【手続補正書】
【提出日】平成17年4月28日(2005.4.28)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
チロシンキナーゼ阻害剤を活性成分として含有する骨喪失を予防及び／又は治療するための組成物。
【請求項２】
チロシンキナーゼ阻害剤が、IL-3の存在下で培養したIL-3依存的細胞の死を促進することができない、請求項1記載の組成物。
【請求項３】
c-kit阻害剤を活性成分として含有する骨喪失を予防及び／又は治療するための組成物。 
【請求項４】
c-kit阻害剤が非毒性の選択的および強力なc-kit阻害剤である、請求項3記載の組成物。
【請求項５】
阻害剤が、インドリノン、ピリミジン誘導体、ピロロピリミジン誘導体、キナゾリン誘導体、キノキサリン誘導体、ピラゾール誘導体、ビス単環式、二環式、または複素環式アリール化合物、ビニレン-アザインドール誘導体およびピリジル-キノロン誘導体、スチリル化合物、スチリル置換ピリジル化合物、セレオインドール、セレニド、三環式ポリヒドロキシル化合物、ならびにベンジルホスホン酸化合物からなる群より選択される、請求項4記載の組成物。
【請求項６】
阻害剤が以下からなる群より選択される、請求項4記載の組成物：
−ピリミジン誘導体、
−インドリノン誘導体、
−単環式、二環式アリール、およびヘテロアリール化合物、ならびに
−キナゾリン誘導体。
【請求項７】
c-kit阻害剤が、以下の式IIの化合物から選択される、請求項3から6のいずれか一項に記載の組成物：
【化１】
2004530722.tif 000001
式中、R1、R2およびR3は、H、F、Cl、Br、I、C1〜C5アルキル、または環状もしくは複素環基、特にピリジル基から独立して選択され；
R4、R5、およびR6は、H、F、Cl、Br、I、C1〜C5アルキル、特にメチル基から独立して選択され；
ならびにR7は、少なくとも一つの置換基を有するフェニル基であり、少なくとも一つの塩基性部位を有する。
【請求項８】
c-kit阻害剤が、4-(4-メチルピペラジン-1-イルメチル)-N-[4-メチル-3-(4-ピリジン-3-イル)ピリミジン-2-イルアミノ]フェニル]ベンズアミドである、請求項3から6のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項９】
c-kit阻害剤がIL-3の存在下で培養したIL-3依存的細胞の死を促進することができない、請求項3から8のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１０】
c-kit阻害剤が活性化c-kitの阻害剤である、請求項3から9のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１１】
活性化c-kit阻害剤がSCF活性化c-kitを阻害することができる、請求項10記載の組成物。
【請求項１２】
阻害剤が構成的に活性化された変異体c-kitを阻害することができる、請求項10記載の組成物。
【請求項１３】
以下を含むスクリーニング法によって得ることができる、選択的で強力かつ非毒性の活性化c-kit阻害剤である化合物を含む、骨喪失を治療するための組成物：
a）（i）活性化c-kit、および（ii）試験する少なくとも一つの化合物を、成分（i）と成分（ii）とが複合体を形成することができる条件下で接触させる段階、
b）活性化c-kitを阻害する化合物を選択する段階、
c）IL-3の存在下で培養したIL-3依存的細胞の死を促進することができない、段階b）において同定された化合物のサブセットを試験して選択する段階。
【請求項１４】
スクリーニング法が、SCF活性化野生型c-kitを同様に阻害することができる変異体活性化c-kitの阻害剤である、段階b）において同定された化合物のサブセットを試験して選択することからなる段階をさらに含む、請求項13記載の組成物。
【請求項１５】
活性化c-kitが、段階a）のSCF活性化野生型c-kitである、請求項13記載の組成物。
【請求項１６】
推定の阻害剤が、段階a）において10 μMより高い濃度で試験される、請求項13から15のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１７】
IL-3が、IL-3依存的細胞の培養培地に0.5 ng/mlから10 ng/mlの濃度で存在する、請求項13から16のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１８】
IL-3依存的細胞が、肥満細胞、トランスフェクトした肥満細胞、BaF3およびIC-2からなる群より選択される、請求項17記載の組成物。
【請求項１９】
成分（ii）が活性化c-kitを阻害する程度がインビトロまたはインビボで測定される、請求項13から18のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２０】
1μM未満の濃度で野生型c-kitを阻害することができる化合物を、試験して選択することからなる段階をさらに含む、請求項13から19のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２１】
試験がインビトロまたはインビボで行われる、請求項20に記載の組成物。
【請求項２２】
変異体活性化c-kitおよび／または野生型c-kitの阻害が免疫沈降又はウェスタンブロットを用いて測定される、請求項13から21のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２３】
c-kitリン酸化の量が測定される、請求項13から21のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２４】
同定および選択された化合物が、強力、選択的で非毒性の野生型c-kit阻害剤である、請求項13から23のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２５】
以下を含むスクリーニング法によって得ることができるc-kit阻害剤を含む、骨喪失を治療するための組成物：
a）永続的に活性化されたc-kitである変異体c-kitを発現する細胞を用いて、細胞死の程度を測定することにより、それぞれがIC50＜10 μMを有する、活性化c-kitを標的とする候補化合物のサブセットを同定するために、複数の被験化合物について増殖アッセイを行う段階、
b）c-kitを特異的に標的にする候補化合物のサブセットを同定するために、IL-3の存在下で培養したIL-3依存的細胞である、野生型c-kitを発現する細胞を用いて、段階（a）において同定された候補化合物のサブセットについて増殖アッセイを行う段階、
c）c-kitを発現する細胞を用いて、段階b）において同定された化合物のサブセットについて増殖アッセイを行い、細胞死の程度を測定することにより、それぞれがIC50＜10 μMを有する、野生型c-kitを標的とする候補化合物のサブセットを選択する段階。
【請求項２６】
細胞死の程度が3Hチミジンの取り込み、トリパンブルー排除法、またはヨウ化プロピジウムによるフローサイトメトリーによって測定される、請求項25記載の組成物。
【請求項２７】
閉経後骨粗鬆症、老人性骨粗鬆症、およびグルココルチコイド誘発骨粗鬆症を含む骨粗鬆症、嚢胞性線維性骨炎、腎性骨形成異常、骨硬化症、オステオペニア、骨軟化症、骨線維形成不全、ならびにページェット病からなる群より選択される骨喪失を予防および／または治療するための、請求項1から26のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２８】
骨喪失を治療する薬剤を製造するためのc-kit阻害剤の使用。
【請求項２９】
閉経後骨粗鬆症、老人性骨粗鬆症、およびグルココルチコイド誘発骨粗鬆症を含む骨粗鬆症、嚢胞性線維性骨炎、腎性骨形成異常、骨硬化症、オステオペニア、骨軟化症、骨線維形成不全、ならびにページェット病からなる群より選択される骨喪失を治療するための、チロシンキナーゼ阻害剤を含む、経口投与に適した組成物。
【請求項３０】
閉経後骨粗鬆症、老人性骨粗鬆症、およびグルココルチコイド誘発骨粗鬆症を含む骨粗鬆症、嚢胞性線維性骨炎、腎性骨形成異常、骨硬化症、オステオペニア、骨軟化症、骨線維形成不全、ならびにページェット病からなる群より選択される骨喪失を治療するための、チロシンキナーゼ阻害剤を含む、局所、鼻腔内、静脈内、筋肉内、動脈内、髄内、鞘内、脳室内、経皮、皮下、腹腔内、腸内、舌下、または直腸投与に適した組成物。