【手続補正書】
【提出日】令和3年4月26日(2021.4.26)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
複数のストレプトアビジンまたはストレプトアビジンムテイン分子を含むオリゴマー粒子試薬であって、該オリゴマー粒子試薬のサイズが、
(i) 50 nmよりも大きい半径；
(ii) 少なくとも5×106 g/molの分子量；および/または
(iii) オリゴマー粒子試薬当たり少なくとも100個のストレプトアビジンもしくはストレプトアビジンムテイン四量体
を含む、オリゴマー粒子試薬。
【請求項２】
前記複数のストレプトアビジンまたはストレプトアビジンムテイン分子が、ビオチン、ビオチン類似体、またはストレプトアビジン結合ペプチドに可逆的に結合するかまたは可逆的に結合することができる、請求項1に記載のオリゴマー粒子試薬。
【請求項３】
オリゴマー粒子試薬が、複数のストレプトアビジンムテイン分子を含み、該複数のストレプトアビジンムテイン分子の各々が、SEQ ID NO:1に示されるアミノ酸の配列におけるストレプトアビジン中の位置を基準として44〜47位に対応する配列位置に、アミノ酸配列Val44-Thr45-Ala46-Arg47またはIle44-Gly45-Ala46-Arg47を含む、請求項1〜2のいずれか一項に記載のオリゴマー粒子試薬。
【請求項４】
オリゴマー粒子試薬が、複数のストレプトアビジンムテイン分子を含み、該複数のストレプトアビジンムテイン分子の各々が、
(a) SEQ ID NO:3〜6、27、28、60、または61のいずれかに示されるアミノ酸の配列；
(b) SEQ ID NO:3〜6、27、28、60、もしくは61のいずれかに対して少なくとも85％、86％、87％、88％、89％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、またはそれ以上の配列同一性を示し、かつVal44-Thr45-Ala46-Arg47もしくはIle44-Gly45-Ala46-Arg47に対応するアミノ酸配列を含有し、かつ/またはビオチン、ビオチン類似体、もしくはストレプトアビジン結合ペプチドに可逆的に結合する、アミノ酸の配列；あるいは
(c) ビオチン、ビオチン類似体、またはストレプトアビジン結合ペプチドに可逆的に結合する、(a)または(b)の機能的断片
を含む、請求項1〜3のいずれか一項に記載のオリゴマー粒子試薬。
【請求項５】
オリゴマー粒子試薬が、ストレプトアビジン結合ペプチドを含む1つ以上の作用物質に結合しており、該ストレプトアビジン結合ペプチドが、該複数のストレプトアビジンまたはストレプトアビジンムテイン分子の結合部位に可逆的に結合する、請求項1〜4のいずれか一項に記載のオリゴマー粒子試薬。
【請求項６】
前記ストレプトアビジン結合ペプチドが、
Trp-Ser-His-Pro-Gln-Phe-Glu-Lys (SEQ ID NO: 8), Trp-Ser-His-Pro-Gln-Phe-Glu-Lys-(GlyGlyGlySer)3-Trp-Ser-His-Pro-Gln-Phe-Glu-Lys (SEQ ID NO:17), Trp-Ser-His-Pro-Gln-Phe-Glu-Lys-(GlyGlyGlySer)2-Trp-Ser-His-Pro-Gln-Phe-Glu-Lys (SEQ ID NO:18), Trp-Ser-His-Pro-Gln-Phe-Glu-Lys-(GlyGlyGlySer)2Gly-Gly-Ser-Ala-Trp-Ser-His-Pro-Gln-Phe-Glu-Lys (SEQ ID NO:19),およびSAWSHPQFEK(GGGS)2GGSAWSHPQFEK (SEQ ID NO: 16)
からなる群より選択される、請求項5に記載のオリゴマー粒子試薬。
【請求項７】
前記1つ以上の作用物質が、抗体またはその抗原結合断片を含む、請求項5または6に記載のオリゴマー粒子試薬。
【請求項８】
前記1つ以上の作用物質が、一価抗体断片、任意でFabであるかまたはそれを含む、請求項7に記載のオリゴマー粒子試薬。
【請求項９】
前記1つ以上の作用物質が、標的細胞の表面上に発現される受容体に結合する受容体結合物質であり、任意で、該受容体結合物質が刺激物質であり、結合が標的細胞においてシグナルを誘導または調節する、請求項5〜8のいずれか一項に記載のオリゴマー粒子試薬。
【請求項１０】
前記受容体結合物質が、T細胞においてTCR/CD3複合体関連シグナルを開始することができ、TCR/CD3複合体のメンバーに結合し、かつ/またはCD3に特異的に結合する、請求項9に記載のオリゴマー粒子試薬。
【請求項１１】
前記刺激物質が第1の受容体結合物質であり、かつ前記オリゴマー粒子試薬が、標的細胞の表面上の共刺激分子に結合する第2の受容体結合物質を含み、該共刺激分子に対する結合が標的細胞においてシグナルを誘導または調節し、任意で、該共刺激分子がCD28である、請求項9または10に記載のオリゴマー粒子試薬。
【請求項１２】
前記1つ以上の作用物質が、抗CD3抗体および抗CD28抗体、任意で抗CD3 Fabおよび抗CD28 Fabである、請求項5〜11のいずれか一項に記載のオリゴマー粒子試薬。
【請求項１３】
(i)可溶性であり、かつ/または
(ii)以下：
両端の値を含めて、50 nm〜150 nm、75 nm〜125 nm、80 nm〜115 nm、もしくは90 nm〜110 nmの半径； 
5×107 g/mol〜5×108 g/mol、1×108 g/mol〜5×108 g/mol、もしくは1×108 g/mol〜2×108 g/mol
の分子量；および/または
1,000〜10,000個のストレプトアビジンもしくはストレプトアビジンムテイン四量体、2,000〜5,000個のストレプトアビジンもしくはストレプトアビジンムテイン四量体、もしくは2,000〜2,500個のストレプトアビジンもしくはストレプトアビジンムテイン四量体
を含む、
請求項1〜12のいずれか一項に記載のオリゴマー粒子試薬。
【請求項１４】
前記複数のストレプトアビジンまたはストレプトアビジンムテイン分子がリジン残基を含み、該リジン残基の20％未満、10％未満、5％未満、または1％未満が、N-置換イミノチオランを含む、請求項1〜13のいずれか一項に記載のオリゴマー粒子試薬。
【請求項１５】
請求項1〜14のいずれか一項に記載の複数のオリゴマー粒子試薬を含む、組成物。
【請求項１６】
前記複数のオリゴマー粒子試薬が、
(i) 70 nmよりも大きい平均直径；
(ii) 少なくとも1×108 g/molの平均分子量；
(iii) 少なくとも2,000個の、オリゴマー粒子試薬当たりのストレプトアビジンもしくはストレプトアビジンムテイン四量体の平均数；および/または
(iv) 複数のオリゴマー粒子試薬の少なくとも95％が10 nm〜150 nmの半径を含む、半径サイズ分布
を含む、請求項15に記載の組成物。
【請求項１７】
前記複数のオリゴマー粒子試薬が、
両端の値を含めて、50 nm〜150 nm、75 nm〜125 nm、80 nm〜110 nm、もしくは90 nm〜110 nmの平均半径；または
90 nm±15 nm、95 nm±20〜25 nm；もしくは97±10 nmの平均半径
を含み；
前記複数のオリゴマー粒子試薬の少なくとも95％が、50〜150 nm、70 nm〜140 nm、80 nm〜120 nm、80 nm〜115 nm、80 nm〜100 nm、90 nm〜110 nm、および/または100 nm〜120 nmの半径を含み；かつ/または
前記複数のオリゴマー粒子試薬の少なくとも95％が、複数のオリゴマー粒子試薬の平均半径および/または半径中央値の±50％、±25％、±20％、±15％、±10％、および/または±5％の間の半径を含む、
請求項15または16に記載の組成物。
【請求項１８】
前記複数のオリゴマー粒子試薬が、80 nm〜115 nmの平均半径を含み、かつオリゴマー粒子試薬の少なくとも95％が、平均半径の±25％の間の半径を含む、請求項15〜17のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１９】
前記複数の粒子が、
(i) 両端の値を含めて、1×108 g/mol〜5×108 g/mol、または1×108 g/mol〜2×108 g/molの平均分子量；および/あるいは
(ii)少なくとも100個、少なくとも500個、少なくとも1,000個、少なくとも1,500個、もしくは少なくとも2,000個、または各々両端の値を含めて、1,000〜20,000個、1,000〜10,000個、2,000〜5,000個、もしくは2,000〜3,500個の、オリゴマー粒子試薬当たりのストレプトアビジンまたはストレプトアビジンムテイン四量体の平均数
を含む、請求項15〜18のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２０】
約-80℃もしくは-80℃未満、約-20℃もしくは-20℃未満、および/または約4℃もしくは4℃未満で少なくとも1週間保存した場合に、前記複数のオリゴマー粒子試薬の平均半径が、25％または10％よりも大きくは増加しない、請求項15〜19のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２１】
チオール官能基と反応することができるチオール反応性官能基を含む複数の活性化ストレプトアビジンまたは活性化ストレプトアビジンムテイン分子と、1つ以上のチオール官能基を含む複数のチオール化ストレプトアビジンまたはチオール化ストレプトアビジンムテイン分子とをインキュベートし、それによって、ストレプトアビジンまたはストレプトアビジンムテインを含むオリゴマー粒子を含む粒子組成物を生成する工程；
オリゴマー粒子を、単量体および/またはより小さなオリゴマー分子から分離する工程；ならびに
オリゴマー粒子を安定剤と接触させ、それによってオリゴマー粒子試薬を作製する工程
を含む、ストレプトアビジンまたはストレプトアビジンムテインを含むオリゴマー粒子試薬を作製するための方法。
【請求項２２】
第1の複数のストレプトアビジンまたはストレプトアビジンムテイン分子を、1つ以上のアミンをチオール反応性官能基に変換することができる活性化剤とインキュベートすることによって、前記複数の活性化ストレプトアビジンまたは活性化ストレプトアビジンムテイン分子が生成され；かつ/または
第2の複数のストレプトアビジンまたはストレプトアビジンムテイン分子と、チオール官能基を1つ以上のリジン残基に付加することができるチオール化剤とのインキュベーションによって、前記複数のチオール化ストレプトアビジンまたはチオール化ストレプトアビジンムテイン分子が生成される、
請求項21に記載の方法。
【請求項２３】
(a) 1つ以上のアミンを、チオール官能基と反応することができるチオール反応基に変換するための条件下で、第1の複数のストレプトアビジンまたはストレプトアビジンムテイン分子を活性化剤とインキュベートし、それによって複数の活性化ストレプトアビジンまたは活性化ストレプトアビジンムテイン分子を生成する工程；
(b) 第2の複数のストレプトアビジンまたはストレプトアビジンムテイン分子を、チオール官能基を1つ以上のリジン残基に付加することができるチオール化剤とインキュベートし、それによって複数のチオール化ストレプトアビジンまたはチオール化ストレプトアビジンムテイン分子を生成する工程；および
(c) 複数の活性化ストレプトアビジンまたは活性化ストレプトアビジンムテイン分子を複数のチオール化ストレプトアビジンまたはチオール化ストレプトアビジンムテイン分子とインキュベートし、それによって、オリゴマー粒子試薬を含む粒子組成物を生成する工程
を含む、オリゴマー粒子試薬を作製するための方法であって、
(c)におけるインキュベーションの開始時に、複数のチオール化ストレプトアビジンまたはチオール化ストレプトアビジンムテイン分子が、
リジン残基の平均して少なくとも60％がチオール官能基を含みかつ/またはチオール化ストレプトアビジンもしくはチオール化ストレプトアビジンムテイン四量体当たり平均して少なくとも10個のリジン残基がチオール官能基を含む
ものである
という条件下で実施される、方法。
【請求項２４】
オリゴマー粒子試薬を、単量体および/またはより小さなオリゴマーストレプトアビジンまたはオリゴマーストレプトアビジンムテイン分子から分離する工程をさらに含む、請求項23に記載の方法。
【請求項２５】
第1の複数のストレプトアビジンまたはストレプトアビジンムテイン分子と活性化剤とのインキュベーションが、ストレプトアビジンまたはストレプトアビジンムテイン 対 活性化試薬のモル比1:1〜1:10で、任意でストレプトアビジンまたはストレプトアビジンムテイン 対 活性化試薬のモル比1:2±2％で行われる、請求項22〜24のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２６】
前記活性化剤が、ヘテロ二官能性架橋剤を含み、任意で該活性化剤が、スルホスクシンイミジル4-(N-マレイミドメチル)シクロヘキサン-1-カルボキシラート（スルホSMCC）および/もしくはスクシンイミジル-6-(β-マレイミドプロピオンアミド)ヘキサノアート（SMPH）を含み、かつ/または任意で前記チオール反応性官能基がマレイミド基である、請求項22〜25のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２７】
第1の複数のストレプトアビジンまたはストレプトアビジンムテイン分子と活性化剤とが、各々両端の値を含めて、6.8〜7.5のpHまたは7.0〜7.4のpHで、任意で7.2または約7.2のpHでインキュベートされ；かつ/または
複数の活性化ストレプトアビジンまたは活性化ストレプトアビジンムテイン分子と複数のチオール化ストレプトアビジンまたはチオール化ストレプトアビジンムテイン分子とが、各々両端の値を含めて、6.8〜7.5のpHまたは7.0〜7.4のpHで、任意で7.2または約7.2のpHでインキュベートされる、
請求項21〜26のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２８】
第2の複数のストレプトアビジンまたはストレプトアビジンムテイン分子とチオール化剤とのインキュベーションが、両端の値を含めて、チオール化試薬 対 ストレプトアビジンまたはストレプトアビジンムテイン分子当たりの各一級アミンのモル比10:1〜1:1で行われ；かつ/あるいは、第2の複数のストレプトアビジンまたはストレプトアビジンムテイン分子とチオール化剤とのインキュベーションが、両端の値を含めて、ストレプトアビジンまたはストレプトアビジンムテイン四量体 対 チオール化剤のモル比1:50〜1:500で、任意で、ストレプトアビジンまたはストレプトアビジンムテイン四量体 対 活性化試薬のモル比1:100または約1:100で行われる、請求項22〜27のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２９】
前記チオール化剤が、2-イミノチオランであるかまたはそれを含む、請求項22〜28のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３０】
第2の複数のストレプトアビジンまたはストレプトアビジンムテイン分子とチオール化剤とが、7.0以上、任意で、両端の値を含めて7.0〜8.0のpHで、任意で約7.7のpHでインキュベートされ；かつ/または
第2の複数のストレプトアビジンまたはストレプトアビジンムテイン分子とチオール化剤とのインキュベーションが、8.0以上、任意で、両端の値を含めて8.0〜9.0、任意で、8.5または約8.5のpHを有する緩衝液の存在下で開始される、
請求項22〜29のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３１】
インキュベーション中の複数の活性化ストレプトアビジンまたは活性化ストレプトアビジンムテイン分子 対 複数のチオール化ストレプトアビジンまたはチオール化ストレプトアビジンムテイン分子が、モル比X:1であり、Xが、ストレプトアビジンまたはストレプトアビジンムテインの分子当たりのチオール化されるのに利用可能なリジン残基の数であり、任意で、モル比が1:1〜8:1または2:1〜6:1、任意で4:1または約4:1である、請求項21〜30のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３２】
オリゴマーストレプトアビジンまたはオリゴマーストレプトアビジンムテイン粒子を含む粒子組成物を生成する工程が、活性化ストレプトアビジンまたは活性化ストレプトアビジンムテイン分子とチオール化ストレプトアビジンまたはチオール化ストレプトアビジンムテイン分子との反応を、該分子をN-エチルマレイミド（NEM）と接触させることにより終了させることをさらに含む、請求項21〜31のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３３】
チオール化ストレプトアビジンまたはチオール化ストレプトアビジンムテイン分子と活性化ストレプトアビジンまたは活性化ストレプトアビジンムテイン分子とをインキュベートする工程の前に、
(i)活性化ストレプトアビジンまたは活性化ストレプトアビジンムテイン分子を含む組成物から活性化剤を除去する工程；および/あるいは
(ii)チオール化ストレプトアビジンまたはチオール化ストレプトアビジンムテイン分子を含む組成物からチオール化剤を除去する工程
を含む、請求項23〜32のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３４】
複数の活性化ストレプトアビジンまたは活性化ストレプトアビジンムテイン分子と複数のチオール化ストレプトアビジンまたはチオール化ストレプトアビジンムテイン分子とのインキュベーションが、第2の複数のストレプトアビジン分子とチオール化剤とのインキュベーションの終了後かつ/またはチオール化ストレプトアビジンもしくはチオール化ストレプトアビジンムテイン分子を含む組成物からのチオール化剤の除去後15分以内に開始される、請求項23〜32のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３５】
第1の複数のストレプトアビジンまたはストレプトアビジンムテイン分子をスクシンイミジル-6-(β-マレイミドプロピオンアミド)ヘキサノアート（SMPH）と1時間または約1時間、7.2または約7.2のpHでインキュベートし、それによって、マレイミドチオール反応官能基を含む複数の活性化ストレプトアビジンまたは活性化ストレプトアビジンムテイン分子を生成する工程；
第2の複数のストレプトアビジンまたはストレプトアビジンムテイン分子を2-イミノチオランと1時間または約1時間、両端の値を含めて7.5〜8.5のpHでインキュベートし、それによって、1つ以上のチオール官能基を含む複数のチオール化ストレプトアビジン分子を生成する工程；および
複数の活性化ストレプトアビジンまたは活性化ストレプトアビジンムテイン分子を複数のチオール化ストレプトアビジン分子と1時間または約1時間、7.2または約7.2のpHでインキュベートし、それによって、オリゴマー粒子試薬を含む粒子組成物を生成する工程
を含む、オリゴマー粒子試薬を作製するための方法であって、
複数の活性化ストレプトアビジン分子と複数のチオール化ストレプトアビジン分子とのインキュベーションが、第2の複数のストレプトアビジン分子と2-イミノチオランとのインキュベーションの終了後10分以内に開始される、方法。
【請求項３６】
オリゴマー粒子試薬を安定剤と接触させる工程をさらに含み、該安定剤がオリゴマー粒子試薬のリジン残基上に存在するN-置換イミノチオランの量を低減させ、任意で該安定剤がヒドロキシルアミンを含む、請求項23〜35のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３７】
オリゴマー粒子試薬をフィルター滅菌する工程をさらに含む、請求項21〜36のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３８】
前記オリゴマー粒子試薬が、サイズ排除クロマトグラフィー（SEC）によって、単量体またはより小さなオリゴマーストレプトアビジンまたはオリゴマーストレプトアビジンムテイン分子から分離され、任意で、該SECが、500 kDa〜1000 kDaまたは約500 kDa〜1000 kDaであるサイズ排除限界、任意で75kDaまたは約75 kDaであるサイズ排除限界を含む、請求項21、22、および24〜37のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３９】
請求項21〜38のいずれか一項に記載の方法によって作製された、オリゴマー粒子試薬。
【請求項４０】
請求項1〜14および39のいずれか一項に記載のオリゴマー粒子試薬、請求項15〜20のいずれか一項に記載の複数のオリゴマー粒子試薬を含む組成物、または請求項21〜38のいずれか一項に記載の方法によって作製されたオリゴマー粒子試薬を、1つ以上の作用物質と、該1つ以上の作用物質を該オリゴマー粒子試薬に可逆的に結合させるための条件下で混合する工程を含む、1つ以上の作用物質をオリゴマー粒子試薬に多量体化する方法。
【請求項４１】
前記1つ以上の作用物質の各々がストレプトアビジン結合ペプチドを含み、該ストレプトアビジン結合ペプチドが、オリゴマー粒子試薬上のストレプトアビジンまたはストレプトアビジンムテイン分子の結合部位に結合することができる、請求項40に記載の方法。
【請求項４２】
前記ストレプトアビジン結合ペプチドが、
Trp-Ser-His-Pro-Gln-Phe-Glu-Lys (SEQ ID NO: 8), Trp-Ser-His-Pro-Gln-Phe-Glu-Lys-(GlyGlyGlySer)3-Trp-Ser-His-Pro-Gln-Phe-Glu-Lys (SEQ ID NO:17), Trp-Ser-His-Pro-Gln-Phe-Glu-Lys-(GlyGlyGlySer)2-Trp-Ser-His-Pro-Gln-Phe-Glu-Lys (SEQ ID NO:18), Trp-Ser-His-Pro-Gln-Phe-Glu-Lys-(GlyGlyGlySer)2Gly-Gly-Ser-Ala-Trp-Ser-His-Pro-Gln-Phe-Glu-Lys (SEQ ID NO:19),およびSAWSHPQFEK(GGGS)2GGSAWSHPQFEK (SEQ ID NO:16)
からなる群より選択される、請求項41に記載の方法。
【請求項４３】
前記1つ以上の作用物質が、抗体またはその抗原結合断片を含む、請求項40〜42のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４４】
前記1つ以上の作用物質が、一価抗体断片、任意でFabを含む、請求項43に記載の方法。
【請求項４５】
前記1つ以上の作用物質が、標的細胞の表面上に発現される受容体に結合するまたは結合することができる受容体結合物質であり、任意で、該受容体結合物質が刺激物質であり、結合が標的細胞においてシグナルを誘導または調節する、請求項40〜44のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４６】
請求項21〜38および40〜45のいずれか一項に記載の方法によって作製された複数のオリゴマー粒子試薬を含む、組成物。
【請求項４７】
請求項1〜14および39のいずれか一項に記載のオリゴマー粒子試薬、請求項15〜20および46のいずれか一項に記載の複数のオリゴマー試薬を含む組成物、または請求項21〜38および40〜45のいずれか一項に記載の方法によって作製されたオリゴマー試薬を含む、製造物品。
【請求項４８】
請求項1〜14および39のいずれか一項に記載のオリゴマー粒子試薬、請求項15〜20および46のいずれか一項に記載の複数のオリゴマー試薬を含む組成物、または請求項21〜38および40〜45のいずれか一項に記載の方法によって作製されたオリゴマー試薬の存在下で、標的細胞を含む細胞組成物をインキュベートし、それによって標的細胞を調節する工程を含み、
任意で、
該標的細胞を調節する工程が、該標的細胞の活性化、濃縮、および/または増大を含み；かつまたは
エクスビボまたはインビトロの方法である、
細胞を調節するための方法。
【請求項４９】
請求項1〜14および39のいずれか一項に記載のオリゴマー粒子試薬、請求項15〜20および46のいずれか一項に記載の複数のオリゴマー試薬を含む組成物、または請求項21〜38および40〜45のいずれか一項に記載の方法によって作製されたオリゴマー試薬の存在下で、標的細胞を含む細胞組成物をインキュベートする工程を含み、任意でエクスビボまたはインビトロの方法である、細胞を培養するための方法。
【請求項５０】
前記オリゴマー粒子試薬が、標的細胞の表面上に発現される受容体に結合する受容体結合物質に可逆的に結合しており、任意で、該受容体結合物質が刺激物質であり、結合が標的細胞においてシグナルを誘導または調節する、請求項48または請求項49に記載の方法。
【請求項５１】
前記標的細胞がT細胞である、請求項45および48〜50のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５２】
前記受容体結合物質が、T細胞においてTCR/CD3複合体関連シグナルを開始することができ、TCR/CD3複合体のメンバーに結合し；かつ/またはCD3に特異的に結合する、請求項45、50、および51のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５３】
前記刺激物質が第1の受容体結合物質であり、かつ前記オリゴマー粒子試薬が、標的細胞の表面上の共刺激分子に結合する第2の受容体結合物質を含み、該共刺激分子に対する結合が標的細胞においてシグナルを誘導または調節し、任意で、該共刺激分子がCD28である、請求項45および50〜52のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５４】
前記1つ以上の作用物質が、抗CD3抗体および抗CD28抗体、任意で抗CD3 Fabおよび抗CD28 Fabである、請求項40〜45のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５５】
前記第1の受容体結合物質および第2の受容体結合物質が、それぞれ抗CD3抗体および抗CD28抗体、任意でそれぞれ、抗CD3 Fabおよび抗CD28 Fabである、請求項53に記載の方法。
【請求項５６】
受容体結合物質とオリゴマー粒子試薬との間の可逆的結合を破壊する工程をさらに含み、該破壊する工程が、受容体結合物質とオリゴマー粒子試薬との間の結合を逆転させるまたはそれと競合することができる物質の標的細胞への導入を含み、任意で該物質が、ビオチンまたはビオチン類似体、任意でD-ビオチンを含む、請求項50〜55のいずれか一項に記載の方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６８】
本明細書に提供される方法のいずれかの特定の態様において、物質は、
2020517705.tif 000001
からなる群より選択されるストレプトアビジン結合ペプチドである。本明細書に提供される方法のいずれかのいくつかの態様において、破壊は、前記インキュベーションの開始後5日以内に実施される。
[本発明1001]
複数のストレプトアビジンまたはストレプトアビジンムテイン分子を含むオリゴマー粒子試薬であって、該オリゴマー粒子試薬のサイズが、
(i) 50 nmよりも大きい半径、
(ii) 少なくとも5×106 g/molの分子量；および/または
(iii) オリゴマー粒子試薬当たり少なくとも100個のストレプトアビジンもしくはストレプトアビジンムテイン四量体
を含む、オリゴマー粒子試薬。
[本発明1002]
前記ストレプトアビジンまたはストレプトアビジンムテイン分子が、ビオチン、ビオチン類似体、またはストレプトアビジン結合ペプチドに可逆的に結合するかまたは可逆的に結合することができる、本発明1001のオリゴマー粒子試薬。
[本発明1003]
複数のストレプトアビジンムテイン分子を含み、該ストレプトアビジンムテイン分子が、SEQ ID NO:1に示されるアミノ酸の配列におけるストレプトアビジン中の位置を基準として44〜47位に対応する配列位置に、アミノ酸配列Val44-Thr45-Ala46-Arg47またはIle44-Gly45-Ala46-Arg47を含む、本発明1001〜1002のいずれかのオリゴマー粒子試薬。
[本発明1004]
(a) SEQ ID NO:3〜6、27、28、60、または61のいずれかに示されるアミノ酸の配列；
(b) SEQ ID NO:3〜6、27、28、60、もしくは61のいずれかに対して少なくとも85％、86％、87％、88％、89％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、またはそれ以上の配列同一性を示し、かつVal44-Thr45-Ala46-Arg47もしくはIle44-Gly45-Ala46-Arg47に対応するアミノ酸配列を含有し、かつ/またはビオチン、ビオチン類似体、もしくはストレプトアビジン結合ペプチドに可逆的に結合する、アミノ酸の配列；あるいは
(c) ビオチン、ビオチン類似体、またはストレプトアビジン結合ペプチドに可逆的に結合する、(a)または(b)の機能的断片
を含む複数のストレプトアビジンムテイン分子を含む、 本発明1001〜1003のいずれかのオリゴマー粒子試薬。
[本発明1005]
SEQ ID NO:6または61に示されるアミノ酸の配列を含む複数のストレプトアビジンムテイン分子を含む、本発明1001〜1004のいずれかのオリゴマー粒子試薬。
[本発明1006]
1つ以上の作用物質に結合しているかまたは結合することができる、本発明1001〜1005のいずれかのオリゴマー粒子試薬。
[本発明1007]
前記1つ以上の作用物質が結合パートナーを含み、該結合パートナーが、オリゴマー粒子試薬上の1つ以上の結合部位に結合することができ、任意で可逆的に結合することができる、本発明1006のオリゴマー粒子試薬。
[本発明1008]
前記結合パートナーが、ストレプトアビジン結合ペプチドを含む、本発明1007のオリゴマー粒子試薬。
[本発明1009]
前記結合パートナーが、
2020517705.tif 000002
からなる群より選択されるストレプトアビジン結合ペプチドを含む、本発明1007または1008のオリゴマー粒子試薬。
[本発明1010]
前記1つ以上の作用物質が、抗体またはその抗原結合断片であるかまたはそれを含む、本発明1007〜1009のいずれかのオリゴマー粒子試薬。
[本発明1011]
前記1つ以上の作用物質が、一価抗体断片であるかまたはそれを含む、本発明1010のオリゴマー粒子試薬。
[本発明1012]
前記1つ以上の作用物質が、Fabであるかまたはそれを含む、本発明1010または本発明1011のオリゴマー粒子試薬。
[本発明1013]
前記1つ以上の作用物質が、標的細胞の表面上に発現される受容体に結合するまたは結合することができる受容体結合物質である、本発明1007〜1012のいずれかのオリゴマー粒子試薬。
[本発明1014]
前記受容体結合物質が、標的細胞の表面上の分子に結合することができる刺激物質であるかまたはそれを含み、結合が標的細胞においてシグナルを誘導または調節する、本発明1007〜1013のいずれかのオリゴマー粒子試薬。
[本発明1015]
前記標的細胞が免疫細胞である、本発明1013または本発明1014のオリゴマー粒子。
[本発明1016]
前記標的細胞がT細胞である、本発明1013〜1015のいずれかのオリゴマー粒子。
[本発明1017]
前記受容体結合物質が、T細胞においてTCR/CD3複合体関連シグナルを開始することができ、TCR/CD3複合体のメンバーに結合し；かつ/またはCD3に特異的に結合する、本発明1013〜1016のいずれかのオリゴマー粒子試薬。
[本発明1018]
前記刺激物質が第1の受容体結合物質であり、かつ前記オリゴマー粒子試薬が第2の受容体結合物質を含み、該第2の受容体結合物質が、標的細胞の表面上の第2の分子に特異的に結合することができ、該第2の分子に対する結合が任意で、標的細胞においてシグナルを誘導または調節することができる、本発明1013〜1017のいずれかのオリゴマー粒子試薬。
[本発明1019]
第2の受容体結合物質が、共刺激分子、アクセサリー分子、免疫チェックポイント分子に特異的に結合するか、TNFファミリーまたはTNFファミリー受容体、サイトカイン受容体、ケモカイン受容体のメンバーであるか、あるいは、接着分子、またはサイトカイン産生、ケモカイン産生、および/もしくは接着分子の発現を誘導する因子であるかまたはそれを含む、本発明1018のオリゴマー粒子試薬。
[本発明1020]
第2の受容体結合物質が共刺激分子に特異的に結合し、かつ該共刺激分子がCD28である、本発明1018または本発明1019のオリゴマー粒子試薬。
[本発明1021]
前記1つ以上の作用物質が、抗CD3抗体および抗CD28抗体、任意で抗CD3 Fabおよび抗CD28 Fabである、本発明1007〜1020のいずれかのオリゴマー粒子試薬。
[本発明1022]
前記受容体結合物質が、共刺激分子、アクセサリー分子、免疫チェックポイント分子に特異的に結合するか、TNFファミリーまたはTNFファミリー受容体、サイトカイン受容体、ケモカイン受容体のメンバーであるか、あるいは、接着分子、またはサイトカイン産生、ケモカイン産生、および/もしくは接着分子の発現を誘導する因子であるかまたはそれを含む、本発明1013〜1016のいずれかのオリゴマー粒子試薬。
[本発明1023]
前記1つ以上の作用物質が選択物質を含み、該選択物質が、標的細胞の表面上に発現される選択マーカーに結合するかまたは結合することができる、本発明1007〜1022のいずれかのオリゴマー粒子試薬。
[本発明1024]
前記標的細胞が免疫細胞、任意でT細胞である、本発明1023のオリゴマー粒子試薬。
[本発明1025]
前記選択マーカーが、CCR7、CD3、CD4、CD8、CD25、CD28、CD27、CD45RA、CD45RO、CD62L、および/またはCD127である、本発明1023または本発明1024のオリゴマー粒子試薬。
[本発明1026]
60 nm超、70 nm超、80 nm超、または90 nm超の半径を含む、本発明1001〜1025のいずれかのオリゴマー粒子試薬。
[本発明1027]
両端の値を含めて、50 nm〜150 nm、75 nm〜125 nm、80 nm〜115 nm、もしくは90 nm〜110 nmの半径；または
90 nm±15 nm、もしくは95 nm±20〜25 nmの半径
を含む、本発明1001〜1026のいずれかのオリゴマー粒子試薬。
[本発明1028]
前記半径が流体力学半径である、本発明1026または本発明1027のオリゴマー粒子試薬。
[本発明1029]
少なくとも5×107 g/mol、もしくは少なくとも1×108 g/mol；および/または
5×107 g/mol〜5×108 g/mol、1×108 g/mol〜5×108 g/mol、もしくは1×108 g/mol〜2×108 g/mol
の分子量を含む、本発明1001〜1028のいずれかのオリゴマー粒子試薬。
[本発明1030]
少なくとも500個のストレプトアビジンもしくはストレプトアビジンムテイン四量体、少なくとも1,000個のストレプトアビジンもしくはストレプトアビジンムテイン四量体、少なくとも1,500個のストレプトアビジンもしくはストレプトアビジンムテイン四量体、または少なくとも2,000個のストレプトアビジンもしくはストレプトアビジンムテイン四量体；および/あるいは；
1,000〜20,000個のストレプトアビジンもしくはストレプトアビジンムテイン四量体、1,000〜10,000個のストレプトアビジンもしくはストレプトアビジンムテイン四量体、または2,000〜5,000個のストレプトアビジンもしくはストレプトアビジンムテイン四量体
を含む、本発明1001〜1029のいずれかのオリゴマー粒子試薬。
[本発明1031]
前記複数のストレプトアビジンまたはストレプトアビジンムテインがリジン残基を含み、該リジン残基の20％未満、10％未満、5％未満、1％未満が、N-置換イミノチオランを含む、本発明1001〜1030のいずれかのオリゴマー粒子試薬。
[本発明1032]
本発明1001〜1031のいずれかの複数のオリゴマー粒子試薬を含む、組成物。
[本発明1033]
前記複数のオリゴマー粒子試薬が、
(i) 70 nmよりも大きい平均直径；
(ii) 少なくとも1×108 g/molの平均分子量；および/または
(iii) 少なくとも2,000個の、オリゴマー粒子試薬当たりのストレプトアビジンもしくはストレプトアビジン四量体の平均数、および/または
(iv) 複数のオリゴマー粒子試薬の少なくとも95％が10 nm〜150 nmの半径を含む、半径サイズ分布
を含む、本発明1032の組成物。
[本発明1034]
前記複数のオリゴマー粒子試薬が、50 nm超、60 nm超、70 nm超、80 nm超、90 nm超、または100 nm超の平均半径を含む、本発明1032または1033の組成物。
[本発明1035]
前記複数のオリゴマー粒子試薬が、両端の値を含めて、50 nm〜150 nm、75 nm〜125 nm、80 nm〜110 nm、もしくは90 nm〜110 nmの平均半径を含む；または
前記複数のオリゴマー粒子試薬が、90 nm±15 nm、95 nm±20〜25 nm；もしくは97±10 nmの平均半径を含む、
本発明1032〜1034のいずれかの組成物。
[本発明1036]
前記複数のオリゴマー粒子試薬の少なくとも95％が、50〜150 nm、70 nm〜140 nm、80 nm〜120 nm、80 nm〜115 nm、80 nm〜100 nm、90 nm〜110 nm、および/または100 nm〜120 nmの半径を含む、本発明1032〜1035のいずれかの組成物。
[本発明1037]
前記オリゴマー粒子試薬の少なくとも95％が、複数のオリゴマー粒子試薬の平均半径および/または半径中央値の±50％、±25％、±20％、±15％、±10％、および/または±5％の間の半径を含む、本発明1032〜1036のいずれかの組成物。
[本発明1038]
前記複数のオリゴマー粒子試薬が、80 nm〜115 nmの平均半径を含み、かつオリゴマー粒子試薬の少なくとも95％が、平均半径の±25％の間の半径を含む、本発明1032〜1037のいずれかの組成物。
[本発明1039]
前記複数の粒子が、
(i) 両端の値を含めて、1×108 g/mol〜5×108 g/mol、または1×108 g/mol〜2×108 g/molの平均分子量；および/あるいは
(ii)少なくとも100個、少なくとも500個、少なくとも1,000個、少なくとも1,500個、もしくは少なくとも2,000個、または各々両端の値を含めて、1,000〜20,000個、1,000〜10,000個、もしくは2,000〜5,000個の、オリゴマー粒子試薬当たりのストレプトアビジンまたはストレプトアビジン四量体の平均数
を含む、本発明1032〜1038のいずれかの組成物。
[本発明1040]
約-80℃もしくは-80℃未満、約-20℃もしくは-20℃未満、および/または約4℃もしくは4℃未満で少なくとも1週間保存した場合に、前記複数のオリゴマー粒子の平均半径が、25％または10％よりも大きくは増加しない、本発明1032〜1039のいずれかの組成物。
[本発明1041]
チオール官能基と反応することができるチオール反応性官能基を含む複数の活性化ストレプトアビジンまたは活性化ストレプトアビジンムテイン分子と、1つ以上のチオール官能基を含む複数のチオール化ストレプトアビジンまたはチオール化ストレプトアビジンムテイン分子とをインキュベートし、それによって、オリゴマー粒子を含む粒子組成物を生成する工程；
オリゴマー粒子を、単量体および/またはより小さなオリゴマー分子から分離する工程；ならびに
オリゴマー粒子を安定剤と接触させ、それによってオリゴマー粒子試薬を作製する工程
を含む、ストレプトアビジンまたはストレプトアビジンムテインを含むオリゴマー粒子試薬を作製するための方法。
[本発明1042]
第1の複数のストレプトアビジンまたはストレプトアビジンムテイン分子を、1つ以上のアミンをチオール反応性官能基に変換することができる活性化剤とインキュベートすることによって、前記複数の活性化ストレプトアビジンまたは活性化ストレプトアビジンムテイン分子が生成される、本発明1041の方法。
[本発明1043]
第2の複数のストレプトアビジンまたはストレプトアビジンムテイン分子と、チオール官能基を1つ以上のリジン残基に付加するまたは付加することができるチオール化剤とのインキュベーションによって、前記複数のチオール化ストレプトアビジンまたはチオール化ストレプトアビジンムテイン分子が生成される、本発明1041または本発明1042の方法。
[本発明1044]
(a) 1つ以上のアミンを、チオール官能基と反応することができるチオール反応基に変換するための条件下で、第1の複数のストレプトアビジンまたはストレプトアビジンムテイン分子を活性化剤とインキュベートし、それによって複数の活性化ストレプトアビジンまたは活性化ストレプトアビジンムテイン分子を生成する工程；
(b) 第2の複数のストレプトアビジンまたはストレプトアビジンムテイン分子を、チオール官能基を1つ以上のリジン残基に付加するまたは付加することができるチオール化剤とインキュベートし、それによって複数のチオール化ストレプトアビジンまたはチオール化ストレプトアビジンムテイン分子を生成する工程；および
(c) 複数の活性化ストレプトアビジンまたは活性化ストレプトアビジンムテイン分子を複数のチオール化ストレプトアビジンまたはチオール化ストレプトアビジンムテイン分子とインキュベートし、それによって、オリゴマー粒子試薬を含む粒子組成物を生成する工程
を含む、オリゴマー粒子試薬を作製するための方法であって、
(c)におけるインキュベーションの開始時に、複数のチオール化ストレプトアビジンまたはチオール化ストレプトアビジンムテイン分子が、
リジンの平均して少なくとも60％がチオール官能基を含みかつ/またはチオール化ストレプトアビジンもしくはチオール化ストレプトアビジンムテイン四量体当たり平均して少なくとも10個のリジンがチオール官能基を含む
ものである
という条件下で実施される、方法。
[本発明1045]
オリゴマー粒子試薬を、単量体および/またはより小さなオリゴマーストレプトアビジンまたはオリゴマーストレプトアビジンムテイン分子から分離する工程をさらに含む、本発明1044の方法。
[本発明1046]
第1の複数のストレプトアビジンまたはストレプトアビジンムテイン分子と活性化剤とのインキュベーションが、ストレプトアビジンまたはストレプトアビジンムテイン 対 活性化試薬のモル比1:1〜1:10で行われる、本発明1041〜1045のいずれかの方法。
[本発明1047]
第1の複数のストレプトアビジンまたはストレプトアビジンムテイン分子と活性化剤とのインキュベーションが、ストレプトアビジンまたはストレプトアビジンムテイン 対 活性化試薬のモル比1:2±2％で行われる、本発明1041〜1046のいずれかの方法。
[本発明1048]
前記活性化剤が、ヘテロ二官能性架橋剤、任意でスルホスクシンイミジル4-(N-マレイミドメチル)シクロヘキサン-1-カルボキシラート（スルホSMCC）および/またはスクシンイミジル-6-(β-マレイミドプロピオンアミド)ヘキサノアート（SMPH）を含む、本発明1041〜1047のいずれかの方法。
[本発明1049]
前記チオール反応性官能基がマレイミド基である、本発明1041〜1048のいずれかの方法。
[本発明1050]
第1の複数のストレプトアビジンまたはストレプトアビジンムテイン分子と活性化剤とが、各々両端の値を含めて、6.8〜7.5、7.0〜7.4のpHで、任意で7.2または約7.2のpHでインキュベートされる、本発明1041〜1049のいずれかの方法。
[本発明1051]
第1の複数のストレプトアビジンまたはストレプトアビジンムテイン分子と活性化剤とが、室温、任意で、両端の値を含めて20℃〜25℃で、任意で23℃もしくは約23℃または24℃もしくは約24℃でインキュベートされる、本発明1041〜1050のいずれかの方法。
[本発明1052]
第1の複数のストレプトアビジンまたはストレプトアビジンムテイン分子と活性化剤とが、各々両端の値を含めて、15分間〜6時間、30分間〜2時間、任意で1時間または約1時間、インキュベートされる、本発明1041〜1051のいずれかの方法。
[本発明1053]
第2の複数のストレプトアビジンまたはストレプトアビジンムテイン分子とチオール化剤とのインキュベーションが、両端の値を含めて、チオール化試薬 対 ストレプトアビジンまたはストレプトアビジンムテイン分子当たりの各一級アミンのモル比10:1〜1:1で行われ；かつ/あるいは、第2の複数のストレプトアビジンまたはストレプトアビジンムテイン分子とチオール化剤とのインキュベーションが、両端の値を含めて、ストレプトアビジンまたはストレプトアビジンムテイン四量体 対 チオール化剤のモル比1:50〜1:500で、任意で、ストレプトアビジンまたはストレプトアビジンムテイン四量体 対 活性化試薬のモル比1:100または約1:100で行われる、本発明1043〜1052のいずれかの方法。
[本発明1054]
前記チオール化剤が、2-イミノチオランであるかまたはそれを含む、本発明1043〜1053のいずれかの方法。
[本発明1055]
第2の複数のストレプトアビジンまたはストレプトアビジンムテイン分子とチオール化剤とが、7.0以上、任意で、両端の値を含めて7.0〜8.0のpHで、任意で約7.7のpHでインキュベートされ；かつ/または
第2の複数のストレプトアビジンまたはストレプトアビジンムテイン分子とチオール化剤とのインキュベーションが、8.0以上、任意で、両端の値を含めて8.0〜9.0、任意で、8.5または約8.5のpHを有する緩衝液の存在下で開始される、
本発明1043〜1054のいずれかの方法。
[本発明1056]
第2の複数のストレプトアビジンまたはストレプトアビジンムテイン分子とチオール化剤とが、室温、任意で、両端の値を含めて20℃〜25℃で、任意で23℃もしくは約23℃でまたは24℃もしくは約24℃でインキュベートされる、本発明1043〜1055のいずれかの方法。
[本発明1057]
第2の複数のストレプトアビジンまたはストレプトアビジンムテイン分子とチオール化剤とが、各々両端の値を含めて、15分間〜2時間、15分間〜1.5時間、または25分間〜1時間、任意で1時間もしくは約1時間または25分間もしくは約25分間インキュベートされる、本発明1043〜1056のいずれかの方法。
[本発明1058]
インキュベーション中の複数の活性化ストレプトアビジンまたは活性化ストレプトアビジンムテイン分子 対 複数のチオール化ストレプトアビジンまたはチオール化ストレプトアビジンムテイン分子が、モル比X:1であり、Xが、ストレプトアビジンまたはストレプトアビジンムテインの分子当たりのチオール化されるのに利用可能なリジン残基の数である、本発明1041〜1057のいずれかの方法。
[本発明1059]
インキュベーション中の複数の活性化ストレプトアビジンまたは活性化ストレプトアビジンムテイン分子 対 複数のチオール化ストレプトアビジンまたはチオール化ストレプトアビジンムテイン分子が、モル比1:1〜8:1または2:1〜6:1、任意で4:1または約4:1である、本発明1041〜1058のいずれかの方法。
[本発明1060]
複数の活性化ストレプトアビジンまたは活性化ストレプトアビジンムテイン分子と複数のチオール化ストレプトアビジンまたはチオール化ストレプトアビジンムテイン分子とが、各々両端の値を含めて、6.8〜7.5、または7.0〜7.4のpHで、任意で7.2または約7.2のpHでインキュベートされる、本発明1041〜1059のいずれかの方法。
[本発明1061]
複数の活性化ストレプトアビジンまたは活性化ストレプトアビジンムテイン分子と複数のチオール化ストレプトアビジンまたはチオール化ストレプトアビジンムテイン分子とが、室温、任意で、両端の値を含めて20℃〜25℃で、任意で23℃もしくは約23℃でまたは24℃もしくは約24℃でインキュベートされる、本発明1041〜1060のいずれかの方法。
[本発明1062]
複数の活性化ストレプトアビジン分子と複数のチオール化ストレプトアビジン分子とが、各々両端の値を含めて、15分間〜6時間、または30分間〜2時間、任意で1時間または約1時間インキュベートされる、本発明1041〜1061のいずれかの方法。
[本発明1063]
オリゴマーストレプトアビジンまたはオリゴマーストレプトアビジンムテイン粒子を含む粒子組成物を生成する工程が、活性化ストレプトアビジンまたは活性化ストレプトアビジンムテイン分子とチオール化ストレプトアビジンまたはチオール化ストレプトアビジンムテイン分子との反応を、該分子をN-エチルマレイミド（NEM）と接触させることにより終了させることをさらに含む、本発明1041〜1062のいずれかの方法。
[本発明1064]
第1の複数のストレプトアビジンまたはストレプトアビジンムテイン分子と活性化剤とのインキュベーションの少なくとも一部分、および第2の複数のストレプトアビジンまたはストレプトアビジンムテイン分子とチオール化剤とのインキュベーションの少なくとも一部分が、同時に別々で実施される、本発明1044〜1063のいずれかの方法。
[本発明1065]
第1の複数のストレプトアビジンまたはストレプトアビジンムテイン分子と活性化剤とのインキュベーション、および第2の複数のストレプトアビジンまたはストレプトアビジンムテイン分子とチオール化剤とのインキュベーションが、実質的に同じ長さの時間にわたって実施され、かつ/または実質的に同じ時に完了する、本発明1064の方法。
[本発明1066]
チオール化ストレプトアビジンまたはチオール化ストレプトアビジンムテイン分子と活性化ストレプトアビジンまたは活性化ストレプトアビジンムテイン分子とをインキュベートする工程の前に、
(i)活性化ストレプトアビジンまたは活性化ストレプトアビジンムテイン分子を含む組成物から活性化剤を除去する工程；および/あるいは
(ii)チオール化ストレプトアビジンまたはチオール化ストレプトアビジンムテイン分子を含む組成物からチオール化剤を除去する工程
を含む、本発明1044〜1065のいずれかの方法。
[本発明1067]
複数の活性化ストレプトアビジンまたは活性化ストレプトアビジンムテイン分子と複数のチオール化ストレプトアビジンまたはチオール化ストレプトアビジンムテイン分子とのインキュベーションが、第2の複数のストレプトアビジン分子とチオール化剤とのインキュベーションの終了後かつ/またはチオール化ストレプトアビジンもしくはチオール化ストレプトアビジンムテイン分子を含む組成物からのチオール化剤の除去後15分以内に開始される、本発明1044〜1066のいずれかの方法。
[本発明1068]
第1の複数のストレプトアビジンまたはストレプトアビジンムテイン分子をスクシンイミジル-6-(β-マレイミドプロピオンアミド)ヘキサノアート（SMPH）と1時間または約1時間、7.2または約7.2のpHでインキュベートし、それによって、マレイミドチオール反応官能基を含む複数の活性化ストレプトアビジンまたは活性化ストレプトアビジンムテイン分子を生成する工程；
第2の複数のストレプトアビジンまたはストレプトアビジンムテイン分子を2-イミノチオランと1時間または約1時間、両端の値を含めて7.5〜8.5のpHでインキュベートし、それによって、1つ以上のチオール官能基を含む複数のチオール化ストレプトアビジン分子を生成する工程；および
複数の活性化ストレプトアビジンまたは活性化ストレプトアビジンムテイン分子を複数のチオール化ストレプトアビジン分子と1時間または約1時間、7.2または約7.2のpHでインキュベートし、それによって、オリゴマー粒子試薬を含む粒子組成物を生成する工程
を含む、オリゴマー粒子試薬を作製するための方法であって、
複数の活性化ストレプトアビジン分子と複数のチオール化ストレプトアビジン分子とのインキュベーションが、第2の複数のストレプトアビジン分子と2-イミノチオランとのインキュベーションの終了後10分以内に開始される、方法。
[本発明1069]
オリゴマー粒子試薬を安定剤と接触させる工程をさらに含む、本発明1044〜1068のいずれかの方法。
[本発明1070]
前記安定剤が、オリゴマー粒子試薬のリジン残基上に存在するN-置換イミノチオランの量を低減させる、本発明1041〜1043および1069のいずれかの方法。
[本発明1071]
前記安定剤がヒドロキシルアミンを含む、本発明1041〜1043、1069、および1070のいずれかの方法。
[本発明1072]
前記安定剤が、クロマトグラフィーによって、任意でサイズ排除クロマトグラフィー（SEC）によって、オリゴマー粒子試薬から除去される、本発明1041〜1043および1069〜1071のいずれかの方法。
[本発明1073]
オリゴマー粒子試薬をフィルター滅菌する工程をさらに含む、本発明1041〜1072のいずれかの方法。
[本発明1074]
前記オリゴマー粒子試薬が、サイズ排除クロマトグラフィー（SEC）によって、単量体またはより小さなオリゴマーストレプトアビジンまたはオリゴマーストレプトアビジンムテイン分子から分離される、本発明1041〜1043および1045〜1073のいずれかの方法。
[本発明1075]
前記SECがサイズ排除限界を含み、かつ該サイズ排除限界が、100 kDa、500 kDa、750 kDa、1000 kDa、もしくは2000 kDaよりも大きいかまたは約100kDa、約500 kDa、約750 kDa、約1000 kDa、もしくは約2000 kDaよりも大きい、本発明1074の方法。
[本発明1076]
前記サイズ排除限界が、500 kDa〜1000 kDaまたは約500 kDa〜1000 kDaであり、任意で75 kDaであるかまたは約75 kDaである、本発明1075の方法。
[本発明1077]
空隙容量を含む1つ以上の画分を収集し、それによってオリゴマー粒子試薬を単量体またはより小さなオリゴマーストレプトアビジンまたはオリゴマーストレプトアビジンムテイン分子から分離する工程を含む、本発明1041〜1043および1045〜1076のいずれかの方法。
[本発明1078]
オリゴマー粒子試薬を、1つ以上の作用物質と、1つ以上の作用物質をオリゴマー粒子試薬に可逆的に結合させるための条件下で混合する工程をさらに含む、本発明1041〜1077のいずれかの方法。
[本発明1079]
本発明1041〜1078のいずれかの方法によって作製された、オリゴマー粒子試薬。
[本発明1080]
本発明1001〜1031のいずれかのオリゴマー粒子試薬、本発明1032〜1040のいずれかの複数のオリゴマー粒子試薬を含む組成物、または本発明1041〜1078のいずれかの方法によって作製されたオリゴマー粒子試薬を、1つ以上の作用物質と、該1つ以上の作用物質を該オリゴマー粒子試薬に可逆的に結合させるための条件下で混合する工程を含む、1つ以上の作用物質をオリゴマー粒子試薬に多量体化する方法。
[本発明1081]
前記1つ以上の作用物質が結合パートナーを含み、該結合パートナーが、オリゴマー粒子試薬上の1つ以上の結合部位に結合することができる、本発明1078または本発明1080の方法。
[本発明1082]
前記結合パートナーが、ストレプトアビジン結合ペプチドを含む、本発明1081の方法。
[本発明1083]
前記結合パートナーが、
2020517705.tif 000003
からなる群より選択されるストレプトアビジン結合ペプチドを含む、本発明1081または本発明1082の方法。
[本発明1084]
前記1つ以上の作用物質が、抗体またはその抗原結合断片であるかまたはそれを含む、本発明1080〜1083のいずれかの方法。
[本発明1085]
前記1つ以上の作用物質が、一価抗体断片であるかまたはそれを含む、本発明1084の方法。
[本発明1086]
前記1つ以上の作用物質が、Fabであるかまたはそれを含む、本発明1084または本発明1085の方法。
[本発明1087]
前記1つ以上の作用物質が、標的細胞の表面上に発現される受容体に結合するまたは結合することができる受容体結合物質である、本発明1080〜1086のいずれかの方法。
[本発明1088]
前記受容体結合物質が、標的細胞の表面上の分子に結合することができる刺激物質であるかまたはそれを含み、結合が標的細胞においてシグナルを誘導または調節する、本発明1087の方法。
[本発明1089]
前記標的細胞が免疫細胞である、本発明1087または本発明1088の方法。
[本発明1090]
前記標的細胞がT細胞である、本発明1087〜1089のいずれかの方法。
[本発明1091]
前記受容体結合物質が、T細胞においてTCR/CD3複合体関連シグナルを開始することができ、TCR/CD3複合体のメンバーに結合し；かつ/またはCD3に特異的に結合する、本発明1087〜1090のいずれかの方法。
[本発明1092]
前記刺激物質が第1の受容体結合物質であり、かつ前記方法が、オリゴマー粒子試薬に第2の受容体結合物質を可逆的に結合させる工程をさらに含み、該第2の受容体結合物質が、標的細胞の表面上の第2の分子に特異的に結合することができ、該第2の分子に対する結合が任意で、標的細胞においてシグナルを誘導または調節することができる、本発明1087〜1091のいずれかの方法。
[本発明1093]
第2の受容体結合物質が、共刺激分子、アクセサリー分子、免疫チェックポイント分子に特異的に結合するか、TNFファミリーまたはTNFファミリー受容体、サイトカイン受容体、ケモカイン受容体のメンバーであるか、あるいは、接着分子、またはサイトカイン産生、ケモカイン産生、および/もしくは接着分子の発現を誘導する因子であるかまたはそれを含む、本発明1092の方法。
[本発明1094]
第2の受容体結合物質が共刺激分子に特異的に結合し、かつ該共刺激分子がCD28である、本発明1092または本発明1093の方法。
[本発明1095]
前記1つ以上の作用物質が、抗CD3抗体および抗CD28抗体、任意で抗CD3 Fabおよび抗CD28 Fabである、本発明1078および1080〜1094のいずれかの方法。
[本発明1096]
前記受容体結合物質が、共刺激分子、アクセサリー分子、免疫チェックポイント分子に特異的に結合するか、TNFファミリーまたはTNFファミリー受容体、サイトカイン受容体、ケモカイン受容体のメンバーであるか、あるいは、接着因子、またはサイトカイン産生、ケモカイン産生、および/もしくは接着分子の発現を誘導する因子であるかまたはそれを含む、本発明1087〜1090のいずれかの方法。
[本発明1097]
前記1つ以上の作用物質が選択物質を含み、該選択物質が、標的細胞の表面上に発現される選択マーカーに結合するかまたは結合することができる、本発明1078および1080〜1096のいずれかの方法。
[本発明1098]
前記標的細胞が免疫細胞、任意でT細胞である、本発明1097の方法。
[本発明1099]
前記選択マーカーが、CCR7、CD3、CD4、CD8、CD25、CD28、CD27、CD45RA、CD45RO、CD62L、および/またはCD127である、本発明1097または本発明1098の方法。
[本発明1100]
本発明1041〜1078および1080〜1099のいずれかの方法によって作製された複数のオリゴマー粒子試薬を含む、組成物。
[本発明1101]
本発明1001〜1031のいずれかのオリゴマー粒子試薬、本発明1032〜1040および1100のいずれかの複数のオリゴマー試薬を含む組成物、または本発明1041〜1078および1080〜1099のいずれかの方法によって作製されたオリゴマー試薬を含む、製造物品。
[本発明1102]
本発明1001〜1031のいずれかのオリゴマー粒子試薬、本発明1032〜1040および1100のいずれかの複数のオリゴマー試薬を含む組成物、または本発明1041〜1078および1080〜1099のいずれかの方法によって作製されたオリゴマー試薬の存在下で、標的細胞を含む細胞組成物をインキュベートし、それによって標的細胞を調節する工程を含む、細胞を調節するための方法。
[本発明1103]
本発明1001〜1031のいずれかのオリゴマー粒子試薬、本発明1032〜1040および1100のいずれかの複数のオリゴマー試薬を含む組成物、または本発明1041〜1078および1080〜1099のいずれかの方法によって作製されたオリゴマー試薬の存在下で、標的細胞を含む細胞組成物をインキュベートする工程を含む、細胞を培養するための方法。
[本発明1104]
前記オリゴマー粒子試薬が、標的細胞の表面上に発現される受容体に結合するまたは結合することができる1つ以上の受容体結合物質に可逆的に結合している、本発明1102または本発明1103の方法。
[本発明1105]
前記1つ以上の受容体結合物質が結合パートナーを含み、該結合パートナーが、オリゴマー粒子試薬上の1つ以上の結合部位に可逆的に結合している、本発明1104の方法。
[本発明1106]
前記結合パートナーが、ストレプトアビジン結合ペプチドを含む、本発明1105の方法。
[本発明1107]
前記結合パートナーが、
2020517705.tif 000004
からなる群より選択されるストレプトアビジン結合ペプチドを含む、本発明1105または本発明1106の方法。
[本発明1108]
前記1つ以上の受容体結合物質が、抗体またはその抗原結合断片であるかまたはそれを含む、本発明1087〜1107のいずれかの方法。
[本発明1109]
前記1つ以上の受容体結合物質が、一価抗体断片であるかまたはそれを含む、本発明1108の方法。
[本発明1110]
前記1つ以上の作用物質が、Fabであるかまたはそれを含む、本発明1108または本発明1109の方法。
[本発明1111]
前記標的細胞が免疫細胞である、本発明1102〜1110のいずれかの方法。
[本発明1112]
前記標的細胞がT細胞である、本発明1102〜1111のいずれかの方法。
[本発明1113]
前記受容体結合物質が、標的細胞の表面上の分子に結合することができる刺激物質であるかまたはそれを含み、結合が標的細胞においてシグナルを誘導または調節する、本発明1104〜1112のいずれかの方法。
[本発明1114]
前記受容体結合物質が、T細胞においてTCR/CD3複合体関連シグナルを開始することができ、TCR/CD3複合体のメンバーに結合し；かつ/またはCD3に特異的に結合する、本発明1104〜1113のいずれかの方法。
[本発明1115]
前記刺激物質が第1の受容体結合物質であり、かつ前記オリゴマー粒子試薬が第2の受容体結合物質を含み、該第2の受容体結合物質が、標的細胞の表面上の第2の分子に特異的に結合することができ、該第2の分子に対する結合が任意で、標的細胞においてシグナルを誘導または調節することができる、本発明1113または本発明1114の方法。
[本発明1116]
第2の受容体結合物質が、共刺激分子、アクセサリー分子、免疫チェックポイント分子に特異的に結合するか、TNFファミリーまたはTNFファミリー受容体、サイトカイン受容体、ケモカイン受容体のメンバーであるか、あるいは、接着分子、またはサイトカイン産生、ケモカイン産生、および/もしくは接着分子の発現を誘導する因子であるかまたはそれを含む、本発明1115の方法。
[本発明1117]
第2の受容体結合物質が共刺激分子に特異的に結合し、かつ該共刺激分子がCD28である、本発明1115または本発明1116の方法。
[本発明1118]
前記1つ以上の作用物質が、抗CD3抗体および抗CD28抗体、任意で抗CD3 Fabおよび抗CD28 Fabである、本発明1104〜1117のいずれかの方法。
[本発明1119]
前記標的細胞が、組換え受容体、任意で組換えT細胞受容体および/またはキメラ抗原受容体（CAR）を発現する、本発明1102〜1118のいずれかの方法。
[本発明1120]
1つ以上の作用物質とオリゴマー粒子試薬との間の可逆的結合を破壊する工程をさらに含み、該破壊する工程が、1つ以上の作用物質とオリゴマー粒子試薬との間の結合を逆転させるまたはそれと競合することができる物質の標的細胞への導入を含む、本発明1104〜1119のいずれかの方法。
[本発明1121]
前記物質が、ビオチンまたはビオチン類似体、任意でD-ビオチンを含む、本発明1120の方法。