【手続補正書】
【提出日】平成15年4月23日(2003.4.23)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）水性反応混合物中の脂肪族または芳香族シアノカルボン酸エステルを、Ａｃｉｄｏｖｏｒａｘ  ｆａｃｉｌｉｓ  ７２Ｗ由来の化学選択的なニトリラーゼ活性により特徴づけられる酵素触媒と接触させ、
（ｂ）（ａ）で生成する脂肪族または芳香族ジカルボン酸モノエステルを単離する
ことを含んでなる、脂肪族または芳香族シアノカルボン酸エステルからの脂肪族または芳香族ジカルボン酸モノエステル製造方法。
【請求項２】
（ａ）水性反応混合物中で、式
Ｒ3Ｏ2Ｃ(ＣＲ1Ｒ2)nＣＨ2ＣＮ
（式中、ｎは０〜１６であり、各(ＣＲ1Ｒ2)単位のＲ1およびＲ2は各々水素、ヒドロキシル、アルコキシル、アリールオキシル、未置換のもしくは置換されたアルキル、未置換のもしくは置換されたアルケニル、未置換のもしくは置換されたアルキリデン、未置換のおよび置換されたアルキルアリール、未置換のもしくは置換されたアリール、アルコキシカルボキシル、またはアリールオキシカルボキシルよりなる群から選択され、Ｒ3は未置換のもしくは置換されたアルキル、アルキルアリール、およびアリールよりなる群から選択される）
を有する脂肪族シアノカルボン酸エステルを、化学選択的なニトリラーゼ活性により特徴づけられ且つ、
Ａｃｉｄｏｖｏｒａｘ  ｆａｃｉｌｉｓ  ７２Ｗ（ＡＴＣＣ  ５５７４６）、
Ａｃｉｄｏｖｏｒａｘ  ｆａｃｉｌｉｓ  ７２−ＰＦ−１５（ＡＴＣＣ  ５５７４７）、
Ａｃｉｄｏｖｏｒａｘ  ｆａｃｉｌｉｓ  ７２−ＰＦ−１７（ＡＴＣＣ  ５５７４５）、
Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ  ＳＳ１００１（ＡＴＣＣ  ＰＴＡ−１１７７）、および
Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ  ＳＷ９１（ＡＴＣＣ  ＰＴＡ−１１７
５）
よりなる群から選択される酵素触媒と接触させ、
（ｂ）（ａ）で生成する脂肪族ジカルボン酸モノエステルを単離する
ことを含んでなる、対応する脂肪族シアノカルボン酸エステルから脂肪族ジカルボン酸モノエステルを製造するための化学選択的方法。
【請求項３】
（ａ）水性反応混合物中で、式
【化２】
2004518408.tif 000001
（式中、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7およびＲ8は各々水素、ヒドロキシル、アルコキシル、アリールオキシル、未置換のもしくは置換されたアルキル、未置換のもしくは置換されたアルケニルと、未置換のもしくは置換されたアルキルアリール、未置換のもしくは置換されたアリール、アルコキシカルボキシル、およびアリールオキシカルボキシルよりなる群から選択され、Ｒ9は未置換のもしくは置換されたアルキル、アルキルアリール、およびアリールよりなる群から選択される）
を有する芳香族シアノカルボン酸エステルを、化学選択的なニトリラーゼ活性により特徴づけられ且つ、
Ａｃｉｄｏｖｏｒａｘ  ｆａｃｉｌｉｓ  ７２Ｗ（ＡＴＣＣ  ５５７４６）、
Ａｃｉｄｏｖｏｒａｘ  ｆａｃｉｌｉｓ  ７２−ＰＦ−１５（ＡＴＣＣ  ５５７４７）、
Ａｃｉｄｏｖｏｒａｘ  ｆａｃｉｌｉｓ  ７２−ＰＦ−１７（ＡＴＣＣ  ５５７４５）、
Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ  ＳＳ１００１（ＡＴＣＣ  ＰＴＡ−１１７７）および、
Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ  ＳＷ９１（ＡＴＣＣ  ＰＴＡ−１１７
５）
よりなる群から選択される酵素触媒と接触させ、
（ｂ）（ａ）で生成する芳香族ジカルボン酸モノエステルを単離する
ことを含んでなる、対応する芳香族シアノカルボン酸エステルから芳香族ジカルボン酸モノエステルを製造するための化学選択的方法。
【請求項４】
（ａ）１）位置選択的および化学選択的なニトリラーゼ活性および２）非位置選択的なニトリルヒドラターゼ活性およびアミダーゼ活性により特徴づけられるＡｃｉｄｏｖｏｒａｘ  ｆａｃｉｌｉｓ  ７２Ｗ（ＡＴＣＣ  ５５７４６）細胞全体の懸濁液を、約３５℃〜７０℃の温度に１０〜１２０分間加熱し、それによって非位置選択的なニトリルヒドラターゼ活性およびアミダーゼ活性を破壊し且つ位置選択的なニトリラーゼ活性を保存し、
（ｂ）場合により、微生物細胞全体の触媒を可溶性支持体または不溶性支持体の上または中に固定化し、
（ｃ）水性反応混合物中で脂肪族または芳香族シアノカルボン酸エステルを微生物細胞全体の触媒と接触させ、
（ｄ）（ｃ）で生成する脂肪族または芳香族ジカルボン酸モノエステルを単離する
ことを含んでなる、脂肪族または芳香族シアノカルボン酸エステルから脂肪族または芳香族ジカルボン酸モノエステルを製造するための位置選択的および化学選択的方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００７０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００７０】
2004518408.tif 000002
なお、本発明の主たる特徴及び態様を示せば以下のとおりである。
１．  （ａ）水性反応混合物中の脂肪族または芳香族シアノカルボン酸エステルを、Ａｃｉｄｏｖｏｒａｘ  ｆａｃｉｌｉｓ  ７２Ｗ由来の化学選択的なニトリラーゼ活性により特徴づけられる酵素触媒と接触させ、
（ｂ）（ａ）で生成する脂肪族または芳香族ジカルボン酸モノエステルを単離する
ことを含んでなる、脂肪族または芳香族シアノカルボン酸エステルからの脂肪族または芳香族ジカルボン酸モノエステル製造方法。
２．  脂肪族シアノカルボン酸エステルが、式
Ｒ3Ｏ2Ｃ(ＣＲ1Ｒ2)nＣＨ2ＣＮ
（式中、ｎは０〜１６であり、各(ＣＲ1Ｒ2)単位のＲ1およびＲ2は各々水素、ヒドロキシル、アルコキシル、アリールオキシル、未置換のもしくは置換されたアルキル、未置換のもしくは置換されたアルケニル、未置換のもしくは置換されたアルキリデン、未置換のもしくは置換されたアルキルアリール、未置換のもしくは置換されたアリール、アルコキシカルボキシル、およびアリールオキシカルボキシルよりなる群から選択され、Ｒ3は未置換のもしくは置換されたアルキル、アルキルアリール、およびアリールよりなる群から選択される）
を有する上記１に記載の方法。
３．  芳香族シアノカルボン酸エステルが、式
【化７】
2004518408.tif 000003
（式中、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7およびＲ8は各々水素、ヒドロキシル、アルコキシル、アリールオキシル、未置換のもしくは置換されたアルキル、未置換のもしくは置換されたアルケニル、未置換のもしくは置換されたアルキルアリール、未置換のもしくは置換されたアリール、アルコキシカルボキシル、およびアリールオキシカルボキシルよりなる群から選択され、Ｒ9は未置換のもしくは置換されたアルキル、アルキルアリール、およびアリールよりなる群から選択される）
を有する上記１に記載の方法。
４．  酵素触媒が、微生物細胞全体、浸透化処理した微生物細胞、微生物細胞抽出物の１もしくはそれ以上の成分、部分精製酵素（単数もしくは複数）または精製酵素（単数もしくは複数）の形態である上記１に記載の方法。
５．  酵素触媒が、Ａｃｉｄｏｖｏｒａｘ  ｆａｃｉｌｉｓ  ７２−ＰＦ−１５（ＡＴＣＣ  ５５７４７）、Ａｃｉｄｏｖｏｒａｘ  ｆａｃｉｌｉｓ  ７２−ＰＦ−１７（ＡＴＣＣ  ５５７４５）、Ａｃｉｄｏｖｏｒａｘ  ｆａｃｉｌｉｓ  ７２Ｗ（ＡＴＣＣ  ５５７４６）、およびＡｃｉｄｏｖｏｒａｘ  ｆａｃｉｌｉｓ  ７２Ｗニトリラーゼ活性を発現するように形質転換した微生物細胞全体よりなる群から選択される微生物細胞全体の形態である上記４に記載の方法。
６．  Ａｃｉｄｏｖｏｒａｘ  ｆａｃｉｌｉｓ  ７２Ｗニトリラーゼ活性を持つ形質転換した微生物細胞が、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ  ＳＳ１００１（ＡＴＣＣ  ＰＴＡ−１１７７）またはＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ  ＳＷ９１（ＡＴＣＣ  ＰＴＡ−１１７５）である上記５に記載の方法。
７．  微生物細胞全体の形態である酵素触媒が、可溶性支持体または不溶性支持体の上または中に固定化されている上記５に記載の方法。
８．  部分精製酵素または精製酵素の形態である酵素触媒が、可溶性支持体または不溶性支持体の上または中に固定化されている上記４に記載の方法。
９．  （ａ）水性反応混合物中で、式
Ｒ3Ｏ2Ｃ(ＣＲ1Ｒ2)nＣＨ2ＣＮ
（式中、ｎは０〜１６であり、各(ＣＲ1Ｒ2)単位のＲ1およびＲ2は各々水素、ヒドロキシル、アルコキシル、アリールオキシル、未置換のもしくは置換されたアルキル、未置換のもしくは置換されたアルケニル、未置換のもしくは置換されたアルキリデン、未置換のおよび置換されたアルキルアリール、未置換のもしくは置換されたアリール、アルコキシカルボキシル、またはアリールオキシカルボキシルよりなる群から選択され、Ｒ3は未置換のもしくは置換されたアルキル、アルキルアリール、およびアリールよりなる群から選択される）
を有する脂肪族シアノカルボン酸エステルを、化学選択的なニトリラーゼ活性により特徴づけられ且つ、
Ａｃｉｄｏｖｏｒａｘ  ｆａｃｉｌｉｓ  ７２Ｗ（ＡＴＣＣ  ５５７４６）、
Ａｃｉｄｏｖｏｒａｘ  ｆａｃｉｌｉｓ  ７２−ＰＦ−１５（ＡＴＣＣ  ５５７４７）、
Ａｃｉｄｏｖｏｒａｘ  ｆａｃｉｌｉｓ  ７２−ＰＦ−１７（ＡＴＣＣ  ５５７４５）、
Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ  ＳＳ１００１（ＡＴＣＣ  ＰＴＡ−１１７７）、および
Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ  ＳＷ９１（ＡＴＣＣ  ＰＴＡ−１１７
５）
よりなる群から選択される酵素触媒と接触させ、
（ｂ）（ａ）で生成する脂肪族ジカルボン酸モノエステルを単離する
ことを含んでなる、対応する脂肪族シアノカルボン酸エステルから脂肪族ジカルボン酸モノエステルを製造するための化学選択的方法。
１０．  （ａ）水性反応混合物中で、式
【化８】
2004518408.tif 000004
（式中、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7およびＲ8は各々水素、ヒドロキシル、アルコキシル、アリールオキシル、未置換のもしくは置換されたアルキル、未置換のもしくは置換されたアルケニルと、未置換のもしくは置換されたアルキルアリール、未置換のもしくは置換されたアリール、アルコキシカルボキシル、およびアリールオキシカルボキシルよりなる群から選択され、Ｒ9は未置換のもしくは置換されたアルキル、アルキルアリール、およびアリールよりなる群から選択される）
を有する芳香族シアノカルボン酸エステルを、化学選択的なニトリラーゼ活性により特徴づけられ且つ、
Ａｃｉｄｏｖｏｒａｘ  ｆａｃｉｌｉｓ  ７２Ｗ（ＡＴＣＣ  ５５７４６）、
Ａｃｉｄｏｖｏｒａｘ  ｆａｃｉｌｉｓ  ７２−ＰＦ−１５（ＡＴＣＣ  ５５７４７）、
Ａｃｉｄｏｖｏｒａｘ  ｆａｃｉｌｉｓ  ７２−ＰＦ−１７（ＡＴＣＣ  ５５７４５）、
Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ  ＳＳ１００１（ＡＴＣＣ  ＰＴＡ−１１７７）および、
Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ  ＳＷ９１（ＡＴＣＣ  ＰＴＡ−１１７
５）
よりなる群から選択される酵素触媒と接触させ、
（ｂ）（ａ）で生成する芳香族ジカルボン酸モノエステルを単離する
ことを含んでなる、対応する芳香族シアノカルボン酸エステルから芳香族ジカルボン酸モノエステルを製造するための化学選択的方法。
１１．  酵素触媒が、微生物細胞全体、浸透化処理した微生物細胞、微生物細胞抽出物の１もしくはそれ以上の成分、部分精製酵素（単数もしくは複数）または精製酵素（単数もしくは複数）の形態である上記９または１０に記載の方法。
１２．  酵素触媒が、可溶性支持体または不溶性支持体の上または中に固定化されている微生物細胞全体の形態である上記１１に記載の方法。
１３．  酵素触媒が、可溶性支持体または不溶性支持体の上または中に固定化されている部分精製酵素（単数もしくは複数）または精製酵素（単数もしくは複数）の形態である上記１１に記載の方法。
１４．  （ａ）１）位置選択的および化学選択的なニトリラーゼ活性および２）非位置選択的なニトリルヒドラターゼ活性およびアミダーゼ活性により特徴づけられるＡｃｉｄｏｖｏｒａｘ  ｆａｃｉｌｉｓ  ７２Ｗ（ＡＴＣＣ  ５５７４６）細胞全体の懸濁液を、約３５℃〜７０℃の温度に１０〜１２０分間加熱し、それによって非位置選択的なニトリルヒドラターゼ活性およびアミダーゼ活性を破壊し且つ位置選択的なニトリラーゼ活性を保存し、
（ｂ）場合により、微生物細胞全体の触媒を可溶性支持体または不溶性支持体の上または中に固定化し、
（ｃ）水性反応混合物中で脂肪族または芳香族シアノカルボン酸エステルを微生物細胞全体の触媒と接触させ、
（ｄ）（ｃ）で生成する脂肪族または芳香族ジカルボン酸モノエステルを単離する
ことを含んでなる、脂肪族または芳香族シアノカルボン酸エステルから脂肪族または芳香族ジカルボン酸モノエステルを製造するための位置選択的および化学選択的方法。
１５．  （ａ）脂肪族シアノカルボン酸エステルが、式
Ｒ3Ｏ2Ｃ(ＣＲ1Ｒ2)nＣＨ2ＣＮ
（式中、ｎは０〜１６であり、各(ＣＲ1Ｒ2)単位のＲ1およびＲ2は各々水素、ヒドロキシル、アルコキシル、アリールオキシル、未置換のもしくは置換されたアルキル、未置換のもしくは置換されたアルケニル、未置換のもしくは置換されたアルキリデン、未置換のおよび置換されたアルキルアリール、未置換のもしくは置換されたアリール、アルコキシカルボキシル、またはアリールオキシカルボキシルよりなる群から選択され、Ｒ3は未置換のもしくは置換されたアルキル、アルキルアリール、およびアリールよりなる群から選択される）
を有し、
（ｂ）対応する脂肪族ジカルボン酸モノエステルを単離する、
脂肪族ジカルボン酸モノエステルを製造するための上記１４に記載の位置選択的および化学選択的方法。
１６．  （ａ）芳香族シアノカルボン酸エステルが、式
【化９】
2004518408.tif 000005
（式中、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7およびＲ8は各々水素、ヒドロキシル、アルコキシル、アリールオキシル、未置換のもしくは置換されたアルキル、未置換のもしくは置換されたアルケニル、未置換のもしくは置換されたアルキルアリール、未置換のもしくは置換されたアリール、アルコキシカルボキシル、およびアリールオキシカルボキシルよりなる群から選択され、Ｒ9は未置換のもしくは置換されたアルキル、アルキルアリール、およびアリールよりなる群から選択される）
を有し、
（ｂ）対応する芳香族ジカルボン酸モノエステルを単離する、
芳香族ジカルボン酸モノエステルを製造するための上記１４に記載の位置選択的および化学選択的方法。
１７．  （ａ）場合により、Ａｃｉｄｏｖｏｒａｘ  ｆａｃｉｌｉｓ  ７２Ｗのニトリラーゼ酵素活性を発現するように形質転換した微生物細胞全体の触媒を可溶性支持体または不溶性支持体の上または中に固定化し、
（ｂ）水性反応混合物中で脂肪族または芳香族シアノカルボン酸エステルを段階（ａ）の微生物細胞全体の触媒とを接触させ、
（ｃ）（ｂ）で生成する脂肪族または芳香族ジカルボン酸モノエステルを単離する
ことを含んでなる、脂肪族または芳香族シアノカルボン酸エステルから脂肪族または芳香族ジカルボン酸モノエステルを製造するための位置選択的および化学選択的方法。
１８．  （ａ）脂肪族シアノカルボン酸エステルが、式
Ｒ3Ｏ2Ｃ(ＣＲ1Ｒ2)nＣＨ2ＣＮ
（式中、ｎは０〜１６であり、各（ＣＲ1Ｒ2）単位のＲ1およびＲ2は各々水素、ヒドロキシル、アルコキシル、アリールオキシル、未置換のもしくは置換されたアルキル、未置換のもしくは置換されたアルケニル、未置換のもしくは置換されたアルキリデン、未置換のおよび置換されたアルキルアリール、未置換のもしくは置換されたアリール、アルコキシカルボキシル、またはアリールオキシカルボキシルよりなる群から選択され、Ｒ3は未置換のもしくは置換されたアルキル、アルキルアリール、およびアリールよりなる群から選択される）
を有し、
（ｂ）対応する脂肪族ジカルボン酸モノエステルを単離する、
対応する脂肪族シアノカルボン酸エステルから脂肪族ジカルボン酸モノエステルを製造するための上記１７に記載の位置選択的および化学選択的方法。
１９．  （ａ）芳香族シアノカルボン酸エステルが、式
【化１０】
2004518408.tif 000006
（式中、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7およびＲ8は各々水素、ヒドロキシル、アルコキシル、アリールオキシル、未置換のもしくは置換されたアルキル、未置換のもしくは置換されたアルケニル、未置換のもしくは置換されたアルキルアリール、未置換のもしくは置換されたアリール、アルコキシカルボキシル、およびアリールオキシカルボキシルよりなる群から選択され、Ｒ9は未置換のもしくは置換されたアルキル、アルキルアリール、およびアリールよりなる群から選択される）
を有し、
（ｂ）対応する芳香族ジカルボン酸モノエステルを単離する、
対応する芳香族シアノカルボン酸エステルから芳香族ジカルボン酸モノエステルを製造するための上記１７に記載の位置選択的および化学選択的方法。
２０．  Ａｃｉｄｏｖｏｒａｘ  ｆａｃｉｌｉｓ  ７２Ｗのニトリラーゼ酵素活性を発現するように形質転換した微生物細胞全体の触媒が、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ  ＳＳ１００１（ＡＴＣＣ  ＰＴＡ−１１７７）およびＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ  ＳＷ９１（ＡＴＣＣ  ＰＴＡ−１１７５）よりなる群から選択される上記１７または１８に記載の方法。