【手続補正書】
【提出日】平成16年11月17日(2004.11.17)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１７】
本発明のさらなる側面は、血管壁または移植片壁の外表面へ薬剤または作用因子をデリバリーする装置の「自己固定」である。最終段階でコラーゲンがFITS（フルオレセインイソチオシアネート）またはベンガルローズ（どちらもシグマケミカルス社(Sigma Chemicals)、セントルイス、MO）のような光反応性基と組み合わされるのであれば、コラーゲン-装置は、より接着性にすることができる。この装置を紫外線で刺激すると、これらの光反応性基が活性化され、接着性が増加するであろう。フィブリン接合剤およびアセチル化コラーゲンもコラーゲンマトリックス材料の外側血管壁に対する接着性を増加させることが分かっている。
初期の研究において、局所的脈管傷害と石灰化加速との関係が示されている。最近、ヒトにおける研究によりマトリックスGla-タンパク質（タンパク質−γ-カルボキシル化ビタミンK-依存性γ-カルボキシラーゼ）は正常な血管平滑筋細胞及び骨細胞により構成的に発現されていることが示された。高レベルのGla-タンパク質mRNAおよび非γ-カルボキシル化タンパク質がアテローム硬化性脈管組織に見られた。このγ-カルボキシル化タンパク質は血管石灰化の防止またはその開始を遅延させるために必要である（Price, P.ら、「ワルファリンはラット動脈および心弁において弾性ラメラの急速な石灰化を引き起こす」”Warfarin causes rapid calcification of the elastic lamellae in rat arteries and heart valves”, Atheroscler Thromb Vasc Biol, (1988) 18: 1400-1407）。これらのデータは損傷による石灰化は強く阻害されなければならないことを示す。カルシウムの蓄積を妨げる医薬の導入は石灰化の遅延を補助するし、血管増殖過程の防止、抑制または治療を補助する。本発明の一つの態様において、ビタミンＫの局所デリバリーはγ-カルボキシラーゼ（この場合Gla-タンパク質）の適切な時期の活性化によって脈管損傷と関連した石灰化効果を打ち消し、他のカルシウム結合タンパク質が適切に機能し、過剰のカルシウムを結合しないことを保証する（Hermann, S.M.ら、「ヒトマトリックスGla-タンパク質(MGP)遺伝子の多型性、血管石灰化および心筋梗塞症」”Polymorphisms of the human matrix Gla-Protein gene (MGP) vascular calcification and myocardial infarction”, Arterioscler Thromb Vasc Biol. (2000) 20: 2836-2893）。ビタミンＫと他の抗増殖薬の混合物を使用しても良い。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２４】
アジュバント
本発明の装置は場合により他の目的を達成する作用因子、たとえばコラーゲン蓄積を阻害し血管壁の石灰化低減を補助する作用因子を含む。Selyeらによる初期の研究により、局所的脈間損傷と石灰化加速との関係が示された。最近、ヒトにおける研究により、マトリックスGla-タンパク質（タンパク質-γ-カルボキシル化ビタミンK-依存性-γ-カルボキシラーゼ）が正常な血管平滑筋細胞および骨細胞によって構成的に発現されていることが示された。高レベルのGla-タンパク質mRNAおよび非γ-カルボキシル化タンパク質がアテローム性硬化症脈管組織で見いだされた。このγ-カルボキシル化タンパク質は血管石灰化を阻止または遅延させるために必要である（Price P.ら、”Warfarin causes rapid calcification of the elastic lamellae in rat arteries and heart valves”, Atheroscler Thromb. Vasc. Biol. (1998); 18:1400-1407）。これらのデータは、損傷によって引き起こされる石灰化は積極的に阻止されなければならないことを示す。カルシウム蓄積を阻止する医薬の導入は石灰化および再狭窄過程の遅延を補助する。本発明において、ビタミンKの局所デリバリーは、カルボキシラーゼ（この場合Gla-タンパク質）の時宜を得た放出により血管損傷にともなう石灰化効果を打ち消し、他のカルシウム結合タンパク質が適切に機能し過剰なカルシウムに結合しないことを保証する（Hermann S.M.ら、”Polymorphisms of the human matrix Gla-protein gene (MGP) vascular calcification and myocardial infarction”, Arterioscler Thromb. Vasc. Biol. (2000);20:2836-93）。ビタミンKと他の抗増殖薬の混合物も使用することができる。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３５】
実施例１．種々の抗増殖作用因子の阻害効果
予め作製されたコラーゲンマトリックスを種々の抗増殖薬溶液中に完全に飽和されるまで置いた。抗増殖薬は、コラゲナーゼおよびエラスターゼ酵素を阻害することなく平滑筋細胞および線維芽細胞を阻害することのできるより活性な化合物を代表するように選んだ。（コラゲナーゼおよびエラスターゼは酵素的にコラーゲン蓄積−狭窄の一つの原因−を阻害する）。コラーゲンマトリックスは、これらの化合物で濃度25 μg/mlにて飽和させ、凍結乾燥し、0.066Mリン酸緩衝液(pH 7.4)で37℃にて24時間洗滌し、約5 μg/cm2の化合物密度を有するディスク形態に切断した。洗滌後、直径15mmの滅菌ディスクを24ウェル培養皿に入れ、細胞を5000/cm2の密度で播種した。５日後、細胞数を測定し、小分けした培地で酵素活性を発色基質加水分解及び分光測光法により評価した。これらのデータを表１に示した。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３７】
実施例２．種々の型のマトリックスのラパマイシン結合容量
次のin vitro研究において、種々の型のマトリックスのラパマイシン結合能を調べた。予め作製された（BioMend, Sulzer Calcitek, IncまたはBiopatch,Ethicon Inc, コラーゲン-アルギン酸塩を含む）ラパマイシンを含むコラーゲンマトリックスをラパマイシン初期濃度250 μg/mlで実施例１に記載したように調製した。予め作製されたキトサン（Almin, C. Chunlin, H., Julinag, Bら、”Antibiotic loaded chitosann bar. In vitro , invivo study of a possible treatment for osteomyelitis”, Clin Orthp pp. 239-247 (1999年９月)に記載された方法を用いた）およびフィブリンマトリックス（実施例５に記載した技術を用いた）を250 μg/mlラパマイシンのDMSO溶液に入れて完全に飽和させた。溶媒を蒸発させた後、薬剤を含むマトリックスを0.066Mリン酸緩衝液(pH 7.4)で37℃にて24時間洗滌した。
マトリックスの容量を比較するため、同じ厚さの1.88cm2マトリックス表面に装荷させた蛍光ラパマイシン誘導体を使用した。0.14M NaCl溶液でインキュベーションした後、残存ラパマイシンをジメチルスルホキシド(DMSO)で抽出し、蛍光分光法を用いて収量を測定した。これらのデータを表２に示す。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３８】
2004523537.tif 000001
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４０】
実施例３．リポソームを用いたデリバリー系
リポソームは薬剤デリバリー系の１形態を代表するものであり、生物学的に活性な物質の制御放出を提供する。リポソームは特に水溶性薬剤のための医薬製剤に使用される。ラパマイシンは典型的な例である。リポソーム封じ込めは投与した薬剤の薬理動態および組織分布に対してかなりの効果を有することが示されている。テストした処方には、グリセリルジラウレート（Sigma Chemicals, St Louis, MO）、コレステロール（Sigma Chemicals, St Louis, MO）およびポリオキシレン-10-ステアリル（Sigma Chemicals, St Louis, MO）質量比56：12：32から構成される非イオン性リポソーム製剤（処方１）またはイソプロピルミリステート（Sigma Chemicals, St Louis, MO）およびミネラル油（Sigma Chemicals, St Louis, MO）を含む非イオン性40％水性アルコール水中油リポソーム乳濁液（処方２）が含まれる。ラパマイシンは各処方物中に、ジメチルスルホキシドまたはイソプロパノール中濃度250 μg/mlにて取り込まれており、形成されたリポソームを予め作製されたコラーゲンシートの表面に塗布してラパマイシンを最大表面濃度にした。サンプルを0.066Mのリン酸緩衝液(pH 7.4)で37℃にて24時間洗滌した。マトリックスの容量を比較するため、1.88cm2マトリックス表面に装荷させた蛍光ラパマイシン誘導体を使用した。0.14M NaCl溶液でインキュベーションした後、残存ラパマイシンを有するマトリックスをジメチルスルホキシド(DMSO)で抽出し、蛍光収量を測定した。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４１】
2004523537.tif 000002
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４３】
実施例４．ラミネートコラーゲンフィルム
ざらつきのある、表面中性化、ラミネートコラーゲンフィルムを調製するために不溶性繊維状コラーゲン等張懸濁液を取得した。濃度５〜18％（好ましくは12％）の冷却した３リットルのコラーゲン懸濁液を一晩0.3-0.6M酢酸（好ましくは0.52M）中４℃にて膨潤させた。膨潤した懸濁液を３リットルの破砕した氷で10-20分間（好ましくは12分間）ブレンダー中で分散させ、その後Ultra-Turrax(Alfa、Sweden)中で30分間ホモゲナイズした。得られたスラリーをフィルターホルダー（Millipore）に設置した孔サイズが250 μmから20 μmへ減少する一連のフィルター（Cellector, Bellco, UK）でろ過した。0.04-0.09mbar（好ましくは0.06mbar）にて脱気後、スラリーを２リットルの冷却0.1-0.05M NaOHと混合し、最終pHを7.4±0.3に調製した。中和懸濁液はマトリックス形成前４−６℃にて数時間だけ保存することができる。この中和懸濁液はラパマイシン含有マトリックスの飽和形態または分散形態調製の基礎として役立つ。中和スラリーは室温にて平らな疎水性表面上で直接3mm厚の湿潤フィルムとして成型することができる。およそ60-70 μm厚の乾燥フィルムが形成される。３〜５mlのスラリーで10cm2の領域を覆う。そのような表面の上にいくつかの層が形成され得る。これらの層はコラーゲンフィルムをラパマイシン、タキソールの溶液またはこれらの組合せ中に浸漬することによる抗増殖作用因子の飽和形態を調製するための基礎として機能する。中和スラリーおよびラパマイシンまたは他の作用因子を懸濁液中で同時に組み合わせることは、活性成分分散形態フィルムの調製のために利用することができる。
【手続補正９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４４】
マトリックス材料の調製において重要な要素はこの装置が形成される元となるタンパク質担体の多孔性である。多孔性は乾燥速度、温度および開始コラーゲンの特性によって制御することができる。多孔性は、薬剤放出のキネティクスを制御するので重要である。マトリックスはラパマイシン（分子量914.2）のような小さな分子に結合するに充分に多孔性であることが望ましく、装置の形態を維持するに充分に耐久性があることが望ましい。有効孔サイズ0.002から0.1ミクロンを有するコラーゲンマトリックスのサンプルをテストした。より高い結合能（飽和実験においてラパマイシンに結合する能力）は、孔サイズ0.004ミクロンを有するマトリックスで観察された。加えて、より大きな孔サイズを有するコラーゲンマトリックスは脆弱である。抗増殖作用因子へのマトリックスの結合能はこの応用性にとって重要であるので、３つの異なる濃度のラパマイシンを使用して、最適孔密度で調製された商業的に入手可能なコラーゲンからラパマイシン-コラーゲンマトリックス結合物を調製した。３種の異なる濃度には、高、中、低と標識し、それぞれ、120±5 μg/cm2、60±4 μg/cm2、および30±3 μg/cm2とした。これらのどのマトリックスも脆弱でなく、非均一ラパマイシン分布を有してはいなかった。異なる密度により薬剤放出のキネティクスを制御できる。
【手続補正１０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４９】
次の構成成分を添加する前に各構成成分を完全に溶解することが好ましい。必要であれば、最後の構成成分を溶解した後に、pHを7.0-7.4に調製し、溶液の体積を水で１リットルに調整する。この溶液を次に脱気する。両溶液を混合チャンバーを通してポンプで非固着性、好ましくは疎水性表面に配分し、およそ２mm厚のフィルムを形成する。次にこのフィルムを約20℃〜60℃の範囲の温度、約30Torr（約4kPa）の圧力にて３〜６時間乾燥させる。フィルムの残存湿分は総湿潤質量の約10％、好ましくは３％未満である。
この乾燥表面に乾燥固体ラパマイシンを添加してフィルム1cm2あたり100から500 μgの密度とする。薬剤が２つのフィブリン層の間にサンドウィッチにされるようにこの表面にフィブリンマトリックスの第２の層を形成する。
本発明の一つの態様において、抗狭窄効果を増強するために、ラパマイシンまたはタキソールのような抗増殖作用因子および／または抗狭窄作用因子、ラパマイシンまたはタクロリムスのような抗拒絶薬、抗炎症薬および／またはアンチセンスオリゴヌクレオチドを添加しても良い。これらの固体物質は上述のフィブリン-ラパマイシンサンドウィッチ複合体を補うために添加されるであろう。
【手続補正１１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５０】
実施例６．キトサンマトリックスを架橋する方法
抗増殖薬に対するキトサンマトリックスの結合能を増大させるため、繊維の架橋を利用する。濃度10％から25％（好ましくは12％）の冷却した50mlのキトサン懸濁液を５〜25mlのアクリル酸クロルアンヒドリドと30分間緩やかにゆっくりと混合してこのポリマーをアセチル化した。この時間後、250 μg/mlのラパマイシンのDMSO溶液を添加し、激しく混合し、自己架橋および結合ラパマイシン形成のためにキトサンマトリックス表面へ注いだ。キトサンの微小多孔性構造のために、このアプローチによりマトリックスの結合容量を15％から45％へ増加させることができる。
【手続補正１２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５１】
実施例７．分散、固定化および固定化−分散によるラパマイシンのコラーゲンマトリックスへの取り込み
飽和させる技術とは別に、３つの異なる方法（分散、固定化、および固定化-分散）によりラパマイシンをコラーゲンマトリックスに取り込んだ。
分散技術：
水不溶性コラーゲンの水性スラリーを、エラスチン・プロダクト社（Elastin Product）（Owensville、MO）から入手した非架橋、乾燥、高純度、凍結乾燥仔ウシ皮膚コラーゲンを用いて調製した。このコラーゲンおよび可溶化バッファーを２〜８℃の温度、好ましくは４℃の温度に冷却し、激しく撹拌して10〜21％（好ましくは12％）のコラーゲンタンパク質を含むコラーゲンスラリーを調製する。このようなスラリーは９％の可塑剤、グリセロール、15％の250 μg/mlのラパマイシンDMSO溶液および水を含む。この溶液は50,000cps(50Pa・s)の粘度を有していた。ラパマイシンと混合後、直ちに８％グルタルアルデヒドをスラリーに添加する（スラリー１リットルあたり100-350ml）。水性スラリーは均一にし、脱気しなければならず、pHは6.0-7.1に調製する。溶液を定常的に激しく混合し、ポンプで非固着性表面に分散させおよそ2mm厚のフィルムを形成させる。全ての手順は４℃の温度にて行う。次にフィルムを45℃付近の温度にて15Torr（２kPa）の圧力で残存湿分が総質量の約10％未満になるまで約３〜７時間乾燥させる。薬剤溶液塗布および乾燥工程をさらに３回繰り返す。
【手続補正１３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５３】
マトリックスからのラパマイシン放出速度を調べるため、サンプルを0.066Mのリン酸バッファー（pH7.4）により、37℃にて24時間洗滌し、1.88cm2の面積を有するディスク形態に切断し、0.14M NaCl、0.05M Trisバッファー、0.5％アルブミン、0.1mg/mlコラゲナーゼ、pH7.0、を含む24ウェルの培養皿に入れる。コラゲナーゼはコラーゲンマトリックスの腐蝕を増加させ、ラパマイシンの放出を容易にするために添加する。種々の時間間隔でウェルから一部を集める。
分散形態と結合形態の組合せも調製する。これらのすべての形態においてラパマイシンの含量は5.0 μg/cm2である。サンプルをウェルに入れ血清を含む1mlの溶出培地を入れる。１時間毎に少量を採取する。
ラパマイシンの含量はFerronらの方法（Ferron GM, Conway WDとJusko WJ., Lipohilic benzamide and anilide derivatives as high-performance liquid chromatography internal standard: application to sirolimus (rapamycin) determination [高性能液体クロマトグラフィーの内部標準としての疎水性ベンザミド及びアニリド：シロリムス（ラパマイシン）測定への応用]、J Chromatogr. B. Biomed Sci. Appl. 1997;Dec703:243-251）に従って測定する。これらの測定はバッチアッセイを用いて行い、従って0ml/分の流速における放出を表す。結果は表６に示し、図14に図示される（抗増殖薬の濃度は μg/mlで表してある）。
【手続補正１４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５５】
他の研究室においても、in vivoにおいて３ μg/gの濃度でゲンタマイシンで飽和させ、筋肉組織に移植したコラーゲンは28日間にわたって抗生物質を血液中にデリバリーし得ることが示された。しかしながら濃度は最適よりも低かった（Mehta S, Humphrey JS, Schenkman DIら、”Gentamycin distribution from a collagen carrier”(コラーゲン担体からのゲンタマイシン分配)、J. Orthop. Res. 1996; 14:749-754）。血管周囲腔におけるコラゲナーゼの濃度の低さおよび血管周辺流の低さ（僅かに一日数ml）を知れば、ラパマイシンで飽和させたマトリックス材料が、数週間の間、抗増殖薬をSMC増殖進行を防止しこれと対抗するために効果的な局所的濃度に維持するであろうin vivoデリバリーキネティクスを生じさせるかも知れないことが理論付けられる。SMCに対する阻害濃度は0.001〜0.005 μg/ml培地の範囲であろう。このようなレベルはin vitroにおいて３週間の間満たされ、またはこれを上回る。さらに、コラーゲンマトリックスに分散されたラパマイシンは１ヶ月またはそれ以上の間抗増殖効果を示し得る。最後に、結合および組合せ形態はマトリックスの完全な腐蝕まで治療を支持することができる。
【手続補正１５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５８】
2004523537.tif 000003
【手続補正１６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６１】
実施例１０．コラーゲンマトリックスと組み合わせたラパマイシンおよびヘパリンの組合せの抗増殖効果
マトリックス内で組み合わせた種々の構成成分の抗増殖効果は相乗効果を示し得る。分散ラパマイシン、可溶性および固定化ヘパリンの組合せを使用する。ヘパリンの固定化のため、5mlの冷却したヘパリン溶液（濃度1mg/ml〜10mg/ml、好ましくは5mg/ml）を５〜20ml（好ましくは11.4ml）のアクリル酸クロルアンヒドリドとおよそ１分あたり１μl（好ましくは分あたり2.5 μl）の速度で混合する。添加後、混合物を温度４〜８℃にて30分間撹拌する。ヘパリン化コラーゲンをリン酸緩衝生理食塩水pH7.4で充分に洗滌する。エオジンAを用いた比色アッセイを用いてマトリックス上に固定されたヘパリンの濃度を決定する。この方法を用いて、0.01mg/cm2〜0.1mg/cm2がマトリックスに共有結合される。
【手続補正１７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６４】
2004523537.tif 000004
【手続補正１８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６５】
実施例１２．
マクロ多孔性およびミクロ多孔性の組合せは本装置の容量を増加させ得る。コラーゲンおよびフィブリンマトリックスを混合してそのような組合せを得た。加えて、コラーゲンの優れた機械的特性はフィブリンの安定性を改善した。フィブリン-ラパマイシン装荷マトリックスを調製するために（150μg/cm2のラパマイシン密度）、表４及び５に示した組成物を使用した。フィブリンの第１の乾燥層形成後、コラーゲン、ラパマイシンおよびヘパリンの第２の層を実施例４に記載したように形成させた（ラパマイシン密度128μg/cm2、ヘパリン密度5000U/cm2）。医薬を装荷したコラーゲンフィブリンシース（厚さ２mm）を管状構造物として形成し、高濃度の（25％）グルタルアルデヒドを１分間用いて外部架橋した。乾燥後、図４に示したらせん形態スリーブを調製した。このスリーブを１０回平面状にしたが、らせん形態は各場合に回復した。最終スリーブのラパマイシン容量は143μg/cm2であった。in vitroヘパリン溶出は７日間継続した。
【手続補正１９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６９】
2004523537.tif 000005
【手続補正２０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００７０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００７０】
2004523537.tif 000006
【手続補正２１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００７３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００７３】
【図１】図1A、1Bは本発明の好ましい実施態様を図示したものである。
【図２】図2Aおよび2Bは、本発明の別の実施態様を図示したものであり、外部支持体または骨格構造が採用されている。
【図３】図3A-Cは本発明の自己かみ合わせ連結態様を図示したものである。
【図４】本発明の別の自己かみ合わせ連結設計の例である。
【図５】スリーブの形状の維持を補助する外部ワイヤー支持体または枠組みを含む、図1A-1B／2A-2Bに示した基本装置を示す。
【図６】種々の脈管修復必要性の観点から、本発明の薬剤溶出スリーブの可能な種々の配置を図示したものである。
【図７】種々の脈管修復必要性の観点から、本発明の薬剤溶出スリーブの可能な種々の配置を図示したものである。
【図８】種々の脈管修復必要性の観点から、本発明の薬剤溶出スリーブの可能な種々の配置を図示したものである。
【図９】種々の脈管修復必要性の観点から、本発明の薬剤溶出スリーブの可能な種々の配置を図示したものである。
【図１０】種々の脈管修復必要性の観点から、本発明の薬剤溶出スリーブの可能な種々の配置を図示したものである。
【図１１】種々の脈管修復必要性の観点から、本発明の薬剤溶出スリーブの可能な種々の配置を図示したものである。
【図１２】種々の脈管修復必要性の観点から、本発明の薬剤溶出スリーブの可能な種々の配置を図示したものである。
【図１３】種々の脈管修復必要性の観点から、本発明の薬剤溶出スリーブの可能な種々の配置を図示したものである。
【図１４】テトラサイクリンおよびラパマイシンで飽和させたコラーゲンの放出速度を示す。ラパマイシンは４種の異なる形式（方法）を用いてコラーゲンマトリックスと併存させた。Ｙ軸上の数値はμg/mlで表した薬剤濃度を示す。Ａ＝テトラサイクリンで飽和させたコラーゲン；Ｂ＝ラパマイシンで飽和させたコラーゲン；Ｃ＝コラーゲンに分散させたラパマイシン；Ｄ＝ラパマイシンを結合させたコラーゲン；Ｅ＝分散ラパマイシン及び結合ラパマイシン形態の組合せ。
【図１５】種々の抗増殖作用因子を結合させたコラーゲンマトリックスを用いた平滑筋細胞の増殖阻害の比較。Y軸上の数値は細胞数を表す。Ａ＝対照；Ｂ＝コラーゲン＋アクチノマイシンD；Ｃ＝コラーゲン＋ラパマイシン。
【図１６】３用量のラパマイシン、タクロリムスおよびパクリタキセルのヒト平滑筋細胞に対する効果の比較。
【図１７】３用量のラパマイシン、タクロリムスおよびパクリタキセルのヒト内皮細胞に対する効果の比較。
【図１８】図18(A)、18(B)は本発明によって得られた結果のいくつかを示す。
【図１９】図19(A)、19(B)は本発明によって得られた結果のいくつかを示す。
【図２０】本発明によって得られた結果のいくつかを示す。