【手続補正書】
【提出日】平成15年12月24日(2003.12.24)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
核酸および／または核酸類似体、ならびに／もしくは核酸および／または核酸類似体および／またはアミノ酸含有物質を、原核細胞および／または真核細胞に導入する方法であって、
−前記核酸、核酸類似体、もしくは核酸または核酸類似体またはアミノ酸含有物質と、原核生物のＨＵ蛋白質との複合体を形成するために、導入される核酸、核酸類似体、もしくは前記核酸または核酸類似体またはアミノ酸含有物質を、前記原核生物のＨＵ蛋白質と接触させる工程と、
−続いて、前記複合体を原核生物または真核生物の標的細胞内に導入するために、核酸、核酸類似体、および／もしくは核酸または核酸類似体またはアミノ酸含有物質と原核生物のＨＵ蛋白質との前記複合体を、前記細胞と接触させる方法。
【請求項２】
核酸として、一本鎖または二本鎖ＤＮＡ、一本鎖または二本鎖ＲＮＡ、プラスミド形式のＤＮＡ、染色体断片、アンチセンスＲＮＡ、リボザイム、触媒ＲＮＡ、ヌクレオチド、染色体ＤＮＡ、もしくはコードｍＲＮＡが導入されることを特徴とする、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
核酸として、コード配列を備えたＤＮＡが使用され、それが標的細胞内で発現されることを特徴とする、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記使用された核酸が、コンパクト化されて、原核生物のＨＵ蛋白質と接触することにより分解から防護されることを特徴とする、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
核酸類似体として、ＰＮＡ（ペプチド核酸）が導入されることを特徴とする、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
核酸または核酸類似体と、原核生物のＨＵ蛋白質との複合体が、可逆性であることを特徴とする、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
植物細胞または動物細胞またはヒト細胞にＤＮＡを導入するための、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
アミノ酸含有物質として、蛋白質、ペプチド、ペプチドホルモン、酵素、蛋白質ドメイン、糖蛋白質、またはアミノ酸、ペプチドホルモン、もしくはリポ蛋白質を基にした医薬活性化合物が導入されることを特徴とする、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
アミノ酸含有物質と原核生物のＨＵ蛋白質との複合体形成が、共有または非共有結合により起こることを特徴とする、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
アミノ酸含有物質として、緑色蛍光蛋白質（ＧＦＰ）が導入されることを特徴とする、請求項８または９に記載の方法。
【請求項１１】
前記原核生物のＨＵ蛋白質が、好冷性、中温性、好熱性、または超好熱性生物に由来することを特徴とする、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
原核生物のＨＵ蛋白質として、ＴｍＨＵ（Thermotoga maritime ＨＵ蛋白質）、Ｓｓｏ７ｄ（Sulfolobus solfataricus およびSulfolobus acidocaldarius 由来）、Ｓｓｈ７（Sulfolobus shibatae 由来）、Ｓａｃ７ｄ（Sulfolobus solfataricus およびSulfolobus acidocaldarius 由来）、ＢｓｔＨＵ（Bacillus stearothermophilus 由来）、ＨＵ（Escherichia coli由来）、ＩＨＦ（Escherichia coli由来）、ＢｓｕＨＵ（Bacillus subtilis 由来）、ＳａＨＵ（Sulfolobus acidocaldarius 由来）、ＢｂｕＨＵ（Borrelia burgdorferi由来）、ＢｇａＨＵ（Borrelia garinii由来）、ＢａｆＨＵ（Borrelia afzelii由来）、ＩＨＦ（Pseudomonas aeruginosa由来）、ＤＮＡ結合蛋白質（Chlamidia spp.）、Ｈｓａ（Staphylococcus aureus 由来）、ＲＩＨＵ（Rhizobium leguminosarum 由来）、ＨＳｌ（Streptomyces lividans 由来）、ＨＣｊ（Campylobacter jejuni由来）、ＨＵ（Bacillus caldolyticus 由来）、ＨＵ（Bacillus caldotenax 由来）、ＨＵ（Bacillus globigii 由来）、ＨＣｃ（Caulobacter crescentus由来）、ＤＮＡ結合蛋白質（Deniococcus radiodurans 由来）、ＨＳａ（Sulfolobus acidocaldarius 由来）、ヒストン様ＤＮＡ結合蛋白質（Streptococcus gordonii由来）、ヒストン様ＤＮＡ結合蛋白質（Streptococcus mutans由来）、ヒストン様ＤＮＡ結合蛋白質（Streptococcus pygenes 由来）、ヒストン様ＤＮＡ結合蛋白質（Streptococcus thermophilus由来）、ヒストン様ＤＮＡ結合蛋白質（Haemophilus influenzae Rd 由来）、ヒストン様ＤＮＡ結合蛋白質（Listera monocytogenes 由来）、ヒストン様ＤＮＡ結合蛋白質（Serratia marcescens 由来）、ヒストン様ＤＮＡ結合蛋白質（Salmonella typhimurium由来）、ヒストン様ＤＮＡ結合蛋白質（Thermus aquaticus 由来）、ヒストン様ＤＮＡ結合蛋白質（Rhizobium meliloti由来）、ヒストン様ＤＮＡ結合蛋白質（Pseudomonas putida由来）、ヒストン様ＤＮＡ結合蛋白質（Mycobacterium tuberculosis由来）、ヒストン様ＤＮＡ結合蛋白質（Mycobacterium leprae由来）、ヒストン様ＤＮＡ結合蛋白質（Zymomonas mobilis 由来）、ヒストン様ＤＮＡ結合蛋白質（Yersinia pseudotuberculosis 由来）、ヒストン様ＤＮＡ結合蛋白質（Mycobacterium bovis 由来）、ヒストン様ＤＮＡ結合蛋白質（Mycoplasma hyopneumoniae由来）、ヒストン様ＤＮＡ結合蛋白質（Mycobacterium smegmatis 由来）、ヒストン様ＤＮＡ結合蛋白質（Helicobacter pylori 由来）、ヒストン様ＤＮＡ結合蛋白質（Aquifex aeolicus由来）、ヒストン様ＤＮＡ結合蛋白質（Agrobacterium tumefaciens 由来）、ヒストン様ＤＮＡ結合蛋白質（Pseudomonas aeruginosa由来）、ヒストン様ＤＮＡ結合蛋白質（Helicobacter pylori 由来）、ヒストン様ＤＮＡ結合蛋白質（Xanthomonas campestris由来）、ヒストン様ＤＮＡ結合蛋白質（Vibrio proteolyticus由来）、ヒストン様ＤＮＡ結合蛋白質（Streptomyces lividans 由来）、ヒストン様ＤＮＡ結合蛋白質（Rickettsia prowazekii 由来）、ヒストン様ＤＮＡ結合蛋白質（Streptomyces coelicolor 由来）、ヒストン様ＤＮＡ結合蛋白質（Mycoplasma capricolum 由来）、ヒストン様ＤＮＡ結合蛋白質（Borrelia burgdorferi由来）、ヒストン様ＤＮＡ結合蛋白質（Borrelia japonica 由来）、ヒストン様ＤＮＡ結合蛋白質（Borrelia andersonii 由来）、またはＨＴａ（Thermoplasma acidophilum由来）が使用されることを特徴とする、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
前記標的細胞への取込み効率の増加または改良が起こるように、前記原核生物のＨＵ蛋白質が修飾されることを特徴とする、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
導入された核酸、核酸類似体、もしくは核酸または核酸類似体またはアミノ酸含有物質の、標的細胞のエンドソームからの放出増加が達成されるように、前記原核生物のＨＵ蛋白質が修飾されることを特徴とする、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
核酸、核酸類似体、もしくは核酸または核酸類似体またはアミノ酸含有物質と、前記原核生物のＨＵ蛋白質との前記複合体が標的細胞の表面のレセプタ分子と結合するように、前記原核生物のＨＵ蛋白質が修飾されることを特徴とする、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
核酸、核酸類似体、もしくは核酸または核酸類似体またはアミノ酸含有物質と、前記原核生物のＨＵ蛋白質との前記複合体を標的細胞とインキュベーションする前に、リポソーム膜またはポリエチレングリコールによる前記複合体のラッピングが起こることを特徴とする、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の方法。