【手続補正書】
【提出日】令和3年6月7日(2021.6.7)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
(1)少なくとも(i)ジカウイルス(ZIKV)の膜前駆体(prM)タンパク質、及びZIKVのエンベロープ(E)タンパク質若しくはその切断型変形体、又は(ii)ZIKVのEタンパク質若しくはその切断型変形体をコードするポリヌクレオチド;並びに
(2)麻疹ウイルス(MV)の全長感染性アンチゲノム(+)RNA鎖をコードするcDNA分子
を含み、
少なくとも(i)ZIKVのprMタンパク質、及びZIKVのEタンパク質若しくはその切断型変形体、又は(ii)ZIKVのEタンパク質若しくはその切断型変形体をコードするポリヌクレオチドが、作動可能にcDNA分子に連結されている、核酸構築物。
【請求項２】
少なくとも(i)ZIKVのprMタンパク質、及びZIKVのEタンパク質若しくはその切断型変形体、又は(ii)ZIKVのEタンパク質若しくはその切断型変形体をコードするポリヌクレオチドが、cDNA分子にクローニングされている、
請求項1に記載の核酸構築物。
【請求項３】
(1)のポリヌクレオチドと(2)のcDNA分子とが共に、6の倍数のヌクレオチド数からなることを特徴とする、請求項1又は2に記載の核酸構築物。
【請求項４】
5'〜3'に、以下のポリヌクレオチド:
(a)MVのNタンパク質をコードするポリヌクレオチド;
(b)MVのPタンパク質をコードするポリヌクレオチド;
(c)少なくとも(i)ZIKVのprMタンパク質、及びZIKVのEタンパク質若しくはその切断型変形体、又は(ii)ZIKVのEタンパク質若しくはその切断型変形体をコードするポリヌクレオチド;
(d)MVのMタンパク質をコードするポリヌクレオチド;
(e)MVのFタンパク質をコードするポリヌクレオチド;
(f)MVのHタンパク質をコードするポリヌクレオチド;並びに
(g)MVのLタンパク質をコードするポリヌクレオチド
を含み、
前記ポリヌクレオチドが、核酸構築物において、ウイルス複製及び転写調節配列の制御下で、作動可能に連結されている、
請求項1から3のいずれか一項に記載の核酸構築物。
【請求項５】
前記麻疹ウイルスが、Schwarz株、Zagreb株、AIK-C株及びMoraten株からなる群から選択される弱毒ウイルス株である、請求項1から4のいずれか一項に記載の核酸構築物。
【請求項６】
少なくとも(i)ZIKVのprMタンパク質、及びZIKVのEタンパク質若しくはその切断型変形体、又は(ii)ZIKVのEタンパク質若しくはその切断型変形体をコードする前記ポリヌクレオチドが、マカク属コドン利用について最適化されているか、又はヒトコドン利用について最適化されている、請求項1から5のいずれか一項に記載の核酸構築物。
【請求項７】
麻疹編集様配列が、少なくとも(i)ZIKVのprMタンパク質、及びZIKVのEタンパク質若しくはその切断型変形体、又は(ii)ZIKVのEタンパク質若しくはその切断型変形体をコードする前記ポリヌクレオチドから欠失している、請求項1から6のいずれか一項に記載の核酸構築物。
【請求項８】
前記ZIKVが、アフリカ系統又はアジア株由来である、請求項1から7のいずれか一項に記載の核酸構築物。
【請求項９】
前記アフリカ系統由来のZIKVが、アフリカ株ArB1362(GenBank:KF383115)若しくはアフリカ単離物IbH_30656(GenBank:HQ234500)由来であり、又は、前記アジア株由来のZIKVが、アジア株BeH818995(GenBank:KU365777)由来である、請求項8に記載の核酸構築物。
【請求項１０】
少なくとも(i)ZIKVのprMタンパク質、及びZIKVのEタンパク質又はその切断型変形体をコードする前記ポリヌクレオチドが、(iii)ZIKVのカプシド由来のシグナルペプチド及びZIKVの膜タンパク質由来のシグナルペプチドを更にコードするか、又は
少なくとも(ii)ZIKVのEタンパク質又はその切断型変形体をコードする前記ポリヌクレオチドが、(iii)ZIKVのカプシド由来のシグナルペプチド又はZIKVの膜タンパク質由来のシグナルペプチドを更にコードする、
請求項1から9のいずれか一項に記載の核酸構築物。
【請求項１１】
Eタンパク質をコードするポリヌクレオチドが、全長Eタンパク質、又は全長Eタンパク質の2つのC末端膜貫通ドメインを欠くその可溶型のいずれかをコードする、請求項1から10のいずれか一項に記載の核酸構築物。
【請求項１２】
Eタンパク質の切断型変形体をコードするポリヌクレオチドが、(i)ZIKVの全長Eタンパク質のアミノ酸位置456で切断されたEタンパク質をコードするポリヌクレオチド、(ii)ZIKVの全長Eタンパク質のアミノ酸位置445で切断されたEタンパク質をコードするポリヌクレオチド、及び(iii)ZIKVの全長Eタンパク質のアミノ酸位置404で切断されたEタンパク質をコードするポリヌクレオチドからなる群から選択される、請求項1から11のいずれか一項に記載の核酸構築物。
【請求項１３】
ポリヌクレオチドが、配列が配列番号20であるZIKVのprMタンパク質をコードし、ポリヌクレオチドが、配列が配列番号23、配列番号26、配列番号29及び配列番号32からなる群から選択されるZIKVのEタンパク質又はその切断型変形体をコードする、請求項1から12のいずれか一項に記載の核酸構築物。
【請求項１４】
ZIKVのprMタンパク質をコードするポリヌクレオチドが、配列番号19の配列を有し、ZIKVのEタンパク質又はその切断型変形体をコードするポリヌクレオチドが、配列番号22、配列番号25、配列番号28及び配列番号31からなる群から選択される配列を有する、請求項1から13のいずれか一項に記載の核酸構築物。
【請求項１５】
配列番号46、配列番号52、配列番号55、配列番号70、配列番号76、配列番号79、配列番号168及び配列番号170からなる群から選択される配列を含む、請求項1から14のいずれか一項に記載の核酸構築物。
【請求項１６】
配列番号46、配列番号55又は配列番号76の配列を有する、請求項15に記載の核酸構築物。
【請求項１７】
配列番号46の配列を有する、請求項16に記載の核酸構築物。
【請求項１８】
配列番号165の配列における位置83のヌクレオチド〜位置18404のヌクレオチドの配列、又は配列番号166の配列における位置83のヌクレオチド〜位置18074のヌクレオチドの配列、又は配列番号167の配列における位置83のヌクレオチド〜位置17702のヌクレオチドの配列を含む、請求項1から17のいずれか一項に記載の核酸構築物。
【請求項１９】
請求項1から18のいずれか一項に記載の核酸構築物を含むトランスファーベクタープラスミド。
【請求項２０】
配列が、配列番号165、配列番号166又は配列番号167である、請求項19に記載のトランスファーベクタープラスミド。
【請求項２１】
配列が、配列番号165である、請求項20に記載のトランスファーベクタープラスミド。
【請求項２２】
ゲノムに挿入された請求項1から18のいずれか一項に記載の核酸構築物を含むか、又は請求項19から21のいずれか一項に記載のトランスファーベクタープラスミドを含む形質転換した細胞であって、真核細胞である細胞。
【請求項２３】
ゲノムとして請求項1から18のいずれか一項に記載の核酸構築物を含む組換え感染性複製型麻疹ウイルス-ジカウイルス(MV-ZIKV)粒子。
【請求項２４】
ゲノム内に、配列番号46、配列番号52、配列番号55、配列番号70、配列番号76、配列番号79、配列番号168及び配列番号170からなる群から選択される配列を含むポリヌクレオチド配列を有する、請求項23に記載の組換え感染性複製型MV-ZIKV粒子。
【請求項２５】
ゲノム内に、配列番号46、配列番号55又は配列番号76の配列を含むポリヌクレオチド配列を含む、請求項24に記載の組換え感染性複製型MV-ZIKV粒子。
【請求項２６】
ゲノム内に、配列番号46の配列を含むポリヌクレオチド配列を含む、請求項25に記載の組換え感染性複製型MV-ZIKV粒子。
【請求項２７】
請求項23から26のいずれか一項に記載の組換え感染性複製型MV-ZIKV粒子と同じZIKVタンパク質を発現するZIKVウイルス様粒子(VLP)と共在した前記MV-ZIKV粒子及び薬学的に許容される媒体を含む活性成分の組成物又はアセンブリ。
【請求項２８】
それを必要とする宿主における、ZIKVタンパク質に対する抗体の、及び/又は細胞免疫応答の誘発による、前記ZIKVに対する保護免疫応答の誘発における使用のための請求項27に記載の活性成分の組成物又はアセンブリ。
【請求項２９】
宿主がヒト宿主である、請求項28に記載の活性成分の組成物又はアセンブリ。
【請求項３０】
対象におけるZIKVによる感染の予防における、又は対象におけるZIKVによる感染の臨床結果の予防における使用のための、同じZIKVタンパク質を発現するZIKV-VLPと共在した、請求項23から26のいずれか一項に記載の組換え感染性複製型MV-ZIKV粒子、又は請求項27に記載の活性成分の組成物若しくはアセンブリ。
【請求項３１】
前記対象がヒトであることを特徴とする、同じZIKVタンパク質を発現するZIKV-VLPと共在した、請求項23から26のいずれか一項に記載の組換え感染性複製型MV-ZIKV粒子、又は請求項27に記載の活性成分の組成物若しくはアセンブリ。
【請求項３２】
少なくとも(i)ZIKVの膜前駆体(prM)タンパク質、及びZIKVのエンベロープ(E)タンパク質若しくはその切断型変形体、又は(ii)ZIKVのEタンパク質若しくはその切断型変形体を発現する組換え感染性麻疹ウイルス-ジカウイルス(MV-ZIKV)粒子、並びに同じZIKVタンパク質を発現するZIKVウイルス様粒子(VLP)をレスキューする方法であって:
1)T7 RNAポリメラーゼ並びに麻疹N及びPタンパク質を安定に発現するヘルパー細胞に、(i)請求項19から21のいずれか一項に記載のトランスファーベクタープラスミド、及び(ii)MV Lポリメラーゼをコードするベクターを共トランスフェクトする工程と、
2)組換えMV-ZIKV粒子の生成を可能にする条件下で前記共トランスフェクトしたヘルパー細胞を培養する工程と、
3)工程2)の前記ヘルパー細胞を、増殖を可能にする細胞と共培養することによって、そのようにして生成した組換えMV-ZIKV粒子を増殖させる工程と、
4)少なくとも(i)ZIKVのprMタンパク質、及びZIKVのEタンパク質若しくはその切断型変形体、又は(ii)ZIKVのEタンパク質若しくはその切断型変形体を発現する組換え感染性複製型MV-ZIKV粒子、並びに同じZIKVタンパク質を発現するZIKV VLPを回収する工程と
を含む方法。
【請求項３３】
前記ヘルパー細胞がHEK293ヘルパー細胞であることを特徴とする、請求項32に記載の方法。
【請求項３４】
工程1)における前記ベクターがプラスミドであることを特徴とする、請求項32又は33に記載の方法。
【請求項３５】
工程3)において、増殖を可能にする前記細胞がベロ細胞であることを特徴とする、請求項32から34のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３６】
トランスファーベクタープラスミドが、配列番号165、配列番号166又は配列番号167の配列を有する請求項32から35のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３７】
トランスファーベクタープラスミドが、配列番号165の配列を有する、請求項36に記載の方法。