【手続補正書】
【提出日】平成16年7月1日(2004.7.1)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
エリスロポエチン、エリスロポエチンの１つ又はそれ以上の突然変異蛋白質、及びエリスロポエチンの１つ又はそれ以上の誘導体より成る群から選択されるエリスロポエチン様分子を含む組成物であって、エリスロポエチン様分子当たりのＮ結合型グリカン上のルイスＸ構造の平均数が少なくとも約２．２であることを特徴とする前記組成物。
【請求項２】
エリスロポエチン様分子当たりのＮ結合型グリカン上のルイスＸ構造の平均数が少なくとも約２．６であることを特徴とする請求項１記載の組成物。
【請求項３】
エリスロポエチン様分子当たりのＮ結合型グリカン上のルイスＸ構造の平均数が少なくとも約２．７であることを特徴とする請求項１記載の組成物。
【請求項４】
エリスロポエチン様分子当たりのＮ結合型グリカン上のルイスＸ構造の平均数が少なくとも約３．６であることを特徴とする請求項１記載の組成物。
【請求項５】
エリスロポエチン様分子当たりのＮ結合型グリカン上のルイスＸ構造の平均数が少なくとも約４．１であることを特徴とする請求項１記載の組成物。
【請求項６】
エリスロポエチン様分子当たりのＮ結合型グリカン上のルイスＸ構造の平均数が少なくとも約５．７であることを特徴とする請求項１記載の組成物。
【請求項７】
前記エリスロポエチン様分子上のＮ−結合型グリカンが主として２アンテナ型構造である請求項１〜６のいずれか１つの請求項記載の組成物。
【請求項８】
エリスロポエチン、エリスロポエチンの１つ又はそれ以上の突然変異蛋白質、及びエリスロポエチンの１つ又はそれ以上の誘導体より成る群から選択されるエリスロポエチン様分子を含む医薬製剤であって、エリスロポエチン様分子当たりのＮ結合型グリカン上のルイスＸ構造の平均数が少なくとも約２．２であることを特徴とするエリスロポエチン様分子の前記医薬製剤。
【請求項９】
エリスロポエチン、エリスロポエチンの１つ又はそれ以上の突然変異蛋白質、及びエリスロポエチンの１つ又はそれ以上の誘導体より成る群から選択されるエリスロポエチン様分子の組成物であって、エリスロポエチン様分子当たりのＮ結合型グリカン上のルイスＸ構造の平均数が少なくとも約２．２であることを特徴とする医薬として使用するためのエリスロポエチン様分子の前記組成物。
【請求項１０】
エリスロポエチン、エリスロポエチンの１つ又はそれ以上の突然変異蛋白質、及びエリスロポエチンの１つ又はそれ以上の誘導体より成る群から選択されるエリスロポエチン様分子の使用方法であって、エリスロポエチン様分子当たりのＮ結合型グリカン上のルイスＸ構造の平均数が少なくとも約２．２でことを特徴とする、虚血、再潅流障害、低酸素が誘発する障害、炎症性疾患、神経変性疾患、及び中枢性又は末梢性の神経系への急性の損傷より成る群から選択された障害の治療のために薬物を調製するための前記使用方法。
【請求項１１】
エリスロポエチン様分子当たりのＮ結合型グリカン上のルイスＸ構造の平均数が少なくとも約２．６であることを特徴とする請求項８記載の医薬製剤、又は請求項９記載の組成物、又は請求項１０記載の使用方法。
【請求項１２】
エリスロポエチン様分子当たりのＮ結合型グリカン上のルイスＸ構造の平均数が少なくとも約２．７であることを特徴とする請求項８記載の医薬製剤、又は請求項９記載の組成物、又は請求項１０記載の使用方法。
【請求項１３】
エリスロポエチン様分子当たりのＮ結合型グリカン上のルイスＸ構造の平均数が少なくとも約３．６であることを特徴とする請求項８記載の医薬製剤、又は請求項９記載の組成物、又は請求項１０記載の使用方法。
【請求項１４】
エリスロポエチン様分子当たりのＮ結合型グリカン上のルイスＸ構造の平均数が少なくとも約４．１であることを特徴とする請求項８記載の医薬製剤、又は請求項９記載の組成物、又は請求項１０記載の使用方法。
【請求項１５】
エリスロポエチン様分子当たりのＮ結合型グリカン上のルイスＸ構造の平均数が少なくとも約５．７であることを特徴とする請求項８記載の医薬製剤、又は請求項９記載の組成物、又は請求項１０記載の使用方法。
【請求項１６】
ルイスＸ構造を含むＮ−結合型グリカンを少なくとも一つ有するエリスロポエチン若しくはその突然変異蛋白質または誘導体を発現して精製するための方法であって、
ａ）アデノウイルス由来のＥ１Ａをコードする核酸を発現する哺乳類細胞において、前記エリスロポエチン若しくはその突然変異蛋白質又は誘導体をコードする核酸を発現させる工程と；
ｂ）その発現したエリスロポエチン若しくその突然変異蛋白質又は誘導体を、ルイスＸ構造を含むＮ−結合型グリカンと結合するレクチン又はモノクローナル抗体と結合させる工程を含む、その発現したエリスロポエチン若しくはその突然変異蛋白質又は誘導体を精製する工程、とを含んでなる前記方法。
【請求項１７】
前記発現したエリスロポエチン若しくはその突然変異蛋白質又は誘導体をＡＡＬレクチンへ結合させる工程を含む請求項１６記載の方法。
【請求項１８】
精製の間に前記エリスロポエチン若しくはその突然変異蛋白質又は誘導体がルイスＸ含量を基にして分画される、請求項１６又は請求項１７記載の方法。
【請求項１９】
前記哺乳類細胞が、応用微生物学・研究センターにある欧州動物細胞培養コレクションにＮｏ．９６０２２９４０として寄託されている細胞から得られる請求項１６から請求項１８のいずれか１つの請求項記載の方法。
【請求項２０】
ルイスＸ構造を含むＮ−結合型グリカンを少なくとも一つ有するエリスロポエチン若しくはその突然変異蛋白質又は誘導体を精製するための方法であって、エリスロポエチン若しくはその突然変異蛋白質又は誘導体を、ルイスＸ構造を含むＮ−結合型グリカンに結合するレクチン又はモノクローナル抗体に結合させる工程、とを含んでなる前記方法。
【請求項２１】
前記エリスロポエチン若しくはその突然変異蛋白質又は誘導体をＡＡＬレクチンへ結合させる工程を含む、請求項２０記載の方法。
【請求項２２】
（シアリル）ルイスＸ構造及び／又はＬａｃｄｉＮＡｃ構造を含むＮ−結合型グリカンを有する蛋白質性分子が濃縮された画分を生成する方法であって、
ａ）アデノウイルス由来のＥ１Ａをコードする核酸を発現する細胞において前記蛋白質性分子を組換えにより発現する工程と；
ｂ）そのように産生された蛋白質性分子を分画し、それによってＮ−結合型グリカンの（シアリル）ルイスＸ構造及び／又はＬａｃｄｉＮＡｃ構造の蛋白質性分子あたりの含量がより高い蛋白質性分子の画分を得る工程、とを含んでなる前記方法。
【請求項２３】
前記蛋白質性分子が、エリスロポエチン、トランスフェリン、グリコデリンＡ（ＰＰ１４）のようなグリコデリン、神経成長因子（ＮＧＦ）、脳由来の神経栄養因子、ニュートロフィン−３、−４／５、及び−６、毛様体神経栄養因子、白血病阻害因子、カルディオトロフィン−１、オンコスタチン−Ｍ、インターロイキン、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ、ＩＧＦ−１及び−２、ＴＧＦ−β、グリア由来の神経栄養因子、ニューロツリン、パーセフィン、ミオスタチン、線維芽細胞増殖因子−１、−２及び−５、アンフィレグリン、アセチルコリン受容体誘導活性、ネトリン−１及び−２、ニューレグリン−２及び−３、プレイオトロフィン、ミッドカイン、幹細胞因子（ＳＣＦ）、アグリン、ＣＳＦ−１、ＰＤＧＦ、サポシンＣ、可溶性補体受容体−１、アルファ−１酸性糖蛋白質、急性期蛋白質、Ｅ−セレクチンリガンド−１、ＬＡＭ−１、癌胎児性抗原様ＣＤ６６抗原、末梢リンパ節アドレシン、ＣＤ７５、ＣＤ７６、ＣＤ４５ＲＯ、ＣＤ２１、Ｐ−セレクチン糖蛋白質リガンド−１、ＧｌｙＣＡＭ−１、ムチン型糖蛋白質、ＣＤ３４、ポドカリキシン、α１−アンチキモトリプシン、α１−プロテアーゼ阻害剤、α−アミラーゼ、唾液プロリンリッチ糖蛋白質、ＳＥＲＰ−１、インターフェロン−β、β−トレース蛋白質、プロテインＣ、ウロキナーゼ、住血吸虫の糖蛋白質、グリコデリンＡ、組織因子経路阻害剤、α−フェトプロテイン、例えば、卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、黄体ホルモン（ＬＨ）、ヒト絨毛性ゴナドトロピン（ｈＣＧ）のような性腺刺激ホルモンのようなヒトの妊娠性蛋白質、又は前記グリコシル化構造を受け入れることが可能であるこれらのいかなるものの断片又は変異体の群から選択される、請求項２２記載の方法。
【請求項２４】
前記蛋白質性分子がエリスロポエチン又はエリスロポエチン様分子である請求項２３記載の方法。
【請求項２５】
前記画分が、前記グリカン構造を用いるアフィニティー精製工程を含む方法によって濃縮される請求項２２〜２４のいずれか１つの請求項記載の方法。
【請求項２６】
前記精製工程が、（シアリル）ルイスＸ構造及び／又はＬａｃｄｉＮＡｃ構造を含む前記Ｎ−結合型グリカンに結合するレクチン又はモノクローナル抗体への前記分子の結合を用いる、請求項２５記載の方法。
【請求項２７】
前記精製工程が、（シアリル）ルイスＸ構造及び／又はＬａｃｄｉＮＡｃ構造を含む前記Ｎ−結合型グリカンのＡＡＬレクチンへの結合を用いる請求項２６記載の方法。
【請求項２８】
前記哺乳類細胞が、応用微生物学・研究センターにある欧州動物細胞培養コレクションにＮｏ．９６０２２９４０として寄託されている細胞から得られる請求項２２から請求項２７のいずれか１つの請求項記載の方法。
【請求項２９】
所定の翻訳後修飾を含む蛋白質性分子を産生することが可能な哺乳類細胞を選択する方法であって、
ａ）マーカー又は前記マーカーの組み合わせが前記蛋白質性分子上に存在すべき前記所定の翻訳後修飾を示すものであって、前記哺乳類細胞中又は該細胞表面における組織特異的マーカー又は組織特異的マーカーの組み合わせの有無を解析する工程と；
ｂ）前記組織特異的マーカーの有無に基づいて前記哺乳類細胞を選択する工程、とを含んでなる前記方法。
【請求項３０】
前記所定の翻訳後修飾がグリコシル化を含む請求項２９記載の方法。
【請求項３１】
前記グリコシル化が、ルイスＸ、シアリルルイスＸ、ＧａｌＮＡｃ構造、ＧｌｃＮＡｃ構造、ＬａｃｄｉＮＡｃ構造、Ｎ−アセチル−グルコサミンに結合したα１，３−結合型フコース、末端Ｎ−アセチル−グルコサミン、末端ガラクトース、二分Ｎ−アセチル−グルコサミン、硫酸基及びシアル酸より成る群から選択される少なくとも１つの修飾を含む請求項３０記載の方法。
【請求項３２】
前記グリコシル化が、ルイスＸ構造及び／又はシアリルルイスＸ構造を含む請求項３１記載の方法。
【請求項３３】
異質な細胞集団から哺乳類細胞を得る方法であって、前記哺乳類細胞はルイスＸ構造及び／又はシアリルルイスＸ構造を含む蛋白質性分子を産生することが可能であり、
ａ）前記異質性細胞集団における前記細胞によって産生される蛋白質上のルイスＸ構造及び／又はシアリルルイスＸ構造に基づいて細胞を分類する工程と；
ｂ）前記ルイスＸ構造及び／又はシアリルルイスＸ構造を含む蛋白質を産生することが可能である細胞を選択する工程、とを含んでなる前記方法。
【請求項３４】
前記哺乳類細胞が神経系由来である請求項２９〜３３のいずれか１つの請求項記載の方法。
【請求項３５】
前記哺乳類細胞がヒトの細胞である請求項２９〜３４のいずれか１つの請求項記載の方法。
【請求項３６】
前記哺乳類細胞が発現可能な形態で核酸を有するような方法で、前記哺乳類細胞にヒトのアデノウイルスのＥ１領域又はその一部をコードする核酸を提供する、請求項２９〜３５のいずれか１つの請求項記載の方法。
【請求項３７】
哺乳類細胞において所定の翻訳後修飾を含む蛋白質性分子を産生させる方法であって、請求項２９〜３６のいずれか１つの請求項に記載の方法によって前記哺乳類細胞を同定する及び／又は選択する及び／又は獲得する工程と、前記哺乳類細胞において前記蛋白質性分子を発現させる工程、とを含んでなる前記方法。
【請求項３８】
前記哺乳類細胞が、応用微生物学・研究センターにある欧州動物細胞培養コレクションにＮｏ．９６０２２９４０として寄託されている細胞である請求項３７記載の方法。
【請求項３９】
哺乳類細胞の培養物から前記蛋白質性分子を精製する付加的工程を含んでなる請求項３８記載の方法。
【請求項４０】
前記精製が前記所定の翻訳後修飾を用いる工程を含む請求項３９記載の方法。
【請求項４１】
前記精製が、前記所定の翻訳後修飾に存在するエピトープに特異的な抗体を用いる工程を含む請求項４０記載の方法。
【請求項４２】
前記精製がレクチン結合工程を含む請求項４１記載の方法。
【請求項４３】
前記蛋白質性分子がエリスロポエチンである請求項４０〜４２のいずれか１つの請求項記載の方法。