【手続補正書】
【提出日】平成16年4月21日(2004.4.21)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】  式Ｐ２Ｐ１−−Ｐ１’Ｐ２’で規定される少なくとも４個のアミノ酸の配列を含む単離されたペプチドであって、式中、
Ｐ２は荷電アミノ酸、極性アミノ酸、または脂肪族アミノ酸であるが、芳香族アミノ酸ではなく；
Ｐ１は芳香族アミノ酸または荷電アミノ酸であるが、極性アミノ酸または荷電アミノ酸ではなく；
Ｐ１’は荷電アミノ酸、または脂肪族アミノ酸、または極性アミノ酸であるが、芳香族アミノ酸ではなく；
Ｐ２’は非荷電脂肪族極性アミノ酸または芳香族アミノ酸であって；、
ここに、該ペプチドは、配列番号：１または配列番号:３の核酸配列によってコードされるヒトアスパルチルプロテアーゼによってＰ１とＰ１’との間で切断され、および該ペプチドは、配列番号:１９；配列番号:２０；配列番号:２１；配列番号:２６；配列番号:２７；配列番号:２８；配列番号:３１；配列番号:３２；配列番号:３３；配列番号:３４；配列番号:３５；配列番号:３６；配列番号:３７；配列番号:３８；配列番号:３９；または配列番号４０に示されるアミノ酸配列の対応するＰ２Ｐ１−−Ｐ１’Ｐ２’部分を含まない該ペプチド。
【請求項２】  式Ｐ２Ｐ１−−Ｐ１’Ｐ２’Ｐ３’で規定されるアミノ酸を含み、式中、Ｐ３’は任意のアミノ酸であって、ここに、該ペプチドは、配列番号:１９；配列番号:２０；配列番号:２１；配列番号:２６；配列番号:２７；配列番号:２８；配列番号:３１；配列番号:３２；配列番号:３３；配列番号:３４；配列番号:３５；配列番号:３６；配列番号:３７；配列番号:３８；配列番号:３９；または配列番号４０に示されるアミノ酸配列の対応するＰ２Ｐ１−−Ｐ１’Ｐ２’ Ｐ３’部分を含まない請求項１記載の単離されたペプチド。
【請求項３】  式Ｐ３Ｐ２Ｐ１−−Ｐ１’Ｐ２’Ｐ３’で規定されるアミノ酸を含み、式中、Ｐ３は非荷電極性アミノ酸、非荷電脂肪族アミノ酸または芳香族アミノ酸であって、ここに、該ペプチドは、配列番号:１９；配列番号:２０；配列番号:２１；配列番号:２６；配列番号:２７；配列番号:２８；配列番号:３１；配列番号:３２；配列番号:３３；配列番号:３４；配列番号:３５；配列番号:３６；配列番号:３７；配列番号:３８；配列番号:３９；または配列番号４０に示されるアミノ酸配列の対応するＰ３Ｐ２Ｐ１−−Ｐ１’Ｐ２’ Ｐ３’部分を含まない請求項１記載の単離されたペプチド。
【請求項４】  式Ｐ４Ｐ３Ｐ２Ｐ１−−Ｐ１’Ｐ２’Ｐ３’で規定されるアミノ酸を含み、式中、Ｐ４は荷電アミノ酸、極性アミノ酸または脂肪族アミノ酸であるが芳香族アミノ酸ではなく、ここに、該ペプチドは、配列番号:１９；配列番号:２０；配列番号:２１；配列番号:２６；配列番号:２７；配列番号:２８；配列番号:３１；配列番号:３２；配列番号:３３；配列番号:３４；配列番号:３５；配列番号:３６；配列番号:３７；配列番号:３８；配列番号:３９；または配列番号４０に示されるアミノ酸配列の対応するＰ４Ｐ３Ｐ２Ｐ１−−Ｐ１’Ｐ２’ Ｐ３’部分を含まない請求項１記載の単離されたペプチド。
【請求項５】  Ｐ３’のカルボキシ末端位に隣接するＰ４’位にアミノ酸をさらに含み、式中、Ｐ４’は任意のアミノ酸であって、ここに、該ペプチドは、配列番号:１９；配列番号:２０；配列番号:２１；配列番号:２６；配列番号:２７；配列番号:２８；配列番号:３１；配列番号:３２；配列番号:３３；配列番号:３４；配列番号:３５；配列番号:３６；配列番号:３７；配列番号:３８；配列番号:３９；または配列番号４０に示されるアミノ酸配列の対応するＰ３Ｐ２Ｐ１−−Ｐ１’Ｐ２’Ｐ３’Ｐ４’部分を含まない請求項２ないし４いずれか１記載の単離されたペプチド。
【請求項６】  Ｐ２がＮ、Ｌ、Ｋ、Ｓ、Ｇ、Ｔ、Ｄ、Ａ、ＱおよびＥよりなる群から選択されるアミノ酸である請求項１記載の単離されたペプチド。
【請求項７】  Ｐ１がＹ、Ｌ、Ｍ、Ｎｌｅ、ＦおよびＨよりなる群から選択されるアミノ酸である請求項１記載の単離されたペプチド。
【請求項８】  Ｐ１’がＥ、Ａ、Ｄ、Ｍ、Ｑ、ＳおよびＧよりなる群から選択されるアミノ酸である請求項１記載の単離されたペプチド。
【請求項９】  Ｐ２’がＶ、Ａ、Ｎ、Ｔ、Ｌ、ＦおよびＳよりなる群から選択されるアミノ酸である請求項１記載の単離されたペプチド。
【請求項１０】  Ｐ３’がＥ、Ｇ、Ｆ、Ｈ、システイン酸およびＳよりなる群から選択されるアミノ酸である請求項２記載の単離されたペプチド。
【請求項１１】  Ｐ３がＡ、Ｖ、Ｉ、Ｓ、Ｈ、Ｙ、ＴおよびＦよりなる群から選択されるアミノ酸である請求項３記載の単離されたペプチド。
【請求項１２】  Ｐ４がＥ、Ｇ、Ｉ、Ｄ、Ｔ、システイン酸およびＳよりなる群から選択されるアミノ酸である請求項４記載の単離されたペプチド。
【請求項１３】  Ｐ４’がＦ、Ｗ、Ｇ、Ａ、Ｈ、Ｐ、Ｇ、Ｎ、Ｓ、およびＥよりなる群から選択されるアミノ酸である請求項４ないし１２いずれか１記載の単離されたペプチド。
【請求項１４】  第１の標識をさらに含む請求項１ないし１３いずれか１記載の単離されたペプチド。
【請求項１５】  第２の標識をさらに含む請求項１４記載の単離されたペプチド。
【請求項１６】  検出可能な標識および失活部分をさらに含み、ここに、Ｐ１とＰ１’との間での該ペプチドの切断が、該失活部分を該標識から分離して該標識の検出を可能にする請求項１ないし１３いずれか１記載の単離されたペプチド。
【請求項１７】  該システイン酸が共有結合された標識をさらに含む請求項１０または１２記載の単離されたペプチド。
【請求項１８】  該ヒトアスパルチルプロテアーゼによる該ペプチドの切断速度が、ヒトＡＰＰβ−セクレターゼ切断配列：ＳＥＶＫＭ−ＤＡＥＦＲ（配列番号:２０）を含むポリペプチドの切断速度よりも大きい請求項１ないし１７いずれか１記載の単離されたペプチド。
【請求項１９】  該ヒトアスパルチルプロテアーゼによる該ペプチドの切断速度が、ヒトＡＰＰスウェディッシュＫＭ→ＮＬ突然変異体、β−セクレターゼ切断配列：ＳＥＶＮＬ−ＤＡＥＦＲ（配列番号:１９）を含むポリペプチドの切断速度よりも大きい請求項１ないし１７いずれか１記載の単離されたペプチド。
【請求項２０】  該ペプチドが、配列番号:５、配列番号:６、配列番号:７、配列番号:８、配列番号:９、配列番号:１０、配列番号:１１、配列番号:１２、配列番号:１３、配列番号:１４、配列番号:１５、配列番号:１６、配列番号:１７、配列番号:１８、配列番号:１２０、配列番号:１３３、配列番号:１３４、配列番号:１３５、配列番号:１３６、配列番号:１３７、配列番号:１３８、配列番号:１４１、配列番号:１４３、配列番号:１４４、配列番号:１４５、配列番号:１４７、配列番号:１４８、配列番号:１４９、配列番号:１５０、配列番号:１５１、配列番号:１５２、配列番号:１５３、配列番号:１５４、配列番号:１５５、配列番号:１５６、配列番号:１５７、配列番号:１５８、配列番号:１５９、配列番号:１６０、配列番号:１６１、配列番号:１６２、配列番号:１６３、配列番号:１６４、配列番号:１６５、配列番号:１６６、配列番号:１６７、配列番号:１６８、配列番号:１６９、配列番号:１９０、配列番号:１９１、配列番号:１９２および配列番号:１９３よりなる群から選択されるアミノ酸である請求項１記載の単離されたペプチド。
【請求項２１】  式Ｐ２Ｐ１−−Ｐ１’Ｐ２’で規定される少なくとも４個のアミノ酸の配列を含む単離されたペプチドであって、式中、
Ｐ２は、Ｎ、ＳおよびＤよりなる群から選択されるアミノ酸を含み；
Ｐ１は、Ｙ、ＬおよびＮｌｅよりなる群から選択されるアミノ酸を含み；
Ｐ１’は、Ｅ、ＡおよびＤよりなる群から選択されるアミノ酸を含み；
Ｐ２’は、ＡおよびＶよりなる群から選択されるアミノ酸を含み；
ここに、配列番号：１または配列番号:３の核酸配列によってコードされるヒトアスパルチルプロテアーゼ（Ｈｕ−Ａｓｐ２）がＰ１とＰ１’との間で該ペプチドを切断し、ただし、Ｐ１’Ｐ２’が配列ＤＡを含むならば、Ｐ２Ｐ１は配列ＮＬまたはＮＮｌｅを含まない該ペプチド。
【請求項２２】  該ペプチドアミノ酸配列が４〜５０個のアミノ酸からなる請求項２１記載の単離されたペプチド。
【請求項２３】  該Ｈｕ−Ａｓｐ２が該ペプチドを、該Ｈｕ−Ａｓｐ２がＰ２Ｐ１−−Ｐ１’Ｐ２’アミノ酸配列ＫＭＤＡを有する対応するペプチドを切断するよりも大きい速度で切断する請求項２１記載の単離されたペプチド。
【請求項２４】  該Ｈｕ−Ａｓｐ２が該ペプチドを、該Ｈｕ−Ａｓｐ２がＰ２Ｐ１−−Ｐ１’Ｐ２’アミノ酸配列ＫＭＤＡを有する対応するペプチドを切断するよりも大きい速度で切断する請求項２１記載の単離されたペプチド。
【請求項２５】  標識をさらに含む請求項２１記載のペプチド。
【請求項２６】  標識および失活部分をさらに含み、ここに、該標識および該失活部分はＰ１−−Ｐ１ペプチド結合の反対側に結合し、これによって、該Ｐ１−−Ｐ１ペプチド結合の切断が該標識と失活部分とを分離する請求項２１記載のペプチド。
【請求項２７】  請求項２１記載のペプチド配列を含むポリペプチドであって、貫通膜ドメインをさらに含んで、該ポリペプチドが真核細胞中で発現されたとき、該ポリペプチドを細胞膜に局在化させる該ポリペプチド。
【請求項２８】  請求項１ないし２０いずれか１記載のペプチドを含み、貫通膜ドメインアミノ酸配列をさらに含むポリペプチド。
【請求項２９】  該ペプチドが該貫通膜ドメインに対してＮ−末端である請求項２８記載のポリペプチド。
【請求項３０】  該ペプチドおよび該貫通膜ドメインがリンカーによって隔てられている請求項２８または２９記載のポリペプチド。
【請求項３１】  該リンカーが約２０ないし約４０個の間のアミノ酸を含むペプチドリンカーである請求項３０記載のポリペプチド。
【請求項３２】  該貫通膜ドメインがゴルジ体または小胞体よりなる群から選択される細胞内膜に該ポリペプチドを固定する請求項２８ないし３１いずれか１記載のポリペプチド。
【請求項３３】  該貫通膜ドメインが、ガラクトシルトランスフェラーゼの貫通膜ドメイン；シアリルトランスフェラーゼの貫通膜ドメイン；ヒトアスパルチルトランスフェラーゼ１の貫通膜ドメイン；ヒトアスパルチルトランスフェラーゼ２の貫通膜ドメイン；シンタキシン６(syntaxin 6)の貫通膜ドメイン；ユビキチンの貫通膜ドメイン；インスリンＢ鎖の貫通膜ドメインおよびＡＰＰの貫通膜ドメインよりなる群から選択される請求項２８ないし３２いずれか１記載の融合タンパク質。
【請求項３４】  レポータータンパク質アミノ酸配列をさらに含む請求項２８ないし３２いずれか１記載のポリペプチド。
【請求項３５】  該レポータータンパク質がルシフェラーゼ；アルカリホスファターゼ；β−ガラクトシダーゼ；β−グルコリニダーゼ；緑色蛍光タンパク質；クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼよりなる群から選択される請求項３４記載のポリペプチド。
【請求項３６】  請求項２０ないし３５いずれか１記載のペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド。
【請求項３７】  請求項１ないし２７いずれか１記載のペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド。
【請求項３８】  請求項３６記載のポリヌクレオチドを含むベクター。
【請求項３９】  請求項３７記載のポリヌクレオチドを含むベクター。
【請求項４０】  該ポリヌクレオチドが、宿主細胞内で該ポリヌクレオチドによってコードされる融合タンパク質の発現を促進するプロモーターに作動可能に連結されている請求項３８記載のベクター。
【請求項４１】  請求項３６記載のポリヌクレオチドで形質転換またはトランスフェクトされた宿主細胞。
【請求項４２】  請求項３８ないし４０いずれか１記載のベクターで形質転換またはトランスフェクトされた宿主細胞。
【請求項４３】  β−セクレターゼ活性のモジュレーターをアッセイする方法であって、
（ａ）推定モジュレーター化合物の存在下および不存在下の両方で、第１組成物を第２組成物に接触させ、ここに、該第１組成物は哺乳類β−セクレターゼポリペプチドまたは生物学的に活性なそのフラグメントを含み、該第２組成物は基質を含み、ここに、該基質は請求項１ないし２６いずれか１記載のペプチドまたは請求項２７ないし３５いずれか１記載のポリペプチドであり；
（ｂ）該推定モジュレーター化合物の存在下および不存在下で、該基質ペプチドの切断を測定し；次いで
（ｃ）該推定モジュレーター化合物の存在下対不存在下での切断の差異からβ−セクレターゼ活性のモジュレーターを同定し、ここに、β−セクレターゼアンタゴニストであるモジュレーターが当該切断を低減し、β−セクレターゼアゴニストであるモジュレーターが当該切断を増大するステップを含む該方法。
【請求項４４】  該第１組成物が精製ヒトＡｓｐ２ポリペプチドを含む請求項４３記載の方法。
【請求項４５】  該第１組成物がＡｓｐ２β−セクレターゼ活性を保持するヒトＡｓｐ２ポリペプチドの可溶性フラグメントである請求項４３記載の方法。
【請求項４６】  該可溶性フラグメントがＡｓｐ２貫通膜ドメインを欠如するフラグメントである請求項４５記載の方法。
【請求項４７】  該第１組成物のβ−セクレターゼポリペプチドが、該β−セクレターゼポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドで形質転換またはトランスフェクトされた細胞から精製および単離されたポリペプチドを含む請求項４３記載の方法。
【請求項４８】  該第１組成物のポリペプチドが、該ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドで形質転換またはトランスフェクトされた細胞中で発現され、ここに、該測定ステップが該細胞のＡＰＰプロセシング活性を測定することを含む請求項４３記載の方法。
【請求項４９】  Ｈｕ−Ａｓｐ２のインヒビターであると同定された剤でアルツハイマー病を治療するステップを含む請求項４３ないし４８いずれか１記載の方法。
【請求項５０】  請求項４３ないし４８いずれか１記載の方法により同定されたβ−セクレターゼモジュレーター。
【請求項５１】  イン・ビボでβ−セクレターゼ活性を阻害する方法であって、哺乳類に、該哺乳類の細胞中でベータセクレターゼを阻害するのに有効な量にてβ−セクレターゼアンタゴニストである請求項５０記載のモジュレーターを投与するステップを含む該方法。
【請求項５２】  β−セクレターゼアッセイ用の基質を生成する方法であって：
該ポリペプチドの発現を許容するように、請求項４０記載のベクターで形質転換またはトランスフェクトされた宿主細胞を増殖させることを含む該方法。
【請求項５３】  該ポリペプチドを精製することをさらに含む請求項５２記載の方法。
【請求項５４】  該宿主細胞が哺乳類宿主細胞、細菌宿主細胞および酵母宿主細胞よりなる群から選択される請求項５２記載の方法。
【請求項５５】  請求項５０記載のモジュレーターおよび医薬上許容される担体を含む医薬組成物。
【請求項５６】  異常β−セクレターゼ活性で特徴付けられる疾患または体調を治療する方法であって、治療が必要な対象に請求項５５記載の医薬組成物を投与することを含む該方法。
【請求項５７】  アルツハイマー病の治療用医薬の製造における、請求項４３記載の方法によって同定されたモジュレーターの使用。
【請求項５８】  ヒトＡｓｐ２−アスパルチルプロテアーゼ（Ｈｕ−Ａｓｐ２）の活性を阻害する剤を同定する方法であって：
（ａ）試験剤の存在下および不存在下で、請求項１ないし２６いずれか１記載のペプチドまたは請求項２７ないし３５いずれか１記載のポリペプチドをＨｕ−Ａｓｐ２活性を含む組成物に接触させ；
（ｂ）該試験剤の存在下および不存在下で、該Ｈｕ−Ａｓｐ２によるＰ１とＰ１’との間の該ペプチドまたはポリペプチドの切断を決定し；次いで
（ｃ）該試験剤存在下でのＨｕ−Ａｓｐ２の切断活性を該試験剤の不存在下での活性と比較して、該Ｈｕ−Ａｓｐ２による切断を阻害する剤を同定し、ここに、該試験剤の存在下で低下した活性がＨｕ−Ａｓｐ２活性を阻害する剤であると同定するステップを含む該方法。
【請求項５９】  該Ｈｕ−Ａｓｐ２が、Ｈｕ−Ａｓｐ２をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドで形質転換またはトランスフェクトされた細胞から精製および単離された組換えＨｕ−Ａｓｐ２である請求項５８記載の方法。
【請求項６０】  該Ｈｕ−Ａｓｐ２が細胞内で発現され、ここに、該接触が該試験剤の存在下および不存在下で該細胞を増殖させることを含み；および、該決定ステップが該ペプチドまたは融合タンパク質の切断を測定することを含む請求項５８記載の方法。
【請求項６１】  該細胞が該ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドをさらに含み、ここに、該接触ステップが、該細胞が該ポリペプチドを発現する条件下で該細胞を増殖させることを含む請求項６０記載の方法。
【請求項６２】  該細胞がヒト胚腎臓細胞系統２９３細胞である請求項６０または６１記載の方法。
【請求項６３】  該ヌクレオチド配列が、
（ａ）配列番号:２に記載のＨｕ−Ａｓｐ２（ａ）アミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列；
（ｂ）配列番号:４に記載のＨｕ−Ａｓｐ２（ｂ）アミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列；
（ｃ）Ｈｕ−Ａｓｐ２（ａ）（配列番号:２）またはＨｕ−Ａｓｐ２（ｂ）（配列番号:４）のフラグメントをコードするヌクレオチド配列、ここに、該フラグメントはＨｕ−Ａｓｐ２（ａ）またはＨｕ−Ａｓｐ２（ｂ）のアスパルチルプロテアーゼ活性特性を示し；および
（ｄ）ストリンジェントハイブリダイゼーション条件下で、配列番号:１および配列番号:３よりなる群から選択されるＨｕ−Ａｓｐ２−コーディングポリヌクレオチドにハイブリダイズするポリヌクレオチドのヌクレオチド配列よりなる群から選択される請求項５９ないし６２いずれか１記載の方法。
【請求項６４】  Ａｓｐ２アスパルチルプロテアーゼの活性をモジュレートする剤を同定する方法であって、
（ａ）試験剤の存在下および不存在下で、Ａｓｐ２アスパルチルプロテアーゼと請求項１ないし２６いずれか１記載のペプチドまたは請求項２７ないし３５いずれか１記載のポリペプチドとを接触させ、ここに、該Ａｓｐ２アスパルチルプロテアーゼは、ストリンジェントハイブリダイゼーション条件下で、配列番号:１および配列番号:３よりなる群から選択されるＨｕ−Ａｓｐ２−コーディングポリヌクレオチドにハイブリダイズする核酸分子によってコードされ；
（ｂ）該試験剤の存在下および不存在下で、該Ａｓｐ２によるＰ１とＰ１’との間の該ペプチドまたは融合タンパク質の切断を決定し；次いで
（ｃ）該試験剤存在下でのＡｓｐ２の切断活性を該試験剤の不存在下での切断活性と比較して、該ポリペプチドの活性をモジュレートする剤を同定し、ここに、Ａｓｐインヒビターであるモジュレーターが当該切断を低減し、Ａｓｐ２アゴニストであるモジュレーターが当該切断を増大する該方法。
【請求項６５】  Ｈｕ−Ａｓｐ２のインヒビターであると同定された剤でアルツハイマー病を治療するステップをさらに含む請求項５８または６４記載の方法。
【請求項６６】  ヒトＡｓｐ２アスパルチルプロテアーゼ（Ｈｕ−Ａｓｐ２）の活性を阻害する剤を同定する方法であって、
（ａ）試験剤の存在下および不存在下で、細胞を増殖させ、ここに、該細胞はＨｕ−Ａｓｐ２を発現し、請求項１ないし２６いずれか１記載のペプチドまたは請求項２７ないし３５いずれか１記載のポリペプチドを含むタンパク質を発現し；
（ｂ）該試験剤の存在下および不存在下で、該細胞中で、該Ｐ１とＰ１’との間の部位にての該タンパク質の切断を決定し；次いで
（ｃ）該試験剤存在下での切断活性を該試験剤の不存在下での切断活性と比較して、Ｈｕ−Ａｓｐ２の活性を阻害する剤を同定し、ここに、該試験剤の存在下で低下した活性がＨｕ−Ａｓｐ２活性を阻害する剤であると同定するステップを含む該方法。
【請求項６７】  該宿主細胞がＨｕ−Ａｓｐ２をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドで形質転換またはトランスフェクトされていて、該ヌクレオチド配列が、
（ａ）配列番号:２に記載のＨｕ−Ａｓｐ２（ａ）アミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列；
（ｂ）配列番号:４に記載のＨｕ−Ａｓｐ２（ｂ）アミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列；
（ｃ）Ｈｕ−Ａｓｐ２（ａ）（配列番号:２）またはＨｕ−Ａｓｐ２（ｂ）（配列番号:４）のフラグメントをコードするヌクレオチド配列、ここに、該フラグメントはＨｕ−Ａｓｐ２（ａ）またはＨｕ−Ａｓｐ２（ｂ）のアスパルチルプロテアーゼ活性特性を示し；および
（ｄ）ストリンジェントハイブリダイゼーション条件下で、配列番号:１および配列番号:３よりなる群から選択されるＨｕ−Ａｓｐ２−コーディングポリヌクレオチドにハイブリダイズするポリヌクレオチドのヌクレオチド配列よりなる群から選択される請求項６６記載の方法。
【請求項６８】  ステップ（ａ）〜（ｃ）によりＨｕ−Ａｓｐ２のインヒビターであると同定された剤でアルツハイマー病を治療するステップをさらに含む請求項６６ないし６７いずれか１記載の方法。
【請求項６９】  アルツハイマー病の治療用医薬の製造における、請求項６６ないし６７いずれか１記載のＨｕ−Ａｓｐ２のインヒビターであると同定された剤の使用。
【請求項７０】  請求項１ないし２７いずれか１記載のペプチドを含むβ−セクレターゼ基質およびβ−セクレターゼ酵素を含むβ−セクレターゼアッセイを実行するためのキット。
【請求項７１】  該β−セクレターゼ基質が請求項２８ないし３５いずれか１記載のポリペプチドである請求項７０記載のキット。
【請求項７２】  該ペプチドまたは融合タンパク質の切断を検出する試薬をさらに含む請求項７０または７１記載のキット。
【請求項７３】  配列ＳＥＩＳＹ−ＥＶＥＦＲ（配列番号:１５２）を有する少なくとも１０個のアミノ酸を有する配列を含む単離されたペプチド。
【請求項７４】  該ペプチドがＳＥＩＳＹ−ＥＶＥＦＲ（配列番号:１５２）のカルボキシ末端に隣接する少なくとも３個のアミノ酸を含む請求項７３記載の単離されたペプチド。
【請求項７５】  該ペプチドがＳＥＩＳＹ−ＥＶＥＦＲ（配列番号:１５２）のアミノ末端に隣接する少なくとも３個のアミノ酸を含む請求項７３記載の単離されたペプチド。
【請求項７６】  該ペプチドがＳＥＩＳＹ−ＥＶＥＦＲ（配列番号:１５２）のカルボキシ末端に隣接する少なくとも５個のアミノ酸を含む請求項７３記載の単離されたペプチド。
【請求項７７】  該ペプチドがＳＥＩＳＹ−ＥＶＥＦＲ（配列番号:１５２）のアミノ末端に隣接する少なくとも５個のアミノ酸を含む請求項７３記載の単離されたペプチド。
【請求項７８】  該ペプチドがＳＥＩＳＹ−ＥＶＥＦＲ（配列番号:１５２）のアミノ末端に隣接する少なくとも１０個のアミノ酸を含む請求項７３記載の単離されたペプチド。
【請求項７９】  該ペプチドが少なくとも１３個のアミノ酸を含む請求項７３記載の方法。
【請求項８０】  該ペプチドが少なくとも１５個のアミノ酸を含む請求項７３記載の方法。
【請求項８１】  該ペプチドが少なくとも２０個のアミノ酸を含む請求項７３記載の方法。
【請求項８２】  該ペプチドが少なくとも５０個のアミノ酸を含む請求項７３記載の方法。