(57)【要約】【課題】低投与量で治療効果の高い核酸系代謝拮抗剤の誘導体が望まれている。【解決手段】ポリエチレングリコール類部分及び側鎖にカルボキシル基を有するポリマー部分からなる高分子化合物の側鎖のカルボキシル基に疎水性の高いリンカーを介して核酸系代謝拮抗剤であるヌクレオシド誘導体が結合していることを特徴とする核酸系代謝拮抗剤の高分子誘導体を提供する。【選択図】図１
2008056654.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ポリエチレングリコール類部分及び側鎖にカルボキシル基を有するポリマー部分からなる高分子化合物の側鎖のカルボキシル基に疎水性のリンカーを介して核酸系代謝拮抗剤が結合していることを特徴とする核酸系代謝拮抗剤の高分子誘導体。
【請求項２】
側鎖にカルボキシル基を有するポリマー部分がポリアスパラギン酸またはポリグルタミン酸誘導体である請求項１に記載の核酸系代謝拮抗剤の高分子誘導体。
【請求項３】
側鎖にカルボキシル基を有するポリマー部分がポリグルタミン酸誘導体である核酸系代謝拮抗剤の高分子誘導体が、下記一般式（１）：
【化９】
2008056654.tif 000015
［式中、Ｒは水素原子又はＣ１〜Ｃ６アルキル基を示し、Ａは水素原子、Ｃ１〜Ｃ６アシル基又はＣ１〜Ｃ６アルコキシカルボニル基を示し、ａ＋ｂは平均値で３〜２００を示し、ａはａ＋ｂのうち７５〜１００％、ｂはａ＋ｂのうち０〜２５％を示し、ｎは平均値で５〜２０００を示し、Ｘは疎水性アミノ酸残基または疎水性アミノ酸誘導体残基を示し、Ｙは核酸系代謝拮抗剤残基、水酸基、及び−Ｎ（Ｒ１）ＣＯＮＨ（Ｒ２）（Ｒ１、Ｒ２は同一でも異なっていてもよく３級アミノ基で置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６アルキル基）からなる群から２種以上選ばれる基（核酸系代謝拮抗剤残基数はａ＋ｂを１００％とすると５〜８０％であり、−Ｎ（Ｒ１）ＣＯＮＨ（Ｒ２）の数は０〜７０％であり、水酸基数は０〜７０％である）を示し、ポリグルタミン酸の構成単位の結合順は任意である。］で表される化合物である請求項１又は２に記載の核酸系代謝拮抗剤の高分子誘導体。
【請求項４】
ＲがＣ１〜Ｃ４アルキル基であり、ＡがＣ２〜Ｃ４アシル基であり、ａ＋ｂが平均値で５〜１００であり、ａがａ＋ｂのうち８０〜１００％であり、ｂがａ＋ｂのうち０〜２０％であり、ｎが平均値で５０〜１０００であり、核酸系代謝拮抗剤残基が一般式（２）：
【化１０】
2008056654.tif 000016
［式中、−Ｒｆは、式（３）：
【化１１】
2008056654.tif 000017
の置換基群より選ばれる基を示す］
で表されるいずれかの核酸系代謝拮抗剤の残基である請求項３に記載の核酸系代謝拮抗剤の高分子誘導体。
【請求項５】
Ｒがメチル基、Ａがアセチル基であり、ａ＋ｂが平均値で１０〜６０であり、ｎが平均値で１００〜３００であり、核酸系代謝拮抗剤残基がゲムシタビン又はドキシフルリジン残基である請求項４に記載の核酸系代謝拮抗剤の高分子誘導体。
【請求項６】
側鎖にカルボキシル基を有するポリマー部分がポリアスパラギン酸誘導体である核酸系代謝拮抗剤の高分子誘導体が、下記一般式（４）：
【化１２】
2008056654.tif 000018
［式中、Ｒ、Ａ、ｎ、Ｘは一般式（１）に同じであり、ｃ＋ｄ＋ｅ＋ｆ＋ｇは平均値で３〜２００を示し、ｃ＋ｄはｃ＋ｄ＋ｅ＋ｆ＋ｇのうち８５〜１００％、ｅ＋ｆ＋ｇはｃ＋ｄ＋ｅ＋ｆ＋ｇのうち０〜１５％を示し、Ｙは核酸系代謝拮抗剤残基、水酸基、及び−Ｎ（Ｒ１）ＣＯＮＨ（Ｒ２）（Ｒ１、Ｒ２は同一でも異なっていてもよく３級アミノ基で置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６アルキル基）からなる群から２種以上選ばれる基（核酸系代謝拮抗剤残基数はｃ＋ｄ＋ｅ＋ｆ＋ｇを１００％とすると５〜８０％であり、−Ｎ（Ｒ１）ＣＯＮＨ（Ｒ２）の数は０〜７０％であり、水酸基数は０〜７０％である）を示し、ポリアスパラギン酸の各構成単位の結合順は任意である。］で表される化合物である請求項１又は２に記載の核酸系代謝拮抗剤の高分子誘導体。
【請求項７】
ＲがＣ１〜Ｃ４アルキル基であり、ＡがＣ２〜Ｃ４アシル基であり、ｃ＋ｄ＋ｅ＋ｆ＋ｇが平均値で５〜１００であり、ｃ＋ｄがｃ＋ｄ＋ｅ＋ｆ＋ｇのうち９０〜１００％であり、ｅ＋ｆ＋ｇがｃ＋ｄ＋ｅ＋ｆ＋ｇのうち０〜１０％であり、ｎが平均値で５０〜１０００であり、核酸系代謝拮抗剤残基が一般式（２）で表されるいずれかの核酸代謝拮抗剤の残基である請求項６に記載の核酸系代謝拮抗剤の高分子誘導体。
【請求項８】
Ｒがメチル基、Ａがアセチル基であり、ｃ＋ｄ＋ｅ＋ｆ＋ｇが平均値で１０〜６０、ｎが平均値で１００〜３００であり、核酸系代謝拮抗剤残基がゲムシタビン又はドキシフルリジン残基である請求項７に記載の核酸系代謝拮抗剤の高分子誘導体。
【請求項９】
疎水性アミノ酸残基または疎水性アミノ酸誘導体残基が一般式（５）：
【化１３】
2008056654.tif 000019
［式中、Ｑは中性アミノ酸の側鎖を示す］
で表される請求項３〜８のいずれか一項に記載の核酸系代謝拮抗剤の高分子誘導体。
【請求項１０】
Ｑがイソプロピル基又はベンジル基である請求項９に記載の核酸系代謝拮抗剤の高分子誘導体。
【請求項１１】
Ｒがメチル基、Ａがアセチル基であり、ａ＋ｂが平均値で１０〜６０、ｎが平均値で１００〜３００であり、疎水性アミノ酸残基または疎水性アミノ酸誘導体残基がフェニルアラニン残基であり、核酸系代謝拮抗剤残基がゲムシタビン残基であり、−Ｎ（Ｒ１）ＣＯＮＨ（Ｒ２）がイソプロピルアミノカルボニルイソプロピルアミノ基である請求項３に記載の核酸系代謝拮抗剤の高分子誘導体。
【請求項１２】
Ｒがメチル基、Ａがアセチル基であり、ｃ＋ｄ＋ｅ＋ｆ＋ｇが平均値で１０〜６０、ｎが平均値で１００〜３００であり、疎水性アミノ酸残基または疎水性アミノ酸誘導体残基がフェニルアラニン残基であり、核酸系代謝拮抗剤がゲムシタビンであり、−Ｎ（Ｒ１）ＣＯＮＨ（Ｒ２）がイソプロピルアミノカルボニルイソプロピルアミノ基である請求項６に記載の核酸系代謝拮抗剤の高分子誘導体。
【請求項１３】
請求項１〜１２のいずれか一項に記載の核酸系代謝拮抗剤の高分子誘導体を薬効成分として含む抗腫瘍剤。
【請求項１４】
請求項１〜１２のいずれか一項に記載の核酸系代謝拮抗剤の高分子誘導体を薬効成分として含む抗ウイルス剤。
【請求項１５】
ポリエチレングリコール類部分及び側鎖にカルボキシル基を有するポリマー部分からなる高分子化合物の側鎖のカルボキシル基に疎水性のリンカーを介して核酸系代謝拮抗剤を導入することを特徴とする請求項１〜１２のいずれか一項に記載の核酸系代謝拮抗剤の高分子誘導体の製造法。
【請求項１６】
一般式（６）：
【化１４】
2008056654.tif 000020
［式中、Ｒは、Ａ、ｎ、ａ、ｂ、Ｘは一般式（１）に同じである］で表される、高分子化合物の側鎖のカルボキシル基に疎水性のリンカーが結合している高分子誘導体に核酸系代謝拮抗剤を導入する請求項１５に記載の核酸系代謝拮抗剤の高分子誘導体の製造法。
【請求項１７】
一般式（７）：
【化１５】
2008056654.tif 000021
［式中、Ｒ、Ａ、ｎ、Ｘは一般式（１）に同じであり、ｃ、ｄ、ｅ、ｆ、ｇは一般式（４）に同じである］で表される、高分子化合物の側鎖のカルボキシル基に疎水性のリンカーが結合している高分子誘導体に核酸系代謝拮抗剤を導入する請求項１５に記載の核酸系代謝拮抗剤の高分子誘導体の製造法。
【請求項１８】
請求項１６に記載の一般式（６）で表される、高分子化合物の側鎖のカルボキシル基に疎水性のリンカーが結合している高分子誘導体。
【請求項１９】
請求項１７に記載の一般式（７）で表される、高分子化合物の側鎖のカルボキシル基に疎水性のリンカーが結合している高分子誘導体。
【請求項２０】
Ｒがメチル基、Ａがアセチル基であり、ａ＋ｂが平均値で１０〜６０、ｎが平均値で１００〜３００である請求項１８に記載の高分子化合物の側鎖のカルボキシル基に疎水性のリンカーが結合している高分子誘導体。
【請求項２１】
Ｒがメチル基、Ａがアセチル基であり、ｃ＋ｄ＋ｅ＋ｆ＋ｇが平均値で１０〜６０、ｎが平均値で１００〜３００である請求項１９に記載の高分子化合物の側鎖のカルボキシル基に疎水性のリンカーが結合している高分子誘導体。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、核酸系代謝拮抗剤の高分子誘導体、その用途及びその製造法に関する。
【背景技術】
【０００２】
悪性腫瘍あるいはウイルス性疾患の治療を目的として種々の核酸系代謝拮抗剤の開発が行なわれ、抗腫瘍剤（抗癌剤）としてはシタラビン（ｃｙｔａｒａｂｉｎｅ）、ゲムシタビン（ｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ）、ドキシフルリジン（ｄｏｘｉｆｌｕｒｉｄｉｎｅ）、アザシチジン（ａｚａｃｉｔｉｄｉｎｅ）、デシタビン（ｄｅｃｉｔａｂｉｎｅ）、ネララビン（ｎｅｌａｒａｂｉｎｅ）等が、抗ウイルス剤としてはザルシタビン（ｚａｌｃｉｔａｂｉｎｅ）、ラミブジン（ｌａｍｉｖｕｄｉｎｅ）等が臨床で使用されている。【０００３】
しかし、これら核酸系代謝拮抗剤は強いｉｎ  ｖｉｔｒｏ活性を示すにもかかわらず、生体内での代謝・排泄を受けやすいために本来の薬剤が持つ薬効を十分に発揮できなかったり、あるいは高投与量を必要とするものが多い。例えば、ゲムシタビンはｉｎ  ｖｉｔｒｏではパクリタキセルやドキソルビシン等の抗癌剤に匹敵する強い細胞増殖抑制活性を有するのに対し、臨床においては体表面積あたり１回１０００ｍｇ／ｍ2の高投与が必要である。これは、２’−デオキシシチジンの代謝酵素であるシチジン脱アミノ化酵素によって塩基の４位アミノ基が代謝・失活されることにより、ｉｎ  ｖｉｖｏ利用率が低くなるためと考えられている（非特許文献１参照）。【０００４】
ポリマーに薬剤を結合させることにより、生体内における薬物動態が改善し治療効果の向上がみられることがある。非特許文献２には、平均分子量約３００００のポリグルタミン酸類とシタラビンとを結合させた高分子誘導体が記載されている。しかしながら、薬剤の高分子誘導体には免疫反応により過敏反応を示す場合があり、その様な場合には薬剤として繰返し投与ができない。【０００５】
特許文献１にはポリエチレングリコール類にシチジン系誘導体を結合させた高分子誘導体が、非特許文献３にはポリエチレングリコール類の両末端にアスパラギン酸を分枝状に置換させそれにシタラビンを結合させた高分子誘導体が記載されている。さらに、特許文献６にはポリエチレングリコール鎖の末端にアミノ酸を用い分岐させ、その各分岐がベンジル脱離反応を受けた後に薬剤を放出する構造を持つ高分子誘導体が記載されている。しかし、これらすべての高分子誘導体は、血漿中での加水分解速度が、長くても数１０時間でそれほど遅くなっておらず、高分子誘導体そのものが、生体内に長時間滞留し、長時間にわたって内包化合物を放出しない。さらに、これら高分子誘導体は、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中の加水分解速度と血漿中の加水分解速度の差が大きく、加水分解反応が生体内の酵素に大きく依存するため、臨床上における治療効果が患者の個体差に大きく影響される可能性がある。【０００６】
特許文献２にはポリエチレングリコール類とポリアスパラギン酸が縮合したブロック型ポリマーに薬剤を結合した分子がミセルを形成し医薬となることが記載されている。又、特許文献３にはポリエチレングリコール類とポリ酸性アミノ酸とのブロック共重合体の側鎖カルボキシル基に疎水性物質を結合した高分子運搬体となる高分子担体が記載されている。さらに、特許文献４にはポリエチレングリコール類とポリグルタミン酸が縮合したブロック型ポリマーのグルタミン酸側鎖カルボキシル基に抗癌性物質を結合させた高分子が記載されている。しかしながら、これらには結合する薬剤として核酸系代謝拮抗剤に関する記載はない。【０００７】
特許文献５にはポリエチレングリコールとポリカルボン酸との重合体のカルボキシル基と、フェノール性カンプトテシン類のフェノール性水酸基とを、エステル縮合した水溶性高分子誘導体が癌化学療法に適していることが記載されているが、これらはポリエチレングリコールとポリカルボン酸との重合体のカルボキシル基に直接薬剤を結合させており、何らかのリンカーか介して薬剤を結合させていない。また、これらにも結合する薬剤として核酸系代謝拮抗剤に関する記載はない。【０００８】
【特許文献１】特表２００３−５２４０２８号公報
【特許文献２】特許第２６９４９２３号公報
【特許文献３】特許第３２６８９１３号公報
【特許文献４】特開平５−９５５号公報
【特許文献５】国際公開番号ＷＯ２００４／０３９８６９号パンフレット
【特許文献６】特表２００４−５３２２８９号公報
【０００９】
【非特許文献１】「キャンサー・サイエンス」、日本癌学会発行、２００４年、第９５巻、１０５−１１１頁（Ｃａｎｃｅｒ  Ｓｃｉｅｎｃｅ、Ｊａｐａｎｅｓｅ  Ｃａｎｃｅｒ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ、Ｖｏｌ．９５、ｐ．１０５−１１１（２００４））
【非特許文献２】「キャンサー・リサーチ」（米国）、米国癌学会発行、１９８４年、第４４巻、２５−３０頁（Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、Ｖｏｌ．４４、ｐ．２５−３０（１９８４））
【非特許文献３】「ジャーナル  オブ  コントロールド  リリース」（英国）、エルゼヴィア発行、２００２年、第７９巻、５５−７０頁（Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ、Ｅｌｓｅｖｉｅｒ、Ｖｏｌ．７９、ｐ．５５−７０（２００２））
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
本発明の目的は、低投与量でより高い効果を有し新規な抗癌剤又は抗ウイルス剤となる核酸系代謝拮抗剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明者らは上記課題を解決するために鋭意研究を行なった結果、核酸系代謝拮抗剤の高分子誘導体、特にポリエチレングリコール類部分及び側鎖にカルボキシル基を有するポリマー部分からなる高分子化合物の側鎖のカルボキシル基に疎水性のリンカーを介して核酸系代謝拮抗剤が結合していることを特徴とする核酸系代謝拮抗剤の高分子誘導体を見出した。【００１２】
即ち、本発明は次の（１）〜（２１）に関する。
（１）ポリエチレングリコール類部分及び側鎖にカルボキシル基を有するポリマー部分からなる高分子化合物の側鎖のカルボキシル基に疎水性のリンカーを介して核酸系代謝拮抗剤が結合していることを特徴とする核酸系代謝拮抗剤の高分子誘導体。
（２）側鎖にカルボキシル基を有するポリマー部分がポリアスパラギン酸またはポリグルタミン酸誘導体である上記（１）記載の核酸系代謝拮抗剤の高分子誘導体。
（３）側鎖にカルボキシル基を有するポリマー部分がポリグルタミン酸誘導体である核酸系代謝拮抗剤の高分子誘導体が、下記一般式（１）：【００１３】
【化１】
2008056654.tif 000003
【００１４】
［式中、Ｒは水素原子又はＣ１〜Ｃ６アルキル基を示し、Ａは水素原子、Ｃ１〜Ｃ６アシル基又はＣ１〜Ｃ６アルコキシカルボニル基を示し、ａ＋ｂは平均値で３〜２００を示し、ａはａ＋ｂのうち７５〜１００％、ｂはａ＋ｂのうち０〜２５％を示し、ｎは平均値で５〜２０００を示し、Ｘは疎水性アミノ酸残基または疎水性アミノ酸誘導体残基を示し、Ｙは核酸系代謝拮抗剤残基、水酸基、及び−Ｎ（Ｒ１）ＣＯＮＨ（Ｒ２）（Ｒ１、Ｒ２は同一でも異なっていてもよく３級アミノ基で置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６アルキル基）からなる群から２種以上選ばれる基（核酸系代謝拮抗剤残基数はａ＋ｂを１００％とすると５〜８０％であり、−Ｎ（Ｒ１）ＣＯＮＨ（Ｒ２）の数は０〜７０％であり、水酸基数は０〜７０％である）を示し、ポリグルタミン酸の構成単位の結合順は任意である。］で表される化合物である上記（１）又は（２）に記載の核酸系代謝拮抗剤の高分子誘導体。
（４）ＲがＣ１〜Ｃ４アルキル基であり、ＡがＣ２〜Ｃ４アシル基であり、ａ＋ｂが平均値で５〜１００であり、ａがａ＋ｂのうち８０〜１００％であり、ｂがａ＋ｂのうち０〜２０％であり、ｎが平均値で５０〜１０００であり、核酸系代謝拮抗剤残基が一般式（２）：【００１５】
【化２】
2008056654.tif 000004
［式中、−Ｒｆは、式（３）：【００１６】
【化３】
2008056654.tif 000005
【００１７】
の置換基群より選ばれる基を示す］
で表されるいずれかの核酸系代謝拮抗剤の残基である上記（３）に記載の核酸系代謝拮抗剤の高分子誘導体。
（５）Ｒがメチル基、Ａがアセチル基であり、ａ＋ｂが平均値で５〜１００であり、ｎが平均値で１００〜３００であり、核酸系代謝拮抗剤残基がゲムシタビン又はドキシフルリジン残基である上記（４）に記載の核酸系代謝拮抗剤の高分子誘導体。
（６）側鎖にカルボキシル基を有するポリマー部分がポリアスパラギン酸誘導体である核酸系代謝拮抗剤の高分子誘導体が、下記一般式（４）：【００１８】
【化４】
2008056654.tif 000006
【００１９】
［式中、Ｒ、Ａ、ｎ、Ｘは一般式（１）に同じであり、ｃ＋ｄ＋ｅ＋ｆ＋ｇは平均値で３〜２００を示し、ｃ＋ｄはｃ＋ｄ＋ｅ＋ｆ＋ｇのうち８５〜１００％、ｅ＋ｆ＋ｇはｃ＋ｄ＋ｅ＋ｆ＋ｇのうち０〜１５％を示し、Ｙは核酸系代謝拮抗剤残基、水酸基、及び−Ｎ（Ｒ１）ＣＯＮＨ（Ｒ２）（Ｒ１、Ｒ２は同一でも異なっていてもよく３級アミノ基で置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６アルキル基）からなる群から２種以上選ばれる基（核酸系代謝拮抗剤残基数はｃ＋ｄ＋ｅ＋ｆ＋ｇを１００％とすると５〜８０％であり、−Ｎ（Ｒ１）ＣＯＮＨ（Ｒ２）の数は０〜７０％であり、水酸基数は０〜７０％である）を示し、ポリアスパラギン酸の各構成単位の結合順は任意である。］で表される化合物である上記（１）又は（２）に記載の核酸系代謝拮抗剤の高分子誘導体。
（７）ＲがＣ１〜Ｃ４アルキル基であり、ＡがＣ２〜Ｃ４アシル基であり、ｃ＋ｄ＋ｅ＋ｆ＋ｇが平均値で５〜１００であり、ｃ＋ｄがｃ＋ｄ＋ｅ＋ｆ＋ｇのうち９０〜１００％であり、ｅ＋ｆ＋ｇがｃ＋ｄ＋ｅ＋ｆ＋ｇのうち０〜１０％であり、ｎが平均値で５０〜１０００であり、核酸系代謝拮抗剤残基が前記一般式（２）で表されるいずれかの核酸代謝系拮抗剤の残基である上記（６）に記載の核酸系代謝拮抗剤の高分子誘導体。
（８）Ｒがメチル基、Ａがアセチル基であり、ｃ＋ｄ＋ｅ＋ｆ＋ｇが平均値で１０〜６０、ｎが平均値で１００〜３００であり、核酸系代謝拮抗剤残基がゲムシタビン又はドキシフルリジン残基である前記（７）に記載の核酸系代謝拮抗剤の高分子誘導体。
（９）疎水性アミノ酸残基または疎水性アミノ酸誘導体残基が一般式（５）：【００２０】
【化５】
2008056654.tif 000007
【００２１】
［式中、Ｑは中性アミノ酸の側鎖を示す］
で表される上記（３）〜（８）のいずれか一項に記載の核酸系代謝拮抗剤の高分子誘導体。
（１０）Ｑがイソプロピル基又はベンジル基である上記（９）に記載の核酸系代謝拮抗剤の高分子誘導体。
（１１）Ｒがメチル基、Ａがアセチル基であり、ａ＋ｂが平均値で１０〜６０、ｎが平均値で１００〜３００であり、疎水性アミノ酸残基または疎水性アミノ酸誘導体残基がフェニルアラニン残基であり、核酸系代謝拮抗剤残基がゲムシタビン残基であり、−Ｎ（Ｒ１）ＣＯＮＨ（Ｒ２）がイソプロピルアミノカルボニルイソプロピルアミノ基である上記（３）に記載の核酸系代謝拮抗剤の高分子誘導体。
（１２）Ｒがメチル基、Ａがアセチル基であり、ｃ＋ｄ＋ｅ＋ｆ＋ｇが平均値で１０〜６０、ｎが平均値で１００〜３００であり、疎水性アミノ酸残基または疎水性アミノ酸誘導体残基がフェニルアラニン残基であり、核酸系代謝拮抗剤残基がゲムシタビン残基であり、−Ｎ（Ｒ１）ＣＯＮＨ（Ｒ２）がイソプロピルアミノカルボニルイソプロピルアミノ基である上記（６）に記載の核酸系代謝拮抗剤の高分子誘導体。
（１３）上記（１）〜（１２）のいずれか一項に記載の核酸系代謝拮抗剤の高分子誘導体を薬効成分として含む抗腫瘍剤。
（１４）上記（１）〜（１２）のいずれか一項に記載の核酸系代謝拮抗剤の高分子誘導体を薬効成分として含む抗ウイルス剤。
（１５）ポリエチレングリコール類部分及び側鎖にカルボキシル基を有するポリマー部分からなる高分子化合物の側鎖のカルボキシル基に疎水性のリンカーを介して核酸系代謝拮抗剤を導入することを特徴とする上記（１）〜（１２）のいずれか一項に記載の核酸系代謝拮抗剤の高分子誘導体の製造法。
（１６）一般式（６）：【００２２】
【化６】
2008056654.tif 000008
【００２３】
［式中、Ｒは、Ａ、ｎ、ａ、ｂ、Ｘは一般式（１）に同じである］で表される、高分子化合物の側鎖のカルボキシル基に疎水性のリンカーが結合している高分子誘導体に核酸系代謝拮抗剤を導入する、上記（１５）に記載の核酸系代謝拮抗剤の高分子誘導体の製造法。
（１７）一般式（７）：【００２４】
【化７】
2008056654.tif 000009
【００２５】
［式中、Ｒ、Ａ、ｎ、Ｘは一般式（１）に同じであり、ｃ、ｄ、ｅ、ｆ、ｇは一般式（４）に同じである］で表される、高分子化合物の側鎖のカルボキシル基に疎水性のリンカーが結合している高分子誘導体に核酸系代謝拮抗剤を導入する、上記（１５）に記載の核酸系代謝拮抗剤の高分子誘導体の製造法。
（１８）上記（１６）に記載の一般式（６）で表される、高分子化合物の側鎖のカルボキシル基に疎水性のリンカーが結合している高分子誘導体。
（１９）上記（１７）に記載の一般式（７）で表される、高分子化合物の側鎖のカルボキシル基に疎水性のリンカーが結合している高分子誘導体。
（２０）Ｒがメチル基、Ａがアセチル基であり、ａ＋ｂが平均値で１０〜６０、ｎが平均値で１００〜３００である上記（１８）に記載の高分子化合物の側鎖のカルボキシル基に疎水性のリンカーが結合している高分子誘導体。
（２１）Ｒがメチル基、Ａがアセチル基であり、ｃ＋ｄ＋ｅ＋ｆ＋ｇが平均値で１０〜６０、ｎが平均値で１００〜３００である上記（１９）に記載の高分子化合物の側鎖のカルボキシル基に疎水性のリンカーが結合している高分子誘導体。
【発明の効果】
【００２６】
本発明の核酸系代謝拮抗剤の高分子誘導体は、ポリエチレングリコール類部分及び側鎖にカルボキシル基を有するポリマー部分からなる高分子化合物の側鎖のカルボキシル基に疎水性のリンカーを介して核酸系代謝拮抗剤であるヌクレオシド誘導体が結合した構造を有することを特徴とする。この高分子誘導体は、その構造上、水中で親水性の高いポリエチレングリコール類部分を外殻、疎水性リンカーを有する側鎖を内殻とした凝集体を形成すると考えられる。この高分子誘導体は生体内において酵素非依存的に核酸系代謝拮抗剤を徐放することができ、低投与量で治療効果に優れた抗癌剤又は抗ウイルス剤として有用である。酵素非依存的に薬剤徐放性を示すことから、治療効果に対する患者の個体差の影響が少ない誘導体となり得る。又、この高分子誘導体は選択的に患部に集積し、より高い効果で副作用が少ない薬剤となる。更に、この高分子誘導体は、薬剤の親水性の程度に関わらず、薬剤の含有量が高い。これは疎水性リンカーを介して薬剤を導入することに起因している。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２７】
本発明の核酸系代謝拮抗剤の高分子誘導体は、ポリエチレングリコール類部分及び側鎖にカルボキシル基を有するポリマー部分からなる高分子化合物の側鎖のカルボキシル基に疎水性のリンカーを介して核酸系代謝拮抗剤が結合していることを特徴とする。【００２８】
本発明において、疎水性のリンカーとしては疎水性であればいずれの置換基でもよく、核酸系代謝拮抗剤の高分子誘導体の薬効発現に支障をきたさない限り特に限定されないが、好ましくは疎水性アミノ酸残基または疎水性アミノ酸誘導体が挙げられる。【００２９】
本発明における「核酸系代謝拮抗剤」とは、抗腫瘍活性又は抗ウイルス活性を有し、ヌクレオシド誘導体の構造を有する化合物である。具体的には、核酸塩基部分が上記式（２）から選択されるいずれかであり、それに結合している基（Ｒｆ）が上記式（３）から選択されるいずれかである化合物である。【００３０】
更に具体的には、例えば、シタラビン（ｃｙｔａｒａｂｉｎｅ）、ゲムシタビン（ｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ）、ドキシフルリジン（ｄｏｘｉｆｌｕｒｉｄｉｎｅ）、アザシチジン（ａｚａｃｉｔｉｄｉｎｅ）、デシタビン（ｄｅｃｉｔａｂｉｎｅ）、ネララビン（ｎｅｌａｒａｂｉｎｅ）、２’−メチリデン−２’−デオキシシチジン（ＤＭＤＣ）、テザシタビン（ｔｅｚａｃｉｔａｂｉｎｅ）、ザルシタビン（ｚａｌｃｉｔａｂｉｎｅ）、ラミブジン（ｌａｍｉｖｕｄｉｎｅ）、５’−デオキシ−５−フルオロシチジン（５’−ＤＦＣＲ）、トロキサシタビン（ｔｒｏｘａｃｉｔａｂｉｎｅ）、３’−エチニルシチジン（ｅｔｈｙｎｙｌｃｙｔｉｄｉｎｅ）又は２’−シアノ−２’−デオキシ−１−β−Ｄ−アラビノフラノシルシトシン（ＣＮＤＡＣ）等が挙げられるが、これらに限定されない。【００３１】
【化８】
2008056654.tif 000010
【００３２】
本発明において「ポリエチレングリコール類部分及び側鎖にカルボキシル基を有するポリマー部分からなる高分子化合物」における側鎖にカルボキシル基を有するポリマー部分としては、カルボキシル基を有する側鎖がポリマー主鎖から枝分かれしたグラフト型ポリマーやポリカルボン酸ポリマーが縮合したブロック型ポリマー等が挙げられる。【００３３】
側鎖にカルボキシル基を有するポリマー部分がグラフト型ポリマーである前記の高分子化合物は、例えば、特開平１１−２７９０８３号公報に記載のポリエチレングリコールとアクリル酸類の縮合物と、アクリル酸類あるいは無水マレイン酸等とを共重合反応に供し、必要に応じて加水分解反応に付すこと等によって得られるポリマー等が挙げられる。【００３４】
側鎖にカルボキシル基を有するポリマー部分がブロック型ポリマーである前記の高分子化合物は、末端官能基を有するポリエチレングリコール類と末端に官能基を有するポリカルボン酸を結合した化合物や、特許文献３、４、及び５に記載されている、末端にアミノ基を有するポリエチレングリコール類で重合を開始するアミノ酸活性化物の重合反応によって得られる化合物等が挙げられる。【００３５】
側鎖にカルボキシル基を有するポリマーは、例えば、ポリアクリル酸、ポリメタクリル酸、ポリリンゴ酸、ポリアスパラギン酸またはポリグルタミン酸等が挙げられ、好ましくはポリアスパラギン酸またはポリグルタミン酸である。【００３６】
本発明における「ポリエチレングリコール類」は、両末端又は片末端が修飾されたポリエチレングリコール誘導体でもよく、その場合、両末端の修飾基は同一でも異なっていてもよい。末端の修飾基としては、置換基を有していてもよいＣ１〜Ｃ６アルキル基が挙げられ、好ましくは置換基を有していてもよいＣ１〜Ｃ４アルキル基である。【００３７】
本発明において置換基を有していてもよいＣ１〜Ｃ６アルキル基におけるＣ１〜Ｃ６アルキル基は直鎖、分岐鎖又は環状のＣ１〜Ｃ６アルキル基が挙げられ、例えば、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、イソブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、ペンチル基、イソペンチル基、２−メチルブチル基、ネオペンチル基、１−エチルプロピル基、ヘキシル基、４−メチルペンチル基、３−メチルペンチル基、２−メチルペンチル基、１−メチルペンチル基、３，３−ジメチルブチル基、２，２−ジメチルブチル基、１，１−ジメチルブチル基、１，２−ジメチルブチル基、１，３−ジメチルブチル基、２，３−ジメチルブチル基、２−エチルブチル基、シクロプロピル基、シクロペンチル基又はシクロヘキシル基等が挙げられ、好ましくはＣ１〜Ｃ４アルキル基であり、例えば、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、ｓ−ブチル基又はｔ−ブチル基等であり、特に好ましくはメチル基、エチル基、ｎ−プロピル基又はイソプロピル基である。【００３８】
本発明において置換基を有してもよいＣ１〜Ｃ６アルキル基の置換基は特に限定されないが、例えば、アミノ基、メチルアミノ基、ジメチルアミノ基、エチルアミノ基、ジエチルアミノ基等が挙げられ、好ましくはアミノ基である。【００３９】
本発明においては両末端が修飾されたポリエチレングリコール誘導体が好ましく、具体的には、一方の末端がＣ１〜Ｃ６アルキル基で他方の末端がアミノＣ１〜Ｃ６アルキル基であるポリエチレングリコール誘導体が挙げられ、一方の末端がＣ１〜Ｃ４アルキル基で他方の末端がアミノＣ１〜Ｃ４アルキル基であるポリエチレングリコール誘導体が好ましく、特に一方の末端がメチル基で他方の末端がアミノプロピル基であるポリエチレングリコール誘導体が好ましい。【００４０】
本発明における「ポリエチレングリコール類」の重量平均分子量は２００〜５０００００程度であり、好ましくは５００〜１０００００程度、より好ましくは２０００〜５００００程度である。【００４１】
本発明における「ポリエチレングリコール類部分及び側鎖にカルボキシル基を有するポリマー部分からなる高分子化合物」として好ましくはブロック型ポリマーであり、より好ましくはポリエチレングリコール類と側鎖にカルボキシル基を有するポリマーとのブロック共重合体である。【００４２】
本発明においてポリエチレングリコール類と側鎖にカルボキシル基を有するポリマーとのブロック共重合体としては、例えば、アルコキシポリエチレングリコール−ポリアクリル酸、アルコキシポリエチレングリコール−ポリメタクリル酸、メトキシポリエチレングリコール−ポリアスパラギン酸又はアルコキシポリエチレングリコール−ポリグルタミン酸等が挙げられ、好ましくはメトキシポリエチレングリコール−ポリアスパラギン酸またはメトキシポリエチレングリコール−ポリグルタミン酸である。【００４３】
本発明における「ポリエチレングリコール類部分及び側鎖にカルボキシル基を有するポリマー部分からなる高分子化合物」の１分子あたりの平均カルボキシル基数は、３〜２００個程度であり、好ましくは５〜１００個程度、より好ましくは１０〜６０個程度である。【００４４】
本発明における「ポリエチレングリコール類部分及び側鎖にカルボキシル基を有するポリマー部分からなる高分子化合物」の重量平均分子量は５００〜５０００００程度であり、好ましくは２０００〜１０００００程度であり、より好ましくは３０００〜５００００程度である。【００４５】
本発明において、ポリエチレングリコール類部分及び側鎖にカルボキシル基を有するポリマー部分からなる高分子化合物の側鎖のカルボキシル基に疎水性のリンカーを介して結合している核酸系代謝拮抗剤の結合量としては、１個〜カルボキシル基の総数の範囲内であれば特に限定されず、生体内に投与した際に薬効を示す量であればよい。好ましくはポリマー部分の総カルボン酸数の５〜８０％、より好ましくは５〜７０％である。【００４６】
上記結合量は、本発明化合物の紫外線吸収スペクトルの強度から求めることができる。又、本発明の核酸系代謝拮抗剤の高分子誘導体をアルカリ加水分解することにより遊離する核酸系代謝拮抗剤を、例えば、高速液体クロマトグラフィー等で定量することによっても求めることができる。【００４７】
本発明の核酸系代謝拮抗剤の高分子誘導体とはポリエチレングリコール類部分及び側鎖にカルボキシル基を有するポリマー部分からなる高分子化合物の側鎖のカルボキシル基に疎水性のリンカーを介して核酸系代謝拮抗剤であるヌクレオシド誘導体が結合していることを特徴とし、好ましくは側鎖にカルボキシル基を有するポリマー部分がポリアスパラギン酸またはポリグルタミン酸の誘導体である核酸系代謝拮抗剤の高分子誘導体である。さらに好ましくは上記一般式（１）［式中、Ｒは水素原子又はＣ１〜Ｃ６アルキル基を示し、Ａは水素原子、Ｃ１〜Ｃ６アシル基又はＣ１〜Ｃ６アルコキシカルボニル基を示し、ａ＋ｂは平均値で３〜２００を示し、ａはａ＋ｂのうち７５〜１００％、ｂはａ＋ｂのうち０〜２５％を示し、ｎは平均値で５〜２０００を示し、Ｘは疎水性アミノ酸残基または疎水性アミノ酸誘導体残基を示し、Ｙは核酸系代謝拮抗剤残基、水酸基、及び−Ｎ（Ｒ１）ＣＯＮＨ（Ｒ２）（Ｒ１、Ｒ２は同一でも異なっていてもよく３級アミノ基で置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６アルキル基）からなる群から２種以上選ばれる基（核酸系代謝拮抗剤残基数はａ＋ｂを１００％とすると５〜８０％であり、−Ｎ（Ｒ１）ＣＯＮＨ（Ｒ２）の数は０〜７０％であり、水酸基数は０〜７０％である）を示し、ポリグルタミン酸の構成単位の結合順は任意である。］及び上記一般式（４）［式中、Ｒ、Ａ、ｎ、Ｘは一般式（１）に同じであり、ｃ＋ｄ＋ｅ＋ｆ＋ｇは平均値で３〜２００を示し、ｃ＋ｄはｃ＋ｄ＋ｅ＋ｆ＋ｇのうち８５〜１００％、ｅ＋ｆ＋ｇはｃ＋ｄ＋ｅ＋ｆ＋ｇのうち０〜１５％を示し、Ｙは核酸系代謝拮抗剤残基、水酸基、及び−Ｎ（Ｒ１）ＣＯＮＨ（Ｒ２）（Ｒ１、Ｒ２は同一でも異なっていてもよく３級アミノ基で置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６アルキル基）からなる群から２種以上選ばれる基（核酸系代謝拮抗剤残基数はｃ＋ｄ＋ｅ＋ｆ＋ｇを１００％とすると５〜８０％であり、−Ｎ（Ｒ１）ＣＯＮＨ（Ｒ２）の数は０〜７０％であり、水酸基数は０〜７０％である）を示し、ポリアスパラギン酸の各構成単位の結合順は任意である。］で表される化合物である。【００４８】
又、本発明の高分子化合物の側鎖のカルボキシル基に疎水性にリンカーが結合している高分子誘導体とは、上記一般式（６）［式中、Ｒは、Ａ、ｎ、ａ、ｂ、Ｘは一般式（１）に同じである］及び上記一般式（７）［式中、Ｒ、Ａ、ｎ、Ｘは一般式（１）に同じであり、ｃ、ｄ、ｅ、ｆ、ｇは一般式（４）に同じである］で表される化合物である。本発明の高分子化合物の側鎖のカルボキシル基に疎水性のリンカーが結合している高分子誘導体に核酸系代謝拮抗剤であるヌクレオシド誘導体を導入することで本発明の核酸系代謝拮抗剤の高分子誘導体を得ることができる。【００４９】
一般式（１）、一般式（４）、一般式（６）及び一般式（７）中、ＲにおけるＣ１〜Ｃ６アルキル基は上記のアルキル基と同じ意味であり、好ましい基も同様である。【００５０】
一般式（１）、一般式（４）、一般式（６）及び一般式（７）中、ＡにおけるＣ１〜Ｃ６アシル基は、例えば、ホルミル基、アセチル基、プロピオニル基、ブチリル基、イソブチリル基、バレリル基、イソバレリル基、ピバロイル基又はヘキサノイル基が挙げられ、好ましくはＣ２〜Ｃ４アシル基、例えば、アセチル基又はプロピオニル基であり、より好ましくはアセチル基である。【００５１】
一般式（１）、一般式（４）、一般式（６）及び一般式（７）中、ＡにおけるＣ１〜Ｃ６アルコキシカルボニル基は、例えば、メトキシカルボニル基、エトキシカルボニル基、プロポキシカルボニル基、イソプロポキシカルボニル基、ｎ−ブトキシカルボニル基、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基、ペントキシカルボニル基、ヘキシルオキシカルボニル基、シクロプロポキシカルボニル基、シクロペンチルオキシカルボニル基又はシクロヘキシルオキシカルボニル基が挙げられ、好ましくはメトキシカルボニル基、エトキシカルボニル基、プロポキシカルボニル基、イソプロポキシカルボニル基、ブトキシカルボニル基又はｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基であり、より好ましくはエトキシカルボニル基又はｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基である。【００５２】
一般式（１）、一般式（４）、一般式（６）及び一般式（７）中、ｎは平均値で５〜２０００であり、好ましくは５０〜１０００程度であり、より好ましくは１００〜３００程度である。【００５３】
一般式（１）及び一般式（６）中、ａ＋ｂは平均値で３〜２００であり、好ましくは５〜１００程度であり、より好ましくは１０〜６０程度である。【００５４】
一般式（１）及び一般式（６）中、ａはａ＋ｂのうち７５〜１００％であり、好ましくは８０〜１００％であり、ｂとしてはａ＋ｂのうち０〜２５％であり、好ましくは０〜２０％である。【００５５】
一般式（４）及び一般式（７）中、ｃ＋ｄ＋ｅ＋ｆ＋ｇは平均値で３〜２００であり、好ましくは５〜１００程度であり、より好ましくは１０〜６０程度である。【００５６】
一般式（４）及び一般式（７）中、ｃ＋ｄはｃ＋ｄ＋ｅ＋ｆ＋ｇのうち８５〜１００％であり、好ましくは９０〜１００％であり、ｅ＋ｆ＋ｇとしてはｃ＋ｄ＋ｅ＋ｆ＋ｇのうち０〜１５％であり、好ましくは０〜１０％である。【００５７】
一般式（１）及び一般式（６）において、ａやｂの括弧の構成単位が、ランダムに結合していても、ブロックを形成して結合していてもよい。Ｙも核酸系代謝拮抗剤、水酸基、−Ｎ（Ｒ１）ＣＯＮＨ（Ｒ２）がランダムに結合していても、ブロックを形成して結合していてもよい（ただし、核酸系代謝拮抗剤残基数はａ＋ｂを１００％とすると５〜８０％であり、−Ｎ（Ｒ１）ＣＯＮＨ（Ｒ２）の数は０〜７０％であり、水酸基数は０〜７０％である）。一般式（１）中、Ｙにおける核酸系代謝拮抗剤として特に好ましくは、ゲムシタビンが挙げられる。【００５８】
一般式（４）及び一般式（７）において、ｃ、ｄ、ｅ、ｆ及びｇの括弧の構成単位が、ランダムに結合していても、ブロックを形成して結合していてもよい。Ｙも核酸系代謝拮抗剤、水酸基、−Ｎ（Ｒ１）ＣＯＮＨ（Ｒ２）がランダムに結合していても、ブロックを形成して結合していてもよい（ただし、核酸系代謝拮抗剤残基数はｃ＋ｄ＋ｅ＋ｆ＋ｇを１００％とすると５〜８０％であり、−Ｎ（Ｒ１）ＣＯＮＨ（Ｒ２）の数は０〜７０％であり、水酸基数は０〜７０％である）。一般式（４）中、Ｙにおける核酸系代謝拮抗剤として特に好ましくは、ゲムシタビンが挙げられる。【００５９】
一般式（１）、一般式（４）、一般式（６）及び一般式（７）中、Ｘにおける疎水性リンカーとしては種々の置換基が挙げられ、核酸系代謝拮抗剤の高分子誘導体の薬効発現に支障をきたさない限り特に限定されないが、好ましくは疎水性アミノ酸残基または疎水性アミノ酸誘導体残基、さらに好ましくは前記一般式（５）［式中、Ｑは中性アミノ酸の側鎖を示す］で表されるα−アミノ酸またはα−アミノ酸誘導体で表される基が挙げられる。【００６０】
一般式（５）におけるＱにおいて中性アミノ酸の側鎖は、例えば、水素原子、メチル基、イソプロピル基、イソブチル基、ｓ−ブチル基、ベンジル基、ヒドロキシメチル基、１−ヒドロキシエチル基、カルバモイルメチル基、２−カルバモイルエチル基等の天然型アミノ酸残基又はｔｅｒｔ−ブトキシメチル基、ベンジルオキシメチル基、ベンジルオキシカルボニルメチル基、２−ベンジルオキシカルボニルエチル基等のアミノ酸残基誘導体等が挙げられ、好ましくはイソプロピル基、イソブチル基、ｓ−ブチル基、ベンジル基、ベンジルオキシメチル基、ベンジルオキシカルボニルメチル基、２−ベンジルオキシカルボニルエチル基等であり、より好ましくはイソプロピル基、ベンジル基、ベンジルオキシメチル基又は２−ベンジルオキシカルボニルエチル基であり、特に好ましくはベンジル基である。【００６１】
一般式（１）及び一般式（４）中、Ｙにおける−Ｎ（Ｒ１）ＣＯＮＨ（Ｒ２）は、核酸系代謝拮抗剤の高分子誘導体の薬効発現に支障をきたさない限り特に限定されないが、好ましくは−Ｎ（Ｒ１）ＣＯＮＨ（Ｒ２）のＲ１、Ｒ２は同一でも異なっていてもよく３級アミノ基で置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６アルキル基で表される基が挙げられる。より好ましくは、シクロヘキシルアミノカルボニルシクロヘキシルアミノ基、イソプロピルアミノカルボニルイソプロピルアミノ基である。【００６２】
なお、−Ｎ（Ｒ１）ＣＯＮＨ（Ｒ２）におけるＲ１、Ｒ２において、３級アミノ基で置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６アルキル基のＣ１〜Ｃ６アルキル基としては、前記のアルキル基と同じ意味であり、好ましい基も同様である。【００６３】
一般式（１）及び一般式（４）中、ポリマーの総カルボキシル基数に対して、Ｙが核酸系代謝拮抗剤残基である割合は５〜８０％、好ましくは５〜７０％であり、Ｙが水酸基である割合は０〜７０％、好ましくは５〜６０％であり、Ｙが−Ｎ（Ｒ１）ＣＯＮＨ（Ｒ２）である割合は０〜７０％、好ましくは０〜６０％である。【００６４】
本発明の核酸系代謝拮抗剤の高分子誘導体において、核酸系代謝拮抗剤等が結合していない側鎖カルボキシル基が存在する場合、当該カルボキシル基は遊離型又はアルカリ類の塩型でもよい。遊離型で得られた場合には自体公知の方法あるいはそれに準じる方法によって目的とする塩に変換することができ、逆に塩で得られた場合には自体公知の方法あるいはそれに準ずる方法により遊離型又は目的とする他の塩に変換することができる。【００６５】
アルカリ類の塩としては、例えば、リチウム塩、ナトリウム塩、カリウム塩、マグネシウム塩、アンモニウム塩又はトリエチルアンモニウム塩等が挙げられる。【００６６】
本発明の核酸系代謝拮抗剤の高分子誘導体における側鎖にカルボキシル基を有するポリマー部分を構成する構造単位は、光学異性体が存在する場合は光学活性体でもラセミ体でも任意の割合の混合体でもよい。例えば、側鎖にカルボキシル基を有するポリマー部分がポリグルタミン酸誘導体の場合、ポリ−Ｌ−グルタミン酸、ポリ−Ｄ−グルタミン酸、側鎖が置換されたＬ−グルタミン酸及び側鎖が置換されたＤ−グルタミン酸が任意の割合で任意の結合順で結合したポリマーでもよい。【００６７】
さらに、側鎖にカルボキシル基を有するポリマー部分がポリアスパラギン酸誘導体の場合、上記光学異性体だけでなく、一般式（４）及び（７）の括弧で示されるｃ及びｅ単位のα−アミノ酸型、ｄ及びｆ単位のβ−アミノ酸型、ｇ単位の環化体の構造単位もある。これらのα及びβ−アミノ酸型や環化体の構成単位の結合順は特に限定されず、ブロック型でもランダム型でもよく、全アスパラギン酸数（ｃ＋ｄ＋ｅ＋ｆ＋ｇ）に対するα−アミノ酸型（ｃ＋ｅ）の割合は１０〜１００％であり、好ましくは２０〜１００％である。この割合は、例えばポリアスパラギン酸の保護基の脱保護条件等を選ぶことにより適宜変えることができる。【００６８】
本発明の核酸系代謝拮抗剤の高分子誘導体として特に好ましい化合物としては、例えば、以下の表１に示す化合物が挙げられる。【００６９】
表１において、Ｐｈｅはフェニルアラニンを表す。又、Ｙの核酸系代謝拮抗剤残基としては、シタラビン、ゲムシタビン、ドキシフルリジン、アザシチジン、デシタビン、ネララビン、テザシタビン、５’−デオキシ−５−フルオロシチジン、２’−デオキシ−２’−メチリデンシチジン（ＤＭＤＣ）、３’−エチニルシチジン、２’−Ｃ−シアノ−２’−デオキシ−１−ベータ−Ｄ−アラビノフラノシルシトシン（ＣＮＤＡＣ）、トロキサシタビン及び（−）−ベータ−Ｌ−ジオキソランシチジンの各残基が挙げられる。【００７０】
【表１】
2008056654.tif 000011
【００７１】
本発明の核酸系代謝拮抗剤の高分子誘導体は、例えば、特許文献３、４及び５記載の方法に準じて製造されたメトキシポリエチレングリコール−ポリアスパラギン酸ブロック共重合体やメトキシポリエチレングリコール−ポリグルタミン酸ブロック共重合体と、カルボキシル基を保護したアミノ酸誘導体とを溶媒中で脱水縮合剤により縮合させた後、脱保護することにより生じる新たなカルボキシル基を有する一般式（６）又は一般式（７）の高分子誘導体の当該新たなカルボキシル基と核酸系代謝拮抗剤とを、溶媒中で脱水縮合剤により縮合させることで製造することができるが、特にこの製造法に限定されるわけではない。【００７２】
なお、本発明の核酸系代謝拮抗剤の高分子誘導体において、核酸系代謝拮抗剤がエステル結合を介して一般式（６）又は一般式（７）で表される高分子誘導体のカルボキシル基と結合している場合と、エステル結合及びアミド結合を介して一般式（６）又は一般式（７）で表される高分子誘導体のカルボキシル基と結合している場合と、アミド結合を介して一般式（６）又は一般式（７）で表される高分子誘導体のカルボキシル基と結合している場合がある。これは、用いる脱水縮合剤によってどの結合様式で入るかが決まるが、本発明においてはいずれの結合様式であってもよい。【００７３】
当該製造法において、リンカーとなるカルボキシル基を保護したアミノ酸及びアミノ酸誘導体の脱水縮合反応（アミド化）における溶媒としては、反応が進行する限り特に限定されないが、例えば、トルエン、キシレン等の芳香族炭化水素類、塩化メチレン、クロロホルム、１，２−ジクロロエタン等のハロゲン化炭化水素類、テトラヒドロフラン、ジオキサン、ジメトキシエタン、ジエチレングリコールジメチルエーテル等のエーテル類、アセトニトリル、プロピオニトリル等のニトリル類、ジメチルホルムアミド、ジメチルアセトアミド、Ｎ−メチルピロリドン等のアミド類、１，３−ジメチルイミダゾリジノン等のウレア類又は前記溶媒の混合溶媒等が挙げられ、好ましくはアミド類又はウレア類であり、より好ましくはジメチルホルムアミド又は１，３−ジメチルイミダゾリジノンである。【００７４】
脱水縮合剤としてはアミン類とカルボキシル基の縮合反応が進行する限り特に限定されないが、好ましくはジシクロヘキシルカルボジイミド、ジイソプロピルカルボジイミド、１−ジメチルアミノプロピル−３−エチルカルボジイミド、カルボニルジイミダゾール、クロロギ酸イソブチル、ピバリン酸クロリド、ＤＭＴ−ＭＭ（４−（４，６−ジメトキシ−１、３、５−トリアジン−２−イル）−４−メチルモルホリニウムクロリド）、ＴＦＦＨ（テトラメチルフルオロホルムアミジニウムヘキサフルオロホスフェート）、１−エトキシカルボニル−２−エトキシ−１，２−ジヒドロキシキノリノン（ＥＥＤＱ）又はＢＯＰ（ベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリス（ジメチルアミノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート）である。【００７５】
当該脱水縮合反応の際、反応補助剤を用いてもよく、該反応補助剤としては、例えば、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール、４−ジメチルアミノピリジン又は２，６−ジ−ｔ−ブチル−４−メチルピリジン等が挙げられる。【００７６】
脱水縮合反応の反応温度は通常４〜６０℃であり、好ましくは室温〜５０℃である。反応時間は２時間〜数日であり、好ましくは４〜４８時間である。【００７７】
上記製造法において、カルボニル基を保護したアミノ酸及びアミノ酸誘導体導入後に行われる保護基の除去方法はそれぞれ用いた保護基に適した方法を用いればよく、公知の方法によって行われる。例えば、ベンジル基は接触還元による加水素分解により除去することができる。保護基の除去により、一般式（６）及び（７）で表される本発明の高分子誘導体を得ることができる。【００７８】
上記製造法において、脱保護により新たに生じたカルボニル基に核酸系代謝拮抗剤を導入する脱水縮合反応における溶媒としては、反応が進行する限り特に限定されないが、上記のメトキシポリエチレングリコール−ポリアスパラギン酸ブロック共重合体やメトキシポリエチレングリコール−ポリグルタミン酸ブロック共重合体とアミノ酸誘導体との脱水縮合する際に使用できる溶媒と同様な溶媒が使用でき、好ましい溶媒も同様である。【００７９】
脱水縮合剤としては、核酸系代謝拮抗剤とカルボキシル基との縮合反応が進行する限り特に限定されないが、前記のメトキシポリエチレングリコール−ポリアスパラギン酸ブロック共重合体やメトキシポリエチレングリコール−ポリグルタミン酸ブロック共重合体とアミノ酸誘導体との脱水縮合する際に使用できる脱水縮合剤と同様な脱水縮合剤が使用でき、好ましい脱水縮合剤も同様である。特に好ましくはジシクロヘキシルカルボジイミド、ジイソプロピルカルボジイミド、１−ジメチルアミノプロピル−３−エチルカルボジイミド等のカルボジイミド系縮合剤及び２−エトキシ−１−エトキシカルボニル−１，２−ジヒドロキノリン（ＥＥＤＱ）等が挙げられる。【００８０】
脱水縮合反応の際、反応補助剤を用いてもよく、該反応補助剤としては、例えば、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール、４−ジメチルアミノピリジン又は２，６−ジ−ｔ−ブチル−４−メチルピリジン等が挙げられる。【００８１】
脱水縮合反応の反応温度は通常４〜６０℃であり、好ましくは１５〜５０℃である。反応時間は１時間〜数日であり、好ましくは４〜４８時間である。【００８２】
当該反応後、必要に応じて自体公知の分離手段、例えば、減圧濃縮、溶媒抽出、結晶化、透析、クロマトグラフィー等を適宜適用して目的化合物を単離、精製することができる。【００８３】
上記の脱水縮合反応によりＹが、核酸系代謝拮抗剤残基、水酸基、−Ｎ（Ｒ１）ＣＯＮＨ（Ｒ２）（Ｒ１、Ｒ２は同一でも異なっていてもよく３級アミノ基で置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６アルキル基）からなる群から２種以上選ばれる基である本発明の核酸系代謝拮抗剤の高分子誘導体が得られる。また、Ｙへ導入される基や、核酸系代謝拮抗剤の高分子誘導体における一般式（６）又は一般式（７）の高分子誘導体と核酸系代謝拮抗剤との結合様式は、用いる脱水縮合剤などにより次のように変えることができる。【００８４】
例えば、脱水縮合剤としてカルボジイミド系の脱水縮合剤を用いると、Ｙが、核酸系代謝拮抗剤残基、水酸基、−Ｎ（Ｒ１）ＣＯＮＨ（Ｒ２）（Ｒ１、Ｒ２は同一でも異なっていてもよく３級アミノ基で置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６アルキル基）からなる群から２種以上選ばれる基である本発明の核酸系代謝拮抗剤の高分子誘導体が得られる。核酸系代謝拮抗剤の高分子誘導体における一般式（６）又は一般式（７）の高分子誘導体と核酸系代謝拮抗剤との結合様式は、核酸系代謝拮抗剤の水酸基やアミノ基などの官能基の反応性に影響を受け、核酸系代謝拮抗剤の水酸基と反応したエステル結合が主となると考えられる。この場合、核酸系代謝拮抗剤との結合様式は、核酸系代謝拮抗剤のもつ官能基によって複数できる場合あるが、核酸系代謝拮抗剤の高分子誘導体の薬効発現に支障をきたさない限り、それらが混合であっても単独であってもよい。【００８５】
また、例えば、脱水縮合剤としてＥＥＤＱを用いると、Ｙが、核酸系代謝拮抗剤残基、水酸基である本発明の核酸系代謝拮抗剤の高分子誘導体が得られる。当該核酸系代謝拮抗剤の高分子誘導体における一般式（６）又は一般式（７）の高分子誘導体と核酸系代謝拮抗剤との結合様式は、ＥＥＤＱの反応メカニズムより、核酸系代謝拮抗剤のシチジン系代謝拮抗剤のアミノ基と反応したアミド結合が主となると考えられる。【００８６】
Ｙが−Ｎ（Ｒ１）ＣＯＮＨ（Ｒ２）（Ｒ１、Ｒ２は同一でも異なっていてもよく３級アミノ基で置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６アルキル基）のみを一般式（６）又は一般式（７）の高分子誘導体へ導入する場合、核酸系代謝拮抗剤なしで前記のカルボジミド系の脱水縮合剤を用いることで導入することができる。【００８７】
なお、ポリエチレングリコール類部分及び側鎖にカルボキシル基を有するポリマー部分からなる高分子化合物に対してリンカーと核酸系代謝拮抗剤が縮合した化合物を別途合成し導入させてもよいが、多官能基を有する活性本体である核酸系代謝拮抗剤の反応及び分解を回避するため、最終工程で核酸系代謝拮抗剤を結合させるのが好ましい。【００８８】
本発明の核酸系代謝拮抗剤の高分子誘導体は、水溶液中でポリエチレングリコール類部分を外殻とするミセルを形成していてもよい。ミセルの形成については、ゲルろ過クロマトグラフィー（ＧＰＣ）法又は動的光散乱法等により確認することができる。【００８９】
本発明においては、リンカーの疎水性を自由に変えることによって、凝集体となる性質を失うことが無く、様々な親水性薬剤を高い含有量で一般式（６）又は一般式（７）の高分子誘導体に導入することが可能である。【００９０】
本発明には前記の核酸系代謝拮抗剤の高分子誘導体を薬効成分として含む抗腫瘍剤又は抗ウイルス剤も含まれる。該核酸系代謝拮抗剤の高分子誘導体は、そのまま投与することも、又、医薬上許容できる物質と混合した薬学的組成物として投与することもできる。薬学的組成物の剤型は注射剤、粉末剤、顆粒剤、錠剤、坐剤等いかなるものでもよい。又、これらの製剤は医薬用に用いられる種々の補助剤、即ち、担体やその他の助剤、例えば、安定剤、防腐剤、無痛化剤、乳化剤等の添加剤を含有していてもよい。【００９１】
製剤中における核酸系代謝拮抗剤の高分子誘導体の含量は製剤により種々異なるが、通常０．１〜１００重量％、好ましくは１〜９８重量％である。【００９２】
核酸系代謝拮抗剤の高分子誘導体を薬効成分とする本発明の抗腫瘍剤の適用は特に限定されないが、例えば、非小細胞肺癌、膵臓癌、胃癌、結腸癌、直腸癌、乳癌、卵巣癌、膀胱癌、ＡＩＤＳ関連カポジ肉腫等に使用され得る。【００９３】
核酸系代謝拮抗剤の高分子誘導体を薬効成分とする本発明の抗ウイルス剤の適用は特に限定されないが、例えば、後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）、帯状疱疹、単純ヘルペスウイルス感染症等に使用され、感染予防目的にも使用され得る。【００９４】
本発明の核酸系代謝拮抗剤の高分子誘導体の投与方法として、経口、注射、直腸内投与、門脈内投与、臓器の灌流液に混合、患部臓器への局所投与等いずれの投与方法でも可能であるが、好ましくは非経口的投与であり、より好ましくは注射による静脈内投与、動脈内投与又は患部臓器への局所投与である。本発明の核酸系代謝拮抗剤の高分子誘導体の投与量は、病状、投与方法、患者の状態、年齢、体重等により異なるが、通常、核酸系代謝拮抗剤換算で体表面積１ｍ２あたり１ｍｇ〜５０００ｍｇ、好ましくは１０ｍｇ〜２０００ｍｇであり、これを１日１回又は数回に分けて投与してもよい。又、この投与は連日行なうこともできるが、数日から数ヶ月の間をおいて反復投与を行なってもよい。必要に応じて前記以外の投与方法、投与量、投与スケジュールを用いることができる。【００９５】
本発明の高分子誘導体がプロドラッグとして作用する場合も本発明に含まれる。ここで、プロドラッグとは生物学的に活性な親化合物の化学的誘導体であって、投与すると生体内で該親化合物を遊離するものである。
【実施例】
【００９６】
以下に、参考例、実施例及び試験例を示し、本発明を更に詳細に説明するが、本発明の範囲はこれらに限定されるものではない。【００９７】
参考例１  分子量約１２０００のモノメトキシポリエチレングリコールと重合数約２６のポリグルタミン酸とのブロック共重合体Ｎ−アセチル化物の合成
片末端メトキシ基片末端３−アミノプロピル基のポリエチレングリコール（ＳＵＮＢＲＩＧＨＴ  ＭＥＰＡ−１２Ｔ、日本油脂株式会社製、平均分子量１２０００、９．６０ｇ）をジメチルスルホキシド（２００ｍＬ）に溶解し、γ−ベンジル−Ｌ−グルタメート  Ｎ−カルボン酸無水物（ＢＬＧ−ＮＣＡ、６．１５ｇ；ポリエチレングリコールに対して３０当量）を加え、３０℃にて一晩撹拌した。イソプロピルエーテル−エタノール混合溶媒（４：１、３．０Ｌ）撹拌下に反応液を滴下し、更に１時間撹拌した。析出した沈殿物をろ取し、イソプロピルエーテル−エタノール混合溶媒（４：１、５００ｍＬ）にて洗浄した。得られた生成物（１４．２５ｇ）をＮ、Ｎ−ジメチルホルムアミド（２２０ｍＬ）に溶解し、無水酢酸（４．２８ｍＬ）を加えて、３０℃にて一晩撹拌した。イソプロピルエーテル−酢酸エチル混合溶媒（４：１、２．２Ｌ）撹拌下に滴下し、更に１時間撹拌した。析出した沈殿物をろ取し、イソプロピルエーテル−酢酸エチル混合溶媒（４：１、４００ｍＬ）にて洗浄した。得られた生成物（１３．５ｇ中１２．０ｇ）をＮ、Ｎ−ジメチルホルムアミド（１９５ｍＬ）に溶解し、５％パラジウム炭素（５５％含水、１．２０ｇ）を加えて、水素雰囲気下室温にて一晩撹拌した。パラジウム炭素をろ別後、ろ液をイソプロピルエーテル−酢酸エチル混合溶媒（４：１、２．０Ｌ）撹拌下に滴下し、更に１時間撹拌した。析出した沈殿物をろ取し、イソプロピルエーテル−酢酸エチル混合溶媒（４：１、３００ｍＬ）にて洗浄した。得られた生成物を蒸留水（５００ｍＬ）に溶解し、１Ｍ水酸化ナトリウム水溶液を加えて液性をｐＨ１１に調整した。蒸留水を加えて最終液量を１０００ｍＬとし、塩化ナトリウム（５０ｇ）を加えた。この溶液を吸着樹脂ＨＰ−２０ｓｓ（三菱化学製、２５０ｍＬ）のカラムに通塔し、５％塩化ナトリウム水溶液（１０００ｍＬ）及び蒸留水（１０００ｍＬ）にて洗浄後、５０％アセトニトリル水溶液（１２５０ｍＬ）にて溶出した。目的物を含む溶出画分を陽イオン交換樹脂Ｄｏｗｅｘ  ５０Ｗ（プロトン型、１５０ｍＬ）のカラムに通塔、溶出し、更に５０％アセトニトリル水（１５０ｍＬ）にて溶出した。目的物を含む溶出画分を液量が約１５０ｍＬになるまで減圧下濃縮した後、凍結乾燥して、標記化合物（８．３０ｇ）を得た。【００９８】
水酸化ナトリウム水溶液を用いた滴定値に基づく本化合物１分子中のグルタミン酸の平均重合数（カルボン酸数）は、２６．７２であった。【００９９】
参考例２  分子量約１２０００のモノメトキシポリエチレングリコールと重合数約１７．５のポリグルタミン酸とのブロック共重合体Ｎ−アセチル化物の合成
参考例１記載の方法に従い、ポリエチレングリコールに対してＢＬＧ−ＮＣＡを２１当量用いることにより、標記化合物を得た。
水酸化ナトリウム水溶液を用いた滴定値に基づく本化合物１分子中のグルタミン酸の平均重合数（カルボン酸数）は、１７．４７であった。【０１００】
参考例３  分子量約１２０００のモノメトキシポリエチレングリコールと重合数約２２のポリグルタミン酸とのブロック共重合体Ｎ−アセチル化物の合成
参考例１記載の方法に従い、ポリエチレングリコールに対してＢＬＧ−ＮＣＡを２５当量用いることにより、標記化合物を得た。
水酸化ナトリウム水溶液を用いた滴定値に基づく本化合物１分子中のグルタミン酸の平均重合数（カルボン酸数）は、２２．１４であった。【０１０１】
参考例４  分子量約１２０００のモノメトキシポリエチレングリコールと重合数約２６のポリグルタミン酸とのブロック共重合体  Ｎ−アセチル化物の合成
参考例１記載の方法に従い、ポリエチレングリコールに対してＢＬＧ−ＮＣＡを３０当量用いることにより、標記化合物を得た。
水酸化ナトリウム水溶液を用いた滴定値に基づく本化合物１分子中のグルタミン酸の平均重合数（カルボン酸数）は、２５．８５であった。【０１０２】
実施例１  分子量約１２０００のモノメトキシポリエチレングリコールと重合数約２６のポリグルタミン酸とのブロック共重合体Ｎ−アセチル化物と、Ｌ−フェニルアラニンベンジルエステルとのアミド結合体（ポリカルボン酸のカルボキシル基に対して約８５％）の合成
参考例１で合成した分子量約１２０００のモノメトキシポリエチレングリコールと重合数約２６のポリグルタミン酸のブロック共重合体  Ｎ−アセチル化物（１．２８ｇ）、Ｌ−フェニルアラニンベンジルエステルの塩酸塩（９６６ｍｇ）及びＮ、Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（５７７μＬ）をＮ、Ｎ−ジメチルホルムアミド（３０ｍＬ）に溶解し、ＤＭＴ−ＭＭ（１．２２ｇ）を加えて４０℃にて一晩撹拌した。反応液を室温まで冷却後、ジイソプロピルエーテル−エタノール混合溶媒（４：１、３００ｍＬ）に滴下した。３０分間撹拌した後、析出した沈殿物をろ取し、ジイソプロピルエーテル−エタノール混合溶媒（４：１）にて洗浄し、標記化合物（１．６０ｇ）を得た。【０１０３】
本化合物を加水分解した後、遊離したベンジルアルコールを高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）にて定量することにより、本化合物のアミド結合しているＰｈｅ−ＯＢｚｌ基の結合率を求めたところポリグルタミン酸のカルボキシル基に対して８４．５％であった。【０１０４】
加水分解の方法
標記化合物（１０．５８ｍｇ）をメタノール（１．０ｍＬ）に溶解し、０．５Ｍ水酸化ナトリウム水溶液（１．０ｍＬ）を加えて４０℃にて１時間撹拌した。酢酸にて中和後、蒸留水にて希釈して正確に１０ｍＬ溶液とした。【０１０５】
ＨＰＬＣの分析条件（ベンジルアルコールの分析）
カラム：ＹＭＣ  Ｈｙｄｒｏｓｐｈｅｒｅ、４．６φ×２５０ｍｍ；
カラム温度：４０℃；
溶離液  Ａ液：１％リン酸水溶液、Ｂ液：アセトニトリル；
グラジエント：Ｂ液％（時間、分）０（０）、０（５）、８０（２５）、８０（３５）、ｓｔｏｐ（３５．０１）；
流速：１ｍＬ／分；
検出器（検出波長）：ＵＶ（２１０ｎｍ）【０１０６】
実施例２  分子量約１２０００のモノメトキシポリエチレングリコールと平均重合数２６．７２のポリグルタミン酸とのブロック共重合体Ｎ−アセチル化物と、Ｌ−フェニルアラニンとのアミド結合体（ポリカルボン酸のカルボキシル基に対して約８５％）の合成
実施例１で合成した化合物（１．６０ｇ）をＮ、Ｎ−ジメチルホルムアミド（３０ｍＬ）に溶解し、５％パラジウム炭素（５５％含水、１５０ｍｇ）を加えて、水素雰囲気下室温にて一晩撹拌した。パラジウム炭素をろ別後、ろ液をイソプロピルエーテル−酢酸エチル混合溶媒（４：１、３００ｍＬ）撹拌下に滴下し、更に１時間撹拌した。析出した沈殿物をろ取し、イソプロピルエーテル−酢酸エチル混合溶媒（４：１）にて洗浄した。得られた生成物を５０％アセトニトリル水に溶解し、陽イオン交換樹脂Ｄｏｗｅｘ  ５０Ｗ（プロトン型、５ｍＬ）を加え、２時間室温で振とう後、樹脂をろ去し、樹脂を５０％アセトニトリル水にて洗浄した。得られたろ液を、減圧下１／２容量まで濃縮した後、凍結乾燥して標記化合物（１．４２ｇ）を得た。【０１０７】
本化合物を実施例１と同様の方法で加水分解後、遊離したベンジルアルコールを実施例１と同様な条件で高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）にて定量することにより、ベンジルアルコールが検出されないことを確認した。【０１０８】
実施例３  一般式（１）でＲがメチル基、Ａがアセチル基、ｎの平均値が２７２、ａ＋ｂの平均値が２６．７２、ａの平均値が２２．６、ｂの平均値が４．１、Ｘがフェニルアラニン残基、Ｙが水酸基、イソプロピルアミノカルボニルイソプロピルアミノ基及びゲムシタビン残基である核酸系代謝拮抗剤の高分子誘導体
実施例２で合成した化合物（７０４ｍｇ）及び塩酸ゲムシタビン（３００ｍｇ）にＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１５ｍＬ）及びＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１７４μＬ）を加えて４０℃にて撹拌した。溶解後、４−ジメチルアミノピリジン（２４．４ｍｇ）及びジイソプロピルカルボジイミド（３１３μＬ）を加えて４０℃にて一晩撹拌した。反応液を室温まで冷却後、ジイソプロピルエーテル−エタノール混合溶媒（４：１、１５０ｍＬ）に滴下した。３０分間撹拌後、析出した沈殿物をろ取し、ジイソプロピルエーテル−エタノール混合溶媒（４：１）にて洗浄した。得られた生成物を５０％アセトニトリル水に溶解し、陽イオン交換樹脂Ｄｏｗｅｘ  ５０Ｗ（プロトン型、２ｍＬ）を加え、２時間室温で振とう後、樹脂をろ去し、樹脂を５０％アセトニトリル水にて洗浄した。得られたろ液を、減圧下１／２容量まで濃縮した後、凍結乾燥して標記化合物（７２０ｍｇ）を得た。【０１０９】
本化合物を加水分解した後、遊離したゲムシタビンを高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）にて定量することにより、本化合物のゲムシタビン含量を求めたところ、塩酸ゲムシタビン換算で１０．９％（ｗ／ｗ）であった。又、本発明化合物についてＨＰＬＣで分析したところ、遊離のゲムシタビン含量は０．２％以下であった。【０１１０】
加水分解の方法
標記化合物（１１．７１ｍｇ）をメタノール（１．０ｍＬ）に溶解し、０．５Ｍ水酸化ナトリウム水溶液（１．０ｍＬ）を加えて４０℃にて１時間撹拌した。酢酸にて中和後、蒸留水にて希釈して正確に１０ｍＬ溶液とした。【０１１１】
ＨＰＬＣの分析条件（ゲムシタビンの分析）
カラム：ＹＭＣ  Ｈｙｄｒｏｓｐｈｅｒｅ、４．６φ×２５０ｍｍ；
カラム温度：４０℃；
溶離液  Ａ液：１％リン酸水溶液、Ｂ液：アセトニトリル；
グラジエント：Ｂ液％（時間、分）０（０）、０（５）、８０（２５）、８０（３５）、ｓｔｏｐ（３５．０１）；
流速：１ｍＬ／分；
検出器（検出波長）：ＵＶ（２１０ｎｍ）【０１１２】
また、本化合物におけるゲムシタビン１分子に対するイソプロピルアミノカルボニルイソプロピルアミノ基のモル比は重水酸化ナトリウム／重水／重アセトニトリルに溶解したものの１Ｈ−ＮＭＲ（水素核磁気共鳴スペクトル）から求められ、０．２４であった。【０１１３】
実施例４  一般式（１）でＲがメチル基、Ａがアセチル基、ｎの平均値が２７２、ａ＋ｂの平均値が２６．７２、ａの平均値が２２．６、ｂの平均値が４．１、Ｘがフェニルアラニン残基、Ｙが水酸基、イソプロピルアミノカルボニルイソプロピルアミノ基及びドキシフルリジン残基である核酸系代謝拮抗剤の高分子誘導体
実施例２で合成した化合物（７０４ｍｇ）とドキシフルリジン（２４６ｍｇ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１５ｍＬ）に加えて４０℃にて撹拌した。溶解後、４−ジメチルアミノピリジン（２４．４ｍｇ）及びジイソプロピルカルボジイミド（３１３μＬ）を加えて４０℃にて一晩撹拌した。反応液を室温まで冷却後、ジイソプロピルエーテル−エタノール混合溶媒（４：１、１５０ｍＬ）に滴下した。３０分間撹拌後、析出した沈殿物を濾取し、ジイソプロピルエーテル−エタノール混合溶媒（４：１）にて洗浄した。得られた生成物を５０％アセトニトリル水に溶解し、陽イオン交換樹脂Ｄｏｗｅｘ  ５０Ｗ（プロトン型、２ｍＬ）を加え、２時間室温で振とう後、樹脂を濾去し、樹脂を５０％アセトニトリル水にて洗浄した。得られた濾液を、減圧下１／２容量まで濃縮後、凍結乾燥して標記化合物（７２０ｍｇ）を得た。【０１１４】
本化合物を加水分解した後、遊離したドキシフルリジンを高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）にて定量することにより、本化合物のドキシフルリジン含量を求めたところ、ドキシフルリジン換算で７．９５％（ｗ／ｗ）であった。又、本発明化合物についてＨＰＬＣで分析したところ、遊離のドキシフルリジン含量は０．２％以下であった。【０１１５】
加水分解の方法
標記化合物（１１．５７ｍｇ）をメタノール（１．０ｍＬ）に溶解し、０．５Ｍ水酸化ナトリウム水溶液（１．０ｍＬ）を加えて４０℃にて１時間撹拌した。酢酸にて中和後、蒸留水にて希釈して正確に１０ｍＬ溶液とした。【０１１６】
ＨＰＬＣの分析条件（ドキシフルリジンの分析）
カラム：ＹＭＣ  Ｈｙｄｒｏｓｐｈｅｒｅ、４．６φ×２５０ｍｍ；
カラム温度：４０℃；
溶離液  Ａ液：１％リン酸水溶液、Ｂ液：アセトニトリル；
グラジエント：Ｂ液％（時間、分）０（０）、０（５）、８０（２５）、８０（３５）、ｓｔｏｐ（３５．０１）；
流速：１ｍＬ／分；
検出器（検出波長）：ＵＶ（２１０ｎｍ）【０１１７】
また、本化合物におけるドキシフルリジン１分子に対するイソプロピルアミノカルボニルイソプロピルアミノ基のモル比は重水酸化ナトリウム／重水／重アセトニトリルに溶解したものの１Ｈ−ＮＭＲ（水素核磁気共鳴スペクトル）から求められ、０．３７であった。【０１１８】
実施例５  分子量約１２０００のモノメトキシポリエチレングリコールと重合数約３６のポリアスパラギン酸とのブロック共重合体Ｎ−アセチル化物と、Ｌ−フェニルアラニンベンジルエステルとのアミド結合体（ポリカルボン酸のカルボキシル基に対して約９６％）の合成
特許文献３に記載された方法によって調製したモノメトキシポリエチレングリコール−ポリアスパラギン酸ブロック共重合体Ｎ−アセチル化物（アスパラギン酸の重合数３５．７；１．０ｇ）、Ｌ−フェニルアラニンベンジルエステルの塩酸塩（９６８ｍｇ）及びＮ、Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（５７８μＬ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１５ｍＬ）に溶解し、ＤＭＴ−ＭＭ（１．２２ｇ）を加えて室温にて一晩撹拌した。反応液を室温まで冷却した後、ジイソプロピルエーテル−エタノール混合溶媒（４：１、２００ｍＬ）に滴下した。３０分間撹拌後、析出した沈殿物をろ取し、ジイソプロピルエーテル−エタノール混合溶媒（４：１）にて洗浄し、標記化合物（１．３９ｇ）を得た。【０１１９】
本化合物を実施例１と同様の方法で加水分解した後、遊離したベンジルアルコールを実施例１と同様な条件で高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）にて定量することにより、本化合物のアミド結合しているＰｈｅ−ＯＢｚｌ基の結合率を求めたところポリグルタミン酸のカルボキシル基に対して９５．８％であった。【０１２０】
実施例６  分子量約１２０００のモノメトキシポリエチレングリコールと重合数約３６のポリアスパラギン酸とのブロック共重合体Ｎ−アセチル化物と、Ｌ−フェニルアラニンとのアミド結合体（ポリカルボン酸のカルボキシル基に対して約９６％）の合成
実施例５で合成した化合物（１．３９ｇ）をＮ、Ｎ−ジメチルホルムアミド（２５ｍＬ）に溶解し、５％パラジウム炭素（５５％含水、１４０ｍｇ）を加えて、水素雰囲気下室温にて一晩撹拌した。パラジウム炭素をろ別後、ろ液をイソプロピルエーテル−酢酸エチル混合溶媒（４：１、２５０ｍＬ）撹拌下に滴下し、更に１時間撹拌した。析出した沈殿物をろ取し、イソプロピルエーテル−酢酸エチル混合溶媒（４：１）にて洗浄した。得られた生成物を５０％アセトニトリル水に溶解し、陽イオン交換樹脂Ｄｏｗｅｘ  ５０Ｗ（プロトン型、５ｍＬ）を加え、２時間室温で振とうした後、樹脂をろ去し、樹脂を５０％アセトニトリル水にて洗浄した。得られたろ液を、減圧下１／２容量まで濃縮した後、凍結乾燥して標記化合物（０．９９ｇ）を得た。【０１２１】
本化合物を実施例１と同様の方法で加水分解した後、遊離したベンジルアルコールを実施例１と同様な条件で高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）にて定量することにより、ベンジルアルコールが検出されないことを確認した。【０１２２】
実施例７  一般式（４）でＲがメチル基、Ａがアセチル基、ｎの平均値が２７２、ｃ＋ｄ＋ｅ＋ｆ＋ｇの平均値が３５．７、ｃ＋ｄの平均値が３４．２、ｅ＋ｆ＋ｇの平均値が１．５、Ｘがフェニルアラニン残基、Ｙが水酸基、イソプロピルアミノカルボニルイソプロピルアミノ基及びゲムシタビン残基である核酸系代謝拮抗剤の高分子誘導体
実施例６で合成した化合物（５３１ｍｇ）及び塩酸ゲムシタビン（２６９ｍｇ）にＮ、Ｎ−ジメチルホルムアミド（１０ｍＬ）及びＮ、Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１５６μＬ）を加えて４０℃にて撹拌した。３０分後、４−ジメチルアミノピリジン（２１．９ｍｇ）及びジイソプロピルカルボジイミド（２８１μＬ）を加えて４０℃にて一晩撹拌した。反応液を室温まで冷却した後、ジイソプロピルエーテル−エタノール混合溶媒（４：１、１００ｍＬ）に滴下した。３０分間撹拌後、析出した沈殿物をろ取し、ジイソプロピルエーテル−エタノール混合溶媒（４：１）にて洗浄した。得られた生成物を５０％アセトニトリル水に溶解し、透析膜（分画分子量：１２０００〜１４０００）を用いて、蒸留水（２Ｌ×３）にて透析した．透析した溶液を凍結乾燥して、凍結乾燥して標記化合物（４９１ｍｇ）を得た。【０１２３】
本化合物（１８．４６ｍｇ）を実施例３と同様の方法で加水分解した後、遊離したゲムシタビンを実施例３と同様な条件で高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）にて定量することにより、本化合物のゲムシタビン含量を求めたところ、塩酸ゲムシタビン換算で１９．２％（ｗ／ｗ）であった。又、本発明化合物についてＨＰＬＣで分析したところ、遊離のゲムシタビン含量は０．２％以下であった。【０１２４】
また、本化合物におけるゲムシタビンに対するイソプロピルアミノカルボニルイソプロピルアミノ基のモル比は重水酸化ナトリウム／重水／重アセトニトリルに溶解したものの1Ｈ−ＮＭＲ（水素核磁気共鳴スペクトル）から求められ、０．２３であった。【０１２５】
実施例８  一般式（４）でＲがメチル基、Ａがアセチル基、ｎの平均値が２７２、ｃ＋ｄ＋ｅ＋ｆ＋ｇの平均値が３５．７、ｃ＋ｄの平均値が３４．２、ｅ＋ｆ＋ｇの平均値が１．５、Ｘがフェニルアラニン残基、Ｙが水酸基及びゲムシタビン残基である核酸系代謝拮抗剤の高分子誘導体
実施例６で合成した化合物（５００ｍｇ）及び塩酸ゲムシタビン（２５３ｍｇ）にＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１０ｍＬ）及びＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１４７μＬ）を加えて４０℃にて撹拌した。３０分後、２−エトキシ−１−エトキシカルボニル−１，２−ジヒドロキノリン（ＥＥＤＱ、２６１ｍｇ）を加えて４０℃にて一晩撹拌した。反応液を室温まで冷却した後、ジイソプロピルエーテル−エタノール混合溶媒（４：１、１００ｍＬ）に滴下した。３０分間撹拌後、析出した沈殿物をろ取し、ジイソプロピルエーテル−エタノール混合溶媒（４：１）にて洗浄した。得られた生成物を５０％アセトニトリル水に溶解し、透析膜（分画分子量：１２０００〜１４０００）を用いて、蒸留水（２Ｌ×３）にて透析した．透析した溶液を凍結乾燥して、凍結乾燥して標記化合物（５１３ｍｇ）を得た。【０１２６】
本化合物（１４．９３ｍｇ）を実施例３と同様の方法で加水分解した後、遊離したゲムシタビンを実施例３と同様な条件で高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）にて定量することにより、本化合物のゲムシタビン含量を求めたところ、塩酸ゲムシタビン換算で１３．２％（ｗ／ｗ）であった。又、本発明化合物についてＨＰＬＣで分析したところ、遊離のゲムシタビン含量は０．２％以下であった。
なお、この反応では縮合剤として２−エトキシ−１−エトキシカルボニル−１，２−ジヒドロキノリン（ＥＥＤＱ）が使用されているため、−Ｎ（Ｒ１）ＣＯＮＨ（Ｒ２）からなる基は1Ｈ−ＮＭＲで確認されなかった。【０１２７】
実施例９  分子量約１２０００のモノメトキシポリエチレングリコールと重合数約１７．５のポリグルタミン酸とのブロック共重合体Ｎ−アセチル化物と、Ｌ−フェニルアラニンベンジルエステルとのアミド結合体（ポリカルボン酸のカルボキシル基に対して約１００％）の合成
参考例２で合成した分子量約１２０００のモノメトキシポリエチレングリコールと重合数約１７．５のポリグルタミン酸のブロック共重合体Ｎ−アセチル化物（１．８０ｇ）、Ｌ−フェニルアラニンベンジルエステルの塩酸塩（９６３ｍｇ）及びＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（５７５μＬ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３６ｍＬ）に溶解し、ＤＭＴ−ＭＭ（１．２２ｇ）を加えて４０℃にて一晩撹拌した。反応液を室温まで冷却後、ジイソプロピルエーテル−エタノール混合溶媒（４：１、４００ｍＬ）に滴下した。３０分間撹拌した後、析出した沈殿物をろ取し、ジイソプロピルエーテル−エタノール混合溶媒（４：１）にて洗浄し、標記化合物（２．４２ｇ）を得た。【０１２８】
本化合物を実施例１と同様の方法で加水分解した後、遊離したベンジルアルコールを実施例１と同様な条件で高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）にて定量することにより、本化合物のアミド結合しているＰｈｅ−ＯＢｚｌ基の結合率を求めたところポリグルタミン酸のカルボキシル基に対して１００．２％であった。【０１２９】
実施例１０  分子量約１２０００のモノメトキシポリエチレングリコールと重合数約１７．５のポリグルタミン酸とのブロック共重合体Ｎ−アセチル化物と、Ｌ−フェニルアラニンとのアミド結合体（ポリカルボン酸のカルボキシル基に対して約１００％）の合成
実施例９で合成した化合物（２．４０ｇ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（４８ｍＬ）に溶解し、５％パラジウム炭素（５５％含水、２４０ｍｇ）を加えて、水素雰囲気下室温にて一晩撹拌した。パラジウム炭素をろ別後、ろ液をイソプロピルエーテル−酢酸エチル混合溶媒（４：１、５００ｍＬ）撹拌下に滴下し、更に１時間撹拌した。析出した沈殿物をろ取し、イソプロピルエーテル−酢酸エチル混合溶媒（４：１）にて洗浄した。得られた生成物を５０％アセトニトリル水に溶解し、陽イオン交換樹脂  Ｍｕｒｏｍａｃ  Ｃ１００２（プロトン型、ムロマチテクノス株式会社、６ｍＬ）を加え、２時間室温で振とう後、樹脂をろ去し、樹脂を５０％アセトニトリル水にて洗浄した。得られたろ液を、減圧下１／２容量まで濃縮した後、凍結乾燥して標記化合物（１．９６ｇ）を得た。【０１３０】
本化合物を実施例１と同様の方法で加水分解した後、遊離したベンジルアルコールを実施例１と同様な条件で高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）にて定量することにより、ベンジルアルコールが検出されないことを確認した。【０１３１】
実施例１１  一般式（１）でＲがメチル基、Ａがアセチル基、ｎの平均値が２７２、ａ＋ｂの平均値が１７．５、ａの平均値が１７．５、ｂの平均値が０、Ｘがフェニルアラニン残基、Ｙが水酸基、イソプロピルアミノカルボニルイソプロピルアミノ基及びゲムシタビン残基である核酸系代謝拮抗剤の高分子誘導体
実施例１０で合成した化合物（１．８３ｇ）、塩酸ゲムシタビン（５６９ｍｇ）及び４−ジメチルアミノピリジン（４６．４ｍｇ）にＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３７ｍＬ）及びＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（３３１μＬ）を加えて４０℃にて撹拌した。３０分後、ジイソプロピルカルボジイミド（５９５μＬ）を加えて４０℃にて一晩撹拌した。反応液を室温まで冷却後、ジイソプロピルエーテル−エタノール混合溶媒（４：１、５００ｍＬ）に滴下した。３０分間撹拌後、析出した沈殿物をろ取し、ジイソプロピルエーテル−エタノール混合溶媒（４：１）にて洗浄した。得られた生成物を５０％アセトニトリル水に溶解し、陽イオン交換樹脂  Ｍｕｒｏｍａｃ  Ｃ１００２（プロトン型、ムロマチテクノス株式会社、６ｍＬ）を加え、２時間室温で振とう後、樹脂をろ去し、樹脂を５０％アセトニトリル水にて洗浄した。得られたろ液の約半量を、さらに陰イオン交換樹脂  Ｍｕｒｏｍａｃ  Ａ２０３Ｔ（ＯＨ型、ムロマチテクノス株式会社、３ｍＬ）を加え、２時間室温で振とう後、樹脂をろ去し、樹脂を５０％アセトニトリル水にて洗浄した。減圧下１／２容量まで濃縮した後、凍結乾燥して標記化合物（０．９３ｇ）を得た。【０１３２】
本化合物（１１．４８ｍｇ）を実施例３と同様の方法で加水分解した後、遊離したゲムシタビンを実施例３と同様な条件で高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）にて定量することにより、本化合物のゲムシタビン含量を求めたところ、塩酸ゲムシタビン換算で９．２６％（ｗ／ｗ）であった。又、本発明化合物についてＨＰＬＣで分析したところ、遊離のゲムシタビン含量は０．２％以下であった。【０１３３】
また、本化合物におけるゲムシタビン１分子に対するイソプロピルアミノカルボニルイソプロピルアミノ基のモル比は重水酸化ナトリウム／重水／重アセトニトリルに溶解したものの１Ｈ−ＮＭＲ（水素核磁気共鳴スペクトル）から求められ、０．４５であった。【０１３４】
塩酸ゲムシタビンの含量及びゲムシタビンに対するイソプロピルアミノカルボニルイソプロピルアミノ基のモル比が得られたことにより、Ｘのフェニルアラニンが１００％導入された（ａ＋ｂ＝ａ）と仮定すると、ゲムシタビンに対する水酸基のモル比は１．５と計算できる。【０１３５】
実施例１２  分子量約１２０００のモノメトキシポリエチレングリコールと重合数約２２のポリグルタミン酸とのブロック共重合体Ｎ−アセチル化物と、Ｌ−フェニルアラニンベンジルエステルとのアミド結合体（ポリカルボン酸のカルボキシル基に対して約１００％）の合成
参考例３で合成した分子量約１２０００のモノメトキシポリエチレングリコールと重合数約２２のポリグルタミン酸とのブロック共重合体Ｎ−アセチル化物（１．３０ｇ）、Ｌ−フェニルアラニンベンジルエステルの塩酸塩（８４５ｍｇ）及びＮ、Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（５０５μＬ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２６ｍＬ）に溶解し、ＤＭＴ−ＭＭ（１．０７ｇ）を加えて４０℃にて一晩撹拌した。反応液を室温まで冷却後、ジイソプロピルエーテル−エタノール混合溶媒（４：１、３００ｍＬ）に滴下した。３０分間撹拌した後、析出した沈殿物をろ取し、ジイソプロピルエーテル−エタノール混合溶媒（４：１）にて洗浄し、標記化合物（１．７５ｇ）を得た。【０１３６】
本化合物を実施例１と同様の方法で加水分解した後、遊離したベンジルアルコールを実施例１と同様な条件で高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）にて定量することにより、本化合物のアミド結合しているＰｈｅ−ＯＢｚｌ基の結合率を求めたところポリグルタミン酸のカルボキシル基に対して９９．９％であった。【０１３７】
実施例１３  分子量約１２０００のモノメトキシポリエチレングリコールと重合数約２２のポリグルタミン酸とのブロック共重合体Ｎ−アセチル化物と、Ｌ−フェニルアラニンとのアミド結合体（ポリカルボン酸のカルボキシル基に対して約１００％）の合成
実施例１２で合成した化合物（１．７０ｇ）をＮ、Ｎ−ジメチルホルムアミド（３４ｍＬ）に溶解し、５％パラジウム炭素（５５％含水、１７０ｍｇ）を加えて、水素雰囲気下室温にて一晩撹拌した。パラジウム炭素をろ別後、ろ液をイソプロピルエーテル−酢酸エチル混合溶媒（４：１、４００ｍＬ）撹拌下に滴下し、更に１時間撹拌した。析出した沈殿物をろ取し、イソプロピルエーテル−酢酸エチル混合溶媒（４：１）にて洗浄した。得られた生成物を５０％アセトニトリル水に溶解し、陽イオン交換樹脂  Ｍｕｒｏｍａｃ  Ｃ１００２（プロトン型、ムロマチテクノス株式会社、６ｍＬ）を加え、２時間室温で振とう後、樹脂をろ去し、樹脂を５０％アセトニトリル水にて洗浄した。得られたろ液を、減圧下１／２容量まで濃縮した後、凍結乾燥して標記化合物（１．４２ｇ）を得た。【０１３８】
本化合物を実施例１と同様の方法で加水分解した後、遊離したベンジルアルコールを実施例１と同様な条件で高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）にて定量することにより、ベンジルアルコールが検出されないことを確認した。【０１３９】
実施例１４  一般式（１）でＲがメチル基、Ａがアセチル基、ｎの平均値が２７２、ａ＋ｂの平均値が２２．１、ａの平均値が２２．１、ｂの平均値が０、Ｘがフェニルアラニン残基、Ｙが水酸基、イソプロピルアミノカルボニルイソプロピルアミノ基及びゲムシタビン残基である核酸系代謝拮抗剤の高分子誘導体
実施例１３で合成した化合物（１．４０ｇ）、塩酸ゲムシタビン（５１２ｍｇ）及び４−ジメチルアミノピリジン（４１．８ｍｇ）にＮ、Ｎ−ジメチルホルムアミド（２８ｍＬ）及びＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（２９８μＬ）を加えて４０℃にて撹拌した。３０分後、ジイソプロピルカルボジイミド（５３５μＬ）を加えて４０℃にて一晩撹拌した。反応液を室温まで冷却後、ジイソプロピルエーテル−エタノール混合溶媒（４：１、５００ｍＬ）に滴下した。３０分間撹拌後、析出した沈殿物をろ取し、ジイソプロピルエーテル−エタノール混合溶媒（４：１）にて洗浄した。得られた生成物を５０％アセトニトリル水に溶解し、陽イオン交換樹脂  Ｍｕｒｏｍａｃ  Ｃ１００２（プロトン型、ムロマチテクノス株式会社、６ｍＬ）を加え、２時間室温で振とう後、樹脂をろ去し、樹脂を５０％アセトニトリル水にて洗浄した。得られたろ液の約半量を、さらに陰イオン交換樹脂  Ｍｕｒｏｍａｃ  Ａ２０３Ｔ（ＯＨ型、ムロマチテクノス株式会社、３ｍＬ）を加え、２時間室温で振とう後、樹脂をろ去し、樹脂を５０％アセトニトリル水にて洗浄した。減圧下１／２容量まで濃縮した後、凍結乾燥して標記化合物（０．７７ｇ）を得た。【０１４０】
本化合物（１１．０２ｍｇ）を実施例３と同様の方法で加水分解した後、遊離したゲムシタビンを実施例３と同様な条件で高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）にて定量することにより、本化合物のゲムシタビン含量を求めたところ、塩酸ゲムシタビン換算で１１．０９％（ｗ／ｗ）であった。又、本発明化合物についてＨＰＬＣで分析したところ、遊離のゲムシタビン含量は０．２％以下であった。【０１４１】
また、本化合物におけるゲムシタビン１分子に対するイソプロピルアミノカルボニルイソプロピルアミノ基のモル比は重水酸化ナトリウム／重水／重アセトニトリルに溶解したものの１Ｈ−ＮＭＲ（水素核磁気共鳴スペクトル）から求められ、０．３６であった。【０１４２】
塩酸ゲムシタビンの含量及びゲムシタビンに対するイソプロピルアミノカルボニルイソプロピルアミノ基のモル比が得られたことにより、Ｘのフェニルアラニンが１００％導入された（ａ＋ｂ＝ａ）と仮定すると、ゲムシタビンに対する水酸基のモル比は１．５と計算できる。【０１４３】
実施例１５  分子量約１２０００のモノメトキシポリエチレングリコールと重合数約２６のポリグルタミン酸とのブロック共重合体Ｎ−アセチル化物と、Ｌ−フェニルアラニンベンジルエステルとのアミド結合体（ポリカルボン酸のカルボキシル基に対して約９７％）の合成
参考例４で合成した分子量約１２０００のモノメトキシポリエチレングリコールと重合数約２６のポリグルタミン酸のブロック共重合体  Ｎ−アセチル化物（１．００ｇ）、Ｌ−フェニルアラニンベンジルエステルの塩酸塩（７３６ｍｇ）及びＮ、Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（４３９μＬ）をＮ、Ｎ−ジメチルホルムアミド（２０ｍＬ）に溶解し、ＤＭＴ−ＭＭ（９３０ｍｇ）を加えて４０℃にて一晩撹拌した。反応液を室温まで冷却後、ジイソプロピルエーテル−エタノール混合溶媒（４：１、２００ｍＬ）に滴下した。３０分間撹拌した後、析出した沈殿物をろ取し、ジイソプロピルエーテル−エタノール混合溶媒（４：１）にて洗浄し、標記化合物（１．３０ｇ）を得た。【０１４４】
本化合物を実施例１と同様の方法で加水分解した後、遊離したベンジルアルコールを実施例１と同様な条件で高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）にて定量することにより、本化合物のアミド結合しているＰｈｅ−ＯＢｚｌ基の結合率を求めたところポリグルタミン酸のカルボキシル基に対して９７．２％であった。【０１４５】
実施例１６  分子量約１２０００のモノメトキシポリエチレングリコールと重合数約２６のポリグルタミン酸とのブロック共重合体  Ｎ−アセチル化物と、Ｌ−フェニルアラニンとのアミド結合体（ポリカルボン酸のカルボキシル基に対して約９７％）の合成
実施例１５で合成した化合物（１．３０ｇ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２５ｍＬ）に溶解し、５％パラジウム炭素（５５％含水、１３０ｍｇ）を加えて、水素雰囲気下室温にて一晩撹拌した。パラジウム炭素をろ別後、ろ液をイソプロピルエーテル−酢酸エチル混合溶媒（４：１、２００ｍＬ）撹拌下に滴下し、更に１時間撹拌した。析出した沈殿物をろ取し、イソプロピルエーテル−酢酸エチル混合溶媒（４：１）にて洗浄した。得られた生成物を５０％アセトニトリル水に溶解し、陽イオン交換樹脂  Ｍｕｒｏｍａｃ  Ｃ１００２（プロトン型、ムロマチテクノス株式会社、５ｍＬ）を加え、２時間室温で振とう後、樹脂をろ去し、樹脂を５０％アセトニトリル水にて洗浄した。得られたろ液を、減圧下１／２容量まで濃縮した後、凍結乾燥して標記化合物（１．１０ｇ）を得た。【０１４６】
本化合物を実施例１と同様の方法で加水分解した後、遊離したベンジルアルコールを実施例１と同様な条件で高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）にて定量することにより、ベンジルアルコールが検出されないことを確認した。【０１４７】
実施例１７  一般式（１）でＲがメチル基、Ａがアセチル基、ｎの平均値が２７２、ａ＋ｂの平均値が２５．８５、ａの平均値が２５．１３、ｂの平均値が０．７２、Ｘがフェニルアラニン残基、Ｙが水酸基、イソプロピルアミノカルボニルイソプロピルアミノ基及びゲムシタビン残基である核酸系代謝拮抗剤の高分子誘導体
実施例１６で合成した化合物（９９５ｍｇ）、塩酸ゲムシタビン（４０２ｍｇ）及び４−ジメチルアミノピリジン（３２．７ｍｇ）にＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２０ｍＬ）及びＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（２３４μＬ）を加えて４０℃にて撹拌した。３０分後、ジイソプロピルカルボジイミド（４２０μＬ）を加えて４０℃にて一晩撹拌した。反応液を室温まで冷却後、ジイソプロピルエーテル−エタノール混合溶媒（４：１、２００ｍＬ）に滴下した。３０分間撹拌後、析出した沈殿物をろ取し、ジイソプロピルエーテル−エタノール混合溶媒（４：１）にて洗浄した。得られた生成物を５０％アセトニトリル水に溶解し、陽イオン交換樹脂  Ｍｕｒｏｍａｃ  Ｃ１００２（プロトン型、ムロマチテクノス株式会社、４ｍＬ）を加え、２時間室温で振とう後、樹脂をろ去し、樹脂を５０％アセトニトリル水にて洗浄した。得られたろ液を、さらに陰イオン交換樹脂  Ｍｕｒｏｍａｃ  Ａ２０３Ｔ（ＯＨ型、ムロマチテクノス株式会社、４ｍＬ）を加え、２時間室温で振とう後、樹脂をろ去し、樹脂を５０％アセトニトリル水にて洗浄した。減圧下１／２容量まで濃縮した後、凍結乾燥して標記化合物（９５０ｍｇ）を得た。【０１４８】
本化合物（１１．２８ｍｇ）を実施例３と同様の方法で加水分解した後、遊離したゲムシタビンを実施例３と同様な条件で高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）にて定量することにより、本化合物のゲムシタビン含量を求めたところ、塩酸ゲムシタビン換算で１２．７６％（ｗ／ｗ）であった。又、本発明化合物についてＨＰＬＣで分析したところ、遊離のゲムシタビン含量は０．２％以下であった。【０１４９】
また、本化合物におけるゲムシタビンに対するイソプロピルアミノカルボニルイソプロピルアミノ基のモル比は重水酸化ナトリウム／重水／重アセトニトリルに溶解したものの１Ｈ−ＮＭＲ（水素核磁気共鳴スペクトル）から求められ、０．３５であった。【０１５０】
塩酸ゲムシタビンの含量及びゲムシタビンに対するイソプロピルアミノカルボニルイソプロピルアミノ基のモル比が得られたことにより、Ｘのフェニルアラニンが１００％導入された（ａ＋ｂ＝ａ）と仮定すると、ゲムシタビンに対する水酸基のモル比は１．４と計算できる。【０１５１】
試験例１  酵素非存在下における薬剤放出性試験（１）
実施例３の化合物、実施例４の化合物、実施例７の化合物、実施例８の化合物をリン酸緩衝生理食塩水（ｐＨ７．４）に１．０ｍｇ／ｍＬとなるように溶解し、３７℃にて定温放置した。放出されたゲムシタビン及びドキシフルリジン量をＨＰＬＣにて経時的に測定し、使用した化合物中の全ゲムシタビン及びドキシフルリジン量に対する放出されたゲムシタビン及びドキシフルリジン量の割合を求めた。結果を図１に示す。本発明の化合物が酵素非存在下、薬剤を徐放することが示された。【０１５２】
試験例２  酵素非存在下における薬剤放出性試験（２）
実施例１１の化合物、実施例１４の化合物、実施例１７の化合物をリン酸緩衝生理食塩水（ｐＨ７．４）に１．０ｍｇ／ｍＬとなるように溶解し、３７℃にて定温放置した。放出されたゲムシタビン量をＨＰＬＣにて経時的に測定し、使用した化合物中の全ゲムシタビン量に対する放出されたゲムシタビン量の割合を求めた。結果を図２に示す。本発明の化合物が酵素非存在下、薬剤を徐放することが示された。【０１５３】
試験例３  マウス血漿中における薬剤放出性
実施例１１の化合物、実施例１７の化合物を、リン酸緩衝生理食塩水（ｐＨ７．４）に溶解後、マウスより採血・調製した血漿を４倍量（ｖ／ｖ）加えて、３７℃にて定温放置した。５０μＬずつを経時的に取り、５０％メタノール水（４５０μＬ）にて希釈した。メンブランフィルター（孔径０．４５μｍ）にて除タンパク処理した後、本発明化合物より放出されたゲムシタビン量をＨＰＬＣにて経時的に測定し、本発明化合物中の全ゲムシタビン量に対する、放出されたゲムシタビン量の割合を求めた。結果を図３に示す。本発明の化合物が、血漿中でも薬剤を徐放していることから、血漿中の酵素による加水分解反応に依存しない化合物であることが示された。【０１５４】
試験例２及び試験例３の結果を比較すると、本発明の化合物が、マウス血漿中においては、酵素非存在下の場合よりも、薬剤放出率が高いものの、その差は小さい。これは本発明の化合物が、酵素による加水分解反応に対して感受性が低いために、マウス血漿中においても高分子誘導体として、長時間滞留し、薬剤を放出していると考えられる。【０１５５】
試験例４  担癌マウスに対する抗腫瘍効果（１）
マウス皮下で継代しているマウス大腸癌Ｃｏｌｏｎ２６腫瘍塊を約２ミリメートル角のブロックにし、套管針を用いてマウス皮下に移植した。腫瘍移植後７日目に実施例５の化合物を５％ブドウ糖注射液で、対照薬としての塩酸ゲムシタビンを生理食塩水で溶解し、表２に示す投与量で静脈内に単回投与した。投与開始日及び投与開始後８日目の腫瘍体積を下記の計算式により算出し、投与開始日に対する投与開始後８日目の相対腫瘍体積を求めた。結果を表２に示す。【０１５６】
【数１】
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【０１５７】
【表２】
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【０１５８】
この結果、本発明の化合物は、対照薬である塩酸ゲムシタビンと比較して低投与量で同等以上の抗腫瘍効果を有することが明らかである。【０１５９】
試験例５  担癌マウスに対する抗腫瘍効果（２）
マウス皮下で継代しているマウス大腸癌Ｃｏｌｏｎ２６腫瘍塊を約２ミリメートル角のブロックにし、套管針を用いてマウス皮下に移植した。腫瘍移植後７日目に実施例１１の化合物、実施例１４の化合物、実施例１７の化合物を５％ブドウ糖注射液で、対照薬としての塩酸ゲムシタビンを生理食塩水にて溶解し、表３に示す投与量で静脈内に単回投与した。投与開始日及び投与開始後７日目、２６日目の腫瘍体積を前記の計算式により算出し、投与開始日に対する投与開始後７日目、２６日目の相対腫瘍体積を求めた。結果を表３に示す。【０１６０】
【表３】
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【０１６１】
この結果、本発明の化合物は、対照薬である塩酸ゲムシタビンと比較して低投与量で持続的に強い抗腫瘍効果を有することが明らかである。
【図面の簡単な説明】
【０１６２】
【図１】酵素非存在下における薬剤放出の経時変化を示す。◆は実施例３の化合物、○は実施例４の化合物、△は実施例７の化合物、×は実施例８の化合物をそれぞれ表す。
【図２】酵素非存在下における薬剤放出の経時変化を示す。◆は実施例１１の化合物、○は実施例１４の化合物、×は実施例１７の化合物をそれぞれ表す。
【図３】マウス血漿中における薬剤放出の経時変化を示す。◆は実施例１１の化合物、×は実施例１７の化合物をそれぞれ表す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【国際調査報告】
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