【手続補正書】
【提出日】令和3年6月2日(2021.6.2)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号１〜８からなる群から選択される少なくとも３つのプロモーターポリヌクレオチド配列を含むプロモーターラダーであって、前記プロモーターラダーが、プロモーター活性のレベルが徐々に増加している複数のプロモーターを含み、各プロモーターヌクレオチド配列が、少なくとも１つの異種の補助標的遺伝子に機能的に連結している、プロモーターラダー。
【請求項２】
前記プロモーターポリヌクレオチド配列のうちの少なくとも１つが配列番号１、５、および７からなる群から選択される、請求項１に記載のプロモーターラダー。
【請求項３】
ａ）前記補助標的遺伝子のうちの少なくとも１つが、ＧＯｓｌｉｍターム  ＧＯ：０００３６７４；ＧＯ：０００３６７７；ＧＯ：０００８１５０；ＧＯ：００３４６４１；またはＧＯ：０００９０５８の下に分類される遺伝子である；
ｂ）前記補助標的遺伝子のうちの少なくとも１つが、以下のＧＯｓｌｉｍターム：ＧＯ：０００３６７４；ＧＯ：０００３６７７；ＧＯ：０００８１５０；ＧＯ：００３４６４１；およびＧＯ：０００９０５８の下に、またはそれらのうちの少なくとも２つ、３つ、４つ、もしくは５つの下に分類される遺伝子である；
ｃ）前記補助標的遺伝子のうちの少なくとも１つが、以下のＫＥＧＧエントリー：Ｍ０００１６；Ｍ００５２５；Ｍ００５２６；Ｍ００５２７；Ｍ０００３０；Ｍ００４３３  Ｍ０００３１；Ｍ０００２０；Ｍ０００１８；Ｍ０００２１；Ｍ００３３８；Ｍ００６０９；Ｍ０００１７；Ｍ０００１９；Ｍ００５３５；Ｍ００５７０；Ｍ００４３２；Ｍ０００１５；Ｍ０００２８；Ｍ００７６３；Ｍ０００２６；Ｍ０００２２；Ｍ０００２３；Ｍ０００２４；Ｍ０００２５；およびＭ０００４０の１つもしくは複数、または全部の遺伝子を含む生合成経路の構成成分ではない；
ｄ）前記補助標的遺伝子のうちの少なくとも１つが、ａｓｄでも、ａｓｋでも、ａｓｐＢでも、ｃｇ０９３１でも、ｄａｐＡでも、ｄａｐＢでも、ｄａｐＤでも、ｄａｐＥでも、ｄａｐＦでも、ｄｄｈでも、ｆｂｐでも、ｈｏｍでも、ｉｃｄでも、ｌｙｓＡでも、ｌｙｓＥでも、ｏｄｘでも、ｐｃｋでも、ｐｇｉでも、ｐｐｃでも、ｐｔｓＧでも、ｐｙｃでも、ｔｋｔでも、ｚｗｆでもなく、それらの内因性機能的オルソログでもない；
ｅ）前記補助標的遺伝子のうちの少なくとも１つが、以下のＫＥＧＧエントリー：Ｍ０００１０、Ｍ００００２、Ｍ００００７、Ｍ００５８０、またはＭ００００５の１つもしくは複数、または全部の遺伝子から選択される；
ｆ）前記補助標的遺伝子のうちの少なくとも１つが、配列番号１４８〜２８６から選択されるアミノ酸配列をコードする；あるいは
ｇ）前記補助標的遺伝子のうちの少なくとも１つが、配列番号９〜１４７から選択されるヌクレオチド配列を有する、請求項１または２に記載のプロモーターラダー。
【請求項４】
請求項１〜３のいずれか一項に記載のプロモーターラダーから選択されるプロモーターポリヌクレオチド配列およびそれが機能的に連結している前記少なくとも１つの異種の補助標的遺伝子を含む組換えポリヌクレオチド。
【請求項５】
請求項１〜３のいずれか一項に記載のプロモーターラダーを含む複数の組換えポリヌクレオチドであって、各組換えポリヌクレオチドが、前記プロモーターラダーからの１つのプロモーターおよびそれが機能的に連結している前記少なくとも１つの異種の補助標的遺伝子を含む、組換えポリヌクレオチド。
【請求項６】
請求項１〜３のいずれか一項に記載のプロモーターラダー、請求項４に記載の組換えポリヌクレオチド、または請求項５に記載の複数の組換えポリヌクレオチドを含む複数の組換えベクターであって、各ベクターが、前記プロモーターラダーからの少なくとも１つのプロモーターおよびそれが機能的に連結している前記異種の補助標的遺伝子または少なくとも１つの組換えポリヌクレオチドを含む、組換えベクター。
【請求項７】
請求項１〜３のいずれか一項に記載のプロモーターラダー、請求項４に記載の組換えポリヌクレオチド、請求項５に記載の複数の組換えポリヌクレオチド、または請求項６に記載の複数の組換えベクターを含む複数の宿主細胞であって、各宿主細胞が、前記プロモーターラダーからの少なくとも１つのプロモーターおよびそれが機能的に連結している前記異種の補助標的遺伝子、少なくとも１つの組換えポリヌクレオチドまたは少なくとも１つのベクターを含む、宿主細胞。
【請求項８】
アミノ酸、有機酸、タンパク質、およびポリマーからなる群から選択される標的生体分子を産生するための生合成経路；ならびに請求項１〜３のいずれか一項に記載のプロモーターラダーから選択されるプロモーターポリヌクレオチド配列およびそれが連結している前記異種の補助標的遺伝子を含む宿主細胞。
【請求項９】
前記生合成経路が、アミノ酸生合成経路である、請求項８に記載の宿主細胞。
【請求項１０】
前記アミノ酸生合成経路が、
ａ）Ｋｙｏｔｏ  Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ  ｏｆ  Ｇｅｎｅｓ  ａｎｄ  Ｇｅｎｏｍｅｓ（ＫＥＧＧ）のエントリーＭ０００１６の遺伝子を含むリシン生合成経路；
ｂ）ＫＥＧＧエントリーＭ００５２５の遺伝子を含むリシン生合成経路；
ｃ）ＫＥＧＧエントリーＭ００５２６の遺伝子を含むリシン生合成経路；
ｄ）ＫＥＧＧエントリーＭ００５２７の遺伝子を含むリシン生合成経路；
ｅ）ＫＥＧＧエントリーＭ０００３０の遺伝子を含むリシン生合成経路；
ｆ）ＫＥＧＧエントリーＭ００４３３の遺伝子を含むリシン生合成経路；
ｇ）ＫＥＧＧエントリーＭ０００３１の遺伝子を含むリシン生合成経路；
ｈ）ＫＥＧＧエントリーＭ０００２０の遺伝子を含むセリン生合成経路；
ｉ）ＫＥＧＧエントリーＭ０００１８の遺伝子を含むスレオニン生合成経路；
ｊ）ＫＥＧＧエントリーＭ０００２１の遺伝子を含むシステイン生合成経路；
ｋ）ＫＥＧＧエントリーＭ００３３８の遺伝子を含むシステイン生合成経路；
ｌ）ＫＥＧＧエントリーＭ００６０９の遺伝子を含むシステイン生合成経路
ｍ）ＫＥＧＧエントリーＭ０００１７の遺伝子を含むメチオニン生合成経路；
ｎ）ＫＥＧＧエントリーＭ０００１９の遺伝子を含むバリン／イソロイシン生合成経路；
ｏ）ＫＥＧＧエントリーＭ００５３５の遺伝子を含むイソロイシン生合成経路；
ｐ）ＫＥＧＧエントリーＭ００５７０の遺伝子を含むイソロイシン生合成経路；
ｑ）ＫＥＧＧエントリーＭ００４３２の遺伝子を含むロイシン生合成経路；
ｒ）ＫＥＧＧエントリーＭ０００１５の遺伝子を含むプロリン生合成経路；
ｓ）ＫＥＧＧエントリーＭ０００２８の遺伝子を含むオルニチン生合成経路；
ｔ）ＫＥＧＧエントリーＭ００７６３の遺伝子を含むオルニチン生合成経路；
ｕ）ＫＥＧＧエントリーＭ０００２６の遺伝子を含むヒスチジン生合成経路；
ｖ）ＫＥＧＧエントリーＭ０００２２の遺伝子を含むシキミ酸生合成経路；
ｗ）エントリーＭ０００２３の遺伝子を含むトリプトファン生合成経路；
ｘ）ＫＥＧＧエントリーＭ０００２４の遺伝子を含むフェニルアラニン生合成経路；
ｙ）ＫＥＧＧエントリーＭ０００２５の遺伝子を含むチロシン生合成経路；および
ｚ）ＫＥＧＧエントリーＭ０００４０の遺伝子を含むチロシン生合成経路
からなる群から選択される、請求項９に記載の宿主細胞。
【請求項１１】
請求項１に記載の前記プロモーターラダーから選択される１つまたは複数の追加のプロモーターポリヌクレオチド配列をさらに含み、それぞれの追加のプロモーターポリヌクレオチド配列が、少なくとも１つの追加の異種の補助標的遺伝子に機能的に連結している、請求項８〜１０のいずれか一項に記載の宿主細胞。
【請求項１２】
ａ）前記少なくとも１つの異種の補助標的遺伝子および前記少なくとも１つの追加の異種の補助標的遺伝子が、同じ代謝経路の要素である；または
ｂ）前記少なくとも１つの異種の補助標的遺伝子および前記少なくとも１つの追加の異種の補助標的遺伝子が、同じ代謝経路の要素ではない、
請求項１１に記載の宿主細胞。
【請求項１３】
Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ属に属し、必要に応じて、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｇｌｕｔａｍｉｃｕｍ種である、請求項８〜１２のいずれか一項に記載の宿主細胞。
【請求項１４】
標的生体分子を産生する方法であって、請求項８〜１３のいずれか一項に記載の宿主細胞を、前記生体分子を産生するのに適した条件下で培養するステップを含む、方法。
【請求項１５】
標的生体分子の産生のための経路を各々含む複数の宿主細胞であって、前記複数の宿主細胞が、
ａ．請求項１〜３のいずれか一項に記載のプロモーターラダーから選択される第１のプロモーターポリヌクレオチド配列およびそれが機能的に連結している前記少なくとも１つの異種の補助標的遺伝子を含む第１の宿主細胞；および
ｂ．請求項１〜３のいずれか一項に記載のプロモーターラダーから選択される第２のプロモーターポリヌクレオチド配列およびそれが機能的に連結している前記少なくとも１つの異種の補助標的遺伝子を含む第２の宿主細胞であって、前記第１および第２のプロモーターポリヌクレオチド配列が異なる、第２の宿主細胞
を含む複数の宿主細胞。
【請求項１６】
前記複数の宿主細胞が少なくとも１×１０６個の細胞を含む、請求項１５に記載の複数の宿主細胞。
【請求項１７】
前記異種の補助標的遺伝子が、シェル３もしくはシェル４の標的遺伝子である、請求項１５または１６に記載の複数の宿主細胞。
【請求項１８】
標的生体分子の産生のための前記経路がアミノ酸生合成経路である、請求項１５〜１７のいずれか一項に記載の複数の宿主細胞。
【請求項１９】
前記アミノ酸生合成経路が、
ａ）Ｋｙｏｔｏ  Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ  ｏｆ  Ｇｅｎｅｓ  ａｎｄ  Ｇｅｎｏｍｅｓ（ＫＥＧＧ）のエントリーＭ０００１６の遺伝子を含むリシン生合成経路；
ｂ）ＫＥＧＧエントリーＭ００５２５の遺伝子を含むリシン生合成経路；
ｃ）ＫＥＧＧエントリーＭ００５２６の遺伝子を含むリシン生合成経路；
ｄ）ＫＥＧＧエントリーＭ００５２７の遺伝子を含むリシン生合成経路；
ｅ）ＫＥＧＧエントリーＭ０００３０の遺伝子を含むリシン生合成経路；
ｆ）ＫＥＧＧエントリーＭ００４３３の遺伝子を含むリシン生合成経路；
ｇ）ＫＥＧＧエントリーＭ０００３１の遺伝子を含むリシン生合成経路；
ｈ）ＫＥＧＧエントリーＭ０００２０の遺伝子を含むセリン生合成経路；
ｉ）ＫＥＧＧエントリーＭ０００１８の遺伝子を含むスレオニン生合成経路；
ｊ）ＫＥＧＧエントリーＭ０００２１の遺伝子を含むシステイン生合成経路；
ｋ）ＫＥＧＧエントリーＭ００３３８の遺伝子を含むシステイン生合成経路；
ｌ）ＫＥＧＧエントリーＭ００６０９の遺伝子を含むシステイン生合成経路；
ｍ）ＫＥＧＧエントリーＭ０００１７の遺伝子を含むメチオニン生合成経路；
ｎ）ＫＥＧＧエントリーＭ０００１９の遺伝子を含むバリン／イソロイシン生合成経路；
ｏ）ＫＥＧＧエントリーＭ００５３５の遺伝子を含むイソロイシン生合成経路；
ｐ）ＫＥＧＧエントリーＭ００５７０の遺伝子を含むイソロイシン生合成経路；
ｑ）ＫＥＧＧエントリーＭ００４３２の遺伝子を含むロイシン生合成経路；
ｒ）ＫＥＧＧエントリーＭ０００１５の遺伝子を含むプロリン生合成経路；
ｓ）ＫＥＧＧエントリーＭ０００２８の遺伝子を含むオルニチン生合成経路；
ｔ）ＫＥＧＧエントリーＭ００７６３の遺伝子を含むオルニチン生合成経路；
ｕ）ＫＥＧＧエントリーＭ０００２６の遺伝子を含むヒスチジン生合成経路；
ｖ）ＫＥＧＧエントリーＭ０００２２の遺伝子を含むシキミ酸生合成経路；
ｗ）エントリーＭ０００２３の遺伝子を含むトリプトファン生合成経路；
ｘ）ＫＥＧＧエントリーＭ０００２４の遺伝子を含むフェニルアラニン生合成経路；
ｙ）ＫＥＧＧエントリーＭ０００２５の遺伝子を含むチロシン生合成経路；および
ｚ）ＫＥＧＧエントリーＭ０００４０の遺伝子を含むチロシン生合成経路
からなる群から選択される、請求項１８に記載の複数の宿主細胞。
【請求項２０】
前記複数が、それぞれ、請求項１に記載のプロモーターラダーから選択される第３、第４、第５、第６、第７、および／または第８のプロモーターポリヌクレオチド配列を含む第３、第４、第５、第６、第７、および／または第８の宿主細胞を含み、前記第３、第４、第５、第６、第７、および／または第８のプロモーターのそれぞれが、異種の補助標的遺伝子に機能的に連結しており、前記プロモーターのそれぞれが異なる、請求項１５〜１９のいずれか一項に記載の複数の宿主細胞。
【請求項２１】
各プロモーターが、同じ異種の補助標的遺伝子に作動可能に連結している、請求項１５〜２０のいずれか一項に記載の複数の宿主細胞。
【請求項２２】
前記宿主細胞がＣｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ宿主細胞であり、必要に応じて、前記Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ宿主細胞がＣｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｇｌｕｔａｍｉｃｕｍ宿主細胞である、請求項１５〜２１のいずれか一項に記載の複数の宿主細胞。
【請求項２３】
標的分子の産生のための選択された代謝経路に直接的に関与する異種の標的遺伝子に作動可能に連結したプロモーターポリヌクレオチド配列をさらに含む、請求項１５〜２２のいずれか一項に記載の複数の宿主細胞。
【請求項２４】
前記宿主細胞のうちの少なくとも１つが、配列番号１、配列番号５、および配列番号７からなる群から選択されるプロモーターポリヌクレオチド配列を含み；そして少なくとも１つの他の宿主細胞が、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号６、および配列番号８からなる群から選択されるプロモーターポリヌクレオチド配列を含む、請求項１５〜２３のいずれか一項に記載の複数の宿主細胞。
【請求項２５】
請求項１５〜２４のいずれか一項に記載の複数の宿主細胞を培養するステップを含む方法。
【請求項２６】
標的生体分子の産生を増加させるための方法であって、
ａ．請求項１５〜２４のいずれか一項に記載の複数の宿主細胞を提供するステップ；
ｂ．前記複数の宿主細胞を、前記標的生体分子を産生するのに適した条件下で培養するステップ；および
ｃ．対照細胞と比較して、標的生体分子の産生の増加を示す宿主細胞を前記複数の宿主細胞から同定するステップ
を含む、方法。
【請求項２７】
前記同定された宿主細胞を、前記複数の他の宿主細胞から単離するステップをさらに含む、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
前記単離された宿主細胞を保存するおよび／または増やすステップを含む、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記複数の宿主細胞が、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、少なくとも６つ、少なくとも７つまたは少なくとも８つの宿主細胞を含み、前記宿主細胞の各々が、請求項１に記載のプロモーターラダーから選択される異なるプロモーターを含み、前記異なるプロモーターが、同じ異種の補助標的遺伝子に機能的に連結している、請求項２６〜２８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３０】
前記異種の補助標的遺伝子がシェル３および／またはシェル４の標的遺伝子である、請求項２６〜２９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３１】
前記提供するステップが、前記異種の標的遺伝子に作動可能に連結した、請求項１に記載のプロモーターラダーを含む組換えベクターライブラリーで複数の宿主細胞を形質転換することを含む、請求項２６〜３０のいずれか一項に記載の方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２０】
一部の実施形態では、宿主細胞は、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ属に属する。一部の実施形態では、宿主細胞はＣｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｇｌｕｔａｍｉｃｕｍである。
特定の実施形態では、例えば、以下が提供される：
（項目１）
少なくとも１つの異種の補助標的遺伝子に機能的に連結している配列番号１〜８からなる群から選択されるプロモーターポリヌクレオチド配列を含む宿主細胞。
（項目２）
ａ．少なくとも１つの第１の異種の標的遺伝子に機能的に連結している第１のプロモーターポリヌクレオチド配列であって、前記少なくとも１つの第１の異種の標的遺伝子が、標的生体分子を産生するための生合成経路の構成成分であり、前記標的生体分子がアミノ酸、有機酸、タンパク質、およびポリマーからなる群から選択される、第１のプロモーターポリヌクレオチド配列；ならびに
ｂ．少なくとも１つの第２の異種の標的遺伝子に機能的に連結している配列番号１〜８からなる群から選択される第２のプロモーターポリヌクレオチド配列であって、前記少なくとも１つの第２の異種の標的遺伝子が補助標的遺伝子である、第２のプロモーターポリヌクレオチド配列
を含む、宿主細胞。
（項目３）
前記第２のプロモーターポリヌクレオチド配列が配列番号１、５、および７からなる群から選択される、項目１に記載の宿主細胞。
（項目４）
前記補助標的遺伝子が、ＧＯｓｌｉｍターム  ＧＯ：０００３６７４；ＧＯ：０００３６７７；ＧＯ：０００８１５０；ＧＯ：００３４６４１；またはＧＯ：０００９０５８の下に分類される遺伝子である、項目１〜３のいずれか一項に記載の宿主細胞。
（項目５）
前記補助標的遺伝子が、以下のＧＯｓｌｉｍターム：ＧＯ：０００３６７４；ＧＯ：０００３６７７；ＧＯ：０００８１５０；ＧＯ：００３４６４１；およびＧＯ：０００９０５８の下に、またはそれらのうちの少なくとも２つ、３つ、４つ、もしくは５つの下に分類される遺伝子である、項目４に記載の宿主細胞。
（項目６）
単離されている、項目１〜５のいずれか一項に記載の宿主細胞。
（項目７）
前記補助標的遺伝子が、以下のＫＥＧＧエントリー：Ｍ０００１６；Ｍ００５２５；Ｍ００５２６；Ｍ００５２７；Ｍ０００３０；Ｍ００４３３  Ｍ０００３１；Ｍ０００２０；Ｍ０００１８；Ｍ０００２１；Ｍ００３３８；Ｍ００６０９；Ｍ０００１７；Ｍ０００１９；Ｍ００５３５；Ｍ００５７０；Ｍ００４３２；Ｍ０００１５；Ｍ０００２８；Ｍ００７６３；Ｍ０００２６；Ｍ０００２２；Ｍ０００２３；Ｍ０００２４；Ｍ０００２５；およびＭ０００４０の１つもしくは複数、または全部の遺伝子を含む生合成経路の構成成分ではない、項目１〜６のいずれか一項に記載の宿主細胞。
（項目８）
前記補助標的遺伝子が、前記宿主細胞におけるａｓｄでも、ａｓｋでも、ａｓｐＢでも、ｃｇ０９３１でも、ｄａｐＡでも、ｄａｐＢでも、ｄａｐＤでも、ｄａｐＥでも、ｄａｐＦでも、ｄｄｈでも、ｆｂｐでも、ｈｏｍでも、ｉｃｄでも、ｌｙｓＡでも、ｌｙｓＥでも、ｏｄｘでも、ｐｃｋでも、ｐｇｉでも、ｐｐｃでも、ｐｔｓＧでも、ｐｙｃでも、ｔｋｔでも、ｚｗｆでもなく、それらの内因性機能的オルソログでもない、項目１〜６のいずれか一項に記載の宿主細胞。
（項目９）
前記補助標的遺伝子が、以下のＫＥＧＧエントリー：Ｍ０００１０、Ｍ００００２、Ｍ００００７、Ｍ００５８０、またはＭ００００５の１つもしくは複数、または全部の遺伝子から選択される、項目１〜６のいずれか一項に記載の宿主細胞。
（項目１０）
前記少なくとも１つの第１の異種の標的遺伝子が、アミノ酸生合成経路の構成成分である遺伝子である、項目２に記載の宿主細胞。
（項目１１）
前記アミノ酸生合成経路が、
Ｋｙｏｔｏ  Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ  ｏｆ  Ｇｅｎｅｓ  ａｎｄ  Ｇｅｎｏｍｅｓ（ＫＥＧＧ）のエントリーＭ０００１６の遺伝子を含むリシン生合成経路；
ＫＥＧＧエントリーＭ００５２５の遺伝子を含むリシン生合成経路；
ＫＥＧＧエントリーＭ００５２６の遺伝子を含むリシン生合成経路；
ＫＥＧＧエントリーＭ００５２７の遺伝子を含むリシン生合成経路；
ＫＥＧＧエントリーＭ０００３０の遺伝子を含むリシン生合成経路；
ＫＥＧＧエントリーＭ００４３３の遺伝子を含むリシン生合成経路；および
ＫＥＧＧエントリーＭ０００３１の遺伝子を含むリシン生合成経路
からなる群から選択される、項目１０に記載の宿主細胞。
（項目１２）
前記アミノ酸生合成経路が、ＫＥＧＧエントリーＭ０００２０の遺伝子を含むセリン生合成経路からなる群から選択される、項目１０に記載の宿主細胞。
（項目１３）
前記アミノ酸生合成経路が、ＫＥＧＧエントリーＭ０００１８の遺伝子を含むスレオニン生合成経路からなる群から選択される、項目１０に記載の宿主細胞。
（項目１４）
前記アミノ酸生合成経路が、
ＫＥＧＧエントリーＭ０００２１の遺伝子を含むシステイン生合成経路；
ＫＥＧＧエントリーＭ００３３８の遺伝子を含むシステイン生合成経路；および／またはＫＥＧＧエントリーＭ００６０９の遺伝子を含むシステイン生合成経路
からなる群から選択される、項目１０に記載の宿主細胞。
（項目１５）
前記アミノ酸生合成経路が、ＫＥＧＧエントリーＭ０００１７の遺伝子を含むメチオニン生合成経路からなる群から選択される、項目１０に記載の宿主細胞。
（項目１６）
前記アミノ酸生合成経路が、ＫＥＧＧエントリーＭ０００１９の遺伝子を含むバリン／イソロイシン生合成経路からなる群から選択される、項目１０に記載の宿主細胞。
（項目１７）
前記アミノ酸生合成経路が、
ＫＥＧＧエントリーＭ００５３５の遺伝子を含むイソロイシン生合成経路；および／または
ＫＥＧＧエントリーＭ００５７０の遺伝子を含むイソロイシン生合成経路
からなる群から選択される、項目１０に記載の宿主細胞。
（項目１８）
前記アミノ酸生合成経路が、ＫＥＧＧエントリーＭ００４３２の遺伝子を含むロイシン生合成経路からなる群から選択される、項目１０に記載の宿主細胞。
（項目１９）
前記アミノ酸生合成経路が、ＫＥＧＧエントリーＭ０００１５の遺伝子を含むプロリン生合成経路からなる群から選択される、項目１０に記載の宿主細胞。
（項目２０）
前記アミノ酸生合成経路が、
ＫＥＧＧエントリーＭ０００２８の遺伝子を含むオルニチン生合成経路；および
ＫＥＧＧエントリーＭ００７６３の遺伝子を含むオルニチン生合成経路
からなる群から選択される、項目１０に記載の宿主細胞。
（項目２１）
前記アミノ酸生合成経路が、ＫＥＧＧエントリーＭ０００２６の遺伝子を含むヒスチジン生合成経路からなる群から選択される、項目１０に記載の宿主細胞。
（項目２２）
前記アミノ酸生合成経路が、
ＫＥＧＧエントリーＭ０００２２の遺伝子を含むシキミ酸生合成経路；
エントリーＭ０００２３の遺伝子を含むトリプトファン生合成経路；  
ＫＥＧＧエントリーＭ０００２４の遺伝子を含むフェニルアラニン生合成経路；
ＫＥＧＧエントリーＭ０００２５の遺伝子を含むチロシン生合成経路；および
ＫＥＧＧエントリーＭ０００４０の遺伝子を含むチロシン生合成経路
からなる群から選択される、項目１０に記載の宿主細胞。
（項目２３）
配列番号１〜８からなる群から選択される１つまたは複数の追加の第２のプロモーターポリヌクレオチド配列をさらに含み、それぞれの追加の第２のプロモーターポリヌクレオチド配列が、少なくとも１つの追加の第２の異種の標的遺伝子に機能的に連結し、前記少なくとも１つの追加の第２の異種の標的遺伝子が補助標的遺伝子である、項目２〜２２のいずれか一項に記載の宿主細胞。
（項目２４）
前記少なくとも１つの第２の異種の標的遺伝子および前記少なくとも１つの追加の第２の異種の標的遺伝子が、同じ代謝経路の要素である、項目２３に記載の宿主細胞。
（項目２５）
前記少なくとも１つの第２の異種の標的遺伝子および前記少なくとも１つの追加の第２の異種の標的遺伝子が、同じ代謝経路の要素ではない、項目２４に記載の宿主細胞。
（項目２６）
配列番号１〜８からなる群から選択される１つまたは複数の追加の第１のプロモーターポリヌクレオチド配列をさらに含み、それぞれの追加の第１のプロモーターポリヌクレオチド配列が、少なくとも１つの追加の第１の異種の標的遺伝子に機能的に連結し、前記少なくとも１つの第１の異種の標的遺伝子および前記少なくとも１つの追加の第１の異種の標的遺伝子が同じ代謝経路内にある、項目２〜２２のいずれか一項に記載の宿主細胞。
（項目２７）
Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ属に属する、項目１〜２６のいずれか一項に記載の宿主細胞。
（項目２８）
Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｇｌｕｔａｍｉｃｕｍである、項目２７に記載の宿主細胞。
（項目２９）
前記補助標的遺伝子が、配列番号１４８〜２８６から選択されるアミノ酸配列をコードする、項目１〜２８のいずれか一項に記載の宿主細胞。
（項目３０）
前記補助標的遺伝子が、配列番号９〜１４７から選択されるヌクレオチド配列を有する、項目１〜２９のいずれか一項に記載の宿主細胞。
（項目３１）
標的生体分子を産生する方法であって、項目１〜３０のいずれか一項に記載の宿主細胞を、前記生体分子を産生するのに適した条件下で培養するステップを含む、方法。
（項目３２）
前記生体分子がＬ−アミノ酸である、項目３１に記載の方法。
（項目３３）
前記Ｌ−アミノ酸がＬ−リシンである、項目３２に記載の方法。
（項目３４）
ａ．プロモーター活性のレベルが徐々に増加している複数のプロモーターを含むプロモーターの群から選択される第１のプロモーターポリヌクレオチド配列を含む第１の宿主細胞であって、前記第１のプロモーターポリヌクレオチドが異種の標的遺伝子に作動可能に連結しており、前記異種の標的遺伝子が、標的生体分子の産生のための経路内の遺伝子、
および前記標的生体分子の産生のための前記経路から外れている異種の補助標的遺伝子から選択される、第１の宿主細胞；
ｂ．プロモーター活性のレベルが徐々に増加している前記複数のプロモーターを含む前記プロモーターの群から選択される第２のプロモーターポリヌクレオチド配列を含む第２の宿主細胞であって、前記第２のプロモーターポリヌクレオチドが、異種の補助標的遺伝子に機能的に連結しており、前記第１および第２のプロモーターポリヌクレオチドが異なる、第２の宿主細胞
を含む複数の宿主細胞。
（項目３５）
前記複数の宿主細胞が少なくとも１×１０６個の細胞を含む、項目３４に記載の複数の宿主細胞。
（項目３６）
プロモーター活性のレベルが徐々に増加している前記複数のプロモーターを含む前記プロモーターの群が構成的プロモーターである、項目３４または３５に記載の複数の宿主細胞。
（項目３７）
プロモーター活性のレベルが徐々に増加している前記複数のプロモーターを含む前記プロモーターの群が誘導性プロモーターである、項目３４または３５に記載の複数の宿主細胞。
（項目３８）
前記第２のプロモーターポリヌクレオチドに作動可能に連結した前記異種の補助標的遺伝子が、シェル３もしくはシェル４の標的遺伝子であり、および／または前記第１のプロモーターポリヌクレオチドがシェル３もしくは４の異種の補助標的遺伝子に作動可能に連結している、項目３４〜３７のいずれか一項に記載の複数の宿主細胞。
（項目３９）
前記第１および／または第２のプロモーターポリヌクレオチドに作動可能に連結した前記異種の補助標的遺伝子が、以下のＫＥＧＧエントリー：Ｍ０００１６；Ｍ００５２５；Ｍ００５２６；Ｍ００５２７；Ｍ０００３０；Ｍ００４３３  Ｍ０００３１；Ｍ０００２０；Ｍ０００１８；Ｍ０００２１；Ｍ００３３８；Ｍ００６０９；Ｍ０００１７；Ｍ０００１９；Ｍ００５３５；Ｍ００５７０；Ｍ００４３２；Ｍ０００１５；Ｍ０００２８；Ｍ００７６３；Ｍ０００２６；Ｍ０００２２；Ｍ０００２３；Ｍ０００２４；Ｍ０００２５；およびＭ０００４０の１つもしくは複数、または全部の遺伝子を含む生合成経路の構成成分ではない、項目３４〜３８のいずれか一項に記載の複数の宿主細胞。
（項目４０）
前記第１および／または第２のプロモーターポリヌクレオチドに作動可能に連結した前記異種の補助標的遺伝子が、前記宿主細胞におけるａｓｄでも、ａｓｋでも、ａｓｐＢでも、ｃｇ０９３１でも、ｄａｐＡでも、ｄａｐＢでも、ｄａｐＤでも、ｄａｐＥでも、ｄａｐＦでも、ｄｄｈでも、ｆｂｐでも、ｈｏｍでも、ｉｃｄでも、ｌｙｓＡでも、ｌｙｓＥでも、ｏｄｘでも、ｐｃｋでも、ｐｇｉでも、ｐｐｃでも、ｐｔｓＧでも、ｐｙｃでも、ｔｋｔでも、ｚｗｆでもなく、それらの内因性機能的オルソログでもない、項目３４〜３８のいずれか一項に記載の複数の宿主細胞。
（項目４１）
前記第１および／または第２のプロモーターポリヌクレオチドに作動可能に連結した前記異種の補助標的遺伝子が、以下のＫＥＧＧエントリー：Ｍ０００１０、Ｍ００００２、Ｍ００００７、Ｍ００５８０、またはＭ００００５の１つもしくは複数、または全部の遺伝子から選択される、項目３４〜３８のいずれか一項に記載の複数の宿主細胞。
（項目４２）
前記第１および／または第２のプロモーターポリヌクレオチドに作動可能に連結した前記異種の補助標的遺伝子が、ＧＯｓｌｉｍターム  ＧＯ：０００３６７４；ＧＯ：００３６７７；ＧＯ：０００８１５０；ＧＯ：００３４６４１；またはＧＯ：００９０５８の下に分類される遺伝子である、項目３４〜４１のいずれか一項に記載の複数の宿主細胞。
（項目４３）
前記第１および／または第２のプロモーターポリヌクレオチドに作動可能に連結した前記異種の補助標的遺伝子が、以下のＧＯｓｌｉｍターム：ＧＯ：０００３６７４；ＧＯ：００３６７７；ＧＯ：０００８１５０；ＧＯ：００３４６４１；ＧＯ：００９０５８の下に、またはそれらの少なくとも２つ、３つ、４つ、もしくは５つの下に分類される遺伝子である、項目４２に記載の複数の宿主細胞。
（項目４４）
前記第１のプロモーターポリヌクレオチドが、標的生体分子の産生のための経路上の異種の標的遺伝子、例えば、前記標的生体分子の産生のための生合成経路のシェル１における異種の標的遺伝子に作動可能に連結している、項目３４〜３７に記載の複数の宿主細胞。
（項目４５）
前記第１のプロモーターポリヌクレオチドが、異種のシェル２標的遺伝子に作動可能に連結している、項目３４〜３７に記載の複数の宿主細胞。
（項目４６）
標的生体分子の産生のための前記経路がアミノ酸生合成経路である、項目３４〜４５のいずれか一項に記載の複数の宿主細胞。
（項目４７）
前記アミノ酸生合成経路が、
Ｋｙｏｔｏ  Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ  ｏｆ  Ｇｅｎｅｓ  ａｎｄ  Ｇｅｎｏｍｅｓ（ＫＥＧＧ）のエントリーＭ０００１６の遺伝子を含むリシン生合成経路；
ＫＥＧＧエントリーＭ００５２５の遺伝子を含むリシン生合成経路；
ＫＥＧＧエントリーＭ００５２６の遺伝子を含むリシン生合成経路；
ＫＥＧＧエントリーＭ００５２７の遺伝子を含むリシン生合成経路；
ＫＥＧＧエントリーＭ０００３０の遺伝子を含むリシン生合成経路；
ＫＥＧＧエントリーＭ００４３３の遺伝子を含むリシン生合成経路；および
ＫＥＧＧエントリーＭ０００３１の遺伝子を含むリシン生合成経路
からなる群から選択される、項目４６に記載の複数の宿主細胞。
（項目４８）
前記アミノ酸生合成経路が、ＫＥＧＧエントリーＭ０００２０の遺伝子を含むセリン生合成経路からなる群から選択される、項目４６に記載の複数の宿主細胞。
（項目４９）
前記アミノ酸生合成経路が、ＫＥＧＧエントリーＭ０００１８の遺伝子を含むスレオニン生合成経路からなる群から選択される、項目４６に記載の複数の宿主細胞。
（項目５０）
前記アミノ酸生合成経路が、
ＫＥＧＧエントリーＭ０００２１の遺伝子を含むシステイン生合成経路；
ＫＥＧＧエントリーＭ００３３８の遺伝子を含むシステイン生合成経路；および／またはＫＥＧＧエントリーＭ００６０９の遺伝子を含むシステイン生合成経路
からなる群から選択される、項目４６に記載の複数の宿主細胞。
（項目５１）
前記アミノ酸生合成経路が、ＫＥＧＧエントリーＭ０００１７の遺伝子を含むメチオニン生合成経路からなる群から選択される、項目４６に記載の複数の宿主細胞。
（項目５２）
前記アミノ酸生合成経路が、ＫＥＧＧエントリーＭ０００１９の遺伝子を含むバリン／イソロイシン生合成経路からなる群から選択される、項目４６に記載の複数の宿主細胞。
（項目５３）
前記アミノ酸生合成経路が、
ａ．ＫＥＧＧエントリーＭ００５３５の遺伝子を含むイソロイシン生合成経路；および／または
ｂ．ＫＥＧＧエントリーＭ００５７０の遺伝子を含むイソロイシン生合成経路
からなる群から選択される、項目４６に記載の複数の宿主細胞。
（項目５４）
前記アミノ酸生合成経路が、ＫＥＧＧエントリーＭ００４３２の遺伝子を含むロイシン生合成経路からなる群から選択される、項目４６に記載の複数の宿主細胞。
（項目５５）
前記アミノ酸生合成経路が、ＫＥＧＧエントリーＭ０００１５の遺伝子を含むプロリン生合成経路からなる群から選択される、項目４６に記載の複数の宿主細胞。
（項目５６）
前記アミノ酸生合成経路が、
ａ．ＫＥＧＧエントリーＭ０００２８の遺伝子を含むオルニチン生合成経路；および
ｂ．ＫＥＧＧエントリーＭ００７６３の遺伝子を含むオルニチン生合成経路
からなる群から選択される、項目４６に記載の複数の宿主細胞。
（項目５７）
前記アミノ酸生合成経路が、ＫＥＧＧエントリーＭ０００２６の遺伝子を含むヒスチジン生合成経路からなる群から選択される、項目４６に記載の複数の宿主細胞。
（項目５８）
前記アミノ酸生合成経路が、
ＫＥＧＧエントリーＭ０００２２の遺伝子を含むシキミ酸生合成経路；
エントリーＭ０００２３の遺伝子を含むトリプトファン生合成経路；
ＫＥＧＧエントリーＭ０００２４の遺伝子を含むフェニルアラニン生合成経路；
ＫＥＧＧエントリーＭ０００２５の遺伝子を含むチロシン生合成経路；および
ＫＥＧＧエントリーＭ０００４０の遺伝子を含むチロシン生合成経路
からなる群から選択される、項目４６に記載の複数の宿主細胞。
（項目５９）
前記第１のプロモーターポリヌクレオチドおよび前記第２のプロモーターポリヌクレオチドが、同じ異種の補助標的遺伝子配列に作動可能に連結している、項目３４〜５８のいずれか一項に記載の複数の宿主細胞。
（項目６０）
プロモーター活性のレベルが徐々に増加している前記複数のプロモーターを含む前記プロモーターの群から選択される第３のプロモーターポリヌクレオチド配列を含む第３の宿主細胞をさらに含み、前記第３のプロモーターが、異種の標的遺伝子に機能的に連結しており、前記第１、第２、および第３のプロモーターが異なる、項目３４〜５９のいずれか一項に記載の複数の宿主細胞。
（項目６１）
前記第１、第２、および第３のプロモーターが、同じ異種の補助標的遺伝子に作動可能に連結している、項目６０に記載の複数の宿主細胞。
（項目６２）
プロモーター活性のレベルが徐々に増加している前記複数のプロモーターを含む前記プロモーターの群から選択される第４のプロモーターポリヌクレオチド配列を含む第４の宿主細胞をさらに含み、前記第４のプロモーターが、異種の標的遺伝子に機能的に連結しており、前記第１、第２、第３、および第４のプロモーターが異なる、項目６０または６１に記載の複数の宿主細胞。
（項目６３）
前記第１、第２、第３、および第４のプロモーターが、同じ異種の補助標的遺伝子に作動可能に連結している、項目６２に記載の複数の宿主細胞。
（項目６４）
プロモーター活性のレベルが徐々に増加している前記複数のプロモーターを含む前記プロモーターの群から選択される第５のプロモーターポリヌクレオチド配列を含む第５の宿主細胞をさらに含み、前記第５のプロモーターが、異種の標的遺伝子に機能的に連結しており、前記第１、第２、第３、第４、および第５のプロモーターが異なる、項目６２または６３に記載の複数の宿主細胞。
（項目６５）
前記第１、第２、第３、第４、および第５のプロモーターが、同じ異種の補助標的遺伝子に作動可能に連結している、項目６４に記載の複数の宿主細胞。
（項目６６）
プロモーター活性のレベルが徐々に増加している前記複数のプロモーターを含む前記プロモーターの群から選択される第６のプロモーターポリヌクレオチド配列を含む第６の宿主細胞をさらに含み、前記第６のプロモーターが、異種の標的遺伝子に機能的に連結しており、前記第１、第２、第３、第４、第５、および第６のプロモーターが異なる、項目６４または６５に記載の複数の宿主細胞。
（項目６７）
前記第１、第２、第３、第４、第５、第６、および第７のプロモーターが、同じ異種の補助標的遺伝子に作動可能に連結している、項目６６に記載の複数の宿主細胞。
（項目６８）
プロモーター活性のレベルが徐々に増加している前記複数のプロモーターを含む前記プロモーターの群から選択される第８のプロモーターポリヌクレオチド配列を含む第８の宿主細胞をさらに含み、前記第８のプロモーターが、異種の標的遺伝子に機能的に連結しており、前記第１、第２、第３、第４、第５、第６、第７、および第８のプロモーターが異なる、項目６６または６７に記載の複数の宿主細胞。
（項目６９）
前記第１、第２、第３、第４、第５、第６、第７、および第８のプロモーターが、同じ異種の補助標的遺伝子に作動可能に連結している、項目６８に記載の複数の宿主細胞。
（項目７０）
前記宿主細胞がＣｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ宿主細胞である、項目３４〜７０のいずれか一項に記載の複数の宿主細胞。
（項目７１）
前記Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ宿主細胞がＣｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｇｌｕｔａｍｉｃｕｍ宿主細胞である、項目７１に記載の複数の宿主細胞。
（項目７２）
標的分子の産生のための選択された代謝経路に直接的に関与する異種の標的遺伝子に作動可能に連結したプロモーターポリヌクレオチド配列をさらに含む、項目３４〜７１のいずれか一項に記載の複数の宿主細胞。
（項目７３）
項目３４〜７２のいずれか一項に記載の複数の宿主細胞を培養するステップを含む方法。
（項目７４）
少なくとも１つの異種の補助標的遺伝子に機能的に連結したプロモーターポリヌクレオチドの組合せを含む複数の形質転換宿主細胞であって、前記プロモーターポリヌクレオチドの組合せが、プロモーター活性のレベルが徐々に増加している複数のプロモーターを含む、複数の形質転換宿主細胞。
（項目７５）
前記プロモーターポリヌクレオチドの組合せが、配列番号１、配列番号５、および配列番号７からなる群から選択される配列を含む少なくとも１つの第１のプロモーターポリヌクレオチド、ならびに配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号６、および配列番号８からなる群から選択される配列を含む少なくとも１つの第２のプロモーターポリヌクレオチドを含む、項目７４に記載の形質転換宿主細胞。
（項目７６）
各プロモーターポリヌクレオチドが、異なる異種の標的遺伝子に機能的に連結している、項目７４または７５に記載の形質転換宿主細胞。
（項目７７）
各プロモーターポリヌクレオチドが、同じ異種の補助標的遺伝子に機能的に連結している、項目７４または７５に記載の形質転換宿主細胞。
（項目７８）
項目７４〜７７のいずれか一項に記載の複数の宿主細胞を培養するステップを含む方法。
（項目７９）
標的生体分子の産生を増加させるための方法であって、
ａ．複数の宿主細胞を提供するステップであって、前記複数の宿主細胞が、プロモーター活性のレベルが徐々に増加している複数の異種のプロモーターを含み、前記複数の前記プロモーターがそれぞれ、異種の標的遺伝子に作動可能に連結しており、前記複数のプロモーターの少なくとも１つのプロモーターが、異種の補助標的遺伝子に作動可能に連結している、ステップ；
ｂ．前記複数の宿主細胞を、前記標的生体分子を産生するのに適した条件下で培養するステップ；および
ｃ．対照細胞と比較して、標的生体分子の産生の増加を示す宿主細胞を前記複数の宿主細胞から同定するステップ
を含む、方法。
（項目８０）
前記同定された宿主細胞を、前記複数の他の宿主細胞から単離するステップをさらに含む、項目７９に記載の方法。
（項目８１）
前記単離された宿主細胞を保存するステップを含む、項目８０に記載の方法。
（項目８２）
前記単離された宿主細胞を増やすステップを含む、項目８０に記載の方法。
（項目８３）
前記複数の宿主細胞が、少なくとも第１および第２の宿主細胞を含み、前記第１および第２の宿主細胞が、プロモーター活性のレベルが徐々に増加している前記複数の異種のプロモーターから選択される異なるプロモーターで形質転換されており、前記異なるプロモーターが、同じ異種の補助標的遺伝子に作動可能に連結している、項目７９〜８２のいずれか一項に記載の方法。
（項目８４）
前記複数の宿主細胞が第３の宿主細胞をさらに含み、前記第１、第２、および第３の宿主細胞がそれぞれ、プロモーター活性のレベルが徐々に増加している前記複数の異種のプロモーターから選択される異なるプロモーターで形質転換されており、前記異なるプロモーターが同じ異種の補助標的遺伝子に作動可能に連結している、項目８３に記載の方法。
（項目８５）
前記複数の宿主細胞が第４の宿主細胞をさらに含み、前記第１、第２、第３、および第４の宿主細胞がそれぞれ、プロモーター活性のレベルが徐々に増加している前記複数の異種のプロモーターから選択される異なるプロモーターで形質転換されており、前記異なるプロモーターが同じ異種の補助標的遺伝子に作動可能に連結している、項目８４に記載の方法。
（項目８６）
前記複数の宿主細胞が第５の宿主細胞をさらに含み、前記第１、第２、第３、第４、および第５の宿主細胞がそれぞれ、プロモーター活性のレベルが徐々に増加している前記複数の異種のプロモーターから選択される異なるプロモーターで形質転換されており、前記異なるプロモーターが同じ異種の補助標的遺伝子に作動可能に連結している、項目８５に記載の方法。
（項目８７）
前記複数の宿主細胞が第６の宿主細胞をさらに含み、前記第１、第２、第３、第４、第５、および第６の宿主細胞がそれぞれ、プロモーター活性のレベルが徐々に増加している前記複数の異種のプロモーターから選択される異なるプロモーターで形質転換されており、前記異なるプロモーターが同じ異種の補助標的遺伝子に作動可能に連結している、項目８６に記載の方法。
（項目８８）
前記複数の宿主細胞が第７の宿主細胞をさらに含み、前記第１、第２、第３、第４、第５、第６、および第７の宿主細胞がそれぞれ、プロモーター活性のレベルが徐々に増加している前記複数の異種のプロモーターから選択される異なるプロモーターで形質転換されており、前記異なるプロモーターが同じ異種の補助標的遺伝子に作動可能に連結している、項目８７に記載の方法。
（項目８９）
前記複数の宿主細胞が第８の宿主細胞をさらに含み、前記第１、第２、第３、第４、第５、第６、第７、および第８の宿主細胞がそれぞれ、プロモーター活性のレベルが徐々に増加している前記複数の異種のプロモーターから選択される異なるプロモーターで形質転換されており、前記異なるプロモーターが同じ異種の補助標的遺伝子に作動可能に連結している、項目８８に記載の方法。
（項目９０）
前記異種の補助標的遺伝子がシェル３および／またはシェル４の標的遺伝子である、項目７９〜８９のいずれか一項に記載の方法。
（項目９１）
前記提供するステップが、前記異種の標的遺伝子に作動可能に連結した、プロモーター活性のレベルが徐々に増加している前記複数のプロモーターを含む組換えベクターライブラリーで複数の宿主細胞を形質転換することを含む、項目７９〜９０のいずれか一項に記載の方法。