【手続補正書】
【提出日】令和3年2月22日(2021.2.22)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
昆虫の適応度を低下させる方法であって、ｄｓＲＮＡを含む有効量のポリヌクレオチドを前記昆虫に送達することを含み、前記ｄｓＲＮＡは、それが投与されていない昆虫と比較して、前記昆虫における昆虫バクテリオサイト調節遺伝子又は昆虫免疫調節遺伝子の発現を低減する方法。
【請求項２】
前記遺伝子が、前記バクテリオサイト特異的システインリッチタンパク質ＢＣＲファミリー由来のタンパク質、分泌タンパク質ＳＰファミリー由来のタンパク質、ＢｉｃＤ（プロテインビカウダル（Ｐｒｏｔｅｉｎ  ｂｉｃａｕｄａｌ）Ｄ）、Ｃａｃｔ（カクタス（ｃａｃｔｕｓ））、ＤＩＦ（ドーサル（Ｄｏｒｓａｌ）関連免疫因子）、Ｔｏｌｌ（トール（Ｔｏｌｌ）相互作用タンパク質）、グルタミントランスポータタンパク質、及びｉｍｄ（免疫欠損タンパク質）からなる群から選択されるタンパク質をコードする、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記遺伝子が、表５、表８、又は表９に挙げるタンパク質と少なくとも９０％のアミノ酸配列同一性、少なくとも９５％のアミノ酸配列同一性、又は１００％のアミノ酸配列同一性を有するタンパク質をコードする、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
前記ｄｓＲＮＡが、前記昆虫の遺伝子の１０〜３０ヌクレオチドと相補的である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
前記方法が、前記昆虫の遺伝子の発現を阻害するのに有効である、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
前記方法が、前記薬剤が送達されていない昆虫と比較して、前記昆虫に常在する１種以上の微生物のレベル、多様性、又は代謝を低下させるのに有効である、請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
前記１種以上の微生物が、ブフネラ属種（Ｂｕｃｈｅｎｅｒａ  ｓｐｐ．）である、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記方法は、前記薬剤が送達されていない昆虫と比較して、前記昆虫の適応度を低下させるのに有効である、請求項１〜７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
前記ポリヌクレオチドが、昆虫に対する送達のために製剤化された組成物として送達される、請求項１〜８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
前記送達は、前記害虫が成長、生息、繁殖、摂餌、又は寄生する少なくとも１つの生息場所に前記ポリヌクレオチドを送達することを含む、請求項１〜９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
前記送達が、農作物に前記ポリヌクレオチドを噴霧することを含む、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
前記ポリヌクレオチドが、前記昆虫による摂取のために昆虫が摂食可能な組成物として送達される、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
前記ポリヌクレオチドが、農業的に許容可能な担体と一緒に、液体、固体、エアゾール、ペースト、ゲル、又は気体組成物として製剤化される、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４】
前記昆虫が、アブラムシである、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１５】
昆虫への送達用に製剤化されたｄｓＲＮＡを含むポリヌクレオチドを含む組成物であって、前記ｄｓＲＮＡが、昆虫バクテリオサイト調節遺伝子又は昆虫免疫調節遺伝子の１５〜３０ヌクレオチドと相補的である組成物。
【請求項１６】
前記遺伝子が、前記バクテリオサイト特異的システインリッチタンパク質ＢＣＲファミリー由来のタンパク質、分泌タンパク質ＳＰファミリー由来のタンパク質、ＢｉｃＤ（プロテインビカウダル（Ｐｒｏｔｅｉｎ  ｂｉｃａｕｄａｌ）Ｄ）、Ｃａｃｔ（カクタス（ｃａｃｔｕｓ））、ＤＩＦ（ドーサル（Ｄｏｒｓａｌ）関連免疫因子）、Ｔｏｌｌ（トール（Ｔｏｌｌ）相互作用タンパク質）、グルタミントランスポータタンパク質、及びｉｍｄ（免疫欠損タンパク質）からなる群から選択されるタンパク質をコードする、請求項１５に記載の組成物。
【請求項１７】
前記遺伝子が、表５、表８、又は表９に挙げるタンパク質と少なくとも９０％のアミノ酸配列同一性、９５％のアミノ酸配列同一性、又は１００％のアミノ酸配列同一性を有するタンパク質をコードする、請求項１５又は１６に記載の組成物。
【請求項１８】
請求項１５〜１７のいずれか１項に記載の組成物の局所塗布を含む植物。
【請求項１９】
そのゲノムに組換えＤＮＡ構築物を有するトランスジェニック植物細胞であって、前記組換えＤＮＡ構築物が、少なくとも１つの二本鎖ＲＮＡ領域を含むＲＮＡをコードするＤＮＡに作動可能に連結した異種プロモータを含み、その少なくとも一方の鎖は、昆虫バクテリオサイト調節遺伝子又は昆虫免疫調節遺伝子の１５〜３０ヌクレオチドと相補的であるヌクレオチド配列を含むトランスジェニック植物細胞。
【請求項２０】
前記遺伝子が、前記バクテリオサイト特異的システインリッチタンパク質ＢＣＲファミリー由来のタンパク質、分泌タンパク質ＳＰファミリー由来のタンパク質、ＢｉｃＤ（プロテインビカウダル（Ｐｒｏｔｅｉｎ  ｂｉｃａｕｄａｌ）Ｄ）、Ｃａｃｔ（カクタス（ｃａｃｔｕｓ））、ＤＩＦ（ドーサル（Ｄｏｒｓａｌ）関連免疫因子）、Ｔｏｌｌ（トール（Ｔｏｌｌ）相互作用タンパク質）、グルタミントランスポータタンパク質、及びｉｍｄ（免疫欠損タンパク質）からなる群から選択されるタンパク質をコードする、請求項１９に記載のトランスジェニック植物。
【請求項２１】
前記遺伝子が、表５、表８、又は表９に挙げるタンパク質と少なくとも９０％のアミノ酸配列同一性、９５％のアミノ酸配列同一性、又は１００％のアミノ酸配列同一性を有するタンパク質をコードする、請求項１９又は２０に記載の組成物。
【請求項２２】
昆虫の適応度を低下させる方法であって、真菌溶液が投与されていない昆虫と比較して昆虫の適応度を低下させる真菌溶液を該昆虫に送達することを含む方法。
【請求項２３】
昆虫の適応度の低下は、昆虫の発育の進行の遅延、昆虫の死亡率の増加、昆虫の免疫応答の増加、および／または内共生生物の力価の減少として測定される、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
真菌溶液が噴霧または注射によって送達される、請求項２２または２３に記載の方法。
【請求項２５】
昆虫の適応度を低下させる方法であって、ペプチド核酸（PNA）が投与されていない昆虫と比較して、昆虫における昆虫バクテレオサイト調節遺伝子または昆虫免疫調節遺伝子の発現を低下させ、昆虫の適応度を低下させるペプチド核酸（PNA）を該昆虫に送達することを含む方法。
【請求項２６】
昆虫の適応度の低下が、昆虫の繁殖力の低下、昆虫の死亡率の増加、昆虫の発育の進行の遅延、および／または内共生力価の増加として測定される、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
ＰＮＡが注射によって送達される、請求項２５または２６に記載の方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０６２７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０６２７】
他の実施形態
前述の本発明は、理解を明確にするために説明及び例として幾らか詳細に記載されているが、そうした記載及び例が本発明の範囲を限定するものと解釈されてはならない。本明細書に引用される全ての特許及び科学文献の開示は、全体として参照により明示的に援用される。本開示は以下の実施形態を包含する。 
[１]  昆虫の適応度を低下させる方法であって、ｄｓＲＮＡを含む有効量のポリヌクレオチドを前記昆虫に送達することを含み、前記ｄｓＲＮＡは、それが投与されていない昆虫と比較して、前記昆虫における昆虫バクテリオサイト調節遺伝子又は昆虫免疫調節遺伝子の発現を低減する方法。
[２]  前記遺伝子が、前記バクテリオサイト特異的システインリッチタンパク質ＢＣＲファミリー由来のタンパク質、分泌タンパク質ＳＰファミリー由来のタンパク質、ＢｉｃＤ（プロテインビカウダル（Ｐｒｏｔｅｉｎ  ｂｉｃａｕｄａｌ）Ｄ）、Ｃａｃｔ（カクタス（ｃａｃｔｕｓ））、ＤＩＦ（ドーサル（Ｄｏｒｓａｌ）関連免疫因子）、Ｔｏｌｌ（トール（Ｔｏｌｌ）相互作用タンパク質）、又はｉｍｄ（免疫欠損タンパク質）からなる群から選択されるタンパク質をコードする、実施形態１に記載の方法。
[３]  前記遺伝子が、表５、表８、又は表９に挙げるタンパク質と少なくとも９０％のアミノ酸配列同一性、少なくとも９５％のアミノ酸配列同一性、又は１００％のアミノ酸配列同一性を有するタンパク質をコードする、実施形態１又は２に記載の方法。
[４]  前記ｄｓＲＮＡが、前記昆虫の遺伝子の１０〜３０ヌクレオチドと相補的である、実施形態１〜３のいずれかに記載の方法。
[５]  前記方法が、前記昆虫の遺伝子の発現を阻害するのに有効である、実施形態１〜４のいずれかに記載の方法。
[６]  前記方法が、前記薬剤が送達されていない昆虫と比較して、前記昆虫に常在する１種以上の微生物のレベル、多様性、又は代謝を低下させるのに有効である、実施形態１〜５のいずれかに記載の方法。   
[７]  前記１種以上の微生物が、ブフネラ属種（Ｂｕｃｈｅｎｅｒａ  ｓｐｐ．）である、実施形態６に記載の方法。   
[８]  前記方法は、前記薬剤が送達されていない昆虫と比較して、前記昆虫の適応度を低下させるのに有効である、実施形態１〜７のいずれかに記載の方法。   
[９]  前記ポリヌクレオチドが、昆虫に対する送達のために製剤化された組成物として送達される、実施形態１〜８のいずれかに記載の方法。   
[１０]  前記送達は、前記害虫が成長、生息、繁殖、摂餌、又は寄生する少なくとも１つの生息場所に前記ポリヌクレオチドを送達することを含む、実施形態１〜９のいずれかに記載の方法。   
[１１]  前記送達が、農作物に前記ポリヌクレオチドを噴霧することを含む、実施形態１〜１０のいずれかに記載の方法。   
[１２]  前記ポリヌクレオチドが、前記昆虫による摂取のために昆虫が摂食可能な組成物として送達される、実施形態１〜１１のいずれかに記載の方法。   
[１３]  前記ポリヌクレオチドが、農業的に許容可能な担体と一緒に、液体、固体、エアゾール、ペースト、ゲル、又は気体組成物として製剤化される、実施形態１〜１２のいずれかに記載の方法。   
[１４]  前記昆虫が、アブラムシである、実施形態１〜１３のいずれかに記載の方法。   
[１５]  昆虫への送達用に製剤化されたｄｓＲＮＡを含むポリヌクレオチドを含む組成物であって、前記ｄｓＲＮＡが、昆虫バクテリオサイト調節遺伝子又は昆虫免疫調節遺伝子の１５〜３０ヌクレオチドと相補的である組成物。   
[１６]  前記遺伝子が、前記バクテリオサイト特異的システインリッチタンパク質ＢＣＲファミリー由来のタンパク質、分泌タンパク質ＳＰファミリー由来のタンパク質、ＢｉｃＤ（プロテインビカウダル（Ｐｒｏｔｅｉｎ  ｂｉｃａｕｄａｌ）Ｄ）、Ｃａｃｔ（カクタス（ｃａｃｔｕｓ））、ＤＩＦ（ドーサル（Ｄｏｒｓａｌ）関連免疫因子）、Ｔｏｌｌ（トール（Ｔｏｌｌ）相互作用タンパク質）、及びｉｍｄ（免疫欠損タンパク質）からなる群から選択されるタンパク質をコードする、実施形態１５に記載の組成物。   
[１７]  前記遺伝子が、表５、表８、又は表９に挙げるタンパク質と少なくとも９０％のアミノ酸配列同一性、９５％のアミノ酸配列同一性、又は１００％のアミノ酸配列同一性を有するタンパク質をコードする、実施形態１５又は１６に記載の組成物。   
[１８]  実施形態１５〜１７のいずれかに記載の組成物の局所塗布を含む植物。   
[１９]  そのゲノムに組換えＤＮＡ構築物を有するトランスジェニック植物細胞であって、前記組換えＤＮＡ構築物が、少なくとも１つの二本鎖ＲＮＡ領域を含むＲＮＡをコードするＤＮＡに作動可能に連結した異種プロモータを含み、その少なくとも一方の鎖は、昆虫バクテリオサイト調節遺伝子又は昆虫免疫調節遺伝子の１５〜３０ヌクレオチドと相補的であるヌクレオチド配列を含むトランスジェニック植物細胞。   
[２０]  前記遺伝子が、前記バクテリオサイト特異的システインリッチタンパク質ＢＣＲファミリー由来のタンパク質、分泌タンパク質ＳＰファミリー由来のタンパク質、ＢｉｃＤ（プロテインビカウダル（Ｐｒｏｔｅｉｎ  ｂｉｃａｕｄａｌ）Ｄ）、Ｃａｃｔ（カクタス（ｃａｃｔｕｓ））、ＤＩＦ（ドーサル（Ｄｏｒｓａｌ）関連免疫因子）、Ｔｏｌｌ（トール（Ｔｏｌｌ）相互作用タンパク質）、及びｉｍｄ（免疫欠損タンパク質）からなる群から選択されるタンパク質をコードする、実施形態１９に記載のトランスジェニック植物。   
[２１]  前記遺伝子が、表５、表８、又は表９に挙げるタンパク質と少なくとも９０％のアミノ酸配列同一性、９５％のアミノ酸配列同一性、又は１００％のアミノ酸配列同一性を有するタンパク質をコードする、実施形態１９又は２０に記載の組成物。