【手続補正書】
【提出日】令和2年12月4日(2020.12.4)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
１つまたは複数の導入遺伝子をコードする１つまたは複数のポリヌクレオチドを含む脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）。
【請求項２】
前記１つまたは複数の導入遺伝子が、１つもしくは複数の工学技術で作製されたヌクレアーゼ、１つもしくは複数の工学技術で作製された転写因子、治療用タンパク質をコードする１つもしくは複数の導入遺伝子、またはこれらの組合せをコードする、請求項１に記載のＬＮＰ。
【請求項３】
前記ポリヌクレオチドが、ゲノム内にランダムに組み込まれているか、ゲノム内に標的化様式で組み込まれているか、または細胞内でエピソームとして発現される、請求項１または請求項２に記載のＬＮＰ。
【請求項４】
前記ヌクレアーゼおよび前記転写因子が、ジンクフィンガータンパク質を含むＤＮＡ結合ドメイン、ＴＡＬ−エフェクタードメインまたは単一ガイドＲＮＡを含み、該ヌクレアーゼが、切断ドメインをさらに含み、該転写因子が、転写制御ドメインをさらに含む、請求項２または請求項３に記載のＬＮＰ。
【請求項５】
前記ポリヌクレオチドが、ＤＮＡ、ＲＮＡまたはその両方を含む、請求項１から４のいずれかに記載のＬＮＰ。
【請求項６】
前記ＲＮＡがｍＲＮＡであり、前記ＤＮＡがプラスミド、ミニ遺伝子、または直鎖状ＤＮＡである、請求項５に記載のＬＮＰ。
【請求項７】
ヌクレアーゼをコードする第１のポリヌクレオチドおよび導入遺伝子を含む第２のポリヌクレオチドを含む、請求項１から６のいずれかに記載のＬＮＰ。
【請求項８】
前記ＬＮＰを細胞に投与し、そこで前記ヌクレアーゼを発現させることにより、細胞のゲノムへの前記導入遺伝子の標的化組込みがもたらされる、請求項７に記載のＬＮＰ。
【請求項９】
カチオン性脂質分子および必要に応じて中性脂質、荷電脂質、ステロイド、ステロイド類似体、ポリマーとコンジュゲートした脂質、またはこれらの組合せを含む、請求項１から８のいずれかに記載のＬＮＰ。
【請求項１０】
前記カチオン性脂質が、以下の式（Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩおよびＩＶ）：
【化５７】
2020500539.tif 000001
（式中、式（Ｉ）に関して、
Ｌ１およびＬ２は、それぞれ独立に、−Ｏ（Ｃ＝Ｏ）−、（Ｃ＝Ｏ）Ｏ−または炭素−炭素二重結合であり；
Ｒ１ａおよびＲ１ｂは、各出現につき、独立に、（ａ）ＨもしくはＣ１〜Ｃ１２アルキルであるか、または（ｂ）Ｒ１ａがＨもしくはＣ１〜Ｃ１２アルキルであり、Ｒ１ｂが、それが結合している炭素原子と一緒に、隣接するＲ１ｂおよびそれが結合している炭素原子と一緒になって炭素−炭素二重結合を形成しているかのいずれかであり；
Ｒ２ａおよびＲ２ｂは、各出現につき、独立に、（ａ）ＨもしくはＣ１〜Ｃ１２アルキルであるか、または（ｂ）Ｒ２ａがＨもしくはＣ１〜Ｃ１２アルキルであり、Ｒ２ｂが、それが結合している炭素原子と一緒に、隣接するＲ２ｂおよびそれが結合している炭素原子と一緒になって炭素−炭素二重結合を形成しているかのいずれかであり；
Ｒ３ａおよびＲ３ｂは、各出現につき、独立に、（ａ）ＨもしくはＣ１〜Ｃ１２アルキルであるか、または（ｂ）Ｒ３ａがＨもしくはＣ１〜Ｃ１２アルキルであり、Ｒ３ｂが、それが結合している炭素原子と一緒に、隣接するＲ３ｂおよびそれが結合している炭素原子と一緒になって炭素−炭素二重結合を形成しているかのいずれかであり；
Ｒ４ａおよびＲ４ｂは、各出現につき、独立に、（ａ）ＨもしくはＣ１〜Ｃ１２アルキルであるか、または（ｂ）Ｒ４ａがＨもしくはＣ１〜Ｃ１２アルキルであり、Ｒ４ｂが、それが結合している炭素原子と一緒に、隣接するＲ４ｂおよびそれが結合している炭素原子と一緒になって炭素−炭素二重結合を形成しているかのいずれかであり；
Ｒ５およびＲ６は、それぞれ独立に、メチルまたはシクロアルキルであり；
Ｒ７は、各出現につき、独立に、ＨまたはＣ１〜Ｃ１２アルキルであり；
Ｒ８およびＲ９は、それぞれ独立に、非置換Ｃ１〜Ｃ１２アルキルである；またはＲ８およびＲ９は、それらが結合している窒素原子と一緒に、窒素原子を１つ含む５員、６員または７員複素環式環を形成しており；
ａおよびｄは、それぞれ独立に、０から２４までの整数であり；
ｂおよびｃは、それぞれ独立に、１から２４までの整数であり；
ｅは、１または２であり、
式（ＩＩ）に関して、
Ｌ１およびＬ２は、それぞれ独立に、−Ｏ（Ｃ＝Ｏ）−、−（Ｃ＝Ｏ）Ｏ−、−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）ｘ−、−Ｓ−Ｓ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｓ−、−ＳＣ（＝Ｏ）−、−ＮＲａＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲａ−、−ＮＲａＣ（＝Ｏ）ＮＲａ−、−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲａ−、−ＮＲａＣ（＝Ｏ）Ｏ−または直接結合であり；
Ｇ１は、Ｃ１〜Ｃ２アルキレン、−（Ｃ＝Ｏ）−、−Ｏ（Ｃ＝Ｏ）−、−ＳＣ（＝Ｏ）−、−ＮＲａＣ（＝Ｏ）−または直接結合であり；
Ｇ２は、−Ｃ（＝Ｏ）−、−（Ｃ＝Ｏ）Ｏ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｓ−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲａ−または直接結合であり；
Ｇ３は、Ｃ１〜Ｃ６アルキレンであり；
Ｒａは、ＨまたはＣ１〜Ｃ１２アルキルであり；
Ｒ１ａおよびＲ１ｂは、各出現につき、独立に、（ａ）ＨもしくはＣ１〜Ｃ１２アルキルであるか、または（ｂ）Ｒ１ａがＨもしくはＣ１〜Ｃ１２アルキルであり、Ｒ１ｂが、それが結合している炭素原子と一緒に、隣接するＲ１ｂおよびそれが結合している炭素原子と一緒になって炭素−炭素二重結合を形成しているかのいずれかであり；
Ｒ２ａおよびＲ２ｂは、各出現につき、独立に、（ａ）ＨもしくはＣ１〜Ｃ１２アルキルであるか、または（ｂ）Ｒ２ａがＨもしくはＣ１〜Ｃ１２アルキルであり、Ｒ２ｂが、それが結合している炭素原子と一緒に、隣接するＲ２ｂおよびそれが結合している炭素原子と一緒になって炭素−炭素二重結合を形成しているかのいずれかであり；
Ｒ３ａおよびＲ３ｂは、各出現につき、独立に、（ａ）ＨもしくはＣ１〜Ｃ１２アルキルであるか、または（ｂ）Ｒ３ａがＨもしくはＣ１〜Ｃ１２アルキルであり、Ｒ３ｂが、それが結合している炭素原子と一緒に、隣接するＲ３ｂおよびそれが結合している炭素原子と一緒になって炭素−炭素二重結合を形成しているかのいずれかであり；
Ｒ４ａおよびＲ４ｂは、各出現につき、独立に、（ａ）ＨもしくはＣ１〜Ｃ１２アルキルであるか、または（ｂ）Ｒ４ａがＨもしくはＣ１〜Ｃ１２アルキルであり、Ｒ４ｂが、それが結合している炭素原子と一緒に、隣接するＲ４ｂおよびそれが結合している炭素原子と一緒になって炭素−炭素二重結合を形成しているかのいずれかであり；
Ｒ５およびＲ６は、それぞれ独立に、Ｈまたはメチルであり；
Ｒ７は、Ｃ４〜Ｃ２０アルキルであり；
Ｒ８およびＲ９は、それぞれ独立に、Ｃ１〜Ｃ１２アルキルである、またはＲ８およびＲ９は、それらが結合している窒素原子と一緒に５員、６員または７員複素環式環を形成しており；
ａ、ｂ、ｃおよびｄは、それぞれ独立に、１から２４までの整数であり；
ｘは、０、１または２であり、
式（ＩＩＩ）に関して、
Ｌ１またはＬ２の一方は−Ｏ（Ｃ＝Ｏ）−、−（Ｃ＝Ｏ）Ｏ−、−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）ｘ−、−Ｓ−Ｓ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｓ−、ＳＣ（＝Ｏ）−、−ＮＲａＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲａ−、ＮＲａＣ（＝Ｏ）ＮＲａ−、−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲａ−または−ＮＲａＣ（＝Ｏ）Ｏ−、であり、Ｌ１またはＬ２の他方は−Ｏ（Ｃ＝Ｏ）−、−（Ｃ＝Ｏ）Ｏ−、−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）ｘ−、−Ｓ−Ｓ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｓ−、ＳＣ（＝Ｏ）−、−ＮＲａＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲａ−、ＮＲａＣ（＝Ｏ）ＮＲａ−、−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲａ−もしくは−ＮＲａＣ（＝Ｏ）Ｏ−または直接結合であり；
Ｇ１およびＧ２は、それぞれ独立に、非置換Ｃ１〜Ｃ１２アルキレンまたはＣ２〜Ｃ１２アルケニレンであり；
Ｇ３は、Ｃ１〜Ｃ２４アルキレン、Ｃ２〜Ｃ２４アルケニレン、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキレン、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルケニレンであり；
Ｒａは、ＨまたはＣ１〜Ｃ１２アルキルであり；
Ｒ１およびＲ２は、それぞれ独立に、Ｃ６〜Ｃ２４アルキルまたはＣ６〜Ｃ２４アルケニルであり；
Ｒ３は、Ｈ、ＯＲ５、ＣＮ、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ４、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ４または−ＮＲ５Ｃ（＝Ｏ）Ｒ４であり；
Ｒ４は、Ｃ１〜Ｃ１２アルキルであり；
Ｒ５は、ＨまたはＣ１〜Ｃ６アルキルであり；
ｘは、０、１または２であり、
式（ＩＶ）に関して、
Ｌ１は、−Ｏ（Ｃ＝Ｏ）Ｒ１、−（Ｃ＝Ｏ）ＯＲ１、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ１、−ＯＲ１、−Ｓ（Ｏ）ｘＲ１、−Ｓ−ＳＲ１、−Ｃ（＝Ｏ）ＳＲ１、−ＳＣ（＝Ｏ）Ｒ１、−ＮＲａＣ（＝Ｏ）Ｒ１、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲｂＲｃ、−ＮＲａＣ（＝Ｏ）ＮＲｂＲｃ、−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲｂＲｃまたは−ＮＲａＣ（＝Ｏ）ＯＲ１であり；
Ｌ２は、−Ｏ（Ｃ＝Ｏ）Ｒ２、−（Ｃ＝Ｏ）ＯＲ２、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ２、−ＯＲ２、−Ｓ（Ｏ）ｘＲ２、−Ｓ−ＳＲ２、−Ｃ（＝Ｏ）ＳＲ２、−ＳＣ（＝Ｏ）Ｒ２、−ＮＲｄＣ（＝Ｏ）Ｒ２、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲｅＲｆ、−ＮＲｃＣ（＝Ｏ）ＮＲｅＲｆ、−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲｅＲｆ、−ＮＲｄＣ（＝Ｏ）ＯＲ２または直接結合であり；
Ｇ１およびＧ２は、それぞれ独立に、Ｃ２〜Ｃ１２アルキレンまたはＣ２〜Ｃ１２アルケニレンであり；
Ｇ３は、Ｃ１〜Ｃ２４アルキレン、Ｃ２〜Ｃ２４アルケニレン、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキレンまたはＣ３〜Ｃ８シクロアルケニレンであり；
Ｒａ、Ｒｂ、ＲｄおよびＲｅは、それぞれ独立に、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ１２アルキルまたはＣ２〜Ｃ１２アルケニルであり；
ＲｃおよびＲｆは、それぞれ独立に、Ｃ１〜Ｃ１２アルキルまたはＣ２〜Ｃ１２アルケニルであり；
Ｒ１およびＲ２は、それぞれ独立に、分枝状Ｃ６〜Ｃ２４アルキルまたは分枝Ｃ６〜Ｃ２４アルケニルであり；
Ｒ３は、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ４）Ｒ５または−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ６であり；
Ｒ４は、Ｃ１〜Ｃ１２アルキルであり；
Ｒ５は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ８アルキルまたはＣ２〜Ｃ８アルケニルであり；
Ｒ６は、Ｈ、アリールまたはアラルキルであり；
ｘは、０、１または２である）
を有する化合物またはその薬学的に許容される塩、互変異性体もしくは立体異性体から選択される、請求項９に記載のＬＮＰ。
【請求項１１】
以下の化合物Ｉ−５、Ｉ−６、ＩＩ−９、ＩＩ−１１、ＩＩ−３６、ＩＩＩ−２５、ＩＩＩ−４５、ＩＩＩ−４９またはＩＶ−１２：
【化５８】
2020500539.tif 000002
【化５９】
2020500539.tif 000003
のうちの１つを含む、請求項１０に記載のＬＮＰ。
【請求項１２】
式（Ｖ）
【化６０】
2020500539.tif 000004
（式中、Ｒ８およびＲ９は、それぞれ独立に、炭素原子を１２個から１６個まで含む直鎖状の飽和アルキル鎖であり、ｗは、４２〜５５である）
の構造を有するペグ化脂質を含む、請求項１から１１のいずれかに記載のＬＮＰ。
【請求項１３】
請求項１から１２のいずれかに記載の１つまたは複数のＬＮＰを含む医薬組成物。
【請求項１４】
ウイルスベクターをさらに含む、請求項１３に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
前記ウイルスベクターが、導入遺伝子ドナーを含む、請求項１４に記載の医薬組成物。
【請求項１６】
請求項１に記載の１つまたは複数のＬＮＰを含む細胞。
【請求項１７】
請求項１６に記載の細胞に由来する細胞。
【請求項１８】
前記細胞が遺伝子改変されており、該遺伝子改変が、挿入、欠失またはその両方を含む、請求項１６または請求項１７に記載の細胞。
【請求項１９】
１つまたは複数のポリヌクレオチドを細胞または被験体に送達する方法における使用のための組成物であって、請求項１から１２のいずれかに記載の１つまたは複数のＬＮＰを含む組成物。
【請求項２０】
細胞のゲノム内の目的領域を切断する方法における使用のための組成物であって、該組成物は、請求項１から１２のいずれかに記載の１つまたは複数のＬＮＰを含み、該方法は、該１つまたは複数のＬＮＰを該細胞に送達するステップを含み、少なくとも１つのＬＮＰが、該ゲノムを切断するヌクレアーゼをコードするポリヌクレオチドを含む、組成物。
【請求項２１】
前記目的領域が、セーフハーバー遺伝子内にある、請求項２０に記載の組成物。
【請求項２２】
前記セーフハーバー遺伝子が、ＡＡＶＳ１遺伝子、アルブミン遺伝子、Ｒｏｓａ遺伝子、ＣＣＲ５遺伝子、ＣＸＣＲ遺伝子またはＨＰＲＴ遺伝子である、請求項２１に記載の組成物。
【請求項２３】
前記１つまたは複数のＬＮＰが、導入遺伝子を含むドナーを含み、該導入遺伝子が、前記ヌクレアーゼによる切断後に前記細胞のゲノム内に組み込まれることが可能である、請求項２０または２１に記載の組成物。
【請求項２４】
前記１つまたは複数のＬＮＰがヌクレアーゼを含み、前記組成物が、導入遺伝子を含むウイルスベクターと組み合わせて投与されることを特徴とし、該導入遺伝子が、該ヌクレアーゼによる切断後に前記細胞のゲノム内に挿入されることが可能である、請求項２０に記載の組成物。
【請求項２５】
疾患を処置する方法における使用のための、請求項１から１２のいずれかに記載の１つもしくは複数のＬＮＰを含む組成物または請求項１３から１５のいずれかに記載の医薬組成物であって、該方法は、該組成物または医薬組成物を、それを必要とする被験体に投与して、該疾患を処置する改変細胞を生成することを含むことを特徴とする、組成物または医薬組成物。
【請求項２６】
少なくとも１つのＬＮＰが、セーフハーバー遺伝子内のゲノムを切断するポリヌクレオチドを含み、前記ＬＮＰの少なくとも１つが、該セーフハーバー遺伝子に組み込まれ、前記被験体において前記改変細胞によって発現されるドナー導入遺伝子を含む、請求項２５に記載の使用のための組成物または医薬組成物。
【請求項２７】
少なくとも１つのＬＮＰが、前記被験体における細胞のゲノムを切断するポリヌクレオチドを含み、前記組成物または医薬組成物が、ドナー導入遺伝子を含むウイルスベクターと組み合わせて該被験体に投与されることを特徴とし、該ドナー導入遺伝子が該ゲノムの切断後に該被験体の該細胞内に組み込まれ、必要に応じて、該組成物または医薬組成物およびウイルスベクターが逐次的におよび／または反復して投与されることを特徴とする、請求項２５に記載の使用のための組成物または医薬組成物。
【請求項２８】
前記方法が、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ、ｅｘ  ｖｉｖｏ、またはｉｎ  ｖｉｖｏで実施される、請求項１９から２４のいずれかに記載の組成物。
【請求項２９】
前記組成物が、２回またはそれよりも多く投与されることを特徴とする、請求項２８に記載の組成物。
【請求項３０】
前記組成物が、患者に投与され、最初の投与の７日後、１４日後、２１日後、２８日後、３０日後、４０日後、５０日後、７５日後、１００日後、２００日後もしくはその後に、またはこれらの組合せで再投与されることを特徴とする、請求項２３または２４に記載の組成物。
【請求項３１】
請求項１から１２のいずれかに記載の１つまたは複数のＬＮＰまたは請求項１３から１５までのいずれかに記載の医薬組成物を含むキット。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６６】
これらおよび他の態様は全体として開示に照らせば当業者には明らかになろう。
特定の実施形態では、例えば、以下が提供される：
（項目１）
１つまたは複数の導入遺伝子をコードする１つまたは複数のポリヌクレオチドを含む脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）。
（項目２）
前記１つまたは複数の導入遺伝子が、１つもしくは複数の工学技術で作製されたヌクレアーゼ、１つもしくは複数の工学技術で作製された転写因子、治療用タンパク質をコードする１つもしくは複数の導入遺伝子、またはこれらの組合せをコードする、項目１に記載のＬＮＰ。
（項目３）
前記ポリヌクレオチドが、ゲノム内にランダムに組み込まれれているか、ゲノム内に標的化様式で組み込まれれているか、または細胞内でエピソームとして発現される、項目１または項目２に記載のＬＮＰ。
（項目４）
前記ヌクレアーゼおよび前記転写因子が、ジンクフィンガータンパク質を含むＤＮＡ結合ドメイン、ＴＡＬ−エフェクタードメインまたは単一ガイドＲＮＡを含み、該ヌクレアーゼが、切断ドメインをさらに含み、該転写因子が、転写制御ドメインをさらに含む、項目２または項目３に記載のＬＮＰ。
（項目５）
前記ポリヌクレオチドが、ＤＮＡ、ＲＮＡまたはその両方を含む、項目１から４のいずれかに記載のＬＮＰ。
（項目６）
前記ＲＮＡがｍＲＮＡであり、前記ＤＮＡがプラスミド、ミニ遺伝子、または直鎖状ＤＮＡである、項目５に記載のＬＮＰ。
（項目７）
ヌクレアーゼをコードする第１のポリヌクレオチドおよび導入遺伝子を含む第２のポリヌクレオチドを含む、項目１から６のいずれかに記載のＬＮＰ。
（項目８）
前記ＬＮＰを細胞に投与し、そこで前記ヌクレアーゼを発現させることにより、細胞のゲノムへの前記導入遺伝子の標的化組込みがもたらされる、項目７に記載のＬＮＰ。
（項目９）
カチオン性脂質分子および必要に応じて中性脂質、荷電脂質、ステロイド、ステロイド類似体、ポリマーとコンジュゲートした脂質、またはこれらの組合せを含む、項目１から８のいずれかに記載のＬＮＰ。
（項目１０）
前記カチオン性脂質が、以下の式（Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩおよびＩＶ）：
【化５７】
2020500539.tif 000005
（式中、式（Ｉ）に関して、
Ｌ１およびＬ２は、それぞれ独立に、−Ｏ（Ｃ＝Ｏ）−、（Ｃ＝Ｏ）Ｏ−または炭素−炭素二重結合であり；
Ｒ１ａおよびＲ１ｂは、各出現につき、独立に、（ａ）ＨもしくはＣ１〜Ｃ１２アルキルであるか、または（ｂ）Ｒ１ａがＨもしくはＣ１〜Ｃ１２アルキルであり、Ｒ１ｂが、それが結合している炭素原子と一緒に、隣接するＲ１ｂおよびそれが結合している炭素原子と一緒になって炭素−炭素二重結合を形成しているかのいずれかであり；
Ｒ２ａおよびＲ２ｂは、各出現につき、独立に、（ａ）ＨもしくはＣ１〜Ｃ１２アルキルであるか、または（ｂ）Ｒ２ａがＨもしくはＣ１〜Ｃ１２アルキルであり、Ｒ２ｂが、それが結合している炭素原子と一緒に、隣接するＲ２ｂおよびそれが結合している炭素原子と一緒になって炭素−炭素二重結合を形成しているかのいずれかであり；
Ｒ３ａおよびＲ３ｂは、各出現につき、独立に、（ａ）ＨもしくはＣ１〜Ｃ１２アルキルであるか、または（ｂ）Ｒ３ａがＨもしくはＣ１〜Ｃ１２アルキルであり、Ｒ３ｂが、それが結合している炭素原子と一緒に、隣接するＲ３ｂおよびそれが結合している炭素原子と一緒になって炭素−炭素二重結合を形成しているかのいずれかであり；
Ｒ４ａおよびＲ４ｂは、各出現につき、独立に、（ａ）ＨもしくはＣ１〜Ｃ１２アルキルであるか、または（ｂ）Ｒ４ａがＨもしくはＣ１〜Ｃ１２アルキルであり、Ｒ４ｂが、それが結合している炭素原子と一緒に、隣接するＲ４ｂおよびそれが結合している炭素原子と一緒になって炭素−炭素二重結合を形成しているかのいずれかであり；
Ｒ５およびＲ６は、それぞれ独立に、メチルまたはシクロアルキルであり；
Ｒ７は、各出現につき、独立に、ＨまたはＣ１〜Ｃ１２アルキルであり；
Ｒ８およびＲ９は、それぞれ独立に、非置換Ｃ１〜Ｃ１２アルキルである；またはＲ８およびＲ９は、それらが結合している窒素原子と一緒に、窒素原子を１つ含む５員、６員または７員複素環式環を形成しており；
ａおよびｄは、それぞれ独立に、０から２４までの整数であり；
ｂおよびｃは、それぞれ独立に、１から２４までの整数であり；
ｅは、１または２であり、
式（ＩＩ）に関して、
Ｌ１およびＬ２は、それぞれ独立に、−Ｏ（Ｃ＝Ｏ）−、−（Ｃ＝Ｏ）Ｏ−、−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）ｘ−、−Ｓ−Ｓ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｓ−、−ＳＣ（＝Ｏ）−、−ＮＲａＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲａ−、−ＮＲａＣ（＝Ｏ）ＮＲａ−、−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲａ−、−ＮＲａＣ（＝Ｏ）Ｏ−または直接結合であり；
Ｇ１は、Ｃ１〜Ｃ２アルキレン、−（Ｃ＝Ｏ）−、−Ｏ（Ｃ＝Ｏ）−、−ＳＣ（＝Ｏ）−、−ＮＲａＣ（＝Ｏ）−または直接結合であり；
Ｇ２は、−Ｃ（＝Ｏ）−、−（Ｃ＝Ｏ）Ｏ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｓ−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲａ−または直接結合であり；
Ｇ３は、Ｃ１〜Ｃ６アルキレンであり；
Ｒａは、ＨまたはＣ１〜Ｃ１２アルキルであり；
Ｒ１ａおよびＲ１ｂは、各出現につき、独立に、（ａ）ＨもしくはＣ１〜Ｃ１２アルキルであるか、または（ｂ）Ｒ１ａがＨもしくはＣ１〜Ｃ１２アルキルであり、Ｒ１ｂが、それが結合している炭素原子と一緒に、隣接するＲ１ｂおよびそれが結合している炭素原子と一緒になって炭素−炭素二重結合を形成しているかのいずれかであり；
Ｒ２ａおよびＲ２ｂは、各出現につき、独立に、（ａ）ＨもしくはＣ１〜Ｃ１２アルキルであるか、または（ｂ）Ｒ２ａがＨもしくはＣ１〜Ｃ１２アルキルであり、Ｒ２ｂが、それが結合している炭素原子と一緒に、隣接するＲ２ｂおよびそれが結合している炭素原子と一緒になって炭素−炭素二重結合を形成しているかのいずれかであり；
Ｒ３ａおよびＲ３ｂは、各出現につき、独立に、（ａ）ＨもしくはＣ１〜Ｃ１２アルキルであるか、または（ｂ）Ｒ３ａがＨもしくはＣ１〜Ｃ１２アルキルであり、Ｒ３ｂが、それが結合している炭素原子と一緒に、隣接するＲ３ｂおよびそれが結合している炭素原子と一緒になって炭素−炭素二重結合を形成しているかのいずれかであり；
Ｒ４ａおよびＲ４ｂは、各出現につき、独立に、（ａ）ＨもしくはＣ１〜Ｃ１２アルキルであるか、または（ｂ）Ｒ４ａがＨもしくはＣ１〜Ｃ１２アルキルであり、Ｒ４ｂが、それが結合している炭素原子と一緒に、隣接するＲ４ｂおよびそれが結合している炭素原子と一緒になって炭素−炭素二重結合を形成しているかのいずれかであり；
Ｒ５およびＲ６は、それぞれ独立に、Ｈまたはメチルであり；
Ｒ７は、Ｃ４〜Ｃ２０アルキルであり；
Ｒ８およびＲ９は、それぞれ独立に、Ｃ１〜Ｃ１２アルキルである、またはＲ８およびＲ９は、それらが結合している窒素原子と一緒に５員、６員または７員複素環式環を形成しており；
ａ、ｂ、ｃおよびｄは、それぞれ独立に、１から２４までの整数であり；
ｘは、０、１または２であり、
式（ＩＩＩ）に関して、
Ｌ１またはＬ２の一方は−Ｏ（Ｃ＝Ｏ）−、−（Ｃ＝Ｏ）Ｏ−、−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）ｘ−、−Ｓ−Ｓ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｓ−、ＳＣ（＝Ｏ）−、−ＮＲａＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲａ−、ＮＲａＣ（＝Ｏ）ＮＲａ−、−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲａ−または−ＮＲａＣ（＝Ｏ）Ｏ−、であり、Ｌ１またはＬ２の他方は−Ｏ（Ｃ＝Ｏ）−、−（Ｃ＝Ｏ）Ｏ−、−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）ｘ−、−Ｓ−Ｓ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｓ−、ＳＣ（＝Ｏ）−、−ＮＲａＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲａ−、ＮＲａＣ（＝Ｏ）ＮＲａ−、−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲａ−もしくは−ＮＲａＣ（＝Ｏ）Ｏ−または直接結合であり；
Ｇ１およびＧ２は、それぞれ独立に、非置換Ｃ１〜Ｃ１２アルキレンまたはＣ１〜Ｃ１２アルケニレンであり；
Ｇ３は、Ｃ１〜Ｃ２４アルキレン、Ｃ１〜Ｃ２４アルケニレン、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキレン、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルケニレンであり；
Ｒａは、ＨまたはＣ１〜Ｃ１２アルキルであり；
Ｒ１およびＲ２は、それぞれ独立に、Ｃ６〜Ｃ２４アルキルまたはＣ６〜Ｃ２４アルケニルであり；
Ｒ３は、Ｈ、ＯＲ５、ＣＮ、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ４、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ４または−ＮＲ５Ｃ（＝Ｏ）Ｒ４であり；
Ｒ４は、Ｃ１〜Ｃ１２アルキルであり；
Ｒ５は、ＨまたはＣ１〜Ｃ６アルキルであり；
ｘは、０、１または２であり、
式（ＩＶ）に関して、
Ｌ１またはＬ２の一方は−Ｏ（Ｃ＝Ｏ）−、−（Ｃ＝Ｏ）Ｏ−、−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）ｘ−、−Ｓ−Ｓ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｓ−、ＳＣ（＝Ｏ）−、−ＮＲａＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲａ−、ＮＲａＣ（＝Ｏ）ＮＲａ−、−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲａ−または−ＮＲａＣ（＝Ｏ）Ｏ−であり、Ｌ１またはＬ２の他方は−Ｏ（Ｃ＝Ｏ）−、−（Ｃ＝Ｏ）Ｏ−、−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）ｘ−、−Ｓ−Ｓ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｓ−、ＳＣ（＝Ｏ）−、−ＮＲａＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲａ−、ＮＲａＣ（＝Ｏ）ＮＲａ−、−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲａ−もしくは−ＮＲａＣ（＝Ｏ）Ｏ−または直接結合であり；
Ｇ１およびＧ２は、それぞれ独立に、非置換Ｃ１〜Ｃ１２アルキレンまたはＣ１〜Ｃ１２アルケニレンであり；
Ｇ３は、Ｃ１〜Ｃ２４アルキレン、Ｃ１〜Ｃ２４アルケニレン、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキレン、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルケニレンであり；
Ｒａは、ＨまたはＣ１〜Ｃ１２アルキルであり；
Ｒ１およびＲ２は、それぞれ独立に、Ｃ６〜Ｃ２４アルキルまたはＣ６〜Ｃ２４アルケニルであり；
Ｒ３は、Ｈ、ＯＲ５、ＣＮ、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ４、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ４または−ＮＲ５Ｃ（＝Ｏ）Ｒ４であり；
Ｒ４は、Ｃ１〜Ｃ１２アルキルであり；
Ｒ５は、ＨまたはＣ１〜Ｃ６アルキルであり；
ｘは、０、１または２である）
を有する化合物またはその薬学的に許容される塩、互変異性体もしくは立体異性体から選択される、項目９に記載のＬＮＰ。
（項目１１）
以下の化合物Ｉ−５、Ｉ−６、ＩＩ−９、ＩＩ−１１、ＩＩ−３６、ＩＩＩ−２５、ＩＩＩ−４５、ＩＩＩ−４９またはＩＶ−１２：
【化５８】
2020500539.tif 000006
【化５９】
2020500539.tif 000007
のうちの１つを含む、項目１０に記載のＬＮＰ。
（項目１２）
式（Ｖ）
【化６０】
2020500539.tif 000008
（式中、Ｒ８およびＲ９は、それぞれ独立に、炭素原子を１２個から１６個まで含む直鎖状の飽和アルキル鎖であり、ｗは、４２〜５５である）
の構造を有するペグ化脂質を含む、項目１から１１のいずれかに記載のＬＮＰ。
（項目１３）
項目１から１２のいずれかに記載の１つまたは複数のＬＮＰを含む医薬組成物。
（項目１４）
ウイルスベクターをさらに含む、項目１３に記載の医薬組成物。
（項目１５）
前記ウイルスベクターが、導入遺伝子ドナーを含む、項目１４に記載の医薬組成物。
（項目１６）
項目１に記載の１つまたは複数のＬＮＰを含む細胞。
（項目１７）
項目１６に記載の細胞に由来する細胞。
（項目１８）
前記細胞が遺伝子改変されており、該遺伝子改変が、挿入、欠失またはその両方を含む、項目１６または項目１７に記載の細胞。
（項目１９）
１つまたは複数のポリヌクレオチドを細胞または被験体に送達する方法であって、項目１から１２のいずれかに記載の１つまたは複数のＬＮＰを該細胞または該被験体に投与するステップを含む方法。
（項目２０）
細胞のゲノム内の目的領域を切断する方法であって、項目１から１２のいずれかに記載の１つまたは複数のＬＮＰを該細胞に送達するステップを含み、少なくとも１つのＬＮＰが、該ゲノムを切断するヌクレアーゼをコードするポリヌクレオチドを含む、方法。
（項目２１）
前記目的領域が、セーフハーバー遺伝子内にある、項目２０に記載の方法。
（項目２２）
前記セーフハーバー遺伝子が、ＡＡＶＳ１遺伝子、アルブミン遺伝子、Ｒｏｓａ遺伝子、ＣＣＲ５遺伝子、ＣＸＣＲ遺伝子またはＨＰＲＴ遺伝子である、項目２１に記載の方法。
（項目２３）
前記１つまたは複数のＬＮＰが、導入遺伝子を含むドナーを含み、該導入遺伝子が、前記ヌクレアーゼによる切断後に前記細胞のゲノム内に組み込まれることが可能である、項目２０または２１に記載の方法。
（項目２４）
前記１つまたは複数のＬＮＰがヌクレアーゼを含み、導入遺伝子を含むウイルスベクターを投与することをさらに含み、該導入遺伝子が、該ヌクレアーゼによる切断後に前記細胞のゲノム内に挿入されることが可能である、項目２０に記載の方法。
（項目２５）
疾患を処置する方法における使用のための、項目１から１２のいずれかに記載の１つもしくは複数のＬＮＰまたは項目１３から１５のいずれかに記載の医薬組成物であって、該方法は、該１つもしくは複数のＬＮＰまたは医薬組成物を、それを必要とする被験体に投与して、それを必要とする被験体における該疾患を処置する改変細胞を生成するステップを含む、ＬＮＰまたは医薬組成物。
（項目２６）
少なくとも１つのＬＮＰが、セーフハーバー遺伝子内のゲノムを切断するポリヌクレオチドを含み、前記ＬＮＰの少なくとも１つが、該セーフハーバー遺伝子に組み込まれ、前記被験体において前記改変細胞によって発現されるドナー導入遺伝子を含む、項目２５に記載の使用のためのＬＮＰまたは医薬組成物。
（項目２７）
少なくとも１つのＬＮＰが、前記被験体における細胞のゲノムを切断するポリヌクレオチドを含み、前記方法が、ドナー導入遺伝子を含むウイルスベクターを該被験体に投与するステップをさらに含み、該ドナー導入遺伝子が該ゲノムの切断後に該被験体の該細胞内に組み込まれ、必要に応じて、該ＬＮＰおよびウイルスベクターが逐次的におよび／または反復して投与される、項目２５に記載の使用のための医薬組成物のＬＮＰ。
（項目２８）
ｉｎ  ｖｉｔｒｏ、ｅｘ  ｖｉｖｏ、またはｉｎ  ｖｉｖｏで実施される、項目１９から２４のいずれかに記載の方法。
（項目２９）
前記ＬＮＰが、２回またはそれよりも多く投与される、項目２８に記載の方法。
（項目３０）
前記ＬＮＰが、患者に投与され、最初の投与の７日後、１４日後、２１日後、２８日後、３０日後、４０日後、５０日後、７５日後、１００日後、２００日後もしくはその後に、またはこれらの組合せで再投与される、項目２３または２４に記載の方法。
（項目３１）
項目１から１２のいずれかに記載の１つまたは複数のＬＮＰまたは項目１３から１５までのいずれかに記載の医薬組成物を含むキット。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０３０４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０３０４】
一部の実施形態では、ＬＮＰは、遺伝子治療試薬としての活性を有するポリヌクレオチドおよび次式（ＩＩＩ）：
【化２６】
2020500539.tif 000009
（式中、
Ｌ１またはＬ２の一方は、−Ｏ（Ｃ＝Ｏ）−、−（Ｃ＝Ｏ）Ｏ−、−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）ｘ−、−Ｓ−Ｓ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｓ−、ＳＣ（＝Ｏ）−、−ＮＲａＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲａ−、ＮＲａＣ（＝Ｏ）ＮＲａ−、−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲａ−または−ＮＲａＣ（＝Ｏ）Ｏ−であり、Ｌ１またはＬ２の他方は、−Ｏ（Ｃ＝Ｏ）−、−（Ｃ＝Ｏ）Ｏ−、−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）ｘ−、−Ｓ−Ｓ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｓ−、ＳＣ（＝Ｏ）−、−ＮＲａＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲａ−、ＮＲａＣ（＝Ｏ）ＮＲａ−、−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲａ−もしくは−ＮＲａＣ（＝Ｏ）Ｏ−または直接結合であり；
Ｇ１およびＧ２は、それぞれ独立に、非置換Ｃ１〜Ｃ１２アルキレンまたはＣ２〜Ｃ１２アルケニレンであり；
Ｇ３は、Ｃ１〜Ｃ２４アルキレン、Ｃ２〜Ｃ２４アルケニレン、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキレン、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルケニレンであり；
Ｒａは、ＨまたはＣ１〜Ｃ１２アルキルであり；
Ｒ１およびＲ２は、それぞれ独立に、Ｃ６〜Ｃ２４アルキルまたはＣ６〜Ｃ２４アルケニルであり；
Ｒ３は、Ｈ、ＯＲ５、ＣＮ、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ４、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ４または−ＮＲ５Ｃ（＝Ｏ）Ｒ４であり；
Ｅ  Ｒ４は、Ｃ１〜Ｃ１２アルキルであり；
Ｒ５は、ＨまたはＣ１〜Ｃ６アルキルであり；
ｘは、０、１または２である）
を有する脂質化合物またはその薬学的に許容される塩、互変異性体、プロドラッグもしくは立体異性体を含む。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０３１４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０３１４】
式（ＩＩＩ）の一部の実施形態では、Ｇ３は、置換されていない。式（ＩＩＩ）の他の実施形態では、Ｇ３は、置換されている。式（ＩＩＩ）の種々の異なる実施形態では、Ｇ３は、直鎖状Ｃ１〜Ｃ２４アルキレンまたは直鎖状Ｃ２〜Ｃ２４アルケニレンである。