【手続補正書】
【提出日】平成15年9月26日(2003.9.26)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【発明の詳細な説明】
【発明の名称】真性糖尿病の処置
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は、特に強力且つ選択的なｃＧＭＰ  ＰＤＥ５阻害剤化合物、特に、真性糖尿病の処置のための化合物バルデナフィル（vardenafil）に関する。
【０００２】
Harrisons at Chapter 334: Diabetes Mellitus by J. Larry Jameson に詳述されるような改訂された真性糖尿病の分類には、下に挙げるような四つの主なグループが含まれる。概して、この分類は、現在理解されているような糖尿病の病因に基づいていてる。インスリン依存性糖尿病（ＩＤＤＭ）という用語は、１型糖尿病に代わって使われている。これら患者は、通常は免疫に媒介されたβ細胞破壊を有し、大部分が、絶対的インスリン欠乏を発症し且つケトーシス傾向にある。インスリン非依存性糖尿病（ＮＩＤＤＭ）という用語は、２型糖尿病に代わって使われているが、これは、最も一般的な形態の糖尿病を包含する。大部分の２型糖尿病患者は、インスリン抵抗性を示し、最後には、付随性インスリン分泌欠損症を発症する。第三のクラスには、インスリンの分泌および働きの遺伝的欠損、外分泌器官である膵臓の疾患、高血糖症を誘発する内分泌障害、薬剤誘発型の糖尿病、感染性原因の糖尿病、および増加した糖尿病発生数に関連している遺伝症候群が含まれる。妊娠糖尿病（ＧＤＭ）がなお、別のクラスにある。
【０００３】
真性糖尿病の病因学的分類
Ｉ．  １型糖尿病＊、通常は絶対的インスリン欠乏をもたらすβ細胞破壊：Ａ．免疫媒介性；Ｂ．特発性
II．  ２型糖尿病＊（相対的インスリン欠乏とともに優先的に存在するインスリン抵抗性〜インスリン抵抗性とともに優先的に存在する分泌欠損までありうる）
III．  他の特定のタイプ：
Ａ．  β細胞機能の遺伝的欠損：染色体１２、ＨＮＦ−１α（以前はＭＯＤＹ３）；染色体７、グルコキナーゼ（以前はＭＯＤＹ２）；染色体２０、ＨＮＦ−４α（以前はＭＯＤＹ１）；ミトコンドリアＤＮＡなど。
【０００４】
Ｂ．  インスリンの働きの遺伝的欠損：Ａ型インスリン抵抗性；妖精症；ラブソン・メンデンハル（Rabson-Mendenhall）症候群；脂肪組織萎縮性糖尿病など。
Ｃ．  外分泌器官である膵臓の疾患：膵炎；外傷／膵切除；新形成；嚢胞性線維症；ヘモクロマトーシス；フィブリン結石性膵疾患など。
【０００５】
Ｄ．  内分泌障害：末端肥大症；クッシング症候群；グルカゴノーマ；褐色細胞腫；甲状腺機能亢進症；ソマトスタチン産生腫瘍；アルドステロノーマなど。
Ｅ．  薬剤または化学物質誘発性：ヴァコア（vacor）；ペンタミジン；ニコチン酸；グルココルチコイド；甲状腺ホルモン；ジアゾキシド；βアドレナリンアゴニスト；チアジド；ジランチン；インターフェロンαなど。
【０００６】
Ｆ．  感染：先天性風疹；サイトメガロウイルスなど。
Ｇ．  例外的な免疫媒介型の糖尿病：「スティッフマン」症候群；抗インスリン受容体抗体など。
【０００７】
Ｈ．  糖尿病に時々関連する他の遺伝症候群：ダウン症候群；クラインフェルター症候群；ターナー症候群；ウォルフラム症候群；フリードライヒ運動失調；ハンチントン舞踏病；ローレンス・ムーン・ビードル症候群；筋緊張性ジストロフィー；ポリフィリン症；プラダー・ヴィリ症候群など。
【０００８】
IV．  妊娠糖尿病（ＧＤＭ）
＊いずれの型の糖尿病患者も、その疾患のある段階でインスリン処置を必要とすることがありうる。インスリンのこのような使用だけで患者を分類することはない。
【０００９】
出典：The expert Committee on the Diagnosis and Classification of Diabetes Mellitus, 1997。
２０００年には、世界中に１５４，３９２，０００人の糖尿病患者がいるであろうと推定されている。これらの内、１５，０００，０００人は米国内、９３４，０００人は英国内であろう。１９９８年について推定されたＷＨＯ管区内の男女双方の糖尿病患者の総数は、１１，６６８，０００人であった。したがって、２型糖尿病の処置のための有効且つ安全な経口療法が、医学的に大いに必要とされている。
【００１０】
本明細書中において、２型糖尿病の患者について成功した診断および処置は、若干のこれら患者の心臓血管病の発症の危険を減少させるであろうと提案する。真性糖尿病の主な病理は、グルコースを有効に調節できないことである。根本的な欠損は、本明細書中の前に概説されたように、糖尿病のタイプ間で異なる。
【００１１】
本発明により、哺乳動物の２型糖尿病を処置する方法であって、この哺乳動物に、有効量のバルデナフィルまたはその薬学的に許容しうる塩、溶媒和物または組成物を投与することを含む方法を提供する。
【００１２】
本明細書中において、２型糖尿病の患者について成功した診断および処置は、若干のこれら患者の心臓血管病の発症の危険を減少させるであろうと提案する。
真性糖尿病の主な病理は、グルコースを有効に調節できないことである。根本的な欠損は、本明細書中の前に概説されたように、糖尿病のタイプ間で異なる。
【００１３】
２型糖尿病の場合、インスリンの作用への抵抗性（インスリン抵抗性）は、肝、脂肪組織および骨格筋などの代謝標的器官で示される。インスリン抵抗性によって影響を受ける代謝経路には、肝および筋細胞内での糖生成、解糖、糖新生およびＧＬＵＴ−４輸送機構、更には、脂質生成、脂肪分解およびタンパク質合成が含まれる。
【００１４】
インスリンの作用への抵抗性は、インスリンの血管作用への内皮の減少した生物学的応答で認められることもありうる。すなわち、インスリンは、少なくとも一部分は酸化窒素の働きによって一つまたは複数の血管の弛緩を促す。次に、内皮で生じた酸化窒素は、血管中でｃＧＭＰ産生を刺激して、血管を弛緩させるまたは拡張させる。血管のこの開放は、より多くの血液を流動させるが、これは、心臓のような決定的臓器により多くの血流が必要とされる場合に特に重要である。インスリン抵抗性の患者の内皮からは、減少した酸化窒素（ＮＯ）放出があること示されている。この減少した酸化窒素放出は、インスリンによるだけでなく、アセチルコリンのような他の重要な血管拡張薬にもよる。インスリンのこの血管作用は、代謝、特に、必ずしもこれに制限されるものではないが、グルコース代謝を調節するインスリンの作用に貢献していると考えられる。
【００１５】
酸化窒素の血管作用に加えて、ＮＯは、骨格筋によって取り込まれるグルコースへの直接的作用も有する。すなわち、in vitro でのＮＯドナー物質（ニトロプルシド）での処置またはｃＧＭＰ類縁体での処置は、グルコース取込み（ＧＬＵＴ４グルコース輸送体による輸送）を増加させる。この血管拡張に依存しない経路は、本明細書中にその内容が援用される G.J.Etgen, D.A.Fryburg and E.M.Gibbs in Diabetes, 46,1997 pp. 1915-1919 に記載されている。本明細書中において、総合すると、酸化窒素およびｃＧＭＰは、インスリンの作用に影響を与える、作用を媒介するまたは模擬する直接的組織レベル作用および血管作用を有するであろうと考えられる。
【００１６】
「正常な」生理機能において、ＮＯは、内皮層を介して拡散し、血管平滑筋細胞（ＶＳＭＣ）弛緩を生じ、そしてグアニル酸シクラーゼの活性化およびサイクリックグアノシン一リン酸産生を経て、血管拡張（vasodilation）をもたらす。長期にわたる観点において、インスリンへの応答障害および関連するＮＯ放出および関連した血管拡張の減少は、アテローム性動脈硬化症を引き起こすことがありうる内皮層下のＶＳＭＣ細胞の移動および増殖をもたらすことがありうると考えられる。
【００１７】
２型糖尿病の個体は、その２型糖尿病／グルコース不耐症によって、いろいろな程度のインスリン感受性（インスリン抵抗性）を有し、したがって、非能率的なインスリン依存性経路を有する。
【００１８】
２型糖尿病には多数の症状発現があるが、本明細書中において、その状態の重要な根本的機構的根拠は、インスリンの血管作用および代謝作用両方への抵抗性にあると考えられる。２型糖尿病における血管抵抗性の根本的な病理は、インスリンに応答して内皮細胞によって産生される減少したＮＯ量であるということも理解される。インスリン抵抗性個体のインスリン経路には、ホスファチジルイノシトール３−キナーゼ（ＰＩ３−Ｋ）経路によるグルコース取込みについてのインスリンのシグナリング障害があり、非能率的なＧＬＵＴ−４輸送機構をもたらすのであろう。いずれの特定の理論にも拘束されたくはないが、更に、本明細書中において、ＧＬＵＴ−４輸送機構の経路およびｃＧＭＰ−ＮＯ機構的経路は、何らかの連結を有すると考えられる。
【００１９】
（ＧＬＵＴ−４輸送機構による）グルコース取込みについてのインスリンシグナリング経路を最適に機能させるためには、正常に機能するＮＯ−ｃＧＭＰ経路を有することが好ましい。
【００２０】
更に、本明細書中において、２型糖尿病患者におけるｃＧＭＰ特異的ＰＤＥ５阻害剤を用いたｃＧＭＰシグナルの増幅は、インスリンのグルコース取込みシグナルを最適にし且つ鍵組織でのインスリンの働きを改善するのに役立つであろうと考えられる。
【００２１】
組織をインスリンに一層感受性にさせることにより、したがって、本明細書中において、２型糖尿病の臨床的パラメーターの改善は、次のものが含まれるがこれに限定されるわけではない改善をもたらすであろうとも考えられる。
【００２２】
１．  血中グルコース調節：真性糖尿病またはグルコース寛容減損（ＩＧＴ）の患者の場合、本明細書中において、インスリン抵抗性の改善は、（絶食かまたは経口グルコース負荷試験後若しくは食後に）血漿グルコース濃度の減少を引き起こすはずであると仮定される。関連して、これら患者の病態生理によって調節されるように、絶食状態におけるかまたはグルコース負荷後若しくは食後の血清インスリン濃度が改善される可能性があるであろう。血中グルコース調節のこれら改善は、それら患者が２型糖尿病であるならば、ヘモグロビンＡ１ｃ（グリコシル化ヘモグロビン）またはフルクトサミンに制限されるわけではないが、このような長期血中グルコース調節の目安の改善として現れると考えられる；および／または
２．  血圧：本明細書中において、インスリン抵抗性の改善は、収縮期および拡張期両方の血圧の改善を生じることもありうると仮定される；および／または
３．  脂質：本明細書中において、インスリン抵抗性の改善は、血清コレステロールおよび血清トリグリセリドが含まれるがこれに制限されるわけではない血清脂質の改善を生じることもありうると仮定される；および／または
４．  尿酸：本明細書中において、インスリン抵抗性の改善は、血清尿酸の改善を生じることもありうると仮定される；および／または
５．  凝固因子：本明細書中において、インスリン抵抗性の改善は、更に、プロコアグラント状態をより悪化させる因子を正常の方向に回復させるであろうと仮定される。
【００２３】
インスリン抵抗性（改善された感受性）のこれら改善は、代償性高インスリン血症の改善を伴うことがありうるしまたは伴わないこともありうる。
ｃＧＭＰ  ＰＤＥ５阻害剤は、ｃＧＭＰを不活性ＧＭＰに変換するホスホジエステラーゼ５酵素の作用を妨げ、それによって、蓄積されるｃＧＭＰの量を増加させる。この蓄積は、利用可能な酸化窒素およびインスリンの血管拡張作用および抗アテローム発生作用を増幅させると考えられる。本明細書中において、この（ｃＧＭＰの）増幅作用は、２型糖尿病の個体で認められる代償性高インスリン血症を軽減させ、したがって、（本明細書中の前に詳述されるような）無傷のＭＡＰキナーゼ経路を介する過度のシグナリングのアテローム発生の結末を減少させるであろうと仮定される。
【００２４】
ｃＧＭＰ  ＰＤＥ５阻害剤は、ｃＧＭＰを不活性ＧＭＰに変換するホスホジエステラーゼ５酵素の作用を妨げ、それによって、蓄積されるｃＧＭＰの量を増加させる。この蓄積は、利用可能な酸化窒素およびインスリンの血管拡張作用および抗アテローム発生作用を増幅させると考えられる。本明細書中において、この（血漿ｃＧＭＰの）増幅作用は、２型糖尿病の個体で認められる代償性高インスリン血症を軽減させ、したがって、（本明細書中の前に詳述されるような）無傷のＭＡＰキナーゼ経路を介する過度のシグナリングのアテローム発生の結末を減少させるであろうと仮定される。
【００２５】
ｃＧＭＰ  ＰＤＥ５阻害剤は、ｃＧＭＰを不活性ＧＭＰに変換するホスホジエステラーゼ５酵素の作用を妨げ、それによって、蓄積されるｃＧＭＰの量を増加させ且つ利用可能な酸化窒素およびインスリンの血管拡張作用および抗アテローム発生作用を増幅させる。本明細書中において、この増幅作用は、２型糖尿病の個体で認められる代償性高インスリン血症を軽減させ、したがって、（本明細書中の前に詳述されるような）無傷のＭＡＰキナーゼ経路を介する過度のシグナリングのアテローム発生の結末を減少させるであろうと仮定される。
【００２６】
バルデナフィルは、ヒト陰茎海綿体中に優先的に存在するホスホジエステラーゼ５型（ＰＤＥ５）イソ酵素であるサイクリックグアノシン一リン酸（ｃＧＭＰ）特異的ＰＤＥ５の強力且つ選択的な阻害剤であるイミダゾトリアジノン化合物である。本明細書中において、ｃＧＭＰからＧＭＰへの変換経路を阻害することにより、選択的ｃＧＭＰ  ＰＤＥ５阻害剤、特に、バルデナフィルは、酸化窒素（ＮＯ）に誘導されるｃＧＭＰの細胞内濃度を増加させ、それによって、ＮＯの作用を増強し、そしてこのようにして、２型糖尿病の患者において利用可能なＮＯおよびインスリンの血管拡張作用および抗アテローム発生作用を増幅させることができると考えられる。
【００２７】
したがって、本発明の第一の側面により、本発明者は、２型糖尿病の患者を処置する方法であって、この患者を、有効量のバルデナフィルまたはその医薬組成物またはその薬学的にまたは獣医学的に許容しうる塩、またはそれらの薬学的にまたは獣医学的に許容しうる溶媒和物で処置することを含む方法を提供する。
【００２８】
疑わしさを避けるために、本明細書中で定義のバルデナフィルは、２−［２−エトキシ−５−（４−エチルピペラジン−１−イル−１−スルホニル）−フェニル］−５−メチル−７−プロピル−３Ｈ−イミダゾ［５，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−４−オンであり、これは、１−［［３−（３，４−ジヒドロ−５−メチル−４−オキソ−７−プロピルイミダゾ［５，１−ｆ］］−as−トリアジン−２−イル）−４−エトキシフェニル］スルホニル］−４−エチルピペラジンとしても知られている。バルデナフィルの製造方法は、ＰＣＴ出願ＷＯ９９／２４４３３号に公開されており、実施例２０、１９、３３７および３３６の化合物を参照されたい。
【００２９】
本発明のもう一つの側面により、２型糖尿病の治癒的、待期的または予防的処置のための薬剤の製造における、ＩＣ−３５１またはその医薬組成物または薬学的に若しくは獣医学的に許容しうる塩、または薬学的に若しくは獣医学的に許容しうる溶媒和物の使用を提供する。疑わしさ避けるために、本明細書中で定義のＩＣ−３５１は、公開された国際出願ＷＯ９５／１９９７８号の実施例７８および９５の化合物である（６Ｒ，１２ａＲ）−２，３，６，７，１２，１２ａ−ヘキサヒドロ−２−メチル−６−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−ピラジノ［２’，１’：６，１］ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，４−ジオン（ＩＣ−３５１）である。
【００３０】
本発明の更にもう一つの側面により、次の化合物も、真性糖尿病の処置に有用である。公開された国際出願ＷＯ９３／０７１２４号の実施例１、３、７および８の化合物；および実施例１１の化合物（ＥＩＳＡＩ）；公開された国際特許出願ＷＯ９３／１２０９５号に開示されたキナゾリン−４−オン；公開された国際特許出願ＷＯ９４／０５６６１号に開示されたピリド［３，２−ｄ］ピリミジン−４−オン；公開された国際特許出願ＷＯ９４／００４５３号に開示されたプリン−６−オン；係属中の英国特許出願ＧＢ−Ａ−９９２４０２０．２号に開示されたプリノン（purinone）化合物。この追加の側面にとって特に興味深いのは、公開された国際出願ＷＯ９５／１９９７８号に開示された化合物；公開された国際出願ＷＯ９９／２４４３３号に開示された化合物および公開された国際出願ＷＯ９３／０７１２４号に開示された化合物である。
【００３１】
また更に、本発明と連係して２型糖尿病の処置に有用な他の５型ホスホジエステラーゼ阻害剤には、４−ブロモ−５−（ピリジルメチルアミノ）−６−［３−（４−クロロフェニル）−プロポキシ］−３（２Ｈ）ピリダジノン；１−［４−［（１，３−ベンゾジオキソール−５−イルメチル）アミオノ］−６−クロロ−２−キノゾリニル］−４−ピペリジンカルボン酸一ナトリウム塩；（＋）−cis−５，６ａ，７，９，９，９ａ−ヘキサヒドロ−２−［４−（トリフルオロメチル）−フェニルメチル−５−メチルシクロペント−４，５］イミダゾ［２，１−ｂ］プリン−４（３Ｈ）オン；フラズロシリン（furazlocillin）；cis−２−ヘキシル−５−メチル−３，４，５，６ａ，７，８，９，９ａ−オクタヒドロシクロペント［４，５］−イミダゾ［２，１−ｂ］プリン−４−オン；３−アセチル−１−（２−クロロベンジル）−２−プロピルインドール−６−カルボキシラート；３−アセチル−１−（２−クロロベンジル）−２−プロピルインドール−６−カルボキシラート；４−ブロモ−５−（３−ピリジルメチルアミノ）−６−（３−（４−クロロフェニル）プロポキシ）−３−（２Ｈ）ピリダジノン；１−メチル−５（５−モルホリノアセチル−２−ｎ−プロポキシフェニル）−３−ｎ−プロピル−１，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ（４，３−ｄ）ピリミジン−７−オン；１−［４−［（１，３−ベンゾジオキソール−５−イルメチル）アミノ］−６−クロロ−２−キナゾリニル］−４−ピペリジンカルボン酸一ナトリウム塩；Pharmaprojects No. ４５１６（Glaxo Wellcome）；Pharmaprojects No. ５０５１（Bayer）；Pharmaprojects No. ５０６４（Kyowa Hakko；ＷＯ９６／２６９４０号を参照されたい）；Pharmaprojects No. ５０６９（Schering Plough）；ＧＦ−１９６９６０（Glaxo Wellcome）；Ｅ−８０１０（Ｅ−４０１０（Eisai）；Ｂａｙ−３８−３０４５および３８−９４５６（Bayer）およびＳｃｈ−５１８６６が含まれる。
【００３２】
本発明によって２型糖尿病の処置で用いるためのいずれか特定のｃＧＭＰ  ＰＤＥ５阻害剤の適性は、参考文献方法を用いたその力価および選択性の評価につづいて、標準的な医薬慣例にしたがう、更には、本明細書中に詳述される試験方法による、その毒性、吸収、代謝、薬物動態等の評価によって容易に決定することができる。
【００３３】
より詳しくは、本発明は、２型糖尿病の患者を処置する方法であって、その患者を、有効量のバルデナフィルまたはその薬学的に許容しうる塩、溶媒和物、プロドラッグ、多形体または医薬組成物で処置することを含む方法を提供する。
【００３４】
本発明は、更に、２型糖尿病の処置または予防用の組成物の製造のためのバルデナフィルの使用を提供する。
塩基性中心を含有する本発明で用いるためのバルデナフィルの薬学的に許容しうる塩は、例えば、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸およびリン酸のような無機酸と、カルボン酸とまたは有機スルホン酸と形成される無毒性酸付加塩である。例には、ＨＣｌ塩、ＨＢｒ塩、ＨＩ塩、硫酸塩または重硫酸塩、硝酸塩、リン酸塩またはリン酸水素塩、酢酸塩、安息香酸塩、コハク酸塩、糖酸塩、フマル酸塩、マレイン酸塩、乳酸塩、クエン酸塩、酒石酸塩、グルコン酸塩、カムシラート塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、フェニルスルホン酸塩、ナフタレンスルホン酸塩およびパモエート塩が含まれる。バルデナフィルのアンモニウム塩、またはバルデナフィルの有機アミン、例えば、エチルアミン、ジ−またはトリエチルアミン、ジ−またはトリエタノールアミン、ジシクロヘキシルアミン、ジメチルアミノエタノール、アルギニン、リシン、エチレンジアミンまたは２−フェニルエチルアミンから誘導される１種類または複数の塩も、本明細書中の使用に薬学的に許容しうる。バルデナフィルは、塩基との薬学的に許容しうる金属塩、特に、無毒性のアルカリ金属塩およびアルカリ土類金属塩を提供することもできる。例には、ナトリウム塩、カリウム塩、アルミニウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩、亜鉛塩およびジエタノールアミン塩が含まれる。適当な医薬塩に関する概説については、Berge et al, J.Pharm.Sci., 66,1-19,1977 を参照されたい。
【００３５】
本発明によって２型糖尿病の処置に有用なバルデナフィル、その薬学的に許容しうる塩および薬学的に許容しうる溶媒和物は、単独で投与することができるが、ヒト療法の場合、概して、予定の投与経路および標準的な医薬慣例に関して選択される適当な医薬賦形剤、希釈剤または担体との混合物で投与されるであろう。
【００３６】
例えば、バルデナフィルまたはその塩または溶媒和物は、経口で、口腔内または舌下に、持続、二重または間断供給施用のような即時、遅延、修正または制御放出のための、着香剤または着色剤を含有してよい錠剤、カプセル剤（ゲル軟カプセル剤を含めた）、小卵剤、エリキシル剤、水剤または懸濁剤の形で投与することができる。バルデナフィルは、急速分散性または急速溶解性の剤形によって、または高エネルギー分散の形でまたはコーティング粒子として投与してもよい。
【００３７】
バルデナフィルは、非経口で、例えば、海綿体内、静脈内、動脈内、腹腔内、脊髄内、脳室内、尿道内、胸骨内、頭蓋内、筋肉内または皮下に投与することもできるし、または注入または無針注射技術によって投与してよい。
【００３８】
ヒト患者への経口および非経口投与について、バルデナフィルまたはその塩または溶媒和物の１日投薬レベルは、通常は、（単回または分割用量で）１０〜５００ｍｇであろう。２型糖尿病の処置について、この投薬は、単回用量、分割１日用量、多数１日用量、一定期間の連続（長期）毎日投薬（１〜５日、または５日以上、例えば１０日またはそれを以上でありうる）であってよい。或いは、２型糖尿病の処置は、例えば、制御放出剤形によるような連続投薬によって行うことができ、この場合、このような連続剤形は、かなりの日数期間１日基準で投与することができるしまたはこのような連続投薬は、一回あたり１日より長時間投薬する徐放製剤によって行うことができる。
【００３９】
ヒト使用について、経口投与の場合、０．００１〜５０ｍｇ／ｋｇ、好ましくは、０．０１ｍｇ／ｋｇ〜２０ｍｇ／ｋｇの用量のバルデナフィルを投与することが、好適な実務である。非経口投与、例えば、鼻、口腔内または吸入で粘膜を経るような場合、０．００１ｍｇ／ｋｇ〜０．５ｍｇ／ｋｇの用量を用いるのが好適な実務である。
【００４０】
したがって、例えば、バルデナフィルまたはその塩または溶媒和物の錠剤またはカプセル剤は、適宜、１個、または一度に２個またはそれを超える投与のために５ｍｇ〜２５０ｍｇの活性化合物を含有してよい。いずれにせよ、医師が、いずれの個々の患者にも最も適当である実際の投薬量を決定するであろうし、そしてそれは、具体的な患者の年齢、体重および応答で異なるであろう。上の投薬量は、平均的な場合を代表するものである。当然ながら、より高いまたはより低い投薬量範囲に価値がある個々の場合がありうるし、このような場合は本発明の範囲内である。
【００４１】
バルデナフィルは、鼻腔内にまたは吸入によって投与することもできる。バルデナフィルは、アトマイザーによる供給用にまたは坐剤若しくはペッサリーの形で製剤化されてもよいし、またはゲル剤、ヒドロゲル剤、ローション剤、水剤、クリーム剤、軟膏剤または散布剤の形で局所適用されてよい。バルデナフィルまたはその塩または溶媒和物は、例えば、皮膚貼付剤の使用によって皮膚に投与されてよいしまたは経皮投与されてもよいし、眼、肺または直腸経路によって投与されてもよい。
【００４２】
概して、ヒトの場合、バルデナフィルの経口投与が好ましい経路であり、最も好都合である。レシピエントが、嚥下障害または経口投与後の薬物吸収障害に苦しんでいる場合、その薬物は、非経口、舌下または口腔内に投与されてよい。
【００４３】
獣医学使用について、バルデナフィルまたはその獣医学的に許容しうる塩、またはその獣医学的に許容しうる溶媒和物またはプロドラッグは、普通の獣医学慣例にしたがって適当に許容しうる製剤として投与され、そして獣医が、具体的な動物に最も適当である投薬計画および経路を決定するであろう。
【００４４】
前述の投与経路および製剤は、本明細書中の前に定義の２型糖尿病の処置のためのＩＣ−３５１処置用のＩＣ−３５１の使用にも応用できる。
本発明は、更に、本明細書中に定義のバルデナフィルと、次のものとの組合せでの２型糖尿病の処置を含む。
【００４５】
（１）１種類またはそれを超える天然に存在するまたは合成のプロスタグランジンまたはそれらのエステル。本明細書中での使用に適当なプロスタグランジンには、アルプロスタジル、プロスタグランジンＥ１、プロスタグランジンＥ０、１３，１４−ジヒドロプロスタグランジンＥ１、プロスタグランジンＥ２、エプロスチノール（eprostinol）、本明細書中に全て援用されるＷＯ０００３３８２５号および／または２０００年３月１４日発行のＵＳ６，０３７，３４６号に記載のものを含めた天然、合成および半合成のプロスタグランジンおよびそれらの誘導体、ＰＧＥ０、ＰＧＥ１、ＰＧＡ１、ＰＧＢ１、ＰＧＦ１α、１９−ヒドロキシＰＧＡ１、１９−ヒドロキシ−ＰＧＢ１、ＰＧＥ２、ＰＧＢ２、１９−ヒドロキシ−ＰＧＡ２、１９−ヒドロキシ−ＰＧＢ２、ＰＧＥ３α、カルボプロストトロメタミン ジノプロスト、トロメタミン、ジノプロストン、リポプロスト（lipo prost）、ジェメプロスト（gemeprost）、メテノプロスト（metenoprost）、スルプロストン（sulprostune）、チアプロストおよびモキシシラート（moxisylate）のような化合物が含まれる；および／または
（２）１種類またはそれを超える、α遮断薬であるαアドレナリン受容体アンタゴニスト化合物。本明細書中での使用に適当な化合物には、１９９８年６月１４日公開のＰＣＴ出願ＷＯ９９／３０６９７号に記載のαアドレナリン受容体遮断薬が含まれ(その中のαアドレナリン受容体に関する開示は本明細書中に援用される)、それらは選択的なα１アドレナリン受容体遮断薬またはα２アドレナリン受容体遮断薬および非選択的アドレナリン受容体遮断薬を含み、適当なα１アドレナリン受容体遮断薬には、フェントラミン、フェントラミンメシラート、トラゾドン、アルフゾシン（alfuzosin）、インドラミン（indoramin）、ナフトピジル（naftopidil）、タムスロシン（tamsulosin）、ダピプラゾール（dapiprazole）、フェノキシベンザミン、イダゾキサン（idazoxan）、エファラキサン（efaraxan）、ヨヒンビン（α２遮断薬）、ラウオルファアルカロイド、Recordati １５／２７３９、ＳＮＡＰ１０６９、ＳＮＡＰ５０８９、ＲＳ１７０５３、ＳＬ８９．０５９１、ドキサゾシン（doxazosin）、テラゾシン、アバノキル（abanoquil）およびプラゾシン；ＵＳ６，０３７，３４６［２０００年３月１４日］によるα２遮断薬であるジベナルニン（dibenarnine）、トラゾリン、トリマゾシン（trimazosin）およびジベナルニン；本明細書中に各々援用されるＵＳ特許第４，１８８，３９０号；第４，０２６，８９４号；第３，５１１，８３６号；第４，３１５，００７号；第３，５２７，７６１号；第３，９９７，６６６号；第２，５０３，０５９号；第４，７０３，０６３号；第３，３８１，００９号；第４，２５２，７２１号；および第２，５９９，０００号に記載のαアドレナリン受容体が含まれ；α２アドレナリン受容体遮断薬には、場合により、ピルキサミン（pirxamine）のような強心薬の存在下のクロニジン、パパベリン、塩酸パパベリンが含まれる；および／または
（３）１種類またはそれを超えるＮＯドナー（ＮＯアゴニスト）化合物。本明細書中での使用に適当なＮＯドナー化合物には、トリニトログリセリン（ニトログリセリンとしても知られる）、イソソルビド５−モノニトラート、イソソルビドジニトラート、ペンタエリトリトールテトラニトラート、エリトリチルテトラニトラート、ニトロプルシドナトリウム（ＳＮＰ）、３−モルホリノシドノンイミンモルシドミン、Ｓ−ニトロソ−Ｎ−アセチルペニシラミン（ＳＮＡＰ）、Ｓ−ニトロソ−Ｎ−グルタチオン（ＳＮＯ−ＧＬＵ）、Ｎ−ヒドロキシ−Ｌ−アルギニン、アミルニトラート、リンシドミン（linsidomine）、リンシドミンクロロヒドラート、（ＳＩＮ−１）Ｓ−ニトロソ−Ｎ−システイン、ジアゼニウムジオラート（ＮＯＮＯアート）、１，５−ペンタンジニトラート、Ｌ−アルギニン、チョウセンニンジン1(ginseng)、ナツメ果実（zizphi fructus）、モルシドミン、Ｒｅ−２０４７、公開されたＰＣＴ出願ＷＯ００１２０７５号に記載のＮＭＩ−６７８−１１およびＮＭＩ−９３７のようなニトロシル化マキシシライト誘導体（nitrosylated maxisylyte derivatives）を含めたモノ−、ジ−またはトリニトラートのような有機硝酸塩または有機硝酸エステルが含まれる；および／または
（４）１種類またはそれを超えるカリウムチャンネルオープナーまたはモジュレーター。本明細書中での使用に適当なカリウムチャンネルオープナー／モジュレーターには、ニコランジル（nicorandil）、クロモカリム（cromokalim）、レブクロマカリム（levcromakalim）、レマカリム（lemakalim）、ピナシジル（pinacidil）、クリアゾキシド（cliazoxide）、ミノキシジル（minoxidil）、カリブドトキシン、グリブリド、４−アミニピリジン、ＢａＣｌ２が含まれる；および／または
（５）１種類またはそれを超えるドーパミン作動性薬、好ましくは、アポモルフィンまたは、プラミペキソール（pramipexole）およびロピリノール（ropirinol）（ＷＯ−００２３０５６号の請求の範囲に記載のもの）、Ｌ−ドパまたはカルビドパ、ＰＮＵ９５６６６（ＷＯ−００４０２２６号の請求の範囲に記載のもの）のような選択的Ｄ２、Ｄ３またはＤ２／Ｄ３アゴニスト；および／または
（６）１種類またはそれを超える血管拡張薬。本明細書中での使用に適当な血管拡張薬には、ニモジピン（nimodepine）、ピナシジル、シクランデレート、イソクススプリン、クロロプルマジン（chloroprumazine）、ハロペリドール、Ｒｅｃ１５／２７３９、トラゾドン、および／または
（７）１種類またはそれを超えるトロンボキサンＡ２アゴニスト、および／または
（８）１種類またはそれを超える麦角アルカロイド。適当な麦角アルカロイドは、２０００年３月１４日発行のＵＳ特許第６，０３７，３４６号に記載されており、アセテルガミン（acetergamine）、ブラゼルゴリン（brazergoline）、ブロメルグリド（bromerguride）、シアネルゴリン（cianergoline）、デロルゴトリル（delorgotrile）、ジスレルジン（disulergine）、エルゴノビンマレイン酸塩、エルゴタミン酒石酸塩、エチスレルジン（etisulergine）、レルゴトリル（lergotrile）、リセルジド、メスレルジン（mesulergine）、メテルゴリン（metergoline）、メテルゴタミン、ニセルゴリン（nicergoline）、ペルゴリド、プロピセルジド（propisergide）、プロテルグリド（proterguride）、テルグリド（terguride）が含まれる；および／または
（９）１種類またはそれを超える化合物であって、中性エンドペプチダーゼの阻害剤のような、ナトリウム利尿因子、具体的には、心房性ナトリウム利尿因子（心房性ナトリウム利尿ペプチドとしても知られる）、Ｂ型およびＣ型ナトリウム利尿因子の作用をモジュレートする化合物；および／または
（１０）１種類またはそれを超える、ロサルタン（losartan）のようなアンギオテンシン受容体アンタゴニスト；および／または
（１１）１種類またはそれを超える、Ｌ−アルギニンのようなＮＯシンターゼ基質；および／または
（１２）１種類またはそれを超える、アムロジピン（amlodipine）のようなカルシウムチャンネル遮断薬；および／または
（１３）１種類またはそれを超えるエンドセリン受容体アンタゴニストおよび阻害剤またはエンドセリン変換酵素；および／または
（１４）１種類またはそれを超える、スタチン（例えば、アトルバスタチン（atorvastatin）／Lipitor−商標）およびフィブラート（fibrates）のようなコレステロール低下薬；および／または
（１５）１種類またはそれを超える抗血小板薬および抗血栓薬、例えば、ｔＰＡ、ｕＰＡ、ワルファリン、ヒルジンおよび他のトロンビン阻害剤、ヘパリン、トロンボプラスチン活性化因子阻害剤；および／または
（１６）１種類またはそれを超える、Avandia または Actos のようなインスリン感作薬、およびグリピジド（スルホニル尿素）、メトホルミンまたはアカルボース（acarbose）に制限されるわけではないがこのような血糖降下薬；および／または
（１７）１種類またはそれを超える、ドネジピル（donezipil）のようなアセチルコリンエステラーゼ阻害剤；および／または
（１８）１種類またはそれを超えるエストロゲン受容体モジュレーターおよび／またはエストロゲンアゴニストおよび／またはエストロゲンアンタゴニスト、好ましくは、ラロキシフェン（raloxifene）またはラソホキシフェン（rasofoxifene）、ＷＯ９６／２１６５６号にその製造が詳述されている（−）−cis−６−フェニル−５−［４−（２−ピロリジン−１−イルエトキシ）−フェニル］−５，６，７，８−テトラヒドロナフタレン−２−オールおよびその薬学的に許容しうる塩（下の化合物Ａ）
【００４６】
【化１】
2004527476.tif 000001
；および／または
（１９）１種類またはそれを超える追加のＰＤＥ阻害剤、より詳しくは、ＰＤＥ２、４、７または８阻害剤、好ましくは、ＰＤＥ２阻害剤であって、好ましくは、それぞれの酵素に対して１００ｎＭ未満のＩＣ５０を有する阻害剤；および／または
（２０）１種類またはそれを超えるＮＰＹ（ニューロペプチドＹ）阻害剤、より詳しくは、ＮＰＹ１またはＮＰＹ５阻害剤、好ましくは、ＮＰＹ１阻害剤であって、好ましくは、１００ｎＭ未満、より好ましくは、５０ｎＭ未満のＩＣ５０を有する（ＮＰＹ１およびＮＰＹ５を含めた）ＮＰＹの阻害剤であり、適当なＮＰＹ、特に、ＮＰＹ１阻害剤化合物は、ＥＰ−Ａ−１０９７７１８号に記載されている；および／または
（２１）１種類またはそれを超えるバソアクティブ・インテスティナル・ペプチド（ＶＩＰ）、ＶＩＰ模擬体、より詳しくは、１種類またはそれを超えるＶＩＰ受容体サブタイプＶＰＡＣ１、ＶＰＡＣまたはＰＡＣＡＰ（下垂体アデニル酸シクラーゼ活性化ペプチド）によって媒介されるもの、１種類またはそれを超えるＶＩＰ受容体アゴニストまたはＶＩＰ類似体（例えば、Ｒｏ−１２５−１５５３）またはＶＩＰフラグメント、１種類またはそれを超えるαアドレナリン受容体アンタゴニストとＶＩＰの組合せ（例えば、Invicorp，Aviptadil）；および／または
（２２）１種類またはそれを超えるメラノコルチン受容体アゴニストまたはモジュレーターまたはメラノコルチンエンハンサーであって、メラノタンII（melanotan II）、ＰＴ−１４、ＰＴ−１４１、またはＷＯ−０９９６４００２号、ＷＯ−０００７４６７９号、ＷＯ−０９９５５６７９号、ＷＯ−００１０５４０１号、ＷＯ−０００５８３６１号、ＷＯ−００１１４８７９号、ＷＯ−００１１３１１２号、ＷＯ−０９９５４３５８号の請求の範囲に記載の化合物のようなもの；および／または
（２３）１種類またはそれを超えるセロトニン受容体アゴニスト、アンタゴニストまたはモジュレーター、より詳しくは、ＷＯ−０９９０２１５９号、ＷＯ−００００２５５０号および／またはＷＯ−０００２８９９３号に記載のものを含めた、５ＨＴ１Ａ（ＶＭＬ６７０を含めた）、５ＨＴ２Ａ、５ＨＴ２Ｃ、５ＨＴ３および／または５ＨＴ６受容体のアゴニスト、アンタゴニストまたはモジュレーター；および／または
（２４）１種類またはそれを超えるテストステロン補充薬（デヒドロアンドロステンジオン（dehydroandrostendione）を含めた）、テストステルノン（testosternone）（Tostrelle）、ジヒドロテストステロンまたはテストステロンインプラント；および／または
（２５）１種類またはそれを超えるエストロゲン、エストロゲンおよびメドロキシプロゲステロンまたは酢酸メドロキシプロゲステロン（ＭＰＡ）（すなわち、組合せとして）、またはエストロゲンおよびメチルテストステロンホルモン補充療法薬（例えば、ＨＲＴ、特に、Premarin、Cenestin、Oestrofeminal、Equin、Estrace、Estrofem、Elleste Solo、Estring、Eastraderm ＴＴＳ、Eastraderm Matrix、Dermestril、Premphase、Preempro、Prempak、Premique、Estratest、Estratest ＨＳ、Tibolone）；および／または
（２６）１種類またはそれを超える、ノルアドレナリン、ドーパミンおよび／またはセロトニンの輸送体のモジュレーターであって、ブプロピオン、ＧＷ−３２０６５９のようなもの；および／または
（２７）１種類またはそれを超えるプリン受容体アゴニストおよび／またはモジュレーター；および／または
（２８）１種類またはそれを超える、ＷＯ−０９９６４００８号に記載のものを含めたニューロキニン（ＮＫ）受容体アンタゴニスト；および／または
（２９）１種類またはそれを超えるオピオイド受容体アゴニスト、アンタゴニストまたはモジュレーター、好ましくは、ＯＲＬ−１受容体のアゴニスト；および／または
（３０）１種類またはそれを超える、オキシトシン／バソプレシン受容体のアゴニストまたはモジュレーター、好ましくは、選択的オキシトシンアゴニストまたはモジュレーター；および／または
（３１）１種類またはそれを超えるカンナビノイド受容体モジュレーター；および／または
（３２）１種類またはそれを超えるＣＮＳ活性剤；および／または
（３３）１種類またはそれを超える化合物であって、エナプリル（enapril）のような、アンギオテンシン変換酵素を阻害する化合物、および１種類またはそれを超える組合せ阻害剤であって、オマパトリラト（omapatrilat）のような、アンギオテンシン変換酵素および中性エンドペプチダーゼの組合せ阻害剤；および／または
（３４）Ｌ−ＤＯＰＡまたはカルビドパ；および／または
（３５）１種類またはそれを超えるステロイドまたは非ステロイド抗炎症薬；および／または
（３６）１種類またはそれを超える、ＬＹ３３３５３１のようなプロテインキナーゼＣ−β阻害剤；および／または
（３７）１種類またはそれを超える、５−アミノ−４−イミダゾールカルボキサミドリボヌクレオシドのような、ＡＭＰ活性化プロテインキナーゼの活性化因子；および／または
（３８）インスリン；および／または
（３９）シブトラミン（sibutramine）またはオルリスタト（orlistat）のような体重減少薬；および／または
（４０）１種類またはそれを超える、ＮＶＰ  ＤＰＰ７２８またはＰ３２／９８のようなジペプチジルペプチダーゼIV阻害剤；および／または
（４１）１種類またはそれを超える、ＮＮＣ２５−２５０４のようなグルカゴンアンタゴニスト；および／または
（４２）１種類またはそれを超える試剤であって、ＰＴＰ１１２のような、ＰＴＰ１Ｂを阻害する試剤；および／または
（４３）１種類またはそれを超える試剤であって、アンチセンス技術を用いてＰＴＰ１Ｂレベルを減少させる試剤；および／または
（４４）１種類またはそれを超える、Chir ９８０１４のようなグリコーゲンシンターゼキナーゼ−３阻害剤；および／または
（４５）１種類またはそれを超える、ＧＬＰ１、ＮＮ−２２１１またはエキセンジン（exendin）４のようなＧＬＰ−１アゴニスト；および／または
（４６）１種類またはそれを超える、Avandia、Actos またはＣＳ０１１のようなＰＰＡＲ−γアゴニスト；および／または
（４７）１種類またはそれを超える、フェノフィブラート（fenofibrate）のようなＰＰＡＲ−αアゴニスト；および／または
（４８）１種類またはそれを超える、ファルグリタザル（farglitazar）、ロシグリタソン（rosiglitasone）、ピオグリタゾン（pioglitazone）、ＧＷ１９２９、ＤＲＦ２７２５、ＡＺ２４２またはＫＲＰ２９７のような二重ＰＰＡＲ−α／ＰＰＡＲ−γアゴニスト；および／または
（４９）１種類またはそれを超える、ＣＰ−４７０７１１のようなソルビトールデヒドロゲナーゼ阻害剤；および／または
（５０）１種類またはそれを超える、ゾポルレスタト（zopolrestat）、ゼナレスタト（zenarestat）またはフィダレスタト（fidarestat）のようなアルドースレダクターゼ阻害剤；および／または
（５１）１種類またはそれを超える成長ホルモン標品または成長ホルモン分泌促進薬；および／または
（５２）１種類またはそれを超えるＮＥＰ阻害剤であって、好ましくは、ＮＥＰがＥＣ３．４．２４．１１であるもの、より好ましくは、ＥＣ３．４．２４．１１の選択的阻害剤であるＮＥＰ阻害剤、より好ましくは、１００ｎＭ未満のＩＣ５０を有する、ＥＣ３．４．２４．１１の選択的阻害剤である選択的ＮＥＰ阻害剤（例えば、オムパトリラト（ompatrilat）またはサムパトリラト（sampatrilat））。適当なＮＥＰ阻害剤化合物は、ＥＰ−Ａ−１０９７７１９号に記載されている。
【００４７】
本発明によって用いるのに好ましい組合せには、バルデナフィルと、本明細書中の前に詳述されている（３６）、（３７）、（３８）または（３９）との組合せが含まれる。
これら好ましい組合せを含めた前述の組合せは、本明細書中の前に定義の２型糖尿病の処置のためのＩＣ−３５１処置用のＩＣ−３５１の使用にも応用できる。
【００４８】
本明細書中の処置の意味には全て、治癒的、待期的および予防的処置が含まれるということは理解されるはずである。
２型糖尿病に関連した鍵パラメーターに対するバルデナフィルの作用は、次の実験プロトコールにおいて有効量のバルデナフィルを調べることによって決定することができる。
【００４９】
動物においてインスリン抵抗性症候群への作用を測定するプロトコール−ｏｂ／ｏｂマウスの血漿グルコースレベルおよび血清トリグリセリドレベルへの作用
実験プロトコール
試験化合物の有効量
以下の実験プロトコールで用いるためのバルデナフィルの有効量は、糖尿病マウスにおけるバルデナフィルの薬物動態学的／薬力学的プロフィールの測定によって決定することができる。このような薬物動態学的／薬力学的プロフィールは、以下に記載されるような、当薬理学業者に知られている標準法によって決定することができる。
【００５０】
試験化合物
調べられる化合物を、１０％ＤＭＳＯ／０．１％プルロニク（pluronics）中に溶解させ、マウス用経口給餌針（２０ゲージ，Popper & Sons, Inc., New Hyde Park, NY）を用いて経口強制飼養によって投与する。有効量（ｍｇ／ｋｇ（体重））を、各用量について投与する。化合物は、１〜５０ｍｇ／ｋｇの用量で調べることができる。或いは、試験化合物は、飲料水中で投与することができる。
【００５１】
実験動物：
Jackson Laboratories（Bar Harbor, ME）から入手されるものなどの雄ｏｂ／ｏｂマウスは、６〜１０週令で実験に用いることができる。マウスは、１ケージにつき５匹収容し、Ｄ１１マウスチャウ（Purina, Brentwood, MO）および水を自由に摂取させる。
【００５２】
薬物動態学的／薬力学的プロトコール：
マウスは、実験開始前の１週間、Pfizer 動物施設に順応させる。マウスを３匹づつの群に分け、試験化合物を投与する。０時およびその後のいろいろな時点に、マウスを斬首によって屠殺し、そして以下に記載のような血漿調製のために採血する。次に、血漿を、試験化合物およびｃＧＭＰのレベルについて以下に記載のように分析する。血漿薬物レベルを用いて、Winnonlin 分析を用いて試験化合物の薬物動態学的パラメーターを計算する。実験の時間経過にわたる血漿ｃＧＭＰレベルは、薬力学的プロフィールを規定し、これを薬物動態学的プロフィールと比較して、引き続きの多数用量実験に適当な投薬範例を決定する。
【００５３】
多数用量プロトコール：
実験プロトコール：
マウスを、実験開始前の１週間、Pfizer 動物施設に順応させる。１日目、眼窩後血液試料を入手し、以下に記載のように血漿グルコースを決定する。次に、マウスを５匹づつの群に分けて、その際各群の平均血漿グルコース濃度に差がないようにする。１日目、マウスに、ビヒクルまたは有効量の試験化合物を午後にだけ投与する。続いて、２〜４日目の午前と午後の１日２回、マウスに投与する。５日目、マウスに午前の用量を与え、そして３時間後、下記のようなグルコースおよびトリグリセリド分析用の血漿調製のために採血する。或いは、試験化合物は、下記のようなグルコースおよびトリグリセリド分析用の血漿調製のために引き続きマウスから採血する場合、飲料水中で、１日目の午後に始めて５日目まで続けて投与することができる。最終的な血漿試料は、５日目に、下記のように眼窩後静脈洞出血させた後採取する。体重を実験の１日目と５日目に測定し、食物消費は５日間にわたって評価する。
【００５４】
最終的な採血および組織採取：
実験最終日の午前のほぼ８時に、試験化合物またはビヒクルをマウスに投与する。投与から３時間後、２５μＬの血液を眼窩後静脈洞から得、Denville Scientific ミクロ試験管中の１００μＬの０．０２５％ヘパリン化食塩水に加える。これら試験管を、Beckman Microfuge １２において最高設定で２分間回転させる。血漿を、血漿グルコースおよびトリグリセリド決定用に採取する。次に、マウスを斬首によって屠殺し、そしてリチウムヘパリンを含む Becton-Dickinson Microtainer 銘柄血漿分離管中に約１ｍｌの血液を採取する。次に、これら管を、Beckman Microfuge １２において最大設定で５分間回転させる。血漿を１．５ｍｌ Eppendorf 管中に採取し、液体窒素中で急速凍結させる。血漿試料は、分析されるまで−８０℃で貯蔵する。
【００５５】
代謝産物およびホルモンの分析：
血漿グルコースおよびトリグリセリドは、Alcyon Clinical Chemistry Analyzer（Abbott Laboratories, Abbott Park, IL）を用い、Abbott によって供給されるキットを用いて測定することができる。血漿ｃＧＭＰは、Amersham（Piscataway, NJ）による Biotrak 酵素免疫検定システムを用いて測定することができる。類似の技法により、血漿インスリンは、ＡＬＰＣＯ（Uppsala, Sweden）による Mercodia ＥＬＩＳＡ Insulin キットによって評価することができる。検定は全て、製造者によって与えられる取扱説明書にしたがって行う。
【００５６】
試験化合物レベルの血漿分析：
調べられる化合物の定量は、ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ検定を用いて、０．０１〜１０μｇ／ｍｌの範囲（ダイナミックレンジ）で行う。調べられる化合物の血漿標準は、対照ｏｂ／ｏｂマウス血漿の連続希釈によって調製する。２０μｌアリコートの血漿を、５０％メタノール／アセトニトリル中０．１μＭの内部標準溶液２００μｌを含む０．７ｍｌ Qglass バイアルに加える。次に、それら試料を旋回させ、ＩＥＣ Centra ＧＰ８％遠心分離機（International Equipment Company, Needham Hieghts, MA）中において３５００ｒｐｍで３分間回転させる。遠心分離後、それら試料を、Phenomenex Primesphere ２．０ｘ３０ｍｍ  ５μｍ  Ｃ１８カラム上に、２５℃において３分間の実行時間（ランタイム）で注入する（３μｌ）。被検体を、５％メタノール（「Ａ」）および９５％の１０ｍＭ酢酸アンモニウム（「Ｂ」）から成る勾配プログラムで、０．５ｍｌ／分の流速で最初に３０秒間溶離させる。次の１．５分間にわたって、溶媒Ａを９５％に傾斜させると同時に、流速を０．７５ｍＬ／分に傾斜させる。２分の時点で、溶媒ＡおよびＢの濃度（それぞれ、９５％および５％）を、更に３０秒間一定に保持し、その後、それら濃度を１秒工程で出発条件に戻す。カラムは、次の注入の前に３０秒間再平衡させる。カラムからの溶出液は、ＰＥ−Sciex ＡＰＩ−３０００三重四重極型質量分析計（Perkin Elmer-Sciex, Foster City, CA）の ターボイオンスプレー(Turbo Ionspray) 源（５００℃，７Ｌ／分の窒素）に入れた。薬物および内部標準は、多重反応モニター（ｍ／ｚ＝親イオン→薬物および内部標準それぞれのフラグメント化）を用いて、それぞれ２．４分および２．７分の保持時間で測定する。薬物対内部標準のピーク面積比は、１／ｘ２秤量での線型最小二乗回帰分析を用いて適合させる。
【００５７】
統計的分析：
薬物処置と適当なビヒクルとの間の比較は、スチューデントｔ検定によって行うことができる。
【００５８】
以上より、本発明は、本明細書中に記載の実験手順およびプロトコールによって示されうるような、有効量のバルデナフィルでの２型糖尿病の処置方法を提供する。
結果（要旨）：
強力且つ選択的なＰＤＥ５阻害剤であるクエン酸シルデナフィル（sildenafil citrate）（ViagraＴＭ）は、本明細書中に詳述される生物学的試験方法によって、ｏｂ／ｏｂマウスで生産される血漿グルコースレベルおよび血清トリグリセリドレベルを減少させることが示された。