【手続補正書】
【提出日】平成16年4月28日(2004.4.28)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
被験体における悪性症状の存在に関してスクリーニングする方法であって、以下の工程：
ＨＥ４ａ抗原ポリペプチドに特異的な少なくとも１つの抗体と被験体からの生物学的試料とを、該抗体と該抗原決定基との結合を検出するために十分な条件下でかつそのために十分な時間にわたり接触させて、（ｉ）該試料中において可溶性形態で天然に存在し、かつ、（ｉｉ）該少なくとも１つの抗体と反応性がある抗原決定基を有する分子の、該生物学的試料中での存在を確定する工程であって、該ポリペプチドは配列番号１１に示すアミノ酸配列、またはその改変体、誘導体もしくは断片を含む、工程、および
それから悪性症状の存在を検出する工程
を含む方法。
【請求項２】
前記抗体は、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、組み換え抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、および単鎖抗体からなる群より選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記抗体は、アフィニティー精製された抗体を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記抗体の結合の検出は、放射核の検出または蛍光体の検出を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
抗原決定基に対する結合の検出は、アビジン分子とビオチン分子との間の結合事象の検出または、ストレプトアビジン分子とビオチン分子との間の結合事象の検出を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記抗体と抗原決定基の結合の検出は、酵素反応の生成物の分光光度検出を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記少なくとも１つの抗体は検出可能に標識される、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記少なくとも１つの抗体は検出可能に標識されず、抗体と抗原決定基の結合の検出が間接的である、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
被験体における悪性症状の存在に関してスクリーニングする方法であって、以下の工程：
少なくとも１つの抗体と被験体からの生物学的試料を該抗体と該抗原決定基との結合を検出するための条件下でかつそのために十分な時間にわたり接触させて（ｉ）該試料中の可溶性形態で天然に存在する分子、ならびに（ｉｉ）細胞表面分子からなる群から選択される分子の該生物学的試料中での存在を確定する工程であって、該試料は被験体からの細胞を含み、該分子は該少なくとも１つの抗体と反応性がある抗原決定基を有し、該抗体の抗原結合部位は、２Ｈ５、３Ｄ８および４Ｈ４からなる群から選択されるモノクローナル抗体の免疫特異的結合を競合的に抑制する、工程であって、該２Ｈ５、３Ｄ８および４Ｈ４はそれぞれ、配列番号１１に示すアミノ酸配列を含むＨＥ４ａの異なるエピトープに対して特異的に結合する、工程、および
それから悪性症状の存在を検出する工程
を含む、方法。
【請求項１０】
被験体における悪性症状の存在に関してスクリーニングする方法であって、以下の工程：
少なくとも１つの抗体と被験体からの生物学的試料を該抗体と該抗原決定基との結合を検出するための条件下でかつそのために十分な時間にわたり接触させて（ｉ）該試料中の可溶性形態で天然に存在する分子、ならびに（ｉｉ）細胞表面分子からなる群から選択される分子の該生物学的試料中での存在を確定する工程であって、該試料は被験体からの細胞を含み、該分子は該抗体と反応性がある抗原決定基を有し、該抗体の抗原結合部位は、モノクローナル抗体３Ｄ８の免疫特異的結合を競合的に抑制する、工程であって、モノクローナル３Ｄ８は、配列番号１１に示すアミノ酸配列を含むＨＥ４ａポリペプチドに特異的に結合する、工程、および
それから悪性症状の存在を検出する工程
を含む、方法。
【請求項１１】
被験体における悪性症状の存在に関してスクリーニングする方法であって、以下の：
少なくとも１つのＨＥ４ａ抗原ポリペプチドに特異的な抗体と被験体からの生物学的試料を該抗体と該抗原決定基との結合を検出するための条件下でかつそのために十分な時間にわたり接触させて（ｉ）該試料中の可溶性形態で天然に存在する分子、ならびに（ｉｉ）細胞表面分子からなる群から選択される分子の該生物学的試料中での存在を確定する工程であって、該試料は被験体からの細胞を含み、該分子は該抗体と反応性がある抗原決定基を有し、ここで、該少なくとも１つの抗原は、ＨＥ４ａ抗原に免疫特異的に結合する、工程であって、該ポリペプチドは、配列番号１１に示すアミノ酸配列、またはその改変体、誘導体もしくは断片を含む、工程、ならびに
それから悪性症状の存在を検出する工程
を含む、方法。
【請求項１２】
前記ＨＥ４ａ抗原は、３Ｄ８、２Ｈ５および４Ｈ４からなる群から選択されるモノクローナル抗体とも免疫特異的に反応性があり、該２Ｈ５、３Ｄ８および４Ｈ４はそれぞれ、配列番号１１に示すアミノ酸配列を含むＨＥ４ａの異なるエピトープに対して特異的に結合する、請求項３０に記載の方法。
【請求項１３】
被験体における悪性症状の存在に関してスクリーニングする方法であって、以下の：
少なくとも１つのＨＥ４ａ抗原ポリペプチドに特異的な少なくとも１つの抗体と被験体からの生物学的試料を該抗体と該抗原決定基との結合を検出するための条件下でかつそのために十分な時間にわたり接触させて（ｉ）該試料中の可溶性形態で天然に存在する分子、ならびに（ｉｉ）細胞表面分子からなる群から選択される分子の該生物学的試料中での存在を確定する、接触させる工程であって、該試料は被験体からの細胞を含み、該分子は該少なくとも１つの抗体と反応性がある抗原決定基を有し、その抗原結合部位は、２Ｈ５、および４Ｈ４からなる群から選択されるモノクローナル抗体の免疫特異的結合を競合的に抑制し、ここで、該少なくとも１つの抗原は、ＨＥ４ａ抗原に免疫特異的に結合する、工程であって、該ポリペプチドは配列番号１１に示すアミノ酸配列、またはその改変体、誘導体もしくは断片を含む、工程、ならびに
それから悪性症状の存在を検出する工程
を含む、方法。
【請求項１４】
前記ＨＥ４抗原はモノクローナル抗体３Ｄ８と免疫特異的に反応性がある、請求項３０に記載の方法。
【請求項１５】
被験体における悪性症状の存在に関してスクリーニングする方法であって、以下の：
少なくとも１つの固定された第一の抗体をＨＥ４ａ抗原ポリペプチドと特異的に結合させて、免疫複合体を形成するための条件下でかつそのために十分な時間にわたり、該ＨＥ４ａ抗原ポリペプチドに特異的な該少なくとも１つの固定された第一抗体と被験体からの生物学的試料とを接触させて、該試料中の可溶性形態で天然に存在する分子の該生物学的試料中での存在を確定する工程であって、該少なくとも１つの第一の抗体の抗原結合部位がモノクローナル抗体３Ｄ８の免疫特異的結合を競合的に抑制する、工程であって、該ポリペプチドは配列番号１１に示すアミノ酸配列、またはその改変体、誘導体もしくは断片を含む、工程、
該少なくとも１つの固定された第一の抗体と特異的に結合しない試料の構成成分を除去する工程、および
該少なくとも１つの第二の抗体と該ＨＥ４ａ抗原ポリペプチドとの特異的結合を検出するための条件下でかつそのために十分な時間にわたり、該免疫複合体をＨＥ４ａ抗原ポリペプチド少なくとも１つの第二の抗体と接触させる工程であって、該少なくとも１つの第二の抗体の抗原結合部位が該少なくとも１つの固定された第１の抗体の抗原結合部位の免疫特異的結合を競合的に抑制しない、工程、および、悪性症状の存在を検出する工程
を含む、方法。
【請求項１６】
被験体における悪性症状の存在に関してスクリーニングする方法であって、以下の：
少なくとも１つの固定された第一の抗体をＨＥ４ａ抗原ポリペプチドと特異的に結合させて、それにより免疫複合体を形成するための条件下でかつそのために十分な時間にわたり、ＨＥ４ａ抗原ポリペプチドに特異的な少なくとも１つの固定された第一の抗体と被験体からの生物学的試料を接触させて、該試料中の可溶性形態で天然に存在する分子の該生物学的試料中での存在を確定する工程であって、該少なくとも１つの第一の抗体の抗原結合部位がモノクローナル抗体３Ｄ８の免疫特異的結合を競合的に抑制する、工程であって、該ポリペプチドは配列番号１１に示すアミノ酸配列、またはその改変体、誘導体もしくは断片を含む、工程、
前記少なくとも１つの固定された第一の抗体と特異的に結合しない試料の構成成分を除去する工程；ならびに
該少なくとも１つの第二の抗体と該ＨＥ４ａ抗原ポリペプチドの特異的結合を検出するための条件下でかつそのために十分な時間にわたり、該免疫複合体をＨＥ４ａ抗原ポリペプチドに少なくとも１つの第二の抗体と接触させる工程であって、該少なくとも１つの第二の抗体の抗原結合部位がモノクローナル抗体２Ｈ５の免疫特異的結合を競合的に抑制しない、工程であって、３Ｄ８と２Ｈ５とは各々、該ＨＥ４ａポリペプチドの異なるエピトープに特異的に結合する、工程、および、
それから悪性症状の存在を検出する工程
を含む、方法。
【請求項１７】
被験体における悪性症状の存在に関してスクリーニングする方法であって、以下の：
少なくとも１つの固定された第一の抗体をメソテリン関連抗原ポリペプチドと特異的に結合させることにより免疫複合体を形成するための条件下でかつそのために十分な時間にわたり、ＨＥ４ａ抗原ポリペプチドに特異的な少なくとも１つの固定された第一の抗体と被験体からの生物学的試料を接触させて、該試料中の可溶性形態で天然に存在する分子の該生物学的試料中での存在を確定する工程であって、該少なくとも１つの第一の抗体の抗原結合部位がモノクローナル抗体３Ｄ８の免疫特異的結合を競合的に抑制する、工程であって、該ポリペプチドは配列番号１１に示すアミノ酸配列、またはその改変体、誘導体もしくは断片を含む、工程、
該少なくとも１つの固定された第一の抗体と特異的に結合しない試料の構成成分を除去する工程；ならびに
該少なくとも１つの第二の抗体と該ＨＥ４ａ抗原ポリペプチドの特異的結合を検出するための条件下でかつそのために十分な時間にわたり、該免疫複合体をＨＥ４ａ抗原ポリペプチドに特異的な少なくとも１つの第二の抗体と接触させる工程であって、該少なくとも１つの第二の抗体の抗原結合部位はモノクローナル抗体４Ｈ４の免疫特異的結合を競合的に抑制しない、工程であって、３Ｄ８と４Ｈ４とは各々、該ＨＥ４ａポリペプチドの異なるエピトープに特異的に結合する、工程、および
それから悪性症状の存在を検出する工程
を含む、方法。
【請求項１８】
中皮種関連抗原、癌胎児性抗原、ＣＡ１２５、シアリルＴＮ、扁平上皮細胞癌抗原、組織ポリペプチド抗原および胎盤アルカリ性ホスファターゼからなる群から選択される悪性症状の少なくとも１つの可溶性マーカーの前記試料中の存在を確定する工程をさらに含む、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
被験体における悪性症状の存在に関してスクリーニングする方法であって、以下の：
抗体と抗原決定基との結合を検出するための条件下でかつそのために十分な時間にわたり、（ｉ）悪性症状を有する疑いのある一次被験体からの一次生物学的試料、ならびに（ｉｉ）悪性症状を有さないことが周知である第二の被験体からの第二の生物学的試料の各々を、ＨＥ４ａ抗原ポリペプチドに特異的な少なくとも１つの抗体と接触させて、（ｉ）該試料中の可溶性形態で天然に存在する分子、および（ｉｉ）細胞表面分子からなる群から選択される分子の該第一および第二の生物学的試料の各々における存在を確定する工程であって、該第一および第二の生物学的試料は各々、該第一および第二の被験体からの細胞をそれぞれ含み、該分子は、該少なくとも１つの抗体と反応性がある抗原決定基を有する、工程であって、該ポリペプチドは配列番号１１に示すアミノ酸配列、またはその改変体、誘導体もしくは断片を含む、工程、
第一の生物学的試料中の該抗体と該抗原決定基の検出可能な結合を、第二の生物学的試料中の該抗体と該抗原決定基の検出可能な結合のレベルと比較する工程、および
それから悪性症状の存在を検出する工程
を含む、方法。
【請求項２０】
被験体における悪性症状の存在に関してスクリーニングする方法であって、以下の工程：
ＨＥ４ａ抗原ポリペプチドと免疫特異的に結合する抗体の存在を被験体からの生物学的試料中で検出する工程であって、該ＨＥ４ａ抗原ポリペプチドは、配列番号５、配列番号７、および配列番号１１またはそれらの改変体、誘導体もしくは断片からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む、方法。
【請求項２１】
請求項１、９、１１，１３、１５〜１７および１９〜２０のいずれか１項に記載の方法であって、前記ＨＥ４ａ抗原ポリペプチドの改変体がスプライス改変体である、方法。
【請求項２２】
ＨＥ４ａ抗原ポリペプチドと特異的に結合するモノクローナル免疫グロブリン可変部を含むＨＥ４ａ抗原ポリペプチドに特異的な抗体であって、
該ＨＥ４ａ抗原ポリペプチドは、配列番号１１に示されるアミノ酸配列を有するポリペプチドを含み、該ＨＥ４ａ抗原ポリペプチドはグリコシル化されている、抗体。
【請求項２３】
融合タンパク質である、請求項２２に記載の抗体。
【請求項２４】
単鎖抗体である、請求項２２に記載の抗体。
【請求項２５】
（ｉ）配列番号１１に記述されるＨＥ４ａ抗原ポリペプチド配列と特異的に結合するが、配列番号９に記述されるポリペプチド配列とは特異的に結合しない抗体、（ｉｉ）配列番号９に記述されるポリペプチド配列と特異的に結合し、そして配列番号１１に記述されるＨＥ４ａポリペプチド配列と特異的に結合する抗体からなる群から選択される、請求項２２に記載の抗体。
【請求項２６】
モノクローナル抗体２Ｈ５、３Ｄ８および４Ｈ４からなる群から選択され、ここで該２Ｈ５、３Ｄ８および４Ｈ４はそれぞれ、配列番号１１に示すアミノ酸配列を含むＨＥ４ａの異なるエピトープに対して特異的に結合する、請求項２２に記載の抗体。
【請求項２７】
被験体における悪性症状の存在に関してスクリーニングする方法であって、以下の：
被験体からの生物学的試料を検出可能に標識されたＨＥ４ａポリペプチドと、該試料中の可溶性形態である天然の抗体の該ＨＥ４ａポリペプチドとの結合を検出するための条件下でかつそのために十分な時間にわたり接触させる工程であって、該ポリペプチドが配列番号５に記述されるアミノ酸配列、配列番号７に記述されるアミノ酸配列、配列番号１１に記述されるアミノ酸配列および配列番号１３に記述されるアミノ酸からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、またはその改変体、誘導体もしくは断片を含む、工程、、および
悪性症状の存在を検出する工程
を含む方法。
【請求項２８】
前記試料は、血液、血清、漿液、血漿、リンパ、尿、脳脊髄液、唾液、粘膜分泌物、膣分泌物、腹水、胸水、囲心腔液、腹膜液、腹腔液、培地、ならし培地および灌注液からなる群から選択される、請求項１、９、１１，１３、１５〜１７、１９〜２０、および２７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２９】
前記悪性症状は、腺癌、中皮腫、卵巣癌、膵臓癌および非小細胞肺癌からなる群から選択される、請求項１、９、１１，１３、１５〜１７、１９〜２０、および２７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３０】
ＨＥ４ａ抗原ポリペプチドおよび少なくとも１つの融合ドメインを含む融合タンパク質をコードする核酸分子であって、該ＨＥ４ａポリペプチドが配列番号１１に記述されるアミノ酸配列を含み、該ＨＥ４ａポリペプチドはグリコシル化されている単離された核酸分子であって、該単離された核酸分子は、配列番号９に示すヌクレオチド配列からなる核酸分子ではない、核酸分子。
【請求項３１】
融合ドメインに融合されるＨＥ４ａポリペプチド配列を含む、融合タンパク質であって該ＨＥ４ａポリペプチド配列は、配列番号１１に示すアミノ酸配列、またはその改変体、誘導体もしくは断片であり、かつ、該ＨＥ４ａはグリコシル化されている、融合タンパク質。
【請求項３２】
前記融合ドメインは免疫グロブリンあるいはその改変体または断片である、請求項３１に記載の融合タンパク質。
【請求項３３】
前記ＨＥ４ａポリペプチドに融合されるポリペプチド配列はプロテアーゼにより切断可能である、請求項３１に記載の融合タンパク質。
【請求項３４】
前記ポリペプチド配列はリガンドに対する親和性を有する親和性タグポリペプチドである、請求項３１に記載の融合タンパク質。
【請求項３５】
請求項３０に記載の核酸に作動可能に連結される少なくとも１つのプロモーターを含む、組換え発現構築物。
【請求項３６】
前記プロモーターは調節されるプロモーターである、請求項３５に記載の発現構築物。
【請求項３７】
前記ＨＥ４ａポリペプチドは第二の核酸配列のポリペプチド産物との融合タンパク質として発現される、請求項３５に記載の発現構築物。
【請求項３８】
前記第二の核酸配列のポリペプチド産物は免疫グロブリン定常部である、請求項３７に記載の発現構築物。
【請求項３９】
組換えウイルス発現構築物である、請求項３５に記載の組換え発現構築物。
【請求項４０】
請求項３５〜３９のいずれか一項に記載の組換え発現構築物を含む、宿主細胞。
【請求項４１】
原核生物細胞または真核生物細胞である、請求項４０に記載の宿主細胞。
【請求項４２】
組換えＨＥ４ａポリペプチドを産生する方法であって、以下の：
請求項３０に記載の核酸配列に作動可能に連結される少なくとも１つのプロモーターを含む組換え発現構築物を含む宿主細胞を培養する工程
を含む方法。
【請求項４３】
前記プロモーターは調節されるプロモーターである、請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】
組換えＨＥ４ａポリペプチドを産生する方法であって、
請求項３９に記載の組換えウイルス発現構築物に感染された宿主細胞を培養する工程を含む、方法。
【請求項４５】
悪性症状を処置するための医薬の製造のためのＨＥ４ａ抗原ポリペプチドに対して特異的な抗体の使用であって、該抗体は、配列番号１１に示すアミノ酸配列を有するＨＥ４ａ抗原ポリペプチドに特異的に結合するモノクローナルイムノグロブリン可変領域を含む、使用。
【請求項４６】
配列番号１１に示すアミノ酸配列、またはその断片を含むＨＥ４ａを含む組成物の、悪性症状を処置するための医薬の製造のための、使用。
【請求項４７】
前記組成物は、配列番号１１に示すアミノ酸配列またはその断片を有するＨＥ４ａポリペプチドに特異的に結合し得る抗体の製造を誘導する、請求項４６に記載の使用。
【請求項４８】
前記組成物は、配列番号１１に示すアミノ酸配列またはその断片を有するＨＥ４ａポリペプチドに特異的に認識し得る抗体の製造を誘導する、請求項４６に記載の使用。
【請求項４９】
前記悪性症状は、腺癌、中皮腫、卵巣癌、膵臓癌および非小細胞肺癌からなる群から選択される、請求項４５または４６に記載の使用。