【手続補正書】
【提出日】平成16年10月20日(2004.10.20)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
哺乳動物細胞から放出される酵素により活性化される生物学的に活性な物質を発現させるための核酸構築物であって、
下記成分：
ａ）少くとも１つのプロモーター要素
ｂ）生物学的に活性な化合物（タンパク質Ｂ）をコードする少くとも１つのＤＮＡ配列で    あって、活性化合物が哺乳類に内在的であるＤＮＡ配列
ｃ）哺乳動物細胞から放出されるプロテアーゼで特異的に開裂させることができるアミノ    酸配列（部分構造Ｃ）をコードする少くとも１つのＤＮＡ配列、および
ｄ）開裂性アミノ酸配列（部分構造Ｃ）により活性化合物（タンパク質Ｂ）に結合されて    いて、活性化合物（タンパク質Ｂ）の活性を阻害するペプチド（部分構造Ｄ）をコー    ドする少くとも１つのＤＮＡ配列であって、ＤＮＡ配列ｃ）が、ＤＮＡ配列ｂ）とＤ    ＮＡ配列ｄ）を作動可能に連結するような自然に存在するものではない、ＤＮＡ配列を含んでなる構築物。
【請求項２】
プロテアーゼがプラスミノーゲンアクチベーター、前立腺特異性抗原、カテプシンまたはマトリックスメタロプロテイナーゼである、請求項１に記載の核酸構築物。
【請求項３】
哺乳動物細胞が腫瘍細胞、白血病細胞、内皮細胞、マクロファージ、リンパ球、筋肉細胞、上皮細胞、グリア細胞、滑膜細胞またはウイルス感染細胞である、請求項１または２に記載の核酸構築物。
【請求項４】
核酸構築物が成分ｂ′）を付加することにより伸長され、その成分が活性化合物（タンパク質Ｂ）を標的構造に結合させるリガンド（部分構造Ｂ′）をコードしている、請求項１〜３のいずれか一項に記載の核酸構築物。
【請求項５】
タンパク質Ｂおよび部分構造Ｄがタンパク質活性化合物の天然前駆体の一部であり、部分構造ＢおよびＤを連結する天然開裂配列が部分構造Ｃで置換されている、請求項１〜４のいずれか一項に記載の核酸構築物。
【請求項６】
部分構造Ｄがタンパク質活性化合物の天然前駆体の部分構造である、請求項１〜５のいずれか一項に記載の核酸構築物。
【請求項７】
プラスミドまたはウイルスベクター中に挿入されている、請求項１〜６のいずれか一項に記載の核酸構築物。
【請求項８】
成分ａ）が非特異的、細胞特異的、ウイルス特異的、代謝的、細胞周期特異的におよび／またはテトラサイクリンによって活性化できるプロモーター配列である、請求項１〜７のいずれか一項に記載の核酸構築物。
【請求項９】
成分ａ）が少くとも２つの同一または異なるプロモーター配列の組合せである、請求項１〜８のいずれか一項に記載の核酸構築物。
【請求項１０】
成分ａ）が、好ましくは内皮細胞、活性化された内皮細胞に隣接する細胞、筋肉細胞、白血病細胞、腫瘍細胞、グリア細胞、リンパ球、マクロファージおよび／または滑膜細胞において活性化される、請求項８または９に記載の核酸構築物。
【請求項１１】
活性化合物（タンパク質Ｂ）が生物活性化カスケードを活性化または阻害し、および／またはこのカスケードの活性成分であり、好ましくは凝固系を活性化または阻害し、フィブリン溶解を活性化し、補体系を活性化し、および／またはキニン系を活性化し、あるいは薬理物質の不活性前駆体を活性物質に変換するか、またはそれ自体が薬理活性物質である酵素である、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の核酸構築物。
【請求項１２】
活性化合物（タンパク質Ｂ）がトロンビン、因子Ｖａ、因子 VIIａ、因子IXａ、因子Ｘａ、ＴＦ凝固活性断片または因子 XIIａから選択される凝固因子；Ａｒｇ‐Ｔｈｒ開裂部位（アミノ酸３２７／３２８位）の領域で変異されたトロンビン；ウロキナーゼ、ｔＰＡまたはその機能性ハイブリッドから選択されるフィブリン溶解タンパク質；ＣＶＦ、Ｃ３ｂまたはその機能性開裂産物から選択される補体因子；タンパク質Ｃ、Ｃ‐１Ｓインヒビター、α１‐抗トリプシン、ヒルジン、ＡＴ-III、ＴＦＰＩ、ＰＡＩ‐１、ＰＡＩ‐２またはＰＡＩ‐３から選択される抗トロンビンタンパク質；カリクレイン；細胞静止、細胞毒性または炎症誘引タンパク質；抗血管形成タンパク質；免疫調節タンパク質；抗炎症タンパク質；神経系への損傷を緩和するタンパク質；ＴＮＦαの神経毒性効果を阻害または中和するタンパク質；血管形成刺激タンパク質；降圧タンパク質；抗ウイルスタンパク質；サイトカイン；インターフェロン；腫瘍壊死因子；オンコスタチンＭまたはＬＩＦ；サイトカインレセプター；細胞に外来的なサイトカインレセプターの部分；サイトカインアンタゴニスト；成長因子；成長因子レセプター；細胞に外来的な成長因子レセプターの部分；ケモカイン；アンギオスタチン；血小板因子４；ＴＩＭＰ‐１、ＴＩＭＰ‐２またはＴＩＭＰ‐３；ニトロレダクターゼ；β‐グルクロニダーゼ；カルボキシペプチダーゼ；β‐ラクタマーゼ；シトシンデアミナーゼ；カタラーゼ；ペルオキシダーゼ；ホスファターゼ；オキシダーゼ；カリクレインまたは内皮細胞酸化窒素シンターゼである、請求項１１に記載の核酸構築物。
【請求項１３】
成分ｂ′が、細胞の表面、好ましくは細胞膜レセプター、細胞膜抗原、細胞膜局在接着分子、あるいは細胞外マトリックスまたはその成分と結合するリガンド（部分構造Ｂ′）をコードしている、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の核酸構築物。
【請求項１４】
リガンドが、細胞膜抗原または細胞外マトリックス上の抗原と特異的に結合する抗体または抗体断片であるか、あるいは細胞膜上のレセプターと結合するペプチドまたはタンパク質、好ましくは成長因子、サイトカイン、インターフェロン、腫瘍壊死因子、ケモカイン、これらリガンドのレセプター結合部分配列、ペプチドホルモン、アンギオテンシン、キニン、葉酸、対応接着分子または細胞外マトリックスと結合する接着分子または接着分子の部分配列、Ｆｃレセプターの細胞外部分、ウイルスの糖タンパク質、これらの細胞と結合する糖タンパク質の部分配列、レセプターの、ウイルス糖タンパク質のまたはグリコリン脂質アンカーの貫膜ドメインである、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の核酸構築物。
【請求項１５】
リガンドが内皮細胞、好ましくは活性化または増殖内皮細胞、腫瘍細胞、筋肉細胞、好ましくは平滑筋細胞、繊維芽細胞、マクロファージ、リンパ球、肝細胞、腎臓細胞、滑膜細胞、炎症細胞、ウイルス感染細胞、気管支上皮細胞、グリア細胞または白血病細胞と結合する、請求項１３または１４に記載の核酸構築物。
【請求項１６】
構築物が少くとも２つの同一または異なる成分ｂ）ｃ）ｄ）および／またはｂ′）ｂ）ｃ）ｄ）からなっていて、その各成分が内部リボソームエントリー部位（ＩＲＥＳ）で互いに連結されている、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の核酸構築物。
【請求項１７】
各成分を互いに連結させることからなる、請求項１〜１６のいずれか一項に記載された核酸構築物の作製法。
【請求項１８】
腫瘍、白血病、アレルギー、自己免疫疾患、感染、炎症、移植拒絶反応、血栓症、血管閉塞、血液凝固および血液循環障害、組織への損傷および／または神経系への損傷の予防および／または治療のための局所または全身投与用の薬剤の製造のための、請求項１〜１６のいずれか一項に記載された核酸構築物の使用。
【請求項１９】
核酸構築物が適切な細胞中に導入される、組換え改変細胞を作製するための、請求項１〜１６のいずれか一項に記載された核酸構築物の使用。
【請求項２０】
核酸構築物が適切な細胞で発現されて、形成されたタンパク質が単離される、核酸構築物によりコードされているタンパク質を作製するための、請求項１〜１６のいずれか一項に記載された核酸構築物の使用。
【請求項２１】
細胞が内皮細胞、リンパ球、マクロファージ、グリア細胞、繊維芽細胞、肝細胞、腎臓細胞、筋肉細胞、骨または軟骨組織の細胞、滑膜細胞、腹膜細胞、皮膚細胞、上皮細胞、白血病細胞および／または腫瘍細胞である、請求項１９または２０に記載の使用。
【請求項２２】
請求項１〜１６のいずれか一項に記載された核酸構築物を有する細胞。