【手続補正書】
【提出日】平成16年11月22日(2004.11.22)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
トランスジェニックＤｒｏｓｏｐｈｉｌａであって、そのゲノムは、配列番号１を有する全長ヒト結腸癌遺伝子腺腫様結腸ポリポーシス（ＡＰＣ）を含み、ここで：
（ａ）該ゲノムの改変は、調節された様式で、ハエにおいて全長ヒトＡＰＣの誤発現を可能にし、
（ｂ）該全長ヒトＡＰＣの該誤発現は、発生異常を生じ、そして
（ｃ）ハエにおける全長ヒトＡＰＣの該誤発現により誘導される該発生異常は、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ  ｗｉｎｇｌｅｓｓ遺伝子に変異を保有するハエにより示される発生異常と類似している、
トランスジェニックＤｒｏｓｏｐｈｉｌａ。
【請求項２】
請求項１に記載のトランスジェニックＤｒｏｓｏｐｈｉｌａであって、ここで、そのゲノムが、配列番号１の全長ヒトＡＰＣ遺伝子由来の配列番号２のアミノ酸９５９〜１８７０を含むβ−カテニン結合ドメインを含み、そしてこのヒトＡＰＣの操作された破壊が、７つのβ−カテニン結合ドメインのうち５つのみを含み、ここで：
（ａ）前記ゲノムの改変が、調節された様式で、ハエにおけるヒトＡＰＣの短縮化バージョンの誤発現を可能にし、
（ｂ）該遺伝子構築物の該誤発現が、前記発生異常を生じ、
（ｃ）ハエにおける該遺伝子構築物の該誤発現により誘導される該発生異常が、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ  ｗｉｎｇｌｅｓｓ遺伝子に変異を保有するハエにより示される発生異常と類似しており、
（ｄ）調節された様式における新規な構築物の該誤発現が、より重篤な発生表現型を生じさせる、
トランスジェニックＤｒｏｓｏｐｈｉｌａ。
【請求項３】
請求項１に記載のトランスジェニックＤｒｏｓｏｐｈｉｌａであって、ここで、ＡＰＣのＮ末端ドメインが、配列番号１の全長ヒトＡＰＣ遺伝子から、配列番号３を有するアミノ酸１〜７６７で置換されており、ここで：
（ａ）前記ゲノムの改変が、調節された様式で、ハエにおけるヒトＡＰＣの前記誤発現を可能にし、そして
（ｂ）調節された様式での新規な構築物の該誤発現が、変態の間のハエ発生における重篤な異常を生じさせる、
トランスジェニックＤｒｏｓｏｐｈｉｌａ。
【請求項４】
薬理学的活性について化合物を選択するための方法であって、該化合物は、ＤｒｏｓｏｐｈｉｌａにおけるヒトＡＰＣの全長およびタンパク質ドメインの発現によって誘導される発生異常を潜在的に阻害するか、または増強し、該方法は、以下：
（ａ）それぞれ、請求項１、請求項２および請求項３に記載の第１のトランスジェニックハエ、第２のトランスジェニックハエおよび第３のトランスジェニックハエを提供する工程であって、ここで該ハエは、該発生異常を有する、工程、
（ｂ）異なる濃度において該化合物を該トランスジェニックＤｒｏｓｏｐｈｉｌａに投与する工程、ならびに
（ｃ）表現型の重篤度における変化についてスクリーニングする工程、
を包含する、方法。
【請求項５】
ヒトＡＰＣタンパク質の全長およびタンパク質ドメインと相互作用する種々のＤｒｏｓｏｐｈｉｌａタンパク質を決定する方法であって、ここで該方法は、以下：
（ａ）それぞれ、請求項１、２および３に記載の第１のトランスジェニックハエ、第２のトランスジェニックハエおよび第３のトランスジェニックハエを提供する工程であって、ここで該ハエは、該発生異常を有する、工程；
（ｂ）該トランスジェニックハエを１セットのＤｒｏｓｏｐｈｉｌａ系統に個々に交配させる工程であって、該Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａの系統の各々は、異なる遺伝子または遺伝子のセットに変異を保有する、工程、ならびに
（ｃ）表現型の重篤度における変化についてスクリーニングする工程、
を包含する、方法。
【請求項６】
ＤｒｏｓｏｐｈｉｌａにおけるヒトＡＰＣの全長およびそのタンパク質ドメインの誤発現後の遺伝子の調節および示差的発現を決定するための方法であって、該方法は以下：
（ａ）請求項１、請求項２および請求項３に記載のトランスジェニックＤｒｏｓｏｐｈｉｌａを提供する工程であって、該ハエは、発生異常を有する、工程、
（ｂ）ディファレンシャルディスプレイ−ＲＴ  ＰＣＲまたはマイクロアレイ技術を使用して示差的遺伝子発現についてスクリーニングする工程；ならびに
（ｃ）ヒトＡＰＣの発現の際に示差的に調節される遺伝子を同定する工程、
を包含する、方法。
【請求項７】
ＤｒｏｓｏｐｈｉｌａにおけるヒトＡＰＣの全長およびそのタンパク質ドメインの誤発現後に、タンパク質の調節および示差的発現を決定するための方法であって、該方法は以下：
（ａ）請求項１、請求項２および請求項３に記載のトランスジェニックＤｒｏｓｏｐｈｉｌａを提供する工程であって、該ハエは、発生異常を有する、工程、
（ｂ）プロテオミクス技術を使用して示差的遺伝子発現およびタンパク質改変を同定する工程、ならびに
（ｃ）ヒトＡＰＣの発現の際に示差的に調節される遺伝子産物を同定する工程、
を包含する、方法。
【請求項８】
ＤｒｏｓｏｐｈｉｌａにおけるＷｎｔ／Ｗｇシグナル伝達を研究するための方法であって、該方法は以下：
（ａ）請求項１、請求項２および請求項３に記載のトランスジェニックＤｒｏｓｏｐｈｉｌａを提供する工程；
（ｂ）これらのトランスジェニックハエを、多数のＧＡＬ４ドライバーと交配させて、種々の組織および異なる発生段階における、構築物の標的化発現を誘導する工程；ならびに
（ｃ）発生異常を検査する工程、
を包含する、方法。
【請求項９】
請求項６〜８に記載される方法であって、ここで、発生異常の検査が、ヒトＡＰＣについての機能獲得遺伝子モデルを使用して行われて、種々の発生プロセス（例えば、翅、脚、眼、触角および成体のクチクラの発生）の機構が研究される、方法。
【請求項１０】
ＡＰＣ遺伝子の誤発現の後に予防薬物および治療薬物をスクリーニングし、そしてその効力を確認する工程を包含する、請求項４に記載の方法。
【請求項１１】
ヒトＡＰＣ経路が、抗炎症剤、鎮痛薬剤、解熱剤および抗腫瘍剤を含む化合物の群から選択される薬物を使用して同定される、請求項４に記載の方法。
【請求項１２】
前記薬物の濃度が、５０μｇ／ｍｌ〜５００μｇ／ｍｌのハエの食物の間の範囲である、請求項４に記載の方法。
【請求項１３】
請求項６〜８に記載の方法であって、ここで、発生異常の検査が、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ  Ｗｎｔ／Ｗｇシグナル伝達経路を研究する利点を有する、ヒトＡＰＣについての機能獲得遺伝子モデルを使用する、方法。
【請求項１４】
種々の発生段階の間および異なる組織においてＷｎｔ／Ｗｇシグナル伝達の反応速度論を研究する工程を包含する、請求項８に記載の方法。
【請求項１５】
β−カテニンと相互作用する新たな標的タンパク質が同定される、請求項５および７に記載の方法。
【請求項１６】
ＡＰＣと相互作用する遺伝子が同定される、請求項６に記載の方法。
【請求項１７】
発生異常の検査が、ヒトＡＰＣについての機能獲得遺伝子モデルを使用して行われて、ヒトＡＰＣ機能の生化学的機能が研究される、請求項５〜８に記載の方法。
【請求項１８】
発生異常の検査が、ヒトＡＰＣについての機能獲得遺伝子モデルを使用して行われて、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ  Ｗｎｔ／Ｗｇシグナル伝達経路のさらなる成分が同定される、請求項５〜８に記載の方法。
【請求項１９】
トランスジェニックＤｒｏｓｏｐｈｉｌａであって、そのゲノムは、配列番号１を有する全長ヒト結腸癌遺伝子腺腫様結腸ポリポーシス（ＡＰＣ）を含み、ここで：
（ａ）該ゲノムの改変は、調節された様式で、ハエにおける全長ヒトＡＰＣの誤発現を可能にし、
（ｂ）該全長ヒトＡＰＣの該誤発現が、発生異常を生じ、そして
（ｃ）ハエにおける全長ヒトＡＰＣの該誤発現により誘導される該発生異常が、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ  ｗｉｎｇｌｅｓｓ遺伝子における変異を保有するハエにより示される発生異常と類似している、
トランスジェニックＤｒｏｓｏｐｈｉｌａ。
【請求項２０】
請求項１９に記載のトランスジェニックＤｒｏｓｏｐｈｉｌａであって、ここで、そのゲノムが、配列番号１の全長ヒトＡＰＣ遺伝子由来の配列番号２のアミノ酸９５９〜１８７０を含むβ−カテニン結合ドメインを含み、そしてヒトＡＰＣのこの操作された破壊が、７つのβ−カテニン結合ドメインのうち５つのみを含み、ここで：
（ａ）前記ゲノムの改変が、調節された様式で、ハエにおけるヒトＡＰＣの短縮化バージョンの誤発現を可能にし、
（ｂ）該遺伝子構築物の該誤発現が、前記発生異常を生じ、
（ｃ）ハエにおける該遺伝子構築物の該誤発現により誘導される該発生異常が、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ  ｗｉｎｇｌｅｓｓ遺伝子における変異を保有するハエにより示される発生異常と類似しており、そして
（ｄ）調節された様式における新規な構築物の該誤発現が、より重篤な発生表現型を生じさせる、
トランスジェニックＤｒｏｓｏｐｈｉｌａ。
【請求項２１】
請求項１９に記載のトランスジェニックＤｒｏｓｏｐｈｉｌａであって、ここで、ＡＰＣのＮ末端ドメインが、配列番号１の全長ヒトＡＰＣ遺伝子から、配列番号３を有するアミノ酸１〜７６７で置換されており、ここで：
（ａ）前記ゲノムの改変が、調節された様式で、ハエにおけるヒトＡＰＣの前記誤発現を可能にし、そして
（ｂ）調節された様式での新規な構築物の該誤発現が、変態の間のハエ発生における重篤な異常を生じさせる、
トランスジェニックＤｒｏｓｏｐｈｉｌａ。
【請求項２２】
抗癌活性について化合物を選択するための方法であって、該化合物は、ＤｒｏｓｏｐｈｉｌａにおけるヒトＡＰＣの全長およびタンパク質ドメインの発現によって誘導される発生異常を潜在的に阻害するか、または増強し、該方法は、以下：
（ａ）それぞれ、請求項１９、請求項２０および請求項２１に記載の第１のトランスジェニックハエ、第２のトランスジェニックハエおよび第３のトランスジェニックハエを提供する工程であって、ここで該ハエは、該発生異常を有する、工程；
（ｂ）異なる濃度において該化合物を該トランスジェニックＤｒｏｓｏｐｈｉｌａに投与する工程、ならびに
（ｃ）表現型の重篤度における変化についてスクリーニングする工程、
を包含する、方法。
【請求項２３】
ヒトＡＰＣタンパク質の全長およびそのタンパク質ドメインと相互作用する種々のＤｒｏｓｏｐｈｉｌａタンパク質を決定する方法であって、ここで該方法は、以下：
（ａ）それぞれ、請求項１９、請求項２０および請求項２１に記載の第１のトランスジェニックハエ、第２のトランスジェニックハエおよび第３のトランスジェニックハエを提供する工程であって、ここで該ハエは、該発生異常を有する、工程、
（ｂ）該トランスジェニックハエを１セットのＤｒｏｓｏｐｈｉｌａ系統に個々に交配させる工程であって、該Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａの系統の各々は、異なる遺伝子または遺伝子のセットに変異を保有する、工程、ならびに
（ｃ）表現型の重篤度における変化についてスクリーニングする工程、
を包含する、方法。
【請求項２４】
ＤｒｏｓｏｐｈｉｌａにおけるヒトＡＰＣの全長およびそのタンパク質ドメインの誤発現後の遺伝子の調節および示差的発現を決定するための方法であって、該方法は以下：
（ａ）請求項１９、請求項２０および請求項２１に記載のトランスジェニックＤｒｏｓｏｐｈｉｌａを提供する工程であって、該ハエは、発生異常を有する、工程、
（ｂ）ディファレンシャルディスプレイ−ＲＴ  ＰＣＲまたはマイクロアレイ技術を使用して示差的遺伝子発現についてスクリーニングする工程、および
（ｃ）ヒトＡＰＣの発現の際に示差的に調節される遺伝子を同定する工程、
を包含する、方法。
【請求項２５】
ＤｒｏｓｏｐｈｉｌａにおけるヒトＡＰＣの全長およびそのタンパク質ドメインの誤発現後のタンパク質の調節および示差的発現を決定するための方法であって、該方法は以下：
（ａ）請求項１９、請求項２０および請求項２１に記載のトランスジェニックＤｒｏｓｏｐｈｉｌａを提供する工程であって、該ハエは、発生異常を有する、工程、
（ｂ）プロテオミクス技術を使用して示差的遺伝子発現およびタンパク質改変を同定する工程、ならびに
（ｃ）ヒトＡＰＣの発現に対して示差的に調節されている遺伝子産物を同定する工程、
を包含する、方法。
【請求項２６】
ＤｒｏｓｏｐｈｉｌａにおけるＷｎｔ／Ｗｇシグナル伝達を研究するための方法であって、該方法は以下：
（ａ）請求項１９〜２１に記載のトランスジェニックＤｒｏｓｏｐｈｉｌａを提供する工程；
（ｂ）これらのトランスジェニックハエを、多数のＧＡＬ４ドライバーと交配させて、種々の組織および異なる発生段階における、構築物の標的化発現を誘導する工程、ならびに
（ｃ）発生異常を検査する工程、
を包含する、方法。
【請求項２７】
発生異常の検査が、ヒトＡＰＣについての機能獲得遺伝子モデルを使用して行われ、種々の発生プロセス（例えば、翅、脚、眼、触角および成体のクチクラの発生）の機構が研究される、請求項２４〜２６に記載の方法。
【請求項２８】
ＡＰＣ遺伝子の誤発現の後に抗癌剤をスクリーニングし、そしてその効力を確認する工程を包含する、請求項２２に記載の方法。
【請求項２９】
ヒトＡＰＣ経路が、抗炎症剤、鎮痛薬剤、解熱剤および抗腫瘍剤を含む化合物の群から選択される薬物を使用して同定される、請求項２２に記載の方法。
【請求項３０】
前記抗癌剤の濃度が、５０μｇ／ｍｌ〜５００μｇ／ｍｌのハエの食物の間の範囲である、請求項２２に記載の方法。
【請求項３１】
発生異常の検査が、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ  Ｗｎｔ／Ｗｇシグナル伝達経路を研究する利点を有する、ヒトＡＰＣについての機能獲得遺伝子モデルを使用する、請求項２４〜２６に記載の方法。
【請求項３２】
種々の発生段階の間および異なる組織においてＷｎｔ／Ｗｇシグナル伝達の反応速度論を研究する工程を包含する、請求項２６に記載の方法。
【請求項３３】
β−カテニンと相互作用する新たな標的タンパク質が同定される、請求項２３および２５に記載の方法。
【請求項３４】
ＡＰＣと相互作用する遺伝子が同定される、請求項２４に記載の方法。
【請求項３５】
発生異常の検査が、ヒトＡＰＣについての機能獲得遺伝子モデルを使用して行われて、ヒトＡＰＣ機能の生化学的機能が研究される、請求項２３〜２６に記載の方法。
【請求項３６】
発生異常の検査が、ヒトＡＰＣについての機能獲得遺伝子モデルを使用して行われて、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ  Ｗｎｔ／Ｗｇシグナル伝達経路のさらなる成分が同定される、請求項２３〜２６に記載の方法。
【請求項３７】
トランスジェニックＤｒｏｓｏｐｈｉｌａの使用であって、そのゲノムは、配列番号１を有する全長ヒト結腸癌遺伝子腺腫様結腸ポリポーシス（ＡＰＣ）を含み、ここで：
（ａ）該ゲノムの改変は、調節された様式で、ハエにおいて全長ヒトＡＰＣの誤発現を可能にし、
（ｂ）該全長ヒトＡＰＣの該誤発現は、発生異常を生じ、
（ｃ）ハエにおける全長ヒトＡＰＣの該誤発現により誘導される該発生異常は、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ  ｗｉｎｇｌｅｓｓ遺伝子に変異を保有するハエにより示される発生異常と類似している、
トランスジェニックＤｒｏｓｏｐｈｉｌａ、および
（ｄ）該トランスジェニックＤｒｏｓｏｐｈｉｌａは、薬物をスクリーニングし、そしてその効力を確認するためのアッセイ系として使用される、
該トランスジェニックＤｒｏｓｏｐｈｉｌａの使用。
【請求項３８】
請求項３７に記載のトランスジェニックＤｒｏｓｏｐｈｉｌａの使用であって、ここで、そのゲノムが、配列番号１の全長ヒトＡＰＣ遺伝子由来の配列番号２のアミノ酸９５９〜１８７０を含むβ−カテニン結合ドメインを含み、そしてこのヒトＡＰＣの操作された破壊が、７つのβ−カテニン結合ドメインのうち５つのみを含み、ここで：
（ａ）前記ゲノムの改変が、調節された様式で、ハエにおけるヒトＡＰＣの短縮化バージョンの誤発現を可能にし、
（ｂ）該遺伝子構築物の該誤発現が、前記発生異常を生じ、
（ｃ）ハエにおける該遺伝子構築物の該誤発現により誘導される該発生異常が、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ  ｗｉｎｇｌｅｓｓ遺伝子に変異を保有するハエにより示される発生異常と類似しており、
（ｄ）調節された様式における新規な構築物の該誤発現が、より重篤な発生表現型を生じ、そして
（ｅ）該トランスジェニックＤｒｏｓｏｐｈｉｌａは、薬物をスクリーニングし、そしてその効力を確認するためのアッセイ系として使用される、
該トランスジェニックＤｒｏｓｏｐｈｉｌａの使用。
【請求項３９】
請求項３７に記載のトランスジェニックＤｒｏｓｏｐｈｉｌａの使用であって、ここで、ＡＰＣのＮ末端ドメインが、配列番号１の全長ヒトＡＰＣ遺伝子から、配列番号３を有するアミノ酸１〜７６７で置換されており、ここで：
（ａ）前記ゲノムの改変が、調節された様式で、ハエにおけるヒトＡＰＣの前記誤発現を可能にし、
（ｂ）調節された様式での新規な構築物の該誤発現が、変態の間のハエ発生における重篤な異常を生じさせ、および
（ｃ）該トランスジェニックＤｒｏｓｏｐｈｉｌａは、薬物をスクリーニングし、そしてその効力を確認するためのアッセイ系として使用される、
該トランスジェニックＤｒｏｓｏｐｈｉｌａの使用。
【請求項４０】
トランスジェニックＤｒｏｓｏｐｈｉｌａの使用であって、そのゲノムは、配列番号１を有する全長ヒト結腸癌遺伝子腺腫様結腸ポリポーシス（ＡＰＣ）を含み、ここで：
（ａ）該ゲノムの改変は、調節された様式で、ハエにおける全長ヒトＡＰＣの誤発現を可能にし、
（ｂ）該全長ヒトＡＰＣの該誤発現が、発生異常を生じ、
（ｃ）ハエにおける全長ヒトＡＰＣの該誤発現により誘導される該発生異常が、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ  ｗｉｎｇｌｅｓｓ遺伝子における変異を保有するハエにより示される発生異常と類似し、および
（ｄ）該トランスジェニックＤｒｏｓｏｐｈｉｌａは、抗癌剤をスクリーニングし、そしてその効力を確認するためのアッセイ系として使用される、
トランスジェニックＤｒｏｓｏｐｈｉｌａの使用。
【請求項４１】
請求項４０に記載のトランスジェニックＤｒｏｓｏｐｈｉｌａの使用であって、ここで、そのゲノムが、配列番号１の全長ヒトＡＰＣ遺伝子由来の配列番号２のアミノ酸９５９〜１８７０を含むβ−カテニン結合ドメインを含み、そしてヒトＡＰＣのこの操作された破壊が、７つのβ−カテニン結合ドメインのうち５つのみを含み、ここで：
（ａ）前記ゲノムの改変が、調節された様式で、ハエにおけるヒトＡＰＣの短縮化バージョンの誤発現を可能にし、
（ｂ）該遺伝子構築物の該誤発現が、前記発生異常を生じ、
（ｃ）ハエにおける該遺伝子構築物の該誤発現により誘導される該発生異常が、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ  ｗｉｎｇｌｅｓｓ遺伝子における変異を保有するハエにより示される発生異常と類似しており、
（ｄ）調節された様式における新規な構築物の該誤発現が、より重篤な発生表現型を生じさせ、および、
（ｅ）該トランスジェニックＤｒｏｓｏｐｈｉｌａは、抗癌剤をスクリーニングし、そしてその効力を確認するためのアッセイ系として使用される、
トランスジェニックＤｒｏｓｏｐｈｉｌａの使用。
【請求項４２】
請求項４０に記載のトランスジェニックＤｒｏｓｏｐｈｉｌａであって、ここで、ＡＰＣのＮ末端ドメインが、配列番号１の全長ヒトＡＰＣ遺伝子から、配列番号３を有するアミノ酸１〜７６７で置換されており、ここで：
（ａ）前記ゲノムの改変が、調節された様式で、ハエにおけるヒトＡＰＣの前記誤発現を可能にし、
（ｂ）調節された様式での新規な構築物の該誤発現が、変態の間のハエ発生における重篤な異常を生じさせ、および、
（ｃ）該トランスジェニックＤｒｏｓｏｐｈｉｌａは、抗癌剤をスクリーニングし、そしてその効力を確認するためのアッセイ系として使用される、
トランスジェニックＤｒｏｓｏｐｈｉｌａの使用。