【手続補正書】
【提出日】平成16年8月23日(2004.8.23)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】  少なくとも二のモノマーのホモポリマー又はコポリマーの電気活性ポリマー、アンチリガンド、及び前記アンチリガンドと特異的に相互作用したリガンドからなる電気活性複合体において、前記アンチリガンドは、直接又は間接的に、電気活性ポリマーと連結しており、さらに、前記電気活性複合体は、前記アンチリガンドに直接又は間接に連結した少なくとも一の電子供与基を含むことを特徴とする、電気活性複合体。
【請求項２】  前記電気活性ポリマーが、ポリピロール、ポリアセチレン、ポリアジン、ポリ（ｐ−フェニレン）、ポリ（ｐ−フェニレンビニレン）、ポリピレン、ポリチオフェン、ポリフラン、ポリセレノフェン、ポリピリダジン、ポリカルバゾール、ポリアニリン及び二重鎖ポリヌクレオチドから選ばれることを特徴とする、請求項１記載の複合体。
【請求項３】  前記電子供与基がフェロセン、キノンおよびこれらの誘導体から選ばれることを特徴とする、請求項１記載の複合体。
【請求項４】  前記リガンドと前記アンチリガンドが、特に、ポリヌクレオチド及びポリペプチドから選ばれる生物的分子であることを特徴とする、請求項１記載の複合体。
【請求項５】  前記リガンド及び／又はアンチリガンドが、直接又は間接的に、シグナルを発生することができるトレーサーにより標識されていることを特徴とする、請求項４記載の複合体。
【請求項６】  前記電子供与基が、直接又は間接的に、アンチリガンドと相互作用したリガンドに連結し、前記アンチリガンドが、直接又は間接的に、電気活性ポリマーに連結していることを特徴とする、請求項１記載の複合体。
【請求項７】  前記アンチリガンド又はリガンドが、第２の連結基を介して、前記電子供与基に共有結合で連結していることを特徴とする、請求項６記載の複合体。
【請求項８】  前記アンチリガンド又はリガンドが、第３の連結基を介して、前記電気活性ポリマーに共有結合で連結していることを特徴とする、請求項１記載の複合体。
【請求項９】  第１及び／又は第２及び／又は第３の連結基が、各々、前記電子供与基を前記アンチリガンドに、前記アンチリガンドを前記電気活性ポリマーに、結合腕を介して、連結するものであることを特徴とする、請求項７又は８に記載の複合体。
【請求項１０】  前記電子供与基が、不活性又は生物的支持体を介して前記リガンドに連結されていることを特徴とする、請求項６記載の複合体。
【請求項１１】  前記不活性支持体が、ポリスチレンビーズ、磁気ビーズ又はガラスビーズであることを特徴とする、請求項１０記載の複合体。
【請求項１２】  前記生物的支持体が、前記電子供与基が内在化された細胞であることを特徴とする、請求項１０記載の複合体。
【請求項１３】  前記電気活性ポリマーが、各々ピロール環からなる少なくとも二のモノマーから形成されるポリピロールであり、かつ前記電気供与基がフェロセンであることを特徴とする、請求項１記載の複合体。
【請求項１４】  前記アンチリガンドがプローブポリヌクレオチドであり、前記リガンドがターゲットポリヌクレオチドであって少なくとも一部が前記アンチリガンドにハイブリダイズしているものであることを特徴とする、請求項１３記載の複合体。
【請求項１５】  前記プローブポリヌクレオチドが、少なくとも、前記フェロセンと、前記モノマーのピロール環に結合していることを特徴とする、請求項１４記載の複合体。
【請求項１６】  前記ピロール環が、３位の炭素において置換されていることを特徴とする、請求項１３記載の複合体。
【請求項１７】  前記プローブポリヌクレオチドが、前記フェロセンの一のシクロペンタジエン環の１位の炭素に結合していることを特徴とする、請求項１５記載の複合体。
【請求項１８】  前記ポリピロールがコポリマーであり、該コポリマーに含まれるモノマーは、そのピロール環が、−ＣＨ２−ＣＯＯＨ又は−ＣＨ２−ＣＨ２ＯＨ基で置換されているものであることを特徴とする、請求項１３記載の複合体。
【請求項１９】  前記フェロセンと前記プローブポリヌクレオチド又はターゲットポリヌクレオチドとの間の前記第２の連結基が、−ＣＯ−基であることを特徴とする、請求項１５記載の複合体。
【請求項２０】  前記プローブポリヌクレオチド又はターゲットポリヌクレオチドと前記ピロール環との間の第３の連結基が、−ＣＨ２−ＣＯ−基であることを特徴とする、請求項１５記載の複合体。
【請求項２１】  前記第１及び／又は第２及び／又は第３の連結基が、結合腕を介して、間接的に、前記フェロセンを前記プローブポリヌクレオチド又はターゲットポリヌクレオチドに、前記ピロール環を前記プローブポリヌクレオチド又はターゲットポリヌクレオチドに連結するものであることを特徴とする、請求項１９又は２０記載の複合体。
【請求項２２】  前記結合腕が、少なくとも二の炭素原子、好ましくは少なくとも２又は３の炭素原子を有する飽和炭化水素鎖であることを特徴とする、請求項２１記載の複合体。
【請求項２３】  前記プローブポリヌクレオチド又はターゲットポリヌクレオチドが、前記フェロセン及び／又は前記モノマーのピロール環に、少なくとも、各々、前記第２及び／又は第３の連結基を介して、及び前記プローブポリヌクレオチド又はターゲットポリヌクレオチドの少なくとも一のアミノ官能基を介して、結合していることを特徴とする、請求項１４乃至２２のいずれか一項に記載の複合体。
【請求項２４】  少なくとも二のモノマーのホモポリマー又はコポリマーの電気活性ポリマー、アンチリガンドからなる電気活性プローブにおいて、前記アンチリガンドは、直接又は間接的に電気活性ポリマーと連結しており、さらに、前記電気活性プローブは、前記アンチリガンドに直接又は間接的に連結した少なくとも一の電子供与基を含むことを特徴とする、電気活性プローブ。
【請求項２５】  前記電気活性ポリマーが、ポリピロール、ポリアセチレン、ポリアジン、ポリ（ｐ−フェニレン）、ポリ（ｐ−フェニレンビニレン）、ポリピレン、ポリチオフェン、ポリフラン、ポリセレノフェン、ポリピリダジン、ポリカルバゾール、ポリアニリン及び二重鎖ポリヌクレオチドから選ばれることを特徴とする、請求項２４記載のプローブ。
【請求項２６】  前記電子供与基がフェロセン、キノンおよびこれらの誘導体から選ばれることを特徴とする、請求項２４記載のプローブ。
【請求項２７】  前記リガンドが、特にポリヌクレオチド及びポリペプチドから選ばれる生物的分子であることを特徴とする、請求項２４記載のプローブ。
【請求項２８】  前記リガンドが、直接又は間接的に、シグナルを発生することができるトレーサーにより標識されていることを特徴とする、請求項２７記載のプローブ。
【請求項２９】  前記アンチリガンドが、第２の連結基を介して、前記電子供与基に共有結合で連結していることを特徴とする、請求項２４記載のプローブ。
【請求項３０】  前記アンチリガンドが、第３の結合基を介して、前記電気活性ポリマーに共有結合で連結していることを特徴とする、請求項２４記載のプローブ。
【請求項３１】  前記第１及び／又は第２及び／又は第３の連結基が、各々、前記電子供与基を前記アンチリガンドに、前記アンチリガンドを前記電気活性ポリマーに、結合腕を介して、連結するものであることを特徴とする、請求項３７乃至３９のいずれか一項に記載のプローブ。
【請求項３２】  前記電気活性ポリマーが、各々ピロール環からなる少なくとも二のモノマーから形成されるポリピロールであり、かつ前記電気供与基がフェロセンであることを特徴とする、請求項２５又は２６記載のプローブ。
【請求項３３】  前記アンチリガンドが、適当なハイブリダイゼーション条件下で、ターゲットポリヌクレオチドにハイブリダイズできる、プローブポリヌクレオチドである、請求項２４又は３２記載のプローブ。
【請求項３４】  前記プローブポリヌクレオチドが、少なくとも、フェロセンと、前記モノマーのピロール環に連結していることを特徴とする、請求項３３記載のプローブ。
【請求項３５】  前記ピロール環が、３位の炭素において置換されていることを特徴とする、請求項３２記載のプローブ。
【請求項３６】  前記プローブポリヌクレオチドが、前記フェロセンの一のシクロペンタジエン環の１位の炭素に結合していることを特徴とする、請求項３４記載のプローブ。
【請求項３７】  前記ポリピロールがコポリマーであり、かつ該コポリマーに含まれるモノマーは、そのピロール環が−ＣＨ２−ＣＯＯＨ又は−ＣＨ２−ＣＨ２ＯＨ基で置換されているものであることを特徴とする、請求項３２記載のプローブ。
【請求項３８】  前記フェロセンと前記プローブポリヌクレオチドとの間の前記第２の連結基が、−ＣＯ−基であることを特徴とする、請求項３４記載のプローブ。
【請求項３９】  前記プローブポリヌクレオチドと前記ピロール環との間の前記第３の連結基が、−ＣＨ２−ＣＯ−基であることを特徴とする、請求項３４記載のプローブ。
【請求項４０】  前記第１及び／又は第２及び／又は第３の連結基が、各々、結合腕を介して、間接的に、前記フェロセンを前記プローブポリヌクレオチドに、前記ピロール環を前記プローブポリヌクレオチドに連結するものであることを特徴とする、請求項３８又は３９に記載のプローブ。
【請求項４１】  前記結合腕が、少なくとも二の炭素原子、好ましくは少なくとも２又は３の炭素原子を有する飽和炭化水素鎖であることを特徴とする、請求項４０記載のプローブ。
【請求項４２】  前記プローブポリヌクレオチドが、少なくとも、前記フェロセン及び／又は前記モノマーのピロール環に、各々、第２及び／又は第３の連結基を介して、及び前記プローブポリヌクレオチドの少なくとも一のアミノ官能基を介して、結合していることを特徴とする、請求項３２乃至４１のいずれか一項に記載のプローブ。
【請求項４３】  （ａ）各々ピロール環からなる少なくとも二のモノマーから形成されるホモポリマー又はコポリマーのポリピロールを得る工程、ここで前記ピロール環は３位の炭素において、プローブポリヌクレオチドにより置換されているものである；
（ｂ）一のシクロペンタジエン環の１位の炭素において、少なくとも一の活性化された又は活性化され得る基を有するフェロセンを得る工程
（ｃ）プローブポリヌクレオチドで置換された前記ホモポリマー又はコポリマーのポリピロールを、前記活性化された又は活性化され得る基を有するフェロセンと接触させる工程
を含むことを特徴とする請求項３１記載のプローブの調製方法。
【請求項４４】  前記フェロセンの活性化された又は活性化され得る基が、同一又は異なっていてもよく、活性化された又は活性化され得るエステル基であり、好ましくは−ＣＯ−[Ｎ−ヒドロキシフタルイミド]基であることを特徴とする、請求項４３記載の方法。
【請求項４５】  前記フェロセンの活性化された又は活性化され得る基が、結合腕を介して、前記フェロセンに結合していることを特徴とする請求項４３又は４４記載の方法。
【請求項４６】  請求項２４乃至４２のいずれか一項に記載のプローブを、特異的アンチリガンド／リガンド相互作用に適当な反応条件下で接触させること、及び接触前のプローブと接触後のプローブの間の、電位差又は電流の変動を示すか又定量することを特徴とする、生物的試料中のリガンドの検出方法。
【請求項４７】  前記リガンドがポリヌクレオチドであることを特徴とする、請求項４６記載の方法。
【請求項４８】  表面の全部又は一部が請求項２４乃至４２のいずれか一項記載のプローブで被覆されている電極。
【請求項４９】  リガンドと相互作用することができるアンチリガンドが結合している電気活性ポリマーの電気活性を増加させるための、前記アンチリガンドと同じモノマーに存在する電子供与基の使用。
【請求項５０】  生物的試料中のリガンドの検出方法において、
・電気活性プローブを特異的アンチリガンド／リガンド相互作用に適した反応条件下で接触させること、
ここで、前記プローブは、少なくとも二のモノマーのホモポリマー又はコポリマーの電気活性ポリマー、リガンドと特異的に相互作用できるアンチリガンドからなるものであり、かつ前記プローブは、少なくとも一の電子供与基を含み、
・接触前のプローブと接触後のプローブの間の、電位差又は電流の変動を示すか又は定量すること
を特徴とする方法。
【請求項５１】  前記電気活性ポリマーが、ポリピロール、ポリアセチレン、ポリアジン、ポリ（ｐ−フェニレン）、ポリ（ｐ−フェニレンビニレン）、ポリピレン、ポリチオフェン、ポリフラン、ポリセレノフェン、ポリピリダジン、ポリカルバゾール、ポリアニリン及び二重鎖ポリヌクレオチドから選ばれることを特徴とする、請求項５０記載の方法。
【請求項５２】  前記電子供与基がフェロセン、キノンおよびこれらの誘導体から選ばれることを特徴とする、請求項５０記載の方法。
【請求項５３】  前記リガンドが、特にポリヌクレオチド及びポリペプチドから選ばれる生物的分子であることを特徴とする、請求項５０記載の方法。
【請求項５４】  前記リガンドが、直接又は間接的に、シグナルを発生することができるトレーサーにより標識されていることを特徴とする、請求項５０記載の方法。
【請求項５５】  前記電子供与基が、直接又は間接的に、一方は前記電気活性ポリマーに、他方は前記アンチリガンドに連結していることを特徴とする、請求項５０記載の方法。
【請求項５６】  前記電子供与基が、第１の連結基を介して、共有結合で、電気活性ポリマーに連結していることを特徴とする、請求項５０記載の方法。
【請求項５７】  前記アンチリガンドが、第２の連結基を介して、共有結合で、電子供与基に連結していることを特徴とする、請求項５０記載の方法。
【請求項５８】  前記第１及び／又は第２及び／又は第３の連結基が、各々、前記電子供与基を前記電気活性ポリマーに、前記電子供与基を前記アンチリガンドに、結合腕を介して、連結するものであることを特徴とする、請求項５５乃至５７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５９】  前記電気活性ポリマーが、各々ピロール環からなる少なくとも二のモノマーから形成されるポリピロールであり、かつ前記電気供与基がフェロセンであることを特徴とする、請求項５２又は５３記載の方法。
【請求項６０】  前記アンチリガンドが、適当なハイブリダイゼーション条件下で、ターゲットポリヌクレオチドにハイブリダイズできるプローブポリヌクレオチドであることを特徴とする、請求項５０又は５９記載の方法。
【請求項６１】  前記フェロセンが、一方は前記ポリ−ブポリヌクレオチドに、他方は前記ポリピロールのモノマーのピロール環に連結していることを特徴とする、請求項５０記載の方法。
【請求項６２】  前記ピロール環が、３位の炭素において置換されていることを特徴とする、請求項５９記載の方法。
【請求項６３】  前記プローブポリヌクレオチドが、前記フェロセンの一のシクロペンタジエン環の１位の炭素に結合していることを特徴とする、請求項６１記載の方法。
【請求項６４】  前記プローブポリヌクレオチドが、前記フェロセンの一のシクロペンタジエン環の１位の炭素に結合しており、前記フェロセンが、他のシクロペンタジエン環の１’位の炭素を介して、前記ピロール環に結合していることを特徴とする、請求項６１記載の方法。
【請求項６５】  前記ポリピロールがコポリマーであり、該コポリマーに含まれるモノマーは、そのピロール環が、−ＣＨ２−ＣＯＯＨ又は−ＣＨ２−ＣＨ２ＯＨ基で置換されているものであることを特徴とする、請求項５９記載の方法。
【請求項６６】  前記フェロセンと前記ピロール環との間の前記第１の連結基が−ＣＯＮＨ−ＣＨ２−基であることを特徴とする、請求項５８記載の方法。
【請求項６７】  前記フェロセンと前記プローブポリヌクレオチドとの間の前記第２の連結基が−ＣＯ−基であることを特徴とする、請求項５８記載の方法。
【請求項６８】  前記第１及び／又は第２及び／又は第３の連結基が、各々、結合腕を介して、間接的に、前記フェロセンを前記ピロール環に、前記フェロセンを前記プローブポリヌクレオチドに、連結するものであることを特徴とする、請求項６６又は６７記載の方法。
【請求項６９】  前記結合腕が、少なくとも二の炭素原子、好ましくは少なくとも２又は３の炭素原子を有する飽和炭化水素鎖であることを特徴とする、請求項６８記載の方法。
【請求項７０】  前記プローブポリヌクレオチドが、前記フェロセンに、各々、前記第２及び／又は第３の連結基を介して、及び前記プローブポリヌクレオチドの少なくとも一のアミノ官能基を介して、結合していることを特徴とする、請求項５９乃至６９のいずれか一項記載の方法。