(57)【要約】  本発明の目的は、巨核球系細胞における胞体突起形成又は血小板形成を効果的に促進することのできる新規な血小板産生促進因子を提供し、また、前記血小板産生促進因子を利用し、有用な医薬品等の組成物や各種方法を提供することにある。即ち本発明は、下記一般式（１）で示される化合物を、精製を行なっていない植物、動物、及び微生物の少なくともいずれかの抽出物における濃度よりも高濃度で含むことを特徴とする植物、動物、及び微生物の少なくともいずれかの抽出物乃至その処理物；下記一般式（１）で示される化合物；前記抽出物乃至その処理物、或いは前記化合物を含む医薬品等の組成物；前記抽出物乃至その処理物、或いは前記化合物を利用した各種方法である。【化６８】2008078453.tif 000073
2008078453.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
植物、動物、及び微生物の少なくともいずれかの抽出物乃至その処理物であって、下記一般式（１）で示される化合物を、精製を行なっていない前記植物、動物、及び微生物の少なくともいずれかの抽出物における濃度よりも高濃度で含み、血小板形成促進活性を有することを特徴とする抽出物乃至その処理物。
【化４９】
2008078453.tif 000054
（式中、Ｘは酸素、イオウ、スルホニル基、又は置換基を有していてもよいイミノ基を示し、該置換基はアシル基、置換されていてもよいアミノ基、又は置換スルホニル基である。破線は二重結合の存在を示し、シスでもトランスでもよい。また環状構造の一部でもよい。ｎ及びｍはそれぞれメチレンの数で１〜１８の整数を示す。Ｒ１及びＲ２はそれぞれ酸素又はＨ２を示す。Ｒ３は水素、それぞれ置換基を有していてもよい低級アルキル基、アリール基、アラルキル基、又は薬学的に許容され得る塩を形成する陽イオンを示す。）
【請求項２】
一般式（１）で示される化合物が、少なくとも、下記一般式（２）で示される化合物及び下記一般式（３）で示される化合物のいずれかである請求項１に記載の抽出物乃至その処理物。
【化５０】
2008078453.tif 000055
（式中、Ｒは水素、薬学的に許容され得る塩を形成する陽イオン、ジヒドロキシプロピル基、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、グルコース、ガラクトース、又はラムノースを示す。）
【化５１】
2008078453.tif 000056
（式中、Ｒは水素、薬学的に許容され得る塩を形成する陽イオン、ジヒドロキシプロピル基、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、グルコース、ガラクトース、又はラムノースを示す。）
【請求項３】
一般式（１）で示される化合物が、少なくとも、下記化学式（１）から（４）で示される化合物のいずれかである請求項１から２のいずれかに記載の抽出物乃至その処理物。  
【化５２】
2008078453.tif 000057
（化学式１の式中、２級ヒドロキシ基の絶対配置は、Ｒ体又はＳ体又はＲＳ体のいずれでもよい。）
【化５３】
2008078453.tif 000058
（化学式２の式中、２級ヒドロキシ基の絶対配置は、Ｒ体又はＳ体又はＲＳ体のいずれでもよい。）
【化５４】
2008078453.tif 000059
【化５５】
2008078453.tif 000060
【請求項４】
少なくとも化学式（１）から（４）で示される化合物のいずれかを０．００１質量％以上の濃度で含むか、又は、化学式（１）から（４）で示される化合物の合計を０．００４質量％以上の濃度で含む請求項１から３のいずれかに記載の抽出物乃至その処理物。
【請求項５】
精製されたものである請求項１から４のいずれかに記載の抽出物乃至その処理物。
【請求項６】
巨核球系細胞における胞体突起形成又は血小板形成の促進作用を有する組成物であって、請求項１から５のいずれかに記載の抽出物乃至その処理物を含むことを特徴とする組成物。
【請求項７】
巨核球系細胞における胞体突起形成又は血小板形成の促進作用を有する組成物であって、一般式（１）で示される化合物を含むことを特徴とする組成物。
【請求項８】
巨核球系細胞における胞体突起形成又は血小板形成の促進作用を有する組成物であって、下記一般式（４）で示される化合物を含むことを特徴とする組成物。
【化５６】
2008078453.tif 000061
（式中、Ｒ４は
【化５７】
2008078453.tif 000062
又は
【化５８】
2008078453.tif 000063
又は
【化５９】
2008078453.tif 000064
又は
【化６０】
2008078453.tif 000065
であり、ＸはＯ、ＮＲ６（Ｒ６は、Ｈ又は下記Ｒ５）、Ｓ、ＳＯ、又はＳＯ2であり、Ｒ５は１−４個のＯＨを有していてもよいＣ１からＣ６の直鎖状、分岐鎖状又は環状のアルキル基であり、Ｙは、ＯＨ又はＣ１からＣ２のアルコキシ基又はハロゲン原子である。）
【請求項９】
Ｘ、Ｒ５、及びＹが、それぞれ下記である、請求項８に記載の組成物。
（ＸはＯ又はＮＲ６であり、Ｒ５は１から２個のＯＨで置換されたＣ２からＣ３のアルキル基であり、ＹはＯＨ又はＣ１からＣ２のアルコキシ基又はＦ、Ｃｌ又はＢｒである。）
【請求項１０】
食品、栄養補助食品、食品添加物又は医薬品である、請求項６から９のいずれかに記載の組成物。
【請求項１１】
一般式（４）で示される化合物（ただし、Ｘ＝Ｏの場合、Ｒ５はＯＨ又は１−グリセリル基ではない）。
【請求項１２】
Ｘ、Ｒ５、及びＹが、それぞれ下記である、請求項１１に記載の化合物。
（ＸはＯ又はＮＲ６であり、Ｒ５は１から２個のＯＨで置換されたＣ２からＣ３のアルキル基であり、ＹはＯＨ又はＣ１からＣ２のアルコキシ基又はＦ、Ｃｌ又はＢｒである。）
【請求項１３】
下記化学式（５）から（１１）のいずれかで示されることを特徴とする化合物。
【化６１】
2008078453.tif 000066
【化６２】
2008078453.tif 000067
【化６３】
2008078453.tif 000068
【化６４】
2008078453.tif 000069
【化６５】
2008078453.tif 000070
【化６６】
2008078453.tif 000071
【化６７】
2008078453.tif 000072
【請求項１４】
請求項６から１０のいずれかに記載の組成物を患者に投与することを特徴とする、血小板減少を伴う疾患を治療又は予防する方法。
【請求項１５】
請求項１から５のいずれかに記載の抽出物乃至その処理物、或いは一般式（１）で示される化合物を巨核球系細胞に接触させることを特徴とする、巨核球系細胞における胞体突起形成又は血小板形成を促進させる方法。
【請求項１６】
一般式（１）で示される化合物の巨核球系細胞における胞体突起形成又は血小板形成の促進作用を指標として行うことを特徴とする、被検試料の巨核球系細胞における胞体突起形成又は血小板形成の促進作用を評価する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規な血小板産生促進因子、該血小板産生促進因子を高濃度に含む抽出物乃至その処理物、該血小板産生促進因子を含む組成物、並びに該血小板産生促進因子を利用した血小板減少を伴う疾患を治療又は予防する方法、巨核球系細胞における胞体突起形成又は血小板形成を促進させる方法、及び巨核球系細胞における胞体突起形成又は血小板形成促進作用を評価する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
血小板は、造血幹細胞の分化・増殖により産生される。この過程においては、まず、造血幹細胞が巨核球前駆細胞を経て巨核球に分化・増殖し、次いで、巨核球が成熟後、胞体を形成し、これが最終的に血小板となって末梢血中に放出されるものと考えられている。血小板減少症の発症は、これら血小板形成に至る過程に障害が生じることに起因している。【０００３】
血小板減少症をきたす疾患のうち、血小板産生異常によるとされているものとしては、再生不良性貧血、骨髄低形成又は骨髄抑制（白血病、悪性リンパ腫、癌の骨髄浸潤、薬剤性骨髄障害（抗がん剤、クロラムフェニコール等）、放射線障害）、巨核球障害（無巨核球性血小板減少性紫斑病、ウイルス感染）、肝炎（ウイルス性及び非ウイルス性）、肝炎のインターフェロン療法、巨赤芽球性貧血、骨髄異形成症候群、発作性血色素尿症、Ｗｉｓｃｏｔｔ−Ａｌｄｒｉｃｈ症候群、Ｂｅｒｎａｒｄ−Ｓｏｕｌｉｅｒ症候群、Ｍｅｙ−Ｈｅｇｇｌｉｎ異常、周期性血小板減少が挙げられる。【０００４】
また、血小板破壊亢進によるとされているものとしては、特発性血小板減少性紫斑病、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）、悪性リンパ腫、ウイルス感染症（インフルエンザ、風疹）、薬剤由来（キニジン、サルファー剤等）新生児血小板減少、輸血後紫斑病、播種性血管内凝固症候群（ＤＩＣ）、血栓性血小板減少性紫斑病（ＴＴＰ）、溶血性尿毒症症候群（ＨＵＳ）、血管腫が挙げられる。【０００５】
一方、血小板分布異常によるとされるものとしては、肝硬変、Ｂａｎｔｉ症候群、骨髄外造血を伴った骨髄線維症が知られている。【０００６】
血小板減少症をはじめとする各種血小板減少を伴う疾病の病態リスクとしては、軽度のものでは紫斑形成や出血が、重篤なものでは頭蓋内出血がある。これら出血性リスク回避のための予防乃至治療の方法として、現在、血小板輸血がなされている。血小板輸血のための、我が国における血小板製剤の供給状況は、１９８５年には２６０万単位であったが、１９９８年には８００万単位弱と３倍に著増し、以後暫時増加傾向にある（非特許文献１）。一方、アメリカにおいては２００１年度報告では血小板減少症の患者のための採血は年間延べ１２００万回実施されている（非特許文献２）。【０００７】
しかしながら、血小板輸血には様々なリスクが報告され、その治療法としての問題点も指摘されている。まず、感染性リスクとして、ＨＩＶ、Ｂ型、Ｃ型肝炎を始めとするウイルス感染（輸血製剤全般）に加え、室温保存に由来する細菌感染（肺炎球菌、梅毒等）の危険性が他の輸血製剤の約５０倍高いとされている（非特許文献３）。また、非感染性リスクとして、保存による血小板の機能低下がみられる（非特許文献２）。即ち、輸血用血小板製剤は、４℃保存下では血小板機能を損なうことから、現在、室温保存がされており、このため他の輸血製剤と比較して保存期間（３日、但し２０００年より導入された細菌増殖予防のための核酸増幅検査に１日を要し、実質的には有効期限が２日間）が短い。更なるリスクとして、人為的ミスによる異型輸血（ＡＢＯ型ＲＨ＋／−型）や血小板輸血では、蕁麻疹、アナフィラキシー、呼吸肺障害等のアレルギー症状の発生が、他の輸血製剤と比較して多いことが挙げられている。【０００８】
血小板輸血のこれらリスクを回避するため、これまでに、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）や顆粒球及びマクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＳＣＦ）と同様に血小板を増加させる内因性増殖因子の検索がなされてきた。その結果、１９９４年にトロンボポイエチン（ＴＰＯ、ｔｈｒｏｍｂｏｐｏｉｅｔｉｎ）が同定され、複数の研究グループから報告された（非特許文献４〜８）。【０００９】
これまでＴＰＯに関しては、様々な血小板減少症に対する臨床治験が実施されてきたが、現在適応承認の認められているものとしては、肝臓未成熟に起因する新生児血小板減少症にとどまり、その適応範囲は狭い。現在、各種の血小板減少性疾患やガンの化学療法及び放射線療法や肝炎のインターフェロン治療に随伴した血小板減少症に対して、血小板を増加させる作用を持つ薬剤は皆無である。【００１０】
ＴＰＯが血小板減少症の治療薬として顕著な有効性を示さない原因としては、ＴＰＯが巨核球と同様に血小板にも存在するＴＰＯレセプター（Ｍｐｌ）を介して血小板を活性化し、血栓形成を誘発してしまうことや、ＴＰＯに対する自己抗体の形成、ＴＰＯの血小板増加作用が巨核球前駆細胞に対する巨核球系前駆細胞（ＣＦＵ−ＭＫ）活性、並びに巨核芽球から巨核球への成熟に対しての作用のみであり、成熟した巨核球からの胞体突起形成を介する血小板産生過程に対しては、それを著しく抑制してしまうことが知られている（非特許文献９）。このため、現在、ＴＰＯ単独、或いはＭｐｌアゴニストの化学合成及びペプチドリガンドのみでは、効率的に血小板を産生することは難しいと考えられている。【００１１】
このような状況から、血小板減少を伴う疾患の治療のためのＴＰＯ以外の新たな分子の探索・開発が求められている。とはいえ、これまでに巨核球分化において最終分化過程である胞体突起形成乃至血小板形成の分子生物学的検討がなされ、いくつかの機能性分子は同定されているものの、その機序の詳細につては未だ不明な点が多いのが現状である。【００１２】
例えば、ノックアウトマウスの実験結果より、ｓｍａｌｌ  Ｍａｆファミリーに属するＭａｆＧ、並びにＣＮＣファミリーに属するＮＦ−Ｅ２それぞれの欠損マウスでは、骨髄内巨核球には大きな変化が認められないが末梢での血小板数の減少が観察され（非特許文献１０〜１１）、ＭａｆＧ及びＮＦ−Ｅ２は胞体突起形成乃至血小板産生に重要な転写因子であることが報告されている。【００１３】
ＭａｆＧ及びＮＦ−Ｅ２はヘテロダイマーを形成し、標的遺伝子のＭａｆ認識部位（ＭＡＲＥ：ＴＧＣＴＧＡＣＴＣＡＧＣＡ）に結合し転写を制御している（非特許文献１２〜１３）。【００１４】
しかしながら、ＭａｆＧ及びＮＦ−Ｅ２の巨核球分化における主要標的遺伝子はいまだ同定されていない。また、内因性或いは外因性の巨核球胞体突起形成／血小板形成を促進する主要な因子は報告されていない。【００１５】
また、最近になり、ピーナッツ種皮の抽出成分自体に、骨髄細胞の増殖活性を高め、血小板産生を促進することが報告された（特許文献１）。しかしながら、その活性成分は同定されていない。【００１６】
【特許文献１】特許第３２１７２７８号公報
【非特許文献１】Ｍｏｄｅｒｎ  Ｐｈｙｓｉｃｉａｎ  ２３  １４６９  ２００３
【非特許文献２】Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３０１，１５３１，２００３
【非特許文献３】Ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ  ４１，１４９３  ２００１
【非特許文献４】Ｎａｔｕｒｅ  ３６９  ５３３  １９９４
【非特許文献５】Ｎａｔｕｒｅ  ３６９  ５６５  １９９４
【非特許文献６】Ｃｅｌｌ  ７７  １１１７  １９９４
【非特許文献７】ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ，３５３  ５７  １９９４
【非特許文献８】Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１１８  ２２９  １９９５
【非特許文献９】Ｅｘｐ  Ｈｅｍａｔｏｌ  ２５  １６９  １９９７
【非特許文献１０】Ｃｅｌｌ  ８１  ６９５  １９９５
【非特許文献１１】Ｇｅｎｅ＆Ｄｅｖ．１２  ２１６４  １９９８
【非特許文献１２】Ｎａｔｕｒｅ  ３６７  ５６８  １９９４
【非特許文献１３】Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  １４  １９０１  １９９７
【発明の開示】
【００１７】
本発明は、前記従来における諸問題を解決し、以下の目的を達成することを課題とする。即ち、本発明は、巨核球系細胞における胞体突起形成又は血小板形成を効果的に促進することのできる新規な血小板産生促進因子、該血小板産生促進因子を高濃度に含む抽出物乃至その処理物、及び該血小板産生促進因子を含む組成物、並びに、該血小板産生促進因子を利用した、血小板減少を伴う疾患を治療又は予防する方法、巨核球系細胞における胞体突起形成又は血小板形成を促進させる方法、及び巨核球系細胞における胞体突起形成又は血小板形成促進作用を評価する方法を提供することを目的とする。
【００１８】
本発明者らは、ヒトの各種血小板減少症病態機構、並びに幹細胞から巨核球分化及び血小板形成への分子機構を検討するために、ヒトＣＤ３４＋細胞から高純度で巨核球を分化誘導し、成熟した巨核球より、胞体突起形成、更に血小板形成に至る分化系を確立している（Ｂｒ．Ｊ．Ｈａｅｍａｔｏｌ．１２１  ３１５  ２００３）。そこで、本発明者らは、本アッセイ系を用いて、ピーナッツ（ラッカセイ；Ａｒａｃｈｉｓ ｈｙｐｏｇａｅａ）種皮より得られた抽出物に対して、胞体突起形成作用を指標に、血小板産生を促進する活性成分の同定を試みた。この活性成分は、一定の精製段階になると不安定な性状を示したため、通常の手法による同定は困難であったが、種々の創意工夫を行った結果、遂に、その活性成分を分離・精製し、更に構造決定することに成功した。さらに、この同定した化合物の合成及び化学誘導体の合成を行い、血小板形成促進作用を持つ新規合成化合物を発見した。ピーナッツ種皮から単離・同定した化合物は、他の植物、動物、微生物にも存在していた。本発明者らは、これらの知見から、単離・同定された化合物及び合成化合物を利用すれば、巨核球胞体突起形成／血小板形成に対して促進作用を有する食品、栄養補助食品、食品添加物、医薬品等の開発が可能であること、また、生体外においても、効率的に血小板を形成させることが可能であること、更に、この活性成分を対照として、種々の試料の巨核球胞体突起形成／血小板形成の促進作用を評価することが可能であることを見出し、本発明を完成するに至った。
【００１９】
本発明は、本発明者らによる前記知見に基づくものであり、前記課題を解決するための手段としては、以下の通りである。即ち、
＜１＞  植物、動物、及び微生物の少なくともいずれかの抽出物乃至その処理物であって、下記一般式（１）で示される化合物を、精製を行なっていない前記植物、動物、及び微生物の少なくともいずれかの抽出物における濃度よりも高濃度で含み、血小板形成促進活性を有することを特徴とする抽出物乃至その処理物である。
【化１】
2008078453.tif 000003
（式中、Ｘは酸素、イオウ、スルホニル基、又は置換基を有していてもよいイミノ基を示し、該置換基はアシル基、置換されていてもよいアミノ基、又は置換スルホニル基である。破線は二重結合の存在を示し、シスでもトランスでもよい。また環状構造の一部でもよい。ｎ及びｍはそれぞれメチレンの数で１〜１８の整数を示す。Ｒ１及びＲ２はそれぞれ酸素又はＨ２を示す。Ｒ３は水素、それぞれ置換基を有していてもよい低級アルキル基、アリール基、アラルキル基、又は薬学的に許容され得る塩を形成する陽イオンを示す。）
＜２＞  一般式（１）で示される化合物が、少なくとも、下記一般式（２）で示される化合物及び下記一般式（３）で示される化合物のいずれかである前記＜１＞に記載の抽出物乃至その処理物である。
【化２】
2008078453.tif 000004
（式中、Ｒは水素、薬学的に許容され得る塩を形成する陽イオン、ジヒドロキシプロピル基、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、グルコース、ガラクトース、又はラムノースを示す。）
【化３】
2008078453.tif 000005
（式中、Ｒは水素、薬学的に許容され得る塩を形成する陽イオン、ジヒドロキシプロピル基、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、グルコース、ガラクトース、又はラムノースを示す。）
＜３＞  一般式（１）で示される化合物が、少なくとも、下記化学式（１）から（４）で示される化合物のいずれかである前記＜１＞から＜２＞のいずれかに記載の抽出物乃至その処理物である。  
【化４】
2008078453.tif 000006
（化学式１の式中、２級ヒドロキシ基の絶対配置は、Ｒ体又はＳ体又はＲＳ体のいずれでもよい。）
【化５】
2008078453.tif 000007
（化学式２の式中、２級ヒドロキシ基の絶対配置は、Ｒ体又はＳ体又はＲＳ体のいずれでもよい。）
【化６】
2008078453.tif 000008
【化７】
2008078453.tif 000009
＜４＞  少なくとも化学式（１）から（４）で示される化合物のいずれかを０．００１質量％以上の濃度で含むか、又は、化学式（１）から（４）で示される化合物の合計を０．００４質量％以上の濃度で含む前記＜１＞から＜３＞のいずれかに記載の抽出物乃至その処理物である。
＜５＞  精製されたものである前記＜１＞から＜４＞のいずれかに記載の抽出物乃至その処理物である。
＜６＞  巨核球系細胞における胞体突起形成又は血小板形成の促進作用を有する組成物であって、前記＜１＞から＜５＞のいずれかに記載の抽出物乃至その処理物を含むことを特徴とする組成物である。
＜７＞  巨核球系細胞における胞体突起形成又は血小板形成の促進作用を有する組成物であって、一般式（１）で示される化合物を含むことを特徴とする組成物である。
＜８＞  巨核球系細胞における胞体突起形成又は血小板形成の促進作用を有する組成物であって、下記一般式（４）で示される化合物を含むことを特徴とする組成物である。
【化８】
2008078453.tif 000010
（式中、Ｒ４は
【化９】
2008078453.tif 000011
又は
【化１０】
2008078453.tif 000012
又は
【化１１】
2008078453.tif 000013
又は
【化１２】
2008078453.tif 000014
であり、ＸはＯ、ＮＲ６（Ｒ６は、Ｈ又は下記Ｒ５）、Ｓ、ＳＯ、又はＳＯ2であり、Ｒ５は１−４個のＯＨを有していてもよいＣ１からＣ６の直鎖状、分岐鎖状又は環状のアルキル基であり、Ｙは、ＯＨ又はＣ１からＣ２のアルコキシ基又はハロゲン原子である。）
＜９＞  Ｘ、Ｒ５、及びＹが、それぞれ下記である、前記＜８＞に記載の組成物である。
（ＸはＯ又はＮＲ６であり、Ｒ５は１から２個のＯＨで置換されたＣ２からＣ３のアルキル基であり、ＹはＯＨ又はＣ１からＣ２のアルコキシ基又はＦ、Ｃｌ又はＢｒである。）
＜１０＞  食品、栄養補助食品、食品添加物又は医薬品である、前記＜６＞から＜９＞のいずれかに記載の組成物である。
＜１１＞  一般式（４）で示される化合物（ただし、Ｘ＝Ｏの場合、Ｒ５はＯＨ又は１−グリセリル基ではない）である。
＜１２＞  Ｘ、Ｒ５、及びＹが、それぞれ下記である、前記＜１１＞に記載の化合物である。
（ＸはＯ又はＮＲ６であり、Ｒ５は１から２個のＯＨで置換されたＣ２からＣ３のアルキル基であり、ＹはＯＨ又はＣ１からＣ２のアルコキシ基又はＦ、Ｃｌ又はＢｒである。）
＜１３＞  下記化学式（５）から（１１）のいずれかで示されることを特徴とする化合物である。
【化１３】
2008078453.tif 000015
【化１４】
2008078453.tif 000016
【化１５】
2008078453.tif 000017
【化１６】
2008078453.tif 000018
【化１７】
2008078453.tif 000019
【化１８】
2008078453.tif 000020
【化１９】
2008078453.tif 000021
＜１４＞  前記＜６＞から＜１０＞のいずれかに記載の組成物を患者に投与することを特徴とする、血小板減少を伴う疾患を治療又は予防する方法である。
＜１５＞  前記＜１＞から＜５＞のいずれかに記載の抽出物乃至その処理物、或いは一般式（１）で示される化合物を巨核球系細胞に接触させることを特徴とする、巨核球系細胞における胞体突起形成又は血小板形成を促進させる方法である。
＜１６＞  一般式（１）で示される化合物の巨核球系細胞における胞体突起形成又は血小板形成の促進作用を指標として行うことを特徴とする、被検試料の巨核球系細胞における胞体突起形成又は血小板形成の促進作用を評価する方法である。
【００２０】
本発明によれば、前記従来における諸問題を解決し、前記目的を達成することができ、巨核球系細胞における胞体突起形成又は血小板形成を効果的に促進することのできる新規な血小板産生促進因子、該血小板産生促進因子を高濃度に含む抽出物乃至その処理物、及び該血小板産生促進因子を含む組成物、並びに、該血小板産生促進因子を利用した、血小板減少を伴う疾患を治療又は予防する方法、巨核球系細胞における胞体突起形成又は血小板形成を促進させる方法、及び巨核球系細胞における胞体突起形成又は血小板形成促進作用を評価する方法を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００２１】
【図１】図１は、実施例２で得られたピーナッツ種皮抽出物（図中、ＰＥＸＴ）の血小板様粒子（ＰＬＰ）形成に対する作用を示した図である。
【図２】図２は、実施例２で得られたピーナッツ種皮抽出物（図中、ＰＥＸＴ）の血小板様粒子（ＰＬＰ）形成に対する作用を示した図である。
【図３】図３は、実施例２で得られたピーナッツ種皮抽出物（図中、ＰＥＸＴ）のｐＭＡＲＥ−ルシフェラーゼ活性に対する作用を示した図である。
【図４】図４は、実施例２で得られたピーナッツ種皮抽出物（図中、ＰＥＸＴ）のヒトＣＤ３４＋細胞からの巨核球形成及び胞体突起形成に対する作用を示した図である。
【図５】図５は、化合物３［（９Ｚ，１１Ｅ）−１３−ｏｘｏ−ｏｃｔａｄｅｃａｄｉｅｎｏｉｃ  ａｃｉｄ］の血小板様粒子（ＰＬＰ）形成に対する作用を示した図である。
【図６】図６は、化合物１〔１−［（９Ｚ，１１Ｅ）−１３−ｏｘｏ−ｏｃｔａｄｅｃａｄｉｅｎｏｙｌ］−ｇｌｙｃｅｒｏｌ〕、化合物２〔１−［（１０Ｅ，１２Ｚ）−９−ｏｘｏ−ｏｃｔａｄｅｃａｄｉｅｎｏｙｌ］−ｇｌｙｃｅｒｏｌ〕、及び化合物４［（１０Ｅ，１２Ｚ）−９−Ｏｘｏ−ｏｃｔａｄｅｃａｄｉｅｎｏｉｃ  ａｃｉｄ］の血小板様粒子（ＰＬＰ）形成に対する作用を示した図である。
【図７】図７はピーナッツ種皮抽出物（ＰＥＸＴ）のマウス経口投与における血小板増加作用を示した図である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２２】
（抽出物乃至その処理物、化合物）
本発明は、下記一般式（１）で示される化合物を含む、植物、動物、及び微生物の少なくともいずれかの抽出物乃至その処理物を提供する。【００２３】
【化２０】
2008078453.tif 000022
【００２４】
＜一般式（１）で示される化合物＞
前記一般式（１）において、Ｘは酸素、イオウ、スルホニル基、又は置換基を有していてもよいイミノ基を示し、該置換基はアシル基、置換されていてもよいアミノ基、又は置換スルホニル基である。破線は二重結合の存在を示し、シスでもトランスでもよい。また環状構造の一部でもよい。ｎ及びｍはそれぞれメチレンの数で１〜１８の整数を示す。Ｒ１及びＲ２はそれぞれ酸素又はＨ２を示す。Ｒ３は水素、それぞれ置換基を有していてもよい低級アルキル基、アリール基、アラルキル基、又は薬学的に許容され得る塩を形成する陽イオンを示す。【００２５】
前記「低級アルキル」とは、一般に直鎖状、分枝状又は環状の炭素数１〜６のアルキルを意味し、例えば、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、シクロプロピル、ｎ−ブチオル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、シクロブチル、ｎ−ペンチル、イソペンチル、ネオペンチル、ｔｅｒｔ−ペンチル、シクロペンチル、ｎ−ヘキシル、イソヘキシル等が挙げられ、これらの低級アルキルは、ハロゲン、アミノ、ヒドロキシ、及びシアノよりなる群から選ばれた１〜３個の同一又は相異なる置換基で置換されていてもよい。ただし、前記ハロゲンとは、フッ素、塩素、臭素、及びヨウ素を意味する。【００２６】
前記「アリ−ル」とは、炭素原子６〜１２の芳香基を意味し、例えば、フェニル、トリル、キシリル、ビフェニル、ナフチル等が挙げられ、前記アリールは、低級アルキル、ハロゲン、アミン、ヒドロキシ、シアノ等から選ばれた１〜３個までの同一又は相異なる置換基で置換されていてもよい。【００２７】
前記「アラルキル」とは、炭素原子数６〜１２の芳香族系アリールで置換されている炭素原子数１〜６の低級アルキルを意味し、当該アリールは前記アリールの定義に従う。前記アラルキルの具体例としては、ベンジル、フェネチル、フェニルプロピル等が挙げられ、前記アラルキルは、低級アルキル、ハロゲン、アミン、ヒドロキシ、シアノ等から選ばれた１〜３個までの同一又は相異なる置換基で置換されていてもよい。【００２８】
前記「薬学的に許容され得る塩を形成する陽イオン」とは、アルカリ金属若しくはアルカリ土金属陽イオン、又はアンモニウムイオンを意味する。具体的には、前記アルカリ金属としては、カリウム、セシウム等が挙げられ、前記アルカリ土金属としては、マグネシウム、カルシウム等が挙げられる。
前記抽出物は、精製を行なっていない前記植物、動物、及び微生物の少なくともいずれかの抽出物における濃度よりも、上記一般式（１）で示される化合物を高濃度で含むことを特徴とする。ここで「精製を行なっていない前記植物、動物、及び微生物の少なくともいずれかの抽出物」とは、植物、動物、又は微生物から、通常の抽出操作（例えば、植物、動物、又は微生物を粉砕又は破砕して、水、エタノール、メタノール、アセトン又はこれらの混合物と、室温又は冷却或いは加熱下で接触させ、ろ過後、ろ液の溶媒を溜去する方法）で有効成分を抽出した段階のものであって、精製操作により有効成分が濃縮されていないものを意味する。【００２９】
前記一般式（１）で示される化合物としては、好ましくは、下記一般式（２）又は下記一般式（３）で示される化合物である。【００３０】
【化２１】
2008078453.tif 000023
【００３１】
【化２２】
2008078453.tif 000024
【００３２】
前記一般式（２）及び前記一般式（３）において、Ｒは水素、薬学的に許容され得る塩を形成する陽イオン、ジヒドロキシプロピル基、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、グルコース、ガラクトース、又はラムノースを示す。【００３３】
また、本発明の抽出物又はその処理物における、前記一般式（１）で示される化合物としては、より好ましくは、下記化学式（１）から（４）のいずれかで示される化合物である（化学式１及び化学式２の式中、２級アルコールの絶対配置はＲ体でもＳ体でもＲＳ体のいずれでもよい）。【００３４】
【化２３】
2008078453.tif 000025
【００３５】
【化２４】
2008078453.tif 000026
【００３６】
【化２５】
2008078453.tif 000027
【００３７】
【化２６】
2008078453.tif 000028
【００３８】
前記抽出物乃至その処理物においては、前記一般式（１）で示される化合物が、１種単独で含まれていてもよいし、２種以上含まれていてもよい。中でも、前記抽出物は、前記化学式（１）から（４）で示される化合物のうち少なくとも１種以上を含むことが好ましく、前記化学式（１）から（４）で示される化合物の全てを含むことがより好ましい。【００３９】
＜動物、植物、微生物＞
前記動物、植物、微生物の種類としては、前記一般式（１）で示される化合物を得ることが可能なものであれば特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、ピーナッツ（ラッカセイ；Ａｒａｃｈｉｓ ｈｙｐｏｇａｅａ）などが挙げられる。また、前記動物、植物、微生物としては、その全体を使用してもよいし、一部を使用してもよく、例えば、前記ピーナッツを用いる場合には、その種皮を特に好適に使用することができる。また、前記動物、植物、微生物は、新鮮なもの又は処理を加えたもののいずれであってもよいが、中でも、乾燥させたもの又は焙煎させたものが望ましい。また、前記動物、植物、微生物は、１種単独で使用してもよいし、２種以上を併用してもよい。【００４０】
＜製造＞
前記抽出物乃至その処理物は、例えば、前記動物、植物、及び微生物の少なくともいずれかを、水、エタノール、又は含水エタノール、或いは有機溶剤で抽出、濃縮して得られる抽出物、及び、ここで得られる抽出物をアクリル系、スチレン系、メタクリル系、又は芳香族系合成吸着剤に吸着させ、１０〜９５％濃度までの含水エタノールで溶出されてくる画分を濃縮して得られる抽出物、及び、その抽出物を乾燥して得られる抽出物等でありうる。また、前記抽出物乃至その処理物は、前記のようにして得られた各抽出物等に、任意の処理を加えて得られる処理物等でありうる。また、前記抽出物乃至その処理物は、前記動物、植物、及び微生物の少なくともいずれかの抽出物に、合成された前記化合物（前記一般式（１）で示される化合物）が添加されたものであってもよい。また、より具体的には、前記抽出物乃至その処理物は、後述する実施例に示す方法等により製造することができる。【００４１】
＜濃度＞
前記抽出物乃至その処理物は、精製を行なっていない植物、動物、及び微生物の抽出物における濃度よりも、上記一般式（１）で示される化合物を高濃度で含むことを特徴とし、このため優れた巨核球胞体突起形成／血小板形成促進作用を有しうる。前記抽出物乃至その処理物においては、少なくとも前記化学式（１）から（４）で示される化合物のいずれかの濃度が、通常、０．００１質量％以上（例えば、０．００２質量％以上、０．００５質量％以上）であり、より好ましくは０．０１質量％以上（例えば、０．０２質量％以上、０．０５質量％以上）であり、更に好ましくは０．１質量％以上（例えば、０．２質量％以上、０．５質量％以上、１質量％以上）である。また、前記抽出物乃至その処理物における前記化学式（１）から（４）の化合物の合計であれば、通常、０．００４質量％以上（例えば、０．０１質量％以上、０．０１５質量％以上、０．０３質量％以上）であり、より好ましくは０．０４質量％以上（例えば、０．０５質量％以上、０．１質量％以上、０．３質量％以上）であり、更に好ましくは０．４質量％以上である。
前記抽出物乃至その処理物中の前記化合物の含量は、例えば高性能液体クロマトグラフィーで分析し、分光光学的に２７５ｎｍ〜２８５ｎｍの範囲で測定することができる。【００４２】
（組成物）
本発明は更に、前記した本発明の抽出物乃至その処理物を含み、巨核球系細胞における胞体突起形成又は血小板形成（巨核球胞体突起形成／血小板形成）の促進作用を有する組成物を提供する。また、本発明は更に、他の態様において、上記一般式（１）で示される化合物を含み、巨核球系細胞における胞体突起形成又は血小板形成の促進作用を有する組成物を提供する。
本発明の組成物における、上記一般式（１）で示される化合物としては、下記一般式（４）で示される化合物であることが好ましい。【００４３】
【化２７】
2008078453.tif 000029
【００４４】
（式中、Ｒ４は
【化２８】
2008078453.tif 000030
又は
【化２９】
2008078453.tif 000031
又は
【化３０】
2008078453.tif 000032
又は
【化３１】
2008078453.tif 000033
であり、ＸはＯ、ＮＲ６（Ｒ６は、Ｈ又は下記Ｒ５）、Ｓ、ＳＯ、又はＳＯ2であり、Ｒ５は１−４個のＯＨを有していてもよいＣ１からＣ６の直鎖状、分岐鎖状又は環状のアルキル基であり、Ｙは、ＯＨ又はＣ１からＣ２のアルコキシ基又はハロゲン原子である。）
Ｒ５で示される好ましいアルキル基としては、例えば、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、シクロプロピル、ブチル、イソブチル、ｓ−ブチル、ｔ−ブチル、シクロブチル、ペンチル、イソペンチル、ネオペンチル、シクロペンチル、ヘキシル、イソヘキシル、シクロヘキシル、２−ヒドロキシエチル、３−ヒドロキシプロピル、１，３−ジヒドロキシプロパンー２−イル、２，３−ジヒドロキシプロピル、２，４−ジヒドロキシブチル、２，５−ジヒドロキシペンチル、２，６−ジヒドロキシヘキシル、又はペンタエリスリトリルが挙げられる。【００４５】
本発明の組成物において、より好ましい化合物は、一般式（４）の式中において、ＸがＯ又はＮＲ６であり、Ｒ５が１から２個のＯＨで置換されたＣ２からＣ３のアルキル基であり、ＹがＯＨ又はＣ１からＣ２のアルコキシ基又はＦ、Ｃｌ又はＢｒである化合物である。
特に好ましい具体的な化合物としては、上記化学式（１）から（４）の化合物及び下記化学式（５）から（１１）に記載の化合物であり、巨核球系細胞における胞体突起形成／血小板形成促進作用の高さの点で、化学式（６）の化合物が最も好ましい。【００４６】
【化３２】
2008078453.tif 000034
【００４７】
【化３３】
2008078453.tif 000035
【００４８】
【化３４】
2008078453.tif 000036
【００４９】
【化３５】
2008078453.tif 000037
【００５０】
【化３６】
2008078453.tif 000038
【００５１】
【化３７】
2008078453.tif 000039
【００５２】
【化３８】
2008078453.tif 000040
【００５３】
（新規化合物）
本発明は、一般式（４）で示される化合物の中に含まれる新規化合物を提供する。本発明の新規化合物は、より詳しくは、上記一般式（４）で示される化合物において、「Ｘ＝Ｏの場合において、Ｒ５がＯＨ又は１−グリセリル基である化合物」を除く化合物である。本発明の新規化合物の好ましい具体例としては、上記化学式（５）から（１１）で示される化合物が挙げられ、これらは、巨核球系細胞における胞体突起形成／血小板形成促進作用に優れる点で、有利である。化学式（６）で示される化合物は、当該作用が高い点で、最も好ましい。【００５４】
＜食品、栄養補助食品、食品添加物、医薬品＞
前記組成物は、例えば、食品、栄養補助食品、食品添加物、又は医薬品でありうる。【００５５】
−医薬品−
例えば、前記組成物が医薬品組成物である場合は、種々の剤形とすることができる。前記医薬品組成物をヒトに投与するときの投与方法は特に限定されるものではないが、経口投与が好ましい。例えば、経口投与のためには、前記医薬品組成物の剤形を錠剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤、丸剤、液剤、乳剤、懸濁剤、溶液剤、酒精剤、シロップ剤、エキス剤、エリキシル剤等とすることができるが、これらに限定されない。また、前記医薬品組成物には薬剤的に許容できる種々の担体を加えることができる。例えば、前記担体としては、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、着香剤、着色剤、甘味剤、矯味剤、溶解補助剤、懸濁化剤、乳化剤、コーティング剤、ビタミンＣ、抗酸化剤等が挙げられるが、これらに限定されない。【００５６】
前記医薬品組成物は、巨核球胞体突起形成／血小板形成促進作用を有するため、例えば、血小板減少症を含む、各種の血小板減少を伴う疾患の予防又は治療に好適に用いることができる。出血性疾患は、その出血傾向をもたらす成因によって分類されるが、血小板減少症は、血小板の量的異常を示し、一次止血栓を十分に形成するのに必要な血小板数を欠いているため、血小板減少性紫斑病の病態を呈する。循環血中の血小板数の減少機序としては、血小板産生機構の欠損、血小板寿命の短縮、血小板分布異常及び頻回の輸血に伴う希釈等が挙げられる。なお、本発明における「血小板減少症」とは、例えば、世界保健機構（Ｗｏｒｌｄ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ）が発表している「国際疾病分類・第１０版」（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ，Ｉｎｊｕｒｉｅｓ  ａｎｄ  Ｃａｕｓｅｓ  ｏｆ  Ｄｅａｔｈ．１０ｔｈ  ｖｅｒｓｉｏｎ；ＩＣＤ−１０）によって「血液及び造血器の疾患並びに免疫機構の障害（Ｄ５０−Ｄ８９）」中の「凝固障害、紫斑病及びその他の出血性病態（Ｄ６５−Ｄ６９）」に分類される疾患をいうものとする。前記医薬品組成物は、その巨核球胞体突起形成／血小板形成促進作用により、血小板減少症を含む血小板の減少を伴う疾患において、血小板減少の症状を軽減、改善若しくは予防することができる。前記医薬品組成物は、例えば、肝炎のインターフェロンによる治療又は癌の化学療法・放射線療法に伴う副作用として発症する血小板の減少に対しても好適である。患者における前記医薬品組成物の効果は、例えば、患者本人の改善感、医師の診断による血小板数の検査などにより評価することができる。【００５７】
本発明の医薬品組成物のヒトへの投与量は、例えば、後述する実施例で得られるようなピーナッツ種皮抽出物の形態であれば、一般的には、成人１日用量として１ｍｇ〜１５，０００ｍｇ、好ましくは１ｍｇ〜１，０００ｍｇである。また、合成若しくは精製された化合物の形態であれば、一般式（１）で示される化合物の少なくともいずれかとして、一般的には、成人１日用量として０．００１ｍｇ〜２００ｍｇ使用することができる。前記投与量は、個別的に、投与されるヒトの年齢、体重、症状、投与経路、投与期間、治療経過等に応じて変化させることもできる。また、１日あたりの量を数回に分けて投与することもできる。また、前記医薬品組成物を、他の血小板増加作用薬や治療法と組み合わせて投与してもよい。【００５８】
−食品、栄養補助食品、食品添加物−
前記組成物は、食品、栄養補助食品、又は食品添加物の形態とすることもできる。前記食品、栄養補助食品、食品添加物の種類としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。例えば、後述する実施例で得られるようなピーナッツ種皮抽出物や前記一般式（１）で示される化合物を各種原材料に適宜配合することにより、麺類、パン、キャンディー、ゼリー、クッキー、スープ、クリーム、バター、健康飲料、錠果、カプセル状等の形態とすることができる。【００５９】
このような食品、栄養補助食品、食品添加物には、前記動物、植物、微生物由来の抽出物、例えばピーナッツ種皮抽出物等の他に、例えば、鉄、カルシウム等の無機成分、種々のビタミン類、オリゴ糖、キトサン等の食物繊維、大豆抽出物等の植物成分、アミノ酸、タンパク質、レシチン等の脂質、ショ糖、乳糖等の糖類などを加えることができる。【００６０】
また、前記ピーナッツ種皮抽出物に、例えば、甘草抽出物、ソヤサポニン類を含むダイズ抽出物、葛花抽出物、羅布麻抽出物、高麗ニンジン抽出物、イチョウ葉抽出物、ツボクサ抽出物、トチュウ抽出物、エゾウコギ抽出物、オウギ抽出物、ガラナ抽出物、マカ抽出物、タンポポ抽出物、アーティチョーク抽出物、ゲンチアナ抽出物、シサンドラ抽出物、ブラックコホシュ抽出物、西洋カボチャ抽出物、大豆抽出物、当帰抽出物、西洋ニンジンボク抽出物、ザクロ抽出物、ヤムイモ抽出物、などを組み合わせることにより、血小板減少症を含む各種の血小板減少を伴う疾患の改善効果を有する食品、栄養補助食品、食品添加物、医薬品などの組成物が得られる。【００６１】
（各種方法）
前記した本発明の抽出物乃至その処理物、或いは前記一般式（１）で示される化合物（例えば、前記化学式（１）から（１１）で示される化合物）は、その巨核球系細胞の胞体突起形成又は血小板形成の促進作用を利用して、上記した利用例（食品、栄養補助食品、食品添加物、医薬品等）以外にも種々の応用が可能である。例えば、血小板再生医療等の目的のために、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ或いはｅｘ  ｖｉｖｏで培養された巨核球系細胞の胞体突起形成又は血小板形成を促進させるために利用することができる。また、前記一般式（１）で示される化合物（例えば、化学式（１）から（１１）で示される化合物）を対照として、各種試料における、ｉｎ  ｖｉｔｒｏやｉｎ  ｖｉｖｏ（例えば、ヒトや、マウス、ラットなどの非ヒト動物）での巨核球系細胞の胞体突起形成又は血小板形成の促進作用を評価することも可能である。
従って、本発明は、上記抽出物乃至その処理物、或いは前記一般式（１）で示される化合物を、巨核球系細胞に接触させることを特徴とする、巨核球系細胞における胞体突起形成又は血小板形成を促進させる方法、並びに、一般式（１）で示される化合物の巨核球系細胞における胞体突起形成又は血小板形成の促進作用を指標として行うことを特徴とする、被検試料の巨核球系細胞における胞体突起形成又は血小板形成の促進作用を評価する方法、をも提供するものである。
【実施例】
【００６２】
本発明を以下の実施例で更に詳しく説明するが、本発明はこれに限定されない。種々の変更、修飾が当業者には可能であり、これらの変更、修飾も本発明に含まれる。なお、実施例中、化合物１〜１１は、前記化学式（１）〜（１１）で示される化合物にそれぞれ対応する。【００６３】
巨核球から血小板への分化促進活性物質の探索を、以下の方法で行った。まず、２種類の全く性質の異なる分離条件でピーナッツ種皮エキスの分画を行った。一つはＳｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ−２０を用いて５０％から１００％ＭｅＯＨで溶出して分画を行い、もう一つはＹＭＣ−Ｐａｃｋ  ＯＤＳ−Ａを用いて５％から９０％ＭｅＯＨで溶出して分画を行った。次いで、この２つの分離条件で得た分画のうち、巨核球から血小板への分化促進活性を示す分画をそれぞれ得た。これらの２つの分離条件の各活性分画に共通に存在し、他の活性の示さない分画には存在しない物質が活性物質である可能性が高いため、そのような物質を見出すことにした。共通する物質の探索にはＬＣＭＳ及びＬＣＭＳ／ＭＳを用いた。
このようにして選定した活性物質の候補化合物につき分離精製を試みたが、ある精製段階になると、この活性物質の候補化合物は非常に不安定な性状を示した。このため通常の方法によりこの活性物質の候補化合物を同定することは困難であると考えられた。そこで、次に、この活性物質の候補化合物のＬＣＭＳ及びＬＣＭＳ／ＭＳを精査して、共通して現れるピークの、ＭＳスペクトラム及びＭＳ／ＭＳスペクトラムの解析を行った。この解析結果から、この活性物質の候補化合物に共通して構成されると考えられる部分構造を示すマススペクトルのピークを特定することができたため、そのピークを、元のピーナッツ種皮エキスから見出した。このピークをもとに、この活性物質の候補化合物を下記の各方法で単離・精製し、その構造を決定した。【００６４】
（実施例１：化合物３［（９Ｚ，１１Ｅ）−１３−Ｏｘｏ−ｏｃｔａｄｅｃａｄｉｅｎｏｉｃ  ａｃｉｄ］及び化合物４［（１０Ｅ，１２Ｚ）−９−ｏｘｏ−ｏｃｔａｄｅｃａｄｉｅｎｏｉｃ  ａｃｉｄ］の単離）
２５０ｋｇのピーナッツ種皮に含水エタノール３５００Ｌを加え、ろ過し、抽出液を得た。抽出液を６０℃にて減圧濃縮し、約１／３０容量まで濃縮後、噴霧乾燥を行い、固形物としてピーナッツ種皮エキス４０ｋｇを得た。
ピーナッツ種皮エキス４００ｇを３０％エタノール５００ｍＬに溶解して、酢酸エチル９００ｍＬを加えた。続いて水１００ｍＬとｎ−ヘキサン３００ｍＬを加えて室温で３０分間攪拌し、１次抽出を行った。上層の有機層を取り出した後、酢酸エチル２００ｍＬとｎ−ヘキサン２００ｍＬを加えて２次抽出を行った。
１次抽出液と２次抽出液を合わせて２００ｇのシリカゲルを用いてクロマトグラフィーを行った。最終的に酢酸エチル／ｎ−ヘキサン１：１の混合溶液で溶出を行い、溶出物から溶媒を瑠去し固形物として８．８３ｇを得た。
更にこの固形物を２００ｇのシリカゲルを用いてクロマトグラフィーにより精製し、酢酸エチル／ｎ−ヘキサン（１：２）溶出部として２７４．９ｍｇを得た。
更に酢酸エチル／ｎ−へキサン（１：１）の混合溶液の溶出部１．０ｇを、数回に分けてＨＰＬＣリサイクルシステムを用いて精製した。使用したカラムはＹＭＣ−Ｐａｃｋ  Ｃ１８  ２０  ｉ．ｄ．ｘ１５０ｍｍを用いて、検出波長２７５ｎｍ、移動層として０．００１％トリフルオロ酢酸を含む７０％アセトニトリル、流速１５ｍＬ／ｍｉｎで各ピークが完全に分離されるまでリサイクルを行った。
その結果、化合物３［（９Ｚ，１１Ｅ）−１３−ｏｘｏ−ｏｃｔａｄｅｃａｄｉｅｎｏｉｃ  ａｃｉｄ］の白色粉末４１．０ｍｇ及び化合物４［（１０Ｅ，１２Ｚ）−９−ｏｘｏ−ｏｃｔａｄｅｃａｄｉｅｎｏｉｃ  ａｃｉｄ］の白色粉末６９．０ｍｇを得た。【００６５】
化合物３［（９Ｚ，１１Ｅ）−１３−Ｏｘｏ−ｏｃｔａｄｅｃａｄｉｅｎｏｉｃ  ａｃｉｄ］は各種スペクトルデータが文献値（Ｇ．Ｉａｃａｚｉｏら，Ｃｈｅｍ．Ｐｈｙｓ．Ｌｉｐｉｄｓ，１３８（２００３）１１５−１２１、Ｃ．Ｄｕｆｏｕｒら，Ｃｈｅｍ．Ｐｈｙｓ．Ｌｉｐｉｄｓ，１３８（２００５）６０−６８）と一致したこと、及び、別途合成したものとＬＣ／ＭＳ、ＮＭＲ（１Ｈ−、及び１３Ｃ−ＮＭＲ）、ＥＩ−ＭＳ、ＵＶが一致したことにより同定した。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）、σ：０．９１（ｔ，Ｊ＝６．９，３Ｈ），１．３３（ｍ，１０Ｈ），１．４３（ｍ，２Ｈ），１．６３（ｍ，２Ｈ），２．３（ｄｔ，Ｊ＝６．５８，７．５２Ｈｚ，２Ｈ），２．３５（ｔ，Ｊ＝７．４６Ｈｚ，２Ｈ），２．５５（ｔ，Ｊ＝７．３５Ｈｚ，２Ｈ），５．９１（ｄｔ，Ｊ＝７．８，１０．７Ｈｚ，１Ｈ），６．１０（ｑ，Ｊ＝１０．９３，１１．２０Ｈｚ，１Ｈ），６．１７（ｄ，Ｊ＝１５．１Ｈｚ，１Ｈ），７．５０（ｄｄｄ，Ｊ＝０．５，１１．６０，１５．１１Ｈｚ，１Ｈ），１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，１００ＭＨｚ），σ：１４．２２，２２．７０，２４．４８，２４．８１，２８．５６，２９．０８，２９．２６，２９．２６，２９．２８，３１．６０，３４．１４，４１．２０，１２７．１１，１２９．５３，１３７．３６，１４２．９８，１７９．７２，２０１．３５，ＥＩ−ＭＳ（ｐｏｓｉｔｉｖｅ  ｍｏｄｅ）ｍ／ｚ（％）：６７（３３），８１（７９），９５（９２），１５１（１００），１６６（９７），２２３（６４），２７６（８），２９４（２７）、ＥＳＩ−ＭＳ（ｐｏｓｉｔｉｖｅ  ｍｏｄｅ）：ｍ／ｚ＝２９５．３［Ｍ＋Ｈ］＋、ＵＶ（０．１％ＨＣＯＯＨ含有６０％アセトニトリル）：２７８．７ｎｍ。【００６６】
化合物４［（１０Ｅ，１２Ｚ）−９−Ｏｘｏ−ｏｃｔａｄｅｃａｄｉｅｎｏｉｃ  ａｃｉｄ］は各種スペクトルデータが文献値（Ｇ．Ｉａｃａｚｉｏら，Ｃｈｅｍ．Ｐｈｙｓ．Ｌｉｐｉｄｓ，１３８（２００３）１１５−１２１、Ｃ．Ｄｕｆｏｕｒら，Ｃｈｅｍ．Ｐｈｙｓ．Ｌｉｐｉｄｓ，１３８（２００５）６０−６８）と一致したこと、及び、別途合成したものとＬＣ／ＭＳ、ＮＭＲ（１Ｈ−、及び１３Ｃ−ＮＭＲ）、ＥＩ−ＭＳ、ＵＶが一致したことにより同定した。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）、σ：０．９１（ｔ，Ｊ＝６．９，３Ｈ），１．３３（ｍ，１０Ｈ），１．４３（ｍ，２Ｈ），１．６３（ｍ，２Ｈ），２．３（ｄｔ，Ｊ＝６．５８，７．５２Ｈｚ，２Ｈ），２．３５（ｔ，Ｊ＝７．４６Ｈｚ，２Ｈ），２．５５（ｔ，Ｊ＝７．３５Ｈｚ，２Ｈ），５．９１（ｄｔ，Ｊ＝７．８，１０．７Ｈｚ，１Ｈ），６．１０（ｑ，Ｊ＝１０．９３，１１．２０Ｈｚ，１Ｈ），６．１７（ｄ，Ｊ＝１５．１Ｈｚ，１Ｈ），７．５０（ｄｄｄ，Ｊ＝０．５，１１．６０，１５．１１Ｈｚ，１Ｈ），１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，１００ＭＨｚ），σ：１４．２２，２２．７０，２４．４８，２４．８１，２８．５６，２９．０８，２９．２６，２９．２６，２９．２８，３１．６０，３４．１４，４１．２０，１２７．１１，１２９．５３，１３７．３６，１４２．９８，１７９．７２，２０１．３５，ＥＩ−ＭＳ（ｐｏｓｉｔｉｖｅ  ｍｏｄｅ）ｍ／ｚ（％）：６７（３３），８１（７９），９５（９２），１５１（１００），１６６（９７），２２３（６４），２７６（８），２９４（２７）、ＥＳＩ−ＭＳ（ｐｏｓｉｔｉｖｅ  ｍｏｄｅ）：ｍ／ｚ＝２９５．３［Ｍ＋Ｈ］＋、ＵＶ（０．１％ＨＣＯＯＨ含有６０％アセトニトリル）：２７８．７ｎｍ。【００６７】
（実施例２：化合物１〜４を高濃度で含むピーナッツ種皮抽出物の製造）
実施例１で得られたピーナッツ種皮エキス１．０ｇを、２５％エタノール１００ｍＬに溶解し、合成吸着樹脂ＸＡＤ−７（ローム・アンド・ハース社製）２０ｍＬに通液させ、有効成分を吸着させた後、水２０ｍＬを流し糖質などの水溶性物質を除去した。その後、８５％エタノール４０ｍＬで脱離し有効成分を含む画分を集め、６０℃にて減圧濃縮し、約１／１０容量まで濃縮後、凍結乾燥を行い、ピーナッツ種皮抽出物を固形物として０．５６ｇ得た。【００６８】
得られた抽出物中の、化合物１〜４の含量の合計を、ウォーターズ社製高性能液体クロマトグラフィーマルチソルベント送液システム６００Ｅ、及びウォーターズ社製２９９６ＰＤＡ検出器を用いて、分析カラムとしてＹＭＣ−Ｐａｃｋ  Ｐｒｏ  Ｃ１８、４．６  ｉ．ｄ．ｘ１５０ｍｍ、及び、検出波長２７５ｎｍ及びＥＳＩ−ＭＳ  ＳＩＲ（Ｓｅｌｅｃｔｅｄ  Ｉｏｎ  Ｒｅｃｏｒｄｉｎｇ）を用いてｍ／ｚ＝２９５を指標とし、移動層０．１％ギ酸と５０％アセトニトリル、流速１．０ｍＬ／ｍｉｎの条件で定量した。その結果、化合物１が０．００１質量％、化合物２が０．００２質量％、化合物３が０．０１質量％、化合物４が０．０２質量％であり、これら化合物の含量の合計は０．０３質量％であった。【００６９】
（実施例２−２：化合物１〜４を高濃度で含むピーナッツ種皮抽出物の製造２）
９．３４ｋｇのピーナッツ種皮に含水エタノール１８４Ｌを加え、室温で２時間攪拌後ろ過し、抽出液を得た。抽出液を６０℃にて１６Ｌまで減圧濃縮後、水１８Ｌ及び８５％エタノール４６Ｌを加えて２５％エタノール濃度にし、ＸＡＤ７樹脂３２Ｌに通液した。ＸＡＤ７樹脂は８５％エタノール６４Ｌを通液して吸着物を溶離させた。溶離液は６０℃にて減圧濃縮を行い、約４Ｌまで濃縮した。濃縮液を噴霧乾燥し、固形物としてピーナッツ種皮エキス９５０ｇを得た。【００７０】
（実施例２−３：化合物１をより高濃度に含むピーナッツ種皮抽出物の製造）
ピーナッツ種皮（１００ｇ）に水（２Ｌ）を加え室温で１０時間攪拌した後、水をろ過し、残渣に７５％エタノール（１．６Ｌ）を加え室温で１０時間攪拌し、ろ過してろ液を得た。ろ過残渣に５０％エタノール（１．６Ｌ）を加え室温で１０時間攪拌し、ろ過した。ろ液を合わせて減圧下で濃縮乾固し、乾燥エキス５．６ｇを得た。このエキス（１００．６ｍｇ）を５０％エタノール（１５ｍＬ）に溶解し、合成吸着樹脂ＸＡＤ−７（ローム・アンド・ハース社製）（２０ｍＬ）に吸着し、水（２０ｍＬ）で洗い、その後８５％エタノール（４０ｍＬ）で溶出し、減圧下で濃縮乾燥し、濃縮エキス（４２ｍｇ）を得た。表１に、得られた濃縮エキス中の化合物１の含量を示し、また、実施例１で得たエキスと、実施例２−３で得られたエキスの血小板様粒子形成の促進作用を比較し示した。【００７１】
【表１】
2008078453.tif 000041
【００７２】
（実施例３：化合物３［（９Ｚ，１１Ｅ）−１３−Ｏｘｏ−ｏｃｔａｄｅｃａｄｉｅｎｏｉｃ  ａｃｉｄ］の合成）
文献（Ｄ．Ｍａｒｔｉｎｉら，Ｂｉｏｃａｔａｌｙｓｉｓ，１１（１９９４）４７−６３）に記述されている方法に従って、ｌｉｎｏｌｅｉｃ  ａｃｉｄ  １．０２ｇをホウ酸緩衝液（ｐＨ  １１）３０ｍＬに加えて純酸素気流下、温度を５℃に保ちながらＳｏｙ−ｂｅａｎ  ｌｉｐｏｘｙｇｅｎａｓｅ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社製）１４０ｍｇを加えて激しく撹拌する。３時間反応後、氷水で冷やしながら３０ｍＬのエタノールと水２０ｍＬを加える。この溶液に１．４ｇのＮａＢＨ４を撹拌しながら序々に加える。２時間反応後、反応溶液に酢酸エチル１０ｍＬを加える。氷水で冷やし、撹拌しながら注意深く２Ｎ−ＨＣｌ水溶液を序々に加えて反応溶液をｐＨ３とする。反応溶液を分液ロートに移し、酢酸エチルを用いて２回抽出する。酢酸エチル層はＮａ２ＳＯ４を用いて乾燥、ろ過する。ろ液にＰｈ３Ｐ  ２３０ｍｇを加えて０℃で一晩放置する。４０℃にて減圧濃縮し、約１／１０容量まで濃縮後に１００ｇのシリカゲルを用いてクロマトグラフィーを行う。最終的にｎ−ヘキサン／酢酸エチル（２：１）の混合溶液で溶出された（９Ｚ，１１Ｅ）−１３−ｈｙｄｒｏｘｙ−ｏｃｔａｄｅｃａｄｉｅｎｏｉｃ  ａｃｉｄ  ７２１ｍｇを得た。続いて（９Ｚ，１１Ｅ）−１３−ｈｙｄｒｏｘｙ−ｏｃｔａｄｅｃａｄｉｅｎｏｉｃ  ａｃｉｄ  ９９．０ｍｇをジクロロメタン１ｍＬに溶解、氷冷下Ｄｅｓｓ−Ｍａｒｔｉｎ  ｐｅｒｉｏｄｉｎａｎｅ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社製）２０６ｍｇを加えて１０分間撹拌する。この反応溶液にｎ−ヘキサン／酢酸エチル（２：１）混合溶液２ｍＬを加えてシリカゲル６０ｇを用いてクロマトグラフィーを行い、化合物３［（９Ｚ，１１Ｅ）−１３−ｏｘｏ−ｏｃｔａｄｅｃａｄｉｅｎｏｉｃ  ａｃｉｄ］白色粉末８５．４ｍｇを得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）σ：０．９（ｔ，Ｊ＝７．１，３Ｈ），１．３３（ｍ，１０Ｈ），１．４２（ｍ，２Ｈ），１．６３（ｍ，２Ｈ），２．３（ｄｔ，Ｊ＝６．５８，７．６９Ｈｚ，２Ｈ），２．３５（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，２Ｈ），２．５５（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，２Ｈ），５．９（ｄｔ，Ｊ＝７．８２，１０．６９Ｈｚ，１Ｈ），６．１２（ｑ，Ｊ＝１０．９３，１１．２０Ｈｚ，１Ｈ），６．１８（ｄ，Ｊ＝１５．３２Ｈｚ，１Ｈ），７．４９（ｄｄｄ，Ｊ＝０．７，１１．５１，１５．３１Ｈｚ，１Ｈ）．１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，１００ＭＨｚ）σ：１４．１５，２２．７０，２３．９６，２４．８２，２８．４８，２９．０４，２９．１２，２９．１２，２９．３８，３１．７１，３４．１１，４１．４１，１２７．２０，１２９．５５，１３７．２５，１４２．７４，１７９．４９，２０１．５６．ＥＩ−ＭＳｍ／ｚ（％）：６７（４９），８１（１００），９５（７１），１５１（７８），１７７（２４），２２３（４３），２３８（２１），２７６（１０），２９４（２９）。
ＥＳＩ−ＭＳ（ｐｏｓｉｔｉｖｅ  ｍｏｄｅ，カラム：ＹＭＣ−Ｐａｃｋ  Ｐｒｏ  Ｃ１８，４．６  ｉ．ｄ．ｘ１５０ｍｍ，移動層０．１％ＨＣＯＯＨ含有６０％アセトニトリル，１ｍＬ／ｍｉｎ）：保持時間１２ｍｉｎ，ｍ／ｚ＝２９５．３［Ｍ＋Ｈ］＋．ＥＳＩ−ＭＳ／ＭＳ（ｎｅｇａｔｉｖｅ  ｍｏｄｅ）ｍ／ｚ（％）：２９３（２６），２４９（５），１９５（１０），１７９（３），１３９（１０），１１３（１００）．ＵＶλｍａｘ（０．１％ＨＣＯＯＨ含有６０％アセトニトリル）：２７９．７ｎｍ。
（Ｄ．Ｍａｒｔｉｎｉら，Ｂｉｏｃａｔａｌｙｓｉｓ，１１（１９９４）４７−６３（Ｓｙｎ）、Ｇ．Ｉａｃａｚｉｏら，Ｃｈｅｍ．Ｐｈｙｓ．Ｌｉｐｉｄｓ，１３８（２００３）１１５−１２１（Ｓｙｎ，ＮＭＲ，ＵＶ）、及び、Ｃ．Ｄｕｆｏｕｒら，Ｃｈｅｍ．Ｐｈｙｓ．Ｌｉｐｉｄｓ，１３８（２００５）６０−６８（ＮＭＲ，ＭＳ，ＵＶ）参照）【００７３】
（実施例４：化合物４［（１０Ｅ，１２Ｚ）−９−ｏｘｏ−ｏｃｔａｄｅｃａｄｉｅｎｏｉｃ  ａｃｉｄ］の合成）
文献（Ｇ．Ｉａｃａｚｉｏら，Ｃｈｅｍ．Ｐｈｙｓ．Ｌｉｐｉｄｓ，１３８（２００３）１１５−１２１）に記述されている方法に従って、ｌｉｎｏｌｅｉｃ  ａｃｉｄ１７．２ｇを大気下、室温で激しく撹拌した。９日間反応後、３００ｍｌのエタノールを加えた。氷水で冷やしながら、この溶液に３．３ｇのＮａＢＨ４を撹拌しながら序々に加えた。２０分反応後、反応溶液に蒸留水３００ｍｌを加えた。氷水で冷やし、撹拌しながら注意深く２Ｎ−ＨＣｌ水溶液を序々に加えて反応溶液をｐＨ３とした。反応溶液を分液ロートに移し、酢酸エチルを用いて２回抽出した。酢酸エチル層はＮａ２ＳＯ４を用いて乾燥、ろ過した。ろ液にトリフェニルフォスフィン（Ｐｈ３Ｐ）４００ｍｇを加えて４℃で一晩放置した。４０℃にて減圧濃縮し、約２０ｇまで濃縮後に４００ｇのシリカゲルを用いてクロマトグラフィーを行った。最終的にヘキサン／酢酸エチル（４：１）で溶出された９−及び１３−Ｈｙｄｒｏｘｙ−ｏｃｔａｄｅｃａｄｉｅｎｏｉｃ  ａｃｉｄの４種混合物２．１７ｇを得た。続いてこの４種混合物をジクロロメタン５０ｍｌに溶解、氷冷下Ｄｅｓｓ−Ｍａｒｔｉｎ  ｐｅｒｉｏｄｉｎａｎｅ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社製）４．６８ｇを加えて１時間撹拌した。この反応溶液にヘキサン２００ｍｌを加えて、シリカゲル１４０ｇを用いてクロマトグラフィーを行い、９−及び１３−Ｏｘｏ−Ｏｃｔａｄｅｃａｄｉｅｎｏｉｃ  ａｃｉｄの４種混合物１．８９ｇを得た。
更にこの４種混合物を数回に分けて、ＨＰＬＣリサイクルシステムを用いて精製した。使用したカラムはＹＭＣ−Ｐａｃｋ  Ｃ１８  ２０ｘ１５０ｍｍを用いて、検出波長２７５ｎｍ、移動相として０．００１％トリフルオロ酢酸を含む７０％アセトニトリル、流速１５ｍｌ／ｍｉｎで、各ピークが完全に分離されるまでリサイクルを行った。
その結果、化合物４［（１０Ｅ，１２Ｚ）−９−ｏｘｏ−ｏｃｔａｄｅｃａｄｉｅｎｏｉｃ  ａｃｉｄ］の白色粉末２２ｍｇを得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）、σ：０．９（ｔ，Ｊ＝６．９，３Ｈ），１．３３（ｍ，１０Ｈ），１．４３（ｍ，２Ｈ），１．６３（ｍ，２Ｈ），２．３（ｄｔ，Ｊ＝６．５８，７．５２Ｈｚ，２Ｈ），２．３５（ｔ，Ｊ＝７．４６Ｈｚ，２Ｈ），２．５５（ｔ，Ｊ＝７．３５Ｈｚ，２Ｈ），５．９（ｄｔ，Ｊ＝７．８，１０．７Ｈｚ，１Ｈ），６．１０（ｑ，Ｊ＝１０．９３，１１．２０Ｈｚ，１Ｈ），６．１９（ｄ，Ｊ＝１５．１Ｈｚ，１Ｈ），７．５０（ｄｄｄ，Ｊ＝０．５，１１．６０，１５．１１Ｈｚ，１Ｈ），１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，１００ＭＨｚ），σ：１４．２３，２２．７１，２４．４８，２４．８２，２８．５６，２９．０９，２９．２６，２９．２６，２９．２９，３１．６０，３４．１１，４１．２１，１２７．１１，１２９．５４，１３７．３４，１４２．９７，１７９．４８，２０１．３１，ＥＩ−ＭＳ（ｐｏｓｉｔｉｖｅ  ｍｏｄｅ）ｍ／ｚ（％）：６７（３４），８１（８４），９５（６４），１５１（８６．７），１６６（１００），２２３（４６），２７６（１２），２９４（４１）、ＥＳＩ−ＭＳ（ｐｏｓｉｔｉｖｅ  ｍｏｄｅ）：ｍ／ｚ＝２９５．３［Ｍ＋Ｈ］＋、ＵＶ（０．１％ＨＣＯＯＨ含有６０％アセトニトリル）：２７８．７ｎｍ。【００７４】
（実施例５：化合物１〔１−［（９Ｚ，１１Ｅ）−１３−ｏｘｏ−ｏｃｔａｄｅｃａｄｉｅｎｏｙｌ］−ｇｌｙｃｅｒｏｌ〕及び化合物２〔１−［（１０Ｅ，１２Ｚ）−９−ｏｘｏ−ｏｃｔａｄｅｃａｄｉｅｎｏｙｌ］−ｇｌｙｃｅｒｏｌ〕の単離）
実施例１で行ったシリカゲルを用いたクロマトグラフィーの後、更に８０％エタノールにて撹拌抽出した。この操作を数回繰り返した抽出液を集め、溶媒を留去し、固形物として１９７ｇを得た。
この固形物１００ｇをＹＭＣ−ＯＤＳ  ６００ｇを用いてクロマトグラフィーにより精製し、８０％エタノール溶出部として１４．３７ｇを得た。
更にこの溶出部について、数回のシリカゲルを用いたクロマトグラフィーを行い、溶出液として酢酸エチル、或いは、酢酸エチル／ヘキサン（２：１）の混合液で精製を行い、油性物質として１７９ｍｇを得た。
この油性物質を、数回に分けてＨＰＬＣリサイクルシステムを用いて精製した。使用したカラムはＹＭＣ−Ｐａｃｋ  Ｃ１８  ２０ｘ２５０ｍｍを用いて、検出波長２７５ｎｍ、移動層として５０％アセトニトリル、流速１０ｍｌ／ｍｉｎで、各ピークが完全に分離されるまでリサイクルを行った。
その結果、化合物１［１−［（９Ｚ，１１Ｅ）−１３−Ｏｘｏ−ｏｃｔａｄｅｃａｄｉｅｎｏｙｌ］−ｇｌｙｃｅｒｏｌ］８．３ｍｇ及び化合物２［１−［（１０Ｅ，１２Ｚ）−９−ｏｘｏ−ｏｃｔａｄｅｃａｄｉｅｎｏｙｌ］−ｇｌｙｃｅｒｏｌ］１３．９ｍｇを得た。
得られた化合物１［１−［（９Ｚ，１１Ｅ）−１３−ｏｘｏ−ｏｃｔａｄｅｃａｄｉｅｎｏｙｌ］−ｇｌｙｃｅｒｏｌ］及び化合物２［１−［（１０Ｅ，１２Ｚ）−９−ｏｘｏ−ｏｃｔａｄｅｃａｄｉｅｎｏｙｌ］−ｇｌｙｃｅｒｏｌ］の各種スペクトルデータは以下の通りである。【００７５】
化合物１［１−［（９Ｚ，１１Ｅ）−１３−ｏｘｏ−ｏｃｔａｄｅｃａｄｉｅｎｏｙｌ］−ｇｌｙｃｅｒｏｌ］：
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）、σ：０．９（ｔ，Ｊ＝６．９，３Ｈ），１．３３（ｍ，１０Ｈ），１．４３（ｍ，２Ｈ），１．６２（ｍ，４Ｈ），２．３２（ｍ，４Ｈ），２．４５（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，２Ｈ），３．６１（ｄｄ，Ｊ＝５．９，１１．４Ｈｚ，１Ｈ），３．７０（ｄｄ，３．９，１１．４Ｈｚ，１Ｈ），３．９４（ｍ，１Ｈ），４．１５（ｄｄ，６．０，１２．７Ｈｚ，１Ｈ），４．２１（ｄｄ，４．６，１２．７Ｈｚ，１Ｈ），５．９１（ｍ，１Ｈ），６．１３（ｄ，Ｊ＝１１．１Ｈｚ，１Ｈ），６．１６（ｄ，Ｊ＝１５．３Ｈｚ，１Ｈ），７．４９（ｄｄ，Ｊ＝１２．０，１５．３Ｈｚ，１Ｈ），１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，１００ＭＨｚ），σ：１４．２１，２２．７０，２４．３５，２５．０２，２８．５７，２８．９８，２９．１４，２９．１９，２９．２３，３１．６０，３４．３３，４１．１６，５３．６０，６５．４０，７０．４８，１２７．１０，１２９．５３，１３７．４４，１４３．０１，１７４．４３，２０１．４３，ＥＩ−ＭＳ（ｐｏｓｉｔｉｖｅ  ｍｏｄｅ）ｍ／ｚ（％）：６７（５１），８１（９１），９５（９０），１５１（１００），１６６（９２），２２３（１３），２７６（７６），２７７（９５），２９７（２２），３３４（４１），３５０（３８），３６８（１８）、ＥＳＩ−ＭＳ（ｐｏｓｉｔｉｖｅ  ｍｏｄｅ）：ｍ／ｚ＝３６９．３［Ｍ＋Ｈ］＋、ＵＶ（０．１％ＨＣＯＯＨ含有６０％アセトニトリル）：２８０．７ｎｍ。【００７６】
化合物２［１−［（１０Ｅ，１２Ｚ）−９−ｏｘｏ−ｏｃｔａｄｅｃａｄｉｅｎｏｙｌ］−ｇｌｙｃｅｒｏｌ］：
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）、σ：０．９（ｔ，Ｊ＝６．９，３Ｈ），１．３３（ｍ，１０Ｈ），１．４３（ｍ，２Ｈ），１．６２（ｍ，４Ｈ），２．３２（ｍ，４Ｈ），２．４５（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，２Ｈ），３．６１（ｄｄ，Ｊ＝５．９，１１．４Ｈｚ，１Ｈ），３．７０（ｄｄ，３．９，１１．４Ｈｚ，１Ｈ），３．９４（ｍ，１Ｈ），４．１５（ｄｄ，６．０，１２．７Ｈｚ，１Ｈ），４．２１（ｄｄ，４．６，１２．７Ｈｚ，１Ｈ），５．９１（ｍ，１Ｈ），６．１３（ｄ，Ｊ＝１１．１Ｈｚ，１Ｈ），６．１６（ｄ，Ｊ＝１５．３Ｈｚ，１Ｈ），７．４９（ｄｄ，Ｊ＝１２．０，１５．３Ｈｚ，１Ｈ），１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，１００ＭＨｚ），σ：１４．２１，２２．７０，２４．３５，２５．０２，２８．５７，２８．９８，２９．１４，２９．１９，２９．２３，３１．６０，３４．３３，４１．１６，５３．６０，６５．４０，７０．４８，１２７．１０，１２９．５３，１３７．４４，１４３．０１，１７４．４３，２０１．４３，ＥＩ−ＭＳ（ｐｏｓｉｔｉｖｅ  ｍｏｄｅ）ｍ／ｚ（％）：６７（５１），８１（９１），９５（９０），１５１（１００），１６６（９２），２２３（１３），２７６（７６），２７７（９５），２９７（２２），３３４（４１），３５０（３８），３６８（１８）、ＥＳＩ−ＭＳ（ｐｏｓｉｔｉｖｅ  ｍｏｄｅ）：ｍ／ｚ＝３６９．３［Ｍ＋Ｈ］＋、ＵＶ（０．１％ＨＣＯＯＨ含有６０％アセトニトリル）：２８０．７ｎｍ。【００７７】
次に、下記のスキームに示す２種類の方法、酵素を用いた方法（Ａ：Ｌｉｐａｓｅ）及び化学合成（Ｂ：ＭｅＳＯ２Ｃｌ，Ｂａｓｅ）、で化合物１の合成を行った。【００７８】
【化３９】
2008078453.tif 000042
【００７９】
（実施例５−２：酵素を用いた化合物１の合成）
実施例３で得た（９Ｚ，１１Ｅ）−１３−Ｏｘｏ−ｏｃｔａｄｅｃａｄｉｅｎｏｉｃ  ａｃｉｄ（化合物３）４５．２ｍｇ（０．１５３ｍｍｏｌｅ）にｇｌｙｃｅｒｏｌ  ６．２ｇ（６７ｍｍｏｌｅ）、リパーゼＧ  ５０（Ａｍａｎｏ  Ｅｎｚｙｍｅ  Ｉｎｃ．Ａｉｃｈｉ  Ｊａｐａｎ）４．３ｍｇ、水５０μｌを加えて室温、２日間攪拌した。反応液をアセトンで３回抽出、アセトンを濃縮し、酢酸エチルを加えてシリカゲルカラムに吸着、酢酸エチルを用いて流出した。酢酸エチル溶液を濃縮し、つづいてシリカゲルに吸着し、溶出溶媒はヘキサン：酢酸エチル１：２でクロマトを行い、１−Ｏ−［（９Ｚ，１１Ｅ）−１３−ｏｘｏ−ｏｃｔａｄｅｃａｄｉｅｎｏｙｌ］ｇｌｙｃｅｒｏｌ（化合物１）を１７ｍｇ（０．０４６ｍｍｏｌｅ）、収率３０％で得た。最終的にはＹＭＣ−Ｐａｃｋ  ＯＤＳ  カラム（２０ｍｍｘ２５０ｍｍ）を用いてリサイクルＨＰＬＣクロマト、溶出溶媒  ５０％  アセトニトリル−水を用いて行い、化合物１の純品１０ｍｇを得た。【００８０】
（実施例５−３：化合物１の化学的合成）
実施例３で得た（９Ｚ，１１Ｅ）−１３−Ｏｘｏ−ｏｃｔａｄｅｃａｄｉｅｎｏｉｃ  ａｃｉｄ（化合物３）２００ｍｇ（０．６８０ｍｍｏｌｅ）のアセトニトリル  ７００μｌの溶液に氷冷下、Ｅｔ３Ｎ  ３００ｍｇ、Ｍｅ３Ｎ−ＨＣｌ  ３１．２ｍｇ（０．３２８ｍｍｏｌｅ）を加えて１０分間撹拌する。反応液を−１０〜−１５℃に冷却してＭｅ−ＳＯ２Ｃｌ  １５６．０ｍｇ（１．３６ｍｍｏｌｅ）のアセトニトリル  ７００μｌ溶液を加えて３０分間撹拌する。続いてｇｌｙｃｅｒｏｌ  ６３ｍｇ（０．６８ｍｍｏｌｅ）、ＤＭＡＰ  ８３ｍｇ（０．６８ｍｍｏｌｅ）を加えて反応液を−１０〜−１５℃に保って１時間撹拌する。
反応終了後反応液に水を加えてエーテルで抽出する。水、飽和食塩水で洗浄後、硫酸ナトリウムで乾燥、溶媒を留去した。続いて酢酸エチル／ヘキサン（１：１）を加えてシリカゲルカラムに吸着、酢酸エチル／ヘキサン（１：１）を用いて流出、溶媒を留去すると粗１−Ｏ−［（９Ｚ，１１Ｅ）−１３−ｏｘｏ−ｏｃｔａｄｅｃａｄｉｅｎｏｙｌ］ｇｌｙｃｅｒｏｌ（化合物１）を１８０ｍｇ（０．１１８ｍｍｏｌｅ）、収率７２％で得た。さらに精製するためにはＹＭＣ−Ｐａｃｋ  ＯＤＳ  カラム（２０ｍｍｘ２５０ｍｍ）を用いてリサイクルＨＰＬＣクロマト、溶出溶媒  ５０％  アセトニトリル−水を用いて行い、化合物１の純品７５ｍｇを得た。【００８１】
（実施例５−４：化合物５〜化合物１１の合成）
実施例３で得られた化合物３を出発原料として、（２Ｓ）−３−ａｍｉｎｏ―１、２−ｄｉｈｙｄｒｏｘｙｐｒｏｐａｎｅ、（２Ｒ）−３−ａｍｉｎｏ―１、２−ｄｉｈｙｄｒｏｘｙｐｒｏｐａｎｅ、１，２−ｄｉｈｙｄｒｏｘｙｅｔｈａｎｅ、２−ａｍｉｎｏ―１−ｈｙｄｒｏｘｙｅｔｈａｎｅ、２−ａｍｉｎｏ―１，３−ｄｉｈｙｄｒｏｘｙｐｒｏｐａｎｅ、ｂｉｓ−（２−ｈｙｄｒｏｘｙｅｔｈｙｌ）ａｍｉｎｅをそれぞれ実施例５−３と同様に反応させて化合物５〜化合物１１を合成した。得られた化合物の収率及び血小板形成促進作用の指標であるｐｌａｔｅｌｅｔ−ｌｉｋｅ  ｐａｒｔｉｃｌｅ（ＰＬＰ）形成促進作用の最小有効量を表２に示す。ＰＬＰ形成促進作用とは、すなわち以下のようにして評価した。１ｘ１０５ｃｅｌｌｓ／ｍＬに調製したＭＥＧ−０１細胞に対して、滅菌ミリＱ水／エタノール混液（１：１）にあらかじめ溶解した得られた化合物を培養液に添加後、１０ｎＭ  ＰＭＡで２から４日間分化誘導した。培養後細胞懸濁液をそれぞれ１００μＬ分収し、Ｚ１  Ｃｏｕｌｔｅｒ  Ｐａｒｔｉｃｌｅ  Ｃｏｕｎｔｅｒ（ＢＥＫＭＡＮ  ＣＯＡＬＴＥＲ社製）を用いて対照群（ＰＭＡ単独）及び得られた化合物処理群の血小板分画と巨核球分画をそれぞれカウントした。データは平均値±標準誤差（Ｎ＝４−６）で表記し、統計解析は一元配置分散分析法並びに多重比較を行った。対照群と比較し有意にＰＬＰ形成を促進させた最小濃度を最小有効量とした。また得られた化合物の物理恒数を表３に示す。【００８２】
１３−Ｏｘｏ−ｏｃｔａｄｅｃａ−９Ｚ，１１Ｅ−ｄｉｅｎｏｉｃ  ａｃｉｄ  （２Ｒ，３−ｄｉｈｙｄｒｏｘｙ−ｐｒｏｐｙｌ）−ａｍｉｄｅ（化合物５）
【化４０】
2008078453.tif 000043
【００８３】
１３−Ｏｘｏ−ｏｃｔａｄｅｃａ−９Ｚ，１１Ｅ−ｄｉｅｎｏｉｃ  ａｃｉｄ  （２Ｓ，３−ｄｉｈｙｄｒｏｘｙ−ｐｒｏｐｙｌ）−ａｍｉｄｅ（化合物６）
【化４１】
2008078453.tif 000044
【００８４】
１３−Ｏｘｏ−ｏｃｔａｄｅｃａｎｏｉｃ  ａｃｉｄ  ２−ｈｙｄｒｏｘｙ−ｅｔｈｙｌ  ｅｓｔｅｒ（化合物７）
【化４２】
2008078453.tif 000045
【００８５】
１３−Ｏｘｏ−ｏｃｔａｄｅｃａｎｏｉｃ  ａｃｉｄ（２−ｈｙｄｒｏｘｙ−ｅｔｈｙｌ）−ａｍｉｄｅ（化合物８）
【化４３】
2008078453.tif 000046
【００８６】
１３−Ｏｘｏ−ｏｃｔａｄｅｃａｎｏｉｃ  ａｃｉｄ（２−ｈｙｄｒｏｘｙ−１−ｈｙｄｒｏｘｙｍｅｔｈｙｌ−ｅｔｈｙｌ）−ａｍｉｄｅ（化合物９）
【化４４】
2008078453.tif 000047
【００８７】
１３−Ｏｘｏ−ｏｃｔａｄｅｃａｎｏｉｃ  ａｃｉｄ  [ｂｉｓ−２−ｈｙｄｒｏｘｙ−ｅｔｈｙｌ]−ａｍｉｄｅ（化合物１０）
【化４５】
2008078453.tif 000048
【００８８】
１３−Ｏｘｏ−ｏｃｔａｄｅｃａｎｏｉｃ  ａｃｉｄ（２−ｈｙｄｒｏｘｙ−１−ｈｙｄｒｏｘｙｍｅｔｈｙｌ−ｅｔｈｙｌ）−ｅｓｔｅｌ（化合物１1）
【化４６】
2008078453.tif 000049
【００８９】
【表２】
2008078453.tif 000050
【００９０】
【表３】
2008078453.tif 000051
【００９１】
（実施例６：細胞標識法を用いた血小板様粒子（ＰＬＰ）形成実験）
恒常的にＰＬＰ形成を起こす特性を有する巨核球芽細胞株であるＭＥＧ−０１細胞を継代培養し、実験に供した。Ｃｅｌｌ  ｔｒａｃｋＴＭ  Ｏｒａｎｇｅ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅ社製）で細胞を指標（４０μＭ／１０６ｃｅｌｌｓ）し、滅菌ミリＱ水／エタノール混液（１：１）にあらかじめ溶解した実施例２で得たピーナッツ種皮抽出物（化合物１〜４を高濃度に含む）を培養液に添加後、１０ｎＭ  ホルボールミリステートアセテート（ＰＭＡ：フナコシ社製）処理し４日間分化誘導した。得られたＰＬＰの画像をＣＣＤカメラよりコンピューターに取り込んだ後、画像処理し、ＩｍａｇｅＳＸＭソフトウエアでＰＬＰを計測解析し解析を行った。得られたデータは平均値±標準誤差（例数：Ｎ＝４−６）で表記した。統計解析は一元配置分散分析法並びに多重比較を行った。【００９２】
ＰＬＰ形成実験においてＣｅｌｌ  ｔｒａｃｋＴＭ  Ｏｒａｎｇｅ標識されたＭＥＧ−０１細胞からのＰＬＰは、ＰＭＡ単独（図１中、ＰＭＡ）と比較して、実施例２で得た抽出物の共存によりＰＬＰの増加が認められた（図１中、ＰＥＸＴ）。また実施例２で得た抽出物は、０．０３μｇ／ｍＬより３．０μｇ／ｍＬの用量で処理を行わない対照群（図１中、ｃｏｎｔｒｏｌ）に対し有意なＰＬＰ形成の促進が認められ、３．０μｇ／ｍＬではＰＭＡと比較しても有意な促進効果が得られた（図１）。よって実施例２で得たピーナッツ種皮抽出物はＭＥＧ−０１細胞からのＰＬＰ形成を促進する作用を有することが示唆された。【００９３】
（実施例７：細胞粒度分布法を用いた血小板様粒子（ＰＬＰ）形成実験）
１ｘ１０５ｃｅｌｌｓ／ｍＬに調製したＭＥＧ−０１細胞に対して、滅菌ミリＱ水／エタノール混液（１：１）にあらかじめ溶解した実施例２で得たピーナッツ種皮抽出物を培養液に添加後、１０ｎＭ  ＰＭＡで２から４日間分化誘導した。培養後細胞懸濁液をそれぞれ１００μＬ分収し、Ｚ１  Ｃｏｕｌｔｅｒ  Ｐａｒｔｉｃｌｅ  Ｃｏｕｎｔｅｒ（ＢＥＫＭＡＮ  ＣＯＡＬＴＥＲ社製）を用いて対照群（ＰＭＡ単独）及びピーナッツ種皮エキス抽出物処理群の血小板分画と巨核球分画をそれぞれカウントした。得られたデータは平均値±標準誤差（Ｎ＝４−６）で表記し、統計解析は一元配置分散分析法並びに多重比較を行った。【００９４】
ＰＭＡ単独（図２中、ＰＭＡ）と比較して、実施例２で得られた抽出物の共存により血小板分画細胞数は０．３μｇ／ｍＬより用量依存的に、且つ有意に増加した（図２、ＰＥＸＴ）。よって実施例２で得たピーナッツ種皮抽出物はＭＥＧ−０１細胞からのＰＬＰ形成を促進する作用を有することが示唆された。【００９５】
（実施例８：ＭＡＲＥ−ルシフェラーゼ活性試験）
巨核芽球株化細胞であるＭＥＧ−０１細胞を継代培養し、実験に供した。Ｉｇａｒａｓｈｉらの報告（Ｎａｔｕｒｅ  ３６７  ５６８  １９９４）に準じ、チキンβグロビンエンハンサー領域のＮＦＥ２サイトのオリゴヌクレオチドの３重繰り返し配列を、ＴＡＴＡ  ｂｏｘを有するｐＴＡＬ−ルシフェラーゼ発現ベクターのＮｈｅＩ−ＢｇｌＩＩサイトに挿入し、ｐＭＡＲＥ−ルシフェラーゼベクターを構築した。エレクトロポレーション法（ａｍａｘａ社製）により内部標準としてｐｈＲＴ−ＴＫベクターをｐＮＦＥ２−ルシフェラーゼと共に遺伝子導入し、実施例２で得たピーナッツ種皮抽出物の共存下で培養後細胞を溶解し、発現したルシフェラーゼの蛍光活性をＤｕａｌ−ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ  Ｒｅｐｏｒｔｅｒ  Ａｓｓａｙ  Ｓｙｓｔｅｍ（ｐｒｏｍｅｇａ社製）を用い測定した。【００９６】
実施例２で得たピーナッツ種皮抽出物（図３中、ＰＥＸＴ）は、ＰＭＡ単独での処理（図３中、ｃｏｎｔｒｏｌ）と比較して、ＭＥＧ−０１細胞において認められるＭＡＲＥを介する転写活性の上昇には影響を与えなかった（図３）。【００９７】
（実施例９：巨核球初代培養実験）
Ｓａｔｏらの方法（Ｂｒ．Ｊ．Ｈａｅｍａｔｏｌ．１２１  ３１５  ２００３）に準じ、ＣＤ３４＋細胞より巨核球並びに血小板への分化誘導を行った。すなわち、健常妊婦出産で得られた臍帯血より密度勾配遠心法により単核球分画し、ＣＤ３４＋ｃｅｌｌ  ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ  ｓｙｓｔｅｍ（Ｄｙｎａｌ社製）によりＣＤ３４＋細胞を純化し、トロンボポイエチン（ＴＰＯ）及びｃ−ｋｉｔ  リガンド（ＫＬ）存在下で培養した。培養後、抗−ＣＤ４１−ＦＩＴＣ抗体並びにＤＡＰＩ（又はＰＩ、７−ＡＤＤ）染色後、ＦＡＣＳ（Ｃａｌｉｂｅｒ、ＬＳＲ、Ａｒｉａ；日本ベクトンディッキンソン社製）により測定し、ＣＥＬＬＱＵＥＳＴ或いはＦＡＣＳＤｉＶａソフトウエアを用いて解析を行った。なお臍帯血はインフォームドコンセントの得られた妊産婦より得た。【００９８】
実施例６及び７で見られた、実施例２で得たピーナッツ種皮抽出物によるＰＬＰ形成が、正常なヒト巨核球でも同様に見られることを確認するため、ヒトＣＤ３４＋細胞から巨核球に分化し、更に胞体突起形成／血小板形成する過程までの実施例２で得たピーナッツ種皮抽出物の作用を検討した。その結果、図４に示すように、実施例２で得たピーナッツ種皮抽出物は巨核球形成には全く影響を与えず、血小板形成のみを有意に促進した。【００９９】
この結果から、生理的条件下においても実施例２で得たピーナッツ種皮抽出物はヒト血小板産生を促進させることが出来る可能性が示唆され、その作用点は巨核球の分化成熟過程ではなく、最終分化過程である胞体突起形成に対し作用しており、その作用機序としては少なくともＮＦＥ２活性化以降のシグナル下流である可能性が示唆された（図３、図４）。これまで知られていた巨核球形成促進因子であるＴＰＯは、巨核球への初期分化（コロニーフォーミングユニット−メガカリオサイト：ＣＦＵ−ＭＫ形成）や巨核球の分化成熟過程をサポートするが、巨核球の最終分化過程である胞体突起形成は促進せず、むしろ顕著に抑制するものであった（Ｅｘｐ  Ｈｅｍａｔｏｌ  ２５  ２７０  １９９７）。【０１００】
実施例２で得たピーナッツ種皮抽出物はこれまでの天然物とは異なり、胞体突起形成／血小板形成の促進因子であり、かつその作用機序がＮＦＥ２の下流シグナルと考えられ、ユニークな薬理学的特性を示す新規の血小板形成促進剤となり得る。そのため、前記ピーナッツ種皮抽出物、及び前記ピーナッツ種皮抽出物に含まれる化合物１〜４は、各種の血小板減少症の予防及び治療や、血小板減少を随伴する各種治療法の副作用軽減等に有用である。更に再生医療としてのｉｎ  ｖｉｔｒｏ或いはｅｘ  ｖｉｖｏでの自己血小板増幅のための有用な手段と考えられる。【０１０１】
（実施例１０：化合物３［（９Ｚ，１１Ｅ）−１３−ｏｘｏ−ｏｃｔａｄｅｃａｄｉｅｎｏｉｃ  ａｃｉｄ］のＰＬＰ形成促進作用）
ＭＥＧ−０１細胞の培養液に、滅菌ミリＱ水／エタノール混液（１：１）にあらかじめ溶解した化合物３［（９Ｚ，１１Ｅ）−１３−ｏｘｏ−ｏｃｔａｄｅｃａｄｉｅｎｏｉｃ  ａｃｉｄ］を添加後、１０ｎＭ  ＰＭＡで２日間分化誘導した。培養後、細胞懸濁液をそれぞれ１００ｍＬ分収し、Ｚ１  Ｃｏｕｌｔｅｒ  Ｐａｒｔｉｃｌｅ  Ｃｏｕｎｔｅｒ（ＢＥＫＭＡＮ  ＣＯＡＬＴＥＲ社製）を用いて対照群（ＰＭＡ単独）及び化合物３［（９Ｚ，１１Ｅ）−１３−ｏｘｏ−ｏｃｔａｄｅｃａｄｉｅｎｏｉｃ  ａｃｉｄ］処理群の血小板分画と巨核球分画をそれぞれカウントした。得られたデータはｍｅａｎ±ＳＥ  （Ｎ＝４）で表記し、統計解析は一元配置分散分析並びに多重比較を行った。【０１０２】
ＰＭＡ単独（図５中、ＰＭＡ）と比較して、化合物３［（９Ｚ，１１Ｅ）−１３−ｏｘｏ−ｏｃｔａｄｅｃａｄｉｅｎｏｉｃ  ａｃｉｄ］の共存により血小板分画細胞数は用量依存的、且つ有意に増加した（図５）。よって化合物３はＭＥＧ−０１細胞からのＰＬＰ形成を促進する作用を有することが示唆された。【０１０３】
（実施例１１：化合物３［（９Ｚ，１１Ｅ）−１３−ｏｘｏ−ｏｃｔａｄｅｃａｄｉｅｎｏｉｃ  ａｃｉｄ］を指標とした血小板様粒子（ＰＬＰ）形成促進作用のアッセイ方法）
化合物３［（９Ｚ，１１Ｅ）−１３−ｏｘｏ−ｏｃｔａｄｅｃａｄｉｅｎｏｉｃ  ａｃｉｄ］を指標として、実施例２で得たピーナッツ種皮抽出物、及び実施例１で得た酢酸／ｎ−ヘキサン（１：２）で得た画分のＰＬＰ形成促進作用を比較した。実施例２で得られた抽出物及び施例１で得られた酢酸／ｎ−ヘキサン（１：２）で得た画分の比活性は、それぞれ１μｇ／ｍＬあたり化合物３〔（９Ｚ，１１Ｅ）−１３−ｏｘｏ−ｏｃｔａｄｅｃａｄｉｅｎｏｉｃ  ａｃｉｄ〕、２５ｎｇ  Ｅｑ／ｍＬ及び１１ｎｇ  Ｅｑ／ｍＬであり、化合物３〔（９Ｚ，１１Ｅ）−１３−ｏｘｏ−ｏｃｔａｄｅｃａｄｉｅｎｏｉｃ  ａｃｉｄ〕を指標として血小板様粒子促進物質の活性比較が可能であることが示された。【０１０４】
（実施例１２：化合物１〔１−［（９Ｚ，１１Ｅ）−１３−ｏｘｏ−ｏｃｔａｄｅｃａｄｉｅｎｏｙｌ］−ｇｌｙｃｅｒｏｌ〕、化合物２〔１−［（１０Ｅ，１２Ｚ）−９−ｏｘｏ−ｏｃｔａｄｅｃａｄｉｅｎｏｙｌ］−ｇｌｙｃｅｒｏｌ〕及び化合物４［（１０Ｅ，１２Ｚ）−９−Ｏｘｏ−ｏｃｔａｄｅｃａｄｉｅｎｏｉｃ  ａｃｉｄ］のＰＬＰ形成作用）
Ｃｅｌｌ  ｔｒａｃｋＴＭ  Ｏｒａｎｇｅ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅ社製）で細胞を指標（４０μＭ／１０６ｃｅｌｌｓ）し、滅菌ミリＱ水／エタノール混液（１：１）にあらかじめ溶解した化合物１〔１−［（９Ｚ，１１Ｅ）−１３−ｏｘｏ−ｏｃｔａｄｅｃａｄｉｅｎｏｙｌ］−ｇｌｙｃｅｒｏｌ〕、化合物２〔１−［（１０Ｅ，１２Ｚ）−９−ｏｘｏ−ｏｃｔａｄｅｃａｄｉｅｎｏｙｌ］−ｇｌｙｃｅｒｏｌ〕及び化合物４［（１０Ｅ，１２Ｚ）−９−Ｏｘｏ−ｏｃｔａｄｅｃａｄｉｅｎｏｉｃ  ａｃｉｄ］を培養液に添加後、１０ｎＭ  ホルボールミリステートアセテート（ＰＭＡ：フナコシ社製）処理し２日間分化誘導した。得られたＰＬＰの画像をＣＣＤカメラよりコンピューターに取り込んだ後、画像処理し、ＩｍａｇｅＳＸＭソフトウエアでＰＬＰを計測解析し解析を行った。得られたデータは平均値±標準誤差（例数：Ｎ＝６）で表記した。統計解析は一元配置分散分析法並びに多重比較を行った。【０１０５】
ＰＬＰ形成実験においてＣｅｌｌ  ｔｒａｃｋＴＭ  Ｏｒａｎｇｅ標識されたＰＬＰ形成はＰＭＡ単独と比較して化合物１〔１−［（９Ｚ，１１Ｅ）−１３−ｏｘｏ−ｏｃｔａｄｅｃａｄｉｅｎｏｙｌ］−ｇｌｙｃｅｒｏｌ〕及び化合物２〔１−［（１０Ｅ，１２Ｚ）−９−ｏｘｏ−ｏｃｔａｄｅｃａｄｉｅｎｏｙｌ］−ｇｌｙｃｅｒｏｌ〕の共存により１０ｎｇ／ｍＬの低用量から濃度依存的にＰＬＰ形成の増加作用を示した（図６）。また化合物４［（１０Ｅ，１２Ｚ）−９−Ｏｘｏ−ｏｃｔａｄｅｃａｄｉｅｎｏｉｃ  ａｃｉｄ］も高用量であったがＰＬＰ形成を増加させた。以上の結果から化合物１〔１−［（９Ｚ，１１Ｅ）−１３−ｏｘｏ−ｏｃｔａｄｅｃａｄｉｅｎｏｙｌ］−ｇｌｙｃｅｒｏｌ〕及び化合物２〔１−［（１０Ｅ，１２Ｚ）−９−ｏｘｏ−ｏｃｔａｄｅｃａｄｉｅｎｏｙｌ］−ｇｌｙｃｅｒｏｌ〕は極めて強力なＰＬＰ形成促進剤であることが示唆された。【０１０６】
（実施例１３：ピーナッツ種皮エキス（ＰＥＸＴ）のマウス経口投与における血小板増加作用）
実施例１で得たピーナッツ種皮抽出物をマウスに経口投与して血小板増加作用を調べた。
マウスはＭＦ飼料（オリエンタル酵母）、飲水として水道水を、自由摂取させ、明暗サイクル９時点灯、２１時消灯で、室温２５℃±５で飼育した。１４日間の予備飼育後、体重を測定し、体重が均一になるようにランダムに２群にわけた。
投与検体としてＰＥＸＴを０．５％ＣＭＣに懸濁して調整し、７−９週零のＩＣＲ系雄性マウス（日本エスエルシー）を対照群（ｎ＝８）とＰＥＸＴ投与群（ｎ＝７）にわけた。ＰＥＸＴ投与群にはＰＥＸＴ１５０ｍｇ／１０ｍＬ／ｋｇを１日１回５日間連続経口投与した。対照群には０．５％ＣＭＣ水溶液１０ｍＬ／ｋｇを１日１回５日間連続経口投与した。
エーテル麻酔下でＵＮＯＰＥＴＴＥを使用してｒｅｔｒｏ−ｏｒｂｉｔａｌより採血した。コールターカウンターＣｏｕｎｔｅｒ  Ｚ１（ＢＥＣＫＭＡＮ  ＣＯＵＬＴＥＲ）を使用して、血小板数を測定した。ビュルケル・チュルク型血球計算盤Ｃ−Ｃｈｉｐ（ｉＮ  ＣＹＴＯ）を使用して，白血球数を測定した。測定日毎にｓｔｕｄｅｎｔ’ｓ  ｔ−ｔｅｓｔを行い、対照群と比較した。【０１０７】
血小板数は投与５日目から対照群（１６２．９２±３．３９ｘ１０４／μＬ）に対し投与群（１８２．５７±１．８５ｘ１０４／μＬ）は有意な増加を示した（ｐ＜０．００１）（図７）。投与終了後も５日目（休薬５日目）まで有意な増加を示した。白血球数は対照群に対して差は観測されなかったことから、ＰＥＸＴは白血球数に対しては作用しないと考えられた。
体重は投与中及び休薬５日目まで対照群に比べ変化を示さなかった。【０１０８】
（参考例１：芳香族環を有する化合物の合成）
上記一般式（１）において、Ｒ１が芳香族環を有する下記誘導体は、次の方法により合成することができる。【０１０９】
【化４７】
2008078453.tif 000052
（ＹはＯＨ又はＣ１からＣ２のアルコキシ基又はハロゲン原子である。）【０１１０】
パラブロム（又はクロル、又はハロ）アセトフェノンにＴＨＦ又はへキサン又はベンゼン又はＤＭＦ又はＤＭＳＯ等の無水の溶媒に溶解し窒素又はアルゴン等の不活性なガスの雰囲気下、−８０〜１００℃、望ましくは−３０〜２０℃でＮａＨ、ＬＤＡ、ｎ−ＢｕＬｉ等を使用してブチルブロマイド（ｏｒクロライド）を加える。これによって合成した９−ケト１０−（３’−ブロモ）ベンゼンデカン酸エチルエステルにＴＨＦ又はへキサン又はベンゼン又はＤＭＦ又はＤＭＳＯ等の無水の溶媒に溶解し窒素又はアルゴン等の不活性なガスの雰囲気下、−８０〜１００℃、望ましくは−３０〜２０℃でＮａＨ又はＬＤＡ又はｎ−ＢｕＬｉ等を使用して６−ブロモ（又はクロル）ヘキサン酸のエステルを加える。これによって合成した化合物を加水分解することによりフリーのカルボン酸を得ることが出来る。グリセロールエステル等は実施例５−３と同様に反応させて合成する。【０１１１】
また、上記一般式（１）において、Ｒ１が芳香族環を有する下記誘導体は、次の方法により合成することができる。【０１１２】
【化４８】
2008078453.tif 000053
（ＹはＯＨ又はＣ１からＣ２のアルコキシ基又はハロゲン原子である。）【０１１３】
パラブロム（又はクロル、又はハロ）アセトフェノンにＴＨＦ又はへキサン又はベンゼン又はＤＭＦ又はＤＭＳＯ等の無水の溶媒に溶解し窒素又はアルゴン等の不活性なガスの雰囲気下、−８０〜１００℃、望ましくは−３０〜２０℃でＮａＨ、ＬＤＡ、ｎ−ＢｕＬｉ等を使用して６−ブロモ（又はクロル）ヘプテンサン酸のエステルを加える。これによって合成した１−３’−ブロモベンゼン−２−ヘプタノンにＴＨＦ又はへキサン又はベンゼン又はＤＭＦ又はＤＭＳＯ等の無水の溶媒に溶解し窒素又はアルゴン等の不活性なガスの雰囲気下、−８０〜１００℃、望ましくは−３０〜２０℃でＮａＨ又はＬＤＡ又はｎ−ＢｕＬｉ等を使用してプロピルブロマイド（ｏｒクロライド）を加える。これによって合成した化合物を加水分解することによりフリーのカルボン酸を得ることが出来る。グリセロールエステル等は実施例５−３と同様に反応させて合成する。【０１１４】
（参考例２：一般式（１）において、ＸがＳ、ＳＯ、ＳＯ２誘導体の合成）
実施例３で得られた化合物３又は化合物４又は上記芳香環誘導体を出発原料として、アルキルチオール化合物をそれぞれ実施例５−３と同様に反応させてＸがＳである化合物が合成できる。またＸがＳＯ、ＳＯ２の化合物はＸがＳである化合物をメタクロルパーベンゾイックアシッド、過酸化水素などの酸化剤と反応させることにより合成することが出来る。
【産業上の利用可能性】
【０１１５】
本発明によれば、体内において血小板の産生を効果的に促進させることのできる、優れた食品、栄養補助食品、食品添加物、医薬品等の開発が可能となる。また、本発明によれば、血小板減少を伴う各種疾患に対する効果的な予防又は治療方法や、生体外において効率的に血小板を形成させる方法、種々の試料の巨核球胞体突起形成／血小板形成の促進作用を評価する方法などを提供することが可能となる。
【図１】
2008078453.tif 000074
【図２】
2008078453.tif 000075
【図３】
2008078453.tif 000076
【図４】
2008078453.tif 000077
【図５】
2008078453.tif 000078
【図６】
2008078453.tif 000079
【図７】
2008078453.tif 000080
【手続補正書】
【提出日】平成20年4月22日(2008.4.22)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ピーナッツ種皮の抽出物乃至その処理物であって、下記一般式（１）で示される化合物を、精製を行なっていないピーナッツ種皮の抽出物における濃度よりも高濃度で含み、血小板形成促進活性を有することを特徴とする抽出物乃至その処理物。
【化４９】
2008078453.tif 000081
（式中、Ｘは酸素、イオウ、スルホニル基、又は置換基を有していてもよいイミノ基を示し、該置換基はアシル基、置換されていてもよいアミノ基、又は置換スルホニル基である。破線は二重結合の存在を示し、シスでもトランスでもよい。また環状構造の一部でもよい。ｎ及びｍはそれぞれメチレンの数で１〜１８の整数を示す。Ｒ１及びＲ２はそれぞれ酸素又はＨ２を示す。Ｒ３は水素、それぞれ置換基を有していてもよい低級アルキル基、アリール基、アラルキル基、又は薬学的に許容され得る塩を形成する陽イオンを示す。）
【請求項２】
一般式（１）で示される化合物が、少なくとも、下記一般式（２）で示される化合物及び下記一般式（３）で示される化合物のいずれかである請求項１に記載の抽出物乃至その処理物。
【化５０】
2008078453.tif 000082
（式中、Ｒは水素、薬学的に許容され得る塩を形成する陽イオン、ジヒドロキシプロピル基、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、グルコース、ガラクトース、又はラムノースを示す。）
【化５１】
2008078453.tif 000083
（式中、Ｒは水素、薬学的に許容され得る塩を形成する陽イオン、ジヒドロキシプロピル基、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、グルコース、ガラクトース、又はラムノースを示す。）
【請求項３】
一般式（１）で示される化合物が、下記化学式（１）又は（２）で示される化合物である請求項１から２のいずれかに記載の抽出物乃至その処理物。
【化５２】
2008078453.tif 000084
（化学式１の式中、２級ヒドロキシ基の絶対配置は、Ｒ体又はＳ体又はＲＳ体のいずれでもよい。）
【化５３】
2008078453.tif 000085
（化学式２の式中、２級ヒドロキシ基の絶対配置は、Ｒ体又はＳ体又はＲＳ体のいずれでもよい。）
【請求項４】
更に、下記化学式（３）又は（４）で示される化合物を含む請求項３に記載の抽出物乃至その処理物。
【化５４】
2008078453.tif 000086
【化５５】
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【請求項５】
少なくとも化学式（１）から（４）で示される化合物のいずれかを０．００１質量％以上の濃度で含むか、又は、化学式（１）から（４）で示される化合物の合計を０．００４質量％以上の濃度で含む請求項１から４のいずれかに記載の抽出物乃至その処理物。
【請求項６】
精製されたものである請求項１から５のいずれかに記載の抽出物乃至その処理物。
【請求項７】
巨核球系細胞における胞体突起形成又は血小板形成の促進作用を有する組成物であって、請求項１から６のいずれかに記載の抽出物乃至その処理物を含むことを特徴とする組成物。
【請求項８】
巨核球系細胞における胞体突起形成又は血小板形成の促進作用を有する組成物であって、一般式（１）で示される化合物を含むことを特徴とする組成物。
【請求項９】
巨核球系細胞における胞体突起形成又は血小板形成の促進作用を有する組成物であって、下記一般式（４）で示される化合物を含むことを特徴とする組成物。
【化５６】
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（式中、Ｒ４は
【化５７】
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又は
【化５８】
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又は
【化５９】
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又は
【化６０】
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であり、ＸはＯ、ＮＲ６（Ｒ６は、Ｈ又は下記Ｒ５）、Ｓ、ＳＯ、又はＳＯ２であり、Ｒ５は１−４個のＯＨを有していてもよいＣ１からＣ６の直鎖状、分岐鎖状又は環状のアルキル基であり、Ｙは、ＯＨ又はＣ１からＣ２のアルコキシ基又はハロゲン原子である。）
【請求項１０】
Ｘ、Ｒ５、及びＹが、それぞれ下記である、請求項９に記載の組成物。
（ＸはＯ又はＮＲ６であり、Ｒ５は１から２個のＯＨで置換されたＣ２からＣ３のアルキル基であり、ＹはＯＨ又はＣ１からＣ２のアルコキシ基又はＦ、Ｃｌ又はＢｒである。）
【請求項１１】
食品、栄養補助食品、食品添加物又は医薬品である、請求項７から１０のいずれかに記載の組成物。
【請求項１２】
患者の巨核球系細胞における胞体突起形成又は血小板形成を促進するための医薬である、請求項７から１０のいずれかに記載の組成物。
【請求項１３】
一般式（４）で示される化合物（ただし、Ｘ＝Ｏの場合、Ｒ５はＯＨ又は１−グリセリル基ではない）。
【請求項１４】
Ｘ、Ｒ５、及びＹが、それぞれ下記である、請求項１３に記載の化合物。
（ＸはＯ又はＮＲ６であり、Ｒ５は１から２個のＯＨで置換されたＣ２からＣ３のアルキル基であり、ＹはＯＨ又はＣ１からＣ２のアルコキシ基又はＦ、Ｃｌ又はＢｒである。）
【請求項１５】
下記化学式（５）から（１１）のいずれかで示されることを特徴とする化合物。
【化６１】
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【化６２】
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【化６３】
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【化６４】
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【化６５】
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【化６６】
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【化６７】
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【請求項１６】
請求項１２に記載の組成物を患者に投与することを特徴とする、血小板減少を伴う疾患を治療又は予防する方法。
【請求項１７】
請求項１から６のいずれかに記載の抽出物乃至その処理物、或いは一般式（１）で示される化合物を巨核球系細胞に接触させることを特徴とする、巨核球系細胞における胞体突起形成又は血小板形成を促進させる方法。
【請求項１８】
一般式（１）で示される化合物の巨核球系細胞における胞体突起形成又は血小板形成の促進作用を指標として行うことを特徴とする、被検試料の巨核球系細胞における胞体突起形成又は血小板形成の促進作用を評価する方法。
【国際調査報告】
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