【手続補正書】
【提出日】平成17年2月24日(2005.2.24)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号：2に示されるアミノ酸配列を有するタンパク質。
【請求項２】
グリコシル化されていることを特徴とする請求項１記載のタンパク質。
【請求項３】
ヒト好塩基性顆粒球においてIL-4および/またはIL-13の産生を刺激する活性を示すことを特徴とする、請求項１または２記載のタンパク質のホモログ、誘導体または断片であるタンパク質またはポリペプチド。
【請求項４】
請求項１から３記載のタンパク質またはポリペプチドをコードする核酸配列を有することを特徴とする核酸分子。
【請求項５】
配列番号：1に示される核酸配列を有する請求項４記載の核酸分子。
【請求項６】
請求項４または５記載の核酸分子が組み込まれていることを特徴とする発現ベクター。
【請求項７】
請求項１から３記載のタンパク質および/またはポリペプチドに特異的であることを特徴とする抗体。
【請求項８】
モノクローナル抗体であることを特徴とする請求項７記載の抗体。
【請求項９】
請求項１から３記載のタンパク質またはポリペプチドを製薬的に許容される補助物質および担体とともに含むことを特徴とする医薬組成物。
【請求項１０】
免疫調節のための、請求項９記載の医薬組成物。
【請求項１１】
IL-4および/またはIL-13産生を刺激するための、請求項９記載の医薬組成物。
【請求項１２】
IgE産生を刺激するための、請求項９記載の医薬組成物。
【請求項１３】
Th2免疫応答を誘導または増強するための、請求項９記載の医薬組成物。
【請求項１４】
Th1免疫応答を伴う疾患を処置するための、請求項９記載の医薬組成物。
【請求項１５】
血清IgEレベルの上昇および/またはインターフェロンガンマ産生の増加により特徴付けられる疾患を処置するための、請求項９記載の医薬組成物。
【請求項１６】
疾患が、多発性硬化症、自己免疫性ブドウ膜炎、糖尿病、慢性関節リウマチ、ベーチェット症候群、ヘリコバクターピロリ感染、炎症性腸疾患、急性臓器移植拒絶反応、再発性流産、アレルギー性鼻結膜炎およびアレルギー性気管支喘息より成る群から選択される、請求項１４または１５記載の医薬組成物。
【請求項１７】
炎症性腸疾患がクローン病である、請求項１６記載の医薬組成物。
【請求項１８】
ヒト好塩基性顆粒球、B細胞、 T細胞、NK細胞、内皮細胞および繊維芽細胞および免疫系その他の組織の他の細胞ならびにそれら由来のセルラインより成る群から選ばれる細胞を、請求項１から３記載のタンパク質またはポリペプチドとインキュベートすることを特徴とする、インビトロにおけるIL-4、IL-13および/またはIgE産生を誘導または増強するための請求項１から３記載のタンパク質またはポリペプチドの使用。
【請求項１９】
イムノグロブリンまたはその断片を検出および精製するための請求項１から３記載のタンパク質またはポリペプチドの使用。
【請求項２０】
イムノグロブリンがIgEおよびIgGであり、断片がFcおよび/またはFab断片であることを特徴とする請求項１９記載の使用。
【請求項２１】
ELISAに関する請求項１９または２０記載の使用。
【請求項２２】
アフィニティークロマトグラフィーに関する請求項１９または２０記載の使用。
【請求項２３】
タンパク質またはポリペプチドのインビトロ発現のための請求項４または５記載の核酸分子の使用。
【請求項２４】
核酸分子が適した発現ベクターに組み込まれかつタンパク質またはポリペプチドが組換え手法により適した宿主細胞において過剰発現されることを特徴とする請求項２３記載の使用。
【請求項２５】
宿主細胞が大腸菌、バキュロウィルスまたは真核細胞であることを特徴とする請求項２４記載の使用。
【請求項２６】
コード化タンパク質またはポリペプチドをインビボで発現させるための医薬組成物の調製のための請求項４または５記載の核酸分子の使用。
【請求項２７】
核酸分子が遺伝子移入ベクターに組み込まれている請求項２６記載の使用。
【請求項２８】
請求項４または５記載の核酸分子が組み込まれている遺伝子移入ベクターを製薬的に許容される補助物質および/または担体とともに含むことを特徴とする医薬組成物。
【請求項２９】
ヒト好塩基性顆粒球、B細胞、 T細胞、NK細胞、内皮細胞および繊維芽細胞および免疫系その他の組織の他の細胞ならびにそれら由来のセルラインより成る群から選ばれる細胞を、請求項１から３記載のタンパク質またはポリペプチドとインキュベートし、IL-4および/またはIL-13を培養上清から単離することを特徴とする、IL-4および/またはIL-13のインビトロにおける産生方法。
【請求項３０】
卵抗原（EA）または寄生虫のTh2またはIgE誘導段階からの抽出物（EX）を水に対して透析し凍結乾燥して、凍結乾燥EAまたはEXを陽イオン交換クロマトグラフィーによって分画し、ヒト好塩基性顆粒球とのインキュベーションにおいてIL-4誘導をもたらす画分を貯蔵し、濃縮し、Aleuria aurantiaアグルチニンまたは請求項１から３記載のタンパク質に対するモノクローナル抗体を連結したNHS-活性化セファロースを用いてアフィニティークロマトグラフィーを行い、ヒト好塩基性顆粒球とのインキュベーションにおいてIL-4誘導をもたらす画分を貯蔵し、濃縮することを特徴とする、寄生虫からのIL-4誘導タンパク質の単離方法。
【請求項３１】
寄生虫が、Schistosoma mansoni、Schistosoma japonicum、Schistosoma haematobium、Fasciola hepatica、Dicrocoelium lanceolatum、Echinococcus multilocularis、Ascaris lumbricoides、Ascaris suum、Ankylostoma duodenale、Necator americanus、Trichuris trichiura、Brugia malayi、Onchocerca volvulus、Wuchereria bancrofti、Taenia solium、Taenia bovisおよび同類種より成る群から選択されることを特徴とする請求項３０記載の方法。
【請求項３２】
Schistosoma mansoni 卵抗原 (SmEA)を水に対して透析し凍結乾燥して、凍結乾燥SmEAを陽イオン交換クロマトグラフィーによって分画し、ヒト好塩基性顆粒球とのインキュベーションにおいてIL-4誘導をもたらす画分を貯蔵し、濃縮し、Aleuria aurantiaアグルチニンまたは請求項１から３記載のタンパク質に対するモノクローナル抗体を連結したNHS-活性化セファロースを用いてアフィニティークロマトグラフィーを行い、ヒト好塩基性顆粒球のインキュベーションにおいてIL-4誘導をもたらす画分を貯蔵し、濃縮することを特徴とする、請求項１記載のタンパク質の単離方法。
【請求項３３】
得られたタンパク質を単離することを特徴とする請求項３０から３２記載の方法。
【請求項３４】
単離されたタンパク質をその後凍結乾燥することを特徴とする請求項３３記載の方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２３】
本発明の目的はそれゆえ、本発明に係るタンパク質およびポリペプチドを、免疫調節のための医薬組成物の調製、好ましくはIL-4および/またはIL-13産生を刺激するための医薬組成物の調製またはIgE産生を刺激するための医薬組成物の調製、に使用することである。
Th2強調免疫応答の誘導または増強は、ある種のワクチンの開発の点からみてもまた望ましい。従って、Th2応答はある種の寄生虫感染（例えば、ネマトーデ感染または住血吸虫症）において保護的であり、一方Th1強調免疫応答はここでは反対の作用を有する。このことは、駆虫性その他のワクチンの調製において留意すべきである。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２７】
本発明のタンパク質およびポリペプチドの免疫学的性質より、これらは特にTh2免疫応答の誘導および増強のための医薬組成物の調製、特にTh1免疫応答を伴う疾患を処置するための医薬組成物の調製に適する。これらの疾患は好ましくは、多発性硬化症、自己免疫性ブドウ膜炎、インシュリン依存型糖尿病、慢性関節リウマチ、ベーチェット症候群、ヘリコバクターピロリ感染、炎症性腸疾患（特にクローン病）、急性臓器移植拒絶反応および再発性流産より成る群中の疾患である。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２８】
本発明の目的は特に、本発明に係るポリペプチド（しかしとりわけIPSE）を免疫調節のための（例えばアレルギー反応における）医薬組成物の調製に使用することである。そのイムノグロブリン結合性によって、本発明に係るペプチドはさらに、血清IgEレベルの上昇および/またはインターフェロンガンマ産生の増加により特徴付けられる疾患、例えばアレルギー性鼻結膜炎およびアレルギー性気管支喘息、の治療に適している。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４４】
実施例７
IPSEのイムノグロブリン結合性の検討
ウェスタンおよびドットブロッティング技術を、本発明に係るポリペプチド、特にIPSE、のイムノグロブリン結合性の検討に使用した。
ドットブロッティング：ポリクローナルIgE(BA1004; DPC Biermann、Bad Nauheim、Germany)を様々な量(1000-30 ng/dot)でニトロセルロース膜にアプライした。その後、メンブランの自由結合部位を0.05% (v/v) Tween 20を添加したpH 7.4の0.1 M Tris緩衝生理食塩水(Tris-Tween)中でインキュベートしてブロックし、そのメンブランをビオチン化組換えIPSE（Hisタグ融合タンパク質；１μg/ml）と室温で一晩インキュベートした。洗浄後、該ブロットをストレプトアビジン-アルカリフォスファターゼ（1：5000）と2時間インキュベートした。新たに洗浄した後、基質色素原混合物(ニトロブルーテトラゾリウム-ブロモクロロインドイルフォスフェート)を添加することによりブロットを現像した。
平行して、様々な量のHisタグIPSE融合タンパク質(1000-30 ng/dot)をニトロセルロース膜にアプライした。自由結合部位のブロッキング（前述の段落参照）に続き、メンブランをビオチン化ポリクローナルIgE（1μg/ml）と室温で一晩インキュベートした。前の段落にあるように、ストレプトアビジン-アルカリフォスファターゼによりさらに現像した。