【手続補正書】
【提出日】平成15年9月4日(2003.9.4)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
誘導された立体配座の重合相互作用によって、凝集性疾患タンパク質（ＡＤＰ）が、病理学的に凝集する病態に伴う凝集性疾患タンパク質（ＡＤＰ）の病理学的状態を誘導するか、またはモデル化する方法であって、（ｉ）ＡＤＰに由来するか、またはＡＤＰの病理学的凝集を開始するタンパク質に由来する凝集部分と、（ｉｉ）異種性膜局在部分とを含む膜局在可能な融合タンパク質を提供する工程を特徴とする方法。
【請求項２】
融合タンパク質の凝集部分が、ＡＤＰに由来し、融合タンパク質の膜局在が、ＡＤＰタンパク質の高親和性捕捉部位を別のＡＤＰの凝集を促進するように暴露させるようにし、そして病態におけるＡＤＰの病理学的凝集が、コアドメインフラグメントへのＡＤＰのタンパク質分解性プロセシングをもたらす、請求項１記載の方法。
【請求項３】
（ａ）融合タンパク質を提供することと；
（ｂ）それを膜に導入することと；
の工程を含む、請求項１または請求項２記載の方法。
【請求項４】
病態におけるＡＤＰの凝集が、神経変性および／または臨床的痴呆に伴う、請求項１〜請求項３のいずれか一項記載の方法。
【請求項５】
凝集部分が、少なくともＡＤＰのコアフラグメントを含むか、または本質的に少なくともＡＤＰのコアフラグメントからなる、請求項４記載の方法。
【請求項６】
膜局在部分が、膜アンカー配列および／または輸送停止配列を含む、請求項１〜請求項５のいずれか一項記載の方法。
【請求項７】
疾患が、ピック病、進行性核上性麻痺、アルツハイマー病から選択される、請求項１〜請求項６のいずれか一項記載の方法。
【請求項８】
ＡＤＰが、タウタンパク質である、請求項１〜請求項７のいずれか一項記載の方法。
【請求項９】
融合タンパク質の凝集部分がタウのコアフラグメントを含み、タウのフラグメントが図５に示す全長のタウタンパク質アミノ酸１８６〜２９６から３９０〜４４１にわたる、請求項８記載の方法。
【請求項１０】
融合タンパク質の凝集部分が、全長タンパク質のアミノ酸残基２９６〜３９０、１９０〜４４１または１９０〜３９０からなる、請求項９記載の方法。
【請求項１１】
（ａ）膜局在形態の融合タンパク質を提供することと；
（ｂ）融合タンパク質を一以上の可能性のある結合パートナーと接触させることと（ここで、該接触工程は、細胞内であり、結合パートナーは、細胞内に存在する）；
（ｃ）可能性のある結合パートナーが、融合タンパク質に結合するかどうかを決定することと；
の工程を含む、ＡＤＰ高親和性捕捉部位の特異的結合パートナーに関してスクリーニングするための、請求項２〜請求項１０のいずれか一項記載の方法。
【請求項１２】
（ａ）膜局在形態の融合タンパク質を提供することと；
（ｂ）融合タンパク質およびＡＤＰまたはその誘導体である別のＡＤＰ分子間の立体配座の重合相互作用の誘導を引き起こすか、または可能にすることと；
（ｃ）場合によっては別のＡＤＰ分子の凝集の程度をモニターリングすることと；
の工程を含むＡＤＰ分子の凝集を誘導するための、請求項１〜請求項１０のいずれか一項記載の方法。
【請求項１３】
膜が、細胞膜であり、そして凝集が、細胞内で生じる、請求項１２記載の方法。
【請求項１４】
工程（ａ）が、
細胞内に融合タンパク質を導入して、それが細胞内の膜で局在するようにすること、または
融合タンパク質をコードする核酸を細胞またはその祖先内に導入して、融合タンパク質を細胞において発現させ、そして細胞内の膜で膜局在化するようにすること、
のいずれかからなる、請求項１３記載の方法。
【請求項１５】
別のＡＤＰ分子が、細胞に生来のものである、全長の可溶性ＡＤＰである、請求項１４記載の方法。
【請求項１６】
別のＡＤＰ分子をコードする核酸を、細胞またはその祖先内に導入し、別のＡＤＰ分子が細胞において発現される工程を含み、別のＡＤＰ分子が、細胞に対して異種性である、請求項１３または請求項１４記載の方法。
【請求項１７】
融合タンパク質が、構成プロモーターの転写制御下で発現され、そして別のＡＤＰ分子が、適当な誘導物質の存在下、誘導プロモーターの転写制御下で発現される、請求項１６記載の方法。
【請求項１８】
別のＡＤＰ分子が、（ｉ）ＡＤＰのフラグメント、（ｉｉ）ＡＤＰの突然変異体、または（ｉｉｉ）全長の可溶性ＡＤＰであるＡＤＰの誘導体である、請求項１６または請求項１７記載の方法。
【請求項１９】
別のＡＤＰ分子が、病態に伴うことが解っているか、または推測されるものに対応するＡＤＰに変異を組み込む、請求項１６または請求項１８記載の方法。
【請求項２０】
以下の種類：（ｉ）非凝集融合タンパク質および／または別のＡＤＰ分子；（ｉｉ）融合タンパク質および／または別のＡＤＰ分子の凝集物；（ｉｉｉ）その凝集の結果である融合タンパク質および／または別のＡＤＰ分子のタンパク質分解性フラグメント；のいずれか一つまたはそれ以上の濃度またはレベルをモニターリングすることにより凝集をモニターリングする、請求項１２〜請求項１９のいずれか一項記載の方法。
【請求項２１】
ＡＤＰが、タウであり、そしてタウのおよそ１８または２５ｋＤａのフラグメントのレベルの増加に基づいて凝集をモニターリングする、請求項２０記載の方法。
【請求項２２】
モニターリングの工程が、（ｉ）融合タンパク質；（ｉｉ）別のＡＤＰ分子；（ｉｉｉ）その凝集の結果である融合タンパク質および／または別のＡＤＰ分子のタンパク質分解性フラグメントのいずれかに特異的な抗体の使用を含む、請求項２０または請求項２１記載の方法。
【請求項２３】
融合タンパク質が、別のＡＤＰタンパク質と免疫学的に区別され、そしてＡＤＰが、タウであり、そして（ｉ）タウのＧｌｙ−１６およびＧｌｎ−２６の間の領域に位置するヒト特異的エピトープに特異的であるか、（ｉｉ）Ｇｌｕ−３９１でトランケートされたコアタウフラグメントに特異的であるか、（ｉｉｉ）反復ドメインにおける一般的なタウエピトープに特異的であるか、または（ｉｖ）Ｓｅｒ−２０８およびＳｅｒ−２３８の間に位置する種類特異的でない一般的なタウエピトープに特異的であるモノクローナル抗体から抗体が選択される、請求項２２記載の方法。
【請求項２４】
（ａ）凝集を変調できることが予測される作用物質の存在下で、請求項１２〜請求項２３のいずれか一項記載の方法を実施すること；
（ｂ）凝集の程度をモニターリングすること；および場合によっては、
（ｃ）凝集の程度を作用物質の変調活性と相関させること；および場合によっては、
（ｄ）作用物質の存在下で得られた結果を作用物質の不在下で得られた結果と比較すること；
を含む、立体配座の重合相互作用の誘導によって凝集性疾患タンパク質（ＡＤＰ）が病理学的に凝集する病態に伴う凝集性疾患タンパク質（ＡＤＰ）の凝集モジュレーターを同定する方法。
【請求項２５】
細胞内で実施される、請求項２４記載の方法。
【請求項２６】
細胞が、ニューロン細胞系または繊維芽細胞系に由来する、請求項２５記載の方法。
【請求項２７】
細胞が、トランスジェニック動物内に含まれ、そして作用物質を動物に投与する、請求項２５記載の方法。
【請求項２８】
（ｉ）立体配座の重合相互作用の誘導によって、凝集性疾患タンパク質（ＡＤＰ）が、病理学的に凝集する病態に伴う凝集性疾患タンパク質（ＡＤＰ）に由来する凝集部分と；（ｉｉ）異種性膜局在部分とを有する膜局在融合タンパク質をコードするキメラヌクレオチド配列を含む、単離された核酸分子。
【請求項２９】
キメラヌクレオチド配列が、外来性３′非翻訳領域配列を含み、そして
膜局在タンパク質が、シグナル配列および、場合によっては膜アンカードメインまたは輸送停止配列をコードする配列を含む、請求項２８記載の核酸。
【請求項３０】
凝集部分ヌクレオチド配列が、タウ、またはタウのコアフラグメントをコードする、請求項２８または請求項２９記載の核酸。
【請求項３１】
凝集部分ヌクレオチド配列が、全長タンパク質のアミノ酸１８６〜２９６から３９０〜４４１の間から伸びるタウのトランケートされたフラグメントをコードする、請求項３０記載の核酸。
【請求項３２】
凝集部分ヌクレオチド配列が、アミノ酸２９６〜３９０、１９０〜４４１または１９０〜３９０をコードする、請求項３１記載の核酸。
【請求項３３】
凝集部分をコードする核酸を異種性膜局在部分をコードする核酸にライゲートする工程を含み、
そして異種性膜局在部分をコードする核酸が、凝集部分をコードする核酸が挿入される組換えベクターの一部である、請求項２８〜請求項３２のいずれか一項記載の核酸を製造する方法。
【請求項３４】
核酸が、場合よっては宿主細胞の転写に関するプロモーターに作動可能に連結されており、ここでプロモーターが場合によっては誘導プロモーターである、請求項２８〜請求項３２のいずれか一項記載の核酸を含む組換えベクター。
【請求項３５】
プロモーターが、組織特異的プロモーター、プリオン特異的プロモーター、または神経特異的エノラーゼプロモーターから選択される、請求項３４記載のベクター。
【請求項３６】
請求項３４または請求項３５記載のベクターを宿主細胞内に導入する工程を含む方法。
【請求項３７】
請求項３４または請求項３５記載の異種性ベクターを含有するか、またはこれで形質転換された宿主細胞。
【請求項３８】
動物の受精卵に請求項３４または請求項３５のいずれか一項記載のベクターを導入する工程を含む、凝集性疾患タンパク質（ＡＤＰ）が、病理学的に凝集する病態に関して増強された、または加速された病理を伴うヒト以外のトランスジェニック動物モデルを調製する方法。
【請求項３９】
（ｉ）立体配座の重合相互作用の誘導によって凝集性疾患タンパク質（ＡＤＰ）が、病理学的に凝集する病態に伴う凝集性疾患タンパク質（ＡＤＰ）に由来する凝集部分と（ｉｉ）異種性膜局在部分とを含む膜局在可能な融合タンパク質をコードするヌクレオチド配列に作動可能に連結されたプロモーターをその複数の細胞の内部に含む、ヒト以外のトランスジェニック動物。
【請求項４０】
膜局在可能な融合タンパク質をコードするヌクレオチド配列に作動可能に連結されたプロモーターを含む、請求項３９の動物の細胞または組織サンプル。
【請求項４１】
動物が、げっ歯類である、請求項３８〜請求項４０のいずれか一項記載の方法、動物またはサンプル。
【請求項４２】
請求項２８〜請求項３２のいずれか一項記載のキメラヌクレオチド配列によりコードされる単離された融合タンパク質。
【請求項４３】
適当な宿主細胞において、請求項２８〜請求項３２のいずれか一項の核酸からの発現を引き起こすか、または可能にする工程を含む、請求項４２のタンパク質を作製する方法。
【請求項４４】
膜局在可能な融合タンパク質をコードするヌクレオチド配列の発現を引き起こすか、または可能にすることを含む、凝集性疾患タンパク質（ＡＤＰ）が病理学的に凝集する病態を請求項３９のヒト以外のトランスジェニック動物に誘導する方法。
【請求項４５】
凝集を変調できると推測される作用物質の存在下で請求項４４記載の方法を実施することを含む、凝集性疾患タンパク質（ＡＤＰ）が、病理学的に凝集する病態において治療、予後または診断用物質として使用するための作用物質をスクリーニングする方法。
【請求項４６】
作用物質が、血液脳関門を通過することができる、請求項２７または請求項４５記載の方法。
【請求項４７】
以下のいずれか：
（ｉ）ＡＤＰのタンパク質分解性プロセシングの程度；
（ｉｉ）作用物質が形成されるＡＤＰ凝集の量を低下させる能力；
（ｉｉｉ）作用物質が既に形成されているＡＤＰ凝集のレベルを排除または低減させる能力；
を動物の脳内で測定する、請求項２７、４５または４６記載の方法。
【請求項４８】
（ｉ）請求項２４〜請求項２７または請求項４５〜請求項４７のいずれか一項記載の方法を実施して作用物質を同定すること；
（ｉｉ）単離された形態の作用物質を提供すること；
（ｉｉｉ）場合によっては病態の処置において使用するための組成物として作用物質を処方すること；
を含む、ＡＤＰが病理学的に凝集する病態において治療、予後または診断用物質として使用するための作用物質を製造する方法。
【請求項４９】
（ｉ）請求項４８記載の方法により作用物質を生成することと；
（ｉｉ）治療上有効量の該作用物質を同一物を必要とする患者に投与することと；
を含む、ＡＤＰが、病理学的に凝集する病態を処置または予防する方法。
【請求項５０】
ＡＤＰがタウであり、そして病態が、アルツハイマー病に相当する、請求項１２〜請求項２０、請求項２４〜請求項２７、請求項４４〜請求項４９のいずれか一項記載の方法または動物。