【手続補正書】
【提出日】令和3年3月17日(2021.3.17)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５８】
本発明の好ましい実施形態が本明細書に示され、説明されたが、そのような実施形態が例としてのみ提供されることは当業者には明らかであろう。本発明から逸脱することなく、当業者は多くの変形、変更、及び置換を想到するであろう。本明細書に記載された本発明の実施形態に対する様々な代替物が、本発明を実施する際に使用され得ることを理解されたい。以下の特許請求の範囲が本発明の範囲を定義し、これらの特許請求の範囲内の方法及び構造並びにそれらの均等物が本発明の範囲に包含されることが意図される。
本開示に係る態様は以下の態様も含む。
［付記１］
複数のマイクロフィラメントソース領域の間の連続的な格子構造又はメッシュ構造で相互接続された細胞由来のマイクロフィラメントを含むネットワーク。
［付記２］
前記マイクロフィラメントが細胞外マイクロフィラメントである、付記１に記載のネットワーク。
［付記３］
前記マイクロフィラメントが膜で囲まれている、付記１に記載のネットワーク。
［付記４］
前記マイクロフィラメントがアクチンを含む、付記１に記載のネットワーク。
［付記５］
前記アクチンがβ−アクチンを含む、付記４に記載のネットワーク。
［付記６］
前記マイクロフィラメントの長さが約１〜１０００μｍである、付記１に記載のネットワーク。
［付記７］
前記マイクロフィラメントが分岐している、付記１に記載のネットワーク。
［付記８］
前記マイクロフィラメントが約２〜１０個の分枝を有する、付記７に記載のネットワーク。
［付記９］
複数のマイクロフィラメントが共に整列し、多様なアーキテクチャ構造の束を形成する、付記１に記載のネットワーク。
［付記１０］
前記マイクロフィラメントソース領域は、前記連続的な格子構造又はメッシュ構造についての連結ノードを形成する、付記１に記載のネットワーク。
［付記１１］
接着性材料をさらに含む、付記１に記載のネットワーク。
［付記１２］
前記接着性材料が前記マイクロフィラメントと会合し、前記マイクロフィラメントの直径を拡大する、付記１１に記載のネットワーク。
［付記１３］
前記ネットワークが、約１μｍ２〜約５００ｃｍ２の範囲内の面積及び約１ｎｍ〜約０．５ｃｍの範囲内の厚さを有する、付記１に記載のネットワーク。
［付記１４］
前記ネットワークは、単層又は多層である、付記１に記載のネットワーク。
［付記１５］
前記マイクロフィラメントの表面積が、細胞内細胞骨格マイクロフィラメントネットワークの表面積相当値より大きい、付記１に記載のネットワーク。
［付記１６］
前記ネットワークが多孔性である、付記１に記載のネットワーク。
［付記１７］
前記孔の大きさが直径約０．１〜５μｍの範囲内である、付記１６に記載のネットワーク。
［付記１８］
生物活性剤及び／又は生物不活性剤をさらに含む、付記１に記載のネットワーク。
［付記１９］
前記生物活性剤が治療薬である、付記１８に記載のネットワーク。
［付記２０］
前記マイクロフィラメントソース領域が細胞を含む、付記１に記載のネットワーク。
［付記２１］
前記ネットワークがマトリックス支持体上に存在し、該マトリックス支持体が生分解性である、付記１に記載のネットワーク。
［付記２２］
前記ネットワークがマトリゲルマトリックス支持体上に存在する、付記１に記載のネットワーク。
［付記２３］
前記ネットワークが細胞由来の核を欠いている、付記１に記載のネットワーク。
［付記２４］
前記ネットワークが細胞を欠いている、付記１に記載のネットワーク。
［付記２５］
前記マイクロフィラメントソース領域が、遺伝子改変を伴うか又は伴わない真核細胞を含む、付記１に記載のネットワーク。
［付記２６］
前記真核細胞が哺乳動物細胞である、付記２５に記載のネットワーク。
［付記２７］
前記哺乳動物細胞がヒト細胞である、付記２６記載のネットワーク。
［付記２８］
前記ヒト細胞がヒト乳腺上皮細胞である、付記２７に記載のネットワーク。
［付記２９］
前記マイクロフィラメントが前記マトリックス支持体の上面内に埋め込まれている、付記１に記載のネットワーク。
［付記３０］
前記マトリックス支持体が細胞の付着及び移動を阻害する、付記１に記載のネットワーク。
［付記３１］
マトリックス支持体及び細胞培養培地中で細胞を培養する工程であって、前記細胞が増殖して凝集細胞塊を形成し、前記細胞塊は該細胞塊の外部及び周囲にマイクロフィラメントを生成し、前記細胞外マイクロフィラメントは連結して連続的な細胞外マイクロフィラメントネットワークを形成する前記工程、及び
前記ネットワークから前記細胞の核及び／又は前記細胞を除去する工程を含む、
マイクロフィラメントのネットワークを生成する方法。
［付記３２］
前記細胞塊が前記マトリックス支持体上に形成される、付記３１記載の方法。
［付記３３］
前記マイクロフィラメントが前記マトリックス支持体の上面内に埋め込まれている、付記３１に記載の方法。
［付記３４］
前記マトリックス支持体が細胞の付着及び移動を阻害する、付記３１に記載の方法。
［付記３５］
前記マイクロフィラメントが細胞外マイクロフィラメントである、付記３１に記載の方法。
［付記３６］
前記マイクロフィラメントが膜で囲まれている、付記３１に記載の方法。
［付記３７］
前記マイクロフィラメントがアクチンを含む、付記３１に記載の方法。
［付記３８］
前記アクチンがβ−アクチンを含む、付記３７に記載の方法。
［付記３９］
前記マイクロフィラメントの長さが約１〜１０００μｍである、付記３１に記載の方法。
［付記４０］
前記マイクロフィラメントが分岐している、付記３９に記載の方法。
［付記４１］
前記マイクロフィラメントが約２〜１０個の分枝を有する、付記４０に記載の方法。
［付記４２］
複数のマイクロフィラメントが共に整列し、多様なアーキテクチャ構造の束を形成する、付記３１に記載の方法。
［付記４３］
前記マイクロフィラメントソース領域は、前記連続的な格子構造又はメッシュ構造についての連結ノードを形成する、付記３１に記載の方法。
［付記４４］
接着性材料をさらに含む、付記３１に記載の方法。
［付記４５］
前記接着性材料が前記マイクロフィラメントと会合し、前記マイクロフィラメントの直径を拡大する、付記４４に記載の方法。
［付記４６］
前記ネットワークが、約１μｍ２〜約５００ｃｍ２の範囲内の面積及び約１ｎｍ〜約０．５ｃｍの範囲内の厚さを有する、付記３１に記載の方法。
［付記４７］
前記ネットワークは、単層又は多層である、付記３１に記載の方法。
［付記４８］
前記マイクロフィラメントの表面積が、細胞内細胞骨格マイクロフィラメントネットワークの表面積相当値より大きい、付記３１に記載の方法。
［付記４９］
前記ネットワークが多孔性である、付記３１に記載の方法。
［付記５０］
前記孔の大きさが直径約０．１〜５μｍの範囲内である、付記４９に記載の方法。
［付記５１］
前記ネットワークが生物活性剤及び／又は生物不活性剤をさらに含む、付記３１に記載の方法。
［付記５２］
前記生物活性剤が治療薬である、付記５１に記載の方法。
［付記５３］
前記マトリックスが生分解性である、付記３１記載の方法。
［付記５４］
前記マトリックスがマトリゲルである、付記３１に記載の方法。
［付記５５］
前記細胞が、遺伝子改変を伴うか又は伴わない真核細胞である、付記３１に記載の方法。
［付記５６］
前記真核細胞が哺乳動物細胞である、付記５５に記載の方法。
［付記５７］
前記哺乳動物細胞がヒト細胞である、付記５６記載の方法。
［付記５８］
前記ヒト細胞がヒト乳腺上皮細胞である、付記５７に記載の方法。
［付記５９］
付記１に記載のマイクロフィラメントネットワークを治療を必要とする領域に適用することを含む、医学的状態を治療する方法。
［付記６０］
前記マイクロフィラメントネットワークが前記マトリックスと共に適用される、付記５９に記載の方法。
［付記６１］
前記マイクロフィラメントネットワークが、マトリックスなしで適用される、付記５９に記載の方法。
［付記６２］
前記医学的状態が創傷又は損傷組織である、付記５９記載の方法。
［付記６３］
前記マイクロフィラメントネットワークが、創傷又は損傷組織の感染を防ぎ、創傷治癒及び組織再生を促進する、付記５９に記載の方法。
［付記６４］
前記医学的状態が火傷である、付記５９記載の方法。
［付記６５］
損傷した皮膚の再上皮化を増進又は促進することを含む、付記５９に記載の方法。
［付記６６］
前記治療を必要とする領域に前記マイクロフィラメントネットワークを適用前、適用時、又は適用後に治療薬を投与することをさらに含む、付記５９に記載の方法。
［付記６７］
細胞クラスターが該細胞クラスターの外部及び周囲にマイクロフィラメントを生成する条件下で、マトリックス基体の表面上で複数の細胞クラスターを培養することを含み、前記細胞外マイクロフィラメントは連結して、前記マトリックス基体の表面上の前記細胞クラスター間でマイクロフィラメントの連続的な細胞外ネットワークを形成する、細胞由来のマイクロフィラメントの連続的なネットワークをインビトロで作成する方法。
［付記６８］
前記細胞クラスターが、約１ミクロン〜約１０００ミクロンの平均距離の間隔で配置されている、付記６７に記載の方法。
［付記６９］
前記細胞クラスターを連結する前記マイクロフィラメントが、約１０ミクロン〜約１００ミクロンの平均長さを有する、付記６７に記載の方法。
［付記７０］
前記連続的な細胞外マイクロフィラメントネットワークが多層の格子である、付記６７記載の方法。
［付記７１］
前記マイクロフィラメントが分岐している、付記６７に記載の方法。
［付記７２］
前記連続的な細胞外マイクロフィラメントネットワークが、約１０ミクロン〜約１０００ミクロンの長さを有する長いマイクロフィラメント及び約１ミクロン〜約１０ミクロンの長さを有する短いマイクロフィラメントを含む多層の格子である、付記６７記載の方法。
［付記７３］
前記マイクロフィラメントの連続的な細胞外ネットワークが、約０．０１ｃｍ２〜５００ｃｍ２の表面積を有する、付記６７に記載の方法。
［付記７４］
前記連続的な細胞外マイクロフィラメントネットワークがメッシュである、付記６７記載の方法。
［付記７５］
前記連続的な細胞外マイクロフィラメントネットワークが多孔性である、付記６７記載の方法。
［付記７６］
細胞が前記マトリックス基体の表面上に移植され、細胞が移動及び凝集してプレクラスターを形成し、増殖して前記細胞クラスターを形成する、付記６７に記載の方法。
［付記７７］
前記連続的な細胞外マイクロフィラメントネットワークから細胞核又は前記細胞クラスターを除去することをさらに含む、付記６７に記載の方法。
［付記７８］
前記マトリックス基体が前記細胞の付着を阻害する、付記６７記載の方法。
［付記７９］
前記マトリックス基体を前記連続的な細胞外マイクロフィラメントネットワークから分離することをさらに含む、付記６７に記載の方法。
［付記８０］
付記１に記載のマイクロフィラメントネットワークを、それを必要とする部位に適用することを含む、創傷修復及び／又は組織再生を促進する方法。
［付記８１］
前記マイクロフィラメントネットワークが前記マトリックスと共に適用される、付記８０に記載の方法。
［付記８２］
前記マイクロフィラメントネットワークが、マトリックスなしで適用される、付記８０に記載の方法。
［付記８３］
前記マイクロフィラメントネットワークは、平方フィート（ｆｔ２）スケールの超大型マイクロフィラメント格子（ＵＭＬ）を形成する、付記８０に記載の方法。
［付記８４］
前記ＵＭＬが細胞移動のための環境を構築する、付記８３に記載の方法。
［付記８５］
前記マイクロフィラメントネットワークが多層であり３次元（３Ｄ）である、付記８０に記載の方法。
［付記８６］
細胞塊を除去して無細胞超大型マイクロフィラメント格子（ＡＵＭＬ）を生成することを含む、付記８０に記載の方法。
［付記８７］
前記ＡＵＭＬが創傷修復を促進する、付記８６に記載の方法。
［付記８８］
前記ＡＵＭＬを創傷部位に適用することを含む、付記８６記載の方法。
［付記８９］
前記ＡＵＭＬを適用することにより、ケラチノサイトが再上皮化された表皮に大きなトンネルを生成することが可能になる、付記８８に記載の方法。
［付記９０］
前記大きなトンネルは、創傷修復部位への細胞及び栄養素の経路を提供する、付記８９に記載の方法。
［付記９１］
前記マイクロフィラメントネットワークが、前記創傷部位の感染を防止する、付記８０に記載の方法。
［付記９２］
損傷を受けた皮膚の再上皮化を増進又は促進することを含む、付記８０に記載の方法。
［付記９３］
前記創傷がＩＩ度熱傷創傷である、付記８０に記載の方法。
［付記９４］
治療を必要とする領域に前記マイクロフィラメントネットワークを適用前、適用時、又は適用後に治療薬を投与することをさらに含む、付記８０に記載の方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
マイクロフィラメントを含むネットワークであって、
前記マイクロフィラメントは、マトリックス支持体上で細胞を培養することにより生成されて前記マトリックス支持体上に形成され、且つ複数のマイクロフィラメントソース領域の間の連続的な格子構造又はメッシュ構造で相互接続されており、
前記マイクロフィラメントソース領域は、前記培養された細胞を含む
前記ネットワーク。
【請求項２】
前記マイクロフィラメントが細胞外マイクロフィラメントである、請求項１に記載のネットワーク。
【請求項３】
前記マイクロフィラメントが膜で囲まれている、請求項１に記載のネットワーク。
【請求項４】
前記マイクロフィラメントがアクチンを含む、請求項１に記載のネットワーク。
【請求項５】
前記アクチンがβ−アクチンを含む、請求項４に記載のネットワーク。
【請求項６】
前記マイクロフィラメントは、長さが約１〜１０００μｍであり、２〜１０個の分枝を有しており、複数のマイクロフィラメントが、共に整列し、多様なアーキテクチャ構造の束を形成している、請求項１に記載のネットワーク。
【請求項７】
前記マイクロフィラメントソース領域は、前記連続的な格子構造又はメッシュ構造についての連結ノードを形成する、請求項１に記載のネットワーク。
【請求項８】
接着性材料をさらに含み、前記接着性材料が前記マイクロフィラメントと会合し、前記マイクロフィラメントの直径を拡大する、請求項１に記載のネットワーク。
【請求項９】
前記ネットワークが、１μｍ２〜５００ｃｍ２の範囲内の面積及び１ｎｍ〜０．５ｃｍの範囲内の厚さを有し、単層又は多層である、請求項１に記載のネットワーク。
【請求項１０】
前記マイクロフィラメントの表面積が、細胞内細胞骨格マイクロフィラメントネットワークの表面積相当値より大きい、請求項１に記載のネットワーク。
【請求項１１】
前記ネットワークが多孔性であり、前記孔の大きさが直径０．１〜５μｍの範囲内である、請求項１に記載のネットワーク。
【請求項１２】
生物活性剤又は生物不活性剤のうちの少なくとも一方をさらに含み、前記生物活性剤が治療薬である、請求項１に記載のネットワーク。
【請求項１３】
前記マイクロフィラメントが前記マトリックス支持体の上面内に埋め込まれており、該マトリックス支持体が生分解性である、請求項１に記載のネットワーク。
【請求項１４】
前記ネットワークがマトリゲルマトリックス支持体上に存在する、請求項１に記載のネットワーク。
【請求項１５】
前記ネットワークが細胞又は細胞由来の核を除去するためにさらに処理されている、請求項１に記載のネットワーク。
【請求項１６】
前記マイクロフィラメントソース領域が、遺伝子改変を伴うか又は伴わない真核細胞を含む、請求項１に記載のネットワーク。
【請求項１７】
前記真核細胞が、哺乳動物細胞、ヒト細胞、又はヒト乳腺上皮細胞を含む、請求項１６に記載のネットワーク。
【請求項１８】
前記マトリックス支持体が細胞の付着及び移動を阻害する、請求項１に記載のネットワーク。