(57)【要約】  本発明は、ヘモグロビンを含む血液試料中の基質の濃度を測定する方法に関する。この方法では、血液試料中に含まれるヘモグロビン濃度を考慮して、基質濃度を演算する。基質濃度の演算にあたっては、たとえば下記数式１および２に基づいてヘモグロビン濃度に関する補正を行う。    【数１】2008133332.tif 000017    【数２】2008133332.tif 000018
2008133332.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヘモグロビンを含む血液試料中の基質の濃度を測定する方法であって、
ヘモグロビンにより影響を受けた基質濃度に相関する測定値と、ヘモグロビン濃度またはそれに相関する値と、を用いて基質濃度を演算する、基質濃度測定方法。
【請求項２】
下記数式１および２に基づいて基質濃度に相関する測定値Ｒｅを補正して基質濃度を演算する、請求項１に記載の基質濃度測定方法。
【数１】
2008133332.tif 000013
【数２】
2008133332.tif 000014
【請求項３】
上記Ｖmaxは、測定すべき血液試料ごとにヘモグロビン濃度またはそれに相関する値を測定し、その測定結果に基づいて血液試料ごとに決定される、請求項２に記載の基質濃度測定方法。
【請求項４】
上記Ｖmaxは、クロマトグラフィにより得られるクロマトグラムに基づいて決定する、請求項３に記載の基質濃度測定方法。
【請求項５】
ヘモグロビンにより影響を受けた基質濃度に相関する測定値Ｒｅは、酵素電極法により測定される、請求項２に記載の基質濃度測定方法。
【請求項６】
測定値Ｒｅは、電圧値あるいは電流値である、請求項５に記載の基質濃度測定方法。
【請求項７】
ヘモグロビンを含む血液試料中の基質の濃度を演算するための演算手段と、ヘモグロビンにより影響を受けた基質濃度に相関する値を測定するための基質測定機構と、を備えた基質濃度測定装置であって、
ヘモグロビン濃度またはそれに相関する値を測定するためのヘモグロビン測定機構をさらに備えており、
上記演算手段は、上記基質測定機構における測定値と、上記ヘモグロビン測定機構における測定値と、を用いて基質濃度を演算するように構成されている、基質濃度測定装置。
【請求項８】
上記演算手段は、下記数式１および２に基づいて基質濃度に相関する測定値Ｒｅを補正して基質濃度を演算するように構成されている、請求項７に記載の基質濃度測定装置。
【数１】
2008133332.tif 000015
【数２】
2008133332.tif 000016
【請求項９】
上記演算手段は、上記Ｖmaxを、測定すべき血液試料ごとにヘモグロビン濃度またはそれに相関する値を測定し、その測定結果に基づいて血液試料ごとに決定するように構成されている、請求項８に記載の基質濃度測定装置。
【請求項１０】
上記ヘモグロビン測定機構は、クロマトグラフィにより得られるクロマトグラムとして上記ヘモグロビン濃度またはそれに相関する値を測定できるように構成されている、請求項９に記載の基質濃度測定装置。
【請求項１１】
上記基質測定機構は、ヘモグロビンにより影響を受けた基質濃度に相関する測定値Ｒｅを得るための酵素電極を含んでいる、請求項８に記載の基質濃度測定装置。
【請求項１２】
測定値Ｒｅは、上記酵素電極において出力される電流値あるいはその電流値を換算した電圧値である、請求項１１に記載の基質濃度測定装置。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ヘモグロビンを含む試料中のグルコースなどの基質の濃度を測定するための方法および装置に関する。
【背景技術】
【０００２】
グルコースなどの基質の濃度を測定する方法としては、電極法と呼ばれる方法がある。この方法は、試料中の基質濃度に相関した情報を、試料に接触させた電極に出力させ、この出力に基づいて基質濃度を演算するものである。電極法は、平衡点法(エンドポイント法)および微分法(レート法)に大別することができる。平衡点法は、電極からの出力の経時的変化が一定値に漸近するときの平衡値に基づいてグルコース濃度を演算する方法である。一方、微分法は、出力をｎ回微分(ｎは正の整数)したときの極大値に基づいてグルコース濃度を演算する方法である。【０００３】
一般的な電極法においては、試料として全血を用いる場合には、血球の影響を受けて、測定値が低値化することが知られている。そのため、血液中のグルコース濃度を測定する場合には、平衡点法における演算結果（ＥＰ値）と微分法における演算結果（ＤＩ値）とを関連付ける方法が考えられている(たとえば特許文献１，２参照)。【０００４】
特許文献１，２に開示された方法は、微分法においてグルコース濃度を演算する場合に、極大値に対応する出力を得るまでの間に、血球外に拡散されるグルコースの総量や拡散速度を考慮したものである。これらの方法は、血球外に拡散されるグルコースの総量や拡散速度の差をＥＰ値とＤＩ値との差に相関させ、血球の影響を補正するものであり、試料中に血球が存在することを前提として成立するものである。【０００５】
ところで、検体として溶血試料を用いる場合、あるいは血球を溶血させる試薬を含む希釈液体により検体を希釈して測定する場合には、試料中にヘモグロビンが含まれることとなる。ヘモグロビンは、全血を用いる場合において血球が溶血し、あるいは血清あるいは血漿を用いる場合において遠心分離前に血球が溶血したときにも、試料中に含まれることとなる。【０００６】
【特許文献１】特開平９−３３５３３号公報
【特許文献２】特公平９−３１８６３４号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
しかしながら、試料中にヘモグロビンが含まれていると、グルコース濃度などを測定する場合に、測定値が低値化する傾向がある。とくに、ヘモグロビンは、過酸化水素と反応しやすいものであるため、過酸化水素電極を用いて基質濃度を測定する場合には、ヘモグロビンが過酸化水素と反応した分だけ、電極の出力が低値化する傾向にあり、高い測定精度を得ることが困難となる。【０００８】
また、血球の溶血を防止することにより試料中にヘモグロビンが含まれてしまうことを回避することも可能ではないが、その場合には、血液の輸送・保存および前処理段階について細心の注意を払う必要があり、煩わしい作業を強いられるばかりか、検体によって溶血のし易さにバラツキがあるため、現実的ではない。【０００９】
本発明は、煩雑な作業を必要とすることなく、血液などの試料中におけるグルコースなどの基質の濃度を測定する際のヘモグロビンの影響を抑制し、測定精度を向上させることを課題としている。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明の第１の側面では、ヘモグロビンを含む血液試料中の基質の濃度を測定する方法であって、ヘモグロビンにより影響を受けた基質濃度に相関する測定値と、ヘモグロビン濃度またはそれに相関する値と、を用いて基質濃度を演算する、基質濃度測定方法が提供される。【００１１】
本発明では、たとえば下記数式１および２に基づいて基質濃度に相関する測定値を補正して基質濃度が演算される。【００１２】
【数１】
2008133332.tif 000003
【００１３】
【数２】
2008133332.tif 000004
【００１４】
Ｖmaxは、測定すべき血液試料ごとにヘモグロビン濃度またはそれに相関する値を測定し、その測定結果に基づいて血液試料ごとに決定するのが好ましく、たとえばクロマトグラフィにより得られるクロマトグラムに基づいて決定される。【００１５】
Ｒｅは、酵素電極法を利用して測定するのが好ましく、たとえば電圧値あるいは電流値として得られる。【００１６】
本発明の第２の側面では、ヘモグロビンを含む血液試料中の基質の濃度を演算するための演算手段と、ヘモグロビンにより影響を受けた基質濃度に相関する値を測定するための基質測定手段と、を備えた基質濃度測定装置であって、ヘモグロビン濃度またはそれに相関する値を測定するためのヘモグロビン測定手段をさらに備えており、上記演算手段は、上記基質測定手段における測定値と、上記ヘモグロビン測定手段における測定値と、を用いて基質濃度を演算するように構成されている、基質濃度測定装置が提供される。【００１７】
上記演算手段は、下記数式１および２に基づいて基質濃度に相関する測定値Ｒｅを補正して基質濃度を演算するように構成される。【００１８】
【数１】
2008133332.tif 000005
【００１９】
【数２】
2008133332.tif 000006
【００２０】
演算手段は、Ｖmaxを、測定すべき試料ごとにヘモグロビン測定手段においてヘモグロビン濃度またはそれに相関する値を測定し、その測定結果に基づいて血液試料ごとに決定するように構成される。【００２１】
ヘモグロビン測定手段は、たとえばクロマトグラフィにより得られるクロマトグラムとしてヘモグロビン濃度またはそれに相関する値を測定できるように構成される。【００２２】
基質測定手段は、たとえばヘモグロビンにより影響を受けた基質濃度に相関する測定値Ｒｅを得るための酵素電極を備えたものとして構成される。この場合、測定値Ｒｅは、上記酵素電極において出力される電流値あるいはその電流値を換算した電圧値とされる。【００２３】
本発明において測定対象となる血液試料は、たとえば全血またはその希釈液であり、基質は、たとえばグルコースである。
【図面の簡単な説明】
【００２４】
【図１】本発明に係る基質濃度測定装置の概略構成を示す模式図である。
【図２】図１に示した基質濃度測定装置におけるヘモグロビン測定ユニットにおいて得られるクロマトグラムの一例を示すものである。
【図３】図１に示した基質濃度測定装置における基質濃度測定ユニットにおける酵素電極の概略構成を示す断面図である。
【図４】図１に示した基質濃度測定装置のブロック図である。
【図５】酵素電極における出力（電圧値）と対血漿値との関係を模式的に示したグラフである。
【図６】Ｖmaxとヘモグロビン量との関係を模式的に示したグラフである。
【図７】実施例１においてヘマトクリット値が４５％のときの、酵素電極における出力（電圧値）と対血漿値との関係を示したグラフである。
【図８】実施例１においてヘマトクリット値が３５％のときの、酵素電極における出力（電圧値）と対血漿値との関係を示したグラフである。
【図９】実施例１においてヘマトクリット値が６０％のときの、酵素電極における出力（電圧値）と対血漿値との関係を示したグラフである。
【図１０】実施例１において、補正後の値の正確性を示すグラフである。
【符号の説明】
【００２５】
１  基質濃度測定装置
２  ヘモグロビン測定ユニット（ヘモグロビン測定手段）
３  基質測定ユニット（基質測定手段）
３４  酵素電極
５  演算部（演算手段）
【発明を実施するための最良の形態】
【００２６】
以下においては、本発明について、図面を参照しつつ説明する。【００２７】
図１に示した濃度測定装置１は、血液試料中のヘモグロビン量および基質濃度を測定できるように構成されたものであり、ヘモグロビン測定ユニット２および基質測定ユニット３を備えている。【００２８】
ヘモグロビン測定ユニット２は、液体クロマトグラフによりヘモグロビン量を測定できるように構成されたものであり、液供給機構２１、試料調製機構２２、およびヘモグロビン測定機構２３を備えている。【００２９】
液供給機構２１は、ボトル２１Ａ，２１Ｂ，２１Ｃの溶離液あるいは洗浄溶血液を、後述するヘモグロビン測定機構２３のインジェクションバルブ２３Ａに個別に供給するためのものである。この液供給機構２１は、ボトル２１Ａ，２１Ｂ，２１Ｃの他に、脱気装置２１Ｄ、マニホールド２１Ｅおよびポンプ２１Ｆを含んでいる。【００３０】
ボトル２１Ａ，２１Ｂは、後述するヘモグロビン測定機構２３における分析カラム２３Ｂに供給すべき溶離液を保持したものである。溶離液としては、たとえばｐＨや塩濃度の異なるバッファが使用される。ボトル２１Ｃは、溶血洗浄液を保持したものである。溶血洗浄液は、全血中の血球を溶血させるとともに目的成分を希釈する能力と、配管類を洗浄する能力とを併せ持つものである。溶血洗浄液は、たとえば緩衝剤および溶血剤を含むものであり、必要に応じてＮａＣｌなどの支持電解質やアジ化Ｎａなどの防腐剤が添加されたものであってもよい。【００３１】
脱気装置２１Ｄは、後述する分析カラム２３Ｂに溶離液や溶血洗浄液を供給する前に、溶離液から溶存気体を除去するためのものである。この脱気装置２１Ｄは、たとえば各溶離液の流路の途中を中空状の気液分離膜により構成するとともに、気液分離膜をチャンバ内に配置したものとして構成することができる。この構成では、チャンバを減圧することにより、気液分離膜の内部を流通する溶離液から溶存気体を除去することができる。もちろん、脱気装置２１Ｄとしては、気液分離膜を収容したチャンバを減圧する構成以外ものであってもよい。【００３２】
マニホールド２１Ｅは、インジェクションバルブ２３Ａに供給する液の種類（ボトル２１Ａ，２１Ｂ，２１Ｃの種類）を選択するためのものであり、図外の制御手段により制御される。【００３３】
ポンプ２１Ｆは、ボトル２１Ａ，２１Ｂ，２１Ｃの液体を、後述するインジェクションバルブ２３Ａおよび分析カラム２３Ｂに供給するためのものである。ポンプ２１Ｆとしては、公知の種々のものを使用することができる。【００３４】
試料調製機構２２は、ヘモグロビン測定機構２３に導入する測定用試料を調製するためのものである。この試料調製機構２２は、たとえば採血管１０に保持された血液などの検体と希釈液とをそれぞれノズルを用いて希釈槽に供給することにより、測定用試料を調製するように構成されている。【００３５】
ヘモグロビン測定機構２３は、液体クロマトグラフィ法を利用して試料中のヘモグロビン量を測定するためのものであり、インジェクションバルブ２３Ａ、分析カラム２３Ｂおよび測光ユニット２３Ｃを含んでいる。【００３６】
インジェクションバルブ２３Ａは、分析カラム２３Ｂに導入すべき一定量（たとえば数μＬ）の試料を定量するとともに、その試料を分析カラム２３Ｂに導入可能とするものである。このインジェクションバルブ２３Ａは、試料調製機構２２、分析カラム２３Ｂおよび廃液タンク（図示略）に連結されている。【００３７】
分析カラム２３Ｂは、充填剤が充填されたものであり、温調機構（図示略）により目的とする温度、たとえば４０℃程度の温度に維持されている。ここで、ヘモグロビンの濃度を測定する場合には、充填剤としては、たとえばメタクリル酸エステル共重合体が使用される。【００３８】
測光ユニット２３Ｃは、分析カラム２３Ｂからの脱着液に含まれるヘモグロビンを光学的に検出するためのものであり、ヘモグロビン量に応じた出力（たとえば吸光度）が得られるように構成されている。ヘモグロビン量に対応する出力は、たとえば図２に示したようなクロマトグラムとして得られる。クロマトグラムからは、ヘモグロビン総量およびグリコヘモグロビン濃度（ヘモグロビン総量に対するグリコヘモグロビンの割合）を把握することができる。【００３９】
図１に示したように、基質測定ユニット３は、試料調製機構３０および検出機構３１を有している。【００４０】
試料調製機構３０は、検体を希釈して試料を調製するためのものであり、調製槽３０Ａ、攪拌動作部３０Ｂ、検体供給部３０Ｃおよび希釈液供給部３０Ｄを含んでいる。【００４１】
調製槽３０Ａは、検体を希釈して試料を調製する場を提供するためのものである。【００４２】
攪拌動作部３０Ｂは、調製槽３０Ａに試料と試薬とを供給したときに、それらを攪拌・混合するためのものであり、攪拌子３０Ｂａおよびスターラ３０Ｂｂを含んでいる。攪拌子３０Ｂａは、調製槽３０Ａに収容されており、スターラ３０Ｂｂによって攪拌子３０Ｂａを回転させることにより、調製槽３０Ａの液体を攪拌できるようになされている。【００４３】
試料供給部３０Ｃは、調製槽３０Ａに対して、採血管１０に保持された血液などの検体を供給するためのものであり、ノズル３０Ｃａを有している。検体としては、血液試料（たとえば全血、血漿あるいは血清の希釈液）が使用される。【００４４】
希釈液供給部３０Ｄは、調製槽３０Ａに対して希釈液を供給するためのものであり、希釈液タンク３０Ｄａおよびポンプ３０Ｄｂを有している。希釈液タンク３０Ｄａは、調製槽３０Ａに供給すべき希釈液を保持したものである。希釈液としては、たとえば緩衝液が用いられ、必要に応じて、ＮａＣｌなどの支持電解質やアジ化ナトリウムなどの防腐剤を含有させたものであってもよい。ポンプ３０Ｄｂは、希釈液タンク３０Ｄａの希釈液を調製槽３０Ａに送液するための動力を付与するものである。【００４５】
検出機構３１は、酵素電極３３、電源３４および電流値測定部３５を備えている。【００４６】
酵素電極３３は、検体における基質との電子授受量に応じた電気的物理量を出力するものである。この酵素電極３３は、図３に示したように、たとえば基質選択透過膜３３Ａ、酵素固定化膜３３Ｂ、過酸化水素選択透過膜３３Ｃおよび過酸化水素電極３３Ｄを有している。【００４７】
基質選択透過膜３３Ａは、酵素固定化層３３Ｂに対して検体中の基質を選択的に供与するためのものである。基質選択透過膜３３Ａは、基質の種類に応じて選択されるが、公知の種々のものを使用することができる。【００４８】
酵素固定化膜３３Ｂは、基質を酸化して過酸化水素を生成させるためのものであり、酸化酵素を含んだものとして構成される。本発明で用いる酸化酵素は、基質の種類に応じて選択される。ここで、基質測定ユニット３での測定対象となる基質としては、グルコースあるいはラクテートを挙げることができ、酸化酵素としては、グルコースオキシダーゼあるいはラクテートオキシダーゼを挙げることができる。【００４９】
過酸化水素選択透過膜３３Ｃは、過酸化水素電極３３Ｄに対して過酸化水素を選択的に供与するためのものである。過酸化水素選択透過膜３３Ｃとしては、たとえばアセチルセルロース系あるいはポリアリルアミン系のものを使用することができる。【００５０】
過酸化水素電極３３Ｄは、供与された過酸化水素量、すなわち基質の濃度に応じた電気的信号を出力するものである。このような過酸化水素電極３３Ｄとしては、たとえば陽極３３Ｄａとして白金、陰極３３Ｄｂとして銀を採用したものを使用することができる。【００５１】
図１に示した電源３４は、酵素電極３３（過酸化水素電極３３Ｄ）に対して電圧を印加するためのものである。電源３４としては、たとえば直流電源が使用され、酵素電極３３（過酸化水素電極３３Ｄ）に対する印加電圧は、たとえば１００〜５００ｍＶに設定される。【００５２】
電流値測定部３５は、過酸化水素電極３３Ｄと過酸化水素との間の電子授受量を電流値として測定するためのものである。電流値測定部３５における電流値の測定は、断続的に行なわれる。【００５３】
廃液機構３２は、測定後に調製槽３０Ａに存在する液体を廃棄するためのものであり、ポンプ３２Ａを有している。この廃液機構３２では、ポンプ３２Ａの動力により調製槽３０Ａの液体が排出される。【００５４】
図４に示したように、基質濃度測定装置１は、制御部４および演算部５をさらに備えている。【００５５】
制御部４は、各部の動作を制御するためのものである。より具体的には、制御部４は、ヘモグロビン測定ユニット２におけるマニホールド２１Ｅ、ポンプ２１Ｆ、インジェクションバルブ２３Ａおよび測光ユニット２３Ｃなどの動作を制御し、基質測定ユニット３におけるポンプ３０Ｄｂ，３２Ａ、ノズル３０Ｃａ、およびスターラ３０Ｂｂなどの動作を制御する。この制御部４はさらに、基質測定ユニット３における検出機構３１の動作をも制御する。より具体的には、制御部４は、図１に示した電源３４を制御して過酸化水素電極３３Ｄに電圧が印加される状態と印加されない状態とを選択し、電流値測定部３５を制御して、電流値を測定するタイミングを制御する。電流値測定部３５は、たとえば５０〜２００μｓｅｃの間隔で繰り返し電流値を測定するように制御部４によって測定動作が制御される。【００５６】
一方、演算部５は、ヘモグロビン測定ユニット２の測光ユニット２３Ｃおよび基質測定ユニット３の電流値測定部３５（図１参照）における測定結果に基づいて、検体中のグルコースなどの基質濃度を演算するためのものである。この演算部５は、演算に必要なプログラムを記憶したものであり、その動作は制御部４によって制御される。本実施の形態においては、演算部５は、電流値測定部３５における出力を、ヘモグロビン濃度を考慮して補正した上で、その補正値に基づいて基質濃度を演算するように構成されている。電流値測定部３５からの出力は、電流値として補正を行なってもよいが、電流値を電圧値に変換した後に補正を行なうのが好ましい。【００５７】
演算部５においては、たとえば電流値測定部３５において得られる電流値を一定の換算式にしたがって換算した電圧値を、下記数式１に基づいて補正を行なう。【００５８】
【数１】
2008133332.tif 000007
【００５９】
数式１において、対血漿値Ｖ（％）は、下記数式２により得られる値である。【００６０】
【数２】
2008133332.tif 000008
【００６１】
演算部５における基質濃度の演算は、数式１により得られる補正値と基質濃度との相関関係を示す検量線あるいはテーブルに対して、補正値を対応させることにより演算される。【００６２】
ここで、対血漿値（Ｖ（％））は、血漿を測定したときの測定値に対するヘモグロビンにより影響を受けた測定値の割合をさすものである。【００６３】
図５に示したように、上記数式２は、対血漿値（Ｖ（％））を縦軸とし、基質濃度に相関する測定値Ｒｅを横軸とした場合、血液試料の対血漿値（Ｖ（％））がＢを切片（縦軸との交点）とし、測定値Ｒｅが大きくなるにつれて一定値（Ｖmax＋Ｂ）に漸近する式となることを示している。すなわち、数式２は、血液試料を用いて基質濃度を測定した場合に、その測定値が血漿値に対して低値化する傾向があることを、酵素固定化膜３３Ｂにおいて生成した過酸化水素のうちの一部が過酸化水素電極３３Ｄにおいて消費されることなくヘモグロビンと反応するために過酸化水素電極３３Ｄにおける出力が低値化することに求めた近似式である。また、数式２は、ミカエリスメンテンの式と類似の関係式であるが、本発明においてミカエリスメンテンが適用できる原理として、酵素固定化膜３３Ｂで発生した過酸化水素が過酸化水素電極３３Ｄへ移行する速度が関与していると考えられる。すなわち、本発明者らは、ヘモグロビンが多くなると、過酸化水素の過酸化水素電極３３Ｄへの移行速度が低くなると考えられ、ミカエリスメンテン式がフィットする要因と推定している。【００６４】
また、血液試料を用いて基質濃度を測定した場合に、その測定値が血漿値に対して低値化する傾向があることは、血液試料中の固形成分（ヘマトクリット値）の影響により可溶化グルコースの割合が低下することとにも求めることができる。すなわち、図５に鎖線で示したように、ヘマトクリット値が小さい場合と大きい場合を比べると、ヘマトクリット値が小さいほど固形成分の影響が相対的に小さいために、対血漿値はヘマトクリット値が小さいときに大きくなり、それとは逆にヘマトクリット値が大きいときに対血漿値が小さくなる傾向にある。このようなヘマトクリット値の影響を考慮するためには、Ｖmaxを、ヘモグロビン濃度またはそれに相関する値から導くのが好ましい。【００６５】
ここで、数式２におけるＶmaxは、血液試料の血漿値に相当するものであるため、ヘモグロビン量の増加とともに大きくなる傾向がある反面、血漿値もまた固形成分（ヘマトクリット値）の影響を受ける。そのため、図６に示したように、ヘマトクリット値が大きくなると、血液試料中のヘモグロビン量も多くなるためにヘモグロビンの影響が大きくなるために、Ｖmaxは一定値に漸近する傾向にある。したがって、Ｖmaxはヘモグロビン量に相関させることが可能であり、たとえばヘモグロビン量をクロマトグラフィにより得られるクロマトグラムによって把握する場合には、Ｖmaxをクロマトグラムにおけるヘモグロビンの総面積（図２においてクロスハッチィングを施した部分）から決定することができる。【００６６】
一方、数式２における定数Ｂは、たとえば健常者の検体を複数用いて目的とする基質を測定し、測定値にフィットする数式２の曲線から設定することができる。【００６７】
本発明では、血液試料中に含まれるヘモグロビン量の影響を考慮して最終的な基質濃度が演算される。そのため、本発明では、ヘモグロビンが酵素固定化膜３３Ｂにおいて生成した過酸化水素と反応することによる低値化分を考慮した基質濃度の演算が可能となる。
その結果、本発明では、血液試料中の基質濃度を精度良く測定することが可能となる。【００６８】
また、ヘモグロビン量の影響を、Ｖmaxに反映させることにより、血液試料中の固形成分（ヘマトクリット値）の影響をも考慮することができる。そのため、本発明では、血液試料中の固形成分（ヘマトクリット値）の影響により可溶化グルコースの割合が低下することを考慮した基質濃度の演算が可能となる。その結果、本発明では、血液試料中の基質濃度をより一層精度良く測定することが可能となる。【００６９】
本発明は、上述した実施の形態には限定されず、種々に変更可能である。すなわち、本発明の要旨は、血液試料中のヘモグロビンの影響を考慮する点にあり、必ずしも上記数式１に示した補正式により、過酸化水素電極３３Ｄの出力を補正する必要はなく、他の補正式によりヘモグロビンの影響を考慮してもよい。【００７０】
また、図１に示した濃度測定装置１のように、基質測定ユニット３に加えて、ヘモグロビン測定ユニット２を備えたものである必要はなく、ヘモグロビン測定ユニット２は、基質濃度測定装置１とは別に設けられたものであってもよく、ヘモグロビン測定手法としては、必ずしもクロマトグラフィ法を採用する必要もない。【００７１】
次に、実施例に基づいて本発明を説明する。ただし、本発明は、以下に説明する実施例に限定されるものではない。
【実施例】
【００７２】
本実施例においては、グルコース濃度の異なる複数の血液試料中について、数式２により基質測定ユニットにおける出力（電圧値）を補正したときの対血漿値について検討した。この対血漿の検討は、３種類のヘマトクリット値について行なった。【００７３】
数式２において、Ｖmax、ＫmおよびＢは、それぞれのヘマトクリット値について、下記表１の通り設定した。【００７４】
【表１】
2008133332.tif 000009
【００７５】
ヘモグロビン濃度は、商品名「ＨＡ−８１６０」：アークレイ（株）製を用いて、クロマトグラムにおけるヘモグロビンの総面積として測定した。ヘモグロビンの総面積の測定値は、それぞれのヘマトクリット値の試料について、下記表２〜表４に示した。【００７６】
血液試料中のグルコース濃度に相関する出力は、商品名「ＨＡ−８１６０」：アークレイ（株）製を用いて、電圧値として測定した。電圧値の測定値は、測定された電圧値に相当する対血漿値Ｖs（％）とともに、それぞれのヘマトクリット値について下記表２〜表４に示した。さらに、測定値（電圧値）と対血漿値の関係について、図７〜図９に示した。【００７７】
一方、数式２によって補正した対血漿値Ｖｒ（％）についても、下記表２〜表４に示すとともに、横軸をグルコース濃度、縦軸を対血漿値（％）として図１０に示した。【００７８】
【表２】
2008133332.tif 000010
【００７９】
【表３】
2008133332.tif 000011
【００８０】
【表４】
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【００８１】
表２ないし表４および図７ないし図９から分かるように、数式２は、実測された電圧値と対血漿値との関係を適切に反映していることが伺える。とくに、図１０から分かるように、数式２により演算した対血漿値は、グルコース濃度が低い範囲から高い範囲の広範囲にわたって、実測される対血漿値との乖離が小さくなっている。したがって、数式２によれば、実測された電圧値から適切な対血漿値を求めることができる。その結果、数式２により求めた対血漿値に基づいて数式１により測定値を補正し、グルコース濃度を演算すれば、ヘモグロビンの影響が適切に除去された値を得ることができる。【００８２】
また、数式２は、ヘマトクリット値の異なる場合であっても、その値が高いか低いかを問わず、実測された電圧値と対血漿値との関係を適切に反映している。したがって、数式２により求めた対血漿値に基づいて数式１などの補正式により測定値を補正してグルコース濃度を演算すれば、固形成分（ヘマトクリット値）の影響が適切に除去された値を得ることができる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【国際調査報告】
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