【誤訳訂正書】
【提出日】平成16年4月9日(2004.4.9)
【誤訳訂正１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】請求項１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【請求項１】
アルカロイドの総含有率が０．２％以下であり、かつ、フラボン、イソフラボン、カルコンおよびプテロカルパンを含有する抽出物であって、前記フラボンが、８−プレニルナリンゲニン、クシェノールＸ、８−プレニルケンペロール、レアキアノンＧおよびクシェノールＥを包含し、前記イソフラボンが、ダイゼインおよびゲニスタインを包含し、前記カルコンが、２，４，４’，６’−テトラヒドロキシ−３’−ラヴァンジュリル−２’−メトキシカルコンを包含し、前記プテロカルパンが、マアッキアインおよびマアッキアイングルコシドを包含する、ことを特徴とするソホラ種からの前記抽出物。
【誤訳訂正２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】請求項３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【請求項３】
アルカロイドを含有しないことを特徴とする、請求項１に記載の抽出物。
【誤訳訂正３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０００４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０００４】
人間または動物に対してエストロゲン作動作用のある物質、すなわちエストロゲンと相互作用する物質は、各種植物に含まれていることが分かっている。１６科を上回る植物のうちの３００種類を上回る植物から採取される少なくとも２０種類の、エストロゲン性／抗エストロゲン性を有する物質がこれまでに発見されている。公知の植物エストロゲンの大部分は、イソフラボン、リグナンまたはクメスタン類に属する。最近になって初めて、さらに効力の強い植物エストロゲン、すなわち８−プレニルナリンゲニンが確認された（Ｓ．Ｒ．Ｍｉｌｌｉｇａｎ  ｅｔ  ａｌ；Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎ．  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．  Ｍｅｔａｂ．  ８４，  ２２４９−２２５２［１９９９］）。試験管内における８−プレニルナリンゲニンのエストロゲン効力をＩｓｈｉｋａｗａ−Ｖａｒ−Ｉ細胞内のアルカリ性ホスファターゼを刺激することによって検査した。これにより、８−プレニルナリンゲニンが、クメストロール、ゲニスタインまたはダイゼインの如き従来公知の植物エストロゲンよりも著しく活発であり、１７βエストラジオールよりもわずかに弱い効果を発揮することが分かった。
【誤訳訂正４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０００５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０００５】
アメリカ合衆国、欧州、中国および日本の住民に対して行われた制御された疫学的調査によって、植物エストロゲンの食物による摂取と、各種腫瘍、特に乳癌および前立腺癌の発症との間には、密接な負の相関関係が存在することが示された。乳癌細胞および前立腺癌細胞の増殖に対する植物エストロゲンの抑制効果も動物実験において確認されている。植物エストロゲンの予防性は、これらの合成エストロゲンと天然エストロゲンとの組み合わせを区別する数多くの異なる生物学的特徴に基づくことは明らかである。投与量および内因性ホルモンの状態によって、植物エストロゲンは、エストロゲン作用、あるいは抗エストロゲン作用さえも有する。他の生物学的作用の例としては、チロシンキナーゼ、ＤＮＡトポイソメラーゼ、リボソームＳ６キナーゼ、オルニチンデカルボキシラーゼ、アロマターゼまたは５αレダクターゼの抑制が挙げられる。さらに、植物エストロゲンは抗酸化性を有することが多く、これらの様々な活性のすべてが組み合わさることによって腫瘍の発生および成長を抑制する役割が果たされることは明らかである（Ｔｈａｍ ｅｔ  ａｌ，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎ．  Ｅｎｄｏｃｒｉｎ．  Ｍｅｔａｂ．  ８３，２２２３−２２３５［１９９８］）。
【誤訳訂正５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０００６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０００６】
本発明の目的は、エストロゲンの欠乏、または、性ホルモンの代謝、特にエストロゲンの代謝における異常によって引き起こされる病状を予防および治療するのに好適な植物抽出物を提供することである。
【誤訳訂正６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１２】
ソホラフラヴェスセンス、その各成分または各成分群の様々な薬理学的特徴についてこれまで述べられている。特にアルカロイドには、抗不整脈作用、抗喘息作用および鎮咳効果、さらに抗潰瘍作用があると考えられている（Ｔａｎｇ  ａｎｄ  Ｅｉｓｅｎｂｒａｎｄ，上記参照）。抗腫瘍作用および免疫抑制性も確認されている。
【誤訳訂正７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１４】
Ｗ．Ｍ．Ｍａｚｕｒ  ｅｔ  ａｌ，  Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  １９９８，９，１９３−２００には、特にソホラジャポニカの種子を調査した場合の、イソフラボンホルモノネチン、バイオチャニンＡ、ダイゼイン、ゲニスタイン、クメストロール、およびマメ科種子に含まれるリグナンセコイソラリシレシノールおよびマタイレシノールの定量法について記述されている。
【誤訳訂正８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１６】
ＥＰ  ０  ９９８  ９２４  Ａ１には、トポイソメラーゼＩＩ抑制活性を有する植物から得られる化合物を含有する抗腫瘍治療薬が記載されている。従って、実施例８では、ソホラからレアキアノールＡを得ることについて触れている。この実施例では、ソホラの乾燥粉末を、還流下において、アセトンおよびメタノールで連続して抽出した。アセトン抽出物を減圧下において濃縮し、水と混ぜ合わせた。得られた混合物を、ベンゼン、エチルアセテートおよびｎ−ブタノールを用いる増分分散抽出に附した。エチルアセテート抽出物を減圧下において濃縮することによって残留物を得た。このようにして得られた残留物を、ベンゼン−アセトン溶媒混合物を用いるシリガゲルクロマトグラフィーで精製して、レアキアノールＡを得た。実施例８で説明されているエチルアセテート抽出物は、本発明に従って得られた抽出物がマアッキアインを含有し、マアッキアイングルコシドが非常に豊富（約５倍）であるという点で、本発明の抽出物とは異なる。これらの両方の化合物については、本発明者らが実施例５のエストロゲンレセプター−結合アッセイを利用して初めて示すことができた、本発明の抽出物の効力に関連する成分が取り扱われている。ＥＰ  ０  ９９８  ９２４  Ａ１には、エストロゲンの欠乏、または、性ホルモンの代謝、特にエストロゲンの代謝における異常によって引き起こされる病状を予防および治療するためのソホラ種の抽出物の使用について何も提案されていない。
【誤訳訂正９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１７】
本発明にとって特に好ましいソホラ種とは、ソホラフラヴェスセンスおよびソホラサブプロストラータである。その理由は、それらの水性アルコールによる根抽出物が本発明の意味合いにおいて驚くほど強力なエストロゲン作用を有していることが分かったからである。これらの水性アルコール抽出物は、さらに分離および精製することによって濃縮することが可能であった。確認された薬理作用は、抽出物中に存在するゲニスタインおよびダイゼインの如きイソフラボン、８−プレニルナリンゲニン、クシェノールＸ、８−プレニルケンペロール、レアキアノンＧおよびクシェノールＥの如きフラボン、マアッキアインおよびマアッキアイングルコシドの如きカルコンおよびプテロカルパン、並びに他の未確認のフラボニド様化合物の相互作用によって生じることが分かった。これに関連して、本発明者らによって新たに発見されたカルコン、すなわち下記式の２，４，４’，６’−テトラヒドロキシ−３’−ラヴァンジュリル−２’−メトキシカルコンも挙げておくべきである。
【誤訳訂正１０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２６】
前記方法の工程ｃ）で行われることとは、主に、アルカロイドの総含有量を少なくすることである。本発明により得られる抽出物は、総アルカロイド含有率が０．２％未満、好ましくは０．１％未満であるという点で特徴付けられる。特に、本発明により得られる抽出物は、アルカロイドを全く含有しない。この文脈において、「アルカロイドを含有しない」という句は、ＨＰＬＣの如き標準的な分析方法もってしてもアルカロイドを検出できないことを意味している。さらに、本発明の抽出物は、フラボン、イソフラボン、カルコンおよびプテロカルパンを含有するという点で特徴付けられる。ナリンゲニンのプレニル誘導体の如き、フラボン化合物をイソプレニル化することができる。イソフラボン化合物は、必要に応じて、モノ−、ジ−またはトリヒドロキシ置換またはｏ−メチル化することができる。さらに、前記抽出物は、グリコシド化フラボン化合物およびグリコシド化イソフラボン化合物を含有していてもよい。特に、本発明による抽出物は、マアッキアイン、マアッキアイングルコシド、８−プレニルナリンゲニン、クシェノールＸ、８−プレニルケンペロール、レアキアノンＧ、クシェノールＥ、および２，４，４’，６’−テトラヒドロキシ−３’−ラヴァンジュリル−２’−メトキシカルコンを含有する。
【誤訳訂正１１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２８】
本発明により得られる抽出物は、慣用の薬学的に許容できる添加剤と共に、カプセル、フィルム錠剤またはコーティング錠剤の如き薬剤へと加工することができる。前記慣用の薬学的に許容できる添加剤としては、フィルムおよびコーティング錠剤用の充填剤、結合剤、展張剤、潤滑剤および被覆剤、並びにカプセル用賦形剤としての油または脂肪を用いることができる。
【誤訳訂正１２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３７】
ＨＰＬＣ分析によれば、得られたエチルアセテート抽出物は、フラボン、イソフラボン、カルコン、プテロカルパン（例えば、８−プレニルナリンゲニン、ダイゼイン、クシェノールＸ、ノルクラリノン、マアッキアイン、ゲニスタイン、８−プレニルケンペロール）を含有していた。アルカロイドの形跡はなかった。
【誤訳訂正１３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００４５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００４５】
薬理的に関連のある物質のＨＰＬＣ含有率
マアッキアイングルコシド                    ２．８％
８−プレニルナリンゲニン                    ０．４％
マアッキアイン                              ０．６％
クシェノールＸ                              １．３％
８−プレニルケンペロール                    ０．７％
レアキアノンＧ                              ６．６％
クシェノールＥ                              ０．３％
２，４，４’，６’−テトラヒドロキシ−        ０．７％
３’−ラヴァンジュリル−２’−メトキ
シカルコン
【誤訳訂正１４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００４６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００４６】
ダイゼインおよびゲニスタインも確認された。アルカロイドは全く確認されなかった。
【誤訳訂正１５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００４７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００４７】
実施例５によるイーストアッセイにおいて挙げられた各物質についてエストロゲン活性が見られた。前記抽出物のエストロゲン活性は、実施例５によるイースト細胞を用いたレポーターゲン（Ｒｅｐｏｒｔｅｒｇｅｎ）アッセイによってもたらされた。図３を参照されたい。
【誤訳訂正１６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００５０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００５０】
実施例５：  ヒトαエストロゲンレセプターを発現する形質移入されたイースト細胞を用いた、生成されたエチルアセテート抽出物のエストロゲン活性の検査
抽出物のエストロゲン特性の検査は、イースト細胞（サッカロミセス属）を用いたレポーターゲンアッセイで行った。これらの細胞は、ヒトαエストロゲンレセプターおよび、エストロゲン反応成分と酵素βガラクトシダーゼの遺伝子とを含有する発現プラスミドに対しては安定である。すべてのサンプルを濃度が２０ｍｇ／ｍｌになるようにＤＭＳＯに溶かした後、希釈せずに、または１／１０もしくは１／１００の比または１μｌ対１００μｌの体積比でＤＭＳＯで希釈した後に、９６ウェル平底マイクロタイターディッシュ内の培地に移した。次に、１００μｌのイースト懸濁液と、色原体基質クロロフェノールレッド−β−Ｄ−ガラクトピラノシドとを添加した。各ディッシュに、前記培地のみ、前記溶媒のみまたは標準的な濃度の１７βエストラジオールの入ったコントロールウェルを設置した。イースト細胞を３２℃で７２時間培養した後、培地の吸収をマイクロタイターディッシュ光度計において５４０ｎｍで測定した。一部のサンプルは２回検査した。
【誤訳訂正１７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００５２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００５２】
前記アッセイの結果が図１、２および３に示されている。これにより、前記抽出物のエストロゲン活性を１７βエストラジオールの活性と比較した。この目的においては、「活性である」と呼べる抽出物は、１７βエストラジオールと比較した場合に、１７βエストラジオールの活性の曲線の明確に上昇している範囲（すなわち１７βエストラジオール濃度約０．１〜０．２ｎＭに対応する範囲）内で確立される１７βエストラジオールの活性に、その活性が一致する抽出物である。
【誤訳訂正１８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００５３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００５３】
特に、図１は、１７βエストラジオールと比較した、イーストアッセイ中のソホラフラヴェスセンスおよびソホラサブプロストラータからの（実施例１ａ）および２ａ）による）７０％［Ｖ／Ｖ］（６２％［Ｗ／Ｗ］）エタノール抽出物のエストロゲン活性を示している。
【誤訳訂正１９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００５４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００５４】
図２は、１７βエストラジオールと比較した、イーストアッセイ中のソホラフラヴェスセンスおよびソホラサブプロストラータから得られた本発明の抽出物（実施例１ｂ）および２ｂ）による、エチルアセテートで分散させた後の７０％［Ｖ／Ｖ］すなわち６２％［Ｗ／Ｗ］エタノール抽出物）のエストロゲン活性を示している。
【誤訳訂正２０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００５５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００５５】
図３は、１７βエストラジオールと比較した、イーストアッセイ中のソホラフラヴェスセンスから得られた本発明の抽出物（実施例３による、エチルアセテートで分散させた後の６０％［Ｗ／Ｗ］エタノール抽出物）のエストロゲン活性を示している。
【誤訳訂正２１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】図面の簡単な説明
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【図面の簡単な説明】
【図１】
１７βエストラジオールと比較した、イーストアッセイ中のソホラフラヴェスセンスおよびソホラサブプロストラータからの（実施例１ａ）および２ａ）による）７０％［Ｖ／Ｖ］（６２％［Ｗ／Ｗ］）エタノール抽出物のエストロゲン活性を示す。
【図２】
１７βエストラジオールと比較した、イーストアッセイ中のソホラフラヴェスセンスおよびソホラサブプロストラータから得られた本発明の抽出物（実施例１ｂ）および２ｂ）による、エチルアセテートで分散させた後の７０％［Ｖ／Ｖ］すなわち６２％［Ｗ／Ｗ］エタノール抽出物）のエストロゲン活性を示す。
【図３】
１７βエストラジオールと比較した、イーストアッセイ中のソホラフラヴェスセンスから得られた本発明の抽出物（実施例３による、エチルアセテートで分散させた後の６０％［Ｗ／Ｗ］エタノール抽出物）のエストロゲン活性を示す。
【誤訳訂正２２】
【訂正対象書類名】図面
【訂正対象項目名】図１（図面の中の説明）
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【図１（図面の中の説明）】
2004501201.tif 000001
【誤訳訂正２３】
【訂正対象書類名】図面
【訂正対象項目名】図２（図面の中の説明）
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【図２（図面の中の説明）】
2004501201.tif 000002