【手続補正書】
【提出日】令和3年11月8日(2021.11.8)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
融合タンパク質をコードする核酸分子であって、（ａ）Ｎ末端シグナルペプチドをコードする第一のポリヌクレオチド配列、およびこれが作動可能に連結する（ｂ）前記Ｎ末端シグナルペプチドにとって異種であるポリペプチドをコードする第二のポリヌクレオチド配列を含み、ここで、前記第一のポリヌクレオチド配列が、
（ｉ）配列番号１、３、５、７、９、１９、２３、２５、２７もしくは２９と少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％もしくは９０％の配列同一性を有するポリヌクレオチド配列；または
（ｉｉ）配列番号１、３、５、７、９、１９、２３、２５、２７もしくは２９の少なくとも４５、９０、１３５、１８０、２２５、２７０、３１５もしくは３４５個の連続したヌクレオチドからなる断片を含むポリヌクレオチド配列；
を含み、
前記Ｎ末端シグナルペプチドが、前記融合タンパク質をパエニバチルス（Ｐａｅｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ）内生胞子の胞子表面にターゲティングすることが可能である、前記核酸分子。
【請求項２】
前記断片が、配列番号１、３、５、７、９、１９、２３、２５、２７または２９の最初のヌクレオチドから始まる、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項３】
前記第一のポリヌクレオチド配列が、配列番号１、７、１９または２７と少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％または９０％の配列同一性を有するポリヌクレオチド配列を含む、請求項１または２に記載の核酸分子。
【請求項４】
前記断片が、配列番号２または配列番号８のアミノ酸１〜１５、または１〜３０、１〜４５、１〜６０、１〜７５、１〜９０、１〜１０５、または１〜１１５をコードする、請求項１〜３のいずれか一項に記載の核酸分子。
【請求項５】
前記Ｎ末端シグナルペプチドにとって異種である前記ポリペプチドが、
（ａ）植物成長刺激性タンパク質；
（ｂ）酵素；
（ｃ）タンパク質；
（ｄ）パエニバチルスにとって異種であるポリペプチド；
（ｅ）治療タンパク質；または
（ｆ）植物免疫刺激性タンパク質
を含む、請求項１〜４のいずれか一項に記載の核酸分子。
【請求項６】
（ａ）１もしくは複数のプロテアーゼ切断部位を含むポリペプチド（ここで、前記ポリペプチドは、前記Ｎ末端シグナルペプチドと前記Ｎ末端シグナルペプチドにとって異種である前記ポリペプチドとの間に位置する）；
（ｂ）選択可能マーカーを含むポリペプチド；
（ｃ）可視化マーカーを含むポリペプチド；
（ｄ）タンパク質認識／精製ドメインを含むポリペプチド；または
（ｅ）フレキシブルリンカーエレメントを含むポリペプチド（これは、前記Ｎ末端シグナルペプチドと前記Ｎ末端シグナルペプチドにとって異種である前記ポリペプチドとを接続する）
をコードする第三のポリヌクレオチド配列をさらに含む、請求項１〜５のいずれか一項に記載の核酸分子。
【請求項７】
前記パエニバチルス内生胞子が、
パエニバチルス種ＮＲＲＬ  Ｂ−５０９７２、パエニバチルス・テラエ（Ｐａｅｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ  ｔｅｒｒａｅ）、パエニバチルス・ポリミキサ（Ｐａｅｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐｏｌｙｍｙｘａ）もしくはパエニバチルス・ペオリアエ（Ｐａｅｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐｅｏｒｉａｅ）を含むパエニバチルス種により形成される内生胞子であるか；または
パエニバチルス種の１６Ｓ  ｒＲＮＡ遺伝子と少なくとも９７、９８もしくは９９％の同一性を共有する１６Ｓ  ｒＲＮＡ遺伝子を持つ細菌により形成される内生胞子である、請求項１〜６のいずれか一項に記載の核酸分子。
【請求項８】
前記第二のポリヌクレオチド配列およびパエニバチルスのうちの少なくとも１つにとって異種であるプロモーターエレメントに作動的に連結されている、請求項１〜７のいずれか一項に記載の核酸分子。
【請求項９】
Ｎ末端シグナルペプチドにとって異種であるポリペプチドに作動可能に連結された前記Ｎ末端シグナルペプチドを含む融合タンパク質であって、前記Ｎ末端シグナルペプチドが、
（ｉ）配列番号２、４、６、８、１０、１８、２０、２１、２２、２４、２６、２８、３０、３１もしくは３２のアミノ酸配列と少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％もしくは９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチド；または
（ｉｉ）配列番号２、４、６、８、１０、１８、２０、２１、２２、２４、２６、２８、３０、３１もしくは３２の少なくとも１５、３０、４５、６０、７５、９０、１０５もしくは１１５個の連続したアミノ酸からなる断片を含むポリペプチド；
を含み、
前記Ｎ末端シグナルペプチドが、前記融合タンパク質をパエニバチルス内生胞子の胞子表面にターゲティングすることが可能である、前記融合タンパク質。
【請求項１０】
前記断片が、配列番号２、４、６、８、１０、１８、２０、２１、２２、２４、２６、２８、３０、３１または３２の最初のアミノ酸から始まる、請求項９に記載の融合タンパク質。
【請求項１１】
前記ポリペプチド配列が、配列番号２、８、２０、２１、２２、２８、３１または３２と少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％または９０％の配列同一性を有する配列を含む、請求項９または１０に記載の融合タンパク質。
【請求項１２】
前記断片が、配列番号２、８、３１または３２のアミノ酸１〜１５、または１〜３０、１〜４５、１〜６０、１〜７５、１〜９０、１〜１０５、または１〜１１５を含む、請求項９〜１１のいずれか一項に記載の融合タンパク質。
【請求項１３】
前記パエニバチルス内生胞子が、
パエニバチルス種ＮＲＲＬ  Ｂ−５０９７２、パエニバチルス・テラエ、パエニバチルス・ポリミキサもしくはパエニバチルス・ペオリアエを含むパエニバチルス種により形成される内生胞子であるか；または、
パエニバチルス種の１６Ｓ  ｒＲＮＡ遺伝子と少なくとも９７、９８もしくは９９％の同一性を共有する１６Ｓ  ｒＲＮＡ遺伝子を持つ細菌により形成される内生胞子である、請求項９〜１２のいずれか一項に記載の融合タンパク質。
【請求項１４】
請求項１〜８のいずれか一項に記載の核酸分子を含む細菌染色体を含む、組換えパエニバチルス細胞。
【請求項１５】
請求項１〜８のいずれか一項に記載の核酸分子を含むベクターであって、前記ベクターが、プラスミド、人工染色体またはウイルスベクターを含む、前記ベクター。
【請求項１６】
請求項１〜８のいずれか一項に記載の核酸分子を含むベクターで形質転換された組換えパエニバチルス細胞。
【請求項１７】
前記パエニバチルス細胞が、
パエニバチルス種ＮＲＲＬ  Ｂ−５０９７２、パエニバチルス・テラエ、パエニバチルス・ポリミキサもしくはパエニバチルス・ペオリアエを含むパエニバチルス種であるか；または、
パエニバチルス種の１６Ｓ  ｒＲＮＡ遺伝子と少なくとも９７、９８もしくは９９％の同一性を共有する１６Ｓ  ｒＲＮＡ遺伝子を持つ細菌である、請求項１６に記載の組換えパエニバチルス細胞。
【請求項１８】
組成物であって、相乗的に有効な量で
ａ）請求項９〜１３のいずれか一項に記載の融合タンパク質を発現する１または複数の組換え内生胞子産生性パエニバチルス細胞（ここで、前記Ｎ末端シグナルペプチドにとって異種である前記ポリペプチドが、植物成長または免疫刺激性タンパク質を含む）を含み；および
ｂ）少なくとも１つの生物学的防除剤を含んでもよい
前記組成物。
【請求項１９】
請求項１〜８のいずれか一項に記載の核酸、請求項９〜１３のいずれか一項に記載の融合タンパク質、請求項１６もしくは１７に記載の組換え細菌細胞、または請求項１８に記載の組成物で処理された種子。
【請求項２０】
植物、種子、ヒトまたは動物を処理する方法であって、
組換えパエニバチルス細胞により産生される内生胞子を含む組成物を植物、種子、ヒトまたは動物に投与することを含み；
ここで、前記組換えパエニバチルス細胞が、請求項９〜１３のいずれか一項に記載の融合タンパク質を発現する、前記方法。
【請求項２１】
単離および／または精製された、請求項９〜１３のいずれか一項に記載の融合タンパク質を含む、組成物。