【手続補正書】
【提出日】平成15年10月22日(2003.10.22)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
微生物から脂質を得るプロセスであって、
（ａ）細胞内脂質を放出させるために、発酵培地で生育させた微生物の細胞を処理する工程と、
（ｂ）放出された細胞内脂質を、同脂質を得るために有機溶媒で抽出することなく有機溶媒の含量が約５％未満の媒質中で実施される、水相を含む重い層と前記脂質を含む軽い層から成る相分離混合物を生成する手順に供する工程と、
（ｃ）前記軽い層から前記重い層を分離する工程と、
（ｄ）前記軽い層から前記脂質を得る工程と、から成るプロセス。
【請求項２】
工程（ａ）の前に、前記発酵培地中に存在する任意のタンパク質の少なくとも一部を可溶化する工程をさらに含む請求項１に記載のプロセス。
【請求項３】
タンパク質を可溶化する前記工程は前記発酵培地を塩基と接触させることを含む、請求項２に記載のプロセス。
【請求項４】
前記処理工程は、前記細胞を溶解して、溶解した細胞混合物を生成することを含む、請求項１に記載のプロセス。
【請求項５】
相分離混合物の生成は溶解した細胞混合物を遠心することを含む、請求項４に記載のプロセス。
【請求項６】
前記処理工程は、細胞の加熱、塩基性化合物への細胞の曝露、キレート化合物への細胞の曝露、またはそれらの組合せから成る群より選択される処理を含む、請求項１に記載のプロセス。
【請求項７】
前記処理工程は発酵培養液に塩基を加えることを含む、請求項１に記載のプロセス。
【請求項８】
前記塩基は水酸化物、炭酸塩、重炭酸塩、リン酸塩およびそれ
らの混合物から成る群より選択される、請求項７に記載のプロセス。
【請求項９】
前記処理工程は前記微生物を少なくとも約５０℃の温度に加熱することを含む、請求項１に記載のプロセス。
【請求項１０】
前記処理工程は、前記細胞を、塩基性化合物、キレート化合物、またはそれらの混合物に暴露する前か、最中か、後に、細胞を少なくとも５０℃に加熱することから成る、請求項９に記載のプロセス。
【請求項１１】
前記処理工程は、前記細胞を乾燥させずに実施して細胞内脂質を放出させる、請求項１〜１０のいずれか一項に記載のプロセス。
【請求項１２】
前記分離工程は、
（i）前記軽い層に水性洗浄溶液を加えるステップと、
（ii）前記軽い層から前記水性洗浄溶液を分離するステップと、
（iii）前記脂質が実質的に乳化されていないようになるまで、前記ステップ（i）および（ii）を繰り返すステップとからさらに成る、請求項１〜１１のいずれか一項に記載のプロセス。
【請求項１３】
前記処理工程、相分離混合物を生成する手順に供する工程、および分離工程が、前記脂質を得るために少なくとも３回繰り返される、請求項１〜１２のいずれか一項に記載のプロセス。
【請求項１４】
前記軽い層は乳化された脂質を含む、請求項１〜１３のいずれか一項に記載のプロセス。
【請求項１５】
前記乳化された脂質は、水相中の前記脂質の懸濁物を含む、請求項１４に記載のプロセス。
【請求項１６】
前記水相は固形細胞材料を含む、請求項１〜１５のいずれか一項に記載のプロセス。
【請求項１７】
相分離混合物を生成する手順に供する前記工程は、放出された細胞内脂質を含む媒質を比重選別法に供して水相を含む重い層と前記脂質を含む軽い層から成る相分離混合物を生成することから成る、請求項１に記載のプロセス。
【請求項１８】
前記比重選別法は、放出された細胞内脂質を含む発酵培地を、積層ディスク型、セパレータ型、またはデカンター型遠心分離機に通過させることから成る、請求項１７に記載のプロセス。
【請求項１９】
前記比重選別法は遠心から成る、請求項１７に記載のプロセス。
【請求項２０】
（ａ）発酵培地中で微生物を生育する工程と、
（ｂ）細胞内脂質を放出させるために、前記微生物の細胞を、
（i）前記発酵培地中に存在する任意のタンパク質の少なくとも一部分を溶かすために同発酵培地を塩基と接触させることと、
（ii）前記発酵培地の温度を少なくとも約５０℃に上昇させて、前記微生物の細胞を溶解し、溶解した細胞混合物を生産することと、
により処理する工程と、
（ｃ）放出された細胞内脂質を、同脂質を得るために有機溶媒により抽出することなく有機溶媒の含量が約５％未満の媒質中で実施され、前記溶解した細胞混合物から異なる密度の物質を分離することから成る、水相を含む重い層と前記脂質を含む軽い層から成る相分離混合物を生成する手順に供する工程と、
（ｄ）前記軽い層から前記重い層を分離する工程と、
（ｅ）前記軽い層に水性洗浄溶液を加える工程と、
（ｆ）工程（ｅ）の前記混合物から異なる密度の物質を分離する工程と、
（ｇ）前記相分離混合物から前記重い層を除去する工程と、
（ｈ）前記脂質が実質的に乳化されていないようになるまで前記工程（ｅ）〜（ｇ）を繰り返す工程と、から成る請求項１に記載のプロセス。
【請求項２１】
（ａ）発酵培地中で微生物を生育する工程と、
（ｂ）細胞内脂質を放出させるために、前記発酵培地および前記微生物の細胞を処理する工程と、
（ｃ）放出された細胞内脂質を含む前記発酵培地を比重選別法に供して水相を含む重い層と前記脂質を含む軽い層から成る相分離混合物を生成する工程と、
（ｄ）前記重い層から前記軽い層を分離する工程と、
（ｅ）前記軽い層を処理して、前記脂質と水との間に形成されたエマルジョンを破壊することと、粗脂質を回収することとにより前記軽い層から脂質を得る工程と、から成る請求項１に記載のプロセス。
【請求項２２】
前記処理工程は、前記細胞を乾燥させずに実施して細胞内脂質を放出させる、請求項２１に記載のプロセス。
【請求項２３】
前記エマルジョンを破壊する処理は、エマルジョンを、水、アルコール、またはアセトンと混合し、かつ、該混合物を比重選別法に供することから成る、請求項２１に記載のプロセス。
【請求項２４】
精製された脂質を得るために、前記脂質をさらに精製または処理に供する、請求項１〜２３のいずれか一項に記載のプロセス。
【請求項２５】
前記脂質は脱色および脱臭される、請求項１〜２４のいずれか一項に記載のプロセス。
【請求項２６】
前記微生物は発酵プロセスから得られる、請求項１〜２５のいずれか一項に記載のプロセス。
【請求項２７】
前記微生物は約１２ｇ／Ｌ未満の塩化ナトリウムの塩分レベルで生育できる、請求項１〜２６のいずれか一項に記載のプロセス。
【請求項２８】
前記微生物が脂質に富んだ微生物である、請求項１〜２７のいずれか一項に記載のプロセス。
【請求項２９】
前記微生物は少なくとも約２０重量％の脂質を含む、請求項１〜２８のいずれか一項に記載のプロセス。
【請求項３０】
前記微生物は藻類、真菌類、細菌類および原生生物から成る群より選択される、請求項１〜２９のいずれか一項に記載のプロセス。
【請求項３１】
前記微生物は、黄金色藻、緑藻、渦鞭毛虫、酵母、モルティエラ（Mortierella ）属の真菌類、およびストラメノパイルから成る群より選択される微生物から成る、請求項１〜３０のいずれか一項に記載のプロセス。
【請求項３２】
前記微生物はヤブレツボカビ（Thraustochytriales）目の微生物から成る、請求項１〜３１のいずれか一項に記載のプロセス。
【請求項３３】
前記微生物は、ヤブレツボカビ（Thraustochytrium）属、シゾチトリウム（Schizochytrium）属およびそれらの混合物から選択される、請求項１〜３２のいずれか一項に記載のプロセス。
【請求項３４】
前記微生物は、ＡＴＣＣ番号２０８８８、ＡＴＣＣ番号２０８８９、ＡＴＣＣ番号２０８９０、ＡＴＣＣ番号２０８９１およびＡＴＣＣ番号２０８９２の識別特性を有する微生物、モルティエラ  シュムッケリ（Mortierella schmuckerii ）株、クリプテコディニウム  コニ（Crypthecodinium cohnii）株、上述の任意のものに由来する突然変異株、ならびにそれらの混合物から成る群から選択される、請求項１〜３３のいずれか一項に記載のプロセス。
【請求項３５】
前記微生物は、コレステロール、フィトステロール、デスモステロール、トコトリエノール、トコフェロール、ユビキノン、β−カロチン等のカロテノイドおよびキサントフィル、ルテイン、リコピン、アスタキサンチン、ゼアキサンチン、カンタキサンチン、および共役リノール酸のような脂肪酸、ならびにエイコサペンタエン酸、ドコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸、アラキドン酸、ステアリドン酸、ジホモガンマリノレン酸およびγ−リノレン酸のようなω−３およびω−６高度不飽和脂肪酸、またはそれらの混合物を少なくとも約０．１ｇ／Ｌ／ｈ生産することができる、請求項１〜３４のいずれか一項に記載のプロセス。
【請求項３６】
前記脂質の少なくとも約２０％は、コレステロール、フィトステロール、デスモステロール、トコトリエノール、トコフェロール、ユビキノン、β−カロチン等のカロテノイドおよびキサントフィル、ルテイン、リコピン、アスタキサンチン、ゼアキサンチン、カンタキサンチン、および共役リノール酸のような脂肪酸、ならびにエイコサペンタエン酸、ドコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸、アラキドン酸、ステアリドン酸、ジホモガンマリノレン酸およびγ−リノレン酸のようなω−３およびω−６高度不飽和脂肪酸、またはそれらの混合物である、請求項１〜３５のいずれか一項に記載のプロセス。
【請求項３７】
請求項１〜３６のいずれか一項に記載のプロセスによって作られた脂質。
【請求項３８】
０．２ｐｐｍ未満の残留無極性有機溶媒を含有し、微生物由来の、請
求項１〜３６のいずれか一項に記載のプロセスによって作られた脂質。
【請求項３９】
０．２ｐｐｍ未満の残留無極性有機溶媒を含有し、１５％を超えるコレステロール、フィトステロール、デスモステロール、トコトリエノール、トコフェロール、ユビキノン、β−カロチン等のカロテノイドおよびキサントフィル、ルテイン、リコピン、アスタキサンチン、ゼアキサンチン、カンタキサンチン、および共役リノール酸のような脂肪酸、ならびにエイコサペンタエン酸、ドコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸、アラキドン酸、ステアリドン酸、ジホモガンマリノレン酸およびγ−リノレン酸のようなω−３およびω−６高度不飽和脂肪酸、またはそれらの混合物を有する、請求項１〜３６のいずれか一項に記載のプロセスによって作られた脂質。
【請求項４０】
１５％を超えるドコサヘキサエン酸と０．２ｐｐｍ未満の無極性有機溶媒を含有する、請求項１〜３６のいずれか一項に記載のプロセスによって作られた脂質。