【手続補正書】
【提出日】平成16年9月24日(2004.9.24)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】  以下の式の化合物
【化１】
2004510767.tif 000001
であって、ここで、置換基Ｒ１およびＲ２は、組み合わせる場合に、５または６員環芳香族環を含む第１の芳香族環系を形成し、該第１の芳香族環系は、必要に応じて１以上のヘテロ原子Ｎ、Ｏ、またはＳを組み込み、そして必要に応じて１または２のさらなる縮合芳香族環を組み込み、該縮合芳香族環は、各々、必要に応じて１以上のヘテロ原子を組み込み；該第１の芳香族環系は、必要に応じて、水素、ハロゲン、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ１−６ペルフルオロアルキル、Ｃ１−６アルキルアミノ、Ｃ２−１２ジアルキルアミノ、スルホ、カルボキシ、ヒドロキシ、アミノ、ニトロ、シアノ、アリール、またはそれらの任意の組合せ、あるいは共有結合した反応性基−Ｌ−Ｚによって置換され；かつ
置換基Ｒ３およびＲ４は、組み合わせられる場合、５または６員環芳香族環を含む第２の芳香族環系を形成し、該第２の芳香族環系は、必要に応じて１〜３のさらなるヘテロ原子Ｎ、Ｏ、またはＳ、あるいはオキソ、チオオキソ、スルホン、またはアミノ官能基を組み込み、そして必要に応じて１または２のさらなる縮合芳香族環を組み込み、該縮合芳香族環自体は、前述のように、必要に応じて１以上のヘテロ原子を組み込み、該第２の芳香族環系は、独立して、必要に応じて、水素、ハロゲン、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ１−６ペルフルオロアルキル、Ｃ１−６アルキルアミノ、Ｃ２−１２ジアルキルアミノ、スルホ、カルボキシ、ヒドロキシ、アミノ、ニトロ、シアノ、アリール、またはそれらの任意の組合せ、あるいは共有結合した反応性基−Ｌ−Ｚによって置換され；
あるいは、Ｒ２およびＲ３は、組み合わせる場合に、該第１および第２の芳香族環系に二重に縮合するさらなる５または６員環の架橋環を形成し、該架橋環は、飽和または不飽和の炭素−炭素結合における炭素原子の組合せを含み、そして必要に応じて、Ｏ、ＮまたはＳ原子の１つを含み、該架橋環の該炭素および窒素原子は、必要に応じてＣ１−６アルキルによって、または−Ｌ−Ｚによって置換され；
ここで、
各Ｌは、独立して、Ｃ、Ｎ、Ｏ、ＰおよびＳからなる群から選択される１〜２０の非水素原子を有する共有単結合、または共有結合連結であり、ここで、安定な化学結合の組合せは、必要に応じて、炭素−炭素結合、炭素−窒素結合、窒素−窒素結合、炭素−酸素結合、炭素−イオウ結合、リン−酸素結合、リン−窒素結合、またはそれらの組合せである、単結合、芳香族結合またはヘテロ芳香族結合を含み、
各Ｚは、独立して、アルデヒドまたはケトンと反応し共有結合を形成し得る官能基であり、
ＸはＯＨまたは−ＮＨ−Ｑ−Ｒ５であり、ここで
Ｑ部分は、電子吸引性結合基である安定な二価のラジカルであり；
Ｒ５は、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ１−６アルキルアミノまたは−Ｌ−Ｚであり、ただし、該化合物は、少なくとも１つの反応性基−Ｌ−Ｚで置換される、
化合物。
【請求項２】  前記第１の芳香族環系が縮合環を含まない、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】  前記第２の芳香族環系が２つの縮合環を含む、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】  前記第１の芳香族環系が縮合環を含まない、請求項３に記載の化合物。
【請求項５】  前記第１および第２の芳香族環系上の前記置換基が、独立して、独立して同じかまたは異なる、水素、ハロゲン、アルコキシ、イオウ、または１以上の−Ｌ−Ｚである、請求項１に記載の化合物。
【請求項６】  前記第２の芳香族環系が、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒまたは−Ｌ−Ｚである、請求項５に記載の化合物。
【請求項７】  前記第１の芳香族環系上の前記置換基が、水素、ハロゲン、イオウ、または−Ｌ−Ｚである、請求項１に記載の化合物。
【請求項８】  Ｘが−ＮＨ−ＱＲ５であり、かつ該Ｑ部分が、カルボニル（−（Ｃ＝Ｏ）−）、チオカルボニル（−（Ｃ＝Ｓ）−）、スルホニル（−（ＳＯ２）−）またはホスホリル（−（ＰＯ２）−）である電子吸引性結合基であり、
Ｒ５が、−Ｌ−Ｚであり、ここで、Ｌは、単結合であるか、またはＬは、置換もしくは非置換のポリメチレン、アリーレン、アルキルアリーレン、アリーレンアルキルもしくはアリールチオの共有結合であり、そしてＺは、−ＮＲ６−ＮＨ２（ヒドラジド）、−ＮＲ６（Ｃ＝Ｏ）ＮＲ７ＮＨ２（セミカルバジド）、−ＮＲ６（Ｃ＝Ｓ）ＮＲ７ＮＨ２（チオセミカルバジド）、−（Ｃ＝Ｏ）ＮＲ６ＮＨ２（カルボニルヒドラジド）、−（Ｃ＝Ｓ）ＮＲ６ＮＨ２（チオカルボニルヒドラジド）、−（ＳＯ２）ＮＲ６ＮＨ２（スルホニルヒドラジド）、−ＮＲ６ＮＲ７（Ｃ＝Ｏ）ＮＲ８ＮＨ２（カルバジド）、−ＮＲ６ＮＲ７（Ｃ＝Ｓ）ＮＲ８ＮＨ２（チオカルバジド）、または−Ｏ−ＮＨ２（ヒドロキシルアミン）であり、ここで、各Ｒ６、Ｒ７およびＲ８は、独立して、Ｈ、またはＣ１−６アルキルである、
請求項１に記載の化合物。
【請求項９】  Ｘが、−ＮＨ−ＱＲ５であり、かつ該Ｑ部分が、カルボニル（−（Ｃ＝Ｏ）−）、チオカルボニル（−（Ｃ＝Ｓ）−）、またはスルホニル（−（ＳＯ２）−）である電子吸引性結合基である、請求項８に記載の化合物。
【請求項１０】  Ｌは単結合であるか、あるいはＬは、Ｃ３−６ペルフルオロアルキルであるポリメチレン結合であるか、またはフェニレンであるアリーレン結合であり、かつＺは、カルボニルヒドラジド、ヒドラジド、スルホニルヒドラジドまたはチオカルボニルヒドラジドであり、Ｒ６は、水素である、請求項８に記載の化合物。
【請求項１１】  式の化合物：
【化２】
2004510767.tif 000002
であって、Ｑは、カルボニル、チオカルボニル、またはスルホニルであり、かつＲ５は、−Ｌ−Ｚであり；Ｌは、アリーレン、Ｃ１−６ペルフルオロアルキル、または共有単結合であり；かつＺは、カルボニルヒドラジド、ヒドラジド、スルホニルヒドラジド、またはチオカルボニルヒドラジドであり；
Ｒ１１〜Ｒ１４は、独立して、Ｈ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ１−６ペルフルオロアルキル、Ｃ１−６アルキルアミノ、Ｃ２−１２ジアルキルアミノ、アミノ、カルボキシ、シアノ、ハロゲン、ヒドロキシ、ニトロ、フェニル、またはスルホであり、
Ｒ２１〜Ｒ２４は、独立して、Ｈ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ１−６ペルフルオロアルキル、Ｃ１−６アルキルアミノ、Ｃ２−１２ジアルキルアミノ、アミノ、カルボキシ、シアノ、ハロゲン、ヒドロキシ、ニトロ、フェニル、スルホ、または−Ｌ−Ｚである、
化合物。
【請求項１２】  Ｑがカルボニルである、請求項１１に記載の化合物。
【請求項１３】  Ｌがアリーレン、Ｃ３−６ペルフルオロアルキル、または共有単結合である、請求項１２に記載の化合物。
【請求項１４】  Ｒ１１〜Ｒ１４およびＲ２１〜Ｒ２４の少なくとも１つが水素である、請求項１３に記載の化合物。
【請求項１５】  以下
【化３】
2004510767.tif 000003
【化４】
2004510767.tif 000004
からなる群から選択される、化合物。
【請求項１６】  サンプル内の目的の標的を染色する方法であって、該方法は、以下の式の化合物：
【化５】
2004510767.tif 000005
を含む染色溶液を、該化合物が目的の生物分子に結合するのに十分な時間の間、目的の標的を含むサンプルと混合する工程を包含し、
ここで、置換基Ｒ１およびＲ２は、組み合わせる場合に、５または６員環芳香族環を含む第１の芳香族環系を形成し、該第１の芳香族環系は、必要に応じて１以上のヘテロ原子Ｎ、Ｏ、またはＳを組み込み、そして必要に応じて１または２のさらなる縮合芳香族環を組み込み、該縮合芳香族環は、各々、必要に応じて１以上のヘテロ原子を組み込み；該第１の芳香族環系は、必要に応じて、水素、ハロゲン、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ１−６ペルフルオロアルキル、Ｃ１−６アルキルアミノ、Ｃ２−１２ジアルキルアミノ、スルホ、カルボキシ、ヒドロキシ、アミノ、ニトロ、シアノ、アリール、またはそれらの任意の組合せ、あるいは共有結合した反応性基−Ｌ−Ｚによって置換され；かつ
置換基Ｒ３およびＲ４は、組み合わせられる場合、５または６員環芳香族環を含む第２の芳香族環系を形成し、該第２の芳香族環系は、必要に応じて１〜３のさらなるヘテロ原子Ｎ、Ｏ、またはＳ、あるいはオキソ、チオオキソ、スルホン、またはアミノ官能基を組み込み、そして必要に応じて１または２のさらなる縮合芳香族環を組み込み、該縮合芳香族環自体は、必要に応じて１以上のヘテロ原子を組み込み、該第２の芳香族環系は、独立して、必要に応じて、水素、ハロゲン、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ１−６ペルフルオロアルキル、Ｃ１−６アルキルアミノ、Ｃ２−１２ジアルキルアミノ、スルホ、カルボキシ、ヒドロキシ、アミノ、ニトロ、シアノ、アリール、またはそれらの任意の組合せ、あるいは共有結合した反応性基−Ｌ−Ｚによって必要に応じて置換され；
あるいは、Ｒ２およびＲ３は、組み合わせる場合に、該第１および第２の芳香族環系に二重に縮合するさらなる５または６員環の架橋環を形成し、該架橋環は、飽和または不飽和の炭素−炭素結合における炭素原子の組合せを含み、そして必要に応じて、Ｏ、ＮまたはＳ原子の１つを含み、該架橋環の該炭素および窒素原子は、必要に応じてＣ１−６アルキルによって、または−Ｌ−Ｚによって置換され；
ここで、
各Ｌは、独立して、Ｃ、Ｎ、Ｏ、ＰおよびＳからなる群から選択される１〜２０の非水素原子を有する共有単結合、または共有結合連結であり、安定な化学結合の組合せは、必要に応じて、炭素−炭素結合、炭素−窒素結合、窒素−窒素結合、炭素−酸素結合、炭素−イオウ結合、リン−酸素結合、リン−窒素結合、またはそれらの組合せである、単結合、芳香族結合またはヘテロ芳香族結合を含み、
各Ｚは、独立して、アルデヒドまたはケトンと反応し共有結合を形成し得る官能基であり、
ＸはＯＨまたは−ＮＨ−Ｑ−Ｒ５であり、ここで
Ｑ部分は、電子吸引性結合基である安定な二価のラジカルであり；
Ｒ５は、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ１−６アルキルアミノまたは−Ｌ−Ｚであり、ただし、該化合物は、少なくとも１つの反応性基−Ｘ−Ｚにより置換される、
方法。
【請求項１７】  請求項１６に記載の方法であって、ここで、該化合物は、式：
【化６】
2004510767.tif 000006
を有し、
ここで、Ｑが、カルボニル、チオカルボニルまたはスルホニルであり、Ｒ５は−Ｌ−Ｚであり；Ｌは、アリーレン、Ｃ１−６ペルフルオロアルキル、または共有単結合であり；かつＺは、カルボニルヒドラジド、ヒドラジド、スルホニルヒドラジド、またはチオカルボニルヒドラジドであり；
Ｒ１１〜Ｒ１４は、独立して、Ｈ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ１−６ペルフルオロアルキル、Ｃ１−６アルキルアミノ、Ｃ２−１２ジアルキルアミノ、アミノ、カルボキシ、シアノ、ハロゲン、ヒドロキシ、ニトロ、フェニル、またはスルホであり、
Ｒ２１〜Ｒ２４は、独立して、Ｈ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ１−６ペルフルオロアルキル、Ｃ１−６アルキルアミノ、Ｃ２−１２ジアルキルアミノ、アミノ、カルボキシ、シアノ、ハロゲン、ヒドロキシ、ニトロ、フェニル、スルホ、または−Ｌ−Ｚである、
方法。
【請求項１８】  目的の前記標的は、ペプチド、タンパク質、核酸、またはリポ多糖類である、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】  目的の前記標的は、グリコペプチド、糖タンパク質、またはリポ多糖類であり、かつ該方法は、前記サンプルに酸化剤を添加する工程をさらに包含する、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】  前記酸化剤が過ヨウ素酸塩である、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】  前記化合物が以下
【化７】
2004510767.tif 000007
【化８】
2004510767.tif 000008
からなる群から選択される、請求項１７に記載の方法。
【請求項２２】  目的の前記標的は、デオキシリボ核酸であり、かつ前記方法が、前記サンプルに脱プリン剤を添加する工程をさらに包含する、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】  前記脱プリン剤がＨＣｌである、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】  目的の前記標的が細胞内にある、請求項１９に記載の方法。
【請求項２５】  前記化合物について、Ｑがカルボニルである、請求項１７に記載の方法。
【請求項２６】  目的の前記標的が、固体または半固体マトリックス内にある、請求項１９に記載の方法。
【請求項２７】  前記固体または半固体マトリックスが、ゲルまたはブロットである、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】  前記化合物について、Ｌがアリーレン、Ｃ３−６ペルフルオロアルキルまたは共有単結合である、請求項２５に記載の方法。
【請求項２９】  前記化合物について、Ｒ１１〜Ｒ１４およびＲ２１〜Ｒ２４の少なくとも１つが水素である、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】  サンプル内の目的の標的を染色するためのキットであって、ａ）以下の式の化合物
【化９】
2004510767.tif 000009
を含む染色溶液、
ｂ）緩衝液、
を含み、
ここで、置換基Ｒ１およびＲ２は、組み合わせる場合に、５または６員環芳香族環を含む第１の芳香族環系を形成し、該第１の芳香族環系は、必要に応じて１以上のヘテロ原子Ｎ、Ｏ、またはＳを組み込み、そして必要に応じて１または２のさらなる縮合芳香族環を組み込み、該縮合芳香族環は、各々、必要に応じて１以上のヘテロ原子を組み込み；該第１の芳香族環系は、必要に応じて、水素、ハロゲン、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ１−６ペルフルオロアルキル、Ｃ１−６アルキルアミノ、Ｃ２−１２ジアルキルアミノ、スルホ、カルボキシ、ヒドロキシ、アミノ、ニトロ、シアノ、アリール、またはそれらの任意の組合せ、あるいは共有結合した反応性基−Ｌ−Ｚによって置換され；かつ
置換基Ｒ３およびＲ４は、組み合わせられる場合、５または６員環芳香族環を含む第２の芳香族環系を形成し、該第２の芳香族環系は、必要に応じて１〜３のさらなるヘテロ原子Ｎ、Ｏ、またはＳ、あるいはオキソ、チオオキソ、スルホン、またはアミノ官能基を組み込み、そして必要に応じて１または２のさらなる縮合芳香族環を組み込み、該縮合芳香族環自体は、必要に応じて１以上のヘテロ原子を組み込み、該第２の芳香族環系は、独立して、必要に応じて、水素、ハロゲン、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ１−６ペルフルオロアルキル、Ｃ１−６アルキルアミノ、Ｃ２−１２ジアルキルアミノ、スルホ、カルボキシ、ヒドロキシ、アミノ、ニトロ、シアノ、アリール、またはそれらの任意の組合せ、あるいは共有結合した反応性基−Ｌ−Ｚによって置換され；
あるいは、Ｒ２およびＲ３は、組み合わせる場合に、該第１および第２の芳香族環系に二重に縮合するさらなる５または６員環の架橋環を形成し、該架橋環は、飽和または不飽和の炭素−炭素結合における炭素原子の組合せを含み、そして必要に応じて、Ｏ、ＮまたはＳ原子の１つを含み、該架橋環の該炭素および窒素原子は、必要に応じてＣ１−６アルキルによって、または−Ｌ−Ｚによって置換され；
ここで、
各Ｌは、独立して、Ｃ、Ｎ、Ｏ、ＰおよびＳからなる群から選択される１〜２０の非水素原子を有する共有単結合、または共有結合連結であり、安定な化学結合の組合せは、必要に応じて、炭素−炭素結合、炭素−窒素結合、窒素−窒素結合、炭素−酸素結合、炭素−イオウ結合、リン−酸素結合、リン−窒素結合、またはそれらの組合せである、単結合、芳香族結合またはヘテロ芳香族結合を含み、
各Ｚは、独立して、アルデヒドまたはケトンと反応し共有結合を形成し得る官能基であり、
ＸはＯＨまたは−ＮＨ−Ｑ−Ｒ５であり、ここで
Ｑ部分は、電子吸引性結合基である安定な二価のラジカルであり；
Ｒ５は、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ１−６アルキルアミノまたは−Ｌ−Ｚであり、ただし、該化合物は、少なくとも１つの反応性基−Ｌ−Ｚによって置換される、
キット。
【請求項３１】  酸化剤または脱プリン剤をさらに含む、請求項３０に記載のキット。
【請求項３２】  前記染色溶液中の前記化合物が式：
【化１０】
2004510767.tif 000010
を有する、請求項３１に記載のキットであって、
ここで、Ｑが、カルボニル、チオカルボニルまたはスルホニルであり、Ｒ５は−Ｌ−Ｚであり；Ｌは、アリーレン、Ｃ１−６ペルフルオロアルキル、または共有単結合であり；かつＺは、カルボニルヒドラジド、ヒドラジド、スルホニルヒドラジド、またはチオカルボニルヒドラジドであり；
Ｒ１１〜Ｒ１４は、独立して、Ｈ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ１−６ペルフルオロアルキル、Ｃ１−６アルキルアミノ、Ｃ２−１２ジアルキルアミノ、アミノ、カルボキシ、シアノ、ハロゲン、ヒドロキシ、ニトロ、フェニル、またはスルホであり、
Ｒ２１〜Ｒ２４は、独立して、Ｈ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ１−６ペルフルオロアルキル、Ｃ１−６アルキルアミノ、Ｃ２−１２ジアルキルアミノ、アミノ、カルボキシ、シアノ、ハロゲン、ヒドロキシ、ニトロ、フェニル、スルホ、または−Ｌ−Ｚである、
キット。
【請求項３３】  前記キットが、ＨＣｌである脱プリン剤を含む、請求項３０に記載のキット。
【請求項３４】  前記染色溶液中の前記化合物が式
【化１１】
2004510767.tif 000011
からなる群から選択される、請求項３２に記載のキット。
【請求項３５】  前記キットが、過ヨウ素酸塩である酸化剤を含む、請求項３１に記載のキット。