【手続補正書】
【提出日】令和3年10月1日(2021.10.1)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下を含む、単離された核酸、
（ｉ）以下を含む、導入遺伝子を含む発現構築物
（ａ）配列番号１５に示される配列を含む配列をコードする、β−グルコセレブロシダーゼ（Ｇｃａｓｅ）タンパク質；
および
（ｂ）任意に、阻害性核酸が、配列番号２０に示される配列によってコードされる、α−シヌクレインを標的とする阻害性核酸をコードするコード配列をさらに含む；
および
（ｉｉ）発現構築物に隣接する２つのアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）逆方向末端反復（ＩＴＲ）配列。
【請求項２】
導入遺伝子が、プロモーターに作動可能に連結されている、請求項１に記載の単離された核酸。
【請求項３】
プロモーターが、ニワトリ−ベータアクチン（ＣＢＡ）プロモーターである、請求項２に記載の単離された核酸。
【請求項４】
ＣＭＶエンハンサーをさらに含む、請求項３に記載の単離された核酸。
【請求項５】
ウッドチャック肝炎ウイルスの転写後調節要素（ＷＰＲＥ）をさらに含む、請求項１〜４のいずれか一項に記載の単離された核酸。
【請求項６】
ウシ成長ホルモンポリＡシグナルテールをさらに含む、請求項１〜４のいずれか一項に記載の単離された核酸。
【請求項７】
各ＩＴＲ配列が、野生型ＡＡＶ２  ＩＴＲ配列である、請求項１〜４のいずれか一項に記載の単離された核酸。
【請求項８】
各ＩＴＲ配列が、発現構築物に対して近位の「Ｄ」領域（配列番号２７）を含む、請求項１〜４のいずれか一項に記載の単離された核酸。
【請求項９】
少なくとも１つのＩＴＲ配列が、発現構築物に対してＩＴＲの外側に位置する「Ｄ」領域（配列番号２７）を含む、請求項１〜４のいずれか一項に記載の単離された核酸。
【請求項１０】
発現構築物に対して５’に位置するＩＴＲ配列が、発現構築物に対して近位の「Ｄ」領域（配列番号２７）を含み、および、発現構築物に対して３’に位置するＩＴＲ配列が、発現構築物に対してＩＴＲ配列の外側に位置する「Ｄ」領域（配列番号２７）を含む、請求項１〜４のいずれか一項に記載の単離された核酸。
【請求項１１】
５’ＩＴＲの核酸配列が、配列番号１のヌクレオチド１〜１４５であり、および、３’ＩＴＲの核酸配列が、配列番号１の核のヌクレオチド３８６７〜４０１１である、請求項１０に記載の単離された核酸。
【請求項１２】
５’ＩＴＲと発現構築物との間にＴＲＹ領域をさらに含み、ここで、ＴＲＹ領域が配列番号２８に示される配列を有する、請求項１１に記載の単離された核酸。
【請求項１３】
以下を含む、組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）ベクター：
（ｉ）以下を含む、導入遺伝子を含む発現構築物
（ａ）配列番号１５に示される配列を含む配列をコードする、Ｇｃａｓｅタンパク質；
および
（ｂ）任意に、阻害性核酸が、配列番号２０に示される配列によってコードされる、α−シヌクレインを標的とする阻害性核酸をコードするコード配列をさらに含む；
および
（ｉｉ）発現構築物に隣接する２つのアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）逆方向末端反復（ＩＴＲ）配列。
【請求項１４】
導入遺伝子が、プロモーターに作動可能に連結されている、請求項１３に記載のｒＡＡＶベクター。
【請求項１５】
プロモーターが、ニワトリ−ベータアクチン（ＣＢＡ）プロモーターである、請求項１４に記載のｒＡＡＶベクター。
【請求項１６】
ＣＭＶエンハンサーをさらに含む、請求項１５に記載のｒＡＡＶベクター。
【請求項１７】
ウッドチャック肝炎ウイルスの転写後調節要素（ＷＰＲＥ）をさらに含む、請求項１３〜１６のいずれか一項に記載のｒＡＡＶベクター。
【請求項１８】
ウシ成長ホルモンポリＡシグナルテールをさらに含む、請求項１３〜１６のいずれか一項に記載のｒＡＡＶベクター。
【請求項１９】
各ＩＴＲ配列が、野生型ＡＡＶ２  ＩＴＲ配列である、請求項１３〜１６のいずれか一項に記載のｒＡＡＶベクター。
【請求項２０】
各ＩＴＲ配列が、発現構築物に対して近位の「Ｄ」領域（配列番号２７）を含む、請求項１３〜１６のいずれか一項に記載のｒＡＡＶベクター。
【請求項２１】
少なくとも１つのＩＴＲ配列が、発現構築物に対してＩＴＲの外側に位置する「Ｄ」領域（配列番号２７）を含む、請求項１３〜１６のいずれか一項に記載のｒＡＡＶベクター。
【請求項２２】
発現構築物に対して５’に位置するＩＴＲ配列が、発現構築物に対して近位の「Ｄ」領域（配列番号２７）を含み、および、発現構築物に対して３’に位置するＩＴＲ配列が、発現構築物に対してＩＴＲ配列の外側に位置する「Ｄ」領域（配列番号２７）を含む、請求項１３〜１６のいずれか一項に記載のｒＡＡＶベクター。
【請求項２３】
５’ＩＴＲの核酸配列が、配列番号１のヌクレオチド１〜１４５であり、および、３’ＩＴＲの核酸配列が、配列番号１の核のヌクレオチド３８６７〜４０１１である、請求項２２に記載のｒＡＡＶベクター。
【請求項２４】
５’ＩＴＲと発現構築物との間にＴＲＹ領域をさらに含み、ここで、ＴＲＹ領域が配列番号２８に示される配列を有する、請求項２３に記載のｒＡＡＶベクター。
【請求項２５】
以下を含む、組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）：
（ｉ）アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）カプシドタンパク質；
および
（ii）請求項１３〜１６のいずれか一項に記載のｒＡＡＶベクター。
【請求項２６】
ＡＡＶカプシドタンパク質が、ＡＡＶ９カプシドタンパク質である、請求項２５に記載のｒＡＡＶ。
【請求項２７】
３’から５’の順番で、以下を含む核酸を含む、組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）ベクター：
（ａ）５’アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）逆方向末端反復（ＩＴＲ）；
（ｂ）ＣＭＶエンハンサー；
（ｃ）ニワトリベータアクチン（ＣＢＡ）プロモーター；
（ｄ）配列番号１５に示される配列を含む配列をコードするβ−グルコセレブロシダーゼ（Ｇｃａｓｅ）タンパク質を含む、および任意に、阻害性核酸が、配列番号２０に示される配列によってコードされる、α−シヌクレインを標的とする阻害性核酸をコードするコード配列をさらに含む、導入遺伝子；
（ｅ）ウッドチャック肝炎ウイルスの転写後調節要素（ＷＰＲＥ）；
（ｆ）ウシ成長ホルモンポリＡシグナルテール；
および
（ｇ）３’ＡＡＶ  ＩＴＲ。
【請求項２８】
以下を含む、組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）：
（ｉ）アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）カプシドタンパク質；
および
（ｉｉ）請求項２７に記載のｒＡＡＶベクター。
【請求項２９】
ＡＡＶカプシドタンパク質が、ＡＡＶ９カプシドタンパク質である、請求項２８に記載のｒＡＡＶ。
【請求項３０】
請求項１３〜２４、および２７のいずれか一項に記載のｒＡＡＶベクターを含む、プラスミド。
【請求項３１】
以下を含む、バキュロウイルスベクター
（ｉ）配列番号１５に示される配列、
および
（ｉｉ）任意に、阻害性核酸が、配列番号２０に示される配列によってコードされる、α−シヌクレインを標的とする阻害性核酸をコードするコード配列をさらに含む。
【請求項３２】
以下を含む、細胞：
（ｉ）１つ以上のアデノ随伴ウイルスrepタンパク質、および／または、１つ以上のアデノ随伴ウイルスcapタンパク質をコードする第1のベクター；
および
（ｉｉ）配列番号１５に示される配列を含む配列をコードするβ−グルコセレブロシダーゼ（Ｇｃａｓｅ）タンパク質を含む、および任意に、阻害性核酸が、配列番号２０に示される配列によってコードされる、α−シヌクレインを標的とする阻害性核酸をコードするコード配列をさらに含む、第２のベクター。
【請求項３３】
第1のベクターが、プラスミドであり、および、第２のベクターが、プラスミドである、請求項３２に記載の細胞。
【請求項３４】
哺乳動物細胞である、請求項３２または３３に記載の細胞。
【請求項３５】
哺乳動物細胞が、ＨＥＫ２９３細胞である、請求項３４に記載の細胞。
【請求項３６】
第1のベクターが、バキュロウイルスベクターであり、および、第２のベクターが、バキュロウイルスベクターである、請求項３２に記載の細胞。
【請求項３７】
昆虫細胞である、請求項３２または３６に記載の細胞。
【請求項３８】
以下を含む、請求項２５、２６、２８、および２９のいずれか一項に記載の組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）を生成する方法：
（ｉ）細胞に、１つ以上のアデノ随伴ウイルスrepタンパク質、および／または、１つ以上のアデノ随伴ウイルスcapタンパク質をコードする第1のベクター、および配列番号15で示される配列を含むコード配列をコードするβ−グルコセレブロシダーゼ（Ｇｃａｓｅ）タンパク質を含む発現構築物を含むｒＡＡＶベクターを送達すること；
および
任意に、阻害性核酸が、配列番号２０に示される配列によってコードされる、α−シヌクレインを標的とする阻害性核酸をコードするコード配列をさらに含む；
(ii)ｒＡＡＶのパッケージングを可能にする条件の下で細胞を培養すること；
および
(iii)ｒＡＡＶの収集のために培養宿主細胞または培養培地を回収すること。
【請求項３９】
パーキンソン病、ゴーシェ病、またはレビー小体型認知症を有するかまたは有すると疑われる対象を処置するための薬物の製造における、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の単離された核酸、請求項１３〜２４および２７のいずれか一項に記載のｒＡＡＶベクター、または請求項２５、２６、２８、および２９のいずれか一項に記載のｒＡＡＶの使用。
【請求項４０】
薬物が、対象のＣＮSへの直接注射のために製剤化される、請求項３9に記載の使用。
【請求項４１】
対象のＣＮSに対する直接注射が、脳内注射、実質内注射、髄腔内注射、大槽内注射、またはそれらの任意の組み合わせである、請求項４０に記載の使用。
【請求項４２】
対象のＣＮSに対する直接注射が、対流強化送達（ＣＥＤ）を含む、請求項４０に記載の使用。
【請求項４３】
薬物が、末梢注射のために製剤化され、ここで任意に、末梢注射が、静脈内注射である、請求項３９に記載の使用。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００９０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００９０】
均等物
本出願には、以下の文献の内容全体が参照により組み込まれる：２０１８年１０月３日に提出された代理人整理番号P1094.70003WO00により参照される国際ＰＣＴ出願；２０１８年１０月３日に提出された代理人整理番号P1094.70004WO00により参照される国際ＰＣＴ出願；２０１７年１０月３日に提出された米国仮出願第62/567,311号、表題「ライソゾーム病の遺伝子治療」；２０１７年１０月３日に提出された第62/567,319号、表題「ライソゾーム病の遺伝子治療」；２０１７年１０月３日に提出された第62/567,301号、表題「ライソゾーム病の遺伝子治療」；２０１７年１０月３日に提出された第62/567,310号、表題「ライソゾーム病の遺伝子治療」；２０１７年１０月３日に提出された第62/567,303号、表題「ライソゾーム病の遺伝子治療」；および２０１７年１０月３日に提出された第62/567,305号、表題「ライソゾーム病の遺伝子治療」。