【手続補正書】
【提出日】令和3年2月9日(2021.2.9)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ドメインリンカーによって連結された2つのコラーゲン結合ドメインと、治療薬剤リンカーによって前記コラーゲン結合ドメインの少なくとも1つに連結された治療薬剤とを含むコラーゲン結合治療薬剤であって、前記コラーゲン結合薬剤が、コラゲナーゼ活性を欠き、前記2つのコラーゲン結合ドメインの各々が、配列番号:1−39のポリペプチドのいずれか1つ、配列番号:1−39のいずれか1つと少なくとも90％の配列同一性を有するポリペプチド、および配列番号:1−39のいずれか1つの連続する少なくとも8つのアミノ酸のフラグメントから成る群から選択される、前記コラーゲン結合治療薬剤。
【請求項２】
前記治療薬剤が、FGF、副甲状腺ホルモン（PTH）、PTH/PTHrP受容体アゴニスト、PTH/PTHrP受容体アンタゴニスト、骨形成タンパク質（BMP）、G-CSF、BMP-2、BMP-3、抗スクレロスチン抗体、成長ホルモン、IGF-1、VEGF、TGF-β、KGF、TGF-α、TGF-β1、TGF-β受容体、CT、GH、GM-CSF、EGF、PDGF、セリプロロール、アクチビン、および結合組織増殖因子から成る群から選択される、請求項1に記載のコラーゲン結合薬剤。
【請求項３】
前記コラーゲン結合ドメインの1つが、配列番号:15−30のいずれか1つのポリペプチド、配列番号:15−30のいずれか1つと少なくとも90％の配列同一性を有するポリペプチド、および配列番号:15−30のいずれか1つの連続する少なくとも8つのアミノ酸のフラグメントから成る群から選択され、他方のコラーゲン結合ドメインが、配列番号:1−14および31−39のいずれか1つのポリペプチド、配列番号:1−14および31−39のいずれか1つと少なくとも90％の配列同一性を有するポリペプチド、または配列番号:1−14および31−39のいずれか1つの連続する少なくとも8つのアミノ酸のフラグメントから成る群から選択される、請求項1又は2に記載のコラーゲン結合薬剤。
【請求項４】
前記2つのコラーゲン結合ドメインが、配列番号:15−30のいずれか1つ、配列番号:15−30のいずれか1つと少なくとも90％の配列同一性を有するポリペプチド、および配列番号:15−30のいずれか1つの連続する少なくとも8つのアミノ酸のフラグメントから成る群から選択される、請求項1〜2のいずれか1項に記載のコラーゲン結合薬剤。
【請求項５】
前記2つのコラーゲン結合ドメインが、配列番号:1−14および31−39のいずれか1つのポリペプチド、配列番号:1−14および31−39のいずれか1つと少なくとも90％の配列同一性を有するポリペプチド、または配列番号:1−14および31−39のいずれか1つの連続する少なくとも8つのアミノ酸のフラグメントから成る群から選択される、請求項1〜2のいずれか1項に記載のコラーゲン結合薬剤。
【請求項６】
前記コラーゲン結合薬剤が、配列番号:40−47のポリペプチドのいずれか1つ、配列番号:40−47のいずれか1つと少なくとも90％の配列同一性を有するポリペプチド、および配列番号:40−47のいずれか1つの連続する少なくとも8つのアミノ酸のフラグメントから成る群から選択されるポリペプチドを含む、請求項1〜2のいずれか1項に記載のコラーゲン結合薬剤。
【請求項７】
前記ドメインリンカーが、ポリペプチドを含む、請求項1〜6のいずれか1項に記載のコラーゲン結合薬剤。
【請求項８】
前記ドメインリンカーが、配列番号:48−55のポリペプチドのいずれか1つ、または配列番号:48−55のポリペプチドのいずれか1つと少なくとも80％の配列同一性を有するポリペプチドから成る群から選択されるポリペプチドを含む、請求項1〜7のいずれか1項に記載のコラーゲン結合薬剤。
【請求項９】
前記治療薬剤が、ポリペプチド、ホルモン、増殖因子、サイトカイン、小分子、ポリヌクレオチド、炭水化物、および脂質から成る群から選択される、請求項1〜8のいずれか1項に記載のコラーゲン結合薬剤。
【請求項１０】
前記治療薬剤が、ポリペプチドを含む、請求項1〜9のいずれか1項に記載のコラーゲン結合薬剤。
【請求項１１】
前記治療薬剤が、FGF、副甲状腺ホルモン（PTH）、PTH/PTHrP受容体アゴニスト、およびPTH/PTHrP受容体アンタゴニストから成る群から選択される、請求項1〜10のいずれか1項に記載のコラーゲン結合薬剤。
【請求項１２】
前記治療薬剤リンカーが、ポリペプチドを含む、請求項1〜11のいずれか1項に記載のコラーゲン結合薬剤。
【請求項１３】
前記治療薬剤のC末端が、前記治療薬剤リンカーによって前記コラーゲン結合薬剤のN末端と連結される、請求項10〜12のいずれか1項に記載のコラーゲン結合薬剤。
【請求項１４】
請求項1−13に記載のコラーゲン結合薬剤のいずれか1つおよび医薬担体を含む、医薬組成物。
【請求項１５】
ある状態を治療するための医薬の製造における、請求項1−13に記載のコラーゲン結合薬剤のいずれか1つまたは請求項14に記載の医薬組成物の使用。
【請求項１６】
前記状態が、副甲状腺機能亢進、毛の症状（過剰な毛の増殖または毛の消失）、コラーゲン症、創傷、骨の症状、脊椎固定、虚血性心疾患、抹消神経障害および脊椎損傷から成る群から選択される、請求項15に記載の使用。
【請求項１７】
前記状態が、骨形成不全、スティックラー症候群、エーレルス-ダンロー症候群、アルポート症候群、キャフェイ病、および限局性コラーゲンまたは軟骨損傷から成る群から選択されるコラーゲン症を含む、請求項15〜16のいずれか1項に記載の使用。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４９】
実施例2の参考文献
[1] Khan SN, Bostrom MP, Lane JM: Bone growth factors.Orthop Clin North Am 2000;31:375-388.
[2] Ueno M, Urabe K, Naruse K, Uchida K, Minehara H, Yamamoto T, Steck R, Gregory L, Wullschleger ME, Schuetz MA, Itoman M: Influence of internal fixator stiffness on murine fracture healing: two types of fracture healing lead to two distinct cellular events and FGF-2 expressions.Exp Anim 2011;60:79-87.
[3] Kato T, Kawaguchi H, Hanada K, Aoyama I, Hiyama Y, Nakamura T, Kuzutani K, Tamura M, Kurokawa T, Nakamura K: Single local injection of recombinant fibroblast growth factor-2 stimulates healing of segmental bone defects in rabbits.J Orthop Res 1998;16:654-659.
[4] Kawaguchi H, Kurokawa T, Hanada K, Hiyama Y, Tamura M, Ogata E, Matsumoto T: Stimulation of fracture repair by recombinant human basic fibroblast growth factor in normal and streptozotocin-diabetic rats.Endocrinology 1994;135:774-781.
[5] Kawaguchi H, Jingushi S, Izumi T, Fukunaga M, Matsushita T, Nakamura T, Mizuno K, Nakamura T, Nakamura K: Local application of recombinant human fibroblast growth factor-2 on bone repair: a dose-escalation prospective trial on patients with osteotomy.J Orthop Res 2007;25:480-487.
[6] Kawaguchi H, Oka H, Jingushi S, Izumi T, Fukunaga M, Sato K, Matsushita T, Nakamura K: A local application of recombinant human fibroblast growth factor 2 for tibial shaft fractures: A randomized, placebo-controlled trial.J Bone Miner Res 2010;25:2735-2743.
[7] Bauer R, Wilson JJ, Philominathan ST, Davis D, Matsushita O, Sakon J: Structural comparison of ColH and ColG collagen-binding domains from Clostridium histolyticum.J Bacteriol 2013;195:318-327.
[8] Bauer R, Janowska K, Taylor K, Jordan B, Gann S, Janowski T, Latimer EC, Matsushita O, Sakon J: Structures of three polycystic kidney disease-like domains from Clostridium histolyticum collagenases ColG and ColH.Acta Crystallogr D Biol Crystallogr 2015;71:565-577.
[9] Uchida K, Matsushita O, Naruse K, Mima T, Nishi N, Hattori S, Ogura T, Inoue G, Tanaka K, Takaso M: Acceleration of periosteal bone formation by human basic fibroblast growth factor containing a collagen-binding domain from Clostridium histolyticum collagenase.J Biomed Mater Res A 2014;102:1737-1743.
[10] Uchida K, Matsushita O, Nishi N, Inoue G, Horikawa K, Takaso M: Enhancement of periosteal bone formation by basic fibroblast-derived growth factor containing polycystic kidney disease and collagen-binding domains from Clostridium histolyticum collagenase.J Tissue Eng Regen Med 3-18-2015.
[11] Sekiguchi H, Uchida K, Inoue G, Matsushita O, Saito W, Aikawa J, Tanaka K, Fujimaki H, Miyagi M, Takaso M: Acceleration of bone formation during fracture healing by poly(pro-hyp-gly)10 and basic fibroblast growth factor containing polycystic kidney disease and collagen-binding domains from Clostridium histolyticum collagenase.J Biomed Mater Res A 2016;104:1372-1378.
[12] Fukata Y, Itoh A, Nonaka Y, Ogawa T, Nakamura T, Matsushita O, Nishi N: Direct cytocidal effect of galectin-9 localized on collagen matrices on human immune cell lines.Biochim Biophys Acta 2014;1840:1892-1901.
[13] Kishimoto T, Morihara Y, Osanai M, Ogata S, Kamitakahara M, Ohtsuki C, Tanihara M: Synthesis of poly(Pro-Hyp-Gly)(n) by direct poly-condensation of (Pro-Hyp-Gly)(n), where n=1, 5, and 10, and stability of the triple-helical structure.Biopolymers 10-15-2005;79:163-172.
[14] Saito W, Uchida K, Matsushita O, Inoue G, Sekiguchi H, Aikawa J, Fujimaki H, Takaso M: Acceleration of callus formation during fracture healing using basic fibroblast growth factor-kidney disease domain-collagen-binding domain fusion protein combined with allogenic demineralized bone powder.J Orthop Surg Res 2015;10:59.
[15] Wilson JJ, Matsushita O, Okabe A, Sakon J: A bacterial collagen-binding domain with novel calcium-binding motif controls domain orientation.EMBO J 4-15-2003;22:1743-1752.
[16] Saito W, Uchida K, Ueno M, Matsushita O, Inoue G, Nishi N, Ogura T, Hattori S, Fujimaki H, Tanaka K, Takaso M: Acceleration of bone formation during fracture healing by injectable collagen powder and human basic fibroblast growth factor containing a collagen-binding domain from Clostridium histolyticum collagenase.J Biomed Mater Res A 2014;102:3049-3055.
[17] Matsushita O, Koide T, Kobayashi R, Nagata K, Okabe A: Substrate recognition by the collagen-binding domain of Clostridium histolyticum class I collagenase.J Biol Chem 3-23-2001;276:8761-8770.
[18] Han X, Zhang W, Gu J, Zhao H, Ni L, Han J, Zhou Y, Gu Y, Zhu X, Sun J, Hou X, Yang H, Dai J, Shi Q: Accelerated postero-lateral spinal fusion by collagen scaffolds modified with engineered collagen-binding human bone morphogenetic protein-2 in rats.PLoS One 2014;9:e98480.
[19] Shiozaki Y, Kitajima T, Mazaki T, Yoshida A, Tanaka M, Umezawa A, Nakamura M, Yoshida Y, Ito Y, Ozaki T, Matsukawa A: Enhanced in vivo osteogenesis by nanocarrier-fused bone morphogenetic protein-4.Int J Nanomedicine 2013;8:1349-1360.
本発明の好ましい態様は、下記の通りである。
〔１〕ドメインリンカーによって連結された2つのコラーゲン結合ドメインと、治療薬剤リンカーによって前記コラーゲン結合ドメインの少なくとも1つに連結された治療薬剤とを含むコラーゲン結合治療薬剤であって、前記コラーゲン結合薬剤が、コラゲナーゼ活性を欠き、前記2つのコラーゲン結合ドメインの各々が、配列番号:1−39のポリペプチドのいずれか1つ、配列番号:1−39のいずれか1つと少なくとも90％の配列同一性を有するポリペプチド、および配列番号:1−39のいずれか1つの連続する少なくとも8つのアミノ酸のフラグメントから成る群から選択される、前記コラーゲン結合治療薬剤。
〔２〕前記治療薬剤が、FGF、副甲状腺ホルモン（PTH）、PTH/PTHrP受容体アゴニスト、PTH/PTHrP受容体アンタゴニスト、骨形成タンパク質（BMP）、G-CSF、BMP-2、BMP-3、抗スクレロスチン抗体、成長ホルモン、IGF-1、VEGF、TGF-β、KGF、TGF-α、TGF-β1、TGF-β受容体、CT、GH、GM-CSF、EGF、PDGF、セリプロロール、アクチビン、および結合組織増殖因子から成る群から選択される、前記〔1〕に記載のコラーゲン結合薬剤。
〔３〕前記コラーゲン結合ドメインの1つが、配列番号:15−30のいずれか1つのポリペプチド、配列番号:15−30のいずれか1つと少なくとも90％の配列同一性を有するポリペプチド、および配列番号:15−30のいずれか1つの連続する少なくとも8つのアミノ酸のフラグメントから成る群から選択され、他方のコラーゲン結合ドメインが、配列番号:1−14および31−39のいずれか1つのポリペプチド、配列番号:1−14および31−39のいずれか1つと少なくとも90％の配列同一性を有するポリペプチド、または配列番号:1−14および31−39のいずれか1つの連続する少なくとも8つのアミノ酸のフラグメントから成る群から選択される、前記〔1〕又は〔2〕に記載のコラーゲン結合薬剤。
〔４〕前記2つのコラーゲン結合ドメインが、配列番号:15−30のいずれか1つ、配列番号:15−30のいずれか1つと少なくとも90％の配列同一性を有するポリペプチド、および配列番号:15−30のいずれか1つの連続する少なくとも8つのアミノ酸のフラグメントから成る群から選択される、前記〔1〕〜〔3〕のいずれか1項に記載のコラーゲン結合薬剤。
〔５〕前記2つのコラーゲン結合ドメインが、配列番号:1−14および31−39のいずれか1つのポリペプチド、配列番号:1−14および31−39のいずれか1つと少なくとも90％の配列同一性を有するポリペプチド、または配列番号:1−14および31−39のいずれか1つの連続する少なくとも8つのアミノ酸のフラグメントから成る群から選択される、前記〔1〕〜〔4〕のいずれか1項に記載のコラーゲン結合薬剤。
〔６〕前記コラーゲン結合薬剤が、配列番号:40−47のポリペプチドのいずれか1つ、配列番号:40−47のいずれか1つと少なくとも90％の配列同一性を有するポリペプチド、および配列番号:40−47のいずれか1つの連続する少なくとも8つのアミノ酸のフラグメントから成る群から選択されるポリペプチドを含む、前記〔1〕〜〔5〕のいずれか1項に記載のコラーゲン結合薬剤。
〔７〕前記ドメインリンカーが、ポリペプチドを含む、前記〔1〕〜〔6〕のいずれか1項に記載のコラーゲン結合薬剤。
〔８〕前記ドメインリンカーが、配列番号:48−55のポリペプチドのいずれか1つ、または配列番号:48−55のポリペプチドのいずれか1つと少なくとも80％の配列同一性を有するポリペプチドから成る群から選択されるポリペプチドを含む、前記〔1〕〜〔7〕のいずれか1項に記載のコラーゲン結合薬剤。
〔９〕前記治療薬剤が、ポリペプチド、ホルモン、増殖因子、サイトカイン、小分子、ポリヌクレオチド、炭水化物、および脂質から成る群から選択される、前記〔1〕〜〔8〕のいずれか1項に記載のコラーゲン結合薬剤。
〔１０〕前記治療薬剤が、ポリペプチドを含む、前記〔1〕〜〔9〕のいずれか1項に記載のコラーゲン結合薬剤。
〔１１〕前記治療薬剤が、FGF、副甲状腺ホルモン（PTH）、PTH/PTHrP受容体アゴニスト、およびPTH/PTHrP受容体アンタゴニストから成る群から選択される、前記〔1〕〜〔10〕のいずれか1項に記載のコラーゲン結合薬剤。
〔１２〕前記治療薬剤リンカーが、ポリペプチドを含む、前記〔1〕〜〔11〕のいずれか1項に記載のコラーゲン結合薬剤。
〔１３〕前記治療薬剤のC末端が、前記治療薬剤リンカーによって前記コラーゲン結合薬剤のN末端と連結される、前記〔10〕〜〔12〕のいずれか1項に記載のコラーゲン結合薬剤。
〔１４〕前記〔1〕−〔13〕に記載のコラーゲン結合薬剤のいずれか1つおよび医薬担体を含む、医薬組成物。
〔１５〕ある状態を治療する方法であって、前記〔1〕−〔13〕に記載のコラーゲン結合薬剤のいずれか1つまたは前記〔14〕に記載の医薬組成物を、前記状態の治療に有効な量で対象に投与する工程を含む、前記方法。
〔１６〕前記対象が、哺乳動物である、前記〔15〕に記載の方法。
〔１７〕前記哺乳動物が、ヒトである、前記〔16〕に記載の方法。
〔１８〕前記状態が、副甲状腺機能亢進、毛の症状（過剰な毛の増殖または毛の消失）、コラーゲン症、創傷、骨の症状、脊椎固定、虚血性心疾患、抹消神経障害および脊椎損傷から成る群から選択される、前記〔15〕〜〔17〕のいずれか1項に記載の方法。
〔１９〕前記状態が、骨形成不全、スティックラー症候群、エーレルス-ダンロー症候群、アルポート症候群、キャフェイ病、および限局性コラーゲンまたは軟骨損傷から成る群から選択されるコラーゲン症を含む、前記〔15〕〜〔17〕のいずれか1項に記載の方法。
〔２０〕ある状態を治療するための医薬の製造における、前記〔1〕〜〔14〕のいずれか1項に記載の組成物の使用。