【手続補正書】
【提出日】平成16年11月24日(2004.11.24)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】  可溶性レセプターまたは結合タンパク質と複合体として少なくとも部分的に結合するアナライトをアッセイする方法であって、
ｉ)測定するアナライトを含む体液サンプルを、当該複合体を解離する界面活性剤と混合することにより液体混合物を形成すること、
ii)ステップｉ)の液体混合物を、アナライトに結合するアナライトの特異的結合パートナーを含む試薬と混合し、アナライトの特異的結合アッセイを実施すること、および
iii)ステップｉ)の液体混合物を当該界面活性剤用の封鎖剤(sequestrant)と混合し、それによってステップii)の特異的結合アッセイを封鎖剤存在下で生じさせる方法。
【請求項２】  封鎖剤がシクロデキストリンである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】  封鎖剤量が結合反応混合物の１-５％の範囲である、請求項２に記載の方法。
【請求項４】  ステップｉ)、ii)およびiii)をすべて単一反応容器で行う、請求項１から３の何れか１つに記載の方法。
【請求項５】  マルチプルアッセイを、マルチウェルプレートのウェルまたはアッセイチューブで平行に行う、請求項１から４の何れかに記載の方法。
【請求項６】  ステップii)のアッセイが均一アッセイである、請求項１から６の何れかに記載の方法。
【請求項７】  ステップii)のアッセイがシンチレーション近接アッセイ(scintillation proximity assay)である、請求項６に記載の方法。
【請求項８】  ステップii)の特異的結合アッセイがイムノアッセイである、請求項１から７の何れかに記載の方法。
【請求項９】  アナライトがインターロイキン-６またはプロスタグランジンＥ２であり、界面活性剤がドデシルトリメチルアンモニウムブロミドであり、そして、封鎖剤がα-シクロデキストリンである、請求項１から８の何れかに記載の方法。
【請求項１０】  請求項１から９の何れかにおいて請求した方法による、アナライトのアッセイに適当なキットであって、界面活性剤；界面活性剤の封鎖剤；アナライトの特異的結合パートナー；トレーサー；および非結合トレーサーから結合トレーサーを分離する分離手段を含むキット。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００９】
本発明の方法は、新規であり、便利のよい、そして迅速である、サンプル中の全アナライトを定量する方法であって、当該アナライトは、可溶性結合タンパク質またはレセプターとすべてかまたは部分的に結合していてもよい。当該方法は、多数の抗体型の使用に依存せず、アナライトを測定に適当な型とする高価なサンプル操作も必要としない。本明細書中に記載した当該方法は、便利のよいイムノアッセイ技術を、アナライトをレセプターまたは結合タンパク質から解離させるのを仲介する界面活性剤と組合せる。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１１】
当該アナライトは、体液の一成分である。特異的結合パートナーが利用できる任意のアナライトが、原理的に、本発明に利用し得る。本発明の使用に適当な典型的な特異的結合パートナーの組み合わせは、ハプテン-抗体、薬剤-抗体、ステロイドホルモン-抗体、タンパク質-抗体、ペプチド-抗体およびポリペプチド-抗体相互作用の中から選択され得る。特異的結合タンパク質調製物をこれらシステムの抗体と置換し得る。好ましくは、特異的結合アッセイはタンパク質結合アッセイまたは特にイムノアッセイである。典型的なアナライトには、タンパク質、ペプチド、サイトカイン、ケモカイン、サイクリックＡＭＰおよびｃＧＭＰのような第二メッセンジャー、ホルモン、薬剤、ステロイド、プロスタグランジン、ビタミンおよびロイコトリエンが含まれる。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１３】
適当に、界面活性剤は、相補的レセプターまたは結合タンパク質からアナライトを分離し得る任意の試薬であり、陽イオン性、陰イオン性、双性イオン性または非イオン性である。適当な界面活性剤の例は、ドデシルトリメチルアンモニウムブロミド(ＤＴＡＢ)、セチルピリジニウムクロリド(ＣＰＣ)、ベンゾチオニウムクロリド(ＢＺＣ)、ドデシル硫酸ナトリウム(ＳＤＳ)、および硫酸Ｎ-ドデシル-Ｎ，Ｎ-ジメチル-３-アンモニオ-１-プロパン(ＤＤＡＰＳ)を含む。ＤＴＡＢ、ＣＰＣおよびＢＺＣは陽イオン性界面活性剤であり、ＤＤＡＰＳは双性イオン性界面活性剤であり、そして、ＳＤＳは陰イオン性界面活性剤である。典型的な界面活性剤濃度は、測定するサンプルの重量の０．２５-４重量％の範囲であり、好ましくは０．５-２．５重量％の範囲である。使用する界面活性剤が少なすぎれば、可溶性レセプターまたは結合タンパク質からのアナライト解離は遅く、または不完全である。測定に適当なアナライトを放出するための界面活性剤の解離活性に加えて、界面活性剤はまた、アッセイのステップii)で加えた特異的結合パートナーへのアナライトによる結合に逆の影響を与える。封鎖剤を使用し、望ましくない逆効果を阻害するか、なくす。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１７】
好ましくは、ステップｉ)から得られる処置サンプルを、ステップii)およびiii)を行うために、中間の分離または精製を全く行わずに、使用し得る。好ましくは、封鎖剤には、ステップii)の液体サンプルと混合する試薬のうち１つが含まれる。そのため、本発明のアッセイに存在する成分には、
ａ)アナライトを含む可能性があり、または含むと思われるサンプル、
ｂ)界面活性剤、
ｃ)固定化支持体に固定され、または固定可能な、アナライトの非標識特異的結合パートナー、
ｄ)標識されるか、または非標識であってかつ標識され得るかの何れかである、アナライトの特異的結合パートナーまたは類似体
を典型的に含み得る。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２１】
当該方法には、界面活性剤で 測定されるアナライトを含むかまたは含むと思われるサンプルをインキュベーションすること、当該混合物にアナライトの測定用のイムノアッセイを行うために必要な試薬を加えること、そのような１つまたはそれ以上の試薬を封鎖剤を含む緩衝液に溶解すること、および存在するアナライト量の測定として生じるシグナルを測定することを含む。得られたシグナルを、同一手順を用いてアッセイの標準曲線を作成した一群のアナライトの既知量を用い得られたシグナルと比較し得る。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２２】
他の態様では、本発明は、記載の方法によりアナライトをアッセイするキットであって、界面活性剤、界面活性剤用の封鎖剤、アナライトの特異的結合パートナー、トレーサーおよび非結合トレーサーから結合トレーサーを分離する分離手段を含むキットを提供する。トレーサーは、アナライトの特異的結合パートナーであるか、または他のアッセイ試薬である標識アッセイ試薬である。構想している分離手段には、例えばＳＰＡビーズまたは磁性ビーズに、またはアッセイ容器の内部表面に固定化されたアッセイ試薬が含まれる。キットにはまた、アナライト標準および緩衝液が含まれる。