【手続補正書】
【提出日】令和3年4月9日(2021.4.9)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
第1の治療的トランスジーンをコードする第1のヌクレオチド配列、第2の治療的トランスジーンをコードする第2のヌクレオチド配列および第1のヌクレオチド配列と第2のヌクレオチド配列の間に配置される切断部位をコードする第3のヌクレオチド配列を含む、組み換えアデノウイルスであって、組み換えアデノウイルスは、5'〜3'の方向で、第1のヌクレオチド配列、第3のヌクレオチド配列および第2のヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド配列を、任意に連続して含み、任意に第1のヌクレオチド配列、第3のヌクレオチド配列および第2のヌクレオチド配列が、単一のプロモーターに操作可能に連結され、該プロモーターが、任意に、第1のヌクレオチド配列の第1のヌクレオチドに対して5'に位置し、第1のヌクレオチド配列、第3のヌクレオチド配列および第2のヌクレオチド配列が、単一のポリペプチド鎖として発現され、任意に、組み換えアデノウイルスは、2型アデノウイルス(Ad2)または好ましくは5型アデノウイルス(Ad5)である、組み換えアデノウイルス。
【請求項２】
該切断部位がタンパク質分解性切断部位であり、任意に、タンパク質分解性切断部位が、真核細胞の小胞体またはゴルジ体に存在するプロテアーゼにより切断され、タンパク質分解性切断部位が、フューリン(furin)切断部位であり、任意に、該フューリン切断部位がRX1X2R (配列番号：6) (式中、X1が任意のアミノ酸であり、X2がLysまたはArgである)またはRAKR (配列番号：7)を含む、請求項１記載の組み換えアデノウイルス。
【請求項３】
第1、第2および第3のヌクレオチド配列が、E1b-19Kの開始部位とE1b-19Kの停止部位もしくは任意にE1b-55Kの開始部位の間に配置されるE1b-19k挿入部位に挿入され、任意に、E1b-19K挿入部位が、E1b-19Kの開始部位に隣接する約200ヌクレオチドの欠失、任意に202ヌクレオチドの欠失（好ましくは、Ad5ゲノム (配列番号：1)のヌクレオチド1714〜1916に対応する欠失）もしくは203ヌクレオチドの欠失（好ましくは、Ad5ゲノム (配列番号：1)のヌクレオチド1714〜1917に対応する欠失）を含み、および／または第1のヌクレオチド配列、第3のヌクレオチド配列および第2のヌクレオチド配列がCTGACCTC (配列番号：2)とTCACCAGG (配列番号：3)の間に挿入され、もしくは組み換えアデノウイルスは、5'〜3'の方向で、CTGACCTC (配列番号：2)、第1のヌクレオチド配列、第3のヌクレオチド配列、第2のヌクレオチド配列およびTCACCAGG (配列番号：3)を含む、請求項１または２記載の組み換えアデノウイルス。
【請求項４】
組み換えアデノウイルスは、
(a)機能性Pea3結合部位の欠失を有するE1aプロモーター、ここで、任意に、該欠失が、E1aの開始部位の上流約-300〜約-250に対応するヌクレオチドの欠失を含み、任意に、該欠失が、E1aの開始部位の上流-304〜-255もしくはE1aの開始部位の上流-305〜-255に対応するヌクレオチドの欠失もしくはAd5ゲノム (配列番号：1)の195〜244に対応するヌクレオチドの欠失を含み、および／またはE1aプロモーターが配列GGTGTTTTGG (配列番号：4)を含む、および／または
(b)機能性TATAボックスの欠失、任意に、TATAボックス全体の欠失を有するE1aプロモーター、ここで、任意に、該欠失が、E1aプロモーターの-27〜-24、E1aプロモーターの-31〜-24、E1aプロモーターの-44〜+54、E1aプロモーターの-146〜+54、Ad5ゲノム (配列番号：1)の472〜475、Ad5ゲノム (配列番号：1)の468〜475、Ad5ゲノム (配列番号：1)の455〜552もしくはAd5ゲノム (配列番号：1)の353〜552に対応するヌクレオチドの欠失を含み、
を含み、および／または組み換えアデノウイルスは、配列CTAGGACTG (配列番号：5)、AGTGCCCG (配列番号：16)および/またはTATTCCCG (配列番号：17)を含むウイルスを生じるポリヌクレオチド欠失を含む、請求項１〜３いずれか一項記載の組み換えアデノウイルス。
【請求項５】
組み換えアデノウイルスは、機能性CAATボックスの欠失、任意にCAATボックス全体の欠失を有するE1aプロモーターを含み、任意に、該欠失が、E1aプロモーターの-76〜-68もしくはAd5ゲノム (配列番号：1)の423〜431に対応するヌクレオチドの欠失を含み、および／または任意に、E1aプロモーターが配列TTCCGTGGCG (配列番号：18)を含む、請求項１〜４いずれか一項記載の組み換えアデノウイルス。
【請求項６】
組み換えアデノウイルスがE3欠失をさらに含み、E3欠失が、pVIIIの停止部位とFiberの開始部位の間、任意に、E3-10.5Kの停止部位とE3-14.7Kの停止部位の間に配置され、任意に、E3欠失が、約500〜約3185、約500〜約3000、約500〜約2500、約500〜約2000、約500〜約1500、約500〜約1000、約1000〜約3185、約1000〜約3000、約1000〜約2500、約1000〜約2000、約1000〜約1500、約1500〜約3185、約1500〜約3000、約1500〜約2000、約2000〜約3185、約2000〜約3000、約2000〜約2500、約2500〜約3185、約2500〜約3000もしくは約3000〜約3185ヌクレオチドの欠失；E3-10.5Kの停止部位に隣接する約500〜約1551、約500〜約1500、約500〜約1000、約1000〜約1551、約1000〜約1500もしくは約1500〜約1551ヌクレオチドの欠失；E3-10.5Kの停止部位に隣接する約1050ヌクレオチドの欠失；E3-10.5Kの停止部位に隣接する1063ヌクレオチドの欠失；E3-10.5Kの停止部位に隣接する1064ヌクレオチドの欠失；Ad5 dl309 E3欠失に対応する欠失；もしくはAd5ゲノム (配列番号：1)のヌクレオチド29773〜30836に対応する欠失を含む、および／または任意に、E3欠失が、E3-gp19Kの停止部位とE3-14.7Kの停止部位の間に配置され、E3欠失が、E3-gp19Kの停止部位に隣接する約500〜約1824、約500〜約1500、約500〜約1000、約1000〜約1824、約1000〜約1500もしくは約1500〜約1824ヌクレオチドの欠失；E3-gp19Kの停止部位に隣接する約1600ヌクレオチドの欠失；E3-gp19Kの停止部位に隣接する1622ヌクレオチドの欠失；および／またはAd5ゲノム (配列番号：1)のヌクレオチド29218〜30839に対応する欠失を含む、請求項１〜５いずれか一項記載の組み換えアデノウイルス。
【請求項７】
組み換えアデノウイルスがE4欠失をさらに含み、E4欠失が、E4-ORF6/7の開始部位と右逆方向末端反復(right inverted terminal repeat) (ITR)の間、任意にE4-ORF6/7の開始部位とE4-ORF1の開始部位の間に配置され、E4欠失が、約500〜約2500、約500〜約2000、約500〜約1500、約500〜約1000、約1000〜約2500、約1000〜約2000、約1000〜約1500、約1500〜約2500、約1500〜約2000もしくは約2000〜約2500ヌクレオチドの欠失；E4-ORF6/7の開始部位に隣接する約250〜約1500、約250〜約1250、約250〜約1000、約250〜約750、約250〜約500、500〜約1500、約500〜約1250、約500〜約1000、約500〜約750、750〜約1500、約750〜約1250、約750〜約1000、約1000〜約1500、約1000〜約1250もしくは約1250〜約1500ヌクレオチドの欠失；E4-ORF6/7の開始部位に隣接する約1450ヌクレオチドの欠失；E4-ORF6/7の開始部位に隣接する1449ヌクレオチドの欠失；および／またはAd5ゲノム (配列番号：1)のヌクレオチド34078〜35526に対応する欠失を含む、請求項１〜６いずれか一項記載の組み換えアデノウイルス。
【請求項８】
第1および/または第2の治療的トランスジーンが、(a)アセチルコリン、抗PD-1抗体重鎖または軽鎖、抗PD-L1抗体重鎖または軽鎖、BORIS/CTCFL、CD19、CD20、CD80、CD86、CD137、CD137L、CD154、DKK1/Wnt、FGF、ICAM、IL-1、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-8、IL-9、IL-17、IL-23、IL-23A/p19、p40、IL-24、IL-27、IL-27A/p28、IL-27B/EBI3、IL-35、インターフェロンγ、MAGE、NY-ESO-1、p53、TGF-β、TGF-βトラップおよびチミジンキナーゼから選択されるポリペプチド、(b)アセチルコリン、抗PD-1抗体重鎖または軽鎖、抗PD-L1抗体重鎖または軽鎖、BORIS/CTCFL、CD19、CD20、CD80、CD86、CD137、CD137L、CD154、DKK1/Wnt、FGF、ICAM、IL-1、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-8、IL-9、IL-23A/p19、p40、インターフェロンγ、MAGE、NY-ESO-1、p53、TGF-β、TGF-βトラップおよびチミジンキナーゼから選択されるポリペプチド、あるいは(c)ヘテロダイマーサイトカイン、任意にIL-23A/p19およびp40の第1および第2のサブユニットのそれぞれをコードし、任意に、第1の治療的トランスジーンがp40をコードし、任意に、第2の治療的トランスジーンがIL-23A/p19をコードし、任意に、組み換えアデノウイルスは、配列番号：9のヌクレオチド17〜1000によりコードされるアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列、配列番号：9のヌクレオチド1013〜1582によりコードされるアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列、配列番号：9のヌクレオチド17〜1582によりコードされるアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列、配列番号：9のヌクレオチド配列および／または配列番号：9に対して80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%もしくは99%の配列同一性を有する配列を含む、請求項１〜７いずれか一項記載の組み換えアデノウイルス。
【請求項９】
第1および/または第2の治療的トランスジーンが、外来性プロモーター配列に操作可能に連結されない、請求項１〜８いずれか一項記載の組み換えアデノウイルス。
【請求項１０】
第1および第2の治療的トランスジーンの合わせたサイズが、約500〜約5000、約500〜約4000、約500〜約3000、約500〜約2000、約500〜約1000、約1000〜約5000、約1000〜約4000、約1000〜約3000、約1000〜約2000、約2000〜約5000、約2000〜約4000、約2000〜約3000、約3000〜約5000、約3000〜約4000もしくは約4000〜5000ヌクレオチド；約500〜約7000、約500〜約6000、約500〜約5000、約500〜約4000、約500〜約3000、約500〜約2000、約500〜約1000、約1000〜約7000、約1000〜約6000、約1000〜約5000、約1000〜約4000、約1000〜約3000、約1000〜約2000、約2000〜約7000、約2000〜約6000、約2000〜約5000、約2000〜約4000、約2000〜約3000、約3000〜約7000、約3000〜約6000、約3000〜約5000、約3000〜約4000、約4000〜約7000、約4000〜約6000、約4000〜約5000ヌクレオチド、約5000〜約7000、約5000〜約6000もしくは約6000〜約7000ヌクレオチド；少なくとも約500〜約5000、約500〜約4000、約500〜約3000、約500〜約2000、約500〜約1000、約1000〜約5000、約1000〜約4000、約1000〜約3000、約1000〜約2000、約2000〜約5000、約2000〜約4000、約2000〜約3000、約3000〜約5000、約3000〜約4000もしくは約4000〜5000ヌクレオチド；少なくとも約500〜約7000、約500〜約6000、約500〜約5000、約500〜約4000、約500〜約3000、約500〜約2000、約500〜約1000、約1000〜約7000、約1000〜約6000、約1000〜約5000、約1000〜約4000、約1000〜約3000、約1000〜約2000、約2000〜約7000、約2000〜約6000、約2000〜約5000、約2000〜約4000、約2000〜約3000、約3000〜約7000、約3000〜約6000、約3000〜約5000、約3000〜約4000、約4000〜約7000、約4000〜約6000、約4000〜約5000ヌクレオチド、約5000〜約7000、約5000〜約6000もしくは約6000〜約7000ヌクレオチド；少なくとも約500、約1000、約2000、約3000、約4000もしくは約5000ヌクレオチド；少なくとも約500、約1000、約2000、約3000、約4000、約5000ヌクレオチド、約6000もしくは約7000ヌクレオチド；約1600ヌクレオチド；約1650ヌクレオチド；および／または約3100ヌクレオチドを含む、請求項１〜９いずれか一項記載の組み換えアデノウイルス。
【請求項１１】
過増殖細胞において選択的に複製する、請求項１〜１０いずれか一項記載の組み換えアデノウイルス。
【請求項１２】
過増殖細胞、任意に癌細胞において第1および/または第2の治療的トランスジーンを選択的に発現する、請求項１〜１１いずれか一項記載の組み換えアデノウイルス。
【請求項１３】
腫瘍崩壊性ウイルスである、請求項１〜１２いずれか一項記載の組み換えアデノウイルス。
【請求項１４】
請求項１〜１３いずれか一項に規定される組み換えアデノウイルスおよび少なくとも1つの薬学的に許容可能な担体または希釈剤を含む、医薬組成物。
【請求項１５】
標的細胞を、請求項１〜１３いずれか一項に規定される組み換えアデノウイルスの有効量に暴露して、2つの治療的トランスジーンを発現させる工程を含む、標的細胞において2つの治療的トランスジーンを発現させる方法であって、任意に、2つの治療的トランスジーンが、発現された場合、単一のポリペプチド鎖を生じ、任意に、単一のポリペプチド鎖が、翻訳後に2つのポリペプチド鎖に切断される、方法。
【請求項１６】
腫瘍細胞の増殖を阻害するために、腫瘍の増殖を阻害するために、または癌の治療を必要とする被験体において癌を治療するために、請求項１〜１３いずれか一項に規定される組み換えアデノウイルスの有効量を含む、腫瘍細胞の増殖を阻害するための、腫瘍増殖の阻害を必要とする被験体において腫瘍増殖を阻害するための、または癌の治療を必要とする被験体において癌を治療するための医薬組成物であって、任意に、癌が、(a)肛門癌、基底細胞癌、膀胱癌、骨癌、脳癌、乳癌、癌腫、胆管癌、子宮頸癌、結腸癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌、胃食道癌、胃腸(GI)癌、消化管間質腫瘍、肝細胞癌、婦人科癌、頭頸部癌、血液癌、腎臓癌、白血病、肝臓癌、肺癌、リンパ腫、黒色腫、メルケル細胞癌、中皮腫、神経内分泌癌、非小細胞肺癌、卵巣癌、膵臓癌、小児癌、前立腺癌、腎細胞癌、肉腫、皮膚癌、小細胞肺癌、皮膚の扁平上皮癌、胃癌、精巣癌および甲状腺癌、または(b)黒色腫、皮膚の扁平上皮癌、基底細胞癌、頭頸部癌、乳癌、肛門癌、子宮頸癌、非小細胞肺癌、中皮腫、小細胞肺癌、腎細胞癌、前立腺癌、胃食道癌、結腸直腸癌、精巣癌、膀胱癌、卵巣癌、肝細胞癌、胆管癌、脳癌、子宮内膜癌、神経内分泌癌、メルケル細胞癌、消化管間質腫瘍、肉腫および膵臓癌から選択され、任意に、組み換えアデノウイルスが、手術、放射線、化学療法、免疫療法、ホルモン療法およびウイルス療法から選択される1つ以上の治療と組み合わせて投与され、任意に、組み換えアデノウイルスの有効量が、102〜1015プラーク形成単位(pfu)であり、任意に、被験体が、ヒトまたは小児のヒトである、医薬組成物。