【誤訳訂正書】
【提出日】平成15年1月28日(2003.1.28)
【誤訳訂正１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】全文
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【書類名】明細書
【発明の名称】表面アレルゲンに対するアレルギー反応を減少させるための方法および組成物
【特許請求の範囲】
【請求項１】物質中のアレルゲンに対するアレルギー反応を減少させるための方法であって、該方法は、該物質に曝露されたヒトにおいてアレルギー反応を減少するのに有効な量において、ＩｇＥに結合する該アレルゲン中のエピトープをマスクする試薬の有効量を、該物質に接触させることにより、
ここで、該試薬が、該アレルゲンに結合する抗体または抗体フラグメント、該アレルゲンに結合する抗体の超可変領域に対応するペプチド、および該アレルゲンに結合する合成化学化合物からなる群より選択され、そして
ここで、該試薬が、肥満細胞上のＩｇＥレセプターとは結合および架橋せず、毒性でも刺激性でもない、
方法。
【請求項２】前記マスキング試薬が、タンパク質アレルゲン上のＩｇＥエピトープと反応性の抗体または抗体フラグメントである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】前記マスキング試薬が、組換えライブラリーのスクリーニングによって同定される、請求項１に記載の方法。
【請求項４】前記マスキング試薬が、コンビナトリアルライブラリーのスクリーニングによって同定される、請求項１に記載の方法。
【請求項５】前記マスキング試薬が、ラテックスゴムアレルゲンをブロックする、請求項１に記載の方法。
【請求項６】前記マスキング試薬が、動物アレルゲンをブロックする、請求項１に記載の方法。
【請求項７】前記マスキング試薬が、空気または真空が通って循環されるフィルター内にある、請求項１に記載の方法。
【請求項８】前記マスキング試薬を内部表面に適用する工程を包含する、請求項１に記載の方法。
【請求項９】物質に対するアレルギー反応を減少させるための組成物であって、該組成物は、以下：
該物質に曝露されたヒトにおいてアレルギー反応を減少させるために有効な量の、ＩｇＥに結合するアレルゲン中のエピトープをマスクする試薬、および
該物質に該マスキング試薬を接触させるための適切なキャリア、
を含み、
ここで、該試薬は、該アレルゲンに結合する抗体または抗体フラグメント、該アレルゲンに結合する抗体の超可変領域に対応するペプチド、および該アレルゲンに結合する合成化学化合物からなる群より選択され、そして
ここで、該試薬が、肥満細胞上のＩｇＥレセプターとは結合および架橋せず、毒性でも刺激性でもない、
組成物。
【請求項１０】前記組成物が、動物への適用に適切である、請求項９に記載の組成物。
【請求項１１】ラテックス物質のコーティングのための、請求項９に記載の組成物。
【請求項１２】前記マスキング試薬が、エアフィルターまたは真空フィルターに固定化される、請求項９に記載の組成物。
【請求項１３】前記マスキング試薬が、内部表面への適用のための処方物にある、請求項９に記載の組成物。
【請求項１４】前記マスキング試薬が、ラテックスタンパク質上のＩｇＥエピトープを改変する化学化合物である、請求項９に記載の組成物。
【請求項１５】皮膚または他の組織表面へ直接接触する、完成したラテックス産物の表面への適用に適切な、粉末形態または液体形態にある、請求項１４に記載の組成物。
【請求項１６】前記マスキング試薬が、動物の毛髪、羽毛またはふけのＩｇＥエピトープに結合する、請求項９に記載の組成物。
【請求項１７】前記マスキング試薬が、昆虫のタンパク質、カビまたは花粉中のＩｇＥエピトープに結合する、請求項９に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
（発明の背景）
本発明は、概して、表面アレルゲン（例えば、一般的に、ラテックスおよび他の材料）に対するアレルギー性応答を減少させる組成物の分野に関する。
【０００２】
アレルギー性疾患は、一般的な健康に関する問題である。アレルギーは、食品、カビ（ｍｏｌｄ）、花粉、草、樹木、昆虫、ペット、ノミ、ダニ、および環境に存在する他の物質に対して存在する。いくつかのアレルギー性反応（特に、食品および昆虫に対する反応）は、生命を脅かすほどに非常に重篤であり得る。上記に考察した主なアレルゲンは、摂食、吸入または注入（注射）されるときに、反応を惹起する。動物の毛皮は１つの一般的なアレルゲンである。アレルゲンはまた、皮膚との接触のみに基づく反応を惹起し得る。別の周知の例は、ラテックスゴムである。このゴムは、多くの製品（例えば、医療向け供給品および個人向け保護装置）において使用されている。
【０００３】
ラテックスゴム製品は、ゴムの木Ｈｅｖｅａ  ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓに由来する乳状の流体および他のプロセシング化学物質から製造される。ラテックスゴム中のタンパク質は、ある範囲のアレルギー性反応を生じ得る。さらに、アレルギー性反応を担うタンパク質が、ラテックスゴムグローブに配置される粉末に付着し得る。この粉末が吸入され得、肺を通じた曝露を生じ得る。２つの型の反応が、ラテックスゴムに感受性の個人において生じ得る：刺激性接触皮膚炎、および即時型全身性過敏症。これらの反応は、ＩｇＥによって媒介される。
【０００４】
抗体と相互作用する、ラテックスゴム中に見出されるタンパク質が二次元電気泳動によって特徴づけされている。５６ｋｄ、４５ｋｄ、３０ｋｄ、２０ｋｄ、１４ｋｄおよび６．５ｋｄ未満のタンパク質画分が検出されている（Ｐｏｓｃｈ  Ａ．ら、（１９９７）Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９９（３）、３８５−３９５）。ＩｇＥ抗体と反応した、８−１４ｋｄおよび２２−２４ｋｄの範囲の酸性タンパク質もまた同定された（Ｐｏｓｃｈ  Ａ．ら、（１９９７）Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９９（３）、３８５−３９５）。Ｈｅｖｅａ  ｂｒａｓｉｌｉｎｅｎｓｉｓに由来する、これらのタンパク質、プロヘベイン（ｐｒｏｈｅｖｅｉｎ）およびヘベイン（ｈｅｖｅｉｎ）は、主要なラテックスゴムアレルゲンであることが知られ、そしてＩｇＧと相互作用することが知られている（Ａｌｅｎｉｕｓ  Ｈ．ら、Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ａｌｌｅｒｇｙ  ２５（７）、６５９−６６５；Ｃｈｅｎ  Ｚ．ら、（１９９７）Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９９（３）、４０２−４０９）。ヘベインレクチンファミリーのタンパク質は、ポテトのレクチンおよびヘビ毒のディスインテグリン（血小板凝集インヒビター）と相同性をおよび／または有することが示された（Ｋｉｅｌｉｓｑｅｗｓｋｉ、Ｍ／Ｌ／ら、（１９９４）Ｐｌａｎｔ  Ｊ．５（６）、８４９−８６１）。
【０００５】
このＩｇＥ結合ドメインは、主に、ヘベイン画分において存在するが、エピトープはまた、プロヘベインについて特異的なドメインにおいて存在することが示されている（Ｃｈｅｎ  Ｚ．ら、（１９９７）、Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９９（３）、４０２−４０９）。プロヘベインのこの主なＩｇＥ結合エピトープは、Ｎ末端の４３アミノ酸フラグメントであると考えられている（Ａｌｅｎｉｕｓ  Ｈ．ら、（１９９６）、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５６（４）１６１８−１６２５）。
【０００６】
アレルギーは、肥満細胞によるヒスタミンおよび他の炎症性メディエーターの放出によって現れる。肥満細胞は、肥満細胞表面上のレセプターに結合したＩｇＥ抗体が抗原によって架橋されるときに、作用するように誘発される。回避（しばしば問題である）および薬物（例えば、抗ヒスタミン剤、鬱血除去剤およびステロイド）での処置（症状を改変するのみである）以外に、現在医学的に受容されている、アレルギーに対する処置は、免疫療法のみである。
【０００７】
免疫療法は、アレルゲン抽出物を反復注射して、そのアレルゲンに対して患者を脱感作することを包含する。不幸なことに、伝統的な免疫療法は、時間がかかり、通常、数年の処置を包含し、そしてしばしば、そのアレルゲンに対してその患者を脱感作するという目標を達成しない。
【０００８】
患者のアレルゲン特異的ＩｇＥ抗体を消耗させる、アレルゲン非特異的な抗ＩｇＥ抗体を用いた初期の試行が以前に有望であることが示されている（Ｂｏｕｌｅｔら、１９９７、１５５；１８３５−１８４０；Ｆａｈｙら、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｒｉｔ．Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ．１９９７；１５５：１８２８−１８３４；Ｄｅｍｏｌｙ  Ｐ．およびＢｏｕｓｑｕｅｔ  Ｊ．Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｊ  Ｒｅｓｐ．Ｃｒｉｔ．  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ．１９９７；１５５：１８２５−１８２７）。他方、免疫原性ペプチド（代表的には、Ｔ細胞エピトープ）を利用した試行は失望させる結果であった（Ｎｏｒｍａｎら、Ｊ．Ａｌｌｅｒ．Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９７；９９：Ｓ１２７）。プラスミドＤＮＡの注射を利用する、別の形態のアレルゲン特異的な免疫療法（Ｒａｚら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、１９９４；９１：９５１９−９５２３；Ｈｚ．ら、Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９６；８：１４０５−１４１１）は、証明されないままである。
【０００９】
アレルギー、特に伝統的な免疫療法が、患者に対する危険性に起因するか、または効力の欠如に起因して、うまくいかないことが示されているアレルギーについて、安全かつ有効な治療についての必要性が存在したままである。また、例えば、もっとも問題のあるアレルゲンがマスクされている食品、材料または物質を作製することによる、治療に対する代替物についての必要性も存在する。
【００１０】
従って、本発明の課題は、その関連するエピトープをマスクする化合物を生成することによって、アレルゲンのアレルゲン性を減少し、従ってそれらアレルゲンに対してＩｇＥが結合することを妨害し、それによって、アレルギー性応答を軽減する方法を提供することである。
【００１１】
（発明の要旨）
表面に接触した際にアレルギー症状を誘導する、アレルゲン上のＩｇＥ結合エピトープ（例えば、とりわけ、ラテックスゴムアレルゲンおよびネコアレルゲンに関連するエピトープ）は、本明細書中で「マスキング試薬」といわれるブロック化リガンドとの相互作用を通してカバーされ得る。これらのエピトープに結合する分子は、以下に記載されるように同定され、そして合成され得る。次いで、これらの分子は、患者のＩｇＥがアレルゲン性のエピトープへ接近するのを妨げることによって、表面タンパク質のアレルゲン性の潜在能力を中和するために処方される。
【００１２】
１つの実施形態においては、この分子は、アレルギー反応を誘発するエピトープに選択的に結合する抗体フラグメントである。標準的な技術を使用して、関連する表面アレルゲンに対してアレルギーのある患者の末梢血単球から単離されたｍＲＮＡから、コンビナトリアルＩｇＥライブラリーを作製し得る。このライブラリーは、関連する抗原を用いてパニングすることによりスクリーニングされ得る。その関連する抗原に対して特異的な組換えＦａｂフラグメントを産生するポジティブクローンが同定され、そしてこのＦａｂフラグメントをコードするｃＤＮＡが単離される。このｃＤＮＡは、組換えタンパク質の発現のための形質転換された細菌、酵母または昆虫細胞もしくは他の高度な産出系からの、組換えタンパク質の大規模な調製のための標準的な方法に従って、大量の組換えＦａｂフラグメントの合成を行うために使用され得る。この組換えＦａｂタンパク質は、単離され、そして関連する表面抗原のＩｇＥ結合エピトープをブロックするための薬剤として、直接使用され得る。
【００１３】
アレルギー応答を誘発するエピトープと選択的に結合する、天然に存在するヒトまたは動物のいずれかの抗体、あるいはそのフラグメントもまた、使用され得る。あるいは、アレルゲン反応性ＩｇＥを産生する患者の末梢性血液の単球に由来するハイブリドーマが、産生され得る。所望される場合、標準的な方法が、タンパク分解を介してまたはクローニングおよび組換え発現を介して、これらの天然に存在するモノクローナル抗体からＦａｂフラグメントを調製するために使用され得る。同様に、これらのＦａｂは、ブロッキング剤として直接使用され得る。
【００１４】
別の実施形態では、上記のように単離されたｃＤＮＡが配列決定され、そして抗原結合超可変領域に関連する２０〜３０アミノ酸に対応するタンパク質配列が決定される。この配列に対応するペプチドは、標準的な技術に従って化学的に合成されるか、または組換えタンパク質の大規模な調製のための標準的な方法を通して合成される。このペプチドは、関連する表面抗原のＩｇＥ結合エピトープをブロックするために直接使用される。
【００１５】
好ましい実施形態では、特異的エピトープへの患者ＩｇＥの結合をブロックする、天然産物の化学的ライブラリー由来の化学的化合物またはコンビナトリアル合成化学的ライブラリー由来の化学的化合物が、同定または合成される。これを達成するために、上記のように同定されたＦａｂフラグメントまたはモノクローナル抗体が、その関連するアレルゲン上の各々のエピトープに対する個々のＩｇＥの結合をブロックする化学的化合物についてのスクリーニングにおいて、使用される。このアッセイにおいて、分画されていないＩｇＥではなく、モノクローナル抗体または組換えモノクローナルのＦａｂの使用が、個々のエピトープに対するＩｇＥの結合をブロックする化合物の同定を可能にする。これらの抗体または抗体のフラグメントは、関連する抗原と結合しそしてそのモノクローナル抗体または組換えＦａｂフラグメントの結合をブロックする化合物について、コンビナトリアル合成化学的ライブラリーまたは天然産物化学的ライブラリーをスクリーニングするためのアッセイにおいて使用される。次いで、これらの化合物は、関連する表面抗原上のＩｇＥ結合エピトープをブロックするための薬剤として直接使用される。
【００１６】
すべての場合において、ブロッキング剤として使用される分子が、それ自身、アレルギー応答を引き起こさないことを決定することが重要である。これは、標準技術（すなわち、皮膚試験など）を使用して達成され得る。
【００１７】
マスキング化合物は、物質に直接適用され得るか、または製造時または後に、物質と混合され得る。物質は、代表的に、エピトープに対するマスキング化合物の結合のための条件を最適化するキャリアにおいて適用される。例えば、抗体利用の場合において、抗体または抗体フラグメントが、生理学的ｐＨの緩衝液または粉末中に懸濁され、次いでこのマスキング化合物と結合するために十分な時間、基材に適用される。これらの物質は、組成物（例えば、ラテックス処方物）、または動物（例えば、イヌまたはネコ）であり得る。ラテックス手袋の場合、この物質は、好ましくは、容易に手袋中に分散される粉末またはコーティングにおいて、またはその手袋の中に挿入する前に手の表面全体にわたって、適用される。用いられる物質は、よいにおいを添加するため、または適用または除去を容易にするための他の物質とともに組み合わされ得る。ネコ、イヌなどの場合、ふけを減少させるエンハンサーまたは毛の光沢または臭いをよりよくさせるための添加剤が添加され得る。この化合物はまた、アレルゲンを引きつける可能性のある表面（例えば、動物またはそれらの毛およびふけが落ちているであろう、壁、床、掛け布、カーペットおよび家具）に置かれ得る。これらは、エーロゾルスプレイ、回転塗布器（ロールオン（ｒｏｌｌ−ｏｎ））、または他の一般的な利用可能な手段を用いて適用され得る。
【００１８】
（発明の詳細な説明）
（定義）
以下の定義は、本明細書中で使用される。
【００１９】
抗原は、抗体の産生（体液性応答）またはＴ細胞からの抗原特異的反応（細胞応答）を誘発する分子である。
【００２０】
アレルゲンは、抗体の他のアイソタイプに加えてＩｇＥ産生を誘導する抗原のサブセットである。
【００２１】
アレルギー反応は、主に、皮膚系（じんま疹（ｕｔｉｃａｒｉａ）、血管性浮腫（ａｎｇｉｏｄｅｍａ）、そう痒症）、呼吸系（喘鳴、咳嗽、喉頭浮腫、鼻漏、流涙／痒い目）、胃腸系（嘔吐、腹痛、下痢）および心血管系（全身性反応が生じる場合）を１つ以上含む臨床的症状を伴う、ＩｇＥが媒介する反応である。
【００２２】
エピトープは、約６のアミノ酸と１５のアミノ酸との間のアミノ酸モチーフから構成される結合部位であり、これは、免疫グロブリンにより結合され得るか、または主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）と共に抗原提示細胞により提示された場合にＴ細胞レセプターにより認識され得る。線状エピトープは、そのアミノ酸が単純な線状配列で認識されるエピトープである。コンフォメーション（ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎａｌ）エピトープは、そのアミノ酸が特定の三次元構造で認識されるエピトープである。
【００２３】
アレルギー反応の減少は、一般的に、呼吸性、胃腸、皮膚、目、耳および粘膜表面に関連し得る、アレルゲンへの曝露と関連する症状を処置した後の、臨床的症状の減少により特徴づけられる。
【００２４】
アレルギー応答を惹起する多くのアレルゲンが、公知であり、このアレルギー応答は、重篤度が、穏やかに刺激するものから生命を脅かすものまでの範囲にわたり得る。これらのアレルゲンの多くは、本明細書中に記載される技術を使用して、中和され得る。例としては、ラテックスゴムタンパク質、動物の毛および／またはふけ、特に、飼育用ペット（例えば、トリ、イヌ、およびネコ）、ならびに家畜類（例えば、ウマ）が挙げられる。他の例としては、昆虫アレルゲン（特に、ノミ、マダニ、ダニ、アリ、ハチおよびゴキブリ由来のタンパク質）が挙げられる。他の例示的なアレルゲンとしては、カビ、塵埃、および花粉が挙げられる。
【００２５】
（Ｉ．マスキング試薬）
好ましい試薬は、組換え抗体フラグメント、抗体の超可変領域由来の合成ペプチド、およびエピトープに結合する抗体を模倣し、これによってＩｇＥの結合をブロックする合成分子である。全ての場合において、これらの試薬が、それ自体でアレルギー応答を引き起こさず、そしてＩｇＥ抗体に結合もせず、肥満細胞上のＦｃεレセプターを架橋（これは、肥満細胞の脱顆粒を引き起こす）もしないことが、重要である。
【００２６】
（組換えＩｇＥ Ｆａｂフラグメント）
標準的な技術を利用して、コンビナトリアルＩｇＥライブラリーを、関連する表面アレルゲンに対してアレルギー性の患者から生成し得る（Ｓｔｅｉｎｂｅｒｇｅｒ，Ｓ．ら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１、１０９６７〜１０９８２（１９９６））。このライブラリーは、Ｓｔｅｉｎｂｅｒｇｅｒらに記載されるように、関連するアレルゲンでパニングすること（ｐａｎｎｉｎｇ）により、スクリーニングされ得る。関連する抗原に特異的な組換えＦａｂフラグメントを産生する陽性クローンは、これによって同定され、そしてこのＦａｂフラグメントをコードするｃＤＮＡが、単離され得る。このｃＤＮＡは、組換えタンパク質の大規模調製のための標準的な方法に従う、大量の組換えＦａｂフラグメントの合成を行うために、使用される。この組換えＦａｂタンパク質は、単離され、そして関連する表面アレルゲンのＩｇＥ結合エピトープをブロックするための薬剤として、直接利用される。
【００２７】
（Ａ．ライブラリーの調製およびスクリーニング）
ＩｇＥ結合部位をブロックする化合物を得るための、以下の２つの主要な方法が存在する：コンビナトリアルライブラリーおよびコンビナトリアル化学。
【００２８】
（コンビナトリアルファージディスプレイライブラリーの適用による、ＩｇＥ結合部位と相互作用する化合物の同定）
Ｓｔｅｉｎｂｅｒｇｅｒら（Ｓｔｅｉｎｂｅｒｇｅｒ，Ｐ．、Ｋｒａｆｔ  Ｄ．およびＶａｌｅｎｔａ  Ｒ．（１９９６）「Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｃｏｍｂｉｎａｔｏｒｉａｌ  ＩｇＥ  Ｌｉｂｒａｒｙ  ｆｒｏｍ  ａｎ  ａｌｌｅｒｇｉｃ  Ｐａｔｉｅｎｔ：Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ＩｇＥ  Ｆａｂｓ  ｗｉｔｈ  ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｍａｊｏｒ  Ｔｉｍｏｔｈｙ  Ｇｒａｓｓ  ｐｏｌｌｅｎ  ａｎｔｉｇｅｎ」Ｐｈｌ  ５頁  Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１、１０９６７〜１０９７２）は、コンビナトリアルＩｇＥファージディスプレイライブラリーを、草アレルギー患者の末梢血単球から単離したｍＲＮＡから調製した。アレルゲン特異的なＩｇＥを、９６ウェルのマイクロタイタープレートの壁に固定化したアレルゲンに対して、その表面上にＩｇＥ  Ｆａｂを発現する糸状ファージをパニングすることによって、選択した。次いで、ｃＤＮＡを、アレルゲン結合ファージから単離し、そして大量のモノクローナル組換えアレルゲン特異的ＩｇＥ  Ｆａｂの産生のために、Ｅ．ｃｏｌｉに形質転換した。この技術は、線状エピトープおよびコンホメーションエピトープの両方に対して、効果的である。
【００２９】
ライブラリースクリーニングが患者の血清に存在するアレルゲン特異的ＩｇＥの完全な目録をもたらしたか否かを決定するために、免疫競合アッセイが、実施され得る。プールされた組換えＦａｂは、固定化されたアレルゲンとともにプレインキュベートされる。結合していないＦａｂを除去するために洗浄した後、次いで、この固定化されたアレルゲンは、患者の血清とともにインキュベートされる。結合していない血清タンパク質を除去するために洗浄した後、ＩｇＥ  Ｆｃドメインに特異的な、レポーター結合二次抗体とのインキュベーションが、実施される。結合したレポーターの検出は、血清ＩｇＥが組換えＦａｂによってアレルゲンに結合するのを妨げられた程度の定量を可能にする。競合していない血清ＩｇＥ結合のレベルは、Ｆａｂとともにプレインキュベートされていないかまたは無関係（ｎｏｎｓｅｎｓｅ）Ｆａｂとともにインキュベートされたアレルゲンを使用して、決定される。
【００３０】
（Ｂ．マスキング化合物の生成）
（抗体または抗体フラグメント）
関連する抗原に特異的な組換えＦａｂフラグメントを生成するｃＤＮＡクローンが、組換え発現系からの組換えタンパク質の大規模調製のための標準的な方法に従って、大量の組換えＦａｂフラグメントの合成を行うために使用される。組換えＦａｂタンパク質は、単離され、そして関連する表面抗原のＩｇＥ結合エピトープをブロックするための薬剤として直接的に利用される。
【００３１】
原核生物宿主または真核生物宿主（細菌、酵母、およびバキュロウイルス−昆虫細胞系を含む）における発現は、代表的に、大量（ｍｇ）のタンパク質マスキング化合物を生成するために使用される。細菌における生成のための方法の例としては、Ｓｐｏｒｅｎｏら、Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ６（３）、２５５〜２６４（１９９４）、およびＰａｃｋｅｒら、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  （ＮＹ）  １１（１１）、１２７１〜１２７７（１９９３）（Ｅ．ｃｏｌｉにおける「ミニ抗体（ｍｉｎｉ−ａｎｔｉｂｏｄｙ）」の発現）が挙げられ、そして哺乳動物細胞における生成のための方法の例としては、Ｗｅｒｎｅｒら、Ｊ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２２（１〜２）、５１〜６８（１９９２）が挙げられる。
【００３２】
トランスジェニック植物またはトランスジェニック動物をまた使用して、組換えタンパク質マスキング化合物を作製し得る。
【００３３】
植物および動物の操作する方法は、１０年の間に周知となってきた。例えば、植物に関して、Ｄａｙ（１９９６）Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｆｏｏｄ  Ｓｃｉ．＆  Ｎｕｔ．３６（Ｓ），５４９−５６７を参照のこと。また、ＦｕｃｈｓおよびＡｓｔｗｏｏｄ（１９９６）Ｆｏｏｄ  Ｔｅｃｈ．８３−８８を参照のこと。組換え動物を作製する方法もまた、十分に確立されている。例えば、Ｃｏｌｍａｎ「Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｍｉｌｋ  ｏｆ  ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ  ｌｉｖｅｓｔｏｃｋ」（１９９８）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｓｙｍｐ．６３，１４１−１４７；ＥｓｐａｎｉｏｎおよびＮｉｅｍａｎｎ，（１９９６）ＤＴＷ  Ｄｔｘｃｈ  Ｔｉｅｒａｒｚｔｌ  Ｗｏｃｈｅｎｓｃｈｒ  １０３（８−９），３２０−３２８；およびＣｏｌｍａｎ，Ａｍ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｎｕｔｒ．６３（４），６３９Ｓ−６４５５Ｓを参照のこと。これらの全ては、試薬の供給源として、役立ち得る。
【００３４】
（超可変ペプチド配列）
関連抗原に結合するＦａｂフラグメントをコードするｃＤＮＡは、上記のように単離される。これらのｃＤＮＡは、配列決定され得、そしてこの抗原結合超可変領域に対応するタンパク質配列を決定し得る。この配列に対応するペプチド「抗体模倣物」は、標準的な技術に従い化学的に合成される。このペプチドを直接使用して、関連表面アレルゲンのＩｇＥ結合エピトープをブロックし得る。一般的に、このペプチドは、１０アミノ酸と１５アミノ酸との間の長さであるが、３０アミノ酸程度の長さでもあり得る。あるいは、このペプチドは、インビトロで変異誘発に供されて、結合親和性および／または安定性を増大する代替物を同定し得る。
【００３５】
（合成化学分子）
いくつかの場合、ＩｇＥ結合エピトープをマスキングすることによってアレルゲンへのＩｇＥの結合をブロックするために、非ペプチド化合物を利用することが好適であり得る。関連アレルゲンに結合するＦａｂフラグメントコードｃＤＮＡを単離し、これらのｃＤＮＡによりコードされるＦａｂタンパク質を上記のように調製する。次いで、これらのタンパク質は、アッセイにおいて用いられ、関連抗原に結合して、かつ組換えＦａｂフラグメントの結合をブロックする化合物についてコンビナトリアルケミカルライブラリーをスクリーニングし得る。これらの化合物を、関連する表面抗原上のＩｇＥ−結合エピトープをブロックする薬剤として直接用いる。
【００３６】
抗原を、マイクロタイタープレートのウェルへの接着を通じて、または固相樹脂への共有結合を通じて固定する。マイクロタイタープレートの各ウェル（または抗原結合樹脂の個々のアリコート）を、化学化合物とともにインキュベートする。試験されるそれぞれの物質は、コンビナトリアル化学合成プロトコールの産物であるか、または天然に存在する化合物のライブラリーもしくは化学合成された化合物のライブラリーに由来する。未結合の化学化合物は、マイクロタイターウェルまたは樹脂アリコートを適切な緩衝液中でリンスすることによって除去される。引き続き、抗原特異的Ｆａｂフラグメント（上記にように誘導した）の１つを含む溶液を、各ウェルに添加するか、または各樹脂アリコートと混合する。未結合のＦａｂフラグメントを除去するための緩衝液中での洗浄の後、検出試薬（例えば、フルオレセインまたは西洋ワサビペルオキシダーゼ）に結合した、ヒトＩｇＥフラグメントに対する二次抗体を添加する。あるいは、標準的な分子生物学的技術を使用し、Ｆａｂフラグメント自体にグリーン蛍光タンパク質のような検出可能シグナル物体を結合させる。この場合、二次抗体インキュベーション工程は必要ない。二次抗体結合を、検出シグナルを測定することにより定量する。アレルゲン上でのＩｇＥ結合エピトープに結合し、そしてこれをブロックするこれらの化合物は、Ｆａｂフラグメントの結合を阻害し、それ故、同様に、検出可能な二次抗体の結合を阻害する。従って、目的の化合物は、検出シグナルを減少させる化合物として同定される。いずれのブロッキング化合物も、ＩｇＥ  Ｆａｂフラグメントへの結合によってではなく、アレルゲン上のエピトープへの結合によって、そのブロッキング効果を獲得していること実証することは非常に重要である。ＩｇＥ  Ｆａｂドメインに結合する化合物は、アレルゲンへの患者のＩｇＥ結合をブロックすることが予期され得るが、それはまた、それらの患者のＩｇＥ分子を架橋し、これにより、マスト細胞脱顆粒反応を誘導する。これは、ブロッキング化合物の適用が妨害されることを意味する。従って、このアッセイを通じて同定されたあらゆる化合物は、Ｆａｂフラグメントに結合する能力についてアッセイされる。Ｆａｂフラグメントは、固相樹脂への共有結合を通じて固定される。Ｆａｂ樹脂は、目的の化合物とインキュベートされ、その後、適切な緩衝液中での洗浄により、未結合の化合物が除去される。次いで、このＦａｂ樹脂を、関連するアレルゲンの放射標識したバージョンとともにインキュベートし、そして未結合のアレルゲンを緩衝液中での洗浄により除去する。抗原放射標識は、［３５Ｓ］−メチオニンを用いた細菌の生合成標識化（アレルゲンが組換え手段により産生される場合）により、または［１２５Ｉ］を用いたネイティブアレルゲンの酵素触媒化放射ヨウ素標識により達成される。Ｆａｂ−樹脂へのアレルゲン結合は、シンチレーション計測により定量される。目的の化合物がＦａｂフラグメントに結合する場合、それは、放射標識したアレルゲンの結合を妨害する。従って、Ｆａｂ樹脂への放射標識アレルゲンの結合を低下させるいずれの化合物もＦａｂフラグメントと直接相互作用するはずである。この特性を明示��る化合物は、廃棄される。この方法は、化合物の固定のために、そして固定された化合物へのＦａｂフラグメントの結合についての試験に、等しく十分に適用され得る。アレルゲンへのＦａｂ結合をブロックするが、Ｆａｂフラグメントへの直接結合しないこれらの化合物のみを、臨床的に可能性のある有用な物質としてさらに追究する。
【００３７】
有用な試薬の同定はまた、「インビトロ遺伝学」またはコンビナトリアル化学と呼ばれるものにおいて、無作為な分子の複合混合物から選択される分子を用いることにより、達成され得る（Ｓｚｏｓｔａｋ、ＴＩＢＳ  １９：８９，１９９２）。このアプローチにおいて、無作為の規定された配列の大きいプールを合成し、次いで、本明細書において記載される技術のようなスクリーニング技術を用いて、選択および富化プロセスに供する。
【００３８】
上記に概説されるこのスクリーニング技術により同定される化学薬剤は、標準的な合成化学を用いて調製され得る。
【００３９】
ブロッキング剤（すなわち、エピトープに結合し、そしてＩｇＥが相互作用することを防ぐ化合物）に関して本明細書に記載されるが、ある場合には、アレルゲンに結合するのではなく、アレルゲンを改変するブロッキング剤を用いることによりＩｇＥ結合を妨げることが可能である。例えば、ラテックスの場合、ラテックス生成のプロセスの間、ラテックスミルクに、タンパク質改変変性試薬を添加することも可能である。これらの試薬が、ラテックス自体の物理的特性を有意に変更することなく１つ以上のエピトープを排除するような方式でこのタンパク質を変更する場合、それらは、有効なブロッキング剤として働き得る。ジスルフィド結合の再形成を妨げるために、ジスルフィド結合および／またはアルキレートシステインを減少させる化学物質は、例えば、エピトープを乱すことが予期され得る（特にこれらのエピトープがコンフォメーションエピトープである場合）。同様に、アミノ基と相互作用する試薬（すなわち、ｎ−ヒドロキシスクシンイミド）またはカルボキシル基と相互作用する試薬（すなわち、ダンシルクロライド）は、これらの試薬により改変されるこれらの基が、エピトープに重度に寄与する場合、ＩｇＥ結合に影響し得る。
【００４０】
（ＩＩ．物質の処理）
マスキング化合物は、アレルギー性応答を誘発する物質を被覆に適用されるか、またはアレルギー性応答を誘発する物質と混合される。マスキング化合物は、意図される物質に適用され、その化合物が、患者のアレルゲン反応を、ＩｇＥ結合媒介性反応の、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも９０％、そして最も好ましくは少なくとも９８％減少するのに十分に結合をブロックすることを保証するように、処理されそしてアッセイされる。実際の量は、各アレルゲンおよび試薬について、ＩｇＥ結合についての標準的アッセイ（例えば、ＥＬＩＳＡアッセイおよび好塩基球アッセイ）を用いて最適化される。
【００４１】
コーティング（被覆）は、吸収、吸着、または共有結合または疎水結合の形成を介する結合により得る。タンパク質を化学的に結合させるための方法は、周知であり、そしてＳｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯのような商業的供給業者から入手可能である。このマスキング化合物は、代表的に、適切な溶媒（例えば、タンパク質についてはリン酸緩衝化生理食塩水、または水溶液中に溶解しない化学化合物については有機溶媒）中で適用される。
【００４２】
ラテックスに対して、ブロッキング化合物が、完成した表面に適用され得るか、または製造のいくつかの段階の間に、ラテックスミルクに混合され得る。動物に対して、ブロッキング剤が、エアロゾルスプレー、ロールオン（ｒｏｌｌｏｎ）、もしくは他の一般的に利用可能な手段を使用して適用され得るか、または動物に処理され得るいくつかの種類のシャンプーまたはリンスに添加され得る。さらに、このブロッキング化合物は、表面に吸着されたアレルゲンがアレルギー反応を誘発することを防ぐために、ペットまたはその毛皮と接触する表面（例えば、壁、床、織物、敷物材料または家具）に適用され得る。従って、ペットアレルギー症状は、そのペットを処理しなくとも、少なくとも部分的に処置され得る。さらに、このブロッキング化合物を、それを内部表面に適用され得るように処方することは、昆虫アレルギー、特にゴキブリ、ノミ、および粉塵ダニまたはカビおよび／または花粉に対するアレルギーを処置する際に特に有益である。カーペット、家具、暖房ダクトなどに堆積したアレルゲンのアレルゲン性を中和するのを補助するために、全ての利用可能な表面をエアロゾルでスプレーし得るか、または家の中の空気を処理されたフィルターに通し得る。このマスキング試薬はまた、昆虫制御手段（例えば、殺虫剤または成長阻害剤）と組み合わせて処方され得、次いで、表面にわたってスプレーされる。さらに別の実施形態において、このマスキング試薬は、例えばピーナッツタンパク質のようなアレルゲンをブロックするように、閉じられた場所（例えば、飛行機）のフィルターに適用される。
【００４３】
動物への塗布についての実施形態において、キャリアは、動物（特にネコ）に対して毒性でないことが重要である。なぜなら、動物は、自らをグルーミング（毛繕い）し、そしてそれによって塗布されたコーティングを摂取するからである。代表的なキャリアとしては、界面活性剤、接着剤、油、芳香剤（ｓｃｅｎｔ）、色素および他の材料（エアロゾルにおいて塗布される場合、プロペラントを含む）が挙げられ得る。手袋、避妊用デバイス、絨毯などに関連する実施形態において、このコーティングは、この物質と接触した場合に個体に対して毒性でなく、かつ刺激がないことが重要である。
【００４４】
マスキング化合物で処理した後の免疫学的変化を評価するためのアッセイは、当業者に公知である。従来のアッセイとしては、ＲＡＳＴ（ＳａｍｐｓｏｎおよびＡｌｂｅｒｇｏ、１９８４）、ＥＬＩＳＡ（Ｂｕｒｋｓら、１９８６）、イムノブロッティング（Ｂｕｒｋｓら、１９８８）、およびインビボ皮膚試験（ＳａｍｐｓｏｎおよびＡｌｂｅｒｇｏ、１９８４）が挙げられる。客観的な臨床的症状は、処理した物質が投与される前および後にモニタリングされて、この臨床的症状における任意の変化を決定し得る。