【手続補正書】
【提出日】平成16年5月26日(2004.5.26)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
３〜２０又は２０〜８０アミノ酸残基の範囲のアミノ酸残基を含んで成る、繊維芽細胞増殖因子（FGF）レセプターと相互作用することができる化合物であって：
（ｉ）神経細胞接着分子（NCAM）の第２フィブロネクチンIII （Fn３，２）モジュールの断片、もしくはその変異体、及び／又は
（ii）NCAMの第１フィブロネクチンIII （Fn３，１）モジュールの断片、
を含んで成り、
前記断片はNCAMのFn３，２モジュールのFG−ループ、もしくはその変異体に対して相同的である化合物。
【請求項２】
前記FGFレセプターが、FGFレセプターＩ、FGFレセプターII、FGFレセプターIII 、又はFGFレセプターIVから選択されている、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
FGFレセプターシグナル伝達を刺激することができる、請求項１又は２に記載の化合物。
【請求項４】
前記FGFレセプターＩシグナル伝達が刺激されている、請求項３に記載の化合物。
【請求項５】
（ii）が式L１−A−L２−B−L３−C−L４
（式中、
A、B、Cのうち１つが塩基性アミノ酸から選択されており、
A、B、Cのうち１つが疎水性アミノ酸から選択されており、
A、B、Cのうち１つがグリシンであり、そして
L１、L２、L３、L４は、化学結合又はn個のアミノ酸残基を有するアミノ酸配列から選択されて良く、ここでnは０〜５の整数である）
のアミノ酸配列を含んで成る、請求項１に記載の化合物。
【請求項６】
Bがグリシンであり、Aが塩基性アミノ酸残基であり、そしてCが疎水性アミノ酸残基である、請求項５に記載の化合物。
【請求項７】
Aがリジン（K）であり、そしてCがロイシン（L）又はアラニン（A）である、請求項６に記載の化合物。
【請求項８】
配列NGKGL又はNGRGLを含んで成る、請求項５〜７のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項９】
（ｉ）が式L１−A−L２−B−L３−C−L４−D−Ｌ５
（式中、
A、B、C、Dのうち１つが塩基性アミノ酸残基から選択されており、
A、B、C、Dのうち１つが疎水性アミノ酸残基から選択されており、
A、B、C、Dのうち１つが酸性アミノ酸残基から選択されており、
A、B、C、Dのうち１つがグリシンであり、そして
L１、L２、L３、L４及びL５は、化学結合又はn個のアミノ酸残基を有するアミノ酸配列から選択されて良く、ここでnは０〜５の整数である）
のアミノ酸配列を含んで成る、請求項１に記載の化合物。
【請求項１０】
前記化合物が、NCAM分子のFn３，２モジュールのFGループ、もしくはその断片、もしくは変異体に対して相同的なペプチドを含んで成る、請求項１〜９のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１１】
前記化合物が、モチーフA−E−N−Q−X−X−K（式中、Xは任意のアミノ酸残基でありうる）を有するペプチド配列を含んで成る、請求項１０に記載の化合物。
【請求項１２】
前記Xが、グルタミン（Q）、アラニン（A）及び／又はアスパラギン（N）及び／又はグリシン（G）から選択されている、請求項１１に記載の化合物。
【請求項１３】
前記化合物が、配列
【化１】
2005510463.tif 000001
【化２】
2005510463.tif 000002
【化３】
2005510463.tif 000003
【化４】
2005510463.tif 000004
【化５】
2005510463.tif 000005
【化６】
2005510463.tif 000006
を含んで成るペプチドを１種類以上含んで成る、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１４】
前記アミノ酸配列が、式AENQ−L４−G（式中、L４は請求項９に規定された通りである）を有する、請求項９に記載の化合物。
【請求項１５】
（ｉ）が、式A−B−L３−L４−C−L４
（式中、
Aは疎水性アミノ酸残基であり、
Bは酸性アミノ酸残基であり、
L３は１又は数個の親水性アミノ酸残基であり、
L４は請求項９においてL４について規定したようなアミノ酸配列であり、そして
Cがグリシンである）
のアミノ酸配列を含んで成る、請求項１に記載の化合物。
【請求項１６】
式L１−A−L２−B−L３−C−L４−D−Ｌ５−Ｅ−L６
（式中、
L１、L２、L３又はL４のうち少なくとも１つがアミノ酸残基Yを含んで成り且つ他の１つがアミノ酸残基Kを含んで成り、
L５及び／又はL６は個別にKであり、そしてA、B、C、D、Eは任意のアミノ酸であるが、但しY〜K間の距離は５アミノ酸以上、例えば、７アミノ酸残基以上、例えば９アミノ酸残基以上、例えば１１アミノ酸残基以上である）
の配列を含んで成る、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１７】
前記化合物が二量体である、請求項１〜１６のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１８】
前記化合物が多量体、例えばデンドリマーである、請求項１〜１６のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１９】
前記化合物が、独立してFGFレセプターを提示する細胞のFGFレセプターシグナル伝達を刺激すること及び／又は増殖を調節すること及び／又は分化を誘導すること及び／又は再生、ニューロンの可塑性及び／又は生存を刺激することができる単量体を含んで成る、請求項１〜１９のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項２０】
前記単量体が相同物である、請求項１７又は１８に記載の化合物。
【請求項２１】
前記単量体が異種である、請求項１７又は１８に記載の化合物。
【請求項２２】
前記FGFレセプターシグナル伝達は、FGFレセプターを発現する細胞に対して所定の濃度の前記化合物が適用された場合のFGFレセプターのリン酸化として測定されている、請求項１〜２１のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項２３】
前記リン酸化の程度がコントロール値の２０％超である、請求項２２に記載の化合物。
【請求項２４】
前記化合物の所定濃度が、０．１〜２００μMである、請求項２２又は２３に記載の化合物。
【請求項２５】
２５〜７５アミノ酸残基の範囲のアミノ酸残基を含んで成る、請求項１に記載の化合物。
【請求項２６】
３〜１９アミノ酸残基の範囲のアミノ酸残基を含んで成る、請求項１に記載の化合物。
【請求項２７】
細胞の増殖の及び／又は分化及び／又は再生及び／又はニューロンの可塑性及び／又は生存を調節することができる、請求項１に記載の化合物。
【請求項２８】
請求項１〜２７のいずれか１項に記載の化合物を１つ以上含んで成る医薬組成物。
【請求項２９】
前記化合物が、NCAM Fn３，２モジュール、もしくはその断片、もしくはその変異体である、請求項２８に記載の医薬組成物。
【請求項３０】
前記化合物が二量体として処方されている、請求項２８〜２９のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項３１】
前記化合物が多量体として処方されている、請求項２８〜２９のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項３２】
経口、経皮、筋内、静脈内、頭蓋内、鞘内、脳室内、鼻腔内又は肺内投与のために処方されている、請求項２８〜３１のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項３３】
前記投与が連続である、請求項３２に記載の医薬組成物。
【請求項３４】
有効な量の１又は複数の請求項１〜２７のいずれか１項に記載の化合物、又は請求項２８〜３３のいずれか１項に記載の医薬組成物と１又は複数の医薬的に許容できる添加剤もしくは担体とを混合することを含んで成る、医薬組成物を生産する方法。
【請求項３５】
請求項１〜２７のいずれか１項に記載の化合物が補綴装置との組み合わせにおいて使用されている、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
前記装置が補綴神経ガイド（prosthetic nerve guide）である、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
前記補綴神経ガイドが、１種類以上の請求項１〜２７のいずれか１項に記載の化合物、又は請求項２８〜３３のいずれか１項に記載の医薬組成物を含んで成ることを特徴とする、請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
有効な量の１種類以上の請求項１〜２７のいずれか１項に記載の化合物、又は請求項２８〜３３のいずれか１項に記載の医薬組成物が対象者に対して投与されている、請求項３４〜３７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３９】
請求項１〜２７のいずれか１項に記載の化合物の医薬の製造のための使用。
【請求項４０】
前記化合物及び／又は医薬組成物が、中枢及び末梢神経系の疾患もしくは症状、手術後の神経傷害、外傷性神経傷害、神経繊維の髄鞘形成傷害、虚血後傷害、多発脳梗塞性痴呆、多発性硬化症、糖尿病による神経変性、神経−筋変性、統合性失調症、気分障害、躁うつ病、アルツハイマー病、パーキンソン病、又はハンチントン病などの治療ためである、請求項３９に記載の使用。
【請求項４１】
前記化合物及び／又は医薬組成物が、神経−筋連絡の機能損傷による症状を含む筋肉の疾患もしくは症状の治療のため、又は性腺、すい臓、腎臓の疾患もしくは変性症状の治療のためである、請求項３９に記載の使用。
【請求項４２】
前記化合物及び／又は医薬組成物が、例えば、心筋細胞の細胞死を予防するためである、請求項３９に記載の使用。
【請求項４３】
前記化合物及び／又は医薬組成物が血管再開通術のためである、請求項４２に記載の使用。
【請求項４４】
前記化合物及び／又は医薬組成物が創傷治癒を促進するためである、請求項３９に記載の使用。
【請求項４５】
前記化合物及び／又は医薬組成物が血管形成を阻害することができる、請求項３９に記載の使用。
【請求項４６】
前記化合物及び／又は医薬組成物がガンを治療するためである、請求項３９又は４５に記載の使用。
【請求項４７】
前記化合物が、学習する能力及び／又は短期及び／もしくは長期記憶の刺激のためである請求項３９又は４０に記載の使用。
【請求項４８】
細胞の増殖及び／又は分化及び／又は再生及び／又はニューロンの可塑性及び／又は生存を調節することができる、請求項３９に記載の使用。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００３】
NCAMは、２５個以上のエキソンを含む単一の遺伝子によってコードされている。前駆体mRNAの選択的スプライシングにより、様々な成熟mRNA種及びそれによるNCAMのタンパク質イソ型が生産されて良い。３つの主要なNCAMイソ型は、NCAMが原形質膜に対して結合する方法及び細胞内NCAMドメインのサイズをそれぞれ決定するエキソン１５と１８の選択適スプライシングによって生み出されている。神経系において、グリコシルスルファチジルイノシトール（GPI）が係留した１２０kDaのイソ型は、グリア細胞の表層で発現しており、膜貫通型の１４０kDaのイソ型はニューロンとグリア細胞の両方で発現しており、その一方で膜貫通型の１８０kDaのイソ型は主にニューロンの表層上で発見されている。NCAMの細胞外部分は、５つのIg様相同モジュール（Ig１、Ig２、Ig３、Ig４とIg５）及び２つのIII 型フィブロネクチンモジュール（F３，１とF３，２）を含んで成る（Berezinら、２０００）。NCAMの個々の細胞外モジュールは、タンパク質の機能における独特な役割を果たすことが示されており、詳細には、Ｆ３，１及びＦ３，２はNCAMが介在した細胞接着及び栄養増殖に関わることが示されている（Freiら、1992；Kasperら、1996、Stahlhutら、1997）。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００７】
シグナル伝達において、NCAMは、例えば、FGFレセプターなどのチロシンリン酸化、及び細胞外カルシウム濃度増加につながる細胞外シグナルを変換する。DohertyとWalsh（１９９９）は、NCAM、Nカドヘリン及びL１がニューロン中の繊維芽細胞増殖因子（FGFR）を活性化することによって軸索の生長を刺激することを記載している。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００８
【補正方法】削除
【補正の内容】
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１３】
神経細胞の生存は、いくつかの参考文献中で議論されてきた。例えば、Hullyら（１９９８）及び米国特許第５，７９２，７４３号は、L１神経細胞接着分子は、毒素MPP+の存在下で培養された胎児中脳ドーパミン作用性神経細胞の生存及び分化を刺激できることを開示している。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３３】
本発明の背景において、NCAM分子とはデータベースSWISSPROT、アクセスNo.：P13596に示されている配列を有するNCAMを意味する。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１４９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１４９】
実施例６
FGループ断片及び変異体
天然細胞接着分子L１及びNCAMのFGループに由来するペプチド（L１の第３F３モジュール及びNCAMの第１F３モジュール）を様々な長さで調製した（図９aを参照のこと）。そしてそれらの一次海馬ニューロンから神経突起が生長することに対する効果を、２５μMの濃度で様々なペプチドを添加することで試験した（図９b）。NCAMペプチドをFN３，１に言及し且つL１ペプチドをL１に言及した。図９aで示した変異を各ペプチド中のアミノ酸の数で示している。図から分かるように、ペプチドは神経突起生長に対する刺激効果を有しており、NCAMの第１フィブロネクチンIII 型モジュールのFgループの９個のアミノ酸の変異のために、そしてL１の第３フィブロネクチンIII 型モジュールのFgループの９個のアミノ酸の変異のために統計的有意に到する。
【表２】
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【表３】
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【表４】
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【表５】
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