【手続補正書】
【提出日】平成15年10月7日(2003.10.7)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
プロゲステロンレセプターアイソフォームAまたはB特異的リガンドをスクリーニングする方法において、
(a)       プロゲステロンレセプターアイソフォームAを発現するプラスミドで第1細胞を安定にトランスフェクトし；
(b)       プロゲステロンレセプターアイソフォームBを発現するプラスミドで第2細胞を安定にトランスフェクトし；
(c)       ホルモン的に応答性のプロモーターに連鎖されたリポーター遺伝子を含んでなるプラスミドで前記第1および第2細胞をさらに安定にトランスフェクトし；
(d)       前記第1および第2細胞を試験すべきリガンドと接触させ；
(e)       前記第1および第2細胞中の前記リポーター遺伝子の転写効率(efficacy)および／または効力(potency)を決定し；そして
(f)       プロゲステロンレセプターアイソフォームAまたはプロゲステロンレセプターアイソフォームBに対する選択性を有するリガンドを選択する；工程を含んでなる方法。
【請求項２】
前記第1および第2細胞中の前記リガンドについて決定された転写効率の差が10％より大きいか、あるいはそれに等しくそして／または前記第1細胞中の前記リガンドで達成される効力が前記第2細胞中の前記リガンドで達成される効力と少なくとも10倍異なるように、工程 (f) における選択性が定義される、請求項1に記載の方法。
【請求項３】
前記細胞が、SK−N−MC細胞である、請求項1又は2に記載の方法。
【請求項４】
前記ホルモン的に応答性のプロモーターが、マウス乳房腫瘍ウイルス (MMTV) プロモーターである、請求項1〜3のいずれか1項に記載の方法。
【請求項５】
前記リポーター遺伝子が、ルシフェラーゼ (LUC) リポーター遺伝子である、請求項1〜4のいずれか1項に記載の方法。
【請求項６】
前記第1および第2細胞における転写効率および／または効力をルシフェラーゼ活性の測定により決定する、請求項5に記載の方法。
【請求項７】
前記プロゲステロンレセプターアイソフォームAまたはプロゲステロンレセプターアイソフォームBを発現するプラスミド、およびプロモーターおよびリポーター遺伝子を含んでなるプラスミドが、抗生物質耐性遺伝子を含んでなる、請求項1〜6のいずれか1項に記載の方法。
【請求項８】
前記抗生物質耐性遺伝子が、ネオマイシンまたはプロマイシン耐性遺伝子である、請求項7に記載の方法。
【請求項９】
前記プロゲステロンレセプターアイソフォームAまたはプロゲステロンレセプターアイソフォームBを発現するプラスミドが、ネオマイシン耐性遺伝子を含んでなり、そしてホルモン的に応答性のプロモーターに連鎖されたリポーター遺伝子を含んでなるプラスミドがプロマイシン耐性遺伝子を含んでなる、請求項8に記載の方法。
【請求項１０】
組織選択的プロゲステロンレセプターリガンドをスクリーニングする方法において、
(a)  プロゲステロンレセプターアイソフォームAを発現するプラスミドで第1細胞を安定にトランスフェクトし；
(b)  プロゲステロンレセプターアイソフォームBを発現するプラスミドで第2細胞を安定にトランスフェクトし；
(c)  ホルモン的に応答性のプロモーターに連鎖されたリポーター遺伝子を含んでなるプラスミドで前記第1および第2細胞をさらに安定にトランスフェクトし；
(d)  前記第1および第2細胞を試験すべきリガンドと接触させ；
(e)  前記第1および第2細胞中の前記リポーター遺伝子の転写効率(efficacy)および／または効力(potency)を決定し；
(f)  プロゲステロンレセプターアイソフォームAまたはプロゲステロンレセプターアイソフォームBに対する選択性を有するリガンドを選択し；
(g)  工程 (f) において選択したリガンドを第1および第2組織中のin vivo試験に付し；そして
(h)  前記第1および第2組織に関して所望の活性を有するリガンドを選択する；工程を含んでなる方法。
【請求項１１】
前記第1組織が乳房組織であり、そして前記第２組織が子宮組織である、請求項10に記載の方法。
【請求項１２】
前記in vivo試験が、前記第1および第2組織におけるプロゲステロン仲介作用を決定する試験である、請求項10又は11に記載の方法。
【請求項１３】
前記第1および第2細胞中の前記リガンドについて決定された転写効率の差が10％より大きいか、あるいはそれに等しくおよび／または前記第1細胞中の前記リガンドで達成される効力が前記第2細胞中の前記リガンドで達成される効力と少なくとも10倍異なるように、工程 (f) における選択性が定義される、請求項10〜12のいずれか1項に記載の方法。
【請求項１４】
前記細胞が、SK−N−MC細胞である、請求項10〜13のいずれか1項に記載の方法。
【請求項１５】
前記ホルモン的に応答性のプロモーターが、マウス乳房腫瘍ウイルス (MMTV) プロモーターである、請求項10〜14のいずれか1項に記載の方法。
【請求項１６】
前記リポーター遺伝子が、ルシフェラーゼ (LUC) リポーター遺伝子である、請求項10〜15のいずれか1項に記載の方法。
【請求項１７】
前記第1および第2細胞における転写効率および／または効力をルシフェラーゼ活性の測定により決定する、請求項16に記載の方法。
【請求項１８】
前記プロゲステロンレセプターアイソフォームAまたはプロゲステロンレセプターアイソフォームBを発現するプラスミド、およびプロモーターおよびリポーター遺伝子を含んでなるプラスミドが、抗生物質耐性遺伝子を含んでなる、請求項10〜17のいずれか1項に記載の方法。
【請求項１９】
前記抗生物質耐性遺伝子が、ネオマイシンまたはプロマイシン耐性遺伝子である、請求項18に記載の方法。
【請求項２０】
プロゲステロンレセプターアイソフォームAまたはプロゲステロンレセプターアイソフォームBを発現するプラスミドが、ネオマイシン耐性遺伝子を含んでなり、そしてホルモン的に応答性のプロモーターに連鎖されたリポーター遺伝子を含んでなるプラスミドがプロマイシン耐性遺伝子を含んでなる、請求項19に記載の方法。
【請求項２１】
プロゲステロンレセプターアイソフォームAまたはプロゲステロンレセプターアイソフォームBを発現するプラスミドで安定にトランスフェクトされたSK−N−MC細胞系統。
【請求項２２】
ホルモン的に応答性のプロモーターに連鎖されたリポーター遺伝子を含んでなるプラスミドでさらに安定にトランスフェクトされた、請求項21に記載のSK−N−MC細胞系統。
【請求項２３】
前記プロゲステロンレセプターアイソフォームAまたはプロゲステロンレセプターアイソフォームBを発現するプラスミド、およびプロモーターおよびリポーター遺伝子を含んでなるプラスミドが、抗生物質耐性遺伝子を含んでなる、請求項22に記載のSK−N−MC細胞系統。
【請求項２４】
前記抗生物質耐性遺伝子がネオマイシンまたはプロマイシン耐性遺伝子である、請求項23に記載のSK−N−MC細胞系統。
【請求項２５】
前記プロゲステロンレセプターアイソフォームAまたはプロゲステロンレセプターアイソフォームBを発現するプラスミドが、ネオマイシン耐性遺伝子を含んでなり、そしてホルモン的に応答性のプロモーターに連鎖されたリポーター遺伝子を含んでなるプラスミドがプロマイシン耐性遺伝子を含んでなる、請求項24に記載のSK−N−MC細胞系統。
【請求項２６】
前記リポーター遺伝子が、ルシフェラーゼ (LUC) リポーター遺伝子であり、そしてホルモン的に応答性のプロモーターがマウス乳房腫瘍ウイルス (MMTV) プロモーターである、請求項22〜25のいずれか1項に記載のSK−N−MC細胞系統。
【請求項２７】
プロゲステロンレセプターアイソフォームAを発現するプラスミドで安定にトランスフェクトされた第1細胞と、プロゲステロンレセプターアイソフォームBを発現するプラスミドで安定にトランスフェクトされた第2細胞とを含んでなるプロゲステロンレセプターアイソフォームAまたはB特異的リガンドをスクリーニングするアッセイキットであって、前記第1および第2細胞がホルモン的に応答性のプロモーターに連鎖されたリポーター遺伝子を含んでなるプラスミドでさらに安定にトランスフェクトされており、ここで試験すべきリガンドと前記第1および第2細胞を接触させると、前記第1細胞および前記第2細胞について発現された遺伝子産物があるレベルで産生され、これらの遺伝子産物のレベルを比較すると、前記第1および第2細胞中の前記リガンドにより誘導される転写効率および／または効力が異なり、ここでこの転写効率の差はプロゲステロンレセプターアイソフォームAまたはプロゲステロンレセプターアイソフォームBに対する選択性を示す、アッセイキット。
【請求項２８】
前記第1および第2細胞中の前記リガンドについて決定された転写効率の差が10％より大きいか、あるいはそれに等しくおよび／または前記第1細胞中の前記リガンドで達成される効力が前記第2細胞中の前記リガンドで達成される効力と少なくとも10倍異なる、請求項27に記載のアッセイキット。
【請求項２９】
前記細胞が、SK−N−MC細胞である、請求項27又は28に記載のアッセイキット。
【請求項３０】
前記ホルモン的に応答性のプロモーターが、マウス乳房腫瘍ウイルス (MMTV) プロモーターである、請求項27〜29のいずれか1項に記載のアッセイキット。
【請求項３１】
リポーター遺伝子がルシフェラーゼ (LUC) リポーター遺伝子である、請求項27〜30のいずれか1項に記載のアッセイキット。
【請求項３２】
前記第1および第2細胞における転写効率および／または効力をルシフェラーゼ活性の測定により決定する、請求項31に記載のアッセイキット。
【請求項３３】
前記プロゲステロンレセプターアイソフォームAまたはプロゲステロンレセプターアイソフォームBを発現するプラスミド、およびプロモーターおよびリポーター遺伝子を含んでなるプラスミドが、抗生物質耐性遺伝子を含んでなる、請求項27〜32のいずれか1項に記載のアッセイキット。
【請求項３４】
前記抗生物質耐性遺伝子が、ネオマイシンまたはプロマイシン耐性遺伝子である、請求項33に記載のアッセイキット。
【請求項３５】
前記プロゲステロンレセプターアイソフォームAまたはプロゲステロンレセプターアイソフォームBを発現するプラスミドが、ネオマイシン耐性遺伝子を含んでなり、そしてホルモン的に応答性のプロモーターに連鎖されたリポーター遺伝子を含んでなるプラスミドがプロマイシン耐性遺伝子を含んでなる、請求項34に記載のアッセイキット。
【請求項３６】
プロゲステロンレセプターアイソフォームAまたはプロゲステロンレセプターアイソフォームB仲介作用を選択的に阻害または刺激する薬剤を製造するための、プロゲステロンレセプターアイソフォームAまたはB特異的リガンドの使用。
【請求項３７】
プロゲステロンレセプターアイソフォームAまたはB特異的リガンドが、請求項1に記載の方法により同定される、請求項36に記載の使用。
【請求項３８】
薬剤を生殖能のコントロールまたはホルモン置換療法において使用する、請求項36又は37に記載の使用。
【請求項３９】
第1選択組織におけるプロゲステロンレセプター仲介作用に影響を及ぼさず、またはそれを阻害し、そして、同時に、第2選択組織におけるプロゲステロンレセプター仲介作用を増強または維持するとき使用するための、請求項36〜38のいずれか1項に記載の使用。
【請求項４０】
前記第1選択組織が乳房組織であり、そして前記第2選択組織が子宮組織である、請求項39に記載の使用。
【請求項４１】
乳房組織の増殖または分化を選択的に阻害し、またはそれに影響を及ぼさず、および／または子宮組織において抗増殖作用を選択的に増強または維持するとき使用するための、請求項40に記載の使用。
【請求項４２】
生殖能のコントロールのための抗体の調製における、プロゲステロンレセプターアイソフォームAまたはB特異的リガンドの使用。
【請求項４３】
プロゲステロンレセプターアイソフォームAまたはB特異的リガンドが、請求項1に記載の方法により同定される、請求項42に記載の使用。
【請求項４４】
第1および第2選択組織におけるプロゲステロンレセプター仲介作用を選択的にモジューレートする薬剤を製造するための、組織選択的プロゲステロンレセプターリガンドの使用。
【請求項４５】
組織選択的プロゲステロンレセプターリガンドが、請求項10に記載の方法により同定される、請求項44に記載の使用。
【請求項４６】
薬剤を生殖能のコントロールまたはホルモン置換療法において使用する、請求項44又は45に記載の使用。
【請求項４７】
第1選択組織におけるプロゲステロンレセプター仲介作用に影響を及ぼさず、またはそれを阻害し、そして、同時に、第2選択組織におけるプロゲステロンレセプター仲介作用を増強または維持するとき使用するための、請求項44〜46のいずれか1項に記載の使用。
【請求項４８】
前記第1選択組織が乳房組織であり、そして前記第2選択組織が子宮組織である、請求項47に記載の使用。
【請求項４９】
乳房組織の増殖または分化を選択的に阻害し、またはそれに影響を及ぼさず、および／または子宮組織において抗増殖作用を選択的に増強または維持するとき使用するための、請求項48に記載の使用。
【請求項５０】
生殖能のコントロールのための抗体の調製における、組織選択的プロゲステロンレセプターリガンドの使用。
【請求項５１】
組織選択的プロゲステロンレセプターリガンドが、請求項10に記載の方法により同定される、請求項50に記載の使用。
【請求項５２】
組織選択的プロゲステロンレセプターリガンドをスクリーニングする方法において、
(a)       プロゲステロンレセプターリガンドを第1選択組織において少なくとも1つのin vivo試験に付し；
(b)       前記リガンドを第2選択組織において少なくとも1つのin vivo試験に付し；そして
(c)       前記第2選択組織に関して前記第1選択組織においてプロゲステロンレセプター仲介作用を選択的にモジューレートするプロゲステロンレセプターリガンドを選択する；工程を含んでなる方法。
【請求項５３】
前記プロゲステロンレセプターリガンドが、プロゲステロンレセプターの純粋なアゴニスト、純粋なアンタゴニストおよび部分的アゴニスト／アンタゴニストから成る群から選択される、請求項52に記載の方法。
【請求項５４】
工程 (c) において選択したプロゲステロンレセプターリガンドが、前記第1選択組織においてプロゲステロンレセプター仲介作用を阻害し、またはそれに影響を及ぼさず、そして前記第2選択組織においてプロゲステロンレセプター仲介作用を増強または維持する、請求項52又は53に記載の方法。
【請求項５５】
前記第1選択組織が乳房組織であり、そして前記第2選択組織が子宮組織である、請求項52〜54のいずれか1項に記載の方法。
【請求項５６】
工程 (c) において選択したプロゲステロンレセプターリガンドが、乳房組織における増殖および分化を選択的に阻害し、またはそれに影響を及ぼさず、および／または子宮組織における抗増殖作用を選択的に増強または維持する、請求項55に記載の方法。
【請求項５７】
組織選択的プロゲステロンレセプターリガンドが、請求項52に記載の方法により同定される、請求項44に記載の使用。
【請求項５８】
薬剤を生殖能のコントロールまたはホルモン置換療法において使用する、請求項57に記載の使用。
【請求項５９】
前記第1選択組織におけるプロゲステロンレセプター仲介作用を阻害し、またはそれに影響を及ぼさず、そして前記第2選択組織におけるプロゲステロンレセプター仲介作用を増強または維持する、請求項57又は58に記載の使用。
【請求項６０】
前記第1選択組織が乳房組織であり、そして前記第2選択組織が子宮組織である、請求項57〜59のいずれか1項に記載の使用。
【請求項６１】
乳房組織の増殖および分化を選択的に阻害し、またはそれに影響を及ぼさず、および／または子宮組織における抗増殖作用を選択的に増強または維持する、請求項60に記載の使用。
【請求項６２】
組織選択的プロゲステロンレセプターリガンドがプロゲステロンレセプターの純粋なアゴニスト、純粋なアンタゴニストおよび部分的アゴニスト／アンタゴニストから成る群から選択される、請求項57〜61のいずれか1項に記載の使用。
【請求項６３】
組織選択的プロゲステロンレセプターリガンドがPR−A転写を選択的に活性化し、そしてPR−B転写を選択的に阻害し、またはそれに影響を及ぼさない、請求項62に記載の使用。
【請求項６４】
組織選択的プロゲステロンレセプターリガンドが、請求項52に記載の方法により同定される、請求項50に記載の使用。