(57)【要約】  本発明は、糞便中の剥離がん細胞の検査等の生物学的試料を用いた検査において、容易かつ安全に試料の処理を行うことの可能な生物学的試料Ｅと懸濁溶媒Ｓとの混合用容器及び生物学的試料Ｅと懸濁溶媒Ｓとの混合方法であって、生物学的試料を収容可能な第一の容器１と、生物学的試料中の核酸を安定化させる懸濁溶媒Ｓを収容した第二の容器２と、第一の容器１と第二の容器２との相互に内部を密閉された状態での螺合又は嵌合を可能にする接合手段と、第一の容器１と第二の容器２とが螺合又は嵌合した状態において第二の容器２における密閉部２ｂによる懸濁溶媒Ｓの密閉を解除させる密閉解除手段とを有する。密閉解除手段によって生物学的試料Ｅと懸濁溶媒Ｓとが密閉状態の容器内で混合が可能となり、常温で安全に核酸を高収率で回収することができる。
2008152980.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくとも一端に形成された開口部と、生物学的試料を収容可能な試料収容部とを有する第一の容器と、
一端に形成された開口部と、試薬を収容した試薬収容部と、該試薬収容部に収容されている前記試薬を密閉した密閉部とを有する第二の容器と、
前記第一の容器と前記第二の容器の夫々における開口部近傍に備えられていて、該第一の容器と第二の容器との相互に内部を密閉された状態での螺合又は嵌合を可能にする接合手段と、
前記第一の容器と前記第二の容器とが螺合又は嵌合した状態において該第二の容器における前記密閉部による前記試薬の密閉を解除させる密閉解除手段と、
を有することを特徴とする生物学的試料と試薬との混合用容器。
【請求項２】
前記密閉部が、前記第二の容器の開口部を封止する膜であり、
前記密閉解除手段が、前記膜を穿孔可能な突起であることを特徴とする請求項１に記載の生物学的試料と試薬との混合用容器。
【請求項３】
前記密閉部が、前記試薬全体を覆う膜であり、
前記密閉解除手段が、前記膜を穿孔可能な突起であることを特徴とする請求項１に記載の生物学的試料と試薬との混合用容器。
【請求項４】
前記密閉部が、前記第二の容器の開口部を封止する栓であり、
前記密閉解除手段が、前記栓の封止を解除可能な突起であることを特徴とする請求項１に記載の生物学的試料と試薬との混合用容器。
【請求項５】
前記密閉部が、前記第二の容器の開口部を封止する弁であり、
前記密閉解除手段が、前記弁の封止を解除可能な突起であることを特徴とする請求項１に記載の生物学的試料と試薬との混合用容器。
【請求項６】
前記接合手段が、前記第一の容器と前記第二の容器に形成されていることを特徴とする請求項１〜５のいずれか一つに記載の生物学的試料と試薬との混合用容器。
【請求項７】
前記接合手段が、内部を密閉された状態で前記第一の容器と前記第二の容器のいずれの開口部とも螺合又は嵌合可能な第一の接合部と、内部を密閉された状態で前記第一の容器と前記第二の容器のいずれの開口部とも螺合又は嵌合可能な第二の接合部とを有する、該第一の容器と第二の容器とは別体のアダプタユニットで構成されていることを特徴とする請求項１〜５のいずれか一つに記載の生物学的試料と試薬との混合用容器。
【請求項８】
前記密閉解除手段が、前記第一の容器に設けられていることを特徴とする請求項１〜５のいずれか一つに記載の生物学的試料と試薬との混合用容器。
【請求項９】
前記密閉解除手段が、前記アダプタユニットに設けられていることを特徴とする請求項７に記載の生物学的試料と試薬との混合用容器。
【請求項１０】
前記第一の容器が、前記接合手段とは反対側の端部に第二の開口部と、前記第二の開口部を密閉可能な蓋とを有することを特徴とする請求項１〜５のいずれか一つに記載の生物学的試料と試薬との混合用容器。
【請求項１１】
前記蓋が試料採取手段を備えていることを特徴とする請求項１０に記載の生物学的試料と試薬との混合用容器。
【請求項１２】
前記試料採取手段が、採取した試料を前記試料収容部に供給可能に構成されていることを特徴とする請求項１１に記載の生物学的試料と試薬との混合用容器。
【請求項１３】
少なくとも一端に形成された開口部と、前記生物学的試料を収容可能な試料収容部と、密閉部を介して試薬を密閉状態で収容した試薬収容部とを有する容器と、
前記容器を密閉可能な蓋と、
を有し、前記容器は、外力を加えることによって前記密閉部による密閉が解除されて前記試薬が前記試料収容部の試料と混合できるように変形可能に構成されていることを特徴とする生物学的試料と試薬との混合用容器。
【請求項１４】
前記容器は、外力を加えることによって側面が変形するように構成されていることを特徴とする請求項１３に記載の生物学的試料と試薬との混合用容器。
【請求項１５】
前記試薬収容部は、側面が蛇腹状に形成され、底面が前記容器の底部をなし、
前記容器は、外力を加えることによって蛇腹が変形するように構成されていることを特徴とする請求項１３に記載の生物学的試料と試薬との混合用容器。
【請求項１６】
少なくとも一端に形成された開口部と、前記生物学的試料を収容可能な試料収容部と、密閉部を介して試薬を密閉状態に収容した試薬収容部とを有する容器と、
前記容器を密閉可能な蓋と、
前記蓋に備えられていて、前記密閉部による前記試薬の密閉を解除させる密閉解除手段と、
を有することを特徴とする生物学的試料と試薬との混合用容器。
【請求項１７】
前記密閉解除手段が、前記密閉部を穿孔可能な突起であることを特徴とする請求項１６に記載の生物学的試料と試薬との混合用容器。
【請求項１８】
前記密閉解除手段が、前記密閉部を押圧可能な突起であることを特徴とする請求項１６に記載の生物学的試料と試薬との混合用容器。
【請求項１９】
前記密閉部が前記試薬全体を覆う膜であることを特徴とする請求項１３〜１７のいずれか一つに記載の生物学的試料と試薬との混合用容器。
【請求項２０】
前記密閉部がアンプルであることを特徴とする請求項１３又は１４に記載の生物学的試料と試薬との混合用容器。
【請求項２１】
前記密閉部が前記試薬収容部の開口部を封止する膜であることを特徴とする請求項１３〜１７のいずれか一つに記載の生物学的試料と試薬との混合用容器。
【請求項２２】
前記密閉部が前記試薬収容部の開口部を封止する栓であることを特徴とする請求項１５又は１６に記載の生物学的試料と試薬との混合用容器。
【請求項２３】
前記試薬収容部は、側面が蛇腹状に形成されていることを特徴とする請求項１６又は１７に記載の生物学的試料と試薬との混合用容器。
【請求項２４】
前記試薬収容部は、側面が蛇腹状に形成され、かつ、
前記密閉解除手段が、前記試薬収容部を押して蛇腹を変形可能な突起であることを特徴とする請求項１６に記載の生物学的試料と試薬との混合用容器。
【請求項２５】
前記密閉部が前記試薬収容部の開口部を封止する弁であることを特徴とする請求項１５、１６、１８、２４のいずれか一つに記載の生物学的試料と試薬との混合用容器。
【請求項２６】
前記蓋が試料採取手段を備えていることを特徴とする請求項１３〜２５のいずれか一つに記載の生物学的試料と試薬との混合用容器。
【請求項２７】
前記試料採取手段が、採取した試料を前記試料収容部に供給可能に構成されていることを特徴とする請求項２６に記載の生物学的試料と試薬との混合用容器。
【請求項２８】
前記試料採取手段が、試料の採取量を一定化にする手段を備えていることを特徴とする請求項２６に記載の生物学的試料と試薬との混合用容器。
【請求項２９】
前記試料採取手段が、前記密閉解除手段を備えていることを特徴とする請求項２６に記載の生物学的試料と試薬との混合用容器。
【請求項３０】
前記試料収容部の容量と前記試薬の容量との比率が、前記試料収容部の容量１に対して前記試薬の容量が１以上であることを特徴とする請求項１〜２９のいずれか一つに記載の生物学的試料と試薬との混合容器。
【請求項３１】
前記試薬が、有機溶媒を有効成分とすること特徴とする請求項１〜３０のいずれか一つに記載の生物学的試料と試薬との混合用容器。
【請求項３２】
前記試薬が、水溶性有機溶媒を有効成分とすること特徴とする請求項１〜３１のいずれ一つかに記載の生物学的試料と試薬との混合用容器。
【請求項３３】
前記水溶性有機溶媒が、水溶性アルコール及び／又はケトン類であることを特徴とする請求項３２に記載の生物学的試料と試薬との混合容器。
【請求項３４】
前記水溶性有機溶媒の濃度が、３０％以上であることを特徴とする請求項３２又は３３に記載の生物学的試料と試薬との混合容器。
【請求項３５】
前記水溶性アルコールが、エタノール、プロパノール及びメタノールからなる群より選ばれる１以上であることを特徴とする請求項３３又は３４に記載の生物学的試料と試薬との混合容器。
【請求項３６】
前記水溶性有機溶媒が、エタノールであることを特徴とする請求項３３〜３５のいずれか一つに記載の生物学的試料と試薬との混合容器。
【請求項３７】
前記ケトン類が、アセトン及び／又はメチルエチルケトンであることを特徴とする請求項３３又は３４に記載の生物学的試料と試薬との混合容器。
【請求項３８】
前記水溶性有機溶媒が、アルデヒド類であることを特徴とする請求項３２に記載の生物学的試料と試薬との混合容器。
【請求項３９】
前記水溶性有機溶媒の濃度が、０．０１〜３０％であることを特徴とする請求項３８に記載の生物学的試料と試薬との混合容器。
【請求項４０】
前記試薬が、界面活性剤を含有することを特徴とする請求項３１〜３９のいずれか一つに記載の生物学的試料と試薬との混合容器。
【請求項４１】
前記試薬が、着色剤を含有することを特徴とする請求項３１〜４０のいずれか一つに記載の生物学的試料と試薬との混合容器。
【請求項４２】
試料が糞便である請求項１〜４１のいずれか一つに記載の生物学的試料と試薬との混合用容器。
【請求項４３】
少なくとも一端に形成された開口部と、生物学的試料を収容可能な試料収容部とを有する第一の容器に前記生物学的試料を収容する試料収容ステップと、
前記第一の容器と、一端に形成された開口部と試薬を収容した試薬収容部と該試薬収容部に収容されている前記試薬を密閉した密閉部とを有する第二の容器と、を相互に内部を密閉された状態で螺合又は嵌合することによって、前記第二の容器における前記密閉部による前記試薬の密閉を解除する解除ステップと、
前記生物学的試料に前記試薬を混合させる混合ステップと、
を含むことを特徴とする生物学的試料と試薬との混合方法。
【請求項４４】
少なくとも一端に形成された開口部と生物学的試料を収容可能な試料収容部と密閉部を介して試薬を密閉状態に収容した試薬収容部とを有する第一の容器に前記生物学的試料を収容する試料収容ステップと、
前記第一の容器を蓋で密閉した後、前記試薬収容部に外力を加えて、前記密閉部による前記試薬の密閉を解除する解除ステップと、
前記生物学的試料に前記試薬を混合させる混合ステップと、
を含むことを特徴とする生物学的試料と試薬との混合方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、生物学的試料と試薬との混合用容器及び生物学的試料と試薬との混合方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
欧米では、大腸がんが、がん死亡率の上位を占めている。日本でも、大腸がんの患者数は、年々急激に増加している。これは、日本人の食生活が欧米型の肉食中心となったことに原因があると考えられている。国内では、毎年約６万人程度が大腸がんに罹患しており、臓器別の死亡数でも、胃がん、肺がんに続く３番目の多さであり、今後更なる増加も予想されている。しかしながら、大腸がんは早期がんであれば手術により１００％近く治せることが知られている。したがって、大腸がんは早期がん検診の対象となり、数多くの検査法が考案されてきた。【０００３】
大腸がんの早期発見を目指した検査法としては、注腸検査や内視鏡検査などが行われている。注腸検査は、バリウムを大腸内に注入し、大腸の粘膜面に付着させ、Ｘ線を照射してその表面の凹凸の撮影を行なう検査方法である。内視鏡検査は、大腸の内部を内視鏡で直接調べる検査方法である。特に、内視鏡検査は、大腸がんの発見に対して、高い感度と特異性を有している。加えて、早期がんや前がん状態のポリープを切除できる利点も有している。【０００４】
しかし、これらの検査法はコストが高い上に被験者への負担が大きく、合併症のリスクを伴っている。さらに、内視鏡検査では操作に熟練を要し、検査のできる施設が限られている。したがって、これらの方法は無症状の一般人を対象にした大腸がん検査には向いていない。【０００５】
そこで、大腸がんの一次スクリーニング法として、簡便で検査コストも低い便潜血検査が広く利用されている。便潜血検査とは糞便に含まれるヘモグロビンの存在を調べることにより、腸内の出血の有無を診断し、間接的に大腸がんの存在を予測する方法である。【０００６】
しかしながら、便潜血検査は、広く実施されている検査方法ではあるものの、実際には感度が約２５％と低く、大腸がんの患者を見落とす率が高い。さらに陽性的中率も低く、便潜血検査陽性の被験者の中で実際に大腸がん患者である割合は１０％以下であり、多くの偽陽性を含んでいる。そのため、より信頼性の高い新たな検査法の開発が強く望まれている。【０００７】
信頼性の高い新たな検査法の候補として、糞便中における剥離したがん細胞の有無を調べる検査に注目が集まっている。この方法によれば、直接的にがん細胞の有無を調べることになるため、大腸がんの罹患に伴い間接的におこる腸内の出血を調べる便潜血検査法に比べて、より信頼性の高い検査法になりうると考えられる。【０００８】
糞便中のがん細胞を調べる検査法としては、例えば、次の特許文献１に、糞便から直接抽出した核酸を利用して遺伝子診断を行う方法が提案されている。また、例えば、次の特許文献２に、糞便からＲＮＡを抽出し、腫瘍マーカーとなる遺伝子の発現の有無を検出する方法が提案されている。
【特許文献１】特表２００２−５１５９７３号公報
【特許文献２】ＷＯ２００４／０８３８５６号公報
【０００９】
ところで、これら特許文献１,２に記載の検査法による検査を行う場合においては、従来の便潜血検査法において一般に用いられている、例えば、次の特許文献３，４に記載のような糞便検体の回収、懸濁容器を用いたのでは、細胞の回収もしくは核酸の抽出に必要な便量を扱うことができない。便潜血検査では、少量の糞便（０．１ｇ以下）で検出可能であり、糞便検体の回収、懸濁容器もその程度の糞便量を扱うのに対し、細胞を回収もしくは核酸を抽出するためには、便潜血検査より多くの量の糞便が必要となることが多いためである。
【特許文献３】特許第２６６８８１５号公報
【特許文献４】実用新案登録第３０４４１４１号公報
【００１０】
そこで、糞便中の剥離がん細胞を回収するための糞便懸濁・濾過用の容器として、例えば、次の特許文献５に、便中のがん細胞を調べるために０．５ｇ以上の糞便を採取できる容器が提案されている。
【特許文献５】特開２００６−１３８８１５号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
ところで、便から核酸を抽出する検査においては、採便後、便中の核酸が分解されないような溶液中に保存することが望ましいため、採便容器に核酸分解酵素の阻害剤などの試薬を入れておく必要がある。この試薬としては、主に有機溶媒などが有効であるが、有機溶媒は危険であり、採便者が手に触れたり揮発したものを吸い込んだりすることは好ましくない。【００１２】
しかし、特許文献５に記載の容器は、試薬が密閉された構造にはなっておらず、採便者が手に触れたり揮発したものを吸い込んだりする危険性があった。【００１３】
また、特許文献３，４に記載のような、通常の便潜血検査法で用いる試料容器は、上述したように、極少量の試料しかサンプリングすることができず、しかも、採便棒を抜くと、容器中の試薬が漏れる、または試薬が付着した採便棒から周囲や作業者に試薬が付着することがあった。【００１４】
本発明は、上記従来の課題に鑑みてなされたものであり、糞便中の剥離がん細胞の検査等の生物学的試料を用いた検査において十分な量の糞便等の生物学的試料を用いることができ、試薬が外部に漏れることなく、容易、かつ、安全に試料の処理を行うことの可能な生物学的試料と試薬との混合用容器及び生物学的試料と試薬との混合方法を提供することを目的としている。
【課題を解決するための手段】
【００１５】
上記目的を達成するため、本発明による生物学的試料と試薬との混合用容器は、少なくとも一端に形成された開口部と、生物学的試料を収容可能な試料収容部とを有する第一の容器と、一端に形成された開口部と、試薬を収容した試薬収容部と、該試薬収容部に収容されている前記試薬を密閉した密閉部とを有する第二の容器と、前記第一の容器と前記第二の容器の夫々における開口部近傍に備えられていて、該第一の容器と第二の容器との相互に内部を密閉された状態での螺合又は嵌合を可能にする接合手段と、前記第一の容器と前記第二の容器とが螺合又は嵌合した状態において該第二の容器における前記密閉部による前記試薬の密閉を解除させる密閉解除手段とを有することを特徴としている。【００１６】
また、本発明の生物学的試料と試薬との混合用容器においては、前記密閉部が、前記第二の容器の開口部を封止する膜であり、前記密閉解除手段が、前記膜を穿孔可能な突起であるのが好ましい。【００１７】
また、本発明の生物学的試料と試薬との混合用容器においては、前記密閉部が、前記試薬全体を覆う膜であり、前記密閉解除手段が、前記膜を穿孔可能な突起であるのが好ましい。【００１８】
また、本発明の生物学的試料と試薬との混合用容器においては、前記密閉部が、前記第二の容器の開口部を封止する栓であり、前記密閉解除手段が、前記栓の封止を解除可能な突起であるのが好ましい。【００１９】
また、本発明の生物学的試料と試薬との混合用容器においては、前記密閉部が、前記第二の容器の開口部を封止する弁であり、前記密閉解除手段が、前記弁の封止を解除可能な突起であるのが好ましい。【００２０】
また、本発明の生物学的試料と試薬との混合用容器においては、前記接合手段が、前記第一の容器と前記第二の容器に形成されているのが好ましい。【００２１】
また、本発明の生物学的試料と試薬との混合用容器においては、前記接合手段が、内部を密閉された状態で前記第一の容器と前記第二の容器のいずれの開口部とも螺合又は嵌合可能な第一の接合部と、内部を密閉された状態で前記第一の容器と前記第二の容器のいずれの開口部とも螺合又は嵌合可能な第二の接合部とを有する、該第一の容器と第二の容器とは別体のアダプタユニットで構成されているのが好ましい。【００２２】
また、本発明の生物学的試料と試薬との混合用容器においては、前記密閉解除手段が、前記第一の容器に設けられているのが好ましい。【００２３】
また、本発明の生物学的試料と試薬との混合用容器においては、前記密閉解除手段が、前記アダプタユニットに設けられているのが好ましい。【００２４】
また、本発明の生物学的試料と試薬との混合用容器においては、前記第一の容器が、前記接合手段とは反対側の端部に第二の開口部と、前記第二の開口部を密閉可能な蓋とを有するのが好ましい。【００２５】
また、本発明の生物学的試料と試薬との混合用容器においては、前記蓋が試料採取手段を備えているのが好ましい。【００２６】
また、本発明の生物学的試料と試薬との混合用容器においては、前記試料採取手段が、採取した試料を前記試料収容部に供給可能に構成されているのが好ましい。【００２７】
また、本発明による生物学的試料と試薬との混合用容器は、少なくとも一端に形成された開口部と、前記生物学的試料を収容可能な試料収容部と、密閉部を介して試薬を密閉状態で収容した試薬収容部とを有する容器と、前記容器を密閉可能な蓋とを有し、前記容器は、外力を加えることによって前記密閉部による密閉が解除されて前記試薬が前記試料収容部の試料と混合できるように変形可能に構成されていることを特徴としている。【００２８】
また、本発明の生物学的試料と試薬との混合用容器においては、前記容器は、外力を加えることによって側面が変形するように構成されているのが好ましい。【００２９】
また、本発明の生物学的試料と試薬との混合用容器においては、前記試薬収容部は、側面が蛇腹状に形成され、底面が前記容器の底部をなし、前記容器は、外力を加えることによって蛇腹が変形するように構成されているのが好ましい。【００３０】
また、本発明による生物学的試料と試薬との混合用容器は、少なくとも一端に形成された開口部と、前記生物学的試料を収容可能な試料収容部と、密閉部を介して試薬を密閉状態に収容した試薬収容部とを有する容器と、前記容器を密閉可能な蓋と、前記蓋に備えられていて、前記密閉部による前記試薬の密閉を解除させる密閉解除手段とを有することを特徴としている。【００３１】
また、本発明の生物学的試料と試薬との混合用容器においては、前記密閉解除手段が、前記密閉部を穿孔可能な突起であるのが好ましい。【００３２】
また、本発明の生物学的試料と試薬との混合用容器においては、前記密閉解除手段が、前記密閉部を押圧可能な突起であるのが好ましい。【００３３】
また、本発明の生物学的試料と試薬との混合用容器においては、前記密閉部が前記試薬全体を覆う膜であるのが好ましい。【００３４】
また、本発明の生物学的試料と試薬との混合用容器においては、前記密閉部がアンプルであるのが好ましい。【００３５】
また、本発明の生物学的試料と試薬との混合用容器においては、前記密閉部が前記試薬収容部の開口部を封止する膜であるのが好ましい。【００３６】
また、本発明の生物学的試料と試薬との混合用容器においては、前記密閉部が前記試薬収容部の開口部を封止する栓であるのが好ましい。【００３７】
また、本発明の生物学的試料と試薬との混合用容器においては、前記試薬収容部は、側面が蛇腹状に形成されているのが好ましい。【００３８】
また、本発明の生物学的試料と試薬との混合用容器においては、前記試薬収容部は、側面が蛇腹状に形成され、かつ、前記密閉解除手段が、前記試薬収容部を押して蛇腹を変形可能な突起であるのが好ましい。【００３９】
また、本発明の生物学的試料と試薬との混合用容器においては、前記密閉部が前記試薬収容部の開口部を封止する弁であるのが好ましい。【００４０】
また、本発明の生物学的試料と試薬との混合用容器においては、前記蓋が試料採取手段を備えているのが好ましい。【００４１】
また、本発明の生物学的試料と試薬との混合用容器においては、前記試料採取手段が、採取した試料を前記試料収容部に供給可能に構成されているのが好ましい。【００４２】
また、本発明の生物学的試料と試薬との混合用容器においては、前記試料採取手段が、試料の採取量を一定化にする手段を備えているのが好ましい。【００４３】
また、本発明の生物学的試料と試薬との混合用容器においては、前記試料採取手段が前記密閉解除手段を備えているのが好ましい。【００４４】
また、本発明による生物学的試料と試薬との混合容器においては、前記試料収容部の容量と前記試薬の容量との比率が、前記試料収容部の容量１に対して前記試薬の容量が１以上であることが好ましい。【００４５】
また、本発明の生物学的試料と試薬との混合用容器においては、前記試薬が、有機溶媒を有効成分とすることが好ましい。【００４６】
また、本発明の生物学的試料と試薬との混合用容器においては、前記試薬が、水溶性有機溶媒を有効成分とすることが好ましい。【００４７】
また、本発明の生物学的試料と試薬との混合用容器においては、前記水溶性有機溶媒が、水溶性アルコール及び／又はケトン類であることが好ましい。【００４８】
また、本発明の生物学的試料と試薬との混合用容器においては、前記水溶性有機溶媒の濃度が、３０％以上であることが好ましい。【００４９】
また、本発明の生物学的試料と試薬との混合用容器においては、前記水溶性アルコールが、エタノール、プロパノール及びメタノールからなる群より選ばれる１以上であることが好ましい。【００５０】
また、本発明の生物学的試料と試薬との混合用容器においては、前記水溶性有機溶媒が、エタノールであることが好ましい。【００５１】
また、本発明の生物学的試料と試薬との混合用容器においては、前記ケトン類が、アセトン及び／又はメチルエチルケトンであることが好ましい。【００５２】
また、本発明の生物学的試料と試薬との混合用容器においては、前記水溶性有機溶媒が、アルデヒド類であることが好ましい。【００５３】
また、本発明の生物学的試料と試薬との混合用容器においては、前記水溶性有機溶媒の濃度が、０．０１〜３０％であることが好ましい。【００５４】
また、本発明の生物学的試料と試薬との混合用容器においては、前記試薬が、界面活性剤を含有することが好ましい。【００５５】
また、本発明の生物学的試料と試薬との混合用容器においては、前記試薬が、着色剤を含有することが好ましい。【００５６】
また、本発明の生物学的試料と試薬との混合用容器においては、試料が糞便であるのが好ましい。【００５７】
また、本発明による生物学的試料と試薬との混合方法においては、少なくとも一端に形成された開口部と、前記生物学的試料を収容可能な試料収容部とを有する第一の容器に生物学的試料を収容する試料収容ステップと、前記第一の容器と、一端に形成された開口部と試薬を収容した試薬収容部と該試薬収容部に収容されている前記試薬を密閉した密閉部とを有する第二の容器と、を相互に内部を密閉された状態で螺合又は嵌合することによって、前記第二の容器における前記密閉部による前記試薬の密閉を解除する解除ステップと、前記生物学的試料に前記試薬を混合させる混合ステップと、を含むことを特徴としている。【００５８】
また、本発明による生物学的試料と試薬との混合方法においては、少なくとも一端に形成された開口部と生物学的試料を収容可能な試料収容部と密閉部を介して試薬を密閉状態に収容した試薬収容部とを有する第一の容器に生物学的試料を収容する試料収容ステップと、前記第一の容器を蓋で密閉した後、前記試薬収容部に外力を加えて、前記密閉部による前記試薬の密閉を解除する解除ステップと、前記生物学的試料に前記試薬を混合させる混合ステップと、を含むことを特徴としている。
【発明の効果】
【００５９】
本発明によれば、糞便中の剥離がん細胞の検査等の生物学的試料を用いた検査において十分な量の糞便等の生物学的試料を用いることができ、試薬が外部に漏れることなく、容易、かつ、安全に、試料と試薬との混合処理を行うことの可能な生物学的試料と試薬との混合用容器及び生物学的試料と試薬との混合方法が得られる。
【図面の簡単な説明】
【００６０】
【図１】図１は、本発明の実施例１にかかる生物学的試料と試薬との混合用容器の概略構成を示す断面図である。
【図２】図２は、図１に示す混合用容器に用いられているアダプタユニットの構成を示す平面図である。
【図３】図３は、図１に示す混合用容器を用いた生物学的試料と試薬との混合処理手順を示す説明図である。
【図４】図４は、実施例１の一変形例にかかる生物学的試料と試薬との混合用容器に用いられているアダプタユニットの構成を示す断面図である。
【図５】図５は、実施例１の他の変形例にかかる生物学的試料と試薬との混合用容器に用いられているアダプタユニットの構成を示す平行方向の断面図である。
【図６】図６は、実施例１の他の変形例にかかる生物学的試料と試薬との混合用容器に用いられているアダプタユニットの構成を示す鉛直方向の断面図である。
【図７】図７は、本発明の実施例２にかかる生物学的試料と試薬との混合用容器の概略構成を示す断面図である。
【図８】図８は、図７の混合用容器におけるアダプタユニットの構成を示す断面図である。
【図９】図９は、図７の混合用容器を用いた生物学的試料と試薬との混合処理手順を示す説明図で、(a)は生物学的試料に対して試料採取手段を向けた状態、(b)は試料採取手段を介して生物学的試料を採取している状態を示す平面図である。
【図１０】図１０は、図７の混合用容器を用いた生物学的試料と試薬との混合処理手順を示す説明図で、(a)は生物学的試料を採取した試料採取手段を備えた蓋で第一の容器における第二の開口部を密閉した状態、(b)は試料採取手段で採取した試料が第一の容器に供給された状態を示す平面図である。
【図１１】図１１は、図７の混合用容器を用いた生物学的試料と試薬との混合処理手順を示す説明図で、(a)は試料が供給されている第一の容器における第一の開口部を第二の容器の開口部に接合する状態、(b)は第一の容器における第一の開口部を第二の容器の開口部に接合することによって第二の容器における密閉部の密閉状態を解除する状態、(c)は密閉部の密閉が解除された後、容器の上下を変えることにより、第二の容器の試薬が第一の容器に流れ込んだ状態を示す平面図である。
【図１２】図１２は、実施例２の一変形例にかかる生物学的試料と試薬との混合用容器の概略構成を示す断面図である。
【図１３】図１３は、実施例２の他の変形例にかかる生物学的試料と試薬との混合用容器の概略構成を示す断面図である。
【図１４】図１４は、実施例２の他の変形例にかかる生物学的試料と試薬との混合用容器の要部の構成を拡大して示す斜視図である。
【図１５】図１５は、本発明の実施例３にかかる生物学的試料と試薬との混合用容器の概略構成を示す断面図である。
【図１６】図１６は、本発明の実施例３にかかる生物学的試料と試薬との混合用容器のスライダの断面図である。
【図１７】図１７は、図１５の混合用容器を用いた生物学的試料と試薬との混合処理手順を示す説明図で、(a)は生物学的試料に対して試料採取手段を向けた状態を示す斜視図であり、(b)は試料採取手段を介して生物学的試料を採取している状態、(c)は採取する生物学的試料の採取量を一定化している状態、(d)は一定量の生物学的試料を採取し終えた状態、(e)は一定量の生物学的試料を採取した試料採取手段を備えた蓋で容器の開口部を密閉しようとすることによって密閉部の密閉状態を解除しようとしている状態を示す平面図である。
【図１８】図１８は、図１５の混合用容器を用いた生物学的試料と試薬との混合処理手順を示す説明図で、(a)は一定量の生物学的試料を採取した試料採取手段を備えた蓋で容器の開口部を密閉しようとすることによって密閉部の密閉状態を解除しようとしている状態、(b)は一定量の生物学的試料を採取した試料採取手段を備えた蓋で容器の開口部を密閉し、密閉部の密閉状態が解除されて、試薬と生物学的試料とが接触した状態を示す平面図である。
【図１９】図１９は、実施例３の一変形例にかかる生物学的試料と試薬との混合用容器の概略構成を示す断面図であって、(a)は混合前の状態、(b)は混合時において密閉部による密閉を解除した状態を示す断面図である。
【図２０】図２０は、実施例３の他の変形例にかかる生物学的試料と試薬との混合用容器の概略構成を示す断面図であって、(a)は混合前の状態、(b)は混合時において密閉部による密閉を解除した状態を示す断面図である。
【図２１】図２１は、実施例３のさらに他の変形例にかかる生物学的試料と試薬との混合用容器の概略構成を混合前の状態で示す断面図である。
【図２２】図２２は、実施例３のさらに他の変形例にかかる生物学的試料と試薬との混合用容器の概略構成を示す断面図である。
【図２３】図２３は、実施例３のさらに他の変形例にかかる生物学的試料と試薬との混合用容器の概略構成を示す断面図である。
【図２４】図２４は、本発明の実施例１にかかる混合用容器を用いて採取した糞便を各処理法で処理して得られたＤＮＡの増幅箇所とプライマーの配列を示すブロック図である。
【図２５】図２５は、本発明の実施例１にかかる混合用容器を用いて採取した糞便を各処理法で処理して得られたＤＮＡを電気泳動法によって解析した結果を示す撮像図である。
【符号の説明】
【００６１】
１          懸濁容器（第一の容器）
１ａ        開口部
１ａ２      第二の開口部
１ｂ        採便収容部（試料収容部）
２          試薬容器（第二の容器）
２ａ        試薬収容部
２ａ１      開口部
２ａ１’    閉栓部
２ｂ        密閉部
２ｂ’      球状の栓
２ｂ”      薄膜
３          アダプタユニット
３ａ        第一の接合部
３ｂ        第二の接合部
３ｃ        密閉解除手段保持部
３ｃ１      隔壁
３ｃ２      穴部
３ｄ１，３ｄ２                    Ｏリング
４，４’，４”，４”’，４””    密閉解除手段
４ａ        小突起
５          蓋
５ａ        凹部
６          試料採取手段（採便筒）
６ａ        採取用開口
６ｂ        螺子
６ｃ        溝
６’        試料採取手段（採便棒）
６ａ’      穴部
７          押出棒
７ａ        摘み
７ｂ        摘み７ａの近傍
７ｃ        凸条部
８，８’    糞便採取キット
９          試薬カプセル
１０        スライダ
１１        混合部
１１ａ      開口部
１２        試薬収容部
１２ａ      入り口
１２ｂ      球状の栓
１２ｃ      弁
１３        試薬収容部保持部材
Ｓ          懸濁溶媒
Ｅ          糞便
【発明を実施するための最良の形態】
【００６２】
実施例の説明に先立ち、本発明の作用効果について説明する。なお、本願において、生物学的試料とは、生体由来の物質を全て含み、例えば、糞便、爪、毛髪、組織などの固体試料や、血液、喀痰、唾液、尿などの液体試料をいう。【００６３】
本発明の生物学的試料と試薬（懸濁溶媒）との混合用容器では、試薬収容部に試薬が密閉された状態に収容している。また、試薬と生物学的試料との混合前には、試薬収容部と試料収容部とは分離して備えている。そして、試薬収容部と試料収容部とを内部が密閉された状態で結合することにより、あるいは、試薬収容部と試料収容部とを内部が密閉された状態で結合し、外力を加えることにより、試薬収容部の密閉状態が解除されて、試薬と試料とが混ざるように構成されている。したがって、本発明によれば、試薬が外部に漏れることなく、容易、かつ、安全に、試料と試薬との混合処理を行うことができる。【００６４】
（実施例１）
図１，２は本発明の実施例１にかかる生物学的試料と試薬との混合用容器の概略構成を示す説明図で、図１は混合前（未使用段階）の状態を示す断面図、図２は図１の混合用容器に用いられているアダプタユニットの構成を示す平面図である。図３は図１の混合用容器を用いた生物学的試料と試薬との混合処理手順を示す説明図で、図３(a)は第一の容器の試料収容部に試料を収容した状態、図３(b)は第一の容器の開口部にアダプタユニットの一端を接合した状態、図３(c)は第一の容器に接合したアダプタユニットの他端に第二の容器の開口部を接合することによって第二の容器における密閉部の密閉状態を解除する状態、図３(d)は密閉部の密閉が解除されて、第二の容器の試薬が第一の容器に流れ込んだ状態を夫々示している。図４は実施例１の一変形例にかかる生物学的試料と試薬との混合用容器に用いられているアダプタユニットの構成を示す平面図である。図５は実施例１の他の変形例にかかる生物学的試料と試薬との混合用容器に用いられているアダプタユニットの構成を示す平面図である。【００６５】
実施例１の混合用容器は、第一の容器としての懸濁容器１と、第二の容器としての試薬容器２と、接合手段としてのアダプタユニット３と、密閉解除手段４を有している。懸濁容器１は、フッ素樹脂であるダイフロン（登録商標）で製造されており、一端に開口部１ａと、試料収容部としての採便収容部１ｂを有している。採便収容部１ｂは、採取した糞便について、剥離がん細胞の検査等に十分な量（即ち、少なくとも５００μｌ（０．５ｇ）以上）を収容できる容積を備えている。【００６６】
試薬容器２は、試薬である懸濁溶媒Ｓを収容した試薬収容部２ａと、懸濁溶媒Ｓを密封した密閉部２ｂを有している。試薬収容部２ａは、高密度ポリエチレンで製造されている。密閉部２ｂは、フッ素ゴムの薄膜で構成されている。そして、懸濁溶媒Ｓが収容された試薬収容部２ａの開口部２ａ１に、与圧をかけて膜面がたるみのない状態にしながらテフロン（登録商標）用接着剤を用いて接着され、開口部２ａ１及び懸濁溶媒Ｓの液面を封止している。【００６７】
アダプタユニット３は、両端が開口された筒状部材で構成され、夫々の開口部に第一の接合部３ａ、第二の接合部３ｂを有している。また、アダプタユニット３は、第一の接合部３ａと第二の接合部３ｂとの間に、密閉解除手段保持部３ｃを備えている。第一の接合部３ａは、内部を密閉された状態で懸濁容器１の開口部１ａと試薬容器２の開口部２ａ１のいずれとも螺合又は嵌合可能に構成されている。なお、図１，２においては、第一の接合部３ａは、懸濁容器１の開口部１ａと螺合又は嵌合されている。第二の接合部３ｂは、内部を密閉された状態で試薬容器２の開口部２ａ１及び懸濁容器１の開口部１ａと螺合又は嵌合可能に構成されている。なお、図１，２においては、第二の接合部３ｂは、試薬容器２の開口部２ａ１と螺合又は嵌合されている。密閉解除手段保持部３ｃは、隔壁３ｃ１で構成されている。隔壁３ｃ１の中央部には、試薬容器２の薄膜２ｂを穿孔可能な円錐状の突起が密閉解除手段４として備えられている。また、隔壁３ｃ１には、懸濁溶媒Ｓである液体が流通可能な穴部３ｃ２が備えられるとともに、液密を確保するためのＯリング３ｄ１，３ｄ２が第一の接合部３ａ，第二の接合部３ｂの近傍に備えられている。【００６８】
このように構成された実施例１の混合用容器を用いた試料と試薬との混合は次のようにして行う。まず、図示しない採便用へら等の採便手段を用いて、試料である糞便を採取する。次いで、懸濁容器１をアダプタユニット３から取り外し、採取した糞便Ｅを所定量（例えば、５００μｌ程度）懸濁容器１の中に入れる（図３(a)）。次いで、試薬容器２をアダプタユニット３から取り外し、アダプタユニット３の第二の接合部３ｂを懸濁容器１の開口部１ａに内部を密閉状態にして取り付ける（図３(b)）。次いで、試薬容器２の開口部２ａ１をアダプタユニット３の第一の接合部３ａに内部を密閉状態にして取り付ける。このとき、アダプタユニット３における密閉解除手段保持部３ｃの隔壁３ｃ１に設けられている密閉解除手段４としての突起の先端が試薬容器２の試薬収容部２ａに収容されている試薬としての懸濁溶媒Ｓを封止している薄膜２ｂを穿孔する（図３(c))。すると、試薬容器２における試薬収容部２ａに収容されていた懸濁溶媒Ｓが、密閉を解除されてアダプタユニット３の隔壁３ｃ１に形成されている穴部３ｃ２を通過して、懸濁容器１に流入する（図３(d)）。この状態で、容器全体を振とうすることによって、糞便Ｅと懸濁溶媒Ｓとが混合される。【００６９】
ここで、本発明に用いられる容器に収容されている試薬（懸濁溶媒Ｓ）は、有機溶媒、または、有機溶媒を含有している溶液が好ましい。特に糞便中の核酸、中でも、RNAは分解しやすいため、有機溶媒、または、有機溶媒を含有している溶液で処理をすることが必要なためである。有機溶媒は、例えば、フェノール、クロロホルム等を用いることができる。さらに好ましい試薬は、水溶性有機溶媒を有効成分とするものである。糞便等の生体試料は、通常多量の水分を含有しており、水に対する溶解度が高い水溶性有機溶媒を有効成分とすることにより、本発明の懸濁溶媒Ｓは、糞便と速やかに混合することができ、より高い核酸高回収効果を得ることができるためである。【００７０】
なお、本発明において水溶性有機溶媒とは、水に対する溶解度が10重量％以上のものをさす。例えば、アルコール類、ケトン類、又はアルデヒド類、有機酸類であって、室温付近、例えば１５〜４０℃において液状である溶媒を意味する。【００７１】
また、本発明の懸濁溶媒Ｓにおいては、水に対する溶解度が１２重量％以上の水溶性有機溶媒であることが好ましく、水に対する溶解度が２０重量％以上の水溶性有機溶媒であることがより好ましく、水に対する溶解度が９０重量％以上の水溶性有機溶媒であることがさらに好ましく、水と任意の割合で混合可能である水溶性有機溶媒であることが特に好ましい。水と任意の割合で混合可能である水溶性有機溶媒として、例えば、メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、２−プロパノール、メルカプトエタノール、アセトン、ホルムアルデヒド等がある。【００７２】
さらに、本発明の懸濁溶媒Ｓに含まれる水溶性有機溶媒は、上記定義を充足するものであって、核酸高回収効果を奏することができる溶媒であれば特に限定されるものではない。水溶性有機溶媒として、例えば、アルコール類としては、水溶性アルコールであるメタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール等があり、ケトン類としては、アセトン、メチルエチルケトン（水に対する溶解度９０重量％）等があり、アルデヒド類としては、アセトアルデヒド(アセチルアルデヒド)、ホルムアルデヒド（ホルマリン）、グルタールアルデヒド、パラフォルムアルデヒド、グリオキサール（ｇｌｙｏｘａｌ）等がある。プロパノールは、ｎ−プロパノールであってもよく、２−プロパノールであってもよい。また、ブタノールは、１−ブタノール（水に対する溶解度２０重量％）であってもよく、２−ブタノール（水に対する溶解度１２．５重量％）であってもよい。本発明において用いられる水溶性有機溶媒としては、水溶性アルコール、アセトン、メチルエチルケトン、ホルムアルデヒドであることが好ましい。水に対する溶解度が十分に高いためである。入手容易性、取り扱い性、安全性等の点から、水溶性アルコールであることがより好ましく、エタノール、プロパノール、メタノールであることがさらに好ましい。特にエタノールは、最も安全性が高く、家庭内でも容易に扱うことが可能であるため、定期健診等のスクリーニング検査において特に有用である。【００７３】
また、本発明の懸濁溶媒Ｓ中の水溶性有機溶媒濃度は、核酸高回収効果を奏することができる濃度であれば、特に限定されるものではなく、水溶性有機溶媒の種類等を考慮して、適宜決定することができる。例えば、有効成分として、水溶性アルコールやケトン類を用いる場合には、本発明の懸濁溶媒Ｓの水溶性有機溶媒濃度は３０％以上であることが好ましい。水溶性有機溶媒濃度が充分に高濃度であることにより、糞便と懸濁溶媒Ｓを混合した場合に、糞便中の哺乳細胞等や腸内常在菌に水溶性有機溶媒成分が迅速に浸透し、核酸高回収効果を速やかに奏することができる。なお、本発明及び本願明細書中においては、特に記載がない限り、「％」は「体積％」を意味する。【００７４】
特に、有効成分として、水溶性アルコールを用いる場合には、本発明の懸濁溶媒Ｓの水溶性有機溶媒濃度は３０％以上であることが好ましく、５０％以上であることがより好ましく、５０〜８０％であることがさらに好ましく、６０〜７０％であることが特に好ましい。水溶性有機溶媒濃度が高い程、水分含量の多い糞便に対しても少量の懸濁溶媒Ｓを用いることによって、充分な核酸高回収効果を得ることができる。【００７５】
また、有効成分として、アセトン、メチルエチルケトンを用いる場合には、本発明の懸濁溶媒Ｓの水溶性有機溶媒濃度は３０％以上であることが好ましく、６０％以上であることがより好ましく、８０％以上であることがさらに好ましい。その他、有効成分として、アセトアルデヒド、ホルムアルデヒド、グルタールアルデヒド、パラフォルムアルデヒド、グリオキサールを用いる場合には、本発明の懸濁溶媒Ｓの水溶性有機溶媒濃度は０．０１〜３０％であることが好ましく、０．０３〜１０％であることがより好ましく、３〜５％であることがさらに好ましい。アルデヒド類は、アルコール類やケトン類よりも低濃度においても、核酸高回収効果を奏することができる。【００７６】
その他、本発明において用いられる水溶性有機溶媒は、１種類の水溶性有機溶媒のみを含有していてもよく、２種類以上の水溶性有機溶媒の混合溶液であってもよい。例えば、２種類以上のアルコールの混合溶液であってもよく、アルコールと他種類の水溶性有機溶媒との混合溶液であってもよい。核酸回収効率がより改善されるため、アルコールとアセトンの混合溶液であることも好ましい。【００７７】
ここで、採取された糞便と混合する懸濁溶媒Ｓの容量は、特に限定されるものではないが、糞便と懸濁溶媒Ｓの混合比率は、糞便容量１に対して懸濁溶媒容量が１以上であることが好ましい。懸濁溶媒Ｓ入り採便容器に糞便を入れる場合に、糞便と等量以上の懸濁溶媒Ｓであれば、糞便の全周囲が懸濁溶媒Ｓに浸らせることができ、本発明の効果を得られるためである。例えば、糞便と懸濁溶媒Ｓが等量である場合には、懸濁溶媒Ｓ入り採便容器の軽量化・小型化が可能となる。一方で、糞便に対して、５倍以上の容量の懸濁溶媒Ｓを混合させることにより、懸濁溶媒Ｓ中への糞便の分散を迅速かつ効果的に行うことができ、さらに、糞便に含有されている水分による水溶性アルコール濃度の低下の影響を抑えることもできる。懸濁溶媒Ｓ入り採便容器の軽量化と糞便の分散性の向上の両方の効果をバランス良く備えることが可能となるため、糞便と懸濁溶媒Ｓの混合比率が、１：１〜１：２０であることがより好ましく、１：３〜１：１０であることがさらに好ましく１：５程度であることがより好ましい。【００７８】
なお、本発明の生物学的試料と試薬との混合方法に供される糞便は、動物のものであれば特に限定されるものではないが、哺乳動物由来のものであることが好ましく、ヒト由来のものであることがより好ましい。例えば、定期健診や診断等のために採取されたヒトの糞便であることが好ましいが、家畜や野生動物等の糞便であってもよい。また、採取後一定期間保存されたものであってもよいが、採取直後のものであることが好ましい。さらに、採取された糞便は、排泄直後のものであることが好ましいが、排泄後時間を経たものであってもよい。【００７９】
また、本発明の生物学的試料と試薬との混合方法に供される糞便の量は、特に限定されるものではないが、０．０５〜１ｇであることが好ましい。さらに、核酸回収の効果を高くするため、糞便の量は、０．１〜１ｇであることが、特に好ましい。糞便量があまりに多くなってしまうと、採取作業に手間がかかり、採便容器も大きくなってしまうため、取り扱い性等が低下するおそれがある。逆に糞便量があまりに少量である場合には、糞便中に含まれる大腸剥離細胞等の哺乳細胞数が少なくなりすぎるため、必要な核酸量を回収できず、目的の核酸解析の精度が低下するおそれがある。また、糞便はヘテロジニアスである、つまり、多種多様な成分が不均一に存在しているため、哺乳細胞の局在の影響を避けるために、採糞時には、糞便の広範囲から採取することが好ましい。【００８０】
ここで、懸濁溶媒Ｓは、水溶性有機溶媒を適宜希釈し、所望の濃度に調整することにより得ることができる。希釈に用いる溶媒は特に限定されるものではないが、水又はＰＢＳ等の緩衝液であることが好ましい。また、懸濁溶媒Ｓは、水溶性有機溶媒成分による核酸高回収効果を損なわない限り、水溶性有機溶媒以外にも、任意の成分を含んでいてもよい。例えば、カオトロピック塩を含有していてもよく、界面活性剤を含有していても良い。カオトロピック塩や界面活性剤を含有することにより、糞便中の細胞活性や各種分解酵素の酵素活性をより効果的に阻害することができる。懸濁溶媒Ｓに含有させ得るカオトロピック塩として、例えば、塩酸グアニジン、グアニジンイソチオシアネート、ヨウ化ナトリウム、過塩素酸ナトリウム、及びトリクロロ酢酸ナトリウム等がある。懸濁溶媒Ｓに含有させ得る界面活性剤としては、非イオン性界面活性剤であることが好ましい。非イオン性界面活性剤として、例えば、Ｔｗｅｅｎ８０、ＣＨＡＰＳ（３−［３−コラミドプロピルジメチルアンモニオ]−１−プロパンスルホネート）、Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００、Ｔｗｅｅｎ２０等がある。カオトロピック塩や界面活性剤の種類や濃度は、核酸高回収効果が得られる濃度であれば、特に限定されるものではなく、糞便量やその後の核酸回収・解析方法等を考慮して、適宜決定することができる。【００８１】
その他、懸濁溶媒Ｓには、適宜着色剤を添加してもよい。懸濁溶媒Ｓを着色することにより、誤飲防止、糞便の色が緩和される等の効果が得られる。該着色剤として、食品添加物として使用される着色料であることが好ましく、青色や緑色等が好ましい。例えば、ファストグリーンＦＣＦ（緑色３号）、ブリリアントブルーＦＣＦ（青色１号）、インジゴカルミン（青色２号）等が挙げられる。また、複数の着色剤を混合して添加してもよく、単独で添加しても良い。【００８２】
また、糞便と懸濁溶媒Ｓとの混合は、速やかに行われることが好ましい。糞便を速やかに懸濁溶媒Ｓ中に分散させることにより、糞便中の細胞に対する水溶性有機溶媒成分の浸透を迅速に行うことができ、核酸高回収効果が速やかに得られるためである。なお、糞便と懸濁溶媒Ｓを混合する方法は、物理的手法により混合する方法であれば、特に限定されるものではない。例えば、予め懸濁溶媒Ｓを入れておいた密閉可能な容器に、採取された糞便を投入して密閉した後、容器を上下に転倒させることにより、混合してもよく、該容器をボルテックス等の振とう機にかけることにより混合してもよい。また、糞便と懸濁溶媒Ｓを、混合用粒子の存在下で混合してもよい。速やかに混合させることができるため、振とう機を用いる方法や、混合用粒子を用いる方法であることが好ましい。特に、予め混合用粒子を含有させた採便容器を用いることにより、家庭等の特殊な装置のない環境においても迅速に混合することができる。【００８３】
なお、混合用粒子としては、水溶性有機溶媒成分による核酸高回収効果を損なわない組成物であって、糞便にぶつかることにより、糞便を迅速に懸濁溶媒Ｓ中に分散させ得る硬度や比重を有する粒子であれば、特に限定されるものではなく、１種類の材質からなる粒子であってもよく、２種類以上の材質からなる粒子であってもよい。このような混合用粒子として、例えば、ガラス、セラミックス、プラスチック、ラテックス、金属等からなる粒子がある。その他、混合用粒子は、磁性粒子であってもよく、非磁性粒子であってもよい。【００８４】
ここで、実施例１の混合用容器によれば、アダプタユニット３を介して懸濁容器１と試薬容器２とを接合することによって、試料（糞便Ｅ）と試薬（懸濁溶媒Ｓ）とを内部を密閉した状態で混合できる。このため、実施例１の混合用容器によれば、試薬が外部に漏れることなく、容易、かつ、安全に、試料と試薬との混合処理を行うことができる。【００８５】
また、実施例１の混合用容器によれば、図１に示すように、薄膜２ｂを穿孔するための突起が懸濁容器１側に向くようにして、アダプタユニット３に対して、懸濁容器１と試料容器２とを取り付けることによって、未使用段階において容器全体を一体に保持することができる。このため、誤って輸送中に試薬容器２の密閉部２ｂが密閉解除手段４である突起に接触して封止が開放されてしまうというような危険性がなく、試料容器２の取り扱いがより容易且つ安全なものとなる。【００８６】
なお、図１の例の混合用容器では、試薬容器２の開口部２ａ１を封止する密閉部２ｂをフッ素ゴムの薄膜で構成したが、開口部２ａ１を封止する膜としては、厚みが数μｍから数ｍｍ程度で、材質としてアルミホイルなどの金属箔、ゴムやプラスチックを用いたものであれば好適に用いることができる。例えば、一変形例として、密閉部２ｂをアルミシールで構成し、密閉解除手段４である突起によってアルミシールに開口が形成されるようにしてもよい。その場合は、懸濁溶媒Ｓの流通路を確保しやすくするために、密閉解除手段４の突起は、図４に示すように、断面形状を、星型など最大外周に対して窪みを有する形状に構成するとよい。この変形例の混合用容器によれば、密閉部２ｂをフッ素ゴムの薄膜で構成した実施例１の混合用容器とは異なり、試料容器２を封止する際に与圧をかけなくてもよくなる。【００８７】
なお、図１の例の混合用容器では、アダプタユニット３を介して、懸濁容器１と試薬容器２とを接合するようにしたが、アダプタユニット３を用いずに、懸濁容器１と試薬容器２とに夫々接合部を直接形成して、互いに密閉した状態で螺合又は嵌合するようにするとともに、密閉解除手段を懸濁容器１に設けてもよい。あるいは、懸濁容器１と試薬容器２のいずれか一方を、アダプタユニット３の構成を一体的に設けた構成とし、他方と密閉した状態で螺合又は嵌合するようにしてもよい。なお、懸濁容器１にアダプタユニット３の構成を一体的に設けた構成とする場合には、隔壁３ｃ１に形成される穴部３ｃ２は、採取した糞便Ｅを懸濁容器１の内部に入れ易い大きさに形成する。また、試薬容器２にアダプタユニット３の構成を一体的に設けた構成とする場合には、試薬容器２とアダプタユニット３の構成部材とが互いに密閉した状態で螺合又は嵌合可能に構成し、互いに密閉した状態で螺合又は嵌合したときに、密閉解除手段４を介して密閉部２ｂによる密閉を解除するようにする。このようにしても、試薬が外部に漏れることなく、容易、かつ、安全に、試料と試薬との混合処理を行うことができる。【００８８】
また、図１の例の混合用容器では、密閉解除手段４を、隔壁３ｃ１の中央部に設けた円錐状の突起で構成したが、試薬容器２の開口部２ａ１を封止する膜が開口部２ａ１の先端部近傍に設けられている場合には、他の変形例として、例えば、図５，６に示すように、隔壁３ｃ１における穴部３ｃ２の形成されていない部位に先の尖った小突起４ａの群を設けてもよい。この変形例の混合用容器では、試薬容器２を懸濁容器１に螺合するときに、小突起４ａの群が回転方向に移動することによって開口部２ａ１を封止する膜を破り、試薬容器２の懸濁溶媒Ｓを懸濁容器１に流入させることができる。【００８９】
さらに、図１の例の混合用容器では、密閉部２ｂを、試薬である懸濁溶媒Ｓが収容された試薬容器２の開口部２ａ１を封止する膜で構成したが、試薬全体を覆う膜で構成してもよい。【００９０】
（実施例２）
図７，８は本発明の実施例２にかかる生物学的試料と試薬との混合用容器の概略構成を示す説明図で、図７は混合前の状態を示す断面図、図８は図７の混合用容器における隔壁の構成を示す平面図である。図９〜１１は図７の混合用容器を用いた生物学的試料と試薬との混合処理手順を示す説明図で、図９(a)は生物学的試料に対して試料採取手段を向けた状態、図９(b)は試料採取手段を介して生物学的試料を採取している状態、図１０(a)は生物学的試料を採取した試料採取手段を備えた蓋で第一の容器における第二の開口部を密閉した状態、図１０(b)は試料採取手段で採取した試料が第一の容器に供給された状態、図１１(a)は、試料が供給されている第一の容器における第一の開口部を第二の容器の開口部に接合する状態、図１１(b)は第一の容器における第一の開口部を第二の容器の開口部に接合することによって第二の容器における密閉部の密閉状態を解除する状態、図１１(c)は密閉部の密閉が解除された後、容器の上下を変えることにより、第二の容器の試薬が第一の容器に流れ込んだ状態を夫々示している。図１２は実施例２の一変形例にかかる生物学的試料と試薬との混合用容器の概略構成を混合前の状態で示す断面図である。図１３，１４は実施例２の他の変形例にかかる生物学的試料と試薬との混合用容器の概略構成を示す説明図で、図１３は混合前の状態を示す断面図、図１４は要部の構成を拡大して示す斜視図である。なお、実施例１と同じ構成要素には同じ符号を付し、説明は省略する。【００９１】
実施例２の混合用容器では、第一の容器としての懸濁容器１は、さらに、開口部１ａとは反対側の端部に第二の開口部１ａ２と、第二の開口部１ａ２を密閉可能な蓋５を有している。また、開口部１ａは、第二の容器としての試料容器２ａの開口部２ａ１と相互に内部を密封された状態で螺合又は嵌合可能に構成されている。【００９２】
蓋５は、試料採取手段として、円筒断面を有し縁部が鋸歯形状である採取用開口６ａを有する透明な材料（例えば、ポリエチレン）からなる採便筒６を有している。また、採便筒６の内部には、糞便を押し出すための押出棒７が備えられている。なお、図７中、７ａは押出棒７を操作するための摘み、５ａは押出棒７の一部を退避させることによって採便筒６の内部に剥離がん細胞の検査等に十分な量（即ち、少なくとも５００μｌ（０．５ｇ）以上）の糞便を採取可能な空間を作るための凹部である。また、押出棒７は、摘み７ａの近傍７ｂが蓋５に螺合されており、摘み７ａを回動させることで、採便筒６の内部を移動することができるように構成されている。このため、押出棒７は、採便筒６の内部を移動することによって、採便筒６を介して採取した糞便を採便筒６の外部に押し出すことができる。なお、摘み７ａの近傍７ｂを蓋５に螺合させずに、摘み７ａを採便筒６の長手方向に沿って移動させることによって、押出棒７が移動するようにしても勿論よい。そして、実施例２の混合用容器では、蓋５と試料採取手段６と押出棒７とで糞便採取キット８が構成されている。【００９３】
また、密閉解除手段保持部３ｃとしての隔壁３ｃ１は、懸濁容器１における蓋５の取り付け用開口である第二の開口部１ａ２と試薬容器２との接合用開口である開口部１ａとの間の開口部１ａ近傍に設けられている。隔壁３ｃ１の中央部には、試薬容器２に設けられた後述する球状の栓２ｂ’を押して開栓するための突起を密閉解除手段４’として有している。また、隔壁３ｃ１には、懸濁溶媒Ｓである液体が流通可能な穴部３ｃ２が備えられるとともに、液密を確保するためのＯリング３ｄ１が開口部１ａにおける開口部２ａ１との接合部の近傍に備えられている。【００９４】
試薬容器２は、開口部２ａ１の内側に円環状の閉栓部２ａ１’を有している。また、密閉部は、高密度ポリエチレン製の球状の栓２ｂ’で構成されている。そして、試薬容器２は、試薬収容部２ａに懸濁溶媒Ｓが収容されるとともに、球状の栓２ｂ’が閉栓部２ａ１’に嵌めこまれて閉栓し、懸濁溶媒Ｓを密閉状態に収容している。【００９５】
このように構成された実施例２の混合用容器を用いた試料と試薬との混合は次のようにして行う。まず、糞便採取キット８を用いて、蓋５に備えられている採便筒６及び押出棒７の先端面を糞便Ｅに向ける（図９(a)）。次いで、採便筒６及び押出棒７の先端面を糞便Ｅに軽く押し当てながら、摘み７ａを所定方向に回して押出棒７の一部を凹部５ａに退避させることによって採便筒６の内部に糞便Ｅを所定量（例えば、５００μｌ程度）採取可能な空間を作り、その空間に糞便Ｅを詰め込んで採取する（図９(b)）。次いで、糞便Ｅを採取した蓋５で懸濁容器１における第二の開口部１ａ２を密閉する（図１０(a)）。次いで、摘み７ａを先程とは反対方向に回して、採便筒６の内部に採取された糞便Ｅが押出棒７により懸濁容器１内に押し出されるようにする（図１０(b)）。次いで、懸濁容器１における第一の開口部１ａを、試薬容器２の開口部２ａ１に内部が密閉された状態で螺合又は嵌合する（図１１(a)）。このとき、懸濁容器１における密閉解除手段保持部３ｃの隔壁３ｃ１に設けられている密閉解除手段４’としての突起の先端が、試薬容器２の閉栓部２ａ１’に嵌め込まれている球状の栓２ｂ’を押す。すると、球状の栓２ｂ’が外れて、試薬収容部２ａの中に入り、懸濁溶媒Ｓが密閉を解除される（図１１(b)）。次いで、容器の上下を変えることにより、試薬容器２の試薬である懸濁溶媒Ｓが懸濁容器１内に流入する（図１１(c))。この状態で、容器全体を振とうすることによって、糞便Ｅと懸濁溶媒Ｓとが混合される。【００９６】
実施例２の混合用容器によっても、実施例１の混合用容器と同様、懸濁容器１と試薬容器２とを接合することによって、試料（糞便Ｅ）と試薬（懸濁溶媒Ｓ）とを内部を密閉した状態で混合できる。このため、実施例２の混合用容器によれば、試薬が外部に漏れることなく、容易、かつ、安全に、試料と試薬との混合処理を行うことができる。【００９７】
さらに、実施例２の混合用容器によれば、密閉部として球状の栓２ｂ’を用いたので、この球状の栓２ｂ’を、糞便と試薬との混合時における糞便破砕手段として使用できる。【００９８】
また、図７の例の混合用容器では、試薬容器２の開口部２ａ１を封止する密閉部を栓２ｂ’で構成したが、一変形例として、図１２に示すように、密閉部を開口部２ａ１の先端を封止する薄膜２ｂ”で構成するとともに、懸濁容器１における密閉解除手段保持部３ｃの隔壁３ｃ１に設けられている密閉解除手段４’としての突起の先端を尖らせてもよい。この変形例の混合用容器によれば、試薬容器２の封止が容易になる。【００９９】
また、その場合には、密閉解除手段４’としての突起を、図５，６に示したような、隔壁３ｃ１における穴部３ｃ２の形成されていない部位に先の尖った小突起４ａの群として構成してもよい。【０１００】
また、図７の例の混合用容器では、採便筒６内部を押出棒７が移動可能に構成としたが、他の変形例として、図１３，１４に示すように、採便筒６も蓋５に対して移動可能に構成してもよい。図１３，１４に示す変形例の混合用容器では、採便筒６の外周部に螺子６ｂが設けられている。また、蓋５の凹部５ａは、採便筒６の一部の螺子６ｂと螺合可能な螺子を備え、採便筒６の一部を退避可能な大きさの径をもって形成されている。また、採便筒６の内周には溝６ｃが形成され、押出棒７は、その溝６ｃに嵌合する凸条部７ｃを有している。【０１０１】
図１３，１４に示した変形例の混合用容器によれば、摘み７ａを回転させたときは、凸条部７ｃに加えられた回転力が溝６ｃに伝わって、採便筒６が回転することで、蓋５に対して採便筒６が押出棒７とともに移動する。また、摘み７ａを上下方向に移動させたときは、採便筒６は移動せず、採便筒６に対して押出棒７が移動する。【０１０２】
従って、この変形例によれば、摘み７ａを引き上げて押出棒７を採便筒６に対して上方に移動させて、採便筒６の内部に採便可能な空間を作った後に、摘み７ａを所定方向に回転させると、採便筒６は摘み７ａの回転に伴って糞便Ｅの内部に進行するようになる。このため、糞便を採取する際に採便筒６及び押出棒７の先端に大きな力をかけて糞便Ｅを押し付ける必要がなくなる。このため、水洗トイレなど水面を浮かんだ糞便を採取する場合において、糞便を沈ませることがなくなり採取し易くなる。【０１０３】
また、図７の例の混合用容器における他の変形例として、採便筒６が蓋５に対して固定されたままで、採便筒６の外周部に螺子６ｂを設けて構成してもよい（図示省略）。この変形例によっても、図１３，１４の例と同様、採便筒６は、その回転に伴って糞便Ｅの内部に進行するようになる。このため、糞便を採取する際に採便筒６及び押出棒７の先端に大きな力をかけて糞便Ｅを押し付ける必要がなくなる。このため、水洗トイレなど水面を浮かんだ糞便を採取する場合において、糞便を沈ませることがなくなり採取し易くなる。【０１０４】
その他、図７の例の混合用容器では、試薬容器２の開口部２ａ１を封止する密閉部を栓２ｂ’で構成したが、さらに他の変形例として、密閉部を弁（図示省略）で構成してもよい。【０１０５】
（実施例３）
図１５，１６は本発明の実施例３にかかる生物学的試料と試薬との混合用容器の概略構成を示す説明図で、図１５は断面図、図１６は図１５に示すスライダの断面図である。図１７，１８は図１５，１６の混合用容器を用いた生物学的試料と試薬との混合処理手順を示す説明図で、図１７(a)は生物学的試料に対して試料採取手段を向けた状態、図１７(b)は試料採取手段を介して生物学的試料を採取している状態、図１７(c)は採取する生物学的試料の採取量を一定化している状態、図１７(d)は一定量の生物学的試料を採取し終えた状態、図１８(a)は一定量の生物学的試料を採取した試料採取手段を備えた蓋で容器の開口部を密閉しようとすることによって密閉部の密閉状態を解除しようとしている状態、図１８(b)は一定量の生物学的試料を採取した試料採取手段を備えた蓋で容器の開口部を密閉し、密閉部の密閉状態が解除されて、試薬と生物学的試料とが接触した状態を夫々示している。図１９(a)，(b)は実施例３の一変形例にかかる生物学的試料と試薬との混合用容器の概略構成を混合前の状態で示す断面図である。図２０(a)，(b)は実施例３の他の変形例にかかる生物学的試料と試薬との混合用容器の概略構成を示す断面図である。なお、実施例１および実施例２と同じ構成要素には同じ符号を付し、説明は省略する。【０１０６】
図１５に示す実施例３の生物学的試料と試薬との混合用容器は、懸濁容器１と、懸濁容器の開口部１ａを密閉可能な蓋５を有している。懸濁容器１は、その内部に密閉部としての試薬カプセル９を収容し、かつ、剥離がん細胞の検査等に十分な量（即ち、少なくとも５００μｌ（０．５ｇ））を収容できる容積を備えている。試薬カプセル９は、シリコンゴムの薄膜袋に与圧をかけて懸濁溶媒Ｓを封入している。【０１０７】
蓋５は、試料採取手段としての採便棒６’を有している。採便棒６’は、糞便を切り取って採取するための穴部６ａ’を有している。また、採便棒６’の先端部は、試薬カプセル９を穿孔可能に尖っており、密閉解除手段４”として機能するように構成されている。また、採便棒６’は、採便棒６’を介して採取される糞便採取量を、剥離がん細胞の検査等に十分な所定量（即ち、少なくとも５００μｌ（０．５ｇ）以上の所定量）に一定化させるための手段として、スライダ１０を備えている。スライダ１０は、図１６に示すように、採便棒６’の外周に沿った形状の貫通孔１０ａを有し、採便棒６’を長手方向に沿ってスライドすることができるように構成されている。また、スライダ１０は、後述する採便棒６’のクリック部（例えば、凹部又は凸部）と係合可能なクリック部（不図示）を有している。採便棒６’は、スライダ１０によって採便棒６’の穴部６ａ’が見える所定位置（開き位置）と、採便棒６’の穴部６ａ’が見えなくなる所定位置（閉じ位置）との２箇所に図示しないクリック部（凹部又は凸部）を有している。そして、実施例３の混合用容器では、蓋５と採便棒６’とスライダ１０とで糞便採取キット８’が構成されている。【０１０８】
このように構成された実施例３の混合用容器を用いた試料と試薬との混合は次のようにして行う。まず、糞便採取キット８’を用いて、蓋５に備えられている採便棒６’の穴部６ａ’を糞便Ｅに向ける（図１７(a)）。次いで、採便棒６’の穴部６ａ’を糞便Ｅに押し付けて穴部６ａ’に糞便Ｅを所定量（例えば、５００μｌ程度）詰め込む（図１７(b)）。次いで、スライダ１０を、採便棒６’の穴部６ａ’が見えなくなる所定位置（閉じ位置）まで移動させて、糞便採取量を一定量に調節する（図１７(c))。次いで、スライダ１０を、採便棒６’の穴部６ａ’が見える所定位置（開き位置）に移動させる（図１７(d)）。次いで、糞便Ｅを採取した蓋５を懸濁容器１の開口部１ａ２に取り付ける（図１８(a)）。このとき、採便棒６’における密閉解除手段としての先端部４”によって、試薬カプセル９が破裂して懸濁溶媒Ｓが密閉を解除される。そして、蓋５で懸濁容器１の開口部１ａ２が密閉された状態において、糞便Ｅと懸濁溶媒Ｓとが接触する（図１８(b)）。この状態で、容器全体を振とうすることによって、糞便Ｅと懸濁溶媒Ｓとが混合される。【０１０９】
実施例３の混合用容器によれば、懸濁容器１に蓋５を取り付けることによって、試料（糞便Ｅ）と試薬（懸濁溶媒Ｓ）とを内部を密閉した状態で混合できる。このため、実施例３の混合用容器によれば、試薬が外部に漏れることなく、容易、かつ、安全に、試料と試薬との混合処理を行うことができる。しかも、実施例３の混合用容器によれば、試薬を入れる容器と試料とを入れる容器とを別個に備えて接合する必要がないので、混合用容器の構造を簡単化することができる。【０１１０】
なお、図１５，１６の例の混合用容器では、先端を尖らせた採取棒６’によって、試薬カプセル９を破裂させるようにしたが、一変形例として、図１９(a)，(b)に示すように、懸濁容器１を可撓性材料で構成し、外部から懸濁容器１の側面を押圧することによって、懸濁容器１の側面を変形させて試薬カプセル９を破裂させるようにしてもよい。さらには、他の変形例として、図２０(a)，(b)に示すように、懸濁容器１を可撓性材料で構成するとともに試薬カプセル９をガラス製やプラスチック製のアンプルで構成し、外部から懸濁容器１に力を加えることによって、懸濁容器１の側面を折り曲げて試薬カプセル９を割るようにしてもよい。【０１１１】
また、さらに他の変形例として、図２１に示すように、懸濁容器１において試料と試薬とを混合させるための混合部１１と、試薬収容部１２とを別部材とし、混合部１１に試薬収容部１２から試薬を流入させるための開口部１１ａを設けるとともに、試薬収容部１２を側面が蛇腹状の試薬容器で構成してもよい。なお、試薬容器内部に懸濁溶媒Ｓが収容され、入り口１２ａを密閉部材としてテフロン（登録商標）製の球状の栓１２ｂによって封止して、この試薬収容部１２を混合部１１と密閉した状態に接合し、試薬収容部１２の底面を押圧して蛇腹を変形させることによって栓１２ｂが開栓して懸濁溶媒Ｓを開放する。この変形例によれば、試薬カプセル９を用いる必要がなくなる。【０１１２】
なお、実施例３の混合用容器においては、試薬を密閉する密閉部を、試料カプセル９や栓１２ｂで構成したが、試薬が収容されている容器の開口部を封止する膜や弁で構成してもよい。開口部を封止する膜としては、実施例１と同様、厚みが数μｍから数ｍｍ程度で、材質としてアルミホイルなどの金属箔、ゴムやプラスチックを用いたものであれば好適に用いることができる。また、密閉部を弁で構成する場合には、採便棒６’を、弁による封止を解除できるように（例えば、弁を押し開くことが可能な突起を備えて）構成するのがよい。【０１１３】
あるいは、実施例３の混合用容器は、さらに他の変形例として、次の図２２，２３に示すようにしてもよい。図２２の例の混合用容器では、試薬収容部１２を側面が蛇腹状の試薬容器で構成し、その内部に懸濁溶媒Ｓを入れ、入り口１２ａを密閉部材として弁１２ｃによって封止している。また、蓋５に試料採取手段として採便筒６を設け、蓋５を懸濁容器１に取り付けたときに、採便筒６の先端が密閉解除手段４”’として試薬収容部１２を上方から押圧し、蛇腹が変形して内部の圧力によって弁１２ｃを開いて懸濁溶媒Ｓが流れ出て糞便Ｅと接触することができるようにしている。なお、図２２中、１３は密閉状態における蛇腹状の試薬収容部１２の位置を固定する保持部材である。【０１１４】
図２３の例の混合用容器では、試薬収容部１２を側面が蛇腹状の試薬容器で構成し、その内部に懸濁溶媒Ｓを入れ、試薬容器全体で密閉している。また、蓋５に試料採取手段として採便筒６を設け、蓋５を懸濁容器１に取り付けたときに、採便筒６の先端が密閉解除手段４””として試薬容器を穿孔可能に鋭利な形状に形成された突起を有している。【０１１５】
これらの変形例の混合用容器によっても、実施例３における他の例の混合用容器と同様、懸濁容器１に蓋５を取り付けることによって、試料（糞便Ｅ）と試薬（懸濁溶媒Ｓ）とを内部を密閉した状態で混合でき、試薬が外部に漏れることなく、容易、かつ、安全に、試料と試薬との混合処理を行うことができる。【０１１６】
しかるに、本発明の混合用容器によれば、保管時に試薬を密閉しておくことができ、使用時には外部と密閉した状態で試薬を容易に試料収容部に入れることができる。なお、検査対象の核酸は、宿主だけでなく、細菌、ウイルスの検査を行うことも可能である。【０１１７】
また、本発明の混合用容器を用いて、生物学的試料中のタンパク質を検出することも可能であり、例えば、癌マーカーとなる抗体を検出し、また、サンプルが便の場合は、便潜血検査を行うことも可能である。例えば、便潜血検査キット（ダイナスクリーン・ヘモ、Abbott社製）を用いることができる。【０１１８】
また、本発明の混合用容器における試薬収納部の容器の材質は、耐薬品性に優れた結晶性の樹脂が好ましい。例えば、ポリエチレン、ポリエチレン共重合体、超高分子量ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリブチレン、ポリメチルペンテン、ポリアミド、ポリエチレンテレフタレート、ポリブチレンテレフタレート、ポリアセタール、ポリイミド、ポリフェニレンサルファイド、ポリエーテルエーテルケトン、液晶ポリマー、フッ素樹脂は、種々の有機溶媒に対して耐性が高く好ましい。【０１１９】
また、本発明の混合用容器における第一の容器などの試料と試薬とを混合した状態で収容する容器（各実施例における懸濁容器１）は、サンプルと試薬が混合したことを確認するために、試料が確認できる程度の透明性があることが好ましい。したがって、ポリエチレン、ポリエチレン共重合体、超高分子量ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリブチレン、ポリメチルペンテン、ポリアミド、ポリエチレンテレフタレート、ポリブチレンテレフタレート、フッ素樹脂で製造するのが耐薬性、透明性の点で好ましい。【０１２０】
また、本発明の混合用容器における第二の容器などの試薬を収容する容器（実施例１，２における試薬容器２や、実施例３における試薬カプセル９、試薬収容部１２など）は、試薬を収容してから使用するまでに数ヶ月から１年程度など長期間経過する可能性がある。収容された試薬の分解や変質を防止するために、第二の容器は、不透明であることが好ましい。例えば、ポリエチレン、ポリエチレン共重合体、超高分子量ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリブチレン、ポリメチルペンテン、ポリアミド、ポリエチレンテレフタレート、ポリブチレンテレフタレート、フッ素樹脂に種々の粒子（例えば、カーボン、タルク、着色した顔料など）を混入したものや、元来不透明であるポリアセタール、ポリイミド、ポリフェニレンサルファイド、ポリエーテルエーテルケトン、液晶ポリマーを用いることができる。【０１２１】
また、本発明の混合用容器において、試料採取手段を第一の容器（各実施例における懸濁容器１）の蓋に設けると、外部への汚染、生体試料への汚染なしに第一の容器に収容することが可能となる。【０１２２】
なお、本発明の混合用容器は、特に、糞便中の剥離がん細胞の検査に有効である。このため、本発明の混合用容器における試料採取手段は、上記各実施例において説明したように、採便手段として構成すると、糞便を容易に容器に収容することが可能となり好ましい。また、本発明の混合用容器に用いる生物学的試料は、特に糞便で有効であり、安全に且つ迅速に糞便中の核酸を安定化でき、核酸の分解を抑え、正確な検出が可能となる。【０１２３】
ここで、本発明の混合用容器を用いて採取した糞便からＤＮＡを抽出し増幅を行った場合、特許文献５に記載の採便容器を用いて採取した糞便からＤＮＡを抽出し増幅を行った場合、採便後ただちに凍結した糞便からＤＮＡを抽出し増幅処理を行った場合のそれぞれについて行った試験結果を次の実施例４及び比較例１，２として示す。なお、核酸の抽出に用いた試薬は、実施例４、比較例１，２とも同一の試薬を用いている。【０１２４】
（実施例４）
図１に示した実施例１の混合用容器を用いて５００μｌの糞便を採取し、試薬と混合し所定期間（１週間）保存したサンプルを用いて、ＤＮＡを抽出して増幅処理を行った。抽出バッファーにはＩＳＯＧＥＮ（ニッポンジーン製）を用いた（混合用容器中のバッファーもＩＳＯＧＥＮである。）。抽出は所定のプロトコルに従って行い、抽出したＤＮＡをＰＣＲ（Polymerase  Chain  Reaction：ポリメラーゼ連鎖反応）にて増幅処理した。【０１２５】
（比較例１）
特許文献５に記載されている従来通常に用いられている採便容器を用いて５００μｌの糞便を採取し、約３時間後に試薬と混合したサンプルを用いて、ＤＮＡを同様に抽出し、ＰＣＲにて増幅処理を行った。【０１２６】
（比較例２）
５００μｌの糞便を採便後すぐに凍結して所定期間（１週間）保存の後、試薬と混合したサンプルを用いて、ＤＮＡを同様に抽出し、ＰＣＲにて増幅を行った。【０１２７】
以下に実施例４、比較例１，２におけるＰＣＲプロトコルを示す。
ＤＮＡ：便から抽出したＤＮＡ  ２０ｎｇ
オリゴヌクレオチド：
配列番号１の塩基配列を有する第１プライマー  β-globin  for
配列番号２の塩基配列を有する第２プライマー  β-globin  rev【０１２８】
上記のＤＮＡ、及び図２４に示す増幅箇所に対応した第１プライマー及び第２プライマーをそれぞれ12.5pmol、10×Ex  Taq  Bufferを１×（５μｌ）、dNTP  mixを0.2mMとなるように混合し、全体を50μlとした。この混合液にTaKaRa  Ex  Taqを1.25units加え、９４℃・３０秒、５５℃・３０秒、７４℃・３０秒の熱サイクルを３０回繰り返し、ＰＣＲ増幅を行った。その結果、増幅が確認できた。検出にはBIOANALYZER（Agilent  Technology社）を用いて電気泳動法により解析した。図２５は、解析結果を示す撮像図である。なお、レーンLにはマーカーが泳動されており、構成塩基対を示す指標として使用される。【０１２９】
（レーン１：実施例４の方法によるＤＮＡの増幅処理）
図２５のレーン１は、実施例４による方法、即ち、実施例１（図１）の混合用容器を用いて試薬との混合処理を行い、所定期間（１週間）保存したサンプルから抽出したＤＮＡを用いて増幅処理を行った結果を示している。図２５に示すように、レーン１では、ＰＣＲでの増幅産物が十分に検出された。この結果から、実施例１の混合用容器を用いた場合、糞便の保存中にＤＮＡは分解されずに保存されていたことがわかる。【０１３０】
（レーン２：比較例１の方法によるＤＮＡの増幅処理）
図２５のレーン２は、比較例１による方法、即ち、特許文献５に記載されている従来通常に用いられている採便容器を用いて糞便を採取し、約３時間後に試薬と混合したサンプルから抽出したＤＮＡを用いて増幅処理を行った結果を示している。図２５に示すように、レーン２では、増幅産物が検出されなかった。このような結果となったのは、試薬と混合していない段階での糞便の保存中にＤＮＡが分解したためと考えられる。【０１３１】
（レーン３：比較例２の方法によるＤＮＡの増幅処理）
図２５のレーン３は、比較例２による方法、即ち、採便後ただちに糞便を凍結し、ＤＮＡが分解されない状態のサンプルから抽出したＤＮＡを用いて増幅処理を行った結果を示している。図２５に示すように、レーン３では、ＤＮＡが分解されない状態のサンプルから抽出したＤＮＡを用いたので、増幅産物が検出された。【０１３２】
以上のように、比較例１のレーン１では増幅産物が検出されなかったのに対し、実施例４のレーン１では、比較例２のレーン３と共に増幅産物が検出された。これらの試験結果から、本発明の混合用容器を用いると、容易に、かつ、安全に、ＤＮＡが分解することなく増幅処理を行うことができることがわかる。【０１３３】
次に、採取した糞便を本発明の懸濁溶媒で処理した後にＲＮＡ抽出を行った場合、採取した糞便を凍結保存してからＲＮＡ抽出を行った場合、採便後ただちに糞便からＲＮＡ抽出を行った場合の、それぞれについての試験結果を次の実施例５及び比較例３，４として示す。なお、本試験に用いた糞便は、健常人１名より採取された糞便を３本に分取し、同一の糞便を核酸抽出に使用している。【０１３４】
（実施例５）
図１に示した混合用容器に試薬（懸濁溶媒）として１０ｍＬの７０％エタノール溶液が入ったものを用いて、糞便を採取して試薬中に分散させた後、室温で１時間静置したサンプルからＲＮＡを抽出した。【０１３５】
（比較例３）
採取した糞便に対して分取直後速やかに液体窒素を用いて凍結処理を行い、凍結処理されたサンプルからＲＮＡを抽出した。【０１３６】
（比較例４）
分取後、溶液等を添加せずに速やかに抽出工程に移行させ、未処理のサンプルからＲＮＡを抽出した。【０１３７】
ここで、各サンプルからＲＮＡを抽出する工程を説明する。先ず、各サンプルに、３ｍＬのフェノール混合物「Ｔｒｉｚｏｌ」（Ｉｎｖｉｔｏｒｏｇｅｎ社製）を添加し、３０秒以上ホモジナイザーで十分に混合した。その後、サンプルとフェノール混合物とを混合した溶液に、３ｍＬのクロロホルムを添加してボルテックスを用いて十分に混合し、１２，０００×ｇ、４℃で２０分間遠心分離処理を行った。遠心分離処理によって得られた上清（水層）は、ＲＮｅａｓｙ  ｍｉｄｉ  ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ社製）のＲＮＡ回収用カラムを通過し、添付のプロトコルに従ってＲＮＡ回収用カラムの洗浄操作及びＲＮＡ溶出操作を行うことによって、ＲＮＡを回収した。回収したＲＮＡの定量は、ナノドロップ（ナノドロップ社製）を用いることによって測定した。【０１３８】
実施例５から回収されたＲＮＡ量は、採取直後に凍結処理を行った比較例３から回収されたＲＮＡ量には若干及ばないものの、比較例４と比較して、非常に多くのＲＮＡを回収することができた。これらの結果から、本発明の懸濁溶媒を用いて処理することにより、室温での調製であっても、非常に効率よく核酸を回収し得るサンプルが得られることが明らかである。検診等のように、患者が自宅で採便する場合には、サンプルの調製を室温付近で行えることが望まれるが、本発明の混合用容器は、このような要請に充分に応えることが可能である。【０１３９】
ここで、比較例２，３のように凍結処理した糞便から核酸を抽出する場合は、凍結糞便を、ホモジナイザー等を用いて粉砕する必要がある。粉砕された糞便の粒径の違いによって核酸の回収量に若干の差が生じる。また、粉砕時に糞便中の核酸が損傷してしまう場合もある。凍結することで糞便中の核酸を安定して保存できるものの、凍結処理と粉砕処理とを行うことで、サンプル調製に時間と労力を要していた。【０１４０】
これに対して、実施例４，５のように懸濁溶媒を用いて保存処理をしたサンプルは、凍結糞便に比して溶液内への分散が容易で、安定した核酸回収が可能であり、凍結処理した糞便とほぼ同等の核酸を得ることができる。また、ＲＮＡはＤＮＡに比べると非常に不安定で分解が進みやすいが、本発明を適用することによって、ＲＮＡであっても高精度に分析を行うことができる。したがって、本発明の混合用容器および懸濁溶媒を用いることで、常温で安全に処理することが可能なうえ、処理後に時間が経過したサンプルにおいても安定した核酸回収が可能となり、家庭で採取された糞便でも検査機関まで搬送する間に核酸が分解されることがなく、高精度に分析することができる。
【産業上の利用可能性】
【０１４１】
本発明は、生体由来の物質の検査、特に糞便中のがん細胞の有無を検査する医療、医学、生物学の分野に有用である。
【図１】
2008152980.tif 000003
【図２】
2008152980.tif 000004
【図３】
2008152980.tif 000005
【図４】
2008152980.tif 000006
【図５】
2008152980.tif 000007
【図６】
2008152980.tif 000008
【図７】
2008152980.tif 000009
【図８】
2008152980.tif 000010
【図９】
2008152980.tif 000011
【図１０】
2008152980.tif 000012
【図１１】
2008152980.tif 000013
【図１２】
2008152980.tif 000014
【図１３】
2008152980.tif 000015
【図１４】
2008152980.tif 000016
【図１５】
2008152980.tif 000017
【図１６】
2008152980.tif 000018
【図１７】
2008152980.tif 000019
【図１８】
2008152980.tif 000020
【図１９】
2008152980.tif 000021
【図２０】
2008152980.tif 000022
【図２１】
2008152980.tif 000023
【図２２】
2008152980.tif 000024
【図２３】
2008152980.tif 000025
【図２４】
2008152980.tif 000026
【図２５】
2008152980.tif 000027
【国際調査報告】
2008152980.tif 000028
2008152980.tif 000029
2008152980.tif 000030
2008152980.tif 000031