【手続補正書】
【提出日】平成17年2月14日(2005.2.14)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】  生物試料から異常な形態のプリオンタンパク質（ＰｒＰｒｅｓ）を精製する方法であって、
（１）前記生物試料を、３０秒から２時間の間、８０℃よりも低い温度において、該生物    試料の重量の１／４〜４倍の量で少なくとも１種類の界面活性剤を含むバッファＡを    用いてインキュベーションし、また場合により、それに先立ち、その後に、またはそ    れと同時に、プロテアーゼを用いてインキュベーションすることによって、懸濁液Ｓ    １を得る工程と、
（２）かかる（１）で得られた懸濁液Ｓ１に、その懸濁液Ｓ１をマイクロエマルジョン又    はマイクロサスペンションとすることによって清澄化させるために適当な量の、前記    ＰｒＰｒｅｓを可溶化せず且つ誘電率が１０〜２５の溶媒又は溶媒混合物からなるバ    ッファＢを加える工程と、
（３）この（２）の工程で得られた懸濁液Ｓ２を遠心分離する工程と、
（４）得られた残渣を、０．１％〜５％の間の濃度、好ましくは０．２５％〜１％の間の    濃度［バッファＣの体積に基づく（ｗ／ｖ）］の、前記（１）で定義された少なくと    も１種類の界面活性剤、及び／又は０．１Ｍと８Ｍの間の濃度の少なくとも１種類の    カオトロピック剤を含むバッファＣに、室温と１００℃の間の温度、好ましくは８０    ℃以上の温度において、可溶化させる工程と、
を必須的に含むことを特徴とする方法。
【請求項２】  生物試料から異常な形態のプリオンタンパク質（ＰｒＰｒｅｓ）を精製する方法であって、
（１）前記生物試料を、３０秒から２時間の間、８０℃よりも低い温度において、該生物    試料の重量の１／４〜４倍の量で少なくとも１種類の界面活性剤を含むバッファＡを    用いてインキュベーションし、また場合により、それに先立ち、その後に、またはそ    れと同時に、プロテアーゼを用いてインキュベーションすることによって、懸濁液Ｓ    １を得る工程と、
（２）かかる（１) で得られた懸濁液Ｓ１に、相分離を生じさせるに適当な量の、前記Ｐ    ｒＰｒｅｓを可溶化せず且つ誘電率が１０〜２５の溶媒又は溶媒混合物からなるバッ    ファＢを加える工程と、
（３）該（２) の工程で得られた懸濁液を遠心分離する工程と、
（４）その界面に存在する薄膜を回収する工程と、
（５）プロテアーゼを加えることなくバッファＡで前記薄膜を再可溶化させる工程と、
（６）かかる工程（５）で得られた懸濁液を遠心分離する工程と、
（７）得られた残渣を、０．１％〜５％の間の濃度、好ましくは０．２５％〜１％の間の    濃度［バッファＣの体積に基づく（ｗ／ｖ）］の、前記（１）で定義された少なくと    も１種類の界面活性剤、及び／又は０．１Ｍと８Ｍの間の濃度の少なくとも１種類の    カオトロピック剤を含むバッファＣに、室温〜１００℃の間の温度、好ましくは８０    ℃以上の温度において、可溶化させる工程と、
を必須的に含むことを特徴とする方法。
【請求項３】  生物試料から異常な形態のプリオンタンパク質（ＰｒＰｒｅｓ）を精製する方法であって、
（１）前記生物試料を、３０秒から２時間の間、８０℃よりも低い温度において、少なく とも１種類の界面活性剤を含むバッファＡを用いてインキュベーションし、そしてそ れに先立ち、その後に、またはそれと同時に、プロテアーゼを用いてインキュベーシ ョンすることによって、懸濁液Ｓ１を得る工程と、
（２）かかる（１）で得られた懸濁液Ｓ１に、その懸濁液Ｓ１をマイクロエマルジョン又 はマイクロサスペンションとすることによって清澄化させるために適当な量の、前記 ＰｒＰｒｅｓを可溶化せず且つ誘電率が１０〜２５の溶媒又は溶媒混合物からなるバ ッファＢを加える工程と、    
（３）この（２）の工程で得られた懸濁液Ｓ２を遠心分離する工程と、
（４）得られた残渣を、０．１％〜５％の間の濃度、好ましくは０．２５％〜１％の間の 濃度［バッファＣの体積に基づく（ｗ／ｖ）］の、前記（１）で定義された少なくと も１種類の界面活性剤、及び／又は０．１Ｍと８Ｍの間の濃度の少なくとも１種類の カオトロピック剤を含むバッファＣに、室温と１００℃の間の温度、好ましくは８０ ℃以上の温度において、可溶化させる工程と、
を必須的に含むことを特徴とする方法。
【請求項４】  生物試料から異常な形態のプリオンタンパク質（ＰｒＰｒｅｓ）を精製する方法であって、
（１）前記生物試料を、３０秒から２時間の間、８０℃よりも低い温度において、少なく とも１種類の界面活性剤を含むバッファＡを用いてインキュベーションし、そしてそ れに先立ち、その後に、またはそれと同時に、プロテアーゼを用いてインキュベーシ ョンすることによって、懸濁液Ｓ１を得る工程と、
（２）かかる（１) で得られた懸濁液Ｓ１に、相分離を生じさせるに適当な量の、前記Ｐ ｒＰｒｅｓを可溶化せず且つ誘電率が１０〜２５の溶媒又は溶媒混合物からなるバッ ファＢを加える工程と
（３）該（２) の工程で得られた懸濁液を遠心分離する工程と、
（４）その界面に存在する薄膜を回収する工程と、
（５）プロテアーゼを加えることなくバッファＡを用いて前記薄膜を再可溶化させる工程 と、
（６）かかる工程（５）で得られた懸濁液を遠心分離する工程と、
（７）得られた残渣を、０．１％〜５％の間の濃度、好ましくは０．２５％〜１％の間の 濃度［バッファＣの体積に基づく（ｗ／ｖ）］の、前記（１）で定義された少なくと も１種類の界面活性剤、及び／又は０．１Ｍと８Ｍの間の濃度の少なくとも１種類の カオトロピック剤を含むバッファＣに、室温〜１００℃の間の温度、好ましくは８０ ℃以上の温度において、可溶化させる工程と、
を必須的に含むことを特徴とする方法。
【請求項５】  前記生物試料が組織又は器官である場合に、かかる試料が、中性バッファと等張性バッファからなる群から選択された均質化バッファ中において、前記工程（１）の前に、均質化されることを特徴とする請求項１乃至４の何れか１つに記載の方法。
【請求項６】  前記インキュベーションの時間が、好ましくは、３０秒〜１０分の間であることを特徴とする請求項１乃至５の何れか１つに記載の方法。
【請求項７】  前記バッファＡ及び／又は前記バッファＣが、
−ＳＤＳ（ドデシル硫酸ナトリウム）、サルコシル（ラウロイルサルコシン）、コール    酸ナトリウム、デオキシコール酸ナトリウム、タウロコール酸ナトリウム等の陰イオ    ン性界面活性剤と、
−ＳＢ３−１０（デシルスルホベタイン）、ＳＢ３−１２（ドデシルスルホベタイン）
、ＳＢ３−１４、ＳＢ３−１６（ヘキサデシルスルホベタイン）、ＣＨＡＰＳ、デオ    キシＣＨＡＰＳ等の両性界面活性剤と、
−Ｃ１２Ｅ８（ドデシルオクタエチレングリコール）、トリトンＸ１００、トリトンＸ    １１４、トイーン２０、トイーン８０、ＭＥＧＡ９（ノナノイルメチルグルカミン）
、オクチルグリコシド、ＬＤＡＯ（ドデシルジメチルアミンオキシド）、ＮＰ４０等    の非イオン性界面活性剤と、
−イオン性界面活性剤と非イオン性界面活性剤の混合物、２種類のイオン性界面活性剤    の混合物、イオン性界面活性剤と両性界面活性剤の混合物等の界面活性剤混合物と、
からなる群から選択された界面活性剤を含むことを特徴とする請求項１乃至６の何れか１つに記載の方法。
【請求項８】  前記工程（１）で採用される温度が、室温〜５０℃の間の温度であり、好ましくは、３７℃であることを特徴とする請求項１乃至７の何れか１つに記載の方法。
【請求項９】  前記工程（１）において、バッファＡ中に存在する界面活性剤の量が、好ましくは、前記生物試料の重量の１／４〜１．５倍の間であることを特徴とする請求項１乃至８の何れか１つに記載の方法。
【請求項１０】  前記バッファＢが、Ｃ3 −Ｃ6 アルコールと平均理論誘電率が１０〜２５の間であるアルコール混合物とからなる群から選択されることを特徴とする請求項１乃至９の何れか１つに記載の方法。
【請求項１１】  前記アルコール又はアルコール混合物として、ブタン−１−オール、ブ
タン−２−オール、２−メチルプロパン−１−オール、イソプロパノール、（イソプロパノール＋ペンタノール）、（エタノール＋ヘキサノール）、（ブタノール＋ペンタノール）が、特に好ましいことを特徴とする請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】  前記工程（３）と前記工程（５）の遠心分離が、２分間〜１０分間、２０，０００ｇ以下の速度、好ましくは、３，５００ｇ〜１７，５００ｇの間の速度で行なわれることを特徴とする請求項１乃至１１の何れか１つに記載の方法。
【請求項１３】  前記バッファＣが、尿素及びグアニジン又はそれらの混合物からなる群の中から選択されたカオトロピック剤を含むことを特徴とする請求項１乃至１２の何れか１つに記載の方法。
【請求項１４】  前記バッファＣにおける前記可溶化工程（請求項１に記載の方法の工程（４）又は請求項２に記載の方法の工程（７））が、５分間〜１０分間、８０℃以上の温度で加熱し、その後、遠心分離を行なうことを特徴とする請求項１乃至１３の何れか１つに記載の方法。
【請求項１５】  生物試料においてＰｒＰｒｅｓを検出する方法であって、
−請求項１乃至１４の何れか１つに従って前記試料を処理する工程と、
−得られた試料を、必要に応じて、希釈する工程と、
−前記ＰｒＰｒｅｓを何らかの適当な分析法を用いて検出する工程と
を含むことを特徴とする方法。
【請求項１６】  生物試料からＰｒＰｒｅｓを精製するために該生物試料を処理するためのキットであって、該生物試料を均質化するためのバッファに加えて、
（ｉ）−ＳＤＳ（ドデシル硫酸ナトリウム）、サルコシル（ラウロイルサルコシン）、コ ール酸ナトリウム、デオキシコール酸ナトリウム、タウロコール酸ナトリウムの 中から選択された陰イオン性界面活性剤；
−ＳＢ３−１０（デシルスルホベタイン）、ＳＢ３−１２（ドデシルスルホベタイ ン）、ＳＢ３−１４、ＳＢ３−１６（ヘキサデシルスルホベタイン）、ＣＨＡＰ Ｓ、デオキシＣＨＡＰＳの中から選択された両性界面活性剤；
−Ｃ１２Ｅ８（ドデシルオクタエチレングリコール）、トリトンＸ１００、トリト ンＸ１１４、トイーン２０、トイーン８０、ＭＥＧＡ９（ノナノイルメチルグル カミン）、オクチルグリコシド、ＬＤＡＯ（ドデシルジメチルアミンオキシド） 、ＮＰ４０の中から選択された非イオン性界面活性剤；及び
−イオン性界面活性剤と非イオン性界面活性剤の混合物、２種類のイオン性界面活 性剤の混合物、イオン性界面活性剤と両性界面活性剤の混合物の中から選択され た界面活性剤混合物
からなる群より選ばれたバッファＡと、
（ｉｉ）Ｃ3 −Ｃ6 アルコールと平均理論誘電率が１０〜２５の間であるアルコール混合 物とからなる群より選ばれたバッファＢと、
（ｉｉｉ）尿素、グアニジン及び、尿素とグアニジンの混合物からなる群より選ばれたカ オトロピック剤を含むバッファＣとを、
それぞれ適当な量にて含むことを特徴とするキット。
【請求項１７】  生物試料中のＰｒＰｒｅｓを検出するためのキットであって、該生物試料を均質化するためのバッファに加えて、
（ｉ）−ＳＤＳ（ドデシル硫酸ナトリウム）、サルコシル（ラウロイルサルコシン）、コ ール酸ナトリウム、デオキシコール酸ナトリウム、タウロコール酸ナトリウムの 中から選択された陰イオン性界面活性剤；
−ＳＢ３−１０（デシルスルホベタイン）、ＳＢ３−１２（ドデシルスルホベタイ ン）、ＳＢ３−１４、ＳＢ３−１６（ヘキサデシルスルホベタイン）、ＣＨＡＰ Ｓ、デオキシＣＨＡＰＳの中から選択された両性界面活性剤；
−Ｃ１２Ｅ８（ドデシルオクタエチレングリコール）、トリトンＸ１００、トリト ンＸ１１４、トイーン２０、トイーン８０、ＭＥＧＡ９（ノナノイルメチルグル カミン）、オクチルグリコシド、ＬＤＡＯ（ドデシルジメチルアミンオキシド） 、ＮＰ４０の中から選択された非イオン性界面活性剤；及び
−イオン性界面活性剤と非イオン性界面活性剤の混合物、２種類のイオン性界面活 性剤の混合物、イオン性界面活性剤と両性界面活性剤の混合物の中から選択され た界面活性剤混合物
からなる群より選ばれたバッファＡと、
（ｉｉ）Ｃ3 −Ｃ6 アルコールと平均理論誘電率が１０〜２５の間であるアルコール混合 物とからなる群より選ばれたバッファＢと、
（ｉｉｉ）尿素、グアニジン及び、尿素とグアニジンの混合物からなる群より選ばれたカ オトロピック剤を含むバッファＣと、
（ｉｖ）１種類の抗ＰｒＰｒｅｓ抗体とを、
それぞれ適当な量にて含むことを特徴とするキット。
【請求項１８】 前記バッファＡが、ＳＢ３−１０（デシルスルホベタイン）、ＳＢ３−１２（ドデシルスルホベタイン）、ＳＢ３−１４、ＳＢ３−１６（ヘキサデシルスルホベタイン）の中から選択されたものであり、
前記バッファＢが、ブタン−２−オールであり、そして
前記バッファＣが、尿素である、
請求項１６又は請求項１７に記載のキット。
【請求項１９】  前記キットが、更にプロテアーゼを含んでいる、請求項１６乃至１８の何れか１つに記載のキット。