【手続補正書】
【提出日】平成16年4月9日(2004.4.9)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（Ａ）少なくとも５０ｍＭの塩化アンモニウム及び少なくとも一つのカルボキシル基を有するカルボン酸又は金属カルボキシレート０．００１重量％〜０．１重量％を含む赤血球溶解液と全血試料とを混合し、
（Ｂ）得られた混合物を遠心分離することにより前記全血試料から白血球のペレットを形成し、
（Ｃ）その上清を除去した後、前記白血球ペレットを前記溶解液の新鮮な試料中で洗浄し、そして
（Ｄ）前記白血球ペレットを遠心分離して単離する白血球の選択的調製方法であって、
前記カルボン酸又は金属カルボキシレートは下記構造式：
Ｒ−ＣＯＯＭ
（上式中、Ｍは水素又は１価のカチオンを表し、Ｒは炭素原子数１〜６のアルキル基、炭素原子数１〜６の置換アルキル基、炭素原子数２〜６のアルケニル基、炭素原子数２〜６の置換アルケニル基、アリール基、置換アリール基、アリールアルキル基又は置換アリールアルキル基を表す）で示され、
前記溶解液のｐＨは６〜８の間にあり、そして
前記（Ａ）〜（Ｄ）を２０分以内で遂行する、白血球の選択的調製方法。
【請求項２】
前記溶解液が５０〜１００ｍＭの塩化アンモニウムを含有する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記カルボン酸又は前記金属カルボキシレートが０．００５〜０．０５重量％である、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記カルボン酸が、モノハロ酢酸、ジハロ酢酸、トリハロ酢酸及び酢酸から成る群より選ばれる、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記カルボン酸が酢酸である、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記ｐＨが６．５〜７．５の間にある、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記（Ａ）〜（Ｄ）を１０〜１６分以内で遂行する、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記全血試料の体積が０．０１〜１０ｍＬである、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
遠心分離工程の各々を１０分未満以内で遂行する、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
（１）（Ａ）少なくとも５０ｍＭの塩化アンモニウム及び少なくとも一つのカルボキシル基を有するカルボン酸又は金属カルボキシレート０．００５重量％以上を含む赤血球溶解液と全血試料とを混合し、
（Ｂ）得られた混合物を遠心分離することにより前記全血試料から白血球のペレットを形成し、
（Ｃ）その上清を除去した後、前記白血球ペレットを前記溶解液の新鮮な試料中で洗浄し、そして
（Ｄ）前記白血球ペレットを遠心分離して単離する方法であって、
前記カルボン酸又は金属カルボキシレートは下記構造式：
Ｒ−ＣＯＯＭ
（上式中、Ｍは水素又は１価のカチオンを表し、Ｒは炭素原子数１〜６のアルキル基、炭素原子数１〜６の置換アルキル基、炭素原子数２〜６のアルケニル基、炭素原子数２〜６の置換アルケニル基、アリール基、置換アリール基、アリールアルキル基又は置換アリールアルキル基を表す）で示され、
前記溶解液のｐＨは６〜８の間にあり、そして
前記（Ａ）〜（Ｄ）を２０分以内で遂行する方法により、全血試料中の標的核酸を含有することが疑われる白血球を選択的に調製する工程と、
（２）前記洗浄後のペレットの中の白血球を溶解することにより前記標的核酸を解放させる工程と、
（３）前記標的核酸の対向鎖に特異的であり且つハイブリダイズし得る一組のプライマーを使用するポリメラーゼ連鎖反応によって、前記解放された標的核酸を増幅する工程と、
（４）前記増幅された標的核酸を検出する工程とを含む、標的核酸を増幅して検出するための方法。
【請求項１１】
前記溶解液が５０〜１００ｍＭの塩化アンモニウムを含有する、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記（Ａ）〜（Ｄ）を１０〜１６分以内で遂行する、
請求項１０に記載の方法。
【請求項１３】
前記全血試料の体積が０．０１〜１０ｍＬである、請求項１０に記載の方法。
【請求項１４】
遠心分離工程の各々を１０分未満以内で遂行する、請求項１０に記載の方法。
【請求項１５】
前記ポリメラーゼ連鎖反応を耐熱性ＤＮＡポリメラーゼの存在下で遂行し、さらに前記プライマーの一方又は両方を検出のために標識する、請求項１０に記載の方法。
【請求項１６】
前記標識プライマーをビオチンで標識し、さらに所定の基質の存在下で検出可能な信号を提供し得る酵素とアビジンの接合体を使用して検出を行う、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
ウイルス、細菌、菌類又は原生動物のＲＮＡ又はＤＮＡを検出するための、請求項１０に記載の方法。
【請求項１８】
連鎖球菌属(Streptococcus species)、ミコバクテリア属(Mycobacterium species)、ニューモシスティス・カリニ（Pneumocystis carinii）、単純ヘルペスウイルス、ＥＢウイルス、サイトメガロウイルス、肝炎ウイルス、レトロウイルス、カンジダ属(Candida species)又はアスペルギルス属(Aspergillus species)由来のＲＮＡ又はＤＮＡを検出するための、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
ＨＩＶ−１、ＨＩＶ−２、ヒト結核菌(Mycobacterium tuberculosis)、鳥結核菌(Mycobacterium avium)又はサイトメガロウイルスＲＮＡ若しくはＤＮＡを検出するための、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記増幅された標的核酸を、前記標識プライマー上の前記標識に応じて比色用信号又は化学発光信号を提供する試薬を使用して検出する、請求項１０に記載の方法。
【請求項２１】
（ａ）標的核酸の対向鎖に特異的であり且つハイブリダイズし得る二種のプライマーであって、その一方又は両方を検出部分で標識した一組のプライマー、及び同一又は別の容器に入れた少なくとも一種の他のＰＣＲ試薬、並びに
（ｂ）別の容器に入れた、少なくとも５０ｍＭの塩化アンモニウム及び少なくとも一つのカルボキシル基を有するカルボン酸又は金属カルボキシレート０．００５重量％以上を含有する溶液又は水で再構成する場合にはその乾燥組成物であって、前記カルボン酸又は金属カルボキシレートは下記構造式：
Ｒ−ＣＯＯＭ
（上式中、Ｍは水素又は１価のカチオンを表し、Ｒは炭素原子数１〜６のアルキル基、炭素原子数１〜６の置換アルキル基、炭素原子数２〜６のアルケニル基、炭素原子数２〜６の置換アルケニル基、アリール基、置換アリール基、アリールアルキル基又は置換アリールアルキル基を表す）で示され、そして
前記溶解液のｐＨは６〜８の間にある前記溶液又は乾燥組成物を含む、ポリメラーゼ連鎖反応用キット。
【請求項２２】
前記プライマーの一方又は両方がビオチンで標識されており、さらに前記キットが耐熱性ＤＮＡポリメラーゼ、マグネシウム又はマンガン塩であるコファクター、ｄＡＴＰ、ｄＣＴＰ、ｄＧＴＰ及びｄＴＴＰを含む、請求項２１に記載のキット。
【請求項２３】
前記一組のプライマーが、ＨＩＶ−１、ＨＩＶ−２、ヒト結核菌(Mycobacterium tuberculosis)、鳥結核菌(Mycobacterium avium)又はサイトメガロウイルスＲＮＡ若しくはＤＮＡの対向鎖に特異的であり且つハイブリダイズし得る二種のプライマーを含む、請求項２１に記載のキット。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１３】
（ａ）標的核酸の対向鎖に特異的であり且つハイブリダイズし得る二種のプライマーであって、その一方又は両方を検出部分で標識した一組のプライマー、及び同一又は別の容器に入れた少なくとも一種の他のＰＣＲ試薬、並びに
（ｂ）別の容器に入れた、少なくとも約５０ｍＭの塩化アンモニウム及び少なくとも一つのカルボキシル基を有するカルボン酸又は金属カルボキシレート約０．００５重量％以上を含有する溶液又は水で再構成する場合にはその乾燥組成物であって、前記カルボン酸又は金属カルボキシレートは下記構造式：
Ｒ−ＣＯＯＭ
（上式中、Ｍは水素又は１価のカチオンを表し、Ｒは炭素原子数１〜６のアルキル基、炭素原子数１〜６の置換アルキル基、炭素原子数２〜６のアルケニル基、炭素原子数２〜６の置換アルケニル基、アリール基、置換アリール基、アリールアルキル基又は置換アリールアルキル基を表す）で示され、そして
前記溶解液のｐＨは６〜８の間にある前記溶液又は乾燥組成物を含む、ポリメラーゼ連鎖反応用キット。