【手続補正書】
【提出日】令和3年10月11日(2021.10.11)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
リボ核酸（ＲＮＡ）を生成するための方法であって、
（ａ）（ｉ）細胞ＲＮＡ、ここで、細胞ＲＮＡは、リボソームＲＮＡ、メッセンジャーＲＮＡ、および／またはトランスファーＲＮＡを含む、および（ｉｉ）リボヌクレアーゼをインキュベートして、５’ヌクレオシド一リン酸（ＮＭＰ）を生成すること；
（ｂ）リボヌクレアーゼを除去すること；および
（ｃ）５’ＮＭＰを、ポリリン酸キナーゼ（ＰＰＫ）、ポリリン酸、目的のＲＮＡをコードするデオキシリボ核酸（ＤＮＡ）鋳型、およびＲＮＡポリメラーゼとインキュベートして、目的のＲＮＡを生成すること
を含む、前記方法。
【請求項２】
リボヌクレアーゼが、ヌクレアーゼＰ１またはRNase Rである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
５’ＮＭＰが、５’ＡＭＰ、５’ＧＭＰ、５’ＣＭＰ、および／または５’ＵＭＰを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
リボヌクレアーゼが、温度、ｐＨ、塩、洗剤、アルコール、化学阻害剤、分離、沈殿、ろ過、キャプチャー、および／またはクロマトグラフィーを介して除去される、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
ＰＰＫが、ＰＰＫ１ファミリーの酵素またはＰＰＫ２ファミリーの酵素である、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
ＰＰＫが、Deinococcus geothermalisからのクラスＩＩＩのＰＰＫ２酵素（配列番号１）である、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
ポリリン酸が、テトラポリリン酸、ペンタポリリン酸、およびヘキサメタリン酸からなる群より選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
ステップ（ｃ）が、ＰＰＫ、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）鋳型、および／またはＲＮＡポリメラーゼを生成する細胞から得られた酵素調製物または細胞ライセートを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
細胞ライセートまたは酵素調製物中のネイティブな酵素の活性が、遺伝子修飾、細胞からの酵素分泌、プロテアーゼターゲティング、温度、ｐＨ、塩、洗剤、アルコール、化学阻害剤、分離、沈殿、ろ過、キャプチャー、および／またはクロマトグラフィーを介して除去されている、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
ネイティブな酵素が、ホスファターゼ、ヌクレアーゼ、プロテアーゼ、デアミナーゼ、オキシドレダクターゼ、およびヒドロラーゼからなる群より選択される、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
リボ核酸（ＲＮＡ）を生成するための方法であって、
（ａ）（ｉ）細胞ＲＮＡおよび（ｉｉ）リボヌクレアーゼをインキュベートして、５’ヌクレオシド一リン酸（ＮＭＰ）を生成すること；
（ｂ）リボヌクレアーゼを除去すること；および
（ｃ）５’ＮＭＰを少なくとも１つのＮＭＰキナーゼ、少なくとも１つのＮＤＰキナーゼ、少なくとも１つのポリリン酸キナーゼ（ＰＰＫ）、ポリリン酸、目的のＲＮＡをコードするデオキシリボ核酸（ＤＮＡ）鋳型、およびＲＮＡポリメラーゼとインキュベートして、目的のＲＮＡを生成すること
を含む、前記方法。
【請求項１２】
細胞ＲＮＡが、リボソームＲＮＡ、メッセンジャーＲＮＡ、および／またはトランスファーＲＮＡを含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
リボヌクレアーゼが、ヌクレアーゼＰ１またはRNase Rである、請求項１１に記載の方法。
【請求項１４】
５’ＮＭＰが、５’ＡＭＰ、５’ＧＭＰ、５’ＣＭＰ、および／または５’ＵＭＰを含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項１５】
リボヌクレアーゼが、温度、ｐＨ、塩、洗剤、アルコール、化学阻害剤、分離、沈殿、ろ過、キャプチャー、および／またはクロマトグラフィーを介して除去される、請求項１１に記載の方法。
【請求項１６】
少なくとも１つのＮＭＰキナーゼが、ＡＭＰキナーゼ、ＣＭＰキナーゼ、ＵＭＰキナーゼ、またはＧＭＰキナーゼである、請求項１１に記載の方法。
【請求項１７】
少なくとも１つのＮＭＰキナーゼが、Thermus thermophilusからのＡＭＰキナーゼ（配列番号１２）、Thermus thermophilusからのＣＭＰキナーゼ（配列番号１３）、Pyrococcus furiosusからのＵＭＰキナーゼ（配列番号１４）、および／またはThermotoga maritimaからのＧＭＰキナーゼ（配列番号１５）である、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
少なくとも１つのＮＤＰキナーゼが、Aquifex aeolicusからのもの（配列番号１６）である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１９】
少なくとも１つのＰＰＫが、ＰＰＫ１ファミリーの酵素またはＰＰＫ２ファミリーの酵素である、請求項１１に記載の方法。
【請求項２０】
少なくとも１つのＰＰＫが、Deinococcus geothermalisからのクラスＩＩＩのＰＰＫ２酵素（配列番号１）である、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
ポリリン酸が、テトラポリリン酸、ペンタポリリン酸、およびヘキサメタリン酸からなる群より選択される、請求項１１に記載の方法。
【請求項２２】
ステップ（ｃ）が、ＰＰＫ、ＮＭＰキナーゼ、ＮＤＰキナーゼ、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）鋳型、および／またはＲＮＡポリメラーゼを生成する細胞から得られた酵素調製物または細胞ライセートを含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項２３】
細胞ライセートまたは酵素調製物中のネイティブな酵素の活性が、遺伝子修飾、細胞からの酵素分泌、プロテアーゼターゲティング、温度、ｐＨ、塩、洗剤、アルコール、化学阻害剤、分離、沈殿、ろ過、キャプチャー、および／またはクロマトグラフィーを介して除去されている、請求項１１に記載の方法。
【請求項２４】
ネイティブな酵素が、ホスファターゼ、ヌクレアーゼ、プロテアーゼ、デアミナーゼ、オキシドレダクターゼ、およびヒドロラーゼからなる群より選択される、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
リボ核酸（ＲＮＡ）を生成するための方法であって、
（ａ）（ｉ）細胞ＲＮＡおよび（ｉｉ）ヌクレアーゼＰ１をインキュベートして、５’ヌクレオシド一リン酸（ＮＭＰ）を生成すること；
（ｂ）ヌクレアーゼＰ１を除去すること；および
（ｃ）５’ＮＭＰを少なくとも１つのＮＭＰキナーゼ、少なくとも１つのＮＤＰキナーゼ、Deinococcus geothermalisからのクラスＩＩＩのＰＰＫ２酵素（配列番号１）、ポリリン酸、目的のＲＮＡをコードするデオキシリボ核酸（ＤＮＡ）鋳型、およびＲＮＡポリメラーゼとインキュベートして、目的のＲＮＡを生成すること
を含む、前記方法。
【請求項２６】
少なくとも１つのＮＭＰキナーゼが、Thermus thermophilusからのＡＭＰキナーゼ（配列番号１２）、Thermus thermophilusからのＣＭＰキナーゼ（配列番号１３）、Pyrococcus furiosusからのＵＭＰキナーゼ（配列番号１４）、および／またはThermotoga maritimaからのＧＭＰキナーゼ（配列番号１５）である、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
少なくとも１つのＮＤＰキナーゼが、Aquifex aeolicusからのもの（配列番号１６）である、請求項２５に記載の方法。
【請求項２８】
リボ核酸（ＲＮＡ）を生成するための方法であって、
（ａ）（ｉ）細胞ＲＮＡおよび（ｉｉ）リボヌクレアーゼをインキュベートして、５’ヌクレオシド一リン酸（ＮＭＰ）を生成すること；
（ｂ）リボヌクレアーゼを除去すること、ここで、リボヌクレアーゼは、温度、ｐＨ、塩、洗剤、アルコール、化学阻害剤、分離、沈殿、ろ過、キャプチャー、および／またはクロマトグラフィーを介して除去される；および
（ｃ）５’ＮＭＰをポリリン酸キナーゼ（ＰＰＫ）、ポリリン酸、目的のＲＮＡをコードするデオキシリボ核酸（ＤＮＡ）鋳型、およびＲＮＡポリメラーゼとインキュベートして、目的のＲＮＡを生成すること
を含む、前記方法。
【請求項２９】
リボヌクレアーゼが、ヌクレアーゼＰ１またはRNase Rである、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
ＰＰＫが、ＰＰＫ１ファミリーの酵素またはＰＰＫ２ファミリーの酵素である、請求項２８に記載の方法。