(57)【要約】本発明は血液凝固第VII因子の活性化剤を提供することを目的とする。リバビリン又はその誘導体を血液凝固第VII因子のプロモーターの活性化剤として利用する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
リバビリン又はその誘導体を含有する、血液凝固第VII因子のプロモーター活性化剤。
【請求項２】
血液凝固第VII因子の補充が有効な疾患又は状態を改善、予防又は治療するための医薬であって、
リバビリン又はその誘導体を含む、医薬。
【請求項３】
前記疾患及び状態は、先天性又は後天性第VII因子欠乏症、外科手術時における出血、外傷による出血及び血液凝固障害以外の疾患による出血から選択されるいずれかである、請求項２に記載の医薬。
【請求項４】
血液凝固系タンパク質の製造方法であって、
血液凝固第VII因子のプロモーターと前記プロモーターにより作動可能に結合され血液凝固因子と実質的に同一の生物学的活性を有するタンパク質をコードするDNA配列とを備える発現用DNAコンストラクトを宿主細胞に導入する工程と、
前記宿主細胞をリバビリン又はその誘導体の存在下で培養する工程と、
前記宿主細胞の培養系から前記タンパク質を採取する工程と、
を備える、製造方法。
【請求項５】
前記宿主細胞は肝細胞を含む、請求項４に記載の製造方法。
【請求項６】
前記肝細胞は自家細胞である、請求項５に記載の製造方法。
【請求項７】
前記タンパク質は、血液凝固第VII因子と実質的に同一の生物学的活性を有するタンパク質である、請求項４〜６のいずれかに記載の製造方法。
【請求項８】
前記タンパク質は、血液凝固第VIII因子、第IX因子及び第X因子のいずれかと実質的に同一の生物学的活性を有するタンパク質である、請求項４〜６のいずれかに記載の製造方法。
【請求項９】
血液凝固系タンパク質の製造方法であって、
肝細胞をリバビリン又はその誘導体の存在下で培養する工程と、
前記宿主細胞の培養系から前記タンパク質を採取する工程と、
を備える、製造方法。
【請求項１０】
血液凝固系タンパク質の産生が活性化された細胞の製造方法であって、
肝細胞をリバビリンの存在下培養する工程を備える、製造方法。
【請求項１１】
前記肝細胞は自家細胞である、請求項１０に記載の製造方法。
【請求項１２】
前記肝細胞は、血液凝固第VII因子のプロモーターと前記プロモーターにより作動可能に結合され血液凝固因子と実質的に同一の生物学的活性を有するタンパク質をコードするDNA配列とを備える発現用DNAコンストラクトを保持している、請求項１０又は１１に記載の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、血液凝固第VII因子プロモーターの活性化剤及びその利用に関する。
【背景技術】
【０００２】
血液の凝固には、血小板を初めとして各種の血液凝固因子が関与して、血液凝固系を構成している。血液凝固のルートには、外因系と内因系との二つのルートがあるが、外因系の血液凝固因子である組織因子（第III因子）と第VII因子とによる刺激により内因系の血液凝固因子である第IX因子及び第VIII因子を活性化する経路が重要であると考えられている。また、外因系凝固ルートは、内因系凝固ルートを介さずに第X因子を活性化して最終的に血液凝固系を完結させて止血を達成することができる。このため、第VIII因子や第IX因子などに対する抗体（インヒビター）が生じたときのバイパス療法のための薬剤として使用されている。したがって、第VII因子を含む血液製剤及び組換え製剤は、血友病におけるインヒビター保有患者及びその他の血液凝固障害の可能性のある患者に対して広く用いられるようになってきている。【０００３】
ヌクレオシド誘導体の抗ウイルス薬として知られているリバビリンとインターフェロンとを血友病患者に投与すると血中の凝固第VII因子量を増加することが報告されている（Journal of Thrombosis and Haemostatis, 4:469-487）。
【発明の開示】
【０００４】
しかしながら、凝固第VII因子量の増加がリバビリンによるものかあるいはリバビリンとインターフェロンの併用による効果であるものかは明らかになっているわけではない。リバビリンは抗RNAウイルス薬として知られ、また、リバビリンは肝臓保護作用を示すことも知られているが、そのメカニズムは明らかになっているわけではない。
【０００５】
そこで、本発明は、血液凝固第VII因子の活性化剤及びその用途を提供することを一つの目的とする。また、本発明は、血液凝固因子を外部から補充するのに替わる血液凝固因子に関連する疾患又は症状に有効な医薬を提供することを一つの目的とする。また、本発明は、プロトロンビン時間が延長する状態又はＩＮＲ（International Normalized Ratio）が上昇する状態を改善等するのに有効な医薬を提供することを他の一つの目的とする。さらにまた、本発明は、血液凝固因子又は当該因子を産生する肝細胞を取得する新たな技術を提供することを他の一つの目的とする。
【０００６】
本発明者らは、リバビリンと凝固第VII因子との関係につき、詳細に検討した結果、リバビリンが肝細胞における凝固第VII因子のプロモーターを活性化することで凝固第VII因子の産生を促進しているという新たな知見を得た。そして、凝固第VII因子の産生促進に関しては、インターフェロンとの相乗効果があるわけでなく、リバビリン単独の効果であるという知見を得た。本発明者らは、これらの知見に基づき、本発明を完成した。すなわち、本発明によれば、以下の手段が提供される。
【０００７】
本発明によれば、リバビリン又はその誘導体を含有する、血液凝固第VII因子のプロモーター活性化剤が提供される。
【０００８】
また、本発明によれば、血液凝固第VII因子の補充が有効な疾患又は状態を改善、予防又は治療するための医薬であって、リバビリン又はその誘導体を含む、医薬が提供される。本医薬においては、前記疾患及び状態は、先天性又は後天性第VII因子欠乏症、外科手術時における出血、外傷による出血及び血液凝固障害以外の疾患による出血から選択されるいずれかである。
【０００９】
本発明によれば、血液凝固系タンパク質の製造方法であって、血液凝固第VII因子のプロモーターと前記プロモーターにより作動可能に結合され血液凝固因子と実質的に同一の生物学的活性を有するタンパク質をコードするDNA配列とを備える発現用DNAコンストラクトを宿主細胞に導入する工程と、前記宿主細胞をリバビリン又はその誘導体の存在下で培養する工程と、前記宿主細胞の培養系から前記タンパク質を採取する工程と、を備える、製造方法が提供される。この製造方法において、前記宿主細胞は肝細胞を含むことが好ましく、より好ましくは前記肝細胞は自家細胞である。また、前記タンパク質は、血液凝固第VII因子と実質的に同一の生物学的活性を有するタンパク質としてもよいし、さらに、血液凝固第VIII因子、第IX因子及び第X因子のいずれかと実質的に同一の生物学的活性を有するタンパク質を用いてもよい。
【００１０】
本発明によれば、血液凝固系タンパク質の製造方法であって、肝細胞をリバビリン又はその誘導体の存在下で培養する工程と、前記宿主細胞の培養系から前記タンパク質を採取する工程と、を備える、製造方法が提供される。
【００１１】
本発明によれば、血液凝固系タンパク質の産生が活性化された細胞の製造方法であって、肝細胞をリバビリンの存在下培養する工程を備える、製造方法が提供される。この製造方法において、前記肝細胞は自家細胞であることが好ましく、前記肝細胞は、血液凝固第VII因子のプロモーターと前記プロモーターにより作動可能に結合され血液凝固因子と実質的に同一の生物学的活性を有するタンパク質をコードするDNA配列とを備える発現用DNAコンストラクトを保持していることが好ましい。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１２】
本発明は、血液凝固第VII因子のプロモーター活性化剤及びその利用に関する。本発明のプロモーター活性化剤は、リバビリン又はその誘導体を含有している。本発明の活性化剤によれば、血液凝固第VII因子のプロモーターを活性化して当該因子の産生を促進することができる。したがって、リバビリン又はその誘導体は、それ自体、血液凝固第VII因子の増強剤であり、当該因子の補充が有効な疾患又は状態を改善、予防又は治療するための医薬として用いることができる。【００１３】
本発明のプロモーター活性化剤を利用することで、肝細胞等の宿主細胞の血液凝固第VII因子のプロモーターを活性化し、このプロモーターを利用して当該プロモーターの制御下で各種血液凝固因子を発現させることができる。すなわち、リバビリンにより、これらの血液凝固因子の産生を促進させ、効率的に各種の血液凝固因子を製造できる。同時に、各種血液凝固因子を製造する肝細胞を容易に取得できる。【００１４】
リバビリンは、肝細胞が産生する他の血液凝固因子（第II因子、第V因子及び第VIII因子）の産生も促進する。このため、肝細胞をリバビリンの存在下に培養することで、肝細胞において複数種類の血液凝固因子を容易に一度に増産させることができる。【００１５】
以上のことから、本発明によれば、血液凝固因子を外部から補充するのに替わる血液凝固因子に関連する疾患又は症状に有効な血液凝固第VII因子及び当該因子を含む血液凝固因子を組み合わせた医薬を提供することができる。また、プロトロンビン時間が延長する状態又はＩＮＲ（International Normalized Ratio）が上昇する状態を改善等するのに有効な医薬を提供することができる。【００１６】
以下、本発明の各種の実施形態につき詳細に説明する。【００１７】
（血液凝固第VII因子プロモーターの活性化剤）
本発明の活性化剤は、リバビリン又はその誘導体を含んでいる。【００１８】
（リバビリン又はその誘導体）
本発明の活性化剤は、リバビリン又はその誘導体を含む。リバビリン（１−β−Ｄ−リボフラノシル−１，２，４−トリアゾール−３−カルボキシアミド）は、以下の式（１）で表される。本発明においては、リバビリンを好ましく用いることができる。【００１９】
【化１】
2009028575.tif 000002
【００２０】
リバビリン誘導体としては、式（１）のリバビリンにおけるリボースの２位、３位及び５位の水酸基のＨが置換されたものや、１，２，４−トリアゾール基における水素が置換されたものが挙げられる。【００２１】
他のリバビリン誘導体としては、特開昭５０−１５４２５３号公報中に開示された１−（β−Ｄ−リボフラノシル）−１，２，４−トリアゾール、特開昭５０−２９７２０号公報中に開示される１，２，４−トリアゾール−３−カルボキシアミドのヌクレオシド誘導体、特開昭５３−１２４２７１号公報中に開示される１，２，４−トリアゾールヌクレオシドが挙げられる。さらに、特表２００２−５２７５２２号公報中に開示される各種のリバビリン誘導体が挙げられる。【００２２】
また、他のリバビリン誘導体としては、ヴィラミジン（Ｖｉｒａｍｉｄｉｎｅ）（Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ａｇｅｎｔｓ ａｎｄ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ、Ｍａｙ ２００４，１８７２−１８７５）や、リバビリンの関連化合物であるＡＩＣＡＲ（５−アミノ−１−β−Ｄ−リボフラノシルイミダゾール−４−カルボキシアミド(Ｖｉｒｕｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ １０７(２００５) １６５−１７１)、５−エチニル−１−β−Ｄ−リボフラノシルイミダゾール−４−カルボキシアミド（ＥＩＣＡＲ）などが挙げられる。さらに他のリバビリン誘導体として以下のものが挙げられる（Ｊ. Ｍｅｄ. Ｃｈｅｍ. １９９２、３５、３２３１−３２３８）。
【化２】
2009028575.tif 000003
【００２３】
さらに、式（１）におけるリボースの３位の水酸基が−ＮＨ２で置換された化合物を用いることもできる。この化合物においても、上記したような各種置換基を備えることができる。こうした化合物としては、例えば、１−β−Ｄ−３’−アミノ−３’−デオキシリボフラノシル−１，２，４−トリアゾール−３−カルボキシアミド、１−β−Ｄ−３’−アミノ−３’−デオキシリボフラノシル−１，２，４−トリアゾール−３−カルボキシヒドラジド、１−β−Ｄ−３’−アミノ−３’−デオキシリボフラノシル−１，２，４−トリアゾール−３−カルボヒドロキサミン酸、１−β−Ｄ−３’−アミノ−３’−デオキシリボフラノシル−１，２，４−トリアゾール−５−カルボキサミド、１−β−Ｄ−３’−アミノ−３’−デオキシリボフラノシル−１，２，４−トリアゾール−３−カルボキサミドラゾン、１−β−Ｄ−３’−アミノ−３’−デオキシリボフラノシル−１，２，４−トリアゾール−３−カルボキサミドキシンが挙げられる（Ｊ.Ｍｅｄ.Ｃｈｅｍ. １９７７、２０、１６８４−１６８７）。【００２４】
上記のほか本明細書中に記載した特許文献、及び特許公開公報の内容、特にそこに記載された一般式及び例示化合物を、全体として本明細書中に援用する。【００２５】
こうした個々の化合物の本活性化剤としての適合性は、本明細書ならびに各種文献記載の方法を用いてその効能を評価し、さらに、当業者の知識に従って、その毒性、吸収、代謝、薬物動態等を評価することにより容易に決定することができる。【００２６】
なお、リバビリン誘導体は、種々のウイルスに対して抗ウイルス性を有していることが好ましい。より好ましくは、インフルエンザなどの呼吸器感染症、腎症候性出血熱、ヘルペス感染症、ラッサ熱、麻疹、ＡＩＤＳ（ＨＩＶ感染症）、Ｃ型肝炎、Ｂ型肝炎等のウイルスに対する抗ウイルス活性を有する。ウイルスに対する抗ウイルス活性は、対象とするウイルスにおいて知られる適切な方法で測定することができる。【００２７】
（血液凝固系タンパク質の製造方法）
本発明の血液凝固系タンパク質の製造方法は、肝細胞をリバビリン又はその誘導体の存在下で培養する工程と、前記肝細胞の培養系から前記タンパク質を採取する工程と、を備えることができる。リバビリンは、血液凝固第VII因子のプロモーターを活性化し、その下流にあるタンパク質である血液凝固第VII因子の産生を促進することができる。このため、肝細胞をリバビリンの存在下で培養することにより、その培養細胞あるいはその培地から血液凝固第VII因子を採取することで、容易に血液凝固第VII因子を取得することができる。【００２８】
培養工程で用いる肝細胞は、特に限定しないが、血液凝固系タンパク質の投与先あるいは利用先である動物種と同種細胞であることが好ましい。例えば、ヒトに利用する場合には、ヒト細胞であることが好ましい。より好ましくは自家細胞である。自家細胞である場合には、得られた血液凝固第VII因子についてのインヒビターが発現しにくくなると考えられる。【００２９】
また、培養工程で肝細胞に供給されるリバビリン又はその誘導体量は、血液凝固第VII因子のプロモーターを活性化できる程度であればよく、特に限定されない。適切なリバビリン又はその誘導体の供給量は適切な予備実験等を行うなど当業者であれば容易に設定することができる。【００３０】
肝細胞培養系から血液凝固第VII因子を採取する方法は、特に限定しない。いわゆる細胞培養系からタンパク質を分離し、必要に応じて精製するのに用いる従来公知の方法を採用することができる。【００３１】
なお、リバビリン又はその誘導体は、肝細胞において各種のタンパク質の合成を活性化することが知られている。したがって、血液凝固第VII因子以外の血液凝固系タンパク質又はそのほかの有用タンパク質がある場合には、これらの混合物を採取し利用することもできる。【００３２】
また、本発明の血液凝固系タンパク質の製造方法は、血液凝固第VII因子のプロモーターと前記プロモーターにより作動可能に結合され血液凝固因子と実質的に同一の生物学的活性を有するタンパク質をコードするDNA配列とを備える発現用DNAコンストラクトを宿主細胞に導入する工程と、前記宿主細胞をリバビリン又はその誘導体の存在下で培養する工程と、前記宿主細胞の培養系から前記タンパク質を採取する工程と、を備えることができる。リバビリンは血液凝固第VII因子のプロモーターを活性化するため、こうした活性化機構を利用して第VII因子の産生を増強又は他の血液凝固因子を含む血液凝固系タンパク質の産生を増強することができる。【００３３】
ここで、血液凝固因子と実質的に同一の生物学的活性を有するタンパク質とは、それ自体、ヒトなどの生体内において外因系凝固ルートあるいは内因系凝固ルートによって活性化される血液凝固系における活性のある各種血液凝固因子であるタンパク質であってもよいし、活性化後に各種血液凝固因子と実質的に同一の生物学的活性を有するタンパク質（すなわち、活性化体の前駆体タンパク質）であってもよい。製造しようとする血液凝固系タンパク質の種類に応じて、活性化体あるいはその前駆体を産生するかが適宜選択される。ここで血液凝固系タンパク質としては、第I因子〜第XIII因子（ただし、VIは欠番である。）、フレチャー因子、フィッツジェラルド因子及びフォン・ウィルブランド因子等が挙げられる。好ましくは、肝細胞で産生される血液凝固因子である。【００３４】
血液凝固系タンパク質としては、血液凝固第VII因子と実質的に同一の生物学的活性を有するタンパク質としてもよい。このような発現用コンストラクトを宿主細胞に導入することにより、第VII因子を得るのに有利である。また、肝細胞にこうした発現用コンストラクトを導入することにより、リバビリンによる内在性及び外来性の第VII因子プロモーターによる第VII因子の産生の双方を促進できるため、効率的に第VII因子を製造することができる。【００３５】
また、血液凝固系タンパク質は、血液凝固第VIII因子、第IX因子及び第X因子のいずれかと実質的に同一の生物学的活性を有するタンパク質とすることもできる。これらのタンパク質は、特に血友病Ａ、Ｂにおいて補充するのに有効な血液凝固因子であるからである。【００３６】
本発明で用いる発現用コンストラクトは、血液凝固第VII因子のプロモーター配列と血液凝固因子のアミノ酸配列又はDNA配列に基づいて作製することができる。例えば、ヒトにおける血液凝固第VII因子のプロモーター配列及び各種血液凝固系タンパク質のアミノ酸配列及びDNA配列は既にデータベース上において公開されており、適宜NCBI（http://www.ncbi.nlm.nih.gov/）等のＨＰから取得することができる。当業者であれば、これらの配列に基づき、また、公知の方法（“Molecular Cloning ”,J.Sambrooket al.,Cold Spring Harbor Laboratory Press,1989)により、所望の発現用コンストラクトを作製することができる。また、こうした発現用コンストラクトを宿主細胞としての肝細胞に導入も、当業者であれば公知の方法（“Molecular Cloning ”,J.Sambrooket al.,Cold Spring Harbor Laboratory Press,1989)を用いてあるいはこれに準じた方法を適宜採用して行うことができる。【００３７】
本発明においては、異種の血液凝固系タンパク質を同一の宿主細胞で発現させて培養してもよいし、異なる宿主細胞に導入して同時又は別個に培養してもよい。複数種類の血液凝固系タンパク質を同時に取得することにより、血液凝固障害の改善、予防又は治療に効果的な血液凝固系タンパク質製剤を得ることができる。【００３８】
本製造方法における培養工程で用いる宿主細胞は、特に限定されない。例えば、ヒトタンパク質を製造するのに適した公知の各種の細胞系列を用いることもできる。また、血液凝固系タンパク質の投与先あるいは利用先である動物種と同種細胞を用いることもできる。例えば、得られた血液凝固系タンパク質をヒトに利用する場合には、ヒト細胞を用いることもできる。ヒト細胞としては、例えば、自家細胞等の肝細胞を用いることもできる。【００３９】
なお、培養工程で肝細胞に供給されるリバビリン又はその誘導体の量は、既に説明したように、血液凝固第VII因子のプロモーターを活性化できる程度であればよい。また、培養工程における培養条件は、用いる宿主細胞に応じて適宜選択すればよい。【００４０】
肝細胞培養系から血液凝固第VII因子を採取する方法は、特に限定しない。いわゆる細胞培養系からタンパク質を分離し、必要に応じて精製するのに用いる従来公知の方法を採用することができる。【００４１】
なお、本発明によれば、こうした製造方法によって得られる血液凝固系タンパク質又はその混合物も提供される。【００４２】
また、本発明で用いる発現用コンストラクトは、適当なベクターに保持させることで遺伝子治療に用いることができる。すなわち、本発明で用いる発現用コンストラクトを保持したベクターを患者の肝臓等に導入することにより、患者の肝臓細胞を形質転換し、さらに、リバビリン又はその誘導体を患者に投与して肝臓に到達させるようにすることで、肝臓においてリバビリン又はその誘導体により発現用コンストラクトに保持させた血液凝固系タンパク質を発現させて、欠損する血液凝固系タンパク質を補充することができる。【００４３】
（血液凝固系タンパク質の産生が活性化された肝細胞の製造方法）
本発明の肝細胞の製造方法は、肝細胞をリバビリン又はその誘導体の存在下培養する工程を備える、製造方法が提供される。本発明の製造方法によれば、リバビリン又はその誘導体により血液凝固第VII因子の産生が活性化された肝細胞を得ることができる。この培養細胞を含む培養系からは血液凝固第VII因子を回収できるほか、他の血液凝固系タンパク質を回収することができる。また、この肝細胞が、自家細胞など患者への移植に適合するものである場合には、細胞移植用の材料として利用することも可能である。【００４４】
なお、こうした肝細胞は、血液凝固第VII因子のプロモーターと前記プロモーターにより作動可能に結合され血液凝固因子と実質的に同一の生物学的活性を有するタンパク質をコードするDNA配列とを備える発現用DNAコンストラクトを保持していることが好ましい。こうした肝細胞をリバビリン又はその誘導体の存在下で培養することにより、第VII因子及び発現コンストラクトに保持させた血液凝固系タンパク質を発現する肝細胞を得ることができる。【００４５】
（血液凝固第VII因子の補充が有効な疾患又は状態を改善、予防又は治療するための医薬）
本発明の医薬は、有効成分としてリバビリン又はその誘導体を含むことができる。本発明の活性化剤は、それ自体血液凝固第VII因子の補充が有効な疾患又は状態を改善、予防又は治療するための医薬として利用できるからである。ここで、このような疾患又は状態としては、例えば、先天性又は後天性の血液凝固第VII因子欠乏症が挙げられる。また、同様の疾患又は状態としては、プロトロンビン時間が延長する状態又はＩＮＲが上昇する状態を改善、予防又は治療するのに有用である。すなわち、外因系及び共通系の血液凝固系の障害状態を改善、予防又は治療できる。さらに、内因系の血液凝固系の障害状態を改善、予防又は治療できる。こうした障害状態としては、例えば、各種の止血及び／又は凝固系の異常を来たす先天性又は後天性の血液疾患が挙げられる。典型的には、先天性又は後天性の血友病Ａ及び血友病Ｂ、播種性血管内凝固症候群（ＤＩＣ）、ＶｉｔＫ欠損症等の凝固系障害、Ｂｅｒｎａｒｄ−Ｓｏｕｌｉｅｒ症候群、Ｇｌａｎｚｍａｎｎ病（血小板無力症）、血小板減少症、血小板機能異常症、血栓性血小板減少性紫斑病（ＴＴＰ）、溶血性尿毒性症候群（ＨＵＳ）、特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、Ｋａｓａｂａｃｈ−Ｍａｒｒｉｔｔ症候群、Ｈｅｎｏｃｈ−Ｓｃｈｏｎｌｅｉｎ紫斑病（ＨＳＰ）等の血小板異常のほか、再生不良性貧血、白血病、悪性貧血、鉄芽球性貧血、Ｗｉｓｋｏｔｔ−Ａｌｄｒｉｃｈ症候群、慢性骨髄増殖性疾患、無フィブリノゲン血症、アンチトロンビンIII欠損症、プロテインＣ欠損症、プロテインＳ欠損症、抗リン脂質抗体症候群（ＡＰＳ）、フィブリノゲン異常症等が挙げられる。さらに、ＨＩＶウイルス感染に伴う血小板減少や凝固因子の低下並びに他のウイルス感染および様々な肝炎ウイルスや他の原因による肝障害、肝炎及び肝硬変などの肝疾患に伴う血小板減少や凝固因子の低下による出血性疾患が挙げられる。なかでも、第VII因子の補充が有効な疾患等としては、先天性又は後天性の血液凝固第VII因子欠乏症、後天性血友病、血液凝固因子に対する抗体（インヒビター）を保有する場合の先天性又は後天性の血友病が挙げられる。【００４６】
本発明の医薬は、ウイルス感染症や肝疾患に伴うＰＴ時間延長状態又はＩＮＲ上昇状態の改善等に有効である。例えば、本医薬がリバビリンを有効成分とする場合、リバビリンの抗ウイルス活性により、ウイルス感染疾患に対する治療効果を発現することができる。また、本発明の医薬は、リバビリン又はその誘導体とインターフェロンとをそれぞれ有効成分として組み合わせてなる医薬として利用することもできる。インターフェロンとリバビリンとの組み合わせは、Ｃ型肝炎ウイルスなどによる慢性肝炎に有効であることから、肝炎の治療効果を発現することもできる。【００４７】
なお、ウイルス感染疾患としては、例えば、インフルエンザウイルス感染、パラインフルエンザウイルス感染、ＲＳウイルス（「ＲＳＶ」）感染（例えば、ＲＳＶ細気管支炎およびＲＳＶ肺炎、特に小児および幼児におけるＲＳＶ感染ならびに既存の心肺疾患を有する患者におけるＲＳＶ肺炎）、麻疹ウイルス感染、ラッサ熱ウイルス感染、朝鮮出血熱感染、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）感染、クリミア−コンゴ出血およびＨＣＶ感染およびＨＩＶ感染、ウエストナイルウイルスまたはクンジンウイルスによって引き起こされるような脳炎感染またはセントルイス脳炎ならびに免疫に障害のある患者において見られるウイルス感染などが挙げられる。【００４８】
本発明の医薬は、血液凝固第VIII因子及び血液凝固第IX因子からなる群から選択される１種又は２種以上の補充が有効である状態を改善、予防又は治療するのに用いることができる。本発明の医薬は、血液凝固第VII因子の産生が促進されることから、これらの凝固因子の欠損を補充することができると推察されるからである。いわゆる血友病Ａや血友病Ｂの出血傾向の改善又は予防に用いることができる。さらに、血友病であってかつインヒビター保有者の出血傾向の改善又は予防に用いることができる。すなわち、本発明の医薬によれば、バイパス療法的な治療を実現できる。【００４９】
本発明の医薬は、また、各種態様の出血時の止血用又はその出血予防用として用いることができる。特に、外科手術時の出血、交通事故等の外傷時の出血、脳出血等の血液凝固障害以外の疾患等における出血時の止血又はこれらの出血の予防に用いることができる。【００５０】
本医薬の投与対象となる患者は、上記いずれかの障害状態を有する又は当該障害状態を生じる可能性のある患者である。こうした患者に投与することにより、上記いずれかの障害状態を改善、予防又は治療できる。【００５１】
（リバビリン又はその誘導体の製剤形態）
リバビリン又はその誘導体における固体形態の調製物は、粉末、錠剤、分散顆粒、カプセル、カシェ剤及び坐剤を包含する。粉末及び錠剤は約５〜約９５％の有効成分を含んでもよい。適切な固体担体は当該分野において公知であり、例えば、炭酸マグネシウム、ステアリン酸マグネシウム、滑石、糖または乳糖である。錠剤、粉末、カシェ剤及びカプセルは、経口投与に適切な固体投与形態として使用できる。医薬上許容される担体および種々の組成物の製造方法の例は、Ａ.Ｇｅｎｎａｒｏ(ｅｄ.)，Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１８ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，(１９９０)，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｔｏｎ，Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａに記載されている。【００５２】
また、液体形態の調製物は、溶液、懸濁液及び乳濁液を包含する。例として、非経口注射用の水もしくは水−ポリエチレングリコール溶液に言及し得る。固体形態の調製物は経口投与のために使用直前に液体調製物に変換され得る。静脈内、筋肉内又は皮下注射すべき非経口形態は通常滅菌溶液の形態であり、張性剤（塩またはグルコース）及び緩衝液を含有してもよい。経口溶液、懸濁液及び乳濁液に混濁剤を含めてもよい。液体形態の調製物は鼻腔内投与用溶液も包含し得る。本医薬の製剤形態としては、吸入に適切なエアロゾル調製物は溶液及び粉末形態の固体を包含し得、当該形態においては、不活性圧縮気体（例えば、窒素）のような医薬上許容される担体との組合せであってもよい。リバビリン又はその誘導体には、固体形態の調製物も包含され、これは使用直前に、経口又は非経口投与のために液体形態の調製物に変換されることが意図される。そのような液体形態は溶液、懸濁液及び乳濁液を包含する。リバビリン又はその誘導体は、経皮送達可能である。経皮組成物は、クリーム、ローション、エアロゾル及び／又は乳濁液の形態を取ってもよく、この目的のために当該分野において従来から用いられているようなマトリックス又はレザバータイプの経皮パッチ中に含めることができる。【００５３】
リバビリン又はその誘導体は、好ましくは単回投与形態である。そのような形態で、調製物を、適切な量（例えば、所望の目的を達成するために有効な量）の有効成分を含有する適切なサイズの単位用量に細分化することができる。【００５４】
（リバビリンの有効量）
リバビリン又はその誘導体の有効量は、対象とする疾患の種類、使用する化合物の種類、患者の年齢、体重、症状及びその剤型によっても異なるが、例えば、経口投与の場合、成人患者に対しては、リバビリンの場合１日１回〜数回、１日量として、好ましくは約１ｍｇ／ｋｇ〜約２００ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは約１ｍｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇ、さらに好ましくは約２ｍｇ／ｋｇ〜約４０ｍｇ／ｋｇ、の範囲で投与することができる。なお、必要に応じ、また、特定の状況のために適正な用法用量の決定は当業者の範囲で行うことができる。なお、インターフェロンと併用する場合には、インターフェロンの種類や投与量によっても異なるが、上記投与量等に基づいて適宜決定することができる。【００５５】
以下、本発明につき具体例を挙げて説明するが、本発明は以下に例示する具体例に限定されるものではない。
【実施例】
【００５６】
ヒト血液凝固第VII因子のプロモーター領域のDNA配列（アクセッション番号：AL137002）に基づいて健常人ゲノムDNAを鋳型にPCR法（センスプライマー：5’-ACTTGAACCCGGGAGGTG-3’、アンチセンスプライマー：5’-GGAaAgCtTGATGAAATCTCTGCAGT-3’／小文字部に変異を加えHindIIIサイト[下線部]を導入）で増幅することにより、このプロモーター領域を含むDNA断片を取得した。このプロモーターDNA断片722bpをTAクローニング法にてpBluescript II KS(+)のEcoRVサイトに(+)方向にサブクローニングの後、そのHindIIIフラグメントをルシフェラーゼのcDNA配列保有プラスミド（プロメガ社製pGL3-Basic由来のpGVB2U：国立循環器病センター・小亀先生より供与 [Kokame, et al. JBC 276,9199-9205,2001]）を利用して、当該プロモーターの作動下にルシフェラーゼタンパクをコードするDNAを備えるプラスミドを構築した。このプラスミドおよび遺伝子導入効率を補正するためにβ-ガラクトシダーゼ発現ベクター・pSV-β-galactosidase プラスミド（プロメガ社製）を、培養ヒト肝細胞（HepG2細胞）にカルシウム沈澱法によりトランスフェクトして、一過性発現系での形質転換培養ヒト肝細胞を取得した。【００５７】
この形質転換培養ヒト肝細胞（70-80％コンフレント）に対して、リバビリンの存在下および非存在下の10％FCS+DMEMにて、5% CO2、37℃で40時間培養したのち細胞を回収し、ピッカジーン培養細胞溶解剤LCβ・PGC-51（東洋インキ社製）にて溶解した。各細胞溶解液中のルシフェラーゼ活性は発光基質ルシフェラーゼアッセイ ピッカジーン（東洋インキ社製）と反応させ、発光量をルミノメータMini Lumat LB9506(（Berthold社製）にて測定した。同じくβ-gal活性は、2×Assay Buffer （プロメガ社製）と反応させ、吸光度を測定した。β-gal活性測定値で補正した相対的ルシフェラーゼ活性の上昇について解析したところ、リバビリン50μg/ml培地下では、リバビリン非存在下よりも1.6倍、同150μg/ml培地下で3.6倍のルシフェラーゼ活性の上昇を認めた。【００５８】
以上のことから、リバビリンは血液凝固VII因子のプロモーターに作用して第VII因子の産生を促進できることがわかった。このため、リバビリンはそれ自体で血液凝固第VII因子の産生を増強できることがわかった。
【配列表フリーテキスト】
【００５９】
配列番号１、２：プライマー
【配列表】
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【国際調査報告】
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