【手続補正書】
【提出日】令和3年5月14日(2021.5.14)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
単離された多重特異性抗体であって、変異Ｑ３１１Ｒ、Ｑ３１１Ｋ、Ｔ３０７Ｐ／Ｌ３０９Ｑ、Ｔ３０７Ｐ／Ｖ３０９Ｑ、Ｔ３０７Ｐ／Ｌ３０９Ｑ／Ｑ３１１Ｒ又はＴ３０７Ｐ／Ｖ３０９Ｑ／Ｑ３１１Ｒを有する第１のＣＨ２−ＣＨ３領域と、３０７、３０９及び３１１位に野生型アミノ酸残基を有する第２のＣＨ２−ＣＨ３領域とを含み、残基の番号付けはＥＵインデックスに従う、前記単離された多重特異性抗体。
【請求項２】
（ａ）前記抗体が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２又はＩｇＧ４アイソタイプであり；及び／又は、
（ｂ）前記第２のＣＨ２−ＣＨ３領域と比較して、前記第１のＣＨ２−ＣＨ３領域のプロテインＡリガンドに対する結合が低下しており、必要に応じて、前記プロテインＡリガンドが、例えば、黄色ブドウ球菌のプロテインＡ、Ｚドメイン又はＹドメインを含み、前記Ｚドメインが、配列番号１のアミノ酸配列を有し；及び／又は
（ｃ）前記抗体が、前記第１のＣＨ２−ＣＨ３領域及び前記第２のＣＨ２−ＣＨ３領域に非対称の安定化変異を更に含み、必要に応じて、前記第１のＣＨ２−ＣＨ３領域及び前記第２のＣＨ２−ＣＨ３領域における、又は前記第２のＣＨ２−ＣＨ３領域及び前記第１のＣＨ２−ＣＨ３領域における、前記非対称の安定化変異が、
ｉ）それぞれ、Ｆ４０５Ｌ及びＫ４０９Ｒ、
ｉｉ）それぞれ、野生型及びＦ４０５Ｌ／Ｒ４０９Ｋ、
ｉｉｉ）それぞれ、Ｔ３６６Ｗ及びＴ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖ、
ｉｖ）それぞれ、Ｔ３６６Ｙ／Ｆ４０５Ａ及びＴ３９４Ｗ／Ｙ４０７Ｔ、
ｖ）それぞれ、Ｔ３６６Ｗ／Ｆ４０５Ｗ及びＴ３９４Ｓ／Ｙ４０７Ａ、
ｖｉ）それぞれ、Ｆ４０５Ｗ／Ｙ４０７Ａ及びＴ３６６Ｗ／Ｔ３９４Ｓ、
ｖｉｉ）それぞれ、Ｌ３５１Ｙ／Ｆ４０５Ａ／Ｙ４０７Ｖ及びＴ３９４Ｗ、
ｖｉｉｉ）それぞれ、Ｔ３６６Ｉ／Ｋ３９２Ｍ／Ｔ３９４Ｗ及びＦ４０５Ａ／Ｙ４０７Ｖ、
ｉｘ）それぞれ、Ｔ３６６Ｌ／Ｋ３９２Ｍ／Ｔ３９４Ｗ及びＦ４０５Ａ／Ｙ４０７Ｖ、
ｘ）それぞれ、Ｌ３５１Ｙ／Ｙ４０７Ａ及びＴ３６６Ａ／Ｋ４０９Ｆ、
ｘｉ）それぞれ、Ｌ３５１Ｙ／Ｙ４０７Ａ及びＴ３６６Ｖ／Ｋ４０９Ｆ、
ｘｉｉ）それぞれ、Ｙ４０７Ａ及びＴ３６６Ａ／Ｋ４０９Ｆ、
ｘｉｉｉ）それぞれ、Ｄ３９９Ｋ／Ｅ３５６Ｋ及びＫ４０９Ｄ／Ｋ３９２Ｄ、又は
ｘｉｖ）それぞれ、Ｄ３９９Ｋ／Ｅ３５６Ｋ／Ｅ３５７Ｋ及びＫ４０９Ｄ／Ｋ３９２Ｄ／Ｋ３７０であり；及び／又は
（ｄ）前記第１のＣＨ２−ＣＨ３領域及び前記第２のＣＨ２−ＣＨ３領域が、
ｉ）それぞれ、配列番号２及び２２、
ｉｉ）それぞれ、配列番号３及び２２、
ｉｉｉ）それぞれ、配列番号４及び２２、
ｉｖ）それぞれ、配列番号５及び２２、
ｖ）それぞれ、配列番号６及び２３、
ｖｉ）それぞれ、配列番号７及び２３、
ｖｉｉ）それぞれ、配列番号８及び２３、
ｖｉｉｉ）それぞれ、配列番号９及び２３、
ｉｘ）それぞれ、配列番号１０及び２４、
ｘ）それぞれ、配列番号１１及び２４、
ｘｉ）それぞれ、配列番号１２及び２４、
ｘｉｉ）それぞれ、配列番号１３及び２４、
ｘｉｉｉ）それぞれ、配列番号１４及び２５、
ｘｉｖ）それぞれ、配列番号１５及び２５、
ｘｖ）それぞれ、配列番号１６及び２５、
ｘｖｉ）それぞれ、配列番号１７及び２５、
ｘｖｉｉ）それぞれ、配列番号１８及び２６、
ｘｖｉｉｉ）それぞれ、配列番号１９及び２６、
ｘｉｘ）それぞれ、配列番号２０及び２６、
ｘｘ）それぞれ、配列番号２１及び２６、
ｘｘｉ）それぞれ、配列番号５２及び５４、
ｘｘｉｉ）それぞれ、配列番号５２及び５５、
ｘｘｉｉｉ）それぞれ、配列番号５３及び５４、
ｘｘｉｖ）それぞれ、配列番号５３及び５５、
ｘｘｖ）それぞれ、配列番号５６及び５４、又は
ｘｘｖｉ）それぞれ、配列番号５６及び５５のアミノ酸配列を有し；及び／又は
（ｅ）前記単離された多重特異性抗体が、ＦｃγＲ又はＦｃＲｎに対する前記抗体の結合を調節する少なくとも１つの変異を更に含み、必要に応じて、ＦｃγＲ又はＦｃＲｎに対する前記抗体の結合を調節する前記少なくとも１つの変異が、Ｌ２３４Ａ、Ｆ２３４Ａ、Ｖ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｐ２３８Ｓ、Ｈ２６８Ａ、Ｖ３０９Ｌ、Ａ３３０Ａ、Ｐ３３１Ｓ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｖ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｖ２３４Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓ／Ｈ２６８Ａ／Ｖ３０９Ｌ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓ／Ｈ２６８Ａ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ、Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２９８Ａ／Ｅ３３３Ａ／Ｋ３３４Ａ、Ｆ２４３Ｌ／Ｒ２９２Ｐ／Ｙ３００Ｌ、Ｆ２４３Ｌ／Ｒ２９２Ｐ／Ｙ３００Ｌ／Ｐ３９６Ｌ、Ｆ２４３Ｌ／Ｒ２９２Ｐ／Ｙ３００Ｌ／Ｖ３０５Ｉ／Ｐ３９６Ｌ、Ｇ２３６Ａ／Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２６７Ｅ、Ｓ２６７Ｅ／Ｌ３２８Ｆ、Ｓ２６７Ｅ／Ｉ３３２Ｅ又はＭ２５２Ｙ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６Ｅであり；及び／又は
（ｆ）前記抗体が、第１の軽鎖及び第２の軽鎖を含み、必要に応じて、前記第１の軽鎖及び前記第２の軽鎖が同じアミノ酸配列を有し；及び／又は
（ｇ）前記単離された多重特異性抗体が、２つ以上の抗原に結合し、必要に応じて、前記２つの抗原が、ＰＤ１、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＮＫＰ４６、ＩＣＯＳ、ＧＩＴＲ、ＯＸ４０、ＣＴＬＡ４、ＬＡＧ３、ＴＩＭ３、ＫＩＲａ、ＣＤ７３、ＣＤ３９、ＩＤＯ、ＢＴＬＡ、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ９６、ＣＤ３０、ＨＶＥＭ、ＤＮＡＭ−１、ＬＦＡ、腫瘍抗原、ＥＧＦＲ、ｃＭｅｔ、ＦＧＦＲ、ＲＯＲ１、ＣＤ１２３、ＩＬ１ＲＡＰ、ＦＧＦＲ、メソテリン、ＣＤ３、Ｔ細胞受容体、ＣＤ３２ｂ、ＣＤ３２ａ、ＣＤ１６ａ、ＣＤ１６ｂ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＰ４６、ＣＤ２８、ＣＤ４７、ＤＬＬ、ＣＤ８、ＣＤ８９、ＨＬＡ、Ｂ細胞受容体、又はＣＤ１３７のうちのいずれか２つであり；及び／又は
（ｈ）前記抗体が、二重特異性抗体である、
請求項１に記載の単離された多重特異性抗体。
【請求項３】
変異Ｑ３１１Ｒ、Ｑ３１１Ｋ、Ｔ３０７Ｐ／Ｌ３０９Ｑ、Ｔ３０７Ｐ／Ｖ３０９Ｑ、Ｔ３０７Ｐ／Ｌ３０９Ｑ／Ｑ３１１Ｒ又はＴ３０７Ｐ／Ｖ３０９Ｑ／Ｑ３１１Ｒを有する第１の重鎖又はそのフラグメントと、３０７、３０９及び３１１位に野生型アミノ酸残基を有する第２の重鎖又はそのフラグメントとを含む、単離された多重特異性抗体を製造する方法であって、
ａ）前記変異Ｑ３１１Ｒ、Ｑ３１１Ｋ、Ｔ３０７Ｐ／Ｌ３０９Ｑ、Ｔ３０７Ｐ／Ｖ３０９Ｑ、Ｔ３０７Ｐ／Ｌ３０９Ｑ／Ｑ３１１Ｒ又はＴ３０７Ｐ／Ｖ３０９Ｑ／Ｑ３１１Ｒ  を有する前記第１の重鎖又はそのフラグメントと第１の軽鎖とを含む第１の親抗体を与えることと、
ｂ）３０７、３０９及び３１１位に野生型アミノ酸残基を有する前記第２の重鎖又はそのフラグメントと第２の軽鎖とを含む第２の親抗体を与えることと、
ｃ）前記第１の親抗体と前記第２の親抗体とを試料中で接触させることと、
ｄ）前記試料をインキュベートすることと、
ｅ）プロテインＡリガンド親和性クロマトグラフィーを使用して前記多重特異性抗体を精製することと、を含み、
必要に応じて、
（ｉ）前記プロテインＡリガンド親和性クロマトグラフィーが、ｐＨ勾配を用い、必要に応じて、前記ｐＨ勾配が、約ｐＨ７．０〜約ｐＨ３．０又は約ｐＨ４．６〜約ｐＨ３．４であり；及び／又は
（ｉｉ）前記多量体抗体が、約ｐＨ４．４〜約ｐＨ４．１で溶出し；及び／又は
（ｉｉｉ）前記プロテインＡリガンド親和性クロマトグラフィーが、クエン酸塩緩衝液を用いる、
前記方法。
【請求項４】
（ａ）前記単離された多重特異性抗体が、前記第１の重鎖又はそのフラグメント及び前記第２の重鎖又はそのフラグメントに非対称の安定化変異を更に有し、必要に応じて、前記第１の重鎖若しくはそのフラグメント及び前記第２の重鎖若しくはそのフラグメントにおける、又は前記第２の重鎖若しくはそのフラグメント及び前記第１の重鎖若しくはそのフラグメントにおける、前記非対称の安定化変異が、
ｉ）それぞれ、Ｆ４０５Ｌ及びＫ４０９Ｒ、
ｉｉ）それぞれ、野生型及びＦ４０５Ｌ／Ｒ４０９Ｋ、
ｉｉｉ）それぞれ、Ｔ３６６Ｗ及びＴ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖ、
ｉｖ）それぞれ、Ｔ３６６Ｙ／Ｆ４０５Ａ及びＴ３９４Ｗ／Ｙ４０７Ｔ、
ｖ）それぞれ、Ｔ３６６Ｗ／Ｆ４０５Ｗ及びＴ３９４Ｓ／Ｙ４０７Ａ、
ｖｉ）それぞれ、Ｆ４０５Ｗ／Ｙ４０７Ａ及びＴ３６６Ｗ／Ｔ３９４Ｓ、
ｖｉｉ）それぞれ、Ｌ３５１Ｙ／Ｆ４０５Ａ／Ｙ４０７Ｖ及びＴ３９４Ｗ、
ｖｉｉｉ）それぞれ、Ｔ３６６Ｉ／Ｋ３９２Ｍ／Ｔ３９４Ｗ及びＦ４０５Ａ／Ｙ４０７Ｖ、
ｉｘ）それぞれ、Ｔ３６６Ｌ／Ｋ３９２Ｍ／Ｔ３９４Ｗ及びＦ４０５Ａ／Ｙ４０７Ｖ、
ｘ）それぞれ、Ｌ３５１Ｙ／Ｙ４０７Ａ及びＴ３６６Ａ／Ｋ４０９Ｆ、
ｘｉ）それぞれ、Ｌ３５１Ｙ／Ｙ４０７Ａ及びＴ３６６Ｖ／Ｋ４０９Ｆ、
ｘｉｉ）それぞれ、Ｙ４０７Ａ及びＴ３６６Ａ／Ｋ４０９Ｆ、
ｘｉｉｉ）それぞれ、Ｄ３９９Ｋ／Ｅ３５６Ｋ及びＫ４０９Ｄ／Ｋ３９２Ｄ、又は
ｘｉｖ）それぞれ、Ｄ３９９Ｋ／Ｅ３５６Ｋ／Ｅ３５７Ｋ及びＫ４０９Ｄ／Ｋ３９２Ｄ／Ｋ３７０であり；及び／又は
（ｂ）前記単離された多重特異性抗体が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２又はＩｇＧ４アイソタイプであり；及び／又は
（ｃ）前記第１の軽鎖及び前記第２の軽鎖が同じアミノ酸配列を有し、
前記第１の親抗体及び前記第２の親抗体が、精製抗体として与えられ、
前記第１の親抗体及び前記第２の親抗体が、前記第１の親抗体及び前記第２の親抗体を発現する細胞から回収された細胞培地中で与えられ；及び／又は
（ｄ）前記多重特異性抗体が、二重特異性抗体である、
請求項３に記載の方法。
【請求項５】
同じアミノ酸配列を有する２個の重鎖又はそのフラグメントと２個の軽鎖又はそのフラグメントとを含む、単離された抗体であって、前記２個の重鎖が、変異Ｑ３１１Ｒ、Ｑ３１１Ｋ、Ｔ３０７Ｐ／Ｌ３０９Ｑ、Ｔ３０７Ｐ／Ｖ３０９Ｑ、Ｔ３０７Ｐ／Ｌ３０９Ｑ／Ｑ３１１Ｒ又はＴ３０７Ｐ／Ｖ３０９Ｑ／Ｑ３１１Ｒを有し、残基の番号付けはＥＵインデックスに従う、単離された抗体であって、必要に応じて、
（ａ）前記２個の重鎖又はそのフラグメントが、変異Ｆ４０５Ｌ、Ｋ４０９Ｒ、Ｆ４０５Ｌ／Ｒ４０９Ｋ、Ｔ３６６Ｗ又はＴ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖを更に有し；及び／又は
（ｂ）前記抗体が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２又はＩｇＧ４アイソタイプであり；及び／又は
（ｃ）前記抗体が、配列番号２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、５２、５３又は５６の重鎖ＣＨ２−ＣＨ３領域を含む、
前記単離された抗体。
【請求項６】
単離されたポリヌクレオチドであって、
ａ）変異Ｑ３１１Ｒ、Ｑ３１１Ｋ、Ｔ３０７Ｐ／Ｌ３０９Ｑ、Ｔ３０７Ｐ／Ｖ３０９Ｑ、Ｔ３０７Ｐ／Ｌ３０９Ｑ／Ｑ３１１Ｒ又はＴ３０７Ｐ／Ｖ３０９Ｑ／Ｑ３１１Ｒを有する前記第１のＣＨ２−ＣＨ３領域をコードするポリヌクレオチドを含み、
ｂ）変異Ｑ３１１Ｒ、Ｑ３１１Ｋ、Ｔ３０７Ｐ／Ｌ３０９Ｑ、Ｔ３０７Ｐ／Ｖ３０９Ｑ、Ｔ３０７Ｐ／Ｌ３０９Ｑ／Ｑ３１１Ｒ又はＴ３０７Ｐ／Ｖ３０９Ｑ／Ｑ３１１Ｒを有する前記第１のＣＨ２−ＣＨ３領域と、３０７、３０９及び３１１位に野生型アミノ酸残基を有する前記第２のＣＨ２−ＣＨ３領域とをコードするポリヌクレオチドを含み、
ｃ）配列番号２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、８７、８８又は９１の前記ポリヌクレオチド配列を含み、
ｄ）配列番号２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、５２、５３又は５６の前記ＣＨ２−ＣＨ３領域を含む抗体重鎖をコードする、
前記単離されたポリヌクレオチド。
【請求項７】
ａ）変異Ｑ３１１Ｒ、Ｑ３１１Ｋ、Ｔ３０７Ｐ／Ｌ３０９Ｑ、Ｔ３０７Ｐ／Ｖ３０９Ｑ、Ｔ３０７Ｐ／Ｌ３０９Ｑ／Ｑ３１１Ｒ又はＴ３０７Ｐ／Ｖ３０９Ｑ／Ｑ３１１Ｒを有する前記第１のＣＨ２−ＣＨ３領域をコードする前記単離されたポリヌクレオチド、
ｂ）配列番号２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、８７、８８又は９１のポリヌクレオチド配列を有する、前記単離されたポリヌクレオチド、
ｃ）変異Ｑ３１１Ｒ、Ｑ３１１Ｋ、Ｔ３０７Ｐ／Ｌ３０９Ｑ、Ｔ３０７Ｐ／Ｖ３０９Ｑ、Ｔ３０７Ｐ／Ｌ３０９Ｑ／Ｑ３１１Ｒ又はＴ３０７Ｐ／Ｖ３０９Ｑ／Ｑ３１１Ｒを有する前記第１のＣＨ２−ＣＨ３領域と、３０７、３０９及び３１１位に野生型アミノ酸残基を有する前記第２のＣＨ２−ＣＨ３領域とをコードするポリヌクレオチドを含む、前記単離されたポリヌクレオチド、
ｄ）
ｉ）配列番号２７及び４７、それぞれ、
ｉｉ）配列番号２８及び４７、それぞれ、
ｉｉｉ）配列番号２９及び４７、それぞれ、
ｉｖ）配列番号３０及び４７、それぞれ、
ｖ）配列番号３１及び４８、それぞれ、
ｖｉ）配列番号３２及び４８、それぞれ、
ｖｉｉ）配列番号３３及び４８、それぞれ、
ｖｉｉｉ）配列番号３４及び４８、それぞれ、
ｉｘ）配列番号３５及び４９、それぞれ、
ｘ）配列番号３６及び４９、それぞれ、
ｘｉ）配列番号３７及び４９、それぞれ、
ｘｉｉ）配列番号３８及び４９、それぞれ、
ｘｉｉｉ）配列番号３９及び５０、それぞれ、
ｘｉｖ）配列番号４０及び５０、それぞれ、
ｘｖ）配列番号４１及び５０、それぞれ、
ｘｖｉ）配列番号４２及び５０、それぞれ、
ｘｖｉｉ）配列番号４３及び５１、それぞれ、
ｘｖｉｉｉ）配列番号４４及び５１、それぞれ、
ｘｉｘ）配列番号４５及び５１、それぞれ、
ｘｘ）配列番号４６及び５１、それぞれ、
ｘｘｉ）配列番号８７及び８９、それぞれ、
ｘｘｉｉ）配列番号８７及び９０、それぞれ、
ｘｘｉｉｉ）配列番号８８及び８９、それぞれ、
ｘｘｉｖ）配列番号８８及び９０、それぞれ、
ｘｘｖ）配列番号９２及び８９、それぞれ、又は
ｘｘｖｉ）配列番号９２及び９０、それぞれ、
を含む前記単離されたポリヌクレオチド、あるいは、
ｅ）請求項６に記載のポリヌクレオチド
を含む、ベクター。
【請求項８】
（ａ）請求項７の（ａ）〜（ｄ）のいずれかに記載のポリヌクレオチドを含むベクターを含む宿主細胞であって、必要に応じて、該宿主細胞が、ハイブリドーマ、骨髄腫、ＳＰ２／０、ＮＳ０、Ｕ２６６、ＣＨＯ、ＣＨＯ−Ｋ１ＳＶ、ＣＨＯ−Ｋ１、ＤＧ４４又はＨｅｋ２９３である、前記宿主細胞、あるいは、
（ｂ）請求項７の（ｅ）に記載のポリヌクレオチドを含むベクターを含む宿主細胞。
【請求項９】
請求項１に記載の単離された多重特異性抗体を製造する方法であって、
（ａ）前記多重特異性抗体が発現される条件下で請求項８の（ａ）に記載の宿主細胞を培養することと、
（ｂ）プロテインＡリガンド親和性クロマトグラフィーを使用して前記多重特異性抗体を精製することと
を含む、前記方法。
【請求項１０】
請求項５に記載の単離された抗体を製造する方法であって、前記抗体が発現される条件下で、請求項８の（ｂ）に記載の宿主細胞を培養することを含む、前記方法。
【請求項１１】
第１のポリペプチドと第２のポリペプチドとを含む多量体タンパク質であって、前記第１のポリペプチドが、変異Ｑ３１１Ｒ、Ｑ３１１Ｋ、Ｔ３０７Ｐ／Ｌ３０９Ｑ、Ｔ３０７Ｐ／Ｖ３０９Ｑ、Ｔ３０７Ｐ／Ｌ３０９Ｑ／Ｑ３１１Ｒ又はＴ３０７Ｐ／Ｖ３０９Ｑ／Ｑ３１１Ｒを有する第１のＣＨ２−ＣＨ３領域を含み、前記第２のポリペプチドが、３０７、３０９及び３１１位に野生型アミノ酸残基を有する第２のＣＨ２−ＣＨ３領域を含み、残基の番号付けはＥＵインデックスに従う、前記多量体タンパク質。
【請求項１２】
（ａ）前記第１のＣＨ２−ＣＨ３領域及び前記第２のＣＨ２−ＣＨ３領域が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２又はＩｇＧ４アイソタイプであり；及び／又は
（ｂ）前記第２のＣＨ２−ＣＨ３領域と比較して、前記第１のＣＨ２−ＣＨ３領域のプロテインＡリガンドに対する結合が低下しており、
必要に応じて、前記プロテインＡリガンドが、例えば、黄色ブドウ球菌のプロテインＡ、Ｚドメイン又はＹドメインを含み、
前記Ｚドメインが、配列番号１のアミノ酸配列を有し；及び／又は
（ｃ）前記多量体タンパク質が、前記第１のＣＨ２−ＣＨ３領域及び前記第２のＣＨ２−ＣＨ３領域に非対称の安定化変異を更に有し、
必要に応じて、前記第１のＣＨ２−ＣＨ３領域及び前記第２のＣＨ２−ＣＨ３領域における、又は前記第２のＣＨ２−ＣＨ３領域及び前記第１のＣＨ２−ＣＨ３領域における、前記非対称の安定化変異が、
ｉ）それぞれ、Ｆ４０５Ｌ及びＫ４０９Ｒ、
ｉｉ）それぞれ、野生型及びＦ４０５Ｌ／Ｒ４０９Ｋ、
ｉｉｉ）それぞれ、Ｔ３６６Ｗ及びＴ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖ、
ｉｖ）それぞれ、Ｔ３６６Ｙ／Ｆ４０５Ａ及びＴ３９４Ｗ／Ｙ４０７Ｔ、
ｖ）それぞれ、Ｔ３６６Ｗ／Ｆ４０５Ｗ及びＴ３９４Ｓ／Ｙ４０７Ａ、
ｖｉ）それぞれ、Ｆ４０５Ｗ／Ｙ４０７Ａ及びＴ３６６Ｗ／Ｔ３９４Ｓ、
ｖｉｉ）それぞれ、Ｌ３５１Ｙ／Ｆ４０５Ａ／Ｙ４０７Ｖ及びＴ３９４Ｗ、
ｖｉｉｉ）それぞれ、Ｔ３６６Ｉ／Ｋ３９２Ｍ／Ｔ３９４Ｗ及びＦ４０５Ａ／Ｙ４０７Ｖ、
ｉｘ）それぞれ、Ｔ３６６Ｌ／Ｋ３９２Ｍ／Ｔ３９４Ｗ及びＦ４０５Ａ／Ｙ４０７Ｖ、
ｘ）それぞれ、Ｌ３５１Ｙ／Ｙ４０７Ａ及びＴ３６６Ａ／Ｋ４０９Ｆ、
ｘｉ）それぞれ、Ｌ３５１Ｙ／Ｙ４０７Ａ及びＴ３６６Ｖ／Ｋ４０９Ｆ、
ｘｉｉ）それぞれ、Ｙ４０７Ａ及びＴ３６６Ａ／Ｋ４０９Ｆ、
ｘｉｉｉ）それぞれ、Ｄ３９９Ｋ／Ｅ３５６Ｋ及びＫ４０９Ｄ／Ｋ３９２Ｄ、又は
ｘｉｖ）それぞれ、Ｄ３９９Ｋ／Ｅ３５６Ｋ／Ｅ３５７Ｋ及びＫ４０９Ｄ／Ｋ３９２Ｄ／Ｋ３７０であり；及び／又は
（ｄ）前記第１のＣＨ２−ＣＨ３領域及び前記第２のＣＨ２−ＣＨ３領域が、
ｉ）それぞれ、配列番号２及び２２、
ｉｉ）それぞれ、配列番号３及び２２、
ｉｉｉ）それぞれ、配列番号４及び２２、
ｉｖ）それぞれ、配列番号５及び２２、
ｖ）それぞれ、配列番号６及び２３、
ｖｉ）それぞれ、配列番号７及び２３、
ｖｉｉ）それぞれ、配列番号８及び２３、
ｖｉｉｉ）それぞれ、配列番号９及び２３、
ｉｘ）それぞれ、配列番号１０及び２４、
ｘ）それぞれ、配列番号１１及び２４、
ｘｉ）それぞれ、配列番号１２及び２４、
ｘｉｉ）それぞれ、配列番号１３及び２４、
ｘｉｉｉ）それぞれ、配列番号１４及び２５、
ｘｉｖ）それぞれ、配列番号１５及び２５、
ｘｖ）それぞれ、配列番号１６及び２５、
ｘｖｉ）それぞれ、配列番号１７及び２５、
ｘｖｉｉ）それぞれ、配列番号１８及び２６、
ｘｖｉｉｉ）それぞれ、配列番号１９及び２６、
ｘｉｘ）それぞれ、配列番号２０及び２６、
ｘｘ）それぞれ、配列番号２１及び２６、
ｘｘｉ）それぞれ、配列番号５２及び５４、
ｘｘｉｉ）それぞれ、配列番号５２及び５５、
ｘｘｉｉｉ）それぞれ、配列番号５３及び５４、
ｘｉｖ）それぞれ、配列番号５３及び５５、
ｘｘｖ）それぞれ、配列番号５６及び５４、又は
ｘｖｉ）それぞれ、配列番号５６及び５５のアミノ酸配列を有し、；及び／又は
（ｅ）前記第１のＣＨ２−ＣＨ３領域及び／又は前記第２のＣＨ２−ＣＨ３領域が異種タンパク質に結合されており、必要に応じて、前記異種タンパク質が、ペプチド、受容体の細胞外ドメイン、リガンドの細胞外ドメイン、分泌タンパク質、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、重鎖可変領域（ＶＨ）、軽鎖可変領域（ＶＬ）、フィブロネクチンＩＩＩ型ドメイン及び／又はファイノマーであり、前記異種タンパク質が、前記第１のＣＨ２−ＣＨ３領域及び／又は前記第２のＣＨ２−ＣＨ３領域のＮ末端又はＣ末端に、必要に応じて配列番号５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、９２、９３、９４、９５、９６、９７又は９８のアミノ酸配列を有するリンカーなどのリンカー、を介して結合され；及び／又は
（ｆ）前記多量体タンパク質が抗体であり、必要に応じて前記抗体が、多重特異性、二重特異性又は単一特異性であり；及び／又は
（ｇ）２個、３個又は４個のポリペプチド鎖を含む、
請求項１１に記載の多量体タンパク質。
【請求項１３】
請求項１又は２に記載の単離された多重特異性抗体、あるいは請求項１１又は１２に記載の多量体タンパク質を含む、医薬組成物。
【請求項１４】
変異Ｑ３１１Ｒ、Ｑ３１１Ｋ、Ｔ３０７Ｐ／Ｌ３０９Ｑ、Ｔ３０７Ｐ／Ｖ３０９Ｑ、Ｔ３０７Ｐ／Ｌ３０９Ｑ／Ｑ３１１Ｒ又はＴ３０７Ｐ／Ｖ３０９Ｑ／Ｑ３１１Ｒを有する第１のＣＨ２−ＣＨ３領域と、３０７、３０９及び３１１位に野生型アミノ酸残基を有する第２のＣＨ２−ＣＨ３領域とを含む単離された多量体タンパク質を製造する方法であって、
ａ）前記変異Ｑ３１１Ｒ、Ｑ３１１Ｋ、Ｔ３０７Ｐ／Ｌ３０９Ｑ、Ｔ３０７Ｐ／Ｖ３０９Ｑ、Ｔ３０７Ｐ／Ｌ３０９Ｑ／Ｑ３１１Ｒ又はＴ３０７Ｐ／Ｖ３０９Ｑ／Ｑ３１１Ｒを有する前記第１のＣＨ２−ＣＨ３領域を含む第１の親タンパク質を与えることと、
ｂ）３０７、３０９及び３１１位に前記野生型アミノ酸残基を有する前記第２のＣＨ２−ＣＨ３領域を含む第２の親タンパク質を与えることと、
ｃ）前記第１の親タンパク質と前記第２の親タンパク質とを試料中で接触させることと、
ｄ）前記試料をインキュベートすることと、
ｅ）プロテインＡリガンド親和性クロマトグラフィーを使用して多重特異性タンパク質を精製することと
を含む、前記方法。
【請求項１５】
（ａ）前記多量体タンパク質が、前記第１のＣＨ２−ＣＨ３領域及び前記第２のＣＨ２−ＣＨ３領域に非対称の安定化変異を更に有し、
必要に応じて、前記第１のＣＨ２−ＣＨ３領域及び前記第２のＣＨ２−ＣＨ３領域における、又は前記第２のＣＨ２−ＣＨ３領域及び前記第１のＣＨ２−ＣＨ３領域における、前記非対称の安定化変異が、
ｉ）それぞれ、Ｆ４０５Ｌ及びＫ４０９Ｒ、
ｉｉ）それぞれ、野生型及びＦ４０５Ｌ／Ｒ４０９Ｋ、
ｉｉｉ）それぞれ、Ｔ３６６Ｗ及びＴ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖ、
ｉｖ）それぞれ、Ｔ３６６Ｙ／Ｆ４０５Ａ及びＴ３９４Ｗ／Ｙ４０７Ｔ、
ｖ）それぞれ、Ｔ３６６Ｗ／Ｆ４０５Ｗ及びＴ３９４Ｓ／Ｙ４０７Ａ、
ｖｉ）それぞれ、Ｆ４０５Ｗ／Ｙ４０７Ａ及びＴ３６６Ｗ／Ｔ３９４Ｓ、
ｖｉｉ）それぞれ、Ｌ３５１Ｙ／Ｆ４０５Ａ／Ｙ４０７Ｖ及びＴ３９４Ｗ、
ｖｉｉｉ）それぞれ、Ｔ３６６Ｉ／Ｋ３９２Ｍ／Ｔ３９４Ｗ及びＦ４０５Ａ／Ｙ４０７Ｖ、
ｉｘ）それぞれ、Ｔ３６６Ｌ／Ｋ３９２Ｍ／Ｔ３９４Ｗ及びＦ４０５Ａ／Ｙ４０７Ｖ、
ｘ）それぞれ、Ｌ３５１Ｙ／Ｙ４０７Ａ及びＴ３６６Ａ／Ｋ４０９Ｆ、
ｘｉ）それぞれ、Ｌ３５１Ｙ／Ｙ４０７Ａ及びＴ３６６Ｖ／Ｋ４０９Ｆ、
ｘｉｉ）それぞれ、Ｙ４０７Ａ及びＴ３６６Ａ／Ｋ４０９Ｆ、
ｘｉｉｉ）それぞれ、Ｄ３９９Ｋ／Ｅ３５６Ｋ及びＫ４０９Ｄ／Ｋ３９２Ｄ、
ｘｉｖ）それぞれ、Ｄ３９９Ｋ／Ｅ３５６Ｋ／Ｅ３５７Ｋ及びＫ４０９Ｄ／Ｋ３９２Ｄ／Ｋ３７０であり；及び／又は
（ｂ）前記第１のＣＨ２−ＣＨ３領域及び前記第２のＣＨ２−ＣＨ３領域が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２又はＩｇＧ４アイソタイプであり；及び／又は
（ｃ）前記第１のＣＨ２−ＣＨ３領域及び前記第２のＣＨ２−ＣＨ３領域が、
ｉ）それぞれ、配列番号２及び２２、
ｉｉ）それぞれ、配列番号３及び２２、
ｉｉｉ）それぞれ、配列番号４及び２２、
ｉｖ）それぞれ、配列番号５及び２２、
ｖ）それぞれ、配列番号６及び２３、
ｖｉ）それぞれ、配列番号７及び２３、
ｖｉｉ）それぞれ、配列番号８及び２３、
ｖｉｉｉ）それぞれ、配列番号９及び２３、
ｉｘ）それぞれ、配列番号１０及び２４、
ｘ）それぞれ、配列番号１１及び２４、
ｘｉ）それぞれ、配列番号１２及び２４、
ｘｉｉ）それぞれ、配列番号１３及び２４、
ｘｉｉｉ）それぞれ、配列番号１４及び２５、
ｘｉｖ）それぞれ、配列番号１５及び２５、
ｘｖ）それぞれ、配列番号１６及び２５、
ｘｖｉ）それぞれ、配列番号１７及び２５、
ｘｖｉｉ）それぞれ、配列番号１８及び２６、
ｘｖｉｉｉ）それぞれ、配列番号１９及び２６、
ｘｉｘ）それぞれ、配列番号２０及び２６、
ｘｘ）それぞれ、配列番号２１及び２６、
ｘｘｉ）それぞれ、配列番号５２及び５４、
ｘｘｉｉ）それぞれ、配列番号５２及び５５、
ｘｘｉｉｉ）それぞれ、配列番号５３及び５４、
ｘｘｉｖ）それぞれ、配列番号５３及び５５、
ｘｘｖ）それぞれ、配列番号５６及び５４、又は
ｘｘｖｉ）それぞれ、配列番号５６及び５５のアミノ酸配列を有し、
（ｄ）前記第１のＣＨ２−ＣＨ３領域及び／又は前記第２のＣＨ２−ＣＨ３領域が異種タンパク質に結合されており、
前記異種タンパク質が、例えば、ペプチド、受容体の細胞外ドメイン、リガンドの細胞外ドメイン、分泌タンパク質、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、重鎖可変領域（ＶＨ）、軽鎖可変領域（ＶＬ）、フィブロネクチンＩＩＩ型ドメイン及び／又はファイノマーであり、
前記異種タンパク質が、前記第１のＣＨ２−ＣＨ３領域及び／又は前記第２のＣＨ２−ＣＨ３領域のＮ末端又はＣ末端に、必要に応じて配列番号５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、９２、９３、９４、９５、９６、９７又は９８のアミノ酸配列を有するリンカーなどのリンカーを介して結合され；及び／又は
（ｅ）前記第１の親タンパク質及び前記第２の親タンパク質が、（ｉ）精製タンパク質として与えられるか、（ｉｉ）前記第１の親タンパク質及び前記第２の親タンパク質を発現する細胞から回収された細胞培地中で与えられる、
請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
（ａ）工程ｄ）において還元剤が添加され、必要に応じて、前記還元剤が、２−メルカプトエチルアミン（２−ＭＥＡ）、ジチオトレイトール（ＤＴＴ）、ジチオエリスリトール（ＤＴＥ）、グルタチオン、トリス（２−カルボキシエチル）ホスフィン（ＴＣＥＰ）、Ｌ−システイン又はβ−メルカプトエタノールであり、２−ＭＥＡが、約１０ｍＭ〜約１００ｍＭ又は約２５ｍＭ〜約７５ｍＭの濃度で存在し、又は
（ｂ）工程ｄ）が、約２５℃〜約３７℃の温度で約９０分〜約６時間にわたって行われる、
請求項３又は１４に記載の方法。