【手続補正書】
【提出日】平成17年1月11日(2005.1.11)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
相互に接触する第１及び第２の固相マトリックスと、
第１のリガンドに対して特異的に結合可能であるが第２のリガンドに対してはそうでない、前記第１の固相マトリックスに固定化された第１の受容体と、及び
前記第２のリガンドに対して特異的に結合可能であるが、前記第１のリガンドに対してはそうでない、前記第２の固相マトリックスに固定化された第２の受容体とからなる、親和性結合組成物。
【請求項２】
第３のリガンドに対して特異的に結合可能であるが、前記第１のリガンド又は前記第２のリガンドに対してはそうでない、第３の固相マトリックスに固定化された第３の受容体をさらに含む、請求項１に記載の親和性結合組成物。
【請求項３】
第４のリガンドに対して特異的に結合可能であるが、前記第１のリガンド、前記第２のリガンド、又は前記第３のリガンドに対してはそうでない、第４の固相マトリックスに固定化された第４の受容体をさらに含む、請求項２に記載の親和性結合組成物。
【請求項４】
第５のリガンドに対して特異的に結合可能であるが、前記第１のリガンド、前記第２のリガンド、前記第３のリガンド、又は前記第４のリガンドに対してはそうでない、第５の固相マトリックスに固定化された第５の受容体をさらに含む、請求項３に記載の親和性結合組成物。
【請求項５】
前記リガンドがタンパク質である、請求項１に記載の親和性結合組成物。
【請求項６】
前記受容体が抗体である、請求項１に記載の親和性結合組成物。
【請求項７】
前記マトリックスが多孔性である、請求項１に記載の親和性結合組成物。
【請求項８】
液体入口及び液体出口を備えるチャンバと、前記チャンバ内の請求項１に記載の親和性結合組成物からなり、前記入口から前記出口に流れる液体が前記親和性結合組成物を通過又は貫通する、親和性カラム。
【請求項９】
液体入口及び液体出口を備えるチャンバと、前記チャンバ内の請求項２に記載の親和性結合組成物からなり、前記入口から前記出口に流れる液体が前記親和性結合組成物を通過又は貫通する、親和性カラム。
【請求項１０】
液体入口及び液体出口を備えるチャンバと、前記チャンバ内の請求項６に記載の親和性結合組成物からなり、前記入口から前記出口に流れる液体が前記親和性結合組成物を通過又は貫通する、親和性カラム。
【請求項１１】
受容体を有する少なくとも１つの固相マトリックスが、異なる受容体を有する少なくとも１つの他の固相マトリックスから選択的に除去可能である、請求項１０に記載の親和性カラム。
【請求項１２】
液体入口及び液体出口を備えるチャンバと、前記チャンバ内の請求項７に記載の親和性結合組成物からなり、前記入口から前記出口に流れる液体が前記親和性結合組成物を通過又は貫通する、親和性カラム。
【請求項１３】
第１の液体入口、第１の液体出口、及び、第１の固相マトリックスに固定化され、第１のリガンドに対して特異的に結合可能であるが第２のリガンドに対してはそうでない第１の受容体を含むチャンバを備えた、第１の親和性カラムと、
第２の液体入口、第２の液体出口、及び、第２の固相マトリックスに固定化され、第２のリガンドに対して特異的に結合可能であるが第１のリガンドに対してはそうでない第２の受容体を含むチャンバを備えた、第２の親和性カラムと、及び
前記第１の液体出口を前記第２の液体入口に接続する導管とからなる、親和性分離装置。
【請求項１４】
受容体を含む液体をリガンドに接触させ、
前記リガンドに結合した前記受容体を、前記受容体を含む液体中の他の成分から分離し、
前記リガンドに結合した前記受容体を溶離して、精製受容体を生成し、及び
前記精製受容体をマトリックスに固定化して受容体マトリックスを形成することからなる、受容体マトリックスの調製方法。
【請求項１５】
前記精製受容体を固定化する前に、さらに、前記溶離に寄与した試薬を中和又は除去し、或いは中和及び除去し、若しくは物理的条件を変更する、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記試薬が脱塩によって除去される、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記リガンドが固定化される、請求項１４に記載の方法。
【請求項１８】
第２の受容体及び第２のリガンドについて前記方法を繰り返し、第２の受容体マトリックスを調製する、請求項１４に記載の方法。
【請求項１９】
前記受容体マトリックスと前記第２の受容体マトリックスを混合する、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
第３の受容体及び第３のリガンドについて前記方法を繰り返し、第３の受容体マトリックスを調製する、請求項１８に記載の方法。
【請求項２１】
前記受容体が抗体であり、前記リガンドがタンパク質である、請求項１４に記載の方法。
【請求項２２】
液体入口、液体出口を備え、固定化されたリガンドを含む第１のカラムと、
液体入口、液体出口を備え、受容体を固定化するためのマトリックスを含む第２のカラムと、及び
前記第１のカラムの出口と前記第２のカラムの入口との間の液体接続とからなる、受容体マトリックスを調製するための装置。
【請求項２３】
液体入口、液体出口を備え、試薬の中和剤又は除去剤或いは受容体−リガンド結合を解離させる条件を含む中間カラムをさらに含み、
前記第１のカラムの液体出口が前記中間カラムの入口に対する液体接続を備え、前記中間カラムの出口が前記第２のカラムの入口に対する液体接続を備える、請求項１８に記載の装置。
【請求項２４】
第１の受容体マトリックスと第２の受容体マトリックスを混合することからなり、
前記第１の受容体が前記第２の受容体とは異なるリガンドと結合する、受容体マトリックスの調製方法。
【請求項２５】
複数の化学的に異なる架橋剤を２つのタンパク質に同時に反応させることからなり、
両方の架橋剤だけで前記２つのタンパク質の間に共有結合を形成可能である、２つのタンパク質の間に共有結合を形成するための方法。
【請求項２６】
前記架橋剤と反応する前に、前記２つのタンパク質は非共有結合によって相互に結合している、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
試料から少なくとも２つの特定の事前定義されたリガンドを除去し、及び
前記試料中に残存するリガンドを分析することからなる、試料からリガンドを分離し、残存するリガンドを分析するための方法。
【請求項２８】
少なくとも３つのリガンドが除去される、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
少なくとも４つのリガンドが除去される、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
前記リガンドがタンパク質である、請求項２７に記載の方法。
【請求項３１】
前記リガンドが特定の事前定義された受容体との結合によって除去され、前記受容体が不溶性形態であるか、又はリガンドとの結合後に不溶化される、請求項２７に記載の方法。
【請求項３２】
前記試料中の全リガンドの少なくとも５０重量％が除去される、請求項２７に記載の方法。
【請求項３３】
前記試料中の全リガンドの少なくとも７５重量％が除去される、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
前記結合したリガンドを前記受容体から除去する、請求項３１に記載の方法。
【請求項３５】
前記受容体を新しい試料に再使用することによって前記処理が繰り返される、請求項３３に記載の方法。
【請求項３６】
同じ受容体で前記処理が２０回繰り返される、請求項３４に記載の方法。
【請求項３７】
同じ受容体で前記処理が５０回繰り返される、請求項３５に記載の方法。
【請求項３８】
同じ受容体で前記処理が２００回繰り返される、請求項３６に記載の方法。
【請求項３９】
前記残存するリガンドが、前記残存するリガンドの分離及び定量によって分析される、請求項２７に記載の方法。
【請求項４０】
少なくとも１つの固定化された受容体が、少なくとも１つの他の固定化された受容体から選択的に除去される、請求項３１に記載の方法。
【請求項４１】
１つの受容体画分を他の受容体画分から選択的に除去可能である、請求項３１に記載の方法。
【請求項４２】
少なくとも２つの受容体画分が少なくとも２つの事前定義された位置に固定化され、
少なくとも１つの受容体が、別の受容体とは異なる事前定義された位置に配置され、及び
前記試料が、両方の事前定義された位置を順次通される、請求項２７に記載の方法。
【請求項４３】
タンパク質含有試料から分離されたタンパク質を含む２次元電気泳動ゲルであって、少なくとも２つの所定のタンパク質が前記ゲル中に実質的に存在せず、前記タンパク質含有試料が前記所定のタンパク質を含み、前記試料中の他のタンパク質が２次元電気泳動ゲル中に存在する、２次元電気泳動ゲル。
【請求項４４】
請求項２７に記載の方法によって生成された、変性リガンド含有試料。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００２】
複合試料からタンパク質を迅速及び特異的に精製する際に注目されるクロマトグラフィ手法は、免疫アフィニティクロマトグラフィである。例えば、Anuradha Subramanian「Methods in Molecular Biology」における章、Affinity Chromatography第１４７巻ｐ．９５以下、Pfeiffer他J.Immunol. Methods９７ｐ．１−９、及びCuatrecasas,J.Boil.、Chem.２４５、ｐ．３０５９以下を参照されたい。この技法は、免疫アフィニティクロマトグラフィカラムによって試料から成分を分離するための、ポリクローナル抗体及びモノクローナル抗体の適用に関して改良されている。Gersten & Marchalonis, J.Immuno. Methods１２７、ｐ．２１５以下、及びSchneider他、J.Biol.Chem.２５７、ｐ．１０７６６以下には、より大きな容量でもって抗原を第１のステップで結合し第２のステップで溶離させるのを容易にする、クロマトグラフィマトリックスへの抗体の部位特異的な固定化に関する大幅な改良が報告されている。