【手続補正書】
【提出日】平成16年4月19日(2004.4.19)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
６０ヌクレオチド長以下の単離されたオリゴヌクレオチドであって、該オリゴヌクレオチドは、以下：
（ａ）配列番号１〜１０、１３、１４、および１５からなる群から選択される配列からの少なくとも１０の連続したヌクレオチドのヌクレオチド配列；
（ｂ）（ａ）のヌクレオチド配列に対して９０％の配列同一性を有するヌクレオチド配列；または、
（ｃ）（ａ）および（ｂ）の相補体、
を含む、オリゴヌクレオチド。
【請求項２】
前記オリゴヌクレオチドが、配列番号１〜１０、１３、１４、および１５からなる群から選択される配列からの少なくとも１０の連続したヌクレオチドのヌクレオチド配列である、請求項１に記載のオリゴヌクレオチド。
【請求項３】
前記ヌクレオチド配列が、配列番号１〜１４からなる群から選択される、請求項１に記載のオリゴヌクレオチド。
【請求項４】
前記ヌクレオチド配列が、配列番号７、１３、または１４を含み、前記オリゴヌクレオチドが、５’末端および／または３’末端に検出可能な標識をさらに含む、請求項１に記載のオリゴヌクレオチド。
【請求項５】
前記検出可能な標識が、６−カルボキシフルオレセイン（６−ＦＡＭ）、テトラメチルローダミン（ＴＡＭＲＡ）、および２’，４’，５’，７’−テトラクロロ−４−７−ジクロロフルオレセイン（ＴＥＴ）からなる群から選択される蛍光標識である、請求項４に記載のオリゴヌクレオチド。
【請求項６】
生物学的サンプル中のＨＢＶ感染を検出するための方法における、請求項１〜５のいずれかに記載のオリゴヌクレオチドの使用。
【請求項７】
生物学的サンプル中のＢ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）感染を検出するための方法であって、該方法は、以下：
ＨＢＶを含むことが推測される生物学的サンプルから核酸を単離する工程；
少なくとも２つのプライマーを使用して該核酸を増幅する工程であって、ここで
（ａ）各プライマーが、約６０ヌクレオチド長以下であり、配列番号５，６、８、９、および１０からなる群から選択される配列からの少なくとも１０の連続したヌクレオチドのヌクレオチド配列を含むか、または
（ｂ）プライマーが、（ａ）のヌクレオチド配列に対して９０％の配列同一性を有し、ここで各２つのプライマーが、該単離された核酸の、それぞれセンス鎖およびアンチセンス鎖とハイブリダイズするために十分に該センス鎖およびアンチセンス鎖の一部に対して相補性である、工程；ならびに、
該サンプル中のＨＢＶの存在または非存在の指標として、増幅された核酸の存在を検出する工程、
を含む、方法。
【請求項８】
請求項７に記載の方法であって、ここで前記核酸は、下記の方法によって前記生物学的サンプルから単離され、該方法は：
（ａ）固相支持体に接合した捕捉核酸を含む該固相支持体を、ハイブリダイズ条件下で、生物学的サンプルと接触させる工程であって、ここで標的核酸鎖は、該捕捉核酸とハイブリダイズする、工程；および
（ｂ）該固相支持体を該サンプルから分離する工程、
を包含する、方法。
【請求項９】
請求項８に記載の方法であって、前記捕捉核酸は、１つ以上のオリゴヌクレオチドを含み、ここで各オリゴヌクレオチドは、約６０ヌクレオチド長以下であり、配列番号１、配列番号２、配列番号３、および配列番号４からなる群から選択される配列からの少なくとも１０の連続したヌクレオチドを含む、方法。
【請求項１０】
前記増幅工程が、ＰＣＲ、転写媒介増幅（ＴＭＡ）または５’蛍光発生（ｆｌｕｏｒｏｇｅｎｉｃ）ヌクレアーゼアッセイを含む、請求項７に記載の方法。
【請求項１１】
前記増幅工程が、ＴＭＡを含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記センスプライマーが、配列番号５を含む、６０ヌクレオチド長以下のオリゴヌクレオチドである、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記アンチセンスプライマーが、２つのオリゴヌクレオチドであって、ここで該オリゴヌクレオチドの各々は、約６０ヌクレオチド長以下のオリゴヌクレオチドであり、配列番号６および８または配列番号９および１０を含む配列の少なくとも１０の連続するヌクレオチドを含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項１４】
約６０ヌクレオチド長以下のプローブオリゴヌクレオチドおよび配列番号７を含む少なくとも１０の連続するヌクレオチドをさらに含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項１５】
前記プローブが、５’末端および３’末端に検出可能な標識をさらに含む、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記検出可能な標識が、６−カルボキシフルオレセイン（６−ＦＡＭ）、テトラメチルローダミン（ＴＡＭＲＡ）、および２’，４’，５’，７’−テトラクロロ−４−７−ジクロロフルオレセイン（ＴＥＴ）からなる群から選択される蛍光標識である、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
生物学的サンプル中のＢ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）感染を検出するための方法であって、該方法は、以下：
（ａ）固相支持体を、配列番号１、２、３、および４からなる群から選択される１つ以上の捕捉核酸が該固相支持体と結合される条件下で、該捕捉核酸と接触させる工程；
（ｂ）（ａ）の該固相支持体を、ハイブリダイズする条件下で、該生物学的サンプルと接触される工程であって、ここで、存在する場合、ＨＢＶからの標的核酸鎖は、該捕捉核酸とハイブリダイズする、工程；および
（ｃ）（ｂ）の該固相支持体を該サンプルから分離する工程；
（ｄ）配列番号５を含むセンスプライマーならびに配列番号６および８または配列番号９および１０を含む少なくとも２つのアンチセンスプライマーを使用して核酸を増幅する工程であって、ここで、該センスプライマーおよびアンチセンスプライマーは、該単離された核酸のそれぞれセンス鎖およびアンチセンス鎖とハイブリダイズするために十分に、該センス鎖およびアンチセンス鎖の一部に対して相補性である、工程；ならびに、
（ｅ）該サンプル中のＨＢＶの存在または非存在の指標として増幅された核酸の存在を検出する工程、
を包含する、方法。
【請求項１８】
前記固相支持体がビーズを含む、請求項７または１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記ビーズは、磁気ビーズである、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
内部標準をさらに含む、請求項７または１７に記載の方法。
【請求項２１】
前記内部標準が、約６０ヌクレオチド長以下の標識されたオリゴヌクレオチドを含み、配列番号１３および１４からなる群から選択される配列の少なくとも１０の連続するヌクレオチドのヌクレオチド配列を含む、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記標識が、６−カルボキシフルオレセイン（６−ＦＡＭ）、テトラメチルローダミン（ＴＡＭＲＡ）、および２’，４’，５’，７’−テトラクロロ−４−７−ジクロロフルオレセイン（ＴＥＴ）からなる群から選択される蛍光標識である、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
ＨＢＶ核酸の捕捉において使用するための単離されたオリゴヌクレオチドであって、該オリゴヌクレオチドは、１つ以上のオリゴヌクレオチドを含み、ここで、各オリゴヌクレオチドは、約６０ヌクレオチド長以下であり、配列番号１、２、３、および４からなる群から選択される配列の少なくとも１０の連続するヌクレオチドのヌクレオチド配列を含む、オリゴヌクレオチド。
【請求項２４】
請求項１、２、３、４、５または２３に記載のオリゴヌクレオチドであって、ここで、前記１つ以上のオリゴヌクレオチドは、ポリＡ、ポリＴ、ポリＧ、ポリＣ、およびポリＵからなる群から選択される、約１５〜２５ヌクレオチド長のホモポリマー鎖をさらに含む、オリゴヌクレオチド。
【請求項２５】
前記ホモポリマー鎖が、ポリＡ鎖である、請求項２４に記載のオリゴヌクレオチド。
【請求項２６】
ＨＢＶ核酸の検出において使用するためのプライマーであって、該プライマーは、センスプライマーおよびアンチセンスプライマーを含み、ここで、該センスプライマーおよび該アンチセンスプライマーは、約６０ヌクレオチド長以下であり、少なくとも１０の連続するヌクレオチドのヌクレオチド配列を含み、ここで、該センスプライマーは、配列番号５を含み、該アンチセンスプライマーは、配列番号６、８、９、および１０からなる群から選択される、プライマー。
【請求項２７】
前記アンチセンスプライマーは、配列番号９および１０からなる、請求項２６に記載のプライマー。
【請求項２８】
生物学的サンプル中のＢ型肝炎（ＨＢＶ）感染を検出するためのキットであって、該キットは：
１つ以上のオリゴヌクレオチドを含む捕捉核酸であって、各該オリゴヌクレオチドは、約６０ヌクレオチド長以下であり、そして配列番号１、配列番号２、配列番号３、および配列番号４からなる群から選択される配列の少なくとも１０ヌクレオチドの連続したヌクレオチド配列を含む、捕捉核酸；
プライマーオリゴヌクレオチドであって、該プライマーオリゴヌクレオチドは、約６０ヌクレオチド長以下であり、配列番号５、６、８、９、および１０からなる群から選択される配列からの少なくとも１０の連続したヌクレオチドのヌクレオチド配列を含む、プライマーオリゴヌクレオチド；ならびに、
ＨＢＶ感染を同定するための指示書、
を含む、キット。
【請求項２９】
ポリメラーゼおよび緩衝液をさらに含む、請求項２８に記載のキット。
【請求項３０】
請求項２９に記載のキットであって、該キットは、約６０ヌクレオチド長以下の標識オリゴヌクレオチドを含む内部標準をさらに含み、該標識オリゴヌクレオチドは、配列番号１３および１４からなる群から選択される配列の少なくとも１０の連続したヌクレオチドのヌクレオチド配列を含む、キット。