(57)【要約】  本発明により、心臓壁の肥厚抑制作用を有する剤、ならびに前記剤を含む心不全の予防剤や、心不全の予防効果が期待できる機能性食品が提供される。本発明の心臓壁肥厚抑制剤は有効成分としてＸａａ Ｐｒｏ Ｐｒｏを含有する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｘａａ Ｐｒｏ Ｐｒｏを有効成分として含有する、心臓壁肥厚抑制剤。
【請求項２】
Ｘａａ Ｐｒｏ ＰｒｏがＶａｌ Ｐｒｏ Ｐｒｏ及び／又はＩｌｅ Ｐｒｏ Ｐｒｏである、請求項１に記載の心臓壁肥厚抑制剤。
【請求項３】
Ｘａａ Ｐｒｏ Ｐｒｏが獣乳カゼイン加水分解物又はその濃縮物に由来する、請求項１又は２に記載の心臓壁肥厚抑制剤。
【請求項４】
獣乳カゼイン加水分解物が、獣乳カゼインを麹菌により発酵させて得られる発酵物である、請求項３に記載の心臓壁肥厚抑制剤。
【請求項５】
獣乳カゼイン加水分解物が、獣乳カゼインを麹菌由来酵素により分解して得られる分解物である、請求項３に記載の心臓壁肥厚抑制剤。
【請求項６】
麹菌由来酵素が、アスペルギルス・オリゼ由来の酵素である、請求項５に記載の心臓壁肥厚抑制剤。
【請求項７】
Ｘａａ Ｐｒｏ Ｐｒｏが乳タンパク質を含む原料をラクトバチルス・ヘルベティカス種に属する菌により発酵させて得られる発酵物に由来する、請求項１又は２に記載の心臓壁肥厚抑制剤。
【請求項８】
ラクトバチルス・ヘルベティカス種に属する菌が、ラクトバチルス・ヘルベティカスＣＭ４株（ＦＥＲＭ ＢＰ−６０６０）である、請求項７に記載の心臓壁肥厚抑制剤。
【請求項９】
請求項１〜８のいずれかに記載の心臓壁肥厚抑制剤を有効成分として含む、心肥大予防剤。
【請求項１０】
請求項１〜８のいずれかに記載の心臓壁肥厚抑制剤を有効成分として含む、心不全予防剤。
【請求項１１】
請求項１〜８のいずれかに記載の心臓壁肥厚抑制剤を含む、機能性食品。
【請求項１２】
心不全予防のための効能を表示した、請求項１１に記載の機能性食品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、心臓壁肥厚の抑制作用を有する有効成分、該有効成分を含む心肥大予防剤および心不全予防剤、ならびに該有効成分を含み心肥大および心不全の予防効果が期待できる機能性食品に関する。
また、本発明は心臓壁肥厚を抑制する方法に関する。さらに本発明は心肥大および心不全を予防する方法に関する。【０００２】
（背景技術）
近年、一部の国では喫煙、高血圧、高血糖、高脂血症など、心疾患を引き起こすとされる危険因子をかかえる人が多くなっており、心不全の患者数は増加する傾向にある。また、これらの病態は人間だけに限られず、犬や猫その他コンパニオンアニマルやペットアニマルなど人間と密接な関係を有する動物にも増加する傾向にある。
心不全の病態、分類、経過はさまざまなので、簡単に定義することはできないものの、収縮期心不全と拡張期心不全の大きく２つのタイプに大別でき、この２つが同時に起こる場合もある。収縮期心不全は、心臓が正常に収縮できなくなるために生じる。心臓は血液を取りこむが、心筋が弱くなっているため、満たされた血液を充分に押し出すことができず、その結果、全身や肺に送られる血液量が少なくなり、心臓、特に左心室が肥大し得る。一方、拡張期心不全は、心臓の壁がかたく厚くなり、心臓が血液を充分にためることができなくなるために発症する。その結果、血液は左心房内や肺の血管内にたまり、うっ血を起こし得る。このように、一般に心不全とは、心臓のポンプ機能が不全に陥ったために、心臓が充分な量の血液を送り出せなくなることをいい、心不全によって、血流量の減少、静脈や肺の中への血液の滞留など、心臓の機能をさらに低下させる他の変化が生じ得る。【０００３】
心不全に至る原疾患として、例えば、高血圧、大動脈狭窄症等による圧負荷の増大、弁膜症等による容量負荷の増大等によって心臓壁が肥厚する、心肥大が挙げられる。一方で、心筋梗塞の発症後に損傷組織において自発的な機能回復反応として心臓壁肥厚が形成されることもある。また、心筋症等、原因不明の心筋障害が起こることによっても心臓壁が肥大する。心臓への機械的負荷が持続することにより心筋の収縮力が次第に低下して心機能の低下を招き、ついには心室性不整脈、心臓虚血、冠動脈疾患、うっ血性心不全へと至る。
これらのことから、心臓壁の肥厚抑制作用を有する化合物は、心肥大や心不全の予防および治療に有用である。【０００４】
心臓壁肥厚改善の方法としては、例えば、高血圧等による心肥大の場合、原因である高血圧症を治療することにより心臓壁肥厚も改善される場合があるが、その作用は満足できるものではなく、しかも降圧剤には全く効果がないものもある（Am J Hypertens.1997 Aug;10(8):913〜20）。また、高血圧症が改善された場合であっても、心臓壁肥厚が改善しない状態で残る場合が多く、このような場合においては、なおも心不全発症の危険性がある。
心不全治療に有効な薬剤として、アンジオテンシンＩから昇圧作用を有するアンジオテンシンＩＩへ変換する酵素（即ち、アンジオテンシン変換酵素； ＡＣＥ）を阻害する物質で降圧作用を有する、アンジオテンシン変換酵素阻害剤（ＡＣＥＩ）、例えば、エナラプリルが挙げられる。また、降圧剤は血圧を下げると同時に腎障害の進行が改善されることが報告されている（J. Clin. Invest, 77, 1993-2000,1986）。しかし一方では、種々の原疾患から誘発される心不全に対して、ＡＣＥ阻害剤は必ずしもすべての症例に有効なわけでなく、むしろ降圧に伴い急性腎不全をきたす危険もあり慎重な投与が必要であることが指摘されており（最新医学、48:1404 〜1409， 1993）、すなわち降圧剤が心不全の予防に不十分なばかりか、むしろ腎不全を誘発する可能性がある。
一方、カゼイン等の食品素材に由来するペプチドにＡＣＥ阻害活性のあることが報告されており、これらが血圧降下作用を有することが知られているが、心臓壁肥大抑制作用を有するか否かは直接示されていない（特許第２７８２１４２号公報、J. Dairy Sci. 1995, 78:777-78、J.Dairy Sci. 1995, 78:1253-1257, Am. J. Clin. Nutr. 1996, 64:767-771）。また、ＡＣＥ阻害による心不全の予防または治療効果は前記のように限定的であるため、ＡＣＥ阻害に因らない疾患の予防または治療が望まれる。【０００５】
（発明の開示）
本発明により、ＡＣＥ阻害活性に依存せずに、心臓壁の肥厚抑制作用を有する化合物又は組成物が提供される。
さらに、本発明により、前記化合物又は組成物を含む心不全予防剤が提供される。
また本発明により、前記化合物又は組成物を含む、心不全の予防効果が期待できる機能性食品が提供される。
さらに本発明により、前記化合物または組成物を対象者に投与することを含む、心臓壁の肥厚を抑制する方法が提供される。
また本発明により、前記化合物または組成物を対象者に投与することを含む、心不全を予防する方法が提供される。
また本発明は、前記化合物または組成物の、心臓壁の肥厚を抑制するための医薬の製造における使用でもある。特に、本発明は、前記化合物または組成物の、心肥大予防用医薬製造における使用でもある。また、本発明は、前記化合物または組成物の、心不全予防用医薬の製造における使用でもある。【０００６】
本発明者等は、Ｘａａ Ｐｒｏ Ｐｒｏ（Ｘａａは任意の天然のアミノ酸）という特定の構造を有するトリペプチドが心臓壁肥厚の抑制作用を有することを見出し、心不全の予防に役立つ医薬及び機能性食品を発明するに至った。その具体的な内容は、以下の通りである。
本発明は、Ｘａａ Ｐｒｏ Ｐｒｏを有効成分として含有する心臓壁の肥厚抑制剤を提供する。
また本発明は、上述のような心臓壁の肥厚抑制作用を有する心肥大予防剤を提供する。
また本発明は、上述のような心臓壁の肥厚抑制作用を有する心不全予防剤を提供する。
また本発明は、上述のような心臓壁の肥厚抑制剤を含む機能性食品を提供する。
本発明は、Ｘａａ Ｐｒｏ ＰｒｏまたはＸａａ Ｐｒｏ Ｐｒｏを含む組成物を対象者に投与することを含む、心臓壁の肥厚を抑制する方法を提供する。
また、本発明は、Ｘａａ Ｐｒｏ ＰｒｏまたはＸａａ Ｐｒｏ Ｐｒｏを含む組成物を対象者に投与することを含む、心肥大を予防する方法をも提供する。
また、本発明は、Ｘａａ Ｐｒｏ ＰｒｏまたはＸａａ Ｐｒｏ Ｐｒｏを含む組成物を対象者に投与することを含む、心不全を予防する方法を提供する。
さらに、本発明は、Ｘａａ Ｐｒｏ ＰｒｏまたはＸａａ Ｐｒｏ Ｐｒｏを含む組成物の、心臓壁の肥厚を抑制する医薬の製造における使用でもある。特に、本発明は、Ｘａａ Ｐｒｏ ＰｒｏまたはＸａａ Ｐｒｏ Ｐｒｏを含む組成物の心肥大防用医薬の製造における使用でもある。また、本発明はＸａａ Ｐｒｏ ＰｒｏまたはＸａａ Ｐｒｏ Ｐｒｏを含む組成物の、心不全予防用医薬の製造における使用でもある。【０００７】
好ましくは、Ｘａａ Ｐｒｏ ＰｒｏがＶａｌ Ｐｒｏ Ｐｒｏ及び／又はＩｌｅ Ｐｒｏ Ｐｒｏである。
本発明の別の態様においては、有効成分Ｘａａ Ｐｒｏ Ｐｒｏが、獣乳カゼイン加水分解物又はその濃縮物に由来する。
本発明のさらに別の態様においては、有効成分Ｘａａ Ｐｒｏ Ｐｒｏが、乳タンパク質を含む原料をラクトバチルス・ヘルベティカス（Lactobacillus helveticus）種に属する菌により発酵させて得られる発酵物に由来する。
好ましくは、ラクトバチルス・ヘルベティカス種に属する菌がラクトバチルス・ヘルベティカスＣＭ４株（ＦＥＲＭ ＢＰ−６０６０）である。【０００８】
（発明を実施するための最良の形態）
本発明の心臓壁肥厚抑制剤は、Ｘａａ Ｐｒｏ Ｐｒｏという構造のトリペプチドを有効成分として含有する。ここで「剤」とは薬剤に限定されるものではなく、例えば、医薬組成物または食品組成物などの組成物、あるいは、例えば食品添加剤などの化合物をいう。本発明でいう「心臓壁肥厚抑制剤」とは、心臓壁肥厚病変の進行を抑えとどめる作用を有するか、心臓壁肥厚病変を改善する作用を有するか、あるいは心臓壁肥厚発症の予防効果を有する化合物又は組成物をいう。
本発明の有効成分Ｘａａ Ｐｒｏ ＰｒｏのＸａａは、任意の天然のアミノ酸でよい。具体的には、Ｖａｌ Ｐｒｏ Ｐｒｏ（バリン−プロリン−プロリン）、Ｉｌｅ Ｐｒｏ Ｐｒｏ（イソロイシン−プロリン−プロリン）、Ｓｅｒ Ｐｒｏ Ｐｒｏ（セリン−プロリン−プロリン）、Ｌｅｕ Ｐｒｏ Ｐｒｏ（ロイシン−プロリン−プロリン）などが挙げられ、好ましくはＶａｌ Ｐｒｏ Ｐｒｏ、Ｉｌｅ Ｐｒｏ Ｐｒｏであり、より好ましくはＶａｌ Ｐｒｏ Ｐｒｏである。また有効成分として、Ｖａｌ Ｐｒｏ Ｐｒｏ及びＩｌｅ Ｐｒｏ Ｐｒｏといった１種以上のトリペプチドＸａａ Ｐｒｏ Ｐｒｏの組合せを含んでいてもよい。
有効成分Ｘａａ Ｐｒｏ Ｐｒｏは有機化学的に合成したトリペプチドであってもよく、また天然由来のトリペプチドであってもよい。【０００９】
トリペプチドＸａａ Ｐｒｏ Ｐｒｏの有機化学的合成法としては、固相法（Ｂｏｃ法、Ｆｍｏｃ法）や液相法といった一般的な方法を用いることができ、例えば、島津製作所製のペプチド合成装置（ＰＳＳＭ−８型）といったペプチド自動合成装置を用いて合成したものであってもよい。ペプチド合成の反応条件等については、当業者の技術常識に基づき、選択する合成方法や所望のトリペプチドＸａａ Ｐｒｏ Ｐｒｏに合せて、適切な反応条件等を任意で設定することができる。
あるいは、天然由来のものとしては、獣乳カゼイン加水分解物又はその濃縮物に由来するものであってもよく、タンパク質を含む食品原料を麹菌や乳酸菌といった菌類によって発酵させて得られる発酵物に由来するものであってもよい。
獣乳カゼイン加水分解物又はその濃縮物や、乳タンパク質を含む原料をラクトバチルス・ヘルベティカス種に属する菌により発酵させて得られる発酵物を用いる場合は、本発明の有効成分であるトリペプチドＸａａ Ｐｒｏ Ｐｒｏ以外に遊離アミノ酸を含んでいても良く、更に、前記ペプチド及び遊離アミノ酸の他に、例えば市販の獣乳カゼイン、乳タンパク質に通常含まれる、脂質、灰分、炭水化物、食物繊維、水分等が含まれていても良く、また、必要に応じてこれらのうちの適当な成分の一部若しくは全部を除去しても良い。【００１０】
本発明の有効成分Ｘａａ Ｐｒｏ Ｐｒｏは、Ｘａａ Ｐｒｏ Ｐｒｏ、特にＶａｌ Ｐｒｏ Ｐｒｏ及びＩｌｅ Ｐｒｏ Ｐｒｏが得られる酵素群を用いて、獣乳カゼインを加水分解する方法、獣乳カゼインを麹菌により発酵する方法により得られる、獣乳カゼイン加水分解物又はその濃縮物に由来するものであってもよい。
獣乳カゼインとしては、例えば、牛乳、馬乳、山羊乳、羊乳等のカゼインが挙げられ、特に牛乳カゼインが好ましく使用できる。
獣乳カゼインを加水分解又は発酵する際のカゼイン濃度は、特に限定されないが獣乳カゼイン分解物を効率良く生産するために、１〜１９重量％が好ましい。【００１１】
前記酵素群としては、例えば、Ｘａａ Ｐｒｏ Ｐｒｏ Ｘａａ配列のカルボキシ末端のＰｒｏ Ｘａａ残基間が切断可能なペプチダーゼを含む酵素群（Ｘ）が好ましく挙げられる。
酵素群（Ｘ）は、活性中心にセリンを持つ、セリンタイプのプロティナーゼもしくは、活性中心に金属を持つ金属プロティナーゼを含むことが好ましい。金属プロティナーゼとしては、中性プロテアーゼＩ、中性プロテアーゼＩＩ及びロイシンアミノペプチダーゼ等が挙げられ、これらの少なくとも１種を更に含むことが、所望の加水分解物を効率良く、且つ短時間で、更には１段階反応で得ることができる点で好ましい。また前記Ｐｒｏ Ｘａａ配列が切断可能なペプチダーゼとしては、等電点が酸性域を示す酵素であることが好ましい。【００１２】
前記酵素群又は酵素群（Ｘ）としては、例えば、アスペルギルス・オリゼ（Aspergillus oryzae）等の麹菌由来の酵素群が挙げられる。このような酵素群は、適当な培地で菌体を培養し、生産される酵素を水抽出した酵素群等が挙げられ、特に、アスペルギルス・オリゼ由来の酵素群のうちの等電点が酸性域を示す酵素群が好ましく挙げられる。
アスペルギルス・オリゼ由来の酵素群としては、市販品を利用することができ、例えば、スミチームＦＰ、ＬＰ又はＭＰ（以上、登録商標、新日本化学（株）製）、ウマミザイム（登録商標、天野エンザイム（株）製）、Ｓｔｅｒｎｚｙｍｅ Ｂ１１０２４、ＰＲＯＨＩＤＲＯＸＹ ＡＭＰＬ（以上、商品名、株式会社樋口商会製）、オリエンターゼＯＮＳ（登録商標、阪急バイオインダストリー（株）製）、デナチームＡＰ（登録商標、ナガセ生化学社製）等が挙げられ、特に、スミチームＦＰ（登録商標、新日本化学（株）製）の使用が好ましい。
これら市販の酵素群を用いる場合には、通常、至適条件が設定されているが、前記カゼイン加水分解物が得られるように条件、例えば、使用酵素量や反応時間等を、用いる酵素群に応じて適宜変更して行なうことができる。【００１３】
前記獣乳カゼインを加水分解する際の酵素群の添加量は、例えば、獣乳カゼインを溶解した水溶液に、酵素群／獣乳カゼインが重量比で１／１０００以上、好ましくは１／１０００〜１／１０、特に好ましくは１／１００〜１／１０、更に好ましくは１／４０〜１／１０の割合となるような量である。
反応条件は、使用する酵素群に応じて目的のカゼイン加水分解物が得られるように適宜選択できるが、温度は、通常２５〜６０℃、好ましくは４５〜５５℃であり、ｐＨは、３〜１０、好ましくは５〜９、特に好ましくは５〜８である。また、酵素反応時間は、通常２〜４８時間、好ましくは７〜１５時間である。
酵素反応の終了は、酵素を失活させることにより行なうことができ、通常、６０〜１１０℃で酵素を失活させ、反応を停止させることができる。
酵素反応停止後、必要に応じて沈澱物を、遠心分離除去や各種フィルター処理により除去することが好ましい。
また、必要に応じて、得られる加水分解物から苦味や臭味を有するペプチドを除去することもできる。このような苦味成分や臭味成分の除去は、活性炭又は疎水性樹脂等を用いて行なうことができる。例えば、得られた加水分解物中に、使用したカゼイン量に対して活性炭を１〜２０重量％添加し、１〜１０時間反応させることにより実施できる。使用した活性炭の除去は、遠心分離や膜処理操作等の公知の方法により行なうことができる。
このようにして得られた獣乳カゼイン加水分解物又はその濃縮物を含む反応液は、そのまま飲料等の液体製品に添加して機能性食品に利用することができる。また、獣乳カゼイン加水分解物の汎用性を高めるために、前記反応液を濃縮後、乾燥し粉末の形態とすることもできる。【００１４】
獣乳カゼイン加水分解物又はその濃縮物に含まれるＸａａ Ｐｒｏ Ｐｒｏの含有割合は、獣乳カゼイン加水分解物又はその濃縮物中のペプチド及び遊離アミノ酸の合計量に対して通常１重量％以上、好ましくは１〜５重量％である。該含有割合を１重量％以上とすることにより、より高い作用が期待される。また、獣乳カゼイン加水分解物又はその濃縮物中に含まれるＩｌｅ Ｐｒｏ Ｐｒｏ又はＶａｌ Ｐｒｏ Ｐｒｏの含有割合は、獣乳カゼイン加水分解物又はその濃縮物中のペプチド及び遊離アミノ酸の合計量に対して、それぞれ単独で０．３重量％以上であっても、Ｉｌｅ Ｐｒｏ Ｐｒｏ及びＶａｌ Ｐｒｏ Ｐｒｏの合計量が０．３重量％以上であっても、高い効果が期待される。更に、Ｉｌｅ Ｐｒｏ Ｐｒｏ及びＶａｌ Ｐｒｏ Ｐｒｏのそれぞれを０．３重量％以上含有する場合には、より高い効果が期待される。【００１５】
また、本発明の有効成分Ｘａａ Ｐｒｏ Ｐｒｏは、乳タンパク質を含む原料をラクトバチルス・ヘルベティカス種に属する菌により発酵させて得られる発酵物に由来するものであってもよい。
ラクトバチルス・ヘルベティカス種に属する菌は、ラクトバチルス・ヘルベティカス種単独で発酵に用いるのが好ましいが、本発明の所望の効果を損なわない範囲で他の乳酸菌等を含んでいても良い。
ラクトバチルス・ヘルベティカス種に属する菌としては、Ｉｌｅ Ｐｒｏ Ｐｒｏ及び／又はＶａｌ Ｐｒｏ Ｐｒｏを高生産しうるプロティナーゼ生産菌が好ましい。例えば、Ｔｗｉｎｉｎｇらの方法（Ｔｗｉｎｉｎｇ， Ｓ． Ａｎａｌ． Ｂｉｏｃｈｅｍ． ）１４３ ３４１０（１９８４））をもとにしたＹａｍａｍｏｔｏらの方法（Ｙａｍａｍｏｔｏ， Ｎ．ら Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ． ）（１９９３） １１４， ７４０）に準じて測定したＵ／ＯＤ５９０の値が４００以上を示す菌株が好ましい。
そのような好ましい菌株としては、例えば、ラクトバチルス・ヘルベティカスＣＭ４株（通商産業省工業技術院生命工学工業技術研究所、日本国茨城県つくば市東1丁目１番３号、郵便番号305（現、産業技術総合研究所特許生物寄託センター、日本国茨城県つくば市東１−１−１  つくばセンター中央第６、郵便番号305-8566）、受託番号：ＦＥＲＭ ＢＰ−６０６０，寄託日１９９７．８．１５）（以下、ＣＭ４株と称す）が挙げられる。このＣＭ４株は、特許手続上の微生物寄託の国際的承認に関するブタペスト条約の下に上記寄託番号で登録されており、この株は既に特許されている。【００１６】
乳タンパク質を含む原料をラクトバチルス・ヘルベティカス種に属する菌により発酵させて得られる発酵物は、ラクトバチルス・ヘルベティカス種に属する菌株を含む発酵乳スターターを乳タンパク質を含む原料に添加し、発酵温度等の発酵条件を適宜選択して発酵させることにより得ることができる。
また、このようにして得られた発酵物の濃縮物等を凍結乾燥、噴霧乾燥等により粉末として用いてもよい。【００１７】
ラクトバチルス・ヘルベティカス種に属する菌は、あらかじめ前培養しておき充分に活性の高いスターターとして用いることが好ましい。初発菌数は、好ましくは１０5〜１０9個／ｍｌ程度である。
乳タンパク質を含む原料をラクトバチルス・ヘルベティカス種に属する菌により発酵させて得られる発酵物は、例えば、特定保健用食品等の機能性食品に利用するに際して、風味を良好にし、嗜好性を良好とするために、前記ラクトバチルス・ヘルベティカス種に属する菌株に酵母を併用して発酵させることもできる。酵母の菌種は特に限定されないが、例えば、サッカロマイセス・セレビシェ（Saccharomyces cerevisiae）等のサッカロマイセス属酵母等が好ましく挙げられる。酵母の含有割合は、その目的に応じて適宜選択することができる。【００１８】
乳タンパク質を含む原料としては、例えば、牛乳、馬乳、羊乳、山羊乳等の動物乳、及び豆乳等の植物乳、これらの加工乳である脱脂乳、還元乳、粉乳、コンデンスミルクが挙げられ、牛乳、豆乳、これらの加工乳が好ましく、牛乳又はその加工乳が特に好ましい。
乳の固形分濃度は特に限定されないが、例えば、脱脂乳を用いる場合の無脂乳固形分濃度は、通常３〜１５重量％程度であり、生産性的には６〜１５重量％が好ましい。
前記発酵は、通常静置若しくは撹拌発酵により、例えば、発酵温度２５〜４５℃、好ましくは３０〜４５℃、発酵時間３〜７２時間、好ましくは１２〜３６時間で、乳酸酸度が１．５％以上になった時点で発酵を停止する方法により行なうことができる。【００１９】
乳タンパク質を含む原料をラクトバチルス・ヘルベティカス種に属する菌により発酵させて得られる発酵物中に含まれるＸａａ Ｐｒｏ Ｐｒｏ、好ましくはＩｌｅ Ｐｒｏ Ｐｒｏ及び／又はＶａｌ Ｐｒｏ Ｐｒｏの含有割合は、該発酵物の凍結乾燥物１００ｇ中に換算して１０ｍｇ以上が好ましく、より好ましくは１５ｍｇ以上である。
本発明の心臓壁肥厚抑制剤の投与量又は摂取量としては、１日あたり、ヒトの場合、有効成分Ｘａａ Ｐｒｏ Ｐｒｏ、好ましくはＶａｌ Ｐｒｏ Ｐｒｏ及び／又はＩｌｅ Ｐｒｏ Ｐｒｏを、通常１０μｇ〜１０ｇ、好ましくは１ｍｇ〜５ｇ、さらに好ましくは３ｍｇ〜１ｇ程度含む用量であり、１日に何回かに分けて投与又は摂取しても良い。
心臓壁肥厚抑制剤の投与又は摂取期間は、投与又は摂取するヒト又は動物の年齢やそのヒトや動物の心不全の危険因子に対する環境等を考慮して種々調整することができ、例えば通常１日以上、好ましくは７日〜３６５日間とすることが出来る。【００２０】
また本発明の心不全予防剤は、上述のようなトリペプチドを有効成分とする。
本発明の心不全予防剤の投与量又は摂取量としては、１日あたり、ヒトの場合、有効成分Ｘａａ Ｐｒｏ Ｐｒｏ、好ましくはＶａｌ Ｐｒｏ Ｐｒｏ及び／又はＩｌｅ Ｐｒｏ Ｐｒｏを、通常１０μｇ〜１０ｇ、好ましくは１ｍｇ〜５ｇ、さらに好ましくは３ｍｇ〜１ｇ程度含む用量であり、１日に何回かに分けて投与又は摂取しても良い。
心不全予防剤の投与又は摂取期間は、投与又は摂取するヒト又は動物の年齢やそのヒトや動物の心不全の危険因子に対する環境等を考慮して種々調整することができ、例えば、通常１日以上、好ましくは７日〜３６５日間とすることができる。
また本発明の心肥大予防剤は、上述のようなトリペプチドを有効成分とする。本発明の心肥大予防剤の投与量又は摂取量、および投与又は摂取の期間は本発明の心不全予防剤と同等である。
本発明の心臓壁肥厚抑制剤、心肥大の予防剤並びに心不全の予防剤の投与又は摂取の方法は、経口的であるのが好ましい。【００２１】
本発明の心臓壁肥厚抑制剤、心肥大の予防剤並びに心不全の予防剤を医薬として用いる場合の形態は、経口投与用の製剤の形態とすることができる。例えば、錠剤、丸剤、硬カプセル剤、軟カプセル剤、マイクロカプセル、散剤、顆粒剤、液剤等が挙げられる。
医薬として製造する場合は、例えば、適宜必要に応じて、製薬的に許容される担体、アジュバント、賦形剤、補形剤、防腐剤、安定化剤、結合剤、ｐＨ調節剤、緩衝剤、増粘剤、ゲル化剤、保存剤、抗酸化剤等を用い、一般に認められた製剤投与に要求される単位用量形態で製造することができる。【００２２】
本発明の食品は、本発明の心臓壁肥厚抑制剤を有効成分として含み、例えば、心臓壁肥厚抑制作用、心肥大の予防および心不全の予防といった効能を有する特定保健用食品等の機能性食品とすることができる。
このような効能を得るための摂取量は、食品、例えば機能性食品が、日常的、連続的又は断続的に長期間摂取することを鑑みると、ヒトの場合、１日あたり、有効成分Ｘａａ Ｐｒｏ Ｐｒｏの量として、あるいはＶａｌ Ｐｒｏ Ｐｒｏ及び／又はＩｌｅ Ｐｒｏ Ｐｒｏの量として、通常１０μｇ〜１０ｇ、好ましくは１ｍｇ〜５ｇ、さらに好ましくは３ｍｇ〜１ｇ程度であり、１日あたりの摂取回数に応じて、食品、例えば機能性食品における１回あたりの摂取量を前記量より更に低くすることも可能である。
有効成分Ｘａａ Ｐｒｏ Ｐｒｏを含む獣乳カゼイン加水分解物又はその濃縮物をそのまま用いる際には、ヒトの場合、１日あたり、該加水分解物又はその濃縮物を通常１ｍｇ〜１００ｇ、特に１００ｍｇ〜１０ｇ程度摂取するのが好ましい。
有効成分Ｘａａ Ｐｒｏ Ｐｒｏを含む発酵物の凍結乾燥物をそのまま用いる際には、ヒトの場合、１日あたり、該発酵物の凍結乾燥物を乾燥量として、通常１〜１００ｇ、特に２〜５０ｇ程度摂取するのが好ましい。
本発明の食品、例えば機能性食品の摂取期間は、特に限定されず、長期間摂取することが好ましいが、上記効能を得るために、例えば、通常１日以上、好ましくは７日〜３６５日間とすることができる。【００２３】
本発明の食品、例えば機能性食品は、本発明の有効成分Ｘａａ Ｐｒｏ Ｐｒｏ、好ましくはＶａｌ Ｐｒｏ Ｐｒｏ及び／又はＩｌｅ Ｐｒｏ Ｐｒｏを含む心臓壁肥厚抑制剤を含み、例えば、上述のようにして得た獣乳カゼイン加水分解物又はその濃縮物や乳タンパク質を含む原料の発酵物をそのまま、あるいは粉末状や顆粒状にして各種食品に添加することができる。また必要に応じて、ラクトバチルス・ヘルベティカス以外の乳酸菌の発酵物や、食品に用いる他の成分、例えば、糖類、タンパク質、脂質、ビタミン、ミネラル、フレーバー、例えば、各種炭水化物、脂質、ビタミン類、ミネラル類、甘味料、香料、色素、テクスチュア改善剤等又はこれらの混合物等の添加物を添加し、栄養的バランスや風味等を改善してもよい。
本発明の食品、例えば機能性食品は、固形物、ゲル状物、液状物の何れの形態とすることができ、例えば、乳酸菌飲料等の発酵乳製品、各種加工飲食品、乾燥粉末、錠剤、カプセル剤、顆粒剤等が挙げられ、更には各種飲料、ヨーグルト、流動食、ゼリー、キャンディ、レトルト食品、錠菓、クッキー、カステラ、パン、ビスケット、チョコレート等とすることができる。
以下、実施例を用いて本発明をより詳細に説明するが、本発明の範囲は実施例に限られない。【００２４】
（実施例）
［ペプチド合成例］
本発明の有効成分Ｉｌｅ Ｐｒｏ Ｐｒｏ及びＶａｌ Ｐｒｏ Ｐｒｏを、以下に示す有機化学合成法（Ｆｍｏｃ法）により合成した。合成は島津製作所製のペプチド自動合成装置（ＰＳＳＭ−８型）を用いた固相法によって行った。
固相担体として２−クロロトリチル（２−Ｃｈｌｏｒｏｔｒｉｔｙｌ）タイプのポリスチレン樹脂であって、アミノ基をフルオレニルメチルオキシカルボニル基（以下Ｆｍｏｃと略す）で保護されたプロリンが結合した樹脂５０ｍｇを使用した（島津製作所社製 登録商標ＳｙｎＰｒｏＰｅｐ Ｒｅｓｉｎ）。前記アミノ酸配列に従って、アミノ基がＦｍｏｃ基で保護されたＦｍｏｃ−Ｉｌｅ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ及びＦｍｏｃ−Ｖａｌを１００μｍｏｌずつ、常法に従い、ペプチド配列通り順次反応させてペプチド結合樹脂を得た。
次にこのペプチド結合樹脂を１ｍｌの反応液Ａ（１０容量％酢酸、１０容量％トリフルオロエタノール、８０容量％ジクロロメタン）に懸濁し、室温で３０〜６０分間反応させてペプチドを樹脂から切離した後、反応液Ａをガラスフィルターで濾過した。濾液の溶媒を減圧除去後、直ちに１ｍｌの反応液Ｂ（８２．５％容量トリフルオロ酢酸、３％容量エチルメチルスルフィド、５％容量純水、５％容量チオアニソール、２．５％容量エタンジチオール、２％容量チオフェノール）を加え、室温で６時間反応させて側鎖保護基を外した。これに無水エーテル１０ｍｌを加えてペプチドを沈殿させ、３０００回転、５分間遠心して分離した。その沈殿を無水エーテルにて数回洗浄した後、窒素ガスを吹き付けて乾燥した。このようにして得られた未精製の合成ペプチド全量を、０．１Ｎ塩酸水溶液２ｍｌに溶解した後に、Ｃ１８の逆層カラムを用いたＨＰＬＣで、以下の条件に従って精製した。【００２５】
ポンプ：形式Ｌ６２００インテリジェントポンプ（日立製作所）、検出機：形式Ｌ４０００ＵＶ検出器（日立製作所）にて２１５ｎｍの紫外部吸収を検出カラム：マイクロボンダスフェアー５μＣ１８（ウォーターズ社製）、溶出液：Ａ液；０．１重量％ＴＦＡ水溶液、Ｂ液；０．１重量％ＴＦＡ入りアセトニトリル（Ｂ／Ａ＋Ｂ）×１００（％）：０→４０％（６０分）、流速：１ｍｌ／分。最大吸収を示した溶出画分を分取し、これを凍結乾燥することにより目的とする合成ペプチドＩｌｅ Ｐｒｏ Ｐｒｏ及びＶａｌ Ｐｒｏ Ｐｒｏをそれぞれ５．７ｍｇ、６．５ｍｇ得た。精製ペプチドを全自動タンパク質一次構造分析装置（形式ＰＰＳＱ−１０、島津製作所製）により、ペプチドのＮ末端から分析し、さらにアミノ酸分析装置（形式８００シリーズ、日本分光社製）にて分析した結果、設計通りであることが確認できた。【００２６】
［獣乳カゼイン加水分解物の調製例］
牛乳由来カゼイン（日本ＮＺＭＰ社製）１ｇを約８０℃に調整した蒸留水９９ｇに加えて充分に撹拌した後、１Ｎ水酸化ナトリウム（和光純薬社製）溶液を添加してｐＨ７．０とし、また温度を２０℃に調整して基質溶液を調製した。
得られた基質溶液にアスペルギルス・オリゼ由来であり、少なくとも金属プロテアーゼ、セリンプロテアーゼ、中性プロテアーゼＩ、中性プロテアーゼＩＩ及びロイシンアミノペプチダーゼを含む市販の酵素（登録商標「スミチームＦＰ」、新日本化学工業社製）を、酵素／カゼインの重量比が１／２５となるように添加して、５０℃で１４時間反応させた。続いて、１１０℃で１０分間のオートクレーブを行い、酵素を失活させ、カゼイン酵素分解物溶液を得た。次に、得られた酵素分解物溶液をスプレードライヤーにより乾燥し、粉末を調製した。
得られた粉末中の含有成分の分析を行なった。タンパク質はケルダール法で測定し、アミノ酸はアミノ酸分析装置にて測定した。また、該タンパク質量からアミノ酸を引いた量をペプチド量とした。更に、脂質は酸分解法で、灰分は直接灰化法で、水分は常圧加熱乾燥法でそれぞれ測定した。尚、１００％から各成分を引いた残りを炭水化物量とした。その結果、アミノ酸は３５．８重量％、ペプチドは４５．７重量％、水分は６．６重量％、脂質は０．２重量％、灰分は４．１重量％及び炭水化物は７．６重量％であった。【００２７】
＜ペプチド構成アミノ酸の測定＞
上記で調製した粉末を適量の蒸留水に溶解し、自動ペプチド分析機（商品名ＰＰＳＱ−１０（株）島津製作所製）を用いて解析し、粉末中においてＮ末端側から順に如何なるアミノ酸が位置するかを調べた。尚、自動ペプチド分析機は遊離アミノ酸を検出しない。
また、５残基目のアミノ酸の合計は１２０ｐｍｏｌ、６残基目のアミノ酸の合計は１００ｐｍｏｌであった。これらの結果より、前記粉末中に含まれるペプチドのほとんどがジペプチド及びトリペプチドであることが判った。また、２残基目のアミノ酸がＰｒｏであるペプチドの割合が４９．５％と顕著に上昇していた。更に３残基目のアミノ酸がＰｒｏであるペプチドの割合も２９．８％と多かった。
従って、前記粉末には、Ｘａａ Ｐｒｏ Ｐｒｏが多く含まれており、これらペプチドは生体内プロテアーゼによる酵素分解作用に対する抵抗性が高いペプチドであると推定できる。【００２８】
＜酵素分解物中に含まれるペプチドの測定＞
上記酵素分解物の粉末について、各種の化学合成標準ペプチドを用いて、常法に従い、該粉末に含まれる表１に示すトリペプチド量を求めた。結果を表１に示す。【００２９】
［表１］
2008123095.tif 000002
【００３０】
また、前記粉末を蒸留水で希釈溶解した溶液中のペプチド及び遊離アミノ酸量が８．１５ｍｇ／ｍｌであり、ペプチド量が４．５７ｍｇ／ｍｌであり、該ペプチド中のＸａａ Ｐｒｏ量が５１４．５μｇであったので、粉末中のペプチド及び遊離アミノ酸の合計量に対するＸａａ Ｐｒｏの割合は６．３重量％であり、更に、該ペプチド中のＸａａ Ｐｒｏ Ｐｒｏ量が１１６．５μｇであったので、粉末中のペプチド及び遊離アミノ酸の合計量に対するＸａａ Ｐｒｏ Ｐｒｏの割合は１．４重量％であることを確認した。【００３１】
［ＣＭ４発酵乳飼料の調製例］
乳タンパク質を含む原料をＣＭ４株により発酵させて得られる発酵乳を用い、本発明の有効成分Ｘａａ Ｐｒｏ Ｐｒｏを含む動物飼料を調製した。
市販の脱脂粉乳を固形率９％（ｗ／ｗ）となるように蒸留水で溶解し、オートクレーブで１０５℃、１０分間、高温加熱殺菌した後、室温まで冷却し、ＣＭ４株スターター発酵液（菌数５×１０8個／ｍｌ）を３％（ｖ／ｗ）接種して、３７℃で２４時間、静置状態で発酵させＣＭ４発酵乳を得た。
得られたＣＭ４発酵乳を８０℃達温殺菌後、凍結乾燥により粉末を得た。得られた凍結乾燥粉末と市販の粉末飼料（商品名「ＣＥ−２」、日本クレア株式会社製）を、質量比１０：９０で混合し、固型飼料を作成し、ＣＭ４発酵乳飼料とした。この飼料には、ＣＭ４発酵乳由来のＶａｌ Ｐｒｏ Ｐｒｏが３４．１ｍｇ／ｋｇ及びＩｌｅ Ｐｒｏ Ｐｒｏが１７．１ｍｇ／ｋｇ含まれていた。【００３２】
［試験１：Ｖａｌ Ｐｒｏ Ｐｒｏ（ＶＰＰ）の左心室壁の肥厚抑制効果］
トリペプチドＶａｌ Ｐｒｏ Ｐｒｏ（ＶＰＰ）の左心室壁の肥厚抑制効果について、試験を行った。
７週齢、雄のＷｉｓｔａｒ系ラット（日本エスエルシー株式会社）を一群９〜１２匹として計３群で試験を行った。一週間馴化飼育した後、一酸化窒素合成阻害剤であるＮＧ−ニトロ−Ｌ−アルギニンメチルエステル塩酸塩（Ｌ−ＮＡＭＥ、Ｓｉｇｍａ社製）を１ｇ／Ｌの濃度で溶解した飲水、Ｌ−ＮＡＭＥとＶＰＰをそれぞれ１ｇ／Ｌと０．３ｇ／Ｌの濃度で溶解した飲水、Ｌ−ＮＡＭＥとアンギオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤であるエナラプリルをそれぞれ１ｇ／Ｌと０．５ｍｇ／Ｌの濃度で溶解した飲水を８週間自由摂取させた。ここでエナラプリルの投与量はＶＰＰとＡＣＥ阻害活性が同等になるように設定した。
ラットはジエチルエーテル麻酔下で放血致死させ、心臓を摘出後、１０％中性緩衝ホルマリン液にて固定した。固定した心臓から右心室、中隔、左心室および冠動脈を含むように心房の下部を水平に切断し、輪状の組織片を作成した。組織片をパラフィン包埋した後３．０〜３．５μｍの厚さでミクロトームにより薄切を行った。各ラットについて、２〜５の切片を作製した。薄切した切片をヘマトキシリン・エオジン染色し、左心室壁の厚さを測定した。心室壁の厚さの測定は、１の切片について顕微鏡下で平均的な厚さがあると思われる複数点の厚さを接眼マイクロメーターにより実測し、その平均の厚さをその切片の測定値として、統計処理を行った。厚さの測定および評価は、各サンプル名を知らされない病理学者が行った。
得られた結果を図１に示す。Ｌ−ＮＡＭＥのみを与えた群に比べ、Ｌ−ＮＡＭＥ及びＶＰＰを与えた群では左心室壁の厚さが減少しており、ＶＰＰにより左心室壁の肥厚が抑えられ、心不全の予防に有効であることが示された。また、同等のＡＣＥ阻害活性となるように投与量を設定したエナラプリルでは効果が認められなかったことから、本効果がＡＣＥ阻害によらないものであることが確認された。【００３３】
［試験２：Ｖａｌ Ｐｒｏ Ｐｒｏ（ＶＰＰ）の右心室壁の肥厚抑制効果］
トリペプチドＶａｌ Ｐｒｏ Ｐｒｏ（ＶＰＰ）の右心室壁の肥厚抑制効果についても確認するため、試験１と同様に試験し、測定および評価した。
得られた結果を図２に示す。Ｌ−ＮＡＭＥのみを与えた群に比べ、Ｌ−ＮＡＭＥ及びＶＰＰを与えた群では右心室壁の厚さが減少していた。したがって、ＶＰＰにより右心室壁の肥厚も抑えられ、心不全の予防に有効であることが示された。試験１と同様、エナラプリルでは効果が認められなかったので、本効果がＡＣＥ阻害によらないものであることが確認された。【００３４】
［試験３：Ｉｌｅ Ｐｒｏ Ｐｒｏ（ＩＰＰ）の左心室壁の肥厚抑制効果］
トリペプチドＩｌｅ Ｐｒｏ Ｐｒｏ（ＩＰＰ）についても心室壁の肥厚抑制効果を試験した。
７週齢、雄のＷｉｓｔａｒ系ラット（日本エスエルシー株式会社）を一群９〜１１匹として計３群で試験を行った。一週間馴化飼育した後、Ｌ−ＮＡＭＥ（Ｓｉｇｍａ社製）を１ｇ／Ｌの濃度で溶解した飲水、Ｌ−ＮＡＭＥとＩＰＰをそれぞれ１ｇ／Ｌと０．３ｇ／Ｌの濃度で溶解した飲水、Ｌ−ＮＡＭＥとアンギオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤であるエナラプリルをそれぞれ１ｇ／Ｌと０．５ｍｇ／Ｌの濃度で溶解した飲水を８週間自由摂取させた。ここでエナラプリルの投与量はＩＰＰとＡＣＥ阻害活性が同等になるように設定した。
ラットはジエチルエーテル麻酔下で放血致死させ、心臓を摘出後、１０％中性緩衝ホルマリン液にて固定した。固定した心臓から右心室、中隔、左心室および冠動脈を含むように心房の下部を水平に切断し、輪状の組織片を作成した。組織片をパラフィン包埋した後３．０〜３．５μｍの厚さでミクロトームにより薄切を行った。各ラットについて、２〜５の切片を作製した。薄切した切片をヘマトキシリン・エオジン染色し、左心室壁の厚さを測定した。心室壁の厚さの測定は、１の切片について顕微鏡下で平均的な厚さがあると思われる複数点の厚さを接眼マイクロメーターにより実測し、その平均の厚さをその切片の測定値として、統計処理を行った。厚さの測定および評価は、各サンプル名を知らされない病理学者が行った。
得られた結果を図３に示す。Ｌ−ＮＡＭＥのみを与えた群に比べ、Ｌ−ＮＡＭＥ及びＩＰＰを与えた群では左心室壁の厚さが減少しており、ＩＰＰによっても左心室壁の肥厚が抑えられ、心不全の予防に有効であることが示された。また、同等のＡＣＥ阻害活性となるように投与量を設定したエナラプリルでは効果が認められなかったことから、本効果がＡＣＥ阻害によらないものであることが確認された。【００３５】
［試験４：Ｉｌｅ Ｐｒｏ Ｐｒｏ（ＩＰＰ）の右心室壁の肥厚抑制効果］
トリペプチドＩｌｅ Ｐｒｏ Ｐｒｏ（ＩＰＰ）の右心室壁の肥厚抑制効果についても確認するため、試験３と同様に試験し、測定および評価した。
７週齢、雄のＷｉｓｔａｒ系ラット（日本エスエルシー株式会社）を一群９〜１２匹として計３群で試験を行った。一週間馴化飼育した後、Ｌ−ＮＡＭＥ（Ｓｉｇｍａ社製）を１ｇ／Ｌの濃度で溶解した飲水、Ｌ−ＮＡＭＥとＩＰＰをそれぞれ１ｇ／Ｌと０．３ｇ／Ｌの濃度で溶解した飲水、Ｌ−ＮＡＭＥとアンギオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤であるエナラプリルをそれぞれ１ｇ／Ｌと０．５ｍｇ／Ｌの濃度で溶解した飲水を８週間自由摂取させた。ここでエナラプリルの投与量はＩＰＰとＡＣＥ阻害活性が同等になるように設定した。
ラットはジエチルエーテル麻酔下で放血致死させ、心臓を摘出後、１０％中性緩衝ホルマリン液にて固定した。固定した心臓から右心室、中隔、左心室および冠動脈を含むように心房の下部を水平に切断し、輪状の組織片を作成した。組織片をパラフィン包埋した後３．０〜３．５μｍの厚さでミクロトームにより薄切を行った。各ラットについて、２〜５の切片を作製した。薄切した切片をヘマトキシリン・エオジン染色し、右心室壁の厚さを測定した。心室壁の厚さの測定は、１の切片について顕微鏡下で平均的な厚さがあると思われる複数点の厚さを接眼マイクロメーターにより実測し、その平均の厚さをその切片の測定値として、各個体の心室壁の厚さを決定した。厚さの測定および評価は、各サンプル名を知らされない病理学者が行った。
心室壁の肥厚の判定は、Ｌ−ＮＡＭＥを加えずに、通常の水道水で飼育した同じ週齢のラット６匹の心室壁の厚さを測定して、その平均を基準値とした。基準値より心室壁の厚さが大きいものを肥厚あり、同じもしくはそれ未満の厚さのものを正常として、肥厚ありと正常のラットの数から尤度比検定による比較を行った。その結果を以下の表２に示す。【００３６】
［表２］ラット右心室壁の肥厚の判定結果
2008123095.tif 000003
＊＊：ｐ＜０．０１【００３７】
得られた結果により、ＩＰＰによっても右心室壁の肥厚が抑えられることが明らかになり、ＩＰＰも心不全の予防に有効であることが明らかとなった。また、同等のＡＣＥ阻害活性となるように投与量を設定したエナラプリルでは効果が認められなかったことから、本効果がＡＣＥ阻害によらないものであることが確認された。【００３８】
［試験５：Ｉｌｅ Ｐｒｏ Ｐｒｏ（ＩＰＰ）の心臓中隔壁の肥厚抑制効果］
トリペプチドＩｌｅ Ｐｒｏ Ｐｒｏ（ＩＰＰ）の心臓中隔壁の肥厚抑制効果についても確認するため、試験３と同様に試験し測定および評価した。
得られた結果を図４に示す。Ｌ−ＮＡＭＥのみを与えた群に比べ、Ｌ−ＮＡＭＥ及びＩＰＰを与えた群では心臓中隔壁の厚さが減少しており、ＩＰＰにより心臓中隔壁の肥厚が抑えられ、心不全の予防に有効であることが示された。また、同等のＡＣＥ阻害活性となるように投与量を設定したエナラプリルでは効果が認められなかったことから、本効果がＡＣＥ阻害によらないものであることが確認された。【００３９】
本発明の心臓壁肥厚抑制剤は、アンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤に抑制作用が認められない場合においても、有効性を示すことから、ＡＣＥ阻害活性に因らない心肥大や心不全の予防用及び／又は治療用の医薬、特に予防剤として非常に有用である。また、有効成分が食品等に由来する天然に存在するトリペプチドであるため、副作用の心配が少なく、且つ高い効力を有する医薬の提供が期待される。
また本発明の心臓壁肥厚抑制剤を飲料や食品に用いるか又は添加することにより、安全かつ日常的に摂取しつつ、心肥大および心不全を予防する効果が期待できる機能性食品が提供される。【００４０】
参考文献
１．特許第２７８２１４２号公報
２．Am J Hypertens.1997 Aug;10(8):913〜20
３．J. Clin. Invest. 77, 1993-2000, 1986
４．最新医学、48:1404 〜1409， 1993
５．J. Dairy Sci. 1995, 78:777-783
６．J.Dairy Sci. 1995, 78:1253-1257
７．Am. J. Clin. Nutr. 1996, 64:767-771
【図面の簡単な説明】
【００４１】
【図１】試験１のＶａｌ Ｐｒｏ Ｐｒｏ（ＶＰＰ）のラット左心室壁の肥厚抑制効果について試験した結果を示す。Ｌ−ＮＡＭＥ投与群は一群１１匹、Ｌ−ＮＡＭＥ及びエナラプリル投与群は一群９匹、Ｌ−ＮＡＭＥ及びＶＰＰ投与群は一群１２匹で試験を行い、グラフは平均値±標準誤差で表した。片側ｔ−検定により比較を行った。図中の記号（＊）は、有意差（ｐ＜０．０５）を示す。
【図２】試験２のＶａｌ Ｐｒｏ Ｐｒｏ（ＶＰＰ）のラット右心室壁の肥厚抑制効果について試験した結果を示す。Ｌ−ＮＡＭＥ投与群は一群１１匹、Ｌ−ＮＡＭＥ及びエナラプリル投与群は一群９匹、Ｌ−ＮＡＭＥ及びＶＰＰ投与群は一群１２匹で試験を行い、グラフは平均値±標準誤差で表した。片側ｔ−検定により比較を行った。図中の記号（＊）は、有意差（ｐ＜０．０５）を示す。
【図３】試験３のＩｌｅ Ｐｒｏ Ｐｒｏ（ＩＰＰ）のラット左心室壁の肥厚抑制効果について試験した結果を示す。Ｌ−ＮＡＭＥ投与群は一群９匹、Ｌ−ＮＡＭＥ及びエナラプリル投与群は一群９匹、Ｌ−ＮＡＭＥ及びＩＰＰ投与群は一群１１匹で試験を行い、グラフは平均値±標準誤差で表した。片側ｔ−検定により比較を行った。図中の記号（＃）は、有意差（ｐ＜０．１）を示す。
【図４】試験５のＩｌｅ Ｐｒｏ Ｐｒｏ（ＩＰＰ）のラット心臓中隔壁の肥厚抑制効果について試験した結果を示す。Ｌ−ＮＡＭＥ投与群は一群９匹、Ｌ−ＮＡＭＥ及びエナラプリル投与群は一群９匹、Ｌ−ＮＡＭＥ及びＩＰＰ投与群は一群１１匹で試験を行い、グラフは平均値±標準誤差で表した。片側ｔ−検定により比較を行った。図中の記号（＊）は、有意差（ｐ＜０．０５）を示す。
【図１】
2008123095.tif 000004
【図２】
2008123095.tif 000005
【図３】
2008123095.tif 000006
【図４】
2008123095.tif 000007
【配列表】
2008123095000001.app
【国際調査報告】
2008123095.tif 000008
2008123095.tif 000009
2008123095.tif 000010
2008123095.tif 000011
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