【手続補正書】
【提出日】平成17年1月17日(2005.1.17)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
哺乳動物におけるレチノイン酸関連オーファン受容体（ＲＯＲ）に由来するポリペプチドであって、そのＮ末端の先端において、図３に示したとおり、ラット、ヒトもしくはマウスのＲＯＲβ、αもしくはγの第１〜２０９位に位置するアミノ酸によってか、またはα、βおよびγ以外のサブタイプおよび／もしくは他の哺乳動物の核内受容体ＲＯＲの対応する位置にあるアミノ酸によって区切られており、かつ、そのＣ末端の先端において、図３に示したとおり、ラット、ヒトもしくはマウスのＲＯＲβ、αもしくはγの第４５０〜４５２位に位置するアミノ酸によってか、またはα、βおよびγ以外のサブタイプおよび／もしくは他の哺乳動物の核内受容体ＲＯＲの対応する位置にあるアミノ酸によって区切られていることを特徴とするポリペプチド。
【請求項２】
上記受容体の配列のＮ末端部分の、初めの少なくとも約１００〜２００個のアミノ酸が欠失していることを特徴とする、請求項１記載のポリペプチド。
【請求項３】
上記受容体のリガンド結合ドメイン、すなわちＬＢＤの結合特性が維持されている、核内受容体ＲＯＲに由来する、請求項１または２記載のポリペプチド。
【請求項４】
哺乳動物、例えばヒトまたはラットの核内受容体ＲＯＲβに由来するポリペプチドであって、この由来するポリペプチドが、請求項１〜３のいずれか一項に定義されたとおりのポリペプチド、例えば図３に示されるラットまたはヒトのＲＯＲβの配列の第２０１〜４５９位に位置するアミノ酸によって区切られているポリペプチドを含み、上記ポリペプチドが、図３に示したとおり、上記核内受容体ＲＯＲβのアミノ酸配列の第４５４もしくは４５８位のシステインの少なくとも一方が、欠失しているか、または天然のものであるなしを問わず、別のアミノ酸、例えばアラニンもしくはセリンで置換されていることを特徴とする、ポリペプチド。
【請求項５】
請求項１〜３のいずれか一項に記載のポリペプチドであって、そのＮ末端の先端において、図３に示されたＲＯＲ配列の第２０１〜２０９位の一つに位置するアミノ酸によって区切られており、かつそのＣ末端の先端において、図３に示されたＲＯＲ配列の第４５１または４５２位の一方に位置するアミノ酸によって区切られている、哺乳動物のＲＯＲ、より詳しくはラット、ヒトまたはマウスのＲＯＲβ、αまたはγのフラグメントに対応することを特徴とする、ポリペプチド。
【請求項６】
・図３に示され、配列番号２に対応するラットＲＯＲβの配列、
・図３に示され、配列番号３に対応するヒトＲＯＲβの配列、
・図３に示され、配列番号４に対応するヒトＲＯＲγの配列、
・図３に示され、配列番号５に対応するマウスＲＯＲγの配列、
・図３に示され、配列番号６に対応するヒトＲＯＲαの配列、
・図３に示され、配列番号７に対応するマウスＲＯＲαの配列
の第２０９〜４５２位に位置するアミノ酸によって区切られたフラグメント；
・図３に示され、配列番号８に対応するラットＲＯＲβの配列、
・図３に示され、配列番号９に対応するヒトＲＯＲβの配列、
・図３に示され、配列番号１０に対応するヒトＲＯＲγの配列、
・図３に示され、配列番号１１に対応するマウスＲＯＲγの配列、
・図３に示され、配列番号１２に対応するヒトＲＯＲαの配列、
・図３に示され、配列番号１３に対応するマウスＲＯＲαの配列
の第２０８〜４５２位に位置するアミノ酸によって区切られたフラグメント；
・図３に示され、配列番号１４に対応するラットＲＯＲβの配列、
・図３に示され、配列番号１５に対応するヒトＲＯＲβの配列、
・図３に示され、配列番号１６に対応するヒトＲＯＲγの配列、
・図３に示され、配列番号１７に対応するマウスＲＯＲγの配列、
・図３に示され、配列番号１８に対応するヒトＲＯＲαの配列、
・図３に示され、配列番号１９に対応するマウスＲＯＲαの配列
の第２０８〜４５１位に位置するアミノ酸によって区切られたフラグメント；
・図３に示され、配列番号２０に対応するラットＲＯＲβの配列、
・図３に示され、配列番号２１に対応するヒトＲＯＲβの配列、
・図３に示され、配列番号２２に対応するヒトＲＯＲγの配列、
・図３に示され、配列番号２３に対応するマウスＲＯＲγの配列、
・図３に示され、配列番号２４に対応するヒトＲＯＲαの配列、
・図３に示され、配列番号２５に対応するマウスＲＯＲαの配列
の第２０９〜４５１位に位置するアミノ酸によって区切られたフラグメント；
・図３に示され、配列番号２６に対応するラットＲＯＲβの配列、
・図３に示され、配列番号２７に対応するヒトＲＯＲβの配列、
・図３に示され、配列番号２８に対応するヒトＲＯＲγの配列、
・図３に示され、配列番号２９に対応するマウスＲＯＲγの配列、
・図３に示され、配列番号３０に対応するヒトＲＯＲαの配列、
・図３に示され、配列番号３１に対応するマウスＲＯＲαの配列
の第２０１〜４５１位に位置するアミノ酸によって区切られたフラグメント；
・図３に示され、配列番号３２に対応するラットＲＯＲβの配列、
・図３に示され、配列番号３３に対応するヒトＲＯＲβの配列、
・図３に示され、配列番号３４に対応するヒトＲＯＲγの配列、
・図３に示され、配列番号３５に対応するマウスＲＯＲγの配列、
・図３に示され、配列番号３６に対応するヒトＲＯＲαの配列、
・図３に示され、配列番号３７に対応するマウスＲＯＲαの配列
の第２０１〜４５２位に位置するアミノ酸によって区切られたフラグメント；
のうちから選ばれる、上記に定義されたとおりの請求項１〜５のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項７】
下記の特性：
リガンドに結合し、受容体ＲＯＲのＬＢＤをトランス活性化する特性を有すること、
水性溶媒に可溶性であること、
特に懸滴蒸気拡散法によって、より詳細には約４℃で、水性溶媒中で晶出できることを特徴とする、請求項１〜６のいずれか一項に記載のポリペプチド、あるいは
上記のものから、例えば１個または数個のアミノ酸の抑制、付加または置換によって誘導される、上記の特性を有するポリペプチドまたはペプチド。
【請求項８】
請求項１〜７のいずれか一項に記載のポリペプチドを含む分子複合体であって、上記ポリペプチドが、アゴニストであるＲＯＲ−ＬＢＤリガンド、例えばステアリン酸、またはＲＯＲ−ＬＢＤのアンタゴニスト、例えばレチノイン酸と会合しているか、ならびに／あるいは
約１５〜２０個のアミノ酸の配列を有し、コアクチベーターモチーフＬＸＸＬＬまたはコリプレッサーモチーフ（Ｉ／Ｌ）ＸＸ（Ｖ／Ｉ）ＩもしくはＬＸＸ（Ｈ／Ｉ）ＩＸＸＸ（Ｉ／Ｌ）（ここで、Ｘは、天然のものであるなしを問わない、あらゆるアミノ酸を表す）を含むコペプチド、例えば転写のコアクチベーターのフラグメントの中から、特にｐ１６０ファミリーのフラグメント、より詳細にはコアクチベーターＳＲＣ１のフラグメント、例えばＳＲＣ１のフラグメント６８６〜７００の中から、または転写のコリプレッサーのフラグメントの中から選ばれるコペプチドと会合している、分子複合体。
【請求項９】
請求項１〜７のいずれか一項に記載のポリペプチドをコードしている核酸。
【請求項１０】
請求項９記載の核酸であって、この配列の転写に必要な要素、特に転写のプロモーターおよびターミネーターに結合する核酸。
【請求項１１】
請求項９または１０記載の核酸を含む、ベクター、特にプラスミド。
【請求項１２】
請求項１１記載のベクターで形質転換された、宿主細胞、例えば大腸菌。
【請求項１３】
請求項１〜７のいずれか一項に記載のポリペプチド、または請求項８記載の分子複合体を得る方法であって、
請求項１１記載のベクターを用いて、請求項９または１０記載の核酸で宿主細胞を形質転換する工程と、
こうして得られた請求項１２記載の形質転換された宿主細胞を、適切な培地中で培養する工程と、
得られた組換えポリペプチドまたは分子複合体を回収し、必要ならば精製する工程と
を含むことを特徴とする方法。
【請求項１４】
請求項１〜７のいずれか一項に記載のポリペプチドまたは請求項８記載の分子複合体を含む、結晶。
【請求項１５】
上記結晶が、少なくとも３オングストロームの分解能まで回折させ、その単位胞寸法の５％以内の結晶安定度を有することを特徴とする、請求項１４記載の結晶。
【請求項１６】
ＲＯＲ−ＬＢＤが、オングストロームで下記の単位胞寸法：ａ＝５２．３０２Å、ｂ＝５８．４９０Åおよびｃ＝１０６．０３６Å、α＝β＝χ＝９０°、ならびに斜方晶系空間群Ｐ２１２１２１を有する、請求項１４または１５記載の結晶。
【請求項１７】
例えば、請求項１３に記載された方法であって、請求項１〜７のいずれか一項に記載のポリペプチドまたは請求項８記載の分子複合体を、水性溶媒中で、特に４℃で懸滴蒸気拡散法によって晶出させる工程を含む方法を実施することによって得られる、請求項１４〜１６のいずれか一項に記載の結晶。
【請求項１８】
請求項１〜７のいずれか一項に記載のポリペプチド、請求項８記載の分子複合体または請求項１４〜１７のいずれか一項に記載の結晶の使用であって、
アゴニストであるＲＯＲ−ＬＢＤリガンドもしくは上記受容体のアンタゴニストのスクリーニングのためか、または受容体の構造を摂動させ、コファクター（コアクチベーターおよびコリプレッサー）の動員およびその結果の遺伝子調節に効果を有するリガンドのスクリーニングのための方法、あるいは
上記ポリペプチド、分子複合体または結晶と、特定の化合物とで形成される複合体の三次元構造の分析のための方法
を実施するための使用。
【請求項１９】
中枢神経系、網膜組織、感覚信号の統合、運動能力および不妊に関連する病理の処置の体制に有用である、ＲＯＲのアゴニストまたはアンタゴニストとして作用する化合物のスクリーニングのための、請求項１８記載の使用。
【請求項２０】
アゴニストであるＲＯＲ−ＬＢＤリガンド、または上記受容体のアンタゴニストをスクリーニングするための方法であって、下記の工程：
請求項１〜７のいずれか一項に記載のポリペプチド、請求項８記載の分子複合体または請求項１４〜１７のいずれか一項に記載の結晶を、有利には固体支持体に結合させて、ＲＯＲ−ＬＢＤリガンドになりやすい特定の化合物に接触させる工程（好ましくは、上記ポリペプチド、分子複合体、結晶または試験されたリガンドは、例えば蛍光性、放射性または酵素性の標識で標識されている）と、
上記ポリペプチド、分子複合体または結晶と、試験されたリガンドとの可能な会合を、使用済み標識を特に先行工程で用いた支持体を洗浄した後に測定することにより、または変性させない条件下での質量分析法により検出する工程と
を含む方法。
【請求項２１】
請求項１〜７のいずれか一項に記載のポリペプチド、請求項８記載の分子複合体または請求項１４〜１７のいずれか一項に記載の結晶と、ＲＯＲ−ＬＢＤリガンドになりやすい特定の化合物とで形成された複合体の三次元構造を分析する方法であって、下記の工程：
上記ポリペプチド、分子複合体または結晶を、上記特定の化合物に接触させる工程と、
上記ポリペプチド、分子複合体または結晶と、試験されたリガンドとの間に形成された複合体を、特に蒸気拡散法を用いて晶出させ、そして特に分子置換法を用いて、上記複合体を三次元的に分析する工程、あるいは
可溶性状態の上記複合体を、ＮＭＲなどの適切な方法を用いることによって、三次元的に分析する工程と
を含む方法。