【手続補正書】
【提出日】平成16年4月5日(2004.4.5)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】  単離核酸であって、その配列が、配列番号３〜配列番号１０、あるいは以下：
（ｉ）配列番号３〜配列番号１０の配列の少なくとも７０％と一致する配列；又は
（ii）ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下、配列番号３〜配列番号１０  の配列若しくはそれらに相補的な配列とハイブリダイズする配列、
として定義される相同配列から選ばれる上記単離核酸。
【請求項２】  配列番号２若しくは配列番号２９のアミノ酸配列、あるいは以下：
ｉ）配列番号２又は配列番号２９の配列の少なくとも７０％と一致する配列；又は
ii）ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下、配列番号１又は２８の配列若  しくはそれらに相補的な配列とハイブリダイズする核酸配列によりコードされる配列、
として定義される相同配列を含み、ポドシン（podocin)と称される単離ポリペプチド。
【請求項３】  特に、第４８１，１７３／１７４，４８８，９２４／９２５，１２８，３４３，４８２，５４８，６０７、及び９４０、あるいは１０３３，５２９，６２２，７７４−７８２，１５４，４２２，４４２，５７１，５７２，５８３，７８３，７９４、及び８４８ヌクレオチドの少なくとも１つの位置での、変異、挿入又は欠失により配列番号１の配列と異なる配列を含む単離核酸。
【請求項４】  配列番号１又は２８の配列、あるいは以下：
ｉ）配列番号１又は２８の配列の少なくとも７０％と一致する配列；又は
ii）請求項２に記載のポドシンと称されるポリペプチドをコードする配列、
として定義される相同配列を含む単離核酸。
【請求項５】  請求項１，３又は４のいずれか１項に記載の核酸を含むクローニング及び／又は発現ベクター。
【請求項６】  請求項５に記載のベクターによりトランスフェクトされた宿主細胞。
【請求項７】  配列番号１１〜配列番号２７の配列から選ばれる配列から成る核酸。
【請求項８】  請求項４に記載の核酸を含むベクターを、請求項２に記載のポリペプチドの発現を可能にする条件下で培養される宿主細胞内に転移させる組換えポドシン・ポリペプチドの製造方法。
【請求項９】  請求項２に記載のポリペプチドに対する抗体。
【請求項１０】  生物サンプル中の請求項４に記載のポリペプチドを検出又は精製するための少なくとも１の請求項９に記載の抗体の使用。
【請求項１１】  請求項１に記載の核酸配列を含むものとして定義されるＮＰＨＳ２遺伝子、又は請求項４に記載の配列に相補的な核酸配列を含むと定義されるその転写産物の異常を検出するための少なくとも１の、請求項１，３，４又は７のいずれか１項に記載の核酸の使用。
【請求項１２】  ステロイド抵抗性ネフローゼ症候群のインビトロにおける診断方法であって、以下の：
ａ１）ＤＮＡを含む生物サンプルを、請求項１に記載の核酸配列を含むと定義される    ＮＰＨＳ２遺伝子の全て又は一部を増幅するための特異的なオリゴヌクレオチドと一    緒にセットし；
ｂ１）上記ＤＮＡを増幅し；
ｃ１）増幅産物を検出し；
ｄ１）得られた増幅産物を、対照サンプルを用いて得られた増幅産物と比較し、そし    てステロイド抵抗性ネフローゼ症候群を示唆する上記ＮＰＨＳ２遺伝子内の起こりう    る異常をこのようにして検出する；
かあるいは代わりに、
ａ２）ＲＮＡを含む生物サンプルを、請求項４に記載の相補的な核酸配列を含むと定    義されるＮＰＨＳ２遺伝子の転写産物の全て又は一部を増幅するための特異的なオリ    ゴヌクレオチドと一緒にセットし；
ｂ２）上記ＤＮＡを増幅し；
ｃ２）増幅産物を検出し；
ｄ２）得られた増幅産物を、対照サンプルを用いて得られた増幅産物と比較し、そし    てステロイド抵抗性ネフローゼ症候群を示唆する上記ＮＰＨＳ２遺伝子内の起こりう    る異常をこのようにして検出する；
から成るステップを含む前記診断方法。
【請求項１３】  医薬として許容される媒質と組合せて、請求項２に記載のポリペプチド又は上記ポリペプチドをコードする核酸を含む医薬組成物。
【請求項１４】  腎臓病、特にステロイド抵抗性ネフローゼ症候群の治療を意図した医薬品を製造するための、請求項２に記載のポリペプチド又は上記ポリペプチドをコードする核酸の使用。
【請求項１５】  ヒトのＮＰＳ２遺伝子の突然変異の存在に関係するステロイド抵抗性ネフローゼ症候群の存在又は不存在の診断方法であって、上記ヒトから得た生物サンプル中のＮＰＳ２遺伝子の１以上の突然変異の存在又は不存在を検出する方法を含む上記診断方法。
【請求項１６】  前記突然変異が、ナンセンス変異、挿入又は欠失、あるいはミスセンス変異である請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】  前記突然変異が、配列番号１の４８１，１７３／１７４，４８８，９２４／９２５，１２８，３４３，４８２，５４８，６０７，９４０，１０３３，５２９，６２２，７７４−７８２，１５４，４２２，５７１，５７２，５８３，７９４、又は８４８位に位置する１以上の突然変異である、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】  ＮＰＳ２遺伝子の１以上の突然変異の存在又は不存在を検出する、請求項１７に記載の方法であって、以下のステップ：
ａ）ヒトから得られた生物サンプルのＤＮＡを特異的に増幅し、それによって増幅産物を得、そして
ｂ）ステップａ）で得られた増幅産物を、野生型ＮＰＳ２遺伝子を含む対照サンプルから得られた増幅産物と比較する、
を含み、
ここで、サンプルからの増幅産物が、対照の増幅産物と異なる場合、次に生物サンプルのＮＰＳ２遺伝子の１以上の突然変異が検出される上記方法。
【請求項１９】  前記ＤＮＡがゲノムＤＮＡである、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】  前記ＮＰＳ２遺伝子が配列番号３〜１０を含む、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】  前記ＤＮＡがｃＤＮＡである、請求項１８に記載の方法。
【請求項２２】  前記ＮＰＳ２遺伝子が配列番号１を含む、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】  前記増幅がＰＣＲによるものである、請求項１８に記載の方法。
【請求項２４】  前記ＰＣＲ増幅が、配列番号１１〜２７から成る群から選ばれるＤＮＡ配列を含むプライマーを使用する、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】  前記突然変異が、ナンセンス変異、挿入又は欠失、あるいはミスセンス変異である請求項１８に記載の方法。
【請求項２６】  前記突然変異が、配列番号１の４８１，１７３／１７４，４８８，９２４／９２５，１２８，３４３，４８２，５４８，６０７，９４０，１０３３，５２９，６２２，７７４−７８２，１５４，４２２，５７１，５７２，５８３，７９４、又は８４８位に位置する１以上の突然変異である、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】  ＮＰＳ２遺伝子の突然変異の存在又は不存在の検出方法であって、以下のステップ：
ａ）少なくとも１の突然変異についてＮＰＳ２遺伝子を含む核酸試験サンプルを分析し；
ｂ）ステップａ）の試験サンプルの分析結果を、突然変異を含まないＮＰＳ２遺伝子を含む対照サンプルの分析結果と比較し；そして
ｃ）試験サンプル中の少なくとも１つの突然変異の存在又は不存在を決定する、
上記方法。
【請求項２８】  前記ＮＰＳ２遺伝子が、配列番号１を含む、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】  前記ＮＰＳ２遺伝子が、配列番号３〜１０を含む、請求項２７に記載の方法。
【請求項３０】  前記突然変異が、ナンセンス変異、挿入又は欠失、あるいはミスセンス変異である請求項２７に記載の方法。
【請求項３１】  前記突然変異が、配列番号１の４８１，１７３／１７４，４８８，９２４／９２５，１２８，３４３，４８２，５４８，６０７，９４０，１０３３，５２９，６２２，７７４−７８２，１５４，４２２，５７１，５７２，５８３，７９４、又は８４８位に位置する１以上の突然変異である、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】  前記ＮＰＳ２遺伝子が、分析前に増幅される、請求項２７に記載の方法。
【請求項３３】  前記増幅が、配列番号１１〜２７から成る群から選ばれるＤＮＡ配列を含むプライマーを使用したＰＣＲ増幅である、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】  ヒトに、ＮＰＳ２遺伝子の突然変異の存在に関係するステロイド抵抗性ネフローゼ症候群の危険性があるかどうかの診断方法であって、上記ヒトから得た生物サンプル中のＮＰＳ２遺伝子の１以上の突然変異の存在又は不存在を検出する方法を含む上記診断方法。
【請求項３５】  前記突然変異が、ナンセンス変異、挿入又は欠失、あるいはミスセンス変異である請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】  前記突然変異が、配列番号１の４８１，１７３／１７４，４８８，９２４／９２５，１２８，３４３，４８２，５４８，６０７，９４０，１０３３，５２９，６２２，７７４−７８２，１５４，４２２，５７１，５７２，５８３，７９４、又は８４８位に位置する１以上の突然変異である、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】  ＮＰＳ２遺伝子の１以上の突然変異の存在又は不存在を検出する、請求項３４に記載の方法であって、以下のステップ：
ａ）ヒトから得られた生物サンプルのＤＮＡを特異的に増幅し、それによって増幅産物を得、そして
ｂ）ステップａ）で得られた増幅産物を、野生型ＮＰＳ２遺伝子を含む対照サンプルから得られた増幅産物と比較する、
を含み、
ここで、サンプルからの増幅産物が、対照の増幅産物と異なる場合、次に生物サンプルのＮＰＳ２遺伝子の１以上の突然変異が検出される上記方法。
【請求項３８】  前記ＤＮＡがゲノムＤＮＡである、請求項３４に記載の方法。
【請求項３９】  前記ＮＰＳ２遺伝子が配列番号３〜１０を含む、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】  前記ＤＮＡがｃＤＮＡである、請求項３４に記載の方法。
【請求項４１】  前記ＮＰＳ２遺伝子が配列番号１を含む、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】  前記増幅がＰＣＲによるものである、請求項３４に記載の方法。
【請求項４３】  前記ＰＣＲ増幅が、配列番号１１〜２７から成る群から選ばれるＤＮＡ配列を含むプライマーを使用する、請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】  前記突然変異が、ナンセンス変異、挿入又は欠失、あるいはミスセンス変異である請求項３７に記載の方法。
【請求項４５】  前記突然変異が、配列番号１の４８１，１７３／１７４，４８８，９２４／９２５，１２８，３４３，４８２，５４８，６０７，９４０，１０３３，５２９，６２２，７７４−７８２，１５４，４２２，５７１，５７２，５８３，７９４、又は８４８位に位置する１以上の突然変異である、請求項４４に記載の方法。
【請求項４６】  配列番号１１〜２７から成る群から選ばれる核酸配列を含むプライマー。