【手続補正書】
【提出日】令和3年11月9日(2021.11.9)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
霊長類の網膜色素上皮の細胞中で外因性遺伝子を発現させる方法であって、配列番号１の核酸配列を含み、若しくはそれからなり、又は少なくとも４００塩基対であり、かつ配列番号１の前記配列と少なくとも８０％の全体同一性を有する核酸配列を含む単離核酸分子を、前記霊長類の前記網膜色素上皮の細胞に送達するステップを含み、前記単離核酸分子は、霊長類の網膜色素上皮の細胞中の外因性遺伝子の発現を、前記外因性遺伝子をコードする核酸配列が前記単離核酸分子に作動可能に結合している場合にドライブするのに効果的である、方法。
【請求項２】
少なくとも４００塩基対であり、かつ配列番号１の核酸配列と少なくとも８０％の全体同一性を有する核酸配列が、配列番号１の核酸配列と少なくとも９５％の全体同一性を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
少なくとも４００塩基対であり、かつ配列番号１の核酸配列と少なくとも８０％の全体同一性を有する核酸配列が、配列番号１の核酸配列を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記単離核酸分子が、外因性遺伝子に作動可能に結合している、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
前記単離核酸分子が、最小プロモーターをさらに含む、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
前記最小プロモーターが、配列番号２の核酸配列を含む、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記単離核酸分子が、発現カセットの一部である、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
前記発現カセットが、ベクターの一部である、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記ベクターが、ウイルスベクターである、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記ベクターが、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターである、請求項８に記載の方法。
【請求項１１】
霊長類の網膜色素上皮の細胞中で特異的に外因性遺伝子を発現させるための単離核酸分子の使用であって、前記単離核酸分子が、配列番号１の核酸配列を含み、若しくはそれからなり、又は少なくとも４００塩基対であり、かつ配列番号１の前記配列と少なくとも８０％の全体同一性を有する核酸配列を含み、前記単離核酸分子は、霊長類の網膜色素上皮の細胞中の外因性遺伝子の発現を、前記外因性遺伝子をコードする核酸配列が前記単離核酸分子に作動可能に結合している場合にドライブするのに効果的である、使用。
【請求項１２】
少なくとも４００塩基対であり、かつ配列番号１の核酸配列と少なくとも８０％の全体同一性を有する核酸配列が、配列番号１の核酸配列と少なくとも９５％の全体同一性を有する、請求項１１に記載の使用。
【請求項１３】
少なくとも４００塩基対であり、かつ配列番号１の核酸配列と少なくとも８０％の全体同一性を有する核酸配列が、配列番号１の核酸配列を含む、請求項１１に記載の使用。
【請求項１４】
前記単離核酸分子が、外因性遺伝子に作動可能に結合している、請求項１１〜１３のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１５】
前記単離核酸分子が、最小プロモーターをさらに含む、請求項１１〜１４のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１６】
前記最小プロモーターが、配列番号２の核酸配列を含む、請求項１５に記載の使用。
【請求項１７】
前記単離核酸分子が、発現カセットの一部である、請求項１１〜１６のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１８】
前記発現カセットが、ベクターの一部である、請求項１７に記載の使用。
【請求項１９】
前記ベクターが、ウイルスベクターである、請求項１８に記載の使用。
【請求項２０】
前記ベクターが、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターである、請求項１８に記載の使用。
【請求項２１】
網膜色素上皮と関連する疾患の治療における使用のための医薬組成物であって、単離核酸分子を含み、前記単離核酸分子が、配列番号１の核酸配列を含み、若しくはそれからなり、又は少なくとも４００塩基対であり、かつ配列番号１の前記配列と少なくとも８０％の全体同一性を有する核酸配列を含み、前記単離核酸分子が、霊長類の網膜色素上皮の細胞中の外因性遺伝子の発現を、前記外因性遺伝子をコードする核酸配列が前記単離核酸分子に作動可能に結合している場合にドライブするのに効果的である、医薬組成物。
【請求項２２】
網膜色素上皮と関連する前記疾患は、加齢黄斑変性症、網膜色素変性症、糖尿病性網膜症及び網膜色素上皮肥大症からなる群から選択される、請求項２１に記載の医薬組成物。
【請求項２３】
少なくとも４００塩基対であり、かつ配列番号１の核酸配列と少なくとも８０％の全体同一性を有する核酸配列が、配列番号１の核酸配列と少なくとも９５％の全体同一性を有する、請求項２１または２２に記載の医薬組成物。
【請求項２４】
少なくとも４００塩基対であり、かつ配列番号１の核酸配列と少なくとも８０％の全体同一性を有する核酸配列が、配列番号１の核酸配列を含む、請求項２１または２２に記載の医薬組成物。
【請求項２５】
前記単離核酸分子が、外因性遺伝子に作動可能に結合している、請求項２１〜２４のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項２６】
前記単離核酸分子が、最小プロモーター配列をさらに含む、請求項２１〜２５のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項２７】
前記最小プロモーター配列が、配列番号２の核酸配列を含む、請求項２６に記載の医薬組成物。
【請求項２８】
前記単離核酸分子が、発現カセットの一部である、請求項２１〜２７のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項２９】
前記発現カセットが、ベクターの一部である、請求項２８に記載の医薬組成物。
【請求項３０】
前記ベクターが、ウイルスベクターである、請求項２９に記載の医薬組成物。
【請求項３１】
前記ベクターが、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターである、請求項２９に記載の医薬組成物。
【請求項３２】
前記外因性遺伝子が、チャネルロドプシンまたはハロロドプシンをコードする、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法、請求項１１〜２０のいずれか１項に記載の使用、または請求項２１〜３１のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００９６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００９６】
ウイルス形質移入及び組織調製
ＡＡＶ投与のため、麻酔した動物の眼球をレンズに近い強膜中で鋭利な３０ゲージ針により穿刺した。２マイクロＬのＡＡＶ粒子懸濁液をＨａｍｉｌｔｏｎシリンジにより網膜下注射した。３週間後、単離網膜をＰＢＳ中４％のＰＦＡ中で３０分間固定し、次いで洗浄ステップをＰＢＳ中で４℃において行った。全網膜をＰＢＳ中１０％の正常ロバ血清（ＮＤＳ）、１％のＢＳＡ、０．５％のＴｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００により室温において１時間処理した。ＰＢＳ中３％のＮＤＳ、１％のＢＳＡ、０．５％のＴｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００中のモノクローナルラット抗ＧＦＰ  Ａｂ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ  Ｉｎｃ．；１：５００）及びポリクローナルヤギ抗ＣｈＡＴ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ：１：２００）による処理を、室温において５日間実施した。二次ロバ抗ラットＡｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ−４８８  Ａｂ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ  Ｉｎｃ．；１：２００）、抗ヤギＡｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ−６３３及びヘキストによる処理を２時間行った。切片を洗浄し、ＰｒｏＬｏｎｇ  Ｇｏｌｄ退色防止試薬（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ  Ｉｎｃ．）によりスライドガラス上にマウントし、Ｚｅｉｓｓ  ＬＳＭ  ７００  Ａｘｉｏ  Ｉｍａｇｅｒ  Ｚ２レーザー走査型共焦点顕微鏡（Ｃａｒｌ  Ｚｅｉｓｓ  Ｉｎｃ．）を使用して撮影した。
以下の態様を包含し得る。
［１］  霊長類の網膜色素上皮の細胞中で特異的に外因性遺伝子を発現させる方法であって、配列番号１の核酸配列を含み、若しくはそれからなり、又は配列番号１の前記配列と少なくとも８０％の全体同一性を有する少なくとも４００ｂｐの核酸配列からなる単離核酸分子を、前記霊長類の前記網膜色素上皮の細胞に送達するステップを含み、前記単離核酸分子は、霊長類の網膜色素上皮の細胞中の外因性遺伝子の発現を、前記外因性遺伝子をコードする核酸配列が前記単離核酸分子に作動可能に結合している場合に特異的にもたらす方法。
［２］  前記単離核酸分子が、最小プロモーター、例えば、配列番号２の最小プロモーターをさらに含む、上記［１］に記載の方法。
［３］  前記単離核酸分子が、発現カセットの一部である、上記［１］又は［２］に記載の方法。
［４］  前記発現カセットが、ベクターの一部である、上記［３］に記載の方法。
［５］  前記ベクターが、ウイルスベクターである、上記［４］に記載の方法。
［６］  霊長類の網膜色素上皮の細胞中で特異的に外因性遺伝子を発現させるための、配列番号１の核酸配列を含み、若しくはそれからなり、又は配列番号１の前記配列と少なくとも８０％の全体同一性を有する少なくとも４００ｂｐの核酸配列からなる単離核酸分子の使用であって、前記単離核酸分子は、霊長類の網膜色素上皮の細胞中の外因性遺伝子の発現を、前記外因性遺伝子をコードする核酸配列が前記単離核酸分子に作動可能に結合している場合に特異的にもたらす使用。
［７］  前記単離核酸分子が、最小プロモーター、例えば、配列番号２の最小プロモーターをさらに含む、上記［６］に記載の使用。
［８］  前記単離核酸分子が、発現カセットの一部である、上記［６］又は［７］に記載の使用。
［９］  前記発現カセットが、ベクターの一部である、上記［８］に記載の使用。
［１０］  前記ベクターが、ウイルスベクターである、上記［９］に記載の使用。
［１１］  網膜色素上皮と関連する疾患の治療における使用のための、配列番号１の核酸配列を含み、若しくはそれからなり、又は配列番号１の前記配列と少なくとも８０％の全体同一性を有する少なくとも４００ｂｐの核酸配列からなる単離核酸分子であって、霊長類の網膜色素上皮の細胞中の外因性遺伝子の発現を、前記外因性遺伝子をコードする核酸配列が前記単離核酸分子に作動可能に結合している場合に特異的にもたらす単離核酸分子。
［１２］  網膜色素上皮と関連する前記疾患は、加齢黄斑変性症、網膜色素変性症、糖尿病性網膜症及び網膜色素上皮肥大症からなる群から選択される、上記［１１］に記載の使用のための単離核酸分子。