【手続補正書】
【提出日】平成16年1月20日(2004.1.20)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】請求項１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【請求項１】
下記の変更の少なくとも1または2以上を含んでなるスブチラーゼ変異型：
X11 { A、R、N、D、C、Q、E、G、H、I、L、K、M、F、S、T、W、Y、V } 、欠失、挿入；
X30 { A、R、N、D、C、Q、E、G、H、I、L、K、M、F、P、S、T、W、Y、V } 、欠失、挿入；
X31 { R、N、D、Q、E、H、K、M、P、W、Y } 、欠失、挿入；
X32 {A、R、D、C、E、G、H、I、L、K、M、F、P、T、W、Y、V } 、挿入；
X34 { A、R、N、D、C、Q、E、G、H、I、L、K、M、F、S、T、W、Y、V } 、欠失；
X65 { A、R、C、G、H、I、L、K、M、F、T、W、Y、V } 、欠失、挿入；
X66 { A、R、C、H、I、L、K、M、F、T、W、Y、V } 、欠失、挿入；
X67 { A、R、N、Q、G、H、I、K、M、F、P、S、T、W、Y、V }；
X68 { R、N、D、Q、E、G、H、I、L、K、F、P、S、T、W、Y、V } 、欠失、挿入；
X69 { A、R、N、D、Q、E、G、H、I、L、K、M、F、P、S、T、W、Y、V } 、欠失、挿入；
X70G；
X71T；
X77N;
X83G、挿入；
X84V；
X85 { A、R、N、D、Q、E、G、H、I、L、M、F、S、T、W、Y、V }；
X90 { A、R、N、D、C、Q、E、G、H、I、L、K、M、F、P、S、T、W、Y、V } 、欠失、挿入；
X95 { R、K、F、W、Y、V } 、欠失；
X107I；
X110G、挿入；
X121V、挿入；
X122 挿入；
X123N；
X125S；
X150 { A、R、N、D、Q、E、G、H、I、L、K、M、F、P、S、T、W、Y、V } 、欠失、挿入；
X152 { A、R、N、D、Q、E、H、K、F、P、W、Y、V }；
X153 { R、N、D、Q、E、G、H、I、L、K、M、F、T、W、Y、V }；
X154 { A、R、G、H、I、L、M、F、W、Y、V }；
X164 { A、R、H、T、W }；
X165 { R、L、F、W、Y }；
X166 { W、Y } 、挿入；
X175 { R、N、D、Q、E、G、H、K、M、F、P、T、W、Y、V }；
X177 { R、N、D、Q、E、G、H、I、L、K、M、F、P、S、T、W、Y、V } 、欠失、挿入；
X178 { A、R、N、D、C、Q、E、G、H、I、L、K、M、F、P、S、T、W、Y、V } 、欠失、挿入；
X180 { A、R、N、D、C、Q、E、G、H、I、L、K、M、F、P、S、T、W、Y、V } 、欠失、挿入；
X199 { R、L、K、F、W、Y、V } 、欠失、挿入；
X200 { A、R、I、L、K、M、F、W、Y、V } 、欠失、挿入；
X201 { A、R、H、I、L、K、M、F、P、T、W、Y、V } 、欠失、挿入；
X202 { A、R、C、G、H、I、L、K、M、F、T、W、Y、V }；
X207 { A、R、N、C、Q、G、H、I、L、K、M、F、P、S、T、W、Y、V }；
X220T、挿入；
X223A、挿入；
X225P、挿入；
X226H、挿入；
X227V、挿入；
X228A、挿入；
X229G、挿入；
X230 挿入；
X231A、挿入；
X253 { A、R、N、D、Q、E、G、H、I、L、M、F、S、T、W、Y、V } 、欠失、挿入；
X264 { A、R、N、Q、G、H、I、L、M、F、S、T、W、Y、V } 、欠失、挿入；
X266 { A、R、N、D、C、Q、E、G、H、I、L、K、M、F、S、T、W、Y、V } 、欠失、挿入；
V68A；
M175ML、M175MI
ここで
(a)   1または2以上の変更は、独立して、次のように特定される：
(i)      異なるアミノ酸で位置を占有するアミノ酸の置換、
(ii)     位置を占有するアミノ酸の欠失、または
(iii)    位置を占有するアミノ酸から下流の少なくとも1つの追加のアミノ酸の挿入、
(b)   変異型はプロテアーゼ活性を有する、そして
(c)   各位置は第1図に示すスブチリシンBPN’ のアミノ酸配列の位置に対応する。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００６】
X201 { A、R、H、I、L、K、M、F、P、T、W、Y、V } 、欠失、挿入；
X202 { A、R、C、G、H、I、L、K、M、F、T、W、Y、V }；
X207 { A、R、N、C、Q、G、H、I、L、K、M、F、P、S、T、W、Y、V }；
X220T、挿入；
X223A、挿入；
X225P、挿入；
X226H、挿入；
X227V、挿入；
X228A、挿入；
X229G、挿入；
X230 挿入；
X231A、挿入；
X253 { A、R、N、D、Q、E、G、H、I、L、M、F、S、T、W、Y、V } 、欠失、挿入；
X264 { A、R、N、Q、G、H、I、L、M、F、S、T、W、Y、V } 、欠失、挿入；
X266 { A、R、N、D、C、Q、E、G、H、I、L、K、M、F、S、T、W、Y、V } 、欠失、挿入；
V68A；
M175ML、M175MI
ここで
(a)   1または2以上の変更は、独立して、次のように特定される：
(iv)     異なるアミノ酸で位置を占有するアミノ酸の置換、
(v)      位置を占有するアミノ酸の欠失、または
(vi)     位置を占有するアミノ酸から下流の少なくとも1つの追加のアミノ酸の挿入、
(b)   変異型はプロテアーゼ活性を有する、そして
(c)  各位置は第1図に示すスブチリシンBPN’ のアミノ酸配列の位置に対応する。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４９】
X201 { A、R、H、I、L、K、M、F、P、T、W、Y、V } 、欠失、挿入；
X202 { A、R、C、G、H、I、L、K、M、F、T、W、Y、V }；
X207 { A、R、N、C、Q、G、H、I、L、K、M、F、P、S、T、W、Y、V }；
X220T、挿入；
X223A、挿入；
X225P、挿入；
X226H、挿入；
X227V、挿入；
X228A、挿入；
X229G、挿入；
X230 挿入；
X231A、挿入；
X253 { A、R、N、D、Q、E、G、H、I、L、M、F、S、T、W、Y、V } 、欠失、挿入；
X264 { A、R、N、Q、G、H、I、L、M、F、S、T、W、Y、V } 、欠失、挿入；
X266 { A、R、N、D、C、Q、E、G、H、I、L、K、M、F、S、T、W、Y、V } 、欠失、挿入；
V68A；
M175ML、M175MI
ここで各位置は第1図に示すスブチリシンBPN’ 中の位置に対応する。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１３９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１３９】
P201 { A、R、H、I、L、K、M、F、T、W、Y、V } 、欠失、挿入；
G202 { A、R、C、H、I、L、K、M、F、T、W、Y、V }；
S207 { A、R、N、C、Q、G、H、I、L、K、M、F、P、T、W、Y、V }；
T220挿入；
A223挿入；
P225挿入；
H226挿入；
V227挿入；
A228挿入；
G229挿入；
A230挿入；
A231A、挿入；
T253 { A、R、N、D、Q、E、G、H、I、L、M、F、S、W、Y、V } 、欠失、挿入；
G264 { A、R、N、Q、H、I、L、M、F、S、T、W、 Y、V } 、欠失、挿入；
G266 { A、R、N、D、C、Q、E、H、I、L、K、M、F、S、T、W、Y、V } 、欠失、挿入；
V68A；
M175ML、M175MI
本発明のスブチラーゼ変異型を精製するために、本発明の変異型を含んでなるバシラス・サチリス (B. subtilis) pJS3発現プラスミドをコンピテントバシラス・サチリス (B. subtilis) 株の中に形質転換し、前述したように発酵する。