【手続補正書】
【提出日】令和3年4月15日(2021.4.15)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ａ．ＬＡＭＰタンパク質のシステイン保存断片と、
ｂ．少なくとも１つの癌抗原と
を含む改善されたＬＡＭＰ構築物。
【請求項２】
ａ．前記抗原が前記システイン保存断片のＮ末端に配置されているか、
ｂ．前記抗原が単一のシステイン保存断片のＣ末端に配置されているか、または
ｃ．前記抗原が２つのシステイン保存断片の間に配置されている、
請求項１に記載の改善されたＬＡＭＰ構築物。
【請求項３】
前記改善されたＬＡＭＰ構築物が次の表１：
【表１−１】
2020518613.tif 000001
【表１−２】
2020518613.tif 000002
【表１−３】
2020518613.tif 000003
【表１−４】
2020518613.tif 000004
【表１−５】
2020518613.tif 000005
【表１−６】
2020518613.tif 000006
【表１−７】
2020518613.tif 000007
【表１−８】
2020518613.tif 000008
【表１−９】
2020518613.tif 000009
【表１−１０】
2020518613.tif 000010
【表１−１１】
2020518613.tif 000011
【表１−１２】
2020518613.tif 000012
【表１−１３】
2020518613.tif 000013
【表１−１４】
2020518613.tif 000014
【表１−１５】
2020518613.tif 000015
【表１−１６】
2020518613.tif 000016
【表１−１７】
2020518613.tif 000017
の列１または列４に記載された少なくとも１つの断片／エピトープを含み、好ましくはＩＬＣ−１、ＩＬＣ−２、ＩＬＣ−３、ＩＬＣ−４、ＩＬＣ−５またはＩＬＣ−６に示すように構築されている、請求項１または２に記載の改善されたＬＡＭＰ構築物。
【請求項４】
各抗原がリンカーによって分離されている、請求項３に記載の改善されたＬＡＭＰ構築物。
【請求項５】
前記リンカーがアミノ酸配列ＧＰＧＰＧまたはＰＭＧＬＰから選択される、請求項４に記載の改善されたＬＡＭＰ構築物。
【請求項６】
前記改善されたＬＡＭＰ構築物が２つ以上のシステイン保存断片を含む、請求項１〜５のいずれか一項に記載の改善されたＬＡＭＰ構築物。
【請求項７】
前記システイン保存断片がＬＡＭＰタンパク質の相同ドメインを含む、請求項１〜６のいずれか一項に記載の改善されたＬＡＭＰ構築物。
【請求項８】
前記改善されたＬＡＭＰ構築物が、ＬＡＭＰタンパク質の膜貫通ドメインをさらに含む、請求項１〜７のいずれか一項に記載の改善されたＬＡＭＰ構築物。
【請求項９】
前記改善されたＬＡＭＰ構築物がシグナル配列をさらに含む、請求項１〜８のいずれか一項に記載の改善されたＬＡＭＰ構築物。
【請求項１０】
前記シグナル配列がＬＡＭＰタンパク質に由来する、請求項９に記載の改善されたＬＡＭＰ構築物。
【請求項１１】
前記ＬＡＭＰタンパク質が、ＬＡＭＰ−１、ＬＡＭＰ２、ＬＡＭＰ−３、ＬＩＭＰ２、Ｍａｃｒｏｓａｉｌｉｎ、Ｅｎｄｏｌｙｎ、ＬＡＭＰ５またはＬＩＭＢＩＣから選択される、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の改善されたＬＡＭＰ構築物。
【請求項１２】
前記ＬＡＭＰタンパク質が配列番号１〜１１３のいずれか１つから選択される、および／または前記癌抗原が配列番号１１４〜１９７のいずれか１つから選択される、請求項１１に記載の改善されたＬＡＭＰ構築物。
【請求項１３】
前記ＬＡＭＰタンパク質が、配列番号１〜１１３と少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一である、および／または前記癌抗原が、配列番号１１４〜１９７と少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一である、請求項１２に記載の改善されたＬＡＭＰ構築物。
【請求項１４】
請求項１〜１３のいずれか一項に記載の改善されたＬＡＭＰ構築物をコードするポリヌクレオチド。
【請求項１５】
請求項１４に記載のポリヌクレオチドを含む宿主細胞。
【請求項１６】
請求項１〜１３のいずれか一項に記載の改善されたＬＡＭＰ構築物、請求項１４に記載のポリヌクレオチド、または請求項１５に記載の宿主細胞を含む組成物。
【請求項１７】
対象に、疾患または障害を軽減または治療する有効量で投与される、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の改善されたＬＡＭＰ構築物、請求項１４に記載のポリヌクレオチド、請求項１５に記載の宿主細胞、または請求項１６に記載の組成物を含む、薬剤。
【請求項１８】
前記薬剤が、プライミングステップと少なくとも１回のブースティングステップを含む投与で使用される、請求項１７に記載の薬剤。
【請求項１９】
前記薬剤が、プライミングステップで使用される、請求項１８に記載の薬剤。
【請求項２０】
前記ブースティングステップが、抗原、改善されたＬＡＭＰ構築物、改善されたＬＡＭＰ構築物によりコードされるポリペプチド、または改善されたＬＡＭＰ構築物を含む細胞の投与を含む、請求項１８または１９に記載の薬剤。
【請求項２１】
プライミングに使用される抗原が、ブースティングに使用される抗原と同じである、請求項１７〜２０のいずれか一項に記載の薬剤。
【請求項２２】
プライミングに使用される抗原が、ブースティングに使用される第２の抗原と同じタンパク質に由来する、請求項１７〜２１のいずれか一項に記載の薬剤。
【請求項２３】
プライミングおよび／またはブースティングに２つ以上の抗原が使用される、請求項１７〜２２のいずれか一項に記載の薬剤。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６２】
【図１９】本明細書および図１〜図１０に記載のＬＡＭＰ構築物に、単独でまたは表１および段落［０１６９］に記載の組み合わせでクローニングできる癌抗原のアミノ酸配列を示す図である。さらに、図１９は、実施例で試験したサバイビン−ＬＡＭＰ構築物のアミノ酸配列を提供する。各構築物のシグナル配列は、小文字と下線付きの文字で表され、サバイビン配列は大文字の白い文字で、黒い影を付けて表され、管腔ドメインは斜体の大文字で表され、膜貫通／細胞質ドメインは大文字で、灰色の影を付けて表され、ＩＬＣ−４では、第２の相同ドメインが太字になっている。追加のアミノ酸（ＬＥおよびＥＦ）がクローニングリンカーの一部として含まれ得る。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１４２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１４２】
具体的には、好ましい一実施形態において、改善されたＬＡＭＰ構築物は、表１に記載の少なくとも１つの癌抗原（好ましくは表１の列４に記載の配列／断片／エピトープ）および／または段落［０１６９］に記載の組み合わせをＬＡＭＰタンパク質のルーメンドメインのＮ末端、ＬＡＭＰタンパク質の少なくとも１つの相同ドメイン、またはＬＡＭＰタンパク質の少なくとも１つのシステイン保存断片に融合したものを含む。例えば、図１のＩＬＣ−２およびＩＬＣ−６を参照。好ましい実施形態では、これらの構築物は、ＬＡＭＰタンパク質の膜貫通ドメイン、および／またはＬＡＭＰタンパク質のサイトゾル尾部も含む。他の好ましい実施形態では、抗原が膜貫通ドメインを含む場合、ＬＡＭＰタンパク質の膜貫通ドメインおよび／またはＬＡＭＰタンパク質のサイトゾル尾部は不要である。好ましい実施形態では、２つの相同ドメインが改善されたＬＡＭＰ構築物に含まれる（例えば、図１のＩＬＣ−１）。さらに好ましい実施形態では、２つの相同ドメインは、ＬＡＭＰ−１、ＬＡＭＰ−２、ＬＡＭＰ−３、またはＥｎｄｏｌｙｎタンパク質に由来する。あるいは、２つの相同ドメインは異なるＬＡＭＰタンパク質に由来する。２つの相同ドメインを含むこれらの構築物には、ＬＡＭＰヒンジドメインも含まれ得る。抗原は全ＬＡＭＰ−１ルーメンドメインと全ＬＡＭＰ−１膜貫通／細胞質尾部との間に常に配置され、ルーメンドメインの断片は強い免疫応答の生成に効果的ではないと報告されているため、この段落で説明した改善されたＬＡＭＰ構築物は先行技術の観点からは予想外である。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１４３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１４３】
別の好ましい実施形態では、改善されたＬＡＭＰ構築物は、表１に記載の少なくとも１つの癌抗原（好ましくは表１の列４に記載の配列／断片／エピトープ）および／または段落［０１６９］に記載の組み合わせをＬＡＭＰタンパク質の単一の相同ドメインのＣ末端またはＬＡＭＰタンパク質の単一のシステイン保存断片に融合したもの（例えば、図１のＩＬＣ−５）を含む。好ましい実施形態では、これらの構築物は、ＬＡＭＰタンパク質の膜貫通ドメイン、および／またはＬＡＭＰタンパク質のサイトゾル尾部（例えば、図１のＩＬＣ−３）も含む。他の好ましい実施形態では、抗原が膜貫通ドメインを含む場合、ＬＡＭＰタンパク質の膜貫通ドメインおよび／またはＬＡＭＰタンパク質のサイトゾル尾部は不要である。表１に記載されている癌抗原は、図１に示すように、完全なＬＡＭＰ構築物に挿入することもできる。あるいは、２つの異なるＬＡＭＰタンパク質からの２つの相同ドメインを使用してもよい。抗原は全ＬＡＭＰ−１ルーメンドメインと全ＬＡＭＰ−１膜貫通／細胞質尾部との間に常に配置され、ルーメンドメインの断片は強い免疫応答の生成に効果的ではないと報告されているため、この段落で説明した改善されたＬＡＭＰ構築物は先行技術の観点からは予想外である。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１４４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１４４】
したがって、改善されたＬＡＭＰ構築物は、表１に記載の少なくとも１つの癌抗原（好ましくは表１の列４に記載の配列／断片／エピトープ）および／または段落［０１６９］に記載の組み合わせをＬＡＭＰタンパク質の単一の相同ドメインのＣ末端またはＬＡＭＰタンパク質の単一のシステイン保存断片に融合したものを含む。例えば、図１のＩＬＣ−３およびＩＬＣ−５を参照。好ましい実施形態では、これらの構築物は、ＬＡＭＰタンパク質の膜貫通ドメイン、および／またはＬＡＭＰタンパク質のサイトゾル尾部も含む。他の好ましい実施形態では、抗原が膜貫通ドメインを含む場合、ＬＡＭＰタンパク質の膜貫通ドメインおよび／またはＬＡＭＰタンパク質のサイトゾル尾部は不要である。この段落で説明されている改善されたＬＡＭＰ構築物は、上記のように先行技術の観点から予想外である。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１４５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１４５】
別の好ましい実施形態では、改善されたＬＡＭＰ構築物は、ＬＡＭＰタンパク質の第１の相同ドメインとＬＡＭＰタンパク質の第２の相同ドメインとの間（または少なくとも２つのシステイン保存断片の間）に融合した少なくとも１つの対象抗原を含む。例えば、図１のＩＬＣ−４を参照。好ましい実施形態では、２つの相同ドメインは、ＬＡＭＰ−１、ＬＡＭＰ−２、ＬＡＭＰ−３、またはＥｎｄｏｌｙｎタンパク質に由来する。これらの構築物において、抗原はＬＡＭＰヒンジ領域に配置され得る。あるいは、２つの異なるＬＡＭＰタンパク質からの２つの相同ドメインを使用してもよい。表１に記載されている少なくとも１つの癌抗原（好ましくは表１の列４に記載されている配列／断片／エピトープ）および／または段落［０１６９］に記載の組み合わせを２つのＬＡＭＰ相同ドメイン（システイン保存断片を含む）の間に融合したものは、上記のように先行技術の観点からは予想外である。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０３８５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０３８５】
本明細書に記載されているものの変形、修正、および他の実装は、本発明および特許請
求の範囲の趣旨および範囲から逸脱することなく、当業者に思い浮かぶであろう。特定さ
れたすべての特許、特許出願、国際出願、および参考文献は、参照によりその全体が本明
細書に明示的に組み込まれる。
本発明は以下の実施形態を含む。
［１］ａ．ＬＡＭＰタンパク質のシステイン保存断片と、
ｂ．少なくとも１つの癌抗原と
を含む改善されたＬＡＭＰ構築物。
［２］ａ．前記抗原が前記システイン保存断片のＮ末端に配置されているか、
ｂ．前記抗原が単一のシステイン保存断片のＣ末端に配置されているか、または
ｃ．前記抗原が２つのシステイン保存断片の間に配置されている、
［１］に記載の改善されたＬＡＭＰ構築物。
［３］前記改善されたＬＡＭＰ構築物が表１の列１または列４に記載された少なくとも１つの断片／エピトープを含み、好ましくはＩＬＣ−１、ＩＬＣ−２、ＩＬＣ−３、ＩＬＣ−４、ＩＬＣ−５またはＩＬＣ−６に示すように構築されている、［１］または［２］に記載の改善されたＬＡＭＰ構築物。
［４］各抗原がリンカーによって分離されている、［３］に記載の改善されたＬＡＭＰ構築物。
［５］前記リンカーがアミノ酸配列ＧＰＧＰＧまたはＰＭＧＬＰから選択される、［４］に記載の改善されたＬＡＭＰ構築物。
［６］前記改善されたＬＡＭＰ構築物が２つ以上のシステイン保存断片を含む、［１］〜［５］のいずれか一項に記載の改善されたＬＡＭＰ構築物。
［７］前記システイン保存断片がＬＡＭＰタンパク質の相同ドメインを含む、［１］〜［６］のいずれか一項に記載の改善されたＬＡＭＰ構築物。
［８］前記改善されたＬＡＭＰ構築物が、ＬＡＭＰタンパク質の膜貫通ドメインをさらに含む、［１］〜［７］のいずれか一項に記載の改善されたＬＡＭＰ構築物。
［９］前記改善されたＬＡＭＰ構築物がシグナル配列をさらに含む、［１］〜［８］のいずれか一項に記載の改善されたＬＡＭＰ構築物。
［１０］前記シグナル配列がＬＡＭＰタンパク質に由来する、［９］に記載の改善されたＬＡＭＰ構築物。
［１１］前記ＬＡＭＰタンパク質が、ＬＡＭＰ−１、ＬＡＭＰ２、ＬＡＭＰ−３、ＬＩＭＰ２、Ｍａｃｒｏｓａｉｌｉｎ、Ｅｎｄｏｌｙｎ、ＬＡＭＰ５またはＬＩＭＢＩＣから選択される、［１］〜［１０］のいずれか一項に記載の改善されたＬＡＭＰ構築物。
［１２］前記ＬＡＭＰタンパク質が配列番号１〜１１３のいずれか１つから選択される、および／または前記癌抗原が配列番号１１４〜１９７のいずれか１つから選択される、［１１］に記載の改善されたＬＡＭＰ構築物。
［１３］前記ＬＡＭＰタンパク質が、配列番号１〜１１３と少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一である、および／または前記癌抗原が、配列番号１１４〜１９７と少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一である、［１２］に記載の改善されたＬＡＭＰ構築物。
［１４］［１］〜［１３］のいずれか一項に記載の改善されたＬＡＭＰ構築物をコードするポリヌクレオチド。
［１５］［１４］に記載のポリヌクレオチドを含む宿主細胞。
［１６］［１］〜［１３］のいずれか一項に記載の改善されたＬＡＭＰ構築物、［１４］に記載のポリヌクレオチド、または［１５］に記載の宿主細胞を含む組成物。
［１７］疾患または障害を有する対象を治療する方法であって、それを必要とする対象に、［１］〜［１３］のいずれか一項に記載の改善されたＬＡＭＰ構築物、［１４］に記載のポリヌクレオチド、［１５］に記載の宿主細胞、または［１６］に記載の組成物を、疾患または障害を軽減または治療するのに十分な量で投与することを含む、方法。
［１８］前記方法が、プライミングステップと少なくとも１回のブースティングステップとを含む、［１７］に記載の方法。
［１９］［１］〜［１３］のいずれか一項に記載の改善されたＬＡＭＰ構築物、［１４］に記載のポリヌクレオチド、［１５］に記載の宿主細胞または［１６］に記載の組成物がプライミングステップで使用される、［１８］に記載の方法。
［２０］前記ブースティングステップが、抗原、改善されたＬＡＭＰ構築物、改善されたＬＡＭＰ構築物によりコードされるポリペプチド、または改善されたＬＡＭＰ構築物を含む細胞の投与を含む、［１８］または［１９］に記載の方法。
［２１］プライミングに使用される抗原がブースティングに使用される抗原と同じである、［１７］〜［２０］のいずれか一項に記載の方法。
［２２］プライミングに使用される抗原が、ブースティングに使用される第２の抗原と同じタンパク質に由来する、［１７］〜［２１］のいずれか一項に記載の方法。
［２３］プライミングおよび／またはブースティングに２つ以上の抗原が使用される、［１７］〜［２２］のいずれか一項に記載の方法。