【手続補正書】
【提出日】平成17年4月19日(2005.4.19)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
治療的用途のために、脂肪組織から幹細胞、前駆細胞及びマトリックス物質を回収及び保存する方法であって、
a.容器の細胞収集部分の中に脂肪組織を真空吸引する工程であって、
前記細胞収集部分は、細胞分離部分を取り囲んでいる前記容器から透過性膜によって離されており、前記透過性膜は、脂肪組織の所望成分を細胞収集部分の中に保持して、廃棄し得る成分を廃棄処分のために通り抜けさせる前記工程；
b.前記収集部分に保持されている物質を分離し、分離された前記物質を洗滌して廃棄し得る成分のいずれをも除去して、マトリックス物質及び脂肪細胞枯渇細胞集団のうち少なくとも一つを分離する前記工程；
c.前記少なくとも一つの脂肪細胞枯渇細胞集団及びマトリックス物質のうち、一つ又はそれ以上の所望部分を凍結保存及び低温貯蔵する工程；
を含む前記方法。
【請求項２】
所望成分が、幹細胞、前駆細胞及びマトリックス物質を含む細胞集団を含み、廃棄し得る成分が膨張溶液、生理食塩水、血液、血餅、遊離脂質及び成熟脂肪細胞を含む、請求項１の方法。
【請求項３】
透過性膜が、規定された多孔度のフィルター材である、請求項１の方法。
【請求項４】
分離及び洗滌する工程が、
収集部分に保持されている物質を単離すること、前記単離された物質を脱凝集及び等張緩衝化溶液中に置くことによって遊離脂質及び脂肪細胞から幹細胞及び前駆細胞を分離すること、並びに前記遊離脂質及び脂肪細胞を除去すること、を含む請求項１の方法。
【請求項５】
脱凝集が、収集部分中の物質のタンパク質分解酵素への曝露、機械的脱凝集又はこれらの組合せによって達成される、請求項４の方法。
【請求項６】
脱凝集が、収集部分中の物質のコラゲナーゼ、トリプシン、パパイン、DNase若しくはリパーゼへの曝露、細かく刻む若しくは剪断する行為、又はそれらの組合せによって達成される、請求項５の方法。
【請求項７】
幹細胞及び前駆細胞が、遠心分離又は浮遊密度浮揚によって廃棄し得る成分から分離される、請求項５の方法。
【請求項８】
脂肪細胞枯渇細胞集団が、他の物質から遠心分離、スピニング膜分離、固相構造物に対する示差的付着及び溶離のいずれかと蛍光発色セルソーティングとによって、又はそれらの組合せによって収集される、請求項１の方法。
【請求項９】
固相構造物が抗体被覆ビーズである、請求項８の方法。
【請求項１０】
脂肪細胞枯渇細胞集団を、幹細胞に富む相と前駆細胞に富む相とに分離することを更に含む、請求項８の方法。
【請求項１１】
治療目的で同種の哺乳動物への送達に適する哺乳動物幹細胞であって、脂肪組織から分離された生存能力のある幹細胞を含み、凍結保存された後に解凍された状態である前記幹細胞。
【請求項１２】
凍結保存する工程が、
脂肪細胞枯渇細胞集団を、一つ以上の凍結保護添加剤と混合すること；
そのようにして生成した混合物を、−50℃に到達するまで約−1℃から約−3℃の一定な冷却速度にて冷却すること；及び
冷却した前記混合物を、液体窒素が入っている貯蔵容器の中に置くこと；
を含む請求項１の方法。
【請求項１３】
凍結保護添加剤が、浸透性の凍結保護剤、非浸透性の凍結保護剤及びこれらの組合せからなる群より選択される、請求項１２の方法。
【請求項１４】
浸透性の凍結保護剤がジメチルスルホキシド、グリセロール、1,2-プロパンジオール又はこれらの組合せであり、非浸透性の凍結保護剤が自家血漿、ヒト血清、ヒドロキシエチルスターチ、アルブミン、ポリビニルピロリドン又はこれらの組合せである、請求項１３の方法。
【請求項１５】
a.脂肪細胞枯渇細胞集団が、5％ヒト血清アルブミン溶液の細胞懸濁液として調製され；
b.前記懸濁液が4℃まで冷却され；
c.前記懸濁液が4℃に維持され、一方ジメチルスルホキシドが冷却された懸濁液にゆっくり添加されて、約5体積％-約20体積％の最終DMSO濃度にされ；
d.前記細胞懸濁液を、−50℃の温度が得られるまで毎分約−1℃の速度にて冷却し；
e.前記細胞懸濁液を、−90℃の温度が得られるまで毎分約−10℃の速度にて冷却して；  f.前記細胞懸濁液が、液体窒素貯蔵容器の気相中に置かれる；
請求項１の方法。
【請求項１６】
脂肪細胞枯渇細胞集団が、凍結保存前に二つ以上の部分に分離される、請求項１の方法。
【請求項１７】
最終DMSO濃度が10体積％である、請求項１５の方法。
【請求項１８】
凍結保存された脂肪細胞枯渇細胞集団を回復させる工程であって、前記細胞集団の温度を約4℃までゆっくり上昇させることを含む前記工程をさらに含む、請求項１の方法。
【請求項１９】
マトリックス物質が、回収された他の物質から分離され、残留する水分含有量が約0.5体積％-約5.0体積％になるまで凍結乾燥され、約25℃以下にて貯蔵される、請求項１の方法。
【請求項２０】
患者に送達するための担体溶液中に生存能力のある幹細胞を含む治療用組成物であって、
前記幹細胞は、脂肪組織から回収されたものであって脂肪組織中に存在する他の細胞材料から分離されたものであり、凍結保存された後に解凍された状態であって治療的又は美容的用途のために生存能力がある、前記治療用組成物。
【請求項２１】
脂肪組織から回収され、幹細胞と同様な処理を受けた前駆細胞を更に含む、請求項２０の治療用組成物。
【請求項２２】
単一ドナーの脂肪組織に由来する生存能力のある幹細胞を、前記幹細胞の生存度を適切なレベルに保つのに充分な量の凍結保存剤中に含む凍結保存治療用組成物であって、
前記幹細胞は、解凍され前記凍結保存剤を除去された後に種々の細胞種に分化して増殖するのに充分な量で存在している、前記治療用組成物。
【請求項２３】
生存能力のある前駆細胞を更に含む、請求項２２の凍結保存治療用組成物。
【請求項２４】
治療的用途のために、脂肪組織から幹細胞、前駆細胞及びマトリックス物質を回収及び保存する方法であって、
a.患者から脂肪組織を取り出す工程；
b.前記脂肪組織から、脂肪細胞枯渇細胞集団及びマトリックス物質の少なくとも一つを分離する工程；及び
c.前記少なくとも一つの脂肪細胞枯渇細胞集団及びマトリックス物質を凍結保存する工程；
を含む前記方法。
【請求項２５】
凍結保存された脂肪細胞枯渇細胞集団を解凍する工程を更に含む、請求項２４の方法。
【請求項２６】
解凍する工程が、脂肪細胞枯渇細胞集団を約37℃の温度まで温めることを含む、請求項２５の方法。
【請求項２７】
取り出す工程が、患者から脂肪組織を吸引することを含む、請求項２４の方法。
【請求項２８】
取り出す工程が、脂肪組織に含まれている幹細胞及び前駆細胞から前記脂肪組織を分離し得る容器の中に脂肪組織を吸引することを含む、請求項２６の方法。
【請求項２９】
分離する工程が、実質的に同一であるが前記分離する工程を含まない方法に対して、生存能力のある細胞数を増加させることを提供するのに有効である、請求項２４の方法。
【請求項３０】
分離する工程が、脂肪組織から多能性幹細胞を分離することを含む、請求項２４の方法。
【請求項３１】
凍結保存する工程が、脂肪細胞枯渇細胞集団を凍結保護剤と混合することを含む、請求項２４の方法。
【請求項３２】
取り出す工程、分離する工程及び凍結保存する工程が連続的に行われる、請求項２４の方法。
【請求項３３】
分離する工程が、遠心分離、スピニング膜分離、固相構造物に対する示差的付着及び溶離の少なくとも一つと蛍光発色セルソーティングとを含む、請求項２４の方法。
【請求項３４】
凍結保存されたマトリックス物質を解凍する工程を更に含む、請求項２４の方法。
【請求項３５】
解凍する工程が、マトリックス物質を約37℃の温度まで温めることを含む、請求項３４の方法。
【請求項３６】
取り出す工程が、脂肪細胞に含まれている他の組織からマトリックス物質を分離し得る容器の中に脂肪組織を吸引することを含む、請求項３５の方法。
【請求項３７】
凍結保存する工程が、マトリックス物質を凍結保護剤と混合することを含む、請求項２４の方法。