(57)【要約】  染色体の修復・安定化に関与するタンパク質２７種について、その機能もしくは発現を抑制することにより、既知の抗癌剤の抗癌作用を増強させる効果があることを見出した。該２７種のタンパク質の機能、もしくは該タンパク質をコードする遺伝子の発現を抑制する化合物は、抗癌剤増感剤として有用である。該化合物を含む医薬組成物は、抗癌治療の際に投与量を少なくすることができ、また、副作用の少ない抗癌剤併用薬剤となる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
DNAの修復もしくは安定化に関与する遺伝子の発現、または該遺伝子によってコードされるタンパク質の機能を阻害する化合物を有効成分として含む、抗癌剤増感剤。
【請求項２】
前記遺伝子が以下のいずれかの遺伝子である、請求項１に記載の抗癌剤増感剤。
（１）Mcm3、（２）Cdc7、（３）TopBP1、（４）Pola p70、（５）RFC3、（６）RFC5、（７）Elg1、（８）Scc1、（９）Scc3、（１０）Chk1、（１１）NBS1、（１２）Hus1、（１３）Ubc13、（１４）CSA、（１５）XPF、（１６）Polh、（１７）Poli、（１８）Dmc1、（１９）DNA-PKcs、（２０）Tin2、（２１）Sir2、（２２）MGMT、（２３）ABH、（２４）DUT、（２５）TIMELESS、（２６）WRN、（２７）BLM
【請求項３】
前記遺伝子が以下のいずれかの遺伝子であり、かつ、抗癌剤がアクチノマイシンＤ、またはクロマイシンＡ３である、請求項１に記載の抗癌剤増感剤。
（１）Mcm3、（７）Elg1、（２１）Sir2、（２５）TIMELESS
【請求項４】
前記遺伝子が以下のいずれかの遺伝子であり、かつ、抗癌剤がカンプトテシン、塩酸イリノテカン、SN-38、またはトポテカンである、請求項１に記載の抗癌剤増感剤。
（１）Mcm3、（２）Cdc7、（３）TopBP1、（５）RFC3、（６）RFC5、（７）Elg1、（１０）Chk1、（１２）Hus1、（１３）Ubc13、（１４）CSA、（１６）Polh、（１７）Poli、（１９）DNA-PKcs、（２５）TIMELESS、（２６）WRN、（２７）BLM
【請求項５】
前記遺伝子が以下のいずれかの遺伝子であり、かつ、抗癌剤がシスプラチン、カルボプラチン、ネダプラチン、ロバプラチン、オキザロプラチン、JM216、JM335、DWA-2114R、NK-121、I-OHP、またはTRK-710である、請求項１に記載の抗癌剤増感剤。
（１）Mcm3、（９）Scc3、（１０）Chk1、（１１）NBS1、（１２）Hus1、（１３）Ubc13、（１４）CSA、（１５）XPF、（２６）WRN、（２７）BLM
【請求項６】
前記遺伝子が以下のいずれかの遺伝子であり、かつ、抗癌剤がドキソルビシン、ダウノルビシン、アクラルビシン、ピラスビシン、またはエピルビシンである、請求項１に記載の抗癌剤増感剤。
（５）RFC3、（７）Elg1、（８）Scc1、（９）Scc3、（１０）Chk1、（１３）Ubc13、（１４）CSA、（１７）Poli、（２５）TIMELESS
【請求項７】
前記遺伝子が以下のいずれかの遺伝子であり、かつ、抗癌剤がエトポシドである、請求項１に記載の抗癌剤増感剤。
（１）Mcm3、（２）Cdc7、（３）TopBP1、（５）RFC3、（６）RFC5、（７）Elg1、（９）Scc3、（１０）Chk1、（１２）Hus1、（１３）Ubc13、（１４）CSA、（１６）Polh、（１７）Poli、（１９）DNA-PKcs、（２０）Tin2、（２３）ABH、（２５）TIMELESS
【請求項８】
前記遺伝子が以下のいずれかの遺伝子であり、かつ、抗癌剤が5-フルオロウラシル、デガフール、カルモフール、ドキシフルリジン、シタラビン、アンシタビン、またはエノシタビンである、請求項１に記載の抗癌剤増感剤。
（１）Mcm3、（５）RFC3、（６）RFC5、（７）Elg1、（８）Scc1、（９）Scc3、（１０）Chk1、（１２）Hus1、（１３）Ubc13、（１４）CSA、（１５）XPF、（１６）Polh、（１７）Poli、（１８）Dmc1、（１９）DNA-PKcs、（２０）Tin2、（２１）Sir2、（２２）MGMT、（２３）ABH、（２４）DUT
【請求項９】
前記遺伝子が以下のいずれかの遺伝子であり、かつ、抗癌剤がマイトマイシンCである、請求項１に記載の抗癌剤増感剤。
（１）Mcm3、（２）Cdc7、（３）TopBP1、（５）RFC3、（６）RFC5、（７）Elg1、（８）Scc1、（９）Scc3、（１０）Chk1、（１２）Hus1、（１３）Ubc13、（１４）CSA、（１５）XPF、（１６）Polh、（１７）Poli、（１８）Dmc1、（１９）DNA-PKcs、（２０）Tin2、（２１）Sir2、（２２）MGMT、（２３）ABH、（２５）TIMELESS
【請求項１０】
前記化合物が、前記遺伝子の発現をRNAi効果により抑制し得る二本鎖RNAである、請求項２〜９のいずれかに記載の抗癌剤増感剤。
【請求項１１】
前記二本鎖RNAが、配列番号：６１〜８７のいずれかに記載の塩基配列からなるRNAと、該RNAと相補的な配列からなるRNAとがハイブリダイズした構造を含む二本鎖RNAである、請求項１０に記載の抗癌剤増感剤。
【請求項１２】
請求項２の（１）〜（２７）のいずれかに記載の遺伝子の発現量、もしくは該遺伝子によってコードされるタンパク質の活性を低下させる化合物を選択することを特徴とする、抗癌剤増感剤のスクリーニング方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、抗癌剤と併用することにより、該抗癌剤の抗癌作用を増強させる効果を有する薬剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、抗癌剤による癌の薬物療法の進歩は目覚しく、余命を延長させる薬剤、投与量、投与法などが確立されつつある。しかし、薬物療法で使われる抗癌剤の多くは、副作用を伴うことが多い。例えば、アクチノマイシンＤ、カンプトテシン、シスプラチン、ドキソルビシン、エトポシド(VP16)、5-フルオロウラシル、マイトマイシンＣ等の抗癌剤についても、正常細胞にも傷害を与える等の強い副作用を有することが知られている。分子標的薬剤のように腫瘍細胞特異的に作用する抗癌剤の開発、あるいは投与の工夫により腫瘍への選択性を高めるための研究がなされているが、副作用をゼロにすることは非常に困難である。【０００３】
副作用は、薬剤（副作用防止剤など）で抑制が可能である。また多剤併用化学療法のように、副作用の異なる複数の抗癌剤を同時に用いて各薬物の副作用を分散することも可能である。しかし副作用を軽減するためには、少量の抗癌剤で効果が得られるような手法の開発が望ましい。抗癌剤の作用を増強させる薬剤があれば、抗癌剤の使用を少量に抑えることが可能である。【０００４】
これまでに、アルキル化剤のアルキルトランスフェラーゼMGMTについて、当該アルキル化効果を増強する効果を有するO6-ベンジルグアニン(benzylguanine)が知られている。この化合物は、アルキル化薬の併用薬となることが知られている（非特許文献１および２参照）。しかしながら、上述のような既存の抗癌剤については、当該抗癌作用を増強させる有効な薬剤は開発されていない。【０００５】
WS（ウェルナー症候群）患者の末梢血リンパ球は健常人のリンパ球に比較して4-nitroquinoline-1-oxide (4NQO)に対する感受性が高い（非特許文献３）。また、EBVで形質転換したWS患者B-細胞（LCL）は健常人のLCLに比較しトポイソメラーゼI阻害剤であるカンプトテシンに対する感受性が高く（非特許文献４）、同様にトポイソメラーゼII阻害剤であるエトポシドに対する感受性が高い（非特許文献５）。また、WRN遺伝子をノックアウトしたES細胞（-WRN/-WRN）は野生のES細胞（+WRN/+WRN）に比較してトポイソメラーゼII阻害剤であるエトポシドに対する感受性が高い（非特許文献６）。最近、WRN遺伝子のプロモータ領域CpGのメチル化によりWRNヘリカーゼの発現が低下した結腸直腸癌はカンプトテシンに対する治療に対して、メチル化の程度が低く、WRNヘリカーゼの発現が高い結腸直腸癌に比較し治療効果が高いことが報告されている（非特許文献７）。また、この論文において、WRN遺伝子に対するsiRNAで細胞を処理しWRN遺伝子のmRNAレベルを下げると、マイトマイシンCによる染色体切断が増強されることが報告されている。【０００６】
しかしながら、WRN遺伝子等の発現または機能を低下させることにより抗癌剤の増感を図るという考え方はこれまでのところ知られていない。
【非特許文献１】Margison, G.P.および Santibanez-Koref, M.F.著、2002年、Bioessays.、Vol.24、p.255-66
【非特許文献２】Gerson, S.L.著、2002年、J Clin Oncol.、Vol.20、p.2388-99
【非特許文献３】Gebhart, E. et al., Hum Genet, 80: 135-139, 1988
【非特許文献４】Okada, M. et al., Biol Pharm Bull, 21: 235-239, 1998
【非特許文献５】Elli, R. et al., Cancer  Genet. Cytogenet., 87: 112-116, 1996
【非特許文献６】Lebel, M. and Leder, P. Proc Natl Acad Sci U S A, 95: 13097-13102, 1998
【非特許文献７】Agrelo, R. et al., Proc Natl Acad Sci U S A, 103: 8822-8827, 2006
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明はこのような状況に鑑みてなされたものであり、抗癌剤の抗癌作用を増強させる薬剤、即ち、抗癌剤増感剤の提供を課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者らは、アクチノマイシンＤ、カンプトテシン、シスプラチン、ドキソルビシン、エトポシド、5-フルオロウラシル、マイトマイシンＣ等の抗癌剤について、抗癌作用を増強し得る併用薬を開発すべく鋭意研究を行った。その結果、発現を抑制することにより、上記抗癌剤の抗癌作用を増強することが可能な複数の遺伝子を見出すことに成功した。本発明者らによって見出されたこれらの遺伝子によってコードされるタンパク質の機能を考察したところ、該遺伝子は染色体の修復・安定化に関与することが分かった。本発明者らによって実際に取得された知見から、染色体の修復・安定化に関与するタンパク質の発現もしくは機能を阻害する物質は、上述の化合物に代表される抗癌剤に対して、抗癌作用を増強させる働きがあることが示された。【０００９】
即ち、本発明者らによって見出された各遺伝子の発現を抑制する物質は、上記の抗癌剤に対する増感剤として機能することが明らかとなった。該遺伝子の発現、もしくは該遺伝子によってコードされるタンパク質の機能を抑制する物質は、上記抗癌剤との併用薬として有用である。【００１０】
上述のように、WRN遺伝子等のDNAの修復もしくは安定化に関与する遺伝子の発現または機能を低下させることにより、抗癌剤の増感を図るという考え方はこれまでのところ知られていない。また、DNAの修復もしくは安定化に関与するWRN遺伝子等の遺伝子の発現を抑制することにより、DNA毒性作用を有する抗癌剤に対する感受性が増強することが本発明者によって初めて実証された。【００１１】
上述の如く本発明者らは、抗癌剤の抗癌作用を増強することが可能な薬剤を開発することに成功し、本発明を完成させた。即ち本発明は、新規な抗癌剤増感剤、および非ヒト動物の抗癌剤感受性を増強させる方法に関し、より詳しくは、
〔１〕  DNAの修復もしくは安定化に関与する遺伝子の発現、または該遺伝子によってコードされるタンパク質の機能を阻害する化合物を有効成分として含む、抗癌剤増感剤、
〔２〕  前記遺伝子が以下のいずれかの遺伝子である、〔１〕に記載の抗癌剤増感剤、
（１）Mcm3、（２）Cdc7、（３）TopBP1、（４）Pola p70、（５）RFC3、（６）RFC5、（７）Elg1、（８）Scc1、（９）Scc3、（１０）Chk1、（１１）NBS1、（１２）Hus1、（１３）Ubc13、（１４）CSA、（１５）XPF、（１６）Polh、（１７）Poli、（１８）Dmc1、（１９）DNA-PKcs、（２０）Tin2、（２１）Sir2、（２２）MGMT、（２３）ABH、（２４）DUT、（２５）TIMELESS、（２６）WRN、（２７）BLM
〔３〕  前記遺伝子が以下のいずれかの遺伝子であり、かつ、抗癌剤がアクチノマイシンＤ、またはクロマイシンＡ３である、〔１〕に記載の抗癌剤増感剤、
（１）Mcm3、（７）Elg1、（２１）Sir2、（２５）TIMELESS
〔４〕  前記遺伝子が以下のいずれかの遺伝子であり、かつ、抗癌剤がカンプトテシン、塩酸イリノテカン、SN-38、またはトポテカンである、〔１〕に記載の抗癌剤増感剤、
（１）Mcm3、（２）Cdc7、（３）TopBP1、（５）RFC3、（６）RFC5、（７）Elg1、（１０）Chk1、（１２）Hus1、（１３）Ubc13、（１４）CSA、（１６）Polh、（１７）Poli、（１９）DNA-PKcs、（２５）TIMELESS、（２６）WRN、（２７）BLM
〔５〕  前記遺伝子が以下のいずれかの遺伝子であり、かつ、抗癌剤がシスプラチン、カルボプラチン、ネダプラチン、ロバプラチン、オキザロプラチン、JM216、JM335、DWA-2114R、NK-121、I-OHP、またはTRK-710である、〔１〕に記載の抗癌剤増感剤、
（１）Mcm3、（９）Scc3、（１０）Chk1、（１１）NBS1、（１２）Hus1、（１３）Ubc13、（１４）CSA、（１５）XPF、（２６）WRN、（２７）BLM
〔６〕  前記遺伝子が以下のいずれかの遺伝子であり、かつ、抗癌剤がドキソルビシン、ダウノルビシン、アクラルビシン、ピラスビシン、またはエピルビシンである、〔１〕に記載の抗癌剤増感剤、
（５）RFC3、（７）Elg1、（８）Scc1、（９）Scc3、（１０）Chk1、（１３）Ubc13、（１４）CSA、（１７）Poli、（２５）TIMELESS
〔７〕  前記遺伝子が以下のいずれかの遺伝子であり、かつ、抗癌剤がエトポシドである、〔１〕に記載の抗癌剤増感剤、
（１）Mcm3、（２）Cdc7、（３）TopBP1、（５）RFC3、（６）RFC5、（７）Elg1、（９）Scc3、（１０）Chk1、（１２）Hus1、（１３）Ubc13、（１４）CSA、（１６）Polh、（１７）Poli、（１９）DNA-PKcs、（２０）Tin2、（２３）ABH、（２５）TIMELESS
〔８〕  前記遺伝子が以下のいずれかの遺伝子であり、かつ、抗癌剤が5-フルオロウラシル、デガフール、カルモフール、ドキシフルリジン、シタラビン、アンシタビン、またはエノシタビンである、〔１〕に記載の抗癌剤増感剤、
（１）Mcm3、（５）RFC3、（６）RFC5、（７）Elg1、（８）Scc1、（９）Scc3、（１０）Chk1、（１２）Hus1、（１３）Ubc13、（１４）CSA、（１５）XPF、（１６）Polh、（１７）Poli、（１８）Dmc1、（１９）DNA-PKcs、（２０）Tin2、（２１）Sir2、（２２）MGMT、（２３）ABH、（２４）DUT
〔９〕  前記遺伝子が以下のいずれかの遺伝子であり、かつ、抗癌剤がマイトマイシンCである、〔１〕に記載の抗癌剤増感剤、
（１）Mcm3、（２）Cdc7、（３）TopBP1、（５）RFC3、（６）RFC5、（７）Elg1、（８）Scc1、（９）Scc3、（１０）Chk1、（１２）Hus1、（１３）Ubc13、（１４）CSA、（１５）XPF、（１６）Polh、（１７）Poli、（１８）Dmc1、（１９）DNA-PKcs、（２０）Tin2、（２１）Sir2、（２２）MGMT、（２３）ABH、（２５）TIMELESS
〔１０〕  前記化合物が、前記遺伝子の発現をRNAi効果により抑制し得る二本鎖RNAである、〔２〕〜〔９〕のいずれかに記載の抗癌剤増感剤、
〔１１〕  前記二本鎖RNAが、配列番号：６１〜８７のいずれかに記載の塩基配列からなるRNAと、該RNAと相補的な配列からなるRNAとがハイブリダイズした構造を含む二本鎖RNAである、〔１０〕に記載の抗癌剤増感剤、
〔１２〕  〔２〕の（１）〜（２７）のいずれかに記載の遺伝子の発現量、もしくは該遺伝子によってコードされるタンパク質の活性を低下させる化合物を選択することを特徴とする、抗癌剤増感剤のスクリーニング方法、
を、提供する。【００１２】
また本発明は、以下の方法を提供する。
〔１３〕  DNAの修復もしくは安定化に関与する遺伝子の発現、または該遺伝子によってコードされるタンパク質の機能を阻害する化合物を個体へ投与する工程を含む、生物（ヒト、または非ヒト動物等）の抗癌剤感受性を増強させる方法。
〔１４〕  前記遺伝子が以下のいずれかの遺伝子である、〔１３〕に記載の生物（ヒト、または非ヒト動物等）の抗癌剤感受性を増強させる方法。
（１）Mcm3、（２）Cdc7、（３）TopBP1、（４）Pola p70、（５）RFC3、（６）RFC5、（７）Elg1、（８）Scc1、（９）Scc3、（１０）Chk1、（１１）NBS1、（１２）Hus1、（１３）Ubc13、（１４）CSA、（１５）XPF、（１６）Polh、（１７）Poli、（１８）Dmc1、（１９）DNA-PKcs、（２０）Tin2、（２１）Sir2、（２２）MGMT、（２３）ABH、（２４）DUT、（２５）TIMELESS、（２６）WRN、（２７）BLM
〔１５〕  前記遺伝子が以下のいずれかの遺伝子であり、かつ、抗癌剤がアクチノマイシンＤ、またはクロマイシンＡ３である、〔１３〕に記載の生物（ヒト、または非ヒト動物等）の抗癌剤感受性を増強させる方法。
（１）Mcm3、（７）Elg1、（２１）Sir2、（２５）TIMELESS
〔１６〕  前記遺伝子が以下のいずれかの遺伝子であり、かつ、抗癌剤がカンプトテシン、塩酸イリノテカン、SN-38、またはトポテカンである、〔１３〕に記載の生物（ヒト、または非ヒト動物等）の抗癌剤感受性を増強させる方法。
（１）Mcm3、（２）Cdc7、（３）TopBP1、（５）RFC3、（６）RFC5、（７）Elg1、（１０）Chk1、（１２）Hus1、（１３）Ubc13、（１４）CSA、（１６）Polh、（１７）Poli、（１９）DNA-PKcs、（２５）TIMELESS、（２６）WRN、（２７）BLM
〔１７〕  前記遺伝子が以下のいずれかの遺伝子であり、かつ、抗癌剤がシスプラチン、カルボプラチン、ネダプラチン、ロバプラチン、オキザロプラチン、JM216、JM335、DWA-2114R、NK-121、I-OHP、またはTRK-710である、〔１３〕に記載の生物（ヒト、または非ヒト動物等）の抗癌剤感受性を増強させる方法。
（１）Mcm3、（９）Scc3、（１０）Chk1、（１１）NBS1、（１２）Hus1、（１３）Ubc13、（１４）CSA、（１５）XPF、（２６）WRN、（２７）BLM
〔１８〕  前記遺伝子が以下のいずれかの遺伝子であり、かつ、抗癌剤がドキソルビシン、ダウノルビシン、アクラルビシン、ピラスビシン、またはエピルビシンである、〔１３〕に記載の生物（ヒト、または非ヒト動物等）の抗癌剤感受性を増強させる方法。
（５）RFC3、（７）Elg1、（８）Scc1、（９）Scc3、（１０）Chk1、（１３）Ubc13、（１４）CSA、（１７）Poli、（２５）TIMELESS
〔１９〕  前記遺伝子が以下のいずれかの遺伝子であり、かつ、抗癌剤がエトポシドである、〔１３〕に記載の生物（ヒト、または非ヒト動物等）の抗癌剤感受性を増強させる方法。
（１）Mcm3、（２）Cdc7、（３）TopBP1、（５）RFC3、（６）RFC5、（７）Elg1、（９）Scc3、（１０）Chk1、（１２）Hus1、（１３）Ubc13、（１４）CSA、（１６）Polh、（１７）Poli、（１９）DNA-PKcs、（２０）Tin2、（２３）ABH、（２５）TIMELESS
〔２０〕  前記遺伝子が以下のいずれかの遺伝子であり、かつ、抗癌剤が5-フルオロウラシル、デガフール、カルモフール、ドキシフルリジン、シタラビン、アンシタビン、またはエノシタビンである、〔１３〕に記載の生物（ヒト、または非ヒト動物等）の抗癌剤感受性を増強させる方法。
（１）Mcm3、（５）RFC3、（６）RFC5、（７）Elg1、（８）Scc1、（９）Scc3、（１０）Chk1、（１２）Hus1、（１３）Ubc13、（１４）CSA、（１５）XPF、（１６）Polh、（１７）Poli、（１８）Dmc1、（１９）DNA-PKcs、（２０）Tin2、（２１）Sir2、（２２）MGMT、（２３）ABH、（２４）DUT
〔２１〕  前記遺伝子が以下のいずれかの遺伝子であり、かつ、抗癌剤がマイトマイシンCである、〔１３〕に記載の生物（ヒト、または非ヒト動物等）の抗癌剤感受性を増強させる方法。
（１）Mcm3、（２）Cdc7、（３）TopBP1、（５）RFC3、（６）RFC5、（７）Elg1、（８）Scc1、（９）Scc3、（１０）Chk1、（１２）Hus1、（１３）Ubc13、（１４）CSA、（１５）XPF、（１６）Polh、（１７）Poli、（１８）Dmc1、（１９）DNA-PKcs、（２０）Tin2、（２１）Sir2、（２２）MGMT、（２３）ABH、（２５）TIMELESS
〔２２〕  前記化合物が、前記遺伝子の発現をRNAi効果により抑制し得る二本鎖RNAである、〔１４〕〜〔２１〕のいずれかに記載の生物（ヒト、または非ヒト動物等）の抗癌剤感受性を増強させる方法。
〔２３〕  前記二本鎖RNAが、配列番号：６１〜８７のいずれかに記載の塩基配列からなるRNAと、該RNAと相補的な配列からなるRNAとがハイブリダイズした構造を含む二本鎖RNAである、〔２２〕に記載の生物（ヒト、または非ヒト動物等）の抗癌剤感受性を増強させる方法。
さらに本発明は、
〔２４〕  本発明の抗癌剤増感剤を個体（例えば、患者等）へ投与する工程を含む、癌の治療方法、
〔２５〕  上記（１）〜（２７）のいずれかに記載の遺伝子の発現を抑制する化合物、もしくは該遺伝子によってコードされるタンパク質の機能を阻害する化合物についての、抗癌剤もしくは抗癌剤増感剤の製造のための使用に関する。
さらに本発明は、以下を提供する。
〔２６〕  DNAの修復もしくは安定化に関与する遺伝子の発現、または該遺伝子によってコードされるタンパク質の機能を阻害する化合物、および、抗癌剤を含む組成物。
〔２７〕  前記遺伝子が以下のいずれかの遺伝子であり、かつ、抗癌剤がアクチノマイシンＤ、またはクロマイシンＡ３である、〔２６〕に記載の組成物。
（１）Mcm3、（７）Elg1、（２１）Sir2、（２５）TIMELESS
〔２８〕  前記遺伝子が以下のいずれかの遺伝子であり、かつ、抗癌剤がカンプトテシン、塩酸イリノテカン、SN-38、またはトポテカンである、〔２６〕に記載の組成物。
（１）Mcm3、（２）Cdc7、（３）TopBP1、（５）RFC3、（６）RFC5、（７）Elg1、（１０）Chk1、（１２）Hus1、（１３）Ubc13、（１４）CSA、（１６）Polh、（１７）Poli、（１９）DNA-PKcs、（２５）TIMELESS、（２６）WRN、（２７）BLM
〔２９〕  前記遺伝子が以下のいずれかの遺伝子であり、かつ、抗癌剤がシスプラチン、カルボプラチン、ネダプラチン、ロバプラチン、オキザロプラチン、JM216、JM335、DWA-2114R、NK-121、I-OHP、またはTRK-710である、〔２６〕に記載の組成物。
（１）Mcm3、（９）Scc3、（１０）Chk1、（１１）NBS1、（１２）Hus1、（１３）Ubc13、（１４）CSA、（１５）XPF、（２６）WRN、（２７）BLM
〔３０〕  前記遺伝子が以下のいずれかの遺伝子であり、かつ、抗癌剤がドキソルビシン、ダウノルビシン、アクラルビシン、ピラスビシン、またはエピルビシンである、〔２６〕に記載の組成物。
（５）RFC3、（７）Elg1、（８）Scc1、（９）Scc3、（１０）Chk1、（１３）Ubc13、（１４）CSA、（１７）Poli、（２５）TIMELESS
〔３１〕  前記遺伝子が以下のいずれかの遺伝子であり、かつ、抗癌剤がエトポシドである、〔２６〕に記載の組成物。
（１）Mcm3、（２）Cdc7、（３）TopBP1、（５）RFC3、（６）RFC5、（７）Elg1、（９）Scc3、（１０）Chk1、（１２）Hus1、（１３）Ubc13、（１４）CSA、（１６）Polh、（１７）Poli、（１９）DNA-PKcs、（２０）Tin2、（２３）ABH、（２５）TIMELESS
〔３２〕  前記遺伝子が以下のいずれかの遺伝子であり、かつ、抗癌剤が5-フルオロウラシル、デガフール、カルモフール、ドキシフルリジン、シタラビン、アンシタビン、またはエノシタビンである、〔２６〕に記載の組成物。
（１）Mcm3、（５）RFC3、（６）RFC5、（７）Elg1、（８）Scc1、（９）Scc3、（１０）Chk1、（１２）Hus1、（１３）Ubc13、（１４）CSA、（１５）XPF、（１６）Polh、（１７）Poli、（１８）Dmc1、（１９）DNA-PKcs、（２０）Tin2、（２１）Sir2、（２２）MGMT、（２３）ABH、（２４）DUT
〔３３〕  前記遺伝子が以下のいずれかの遺伝子であり、かつ、抗癌剤がマイトマイシンCである、〔２６〕に記載の組成物。
（１）Mcm3、（２）Cdc7、（３）TopBP1、（５）RFC3、（６）RFC5、（７）Elg1、（８）Scc1、（９）Scc3、（１０）Chk1、（１２）Hus1、（１３）Ubc13、（１４）CSA、（１５）XPF、（１６）Polh、（１７）Poli、（１８）Dmc1、（１９）DNA-PKcs、（２０）Tin2、（２１）Sir2、（２２）MGMT、（２３）ABH、（２５）TIMELESS
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】２７種類の各遺伝子の各種抗癌剤に対するIC50値を示す。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１４】
本発明者らは、機能もしくは発現を抑制することにより、既知の抗癌剤の抗癌作用を増強させることが可能なタンパク質（遺伝子）２７種を見出すことに成功した。該タンパク質（遺伝子）は、以下の（１）〜（２７）に記載のタンパク質（遺伝子）である。
（１）Mcm3、（２）Cdc7、（３）TopBP1、（４）Pola p70、（５）RFC3、（６）RFC5、（７）Elg1、（８）Scc1、（９）Scc3、（１０）Chk1、（１１）NBS1、（１２）Hus1、（１３）Ubc13、（１４）CSA、（１５）XPF、（１６）Polh、（１７）Poli、（１８）Dmc1、（１９）DNA-PKcs、（２０）Tin2、（２１）Sir2、（２２）MGMT、（２３）ABH、（２４）DUT、（２５）TIMELESS、（２６）WRN、（２７）BLM【００１５】
上記の遺伝子は、DNAの修復もしくは安定化に関与する遺伝子である。本発明は、DNAの修復もしくは安定化に関与する遺伝子の発現、または該遺伝子によってコードされるタンパク質の機能を阻害する化合物を有効成分として含む、抗癌剤増感剤を提供する。
本発明の好ましい態様においては、上記（１）〜（２７）からなる群より選択される遺伝子の発現、または該遺伝子によってコードされるタンパク質の機能を阻害する化合物を有効成分として含有する、抗癌剤増感剤を提供する。
また本発明は、DNAの修復もしくは安定化に関与する遺伝子の発現、または該遺伝子によってコードされるタンパク質の機能を阻害する化合物を個体へ投与する工程を含む、生物（ヒト、または、非ヒト動物等）の抗癌剤感受性を増強させる方法を提供する。
本発明の方法の好ましい態様においては、上記（１）〜（２７）からなる群より選択される遺伝子の発現、または該遺伝子によってコードされるタンパク質の機能を阻害する化合物を個体へ投与する工程を含む方法である。【００１６】
本明細書において記載された遺伝子名は、広く一般的に知られる名称であることから、当業者であれば該遺伝子の塩基配列についての情報をもとに、公共の文献データベースあるいは遺伝子データベース（例えばGenBank等）から適宜取得することができる。
本発明の上記（１）〜（２７）に記載の各遺伝子の塩基配列、および該遺伝子によってコードされるタンパク質のアミノ酸配列の具体例を配列表に掲載する。上記遺伝子の配列情報が取得可能なNCBIのアクセッション番号、および該番号によって取得される遺伝子の塩基配列の配列番号との関係を表１に示す。また本発明の上記の各遺伝子によってコードされるタンパク質のアミノ酸配列の一例についても配列表に示す。【００１７】
【表１】
2008047574.tif 000002
【００１８】
なお、上記（１）〜（２７）に記載の各遺伝子は、塩基配列中の多型の有無等により、同一の遺伝子であっても複数のアクセッション番号が付与されている場合がある。この「多型」とは、一塩基の置換、欠失、挿入変異からなる一塩基多型（SNPs）に限定されず、連続する数塩基の置換、欠失、挿入変異も含まれる。従って、上記（１）〜（２７）に記載の各遺伝子の塩基配列としては、必ずしも表１に記載のアクセッション番号によって取得される配列あるいは配列番号：１〜３０に記載された配列に限定されない。同様に、上記（１）〜（２７）に記載の各遺伝子によってコードされるタンパク質のアミノ酸配列も、配列番号：３１〜６０に記載されたアミノ酸配列に特に限定されない。【００１９】
本発明の上記タンパク質は、配列番号：３１〜６０に記載されたアミノ酸配列に限定されず、該アミノ酸配列において、１もしくは複数のアミノ酸残基が付加、欠失、置換、挿入されたアミノ酸配列を含む上記（１）〜（２７）に記載の遺伝子によってコードされるタンパク質の変異タンパク質もしくはホモログタンパク質であって、上記（１）〜（２７）に記載の遺伝子によってコードされるタンパク質（配列番号：３１〜６０に記載されたタンパク質）と機能的に同等なタンパク質も含まれる。ここで「機能的に同等なタンパク質」とは、上記（１）〜（２７）に記載の遺伝子によってコードされるタンパク質における機能（例えば、染色体の修復あるいは安定化機能）と同様の機能を備えたタンパク質である。【００２０】
あるいは上記（１）〜（２７）に記載の遺伝子によってコードされるタンパク質のアミノ酸配列に対して、例えば９０%以上、望ましくは９５%以上、更に望ましくは９９%以上の相同性を有するタンパク質を、上記（１）〜（２７）に記載の遺伝子によってコードされるタンパク質と機能的に同等なタンパク質として示すことができる。
また、本発明の上記（１）〜（２７）に記載の遺伝子は特に制限されるものではないが、通常、動物由来であり、より好ましくは哺乳動物由来であり、最も好ましくはヒト由来である。【００２１】
なお、本発明における上記薬剤は、例えば、抗癌剤感受性増強剤、抗癌剤併用剤、抗癌剤作用増強剤、あるいは、抗癌剤副作用抑制剤、抗癌剤副作用低減剤等と表記することも可能である。また、前記「抗癌剤」は、「抗腫瘍剤」、「抗腫瘍薬剤」または「抗腫瘍医薬組成物」等と表現される場合もある。
上記（１）〜（２７）からなる群より選択される遺伝子によってコードされるタンパク質は、染色体の修復あるいは安定化に関与している。従って本発明の好ましい態様において「タンパク質の機能を阻害する」とは、具体的には、本発明のタンパク質が有する染色体の修復あるいは安定化の機能を阻害することを指す。【００２２】
本発明の上記（１）〜（２７）に記載の各タンパク質は、より詳細には、以下の（ａ）〜（ｎ）に記載された機能を有する。従って、本発明の好ましい態様において、「機能を阻害する」とは、本発明のタンパク質の有する下記の機能を阻害することを指す。ただし、下記に記載された機能は、本発明のタンパク質が有する機能の一例であり、例示した以外の機能を阻害する物質であっても、本発明の抗癌剤増感剤として作用すると考えられる。【００２３】
（ａ）ヒト染色体不安定性疾患関連遺伝子
ヒト染色体不安定性疾患の患者由来細胞では、染色体の切断・欠失・転座・異数化が見られ、またこれら疾患の患者由来細胞はDNA損傷を引き起こす薬剤に対して感受性を示すなど、染色体の不安定化が生じていることから、ヒト染色体不安定性疾患関連遺伝子は染色体安定化に関与している。ヒト染色体不安定性疾患としては、例えば色素性乾皮症、コケイン症、あるいは早老症等が挙げられる。これら各疾患に関連する本発明の遺伝子を以下に記載する。
・ナイミーヘン症候群：（１１）NBS1
・色素性乾皮症： （１５）XPF
・コケイン症： （１４）CSA
・早老症： （２６）WRN、（２７）BLM【００２４】
（ｂ）染色体DNAの複製開始、複製フォークの進行を含む染色体DNA複製反応
染色体DNA複製反応は細胞が増殖する時に、染色体DNAを複製する役割を担っており、１個の細胞が２個に分裂する際に正確に染色体を２倍に複製して染色体数を維持する機能をもつ。この機能を有する本発明の遺伝子を以下に記載する。
（１）Mcm3、（２）Cdc7、（４）Pola p70、（７）Elg1、（３）TopBP1、（５）RFC3、（６）RFC5【００２５】
（ｃ）DNA損傷チェックポイント
DNA損傷チェックポイントは、細胞周期がＧ１期、Ｓ期、Ｇ２期、Ｍ期の各ステージから次のステージへ移行する際に、染色体に切断・化学修飾・架橋を含むDNA損傷をチェックする役割を担っており、次の細胞周期のステージへ移行する前に染色体上のDNA損傷を取り除く機能をもつ。この機能を有する本発明の遺伝子を以下に記載する。
（１０）Chk1、（１１）NBS1、（１２）Hus1、（３）TopBP1【００２６】
（ｄ）姉妹染色分体凝集・分離
姉妹染色分体凝集・分離は、体細胞において複製を終えた姉妹染色分体を娘細胞に正確に分離する役割を担っている。この機能を有する本発明の遺伝子を以下に記載する。
（８）Scc1、（９）Scc3【００２７】
（ｅ）直接塩基修復
直接塩基修復は、染色体DNA中の塩基に酸化やメチル化を含む化学修飾損傷が生じた場合に、修飾された塩基を取り除く役割を担っている。この機能を有する本発明の遺伝子を以下に記載する。
（２２）MGMT、（２３）ABH【００２８】
（ｆ）ヌクレオチド除去修復
ヌクレオチド除去修復は、紫外線照射によって染色体DNA中に生じる、シクロブタン型ピリミジン２量体や６−４光産物、またシスプラチンによって染色体DNA中の隣り合った塩基の間で生じる、DNA鎖内架橋などの損傷を認識して、損傷部を除去して修復する役割を担っている。この機能を有する本発明の遺伝子を以下に記載する。
（１４）CSA、（１５）XPF【００２９】
（ｇ）相同組換え修復
相同組換え修復は、塩基除去修復、ミスマッチ除去修復、ヌクレオチド除去修復などの修復機構が不完全で生じたDNA損傷、また染色体DNA中に生じた切断、ギャップなどを含む様々なDNA損傷を、損傷をもたない相同染色体を鋳型として修復する役割を担っている。この機能を有する本発明の遺伝子を以下に記載する。
（１８）DMC1、（１１）NBS1、（２６）WRN、（２７）BLM【００３０】
（ｈ）非相同末端結合修復（非相同組換え修復）
非相同末端結合修復（非相同組換え修復）は、染色体DNA中に生じた二重鎖切断の末端を結合して修復する役割を担っている。この機能を有する本発明の遺伝子を以下に記載する。
（１９）DNA-pkcs、（２６）WRN【００３１】
（ｉ）二本鎖DNA切断修復
二本鎖DNA切断修復は、染色体DNA中に生じた二重鎖切断を修復する役割を担っており、相同組換え修復や非相同末端結合修復（非相同組換え修復）がこの修復機構に含まれる。この機能を有する本発明の遺伝子を以下に記載する。
（１１）NBS1、（１８）DMC1、（１９）DNA-pkcs、（２６）WRN、（２７）BLM【００３２】
（ｊ）DNA複製後修復（DNA損傷トレランス）
DNA複製後修復（DNA損傷トレランス）は、損傷をもつ染色体DNAが複製される場合に、損傷が存在するDNA鎖の複製を可能にする機構で、残されたDNA損傷は複製後に修復される。この機能を有する本発明の遺伝子を以下に記載する。
（１３）Ubc13【００３３】
（ｋ）DNAポリメラーゼ
DNAポリメラーゼは、複製、組換え、修復などの染色体安定化機構において、DNA合成反応を行う役割を担っている。この機能を有する本発明の遺伝子を以下に記載する。
（１７）Poli、（１６）Polh、（４）Pola p70【００３４】
（ｌ）ヌクレオチド浄化
ヌクレオチド浄化は、DNA合成反応の基質となるヌクレオチド中の塩基に酸化やメチル化を含む化学修飾損傷が生じた場合に、修飾された塩基を取り除く役割を担っている。この機能を有する本発明の遺伝子を以下に記載する。
（２４）DUT【００３５】
（ｍ）クロマチン構造維持
クロマチン構造維持は、染色体の高次構造を介した複製、組換え、修復などの染色体安定化機構に働く。この機能を有する本発明の遺伝子を以下に記載する。
（２１）Sir2【００３６】
（ｎ）テロメア構造維持
テロメア構造維持は、染色体末端のテロメア長の制御、テロメア領域の特殊な高次構造の形成・維持を介して、染色体安定化に重要な役割を担っている。この機能を有する本発明の遺伝子を以下に記載する。
（２０）Tin2、（２１）Sir2【００３７】
上記の各遺伝子は、共通の機能として、染色体の修復・安定化に関与している。従って、染色体の修復・安定化を阻害する物質（化合物）は、抗癌剤増感剤として作用することが期待される。この「染色体の安定化を阻害する」とは、例えば、染色体DNA中に修復されずに残った損傷が蓄積した状態となること等を指し、具体的には、染色体DNA中に一本鎖が露出した領域が蓄積したり、二本鎖DNA切断部分が多数出現する状態を指すが、必ずしもこのような状態に限定されない。【００３８】
本発明において上記（ａ）〜（ｎ）のいずれかの機能を阻害するためには、例えば該機能に関与する遺伝子の発現を阻害する、もしくは該遺伝子によってコードされるタンパク質の機能（活性）を阻害することが挙げられる。【００３９】
また本発明の好ましい態様において抗癌剤は、DNA毒作用をもつ抗癌剤である。例えば、アクチノマイシンＤ、カンプトテシン、シスプラチン、ドキソルビシン、エトポシド、5-フルオロウラシル、マイトマイシンＣ等を挙げることができる。なお、これらの抗癌剤には、以下で示す別称（あるいは正式名称）が存在する。また、以下で示す以外の別称があった場合であっても、当業者において、化合物の構造等から本願の上記抗癌剤と同一か否かについて適宜知ることが可能である。【００４０】
アクチノマイシンDの別称：
3H-Phenoxazine-1,9-dicarboxamide, 2-amino-N,N'-bis[hexadecahydro-2,5,9-trimethyl-6,13-bis(1-methylethyl)-1,4,7,11,14-pentaoxo-1H-pyrrolo[2,1-i][1,4,7,10,13]oxatetraazacyclohexadecin-10-yl]-4,6-dimethyl-3-oxo-; ACT; hbf 386; Lyovac cosmegen; Meractinomycin; Oncostatin K; X 97; Actactinomycin A IV; Actinomycin 7; Actinomycin AIV; Actinomycindioic D acid, dilactone; Actinomycin C1; actinomycin cl; Actinomycin D; (-)-actinomycin d; actinomycin i; Actinomycin I1; Actinomycin IV; Actinomycin-[threo-val-pro-sar-meval]; Actinomycin X 1; actinomycin x i; actinomyein-theo-val-pro-sar-meval; ACTO-D; AD; Dilactone actinomycindioic D acid; Dilactone actinomycin D acid; C1; Cosmegen; Dactinomycin; Dactinomycin D; dactinomyein d【００４１】
カンプトテシンの別称：
(+)-camptothecin; 4-Ethyl-4-hydroxy-1H-pyrano-[3[,4[:6,7]indolizino[1,2-b]quinoline-3,14(4H,12H)-dione; 4-Ethyl-4-hydroxy-1H-pyrano-[3',4':6,7]indolizino[1,2-b]quinoline-3,14(4H,12H)-dione; camptothecin; CPT; (S)-(+)-Camptothecin; (S)-4-ethyl-4-hydroxy-1H-Pyrano[3',4':6,7]indolizino[1,2-b]quinoline-3,14(4H,12H)-dione; (S)-Camptothecin【００４２】
シスプラチンの別称：
2'-Deoxycytidine diphosphate; diaminedichloroplatinum; CACP; CDDP; cis-Diammine dichloroplatinum(II); cis-Diaminedichloroplatinum; cis-Diaminedichloroplatinum(II); cis-diaminodichloroplatinum(II); cis-dichlorodiamineplatinum; cis-Dichlorodiamineplatinum(II); cis-dichlorodiaminoplatinum(II); cis-Dichlorodiammine platinum (II); cis-ddp; Cisplatin; CISPLATIN (CIS-DIAMINEDICHLOROPLATIUM (II)); cis-Platinous diamine dichloride; cis-Platinous Diamine Dichloroplatin; cis-platinous diaminodichloride; cis-platinum(II) diamine dichloride; cisplatyl; cis Pt II; CPDC; CPDD; dCDP; DDP; DDPt; neoplatin; peyrone's chloride; Platiblastin; platinex; Platinol; PT-01; (SP-4-2)-diaminedichloroplatinum【００４３】
ドキソルビシンの別称：
10-((3-Amino-2,3,6-trideoxy-alpha-L-lyso-hexopyranosyl)oxy)-7,8,9,10-tetrahydro-6,8,11-trihydroxy-8-(hydroxyacetyl)-1-methoxy-5,12-naphthacenedione; 14-Hydroxydaunomycin; (8S-cis)-10-(3-Amino-2,3,6-Trideoxy-alpha-L-Lyxo-Hexopyranosyl)Oxy-7,8,9,10-Tetrahydro-6,8,11-Trihydroxy-8-(Hydroxyacetyl)-1-Methoxy-5,12-Naphthacenedione; adiblastine (hydrochloride salt); adriablastine (hydrochloride salt); adriablatina (hydrochloride salt); Adriacin; Adriacin (hydrochloride salt); Adriamycin; Adriamycin PFS; Adriamycin PFS (hydrochloride salt); Adriamycin RDF; Adriamycin RDF (hydrochloride salt); Adriblastin; Adriblastina; Adriblastina (hydrochloride salt); adriblatina (hydrochloride salt); Doxorubicin; Doxorubicin hydrochloride (hydrochloride salt); Farmablastina (hydrochloride salt); Hydroxydaunomycin hydrochloride (hydrochloride salt); Hydroxydaunorubicin hydrochloride (hydrochloride salt); Rubex; Rubex (hydrochloride salt) 【００４４】
エトポシドの別称：
4'-Demethylepipodophyllotoxin-(4,6-O-(R)-ethylidene-beta-D-glucopyranoside); 4'-Demethylepipodophyllotoxin 9-(4,6-O-(R)-ethylidene-beta-D-glucopyranoside); 4'-Demethylepipodophyllotoxin 9- (4,6-0-(R)-ethylidene- beta-D-glycopyranoside); 4-Demethylepipodophyllotoxin-beta-D-ethylideneglucoside; 4'-Demethylepipodophyllotoxin ethylidene-beta-D-glucoside; [5R-[5alpha,5abeta,8aalpha,9beta(R*)]]-9-[(4,6-O-ethylidene-beta-D-glucopyranosyl)oxy]-5,8,8a,9-tetrahydro-5-(4-hydroxy-3,5-dimethoxyphenyl)furo[3',4':6,7]naphtho[2,3-d]-1,3-dioxol-6(5aH)-one; Demethyl-epipodophyllotoxin,ethylidene glucoside; Epe; EPEG; Epipodophyllotoxin, 4'-demethyl-, 4,6-O-ethylidene-beta-D-glucopyranoside; Epipodophyllotoxin, 4'-demethyl-, 9-(4,6-O-ethylidene-beta-D-glucopyranoside); Epipodophyllotoxin VP-16213; Etoposide; Etopside; Furo[3',4':6,7]naphtho[2,3-d][1,3]dioxol-6(5a,H)-one-,((4,6-O-ethylidene-beta-D-glucopyranosyl)oxy)-5,8,8a,9-tetrahydro-5-(4-hydroxy-3,5-dimethoxyphenyl, (5R-(5alpha,5abeta,8aalpha,9beta(R*)))); Vepesid; Vepesid J; VP-16; VP-16-213; VP-16 (etoposide) 【００４５】
5-フルオロフラシルの別称：
50fluoro uracil; 5-fluoro-2,4(1H,3H)-Pyrimidinedione; queroplex; Ro 2-9757; Timazin; U-8953; Ulup; 5-Fluoro-2,4-pyrimidinedione; 5-Fluoropyrimidine-2,4-dione; 5-Fluorouracil; 5-Ftouracyl; 5-FU; Adrucil; Arumel; Carzonal; Effluderm (free base); Efudix; Efudex; efurix; Fluoroblastin; Fluoroplex; Fluorouracil; Fluorouracil (Topical); Fluracil; fluracilum; Fluri; Fluril; Fluroblastin; ftoruracil; FU; Kecimeton【００４６】
マイトマイシンCの別称：
[1aR-(1aalpha,8beta,8aalpha,8balpha)]-6-amino-8-[[(aminocarbonyl)oxy]methyl]-1,1a,2,8,8a,8b-hexahydro-8a-methoxy-5-methylazirino[2',3':3,4]pyrrolo[1,2-alpha]indole-4,7-dione; (1ar)-6-amino-8-(((aminocarbonyl)oxy)methyl)-1,1a,2,8,8a,8b-hexahydro-8a-methoxy-5-methylazirino[2',3':3,4]pyrrolo[1,2-a]indole-4,7-dione; 6-amino-1,1a,2,8,8a,8b-hexahydro-8-(hydroxymethyl)-8a-methoxy-5-methylazirino[2',3':3,4]pyrrolo[1,2-a]indole-4,7-dione, carbamate (ester); 6-amino-8-[[(aminocarbonyl)oxy]methyl]-1,1a,2,8,8a,8b-hexahydro-8a-methoxy-5-methyl, [1aS-(1aalpha,8beta,8aalpha,8balpha)]-azirino[2',3':3,4]pyrrolo[1,2a]indole-4,7-dione; 7-Amino-9alpha-methoxymitosane; Ametycin; Azirino[2',3':3,4]pyrrolo[1,2-a]indole-4,7-dione, 6-amino-8-[[(aminocarbonyl)oxy]methyl]-1,1a,2,8,8a,8b-hexahydro-8a-methoxy-5-methyl-, [1aS-(1aalpha,8beta,8aalpha,8balpha)]-; Mit-C; Mito-C; Mitocin-C; Mitomycin; Mitomycin C; Mitomycinum; MMC; Mutamycin; Mytomycin【００４７】
上記の各種抗癌剤は、好ましくは、以下で示す遺伝子の発現もしくは該遺伝子によってコードされるタンパク質の機能を抑制することにより、作用（感受性）を増強させることができる。
即ち、抗癌剤がアクチノマイシンＤである場合には、本発明の遺伝子としては以下の遺伝子であることが好ましい。
（１）Mcm3、（７）Elg1、（２１）Sir2、（２５）TIMELESS
抗癌剤アクチノマイシンＤは、二本鎖DNAに結合し、RNA合成を選択的に阻害する作用を有することが知られている。【００４８】
本発明者らは上記遺伝子の発現もしくは該遺伝子によってコードされるタンパク質の機能を阻害することにより、アクチノマイシンＤの抗癌作用（感受性）を増強させることが可能であることを見出した。即ち、アクチノマイシンＤと同様の作用機序を有する抗癌剤であれば、上記遺伝子の発現もしくは該遺伝子によってコードされるタンパク質の機能を阻害することによって抗癌作用を増強させることが可能と考えられる。アクチノマイシンＤと同様の作用機序を有する抗癌剤としては、例えばクロマイシンＡ３等を好適に示すことができるが、同様の機序を有する抗癌剤であれば、これらに特に限定されない。【００４９】
また、抗癌剤がカンプトテシンである場合には、本発明の遺伝子としては以下の遺伝子であることが好ましい。
（１）Mcm3、（２）Cdc7、（３）TopBP1、（５）RFC3、（６）RFC5、（７）Elg1、（１０）Chk1、（１２）Hus1、（１３）Ubc13、（１４）CSA、（１６）Polh、（１７）Poli、（１９）DNA-PKcs、（２５）TIMELESS、（２６）WRN、（２７）BLM
抗癌剤カンプトテシンは、I型DNAトポイソメラーゼを阻害することによって、DNA合成を阻害する作用を有する。本剤の殺細胞効果は細胞周期のS期に特異的である。なお、上記遺伝子の発現もしくは該遺伝子によってコードされるタンパク質の機能を抑制することにより、作用（感受性）を増強させることが可能と考えられる抗癌剤としては、カンプトテシンと同様の作用機序を有する抗癌剤であれば特に制限はなく、例えば塩酸イリノテカン、SN-38、またはトポテカン等を挙げることができる。【００５０】
また、抗癌剤がシスプラチンである場合には、本発明の遺伝子としては以下の遺伝子であることが好ましい。
（１）Mcm3、（９）Scc3、（１０）Chk1、（１１）NBS1、（１２）Hus1、（１３）Ubc13、（１４）CSA、（１５）XPF、（２６）WRN、（２７）BLM
抗癌剤シスプラチンは、白金錯化合物、塩素イオンの低い細胞内では反応性に富み、核酸塩基と結合する。主にDNAの1本鎖内架橋や2本鎖間架橋を作り、DNA合成や腫瘍細胞の分裂を阻害する作用を有する。なお、上記遺伝子の発現もしくは該遺伝子によってコードされるタンパク質の機能を抑制することにより、作用（感受性）を増強させることができる抗癌剤としては、シスプラチンと同様の作用機序を有する抗癌剤であれば特に制限はなく、例えばカルボプラチン（Carboplatin）、ネダプラチン（Nedaplatin）、ロバプラチン（Lobaplatin）、オキザロプラチン（Oxaliplatin）、JM216、JM335、DWA-2114R、NK-121、I-OHP、またはTRK-710等を挙げることができる。【００５１】
また、抗癌剤がドキソルビシンである場合には、本発明の遺伝子としては以下の遺伝子であることが好ましい。
（５）RFC3、（７）Elg1、（８）Scc1、（９）Scc3、（１０）Chk1、（１３）Ubc13、（１４）CSA、（１７）Poli、（２５）TIMELESS
抗癌剤ドキソルビシンは、腫瘍細胞内のDNAと結合し細胞分裂の際にDNAの開裂を妨げる作用を有する。またDNA依存性RNAポリメラーゼ及びデオキシリボヌクレアーゼを抑制する。なお、上記遺伝子の発現もしくは該遺伝子によってコードされるタンパク質の機能を抑制することにより、作用（感受性）を増強させることができる抗癌剤としては、ドキソルビシンと同様の作用機序を有する抗癌剤であれば特に制限はなく、例えばダウノルビシン、アクラルビシン、ピラスビシン、またはエピルビシン等を挙げることができる。【００５２】
また、抗癌剤がエトポシドである場合には、本発明の遺伝子としては以下の遺伝子であることが好ましい。
（１）Mcm3、（２）Cdc7、（３）TopBP1、（５）RFC3、（６）RFC5、（７）Elg1、（９）Scc3、（１０）Chk1、（１２）Hus1、（１３）Ubc13、（１４）CSA、（１６）Polh、（１７）Poli、（１９）DNA-PKcs、（２０）Tin2、（２３）ABH、（２５）TIMELESS
抗癌剤エトポシドは、細胞周期のS期後半及びG2期にある細胞に対し殺細胞作用を示す。in vitroで単離DNA鎖を切断しないため、DNAに対する作用は間接的なものと考えられている。なお、上記遺伝子の発現もしくは該遺伝子によってコードされるタンパク質の機能を抑制することにより、作用（感受性）を増強させることができる抗癌剤は、エトポシドと同様の作用機序を有する抗癌剤であれば、エトポシドに特に限定されない。【００５３】
また、抗癌剤が5-フルオロウラシルである場合には、本発明の遺伝子としては以下の遺伝子であることが好ましい。
（１）Mcm3、（５）RFC3、（６）RFC5、（７）Elg1、（８）Scc1、（９）Scc3、（１０）Chk1、（１２）Hus1、（１３）Ubc13、（１４）CSA、（１５）XPF、（１６）Polh、（１７）Poli、（１８）Dmc1、（１９）DNA-PKcs、（２０）Tin2、（２１）Sir2、（２２）MGMT、（２３）ABH、（２４）DUT
抗癌剤5-フルオロウラシルは、ピリミジン代謝拮抗薬であり、腫瘍細胞内でfluorodeoxy UMP（FdUMP）に転換され、deoxy UMPと拮抗してチミジル酸合成酵素を抑制しDNA合成を阻害する作用を有する。またRNAに組み込まれてfluoro RNA生成やリボソームRNA形成の阻害にも関与する。なお、上記遺伝子の発現もしくは該遺伝子によってコードされるタンパク質の機能を抑制することにより、作用（感受性）を増強させることができる抗癌剤としては、5-フルオロウラシルと同様の作用機序を有する抗癌剤であれば特に制限はなく、例えばデガフール、カルモフール、ドキシフルリジン、シタラビン、アンシタビン、またはエノシタビン等を挙げることができる。【００５４】
また、抗癌剤がマイトマイシンＣである場合には、本発明の遺伝子としては以下の遺伝子であることが好ましい。
（１）Mcm3、（２）Cdc7、（３）TopBP1、（５）RFC3、（６）RFC5、（７）Elg1、（８）Scc1、（９）Scc3、（１０）Chk1、（１２）Hus1、（１３）Ubc13、（１４）CSA、（１５）XPF、（１６）Polh、（１７）Poli、（１８）Dmc1、（１９）DNA-PKcs、（２０）Tin2、（２１）Sir2、（２２）MGMT、（２３）ABH、（２５）TIMELESS
抗癌剤マイトマイシンＣは、腫瘍細胞のDNAと結合し、二重鎖DNAへの架橋形成を介してDNAの複製を阻害する作用を有する。また細胞周期のDNA合成前期（G1）後半からDNA合成期（S）前半に作用する。なお、上記遺伝子の発現もしくは該遺伝子によってコードされるタンパク質の機能を抑制することにより、作用（感受性）を増強させることができる抗癌剤は、マイトマイシンＣと同様の作用機序を有する抗癌剤であれば、マイトマイシンＣに特に限定されない。【００５５】
また、本発明において、上記（１）〜（２７）からなる群より選択されるタンパク質の機能を阻害する化合物としては、例えば、以下のような物質を挙げることができる。
（ａ）上記（１）〜（２７）からなる群より選択されるタンパク質に対してドミナントネガティブの性質を有する該タンパク質変異体
（ｂ）上記（１）〜（２７）からなる群より選択されるタンパク質に結合する抗体
（ｃ）上記（１）〜（２７）からなる群より選択されるタンパク質に結合する低分子化合物【００５６】
上記のドミナントネガティブの性質を有するタンパク質変異体とは、該タンパク質が発現することによって、内在性の野生型タンパク質の活性を消失もしくは低下させる機能を有するタンパク質を指す。
また本発明は、上記（１）〜（２７）からなる群より選択される遺伝子によってコードされるタンパク質に結合する抗体を有効成分として含有する、染色体の修復あるいは安定化を阻害する作用を有する抗癌剤増感剤を提供する。【００５７】
また、上記抗体は、本発明のタンパク質と結合することにより、該タンパク質の機能を阻害することが期待される。上記抗体は、当業者に公知の方法により調製することが可能である。ポリクローナル抗体であれば、例えば、次のようにして得ることができる。天然の本発明のタンパク質、あるいはGSTとの融合タンパク質として大腸菌等の微生物において発現させたリコンビナントタンパク質、またはその部分ペプチドをウサギ等の小動物に免疫し血清を得る。これを、例えば、硫安沈殿、プロテインA、プロテインGカラム、DEAEイオン交換クロマトグラフィー、または、本発明のタンパク質をカップリングしたアフィニティーカラム等により精製することにより調製する。また、モノクローナル抗体であれば、例えば、本発明のタンパク質もしくはその部分ペプチドをマウスなどの小動物に免疫を行い、同マウスより脾臓を摘出し、これをすりつぶして細胞を分離し、該細胞とマウスミエローマ細胞とをポリエチレングリコール等の試薬を用いて融合させ、これによりできた融合細胞（ハイブリドーマ）の中から、本発明のタンパク質に結合する抗体を産生するクローンを選択する。次いで、得られたハイブリドーマをマウス腹腔内に移植し、同マウスより腹水を回収し、得られたモノクローナル抗体を、例えば、硫安沈殿、プロテインA、プロテインGカラム、DEAEイオン交換クロマトグラフィー、本発明のタンパク質や合成ペプチドをカップリングしたアフィニティーカラム等により精製することで、調製することが可能である。【００５８】
本発明の抗体の形態には、特に制限はなく、本発明のタンパク質に結合する限り、上記ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体のほかに、ヒト抗体、遺伝子組み換えによるヒト型化抗体、さらにその抗体断片や抗体修飾物も含まれる。
抗体取得の感作抗原として使用される本発明のタンパク質は、その由来となる動物種に制限されないが哺乳動物、例えばマウス、ヒト由来のタンパク質が好ましく、特にヒト由来のタンパク質が好ましい。ヒト由来のタンパク質は、本明細書に開示される遺伝子配列またはアミノ酸配列を用いて得ることができる。【００５９】
本発明において、感作抗原として使用されるタンパク質は、完全なタンパク質あるいはタンパク質の部分ペプチドであってもよい。タンパク質の部分ペプチドとしては、例えば、タンパク質のアミノ基（N）末端断片やカルボキシ（C）末端断片が挙げられる。本明細書における「抗体」とはタンパク質の全長または断片に反応する抗体を意味する。
また、ヒト以外の動物に抗原を免疫して上記ハイブリドーマを得る他に、ヒトリンパ球、例えばEBウィルスに感染したヒトリンパ球をin vitroでタンパク質、タンパク質発現細胞又はその溶解物で感作し、感作リンパ球をヒト由来の永久分裂能を有するミエローマ細胞、例えばU266と融合させ、タンパク質への結合活性を有する所望のヒト抗体を産生するハイブリドーマを得ることもできる。【００６０】
本発明のタンパク質に結合する抗体は、例えば、抗癌剤との併用を目的とした使用が考えられる。得られた抗体を人体に投与する目的（抗体治療）で使用する場合には、免疫原性を低下させるため、ヒト抗体やヒト型抗体が好ましい。
また、上記低分子化合物は、天然または人工の化合物のいずれであってもよい。本発明の化合物は、後述のスクリーニング方法によって、取得することが可能である。【００６１】
また、本発明において、上記（１）〜（２７）に記載の遺伝子の発現を阻害する物質としては、例えば、以下のような物質を挙げることができる。
（ａ）上記（１）〜（２７）からなる群より選択される遺伝子の転写産物、またはその一部に対するアンチセンス核酸
（ｂ）上記（１）〜（２７）からなる群より選択される遺伝子の転写産物を特異的に開裂するリボザイム活性を有する核酸
（ｃ）上記（１）〜（２７）からなる群より選択される遺伝子の発現を、RNAi効果による阻害作用を有する核酸【００６２】
本発明における「核酸」とは、通常RNAまたはDNAを意味する。特定の内在性遺伝子の発現を阻害する方法としては、アンチセンス技術を利用する方法が当業者によく知られている。アンチセンス核酸が標的遺伝子の発現を阻害する作用としては、以下のような複数の要因が存在する。すなわち、三重鎖形成による転写開始阻害、RNAポリメラーゼによって局部的に開状ループ構造が作られた部位とのハイブリッド形成による転写阻害、合成の進みつつあるRNAとのハイブリッド形成による転写阻害、イントロンとエキソンとの接合点におけるハイブリッド形成によるスプライシング阻害、スプライソソーム形成部位とのハイブリッド形成によるスプライシング阻害、mRNAとのハイブリッド形成による核から細胞質への移行阻害、キャッピング部位やポリ(A)付加部位とのハイブリッド形成によるスプライシング阻害、翻訳開始因子結合部位とのハイブリッド形成による翻訳開始阻害、開始コドン近傍のリボソーム結合部位とのハイブリッド形成による翻訳阻害、mRNAの翻訳領域やポリソーム結合部位とのハイブリッド形成によるペプチド鎖の伸長阻害、および核酸とタンパク質との相互作用部位とのハイブリッド形成による遺伝子発現阻害などである。このようにアンチセンス核酸は、転写、スプライシングまたは翻訳など様々な過程を阻害することで、標的遺伝子の発現を阻害する（平島および井上, 新生化学実験講座2 核酸IV遺伝子の複製と発現, 日本生化学会編, 東京化学同人, 1993, 319-347.）。【００６３】
本発明で用いられるアンチセンス核酸は、上記のいずれの作用により本発明の遺伝子の発現を阻害してもよい。一つの態様としては、本発明の遺伝子のmRNAの5'端近傍の非翻訳領域に相補的なアンチセンス配列を設計すれば、遺伝子の翻訳阻害に効果的と考えられる。また、コード領域もしくは3'側の非翻訳領域に相補的な配列も使用することができる。このように、本発明の遺伝子の翻訳領域だけでなく非翻訳領域の配列のアンチセンス配列を含む核酸も、本発明で利用されるアンチセンス核酸に含まれる。使用されるアンチセンス核酸は、適当なプロモーターの下流に連結され、好ましくは3'側に転写終結シグナルを含む配列が連結される。このようにして調製された核酸は、公知の方法を用いることで、所望の動物へ形質転換できる。アンチセンス核酸の配列は、形質転換される動物が持つ内在性遺伝子またはその一部と相補的な配列であることが好ましいが、遺伝子の発現を有効に抑制できる限り、完全に相補的でなくてもよい。転写されたRNAは、標的遺伝子の転写産物に対して好ましくは90％以上、最も好ましくは95％以上の相補性を有する。アンチセンス核酸を用いて標的遺伝子の発現を効果的に抑制するには、アンチセンス核酸の長さは少なくとも15塩基以上であり、好ましくは100塩基以上であり、さらに好ましくは500塩基以上である。【００６４】
また、本発明の遺伝子の発現の阻害は、リボザイム、またはリボザイムをコードするDNAを利用して行うことも可能である。リボザイムとは触媒活性を有するRNA分子を指す。リボザイムには種々の活性を有するものが存在するが、中でもRNAを切断する酵素としてのリボザイムに焦点を当てた研究により、RNAを部位特異的に切断するリボザイムの設計が可能となった。リボザイムには、グループIイントロン型やRNase Pに含まれるM1 RNAのように400ヌクレオチド以上の大きさのものもあるが、ハンマーヘッド型やヘアピン型と呼ばれる40ヌクレオチド程度の活性ドメインを有するものもある（小泉誠および大塚栄子, 蛋白質核酸酵素, 1990, 35, 2191.）。【００６５】
例えば、ハンマーヘッド型リボザイムの自己切断ドメインは、G13U14C15という配列のC15の3'側を切断するが、その活性にはU14とA9との塩基対形成が重要とされ、C15の代わりにA15またはU15でも切断され得ることが示されている（Koizumi, M. et al., FEBS Lett, 1988, 228, 228.）。基質結合部位が標的部位近傍のRNA配列と相補的なリボザイムを設計すれば、標的RNA中のUC、UUまたはUAという配列を認識する制限酵素的なRNA切断リボザイムを作出することができる（Koizumi, M. et al., FEBS Lett, 1988, 239, 285.、小泉誠および大塚栄子, 蛋白質核酸酵素, 1990, 35, 2191.、Koizumi, M. et al., Nucl Acids Res, 1989, 17, 7059.）。【００６６】
また、ヘアピン型リボザイムも本発明の目的に有用である。このリボザイムは、例えばタバコリングスポットウイルスのサテライトRNAのマイナス鎖に見出される（Buzayan, JM., Nature, 1986, 323, 349.）。ヘアピン型リボザイムからも、標的特異的なRNA切断リボザイムを作出できることが示されている（Kikuchi, Y. & Sasaki, N., Nucl Acids Res, 1991, 19, 6751.、菊池洋, 化学と生物, 1992, 30, 112.）。このように、リボザイムを用いて本発明の遺伝子の転写産物を特異的に切断することで、該遺伝子の発現を阻害することができる。【００６７】
本発明の上記（１）〜（２７）のいずれかに記載の遺伝子の発現を阻害する化合物の好ましい態様としては、本発明の上記（１）〜（２７）のいずれかに記載の遺伝子に対してRNAi（RNA interference；RNA干渉）効果を有する二本鎖RNA（siRNA）を挙げることができる。より具体的には、配列番号：６１〜８７のいずれかに記載の塩基配列を含むRNAを挙げることができる。また、上記siRNAの具体的な態様としては、配列番号：６１〜８７のいずれかに記載の塩基配列からなるRNAを一方の鎖とする二本鎖RNA（siRNA）を挙げることができる。【００６８】
一般的にRNAiとは、標的遺伝子のmRNA配列と相同な配列からなるセンスRNAおよびこれと相補的な配列からなるアンチセンスRNAとからなる二本鎖RNAを細胞内に導入することにより、標的遺伝子mRNAの破壊を誘導し、標的遺伝子の発現が阻害される現象を言う。
RNAi機構の詳細については未だに不明な部分もあるが、DICERといわれる酵素（RNase III核酸分解酵素ファミリーの一種）が二本鎖RNAと接触し、二本鎖RNAがsmall interfering RNAまたはsiRNAと呼ばれる小さな断片に分解されるものと考えられている。本発明におけるRNAi効果を有する二本鎖RNAには、このsiRNAも含まれる。【００６９】
本発明の好ましい態様においては、上記（１）〜（２７）のいずれかに記載の遺伝子の発現をRNAi効果により抑制し得るRNA(siRNA)であって、配列番号：６１〜８７のいずれかに記載の塩基配列からなるRNAと、該RNAと相補的な配列からなるRNAとがハイブリダイズした構造を含む二本鎖RNAを有効成分として含む、抗癌剤増感剤を提供する。
例えば、配列番号：６１に記載の塩基配列（5'- gaugcaggaugacaaucagTT-3'）を含む本発明のsiRNAとは、以下のような構造のRNA分子を例示することができる。
2008047574.tif 000003
（上記「I」は水素結合を表す。）
なお、上記RNA分子において一方の端が閉じた構造の分子、例えば、ヘアピン構造を有するsiRNA(shRNA)も本発明に含まれる。即ち、分子内において二本鎖RNA構造を形成し得る分子もまた本発明に含まれる。
例えば、
5'-gaugcaggaugacaaucag (xxxx)n cugauugucauccugcauc-3'  のような分子もまた本発明に含まれる。（上記「(xxxx)n」は任意塩基および配列数からなるポリヌクレオチドを表す。）【００７０】
上記siRNAの好ましい態様としては、上記（１）〜（２７）のいずれかに記載の遺伝子の発現をRNAi効果により抑制し得るRNA(siRNA)であって、配列番号：６１〜８７のいずれかに記載の塩基配列からなるRNAと、該RNAと相補的な配列からなるRNAとがハイブリダイズした構造を含む二本鎖RNAを好適に示すことができる。
本発明の上記「RNAi効果により抑制し得る二本鎖RNA」の具体例として、表１に記載の塩基配列（配列番号：６１〜８７のいずれかに記載の塩基配列）を該二本鎖RNAの一方の鎖とするsiRNA分子（配列番号：６１〜８７のいずれかに記載の塩基配列と、該RNAと相補的な配列からなるRNAとがハイブリダイズした構造を含むsiRNA分子）を挙げることができる。即ち本発明の一つの態様としては、RNAi効果により抑制し得る二本鎖RNAの一方の鎖が、配列番号：６１〜８７のいずれかに記載の塩基配列からなるsiRNA分子（配列番号：６１〜８７のいずれかに記載の塩基配列と、該RNAと相補的な配列からなるRNAとがハイブリダイズした構造を含むsiRNA分子）を有効成分として含む、抗癌剤増感剤を提供する。【００７１】
ただし、二本鎖RNAの末端において、例えば、１もしくは複数のRNAが付加もしくは欠失された構造の二本鎖RNAもまた、本発明に含まれる。その場合、二本鎖を形成するRNAは、上記（１）〜（２７）のいずれかに記載の遺伝子の部分配列と完全に同一（相同）である必要はないが、相同性を有することが好ましい。また、本発明のRNAi効果を有する二本鎖RNAは、通常、本発明の上記（１）〜（２７）のいずれかに記載の遺伝子のmRNAにおける連続する任意のRNA領域と相同な配列からなるセンスRNA、および該センスRNAに相補的な配列のアンチセンスRNAからなる二本鎖RNAである。【００７２】
本発明のsiRNAにおいて二本鎖を形成する領域のRNAの長さは、好ましくは15〜30bp程度の長さであり、より好ましくは19〜21bpの長さであり、最も好ましくは19 bp（例えば、配列番号：６１〜８７のいずれかに記載のRNAを一方の鎖とするsiRNA）の長さであるが、必ずしもこれらの長さに限定されない。【００７３】
また、そのままの長さではRNAi効果を有さないような長鎖のRNAであっても、細胞においてRNAi効果を有するsiRNAへ分解されることが期待されるため、本発明における二本鎖RNAの長さは、特に制限されない。また、本発明の上記（１）〜（２７）のいずれかに記載の遺伝子のmRNAの全長もしくはほぼ全長の領域に対応する長鎖二本鎖RNAを、例えば、予めDICERで分解させ、その分解産物を抗癌剤増感剤として利用することが可能である。この分解産物には、RNAi効果を有する二本鎖RNA分子(siRNA)が含まれることが期待される。この方法によれば、RNAi効果を有することが期待されるmRNA上の領域を、特に選択しなくともよい。即ち、RNAi効果を有する本発明の遺伝子のmRNA上の領域は、必ずしも正確に規定される必要はない。【００７４】
また、通常、末端に数塩基のオーバーハングを有する二本鎖RNAは、RNAi効果が高いことから、本発明の二本鎖RNAは、末端に数塩基のオーバーハングを有することが望ましい。このオーバーハングを形成する塩基の長さ、および配列は特に制限されない。また、このオーバーハングは、DNAおよびRNAのいずれであってもよい。好ましくは、2塩基のオーバーハングを例示することができる。本発明においては例えば、TT（チミンが2個）、UU（ウラシルが2個）、その他の塩基のオーバーハングを有する二本鎖RNA（最も好ましくは19塩基の二本鎖RNAと2塩基(TT)のオーバーハングを有する分子）を好適に用いることができる。本発明の二本鎖RNAには、このようにオーバーハングを形成する塩基がDNAであるような分子や、標的mRNA配列と相同な配列も含まれる。
例えば、オーバーハング部分の塩基がTTである場合には、本発明のsiRNA分子としては、
2008047574.tif 000004
のような分子（3'側にTTが付加された分子）を例示することができる。【００７５】
本発明の上記「RNAi効果により抑制し得る二本鎖RNA」は、当業者においては、該二本鎖RNAの標的となる本発明によって開示された上記（１）〜（２７）のいずれかに記載の遺伝子の塩基配列を基に、適宜作製することができる。本発明の上記（１）〜（２７）のいずれかに記載の遺伝子の塩基配列は、上述のように公共の遺伝子データベースから容易に取得することができる。一例を示せば、配列番号：１〜３０のいずれかに記載の塩基配列をもとに、本発明の二本鎖RNAを作製することができる。即ち、配列番号：１〜３０のいずれかに記載の塩基配列をもとに、該配列の転写産物であるmRNAの任意の連続するRNA領域を選択し、この領域に対応する二本鎖RNAを作製することは、当業者においては、容易に行い得ることである。また、該配列の転写産物であるmRNA配列から、より強いRNAi効果を有するsiRNA配列を選択する方法は、例えば文献（Reynold et al. Nature biotechnology 22. 326-330 (2004)、Ui-Tei et al. Nucleic Acids Res. 32. 936-948 (2004)、Boese Q, Leake D, Reynolds A, Read S, Scaringe SA, Marshall WS, Khvorova A. Mechanistic insights aid computational short interfering RNA design.Methods Enzymol. 2005;392:73-96.、Snove O Jr, Nedland M, Fjeldstad SH, Humberset H, Birkeland OR, Grunfeld T, Saetrom P. Designing effective siRNAs with off-target control. Biochem Biophys Res Commun. 2004;325(3):769-73.、Yiu SM, Wong PW, Lam TW, Mui YC, Kung HF, Lin M, Cheung YT. Filtering of Ineffective siRNAs and Improved siRNA Design Tool. Bioinformatics. 200515;21(2):144-51、Chalk AM, Wahlestedt C, Sonnhammer EL. Improved and automated prediction of effective siRNA. Biochem Biophys Res Commun. 2004;319(1):264-74.、Amarzguioui M, Prydz H. An algorithm for selection of functional siRNA sequences. Biochem Biophys Res Commun. 2004;316(4):1050-8.、Sioud M, Leirdal M. Potential design rules and enzymatic synthesis of siRNAs. Methods Mol Biol. 2004;252:457-69.）等を参考にして、当業者においては、適宜実施することが可能である。また、一方の鎖（例えば、配列番号：６１〜８７のいずれかに記載の塩基配列）が判明していれば、当業者においては容易に他方の鎖（相補鎖）の塩基配列を知ることができる。siRNAは、当業者においては市販の核酸合成機を用いて適宜作製することが可能である。また、所望のRNAの合成については、一般の合成受託サービスを利用することが可能である。【００７６】
また、本発明におけるsiRNAは、必ずしも全てのヌクレオチドがリボヌクレオチド(RNA)でなくともよい。即ち、本発明において、siRNAを構成する１もしくは複数のリボヌクレオチドは、対応するデオキシリボヌクレオチドであってもよい。この「対応する」とは、糖部分の構造は異なるものの、同一の塩基種（アデニン、グアニン、シトシン、チミン（ウラシル））であることを指す。例えば、アデニンを有するリボヌクレオチドに対応するデオキシリボヌクレオチドとは、アデニンを有するデオキシリボヌクレオチドのことを言う。また、前記「複数」とは特に制限されないが、好ましくは２〜５個程度の少数を指す。
また、本発明においてsiRNAを構成する核酸は、例えば、LNA(Locked Nucleic Acid)等の核酸アナログであってもよい。該LNPは、ヌクレアーゼに耐性の物質であるため、より長時間siRNA効果を持続させることが可能である。【００７７】
さらに、本発明の二本鎖RNAを発現し得るDNA（ベクター）もまた、本発明の上記（１）〜（２７）に記載の遺伝子の発現を抑制し得る化合物の好ましい態様に含まれる。本発明の上記二本鎖RNAを発現し得るDNA（ベクター）は、通常、該二本鎖RNAの一方の鎖をコードするDNA、および該二本鎖RNAの他方の鎖をコードするDNAが、それぞれ発現し得るようにプロモーターと連結した構造を有するDNAである。本発明の上記DNAは、当業者においては、一般的な遺伝子工学技術により、容易に作製することができる。より具体的には、本発明のRNAをコードするDNAを公知の種々の発現ベクターへ適宜挿入することによって、本発明の発現ベクターを作製することが可能である。【００７８】
なお、上述のように上記（１）〜（２７）のいずれかに記載の遺伝子には、同一の遺伝子であっても種々の多型が含まれている場合がある。当業者においては、配列番号：６１〜８７のいずれかに記載の塩基配列に対し、例えば、上記（１）〜（２７）のいずれかに記載の遺伝子に関する公共の多型データベースからの情報を加味し、RNAi効果を有することが期待されるRNAの配列を適宜設計することができる。このようなRNAを含む抗癌剤増感剤もまた本発明に含まれる。また、当業者においては、複数種作製された本発明の二本鎖RNAから、最適なRNAi効果を有するRNAを適宜選択して抗癌剤増感剤とすることも可能である。【００７９】
また、本発明の二本鎖RNAの基となる遺伝子（標的遺伝子）の配列は、必ずしも遺伝子全長の塩基配列が判明している必要はない。選択すべき任意の連続するRNA領域（例えば、20〜30塩基）が判明していればよい。従って、EST（Expressed Sequence Tag）等のようにmRNAの一部は判明しているが、全長が判明していない遺伝子断片からも、該断片の塩基配列を基に本発明の二本鎖RNAを作製することが可能である。以下に、GenBankデータベースにおいて、本発明の遺伝子と高い相同性を示したEST配列のアクセッションナンバーを、各遺伝子名ごとに分けて記載する。但し、これらは多数存在するEST配列のうちの一例に過ぎず、当業者においては、適切なEST断片に関する情報を公共のデータベースから容易に取得することができる。【００８０】
（1）Mcm3：BM467763、AL551465、BQ066322、BQ061652、AL559830、BQ059704、BM471050、BU849776、AL545116、BQ063041、BU541430、BU860117、BM542415、AU124791、BU857116、BM453648、BQ056448、BM927480、BQ218351、BQ057647、BQ940737、AU119321、BX462455、BQ898140、CF995699、BI772155、AL549372、BQ214499、BU856617、BM007763、BI223143、BQ652945、BQ649476、BU509755、BQ058522、BQ641758、BQ064200、BG281527、AU133404、BE249947、BU601317、BU154249、BQ927115、BI457651、BX462766、BU558287、BQ051029、BM917594、AU134083、BM561561、CD656673、BQ422727、BQ058080、BM478599、BQ881515、BE795211、BI196606、BG034961、BE892181、BQ649956、BM479437、BG765473、AL527918、BE560376、BI261474、BI599305、BX348989、BE793456、BM461732、BE620320、BE783059、BE799563、BE561200、BQ064568、BE620857、BG681460、BE616575、AU124152、BM832703、BG392301、BG259417、AW083217、BI086286、BQ650935、BI259905、BG686972、CD642696、BI091236、CD655620、BI551396、BE778348、BG773437、BU193733、BE274144、BE891644、AW732422、AU131124、BG742232、BU178300、AU123260【００８１】
（2）Cdc7：CA441701、BG170872、BM463748、AL044123、BE789148、AU120443、AU129167、AU116849、AW968900、AW574512、BI462237、AL602215、BM789148、CB959717、AL039323、AA814975、AA936081、BG721963、BU657893、CB216422、AU117631、AA768993、AA131310、BF366907、W76628、N40295、BF982876、AA488999、AW405542、AL044122、BF031756、BQ221549、AA291015、BX419687、BF696442、AA488783、CD523327、BG116756、D20593、CD689440、BG116838、BU568048、CD642993【００８２】
（3）TopBP1：BI860562.1、BG211676.1、BG205968.1、BG205121.1、BG199994.1、BG197369.1、BG194973.1、BG191292.1、BG188141.1、BG182400.1、BG574255.1、BG530865.1、BG530326.1、BG506287.1、BG503699.1、BG499145.1、BG470035.1、BG212752.1、BG679852.1、N66108.1、BI025248.1、BG944229.1、AU185190.1、AL601561.1、BI457669.1、BI599631.1、BI599739.1、N98714.1、BI909100.1、BM193596.1、BM457984.1、BM466768.1、BM468599.1、AU154485.1、AU148410.1、BF059530.1、BF687788.1、BF677901.1、BF247342.1、BF219040.1、BF217865.1、AU133127.1、AU133081.1、AU127105.1AU126208.1、AU124582.1、AV762536.1、BF103955.1、AV734003.1、R97836.1、BG388685.1、BG388593.1、BG436243.1、BG425541.1、BG258516.1、F19044.2、BF902481.1、BF898849.1、BF897077.1、BF977080.1、BF976093.1、BF974954.1、BG031742.1、BF811031.1、BF742486.1、BF571595.1、AU154511.1、BU430653.1、BU166007.1、BU166267.1、BU176955.1、T57641.1、T59304.1、AA122044.1、BU567509.1、BU569949.1、BU615657.1、AA179731.1、AA180484.1、AA195149.1、AA195048.1、BU682937.1、BU742911.1、AA877778.1、AA827881.1、AA806586.1、AA687343.1、AA679914.1、AA629943.1、AA580922.1、AA548644.1、AA502992.1、AA287172.1、AA287050.1、AA374330.1、AA283610.1、CA414001.1、AA282490.1、BU934705.1、BU754087.1、AL703988.1、BM980333.1、BM976686.1、W80449.1、W79045.1、BM849790.1、BM847838.1、W61209.1、W61104.1、BM787623.1、BM800578.1、BM727770.1、BM696206.1、BM681414.1、BM665950.1、BM664480.1、BM477192.1、BU430127.1、BU429013.1、BQ924347.1、BM150522.1、BM147383.1、BM145207.1、AA019931.1、AA019919.1、AA015707.1、AA013344.1、AA013051.1、BQ232300.1、BQ183678.1、W92384.1、W92328.1、BQ049012.1、BQ002533.1、AI932674.1、BX340974.2、BX340975.2、BX373975.2、AI949967.1、AI950324.1、BX421354.2、BX435839.1、BX452308.2、AW003763.1、CD652979.1、AW027550.1、BX495380.1、BX501663.1、AL120892.1、AW102634.1、AW500655.1、AW474804.1、AW468446.1、AW444550.1、AW361151.1、AW338037.1、AW292841.1、AL135165.1、F09486.1、F11839.1、AI905758.1、BP429870.1、AW197098.1、AW196674.1、CF121353.1、CF121336.1、CF121614.1、AI243782.1、R33183.1、R33092.1、AI241899.1、AI241853.1、AI221574.1、AI219074.1、BX092549.1、BX112533.1、R20921.1、R20807.1、AI041207.1、AI032829.1、AI028590.1、AI022185.1、AI004886.1、AA970099.1、AI911250.1、AI911060.1、AI862633.1、AI803733.1、AI718633.1、AI690370.1、AI656252.1、AI652145.1、AI630013.1、R54257.1、AI492307.1、AI470457.1、AI470058.1、R51863.1、AI351858.1、AI288841.1、AI249039.1、BE545536.1、CV814998.1、CV808215.1、BE466592.1、CV379650.1、BE350532.1、BP348277.1、BP283951.1、BP261103.1、BP340246.1、BP332144.1、BP368690.1、BP367688.1、BP367131.1、BP344747.1、BP327858.1、BP326794.1、R97785.1、BF033225.1、BE960630.1、BE940106.1、D63182.1、BE894142.1、BE888860.1、BE884830.1、BE875686.1、BE872454.1、BE867751.1、BE866097.1、BE832117.1、BE832116.1、R84827.1、BE709318.1、BE613449.1、CN346334.1、CN346332.1、CN346333.1、CN346341.1、CN346340.1、CN346339.1、CN346338.1、CN346337.1、CN346336.1、CN346335.1、AW957490.1、BX955996.1、BX952812.1、R76678.1、R76351.1、AW629039.1、AW516017.1、BP298788.1、BP234764.1、BP212638.1、BP243801.1、BP242220.1、BP239750.1、BP230541.1、BE247037.1、BE244452.1、BE243607.1、BE003309.1、AW978277.1、CN401550.1、CN401549.1、CN346344.1、CN346343.1、CN346342.1、AA904777.1、BX111918.1、AI349010.1、AI418392.1、AI765121.1、AI791182.1、CD518246.1、AW152201.1、AW298388.1、AW341537.1、AW341604.1、CK821263.1、CK821264.1、R80373.1、AW863732.1、AW977932.1、BE244367.1、CR745164.1、BE958245.1、H91689.1、BG957520.1、BG980219.1、W03290.1、BM310656.1、BM310955.1、BM147983.1、AA219165.1、AA524804.1、AA704218.1、AA872196.1【００８３】
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（10）Chk1：BX384024、BX425856、BX352948、BM458297、BM803862、BX363020、BX384025、BX383978、BX363830、BX443777、BQ071454、AL515222、BQ919396、BX346314、BX363829、BX414303、BQ424951、BX345096、BM048703、BM478961、BU620586、BX386787、BX386786、BU181250、BG717056、BX440542、BG687019、AL523644、BG258170、CA441277、AI924526、BI088504、BF795495、AL708308、BG612596、BQ226720、BM968823、BG339614、BG944287、BE299090、BI521358、BX351192、BG828404、BQ223060、BF310022、BQ641604、BM558032、BG218896、BF242017、BF001625、BG470645、CB127107、BG192348、CB124258、BF204894、CB124369、BE464453、CB125201、BG256454、AL559804、BE298964、BX383977、CB124285、BG194802、CB998143、BE904400、AL559805、BG216281、BG191840、BX425855、BG215785、N99369、BG470702、BM193374、BX363019、BI197298、BE882051、BE297644、N53057、BE548526、BI824209、BG211479、BX346313、CB142976、AA224307、CD694666、BQ322635、AA962684、AI536947、BM455102、R86187、H67490、BF973418、AL515221、BF946916、N71469、AI750793、AL523643、H59530、BU927896【００９０】
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（12）Hus1：BX510134、CD520767、AL554895、CD104810、BU933524、BU932644、BU600981、BU171912、BF185772、BG386353、BG286955、BE874516、BM462752、BU932377、BE568470、BE892098、BM546627、BF510091、BE543378、BG330719、BU193379、BG703514、BM906889、BE644764、BF796878、BM822628、BE566605、AA902233、AA280710、CA418558、BQ646867、CD678464、AI675254、AI968159、BG028551、BU680921、AI968626、AI750426、BU784416、BE891273、BF056974、AW518029、R29753、AW270395、CD357688、AI656993、BX115181、AI149713、AI538328、CB992757、AW965692、BU588470、BF222727、AI654498、AA693873、AA353895、AA828114、AA773515、AA897773、AA652723、BX500811、BF998283、AI968739、AI656972、BX370241、AW467865、BF211281、BU928301【００９２】
（13）Ubc13：CF130960、CD710574、CD692115、CD673025、AL543503、CD245362、CB988950、AU280192、CB215753、CB161684、CB161357、CB159339、CB158868、CB147566、BX110715、CA453274、CA310015、BU959707、BU942968、BU941352、BU935537、BU787955、BU509214、BU195662、BU177345、BQ670955、BQ651546、BQ438057、BQ434581、BQ431772、BQ278353、BQ233659、BQ233603、BQ233591、BQ220048、BQ212232、BQ071631、BQ053849、BQ053589、BM927363、BM920802、BM916123、BM810273、BM805692、BM548060、BM480191、BM456876、BM449746、BI830293、BI829065、BI822117、BI753449、BI603033、BI193140、BG759142、BG758336、BG720632、BG716212、BG701931、BG613290、BG548397、BG531270、BG503962、BG432626、BF974186、AU125145、AU119879、AV758049、BE747116、BE266994、BE314665、BE207615、AW246428、CD685196、CD558824、CB987518、BU940976、BU177313、BG715594、BG715088、BG714343、BG701027、BG615565、BG504869、AW950789、AW250538、BG716471、BE262841、AW673494、CD686244、CB957396、BI197667、BE313357、CD701933、AL583561、CD385216、BU596184、BX415171、BX400510、AL534723【００９３】
（14）CSA：BI918304、BM833676、BG611935、BM017684、BG722970、BG612963、BI458951、AI950957、BI601669、BU603353、BU533681、AA454500、AW954940、BI828404、BE540951、BF244952、BE567160、AL691658、CB160846、BG387575、AW388466、AW388282、BF206366、AW301277、BI850241、BF665074、CD687697、AW409745、W19086、BF790869、BM147057、BF665145、BG616128、BE568475、BQ218876、BX116922、AA129369、CD109410、BG032140、BG037177、BF588485、BF000147、CF552572、AA159858、BI561029、BM835908、BQ645232、AW418819、BF247700、AU100233【００９４】
（15）XPF：BI522552、CB956135、BG620282、BG181154、CF529228、BQ013114、BX503907、BQ310815、BM671280、BQ011470、AW977575、BM710111、BG724387、AL705565、BE818393、AA291199、AA770518、BE837466、CD674166、AA774566、AI431784、AA256859、AW271424、AA638976、AV685090、BE818447、AA255461、AW242081、AA723776、AV692790、BE814005、AI653508、AA721794、BX103000、AA834535、AA292809、AA808363、BI459712、AA284141、AA639091【００９５】
（16）Polh：BQ055421.1、BG769277.1、BQ220824.1、BG721650.1、BM471882.1、BM472352.1、BM476481.1、CF137849.1、BG719631.1、BQ428829.1、BG614126.1、BQ888430.1、BI048141.1、BI060674.1、BG955636.1、BI226147.1、BI161368.1、BI438288.1、BG684347.1、BG542206.1、BF963202.1、BF960108.1、BF953989.1、H96387.1、H96386.1、BF838042.1、AU159033.2、AU141481.1、AA768381.1、BE729719.1、AA894834.1、AA740992.1、AA487384.1、AA503619.1、CA431025.1、AA263100.1、BU963407.1、AA095690.1、BU164898.1、BU430448.1、BQ642501.1、BQ439014.1、BQ059637.1、BM990988.1、BM839428.1、BM827068.1、BM704573.1、BM686178.1、BM051808.1、BM051627.1、BI861960.1、BI861196.1、BE046916.1、AW969511.1、CN344462.1、AW859582.1、CK818199.1、BX954583.1、AW821187.1、AW675168.1、AW665155.1、AW501629.1、AW501416.1、AW501415.1、AW501259.1、AW501081.1、AW501073.1、AW500974.1、D20281.1、CF144034.1、AW025961.1、AI983303.1、AI928759.1、AI554887.1、AI286076.1、CB120568.1、BX090095.1、BE562083.1、BE561029.1、BE560699.1、BE559889.1、BE514130.1、BE513962.1、BE501130.1、BE464074.1、BE397520.1、BE396589.1、CV370574.1、CV358289.1、BP311517.1、BP284196.1、BP282479.1、BP357687.1、BP313547.1、BP244774.1、BP239507.1、BP239187.1、BP194692.1、CR743346.1、CV029019.1、BE247611.1、BE142681.1、BE048911.1、CB049803.1、CB049804.1、AI377323.1、AI499634.1、AW628666.1、BE063512.1、BE063581.1、BE151431.1、CV398937.1、BE940365.1、AV746518.1、BF336095.1、BF763139.1、BF959477.1、BF962188.1、BF962274.1、BF964212.1、D81363.1、BQ425958.1、AA425665.1、AA428512.1、AA879237.1【００９６】
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（22）MGMT：BU931774、BU859113、BU172662、BQ641434、BQ220709、BI771279、BI520278、BG753063、BU850242、BQ228817、BQ710379、BI520938、BG764104、BX094941、BQ279107、BI226276、BU858086、BX509195、BM759902、BI520029、BU154192、AL520114、BM974121、CF130478、BM738844、CB992752、BI772512、BG436862、AL520115、BM973348、BG249568、BI520980、AL524961、CB993639、BM009017、BU845865、BM970224、BX373012、BU616455、CB055208、BI225271、BI333401、BX376972、CB055209、BU947266、CB997161、BE858532、BM972582、AI719186、BM670373、BU845870、AA978354、BM744653、BG340352、BQ222473、BM758658、CD369999、BG183775、BX351398、BE541556、CD249663、BM744647、BU737340、BM754382、BG181704、AW168149、BM712082、AI963126、AW274265、BF109578、BE464809、BM711175、AI016474、AA126722、AI143841、AA948354、BU786059、BM049297、AA779559、AI052155、W58681、N95214、AA988766、BU566480、BX349121、BQ072274、AI057145、BM823702、AI040746、W25247、AA677158、AA136191、BX383619、AI123988、R72558、BQ217761、AW804292、AA565025、BE774145、AA868690【０１０２】
（23）ABH：CB997382.1、CB992340.1、BI837166.1、BM807740.1、BI824973.1、BI517295.1、BE887377.1、BU165019.1、BI822148.1、W16700.1、W16542.1、BI755644.1、BI223337.1、N79558.1、N79504.1、BG954955.1、N77150.1、BG216828.1、AL562939.3、BM680957.1、BM681225.1、BM726354.1、BM726581.1、BQ186339.1、BQ228944.1、BQ709174.1、BU149647.1、BU623623.1、AA298689.1、AA298690.1、AA302918.1、AA609609.1、AA759044.1、AA760913.1、AA811353.1、BX095987.1、BX105183.1、AI240118.1、AI246473.1、AI368879.1、AI377929.1、AI536743.1、AI572185.1、AI625784.1、AI668640.1、AI734243.1、AI797255.1、Z21593.1、AI910744.1、AI922200.1、BX375565.2、AL121334.1、AW794512.1、AW903391.1、AW949834.1、CN408211.1、CV812743.1、CV805817.1、BE552451.1、BE937103.1、AV707049.1、BF194721.1、BF057641.1、BF062195.1、BF062252.1、AL526757.3、AL527602.3、AI248436.1、CB962033.1、AW804807.1、AW813119.1、CN408213.1、CN408214.1、CN408212.1、CV029550.1、CV356547.1、CV368163.1、CV405337.1、BE873425.1、BF365320.1、BG000570.1、BI911670.1、BM467040.1、BQ882852.1、BU569974.1【０１０３】
（24）DUT：AL576853、AL519489、BM757904、CD247125、BM457507、BI091680、BQ440183、BM915011、BM740990、BU600705、BE386365、AL532465、AI686520、BM475441、AW968574、BF338018、BF206146、AI680930、BG682494、BI836025、BE221492、BI255334、AI951891、BI868234、AW968748、BM470935、BG700386、BE897174、CB529208、BU677683、BU677665、BU620392、AL554011、BQ777742、BE254729、CA777885、BU597092、AU119115、BU623296、BG717317、BG655751、AW162006、BI670458、BG705392、BE902236、BG717215、BG53201、BG610639、BG677850、AI635074、AI261871、BI091131、BG163981、BG113287、BE706306、AA056738、BE644721、CB110414、BF317403、BE551158、AA737006、BM554499、BE222283、AL532464、BM840182、AA256721、AI373097、AW629827、CA778151、CB117412、BE549576、BG505144、BE218639、BF058963、AW341118、AW967946、AA278799、BE504213、AI191219、BI860728、AW962792、AI697600、CB137303、CB133275、BE502892、AA291243、AI199667、AA446533、BE673841、AI937879、AA434589、AI986329、AA433910、CA488337、BF938984、BU608498、BM559498、BU683317、BG403290、BM817453【０１０４】
（25）TIMELESS：BM467715、BM927658、BM541298、BM801216、BQ052552、BQ945096、AL560919、BQ068552、BU845242、BQ071352、BU930918、BU854737、BQ068451、BQ961203、BQ055183、BU500665、BX390921、BX401304、BQ962781、BQ672871、BG749383、BX346012、BU521442、CF242984、BU552412、CD653932、AU125640、BU543485、BQ927368、BQ051381、BI222498、BG822789、BQ944034、BM046877、BU146750、BU956003、BQ670516、BQ061549、BG757741、BE797452、CA430803、BG819936、BE746308、BU187951、BE794062、BM013386、BE795708、BU553769、BM552373、BQ424129、CD654639、BM910771、BG388233、BE729276、BM013167、BE791318、BE514198、BM740568、BX350660、BG110568、BX110927、BI087328、BQ958679、BE727460、BG823400、BE729002、BG289919、BF971197、BM048813、BE514731、BE314800、BQ887260、BE745259、BE408808、BE208475、CA489086、BG478136、BU188642、CD673319、BE389356、AW382754、BE793649、BQ214512、AW383633、BM793905、BM789297、BQ221649、AW383534、AW673493、BM018763、CB990372、AW383548、BQ937242、BQ678339、BU172010、BU167922、BU163559、BQ679317、BQ679254、BQ679251【０１０５】
（26）WRN：H80461.1、BF821677.1、T39125.1、N64051.1、BG992948.1、BG941850.1、BG714322.1、BM471189.1、BM552381.1、W40393.1、BM721721.1、BM785803.1、AL707510.1、AL709832.1、BQ305407.1、BQ305613.1、BQ354585.1、BQ774611.1、BU633322.1、AA193286.1、AA193296.1、BU683758.1、AA344201.1、AA359610.1、AA373157.1、AA287923.1、AA287985.1、AA778924.1、AI025669.1、CB156864.1、AI277125.1、AI203498.1、AI280329.1、AI457716.1、R58879.1、AW016548.1、CD657076.1、BX489680.1、CD723639.1、AW102683.1、CF137269.1、AW811688.1、AW959698.1、AW965099.1、CN425423.1、CR737800.1、BP357289.1、BP279291.1、BP282255.1、BP349077.1、CV336651.1、CV808073.1、BE787985.1、BE932661.1、BF103840.1、AA835784.1、AI023450.1、CD518484.1、CD654107.1、AW264759.1、AW795617.1、CK822577.1、CK822578.1、AW867817.1、CN287362.1、CV405693.1、CV412820.1、R93929.1、R93930.1、R94279.1、BF380402.1、BF380420.1、BF513297.1、BF897051.1、N54899.1、N67012.1、BM505282.1、BM509688.1、BM720570.1、BQ711780.1、BF927695.1、AA878280.1【０１０６】
（27）BLM：BG772975.1、BG721596.1、BU588736.1、BG531593.1、BM804157.1、BG217661.1、BG210806.1、BG199179.1、BG192554.1、BG187329.1、BG185919.1、BG182955.1、BG574669.1、BG397477.1、AL556853.3、AL556823.3、H53763.1、BE963549.2、BE940055.1、BE889560.1、BE778486.1、BE618504.1、CV803292.1、BE538092.1、BE535950.1、BP333288.1、AA769336.1、AA747832.1、AA480209.1、CA488994.1、AA249737.1、AA214549.1、BU431321.1、BM151892.1、BM150628.1、BQ359304.1、BQ316432.1、BQ230262.1、BM542461.1、BM451903.1、BM041661.1、BM040993.1、BI667071.1、AU185765.1、BI091772.1、BI091601.1、BG875917.1、BG756262.1、AI114820.1、AW138812.1、CD707743.1、CD698394.1、AL120858.1、BX475196.1、BX474261.1、BX451970.1、BX451969.1、BX419085.2、BX434842.2、BX283839.1、CB243435.1、AI630521.1、AI590599.1、AI423875.1、AI394601.1、BX092961.1、BX106802.1、AI097184.1、AA904488.1、AA903504.1、AA974756.1、AA862803.1、BP366542.1、BP363946.1、BP199711.1、BE245802.1、BE245666.1、CN277542.1、CN277540.1、CN277539.1、CN277538.1、CN277537.1、CN277541.1、AW847854.1、AW847725.1、AW847706.1、AW847600.1、AW847599.1、AW847595.1、AW575595.1、AW504704.1、AW503829.1、AW502890.1、AW404657.1、BX643554.1、BX643048.1、BX102449.1、CK299441.1、AW847795.1、AW847798.1、AW847850.1、CN359774.1、BE143192.1、CR742420.1、R94839.1、R96946.1、R97003.1、H53817.1、BF767997.1、BF804521.1、BI020403.1、BI041746.1、BI041748.1、BG979051.1、BG979187.1、BQ184600.1、BQ186574.1、BQ189280.1、AA213534.1、AA299069.1、T83692.1、T84312.1、T85194.1、AA584761.1、T95850.1、T95942.1、T99033.1、T99034.1、T99720.1、T99721.1、AA776195.1【０１０７】
本発明の好ましい態様においては、本発明の上記（１）〜（２７）に記載の遺伝子、もしくは上記各ESTに対応するmRNAにおける、連続するRNA領域を一方の鎖とするRNAi効果を有する二本鎖RNAを有効成分として含む、抗癌剤増感剤を提供する。
本発明者らによって、上記（１）〜（２７）に記載の遺伝子の発現を抑制する物質は、抗癌剤感受性増強作用を有することが見出された。従って、上記の各遺伝子の発現を指標とすることにより、抗癌剤感受性増強作用を有する化合物をスクリーニングすることが可能である。該化合物は、抗癌剤増感剤として有用である。
即ち本発明は、上記（１）〜（２７）のいずれかに記載の遺伝子の発現量、もしくは該遺伝子によってコードされるタンパク質の活性を低下させる化合物を選択することを特徴とする、抗癌剤増感剤のスクリーニング方法を提供する。【０１０８】
本発明のスクリーニング方法の好ましい態様としては、以下の（ａ）〜（ｃ）の工程を含む、抗癌剤増感剤のスクリーニング方法に関する。
（ａ）本発明の（１）〜（２７）のいずれかに記載の遺伝子を発現する細胞もしくは細胞抽出液と、被検化合物を接触させる工程
（ｂ）前記遺伝子の発現レベルを測定する工程
（ｃ）被検化合物の非存在下において測定した場合と比較して、該発現レベルを低下させる化合物を選択する工程【０１０９】
上記工程（ａ）における細胞としては、内因性の上記（１）〜（２７）に記載の遺伝子が発現している細胞、または外来性の上記（１）〜（２７）に記載の遺伝子が導入され、該遺伝子を発現している細胞等を利用することができる。外来性の前記遺伝子が発現した細胞は、通常、該遺伝子を含む発現ベクターを宿主細胞へ導入することにより作製することができる。この発現ベクターは、当業者においては一般的な遺伝子工学技術によって作製することができる。上記方法における「細胞」としては、例えば、MCF7 (乳癌)、A549 (肺癌)、U2OS (骨肉腫)、C33A (子宮頚癌)、HT1080（繊維肉腫）、PA-1（卵巣の奇形癌）、Tera2（胎生期癌）、T24（膀胱癌）、K562（慢性骨髄性白血病）、Molt4（急性リンパ芽球性白血病）、A172（神経膠芽細胞腫）、HeLa（子宮頚癌）、HepG2 (肝癌)、ACC62 (メラノーマ)、KP4 (膵臓癌)、CaKi‐1 (腎臓癌)、MKN45 (胃癌)、LNcap (前立腺癌)、MDA-MB435 (乳癌)、EJ 1 （膀胱癌）、OVCAR3 （卵巣癌）等の細胞を利用することができるが、必ずしもこれらの特定の細胞に限定されず、本発明の遺伝子を有する細胞であればよい。
また、上記工程（ａ）における「接触」は、通常、上記（１）〜（２７）のいずれかに記載の遺伝子を発現する細胞の培養液に被検化合物を添加することによって行うが、この方法に限定されない。被検化合物がタンパク質等の場合には、該タンパク質を発現するDNAベクターを、該細胞へ導入することにより、「接触」を行うことができる。【０１１０】
次いで本方法においては、上記（１）〜（２７）に記載の遺伝子の発現レベルを測定する。ここで「遺伝子の発現」には、転写および翻訳の双方が含まれる。遺伝子の発現レベルの測定は、当業者に公知の方法によって行うことができる。例えば、上記（１）〜（２７）に記載の遺伝子を発現する細胞からmRNAを定法に従って抽出し、このmRNAを鋳型としたノーザンハイブリダイゼーション法またはRT-PCR法を実施することによって、該遺伝子の転写レベルの測定を行うことができる。また、上記遺伝子を発現する細胞からタンパク質画分を回収し、該遺伝子によってコードされるタンパク質の発現をSDS-PAGE等の電気泳動法で検出することにより、遺伝子の翻訳レベルの測定を行うこともできる。さらに、上記遺伝子によってコードされるタンパク質に対する抗体を用いて、ウェスタンブロッティング法を実施することにより、該タンパク質の発現を検出し、遺伝子の翻訳レベルの測定を行うことも可能である。上記遺伝子によってコードされるタンパク質の検出に用いる抗体としては、検出可能な抗体であれば、特に制限はないが、例えばモノクローナル抗体、またはポリクローナル抗体の両方を利用することができる。【０１１１】
本方法においては更に、被検化合物の非存在下において測定した場合（対照）と比較して、該発現レベルを低下させる化合物を選択する。このようにして選択された化合物は、抗癌剤感受性を増強させる作用を有することが期待される。さらに、該化合物は、抗癌剤の増感を作用機序とする抗癌剤の併用薬剤となることが期待される。【０１１２】
また、本発明のスクリーニング方法の別の態様としては、上記（１）〜（２７）のいずれかに記載の遺伝子の発現レベルを低下させるような化合物を、レポーター遺伝子を利用してスクリーニングする方法が挙げられる。
即ち本発明は、以下の（ａ）〜（ｃ）の工程を含む、抗癌剤増感剤のスクリーニング方法を提供する。
（ａ）上記（１）〜（２７）のいずれかに記載の遺伝子の転写調節領域とレポーター遺伝子とが機能的に結合した構造を有するDNAを含む細胞または細胞抽出液と、被検化合物を接触させる工程
（ｂ）前記レポーター遺伝子の発現レベルを測定する工程
（ｃ）被検化合物の非存在下において測定した場合と比較して、前記発現レベルを低下させる化合物を選択する工程【０１１３】
本方法においては、まず、上記（１）〜（２７）のいずれかに記載の遺伝子の転写調節領域とレポーター遺伝子とが機能的に結合した構造を有するDNAを含む細胞または細胞抽出液と、被検化合物を接触させる。ここで「機能的に結合した」とは、上記（１）〜（２７）に記載の遺伝子の転写調節領域に転写因子が結合することにより、レポーター遺伝子の発現が誘導されるように、該遺伝子の転写調節領域とレポーター遺伝子とが結合していることをいう。従って、レポーター遺伝子が他の遺伝子と結合しており、他の遺伝子産物との融合タンパク質を形成する場合であっても、該遺伝子の転写調節領域に転写因子が結合することによって、該融合タンパク質の発現が誘導されるものであれば、上記「機能的に結合した」の意に含まれる。上記（１）〜（２７）に記載の遺伝子のcDNA塩基配列に基づいて、当業者においては、ゲノム中に存在する該遺伝子の転写調節領域を周知の方法により取得することが可能である。【０１１４】
本方法に用いるレポーター遺伝子としては、その発現が検出可能であれば特に制限されず、例えば、CAT遺伝子、lacZ遺伝子、ルシフェラーゼ遺伝子、およびGFP遺伝子等が挙げられる。「上記（１）〜（２７）のいずれかに記載の遺伝子の転写調節領域とレポーター遺伝子とが機能的に結合した構造を有するDNAを含む細胞」として、例えば、上記（１）〜（２７）に記載の遺伝子の転写調節領域とレポーター遺伝子とが機能的に結合した構造を有するベクターが導入された細胞等が挙げられる。上記ベクターは、当業者においては一般的な遺伝子工学技術によって作製することができる。ベクターの細胞への導入は、一般的な方法、例えば、リン酸カルシウム沈殿法、電気パルス穿孔法、リポフェタミン法、マイクロインジェクション法等によって実施することができる。「上記（１）〜（２７）に記載の遺伝子の転写調節領域とレポーター遺伝子とが機能的に結合した構造を有するDNAを含む細胞」には、染色体に該構造が挿入された細胞も含まれる。染色体へのDNA構造の挿入は、当業者に一般的に用いられる方法、例えば、ランダムインテグレーションや、相同組み換えを利用した遺伝子導入法により行うことができる。【０１１５】
「上記（１）〜（２７）のいずれかに記載の遺伝子の転写調節領域とレポーター遺伝子とが機能的に結合した構造を有するDNAを含む細胞抽出液」とは、例えば、市販の試験管内転写翻訳キットに含まれる細胞抽出液に、上記（１）〜（２７）に記載の遺伝子の転写調節領域とレポーター遺伝子とが機能的に結合した構造を有するDNAを添加したものを挙げることができる。
本方法における「接触」は、「上記（１）〜（２７）のいずれかに記載の遺伝子の転写調節領域とレポーター遺伝子とが機能的に結合した構造を有するDNAを含む細胞」の培養液に被検化合物を添加する、または該DNAを含む上記の市販された細胞抽出液に被検化合物を添加することにより行うことができるが、これらの方法に限定されない。被検化合物がタンパク質の場合には、例えば、該タンパク質を発現するDNAベクターを、該細胞へ導入することにより接触を行うことも可能である。【０１１６】
本方法においては、次いで、該レポーター遺伝子の発現レベルを測定する。レポーター遺伝子の発現レベルは、該レポーター遺伝子の種類に応じて、当業者に公知の方法により測定することができる。例えば、レポーター遺伝子がCAT遺伝子である場合には、該遺伝子産物によるクロラムフェニコールのアセチル化を検出することによって、レポーター遺伝子の発現量を測定することができる。レポーター遺伝子がlacZ遺伝子である場合には、該遺伝子発現産物の触媒作用による色素化合物の発色を検出することにより、また、ルシフェラーゼ遺伝子である場合には、該遺伝子発現産物の触媒作用による蛍光化合物の蛍光を検出することにより、さらに、GFP遺伝子である場合には、GFPタンパク質による蛍光を検出することにより、レポーター遺伝子の発現量を測定することができる。【０１１７】
本方法においては、次いで、測定したレポーター遺伝子の発現レベルを、被検化合物の非存在下において測定した場合と比較して、低下させる化合物を選択する。このようにして選択された化合物は、抗癌剤の感受性を増強させる作用を有することが期待される。
本発明の別の態様としては、上記（１）〜（２７）のいずれかに記載の遺伝子によってコードされるタンパク質の活性を指標とする、抗癌剤増感剤のスクリーニング方法である。【０１１８】
本発明は、以下の（ａ）〜（ｃ）の工程を含む、抗癌剤増感剤のスクリーニング方法を提供する。
（ａ）上記（１）〜（２７）のいずれかに記載の遺伝子によってコードされるタンパク質、または該タンパク質を発現する細胞もしくは細胞抽出液と、被検化合物を接触させる工程
（ｂ）前記タンパク質の活性を測定する工程
（ｃ）被検化合物の非存在下において測定した場合と比較して、前記タンパク質の活性を低下させる化合物を選択する工程
上記タンパク質の活性としては、具体的には、本発明の（１）〜（２７）に記載のタンパク質に関する上述の機能（活性）等を挙げることができる。当業者においては、スクリーニングにおいて指標とするタンパク質についての機能（活性）、および該機能（活性）の評価（測定）方法についての情報を、例えば、文献データベース等により適宜、入手することができる。
一例を示せば、指標とするタンパク質がMcm3である場合は、例えば、該タンパク質を含むMcm2,3,5複合体によるMcm4,6,7のhelicase活性阻害活性を検出することによって、該タンパク質の機能を評価（測定）することができる(JBC(1998)273,8369-8375.)。【０１１９】
指標とするタンパク質がCdc7である場合は、例えば、MCM複合体を基質とした該タンパク質のリン酸化活性を検出することによって、該タンパク質の機能を評価（測定）することができる(EMBO(1997)16,4340-4351.)。
指標とするタンパク質がTopBP1である場合は、例えば、該タンパク質とDNA polymerase εの相互作用によるDNA合成活性を検出することによって、該タンパク質の機能を評価（測定）することができる（J Biol Chem. (2001) 276, 30399-30406）。
指標とするタンパク質がPola p70である場合は、例えば、該タンパク質を含むPola p180、p70、p58、p48による4量体形成、あるいはこの複合体のPrimase、Polymerase活性を検出することによって、該タンパク質の機能を評価（測定）することができる(Eur.J.Biochem.222,781-793.)。【０１２０】
指標とするタンパク質がRFC3である場合は、例えば、該タンパク質とRFC2、RFC4、RFC5とRad17の複合体のATPase活性を測定することによって、該タンパク質の機能を評価（測定）することができる（J Biol Chem. (2004) 279, 20921-20926.）。
指標とするタンパク質がRFC5である場合は、例えば、該タンパク質とRFC2、RFC3、RFC4とRad17の複合体のATPase活性を測定することによって、該タンパク質の機能を評価（測定）することができる（J Biol Chem. (2004) 279, 20921-20926.）。
指標とするタンパク質がElg1である場合は、例えば、該タンパク質とRFC2、RFC3、RFC4、RFC5との複合体形成を検出する事によって、該タンパク質の機能を評価する事ができる（EMBO J. (2003) 22, 4304-4313.）。【０１２１】
指標とするタンパク質がScc1である場合は、例えば、該タンパク質とSmc1,Smc3,Scc3との14S cohesin複合体形成を検出することによって、該タンパク質の機能を評価（測定）することができる(JCB(2000)151,749-762.)。
指標とするタンパク質がScc3である場合は、例えば、該タンパク質とSmc1,Smc3,Scc1との14S cohesin複合体形成を検出することによって、該タンパク質の機能を評価（測定）することができる(JCB(2000)151,749-762.)。
指標とするタンパク質がChk1である場合は、例えば、p53タンパク質を基質とした該タンパク質によるリン酸化を検出することによって、該タンパク質の機能を評価（測定）することができる(Genes Dev. (2000) 14, 289-300)。【０１２２】
指標とするタンパク質がNBS1である場合は、例えば、DNA損傷に応答した該タンパク質とMre11/Rad50との複合体形成を検出することによって、該タンパク質の機能を評価（測定）することができる(Cell(1998)93,477-486.)。
指標とするタンパク質がHus1である場合は、例えば、DNA損傷に応答した該タンパク質とRad1,Rad9との複合体形成を検出することによって、該タンパク質の機能を評価（測定）することができる(J. Biol. Chem. (1999)274,567-570.)。
指標とするタンパク質がUbc13である場合は、例えば、該タンパク質のユビキチンconjugating活性を検出することによって、該タンパク質の機能を評価（測定）することができる(Cell(1999)96,645-653.)。【０１２３】
指標とするタンパク質がCSAである場合は、例えば、該タンパク質とCSB,TFIIHとの相互作用を検出することによって、該タンパク質の機能を評価（測定）することができる(Cell(1995)82,555-564.)。
指標とするタンパク質がXPFである場合は、例えば、該タンパク質とERCC1との複合体形成、stem-loop構造DNAを基質とした該タンパク質のendonuclease活性を検出することによって、該タンパク質の機能を評価（測定）することができる(Cell(1996)86,811-822.)。
指標とするタンパク質がPolhである場合は、例えば、該タンパク質のDNA合成活性を検出することによって、該タンパク質の機能を評価（測定）することができる（Nature. (1999) 399, 700-704.）。【０１２４】
指標とするタンパク質がPoliである場合は、例えば、ミスマッチpartial duplex DNAからのprimer extension活性を検出することによって、該タンパク質の機能を評価（測定）することができる(JBC(2001)276,30615-30622.)。
指標とするタンパク質がDmc1である場合は、例えば、該タンパク質のDNA依存性ATPase活性を測定することによって、該タンパク質の機能を評価（測定）することができる（Proc Natl Acad Sci U S A. (1997) 94, 11221-11226.）。
指標とするタンパク質がDNA-PKcsである場合は、例えば、該タンパク質のkinase活性を検出することによって、該タンパク質の機能を評価（測定）することができる（Nucleic Acids Res. (1993) 21, 1289-1295.）。
指標とするタンパク質がTin2である場合は、例えば、該タンパク質とTRF1との相互作用を検出することによって、該タンパク質の機能を評価（測定）することができる(Nat Genet(1999)23,405-412.)。【０１２５】
指標とするタンパク質がSir2である場合は、例えば、該タンパク質のヒストン脱アセチル化アッセイによって、該タンパク質の機能を評価（測定）することができる(Gene(1999)234,161-168.)。
指標とするタンパク質がMGMTである場合は、例えば、該タンパク質によるメチル化DNAからのメチル基転移反応を検出することによって、該タンパク質の機能を評価（測定）することができる(JBC(1990)265,14754-14762.)。
指標とするタンパク質がDUTである場合は、例えば、該タンパク質のdUTPase活性を検出することによって、該タンパク質の機能を評価（測定）することができる（J Biol Chem. (1996) 271, 7745-7751.）。【０１２６】
指標とするタンパク質がTIMELESSである場合は、例えば、該タンパク質とmammalian clock Period proteins (mPERs)との複合体形成を検出することによって、該タンパク質の機能を評価（測定）することができる（Science (2003) 302, 439-442.）。
指標とするタンパク質がWRNである場合は、例えば、該タンパク質の3'-5' DNAヘリカーゼ活性および、DNA依存性ATP分解活性を検出することによって、該タンパク質の機能を評価（測定）することができる（Nucleic Acids Res. (1997) 25, 2973-2978.）。
指標とするタンパク質がBLMである場合は、例えば、該タンパク質の3'-5' DNAヘリカーゼ活性および、DNA依存性ATP分解活性を検出することによって、該タンパク質の機能を評価（測定）することができる（J Biol Chem. (1997) 272, 30611-30614.）。【０１２７】
次いで、被検化合物の非存在下において測定した場合と比較して、上記（１）〜（２７）のいずれかに記載の遺伝子によってコードされるタンパク質の活性を低下させる化合物を選択する。上記方法に使用する該遺伝子によってコードされるタンパク質は、変異を含まない全長タンパク質であることが好ましいが、該タンパク質と同等の活性を有するものであれば、一部のアミノ酸配列が置換および／あるいは欠失されたタンパク質であってもよい。
本発明の上記スクリーニング方法においては、好ましくは、アクチノマイシンＤ、カンプトテシン、シスプラチン、ドキソルビシン、エトポシド、5-フルオロウラシル、マイトマイシンＣ等の抗癌剤について、その抗癌作用を増強させる物質を効率的にスクリーニングすることができる。【０１２８】
また本発明のスクリーニング方法において、さらに好ましくは、抗癌剤がアクチノマイシンＤである場合には、発現もしくは活性の測定の際に指標とする遺伝子（タンパク質）は、以下の遺伝子（タンパク質）であることが好ましい。
（１）Mcm3、（７）Elg1、（２１）Sir2、（２５）TIMELESS
また、抗癌剤がカンプトテシンである場合には、発現もしくは活性の測定の際に指標とする遺伝子（タンパク質）は、以下の遺伝子（タンパク質）であることが好ましい。
（１）Mcm3、（２）Cdc7、（３）TopBP1、（５）RFC3、（６）RFC5、（７）Elg1、（１０）Chk1、（１２）Hus1、（１３）Ubc13、（１４）CSA、（１６）Polh、（１７）Poli、（１９）DNA-PKcs、（２５）TIMELESS、（２６）WRN、（２７）BLM【０１２９】
また、抗癌剤がシスプラチンである場合には、発現もしくは活性の測定の際に指標とする遺伝子（タンパク質）は、以下の遺伝子（タンパク質）であることが好ましい。
（１）Mcm3、（９）Scc3、（１０）Chk1、（１１）NBS1、（１２）Hus1、（１３）Ubc13、（１４）CSA、（１５）XPF、（２６）WRN、（２７）BLM
また、抗癌剤がドキソルビシンである場合には、発現もしくは活性の測定の際に指標とする遺伝子（タンパク質）は、以下の遺伝子（タンパク質）であることが好ましい。
（５）RFC3、（７）Elg1、（８）Scc1、（９）Scc3、（１０）Chk1、（１３）Ubc13、（１４）CSA、（１７）Poli、（２５）TIMELESS【０１３０】
また、抗癌剤がエトポシドである場合には、発現もしくは活性の測定の際に指標とする遺伝子（タンパク質）は、以下の遺伝子（タンパク質）であることが好ましい。
（１）Mcm3、（２）Cdc7、（３）TopBP1、（５）RFC3、（６）RFC5、（７）Elg1、（９）Scc3、（１０）Chk1、（１２）Hus1、（１３）Ubc13、（１４）CSA、（１６）Polh、（１７）Poli、（１９）DNA-PKcs、（２０）Tin2、（２３）ABH、（２５）TIMELESS
また、抗癌剤が5-フルオロウラシルである場合には、発現もしくは活性の測定の際に指標とする遺伝子（タンパク質）は、以下の遺伝子（タンパク質）であることが好ましい。
（１）Mcm3、（５）RFC3、（６）RFC5、（７）Elg1、（８）Scc1、（９）Scc3、（１０）Chk1、（１２）Hus1、（１３）Ubc13、（１４）CSA、（１５）XPF、（１６）Polh、（１７）Poli、（１８）Dmc1、（１９）DNA-PKcs、（２０）Tin2、（２１）Sir2、（２２）MGMT、（２３）ABH、（２４）DUT【０１３１】
また、抗癌剤がマイトマイシンＣである場合には、発現もしくは活性の測定の際に指標とする遺伝子（タンパク質）は、以下の遺伝子（タンパク質）であることが好ましい。
（１）Mcm3、（２）Cdc7、（３）TopBP1、（５）RFC3、（６）RFC5、（７）Elg1、（８）Scc1、（９）Scc3、（１０）Chk1、（１２）Hus1、（１３）Ubc13、（１４）CSA、（１５）XPF、（１６）Polh、（１７）Poli、（１８）Dmc1、（１９）DNA-PKcs、（２０）Tin2、（２１）Sir2、（２２）MGMT、（２３）ABH、（２５）TIMELESS【０１３２】
また本発明の好ましい態様においては、上記（１）〜（２７）からなる群より選択される遺伝子の発現、または該遺伝子によってコードされるタンパク質の機能を阻害する化合物を個体へ投与する工程を含む、生物（ヒト、または、非ヒト動物等）の抗癌剤感受性を増強させる方法である。【０１３３】
さらに本発明は、所望の化合物について、該化合物が抗癌剤に対して抗癌作用を増強させる機能を有するか否かの判定方法を提供する。即ち該判定方法は、被検化合物について、本発明の上記（１）〜（２７）のいずれかに記載の遺伝子の発現量、または該遺伝子によってコードされるタンパク質の活性を低下させる作用を有するか否かを評価し、低下させる作用を有する場合に、該被検化合物は抗癌剤の抗癌作用を増強させる機能を有するものと判定する。
また本発明は、上記の抗癌剤、および本発明の抗癌剤増感剤の双方を必須成分として含む、癌治療のための医薬組成物を提供する。該医薬組成物は、従来の抗癌剤と比べて低濃度で治療効果を奏し、また、副作用の少ない治療薬として期待される。
一例を示せば、アクチノマイシンＤと、（１）Mcm3、（７）Elg1、（２１）Sir2、または（２５）TIMELESSのいずれかの遺伝子の発現を阻害する化合物とを混合した組成物は、従来の抗癌剤と比べて低濃度で治療効果を奏する抗癌剤（医薬組成物）となることが期待される。【０１３４】
また本発明は、抗癌剤増感剤を医薬組成物として製造する方法を提供する。本方法においてはまず、本発明の上記スクリーニング方法によって抗癌剤増感剤の成分となる化合物を選択する。次いで、選択された化合物を薬学上許容される担体と混合する。これら薬学上許容される担体として、例えば界面活性剤、賦形剤、着色料、着香料、保存料、安定剤、緩衝剤、懸濁剤、等張化剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、流動性促進剤、矯味剤等が挙げられるが、これらに制限されず、その他常用の担体を適宜使用することができる。【０１３５】
本発明の抗癌剤増感剤の製剤化にあたっては、常法に従い、必要に応じて上記担体を添加することができる。具体的には、軽質無水ケイ酸、乳糖、結晶セルロース、マンニトール、デンプン、カルメロースカルシウム、カルメロースナトリウム、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニルアセタールジエチルアミノアセテート、ポリビニルピロリドン、ゼラチン、中鎖脂肪酸トリグリセライド、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油60、白糖、カルボキシメチルセルロース、コーンスターチ、無機塩類等を挙げることができる。【０１３６】
上記薬剤の剤型の種類としては、例えば経口剤として錠剤、粉末剤、丸剤、散剤、顆粒剤、細粒剤、軟・硬カプセル剤、フィルムコーティング剤、ペレット剤、舌下剤、ペースト剤等、非経口剤として注射剤、坐剤、経皮剤、軟膏剤、硬膏剤、外用液剤等が挙げられ、当業者においては投与経路や投与対象等に応じた最適の剤型を選ぶことができる。本発明のタンパク質を発現するDNA、本発明の遺伝子の発現を抑制するアンチセンスRNA、リボザイム、siRNAを発現するDNAを生体内に投与する場合、レトロウイルス、アデノウイルス、センダイウイルスなどのウイルスベクターやリポソームなどの非ウイルスベクターを利用することができる。また、本発明の遺伝子の発現を抑制する合成アンチセンス核酸や合成siRNAを生体内に投与する場合、リポソーム、高分子ミセル、カチオン性キャリアなどの非ウイルスベクターを利用することができる。投与方法としては、例えばin vivo法およびex vivo法を挙げることができる。【０１３７】
本発明の薬剤または医薬組成物の投与量は、剤型の種類、投与方法、患者の年齢や体重、患者の症状等を考慮して、最終的には医師の判断により適宜決定することができる。
また本発明は、本発明の抗癌剤増感剤を個体（例えば、患者等）へ投与する工程を含む、癌の治療方法に関する。投与方法は特に制限されないが、例えば、静脈投与、動脈投与、皮下投与等が挙げられる。
さらに本発明は、上記（１）〜（２７）のいずれかに記載の遺伝子の発現を抑制する化合物、もしくは該遺伝子によってコードされるタンパク質の機能を阻害する化合物についての、抗癌剤もしくは抗癌剤増感剤の製造のための使用に関する。
なお、本明細書において引用された全ての先行技術文献は、参照として本明細書に組み入れられる。
【実施例】
【０１３８】
以下、本発明を実施例により詳細に説明するが、本発明はこれら実施例により制限されるものではない。【０１３９】
〔実施例１〕細胞培養
HeLa細胞を、10％ 牛胎児血清、50μg/mlゲンタマイシンを含むDulbecco's modified Eagle's medium中で、37度、5％CO2条件下にて培養した。【０１４０】
〔実施例２〕siRNAの設計
染色体安定化に関する27遺伝子に対するsiRNAをElbasherらの方法（Elbasher, M.S. et al. Duplexes of 21-nucleotide RNAs mediate RNA interference in cultured mammalian cells. Nature 411, 494-498（2001））に従って設計した。それぞれのsiRNA配列および各配列に対応する配列番号を表１に示す。siRNAの合成をQiagen社において行った。【０１４１】
〔実施例３〕siRNAによる遺伝子発現抑制
トランスフェクションの24時間前に、HeLa細胞を24ウエルプレートに1×104個／ウェルの密度で播種した。Oligofectamine（Invitrogen）を用い、製造者のプロトコールに従ってトランスフェクションを行った。20％コンフルエントのHeLa細胞に、１ウェルあたり5 pmolのsiRNAを導入し、トランスフェクション後48時間の細胞から、RNeasy Mini Kit（Qiagen社製）を用いて、全RNAを抽出した。RT-PCRに用いたすべてのプライマーおよび、TaqManプローブをApplied Biosystemsから購入し、QuantiTect Probe RT-PCR Kit（Qiagen社製）を用いてRT-PCR反応を行い、ABI PRISM 7000 Sequence Detection System（Applied Biosystems社製）を用いて定量化を行った。β-アクチンの発現を標準として、それぞれの遺伝子の発現を比較定量した。
各遺伝子の発現に影響を及ぼさないコントロールsiRNA（NS）を導入した細胞における、各遺伝子の発現量を100%として、siRNAを導入した細胞における各遺伝子の発現量を比較した。その結果、すべての遺伝子の発現が90％以上抑制された（表１）。【０１４２】
〔実施例４〕抗癌剤感受性試験
トランスフェクションの24時間前に、HeLa細胞を24ウエルプレートに1×104個／ウェルの密度で播種した。Oligofectamine（Invitrogen）を用い、製造者のプロトコールに従ってトランスフェクションを行った。20％コンフルエントのHeLa細胞に、１ウェルあたり5 pmolのsiRNAを導入し、24時間後にそれぞれの抗癌剤を含む培地に交換した。抗癌剤として、アクチノマイシンD、カンプトテシン、シスプラチン、ドキソルビシン、エトポシド、5-フルオロウラシル、マイトマイシンCを使用した。生細胞数測定試薬SF（ナカライテスク社製）を用いて、トランスフェクション後48時間の生細胞数を測定した。実験を３回繰り返して行い、コントロールsiRNA（NS）を導入した細胞に対する各薬剤のIC50値と、それぞれのsiRNAを導入した細胞のIC50値を比較した。siRNAの導入によってIC50値が明瞭に低下し、抗癌剤に対する感受性が高まった遺伝子を図１に示した。【０１４３】
Mcm3、Elg1、Sir2、TIMELESS遺伝子の発現を抑制すると、NSと比べてアクチノマイシンDに対するIC50値が2-4倍低下し、感受性が高まった。同様に、Mcm3、Cdc7、TopBP1、RFC3、RFC5、Elg1、Chk1、Hus1、Ubc13、CSA、Polh、Poli、DNA-PKcs、TIMELESS、WRN、BLM遺伝子の発現を抑制すると、カンプトテシンに対する感受性が高まった。Mcm3、Scc3、Chk1、NBS1、Hus1、Ubc13、CSA、XPF、WRN、BLM遺伝子の発現を抑制すると、シスプラチンに対する感受性が高まった。RFC3、Elg1、Scc1、Scc3、Chk1、Ubc13、CSA、Poli、TIMELESS遺伝子の発現を抑制すると、ドキソルビシンに対する感受性が高まった。Mcm3、Cdc7、TopBP1、RFC3、RFC5、Elg1、Scc3、Chk1、Hus1、Ubc13、CSA、Polh、Poli、DNA-PKcs、Tin2、ABH、TIMELESS遺伝子の発現を抑制すると、エトポシドに対する感受性が高まった。Mcm3、RFC3、RFC5、Elg1、Scc1、Scc3、Chk1、Hus1、Ubc13、CSA、XPF、Polh、Poli、Dmc1、DNA-PKcs、Tin2、Sir2、MGMT、ABH、DUT遺伝子の発現を抑制すると、5-フルオロウラシルに対する感受性が高まった。Mcm3、Cdc7、TopBP1、RFC3、RFC5、Elg1、Scc1、Scc3、Chk1、Hus1、Ubc13、CSA、XPF、Polh、Poli、Dmc1、DNA-PKcs、Tin2、Sir2、MGMT、ABH、TIMELESS遺伝子の発現を抑制すると、マイトマイシンCに対する感受性が高まった。
以上の結果から、染色体の修復・安定化に関与する遺伝子の発現を抑制することにより、抗癌剤の効果が増強されることが示された。【０１４４】
〔実施例５〕WRNヘリカーゼ阻害剤のスクリーニング方法と選択された化合物
以下に記載のスクリーニング方法により、WRNヘリカーゼ阻害剤を選択した。
１）試験化合物の調整：化合物ライブラリーのワーキングプレート（2mMの濃度の化合物を各wellに5μlずつ分注したもの）に各wellあたり195μlのアッセイバッファーを加える。アッセイバッファーの組成は1.0 mM ATP, 5 mM MgCl2、1mM DTT、0.1mg/ml BSAを含む、50 mM Tirs-HClバッファー（pH 7.5）である。１２連ピペットで攪拌する。
２）黒色プレートに上記液を5μlずつ移し、アッセイバッファーで５倍希釈する。
３）基質溶液を10μlずつ添加する。基質溶液は、ユーロピウムでラベルしたDNA（Eu-DNA）5 nM 、トラッパーDNA 50 nMをアッセイバッファーに溶かしたものである。
４）WRNヘリカーゼ（3.52 nM）溶液を１０μlずつ添加する。
５）アルミフォイルで覆い、37℃で１時間反応させる。
６）50 mM Tris-HCl (pH7.5)に溶かした25 mM EDTAを25μlずつ添加して反応を停止させる。
７）パーキン・エルマ社のARVOsx-HTSを用い、Excitation：340 nM、Emission： 620 nMで測定する。
上記スクリーニングによって取得された、WRNヘリカーゼ阻害剤を表２に示す。【０１４５】
【表２】
2008047574.tif 000005
１〜２１はスクリーニングして得られたWRNヘリカーゼ阻害剤である。数値はLD50（μM）で示した阻害活性である。今回見出されたWRNヘリカーゼ阻害剤は、ブルーム（BLM）ヘリカーゼに対しても阻害活性を示した。Helicase IIは大腸菌由来のヘリカーゼであり、Quenchingはこれら化合物のクエンチング効果をLD50（μM）で示したものである。
【産業上の利用可能性】
【０１４６】
本発明により、染色体の修復・安定化に関与するタンパク質の発現もしくは機能を阻害することにより、種々の抗癌剤について、抗癌作用を増強させることが可能である。
本発明の、染色体の修復および安定化に関与する遺伝子の機能を阻害する物質は、抗癌剤増感剤として、また、生物（ヒト、または非ヒト動物等）の抗癌剤感受性を増強させる方法にとって、大いに有用である。本発明の抗癌剤増感剤は、各種抗癌剤の使用量を抑えることができることから、抗癌剤と併用することにより、抗癌剤の有する副作用を低減させることが可能である。
【図１】
2008047574.tif 000006
【配列表】
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【国際調査報告】
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