【手続補正書】
【提出日】令和3年3月12日(2021.3.12)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒト心筋細胞とインビトロで分化したヒト心外膜細胞またはそのようなヒト心外膜細胞の分化した子孫とを含む、移植用組成物。
【請求項２】
(i) 前記ヒト心筋細胞がインビトロで分化した細胞である、
(ii) 前記心外膜細胞もしくはそれらの子孫、前記心筋細胞、またはその両方が、胚性幹細胞からまたは人工多能性幹細胞から分化した細胞である、
(iii) 前記心外膜細胞もしくはそれらの子孫、前記心筋細胞、またはその両方が、移植レシピエントにとって自己であるiPS細胞から分化した細胞である、もしくは
(iv) 前記心外膜細胞がフィブロネクチンを発現する、
請求項1に記載の移植用組成物。
【請求項３】
ZVAD-FMK、Bcl-XL、シクロスポリンA、ピナシジル、およびIGF-1のうちの1つまたは複数をさらに含む、請求項1または2に記載の移植用組成物。
【請求項４】
前記心筋細胞が、前記心外膜細胞またはその子孫に対して約2:1の比率で存在する、請求項1〜3のいずれか一項に記載の移植用組成物。
【請求項５】
前記心外膜細胞またはそれらの子孫を欠いている同様の組成物よりも少なくとも20%効率的に生着する、請求項1〜4のいずれか一項に記載の移植用組成物。
【請求項６】
請求項1〜5のいずれか一項に記載の移植用組成物を含む、心臓送達装置。
【請求項７】
ZVAD-FMK、Bcl-XL、シクロスポリンA、ピナシジル、およびIGF-1のうちの1つまたは複数を含む培養用培地中またはカクテル中の、インビトロで分化したヒト心外膜細胞または分化したその子孫と物理的に結合したヒト心筋細胞を含む組織粒子。
【請求項８】
(i) 2〜2500個の細胞を含む、
(ii) 心筋細胞と心外膜細胞または分化したその子孫の比率が約2:1である、
(iii) 前記心外膜細胞、前記心筋細胞、またはその両方が、胚性幹細胞からまたは人工多能性幹細胞から分化した細胞である、
(iv) 前記心筋細胞がインビトロで分化した細胞である、もしくは
(v) 前記心筋細胞、前記心外膜細胞、またはその両方が、胚性幹細胞からまたは人工多能性幹細胞からインビトロで分化した細胞である、
請求項7に記載の組織粒子。
【請求項９】
それを必要とする対象の心臓組織に投与される、心筋細胞と混合された心外膜細胞を含む組成物を含む、心臓組織中への心筋細胞の生着を促進するための医薬。
【請求項１０】
前記対象が心筋梗塞症を患ったことがある、請求項9に記載の医薬。
【請求項１１】
心筋細胞と混合された心外膜細胞を含む前記組成物が、請求項1〜5のいずれか一項に記載の移植用組成物であるか、または請求項7または8に記載の組織粒子を含む、請求項9に記載の医薬。
【請求項１２】
それを必要とする対象の心臓組織に投与される、ヒト心外膜細胞と混合されたヒト心筋細胞を含む組成物を含む、移植されたヒト心筋細胞の成熟表現型を促進するための医薬。
【請求項１３】
前記対象が心筋梗塞症を患ったことがある、請求項12に記載の医薬。
【請求項１４】
ヒト心外膜細胞と混合されたヒト心筋細胞を含む前記組成物が、請求項1〜5のいずれか一項に記載の移植用組成物であるか、または請求項7または8に記載の組織粒子を含む、請求項12に記載の医薬。
【請求項１５】
心筋細胞が心外膜細胞と混合されて移植された場合に、心筋細胞成熟度が、心筋細胞移植のみと比較して、筋節長の増加、心筋細胞の直径または長さの増加、トロポニンの心臓アイソフォームのcTnTの発現、およびコネキシン43発現のうちの1つまたは複数によって示される、請求項12〜14のいずれか一項に記載の医薬。
【請求項１６】
それを必要とする対象の心臓組織に投与される、ヒト心外膜細胞と混合されたヒト心筋細胞を含む組成物を含む、心臓の心筋細胞移植体の部位における微小血管密度を増加させるための医薬。
【請求項１７】
前記対象が心筋梗塞症を患ったことがある、請求項16に記載の医薬。
【請求項１８】
ヒト心外膜細胞と混合されたヒト心筋細胞を含む前記組成物が、請求項1〜5のいずれか一項に記載の移植用組成物であるか、または請求項7または8に記載の組織粒子を含む、請求項16または17に記載の医薬。
【請求項１９】
(i) 微小血管密度またはそのマーカーが、心外膜細胞を欠いている心筋細胞移植体が投与された場合に見いだされるものと比較して少なくとも10%増加する、または 
(ii) 微小血管密度が、CD31、VEカドヘリン、フォン・ヴィレブランド因子 (vWF) のうちの1つもしくは複数の発現によって、または血管内皮と優先的に結合するレクチンによる染色によって示される、
請求項16〜18のいずれか一項に記載の医薬。
【請求項２０】
それを必要とする対象の心臓組織に投与される、ヒト心外膜細胞と混合されたヒト心筋細胞を含む組成物を含む、心臓組織における心筋細胞移植片サイズを増加させるための医薬。
【請求項２１】
前記対象が心筋梗塞症を患ったことがある、請求項20に記載の医薬。
【請求項２２】
ヒト心外膜細胞と混合されたヒト心筋細胞を含む前記組成物が、請求項1〜5のいずれか一項に記載の移植用組成物であるか、または請求項7または8に記載の組織粒子を含む、請求項20または21に記載の医薬。
【請求項２３】
心筋細胞移植片サイズが、ヒト心外膜細胞と混合されたヒト心筋細胞を含む組成物を投与することにより、実質的に同じ数のヒト心筋細胞を含むがヒト心外膜細胞を欠いている組成物の投与と比較して少なくとも10%増加する、請求項20〜22のいずれか一項に記載の医薬。
【請求項２４】
インビトロで分化した心筋細胞を心外膜細胞、分化したその子孫、または心外膜細胞馴化培地の存在下で培養する段階を含む、インビトロで分化した心筋細胞の成熟度を促進する方法。
【請求項２５】
(i) 前記心筋細胞および前記心外膜細胞がヒトの細胞である、
(ii) 前記心外膜細胞がインビトロで分化した細胞である、
(iii) 前記心外膜細胞、前記心筋細胞、またはその両方が、胚性幹細胞からまたは人工多能性幹細胞からインビトロで分化した細胞である、もしくは
(iv) 前記心筋細胞成熟度が、人工組織 (engineered tissue)におけるまたは移植片における筋節長の増加、心筋細胞の直径または長さの増加、トロポニンの心臓アイソフォームのcTnTの発現、およびコネキシン43発現のうちの1つまたは複数によって示される、
請求項24に記載の方法。
【請求項２６】
心外膜細胞と混合された心筋細胞を含む移植用組成物を含む、移植された心筋細胞とレシピエント心筋細胞との間の電気的接続を促進するための医薬。
【請求項２７】
(i) 前記心筋細胞および前記心外膜細胞がヒトの細胞である、
(ii) 前記心筋細胞、前記心外膜細胞、またはその両方がインビトロで分化した細胞である、もしくは
(iii) 前記心外膜細胞、前記心筋細胞、またはその両方が、胚性幹細胞からまたは人工多能性幹細胞からインビトロで分化した細胞である、
請求項26に記載の医薬。
【請求項２８】
コネキシン43の発現が、心外膜細胞なしで投与され移植された心筋細胞におけるコネキシン43発現と比較して、心外膜細胞と混合されて投与され移植された心筋細胞において増大する、請求項26または27に記載の医薬。
【請求項２９】
心外膜細胞または分化したその子孫と混合された心筋細胞を含む移植用組成物を含む、移植された心筋細胞の増殖を増大させるための医薬。
【請求項３０】
(i) 前記心筋細胞、前記心外膜細胞、またはその両方がインビトロで分化した細胞である、
(ii) 前記心筋細胞、前記心外膜細胞、またはその両方が、胚性幹細胞からまたは人工多能性幹細胞からインビトロで分化した細胞である、もしくは
(iii) 前記移植用組成物が、請求項1〜5のいずれか一項に記載の組成物を含むか、または請求項7または8に記載の組織粒子を含む、
請求項29に記載の医薬。
【請求項３１】
それを必要とする対象の心臓組織に投与される、請求項1〜5のいずれか一項に記載の組成物、または請求項7または8に記載の組織粒子を含む、心筋梗塞症を処置するための医薬。
【請求項３２】
移植された心筋細胞の生着、増殖、成熟度、または機能のうちの1つまたは複数が、実質的に同じ数の心筋細胞を含むが心外膜細胞を欠いている組成物の投与と比較して改善される、請求項31に記載の方法。
【請求項３３】
インビトロで分化したヒト心筋細胞の調製物を提供する段階；
インビトロで分化したヒト心外膜細胞の調製物を提供する段階；ならびに
ZVAD-FMK、Bcl-XL、シクロスポリンA、ピナシジル、およびIGF-1のうちの1つまたは複数を含む組成物中で該心筋細胞を該心外膜細胞と混合する段階
を含む、心筋細胞移植用組成物を作製する方法。
【請求項３４】
(i) 前記心筋細胞、前記心外膜細胞、またはその両方が、胚性幹細胞からまたは人工多能性幹細胞から分化した細胞である、
(ii) 前記心筋細胞と前記心外膜細胞が約2:1の比率で混合物中に存在する、
(iii) 移植の前に前記心外膜細胞および前記心筋細胞に熱ショックを与える段階をさらに含む、
(iv) 貯蔵用に凍結される前に前記心筋細胞に熱ショックを与え、かつ、該心筋細胞を解凍して、前記方法において用いられる心筋細胞の前記調製物を提供する、もしくは
(v) 心筋細胞移植用組成物を作製するために前記心外膜細胞を使用しようとする前日に、該心外膜細胞に熱ショックを与える、
請求項33に記載の方法。