【手続補正書】
【提出日】令和3年9月17日(2021.9.17)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
第１のＲＮＡ成分、前記第１のＲＮＡ成分に共有結合した第２のＲＮＡ成分、並びに任意に、（ｉ）前記第１及び第２のＲＮＡ成分を共有結合する結合リボヌクレオチド配列、（ｉｉ）５’リーダー配列、並びに（ｉｉｉ）３’トレーラー配列のうちの１以上又はその全てを含むＲＮＡ分子であって、
前記第１のＲＮＡ成分は、５’から３’の順に、第１の５’リボヌクレオチド、第１のＲＮＡ配列、及び第１の３’リボヌクレオチドからなり、前記第１の５’及び３’リボヌクレオチドは、前記第１のＲＮＡ成分において互いに塩基対形成し、前記第１のＲＮＡ配列は、少なくとも２１の連続するリボヌクレオチドの第１のセンスリボヌクレオチド配列、少なくとも４のリボヌクレオチドの第１のループ配列、及び少なくとも２１の連続するリボヌクレオチドの第１のアンチセンスリボヌクレオチド配列を含み、前記第１のアンチセンスリボヌクレオチド配列は、前記ＲＮＡ分子内の前記第１のセンスリボヌクレオチド配列とハイブリダイズし、前記第１のアンチセンスリボヌクレオチド配列は、標的ＲＮＡ分子の第１の領域にハイブリダイズすることができ、
前記第２のＲＮＡ成分は、存在する場合は前記結合リボヌクレオチド配列を介して、又は前記結合リボヌクレオチド配列が存在しない場合は直接、前記第１の５’リボヌクレオチド又は前記第１の３’リボヌクレオチドに共有結合し、
前記第２のＲＮＡ成分は、５’から３’の順に、第２の５’リボヌクレオチド、第２のＲＮＡ配列、及び第２の３’リボヌクレオチドからなり、前記第２の５’及び３’リボヌクレオチドは、前記ＲＮＡ分子において互いに塩基対形成し、前記第２のＲＮＡ配列は、少なくとも２１ヌクレオチド長の第２のセンスリボヌクレオチド配列、少なくとも４のリボヌクレオチドの第２のループ配列、及び少なくとも２１ヌクレオチド長の第２のアンチセンスリボヌクレオチド配列を含み、前記第２のセンスリボヌクレオチド配列は、前記ＲＮＡ分子内の少なくとも２１の連続するヌクレオチドの長さにわたって前記第２のアンチセンスリボヌクレオチド配列とハイブリダイズし、
前記５’リーダー配列は、存在する場合、前記第２のＲＮＡ成分が前記第１の３’リボヌクレオチドに結合する場合は前記第１の５’リボヌクレオチドに共有結合するか、又は前記第２のＲＮＡ成分が前記第１の５’リボヌクレオチドに結合する場合は前記第２の５’リボヌクレオチドに共有結合するリボヌクレオチドの配列からなり、
前記３’トレーラー配列は、存在する場合、前記第２のＲＮＡ成分が前記第１の３’リボヌクレオチドに結合する場合は前記第２の３’リボヌクレオチドに共有結合するか、又は前記第２のＲＮＡ成分が前記第１の５’リボヌクレオチドに結合する場合は前記第１の３’リボヌクレオチドに共有結合するリボヌクレオチドの配列からなり、
前記ＲＮＡ分子は、５’末端及び３’末端を含む一本鎖のリボヌクレオチドである、
ＲＮＡ分子。
【請求項２】
（ａ）前記第１のセンスリボヌクレオチド配列若しくは前記第１のアンチセンスリボヌクレオチド配列若しくはその両方が、少なくとも４０の連続するヌクレオチドの長さであるか、又は（ｂ）前記第２のセンスリボヌクレオチド配列若しくは前記第２のアンチセンスリボヌクレオチド配列若しくはその両方が、少なくとも４０の連続するヌクレオチドの長さであるか、又は（ａ）及び（ｂ）の両方である、請求項１に記載のＲＮＡ分子。
【請求項３】
（ａ）前記第１及び第２のアンチセンスリボヌクレオチド配列が、前記第１及び第２のセンスリボヌクレオチド配列に隣接するか、又は（ｂ）前記第１及び第２のセンスリボヌクレオチド配列が、前記第１及び第２のアンチセンスリボヌクレオチド配列に隣接する、請求項１又は２に記載のＲＮＡ分子。
【請求項４】
以下の１つ又は複数を特徴とする、請求項１〜３のいずれか１項に記載のＲＮＡ分子：
（ｉ）前記第１のアンチセンスリボヌクレオチド配列の少なくとも２０の連続するリボヌクレオチドが、全て、前記標的ＲＮＡ分子の前記第１の領域のヌクレオチドと塩基対形成することができる；
（ｉｉ）前記第１のセンスリボヌクレオチド配列が、いかなる介在ヌクレオチドもなしで前記第１の５’リボヌクレオチドに共有結合しているか、又は前記第１のアンチセンスリボヌクレオチド配列が、いかなる介在ヌクレオチドもなしで前記第１の３’リボヌクレオチドに共有結合しているか、又はその両方である；
（ｉｉｉ）前記ＲＮＡ分子が、２０未満のリボヌクレオチドである前記結合リボヌクレオチド配列を含む；
（ｉｖ）前記結合リボヌクレオチド配列が、前記標的ＲＮＡ分子にハイブリダイズする；
（ｖ）前記結合リボヌクレオチド配列が、前記標的ＲＮＡ分子の相補体の一部と同一である；
（ｖｉ）前記結合リボヌクレオチド配列が、１〜１０リボヌクレオチド長である；
（ｖｉｉ）前記ＲＮＡ分子が、標的ＲＮＡ分子の領域と配列が同一である、２つ以上のセンスリボヌクレオチド配列、及びそれに完全に塩基対形成するアンチセンスリボヌクレオチド配列を含む；
（ｖｉｉｉ）前記第１及び第２のセンスリボヌクレオチド配列が、同じ標的ＲＮＡ分子の異なる領域と配列が同一である；
（ｉｘ）前記第１及び第２のセンスリボヌクレオチド配列が、異なる標的ＲＮＡ分子の領域と配列が同一である；
（ｘ）前記第１及び第２のセンスリボヌクレオチド配列が、介在ループ配列を持たない；
（ｘｉ）前記第１及び第２のアンチセンスリボヌクレオチド配列が、それぞれ前記第１及び第２のセンスリボヌクレオチド配列と完全に塩基対形成し、標的ＲＮＡ分子の領域とそれぞれ相補的である；
（ｘｉｉ）前記第１及び第２のアンチセンスリボヌクレオチド配列が、同じ標的ＲＮＡ分子の異なる領域と相補的である；
（ｘｉｉｉ）前記第２のアンチセンスリボヌクレオチド配列が、前記第１のアンチセンスリボヌクレオチド配列とは異なる標的ＲＮＡ分子の領域に相補的である；
（ｘｉｖ）前記第１及び第２のセンスリボヌクレオチド配列が、介在ループ配列を持たない；
（ｘｖ）（ａ）前記第１の５’リボヌクレオチド及び前記第２の３’リボヌクレオチドが、隣接しており、それぞれが塩基対形成しており、互いに直接共有結合はしていないか、又は、（ｂ）前記第２の５’リボヌクレオチド及び前記第１の３’リボヌクレオチドが、隣接しており、それぞれが塩基対形成しており、互いに直接共有結合していない；
（ｘｖｉ）前記第１のアンチセンスリボヌクレオチド配列が、標的ＲＮＡの第１の領域にハイブリダイズし、前記第２のアンチセンスリボヌクレオチド配列が、標的ＲＮＡの第２の領域にハイブリダイズし、前記標的ＲＮＡの前記第２の領域が前記標的ＲＮＡの前記第１の領域とは異なり、前記第１及び第２のセンスリボヌクレオチド配列が、連続しており、前記２つのアンチセンス配列が、前記ＲＮＡ分子内で連続していない；
（ｘｖｉｉ）前記第１のセンスリボヌクレオチド配列が、標的ＲＮＡの第１の領域に少なくとも６０％同一であり、前記第２のセンスリボヌクレオチド配列が、標的ＲＮＡの第２の領域に少なくとも６０％同一であり、前記標的ＲＮＡの前記第２の領域が前記標的ＲＮＡの前記第１の領域とは異なり、前記第１及び第２のアンチセンスリボヌクレオチド配列が、連続しており、前記標的ＲＮＡにハイブリダイズし、前記２つのセンス配列が前記ＲＮＡ分子内で連続していない；
（ｘｖｉｉｉ）前記ＲＮＡ分子が、前記５’リーダー配列、前記３’トレーラー配列、又はその両方を含む；
（ｘｉｘ）前記ＲＮＡ分子における前記ループ配列の少なくとも１つ又は全てが、２０ヌクレオチドより長い；
（ｘｘ）前記ＲＮＡ分子が、バルジがないか、若しくは１つ、若しくは２つ以上のバルジを有するか、又は前記ＲＮＡ分子の二本鎖領域が、前記二本鎖領域において塩基対形成されていない１つ、若しくは２つ、若しくはそれ以上のヌクレオチドを含む；
（ｘｘｉ）前記ＲＮＡ分子が、３、４、又はそれ以上のループを有する；
（ｘｘｉｉ）前記ＲＮＡ分子が、ループを２つだけ有する。
【請求項５】
前記標的ＲＮＡが、真核細胞内にある、請求項１〜４のいずれか１項に記載のＲＮＡ分子。
【請求項６】
遺伝的構築物からの転写によって、細胞内で産生される、請求項１〜５のいずれか１項に記載のＲＮＡ分子。
【請求項７】
キメラリボ核酸（ＲＮＡ）分子であって、前記キメラＲＮＡ分子が、互いにハイブリダイズして二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）領域を形成することができるセンスリボヌクレオチド配列及びアンチセンスリボヌクレオチド配列を含むｄｓＲＮＡ領域を含み、
ｉ）前記センスリボヌクレオチド配列は、５’から３’の順に共有結合された、第１の５’リボヌクレオチド、第１のＲＮＡ配列、及び第１の３’リボヌクレオチドからなり、
ｉｉ）前記アンチセンスリボヌクレオチド配列は、５’から３’の順に共有結合された、第２の５’リボヌクレオチド、第２のＲＮＡ配列、及び第２の３’リボヌクレオチドからなり、
ｉｉｉ）前記第１の５’リボヌクレオチドが前記第２の３’リボヌクレオチドと塩基対形成して前記ｄｓＲＮＡ領域の末端塩基対を形成し、
ｉｖ）前記第２の５’リボヌクレオチドが前記第１の３’リボヌクレオチドと塩基対形成して前記ｄｓＲＮＡ領域の末端塩基対を形成し、
ｖ）前記センスリボヌクレオチド配列及び前記アンチセンスリボヌクレオチド配列の前記リボヌクレオチドの約５％〜約４０％が、全体で、非標準塩基対で塩基対形成されるか、又は塩基対形成されず、
ｖｉ）前記ｄｓＲＮＡ領域が２０の連続する標準的な塩基対を含まず、
ｖｉｉ）前記ＲＮＡ分子が、真核細胞中又はｉｎ  ｖｉｔｒｏでプロセシングされ、それにより前記アンチセンスリボヌクレオチド配列が切断され、２０〜２４リボヌクレオチド長の短鎖アンチセンスＲＮＡ（ａｓＲＮＡ）分子を生成することができ、
ｖｉｉｉ）前記ＲＮＡ分子、又は少なくともいくつかの前記ａｓＲＮＡ分子、又はその両方が、前記真核細胞内の標的ＲＮＡ分子の発現又は活性を低下させることができ、
ｉｘ）前記ＲＮＡ分子が、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ又は細胞内、又はその両方において転写により酵素的に作成されることができる、キメラＲＮＡ分子。
【請求項８】
請求項１〜７のいずれか１項に記載のＲＮＡ分子をコードする単離及び／又は外因性ポリヌクレオチド又はベクター。
【請求項９】
請求項１〜７のいずれか１項に記載のＲＮＡ分子、及び請求項８に記載のポリヌクレオチド又はベクター、のうちの１つ又は両方を含む宿主細胞又は非ヒト生物又はその一部。
【請求項１０】
請求項１〜７のいずれか１項に記載のＲＮＡ分子を生成する方法であって、前記方法が、請求項８に記載のポリヌクレオチドを宿主細胞又は無細胞発現系において発現させることを含む、方法。
【請求項１１】
請求項９に記載の非ヒト生物を生成する方法であって、前記方法が、請求項８に記載のポリヌクレオチドを細胞内に導入して、前記細胞のゲノム中に安定して組み込むことと、前記細胞から前記非ヒト生物を生成することとを含む、方法。
【請求項１２】
請求項９に記載の宿主細胞又は非ヒト生物の抽出物であって、前記抽出物が、請求項１〜７のいずれか１項に記載のＲＮＡ分子及び／又は請求項８に記載のポリヌクレオチド若しくはベクターを含む、抽出物。
【請求項１３】
請求項１〜７のいずれか１項に記載のＲＮＡ分子、請求項８に記載のポリヌクレオチド若しくはベクター、請求項９に記載の宿主細胞若しくは非ヒト生物、又は請求項１２に記載の抽出物のうちの１つ以上、及び１つ以上の適切な担体、を含む組成物。
【請求項１４】
生物における標的ＲＮＡ分子のレベル及び／又は活性を下方制御する組成物であって、前記組成物が、請求項１〜７のいずれか１項に記載のＲＮＡ分子、請求項８に記載のポリヌクレオチド若しくはベクター、請求項９に記載の宿主細胞、請求項１２に記載の抽出物、又は請求項１３に記載の組成物、のうちの１つ以上を含む、組成物。
【請求項１５】
非ヒト生物を制御する方法であって、前記方法が、請求項１〜７のいずれか１項に記載のＲＮＡ分子、請求項８に記載のポリヌクレオチド若しくはベクター、請求項９に記載の宿主細胞、請求項１２に記載の抽出物、又は請求項１３に記載の組成物、のうちの１つ以上を前記非ヒト生物に送達することを含み、前記ＲＮＡ分子が、前記非ヒト生物に有害な影響を及ぼす、方法。
【請求項１６】
対象の疾患の予防又は治療に使用するための、請求項１〜７のいずれか１項に記載のＲＮＡ分子、請求項８に記載のポリヌクレオチド若しくはベクター、請求項９に記載の宿主細胞若しくは非ヒト生物、請求項１２に記載の抽出物、又は請求項１３に記載の組成物であって、前記ＲＮＡ分子が、前記疾患の少なくとも１つの症状又は前記疾患の予防に対して有益な効果を有する、ＲＮＡ分子、ポリヌクレオチド若しくはベクター、宿主細胞若しくは非ヒト生物、抽出物、又は組成物。
【請求項１７】
ＲＮＡ分子を植物に導入する方法であって、前記方法が、請求項１〜７のいずれか１項に記載のＲＮＡ分子を含む組成物を前記植物又はその一部に局所的に適用することを含む、方法。