【手続補正書】
【提出日】平成15年10月8日(2003.10.8)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）非胎児血管芽細胞を含む細胞集団を提供すること、および
（ｂ）前記非胎児血管芽細胞の増殖を促進する条件下で前記細胞集団を成長すること
を含む、非胎児血管芽細胞を含む細胞集団を提供する方法。
【請求項２】
段階（ｂ）において、前記条件は、前記非胎児血管芽細胞の数および相互の近接度が、他の細胞に比べて、集団における非胎児血管芽細胞の割合を増加して、高濃度細胞培養物を提供するのに十分なものである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
（ｃ）前記細胞培養物中の他の細胞から前記非胎児血管芽細胞の少なくとも一部分を分離することをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記分離段階（ｃ）は、ネガティブ選択プロセスを含む、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記分離段階（ｃ）は、成長段階（ｂ）と同時に、その間に断続的に、またはその後に行われる、請求項３に記載の方法。
【請求項６】
前記分離段階は成育段階（ｂ）の間に一回より多く行われる、請求項３に記載の方法。
【請求項７】
前記分離段階は５〜１０日ごとに行われる、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記成長段階は細胞増殖中に少なくとも一つの成長因子を前記細胞集団に提供することを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
複数の成長因子を前記細胞集団に提供する、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記成長因子はＳＣＦ、ＴＰｏおよびＦＬＴ−３を含む、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記成長因子はＶＥＧＦである、請求項８に記載の方法。
【請求項１２】
前記非胎児血管芽細胞はヒトの血管芽細胞である、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
提供段階（ａ）で提供される非胎児血管芽細胞はヒトの臍帯血から得られる、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
非胎児血管芽細胞の少なくとも５％は前記ヒト血管芽細胞である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１５】
非胎児血管芽細胞の少なくとも１５％は前記ヒト血管芽細胞である、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
非胎児血管芽細胞の少なくとも２５％は前記ヒト血管芽細胞である、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記ヒト血管芽細胞は、ＣＤ２-、ＣＤ３-、ＣＤ１４-、ＣＤ１６-、ＣＤ１９-、ＣＤ２４-、ＣＤ５６-、ＣＤ６６ｂ-、グリコホリンＡ-として特徴付けられる、請求項１２に記載の方法。
【請求項１８】
前記ヒト血管芽細胞は、さらにｆｌｋ−１+、ＣＤ４５+として特徴付けられる、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記ヒト血管芽細胞は、さらにＣＸＣＲ４＋、ＭＤＲ＋として特徴付けられる、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
非胎児血管芽細胞の少なくともいくつかは、ＣＤ３４−、Ｌｉｎ−細胞である、請求項１に記載の方法。
【請求項２１】
ＣＤ３４−、Ｌｉｎ−である細胞の割合が初発の細胞培養物中に比べて成長段階（ｂ）後の方が高いものである、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
非胎児血管芽細胞の少なくとも５％は前記ＣＤ３４−、Ｌｉｎ−細胞である、請求項２０に記載の方法。
【請求項２３】
非胎児血管芽細胞の少なくとも１５％は前記ＣＤ３４−、Ｌｉｎ−細胞である、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
非胎児血管芽細胞の少なくとも２５％は前記ＣＤ３４−、Ｌｉｎ−細胞である、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
非胎児血管芽細胞を含む細胞集団であって、前記細胞集団より少ない非胎児血管芽細胞を含む初発の細胞サンプルの拡張から得られる細胞集団。
【請求項２６】
前記初発の細胞サンプルは、細胞集団より少なくとも１０％少ない割合の非胎児血管芽細胞を含む、請求項２５に記載の細胞集団。
【請求項２７】
高濃度細胞培養物中の非胎児血管芽細胞である細胞の割合が初発の細胞サンプル中の非胎児血管芽細胞である細胞の割合より高いものである、請求項２５に記載の細胞集団。
【請求項２８】
細胞の少なくとも２％は非胎児血管芽細胞である細胞の組成物。
【請求項２９】
細胞の少なくとも５％は非胎児血管芽細胞である、請求項２８に記載の組成物。
【請求項３０】
細胞の少なくとも１５％は非胎児血管芽細胞である、請求項２９に記載の組成物。
【請求項３１】
細胞の少なくとも２５％は非胎児血管芽細胞である、請求項３０に記載の組成物。
【請求項３２】
前記非胎児血管芽細胞はヒトの血管芽細胞を含む、請求項２８に記載の組成物。
【請求項３３】
前記非胎児血管芽細胞はＣＤ３４−、Ｌｉｎ−細胞を含む、請求項２８に記載の組成物。
【請求項３４】
前記ヒト血管芽細胞は、ＣＤ２-、ＣＤ３-、ＣＤ１４-、ＣＤ１６-、ＣＤ１９-、ＣＤ２４-、ＣＤ５６-、ＣＤ６６ｂ-、グリコホリンＡ-として特徴付けられる、請求項３２に記載の組成物。
【請求項３５】
前記ヒト血管芽細胞は、さらにｆｌｋ−１+、ＣＤ４５+として特徴付けられる、請求項３２に記載の組成物。
【請求項３６】
前記ヒト血管芽細胞は、さらにＣＸＣＲ４＋、ＭＤＲ＋として特徴付けられる、請求項３５に記載の組成物。
【請求項３７】
（ａ）非胎児未分化ヒト血管芽細胞を含む第一の細胞集団を提供すること、および
（ｂ）前記非胎児未分化血管芽細胞の増殖を促進する条件下で前記第一の細胞集団を成長すること
を含む、非胎児未分化ヒト血管芽細胞を含む細胞集団を提供する方法。
【請求項３８】
ＣＤ３４-、Ｌｉｎ-、ＣＤ４５+で特徴付けられる非胎児細胞を少なくとも２％含む細胞集団。
【請求項３９】
ＣＤ３４-、Ｌｉｎ-、ＣＤ４５+で特徴付けられる非胎児細胞を少なくとも５％含む、請求項３８に記載の細胞集団。
【請求項４０】
ＣＤ３４-、Ｌｉｎ-、ＣＤ４５+で特徴付けられる非胎児細胞を少なくとも１５％含む、請求項３８に記載の細胞集団。
【請求項４１】
ＣＤ３４-、Ｌｉｎ-、ＣＤ４５+で特徴付けられる非胎児細胞を少なくとも２５％含む、請求項３８に記載の細胞集団。
【請求項４２】
前記非胎児細胞はさらにＣＤ３８-で特徴付けられる、請求項３８〜４１のいずれか一項に記載の細胞集団。
【請求項４３】
（ａ）血管芽細胞を含む細胞集団を提供すること、
（ｂ）血管芽細胞の増殖を促進する条件下で前記細胞集団を培養すること、および
（ｃ）段階（ｂ）と同時に、その間に断続的に、またはその後に、前記細胞集団から血管芽細胞の少なくとも一部分を選択すること
を含み、段階（ｃ）は、段階（ｂ）中に一回より多く行われることを特徴とする、血管芽細胞を含む細胞集団を提供する方法。
【請求項４４】
（ａ）ＣＤ３４-、Ｌｉｎ-細胞を含む細胞集団を提供すること、
（ｂ）ＣＤ３４-、Ｌｉｎ-細胞の増殖を促進する条件下で前記細胞集団を培養すること、および
（ｃ）段階（ｂ）と同時に、その間に断続的に、またはその後に、前記細胞集団からＣＤ３４-、Ｌｉｎ-細胞の少なくとも一部分を選択すること
を含み、段階（ｃ）は、段階（ｂ）中に一回より多く行われることを特徴とする、ＣＤ３４-、Ｌｉｎ-細胞を含む細胞集団を提供する方法。
【請求項４５】
（ａ）Ｌｉｎ-細胞を含む細胞集団を提供すること、
（ｂ）Ｌｉｎ-細胞の増殖を促進する条件下で前記細胞集団を培養すること、および
（ｃ）段階（ｂ）と同時に、その間に断続的に、またはその後に、前記細胞集団からＬｉｎ-細胞の少なくとも一部分を選択すること
を含み、段階（ｃ）は、段階（ｂ）中に一回より多く行われる、Ｌｉｎ-細胞を含む細胞集団を提供する方法。
【請求項４６】
ＣＤ３４+、Ｌｉｎ-、ＣＤ４５+細胞およびＣＤ３４-、Ｌｉｎ-、ＣＤ４５+細胞を含む細胞集団を提供すること、および
ＣＤ３４+、Ｌｉｎ-、ＣＤ４５+細胞およびＣＤ３４-、Ｌｉｎ-、ＣＤ４５+細胞の増殖を促進する条件下で前記細胞集団を培養すること
を含む、ＣＤ３４+、Ｌｉｎ-、ＣＤ４５+細胞およびＣＤ３４-、Ｌｉｎ-、ＣＤ４５+細胞を含む細胞集団を提供する方法。
【請求項４７】
（ａ）標的細胞または標的細胞の前駆細胞を含む細胞集団の初発サンプルを栄養培地に接種すること、
（ｂ）前記初発サンプルを培養して細胞集団を得ること、および
（ｃ）段階（ｂ）と同時に、その間に断続的に、またはその後に、標的細胞または非標的細胞に親和性を有する少なくとも一つの選択分子を有する選択要素を、段階（ｂ）で得られた細胞集団中の標的細胞または非標的細胞に接触させ、標的細胞を選択すること
を含む、標的細胞集団の選択的拡張方法。
【請求項４８】
段階（ｃ）において標的細胞または非標的細胞が除去されることを特徴とする、請求項４７に記載の方法。
【請求項４９】
段階（ｃ）において標的細胞が除去されることを特徴とする、請求項４７に記載の方法。
【請求項５０】
段階（ｃ）において非標的細胞が除去されることを特徴とする、請求項４７に記載の方法。
【請求項５１】
段階（ａ）において、標的細胞の前駆細胞を含む細胞集団の初発サンプルが用いられる、請求項４７に記載の方法。
【請求項５２】
前記選択要素は、選択分子を結合させた固体支持体からなる、請求項４７に記載の方法。
【請求項５３】
前記栄養培地は、細胞培養の始めにチャンバーに供給される、または、連続的にチャンバーに流されるものである、請求項５２に記載の方法。
【請求項５４】
前記選択分子は、標的細胞の細胞表面抗原に結合するものである、請求項４７に記載の方法。
【請求項５５】
前記選択分子は、非標的細胞の細胞表面抗原に結合するものである、請求項４７に記載の方法。
【請求項５６】
細胞を成長させるための栄養培地、
前記栄養培地を入れるチャンバー、および、
細胞集団中の非標的細胞に親和性がある少なくとも一種の選択分子を付着させ得る結合部位を有する選択要素
からなり、前記選択要素が細胞培養中または細胞培養後に栄養培地と接触できるように構成されていることを特徴とする、細胞集団中で標的細胞を選択的に拡張するためのシステム。
【請求項５７】
未分化細胞を含むサンプルを栄養培地に導入すること、
前記サンプルを培養し、細胞集団を得ること、および
前記細胞集団から未分化細胞を選択すること
を含む、免疫機能を増強するための細胞集団を提供する方法。
【請求項５８】
前記サンプルは自己由来である、請求項５７に記載の方法。
【請求項５９】
前記サンプルは血液である、請求項５７に記載の方法。
【請求項６０】
未分化細胞を含むサンプルを栄養培地に導入すること、
前記未分化細胞を分化させ、標的細胞を含む細胞集団を得ること、
得られた細胞集団を培養すること、および
培養された細胞集団から標的細胞を選択すること
を含む、免疫機能を増強するための細胞集団を提供する方法。
【請求項６１】
（ａ）標的細胞または標的細胞の前駆細胞を含む細胞集団の初発サンプルを栄養培地に導入すること、
（ｂ）前記初発サンプルを培養して細胞集団を得ること、
（ｃ）段階（ｂ）を開始した後、標的細胞または非標的細胞に親和性を有する少なくとも一つの選択分子を含む選択要素を、段階（ｂ）で得られた細胞集団中の標的細胞または非標的細胞に接触させ、標的細胞を選択すること、
（ｄ）段階（ｃ）で選択された標的細胞を培養すること、および
（ｅ）段階（ｄ）を開始した後、標的細胞または非標的細胞に親和性を有する少なくとも一つの選択分子を含む選択要素を、段階（ｄ）で得られた細胞集団中の標的細胞または非標的細胞に接触させ、標的細胞を選択すること、
を含む、標的細胞集団の選択的拡張方法。
【請求項６２】
段階（ｄ）および段階（ｅ）は複数回繰り返される、請求項６１に記載の方法。
【請求項６３】
段階（ｄ）および段階（ｅ）は段階（ｂ）の培養中に連続して行われる、請求項６１に記載の方法。
【請求項６４】
（ａ）標的細胞または標的細胞の前駆細胞を含む細胞集団の初発サンプルを栄養培地に導入すること、
（ｂ）前記初発サンプルを培養して細胞集団を得ること、
（ｃ）段階（ｂ）と同時に、その間に断続的に、またはその後に、非標的細胞に親和性を有する少なくとも一つの選択分子を含む選択要素を、段階（ｂ）で得られた細胞集団中の非標的細胞に接触させ、標的細胞を選択すること
を含む、標的細胞を含む細胞集団の選択的拡張方法。
【請求項６５】
標的細胞に親和性を有する少なくとも一つの選択分子を含む選択要素を、培養された細胞集団中の標的細胞に接触させ、標的細胞を選択することをさらに含む、請求項６４に記載の方法。
【請求項６６】
（ａ）標的細胞または標的細胞の前駆細胞を含む細胞集団の初発サンプルを栄養培地に導入すること、
（ｂ）前記初発サンプルを培養して細胞集団を得ること、および
（ｃ）段階（ｂ）中に連続的に、標的細胞または非標的細胞に親和性を有する少なくとも一つの選択分子を含む選択要素を、段階（ｂ）で得られた細胞集団中の標的細胞または非標的細胞に接触させ、標的細胞を選択すること
を含む、標的細胞を含む細胞集団の選択的拡張方法。
【請求項６７】
（ａ）標的細胞または標的細胞の前駆細胞を含む細胞集団の初発サンプルを栄養培地に導入すること、
（ｂ）前記初発サンプルを培養して細胞集団を得ること、および
（ｃ）段階（ｂ）中に断続的に、標的細胞または非標的細胞に親和性を有する少なくとも一つの選択分子を含む選択要素を、段階（ｂ）で得られた細胞集団中の標的細胞または非標的細胞に接触させ、標的細胞を選択すること、
（ｄ）段階（ｃ）で選択された標的細胞をさらに培養し細胞集団を得ること、および
（ｅ）段階（ｄ）と同時に、その間に断続的に、またはその後に、標的細胞または非標的細胞に親和性を有する少なくとも一つの選択分子を含む選択要素を、段階（ｄ）で得られた細胞集団中の標的細胞または非標的細胞に接触させ、標的細胞を選択すること
を含み、段階（ｅ）で選択された標的細胞はこれ以上培養されないことを特徴とする、標的細胞集団の増殖方法。
【請求項６８】
前記選択分子は標的細胞に親和性を有するものである、請求項４７、６１、６６または６７に記載の方法。
【請求項６９】
前記選択分子は非標的細胞に親和性を有するものである、請求項４７、６１、６６または６７に記載の方法。
【請求項７０】
段階（ａ）の前に、標的細胞または非標的細胞に親和性を有する少なくとも一つの選択分子を含む選択要素を初発サンプルに接触させることにより、非標的細胞から標的細胞または標的細胞の前駆細胞を含む細胞集団を選択することを含む、請求項４７、６１、６４、６６または６７に記載の方法。