【手続補正書】
【提出日】平成17年2月22日(2005.2.22)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ａ．テスト対象から得た生物学的検体を用い、該検体は無傷の稀な細胞を含有することが疑われる混合された細胞集団を含み、およびさらに
i．稀な細胞に由来する細胞断片、または
ii．稀な細胞に由来する細胞デブリス；
を含み；
ｂ．磁気−標識試料を調製し、ここに、該生物学的試料は、該無傷の稀な細胞、および該細胞断片または該細胞デブリスと特異的に反応する第１の生物特異的リガンドにカップリングした磁性粒子と、他の検体成分の実質的排除まで、混合され；
ｃ．該磁気−標識試料を、該無傷の稀な細胞、および該細胞断片または該細胞デブリスを特異的に標識する少なくとも１つのさらなる生物特異的リガンドと、他の検体成分の実質的排除まで、接触させ；
ｄ．該標識された稀な細胞、および該標識された細胞断片または該標識された細胞デブリスを分析することを含み、該標識された稀な細胞、該標識された細胞断片、および該標識された細胞デブリスの存在は病気の存在を示す；
ことを特徴とするテスト対象において病気を診断する方法。
【請求項２】
該生物学的検体が血液である請求項１記載の方法。
【請求項３】
請求項１の工程ａの後に、該生物学的検体を、該生物学的検体を安定化することができる剤と接触させる請求項２記載の方法。
【請求項４】
該磁性粒子がコロイド状である請求項１記載の方法。
【請求項５】
該磁気−標識試料を調製する工程の後に、該試料を高勾配磁場に付して、該無傷な稀な細胞、および該細胞断片または該細胞デブリスが豊富化された、分離された磁気−標識画分を生じさせる請求項１記載の方法。
【請求項６】
該分析がマルチパラメーターフローサイトメトリー、免疫蛍光顕微鏡、レーザー走査サイトメトリー、明視野ベースイメージ分析、毛細管測容法、スペクトルイメージング分析、手動細胞分析、および自動細胞分析よりなる群から選択される請求項１記載の方法。
【請求項７】
該分析が、形態学的分析およびエピトープ分析よりなる群から選択される少なくとも１つに基づく請求項１記載の方法。
【請求項８】
ａ．テスト対象から得た生物学的検体を用い、該検体は無傷な稀な細胞および稀な細胞のクラスターを含むことが疑われる混合された細胞集団を含み；
ｂ．磁気−標識試料を調製し、ここに、該生物学的試料は、該無傷な稀な細胞および稀な細胞の該クラスターと特異的に反応する第１の生物特異的リガンドにカップリングした磁性粒子と、他の検体成分の実質的排除まで、混合され；
ｃ．該磁気−標識試料を、該無傷の稀な細胞および稀な細胞の該クラスターを特異的に標識する少なくとも１つのさらなる生物特異的リガンドと、他の検体成分の実質的排除まで、接触させ；
ｄ．該標識された稀な細胞および稀な細胞の該標識されたクラスターを分析することを含み、該標識された稀な細胞および稀な細胞の該標識されたクラスターの存在は病気の存在を示す；
ことを特徴とする、テスト対象において病気を診断する方法。
【請求項９】
該生物学的検体が血液である請求項８記載の方法。
【請求項１０】
請求項８の工程ａの後に、該生物学的検体を、該生物学的検体を安定化することができる剤と接触させる請求項９記載の方法。
【請求項１１】
該磁性粒子がコロイド状である請求項８記載の方法。
【請求項１２】
該磁気−標識試料を調製する工程の後に、該試料を高勾配磁場に付して、該無傷の稀な細胞および稀な細胞の該クラスターが豊富化された、分離された磁気−標識画分を生じさせる請求項８記載の方法。
【請求項１３】
該分析がマルチパラメーターフローサイトメトリー、免疫蛍光顕微鏡、レーザー走査サイトメトリー、明視野ベースイメージ分析、毛細管測容法、スペクトルイメージング分析、手動細胞分析、および自動細胞分析よりなる群から選択される請求項８記載の方法。
【請求項１４】
ａ．テスト対象から得た生物学的検体を用い、該検体は無傷な悪性細胞を含むことが疑われる混合された細胞集団を含み、およびさらに
i．悪性細胞に由来する細胞断片、または
ii．悪性細胞に由来する細胞デブリスを含み；
ｂ．磁気−標識試料を調製し、ここに、該生物学的検体は、該無傷の悪性細胞、および該細胞断片または該細胞デブリスと特異的に反応する第１の生物特異的リガンドにカップリングされた磁性粒子と、他の検体成分の実質的排除まで、混合され；
ｃ．該磁気−標識試料を、該無傷の悪性細胞、および該細胞断片または該細胞デブリスを特異的に標識する少なくとも１つのさらなる生物特異的リガンドと、他の検体成分の実質的排除まで、接触させ；
ｄ．該標識された悪性細胞、および該標識された細胞断片、該標識された細胞デブリスを分析し、該標識された悪性細胞、該標識された細胞断片、および該標識された細胞デブリスの存在は、悪性疾患の存在を示す；
ことを特徴とするテスト対象において悪性疾患を診断する方法。
【請求項１５】
該生物学的検体が血液である請求項１４記載の方法。
【請求項１６】
請求項１４の工程ａの後に、該生物学的検体を、該生物学的検体を安定化させることができる剤と接触させる請求項１５記載の方法。
【請求項１７】
該磁性粒子がコロイド状である請求項１４記載の方法。
【請求項１８】
該磁気−標識試料を調製する工程の後に、該試料を高勾配磁場に付して、該無傷の悪性細胞、および該細胞断片または該細胞デブリスが豊富化された、別々の磁気−標識画分を生じさせる請求項１４記載の方法。
【請求項１９】
該分析がマルチパラメーターフローサイトメトリー、免疫蛍光顕微鏡、レーザー走査サイトメトリー、明視野ベースイメージ分析、毛細管測容法、スペクトルイメージング分析、手動細胞分析、および自動細胞分析よりなる群から選択される請求項１４記載の方法。
【請求項２０】
該分析が、さらに、アポトーシスまたは壊死によって引き起こされるそれらの起源に基づいて細胞断片または該細胞デブリスを分類することを含む請求項１４記載の方法。
【請求項２１】
分析が、さらに、機械的損傷、薬物−誘導損傷、または免疫学的損傷によって引き起こされるそれらの起源に基づいて細胞断片または該細胞デブリスを分類することを含む請求項２０記載の方法。
【請求項２２】
該分類が、形態学的分析およびエピトープ分析よりなる群から選択される少なくとも１つをベースとする請求項２０記載の方法。
【請求項２３】
ａ．テスト対象から得た生物学的検体を用い、該検体は無傷な悪性細胞および悪性細胞のクラスターを含むことが疑われる混合された細胞集団を含み；
ｂ．磁気−標識試料を調製し、ここに、該生物学的試料は、該無傷の悪性細胞および悪性細胞の該クラスターと特異的に反応する第１の生物特異的リガンドにカップリングした磁性粒子と、他の検体成分の実質的排除まで、混合され；
ｃ．該磁気−標識試料を、該無傷の悪性細胞および悪性細胞の該クラスターを特異的に標識する少なくとも１つのさらなる生物特異的リガントと、他の検体成分の実質的排除まで、接触させ、
ｄ．該標識された悪性細胞および悪性細胞の該標識されたクラスターを分析することを含み、該標識された悪性細胞および悪性細胞の該標識されたクラスターの存在が、悪性疾患の存在を示す；
ことを特徴とする、テスト対象において悪性疾患を診断する方法。
【請求項２４】
該生物学的検体が血液である請求項２３記載の方法。
【請求項２５】
請求項２３の工程ａの後に、該生物学的検体を、該生物学的検体を安定化させることができる剤と接触させる請求項２４記載の方法。
【請求項２６】
該磁性粒子がコロイド状である請求項２３記載の方法。
【請求項２７】
該磁気−標識試料を調製する工程の後に、該試料を高勾配磁場に付して、該無傷の悪性細胞および悪性細胞クラスターが豊富化された、分離された磁気−標識画分を生じさせる請求項２３記載の方法。
【請求項２８】
該分析がマルチパラメーターフローサイトメトリー、免疫蛍光顕微鏡、レーザー走査サイトメトリー、明視野ベースイメージ分析、毛細管測容法、スペクトルイメージング分析、手動細胞分析、および自動細胞分析よりなる群から選択される請求項２３記載の方法。
【請求項２９】
ａ．テスト対象から得た生物学的検体を用い、該検体は無傷な悪性細胞を含むことが疑われる混合された細胞集団を含み、さらに、
i．悪性細胞に由来する細胞断片、または
ii．悪性細胞に由来する細胞デブリスを含み；
ｂ．磁気−標識試料を調製し、ここに、該生物学的試料は、該無傷の悪性細胞、および該細胞断片または該細胞デブリスと特異的に反応する第１の生物特異的リガンドとカップリングされた磁性粒子と、他の検体成分の実質的排除まで、混合され；
ｃ．該磁気−標識試料は、該無傷の悪性細胞、および該細胞断片または該細胞デブリスを特異的に標識する少なくとも１つのさらなる生物特異的リガンドと、他の検体成分の実質的排除まで、接触させ；
ｄ．該標識された悪性細胞、および該標識された細胞断片または該標識された細胞デブリスを分析することを含み、該標識された悪性細胞、該標識された細胞断片、および標識された細胞デブリスの存在は、悪性疾患の存在を示す；
ことを特徴とする、テスト対象において悪性疾患をスクリーニングする方法。
【請求項３０】
該生物学的検体が血液である請求項２９記載の方法。
【請求項３１】
請求項２９の工程ａの後に、該生物学的検体を、該生物学的検体を安定化させることができる剤と接触させる請求項３０記載の方法。
【請求項３２】
該磁性粒子がコロイド状である請求項２９記載の方法。
【請求項３３】
該磁気−標識試料を調製する工程の後に、該試料を高勾配磁場に付して、該無傷の悪性細胞、および該細胞断片または該細胞デブリスが豊富化された、分離された磁気−標識画分を生じさせる請求項２９記載の方法。
【請求項３４】
該分析がマルチパラメーターフローサイトメトリー、免疫蛍光顕微鏡、レーザー走査サイトメトリー、明視野ベースイメージ分析、毛細管測容法、スペクトルイメージング分析、手動細胞分析、および自動細胞分析よりなる群から選択される請求項２９記載の方法。
【請求項３５】
該分析が、さらに、アポトーシスまたは壊死によって引き起こされるそれらの起源に基づいて細胞断片または該細胞デブリスを分類することを含む請求項２９記載の方法。
【請求項３６】
機械的損傷、薬物−誘導損傷、または免疫学的損傷によって引き起こされるそれらの起源に基づいて細胞断片または該細胞デブリスを分類することを含む請求項３５記載の方法。
【請求項３７】
該分類が、形態学的分析およびエピトープ分析よりなる群から選択される少なくとも１つに基づく請求項３５記載の方法。
【請求項３８】
ａ．テスト対象から得た生物学的検体を用い、該検体は無傷の悪性細胞および悪性細胞のクラスターを含むことが疑われる混合された細胞集団を含み；
ｂ．磁気−標識試料を調製し、ここに、該生物学的試料は、該無傷の悪性細胞および悪性細胞の該クラスターと特異的に反応する第１の生物特異的リガンドにカップリングされた磁性粒子と、他の検体成分の実質的排除まで、混合され；
ｃ．該磁気−標識試料は、該無傷の悪性細胞および悪性細胞の該クラスターを特異的に標識する少なくとも１つのさらなる生物特異的リガンドと、他の検体成分の実質的排除まで、接触させ；
ｄ．該標識された悪性細胞および悪性細胞の該標識されたクラスターを分析することを含み、該標識された悪性細胞および悪性細胞の該標識されたクラスターの存在は悪性疾患の存在を示す；
ことを特徴とする、テスト対象において悪性疾患をスクリーニングする方法。
【請求項３９】
該生物学的検体が血液である請求項３８記載の方法。
【請求項４０】
請求項３８の工程ａの後に、該生物学的検体を、該生物学的検体を安定化させることができる剤と接触させる請求項３９記載の方法。
【請求項４１】
該磁性粒子がコロイド状である請求項３８記載の方法。
【請求項４２】
該磁気−標識試料を調製する工程の後に、該試料を高勾配磁場に付して、該無傷の悪性細胞および悪性細胞の該クラスターが豊富化された、分離された磁気−標識画分を生じさせる請求項３８記載の方法。
【請求項４３】
該分析がマルチパラメーターフローサイトメトリー、免疫蛍光顕微鏡、レーザー走査サイトメトリー、明視野ベースイメージ分析、毛細管測容法、スペクトルイメージング分析、手動細胞分析、および自動細胞分析よりなる群から選択される請求項３８記載の方法。
【請求項４４】
ａ．テスト対象から得た生物学的検体を用い、該検体は無傷な悪性細胞を含むことが疑われる混合された細胞集団を含み、およびさらに
i．悪性細胞に由来する細胞断片、または
ii．悪性細胞に由来する細胞デブリスを含み；
ｂ．磁気−標識試料を調製し、ここに、該生物学的試料は、該無傷の悪性細胞、および該細胞断片または該細胞デブリスと特異的に反応する第１の生物特異的リガンドとカップリングされた磁性粒子と、他の検体成分の実質的排除まで、混合され；
ｃ．該磁気−標識試料を、該無傷の悪性細胞、および該細胞断片または該細胞デブリスを特異的に標識する少なくとも１つのさらなる生物特異的リガンドと、他の検体成分の実施的排除まで、接触させ；
ｄ．該標識された悪性細胞、および標識された細胞断片、該標識された細胞デブリスを分析し、該標識された悪性細胞、該標識された細胞断片、および該標識された細胞デブリスの存在は悪性疾患の存在を示す；
ことを特徴とする、テスト対象において悪性疾患をモニターする方法。
【請求項４５】
該生物学的検体が血液である請求項４４記載の方法。
【請求項４６】
請求項４４の工程ａの後に、該生物学的検体を、該生物学的検体を安定化することができる剤と接触させる請求項４５記載の方法。
【請求項４７】
該磁性粒子がコロイド状である請求項４４記載の方法。
【請求項４８】
該磁気的に標識された試料を調製する工程の後に、該試料を高勾配磁場に付して、該無傷悪性細胞、および該細胞断片または該細胞デブリスが豊富化された、分離された磁気的に標識された画分を得る請求項４４記載の方法。
【請求項４９】
該分析がマルチパラメーターフローサイトメトリー、免疫蛍光顕微鏡、レーザー走査サイトメトリー、明視野ベースイメージ分析、毛細管測容法、スペクトルイメージング分析、手動細胞分析、および自動細胞分析よりなる群から選択される請求項４４記載の方法。
【請求項５０】
該分析が、さらに、アポトーシスまたは壊死によって引き起こされたその起源に基づいて細胞断片または該細胞デブリスを分類することを含む請求項４４記載の方法。
【請求項５１】
分析が、さらに、機械的損傷、薬物−誘導損傷、または免疫学的損傷によって引き起こされたその起源に基づいて細胞断片または該細胞デブリスを分類すること含む請求項５０記載の方法。
【請求項５２】
該分類が、形態学的分析およびエピトープ分析よりなる群の少なくとも１つに基づく請求項５０記載の方法。
【請求項５３】
ａ．テスト対象から得た生物学的検体を用い、該検体は、無傷悪性細胞および悪性細胞のクラスターを含有することが疑われる混合された細胞集団を含み；
ｂ．磁気的に標識された試料を調製し、ここに、該生物学的試料は、該無傷悪性細胞および悪性細胞の該クラスターと特異的に反応する第１の生物特異的リガンドにカップリングした磁性粒子と、他の検体成分の実質的排除まで、混合され；
ｃ．該磁気的に標識された試料を、該無傷悪性細胞および悪性細胞の該クラスターを特異的に標識する少なくとも１つのさらなる生物特異的リガンドと、他の検体成分の実質的排除まで、接触させ；
ｄ．該標識された悪性細胞および悪性細胞の該標識されたクラスターを分析し、該標識された悪性細胞および悪性細胞の該標識されたクラスターの存在は悪性疾患の存在を示す；
ことを特徴とする、テスト対象において悪性疾患をモニターする方法。
【請求項５４】
該生物学的検体が血液である請求項５３記載の方法。
【請求項５５】
請求項５３の工程ａの後に、該生物学的検体を、該生物学的検体を安定化することができる剤と接触させる請求項５４記載の方法。
【請求項５６】
該磁性粒子がコロイド状である請求項５３記載の方法。
【請求項５７】
該磁気的に標識された試料を調製する工程の後に、該試料を高勾配磁場に付して、該無傷悪性細胞および悪性細胞の該クラスターが豊富化された、分離された磁気的に標識された画分を得る請求項５３記載の方法。
【請求項５８】
該分析がマルチパラメーターフローサイトメトリー、免疫蛍光顕微鏡、レーザー走査サイトメトリー、明視野ベースイメージ分析、毛細管測容法、スペクトルイメージング分析、手動細胞分析、および自動細胞分析よりなる群から選択される請求項５３記載の方法。
【請求項５９】
ａ．i．磁性コア材料、
ii．蛋白質ベースのコーティング材料、および
iii．該悪性細胞、および該細胞断片または該細胞デブリスの第１の特徴的な決定基に特異的に結合する抗体
を含むコートされた磁性ナノ粒子；
ｂ．該悪性細胞、および該細胞断片または該細胞デブリスの第２の特徴的な決定基に対する結合特異性を有する少なくとも１つの抗体；
ｃ．該悪性細胞、および該細胞断片または該細胞デブリスのさらなる特徴を染色することができる剤；
を含む、悪性細胞、および悪性細胞に由来する細胞断片または悪性細胞に由来する細胞デブリスの存在につき生物学的検体をアッセイするためのキット。
【請求項６０】
さらに、異なる特徴的な決定基につき各々が特異的な抗体のパネルを含む請求項５９記載のキット。
【請求項６１】
さらに、非−標的存在を標識することができる特異的剤をさらに含む請求項５９記載のキット。