【手続補正書】
【提出日】令和3年5月24日(2021.5.24)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
生体試料中の呼吸に関与する器官の癌幹細胞を単離するインビトロ方法であって：
(a)フコースα1-2ガラクトース基を認識する少なくとも１つのレクチンを用いて呼吸に関与する器官の癌幹細胞を標識付けして、呼吸に関与する器官の癌幹細胞が少なくとも１つのレクチンで標識付けされた生体試料を得るステップであって、前記レクチンがビオチン又はフルオロフォアに接合されている、ステップ；
次に、
(b)少なくとも１つのレクチンを用いて標識付けされた呼吸に関与する器官の前記癌幹細胞を単離するステップであって、前記レクチンがビオチンに接合されている場合、磁気ビーズで構成され、ストレプトアビジン又はアビジンで官能化された支持体を介して磁気の存在下で行われ、前記レクチンがフルオロファアに接合されている場合、フローサイトメトリーでの細胞選別により行われる、単離ステップ
を含むインビトロ単離方法。
【請求項２】
前記フコースα1-2ガラクトース基がフコースα1-2ガラクトースβ1-4 N-アセチルグルコサミン基である、請求項１に記載のインビトロ単離方法。
【請求項３】
前記少なくとも１つのレクチンが、レクチンUEA-I又はそのホモログTJA-II、ABA、ACA、ジャカリン、GSL-I及びGSL-I1から選択され、
特に、UEA-I又はそのホモログTJA-II、ABA、ACA、ジャカリン、GSL-I及びGSL-I1から選択される少なくとも２つのレクチン、特にGSL-IとGSL-IIとの混合物又はUEA-IとGSL-Iとの混合物であり、
特に、UEA-I又はそのホモログTJA-II、ABA、ACA、ジャカリン、GSL-I及びGSL-I1から選択される少なくとも３つのレクチン、特にUEA-IとジャカリンとABAとの混合物又はUEA-IとジャカリンとACAとの混合物である、請求項１に記載のインビトロ単離方法。
【請求項４】
少なくとも２つのレクチンが用いられ、該少なくとも２つのレクチンは等量又は不等量である、請求項１に記載のインビトロ単離方法。
【請求項５】
少なくとも２つのレクチンが用いられ、該少なくとも２つのレクチンが非等モル量であり、
特に、該少なくとも２つのレクチンが重量比2：1、3：1又は4：1の非等モル量のUEA-I及びGSL-Iである、請求項１に記載のインビトロ単離方法。
【請求項６】
前記生体試料が呼吸に関与する器官の生体試料であり、前記呼吸に関与する器官が、肺、喉頭、咽頭、口、鼻、喉、舌、副鼻腔、気管及び唾液腺(扁桃腺及び耳下腺を含む)から選択される、請求項１に記載のインビトロ単離方法。
【請求項７】
前記検出方法の後に、前記生体試料中の呼吸に関与する器官の癌幹細胞を検出する、請求項１に記載のインビトロ単離方法であって、前記検出が
(a)フコースα1-2ガラクトース基を認識する少なくとも１つのレクチンを用いて呼吸に関与する器官の癌幹細胞を標識付けして、呼吸に関与する器官の癌幹細胞が少なくとも１つのレクチンで標識付けされた生体試料を得るステップであって、前記レクチンがフルオロフォア、放射性同位体、酵素、金ビーズ又はビオチンから選択される標識に接合されているステップ；
次に
(b)少なくとも１つのレクチンを用いて標識付けされた呼吸に関与する器官の前記癌幹細胞を検出するステップ
を含む、方法。
【請求項８】
呼吸に関与する器官の癌の治療適応性についての予後予測値を規定するために呼吸に関与する器官の癌の再発リスク及び/又は悪性度の診断を補助するデータを取得する方法であって、
フコースα1-2ガラクトース単位を認識する少なくとも１つのレクチンを用いて呼吸に関与する器官の生体試料中の呼吸に関与する器官の癌幹細胞を標識付けして、前記試料中に、少なくとも１つのレクチンで標識付けされた呼吸に関与する器官の癌幹細胞を得るステップを含む、方法。
【請求項９】
(a)フコースα1-2ガラクトース基を認識する少なくとも１つのレクチンを用いて呼吸に関与する器官の癌幹細胞を標識付けして、前記生体試料中に、少なくとも１つのレクチンを用いて標識付けされた呼吸に関与する器官の癌幹細胞を得るステップであって、前記レクチンがフルオロフォア又はビオチンから選択される標識に接合されている、ステップ、
(b)前記少なくとも１つの接合されたレクチンで標識付けされた呼吸に関与する器官の癌幹細胞の単離ステップであって、
− ビオチンに接合されたレクチンを用いて標識付けた場合、前記単離は、ストレプトアビジン又はアビジンで官能化された支持体を介して行われ、
特に官能化された支持体はストレプトアビジン又はアビジンで官能化された磁気ビーズからなり、前記単離は磁気の存在下で磁気細胞選別により行われるか、又は
− フルオロファアに接合されたレクチンを用いて標識付けた場合、前記単離は、フローサイトメトリーにおける細胞選別により行われる、単離ステップ
(c)フコースα1-2ガラクトース基を認識する少なくとも１つのレクチンを用いて、単離された呼吸に関与する器官の癌幹細胞に新たに標識付けして、単離及び標識付けされた呼吸に関与する器官の癌幹細胞を得るステップであって、前記レクチンがフルオロフォア、放射性同位体、酵素、金ビーズ又はビオチンから選択される標識に接合されている、ステップ
(d)単離及び標識付けされた呼吸に関与する器官の癌幹細胞の検出ステップであって、
− レクチンがフルオロファアに接合されているとき、又はレクチンがビオチンに接合され、ストレプトアビジン若しくはアビジンに接合されたフルオロフォアを介して検出されるとき、蛍光顕微鏡又は蛍光読取装置
− レクチンが化学発光基質を利用する酵素に接合されているとき、又はレクチンがビオチンに接合され、ストレプトアビジン若しくはアビジンに接合された化学発光基質を利用する酵素を介して検出されるとき、発光顕微鏡又は発光読取装置
− レクチンが放射性同位体に接合されているとき、又はレクチンがビオチンに接合され、ストレプトアビジン若しくはアビジンに接合された放射性同位体を介して検出されるとき、ガンマカメラ
− レクチンが発色基質を利用する酵素に接合されているとき、又はレクチンがビオチンに接合され、ストレプトアビジン若しくはアビジンに接合された発色基質を利用する酵素を介して検出されるとき、紫外光/可視光顕微鏡又は吸光読取装置
− レクチンが金ビーズに接合されているとき、又はレクチンがビオチンに接合され、ストレプトアビジン若しくはアビジンに接合された金ビーズを介して検出されるとき、電子顕微鏡
を用いて検出するステップ
(e)場合により、呼吸に関与する器官の癌幹細胞の定量化ステップ
(f)前記生体試料中の呼吸に関与する器官の癌幹細胞の検出強度と、前記生体試料に隣接する健全な試料中の呼吸に関与する器官の癌幹細胞の検出強度との比較ステップであって、
任意に、前記生体試料中の呼吸に関与する器官の癌幹細胞の量と、前記生体試料に隣接する健全な試料中の呼吸に関与する器官の癌幹細胞の量とを比較するステップ
を含む、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
(a)フコースα1-2ガラクトース基を認識する少なくとも１つのレクチンを用いて呼吸に関与する器官の癌幹細胞を標識付けして、前記生体試料中に、少なくとも１つのレクチンを用いて標識付けされた呼吸に関与する器官の癌幹細胞を得るステップであって、前記レクチンがフルオロフォア、放射性同位体、酵素、金ビーズ又はビオチンから選択される標識に接合されている、ステップ、
(b)標識付けされた呼吸に関与する器官の癌幹細胞の検出ステップであって、
− レクチンがフルオロファアに接合されているとき、又はレクチンがビオチンに接合され、ストレプトアビジン若しくはアビジンに接合されたフルオロフォアを介して検出されるとき、蛍光顕微鏡又は蛍光読取装置
− レクチンが化学発光基質を利用する酵素に接合されているとき、又はレクチンがビオチンに接合され、ストレプトアビジン若しくはアビジンに接合された化学発光基質を利用する酵素を介して検出されるとき、発光顕微鏡又は発光読取装置
− レクチンが放射性同位体に接合されているとき、又はレクチンがビオチンに接合され、ストレプトアビジン若しくはアビジンに接合された放射性同位体を介して検出されるとき、ガンマカメラ
− レクチンが発色基質を利用する酵素に接合されているとき、又はレクチンがビオチンに接合され、ストレプトアビジン若しくはアビジンに接合された発色基質を利用する酵素を介して検出されるとき、紫外光/可視光顕微鏡又は吸光読取装置
− レクチンが金ビーズに接合されているとき、又はレクチンがビオチンに接合され、ストレプトアビジン若しくはアビジンに接合された金ビーズを介して検出されるとき、電子顕微鏡
を用いて検出するステップ
(c)場合により、呼吸に関与する器官の癌幹細胞の定量化ステップ
(d)前記生体試料中の呼吸に関与する器官の癌幹細胞の検出強度と、前記生体試料に隣接する健全な試料中の呼吸に関与する器官の癌幹細胞の検出強度との比較ステップであって、
任意に、前記生体試料中の呼吸に関与する器官の癌幹細胞の量と、前記生体試料に隣接する健全な試料中の呼吸に関与する器官の癌幹細胞の量とを比較するステップ
を含む、請求項８に記載の方法。
【請求項１１】
前記フコースα1-2ガラクトース基がフコースα1-2ガラクトースβ1-4 N-アセチルグルコサミン基である、請求項８に記載の方法。
【請求項１２】
前記少なくとも１つのレクチンが、レクチンUEA-I又はそのホモログTJA-II、ABA、ACA、ジャカリン、GSL-I及びGSL-I1から選択され、
特に、UEA-I又はそのホモログTJA-II、ABA、ACA、ジャカリン、GSL-I及びGSL-I1から選択される少なくとも２つのレクチン、特にGSL-IとGSL-IIとの混合物又はUEA-IとGSL-Iとの混合物であり、
特に、UEA-I又はそのホモログTJA-II、ABA、ACA、ジャカリン、GSL-I及びGSL-I1から選択される少なくとも３つのレクチン、特にUEA-IとジャカリンとABAとの混合物又はUEA-IとジャカリンとACAとの混合物である、請求項８に記載の方法。
【請求項１３】
少なくとも２つのレクチンが用いられ、該少なくとも２つのレクチンが等量又は不等量である、請求項８に記載の方法。
【請求項１４】
少なくとも２つのレクチンが用いられ、該少なくとも２つのレクチンが非等モル量であり、
特に、該２つのレクチンが重量比2：1、3：1又は4：1の非等モル量のUEA-I及びGSL-Iである、請求項８に記載の方法。
【請求項１５】
前記生体試料が呼吸に関与する器官の生体試料であり、前記呼吸に関与する器官が、肺、喉頭、咽頭、口、鼻、喉、舌、副鼻腔、気管及び唾液腺(扁桃腺及び耳下腺を含む)から選択される、請求項８に記載の方法。
【請求項１６】
前記癌が肺癌、喉頭癌、咽頭癌、口腔癌、鼻の癌、咽喉癌、舌癌、副鼻腔癌、気管癌及び唾液腺癌(扁桃腺癌及び/又は耳下腺癌など)から選択される、請求項８に記載の方法。
【請求項１７】
呼吸に関与する器官の癌の治療適応性についての予後予測値を規定するための、呼吸に関与する器官の癌の再発リスク及び/又は悪性度のインビトロ診断キットであって、
ビオチンに接合された、フコースα1-2ガラクトース基を認識する少なくとも１つのレクチンと、ストレプトアビジンで官能化された磁気ビーズと、任意成分として、フルオロフォア、放射性同位体、酵素又は金ビーズに接合された、フコースα1-2ガラクトース基を認識する少なくとも１つのレクチンとを含むか、又は、
フルオロフォアに接合された、フコースα1-2ガラクトース基を認識する少なくとも１つのレクチンと、任意成分として、ビオチン、放射性同位体、酵素又は金ビーズに接合された、フコースα1-2ガラクトース基を認識する少なくとも１つのレクチンとを含み、
特に、前記フコースα1-2ガラクトース基がフコースα1-2ガラクトースβ1-4 N-アセチルグルコサミン基である、インビトロ診断キット。
【請求項１８】
前記少なくとも１つのレクチンが、レクチンUEA-I又はそのホモログTJA-II、ABA、ACA、ジャカリン、GSL-I及びGSL-I1から選択され、
特に、UEA-I又はそのホモログTJA-II、ABA、ACA、ジャカリン、GSL-I及びGSL-I1から選択される少なくとも２つのレクチン、特にGSL-IとGSL-IIとの混合物又はUEA-IとGSL-Iとの混合物であり、
特に、UEA-I又はそのホモログTJA-II、ABA、ACA、ジャカリン、GSL-I及びGSL-I1から選択される少なくとも３つのレクチン、特にUEA-IとジャカリンとABAとの混合物又はUEA-IとジャカリンとACAとの混合物である、請求項１７に記載のインビトロ診断キット。
【請求項１９】
少なくとも２つのレクチンが用いられ、該少なくとも２つのレクチンが等量又は不等量である、請求項１７に記載のインビトロ診断キット。
【請求項２０】
少なくとも２つのレクチンが用いられ、該少なくとも２つのレクチンが非等モル量であり、
特に、該２つのレクチンが重量比2：1、3：1又は4：1の非等モル量のUEA-I及びGSL-Iである、請求項１７に記載のインビトロ診断キット。