【手続補正書】
【提出日】令和3年11月12日(2021.11.12)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）を治療用ＴＩＬ集団に拡大培養する方法であって、
（ｉ）ＩＬ−２を含む細胞培養培地中で、患者の腫瘍からの少なくとも１つの細針吸引（ＦＮＡ）又は少なくとも１つの小生検から得られた第１のＴＩＬ集団を培養することにより、第１の拡大培養を実施して、第２のＴＩＬ集団を産生することであって、前記細胞培養培地は、任意選択により、１〜３日目のいずれか１つでＯＫＴ−３を補充され、前記第１の拡大培養は、前記第２のＴＩＬ集団を得るために約３日間〜約１２にわたって実施され、前記第２のＴＩＬ集団は、前記第１のＴＩＬ集団が小生検からのものである場合、約３日〜約１２日までに少なくとも５×１０７個のＴＩＬを含む、産生すること；及び
（ｉｉ）前記第２のＴＩＬ集団の前記細胞培養培地に追加のＩＬ−２、ＯＫＴ−３及び抗原提示細胞（ＡＰＣ）を補充することにより、第２の拡大培養を実施して、第３のＴＩＬ集団を産生することであって、前記第３のＴＩＬ集団は、数において前記第２のＴＩＬ集団より少なくとも２５倍多く、前記第２の拡大培養は、前記第３のＴＩＬ集団を得るために約３日間〜約１２日間にわたって実施され、前記第３のＴＩＬ集団は、治療用ＴＩＬ集団である、産生すること
を含む方法。
【請求項２】
ステップ（ｉ）におけるＩＬ−２を含む前記細胞培養培地は、ＯＫＴ−３を更に含み、且つ任意選択により、１〜３日目のいずれか１つでＯＫＴ−３を補充されず、ステップ（ｉ）は、第１の初回刺激拡大培養ステップであり、及びステップ（ｉｉ）は、第２の急速拡大培養であり、且つ任意選択により、ステップ（ｉｉ）後、前記細胞は、細胞培養物から取り出され、且つ貯蔵培地中に凍結保存され、且つ任意選択により、貯蔵培地中に凍結保存された後、前記細胞は解凍され、前記患者に投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
ステップ（ｉ）〜（ｉｉ）は、約１７日〜約２４日の期間内に実施され、且つ任意選択により、約１８日〜約２２日の期間内に実施され、且つ任意選択により、約２０日〜約２２日の期間内に実施され、且つ任意選択により、約２２日の期間内に実施される、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
ステップ（ｉｉ）からの治療用ＴＩＬ集団における前記細胞は、ＣＤ４、ＣＤ８及びＴＣＲαβを新鮮回収細胞と同様のレベルで発現する、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
前記ＡＰＣは、末梢血単核球（ＰＢＭＣ）であり、且つ任意選択により、ステップ（ｉ）における培養の開始後３〜１２日目のいずれかのステップ（ｉ）における細胞培養物及び／又はステップ（ｉｉ）における培養の開始後１１〜１４日目のいずれかのステップ（ｉｉにおける細胞培養物に添加され、且つ任意選択により、前記ＡＰＣは、人工ＡＰＣ（ａＡＰＣ）又は自己ＡＰＣである、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記第３のＴＩＬ集団は、前記第２のＴＩＬ集団と比べて、エフェクターＴ細胞及び／又はセントラルメモリーＴ細胞の増加したサブ集団を含み、ステップ（ｉｉ）における前記治療用ＴＩＬ集団中の前記エフェクターＴ細胞及び／又はセントラルメモリーＴ細胞は、前記第２の細胞集団中のエフェクターＴ細胞及び／又はセントラルメモリーＴ細胞と比べて、ＣＤ２７の発現、ＣＤ２８の発現、より長いテロメア、増加したＣＤ５７発現及び減少したＣＤ５６発現からなる群から選択される１つ以上の特徴を呈し、且つ任意選択により、前記エフェクターＴ細胞及び／又はセントラルメモリーＴ細胞は、増加したＣＤ５７発現及び減少したＣＤ５６発現を呈する、請求項２〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記治療用ＴＩＬ集団は、患者に注入のためのものである、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
ステップ（ｉ）における前記第１の拡大培養は、前記第２のＴＩＬ集団の前記細胞培養培地にＯＫＴ−３、ＩＬ−１５、ＯＸ４０アゴニスト性抗体及び／又は４−１ＢＢアゴニスト性抗体を更に補充することによって実施され、そして／あるいはステップ（ｉｉ）における前記第２の拡大培養は、前記第２のＴＩＬ集団の前記細胞培養培地にＩＬ−１５、ＯＸ４０アゴニスト性抗体及び／又は４−１ＢＢアゴニスト性抗体を更に補充することによって実施される、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
ステップ（ｉ）における前記ＦＮＡは、少なくとも４００，０００個のＴＩＬを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記小生検は、膵臓、黒色腫、乳房及び卵巣からなる群から選択される腫瘍から得られ、且つ任意選択により、前記ＦＮＡは、肺、黒色腫、頭頸部、子宮頸部、卵巣、膵臓、神経膠芽腫、結腸直腸及び肉腫からなる群から選択される腫瘍から得られ、且つ任意選択により、前記肺腫瘍は、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）であり、任意選択により、前記患者は、以前に外科的処置を受けたことがある、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
ステップ（ｉ）における前記第１のＴＩＬ集団は、ＦＮＡから得られ、且つ任意選択により、前記ＦＮＡは、２５〜１８ゲージ針を使用して得られる、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
ステップ（ｉ）における前記第１のＴＩＬ集団は、小生検から得られ、且つ任意選択により、前記小生検は、１６〜１１ゲージ針を使用して得られる、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
ステップ（ｉｉ）は、前記治療用ＴＩＬ集団中において、治療有効投与量の前記ＴＩＬのために十分なＴＩＬを得るために１〜４回繰り返され、且つ任意選択により、治療有効投与量のために十分なＴＩＬの数は、約２．３×１０１０〜約１３．７×１０１０個である、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
前記第１の拡大培養は、約３日〜約１０日実施される、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
前記第１の拡大培養が、前記細胞培養培地にＯＫＴ−３を補充することを含む、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
前記第３のＴＩＬ集団の前記細胞培養培地にＩＬ−１５、ＯＸ４０アゴニスト性抗体及び／又は４−１ＢＢアゴニスト性抗体を更に補充することによって実施される、ステップ（ｉｉ）における追加の第２の拡大培養を更に含む、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
癌を有する対象を治療する方法において使用するための、治療用腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）集団である拡大培養された腫瘍浸潤リンパ球であって、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の方法により得られる、腫瘍浸潤リンパ球。
【請求項１８】
前記癌は、黒色腫、子宮頸癌、頭頸部癌、膠芽腫、卵巣癌、肉腫、膵癌、膀胱癌、乳癌、トリプルネガティブ乳癌及び非小細胞肺癌からなる群から選択される、請求項１７に記載の腫瘍浸潤リンパ球。
【請求項１９】
（ａ）前記第１のＴＩＬ集団を閉鎖系に添加すること；
（ｂ）ＩＬ−２を含む細胞培養培地中で前記第１のＴＩＬ集団を培養することにより、前記第１の拡大培養を実施して、第２のＴＩＬ集団を産生することであって、前記細胞培養培地は、１〜３日目のいずれか１つでＯＫＴ−３を補充され、前記第１の拡大培養は、前記第２のＴＩＬ集団を得るために約３日間〜約１２日間にわたって実施され、前記第２のＴＩＬ集団は、前記第１のＴＩＬ集団が小生検からのものである場合、約３日〜約１２日までに少なくとも５×１０７個のＴＩＬを含み、前記第１の拡大培養は、第１のガス透過性表面積を提供する閉鎖型容器内で実施され、前記第２のＴＩＬ集団は、数において前記第１のＴＩＬ集団より少なくとも２５倍多く、ステップ（ａ）からステップ（ｂ）への移行は、前記系を開放することなく行われる、産生すること；
（ｃ）前記第２のＴＩＬ集団の前記細胞培養培地に追加のＩＬ−２、ＯＫＴ−３及び抗原提示細胞（ＡＰＣ）を補充することにより、前記第２の拡大培養を実施して、第３のＴＩＬ集団を産生することであって、前記第２の拡大培養は、前記第３のＴＩＬ集団を得るために約３日間〜約１２日間にわたって実施され、前記第３のＴＩＬ集団は、治療用ＴＩＬ集団であり、前記第２の拡大培養は、第２のガス透過性表面積を提供する閉鎖型容器内で実施され、ステップ（ｂ）からステップ（ｃ）への移行は、前記系を開放することなく行われる、産生すること；
（ｄ）ステップ（ｃ）から得られた前記治療用ＴＩＬ集団を回収することであって、ステップ（ｃ）からステップ（ｄ）への移行は、前記系を開放することなく行われる、回収すること；及び
（ｅ）ステップ（ｄ）からの前記回収されたＴＩＬ集団を輸注バッグに移すことであって、ステップ（ｄ）から（ｅ）への移行は、前記系を開放することなく行われる、移すこと
を含む、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）を治療用ＴＩＬ集団に拡大培養する方法であって、
（ａ）患者の腫瘍からの少なくとも１つの細針吸引（ＦＮＡ）又は少なくとも１つの小生検から得られた第１のＴＩＬ集団を閉鎖系に添加すること；
（ｂ）ＩＬ−２を含む細胞培養培地中で前記第１のＴＩＬ集団を培養することにより、前記第１の拡大培養を実施して、第２のＴＩＬ集団を産生することであって、前記細胞培養培地は、１〜３日目のいずれか１つでＯＫＴ−３を補充され、前記第１の拡大培養は、前記第２のＴＩＬ集団を得るために約３日間〜約１２日間にわたって実施され、前記第２のＴＩＬ集団は、前記第１のＴＩＬ集団が小生検からのものである場合、約３日〜約１２日までに少なくとも５×１０７個のＴＩＬを含み、前記第１の拡大培養は、第１のガス透過性表面積を提供する閉鎖型容器内で実施され、前記第１の拡大培養は、前記第２のＴＩＬ集団を得るために約３日間〜約１２日間の第１の期間にわたって実施され、前記第２のＴＩＬ集団は、数において前記第１のＴＩＬ集団より少なくとも２５倍多く、ステップ（ａ）からステップ（ｂ）への移行は、前記系を開放することなく行われる、産生すること；
（ｃ）前記第２のＴＩＬ集団の前記細胞培養培地に追加のＩＬ−２、ＯＫＴ−３及び抗原提示細胞（ＡＰＣ）を補充することにより、前記第２の拡大培養を実施して、第３のＴＩＬ集団を産生することであって、前記第２の拡大培養は、前記第３のＴＩＬ集団を得るために約３日間〜約１２日間の第２の期間にわたって実施され、前記第３のＴＩＬ集団は、治療用ＴＩＬ集団であり、前記第２の拡大培養は、第２のガス透過性表面積を提供する閉鎖型容器内で実施され、ステップ（ｂ）からステップ（ｃ）への移行は、前記系を開放することなく行われる、産生すること；
（ｄ）ステップ（ｃ）から得られた前記治療用ＴＩＬ集団を回収することであって、ステップ（ｃ）からステップ（ｄ）への移行は、前記系を開放することなく行われる、回収すること；及び
（ｅ）ステップ（ｄ）からの前記回収されたＴＩＬ集団を輸注バッグに移すことであって、ステップ（ｄ）から（ｅ）への移行は、前記系を開放することなく行われる、移すこと
を含む方法。
【請求項２１】
ステップ（ｂ）におけるＩＬ−２を含む前記細胞培養培地は、ＯＫＴ−３を更に含み、且つ任意選択により、１〜３日目のいずれか１つでＯＫＴ−３を補充されず、ステップ（ｂ）は、第１の初回刺激拡大培養ステップであり、及びステップ（ｃ）は、第２の急速拡大培養ステップであり、且つ任意選択により、前記方法は、凍結保存プロセスを使用して、ステップ（ｅ）における前記回収されたＴＩＬ集団を含む前記輸注バッグを凍結保存するステップを更に含み、且つ任意選択により、前記凍結保存プロセスは、回収されたＴＩＬ集団対ＣＳ１０培地の１：１比を使用して実施される、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記ＡＰＣは、末梢血単核球（ＰＢＭＣ）であり、且つ任意選択により、前記ＰＢＭＣは、照射され、且つ同種異系であり、且つ任意選択により、前記ＰＢＭＣは、ステップ（ｂ）における前記第１の期間の３〜１２日目のいずれか及び／又はステップ（ｃ）における第２の期間の３〜１２日目のいずれかに細胞培養物に添加される、請求項２０又は２１に記載の方法。
【請求項２３】
ステップ（ｂ）における前記第１の拡大培養は、前記第２のＴＩＬ集団の前記細胞培養培地にＯＫＴ−３、ＩＬ−１５、ＯＸ４０アゴニスト性抗体及び／又は４−１ＢＢアゴニスト性抗体を更に補充することによって実施され、そして／あるいはステップ（ｃ）における前記第２の拡大培養は、前記第２のＴＩＬ集団の前記細胞培養培地にＩＬ−１５、ＯＸ４０アゴニスト性抗体及び／又は４−１ＢＢアゴニスト性抗体を更に補充することによって実施される、請求項２０に記載の方法。
【請求項２４】
ステップ（ａ）における前記ＴＩＬは、ＦＮＡから得られ、且つ任意選択により、前記ＦＮＡは、少なくとも４００，０００個のＴＩＬを含み、且つ任意選択により、前記ＦＮＡは、２５〜１８ゲージ針を使用して得られ、且つ任意選択により、前記ＦＮＡは、肺、黒色腫、頭頸部、子宮頸部、卵巣、膵臓、神経膠芽腫、結腸直腸及び肉腫からなる群から選択される腫瘍から得られ、且つ任意選択により、前記肺腫瘍は、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）であり、任意選択により、前記患者は、以前に外科的処置を受けたことがある、請求項２０に記載の方法。
【請求項２５】
ステップ（ａ）における前記第１のＴＩＬ集団は、小生検から得られ、且つ任意選択により、前記小生検は、膵臓、黒色腫、乳房及び卵巣からなる群から選択される腫瘍から得られ、且つ任意選択により、前記小生検は、１６〜１１ゲージ針を使用して得られる、請求項２０に記載の方法。
【請求項２６】
ステップ（ｄ）における前記回収は、LOVO（登録商標）細胞プロセスシステムを使用して実施され、且つ任意選択により、前記細胞培養培地は、Ｇコンテナ（登録商標）及びXuri細胞培養バッグ（登録商標）からなる群から選択される容器内に提供され、且つ任意選択により、ステップ（ｅ）における前記輸注バッグは、hypothermosol輸注バッグである、請求項２０に記載の方法。
【請求項２７】
ステップ（ａ）〜（ｅ）は、約１７日〜約２４日の期間内に実施され、且つ任意選択により、ステップ（ａ）〜（ｅ）は、約１８日〜約２２日の期間内に実施され、且つ任意選択により、ステップ（ａ）〜（ｅ）は、約２０日〜約２２日の期間内に実施される、請求項２０に記載の方法。
【請求項２８】
ステップ（ａ）〜（ｅ）及び、任意選択により、凍結保存は、２２日以下で実施される、請求項２０に記載の方法。
【請求項２９】
ステップ（ｄ）で回収された前記治療用ＴＩＬ集団は、治療有効投与量の前記ＴＩＬのために十分なＴＩＬを含み、且つ任意選択により、治療有効投与量のために十分なＴＩＬの数は、約２．３×１０１０〜約１３．７×１０１０個である、請求項２０〜２８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３０】
ステップ（ａ）〜（ｄ）は、単一の容器内で実施され、ステップ（ａ）〜（ｄ）を単一の容器内で実施することは、ステップ（ａ）〜（ｄ）を複数の容器内で実施することと比較して、切除された腫瘍毎のＴＩＬ収率の増加をもたらし、且つ任意選択により、前記抗原提示細胞は、前記系を開放することなく、ステップ（ｃ）における第２の拡大培養中に前記ＴＩＬに添加され、且つ任意選択により、前記第３のＴＩＬ集団は、前記第２のＴＩＬ集団と比べて、エフェクターＴ細胞及び／又はセントラルメモリーＴ細胞の増加したサブ集団を含み、前記治療用ＴＩＬ集団中の前記エフェクターＴ細胞及び／又はセントラルメモリーＴ細胞は、前記第２の細胞集団から得られるエフェクターＴ細胞及び／又はセントラルメモリーＴ細胞と比べて、ＣＤ２７＋を発現すること、ＣＤ２８＋を発現すること、より長いテロメア、増加したＣＤ５７発現及び減少したＣＤ５６発現からなる群から選択される１つ以上の特徴を呈し、且つ任意選択により、前記第３のＴＩＬ集団から得られた前記エフェクターＴ細胞及び／又はセントラルメモリーＴ細胞は、前記第２の細胞集団から得られるエフェクターＴ細胞及び／又はセントラルメモリーＴ細胞と比べて、増加したＣＤ５７発現及び減少したＣＤ５６発現を呈する、請求項２０〜２９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３１】
癌を有する対象を治療する方法において使用するための拡大培養された腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）であって、前記腫瘍浸潤リンパ球が請求項２０〜３０のいずれか一項に記載の方法により得られ、前記方法が、任意選択により、
（ｆ）凍結保存プロセスを使用して、ステップ（ｅ）からの前記回収されたＴＩＬ集団を含む前記輸注バッグを凍結保存すること、を含み、ステップ（ｆ）における前記輸注バッグからの治療有効投与量の前記第３のＴＩＬ集団が患者への投与のためのものである、腫瘍浸潤リンパ球。
【請求項３２】
ステップ（ｄ）で回収された前記治療用ＴＩＬ集団は、治療有効投与量の前記ＴＩＬを投与するのに十分なＴＩＬを含む、請求項３１に記載の腫瘍浸潤リンパ球。
【請求項３３】
治療有効投与量のＴＩＬ細胞を投与する前に、非破壊的リンパ球枯渇レジメンは、前記患者に投与されており、且つ任意選択により、前記骨髄非破壊的リンパ球枯渇レジメンは、６０ｍｇ／ｍ２／日の用量で２日間にわたってシクロホスファミドを投与し、同時に２５ｍｇ／ｍ２／日の用量で５日間にわたってフルダラビンを投与するステップを含み、且つ任意選択により、前記患者が、前記患者に前記ＴＩＬ細胞を投与した翌日に始まる高用量ＩＬ−２レジメンで治療され、且つ任意選択により、前記高用量ＩＬ−２レジメンは、忍容量まで８時間毎に１５分ボーラス静脈内注入として投与される６００，０００又は７２０，０００ＩＵ／ｋｇを含む、請求項３１又は３２に記載の腫瘍浸潤リンパ球。
【請求項３４】
請求項１〜１６及び１９〜３０のいずれか一項に記載の方法を使用して拡大培養されたＴＩＬを含む組成物であって、任意選択により、前記組成物が凍結保存剤を更に含み、任意選択により、前記凍結保存剤は、ジメチルスルホキシドを含み、任意選択により、前記組成物が、ジメチルスルホキシドを含む凍結保存剤並びに塩化ナトリウム、グルコン酸ナトリウム及び酢酸ナトリウムを含む等張剤を含むか、ジメチルスルホキシド及びデキストラン４０を含む凍結保存剤並びに塩化ナトリウム、グルコン酸ナトリウム及び酢酸ナトリウムを含む等張剤を含み、且つ任意選択により、前記組成物が、無菌輸注バッグで提供される、組成物。