【手続補正書】
【提出日】令和3年8月20日(2021.8.20)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒト心室前駆細胞を単離するための方法であって、前記方法が、
心臓前駆細胞を含有するヒト細胞の培養物を、ニューロピリン−１（ＮＲＰ１）と反応性の１つ以上の薬剤と接触させることと、
ＮＲＰ１反応性陽性細胞を、非反応性細胞から分離して、それにより、ヒト心室前駆細胞を単離することと、を含む、方法。
【請求項２】
前記ヒト細胞の培養物が、ヒト心室前駆細胞と反応性の少なくとも１つの第２の薬剤とさらに接触され、ＮＲＰ１反応性／第２の薬剤反応性陽性細胞が、非反応性細胞から分離され、それにより、ヒト心室前駆細胞を単離する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記少なくとも１つの第２の薬剤が、ＪＡＧ１、ＦＺＤ４、ＬＩＦＲ、ＦＧＦＲ３および／またはＴＮＦＳＦ９と反応性である、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記ヒト細胞の培養物が、前記少なくとも１つの第２の薬剤と接触する前に、前記ＮＲＰ１と反応性の薬剤と接触される、請求項２に記載の方法。
【請求項５】
前記ヒト細胞の培養物が、前記ＮＲＰ１と反応性の薬剤と接触する前に、前記少なくとも１つの第２の薬剤と接触される、請求項２に記載の方法。
【請求項６】
前記ヒト細胞の培養物が、前記ＮＲＰ１と反応性の薬剤と、前記少なくとも１つの第２の薬剤とに、同時に接触される、請求項２に記載の方法。
【請求項７】
前記ヒト心室前駆細胞を、ヒト多能性幹細胞の表面上に発現する少なくとも１つのマーカーと反応性の１つ以上の薬剤と接触させることと、マーカーに非反応性の陰性細胞を反応性細胞から分離して、それにより、ヒト心室前駆細胞をさらに単離することと、をさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
ヒト多能性幹細胞の表面上に発現する前記少なくとも１つのマーカーが、ＴＲＡ−１−６０、ＴＲＡ−１−８１、ＴＲＡ−２−５４、ＳＳＥＡ１、ＳＳＥＡ３、ＳＳＥＡ４、ＣＤ９、ＣＤ２４、Ｅ−カドヘリン、およびポドカリキシン、ならびにこれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
ヒト多能性幹細胞の表面上に発現する前記少なくとも１つのマーカーが、ＴＲＡ−１−６０である、請求項７に記載の方法。
【請求項１０】
前記ＴＲＡ−１−６０と反応性の薬剤が、抗ＴＲＡ−１−６０抗体である、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記ＮＲＰ１と反応性の薬剤が、抗ＮＲＰ１抗体である、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
前記ＮＲＰ１と反応性の薬剤が、可溶性ＮＲＰ１リガンド融合タンパク質である、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
前記ＮＲＰ１リガンドが、ＶＥＧＦ−ＡまたはＳｅｍａ３Ａである、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記ＮＲＰ１反応性陽性細胞が、蛍光活性化細胞選別法（ＦＡＣＳ）または磁気活性化細胞選別法（ＭＡＣＳ）によって、前記非反応性細胞から分離される、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
前記ヒト心室前駆細胞が、これらがＭＬＣ２ｖ陽性であるように、さらに培養され、かつ分化される、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
心臓前駆細胞を含有する前記ヒト細胞の培養物が、ヒト誘導多能性幹細胞のヒト胚性幹細胞に由来する、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
ヒト心室前駆細胞を単離するための方法であって、前記方法が、
ヒト多能性幹細胞を、心臓前駆細胞を生成する条件下で培養して、細胞の培養物を得ることと、
前記細胞の培養物を、ニューロピリン−１（ＮＲＰ１）と反応性の１つ以上の薬剤と接触させることと、
ＮＲＰ１反応性陽性細胞を、非反応性細胞から分離して、それにより、ヒト心室前駆細胞を単離することと、を含む、方法。
【請求項１８】
前記ヒト細胞の培養物が、ヒト心室前駆細胞と反応性の少なくとも１つの第２の薬剤とさらに接触され、ＮＲＰ１反応性／第２の薬剤反応性陽性細胞が、非反応性細胞から分離され、それにより、ヒト心室前駆細胞を単離する、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記少なくとも１つの第２の薬剤が、ＪＡＧ１、ＦＺＤ４、ＬＩＦＲ、ＦＧＦＲ３および／またはＴＮＦＳＦ９と反応性である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記ヒト細胞の培養物が、前記少なくとも１つの第２の薬剤と接触する前に、前記ＮＲＰ１と反応性の薬剤と接触される、請求項１８に記載の方法。
【請求項２１】
前記ヒト細胞の培養物が、前記ＮＲＰ１と反応性の薬剤と接触する前に、前記少なくとも１つの第２の薬剤と接触される、請求項１８に記載の方法。
【請求項２２】
前記ヒト細胞の培養物が、前記ＮＲＰ１と反応性の薬剤と、前記少なくとも１つの第２の薬剤とに、同時に接触される、請求項１８に記載の方法。
【請求項２３】
前記ヒト心室前駆細胞を、ヒト多能性幹細胞の表面上に発現する少なくとも１つのマーカーと反応性の１つ以上の薬剤と接触させることと、マーカーに非反応性の陰性細胞を反応性細胞から分離して、それにより、ヒト心室前駆細胞をさらに単離することと、をさらに含む、請求項１７に記載の方法。
【請求項２４】
ヒト多能性幹細胞の表面上に発現する前記少なくとも１つのマーカーが、ＴＲＡ−１−６０、ＴＲＡ−１−８１、ＴＲＡ−２−５４、ＳＳＥＡ１、ＳＳＥＡ３、ＳＳＥＡ４、ＣＤ９、ＣＤ２４、Ｅ−カドヘリン、およびポドカリキシン、ならびにこれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
ヒト多能性幹細胞の表面上に発現する前記少なくとも１つのマーカーが、ＴＲＡ−１−６０である、請求項２３に記載の方法。
【請求項２６】
前記ＴＲＡ−１−６０と反応性の薬剤が、抗ＴＲＡ−１−６０抗体である、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記ＮＲＰ１と反応性の薬剤が、抗ＮＲＰ１抗体である、請求項１７〜２６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２８】
前記ＮＲＰ１と反応性の薬剤が、可溶性ＮＲＰ１リガンド融合タンパク質である、請求項１７〜２６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２９】
前記ＮＲＰ１リガンドが、ＶＥＧＦ−ＡまたはＳｅｍａ３Ａである、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
前記ＮＲＰ１反応性陽性細胞が、蛍光活性化細胞選別法（ＦＡＣＳ）または磁気活性化細胞選別法（ＭＡＣＳ）によって、前記非反応性細胞から分離される、請求項１７〜２９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３１】
前記ヒト心室前駆細胞が、これらがＭＬＣ２ｖ陽性であるように、さらに培養され、かつ分化される、請求項１７〜３０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３２】
心臓前駆細胞を含有する前記ヒト細胞の培養物が、ヒト誘導多能性幹細胞のヒト胚性幹細胞に由来する、請求項１７〜３１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３３】
ヒト心室前駆細胞のクローン集団を得るための方法であって、前記方法が、
ヒト心室前駆細胞の培養物をＮＲＰ１と反応性の１つ以上の薬剤と接触させることによって、単一のＮＲＰ１＋ヒト心室前駆細胞を単離することと、
単一のＮＲＰ１＋ヒト心室前駆細胞が、前記細胞が少なくとも１×１０９個の細胞にまで拡大増殖するような条件下で培養し、それにより、ヒト心室前駆細胞のクローン集団を得ることと、を含む、方法。
【請求項３４】
前記単一のＮＲＰ１＋ヒト心室前駆細胞が、初期培養時に、Ｉｓｌｅｔ１陽性、Ｎｋｘ２．５陰性、およびｆｌｋ１陰性である、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
前記単一のＮＲＰ１＋ヒト心室前駆細胞が、蛍光活性化細胞選別法または磁気活性化細胞選別法によって単離される、請求項３３に記載の方法。
【請求項３６】
前記ＮＲＰ１と反応性の薬剤が、抗ＮＲＰ１抗体である、請求項３３に記載の方法。
【請求項３７】
前記単一のＮＲＰ１＋ヒト心室前駆細胞が、前記細胞を心室分化に偏向させるような条件下で培養される、請求項３３に記載の方法。
【請求項３８】
前記単一のＮＲＰ１＋ヒト心室前駆細胞が、少なくとも１０×１０９個の細胞にまで拡大増殖する、請求項３３に記載の方法。
【請求項３９】
請求項３３に記載の方法によって得られた、少なくとも１×１０９個のＮＲＰ１＋ヒト心室前駆細胞のクローン集団。
【請求項４０】
請求項３８に記載の方法によって得られた、少なくとも１０×１０９個のＮＲＰ１＋ヒト心室前駆細胞のクローン集団。
【請求項４１】
対象の心機能を向上させるための薬学的組成物であって、前記薬学的組成物は、請求項３９に記載のクローン集団を含み、前記薬学的組成物は、前記対象に投与されることを特徴とする、薬学的組成物。
【請求項４２】
前記薬学的組成物が、前記対象の心臓に直接投与されることを特徴とする、請求項４１に記載の薬学的組成物。
【請求項４３】
前記対象が、心筋梗塞に罹患している、請求項４１または４２に記載の薬学的組成物。
【請求項４４】
前記対象が、先天性心臓障害を有する、請求項４１または４２に記載の薬学的組成物。
【請求項４５】
前記薬学的組成物が、前記対象の心臓の心室領域に直接投与されることを特徴とする、請求項４２に記載の薬学的組成物。
【請求項４６】
前記薬学的組成物が、二次元または三次元マトリックス上に製剤化された前記クローン集団を含む、請求項４１〜４５のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項４７】
ヒト心室組織を生成する方法であって、
ＮＲＰ１＋ヒト心室前駆細胞を非ヒト動物の臓器に移植することと、
ヒト心室組織が生成されるように、前駆細胞をインビボで増殖させることと、を含む、方法。
【請求項４８】
前記非ヒト動物が、免疫不全マウスである、請求項４７に記載の方法。
【請求項４９】
前記臓器が、腎臓または心臓である、請求項４７に記載の方法。
【請求項５０】
前記細胞が、以下の、（ｉ）心臓中胚葉形成のピーク後、（ｉｉ）Ｉｓｌｅｔ−１発現のピーク時、（ｉｉｉ）ＮＫＸ２．５発現のピーク前、（ｉｖ）下流遺伝子ＭＥＦ−２およびＴＢＸ−１のピーク発現の前、ならびに（ｖ）分化した収縮タンパク質遺伝子の発現前のうちの細胞マーカーパターンのうちの１つ、２つ、３つ、４つ、または５つが存在する時点で移植される、請求項４７に記載の方法。
【請求項５１】
前記細胞が、ヒト心室前駆細胞を生成する条件下でのヒト多能性幹細胞のインビトロ培養の５日目〜７日目（両端の値を含む）に移植される、請求項４７に記載の方法。
【請求項５２】
前記細胞が、ヒト心室前駆細胞を生成する条件下でのヒト多能性幹細胞のインビトロ培養の６日目に移植される、請求項５１に記載の方法。
【請求項５３】
試験化合物の心臓毒性をスクリーニングする方法であって、
ＮＲＰ１＋ヒト心室前駆細胞を提供することと、
前記細胞を、前記試験化合物と接触させることと、
前記細胞に対する前記試験化合物の毒性を測定することと、を含み、
前記細胞に対する前記試験化合物の毒性が、前記試験化合物の心臓毒性を示す、方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２８】
本発明の他の特徴および利点は、以下の発明を実施するための形態から明らかになるであろう。
特定の実施形態では、例えば、以下が提供される：
（項目１）
ヒト心室前駆細胞を単離するための方法であって、前記方法が、
心臓前駆細胞を含有するヒト細胞の培養物を、ニューロピリン−１（ＮＲＰ１）と反応性の１つ以上の薬剤と接触させることと、
ＮＲＰ１反応性陽性細胞を、非反応性細胞から分離して、それにより、ヒト心室前駆細胞を単離することと、を含む、方法。
（項目２）
前記ヒト細胞の培養物が、ヒト心室前駆細胞と反応性の少なくとも１つの第２の薬剤とさらに接触され、ＮＲＰ１反応性／第２の薬剤反応性陽性細胞が、非反応性細胞から分離され、それにより、ヒト心室前駆細胞を単離する、項目１に記載の方法。
（項目３）
前記少なくとも１つの第２の薬剤が、ＪＡＧ１、ＦＺＤ４、ＬＩＦＲ、ＦＧＦＲ３および／またはＴＮＦＳＦ９と反応性である、項目２に記載の方法。
（項目４）
前記ヒト細胞の培養物が、前記少なくとも１つの第２の薬剤と接触する前に、前記ＮＲＰ１と反応性の薬剤と接触される、項目２に記載の方法。
（項目５）
前記ヒト細胞の培養物が、前記ＮＲＰ１と反応性の薬剤と接触する前に、前記少なくとも１つの第２の薬剤と接触される、項目２に記載の方法。
（項目６）
前記ヒト細胞の培養物が、前記ＮＲＰ１と反応性の薬剤と、前記少なくとも１つの第２の薬剤とに、同時に接触される、項目２に記載の方法。
（項目７）
前記ヒト心室前駆細胞を、ヒト多能性幹細胞の表面上に発現する少なくとも１つのマーカーと反応性の１つ以上の薬剤と接触させることと、マーカーに非反応性の陰性細胞を反応性細胞から分離して、それにより、ヒト心室前駆細胞をさらに単離することと、をさらに含む、項目１に記載の方法。
（項目８）
ヒト多能性幹細胞の表面上に発現する前記少なくとも１つのマーカーが、ＴＲＡ−１−６０、ＴＲＡ−１−８１、ＴＲＡ−２−５４、ＳＳＥＡ１、ＳＳＥＡ３、ＳＳＥＡ４、ＣＤ９、ＣＤ２４、Ｅ−カドヘリン、およびポドカリキシン、ならびにこれらの組み合わせからなる群から選択される、項目７に記載の方法。
（項目９）
ヒト多能性幹細胞の表面上に発現する前記少なくとも１つのマーカーが、ＴＲＡ−１−６０である、項目７に記載の方法。
（項目１０）
前記ＴＲＡ−１−６０と反応性の薬剤が、抗ＴＲＡ−１−６０抗体である、項目９に記載の方法。
（項目１１）
前記ＮＲＰ１と反応性の薬剤が、抗ＮＲＰ１抗体である、項目１〜１０のいずれか一項に記載の方法。
（項目１２）
前記ＮＲＰ１と反応性の薬剤が、可溶性ＮＲＰ１リガンド融合タンパク質である、項目１〜１０のいずれか一項に記載の方法。
（項目１３）
前記ＮＲＰ１リガンドが、ＶＥＧＦ−ＡまたはＳｅｍａ３Ａである、項目１２に記載の方法。
（項目１４）
前記ＮＲＰ１反応性陽性細胞が、蛍光活性化細胞選別法（ＦＡＣＳ）または磁気活性化細胞選別法（ＭＡＣＳ）によって、前記非反応性細胞から分離される、項目１〜１３のいずれか一項に記載の方法。
（項目１５）
前記ヒト心室前駆細胞が、これらがＭＬＣ２ｖ陽性であるように、さらに培養され、かつ分化される、項目１〜１４のいずれか一項に記載の方法。
（項目１６）
心臓前駆細胞を含有する前記ヒト細胞の培養物が、ヒト誘導多能性幹細胞のヒト胚性幹細胞に由来する、項目１〜１５のいずれか一項に記載の方法。
（項目１７）
ヒト心室前駆細胞を単離するための方法であって、前記方法が、
ヒト多能性幹細胞を、心臓前駆細胞を生成する条件下で培養して、細胞の培養物を得ることと、
前記細胞の培養物を、ニューロピリン−１（ＮＲＰ１）と反応性の１つ以上の薬剤と接触させることと、
ＮＲＰ１反応性陽性細胞を、非反応性細胞から分離して、それにより、ヒト心室前駆細胞を単離することと、を含む、方法。
（項目１８）
前記ヒト細胞の培養物が、ヒト心室前駆細胞と反応性の少なくとも１つの第２の薬剤とさらに接触され、ＮＲＰ１反応性／第２の薬剤反応性陽性細胞が、非反応性細胞から分離され、それにより、ヒト心室前駆細胞を単離する、項目１７に記載の方法。
（項目１９）
前記少なくとも１つの第２の薬剤が、ＪＡＧ１、ＦＺＤ４、ＬＩＦＲ、ＦＧＦＲ３および／またはＴＮＦＳＦ９と反応性である、項目１８に記載の方法。
（項目２０）
前記ヒト細胞の培養物が、前記少なくとも１つの第２の薬剤と接触する前に、前記ＮＲＰ１と反応性の薬剤と接触される、項目１８に記載の方法。
（項目２１）
前記ヒト細胞の培養物が、前記ＮＲＰ１と反応性の薬剤と接触する前に、前記少なくとも１つの第２の薬剤と接触される、項目１８に記載の方法。
（項目２２）
前記ヒト細胞の培養物が、前記ＮＲＰ１と反応性の薬剤と、前記少なくとも１つの第２の薬剤とに、同時に接触される、項目１８に記載の方法。
（項目２３）
前記ヒト心室前駆細胞を、ヒト多能性幹細胞の表面上に発現する少なくとも１つのマーカーと反応性の１つ以上の薬剤と接触させることと、マーカーに非反応性の陰性細胞を反応性細胞から分離して、それにより、ヒト心室前駆細胞をさらに単離することと、をさらに含む、項目１７に記載の方法。
（項目２４）
ヒト多能性幹細胞の表面上に発現する前記少なくとも１つのマーカーが、ＴＲＡ−１−６０、ＴＲＡ−１−８１、ＴＲＡ−２−５４、ＳＳＥＡ１、ＳＳＥＡ３、ＳＳＥＡ４、ＣＤ９、ＣＤ２４、Ｅ−カドヘリン、およびポドカリキシン、ならびにこれらの組み合わせからなる群から選択される、項目２３に記載の方法。
（項目２５）
ヒト多能性幹細胞の表面上に発現する前記少なくとも１つのマーカーが、ＴＲＡ−１−６０である、項目２３に記載の方法。
（項目２６）
前記ＴＲＡ−１−６０と反応性の薬剤が、抗ＴＲＡ−１−６０抗体である、項目２５に記載の方法。
（項目２７）
前記ＮＲＰ１と反応性の薬剤が、抗ＮＲＰ１抗体である、項目１７〜２６のいずれか一項に記載の方法。
（項目２８）
前記ＮＲＰ１と反応性の薬剤が、可溶性ＮＲＰ１リガンド融合タンパク質である、項目１７〜２６のいずれか一項に記載の方法。
（項目２９）
前記ＮＲＰ１リガンドが、ＶＥＧＦ−ＡまたはＳｅｍａ３Ａである、項目２８に記載の方法。
（項目３０）
前記ＮＲＰ１反応性陽性細胞が、蛍光活性化細胞選別法（ＦＡＣＳ）または磁気活性化細胞選別法（ＭＡＣＳ）によって、前記非反応性細胞から分離される、項目１７〜２９のいずれか一項に記載の方法。
（項目３１）
前記ヒト心室前駆細胞が、これらがＭＬＣ２ｖ陽性であるように、さらに培養され、かつ分化される、項目１７〜３０のいずれか一項に記載の方法。
（項目３２）
心臓前駆細胞を含有する前記ヒト細胞の培養物が、ヒト誘導多能性幹細胞のヒト胚性幹細胞に由来する、項目１７〜３１のいずれか一項に記載の方法。
（項目３３）
ヒト心室前駆細胞のクローン集団を得るための方法であって、前記方法が、
ヒト心室前駆細胞の培養物をＮＲＰ１と反応性の１つ以上の薬剤と接触させることによって、単一のＮＲＰ１＋ヒト心室前駆細胞を単離することと、
単一のＮＲＰ１＋ヒト心室前駆細胞が、前記細胞が少なくとも１×１０９個の細胞にまで拡大増殖するような条件下で培養し、それにより、ヒト心室前駆細胞のクローン集団を得ることと、を含む、方法。
（項目３４）
前記単一のＮＲＰ１＋ヒト心室前駆細胞が、初期培養時に、Ｉｓｌｅｔ１陽性、Ｎｋｘ２．５陰性、およびｆｌｋ１陰性である、項目３３に記載の方法。
（項目３５）
前記単一のＮＲＰ１＋ヒト心室前駆細胞が、蛍光活性化細胞選別法または磁気活性化細胞選別法によって単離される、項目３３に記載の方法。
（項目３６）
前記ＮＲＰ１と反応性の薬剤が、抗ＮＲＰ１抗体である、項目３３に記載の方法。
（項目３７）
前記単一のＮＲＰ１＋ヒト心室前駆細胞が、前記細胞を心室分化に偏向させるような条件下で培養される、項目３３に記載の方法。
（項目３８）
前記単一のＮＲＰ１＋ヒト心室前駆細胞が、少なくとも１０×１０９個の細胞にまで拡大増殖する、項目３３に記載の方法。
（項目３９）
項目３３に記載の方法によって得られた、少なくとも１×１０９個のＮＲＰ１＋ヒト心室前駆細胞のクローン集団。
（項目４０）
項目３８に記載の方法によって得られた、少なくとも１０×１０９個のＮＲＰ１＋ヒト心室前駆細胞のクローン集団。
（項目４１）
対象の心機能を向上させる方法であって、前記方法が、項目３９に記載のクローン集団を含む薬学的組成物を、前記対象に投与することを含む、方法。
（項目４２）
前記クローン集団が、前記対象の心臓に直接投与される、項目４１に記載の方法。
（項目４３）
前記対象が、心筋梗塞に罹患している、項目４１または４２に記載の方法。
（項目４４）
前記対象が、先天性心臓障害を有する、項目４１または４２に記載の方法。
（項目４５）
前記クローン集団が、前記対象の心臓の心室領域に直接投与される、項目４２に記載の方法。
（項目４６）
前記薬学的組成物が、二次元または三次元マトリックス上に製剤化された前記クローン集団を含む、項目４１〜４５のいずれか一項に記載の方法。
（項目４７）
ヒト心室組織を生成する方法であって、
ＮＲＰ１＋ヒト心室前駆細胞を非ヒト動物の臓器に移植することと、
ヒト心室組織が生成されるように、前駆細胞をインビボで増殖させることと、を含む、方法。
（項目４８）
前記非ヒト動物が、免疫不全マウスである、項目４７に記載の方法。
（項目４９）
前記臓器が、腎臓または心臓である、項目４７に記載の方法。
（項目５０）
前記細胞が、以下の、（ｉ）心臓中胚葉形成のピーク後、（ｉｉ）Ｉｓｌｅｔ−１発現のピーク時、（ｉｉｉ）ＮＫＸ２．５発現のピーク前、（ｉｖ）下流遺伝子ＭＥＦ−２およびＴＢＸ−１のピーク発現の前、ならびに（ｖ）分化した収縮タンパク質遺伝子の発現前のうちの細胞マーカーパターンのうちの１つ、２つ、３つ、４つ、または５つが存在する時点で移植される、項目４７に記載の方法。
（項目５１）
前記細胞が、ヒト心室前駆細胞を生成する条件下でのヒト多能性幹細胞のインビトロ培養の５日目〜７日目（両端の値を含む）に移植される、項目４７に記載の方法。
（項目５２）
前記細胞が、ヒト心室前駆細胞を生成する条件下でのヒト多能性幹細胞のインビトロ培養の６日目に移植される、項目５１に記載の方法。
（項目５３）
試験化合物の心臓毒性をスクリーニングする方法であって、
ＮＲＰ１＋ヒト心室前駆細胞を提供することと、
前記細胞を、前記試験化合物と接触させることと、
前記細胞に対する前記試験化合物の毒性を測定することと、を含み、
前記細胞に対する前記試験化合物の毒性が、前記試験化合物の心臓毒性を示す、方法。