(57)【要約】  本発明は、ブドウの果皮及び種子の少なくともいずれかを利用し、有用なブドウ果皮・種子乳酸菌発酵物を提供すること、また、前記ブドウ果皮・種子乳酸菌発酵物を利用し、II型糖尿病、高脂血症、肥満等のメタボリックシンドローム関連症状を効果的、かつ安全に治療、改善、又は予防することが可能な医薬及び食品、並びに、皮膚の美白・老化防止に効果的、かつ安全な医薬及び食品を提供することを目的とする。即ち、本発明は、ブドウの果皮及び種子の少なくともいずれかを乳酸菌で発酵させて得られることを特徴とするブドウ果皮・種子乳酸菌発酵物、並びに、前記ブドウ果皮・種子乳酸菌発酵物を含む医薬及び食品に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ブドウの果皮及び種子の少なくともいずれかを乳酸菌で発酵させて得られることを特徴とするブドウ果皮・種子乳酸菌発酵物。
【請求項２】
メタボリックシンドローム関連症状を治療又は予防するための医薬であって、ブドウの果皮及び種子の少なくともいずれかを乳酸菌で発酵させて得られるブドウ果皮・種子乳酸菌発酵物を含むことを特徴とする医薬。
【請求項３】
II型糖尿病の治療又は予防に用いられる請求項２に記載の医薬。
【請求項４】
高脂血症の治療又は予防に用いられる請求項２に記載の医薬。
【請求項５】
肥満の治療又は予防に用いられる請求項２に記載の医薬。
【請求項６】
皮膚の美白・老化防止のための医薬であって、ブドウの果皮及び種子の少なくともいずれかを乳酸菌で発酵させて得られるブドウ果皮・種子乳酸菌発酵物を含むことを特徴とする医薬。
【請求項７】
メタボリックシンドローム関連症状を改善又は予防するための食品であって、ブドウの果皮及び種子の少なくともいずれかを乳酸菌で発酵させて得られるブドウ果皮・種子乳酸菌発酵物を含むことを特徴とする食品。
【請求項８】
II型糖尿病の改善又は予防に用いられる請求項７に記載の食品。
【請求項９】
高脂血症の改善又は予防に用いられる請求項７に記載の食品。
【請求項１０】
肥満の改善又は予防に用いられる請求項７に記載の食品。
【請求項１１】
皮膚の美白・老化防止のための食品であって、ブドウの果皮及び種子の少なくともいずれかを乳酸菌で発酵させて得られるブドウ果皮・種子乳酸菌発酵物を含むことを特徴とする食品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ブドウの果皮及び種子の少なくともいずれかを利用した、II型糖尿病、高脂血症、肥満等のメタボリックシンドローム関連症状を治療、改善、又は予防するための医薬及び食品、並びに、皮膚の美白・老化防止のための医薬及び食品に関する。
【背景技術】
【０００２】
メタボリックシンドロームとは、内臓脂肪の蓄積により引き起こされる、肥満、糖尿病、高血圧、高脂血症等の生活習慣病が重なった状態をいい、この状態が続くと動脈硬化が進行し易くなり、心筋梗塞や脳卒中を起こす危険性が増加する。最近の厚生労働省の調査によると、メタボリックシンドロームとその予備群は中高年世代で２，０００万人近いことが示され、中高年男性の２人に１人はメタボリックシンドロームかその予備軍であると考えられている。
メタボリックシンドロームを引き起こす原因は、過栄養、運動不足、ストレス過剰、高脂肪食過剰摂取等の生活習慣に基づく内臓脂肪の蓄積と考えられている。この内臓脂肪の蓄積により、血中グルコース量や血中中性脂肪量、血圧等を調節するインスリンに対する感受性が低下し、インスリン抵抗性と呼ばれる状態を作り出し、肥満、糖尿病、高血圧、高脂血症や、動脈硬化等を引き起こす。
インスリン抵抗性を引き起こす因子としては、マクロファージや肥大肥満細胞から産生される腫瘍壊死因子−α（ＴＮＦ−α）が考えられており、インスリンのシグナル伝達は、このＴＮＦ−αにより阻害されることが示されている（例えば、非特許文献１参照）。これに対し、脂肪細胞から産生されるアディポネクチンは、ＴＮＦ−αに拮抗的な作用を示し、インスリンに対する感受性を増強させることが知られている（例えば、非特許文献２参照）。更に近年、高脂肪食による肥満などの環境因子により、アディポネクチンの欠乏が惹起され、インスリンに対する感受性が低下することが示され、アディポネクチンは糖尿病やメタボリックシンドロームの病態評価の指標、及び治療のターゲット分子として期待されている（例えば、非特許文献３参照）。
これらのことから、メタボリックシンドロームの治療、改善、又は予防においては、内臓脂肪、血中グルコース、血中中性脂肪などの肥満、糖尿病誘導因子を減少させ、一方で、アディポネクチンなどの抗糖尿病作用、抗メタボリックシンドローム作用を有する因子を誘導することが重要であると考えられる。【０００３】
また、体内に炭水化物が摂取されると、消化管においてα−アミラーゼ、α−グルコシダーゼによって消化され、最終的に単糖類であるグルコースに分解されて、腸管膜上の繊毛から吸収される。吸収されたグルコースは血中に移行し、一時的に過血糖症状が起こる。II型糖尿病患者においては、インスリンの作用がはたらかず、高血糖値が維持され、グルコースによる血管障害が惹起されて、神経障害、網膜症、白内障など重篤な合併症が引き起こされる。
これに対して、α−アミラーゼ、α−グルコシダーゼ等の消化酵素の働きを阻害し、グルコースの生成を抑制することで、摂取された糖類は吸収されることなく体外へ排出され、炭水化物摂取による血糖値上昇は抑制される。
肥満遺伝子であるＡｙ遺伝子を導入したマウスであるＫＫＡｙマウスは、II型糖尿病モデルマウスとして用いられており、肥満、インスリン抵抗性、高中性脂肪血症など、メタボリックシンドロームの症状をきたすことが知られている。また、メタボリックシンドロームの症状をきたした時には、血中アディポネクチンは著明に減少することが確認されており、更に、遺伝子組換えアディポネクチンの補給により、インスリン抵抗性や高中性脂肪血症が改善されることが報告されている（例えば、非特許文献２参照）。【０００４】
このようなII型糖尿病、高脂血症、肥満等のメタボリックシンドローム関連症状を治療、改善、又は予防する方法としては、従来から様々な方法が提唱されているが、前記したようにメタボリックシンドローム及びその予備群の患者数は非常に多く、そのため、より効果的、かつ安全な治療、改善、又は予防方法が、未だ求められているのが現状である。【０００５】
一方で、皮膚の美白や老化防止を望む人の数も、女性を中心として非常に多い。皮膚の老化は、加齢に加えて、炎症に起因するところが大きく、皮膚の炎症は肌の硬化、しわ形成、はり・つやの喪失の原因と考えられている。炎症の原因としては紫外線によるものが一般的であるが、近年、メイラード反応により生成する終末糖化産物群（Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｇｌｙｃａｔｉｏｎ  Ｅｎｄ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ；ＡＧＥ）の関与が注目されている。メイラード反応はタンパク質と糖の非酵素的反応であり、生成されたＡＧＥはマクロファージなどの炎症性細胞の細胞膜レセプター（ＲＡＧＥ）を介して活性化し、ＴＮＦ−αなどの炎症性サイトカインの産生を誘導する。タンパク質の非酵素的糖化は通常の老化により進行するが、特に前記したようなメタボリックシンドロームなど、血糖値が高い人ではその進行が速く、皮膚老化促進の原因のひとつとなっている（例えば、非特許文献４参照）。【０００６】
また、紫外線を浴びた皮膚では、ケラチノサイトからαメラノサイト刺激ホルモン（α−ＭＳＨ）と呼ばれる物質が産生され、α−ＭＳＨはメラノサイトにはたらきメラニン合成酵素であるチロシナーゼを活性化させる。メラノサイト内にあるチロシンは、チロシナーゼの作用によりドーパ（ＤＯＰＡ）を経てドーパキノン（ＤＯＰＡｑｕｉｎｏｎｅ）に変換され、ユーメラニン（Ｅｕｍｅｌａｎｉｎ）やフェオメラニン（Ｐｈｅｏｍｅｌａｎｉｎ）などのメラニンが生成されて皮膚への沈着が起こり、肌のくすみの原因となる（例えば、非特許文献５参照）。【０００７】
ＡＧＥによって誘導される炎症性サイトカインの産生を抑制し、細胞内チロシナーゼの活性阻害によりメラニン生成を抑制する物質は、皮膚の美白、老化防止において優れた効果を発揮することが考えられ、このような物質が求められているのが現状である。【０００８】
【非特許文献１】Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２００１；２７６：４１２４５−４１２５４．
【非特許文献２】Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄ．２００１；７：９４１−９４６．
【非特許文献３】Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄ．２００２；２７７：２５８６３−２５８６６．
【非特許文献４】Ｄｉａｂｅｔｏｌｏｇｉａ．２００１；４４：１２９−１４６．
【非特許文献５】Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１９９４；９３（５）：２２５８−２２６２．
【発明の開示】
【０００９】
本発明は、前記従来における諸問題を解決し、以下の目的を達成することを課題とする。即ち、本発明は、ブドウの果皮及び種子の少なくともいずれかを利用し、有用なブドウ果皮・種子乳酸菌発酵物を提供することを目的とする。また、前記ブドウ果皮・種子乳酸菌発酵物を利用し、II型糖尿病、高脂血症、肥満等のメタボリックシンドローム関連症状を効果的、かつ安全に治療、改善、又は予防することが可能な医薬及び食品、並びに、皮膚の美白・老化防止に効果的、かつ安全な医薬及び食品を提供することを目的とする。
【００１０】
前記課題を解決するため、本発明者らは鋭意検討した結果、以下のような知見を得た。即ち、ブドウの果皮及び種子の少なくともいずれかを乳酸菌で発酵させたブドウ果皮・種子乳酸菌発酵物が、優れた血糖値上昇抑制作用、血中トリグリセリド（中性脂肪）上昇抑制作用、肥満抑制作用、血中アディポネクチン上昇作用等を有しており、そのため、前記ブドウ果皮・種子乳酸菌発酵物を利用することにより、II型糖尿病、高脂血症、肥満等のメタボリックシンドローム関連症状を、効果的、かつ安全に治療、改善、又は予防することができるという知見である。また、前記ブドウ果皮・種子乳酸菌発酵物は、メイラード反応により生成した終末糖化産物群（ＡＧＥ）に起因するＴＮＦ−α産生を抑制する作用、チロシナーゼ活性抑制作用、メラニン合成抑制作用、紫外線による皮膚炎症を抑制する作用等も有しており、そのため、皮膚の美白・老化防止にも効果的であるという知見である。
【００１１】
近年、植物において、果汁よりも、果皮や種子に多量のフラボノイド類が含まれていることが報告され、これらの未利用農産物が注目され始めている。フラボノイド類は酵素と結合し、その活性を阻害することが知られており、過食等によって引き起こされるメタボリックシンドロームの予防、治療を対象とした機能性食品として開発が行われている。しかしながら、既存のフラボノイド類は経口投与したときの吸収面で難点があり、その効果は抽出物、精製物においても十分発揮できていないのが現状である。
本発明者らは、まず、ブドウ果皮及び種子の粉末（ブドウ果皮・種子乾燥パウダー）との培養で好適に増殖する乳酸菌のスクリーニングを行い、適した乳酸菌を選択した。そして、この乳酸菌を用いてブドウ果皮・種子乾燥パウダーを発酵処理することにより、消化酵素（アミラーゼ、グルコシダーゼ）に対する阻害活性が上昇し、かつ、糖負荷マウスに経口投与したときの過血糖症状抑制効果についてもより有効な物質（ブドウ果皮・種子乳酸菌発酵物）が得られることを見出した。更に、得られたブドウ果皮・種子乳酸菌発酵物は、肥満に伴い糖尿病の症状を発症するモデルマウスにおいても、著明な血糖値上昇抑制作用、血中トリグリセリド（中性脂肪）上昇抑制作用、肥満抑制作用等が認められること、また、抗糖尿病因子、抗メタボリックシンドローム因子として注目されているアディポネクチンを顕著に上昇させる作用を有していることを見出した。また、本発明者らは更に、前記ブドウ果皮・種子乳酸菌発酵物は、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）とリボースで生成したＡＧＥにより誘導されたマクロファージからのＴＮＦ−α産生を抑制できること、Ｂ１６メラノーマ細胞の細胞内チロシナーゼ活性を抑制し、α−ＭＳＨ刺激によるメラニン合成を抑制できること、マウスへの経口投与により紫外線による皮膚炎症を抑制できることをも見出し、本発明の完成に至った。
【００１２】
本発明は、本発明者らによる前記知見に基づくものであり、前記課題を解決するための手段としては、以下の通りである。即ち、
＜１＞  ブドウの果皮及び種子の少なくともいずれかを乳酸菌で発酵させて得られることを特徴とするブドウ果皮・種子乳酸菌発酵物である。
＜２＞  乾燥した状態のブドウの果皮及び種子の少なくともいずれかを乳酸菌で発酵させて得られる前記＜１＞に記載のブドウ果皮・種子乳酸菌発酵物である。
＜３＞  微粉（パウダー）化された状態のブドウの果皮及び種子の少なくともいずれかを乳酸菌で発酵させて得られる前記＜１＞から＜２＞のいずれかに記載のブドウ果皮・種子乳酸菌発酵物である。
＜４＞  乾燥粉末（乾燥パウダー）の状態のブドウの果皮及び種子の少なくともいずれかを乳酸菌で発酵させて得られる前記＜１＞から＜３＞のいずれかに記載のブドウ果皮・種子乳酸菌発酵物である。
＜５＞  乳酸菌として、ラクトバチルス  プランタラム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐｌａｎｔａｒｕｍ）、ラクトバチルス  サリバリウス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓａｌｉｖａｌｉｕｓ）、ラクトバチルス  アミロボラス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｍｙｌｏｖｏｒｕｓ）、ラクトバチルス  カゼイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃａｓｅｉ）、ラクトバチル  キタサトニス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｋｉｔａｓａｔｏｎｉｓｉ）、ラクトバチル  ロイテリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒｅｕｔｅｒｉ）、ラクトバチル  ジョンソニ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｊｈｏｎｓｏｎｉｉ）、ラクトバチルス  アシドフィラス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ）、ラクトバチルス  ブレビス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｂｒｅｖｉｓ）、ラクトバチルス  コリニホルミス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃｏｒｙｎｉｆｏｒｍｉｓ）、ラクトバチルス  カルバタス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃｕｒｖａｔｕｓ）、ラクトバチルス  デルブリュキィ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ）、ラクトバチルス  ファルシミナス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｆａｒｃｉｍｉｎｕｓ）、ラクトバチルス  ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒｈａｍｎｏｓｕｓ）、ペディオコッカス  ダムノサス（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ  ｄａｍｎｏｓｕｓｕ）、ペディオコッカス  ハロフィラス（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ  ｈａｌｏｐｈｉｌｕｓ）、ペディオコッカス  パルバラス（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ  ｐａｒｖｕｌｕｓ）、ペディオコッカス  ペントサセウス（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｅｎｔｏｓａｃｅｕｓ）、ビフィドバクテリウム  アドレセンティス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｄｏｌｅｓｃｅｎｔｉｓ）、ビフィドバクテリウム  ビフィダス（（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｂｉｆｉｄｕｓ）、ラクトコッカス  クレモリス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｃｒｅｍｏｒｉｓ）、ラクトコッカス  ラクティス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｌａｃｔｉｓ）、リューコノストック  エノス（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ  ｏｅｎｏｓ）、リューコノストック  ラクティス（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ  ｌａｃｔｉｓ）、リューコノストック  メセンテロイデス（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ  ｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓ）、及び、エンテロコッカス  フェカリス（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃａｌｉｓ）からなる群より選択される少なくともいずれかを使用して得られる前記＜１＞から＜４＞のいずれかに記載のブドウ果皮・種子乳酸菌発酵物である。
【００１３】
＜６＞  メタボリックシンドローム関連症状を治療又は予防するための医薬であって、ブドウの果皮及び種子の少なくともいずれかを乳酸菌で発酵させて得られるブドウ果皮・種子乳酸菌発酵物を含むことを特徴とする医薬である。
＜７＞  乾燥した状態のブドウの果皮及び種子の少なくともいずれかを乳酸菌で発酵させて得られるブドウ果皮・種子乳酸菌発酵物を含む前記＜６＞に記載の医薬である。
＜８＞  微粉（パウダー）化された状態のブドウの果皮及び種子の少なくともいずれかを乳酸菌で発酵させて得られるブドウ果皮・種子乳酸菌発酵物を含む前記＜６＞から＜７＞のいずれかに記載の医薬である。
＜９＞  乾燥粉末（乾燥パウダー）の状態のブドウの果皮及び種子の少なくともいずれかを乳酸菌で発酵させて得られるブドウ果皮・種子乳酸菌発酵物を含む前記＜６＞から＜８＞のいずれかに記載の医薬である。
＜１０＞  乳酸菌として、ラクトバチルス  プランタラム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐｌａｎｔａｒｕｍ）、ラクトバチルス  サリバリウス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓａｌｉｖａｌｉｕｓ）、ラクトバチルス  アミロボラス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｍｙｌｏｖｏｒｕｓ）、ラクトバチルス  カゼイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃａｓｅｉ）、ラクトバチル  キタサトニス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｋｉｔａｓａｔｏｎｉｓｉ）、ラクトバチル  ロイテリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒｅｕｔｅｒｉ）、ラクトバチル  ジョンソニ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｊｈｏｎｓｏｎｉｉ）、ラクトバチルス  アシドフィラス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ）、ラクトバチルス  ブレビス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｂｒｅｖｉｓ）、ラクトバチルス  コリニホルミス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃｏｒｙｎｉｆｏｒｍｉｓ）、ラクトバチルス  カルバタス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃｕｒｖａｔｕｓ）、ラクトバチルス  デルブリュキィ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ）、ラクトバチルス  ファルシミナス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｆａｒｃｉｍｉｎｕｓ）、ラクトバチルス  ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒｈａｍｎｏｓｕｓ）、ペディオコッカス  ダムノサス（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ  ｄａｍｎｏｓｕｓｕ）、ペディオコッカス  ハロフィラス（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ  ｈａｌｏｐｈｉｌｕｓ）、ペディオコッカス  パルバラス（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ  ｐａｒｖｕｌｕｓ）、ペディオコッカス  ペントサセウス（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｅｎｔｏｓａｃｅｕｓ）、ビフィドバクテリウム  アドレセンティス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｄｏｌｅｓｃｅｎｔｉｓ）、ビフィドバクテリウム  ビフィダス（（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｂｉｆｉｄｕｓ）、ラクトコッカス  クレモリス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｃｒｅｍｏｒｉｓ）、ラクトコッカス  ラクティス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｌａｃｔｉｓ）、リューコノストック  エノス（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ  ｏｅｎｏｓ）、リューコノストック  ラクティス（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ  ｌａｃｔｉｓ）、リューコノストック  メセンテロイデス（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ  ｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓ）、及び、エンテロコッカス  フェカリス（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃａｌｉｓ）からなる群より選択される少なくともいずれかを使用して得られるブドウ果皮・種子乳酸菌発酵物を含む前記＜６＞から＜９＞のいずれかに記載の医薬である。
＜１１＞  II型糖尿病の治療又は予防に用いられる前記＜６＞から＜１０＞のいずれかに記載の医薬である。
＜１２＞  高脂血症の治療又は予防に用いられる前記＜６＞から＜１０＞のいずれかに記載の医薬である。
＜１３＞  肥満の治療又は予防に用いられる前記＜６＞から＜１０＞のいずれかに記載の医薬である。
＜１４＞  血中グルコース濃度を低下させる作用を有する前記＜６＞から＜１０＞のいずれかに記載の医薬である。
＜１５＞  血中トリグリセリド濃度を低下させる作用を有する前記＜６＞から＜１０＞のいずれかに記載の医薬である。
＜１６＞  腹腔内脂肪重量を低下させる作用を有する前記＜６＞から＜１０＞のいずれかに記載の医薬である。
＜１７＞  血中アディポネクチン濃度を上昇させる作用を有する前記＜６＞から＜１０＞のいずれかに記載の医薬である。
【００１４】
＜１８＞  皮膚の美白・老化防止のための医薬であって、ブドウの果皮及び種子の少なくともいずれかを乳酸菌で発酵させて得られるブドウ果皮・種子乳酸菌発酵物を含むことを特徴とする医薬である。
＜１９＞  乾燥した状態のブドウの果皮及び種子の少なくともいずれかを乳酸菌で発酵させて得られるブドウ果皮・種子乳酸菌発酵物を含む前記＜１８＞に記載の医薬である。
＜２０＞  微粉（パウダー）化された状態のブドウの果皮及び種子の少なくともいずれかを乳酸菌で発酵させて得られるブドウ果皮・種子乳酸菌発酵物を含む前記＜１８＞から＜１９＞のいずれかに記載の医薬である。
＜２１＞  乾燥粉末（乾燥パウダー）の状態のブドウの果皮及び種子の少なくともいずれかを乳酸菌で発酵させて得られるブドウ果皮・種子乳酸菌発酵物を含む前記＜１８＞から＜２０＞のいずれかに記載の医薬である。
＜２２＞  乳酸菌として、ラクトバチルス  プランタラム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐｌａｎｔａｒｕｍ）、ラクトバチルス  サリバリウス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓａｌｉｖａｌｉｕｓ）、ラクトバチルス  アミロボラス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｍｙｌｏｖｏｒｕｓ）、ラクトバチルス  カゼイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃａｓｅｉ）、ラクトバチル  キタサトニス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｋｉｔａｓａｔｏｎｉｓｉ）、ラクトバチル  ロイテリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒｅｕｔｅｒｉ）、ラクトバチル  ジョンソニ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｊｈｏｎｓｏｎｉｉ）、ラクトバチルス  アシドフィラス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ）、ラクトバチルス  ブレビス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｂｒｅｖｉｓ）、ラクトバチルス  コリニホルミス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃｏｒｙｎｉｆｏｒｍｉｓ）、ラクトバチルス  カルバタス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃｕｒｖａｔｕｓ）、ラクトバチルス  デルブリュキィ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ）、ラクトバチルス  ファルシミナス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｆａｒｃｉｍｉｎｕｓ）、ラクトバチルス  ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒｈａｍｎｏｓｕｓ）、ペディオコッカス  ダムノサス（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ  ｄａｍｎｏｓｕｓｕ）、ペディオコッカス  ハロフィラス（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ  ｈａｌｏｐｈｉｌｕｓ）、ペディオコッカス  パルバラス（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ  ｐａｒｖｕｌｕｓ）、ペディオコッカス  ペントサセウス（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｅｎｔｏｓａｃｅｕｓ）、ビフィドバクテリウム  アドレセンティス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｄｏｌｅｓｃｅｎｔｉｓ）、ビフィドバクテリウム  ビフィダス（（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｂｉｆｉｄｕｓ）、ラクトコッカス  クレモリス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｃｒｅｍｏｒｉｓ）、ラクトコッカス  ラクティス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｌａｃｔｉｓ）、リューコノストック  エノス（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ  ｏｅｎｏｓ）、リューコノストック  ラクティス（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ  ｌａｃｔｉｓ）、リューコノストック  メセンテロイデス（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ  ｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓ）、及び、エンテロコッカス  フェカリス（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃａｌｉｓ）からなる群より選択される少なくともいずれかを使用して得られるブドウ果皮・種子乳酸菌発酵物を含む前記＜１８＞から＜２１＞のいずれかに記載の医薬である。
＜２３＞  メイラード反応により生成した終末糖化産物群（ＡＧＥ）に起因するＴＮＦ−α産生を抑制する作用を有する前記＜１８＞から＜２２＞のいずれかに記載の医薬である。
＜２４＞  チロシナーゼ活性抑制作用を有する前記＜１８＞から＜２２＞のいずれかに記載の医薬である。
＜２５＞  メラニン合成抑制作用を有する前記＜１８＞から＜２２＞のいずれかに記載の医薬である。
＜２６＞  紫外線による皮膚炎症を抑制する作用を有する前記＜１８＞から＜２２＞のいずれかに記載の医薬である。
【００１５】
＜２７＞  メタボリックシンドローム関連症状を改善又は予防するための食品であって、ブドウの果皮及び種子の少なくともいずれかを乳酸菌で発酵させて得られるブドウ果皮・種子乳酸菌発酵物を含むことを特徴とする食品である。
＜２８＞  乾燥した状態のブドウの果皮及び種子の少なくともいずれかを乳酸菌で発酵させて得られるブドウ果皮・種子乳酸菌発酵物を含む前記＜２７＞に記載の食品である。
＜２９＞  微粉（パウダー）化された状態のブドウの果皮及び種子の少なくともいずれかを乳酸菌で発酵させて得られるブドウ果皮・種子乳酸菌発酵物を含む前記＜２７＞から＜２８＞のいずれかに記載の食品である。
＜３０＞  乾燥粉末（乾燥パウダー）の状態のブドウの果皮及び種子の少なくともいずれかを乳酸菌で発酵させて得られるブドウ果皮・種子乳酸菌発酵物を含む前記＜２７＞から＜２９＞のいずれかに記載の食品である。
＜３１＞  乳酸菌として、ラクトバチルス  プランタラム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐｌａｎｔａｒｕｍ）、ラクトバチルス  サリバリウス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓａｌｉｖａｌｉｕｓ）、ラクトバチルス  アミロボラス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｍｙｌｏｖｏｒｕｓ）、ラクトバチルス  カゼイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃａｓｅｉ）、ラクトバチル  キタサトニス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｋｉｔａｓａｔｏｎｉｓｉ）、ラクトバチル  ロイテリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒｅｕｔｅｒｉ）、ラクトバチル  ジョンソニ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｊｈｏｎｓｏｎｉｉ）、ラクトバチルス  アシドフィラス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ）、ラクトバチルス  ブレビス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｂｒｅｖｉｓ）、ラクトバチルス  コリニホルミス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃｏｒｙｎｉｆｏｒｍｉｓ）、ラクトバチルス  カルバタス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃｕｒｖａｔｕｓ）、ラクトバチルス  デルブリュキィ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ）、ラクトバチルス  ファルシミナス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｆａｒｃｉｍｉｎｕｓ）、ラクトバチルス  ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒｈａｍｎｏｓｕｓ）、ペディオコッカス  ダムノサス（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ  ｄａｍｎｏｓｕｓｕ）、ペディオコッカス  ハロフィラス（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ  ｈａｌｏｐｈｉｌｕｓ）、ペディオコッカス  パルバラス（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ  ｐａｒｖｕｌｕｓ）、ペディオコッカス  ペントサセウス（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｅｎｔｏｓａｃｅｕｓ）、ビフィドバクテリウム  アドレセンティス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｄｏｌｅｓｃｅｎｔｉｓ）、ビフィドバクテリウム  ビフィダス（（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｂｉｆｉｄｕｓ）、ラクトコッカス  クレモリス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｃｒｅｍｏｒｉｓ）、ラクトコッカス  ラクティス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｌａｃｔｉｓ）、リューコノストック  エノス（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ  ｏｅｎｏｓ）、リューコノストック  ラクティス（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ  ｌａｃｔｉｓ）、リューコノストック  メセンテロイデス（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ  ｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓ）、及び、エンテロコッカス  フェカリス（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃａｌｉｓ）からなる群より選択される少なくともいずれかを使用して得られるブドウ果皮・種子乳酸菌発酵物を含む前記＜２７＞から＜３０＞のいずれかに記載の食品である。
＜３２＞  II型糖尿病の改善又は予防に用いられる前記＜２７＞から＜３１＞のいずれかに記載の食品である。
＜３３＞  高脂血症の改善又は予防に用いられる前記＜２７＞から＜３１＞のいずれかに記載の食品である。
＜３４＞  肥満の改善又は予防に用いられる前記＜２７＞から＜３１＞のいずれかに記載の食品である。
＜３５＞  血中グルコース濃度を低下させる作用を有する前記＜２７＞から＜３１＞のいずれかに記載の食品である。
＜３６＞  血中トリグリセリド濃度を低下させる作用を有する前記＜２７＞から＜３１＞のいずれかに記載の食品である。
＜３７＞  腹腔内脂肪重量を低下させる作用を有する前記＜２７＞から＜３１＞のいずれかにに記載の食品である。
＜３８＞  血中アディポネクチン濃度を上昇させる作用を有する前記＜２７＞から＜３１＞のいずれかに記載の食品である。
【００１６】
＜３９＞  皮膚の美白・老化防止のための食品であって、ブドウの果皮及び種子の少なくともいずれかを乳酸菌で発酵させて得られるブドウ果皮・種子乳酸菌発酵物を含むことを特徴とする食品である。
＜４０＞  乾燥した状態のブドウの果皮及び種子の少なくともいずれかを乳酸菌で発酵させて得られるブドウ果皮・種子乳酸菌発酵物を含む前記＜３９＞に記載の食品である。
＜４１＞  微粉（パウダー）化された状態のブドウの果皮及び種子の少なくともいずれかを乳酸菌で発酵させて得られるブドウ果皮・種子乳酸菌発酵物を含む前記＜３９＞から＜４０＞のいずれかに記載の食品である。
＜４２＞  乾燥粉末（乾燥パウダー）の状態のブドウの果皮及び種子の少なくともいずれかを乳酸菌で発酵させて得られるブドウ果皮・種子乳酸菌発酵物を含む前記＜３９＞から＜４１＞のいずれかに記載の食品である。
＜４３＞  乳酸菌として、ラクトバチルス  プランタラム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐｌａｎｔａｒｕｍ）、ラクトバチルス  サリバリウス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓａｌｉｖａｌｉｕｓ）、ラクトバチルス  アミロボラス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｍｙｌｏｖｏｒｕｓ）、ラクトバチルス  カゼイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃａｓｅｉ）、ラクトバチル  キタサトニス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｋｉｔａｓａｔｏｎｉｓｉ）、ラクトバチル  ロイテリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒｅｕｔｅｒｉ）、ラクトバチル  ジョンソニ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｊｈｏｎｓｏｎｉｉ）、ラクトバチルス  アシドフィラス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ）、ラクトバチルス  ブレビス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｂｒｅｖｉｓ）、ラクトバチルス  コリニホルミス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃｏｒｙｎｉｆｏｒｍｉｓ）、ラクトバチルス  カルバタス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃｕｒｖａｔｕｓ）、ラクトバチルス  デルブリュキィ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ）、ラクトバチルス  ファルシミナス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｆａｒｃｉｍｉｎｕｓ）、ラクトバチルス  ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒｈａｍｎｏｓｕｓ）、ペディオコッカス  ダムノサス（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ  ｄａｍｎｏｓｕｓｕ）、ペディオコッカス  ハロフィラス（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ  ｈａｌｏｐｈｉｌｕｓ）、ペディオコッカス  パルバラス（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ  ｐａｒｖｕｌｕｓ）、ペディオコッカス  ペントサセウス（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｅｎｔｏｓａｃｅｕｓ）、ビフィドバクテリウム  アドレセンティス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｄｏｌｅｓｃｅｎｔｉｓ）、ビフィドバクテリウム  ビフィダス（（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｂｉｆｉｄｕｓ）、ラクトコッカス  クレモリス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｃｒｅｍｏｒｉｓ）、ラクトコッカス  ラクティス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｌａｃｔｉｓ）、リューコノストック  エノス（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ  ｏｅｎｏｓ）、リューコノストック  ラクティス（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ  ｌａｃｔｉｓ）、リューコノストック  メセンテロイデス（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ  ｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓ）、及び、エンテロコッカス  フェカリス（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃａｌｉｓ）からなる群より選択される少なくともいずれかを使用して得られるブドウ果皮・種子乳酸菌発酵物を含む前記＜３９＞から＜４２＞のいずれかに記載の食品である。
＜４４＞  メイラード反応により生成した終末糖化産物群（ＡＧＥ）に起因するＴＮＦ−α産生を抑制する作用を有する前記＜３９＞から＜４３＞のいずれかに記載の食品である。
＜４５＞  チロシナーゼ活性抑制作用を有する前記＜３９＞から＜４３＞のいずれかに記載の食品である。
＜４６＞  メラニン合成抑制作用を有する前記＜３９＞から＜４３＞のいずれかに記載の食品である。
＜４７＞  紫外線による皮膚炎症を抑制する作用を有する前記＜３９＞から＜４３＞のいずれかに記載の食品である。
【００１７】
本発明によれば、前記従来における諸問題を解決し、前記目的を達成することができ、ブドウの果皮及び種子の少なくともいずれかを利用し、有用なブドウ果皮・種子乳酸菌発酵物を提供することができる。更に、前記ブドウ果皮・種子乳酸菌発酵物を利用し、II型糖尿病、高脂血症、肥満等のメタボリックシンドローム関連症状を効果的、かつ安全に治療、改善、又は予防することが可能な医薬及び食品、並びに、皮膚の美白・老化防止に効果的、かつ安全な医薬及び食品を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
【図１】図１は、実施例２において、本発明のブドウ果皮・種子乳酸菌発酵物（乳酸菌発酵ブドウ果皮・種子）を作製する際の至適乳酸菌量を検討した結果を示したグラフである。
【図２】図２は、実施例３において、本発明のブドウ果皮・種子乳酸菌発酵物（乳酸菌発酵ブドウ果皮・種子）を作製する際の至適培養時間を検討した結果を示したグラフである。
【図３】図３は、実施例４において、各検体のアミラーゼ酵素活性阻害能力を比較した結果を示したグラフである。
【図４】図４は、実施例５において、各検体のグルコシダーゼ酵素活性阻害能力を比較した結果を示したグラフである。
【図５】図５は、実施例６において、各検体のスクロース負荷試験による血糖値上昇抑制能力を比較した結果を示したグラフである。
【図６】図６は、実施例７において、各検体のデンプン負荷試験による血糖値上昇抑制能力を比較した結果を示したグラフである。
【図７】図７は、実施例８において、各検体のオリーブオイル負荷試験による血中トリグリグリセリド（ＴＧ）上昇抑制能力を比較した結果を示したグラフである。
【図８Ａ】図８Ａは、実施例９における、各群のマウス（９週齢）の外観の違いを示した写真像である。
【図８Ｂ】図８Ｂは、実施例９における、各群のマウスの体重増加の違いを示したグラフである。
【図８Ｃ】図８Ｃは、実施例９における、各群のマウス（９週齢）の腹腔内脂肪重量の違いを示したグラフである。
【図８Ｄ】図８Ｄは、実施例９における、各群のマウスの血清中トリグリセリド(ＴＧ)濃度増加の違いを示したグラフである。
【図８Ｅ】図８Ｅは、実施例９における、各群のマウスの血清中グルコース濃度増加の違いを示したグラフである。
【図８Ｆ】図８Ｆは、実施例９における、各群のマウス（９週齢）の血清中アディポネクチン濃度の違いを示したグラフである。
【図９】図９は、実施例１０における、乳酸菌発酵ブドウ果皮・種子検体のアディポネクチン産生誘導能力を示したグラフである。
【図１０】図１０は、実施例１１における、乳酸菌発酵ブドウ果皮・種子のＴＮＦ−αによるアディポネクチン産生抑制に対する拮抗能力を示したグラフである。
【図１１】図１１は、実施例１２において、各検体のＡＧＥ刺激マクロファージからのＴＮＦ−α産生抑制能力を比較した結果を示したグラフである。
【図１２】図１２は、実施例１３において、各検体のＢ１６メラノーマ細胞の細胞内チロシナーゼ活性抑制能力を比較した結果を示したグラフである。
【図１３】図１３は、実施例１４において、各検体のＢ１６メラノーマ細胞のメラニン合成抑制能力を比較した結果を示したグラフである。
【図１４】図１４は、実施例１５において、各検体の紫外線照射マウスにおける皮膚炎症抑制能力を比較した結果を示したグラフである。
【図１５】図１５は、実施例１６における、本発明のブドウ果皮・種子乳酸菌発酵物（乳酸菌発酵ブドウ果皮・種子）検体の分離・分画方法を示した図である。
【図１６Ａ】図１６Ａは、実施例１６における、酢酸エチル画分（ＥｔＯＡｃ  ｆｒ）のＴＬＣ結果を示した図である。
【図１６Ｂ】図１６Ｂは、実施例１６における、酢酸エチル画分（ＥｔＯＡｃ  ｆｒ）のＨＰＬＣ結果を示した図である。
【図１７Ａ】図１７Ａは、実施例１６における、クロロホルム画分（ＣＨＣｌ３  ｆｒ）のＴＬＣ結果を示した図である。
【図１７Ｂ】図１７Ｂは、実施例１６における、クロロホルム画分（ＣＨＣｌ３  ｆｒ）のＨＰＬＣ結果を示した図である。
【図１８Ａ】図１８Ａは、実施例１６における、ｎ−ブタノール画分（ｎ−ＢｕＯＨ  ｆｒ）のＴＬＣ結果を示した図である。
【図１８Ｂ】図１８Ｂは、実施例１６における、ｎ−ブタノール画分（ｎ−ＢｕＯＨ  ｆｒ）のＨＰＬＣ結果を示した図である。
【図１９Ａ】図１９Ａは、実施例１６における、メタノール画分（ＭｅＯＨ  ｆｒ）のＴＬＣ結果を示した図である。
【図１９Ｂ】図１９Ｂは、実施例１６における、メタノール画分（ＭｅＯＨ  ｆｒ）のＨＰＬＣ結果を示した図である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１９】
（ブドウ果皮・種子乳酸菌発酵物）
本発明のブドウ果皮・種子乳酸菌発酵物は、ブドウの果皮及び種子の少なくともいずれか（果皮・種子）を乳酸菌で発酵させて得られることを特徴とする。なお、本明細書中において、前記ブドウ果皮・種子乳酸菌発酵物を、「乳酸菌発酵ブドウ果皮・種子」等と称することがある。【００２０】
＜ブドウ＞
前記ブドウとしては、ブドウ科（Ｖｉｔａｃｅａｅ）ブドウ属（Ｖｉｔｉｓ）に属する植物であれば特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、ヨーロッパ・ブドウ（ヴィティス・ヴィニフェラ（Ｖｉｔｉｓ  ｖｉｎｉｆｅｒａ））、アメリカ・ブドウ（ヴィティス・ラブルスカ（Ｖｉｔｉｓ  ｌａｂｒｕｓｃａ））、ヴィティス・アムレンシス（Ｖｉｔｉｓ  ａｍｕｒｅｎｓｉｓ）、ヴィティス・コイネティアエ（Ｖｉｔｉｓ  ｃｏｉｇｎｅｔｉａｅ）、これらの交雑種などが挙げられる。前記ブドウの品種としても、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、甲州（Ｋｏｓｈｕ）、シャルドネ（Ｃｈａｒｄｏｎｎａｙ）、ミュスカ（Ｍｕｓｃａｔ）、ソーヴィニヨン・ブラン（Ｓａｕｖｉｇｎｏｎ  Ｂｌａｎｃ）、セミヨン（Ｓｅｍｉｌｌｏｎ）、リースリング（Ｒｉｅｓｌｉｎｇ）、シルヴァナアー（Ｓｉｌｖａｎｅｒ）、ミューラ・トゥルガウ（Ｍｕｌｌｅｒ−Ｔｈｕｒｇａｕ）、ケルナー（Ｋｅｒｎｅｒ）、ゲヴュルツトラミネール（Ｇｅｗｕｒｚｔｒａｍｉｎｅｒ）、シャスラ（Ｃｈａｓｓｅｌａｓ）、シュナン・ブラン（Ｃｈｅｎｉｎ  Ｂｌａｎｃ）、セミヨン（Ｓｅｍｉｌｌｏｎ）、デラウェア（Ｄｅｌａｗａｒｅ）、バッカス（Ｂａｃｃｈｕｓ）、ピノ・グリ（Ｐｉｎｏｔ  Ｇｒｉｓ）、ピノ・プラン（Ｐｉｎｏｔ  Ｂｌａｎｃ）、フルミント（Ｆｕｒｍｉｎｎｔ）、ミュスカデ（Ｍｕｓｃａｄｅｔ）、ミュスカデル（Ｍｕｓｃａｄｅｌｌｅ）、リースリング（Ｒｉｅｓｌｉｎｇ）、カベルネ・ソーヴィニヨン（Ｃａｂｅｒｎｅｔ  Ｓａｕｖｉｇｎｏｎ）、マスカット・ベリーＡ（Ｍｕｓｃａｔ  Ｂａｉｌｅｙ  Ａ）、ネッビオーロ（Ｎｅｂｂｉｏｌｏ）、グルナッシュ（Ｇｒｅｎａｃｈｅ）、メルロー（Ｍｅｒｌｏｔ）、シラー（Ｓｙｒａｈ）、ネグロアマーロ（Ｎｅｇｒｏａｍａｒｏ）、サンジョヴェーゼ（Ｓａｎｇｉｏｖｅｓｅ）、タナ（Ｔａｎｎａｔ）、プリミティーボ（Ｐｒｉｍｉｔｉｖｏ）、ブルネエッロ（Ｂｒｕｎｅｌｌｏ）、カベルネ・フラン（Ｃａｂｅｒｎｅｔ  Ｆｒａｎｃ）、ガメイ（Ｇａｍａｙ）、コンコード（Ｃｏｎｃｏｒｄ）、サンジョヴェーゼ（Ｓａｎｇｉｏｖｅｓｅ）、サンソー（Ｃｉｎｓａｕｔ）、ジンファンデル（Ｚｉｎｆａｎｄｅｌ）、セルベル（Ｓｅｉｂｅｌ）、ツヴァイゲルトレーベ（Ｚｗｅｉｇｅｌｔｒｅｂｅ）、テンプラニーリョ（Ｔｅｍｐｒａｎｉｌｌｏ）、バラベーラ（Ｂａｒｂｅｒａ）、ピノ・ノワール（Ｐｉｎｏｔ  Ｎｏｉｒ）、ピノ・ムニエ（Ｐｉｎｏｔ  Ｍｅｕｎｉｅｒ）、プティ・ヴェルドー（Ｐｅｔｉｔ  Ｖｅｒｄｏｔ）、マルヴァジア（Ｍａｌｖａｓｉａ）、マルベック（Ｍａｌｂｅｃ）、ムールヴェードル（Ｍｏｕｒｖｅｒｄｅｒ）、巨峰（ｋｙｏｈｏ）などが挙げられる。【００２１】
＜果皮・種子＞
前記果皮・種子としては、前記したブドウの果皮及び種子の少なくともいずれかであれば、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、前記果皮・種子の状態としては、生の状態であってもよいし、乾燥した状態であってもよい。また、前記果皮・種子のサイズとしては、前記果皮及び種子の少なくともいずれかを採取したそのままの状態であってもよいし、所望の大きさに裁断された状態であってもよいし、微粉（パウダー）化された状態であってもよい。中でも、前記果皮・種子は、後述する乳酸菌を作用させ易くする観点から、乾燥した状態であることが好ましく、また、微粉（パウダー）化された状態であることが好ましい。すなわち、前記果皮・種子は、乾燥粉末（乾燥パウダー）の状態であることが特に好ましい。前記果皮・種子の乾燥粉末（乾燥パウダー）を作製する方法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、公知の手法を用いて行うことができる。前記果皮・種子の乾燥粉末（乾燥パウダー）の平均粒子径としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、例えば、１０〜２００メッシュが好ましい。前記平均粒子径が、１０メッシュ未満であると、発酵物の活性が弱いことがある。一方、前記平均粒子径が前記特に好ましい範囲内であると、強い活性を有する発酵物が得られる点で、有利である。
また、前記ブドウの果皮・種子としては、その入手方法に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、例えば、ワインやジュース等の製造過程で果汁を絞った後のブドウの残り滓を使用することが、コスト性に優れ、かつ、産業廃棄物を減らすことのできる点で、望ましいと考えられる。
また、前記ブドウの果皮・種子としては、前記ブドウの果皮を単独で使用してもよいし、前記ブドウの種子を単独で使用してもよいし、前記ブドウの果皮と種子とを併用してもよい。
ここで、前記ブドウ果皮・種子乳酸菌発酵物の原料としては、その全てが必ずしも前記したブドウの果皮及び種子の少なくともいずれかからなる必要はなく、その少なくとも一部に前記したブドウの果皮及び種子の少なくともいずれかが含まれていればよい。例えば、前記ブドウ果皮・種子乳酸菌発酵物の原料としては、前記ブドウの果皮・種子以外に、前記ブドウの果実、果汁、葉、茎などが適宜含まれていてもよい。前記ブドウの果皮・種子と、前記ブドウの果皮・種子以外との使用量比としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。【００２２】
＜乳酸菌＞
前記乳酸菌としては、発酵によって乳酸を産生する細菌であれば、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、ラクトバチルス属（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）、ペディオコッカス属（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ）、ビフィドバクテリウム属（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、ラクトコッカス属（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ）、リューコノストック属（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ）、エンテロコッカス属（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ）に属する細菌などが挙げられる。前記乳酸菌の種としても、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、中でも、前記したブドウの果皮・種子を炭素源として、効率よく増殖を行うことのできる種を使用することが好ましい。このような好ましい種としては、例えば、ラクトバチルス属として、ラクトバチルス  プランタラム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐｌａｎｔａｒｕｍ）、ラクトバチルス  サリバリウス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓａｌｉｖａｌｉｕｓ）、ラクトバチルス  アミロボラス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｍｙｌｏｖｏｒｕｓ）、ラクトバチルス  カゼイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃａｓｅｉ）、ラクトバチル  キタサトニス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｋｉｔａｓａｔｏｎｉｓｉ）、ラクトバチル  ロイテリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒｅｕｔｅｒｉ）、ラクトバチル  ジョンソニ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｊｈｏｎｓｏｎｉｉ）、ラクトバチルス  アシドフィラス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ）、ラクトバチルス  ブレビス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｂｒｅｖｉｓ）、ラクトバチルス  コリニホルミス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃｏｒｙｎｉｆｏｒｍｉｓ）、ラクトバチルス  カルバタス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃｕｒｖａｔｕｓ）、ラクトバチルス  デルブリュキィ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ）、ラクトバチルス  ファルシミナス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｆａｒｃｉｍｉｎｕｓ）、ラクトバチルス  ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒｈａｍｎｏｓｕｓ）；ペディオコッカス属として、ペディオコッカス  ダムノサス（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ  ｄａｍｎｏｓｕｓｕ）、ペディオコッカス  ハロフィラス（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ  ｈａｌｏｐｈｉｌｕｓ）、ペディオコッカス  パルバラス（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ  ｐａｒｖｕｌｕｓ）、ペディオコッカス  ペントサセウス（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｅｎｔｏｓａｃｅｕｓ）；ビフィドバクテリウム属として、ビフィドバクテリウム  アドレセンティス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｄｏｌｅｓｃｅｎｔｉｓ）、ビフィドバクテリウム  ビフィダス（（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｂｉｆｉｄｕｓ）；ラクトコッカス属として、ラクトコッカス  クレモリス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｃｒｅｍｏｒｉｓ）、ラクトコッカス  ラクティス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｌａｃｔｉｓ）；リューコノストック属として、リューコノストック  エノス（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ  ｏｅｎｏｓ）、リューコノストック  ラクティス（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ  ｌａｃｔｉｓ）、リューコノストック  メセンテロイデス（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ  ｍｅｓｅｎｔｅｒ��ｉｄｅｓ）；エンテロコッカス属として、エンテロコッカス  フェカリス（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃａｌｉｓ）などが挙げられる。中でも、前記乳酸菌の種としては、ラクトバチルス  プランタラム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐｌａｎｔａｒｕｍ）が、効率よく増殖し、得られた発酵物の活性が強い点で、特に好ましい。【００２３】
＜発酵＞
前記発酵は、前記したブドウの果皮・種子を少なくとも一部に含む原料を、前記乳酸菌を用いて発酵させることにより行うことができる。前記発酵の方法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、前記原料に、前記乳酸菌を添加し、培養する方法などが挙げられる。より具体的には、例えば、後述する実施例に記載の方法により前記発酵を行うことができる。【００２４】
前記発酵時の乳酸菌の使用量としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、前記原料１０ｇに対して、１０１２ＣＦＵ以上が好ましく、１０１３ＣＦＵ以上が特に好ましい。前記乳酸菌の使用量が、１０１２ＣＦＵ未満であると、発酵物の活性が弱くなることがある。一方、前記乳酸菌の使用量が前記特に好ましい範囲内であると、強い活性を有する発酵物が得られる点で、有利である。【００２５】
前記発酵時の温度としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、１０〜４０℃が好ましく、１７〜３０℃が特に好ましい。前記温度が、１０℃未満であると、菌の増殖が悪くなることがあり、４０℃を超えると、菌が生育できなくなることがある。一方、前記温度が前記特に好ましい範囲内であると、強い活性を有する発酵物が得られる点で、有利である。【００２６】
前記発酵時間としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、４８〜１４４時間が好ましく、７２時間が特に好ましい。前記発酵時間が、４８時間未満であると、発酵物の活性が弱いことがある。一方、前記発酵時間が、前記特に好ましい範囲内であると、強い活性を有する発酵物が得られる点で、有利である。【００２７】
前記発酵により、本発明のブドウ果皮・種子乳酸菌発酵物を得ることができる。なお、前記ブドウ果皮・種子乳酸菌発酵物は、後述する実施例に示されるように、未発酵のブドウ果皮・種子とは異なる成分からなるものであり、そのため、新規の組成物であるということができる。
前記ブドウ果皮・種子乳酸菌発酵物は、そのままで、又は適宜加工することによって、様々な用途に使用することが可能である。例えば、後述する実施例に示されるように、前記ブドウ果皮・種子乳酸菌発酵物は、優れた血糖値上昇抑制作用、血中トリグリセリド（中性脂肪）上昇抑制作用、肥満抑制作用、血中アディポネクチン上昇作用等を有しており、そのため、前記ブドウ果皮・種子乳酸菌発酵物は、例えば、II型糖尿病、高脂血症、肥満等のメタボリックシンドローム関連症状を治療、改善、又は予防することを目的とした、後述する本発明の第１の医薬及び食品の有効成分として、好適に利用可能である。また、前記ブドウ果皮・種子乳酸菌発酵物は、メイラード反応により生成した終末糖化産物群（ＡＧＥ）に起因するＴＮＦ−α産生を抑制する作用、チロシナーゼ活性抑制作用、メラニン合成抑制作用、紫外線による皮膚炎症を抑制する作用等にも優れ、そのため、前記ブドウ果皮・種子乳酸菌発酵物は、例えば、皮膚の美白・老化防止を目的とした、後述する本発明の第２の医薬及び食品の有効成分としても、好適に利用可能である。【００２８】
（医薬）
本発明の第１の医薬は、メタボリックシンドローム関連症状を治療又は予防するための医薬であって、ブドウの果皮及び種子の少なくともいずれかを乳酸菌で発酵させて得られるブドウ果皮・種子乳酸菌発酵物を含み、必要に応じて適宜その他の成分を含む。
また、本発明の第２の医薬は、皮膚の美白・老化防止のための医薬であって、ブドウの果皮及び種子の少なくともいずれかを乳酸菌で発酵させて得られるブドウ果皮・種子乳酸菌発酵物を含み、必要に応じて適宜その他の成分を含む。
なお、本明細書中において、前記「第１の医薬」及び前記「第２の医薬」を単に「医薬」と総称することがある。【００２９】
＜ブドウ果皮・種子乳酸菌発酵物＞
前記ブドウ果皮・種子乳酸菌発酵物は、ブドウの果皮及び種子の少なくともいずれか（果皮・種子）を乳酸菌で発酵させて得られるものであり、前記「ブドウ」、「果皮・種子」、「乳酸菌」、「発酵」としては、前記した本発明のブドウ果皮・種子乳酸菌発酵物の項目に記載した通りである。したがって、前記医薬におけるブドウ果皮・種子乳酸菌発酵物としては、前記した本発明のブドウ果皮・種子乳酸菌発酵物を好適に使用することができる。
前記医薬中の前記ブドウ果皮・種子乳酸菌発酵物の含有量は、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、また、前記医薬は、前記ブドウ果皮・種子乳酸菌発酵物そのものであってもよい。【００３０】
＜その他の成分＞
前記その他の成分としては、特に制限はなく、本発明の効果を損なわない範囲内で、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、医薬的に許容され得る担体などが挙げられる。前記担体としては、特に制限はなく、例えば、後述する前記医薬の剤型等に応じて適宜選択することができる。また、前記医薬中の前記その他の成分の含有量としても、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。【００３１】
＜剤型＞
前記医薬の剤型としては、特に制限はなく、例えば、所望の投与方法に応じて適宜選択することができ、例えば、経口固形剤（錠剤、被覆錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤等）、経口液剤（内服液剤、シロップ剤、エリキシル剤等）、注射剤（溶液、懸濁液、用事溶解用固形剤等）、坐剤、軟膏剤、貼付剤、ゲル剤、クリーム剤、外用散剤、スプレー剤、吸入散剤などが挙げられる。【００３２】
前記経口固形剤としては、例えば、前記ブドウ果皮・種子乳酸菌発酵物に、賦形剤、更には必要に応じて結合剤、崩壊剤、滑沢剤、着色剤、矯味・矯臭剤等の添加剤を加え、常法により製造することができる。
前記賦形剤としては、例えば、乳糖、白糖、塩化ナトリウム、ブドウ糖、デンプン、炭酸カルシウム、カオリン、微結晶セルロース、珪酸などが挙げられる。前記結合剤としては、例えば、水、エタノール、プロパノール、単シロップ、ブドウ糖液、デンプン液、ゼラチン液、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルスターチ、メチルセルロース、エチルセルロース、シェラック、リン酸カルシウム、ポリビニルピロリドンなどが挙げられる。前記崩壊剤としては、例えば、乾燥デンプン、アルギン酸ナトリウム、カンテン末、炭酸水素ナトリウム、炭酸カルシウム、ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸モノグリセリド、乳糖などが挙げられる。前記滑沢剤としては、例えば、精製タルク、ステアリン酸塩、ホウ砂、ポリエチレングリコールなどが挙げられる。前記着色剤としては、例えば、酸化チタン、酸化鉄などが挙げられる。前記矯味・矯臭剤としては、例えば、白糖、橙皮、クエン酸、酒石酸などが挙げられる。【００３３】
前記経口液剤としては、例えば、前記ブドウ果皮・種子乳酸菌発酵物に、矯味・矯臭剤、緩衝剤、安定化剤等の添加剤を加え、常法により製造することができる。
前記矯味・矯臭剤としては、例えば、白糖、橙皮、クエン酸、酒石酸などが挙げられる。前記緩衝剤としては、例えば、クエン酸ナトリウムなどが挙げられる。前記安定化剤としては、例えば、トラガント、アラビアゴム、ゼラチンなどが挙げられる。【００３４】
前記注射剤としては、例えば、前記ブドウ果皮・種子乳酸菌発酵物に、ｐＨ調節剤、緩衝剤、安定化剤、等張化剤、局所麻酔剤等を添加し、常法により皮下用、筋肉内用、静脈内用等の注射剤を製造することができる。
前記ｐＨ調節剤及び前記緩衝剤としては、例えば、クエン酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、リン酸ナトリウムなどが挙げられる。前記安定化剤としては、例えば、ピロ亜硫酸ナトリウム、ＥＤＴＡ、チオグリコール酸、チオ乳酸などが挙げられる。前記等張化剤としては、例えば、塩化ナトリウム、ブドウ糖などが挙げられる。前記局所麻酔剤としては、例えば、塩酸プロカイン、塩酸リドカインなどが挙げられる。【００３５】
前記坐剤としては、例えば、前記ブドウ果皮・種子乳酸菌発酵物に、ポリエチレングリコール、ラノリン、カカオ脂、脂肪酸トリグリセリド等の公知の坐剤製剤用担体と、必要に応じてツイーン（ＴＷＥＥＮ：登録商標）等の界面活性剤などを加えた後、常法により製造することができる。【００３６】
前記軟膏剤としては、例えば、前記ブドウ果皮・種子乳酸菌発酵物に、公知の基剤、安定剤、湿潤剤、保存剤等を配合し、常法により混合し、製造することができる。
前記基剤としては、例えば、流動パラフィン、白色ワセリン、サラシミツロウ、オクチルドデシルアルコール、パラフィンなどが挙げられる。前記保存剤としては、例えば、パラオキシ安息香酸メチル、パラオキシ安息香酸エチル、パラオキシ安息香酸プロピルなどが挙げられる。【００３７】
前記貼付剤としては、例えば、公知の支持体に前記軟膏剤としてのクリーム剤、ゲル剤、ペースト剤等を、常法により塗布し、製造することができる。前記支持体としては、例えば、綿、スフ、化学繊維からなる織布、不織布、軟質塩化ビニル、ポリエチレン、ポリウレタン等のフィルム、発泡体シートなどが挙げられる。【００３８】
＜投与＞
前記医薬の投与対象としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、ヒト、マウス、ラット、ハムスター、イヌ、ネコ、ウシ、ブタ、サルなどが挙げられる。
また、前記医薬の投与方法としては、特に制限はなく、前記医薬の剤型等に応じて適宜選択することができ、例えば、経口投与、注射による投与などが挙げられる。
また、前記医薬の投与量としては、特に制限はなく、投与対象である患者の年齢、体重、性別、症状等に応じて適宜選択することができるが、ヒト成人１日あたり、有効成分である前記ブドウ果皮・種子乳酸菌発酵物の量として、５０ｍｇ〜５ｇ程度が好ましい。
また、前記医薬の投与頻度としても、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、前記１日あたりの投与量を、１日に１回で投与してもよいし、複数回に分けて投与してもよい。
また、前記医薬の投与時期としても、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、前記医薬は、治療的に投与されてもよいし、予防的に投与されてもよい。【００３９】
＜対象＞
前記第１の医薬の治療又は予防対象としては、特に制限はなく、「メタボリックシンドローム関連症状」の中から、目的に応じて適宜選択することができる。ここで、メタボリックシンドロームとは、一般に、内臓脂肪の蓄積によってインスリン抵抗性の状態が起こり、これによりII型糖尿病（高血糖）、高血圧、高脂血症（例えば、高コレステロール血症、高トリグリセリド血症）、肥満等の、動脈硬化が引き起こされるやすくなる要因が一患者内に複数存在するようになった状態をいう。例えば、２００５年４月に日本内科学会総会において公表された日本における基準では、内臓脂肪の蓄積を反映するウエスト周囲径が、男性で８５ｃｍ以上、女性で９０ｃｍ以上の患者（内臓脂肪面積１００ｃｍ２以上に相当）の中で、（１）血清脂質異常（トリグリセリド値１５０ｍｇ／ｄＬ以上、又はＨＤＬコレステロール値４０ｍｇ／ｄＬ未満）、（２）血圧高値（最高血圧１３０ｍｍＨｇ以上、又は最低血圧８５ｍｍＨｇ以上）（３）高血糖（空腹時血糖値１１０ｍｇ／ｄＬ以上）の３項目のうち２項目以上にあてはまる場合をメタボリックシンドロームと診断すると規定されている。
したがって、前記医薬の治療又は予防対象となる「メタボリックシンドローム関連症状」としては、前記メタボリックシンドロームに関連して起こり得る症状であれば、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、メタボリックシンドロームの要因となる内臓脂肪蓄積、インスリン抵抗性といった状態や、これらの状態から導かれるII型糖尿病（高血糖）、高血圧、高脂血症（例えば、高コレステロール血症、高トリグリセリド血症）、肥満等の症状、また、これらの症状が進行した結果導かれる動脈硬化、心筋梗塞、脳卒中などが挙げられる。前記医薬は、本発明の前記ブドウ果皮・種子乳酸菌発酵物を少なくとも含むので、優れた血糖値上昇抑制作用、血中トリグリセリド上昇抑制作用、肥満抑制作用、血中アディポネクチン上昇作用等を有しており、したがって、前記した各種メタボリックシンドローム関連症状の中でも、II型糖尿病（高血糖）、高脂血症（特に高トリグリセリド血症）、肥満の治療又は予防に、特に好適である。【００４０】
また、前記第２の医薬は、皮膚の美白・老化防止を目的とした医薬であり、したがって、前記医薬の対象となる症状としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、皮膚の炎症、硬化、色素沈着、しわ形成、はり・つやの喪失、日焼け、かさつき、シミ、ソバカス、にきび、ふきでものなどが挙げられる。前記医薬は、本発明の前記ブドウ果皮・種子乳酸菌発酵物を少なくとも含むので、メイラード反応により生成した終末糖化産物群（ＡＧＥ）に起因するＴＮＦ−α産生を抑制する作用、チロシナーゼ活性抑制作用、メラニン合成抑制作用、紫外線による皮膚炎症を抑制する作用等に優れ、そのため、皮膚の美白・老化防止に効果的である。【００４１】
（食品）
本発明の第１の食品は、メタボリックシンドローム関連症状を改善又は予防するための食品であって、ブドウの果皮及び種子の少なくともいずれかを乳酸菌で発酵させて得られるブドウ果皮・種子乳酸菌発酵物を含み、必要に応じて適宜その他の成分を含む。
また、本発明の第２の食品は、皮膚の美白・老化防止のための食品であって、ブドウの果皮及び種子の少なくともいずれかを乳酸菌で発酵させて得られるブドウ果皮・種子乳酸菌発酵物を含み、必要に応じて適宜その他の成分を含む。
なお、本明細書中において、前記「第１の食品」及び前記「第２の食品」を単に「食品」と総称することがある。【００４２】
＜ブドウ果皮・種子乳酸菌発酵物＞
前記ブドウ果皮・種子乳酸菌発酵物は、ブドウの果皮及び種子の少なくともいずれか（果皮・種子）を乳酸菌で発酵させて得られるものであり、前記「ブドウ」、「果皮・種子」、「乳酸菌」、「発酵」としては、前記した本発明のブドウ果皮・種子乳酸菌発酵物の項目に記載した通りである。したがって、前記食品におけるブドウ果皮・種子乳酸菌発酵物としては、前記した本発明のブドウ果皮・種子乳酸菌発酵物を好適に使用することができる。
前記食品中の前記ブドウ果皮・種子乳酸菌発酵物の含有量は、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、また、前記食品は、前記ブドウ果皮・種子乳酸菌発酵物そのものであってもよい。【００４３】
＜その他の成分＞
前記その他の成分としては、特に制限はなく、本発明の効果を損なわない範囲内で、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、各種食品原料などが挙げられる。前記食品原料としても、特に制限はなく、例えば、後述する前記食品の種類等に応じて適宜選択することができる。また、前記食品中の前記その他の成分の含有量としても、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。【００４４】
＜食品の種類＞
前記食品の種類としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、ゼリー、キャンディー、チョコレート、ビスケット、グミ等の菓子類；柿の種、おかき等のおつまみ類；緑茶、紅茶、コーヒー、清涼飲料等の嗜好飲料；原料乳、ヨーグルト、アイスクリーム等の乳製品；野菜飲料、果実飲料、ジャム類等の野菜・果実加工品；スープ等の液体食品；パン類、麺類等の穀物加工品；各種調味料；ハンバーグ、コロッケ、かまぼこ、さつま揚げ等の肉・魚介類加工品；などが挙げられる。これらの食品の製造方法としては、特に制限はなく、例えば、通常の各種食品の製造方法に応じて、適宜製造することができる。
また、前記食品は、例えば、錠剤、顆粒剤、カプセル剤等の経口固形剤や、内服液剤、シロップ剤等の経口液剤として製造されたものであってもよい。前記経口固形剤、経口液剤の製造方法は、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、前記した医薬の経口固形剤、経口液剤の製造方法にならい、製造することができる。【００４５】
前記食品の投与（摂取）形態としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、前記した本発明の医薬の投与形態（投与対象、投与方法、投与量、投与時期）に準じて、適宜投与（摂取）することができる。
また、前記食品の改善又は予防対象としても、特に制限はなく、前記した本発明の医薬の治療又は予防対象と同様に適宜選択することができる。【００４６】
前記第１の食品は、本発明の前記ブドウ果皮・種子乳酸菌発酵物を少なくとも含むので、優れた血糖値上昇抑制作用、血中トリグリセリド上昇抑制作用、肥満抑制作用、血中アディポネクチン上昇作用等を有しており、したがって、前記食品は、II型糖尿病（高血糖）、高脂血症（特に高トリグリセリド血症）、肥満等のメタボリックシンドローム関連症状を改善又は予防する目的で摂取される機能性食品として、特に有用である。
より具体的には、例えば、メタボリックシンドローム関連症状を引き起こし易くする原因の一つであると考えられる高脂肪食の調理時又は摂取時に、前記食品を調味料として用いることにより摂取する態様や、高脂肪食の摂取前又は摂取後に、前記食品を錠剤やカプセル剤型のサプリメントとして摂取する態様などが好適であると考えられる。【００４７】
また、前記第２の食品は、本発明の前記ブドウ果皮・種子乳酸菌発酵物を少なくとも含むので、メイラード反応により生成した終末糖化産物群（ＡＧＥ）に起因するＴＮＦ−α産生を抑制する作用、チロシナーゼ活性抑制作用、メラニン合成抑制作用、紫外線による皮膚炎症を抑制する作用等に優れ、そのため、皮膚の美白・老化防止を目的として摂取される機能性食品として、特に有用である。
より具体的には、例えば、前記食品を錠剤やカプセル剤型のサプリメントとして摂取する態様などが好適であると考えられる。【００４８】
[効果]
本発明によれば、様々な用途に好適なブドウ果皮・種子乳酸菌発酵物を提供することができ、更に、前記ブドウ果皮・種子乳酸菌発酵物を利用した、II型糖尿病、高脂血症、肥満等のメタボリックシンドローム関連症状を治療、改善又は予防することが可能な医薬及び食品、並びに、皮膚の美白・老化防止に効果的、かつ安全な医薬及び食品を提供することができる。
本発明のブドウ果皮・種子乳酸菌発酵物、並びに前記ブドウ果皮・種子乳酸菌発酵物を含む本発明の医薬及び食品は、従来は廃棄されていたブドウの果皮や種子を有効利用できることから、環境性の観点からも優れたものであるということができる。また、本発明のブドウ果皮・種子乳酸菌発酵物は、抽出、精製等したものではなく、より自然食品に近い。そのため、前記ブドウ果皮・種子乳酸菌発酵物を含む本発明の医薬及び食品は、前記したようなメタボリックシンドローム関連症状の治療、改善、予防効果や、皮膚の美白・老化防止効果に優れるのみならず、安全性にも極めて優れたものであるということができる。
【実施例】
【００４９】
以下に実施例を挙げて本発明を具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例に何ら限定されるものではない。【００５０】
（実施例１：至適乳酸菌のスクリーニング）
本発明のブドウ果皮・種子乳酸菌発酵物（乳酸菌発酵ブドウ果皮・種子）の作製に好適な乳酸菌を選択するため、以下のようにして至適乳酸菌のスクリーニングを行った。
甲州ブドウの果皮及び種子を粉砕し、ブドウ果皮・種子乾燥パウダーを作製し、１質量％になるようにＰＢＳ  ５０ｍｌに懸濁後、表１に示す各乳酸菌を１×１０６ＣＦＵ／ｍｌの濃度になるよう接種した。３７℃、４８時間培養後、培養液を回収し、ｐＨをｐＨメーターで測定した。
結果を表１に示す。各菌の添加前のｐＨ７．０に対し、いずれの乳酸菌の添加培養後においてもｐＨの減少が認められた。中でも、ラクトバチルス  プランタラム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐｌａｎｔａｒｕｍ）、ラクトバチルス  サリバリウス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓａｌｉｖａｌｉｕｓ）、ラクトバチルス  アミロボラス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｍｙｌｏｖｏｒｕｓ）、ラクトバチルス  カゼイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃａｓｅｉ）、ペディオコッカス  ペントサセウス（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｅｎｔｏｓａｃｅｕｓ）の添加培養後においては顕著なｐＨの減少が認められ、これらの乳酸菌はブドウ果皮及び種子を炭素源としてよく増殖することが示された（表１）。
なお、以降の実施例において、乳酸菌発酵ブドウ果皮・種子の検体の作製は、特に記す場合を除き、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐｌａｎｔａｒｕｍ（ＫＵ１４６）を用いて行った。【００５１】
【表１】
2008093670.tif 000002
【００５２】
（実施例２：添加乳酸菌量の検討）
本発明のブドウ果皮・種子乳酸菌発酵物（乳酸菌発酵ブドウ果皮・種子）の作製に好適な乳酸菌の添加量を、以下のようにして検討した。
甲州ブドウの果皮及び種子を粉砕し、ブドウ果皮・種子乾燥パウダーを作製し、１０質量％になるようにＰＢＳ  ２０ｍｌに懸濁後、図１に表示する各量の乳酸菌を添加して、５日間、３７℃で培養した。得られた各検体の生理活性について、α−グルコシダーゼ酵素阻害活性を指標に検討した。α−グルコシダーゼ活性の測定は酵素基質法にて行った。すなわち、蒸留水で１０ｍｇ／ｍｌの濃度に調整した各検体１０ｍｌに、０．０７Ｕ／ｍｌのαグルコシダーゼ溶液（シグマ社）５０ｍｌを加え、５分間反応させた後、５ｍＭのｐ−ｎｉｔｒｏｐｈｅｎｙｌ−ａ−ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｅ（ナカライテスク株式会社）溶液５０ｍｌを加えた。５分間反応させた後、波長４０５ｎｍで吸光度を測定した。
結果を図１に示す。測定値は検体の代わりに蒸留水で行ったときの値（ｃｏｎｔｒｏｌ）を１００％とし、ｃｏｎｔｒｏｌに対する％を縦軸に示した。添加乳酸菌１０９ＣＦＵ／ｍｌの濃度から酵素阻害活性が認められ、１０１１ＣＦＵ／ｍｌでプラトーに達していた（図１）。【００５３】
（実施例３：培養時間の検討）
本発明のブドウ果皮・種子乳酸菌発酵物（乳酸菌発酵ブドウ果皮・種子）の作製に好適な培養時間を、以下のようにして検討した。
甲州ブドウの果皮及び種子を粉砕し、ブドウ果皮・種子乾燥パウダーを作製し、１０質量％になるようにＰＢＳ  ２０ｍｌに懸濁後、１０１１ＣＦＵ／ｍｌの乳酸菌を添加して、１日から６日間、３７℃で培養した。得られた各検体の生理活性について、α−グルコシダーゼ酵素阻害活性を指標に検討した。α−グルコシダーゼの活性測定については実施例２と同様に行った。
結果を図２に示す。測定値は検体の代わりに蒸留水で行ったときの値（ｃｏｎｔｒｏｌ）を１００％とし、ｃｏｎｔｒｏｌに対する％を縦軸に示した。培養２日目から強い酵素阻害活性が認められ、３日目以降プラトーに達していた（図２）。【００５４】
[検体作製法]
実施例１〜３の結果から、以降の実施例におけるブドウ果皮・種子乳酸菌発酵物（乳酸菌発酵ブドウ果皮・種子）の検体の作製は、特に記す場合を除き、以下の方法で行った。
甲州ブドウの果皮及び種子を粉砕し、ブドウ果皮・種子乾燥パウダーを作製し、１０質量％になるようにＰＢＳに懸濁後、乳酸菌（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐｌａｎｔａｒｕｍ（ＫＵ１４６））を１×１０１１ＣＦＵ／ｍｌの濃度になるよう接種した。３７℃、４８時間（２日間）培養後、培養液を回収し、８０℃、２時間熱処理した。得られた検体は蒸留水で希釈し、各実施例における所望の濃度に調整した。【００５５】
（実施例４：アミラーゼ酵素阻害作用）
本発明のブドウ果皮・種子乳酸菌発酵物（乳酸菌発酵ブドウ果皮・種子）のアミラーゼ酵素阻害作用を、以下のようにして検討した。
α−アミラーゼ活性の測定は市販のアミラーゼテストワコー（和光純薬工業株式会社）を参考に行った。すなわち、蒸留水で２．５ｍｇ／ｍｌの濃度に調整した各検体２０ｍｌに、７Ｕ／ｍｌのα−アミラーゼ溶液（和光純薬工業株式会社）５０ｍｌを加え、５分間反応させた後、基質緩衝液（４％デンプン溶液）５０ｍｌを加えた。７．５分間反応させた後、発色液（０．０１Ｎ  ヨウ素液）５０ｍｌ、及び蒸留水１５０ｍｌを加え、波長４５０ｎｍで吸光度を測定した。なお、使用した各検体の詳細は以下の通りである。
１群（無処理ブドウ果皮・種子粉末）：前記[検体作製法]において使用したブドウ果皮・種子乾燥パウダーを検体として使用した（比較対照群）。
２群（ブドウ果皮・種子＋乳酸菌（発酵））：前記[検体作製法]により作製された乳酸菌発酵ブドウ果皮・種子を検体として使用した（実験群）。
３群（ブドウ果皮・種子＋乳酸菌（未発酵））：前記[検体作製法]において、生きた乳酸菌の代わりに、８０℃、２時間の熱処理で殺菌した乳酸菌の死菌を接種し、作製したものを検体として使用した（比較対照群）。
４群（乳酸菌のみ）：前記[検体作製法]において使用した乳酸菌（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐｌａｎｔａｒｕｍ（ＫＵ１４６））のみを検体として使用した（比較対照群）。
結果を図３に示す。測定値は検体の代わりに蒸留水で行ったときの値（ｃｏｎｔｒｏｌ）を１００％とし、ｃｏｎｔｒｏｌに対する％を縦軸に示した。図３の結果より、乳酸菌発酵ブドウ果皮・種子検体（２群）は、多糖類から２糖類に変換する酵素であるアミラーゼの活性を効果的に抑制したことが判る。すなわち、乳酸菌発酵ブドウ果皮・種子の摂取によって、食事によって取り込まれた多糖類は、グルコースに変換されることなく体外へ排出されることが考えられる。このことから、乳酸菌発酵ブドウ果皮・種子は、食後の血糖値の上昇を抑制することができ、糖尿病の予防や治療に有効であると判定された。一方、乳酸菌発酵ブドウ果皮・種子以外の検体ではこの作用は認められず、乳酸菌によるブドウ果皮・種子の発酵が重要であることが判る。【００５６】
（実施例５：グルコシダーゼ酵素阻害作用）
本発明のブドウ果皮・種子乳酸菌発酵物（乳酸菌発酵ブドウ果皮・種子）のグルコシダーゼ酵素阻害作用を、以下のようにして検討した。
α−グルコシダーゼ活性の測定は酵素基質法にて行った。すなわち、蒸留水で１０ｍｇ／ｍｌの濃度に調整した各検体１０ｍｌに、０．０７Ｕ／ｍｌのα−グルコシダーゼ溶液（シグマ社）５０ｍｌを加え、５分間反応させた後、５ｍＭのｐ−ｎｉｔｒｏｐｈｅｎｙｌ−ａ−ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｅ（ナカライテスク株式会社）溶液  ５０ｍｌを加えた。５分間反応させた後、波長４０５ｎｍで吸光度を測定した。なお、使用した各検体の詳細は実施例４と同様である。
結果を図４に示す。測定値は検体の代わりに蒸留水で行ったときの値（ｃｏｎｔｒｏｌ）を１００％とし、ｃｏｎｔｒｏｌに対する％を縦軸に示した。図４の結果より、乳酸菌発酵ブドウ果皮・種子検体（２群）は、２糖類からグルコースに変換する酵素であるグルコシダーゼの活性を効果的に抑制したことが判る。すなわち、乳酸菌発酵ブドウ果皮・種子の摂取によって、食事によって取り込まれた２糖類は、グルコースに変換されることなく体外へ排出されることが考えられる。このことから、乳酸菌発酵ブドウ果皮・種子は、食後の血糖値の上昇を抑制することができ、糖尿病の予防や治療に有効であると判定された。一方、乳酸菌発酵ブドウ果皮・種子以外の検体ではこの作用は認められず、乳酸菌によるブドウ果皮・種子の発酵が重要であることが判る。【００５７】
（実施例６：スクロース負荷による過血糖抑制作用）
本発明のブドウ果皮・種子乳酸菌発酵物（乳酸菌発酵ブドウ果皮・種子）のスクロース負荷による過血糖抑制作用を、以下のようにして検討した。
６週齢、雄性、ＩＣＲマウス（日本ＳＬＣ株式会社）を、２０時間絶食させた後、蒸留水に懸濁した各検体１００ｍｇ／ｋｇを、胃ゾンデを用いて強制経口投与した。更に、蒸留水に溶解したスクロース（和光純薬工業株式会社）を４ｇ／ｋｇで経口投与し、投与３０、６０、９０分後にヘマトクリット毛細管（テルモ株式会社）を用い、眼底静脈より採血を行った。血液は２，５００ｒｐｍ、１０分間遠心分離後、血清を回収し、グルコースＣＩＩテストワコー（和光純薬工業株式会社）を用いてグルコース濃度を測定した。なお、使用した各検体の詳細は実施例４と同様である。また、コントロールとしては各検体の代わりに蒸留水のみを投与した。
結果を図５に示す。コントロール群では、２糖類であるスクロースは、体内の酵素であるグルコシダーゼによりグルコース分解され、腸管より吸収され、投与３０分後では急激な血中グルコースの上昇が認められた。一方で、スクロースと同時に乳酸菌発酵ブドウ果皮・種子検体を投与することにより、血中でのグルコースの上昇は緩やかとなり、投与３０分、９０分後では有意な血中グルコース濃度の抑制が認められた（図５、―○―）。このことから、乳酸菌発酵ブドウ果皮・種子は、食後の血糖値の上昇を抑制することができ、糖尿病の予防や治療に有効であると判定された。一方、乳酸菌発酵ブドウ果皮・種子以外の検体ではこの作用は認められず、乳酸菌によるブドウ果皮・種子の発酵が重要であることが判る。【００５８】
（実施例７：デンプン負荷による過血糖抑制作用）
本発明のブドウ果皮・種子乳酸菌発酵物（乳酸菌発酵ブドウ果皮・種子）のデンプン負荷による過血糖抑制作用を、以下のようにして検討した。
６週齢、雄性、ＩＣＲマウス（日本ＳＬＣ株式会社）を、２０時間絶食させた後、蒸留水に懸濁した各検体１００ｍｇ／ｋｇを、胃ゾンデを用いて強制経口投与した。更に、蒸留水に溶解したポテトデンプン（シグマ社）を４ｇ／ｋｇで経口投与し、投与３０、６０、９０分後にヘマトクリット毛細管（テルモ株式会社）を用い、眼底静脈より採血を行った。血液は２，５００ｒｐｍ、１０分間遠心分離後、血清を回収し、グルコースＣＩＩテストワコー（和光純薬工業株式会社）を用いてグルコース濃度を測定した。なお、使用した各検体の詳細は実施例４と同様である。また、コントロールとしては各検体の代わりに蒸留水のみを投与した。
結果を図６に示す。コントロール群では、多糖類であるデンプンは、体内の酵素であるアミラーゼ、及びグルコシダーゼによりグルコース分解され、腸管より吸収され、投与３０分後では急激な血中グルコースの上昇が認められた。一方で、デンプンと同時に乳酸菌発酵ブドウ果皮・種子検体を投与することにより、血中でのグルコースの上昇は緩やかとなり、投与３０分、６０分、９０分後において有意な血中グルコース濃度の抑制が認められた（図６、―○―）。このことから、乳酸菌発酵ブドウ果皮・種子は、食後の血糖値の上昇を抑制することができ、糖尿病の予防や治療に有効であると判定された。一方、乳酸菌発酵ブドウ果皮・種子以外の検体ではこの作用は認められず、乳酸菌によるブドウ果皮・種子の発酵が重要であることが判る。【００５９】
（実施例８：オリーブオイル負荷による血中トリグリセリド（ＴＧ）上昇抑制作用）
本発明のブドウ果皮・種子乳酸菌発酵物（乳酸菌発酵ブドウ果皮・種子）のオリーブオイル負荷による血中トリグリセリド（ＴＧ）上昇抑制作用を、以下のようにして検討した。
６週齢、雄性、ＩＣＲマウス（日本ＳＬＣ株式会社）を、２０時間絶食させた後、蒸留水に懸濁した各検体１００ｍｇ／ｋｇを、胃ゾンデを用いて強制経口投与した。検体投与３０分後、オリーブオイル（和光純薬工業株式会社）を５ｍｌ／ｋｇで経口投与し、オリーブオイル投与９０分後に各マウスより血液を回収した。血液は２，５００ｒｐｍ、１０分間遠心分離後、血清を回収し、トリグリセリド濃度をトリグリセライドＥ−テストワコー（和光純薬工業株式会社）を用いて測定した。なお、検体としては、前記[検体作製法]により作製された乳酸菌発酵ブドウ果皮・種子（実験群）、及び、前記[検体作製法]において使用したブドウ果皮・種子乾燥パウダー（無処理ブドウ果皮・種子；比較対照群）を使用した。また、コントロールとしては検体の代わりに蒸留水のみを投与した。
結果を図７に示す。コントロール群では、オリーブオイル投与９０分後において血中ＴＧ濃度の著明な上昇が認められた。一方で、オリーブオイル投与前に乳酸菌発酵ブドウ果皮・種子検体を投与することにより、有意な血中ＴＧ濃度の抑制が認められた（図７）。このことから、乳酸菌発酵ブドウ果皮・種子は、食後の血中ＴＧ濃度の上昇を抑制することができ、高脂血症の予防や治療に有効であると判定された。一方、無処理のブドウ果皮・種子ではこの作用は認められず、乳酸菌によるブドウ果皮・種子の発酵が重要であることが判る。【００６０】
（実施例９：II型糖尿病マウスを用いた抗糖尿病作用）
II型糖尿病モデルマウスとして用いられ、かつ、内臓脂肪蓄積、インスリン抵抗性、肥満、高血糖、高トリグリセリド血症等のメタボリックシンドローム関連症状をきたすことが知られているＫＫＡｙマウスを用い、本発明のブドウ果皮・種子乳酸菌発酵物（乳酸菌発酵ブドウ果皮・種子）のメタボリックシンドローム関連症状に対する効果を、以下のようにして検討した。
５週齢、雄性、ＫＫＡｙ／ＴａＪｃｌマウス（日本クレア株式会社）を用い、蒸留水に懸濁した各検体１５０ｍｇ／ｋｇを、胃ゾンデを用いて１日２回、強制経口投与した。週５回、５週間投与を行い、最終投与翌日に各マウスより血液、及び腹腔内脂肪を回収した。血液は２，５００ｒｐｍ、１０分間遠心分離後、血清を回収し、グルコース及びトリグリセリド濃度を、グルコースＣＩＩテストワコー（和光純薬工業株式会社）及びトリグリセライドＥ−テストワコー（和光純薬工業株式会社）を用いて測定し、更にアディポネクチン濃度を、ＣｉｒｃｕＬｅｘマウスアディポネクチンＥＬＩＳＡキット（ＣｉｒｃｕＬｅｘ；ＣｙｃＬｅｘ社）を用いて測定した。腹腔内脂肪は重量を測定した。なお、検体としては、前記[検体作製法]により作製された乳酸菌発酵ブドウ果皮・種子（実験群）、及び、前記[検体作製法]において使用したブドウ果皮・種子乾燥パウダー（無処理ブドウ果皮・種子；比較対照群）を使用した。また、コントロールとしては検体の代わりに蒸留水のみを投与した。
結果を図８Ａ〜図８Ｆに示す。
図８Ａに９週齢マウスの外観を示す。コントロール群のマウスでは外観の顕著な肥満化が認められたのに対して、乳酸菌発酵ブドウ果皮・種子検体投与群のマウスでは肥満化は認められなかった。
図８Ｂに体重増加について示す。コントロール群においては実験開始時（５週齢）に比べ、５週間後（９週齢）では著明な体重増加が認められた。一方、乳酸菌発酵ブドウ果皮・種子検体投与群では、９週齢において、コントロール群と比べ、有意な体重増加の抑制が認められた。
図８Ｃに９週齢マウスにおける腹腔内脂肪重量について示す。コントロール群と比べ、乳酸菌発酵ブドウ果皮・種子検体投与群のマウスは有意な腹腔内脂肪重量増加の抑制が認められた。
図８Ｄに血清中トリグリセリド(ＴＧ)濃度について示す。コントロール群においては実験開始時（５週齢）に比べ、５週間後（９週齢）では著明な血清中トリグリセリド濃度の増加が認められた。一方、乳酸菌発酵ブドウ果皮・種子検体投与群では、９週齢において、コントロール群と比べ、有意な血清中トリグリセリド濃度増加の抑制が認められた。
図８Ｅに血清中グルコース濃度について示す。コントロール群においては実験開始時（５週齢）に比べ、５週間後（９週齢）では著明な血清中グルコース濃度の増加が認められた。一方、乳酸菌発酵ブドウ果皮・種子検体投与群では、９週齢においてもグルコース濃度の増加は全く認められず、コントロール群と比べ、有意な血清中グルコース濃度増加の抑制が認められた。
図８Ｆに９週齢マウスにおける血清中アディポネクチン濃度について示す。コントロール群と比べ、乳酸菌発酵ブドウ果皮・種子検体投与群のマウスでは、有意なアディポネクチン濃度の上昇が認められた。
肥満に伴い糖尿病を発症し、かつ各種メタボリックシンドローム関連症状を示すＫＫＡｙII型糖尿病モデルマウスにおいて、乳酸菌発酵ブドウ果皮・種子検体を投与することにより、肥満の抑制、血中トリグリセリド上昇の抑制、血糖値上昇の抑制が認められ、更に、抗メタボリックシンドローム因子として注目されているアディポネクチンについては上昇が認められた。これらの結果から、本発明のブドウ果皮・種子乳酸菌発酵物（乳酸菌発酵ブドウ果皮・種子）は、II型糖尿病、高脂血症、肥満等のメタボリックシンドローム関連症状の予防や治療に有効であると判定された。一方、無処理のブドウ果皮・種子ではこれらの作用は認められず、乳酸菌によるブドウ果皮・種子の発酵が重要であることが判る（図８Ｂ〜８Ｆ）。【００６１】
（実施例１０：脂肪細胞からのアディポネクチン産生誘導作用）
本発明のブドウ果皮・種子乳酸菌発酵物（乳酸菌発酵ブドウ果皮・種子）の脂肪細胞からのアディポネクチン産生誘導作用を、以下のようにして検討した。
２×１０５個の脂肪細胞前駆細胞（３Ｔ３−Ｌ１；大日本住友製薬）を２４穴プレートに播種し、脂肪前駆細胞培養用培地（大日本住友製薬株式会社）を用い、３７℃炭酸ガス培養器で３日間培養した。培養後、脂肪細胞分化培地（大日本住友製薬株式会社）に培地交換し、さらに３日間培養して脂肪細胞に分化させた。分化後、脂肪細胞培養用培地（大日本住友製薬株式会社）に培地交換し、７日間培養して実験に使用した。
分化させた脂肪細胞のプレートの各穴に０．１、１ｍｇ／ｍｌの検体を添加し、２４時間３７℃炭酸ガス培養器で培養した。なお、検体としては、前記[検体作製法]により作製された乳酸菌発酵ブドウ果皮・種子を使用した。また、コントロールには同量の精製水を添加した。培養後、プレートを１，０００ｒｐｍ、５分間遠心後、上清を回収し、上清中に含まれるアディポネクチン量をＥＬＩＳＡキット（アディポネクチン  マウスＥＩＡキットｔ；ＭＢＬ社）を用いて測定した。グラフには各群３穴で行った平均値と標準誤差を示した。
結果を図９に示す。乳酸菌発酵ブドウ果皮・種子を添加して培養することにより、用量依存的に脂肪細胞からのアディポネクチン産生量を増加させることができ、１ｍｇ／ｍｌの用量では有意な増加作用が認められた（図９）。メタボリックシンドローム因子として注目されているアディポネクチン産生を誘導する作用を有することから、乳酸菌発酵ブドウ果皮・種子は、II型糖尿病、高脂血症、肥満等のメタボリックシンドローム関連症状の予防や治療に有効であることが判る。【００６２】
（実施例１１：ＴＮＦ−αによるアディポネクチン産生抑制に対する拮抗作用）
本発明のブドウ果皮・種子乳酸菌発酵物（乳酸菌発酵ブドウ果皮・種子）のＴＮＦ−αによるアディポネクチン産生抑制に対する拮抗作用を、以下のようにして検討した。
前記実施例１０と同様にして分化させた脂肪細胞のプレートの各穴に、１ｍｇ／ｍｌの検体及び各濃度のＴＮＦ−αを添加し、２４時間３７℃炭酸ガス培養器で培養した。なお、検体としては、前記[検体作製法]により作製された乳酸菌発酵ブドウ果皮・種子を使用した。また、コントロールにはＴＮＦ−α、及び検体の代わりに同量の精製水を添加した。培養後、プレートを１，０００ｒｐｍ、５分間遠心後、上清を回収し、上清中に含まれるアディポネクチン量をＥＬＩＳＡキットを用いて測定した。
結果を図１０に示す。脂肪細胞をＴＮＦ−αで処理することにより、アディポネクチン産生量の低下が認められた。一方、乳酸菌発酵ブドウ果皮・種子の添加により、ＴＮＦ−α処理によるアディポネクチン産生量低下に対する有意な抑制作用が認められた（図１０）。メタボリックシンドローム因子として注目されているアディポネクチンの産生量低下を抑制する作用を有することから、乳酸菌発酵ブドウ果皮・種子は、II型糖尿病、高脂血症、肥満等のメタボリックシンドローム関連症状の予防や治療に有効であることが判る。【００６３】
（実施例１２：ＡＧＦ刺激マクロファージからのＴＮＦ−α産生抑制作用）
本発明のブドウ果皮・種子乳酸菌発酵物（乳酸菌発酵ブドウ果皮・種子）のＡＧＦ刺激マクロファージからのＴＮＦ−α産生抑制作用を、以下のようにして検討した。
１０週齢、雄性Ｃ５７ＢＬ／６マウス（日本ＳＬＣ株式会社）の腹腔内に１０％チオグリコレート（ディフコ社）を投与し、３日後に腹腔細胞を回収した。細胞をＲＰＭＩ培地（ギブコ社）で洗浄し、１０％牛胎児血清（ＦＣＳ）を含むＲＰＭＩ培地に懸濁して２ｘ１０６ｃｅｌｌｓ／ｍｌの濃度に調整した。４８穴プレートの各穴に細胞液５００μｌを加え、３７℃炭酸ガス培養器で２時間培養後、下記のようにして作製した終末糖化産物群（ＡＧＥ）５０μｌ及び各濃度の検体を添加し、２４時間３７℃炭酸ガス培養器で培養した。なお、検体としては、前記[検体作製法]により作製された乳酸菌発酵ブドウ果皮・種子（実験群）、及び、前記[検体作製法]において使用したブドウ果皮・種子乾燥パウダー（無処理ブドウ果皮・種子；比較対照群）を使用した。また、コントロールの穴には検体の代わりに同量の精製水を加えた。培養終了後、細胞上清を回収し、上清中に含まれるＴＮＦ−α量をＥＬＩＳＡキット（ＢＤ社）を用いて定量した。グラフにはＡＧＥ無添加の吸光度を１としたときのコントロール及び検体処理の値を示した。
−終末糖化産物群（ＡＧＥ）の作製−
Ｊ．Ｖ．Ｖａｌｅｎｃｉａらの方法（非特許文献  Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｂｉｏｃｅｍｉ．２００４；３２４：６８−７８．）に従い行った。すなわち、１０％牛血清アルブミン（ＢＳＡ；ＡＰ社）、及び１０％Ｄ（−）リボース（和光純薬工業株式会社）を等量混合し、３７℃で１４日間反応させ、メイラード反応によりＡＧＥを作製した。ＡＧＥの生成は吸光度計により波長６００ｎｍの吸光度を測定して確認した。
結果を図１１に示す。ＡＧＥ刺激により、腹腔細胞からのＴＮＦ−α産生誘導の増加が認められた。一方、乳酸菌発酵ブドウ果皮・種子の添加により、有意なＴＮＦ−α産生抑制作用が認められた（図１１）。糖とタンパク質とのメイラード反応により生成したＡＧＥによる炎症サイトカインの産生誘導に対し、乳酸菌発酵ブドウ果皮・種子による抑制効果が認められたことから、乳酸菌発酵ブドウ果皮・種子が、ＡＧＥ炎症による皮膚老化に対し、予防的効果を発揮できることが示された。一方、無処理のブドウ果皮・種子ではこの作用は認められず、乳酸菌によるブドウ果皮・種子の発酵が重要であることが判る。【００６４】
（実施例１３：Ｂ１６メラノーマ細胞の細胞内チロシナーゼ活性抑制作用）
本発明のブドウ果皮・種子乳酸菌発酵物（乳酸菌発酵ブドウ果皮・種子）のＢ１６メラノーマ細胞の細胞内チロシナーゼ活性抑制作用を、以下のようにして検討した。
Ｂ１６メラノーマ細胞を、１０％ＦＣＳを含むダルベッコ変性ＭＥＭ培地（ＤＭＥＭ；ギブコ社）に懸濁して、１ｘ１０５ｃｅｌｌｓ／ｍｌの濃度に調整し、６穴プレートの各穴に細胞液３ｍｌを加え、３７℃炭酸ガス培養器で１時間培養した。培養後、各濃度の検体を加え、さらに２日間培養後、リン酸緩衝液（ＰＢＳ）で細胞表面を洗い、１００ｎＭフェニルメチルスルフォニルフルオリド（ＰＭＳＦ；和光純薬工業株式会社）、及び１％トリトンＸ（ＩＣＮ社）を含んだリン酸緩衝液３００μｌを加え、凍結融解して細胞を破壊した。なお、検体としては、前記[検体作製法]により作製された乳酸菌発酵ブドウ果皮・種子（実験群）、及び、前記[検体作製法]において使用したブドウ果皮・種子乾燥パウダー（無処理ブドウ果皮・種子；比較対照群）を使用した。コントロールの穴には検体の代わりに同量の精製水を加えた。細胞破壊液を回収し、１，２０００ｒｐｍで１０分間遠心分離後、上清８０μｌに２ｍｇ／ｍｌのＬ−３−（３，４−ジヒドロフェニル）アラニン（Ｌ−ＤＯＰＡ；東京化成工業株式会社）２０μｌを加え、室温で１日間反応させた後、Ｌ−ＤＯＰＡからチロシナーゼにより返還されたメラニン色素量を、波長４５０ｎｍで吸光度を測定して定量した。グラフには細胞破壊液の代わりにＰＢＳとＬ−ＤＯＰＡを混合したときの値を１としたときのコントロール及び検体処理の値を示した。各群それぞれ３穴で行った平均値と標準誤差で示した。
結果を図１２に示す。細胞内チロシナーゼによりＬ−ＤＯＰＡが返還され、メラニン色素生成が認められた。一方、乳酸菌発酵ブドウ果皮・種子を添加して培養した細胞では有意なメラニン色素の生成抑制作用が認められ、細胞内チロシナーゼの活性が抑制されていることが確認された（図１２）。このことから、乳酸菌発酵ブドウ果皮・種子は、メラノサイトの細胞内チロシナーゼの活性を阻害することにより、メラニン色素の生成を抑制し、美白効果を発揮できることが示された。一方、無処理のブドウ果皮・種子ではこの作用は認められず、乳酸菌によるブドウ果皮・種子の発酵が重要であることが判る。【００６５】
（実施例１４：Ｂ１６メラノーマ細胞のメラニン合成抑制作用）
本発明のブドウ果皮・種子乳酸菌発酵物（乳酸菌発酵ブドウ果皮・種子）のＢ１６メラノーマ細胞のメラニン合成抑制作用を、以下のようにして検討した。
Ｂ１６メラノーマ細胞を、１０％ＦＣＳを含むＤＭＥＭ培地に懸濁して、１ｘ１０５ｃｅｌｌｓ／ｍｌの濃度に調整し、６穴プレートの各穴に細胞液３ｍｌを加え、３７℃炭酸ガス培養器で１時間培養した。培養後、１０μｇ／ｍｌのαＭＳＨ（ＳＩＧＭＡ社）、及び各濃度の検体を加え、さらに５日間培養した。なお、検体としては、前記[検体作製法]により作製された乳酸菌発酵ブドウ果皮・種子（実験群）、及び、前記[検体作製法]において使用したブドウ果皮・種子乾燥パウダー（無処理ブドウ果皮・種子；比較対照群）を使用した。コントロールの穴には検体の代わりに同量の精製水を加えた。培養後、リン酸緩衝液で細胞表面を洗い、０．２５％トリプシンで細胞を剥がして回収し、２Ｎ  ＮａＯＨ  ３００μｌを加え、９０℃で３０分間処理して細胞を破壊した。１２，０００ｒｐｍで１０分間遠心分離後、上清を回収し、細胞内メラニン色素量を、波長４５０ｎｍで吸光度を測定して定量した。グラフの値は、αＭＳＨ無添加の吸光度を１としたときのコントロール及び検体処理の値を示した。各群それぞれ３穴で行った平均値と標準誤差で示した。
結果を図１３に示す。αＭＳＨ刺激により、約４．５倍のメラニン合成量の増加が認められた。一方、乳酸菌発酵ブドウ果皮・種子の添加により、有意なメラニン量の抑制作用が認められた（図１３）。このことから、乳酸菌発酵ブドウ果皮・種子は、メラニン色素の生成を抑制することにより、美白効果を発揮できることが示された。一方、無処理のブドウ果皮・種子ではこの作用は認められず、乳酸菌によるブドウ果皮・種子の発酵が重要であることが判る。【００６６】
（実施例１５：紫外線照射マウスにおける皮膚炎症抑制作用）
本発明のブドウ果皮・種子乳酸菌発酵物（乳酸菌発酵ブドウ果皮・種子）の紫外線（ＵＶＢ）照射マウスにおける皮膚炎症抑制作用を、以下のようにして検討した。
１０週齢、雄性ＢＡＬＢ／ｃマウス（日本ＳＬＣ株式会社）の背部体毛を剃毛して６００ｍＪ／ｃｍ２に相当するＵＶＢを照射した。照射１日後、１％エバンスブルー色素（和光純薬工業株式会社）２００μｌを静脈内投与して、炎症部位に漏出した色素量を以下の方法で定量した。すなわち、エバンスブルー投与３０分後、１ｃｍ２の背部皮膚を切り取り、１Ｎ  水酸化カリウム液０．２５ｍｌに２４時間浸して溶解した。３Ｎ  リン酸溶液０．１２５ｍｌで中和後、アセトン０．３２５ｍｌを加え、色素を抽出した。２，５００ｒｐｍ、１０分間遠心後、アセトン層を回収し、波長５９５ｎｍで吸光度を測定して色素量を定量した。検体は３００ｍｇ／ｋｇの用量で、紫外線照射４日前から照射３０分前まで１日１回、計５回経口投与した。なお、検体としては、前記[検体作製法]により作製された乳酸菌発酵ブドウ果皮・種子（実験群）、及び、前記[検体作製法]において使用したブドウ果皮・種子乾燥パウダー（無処理ブドウ果皮・種子；比較対照群）を使用した。また、コントロール群には検体の代わりに同量の精製水を投与した。グラフには１群４匹で行ったときの、紫外線非照射のマウスの値を１としたときのコントロール及び検体投与マウスの値を示した。
結果を図１４に示す。紫外線照射により、局所におけるエバンスブルー色素の漏出が認められ、皮膚の炎症が確認された。一方、乳酸菌発酵ブドウ果皮・種子を経口投与したマウスにおいては、有意な色素漏出の抑制作用が認められた（図１４）。このことから、乳酸菌発酵ブドウ果皮・種子は経口投与において、紫外線による皮膚炎症を抑制できることが示された。一方、無処理のブドウ果皮・種子ではこの作用は認められず、乳酸菌によるブドウ果皮・種子の発酵が重要であることが判る。【００６７】
（実施例１６：乳酸菌発酵によるブドウ果皮・種子の成分変化の解析）
本発明のブドウ果皮・種子乳酸菌発酵物（乳酸菌発酵ブドウ果皮・種子）の成分を、以下のようにして検討した。
図１５に示した方法で分離・分画することにより、乳酸菌発酵ブドウ果皮・種子検体の分析用試料を調製した。具体的には、甲州の果皮及び種子１０ｇから得られた乾燥粉末（乾燥パウダー）１ｇをＰＢＳ１０ｍｌに懸濁し、各乳酸菌（Ｌ．ｐｌａｎｔａｒｕｍ（ＫＵ１４６）、Ｌ．ｐｌａｎｔａｒｕｍ（ＫＵ５５１）、Ｌ．ｓａｌｉｖａｌｉｕｓ（Ｙｕ１３））を１×１０１１ＣＦＵ／ｍｌの濃度になるよう接種し、３７℃、４８時間（２日間）発酵させた後の培養液をろ過し、ろ液と残渣に分けた。ろ液は、ｎ−ヘキサンで３回抽出してｎ−ヘキサン画分を得た（２．３ｍｇ）。更に水層は、酢酸エチルで３回抽出して酢酸エチル画分を得た（１１．１ｍｇ）。同様に、クロロホルム画分（２．０ｍｇ）、ｎ−ブタノール画分（４０．０ｍｇ）、水画分（２５７．０ｍｇ）を得た。一方、残渣は熱メタノールで３回抽出し、メタノール画分（８０．０ｍｇ）を得た。
得られた画分をＴＬＣ及びＨＰＬＣを用いて分析した結果、乳酸菌発酵による成分変化はｎ−ヘキサン画分ではみられなかったが、酢酸エチル画分（図１６Ａ、図１６Ｂ）、クロロホルム画分（図１７Ａ、図１７Ｂ）、ｎ−ブタノール画分（図１８Ａ、図１８Ｂ）、メタノール画分（図１９Ａ、図１９Ｂ）では認められた。なお、ＴＬＣ及びＨＰＬＣの分析条件は図１６Ａ〜図１９Ｂ中に示した通りである。より具体的には、乳酸菌発酵ブドウ果皮・種子の各画分において、以下のような成分変化が認められた。
酢酸エチル画分では、ＴＬＣクロマトグラムにおいて、Ｒｆ値  ０．１０〜０．２０のスポット（図１６Ａ中、矢印）の消失が確認され（図１６Ａ）、ＨＰＬＣクロマトグラムにおいて、ｔＲ  ６ｍｉｎ付近のピークの減少、ｔＲ  ８ｍｉｎ、１３ｍｉｎ付近のピークの増大が確認された（図１６Ｂ）。
クロロホルム画分では、ＴＬＣクロマトグラムにおいて、Ｒｆ値  ０．４２に黄色スポット（図１７Ａ中、矢印、濃いスポット部分）とＲｆ値  ０．０２に赤紫色スポット（図１７Ａ中、矢印、濃いスポット部分）が新たに出現した（図１７Ａ）。ＨＰＬＣクロマトグラムにおいて、ｔＲ  ４．５、６−７、１１ｍｉｎ付近に新たなピークが確認された（図１７Ｂ）。
ｎ−ブタノール画分では、ＴＬＣクロマトグラムにおいて、Ｒｆ値  ０．２０〜０．２５の褐色スポット（図１８Ａ中、矢印、濃いスポット部分）の大きさが減少した（図１８Ａ）。ＨＰＬＣクロマトグラムにおいて、ｔＲ  ６ｍｉｎ付近のピークが増大し（１０％）、２６ｍｉｎ付近のピークが増大した（１％）（図１８Ｂ）。
メタノール画分では、ＴＬＣクロマトグラムにおいて、Ｒｆ値  ０．２５付近の褐色スポット（図１９Ａ中、矢印、濃いスポット部分）の大きさが減少した（図１９Ａ）。ＨＰＬＣクロマトグラムにおいて、ｔＲ  ５ｍｉｎ付近に新たなピークが確認された（図１９Ｂ）。
本実施例１６の結果から、各乳酸菌発酵ブドウ果皮・種子（図１６Ａ〜図１９Ｂ中、ＫＵ１４６、ＫＵ５５１、Ｙｕ１３）では、その成分が、無処理のブドウ果皮・種子（図１６Ａ〜図１９中、甲州）から大きく変化していることが示された。本発明のブドウ果皮・種子乳酸菌発酵物（乳酸菌発酵ブドウ果皮・種子）は、このような成分変化が起こった結果、実施例１〜１１で示されたようなメタボリックシンドローム関連症状に対する優れた治療、改善、予防効果、並びに、実施例１２〜１５で示されたような皮膚の美白・老化防止効果を奏することができるようになると考えられる。
【産業上の利用可能性】
【００６８】
本発明のブドウ果皮・種子乳酸菌発酵物、並びに前記ブドウ果皮・種子乳酸菌発酵物を利用した本発明の医薬及び食品は、例えば、II型糖尿病、高脂血症、肥満等のメタボリックシンドローム関連症状の治療、改善又は予防や、皮膚の美白・老化防止に、好適に利用可能である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図８Ｃ】
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【図８Ｄ】
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【図８Ｅ】
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【図８Ｆ】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６Ａ】
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【図１６Ｂ】
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【図１７Ａ】
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【図１７Ｂ】
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【図１８Ａ】
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【図１８Ｂ】
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【図１９Ａ】
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【図１９Ｂ】
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【国際調査報告】
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