【手続補正書】
【提出日】平成17年1月28日(2005.1.28)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】  胆汁排泄感受性の候補化合物をスクリーニングする方法であって、
(ａ)肝細胞の培養物を提供すること、この場合、肝細胞の培養物は少なくとも１個の毛細胆管を含み、
(ｂ)当該培養物に対し候補化合物をさらすこと、および
(ｃ)少なくとも１個の毛細胆管中の候補化合物の量であって、候補化合物が胆汁排泄感受性を示す少なくとも１個の毛細胆管中の候補化合物の量を決定すること、
のステップを含む方法。
【請求項２】  肝細胞が、ラット、ヒト、サル、ヒトニザル、ネコ、イヌ、ブタ、食用ブタ、蓄牛、ウシ、ヒツジ、ウマ、シチメンチョウ、ニワトリ、カモおよびガンからなる群から選択される起源から分離される、請求項１の方法。
【請求項３】  肝細胞の培養物が、肝臓の長期培養物を更に含む、請求項１の方法。
【請求項４】  肝細胞の培養物が、細管ネットワークを更に含む、請求項１の方法。
【請求項５】  肝細胞の培養物が、肝細胞のクラスター、肝細胞の集合体、肝細胞の少なくとも１層、およびその組合せからなる群から選択される配置を有するとして更に特徴付けられる、請求項１の方法。
【請求項６】  肝細胞が、マトリクス中に植え込まれた、請求項５の方法。
【請求項７】  肝細胞の培養物が、肝細胞のサンドイッチ培養物を更に含み、当該サンドイッチ培養物は肝細胞の少なくとも１層および肝細胞の少なくとも１層を伴う少なくとも１個の毛細胆管を含む、請求項５に記載の方法。
【請求項８】  肝細胞のサンドイッチ培養物が、肝細胞の長期サンドイッチ培養物を更に含む、請求項７の方法。
【請求項９】  肝細胞の少なくとも１層がマトリクスの２層の間にサンドイッチされる、請求項７の方法。
【請求項１０】  当該マトリクスが、生物学的マトリクス培地、合成マトリクス培地、およびそれらの組合せからなる群から選択される、請求項９の方法。
【請求項１１】  当該生物学的マトリクス培地が、コラーゲン、ラミニン、基底膜由来複合体、それらの誘導物およびそれらの組合せからなる群から選択される、請求項１０の方法。
【請求項１２】  少なくとも１個の毛細胆管中の候補化合物の量が、培養物の胆汁クリアランス値を計算することによって決定され、該胆汁クリアランス計算値が候補化合物の胆汁排泄感受性を示す、請求項１の方法。
【請求項１３】  胆汁排泄感受性の、多数の候補化合物を同時にスクリーニングする方法であって、
(ａ)複数の肝細胞の培養物を提供すること、この場合、肝細胞の各培養物は、少なくとも１個の毛細胆管を含み、
(ｂ)複数の培養物内の各培養物に対し複数の候補化合物の異なる候補化合物をさらすこと、および
(ｃ)各培養物内の少なくとも１個の毛細胆管中の候補化合物の量であって、候補化合物が胆汁排泄感受性を示す少なくとも１個の毛細胆管中の候補化合物の量を決定すること、
のステップを含む方法。
【請求項１４】  肝細胞が、ラット、ヒト、サル、ヒトニザル、ネコ、イヌ、ブタ、食用ブタ、蓄牛、ウシ、ヒツジ、ウマ、シチメンチョウ、ニワトリ、カモおよびガンからなる群から選択される起源から分離される、請求項１３の方法。
【請求項１５】  肝細胞の培養物が、肝細胞の長期培養物を更に含む、請求項１３の方法。
【請求項１６】  肝細胞の培養物が、細管ネットワークを更に含む、請求項１３の方法。
【請求項１７】  肝細胞の培養物が、肝細胞のクラスター、肝細胞の集合体、肝細胞の少なくとも１層、およびその組合せからなる群から選択される配置を有するとして更に特徴付けられる、請求項１３の方法。
【請求項１８】  肝細胞が、マトリクス中に植え込まれた、請求項１７の方法。
【請求項１９】  肝細胞の培養物が、肝細胞のサンドイッチ培養物を更に含み、当該サンドイッチ培養物は肝細胞の少なくとも１層および肝細胞の少なくとも１層を伴う少なくとも１個の毛細胆管を含む、請求項１７に記載の方法。
【請求項２０】  肝細胞の各サンドイッチ培養物が、肝細胞の長期サンドイッチ培養物を更に含む、請求項１９の方法。
【請求項２１】  肝細胞の少なくとも１層がマトリクスの２層の間にサンドイッチされる、請求項１９の方法。
【請求項２２】  当該マトリクスが、生物学的マトリクス培地、合成マトリクス培地、およびそれらの組合せからなる群から選択される、請求項２１の方法。
【請求項２３】  当該生物学的マトリクス培地が、コラーゲン、ラミニン、基底膜由来複合体、それらの誘導物およびそれらの組合せからなる群から選択される、請求項２２の方法。
【請求項２４】  少なくとも１個の毛細胆管中の候補化合物の量が、培養物の胆汁クリアランス値を計算することによって決定され、該胆汁クリアランス計算値が候補化合物の胆汁排泄感受性を示す、請求項１３の方法。
【請求項２５】  胆汁排泄感受性の候補化合物をスクリーニングする方法であって、
(ａ)肝細胞の培養物を提供すること、この場合、当該培養物は少なくとも１個の毛細胆管を含み、
(ｂ)取り込むことができる十分な時間、当該培養物に対し候補化合物および事前に選択した量のマーカー化合物をさらすこと、
(ｃ)培養物を洗浄すること、
(ｄ)事前に選択した量のマーカー化合物との比較として低減した量のマーカー化合物の存在または非存在が候補化合物の胆汁排泄感受性を示す、培養物中の少なくとも１個の毛細胆管に存在するマーカー化合物の量を決定すること、
のステップを含む方法。
【請求項２６】  肝細胞が、ラット、ヒト、サル、ヒトニザル、ネコ、イヌ、ブタ、食用ブタ、蓄牛、ウシ、ヒツジ、ウマ、シチメンチョウ、ニワトリ、カモおよびガンからなる群から選択される起源から分離される、請求項２５の方法。
【請求項２７】  肝細胞の培養物が、肝細胞の長期培養物を更に含む、請求項２５の方法。
【請求項２８】  肝細胞の培養物が、細管ネットワークを更に含む、請求項２５の方法。
【請求項２９】  肝細胞の培養物が、肝細胞のクラスター、肝細胞の集合体、肝細胞の少なくとも１層、およびその組合せからなる群から選択される配置を有するとして更に特徴付けられる、請求項２５の方法。
【請求項３０】  肝細胞が、マトリクス中に植え込まれた、請求項２９の方法。
【請求項３１】  肝細胞の培養物が、肝細胞のサンドイッチ培養物を更に含み、当該サンドイッチ培養物は肝細胞の少なくとも１層および肝細胞の少なくとも１層を伴う少なくとも１個の毛細胆管を含む、請求項２９に記載の方法。
【請求項３２】  肝細胞のサンドイッチ培養物が、肝細胞の長期サンドイッチ培養物を更に含む、請求項３１の方法。
【請求項３３】  肝細胞の少なくとも１層がマトリクスの２層の間にサンドイッチされる、請求項３２の方法。
【請求項３４】  当該マトリクスが、生物学的マトリクス培地、合成マトリクス培地、およびそれらの組合せからなる群から選択される、請求項３３の方法。
【請求項３５】  当該生物学的マトリクス培地が、コラーゲン、ラミニン、基底膜由来複合体、それらの誘導物およびそれらの組合せからなる群から選択される、請求項３４の方法。
【請求項３６】  マーカー化合物が、蛍光源化合物、蛍光性化合物、ケミルミネセンス化合物、比色分析用化合物、放射標識化合物およびそれらの組合せからなる群から選択される、請求項２６の方法。
【請求項３７】  ステップ(ａ)から(ｄ)をマルチウェルプレートの少なくとも１個のウェルにおいて行う、請求項２６の方法。
【請求項３８】  胆汁排泄感受性の、多数の候補化合物を同時にスクリーニングすることを更に含む、請求項２６の方法。
【請求項３９】  胆汁排泄感受性の候補化合物をスクリーニングする方法であって、
(ａ)肝細胞の第１および第２の培養物を確立すること、この場合、各培養物は、少なくとも１個の毛細胆管を含み、第１の培養物は未処置毛細胆管を含み、そして第２の培養物は、破壊された毛細胆管を含み、
(ｂ)候補化合物を取り込むことができる十分な時間、第１の培養物および第２の培養物に対し候補化合物をさらすこと、
(ｃ)第１および第２の培養物を洗浄し、次いで細胞溶解させること、
(ｄ)ステップ(ｃ)の各培養物から得られた溶解物中に存在する候補化合物の量を測定すること、
(ｅ)ステップ(ｄ)で測定した各培養物の溶解物中の候補化合物の量を用い、未処置毛細胆管を有する第１の培養物および破壊された毛細胆管を有する第２の培養物から得られた胆汁クリアランス値を計算すること、この場合、当該胆汁クリアランス計算値は、候補化合物の胆汁排泄感受性を示す、
のステップを含む方法。
【請求項４０】  肝細胞が、ラット、ヒト、サル、ヒトニザル、ネコ、イヌ、ブタ、食用ブタ、蓄牛、ウシ、ヒツジ、ウマ、シチメンチョウ、ニワトリ、カモおよびガンからなる群から選択される起源から分離される、請求項３９の方法。
【請求項４１】  肝細胞の第１および第２の培養物が、それぞれ更に、肝細胞の長期培養物を含む、請求項３９の方法。
【請求項４２】  肝細胞の第１および第２の培養物が、細管ネットワークを更に含む、請求項３９の方法。
【請求項４３】  肝細胞の第１および第２の培養物が、肝細胞のクラスター、肝細胞の集合体、肝細胞の少なくとも１層、およびその組合せからなる群から選択される配置を有するとして更に特徴付けられる、請求項３９の方法。
【請求項４４】  肝細胞が、マトリクス中に植え込まれた、請求項３９の方法。
【請求項４５】  第１および第２の肝細胞の培養物は、肝細胞のサンドイッチ培養物を更に含み、当該サンドイッチ培養物は肝細胞の少なくとも１層および肝細胞の少なくとも１層を伴う少なくとも１個の毛細胆管を含む、請求項３９に記載の方法。
【請求項４６】  肝細胞の少なくとも１層がマトリクスの２層の間にサンドイッチされる、請求項４５の方法。
【請求項４７】  肝細胞の第１および第２の培養物が、それぞれ更に、肝細胞の長期培養物を含む、請求項４５の方法。
【請求項４８】  当該マトリクスが、生物学的マトリクス培地、合成マトリクス培地、およびそれらの組合せからなる群から選択される、請求項４６の方法。
【請求項４９】  当該生物学的マトリクス培地が、コラーゲン、ラミニン、基底膜由来複合体、それらの誘導物およびそれらの組合せからなる群から選択される、請求項４８の方法。
【請求項５０】  ステップ(ａ)から(ｄ)をマルチウェルプレートの少なくとも１個のウェルにおいて行う、請求項３９の方法。
【請求項５１】  胆汁排泄感受性の、多数の候補化合物を同時にスクリーニングすることを更に含む、請求項３９の方法。
【請求項５２】  胆汁排泄感受性の候補親化合物の代謝産物をスクリーニングする方法であって、
(ａ)肝細胞の第１セットおよび第２セットの２つの培養物を確立すること、この場合、各培養物は、少なくとも１個の毛細胆管を含み、各セット内の第１の培養物は未処置毛細胆管を含み、そして各セット内の第２の培養物は、破壊された毛細胆管を含み、
(ｂ)候補化合物を取り込むことができる十分な時間、各セットの第１の培養物および第２の培養物に対し候補親化合物をさらすこと、
(ｃ)第１セットの培養物の肝細胞において代謝酵素活性を誘導すること、
(ｄ)各セットの第１および第２の培養物を洗浄し、次いで細胞溶解させること、
(ｅ)ステップ(ｄ)の各培養物から得られた溶解物中に存在する候補親化合物の量を測定すること、
(ｆ)ステップ(ｄ)における各培養物から得られた溶解物中に存在する候補親化合物の代謝産物の量を測定すること、
(ｇ)ステップ(ｅ)で測定した各培養物の溶解物中の候補親化合物の量を用い、未処置毛細胆管を有する第１の培養物および破壊された毛細胆管を有する第２の培養物から得られた胆汁クリアランス値を計算すること、この場合、当該胆汁クリアランス計算値は、候補親化合物の胆汁排泄感受性を示し、
(ｈ)ステップ(ｆ)で測定した各培養物の溶解物中の候補親化合物の代謝産物の量を用い、未処置毛細胆管を有する第１の培養物および破壊された毛細胆管を有する第２の培養物から得られた胆汁クリアランス値を計算すること、この場合、当該胆汁クリアランス計算値は、候補親化合物の代謝産物の胆汁排泄感受性を示す、
のステップを含む方法。
【請求項５３】  肝細胞が、ラット、ヒト、サル、ヒトニザル、ネコ、イヌ、ブタ、食用ブタ、蓄牛、ウシ、ヒツジ、ウマ、シチメンチョウ、ニワトリ、カモおよびガンからなる群から選択される起源から分離される、請求項５２の方法。
【請求項５４】  肝細胞の第１および第２セットの培養物が、それぞれ更に、肝細胞の長期培養物を含む、請求項５２の方法。
【請求項５５】  肝細胞の第１および第２セットの培養物が、細管ネットワークを更に含む、請求項５２の方法。
【請求項５６】  肝細胞の培養物が、肝細胞のクラスター、肝細胞の集合体、肝細胞の少なくとも１層、およびその組合せからなる群から選択される配置を有するとして更に特徴付けられる、請求項５２の方法。
【請求項５７】  肝細胞が、マトリクス中に植え込まれた、請求項５６の方法。
【請求項５８】  肝細胞の各培養物が、肝細胞のサンドイッチ培養物を更に含み、当該サンドイッチ培養物が肝細胞の少なくとも１層および肝細胞の少なくとも１層を伴う少なくとも１個の毛細胆管を含む、請求項５６に記載の方法。
【請求項５９】  肝細胞の少なくとも１層がマトリクスの２層の間にサンドイッチされる、請求項５８の方法。
【請求項６０】  肝細胞の培養物が、それぞれ更に、肝細胞の長期培養物を含む、請求項５８の方法。
【請求項６１】  当該マトリクスが、生物学的マトリクス培地、合成マトリクス培地、およびそれらの組合せからなる群から選択される、請求項５９の方法。
【請求項６２】  当該生物学的マトリクス培地が、コラーゲン、ラミニン、基底膜由来複合体、それらの誘導物およびそれらの組合せからなる群から選択される、請求項６１の方法。
【請求項６３】  ステップ(ａ)から(ｆ)をマルチウェルプレートの少なくとも１個のウェルにおいて行う、請求項５２の方法。
【請求項６４】  胆汁排泄感受性の、多数の候補親化合物および多数の候補親化合物の代謝産物を同時にスクリーニングすることを更に含む、請求項５２の方法。