【手続補正書】
【提出日】平成15年11月20日(2003.11.20)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
プラバスタチン、コンパクチン、およびロバスタチンから選択される化合物のナトリウム塩を醗酵液から単離するための方法において、ａ）化合物の濃縮溶液を形成する工程;
ｂ）上記濃縮溶液から上記化合物の塩を得る工程;
ｃ）上記化合物の塩を精製する工程;
ｄ）ｉ）上記塩から上記化合物を遊離する工程、
ｉｉ）上記化合物に水酸化ナトリウムを接触することで、これにより上記化合物のナトリウム塩の水溶液を形成する工程、および
ｉｉｉ）上記化合物のナトリウム塩の水溶液に水に不溶なイオン交換樹脂を接触することで過剰なナトリウムイオンを除去する工程、により上記化合物の塩を上記化合物のナトリウム塩に塩転化する(trans-salifying)する工程；および
ｅ）上記化合物のナトリウム塩の水溶液から上記化合物のナトリウム塩を単離する工程；
を含んでいる方法。
【請求項２】
上記濃縮水溶液が、
ａ）酸性醗酵ブロスに有機抽出溶媒を接触することにより、上記化合物の有機抽出物を形成する工程；
ｂ）塩基性の水溶性溶液を接触することにより上記有機抽出物を逆抽出し、これにより水溶性抽出物を形成する工程；および
ｃ）水溶性抽出物を濃縮して、これにより上記化合物の濃縮された水性溶液を形成る工程；
によって形成される濃縮水溶液である請求項１記載の方法。
【請求項３】
上記濃縮水溶液が、
ａ）酸性醗酵液に有機抽出溶媒を接触することにより、上記化合物の有機抽出物を形成する工程；
ｂ）塩基性水溶液を接触することにより上記有機抽出物を逆抽出して、これによって上記化合物の水溶性抽出物の形成する工程；および
ｃ）上記有機再抽出溶媒を接触することで、水溶性抽出物から上記化合物を再抽出して、これにより上記化合物の濃縮された有機溶液を形成する工程；
によって形成される濃縮有機溶液である請求項１記載の方法。
【請求項４】
水溶性抽出物の濃縮処理が、真空蒸留によって行われる請求項２記載の方法。
【請求項５】
有機抽出溶媒を酸性醗酵液に接触させる処理が、pH約1とpH約6の間のpHで行われる請求項２記載の方法。
【請求項６】
塩基性水溶液の逆抽出が、pH約7.0とpH約13.7の間のpHで行われる請求項２記載の方法。
【請求項７】
有機抽出溶媒が、C2−C4アルキルフォルメイト、C2−C4のアルキルカルボン酸のC1からC4のアルキルエステル、ジクロロメタン、ジクロロエタン、クロロフォルム、四塩化炭素、およびブチル・メチルケトンから成る群から選択される請求項２記載の方法。
【請求項８】
有機抽出溶媒が酢酸である請求項７記載の方法。
【請求項９】
酸性醗酵液に有機抽出溶媒を接触する処理が、pH約1とpH約6の間のpHで行われる請求項３記載の方法。
【請求項１０】
塩基性水溶液での逆抽出処理が、pH約7.0とpH約13.7の間のpHで行われる請求項３記載の方法。
【請求項１１】
上記化合物に有機溶媒での逆抽出処理が、pH約1とpH約6の間のpHで行われる請求項３記載の方法。
【請求項１２】
有機抽出溶媒および有機再抽出溶媒が、C2−C4アルキル・フォルメイト、C2−C4のアルキルカルボン酸のC1からC4のアルキルエステル、ジクロロメタン、ジクロロエタン、クロロフォルム、四塩化炭素、およびブチル・メチルケトンから成る群からそれぞれ独立的に選択される請求項３記載の方法。
【請求項１３】
有機抽出溶媒および有機再抽出溶媒が、酢酸である請求項12記載の方法。
【請求項１４】
有機抽出溶媒および有機再抽出溶媒が、イソブチルアセテート (i-butyl acetate)である請求項13記載の方法。
【請求項１５】
上記化合物の塩を得る処理が、約-10℃と約+60℃の間の温度で行われる請求項１記載の方法。
【請求項１６】
上記化合物の塩を得る処理が、濃縮溶液に金属塩、アンモニア、アミンまたはアンモニウム塩を加えることにより上記化合物の塩を析出することを含んで成る請求項１記載の方法。
【請求項１７】
上記化合物の塩が、アンモニウム塩を加えることによって析出される請求項16記載の方法。
【請求項１８】
上記アンモニウム塩がNH4Cl、NH4Br、NH4I、(NH4)2SO4、NH4NO3、(NH4)3PO4、(NH4)2S2O4、NH4OAcおよびNH4SCNからなる群から選択される請求項17記載の方法。
【請求項１９】
上記アンモニウム塩がNH4Clである請求項18記載の方法。
【請求項２０】
上記化合物の塩に気体アンモニアを加えることで析出される請求項16記載の方法。
【請求項２１】
上記化合物の塩に、気体アンモニアとアンモニウム塩を加えることにより析出される請求項１６記載の方法。
【請求項２２】
上記化合物の塩に、金属塩を加えることにより析出される請求項16記載の方法。
【請求項２３】
上記金属塩が、リチウム塩、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩、銅塩、鉄塩、ニッケル塩、マンガン塩、スズ塩、亜鉛塩、およびアルミニウム塩から成る群から選択される請求項22記載の方法。
【請求項２４】
金属塩が、金属イオンLi+、Na+、K+、Ca2+、Mg2+、Cu2+、Fe2+、Fe3+、Ni2+、Mn2+、Sn2+、Zn2+、Al3+イオンを含んでいる塩から選択される請求項23記載の方法。
【請求項２５】
上記化合物の塩にアミン塩を加えることで析出される請求項16記載の方法。
【請求項２６】
上記アミン塩が、C1−C3の１級、２級、および３級アルキル・アミンからなる群から選択されるアミン成分を有する請求項25記載の方法。
【請求項２７】
上記化合物の塩を精製する工程が、上記化合物の塩を再結晶するステップを含んでいる請求項１記載の方法。
【請求項２８】
上記化合物の塩を再結晶する処理が、
ａ）水中に上記化合物の塩を溶かして、これによって上記化合物の塩の水溶液を形成する工程；
ｂ）上記化合物の水溶液に抗溶媒(ant-solvent)を希釈する工程；および
ｃ）上記化合物の塩と同じ金属、アンモニウム、またはアミニウムのイオンの有する塩を加える工程；
を含んでいる請求項27記載の方法。
【請求項２９】
上記抗溶媒(ant-solvent)は、酢酸エチル、イソブチルアセテート、イソブタノール、アセトン、アセトニトリルおよびエタノールから成る群から選択される請求項28記載の方法。
【請求項３０】
上記化合物の塩と同じ金属、アンモニウムイオン、またはアミニウムイオンを有する塩が、アンモニウム塩である請求項28記載の方法。
【請求項３１】
上記アンモニウム塩が、NH4Cl、NH4Br、NH4I、(NH4)2SO4、NH4NO3、(NH4)3PO4、(NH4)2S2O4、NH4OAcおよびNH4SCNからなる群から選択される請求項30記載の方法。
【請求項３２】
上記アンモニウム塩がNH4Clである請求項31記載の方法。
【請求項３３】
上記化合物の塩から上記化合物を遊離させる処理が、
ａ）水溶性溶媒中に上記化合物の塩を溶かす工程；
ｂ）水溶性溶媒中にプロチン酸を加える工程；および
ｃ）水溶性溶媒から有機溶媒に上記化合物を抽出し、上記化合物の有機溶液を形成する工程；を含んでおり、
さらに上記化合物を、水酸化ナトリウム水溶液に接触して、上記化合物の有機溶液を水酸化ナトリウム水溶液で逆抽出する工程；
を含んでいる請求項１記載の方法。
【請求項３４】
上記化合物の抽出処理が、pH約1とpH約6の間のpHで行われる請求項33記載の方法。
【請求項３５】
上記有機溶媒が、C2−C4アルキル・フォルメイト、C1からC4のアルキルC2−C4のアルカノエイト、ジクロロメタン、ジクロロエタン、クロロフォルム、四塩化炭素、およびブチル・メチルケトンから成る群から選択される請求項33記載の方法。
【請求項３６】
上記有機溶媒が、イソブチルアセテートである請求項35記載の方法。
【請求項３７】
上記化合物の有機溶液を水酸化ナトリウム水溶液に逆抽出する処理が、pH約6.5とpH約13.7の間のpHで行われる請求項33記載の方法。
【請求項３８】
上記化合物のナトリウム塩の単離が、
ａ）上記化合物のナトリウム塩の水溶液を濃縮するステップ；および
ｂ）上記化合物のナトリウム塩の水溶液に有機溶媒、または有機溶媒の混合液を希釈するステップ；を含んでいる請求項１記載の方法。
【請求項３９】
上記化合物のナトリウム塩の単離が、上記化合物のナトリウム塩の水溶液を凍結乾燥するステップ含んでいる請求項１記載の方法。
【請求項４０】
上記化合物のナトリウム塩水溶液の濃縮処理が、真空蒸留によって行われる請求項38記載の方法。
【請求項４１】
上記化合物のナトリウム塩水溶液の濃縮処理が、ナノーろ過(nano-filtration)によって行われる請求項38記載の方法。
【請求項４２】
上記化合物のナトリウム塩水溶液が、アセトンで希釈される請求項38記載の方法。
【請求項４３】
上記化合物のナトリウム塩水溶液は、アセトン／アセトニトリル混合物、エタノール／アセトニトリル混合物およびエタノール／酢酸エチルの混合物からなる群から選択される有機溶媒の混合物で希釈される請求項38記載の方法。
【請求項４４】
上記化合物のナトリウム塩を単離する処理が、約-10℃と約+60℃の間の温度で行われる請求項38記載の方法。
【請求項４５】
プラバスタチンナトリウムを実質的に伴わないプラバスタチンラクトン。
【請求項４６】
全不純物の含量が、約0.5%重量かそれに満たない請求項45記載のプラバスタチンナトリウム。
【請求項４７】
全不純物の含量が、約0.2%重量かそれに満たない請求項46記載のプラバスタチンナトリウム。
【請求項４８】
微生物により生産されたプラバスタチンを含有する発酵液から有機溶剤を用いてプラバスタチンを抽出する工程を含む、プラバスタチン又はその医薬として許容される塩の単離及び精製方法であって、前記抽出工程において、式：CH3CO2R（式中、Rは３〜４個の炭素を有するアルキル基である）を有する有機溶剤を使用することを特徴とする方法。
【請求項４９】
微生物により生産されたプラバスタチンを含有する発酵液から有機溶剤を用いてプラバスタチンを抽出する工程を含む、プラバスタチン又はその医薬として許容される塩の単離及び精製方法であって、前記抽出工程において、式：CH3CO2R（式中、Rは３〜４個の炭素を有するアルキル基である）を有する有機溶剤を使用し、そして酸を用いて不純物を減少させる工程を実施する、ことを特徴とする方法。
【請求項５０】
微生物により生産されたプラバスタチンを含有する発酵液から有機溶剤を用いてプラバスタチンを抽出する工程を含む、プラバスタチン又はその医薬として許容される塩の単離及び精製方法であって、前記抽出工程において、式：CH3CO2R（式中、Rは３〜４個の炭素を有するアルキル基である）を有する有機溶剤を使用し、そして塩基を用いて不純物を減少させる工程を実施する、ことを特徴とする方法。
【請求項５１】
微生物により生産されたプラバスタチンを含有する発酵液から有機溶剤を用いてプラバスタチンを抽出する工程を含む、プラバスタチン又はその医薬として許容される塩の単離及び精製方法であって、前記抽出工程において、式：CH3CO2R（式中、Rは３〜４個の炭素を有するアルキル基である）を有する有機溶剤を使用し、そして酸を用いて不純物を減少させる工程及び塩基を用いて不純物を減少させる工程を実施する、ことを特徴とする方法。
【請求項５２】
前記酸として無機酸を使用し、前記不純物の減少を不純物の分解により行い、その際のpHが２〜５である、請求項49又は51に記載の方法。
【請求項５３】
Rがｎ−プロピル基又はｎ−ブチル基である、請求項48〜51のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５４】
前記不純物を分解により減少させる、請求項48〜51のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５５】
アンモニウム塩を用いる塩析による、プラバスタチン又はその医薬として許容される塩の単離及び精製方法。
【請求項５６】
前記塩析に用いる塩が塩化アンモニウムである、請求項55に記載の方法。
【請求項５７】
塩基により不純物を減少させる工程を更に実施する、請求項55又は56に記載の方法。
【請求項５８】
酸により不純物を減少させる工程を更に実施する、請求項55〜57のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５９】
前記酸が硫酸である、請求項58に記載の方法。
【請求項６０】
酸により不純物を減少させるための工程におけるpHが２〜５である、請求項58又は59に記載の方法。
【請求項６１】
不純物を分解により減少させる、請求項57に記載の方法。
【請求項６２】
不純物を分解により減少させる、請求項58に記載の方法。
【請求項６３】
発酵液からプラバスタチン又はそのナトリウム塩を単離する方法であって、
発酵液中にプラバスタチンを生成せしめ；そして
プラバスタチン又はそのナトリウム塩を発酵液から、ギ酸C2−C4アルキル又はC2−C4カルボン酸のC1−C4アルキルエステルの少なくとも１種類から本質的に成る溶剤を使用して、プラバスタチン又はそのナトリウム塩を抽出する、ことを含んで成る方法。
【請求項６４】
前記溶剤が、酢酸C3又はC4アルキルである、請求項63に記載の方法。
【請求項６５】
抽出されたプラバスタチン又はそのナトリウム塩中の不純物の量を、酸を用いて減少させることを更に含んで成る、請求項63又は64に記載の方法。
【請求項６６】
抽出されたプラバスタチン又はそのナトリウム塩中の不純物の量を、塩基を用いて減少させることを更に含んで成る、請求項63〜65のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６７】
抽出されたプラバスタチン又はそのナトリウム塩中の不純物の量を、酸及び塩基を用いて減少させることを更に含んで成る、請求項63又は64に記載の方法。
【請求項６８】
前記抽出されたプラバスタチン又はそのナトリウム塩にプラバスタチンラクトンが実質的に含まれない、請求項63〜67のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６９】
抽出されたプラバスタチン又はそのナトリウム塩中の不純物の量が、0.5重量％未満である、、請求項67又は68に記載の方法。
【請求項７０】
抽出されたプラバスタチン又はそのナトリウム塩中の不純物の量が、0.2重量％未満である、、請求項67又は68に記載の方法。
【請求項７１】
不純物を分解により減少させる、請求項67〜70のいずれか１項に記載の方法。