【手続補正書】
【提出日】令和3年3月5日(2021.3.5)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくとも２種の可溶性タンパク質を含む単離された可溶性融合タンパク質複合体であって、
第１可溶性タンパク質は、インターロイキン−１５（ＩＬ−１５）ドメイン及びＩＬ−１２ドメインを含み、前記ＩＬ−１５ドメイン及び前記ＩＬ−１２ドメインはそれぞれ実質的に配列番号８と同一であり、及び
第２可溶性タンパク質は、ＩＬ−１８ドメイン、及びホモ二量体免疫グロブリン結晶化可能断片（Ｆｃ）ドメインに融合された可溶性ＩＬ−１５受容体アルファｓｕｓｈｉ結合ドメイン（ＩＬ−１５ＲαＳｕ）を含み、前記ＩＬ―１８ドメイン及び前記ＩＬ−１５ＲαＳｕドメインはそれぞれ実質的に配列番号６と同一であり、
前記ホモ二量体免疫グロブリンＦｃドメインは、ジスルフィド結合により共有結合された２つの単量体を含み、
前記第１可溶性タンパク質の前記ＩＬ−１５ドメインは、前記第２可溶性タンパク質の前記ＩＬ−１５ＲαＳｕドメインに結合して可溶性融合タンパク質複合体を形成する、単離された可溶性融合タンパク質複合体。
【請求項２】
前記ＩＬ−１２ドメインは、ＩＬ−１２のｐ４０及びｐ３５サブユニットを含む、請求項１に記載の可溶性融合タンパク質複合体。
【請求項３】
ＩＬ−１２の前記ｐ４０及びｐ３５サブユニットは、可動性のポリペプチドリンカーによって一本鎖フォーマット内に連結されている、請求項２に記載の可溶性融合タンパク質複合体。
【請求項４】
前記第１可溶性タンパク質は、配列番号８に規定されたアミノ酸配列を含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の可溶性融合タンパク質複合体。
【請求項５】
前記第２可溶性タンパク質は、配列番号６に規定されたアミノ酸配列を含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の可溶性融合タンパク質複合体。
【請求項６】
前記第１可溶性タンパク質は、前記第１可溶性タンパク質のＦｃドメインを前記第２可溶性タンパク質のＦｃドメインに連結するジスルフィド結合によって前記第２可溶性タンパク質に共有結合されている、請求項１に記載の可溶性融合タンパク質複合体。
【請求項７】
前記第１又は第２可溶性タンパク質は、疾患抗原及び／又は免疫チェックポイント若しくはシグナル伝達分子に結合する結合ドメインをさらに含む、請求項１に記載の可溶性融合タンパク質複合体。
【請求項８】
前記疾患抗原は、新生物又は感染性疾患に関連している、請求項７に記載の可溶性融合タンパク質複合体。
【請求項９】
少なくとも２種の可溶性タンパク質を含む単離された可溶性融合タンパク質複合体であって、
第１可溶性タンパク質は、インターロイキン−１５（ＩＬ−１５）ドメイン及びＩＬ−１８ドメインを含み、前記ＩＬ−１５ドメイン及び前記ＩＬ−１８ドメインはそれぞれ実質的に配列番号４と同一であり、及び
第２可溶性タンパク質は、ＩＬ−１２ドメイン、及びホモ二量体免疫グロブリン結晶化可能断片（Ｆｃ）ドメインに融合された可溶性ＩＬ−１５受容体アルファｓｕｓｈｉ結合ドメイン（ＩＬ−１５ＲαＳｕ）を含み、
ＩＬ―１２ドメイン及びＩＬ−１５ＲαＳｕドメインはそれぞれ実質的に配列番号２と同一であり、
前記ホモ二量体免疫グロブリンＦｃドメインは、ジスルフィド結合により共有結合された２つの単量体を含み、
前記第１可溶性タンパク質の前記ＩＬ−１５ポリペプチドドメインは、前記第２可溶性タンパク質の前記ＩＬ−１５ＲαＳｕドメインに結合して可溶性融合タンパク質複合体を形成する、単離された可溶性融合タンパク質複合体。
【請求項１０】
前記ＩＬ−１２ドメインは、ＩＬ−１２のｐ４０及びｐ３５サブユニットを含む、請求項９に記載の可溶化融合タンパク質複合体。
【請求項１１】
ＩＬ−１２の前記ｐ４０及びｐ３５サブユニットは、フレキシブルなポリペプチドリンカーによって一本鎖フォーマット内に連結されている、請求項１０に記載の可溶化融合タンパク質複合体。
【請求項１２】
前記第１可溶性タンパク質は、配列番号４に規定されたアミノ酸配列を含む、請求項９〜１１のいずれか一項に記載の可溶化融合タンパク質複合体。
【請求項１３】
前記第２可溶性タンパク質は、配列番号２に規定されたアミノ酸配列を含む、請求項９〜１１のいずれか一項に記載の可溶化融合タンパク質複合体。
【請求項１４】
前記第１可溶性タンパク質は、前記第１可溶性タンパク質のＦｃドメインを前記第２可溶性タンパク質のＦｃドメインに連結するジスルフィド結合によって前記第２可溶性タンパク質に共有結合されている、請求項９に記載の可溶化タンパク質複合体。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００６】
したがって、少なくとも２種の可溶性タンパク質を含む単離された可溶性融合タンパク質複合体が提供される。例えば、第１タンパク質は、ＩＬ−１５ポリペプチド、例えばＮ７２Ｄ突然変異を含む変異ＩＬ−１５ポリペプチド（ＩＬ−１５Ｎ７２Ｄ）を含む。第２タンパク質は、免疫グロブリンＦｃドメイン（ＩＬ−１５ＲαＳｕ／Ｆｃ）に融合された可溶性ＩＬ−１５受容体アルファｓｕｓｈｉ結合ドメイン（ＩＬ−１５ＲαＳｕ）を含む。単離された可溶性融合タンパク質複合体の第３成分は、ＩＬ−１２の結合ドメインを含み、ここで、ＩＬ−１２結合ドメインは、ＩＬ−１５Ｎ７２Ｄ又はＩＬ−１５ＲαＳｕ／Ｆｃタンパク質のいずれかに融合されている。単離された可溶性融合タンパク質複合体の第４成分は、ＩＬ−１８の結合ドメインを含み、ここで、ＩＬ−１８結合ドメインは、ＩＬ−１５Ｎ７２Ｄ又はＩＬ−１５ＲαＳｕ／Ｆｃタンパク質のいずれかに融合されている。一部の場合、ＩＬ−１２及び／又はＩＬ−１８結合ドメインは、ＩＬ−１５Ｎ７２Ｄ及びＩＬ−１５ＲαＳｕ／Ｆｃタンパク質の両方に融合されている。他の場合、ＩＬ−１２又はＩＬ−１８結合ドメインのいずれかは、ＩＬ−１５Ｎ７２Ｄ又はＩＬ−１５ＲαＳｕ／Ｆｃタンパク質に融合されており、別の結合ドメインは、他のタンパク質に融合されている。他の場合、この複合体は、ＩＬ−１２を含まないＩＬ−１５Ｎ７２Ｄ：ＩＬ−１５ＲαＳｕ−Ｉｇ  Ｆｃスカフォールドに融合されたＩＬ−１８結合ドメイン又はＩＬ−１２を含まないＩＬ−１５Ｎ７２Ｄ：ＩＬ−１５ＲαＳｕ−Ｉｇ  Ｆｃスカフォールドに融合されたＩＬ−１８結合ドメインを含む。融合は、タンパク質のＮ末端又はＣ末端で作成され得る。ＩＬ−１２タンパク質は、ｐ４０及びｐ３５のＩＬ−１２サブユニットのヘテロ二量体を含み得る。代わりに、ＩＬ−１２タンパク質は、ｐ４０及びｐ３５のサブユニットが可動性のポリペプチドリンカーによって連結されている一本鎖フォーマットを含み得る。一本鎖ＩＬ−１２は、ｐ３５のＮ末端に連結されたｐ４０のＣ末端又はｐ４０のＮ末端に連結されたｐ３５のＣ末端のいずれかを含み得る。典型的な融合タンパク質複合体は、ＩＬ−１５Ｎ７２Ｄに共有結合されたＩＬ−１８ポリペプチド及びＩＬ−１５ＲαＳｕ／Ｆｃ融合タンパク質に共有結合された一本鎖ＩＬ−１２ポリペプチドを含む。代わりに、融合タンパク質複合体は、ＩＬ−１５Ｎ７２Ｄに共有結合された一本鎖ＩＬ−１２ポリペプチド及びＩＬ−１５ＲαＳｕ／Ｆｃ融合タンパク質に共有結合されたＩＬ−１８ポリペプチドを含む（図１Ａ、１Ｂ）。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３４】
１つの実施形態では、ＩＬ−１２結合ドメインは、ＩＬ−１２のｐ４０及びｐ３５のサブユニットを含む。１つの実施形態では、ＩＬ−１２のｐ４０及びｐ３５のサブユニットは、可動性のポリペプチドリンカーによって一本鎖フォーマット内に連結される。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１２９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１２９】
ＩＬ−１２は、αサブユニット（ｐ３５）及びβサブユニット（ｐ４０）からなるジスルフィド結合ヘテロ二量体であり、ここで、αサブユニットは、４ヘリックスバンドルの長鎖サイトカインからなり、βサブユニットは、ＩＬ−６ファミリーの非シグナル伝達受容体と相同である。ＩＬ−１２の結晶構造及び突然変異誘発分析は、サブユニット相互作用のために重要なｐ３５／ｐ４０界面でのアミノ酸残基を規定した（Ｙｏｏｎ，ｅｔ  ａｌ．．２０００，ＥＭＢＯ  Ｊ．９，３５３０−３５４）。例えば、ｐ３５における重要なアルギニン残基（Ｒ１８９）は、Ｒ１８９側鎖がｐ４０上の親水性ポケット内に埋め込まれるようにｐ４０内のアスパラギン酸（Ｄ２９０）と相互作用する。さらに、ｐ４０における構造変化は、これらの相互作用を最適化する際に重要な可能性がある。この情報に基づき、改善されたサブユニット相互作用を示すアミノ酸変化を含有するＩＬ−１２変異体を生成し得る。さらに、ｐ４０のＮ末端に連結したｐ３５のＣ末端を通して又はその逆を通してのいずれかで可動性リンカーによってｐ４０サブユニットに連結されたｐ３５サブユニットからなるＩＬ−１２の一本鎖形を生成し得る。そのような変異体は、ＩＬ−１２結合ドメインの発現、サブユニット相互作用及び／又は安定性を最適化するために本発明の融合タンパク質複合体中に組み込まれ得る。同様に、遺伝子発現、翻訳、翻訳後修飾及び／又は分泌を改善するためにＩＬ−１２遺伝子及び発現構築物を修飾し得る（すなわちコドン最適化、二次構造の除去）。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１４７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１４７】
リンカー
一部の場合、本発明の融合タンパク質複合体は、ＩＬ−１５又はＩＬ−１５Ｒαドメインと、ＩＬ−１２及び／若しくはＩＬ−１８結合ドメイン又はＩＬ−１２サブユニットとの間に挿入された可動性リンカー配列も含む。リンカー配列は、ＩＬ−１５又はＩＬ−１５Ｒαドメインの両方の機能的活性を可能にするため、それらに関してポリペプチドの有効な配置を可能にしなければならない。代わりに、リンカーは、機能的ＩＬ−１２結合ドメインの形成を可能にしなければならない。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１５０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１５０】
本発明の融合タンパク質複合体は、好ましくは、ＩＬ−１５又はＩＬ−１５Ｒαドメインと免疫グロブリンＦｃドメインとの間に挿入された可動性リンカー配列も含む。リンカー配列は、各ドメインの機能的活性を可能にするため、Ｆｃドメイン、生物活性ポリペプチド及びＩＬ−１５又はＩＬ−１５Ｒαドメインの効果的な配置を可能にしなければならない。例えば、Ｆｃドメインは、オプソニン作用、細胞溶解、肥満細胞、好塩基球及び好酸球の脱顆粒並びに他のＦｃ受容体依存性プロセス；補体経路の活性化；並びに融合タンパク質複合体のインビボ半減期の増強を含むＦｃ媒介性作用を刺激するために、適正な融合タンパク質複合体の形成及び／又は免疫細胞上のＦｃ受容体若しくは補体系のタンパク質との相互作用を可能にするように効果的に配置される。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１５２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１５２】
好ましくは、リンカー配列は、約７〜２０個のアミノ酸，より好ましくは約１０〜２０個のアミノ酸を含む。リンカー配列は、好ましくは、単一の望ましくない立体配座に生物活性ポリペプチド又はエフェクター分子を保持することがないように可動性である。リンカー配列は、例えば、認識部位を融合分子から間隔を空けるために使用できる。詳細には、ペプチドリンカー配列は、例えば、同一物を化学的に架橋結合するため及び分子の可動性を提供するために生物活性ポリペプチドとエフェクター分子との間に配置され得る。リンカーは、好ましくは、主として、可動性を提供するために、グリシン、アラニン及びセリンなどの短い側鎖を有するアミノ酸を含む。好ましくは、リンカー配列の約８０又は９０％以上がグリシン、アラニン又はセリン残基、特にグリシン及びセリン残基を含む。
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１５３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１５３】
抗体可変領域を一緒に接合するために使用されるのに成功してきた多数の可動性リンカー設計のいずれかを含む、様々なリンカー配列を使用し得る（例えば、Ｗｈｉｔｌｏｗ，Ｍ．ｅｔ  ａｌ．，（１９９１）Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ａ  Ｃｏｍｐａｎｉｏｎ  ｔｏ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，２：９７−１０５を参照されたい）。
【手続補正９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２２２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２２２】
詳細には、ＩＬ−１２及び／又はＩＬ−１８ドメインをＩＬ−１５Ｎ７２Ｄ及びＩＬ−１５ＲαＳｕ／Ｆｃ鎖に連結する構築物を作成した。ＩＬ−１２の場合、成熟サイトカインは、活性一本鎖形を生成するために可動性リンカーを介して連結され得る２つのポリペプチドサブユニット（ｐ４０及びｐ３５）からなる。一部の場合、ＩＬ−１２又はＩＬ−１８ポリペプチドのいずれかがＩＬ−１５Ｎ７２Ｄ及び／又はＩＬ−１５ＲαＳｕ／Ｆｃ鎖のＮ末端に連結されている。他の場合、ＩＬ−１２又はＩＬ−１８ポリペプチドは、ＩＬ−１５Ｎ７２Ｄ及び／又はＩＬ−１５ＲαＳｕ／Ｆｃ鎖のＮ末端に連結されている。ＩＬ−１２及び／又はＩＬ−１８結合ドメインに融合されたＩＬ−１５Ｎ７２Ｄ：ＩＬ−１５ＲαＳｕ／Ｆｃスカフォールドを含む特異的融合タンパク質複合体について下記で記載する。
【手続補正１０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２６２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２６２】
本発明をその好ましい実施形態を参照して具体的に示すと共に説明してきたが、添付の特許請求の範囲に包含される本発明の範囲から逸脱しない限り、様式及び詳細について多様な変更形態が可能であることが当業者に理解されるであろう。
本発明は以下の実施形態を含む。
［１］
少なくとも２種の可溶性タンパク質を含む単離された可溶性融合タンパク質複合体であって、
第１可溶性タンパク質は、インターロイキン−１５（ＩＬ−１５）ポリペプチドドメインを含み、及び第２可溶性タンパク質は、免疫グロブリンＦｃドメインに融合された可溶性ＩＬ−１５受容体アルファｓｕｓｈｉ結合ドメイン（ＩＬ−１５ＲαＳｕ）を含み、
前記第１又は第２可溶性タンパク質は、ＩＬ−１８結合ドメイン又はその機能的断片をさらに含み、
前記第１又は第２可溶性タンパク質は、ＩＬ−１２結合ドメイン又はその機能的断片をさらに含み、
前記第１可溶性タンパク質の前記ＩＬ−１５ポリペプチドドメインは、前記第２可溶性タンパク質の前記ＩＬ−１５ＲαＳｕドメインに結合して可溶性融合タンパク質複合体を形成する、単離された可溶性融合タンパク質複合体。
［２］
前記ＩＬ−１５ポリペプチドは、Ｎ７２Ｄ突然変異を含むＩＬ−１５変異体（ＩＬ−１５Ｎ７２Ｄ）である、［１］に記載の可溶性融合タンパク質複合体。
［３］
前記ＩＬ−１２結合ドメインは、ＩＬ−１２のｐ４０及びｐ３５サブユニットを含む、［１］に記載の可溶性融合タンパク質複合体。
［４］
ＩＬ−１２の前記ｐ４０及びｐ３５サブユニットは、可撓性ポリペプチドリンカーによって一本鎖フォーマット内に連結されている、［３］に記載の可溶性融合タンパク質複合体。
［５］
前記第１可溶性タンパク質は、配列番号２又は６の１つに規定されたアミノ酸配列を含む、［２］〜［４］のいずれか一項に記載の可溶性融合タンパク質複合体。
［６］
前記第２可溶性タンパク質は、配列番号４又は８の１つに規定されたアミノ酸配列を含む、［２］〜［４］のいずれか一項に記載の可溶性融合タンパク質複合体。
［７］
［１］に記載の第２可溶性融合タンパク質複合体に共有結合されている、［１］に記載の第１可溶性融合タンパク質複合体を含む可溶性融合タンパク質複合体。
［８］
前記第１可溶性融合タンパク質複合体は、前記第１可溶性融合タンパク質複合体のＦｃドメインを前記第２可溶性融合タンパク質複合体のＦｃドメインに連結するジスルフィド結合によって前記第２可溶性融合タンパク質複合体に共有結合されている、［７］に記載の可溶性融合タンパク質複合体。
［９］
前記第１又は第２可溶性タンパク質は、疾患抗原及び／又は免疫チェックポイント若しくはシグナル伝達分子に結合する結合ドメインをさらに含む、［１］に記載の可溶性融合タンパク質複合体。
［１０］
前記疾患抗原は、新生物又は感染性疾患に関連している、［９］に記載の可溶性融合タンパク質複合体。
［１１］
［５］に記載の第１可溶性タンパク質をコードする核酸配列であって、配列番号１又は５の１つに規定された配列を含む核酸配列。
［１２］
前記可溶性タンパク質をコードする前記配列に機能的に連結されたプロモーター、翻訳開始シグナル及びリーダー配列をさらに含む、［１１］に記載の核酸配列。
［１３］
［６］に記載の第２可溶性タンパク質をコードする核酸配列であって、配列番号３又は７の１つに規定された配列を含む核酸配列。
［１４］
前記可溶性タンパク質をコードする前記配列に機能的に連結されたプロモーター、翻訳開始シグナル及びリーダー配列をさらに含む、［１３］に記載の核酸配列。
［１５］
［１１］及び／又は［１３］に記載の核酸配列を含むＤＮＡベクター。
［１６］
免疫機能を増強するための方法であって、
ａ）複数の細胞を［１］〜［１０］のいずれか一項に記載の可溶性融合タンパク質複合体と接触させる工程であって、前記複数の細胞は、前記ＩＬ−１５ポリペプチドドメインに結合するＩＬ−１５Ｒ鎖、前記ＩＬ−１２ドメインに結合するＩＬ−１２Ｒ鎖及び／又は前記ＩＬ−１８ドメインに結合するＩＬ−１８Ｒ鎖を含む免疫細胞をさらに含む、工程と、
ｂ）前記ＩＬ−１５Ｒ、ＩＬ−１２Ｒ及び／又はＩＬ−１８Ｒのシグナル伝達を介して前記免疫細胞を活性化する工程と
を含む方法。
［１７］
標的細胞を殺傷するための方法であって、
ａ）複数の細胞を［１］〜［１０］のいずれか一項に記載の可溶性融合タンパク質複合体と接触させる工程であって、前記複数の細胞は、前記ＩＬ−１５ポリペプチドドメインに結合するＩＬ−１５Ｒ鎖、前記ＩＬ−１２ドメインに結合するＩＬ−１２Ｒ鎖及び／又は前記ＩＬ−１８ドメインに結合するＩＬ−１８Ｒ鎖を含む免疫細胞と、標的疾患細胞とをさらに含む、工程と、
ｂ）前記ＩＬ−１５Ｒ、ＩＬ−１２Ｒ及び／又はＩＬ−１８Ｒのシグナル伝達を介して前記免疫細胞を活性化する工程と、
ｃ）前記活性化免疫細胞によって前記標的疾患細胞を殺傷する工程と
を含む方法。
［１８］
前記標的細胞は、腫瘍細胞又は感染細胞である、［１７］に記載の方法。
［１９］
対象における免疫応答を増強する方法であって、
ａ）複数の細胞を［１］〜［１０］のいずれか一項に記載の可溶性融合タンパク質複合体と接触させる工程であって、前記複数の細胞は、前記ＩＬ−１５ポリペプチドドメインに結合するＩＬ−１５Ｒ鎖、前記ＩＬ−１２ドメインに結合するＩＬ−１２Ｒ鎖及び／又は前記ＩＬ−１８ドメインに結合するＩＬ−１８Ｒ鎖を含む免疫細胞をさらに含む、工程と、
ｂ）前記ＩＬ−１５Ｒ、ＩＬ−１２Ｒ及び／又はＩＬ−１８Ｒのシグナル伝達を介して前記免疫細胞を活性化する工程と、
ｃ）前記活性化免疫細胞を患者に投与する（又は養子移入する）工程と、
ｄ）前記患者における免疫応答を増強する工程と
を含む方法。
［２０］
患者における疾患を予防又は治療する方法であって、
ａ）複数の細胞を［１］〜［１０］のいずれか一項に記載の可溶性融合タンパク質複合体と接触させる工程であって、前記複数の細胞は、前記ＩＬ−１５ドメインに結合するＩＬ−１５Ｒ鎖、前記ＩＬ−１２ドメインに結合するＩＬ−１２Ｒ鎖及び／又は前記ＩＬ−１８ドメインによって認識されるＩＬ−１８Ｒ鎖を含む免疫細胞をさらに含む、工程と、
ｂ）前記ＩＬ−１５Ｒ、ＩＬ−１２Ｒ及び／又はＩＬ−１８Ｒのシグナル伝達を介して前記免疫細胞を活性化する工程と、
ｃ）有効量の前記活性化免疫細胞を前記患者に投与する（又は養子移入する）工程と、
ｄ）前記患者における前記疾患を予防又は治療するために十分な前記活性化免疫細胞を介して疾患細胞を損傷又は殺傷する工程と
を含む方法。
［２１］
前記疾患は、新生物又は感染性疾患である、［２０］に記載の方法。
［２２］
対象における免疫応答を増強する方法であって、有効量の［１］〜［１０］のいずれか一項に記載の可溶性融合タンパク質複合体を前記対象に投与する工程を含む方法。
［２３］
新生物又は感染性疾患の治療を、それを必要とする対象において行うための方法であって、［１］〜［１０］のいずれか一項に記載の可溶性融合タンパク質複合体を含む有効量の医薬組成物を前記対象に投与し、それにより前記新生物又は感染性疾患を治療する工程を含む方法。
［２４］
前記新生物は、膠芽腫、前立腺癌、血液学的癌、Ｂ細胞新生物、多発性骨髄腫、Ｂ細胞リンパ腫、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、慢性リンパ球性白血病、急性骨髄性白血病、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、固形腫瘍、尿路上皮／膀胱癌、黒色腫、肺癌、腎細胞癌、乳癌、胃食道癌、前立腺癌、膵臓癌、結腸直腸癌、卵巣癌、非小細胞肺癌及び扁平上皮頭頚部癌からなる群から選択される、［２１］又は［２３］に記載の方法。
［２５］
前記免疫細胞は、ＮＫ細胞又はサイトカイン誘導性メモリー様（ＣＩＭＬ）ＮＫ細胞である、［１６］〜［２１］のいずれか一項に記載の方法。
［２６］
前記活性化免疫細胞の前記有効量は、１×１０４細胞／ｋｇ〜１×１０１０細胞／ｋｇである、［２０］に記載の方法。
［２７］
前記免疫細胞は、少なくとも週１回投与される、［２０］に記載の方法。
［２８］
前記有効量は、前記融合タンパク質複合体の約１〜１００μｇ／ｋｇである、［２２］又は［２３］に記載の方法。
［２９］
前記融合タンパク質複合体は、少なくとも週１回投与される、［２２］又は［２３］に記載の方法。
［３０］
前記融合タンパク質複合体は、免疫細胞増殖、活性化マーカー、標的細胞に対する細胞傷害性及び／又はＩＦＮ−γを含む前炎症性サイトカインの産生を増加させる、［１６］〜［２９］のいずれか一項に記載の方法。
［３１］
第１及び第２可溶性タンパク質を含む単離された可溶性融合タンパク質複合体であって、前記第１可溶性タンパク質は、ＩＬ−１２若しくはＩＬ−１８結合ドメイン又はその機能的断片に連結されたインターロイキン−１５（ＩＬ−１５）ポリペプチドドメインを含み、
前記第２可溶性タンパク質は、免疫グロブリンＦｃドメインに融合された可溶性ＩＬ−１５受容体アルファｓｕｓｈｉ結合ドメイン（ＩＬ−１５ＲαＳｕ）を含み、前記ＩＬ−１５ＲαＳｕドメインは、ＩＬ−１２若しくはＩＬ−１８結合ドメイン又はその機能的断片に連結されており、及び
前記第１可溶性タンパク質の前記ＩＬ−１５ポリペプチドドメインは、前記第２可溶性タンパク質の前記ＩＬ−１５ＲαＳｕドメインに結合して可溶性融合タンパク質複合体を形成する、単離された可溶性融合タンパク質複合体。
［３２］
ＩＬ−１２及び／若しくはＩＬ−１８結合ドメイン又はその機能的断片に連結されたインターロイキン−１５（ＩＬ−１５）ポリペプチドドメインを含む単離された可溶性融合タンパク質複合体。
［３３］
前記ＩＬ−１５ポリペプチドドメインは、Ｎ７２Ｄ突然変異を含むＩＬ−１５変異体（ＩＬ−１５Ｎ７２Ｄ）である、［３２］に記載の単離された可溶性融合タンパク質複合体。
［３４］
免疫グロブリンＦｃドメインに融合された可溶性ＩＬ−１５受容体アルファｓｕｓｈｉ結合ドメイン（ＩＬ−１５ＲαＳｕ）を含む単離された可溶性融合タンパク質複合体であって、前記ＩＬ−１５ＲαＳｕドメインは、ＩＬ−１２及び／若しくはＩＬ−１８結合ドメイン又はその機能的断片に連結されている、単離された可溶性融合タンパク質複合体。
［３５］
第１及び第２可溶性タンパク質を含む単離された可溶性融合タンパク質複合体であって、前記第１可溶性タンパク質は、免疫グロブリンＦｃドメインに融合されたインターロイキン−１５受容体アルファｓｕｓｈｉ結合ドメイン（ＩＬ−１５ＲαＳｕ）を含み、前記ＩＬ−１５ＲαＳｕドメインは、ＩＬ−１８結合ドメイン又はその機能的断片に融合されており、
前記第２可溶性タンパク質は、ＩＬ−１８ドメインに融合されたインターロイキン−１５（ＩＬ−１５）ポリペプチドドメインを含み、
前記第１可溶性タンパク質の前記ＩＬ−１５ポリペプチドドメインは、前記第２可溶性タンパク質の前記ＩＬ−１５ＲαＳｕドメインに結合して可溶性融合タンパク質複合体を形成する、単離された可溶性融合タンパク質複合体。
［３６］
第１及び第２可溶性タンパク質を含む単離された可溶性融合タンパク質複合体であって、
前記第１可溶性タンパク質は、免疫グロブリンＦｃドメインに融合されたインターロイキン−１５受容体アルファｓｕｓｈｉ結合ドメイン（ＩＬ−１５ＲαＳｕ）を含み、前記ＩＬ−１５ＲαＳｕドメインは、ＩＬ−１２結合ドメイン又はその機能的断片に融合されており、
前記第２可溶性タンパク質は、ＩＬ−１２ドメインに融合されたインターロイキン−１５（ＩＬ−１５）ポリペプチドドメインを含み、
前記第１可溶性タンパク質の前記ＩＬ−１５ポリペプチドドメインは、前記第２可溶性タンパク質の前記ＩＬ−１５ＲαＳｕドメインに結合して可溶性融合タンパク質複合体を形成する、単離された可溶性融合タンパク質複合体。
［３７］
前記ＩＬ−１５ポリペプチドドメインは、Ｎ７２Ｄ突然変異を含むＩＬ−１５変異体（ＩＬ−１５Ｎ７２Ｄ）である、［３５］又は［３６］に記載の単離された可溶性融合タンパク質複合体。
［３８］
インターロイキン−１５ポリペプチドドメイン、第１及び第２可溶性タンパク質を含む単離された可溶性融合タンパク質複合体であって、
前記第１可溶性タンパク質は、免疫グロブリンＦｃドメインに融合されたインターロイキン−１５受容体アルファｓｕｓｈｉ結合ドメイン（ＩＬ−１５ＲαＳｕ）を含み、前記ＩＬ−１５ＲαＳｕドメインは、ＩＬ−１２及び／若しくはＩＬ−１８結合ドメイン又はその機能的断片に連結されており、
第２可溶性タンパク質は、免疫グロブリンＦｃドメインに融合されたインターロイキン−１５受容体アルファｓｕｓｈｉ結合ドメイン（ＩＬ−１５ＲαＳｕ）を含み、前記ＩＬ−１５ＲαＳｕドメインは、ＩＬ−１２及び／若しくはＩＬ−１８結合ドメイン又はその機能的断片に連結されており、
前記ＩＬ−１５ポリペプチドドメインは、前記第１及び／又は第２可溶性タンパク質の前記ＩＬ−１５ＲαＳｕドメインに結合して可溶性融合タンパク質複合体を形成する、単離された可溶性融合タンパク質。
［３９］
免疫グロブリンＦｃドメインに融合されたインターロイキン−１５受容体アルファｓｕｓｈｉ結合ドメイン（ＩＬ−１５ＲαＳｕ）、第１及び第２可溶性タンパク質を含む単離された可溶性融合タンパク質であって、
前記第１可溶性タンパク質は、ＩＬ−１２及び／若しくはＩＬ−１８結合ドメイン又はその機能的断片に連結されたインターロイキン−１５ポリペプチドドメインを含み、及び第２可溶性タンパク質は、ＩＬ−１２及び／若しくはＩＬ−１８結合ドメイン又はその機能的断片に連結されたインターロイキン−１５ポリペプチドドメインを含み、
前記第１及び／又は第２可溶性タンパク質の前記ＩＬ−１５ポリペプチドドメインは、前記ＩＬ−１５ＲαＳｕドメインに結合して可溶性融合タンパク質複合体を形成する、単離された可溶性融合タンパク質。
［４０］
前記ＩＬ−１５ポリペプチドドメインは、Ｎ７２Ｄ突然変異を含むＩＬ−１５変異体（ＩＬ−１５Ｎ７２Ｄ）である、［３８］又は［３９］に記載の単離された可溶性融合タンパク質複合体。