【手続補正書】
【提出日】平成17年2月21日(2005.2.21)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＣｐＧ含有オリゴヌクレオチドの免疫刺激効果を低減する方法であって、該オリゴヌクレオチド中のＣｐＧジヌクレオチドの５’および／または３’側の近傍の位置に、３’置換ヌクレオシドおよび／または２’−５’ヌクレオシド間結合を導入することを含む、前記方法。
【請求項２】
遺伝子または遺伝子転写物に相補的なオリゴヌクレオチドを作製するために使用される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
オリゴヌクレオチドがアンチセンス活性を有する、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
オリゴヌクレオチド中に存在する各ＣｐＧジヌクレオチドにつき１個のみの３’置換ヌクレオシドまたは２’−５’ヌクレオシド間結合がオリゴヌクレオチド中に導入されている、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
オリゴヌクレオチド中に１個のみの３’置換ヌクレオシドまたは２’−５’ヌクレオシド間結合が導入されている、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
低減された免疫刺激効果を有するＣｐＧ含有オリゴヌクレオチドであって、該オリゴヌクレオチドがＣｐＧジヌクレオチドの５’および／または３’側の近傍の位置に、３’置換ヌクレオシドおよび／または２’−５’ヌクレオシド間結合を含む、前記オリゴヌクレオチド。
【請求項７】
オリゴヌクレオチドが１２〜５０ヌクレオチドの長さである、請求項６に記載のオリゴヌクレオチド。
【請求項８】
オリゴヌクレオチドが１７〜３５ヌクレオチドの長さである、請求項７に記載のオリゴヌクレオチド。
【請求項９】
オリゴヌクレオチドが遺伝子または遺伝子転写物と相補的である、請求項６に記載のオリゴヌクレオチド。
【請求項１０】
オリゴヌクレオチドがアンチセンス活性を有する、請求項９に記載のオリゴヌクレオチド。
【請求項１１】
オリゴヌクレオチドが、該オリゴヌクレオチドに存在する各ＣｐＧジヌクレオチドにつき１個のみの３’置換ヌクレオシドまたは２’−５’ヌクレオシド間結合を有する、請求項６に記載のオリゴヌクレオチド。
【請求項１２】
オリゴヌクレオチドが１個のみの３’置換ヌクレオシドまたは２’−５’ヌクレオシド間結合を有する、請求項６に記載のオリゴヌクレオチド。
【請求項１３】
低減された免疫刺激効果を有するＣｐＧ含有オリゴヌクレオチドの、哺乳類においてアンチセンス特異的な遺伝子発現の低減を得るための治療組成物を製造するための使用であって、該オリゴヌクレオチドが、ＣｐＧジヌクレオチドの５’および／または３’側の近傍の位置に３’置換ヌクレオシドおよび／または２’−５’ヌクレオシド間結合を含む、前記使用。
【請求項１４】
オリゴヌクレオチドが、該オリゴヌクレオチドに存在する各ＣｐＧジヌクレオチドにつき１個のみの３’置換ヌクレオシドまたは２’−５’ヌクレオシド間結合を有する、請求項１３に記載の使用。
【請求項１５】
オリゴヌクレオチドが１個のみの３’置換ヌクレオシドまたは２’−５’ヌクレオシド間結合を有する、請求項１３に記載の使用。
【請求項１６】
ＣｐＧ含有オリゴヌクレオチドの免疫刺激効果を増大させる方法であって、該方法が、オリゴヌクレオチド中の、ＣｐＧジヌクレオチドに対して５’側３番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して５’側４番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して５’側５番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して５’側６番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して３’側の２つのヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して３’側３番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して３’側４番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して３’側５番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して３’側６番目のヌクレオシド、およびそれらの組合せからなる群から選択される位置に３’置換ヌクレオシド、２’−５’ヌクレオシド間結合および／または荷電されていないヌクレオシド間結合を導入することを含む、前記方法。
【請求項１７】
オリゴヌクレオチドがアンチセンスオリゴヌクレオチドではない、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
荷電されていないヌクレオシド間結合がアルキルホスホネートである、請求項１６に記載の方法。
【請求項１９】
アルキルホスホネートがメチルホスホネートである、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
増大した免疫刺激効果を有するＣｐＧ含有オリゴヌクレオチドであって、該オリゴヌクレオチドが、ＣｐＧジヌクレオチドに対して５’側３番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して５’側４番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して５’側５番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して５’側６番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して３’側の２つのヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して３’側３番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して３’側４番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して３’側５番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して３’側６番目のヌクレオシド、およびそれらの組合せからなる群から選択される位置に３’置換ヌクレオシド、２’−５’ヌクレオシド間結合および／または荷電されていないヌクレオシド間結合を含む、前記オリゴヌクレオチド。
【請求項２１】
オリゴヌクレオチドがアンチセンスオリゴヌクレオチドではない、請求項２０に記載のオリゴヌクレオチド。
【請求項２２】
オリゴヌクレオチドが６〜５０ヌクレオチドの長さである、請求項２０に記載のオリゴヌクレオチド。
【請求項２３】
オリゴヌクレオチドが、安定性を改善するために修飾されたヌクレオチド間結合または修飾された糖をさらに含む、請求項２０に記載のオリゴヌクレオチド。
【請求項２４】
荷電されていないヌクレオシド間結合がアルキルホスホネートである、請求項２０に記載のオリゴヌクレオチド。
【請求項２５】
アルキルホスホネートがメチルホスホネートである、請求項２４に記載のオリゴヌクレオチド。
【請求項２６】
ＣｐＧジヌクレオチドに対して５’側３番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して５’側４番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して５’側５番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して５’側６番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して３’側の２つのヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して３’側３番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して３’側４番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して３’側５番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して３’側６番目のヌクレオシド、およびそれらの組合せからなる群から選択される位置に３’置換ヌクレオシド、２’−５’ヌクレオシド間結合および／または荷電されていないヌクレオシド間結合を含むオリゴヌクレオチドの、哺乳類に免疫応答を誘導するための治療組成物の製造のための使用。
【請求項２７】
オリゴヌクレオチドがアンチセンスオリゴヌクレオチドではない、請求項２６に記載の使用。
【請求項２８】
荷電されていないヌクレオシド間結合がアルキルホスホネートである、請求項２６に記載の使用。
【請求項２９】
アルキルホスホネートがメチルホスホネートである、請求項２８に記載の使用。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１７】
第１０の側面において、本発明は、ＣｐＧ含有オリゴヌクレオチドの免疫刺激効果を増大させる方法を提供する。本発明のこの側面の方法は、オリゴヌクレオチド中の、ＣｐＧジヌクレオチドに対して５’側３番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して５’側４番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して５’側５番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して５’側６番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して３’側の２つのヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して３’側３番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して３’側４番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して３’側５番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して３’側６番目のヌクレオシド、およびそれらの組合せからなる群から選択される位置に、３’置換ヌクレオシドを導入することを含む。ある好ましい態様では、該オリゴヌクレオチドは、アンチセンスオリゴヌクレオチドではない。好ましい態様において、この方法は、３’置換ヌクレオシドの２’位と、３’置換ヌクレオシドであってもなくてもよいもう１つのヌクレオシドの５’位との間に２’−５’結合を創出することを含む。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１８】
第１１の側面において、本発明は、増大した免疫刺激効果を有するＣｐＧ含有オリゴヌクレオチドであって、該オリゴヌクレオチドが、ＣｐＧジヌクレオチドに対して５’側３番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して５’側４番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して５’側５番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して５’側６番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して３’側の２つのヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して３’側３番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して３’側４番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して３’側５番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して３’側６番目のヌクレオシド、およびそれらの組合せからなる群から選択される位置に、３’置換ヌクレオシドを含むものを提供する。ある好ましい態様では、該オリゴヌクレオチドは、アンチセンスオリゴヌクレオチドではない。好ましい態様において、本発明のこの側面のＣｐＧ含有オリゴヌクレオチドは、３’置換ヌクレオシドの２’位と、３’置換ヌクレオシドであってもなくてもよいもう１つのヌクレオシドの５’位との間に２’−５’結合を含む。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１９】
第１２の側面において、本発明は、哺乳類に免疫応答を誘導する方法を提供し、該方法は、ＣｐＧジヌクレオチドに対して５’側３番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して５’側４番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して５’側５番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して５’側６番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して３’側の２つのヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して３’側３番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して３’側４番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して３’側５番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して３’側６番目のヌクレオシド、およびそれらの組合せからなる群から選択される位置に３’置換ヌクレオシドを含むオリゴヌクレオチドを、哺乳類に投与することを含む。ある好ましい態様では、該オリゴヌクレオチドは、アンチセンスオリゴヌクレオチドではない。好ましい態様において、本発明のこの側面に使用されるＣｐＧ含有オリゴヌクレオチドは、３’置換ヌクレオシドの２’位と、３’置換ヌクレオシドであってもなくてもよいもう１つのヌクレオシドの５’位との間に２’−５’結合を含む。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２０】
第１３の側面において、本発明は、ＣｐＧ含有オリゴヌクレオチドの免疫刺激効果を増大させる方法を提供する。本発明のこの側面の方法は、オリゴヌクレオチド中の、ＣｐＧジヌクレオチドに対して５’側３番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して５’側４番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して５’側５番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して５’側６番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して３’側の２つのヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して３’側３番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して３’側４番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して３’側５番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して３’側６番目のヌクレオシド、およびそれらの組合せからなる群から選択される位置に、荷電されていないヌクレオシド間結合を導入することを含む。ある好ましい態様では、該オリゴヌクレオチドは、アンチセンスオリゴヌクレオチドではない。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２１】
第１４の側面において、本発明は、増大した免疫刺激効果を有するＣｐＧ含有オリゴヌクレオチドであって、該オリゴヌクレオチドが、ＣｐＧジヌクレオチドに対して５’側３番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して５’側４番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して５’側５番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して５’側６番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して３’側の２つのヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して３’側３番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して３’側４番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して３’側５番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して３’側６番目のヌクレオシド、およびそれらの組合せからなる群から選択される位置に、荷電されていないヌクレオシド間結合を含むものを提供する。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２２】
第１５の側面において、本発明は、哺乳類に免疫応答を誘導する方法を提供し、該方法は、ＣｐＧジヌクレオチドに対して５’側３番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して５’側４番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して５’側５番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して５’側６番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して３’側の２つのヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して３’側３番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して３’側４番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して３’側５番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して３’側６番目のヌクレオシド、およびそれらの組合せからなる群から選択される位置に荷電されていないヌクレオシド間結合を含むオリゴヌクレオチドを、哺乳類に投与することを含む。ある好ましい態様では、該オリゴヌクレオチドは、アンチセンスオリゴヌクレオチドではない。
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２３】
第１６の側面において、本発明は、ＣｐＧ含有オリゴヌクレオチドの免疫刺激効果を増大させる方法を提供する。本発明のこの側面の方法は、オリゴヌクレオチド中の、ＣｐＧジヌクレオチドに対して５’側３番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して５’側４番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して５’側５番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して５’側６番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して３’側の２つのヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して３’側３番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して３’側４番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して３’側５番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して３’側６番目のヌクレオシド、およびそれらの組合せからなる群から選択される位置に、２’−５’ヌクレオシド間結合を導入することを含む。ある好ましい態様では、該オリゴヌクレオチドは、アンチセンスオリゴヌクレオチドではない。
【手続補正９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２４】
第１７の側面において、本発明は、増大した免疫刺激効果を有するＣｐＧ含有オリゴヌクレオチドであって、該オリゴヌクレオチドが、ＣｐＧジヌクレオチドに対して５’側３番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して５’側４番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して５’側５番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して５’側６番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して３’側の２つのヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して３’側３番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して３’側４番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して３’側５番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して３’側６番目のヌクレオシド、およびそれらの組合せからなる群から選択される位置に、２’−５’ヌクレオシド間結合を含むものを提供する。
【手続補正１０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２５】
第１８の側面において、本発明は、哺乳類に免疫応答を誘導する方法を提供し、該方法は、ＣｐＧジヌクレオチドに対して５’側３番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して５’側４番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して５’側５番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して５’側６番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して３’側の２つのヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して３’側３番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して３’側４番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して３’側５番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して３’側６番目のヌクレオシド、およびそれらの組合せからなる群から選択される位置に２’−５’ヌクレオシド間結合を含むオリゴヌクレオチドを、哺乳類に投与することを含む。ある好ましい態様では、該オリゴヌクレオチドは、アンチセンスオリゴヌクレオチドではない。
【手続補正１１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３４】
好ましくは、このようなオリゴヌクレオチドは、約１２〜約５０のヌクレオチド、最も好ましくは、約１７〜約３５のヌクレオチドを有するだろう。本発明のこの側面の好ましいオリゴヌクレオチドは、遺伝子または遺伝子転写物に相補的である。より好ましくは、このようなオリゴヌクレオチドはアンチセンス活性を有する。いくつかの好ましい態様では、オリゴヌクレオチドは、該オリゴヌクレオチド中に存在する各ＣｐＧジヌクレオチドにつき１個のみの３’置換ヌクレオシドを有する。いくつかの好ましい態様では、オリゴヌクレオチドは、１個のみの３’置換ヌクレオシドを有する。
【手続補正１２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３７】
単一の処置エピソードとして、１つの個体に、治療的に有効な量の１種または２種以上の本発明の治療組成物を、同時にまたは順次投与することが望ましいかもしれない。好ましい態様においては、問題の組成物を投与した後、補体の活性化、有糸分裂誘起（mitogenesis）およびトロンビン血餅形成の抑制（inhibition of thrombin clot formation）からなる群から選択される生物学的効果について１種または２種以上の測定が行なわれる。
本発明のこの側面の方法は、疾患または遺伝子発現の動物モデルに有用であり、そしてさらに、ヒトまたは動物の疾患の治療的処置に有用である。
【手続補正１３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４１】
第５の側面において、本発明は、低減された免疫刺激効果を有するＣｐＧ含有オリゴヌクレオチドであって、該オリゴヌクレオチドが、ＣｐＧジヌクレオチドの５’側の近傍の位置に、荷電されていないヌクレオシド間結合を含むものを提供する。好ましくは、このようなオリゴヌクレオチドは、約１７〜約５０のヌクレオチド、最も好ましくは、約１２〜約３５のヌクレオチドを有するだろう。本発明のこの側面の好ましいオリゴヌクレオチドは、遺伝子または遺伝子転写物に相補的である。より好ましくは、このようなオリゴヌクレオチドはアンチセンス活性を有する。いくつかの好ましい態様では、オリゴヌクレオチドは、該オリゴヌクレオチド中に存在する各ＣｐＧジヌクレオチドにつき１個のみの荷電されていないヌクレオシド間結合を有する。いくつかの好ましい態様では、オリゴヌクレオチドは、１個のみの荷電されていないヌクレオシド間結合を有する。
【手続補正１４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４４】
単一の処置エピソードとして、１つの個体に、治療的に有効な量の１種または２種以上の本発明の治療組成物を、同時にまたは順次投与することが望ましいかもしれない。好ましい態様においては、問題の組成物を投与した後、補体の活性化、有糸分裂誘起およびトロンビン血餅形成の抑制からなる群から選択される生物学的効果について１種または２種以上の測定が行なわれる。
本発明のこの側面の方法は、疾患または遺伝子発現の動物モデルに有用であり、そしてさらに、ヒトまたは動物の疾患の治療的処置に有用である。
【手続補正１５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４６】
本発明のこの側面の方法は、ＣｐＧジヌクレオチドの組込み直後のサイクルにおける合成過程に、適切な３’保護モノマーシントンを単に使用することにより、よく知られた任意の合成技術を用いて、都合よく行うことができる。好ましいモノマーは、ホスホルアミダイト、ホスホトリエステルおよびＨ−ホスホネートを含む。したがって、本発明の目的において、「オリゴヌクレオチド中の、ＣｐＧジヌクレオチドの５’側の近傍の位置に、２’−５’ヌクレオシド間結合を導入すること」とは、単に、２’−５’ヌクレオシド間結合を有するオリゴヌクレオチドを、このような位置に合成すること、即ち、ＣｐＧのＣの５’位が２’−５’結合を形成することを意味する。２’−５’ヌクレオシド間結合を含むオリゴヌクレオチドの合成は、当該分野によく知られている。
【手続補正１６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４７】
第８の側面において、本発明は、低減された免疫刺激効果を有するＣｐＧ含有オリゴヌクレオチドであって、該オリゴヌクレオチドが、ＣｐＧジヌクレオチドの５’側の近傍の位置に、２’−５’ヌクレオシド間結合を含むものを提供する。好ましくは、このようなオリゴヌクレオチドは、約１２〜約５０のヌクレオチド、最も好ましくは、約１７〜約３５のヌクレオチドを有するだろう。本発明のこの側面の好ましいオリゴヌクレオチドは、遺伝子または遺伝子転写物に相補的である。より好ましくは、このようなオリゴヌクレオチドはアンチセンス活性を有する。いくつかの好ましい態様では、オリゴヌクレオチドは、該オリゴヌクレオチド中に存在する各ＣｐＧジヌクレオチドにつき１個のみの２’−５’ヌクレオシド間結合を有する。いくつかの好ましい態様では、オリゴヌクレオチドは、１個のみの２’−５’ヌクレオシド間結合を有する。
【手続補正１７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５０】
単一の処置エピソードとして、１つの個体に、治療的に有効な量の１種または２種以上の本発明の治療組成物を、同時にまたは順次投与することが望ましいかもしれない。好ましい態様においては、問題の組成物を投与した後、補体の活性化、有糸分裂誘起およびトロンビン血餅形成の抑制からなる群から選択される生物学的効果について１種または２種以上の測定が行なわれる。
本発明のこの側面の方法は、疾患または遺伝子発現の動物モデルに有用であり、そしてさらに、ヒトまたは動物の疾患の治療的処置に有用である。
【手続補正１８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５１】
第１０の側面において、本発明は、ＣｐＧ含有オリゴヌクレオチドの免疫刺激効果を増大させる方法を提供する。本発明のこの側面の方法は、オリゴヌクレオチド中の、ＣｐＧジヌクレオチドに対して５’側３番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して５’側４番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して５’側５番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して５’側６番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して３’側の２つのヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して３’側３番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して３’側４番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して３’側５番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して３’側６番目のヌクレオシド、およびそれらの組合せからなる群から選択される位置に、３’置換ヌクレオシドを導入することを含む。ある好ましい態様では、該オリゴヌクレオチドは、アンチセンスオリゴヌクレオチドではない。好ましい態様において、この方法は、３’置換ヌクレオシドの２’位と、３’置換ヌクレオシドであってもなくてもよいもう１つのヌクレオシドの５’位との間に２’−５’結合を創出することを含む。
【手続補正１９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５３】
本発明のこの側面の方法は、ＣｐＧジヌクレオチドの組込み直後のサイクルにおける合成過程に、適切な３’置換モノマーシントンを単に使用することにより、よく知られた任意の合成技術を用いて、都合よく行うことができる。好ましいモノマーは、ホスホルアミダイト、ホスホトリエステルおよびＨ−ホスホネートを含む。したがって、本発明の目的において、「オリゴヌクレオチド中の、ＣｐＧジヌクレオチドに対して５’側３番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して５’側４番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して５’側５番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して５’側６番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して３’側の２つのヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して３’側３番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して３’側４番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して３’側５番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して３’側６番目のヌクレオシド、およびそれらの組合せからなる群から選択される位置に、３’置換ヌクレオシドを導入すること」とは、単に、３’置換ヌクレオシドを有するオリゴヌクレオチドを、このような位置に合成することを意味する。
【手続補正２０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５４】
第１１の側面において、本発明は、増大した免疫刺激効果を有するＣｐＧ含有オリゴヌクレオチドであって、該オリゴヌクレオチドが、ＣｐＧジヌクレオチドに対して５’側３番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して５’側４番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して５’側５番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して５’側６番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して３’側の２つのヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して３’側３番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して３’側４番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して３’側５番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して３’側６番目のヌクレオシド、およびそれらの組合せからなる群から選択される位置に、３’置換ヌクレオシドを含むものを提供する。ある好ましい態様では、該オリゴヌクレオチドは、アンチセンスオリゴヌクレオチドではない。好ましい態様において、本発明のこの側面のＣｐＧ含有オリゴヌクレオチドは、３’置換ヌクレオシドの２’位と、３’置換ヌクレオシドであってもなくてもよいもう１つのヌクレオシドの５’位との間に２’−５’結合を含む。
【手続補正２１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５５】
本発明の第１１の側面の好ましいオリゴヌクレオチドは、長さが約６〜約５０ヌクレオチドであり、安定性、生物学的利用性、または、その他の臨床的に関係する特徴を改善するために、修飾されたヌクレオチド間結合または修飾された糖をさらに含んでもよい。
【手続補正２２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５６】
第１２の側面において、本発明は、哺乳類に免疫応答を誘導する方法を提供し、該方法は、ＣｐＧジヌクレオチドに対して５’側３番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して５’側４番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して５’側５番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して５’側６番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して３’側の２つのヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して３’側３番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して３’側４番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して３’側５番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して３’側６番目のヌクレオシド、およびそれらの組合せからなる群から選択される位置に３’置換ヌクレオシドを含むオリゴヌクレオチドを、哺乳類に投与することを含む。ある好ましい態様では、該オリゴヌクレオチドは、アンチセンスオリゴヌクレオチドではない。好ましい態様において、本発明のこの側面に使用されるＣｐＧ含有オリゴヌクレオチドは、３’置換ヌクレオシドの２’位と、３’置換ヌクレオシドであってもなくてもよいもう１つのヌクレオシドの５’位との間に２’−５’結合を含む。
【手続補正２３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５７】
本発明のこの側面の方法では、好ましくは、オリゴヌクレオチドの投与は非経口投与、経口投与、舌下投与、経皮投与、局所投与、鼻内投与または直腸内投与であるべきである。治療組成物の投与は、公知の手順を使用し、疾患の症状または代用の指標を減少させるために効果的な用量および期間で行うことができる。全身的に投与する場合、治療組成物は、好ましくは、オリゴヌクレオチドの血液レベルが約０．０１マイクロモーラー〜約１０マイクロモーラーに達する十分な用量で投与される。局所的な投与においては、これより大幅に低い濃度が有効かも知れず、そして、大幅に高い濃度が耐容されるかもしれない。好ましくは、オリゴヌクレオチドの総用量は、患者１日当たりオリゴヌクレオチド約0.1ｍｇから、１日体重１ｋｇ当たりオリゴヌクレオチド約２００ｍｇまでの範囲だろう。単一の処置エピソードとして、１つの個体に、治療的に有効な量の１種または２種以上の本発明の治療組成物を、同時にまたは順次投与することが望ましいかもしれない。好ましい態様においては、問題の組成物を投与した後、補体の活性化、有糸分裂誘起およびトロンビン血餅形成の抑制からなる群から選択される生物学的効果について１種または２種以上の測定が行なわれる。
【手続補正２４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５８】
ある好ましい態様において、本発明のオリゴヌクレオチドは、免疫応答の特異性または大きさを増大させるために、ワクチンおよび／またはアジュバントとの組合せにおいて投与される。オリゴヌクレオチドまたはワクチンか、あるいはその両方は、随意的に、キーホールリンペットヘモシアニン、コレラ毒素Ｂサブユニットなどの免疫原性タンパク質、または、任意のその他の免疫原性担体タンパク質と結合されていてもよい。フロイント完全アジュバントを含むがこれに限定されない、任意の多くのアジュバントを使用してもよい。この側面に関して、「との組合わせにおいて」とは、同一患者における同一疾患の処置の間において、を意味し、同時投与ならびに数日までの時間的に間隔をあけた順序を含む任意の順序で、オリゴヌクレオチドおよび/またはワクチンおよび／またはアジュバントを投与することを含む。
【手続補正２５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６０】
第１３の側面において、本発明は、ＣｐＧ含有オリゴヌクレオチドの免疫刺激効果を増大させる方法を提供する。本発明のこの側面の方法は、オリゴヌクレオチド中の、ＣｐＧジヌクレオチドに対して５’側３番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して５’側４番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して５’側５番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して５’側６番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して３’側の２つのヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して３’側３番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して３’側４番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して３’側５番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して３’側６番目のヌクレオシド、およびそれらの組合せからなる群から選択される位置に、荷電されていないヌクレオシド間結合を導入することを含む。ある好ましい態様では、該オリゴヌクレオチドは、アンチセンスオリゴヌクレオチドではない。
【手続補正２６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６２】
本発明のこの側面の方法は、ＣｐＧジヌクレオチドの組込み直後のサイクルにおける合成過程に、適切なＰ置換モノマーシントンを単に使用することにより、よく知られた任意の合成技術を用いて、都合よく行うことができる。好ましいモノマーは、ホスファイト、ホスホトリエステルおよびＨ−ホスファイトを含む。したがって、本発明の目的において、「オリゴヌクレオチド中の、ＣｐＧジヌクレオチドに対して５’側３番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して５’側４番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して５’側５番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して５’側６番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して３’側の２つのヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して３’側３番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して３’側４番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して３’側５番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して３’側６番目のヌクレオシド、およびそれらの組合せからなる群から選択される位置に、荷電していないヌクレオシド間結合を導入すること」とは、単に、荷電していないヌクレオシド間結合を有するオリゴヌクレオチドを、このような位置に合成すること、即ち、ＣｐＧのＣから数えて、荷電していないヌクレオシド間結合が、そのヌクレオシドの３’結合であることを意味する。荷電されていないヌクレオシド間結合を含むオリゴヌクレオチドの合成は、当該分野によく知られている。
【手続補正２７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６３】
第１４の側面において、本発明は、増大した免疫刺激効果を有するＣｐＧ含有オリゴヌクレオチドであって、該オリゴヌクレオチドが、ＣｐＧジヌクレオチドに対して５’側３番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して５’側４番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して５’側５番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して５’側６番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して３’側の２つのヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して３’側３番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して３’側４番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して３’側５番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して３’側６番目のヌクレオシド、およびそれらの組合せからなる群から選択される位置に、荷電されていないヌクレオシド間結合を含むものを提供する。
【手続補正２８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６５】
第１５の側面において、本発明は、哺乳類に免疫応答を誘導する方法を提供し、該方法は、哺乳類に、ＣｐＧジヌクレオチドに対して５’側３番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して５’側４番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して５’側５番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して５’側６番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して３’側の２つのヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して３’側３番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して３’側４番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して３’側５番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して３’側６番目のヌクレオシド、およびそれらの組合せからなる群から選択される位置に、荷電されていないヌクレオシド間結合を含むオリゴヌクレオチドを投与することを含む。ある好ましい態様では、該オリゴヌクレオチドは、アンチセンスオリゴヌクレオチドではない。
【手続補正２９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６６】
本発明のこの側面の方法では、好ましくは、オリゴヌクレオチドの投与は非経口投与、経口投与、舌下投与、経皮投与、局所投与、鼻内投与または直腸内投与であるべきである。治療組成物の投与は、公知の手順を使用し、疾患の症状または代用の指標を減少させるために効果的な用量および期間で行うことができる。全身的に投与する場合、治療組成物は、好ましくは、オリゴヌクレオチドの血液レベルが約０．０１マイクロモーラー〜約１０マイクロモーラーに達する十分な用量で投与される。局所的な投与においては、これより大幅に低い濃度が有効かも知れず、そして、大幅に高い濃度が耐容されるかもしれない。好ましくは、オリゴヌクレオチドの総用量は、患者１日当たりオリゴヌクレオチド約0.1ｍｇから、１日体重１ｋｇ当たりオリゴヌクレオチド約２００ｍｇまでの範囲だろう。単一の処置エピソードとして、１つの個体に、治療的に有効な量の１種または２種以上の本発明の治療組成物を、同時にまたは順次投与することが望ましいかもしれない。好ましい態様においては、問題の組成物を投与した後、補体の活性化、有糸分裂誘起およびトロンビン血餅形成の抑制からなる群から選択される生物学的効果について１種または２種以上の測定が行なわれる。
【手続補正３０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６７】
ある好ましい態様において、本発明のオリゴヌクレオチドは、免疫応答の特異性または大きさを増大させるために、ワクチンおよび／またはアジュバントとの組合せにおいて投与される。オリゴヌクレオチドまたはワクチンか、あるいはその両方は、随意的に、キーホールリンペットヘモシアニン、コレラ毒素Ｂサブユニットなどの免疫原性タンパク質、または、任意のその他の免疫原性担体タンパク質と結合されていてもよい。フロイント完全アジュバントを含むがこれに限定されない、任意の多くのアジュバントを使用してもよい。この側面に関して、「との組合わせにおいて」とは、同一患者における同一疾患の処置の間において、を意味し、同時投与ならびに数日までの時間的に間隔をあけた順序を含む任意の順序で、オリゴヌクレオチドおよび/またはワクチンおよび／またはアジュバントを投与することを含む。このような組合せ処置はまた、オリゴヌクレオチド、およびワクチン／またはワクチン単独、およびアジュバント／またはアジュバント単独の１回より多い投与を含んでもよい。オリゴヌクレオチドおよび／またはワクチンおよび／またはアジュバントの投与は、同一のまたは異なる経路によってなされてもよい。
【手続補正３１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６９】
本発明のこの側面の方法は、ＣｐＧジヌクレオチドの組込み直後のサイクルにおける合成過程に、適切な３’保護モノマーシントンを単に使用することにより、よく知られた任意の合成技術を用いて、都合よく行うことができる。好ましいモノマーは、ホスホルアミダイト、ホスホトリエステルおよびＨ−ホスホネートを含む。したがって、本発明の目的において、「オリゴヌクレオチド中の、ＣｐＧジヌクレオチドに対して５’側３番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して５’側４番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して５’側５番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して５’側６番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して３’側の２つのヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して３’側３番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して３’側４番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して３’側５番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して３’側６番目のヌクレオシド、およびそれらの組合せからなる群から選択される位置に、２’−５’ヌクレオシド間結合を導入すること」とは、単に、２’−５’ヌクレオシド間結合を有するオリゴヌクレオチドを、このような位置に合成すること、即ち、ＣｐＧのＣから数えて、２’−５’ヌクレオシド間結合が、そのヌクレオシドの３’結合であることを意味する。２’−５’ヌクレオシド間結合を含むオリゴヌクレオチドの合成は、当該分野によく知られている。
【手続補正３２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００７０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００７０】
第１７の側面において、本発明は、増大した免疫刺激効果を有するＣｐＧ含有オリゴヌクレオチドであって、該オリゴヌクレオチドが、ＣｐＧジヌクレオチドに対して５’側３番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して５’側４番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して５’側５番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して５’側６番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して３’側の２つのヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して３’側３番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して３’側４番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して３’側５番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して３’側６番目のヌクレオシド、およびそれらの組合せからなる群から選択される位置に、２’−５’ヌクレオシド間結合を含むものを提供する。
【手続補正３３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００７２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００７２】
第１８の側面において、本発明は、哺乳類に免疫応答を誘導する方法を提供し、該方法は、哺乳類に、ＣｐＧジヌクレオチドに対して５’側３番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して５’側４番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して５’側５番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して５’側６番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して３’側の２つのヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して３’側３番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して３’側４番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して３’側５番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドに対して３’側６番目のヌクレオシド、およびそれらの組合せからなる群から選択される位置に、２’−５’ヌクレオシド間結合を含むオリゴヌクレオチドを投与することを含む。ある好ましい態様では、該オリゴヌクレオチドは、アンチセンスオリゴヌクレオチドではない。
【手続補正３４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００７３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００７３】
本発明のこの側面の方法では、好ましくは、オリゴヌクレオチドの投与は非経口投与、経口投与、舌下投与、経皮投与、局所投与、鼻内投与または直腸内投与であるべきである。治療組成物の投与は、公知の手順を使用し、疾患の症状または代用の指標を減少させるために効果的な用量および期間で行うことができる。全身的に投与する場合、治療組成物は、好ましくは、オリゴヌクレオチドの血液レベルが約０．０１マイクロモーラー〜約１０マイクロモーラーに達する十分な用量で投与される。局所的な投与においては、これより大幅に低い濃度が有効かも知れず、そして、大幅に高い濃度が耐容されるかもしれない。好ましくは、オリゴヌクレオチドの総用量は、患者１日当たりオリゴヌクレオチド約0.1ｍｇから、１日体重１ｋｇ当たりオリゴヌクレオチド約２００ｍｇまでの範囲だろう。単一の処置エピソードとして、１つの個体に、治療的に有効な量の１種または２種以上の本発明の治療組成物を、同時にまたは順次投与することが望ましいかもしれない。好ましい態様においては、問題の組成物を投与した後、補体の活性化、有糸分裂誘起およびトロンビン血餅形成の抑制からなる群から選択される生物学的効果について１種または２種以上の測定が行なわれる。
【手続補正３５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００７４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００７４】
ある好ましい態様において、本発明のオリゴヌクレオチドは、免疫応答の特異性または大きさを増大させるために、ワクチンおよび／またはアジュバントとの組合せにおいて投与される。オリゴヌクレオチドまたはワクチンか、あるいはその両方は、随意的に、キーホールリンペットヘモシアニン、コレラ毒素Ｂサブユニットなどの免疫原性タンパク質、または、任意のその他の免疫原性担体タンパク質と結合されていてもよい。フロイント完全アジュバントを含むがこれに限定されない、任意の多くのアジュバントを使用してもよい。この側面に関して、「との組合わせにおいて」とは、同一患者における同一疾患の処置の間において、を意味し、同時投与ならびに数日までの時間的に間隔をあけた順序を含む任意の順序で、オリゴヌクレオチドおよび/またはワクチンおよび／またはアジュバントを投与することを含む。このような組合せ処置はまた、オリゴヌクレオチド、およびワクチン／またはワクチン単独、およびアジュバント／またはアジュバント単独の１回より多い投与を含んでもよい。オリゴヌクレオチドおよび／またはワクチンおよび／またはアジュバントの投与は、同一のまたは異なる経路によってなされてもよい。
【手続補正３６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００８０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００８０】
例２
in vitroでの免疫刺激効果の調節：３’置換
本研究においてオリゴヌクレオチドの免疫刺激活性を評価するために、我々は、図１に記載のとおりに、マウス脾臓細胞増殖アッセイを用いた。表１に示したオリゴをこれらの研究に使用した。
【表１】
2003520811.tif 000001
【手続補正３７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００８１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００８１】
我々は、単一のＣｐＧジヌクレオチドを含むＰＳ−オリゴヌクレオチド（オリゴ１）、および、修飾されたヌクレオシドにより、１または２個のデオキシヌクレオシドの置換を特定部位で行なったオリゴ２〜５を使用した。
オリゴ２〜５における３’−Ｏ−メチルリボヌクレオシドによる置換は、同時に２’−５’ヌクレオシド間結合の組込みをもたらした。介在するヌクレオシドなしのＣｐＧの５’置換（オリゴ２）は、免疫刺激活性を減少させた。驚くべきことに、介在するヌクレオシドなしのＣｐＧの３’置換（オリゴ５）もまた、免疫刺激活性を減少させた。加えて、ＣｐＧの５’における３’−Ｏ−メチルリボヌクレオシド置換を伴うオリゴ３および４は、免疫刺激活性を増大させた（指数はそれぞれ４．６±０．４３および５．７±０．８７）。
【手続補正３８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００８２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００８２】
例３
in vivoでの免疫刺激効果の調節：メチルホスホネート置換
in vitroの結果のin vivoモデルでの適用性を試験するために、選択したオリゴヌクレオチドをマウスに投与し、免疫刺激活性のレベルの指標として脾腫の度合いを測定した。５ｍｇ／ｋｇの単一用量をＢａｌｂ／ｃマウス（雌、４〜６週齢、Harlan Sprague Dawley Inc）に腹腔内投与した。マウスを投与の７２時間後に屠殺し、脾臓を採取し重量を測定した。陽性対照であるオリゴ１は、ＰＢＳのみを受けた陰性対照マウスに比べ、脾臓重量の７４％の増加をもたらした。
【手続補正３９】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図３】
2003520811.tif 000002