【手続補正書】
【提出日】平成17年11月1日(2005.11.1)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】発明の名称
【補正方法】変更
【補正の内容】
【発明の名称】細胞培養装置
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】  磁性体を含有する粒子状支持体の表面の少なくとも一部に温度感受性樹脂を被覆したマイクロキャリアを使用して接着依存性細胞を培養する細胞培養装置であって、前記マイクロキャリア上で培養した細胞を温度変化により剥離するための剥離機構と、剥離したマイクロキャリアと細胞とを磁場を付与することによって分離するための磁場分離機構を備えた培養槽を有することを特徴とする細胞培養装置。
【請求項２】  磁性体を含有する粒子状支持体の表面の少なくとも一部に温度感受性樹脂を被覆したマイクロキャリアを使用して接着依存性細胞を培養する細胞培養装置であって、前記マイクロキャリア上で培養した細胞を温度変化により剥離するための剥離機構を有する培養槽と、前記培養槽と接続され、剥離したマイクロキャリアと細胞とを磁場を付与することによって分離するための磁場分離機構を備えたマイクロキャリア回収部とを有することを特徴とする細胞培養装置。
【請求項３】  磁性体を含有する粒子状支持体の表面の少なくとも一部に温度感受性樹脂を被覆したマイクロキャリアを使用して接着依存性細胞を培養する細胞培養装置であって、前記マイクロキャリア上で培養した細胞を温度変化により剥離するための剥離機構と、剥離したマイクロキャリアと細胞とを磁場を付与することによって分離するための第一の磁場分離機構及び前記培養槽と接続され、剥離したマイクロキャリアと細胞とを磁場を付与することによって分離するための第二磁場分離機構を備えたことを特徴とする細胞培養装置。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、接着依存性細胞の培養担体としてマイクロキャリアを使用した細胞培養装置に関する。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００８】
従って、本発明の課題は、接着依存性細胞の培養担体として用いるマイクロキャリアから細胞を容易に、高密度、大量かつ高い回収効率で選択的に回収可能な細胞培養装置を提供することである。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１０
【補正方法】削除
【補正の内容】
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１１】
すなわち、本発明に係る接着依存性細胞の培養装置は、磁性体を含有する粒子状支持体の表面の少なくとも一部に温度感受性樹脂を被覆したマイクロキャリアを使用して接着依存性細胞を培養する細胞培養装置であって、前記マイクロキャリア上で培養した細胞を温度変化により剥離するための剥離機構と、剥離したマイクロキャリアと細胞とを磁場を付与することによって分離するための磁場分離機構を備えた培養槽を有する；あるいは
前記マイクロキャリア上で培養した細胞を温度変化により剥離するための剥離機構を有する培養槽と、前記培養槽と接続され、剥離したマイクロキャリアと細胞とを磁場を付与することによって分離するための磁場分離機構を備えた細胞回収部とを有する；あるいは
複数の磁場分離機構を備えたことを特徴とするものである。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１２】
このように、既存の培養装置に剥離機構と磁場分離機構を設けることによって、あるいは既存の培養装置に剥離機構を設け、後段に磁場分離機構を設けることによって、磁性体を含有する粒子状支持体の表面の少なくとも一部に温度感受性樹脂を被覆したマイクロキャリアを使用して培養された接着依存性細胞を剥離機構により容易に剥離し、マイクロキャリアを磁場分離機構により分離し、剥離した細胞を選択的に回収することが可能である。
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１３】
なお、後記する発明の実施の形態では、本発明の細胞培養装置に用いる培養方法として、
マイクロキャリア上で接着依存性細胞を培養し、
培養した細胞を温度変化により前記マイクロキャリアから剥離し、
マイクロキャリアを磁気分離することによって、剥離した細胞を選択的に回収することとしている。
このように構成することによって、マイクロキャリアの表面上で培養された接着依存性細胞を温度変化により、前記温度感受性樹脂の接着性を変化させることにより、マイクロキャリアから剥離し、磁場処理することによってマイクロキャリアを容易に分離し、剥離した細胞を選択的に回収することができる。
【手続補正９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２７】
（第一の培養装置）
まず、図２（ａ）を用いて、本実施形態に係る培養装置１０の一実施形態（以下、第一の培養装置と言う）の構成を説明する。
第一の培養装置１０は、導入口１２、排出口１３を備えた従来公知の浮遊培養槽１１において、温度変化によりマイクロキャリア１上で培養した細胞を温度変化により剥離するための剥離機構１４と、細胞を剥離したマイクロキャリアと細胞とを磁場を付与することによって分離するための磁場分離機構１５を培養槽の外部に備えている。剥離機構１４として、具体的には培養装置に本来備わる、浮遊培養槽１１の培地の温度を制御するサーモスタット機構を採用した。この剥離機構１４の機能は、サーモスタットを制御する温度制御装置の温度を手動または自動で所定温度に変化させることによって達成される。また、磁場分離機構１５は、磁場付与手段から構成されており、具体的には磁場付与手段として浮遊培養槽１１に対し着脱可能に設置したネオジミウム、鉄、硼素からなる希土類永久磁石を使用した。なお、図２（ａ）および（ｂ）において、培養槽１１に設けられた攪拌手段、酸素供給口等の従来と同様の部分の記載、説明は省略した。
【手続補正１０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２８】
次に、本実施形態に係る第一の培養装置の動作を説明する。本装置の動作は、大別して細胞培養工程、細胞剥離工程、細胞分離回収工程とからなる。
細胞培養工程においては、培養槽１１内に所定の培養液と、所定量の細胞を播種した本実施形態に係るマイクロキャリア１を導入した。サーモスタット機構を動作させ、培養槽１１内の温度を従来公知の条件、好ましくは３７℃に設定した。接着依存性細胞をマイクロキャリア１に接着した状態で、大量に浮遊培養した。
細胞剥離工程においては、剥離機構１４を動作させ、培養液の液温を温度感受性樹脂の上限臨界溶解温度または下限臨界溶解温度に変化させることにより、温度感受性樹脂の表面特性を疎水性から親水性へと変化させた。この温度感受性樹脂の特性変化により、マイクロキャリア上で培養された接着依存性細胞がマイクロキャリア１から剥離した。その結果、培地、マイクロキャリアから剥離した接着依存性細胞と、マイクロキャリアとの混合懸濁液が生成した。
【手続補正１１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４６】
以上説明した通り、本実施形態は以下の優れた効果を奏する。
本発明の実施形態に係るマイクロキャリアによると、マイクロキャリアの表面に被覆されている温度感受性樹脂は、温度により接着性が変化するので、培養液（培地）の温度、すなわちマイクロキャリアの温度を変化させることによって、接着依存性細胞をマイクロキャリアから剥離し、そして磁場処理することによって磁性体を含有するマイクロキャリアを効果的に分離し、剥離した細胞を選択的に回収することができる。
【手続補正１２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４７】
本発明の実施形態に係る培養装置によると、培養装置として既存のサーモスタットを剥離機構として利用できるため、既存の（剥離機構を含む）培養装置に磁場分離機構を設けることによって、あるいは既存の（剥離機構を含む）培養装置の後段に磁場分離機構を設けることによって、本実施形態に係るマイクロキャリアを使用して培養された接着依存性細胞を剥離機構により容易に剥離し、マイクロキャリアを磁場分離機構により分離し、分離した細胞を選択的に回収することが可能となる。
本発明の実施形態に係る培養方法によると、マイクロキャリアの表面において培養された接着依存性細胞を温度変化によりマイクロキャリアから剥離し、磁場処理することによってマイクロキャリアを容易に分離することができ、細胞を選択的に回収できる。
【手続補正１３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４８】
【発明の効果】
本発明によれば、接着依存性細胞の培養担体として用いるマイクロキャリアから細胞を容易に、高密度、大量かつ高い回収効率で選択的に回収可能な細胞培養装置を提供することができる。