【手続補正書】
【提出日】平成17年2月16日(2005.2.16)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００８３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００８３】
アネキシンＶのホモダイマーは図１に模式的に示され（５’−３’センス鎖）（配列番号：４）、且つ配列番号：６により表されるアミノ酸配列をコードするＤＮＡ構築物を用いて生成することができる。この実施例においては、アネキシンＶ遺伝子をＥｃｏＲＩ及びＢｇｌＩＩ部位において発現ベクターｐＣＭＶＦＬＡＧ２（シグマアルドリッチから利用可能）にクローン化する。アネキシンＶ配列の前と後の正確な配列は未知であり、「ｘ」と記す。よって、正確なコドンの整列化を保証するための修飾の前に、上記構築物を配列決定する必要がある。ｐＣＭＶＦＬＡＧ２ベクターは、内蔵の（built in）強力なプロモーター及び開始配列（Ｋｏｚａｋ）及び開始（ＡＴＧ）を付属する。各アネキシンＶ遺伝子前の開始コドンは、よって、除去されなければならず、そして厳重な発現のための停止コドンを第２アネキシンＶ遺伝子の末端に添加するべきである。当該ベクターは、蛋白質の精製のために使用できる８−アミノ酸のペプチド配列も付属する（ａｓｐ−ｔｙｒ−ｌｙｓ−ａｓｐ−ａｓｐ−ａｓｐ−ａｓｐ−ｌｙｓ）（配列番号：９）。グリシン−セリンの回転（swivel）末端を有する１４−アミノ酸のスペーサーは、一列に並んだ遺伝子間の最適な回転を可能にする。制限部位ＰｖｕＩＩとＳｃａＩの追加は、必要であれば上記リンカーの除去を可能にする。プロテアーゼ部位の追加は発現に続く一列の蛋白質の分割を可能にする。ＰｒｅＳｃｉｓｓｉｏｎ（商標）プロテアーゼはアマシャムファルマシアバイオテックから利用可能であり、一列に並んだ蛋白質を分割するのに使用できる。
アネキシンＶは以下のアミノ酸配列を有する：
Ala Gln Val Leu Arg Gly Thr Val Thr Asp Phe Pro Gly Phe Asp Glu
Arg Ala Asp Ala Glu Thr Leu Arg Lys Ala Met Lys Gly Leu Gly Thr
Asp Glu Glu Ser Ile Leu Thr Leu Leu Thr Ser Arg Ser Asn Ala Gln
Arg Gln Glu Ile Ser Ala Ala Phe Lys Thr Leu Phe Gly Arg Asp Leu
Leu Asp Asp Leu Lys Ser Glu Leu Thr Gly Lys Phe Glu Lys Leu Ile
Val Ala Leu Met Lys Pro Ser Arg Leu Tyr Asp Ala Tyr Glu Leu Lys
His Ala Leu Lys Gly Ala Gly Thr Asn Glu Lys Val Leu Thr Glu Ile
Ile Ala Ser Arg Thr Pro Glu Glu Leu Arg Ala Ile Lys Gln Val Tyr
Glu Glu Glu Tyr Gly Ser Ser Leu Glu Asp Asp Val Val Gly Asp Thr
Ser Gly Tyr Tyr Gln Arg Met Leu Val Val Leu Leu Gln Ala Asn Arg
Asp Pro Asp Ala Gly Ile Asp Glu Ala Gln Val Glu Gln Asp Ala Gln
Ala Leu Phe Gln Ala Gly Glu Leu Lys Trp Gly Thr Asp Glu Glu Lys
Phe Ile Thr Ile Phe Gly Thr Arg Ser Val Ser His Leu Arg Lys Val
Phe Asp Lys Tyr Met Thr Ile Ser Gly Phe Gln Ile Glu Glu Thr Ile
Asp Arg Glu Thr Ser Gly Asn Leu Glu Gln Leu Leu Leu Ala Val Val
Lys Ser Ile Arg Ser Ile Pro Ala Tyr Leu Ala Glu Thr Leu Tyr Tyr
Ala Met Lys Gly Ala Gly Thr Asp Asp His Thr Leu Ile Arg Val Met
Val Ser Arg Ser Glu Ile Asp Leu Phe Asn Ile Arg Lys Glu Phe Arg
Lys Asn Phe Ala Thr Ser Leu Tyr Ser Met Ile Lys Gly Asp Thr Ser
Gly Asp Tyr Lys Lys Ala Leu Leu Leu Leu Cys Gly Glu Asp Asp
（配列番号：３）。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００８４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００８４】
図１に例示されたＤＮＡ構築物内に示されるアネキシンＶのヌクレオチド配列は以下のとおりである：
ＧＣＡＣＡＧＧＴＴＣＴＣＡＧＡＧＧＣＡＣＴＧＴＧＡＣＴＧＡＣＴＴＣＣＣＴＧＧＡＴＴＴＧＡＴＧＡＧＣＧＧＧＣＴＧＡＴＧＣＡＧＡＡＡＣＴＣＴＴＣＧＧＡＡＧＧＣＴＡＴＧＡＡＡＧＧＣＴＴＧＧＧＣＡＣＡＧＡＴＧＡＧＧＡＧＡＧＣＡＴＣＣＴＧＡＣＴＣＴＧＴＴＧＡＣＡＴＣＣＣＧＡＡＧＴＡＡＴＧＣＴＣＡＧＣＧＣＣＡＧＧＡＡＡＴＣＴＣＴＧＣＡＧＣＴＴＴＴＡＡＧＡＣＴＣＴＧＴＴＴＧＧＣＡＧＧＧＡＴＣＴＴＣＴＧＧＡＴＧＡＣＣＴＧＡＡＡＴＣＡＧＡＡＣＴＡＡＣＴＧＧＡＡＡＡＴＴＴＧＡＡＡＡＡＴＴＡＡＴＴＧＴＧＧＣＴＣＴＧＡＴＧＡＡＡＣＣＣＴＣＴＣＧＧＣＴＴＴＡＴＧＡＴＧＣＴＴＡＴＧＡＡＣＴＧＡＡＡＣＡＴＧＣＣＴＴＧＡＡＧＧＧＡＧＣＴＧＧＡＡＣＡＡＡＴＧＡＡＡＡＡＧＴＡＣＴＧＡＣＡＧＡＡＡＴＴＡＴＴＧＣＴＴＣＡＡＧＧＡＣＡＣＣＴＧＡＡＧＡＡＣＴＧＡＧＡＧＣＣＡＴＣＡＡＡＣＡＡＧＴＴＴＡＴＧＡＡＧＡＡＧＡＡＴＡＴＧＧＣＴＣＡＡＧＣＣＴＧＧＡＡＧＡＴＧＡＣＧＴＧＧＴＧＧＧＧＧＡＣＡＣＴＴＣＡＧＧＧＴＡＣＴＡＣＣＡＧＣＧＧＡＴＧＴＴＧＧＴＧＧＴＴＣＴＣＣＴＴＣＡＧＧＣＴＡＡＣＡＧＡＧＡＣＣＣＴＧＡＴＧＣＴＧＧＡＡＴＴＧＡＴＧＡＡＧＣＴＣＡＡＧＴＴＧＡＡＣＡＡＧＡＴＧＣＴＣＡＧＧＣＴＴＴＡＴＴＴＣＡＧＧＣＴＧＧＡＧＡＡＣＴＴＡＡＡＴＧＧＧＧＧＡＣＡＧＡＴＧＡＡＧＡＡＡＡＧＴＴＴＡＴＣＡＣＣＡＴＣＴＴＴＧＧＡＡＣＡＣＧＡＡＧＴＧＴＧＴＣＴＣＡＴＴＴＧＡＧＡＡＡＧＧＴＧＴＴＴＧＡＣＡＡＧＴＡＣＡＴＧＡＣＴＡＴＡＴＣＡＧＧＡＴＴＴＣＡＡＡＴＴＧＡＧＧＡＡＡＣＣＡＴＴＧＡＣＣＧＣＧＡＧＡＣＴＴＣＴＧＧＣＡＡＴＴＴＡＧＡＧＣＡＡＣＴＡＣＴＣＣＴＴＧＣＴＧＴＴＧＴＧＡＡＡＴＣＴＡＴＴＣＧＡＡＧＴＡＴＡＣＣＴＧＣＣＴＡＣＣＴＴＧＣＡＧＡＧＡＣＣＣＴＣＴＡＴＴＡＴＧＣＴＡＴＧＡＡＧＧＧＡＧＣＴＧＧＧＡＣＡＧＡＴＧＡＴＣＡＴＡＣＣＣＴＣＡＴＣＡＧＡＧＴＣＡＴＧＧＴＴＴＣＣＡＧＧＡＧＴＧＡＧＡＴＴＧＡＴＣＴＧＴＴＴＡＡＣＡＴＣＡＧＧＡＡＧＧＡＧＴＴＴＡＧＧＡＡＧＡＡＴＴＴＴＧＣＣＡＣＣＴＣＴＣＴＴＴＡＴＴＣＣＡＴＧＡＴＴＡＡＧＧＧＡＧＡＴＡＣＡＴＣＴＧＧＧＧＡＣＴＡＴＡＡＧＡＡＡＧＣＴＣＴＴＣＴＧＣＴＧＣＴＣＴＧＴＧＧＡＧＡＡＧＡＴＧＡＣ（配列番号：１）。
【手続補正３】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図１】
2004528025.tif 000001