【手続補正書】
【提出日】令和3年2月15日(2021.2.15)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
インビトロ又はエクスビボでのＮＫ細胞の活性化方法であって、
培地中の前記ＮＫ細胞を破骨細胞（ＯＣ）と一緒に培養することを含む、前記方法。
【請求項２】
ｉ）ＮＫ細胞及び破骨細胞を含む細胞培養物を提供すること；並びに
ｉｉ）前記細胞培養物中の前記ＮＫ細胞及び前記破骨細胞を培養すること
を含み、それによって、前記ＮＫ細胞を活性化することを含む、方法。
【請求項３】
前記ＮＫ細胞が、一次ＮＫ細胞であり、場合により、前記一次ＮＫ細胞が、形質転換されていない、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
前記活性化ＮＫ細胞が、４週間以内に少なくとも約１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５回、又はそれ以上の集団倍加まで増殖する、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
前記培養物が、複数の破骨細胞（ＯＣ）及び複数のＮＫ細胞を含み、並びに前記細胞培養物中のＯＣ：ＮＫ細胞の比が、少なくとも１：２である、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
前記破骨細胞が、ＮＫ細胞の細胞傷害性を増強し、場合により、前記ＮＫ細胞の細胞傷害性が、前記ＮＫ細胞による口腔扁平上皮癌幹様細胞（ＯＳＣＳＣ）の溶解によって測定される、請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
前記ＮＫ細胞の細胞傷害性が、５１Ｃｒ放出細胞傷害性アッセイによって測定される、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記破骨細胞が、前記ＮＫ細胞によるＩＦＮ−γの分泌を増強し、場合により、前記破骨細胞が、前記ＮＫ細胞によるＩＬ−１２の分泌を増強する、請求項１〜７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
前記破骨細胞が、前記ＮＫ細胞によるＮＫＧ２Ｄ、ＮＫｐ４６、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＣＤ９４、ＫＩＲ２、及びＫＩＲ３のうちの１つ以上の発現を増強する、請求項１〜８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
前記ＮＫ細胞が、がん試料から精製される、請求項１〜９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
前記がん試料が、前記がんを有する対象由来である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記対象が、ヒトである、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記細胞培養物が、前記がん試料からも生じるＴ細胞をさらに含む、請求項１０〜１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４】
前記ＮＫ細胞が、前記Ｔ細胞に対して優先的に増殖される、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記ＮＫ細胞を少なくとも１ヵ月間優先的に増殖させることをさらに含む、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記培養培地に少なくとも１つの破骨細胞を補充し、前記ＮＫ細胞を優先的に増殖させ続けることをさらに含む、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記Ｔ細胞が、ＩＦＮ−γを分泌するが、細胞傷害性を媒介せず、場合により、前記細胞傷害性が、好ましくは５１Ｃｒ放出細胞傷害性アッセイで、前記Ｔ細胞によるＯＳＣＳＣの溶解によって測定される、請求項１４に記載の方法。
【請求項１８】
前記増殖したＮＫ細胞が、ＣＤ８＋Ｔ細胞を増殖させることができる、請求項１３〜１７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１９】
前記ＯＣにより増殖した前記ＮＫ細胞が、ＣＤ４＋Ｔ細胞に比べて、ＣＤ８＋Ｔ細胞を優先的に増殖させることができる、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
抗ＣＤ３抗体を前記細胞培養物に添加することをさらに含む、請求項１〜１９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２１】
前記抗ＣＤ３抗体が、前記ＮＫ細胞によるＩＦＮ−γの分泌をさらに増強する、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記活性化ＮＫ細胞が、分割アネルギー化される、請求項１〜２１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２３】
前記細胞培養物に、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｅｓ、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｌｏｎｇｕｍ、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｂｒｅｖｅ、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｉｎｆａｎｔｉｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐｌａｎｔａｒｕｍ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐａｒａｃａｓｅｉ、ＫＥ９９、及びＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓから選択される少なくとも１つの細菌株を含む組成物を添加することをさらに含み、場合により、前記少なくとも１つの細菌株が、生きているか又は超音波処理される、請求項１〜２２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２４】
前記組成物が、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｅｓ、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｌｏｎｇｕｍ、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｂｒｅｖｅ、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｉｎｆａｎｔｉｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐｌａｎｔａｒｕｍ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐａｒａｃａｓｅｉ、ＫＥ９９、及びＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓを含む、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記組成物が、ｓＡＪ２細菌を含む、請求項２３に記載の方法。
【請求項２６】
前記細胞培養物中の前記ＮＫ細胞及び／又は前記ＯＣ濃度に対する前記ｓＡＪ２細菌濃度の比が、
ｉ）ＮＫ細胞：ｓＡＪ２について少なくとも１：２；
ｉｉ）ＯＣ：ｓＡＪ２について少なくとも１：４；及び／又は
ｉｉｉ）ＯＣ：ＮＫ細胞：ｓＡＪ２について少なくとも１：２：４
である、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記細胞培養物に、ＮＫ細胞を活性化することができる別の薬剤を添加することをさらに含む、請求項１〜２６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２８】
前記破骨細胞が、前記ＮＫ細胞によって産生される少なくとも１つのサイトカイン又はケモカインの産生、分泌、及び／又は機能を増強する、請求項１〜２７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２９】
ｉ）破骨細胞（ＯＣ）、ＮＫ細胞、及びＴ細胞を含む細胞培養物を提供すること；並びに
ｉｉ）前記細胞培養物中の前記ＮＫ細胞、前記Ｔ細胞、及び前記破骨細胞を培養すること
を含み、それによって、前記Ｔ細胞に比べて、前記ＮＫ細胞を優先的に活性化することを含む、方法。
【請求項３０】
ｉ）樹状細胞（ＤＣ）、ＮＫ細胞及びＴ細胞を含む細胞培養物を提供すること；並びに  ｉｉ）前記細胞培養物中の前記ＮＫ細胞、前記Ｔ細胞、及び前記樹状細胞を培養すること
を含み、それによって、前記ＮＫ細胞に比べて、前記Ｔ細胞を優先的に活性化することを含む、方法。
【請求項３１】
前記ＮＫ細胞が、一次ＮＫ細胞であり、場合により、前記一次ＮＫ細胞が、形質転換されていない、請求項２９又は３０に記載の方法。
【請求項３２】
前記培養物が、複数の破骨細胞（ＯＣ）及び複数のＮＫ細胞を含み、並びに前記細胞培養物中のＯＣ：ＮＫ細胞の濃度比が、少なくとも１：２である、請求項２９又は３１に記載の方法。
【請求項３３】
前記破骨細胞が、ＮＫ細胞増殖を増強し、場合により、前記破骨細胞が、前記ＮＫ細胞によるＩＬ−１５の分泌を増強する、請求項２９、３１、又は３２に記載の方法。
【請求項３４】
前記活性化ＮＫ細胞が、４週間以内に少なくとも約１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５回、又はそれ以上の集団倍加まで増殖する、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
前記破骨細胞が、ＮＫ細胞の細胞傷害性を増強し、場合により、前記ＮＫ細胞の細胞傷害性が、前記ＮＫ細胞による口腔扁平上皮癌幹様細胞（ＯＳＣＳＣ）の溶解によって測定される、請求項２９及び３１〜３４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３６】
前記細胞の細胞傷害性が、５１Ｃｒ放出細胞傷害性アッセイによって測定される、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
前記破骨細胞が、前記ＮＫ細胞によるＩＦＮ−γの分泌を増強し、場合により、前記破骨細胞が、前記ＮＫ細胞によるＩＬ−１２の分泌を増強する、請求項２９及び３１〜３６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３８】
前記破骨細胞が、前記ＮＫ細胞によるＮＫＧ２Ｄ、ＮＫｐ４６、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＣＤ９４、ＫＩＲ２、及びＫＩＲ３のうちの１つ以上の発現を増強する、請求項２９及び３１〜３７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３９】
前記ＮＫ細胞及び／又は前記Ｔ細胞が、がん試料から精製される、請求項２９〜３８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４０】
前記がん試料が、前記がんを有する対象由来である、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
前記対象が、ヒトである、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
前記ＮＫ細胞の優先的活性化が、少なくとも１ヵ月間持続する、請求項２９及び３１〜４１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４３】
前記ＮＫ細胞の優先的活性化が減衰又は停止した後、少なくとも１つの破骨細胞を前記細胞培養物に添加することによって、前記ＮＫ細胞の活性化を継続することをさらに含み、場合により、少なくとも１つの破骨細胞の前記細胞培養物への添加が、前記ＮＫ細胞の培養の少なくとも１ヵ月後である、請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】
前記Ｔ細胞が、ＩＦＮ−γを分泌するが、細胞傷害性を媒介せず、場合により、前記細胞傷害性が、好ましくは、５１Ｃｒ放出細胞傷害性アッセイで、前記Ｔ細胞によるＯＳＣＳＣの溶解によって測定される、請求項２９〜４３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４５】
前記増殖したＮＫ細胞が、ＣＤ８＋Ｔ細胞を増殖させることができる、請求項２９及び３１〜４４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４６】
前記ＯＣにより増殖した前記ＮＫ細胞が、ＣＤ４＋Ｔ細胞に比べて、ＣＤ８＋Ｔ細胞を優先的に増殖させることができる、請求項４５に記載の方法。
【請求項４７】
前記ＤＣにより増殖した前記ＮＫ細胞が、ＣＤ８＋Ｔ細胞に対して、ＣＤ４＋Ｔ細胞を優先的に増殖させることができる、請求項３０〜４４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４８】
抗ＣＤ３抗体を前記細胞培養物に添加することをさらに含む、請求項２９及び３１〜４６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４９】
前記抗ＣＤ３抗体が、前記ＮＫ細胞によるＩＦＮ−γの分泌をさらに増強する、請求項４８に記載の方法。
【請求項５０】
前記活性化ＮＫ細胞が、分割アネルギー化される、請求項２９〜４９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５１】
前記細胞培養物に、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｅｓ、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｌｏｎｇｕｍ、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｂｒｅｖｅ、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｉｎｆａｎｔｉｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐｌａｎｔａｒｕｍ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐａｒａｃａｓｅｉ、ＫＥ９９、及びＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓから選択される少なくとも１つの細菌株を含む組成物を添加することをさらに含み、場合により、前記少なくとも１つの細菌株が、生きているか又は超音波処理される、請求項２９及び３１〜５０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５２】
前記組成物が、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｅｓ、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｌｏｎｇｕｍ、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｂｒｅｖｅ、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｉｎｆａｎｔｉｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐｌａｎｔａｒｕｍ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐａｒａｃａｓｅｉ、ＫＥ９９、及びＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓを含む、請求項５１に記載の方法。
【請求項５３】
前記組成物が、ｓＡＪ２細菌を含む、請求項５２に記載の方法。
【請求項５４】
前記細胞培養物中の前記ＮＫ細胞及び／又は前記ＯＣ濃度に対する前記ｓＡＪ２細菌濃度の比が、
ｉ）ＮＫ細胞：ｓＡＪ２について少なくとも１：２；
ｉｉ）ＯＣ：ｓＡＪ２について少なくとも１：４；及び／又は
ｉｉｉ）ＯＣ：ＮＫ細胞：ｓＡＪ２について少なくとも１：２：４
である、請求項５３に記載の方法。
【請求項５５】
前記細胞培養物に、ＮＫ細胞を活性化することができる別の薬剤を添加することをさらに含む、請求項２９及び３１〜５２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５６】
前記細胞培養物に、Ｔ細胞を活性化することができる別の薬剤を添加することをさらに含む、請求項３０〜５２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５７】
前記破骨細胞（ＯＣ）が、前記ＮＫ細胞によって産生される少なくとも１つのサイトカイン又はケモカインの産生、分泌、及び／又は機能を増強する、請求項２９及び３１〜５５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５８】
がん又はがん関連疾患若しくは障害の治療用の組成物であって、破骨細胞（ＯＣ）、破骨細胞（ＯＣ）を含む細胞培養物、及び／又は破骨細胞（ＯＣ）を含む細胞培養物の上清を含む、前記組成物。
【請求項５９】
前記破骨細胞が、前記対象中のＮＫ細胞を活性化させる、請求項５８に記載の組成物。
【請求項６０】
前記ＮＫ細胞が、一次ＮＫ細胞であり、場合により、前記一次ＮＫ細胞が、形質転換されていない、請求項５９に記載の組成物。
【請求項６１】
前記破骨細胞が、前記対象中のＮＫ細胞増殖を増強し、場合により、前記破骨細胞が、前記ＮＫ細胞によるＩＬ−１５の分泌を増強する、請求項５９〜６０のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項６２】
前記増強されたＮＫ細胞増殖が、４週間以内に少なくとも約１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５回、又はそれ以上の集団倍加である、請求項６１に記載の組成物。
【請求項６３】
前記破骨細胞が、ＮＫ細胞の細胞傷害性を増強し、場合により、前記ＮＫ細胞の細胞傷害性が、前記ＮＫ細胞による口腔扁平上皮癌幹様細胞（ＯＳＣＳＣ）の溶解によって測定される、請求項５９〜６２のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項６４】
前記ＮＫ細胞の細胞傷害性が、５１Ｃｒ放出細胞傷害性アッセイによって測定される、請求項６３に記載の組成物。
【請求項６５】
前記破骨細胞が、前記ＮＫ細胞によるＩＦＮ−γの分泌を増強し、場合により、前記破骨細胞が、前記ＮＫ細胞によるＩＬ−１２の分泌を増強する、請求項５９〜６４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項６６】
前記破骨細胞が、Ｔ細胞に比べて、ＮＫ細胞を優先的に活性化し、場合により、前記破骨細胞が、Ｔ細胞に比べて、ＮＫ細胞の増殖を優先的に増強させる、請求項５９〜６５のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項６７】
前記ＮＫ細胞の優先的な増殖が、少なくとも１ヵ月間持続する、請求項６６に記載の組成物。
【請求項６８】
前記Ｔ細胞が、ＩＦＮ−γを分泌するが、前記がんの細胞傷害性を媒介せず、場合により、前記細胞傷害性が、例えば、５１Ｃｒ放出細胞傷害性アッセイで、前記Ｔ細胞によるＯＳＣＳＣの溶解によって測定される、請求項６７に記載の組成物。
【請求項６９】
前記活性化ＮＫ細胞が、ＣＤ８＋Ｔ細胞を増殖させる、請求項５９〜６８のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項７０】
前記活性化ＮＫ細胞が、ＣＤ４＋Ｔ細胞に比べて、ＣＤ８＋Ｔ細胞を優先的に増殖させる、請求項６９に記載の組成物。
【請求項７１】
抗ＣＤ３抗体をさらに含む、請求項５８〜７０のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項７２】
前記抗ＣＤ３抗体が、前記ＮＫ細胞によるＩＦＮ−γの分泌をさらに増強する、請求項７１に記載の組成物。
【請求項７３】
前記活性化ＮＫ細胞が、分割アネルギー化される、請求項５９〜７２のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項７４】
Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｅｓ、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｌｏｎｇｕｍ、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｂｒｅｖｅ、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｉｎｆａｎｔｉｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐｌａｎｔａｒｕｍ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐａｒａｃａｓｅｉ、ＫＥ９９、及びＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓから選択される少なくとも１つの細菌株をさらに含み、場合により、前記少なくとも１つの細菌株が、生きているか又は超音波処理される、請求項５８〜７３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項７５】
前記組成物が、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｅｓ、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｌｏｎｇｕｍ、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｂｒｅｖｅ、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｉｎｆａｎｔｉｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐｌａｎｔａｒｕｍ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐａｒａｃａｓｅｉ、ＫＥ９９、及びＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓを含む、請求項７４に記載の組成物。
【請求項７６】
前記組成物が、ｓＡＪ２細菌を含む、請求項７４に記載の組成物。
【請求項７７】
前記細胞培養物に、ＮＫ細胞を活性化することができる別の薬剤をさらに含む、請求項５８〜７６のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項７８】
前記破骨細胞（ＯＣ）が、前記ＮＫ細胞によって産生される少なくとも１つのサイトカイン又はケモカインの産生、分泌、及び／又は機能を増加又は促進する、請求項５８〜７７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項７９】
前記破骨細胞、前記細胞培養物、及び／又は前記上清を、医薬組成物中で投与するためのものである、請求項５８〜７８のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項８０】
前記破骨細胞、前記細胞培養物、及び／又は前記上清を、前記がんに全身又は局所投与するためのものである、請求項５８〜７９のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項８１】
前記破骨細胞、前記細胞培養物、及び／又は前記上清を、少なくとも２回投与するためのものであり、場合により、その投与において、前記破骨細胞、前記細胞培養物、及び／又は前記上清が、最初の投与から少なくとも１ヵ月後に前記対象に投与される、請求項５８〜８０のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項８２】
ヒトに投与するための、請求項５８〜８１のいずれか１項に記載の組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２５】
いくつかの実施形態では、対象は、ヒトであり得る。
本発明は、以下の実施形態も提供する。
項目［１］  インビトロ又はエクスビボでのＮＫ細胞の活性化方法であって、
培地中の前記ＮＫ細胞を破骨細胞（ＯＣ）と一緒に培養することを含む、前記方法。
項目［２］  ｉ）ＮＫ細胞及び破骨細胞を含む細胞培養物を提供すること；並びに
ｉｉ）前記細胞培養物中の前記ＮＫ細胞及び前記破骨細胞を培養すること
を含み、それによって、前記ＮＫ細胞を活性化することを含む、方法。
項目［３］  前記ＮＫ細胞が、一次ＮＫ細胞であり、場合により、前記一次ＮＫ細胞が、形質転換されていない、項目［１］又は［２］に記載の方法。
項目［４］  前記活性化ＮＫ細胞が、４週間以内に少なくとも約１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５回、又はそれ以上の集団倍加まで増殖する、先行項目のいずれか１つに記載の方法。
項目［５］  前記培養物が、複数の破骨細胞（ＯＣ）及び複数のＮＫ細胞を含み、並びに前記細胞培養物中のＯＣ：ＮＫ細胞の比が、少なくとも１：２である、先行項目のいずれか１つに記載の方法。
項目［６］  前記破骨細胞が、ＮＫ細胞の細胞傷害性を増強し、場合により、前記ＮＫ細胞の細胞傷害性が、前記ＮＫ細胞による口腔扁平上皮癌幹様細胞（ＯＳＣＳＣ）の溶解によって測定される、先行項目のいずれか１つに記載の方法。
項目［７］  前記ＮＫ細胞の細胞傷害性が、５１Ｃｒ放出細胞傷害性アッセイによって測定される、項目［６］に記載の方法。
項目［８］  前記破骨細胞が、前記ＮＫ細胞によるＩＦＮ−γの分泌を増強し、場合により、前記破骨細胞が、前記ＮＫ細胞によるＩＬ−１２の分泌を増強する、先行項目のいずれか１つに記載の方法。
項目［９］  前記破骨細胞が、前記ＮＫ細胞によるＮＫＧ２Ｄ、ＮＫｐ４６、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＣＤ９４、ＫＩＲ２、及びＫＩＲ３のうちの１つ以上の発現を増強する、先行項目のいずれか１つに記載の方法。
項目［１０］  前記ＮＫ細胞が、がん試料から精製される、先行項目のいずれか１つに記載の方法。
項目［１１］  前記がん試料が、前記がんを有する対象由来である、項目［１０］に記載の方法。
項目［１２］  前記対象が、ヒトである、項目［１１］に記載の方法。
項目［１３］  前記細胞培養物が、前記がん試料からも生じるＴ細胞をさらに含む、項目［１０］〜［１２］のいずれか１つに記載の方法。
項目［１４］  前記ＮＫ細胞が、前記Ｔ細胞に対して優先的に増殖される、項目［１３］に記載の方法。
項目［１５］  前記ＮＫ細胞を少なくとも１ヵ月間優先的に増殖させることをさらに含む、項目［１４］に記載の方法。
項目［１６］  前記培養培地に少なくとも１つの破骨細胞を補充し、前記ＮＫ細胞を優先的に増殖させ続けることをさらに含む、項目［１５］に記載の方法。
項目［１７］  前記Ｔ細胞が、ＩＦＮ−γを分泌するが、細胞傷害性を媒介せず、場合により、前記細胞傷害性が、好ましくは５１Ｃｒ放出細胞傷害性アッセイで、前記Ｔ細胞によるＯＳＣＳＣの溶解によって測定される、項目［１４］に記載の方法。
項目［１８］  前記増殖したＮＫ細胞が、ＣＤ８＋Ｔ細胞を増殖させることができる、項目［１３］〜［１７］のいずれか１つに記載の方法。
項目［１９］
前記ＯＣにより増殖した前記ＮＫ細胞が、ＣＤ４＋Ｔ細胞に比べて、ＣＤ８＋Ｔ細胞を優先的に増殖させることができる、項目［１８］に記載の方法。
項目［２０］  抗ＣＤ３抗体を前記細胞培養物に添加することをさらに含む、先行項目のいずれか１つに記載の方法。
項目［２１］  前記抗ＣＤ３抗体が、前記ＮＫ細胞によるＩＦＮ−γの分泌をさらに増強する、項目［２０］に記載の方法。
項目［２２］  前記活性化ＮＫ細胞が、分割アネルギー化される、先行項目のいずれか１つに記載の方法。
項目［２３］  前記細胞培養物に、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｅｓ、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｌｏｎｇｕｍ、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｂｒｅｖｅ、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｉｎｆａｎｔｉｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐｌａｎｔａｒｕｍ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐａｒａｃａｓｅｉ、ＫＥ９９、及びＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓから選択される少なくとも１つの細菌株を含む組成物を添加することをさらに含み、場合により、前記少なくとも１つの細菌株が、生きているか又は超音波処理される、先行項目のいずれか１つに記載の方法。
項目［２４］  前記組成物が、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｅｓ、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｌｏｎｇｕｍ、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｂｒｅｖｅ、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｉｎｆａｎｔｉｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐｌａｎｔａｒｕｍ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐａｒａｃａｓｅｉ、ＫＥ９９、及びＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓを含む、項目［２３］に記載の方法。
項目［２５］  前記組成物が、ｓＡＪ２細菌を含む、項目［２３］に記載の方法。
項目［２６］  前記細胞培養物中の前記ＮＫ細胞及び／又は前記ＯＣ濃度に対する前記ｓＡＪ２細菌濃度の比が、
ｉ）ＮＫ細胞：ｓＡＪ２について少なくとも１：２；
ｉｉ）ＯＣ：ｓＡＪ２について少なくとも１：４；及び／又は
ｉｉｉ）ＯＣ：ＮＫ細胞：ｓＡＪ２について少なくとも１：２：４
である、項目［２５］に記載の方法。
項目［２７］  前記細胞培養物に、ＮＫ細胞を活性化することができる別の薬剤を添加することをさらに含む、先行項目のいずれか１つに記載の方法。
項目［２８］  前記破骨細胞が、前記ＮＫ細胞によって産生される少なくとも１つのサイトカイン又はケモカインの産生、分泌、及び／又は機能を増強する、先行項目のいずれか１つに記載の方法。
項目［２９］  ｉ）破骨細胞（ＯＣ）、ＮＫ細胞、及びＴ細胞を含む細胞培養物を提供すること；並びに
ｉｉ）前記細胞培養物中の前記ＮＫ細胞、前記Ｔ細胞、及び前記破骨細胞を培養すること
を含み、それによって、前記Ｔ細胞に比べて、前記ＮＫ細胞を優先的に活性化することを含む、方法。
項目［３０］  ｉ）樹状細胞（ＤＣ）、ＮＫ細胞及びＴ細胞を含む細胞培養物を提供すること；並びに  ｉｉ）前記細胞培養物中の前記ＮＫ細胞、前記Ｔ細胞、及び前記樹状細胞を培養すること
を含み、それによって、前記ＮＫ細胞に比べて、前記Ｔ細胞を優先的に活性化することを含む、方法。
項目［３１］  前記ＮＫ細胞が、一次ＮＫ細胞であり、場合により、前記一次ＮＫ細胞が、形質転換されていない、項目［２９］又は［３０］に記載の方法。
項目［３２］  前記培養物が、複数の破骨細胞（ＯＣ）及び複数のＮＫ細胞を含み、並びに前記細胞培養物中のＯＣ：ＮＫ細胞の濃度比が、少なくとも１：２である、項目［２９］又は［３１］に記載の方法。
項目［３３］  前記破骨細胞が、ＮＫ細胞増殖を増強し、場合により、前記破骨細胞が、前記ＮＫ細胞によるＩＬ−１５の分泌を増強する、項目［２９］、［３１］、又は［３２］に記載の方法。
項目［３４］  前記活性化ＮＫ細胞が、４週間以内に少なくとも約１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５回、又はそれ以上の集団倍加まで増殖する、項目［３３］に記載の方法。
項目［３５］  前記破骨細胞が、ＮＫ細胞の細胞傷害性を増強し、場合により、前記ＮＫ細胞の細胞傷害性が、前記ＮＫ細胞による口腔扁平上皮癌幹様細胞（ＯＳＣＳＣ）の溶解によって測定される、項目［２９］及び［３１］〜［３４］のいずれか１つに記載の方法。
項目［３６］  前記細胞の細胞傷害性が、５１Ｃｒ放出細胞傷害性アッセイによって測定される、項目［３５］に記載の方法。
項目［３７］  前記破骨細胞が、前記ＮＫ細胞によるＩＦＮ−γの分泌を増強し、場合により、前記破骨細胞が、前記ＮＫ細胞によるＩＬ−１２の分泌を増強する、項目［２９］及び［３１］〜［３６］のいずれか１つに記載の方法。
項目［３８］  前記破骨細胞が、前記ＮＫ細胞によるＮＫＧ２Ｄ、ＮＫｐ４６、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＣＤ９４、ＫＩＲ２、及びＫＩＲ３のうちの１つ以上の発現を増強する、項目［２９］及び［３１］〜［３７］のいずれか１つに記載の方法。
項目［３９］  前記ＮＫ細胞及び／又は前記Ｔ細胞が、がん試料から精製される、項目［２９］〜［３８］のいずれか１つに記載の方法。
項目［４０］  前記がん試料が、前記がんを有する対象由来である、項目［３９］に記載の方法。
項目［４１］  前記対象が、ヒトである、項目［４０］に記載の方法。
項目［４２］  前記ＮＫ細胞の優先的活性化が、少なくとも１ヵ月間持続する、項目［２９］及び［３１］〜［４１］のいずれか１つに記載の方法。
項目［４３］  前記ＮＫ細胞の優先的活性化が減衰又は停止した後、少なくとも１つの破骨細胞を前記細胞培養物に添加することによって、前記ＮＫ細胞の活性化を継続することをさらに含み、場合により、少なくとも１つの破骨細胞の前記細胞培養物への添加が、前記ＮＫ細胞の培養の少なくとも１ヵ月後である、項目［４２］に記載の方法。
項目［４４］  前記Ｔ細胞が、ＩＦＮ−γを分泌するが、細胞傷害性を媒介せず、場合により、前記細胞傷害性が、好ましくは、５１Ｃｒ放出細胞傷害性アッセイで、前記Ｔ細胞によるＯＳＣＳＣの溶解によって測定される、項目［２９］〜［４３］のいずれか１つに記載の方法。
項目［４５］  前記増殖したＮＫ細胞が、ＣＤ８＋Ｔ細胞を増殖させることができる、項目［２９］及び［３１］〜［４４］のいずれか１つに記載の方法。
項目［４６］  前記ＯＣにより増殖した前記ＮＫ細胞が、ＣＤ４＋Ｔ細胞に比べて、ＣＤ８＋Ｔ細胞を優先的に増殖させることができる、項目［４５］に記載の方法。
項目［４７］  前記ＤＣにより増殖した前記ＮＫ細胞が、ＣＤ８＋Ｔ細胞に対して、ＣＤ４＋Ｔ細胞を優先的に増殖させることができる、項目［３０］〜［４４］のいずれか１つに記載の方法。
項目［４８］  抗ＣＤ３抗体を前記細胞培養物に添加することをさらに含む、項目［２９］及び［３１］〜［４６］のいずれか１つに記載の方法。
項目［４９］  前記抗ＣＤ３抗体が、前記ＮＫ細胞によるＩＦＮ−γの分泌をさらに増強する、項目［４８］に記載の方法。
項目［５０］  前記活性化ＮＫ細胞が、分割アネルギー化される、項目［２９］〜［４９］のいずれか１つに記載の方法。
項目［５１］  前記細胞培養物に、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｅｓ、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｌｏｎｇｕｍ、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｂｒｅｖｅ、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｉｎｆａｎｔｉｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐｌａｎｔａｒｕｍ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐａｒａｃａｓｅｉ、ＫＥ９９、及びＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓから選択される少なくとも１つの細菌株を含む組成物を添加することをさらに含み、場合により、前記少なくとも１つの細菌株が、生きているか又は超音波処理される、項目［２９］及び［３１］〜［５０］のいずれか１つに記載の方法。
項目［５２］  前記組成物が、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｅｓ、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｌｏｎｇｕｍ、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｂｒｅｖｅ、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｉｎｆａｎｔｉｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐｌａｎｔａｒｕｍ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐａｒａｃａｓｅｉ、ＫＥ９９、及びＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓを含む、項目［５１］に記載の方法。
項目［５３］  前記組成物が、ｓＡＪ２細菌を含む、項目［５２］に記載の方法。
項目［５４］  前記細胞培養物中の前記ＮＫ細胞及び／又は前記ＯＣ濃度に対する前記ｓＡＪ２細菌濃度の比が、
ｉ）ＮＫ細胞：ｓＡＪ２について少なくとも１：２；
ｉｉ）ＯＣ：ｓＡＪ２について少なくとも１：４；及び／又は
ｉｉｉ）ＯＣ：ＮＫ細胞：ｓＡＪ２について少なくとも１：２：４
である、項目［５３］に記載の方法。
項目［５５］  前記細胞培養物に、ＮＫ細胞を活性化することができる別の薬剤を添加することをさらに含む、項目［２９］及び［３１］〜［５２］のいずれか１つに記載の方法。
項目［５６］  前記細胞培養物に、Ｔ細胞を活性化することができる別の薬剤を添加することをさらに含む、項目［３０］〜［５２］のいずれか１つに記載の方法。
項目［５７］  前記破骨細胞（ＯＣ）が、前記ＮＫ細胞によって産生される少なくとも１つのサイトカイン又はケモカインの産生、分泌、及び／又は機能を増強する、項目［２９］及び［３１］〜［５５］のいずれか１つに記載の方法。
項目［５８］  がん又はがん関連疾患若しくは障害を有するか又は有すると疑われる対象におけるがん又はがん関連疾患若しくは障害の治療方法であって、
前記対象に、治療有効量の破骨細胞（ＯＣ）、破骨細胞（ＯＣ）を含む細胞培養物、及び／又は破骨細胞（ＯＣ）を含む細胞培養物の上清を投与することを含む、前記方法。
項目［５９］  前記破骨細胞が、前記対象中のＮＫ細胞を活性化させる、項目［５８］に記載の方法。
項目［６０］  前記ＮＫ細胞が、一次ＮＫ細胞であり、場合により、前記一次ＮＫ細胞が、形質転換されていない、項目［５９］に記載の方法。
項目［６１］  前記破骨細胞が、前記対象中のＮＫ細胞増殖を増強し、場合により、前記破骨細胞が、前記ＮＫ細胞によるＩＬ−１５の分泌を増強する、項目［５９］〜［６０］のいずれか１つに記載の方法。
項目［６２］  前記増強されたＮＫ細胞増殖が、４週間以内に少なくとも約１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５回、又はそれ以上の集団倍加である、項目［６１］に記載の方法。
項目［６３］  前記破骨細胞が、ＮＫ細胞の細胞傷害性を増強し、場合により、前記ＮＫ細胞の細胞傷害性が、前記ＮＫ細胞による口腔扁平上皮癌幹様細胞（ＯＳＣＳＣ）の溶解によって測定される、項目［５９］〜［６２］のいずれか１つに記載の方法。
項目［６４］  前記ＮＫ細胞の細胞傷害性が、５１Ｃｒ放出細胞傷害性アッセイによって測定される、項目［６３］に記載の方法。
項目［６５］  前記破骨細胞が、前記ＮＫ細胞によるＩＦＮ−γの分泌を増強し、場合により、前記破骨細胞が、前記ＮＫ細胞によるＩＬ−１２の分泌を増強する、項目［５９］〜［６４］のいずれか１つに記載の方法。
項目［６６］  前記破骨細胞が、Ｔ細胞に比べて、ＮＫ細胞を優先的に活性化し、場合により、前記破骨細胞が、Ｔ細胞に比べて、ＮＫ細胞の増殖を優先的に増強させる、項目［５９］〜［６５］のいずれか１つに記載の方法。
項目［６７］  前記ＮＫ細胞の優先的な増殖が、少なくとも１ヵ月間持続する、項目［６６］に記載の方法。
項目［６８］  前記Ｔ細胞が、ＩＦＮ−γを分泌するが、前記がんの細胞傷害性を媒介せず、場合により、前記細胞傷害性が、例えば、５１Ｃｒ放出細胞傷害性アッセイで、前記Ｔ細胞によるＯＳＣＳＣの溶解によって測定される、項目［６７］に記載の方法。
項目［６９］  前記活性化ＮＫ細胞が、前記対象中のＣＤ８＋Ｔ細胞を増殖させる、項目［５９］〜［６８］のいずれか１つに記載の方法。
項目［７０］  前記活性化ＮＫ細胞が、ＣＤ４＋Ｔ細胞に比べて、ＣＤ８＋Ｔ細胞を優先的に増殖させる、項目［６９］に記載の方法。
項目［７１］  抗ＣＤ３抗体を前記対象に添加することをさらに含む、項目［５８］〜［７０］のいずれか１つに記載の方法。
項目［７２］  前記抗ＣＤ３抗体が、前記ＮＫ細胞によるＩＦＮ−γの分泌をさらに増強する、項目［７１］に記載の方法。
項目［７３］  前記活性化ＮＫ細胞が、分割アネルギー化される、項目［５９］〜［７２］のいずれか１つに記載の方法。
項目［７４］  前記対象に、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｅｓ、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｌｏｎｇｕｍ、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｂｒｅｖｅ、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｉｎｆａｎｔｉｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐｌａｎｔａｒｕｍ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐａｒａｃａｓｅｉ、ＫＥ９９、及びＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓから選択される少なくとも１つの細菌株を含む組成物を添加することをさらに含み、場合により、前記少なくとも１つの細菌株が、生きているか又は超音波処理される、項目［５８］〜［７３］のいずれか１つに記載の方法。
項目［７５］  前記組成物が、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｅｓ、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｌｏｎｇｕｍ、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｂｒｅｖｅ、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｉｎｆａｎｔｉｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐｌａｎｔａｒｕｍ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐａｒａｃａｓｅｉ、ＫＥ９９、及びＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓを含む、項目［７４］に記載の方法。
項目［７６］  前記組成物が、ｓＡＪ２細菌を含む、項目［７４］に記載の方法。
項目［７７］  前記細胞培養物に、ＮＫ細胞を活性化することができる別の薬剤を添加することをさらに含む、項目［５８］〜［７６］のいずれか１つに記載の方法。
項目［７８］  前記破骨細胞（ＯＣ）が、前記ＮＫ細胞によって産生される少なくとも１つのサイトカイン又はケモカインの産生、分泌、及び／又は機能を増加又は促進する、項目［５８］〜［７７］のいずれか１つに記載の方法。
項目［７９］  前記破骨細胞、前記細胞培養物、及び／又は前記上清が、医薬組成物中で投与される、項目［５８］〜［７８］のいずれか１つに記載の方法。
項目［８０］  前記破骨細胞、前記細胞培養物、及び／又は前記上清が、前記がんに全身又は局所投与される、項目［５８］〜［７９］のいずれか１つに記載の方法。
項目［８１］  前記破骨細胞、前記細胞培養物、及び／又は前記上清が、前記対象に少なくとも２回投与され、場合により、前記破骨細胞、前記細胞培養物、及び／又は前記上清が、最初の投与から少なくとも１ヵ月後に前記対象に投与される、項目［５８］〜［８０］のいずれか１つに記載の方法。
項目［８２］  前記対象が、ヒトである、項目［５８］〜［８１］のいずれか１つに記載の方法。