【手続補正書】
【提出日】平成17年2月14日(2005.2.14)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
患者に注射する安定化した薬剤又はワクチンを含む医薬組成物であって、
前記薬剤又はワクチンが可溶性ガラス製ミクロスフェアに入れられ、
前記可溶性ガラス製ミクロスフェアが生体適合性無水液に懸濁され、それにより無水液に囲まれたままで、前記薬剤又はワクチンが溶解から保護され、
注射後の長期間当該薬剤又はワクチンを患者の循環系にゆっくりと放出することで、薬剤が作用し又はワクチンが免疫応答を誘発する期間を長くする、
医薬組成物。
【請求項２】
前記薬剤が、ホルモン、鎮痛薬、麻酔薬、麻薬拮抗薬、化学療法剤、免疫抑制剤、成長及び分化の調節剤及び因子、免疫調節剤、避妊薬、血管作用薬、抗凝血剤、心臓作用薬、抗炎症薬並びに中枢神経作用薬からなる群から選ばれる請求項１記載の医薬組成物。
【請求項３】
前記ワクチンが、トキシン、トキソイド、生存又は死滅バクテリア、生存又は死滅ウイルス、生存又は死滅原生動物、組換えタンパク質、ＤＮＡ、ＲＮＡ、多糖、リポタンパク質、脂質及び組換えペプチド又は合成ペプチドからなる群から選ばれる請求項１記載の医薬組成物。
【請求項４】
前記可溶性ガラス製ミクロスフェアが、非還元糖、糖アルコール、金属カルボキシレート及びリン酸ガラスからなる群から選ばれる請求項１記載の医薬組成物。
【請求項５】
前記非還元糖が、スクロース、トレハロース、ラフィノース、及びスタキオースからなる群から選ばれる請求項４記載の医薬組成物。
【請求項６】
前記糖アルコールが、マンニトール、アラビニトール、イノシトール、グルシトール、ガラクチトール、キシリトール、マルチトール、ラクチトール、グルコピラノシルソルビトール及びグルコピラノシルマンニトールからなる群から選ばれる請求項４記載の医薬組成物。
【請求項７】
前記生体適合性無水液が、無水親水性液、無水疎水性液、無水シリコーン液及び無水ペルフルオロカーボンからなる群から選ばれる請求項１記載の医薬組成物。
【請求項８】
前記ガラス製ミクロスフェアが、それが懸濁させている生体適合性無水液の密度に合うように当該ミクロスフェアの平均密度を上げるのに十分な量の不溶性生物適合性の高密度試薬を含む請求項１記載の医薬組成物。
【請求項９】
前記不溶性生物適合性の高密度試薬が、リン酸カルシウム、リン酸アルミニウム、水酸化アルミニウム、硫酸バリウム及び二酸化チタンからなる群から選ばれる請求項８記載の医薬組成物。
【請求項１０】
前記ワクチンが破傷風トキソイドである請求項１記載の医薬組成物。
【請求項１１】
前記ワクチンがアジュバントに吸着している請求項１０記載の医薬組成物。
【請求項１２】
前記アジュバントが、水酸化アルミニウム、リン酸アルミニウム及びリン酸カルシウムからなる群から選ばれる請求項１１記載の医薬組成物。
【請求項１３】
前記ガラス製ミクロスフェアに入れた前記安定化破傷風トキソイドの調製を助けるために、リン酸カルシウム、トレハロース、塩化亜鉛、塩化マグネシウム、及びトリス緩衝液の溶液が加えられた請求項１０記載の医薬組成物。
【請求項１４】
前記溶液をスプレードライして微粉末にした請求項１３記載の医薬組成物。
【請求項１５】
前記粉末をペルフルオロカーボンに懸濁させて安定な懸濁液を調製した請求項１４記載の医薬組成物。
【請求項１６】
前記ペルフルオロカーボンが、ペルフルオロヘキサン、ペルフルオロデカリン、ペルフルオロオクタン及びペルフルオロフェナントレンからなる群から選ばれる請求項１５記載の医薬組成物。
【請求項１７】
有効量を投与したときに作用期間を長くする薬剤又はワクチンの処方方法であって、前記薬剤又はワクチンが、
前記薬剤又はワクチンを可溶性ガラス製ミクロスフェアに導入し、
前記可溶性ガラス製ミクロスフェアを生体適合性無水液に懸濁させ、それによって無水液に囲まれながら前記薬剤又はワクチンが溶解から保護されていて、そのため当該薬剤又はワクチンを患者の循環系にゆっくりと放出するようにすることによって処方される、
薬剤又はワクチンの処方方法。
【請求項１８】
可溶性ガラス製ミクロスフェアを調製するステップが、スプレードライ、空気乾燥、真空乾燥、エマルジョン凝固、沈殿化又は溶融化及び微粉末に粉砕することからなる群から選ばれたステップを含む請求項１７記載の方法。
【請求項１９】
前記微粉末が、ペルフルオロカーボンである生体適合性無水液に懸濁させている請求項１８記載の方法。
【請求項２０】
前記ペルフルオロカーボンが、ペルフルオロヘキサン、ペルフルオロデカリン、ペルフルオロオクタン及びペルフルオロフェナンスレンからなる群から選ばれる請求項１９記載の方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００７】
すべての対照ワクチンでは、初回免疫後に抗体価が典型的な動態応答を示し、特に抗体レベルは４〜８週目でピークになり、１２週までに降下することが分かった。しかし、生体適合性無水液に懸濁させたガラス製ミクロスフェア中で安定化されたワクチンを両グループに注射すると、動物内の抗体レベルは注射後１２週間の全期間を通して上昇し続けた。破傷風トキソイドをモルモットに予防接種したときに今まで認められなかったこの結果は、抗体生成の動態にはっきりした変化があることを示していた。標準的なワクチンを繰り返し注射したモルモットの従来の抗体動態解析な結果と比較すると、本研究は抗原が制御放出されることを示していた。本研究では抗体レベルが１２週間目でも上昇していることから、標準的な可溶性ワクチンを多数回注射した後に認められる場合と同じように動物が保護されていることを示していた。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００８】
糖ガラスは不安定な生体分子に対して安定な環境を提供するのに有効であることが立証されたが、金属カルボキシレートや類似のガラス（「ガラスの徐放系（Ｓｌｏｗ  Ｒｅｌｅａｓｅ  Ｖｉｔｒｅｏｕｓ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）」ＰＣＴ  Ｎｏ  ＷＯ  ９０／１１７５６）、リン酸ガラス（「ホスフェートガラス質セラミックの生物学的及び医学的応用（Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  Ｇｌａｓｓ  Ｃｅｒａｍｉｃｓ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｎａ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ）」ＵＳ  Ｐａｔｅｎｔ  Ｎｏ  ４，６９８，３１８）など他の水溶性ガラスは、糖ガラスと組み合わせるか単独でも（不安定生成物の安定化に用いる非晶性ガラス（「Ａｍｏｒｐｈｏｕｓ  ｇｌａｓｓｅｓ  ｆｏｒ  ｓｔａｂｉｌｉｚｉｎｇ  ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ  ｐｒｏｄｕｃｔｓ）」ＰＣＴ  ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ＷＯ  ９９／４７１７４）ガラス製ミクロスフェアとして処方でき、この系で使用するのに適した他の望ましい特性を有している。その１つは、水中でそれぞれ異なる溶解速度をもつ塩の混合物から調製することによって、ガラスの溶解速度を前もって決定できるということも含まれる（制御送達装置（「Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｄｅｖｉｃｅｓ）」ＵＳ  ｐａｔｅｎｔ  Ｎｏ  ５，２７０，０４８）。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２２】
この実験で、ＰＦＣに懸濁させたガラス製ミクロスフェアは、試験管中で水と混合すると速やかに溶解することが示唆され、これらの調製物が生体中でも同様に抗原を急速に放出するであろうことが示唆された。明らかにこれは正しくない。驚くべきことに、注射後の相当な期間にわたって抗原がゆっくりと制御放出されると思われる。この系における抗原の放出は、フロイント完全アジュバントなど動物で使用するある種のオイル主剤のアジュバントの液体エマルジョンで起きると考えられる放出と類似していた。フロイントアジュバントのミネラルオイル層に分散した抗原溶液の液滴から抗原がゆっくりと漏れ出すことが、この方法で免疫化した動物の体内で免疫応答が大きく増幅される原因と考えられている［Ｆｒｅｕｎｄ  Ｊ．「活性免疫の解釈（Ｓｏｍｅ  ａｓｐｅｃｔｓ  ｏｆ  ａｃｔｉｖｅ  ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ）」Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ  １  ２９１（１９４７）］。無水の生体適合液体に懸濁させた糖ガラス製ミクロスフェア中で安定化された抗原で予防注射した後、類似の結果が得られている。フロイントアジュバントとこの系との主な相違点は、前者が抗原水溶液の液滴をオイルに加えた液体エマルジョンであり、したがって本質的に不安定であるのに対し、後者は安定化された乾燥固体がガラス製ミクロスフェアに入った懸濁液であって、本質的に安定である点である。付言するなら、フロイントアジュバントは激しい痛みを伴うのでヒトに使用するには適さないが［１９７５年１０月６日から１０日までジュネーブで行われた「ＷＨＯ科学グループ会議でのアジュバントの免疫学的報告（Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  ａｄｊｕｖａｎｔｓ  ｒｅｐｏｒｔ  ｏｆ  ａ  ＷＨＯ  ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  ｇｒｏｕｐ  ｍｅｅｔｉｎｇ）」１９７６］、ここで使用しているＰＦＣ組成物は非毒性である。注射後に即時性及び遅延性の刺激や炎症を起こさない。したがって、単回投与ワクチンとしてヒト特に子供へ使用を展開していくのに理想的であり、刺激性がないのは思いがけない利点であった。可溶性ガラス製ミクロスフェア中で安定化された活性物質の放出をこうした組成によって制御できることは、当然のことながらワクチンに限定されない。多種多様な他の薬剤でも治療上の効果を上げるには繰り返し注射することが必要である。実際、非経口薬剤で単回投与で有効なものは例外的である。各場合において、活性分子が可溶性ガラス中の固溶体から体液内の遊離液中に放出される速度は正確に制御する必要があり、異なる活性分子それぞれで相違するはずである。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２６】
密度調整剤として使用されるリン酸カルシウムは、水に不溶で、高度に水和した微細コロイド状懸濁液を形成し、これは水溶液からの大量の高分子、特にタンパク質と可逆的に結合することができる。こうした研究で使用される破傷風トキソイドワクチン中に存在する抗原のかなりの部分は、そのワクチンにもともと使用されていた水酸化アルミニウムアジュバントと、密度調整剤として使用されるリン酸カルシウム懸濁液の双方に結合していた。これらの無機コロイドに結合したタンパク質抗原は、動物の研究で見られた持続放出の貯蔵庫として働く。放出グラフでの遅延の程度は、対照としてワクチンを水の懸濁液とした場合より、ＰＦＣ液の懸濁液とした場合の方がはるかに大きいと思われる。このことから非水性ＰＦＣ液が無機コロイドからの放出速度を制御する決定的な要素であることが示唆される。タンパク質が無機コロイドに結合するのではなく、ガラス製ミクロスフェア内の固溶体中で遊離した状態にある場合に、やはりＰＦＣ液からの持続放出が起こるかどうかを立証するには更に実験をする必要があろう。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２７】
このような処方物中にリン酸カルシウムを使用することは、糖ガラス製ミクロスフェアの密度をＰＦＣ液と一致させることに加えて、更なる利点がある。骨自体の無機質部分はリン酸カルシウムのヒドロキシアパタイトという形で構成されているので、この添加剤の化学的性質は生体適合性で非毒性である。リン酸カルシウムをこのように注射しても局部的に非毒性で注射部位から徐々に可溶化しかつ／又は最終的にはリンパ節から局所的に排出されて過剰分が残ることはないと考えても差し支えない。