【誤訳訂正書】
【提出日】平成16年4月9日(2004.4.9)
【誤訳訂正１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】特許請求の範囲
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】  単離されたポリヌクレオチドであって、以下：
ａ．伸長したメチル化していないＣｐＧ島を含むエレメント；
ｂ．発現可能な遺伝子であって、該発現可能な遺伝子は該ＣｐＧ島に作動可能に連結され、そしてさらに該発現可能な遺伝子は、該ＣｐＧ島に天然では連結されていない、発現可能な遺伝子；および
ｃ．該遺伝子に作動可能に連結されたプロモーターであって、該プロモーターは、該ＣｐＧ島に天然では作動可能に連結されていない、プロモーター
を含み、ここで２つ以上の組織型において該遺伝子の再現可能な転写の活性化が達成される、ポリヌクレオチド。
【請求項２】  前記伸長したメチル化していないＣｐＧ島が、少なくとも１つの内在性プロモーターを含む、請求項１に記載の単離されたポリヌクレオチド。
【請求項３】  前記伸長したメチル化していないＣｐＧ島が、多岐に転写する内在性二重プロモーターを含む、請求項２に記載の単離されたポリヌクレオチド。
【請求項４】  前記伸長したメチル化していないＣｐＧ島が、多岐に転写する内在性二方向性プロモーターを含む、請求項２に記載の単離されたポリヌクレオチド。
【請求項５】  前記メチル化されていないＣｐＧ島が、１つまたは複数の転写開始部位にまたがって３００ｂｐより長く広がっている、請求項１〜４のいずれかに記載の単離されたポリヌクレオチド。
【請求項６】  前記メチル化されていないＣｐＧ島が、５００ｂｐより長く広がっている、請求項１〜４のいずれかに記載の単離されたポリヌクレオチド。
【請求項７】  前記ポリヌクレオチドが、ヒトＴＡＴＡ結合タンパク質遺伝子ならびに各々１２ｋｂの５’隣接配列および３’隣接配列にわたる４４ｋｂのＤＮＡフラグメント、または２以上の組織型において発現可能な遺伝子の再現可能な転写の活性化を達成するそれらのフラグメントを含む、請求項１〜６のいずれかに記載の単離されたポリヌクレオチド。
【請求項８】  前記ポリヌクレオチドが、１ｋｂの５’隣接配列および５ｋｂの３’隣接配列を伴うヒトＴＡＴＡ結合タンパク質遺伝子にわたる２５ｋｂのＤＮＡフラグメントまたは２以上の組織型において発現可能な遺伝子の再現可能な転写の活性化を達成するそれらのフラグメントを含む、請求項１〜６のいずれかに記載の単離されたポリヌクレオチド。
【請求項９】  請求項１〜６のいずれかに記載の単離されたポリヌクレオチドであって、以下のヌクレオチド配列：
【化１】
2002522027.tif 000001
2002522027.tif 000002
2002522027.tif 000003
2002522027.tif 000004
2002522027.tif 000005
2002522027.tif 000006
を含む、ポリヌクレオチド。
【請求項１０】  前記ポリヌクレオチドが、３０ｋｂの５’隣接配列および２０ｋｂの３’隣接配列を伴うヒトｈｎＲＮＰ  Ａ２遺伝子にわたる６０ｋｂのＤＮＡフラグメントまたは２以上の組織型において発現可能な遺伝子の再現可能な転写の活性化を達成するそれらのフラグメントを含む、請求項１〜６のいずれかに記載の単離されたポリヌクレオチド。
【請求項１１】  ５ｋｂの５’隣接配列および１．５ｋｂの３’隣接配列を伴うヒトｈｎＲＮＰ  Ａ２遺伝子にわたる１６ｋｂのＤＮＡフラグメント、または２以上の組織型において発現可能な遺伝子の再現可能な転写の活性化を達成するそれらのフラグメントを含む、請求項１〜６のいずれかに記載の単離されたポリヌクレオチド。
【請求項１２】  請求項１〜６のいずれかに記載の単離されたポリヌクレオチドであって、以下のヌクレオチド配列：
【化２】
2002522027.tif 000007
2002522027.tif 000008
2002522027.tif 000009
2002522027.tif 000010
2002522027.tif 000011
2002522027.tif 000012
2002522027.tif 000013
2002522027.tif 000014
2002522027.tif 000015
を含む、ポリヌクレオチド。
【請求項１３】  請求項１２に記載の単離されたポリヌクレオチドであって、以下の配列：
【化３】
2002522027.tif 000016
2002522027.tif 000017
2002522027.tif 000018
2002522027.tif 000019
2002522027.tif 000020
2002522027.tif 000021
2002522027.tif 000022
2002522027.tif 000023
2002522027.tif 000024
の１〜８２８６の配列、１〜６２６４の配列、１〜５６３６の配列、４１０２〜８２８６の配列、１〜７６２７の配列、または１〜９１２７の配列を含む、ポリヌクレオチド。
【請求項１４】  請求項１〜１３のいずれかに記載のポリヌクレオチドを含む、ベクター。
【請求項１５】  発現可能な遺伝子がクローン化され得る多重クローニング部位をさらに含む、請求項１４に記載のベクター。
【請求項１６】  前記多重クローニング部位に作動可能に連結されたポリアデニル化部位をさらに含む、請求項１５に記載のベクター。
【請求項１７】  ＣＭＶプロモーターを含む、請求項１４〜１６のいずれかに記載のベクター。
【請求項１８】  前記ベクターがエピソームベクターである、請求項１４〜１７のいずれかに記載のベクター。
【請求項１９】  前記ベクターが組み込み型ベクターである、請求項１４〜１７のいずれかに記載のベクター。
【請求項２０】  前記ベクターがプラスミドである、請求項１４〜１７のいずれかに記載のベクター。
【請求項２１】  前記発現可能な遺伝子が治療用核酸である、請求項１４〜２０のいずれかに記載のベクター。
【請求項２２】  請求項１４〜２１のいずれかに記載のベクターであって、以下の配列：
【化４】
2002522027.tif 000025
2002522027.tif 000026
2002522027.tif 000027
2002522027.tif 000028
2002522027.tif 000029
2002522027.tif 000030
2002522027.tif 000031
2002522027.tif 000032
2002522027.tif 000033
の１〜８２８６のヌクレオチド、ＣＭＶプロモーター、多重クローニング部位、ポリアデニル化配列、および適切な制御エレメントの下にある選択可能なマーカーをコードする遺伝子を含む、ベクター。
【請求項２３】  以下：
【化５】
2002522027.tif 000034
に図解して説明される、ＣＥＴ２００ベクター。
【請求項２４】  以下：
【化６】
2002522027.tif 000035
に図解して説明される、ＣＥＴ２１０ベクター。
【請求項２５】  請求項１４〜２４のいずれかに記載のベクターでトランスフェクトされた、宿主細胞。
【請求項２６】  遺伝子治療における使用のための、伸長したメチル化していないＣｐＧ島を含む単離されたポリヌクレオチド、または請求項１４〜２４のいずれかに記載のベクター、または請求項２５に記載の宿主細胞。
【請求項２７】  遺伝子治療における使用のための組成物の製造における、伸長したメチル化していないＣｐＧ島を含むポリヌクレオチド、または請求項１４〜２４のいずれかに記載のベクター、または請求項２５に記載の宿主細胞の使用。
【請求項２８】  有効用量の伸長したメチル化していないＣｐＧ島を含むポリヌクレオチド、請求項１４〜２４のいずれか１項に記載のベクター、または請求項２５に記載の宿主細胞を含む、薬学的組成物。
【請求項２９】  薬学的に受容可能な賦形剤との組み合わせにおいて、伸長したメチル化していないＣｐＧ島を含むポリヌクレオチド、または請求項１４〜２４のいずれか１項に記載のベクター、または請求項２５に記載の宿主細胞を含む、薬学的組成物。
【請求項３０】  所望の遺伝子産物を得るための細胞培養系における使用のための、伸長したメチル化していないＣｐＧ島を含むポリヌクレオチド、または請求項１４〜２４のいずれか１項に記載のベクター、または請求項２５に記載の宿主細胞。
【請求項３１】  内在性遺伝子の発現を増加させるための、伸長したメチル化していないＣｐＧ島を含む単離されたポリヌクレオチドの使用であって、該使用は、該内在性遺伝子と作動可能に連結される位置で細胞のゲノム中に該ポリヌクレオチドを挿入し、それにより該遺伝子の発現レベルを増加させる工程を包含する、使用。
【請求項３２】  単離された遺伝子の発現を増加させる方法であって、該遺伝子を含むポリヌクレオチドを、ゲノムにおける該遺伝子のネイティブな位置で、伸長したメチル化していないＣｐＧ島と作動可能に連結される位置に挿入する工程を包含する、方法。
【請求項３３】  伸長したメチル化していないＣｐＧ島を含むポリヌクレオチドを含有する細胞を含む、非ヒトトランスジェニック動物であって、該ポリヌクレオチドが人工的に導入された、非ヒトトランスジェニック動物。
【請求項３４】  アンチセンス遺伝子配列の発現を得て、対応する遺伝子配列の発現を不活化するための、伸長したメチル化していないＣｐＧ島を含む単離されたポリヌクレオチドの使用。
【請求項３５】  発現ライブラリーの調製における、伸長したメチル化していないＣｐＧ島を含む単離されたポリヌクレオチドの使用。
【請求項３６】  非ヒト動物において発現可能な遺伝子を同定するための方法における、伸長したメチル化していないＣｐＧ島を含む単離されたポリヌクレオチドの使用であって、該方法は、非ヒト動物の胚幹細胞内に該ポリヌクレオチドを含む構築物を挿入する工程を包含し、ここで、該構築物は、発現される遺伝子内への挿入後に薬物選択を可能にする、使用。
【請求項３７】  伸長したメチル化していないＣｐＧ島を含む他の配列を同定するためのアッセイにおける、伸長したメチル化していないＣｐＧ島を含む単離されたポリヌクレオチド、またはそのフラグメントの使用。
【請求項３８】  作動可能に連結された遺伝子の再現可能な転写の活性化を容易にする伸長したメチル化していないＣｐＧ島を含むポリヌクレオチドを同定するための方法であって、該方法は以下：
（ｉ）伸長したメチル化していないＣｐＧ島を含むポリヌクレオチドを含むベクターで細胞をトランスフェクトすることによって、候補ポリヌクレオチドを試験する工程であって、ここで該ベクターは、該ポリヌクレオチドに作動可能に連結されたマーカー遺伝子を含む、工程；および
（ｉｉ）該マーカー遺伝子の発現を決定する工程、
を包含する、方法。
【誤訳訂正２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】発明の名称
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【発明の名称】遍在性クロマチンオープニングエレメント（ＵＣＯＥ）を含むポリヌクレオチド
【誤訳訂正３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０００１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０００１】
本発明は、ＬＣＲ由来ではない遍在性クロマチンオープニングエレメント（ｕｂｉｑｕｉｔｏｕｓ  ｃｈｒｏｍａｔｉｎ  ｏｐｅｎｉｎｇ  ｅｌｅｍｅｎｔ）（ＵＣＯＥ）を含むポリヌクレオチドに関する。本発明はまた、このポリヌクレオチド配列を含むベクター、このベクターを含む宿主細胞、治療およびアッセイにおけるこのポリヌクレオチド、ベクター、または宿主細胞の使用、ならびにＵＣＯＥを同定する方法に関する。
【誤訳訂正４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０００２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０００２】
高等真核生物におけるクロマチン構造の現在のモデルは、遺伝子が「ドメイン」に組織化されていると仮定している（ＤｉｌｌｏｎおよびＧｒｏｓｖｅｌｄ、１９９４）。クロマチンドメインは、ヒトβ−グロビンファミリー（Ｇｒｏｓｖｅｌｄら、１９９３）のように厳密な組織特異的様式で発現される遺伝子、ヒトＴＢＰ／Ｃ５遺伝子座（Ｔｒａｃｈｔｕｌｅｃ，Ｚ．ら、１９９７）のような遍在的に発現される遺伝子、またはマウスγ／δＴＣＲ／ｄａｄ−１遺伝子座（Ｈｏｎｇら、１９９７；Ｏｒｔｉｚら、１９９７）ならびにヒトα−グロビン遺伝子座（Ｖｙａｓら、１９９２）のような組織特異的に発現される遺伝子および遍在的に発現される遺伝子の混合物、の群からなり得る。２つの異なる組織特異性を有する遺伝子もまた、密接に連鎖され得る。例えば、ヒト成長ホルモンおよび絨毛性体乳腺発育ホルモン遺伝子（Ｊｏｎｅｓら、１９９５）。クロマチンドメインは、閉鎖した「凝縮された」転写的にサイレントな状態、または「非凝縮性の」開かれかつ転写的に能力を有する立体配置のいずれかで存在すると予見される。ＤＮａｓｅ  Ｉ感受性、ＤＮＡの低メチル化およびヒストンの高アセチル化によって特徴付けられる開いたクロマチン構造の確立は、遺伝子発現の開始に対する先行条件であると考えられる。
【誤訳訂正５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０００４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０００４】
すべてのＬＣＲは、顕著な組織特異的成分または組織を制限された成分を有する遺伝子ドメインと関連し、そして一連のＤＮａｓｅ  Ｉ高感受性部位（ｈｙｐｅｒｓｅｎｓｉｔｉｖｅ  ｓｉｔｅ）（これは、それらが調節する遺伝子の５’（Ｇｒｏｓｖｅｌｄら、１９８７；ＣａｒｓｏｎおよびＷｉｌｅｓ、１９９３；Ｂｏｎｉｆｅｒら、１９９４；Ｊｏｎｅｓら、１９９５；Ｍｏｎｔｏｌｉｕら、１９９６）、または３’（Ｇｒｅａｖｅｓら、１９８９）のいずれかに位置し得る）と関連する。さらに、ＬＣＲエレメントは、近接で隔てられた遺伝子間に存在することが近年見出された（Ｈｏｎｇら、１９９７；Ｏｒｔｉｚら、１９９７）。ＬＣＲ様エレメントはまた、遺伝子内にイントロンの位置を有することが報告されている（Ａｒｏｎｏｗら、１９９５）。研究されたいくつかの場合において、これらのエレメントは、組織特異的転写因子結合部位および遍在性転写因子結合部位の大きなクラスターに対応する（Ｔａｌｂｏｔら、１９９０；Ｐｈｉｌｉｐｓｅｎら、１９９０；Ｐｒｕｚｉｎａら、１９９１；Ｌａｋｅら、１９９０；Ｊａｒｍａｎら、１９９１；Ａｒｏｎｏｗら、１９９５）。
【誤訳訂正６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２８】
本発明のＵＣＯＥは、任意のエレメントであり得、このエレメントは、クロマチンを開くかまたはクロマチンを開いた状態に維持するかして、少なくとも２つの異なる組織型の細胞における作動可能に連結された遺伝子の再現可能な発現を容易にするが、ただしこのエレメントは、ＬＣＲに由来しない。好ましい実施態様において、ＵＣＯＥは、伸長したメチル化していないＣｐＧ島を含む。ＣｐＧ島は、バルクＤＮＡにおける平均４０％と比較して、平均ＧＣ含量約６０％を有する。当業者は、標準技術を使用して（例えば、ＣおよびＧ配列に特異的な制限酵素を使用して）ＣｐＧ島を容易に同定し得る。このような技術は、Ｌａｒｓｅｎら、１９９２およびＫｏｌｓｔｏら、１９８６に記載されている。伸長したメチル化していないＣｐＧ島とは、１より多い転写開始部位を包含する領域にわたって伸長し、そして／または３００ｂｐを超えて、そして好ましくは５００ｂｐを超えて伸長する、メチル化していないＣｐＧ島である。
【誤訳訂正７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２００
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２００】
トランスジェニックマウス系統であるＴＬＮ：３、ＴＬＮ：８、およびＴＬＮ：２８の種々の組織由来の総ＲＮＡ（１μｇ）を、上記の分析手順に供し、そしてＰｈｏｓｐｈｏｒＩｍａｇｅｒ分析によって定量化した（図８）。すべてのマウスが、これら２つの遺伝子のインタクトな単一のコピーを保有する、分析されたすべての組織（ＴＬＮ：３を含む）において、ヒトのＴＢＰ導入遺伝子およびＣ５導入遺伝子の両方の有意なレベルの発現を示した。最も重要なことには、特にＣ５について、所定のマウス系統内の組織間において再現可能なレベルの発現が観察された。このことは、おそらくＴＬＮクローンが、遍在性のクロマチンを開く能力を保有することを示す。しかし、導入遺伝子コピー数あたりの発現レベルにおける幾分の変動が、マウス系統間で観察された。さらに、ＴＬＮ：８系統における組織間のＴＢＰ発現もまた、５〜４０％変動した。これらの結果は、ＴＬＮがクロマチンを開く能力を保有するが、Ｃ５そして特にＴＢＰプロモーターには正および負の転写干渉をする傾向があることを示唆する。このことは、同様に、このクローンのＴＢＰ領域およびＣ５領域の固有の転写活性化能力が弱く、従って位置効果を超える優性効果を常には発揮し得ないことを意味する。このことは、この領域のクロマチンを開くＵＣＯＥ効果であるように思われるものとは対照的であり、これは強力で、そしてこのような位置効果を無効にするように思われる。この仮説は、例えば、ＴＬＮ：８系統におけるＣ５についてのプロモーターを有する脾臓と筋肉との間のＴＢＰレベルの比率と比較して、より弱いＴＢＰプロモーターが、より可変性である傾向があるという観察によって支持される（図８）。
【誤訳訂正８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２０２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２０２】
（ＴＢＰ遺伝座の４０ｋｂサブクローンの発現分析）
トランスジェニックマウスにおける、ｐＣＰ２−ＴＬＮクローンによって与えられる再現可能で生理学的なレベルの発現は、これが、遍在性のクロマチンを開く能力を保有することを示す。この活性を担うＤＮＡの領域の詳細なマッピングに対する最初の工程として、本発明者らは、ヒトＴＢＰ遺伝座の４０ｋｂのサブクローン（ｐＣＰ２−ＴＳＮ；図１ａ）を分析することを開始した。このｐＣＰ−ＴＳＮクローンは、ＴＢＰ遺伝子の周辺に１２ｋｂの５’隣接配列および３’隣接配列の両方を保有する。結果として、これは、完全なＴＢＰ遺伝子および３’を短縮化したＣ５の変異体のみを保有する。
【誤訳訂正９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２０５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２０５】
これらのデータは、再現可能で生理学的なレベルの発現が、単一および複数の導入遺伝子コピー数の両方でｐＣＰ２−ＴＳＮによって生成され得ることを実証する。このことは、このゲノムクローンが、遍在性のクロマチンを開く能力を保有することを強力に示唆する。導入遺伝子コピーあたりの生理学的レベルよりも著しく高い発現レベルを生じる明白な「正の」位置効果を示す多くのクローン（例えば、番号４、３３、および６）が、明らかに存在する。このことは、既に開いた活性なクロマチン内で導入遺伝子の組み込みが行なわれる特定の場合において予期される結果である。これらの状況下で、強力な転写エンハンサーの付近での存在は、本質的に弱いＴＢＰプロモーターに対して刺激効果を有することが予期される。
【誤訳訂正１０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２０８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２０８】
ｐＢＬ−ＴＰＯ−ｐｕｒｏ構築物は、ＴＳＮ構築物を用いて得られた結果と類似の結果を与えた（図３７）。このデータは、再現可能な生理学的レベルの発現が、単一および複数の導入遺伝子コピー数で、ＴＳＮおよびＴＰＯの両方によって、生成され得ることを実証する。このデータは、遍在性のクロマチンを開く能力を保有するゲノムクローンと一致する。この推測はさらに、ＴＰＯクローン番号７（２コピー）、２９（単一コピー）、および３４（２コピー）が動原体性の組み込み事象である（データを以下に示す）という知見によってさらに増強され、そしてこれは、ゲノムフラグメントがヘテロクロマチン環境内から発現される能力を有することを実証する
導入遺伝子コピーあたりの生理学的レベルよりも著しく高い発現レベルを生じる明白な「正の」位置効果を示す、多数のクローン（例えば、図３７、クローン１１）が明らかに存在する。このことは、既に開いた活性なクロマチン内で導入遺伝子の組み込みが行なわれる特定の場合において予期される結果である。これらの状況下で、強力な転写エンハンサーの付近での存在は、本質的に弱いＴＢＰプロモーターに対して刺激効果を有することが予期される。
【誤訳訂正１１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２１０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２１０】
（ＤＮａｓｅ  Ｉ高感受性部位のマッピング）
すべての既知のＬＣＲエレメントは、高度に組織特異的なＤＮａｓｅ  Ｉ高感受性の領域であることが見出されており、これは、これらのエレメントが生成すると考えられる非常に開いたクロマチン立体配置を暗示する。従って、本発明者らは、ヒトＴＢＰ遺伝子内およびこの周辺の両方でＤＮａｓｅ  Ｉ高感受性（ＨＳ）部位の存在について分析することを開始した。図１２は、ヒト骨髄性白血病Ｋ５６２細胞株由来の核を用いる一連の実験を要約する。これは、ＴＢＰ遺伝子の１２ｋｂの５’から開始し、そして３’を４．５ｋｂ伸長する４０ｋｂの領域にわたって、ＤＮａｓｅ  Ｉ  ＨＳ部位をマッピングする。この領域全体を通して明らかであるＨＳ部位のみが、Ｃ５遺伝子およびＴＢＰ遺伝子の隣接したプロモーター領域にマッピングされる（図１２、上パネル、ＨｉｎｄＩＩＩ消化／ＨｉｎｄＩＩＩ−ＸｂａＩプローブ）。これらのＨＳ部位は、一過的トランスフェクションアッセイによって決定されたような、以前に同定されたＴＢＰ遺伝子発現およびＣ５遺伝子発現について重要なプロモーターエレメントと非常に相関する（Ｔｕｍａｒａ，Ｔ．ら、１９９４；ＦｏｕｌｄｓおよびＨａｗｌｅｙ、１９９７）。しかし、ＬＣＲ型エレメントがこの遺伝子座内に存在する場合、それらは、ＴＢＰ遺伝子およびＣ５遺伝子の両方の転写開始部位からかなり遠いように思われる。これは、遍在性のクロマチンを開く能力の最初の指標を与えた、ＴＢＰ遺伝子にわたる４０ｋｂのクローンの外側に、いかなるＬＣＲ型エレメントをも配置する。
【誤訳訂正１２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２１６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２１６】
ヒト組織内のＨＰ１γ遺伝子の発現パターンを、広範なヒトの組織および細胞型由来のポリ（Ａ）+−ＲＮＡで調製したドットブロットで評価した。この結果（図３８）は、ｈｎＲＮＰ−Ａ２のような遺伝子もまた遍在的に発現されることを示す。従って、この２つの遺伝子は、ＴＢＰ遺伝子座の遍在的に発現される遺伝子ドメインと類似した遍在的に発現される遺伝子ドメインを形成するようであり得る。
【誤訳訂正１３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２２０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２２０】
（トランスジェニックマウスにおけるｈｎＲＮＰ  Ａ２遺伝子座の６０ｋｂのサブクローンの分析）
ＭＡ１６０  ｐＣＹＰＡＣ由来クローンを用いて得られデータは、このゲノムフラグメントが遍在性のクロマチンを開く能力を有することを示す。この活性の原因であるＤＮＡ領域の位置をさらに決定するために、ＭＡ１６０から得られた６０ｋｂのＡａｔＩＩサブフラグメント（Ａａ６０）を用いてトランスジェニックマウスを作製した（図１３Ｂ）。このフラグメントは、ｈｎＲＮＰＡ−２遺伝子の周りに３０ｋｂの５’隣接配列および２０ｋｂの３’隣接配列を有する。これまでに、Ａａ６０フラグメントを有する三匹のトランスジェニックマウス（Ａａ７、Ａａ２３およびＡａ３１）が作製されており、うち二匹（Ａａ２３および３１）は、育種されて系統が確立している。導入遺伝子の推定複製数は、Ａａ７が３個；Ａａ２３が１〜２個；Ａａ３１が１〜２個である。
【誤訳訂正１４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２２１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２２１】
ある範囲の組織からの全ＲＮＡ（１μｇ）を、上記のように導入遺伝子の発現について分析した。その結果を図１５に示し、そしてＰｈｏｓｐｈｏｒＩｍａｇｅｒにより定量した（図１７Ｂ）。これらのデータは、全てのトランスジェニックマウスが、全ての分析した組織において導入遺伝子の複製数当たりの再現可能なレベルで発現することを示す。これは、ＭＡ１６０により示される遍在性のクロマチンを開く能力がＡａ６０のサブフラグメントにおいて保存されることを示す。
【誤訳訂正１５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２２４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２２４】
示されたデータは、本発明者らが、再現可能な、遍在性の、トランスジェニックマウスの全ての組織における２つの異なる遺伝子座（ＴＢＰおよびｈｎＲＮＰ
Ａ２）での発現の生理学的レベルを入手し得ていることを、明らかに示す。これはＬＣＲに由来しない、遍在性のクロマチンを開く能力を有する遺伝子制御エレメントが実際に存在することを示す。
【誤訳訂正１６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２２５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２２５】
本明細書中に示されるデータは、他の遍在的に発現される遺伝子（例えば、ヒトβ−アクチン（例えば、Ｒａｙ，Ｐ．ら、１９９１；Ｙａｍａｓｈｉｔａら、１９９３；Ｄｅｐｒｉｍｏら、１９９６を参照のこと）、マウスヒドロキシメチルグルタリルＣｏＡレダクターゼ（Ｍｅｈｔａｌｉら、１９９０）、マウスアデノシンデアミナーゼ（Ｗｉｎｓｔｏｎら、１９９２および１９９６）、ヒトオルニチンデカルボキシラーゼ（Ｈａｌｍｅｋｙｔｏら、１９９１）およびマウスホスホグリセレートキナーゼ−１（Ｍｃｂｕｒｎｅｙら、１９９４））からのプロモーター−エンハンサーの組合わせを用いて、以前に公開された結果と全く異なる機能を実証していることに注目することが重要である。これらの初期の研究において、高度なレベルの発現が、組織のサブセットのみにおいて観察され、そしてクロマチンを開く機能は、実証も試験もされなかった。
【誤訳訂正１７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２２６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２２６】
ＴＢＰ遺伝子の場合、組織培養細胞からの発現データ（図１１）は、この遍在性のクロマチンを開く能力が１２ｋｂの５’および３’の隣接配列を有する４０ｋｂのゲノムフラグメント（ｐＣＰ２−ＴＳＮ、図１ａ）内に含まれることを示す。
【誤訳訂正１８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２２７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２２７】
ｈｎＲＮＰ  Ａ２遺伝子にわたる６０ｋｂのフラグメント（Ａａ６０；図１３Ｂ）を有するトランスジェニックマウスのデータは、遍在性のクロマチンを開く能力を有する領域がこのフラグメントに含まれることを示す（図１５〜１７）。
【誤訳訂正１９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２２８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２２８】
これまでにこれらの領域にマッピングされたＤｎａｓｅ  Ｉ  ＨＳ部位のみは、ＬＣＲ型エレメントよりもむしろ古典的なプロモーターに対応する。従って、遍在性クロマチンオープニングエレメント（ＵＣＯＥ）として作用するＤＮＡの領域は、ＬＣＲエレメント（これは、組織特異的または制限的様式において発現される遺伝子と関連する）の定義と一致しない。従って、ＵＣＯＥおよびそれらの活性は、ＬＣＲおよびＫＣＲ由来のエレメントと明らかに区別され得る。
【誤訳訂正２０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２５１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２５１】
（ＣＨＯ細胞におけるエリスロポエチンの発現）
プラスミドであるＣＥＴ３００、ＣＥＴ３０１およびｐＣＭＶ−ＥＰＯを制限エンドヌクレアーゼＤｒａＩＩＩを用いて直線化した。次いで、制限されたＤＮＡをフェノール−クロロホルムでの抽出、続くエタノール沈殿により精製した。ＤＮＡを滅菌水に再懸濁し、そして等モル量のプラスミドをＣＨＯ細胞にエレクトロポレーションした。生存細胞を２２５ｃｍ3の培養フラスコにプレートし、そして、０．６ｍｇ／ｍｌ  Ｇ４１８を含有する完全培地での２４時間後の培地交換により、安定に形質転換した細胞を選択した。Ｇ４１８耐性コロニーが出現するまで（エレクトロポレーション後約１０日）この培地中で細胞を増殖させた。次いで、フラスコから剥離し、そして細胞を１ｍｌの完全培地を含有する６ウェルシャーレ中で１０6細胞／ウェルに播種した。４８時間後、培地を除去し、そして、Ｑｕａｎｔｉｋｉｎｅ（登録商標）ＩＶＤ（登録商標）Ｈｕｍａｎ  ＥＰＯイムノアッセイキット（Ｒ＆Ｄ  システム、Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＵＳ）を用いる酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）により、培地中のエリスロポエチンのレベルを定量した。構築物ＣＥＴ３００、ＣＥＴ３０１およびｐＣＭＶ−ＥＰＯにより産生されたＥＰＯのレベルは、それぞれ１７８０  Ｕ／ｍｌ、１０４０  Ｕ／ｍｌおよび１２８  Ｕ／ｍｌであった（図４０）。従って、順方向および逆方向に７．５ｋｂのＲＮＰフラグメントを含有する構築物、ＣＥＴ３００およびＣＥＴ３０１は、上記の実験において、ＥＰＯの発現を駆動する強力な遍在性のＣＭＶプロモーターを含むコントロールのプラスミドｐＣＭＶ−ＥＰＯよりも、それぞれ約１４倍および８倍高いレベルでＥＰＯを産生した。