【手続補正書】
【提出日】令和2年12月10日(2020.12.10)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ハイドロゲルでコーティングされた１またはそれより多くの生細胞を含む組成物であって、
前記ハイドロゲルが、マルチアームポリマーの共有結合性架橋ネットワークを含み、
前記ハイドロゲルが、クリックケミストリー反応対の間での反応を通して形成された共有結合を含む、前記組成物。
【請求項２】
前記マルチアームポリマーが、５〜１０ｋＤａの４アームＰＥＧ、１００〜２００ｋＤａでありホスホコリン６０〜９０％のメタクリロイルオキシエチルホスホコリンコポリマー、またはそれらの組み合わせである、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記共有結合が、アジド−ＤＢＣＯである、請求項１または２に記載の組成物。
【請求項４】
ハイドロゲル中での生体表面のコンフォーマルコーティング方法であって、
２つの水性層を含む系を用意することであって、第１の層が、０．２５％〜２％（Ｗ／Ｖ）の懸濁化剤、１％〜２５％（Ｗ／Ｖ）の第１の官能化マルチアームポリマー、及び前記生体表面の溶液を含み、
第２の層が、糖類のクッション及び１％〜２５％（Ｗ／Ｖ）の第２の官能化マルチアームポリマーを含み、前記第２の官能化マルチアームポリマーの官能基が、生理学的条件下で前記第１の官能化マルチアームポリマーの官能基と反応性である、前記用意することと、
前記生体表面を前記第２の層の中に通過させ、それによって前記第１及び第２の官能基が反応し、前記生体表面にコンフォーマルコーティングを施す架橋したハイドロゲルを形成できるようにすることと、を含む、前記方法。
【請求項５】
前記第１の官能化マルチアームポリマーが、５〜１０ｋＤａの４アームＰＥＧである、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記第１の官能化マルチアームポリマーが、１００〜２００ｋＤａでありホスホコリン６０〜９０％のメタクリロイルオキシエチルホスホコリンコポリマーである、請求項４に記載の方法。
【請求項７】
前記第１の官能化マルチアームポリマーの前記官能基が、クリック官能基である、請求項４〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
前記クリック官能基が、ＤＢＣＯまたはアジドである、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記第２の官能化マルチアームポリマーが、５〜１０ｋＤａの４アームＰＥＧである、請求項４〜８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
前記第２の官能化マルチアームポリマーが、１００〜２００ｋＤａでありホスホコリン６０〜９０％のメタクリロイルオキシエチルホスホコリンコポリマーである、請求項４〜８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
前記第２の官能化マルチアームポリマーの前記官能基が、クリック官能基である、請求項４〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
前記クリック官能基が、アジドまたはＤＢＣＯである、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記第１の官能化マルチアームポリマーまたは前記第２の官能化マルチアームポリマーのいずれか一方がアジド基を含み、他方がＤＢＣＯ基を含む、請求項４〜１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４】
前記第２の層が第２の懸濁化剤を含み、前記第２の懸濁化剤が、前記第１の層における前記懸濁化剤と同じである、請求項４〜１３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１５】
前記系が、前記第１の層と前記第２の層との間に介在層を含み、任意選択的に、前記介在層が気層である、請求項４〜１４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１６】
前記懸濁化剤が、１％で存在する１〜８ＭＤａの分子量を有するＰＥＯである、請求項４〜１５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１７】
前記第２の層が、０．２５％〜２％（Ｗ／Ｖ）の懸濁化剤の溶液をさらに含み、
前記第１の官能化マルチアームポリマーが、メタクリロイルオキシエチルホスホコリンコポリマーである、請求項１５に記載の方法。
【請求項１８】
前記第１の層が、前記第２の層に連続的に添加され、任意選択的に、前記第２の層が、前記混合物が遠心力下で移動できるように寸法決めされた開口部を有する先細サイドアームを通した前記第１の層の前記添加に好適な容器内にある、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記生体表面が、遠心分離によって前記第２の層の中に通過させられる、請求項４〜１８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２０】
前記コンフォーマルコーティングの厚さが、２０μｍ未満である、請求項４〜１９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２１】
前記生体表面が、１またはそれより多くの生細胞を含む、請求項４〜２０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２２】
前記１またはそれより多くの生細胞が、インスリン産生細胞である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の組成物または請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記１またはそれより多くの生細胞が、多能性幹細胞である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の組成物または請求項２１に記載の方法。
【請求項２４】
２ｍＭ〜２０ｍＭのグルコースで刺激すると、前記コンフォーマルコーティングに供されていない１またはそれより多くの好適な対照細胞と比べて、前記１またはそれより多くの細胞が、前記１またはそれより多くの好適な対照細胞と実質的に同様である動態で及び／または濃度でインスリンを分泌する、請求項２２に記載の組成物または方法。
【請求項２５】
請求項４〜２４のいずれか１項に記載の方法によって調製された、コンフォーマルコーティングを有する生体表面。
【請求項２６】
薬学的に許容される希釈剤または賦形剤をさらに含み、任意選択的に、前記生体表面が、シリンジ中または生体適合性容器中に含有される、請求項１〜３または２２〜２４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２７】
哺乳類対象の治療方法における使用のための、請求項１〜３または２２〜２６のいずれか１項に記載の組成物であって、前記方法が、前記対象に、治療上有効量の前記組成物を投与することを含み、任意選択的に、前記投与が、直接注射によってまたは生体適合性容器の埋め込みによってのいずれかで行われ得ることを特徴とする、前記組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００７】
また、関連する態様では、本発明によって提供される組成物は、例えば、障害の治療または緩和方法において、ヒトなどの対象に投与することができる。例えば、生物学的機能（例えば、インスリン産生）の欠如あるいは欠乏を特徴とする障害（１型糖尿病などのインスリン欠乏症）が、本発明によって提供される有効量の組成物、例えば、コンフォーマルコーティングを施された生体表面（例えば、インスリン産生細胞）を含む組成物を投与することによって、治療され得る。
特定の実施形態では、例えば、以下が提供される：
（項目１）
ハイドロゲルコンフォーマルコーティングを有する生体表面を含む組成物であって、前記コンフォーマルコーティングを有しない好適な対照生体表面と比べて、前記生体表面が、ｉ）機能を保持する、及びｉｉ）損傷または他の形態の表面修飾を実質的に有しないか、またはごく少量しか有しない、前記組成物。
（項目２）
前記ハイドロゲルが、５〜１０ｋＤａの４アームＰＥＧ、もしくは１００〜２００ｋＤａでありホスホコリン６０〜９０％のメタクリロイルオキシエチルホスホコリンコポリマー、またはそれらの組み合わせなどのマルチアームポリマーの共有結合性架橋ネットワークを含む、項目１に記載の組成物。
（項目３）
ハイドロゲル中での生体表面のコンフォーマルコーティング方法であって、
２つの水性層を含む系を用意することであって、第１の層が、約０．２５％〜約２％（Ｗ／Ｖ）の懸濁化剤、約１％〜約２５％（Ｗ／Ｖ）の第１の官能化マルチアームポリマー、及び前記生体表面の溶液を含み、
第２の層が、糖類のクッション及び約１％〜約２５％（Ｗ／Ｖ）の第２の官能化マルチアームポリマーを含み、前記第２の官能化マルチアームポリマーの官能基が、生理学的条件下で前記第１の官能化マルチアームポリマーの官能基と反応性である、前記用意することと、
前記生体表面を前記第２の層の中に通過させ、それによって前記第１及び第２の官能基が反応し、前記生体表面にコンフォーマルコーティングを施す架橋したハイドロゲルを形成できるようにすることと、を含む、前記方法。
（項目４）
前記第１の官能化マルチアームポリマーが、５〜１０ｋＤａの４アームＰＥＧである、項目３に記載の方法。
（項目５）
前記第１の官能化マルチアームポリマーが、１００〜２００ｋＤａでありホスホコリン６０〜９０％のメタクリロイルオキシエチルホスホコリンコポリマーである、項目３に記載の方法。
（項目６）
前記第１の官能化マルチアームポリマーの前記官能基が、リジン−ＤＢＣＯを含むＤＢＣＯ、またはアジドなどのクリック官能基である、項目３〜５のいずれか１項に記載の方法。
（項目７）
前記第２の官能化マルチアームポリマーが、５〜１０ｋＤａの４アームＰＥＧである、項目３〜６のいずれか１項に記載の方法。
（項目８）
前記第２の官能化マルチアームポリマーが、１００〜２００ｋＤａでありホスホコリン６０〜９０％のメタクリロイルオキシエチルホスホコリンコポリマーである、項目３〜６のいずれか１項に記載の方法。
（項目９）
前記第２の官能化マルチアームポリマーの前記官能基が、アジドまたはＤＢＣＯなどのクリック官能基である、項目３〜８のいずれか１項に記載の方法。
（項目１０）
前記第２の層が第２の懸濁化剤を含み、任意選択的に、前記第２の懸濁化剤が、前記第１の層における前記懸濁化剤と同じである、項目３〜９のいずれか１項に記載の方法。
（項目１１）
前記系が、前記第１の層と前記第２の層との間に介在層を含み、任意選択的に、前記介在層が気層である、項目３〜１０のいずれか１項に記載の方法。
（項目１２）
前記懸濁化剤が、約１％で存在する約１〜８ＭＤａの分子量を有するＰＥＯである、項目３〜１１のいずれか１項に記載の方法。
（項目１３）
ハイドロゲル中での生体表面のコンフォーマルコーティング方法であって、
介在する気層によって分離された２つの水性層を含む系を用意することであって、第１の層が、約０．２５％〜約２％（Ｗ／Ｖ）の懸濁化剤、約１％〜約２５％（Ｗ／Ｖ）の第１の官能化マルチアームポリマー、及び前記生体表面の溶液を含み、
第２の層が、約０．２５％〜約２％（Ｗ／Ｖ）の懸濁化剤、糖類のクッション、及び約１％〜約２５％（Ｗ／Ｖ）の第２の官能化マルチアームポリマーの溶液を含み、前記第２の官能化マルチアームポリマーの官能基が、生理学的条件下で前記第１の官能化マルチアームポリマーの官能基と反応性である、前記用意することと、
前記生体表面を前記第２の層の中に通過させ、それによって前記第１及び第２の官能基が反応し、前記生体表面にコンフォーマルコーティングを施す架橋したハイドロゲルを形成できるようにすることと、を含み、前記第１の官能化マルチアームポリマーが、メタクリロイルオキシエチルホスホコリンコポリマーである、前記方法。
（項目１４）
前記第１の層が、前記第２の層に連続的に添加され、任意選択的に、前記第２の層が、前記混合物が遠心力下で移動できるように寸法決めされた開口部を有する先細サイドアームを通した前記第１の層の前記添加に好適な容器内にある、項目１３に記載の方法。
（項目１５）
前記生体表面が、遠心分離によって前記第２の層の中に通過させられる、項目３〜１４のいずれか１項に記載の方法。
（項目１６）
前記コンフォーマルコーティングの厚さが、約２０μｍ未満である、先行項目のいずれか１項に記載の組成物または方法。
（項目１７）
前記生体表面が、ヒト細胞などの哺乳類細胞などの動物細胞などの、生細胞を含む、先行項目のいずれか１項に記載の組成物または方法。
（項目１８）
前記生細胞がインスリン産生細胞である、項目１７に記載の組成物または方法。
（項目１９）
前記細胞が、誘導多能性幹細胞などの多能性幹細胞である、項目１７または１８に記載の組成物または方法。
（項目２０）
約２ｍＭ〜約２０ｍＭのグルコースで刺激すると、前記コンフォーマルコーティングに供されていない好適な対照細胞と比べて、前記細胞が、前記好適な対照細胞と実質的に同様である動態で及び／または濃度でインスリンを分泌する、項目１９に記載の組成物または方法。
（項目２１）
項目３〜２０のいずれか１項に記載の方法によって調製された、コンフォーマルコーティングを有する生体表面。
（項目２２）
薬学的に許容される希釈剤または賦形剤をさらに含み、任意選択的に、前記生体表面が、シリンジ中または生体適合性容器中に含有される、項目１、２、または１６〜２１のいずれか１項に記載の組成物。
（項目２３）
哺乳類対象の治療方法であって、前記対象に、治療上有効量の項目１、２、または１６〜２２のいずれか１項に記載の組成物を投与することを含み、任意選択的に、前記投与が、直接注射によってまたは生体適合性容器の埋め込みによってのいずれかで行われ得る、前記方法。