状腺、小腸、睾丸、卵巣、脳、骨髄、水晶体、角膜、眼色素上皮、網膜、そして血清および胆汁。
【００４４】
識別された糖タンパク質はすべて、濃度が１０−１２〜１０−２９モル／リットル以下の極めて低用量で、生物活性を示した。
【００４５】
所与の本発明で抽出された糖タンパク質に対して、生物効果（Ｅａ）を定義した。例えば、以下の式によって計算した：
Ｅａ＝２００％−Ｎｔ／Ｎｃ×１００％
式中、Ｅａは糖タンパク質によって生じる生物効果であり、ＮｔおよびＮｃはそれぞれ、試験（糖タンパク質を含む組織培養物）および対照（糖タンパク質を含まない組織培養）において１ｍｇの組織から放出された細胞核の量である。
【００４６】
細胞核の計算は、Ｇｏｒｙａｅｖのチャンバの定義された体積にて実施した。統計データ処理は、Ｓｔｕｄｅｎｔの判定基準用法によって、変分統計法によって実施した。組織培養物の調製手順は、以下で構成される。動物（マウス−ハイブリッドＣＢＡ／Ｃ５７Ｂ１、オス、１６〜１８ｇ）の断頭後、肝臓を室温にて１９９培地に入れた。１〜１．５ｍｍ２の大きさの組織断片を大型の肝臓葉中心部から切り出したが、肝臓葉の端および太い血管のある部分は採取しなかった。
【００４７】
培養物は、以下の組成の培養液を含むペニシリンバイアル中に、バイアルに付き５個の組織培養物に配置した：１９９培地１ｍｌ＋ウシ血清またはウマ血清０．２ｍｌ＋ある濃度の研究された糖タンパク質溶液０．１ｍｌ。対照用バイアルには、糖タンパク質溶液の代わりに０．１ｍｌのリンガー液を加えた。バイアルはすべて、３７℃にて最高２時間インキュベートした。
【００４８】
肝細胞膜の粘弾特性を説明するパラメータを推定するために、各組織断片を濾紙で乾燥させてから、バックラッシュ５０ミクロンの特殊ガラスホモジナイザ中に配置し、その後、リンガー液で調製したトリパンダークブルー０．１％溶液を加え、最後に内筒を２５〜３０回、回転させて、この溶液を分散させた。その後、分散物中に生じた単細胞核の量を計算した。糖タンパク質の生物効果は、上述の公式によって計算した。
【００４９】
肝細胞膜の粘弾特性に影響を与えた３種類の規定された群の糖タンパク質は、以下の臓器の組織から抽出した：肝臓、肺、胸腺、脾臓、心臓、腎臓、膵臓、乳腺および甲状腺、小腸、睾丸、卵巣、脳、骨髄、水晶体、角膜、眼色素上皮、網膜、さらに血清および胆汁。
【００５０】
識別された糖タンパク質の場合、Ｅａの値は、１０−１２〜１０−２９モル／リットルの濃度で、１２５〜１５０％までであった（図１、２）。
【００５１】
（発明の実施形態の詳細な説明）
本発明による極めて低用量で生物活性を示す糖タンパク質は、細胞間隙、血清、胆汁および各種臓器から採取された組織から抽出される：上述のステージを用いる肝臓、肺、胸腺、脾臓、心臓、腎臓、膵臓、乳腺および甲状腺、小腸、睾丸、卵巣、脳、骨髄、水晶体、角膜、眼色素上皮、および網膜。
【００５２】
以下の実施例は所与の本発明を説明するが、決して制限するものではない。
【００５３】
実施例１
哺乳類肝臓からの糖タンパク質の入手
１．１．肝抽出物の採取
実験は、体重１５０〜１８０ｇのウィスター系のオスメス両方のラットに対して行った。ラットは断頭した。３０〜４０秒以内に、各動物は門脈を通じて血液を洗い流した。
【００５４】
これは還流溶液流（０．１５モル／リットルのＮａＣｌ；０．０４モル／リットルのＫＣｌ；０．００１モル／リットルのＣａＣｌ２）を用いて、５〜７ｍｌ／分の速度で行った。肝臓は、重さ１．５〜２．０ｇの断片に切断し、上述の組成の溶液中に４℃にて２時間配置した（肝臓１片につき１５〜２０ｍｌ）。得られた抽出物を収集した。組織は、新たな生理学的溶液に浸漬し、さらに１時間抽出した。得られた抽出物は１つに合わせた。血液細胞および損傷肝細胞を除去するために、組織抽出物を５０００ｇで最高２０分間遠心分離し、次にデカンテーションを行って次の精製に用いた。
【００５５】
１．２．組織抽出物からのタンパク質の塩析
無水硫酸アンモニウムを激しく撹拌しながら組織抽出物に徐々に加え、飽和塩溶液（４℃、ｐＨ８．０〜８．５）を得た。生成された混合タンパク質の沈澱物は、３５０００ｇで３０分間遠心分離して沈殿させた。上清を収集し、国産のセルロースフィルム（ＧＯＳＴ７７３０−８９）を使用して、蒸留水に対して長時間透析した。透析の間、蒸留水は何度も淡水と置換した。アンモニウムイオンを完全に除去した後、親液乾燥法を用いて、上清を１００ｍｌの体積まで濃縮し、同じ条件で塩析手順を繰り返した。同様に得られた第２の上清も、蒸留水に対して透析してからアンモニウムイオンを完全に除去し、次に等電点電気泳動法によって分離した。
【００５６】
組織抽出物上清の等電点電気泳動は、上述の技術によって実施した。
【００５７】
実施例２
哺乳類胸腺による糖タンパク質
実験は、体重１５０〜１８０ｇのウィスター系のオスメス両方のラットに対して行った。ラットは断頭した。胸腺を切除し、生理学的溶液（０．１５モル／リットルのＮａＣｌ；０．０４モル／リットルのＫＣｌ；０．００１モル／リットルのＣａＣｌ２）中で完全にすすぎ、上述の組成による溶液で４℃にて２時間抽出した（胸腺１個に対して３〜４ｍｌの抽出溶液）。得られた抽出物を収集した。新たな生理学的溶液に浸漬し、さらに１時間抽出した。得られた抽出物は１つに合わせた。血液細胞および損傷胸腺細胞を除去するために、組織抽出物を５０００ｇで最高２０分間遠心分離し、次にデカンテーションを行って次の精製に用いた。組織抽出物の塩析およびｐＨ−等電点電気泳動は、上述の技術に従って実施した。肝臓抽出物の分離と同じ方法である、ｐＨ−等電点電気泳動の後、３種類のタンパク画分を収集した：ｐＨ間隔４．６〜８．５のｐｌを有する酸性および塩基性糖タンパク質。
【００５８】
識別された胸腺糖タンパク質はすべて、１０−１２〜１０−２９モル／リットル以下の濃度にて、極めて低用量における生物活性を示した。
【００５９】
実施例３
哺乳類眼組織による糖タンパク質
新しい雄ウシ眼（３０片）より以下の組織を抽出した：水晶体、角膜、色素上皮および網膜。組織は、生理学的溶液（０．１５モル／リットルのＮａＣｌ；０．０４モル／リットルのＫＣｌ；０．００１モル／リットルのＣａＣｌ２）中で完全にすすぎ、大片に切断して、上述の組成の溶液中で４℃にて、個別に２時間抽出した。得られた抽出物は３０００ｇで最高１５分間遠心分離し、次にデカンテーションを行って次の精製に用いた。組織抽出物の塩析およびｐＨ−等電点電気泳動は、上述の技術に従って実施した。ｐＨ−等電点電気泳動の後、各組織の３種類のタンパク画分を収集した：水晶体、角膜、色素上皮および網膜のｐＨ間隔４．６〜８．５のｐｌを有する酸性および塩基性糖タンパク質。
【００６０】
眼組織による識別された糖タンパク質はすべて、１０−１２〜１０−２９モル／リットル以下の濃度にて、極めて低用量における生物活性を示した。
【００６１】
実施例４
ウシ血清からのｐＨ間隔４．６５〜５．１のｐｌを有する糖タンパク質の抽出  無水硫酸アンモニウムを５ｌのウシ血清に徐々に加え、飽和塩溶液（４℃、ｐＨ８．０〜８．５）を得た。生成した沈殿物は濾過によって除去し、濾液は１００００ｇで１５分間遠心分離した。次いでタンパク質沈澱物を除去し、上清を収集して、蒸留水に対して長時間透析し、アンモニウムイオンを完全に除去した。その後、凍結乾燥して、再度蒸留水に溶解させて体積を０．５ｌとした。得られた溶液に無水硫酸アンモニウムを撹拌しながら加え、飽和させた。この混合物を４日間４℃にて放置し、次に１００００ｇで１５分間遠心分離した。上清を蒸留水で透析して、アンモニウムイオンを完全に除去した。次に凍結乾燥し、再度５０ｍｌの蒸留水に溶解させた。上述の技術によるｐＨ−等電点電気泳動法によって、さらに分離を行った。
【００６２】
ｐＨ−等電点電気泳動の後、ｐＨ間隔４．６５〜５．１の画分を収集し、蒸留水で透析して、凍結乾燥させた。０．５５ｍｇが得られた。得られた試料は、ややクリーム色に着色された、均質な糖タンパク質粉末に細かく分割した。糖タンパク質は、４０〜５５％の炭水化物を含んでいた。Ｄ−マンノースとＮ−アセチル−Ｄグルコサミンのモル比は５：２〜３：２となり、糖タンパク質濃度１０−１２〜１０−２９モル／リットル以下における生物活性（生体内での肝細胞膜の粘弾性特性に対する影響）は、対照に対して１２５％以上となる。
【００６３】
同様に、糖タンパク質は、ラット血清、イヌ血液、ウマ血液およびヒト血から抽出される。血清から抽出される糖タンパク質はすべて、ｐＨ間隔４．６５〜５．１の等電位点を有し、ポリアクリルアミドゲルのＳＤＳ−電気泳動による見かけの分子量は３５〜３７ｋＤａ、ゲルクロマトグラフィーによる見かけの分子量は２５〜２７ｋＤａである。これらは１０−１２〜１０−２９モル／リットル以下の濃度にて、極めて低用量における生物活性を有する。
【００６４】
商業用途
以下の実施例（５〜１７）、図（１〜２９）および表（１〜８）は、所与の本発明で述べた糖タンパク質の生物活性および生物効果を示す。
【００６５】
実施例５
生体内の肝細胞膜の粘弾特性に対する糖タンパク質の影響
研究は重さ１〜１．５ｍｇの肝臓組織断片の多臓器培養を用いて、培養液中で実施し、一定量の研究した糖タンパク質を加えた。各糖タンパク質ごとに、ある間隔の濃度が定義され、そこで生物活性が示される。
【００６６】
このため、タンパク質／ｍｌの１０−１５ｍｇに対して１０、１００、１０００倍などの、初期試料（１ｍｇのタンパク質／ｍｌの濃度）の一連の連続希釈を実施した。対照バイアルにおいて、研究した試料の代わりに同量のリンガー液を加えた。１つの実験で研究した外植片はすべて、１匹の動物の肝臓から得た。各々の独立した実験において、各実験点（糖タンパク質の適切な濃度）について５個以上の組織断片を考慮した。各糖タンパク質の生物活性を定義するために、３−４以上の実験を実施した。
【００６７】
生物効果は、上述の式によって計算され、図１〜２に示されている。
【００６８】
実施例６
胸腺塩基性糖タンパク質の遅延型過敏反応に対する影響
塩基性胸腺糖タンパク質（ＢＴＧ）を、Ｃ５７ＢＬ１６ｓｐｆ状態であり、体重２０ｇの５匹のマウスで構成される４つのグループに与えた。１匹に対して用量２×１０８のヒツジ赤血球によってマウスに腹腔内免疫化を行った時から３日以内に、腹腔内導入は１匹のマウスに対して、用量２×１０−６、２×１０−１２、２×１０−１６、および２×１０−１８で３回行った。免疫化の５日後、１×１０８のヒツジ赤血球５０μｌをレシピエントの後足に皮下投与した。そしてさらに１日後、浮腫強度を反対側面の肢と比較してＫｉｔａｍｕｒａ法によって定義し、脾臓抗体形成細胞の数をＪｅｒｎｅ法によって定義した。結果を表１に示す。
【００６９】
【表１】
2004502740.tif 000001
表から、試料は脾臓の抗体形成細胞に大きな影響を与えないことがよくわかる。同時に、１匹のマウスへの用量２×１０−１２ｇの試料導入によって、遅延型過敏反応が極めて高い信頼性で強化される。
【００７０】
このように我々は、ＢＴＧ試料が１匹のマウスに対する２×１０−１２の用量で、タイプ１Ｔリンパ球ヘルパーによって引き起こされる遅延過敏症反応を刺激する能力を示し、これは特定の抗腫瘍免疫反応の発生の原因となっている。
【００７１】
Ｊｅｒｎｅ  Ｎ．，Ｎｏｒｄｉｎ  Ａ．（１９６３）単一抗体生成細胞によるプラーク形成（Ｐｌａｑｕｅ  ｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ｉｎ  ａｇａｒ  ｂｙ  ｓｉｎｇｌｅ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｃｅｌｌｓ）。Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｖ．１４０，Ｐ．４０５。
【００７２】
Ｋｉｔａｍｕｒａ  Ｋ．（１９８０）マウスの遅延型過敏症を評価するためのフットパッド重量アッセイ（Ａ  ｆｏｏｔ  ｐａｄ  ｗｅｉｇｈｔ  ａｓｓａｙ  ｔｏ  ｅｖａｌｕａｔｅ  ｄｅｌａｙｅｄ  ｔｙｐｅ  ｈｙｐｅｒｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｍｉｃｅ）。Ｊ．ｌｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．，Ｖ．３９、Ｐ．２７７−２８３。
【００７３】
実施例７
胸腺腫ＥＬ４を有するマウスの生存に対する胸腺塩基性糖タンパク質の影響
ＢＴＧは、抗腫瘍免疫を刺激する活性を有するかどうか証明するために研究された。このため、同じ系統のマウスから生まれた、Ｃ５７ＢＬ／６  ＫｂＩｂＤｂのマウスに、１×１０３、１×１０４および１×１０５の用量で、ＥＬ４細胞を１回注射した。試料は１匹のマウスに対して２×１０−６、２×１０−１２および２×１０−１６ｇの用量で、免疫化の日から最高１週間、毎日導入した（９個の試験グループ、３個の対照グループ、それぞれマウス５〜７匹）。試料の効果は、適切なグループの対照レシピエントと比較して、各種の腫瘍細胞用量のレシピエントの平均余命によって評価した。
【００７４】
結果を図３〜５に示す。図３は、対照（点線）と比較した、１匹のマウスに対する用量２×１０−１２ｇの試料の保護効果（太線）を示す。この試験では、グループ１の１０匹のレシピエントが生存したままであるのに対して、対照では、腹水形で増殖する腫瘍の結果、すべてのマウスが死亡した。図４は、対照（点線）と比較した、１匹のマウスに対する用量２×１０−６ｇの試料の低い保護効果（太線）を示す。腫瘍細胞用量が１×１０５である場合、試料の効果を見ることはできないように思われた（図５）。提出されたデータは、１匹のマウスに対する用量２×１０−１２ｇのＢＴＧによって、試験動物−腫瘍細胞の最小用量（１×１０３）を投与されたグループの平均余命が、高い信頼性で増加することを示す。
【００７５】
ＢＴＧによって示された生物効果がわずかであるという事実にもかかわらず、以下を考慮に入れる必要がある：胸腺腫細胞の複製時間が、抗腫瘍エフェクター活性を有するＴ−リンパ球の複製時間を、数倍超過すること。また、挿入された腫瘍細胞の完全な拒絶は一般に、挿入腫瘍が、細胞免疫を刺激するサイトカイン生成のための遺伝構造によって修飾された場合、あるいは細胞成長抑止剤を用いた複合治療を受けている場合のみに見られる。
【００７６】
Ｓｕｍｉｍｏｔｏ  Ｈ．，Ｔａｎｉ  Ｋ．，Ｎａｋａｚａｋｉ  Ｙ．，Ｔａｎａｂｅ  Ｔ．，Ｈｉｂｉｎｏ  Ｈ．，Ｗｕ  Ｍ．Ｓ．，Ｉｚａｗａ  Ｋ．，Ｈａｍａｄａ  Ｈ．，Ａｓａｎｏ  Ｓ．（１９９８）、同系免疫応答マウスにおける治療抗腫瘍免疫のＧＭ−ＣＳＦまたはＢ７−１（ＣＤ８０）トランスフェクタントに対する、インターロイキン−１２−形質導入マウス肺癌細胞の優位性（Ｓｕｐｅｒｉｏｒｉｔｙ  ｏｆ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１２−ｔｒａｎｓｄｕｃｅｄ  ｍｕｒｉｎｅ  ｌｕｎｇ  ｃａｎｃｅｒ  ｃｅｌｌ  ｔｏ  ＧＭ−ＣＳＦ  ｏｒ  Ｂ７−１（ＣＤ８０）ｔｒａｎｓｆｅｃｔａｎｔｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ａｎｔｉｔｕｍｏｒａｌ  ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ｉｎ  ｓｙｎｇｅｎｅｉｃ  ｉｍｍｕｎｏｃｏｍｐｅｔｅｎｔ  ｍｉｃｅ）、Ｃａｎｃｅｒ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ  Ｖ．５，Ｎ  １，Ｐ．２９−３７。
【００７７】
Ｅｈｒｋｅ  Ｍ．Ｊ．，Ｖｅｒｓｔｏｖｓｅｋ  Ｓ．，Ｐｏｃｃｈｉａｒｉ  Ｓ．Ｋ．，Ｋｒａｗｃｚｙｋ  Ｃ．Ｍ．，Ｕｊｈａｚｙ  Ｐ．，Ｚａｌｅｓｋｉｓ  Ｇ．，Ｍａｃｃｕｂｂｉｎ  Ｄ．Ｌ．，Ｍｅｅｒ  Ｊ．Ｍ．，Ｍｉｈｉｃｈ  Ｅ．（１９９８）、シクロホスファミドとＴＮＦ−アルファ治療によってリンパ腫が治癒したマウスにおける胸腺の抗腫瘍エフェクタ：初期腫瘍接種後、２０ヶ月までの表現型および機能性キャラクタリゼーション（Ｔｈｙｍｉｃ  ａｎｔｉ−ｔｕｍｏｒ  ｅｆｆｅｃｔｏｒｓ  ｉｎ  ｍｉｃｅ  ｃｕｒｅｄ  ｏｆ  ｌｙｍｐｈｏｍａ  ｂｙ  ｃｙｃｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ  ｐｌｕｓ  ＴＮＦ−ａｌｐｈａ  ｔｈｅｒａｐｙ：ｐｈｅｎｏｔｙｐｉｃ  ａｎｄ  ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｕｐ  ｔｏ  ２０  ｍｏｎｔｈｓ  ａｆｔｅｒ  ｉｎｉｔｉａｌ  ｔｕｍｏｒ  ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ）、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，Ｖ．７６，Ｎ．４，Ｐ．５７９−５８６。
【００７８】
実施例８
遅延型過敏反応に対する胸腺糖タンパク質の影響
酸性胸腺糖タンパク質（ＡＴＧ）を、Ｃ５７ＢＬ／６ｓｐｆ状態を有し、体重２０ｇの５匹のマウスで構成される４つのグループに与えた。１匹に対して用量２×１０８のヒツジ赤血球によってマウスに腹腔内免疫化を行った時から３日以内に、腹腔内導入は１匹のマウスに対して、用量２×１０−６、２×１０−１２、２×１０−１６、および２×１０−１８で３回行った。免疫化の５日後、１×１０８のヒツジ赤血球５０μｌをレシピエントの後足に皮下投与した。そしてさらに１日後、浮腫強度を反対側面の肢と比較してＫｉｔａｍｕｒａ法によって定義し、脾臓抗体形成細胞の数をＪｅｒｎｅ法によって定義した。結果を表２に示す。
【００７９】
表から、試料は脾臓の抗体形成細胞に大きな影響を与えないことがよくわかる。同時に、１匹のマウスへの用量２×１０−１２ｇの試料導入によって、遅延型過敏反応が極めて高い信頼性で阻害される。
【００８０】
このように我々は、ＡＴＧ試料が１匹のマウスに対する２×１０−１２の用量で、遅延型過敏反応を遅くする能力を示す。
【００８１】
【表２】
2004502740.tif 000002
実施例９
神経線維の脱髄による興奮伝達に対する哺乳類胸腺からの糖タンパク質の影響
研究の目的として、ヨーロッパアカガエル（Ｒａｎａ  ｔａｍｐｏｒａｒｉａ）の有髄神経を除去した。生体内での神経の焦点脱髄を実施するために、リゾレシチン（ＬＬ）を、手術中のカエルの有髄坐骨神経鞘に導入して使用した（腔内注射）。この作用によって神経脱髄が開始し、その複数のステージが自己免疫の脱髄と一致することは周知である。ミエリン状態の最初の変化は、手術１日後で見られ、６〜１２日後には、ミエリンが神経線維の節間部を完全に「露出させる」。手術の３〜４週間後、新たなミエリン形成が観察される。
【００８２】
脱髄および脱髄後の再生のプロセスに対する塩基性および酸性胸腺糖タンパク質の影響の研究は、２種類の実験で実施された：ＬＬを動物に導入した１週間後に、生体外で、単離された神経に対して、そして生体内でも実施した。ＬＬおよび研究された胸腺糖タンパク質を動物に同時に与えた。生体内実験を実施する際に、以下の試験を行った：
１．神経の電気生理学的パラメータに対するＬＬおよび胸腺糖タンパク質を評価した。
【００８３】
２．ＬＬおよび胸腺糖タンパク質の結合作用の効果を決定した。
【００８４】
対照動物は、ＬＬおよび胸腺糖タンパク質の影響に暴露させなかったが、すべての実験時間を通じて同じ条件下に置いた。生体外実験の間、膜電位および活動電位（ＡＤ）の細胞外記録の標準方法を用いた。これは以下を決定するに有用であった：
１．ＬＬ作用、胸腺糖タンパク質作用およびそれらの複合作用下での、ＡＤ振幅の変化力学、閾値、ＡＤ伝導率および単離神経の律動応答の最大周波数。
【００８５】
２．動物へのＬＬおよび胸腺糖タンパク質の複合導入の１週間後の、ＡＤ振幅の変化力学、閾値、ＡＤ伝導率および単離神経の律動応答の最大周波数。
【００８６】
胸腺からの糖タンパク質は、１０−１４モル／ｌ、１０−１８モル／ｌおよび１０−２４モル／ｌにて研究した。
【００８７】
単離神経は事前に、以下の組成の生理学的溶液（ｍＭ）中に３０分以上置かれた：ＮａＣｌ−１１１．２；ＫＣＩ−１．８８；ＣａＣｌ２−１．０８；ｐＨ−７．２；１８〜２０℃。生理学的溶液および、規定組成の生理学的溶液で調製される糖タンパク質を調製するために、再蒸留物を使用した。
【００８８】
本研究で、膜結合カルシウムレベルの変化を評価するために、我々は、原形質膜中に局在し、カルシウムイオンと錯体可能な、Ｃａ２＋結合プローブ−クロルテトラサイクリンを応用して、蛍光分光法を使用した。神経に対する実験は、神経蛍光レベルとＡＤ振幅を同時に記録可能な特別設計のチャンバ内で実施した。ルミネセンスはすべての実験の間、同じ神経部または単離線維から記録した。神経蛍光はＬｕｍａｍ  Ｉ−３（ＬＯＭＯ）発光顕微鏡を用いてを記録した。クロルテトラサイクリンの蛍光刺激は、ハロゲンランプＫＧＭ９ｘ７０ならびにフィルタＰＳ−１−６およびＳＺＳ２１−１の組み合わせによって発生された。記録は、４９０および５５０ｎｍの最大光伝達の波長により、測光ノズルおよび干渉光フィルタを用いて実施した。神経部測光の直径は、対物レンズ×１０で、５０ミクロンであった。ＬＬ作用および神経脱髄によって、律動性神経伝導性（ＲＮ）の電気生理学的パラメータの一部に著しい変化が生じる。本研究の間、我々は、研究した用量の生体内塩基性および酸性胸腺糖タンパク質が、神経脱髄におけるＲＮパラメータの変化を補正することを発見した（表３、４および５）。
【００８９】
糖タンパク質溶液のみを注射しても、有髄神経伝導性の確実な変化が生じなかったことに注目する必要がある。
【００９０】
【表３】
2004502740.tif 000003
別の実験において、低濃度（１０−１８Ｍおよび１０−２４Ｍ）の胸腺糖タンパク質の注入後の、動物全体の神経伝導性の回復を調査した。本研究の結果を表４および５に示す。
【００９１】
【表４】
2004502740.tif 000004
ミエリン破壊によってＡＤ拡張率の低下が起こることは周知である。本研究の間、我々は、ＬＬの作用の下で、単離神経によるＡＤ伝導率が低下し、ＬＬおよび研究した胸腺糖タンパク質の複合作用下では、これらの変化が減少することを発見した（図６、７）。胸腺糖タンパク質を最大限に希釈すると（１０−２４Ｍまで）、ＬＬおよび糖タンパク質溶液によるインキュベーションの最初の７〜１５分間においてのみ、回復傾向が見られた（しかし確実な相違は見られなかった）。それゆえ胸腺タンパク質およびＬＬ溶液中で神経を長時間インキュベートすると、濃度が１０−１４モル／リットルの場合のみに、統計的に信頼性のあるＡＤ伝導率の回復が生じる。
【００９２】
【表５】
2004502740.tif 000005
以下の一連の実験において、ＬＬおよび胸腺糖タンパク質による作用下のＡＤ増幅変化を調べた（図８）。実験時間の間（ＬＬ作用）、（周波数１００Ｈｚにおいて）このＲＮパラメータの著しい変化が観察された、と判断された。ＬＬおよび胸腺糖タンパク質（１０−１４Ｍ）の複合作用の下では、ＡＤ増幅の明らかな変化が回復された。
【００９３】
以下の一連の実験において、細胞間カルシウムの再分布を研究し、膜結合カルシウムレベルの局在化および変化を明らかにする、プローブ−クロルテトラサイクリンの蛍光を記録した。神経の蛍光は、ＬＬ溶液でインキュベートされた神経線維、そしてＬＬおよび胸腺糖タンパク質の複合作用下にある線維とともに調査された。
【００９４】
神経をクロルテトラサイクリンによってインキュベートする場合、最大値の蛍光の−膜結合Ｃａ２＋レベルに比例するパラメータ−が膜神経構造（軸索およびＳｃｈｗａｎｎ細胞の原形質膜、さらにはミエリン）から記録されることは、以前に示された。ＬＬ作用の下で、膜結合カルシウムレベルは増加するが、ＬＬおよび胸腺糖タンパク質の複合作用の下では、結合値はそれよりはるかに増加する（図９〜１１）。得られた結果からわかるように、カルシウム結合の最大値は、濃度１０−１４ＭにおけるＬＬおよび胸腺糖タンパク質作用の下で著しく変化する。胸腺糖タンパク質濃度が１０−１８Ｍまで低下する限り、膜神経構造による最大カルシウム結合は減少するが、それは対照（ＬＬの作用）を超える。９０分の間に胸腺糖タンパク質濃度が１０−２４Ｍまで低下すると、結合カルシウムレベルにわずかな変化が生じる。得られたデータは、研究した糖タンパク質の、調査した「想像上の」溶液の膜結合カルシウムのレベルを変化させる能力を示す。
【００９５】
研究によって、複数のパラメータの変化が明らかとなり、神経脱髄の場合にはＲＮが、生体内および生体外の両方の胸腺糖タンパク質の作用の下では、特有のＲＮ再構成の存在についても説明される。
【００９６】
Ｋｏｌｓ  Ｏ．Ｐ．，Ｍａｋｓｉｍｏｖ  Ｇ．Ｖ．，Ｒａｄｅｎｏｖｉｃｈ  Ｃｈ．Ｎ．律動性神経伝導性の生物物理学（Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃｓ  ｏｆ  ｒｈｙｔｈｍｉｃ  ｎｅｕｒｉｌｉｔｙ）、モスクワ、モスクワ州立大学、２０６、１９９３。
【００９７】
Ｍａｋｓｉｍｏｖ  Ｇ．Ｖ．，Ｏｒｌｏｖ  Ｓ．Ｎ  神経細胞機能時のカルシウムイオンの輸送：機構および調節（Ｔｒａｎｓｐｏｒｔ  ｏｆ  ｃａｌｃｉｕｍ  ｉｏｎｓ  ｗｈｉｌｅ  ｎｅｒｖｅ  ｆｉｂｅｒ  ｆｕｎｃｔｉｏｎｉｎｇ：ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ａｎｄ  ｒｅｇｕａｌｔｉｏｎ）、モスクワ、モスクワ州立大学、８８、１９９４。
【００９８】
Ｗａｘｍａｎ  Ｓ．Ｇ．，Ｋｏｃｓｉｓ  Ｊ．Ｄ．，Ｓｔｙｓ  Ｐ．Ｋ．軸索。構造、機能および病態生理学（Ｔｈｅ  ａｘｏｎ．Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｐａｔｈｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ）、オックスフォード大学出版、ニューヨーク−オックスフォード、３２５、１９９５。
【００９９】
実施例１０
神経線維の脱髄による興奮伝達に対する哺乳類血清からの糖タンパク質（ｐＨ間隔４．６５〜５．１のｐｌ）影響
実験は、実施例９に記載した技術に基づいて実施した。
【０１００】
ＬＬ作用および神経脱髄によって、律動性神経伝導性（ＲＮ）の電気生理学的パラメータの一部に著しい変化が生じる。本研究の間、我々は、用量１０−１４モル／リットルの生体内血清糖タンパク質（ＳＧ）が、神経脱髄におけるＲＮパラメータの変化を補正することを発見した（表６）。糖タンパク質溶液のみを注射しても、有髄神経伝導性の確実な変化が生じなかったことに注目する必要がある。
【０１０１】
【表６】
2004502740.tif 000006
神経に対するＬＬおよびＳＧによる複合影響の下では、ＬＬの導入によって生じる変化の特性は低下する（図１２、１３）、と判断される。ＳＧ溶液を１０−１８モル／リットルの濃度に希釈した場合、生物効果はわずかであったが、データは対照と比較すると、確実に相違があった。したがって、ＳＧおよびＬＬ溶液中で神経を長時間インキュベートすると、１０−１４モル／リットルおよび１０−１８モル／リットルの濃度で、統計的に信頼性のあるＡＤ伝達率の回復が起きる。
【０１０２】
以下の一連の実験において、ＬＬおよびＳＧ作用下のＡＤ振幅の変化を調べた（図１４）。実験時間の間（ＬＬ作用）、（１００Ｈｚの周波数において）このＲＮパラメータの著しい変化が見られた、と判断された。ＬＬおよびＳＧの複合作用（１０−１４Ｍ）の下で、ＡＤ振幅の明らかになった変化は回復する。
【０１０３】
以下の一連の実験において、細胞間カルシウムの再分布を研究し、膜結合カルシウムレベルの局在化および変化を明らかにする、プローブ−クロルテトラサイクリンの蛍光を記録した。神経の蛍光は、ＬＬ溶液でインキュベートされた神経線維、そしてＬＬおよびＳＧの複合作用下にある線維とともに調査された。
【０１０４】
ＬＬ作用の下で、膜結合カルシウムレベルは増加するが、ＬＬおよびＳＧ値の複合作用の下では、結合値はそれよりはるかに増加する（図１５〜１７）。得られた結果からわかるように、カルシウム結合の最大値は、濃度１０−１４ＭにおけるＬＬおよびＳＧ作用の下で著しく変化する。ＳＧ濃度が１０−２４Ｍまで低下する限り、膜神経構造による最大カルシウム結合は減少する。得られたデータは、研究したＳＧの、調査した「想像上の」溶液の膜結合カルシウムのレベルを変化させる能力を示す。
【０１０５】
研究によって、複数のパラメータの変化が明らかとなり、神経脱髄の場合にはＲＮが、生体内および生体外の両方の血清糖タンパク質の作用の下では、特有のＲＮ再構成の存在についても説明される。
【０１０６】
実施例１１
神経線維の脱髄による興奮伝達に対する雄ウシ網膜からの塩基性糖タンパク質の影響
実験は、実施例９に記載した技術に基づいて実施した。
【０１０７】
ＬＬ作用および神経脱髄によって、律動性神経伝導性（ＲＮ）の電気生理学的パラメータの一部に著しい変化が生じる。本研究の間、我々は、用量１０−１４モル／リットルおよび１０−１８モル／リットルの、雄ウシ網膜からの生体内塩基性糖タンパク質（ＢＲＧ）が、神経脱髄におけるＲＮパラメータの変化を補正することを発見した（表７）。糖タンパク質溶液のみを注射しても、有髄神経伝導性の確実な変化が生じなかったことに注目する必要がある。
【０１０８】
【表７】
2004502740.tif 000007
神経に対するＬＬおよびＢＲＧによる複合影響の下では、ＬＬの導入によって生じる変化の特性は低下する（図１８、１９）、と判断される。
【０１０９】
ＢＲＧ溶液を１０−１８モル／リットルの濃度に希釈した場合、生物効果の値は対照と比較すると、確実に相違があった。したがって、ＢＲＧおよびＬＬ溶液中で神経を長時間インキュベートすると、１０−１４モル／リットルおよび１０−１８モル／リットルの濃度で、統計的に信頼性のあるＡＤ伝達率の回復が起きる。
【０１１０】
以下の一連の実験において、ＬＬおよびＢＲＧ作用下のＡＤ振幅の変化を調べた（図２０）。実験時間の間（ＬＬ作用）、（１００Ｈｚの周波数において）このＲＮパラメータの著しい変化が見られた、と判断された。ＬＬおよびＢＲＧの複合作用（１０−１４Ｍ）の下で、ＡＤ振幅の明らかになった変化は回復する。
【０１１１】
以下の一連の実験において、細胞間カルシウムの再分布を研究し、膜結合カルシウムレベルの局在化および変化を明らかにする、プローブ−クロルテトラサイクリンの蛍光を記録した。神経の蛍光は、ＬＬ溶液でインキュベートされた神経線維、そしてＬＬおよびＢＲＧの複合作用下にある線維とともに調査された。
【０１１２】
ＬＬ作用の下で、膜結合カルシウムレベルは増加するが、ＬＬおよびＢＲＧ値の複合作用の下では、結合値はそれよりはるかに増加する（図２１〜２３）。得られた結果からわかるように、カルシウム結合の最大値は、濃度１０−１４ＭにおけるＬＬおよびＢＲＧ作用の下で著しく変化する。ＢＲＧ濃度が１０−２４Ｍまで低下する限り、膜神経構造による最大カルシウム結合は減少する。得られたデータは、研究したＢＲＧの、調査した「想像上の」溶液の膜結合カルシウムのレベルを変化させる能力を示す。
【０１１３】
研究によって、複数のパラメータの変化が明らかとなり、神経脱髄の場合にはＲＮが、生体内および生体外の両方の、雄ウシ網膜による塩基性糖タンパク質の作用の下では、特有のＲＮ再構成の存在についても説明される。
【０１１４】
実施例１２
神経線維の脱髄による興奮伝達に対する雄ウシ眼色素上皮からの塩基性糖タンパク質の影響
実験は、実施例９に記載した技術に基づいて実施した。
【０１１５】
ＬＬ作用および神経脱髄によって、律動性神経伝導性（ＲＮ）の電気生理学的パラメータの一部に著しい変化が生じる。本研究の間、我々は、用量１０−１４モル／リットルの、雄ウシ眼色素上皮からの生体内塩基性糖タンパク質（ＢＰＥＧ）が、神経脱髄におけるＲＮパラメータの変化を補正することを発見した（表８）。糖タンパク質溶液のみを注射しても、有髄神経伝導性の確実な変化が生じなかったことに注目する必要がある。
【０１１６】
【表８】
2004502740.tif 000008
神経に対するＬＬおよびＢＰＥＧによる複合影響の下では、ＬＬの導入によって生じる変化の特性は低下する（図２４、２５）、と判断される。ＢＰＥＧおよびＬＬ溶液中で神経を長時間インキュベートすると、１０−１４モル／リットルの濃度で、統計的に信頼性のあるＡＤ伝達率の回復が起きる。
【０１１７】
以下の一連の実験において、ＬＬおよびＢＰＥＧ作用下のＡＤ振幅の変化を調べた（図２６）。実験時間の間（ＬＬ作用）、（１００Ｈｚの周波数において）このＲＮパラメータの著しい変化が見られた、と判断された。ＬＬおよびＢＰＥＧの複合作用（１０−１４Ｍ）の下で、ＡＤ振幅の明らかになった変化は回復する。
【０１１８】
以下の一連の実験において、細胞間カルシウムの再分布を研究し、膜結合カルシウムレベルの局在化および変化を明らかにする、プローブ−クロルテトラサイクリンの蛍光を記録した。
【０１１９】
神経の蛍光は、ＬＬ溶液でインキュベートされた神経線維、そしてＬＬおよびＢＰＥＧの複合作用下にある線維とともに調査された。
【０１２０】
ＬＬ作用の下で、膜結合カルシウムレベルは増加するが、ＬＬおよびＢＰＥＧ値の複合作用の下では、結合値はそれよりはるかに増加する（図２７〜２９）。得られた結果からわかるように、カルシウム結合の最大値は、濃度１０−１４ＭにおけるＬＬおよびＢＰＥＧ作用の下で著しく変化する。ＢＰＥＧ濃度が１０−１８Ｍおよび１０−２４Ｍまで低下する限り、膜神経構造による最大カルシウム結合は減少する。得られたデータは、研究したＢＰＥＧの、調査した「想像上の」（１０−１４モル／リットル）溶液の膜結合カルシウムのレベルを変化させる能力を示す。
【０１２１】
研究によって、複数のパラメータの変化が明らかとなり、神経脱髄の場合にはＲＮが、生体内および生体外の両方の、雄ウシ眼色素上皮による塩基性糖タンパク質の作用の下では、特有のＲＮ再構成の存在についても説明される。
【０１２２】
実施例１３
肝細胞原形質膜および生体内でのタンパク質合成に対する酸性肝臓糖タンパク質の影響
実験は、重量１８０ｇの雄のウィスター系ラットより採取した複数の臓器肝臓培養物に対して実施した。５回の実験を行った。各実験には、２５〜３０片の肝臓を使用した。１回の実験で研究する外植片はすべて、１匹の動物の肝臓から採取した。外植片は、ミリポアフィルタ（Ｓｙｎｐｏｒ、直径０．６ｍｍ）を用いて、培養液および空気界面上で培養した。培養は３７℃にて１４〜１６時間実施した。培養後、一群の外植片を用量２５μＣｕの標識３Ｈ−ロイシンを含む培地に１０分間に移転した。タンパク質合成の強度は、同じサンプル中の標識ロイシンプールに移動したタンパク質中のロイシン含有に対して評価した。標識前駆体の細胞透過率は、遊離した標識アミノ酸のプールによって決定した。酸性肝臓糖タンパク質（ＡＬＧ）の影響は、濃度１０−１４モル／リットルのその溶液について定義した。ＡＬＧの溶液は、標識ロイシンによるインキュベーションの前に２時間、試験バイアル内の培地に加え、次に規定濃度のＡＬＧおよび標識アミノ酸を含む培地に１０分間移転させた。
【０１２３】
ＡＬＧ影響下のタンパク質合成強度は、対照と比較してかなり、ほぼ半分に低下していることがわかった（対照では、本前駆体のプールへの標識ロイシン含有率は例えば、０．４２±０．０９となったが、試験では０．２１±０．０４であった）。
【０１２４】
肝細胞膜の透過率は、ＡＬＧ存在時にはかなり上昇した（対照では例えば、遊離アミノ酸のプールは、１分当たり１１２０±５０ｉｍｐとなったが、試験バイアルでは相応して、２１８０±３０となった）。
【０１２５】
試験臓器培養物からの外植片の形態は、対照と比較しても変化はなかった。
【０１２６】
実施した研究の結果により、ＡＬＧは肝臓組織構造が保持された状態において、極めて低用量で、肝細胞におけるタンパク質合成の強度およびその原形質膜の透過率に影響を与えることが示されている。
【０１２７】
実施例１４
肝細胞原形質膜の透過率および生体内でのタンパク質合成の強度に対する哺乳類血清による糖タンパク質（ｐＨ間隔４．６５〜５．１におけるｐｌ）の影響
実験は、重量１８０ｇの雄のウィスター系ラットより採取した複数の臓器肝臓培養物に対して実施した。５回の実験を行った。各実験には、２５〜３０片の肝臓を使用した。１回の実験で研究する外植片はすべて、１匹の動物の肝臓から採取した。外植片は、ミリポアフィルタ（Ｓｙｎｐｏｒ、直径０．６ｍｍ）を用いて、培養液および空気界面上で培養した。培養は３７℃にて１４〜１６時間実施した。培養後、一群の外植片を、用量２５μＣｕの標識３Ｈ−ロイシンを含む培地に１０分間移転した。タンパク質合成の強度は、同じサンプル中の標識ロイシンプールに移動したタンパク質中のロイシン含有に対して評価した。標識前駆体の細胞透過率は、遊離した標識アミノ酸のプールによって決定した。血清糖タンパク質（ＳＧ）の影響は、濃度１０−１４モル／リットルのその溶液について定義した。ＳＧの溶液は、標識ロイシンによるインキュベーションの前に２時間、試験バイアル内の培地に加え、次に規定濃度のＳＧおよび標識アミノ酸を含む培地に１０分間移転させた。
【０１２８】
ＳＧ影響下のタンパク質合成強度は、対照と比較してかなり、ほぼ半分に低下していることがわかった（対照では、本前駆体のプールへの標識ロイシン含有率は、例えば０．４２±０．０９となったが、試験では０．１７±０．０５であった）。肝細胞膜の透過率は、ＳＧ存在時にはかなり上昇した（対照では例えば、遊離アミノ酸のプールは、１分当たり１１２０±５０ｉｍｐとなったが、試験バイアルでは相応して、２９８０±３０となった）。
【０１２９】
試験臓器培養物からの外植片の形態は、対照と比較しても変化はなかった。
【０１３０】
実施した研究の結果により、ＳＧは肝臓組織構造が保持された状態において、極めて低用量で、肝細胞におけるタンパク質合成の強度およびその原形質膜の透過率に影響を与えることが示されている。
【０１３１】
以下の実施例（１５〜１７）は、本発明による糖タンパク質に基づく製薬組成物について述べる。
【０１３２】
実施例１５
極めて低用量で薬理作用を有する、哺乳類血清による糖タンパク質（ｐＨ間隔４．６５〜５．１におけるｐｌ）に基づく組成物
組成：
血清糖タンパク質    １×１０−１０ｇ
塩化ナトリウム    ８．８ｇ
塩化カルシウム    ０．００１ｇ
水    最大１リットル
は、上皮および結合組織における修復プロセスのバイオレギュレータである。
【０１３３】
点眼液として使用する場合、このように規定された組成物は、機械的外傷または燃焼の後の、角膜の回復を助ける。これは軽い瘢痕を形成し、同時に、瘢痕組織の過剰な増殖を制限する。角膜移植、角膜炎および一部の結膜炎の治療に特に有効である。この組成物を角膜穿通創傷の治療に利用すると、炎症反応期間の短縮、創傷端縫合離開の一掃、損傷面上皮化の促進、前眼房の早期再生、合併症頻度の低減（フィブリンおよび前房蓄膿の滲出）、回復再生の促進、新たな瘢痕組織の再生が生じ、これは、角膜の活性血管真性を起こさずに、増殖成分の行き渡ったさらに緻密で構造化された瘢痕の形成を引き起こす。細胞レベルでは、以下が見られる：上皮、マクロファージ、角膜芽細胞の移動の促進、白血球浸潤の減少、最終的には上皮線維素成分によって創傷管が迅速に充填される、創傷管剥離の兆候のない内皮連続層の早期形成、創傷端のより早期で確実な閉鎖、フィブリンの活性再吸収および新たなコラーゲン線維を合成している角膜芽細胞増殖によるその置換。この組成物を使用すると、以下が起こる：コラーゲン板のさらに緻密な配列および瘢痕組織の質を決定する、細胞上に増殖する線維成分の広がり。さらに穏やかで緻密な、そして無血管性の瘢痕が形成されると、角膜の透明性および屈折によりわずかな変化が生じる。眼熱傷の場合、規定された組成物の治療効果は第１４日までに発生し、以下より構成される：線維芽細胞要素の著しい増殖、傷ついた角膜組織への浸潤および、初期の形態組織構造を制限する角膜のプレート構造を生じさせる、増殖細胞のベクトル配向。
【０１３４】
注射形として使用する場合、この規定された組成物は、頸部臀部骨折を含む、四肢骨折時の骨組織再生を刺激する。これは、軟骨組織の構造および機能異常に関連する、重症の関節症状の治療、膝関節軟骨の機械的損傷の治療、関節症および滑膜炎治療に有効である。組成物の導入によって、損傷軟骨組織の変性プロセスが抑制される。損傷関節軟骨の治療に使用する場合は、本組成物は若い軟骨細胞の迅速な蓄積およびその分化を行わせ、その結果、置換軟骨組織を対照よりも迅速に形成させ、損傷部分における関節表面さえ再構築する。このことは次に、関節移動性の回復で基本的な役割を果たす。若い軟骨細胞は損傷部分を充填し、初期ヒアリン軟骨などの層上への分化が起きるため、軟骨組織は決定的な方法で再生する。組成物の関節内導入を実施する場合、薬剤を２、３回注射した後に、痛覚症状の減少が見られる。規定された組成物の適用効率を、スポーツマンの膝関節軟骨の外傷性損傷の治療の場合に、最も周知の軟骨保護剤、例えば「Ｚｅｅｌ」と比較すると、所与の組成物の場合には平均７〜１０日で、「Ｚｅｅｌ」適用の場合には平均１４〜１７日で、痛覚症状および滑膜炎が止まった。
【０１３５】
それゆえ、以前のレベルまでの運動結果の回復は、「Ｚｅｅｌ」を適用した場合よりも、２〜２．５倍早く起こった。
【０１３６】
組成物の１リットル（または１ｋｇ）当たり１×１０−１０ｇの糖タンパク質という濃度の血清糖タンパク質を有効成分として含む、各種の形（ゲル、軟膏、坐薬、溶液）の多様な組成物は、創傷治癒特性を持ち、熱傷疾患、褥瘡の治療およびそれらの治療を含む、皮膚損傷治療に有効である。それらは、放射線治療後に癌患者に発生する放射線損傷の後の皮膚修復プロセスを刺激する。これらの組成物は、胃腸病学（潰瘍、胃炎、胃十二指腸炎）、肛門病学（直腸疾患）、婦人科学（子宮膣部びらん）、心臓病学（心筋梗塞後の回復期）に有効である。
【０１３７】
実施例１６
極めて低用量で薬理作用を有する、ウシ網膜による酸性肝臓糖タンパク質に基づく組成物
組成：
網膜による酸性糖タンパク質    １×１０−１０ｇ
塩化ナトリウム    ８．８ｇ
塩化カルシウム    ０．００１ｇ
水    最大１リットル
は、損傷した網膜機能の回復を助ける、修復プロセスのバイオレギュレータであり、外科的介入時の網膜剥離を防止する。
【０１３８】
この規定された組成物は、視覚実現を担う網膜の塩基性酵媒システムの機能を刺激し、網膜の細胞膜中の脂質の過酸化物酸化を抑制する。この組成物は有効なバイオレギュレータであり、網膜および細胞分割の組織構造における位置的な細胞配置を担当する。これは傷害または病理学的プロセス発生後の、網膜組織の空間的な機能構成の回復を助ける。所与の本組成物は、近視疾患、各種病因の網膜再生、眼貫通創傷後の症状に治療的効果を有する。
【０１３９】
実施例１７
極めて低用量で薬理作用を有する、ウシ眼色素上皮による酸性肝臓糖タンパク質に基づく組成物
組成：
網膜による酸性糖タンパク質    １×１０−１０ｇ
塩化ナトリウム    ８．８ｇ
塩化カルシウム    ０．００１ｇ
水    最大１リットル
は、損傷した眼色素上皮機能の回復を助ける、バイオレギュレータである。
【０１４０】
今日、使用によって、各種病因の網膜炎および黄斑症発生の初期段階での病理プロセスを抑制する薬物はない。規定した組成物は、各種病因の黄斑症および網膜炎の治療に有効である。
【図面の簡単な説明】
【図１】
所与の本発明で述べた糖タンパク質の生物活性および生物効果を示す。
【図２】
所与の本発明で述べた糖タンパク質の生物活性および生物効果を示す。
【図３】
所与の本発明で述べた糖タンパク質の生物活性および生物効果を示す。
【図４】
所与の本発明で述べた糖タンパク質の生物活性および生物効果を示す。
【図５】
所与の本発明で述べた糖タンパク質の生物活性および生物効果を示す。
【図６】
所与の本発明で述べた糖タンパク質の生物活性および生物効果を示す。
【図７】
所与の本発明で述べた糖タンパク質の生物活性および生物効果を示す。
【図８】
所与の本発明で述べた糖タンパク質の生物活性および生物効果を示す。
【図９】
所与の本発明で述べた糖タンパク質の生物活性および生物効果を示す。
【図１０】
所与の本発明で述べた糖タンパク質の生物活性および生物効果を示す。
【図１１】
所与の本発明で述べた糖タンパク質の生物活性および生物効果を示す。
【図１２】
所与の本発明で述べた糖タンパク質の生物活性および生物効果を示す。
【図１３】
所与の本発明で述べた糖タンパク質の生物活性および生物効果を示す。
【図１４】
所与の本発明で述べた糖タンパク質の生物活性および生物効果を示す。
【図１５】
所与の本発明で述べた糖タンパク質の生物活性および生物効果を示す。
【図１６】
所与の本発明で述べた糖タンパク質の生物活性および生物効果を示す。
【図１７】
所与の本発明で述べた糖タンパク質の生物活性および生物効果を示す。
【図１８】
所与の本発明で述べた糖タンパク質の生物活性および生物効果を示す。
【図１９】
所与の本発明で述べた糖タンパク質の生物活性および生物効果を示す。
【図２０】
所与の本発明で述べた糖タンパク質の生物活性および生物効果を示す。
【図２１】
所与の本発明で述べた糖タンパク質の生物活性および生物効果を示す。
【図２２】
所与の本発明で述べた糖タンパク質の生物活性および生物効果を示す。
【図２３】
所与の本発明で述べた糖タンパク質の生物活性および生物効果を示す。
【図２４】
所与の本発明で述べた糖タンパク質の生物活性および生物効果を示す。
【図２５】
所与の本発明で述べた糖タンパク質の生物活性および生物効果を示す。
【図２６】
所与の本発明で述べた糖タンパク質の生物活性および生物効果を示す。
【図２７】
所与の本発明で述べた糖タンパク質の生物活性および生物効果を示す。
【図２８】
所与の本発明で述べた糖タンパク質の生物活性および生物効果を示す。
【図２９】
所与の本発明で述べた糖タンパク質の生物活性および生物効果を示す。


【誤訳訂正２】
【訂正対象書類名】図面
【訂正対象項目名】全図
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【図１】
2004502740.tif 000009
【図２】
2004502740.tif 000010
【図３】
2004502740.tif 000011
【図４】
2004502740.tif 000012
【図５】
2004502740.tif 000013
【図６】
2004502740.tif 000014
【図７】
2004502740.tif 000015
【図８】
2004502740.tif 000016
【図９】
2004502740.tif 000017
【図１０】
2004502740.tif 000018
【図１１】
2004502740.tif 000019
【図１２】
2004502740.tif 000020
【図１３】
2004502740.tif 000021
【図１４】
2004502740.tif 000022
【図１５】
2004502740.tif 000023
【図１６】
2004502740.tif 000024
【図１７】
2004502740.tif 000025
【図１８】
2004502740.tif 000026
【図１９】
2004502740.tif 000027
【図２０】
2004502740.tif 000028
【図２１】
2004502740.tif 000029
【図２２】
2004502740.tif 000030
【図２３】
2004502740.tif 000031
【図２４】
2004502740.tif 000032
【図２５】
2004502740.tif 000033
【図２６】
2004502740.tif 000034
【図２７】
2004502740.tif 000035
【図２８】
2004502740.tif 000036
【図２９】
2004502740.tif 000037