【手続補正書】
【提出日】令和3年6月28日(2021.6.28)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
細胞表面タンパク質に特異的に結合する標的指向リガンドを含む送達分子であって、該標的指向リガンドが、
タンパク質ペイロード、核酸ペイロード、および／または荷電ポリマーポリペプチドドメインにコンジュゲートしており、かつ
該標的指向リガンドが細胞表面タンパク質に結合し、その後、該送達分子がエンドサイトーシスした時に、長いエンドソームリサイクリング経路に関与するように構成されている、
送達分子。
【請求項２】
前記細胞表面タンパク質が、受容体チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）、ファミリーＢのＧタンパク質共役受容体（ＧＰＣＲ）、細胞表面糖タンパク質、および細胞間接着分子からなる群より選択される、請求項１に記載の送達分子。
【請求項３】
前記標的指向リガンドが、Ｅ−セレクチン、Ｌ−セレクチン、Ｐ−セレクチン、線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）、エキセンディン、α５β１インテグリン、トランスフェリン、およびそれらの変異体または断片からなる群より選択される、請求項１に記載の送達分子。
【請求項４】
受容体チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）に特異的に結合する標的指向リガンドを含む送達分子であって、該標的指向リガンドが、
タンパク質ペイロード、核酸ペイロード、および／または荷電ポリマーポリペプチドドメインにコンジュゲートしており、かつ
オルソステリック結合の間に占められる該ＲＴＫのセグメントに結合する、
送達分子。
【請求項５】
前記ＲＴＫが、線維芽細胞増殖因子受容体（ＦＧＦＲ）である、請求項４に記載の送達分子。
【請求項６】
前記標的指向リガンドが、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３、４、５、６、７、８、９および１０からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、請求項５に記載の送達分子。
【請求項７】
ファミリーＢのＧタンパク質共役受容体（ＧＰＣＲ）に特異的に結合する標的指向リガンドを含む送達分子であって、該標的指向リガンドが、
タンパク質ペイロード、核酸ペイロード、および／または荷電ポリマーポリペプチドドメインにコンジュゲートしており、かつ
該ＧＰＣＲのアロステリックドメインおよび該ＧＰＣＲのオルソステリックドメインの両方に結合する、
送達分子。
【請求項８】
前記標的指向リガンドが、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１および２からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、請求項７に記載の送達分子。
【請求項９】
トランスフェリン受容体に特異的に結合する標的指向リガンドを含む送達分子であって、該標的指向リガンドが、
タンパク質ペイロード、核酸ペイロード、および／または荷電ポリマーポリペプチドドメインにコンジュゲートしており、かつ
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１のアミノ酸配列を含む、
送達分子。
【請求項１０】
α５β１インテグリンに特異的に結合する標的指向リガンドを含む送達分子であって、該標的指向リガンドが、
タンパク質ペイロード、核酸ペイロード、および／または荷電ポリマーポリペプチドドメインにコンジュゲートしており、かつ
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２およびＲＧＤからなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、
送達分子。
【請求項１１】
前記標的指向リガンドが、核酸ペイロードにコンジュゲートしており、かつ該核酸ペイロードがＲＮＡｉ剤であり、任意で、該ＲＮＡｉ剤がｓｉＲＮＡ分子である、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の送達分子。
【請求項１２】
前記標的指向リガンドが、リンカーを介してタンパク質ペイロード、核酸ペイロード、および／または荷電ポリマーポリペプチドドメインにコンジュゲートしている、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の送達分子。
【請求項１３】
前記リンカーが、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７のアミノ酸配列を含む、請求項１２に記載の送達分子。
【請求項１４】
前記標的指向リガンドが、荷電ポリマーポリペプチドドメインにコンジュゲートしており、かつ該荷電ポリマーポリペプチドドメインが、核酸ペイロードと縮合している、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の送達分子。
【請求項１５】
前記荷電ポリマーポリペプチドドメインが、ポリアルギニンおよびポリヒスチジンからなる群より選択される、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の送達分子。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００８】
【図１Ａ】（パネルＡ〜Ｆ）主題の送達分子の例示的な構成の概略図を提供する。標的指向リガンドは、Ｎ末端またはＣ末端でコンジュゲートし得る（各パネルの左）が、内部位置でもコンジュゲートし得る（各パネルの右）ことに留意されたい。パネルＡ、Ｃ、およびＥにおける分子は、リンカーを含むが、パネルＢ、Ｄ、およびＦの分子は含まない。（パネルＡ〜Ｂ）ペイロードにコンジュゲートした標的指向リガンドを含む送達分子。（パネルＣ〜Ｄ）ナノ粒子の荷電安定化層と静電的に相互作用している荷電ポリマーポリペプチドドメインにコンジュゲートした標的指向リガンドを含む送達分子。（パネルＥ〜Ｆ）核酸ペイロードと縮合している荷電ポリマーポリペプチドドメインにコンジュゲートした標的指向リガンドを含む送達分子。
【図１Ｂ】図１Ａの説明を参照のこと。
【図１Ｃ】図１Ａの説明を参照のこと。
【図１Ｄ】図１Ａの説明を参照のこと。
【図１Ｅ】図１Ａの説明を参照のこと。
【図１Ｆ】図１Ａの説明を参照のこと。
【図２Ａ】（パネルＡ〜Ｄ）主題の送達分子の例示的な構成の概略図を提供する。示された標的指向リガンドは、エキセンディン（Ｓ１１Ｃ置換を有する）（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２を参照）である。リンカーを伴うおよび伴わない、かつナノ粒子の荷電安定化層（「アニオン性ナノ粒子表面」）と静電的に相互作用している荷電ポリマーポリペプチドドメインへの（リンカーを介した）コンジュゲーションを伴う、異なるコンジュゲーション化学を有する例が示される。図２、パネルＡは、還元的に切断可能なジスルフィド結合を用いて核酸、タンパク質またはリボ核タンパク質にコンジュゲートしたエキセンディン−４（１〜３９）［Ｃｙｓ１１］（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２）のコンジュゲーション戦略の例を提供する。図２、パネルＢは、アミン反応性結合を用いて核酸、タンパク質またはリボ核タンパク質にコンジュゲートしたエキセンディン−４（１〜３９）［Ｃｙｓ１１］のコンジュゲーション戦略の例を提供する。図２、パネルＣは、（アミン反応性ドメインを介して）核酸、タンパク質またはリボ核タンパク質にコンジュゲートしているリンカーに、還元的に切断可能なジスルフィド結合を介してコンジュゲートしたエキセンディン−４（１〜３９）［Ｃｙｓ１１］のコンジュゲーション戦略の例を提供する。図２、パネルＤは、ナノ粒子の荷電安定化層（例えば、シリカ、ペプトイド、ポリシステイン、またはリン酸カルシウムコーティング）と静電的に相互作用することによってナノ粒子表面をコーティングする荷電ポリマーポリペプチドドメイン（９Ｒ配列が示されている）にコンジュゲートしているリンカーに、還元的に切断可能なジスルフィド結合を介してコンジュゲートしたエキセンディン−４（１〜３９）［Ｃｙｓ１１］のコンジュゲーション戦略の例を提供する。
【図２Ｂ】図２Ａの説明を参照のこと。
【図２Ｃ】図２Ａの説明を参照のこと。
【図２Ｄ】図２Ａの説明を参照のこと。
【図３−１】例えば、アロステリック／親和性Ｎ末端ドメインおよびオルソステリックエンドソームソーティング／シグナル伝達ドメインへの結合に対して、標的指向リガンドを評価する際に考慮される別々のドメインを強調して、ファミリーＢのＧＰＣＲの概略図を提供する。（図は、Ｓｉｕ，Ｆａｉ  Ｙｉｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ４９９．７４５９（２０１３）：４４４〜４４９を出典とする）。
【図３−２】図３−１の説明を参照のこと。
【図４−１】親和性が維持され、標的指向リガンドが、核酸放出を促進し、かつ核酸分解を制限する長いエンドソームリサイクリング経路に関与するように、標的指向リガンドに対する挿入および／または置換（例えばシステイン残基で）のための内部アミノ酸位置を同定する例を提供する。この場合、標的指向リガンドは、エキセンディン−４であり、アミノ酸位置１０、１１、および１２は、可能な挿入および／または置換（例えば、システイン残基で、例えば、Ｓ１１Ｃ変異）のための部位として同定された。図は、グルカゴン−ＧＣＧＲ（４ＥＲＳ）およびＧＬＰ１−ＧＬＰ１Ｒ−ＥＣＤ複合体（ＰＤＢ：３ＩＯＬ）の既知の結晶構造に対するシミュレートされたエキセンディン−４［Ｓ１１Ｃ］（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２）のアラインメント、および３次元空間で回転させたＰＤＢレンダリングを示す。
【図４−２】図４−１の説明を参照のこと。
【図５】三元ＦＧＦ２−ＦＧＦＲ１−ＨＥＰＡＲＩＮ複合体（ＰＤＢ上の１ｆｑ９）の一部としてのｔｂＦＧＦフラグメント（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７９）を示す。ＣＫＮＧＧＦＦＬＲＩＨＰＤＧＲＶＤＧＶＲＥＫＳ（強調）（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４３）は、ＦＧＦＲ１に対する親和性にとって重要であると決定された。
【図６】ＦＧＦ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８０）由来のＨＦＫＤＰＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５）がリガンド−受容体オルソステリック活性および親和性に使用され得るペプチドであると決定するために使用されるアラインメントおよびＰＤＢ  ３Ｄレンダリングを提供する。
【図７】ＦＧＦフラグメント（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８１）由来のＬＥＳＮＮＹＮＴ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６）がリガンド−受容体オルソステリック活性および親和性に使用され得るペプチドであると決定するために使用されるアラインメントおよびＰＤＢ  ３Ｄレンダリングを提供する。
【図８】ペイロード：ペプチド核酸（ＰＮＡ）結合部位を有するＶＷＦ−ＥＧＦＰ  ｐＤＮＡを有するナノ粒子の凝縮曲線を提供する。
【図９Ａ】ペイロード：ＨＢＢ  ｇＲＮＡと複合体を形成したＮＬＳ−ＣＡＳ９−ＮＬＳ  ＲＮＰを有するナノ粒子の凝縮曲線を提供する。
【図９Ｂ】図９Ａの説明を参照のこと。
【図９Ｃ】図９Ａの説明を参照のこと。
【図９Ｄ】図９Ａの説明を参照のこと。
【図１０】ペイロード：ＨＢＢ  ｇＲＮＡを有するナノ粒子の凝縮曲線を提供する。
【図１１】ペイロード：ＨＢＢ  ｇＲＮＡを有するナノ粒子の凝縮曲線を提供する。
【図１２】ペイロード：ＨＢＢ  ｇＲＮＡと複合体を形成したＮＬＳ−ＣＡＳ９−ＮＬＳ  ＲＮＰを有するナノ粒子の凝縮曲線を提供する。
【図１３】ペイロード：ペプチド核酸（ＰＮＡ）結合部位を有するＶＷＦ−ＥＧＦＰ  ｐＤＮＡを有するナノ粒子の凝縮曲線を提供する。
【図１４】ペイロード：ペプチド核酸（ＰＮＡ）結合部位を有するＶＷＦ−ＥＧＦＰ  ｐＤＮＡを有するナノ粒子の凝縮曲線を提供する。
【図１５】ペイロード：ＨＢＢ  ｇＲＮＡを有するＮＬＳ−ＣＡＳ９−ＮＬＳのＲＮＰを有するナノ粒子の凝縮曲線を提供する。
【図１６】ペイロード：ペプチド核酸（ＰＮＡ）結合部位を有するＶＷＦ−ＥＧＦＰ  ｐＤＮＡを有するナノ粒子の凝縮曲線を提供する。
【図１７】ペイロード：Ｃｙ５＿ＥＧＦＰ  ｍＲＮＡを有するナノ粒子の凝縮曲線を提供する。
【図１８】ペイロード：ＢＬＯＣＫ−ｉＴ  Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ５５５  ｓｉＲＮＡを有するナノ粒子の凝縮曲線を提供する。
【図１９】ペイロード：ＨＢＢ  ｇＲＮＡと複合体を形成したＮＬＳ−Ｃａｓ９−ＥＧＦＰ  ＲＮＰを有するナノ粒子の凝縮曲線を提供する。
【図２０Ａ】ペイロードとしてＡｌｅｘａ  ５５５  Ｂｌｏｃｋ−ＩＴ  ｓｉＲＮＡを有するナノ粒子を使用した場合に収集されたデータを提供する。
【図２０Ｂ】図２０Ａの説明を参照のこと。
【図２０Ｃ】図２０Ａの説明を参照のこと。
【図２１−１】ペイロードとしてＮＬＳ−Ｃａｓ９−ＧＦＰおよびＨＢＢガイドＲＮＡによって形成されたリボ核タンパク質（ＲＮＰ）を有するナノ粒子を使用した場合に収集されたデータを提供する。
【図２１−２】図２１−１の説明を参照のこと。
【図２１−３】図２１−１の説明を参照のこと。
【図２２−１】ペイロードとしてＣｙ５  ＥＧＦＰ  ｍＲＮＡを有するナノ粒子を使用した場合に収集されたデータを提供する。
【図２２−２】図２１−１の説明を参照のこと。
【図２３−１】ペイロード：Ｃｙ５タグ化ペプチド核酸（ＰＮＡ）結合部位を有するＶＷＦ−ＥＧＦＰ  ｐＤＮＡを有するナノ粒子を使用した場合に収集されたデータを提供する。
【図２３−２】図２３−１の説明を参照のこと。
【図２３−３】図２３−１の説明を参照のこと。
【図２４】ＲＮＰに、カチオン性ポリペプチドＣＤ４５＿ｍＳｉｇｌｅｃ＿（４ＧＳ）２＿９Ｒ＿Ｃを添加し、続いてＰＬＥ１００を添加し、さらにカチオン性ポリペプチドを添加することによる蛍光強度の低下を示すＳＹＢＲ  Ｇｏｌｄ排除アッセイからのデータを提供する。
【図２５】ｓｉＲＮＡおよびＳＹＢＲ  Ｇｏｌｄに、カチオン性ポリペプチドＣＤ４５＿ｍＳｉｇｌｅｃ＿（４ＧＳ）２＿９Ｒ＿Ｃを添加し、続いてＰＬＥ１００を添加し、さらにカチオン性ポリペプチドを添加することによって蛍光強度の変動を示すＳＹＢＲ  Ｇｏｌｄ排除アッセイからのデータを提供する。
【図２６】ＨＢＢ  ｇＲＮＡおよびＳＹＢＲ  Ｇｏｌｄを有するＮＬＳ−Ｃａｓ９−ＥＧＦＰのＲＮＰに、カチオン性ポリペプチドヒストンペプチドＨ２Ａを添加し、続いてＣＤ４５＿ｍＳｉｇｌｅｃ＿（４ＧＳ）２＿９Ｒ＿Ｃを添加し、さらにＰＬＥ１００を添加することによって蛍光強度の変動を示すＳＹＢＲ  Ｇｏｌｄ排除アッセイからのデータを提供する。
【図２７】ＨＢＢ  ｇＲＮＡおよびＳＹＢＲ  Ｇｏｌｄを有するＮＬＳ−Ｃａｓ９−ＥＧＦＰのＲＮＰに、ＣＤ４５＿ｍＳｉｇｌｅｃ＿（４ＧＳ）２＿９Ｒ＿Ｃと一緒にカチオン性ポリペプチドヒストンペプチドＨ４を添加し、さらにＰＬＥ１００を添加することによって蛍光強度の変動を示すＳＹＢＲ  Ｇｏｌｄ排除アッセイからのデータを提供する。
【図２８】ｍＲＮＡに、カチオン性ポリペプチドＣＤ４５＿ｍＳｉｇｌｅｃ＿（４ＧＳ）２＿９Ｒ＿Ｃを添加し、さらにＰＬＥ１００を添加することによって蛍光強度の変動を示すＳＹＢＲ  Ｇｏｌｄ排除アッセイからのデータを提供する。
【図２９】ｍＲＮＡに、ヒストンＨ４を添加し、さらにＣＤ４５−ｍＳｉｇｌｅｃ−（４ＧＳ）２＿９Ｒ＿ｃおよびＰＬＥ１００を添加することによって蛍光強度の変動を示すＳＹＢＲ  Ｇｏｌｄ排除アッセイからのデータを提供する。
【図３０】ｍＲＮＡに、ヒストンＨ２Ａを添加し、さらにＣＤ４５−ｍＳｉｇｌｅｃ−（４ＧＳ）２＿９Ｒ＿ｃおよびＰＬＥ１００を添加することによって蛍光強度の変動を示すＳＹＢＲ  Ｇｏｌｄ排除アッセイからのデータを提供する。
【図３１】カチオン性ポリペプチドＣＤ４５＿ｍＳｉｇｌｅｃ＿（４ＧＳ）２＿９Ｒ＿Ｃを添加し、続いてＰＬＥ１００を添加することによって蛍光強度の変動を示すＶＷＦ＿ＥＧＦＰ  ｐＤＮＡとのインターカレーションからのＳＹＢＲ  Ｇｏｌｄ排除アッセイからのデータを提供する。
【図３２】ヒストンＨ４を添加し、続いてカチオン性ポリペプチドＣＤ４５＿ｍＳｉｇｌｅｃ＿（４ＧＳ）２＿９Ｒ＿Ｃを添加し、続いてＰＬＥ１００を添加することによって蛍光強度の変動を示すＶＷＦ＿ＥＧＦＰ  ｐＤＮＡとのインターカレーションからのＳＹＢＲ  Ｇｏｌｄ排除アッセイからのデータを提供する。
【図３３】ヒストンＨ４を添加し、続いてカチオン性ポリペプチドＣＤ４５＿ｍＳｉｇｌｅｃ＿（４ＧＳ）２＿９Ｒ＿Ｃを添加し、続いてＰＬＥ１００を添加することによって蛍光強度の変動を示すＶＷＦ＿ＥＧＦＰ  ｐＤＮＡとのインターカレーションからのＳＹＢＲ  Ｇｏｌｄ排除アッセイからのデータを提供する。
【図３４Ａ】（パネルＡ〜Ｃ）ポリプレックスサイズ分布、シリカコーティングサイズおよびゼータ電位分布、ならびにリガンドコーティング／官能化粒子サイズおよびゼータ電位分布に関するデータを提供する。
【図３４Ｂ−１】図３４Ａの説明を参照のこと。
【図３４Ｂ−２】図３４Ａの説明を参照のこと。
【図３４Ｃ−１】図３４Ａの説明を参照のこと。
【図３４Ｃ−２】図３４Ａの説明を参照のこと。
【図３５】分岐ヒストンペプチドコンジュゲートパイロット粒子に関するデータを提供する。
【図３６−１】プロジェクトＨＳＣ．００１．００１に関するデータを提供する（表４参照）。
【図３６−２】図３６−１の説明を参照のこと。
【図３７】プロジェクトＨＳＣ．００１．００２に関するデータを提供する（表４参照）。
【図３８−１】プロジェクトＨＳＣ．００２．０１（標的指向リガンド−ＥＳＥＬＬｇ＿ｍＥＳＥＬ＿（４ＧＳ）２＿９Ｒ＿Ｎ）に関するデータを提供する（表４参照）。
【図３８−２】図３８−１の説明を参照のこと。
【図３９−１】プロジェクトＨＳＣ．００２．０２（標的指向リガンド−ＥＳＥＬＬｇ＿ｍＥＳＥＬ＿（４ＧＳ）２＿９Ｒ＿Ｃ）に関するデータを提供する（表４参照）。
【図３９−２】図３９−１の説明を参照のこと。
【図４０−１】プロジェクトＨＳＣ．００２．０３（標的指向リガンド−ＣＤ４５＿ｍＳｉｇｌｅｃ＿（４ＧＳ）２＿９Ｒ＿Ｃ）に関するデータを提供する（表４参照）。
【図４０−２】図４０−１の説明を参照のこと。
【図４１−１】プロジェクトＨＳＣ．００２．０４（標的指向リガンド−Ｃｙ５ｍＲＮＡ−ＳｉＯ２−ＰＥＧ）に関するデータを提供する（表４参照）。
【図４１−２】図４１−１の説明を参照のこと。
【図４２−１】プロジェクトＢＬＯＯＤ．００２．８８（標的指向リガンド−ＣＤ４５＿ｍＳｉｇｌｅｃ＿（４ＧＳ）２＿９Ｒ＿Ｃ）に関するデータを提供する（表４参照）。
【図４２−２】図４２−１の説明を参照のこと。
【図４３−１】プロジェクトＢＬＯＯＤ．００２．８９（標的指向リガンド−ＣＤ４５＿ｍＳｉｇｌｅｃ＿（４ＧＳ）２＿９Ｒ＿Ｃ）に関するデータを提供する（表４参照）。
【図４３−２】図４３−１の説明を参照のこと。
【図４４−１】プロジェクトＢＬＯＯＤ．００２．９０に関するデータを提供する（表４参照）。
【図４４−２】図４４−１の説明を参照のこと。
【図４５−１】プロジェクトＢＬＯＯＤ．００２．９１（ＰＬＲ５０）に関するデータを提供する（表４参照）。
【図４５−２】図４５−１の説明を参照のこと。
【図４６−１】プロジェクトＢＬＯＯＤ．００２．９２（標的指向リガンド−ＣＤ４５＿ｍＳｉｇｌｅｃ＿（４ＧＳ）２＿９Ｒ＿Ｃ）に関するデータを提供する（表４参照）。
【図４６−２】図４６−１の説明を参照のこと。
【図４７−１】プロジェクトＴＣＥＬＬ．００１．１に関するデータを提供する（表４参照）。
【図４７−２】図４７−１の説明を参照のこと。
【図４８−１】プロジェクトＴＣＥＬＬ．００１．３に関するデータを提供する（表４参照）。
【図４８−２】図４８−１の説明を参照のこと。
【図４９−１】プロジェクトＴＣＥＬＬ．００１．１３に関するデータを提供する（表４参照）。
【図４９−２】図４９−１の説明を参照のこと。
【図５０−１】プロジェクトＴＣＥＬＬ．００１．１４に関するデータを提供する（表４参照）。
【図５０−２】図５０−１の説明を参照のこと。
【図５１−１】プロジェクトＴＣＥＬＬ．００１．１６に関するデータを提供する（表４参照）。
【図５１−２】図５１−１の説明を参照のこと。
【図５２−１】プロジェクトＴＣＥＬＬ．００１．１８に関するデータを提供する（表４参照）。
【図５２−２】図５２−１の説明を参照のこと。
【図５３−１】プロジェクトＴＣＥＬＬ．００１．２８に関するデータを提供する（表４参照）。
【図５３−２】図５３−１の説明を参照のこと。
【図５４−１】プロジェクトＴＣＥＬＬ．００１．２９に関するデータを提供する（表４参照）。
【図５４−２】図５４−１の説明を参照のこと。
【図５５−１】プロジェクトＴＣＥＬＬ．００１．３１に関するデータを提供する（表４参照）。
【図５５−２】図５５−１の説明を参照のこと。
【図５６−１】プロジェクトＴＣＥＬＬ．００１．３３に関するデータを提供する（表４参照）。
【図５６−２】図５６−１の説明を参照のこと。
【図５７】プロジェクトＴＣＥＬＬ．００１．４３に関するデータを提供する（表４参照）。
【図５８−１】プロジェクトＴＣＥＬＬ．００１．４４に関するデータを提供する（表４参照）。
【図５８−２】図５８−１の説明を参照のこと。
【図５９−１】プロジェクトＴＣＥＬＬ．００１．４６に関するデータを提供する（表４参照）。
【図５９−２】図５９−１の説明を参照のこと。
【図６０−１】プロジェクトＴＣＥＬＬ．００１．４８に関するデータを提供する（表４参照）。
【図６０−２】図６０−１の説明を参照のこと。
【図６１−１】プロジェクトＴＣＥＬＬ．００１．５８に関するデータを提供する（表４参照）。
【図６１−２】図６１−１の説明を参照のこと。
【図６２−１】プロジェクトＴＣＥＬＬ．００１．５９に関するデータを提供する（表４参照）。
【図６２−２】図６２−１の説明を参照のこと。
【図６３−１】プロジェクトＣＹＮＯＢＭ．００２．８２に関するデータを提供する（表４参照）。
【図６３−２】図６３−１の説明を参照のこと。
【図６４−１】プロジェクトＣＹＮＯＢＭ．００２．８３に関するデータを提供する（表４参照）。
【図６４−２】図６４−１の説明を参照のこと。
【図６５−１】プロジェクトＣＹＮＯＢＭ．００２．８４に関するデータを提供する（表４参照）。
【図６５−２】図６５−１の説明を参照のこと。
【図６６−１】プロジェクトＣＹＮＯＢＭ．００２．８５に関するデータを提供する（表４参照）。
【図６６−２】図６６−１の説明を参照のこと。
【図６７−１】プロジェクトＣＹＮＯＢＭ．００２．８６に関するデータを提供する（表４参照）。
【図６７−２】図６７−１の説明を参照のこと。
【図６８−１】プロジェクトＣＹＮＯＢＭ．００２．７６に関するデータを提供する（表４参照）。
【図６８−２】図６８−１の説明を参照のこと。
【図６９】プロジェクトＣＹＮＯＢＭ．００２．７７に関するデータを提供する（表４参照）。
【図７０−１】プロジェクトＣＹＮＯＢＭ．００２．７８に関するデータを提供する（表４参照）。
【図７０−２】図７０−１の説明を参照のこと。
【図７１】プロジェクトＣＹＮＯＢＭ．００２．７９に関するデータを提供する（表４参照）。
【図７２】プロジェクトＣＹＮＯＢＭ．００２．８０に関するデータを提供する（表４参照）。
【図７３−１】ＣｙｎｏＢＭ．００２試料についてのトランスフェクションされていない対照に関するデータを提供する。
【図７３−２】図７３−１の説明を参照のこと。
【図７３−３】図７３−１の説明を参照のこと。
【図７３−４】図７３−１の説明を参照のこと。
【図７４−１】ＮＬＳ−Ｃａｓ９−ＥＧＦＰ  ＢＣＬ１１ａ  ｇＲＮＡ  ＲＮＰのリポフェクタミンＣＲＩＳＰＲＭＡＸ送達に関するデータを提供する。
【図７４−２】図７４−１の説明を参照のこと。
【図７４−３】図７４−１の説明を参照のこと。
【図７４−４】図７４−１の説明を参照のこと。
【図７５−１】プロジェクトＣｙｎｏＢＭ．００２  ＲＮＰ−Ｏｎｌｙ対照に関するデータを提供する（表４参照）。
【図７５−２】図７５−１の説明を参照のこと。
【図７５−３】図７５−１の説明を参照のこと。
【図７６−１】プロジェクトＣｙｎｏＢＭ．００２．８２に関するデータを提供する（表４参照）。
【図７６−２】図７６−１の説明を参照のこと。
【図７６−３】図７６−１の説明を参照のこと。
【図７６−４】図７６−１の説明を参照のこと。
【図７６−５】図７６−１の説明を参照のこと。
【図７７−１】プロジェクトＣｙｎｏＢＭ．００２．８３に関するデータを提供する（表４参照）。
【図７７−２】図７７−１の説明を参照のこと。
【図７７−３】図７７−１の説明を参照のこと。
【図７７−４】図７７−１の説明を参照のこと。
【図７７−５】図７７−１の説明を参照のこと。
【図７８−１】プロジェクトＣＹＮＯＢＭ．００２．８４に関するデータを提供する（表４参照）。
【図７８−２】図７８−１の説明を参照のこと。
【図７８−３】図７８−１の説明を参照のこと。
【図７８−４】図７８−１の説明を参照のこと。
【図７８−５】図７８−１の説明を参照のこと。
【図７９−１】プロジェクトＣｙｎｏＢＭ．００２．８５に関するデータを提供する（表４参照）。
【図７９−２】図７９−１の説明を参照のこと。
【図７９−３】図７９−１の説明を参照のこと。
【図７９−４】図７９−１の説明を参照のこと。
【図７９−５】図７９−１の説明を参照のこと。
【図８０−１】プロジェクトＣｙｎｏＢＭ．００２．８６に関するデータを提供する（表４参照）。
【図８０−２】図８０−１の説明を参照のこと。
【図８０−３】図８０−１の説明を参照のこと。
【図８０−４】図８０−１の説明を参照のこと。
【図８０−５】図８０−１の説明を参照のこと。
【図８１−１】プロジェクトＣｙｎｏＢＭ．００２．７５に関するデータを提供する（表４参照）。
【図８１−２】図８１−１の説明を参照のこと。
【図８１−３】図８１−１の説明を参照のこと。
【図８１−４】図８１−１の説明を参照のこと。
【図８２−１】プロジェクトＣｙｎｏＢＭ．００２．７６に関するデータを提供する（表４参照）。
【図８２−２】図８２−１の説明を参照のこと。
【図８２−３】図８２−１の説明を参照のこと。
【図８２−４】図８２−１の説明を参照のこと。
【図８３−１】プロジェクトＣｙｎｏＢＭ．００２．７７に関するデータを提供する（表４参照）。
【図８３−２】図８３−１の説明を参照のこと。
【図８３−３】図８３−１の説明を参照のこと。
【図８３−４】図８３−１の説明を参照のこと。
【図８４−１】プロジェクトＣｙｎｏＢＭ．００２．７８に関するデータを提供する（表４参照）。
【図８４−２】図８４−１の説明を参照のこと。
【図８４−３】図８４−１の説明を参照のこと。
【図８４−４】図８４−１の説明を参照のこと。
【図８５−１】プロジェクトＣｙｎｏＢＭ．００２．７９に関するデータを提供する（表４参照）。
【図８５−２】図８５−１の説明を参照のこと。
【図８５−３】図８５−１の説明を参照のこと。
【図８５−４】図８５−１の説明を参照のこと。
【図８６−１】プロジェクトＣｙｎｏＢＭ．００２．８０に関するデータを提供する（表４参照）。
【図８６−２】図８６−１の説明を参照のこと。
【図８６−３】図８６−１の説明を参照のこと。
【図８６−４】図８６−１の説明を参照のこと。
【図８７−１】プロジェクトＣｙｎｏＢＭ．００２．８１に関するデータを提供する（表４参照）。
【図８７−２】図８７−１の説明を参照のこと。
【図８７−３】図８７−１の説明を参照のこと。
【図８７−４】図８７−１の説明を参照のこと。
【図８８】ＣｙｎｏＢＭ．００２  ＲＮＰ−Ｏｎｌｙ対照の定性的画像を提供する。
【図８９】プロジェクトＨＳＣ．００４のハイコンテントスクリーニングに関するデータを提供する（表４参照）。
【図９０】プロジェクトＴＣＥＬＬ．００１のハイコンテントスクリーニングに関するデータを提供する（表４参照）。
【図９１】プロジェクトＴＣＥＬＬ．００１のリポフェクタミンＣＲＩＳＰＲＭＡＸ対照に関するデータを提供する（表４参照）。
【図９２】プロジェクトＴＣｅｌｌ．００１．１に関するデータを提供する（表４参照）。
【図９３】プロジェクトＴＣｅｌｌ．００１．２に関するデータを提供する（表４参照）。
【図９４−１】プロジェクトＴＣｅｌｌ．００１．３に関するデータを提供する（表４参照）。
【図９４−２】図９４−１の説明を参照のこと。
【図９５−１】プロジェクトＴＣｅｌｌ．００１．４に関するデータを提供する（表４参照）。
【図９５−２】図９５−１の説明を参照のこと。
【図９６−１】プロジェクトＴＣｅｌｌ．００１．５に関するデータを提供する（表４参照）。
【図９６−２】図９６−１の説明を参照のこと。
【図９７−１】プロジェクトＴＣｅｌｌ．００１．６に関するデータを提供する（表４参照）。
【図９７−２】図９７−１の説明を参照のこと。
【図９８−１】プロジェクトＴＣｅｌｌ．００１．７に関するデータを提供する（表４参照）。
【図９８−２】図９８−１の説明を参照のこと。
【図９９−１】プロジェクトＴＣｅｌｌ．００１．８に関するデータを提供する（表４参照）。
【図９９−２】図９９−１の説明を参照のこと。
【図１００−１】プロジェクトＴＣｅｌｌ．００１．９に関するデータを提供する（表４参照）。
【図１００−２】図１００−１の説明を参照のこと。
【図１０１−１】プロジェクトＴＣｅｌｌ．００１．１０に関するデータを提供する（表４参照）。
【図１０１−２】図１０１−１の説明を参照のこと。
【図１０２−１】プロジェクトＴＣｅｌｌ．００１．１１に関するデータを提供する（表４参照）。
【図１０２−２】図１０２−１の説明を参照のこと。
【図１０３−１】プロジェクトＴＣｅｌｌ．００１．１２に関するデータを提供する（表４参照）。
【図１０３−２】図１０３−１の説明を参照のこと。
【図１０４−１】プロジェクトＴＣｅｌｌ．００１．１３に関するデータを提供する（表４参照）。
【図１０４−２】図１０４−１の説明を参照のこと。
【図１０５−１】プロジェクトＴＣｅｌｌ．００１．１４に関するデータを提供する（表４参照）。
【図１０５−２】図１０５−１の説明を参照のこと。
【図１０６−１】プロジェクトＴＣｅｌｌ．００１．１５に関するデータを提供する（表４参照）。
【図１０６−２】図１０６−１の説明を参照のこと。
【図１０７】プロジェクトＴＣｅｌｌ．００１についての陰性対照に関するデータを提供する（表４参照）。
【図１０８−１】プロジェクトＢｌｏｏｄ．００２に関するデータを提供する（表４参照）。
【図１０８−２】図１０８−１の説明を参照のこと。
【図１０８−３】図１０８−１の説明を参照のこと。
【図１０９】プロジェクトＴＣｅｌｌ．００１．２７に関するデータを提供する（表４参照）。
【図１１０−１】タンパク質表面に安定な荷電層を形成するためにアニオン性またはカチオン性ペプチド／材料を添加すべきかどうかを決定することを可能にするＣＲＩＳＰＲ  ＲＮＰ（可能なペイロード）の電荷密度プロットを示す。
【図１１０−２】図１１０−１の説明を参照のこと。
【図１１１−１】タンパク質表面に安定な荷電層を形成するためにアニオン性またはカチオン性ペプチド／材料を添加すべきかどうかを決定することを可能にするＳｌｅｅｐｉｎｇ  Ｂｅａｕｔｙ  Ｔｒａｎｓｐｏｓｏｎｓ（可能なペイロード）の電荷密度プロットを示す。
【図１１１−２】図１１１−１の説明を参照のこと。
【図１１２−１】（２ｂ）その後の多層化学の付加、複数の核酸または荷電治療薬の同時送達、または架橋による層安定化の有無を問わず、（２ａ）アンカー−リンカー−リガンドまたは独立型カチオン性アンカーのようなカチオン性アンカーの付加（２）の前にＣＲＩＳＰＲ  ＲＮＰ表面上のカチオン性部位に固定する例示的なアニオン性ペプチド（長さ９〜１０アミノ酸、直径約１０ｎｍまでのＣＲＩＳＰＲ  ＲＮＰ）（１）を示す。
【図１１２−２】図１１２−１の説明を参照のこと。
【図１１３】Ｃａｓ９  ＲＮＰまたは任意の均一にまたは双性イオン的に帯電した表面を含み得るコアテンプレートに基づく付加順序および静電マトリックス組成物の例を示す。
【図１１４−１】ＩＬ２Ｒに結合したＩＬ２のモデル化構造を提供する。
【図１１４−２】図１１４−１の説明を参照のこと。
【図１１５−１】一本鎖ＣＤ３抗体フラグメントのモデル化構造を提供する。
【図１１５−２】図１１５−１の説明を参照のこと。
【図１１６】Ｎ−アセチルノイラミン酸（Ｎｅｕ５Ａｃ）と複合体を形成したシアロアドヘシンのＮ−末端のモデル化構造を提供する。
【図１１７】幹細胞因子（ＳＣＦ）のモデル化構造を提供する。
【図１１８】ｃＫｉｔ受容体フラグメントの合理的設計中に生成された画像の例を提供する。
【図１１９】ｃＫｉｔ受容体フラグメントの合理的設計中に生成された画像の例を提供する。
【図１２０】ｃＫｉｔ受容体フラグメントの合理的設計中に生成された画像の例を提供する。
【図１２１】合理的に設計されたｃＫｉｔ受容体フラグメントの分析からの円二色性データを提供する。
【図１２２】合理的に設計されたｃＫｉｔ受容体フラグメントの安定化された立体配座のモデリングを示す。
【図１２３−１】ＨＴＰがカチオン性ポリマー骨格の側鎖にコンジュゲートしている分岐ヒストン構造の例を示す。右側のポリマーは前駆体骨格分子を表し、左側の分子は分岐構造のセグメントの一例である。
【図１２３−２】図１２３−１の説明を参照のこと。
【図１２３−３】図１２３−１の説明を参照のこと。
【図１２３−４】図１２３−１の説明を参照のこと。
【図１２３−５】図１２３−１の説明を参照のこと。
【図１２３−６】図１２３−１の説明を参照のこと。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２５】
主題の送達分子の一部として使用され得る標的指向リガンドの例には、表１に列挙されているものが含まれるが、これらに限定されない。主題の送達分子の一部として使用され得る標的指向リガンドの例には、表２に列挙されているものが含まれるが、これらに限定されない（表２に列挙される配列の多くはリンカー（例えば、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４６））を介してカチオン性ポリペプチドドメイン（例えば、９Ｒ、６Ｒなど）にコンジュゲートした標的指向リガンド（例えば、列２のＳＮＲＷＬＤＶＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７２））を含む）。標的指向リガンドに含まれ得るアミノ酸配列の例には、
2020502120.tif 000001
が含まれるが、これらに限定されない。したがって、いくつかの場合において、標的指向リガンドは、
2020502120.tif 000002
と８５％以上（例えば、９０％以上、９５％以上、９８％以上、９９％以上、または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６２】
ヒストンおよびＨＴＰの例
例には、以下の配列が含まれるが、これらに限定されない。
2020502120.tif 000003
2020502120.tif 000004
2020502120.tif 000005
2020502120.tif 000006
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００７２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００７２】
本明細書における１つ以上の天然または修飾ポリペプチド配列は、末端または間欠的アルギニン、リジン、またはヒスチジン配列で修飾されてもよい。一実施形態では、各ポリペプチドは、ナノ粒子コア内に等しいアミンモル濃度で含まれる。この実施形態では、各ポリペプチドのＣ末端は、５Ｒ（５アルギニン）で修飾され得る。いくつかの実施形態において、各ポリペプチドのＣ末端は、９Ｒ（９アルギニン）で修飾され得る。いくつかの実施形態において、各ポリペプチドのＮ末端は、５Ｒ（５アルギニン）で修飾され得る。いくつかの実施形態において、各ポリペプチドのＮ末端は、９Ｒ（９アルギニン）で修飾され得る。いくつかの場合において、Ｈ２Ａ、Ｈ２Ｂ、Ｈ３および／またはＨ４ヒストンフラグメント（例えば、ＨＴＰ）は、それぞれＦＫＦＬカテプシンＢタンパク質分解性切断ドメイン（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８２）またはＲＧＦＦＰカテプシンＤタンパク質分解性切断ドメイン（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８３）で直列に架橋されている。いくつかの場合において、Ｈ２Ａ、Ｈ２Ｂ、Ｈ３および／またはＨ４ヒストンフラグメント（例えば、ＨＴＰ）は、５Ｒ（５アルギニン）、９Ｒ（９アルギニン）、５Ｋ（５リジン）、９Ｋ（９リジン）、５Ｈ（５ヒスチジン）、または９Ｈ（９ヒスチジン）カチオン性スペーサードメインによって直列に架橋され得る。いくつかの場合において、１つ以上のＨ２Ａ、Ｈ２Ｂ、Ｈ３および／またはＨ４ヒストンフラグメント（例えば、ＨＴＰ）は、それらのＮ末端でプロタミンにジスルフィド結合している。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００９８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００９８】
いくつかの例示的な実施形態において、３つ全ての標的指向リガンド（ＳＣＦ、ＣＤ７０、およびＳＨ２Ｄ１Ａ）は、主題の組成物の一部である。例えば、（１）（ｃ−Ｋｉｔ受容体を標的とする）標的指向ポリペプチドＳＣＦは、
2020502120.tif 000007
を含み得、Ｘは、例えば、いくつかの場合において、Ｎ末端および／またはＣ末端に存在し得るか、またはポリペプチド配列内に埋め込まれ得る、荷電ポリマーポリペプチドドメイン（例えば、６Ｈなどのポリヒスチジン、９Ｒなどのポリアルギニンなど）であり、（２）（ＣＤ２７を標的とする）標的指向ポリペプチドＣＤ７０は、
2020502120.tif 000008
を含み得、Ｘは、例えば、いくつかの場合において、Ｎ末端および／またはＣ末端に存在し得るか、またはポリペプチド配列内に埋め込まれ得る、荷電ポリマーポリペプチドドメイン（例えば、６Ｈなどのポリヒスチジン、９Ｒなどのポリアルギニンなど）であり、（３）（ＣＤ１５０を標的とする）標的指向ポリペプチドＳＨ２Ｄ１Ａは、
2020502120.tif 000009
を含み得、Ｘは、例えば、いくつかの場合において、Ｎ末端および／またはＣ末端に存在し得るか、またはポリペプチド配列（例えば、
2020502120.tif 000010
など）内に埋め込まれ得る、荷電ポリマーポリペプチドドメイン（例えば、６Ｈなどのポリヒスチジン、９Ｒなどのポリアルギニンなど）である。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１３５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１３５】
実施例１：ファミリーＢのＧＰＣＲへの標的指向された結合を提供する標的指向リガンド
図３は、例えば、アロステリック／親和性Ｎ末端ドメインおよびオルソステリックエンドソームソーティング／シグナル伝達ドメインへの結合に対して、標的指向リガンドを評価する際に考慮すべき別々のドメインを強調して、ファミリーＢのＧＰＣＲの残基１７０〜４３２（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７８）の概略図を提供する。（図は、Ｓｉｕ，Ｆａｉ  Ｙｉｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ４９９．７４５９（２０１３）：４４４〜４４９を出典とする）。そのようなドメインは、システイン置換のために標的指向リガンドエキセンディン−４内の部位を選択するときに考慮した。
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１３９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１３９】
（表２）以下の実験で使用される送達分子の特徴。標的指向リガンド名／命名形式：Ａ＿Ｂ＿Ｃ＿Ｄ＿Ｅ＿Ｆ、ここで、Ａ＝受容体名：リガンドが標的指向している受容体の名前、Ｂ＝標的指向リガンド供給源：受容体を標的指向しているリガンドの名前（リガンドが野生型でない場合は修飾の接頭辞「ｍ」または「ｒｍ」）、Ｃ＝リンカー名、Ｄ＝荷電ポリペプチド名、Ｅ＝Ｂに基づくリンカー末端、およびＦ＝バージョン番号（同じＷＴに由来するがＡＡ配列が異なる２つの修飾標的指向リガンドを区別するため）。
2020502120.tif 000011
2020502120.tif 000012
【手続補正９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２８６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２８６】
実施例５
図１１４．ペプチド工学−ＩＬ２Ｒ標的指向のための新規なＩＬ２模倣フラグメント。インターロイキン２受容体（右）に結合したインターロイキン２（左）（ＰＤＢ：１Ｚ９２）
配列ＡＳＮ（３３）−ＰＲＯ（３４）−ＬＹＳ（３５）−ＬＥＵ（３６）−ＴＨＲ（３７）−ＡＲＧ（３８）−ＭＥＴ（３９）−ＬＥＵ（４０）−ＴＨＲ（４１）−ＰＨＥ（４２）−ＬＹＳ（４３）−ＰＨＥ（４４）−ＴＹＲ（４５）（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７３）は、ＩＬ２（ＰＤＢ  １Ｚ９２）から選択され、ＩＬ２受容体α鎖への活性結合の領域と相関する。ＩＬ２ＲとＩＬ２の相互作用モチーフを選択することによる相補的結合の操作：ここで、配列ＣＹＳ（３）−ＡＳＰ（４）−ＡＳＰ（５）−ＡＳＰ（６）−ＭＥＴ（２５）−ＬＥＵ（２６）−ＡＳＮ（２７）−ＣＹＳ（２８）−ＧＬＵ（２９）（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８４）は、ＩＬ２受容体からの２つの結合モチーフについて選択される。
【手続補正１０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２８７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２８７】
図１１５：ペプチド工学−ＣＤ３を用いた新しい抗体由来の「アクティブバインディングポケット」エンジニアリング概念実証。配列ＴＨＲ（３０）−ＧＬＹ（３１）−ＡＳＮ（５２）−ＰＲＯ（５３）−ＴＹＲ（５４）−ＬＹＳ（５５）−ＧＬＹ（５６）−ＶＡＬ（５７）−ＳＥＲ（５８）−ＴＨＲ（５９）−ＴＹＲ（１０１）−ＴＹＲ（１０２）−ＧＬＹ（１０３）−ＡＳＰ（１０４）（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８５）はＣＤ３抗体（ＰＤＢ  １ＸＩＷ）から選択され、ＣＤ３イプシロンおよびデルタ鎖への活性結合の領域と相関する。アミノ酸の順序は、より大きいタンパク質によって維持されている三次構造をもはや持たない結合ポケット内のペプチドの二次元平面の結合動力学を反映するために再配列される。この寸法減少は以下の結果をもたらす：ＴＨＲ（５９）−ＳＥＲ（５８）−ＶＡＬ（５７）−ＧＬＹ（５６）−ＬＹＳ（５５）−ＴＹＲ（５４）−ＰＲＯ（５３）−ＡＳＮ（５２）−ＴＨＲ（３０）−ＧＬＹ（３１）−ＴＹＲ（１０１）−ＴＹＲ（１０２）−ＧＬＹ（１０３）−ＡＳＰ（１０４）（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７４）。
【手続補正１１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２８８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２８８】
図１１６：ペプチド工学−ＣＤ４５グリコシル化標的指向のための新規なＳＩＧＬＥＣ誘導体。Ｎ−アセチルノイラミン酸（Ｎｅｕ５Ａｃ）との複合体中のシアロアドヘシンＮ末端のＰＤＢレンダリング（ＲＣＳ  ＰＤＢ  １ＯＤＡ）。レンダリングにおいてシアロアドヘシンに近いシアロアドヘシンフラグメントを、グリコシル化ＣＤ４５および他の複雑な細胞表面糖タンパク質を標的とするために利用した。ＴＣＥＬＬ．００１．３のＣＲＩＳＰＲ  ＲＮＰ、ならびにＢＬＯＯＤ．００２．１〜ＢＬＯＯＤ．００２．２の全血リンパ球ゲートのｍＲＮＡでＴ細胞の標的指向に成功した。リガンドの配列は、ＳＮＲＷＬＤＶＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７２）である。
【手続補正１２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２８９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２８９】
図１１７：ペプチド工学−ｃ−Ｋｉｔ標的指向のための新規なＳＣＦフラグメント。破線の丸−幹細胞因子のシグナルペプチドドメイン（ＲＣＳ  ＰＤＢ  １ＳＣＦ）は、ｃ−Ｋｉｔ活性に必要な二量体ドメインを表す。特定のナノ粒子表面サイズ＋ＳＣＦコーティング密度による細胞取り込みに対するリガンド提示の効果は、ＣｙｎｏＢＭ．００２．７９（約５％の効率）とＣｙｎｏＢＭ．００２．８５（約５６％の効率）との間で比較対照することができる。さらに、Ｅ−セレクチン＋ＳＣＦフラグメント（ＨＳＣ．００４．７３）は高い効率を達成するが、ＳＣＦフラグメントはそれ自体では達成しない（ＨＳＣ．００４．７４）、コントラストがヒトＣＤ３４＋造血幹細胞トランスフェクションの定性的画像と共に表示される。挙動の著しい相違は、エンドサイトーシスの合図を生じさせ、続いて核酸および／またはリボ核タンパク質材料を核内標的指向する際の二量体ペプチドの特定の役割を示唆している。リガンドの配列は、
2020502120.tif 000013
である。
【手続補正１３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２９０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２９０】
図１１８：ペプチド工学−膜結合ＳＣＦ標的指向のための新規ｃＫｉｔ受容体フラグメント。内皮細胞および骨髄細胞上での造血幹細胞ローリング挙動の挙動を模倣し、全身的トランスフェクション効率を高めるための、ｃ−Ｋｉｔ由来の幹細胞因子標的指向ペプチドの合理的設計（ＣｙｎｏＢＭ．００２．８０を参照）。折り畳みについて評価した配列：名称ＳＣＦＮ、配列：
2020502120.tif 000014
。ＲｏｓｅｔｔａおよびＮＡＭＤシミュレーションパッケージを用いて配列を評価した。Ｒｏｓｅｔｔａ結果：ａｂ  ｉｎｉｔｉｏ折り畳みのために短縮配列をＲｏｓｅｔｔａに入れた
2020502120.tif 000015
。
【手続補正１４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２９５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２９５】
青い鎖は、残基７１〜９４：
2020502120.tif 000016
の範囲の、ＫＩＴ中に存在するより規則的ならせんを表した。アンカーおよびリンカーを有するＫＩＴ残基７１〜９４のＮＡＭＤシミュレーション：
2020502120.tif 000017
【手続補正１５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２９６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２９６】
鎖がリンカー残基と強く相互作用する構造に収束した。残基７１〜９４については、ＫＩＴ中の他の２つのヘリックスと相互作用することによってヘリックスを安定化させる疎水性残基がある。疎水性残基は、赤（下線）で示されている：
2020502120.tif 000018
。疎水性残基を除去するために配列を変更し、らせん状の折り畳みを誘導するのを助けるアミノイソ酪酸（Ａｉｂ）で置き換えて、以下の配列に到達した：
2020502120.tif 000019
。Ａｉｂを含む配列をＲｉｎｋ樹脂上で合成し、遊離アミンおよびアシル化アミン（Ａｃ）で単離した。二次構造は円二色性によって調べた。
【手続補正１６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２９７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２９７】
図１２１：ペプチド工学−ｃＫｉｔ受容体フラグメント（続き）
ＳＣＦ＿ｍｃＫｉｔ＿（４ＧＳ）２＿９Ｒ＿ＮおよびＳＣＦ＿ｍｃＫｉｔ（Ａｃ）＿（４ＧＳ）２＿９Ｒ＿Ｎの円二色性リガンド末端のアセチル化は、荷電ポリペプチド末端の電荷を中和するために利用され得る。上：ＫＩＴ７１９４＿ＡＩＢ１のＣＤは、アルファヘリックスおよびＡｉｂ単位を含むヘリックスの二次構造と一致して、２２２付近でわずかに落ち込み、２０８付近で大きな落ち込みを示している。下：ＫＩＴ７１９４＿ＡＩＢ１＿Ａｃは、ＫＩＴ７１９４＿ＡＩＢ１と同じＣＤを示している。時々アシル化は折りたたみを助け得るが、それは必要ではないようである。アセチル化はまた、末端アミンが荷電よりもむしろ中性である必要があるリガンド相互作用を助け得る。完全アンカー−リンカー−ＫＩＴ７１９４＿ＡＩＢ１構築物：
2020502120.tif 000020
。
【手続補正１７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】変更
【補正の内容】
【配列表】
2020502120000001.app