【手続補正書】
【提出日】平成17年3月11日(2005.3.11)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
野生型コレラトキシン（ＣＴ）のサブユニットＡのアミノ酸配列を含んでなる免疫原性突然変異コレラホロトキシン（ＣＴ−ＣＲＭ）であって、該サブユニットＡがＡサブユニットのアミノ酸２５位に少なくとも１つの単一アミノ酸置換を含んでなり、そして突然変異ＣＴ−ＣＲＭが野生型ＣＴに比べて低減した毒性を有する、上記免疫原性突然変異コレラホロトキシン。
【請求項２】
Ａサブユニットのアミノ酸２５位のアミノ酸アルギニンが、トリプトファンまたはグリシンに置換されている、請求項１に記載のＣＴ−ＣＲＭ。
【請求項３】
Ａサブユニットのアミノ酸２５位以外のアミノ酸位で、コレラホロトキシンのＡサブユニットに少なくとも１つのさらなる突然変異をさらに含んでなる、請求項１に記載のＣＴ−ＣＲＭ。
【請求項４】
上記のさらなる突然変異が：
（ａ）アミノ酸７位のアルギニン、アミノ酸９位のアスパラギン酸、アミノ酸１１位のアルギニン、２９位のグルタミン酸、アミノ酸４４位のヒスチジン、アミノ酸５３位のバリン、アミノ酸５４位のアルギニン、アミノ酸６１位のセリン、アミノ酸６３位のセリン、アミノ酸７０位のヒスチジン、アミノ酸９７位のバリン、アミノ酸１０４位のチロシン、アミノ酸１０６位のプロリン、アミノ酸１０７位のヒスチジン、アミノ酸１０９位のセリン、アミノ酸１１０位のグルタミン酸、アミノ酸１１２位のグルタミン酸、アミノ酸１１４位のセリン、アミノ酸１２７位のトリプトファン、アミノ酸１４６位のアルギニンおよびアミノ酸１９２位のアルギニン；
（ｂ）Ａサブユニットのアミノ酸４９位の単一アミノ酸挿入、
（ｃ）Ａサブユニットのアミノ酸３５位および３６位の二重アミノ酸挿入、
（ｄ）アミノ酸３０位の単一アミノ酸置換、および
（ｅ）Ａサブユニットのアミノ酸３１位および３２位の二重アミノ酸挿入、
からなる群から選択される、請求項３に記載のＣＴ−ＣＲＭ。
【請求項５】
野生型コレラトキシン（ＣＴ）のサブユニットＡのアミノ酸配列を含んでなる免疫原性突然変異コレラホロトキシン（ＣＴ−ＣＲＭ）であって、該サブユニットＡがＡサブユニットのアミノ酸４９位に少なくとも１つの単一アミノ酸挿入を含んでなり、そして突然変異ＣＴ−ＣＲＭが該野生型ＣＴに比べて低減した毒性を有する、上記免疫原性突然変異コレラホロトキシン。
【請求項６】
アミノ酸ヒスチジンが、野生型アミノ酸４８位と４９位の間でＡサブユニットのアミノ酸４９位に挿入されている、請求項５に記載のＣＴ−ＣＲＭ。
【請求項７】
Ａサブユニットのアミノ酸４９位以外のアミノ酸位で、コレラホロトキシンのＡサブユニット中に少なくとも１つのさらなる突然変異をさらに含んでなる、請求項５に記載のＣＴ−ＣＲＭ。
【請求項８】
上記のさらなる突然変異が：
（ａ）アミノ酸７位のアルギニン、アミノ酸９位のアスパラギン酸、アミノ酸１１位のアルギニン、２９位のグルタミン酸、アミノ酸４４位のヒスチジン、アミノ酸５３位のバリン、アミノ酸５４位のアルギニン、アミノ酸６１位のセリン、アミノ酸６３位のセリン、アミノ酸７０位のヒスチジン、アミノ酸９７位のバリン、アミノ酸１０４位のチロシン、アミノ酸１０６位のプロリン、アミノ酸１０７位のヒスチジン、アミノ酸１０９位のセリン、アミノ酸１１０位のグルタミン酸、アミノ酸１１２位のグルタミン酸、アミノ酸１１４位のセリン、アミノ酸１２７位のトリプトファン、アミノ酸１４６位のアルギニンおよびアミノ酸１９２位のアルギニン；
（ｂ）Ａサブユニットのアミノ酸２５位の単一アミノ酸挿入、
（ｃ）Ａサブユニットのアミノ酸３５位および３６位の二重アミノ酸挿入、
（ｄ）アミノ酸３０位の単一アミノ酸置換、および
（ｅ）Ａサブユニットのアミノ酸３１位および３２位の二重アミノ酸挿入、
からなる群から選択される、請求項７に記載のＣＴ−ＣＲＭ。
【請求項９】
野生型コレラトキシン（ＣＴ）のサブユニットＡのアミノ酸配列を含んでなる免疫原性突然変異コレラホロトキシン（ＣＴ−ＣＲＭ）であって、該サブユニットＡがＡサブユニットのアミノ酸３５位および３６位に少なくとも１つの二重アミノ酸挿入を含んでなり、そして突然変異ＣＴ−ＣＲＭが該野生型ＣＴに比べて低減した毒性を有する、上記免疫原性突然変異コレラホロトキシン。
【請求項１０】
アミノ酸グリシンおよびプロリンが、野生型アミノ酸３４位と３５位の間でＡサブユニットのアミノ酸３５および３６位に挿入されている、請求項９に記載のＣＴ−ＣＲＭ。
【請求項１１】
Ａサブユニットのアミノ酸３５位および３６位以外のアミノ酸位で、コレラホロトキシンのＡサブユニット中に少なくとも１つのさらなる突然変異をさらに含んでなる、請求項１０に記載のＣＴ−ＣＲＭ。
【請求項１２】
上記のさらなる突然変異が：
（ａ）アミノ酸７位のアルギニン、アミノ酸９位のアスパラギン酸、アミノ酸１１位のアルギニン、２９位のグルタミン酸、アミノ酸４４位のヒスチジン、アミノ酸５３位のバリン、アミノ酸５４位のアルギニン、アミノ酸６１位のセリン、アミノ酸６３位のセリン、アミノ酸７０位のヒスチジン、アミノ酸９７位のバリン、アミノ酸１０４位のチロシン、アミノ酸１０６位のプロリン、アミノ酸１０７位のヒスチジン、アミノ酸１０９位のセリン、アミノ酸１１０位のグルタミン酸、アミノ酸１１２位のグルタミン酸、アミノ酸１１４位のセリン、アミノ酸１２７位のトリプトファン、アミノ酸１４６位のアルギニンおよびアミノ酸１９２位のアルギニンからなる群から選択されるサブユニットＡのアミノ酸の置換である、請求項１４に記載のＣＴ−ＣＲＭ；
（ｂ）Ａサブユニットのアミノ酸２５位の単一アミノ酸挿入、
（ｃ）Ａサブユニットのアミノ酸４９位の単一アミノ酸挿入、
（ｄ）アミノ酸３０位の単一アミノ酸置換、および
（ｅ）Ａサブユニットのアミノ酸３１位および３２位の二重アミノ酸挿入
からなる群から選択される、請求項１１に記載のＣＴ−ＣＲＭ。
【請求項１３】
野生型コレラトキシン（ＣＴ）のサブユニットＡのアミノ酸配列を含んでなる免疫原性突然変異コレラホロトキシン（ＣＴ−ＣＲＭ）であって、該サブユニットＡがＡサブユニットのアミノ酸３０位に少なくとも１つの単一アミノ酸置換およびアミノ酸３１位および３２位に二重アミノ酸挿入を含んでなり、そして突然変異ＣＴ−ＣＲＭが該野生型ＣＴに比べて低減した毒性を有する、上記免疫原性突然変異コレラホロトキシン。
【請求項１４】
Ａサブユニットのアミノ酸３０位のアミノ酸チロシンがトリプトファンに置換され、そしてアミノ酸アラニンおよびヒスチジンが野生型アミノ酸３０位と３１位の間でＡサブユニットのアミノ酸３１位および３２位に挿入されている、請求項１３に記載のＣＴ−ＣＲＭ。
【請求項１５】
Ａサブユニットのアミノ酸３０位、３１位および３２位以外のアミノ酸位でコレラホロトキシンのＡサブユニット中に少なくとも１つのさらなる突然変異をさらに含んでなる、請求項１３に記載のＣＴ−ＣＲＭ。
【請求項１６】
上記のさらなる突然変異が：
（ａ）アミノ酸７位のアルギニン、アミノ酸９位のアスパラギン酸、アミノ酸１１位のアルギニン、２９位のグルタミン酸、アミノ酸４４位のヒスチジン、アミノ酸５３位のバリン、アミノ酸５４位のアルギニン、アミノ酸６１位のセリン、アミノ酸６３位のセリン、アミノ酸７０位のヒスチジン、アミノ酸９７位のバリン、アミノ酸１０４位のチロシン、アミノ酸１０６位のプロリン、アミノ酸１０７位のヒスチジン、アミノ酸１０９位のセリン、アミノ酸１１０位のグルタミン酸、アミノ酸１１２位のグルタミン酸、アミノ酸１１４位のセリン、アミノ酸１２７位のトリプトファン、アミノ酸１４６位のアルギニンおよびアミノ酸１９２位；
（ｂ）Ａサブユニットのアミノ酸２５位の単一アミノ酸挿入、
（ｃ）Ａサブユニットのアミノ酸４９位の単一アミノ酸挿入、および
（ｄ）Ａサブユニットのアミノ酸３５位および３６位の二重アミノ酸挿入、
からなる群から選択される、請求項１５に記載のＣＴ−ＣＲＭ。
【請求項１７】
突然変異ホロトキシンが脊椎動物宿主において抗原に対する免疫応答を強化する、請求項１ないし１６のいずれかに記載の突然変異コレラホロトキシン（ＣＴ−ＣＲＭ）を含んでなる免疫原性組成物。
【請求項１８】
さらにタンパク質、ポリペプチド、ペプチドまたはタンパク質に由来する断片を含んでなる選択される抗原を含んでなる請求項１７に記載の組成物であって、選択される抗原が病原性細菌、ウイルス、真菌および寄生生物、ガン細胞、腫瘍細胞、アレルゲンおよび自己−分子からなる群の員に由来する、上記組成物。
【請求項１９】
選択される抗原が、型に分類できる、および型に分類できないインフルエンザ菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）、ヘモフィルス  ソムナス（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｓｏｍｍｕｓ）、モラクセラ  カタラーリス（Ｍｏｒａｘｅｌｌａ  ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓ）、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、化膿連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ）、ストレプトコッカス  アガラクティー（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ａｇａｌａｃｔｉａｅ）、ストレプトコッカス  フェカリス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃａｌｉｓ）、ヘリコバクター  ピロリ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉ）、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）、淋菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ）、トラコーマ  クラミジア（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ）、クラミジア肺炎菌（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、クラミジア  シッタキ（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  ｐｓｉｔｔａｃｉ）、百日咳菌（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）、アロイオコッカス  オチジティス（Ａｌｌｏｉｏｃｏｃｃｕｓ  ｏｔｉｄｉｔｉｓ）、チフス菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｙｐｈｉ）、ネズミチフス菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）、豚コレラ菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｃｈｏｌｅｒａｅｓｕｉｓ）、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉ  ｃｏｌｉ）、シゲラ（Ｓｈｉｇｅｌｌａ）、コレラ菌（Ｖｉｂｒｉｏ  ｃｈｏｌｅｒａｅ）、ジフテリア菌（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｄｉｐｔｈｅｒｉｅａｅ）、結核菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）、トリ型結核菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｖｉｕｍ）−マイコバクテリウム  イントラセルラー（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｅ）コンプレックス、プロテウス  ミラビリス（Ｐｒｏｔｅｕｓ  ｍｉｒａｂｉｌｌｉｓ）、プロテウス  ベルガリス（Ｐｒｏｔｅｕｓ  ｖｕｌｇａｒｉｓ）、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）、表皮ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ）、破傷風菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｔｅｔａｎｉ）、レプトスピラ  インターロガンス（Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ  ｉｎｔｅｒｒｏｇａｎｓ）、ボレリア  ブルグドルフェリ（Ｂｏｒｒｅｌｉａ  ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉ）、パスツレラ  ヘモリティカ（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ  ｈａｅｍｏｌｙｔｉｃａ）、パスツレラ  マルトシダ（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ  ｍｕｌｔｏｃｉｄａ）、アクチノバチルス  プレウロニューモニア（Ａｃｔｉｎｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐｌｅａｕｒｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）およびマイコプラズマ  ガリスセプチム（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｇａｌｌｉｓｅｐｔｉｕｍ）からなる細菌種に由来する、請求項１８に記載の組成物。
【請求項２０】
抗原がインフルエンザ菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）Ｐ４外膜タンパク質、インフルエンザ菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）Ｐ６外膜タンパク質、およびインフルエンザ菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）接着および浸透タンパク質（Ｈａｐｓ）、ヘリコバクター  ピロリ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉ）ウレアーゼタンパク質、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）グループＢ組換えクラス１ピリン（ｒｐｉｌｉｎ）および髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）グループＢクラス１外膜タンパク質（ＰｏｒＡ）からなる群から選択される、請求項１９に記載の組成物。
【請求項２１】
選択される抗原が、ＲＳウイルス、パラインフルエルザウイルス１、２、３型、ヒト  メタニューモウイルス、インフルエンザウイルス、単純ヘルペスウイルス、ヒト  サイトメガロウイルス、ヒト免疫不全ウイルス、Ａ型肝炎ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、ヒト  パピローマウイルス、ポリオウイルス、ロタウイルス、カリシウイルス、麻疹ウイルス、ムンプスウイルス、風疹ウイルス、アデノウイルス、狂犬病ウイルス、イヌジステンバーウイルス、牛疫ウイルス、鳥気管支ウイルス、ヘンドラウイルス、ニパウイルス、コロナウイルス、パルボウイルス、感染性鼻気管支ウイルス、ネコ白血病ウイルス、ネコ感染性腹膜炎ウイルス、鳥感染性ファブリキウス病ウイルス、ニューカッスル病ウイルス、マレック病ウイルス、ブタ呼吸および生殖症候群ウイルス、ウマ動脈炎ウイルスおよび脳炎ウイルスからなるウイルス種から選択される請求項１８に記載の組成物。
【請求項２２】
選択される抗原が、ＲＳウイルス融合タンパク質および単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）２型糖タンパク質Ｄ（ｇＤ２）からなる群から選択される請求項２１に記載の組成物。
【請求項２３】
選択される抗原が、アスペルギルス属（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｉｓ）、ブラストマイセス属（Ｂｌａｓｔｏｍｙｃｅｓ）、カンジダ属（Ｃａｎｄｉｄａ）、コクシジオイデス属（Ｃｏｃｃｉｄｉｏｄｅｓ）、クリプトコッカス属（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）およびヒストプラスマ属（Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ）からなる病原性真菌の群から選択される真菌に由来する請求項１８に記載の組成物。
【請求項２４】
選択される抗原が、寄生生物抗原が、リューシュマニア  メジャー（Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｍａｊｏｒ）、回虫属（Ａｓｃａｒｉｓ）、鞭虫属（Ｔｒｉｃｈｕｒｉｓ）、ジアルジア属（Ｇｉａｒｄｉａ）、住血吸虫属（Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ）、クリプトスポリジウム属（Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ）、トリコモナス属（Ｔｒｉｃｈｏｍｏｎａｓ）、トキソプラズマ  ゴンジー（Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ  ｇｏｎｄｉｉ）およびニューモシスティス  カリニ（Ｐｎｅｕｍｏｃｙｃｔｉｓ  ｃａｒｉｎｉｉ）からなる病原性寄生生物の群から選択される寄生生物に由来する請求項１８に記載の組成物。
【請求項２５】
選択される抗原が、前立腺特異的抗原、癌−胎児性抗原、ＭＵＣ−１、Ｈｅｒ２、ＣＡ−１２５、ＭＡＧＥ−３、ホルモンおよびホルモン類似体からなる群から選択される請求項１８に記載の組成物。
【請求項２６】
上記抗原がアミロイド前駆体タンパク質に由来し、そしてアミロイド前駆体タンパク質の４２アミノ酸断片であるＡβペプチド、またはＡβペプチドの断片から選択されるポリペプチド、ペプチドまたは断片である請求項１８に記載の組成物。
【請求項２７】
さらに希釈剤、賦形剤または担体を含んでなる請求項１８に記載の組成物。
【請求項２８】
突然変異コレラホロトキシンに加えて第２のアジュバントをさらに含んでなる請求項１８に記載の組成物。
【請求項２９】
抗原に対する脊椎動物宿主の免疫応答を強化する方法であって、宿主に請求項１ないし１６のいずれかに記載の突然変異コレラホロトキシン（ＣＴ−ＣＲＭ）を含んでなる免疫原性組成物を投与することを含んでなり、突然変異コレラホロトキシンが抗原に対する脊椎動物宿主の免疫応答を強化する上記方法。
【請求項３０】
請求項１ないし１６のいずれかに記載の免疫原性突然変異コレラホロトキシンをコードする単離され、そして精製された核酸分子。
【請求項３１】
宿主細胞中で上記突然変異ホロトキシンの発現を可能とする調節配列をさらに含んでなり、この配列は該ホロトキシンをコードする配列に操作可能に連結されている、請求項３０に記載の核酸分子。
【請求項３２】
免疫原性突然変異コレラホロトキシンをコードする配列が宿主細胞中で該突然変異ホロトキシンの発現を可能とする調節配列に操作可能に連結されている、請求項１ないし１６のいずれかに記載の免疫原性突然変異コレラホロトキシンをコードする単離され、そして精製された核酸配列を含んでなる核酸分子で形質転換、形質導入、感染またはトランスフェクションされた宿主細胞。
【請求項３３】
コレラホロトキシンが野生型コレラホロトキシンに比べて低減した毒性を有する免疫原性突然変異コレラホロトキシンの生産法であって、請求項１ないし１６のいずれかに記載の免疫原性突然変異コレラホロトキシンをコードする単離され、そして精製された核酸配列を含んでなる核酸分子で形質転換、形質導入、感染またはトランスフェクションされた宿主細胞を培養することを含んでなり、免疫原性突然変異コレラホロトキシンをコードする配列が、宿主細胞中による該免疫原性突然変異コレラホロトキシンの発現を可能とする条件下で該宿主細胞中での該突然変異ホロトキシンの発現を可能とする調節配列に操作可能に連結されている上記方法。
【請求項３４】
抗原に対する脊椎動物宿主の免疫応答を強化するための薬剤の調製における、病原性細菌、ウイルス、真菌、寄生生物、ガン細胞、腫瘍細胞、アレルゲン、自己−分子または脊椎動物抗原から選択される該抗原と組み合わせた請求項１ないし１６のいずれかに記載の突然変異コレラホロトキシンの有効アジュバント量での使用。