(57)【要約】アトピー性疾患の治療剤又は予防剤として優れた効果を有する抗アトピー性疾患組成物を提供する。バシディオマイセテスＸ（Ｂａｓｉｄｉｏｍｙｃｅｔｅｓ−Ｘ）ＦＥＲＭ  ＢＰ−１００１１を培養した菌糸塊又はその抽出組成物を有効成分として含有する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
バシディオマイセテスＸ（Ｂａｓｉｄｉｏｍｙｃｅｔｅｓ−Ｘ）ＦＥＲＭ  ＢＰ−１００１１を培養した菌糸塊又はその抽出組成物を有効成分として含有することを特徴とする抗アトピー性疾患組成物。
【請求項２】
粉末、顆粒、錠剤、カプセル、溶液状、ゲル状、クリーム状及び軟膏から選択される形態であることを特徴とする請求項１に記載の抗アトピー性疾患組成物。
【請求項３】
前記抽出組成物が、前記バシディオマイセテスＸ（Ｂａｓｉｄｉｏｍｙｃｅｔｅｓ−Ｘ）ＦＥＲＭ  ＢＰ−１００１１を培養した菌糸塊を水及び親水性溶媒から選択される少なくとも一種を含む抽出溶媒で抽出したものであることを特徴とする請求項１又は２に記載の抗アトピー性疾患組成物。
【請求項４】
前記抽出組成物が、前記バシディオマイセテスＸ（Ｂａｓｉｄｉｏｍｙｃｅｔｅｓ−Ｘ）ＦＥＲＭ  ＢＰ−１００１１を培養した菌糸塊を加熱して抽出したものであることを特徴とする請求項１〜３の何れかに記載の抗アトピー性疾患組成物。
【請求項５】
前記抽出組成物が、前記バシディオマイセテスＸ（Ｂａｓｉｄｉｏｍｙｃｅｔｅｓ−Ｘ）ＦＥＲＭ  ＢＰ−１００１１を培養した菌糸塊を加圧して抽出したものであることを特徴とする請求項１〜４の何れかに記載の抗アトピー性疾患組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アトピー性疾患の有用な治療剤又は予防剤である抗アトピー性疾患組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
アレルギー性物質の吸入または摂取による皮膚の炎症であるアトピー性皮膚炎等のアトピー性疾患の治療剤として、様々な免疫抑制剤が用いられている（特許文献１参照）。しかしながら、さらにアトピー性疾患の治療・予防に対して優れた効果を有する抗アトピー性疾患組成物の出現が、要望されている。【０００３】
一方、古来より、きのこ類は独特の風味や香りを有する食材として汎用されると共に、免疫力の向上、抗菌、体調リズムの調節、老化防止などの生理機能活性化作用などを有するとして漢方薬又はある種の疾患の民間薬としても用いられてきた。また、きのこに関する薬効成分の研究も進歩してきており、抗菌・抗ウイルス作用、強心作用、血糖降下作用、コレステロール低下作用、抗血栓作用、血圧降下作用を示す成分が見い出されている。そして、本願出願人は、新規なきのこであるバシディオマイセテスＸ（Ｂａｓｉｄｉｏｍｙｃｅｔｅｓ−Ｘ）ＦＥＲＭ  ＢＰ−１００１１の抽出組成物について、以前に出願した（特許文献２参照）。このバシディオマイセテス抽出組成物は、多量の多糖類（β−Ｄ−グルカン）が含まれており、抗酸化力が高く、ＯＨラジカル消去活性を有し、免疫調整効果を有するものであり、老化防止などの効能が期待できる健康食品、免疫賦活剤として用いて好適なものである。しかしながら、特許文献２は、免疫抑制剤としては全く記載されておらず、アトピー性疾患の治療・予防については、全く考慮されていなかった。【０００４】
【特許文献１】特開２００６−２７５５６６号公報
【特許文献２】国際公開公報ＷＯ２００４−０９７００７号
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明はこのような事情に鑑み、アトピー性疾患の治療剤又は予防剤として優れた効果を有する抗アトピー性疾患組成物を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
前記課題を解決する本発明の第１の態様は、バシディオマイセテスＸ（Ｂａｓｉｄｉｏｍｙｃｅｔｅｓ−Ｘ）ＦＥＲＭ  ＢＰ−１００１１を培養した菌糸塊又はその抽出組成物を有効成分として含有することを特徴とする抗アトピー性疾患組成物にある。【０００７】
本発明の第２の態様は、粉末、顆粒、錠剤、カプセル、溶液状、ゲル状、クリーム状及び軟膏から選択される形態であることを特徴とする第１の態様に記載の抗アトピー性疾患組成物にある。【０００８】
本発明の第３の態様は、前記抽出組成物が、前記バシディオマイセテスＸ（Ｂａｓｉｄｉｏｍｙｃｅｔｅｓ−Ｘ）ＦＥＲＭ  ＢＰ−１００１１を培養した菌糸塊を水及び親水性溶媒から選択される少なくとも一種を含む抽出溶媒で抽出したものであることを特徴とする第１又は２の態様に記載の抗アトピー性疾患組成物にある。【０００９】
本発明の第４の態様は、前記抽出組成物が、前記バシディオマイセテスＸ（Ｂａｓｉｄｉｏｍｙｃｅｔｅｓ−Ｘ）ＦＥＲＭ  ＢＰ−１００１１を培養した菌糸塊を加熱して抽出したものであることを特徴とする第１〜３の何れかの態様に記載の抗アトピー性疾患組成物にある。【００１０】
本発明の第５の態様は、前記抽出組成物が、前記バシディオマイセテスＸ（Ｂａｓｉｄｉｏｍｙｃｅｔｅｓ−Ｘ）ＦＥＲＭ  ＢＰ−１００１１を培養した菌糸塊を加圧して抽出したものであることを特徴とする第１〜４の何れかの態様に記載の抗アトピー性疾患組成物にある。【００１１】
かかる本発明の抗アトピー性疾患組成物は、アトピー性疾患の治療剤又は予防剤であり、特にアトピー性皮膚炎の症状を改善することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】試飲前及び試飲後２ヵ月後の写真撮影結果である。
【図２】試飲前及び試飲後２ヵ月後の写真撮影結果である。
【図３】試飲前及び試飲後２ヵ月後の写真撮影結果である。
【図４】試飲前及び試飲後２ヵ月後の写真撮影結果である。
【図５】試飲前及び試飲後２ヵ月後の写真撮影結果である。
【図６】試飲前及び試飲後２ヵ月後の写真撮影結果である。
【図７】試飲前及び試飲後２ヵ月後の写真撮影結果である。
【図８】試飲前及び試飲後２ヵ月後の写真撮影結果である。
【図９】ＱＯＬ評価結果を示す図である。
【図１０】ＱＯＬ評価結果を示す図である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１３】
本発明の抗アトピー性疾患組成物は、バシディオマイセテスＸを培養した菌糸塊、又は、バシディオマイセテスＸを培養した菌糸塊の抽出組成物（以下「バシディオマイセテスＸ抽出組成物」という）を有効成分として含有する。【００１４】
ここで、本発明でいうバシディオマイセテスは、担子菌であり、嘴状突起（クランプ）は観察されるが、担子器形成能を有しないという特性を有しており、他の担子菌と区別される。すなわち、培養しても、担子器を形成せずに、菌核（菌糸塊）を形成するだけである。かかるバシディオマイセテスは、菌を自然界から探索した結果得たものであり、単離し、バシディオマイセテスＸ（Ｂａｓｉｄｉｏｍｙｃｅｔｅｓ−Ｘ）として独立行政法人産業技術総合研究所  特許生物寄託センターに寄託した（受託番号：ＦＥＲＭ  ＢＰ−１００１１）。【００１５】
このバシディオマイセテスＸは、分生子を形成しない、すなわち、無性世代を有しないものである。すなわち、例えば、ポテトグルコース寒天培地で培養すると、培養菌糸は、クランプを有し、平滑であるが、分生子を形成せず、子実体を形成しない。コロニー表面の形状色調を観察すると、コロニー内に淡桃色菌糸塊を形成しており、植菌部位から同心円状に生長したコロニー内に複数の菌糸塊を形成した場合、菌糸塊相互は菌糸束により連結される。なお、コロニーの裏面の色調は淡桃色である。また、グルコース・ドライイースト寒天培地で培養すると、培養菌糸はクランプを有し、平滑であるが、分生子を形成せず、子実体を形成しない。コロニー表面の形状色調を観察すると、コロニー内に淡桃〜白色の菌糸塊を形成し、植菌部位を中心とするように厚さ５〜６ｍｍの菌糸塊を形成している。なお、コロニーの裏面の色調は、淡桃〜白色である。【００１６】
バシディオマイセテスＸの最適生育条件は、例えば、ｐＨ５．０〜６．０で、温度２２〜２６℃である。また、生育範囲は、例えば、ｐＨ４．０〜７．５で、温度５〜３０℃である。【００１７】
また、バシディオマイセテスＸは、上述したように一般的な方法により培養でき、培養方法は特に限定されるものではないが、例えば、適当な栄養源を添加して滅菌した寒天培地、おがくず培地、液体培地などに、培養済の菌株あるいは種菌を無菌的に植菌し、適温条件下で培養することにより、バシディオマイセテスＸの菌糸塊を得ることができる。なお、バシディオマイセテスＸを培養すると培養した環境に応じて菌糸塊を形成する。【００１８】
このようなバシディオマイセテスＸを培養した菌糸塊を、必要に応じて乾燥し、粉末、顆粒、錠剤、カプセル、溶液状、ゲル状、クリーム状又は軟膏等にすることにより、本発明の抗アトピー性疾患組成物となる。【００１９】
また、上記バシディオマイセテスＸを培養した菌糸塊から細胞内容物を抽出した抽出組成物を、本発明の抗アトピー性疾患組成物の有効成分としてもよい。バシディオマイセテスＸを培養した菌糸塊からの抽出方法は特に限定されない。例えば、菌糸塊から細胞内容物を効率よく抽出するには、好適には、必要に応じて菌糸塊を凍結するなどして細胞壁に損傷を与えて解凍した後、ミキサーなどにより破砕し、エキスを抽出する。エキスの抽出も特に限定されないが、水、低級アルコールなど、さらには、酸、アルカリ、その他の添加剤を添加した抽出液を用いて常温又は加熱条件下、又は加圧下にて抽出する。一般的には、熱水で煮出して抽出するか、あるいは、水又はアルコールやアルカリを添加した水と破砕物を混合した状態で、例えば、１００ＭＰａ〜７００ＭＰａ程度、好ましくは、３００ＭＰａ〜６００ＭＰａ程度加圧して抽出するのがよい。【００２０】
ここで、熱水抽出の一例を説明する。まず、例えば、凍結しているバシディオマイセテスＸ菌糸塊を常温解凍し、ミキサーを用いて破砕し、破砕したバシディオマイセテスＸ菌糸塊と抽出溶媒である水との割合を、例えば、１：５程度とし、例えば、破砕バシディオマイセテスＸ菌糸塊５０ｇをガラス瓶に入れ、水２５０ｍｌを加えて蓋を締め、これを鍋の底にタオルを敷いた上に水を注ぎ、破砕菌糸塊の入ったガラス瓶を置いて加熱・沸騰させる。沸騰してから９０分間加熱を継続し、冷却後固液分離し、バシディオマイセテスＸ抽出液を得る。抽出液のｐＨは例えば、６．３〜６．５を示す。【００２１】
このように得た抽出液は、必要に応じて濃縮し、バシディオマイセテスＸを培養した菌糸塊から抽出した抽出組成物とする。なお、エキスの濃縮は特に限定されないが、例えば、以下のように行う。【００２２】
得られたバシディオマイセテスＸ抽出液をビーカーに移し、加熱・蒸発させて濃縮する。このとき、抽出液は淡いベージュ色から褐色を呈するようになり、盛んに発泡をはじめるようになるが、更に蒸発・濃縮を継続し、例えば、ｐＨ４．９、密度１．２５ｇ／ｃｍ3のタール状となった時点で、濃縮を終了させる。この濃縮エキスは、醤油様の芳香を発する。なお、この時点における、バシディオマイセテスＸ菌糸塊からの濃縮エキスの収率は平均１２％である。このように得た濃縮エキスは冷却するに従い、粘性が非常に高まるため、濃縮終了と同時に保存容器に移す必要がある。また、保存容器に移した濃縮エキスは、そのまま冷却後、冷凍・凍結保存とするのが好ましい。【００２３】
このバシディオマイセテスＸを培養した菌糸塊から抽出した抽出組成物を、必要に応じて乾燥し、粉末、顆粒、錠剤、カプセル、溶液状、ゲル状、クリーム状又は軟膏等にしたものが、本発明の抗アトピー性疾患組成物である。また、バシディオマイセテスＸを培養した菌糸塊から抽出した抽出組成物そのものを、本発明の抗アトピー性疾患組成物としてもよい。なお、抗アトピー性疾患組成物中の、バシディオマイセテスＸを培養した菌糸塊から抽出した抽出組成物の含有割合は、剤型や投薬方法等に合わせて適宜設定すればよく、特に限定されない。【００２４】
本発明の抗アトピー性疾患組成物は、バシディオマイセテスＸを培養して得られる菌糸塊、又は、その抽出組成物を有するため、後述する実施例に示すように、アトピー性皮膚炎等のアトピー性疾患の治療剤又は予防剤となる。これは、バシディオマイセテスＸ又はバシディオマイセテスＸの抽出組成物が、アトピー性疾患に対する免疫抑制剤として機能するためと推測される。【００２５】
本発明の抗アトピー性疾患組成物のヒトへの投薬方法に特に制限はなく、症状に合わせて内服又は外用することができるが、例えばバシディオマイセテスＸを培養した菌糸塊を乾燥して粉末化し、打錠して２００〜３００ｍｇ程度の錠剤としたものを、１日３回経口投与する方法が挙げられる。服用期間は特に限定されないが、長期間とすることが好ましく、例えば、８週間以上が好ましい。
【実施例】
【００２６】
以下、本発明を実施例、及び、バシディオマイセテスＸを培養した菌糸塊から抽出した抽出組成物の製造例を参照しながらさらに具体的に説明する。なお、製造例１〜４でバシディオマイセテスＸの栽培例を、製造例５〜９で抽出例を示す。【００２７】
（製造例１）  菌糸塊からの分離
（１）培地の調製
下記表１の配合で、ＰＳＡ及びＰＤＡ培地を調製し、試験管又は三角フラスコに分注した後、シリコセン（または綿栓）を施しオートクレーブにより１２１℃２０分高圧蒸気滅菌した。その後、試験管の場合は、滅菌後熱いうちに傾斜させてスラント（斜面）培地とし、三角フラスコの場合は、そのまま静置してプレート（平面）培地とした。【００２８】
【表１】
2008129996.tif 000002
【００２９】
（２）菌糸塊からの分離
大きめのバシディオマイセテスＸ菌糸塊を手で割り、火炎滅菌したメスを冷却させてからバシディオマイセテスＸ断面より切片を切断し、火炎滅菌冷却後のピンセットで、（１）のＰＤＡ及びＰＳＡ培地スラントにバシディオマイセテスＸ切片を植菌した。なお操作は、無菌箱又はクリーンベンチ内の、無菌処理済み条件下で行った。【００３０】
（３）培養
２４℃条件下でインキュベーターにおいて培養させたところ、２４〜４８時間後には発菌した。発菌後、２４℃条件下で培養を継続すると、１４日間でAgar培地上に菌糸が生育した。【００３１】
（製造例２）  菌糸塊生産のためのおがくず培地による培養
（１）種菌の培養
おがくず１Ｌ、脱脂ぬか１５ｇ、ふすま１５ｇ及びサンパール（菌糸活性剤・日本製紙製）５ｇに、水を加えて十分に攪拌し、培地を強く握って水がにじむ程度（湿式含水率７０％程度）として、おがくず培地を調製した。この培地を三角フラスコに入れ、シリコセンを施した後、オートクレーブにより１２１℃４０分高圧蒸気滅菌した。滅菌後２４時間後に、製造例１のスラントにて培養中のバシディオマイセテスＸ菌糸を無菌箱内にて無菌操作によっておがくず培地に植菌した。なお、植菌は滅菌三角刀でスラントの一部を切除するようにし、菌糸にダメージを与えないよう行った。また、植菌の密度は、おがくず培地表面積の２０〜３０％とした。２４℃条件下で培養したところ３日後（遅くとも５日後）に発菌し、３０日後には三角フラスコおがくず培地に充満した。【００３２】
（２）菌糸塊の発生
（１）と同様にしたおがくず培地を調製し、この培地をポリプロピレン製ビンに入れ、フタをして、オートクレーブにより１２１℃４０分高圧蒸気滅菌した。滅菌後２４時間後、無菌処理済みの無菌箱内において無菌操作により、（１）で培養した種菌をポリプロピレン製ビンのおがくず培地に植菌した。なお、植菌の密度は、おがくず培地表面積がほぼ覆われる程度とした。２４℃条件下で培養したところ、４８時間後に発菌し、６０日後にはポリプロピレン製ビン内のおがくず培地全体に菌糸が充満した。更に４０〜５０日経過すると、ポリプロピレン製ビン内壁に菌糸が展開し、菌糸束を形成、更に培養を継続すると菌糸塊を形成した。【００３３】
（製造例３）  菌糸塊生産のための液体培地による培養
１ｃｍ角としたジャガイモ２００ｇを精製水を用いて煮沸後２０分継続、冷却後、固液分離したジャガイモ浸出液、スクロース２０ｇに蒸留水を全量１Ｌとなるように加え液体培地を調製した。この液体培地を試験管に各５ｍｌに分注し、シリコセンを施し滅菌（１２１℃２０分高圧蒸気滅菌あるいは１００℃８時間常圧蒸気滅菌）した。その後、無菌処理済の無菌箱内において無菌操作により、製造例１のスラントにおいて培養中のバシディオマイセテスＸ切片の下端が接するよう植菌した。２４℃条件下で培養したところ、４８時間で発菌し、更に培養を継続すると、液体培地に接するように菌糸塊を形成した。【００３４】
（製造例４）  菌糸塊生産のためのAgar培地による培養
１ｃｍ角としたジャガイモ２００ｇを精製水を用いて煮沸後２０分継続、冷却後、固液分離したジャガイモ浸出液、スクロース２０ｇ及びＡｇａｒ１ｇ（０．１％）に蒸留水を全量１Ｌとなるように加えて、Agar培地を調整した。なお、通常Agar培地は１．５〜２．０（培地１Ｌに対し、１５〜２０ｇ）のAgar添加するが、培養後の菌糸塊と、Agar培地の分離を容易にするため、また液体培地ではバシディオマイセテスＸの切片が沈降しやすいため物理的強度を維持する目的で、０．１％添加する事とした。この０．１％Agar培地を試験管に各５ｍｌに分注し、シリコセンを施した後オートクレーブにより１２１℃２０分間高圧蒸気滅菌した。その後、無菌処理済みの無菌箱内において、製造例１のスラントにおいて培養中のバシディオマイセテスＸ菌糸塊から切片を切除し、０．１％Agar培地に無菌操作により植菌した。２４℃条件下で培養すると、４８時間で発菌し更に培養を継続することにより、菌糸塊を形成した。【００３５】
（製造例５）  濃縮バシディオマイセテスＸ抽出組成物の煮出しによる製造
菌糸の細胞壁に損傷を与え、細胞内容物が浸出することを容易にするため、生鮮バシディオマイセテスＸ菌糸塊を冷凍・凍結させ、凍結しているバシディオマイセテスＸ菌糸塊を常温解凍し、ミキサーを用いて破砕した。破砕バシディオマイセテスＸ菌糸塊５０ｇをガラス瓶に入れ、水２５０ｍｌを加えて蓋を締め、鍋の底にタオルを敷いた上に水を注ぎ、破砕菌糸塊の入ったガラス瓶を置いて加熱・沸騰させ、沸騰してから９０分間加熱を継続した。冷却後固液分離し、バシディオマイセテスＸ抽出組成物を得た。なお、抽出液のｐＨは６．３〜６．５であった。【００３６】
得られたバシディオマイセテスＸ抽出組成物をビーカーに移し、加熱・蒸発させて濃縮した。抽出組成物は淡いベージュ色から褐色を呈するようになり、盛んに発泡をはじめるようになったが、更に蒸発・濃縮を継続した。ｐＨ４．９、密度１．２５ｇ／ｃｍ3のタール状となった時点で、濃縮を終了させた。この濃縮バシディオマイセテスＸ抽出組成物は、醤油様の芳香を発した。なお、この時点における、バシディオマイセテスＸ菌糸塊からの濃縮バシディオマイセテスＸ抽出組成物の収率は１２％であった。バシディオマイセテスＸ抽出組成物は冷却するに従い、粘性が非常に高まるため、濃縮終了と同時に保存容器に移し、そのまま冷却後、冷凍・凍結保存した。【００３７】
（製造例６）  バシディオマイセテスＸ抽出組成物の煮出しによる製造
菌糸の細胞壁に損傷を与え、細胞内容物が浸出することを容易にするため、生鮮バシディオマイセテスＸ菌糸塊を冷凍・凍結させた後、凍結しているバシディオマイセテスＸ菌糸塊を常温解凍した。【００３８】
この解凍後のバシディオマイセテスＸ菌糸塊（湿重量２０ｇ）を計りとり、０．５ｃｍ角に刻んだものをビーカーに入れ、水１００ｍｌを加えてから、９０℃で弱く煮沸し、溶液が最初の量の１／２になるまで煮詰めた。その後水を加えて元の用量に戻し、ガーゼでろ過して固形物を除いた後に密封、冷蔵庫に保存したものを製造例６のバシディオマイセテスＸ抽出組成物とした。【００３９】
（製造例７）  バシディオマイセテスＸ抽出組成物の高圧処理による製造
製造例６と同様に処理したバシディオマイセテスＸ菌糸塊（湿重量２０ｇ）をビニール袋にとり、水１００ｍｌを加えた後、減圧脱気して封入した。これを超高圧装置（神戸製鋼製７００ＭＰａ処理可能タイプ）にセットして、静水圧４００ＭＰａで１０分間処理し、ガーゼろ過し、冷蔵保存したものを製造例７のバシディオマイセテスＸ抽出組成物とした。【００４０】
（製造例８）  バシディオマイセテスＸ抽出組成物の高圧処理による製造
静水圧６００ＭＰａで処理した以外は、製造例７と同様にして製造した組成物を製造例８のバシディオマイセテスＸ抽出組成物とした。【００４１】
（製造例９）  バシディオマイセテスＸ抽出組成物の高圧処理による製造
水１００ｍｌの代わりに０．１％ＫＣｌ水溶液１００ｍｌを用いた以外は、製造例８と同様にして製造した組成物を製造例９のバシディオマイセテスＸ抽出組成物とした。【００４２】
（実施例１）
製造例２で得られたバシディオマイセテスＸ菌糸塊を乾燥して粉末に加工し、殺菌後２００ｍｇずつ直接打錠した。なお、錠型は円形で大きさは直径８ｍｍ厚さ２ｍｍである。【００４３】
（試験例）
＜試験方法＞
主な疾患としてアレルギー症状に悩む患者２２名に対して試飲試験を実施した。具体的には、実施例１で得られた錠剤を、アルミフォイルに１袋５粒ずつ充填し、ラベルを貼った白箱に９０袋（１ヶ月分）を入れて表２に示す被験者に提供して、５粒入りの１袋を１日に３袋（毎食後１袋、合計１日３袋）摂取してもらった。なお、試飲試験は２ヶ月間連続して行った。【００４４】
【表２】
2008129996.tif 000003
【００４５】
＜調査項目＞
（１）血液検査と生化学検査
試飲前及び試飲後２ヵ月後に血液検査を行い、実施例１の錠剤飲用がアトピー性皮膚炎患者の血液検査値に及ぼす影響を調査した。主な血液検査項目を表３に示す。項目毎の試飲前と試飲後２ヵ月後の間の有意差検定はＳｔａｔ  ＶｉｅｗによるＴ検定及び重相関解析法を用いて行った。その結果を表４〜９に示す。表４〜７は被験者毎の結果を、表８〜９は試飲前及び試飲後の被験者全員の平均値及びそのＴ検定結果を示す。なお、表４〜７の各被験者欄の左側の数値が試飲前、右側の数値が試飲後２ヵ月後の値である。【００４６】
試飲前と試飲後２ヵ月後の間の５０項目の血液検査結果を比較したところ、Ｐ値は０．１２３〜０．９８８の間にあり、両群間で有意な変動を示した項目は見当たらず、実施例１の抗アトピー性疾患組成物の飲用がこれらの血液検査値には影響を及ぼさず、急性毒性及び亜急性毒性が無いことが確認できた。【００４７】
【表３】
2008129996.tif 000004
【００４８】
【表４】
2008129996.tif 000005
【００４９】
【表５】
2008129996.tif 000006
【００５０】
【表６】
2008129996.tif 000007
【００５１】
【表７】
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【００５２】
【表８】
2008129996.tif 000009
【００５３】
【表９】
2008129996.tif 000010
【００５４】
（２）写真観察
試飲前及び試飲後２ヵ月後に、各被験者の症状の最も顕著な部位について本人の同意を得て写真を撮影し、改善度合いを検視的に判断した。試飲前及び試飲後２ヵ月後の写真撮影結果を図１〜８に、写真判定による評価を表１０に示す。【００５５】
Case  No.１〜１２の１２例では、不良又は良くならない患者は２名であり、残る１０例中、良好６名、軽快１名、変化なし又は悪くはない患者は３名で、１０名は有効と見られる。また、Case  No.１３〜２２の１０例では、効果不明が１名、良好が５名、少し良いが２名、変化なし又は悪くはないが２名で、１０名中９名が有効と見られる。したがって、総合的には２２名中、１９名が有効となる。したがって、写真判定による改善度合いで有意差を確認することが出来た。なお、試験用のサンプルが錠剤で、飲用しやすいことが良い結果につながったといえる。【００５６】
【表１０】
2008129996.tif 000011
【００５７】
（３）ＱＯＬ（症状の変化）評価
試飲前、試飲後２週目、試飲後５週目及び試飲後８週目に、日中及び夜間のかゆみの状態の程度について、５項目の中から１つを選択する問診方式の調査票により、被験者の症状の変化をＱＯＬとして調査した。調査には表１１に示す日中及び夜間のかゆみの状態をスコア化した調査票を用いた。この調査票は、かゆみの状態を５段階で評価し、最悪の状態を「１」、改善が進むごとに「１」ずつ上昇し、最良の状態を「５」で表したものである。かゆみの症状が改善すればスコアが高くなるように設定した。試飲前、試飲後２週目、試飲後５週目及び試飲後８週目に各患者から得られたスコアの平均を求めた。試飲前の値と試飲後に得られた値との間の有意差検定はＳｔａｔ  ＶｉｅｗによるＴ検定及び重相関解析法を用いて行った。その結果を表１２〜１５及び図９〜１０に示す。なお、表１２及び１３は被験者毎の結果を、表１４及び１５は試飲前及び試飲後の被験者全員の平均値及びそのＴ検定結果を示す。【００５８】
表１４及び表１５に示すように、日中では、平均スコアは試飲前２．５７、試飲後２週目３．０２、５週目３．２４、８週目３．１８であり、試飲前に比べ試飲後の平均スコアは各々０．４６、０．６７、０．６１上昇した。夜間では、試飲前の平均スコア３．０５に比べ、試飲後２週目は０．４０、５週目は０．６９、８週目は０．８０、平均スコアが高くなった。日中、夜間ともに試飲前の値に比べ試飲後２週目以降に有意な症状改善が認められた。さらに試飲後５週目と８週目では日中より夜間において平均スコアの上昇幅が大きかったことから、試飲５週目以降では夜間の方が日中より症状の改善効果が高いことが明らかとなった。さらに、夜間では飲用期間が長くなるにともない平均スコアも高くなる傾向を示した。【００５９】
この結果、日中及び夜間の双方とも試飲後に有意な症状の改善が認められ、本発明の抗アトピー性疾患組成物の飲用によりアトピー性疾患が改善できることが確認出来た。また、夜間では長期飲用する程症状の改善効果が大きいことが確認された。【００６０】
【表１１】
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【００６１】
【表１２】
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【００６２】
【表１３】
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【００６３】
【表１４】
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【００６４】
【表１５】
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【００６５】
＜統計学的解析＞
有意差の出たＱＯＬ評価及び被験者全員についての血液生化学的検査値の変動を、更に下記のような層別に基づいて統計解析を行った。
（ｉ）ＱＯＬ評価の改善の有無による比較（男女合計）
ＱＯＬ評価で、日中に症状改善を示した群（Ｃａｓｅ．Ｎｏ．１，２，４，７，９，１３，１５，１７，２０，２２）と、日中に症状改善がなかった群（Ｃａｓｅ．Ｎｏ．３，５，６，８，１０，１１，１２，１４，１６，１８，１９，２１）の２群に分け、両群間の血液生化学的検査値を比較した。その結果を表１６に示す。症状改善有り群の好酸球数（５．４０±２．７２％）は症状改善無し群の好酸球数（８．６７±４．０８％）に比べ有意に低かった（Ｐ＝０．０４）。
さらに、夜間に症状改善を示した群（Ｃａｓｅ．Ｎｏ．１〜５，７，８，１２〜１４，１６，１７，２２）と、夜間に症状改善がなかった群（Ｃａｓｅ．Ｎｏ．６，９〜１１，１５，１８〜２１）の間の血液生化学的検査値を比較し、その結果を表１７に示す。夜間に症状改善有り群のチモール値（ＴＴＴ：３．９５±１．６２  単位）は症状改善無し群のチモール値（１．８９±０．８６  単位）に比べ有意に高かった（Ｐ＝０．００２）。しかし、日中及び夜間共に、両群間で有意差が認められた項目はなかった。【００６６】
（ｉｉ）試飲前後の比較（男女別）
試飲前及び試飲後２ヵ月目の血液生化学的検査値の比較を男性（Ｃａｓｅ  Ｎｏ．２，４，６，８，９，１２，１６）、女性（Ｃａｓｅ  Ｎｏ．１，３，５，７，１０，１１，１３〜１５，１７〜２２）で行い、その結果を表１８（男性）及び表１９（女性）に示す。
男性では、試飲前のアルブミン値は４．５９±０．１９ｇ／ｄｌであり、試飲後２ヶ月目の値（４．４３±０．２６ｇ／ｄｌ）値は試飲前に比べ有意に低下した（Ｐ＝０．０４）。また、試飲前のＨＤＬ−コレステロール値（５８．５７±８．５４ｍｇ／ｄｌ）とＬＤＬ−コレステロール値（１２０．００±３３．０９ｍｇ／ｄｌ）は試飲後に各々有意に低下した（５２．４３±１１．５６ｍｇ／ｄｌ、及び１０９．５７±２８．０９ｍｇ／ｄｌ）。さらに、試飲前のＣＲＰ値（−０．２１±０．０９ｍｇ／ｄｌ）に比べ試飲後の値（−０．０９±０．１３ｍｇ／ｄｌ）は有意に高かった。
女性では、試飲前のＡＬＴ（ＧＰＴ）値（１４．２０±６．２０Ｕ／Ｌ）に比べ試飲後２ヶ月目の値（１１．７３±５．０８Ｕ／Ｌ）は、有意に低かった。
男性では、試飲前と試飲後の間でアルブミン、ＨＤＬ−コレステロール、ＬＤＬ−コレステロール、ＣＲＰ値に有意差が認められたが、女性ではＡＬＴ（ＧＰＴ）値のみであり、男女共通に有意な変動が認められた項目はなかった。【００６７】
【表１６】
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【００６８】
【表１７】
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【００６９】
【表１８】
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【００７０】
【表１９】
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【００７１】
微生物への言及
寄託機関の名称：独立行政法人産業技術総合研究所  特許生物寄託センター
寄託機関のあて名：日本国  茨城県つくば市東１丁目１番地１  中央第６  （郵便番号３０５−８５６６）
寄託機関に寄託した日付：２００３年２月２７日
寄託機関が寄託について付した受託番号：ＦＥＲＭ  ＢＰ−１００１１
寄託者の氏名（名称）：マイコロジーテクノ株式会社  代表取締役  津野芳彰
寄託者のあて名：日本国  新潟県新潟市万代４−３−２０（郵便番号９５０−００８８）
当該寄託された微生物は、２００３年２月２７日に独立行政法人産業技術総合研究所  特許生物寄託センターへ国内寄託した微生物（受託番号ＦＥＲＭ  Ｐ−１９２４１）を、２００４年４月１５日に国際寄託（受託番号ＦＥＲＭ  ＢＰ−１００１１）に移管したものである。
その他、当該微生物の特徴に関する情報
微生物の種類：かび
分類学上の位置：担子菌類  種未同定の菌核（菌糸塊）
培養条件：培地名  ポテトグルコース寒天培地  
培地組成  培地  １０００ｍＬあたり、ジャガイモ２００ｇ浸出液、グルコース２０ｇ、寒天２０ｇ
培地のｐＨ  ５．６
培地の殺菌条件  オートクレーブ  １２１℃  ２０分
培養温度  ２４℃
培養期間  ５日間
酸素要求性  好気
培養方法  好気
光要求性  不要
継代培養条件  植え継ぎ間隔  ３ヶ月、保管温度  ５℃冷暗所
保管条件：凍結乾燥法による保管  否
Ｌ−乾燥法による保管  否
凍結法による保管（−８０℃付近）  否
上記方法で保管できない場合の保管法  継代培養による保管（植え継ぎ間隔  ３ヶ月、保管温度  ５℃冷暗所）
胞子（分生子）形成：無
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【国際調査報告】
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