【手続補正書】
【提出日】令和3年1月15日(2021.1.15)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ａｘｌに結合するためのキメラ抗原受容体であって、
ａ）抗原特異的標的化領域（ＡＳＴＲ）であり、ここでＡｘｌに結合する前記ＡＳＴＲが、Ｈ１、Ｈ２、およびＨ３配列を有する３つの相補性決定領域を含む抗体重鎖可変領域、並びにＬ１、Ｌ２、およびＬ３配列を有する３つの相補性決定領域を含む軽鎖可変領域を含み、ここで
ｉ）前記Ｈ１配列が、Ｘ１ＧＸ２ＴＭＮ（配列番号８７）であり；
ｉｉ）前記Ｈ２配列が、ＬＩＫＰＳＮＧＧＴＳＹＮＱＫＦＫＧ（配列番号８８）であり；
ｉｉｉ）前記Ｈ３配列が、ＧＸ３ＹＸ４ＳＹＸ５ＡＭＤＹ（配列番号８９）であり、
ｉｖ）前記Ｌ１配列が、ＫＡＳＱＤＶＸ６ＳＡＶＡ（配列番号９０）であり；
ｖ）前記Ｌ２配列が、ＷＸ７Ｘ８ＴＲＸ９Ｔ（配列番号９１）であり；および
ｖｉ）前記Ｌ３配列が、ＱＥＨＦＳＸ１０ＰＬＸ１１（配列番号９２）であり；
ここでＸ１はＴまたはＷであり；Ｘ２はＨまたはＡであり；Ｘ３はＨまたはＤであり；Ｘ４はＥまたはＨであり；Ｘ５はＥまたはＦであり；Ｘ６はＳまたはＶであり；Ｘ７はＡまたはＱであり；Ｘ８はＳまたはＤであり；Ｘ９はＨまたはＤであり；Ｘ１０はＴまたはＰであり；およびＸ１１はＴまたはＲであり；
ｂ）膜貫通ドメイン；および
ｃ）細胞内活性化ドメイン
を含み、前記膜貫通ドメインが前記ＡＳＴＲと前記細胞内活性化ドメインとの間に位置する、キメラ抗原受容体。
【請求項２】
前記ＡＳＴＲが、配列番号７９の抗体重鎖および配列番号８０の抗体軽鎖を含む単鎖可変抗体フラグメントと同じＡｘｌのエピトープに結合する、請求項１に記載のキメラ抗原受容体。
【請求項３】
前記重鎖可変領域が、配列番号７９のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載のキメラ抗原受容体。
【請求項４】
前記軽鎖可変領域が、配列番号８０のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載のキメラ抗原受容体。
【請求項５】
前記重鎖可変領域が、配列番号７９のアミノ酸配列を含む、請求項４に記載のキメラ抗原受容体。
【請求項６】
前記重鎖および軽鎖が、リンカーにより分離され、前記リンカーが、６〜１００アミノ酸長である、請求項１〜５のいずれかに記載のキメラ抗原受容体。
【請求項７】
Ｒｏｒ２に結合するためのキメラ抗原受容体であって、
ａ）抗原特異的標的化領域（ＡＳＴＲ）であり、ここでＲｏｒ２に結合する前記ＡＳＴＲが、Ｈ１、Ｈ２、およびＨ３配列を有する３つの相補性決定領域を含む抗体重鎖可変領域、並びにＬ１、Ｌ２、およびＬ３配列を有する３つの相補性決定領域を含む軽鎖可変領域を含み、ここで
ｉ）Ｈ１配列が、ＧＹＴＸ１ＴＥＸ２ＴＸ３Ｈ（配列番号９５）またはＸ４ＧＹＳＩＴＴＧＹＹＷＮ（配列番号９６）であり；
ｉｉ）Ｈ２配列が、ＧＸ５ＮＸ６ＮＮＧＧＴＧＹＮＱＫＦＫＧ（配列番号９７）またはＹＩＴＹＤＧＳＫＮＹＮＰＳＬＫＮ（配列番号９８）であり；
ｉｉｉ）Ｈ３配列が、ＧＳＬＹＳＹＧＮＳＹＦＤＹ（配列番号９９）またはＦＥＧＶＷＸ７ＧＬＤＹ（配列番号１００）であり;
ｉｖ）前記Ｌ１配列が、ＳＡＴＳＳＸ８ＳＹＭＨ（配列番号１０１）またはＲＡＳＥＳＶＤＲＹＧＮＳＦＩＨ（配列番号１０２）であり；
ｖ）前記Ｌ２配列が、Ｘ９ＴＳＮＬＡＳ（配列番号１０３）またはＲＴＹＮＬＥＳ（配列番号１０４）であり；および
ｖｉ）前記Ｌ３配列が、ＱＱＲＳＳＹＰＦＴ（配列番号１０５）またはＱＱＴＮＥＤＰＷＴ（配列番号１０６）であり、
ここでＸ１はＦまたはＥであり；Ｘ２はＹまたはＤ；Ｘ３はＭまたはＤであり；Ｘ４はＴまたはＳであり；Ｘ５はＥまたはＩであり；Ｘ６はＴまたはＤであり；Ｘ７はＹまたはＧであり；Ｘ８がＥまたはＶであり；およびＸ９がＧまたはＨであり；
ｂ）膜貫通ドメイン；および
ｃ）細胞内活性化ドメイン
を含み、前記膜貫通ドメインが前記ＡＳＴＲと前記細胞内活性化ドメインとの間に位置する、キメラ抗原受容体。
【請求項８】
前記キメラ抗原受容体が、ストークドメインおよび共刺激ドメインをさらに含み、前記キメラ抗原受容体が、アミノ末端からカルボキシ末端までに、前記ＡＳＴＲ、前記ストークドメイン、前記膜貫通ドメイン、前記共刺激ドメイン、および前記細胞内活性化ドメインを含み、
前記ストークドメインが、ＣＤ８ストークドメインまたはＣＤ２８ストークドメインであり、
前記膜貫通ドメインが、ＣＤ８膜貫通ドメインまたはＣＤ２８膜貫通ドメインであり、
前記共刺激ドメインが、ＣＤ１３７共刺激ドメイン、ＩＣΔ共刺激ドメイン、Ｃ２８共刺激ドメインであり、またはＩＣΔ共刺激ドメインおよびＣＤ１３７共刺激ドメインの両方を含み、そして
ここで前記細胞内活性化ドメインが、ＣＤ３Ｚ活性化ドメインである、請求項１〜５のいずれかに記載のＡｘｌに結合するためのキメラ抗原受容体、又は請求項７に記載のＲｏｒ２に結合するためのキメラ抗原受容体。
【請求項９】
前記ストークドメインが、ＣＤ２８ストークドメインであり、前記膜貫通ドメインが、ＣＤ２８膜貫通ドメインであり、及び前記共刺激ドメインが、ＩＣΔ共刺激ドメインである、請求項８に記載のＡｘｌに結合するためのキメラ抗原受容体。
【請求項１０】
前記ＡＳＴＲが、７．４のｐＨに比べて、６．７のｐＨでＡｘｌまたはＲｏｒ２に対し増大した結合を示す、条件的活性型ＡＳＴＲである、請求項１〜５のいずれかに記載のＡｘｌに結合するためのキメラ抗原受容体、又は請求項８に記載のＲｏｒ２に結合するためのキメラ抗原受容体。
【請求項１１】
前記ＡＳＴＲが、単鎖抗体、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、（Ｆａｂ’）２フラグメント、Ｆｖフラグメント、および二価の単鎖抗体またはダイアボディから選択される抗体であり、ここで任意に前記ＡＳＴＲが、重鎖および軽鎖を含む単鎖可変フラグメントである、請求項１〜５のいずれかに記載のＡｘｌに結合するためのキメラ抗原受容体、又は請求項７に記載のＲｏｒ２に結合するためのキメラ抗原受容体。
【請求項１２】
Ｔ細胞および／またはＮＫ細胞中で活性なプロモーターに動作可能に連結された核酸配列を含むゲノムを含む、単離組換えＴ細胞および／またはＮＫ細胞であって、前記核酸配列が、請求項１〜５のいずれかに記載のＡｘｌに結合するためのキメラ抗原受容体、又は請求項７に記載のＲｏｒ２に結合するためのキメラ抗原受容体をコードするものであり、任意に、ここで前記キメラ抗原受容体をコードする前記核酸配列が、認識ドメインをさらにコードし、前記認識ドメインをコードする核酸が、リボソームスキップ配列により前記キメラ抗原受容体をコードする核酸から分離される、単離組換えＴ細胞および／またはＮＫ細胞。
【請求項１３】
Ｔ細胞および／またはＮＫ細胞中で活性なプロモーターに動作可能に連結された核酸配列を含むベクターであって、前記核酸配列が、請求項１〜５のいずれかに記載のＡｘｌに結合するためのキメラ抗原受容体、又は請求項７に記載のＲｏｒ２に結合するためのキメラ抗原受容体をコードするものであり、任意に、ここで前記キメラ抗原受容体をコードする前記核酸配列が、認識ドメインをさらにコードし、前記認識ドメインをコードする核酸が、リボソームスキップ配列により前記キメラ抗原受容体をコードする核酸から分離される、ベクター。
【請求項１４】
Ｔ細胞またはＮＫ細胞を活性化する方法であって、標的哺乳動物細胞を、Ｔ細胞および／またはＮＫ細胞と７．０未満のｐＨの微小環境中で接触させることを含み、前記標的哺乳動物細胞がＡｘｌまたはＲｏｒ２を発現し、前記Ｔ細胞またはＮＫ細胞が、それぞれ請求項１〜５のいずれかに記載のＡｘｌに結合するためのキメラ抗原受容体、又は請求項８に記載のＲｏｒ２に結合するためのキメラ抗原受容体を発現し、任意にここで前記微小環境が、チロシンキナーゼ阻害剤を含む、方法。
【請求項１５】
前記接触前に、前記Ｔ細胞またはＮＫ細胞を、ゲノム中に前記キメラ抗原受容体をコードする複製不能組換えレトロウイルス粒子で形質導入し、前記Ｔ細胞またはＮＫ細胞を遺伝子改変することをさらに含む、請求項１４に記載の方法。