(57)【要約】  本発明は、極めて優れた脂肪細胞分化抑制剤、抗肥満薬、耐糖能異常改善剤、アディポネクチン産生促進剤、抗肥満用食品、抗肥満用食品添加剤、及び抗肥満用飼料を提供することを目的とする。下記一般式（Ｉ）で示されるスチルベン誘導体を用いる。（式中、Ｒ１〜Ｒ６は、それぞれ独立して水素又はヒドロキシ基を表す。但し、Ｒ２、Ｒ４及びＲ６がヒドロキシ基であり、かつＲ１、Ｒ３及びＲ５が水素である場合を除く。）  【化１】2008136173.tif 000019
2008136173.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記一般式（Ｉ）で示されるスチルベン誘導体を有効成分とする脂肪細胞分化抑制剤。
【化１】
2008136173.tif 000011
（式中、Ｒ１〜Ｒ６は、それぞれ独立して水素又はヒドロキシ基を表す。但し、Ｒ２、Ｒ４及びＲ６がヒドロキシ基であり、かつＲ１、Ｒ３及びＲ５が水素である場合を除く。）
【請求項２】
スチルベン誘導体がイソ−レスベラトロール、３，５−トランス−ジヒドロキシスチルベン、３，４’−トランス−ジヒドロキシスチルベン、３，３’−トランス−ジヒドロキシスチルベン、３−トランス−ヒドロキシスチルベン、又は４−トランス−ヒドロキシスチルベンであることを特徴とする請求項１に記載の脂肪細胞分化抑制剤。  
【請求項３】
下記一般式（Ｉ）で示されるスチルベン誘導体を有効成分とする抗肥満剤。
【化２】
2008136173.tif 000012
（式中、Ｒ１〜Ｒ６は、それぞれ独立して水素又はヒドロキシ基を表す。但し、Ｒ２、Ｒ４及びＲ６がヒドロキシ基であり、かつＲ１、Ｒ３及びＲ５が水素である場合を除く。）
【請求項４】
スチルベン誘導体がイソ−レスベラトロール、３，５−トランス−ジヒドロキシスチルベン、３，４’−トランス−ジヒドロキシスチルベン、３，３’−トランス−ジヒドロキシスチルベン、３−トランス−ヒドロキシスチルベン、又は４−トランス−ヒドロキシスチルベンであることを特徴とする請求項３に記載の抗肥満剤。
【請求項５】
下記一般式（Ｉ）で示されるスチルベン誘導体を含有し、かつ、脂肪細胞分化抑制機能、抗肥満機能、耐糖能異常改善機能から選ばれる少なくとも１つ以上の機能を有する食品。
【化３】
2008136173.tif 000013
（式中、Ｒ１〜Ｒ６は、それぞれ独立して水素又はヒドロキシ基を表す。但し、Ｒ２、Ｒ４及びＲ６がヒドロキシ基であり、かつＲ１、Ｒ３及びＲ５が水素である場合を除く。）
【請求項６】
下記一般式（Ｉ）で示されるスチルベン誘導体が添加され、かつ、脂肪細胞分化抑制機能、抗肥満機能、耐糖能異常改善機能から選ばれる少なくとも１つ以上の機能を有する食品。
【化４】
2008136173.tif 000014
（式中、Ｒ１〜Ｒ６は、それぞれ独立して水素又はヒドロキシ基を表す。但し、Ｒ２、Ｒ４及びＲ６がヒドロキシ基であり、かつＲ１、Ｒ３及びＲ５が水素である場合を除く。）
【請求項７】
スチルベン誘導体がイソ−レスベラトロール、３，５−トランス−ジヒドロキシスチルベン、３，４’−トランス−ジヒドロキシスチルベン、３，３’−トランス−ジヒドロキシスチルベン、３−トランス−ヒドロキシスチルベン、又は４−トランス−ヒドロキシスチルベンであることを特徴とする請求項５又は６に記載の食品。
【請求項８】
下記一般式（Ｉ）で示されるスチルベン誘導体を含有し、かつ、脂肪細胞分化抑制機能、抗肥満機能、耐糖能異常改善機能から選ばれる少なくとも１つ以上の機能を有する食品添加剤。
【化５】
2008136173.tif 000015
（式中、Ｒ１〜Ｒ６は、それぞれ独立して水素又はヒドロキシ基を表す。但し、Ｒ２、Ｒ４及びＲ６がヒドロキシ基であり、かつＲ１、Ｒ３及びＲ５が水素である場合を除く。）
【請求項９】
スチルベン誘導体がイソ−レスベラトロール、３，５−トランス−ジヒドロキシスチルベン、３，４’−トランス−ジヒドロキシスチルベン、３，３’−トランス−ジヒドロキシスチルベン、３−トランス−ヒドロキシスチルベン、又は４−トランス−ヒドロキシスチルベンであることを特徴とする請求項８に記載の食品添加剤。
【請求項１０】
下記一般式（Ｉ）で示されるスチルベン誘導体を有効成分として含有し、かつ脂肪細胞分化抑制機能、抗肥満機能、耐糖能異常改善機能から選ばれる少なくとも１つ以上の機能を有する飼料。
【化６】
2008136173.tif 000016
（式中、Ｒ１〜Ｒ６は、それぞれ独立して水素又はヒドロキシ基を表す。但し、Ｒ２、Ｒ４及びＲ６がヒドロキシ基であり、かつＲ１、Ｒ３及びＲ５が水素である場合を除く。）
【請求項１１】
スチルベン誘導体がイソ−レスベラトロール、３，５−トランス−ジヒドロキシスチルベン、３，４’−トランス−ジヒドロキシスチルベン、３，３’−トランス−ジヒドロキシスチルベン、３−トランス−ヒドロキシスチルベン、又は４−トランス−ヒドロキシスチルベンであることを特徴とする請求項１０に記載の飼料。
【請求項１２】
下記一般式（Ｉ）で示されるスチルベン誘導体を有効成分とする耐糖能異常改善剤。
【化７】
2008136173.tif 000017
（式中、Ｒ１〜Ｒ６は、それぞれ独立して水素又はヒドロキシ基を表す。但し、Ｒ２、Ｒ４及びＲ６がヒドロキシ基であり、かつＲ１、Ｒ３及びＲ５が水素である場合を除く。）
【請求項１３】
スチルベン誘導体がイソ−レスベラトロール、３，５−トランス−ジヒドロキシスチルベン、３，４’−トランス−ジヒドロキシスチルベン、３，３’−トランス−ジヒドロキシスチルベン、３−トランス−ヒドロキシスチルベン、又は４−トランス−ヒドロキシスチルベンであることを特徴とする請求項１２に記載の耐糖能異常改善剤。
【請求項１４】
下記一般式（Ｉ）で示されるスチルベン誘導体を有効成分とするアディポネクチン産生促進剤。
【化８】
2008136173.tif 000018
（式中、Ｒ１〜Ｒ６は、それぞれ独立して水素又はヒドロキシ基を表す。但し、Ｒ２、Ｒ４及びＲ６がヒドロキシ基であり、かつＲ１、Ｒ３及びＲ５が水素である場合を除く。）
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、特定のスチルベン誘導体を有効成分とする脂肪細胞分化抑制剤、抗肥満剤、耐糖能異常改善剤、及びアディポネクチン産生促進剤、並びに、特定のスチルベン誘導体を含有する食品、食品添加剤、及び飼料（以下、「本発明の脂肪細胞分化抑制剤等」ともいう。）に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、脂肪細胞はこれまでの単純な脂肪をエネルギーとして蓄積するだけの器官ではなく、様々なアディポサイトカインを分泌する分泌細胞として認識されるようになってきた（図１）。肥大した脂肪細胞からは飽食シグナルであるレプチンだけでなく、血栓形成に関わるＰＡＩ−１、インスリン抵抗性を増加させるＴＮＦ−αやインスリン抵抗性を示すレジスチンなどが分泌されることから、肥満に関連する生活習慣病の発症メカニズムが明らかになってきた。また、現在非常に問題となっている糖尿病や高血圧、動脈硬化などを併発するメタボリックシンドロームの予防と治療には、肥満による脂肪の蓄積を減らすことが重要である。【０００３】
一方、レスベラトロールすなわち３，５，４’−トリヒドロキシスチルベンは、種々のトリヒドロ及びテトラヒドロキシスチルベンを含むスチルベンフィトアレキシン群に属する。レスベラトロールは、赤ブドウに最も多く存在し、好ましい薬理学的効果を持つ物質として知られる。  
例えば、特許文献１には、スチルベン系フィトアレキシンを含む組成物を、風邪及びインフルエンザ様疾患に関連した症状の予防薬及び治療薬や、呼吸障害に関連したうっ血の予防薬および治療薬等に用いることが記載されている。また、特許文献２には、心血管系障害、末梢血管疾患及び糖尿病性末梢ノイロパティの効果的な予防及び処置に適する医薬組成物として、Ｌ−カルニチン、低級アルカノイル Ｌ−カルニチン又はその薬理学的に許容される塩とレスベラトロール、レスベラトロール誘導体又はレスベラトロール含有天然生成物との共作動的治療使用のための医薬組成物が記載されている。さらに、特許文献３には、スチルベン化合物又はその医薬的に許容し得る塩を、糖尿病又はレトロウイルス関連疾患の予防及び治療用医薬の製造に使用することが記載されている。【０００４】
また、非特許文献１には、レスベラトロール（resveratrol）が、カロリー制限に関わる脱アセチル化酵素（Ｓｉｒｔ１）を活性化することによって、脂肪細胞の分化誘導に関与するＰＰＡＲ−γ（peroxisome proliferator-activated receptor-gamma）の機能を抑制し、脂肪細胞の蓄積を妨げることが示唆されている。しかしながら一方では、レスベラトロールを含む数種のスチルベン誘導体は、濃度依存的に細胞毒性を持つことも明らかになっている（非特許文献２）。【０００５】
さらに、特許文献４には、フラボン、イソフラボン、スチルベン又はこれらの誘導体（レスベラトロール等を含む）等の化合物が、ＳＩＲＴ１（Ｓｉｒｔ１）を活性化すること、及び、ＳＩＲＴ１を介して体重増加を防止したり糖尿病を改善する可能性があることが開示されている。しかし、特許文献４においては、哺乳動物を用いたインビボの実験は行われておらず、前述の化合物がインビボにおいて実際に体重増加を抑制するかどうかや、血糖値の改善効果を有しているかについては不明であった。さらに、特許文献４には、本発明のスチルベン誘導体の一部が開示されているものの、そのＳＩＲＴ１活性はレスベラトロールよりも低く、その有用性はあまり期待できないと考えられていた。【０００６】
【特許文献１】特表２００３−５０５５００号公報
【特許文献２】特開平９−１６５３３１号公報
【特許文献３】特表２００４−５３７５６１号公報
【特許文献４】米国２００６／０２７６４１６号公開公報
【非特許文献１】Nature 429, 771-776, 2004
【非特許文献２】Foods Food Ingredients J. Jpn. No.200 (2002), 15-16
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明の課題は、極めて優れた脂肪細胞分化抑制剤、抗肥満剤、耐糖能異常改善剤、アディポネクチン産生促進剤、抗肥満用等の食品、抗肥満用等の食品添加剤、及び抗肥満用等の飼料を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者らは、レスベラトロール以外の様々なスチルベン誘導体を検索した結果、非常に意外なことに、３−トランス−ヒドロキシスチルベン等の特定のスチルベン誘導体が、レスベラトロールよりも優れた脂肪細胞分化抑制効果、抗肥満効果、耐糖能異常改善効果、アディポネクチン産生促進効果を奏することを見い出し、本発明を完成するに至った。【０００９】
すなわち本発明は、（１）下記一般式（Ｉ）で示されるスチルベン誘導体を有効成分とする脂肪細胞分化抑制剤【００１０】
【化１】
2008136173.tif 000003
【００１１】
（式中、Ｒ１〜Ｒ６は、それぞれ独立して水素又はヒドロキシ基を表す。但し、Ｒ２、Ｒ４及びＲ６がヒドロキシ基であり、かつＲ１、Ｒ３及びＲ５が水素である場合を除く。）や、（２）スチルベン誘導体がイソ−レスベラトロール、３，５−トランス−ジヒドロキシスチルベン、３，４’−トランス−ジヒドロキシスチルベン、３，３’−トランス−ジヒドロキシスチルベン、３−トランス−ヒドロキシスチルベン、又は４−トランス−ヒドロキシスチルベンであることを特徴とする上記（１）に記載の脂肪細胞分化抑制剤に関する。【００１２】
また本発明は、（３）下記一般式（Ｉ）で示されるスチルベン誘導体を有効成分とする抗肥満剤【００１３】
【化２】
2008136173.tif 000004
【００１４】
（式中、Ｒ１〜Ｒ６は、それぞれ独立して水素又はヒドロキシ基を表す。但し、Ｒ２、Ｒ４及びＲ６がヒドロキシ基であり、かつＲ１、Ｒ３及びＲ５が水素である場合を除く。）や、（４）スチルベン誘導体がイソ−レスベラトロール、３，５−トランス−ジヒドロキシスチルベン、３，４’−トランス−ジヒドロキシスチルベン、３，３’−トランス−ジヒドロキシスチルベン、３−トランス−ヒドロキシスチルベン、又は４−トランス−ヒドロキシスチルベンであることを特徴とする上記（３）に記載の抗肥満剤に関する。【００１５】
さらに本発明は、（５）下記一般式（Ｉ）で示されるスチルベン誘導体を含有し、かつ、脂肪細胞分化抑制機能、抗肥満機能、耐糖能異常改善機能から選ばれる少なくとも１つ以上の機能を有する食品【００１６】
【化３】
2008136173.tif 000005
【００１７】
（式中、Ｒ１〜Ｒ６は、それぞれ独立して水素又はヒドロキシ基を表す。但し、Ｒ２、Ｒ４及びＲ６がヒドロキシ基であり、かつＲ１、Ｒ３及びＲ５が水素である場合を除く。）や、（６）下記一般式（Ｉ）で示されるスチルベン誘導体が添加され、かつ、脂肪細胞分化抑制機能、抗肥満機能、耐糖能異常改善機能から選ばれる少なくとも１つ以上の機能を有する食品【００１８】
【化４】
2008136173.tif 000006
【００１９】
（式中、Ｒ１〜Ｒ６は、それぞれ独立して水素又はヒドロキシ基を表す。但し、Ｒ２、Ｒ４及びＲ６がヒドロキシ基であり、かつＲ１、Ｒ３及びＲ５が水素である場合を除く。）や、（７）スチルベン誘導体がイソ−レスベラトロール、３，５−トランス−ジヒドロキシスチルベン、３，４’−トランス−ジヒドロキシスチルベン、３，３’−トランス−ジヒドロキシスチルベン、３−トランス−ヒドロキシスチルベン、又は４−トランス−ヒドロキシスチルベンであることを特徴とする上記（５）又は（６）に記載の食品に関する。【００２０】
またさらに本発明は、（８）下記一般式（Ｉ）で示されるスチルベン誘導体を含有し、かつ、脂肪細胞分化抑制機能、抗肥満機能、耐糖能異常改善機能から選ばれる少なくとも１つ以上の機能を有する食品添加剤【００２１】
【化５】
2008136173.tif 000007
【００２２】
（式中、Ｒ１〜Ｒ６は、それぞれ独立して水素又はヒドロキシ基を表す。但し、Ｒ２、Ｒ４及びＲ６がヒドロキシ基であり、かつＲ１、Ｒ３及びＲ５が水素である場合を除く。）や、（９）スチルベン誘導体がイソ−レスベラトロール、３，５−トランス−ジヒドロキシスチルベン、３，４’−トランス−ジヒドロキシスチルベン、３，３’−トランス−ジヒドロキシスチルベン、３−トランス−ヒドロキシスチルベン、又は４−トランス−ヒドロキシスチルベンであることを特徴とする上記（８）に記載の食品添加剤に関する。【００２３】
さらにまた本発明は、（１０）下記一般式（Ｉ）で示されるスチルベン誘導体を有効成分として含有し、かつ脂肪細胞分化抑制機能、抗肥満機能、耐糖能異常改善機能から選ばれる少なくとも１つ以上の機能を有する飼料【００２４】
【化６】
2008136173.tif 000008
【００２５】
（式中、Ｒ１〜Ｒ６は、それぞれ独立して水素又はヒドロキシ基を表す。但し、Ｒ２、Ｒ４及びＲ６がヒドロキシ基であり、かつＲ１、Ｒ３及びＲ５が水素である場合を除く。）や、（１１）スチルベン誘導体がイソ−レスベラトロール、３，５−トランス−ジヒドロキシスチルベン、３，４’−トランス−ジヒドロキシスチルベン、３，３’−トランス−ジヒドロキシスチルベン、３−トランス−ヒドロキシスチルベン、又は４−トランス−ヒドロキシスチルベンであることを特徴とする上記（１０）に記載の飼料に関する。【００２６】
またさらに本発明は、（１２）下記一般式（Ｉ）で示されるスチルベン誘導体を有効成分とする耐糖能異常改善剤【００２７】
【化７】
2008136173.tif 000009
【００２８】
（式中、Ｒ１〜Ｒ６は、それぞれ独立して水素又はヒドロキシ基を表す。但し、Ｒ２、Ｒ４及びＲ６がヒドロキシ基であり、かつＲ１、Ｒ３及びＲ５が水素である場合を除く。）や、（１３）スチルベン誘導体がイソ−レスベラトロール、３，５−トランス−ジヒドロキシスチルベン、３，４’−トランス−ジヒドロキシスチルベン、３，３’−トランス−ジヒドロキシスチルベン、３−トランス−ヒドロキシスチルベン、又は４−トランス−ヒドロキシスチルベンであることを特徴とする上記（１２）に記載の耐糖能異常改善剤に関する。【００２９】
また、本発明は（１４）下記一般式（Ｉ）で示されるスチルベン誘導体を有効成分とするアディポネクチン産生促進剤【００３０】
【化８】
2008136173.tif 000010
【００３１】
（式中、Ｒ１〜Ｒ６は、それぞれ独立して水素又はヒドロキシ基を表す。但し、Ｒ２、Ｒ４及びＲ６がヒドロキシ基であり、かつＲ１、Ｒ３及びＲ５が水素である場合を除く。）に関する。【００３２】
なお、本発明における「耐糖能異常」とは、哺乳動物（好ましくはヒト、サル、マウス、ラット、モルモット、ハムスター、ウサギ、ネコ、イヌ、ヤギ、ウシ、ウマ）における、糖代謝に関して正常ではない病態をすべて包含するものである。ヒトの耐糖能異常として例えば、日本糖尿病学会の判定基準（糖尿病42(5)：385〜404, 1999参照。）である、血糖値が空腹時値１１０ｍｇ／ｄｌ以上、又は７５ｇ糖負荷試験（ＯＧＴＴ）２時間値１４０ｍｇ／ｄｌ以上の病態を例示することができ、この中には、１型糖尿病、２型糖尿病、妊娠糖尿病等の糖尿病；インスリン抵抗性；肝疾患や内分泌疾患に伴う糖代謝異常；等の各種疾患が含まれる。
【図面の簡単な説明】
【００３３】
【図１】脂肪細胞から分泌されるアディポサイトカインとその作用を示す図である。
【図２】４−トランス−ヒドロキシスチルベンの各濃度における脂肪細胞分化マーカー（Ｃ／ＥＢＰα、ＰＰＡＲγ、ＬＰＬ、レジスチン）遺伝子発現の抑制作用を示す図である。
【図３】レスベラトロール及び本件スチルベン誘導体（６種類）の構造を示す図である。なお、3,5,4'-trihydroxy-trans-stilbeneは３，５，４’−トランス−トリヒドロキシスチルベンであり、3,5,3'-trihydroxy-trans-stilbeneは３，５，３’−トランス−トリヒドロキシスチルベンであり、3,5-dihydroxy-trans-stilbeneは３，５−トランス−ジヒドロキシスチルベンであり、3,4'-dihydroxy-trans-stilbeneは３，４’−トランス−ジヒドロキシスチルベンであり、3,3'-dihydroxy-trans-stilbeneは３，３’−トランス−ジヒドロキシスチルベンであり、3-hydroxy-trans-stilbeneは３−トランス−ヒドロキシスチルベンであり、4-hydroxy-trans-stilbeneは４−トランス−ヒドロキシスチルベンである。
【図４】６種の本件スチルベン誘導体（終濃度０．５μＭ）の脂肪細胞分化マーカー（レジスチン）遺伝子発現の抑制作用を示す図である。
【図５】６種の本件スチルベン誘導体（終濃度０．５μＭ）の脂肪細胞分化マーカー（ＰＰＡＲγ）遺伝子発現の抑制作用を示す図である。
【図６】レスベラトロール（１μＭ）、３−トランス−ヒドロキシスチルベン（０．１、０．５、１．０μＭ）、及び４−トランス−ヒドロキシスチルベン（０．１、０．５、１．０μＭ）の、脂肪細胞分化マーカー（レジスチン）遺伝子発現の抑制作用を示す図である。
【図７】レスベラトロール（１μＭ）、３−トランス−ヒドロキシスチルベン（０．１、０．５、１．０μＭ）、及び４−トランス−ヒドロキシスチルベン（０．１、０．５、１．０μＭ）の、脂肪細胞分化マーカー（ＰＰＡＲγ）遺伝子発現の抑制作用を示す図である。
【図８】摂食試験における、マウスの日々の餌の摂取カロリーの推移を示す図である。
【図９】摂食試験における、マウスの体重の経時的変化を示す図である。
【図１０】摂食試験後のマウスの各組織の重量を示す図である。
【図１１】摂食試験開始から５週目のマウスについて行った経口ブドウ糖負荷試験（ＯＧＴＴ）の結果を示す図である。
【図１２】摂食試験開始から５週目のマウスについて行ったインスリン負荷試験（ＩＴＴ）の結果を示す図である。
【図１３】摂食試験開始から６週目のマウスについて行った、骨格筋の糖取り込みアッセイの結果を示す図である。
【図１４】摂食試験後のマウスの脂肪組織におけるアディポサイトカイン遺伝子（ＰＰＡＲγ、アディポネクチン、レプチン）発現を示す図である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３４】
本発明の脂肪細胞分化抑制剤や抗肥満剤や耐糖能異常改善剤やアディポネクチン産生促進剤としては、一般式（Ｉ）で示されるスチルベン誘導体（以下、「本件スチルベン誘導体」ともいう）を有効成分とするものであれば特に制限されない。また、本発明の食品（サプリメント形態を含む）や飼料としては、一般式（Ｉ）で示されるスチルベン誘導体を含有しているか、又は添加され、かつ脂肪細胞分化抑制機能、抗肥満機能、耐糖能異常改善機能、アディポネクチン産生促進機能から選ばれる少なくとも１つ以上の機能を有するものであれば特に制限されない。さらに、本発明の食品添加剤としては、一般式（Ｉ）で示されるスチルベン誘導体を含有し、かつ脂肪細胞分化抑制機能、抗肥満機能、耐糖能異常改善機能、アディポネクチン産生促進機能から選ばれる少なくとも１つ以上の機能を有しているものであれば特に制限されない。また、一般式（Ｉ）で示されるスチルベン誘導体を、脂肪細胞分化抑制剤、抗肥満剤、耐糖能異常改善剤及び／又はアディポネクチン産生促進剤として使用する方法としては、本件スチルベン誘導体を、脂肪細胞分化抑制剤、抗肥満剤耐糖能異常改善剤及び／又はアディポネクチン産生促進剤として使用する方法であれば特に制限されない。【００３５】
本発明に用いるスチルベン誘導体としては、一般式（Ｉ）で示されるスチルベン誘導体であれば特に制限されないが、脂肪細胞分化抑制効果や抗肥満効果や耐糖能異常改善効果やアディポネクチン産生促進効果の観点からは、一般式（Ｉ）においてＲ１、Ｒ２及びＲ３が水素であるスチルベン誘導体や、一般式（Ｉ）においてＲ２がヒドロキシ基であり、Ｒ１及びＲ３が水素であるスチルベン誘導体や、一般式（Ｉ）においてＲ３がヒドロキシ基であり、Ｒ１及びＲ２が水素であるスチルベン誘導体や、一般式（Ｉ）においてＲ４、Ｒ５及びＲ６が水素であるスチルベン誘導体や、一般式（Ｉ）においてＲ４がヒドロキシ基であり、Ｒ５及びＲ６が水素であるスチルベン誘導体や、一般式（Ｉ）においてＲ４及びＲ６がヒドロキシ基であり、Ｒ５が水素であるスチルベン誘導体であることが好ましく、一般式（Ｉ）におけるＲ１〜Ｒ３が前述の好ましく挙げられた基の組み合わせのいずれかであり、かつ、Ｒ４〜Ｒ６が前述の好ましく挙げられた基の組み合わせのいずれかであるスチルベン誘導体であることがより好ましく、中でもイソ−レスベラトロール（一般式（Ｉ）においてＲ３、Ｒ４及びＲ６がヒドロキシ基であり、Ｒ１、Ｒ２及びＲ５が水素である化合物）、３，５−トランス−ジヒドロキシスチルベン（一般式（Ｉ）においてＲ４及びＲ６がヒドロキシ基であり、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ５が水素である化合物）、３，４’−トランス−ジヒドロキシスチルベン（一般式（Ｉ）においてＲ２及びＲ４がヒドロキシ基であり、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５及びＲ６が水素である化合物）、３，３’−トランス−ジヒドロキシスチルベン（一般式（Ｉ）においてＲ３及びＲ４がヒドロキシ基であり、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ５及びＲ６が水素である化合物）、３−トランス−ヒドロキシスチルベン（一般式（Ｉ）においてＲ４がヒドロキシ基であり、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ５及びＲ６が水素である化合物）、４−トランス−ヒドロキシスチルベン（一般式（Ｉ）においてＲ２がヒドロキシ基であり、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６が水素である化合物）がさらに好ましく、イソ−レスベラトロール、３，５−トランス−ジヒドロキシスチルベン、３，４’−トランス−ジヒドロキシスチルベン、３，３’−トランス−ジヒドロキシスチルベン、３−トランス−ヒドロキシスチルベンがさらにより好ましく、３，５−トランス−ジヒドロキシスチルベン、３−トランス−ヒドロキシスチルベンがよりさらに好ましく、３−トランス−ヒドロキシスチルベンが最も好ましい。【００３６】
なお、細胞毒性がより低い点で、一般式（Ｉ）においてＲ２やＲ５がヒドロキシ基ではなく、水素であるスチルベン誘導体が好ましく、さらに、一般式（Ｉ）においてＲ１〜Ｒ６のうち、Ｒ３がヒドロキシ基であり、他のＲが水素であるスチルベン誘導体や、Ｒ６とＲ４がヒドロキシ基であり、他のＲが水素であるスチルベン誘導体や、Ｒ４とＲ３がヒドロキシ基であり、他のＲが水素であるスチルベン誘導体や、Ｒ６とＲ３がヒドロキシ基であり、他のＲが水素であるスチルベン誘導体や、Ｒ６とＲ４とＲ３がヒドロキシ基であり、他のＲが水素であるスチルベン誘導体がより好ましく、より具体的には、イソ−レスベラトロール、３，５−トランス−ジヒドロキシスチルベン、３，３’−トランス−ジヒドロキシスチルベン、３−トランス−ヒドロキシスチルベンがさらに好ましい。一般式（Ｉ）においてＲ２がヒドロキシ基である化合物より、Ｒ２が水素であるスチルベン誘導体の方が、低毒性であることは、Foods Food Ingredients J. Jpn. No.200 (2002), 15-16（前述の非特許文献２）等に記載されている。また、一般式（Ｉ）においてＲ１〜Ｒ６のうち、Ｒ３がヒドロキシ基であり、他のＲが水素であるスチルベン誘導体や、Ｒ６とＲ４がヒドロキシ基であり、他のＲが水素であるスチルベン誘導体や、Ｒ４とＲ３がヒドロキシ基であり、他のＲが水素であるスチルベン誘導体や、Ｒ６とＲ３がヒドロキシ基であり、他のＲが水素であるスチルベン誘導体や、Ｒ６とＲ４とＲ３がヒドロキシ基であり、他のＲが水素であるスチルベン誘導体は、脂肪細胞分化抑制効果や抗肥満効果や耐糖能異常改善効果やアディポネクチン産生促進効果の点でも優れているため好ましい。【００３７】
本件スチルベン誘導体の脂肪細胞分化抑制効果や抗肥満効果や耐糖能異常改善効果やアディポネクチン産生促進効果は、後述の実施例に記載されたアッセイ等により、脂肪細胞の分化マーカー遺伝子やアディポサイトカイン遺伝子の発現量を調べることにより、容易に確認することができる。【００３８】
本件スチルベン誘導体の脂肪細胞分化抑制効果や抗肥満効果や耐糖能異常改善効果やアディポネクチン産生促進効果の程度は特に制限されないが、脂肪細胞分化抑制効果や抗肥満効果について例示すると、分化誘導培地中の終濃度２．５μＭにて後述の実施例１に記載されたのと同様のアッセイを行った場合に、脂肪細胞の分化マーカー遺伝子であるＣ／ＥＢＰα遺伝子、ＰＰＡＲγ遺伝子、ＬＰＬ遺伝子、レジスチン遺伝子のいずれか１つ又は２つ以上の遺伝子のｍＲＮＡ発現量が、レスベラトロール（分化誘導培地中の終濃度２．５μＭ）のｍＲＮＡ発現量に対して、好ましくは８０％以下であり、より好ましくは７０％以下であり、さらに好ましくは６０％以下であり、さらにより好ましくは５０％以下であり、また、本件スチルベン誘導体を０．４質量％含有する高脂肪食（高脂肪食Ｓｔ）及びレスベラトロールを０．４質量％含有する高脂肪食（高脂肪食Ｒｅｓ）を用いて後述の実施例３の図９の実験と同様の実験を行い、高脂肪食Ｓｔと高脂肪食Ｒｅｓの摂食量が同等である場合に、高脂肪食Ｓｔを摂取させた６ｗｅｅｋにおけるマウスの体重が、高脂肪食Ｒｅｓを摂取させた場合に比べて好ましくは９０％以下であり、より好ましくは８６％以下であり、また、高脂肪食Ｓｔを摂取させた６ｗｅｅｋにおけるマウスの白色脂肪組織の質量が高脂肪食Ｒｅｓを摂取させた場合に比べて好ましくは７０％以下であり、より好ましくは６０％以下であり、さらに好ましくは５０％以下である。また、耐糖能異常改善効果について例示すると、後述の実施例３と同様のＯＧＴＴにおいて、高脂肪食Ｓｔを摂食させた５ｗｅｅｋにおけるマウスの３０分後の血糖値が高脂肪食Ｒｅｓを摂食させた場合のそれと比較して８５％以下であり、より好ましくは８０％以下であり、さらに好ましくは７５％以下であり、また、後述の実施例３と同様のＩＴＴにおいて、高脂肪食Ｓｔを摂食させた５ｗｅｅｋにおけるマウスの９０分後の血糖値が高脂肪食Ｒｅｓを摂食させた場合のそれと比較して好ましくは９０％以下であり、より好ましくは８５％以下である。また、アディポネクチン産生促進効果について例示すると、後述の実施例４と同様のアッセイを行った場合に、アディポネクチン遺伝子のｍＲＮＡ発現量が、高脂肪食Ｒｅｓ（高脂肪食ＲＳＶ）を与えたマウスのｍＲＮＡ発現量に対して好ましくは１０５％以上、より好ましくは１１０％以上である。【００３９】
本発明においては、本件スチルベン誘導体を１種単独で用いてもよいし、２種以上を併用してもよい。また、本発明の脂肪細胞分化抑制剤等には、本件スチルベン誘導体の含有物を用いてもよい。【００４０】
上記本件スチルベン誘導体の製造方法は、特に制限されず、例えばレスベラトロール（一般式（Ｉ）においてＲ２、Ｒ４及びＲ６がヒドロキシ基であり、Ｒ１、Ｒ３及びＲ５が水素である化合物）を原料化合物とするなどして、公知の方法により化学的に合成して得ることができる。また、市販品を利用することもできる。【００４１】
本件スチルベン誘導体は、生物の脂肪組織に蓄積し、脂肪細胞中の分化特異的遺伝子（例えば、Ｃ／ＥＢＰα、ＰＰＡＲγ、ＬＰＬ、レジスチン）の発現を抑制することによって、前駆脂肪細胞から脂肪細胞への分化を抑制し、何らかのメカニズムにより、抗肥満活性を奏する。このように、本件スチルベン誘導体は、生体中における脂肪細胞の増加を抑制するため、脂肪細胞が分泌するある種のアディポサイトカインの量も減少すると共に、ある種のアディポサイトカイン（特にアディポネクチン）の量が増加し、その結果、何らかのメカニズムにより、糖尿病やインスリン抵抗性等の耐糖能異常に対する改善作用を有すると考えられる。また、同様の作用機作により、抗動脈硬化作用、抗血圧上昇作用を有することも強く期待される。したがって、本件スチルベン誘導体は、糖尿病の予防・治療剤等の耐糖能異常の改善剤としてだけでなく、抗動脈硬化剤（動脈硬化予防・治療剤）、抗血圧上昇剤（高血圧症予防・治療剤）としても用い得る可能性が高い。アディポネクチン産生促進によって、インスリン抵抗性等の耐糖能異常改善作用や抗動脈硬化作用が得られることは、例えばJ Biol. Chem. 277, 29, 25863-25866 (2002) やCirculation. 106, 2767-2770 (2002)にも開示されている。【００４２】
本発明の脂肪細胞分化抑制剤、抗肥満剤、耐糖能異常改善剤、アディポネクチン産生促進剤、食品、食品添加剤や飼料中の本件スチルベン誘導体の含有量としては、特に制限されず、これらの剤や食品や飼料の摂取量と、後述の好ましい投与量とを併せて考慮することにより適宜調節することができるが、脂肪細胞分化抑制剤や抗肥満剤やアディポネクチン産生促進剤や食品添加剤の場合、全量に対して７５質量％以上とすることが好ましく、９０質量％以上とすることがより好ましく、９５質量％以上とすることがさらに好ましく、９９．５質量％とすることがよりさらに好ましく、食品や飼料の場合、全量に対して５質量％以上とすることが好ましく、１０質量％以上とすることがより好ましく、２０質量％以上とすることがさらに好ましく、３０質量％以上とすることがさらに好ましい。【００４３】
本発明の脂肪細胞分化抑制剤、抗肥満剤、耐糖能異常改善剤、アディポネクチン産生促進剤、食品、食品添加剤や飼料は、本件スチルベン誘導体のみを含有していてもよいし、本発明の効果を損なわない限り、他の脂肪細胞分化抑制剤や他の抗肥満剤、耐糖能異常改善剤、アディポネクチン産生促進剤など、他の任意成分を含有していてもよい。【００４４】
本発明の脂肪細胞分化抑制剤や抗肥満剤や耐糖能異常改善剤やアディポネクチン産生促進剤の剤型としては、特に制限されず、投与経路に応じて薬学上許容される担体を用いて適当な固形製剤や液体製剤等に処方することができる。本発明の脂肪細胞分化抑制剤や抗肥満剤や耐糖能異常改善剤やアディポネクチン産生促進剤の投与形態としては、経口投与、注射による投与等の一般的投与経路を挙げることができる。【００４５】
経口投与のための固形剤としては、カプセル剤、錠剤、丸剤、トローチ剤、散剤及び顆粒剤等が挙げられる。これらの剤形とするには通常用いられる製剤化助剤及び製剤化方法を用いることができ、例えば、賦形剤として、乳糖、マンニトール、キシリトール、エリスリトール、結晶セルロース、リン酸水素カルシウム、軽質無水ケイ酸等を用いることができ、崩壊剤としてカルボキシメチルセルロースカルシウム、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、デンプン、クロスカルメロースナトリウム等を用いることができる。【００４６】
経口投与のための液体製剤としては、液体製剤の調製に通常用いられる不活性希釈剤を含む薬学上許容し得る乳剤、溶液、懸濁剤、シロップ剤及びエリキシル剤が挙げられる。液体製剤は、本明細書に記載の組成物と添加剤とに加えて、補助剤、例えば、湿潤剤、乳化、及び懸濁剤、並びに調味剤及び香味剤を配合することにより調製できる。【００４７】
投与量は、疾病の種類、患者の体重や年齢、投与形態、症状等により適宜選定することができるが、例えば成人に投与する場合、スチルベン誘導体として、１日あたり１ｍｇ〜５ｇ、好ましくは２０ｍｇ〜２ｇ、より好ましくは５０ｍｇ〜１ｇを、数回に分けてあるいは１回で投与することが望ましい。【００４８】
本発明の食品添加剤の剤型としては、特に制限されず、適当な担体を用いて固形製剤や液体製剤とすることができる。【００４９】
本発明の食品における食品の種類としては、食品である限り特に制限されず、固形食品、クリーム状あるいはジャム状の半流動食品、ゲル状食品、飲料、茶葉等のあらゆる形態の食品を用いることができるが、より具体的には、ヨーグルト、ドリンクヨーグルト、ジュース、牛乳、豆乳、酒類、コーヒー、紅茶、煎茶、ウーロン茶、スポーツ飲料等の各種飲料や、プリン、クッキー、パン、ケーキ、ゼリー、煎餅などの焼き菓子、羊羹などの和菓子、冷菓、チューインガム等のパン・菓子類や、うどん、そば等の麺類や、かまぼこ、ハム、魚肉ソーセージ等の魚肉練り製品や、みそ、しょう油、ドレッシング、マヨネーズ、甘味料等の調味類や、チーズ、バター等の乳製品や、豆腐、こんにゃく、その他佃煮、餃子、コロッケ、サラダ等の各種総菜を例示することができる。本発明の食品は、これら食品に本件スチルベン誘導体を含有させることにより製造することができる。なお、本発明の食品には、いわゆるサプリメントの形態も含まれる。【００５０】
また、本発明の飼料における飼料の種類としては、家畜・家禽用飼料やペットフードであれば特に制限されず、ドライタイプ、ウェットタイプ、セミモイストタイプ、ビスケットタイプ、ソーセージタイプ、ジャーキータイプ、粉末タイプ、顆粒タイプ、カプセルタイプ等のあらゆる形態の飼料を用いることができる。本発明の飼料は、これら飼料に本件スチルベン誘導体を含有させることにより製造することができる。【００５１】
本発明の食品や食品添加剤や飼料は、スチルベン誘導体を含有し、脂肪細胞分化抑制機能、抗肥満機能、耐糖能異常改善機能、アディポネクチン産生促進機能から選ばれる少なくとも１つ以上の機能がある旨が表示された食品や食品添加剤や飼料とすることもできる。なお、本発明における「脂肪細胞分化抑制機能」とは、幹細胞等から脂肪細胞への分化を抑制する機能を意味し、具体的には前述の脂肪細胞分化抑制効果を挙げることができ、本発明における「抗肥満機能」とは、哺乳動物に摂取させた場合に、体重（特に白色脂肪組織の重量）の増加を抑制する機能を意味し、具体的には前述の抗肥満効果を挙げることができ、本発明における「耐糖能異常改善機能」とは、前述のいずれかの耐糖能異常を改善する機能を意味し、具体的には前述の耐糖能異常改善効果を挙げることができ、本発明における「アディポネクチン産生促進機能」とは、哺乳動物に投与したときに、その動物におけるアディポネクチン産生量を上昇させる機能を意味し、具体的には前述のアディポネクチン産生促進効果を挙げることができる。
また、本発明の脂肪細胞分化抑制剤や抗肥満剤や耐糖能異常改善剤やアディポネクチン産生促進剤や食品添加剤は他の組成物に添加して用いることができる。【００５２】
本発明における方法としては、脂肪細胞分化抑制剤、抗肥満剤、耐糖能異常改善剤及び／又はアディポネクチン産生促進剤の製造における本件スチルベン誘導体の使用や、本件スチルベン誘導体を脂肪細胞分化抑制剤、抗肥満剤、耐糖能異常改善剤及び／又はアディポネクチン産生促進剤に使用する方法や、肥満、耐糖能異常、動脈硬化、高血圧症から選択される疾患の治療における本件スチルベン誘導体の使用や、本件スチルベン誘導体を哺乳動物に投与することを特徴とする、肥満、耐糖能異常、動脈硬化、高血圧症の治療方法などを例示することができる。【００５３】
以下、実施例により本発明をより具体的に説明するが、本発明の技術的範囲はこれらの例示に限定されるものではない。
【実施例１】
【００５４】
［本件スチルベン誘導体の脂肪細胞分化に対する影響  １］
本件スチルベン誘導体の脂肪細胞分化に対する影響を調べるために、以下の実験を行った。本件スチルベン誘導体としては、４−トランス−ヒドロキシスチルベンを用い、コントロールとしてレスベラトロールを用いた。４−トランス−ヒドロキシスチルベンとレスベラトロールをそれぞれエタノールに溶解後、−２０℃で保存し、サンプル溶液とした。また、もうひとつのコントロールとして、エタノールのみのサンプル溶液も用いた。【００５５】
一方、マウス由来の脂肪前駆細胞である３Ｔ３−Ｌ１細胞（ＡＴＣＣから入手）を、ＤＭＥＭ  high glucose（ＨＧ）（含１０％ＦＢＳ）培地で、３７℃、５％ＣＯ２存在下にて培養し、コンフルエントな状態になってから２日経過後に分化誘導を開始した（その日をＤＡＹ０とする）。分化誘導には以下の組成の分化誘導培地に、前述のサンプル溶液を所定量添加した培地を使用した。
［分化誘導培地］
ＤＭＥＭ（ＨＧ）  
＋１０％ＦＢＳ  
＋０．５ｍＭ  １−メチル−３−イソブチルキサンチン
（ＩＢＭＸ：和光純薬工業（株）製）
＋１０μｇ／ｍｌ  インスリン（Ｉｎｓ：ＳＩＧＭＡ社製）
＋１μＭ  デキサメタゾン    （ＤＥＸ：ＳＩＧＭＡ社製）【００５６】
分化誘導の開始から４４〜４５時間経過後（ＤＡＹ２）に、新たな培地（ＤＭＥＭ ＨＧ＋１０％ＦＢＳ＋５μｇ／ｍｌ Ｉｎｓ）で培地交換を行い、さらに２日間培養を続けた後（ＤＡＹ４）、新たに同様の培地（ＤＭＥＭ ＨＧ＋１０％ＦＢＳ＋５μｇ／ｍｌ Ｉｎｓ）で培地交換を行い、さらに２日間培養を続けた後（ＤＡＹ６）、それぞれの細胞を回収した。回収した細胞から常法にしたがってそれぞれｔｏｔａｌ  ＲＮＡを抽出し、これらｔｏｔａｌ  ＲＮＡを用いた定量ＲＴ−ＰＣＲにより、脂肪細胞の分化マーカーであるＣ／ＥＢＰα遺伝子、ＰＰＡＲγ遺伝子や、これらのターゲット遺伝子であるＬＰＬ遺伝子やレジスチン（resistin）遺伝子のｍＲＮＡ発現量を測定した。【００５７】
図２には、４−トランス−ヒドロキシスチルベン（Ｔ）（分化誘導培地中の終濃度０．５μＭ、１．０μＭ、２．５μＭ）やレスベラトロール（分化誘導培地中の終濃度２．５μＭ）を用いた場合の、脂肪細胞の分化マーカー遺伝子のｍＲＮＡの相対発現量を示す。図２から分かるように、４−トランス−ヒドロキシスチルベンは、同濃度（２．５μＭ）のレスベラトロールよりも強く脂肪細胞の分化マーカー（Ｃ／ＥＢＰα、ＰＰＡＲγ、ＬＰＬ、レジスチン）遺伝子の発現レベルを低下させた。また、４−トランス−ヒドロキシスチルベンは、より低濃度（０．５μＭや１μＭ）であっても、２．５μＭのレスベラトロールよりも強く脂肪細胞の分化マーカー遺伝子の発現レベルを低下させた。
【実施例２】
【００５８】
［本件スチルベン誘導体の脂肪細胞分化に対する影響  ２］
前述のように、今までの研究から、レスベラトロールを含むスチルベン誘導体（特にスチルベン骨格のＢ環４位（一般式（Ｉ）におけるＲ２）にＯＨを有するもの）では、濃度依存的に細胞毒性をもつことが明らかになっている。そこで本発明者らは、レスベラトロール及び６種類の本件スチルベン誘導体（構造式を図３に示す）の、３Ｔ３−Ｌ１細胞の脂肪細胞分化に対する影響について比較検討を行った。
構造式ａ：イソ−レスベラトロール
構造式ｂ：３，５−トランス−ジヒドロキシスチルベン
構造式ｃ：３，４’−トランス−ジヒドロキシスチルベン
構造式ｄ：３，３’−トランス−ジヒドロキシスチルベン
構造式ｅ：３−トランス−ヒドロキシスチルベン
構造式ｆ：４−トランス−ヒドロキシスチルベン【００５９】
サンプル溶液については、実施例１と同様に調製した。これらサンプル溶液を所定の濃度で用いて、実施例１と同様の方法で脂肪細胞の分化マーカー遺伝子の発現量を測定した。
図４には、分化誘導培地中の本件スチルベン誘導体やレスベラトロールの終濃度を０．５μＭとした場合のレジスチン（ＲＥＧＩＳＴＩＮ）遺伝子のｍＲＮＡの相対発現量を示す。図５には、分化誘導培地中の本件スチルベン誘導体やレスベラトロールの終濃度を０．５μＭとした場合のＰＰＡＲγ遺伝子のｍＲＮＡの相対発現量を示す。図６には、分化誘導培地中の本件スチルベン誘導体やレスベラトロールの終濃度を図６記載の濃度とした場合のレジスチン（ＲＥＧＩＳＴＩＮ）遺伝子のｍＲＮＡの相対発現量を示す。図７には、分化誘導培地中の本件スチルベン誘導体やレスベラトロールの終濃度を図７記載の濃度とした場合のＰＰＡＲγ遺伝子のｍＲＮＡの相対発現量を示す。【００６０】
図４や図５に示すように、検討したすべての本件スチルベン誘導体は、レスベラトロールよりも強くＰＰＡＲγの発現レベルを低下させ、それに伴ってレジスチンのｍＲＮＡ発現レベルも低下していた。すなわち、本実施例で検討した６種類のスチルベン誘導体は、レスベラトロールと比較し、より強い脂肪細胞への分化抑制効果を有することが明らかになった。また、各種スチルベン誘導体の中でも、３−トランス−ヒドロキシスチルベン（図３中の構造式ｅ）、３，４’−トランス−ジヒドロキシスチルベン（図３中の構造式ｃ）、 ３，３’−トランス−ジヒドロキシスチルベン（図３中の構造式ｄ）、３，５−トランス−ジヒドロキシスチルベン（図３中の構造式ｂ）は、より強い脂肪細胞への分化抑制作用を有することが示唆された。【００６１】
図６や図７に示すように、４−トランス−ヒドロキシスチルベン（図３中の構造式ｆ）は、レスベラトロールより脂肪細胞の分化抑制作用及びレジスチンの発現低下作用は強く、レスベラトロールの１／１０量以下の濃度でも同等以上の効果があることが明らかになった。また、３−トランス−ヒドロキシスチルベン（図３中の構造式ｅ）については、４−トランス−ヒドロキシスチルベンよりもさらに高い脂肪細胞の分化抑制効果が見られた。
【実施例３】
【００６２】
［本件スチルベン誘導体に関する動物実験］
本件スチルベン誘導体がインビボにおいても脂肪細胞の分化抑制効果を発揮し得るかを調べるために、マウスを用いた以下の摂食試験を行った。
まず、摂食試験に用いるサンプル飼料（コントロール）として、高脂肪食と普通食を調製した。具体的には、市販の配合飼料やビタミンミックス（オリエンタル酵母株式会社製）を利用して標準粉末飼料ＡＩＮ９３Ｇ（アメリカ国立栄養研究所による標準組成）を調製し、そのＡＩＮ９３Ｇに２０質量％のラードを添加した飼料を「普通食ＬＦ」とし、５０質量％のラードを添加した飼料を「高脂肪食ＨＦ」とした。次いで、前述の高脂肪食ＨＦにレスベラトロールを０．４質量％含有させた飼料を「高脂肪食Ｒｅｓ」（コントロール）とし、前述の高脂肪食ＨＦに３−トランス−ヒドロキシスチルベン（図３中の構造式ｅ）を０．４質量％含有させた飼料を「高脂肪食３ＯＨ」とした。
これら４種類の餌をそれぞれ別のＣ５７ＢＬ／６マウスに６週間自由摂取させ、マウスの餌の摂取量とマウスの体重変化を測定した。マウスの日々の餌の摂取カロリー（cal/mouse）の推移を図８に示す。図８から分かるように、普通食ＬＦ（図中、「ＬＦ」と表す。）は他の餌に比べてマウスの摂食カロリーがやや少なかったのに対し、高脂肪食３ＯＨ（図中、「３ＯＨ」と表す。）や高脂肪食Ｒｅｓ（図中「Ｒｅｓ」と表す。）や高脂肪食ＨＦ（図中、「ＨＦ」と表す。）はマウスの摂食カロリーは飼育期間中で平均すればほぼ同じであった。
次に、マウスの体重の経時的変化を図９に示す。高脂肪食３ＯＨ、高脂肪食Ｒｅｓ及び高脂肪食ＨＦはそれぞれマウスの摂食カロリーが同程度であったにもかかわらず、高脂肪食Ｒｅｓや高脂肪食３ＯＨを与えたマウスでは、高脂肪食ＨＦを与えたマウスに比べて体重の増加が抑制された。特に高脂肪食３ＯＨを与えたマウスでは、高脂肪食Ｒｅｓを与えたマウスよりも、体重増加の著しい抑制効果が示され、その体重増加は、普通食ＬＦを与えたマウスより著しく低かった。この効果は、高脂肪食３ＯＨの摂取カロリーが普通食（ＬＦ）よりも多かった（図８）ことを考慮すれば、高脂肪食３ＯＨにおける３−トランス−ヒドロキシスチルベンの体重増加抑制効果は非常に優れたものといえる。【００６３】
さらに、前述の６週間の摂食試験を終えた各マウスを解剖して、Gastro（gastrocnemius：下肢腓腹筋）、ＷＡＴ（White Adipose Tissue：白色脂肪組織）、Liver（肝臓）、ＢＡＴ（Brown Adipose Tissue：褐色脂肪組織）の各組織の重量を測定した。その結果を図１０に示す。図１０から分かるように、前記摂食試験を終えた各マウスの体重の多少は、白色脂肪組織の重量の多少にほぼ対応していることが示された。例えば、高脂肪食Ｒｅｓを与えると、高脂肪食によって誘発される脂肪蓄積を、普通食ＬＦを与えた場合と同程度にまで抑制することができ、また、高脂肪食３ＯＨを与えると、脂肪食Ｒｅｓを与えた場合のおよそ半分にまで脂肪蓄積を著しく抑制することが可能であることが示された。図８〜図１０の結果から、本件スチルベン誘導体が、インビボにおいても、脂肪細胞の分化を著しく抑制する効果や抗肥満効果を有していることが示された。【００６４】
なお、前述の６週間の摂食試験の５週目のマウスについて、経口ブドウ糖負荷試験（Oral glucose tolerance test：ＯＧＴＴ）と、インスリン負荷試験（Insulin Tolerance Test：ＩＴＴ）も行った。ＯＧＴＴは、マウス体重１ｇあたり１．５ｍｇのブドウ糖を経口投与し、時間経過ごとに尻尾から採取した血液中のグルコース濃度（ｍｇ／ｄｌ）（以下、「血糖値」ともいう。）を測定することによって行った。一方、ＩＴＴは、マウス体重１ｇあたり０．４ｍＵのインスリンを腹腔内投与し、時間経過ごとに尻尾から採取した血液中のグルコース濃度（ｍｇ／ｄｌ）を測定することによって行った。
ＯＧＴＴの結果及びＩＴＴの結果を、それぞれ図１１と図１２に示す。図１１の結果から分かるように、高脂肪食Ｒｅｓの場合は、高脂肪食ＨＦの場合とほぼ同様に、糖負荷後の血糖値が比較的高く推移したのに対し、高脂肪食３ＯＨの場合は、それらより低いのはもちろんのこと、普通食ＬＦの場合よりも低く推移した。また、図１２の結果から分かるように、高脂肪食３ＯＨの場合は、高脂肪食ＨＦや高脂肪食Ｒｅｓに比べて優れたインスリン感受性を示した。なお、図１２のグラフは、比較のため、インスリン投与前の血糖値を１００に補正して表している。【００６５】
さらに、前述の６週間の摂食試験の６週目のマウスについて、骨格筋（soleus）の糖取り込みアッセイを行った。具体的には、３Ｈで標識した２−デオキシグルコース及び１４Ｃで標識したマンニトールを含む糖液（糖液Ａ）と、前記糖液にインスリン（１００ｎＭ）を添加した糖液（糖液Ｂ）を準備し、各マウスから単離したヒラメ筋を糖液Ａや糖液Ｂに一定時間浸して取り込まれた放射活性を測定した。その結果を図１３に示す。図１３の各マウスにおける右側の棒グラフは、糖液Ｂ（インスリン有り）を用いた場合の各マウスにおける糖の取込量を、それぞれ糖液Ａ（インスリン無し）における糖の取込量（図１３の各マウスにおける左の棒グラフ）を１として補正した値を表す。図１３の結果から分かるように、高脂肪食３ＯＨを摂食していたマウスは、高脂肪食Ｒｅｓを摂食していたマウスに比べて、インスリン存在下での骨格筋（ヒラメ筋）における糖の取り込みが増加し、インスリンに対する感受性が向上していた。図１１〜図１３の結果により、高脂肪食３ＯＨに含まれる３−トランス−ヒドロキシスチルベンは、高脂肪食によって誘発される肥満に伴う耐糖能異常に対し、レスベラトロールと比較して著しく優れた改善効果を有することが示された。
【実施例４】
【００６６】
［本件スチルベン誘導体のアディポサイトカイン発現に対する影響］
前記実施例３において、６週間の摂食試験を終えた各マウスの脂肪細胞を回収した。回収した脂肪細胞から常法にしたがってそれぞれｔｏｔａｌ  ＲＮＡを抽出し、これらｔｏｔａｌ  ＲＮＡを用いた定量ＲＴ−ＰＣＲにより、脂肪細胞の分化マーカーＰＰＡＲγ遺伝子や、アディポサイトカインであるアディポネクチン（adiponectin）遺伝子やレプチン（leptin）遺伝子のｍＲＮＡ発現量を測定した。図１４には、各マウスにおける上記の３つの遺伝子のｍＲＮＡ発現量を、普通食ＬＦを与えたマウスでのｍＲＮＡ発現量に対する相対ｍＲＮＡ発現量として示す。図１４から分かるように、高脂肪食３ＯＨを与えたマウスでは、高脂肪食Ｒｅｓ（高脂肪食ＲＳＶ）を与えたマウスよりも、アディポネクチンの発現が向上していることが示された。アディポネクチンが、耐糖能異常改善作用だけでなく抗動脈硬化作用を有していることが知られていることからすると、本発明のスチルベン誘導体は、抗動脈硬化剤や抗血圧上昇剤としても使用し得ると考えられる。
【産業上の利用可能性】
【００６７】
本発明によると、極めて優れた脂肪細胞分化抑制剤、抗肥満剤、耐糖能異常改善剤、及びアディポネクチン産生促進剤、並びに、脂肪細胞分化抑制機能、抗肥満機能、耐糖能異常改善機能、アディポネクチン産生促進機能から選ばれる少なくとも１つ以上の機能を有する食品、食品添加剤、及び飼料を提供することができる。
【図１】
2008136173.tif 000020
【図２】
2008136173.tif 000021
【図３】
2008136173.tif 000022
【図４】
2008136173.tif 000023
【図５】
2008136173.tif 000024
【図６】
2008136173.tif 000025
【図７】
2008136173.tif 000026
【図８】
2008136173.tif 000027
【図９】
2008136173.tif 000028
【図１０】
2008136173.tif 000029
【図１１】
2008136173.tif 000030
【図１２】
2008136173.tif 000031
【図１３】
2008136173.tif 000032
【図１４】
2008136173.tif 000033
【国際調査報告】
2008136173.tif 000034
2008136173.tif 000035
2008136173.tif 000036
2008136173.tif 000037
2008136173.tif 000038
2008136173.tif 000039
2008136173.tif 000040
2008136173.tif 000041