【手続補正書】
【提出日】平成16年4月28日(2004.4.28)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】  （ａ）配列番号８に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする配列；
（ｂ）配列番号７に記載の配列；
（ｃ）ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で（ａ）又は（ｂ）にハイブリダイズするポリヌクレオチドの配列に相補的な配列；
（ｄ）配列番号７１及び／又は配列番号７２に記載のヌクレオチド配列を含むプライマーを用いるポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によって増幅可能なポリヌクレオチドの配列；
（ｅ）配列番号８の構成的に活性化された変異体をコードする配列であって、当該構成的に活性化された変異体は、配列番号８のＴＭ６ドメイン内の保存的なプロリン残基から１６アミノ酸残基の位置における変異を含む；
（ｆ）配列番号８のＴＭ６ドメイン内の保存的なプロリン残基をコードするコドンから１６アミノ酸残基Ｎ末端側のアミノ酸をコードするコドンに位置する変異を含む配列番号７の変異体；及び
（ｇ）内在性のＧタンパク質共役型受容体のアミノ酸配列をコードする配列であって、ヒトＤＮＡサンプルにおいて、配列番号７１及び／又は配列番号７２に記載のヌクレオチド配列を含むプライマーを用いてポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）を実施することによって取得可能な配列、
からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む、ヒトＧタンパク質共役型受容体ポリペプチドをコードする単離ポリヌクレオチド。
【請求項２】  （ａ）配列番号８に記載のアミノ酸配列をコードする配列；及び
（ｂ）配列番号７に記載のヌクレオチド配列、
からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む、ヒトＧタンパク質共役型受容体ポリペプチドをコードする単離ポリヌクレオチド。
【請求項３】  ヒト膵臓組織から得られる請求項１又は２に記載の単離ポリヌクレオチド。
【請求項４】  当該ヌクレオチド配列は、内在的にヒト膵臓によって選択的に発現される請求項１〜３のいずれか一項に記載の単離ポリヌクレオチド。
【請求項５】  発現は、ＲＴ−ＰＣＲを実施することを含むプロセスを用いて決定される請求項４記載の単離ポリヌクレオチド。
【請求項６】  当該ポリヌクレオチドは、請求項１〜５のいずれか一項に記載の単離ポリヌクレオチドのヌクレオチド配列を含む、ＧＰＣＲ融合タンパク質をコードする単離ポリヌクレオチド。
【請求項７】  Ｇタンパク質をコードする核酸を含む請求項６記載の単離ポリヌクレオチド。
【請求項８】  請求項１記載の単離ポリヌクレオチドに相補的な単離ポリヌクレオチド。
【請求項９】  請求項１〜７のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドを含むベクター。
【請求項１０】  当該ベクターは発現ベクターであり、請求項１〜７のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドは作動可能であるようにプロモーターに結合している請求項９記載のベクター。
【請求項１１】  請求項９記載のベクターを含む組換え宿主細胞。
【請求項１２】  請求項１０記載のベクターを含む組換え宿主細胞。
【請求項１３】  請求項１１記載の組換え宿主細胞の単離膜であって、請求項１〜７のいずれか一項に記載の単離ポリヌクレオチドによってコードされるＧタンパク質共役型受容体を含む膜。
【請求項１４】  （ａ）請求項１０記載の発現ベクターを宿主細胞にトランスフェクトし、それによってトランスフェクトされた宿主細胞を生産し；及び
（ｂ）トランスフェクトされた宿主細胞を、ヒトＧタンパク質共役型受容体又はＧＰＣＲ融合タンパク質を発現ベクターから発現するのに十分な条件下で培養する、
ステップを含む、ヒトＧタンパク質共役型受容体又はＧＰＣＲ融合タンパク質を生産する方法。
【請求項１５】  トランスフェクトされた宿主細胞を取得することを更に含む請求項１４記載の方法。
【請求項１６】  宿主細胞は哺乳動物細胞である請求項１４又は１５記載の方法。
【請求項１７】  哺乳動物細胞は、ＣＯＳ−７細胞、２９３細胞、及び２９３Ｔ細胞からなる群から選択される請求項１６記載の方法。
【請求項１８】  宿主細胞は膵臓の細胞である請求項１４〜１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】  （ａ）配列番号８に記載のアミノ酸配列を含む配列；
（ｂ）ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で配列番号７にハイブリダイズするポリヌクレオチドに相補的な配列にコードされる配列；
（ｃ）配列番号７１及び／又は配列番号７２に記載のヌクレオチド配列を含むプライマーを用いるポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によって増幅可能なポリヌクレオチドにコードされる配列；
（ｄ）配列番号８の構成的に活性化される変異体の配列であって、当該構成的に活性化される変異体は、配列番号８のＴＭ６ドメイン内の保存的なプロリン残基から１６アミノ酸残基Ｎ末端側に位置する変異を含む配列；及び
（ｅ）内在性のＧタンパク質共役型受容体をコードする核酸配列にコードされる配列であって、当該核酸配列は、ヒトＤＮＡサンプルにおいて、配列番号７１及び／又は配列番号７２に記載のヌクレオチド配列を含むプライマーを用いてポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）を実施することによって取得可能である、
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、単離又は組換えヒトＧタンパク質共役型受容体ポリペプチド。
【請求項２０】  配列番号８に記載のアミノ酸配列を含む単離又は組換えヒトＧタンパク質共役型受容体ポリペプチド。
【請求項２１】  請求項１９又は２０に記載の単離又は組換えヒトＧタンパク質共役型受容体ポリペプチドのアミノ酸配列を含む単離又は組換えＧＰＣＲ融合タンパク質。
【請求項２２】  Ｇタンパク質を含む請求項２１記載の単離又は組換えＧＰＣＲ融合タンパク質。
【請求項２３】  （ａ）候補化合物を、請求項１９又は２０に記載のヒトＧタンパク質共役型受容体ポリペプチドを発現する組換え宿主細胞あるいは当該ヒトＧタンパク質共役型受容体ポリペプチドを含む単離膜に接触させ；及び
（ｂ）化合物がＧタンパク質共役型受容体ポリペプチドの機能性を阻害又は促進する能力を測定し、当該機能性の阻害又は促進は、候補化合物がＧタンパク質共役型受容体ポリペプチドのアゴニスト、部分的アゴニスト又は反作用薬であることを示す、
ステップを含むＧタンパク質共役型受容体のアゴニスト、部分的アゴニスト又は反作用薬としての１又はそれ以上の候補化合物を同定する方法。
【請求項２４】  宿主細胞又は膜を提供することを更に含む請求項２３記載の方法。
【請求項２５】  宿主細胞は請求項１０記載の発現ベクターを含む請求項２３又は２４記載の方法。
【請求項２６】  ヒトＧタンパク質共役型受容体ポリペプチドは、配列番号８に記載のアミノ酸配列を含む請求項２３〜２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２７】  （ａ）候補化合物を、請求項２１又は２２に記載のＧＰＣＲ融合タンパク質を発現する組換え宿主細胞あるいは当該ＧＰＣＲ融合タンパク質を含む単離膜に接触させ；及び
（ｂ）化合物が当該ＧＰＣＲ融合タンパク質のＧタンパク質共役型受容体ポリペプチド部分の機能性を阻害又は促進する能力を測定し、当該機能性の阻害又は促進は、候補化合物がＧタンパク質共役型受容体ポリペプチドのアゴニスト、部分的アゴニスト又は反作用薬であることを示す、
ステップを含むＧタンパク質共役型受容体のアゴニスト、部分的アゴニスト又は反作用薬としての１又はそれ以上の候補化合物を同定する方法。
【請求項２８】  宿主細胞又は膜を提供することを更に含む請求項２７記載の方法。
【請求項２９】  宿主細胞は請求項１０記載の発現ベクターを含む請求項２７又は２８記載の方法。
【請求項３０】  ＧＰＣＲ融合タンパク質は、配列番号８に記載のアミノ酸配列及びＧタンパク質のアミノ酸配列を含む請求項２７〜２９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３１】  （ａ）配列番号８に記載のアミノ酸配列及びＧタンパク質を含むＧＰＣＲ融合タンパク質を発現する組換え宿主細胞又は当該ＧＰＣＲ融合タンパク質を含む単離膜を提供し；
（ｂ）候補化合物を組換え宿主細胞又は単離膜に接触させ；及び
（ｃ）化合物が当該ＧＰＣＲ融合タンパク質のＧタンパク質共役型受容体ポリペプチド部分の機能性を阻害又は促進する能力を測定し、当該機能性の阻害又は促進は、候補化合物がＧタンパク質共役型受容体ポリペプチドのアゴニスト、部分的アゴニスト又は反作用薬であることを示す、
ステップを含むＧタンパク質共役型受容体のアゴニスト、部分的アゴニスト又は反作用薬としての１又はそれ以上の候補化合物を同定する方法。
【請求項３２】  請求項２３〜３１のいずれか一項に記載の方法を実施することを含む、膵臓中のＧタンパク質共役型受容体によって媒介されるシグナル伝達を変化させる化合物を同定するためのプロセス。