(57)【要約】  本発明は、食品、栄養機能食品、特定保健用食品、栄養補助剤、栄養剤、動物薬、飲料、飼料、化粧品、医薬品、治療薬、予防薬等として有用な還元型補酵素Ｑ10の安定化方法並びに安定化された組成物を提供すること。さらには、酸化型補酵素Ｑ10を原料とする簡便な還元型補酵素Ｑ10の製造方法を提供することを課題とする。本発明によって、甘草疎水性抽出物と還元型補酵素Ｑ10を共存させることにより、還元型補酵素Ｑ10の酸化を抑制させ、還元型補酵素Ｑ10を安定に保持することができる。また、酸化型補酵素Ｑ10と甘草疎水性抽出物を共存させることにより、還元型補酵素Ｑ10を製造することができる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
甘草疎水性抽出物を用いて酸化型補酵素Ｑ10を還元型補酵素Ｑ10へと還元する、還元型補酵素Ｑ10の製造方法。
【請求項２】
有機溶媒、水、油脂類またはそれらの混合物の存在下で還元反応を行う請求項１に記載の製造方法。
【請求項３】
有機溶媒が、エタノールである請求項２に記載の製造方法。
【請求項４】
油脂類が、ヤシ油、パーム油、パーム核油、アマニ油、つばき油、玄米胚芽油、オリーブ油、菜種油、米油、落花生油、コーン油、小麦胚芽油、大豆油、エゴマ油、綿実油、ヒマワリ種子油、カポック油、月見草油、シア脂、サル脂、カカオ脂、ゴマ油、サフラワー油、アボガド油、けし油、ごぼう子油、豚脂、乳脂、魚油、牛脂、これらを分別、水素添加、エステル交換等により加工した油脂、中鎖脂肪酸トリグリセリド及び脂肪酸の部分グリセリドからなる群より選択される１種以上である請求項２に記載の製造方法。
【請求項５】
反応開始時の反応系における甘草疎水性抽出物濃度が１重量％以上である請求項１〜４のいずれか１項に記載の製造方法。
【請求項６】
反応開始時の反応系における酸化型補酵素Ｑ10濃度が０．１重量％以上である請求項１〜５のいずれか１項に記載の製造方法。
【請求項７】
製剤中で還元反応を行う、請求項１〜６のいずれか１項に記載の製造方法。
【請求項８】
製剤がカプセル剤である請求項７記載の製造方法。
【請求項９】
カプセル剤がソフトカプセル剤である請求項８記載の製造方法。
【請求項１０】
脱酸素雰囲気下に還元反応を行うことを特徴とする請求項１〜９のいずれか１項に記載の製造方法。
【請求項１１】
還元型補酵素Ｑ10と甘草疎水性抽出物を共存下に含有する組成物とすることを特徴とする還元型補酵素Ｑ10の安定化方法。
【請求項１２】
組成物中に、有機溶媒、水及び油脂類からなる群より選択される少なくとも１種をさらに含有する請求項１１に記載の安定化方法。
【請求項１３】
有機溶媒がエタノールである請求項１２に記載の安定化方法。
【請求項１４】
油脂類が、ヤシ油、パーム油、パーム核油、アマニ油、つばき油、玄米胚芽油、オリーブ油、菜種油、米油、落花生油、コーン油、小麦胚芽油、大豆油、エゴマ油、綿実油、ヒマワリ種子油、カポック油、月見草油、シア脂、サル脂、カカオ脂、ゴマ油、サフラワー油、アボガド油、けし油、ごぼう子油、豚脂、乳脂、魚油、牛脂、これらを分別、水素添加、エステル交換等により加工した油脂、中鎖脂肪酸トリグリセリド及び脂肪酸の部分グリセリドからなる群より選択される１種以上である請求項１２に記載の安定化方法。
【請求項１５】
組成物中の甘草疎水性抽出物含量が１重量％以上である請求項１１〜１４のいずれか１項に記載の安定化方法。
【請求項１６】
組成物中の還元型補酵素Ｑ10含量が０．１重量％以上である請求項１１〜１５のいずれか１項に記載の安定化方法。
【請求項１７】
組成物中にさらに他の活性成分を含有する請求項１１〜１６のいずれか１項に記載の安定化方法。
【請求項１８】
還元型補酵素Ｑ10は、外部添加したものである請求項１１〜１７のいずれか１項に記載の安定化方法。
【請求項１９】
組成物を脱酸素雰囲気下に調製及び／又は保管することを特徴とする請求項１１〜１８のいずれか１項に記載の安定化方法。
【請求項２０】
還元型補酵素Ｑ10と甘草疎水性抽出物を含有する組成物。
【請求項２１】
組成物中の還元型補酵素Ｑ10含量が０．１重量％以上である請求項２０に記載の組成物。
【請求項２２】
還元型補酵素Ｑ10が、外部添加したものである請求項２０又は２１に記載の組成物。
【請求項２３】
還元型補酵素Ｑ10が、組成物中で酸化型補酵素Ｑ10を、甘草疎水性抽出物を用いて還元したものである請求項２０又は２１に記載の組成物。
【請求項２４】
酸化型補酵素Ｑ10と甘草疎水性抽出物を含有する組成物。
【請求項２５】
さらに、有機溶媒、水及び油脂類からなる群より選択される少なくとも１種を含有する請求項２０〜２４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２６】
有機溶媒が、エタノールである請求項２５に記載の組成物。
【請求項２７】
油脂類が、ヤシ油、パーム油、パーム核油、アマニ油、つばき油、玄米胚芽油、オリーブ油、菜種油、米油、落花生油、コーン油、小麦胚芽油、大豆油、エゴマ油、綿実油、ヒマワリ種子油、カポック油、月見草油、シア脂、サル脂、カカオ脂、ゴマ油、サフラワー油、アボガド油、けし油、ごぼう子油、豚脂、乳脂、魚油、牛脂、これらを分別、水素添加、エステル交換等により加工した油脂、中鎖脂肪酸トリグリセリド及び脂肪酸の部分グリセリドからなる群より選択される１種以上である請求項２５に記載の組成物。
【請求項２８】
組成物中の甘草疎水性抽出物含量が１重量％以上である請求項２０〜２７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２９】
さらに他の活性成分を含有する請求項２０〜２８のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項３０】
甘草疎水性抽出物が、甘草ポリフェノールを５０重量％以上含有するものである請求項２０〜２９のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項３１】
製剤形態に加工された請求項２０〜３０のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項３２】
製剤形態がカプセル剤である請求項３１に記載の組成物。
【請求項３３】
カプセル剤が、ソフトカプセル剤である請求項３２に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、甘草疎水性抽出物を使用した還元型補酵素Ｑ10の製造方法、ならびに、その安定化方法に関する。還元型補酵素Ｑ10は、酸化型補酵素Ｑ10と比較して高い経口吸収性を示し、優れた、食品、栄養機能食品、特定保健用食品、栄養補助剤、栄養剤、動物薬、飲料、飼料、ペットフード、化粧品、医薬品、治療薬、予防薬等として有用な化合物である。
【背景技術】
【０００２】
広く生物界に分布することが知られているベンゾキノン誘導体である酸化型補酵素Ｑ10は、そのビタミン様の機能からビタミンＱとも呼ばれており、弱った細胞活性を健康な状態に戻す栄養源として身体を若返らせる成分である。一方、還元型補酵素Ｑ10は酸化型補酵素Ｑ10の２電子還元体であり、酸化型補酵素Ｑ10が橙色結晶であるのに対し、還元型補酵素Ｑ10は白色結晶である。還元型補酵素Ｑ10及び酸化型補酵素Ｑ10は、ミトコンドリア、リソゾーム、ゴルジ体、ミクロソーム、ペルオキシソーム、或いは細胞膜などに局在し、電子伝達系の構成成分としてＡＴＰ産生賦活、生体内での抗酸化作用、膜安定化に関与している事が知られている生体の機能維持に必要不可欠な物質である。【０００３】
還元型補酵素Ｑ10は、例えば、合成、発酵、天然物からの抽出等の従来公知の方法により補酵素Ｑ10を得た後、クロマトグラフィーにより流出液中の還元型補酵素Ｑ10区分を濃縮する方法等により得られることが知られている（特許文献１：特開平１０−１０９９３３）。この場合には、上記補酵素Ｑ10中に含まれる酸化型補酵素Ｑ10を、水素化ホウ素ナトリウム、亜ジチオン酸ナトリウム（次亜硫酸ナトリウム）等の一般的な還元剤を用いて還元した後、クロマトグラフィーによる濃縮を行っても良いこと、また、還元型補酵素Ｑ10は、既存の高純度補酵素Ｑ10に上記還元剤を作用させる方法によっても得られることが、該特許公報中に記載されている。【０００４】
しかしながら、これらの方法により取得された還元型補酵素Ｑ10は食用、化粧品用等に使用するには、更なる加工を必要とする。【０００５】
また、還元型補酵素Ｑ10は、酸素分子によって酸化型補酵素Ｑ10に酸化されやすく、還元型補酵素Ｑ10を食品、栄養機能食品、特定保健用食品、栄養補助剤、栄養剤、動物薬、飲料、飼料、化粧品、医薬品、治療薬、予防薬等或いはそれらの素材や組成物に加工する際、及び／又は、加工後保存する際、還元型補酵素Ｑ10の安定化が重要な課題として残されている。上記の加工や保存に際して、完全な酸素の除去或いは遮断は極めて難しく、特に加工時の加温や長期にわたる保存において、残存する或いは混入する酸素が大きな悪影響を及ぼす。上記酸化は、酸化型補酵素Ｑ10の副生といった品質面の問題に直結する。【０００６】
そのまま食用等に使用できる還元型補酵素Ｑ10の製造方法、並びに、還元型補酵素Ｑ10を安定に保持するための方法も存在し（特許文献２：ＷＯ０１／５２８２２）、該公報には、１）還元型補酵素Ｑ10、還元型補酵素Ｑ10が酸化型補酵素Ｑ10に酸化されるのを抑制するために有効な量の還元剤、及び、上記還元型補酵素Ｑ10と上記還元剤を溶解するために有効な量の界面活性剤又は植物油又はこれらの混合物、そして必要に応じて溶媒からなる組成物、２）上記組成物をゼラチンカプセル又はタブレットに製剤化した経口投与のための組成物、更に、３）酸化型補酵素Ｑ10並びに還元剤を用いてｉｎ  ｓｉｔｕで還元型補酵素Ｑ10を含有する上記組成物を調製する方法、が開示されている。この方法では、直接、食用等に使用できる還元型補酵素Ｑ10含有組成物が調製できるため、メリットはあるものの、組成物中に含まれる還元型補酵素Ｑ10の品質や安定化効果等に関する詳細な記述はなく、どの程度の安定化が見込めるかは明らかでない。【０００７】
また、上記の組成物やその調製方法においては、非常に多種、多量の界面活性剤が使用されているため、非常に複雑・煩雑なものとなっており、さらに、還元剤として使用されるアスコルビン酸類は酸化されて相当量のデヒドロアスコルビン酸類を生じ、それが上記組成物中に混入するという問題もある。デヒドロアスコルビン酸類や分解により生成したシュウ酸は、アスコルビン酸類とは異なり、有害性が高い。たとえば、肝臓や腎臓中の過酸化脂質量の増加と抗酸化物質の減少や腎臓中のシュウ酸量の増加が報告されており、酸化ストレスに対する抵抗力の低下や尿管結石を発症し易い（非特許文献１：Nutrition Research Vol.13, 667-676 (1993)）等の副作用が懸念される。【０００８】
上記課題のうち、還元型補酵素Ｑ10の安定性の改善を目的に、還元型補酵素Ｑ10と、オリーブ油以外の油脂及び／又はポリオールと、必要に応じてポリグリセリン脂肪酸エステルとを含有する、還元型補酵素Ｑ10の安定化を実質的に阻害しない組成物（特許文献３：ＷＯ０３／６２１８２）や、還元型補酵素Ｑ10とプロピレングリコール脂肪酸エステルとを共存させた組成物（特許文献４：ＷＯ２００７／５２８０２）も報告されているが、長期や悪条件下での保存などさらなる酸化安定性が要求される条件では、該方法の酸化安定性も十分とはいえない場合もある。【０００９】
一方、甘草は、中国、ヨーロッパ、ロシア、アフガニスタン、イラン、パキスタン等に広く分布するマメ科カンゾウ属（Glycyrrhiza属）の植物であり、その根などを食品及び生薬として利用してきた長い摂取経験がある植物である。食品としての甘草利用は、日本では食品添加物や食品に使用されているのを始め、米国では甘草が、ＧＲＡＳ（Generally Recognized As Safe）食品として１９８５年にＦＤＡにより登録されており、１９９０年のデザイナーズフーズ計画において、甘草はがん予防食品として認められ摂取が推奨された。欧州では、甘草は、甘草飴をはじめとした甘草菓子として日常的に摂取されている食品である。【００１０】
また、甘草又は甘草水抽出残渣から有機溶媒等によって抽出される甘草疎水性成分には、酸化防止作用、抗菌作用、酵素阻害作用、抗腫瘍作用、抗アレルギー作用、抗ウィルス作用等、多くの有用な作用を示すことが報告されている。甘草の主な品種として、グリキルリーザ・グラブラ（Glycyrrhiza. glabra）、Ｇ．ウラレンシス（G. uralensis）、Ｇ．インフラータ（G. inflata）などが挙げられる。また、甘草に含まれる甘草ポリフェノールはプレニルフラボノイドが多数含まれていることを特徴とし、これら疎水性成分のフラボノイドは品種によって特異的な化合物が含まれている（非特許文献２：Progress in the Chemistry of Organic Natural Products, Vol.73, (1998)）。この品種特異的なフラボノイドは、甘草の品種同定に利用されることもある。【００１１】
最近、甘草から得られる抽出物のうち、甘草ポリフェノールを含有し、グリチルリチン含量が極微量である甘草疎水性抽出物が、内臓脂肪低減作用やメタボリックシンドローム（マルチプル・リスク・ファクター症候群）の予防及び／又は改善に有用であることが見い出されている（特許文献５：ＷＯ０２／４７６９９）。また甘草疎水性抽出物がリパーゼ阻害作用やコレステロール吸収阻害作用を有すること（特許文献６：ＷＯ２００５／１１０４００）、さらにその成分がＰＰＡＲγリガンド活性を有すること（特許文献７、８、９：ＷＯ０３／０３７３１６、ＷＯ２００６／０８５５６２、ＷＯ２００７／０６０９９２）等が報告されている。また、甘草疎水性成分にはラジカル消去能力があることが報告されている（非特許文献３：The Journal of Alternative and Complementary Medicine, Vol.13, 103-109 (2007)）。【００１２】
甘草は、グリチルリチンを有効成分とする乾燥物や親水性抽出物が、生薬として単独あるいは複数の生薬との組合せで用いられているが、実質的にグリチルリチン量が少ない甘草疎水性抽出物と他の成分等と組み合わせた組成物として積極的に有用性を訴求した報告は見当たらない。
【特許文献１】特開平１０−１０９９３３
【特許文献２】ＷＯ０１／５２８２２
【特許文献３】ＷＯ０３／６２１８２
【特許文献４】ＷＯ２００７／５２８０２
【特許文献５】ＷＯ０２／４７６９９
【特許文献６】ＷＯ２００５／１１０４００
【特許文献７】ＷＯ０３／０３７３１６
【特許文献８】ＷＯ２００６／０８５５６２
【特許文献９】ＷＯ２００７／０６０９９２
【非特許文献１】Nutrition Research Vol.13, 667-676 (1993)
【非特許文献２】Progress in the Chemistry of Organic Natural Products, Vol.73, (1998)
【非特許文献３】The Journal of Alternative and Complementary Medicine, Vol.13, 103-109 (2007)
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１３】
本発明は、上記に鑑み、食品への使用実績があり、安全性の高い成分を使用し、還元型補酵素Ｑ10含有組成物をそのまま、あるいは食品、栄養機能食品、特定保健用食品、栄養補助剤、栄養剤、動物薬、飲料、飼料、ペットフード、化粧品、医薬品、治療薬、予防薬等に加工及び／又は保存するに際して、還元型補酵素Ｑ10を酸化から防護して安定に保持することのできる好適な組成物やその簡便な方法、並びに、酸化型補酵素Ｑ10を還元して還元型補酵素Ｑ10とする還元型補酵素Ｑ10の製造方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意研究した結果、甘草疎水性抽出物に酸化型補酵素Ｑ10を還元型補酵素Ｑ10へと還元できる能力があることをはじめて見い出した。また、還元型補酵素Ｑ10と甘草疎水性抽出物とを共存させた組成物とすることにより、還元型補酵素Ｑ10の安定性が大きく改善されることも判明した。【００１５】
すなわち、本発明は、（１）甘草疎水性抽出物を用いて酸化型補酵素Ｑ10を還元型補酵素Ｑ10へと還元する、還元型補酵素Ｑ10の製造方法、及び（２）還元型補酵素Ｑ10と甘草疎水性抽出物を共存下に含有する組成物とすることを特徴とする還元型補酵素Ｑ10の安定化方法と該方法によって安定化された還元型補酵素Ｑ10含有組成物、に関する。
【発明の効果】
【００１６】
本発明によれば、ことさらに複数の成分を添加することなく、食経験があり安全な甘草疎水性抽出物を用いるだけで、酸化型補酵素Ｑ10を還元型補酵素Ｑ10へ還元する還元型補酵素Ｑ10の簡便な製造方法、及び還元型補酵素Ｑ10の安定化方法を提供することができる。さらには、酸化に対して安定で且つ好適な還元型補酵素Ｑ10含有組成物を提供することができる。本発明の組成物は、組成物中の還元型補酵素Ｑ10が酸化に対して防護されて安定に保持されているだけでなく、生理活性成分として有用な甘草疎水性抽出物をも含有するものであり、医薬品、サプリメント又は食品としてさまざまな効果効能が期待できる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１７】
以下、本発明を詳細に説明する。なお、本明細書において、補酵素Ｑ10とのみ記載した場合は、酸化型、還元型を問わず、両者が混在する場合には混合物全体を表すものである。【００１８】
本発明は、（１）還元型補酵素Ｑ10の製造方法、及び、（２）還元型補酵素Ｑ10の安定化方法及び該方法で安定化された組成物、に関する。【００１９】
まず、本発明の第１について説明する。本発明の第１は、甘草疎水性抽出物を用いて、酸化型補酵素Ｑ10を還元型補酵素Ｑ10へと還元する、還元型補酵素Ｑ10の製造方法である。【００２０】
本発明の第１である製造方法において、原料となる酸化型補酵素Ｑ10は、酸化型補酵素Ｑ10単独でも良く、又、還元型補酵素Ｑ10との混合物であっても良い。上記酸化型補酵素Ｑ10が還元型補酵素Ｑ10との混合物である場合、補酵素Ｑ10の総量（すなわち、還元型補酵素Ｑ10及び酸化型補酵素Ｑ10の合計量）に占める酸化型補酵素Ｑ10の割合は、特に制限されないが、例えば１重量％以上、普通５重量％以上、好ましくは１０重量％以上、より好ましくは２０重量％以上である。上限は特に限定されないが、普通９９．９重量％以下である。もちろん、酸化型補酵素Ｑ10が１００重量％の場合、すなわち酸化型補酵素Ｑ10を単独で使用してもよい。【００２１】
本発明の第１で使用する酸化型補酵素Ｑ10は、例えば、合成、発酵、天然物からの抽出等の従来公知の方法により得ることができる。好ましくは、発酵、天然物からの抽出により得られたものである。【００２２】
本発明において、甘草疎水性抽出物の由来となる甘草は、カンゾウ属（Glycyrrhiza属）に属する植物なら特に限定されないが、具体的には、グリキルリーザ  ウラレンシス（Glycyrrhiza uralensis（G. uralensis））、グリキルリーザ  インフラータ（G. inflata）、グリキルリーザ  グラブラ（G. glabra）、グリキルリーザ  エウリカーパ（G. eurycarpa）、グリキルリーザ  アスペラ（G. aspera）等が挙げられる。好ましくは、G. uralensis、G. inflata、G. glabra等であり、さらに好ましくは、G. glabraである。【００２３】
本発明で使用される甘草疎水性抽出物は、甘草の油性（疎水性）成分を主体とする、甘草の抽出物である。甘草疎水性抽出物を得る方法としては特に限定されず、公知の方法を用いることが可能である。例えば、上記甘草またはその粉末、あるいはそれらの水抽出物残渣（例えば、甘草の親水性成分を水或いはアルカリ水溶液を用いて抽出・除去した後の甘草残渣または残渣を乾燥させたもの）から、有機溶媒や油脂類で抽出することにより得ることが出来る。あるいは、上記方法で一度抽出された疎水性抽出物を、さらに別種の有機溶媒や油脂類で抽出することにより得ることができる。ここで用いる抽出溶媒は、医薬品や食品、食品添加物などの製造、加工に使用が許可されたものが好ましく、後述するアルコール類、脂肪酸エステル類、ケトン類、炭化水素類、油脂類等を挙げることができる。言うまでもなく、これら抽出溶媒を単独で使用しても良いし、少なくとも２種以上の混合溶媒として用いてもよい。【００２４】
上記抽出溶媒の中でも、エタノール、酢酸エチル、アセトン、ヘキサン、ヘプタン、油脂類等を使用するのが好ましく、油脂類としては、抽出率等の観点から中鎖脂肪酸トリグリセリド（ＭＣＴ）、脂肪酸の部分グリセリドを使用するのが好ましく、中鎖脂肪酸トリグリセリドをエタノールなどと組み合わせて使用するのが特に好ましい。尚、上記抽出溶媒は、含水溶媒を用いても良いが、後述する目的で、甘草疎水性抽出物中のグリチルリチンの含有量を低く抑えるためには、抽出溶媒の含水割合は低い方が好ましい。【００２５】
甘草の疎水性成分を抽出して得た抽出液、またはそれから抽出溶媒を除去したものを、本発明で使用する甘草疎水性抽出物とする。本発明において甘草疎水性抽出物は、抽出物のまま使用してもよいが、さらに精製工程、たとえばカラム処理、脱臭処理、脱色処理などにより粗精製又は精製したものを使用してもよい。【００２６】
本発明で使用される甘草疎水性抽出物の主体となる油性（疎水性）成分には、甘草ポリフェノールが含まれる。本発明で使用される甘草疎水性抽出物は甘草ポリフェノールを多く含有するものが好ましく、その観点から、本発明で使用する甘草疎水性抽出物中に含まれる甘草ポリフェノール含有量は、乾燥重量割合として、好ましくは５０重量％以上、より好ましくは６０％重量以上である。【００２７】
本発明の甘草疎水性抽出物に含有される甘草ポリフェノールは、上記のような甘草に含まれるポリフェノール成分であれば特に限定されず、具体的には、グリシクマリン（glycycoumarin）、グリシロール（glycyrol）、グリシリン（glycyrin）、リクイリチゲニン（liquiritigenin）、グリコリコン（glicoricone）、グラブリジン（glabridin）、グラブレン（glabrene）、グラブロール（glabrol）、３’−ヒドロキシ−４’−Ｏ−メチルグラブリジン（3’-hydroxyl-4’-O-methylglabridin）、４’−Ｏ−メチルグラブリジン（4’-O-methylglabridin）、グリウラリンＢ（glyurallin B）、リコクマロン（licocoumarone）、ガンカオニンＩ（gancaonin I）、デヒドログリアスペリンＤ（dehydroglyasperin D）、エチナチン（echinatin）、イソリコフラボノール（isolicoflavonol）、デヒドログリアスペリンＣ（dehydroglyasperin C）、グリアスペリンＢ（glyasperin B）、グリチルイソフラバノン（glycyrrhisoflavanone）、ルピワイテオン（lupiwighteone）、グリアスペリンＤ（glyasperin D）、セミリコイソフラボンＢ（semilicoisoflavone B）等が挙げられる。【００２８】
本発明の甘草疎水性抽出物には、これらのような甘草ポリフェノール成分のうち少なくとも１種以上の甘草ポリフェノールが含まれるが、そのうち、グラブリジン、グラブレン、グラブロール、３’−ヒドロキシ−４’−Ｏ−メチルグラブリジン、４’−Ｏ−メチルグラブリジンのいずれかが含まれているのが好ましく、少なくともグラブリジンが含まれているのがより好ましい。【００２９】
ポリフェノールは、フェノール基を複数持つ構造を有する化合物であり、ベンゼン環に複数の水酸基が結合したすべての化合物であるとの解釈が一般的になっている。ポリフェノール量の測定法としては、酒石酸鉄法、プルシアンブルー法、フォリン−チオカルト法、フォリン−デニス法などの比色法やＨＰＬＣ法による成分ごとの測定があり、どの測定法を用いてもよいが、ポリフェノール全体量の測定にはフォリン−デニス法もしくはフォリン−チオカルト法が使われることが多い。フォリン−デニス法あるいはフォリン−チオカルト法の場合、標準物質を用いることで標準物質による検量線を作成し、標準物質換算で求めることができる。【００３０】
甘草疎水性抽出物の場合は、例えばグリキルリーザ  グラブラ（G.glabra）であれば、グラブリジンを標準物質とすることができる。具体的には、例えば後述する実施例記載の方法により、使用する甘草疎水性抽出物中に含まれる甘草ポリフェノール成分の含有量を、グラブリジン換算値として求めることができる。【００３１】
また、本発明において、甘草疎水性抽出物として、上記、甘草ポリフェノールそのもの純品（たとえば単離精製したものや試薬、化学合成品など）を使用することもできる。【００３２】
また、本発明で使用する甘草疎水性抽出物中には、その抽出条件によっては、甘草ポリフェノール以外の成分、例えば親水性成分であるグリチルリチンが含まれることがある。本発明において、使用する甘草疎水性抽出物中の、グリチルリチンの含有量は少ない方が好ましく、少なくとも甘草疎水性抽出物のグリチルリチンの含有量が、甘草ポリフェノール成分、例えばグラブリジンの含有量以下であるものを使用するのが好ましく、具体的には、グリチルリチン含有量が０．５重量％以下のものがより好ましく、グリチルリチン含有量が０．１重量％以下のものがさらに好ましく、グリチルリチン含有量が０．０５重量％以下のものが特に好ましく、グリチルリチンを実質的に含まない（例えば検出限界以下）ものを使用するのがもっとも好ましい。【００３３】
本発明の第１（製造方法）において、反応開始時の反応系（全反応液の全重量）に対する甘草疎水性抽出物の濃度は特に制限されないが、酸化型補酵素Ｑ10を還元型補酵素Ｑ10に効率よく還元させるという観点から、抽出物の乾燥重量に換算して、普通約１重量％以上、好ましくは約３重量％以上、より好ましくは約５重量％以上、特に好ましくは約１０重量％以上である。上限は、特に制限されないが、適切な性状の確保等の観点から、普通約７０重量％以下、好ましくは約６０重量％以下、より好ましくは約５０重量％以下である。【００３４】
本発明の第１（製造方法）において、反応開始時の反応系（全反応液の全重量）に対する酸化型補酵素Ｑ10の濃度は特に制限されないが、普通、約０．０１重量％以上、好ましくは約０．０５重量％以上、より好ましくは約０．１重量％以上、特に好ましくは約０．２％重量以上、さらに好ましくは約０．５重量％以上、中でも約１重量％以上である。上限は特に限定されないが、反応系における酸化型補酵素Ｑ10の溶解性や還元剤である甘草疎水性抽出物の必要量を確保する観点から、普通９０重量％以下、好ましくは６０重量％以下、より好ましくは５０重量％以下、さらに好ましくは３０重量％以下である。【００３５】
尚、本発明の第１（製造方法）において、反応開始時の酸化型補酵素Ｑ10と甘草疎水性抽出物の重量比は特に制限されないが、甘草疎水性抽出物に対する酸化型補酵素Ｑ10の重量比（酸化型補酵素Ｑ10重量／甘草疎水性抽出物重量）として、普通約１／９９以上、好ましくは約５／９５以上、より好ましくは約１０／９０以上、特に好ましくは約２０／８０以上である。甘草疎水性抽出物に対する酸化型補酵素Ｑ10の重量比の上限は特に制限されないが、例えば、約９０／１以下、好ましくは約８０／２０以下、より好ましくは約７０／３０以下、特に好ましくは約６０／４０以下である。【００３６】
本発明の第１（製造方法）において、原料となる酸化型補酵素Ｑ10と甘草疎水性抽出物は反応系において接触しておればよく、その系は均一であっても良く、又、不均一であっても良く、特に制限されない。例えば、酸化型補酵素Ｑ10と甘草疎水性抽出物が各々固体として接触している場合、一方が溶媒等に溶解した液層に、他方がその液層に固体として存在する場合、酸化型補酵素Ｑ10が融液として存在し、甘草疎水性抽出物がその融液中に固体として存在する場合、各々が液相に存在し、液−液二層を形成する場合、各々が同一液相に存在する場合等を挙げることができる。言うまでもなく、酸化型補酵素Ｑ10と甘草疎水性抽出物との接触効率の高い系が、酸化型補酵素Ｑ10の還元には効果的であり、この観点からは、酸化型補酵素Ｑ10と甘草疎水性抽出物が同一液相に存在するのが最も好ましい。また、上記反応系のような、酸化型補酵素Ｑ10と甘草疎水性抽出物を含有する組成物も本発明に含まれる。【００３７】
上記観点から、本発明の第１における還元反応を行う際、酸化型補酵素Ｑ10及び／又は甘草疎水性抽出物を液相に存在させるために溶媒を使用するのが好ましい。本発明の第１における還元反応において使用する溶媒としては、特に制限されないが、炭化水素類、脂肪酸エステル類、エーテル類、アルコール類、ケトン類、脂肪酸類、窒素化合物類（ニトリル類、アミド類を含む）、硫黄化合物類等の有機溶媒、油脂類、水等を挙げることができる。但し、酸化型補酵素Ｑ10及び甘草疎水性抽出物は脂溶性であることから、溶媒として水を使用する場合は、他の溶媒との混合系で使用するのが好ましい。【００３８】
上記炭化水素類としては、特に制限されないが、例えば、脂肪族炭化水素、芳香族炭化水素、ハロゲン化炭化水素等を挙げることができる。特に、脂肪族炭化水素、芳香族炭化水素が好ましく、とりわけ、脂肪族炭化水素が好ましい。【００３９】
脂肪族炭化水素としては、環状、非環状を問わず、又、飽和、不飽和を問わず、特に制限されないが、非環状の脂肪族炭化水素が特に好ましく用いられる。また、通常、炭素数３〜２０、好ましくは、炭素数５〜１２のものが用いられる。【００４０】
具体例としては、例えば、プロパン、ブタン、イソブタン、ペンタン、２−メチルブタン、シクロペンタン、２−ペンテン、ヘキサン、２−メチルペンタン、２，２−ジメチルブタン、２，３−ジメチルブタン、メチルシクロペンタン、シクロヘキサン、１−ヘキセン、シクロヘキセン、ヘプタン、２−メチルヘキサン、３−メチルヘキサン、２、３−ジメチルペンタン、２，４−ジメチルペンタン、メチルシクロヘキサン、１−ヘプテン、オクタン、２，２，３−トリメチルペンタン、イソオクタン、エチルシクロヘキサン、１−オクテン、ノナン、２，２，５−トリメチルヘキサン、１−ノネン、デカン、１−デセン、ｐ−メンタン、ウンデカン、ドデカン等を挙げることができる。【００４１】
中でも、炭素数５〜８の飽和脂肪族炭化水素が好ましく、ペンタン、２−メチルブタン、シクロペンタン、ヘキサン、２−メチルペンタン、２，２−ジメチルブタン、２，３−ジメチルブタン、メチルシクロペンタン、シクロヘキサン、へプタン、２−メチルヘキサン、３−メチルヘキサン、２，３−ジメチルペンタン、２，４−ジメチルペンタン、メチルシクロヘキサン、オクタン、２，２，３−トリメチルペンタン、イソオクタン、エチルシクロヘキサン等が特に好ましい。【００４２】
芳香族炭化水素としては、特に制限されないが、普通、炭素数６〜２０、特に炭素数６〜１２、とりわけ炭素数７〜１０のものが好適に用いられる。具体例としては、例えば、ベンゼン、トルエン、キシレン、ｏ−キシレン、ｍ−キシレン、ｐ−キシレン、エチルベンゼン、クメン、メシチレン、テトラリン、ブチルベンゼン、ｐ−シメン、シクロヘキシルベンゼン、ジエチルベンゼン、ペンチルベンゼン、ジペンチルベンゼン、ドデシルベンゼン、スチレン等を挙げることができる。好ましくは、トルエン、キシレン、ｏ−キシレン、ｍ−キシレン、ｐ−キシレン、エチルベンゼン、クメン、メシチレン、テトラリン、ブチルベンゼン、ｐ−シメン、シクロヘキシルベンゼン、ジエチルベンゼン、ペンチルベンゼンであり、より好ましくは、トルエン、キシレン、ｏ−キシレン、ｍ−キシレン、ｐ−キシレン、クメン、テトラリンであり、最も好ましくは、クメンである。【００４３】
ハロゲン化炭化水素としては、環状、非環状を問わず、又、飽和、不飽和を問わず、特に制限されないが、一般に、非環状のものが好ましく用いられる。普通、塩素化炭化水素、フッ素化炭化水素が好ましく、特に塩素化炭化水素が好ましい。炭素数１〜６、特に炭素数１〜４、とりわけ炭素数１〜２のものが好適に用いられる。【００４４】
具体例としては、例えば、ジクロロメタン、クロロホルム、四塩化炭素、１，１−ジクロロエタン、１，２−ジクロロエタン、１，１，１−トリクロロエタン、１，１，２−トリクロロエタン、１，１，１，２−テトラクロロエタン、１，１，２，２−テトラクロロエタン、ペンタクロロエタン、ヘキサクロロエタン、１，１−ジクロロエチレン、１，２−ジクロロエチレン、トリクロロエチレン、テトラクロロエチレン、１，２−ジクロロプロパン、１，２，３−トリクロロプロパン、クロロベンゼン、１，１，１，２−テトラフルオロエタン等を挙げることができる。【００４５】
好ましくは、ジクロロメタン、クロロホルム、四塩化炭素、１，１−ジクロロエタン、１，２−ジクロロエタン、１，１，１−トリクロロエタン、１，１，２−トリクロロエタン、１，１−ジクロロエチレン、１，２−ジクロロエチレン、トリクロロエチレン、クロロベンゼン、１，１，１，２−テトラフルオロエタンであり、より好ましくは、ジクロロメタン、クロロホルム、１，２−ジクロロエチレン、トリクロロエチレン、クロロベンゼン、１，１，１，２−テトラフルオロエタンである。【００４６】
上記脂肪酸エステル類としては、特に制限されないが、例えば、プロピオン酸エステル、酢酸エステル、ギ酸エステル等を挙げることができる。特に、酢酸エステル、ギ酸エステルが好ましく、とりわけ、酢酸エステルが好ましい。特に制限されないが、一般に、エステル基としては、炭素数１〜８のアルキルエステル又はアラルキルエステル、好ましくは炭素数１〜６のアルキルエステル、より好ましくは炭素数１〜４のアルキルエステルが好ましく用いられる。【００４７】
プロピオン酸エステルとしては、例えば、プロピオン酸メチル、プロピオン酸エチル、プロピオン酸ブチル、プロピオン酸イソペンチルを挙げることができる。【００４８】
酢酸エステルとしては、例えば、酢酸メチル、酢酸エチル、酢酸プロピル、酢酸イソプロピル、酢酸ブチル、酢酸イソブチル、酢酸ｓｅｃ−ブチル、酢酸ペンチル、酢酸イソペンチル、酢酸ｓｅｃ−ヘキシル、酢酸シクロヘキシル、酢酸ベンジル等を挙げることができる。好ましくは、酢酸メチル、酢酸エチル、酢酸プロピル、酢酸イソプロピル、酢酸ブチル、酢酸イソブチル、酢酸ｓｅｃ−ブチル、酢酸ペンチル、酢酸イソペンチル、酢酸ｓｅｃ−ヘキシル、酢酸シクロヘキシルであり、より好ましくは、酢酸メチル、酢酸エチル、酢酸プロピル、酢酸イソプロピル、酢酸ブチル、酢酸イソブチルであり、最も好ましくは、酢酸エチルである。【００４９】
ギ酸エステルとしては、例えば、ギ酸メチル、ギ酸エチル、ギ酸プロピル、ギ酸イソプロピル、ギ酸ブチル、ギ酸イソブチル、ギ酸ｓｅｃ−ブチル、ギ酸ペンチル等を挙げることができる。好ましくは、ギ酸メチル、ギ酸エチル、ギ酸プロピル、ギ酸ブチル、ギ酸イソブチル、ギ酸ペンチルであり、最も好ましくは、ギ酸エチルである。【００５０】
上記エーテル類としては、環状、非環状を問わず、又、飽和、不飽和を問わず、特に制限されないが、一般に、飽和のものが好ましく用いられる。普通、炭素数３〜２０、特に炭素数４〜１２、とりわけ炭素数４〜８のものが好適に用いられる。【００５１】
具体例としては、例えば、ジエチルエーテル、メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル、ジプロピルエーテル、ジイソプロピルエーテル、ジブチルエーテル、ジヘキシルエーテル、エチルビニルエーテル、ブチルビニルエーテル、アニソール、フェネトール、ブチルフェニルエーテル、メトキシトルエン、ジオキサン、フラン、２−メチルフラン、テトラヒドロフラン、テトラヒドロピラン、エチレングリコールジメチルエーテル、エチレングリコールジエチルエーテル、エチレングリコールジブチルエーテル、エチレングリコールモノメチルエーテル、エチレングリコールモノエチルエーテル、エチレングリコールジブチルエーテル等を挙げることができる。【００５２】
好ましくは、ジエチルエーテル、メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル、ジプロピルエーテル、ジイソプロピルエーテル、ジブチルエーテル、ジヘキシルエーテル、アニソール、フェネトール、ブチルフェニルエーテル、メトキシトルエン、ジオキサン、２−メチルフラン、テトラヒドロフラン、テトラヒドロピラン、エチレングリコールジメチルエーテル、エチレングリコールジエチルエーテル、エチレングリコールジブチルエーテル、エチレングリコールモノメチルエーテル、エチレングリコールモノエチルエーテルであり、より好ましくは、ジエチルエーテル、メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル、アニソール、ジオキサン、テトラヒドロフラン、エチレングリコールモノメチルエーテル、エチレングリコールモノエチルエーテルであり、さらに好ましくは、ジエチルエーテル、メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル、アニソール等であり、最も好ましくは、メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテルである。【００５３】
上記アルコール類としては、環状、非環状を問わず、又、飽和、不飽和を問わず、特に制限されないが、一般に、飽和のものが好ましく用いられる。普通、炭素数１〜２０、特に炭素数１〜１２、とりわけ炭素数１〜６、なかでも炭素数１〜５の１価アルコールが好ましく、又、炭素数２〜５の２価アルコールが好ましく、又、炭素数３の３価アルコールが好ましい。【００５４】
１価のアルコールとしては、例えば、メタノール、エタノール、１−プロパノール、２−プロパノール、１−ブタノール、２−ブタノール、イソブチルアルコール、ｔｅｒｔ−ブチルアルコール、１−ペンタノール、２−ペンタノール、３−ペンタノール、２−メチル−１−ブタノール、イソペンチルアルコール、ｔｅｒｔ−ペンチルアルコール、３−メチル−２−ブタノール、ネオペンチルアルコール、１−ヘキサノール、２−メチル−１−ペンタノール、４−メチル−２−ペンタノール、２−エチル−１−ブタノール、１−ヘプタノール、２−ヘプタノール、３−ヘプタノール、１−オクタノール、２−オクタノール、２−エチル−１−ヘキサノール、１−ノナノール、１−デカノール、１−ウンデカノール、１−ドデカノール、アリルアルコール、プロパルギルアルコール、ベンジルアルコール、シクロヘキサノール、１−メチルシクロヘキサノール、２−メチルシクロヘキサノール、３−メチルシクロヘキサノール、４−メチルシクロヘキサノール等を挙げることができる。【００５５】
好ましくは、メタノール、エタノール、１−プロパノール、２−プロパノール、１−ブタノール、２−ブタノール、イソブチルアルコール、ｔｅｒｔ−ブチルアルコール、１−ペンタノール、２−ペンタノール、３−ペンタノール、２−メチル−１−ブタノール、イソペンチルアルコール、ｔｅｒｔ−ペンチルアルコール、３−メチル−２−ブタノール、ネオペンチルアルコール、１−ヘキサノール、２−メチル−１−ペンタノール、４−メチル−２−ペンタノール、２−エチル−１−ブタノール、シクロヘキサノールであり、より好ましくは、メタノール、エタノール、１−プロパノール、２−プロパノール、１−ブタノール、２−ブタノール、イソブチルアルコール、ｔｅｒｔ−ブチルアルコール、１−ペンタノール、２−ペンタノール、３−ペンタノール、２−メチル−１−ブタノール、イソペンチルアルコール、ｔｅｒｔ−ペンチルアルコール、３−メチル−２−ブタノール、ネオペンチルアルコールであり、さらに好ましくは、メタノール、エタノール、１−プロパノール、２−プロパノール、１−ブタノール、２−ブタノール、イソブチルアルコール、２−メチル−１−ブタノール、イソペンチルアルコールであり、最も好ましくは、エタノールである。【００５６】
２価のアルコールとしては、１，２−エタンジオール、１，２−プロパンジオール、１，３−プロパンジオール、１，２−ブタンジオール、１，３−ブタンジオール、１，４−ブタンジオール、２，３−ブタンジオール、１，５−ペンタンジオール等を挙げることができる。好ましくは、１，２−エタンジオール、１，２−プロパンジオール、１，３−プロパンジオールであり、最も好ましくは、１，２−エタンジオールである。【００５７】
３価のアルコールとしてはグリセリン等を好適に用いることができる。【００５８】
上記ケトン類としては、特に制限されず、普通炭素数３〜６のものが好適に用いられる。具体例としては、例えば、アセトン、メチルエチルケトン、メチルブチルケトン、メチルイソブチルケトン等を挙げることができ、好ましくは、アセトン、メチルエチルケトンであり、最も好ましくは、アセトンである。【００５９】
ニトリル類としては、環状、非環状を問わず、又、飽和、不飽和を問わず、特に制限されないが、一般に飽和のものが好ましく用いられる。普通、炭素数２〜２０、特に炭素数２〜１２、とりわけ炭素数２〜８のものが好適に用いられる。具体例としては、例えば、アセトニトリル、プロピオニトリル、マロノニトリル、ブチロニトリル、イソブチロニトリル、スクシノニトリル、バレロニトリル、グルタロニトリル、ヘキサンニトリル、ヘプチルシアニド、オクチルシアニド、ウンデカンニトリル、ドデカンニトリル、トリデカンニトリル、ペンタデカンニトリル、ステアロニトリル、クロロアセトニトリル、ブロモアセトニトリル、クロロプロピオニトリル、ブロモプロピオニトリル、メトキシアセトニトリル、シアノ酢酸メチル、シアノ酢酸エチル、トルニトリル、ベンゾニトリル、クロロベンゾニトリル、ブロモベンゾニトリル、シアノ安息香酸、ニトロベンゾニトリル、アニソニトリル、フタロニトリル、ブロモトルニトリル、メチルシアノベンゾエート、メトキシベンゾニトリル、アセチルベンゾニトリル、ナフトニトリル、ビフェニルカルボニトリル、フェニルプロピオニトリル、フェニルブチロニトリル、メチルフェニルアセトニトリル、ジフェニルアセトニトリル、ナフチルアセトニトリル、ニトロフェニルアセトニトリル、クロロベンジルシアニド、シクロプロパンカルボニトリル、シクロヘキサンカルボニトリル、シクロヘプタンカルボニトリル、フェニルシクロヘキサンカルボニトリル、トリルシクロヘキサンカルボニトリル等を挙げることができる。【００６０】
好ましくは、アセトニトリル、プロピオニトリル、スクシノニトリル、ブチロニトリル、イソブチロニトリル、バレロニトリル、シアノ酢酸メチル、シアノ酢酸エチル、ベンゾニトリル、トルニトリル、クロロプロピオニトリルであり、より好ましくは、アセトニトリル、プロピオニトリル、ブチロニトリル、イソブチロニトリルであり、最も好ましくは、アセトニトリルである。【００６１】
ニトリル類を除く窒素化合物類としては、例えば、ニトロメタン、アセトニトリル、トリエチルアミン、ピリジン、ホルムアミド、Ｎ−メチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ−メチルピロリドン等を挙げることができる。【００６２】
硫黄化合物類としては、例えば、ジメチルスルホキシド、スルホラン等を挙げることができる。【００６３】
上記脂肪酸類としては、例えば、ギ酸、酢酸、プロピオン酸等を挙げることができるが、ギ酸、酢酸が好ましく、最も好ましくは酢酸である。【００６４】
上記油脂類としては、動植物からの天然油脂であってもよく、合成油脂や加工油脂であっても良い。植物油脂としては、例えば、ヤシ油、パーム油、パーム核油、アマニ油、つばき油、玄米胚芽油、菜種油、米油、落花生油、コーン油、小麦胚芽油、大豆油、エゴマ油、綿実油、ヒマワリ種子油、カポック油、月見草油、シア脂、サル脂、カカオ脂、ゴマ油、サフラワー油、オリーブ油、アボガド油、けし油、ごぼう子油等を挙げることができ、動物油脂としては、例えば、豚脂、乳脂、魚油、牛脂等を挙げることができ、さらに、これらを分別、水素添加、エステル交換等により加工した油脂（例えば硬化油）も挙げることができる。言うまでもなく、中鎖脂肪酸トリグリセリド（ＭＣＴ）、脂肪酸の部分グリセリド等も使用しうる。また、これらの混合物を使用しても良い。【００６５】
中鎖脂肪酸トリグリセリドとしては、特に制限されないが、例えば、脂肪酸の炭素数が各々６〜１２、好ましくは８〜１２のトリグリセリド等を挙げることができる。【００６６】
上記油脂類のうち、取り扱い易さ、臭気等の面から植物油脂、合成油脂、加工油脂が好ましい。これらの中でも、具体的に、ヤシ油、パーム油、パーム核油、菜種油、米油、大豆油、綿実油、サフラワー油、オリーブ油、中鎖脂肪酸トリグリセリド、脂肪酸の部分トリグリセリド等が好ましく、米油、大豆油、菜種油、サフラワー油、中鎖脂肪酸トリグリセリド、脂肪酸の部分トリグリセリド等が特に好ましい。【００６７】
上記溶媒の中でも、食品、医薬品、化粧品等に許容できる溶媒が好ましく、食品に許容できる溶媒がより好ましい。反応生成物を加工せずとも直接摂取できるという観点からは、エタノール、水、油脂類またはこれらの混合溶媒が特に好ましく、油脂類または油脂類を含有する混合溶媒がとリわけ好ましい。油脂類の中では、甘草ポリフェノールの溶解性等の観点から、中鎖脂肪酸トリグリセリドまたは脂肪酸の部分グリセリドを使用するのが好ましく、中鎖脂肪酸トリグリセリドまたはそれを含有する混合溶媒がもっとも好ましい。【００６８】
言うまでもなく、上記溶媒は、原料である酸化型補酵素Ｑ10を単離せずに上記溶媒を含む反応混合物あるいは抽出混合物から持ち込まれる溶媒であっても良いし、甘草疎水性抽出物の抽出時に使用した抽出溶媒を除去せず、そのまま還元反応における溶媒成分としてもなんら差し支えない。【００６９】
本発明の第１における還元反応は、原料となる酸化型補酵素Ｑ10と甘草疎水性抽出物を、必要に応じて上記溶媒存在下に、共存させればよく、その方法は限定されないが、甘草またはその粉末、あるいは、あらかじめ甘草の親水性成分を水或いはアルカリ水溶液を用いて抽出・除去した甘草残渣または残渣を乾燥させたものから、甘草中の疎水性成分を、上記有機溶媒または油脂類、好ましくは、エタノールと中鎖脂肪酸トリグリセリドを用いて抽出し、エタノールを留去することにより得られた甘草疎水性抽出物の中鎖脂肪酸トリグリセリド溶液に、合成、発酵、天然物からの抽出等の従来公知の方法により得られた酸化型補酵素Ｑ10を添加し、酸化型補酵素Ｑ10と甘草疎水性抽出物を共存させた組成物とすることで還元反応を実施するのが、本発明の第１における最も好ましい態様である。また、上記好ましい態様において、必要に応じて他の溶媒や他の還元剤、その他添加物を添加して還元反応を実施してもよい。【００７０】
本発明の第１における還元反応の還元時の温度としては特に制限されないが、通常、２０℃以上、好ましくは３０℃以上,より好ましくは４０℃以上で実施するのが好ましい。【００７１】
本発明の効果を最大限に発揮するためには、上記還元反応は、例えば、脱酸素雰囲気下において、実施するのが好ましい。脱酸素雰囲気は、不活性ガスによる置換、減圧、沸騰やこれらを組み合わせることにより達成できる。少なくとも、不活性ガスによる置換、即ち、不活性ガス雰囲気を用いるのが好適である。上記不活性ガスとしては、例えば、窒素ガス、ヘリウムガス、アルゴンガス、水素ガス、炭酸ガス等を挙げることができ、好ましくは窒素ガスである。【００７２】
尚、本発明の第１の製造方法において、還元反応は製剤中で行ってもよい。すなわち、酸化型補酵素Ｑ10と甘草疎水性抽出物とを含有する混合物を調製し、該混合物を製剤形態に加工した後に、該形態の製剤中で酸化型補酵素Ｑ10を還元型補酵素Ｑ10へと還元し、還元型補酵素Ｑ10を製造するのも本発明の範疇である。この場合の還元は、一定期間以上の保存や加温又はその組み合わせ等によって行われる。ここでいう一定期間とは特に限定されず、例えば１日以上、１週間以上、１ヶ月以上など適宜採用しうる。本発明において、製剤とは、特に限定されないが、例えば、カプセル剤（ハードカプセル剤、ソフトカプセル剤、マイクロカプセル剤）、錠剤、シロップ剤、液状製剤、飲料等の経口投与形態、あるいは、クリーム、坐薬、練り歯磨き等の外用剤形態をいう。製剤中で還元反応を行う場合の製剤は、上記経口投与形態であるものが好ましく、より好ましくはカプセル剤、特に好ましくはソフトカプセル剤が用いられる。【００７３】
本発明の製造方法により、簡便に還元型補酵素Ｑ10を製造することができる。このとき（反応終了時）の補酵素Ｑ10の総量（すなわち、還元型補酵素Ｑ10及び酸化型補酵素Ｑ10の合計量）に占める還元型補酵素Ｑ10の割合は、普通約２０重量％以上、好ましくは約４０重量％以上、より好ましくは６０重量％以上、特に好ましくは８０重量％以上、とりわけ９０重量％以上、なかんずく９６重量％以上である。【００７４】
本発明の第１である製造方法によって得られた還元型補酵素Ｑ10は、還元反応終了後、適宜溶媒除去や単離・精製操作を行って、粗精製あるいは純粋な還元型補酵素Ｑ10を得ることもできるし、後述するように、還元反応終了後の混合組成物を、還元型補酵素Ｑ10と甘草疎水性抽出物を含有する組成物として、そのままあるいは必要に応じて溶媒を除去した後に製剤化して、医薬品、食品などの分野で使用することもできる。【００７５】
次に本発明の第２について説明する。本発明の第２は、還元型補酵素Ｑ10と甘草疎水性抽出物とを共存させることによる還元型補酵素Ｑ10の安定化方法（すなわち、還元型補酵素Ｑ10と甘草疎水性抽出物とを共存下に含有する組成物とすることを特徴とする還元型補酵素Ｑ10の安定化方法）、並びに、該方法によって還元型補酵素Ｑ10が安定化された、還元型補酵素Ｑ10と甘草疎水性抽出物とを含有する組成物である。【００７６】
本発明の第２の安定化方法及び該安定化された組成物において、安定化の対象となる還元型補酵素Ｑ10は、還元型補酵素Ｑ10単独でも良く、又、酸化型補酵素Ｑ10との混合物であっても良い。上記還元型補酵素Ｑ10が酸化型補酵素Ｑ10との混合物である場合、補酵素Ｑ10の総量（すなわち、還元型補酵素Ｑ10及び酸化型補酵素Ｑ10の合計量）に占める還元型補酵素Ｑ10の割合は、特に制限されないが、例えば２０重量％以上、普通４０重量％以上、好ましくは６０重量％以上、より好ましくは８０重量％以上、とりわけ９０重量％以上、なかんずく９６重量％以上である。上限は特に限定されないが、普通９９．９重量％以下である。もちろん、還元型補酵素Ｑ10が１００重量％の場合、すなわち還元型補酵素Ｑ10を単独で使用してもよい。【００７７】
本発明の第２で使用する還元型補酵素Ｑ10は、例えば、合成、発酵、天然物からの抽出等の従来公知の方法により得ることができる。好ましくは、既存の高純度補酵素Ｑ10など酸化型補酵素Ｑ10、あるいは酸化型補酵素Ｑ10と還元型補酵素Ｑ10の混合物を、一般的な還元剤、例えば、ハイドロサルファイトナトリウム（次亜硫酸ナトリウム）、水素化ホウ素ナトリウム、アスコルビン酸類等を用いて還元することにより得られたものであり、より好ましくは、既存の高純度補酵素Ｑ10など酸化型補酵素Ｑ10、あるいは酸化型補酵素Ｑ10と還元型補酵素Ｑ10の混合物を、アスコルビン酸類を用いて還元することにより得られたものである。言うまでもなく、本発明の第１の製造方法によって得られる、還元型補酵素Ｑ10も好適に使用できる。【００７８】
本発明の第２の安定化方法及び該安定化された組成物において使用される甘草疎水性抽出物の具体例や詳細な説明は、本発明の第１の製造方法において説明したものと同じである。【００７９】
本発明の第２（安定化方法及び組成物）において、全組成物重量に対する甘草疎水性抽出物の含有量は特に制限されないが、還元型補酵素Ｑ10の安定化効果を充分に発揮させるという観点から、抽出物の乾燥重量に換算して、普通約１重量％以上、好ましくは約３重量％以上、より好ましくは約５重量％以上、特に好ましくは約７．５重量％以上である。上限は、特に制限されないが、適切な性状の確保等の観点から、普通約７０重量％以下、好ましくは約６０重量％以下、より好ましくは約５０重量％以下である。【００８０】
本発明の第２（安定化方法及び組成物）において、全組成物重量に対する還元型補酵素Ｑ10の含有量は特に制限されないが、組成物中の有効成分である還元型補酵素Ｑ10量をある程度確保するという観点から、普通、約０．０１重量％以上、好ましくは約０．０５重量％以上、より好ましくは約０.１重量％以上、特に好ましくは約０．２重量％以上、さらに好ましくは約０．５重量％以上、中でも約１重量％以上である。上限は特に限定されないが、適切な性状確保の観点から、普通９０重量％以下、好ましくは６０重量％以下、より好ましくは５０重量％以下である。【００８１】
尚、本発明の第２（安定化方法及び組成物）において、組成物中に含まれる還元型補酵素Ｑ10と甘草疎水性抽出物の重量比は特に制限されないが、通常、甘草疎水性抽出物に対する還元型補酵素Ｑ10の重量比（還元型補酵素Ｑ10重量／甘草疎水性抽出物重量）として、普通約１／９９以上、好ましくは約５／９５以上、より好ましくは約１０／９０以上、特に好ましくは約２０／８０以上である。本発明の第２の安定化方法及び安定化された組成物においては、本発明の第１の製造方法で使用する甘草疎水性抽出物の量よりも相対的に少ない甘草疎水性抽出物の使用量で安定化効果を得ることが出来る。そのような観点から、甘草疎水性抽出物に対する還元型補酵素Ｑ10の重量比（還元型補酵素Ｑ10重量／甘草疎水性抽出物重量）の上限は特に制限されないが、例えば、約９０／１以下、好ましくは約９０／１０以下、より好ましくは約８０／２０以下、特に好ましくは約３０／１０以下である。【００８２】
本発明の第２（安定化方法及び組成物）において、還元型補酵素Ｑ10と甘草疎水性抽出物は、組成物中共存下に含まれている必要があるが、ここでいう「共存下」とは、両者が何らかの形で接触しておればよい。接触形態としては特に制限されず、組成物の系は均一であっても良く、又、不均一であっても良い。例えば、組成物中、還元型補酵素Ｑ10と甘草疎水性抽出物が各々固体として接触している場合、一方が溶媒等に溶解した液層に、他方がその液層に固体として存在する場合、還元型補酵素Ｑ10が融液として存在し、甘草疎水性抽出物がその融液中に固体として存在する場合、各々が液相に存在し、液−液二層を形成する場合、各々が同一液相に存在する場合等を挙げることができる。言うまでもなく、還元型補酵素Ｑ10と甘草疎水性抽出物との接触効率の高い系が、還元型補酵素Ｑ10の安定化に効果的であり、この観点からは、還元型補酵素Ｑ10と甘草疎水性抽出物が同一液相に存在するのが最も好ましい。【００８３】
上記観点から、本発明の第２である安定化方法及び安定化された組成物においては、組成物中の還元型補酵素Ｑ10及び／又は甘草疎水性抽出物を液相に存在させるために溶媒を使用するのが好ましい。本発明の第２において使用する溶媒としては、特に制限されないが、上述した炭化水素類、脂肪酸エステル類、エーテル類、アルコール類、ケトン類、脂肪酸類、窒素化合物類（ニトリル類、アミド類を含む）、硫黄化合物類等の有機溶媒、油脂類、水等を挙げることができる。【００８４】
上記溶媒の中でも、食品、医薬品、化粧品等に許容できる溶媒が好ましく、食品に許容できる溶媒が特に好ましい。還元型補酵素Ｑ10と甘草疎水性抽出物を含有する組成物を直接摂取するという観点からは、エタノール、水、油脂類が好ましく、油脂類を使用するのが最も好ましい。また、還元型補酵素Ｑ10及び甘草疎水性抽出物は脂溶性であることから、溶媒として水を使用する場合は、還元型補酵素Ｑ10及び甘草疎水性抽出物を溶解しうる他の溶媒との混合系で使用するのが好ましく、水の使用量としては組成物全体に対し、例えば９０重量％以下、好ましくは５０重量％以下、より好ましくは３０重量％以下である。【００８５】
そのほか、本発明の第２において使用する溶媒の詳細や好ましい例としては、本発明の第１において説明したものと同じである。【００８６】
言うまでもなく、上記溶媒は、還元型補酵素Ｑ10として上記溶媒を含む反応混合物あるいは抽出混合物を使用した場合に含まれる溶媒であっても良いし、甘草疎水性抽出物の抽出時に使用した抽出溶媒を除去せず、そのまま還元反応における溶媒成分としてもなんら差し支えない。【００８７】
本発明の第２における、還元型補酵素Ｑ10と甘草疎水性抽出物を共存下に含有する組成物の調製方法としては特に制限されない。還元型補酵素Ｑ10を外部添加する方法として、例えば、単に還元型補酵素Ｑ10と甘草疎水性抽出物を混合するだけでもいいし、両者を混合後、上記溶媒を混合しても良い。また、還元型補酵素Ｑ10を含有する溶液に甘草疎水性抽出物を混合しても良いし、甘草疎水性抽出物を含有する溶液に還元型補酵素Ｑ10を混合しても良いし、還元型補酵素Ｑ10を含有する溶液と甘草疎水性抽出物を含有する溶液を混合してもよい。【００８８】
還元型補酵素Ｑ10と甘草疎水性抽出物を共存下に含有する組成物を調製する際の容易性等の観点からは、甘草またはその粉末、あるいは、あらかじめ甘草の親水性成分を水或いはアルカリ水溶液を用いて抽出・除去した甘草残渣または残渣を乾燥させたものから、甘草中の疎水性成分を、上記有機溶媒または油脂類、好ましくは、エタノールと中鎖脂肪酸トリグリセリドを用いて抽出し、エタノールを留去することにより得られた甘草疎水性抽出物の中鎖脂肪酸トリグリセリド溶液に、合成、発酵、天然物からの抽出等の従来公知の方法により得られた還元型補酵素Ｑ10、好ましくは、既存の高純度補酵素Ｑ10を還元することにより得られた還元型補酵素Ｑ10を外部添加し、還元型補酵素Ｑ10と甘草疎水性抽出物を含有する組成物とするのが、本発明の最も好ましい態様の１つである。【００８９】
また、本発明の第１の製造方法によって得られた還元型補酵素Ｑ10をそのまま利用する、すなわち、還元反応終了後の甘草疎水性抽出物と還元型補酵素Ｑ10が共存した反応混合物を、そのまま、本発明の第２における組成物として利用することもできる。具体的には、酸化型補酵素Ｑ10と甘草疎水性抽出物とを含有する組成物を調製し、必要に応じて製剤形態とした後に、該組成物中で酸化型補酵素Ｑ10を還元型補酵素Ｑ10へと還元し、還元型補酵素Ｑ10を含有する組成物とすることもできる。本発明において、これらの態様も別の最も好ましい態様の１つである。【００９０】
本発明の第２においては、組成物中に、還元型補酵素Ｑ10と甘草疎水性抽出物、溶媒以外の物質の他に、例えば、賦形剤、崩壊剤、滑沢剤、結合剤、色素、凝集防止剤、吸収促進剤、溶解補助剤、安定化剤、香料、界面活性剤、還元型補酵素Ｑ10以外の活性成分、酸化防止剤等を含むことができ、特に制限されない。【００９１】
上記賦形剤としては、特に制限されないが、例えば、スクロース、ラクトース、グルコース、デンプン、デキストリン、マンニトール、結晶セルロース、リン酸カルシウム、硫酸カルシウム等を挙げることができる。【００９２】
上記崩壊剤としては、特に制限されないが、例えば、デンプン、寒天、クエン酸カルシウム、炭酸カルシウム、炭酸水素ナトリウム、デキストリン、結晶セルロース、カルボキシメチルセルロース、トラガント、アルギン酸等を挙げることができる。【００９３】
上記滑沢剤としては、特に制限されないが、例えば、タルク、ステアリン酸マグネシウム、ポリエチレングリコール、シリカ、硬化油等を挙げることができる。【００９４】
上記結合剤としては、特に制限されないが、例えば、エチルセルロース、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、トラガント、シェラック、ゼラチン、プルラン、アラビアゴム、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、ポリアクリル酸、ポリメタクリル酸、ソルビトール等を挙げることができる。【００９５】
上記色素としては、特に制限されないが、例えば酸化チタン、食用色素、ベンガラ色素、ベニバナ色素、カラメル色素、クチナシ色素、タール色素、クロロフィル等の色素を挙げることができる。【００９６】
上記凝集防止剤としては、特に制限されないが、例えば、ステアリン酸、タルク、軽質無水ケイ酸、含水二酸化ケイ酸等を挙げることができる。【００９７】
上記吸収促進剤としては、特に制限されないが、例えば、高級アルコール類、高級脂肪酸類等を挙げることができる。【００９８】
上記溶解補助剤としては、特に制限されないが、例えば、フマル酸、コハク酸、リンゴ酸等の有機酸等を挙げることができる。【００９９】
上記安定化剤としては、特に制限されないが、例えば、安息香酸、安息香酸ナトリウム、パラオキシ安息香酸エチル、蜜蝋、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、メチルセルロース等を挙げることができる。【０１００】
上記香料としては特に制限されないが、オレンジ油、カプシカム油、からし油、ガーリック油、キャラウエー油、クローブ油、桂皮油、ココア抽出物、コーヒー豆抽出物、ジンジャー油、スペアミント油、セロリー種子油、タイム油、たまねぎ油、ナツメグ油、パセリ種子油、はっか油、バニラ抽出物、ファンネル油、ペニロイヤル油、ペーパーミント油、ユーカリ油、レモン油、ローズ油、ローズマリー油、アーモンド油、アジョワン油、アニス油、アミリス油、アンゲリカルート油、アンブレット種子油、エストラゴン油、オリガナム油、オリス根油、オリバナム油、カシア油、カスカリラ油、カナンガ油、カモミール油、カラムス油、カルダモン油、キャロット種子油、キュベブ油、クミン油、グレープフルーツ油、桂葉油、ケード油、こしょう油、コスタス根油、コニャック油、コパイバア油、コリアンダー油、しそ油、じゃ香、ジュニパーベリー油、スターアニス油、セイジ油、セボリー油、ゼラニウム油、タンゼリン油、ディル油、とうか油、トルーバルサム油、バジル油、バーチ油、パチュリ油、パルマローザ油、ピメント油、プチグレイン油、ベイ葉油、ベルガモット油、ペルーバルサム油、ベンゾイン樹脂、ボアドローズ油、ホップ油、ボロニアアブソリュート、マージョラン油、マンダリン油、ミルトル油、ユズ香料、ライム油、ラベンジン油、ラベンダー油、ルー油、レモングラス油、レチオニン、ロベージ油、ローレルリーフ油、ワームウッド油等を挙げることができる。【０１０１】
上記界面活性剤としては、例えば、グリセリン脂肪酸エステル、ショ糖脂肪酸エステル、有機酸モノグリセリド、ソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、プロピレングリコール脂肪酸エステル、縮合リシノレイン酸グリセリド、サポニン、リン脂質等を挙げることができ、このなかでも、グリセリン脂肪酸エステル、ショ糖脂肪酸エステル、有機酸モノグリセリド、ソルビタン脂肪酸エステル、プロピレングリコール脂肪酸エステル、縮合リシノレイン酸グリセリド、リン脂質が好ましく使用できる。【０１０２】
グリセリン脂肪酸エステルとしては、特に制限されないが、例えば、グリセリンの重合度が１〜１０のものを挙げることができる。脂肪酸の炭素数が各々６〜１８のグリセリン脂肪酸エステル等を挙げることができる。グリセリン脂肪酸エステルを構成する脂肪酸残基としては特に制限されないが、脂肪酸の炭素数が各々６〜１８のものを好ましく使用することができ、例えば、カプリル酸、カプリン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、イソステアリン酸、オレイン酸、リノール酸、リノレン酸等を挙げることができる。【０１０３】
プロピレングリコール脂肪酸エステルとしては、モノエステル、ジエステル問わず使用できる。プロピレングリコール脂肪酸エステルを構成する脂肪酸残基としては特に制限されないが、脂肪酸の炭素数が６〜１８のものを好ましく使用することができ、例えば、カプリル酸、カプリン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、イソステアリン酸、オレイン酸、リノール酸、リノレン酸等を挙げることができる。【０１０４】
リン脂質としては、特に制限されないが、例えば、卵黄レシチン、精製大豆レシチン、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、スフィンゴミエリン、ジセチルリン酸、ステアリルアミン、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジン酸、ホスファチジルイノシトールアミン、カルジオリピン、セラミドホスホリルエタノールアミン、セラミドホスホリルグリセロール、及び、これらの混合物等を挙げることができる。言うまでもなく、水素添加、酵素分解等の加工を施したリン脂質も使用できる。還元型補酵素Ｑ10の吸収性向上の観点からは、酵素分解されたリン脂質を使用するのが好ましい。【０１０５】
サポニンとしては、特に制限されないが、エンジュサポニン、キラヤサポニン、精製大豆サポニン、ユッカサポニン等を挙げることができる。【０１０６】
上記還元型補酵素Ｑ10以外の活性成分としては、例えば、アミノ酸、ビタミン、ミネラル、ポリフェノール、有機酸、糖類、ペプチド、タンパク質等を挙げることができる。【０１０７】
上記酸化防止剤としては、例えば、アスコルビン酸類、トコフェロール類、ビタミンＡ、β−カロチン、亜硫酸水素ナトリウム、チオ硫酸ナトリウム、ピロ亜硫酸ナトリウム、クエン酸類等を挙げることができる。これらの中でも、アスコルビン酸類、クエン酸類は還元型補酵素Ｑ10の酸化を好適に抑制するため、アスコルビン酸類、クエン酸類の使用が特に好ましい。尚、アスコルビン酸類は、アスコルビン酸類を含有したレモンやオレンジ、グレープフルーツ等の果汁濃縮物（エキス、パウダー等）を利用しても良い。【０１０８】
上記した物質は、複数の役割を担わせても良い。例えば、でんぷんに賦形剤と崩壊剤の役割を担わせても良いし、クエン酸に溶解補助剤、還元型補酵素Ｑ10以外の有効成分、酸化防止剤の３つの役割を担わせても良い。【０１０９】
本発明の第２である還元型補酵素Ｑ10と甘草疎水性抽出物を含有する組成物は、そのまま使用することもできるが、本発明の第１に記載したような製剤、すなわち、カプセル剤（ハードカプセル剤、ソフトカプセル剤、マイクロカプセル剤）、錠剤、シロップ剤、飲料等の経口投与形態や、クリーム、坐薬、練り歯磨き等の外用剤の形態に加工しても使用しうる。その中でも上記経口投与形態へ加工するのが好ましく、特に好ましくは、カプセル剤の形態であり、とりわけ、ソフトカプセル剤へ加工するのが好ましい。【０１１０】
このときの、カプセル基材としては特に制限されず、牛骨、牛皮、豚皮、魚皮等を由来とするゼラチンをはじめとして、他の基材（例えば、食品添加物として使用しうるカラギーナン、アルギン酸等の海藻由来品やローカストビーンガムやグアーガム等の植物種子由来品等の増粘安定剤やセルロース類を含む製造用剤）も使用しうる。【０１１１】
本発明の効果を最大限に発揮するためには、例えば、脱酸素雰囲気下において、本発明の第２の安定化方法を実施するのが好ましく、又、本発明の第２の組成物を調製及び／又は保存するのが好ましい。また上記の製剤への加工や加工後の保存も脱酸素雰囲気にて行うのが好ましい。脱酸素雰囲気は、不活性ガスによる置換、減圧、沸騰やこれらを組み合わせることにより達成できる。少なくとも、不活性ガスによる置換、即ち、不活性ガス雰囲気を用いるのが好適である。上記不活性ガスとしては、例えば、窒素ガス、ヘリウムガス、アルゴンガス、水素ガス、炭酸ガス等を挙げることができ、好ましくは窒素ガスである。【０１１２】
以上のように、本発明の第２の還元型補酵素Ｑ10と甘草疎水性抽出物を含有する組成物、およびその経口投与形態等の加工製剤においては、還元型補酵素Ｑ10を安定に保存することができる。所定期間保存後の還元型補酵素Ｑ10の保持率（例えば、所定期間保存後の補酵素Ｑ10に対する還元型補酵素Ｑ10の割合／保存開始時の補酵素Ｑ10に対する還元型補酵素Ｑ10の割合）として、通常約８０重量％以上、好ましくは約９０重量％以上、より好ましくは約９５重量％以上を維持することが期待できる。上記保存期間は、例えば、１日以上、好ましくは１週間以上、より好ましくは１ヶ月以上、特に好ましくは半年以上、とりわけ１年以上、なかんずく２年以上である。保存時の温度は特に限定されず、通常製剤を保存する条件であれば特に限定されないが、例えば０℃〜６０℃、好ましくは室温である。【０１１３】
本発明の第２の還元型補酵素Ｑ10と甘草疎水性抽出物を含有する組成物は、有効成分である還元型補酵素Ｑ10が酸化から防護され安定に保持されているだけでなく、内臓脂肪低減効果やメタボリックシンドロームの予防改善効果等、さまざまな作用を有する甘草疎水性抽出物も含まれているため、還元型補酵素Ｑ10と甘草疎水性抽出物の持つ両者の効果やその相乗効果が期待でき、栄養機能食品、特定保健用食品などの食品やドリンク剤、医薬品、動物薬、ペットフード等として有用な組成物である。
【実施例】
【０１１４】
以下に製造例、実施例を挙げて本発明をさらに詳しく説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。なお、下記実施例において酸化型補酵素Ｑ10は、株式会社カネカ製のもの（純度９９．５％）を使用した。また、酸化型補酵素Ｑ10や還元型補酵素Ｑ10の純度、総補酵素Ｑ10に対する還元型補酵素Ｑ10の割合（すなわち、還元型補酵素Ｑ10／（酸化型補酵素Ｑ10＋還元型補酵素Ｑ10）：以下、単に「還元型補酵素Ｑ10の割合」ともいう）は下記ＨＰＬＣ分析により求めた。【０１１５】
（ＨＰＬＣ分析条件）
カラム：ＳＹＭＭＥＴＲＹ  Ｃ１８（Ｗａｔｅｒｓ製）２５０ｍｍ（長さ）４．６ｍｍ（内径）、移動相；Ｃ2Ｈ5ＯＨ：ＣＨ3ＯＨ＝４：３（ｖ：ｖ）、検出波長；２１０ｎｍ、流速；１ｍｌ／ｍｉｎ、還元型補酵素Ｑ10の保持時間；９．１ｍｉｎ、酸化型補酵素Ｑ10の保持時間；１３．３ｍｉｎ。【０１１６】
（製造例１）甘草疎水性抽出物の調製
アフガン産甘草（G. glabra）の根茎部１．０ｋｇを用い、エタノール５．０Ｌによる抽出（４５℃、２時間、２回）を行った後、減圧濃縮により濃縮液０．４５Ｌを得た。次いで、この濃縮液０．３Ｌを濃縮した後、更に活性炭処理を実施することにより、甘草疎水性抽出物含有エタノール溶液１２３．６ｇ（甘草疎水性抽出物２４．８ｇ含有）を得た。【０１１７】
（製造例２）甘草疎水性抽出物−ＭＣＴ溶液の調製
製造例１の甘草疎水性抽出物含有エタノール溶液６３．９ｇと中鎖脂肪酸トリグリセリド（以下、ＭＣＴという）（製品名；アクターＭ２、理研ビタミン（株）、脂肪酸組成はＣ８：Ｃ１０＝９９：１）１８．８ｇを混合し、減圧濃縮によりエタノールを除去した。減圧濃縮により得られた２８．７ｇを吸引濾過により不溶分を濾別した後、不溶分をヘキサンで洗浄し、得られた回収液は先の濾液に加えた。回収した濾液２６．２ｇにＭＣＴ４．５ｇを添加して、甘草疎水性抽出物のＭＣＴ溶液３０．７ｇ（甘草疎水性抽出物８．９ｇを含有、グリチルリチン検出限界以下）を得た。【０１１８】
ＨＰＬＣ分析
＜ＨＰＬＣ分析サンプルの調整＞
上記甘草疎水性抽出物−ＭＣＴ溶液１ｇをＨＰＬＣ用メタノールに溶解し、全量を１００ｍｌに調整した。【０１１９】
＜ＨＰＬＣ条件＞
カラム  ：  ＹＭＣ、Ｊ’ｓｐｈｅｒｅ  ＯＤＳ−Ｈ８０、４．６×２５０ｍｍ
カラム温度  ：  ４０℃
移動相  ：  Ａ＝２０ｍＭリン酸水溶液
Ｂ＝アセトニトリル：メタノール（５０：５０＝ｖ/ｖ）
グラジエント  ：
移動相Ａに対して、Ｂの比率を分析開始２０ｍｉｎまで５０％で一定とし、２０ｍｉｎ以降７５ｍｉｎ後に８０％となるように一定比率で上昇させ、７５ｍｉｎ以降８０ｍｉｎまで１００％で一定とし、８０ｍｉｎ以降１００ｍｉｎまで５０％で一定とする条件
流速  ：  １ｍｌ／ｍｉｎ
波長  ：  ＵＶ２８２ｎｍ
サンプル注入量：  ２０μＬ。【０１２０】
＜分析結果＞
甘草疎水性抽出物−ＭＣＴ溶液１ｇに含まれる各々の成分の含有量は、グラブレン（４．４ｍｇ）、グラブリジン（３０．０ｍｇ）、グラブロール（６．０ｍｇ）、４’−Ｏ−メチルグラブリジン（５．２ｍｇ）であった。【０１２１】
＜ポリフェノール分析＞
グラブリジン（和光純薬工業株式会社製）を標準物質に用いたフォリン−デニス法によるポリフェノール含量の測定を行った結果、甘草疎水性抽出物−ＭＣＴ溶液１ｇ中のポリフェノールの総含有量は、２３９．１ｍｇであった。【０１２２】
（製造例３）還元型補酵素Ｑ10の調製
１０００ｇのエタノールに、１００ｇの酸化型補酵素Ｑ10（株式会社カネカ製）、６０ｇのＬ−アスコルビン酸を加え、７８℃にて攪拌し、還元反応を行った。３０時間後、５０℃まで冷却し、同温を保持しながらエタノールを４００ｇ添加した。このエタノール溶液（還元型補酵素Ｑ10１００ｇを含む）を攪拌しながら、１０℃／時間の冷却速度で２℃まで冷却し、白色のスラリーを得た。得られたスラリーを減圧ろ過し、湿結晶を冷エタノール、冷水、冷エタノール、で順に洗浄（洗浄に用いた冷溶媒の温度は２℃）して、さらに、湿結晶を減圧乾燥（２０〜４０℃、１〜３０ｍｍＨｇ）することにより、白色の乾燥結晶９５ｇを得た。なお、減圧乾燥を除くすべての操作は窒素雰囲気下で実施した。得られた結晶の還元型補酵素Ｑ10の割合は９９．５重量％であった。【０１２３】
（実施例１〜２、比較例１〜２）
３０ｍＬのサンプルビンに、表１に記載された量の、製造例２で得られた甘草疎水性抽出物−ＭＣＴ溶液と、製造例３で得られた還元型補酵素Ｑ10結晶を加え混合し、１０ｇの溶液とした。この溶液を、４０℃、空気中にて保存し、１５日、及び、３０日間保存後の還元型補酵素Ｑ10の残存率（保存後の還元型補酵素Ｑ10の割合／保存開始時の還元型補酵素Ｑ10の割合）をそれぞれ求めた。結果を表１に示す。尚、比較のため、甘草疎水性抽出物−ＭＣＴ溶液に代わり、ＭＣＴのみを使用したときの結果も併せて示す。【０１２４】
【表１】
2009025277.tif 000002
【０１２５】
以上、実施例１〜２及び比較例１〜２の結果より、還元型補酵素Ｑ10と甘草疎水性抽出物を共存下に含有する組成物とすることにより、還元型補酵素Ｑ10の安定性が向上することが判明した。【０１２６】
（比較例３〜５）
３０ｍＬのサンプルビンに、それぞれ表２に記載された量の、ウコン抽出物（丸善製薬株式会社製；ポリフェノール含量７０重量％）（比較例３）、ケルセチン（ケルセチン２水和物、シグマ社製）（比較例４）、ルチン（ルチン水和物、シグマ社製）（比較例５）と、製造例３で得られた還元型補酵素Ｑ10結晶及びＭＣＴを加え混合し、１０ｇの混合液とした。この混合液を、４０℃、空気中にて３０日間保存し、保存後の還元型補酵素Ｑ10の残存率（保存後の還元型補酵素Ｑ10の割合／保存開始時の還元型補酵素Ｑ10の割合）を求めた。結果を表２に示す。【０１２７】
【表２】
2009025277.tif 000003
【０１２８】
以上の結果より、還元型補酵素Ｑ10を安定化する能力において、他の植物抽出物（ウコン抽出物）や他のポリフェノールと比較して、甘草疎水性抽出物が特に優れていることが確認できた。【０１２９】
（実施例３、比較例６）
３０ｍＬのサンプルビンに、表３に記載された量の、製造例２で得られた甘草疎水性抽出物−ＭＣＴ溶液と、酸化型補酵素Ｑ10結晶（株式会社カネカ製）を加え混合し、１０ｇの溶液とした。この溶液を、４０℃、空気中にて３０日間保存し、保存後の酸化型補酵素Ｑ10から還元型補酵素Ｑ10への変換率（保存後の還元型補酵素Ｑ10の割合）を求めた。結果を表３に示す。尚、比較のため、甘草疎水性抽出物−ＭＣＴ溶液に代わり、ＭＣＴのみを使用したときの結果も併せて示す。【０１３０】
【表３】
2009025277.tif 000004
【０１３１】
以上、実施例３及び比較例６の結果より、酸化型補酵素Ｑ10と甘草疎水性抽出物とを共存させることにより、酸化型補酵素Ｑ10が還元型補酵素Ｑ10へと変換されることが判明した。【０１３２】
（実施例４）
１００ｍＬのナスフラスコに製造例２で得られた甘草疎水性抽出物−ＭＣＴ溶液１９．８ｇと酸化型補酵素Ｑ10結晶（株式会社カネカ製）０．２ｇを加え、窒素雰囲気下、８０℃にて攪拌した。９６時間経過後の酸化型補酵素Ｑ10の還元型補酵素Ｑ10への変換率（保存後の還元型補酵素Ｑ10の割合）は９８．１重量％であった。【０１３３】
（比較例７）
１００ｍＬのナスフラスコにルチン（ルチン水和物、シグマ社製）４．８ｇ、ＭＣＴ１５ｇ、酸化型補酵素Ｑ10結晶（株式会社カネカ製）０．２ｇを加え、窒素雰囲気下、８０℃にて攪拌した。９６時間経過後の酸化型補酵素Ｑ１０の還元型補酵素Ｑ１０への変換率（保存後の還元型補酵素Ｑ10の割合）は４８．７重量％であり、ルチンは酸化型補酵素Ｑ10を還元する能力において、甘草疎水性抽出物には及ばないことが確認できた。【０１３４】
（製剤例１）
製造例２で得られた甘草疎水性抽出物−ＭＣＴ溶液２５重量部に、ＭＣＴ５０重量部、リゾレシチン５重量部、ミツロウ５重量部を添加し、均一に混合した後に、製造例３で得られた還元型補酵素Ｑ10結晶１５重量部を４０℃にて添加した。得られた混合物は、定法により、ゼラチンのソフトカプセル製剤とした。【０１３５】
（製剤例２）
製造例２で得られた甘草疎水性抽出物−ＭＣＴ溶液１０重量部に、ＭＣＴ６０重量部、レシチン５重量部、ミツロウ１０重量部、硬化油５重量部を添加し、均一に混合した後に、製造例３で得られた還元型補酵素Ｑ10結晶１０重量部を４０℃にて添加した。得られた混合物は、定法により、ゼラチンのソフトカプセル製剤とした。【０１３６】
（製剤例３）
製造例２で得られた甘草疎水性抽出物−ＭＣＴ溶液２８重量部に、ＭＣＴ５６重量部、リゾレシチン５重量部、ミツロウ５重量部を添加し、均一に混合した後に、酸化型補酵素Ｑ10６重量部を４０℃にて添加した。得られた混合物は、定法により、ゼラチンのソフトカプセル製剤とした。該カプセルを３０℃で１ヶ月保存し、カプセル内の酸化型補酵素Ｑ10の一部が還元型補酵素Ｑ10に還元されたソフトカプセル製剤を得た。
【国際調査報告】
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