【手続補正書】
【提出日】平成16年7月6日(2004.7.6)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】請求項１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【請求項１】
ユリ科（Liliaceae）のジャノヒゲ属(Ophiopogon)植物のエキスからなる、メラノサイトのデンドライトの伸長抑制剤。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】請求項４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【請求項４】
前記エキスが、前記ユリ科（Liliaceae）のジャノヒゲ属(Ophiopogon)植物の根の膨大部の極性溶媒の抽出物であることを特徴とする、請求項１〜３の何れか一項に記載のメラノサイトのデンドライトの伸長抑制剤。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】請求項５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【請求項５】
前記エキスの抽出極性溶媒が水であることを特徴とする、請求項１〜４の何れか一項に記載のメラノサイトのデンドライトの伸長抑制剤。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】請求項１０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【請求項１０】
ユリ科（Liliaceae）のジャノヒゲ属(Ophiopogon)植物のエキスを含有する、美白用の化粧料。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】請求項１１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【請求項１１】
ユリ科（Liliaceae）のジャノヒゲ属(Ophiopogon)植物のエキスが、前記ユリ科（Liliaceae）のジャノヒゲ属(Ophiopogon)植物の根の膨大部の極性溶媒抽出物であることを特徴とする、請求項１０に記載の美白用の化粧料。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００２】
【従来の技術】
メラノサイトは動物において、色素に係わる生命現象の主役となっていることは既に知られていることであるが、かかる色素であるメラニンがメラノサイトで産生され、どの様な経緯で表皮細胞に移動していくかについては、未だ詳細には知られておらず、かかるメラニン顆粒の移動には、マクロファージが関与している場合が少なくないことのみが知られているにすぎない。かかるマクロファージの関与については、メラノサイトのデンドライトの伸長因子（ＤＥＦ）を産生することにより為されていることが指摘されているが、この様な伸長因子の働きを抑制する試みや、抑制することによりメラノサイトのデンドライトの伸長を抑制すること、該デンドライトの伸長抑制により、メラニン顆粒の移動を抑制し、皮膚が黒化するのを防ぐ試みは全く為されていない。更に、ユリ科（Liliaceae）のジャノヒゲ属(Ophiopogon)植物、例えばジャノヒゲ(Ophiopogon japonicus Ker-Gawler）やオオバジャノヒゲ(Ophiopogon planiscapus Nigrescens又は、Ophiopogon planiscapus Ebony Knight)のエキス、好ましくは根の膨大部のエキスにこの様なメラノサイトの伸長抑制作用が有ることも全く知られていない。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００７】
【課題の解決手段】
この様な状況に鑑みて、本発明者らは、炎症を伴った色素異常やソバカスなどの色素異常に対して有効な予防或いは改善手段を求めて、鋭意研究を重ねた結果、ユリ科（Liliaceae）のジャノヒゲ属(Ophiopogon)植物、例えばジャノヒゲ(Ophiopogon japonicus Ker-Gawler）の根の膨大部のエキスは、優れたメラノサイトのデンドライトの伸長抑制作用を見出し、かかる作用を有する物質を皮膚外用剤に含有させることにより、この様な皮膚外用剤により、炎症を伴った色素異常やソバカスなどの色素異常の予防・改善に有用であることを見出し、発明を完成させるに至った。即ち、本発明は次に示す技術に関するものである。
（１） ユリ科（Liliaceae）のジャノヒゲ属(Ophiopogon)植物のエキスからなる、メラノサイトのデンドライトの伸長抑制剤。
（２） ジャノヒゲ属(Ophiopogon)植物がジャノヒゲ(Ophiopogon japonicus Ker-Gawler）、オオバジャノヒゲ(Ophiopogon planiscapus Nigrescens又は、Ophiopogon planiscapus Ebony Knight)、ナガバジャノヒゲ（Ophiopogon ohwiiOkuyama）、ノシラン(Ophiopogon jaburan Lodd.)、オフィオポゴン ヴェトナメンシス(Ophiopogon vietnamensis)、オフィオポゴン チンギィ(Ophiopogon chingii)、オフィオポゴン ラティフォリウス(Ophiopogon latifolius)、オフィオポゴン プラティフィラス(Ophiopogon platyphyllus)、オフィオポゴン ロンギフォリウス(Ophiopogon longifolius)、オフィオポゴン インターメディウス(Ophiopogon intermedius D.Don)、オフィオポゴン レグニエリ（Ophiopogonregnieri）、オフィオポゴン トキネンシス（Ophiopogon tonkinensis）、オフィオポゴン グリフィシイ（Ophiopogon griffithii）、オフィオポゴン クラダンゲンシス（Ophiopogon kradungensis）、オフィオポゴン レプタンス（Ophiopogon reptans）、オフィオポゴン カウレセンス（Ophiopogon caulescens）、 オフィオポゴン プロリファー（Ophiopogon prolifer）、オフィオポゴンマレイナス(Ophiopogon malayanus)、オフィオポゴン ドラカエノイデス(Ophiopogon dracaenoides)、オフィオポゴン ピエレイ(Ophiopogon pier
rei)、オフィオポゴン ハイナエンシス(Ophiopogon hainanensis)、オフィオポゴン クラーケイ(Ophiopogon clarkei)、オフィオポゴン グランディス(Ophiopogon grandis)、オフィオポゴン ルシュイエンシス(Ophiopogon lushuiensis)、オフィオポゴン メリーリー(Ophiopogon merrilli)、オフィオポゴン ズィンギベラウセス(Ophiopogon zingiberzceus)、オフィオポゴン アカウリス(Ophiopogonacaulis)、オフィオポゴン ウォーリチアヌス(Ophiopogon wallichianus)、オフィオポゴン ボンディニエリ(Ophiopogon bondinieri)、オフィオポゴン インディカス(Ophiopogon indicus)の一種以上から選ばれることを特徴とする、（１）に記載のメラノサイトのデンドライトの伸長抑制剤。
（３） ジャノヒゲ属(Ophiopogon)植物がジャノヒゲ(Ophiopogon japonicus Ker-Gawler）、オオバジャノヒゲ(Ophiopogon planiscapus Nigrescens又は、Ophiopogon planiscapus Ebony Knight)、ナガバジャノヒゲ（Ophiopogon ohwiiOkuyama）、ノシラン(Ophiopogon jaburan Lodd.) の一種以上から選ばれることを特徴とする、（１）乃至（２）に記載のメラノサイトのデンドライトの伸長抑制剤。
（４） 前記エキスが、前記ユリ科（Liliaceae）のジャノヒゲ属(Ophiopogon)植物の根の膨大部の極性溶媒の抽出物であることを特徴とする、（１）〜（３）の何れか一に記載のメラノサイトのデンドライトの伸長抑制剤。
（５） 前記エキスの抽出極性溶媒が水であることを特徴とする、（１）〜（４）の何れか一に記載のメラノサイトのデンドライトの伸長抑制剤。
（６） デンドライトの伸長抑制が、マクロファージ由来のデンドライト伸長促進因子の抑制作用に起因することを特徴とする、（１）〜（５）の何れか一に記載のメラノサイトの伸長抑制剤。
（７） （１）〜（６）の何れか一に記載のメラノサイトの伸長抑制剤を含有することを特徴とする、メラノサイトとマクロファージが関与する皮膚現象対応用の皮膚外用剤。
（８） 化粧料であることを特徴とする、（７）に記載のメラノサイトとマクロファージが関与する皮膚現象対応用の皮膚外用剤。
（９） メラノサイトとマクロファージが関与する皮膚現象が、光による炎症を伴った、皮膚の黒化現象或いはソバカスである、（７）又は（８）に記載のメラノサイトとマクロファージが関与する皮膚現象対応用の皮膚外用剤。
（１０） ユリ科（Liliaceae）のジャノヒゲ属(Ophiopogon)植物のエキスを含有する、美白用の化粧料。
（１１） ユリ科（Liliaceae）のジャノヒゲ属(Ophiopogon)植物のエキスが、前記ユリ科（Liliaceae）のジャノヒゲ属(Ophiopogon)植物の根の膨大部の極性溶媒抽出物であることを特徴とする、（１０）に記載の美白用の化粧料。
以下、本発明について、実施の形態を中心に詳細に説明を加える。
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００８】
【発明の実施の形態】
（１）本発明のメラノサイトのデンドライトの伸長抑制剤本発明のメラノサイトのデンドライトの伸長抑制剤は、ユリ科（Liliaceae）のジャノヒゲ属(Ophiopogon)植物のエキスからなる。ジャノヒゲ属(Ophiopogon)植物がジャノヒゲ(Ophiopogon japonicus Ker-Gawler）、オオバジャノヒゲ(Ophiopogon planiscapus Nigrescens又は、Ophiopogon planiscapus Ebony Knight)、ナガバジャノヒゲ（Ophiopogon ohwii Okuyama）、ノシラン(Ophiopogonjaburan Lodd.)、オフィオポゴン ヴェトナメンシス(Ophiopogon vietnamensis)、オフィオポゴン チンギィ(Ophiopogon chingii)、オフィオポゴン ラティフォリウス(Ophiopogon latifolius)、オフィオポゴン プラティフィラス(Ophiopogon platyphyllus)、オフィオポゴン ロンギフォリウス(Ophiopogon longifolius)、オフィオポゴン インター
メディウス(Ophiopogon intermedius D.Don)、オフィオポゴン レグニエリ（Ophiopogon regnieri）、オフィオポゴン トキネンシス（Ophiopogon tonkinensis）、オフィオポゴン グリフィシイ（Ophiopogon griffithii）、オフィオポゴン クラダンゲンシス（Ophiopogon kradungensis）、オフィオポゴン レプタンス（Ophiopogon reptans）、オフィオポゴン カウレセンス（Ophiopogon caulescens）、 オフィオポゴン プロリファー（Ophiopogon prolifer）、オフィオポゴン マレイナス(Ophiopogon malayanus)、オフィオポゴン ドラカエノイデス(Ophiopogon dracaenoides)、オフィオポゴン ピエレイ(Ophiopogon
pierrei)、オフィオポゴン ハイナエンシス(Ophiopogon hainanensis)、オフィオポゴン
クラーケイ(Ophiopogon clarkei)、オフィオポゴン グランディス(Ophiopogon grandis)、オフィオポゴン ルシュイエンシス(Ophiopogon lushuiensis)、オフィオポゴン メリーリー(Ophiopogonmerrilli)、オフィオポゴン ズィンギベラウセス(Ophiopogon zingiberzceus)、オフィオポゴン アカウリス(Ophiopogon acaulis)、オフィオポゴン ウォーリチアヌス(Ophiopogon wallichianus)、オフィオポゴン ボンディニエリ(Ophiopogon bondinieri)、オフィオポゴン インディカス(Ophiopogon indicus)等があり、本発明のデンドライトの伸長を抑制する物質は何れにも含まれている。従って、本発明のエキスとしてはこれらの植物の何れもが使用できる。しかし、中でもメラノサイトのデンドライトの伸長抑制剤のエキスを抽出するのには、ジャノヒゲ(Ophiopogon japonicus Ker-Gawler）、オオバジャノヒゲ(Ophiopogon planiscapus Nigrescens又は、Ophiopogon planiscapus Ebony
Knight)、ナガバジャノヒゲ（Ophiopogon ohwii Okuyama）、ノシラン(Ophiopogon jaburan Lodd.)を用いるのが好ましい。これは、メラノサイトのデンドライトの伸長抑制物質が多く含まれているからである。ここで、エキスとは、かかる植物の植物体それ自身、植物体を乾燥或いは細切、粉砕など加工した加工物、植物体乃至はその加工物を溶媒で抽出した抽出物、抽出物の溶媒を除去した、溶媒除去物、抽出物乃至はその溶媒除去物をカラムクロマトグラフィーや液液抽出で精製した精製分画物などの総称を意味する。尚、エキスは、植物体の全草から抽出することができる。これらの内、本発明のメラノサイトのデンドライトの伸長抑制剤としては、ジャノヒゲ属(Ophiopogon)植物の場合は、根の膨大部の溶媒抽出物乃至はその溶媒除去物が好ましい、それは、根の膨大部がメラノサイトのデンドライドの伸長抑制成分が多く含まれているからである。かかる溶媒としては、極性溶媒が特に好ましく例示できる。この様な極性溶媒としては、例えば、水、エタノール、メタノール、１，３−ブタンジオール、プロピレングリコールなどのアルコール類、酢酸エチルや蟻酸メチルなどのエステル類、アセトンやメチルエチルケトンなどのケトン類、クロロホルムや塩化メチレン等のハロゲン化炭化水素類、アセトニトリル等のニトリル類、ジエチルエーテルやテトラヒドロフランなどのエーテル類から選ばれる１種乃至は２種以上が好ましく例示できる。これらの内、特に好ましいものは、水乃至はアルコールである。最も好ましくは、水である。この様な抽出物を作成するには、植物体乃至はその加工物に１〜１０倍量の溶媒を加え、室温であれば数日、沸点付近の温度であれば数時間浸漬すればよい。しかる後に、不溶物を濾過などで除去し、必要に応じて減圧濃縮や凍結乾燥により溶媒除去することが出来る。ジャノヒゲ(Ophiopogon japonicus Ker-Gawler）の根の膨大部の場合、水及び熱水抽出して、エキスが得られる。必要に応じて、水性エキスを濾過し、減圧濃縮する、そして場合によって凍結乾燥するのがエキスとして特に好ましい。かくして得られた、本発明のメラノサイトのデンドライトの伸長抑制剤である、ユリ科（Liliaceae）のジャノヒゲ属(Ophiopogon)、ジャノヒゲ(Ophiopogon japonicus Ker-Gawler）の根の膨大部のエキスは、メラノサイトがデンドライトを伸長するのを抑制する作用に優れ、以て、メラノサイトより皮膚組織へメラニン顆粒が移動するのを抑制し、この様なメラニン顆粒の移動をメカニズムとする、光照射時に生じる、炎症を伴った黒化やソバカスなどの色素異常を予防或いは改善する作用を有する。この様な作用は、マクロファージが放出するメラノサイトのデンドライトの伸長因子がメラノサイトに働きかけるのを阻害することを機序としていると考えられる。勿論、色素異常が、メラニン顆粒の産生にあたってこの様なルートをとることから、本発明のメラノサイトのデンドライト伸長抑制剤は、光照射による炎症を伴った黒化やソバカス以外の色素異常も抑制するが、この様な色
素異常は他の手段でも予防や改善が可能であるため、本発明の効果の特徴は前記の光照射時に生じる、炎症を伴った黒化やソバカスなどの色素異常を予防或いは改善する作用と言える。又、この様なエキスにはチロシナーゼ活性阻害やメラニン産生阻害作用を有する物質も含まれているため、この様な作用を目的として美白用の化粧料に含有させることも出来る。この様な作用は、前記本発明のデンドライト伸長抑制作用と相乗的或いは相加的に働くため、これらエキスを化粧料に含有させて、美白用の化粧料とすることも本発明の技術的範囲に属する。
【手続補正９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１４】
＜実施例３＞上記実施例１、２のメラノサイトのデンドライト伸長抑制剤を用いて、デンドライト伸長抑制作用を調べた。即ち、予め常法に従い、マウス腹腔より、マクロファージを回収し、１０％ＦＢＳ加イーグルの最少培地で希釈し、２×１０6セル／ｍｌの濃度のマクロファージ液を調製しておいた。このものを９０μｌずつ３５ｍｍシャーレに分注し、これに０．０５ｍＷ／ｃｍ2で２０分間の紫外線照射を行った。これらのメラノサイトのデンドライト伸長抑制剤であるバクモンドウエキス１及び２を乾燥重量％で０．００５％となるようＤＭＳＯに溶かして加え３７℃で１晩培養した。又、他方マウスの尾を切り、尾の表皮を細かく刻みシャーレに入れ０．５％トリプシンにて３７℃で一晩処理し、ピンセットを用いて、表皮と真皮に分離し、表皮のみを回収し、０．５％トリプシンにて３７℃で２０分間処理し、フィルター濾過でメラノサイトのみを濾液として集めた。このメラノサイトを含む濾液を、イーグルの最少培地に１０％ＦＢＳ、１０-4ＭのＩＢＭＸ及び１０ｎｇ／ｍｌのＴＰＡを加えた培地で、３７℃、４８時間培養した。これを同培地で懸濁させ、９６穴ウェルに１０００セル／ウェルずつ分注し、３７℃で一晩培養した。メラノサイトの培地を捨て、ＰＢＳで３回洗浄した後、１０％ＦＢＳ加イーグルの最少培地３５μｌに置換した。これに前記検体を含むマクロファージの培養上清３５μｌずつ添加し、３７℃で二晩培養し、光学顕微鏡下写真撮影を行い、この写真よりデンドライトの長さを測定した。結果を表１に示す。これより、本発明のメラノサイトのデンドライト伸長抑制剤であるバクモンドウエキス１及び２によるデンドライト伸長の抑制作用に優れることが分かる。
（検体）
１）ＵＶ照射＋メラノサイトのデンドライト伸長抑制剤であるアセンヤクエキス１及び２のＤＭＳＯ溶液（０．００５％）
２）ＵＶ照射のみ（ポジティブコントロール）
３）ＵＶ非照射のみ（ネガティブコントロール）