【手続補正書】
【提出日】平成16年9月27日(2004.9.27)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ピロールを含有する生体化合物を測定する方法であって、
ｉ）生体化合物を
ａ）任意に標識された誘導体化剤（固相支持体に結合したまたは結合することができる）であって、この誘導体化剤は生体化合物とともに反応生成物を形成し、ついで反応生成物との複合体を形成する検出可能分子に暴露される誘導体化剤、または
ｂ）固相支持体に結合していない任意に標識された誘導体化剤であって、この誘導体化剤は生体化合物とともに反応生成物を形成し、ついで反応生成物において生体化合物に特異的な結合剤に暴露され、前記結合剤が固相支持体に結合される誘導体化剤、または
ｃ）固相支持体に結合した結合剤であって、前記結合剤は生体化合物に特異的であり、それと複合体を形成し、ついで、前記複合体の生体化合物部分と反応生成物を形成する任意で標識された誘導体化剤に暴露される結合剤
の１つと接触させるステップ、および
ｉｉ）検出可能な分子を検出することによって、または遊離の若しくは結合した結合剤の量を測定することによって、または存在する標識の量を測定することによって結合した生体化合物の量を決定し、それによってピロール含有生体化合物を測定するステップ、
を含むピロール含有生体化合物の測定方法。
【請求項２】
（ａ）結合した形態にて以下の構造の誘導体化剤に生体化合物を接触させるステップであって、
【化１】
2004510981.tif 000001
（式中、Ｒ1はアルキル基、Ｒ2はアルキル基、Ａは連結基、Ｂは固相支持体である。）接触により反応生成物の形成が誘導され、この反応生成物は誘導体化剤への生体化合物の共有結合を含むステップ、
（ｂ）検出可能分子に反応生成物を接触させるステップであって、接触により反応生成物への検出可能分子の特異的な結合が誘導され、複合体が提供されるステップ、
（ｃ）検出可能分子を検出するステップ、
それによってピロール含有生体化合物を測定するステップ、
を含む請求項１に記載のピロール含有生体化合物の測定方法。
【請求項３】
Ｒ1が１〜１０の炭素原子を含有する直鎖アルキル基、Ｒ2が１〜１０の炭素原子を含有する直鎖アルキル基である請求項２に記載のピロール含有生体化合物の測定方法。
【請求項４】
Ａがヘテロアルキル基である請求項２に記載のピロール含有生体化合物の測定方法。
【請求項５】
検出分子が１次モノクローナル抗体である請求項２に記載のピロール含有生体化合物の測定方法。
【請求項６】
Ｒ1が１〜５の炭素原子を含有する直鎖アルキル基、Ｒ2が１〜５の炭素原子を含有する直鎖アルキル基である請求項３に記載のピロール含有生体化合物の測定方法。
【請求項７】
Ａが少なくとも１つの窒素原子を含むヘテロアルキル基である請求項４に記載のピロール含有生体化合物の測定方法。
【請求項８】
方法が、１次モノクローナル抗体に特異的に結合する２次モノクローナル抗体に複合体を接触させるステップをさらに含む請求項５に記載のピロール含有生体化合物の測定方法。
【請求項９】
誘導体化剤が結合した形態にて以下の構造のものである請求項６に記載のピロール含有生体化合物の測定方法。
【化２】
2004510981.tif 000002
【請求項１０】
Ａが少なくとも１つの窒素原子を含有するヘテロアルキル基であり、検出分子が１次モノクローナル抗体である請求項９に記載のピロール含有生体化合物の測定方法。
【請求項１１】
方法が、１次モノクローナル抗体に特異的に結合する２次モノクローナル抗体に複合体を接触させるステップをさらに含む請求項１０に記載のピロール含有生体化合物の測定方法。
【請求項１２】
ａ）溶液中にて任意で標識された誘導体化剤に生体化合物を接触させてそれとの反応生成物を形成し、ついで、固相支持体に結合した結合剤に暴露するステップであって、結合剤は反応生成物において生体化合物に特異的であるステップ、および
ｂ）固相支持体に結合した標識された誘導体化剤の量を決定することにより結合した生体化合物の量を決定するステップ、
それによってピロール含有化合物を測定するステップ、
を含む請求項１に記載のピロール含有生体化合物の測定方法。
【請求項１３】
誘導体化剤がビオチン化されたエーリッヒ試薬である請求項１２に記載のピロール含有生体化合物の測定方法。
【請求項１４】
誘導体化剤が放射性標識、蛍光標識または酵素標識によって標識されている請求項１２のピロール含有生体化合物の測定方法。
【請求項１５】
結合剤との接触に先立って反応生成物を含有する溶液を中和する請求項１２に記載のピロール含有生体化合物の測定方法。
【請求項１６】
ａ）溶液中にて誘導体化剤に生体化合物を接触させ、反応生成物を形成するステップであって、誘導体化剤が強い結合対の第１のパートナーを含むステップ、
ｂ）その表面上に強い結合対の第２のパートナーを有する固相支持体に反応生成物を接触させ、反応生成物とともに結合複合体を形成するステップ、
ｃ）検出可能分子に結合複合体を接触させるステップ、
ｄ）結合した生体化合物の量を決定するステップ、
それによってピロール含有生体化合物を測定するステップ、
を含む請求項１に記載のピロール含有生体化合物の測定方法。
【請求項１７】
固相支持体との接触に先立って反応生成物を含有する溶液を中和する請求項１６に記載のピロール含有生体化合物の測定方法。
【請求項１８】
検出可能分子が生体化合物に特異的なモノクローナル抗体であり、固相支持体に結合したＭＡｂの量を検出することによって生体化合物の量を決定する請求項１６に記載のピロール含有生体化合物の測定方法。
【請求項１９】
ａ）結合した形態にて以下の構造の誘導体化剤に生体化合物を接触させるステップであって、
【化３】
2004510981.tif 000003
（Ｒ1はアルキル基、Ｒ2はアルキル基、Ｒ4はヘテロアルキル基、Ｘは第１の標識分子であり、かつ強い結合対の第１のパートナーとして作用し、Ｙは第２の標識分子であり、かつ固相支持体表面上の強い結合対の第２のパートナーとして作用する。）接触により反応生成物の形成が誘導され、この反応生成物は誘導体化剤への生体化合物の共有結合を含むステップ、
ｂ）検出可能分子に反応生成物を接触させるステップであって、この接触により、検出可能分子の反応生成物への特異的な結合が誘導され、複合体が提供されるステップ、
ｃ）検出可能分子を検出するステップ、
それによってピロール含有生体化合物を測定するステップ、
を含む請求項１６に記載のピロール含有生体化合物の測定方法。
【請求項２０】
Ｒ1が１〜１０の炭素原子を含有する直鎖アルキル基、Ｒ2が１〜１０の炭素原子を含有する直鎖アルキル基である請求項１９に記載のピロール含有生体化合物の測定方法。
【請求項２１】
Ｒ4が２〜１０の炭素原子および少なくとも２のヘテロ原子を含有する直鎖へテロアルキル基である請求項１９のピロール含有生体化合物の測定方法。
【請求項２２】
Ｙがその表面上にアビジンを有する固相支持体である請求項１９に記載のピロール含有生体化合物の測定方法。
【請求項２３】
検出可能分子が１次モノクローナル抗体である請求項１９に記載のピロール含有生体化合物の測定方法。
【請求項２４】
Ｒ1が１〜５の炭素原子を含有する直鎖アルキル基、Ｒ2が１〜５の炭素原子を含有する直鎖アルキル基である請求項１９に記載のピロール含有生体化合物の測定方法。
【請求項２５】
方法が、１次モノクローナル抗体に特異的に結合する２次モノクローナル抗体に複合体を接触させるステップをさらに含む請求項１８に記載のピロール含有生体化合物の測定方法。
【請求項２６】
誘導体化剤が、結合した形態にて、以下の構造のものである
【化４】
2004510981.tif 000004
（式中、Ｒ1は１〜５の炭素原子を含有する直鎖アルキル基、Ｒ2は１〜５の炭素原子を含有する直鎖アルキル基、Ｒ4は２〜１０の炭素原子および少なくとも２のヘテロ原子を含有する直鎖へテロアルキル基、Ｙはその表面にアビジンまたはストレプトアビジンを有する固相支持体である。）請求項２５に記載のピロール含有生体化合物の測定方法。
【請求項２７】
Ｒ1が−ＣＨ3、Ｒ2が−ＣＨ2ＣＨ2−、Ｒ4が−ＮＨ（ＣＨ2）5ＮＨ−または−ＮＨ（ＣＨ2）2ＳＳ（ＣＨ2）2ＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ2）5ＮＨ−である請求項２６に記載のピロール含有生体化合物の測定方法。
【請求項２８】
Ｒ4が−ＮＨ（ＣＨ2）5ＮＨ−である請求項２７に記載のピロール含有生体化合物の測定方法。
【請求項２９】
以下の構造の化合物。
【化５】
2004510981.tif 000005
（式中、Ｒ1はアルキル基、Ｒ2はアルキル基、Ａは連結基、Ｂは固相支持体である。）
【請求項３０】
Ｒ1が１〜１０の炭素原子を含有する直鎖アルキル基、Ｒ2が１〜１０の炭素原子を含有する直鎖アルキル基である請求項２９に記載の化合物。
【請求項３１】
Ｒ1が１〜５の炭素原子を含有する直鎖アルキル基、Ｒ2が１〜５の炭素原子を含有する直鎖アルキル基、Ａがヘテロアルキル基である請求項３０に記載の化合物。
【請求項３２】
Ｒ1が−ＣＨ3、Ｒ2が−ＣＨ2ＣＨ2−、Ａが少なくとも１つの窒素原子を含むヘテロアルキル基である請求項３１に記載の化合物。
【請求項３３】
以下の構造の化合物。
【化６】
2004510981.tif 000006
（式中、Ｒ1は１〜１０の炭素原子を含有する直鎖アルキル基、Ｒ2は１〜１０の炭素原子を含有する直鎖アルキル基、Ｒ4は２〜１０の炭素原子および少なくとも２のヘテロ原子を含有する直鎖へテロアルキル基である。）
【請求項３４】
Ｒ1が１〜５の炭素原子を含有する直鎖アルキル基、Ｒ2が１〜５の炭素原子を含有する直鎖アルキル基である請求項３３に記載の化合物。
【請求項３５】
Ｒ1が−ＣＨ3、Ｒ2が−ＣＨ2ＣＨ2−、Ｒ4が−ＮＨ（ＣＨ2）5ＮＨ−または−ＮＨ（ＣＨ2）2ＳＳ（ＣＨ2）2ＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ2）5ＮＨ−である請求項３４に記載の化合物。
【請求項３６】
Ｒ4が−ＮＨ（ＣＨ2）5ＮＨ−である請求項３５に記載の化合物。
【請求項３７】
抗原の調製方法であって
ｉ）ピロール含有生体化合物を
ａ）任意に標識された誘導体化剤（固相支持体に結合したまたは結合することができる）であって、この誘導体化剤は生体化合物とともに反応生成物を形成し、ついで反応生成物との複合体を形成する検出可能分子に暴露される誘導体化剤、または
ｂ）固相支持体に結合していない任意に標識された誘導体化剤であって、この誘導体化剤は生体化合物とともに反応生成物を形成し、ついで反応生成物において生体化合物に特異的な結合剤に暴露され、前記結合剤が固相支持体に結合される誘導体化剤、または
ｃ）固相支持体に結合した結合剤であって、前記結合剤は生体化合物に特異的であり、それと複合体を形成し、ついで、前記複合体の生体化合物部分と反応生成物を形成する任意で標識された誘導体化剤に暴露される結合剤、
の１つと接触させるステップ、および
ｉｉ）固相支持体からこの生体化合物を溶出するステップ；
を含む、抗原の調製方法。
【請求項３８】
誘導体化剤が、結合した形態にて以下の構造のものである請求項３７に記載の方法。
【化７】
2004510981.tif 000007
（式中、Ｒ1はアルキル基、Ｒ2はアルキル基、Ａは連結基、Ｂは固相支持体である。）
【請求項３９】
誘導体化剤が、結合した形態にて以下の構造のものである請求項３７に記載の方法。
【化８】
2004510981.tif 000008
（式中、Ｒ1はアルキル基、Ｒ2はアルキル基、Ｒ4はヘテロアルキル基、Ｘは強い結合対の第１のパートナー、Ｙはその表面上に強い結合対の第２のパートナーを有する固相支持体である。）