【手続補正書】
【提出日】令和2年12月10日(2020.12.10)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
高収率及び最小凝集で医薬抗原結合タンパク質を製造する方法であって、前記医薬抗原結合タンパク質が、配列番号１及び配列番号２の抗デングモノクローナル抗体であり、又は前記医薬抗原結合タンパク質が、配列番号３及び配列番号４の抗狂犬病モノクローナル抗体であり、当該方法が、以下の工程：
ａ）化学的に規定された非動物由来細胞増殖産生培地中で抗原結合タンパク質を発現する哺乳類細胞を大規模に培養する工程、ここで前記培養工程は、細胞数を１０ｘ１０６〜２０ｘ１０６ｃｅｌｌｓ／ｍｌの範囲内に効果的に維持し、そして少なくとも２ｇｍ／ｌの収率をもたらし、ここで前記哺乳類細胞の細胞株は、前記医薬抗原結合タンパク質が抗デングモノクローナル抗体である場合ＣＨＯ−Ｋ１  ＳＶ  ＧＳ−ＫＯであり、又は前記医薬抗原結合タンパク質が、配列番号３及び配列番号４の抗狂犬病モノクローナル抗体である場合ＧＳ−ＣＨＯである；
ｂ）工程（ａ）で得られた回収上清液からの抗原結合タンパク質を精製する工程、ここで前記精製工程は少なくとも８０％の回収率、少なくとも９９％の純度をもたらし、ここで前記精製工程は、順に、親和性クロマトグラフィー、低ｐＨウイルス不活性化、カチオン交換クロマトグラフィー、アニオン交換クロマトグラフィー、ナノ濾過、接線流濾過／限外濾過を含み、前記親和性クロマトグラフィーのマトリックスがプロテインＡである；
ｃ）前記医薬抗原結合タンパク質を含有する安定製剤を調製する工程、ここで前記製剤のオスモル濃度が３００〜４００ｍＯｓｍ／ｋｇであり、そして前記製剤の粘度が２．５ｍＰａ・Ｓ未満である；
を含む、方法。
【請求項２】
請求項１に記載の方法であって、細胞培養産生培地中で抗体を発現する哺乳類細胞を大規模に培養する工程を含みここで前記培養工程が基本培地の使用、供給溶液として濃縮基本培地の使用、明確な供給戦略と共に供給溶液の使用を含み、増強された細胞増殖をもたらし、低濃度の乳酸及びアンモニアを維持し、細胞数を効果的に維持し、それにより、細胞寿命及び高収率を高める、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記細胞培養培地が、非動物由来の化学的に規定された培養培地から成る、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記細胞培養培地が、前記細胞培養工程の間、少なくとも１度、１又は２以上の他の栄養物により補充される、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
前記細胞培養培地が、連続的、毎日、１日置き、２日置き又はそれらの組合せである補充を含むスケジュールで補充される、請求項１又は４に記載の方法。
【請求項６】
前記細胞培養培地が、濃縮された非動物由来の化学的に規定された培養培地供給溶液；アミノ酸のアルカリｐＨ溶液と組み合わせられたアミノ酸、ビタミン、脂質、増殖因子、塩微量元素及びグルコースを含有し中性に近いｐＨを有する溶液により補充される、請求項４に記載の方法。
【請求項７】
前記細胞培養培地が２５０〜５００ｍＯｓｍ／ｋｇの範囲のオスモル濃度を有し；溶存濃度が１０〜６０％の範囲で維持され；細胞培養温度が３０℃〜３８℃の範囲であり；第１の温度が好ましくは、３６〜３７℃であり、そして任意には、第２の温度が好ましくは、３０〜３５℃であり；グルコース濃度が７％以下、好ましくは４％及び５％で維持され；生存率が８０％に低められる場合、細胞培養物を収穫し；ここで細胞培養条件が、乳酸濃度などの二次代謝物が５ｇ／ｌ以下であり、そしてアンモニア濃度が５ｍモル／ｌ以下であるような態度で維持される、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記発酵培地のオスモル濃度が４００〜５００ｍＯｓｍ／ｋｇである、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記発酵培地の溶存酸素が、２０〜４０％の範囲で維持される、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記細胞が、バッチ式、流加式、連続式、濯流式、より特定には、流加式で培養される、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
精製に使用される緩衝液中の塩濃度は、３０ｍＭ〜５００ｍＭの範囲である、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
精製に使用される緩衝液中の塩濃度は、５０ｍＭ〜３００ｍＭの範囲である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
疎水性相互作用クロマトグラフィー、疎水性電荷誘導クロマトグラフィー、セラミックヒドロキシアパタイトクロマトグラフィー、マルチモーダルクロマトグラフィー、メンブレンクロマトグラフィーの１又は２以上を含む群から選択された追加のクロマトグラフィー工程をさらに含み、前記クロマトグラフィーの樹脂が、高度に架橋されたアガロースカチオン交換体、高度に架橋されたアガロースアニオン交換体、ポリフッ化ビニリデン（ＰＶＤＦ）メンブレン、修飾疎水性ポリエーテルスルホンメンブレン、及び安定化強化セルロースメンブレンから選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
前記プロテインＡクロマトグラフィーが、ポリビニルエーテルに基づく親水性ポリマー、高度に架橋されたセルロース、プロテインＡに基づく親和性樹脂、高フローアガロース、架橋４％アガロースと結合した組換えプロテインＡ、架橋ポリ（スチレン−ジビニルベンゼン）、メタクリレートポリマー及び調整細孔ガラス（ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  ｐｏｒｅ  ｇｌａｓｓ）からなる群から選択される１つ以上の樹脂から成る、請求項１に記載の方法。
【請求項１５】
前記プロテインＡクロマトグラフィーが、
ａ）平衡化緩衝液：２０ｍＭのリン酸緩衝液；１００〜１５０ｍＭのＮａＣｌ；０．０５％ポリソルベート８０；ｐＨ７．０±２；
ｂ）ローディング：明確化された収穫物；
ｃ）洗浄Ｉ緩衝液：２０ｍＭのリン酸緩衝液；１００〜１５０ｍＭのＮａＣｌ、より特定には１５０ｍＭのＮａＣｌ；０．０５％ポリソルベート８０；ｐＨ７．０±０．２；
ｄ）洗浄ＩＩ緩衝液：２０ｍＭのリン酸緩衝液；２５０ｍＭ〜１ＭのＮａＣｌ、より特定には１ＭのＮａＣｌ；０．０５％ポリソルベート８０；ｐＨ７．０±０．２；
ｅ）洗浄ＩＩＩ緩衝液：１０ｍＭのリン酸緩衝液；１００〜１５０ｍＭのＮａＣｌ、より特定には１２５ｍＭのＮａＣｌ；０．０５％ポリソルベート８０；ｐＨ７．０±０．２；
ｆ）溶出緩衝液：２０ｍＭのクエン酸緩衝液；ｐＨ３．０±０．２；及び任意には、０．０２５％（ｗ／ｖ）ポリソルベート８０；
ｇ）ＣＩＰ緩衝液：０．１ＭのＮａＯＨ；
ｈ）滞留時間：４．００〜８．００分；
ｉ）使用カラム：ＸＫ２６；
ｊ）線形流速：１０〜５００ｃｍ／時、より特定には１００〜１５０ｃｍ／時；
から成る、請求項１に記載の方法。
【請求項１６】
プロテインＡクロマトグラフィーからの溶出液のウィルス不活性化が、ｐＨ３．３〜３．５に５０〜１００分間、溶出液を保持することにより達成される、請求項１に記載の方法。
【請求項１７】
前記カチオン交換クロマトグラフィーが、１又は２以上のスルホネート系基；スルホエチル系基；スルホプロピル系基、スルホイソブチル系基；スルホキシエチル系基（；カルボキシメチル系基（；スルホン酸及びカルボン酸系基；カルボン酸系基；スルホン酸系基；及びオルトリン酸系基からなる群から選択される樹脂から成る、請求項１に記載の方法。
【請求項１８】
前記陽イオン交換クロマトグラフィーか、
ａ）前平衡化緩衝液；２００ｍＭのクエン酸緩衝液；ｐＨ６．０±０．２、
ｂ）平衡化緩衝液；１０ｍＭのクエン酸緩衝液；０．０２５％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０；ｐＨ６．０±０．２、
ｃ）洗浄緩衝液Ａ：１０ｍＭのクエン酸緩衝液；ｐＨ６．０±０．２、
ｄ）洗浄緩衝液Ｂ：２０ｍＭのクエン酸緩衝液；３００〜５００ｍＭのＮａＣｌ；ｐＨ６．０±０．２、
ｅ）ＣＩＰ緩衝液：０．５ＭのＮａＯＨ、
ｆ）滞留時間：４．００〜７．００分、
ｇ）使用されるカラム：ＸＫ２６、
から成る、請求項１に記載の方法。
【請求項１９】
前記アニオン交換クロマトグラフィーが、１又は２以上の
ジエチルアミノエチルセルロース、ポリエチレンアミン官能基、強化セルロース、ポリスチレン／ジビニルベンゼン、架橋アガロース、架橋デキストランマトリックス、シリカゲル／ジエチルアミノメチル誘導化ゲルマトリックス、アクリルアミノ及びビニルモノマー、メタクリレートポリマー／コポリマー、パック済みＰＲＣ、セラミックビーズ、ポリ（Ｎ−トリス［ヒドロキシメチル］メチルアクリルアミド）、シリカ／デキストランコンポジット、多孔質シリカ、ポリエーテルスルホン（ＰＥＳ）、スチレン−ジビニルベンゼン、ポリフッ化ビニリデン（ＰＶＤＦ）、ビーズ化球状セルロース、架橋ポリメタクリレート、アルキルベンジルアンモニウム架橋ポリスチレン、架橋フェノール−ホルムアルデヒドポリ重合体、ポリメタクリレート、水酸化メタクリルポリマー及びセルロースからなる群から選択される樹脂を用いて実施される、請求項１に記載の方法。
【請求項２０】
前記アニオン交換クロマトグラフィーが、
ａ）洗浄緩衝液：０．５ＭのＮａＯＨ、
ｂ）前平衡化緩衝液：２００ｍＭのクエン酸緩衝液；ｐＨ６．０±０．２、
ｃ）平衡化緩衝液：２０ｍＭのクエン酸緩衝液；ｐＨ６．０±０．２；及び任意には、０．０２５％ポリソルベート８０、
ｄ）保存緩衝液：０．１ＭのＮａＯＨ、
ｅ）線形流速：１０〜５００ｃｍ／時、より特定には１００〜１５０ｃｍ／時、
ｆ）使用されるカラム：ＸＫ２６、
から成る、請求項１に記載の方法。
【請求項２１】
前記アニオン交換クロマトグラフィーが、「フロースルー及び洗浄モード」であるか、又は「結合及び溶出モード」である、請求項１に記載の方法。
【請求項２２】
ウィルス粒子の除去が、１又は２以上のポリエーテルスルホン（ＰＥＳ）に基づくメンブレン、銅アンモニア再生セルロース、ポリエーテルスルホン（ＰＥＳ）、ポリフッ化ビニリデン（ＰＶＤＦ）、ポリエーテルスルホン（ＰＥＳ）、ポリエーテルスルホン（ＰＥＳ）中空繊維メンブレン、及び親水性ポリフッ化ビニリデン（ＰＶＤＦ）を含む群から選択されたウィルス保持フィルターを用いるナノ濾過により達成される、請求項１に記載の方法。
【請求項２３】
前記抗原結合タンパク質が、接線流濾過（ＴＦＦ）を用いて濃縮される、請求項１に記載の方法。
【請求項２４】
前記ＴＦＦが、１又は２以上のオメガポリエーテルスルホン（ＰＥＳ）、ポリフッ化ビニリデン（ＰＶＤＦ）、コンポジット再生セルロース及びポリエーテルスルホンを含む群から選択された３０ｋＤａメンブレンを用いて実施される、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記接線流濾過工程が、
ａ）ダイアフィルトレーション緩衝液を用いてのダイアフィルトレーション：２５ｍＭのヒスチジン緩衝液；７５ｍＭのアルギニン緩衝液；５０〜１５０ｍＭのＮａＣｌ：ｐＨ６．５０±０．５；
ｂ）洗浄緩衝液：０．５ＭのＮａＯＨ；
ｃ）保存緩衝液：０．１ＭのＮａＯＨ；
ｄ）５〜１０倍の膜容量を用いての平衡化；
ｅ）１０〜２０ダイアフィルトレーション容量を用いての濃縮及びダイアフィルトレーション；
ｆ）３〜５膜容量を用いてのＷＦＩ洗浄；
ｇ）０．５〜１．０ＭのＮａＯＨを用いての洗浄；、
ｄ）０．１ＭのＮａＯＨを用いての保存；
から成る、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
精製治療用タンパク質調製物が、２％以下の凝集物、好ましくは１％未満の凝集物を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項２７】
前記安定抗原結合タンパク質製剤が、少なくとも１つの抗原結合タンパク質、少なくとも１つの安定剤、少なくとも１つの緩衝液、少なくとも等張剤及び少なくとも１つの界面活性剤から成る、請求項１に記載の方法。
【請求項２８】
前記安定抗原結合タンパク質製剤が、１ｍｇ／ｍｌ〜１００ｍｇ／ｍｌの抗原結合タンパク質から成る、請求項１に記載の方法。
【請求項２９】
前記安定抗原結合タンパク質製剤が、３％以下の凝集、最小量の目に見えない粒子、及び改善された効力から成る、請求項１〜２８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３０】
前記製剤中の抗原結合タンパク質モノマーの濃度が９９％以上であり；残留ＣＨＯ  ＤＮＡが抗原結合タンパク質１ｍｇ当たり２ｐｇ以下、より特定には、抗原結合タンパク質１ｍｇ当たり０．１ｐｇ以下であり；残留ＣＨＯタンパク質が、抗原結合タンパク質１ｍｇ当たり１００ｎｇ以下、より特定には、抗原結合タンパク質１ｍｇ当たり１０ｎｇ以下であり；残留プロテインＡが、抗原結合タンパク質１ｍｇ当たり１０ｎｇ以下、より特定には、抗原結合タンパク質１ｍｇ当たり１．５ｎｇ以下であり；エンドトキシンは、抗原結合タンパク質１ｍｇ当たり０．１ＥＵ以下である、請求項１に記載の方法。
【請求項３１】
前記製剤が、以下：
−・＜２．５％（ｗ／ｖ）、好ましくは＜１％（ｗ／ｖ）、最も好ましくは０．５％（ｗ／ｖ）のスクロース；
−  １０〜５０ｍＭ；好ましくは２５ｍＭのヒスチジン；
−  １０〜１５０ｍＭ；好ましくは７５ｍＭのアルギニン；
−  ５０〜２５０ｍＭ；好ましくは１００〜１４５ｍＭの塩化ナトリウム；
−  ０．００２〜０．２％（ｗ／ｖ）；好ましくは０．０２％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０；及び
−  １ｍｇ／ｍｌ〜１００ｍｇ／ｍｌ、好ましくは１ｍｇ／ｍｌ〜５０ｍｇ／ｍｌの抗原結合タンパク質；
を含有する、請求項１に記載の方法。
【請求項３２】
請求項１〜３１のいずれ１項に記載の方法に従って得られた製剤。
【請求項３３】
ａ）１〜１００ｍｇ／ｍｌの少なくとも１つの抗原結合タンパク質；
ｂ）２０〜４０ｍＭのヒスチジン；
ｃ）５０〜１００ｍＭのアルギニン；
ｄ）０．００２〜０．０２％のポリソルベート８０（ｗ／ｖ）；
ｅ）５０〜１５０ｍＭのＮａＣｌ；
ｆ）２．５％以下のスクロース（ｗ／ｖ）；
から成る医薬製剤であり、ここでｐＨは、６．５±０．５であり、オスモル濃度は３００〜４５０ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇであり、粘度は２．５ｍＰａ・Ｓ以下であり、そして２〜８℃で少なくとも９ヵ月間、２５℃で少なくとも１ヵ月間、４０℃で少なくとも４０日間、５０℃で少なくとも２日間安定である、医薬製剤。
【請求項３４】
２〜８０ｍｇ／ｍｌの少なくとも１つの抗原結合タンパク質；２５ｍＭのヒスチジン；７５ｍＭのアルギニン；１０１ｍＭのＮａＣｌ；０．０２％のポリソルベート８０（ｗ／ｖ）；及び０．５％のスクロース（ｗ／ｖ）から成り、ｐＨが６．５±０．５である、請求項３３に記載の医薬製剤。
【請求項３５】
前記製剤のオスモル濃度が３８０ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇである、請求項３３又は３４のいずれかに記載の医薬製剤。
【請求項３６】
２〜８０ｍｇ／ｍｌの抗原結合タンパク質；２５ｍＭのヒスチジン；７５ｍＭのアルギニン；１０１ｍＭのＮａＣｌ；０．０２％のポリソルベート８０（ｗ／ｖ）；及び０．５％のスクロース（ｗ／ｖ）から成り、ｐＨが６．５±０．５であり、オスモル濃度が３８０ｍＯｓｍ／ｋｇであり、そして粘度が２．５ｍＰａ・Ｓ以下である、請求項３３〜３５のいずれか１項に記載の医薬製剤。
【請求項３７】
２５ｍｇ／ｍｌの抗原結合タンパク質；２５ｍＭのヒスチジン；７５ｍＭのアルギニン；１０１ｍＭのＮａＣｌ；０．０２％のポリソルベート８０（ｗ／ｖ）；及び０．５％のスクロース（ｗ／ｖ）から成り、ｐＨが６．５±０．５であり、オスモル濃度が３８０ｍＯｓｍ／ｋｇであり、そして粘度が２．５ｍＰａ・Ｓ以下である、請求項３３〜３６のいずれか１項に記載の医薬製剤。
【請求項３８】
５０ｍｇ／ｍｌの抗原結合タンパク質；２５ｍＭのヒスチジン；７５ｍＭのアルギニン；１０１ｍＭのＮａＣｌ；０．０２％のポリソルベート８０（ｗ／ｖ）；及び０．５％のスクロース（ｗ／ｖ）から成り、ｐＨが６．５±０．５であり、オスモル濃度が３８０ｍＯｓｍ／ｋｇであり、そして粘度が２．５ｍＰａ・Ｓ以下である、請求項３３〜３７のいずれか１項に記載の医薬製剤。
【請求項３９】
液体製剤である、請求項３３〜３８のいずれか１項に記載の医薬製剤。
【請求項４０】
デング熱又は狂犬病ウイルスの治療、予防又は診断に用いられる、請求項３３〜３９のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項４１】
請求項３３〜４０のいずれか１項に記載の医薬製剤であって、ボトル、バイアル、アンプル、ＩＶバッグ、ウェアラブルインジェクター、ボーラスインジェクター、シリンジ、ペン、ポンプ、マルチドーズニードルシリンジ、マルチドーズペン、インジェクター、シレット、オートインジェクター、プレ−充填注射器、又はそれらの組み合わせから選択される容器に収納される、医薬製剤。
【請求項４２】
少なくとも１つの一次包装成分が、ポリプロピレン（ＰＰ）、ポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴＧ）、高密度ポリエチレン（ＨＤＰＥ）、ポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）、ポリペンタフルオロスチレン（ＰＦＳ）、ポリカーボネート、ポリ塩化ビニル（ＰＶＣ）、ポリシクロペンタン（ＣＺ）、環状オレフィンコポリマー（ＣＯＣ）、ポリオレフィン、及びそれらの組み合わせ又はコポリマーから選択された容器クロージャーを含む、請求項４１に記載の医薬製剤。
【請求項４３】
高収率及び最小凝集で医薬抗原結合タンパク質を製造する方法であって、前記医薬抗原結合タンパク質が、配列番号１又は配列番号２のデングモノクローナル抗体であり、又は前記医薬抗原結合タンパク質が、配列番号３又は配列番号４の狂犬病モノクローナル抗体であり、当該方法が、以下の工程：
ａ）細胞増殖産生培地中で抗原結合タンパク質を発現する哺乳類細胞を大規模に培養する工程、ここで前記培養工程は、細胞数を効果的に維持し、そして少なくとも２ｇｍ／ｌの収率をもたらし、ここで前記哺乳類細胞の細胞株は、前記医薬抗原結合タンパク質がデングモノクローナル抗体である場合ＣＨＯ−Ｋ１  ＳＶ  ＧＳ−ＫＯであり、又は前記医薬抗原結合タンパク質が、配列番号３及び配列番号４の狂犬病モノクローナル抗体である場合ＧＳ−ＣＨＯである；
ｂ）工程（ａ）で得られた回収上清液からの抗原結合タンパク質を精製する工程、ここで前記精製工程は少なくとも８０％の回収率、及び少なくとも９９％の純度をもたらし、ここで前記精製工程は、順に、親和性クロマトグラフィー、低ｐＨウイルス不活性化、カチオン交換クロマトグラフィー、アニオン交換クロマトグラフィー、ナノ濾過、接線流濾過／限外濾過を含み、前記親和性クロマトグラフィーのマトリックスがプロテインＡである；及び
ｃ）前記医薬抗原結合タンパク質を含有する安定製剤を調製する工程、ここで前記製剤のオスモル濃度が３００〜４００ｍＯｓｍ／ｋｇであり、そして前記製剤の粘度が２．５ｍＰａ・Ｓ未満である；
を含み、前記製剤が、以下
−・＜２．５％（ｗ／ｖ）、好ましくは＜１％（ｗ／ｖ）、最も好ましくは０．５％（ｗ／ｖ）のスクロース；
−  １０〜５０ｍＭ；好ましくは２５ｍＭのヒスチジン；
−  １０〜１５０ｍＭ；好ましくは７５ｍＭのアルギニン；
−  ５０〜２５０ｍＭ；好ましくは１００〜１４５ｍＭの塩化ナトリウム；
−  ０．００２〜０．２％（ｗ／ｖ）；好ましくは０．０２％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０；及び
−  １ｍｇ／ｍｌ〜１００ｍｇ／ｍｌ、好ましくは１ｍｇ／ｍｌ〜５０ｍｇ／ｍｌの抗原結合タンパク質；
を含有する、方法。