【手続補正書】
【提出日】平成16年11月19日(2004.11.19)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】  ナトリウムチャンネルアルファサブユニットのＳＳ１部位またはＳＳ２部位上の、ある位置に特異的に結合するナトリウムチャンネル遮断化合物を最低１つと、弱有機酸とプロピレングリコールの水溶液で構成されｐＨ範囲が３．０から５．０の薬剤条件を満たすキャリアを含む組成物。
【請求項２】  弱有機酸が酢酸である請求項１記載の組成物。
【請求項３】  最低１つのナトリウムチャンネル遮断化合物が、テトロドトキシンまたは類縁体である請求項１記載の組成物。
【請求項４】  最低１つのナトリウムチャンネル遮断化合物が、サキシトキシンまたは類縁体である請求項１記載の組成物。
【請求項５】  テトロドトキシンの類縁体が、アンヒドロテトロドトキシン、テトロダミノトキシン、メトキシテトロドトキシン、エトキシテトロドトキシン、デオキシテトロドトキシンまたはテトロドニック酸である請求項３記載の組成物。
【請求項６】  さらに希酢酸、希塩酸および希クエン酸から選択された酸性の補助溶媒を最低１つ含む請求項１記載の組成物。
【請求項７】  さらに酢酸塩緩衝液、クエン酸塩緩衝液、リン酸塩緩衝液またはホウ酸塩緩衝液から選択された最低１つのｐＨ緩衝剤を含む請求項１記載の組成物。
【請求項８】  プロピレングリコールが、溶液の全容量中に１０％から８０％存在する請求項１記載の組成物。
【請求項９】  プロピレングリコールが、溶液の全容量中に３０％から５０％存在する請求項１記載の組成物。
【請求項１０】  プロピレングリコールが、溶液の全容量中に３０％から５０％存在する請求項２記載の組成物。
【請求項１１】  さらに血管収縮薬、抗生物質およびステロイド系または非ステロイドの抗炎症薬を含む請求項１記載の組成物。
【請求項１２】  さらに塩化ベンザルコニウム、クロロブタノール、酢酸フェニル水銀および硝酸フェニル水銀を含むグループから選択された保存剤を含む請求項１記載の組成物。
【請求項１３】  さらに塩化ナトリウム、マンニトールおよびグリセリンのグループから選択された弾性調整剤を含む請求項１記載の組成物。
【請求項１４】  さらにグリコール、オレイン酸、アルキルアミンを含むグループから選択された浸透促進剤を含む請求項１記載の組成物。
【請求項１５】  ナトリウムチャンネルアルファサブユニットのＳＳ１部位またはＳＳ２部位上の、ある位置に特異的に結合するナトリウムチャンネル遮断化合物を最低１つと、弱有機酸媒体の水溶液で構成されｐＨ範囲が３．０から５．０の薬剤条件を満たすキャリアを含む組成物。
【請求項１６】  弱有機酸が、酢酸である請求項１５記載の組成物。
【請求項１７】  最低１つのナトリウムチャンネル遮断化合物が、テトロドトキシンまたは類縁体である請求項１５記載の組成物。
【請求項１８】  最低１つのナトリウムチャンネル遮断化合物が、テトロドトキシンまたは類縁体である請求項１６記載の組成物。
【請求項１９】  ナトリウムチャンネルアルファサブユニットのＳＳ１部位またはＳＳ２部位上の、ある位置に特異的に結合するナトリウムチャンネル遮断化合物を最低１つと、Ｃ２からＣ６アルカングリコールの水溶液で構成されｐＨ範囲が３．０から５．０の薬剤条件を満たすキャリアを含む組成物。
【請求項２０】  グリコールが、プロピレングリコールである請求項１９記載の組成物。
のことである。
【請求項２１】  最低１つのナトリウムチャンネル遮断化合物が、テトロドトキシンまたは類縁体である請求項１９記載の組成物。
【請求項２２】  最低１つのナトリウムチャンネル遮断化合物が、テトロドトキシンまたは類縁体である請求項２０記載の組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４０】
２．  確認試験
２．１ 紫外線（ＵＶ）吸収：テトロドトキシン自体にはＵＶ吸収特性はない。しかしながら、アルカリ水で加水分解され、２−アミノ６−メチロール８−ヒドロキシキナゾリン（Ｃ9ベース）とある程度のシュウ酸ナトリウムがを生じ、これがＵＶ域の顕著な吸収特性を示すので、特定・確認用に使用できる。
方法：製品の１０ｍｌを栓付の試験管に入れ、６．０ Ｍ ＮａＯＨ溶液を１ｍｌ加えてよく振り混ぜ、８０℃の水槽で４５分間熱した上で室温までにすぐ冷まし、分光測光法（Ａｐｐｅｎｄｉｘ ＩＶ Ａ， Ｐｈａｒｍａｃｏｐｏｅｉａ ｏｆ Ｐ．Ｒ．Ｃｈｉｎａ， Ｖｏｌ． ２， １９９５に記載）にのっとって３４０−２２０ｎｍの範囲での吸収スペクトルを測定する。結果は図１から４と以下の表に示されている。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４２】
２．２ 高性能液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）：ＨＰＬＣは後述の「内容測定」に述べられている通り行われた。クロマトグラムは図５に示されている。製品サンプルと対照サンプルは同じ保持時間を示している。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５１】
４．  内容測定
ＨＰＬＣ検定法を内容測定の分析方法として採用した。
４．１ 機材と試薬
機材：ベックマンＨＰＬＣ（アメリカ。Ｍｏｄｅｌ １２５ポンプを含む。Ｍｏｄｅｌ １６６可変波長検出器、Ｇｏｌｄ Ｎｏｕｖｅａｕクロマトグラフィーワークステーション）。
薬剤：テトロドトキシン（Ｎａｎｎｉｎｇ Ｍａｐｌｅ Ｌｅａｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｃｏ．， Ｌｔｄ． （ＭＬＰ）により精製）とＴＴＸの対照サンプル（ＭＬＰ提供）。
試薬：ナトリウム１−ヘプタンスルフォン酸塩（東京化成工業株式会社）、メタノール（Ｍｅｒｃｋ）、脱イオン水。
４．２ クロマトグラフの条件とシステム：
カラム：ＯＤＳ（５ μｍ）、４．６ｍｍ×２５０ｍｍ
カラム温度：３０℃
移動相：０．０１Ｍナトリウム１−ヘプタンスルフォン酸塩（ｐＨ５．３０）−メタノール（１００：１）
流量：１．５ｍｌ／分
検出波長：２０５ｎｍ
クロマトグラムは図６に示されている。
カラム効率（ｎ）
理論段数／メートルｎ ＝ ４３２２７をテトロドトキシンピークとして計算した。
テトロドトキシンピークとその隣接ピークの分離（Ｒ）＝１．８
テトロドトキシンピークの非対称ファクタ（Ｔ）＝１．１４
４．３ 精度
クロマトグラフにサンプル溶液を１００μｌ注入し、クロマトグラムを記録してピーク面積を測定する。この検査を６回繰り返す。テトロドトキシンピーク面積のＲＳＤは０．２％ （ｎ＝６）である。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５３】
４．５ 回収試験
2004513186.tif 000001
方法：テトロドトキシンなしで、上記調合に従い溶液を準備し、溶液Ａと呼ぶ。
テトロドトキシンを１４．０８ｍｇ量り、０．２％酢酸を加えて溶液の５０ｍｌを作る。これを溶液Ｂと呼ぶ。
溶液Ｂの０．５ｍｌに０．２％酢酸溶液を加え１０ｍｌにする。これを溶液Ｃと呼ぶ。
溶液Ｂの０．５ｍｌに溶液Ａを加え１０ｍｌにする。これを溶液Ｄと呼ぶ。
溶液Ａ、Ｃ、Ｄから１００μｌを採り、ＨＰＬＣシステムにそれぞれ注入し、クロマトグラムを記録する（図７）。回収率を計算する。ここで調べたテトロドトキシンの回収率は１０１．８％であった。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５５】
４．６ サンプル内容測定
サンプルの１００ μｌを正確に採ってＨＰＬＣカラムに注入し、クロマトグラムを記録し（図６）、ピーク面積を測定する。含有量は標準較正曲線に基づき計算する。３バッチのサンプルの結果は下記のとおりである。
2004513186.tif 000002
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５８】
2004513186.tif 000003
2004513186.tif 000004
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６２】
例４−テトロドトキシン（ＴＴＸ）注射液の安定性の調査
注射用に調合されたテトロドトキシン（ＴＴＸ）の光、熱、保存期間に対する安定性を色々な条件下で調査した。結果が示すところによると光は特に注射用ＴＴＸには影響がなく、物理的な外見や含有量にも明らかな変化は見られなかった。しかしながら、製品は温度に敏感で、温度が上がるにつれて含有量が減少した。ＴＴＸ注射液は低温で保存することが推奨される。
１．  目的
テトロドトキシン注射液処方のバッチから（バッチナンバー９９０１２０−１Ａ）パッケージを取り去ることにより、ＴＴＸ注射液安定性に対する光、熱および保存期間の影響を観察する。
２．  試験条件
光：蛍光灯（２０００−４０００Ｌｘ）で１、３、５、１０日間露光。
高温：４０℃、６０℃、８０℃に１、３、５、１０日間さらす。
加速試験：４０℃・相対湿度７５％に２ヶ月間さらす。
３．  試験項目と方法
外見：目視観測
内容測定：ＨＰＬＣによる（詳細については例２を参照のこと）
４．  試験結果
表１１および図８から２５を参照。
５．  結論
蛍光灯（３０００Ｌｘ）に露光した試験サンプルグループでは、サンプルの外見と内容に変化はなかった。４０℃、６０℃、８０℃にさらされた時は、外見には特に変化はなかったが、含有量にかなりの減少が見られた。保存期間は同じでも温度が高いほど含有量が低くなった。
テトロドトキシン注射液は低温（２℃−８℃）保存されるべきであることを試験結果は示している。