【誤訳訂正書】
【提出日】令和3年2月1日(2021.2.1)
【誤訳訂正１】
【訂正対象書類名】特許請求の範囲
【訂正対象項目名】全文
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（ＡＣ００９−Ｈ１）で表される化合物。
【化１】
2018507175.tif 000001
【請求項２】
式（ＡＣ０１２−Ｈ１）で表される化合物。
【化２】
2018507175.tif 000002
【請求項３】
癌の治療用の医薬組成物であって、該組成物は、治療に有効な量の化合物及び少なくとも一つの薬学的に許容されるキャリアとを含み、
前記化合物は、以下の式で表されるＡＣ０１１、ＡＣ００９−Ｈ１及びＡＣ０１２−Ｈ１からなる群から選択される少なくとも１種である癌の治療用の医薬組成物。
【化３】
2018507175.tif 000003
【請求項４】
前記キャリアは、賦形剤、希釈剤、増粘剤、充填剤、結合剤、崩壊剤、潤滑剤、油性及び非油性の基剤、界面活性剤、懸濁化剤、ゲル化剤、補助剤、防腐剤、酸化防止剤、安定剤、色素並びに香料の少なくとも１種を含む請求項３に記載の医薬組成物。
【請求項５】
前記医薬組成物は、癌細胞の増殖を抑制することにより治療効果を有する請求項３に記載の医薬組成物。
【請求項６】
前記医薬組成物は、静脈注射用の製剤、皮下注射用の製剤、経口投与用の製剤又は塗布用の製剤である請求項３に記載の医薬組成物。
【請求項７】
前記医薬組成物は、溶液、乳剤、懸濁剤、粉末、錠剤、油剤、軟膏剤又はカプセルの剤形である請求項３に記載の医薬組成物。
【請求項８】
前記癌は、前立腺癌、肝癌、黒色腫、脳腫瘍、大腸癌からなる群から選択される少なくとも１種である請求項３に記載の医薬組成物。
【請求項９】
前記癌は大腸癌又は肝癌である請求項３に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
牛樟芝菌糸体の生物活性を有する化合物の製造方法であって、
該方法は、
牛樟芝菌糸体をｎ−ヘキサンで、それぞれ一時間から三時間、二回還流抽出し、
真空濾過した後、二つのヘキサン抽出液を混合し、
シリカゲル（７０−２３０メッシュ）と菌糸体とでカラムを準備し、
ｎ−ヘキサン／酢酸エチルの勾配溶液で溶出してＦ１、Ｆ２とＦ３の画分を得、勾配は、それぞれ、１７−２２％の酢酸エチル、２３−２７％の酢酸エチル及び２８−３３％の酢酸エチルであり、Ｆ３を保持時間によって三つの画分Ｆ３−１、Ｆ３−２、Ｆ３−３に連続して分離し、
画分Ｆ３−１を、移動相としてＣＨ２Ｃｌ２／アセトンを用いて、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（５０：１から２０：１の勾配溶出）で分離し、ＣＨ２Ｃｌ２／アセトン＝４０：１−１５：１の画分を採取し、更に順相セミ分取ＨＰＬＣカラムにてｎ−ヘキサン／酢酸エチル（４：１）を用いて精製された下記ＡＣ００６を得、
【化４】
2018507175.tif 000004
画分Ｆ３−２を順相ＭＰＬＣシリカゲルカラムで、移動相としてＣＨ２Ｃｌ２／アセトン勾配溶液（１００％：０％から７０％：３０％）を用いて分離し、９５％：５％から８５％：１５％までの画分を採取してＦ３−２−１、Ｆ３−２−２、Ｆ３−２−３の三つの画分に連続して分離し、
画分Ｆ３−２−３を、移動相としてｎ−ヘキサン／酢酸エチル（１００％：０％から０％：１００％）を用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、ｎ−ヘキサン／アセトン＝９０／１０から７０／３０までの画分を採取し、さらに、移動相としてｎ−ヘキサン／酢酸エチル（１００％：０％から０％：１００％）を用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して、ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝６０／４０の溶出溶液で下記ＡＣ００７を得、
【化５】
2018507175.tif 000005
画分Ｆ−３−３を、順相ＭＰＬＣシリカゲルカラムで、ＣＨ２Ｃｌ２／アセトン（１００％：０％から０％：１００％）勾配溶出を用いて分離し、９０％：１０％から７０％：３０％までの画分を採取し、画分Ｆ３−３−１、Ｆ３−３−２、Ｆ３−３−３、Ｆ３−３−４、Ｆ３−３−５の五つに連続して分離し、
Ｆ−３−３−５（ＣＨ２Ｃｌ２／アセトン＝７３／２７の画分）を、移動相としてｎ−ヘキサン／アセトン（９５％：５％から５０％：５０％）を用いたシリカゲルカラムで精製して、８５％：１５％から７０％：３０％の画分を採取し、画分Ｆ３−３−５−１、Ｆ３−３−５−２、Ｆ３−３−５−３、Ｆ３−３−５−４、Ｆ３−３−５−５に五つに連続して分離し、
画分Ｆ３−３−５−１（ｎ−ヘキサン／アセトン＝９０／１０−８０／２０）を、移動相として水中の１％蟻酸／メタノール＝３５／６５〜２０／８０勾配を用いて、逆相ＭＰＬＣ  Ｃ−１８カラム精製により分離し、水中の１％蟻酸／メタノール＝２８／７２−２２／７８の画分を取って、移動相としてｎ−ヘキサン／酢酸エチルの勾配溶出（８０％：２０％から５０％：５０％まで）を用いて、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、ｎ−ヘキサン／酢酸エチル（７５％：２５％−６５％：３５％）の溶出溶液で下記ＡＣ０１２を得、
【化６】
2018507175.tif 000006
画分Ｆ３−３−５−３を、移動相として水中の１％蟻酸／メタノール＝２５／７５の１５ｍＬ／ｍｉｎのイソクラティック溶出を用いた逆相ＭＰＬＣ  Ｃ−１８シリカゲルカラムクロマトグラフィーによって分離し、さらに、移動相としてＣＨ２Ｃｌ２／酢酸エチルを用いてシリカゲル勾配溶液（１００％：０％から０％：１００％まで）で１３０から１７０分の保持時間の画分を精製し、ＣＨ２Ｃｌ２／酢酸エチル＝８０／２０−６０／４０の溶出溶液で下記ＡＣ００９を採取し、
【化７】
2018507175.tif 000007
画分Ｆ３−３−５−４（ｎ−ヘキサン／アセトン＝７６／２４）を分離し、移動相として水中の１％蟻酸／メタノール＝２５％：７５％及びイソクラティック溶出を用いた逆相ＭＰＬＣ  Ｃ−１８カラムクロマトグラフィで精製し、下記ＡＣ０１１を得、
【化８】
2018507175.tif 000008
前記ＡＣ００６、ＡＣ００７、ＡＣ００９、ＡＣ０１１、ＡＣ０１２は、牛樟芝菌糸体の生物活性を有する化合物である製造方法。
【請求項１１】
１モル当量のＮａＯＭｅで前記生物活性を有する化合物を加水分解し、
加水分解反応が終わった後、酸性アンバライトを加えて濾紙で濾過し、中間産物を得、
分離樹脂としてシリカゲルを、移動相としてヘキサンと酢酸エチルの勾配溶液を用いたシリカゲルクロマトグラフィーにより該中間産物を溶出し、ヘキサンと酢酸エチルとの溶出勾配を４：１から１：１までとして、勾配溶液が１：１の比率で生成物を溶出し、
Ｃ１８セミ分取カラムとイソクラティック溶出剤としてメタノール：０．１％ＦＡ緩衝液（リン酸緩衝生理食塩水）＝７５：２５の溶液とを用いた逆相ＨＰＬＣによって前記生成物を精製して、前記生物活性を有する化合物のＣ４が水酸基である誘導体を製造する請求項１０に記載の方法。
【誤訳訂正２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１７】
本発明は更に牛樟芝菌糸体で生物活性を有する化合物及びその誘導体を製造する方法を提供し、それは以下のステップを含む。
牛樟芝菌糸体をｎ−ヘキサンで、それぞれ一時間から三時間、二回還流抽出し、
真空濾過した後、二つのヘキサン抽出液を混合し、
シリカゲル（７０−２３０メッシュ）と菌糸体でカラムを準備し、
ｎ−ヘキサン／酢酸エチルの勾配溶液で溶出してＦ１、Ｆ２とＦ３の画分を得、勾配は、それぞれ、１７−２２％の酢酸エチル、２３−２７％の酢酸エチル及び２８−３３％の酢酸エチルであり、Ｆ３を保持時間によって三つの画分Ｆ３−１〜Ｆ３−３に分け、
画分Ｆ３−１を、移動相としてＣＨ２Ｃｌ２／アセトンを用いて、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（５０：１から２０：１の勾配溶出）で分離し、ＣＨ２Ｃｌ２／アセトン＝４０：１−１５：１の画分を採取し、更に順相セミ分取ＨＰＬＣカラムにてｎ−ヘキサン／酢酸エチル（４：１）を用いて精製されたＡＣ００６を得、
画分Ｆ３−２を順相ＭＰＬＣシリカゲルカラムで、移動相としてＣＨ２Ｃｌ２／アセトン勾配溶液（１００％：０％から７０％：３０％）を用いて分離し、９５％：５％から８５％：１５％までの画分を採取してＦ３−２−１からＦ３−２−３まで三つの画分に分離し、
画分Ｆ３−２−３を、移動相としてｎ−ヘキサン／酢酸エチル（１００％：０％から０％：１００％）を用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、ｎ−ヘキサン／アセトン＝９０／１０から７０／３０までの画分を採取し、さらに、移動相としてｎ−ヘキサン／酢酸エチル（１００％：０％から０％：１００％）を用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して、ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝６０／４０の溶出溶液でＡＣ００７を得、
画分Ｆ−３−３を、順相ＭＰＬＣシリカゲルカラムで、ＣＨ２Ｃｌ２／アセトン（１００％：０％から０％：１００％）勾配溶出を用いて分離し、９０％：１０％から７０％：３０％までの画分を採取し、画分Ｆ３−３−１からＦ３−３−５まで五つに分離し、
Ｆ−３−３−５（ＣＨ２Ｃｌ２／アセトン＝７３／２７の画分）を、移動相としてｎ−ヘキサン／アセトン（９５％：５％から５０％：５０％）を用いたシリカゲルカラムで精製して、８５％：１５％から７０％：３０％の画分を採取し、画分Ｆ３−３−５−１からＦ３−３−５−５まで五つに分離する。
【誤訳訂正３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１８】
画分Ｆ３−３−５−１（ｎ−ヘキサン／アセトン＝９０／１０−８０／２０）を、移動相として水中の１％蟻酸／メタノール＝３５／６５〜２０／８０勾配を用いて、逆相ＭＰＬＣ  Ｃ−１８カラム精製により分離し、水中の１％蟻酸／メタノール＝２８／７２−２２／７８の画分を取って、移動相としてｎ−ヘキサン／酢酸エチルで勾配溶出（８０％：２０％から５０％：５０％まで）を用いて、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、ｎ−ヘキサン／酢酸エチル（７５％：２５％−６５％：３５％）の溶出溶液でＡＣ０１２を得、
画分Ｆ３−３−５−３を、移動相として水中の１％蟻酸／メタノール＝２５／７５の１５ｍＬ／ｍｉｎのイソクラティック溶出を用いた逆相ＭＰＬＣ  Ｃ−１８シリカゲルカラムクロマトグラフィーによって分離し、さらに、移動相としてＣＨ２Ｃｌ２／酢酸エチルを用いてシリカゲル勾配溶液（１００％：０％から０％：１００％まで）で１３０から１７０分の保持時間の画分を精製し、ＣＨ２Ｃｌ２／酢酸エチル＝８０／２０−６０／４０の溶出溶液でＡＣ００９を採取し、
画分Ｆ３−３−５−４（ｎ−ヘキサン／アセトン＝７６／２４）を分離し、移動相として水中の１％蟻酸／メタノール＝２５％：７５％及びイソクラティック溶出を用いた逆相ＭＰＬＣ  Ｃ−１８カラムクロマトグラフィで精製し、ＡＣ０１１を得、
前記ＡＣ００６、ＡＣ００７、ＡＣ００９、ＡＣ０１１、ＡＣ０１２は、牛樟芝菌糸体の生物活性を有する化合物である。
【誤訳訂正４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１９】
好ましい実施様態では、該生物活性を有する化合物を更にC4がヒドロキシル基である誘導体の製造に用いられ、下記ステップを含む。
１モル当量のメタノールで前記生物活性を有する化合物を加水分解し、
加水分解反応が終わった後、酸性アンバライトを加えて濾紙で濾過し、中間産物を得、
分離樹脂としてシリカゲルを、移動相としてヘキサンと酢酸エチルとの勾配を用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより該中間産物を溶出し、ヘキサンと酢酸エチルとの溶出勾配を４：１から１：１までとして、勾配溶液が１：１の比率で生成物を溶出し、
Ｃ１８セミ分取カラムとイソクラティック溶出剤としてメタノール：０．１％ＦＡ緩衝液（リン酸緩衝生理食塩水）＝７５：２５の溶液を用いた逆相ＨＰＬＣによって前記生成物を精製して、前記生物活性を有する化合物のＣ４が水酸基である誘導体を得ることができる。
また、本発明は血管の新生と癌細胞の増殖を抑制する組成物を提供し、それは上記牛樟芝抗生物質、適当な希釈剤、賦形剤を含み、該組成物は高い増殖能力を持つ細胞の増殖を抑制できる。
【誤訳訂正５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２４】
実施例１：牛樟芝化合物の製造
牛樟芝の液体発酵菌糸体をｎ−ヘキサンで、それぞれ一時間から三時間、二回還流抽出し、
真空濾過した後、二つのヘキサン抽出液を混合し、
シリカゲル（７０−２３０メッシュ）と菌糸体とでカラムを準備し、  ｎ−ヘキサン／酢酸エチルの勾配溶液で溶出してＦ１、Ｆ２とＦ３の画分を得、勾配は、それぞれ、１７−２２％の酢酸エチル、２３−２７％の酢酸エチル及び２８−３３％の酢酸エチルであり、Ｆ３を保持時間によって三つの画分Ｆ３−１〜Ｆ３−３に分ける。
【誤訳訂正６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２６】
画分Ｆ３−２を順相ＭＰＬＣシリカゲルカラムで、移動相としてＣＨ２Ｃｌ２／アセトン勾配溶液（１００％：０％から７０％：３０％）を用いて分離し、９５％：５％から８５％：１５％までの画分を採取してＦ３−２−１からＦ３−２−３まで三つの画分に分ける。
画分Ｆ３−２−３を、移動相としてｎ−ヘキサン／酢酸エチル（１００％：０％から０％：１００％）を用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、ｎ−ヘキサン／アセトン＝９０／１０から７０／３０までの画分を採取し、さらに、移動相としてｎ−ヘキサン／酢酸エチル（１００％：０％から０％：１００％）を用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して、ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝６０／４０の溶出溶液でＡＣ００７を得る。
【誤訳訂正７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２７】
画分Ｆ−３−３を、順相ＭＰＬＣシリカゲルカラムで、ＣＨ２Ｃｌ２／アセトン（１００％：０％から０％：１００％）勾配溶出を用いて分離し、９０％：１０％から７０％：３０％までの画分を採取し、画分Ｆ３−３−１からＦ３−３−５まで五に分離し、さらに、Ｆ−３−３−５（ＣＨ２Ｃｌ２／アセトン＝７３／２７の画分）移動相としてｎ−ヘキサン／アセトン（９５％：５％から５０％：５０％）を用いたシリカゲルカラムで精製して、８５％：１５％から７０％：３０％の画分を採取し、画分Ｆ３−３−５−１からＦ３−３−５−５まで五つに分離する。
Ｆ３−３−５−１（ｎ−ヘキサン／アセトン＝９０／１０−８０／２０）を、移動相として水中の１％蟻酸／メタノール＝３５／６５〜２０／８０勾配を用いて、逆相ＭＰＬＣ  Ｃ−１８カラム精製により取る。水中の１％蟻酸／メタノール＝２８／７２−２２／７８の画分を取って、移動相としてｎ−ヘキサン／酢酸エチルで勾配溶出（８０％：２０％から５０％：５０％まで）を用いて、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、ｎ−ヘキサン／酢酸エチル（７５％：２５％−６５％：３５％）の溶出溶液でＡＣ０１２を得る。
【誤訳訂正８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２８】
画分Ｆ３−３−５−３を、移動相として水中の１％蟻酸／メタノール＝２５／７５の１５ｍＬ／ｍｉｎのイソクラティック溶出を用いた逆相ＭＰＬＣ  Ｃ−１８シリカゲルカラムクロマトグラフィーによって分離し、ＡＣ００９のほとんどを含有する画分を得、さらに、移動相としてＣＨ２Ｃｌ２／酢酸エチルを用いてシリカゲル勾配溶液（１００％：０％から０％：１００％まで）で１３０から１７０分の保持時間の画分を精製し、ＣＨ２Ｃｌ２／酢酸エチル＝８０／２０−６０／４０の溶出溶液でＡＣ００９を採取する。
【誤訳訂正９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２９】
Ｆ３−１を取り、移動相として水中の１％蟻酸／メタノール＝２５％：７５％イソクラティックを用いた逆相ＨＰＬＣ  Ｃ−１８カラムクロマトグラフィーで精製し、ＡＣ−０５−０１を得る。