【手続補正書】
【提出日】平成17年1月13日(2005.1.13)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
安定した細胞系における前駆体タンパク質を産生物フラグメントにタンパク質分解的に変換する方法であって、前駆体タンパク質は、前駆体タンパク質が病理学的に凝集する病態に伴い、
下記工程：
（ａ）下記：
（ｉ）鋳型フラグメントが、細胞に対して無毒性レベルで、細胞において構成的に発現されるような、前駆体タンパク質の鋳型フラグメント；および
（ｉｉ）タンパク質が刺激に応答して細胞において誘導的に発現される、前駆体タンパク質；
をコードする核酸でトランスフェクションされた安定した細胞系を提供すること
（ｂ）細胞において前駆体タンパク質を誘導的に発現させるような刺激に細胞を供すること
を含み、
それにより鋳型フラグメントと前駆体タンパク質との相互作用が、前駆体タンパク質の産生物フラグメントへの凝集およびタンパク質分解性プロセシングを起こすように前駆体タンパク質における立体配座変化を引き起こす方法。
【請求項２】
インビボでの病理学的凝集が、神経変性および／または臨床痴呆に伴う病態における前駆体タンパク質のタンパク質分解性プロセシングに導く、請求項１記載の方法。
【請求項３】
病態における前駆体タンパク質の病理学的凝集が、コアドメインフラグメントおよび少なくとも鋳型タンパク質のコアフラグメントを含む鋳型フラグメントへのタンパク質分解性プロセシングを導く、請求項１または請求項２記載の方法。
【請求項４】
複数の異なる産生物フラグメントが産生される、請求項１〜３のいずれか一項記載の方法。
【請求項５】
少なくとも一つの産生物フラグメントの産生をモニタリングする、請求項１〜４のいずれか一項記載の方法。
【請求項６】
病態に伴う前駆体タンパク質の凝集および／またはタンパク質分解性プロセシングのモジュレーターを同定する方法であって、下記：
（ａ）凝集を調整することができることが推測される作用物質を提供すること、
（ｂ）作用物質の存在下で請求項５記載の方法を実施すること、
（ｃ）モニタリングした産生物または各々の産生物フラグメントの産生を作用物質の調整活性と相関させること
を含む方法。
【請求項７】
工程（ｂ）が、
（ａ）細胞を一つ以上のプレート上で培養すること、
（ｂ）作用物質が、細胞内に入るのに十分な時間、細胞を作用物質と共にインキュベーションすること
により実施される、請求項６記載の方法。
【請求項８】
モニタリングしたその産生物または各々の産生物フラグメントの産生を基準値と比較し、そして
作用物質の不在下でこの方法を実施することにより基準値が得られる、請求項６または請求項７記載の方法。
【請求項９】
前駆体タンパク質が、タウタンパク質である、請求項４記載の方法。
【請求項１０】
鋳型フラグメントが、図７に示す全長タウタンパク質のアミノ酸１８６〜２９７から３９０〜４４１に広がるタウのフラグメントを含む、請求項９記載の方法。
【請求項１１】
鋳型フラグメントが、図７に示す全長タウタンパク質のアミノ酸２９５、２９６または２９７からアミノ酸残基３９０または３９１に広がるタウのフラグメントからなる、請求項１０記載の方法。
【請求項１２】
タウのおよそ１２、１４、２５、２７、３０、３２、３６、３８、４２または４４kDaの産生物フラグメントの産生をモニタリングする、請求項９〜１１のいずれか一項記載の方法。
【請求項１３】
タウのおよそ１２kDaの産生物フラグメントの産生をモニタリングする、請求項１２記載の方法。
【請求項１４】
その産生物または各々の毒性産生物フラグメントの産生をＳＤＳ  ＰＡＧＥでモニタリングする、請求項９〜１３のいずれか一項記載の方法。
【請求項１５】
その産生物または各々の毒性産生物フラグメントの産生を免疫学的にモニタリングする、請求項９〜１４のいずれか一項記載の方法。
【請求項１６】
（ｉ）タウのＧｌｙ−１６およびＧｌｎ−２６の間の領域に位置するヒト特異的エピトープに特異的であるか、（ｉｉ）Ｇｌｕ−３９１で断端されたコアタウフラグメントに特異的であるか、（ｉｉｉ）反復ドメインの一般的タウエピトープに特異的であるか、または
（ｉｖ）Ｓｅｒ−２０８〜Ｓｅｒ−２３８の間に位置する種非特異的一般的タウエピトープに特異的である、モノクローナル抗体から選択される抗体をモニタリングで用いる、請求項１５記載の方法。
【請求項１７】
（ａ）凝集を調整することができることが推測される作用物質を提供すること、
（ｂ）前駆体タンパク質がタウである場合に、作用物質の存在下で請求項５〜８または請求項１０〜１６のいずれか一項記載の方法を実施すること、
（ｃ）モニタリングした産生物または各々の産生物フラグメントの産生を作用物質の調整活性と相関させること
を含む、タウオパチーの処置のための治療用または予後用物質として使用するための医薬品をスクリーニングする方法。
【請求項１８】
（ａ）請求項１７記載の方法を実施して医薬品を同定すること、
（ｂ）単離された形態の医薬用物質を提供すること
を含む、タウオパチーの処置のための治療用または予後用モジュレーターとして使用するための医薬品を製造する方法。
【請求項１９】
更にタウオパチーの処置に使用するための医薬用組成物として作用物質を処方することを含む、請求項１８記載の方法。
【請求項２０】
タウオパチーが、アルツハイマー病、運動ニューロン病、レビ小体疾患、ピック病または進行性核上性麻痺から選択される、請求項１８または請求項１９記載の方法。
【請求項２１】
請求項１〜２０のいずれか一項記載の方法において使用するための安定した細胞を産生する方法であって、
該方法において、細胞系を刺激に供する場合、前駆体タンパク質を産生物フラグメントにタンパク質分解的に変換することが可能であり、
前駆体タンパク質は、前駆体タンパク質が病理学的に凝集する病態に伴い、
（ｉ）鋳型フラグメントが細胞に対して無毒性レベルで構成的に細胞において発現されるような、前駆体タンパク質の鋳型フラグメント；および
（ｉｉ）疾患タンパク質が刺激に応答して細胞において誘導的に発現される、前駆体タンパク質；
をコードする核酸を細胞に導入する工程を含む、方法。
【請求項２２】
前駆体タンパク質をコードする核酸が、ｌａｃ誘導性プロモーターに作動可能に連結されており、そして
鋳型フラグメントをコードする核酸が、サイトメガロウイルスプロモーター配列に作動可能に連結されている、請求項２１のいずれか一項記載の方法。
【請求項２３】
鋳型フラグメントをコードする核酸が、鋳型ベクターとして導入され、そして前駆体タンパク質をコードする核酸が、別個の前駆体タンパク質ベクターとして導入される、請求項２１または請求項２２記載の方法。
【請求項２４】
前駆体タンパク質ベクターが、前駆体タンパク質をコードする核酸がクローニングされているｐＯＰＲＳＶＩＣＡＴベクターに由来し、そして
鋳型フラグメントベクターが、前駆体タンパク質をコードする核酸がクローニングされているプラスミドｐＺｅｏ２９５−３９１ベクターに由来する、請求項２３記載の方法。
【請求項２５】
前駆体タンパク質が、タウである、請求項２１〜２４のいずれか一項記載の方法。
【請求項２６】
鋳型フラグメントをコードする核酸が、タウのコアフラグメントをコードする、請求項２５記載の方法。
【請求項２７】
鋳型フラグメントをコードする核酸が、全長タンパク質のアミノ酸１８６〜２９７から３９０〜４４１の間に広がるタウのフラグメントをコードする、請求項２６記載の方法。
【請求項２８】
鋳型フラグメントをコードする核酸が、図７で示す全長タウタンパク質のアミノ酸２９５、２９６または２９７からアミノ酸残基３９０または３９１に広がるタウのフラグメントをコードする、請求項２７記載の方法。
【請求項２９】
鋳型フラグメントをコードする核酸が、図７で示すアミノ酸残基２９５〜３９１に広がるタウのフラグメントをコードする、請求項２８記載の方法。
【請求項３０】
前駆体タンパク質が、前駆体タンパク質が病理学的に凝集する病態に伴い、
哺乳動物宿主細胞が、
（ｉ）鋳型フラグメントが、細胞に対して無毒性レベルで細胞において構成的に発現されるような前駆体タンパク質の鋳型フラグメント；および
（ｉｉ）疾患タンパク質が、刺激に応答して細胞において誘導的に発現される前駆体タンパク質；
で形質転換されており、
細胞系が刺激に供される場合、前駆タンパク質を産生物フラグメントにタンパク質分解的に変換することができる、哺乳動物宿主細胞。
【請求項３１】
場合により、以下の細胞系：３Ｔ３；ＮＩＥ−１１５；３Ｔ６；Ｎ２Ａ；ＳＹ５Ｙ；ＣＯＳ−７から選択される、ニューロン細胞系または繊維芽細胞系に由来する、請求項３０記載の細胞。
【請求項３２】
前駆体タンパク質がタウである、請求項３０または請求項３１記載の細胞。
【請求項３３】
鋳型フラグメントをコードする核酸が、タウのコアフラグメントをコードしている、請求項３２記載の細胞。
【請求項３４】
鋳型フラグメントをコードする核酸が、全長タンパク質のアミノ酸１８６〜２９７から３９０〜４４１の間に広がるタウのフラグメントをコードする、請求項３３記載の細胞。
【請求項３５】
鋳型フラグメントをコードする核酸が、図７で示す全長タウタンパク質のアミノ酸２９５、２９６または２９７からアミノ酸残基３９０または３９１に広がるタウのフラグメントをコードする、請求項３４記載の細胞。
【請求項３６】
鋳型フラグメントをコードする核酸が、図７で示すアミノ酸残基２９５〜３９１に広がるタウのフラグメントをコードする、請求項３５記載の細胞。
【請求項３７】
前駆体タンパク質の産生を刺激するための作用物質または前駆体タンパク質の鋳型フラグメントとの相互作用を検出するための作用物質から選択される少なくとも一つの別の成分に加えて、請求項３１〜３６のいずれか一項記載の宿主細胞を含むキット。
【請求項３８】
検出用作用物質が、抗体である、請求項３７記載のキット。