【手続補正書】
【提出日】令和3年10月14日(2021.10.14)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ｍＲＮＡの細胞内送達のためのｍＲＮＡ送達複合体を含む組成物であって、前記ｍＲＮＡ送達複合体が、細胞膜透過ペプチド（ＣＰＰ）および前記ｍＲＮＡを含み、前記細胞膜透過ペプチドが、ＡＤＧＮ−１００ペプチド、ＶＥＰＥＰ−３ペプチド、ＶＥＰＥＰ−６ペプチド、およびＶＥＰＥＰ−９ペプチドからなる群から選択される、組成物。
【請求項２】
ｍＲＮＡの細胞内送達のためのｍＲＮＡ送達複合体を含む組成物であって、前記ｍＲＮＡ送達複合体が、細胞膜透過ペプチド（ＣＰＰ）および前記ｍＲＮＡを含み、前記ｍＲＮＡ送達複合体が、
ａ）前記ｍＲＮＡを含む第１の溶液を前記ＣＰＰを含む第２の溶液と混合して第３の溶液を形成するステップであって、前記第３の溶液が、ｉ）約０〜５％のスクロース、ｉｉ）約０〜５％のグルコース、ｉｉｉ）約０〜５０％のＤＭＥＭ、ｉｖ）約０〜８０ｍＭのＮａＣｌ、もしくはｖ）約０〜２０％のＰＢＳを含むかまたは含むように調整される、ステップと；
ｂ）前記第３の溶液をインキュベートして、前記ｍＲＮＡ送達複合体の形成を可能とするステップと
を含むプロセスによって調製される、組成物。
【請求項３】
ｍＲＮＡの細胞内送達のためのｍＲＮＡ送達複合体を含む組成物であって、前記ｍＲＮＡ送達複合体が、細胞膜透過ペプチド（ＣＰＰ）および前記ｍＲＮＡを含み、前記ｍＲＮＡが、治療用タンパク質をコードする、組成物。
【請求項４】
ｍＲＮＡの細胞内送達のためのｍＲＮＡ送達複合体を含む組成物であって、前記ｍＲＮＡ送達複合体が、細胞膜透過ペプチド（ＣＰＰ）および前記ｍＲＮＡを含み、前記ｍＲＮＡ送達複合体が、ＲＮＡｉをさらに含む、組成物。
【請求項５】
前記ｍＲＮＡが、疾患または状態を処置するための治療用タンパク質をコードし、前記ＲＮＡｉが、ＲＮＡを標的とし、前記ＲＮＡの発現が、前記疾患または状態に関連する、請求項４に記載の組成物。
【請求項６】
前記細胞膜透過ペプチドが、ＡＤＧＮ−１００ペプチドまたはＶＥＰＥＰ−６ペプチドである、請求項１から５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項７】
前記細胞膜透過ペプチドが、前記ｍＲＮＡに共有結合によって連結している、請求項１から６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項８】
前記細胞膜透過ペプチドが、そのＮ末端に共有結合によって連結しているアセチル基を含む、請求項１から７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項９】
前記細胞膜透過ペプチドが、そのＣ末端に共有結合によって連結しているシステアミド基を含む、請求項１から８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１０】
前記ｍＲＮＡ送達複合体における前記細胞膜透過ペプチドの少なくとも一部が、連結によりターゲティング部分に連結している、請求項１から９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１１】
前記細胞膜透過ペプチドの前記ｍＲＮＡに対するモル比が、約１：１〜約１００：１の間である、請求項１から１０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１２】
前記ｍＲＮＡ送達複合体の平均直径が、約２０ｎｍ〜約１０００ｎｍの間である、請求項１から１１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１３】
請求項１から１２のいずれか一項に記載の組成物を含むコアを含むナノ粒子。
【請求項１４】
前記コアが、１つまたは複数の追加の、請求項１から１２のいずれか一項に記載の組成物をさらに含む、請求項１２に記載のナノ粒子。
【請求項１５】
前記コアが、ＲＮＡｉをさらに含む、請求項１３または１４に記載のナノ粒子。
【請求項１６】
前記ＲＮＡｉが、下方調節のために発癌遺伝子を標的とする、請求項１５に記載のナノ粒子。
【請求項１７】
前記コアが、末梢細胞膜透過ペプチドを含むシェルにより被覆されている、請求項１３から１６のいずれか一項に記載のナノ粒子。
【請求項１８】
前記末梢細胞膜透過ペプチドが、ＡＤＧＮ−１００ペプチド、ＰＥＰ−１ペプチド、ＰＥＰ−２ペプチド、ＰＥＰ−３ペプチド、ＶＥＰＥＰ−３ペプチド、ＶＥＰＥＰ−６ペプチド、およびＶＥＰＥＰ−９ペプチドからなる群から選択される、請求項１７に記載のナノ粒子。
【請求項１９】
請求項１から１２のいずれか一項に記載の組成物または請求項１３から１８のいずれか一項に記載のナノ粒子と、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物。
【請求項２０】
請求項１から１２のいずれか一項に記載の組成物を調製する方法であって、前記細胞膜透過ペプチドを１つまたは複数のｍＲＮＡと組み合わせるステップを含み、それによって前記ｍＲＮＡ送達複合体を形成する方法。
【請求項２１】
前記細胞膜透過ペプチドおよび前記ｍＲＮＡが、それぞれ、約１：１〜約１００：１のモル比で組み合わされる、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記組み合わせるステップが、前記ｍＲＮＡを含む第１の溶液を前記ＣＰＰを含む第２の溶液と混合して第３の溶液を形成するステップであって、前記第３の溶液が、ｉ）約０〜５％のスクロース、ｉｉ）約０〜５％のグルコース、ｉｉｉ）約０〜５０％のＤＭＥＭ、ｉｖ）約０〜８０ｍＭのＮａＣｌ、もしくはｖ）約０〜２０％のＰＢＳを含むかまたは含むように調整され、前記第３の溶液が、前記ｍＲＮＡ送達複合体の形成を可能とするようにインキュベートされる、ステップを含む、請求項２０または２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記第１の溶液が、滅菌水中に前記ｍＲＮＡを含む、および／または前記第２の溶液が、滅菌水中に前記ＣＰＰを含む、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記第３の溶液が、インキュベートした後に、ｉ）約０〜５％のスクロース、ｉｉ）約０〜５％のグルコース、ｉｉｉ）約０〜５０％のＤＭＥＭ、ｉｖ）約０〜８０ｍＭのＮａＣｌ、またはｖ）約０〜２０％のＰＢＳを含むように調整されて、前記ｍＲＮＡ送達複合体を形成する、請求項２２または２３に記載の方法。
【請求項２５】
１つまたは複数のｍＲＮＡを細胞に送達するための、請求項１から１２のいずれか一項に記載の組成物または請求項１３から１８のいずれか一項に記載のナノ粒子であって、前記組成物または前記ナノ粒子が、前記細胞と接触されることを特徴とし、前記組成物または前記ナノ粒子が、前記１つまたは複数のｍＲＮＡを含む、組成物またはナノ粒子。
【請求項２６】
個体の疾患を処置するための請求項１９に記載の医薬組成物。
【請求項２７】
前記疾患が、がん、糖尿病、自己免疫疾患、血液疾患、心疾患、血管疾患、炎症性疾患、線維性疾患、ウイルス感染性疾患、遺伝性疾患、眼疾患、肝臓疾患、肺疾患、筋肉疾患、タンパク質欠損疾患、リソソーム蓄積症、神経学的疾患、腎臓疾患、老化および変性疾患、ならびにコレステロールレベル異常によって特徴付けられる疾患からなる群から選択される、請求項２６に記載の医薬組成物。
【請求項２８】
前記疾患が、タンパク質欠損疾患である、請求項２７に記載の医薬組成物。
【請求項２９】
前記疾患が、がんである、請求項２７に記載の医薬組成物。
【請求項３０】
前記医薬組成物が、前記がんの発症および／または進行に関与する発癌遺伝子を標的とするＲＮＡｉをさらに含む、請求項２９に記載の医薬組成物。
【請求項３１】
前記個体がヒトである、請求項２６から３０のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項３２】
請求項１から１２のいずれか一項に記載の組成物および／または請求項１３から１８のいずれか一項に記載のナノ粒子を含む組成物を含むキット。
【請求項３３】
個体のがんを処置するための、腫瘍抑制タンパク質をコードするｍＲＮＡを含む組成物であって、前記腫瘍抑制タンパク質が、ＰＴＥＮ、網膜芽細胞腫ＲＢ（またはＲＢ１）、ＴＰ５３、ＴＰ６３、ＴＰ７３、ＣＤＫＮ２Ａ（ＩＮＫ４Ａ）、ＣＤＫＮ１Ｂ、ＣＤＫＮ１Ｃ、ＤＬＤ／ＮＰ１、ＨＥＰＡＣＡＭ、ＳＤＨＢ、ＳＤＨＤ、ＳＦＲＰ１、ＴＣＦ２１、ＴＩＧ１、ＭＬＨ１、ＭＳＨ２、ＭＳＨ６、ＷＴ１、ＷＴ２、ＮＦ１、ＮＦ２Ｎ、ＶＨＬ、ＫＬＦ４、ｐＶＨＬ、ＡＰＣ、ＣＤ９５、ＳＴ５、ＹＰＥＬ３、ＳＴ７、ＡＰＣ、ＭＡＤＲ２、ＢＲＣＡ１、ＢＲＣＡ２、パッチド、ＴＳＣ１、ＴＳＣ２、ＰＡＬＢ２、ＳＴ１４、またはＶＨＬから選択される腫瘍抑制遺伝子に対応する、組成物。
【請求項３４】
発癌遺伝子を標的とするｓｉＲＮＡと組み合わせて投与されることを特徴とする、請求項３３に記載の組成物。
【請求項３５】
前記発癌遺伝子が、ＫＲＡＳを含む、請求項３４に記載の組成物。
【請求項３６】
前記ｓｉＲＮＡが、ＫＲＡＳの変異体形態を標的とし、ＫＲＡＳの前記変異体形態が、ＫＲＡＳのコドン１２または６１上に変異を含む、請求項３５に記載の組成物。
【請求項３７】
前記腫瘍抑制遺伝子が、ＰＴＥＮおよびＴＰ５３から選択される、請求項３３から３６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３８】
前記がんが、膵がん、卵巣がん、前立腺がんおよび神経膠芽腫から選択される、請求項３３から３７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３９】
前記個体が、前記腫瘍抑制遺伝子に異常を含む、請求項３３から３８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項４０】
前記個体が、前記発癌遺伝子に異常を含む、請求項３４から３９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項４１】
個体の疾患または状態を処置するための、治療用タンパク質またはその組換え形態をコードするｍＲＮＡを含む組成物であって、前記治療用タンパク質が、アルファ１アンチトリプシン、フラタキシン、インスリン、成長ホルモン（ソマトトロピン）、成長因子、ホルモン、ジストロフィン、インスリン様成長因子１（ＩＧＦ１）、第ＶＩＩＩ因子、第ＩＸ因子、アンチトロンビンＩＩＩ、プロテインＣ、β−グルコ−セレブロシダーゼ、アルグルコシダーゼ−α，α−ｌ−イズロニダーゼ、イズロン酸−２−スルファターゼ、ガルスルファーゼ、ヒトα−ガラクトシダーゼＡ、α−１−プロテイナーゼインヒビター、ラクターゼ、膵酵素（リパーゼ、アミラーゼ、およびプロテアーゼを含む）、アデノシンデアミナーゼ、およびアルブミンからなる群から選択される、組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４０】
一部の実施形態では、上記の実施形態のいずれかによるｍＲＮＡ送達複合体および／または上記の実施形態のいずれかによるナノ粒子を含む組成物を含むキットが提供される。
本発明は、例えば以下の項目を提供する。
（項目１）
細胞膜透過ペプチド（ＣＰＰ）およびｍＲＮＡを含む、前記ｍＲＮＡの細胞内送達のためのｍＲＮＡ送達複合体であって、前記細胞膜透過ペプチドが、ＶＥＰＥＰ−３ペプチド、ＶＥＰＥＰ−６ペプチド、ＶＥＰＥＰ−９ペプチド、およびＡＤＧＮ−１００ペプチドからなる群から選択される、ｍＲＮＡ送達複合体。
（項目２）
細胞膜透過ペプチド（ＣＰＰ）およびｍＲＮＡを含む、前記ｍＲＮＡの細胞内送達のためのｍＲＮＡ送達複合体であって、
ａ）前記ｍＲＮＡを含む第１の溶液を前記ＣＰＰを含む第２の溶液と混合して第３の溶液を形成するステップであって、前記第３の溶液が、ｉ）約０〜５％のスクロース、ｉｉ）約０〜５％のグルコース、ｉｉｉ）約０〜５０％のＤＭＥＭ、ｉｖ）約０〜８０ｍＭのＮａＣｌ、もしくはｖ）約０〜２０％のＰＢＳを含むかまたは含むように調整される、ステップと；
ｂ）前記第３の溶液をインキュベートして、前記ｍＲＮＡ送達複合体の形成を可能とするステップと
を含むプロセスによって調製される、ｍＲＮＡ送達複合体。
（項目３）
細胞膜透過ペプチド（ＣＰＰ）およびｍＲＮＡを含む、前記ｍＲＮＡの細胞内送達のためのｍＲＮＡ送達複合体であって、前記ｍＲＮＡが、治療用タンパク質をコードする、ｍＲＮＡ送達複合体。
（項目４）
細胞膜透過ペプチド（ＣＰＰ）およびｍＲＮＡを含む、前記ｍＲＮＡの細胞内送達のためのｍＲＮＡ送達複合体であって、ＲＮＡｉをさらに含む、ｍＲＮＡ送達複合体。
（項目５）
前記ｍＲＮＡが、疾患または状態を処置するための治療用タンパク質をコードし、前記ＲＮＡｉが、ＲＮＡを標的とし、前記ＲＮＡの発現が、前記疾患または状態に関連する、項目４に記載のｍＲＮＡ送達複合体。
（項目６）
前記細胞膜透過ペプチドが、ＶＥＰＥＰ−６ペプチドまたはＡＤＧＮ−１００ペプチドである、項目１から５のいずれか一項に記載のｍＲＮＡ送達複合体。
（項目７）
前記細胞膜透過ペプチドが、前記ｍＲＮＡに共有結合によって連結している、項目１から６のいずれか一項に記載のｍＲＮＡ送達複合体。
（項目８）
前記細胞膜透過ペプチドが、そのＮ末端に共有結合によって連結しているアセチル基を含む、項目１から７のいずれか一項に記載のｍＲＮＡ送達複合体。
（項目９）
前記細胞膜透過ペプチドが、そのＣ末端に共有結合によって連結しているシステアミド基を含む、項目１から８のいずれか一項に記載のｍＲＮＡ送達複合体。
（項目１０）
前記ｍＲＮＡ送達複合体における前記細胞膜透過ペプチドの少なくとも一部が、連結によりターゲティング部分に連結している、項目１から９のいずれか一項に記載のｍＲＮＡ送達複合体。
（項目１１）
前記細胞膜透過ペプチドの前記ｍＲＮＡに対するモル比が、約１：１〜約１００：１の間である、項目１から１０のいずれか一項に記載のｍＲＮＡ送達複合体。
（項目１２）
前記ｍＲＮＡ送達複合体の平均直径が、約２０ｎｍ〜約１０００ｎｍの間である、項目１から１１のいずれか一項に記載のｍＲＮＡ送達複合体。
（項目１３）
項目１から１２のいずれか一項に記載のｍＲＮＡ送達複合体を含むコアを含むナノ粒子。
（項目１４）
前記コアが、１つまたは複数の追加の、項目１から１２のいずれか一項に記載のｍＲＮＡ送達複合体をさらに含む、項目１２に記載のナノ粒子。
（項目１５）
前記コアが、ＲＮＡｉをさらに含む、項目１３または１４に記載のナノ粒子。
（項目１６）
前記ＲＮＡｉが、下方調節のために発癌遺伝子を標的とする、項目１５に記載のナノ粒子。
（項目１７）
前記コアが、末梢細胞膜透過ペプチドを含むシェルにより被覆されている、項目１３から１６のいずれか一項に記載のナノ粒子。
（項目１８）
前記末梢細胞膜透過ペプチドが、ＰＥＰ−１ペプチド、ＰＥＰ−２ペプチド、ＰＥＰ−３ペプチド、ＶＥＰＥＰ−３ペプチド、ＶＥＰＥＰ−６ペプチド、ＶＥＰＥＰ−９ペプチド、およびＡＤＧＮ−１００ペプチドからなる群から選択される、項目１７に記載のナノ粒子。
（項目１９）
項目１から１２のいずれか一項に記載のｍＲＮＡ送達複合体または項目１３から１８のいずれか一項に記載のナノ粒子と、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物。
（項目２０）
項目１から１２のいずれか一項に記載のｍＲＮＡ送達複合体を調製する方法であって、前記細胞膜透過ペプチドを１つまたは複数のｍＲＮＡと組み合わせるステップを含み、それによって前記ｍＲＮＡ送達複合体を形成する方法。
（項目２１）
前記細胞膜透過ペプチドおよび前記ｍＲＮＡが、それぞれ、約１：１〜約１００：１のモル比で組み合わされる、項目２０に記載の方法。
（項目２２）
前記組み合わせるステップが、前記ｍＲＮＡを含む第１の溶液を前記ＣＰＰを含む第２の溶液と混合して第３の溶液を形成するステップであって、前記第３の溶液が、ｉ）約０〜５％のスクロース、ｉｉ）約０〜５％のグルコース、ｉｉｉ）約０〜５０％のＤＭＥＭ、ｉｖ）約０〜８０ｍＭのＮａＣｌ、もしくはｖ）約０〜２０％のＰＢＳを含むかまたは含むように調整され、前記第３の溶液が、前記ｍＲＮＡ送達複合体の形成を可能とするようにインキュベートされる、ステップを含む、項目２０または２１に記載の方法。
（項目２３）
前記第１の溶液が、滅菌水中に前記ｍＲＮＡを含む、および／または前記第２の溶液が、滅菌水中に前記ＣＰＰを含む、項目２２に記載の方法。
（項目２４）
前記第３の溶液が、インキュベートした後に、ｉ）約０〜５％のスクロース、ｉｉ）約０〜５％のグルコース、ｉｉｉ）約０〜５０％のＤＭＥＭ、ｉｖ）約０〜８０ｍＭのＮａＣｌ、またはｖ）約０〜２０％のＰＢＳを含むように調整されて、前記ｍＲＮＡ送達複合体を形成する、項目２２または２３に記載の方法。
（項目２５）
１つまたは複数のｍＲＮＡを細胞に送達する方法であって、前記細胞を項目１から１２のいずれか一項に記載のｍＲＮＡ送達複合体または項目１３から１８のいずれか一項に記載のナノ粒子と接触させるステップを含み、前記ｍＲＮＡ送達複合体または前記ナノ粒子が、前記１つまたは複数のｍＲＮＡを含む、方法。
（項目２６）
個体の疾患を処置する方法であって、前記個体に項目１９に記載の医薬組成物の有効量を投与するステップを含む方法。
（項目２７）
前記疾患が、がん、糖尿病、自己免疫疾患、血液疾患、心疾患、血管疾患、炎症性疾患、線維性疾患、ウイルス感染性疾患、遺伝性疾患、眼疾患、肝臓疾患、肺疾患、筋肉疾患、タンパク質欠損疾患、リソソーム蓄積症、神経学的疾患、腎臓疾患、老化および変性疾患、ならびにコレステロールレベル異常によって特徴付けられる疾患からなる群から選択される、項目２６に記載の方法。
（項目２８）
前記疾患が、タンパク質欠損疾患である、項目２７に記載の方法。
（項目２９）
前記疾患が、がんである、項目２７に記載の方法。
（項目３０）
前記医薬組成物が、前記がんの発症および／または進行に関与する発癌遺伝子を標的とするＲＮＡｉをさらに含む、項目２９に記載の方法。
（項目３１）
前記個体がヒトである、項目２５から３０のいずれか一項に記載の方法。
（項目３２）
項目１から１２のいずれか一項に記載のｍＲＮＡ送達複合体および／または項目１３から１８のいずれか一項に記載のナノ粒子を含む組成物を含むキット。
（項目３３）
個体のがんを処置する方法であって、前記個体に腫瘍抑制タンパク質をコードするｍＲＮＡの有効量を投与するステップを含み、前記腫瘍抑制タンパク質が、ＰＴＥＮ、網膜芽細胞腫ＲＢ（またはＲＢ１）、ＴＰ５３、ＴＰ６３、ＴＰ７３、ＣＤＫＮ２Ａ（ＩＮＫ４Ａ）、ＣＤＫＮ１Ｂ、ＣＤＫＮ１Ｃ、ＤＬＤ／ＮＰ１、ＨＥＰＡＣＡＭ、ＳＤＨＢ、ＳＤＨＤ、ＳＦＲＰ１、ＴＣＦ２１、ＴＩＧ１、ＭＬＨ１、ＭＳＨ２、ＭＳＨ６、ＷＴ１、ＷＴ２、ＮＦ１、ＮＦ２Ｎ、ＶＨＬ、ＫＬＦ４、ｐＶＨＬ、ＡＰＣ、ＣＤ９５、ＳＴ５、ＹＰＥＬ３、ＳＴ７、ＡＰＣ、ＭＡＤＲ２、ＢＲＣＡ１、ＢＲＣＡ２、パッチド、ＴＳＣ１、ＴＳＣ２、ＰＡＬＢ２、ＳＴ１４、またはＶＨＬから選択される腫瘍抑制遺伝子に対応する、方法。
（項目３４）
前記個体に発癌遺伝子を標的とするｓｉＲＮＡの有効量を投与するステップをさらに含む、項目３３に記載の方法。
（項目３５）
前記発癌遺伝子が、ＫＲＡＳを含む、項目３４に記載の方法。
（項目３６）
前記ｓｉＲＮＡが、ＫＲＡＳの変異体形態を標的とし、ＫＲＡＳの前記変異体形態が、ＫＲＡＳのコドン１２または６１上に変異を含む、項目３５に記載の方法。
（項目３７）
前記腫瘍抑制遺伝子が、ＰＴＥＮおよびＴＰ５３から選択される、項目３３から３６のいずれか一項に記載の方法。
（項目３８）
前記がんが、膵がん、卵巣がん、前立腺がんおよび神経膠芽腫から選択される、項目３３から３７のいずれか一項に記載の方法。
（項目３９）
前記個体が、前記腫瘍抑制遺伝子に異常を含む、項目３３から３８のいずれか一項に記載の方法。
（項目４０）
前記個体が、前記発癌遺伝子に異常を含む、項目３４から３９のいずれか一項に記載の方法。
（項目４１）
個体の疾患または状態を処置する方法であって、治療用タンパク質またはその組換え形態をコードするｍＲＮＡの有効量を投与するステップを含み、前記治療用タンパク質が、アルファ１アンチトリプシン、フラタキシン、インスリン、成長ホルモン（ソマトトロピン）、成長因子、ホルモン、ジストロフィン、インスリン様成長因子１（ＩＧＦ１）、第ＶＩＩＩ因子、第ＩＸ因子、アンチトロンビンＩＩＩ、プロテインＣ、β−グルコ−セレブロシダーゼ、アルグルコシダーゼ−α，α−ｌ−イズロニダーゼ、イズロン酸−２−スルファターゼ、ガルスルファーゼ、ヒトα−ガラクトシダーゼＡ、α−１−プロテイナーゼインヒビター、ラクターゼ、膵酵素（リパーゼ、アミラーゼ、およびプロテアーゼを含む）、アデノシンデアミナーゼ、およびアルブミンからなる群から選択される、方法。