【手続補正書】
【提出日】平成16年5月18日(2004.5.18)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】  各個体のニューロンにおいてカルボキシル末端側切断型apoEの形成を低下させることによって、その個体において神経原線維変化が形成されるのを阻害するための薬剤の製造における、神経細胞においてタンパク質分解によるapoEの分解を触媒する酵素のタンパク質分解活性を低下させる作用薬の使用。
【請求項２】  カルボキシル末端側切断型apoEの形成が低下することによって、各個体におけるapoE関連疾患が治療される、請求項１記載の使用。
【請求項３】  疾患が、アルツハイマー病、冠状動脈疾患、頭蓋骨損傷、および脳梗塞からなる群より選択される、請求項２記載の使用。
【請求項４】  ゲノムの中に安定的に組み込まれた導入遺伝子を含む、ヒト以外のトランスジェニック動物であって、該導入遺伝子が、該動物のニューロンにおいてカルボキシル末端側切断型apoEをコードする配列が発現して、カルボキシル末端側切断型apoEタンパク質が合成されるよう、機能可能なようにプロモーターに結合している、カルボキシル末端側切断型apoEをコードする塩基配列を含み、さらに、該カルボキシル末端側切断型apoEタンパク質が合成される結果、該トランスジェニック動物がADの症状を発症する、ヒト以外のトランスジェニック動物。
【請求項５】  カルボキシル末端側切断型apoEをコードする導入遺伝子の塩基配列が過剰発現される結果、該導入遺伝子を持たない同種動物と比較してカルボキシル末端側切断型apoEの量が上昇する、請求項４記載のヒト以外のトランスジェニック動物。
【請求項６】  ADの症状が、神経細胞に神経原線維変化が存在することである、請求項４記載のヒト以外のトランスジェニック動物。
【請求項７】  カルボキシル末端側切断型apoEをコードする塩基配列を含む核酸分子を含む単離細胞。
【請求項８】  細胞が神経細胞である、請求項７記載の単離細胞。
【請求項９】  apoEがapoE4である、請求項２記載の使用、請求項４記載のヒト以外のトランスジェニック動物、または請求項７記載の細胞。
【請求項１０】  カルボキシル末端側切断型apoE4がapoE4（Δ272-299）である、請求項９記載の使用、ヒト以外のトランスジェニック動物、または細胞。
【請求項１１】  アルツハイマー病（AD）に随伴する現象を調節する生物活性作用薬をスクリーニングするインビトロの方法であって、
カルボキシル末端側切断型apoEを産生する細胞を被検作用薬と接触させる工程、および、
該作用薬が細胞におけるカルボキシル末端側apoE量に与える効果を測定する工程
を含む方法。
【請求項１２】  細胞が、apoEをコードする塩基配列を含む核酸を導入遺伝子として含む、ヒト以外のトランスジェニック動物中の細胞であり、カルボキシル末端側切断型apoEの量が減少することによって神経原線維変化の減少がもたらされる、請求項１１記載の方法。
【請求項１３】  神経細胞においてタンパク質分解によるapoEの分解を触媒する酵素のタンパク質分解活性を低下させる生物活性作用薬をスクリーニングするインビトロの方法であって、
該酵素を被検作用薬と、該酵素による作用を受けると検出可能な生成物を生じる基質とに接触させる工程、および、
検出可能な生成物の形成に対する被検作用薬の効果があるようならば、その効果を測定する工程
を含む方法。
【請求項１４】  基質が、(P3)nP2P1-Xという化学式をもち、ここでP4P3P2P1がペプチドであり、Xがペプチドのカルボキシル末端に結合する部分（「タグ基」）であり、また、酵素による作用を受けて該ペプチドから切断されると検出可能なシグナルをもたらすペプチドであって、P1が、ロイシン、フェニルアラニン、およびメチオニンからなる群より選択される疎水性残基であり、P2がプロリンであり、P3がアラニンであり、さらに、n≧2である、請求項１３記載の方法。
【請求項１５】  各個体において神経原線維変化が形成されるのを阻害するための薬剤の製造における、リン酸化されたtauおよびリン酸化されたNF-Hとカルボキシル末端側切断型apoEが相互作用するのを阻害する作用薬の使用。
【請求項１６】  各個体の神経細胞の中で神経原線維変化が形成されるのを阻害するための薬剤の製造における、apoEの切断を触媒してカルボキシル末端側切断型apoEが生成されるのを触媒する神経細胞内酵素の酵素活性を阻害する作用薬の使用。
【請求項１７】  神経細胞においてカルボキシル末端側切断型apoEが形成されるのを触媒する酵素を阻害する作用薬、および、
薬学的に許容される賦形剤
を含む組成物。
【請求項１８】  作用薬が、Ala-Ala-Pro-Phe（配列番号：1）、Ala-Ala-Pro-Leu（配列番号：3）、およびAla-Ala-Ala-Ala-Pro-Phe（配列番号：4）からなる群より選択されるペプチドである、請求項１６記載の使用または請求項１７記載の組成物。
【請求項１９】  薬学的組成物であって、
キモトリプシン様プロテアーゼインヒビターのインヒビター、
アセチルコリンエステラーゼインヒビター、非ステロイド系抗炎症剤、シクロオキシゲナーゼ-2インヒビター、およびモノアミンオキシダーゼインヒビターからなる群より選択される作用薬、および
薬学的に許容される賦形剤
を含む薬学的組成物。
【請求項２０】  治療の前に神経細胞におけるカルボキシル末端側切断型apoEの存在に関してアッセイを行う、アルツハイマー病を治療するための薬剤の製造における、神経細胞におけるカルボキシル末端側切断型apoEの形成を触媒する酵素のインヒビターの使用。
【請求項２１】  神経細胞においてカルボキシル末端側切断型apoEが形成されるのを触媒する酵素のインヒビター、および薬学的に許容される賦形剤を含む組成物、ならびに、組成物を必要としている個体に該組成物を投与するための指示書を含むキット。
【請求項２２】  アルツハイマー病を治療するための薬剤の製造における、神経細胞においてカルボキシル末端側切断型apoEが形成されるのを触媒する酵素を効果的に阻害できる量でのキモトリプシン様セリンプロテアーゼのインヒビターの使用であって、該酵素が阻害されて、各個体における神経細胞において神経原線維変化の量が低下する、使用。
【請求項２３】  神経細胞中のカルボキシル末端側切断型apoEの量を減少させるための薬剤の製造における、Aβ1-42により神経細胞内でカルボキシル末端側切断型apoEが形成されるのを触媒する酵素の活性化を抑制する作用薬の使用であって、酵素の活性化を抑制することによって、細胞内のカルボキシル末端側切断型apoE量の減少がもたらされる、使用。
【請求項２４】  各個体のニューロンにおいてカルボキシル末端側切断型apoEの形成を低下させることによって、その個体において神経原線維変化が形成されるのを阻害するための薬剤の製造における、神経細胞においてタンパク質分解によるapoEの分解を触媒する酵素のタンパク質分解活性を低下させる作用薬。
【請求項２５】  カルボキシル末端側切断型apoEの形成が低下することによって、各個体におけるapoE関連疾患が治療される、請求項２４記載の作用薬。
【請求項２６】  疾患が、アルツハイマー病、冠状動脈疾患、頭蓋骨損傷、および脳梗塞からなる群より選択される、請求項２５記載の作用薬。
【請求項２７】  apoEがapoE4である、請求項２５記載の作用薬。
【請求項２８】  カルボキシル末端側切断型apoE4がapoE4（Δ272-299）である、請求項２７記載の作用薬。
【請求項２９】  各個体において神経原線維変化が形成されるのを阻害するための薬剤の製造における、リン酸化されたtauおよびリン酸化されたNF-Hとカルボキシル末端側切断型apoEが相互作用するのを阻害する作用薬。
【請求項３０】  各個体の神経細胞の中で神経原線維変化が形成されるのを阻害するための薬剤の製造における、細胞内でapoEの切断を触媒してカルボキシル末端側切断型apoEが生成されるのを触媒する神経細胞内酵素の酵素活性を阻害する作用薬。
【請求項３１】  神経細胞においてカルボキシル末端側切断型apoEが形成されるのを触媒する酵素を阻害する作用薬。
【請求項３２】  Ala-Ala-Pro-Phe（配列番号：1）、Ala-Ala-Pro-Leu（配列番号：3）、およびAla-Ala-Ala-Ala-Pro-Phe（配列番号：4）からなる群より選択されるペプチドである、請求項３０または３１記載の作用薬。
【請求項３３】  治療の前に神経細胞におけるカルボキシル末端側切断型apoEの存在に関してアッセイを行う、アルツハイマー病を治療するための薬剤の製造における、神経細胞におけるカルボキシル末端側切断型apoEの形成を触媒する酵素のインヒビター。
【請求項３４】  アルツハイマー病を治療するための薬剤の製造における、神経細胞においてカルボキシル末端側切断型apoEが形成されるのを触媒する酵素を効果的に阻害できる量でのキモトリプシン様セリンプロテアーゼのインヒビターであって、該酵素が阻害されて、各個体における神経細胞において神経原線維変化の量が低下する、インヒビター。
【請求項３５】  神経細胞中のカルボキシル末端側切断型apoEの量を減少させるための薬剤の製造における、Aβ1-42により神経細胞内でカルボキシル末端側切断型apoEが形成されるのを触媒する酵素の活性化を抑制する作用薬であって、酵素の活性化を抑制することによって、細胞内のカルボキシル末端側切断型apoE量の減少がもたらされる、作用薬。