【手続補正書】
【提出日】平成16年9月30日(2004.9.30)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】  ヒト化抗リンホトキシンβレセプター（ＬＴ−β−Ｒ）抗体であって、その軽鎖相補性決定領域は、配列番号１のアミノ酸残基２４〜３４、５０〜５６および８９〜９７によって定義され、その重鎖相補性決定領域は、配列番号２のアミノ酸残基３１〜３５、５０〜６６および９９〜１０９によって定義され、該抗体はその軽鎖中の以下の残基
：Ｋ３、Ｗ４１、Ｉ４６、Ｑ６９およびＹ７１
の少なくとも一つ；または
その重鎖中の以下の残基
：Ｆ３７、Ｔ４０、Ａ４９、Ｍ８９およびＶ９３（Ｋａｂａｔ  番号付けの慣例）
の少なくとも一つを含む、ヒト化抗ＬＴ−β−Ｒ抗体。
【請求項２】  ヒト化抗リンホトキシンβレセプター（ＬＴ−β−Ｒ）抗体であって、その軽鎖相補性決定領域は、配列番号１のアミノ酸残基２４〜３４、５０〜５６および８９〜９７によって定義され、その重鎖相補性決定領域は、配列番号２のアミノ酸残基３１〜３５、５０〜６６および９９〜１０９によって定義され、該抗体はその軽鎖中の残基Ｙ７１（Ｋａｂａｔ  番号付けの慣例）を含む、ヒト化抗ＬＴ−β−Ｒ抗体。
【請求項３】  ヒト化抗リンホトキシンβレセプター（ＬＴ−β−Ｒ）抗体であって、その軽鎖相補性決定領域は、配列番号１のアミノ酸残基２４〜３４、５０〜５６および８９〜９７によって定義され、その重鎖相補性決定領域は、配列番号２のアミノ酸残基３１〜３５、５０〜６６および９９〜１０９によって定義され、該抗体はその重鎖中の残基Ｆ３７およびＡ４９（Ｋａｂａｔ  番号付けの慣例）を含む、ヒト化抗ＬＴ−β−Ｒ抗体。
【請求項４】  請求項１に記載の抗体であって、該抗体は、配列番号８のアミノ酸残基１〜１０７によって定義される軽鎖可変ドメイン配列を含む、抗体。
【請求項５】  請求項１に記載の抗体であって、該抗体は、配列番号１６のアミノ酸残基１〜１２０によって定義される重鎖可変ドメイン配列を含む、抗体。
【請求項６】  請求項４に記載の抗体であって、該抗体は、配列番号１６のアミノ酸残基１〜１２０によって定義される重鎖可変ドメイン配列をさらに含む、抗体。
【請求項７】  細胞株Ｅ４６．４（ＡＴＣＣ特許寄託物名ＰＴＡ−３３５７）または細胞株Ｅ７７．４（ＡＴＣＣ特許寄託物名３７６５）によって産生される抗体と同一の重鎖ポリペプチド配列および軽鎖ポリペプチド配列を含む、抗体。
【請求項８】  請求項１〜７のいずれか１項に記載の抗体であって、該抗体は、親抗体の結合特性を実質的に保持する、抗体。
【請求項９】  請求項１〜７のいずれか１項に記載の抗体であって、該抗体は、さらに免疫毒素と連結されている、抗体。
【請求項１０】  請求項１〜７のいずれか１項に記載の抗体であって、該抗体は、さらに化学療法剤と連結されている、抗体。
【請求項１１】  請求項１〜７のいずれか１項に記載の抗体および薬学的に受容可能なキャリアを含む、組成物。
【請求項１２】  ヒトにおいて新生物腫瘍の発達、重篤度または影響を処置または減少させるための請求項１１に記載の組成物。
【請求項１３】  細胞株Ｅ４６．４（ＡＴＣＣ特許寄託物名ＰＴＡ−３３５７）または細胞株Ｅ７７．４（ＡＴＣＣ特許寄託物名３７６５）によって産生される抗体の軽鎖についてのコード配列を含む、単離された核酸。
【請求項１４】  細胞株Ｅ４６．４（ＡＴＣＣ特許寄託物名ＰＴＡ−３３５７）または細胞株Ｅ７７．４（ＡＴＣＣ特許寄託物名３７６５）によって産生される抗体の重鎖についてのコード配列を含む、単離された核酸。
【請求項１５】  配列番号８の残基１〜１０７についてのコード配列を含む、単離された核酸。
【請求項１６】  配列番号１６の残基１〜１２０についてのコード配列を含む、単離された核酸。
【請求項１７】  細胞株Ｅ４６．４（ＡＴＣＣ特許寄託物名ＰＴＡ−３３５７）または細胞株Ｅ７７．４（ＡＴＣＣ特許寄託物名３７６５）の細胞。
【請求項１８】  ヒト化抗リンホトキシンβレセプター（ＬＴ−β−Ｒ）抗体またはその抗原結合フラグメントであって、
ａ）配列番号１に示される相補性決定領域(ＣＤＲ)を含む軽鎖、
ｂ）配列番号２に示されるＣＤＲを含む重鎖、ならびに
ｃ）Ｋ３、Ｗ４１、Ｉ４６、Ｑ６９およびＹ７１からなる群から選択される該軽鎖の残基；またはＦ３７、Ｔ４０、Ａ４９、Ｍ８９およびＶ９３（Ｋａｂａｔ  番号付けの慣例）からなる群から選択される該重鎖の残基を含む、ヒトアクセプターフレームワーク由来の可変フレームワーク領域
を含む、ヒト化抗ＬＴ−β−Ｒ抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項１９】  ヒト化抗リンホトキシンβレセプター（ＬＴ−β−Ｒ）抗体またはその抗原結合フラグメントであって、
ａ）配列番号１に示される相補性決定領域(ＣＤＲ)を含む軽鎖、
ｂ）配列番号２に示されるＣＤＲを含む重鎖、および
ｃ）該軽鎖のＹ７１（Ｋａｂａｔ  番号付けの慣例）を含むヒトアクセプターフレームワーク由来の可変フレームワーク領域
を含む、ヒト化抗ＬＴ−β−Ｒ抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項２０】  ヒト化抗リンホトキシンβレセプター（ＬＴ−β−Ｒ）抗体またはその抗原結合フラグメントであって、
ａ）配列番号１に示される相補性決定領域(ＣＤＲ)を含む軽鎖、
ｂ）配列番号２に示されるＣＤＲを含む重鎖、ならびに
ｃ）該重鎖のＦ３７およびＡ４９（Ｋａｂａｔ  番号付けの慣例）を含む、ヒトアクセプターフレームワーク由来の可変フレームワーク領域
を含む、ヒト化抗ＬＴ−β−Ｒ抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項２１】  ヒト化抗体軽鎖であって、
配列番号１に示される可変相補性決定領域(ＣＤＲ)、ならびに
Ｋ３、Ｗ４１、Ｉ４６、Ｑ６９およびＹ７１（Ｋａｂａｔ  番号付けの慣例）からなる群から選択される残基を含む可変ヒトアクセプターフレームワーク
を含む、ヒト化抗体軽鎖。
【請求項２２】  ヒト化抗体重鎖であって、
配列番号２に示される可変相補性決定領域(ＣＤＲ)、ならびに
Ｆ３７、Ｔ４０、Ａ４９、Ｍ８９およびＶ９３（Ｋａｂａｔ  番号付けの慣例）からなる群から選択される残基を含む可変ヒトアクセプターフレームワーク
を含む、ヒト化抗体重鎖。
【請求項２３】  ヒト化抗リンホトキシンβレセプター（ＬＴ−β−Ｒ）抗体またはその抗原結合フラグメントであって、
ａ）配列番号１に示される相補性決定領域(ＣＤＲ)を含む軽鎖、
ｂ）配列番号２に示されるＣＤＲを含む重鎖、
ｃ）該軽鎖のＹ７１（Ｋａｂａｔ  番号付けの慣例）またはその保存的アミノ酸置換を含む、ヒトアクセプターフレームワーク由来の可変フレームワーク領域、および
ｄ）該重鎖のＡ４９（Ｋａｂａｔ  番号付けの慣例）またはその保存的アミノ酸置換を含む、ヒトアクセプターフレームワーク由来の可変フレームワーク領域、
を含む、ヒト化抗ＬＴ−β−Ｒ抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項２４】  請求項２３に記載のヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記フレームワーク領域が、前記軽鎖のＷ４１およびＩ４６（Ｋａｂａｔ  番号付けの慣例）またはその保存的アミノ酸置換をさらに含む、ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項２５】  請求項２３または２４に記載のヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記フレームワーク領域が、前記軽鎖のＫ３およびＱ６９（Ｋａｂａｔ  番号付けの慣例）またはその保存的アミノ酸置換をさらに含む、ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項２６】  請求項２３〜２５のいずれか１項に記載のヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記フレームワーク領域が、前記重鎖のＦ３７（Ｋａｂａｔ  番号付けの慣例）またはその保存的アミノ酸置換をさらに含む、ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項２７】  請求項２３〜２６のいずれか１項に記載のヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記フレームワーク領域が、前記重鎖のＶ９３（Ｋａｂａｔ  番号付けの慣例）またはその保存的アミノ酸置換をさらに含む、ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項２８】  請求項２３〜２７のいずれか１項に記載のヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記フレームワーク領域が、前記重鎖のＴ４０およびＭ８９（Ｋａｂａｔ  番号付けの慣例）またはその保存的アミノ酸置換をさらに含む、ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項２９】  ヒト化抗リンホトキシンβレセプター（ＬＴ−β−Ｒ）抗体またはその抗原結合フラグメントであって、
配列番号３２に示されるアミノ酸配列を含む抗体軽鎖、および
配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む抗体重鎖
を含む、ヒト化抗ＬＴ−β−Ｒ抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項３０】  化学療法剤とさらに連結されている、請求項１〜１０、１８〜２０および２３〜２９のいずれか１項に記載のヒト化抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項３１】  前記化学療法剤が、アドリアマイシン、５ＦＵ、ビンブラスチン、アクチノマイシンＤ、エトポシド、シスプラチン、メトトレキサートおよびドキソルビシンからなる群から選択される、請求項３０に記載のヒト化抗体。
【請求項３２】  免疫毒素とさらに連結されている、請求項１〜１０、１８〜２０および２３〜３１のいずれか１項に記載のヒト化抗体。
【請求項３３】  前記抗体がＩｇＧ１である、請求項１〜１０、１８〜２０および２３〜３２のいずれか１項に記載のヒト化抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項３４】  前記抗原結合フラグメントがＦａｂフラグメント、Ｆ（ａｂ’）２およびＦｖフラグメントからなる群から選択される、請求項１〜１０、１８〜２０および２３〜３３のいずれか１項に記載のヒト化抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項３５】  請求項１〜１０、１８〜２０および２３〜３４のいずれか１項に記載のヒト化抗リンホトキシン−βレセプター（ＬＴ−β−Ｒ）抗体またはその抗原結合フラグメントの治療有効量を含む、薬学的組成物。
【請求項３６】  ヒトにおいて新生物腫瘍形成の重篤度もしくは影響を処置または軽減させるための薬学的組成物の調製における、請求項１〜１０、１８〜２０および２３〜３５のいずれか１項に記載のヒト化抗リンホトキシン−βレセプター（ＬＴ−β−Ｒ）抗体またはその抗原結合フラグメントの使用。
【請求項３７】  ヒトにおいて腫瘍容積を減少させるための薬学的組成物の調製における、請求項１〜１０、１８〜２０および２３〜３６のいずれか１項に記載のヒト化抗リンホトキシン−βレセプター（ＬＴ−β−Ｒ）抗体またはその抗原結合フラグメントの使用。
【請求項３８】  ヒトにおいて固形腫瘍を処置するための薬学的組成物の調製における、請求項１〜１０、１８〜２０および２３〜３７のいずれか１項に記載のヒト化抗リンホトキシン−βレセプター（ＬＴ−β−Ｒ）抗体またはその抗原結合フラグメントの使用。
【請求項３９】  前記腫瘍が、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、結腸直腸癌（ＣＲＣ）、前立腺癌、胃癌、皮膚癌、食道癌、膀胱癌、結腸腺癌、子宮頸癌、黒色腫、乳癌および原発性結腸腫瘍からなる群から選択される、請求項３７または３８に記載の使用。
【請求項４０】  前記組成物が、化学療法剤の存在下でかまたは化学療法剤と組み合わせて投与されるように設計される、請求項３７〜３９のいずれか１項に記載の使用。
【請求項４１】  前記化学療法剤が、アドリアマイシン、５ＦＵ、ビンブラスチン、アクチノマイシンＤ、エトポシド、シスプラチン、メトトレキサートおよびドキソルビシンからなる群から選択される、請求項４０に記載の使用。
【請求項４２】  前記組成物が、細胞傷害性因子もしくは免疫毒素の存在下でか、または細胞傷害性因子もしくは免疫毒素と組み合わせて投与されるように設計される、請求項３６〜４１のいずれか１項に記載の使用。
【請求項４３】  前記細胞傷害性因子がＩＦＮ−γ、ＴＮＦ−α、ＴＮＦ−β、ＩＬ−１およびＩＬ−２からなる群から選択される、請求項４２に記載の使用。
【請求項４４】  配列番号４、配列番号６および配列番号８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む抗体軽鎖可変領域をコードする、単離された核酸。
【請求項４５】  配列番号１０、配列番１２、配列番号１４および配列番号１６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む抗体重鎖可変領域をコードする、単離された核酸。
【請求項４６】  配列番号３２に示されるアミノ酸配列を含む抗体軽鎖をコードする、単離された核酸。
【請求項４７】  配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む抗体重鎖をコードする、単離された核酸。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１２１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１２１】
（実施例３）
（Ａ３７５細胞におけるＩＬ−８アゴニズム）
精製したｍＡｂを活性に対してアッセイした。Ａ３７５ヒトミエローマ細胞におけるＩＬ−８放出アッセイの結果を図１Ａ（捕捉されている）および図１Ｂ（可溶性）に示す。そのアッセイは、抗ＬＴ−β−Ｒ抗体のＡ３７５ヒトミエローマ細胞表面上に発現したＬＴ−β−Ｒとの結合の際に放出されたＩＬ−８の量を測定する。Ａ３７５細胞を、可溶性抗体またはヤギ抗ヒトＩｇＧ  Ｆｃ（Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）コートウェル上に捕捉された抗体のいずれかを含む９６ウェルプレートへ１０５／ｍｌとなるようにプレートに植えた。この培養プレートを一晩インキュベートした。馴化培地を採集し、ＥＬＩＳＡによってＩＬ−８に対して解析した。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１２２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１２２】
（実施例４）
（ＷｉＤｒ細胞における細胞毒性）
抗ヒトＩｇＧ  Ｆｃコートウェル上の可溶性抗ＬＴ−β−Ｒ抗体とともにＷｉＤｒ大腸癌細胞を使用した細胞毒性アッセイの結果は、図２Ａ（捕捉された）および図２Ｂ（可溶性）に示されるように、抗ＬＴ−β−Ｒ抗体が癌細胞中で細胞毒性を増加することを示す。ＷｉＤｒ細胞を、可溶性抗体またはヤギ抗ヒトＩｇＧ  Ｆｃ（Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）コートウェル上に捕捉された抗体のいずれかを含む９６ウェルプレートへ８０ｕｎｉｔｓ／ｍｌ  ｈｕＩＦＮγ存在下で６×１０４／ｍｌとなるようにプレートに植えた。この培養プレートを５日間インキュベーションした。ＭＴＴを４時間加え、結果として得られる沈殿を１０ｍＭ  ＨＣｌ中の１０％ＳＤＳとともに一晩インキュベーションすることによって溶解し、Ｏ．Ｄ．をマイクロプレートリーダーで読み取った。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】図面の簡単な説明
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図面の簡単な説明】
【図１】
図１Ａ（捕捉された）および図１Ｂ（可溶性）は、ＷｉＤｒ細胞に対する細胞傷害性のグラフを示す。ｍＣＢＥ１１（マウス）（菱形）、ｈｕＣＢＥ１１＃２（軽鎖のバージョン２（ＶＬ＃２）および重鎖のバージョン２）（ＶＨ＃２）を含むヒト化抗ＬＴ−β−Ｒ抗体）（丸）、ｈｕＣＢＥ１１＃４（軽鎖のバージョン３（ＶＬ＃３）および重鎖のバージョン４（ＶＨ＃４）を含むヒト化抗ＬＴ−β−Ｒ抗体）（星形）。
【図２】
図２Ａ（捕捉された）および図２Ｂ（可溶性）は、Ａ３７５細胞に対するＩＬ−８アゴニズムのグラフを示す。ｍＣＢＥ１１（菱形）、ｈｕＣＢＥ１１＃２（軽鎖のバージョン２（ＶＬ＃２）および重鎖のバージョン２（ＶＨ＃２）を含むヒト化抗ＬＴ−β−Ｒ抗体）（丸）、ｈｕＣＢＥ１１＃４（軽鎖のバージョン３（ＶＬ＃３）および重鎖のバージョン４（ＶＨ＃４）を含むヒト化抗ＬＴ−β−Ｒ抗体）（星形）。
【図３】
図３は、腫瘍体積対グラフ投与日を示す。ｍＣＢＥ１１（三角）、ｈｕＣＢＥ１１＃４（軽鎖のバージョン３（ＶＬ＃３）および重鎖のバージョン４（ＶＨ＃４）を含むヒト化抗ＬＴ−β−Ｒ抗体）（丸）、未処置（四角）。
【図４】
図４は、動物の生存率対腫瘍注射後の日数のグラフを示す。ｍＣＢＥ１１（三角）、ｈｕＣＢＥ１１＃４（軽鎖のバージョン３および重鎖のバージョン４を包含するヒト化抗ＬＴ−β−Ｒ抗体）（丸）、未処置（四角）。
【図５】
図５は、腫瘍体積対注射後の日数のグラフを示す。ＨｕＣＢＥ１１＃４（軽鎖のバージョン３（ＶＬ＃３）および重鎖のバージョン４（ＶＨ＃４）を含むヒト化抗ＬＴ−β−Ｒ抗体）（丸）、および未処置のコントロール（四角）。
【図６】
図６は、増殖前腫瘍体積対処置後の日数のグラフを示す。コントロール（四角）；以下の異なる投与量でｈｕＣＢＥ１１＃４（軽鎖のバージョン３（ＶＬ＃３）および重鎖のバージョン４（ＶＨ＃４）を含むヒト化抗ＬＴ−β−Ｒ抗体）：５００μｇ（丸）、１００μｇ（三角）、および２０μｇ（菱形）；ｍＣＢＥ１１（×）。
【図７】
図７は、増殖前腫瘍を有する動物の生存率対処置後の日数のグラフを示す。コントロール（四角）；異なる投与量のｈｕＣＢＥ１１＃４（軽鎖のバージョン３（ＶＬ＃３）および重鎖のバージョン４（ＶＨ＃４）を包含するヒト化抗ＬＴ−β−Ｒ抗体）：５００μｇ（丸）、１００μｇ（三角）、および２０μｇ（菱形）；ｍＣＢＥ１１（×）。
【図８】
図８は、平均蛍光強度対ｈｕＣＢＥ１１＃４濃度の対数プロットにおけるグラフを示す。