【手続補正書】
【提出日】令和3年2月8日(2021.2.8)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ミトコンドリアと、
（ｉ）Ｃ末端を有するミトコンドリア標的化ペプチド（ＭＴＰ）、
（ｉｉ）Ｎ末端およびＣ末端を有するＮｉｆＤポリペプチド（ＮＤ）、
（ｉｉｉ）オリゴペプチドリンカー、および
（ｉｖ）Ｎ末端を有するＮｉｆＫポリペプチド（ＮＫ）、
を含む、融合ポリペプチドであって、
前記ＭＴＰのＣ末端が、前記ＮＤのＮ末端に翻訳的に融合され、そして
前記リンカーが、前記ＮＤのＣ末端と前記ＮＫのＮ末端に翻訳的に融合される、
融合ポリペプチドとを含む、植物細胞。
【請求項２】
以下の特徴：
ａ）前記融合ポリペプチドのＣ末端が、ＮＫのＣ末端であり、任意選択で、前記ＮＫのＣ末端が、野生型ＮｉｆＫＣ末端である；
ｂ）前記オリゴペプチドリンカーが、８〜５０個のアミノ酸の長さである；
ｃ）前記融合ポリペプチド中のＮｉｆＤポリペプチドおよびＮｉｆＫポリペプチドが、２つの別個のポリペプチドとして存在したときのＮｉｆＤポリペプチドおよびＮｉｆＫポリペプチドと同じ機能を有する；
ｄ）前記ＭＴＰが、前記融合ポリペプチドがＭＰＰによって切断されて、Ｎ末端切断ペプチドおよび（ｉｉ）〜（ｉｖ）を含むプロセシングされた融合ポリペプチド（ＣＦ）を産生することができるような、マトリックスプロセシングプロテアーゼ（ＭＰＰ）のためのプロテアーゼ切断部位を含み、好ましくは、前記ＣＦが、ＭＴＰのＣ末端アミノ酸の、すべてではなく、いくつか、好ましくはＭＴＰのＣ末端アミノ酸の５〜４５個のアミノ酸を含む；
ｅ）前記ＭＴＰが、少なくとも１０個のアミノ酸、好ましくは１０〜８０個のアミノ酸を含む；
ｆ）前記ＭＴＰが、ミトコンドリアタンパク質前駆体のＭＴＰ、またはその変異体、好ましくは、植物ＭＴＰを含む；
ｇ）前記融合ポリペプチドをコードする外来ポリヌクレオチドが、前記細胞の核ゲノム内に組み込まれる、
の１もしくは複数またはすべてが適用される、請求項１に記載の植物細胞。
【請求項３】
ミトコンドリアと、
（ｉ）Ｃ末端を有するミトコンドリア標的化ペプチド（ＭＴＰ）、
（ｉｉ）Ｎ末端およびＣ末端を有するＮｉｆＥポリペプチド（ＮＥ）、
（ｉｉｉ）オリゴペプチドリンカー、および
（ｉｖ）Ｎ末端を有するＮｉｆＮポリペプチド（ＮＮ）
を含む融合ポリペプチドであって、
前記ＭＴＰのＣ末端が、翻訳的に前記ＮＥのＮ末端に融合され、そして
前記リンカーが、前記ＮＥのＣ末端と前記ＮＮのＮ末端に翻訳的に融合される、
融合ポリペプチドとを含む、植物細胞。
【請求項４】
前記植物細胞が、１もしくは複数のＮｉｆ融合ポリペプチド（ＮＦ）をさらに含み、そして、各ＮＦが、（ｉ）Ｃ末端を有するミトコンドリア標的化ペプチド（ＭＴＰ）および（ｉｉ）Ｎ末端を有するＮｉｆポリペプチド（ＮＰ）を含み、ここで、前記ＭＴＰのＣ末端が、前記ＮＰのＮ末端に翻訳的に融合され、およびここで、それぞれのＭＴＰが、独立に同じであるかまたは異なっており、かつ、それぞれのＮＰが、独立に同じであるかまたは異なっており、そして、ミトコンドリアが、１もしくは複数のＮＦ、および／またはそのプロセシングされた生成物（ＣＦ）を含み、ここで、各ＣＦが、存在する場合、そのＭＴＰ内の対応するＮＦの切断によって産生される、請求項１〜３に記載の植物細胞。
【請求項５】
ａ）前記ＮＦポリペプチドのうち少なくとも１つが、ＮｉｆＨである；および／または
ｂ）前記ミトコンドリアが、（ｉ）ＮｉｆＤ、ＮｉｆＨ、ＮｉｆＫ、ＮｉｆＢ、ＮｉｆＥおよびＮｉｆＮ、または（ｉｉ）ＮｉｆＤ、ＮｉｆＨ、ＮｉｆＫまたはＮｉｆＳから成る群から選択されるＮｉｆポリペプチドのうちの１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、またはそのすべてを含む、請求項４に記載の植物細胞。
【請求項６】
融合ポリペプチドまたはそれから産生されたプロセシングされたＮｉｆポリペプチドであって、前記融合ポリペプチドが、
（ｉ）Ｃ末端を有するミトコンドリア標的化ペプチド（ＭＴＰ）、
（ｉｉ）Ｎ末端およびＣ末端を有するＮｉｆＤポリペプチド（ＮＤ）、
（ｉｉｉ）オリゴペプチドリンカー、および
（ｉｖ）Ｎ末端を有するＮｉｆＫポリペプチド（ＮＫ）、
を含み、
前記ＭＴＰのＣ末端が、前記ＮＤのＮ末端に翻訳的に融合され、
前記リンカーが、前記ＮＤのＣ末端と前記ＮＫのＮ末端に翻訳的に融合され、そして
前記プロセシングされたＮｉｆポリペプチドが、前記融合ポリペプチドのＭＴＰ内の切断によって前記融合ポリペプチドから産生されたものである、
融合ポリペプチドまたはプロセシングされたＮｉｆポリペプチド。
【請求項７】
以下の特徴：
（ｉ）前記融合ポリペプチドのＣ末端が、ＮＫのＣ末端であり、任意選択で、ＮＫのＣ末端が、野生型ＮｉｆＫのＣ末端である、請求項６に記載の融合ポリペプチドまたはプロセシングされたＮｉｆポリペプチド。
（ｉｉ）前記融合ポリペプチドが、マトリックスプロセシングプロテアーゼ（ＭＰＰ）によって切断されて、請求項６の（ｉｉ）〜（ｉｖ）を含んだ、１もしくは複数のプロセシングされたＮｉｆポリペプチド生成物を産生することができる；
（ｉｉｉ）前記融合ポリペプチドが、植物細胞または細菌細胞の中、好ましくは植物細胞のミトコンドリアの中に存在する；
（ｉｖ）前記プロセシングされたＮｉｆポリペプチドが、植物細胞のミトコンドリアマトリックス中のＭＰＰによる融合ポリペプチドの切断によって産生されたものである；
（ｖ）前記プロセシングされたＮｉｆポリペプチドが、植物細胞または細菌細胞の中、好ましくは植物ミトコンドリアの中、より好ましくは植物細胞ミトコンドリアのミトコンドリアマトリックス（ＭＭ）の中に存在する；および
（ｖｉ）前記融合ポリペプチドまたは前記プロセシングされたＮｉｆポリペプチドが、対応する野生型Ｎｉｆポリペプチドと同じ生化学的活性を有し、好ましくは、任意選択で細菌細胞において測定される場合、対応する野生型Ｎｉｆポリペプチドとほぼ同じレベルの生化学的活性を有する、
の１もしくは複数またはすべてが適用される、請求項６に記載の融合ポリペプチドまたはプロセシングされたＮｉｆポリペプチド。
【請求項８】
請求項６または７に記載の融合ポリペプチドまたはプロセシングされたＮｉｆポリペプチドのうちの１もしくは複数をコードするポリヌクレオチドまたは前記ポリヌクレオチドを含むキメラベクター。
【請求項９】
以下の特徴：
（ｉ）前記ポリヌクレオチドが、細菌の対応するＮｉｆタンパク質をコードする天然のポリヌクレオチドに対して、植物細胞における発現のためにコドン修飾されている；
（ｉｉ）前記キメラベクターが、前記ポリヌクレオチドに作動可能に連結されたプロモーターをさらに含む；そして
（ｉｉｉ）前記ポリヌクレオチドまたは前記キメラベクターが、植物細胞内または細菌細胞内に存在し、好ましくは、前記植物細胞の核ゲノム内に組み込まれている、
の１もしくは複数が適用される、請求項８に記載のポリヌクレオチドまたはキメラベクター。
【請求項１０】
トランスジェニック植物を産生する方法であって、前記方法が、以下のステップ：
ｉ）請求項８または９に記載のポリヌクレオチドまたはベクター植物細胞内に導入し、
ｉｉ）前記細胞からトランスジェニック植物を再生すること、および
ｉｉｉ）任意選択で、前記植物から種子を採取すること、および／または
ｉｖ）任意選択で、前記トランスジェニック植物から１もしくは複数の子孫植物を産生し、それによって、トランスジェニック植物を産生すること、
を含む方法。
【請求項１１】
請求項１〜５のいずれか１項に記載の細胞を含むか、または請求項１０に記載の方法により産生されたトランスジェニック植物または種子などのその部分であって、前記トランスジェニック植物またはその部分が、前記融合ポリペプチドをコードする１もしくは複数の外来ポリヌクレオチドのトランスジェニックである、トランスジェニック植物またはその部分。
【請求項１２】
以下の特徴：
ｉ）１つ、複数、またはすべての外来ポリヌクレオチドが、植物の根で発現されており、好ましくは、植物の葉よりも植物の根で優れたレベルで発現されている；
ｉｉ）前記トランスジェニック植物が、コムギ、コメ、トウモロコシ、トリティカーレ、オートムギ、またはオオムギ、好ましくはコムギなどの穀物用植物である；
ｉｉｉ）前記トランスジェニック植物またはその部分が、前記外来ポリヌクレオチドのホモ接合体またはヘテロ接合体である；そして
ｉｖ）前記トランスジェニック植物が、田畑に生えている、
の１もしくは複数またはすべてが適用される、請求項１１に記載のトランスジェニック植物またはその部分。
【請求項１３】
田畑に生えている、請求項１１または１２に記載の植物の少なくとも１００本の集団。
【請求項１４】
請求項１１または１２に記載のトランスジェニック植物またはその部分から製品を製造する方法であって、好ましくは、前記製品は、フラワー、全粒粉、デンプン、油脂、またはシードミールであり、前記方法は、前記トランスジェニック植物またはその部分から、前記製品を抽出するか、またはシードミールを製造すること、
を含む方法。
【請求項１５】
食品を調製する方法であって、請求項１１または１２に記載のトランスジェニック植物由来の種子、または前記種子由来のフラワー、全粒粉もしくはデンプンを、別の食品成分と混合することを含む方法。