【手続補正書】
【提出日】令和3年8月11日(2021.8.11)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
単離された間葉系幹細胞（ＭＳＣ）エキソソームであって、
（ｉ）単離されたＭＳＣエキソソームは、ＦＬＴ１、ＰＬＡＵＲ、ＭＭＥ、ＣＤＨ２、ＳＬＣ１６Ａ３、ＣＤＨ１３、ＩＴＧＢ５、ＩＴＧＡ１１、ＡＰＰ、ＧＰＣ６、ＩＧＳＦ８、ＩＲＰ２、ＴＳＰＡＮ９、ＤＡＧ１、ＳＬＣ３８Ａ２、ＳＬＣ１２Ａ８、ＧＪＡ１、ＩＴＧＡ１、ＰＬＸＮＢ２、ＳＬＣ１６Ａ１、およびＰＲＯＣＲからなる群から選択される１以上のマーカーを含む；
（ｉｉ）単離されたＭＳＣエキソソームは、線維芽細胞エキソソームと比較して濃縮された１以上のマーカーを含み、該１以上のマーカーは、ＰＴｋ７、ＣＤ１０９、ＳＬＣ１Ａ５、ＩＴＧＡ３、ＩＴＧＡ２、ＢＳＧ、ＤＰＰ４、ＡＴＰ１Ａ１、ＦＡＰ、ＶＡＳＮ、ＩＧＦ２Ｒ、およびＣＤ８２からなる群から選択される；および／または
（ｉｉｉ）単離されたＭＳＣエキソソームは、線維芽細胞エキソソームと比較して濃縮された１以上のマーカーを含み、該１以上のマーカーは、ＲＣＮ１、ＲＡＰ１Ｂ、ＧＤＦ１５、ＦＬＴ１、ＯＬＦＭＬ３、ＰＬＯＤ２、ＰＳＭＡ４、ＰＡＰＰＡ、ＩＮＨＢＡ、ＳＰＯＣＫ１、ＨＳＰＢ１、ＬＯＸＬ４、ＰＯＬＤ３、ＣＡＬＵ、ＩＧＦＢＰ４、Ｃ４Ｂ、ＴＩＮＡＧＬ１、ＳＵＬＦ１、ＴＰＭ３、ＡＨＮＡＫ、ＣＡＬＲ、ＲＲＡＳ２、ＰＦＫＰ、およびＣＯＬ１６Ａ１からなる群から選択される、
前記単離されたＭＳＣエキソソーム。
【請求項２】
ＦＬＯＴ１、ＣＤ９、およびＣＤ６３からなる群から選択される１以上のマーカーをさらに含む、請求項１に記載の単離されたＭＳＣエキソソーム。
【請求項３】
単離されたＭＳＣエキソソームがＭＳＣ馴化培地から単離されている、および／または、ＭＳＣがホウォートンゼリーまたは骨髄からのものである、および／または、単離されたＭＳＣエキソソームが非エキソソームタンパク質夾雑物を実質的に含まない、および／または、単離されたＭＳＣエキソソームが約３０〜１５０ｎｍの直径を有する、および／または、単離されたＭＳＣエキソソームが免疫調節活性を有する、請求項１または２に記載の単離されたＭＳＣエキソソーム。
【請求項４】
請求項１〜３のいずれか一項に記載の単離されたＭＳＣエキソソームを含む医薬組成物であって、
ｉ）二次薬剤、任意にここで、二次薬剤は、肺サーファクタント、ステロイド、抗酸化剤、または吸入された一酸化窒素である；および／または
ｉｉ）薬学的に許容し得る担体
をさらに含む、前記医薬組成物。
【請求項５】
対象において肺疾患を処置するための、請求項１〜３のいずれか一項に記載の単離されたＭＳＣエキソソーム、または請求項４に記載の医薬組成物。
【請求項６】
対象がヒト対象である、請求項５に記載の単離されたＭＳＣエキソソームまたは医薬組成物であって、任意にここで、
ｉ）対象は、妊娠３７週前に生まれている；
ｉｉ）対象は、妊娠２６週前に生まれている；
ｉｉｉ）対象は、過酸素症に誘発された肺損傷を有する；
ｉｖ）対象に酸素が投与されていたか、または対象に人工呼吸器が取り付けられていた；
ｖ）対象は、気管支肺異形成症（ＢＰＤ）を発症しているか、または発症するリスクがある；
ｖｉ）対象は、過酸素症に誘発された肺高血圧症を有する；
ｖｉｉ）対象は、末梢肺動脈リモデリングを示す；
ｖｉｉｉ）対象は、肺において炎症を有する；
ｉｘ）対象は、４週齢未満である；
ｘ）対象は、４週齢〜３歳である；
ｘｉ）対象は、３〜１８歳である；および／または
ｘｉｉ）対象は成人である、
前記単離されたＭＳＣエキソソームまたは医薬組成物。
【請求項７】
ｉ）単離されたＭＳＣエキソソームがボーラス用量で対象に投与されるか、または、単離されたＭＳＣエキソソームが対象に繰り返し投与される；
ｉｉ）単離されたＭＳＣエキソソームが、肺機能を改善する；
ｉｉｉ）単離されたＭＳＣエキソソームが、肺構造を回復する；
ｉｖ）単離されたＭＳＣエキソソームが、肺線維症を低減する；
ｖ）単離されたＭＳＣエキソソームが、肺における炎症を低減する；および／または
ｖｉ）単離されたＭＳＣエキソソームが、末梢肺動脈リモデリングを低減する、
請求項６に記載の単離されたＭＳＣエキソソームまたは医薬組成物。
【請求項８】
単離されたＭＳＣエキソソームが生後１時間以内に投与されるか、または、単離されたＭＳＣエキソソームが生後１ヶ月以内に投与される、請求項７に記載の単離されたＭＳＣエキソソームまたは医薬組成物。
【請求項９】
ｉ）単離されたＭＳＣエキソソームが、静脈内または鼻腔内に投与される；
ｉｉ）単離されたＭＳＣエキソソームが、対象の肺または気管に投与される；
ｉｉｉ）単離されたＭＳＣエキソソームが、吸入によって投与される；
ｉｖ）単離されたＭＳＣエキソソームが、エアロゾルで投与される；
ｖ）単離されたＭＳＣエキソソームが、ネブライザーを使用して投与される；または
ｖｉ）単離されたＭＳＣエキソソームが、気管内チューブを使用して投与される、
請求項６〜８のいずれか一項に記載の単離されたＭＳＣエキソソームまたは医薬組成物。
【請求項１０】
対象が哺乳動物である、請求項６〜９のいずれか一項に記載の単離されたＭＳＣエキソソームまたは医薬組成物であって、任意にここで、
ｉ）哺乳動物はヒトである；または
ｉｉ）哺乳動物は齧歯類の動物である、さらに任意にここで、齧歯類の動物はマウスまたはラットである、
前記単離されたＭＳＣエキソソームまたは医薬組成物。
【請求項１１】
対象において肺疾患を処置するための医薬の製造における使用のための、請求項１〜３のいずれか一項に記載の単離されたＭＳＣエキソソーム、または請求項４に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
イオジキサノール（ＩＤＸ）クッション勾配を使用してＭＳＣ馴化培地を分画すること、および、非エキソソームタンパク質夾雑物を実質的に含まない画分を収集することを含む、間葉系幹細胞（ＭＳＣ）エキソソームを単離する方法。
【請求項１３】
ＭＳＣ馴化培地が分画前に濃縮される、任意にここで、ＭＳＣ馴化培地がタンジェント流濾過を介して濃縮される、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
分画することが、ＭＳＣ馴化培地をＩＤＸクッション勾配に浮遊させることおよび超遠心分離を含む、請求項１２または１３に記載の方法。
【請求項１５】
請求項１２〜１４のいずれか一項に記載の方法を使用して単離されたＭＳＣエキソソーム。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００３】
概要
本明細書に提供されるのは、精製されたＭＳＣエキソソーム（例えば、ヒト臍帯ホウォートンゼリーまたは骨髄由来）の特性解析である。本明細書に記載の精製方法を使用して、肺疾患（例えば、気管支肺異形成症（ＢＰＤ））に治療的な有効性をもたらすＭＳＣエキソソームが単離され、かかる精製されたＭＳＣエキソソームに関連するマーカーが同定される。さらに本明細書に提供されるのは、精製されたＭＳＣエキソソームを使用して肺疾患（例えば、ＢＰＤ）を処置する方法である。いくつかの態様において、ＭＳＣエキソソームのボーラス用量は、肺疾患（例えば、ＢＰＤ）の重症度を低減するのに有効である。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００４】
したがって、本開示のいくつかの側面は、単離された間葉系幹細胞（ＭＳＣ）エキソソームを提供し、ここで、（ｉ）単離されたＭＳＣエキソソームは、ＦＬＴ１、ＰＬＡＵＲ、ＭＭＥ、ＣＤＨ２、ＳＬＣ１６Ａ３、ＣＤＨ１３、ＩＴＧＢ５、ＩＴＧＡ１１、ＡＰＰ、ＧＰＣ６、ＩＧＳＦ８、ＩＲＰ２、ＴＳＰＡＮ９、ＤＡＧ１、ＳＬＣ３８Ａ２、ＳＬＣ１２Ａ８、ＧＪＡ１、ＩＴＧＡ１、ＰＬＸＮＢ２、ＳＬＣ１６Ａ１、およびＰＲＯＣＲからなる群から選択される１以上のマーカーを含む；（ｉｉ）単離されたＭＳＣエキソソームは、線維芽細胞エキソソームと比較して濃縮された１以上のマーカーを含み、該１以上のマーカーは、ＰＴｋ７、ＣＤ１０９、ＳＬＣ１Ａ５、ＩＴＧＡ３、ＩＴＧＡ２、ＢＳＧ、ＤＰＰ４、ＡＴＰ１Ａ１、ＦＡＰ、ＶＡＳＮ、ＩＧＦ２Ｒ、およびＣＤ８２からなる群から選択される；および／または（ｉｉｉ）単離されたＭＳＣエキソソームは線維芽細胞エキソソームと比較して濃縮された１以上のマーカーを含み、該１以上のマーカーは、ＲＣＮ１、ＲＡＰ１Ｂ、ＧＤＦ１５、ＦＬＴ１、ＯＬＦＭＬ３、ＰＬＯＤ２、ＰＳＭＡ４、ＰＡＰＰＡ、ＩＮＨＢＡ、ＳＰＯＣＫ１、ＨＳＰＢ１、ＬＯＸＬ４、ＰＯＬＤ３、ＣＡＬＵ、ＩＧＦＢＰ４、Ｃ４Ｂ、ＴＩＮＡＧＬ１、ＳＵＬＦ１、ＴＰＭ３、ＡＨＮＡＫ、ＣＡＬＲ、ＲＲＡＳ２、ＰＦＫＰ、およびＣＯＬ１６Ａ１からなる群から選択される。