【誤訳訂正書】
【提出日】令和3年11月1日(2021.11.1)
【誤訳訂正１】
【訂正対象書類名】特許請求の範囲
【訂正対象項目名】全文
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくとも１つのエフェクター部分と、
少なくとも１つのバインダー部分と、を含み、
前記エフェクター部分は、直接、及び/又は、リンカーを介して、前記バインダー部分に接続され、
前記エフェクター部分は、更に、イソロイシン残基を含むN-ホルミルメチオニンペプチドを含む、合成化合物。
【請求項２】
請求項１に記載の合成化合物であって、前記N-ホルミルメチオニンペプチドは、Ｎ末端に位置しているN-ホルミルメチオニン残基を含む。
【請求項３】
請求項１または２に記載の合成化合物であって、
前記N-ホルミルメチオニンペプチドは、前記少なくとも１つのイソロイシン残基に加え、ロイシン、フェニルアラニン、バリン、及び/又は、トレオニンからなる群から選択される少なくとも１つの残基を含む。
【請求項４】
請求項１〜３のいずれかに記載の合成化合物であって、
前記N-ホルミルメチオニンペプチドは、少なくとも１つのイソロイシン残基に加え、
・少なくとも１つのフェニルアラニン残基、及び、少なくとも１つのロイシン残基、又は、
・少なくとも１つのフェニルアラニン残基、少なくとも１つのロイシン残基、並びに、トレ二オン残基及び/又はバリン残基から選択される少なくとも１つの残基、
を含む。
【請求項５】
請求項１〜４のいずれかに記載の合成化合物であって、
前記N-ホルミルメチオニン残基は、N->C方向において、
・１つ又は２つのイソロイシン残基を含む第１ブロック、及び、
・フェニルアラニン残基及びロイシンを互いに任意の順序で含む第２のブロック、が続き、
前記第２ブロックは、互いに任意の順序で位置決めすることができ、直接又は最大２つのアミノ酸残基を含むペプチド配列を介して結合することができる。
【請求項６】
請求項１〜５のいずれかに記載の合成化合物であって、
前記エフェクター部分は、前記N-ホルミルメチオニン残基に加え、
・IFL
・LFII
・IVTLF
・LFIIK、及び/又は、
・IFTLFからなる群から選択される少なくとも１つの配列モチーフを含む。
【請求項７】
請求項１〜６のいずれかに記載の合成化合物であって、
前記エフェクター部分は、fMIFL（配列番号３）、fMLFII（配列番号４）、及び/又は、fMIVTLF（配列番号５）、fMLFIIK（配列番号６）、及び、fMIFTLF（配列番号７）からなる群から選択される少なくとも１つのペプチド配列を含む。
【請求項８】
請求項１〜７のいずれかに記載の合成化合物であって、
前記バインダー部分は、
・ペプチド又はペプチド模倣物、
・抗体、又は、そのフラグメント若しくは誘導体、
・受容体分子、又は、そのフラグメント若しくは誘導体、
・抗体模倣物、又は、そのフラグメント若しくは誘導体、及び/又は、
・アプタマー、から成る群から選択される少なくとも１つである。
【請求項９】
請求項１〜８のいずれかに記載の合成化合物であって、
前記バインダー部分は、α3インテグリン若しくはαvβ6インテグリン、又は、そのサブドメイン若しくはエピトープを標的とする。
【請求項１０】
請求項１〜９のいずれかに記載の合成化合物であって、
前記バインダーペプチド又はペプチド模倣物は、配列番号１又は配列番号２に記載の残基シーケンスを備える。
【請求項１１】
請求項１〜１０のいずれかに記載の合成化合物であって、
前記リンカーは、ポリエチレングリコールを含む。
【請求項１２】
請求項６に記載の合成化合物であって、
前記リンカーは、長さが≦４０及び≧１５モノマーの間の１つ以上のポリエチレングリコール分子を含む。
【請求項１３】
請求項６又は７に記載の合成化合物であって、
前記ポリエチレングリコールリンカーは、１つ以上アミノ酸側鎖群により、前記エフェクター部分に結合している。
【請求項１４】
請求項１〜１３のいずれかに記載の合成化合物であって、
エフェクター部分、バインダー部分、アゴニストから選択される少なくとも２つの部分は、クリックケミストリーにより互いに結合している。
【請求項１５】
請求項１〜１４のいずれかの合成化合物と、生理学的に許容される賦形剤と、を含む医薬製剤。
【請求項１６】
ヒト又は動物の治療のために、請求項１〜１５のいずれかに記載の合成化合物又は請求項１５に記載の製剤の使用。
【請求項１７】
請求項１３に記載の使用であって、
前記使用は、 
・腫瘍性疾患 
・自己免疫疾患
・神経病理学的疾患
・代謝性疾患、及び/又は、 
・感染性疾患、からなる群から選択される少なくとも１つの疾患の治療に関連する。
【誤訳訂正２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１４】
本発明の１つの面によると、合成化合物が提供される。合成化合物は、少なくとも１つのエフェクター部分と、少なくとも１つのバインダー部分とを含む。エフェクター部分は、バインダー部分に接続され、イソロイシン残基を含むN-ホルミルメチオニンペプチドを含む。
【誤訳訂正３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１５】
前記N-ホルミルメチオニンペプチドは、前記ペプチドにおいてＮ末端に位置することが好ましいN-ホルミルメチオニン残基を含む。
【誤訳訂正４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１７】
これらの効果は、イソロイシン残基を欠く従来技術の分子と比べ、エフェクター部分の効能及びこのようなエフェクター部分を含む合成化合物の効能を高めることである。
【誤訳訂正５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２２】
N-ホルミルメチオニンペプチドは、ロイシン、フェニルアラニン、バリン、及び/又は、スレオニンから成る群から選択される少なくとも１つの残基を更に含むことが好ましい。
【誤訳訂正６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３１】
ここでの「ペプチド模倣物」という用語は、ペプチドの化学構造（例えば、自然発生アミノ酸残基）が、置換構造のコンフォメーションを模倣する他の化学構造と置換した化合物を示す。ペプチド模倣物の例として、ペプチド化合物が挙げられる。ペプチド化合物は、ペプチド骨格が１つ以上のベンゾジアゼビン分子（例えば、James他（1993）参照）及び「レトロインベルソ」ペプチド（Sisto、米国特許4,522,752号参照）により置換したものである。また、「ペプチド模倣物」という用語は、非自然発生アミノ酸（例えば、Ｄアミノ酸又は修飾されたアミノ酸）を含む分子を示す。非自然発生アミノ酸は、例えば、FPRL-1アゴニスト（N-ホルミルメチオニンペプチド受容体様1アゴニスト）のようなペプチドの機能にかなりの程度の悪影響を及ぼすことなく、コンフォメーション的及び機能的にペプチド含有化合物における特定のアミノ酸の代替物の役割を果たす。
【誤訳訂正７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３４】
別の好ましい実施例では、N-ホルミルメチオニンペプチドは、少なくとも１つのイソロイシン残基に加え、ロイシン、フェニルアラニン、バリン、及び/又は、スレオニンからなる群から選択される少なくとも１つの残基を含む。
【誤訳訂正８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３５】
N-ホルミルメチオニンペプチドは、少なくとも１つのイソロイシン残基に加え、
・少なくとも１つのフェニルアラニン残基と、少なくとも１つのロイシン残基と、又は
・少なくとも１つのフェニルアラニン残基と、少なくとも１つのロイシン残基と、スレオニン残基及び/又はバリン残基から選択される少なくとも１つと、を
含むことが好ましい。
【誤訳訂正９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３６】
特に好ましい実施例では、N-ホルミルメチオニン残基は、N->C方向において、
・１つ又は２つのイソロイシン残基を含む第１ブロックと、
・互いに任意の順番でフェニルアラニン残基及びロイシンを含む第２ブロックと、が続く。
ここで、２つのブロックを、互いに任意の順番で位置決めすることができ、２つのブロックは、直接、又は、最大２つのアミノ酸残基を含むペプチド配列により結合する。
【誤訳訂正１０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３７】
ここでの「方向N->C」という用語は、第１及び第２ブロックがN-ホルミルメチオニン残基に対してＣ末端に位置することを意図する。
【誤訳訂正１１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３８】
特に好ましい実施例では、エフェクター部分は、N-ホルミルメチオニン残基に加え、
以下から成る群から選択される少なくとも１つの配列モチーフを含む。
・IFL
・LFII
・IVTLF
・LFIIK、及び/又は、
・IFTLF
【誤訳訂正１２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００５５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００５５】
このようなフルサイズのIgG抗体は、約150Kdの分子量と、約1330アミノ酸残基の蓄積鎖長（2x重鎖+2x軽鎖）とを有する。これに対し、開示された実施可能な例のペプチド又はペプチド模倣物バインダーは、10未満のアミノ酸残基を有し、非自然発生アミノ酸を含む。従って、これらはIgGのサイズの１％未満を有する。
【誤訳訂正１３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００５６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００５６】
このため、イソロイシン残基を含むホルミルメチオニンペプチドをバインダー部分に結合する概念は、バインダー部分が（非常に小さい）ペプチド又はペプチド模倣物である場合だけでなく、バインダー部分が（非常に大きい）IgGである場合にも機能的である。
【誤訳訂正１４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００５７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００５７】
他の種類のバインダー部分（受容体分子、又は、そのフラグメント若しくは誘導体、又は、抗体模倣物、又は、そのフラグメント若しくは受容体、又は、アプタマー）のサイズは、10AAペプチドと完全なIgGとの間のサイズ範囲にあることから、イソロイシン残基を含むホルミルメチオニンペプチドを結合する概念もこれらの実施例では機能的である。
【誤訳訂正１５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００６８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００６８】
ポリエチレングリコールが結合する適切な官能基の選択は、PEGに結合するアミノ酸残基に利用可能な反応基の種類に基づいている。タンパク質の場合、典型的な反応性アミノ酸は、リシン、システイン、ヒスチジン、アルギニン、アスパラギン酸、グルタミン酸、セリン、スレオニン、チロシンを含む。
【誤訳訂正１６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００６９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００６９】
ポリエチレングリコールリンカーは、１つ以上のアミノ酸側鎖基によりエフェクター部分に結合することが好ましい。アミノ酸側鎖基はアミノ基であることが好ましい。側鎖を有するアミノ酸残基は、リジン残基であることが好ましい。側鎖を有するアミノ酸残基は、エフェクター部分においてＣ末端に位置している。２つ以上のリンカーが使用されている場合、側鎖を有する２つ以上のアミノ酸残基は、互いに隣接して、例えば、Ｃ末端に位置している。
【誤訳訂正１７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００７０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００７０】
エフェクター部分は、アミド結合により、例えば、リジン残基のエプシロンアミノ基を介して、ポリエチレングリコールリンカーの末端カルボキシ基に共有結合していることが好ましい。
【誤訳訂正１８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１０６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１０６】
【図１ａ】図１ａは、銅触媒［３+２］アジド‐アルキン環状付加の反応スキームを示す。バインダーペプチド模倣物配列番号１（表１参照）を含有するアジド(i)は、エフェクター骨格fMIFL（表１参照）及びPEGリンカーを含有するアルキン(ii)ときちんと反応し、室温で30分後、1, 4‐トリアゾール(iii)が得られる。
【図１ｂ】図１ｂは、スキーム１に示された精製化合物の分析データ：Ａ）逆相HPLCデータ：Ｂ）同じ化合物のエレクトロスプレーイオン化学量分析データを示す。
【図２】図２は、本発明に係る化合物の異なる構成を示す。Ａでは、本発明の化合物は、免疫グロブリンＧの構造に類似している。エフェクター部分は、免疫グロブリンＧのFc部分と同様に、Ｙ形状構造の基部に位置する。２つのリンカーは、エフェクター部分に付着し、２つの同一のバインダー部分は、免疫グロブリンＧのCDRs又は可変ドメインと同様に、リンカーの末端に付着している。Ｂでは、２つのリンカーは、例えば、異なる標的に特異性を有する２つの異なるバインダー部分を有する。従って、化合物は三官能性である。Ｃでは、１つのリンカーはエフェクター部分に付着し、リンカーは途中で２つのアームに分岐しており、各リンカーは、末端に２つのバインダーを有し、この例では、２つのバインダーは互いに異なっている。従って、化合物はＹと同様の形を有する。
【図３】図３は、本発明に係る合成化合物の異なる構成を示す。Ａでは、３つのリンカーはエフェクター部分に付着していることから、化合物は、１つのエフェクター部分と、３つの同一のバインダー部分とを備える花束と同様の形を有する。Ｂでは、２つのリンカーは、２つのエフェクター部分に付着し、各リンカーの末端にバインダーを有し、リンカーは互いに途中で結合している。従って、化合物はＸと同様の形を有する。図示しないが同様に好ましくは、１つのみのリンカーがエフェクター部分に付着していることから、化合物は、１つのみのエフェクター部分と１つのみのバインダー部分とを備えるＩ形状を有する。別の変形例も可能である。図２のＣの実施例は、例えば、２つの同一バインダーを有することが可能である。図３のＡの実施例は、例えば、異なる標的に特異性を有する異なるバインダー部分を有することが可能である。図３のＢの実施例は、途中で結合した３つ以上のリンカーを有することから、星型に類似している。図３のＡの実施例は、それぞれがバインダー部分（異なるものと同じ）を有する４つ以上のリンカーを有することが可能である。エフェクター及びバインダー部分の選択に応じて、化合物を、二官能性（１つのエフェクター部分官能基及び同じ特異性を備える１つ以上のバインダー部分）、又は、三官能性若しくは多官能性（１つのエフェクター部分官能基及び異なる特異性を備える２つ以上のバインダー部分）とすることができ、又は、化合物は別の官能性を有することが可能である（ｃ５受容体アゴニストが提供される場合）。バインダー部分を、ペプチド若しくはペプチド模倣物、抗体、又は、そのフラグメント若しくは誘導体、受容体分子、又は、そのフラグメント若しくは誘導体、抗体模倣物、又は、そのフラグメント若しくは誘導体、及び/又は、アプタマーとすることができる。
【図４】図４は、走化性アッセイ（Ａ）と、DHR123酸化アッセイ（Ｂ）とを示し、ヒト白血球において生体外で（Ile残基を欠く）と、fMIFL共役とを比較する。fMIFLは、著しく良好な走化性効果及び酸化バーストのより良好な活性化を実証する。
【図５】図５は、DHR123酸化アッセイを示し、マウス白血球において生体外でfMLF（Ile残基を欠く）と、fMFLとを比較する。fMIFLは、酸化バーストのより良好な活性化を実証する。
【図６】図６は、ヒト顆粒球による走化性アッセイ（Ａ）と、ヒト単球による走化性アッセイ（Ｂ）と、ヒト白血球によるDHR123酸化アッセイ（Ｃ）とを示し、各アッセイでは、ヒト白血球において生体外でfMIFLと、fMLFIIと、fMIVTLFとを比較する。
【図７】図７は、DHR123酸化アッセイを示し、マウス白血球において生体外でfMIFLと、fMLFIIと、fMIVTLFと比較する。
【図８】図８は、α3インテグリン（実線）を標的とする200nMビオチン化ペプチド模倣物バインダー配列番号１と、又は、前記バインダーのスクランブル変異体（点線）と共に培養したヒト腫瘍細胞株を示す。ストレプトアビジン-PerCP-Cy5.5による染色。前記スクランブル変異体では、オリジナルのペプチド配列はランダムに置換されている。バインダーは、α3インテグリン表面抗原を全て発現する細胞株A431、PC3、及び、U87-MGを結合するが、前記抗体を発現しないK562細胞株を結合しないことがわかる。以下の細胞株を使用した。表面抗原α3インテグリン及びαvβ6インテグリンの存在又は不存在は、対応する抗体テストにより確認されている。
【図９】図９は、αvβ6インテグリン（実線）を標的とする10nMのビオチン化ペプチドバインダー配列番号２又は、前記バインダーのスクランブル変異体（点線）と共に培養したヒト腫瘍細胞株を示す。ストレプトアビジン-PerCP-Cy5.5による染色。前記スクランブル変異体では、オリジナルのペプチド配列は、ランダムに置換されている。バインダーは、αvβ6インテグリン表面抗原を発現する細胞株A431及びHT-29に結合するが、前記抗原を発現しない細胞株PC-3及びU87-MGには結合しないことがわかる。
【図１０】図１０は、１μMの合成化合物Ｉ型（実線）と共に又は合成化合物（点線）なしで培養したヒト腫瘍細胞株を示す。ストレプトアビジン‐PerCp-Cy5.5による染色。合成化合物Ｉ型は、(i)配列番号１を有するペプチド模倣物を含み、α3インテグリンを標的とするバインダー部分と、(ii)配列番号３を有するペプチド模倣物を含むエフェクター部分及びPEGリンカー(fMIFL）と、からなる合成化合物である。α3インテグリンに対する合成化合物I型の結合能は、単なるバインダー部分のそれと同様であることは明らかである（図８参照）。これは、エフェクターと、リンカーとの結合がバインダーの結合能力に影響しないことを意味する。
【図１１】図１１は、マウス白血球における生体外での合成化合物Ｉ型と、非共役化fMIFLとを比較するDHR123酸化アッセイを示す。合成化合物Ｉ型は、(i)配列番号１を有し、α3インテグリンを標的とするペプチド模倣物（表１参照）を含むバインダー部分と、(ii)配列番号３を有するペプチド模倣物（fMIFL、表１参照）を含むエフェクター部分及びPEGリンカーと、からなる合成化合物である。fMIFの酸化バーストの活性化は、PEG-リンカー及びそれぞれのバインダーペプチド模倣物への共役によって影響を受けないことは明らかである。
【図１２】図１２は、本発明に係る合成化合物の別の構造を示す。合成化合物は、フル機能リンカーを有していない。エフェクター部分は、免疫グロブリンＧのFc部分と同様に、Ｙ形状構造の基部に位置するが、２つの異なるバインダー部分は、免疫グロブリンＧの可変ドメイン又はCDRsと同様に、エフェクター部分に直接接続する。このような直接接続を、直接共役、例えば、共有結合により達成することができる。適切な架橋剤を用いることができる。適切な架橋剤を、例えばEDC又はDCCのようなカルボジイミドとすることができる。バインダー部分をペプチド若しくはペプチド模倣物、抗体、又は、そのフラグメント若しくは誘導体、受容体分子、又は、そのフラグメント若しくは誘導体、抗体模倣体、そのフラグメント若しくは誘導体、及び/又は、アプタマーとすることができる。図２、３に記載した通り、この概念の異なる変形例が可能である。変形例は、例えば、２つの同一バインダー部分、３つ以上のバインダー部分、２つ以上のエフェクター部分等である。
【図１３】図１３は、異なるN-ホルミルメチオニンペプチドへの暴露時のマウス白血球のDHRアッセイを示す。ローダミン陽性細胞の割合は、それぞれの分子のエフェクター効果の尺度である。イソロイシンを含む４つのN-ホルミルメチオニンエフェクターペプチドは、イソロイシンを含まない対照より２〜３桁高い効力を示す。
【図１４】図１４は、異なるN-ホルミルメチオニンペプチドへの暴露時のヒト白血球のDHR酸化アッセイを示す。ローダミン陽性細胞の割合は、それぞれの分子のエフェクター効果の尺度である。イソロイシンを含む３つのN-ホルミルメチオニンエフェクターペプチドは、イソロイシンを含まない対照より２〜３桁高い効力を示す。図１３及び図１４は、イソロイシン残基を含むN-ホルミルメチオニンペプチドが、イソロイシン残基を欠くN-ホルミルメチオニンペプチドよりもはるかに良好な免疫刺激効果を有することを印象的に示している。
【表１】
2019523782.tif 000001
表１は、ここで説明されているバインダーペプチド/ペプチド模倣物及びエフェクター ペプチド/ペプチド模倣物の概要を示す。N末端n-ホルミル-メチオニンが以下の構造を有 することを理解することが重要である。
【化１】
2019523782.tif 000002