【手続補正書】
【提出日】平成17年3月2日(2005.3.2)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
注入される細菌エフェクタータンパク質と、該エフェクタータンパク質を標的細胞にターゲティングするキャリアとの結合体であって、
該キャリアが、該エフェクターを標的細胞にターゲティングし、そしてレセプター媒介エンドサイトーシスを受ける第１のドメイン、および該エフェクターをエンドソーム膜を横切って該細胞のサイトゾル内にトランスロケートする第２のドメインを含む、結合体。
【請求項２】
リンカーによって前記キャリアに連結された前記エフェクタータンパク質を含む、請求項１に記載の結合体。
【請求項３】
前記リンカーが、切断可能であり、そのため、該リンカーが前記標的細胞内に侵入した後に切断され、前記エフェクターを前記キャリアから遊離し得る、請求項２に記載の結合体。
【請求項４】
前記キャリアが、上皮細胞、神経細胞、分泌細胞、免疫細胞、内分泌細胞、炎症細胞、外分泌細胞、骨細胞、および心臓血管系の細胞から選択される細胞にエフェクターをターゲティングする、請求項１から３のいずれかの項に記載の結合体。
【請求項５】
単一のポリペプチドである、請求項１から４のいずれかの項に記載の結合体。
【請求項６】
前記注入される細菌エフェクタータンパク質が、ＧＴＰアーゼの活性化、ＧＴＰアーゼの不活性化、結合したＧＤＰのＧＴＰによる置換の増強、ＧＴＰアーゼの共有結合改変の惹起、プロテインキナーゼ活性、プロテインホスファターゼ活性、イノシトールホスファターゼ活性、マイトジェン活性化プロテインキナーゼキナーゼの阻害、遺伝子発現の調節、転写因子、および細胞輸送の調節から選択される活性を有する、請求項１から５のいずれかの項に記載の結合体。
【請求項７】
請求項１から６のいずれかの項に記載の結合体を含む、薬学的組成物。
【請求項８】
細胞の生存を促進すること、細胞に対する損傷を防止すること、細胞に対する損傷を復帰させること、細胞の増殖を促進すること、アポトーシスを阻害すること、細胞からの炎症メディエーターの放出を阻害すること、細胞の分割を促進すること、および細胞内感染を治療することから選択される治療のための、請求項１から６のいずれかの項に記載の結合体を含む、薬学的組成物。
【請求項９】
細胞内感染を治療するための、請求項７または８に記載の薬学的組成物。
【請求項１０】
細胞の生存を阻害すること、細胞の増殖を阻害すること、細胞の分割を阻害すること、アポトーシスを促進すること、細胞を殺傷すること、細胞からの炎症メディエーターの放出を促進すること、細胞からの窒素酸化物放出を調節すること、細胞からの分泌を阻害すること、細胞内輸送を妨害すること、および細胞表面マーカーの発現を調節することから選択される治療のための、請求項７から９のいずれかの項に記載の薬学的組成物。
【請求項１１】
細胞内輸送を妨害するための、請求項１０に記載の薬学的組成物。
【請求項１２】
細胞表面マーカーの発現を調節するための、請求項１０に記載の薬学的組成物。
【請求項１３】
細胞からの分泌を阻害するための、請求項１０に記載の薬学的組成物。
【請求項１４】
神経細胞の治療のための、請求項７から１３のいずれかの項に記載の薬学的組成物。
【請求項１５】
神経細胞の生存を促進するための、請求項１４に記載の薬学的組成物。
【請求項１６】
請求項１から６のいずれかの項に記載の結合体をコードする、ＤＮＡ構築物。
【請求項１７】
請求項１６に記載のＤＮＡ構築物を含む、薬学的組成物。
【請求項１８】
請求項１６に記載のＤＮＡ構築物を含有するベクターを含む、薬学的組成物。
【請求項１９】
注入される細菌エフェクタータンパク質を細胞に送達するための薬学的組成物であって、
該エフェクタータンパク質を含み；
該エフェクタータンパク質は切断可能なリンカーによって細胞ターゲティング成分に連結され、
該細胞ターゲティング成分が、細胞に結合し、そしてレセプター媒介エンドサイトーシスを受ける第１のドメイン、および該組成物の該エフェクタータンパク質をエンドソーム膜を横切って該細胞のサイトゾル内にトランスロケートする第２のドメインを含む、組成物。
【請求項２０】
前記第１のドメインが、（ａ）クロストリジウム菌毒素の神経細胞結合ドメイン；ならびに（ｂ）該（ａ）のドメインの神経細胞結合活性を実質的に保持する（ａ）のドメインのフラグメント、改変体、および誘導体から選択される、請求項１９に記載の組成物。
【請求項２１】
前記第２のドメインが、（ａ）ポリペプチド配列を細胞にトランスロケートするクロストリジウム菌神経毒素のドメイン、ならびに（ｂ）該（ａ）のドメインのトランスロケーティング活性を実質的に保持する（ａ）のドメインのフラグメント、改変体、および誘導体から選択される、請求項１９または２０に記載の組成物。
【請求項２２】
前記第２のドメインが、
（ａ）クロストリジウム菌毒素のＨＮドメインではなく、そしてクロストリジウム菌毒素のＨＮドメインのフラグメントまたは誘導体ではない、トランスロケーションドメイン；
（ｂ）生理学的緩衝液中でサイズによって測定される場合の非凝集トランスロケーションドメイン；
（ｃ）ジフテリア毒素のＨＮドメイン；
（ｄ）ジフテリア毒素のＨＮドメインのトランスロケーティング活性を実質的に保持する（ｃ）のフラグメントまたは誘導体；
（ｅ）融合性ペプチド；
（ｆ）膜破壊ペプチド；および
（ｇ）（ｅ）および（ｆ）のトランスロケーティングフラグメントおよび誘導体
から選択される、請求項１９または２０に記載の組成物。
【請求項２３】
前記リンカーが、神経細胞中で切断されて、前記ターゲティング成分から前記エフェクタータンパク質を遊離させる、請求項１９から２２のいずれかの項に記載の組成物。
【請求項２４】
前記リンカーが、ジスルフィド結合または前記標的細胞中で見出されるプロテアーゼ部位である、請求項２３に記載の組成物。
【請求項２５】
請求項１から６のいずれかに記載の結合体を調製する方法であって、
該方法が、前記エフェクタータンパク質を前記キャリアと結合する工程を含む、方法。
【請求項２６】
前記エフェクタータンパク質を前記キャリアと化学的に連結する工程を含む、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記エフェクタータンパク質に相当する第１の領域および前記キャリアをコードする第２の領域を有するポリペプチドをコードするＤＮＡを発現させる工程を含む、請求項２５に記載の方法。
【請求項２８】
前記ポリペプチドが、前記第１および第２の領域の間に第３の領域を含み、該第３の領域が前記標的細胞に存在するタンパク質分解酵素によって切断される、請求項２５から２７のいずれかの項に記載の方法。
【請求項２９】
前記第１および第２の領域の間で前記ポリペプチドを連結する工程、および該第１および該第２の領域をジスルフィド結合によって連結する工程を含む、請求項２５から２７のいずれかの項に記載の方法。
【請求項３０】
医薬品の製造における、注入される細菌エフェクタータンパク質と該エフェクタータンパク質を標的細胞にターゲティングするキャリアとの結合体の使用であって、該キャリアが、該エフェクタータンパク質を標的細胞にターゲティングし、そしてレセプター媒介エンドサイトーシスを受ける第１のドメイン、およびエンドソーム膜を横切って該細胞サイトゾル内に該エフェクターをトランスロケートする第２のドメインを含む、使用。
【請求項３１】
医薬品の製造における、請求項１から６のいずれかの項に記載の結合体をコードする、ＤＮＡ構築物の使用。
【請求項３２】
神経細胞の治療のための医薬品の製造における、請求項３０または３１に記載の使用。
【請求項３３】
細胞内感染を治療するための医薬品の製造における、請求項３０または３１に記載の使用。
【請求項３４】
細胞内輸送を妨害するための医薬品の製造における、請求項３０または３１に記載の使用。
【請求項３５】
細胞表面マーカーの発現を調節するための医薬品の製造における、請求項３０または３１に記載の使用。
【請求項３６】
細胞からの分泌を阻害するための医薬品の製造における、請求項３０または３１に記載の使用。
【請求項３７】
神経細胞の治療のための医薬品の製造における、注入される細菌エフェクタータンパク質の使用。
【請求項３８】
細胞内感染を治療するための医薬品の製造における、注入される細菌エフェクタータンパク質の使用。
【請求項３９】
細胞内輸送を妨害するための医薬品の製造における、注入される細菌エフェクタータンパク質の使用。
【請求項４０】
細胞表面マーカーの発現を調節するための医薬品の製造における、注入される細菌エフェクタータンパク質の使用。
【請求項４１】
細胞からの分泌を阻害するための医薬品の製造における、注入される細菌エフェクタータンパク質の使用。
【請求項４２】
神経細胞の治療のための医薬品の製造における、注入される細菌エフェクタータンパク質をコードするＤＮＡ構築物の使用。
【請求項４３】
細胞内感染を治療するための医薬品の製造における、注入される細菌エフェクタータンパク質をコードするＤＮＡ構築物の使用。
【請求項４４】
細胞内輸送を妨害するための医薬品の製造における、注入される細菌エフェクタータンパク質をコードするＤＮＡ構築物の使用。
【請求項４５】
細胞表面マーカーの発現を調節するための医薬品の製造における、注入される細菌エフェクタータンパク質をコードするＤＮＡ構築物の使用。
【請求項４６】
細胞からの分泌を阻害するための医薬品の製造における、注入される細菌エフェクタータンパク質をコードするＤＮＡ構築物の使用。
【請求項４７】
請求項１７から２４のいずれかの項に記載の組成物を含む、注入される細菌エフェクタータンパク質を神経細胞に送達するための投与用組成物。
【請求項４８】
前記投与が注射である、請求項４７に記載の組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００１】
本発明は、分泌され、注入される細菌エフェクタータンパク質の薬学的使用に関する。特に、本発明は、このようなタンパク質ならびに該タンパク質とキャリアとの組み合わせおよび結合体の製造および使用に関する。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１５】
したがって、本発明の第１の局面は、タイプIIIまたはタイプIV分泌経路によって分泌される細菌の注入されるエフェクターを含む薬学的組成物である。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１０６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１０６】
「タイプIIIまたはタイプIV分泌系によって分泌された、注入されるエフェクター」とは、タイプIIIまたはタイプIV分泌系としばしば言われる改変された線毛または「針様」注入システムにより宿主細胞（哺乳動物、植物、昆虫、魚、またはその他）に注入される細菌タンパク質を意味し、そしてこの用語は、必須のエフェクター活性を保持するフラグメント、改変体、および誘導体を包含する。