【手続補正書】
【提出日】平成17年1月25日(2005.1.25)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（１）免疫複合体に選択的に反応する抗体であって、
（２）該免疫複合体はトランスフェリンと免疫グロブリンから成る免疫複合体であり、
（３）該免疫複合体の体液中の量は、アルコール中毒患者に多く、非アルコール中毒患者に少ないことが有意な差異で測定されることを特徴とする抗体。
【請求項２】
前記抗体がモノクローナル抗体である請求項１記載の抗体。
【請求項３】
前記抗体がポリクローナル抗体である請求項１記載の抗体。
【請求項４】
前記免疫複合体を免疫原として動物に免疫することにより得られた請求項１乃至３の何れか１項記載の抗体。
【請求項５】
（１）トランスフェリンと免疫グロブリンから成る免疫複合体であって、該免疫複合体の体液中の量がアルコール中毒患者に多く、非アルコール中毒患者に少ないことが有意な差異で測定される免疫複合体を、動物に免疫することにより動物の体内に該免疫複合体に対して選択的に反応する抗体を産生させ、
（２）該動物から該抗体を採取することを特徴とする抗体の製造方法。
【請求項６】
前記抗体がモノクローナル抗体である請求項５記載の抗体の製造方法。
【請求項７】
前記抗体がポリクローナル抗体である請求項５記載の抗体の製造方法。
【請求項８】
請求項２記載のモノクローナル抗体を産生する能力を有するハイブリドーマ。
【請求項９】
体液に、請求項１乃至４の何れか１項記載の抗体を接触させ、該抗体に選択的に反応する免疫複合体を検出、又は定量化することを特徴とする免疫測定方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１５】
本発明の抗体産生方法は、（１）トランスフェリンと免疫グロブリンから成る免疫複合体であって、該免疫複合体の体液中の量がアルコール中毒患者に多く、非アルコール中毒患者に少ないことが有意な差異で測定される免疫複合体を、動物に免疫することにより動物の体内に該免疫複合体に対して選択的に反応する抗体を産生させ、（２）該動物から該抗体を採取することを特徴とする。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１７】
本発明の免疫測定方法は、前記した本発明の抗体を、体液に接触させ、該抗体に選択的に反応する免疫複合体を検出または、定量化することを特徴とする。即ち、前記した本発明の免疫測定方法に用いられる抗体には次の１）−４）の態様が挙げられる。
１）免疫複合体に選択的に反応する抗体であって、該免疫複合体はトランスフェリンと免疫グロブリンから成る免疫複合体であり、該免疫複合体の体液中の量は、アルコール中毒患者に多く、非アルコール中毒患者に少ないことが有意な差異で測定されることを特徴とする抗体。
２）前記１）の抗体がモノクローナル抗体である抗体；
３）前記１）の抗体がポリクローナル抗体である抗体；
４）トランスフェリンと免疫グロブリンから成る免疫複合体を免疫原として動物に免疫することにより得られた抗体。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１８】
前記免疫測定方法において、免疫複合体に対する抗体は、トランスフェリンと免疫グロブリンから成る免疫複合体のみに反応することから、該免疫複合体を高精度に測定することができる。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１９
【補正方法】削除
【補正の内容】
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２０
【補正方法】削除
【補正の内容】
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２３】
【発明の実施の形態】
本発明の免疫測定方法に適用可能な方法には、不均一系測定方法としては、放射性同位体元素標識免疫測定法、酵素標識免疫測定法、蛍光標識免疫測定法、免疫比濁法、ラテックススライド凝集法、ラテックス免疫比濁法、サンドイッチ法等が挙げられる。均一系としては蛍光消光法、蛍光増強法、エネルギートランスファー法、凝集法、比濁法等が挙げられる。本発明の免疫測定方法は如何なる反応形式で行われてもよく、均一系でも不均一系でも何れであってもよい。これらの免疫測定法は用手法あるいは自動化されてもよい。
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２９】
免疫測定方法
１）免疫原及び抗体の取得
アルコール性肝疾患患者及び／又はアルコール中毒者の体液から精製あるいは部分的に精製された少なくとも一種のイソ型トランスフェリンと免疫グロブリンから成る免疫複合体を免疫原として用い、動物に免疫して、該動物からトランスフェリンと免疫グロブリンから成る免疫複合体に選択的に反応する抗体を取得することができる。
【手続補正９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３６
【補正方法】削除
【補正の内容】
【手続補正１０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３７
【補正方法】削除
【補正の内容】
【手続補正１１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５３
【補正方法】削除
【補正の内容】
【手続補正１２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５４
【補正方法】削除
【補正の内容】
【手続補正１３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５５】
〔実施例８〕
ＣＴ８６１抗体のアルコール中毒マーカーとしての有用性
公知のアルコール中毒のマーカーとしてのγ−ＧＴＰ及び糖鎖欠損トランスフェリン（ＣＤＴ）の測定値と、ＣＴ８６１抗体を用いたサンドイッチＥＬＩＳＡの測定値を、アルコール中毒患者血清５５検体及び健常者血清１４検体を用いて次のようにして比較した。
【手続補正１４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６５】
上記６９検体を用いて各測定系についてＲＯＣ曲線を描いた。図６−１は、γ−ＧＴＰ測定系のＲＯＣ曲線を示す。図６−２は、％ＣＤＴの測定系のＲＯＣ曲線を示す。図６−３は、ＣＴ８６１抗体を用いたサンドイッチＥＬＩＳＡのＲＯＣ曲線を示す。γ−ＧＴＰでは図６−１の曲線下の面積が０．７９１、％ＣＤＴでは図６−２の曲線下の面積が０．９０１であるのに対し、ＣＴ８６１抗体を用いたサンドイッチＥＬＩＳＡでは図６−３の曲線下の面積が０．９９８となり、ＣＴ８６１抗体を用いたサンドイッチＥＬＩＳＡはアルコール中毒患者の診断に優れた測定系であることが分かる。
【手続補正１５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】図面の簡単な説明
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図面の簡単な説明】
【図１】
実施例１で示したサンドイッチＥＬＩＳＡ法により、血清中に存在するトランスフェリンと免疫グロブリンから成る免疫複合体の量を、健常者とアルコール性肝疾患患者の間で比較した結果を示す図である。
【図２】
血清中の全トランスフェリン分画をゲルろ過カラムにかけたときの溶出プロファイル（実線ＯＤ２８０ｎｍ）、及びトランスフェリンと免疫グロブリンから成る免疫複合体の溶出分画（破線ＯＤ４９０ｎｍ）を示す。
【図３】
実施例５で示したＥＬＩＳＡ法により、ＣＴ８６１がトランスフェリンと免疫グロブリンから成る免疫複合体に特異性が高いことを示す図である。
【図４】
実施例６で示した血清をゲルろ過カラムにかけたときの溶出プロファイル（実線ＯＤ２８０ｎｍ）及びＣＴ８６１の反応する分画（破線ＯＤ４９０ｎｍ）を示した図である。
【図５】
実施例７で示すＣＴ８６１を用いたサンドイッチＥＬＩＳＡ法が健常者と肝疾患患者を明確に区別する測定系であることを示した図である。
【図６】
図６は、γ−ＧＴＰ測定系（図６−１）、％ＣＤＴの測定系（図６−２）、ＣＴ８６１抗体を用いたサンドイッチＥＬＩＳＡ（図６−３）の各ＲＯＣ曲線を示す図であり、ＣＴ８６１を用いたサンドイッチＥＬＩＳＡがアルコール中毒患者の診断に優れた測定系であることを示す。
【手続補正１６】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図６】
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【手続補正１７】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図７
【補正方法】削除
【補正の内容】