【手続補正書】
【提出日】平成15年12月3日(2003.12.3)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）細胞外リガンドからのシグナル伝達に応答する誘導可能な活性化ドメイン、および
（ｂ）核酸配列に結合しそして内在性遺伝子の転写を活性化する合成ＤＮＡ結合ドメイン
を含んでなる、キメラ転写因子をコードする核酸であって、
ここで、上記活性化ドメインが、転写因子の活性を調節できるように上記ＤＮＡ結合ドメインに操作可能に連結され、ＪａｋＳＴＡＴ、ＭＡＰキナーゼ、ホスファチジルイノシトール／Ｃａ++、および環状ヌクレオチドからなる群より選ばれたシグナル伝達経路に応答する、上記核酸。
【請求項２】
（ａ）細胞外リガンドからのシグナル伝達に応答する誘導可能な活性化ドメイン、および
（ｂ）核酸配列に結合しそして内在性遺伝子の転写を活性化する合成ＤＮＡ結合ドメイン
を含んでなる、キメラ転写因子をコードする核酸であって、
ここで、上記活性化ドメインが、転写因子の活性を調節できるように上記ＤＮＡ結合ドメインに操作可能に連結され、サイトカイン受容体シグナル伝達経路に応答し、そして上記合成ＤＮＡ結合ドメインが少なくとも１個の変性ジンクフィンガーを含む、上記核酸。
【請求項３】
ａ）細胞外リガンドからのシグナル伝達に応答する誘導可能な活性化ドメイン、および
（ｂ）核酸配列に結合しそして内在性遺伝子の転写を活性化する合成ＤＮＡ結合ドメイン
を含んでなる、キメラ転写因子をコードする核酸であって、
ここで、上記活性化ドメインが、転写因子の活性を調節できるように上記ＤＮＡ結合ドメインに操作可能に連結され、活性化ドメインが成長因子シグナル伝達経路に応答し、そして合成ＤＮＡ結合ドメインが少なくとも１個の変性ジンクフィンガーを含む、上記核酸。
【請求項４】
ａ）細胞外リガンドからのシグナル伝達に応答する誘導可能な活性化ドメイン、および
（ｂ）核酸配列に結合しそして内在性遺伝子の転写を活性化する合成ＤＮＡ結合ドメイン
を含んでなる、キメラ転写因子をコードする核酸であって、
ここで、上記活性化ドメインが、転写因子の活性を調節できるように上記ＤＮＡ結合ドメインに操作可能に連結され、Ｇ−タンパク質共役型受容体シグナル伝達経路に応答し、そして合成ＤＮＡ結合ドメインが少なくとも１個の変性ジンクフィンガーを含む、上記核酸。
【請求項５】
ａ）細胞外リガンドからのシグナル伝達に応答する誘導可能な活性化ドメイン、および
（ｂ）核酸配列に結合しそして内在性遺伝子の転写を活性化する合成ＤＮＡ結合ドメイン
を含んでなる、キメラ転写因子をコードする核酸であって、
ここで、上記活性化ドメインが、転写因子の活性を調節できるように上記ＤＮＡ結合ドメインに操作可能に連結され、細胞内受容体のリガンド結合ドメインであり、そして合成ＤＮＡ結合ドメインが少なくとも１個の変性ジンクフィンガーを含む、上記核酸。
【請求項６】
（ａ）請求項１
（ｂ）請求項２
（ｃ）請求項３
（ｄ）請求項４、および
（ｅ）請求項５
からなる群より選ばれた核酸を含んでなる発現ベクター。
【請求項７】
請求項６の発現ベクターを含む細胞。
【請求項８】
（ａ）請求項６の発現ベクターを適合する宿主細胞内に転移し、そして
（ｂ）発現ベクターからのキメラ転写因子の発現を可能とする条件下で宿主細胞を培養する
ことを含んでなる、組換え宿主細胞内のキメラ転写因子の発現のための方法。
【請求項９】
ａ）細胞がキメラ転写因子を発現する請求項７の細胞と化合物を接触させ、
ｂ）該転写因子の促進的制御下で遺伝子の発現を測定し、
ｃ）遺伝子発現の量に対する化合物の効果を決定する
段階を含んでなる方法。
【請求項１０】
ａ）化合物、細胞外リガンドおよび請求項７の細胞を接触させ、該細胞が該リガンドに応答可能でありそしてキメラ転写因子を含み、
ｂ）該外因性転写因子の転写制御下で内在性遺伝子の発現を測定し、そして
ｃ）遺伝子発現の量に対する化合物の効果を決定する
段階を含んでなる方法。
【請求項１１】
（ａ）細胞外リガンドからのシグナル伝達に応答する誘導可能な活性化ドメイン、および
（ｂ）核酸配列に結合しそして内在性受容体遺伝子の転写を活性化する合成ＤＮＡ結合ドメインであって、活性化ドメインが転写因子の活性を調節できるようにＤＮＡ結合ドメインに操作可能に連結される
ことを含んでなるキメラ転写因子をコードする核酸。
【請求項１２】
請求項１１の核酸を含んでなる発現ベクター。
【請求項１３】
請求項１２の発現ベクターを含む細胞。
【請求項１４】
（ａ）請求項１２の発現ベクターを適合する宿主細胞内に転移し、そして
（ｂ）発現ベクターからのキメラ転写因子の発現を可能とする条件下で宿主細胞を培養する
ことを含んでなる、組換え宿主細胞内のキメラ転写因子の発現のための方法。
【請求項１５】
ａ）細胞が細胞内の関係する受容体を上方制御する誘導可能な転写因子を含む、請求項１１の細胞を提供し、そして
ｂ）受容体が細胞により産生されるように細胞外リガンドを用いて転写因子の機能を刺激し、受容体の量が転写因子の活性により調節される
段階を含んでなる受容体の量を調節するための方法。
【請求項１６】
ａ）化合物を請求項１１の非−刺激細胞と接触させ、そして刺激細胞が受容体を発現するように化合物を請求項１１の刺激細胞と接触させ、
ｂ）非−刺激細胞および刺激細胞内の受容体の活性を測定し、そして
ｃ）受容体の活性に対する化合物の効果を決定する
段階を含んでなる方法。
【請求項１７】
ａ）化合物および細胞外リガンドを請求項１１の非刺激細胞と接触させ、そして刺激細胞が受容体を発現するように化合物および細胞外リガンドを請求項１１の刺激細胞と接触させ、
ｂ）非刺激細胞および刺激細胞内の受容体の活性を測定し、そして
ｃ）受容体の活性に対する化合物の効果を決定する
段階を含んでなる方法。
【請求項１８】
ａ）構成的活性ドメイン、
ｂ）核酸配列に結合しそして内在性遺伝子の転写を活性化する合成ＤＮＡ結合ドメイン、および
ｃ）プロテアーゼ切断部位を含む膜固定ドメイン
を含んでなり、構成的活性ドメインを転写因子が非調節様式で活性であるようにＤＮＡ結合ドメインに操作可能に連結する、キメラ転写因子をコードする核酸。
【請求項１９】
請求項１８の核酸を含む発現ベクター。
【請求項２０】
請求項１９の発現ベクターを含む細胞。
【請求項２１】
ａ）化合物を請求項２０の細胞と接触させ、該細胞は膜結合で構成的活性の転写因子を含み、
ｂ）該化合物によりプロテアーゼの活性を刺激して膜から転写因子を遊離し、その結果転写因子の核へのトランスロケーションを可能とし、
ｃ）膜結合転写因子の促進的制御下で遺伝子の発現を測定し、そして
ｄ）遺伝子発現の量に対する化合物の効果を決定する
段階を含んでなる方法。
【請求項２２】
ａ）化合物および細胞外リガンドを請求項２０の細胞と接触させ、該細胞は膜結合で構成的活性の転写因子を含み、
ｂ）該化合物または該リガンドのいずれかによりプロテアーゼの活性を刺激して膜から転写因子を遊離し、その結果転写因子の核へのトランスロケーションを可能とし、
ｃ）膜結合転写因子の促進性制御下で遺伝子の発現を測定し、そして
ｄ）遺伝子発現の量に対する化合物の効果を決定する
段階を含んでなる方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００４】
【発明の背景】  全細胞に基づくアッセイにおける作用を測定する新規の手段は、生物学的アッセイを開発する科学者にとって望ましい。特に、複数の細胞外リガンドに容易に適合されるアッセイは、薬剤開発の時間および経費を低減すると期待される。この要求は、外因性転写因子の制御下での内在性遺伝子（以下、内因性遺伝子ということもある）の活性化を利用する全細胞に基づく生物学的アッセイを記述する本発明により取り組まれる。