【手続補正書】
【提出日】令和3年3月9日(2021.3.9)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
結晶性生体分子を含む組成物を調製する方法であって、前記結晶性生体分子が、それぞれ１つ以上のポリペプチド鎖を含むタンパク質であり、前記方法が、
ａ）注入口及び排出口を含む回転チャンバーにおいて結晶性生体分子の流動床を形成させ、実質的に水平な軸の周囲で前記チャンバーを回転させて、前記チャンバー中で遠心力（Ｆｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｌ）を生成させることによって前記流動床が生成され、前記Ｆｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｌの方向とは逆方向に、及びＦｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｌを相殺する力（ＦＦＲ１）を有する第１の流速（ＦＲ１）で、前記注入口を通じて第１の溶液の第１の流れを流動させ、結晶化生体分子の流動床の形成を実質的に維持しながら前記チャンバーから前記第１の溶液を回収することと；
ｂ）段階（ｉ）、（ｉｉ）又は（ｉｉｉ）：
ｉ．結晶化生体分子の流動床の形成を実質的に維持しながら前記第１の溶液の第１の流れを置き換えるために第２の溶液の第２の流れを流動させること；
ｉｉ．Ｆｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｌ未満である力（ＦＦＲ２）を有する第２の流速（ＦＲ２）にＦＲ１を変化させることによって、又はＦＦＲ１よりも大きいレベルまでＦｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｌを上昇させるために前記チャンバーの回転速度を上昇させることによって、前記チャンバーの領域内で前記結晶化生体分子を濃縮すること；
ｉｉｉ．段階（ｉ）及び段階（ｉｉ）の組み合わせ
を実施することと；
ｃ）前記チャンバーから前記結晶性生体分子を除去するためにＦｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｌの方向に対して平行である方向に、前記排出口を通じて前記チャンバーに第２の流れを流動させることと、
を含む、方法。
【請求項２】
少なくとも段階（ｉ）中でＦｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｌが１０００ｇである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
段階（ｉ）中、前記第２の溶液の前記第２の流れの供給体積が５０〜５００ｍＬであり、
必要に応じて、前記第２の溶液の前記第２の流れの供給体積が１００〜３００ｍＬである、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
チャンバーあたりの前記第１の溶液の体積の数が段階（ｉ）中で２以上である；
ＦＲ１が段階（ｉ）中に５０ｍＬ／ｍｉｎ〜１５０ｍＬ／ｍｉｎであり；好ましくはＦＲ１が７０ｍＬ／ｍｉｎ〜１２０ｍＬ／ｍｉｎである；
前記第１の溶液が高浸透圧性結晶化緩衝液である；および
前記第２の溶液が等張性処方緩衝液である
のうちの少なくとも１つである、請求項１〜３の何れか１項に記載の方法。
【請求項５】
前記Ｆｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｌが段階（ｉｉ）中に１０００ｇである；
前記第２の溶液の第２の流れの供給体積が段階（ｉｉ）中に１００〜５００ｍＬであり；好ましくは前記第２の溶液の前記第２の流れの供給体積が約１５０〜約３５０ｍＬである；
チャンバーあたりの前記第１の溶液の体積の数が段階（ｉｉ）中に１又は２である；
ＦＲ２が段階（ｉｉ）中に１０ｍＬ／ｍｉｎ〜５０ｍＬ／ｍｉｎであり；好ましくは２０ｍＬ／ｍｉｎ〜４０ｍＬ／ｍｉｎである；および
前記結晶性生体分子の濃度が少なくとも２倍上昇する
のうちの少なくとも１つである、請求項１〜４の何れか１項に記載の方法。
【請求項６】
前記方法は、向流勾配遠心分離（ＣＦＧＣ）系で行われる、請求項１〜５の何れか１項に記載の方法。
【請求項７】
前記装置は、第１のポンプおよびチャンバー蠕動ポンプを含む、請求項１〜６の何れか一項に記載の方法。
【請求項８】
ＦＲ１が前記第１のポンプにより調節され、前記第１のポンプが段階（ｂ）の後に１０ｍＬ／ｍｉｎ〜１００ｍＬ／ｍｉｎに設定され；好ましくは、前記第１のポンプが１５ｍＬ／ｍｉｎ〜６５ｍＬ／ｍｉｎに設定される、請求項１〜７の何れか１項に記載の方法。
【請求項９】
前記回転チャンバーが前記チャンバー蠕動ポンプに連結される、請求項１〜８の何れか１項に記載の方法。
【請求項１０】
前記チャンバー蠕動ポンプが、前記第１のポンプ及びＦｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｌと同じ方向に送り込むように設定され；
必要に応じて、前記チャンバー蠕動ポンプが段階（ｂ）の後に５０ｍＬ／ｍｉｎ〜１００ｍＬ／ｍｉｎに設定され；
必要に応じて、前記チャンバー蠕動ポンプが７５ｍＬ／ｍｉｎに設定され；そして
必要に応じて、前記チャンバー蠕動ポンプが７５ｍＬ／ｍｉｎに設定され、前記第１のポンプが５０ｍＬ／ｍｉｎに設定され、１０ｇを下回るまでＦｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｌを低下させる、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記方法が複数の回転チャンバーを含む装置中で行われ；
必要に応じて、前記装置が、少なくとも２個、少なくとも４個又は少なくとも６個の回転チャンバーを含む、請求項１〜１０の何れか１項に記載の方法。
【請求項１２】
段階（ａ）〜（ｃ）が複数のチャンバー中で行われる、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
結晶性生体分子が前記装置の別のチャンバーから除去されるときとは別個の時間に、結晶性生体分子が前記装置のチャンバーから除去される、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記結晶性生体分子が抗体である、請求項１〜１３の何れか１項に記載の方法。
【請求項１５】
前記組成物が、患者への投与に適切である、請求項１〜１４の何れか１項に記載の方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１２】
試料中の結晶性生体分子及び／又は非晶質生体分子を検出する方法も本明細書中で開示される。代表的な実施形態において、本方法は、試料の複数の１Ｈ  ＮＭＲ  Ｃａｒｒ−Ｐｕｒｃｅｌｌ−Ｍｅｉｂｏｏｍ−Ｇｉｌｌ（ＣＰＭＧ）スペクトルを得ること及び試料の１３Ｃ  ＮＭＲ交差分極（ＣＰ）スペクトルを得ることを含む。
特定の実施形態では、例えば、以下が提供される：
（項目１）
結晶性生体分子を含む組成物を調製する方法であって、
ａ）注入口及び排出口を含む回転チャンバーにおいて結晶性生体分子の流動床を形成させ、実質的に水平な軸の周囲で前記チャンバーを回転させて、前記チャンバー中で遠心力（Ｆｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｌ）を生成させることによって前記流動床が生成され、前記Ｆｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｌの方向とは逆方向に、及びＦｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｌを相殺する力（ＦＦＲ１）を有する第１の流速（ＦＲ１）で、前記注入口を通じて第１の溶液の第１の流れを流動させ、結晶化生体分子の流動床の形成を実質的に維持しながら前記チャンバーから前記第１の溶液を回収することと；
ｂ）段階（ｉ）、（ｉｉ）又は（ｉｉｉ）：
ｉ．結晶化生体分子の流動床の形成を実質的に維持しながら前記第１の溶液の第１の流れを置き換えるために第２の溶液の第２の流れを流動させること；
ｉｉ．Ｆｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｌ未満である力（ＦＦＲ２）を有する第２の流速（ＦＲ２）にＦＲ１を変化させることによって、又はＦＦＲ１よりも大きいレベルまでＦｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｌを上昇させるために前記チャンバーの回転速度を上昇させることによって、前記チャンバーの領域内で前記結晶化生体分子を濃縮すること；
ｉｉｉ．段階（ｉ）及び段階（ｉｉ）の組み合わせ
を実施することと；
ｃ）前記チャンバーから前記結晶性生体分子を除去するためにＦｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｌの方向に対して平行である方向に、前記排出口を通じて前記チャンバーに第２の流れを流動させることと、
を含む、方法。
（項目２）
少なくとも段階（ｉ）中でＦｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｌが１０００ｇである、項目１に記載の方法。
（項目３）
段階（ｉ）中、前記第２の溶液の前記第２の流れの供給体積が約５０〜約５００ｍＬである、項目１又は２に記載の方法。
（項目４）
前記第２の溶液の前記第２の流れの供給体積が約１００〜約３００ｍＬである、項目３に記載の方法。
（項目５）
チャンバーあたりの前記第１の溶液の体積の数が段階（ｉ）中で２以上である、項目１〜４の何れか１項に記載の方法。
（項目６）
ＦＲ１が段階（ｉ）中に約５０ｍＬ／ｍｉｎ〜約１５０ｍＬ／ｍｉｎである、項目１〜５の何れか１項に記載の方法。
（項目７）
ＦＲ１が約７０ｍＬ／ｍｉｎ〜約１２０ｍＬ／ｍｉｎである、項目６に記載の方法。
（項目８）
前記第１の溶液が高浸透圧性結晶化緩衝液である、項目１〜７の何れか１項に記載の方法。
（項目９）
前記第２の溶液が等張性処方緩衝液である、項目１〜８の何れか１項に記載の方法。
（項目１０）
前記Ｆｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｌが段階（ｉｉ）中に１０００ｇである、項目１〜９の何れか１項に記載の方法。
（項目１１）
前記第２の溶液の第２の流れの供給体積が段階（ｉｉ）中に約１００〜約５００ｍＬである、項目１〜１０の何れか１項に記載の方法。
（項目１２）
前記第２の溶液の前記第２の流れの供給体積が約１５０〜約３５０ｍＬである、項目１１に記載の方法。
（項目１３）
チャンバーあたりの前記第１の溶液の体積の数が段階（ｉｉ）中に１又は２である、項目１〜１２の何れか１項に記載の方法。
（項目１４）
ＦＲ２が段階（ｉｉ）中に約１０ｍＬ／ｍｉｎ〜約５０ｍＬ／ｍｉｎである、項目１〜１３の何れか１項に記載の方法。
（項目１５）
ＦＲ２が約２０ｍＬ／ｍｉｎ〜約４０ｍＬ／ｍｉｎである、項目１４に記載の方法。
（項目１６）
前記結晶性生体分子の濃度が少なくとも２倍上昇する、項目１〜１５の何れか１項に記載の方法。
（項目１７）
前記結晶性生体分子の濃度が少なくとも３倍上昇する、項目１６に記載の方法。
（項目１８）
前記結晶性生体分子の濃度が少なくとも４倍上昇する、項目１７に記載の方法。
（項目１９）
約５ｇ及び約２０ｇのレベルまでＦｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｌを低下させることを含む、項目１〜１８の何れか１項に記載の方法。
（項目２０）
１０ｇを下回るまでＦｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｌを低下させる、項目１９に記載の方法。
（項目２１）
ＦＲ１が第１のポンプにより調節され、前記第１のポンプが段階（ｂ）の後に約１０ｍＬ／ｍｉｎ〜約１００ｍＬ／ｍｉｎに設定される、項目１〜２０の何れか１項に記載の方法。
（項目２２）
前記第１のポンプが約１５ｍＬ／ｍｉｎ〜約６５ｍＬ／ｍｉｎに設定される、項目２１に記載の方法。
（項目２３）
前記回転チャンバーがチャンバー蠕動ポンプに連結される、項目１〜２２の何れか１項に記載の方法。
（項目２４）
前記チャンバー蠕動ポンプが、前記第１のポンプ及びＦｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｌと同じ方向に送り込むように設定される、項目２３に記載の方法。
（項目２５）
前記チャンバー蠕動ポンプが段階（ｂ）の後に約５０ｍＬ／ｍｉｎ〜約１００ｍＬ／ｍｉｎに設定される、項目２４に記載の方法。
（項目２６）
前記チャンバー蠕動ポンプが約７５ｍＬ／ｍｉｎに設定される、項目２５に記載の方法。
（項目２７）
前記チャンバー蠕動ポンプが約７５ｍＬ／ｍｉｎに設定され、前記第１のポンプが約５０ｍＬ／ｍｉｎに設定され、１０ｇを下回るまでＦｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｌを低下させる、項目２６に記載の方法。
（項目２８）
前記方法が複数の回転チャンバーを含む装置中で行われる、項目１〜２７の何れか１項に記載の方法。
（項目２９）
前記装置が、少なくとも２個、少なくとも４個又は少なくとも６個の回転チャンバーを含む、項目２８に記載の方法。
（項目３０）
前記装置が、４個又は６個のチャンバーを含む、項目２９に記載の方法。
（項目３１）
段階（ａ）〜（ｃ）が複数のチャンバー中で行われる、項目３０に記載の方法。
（項目３２）
結晶性生体分子が前記装置の別のチャンバーから除去されるときとは別個の時間に、結晶性生体分子が前記装置のチャンバーから除去される、項目３１に記載の方法。
（項目３３）
前記結晶性生体分子がタンパク質であるか又は１つ以上のポリペプチド鎖を含む、項目１〜３２の何れか１項に記載の方法。
（項目３４）
前記結晶性タンパク質が免疫グロブリン又はそれらの抗原結合断片である、項目３３に記載の方法。
（項目３５）
試料中で結晶性生体分子及び／又は非晶質生体分子を検出する方法であって、
ａ）前記試料の複数の１Ｈ  ＮＭＲ  Ｃａｒｒ−Ｐｕｒｃｅｌｌ−Ｍｅｉｂｏｏｍ−Ｇｉｌｌ（ＣＰＭＧ）スペクトルを得ることと、
ｂ）前記試料の１３Ｃ  ＮＭＲ交差分極（ＣＰ）スペクトルを得ることと、
を含む、方法。
（項目３６）
前記方法の段階（ａ）中に約２５０〜約１０００ＭＨｚの１Ｈ共振周波数を操作することを含む、項目３５に記載の方法。
（項目３７）
約２５０〜約３５０Ｋで温度を維持することを含む、項目３５又は３６に記載の方法。
（項目３８）
マジック角回転（ＭＡＳ）プローブを操作することを含む、項目３５〜３７の何れか１項に記載の方法。
（項目３９）
前記ＭＡＳプローブが少なくとも２個のＲＦチャネルを含む、項目３８に記載の方法。
（項目４０）
前記ＭＡＳプローブが１Ｈ及び１３Ｃに対して調整される、項目３９に記載の方法。
（項目４１）
前記ＭＡＳプローブが約２ｋＨｚ〜約８ｋＨｚの回転周波数で操作される、項目３８〜４０の何れか１項に記載の方法。
（項目４２）
９０°パルスを使用することを含む、項目３５〜４１の何れか１項に記載の方法。
（項目４３）
約２．５μｓの１Ｈ  ９０°パルスを使用することを含む、項目４２に記載の方法。
（項目４４）
前記１Ｈ  ＣＰＭＧスペクトルが、約２μｓ〜約２０μｓ長の約５〜約１００パイパルスで得られた、項目３５〜４３の何れか１項に記載の方法。
（項目４５）
前記２０パイパルスのそれぞれが約１０μｓ〜約１ｍｓ離された、項目４４に記載の方法。
（項目４６）
ＣＰＭＧパルスの全時間が約５００μｓ〜約５０ｍｓである、項目４５に記載の方法。
（項目４７）
１４ｋＨｚまでの周波数で回転させながら複数の１Ｈ  ＣＰＭＧスペクトルを得ることを含む、項目３５〜４６の何れか１項に記載の方法。
（項目４８）
測定中の前記１３Ｃ  ＣＰの接触時間が約１００μｓ〜約１０ｍｓである、項目３５〜４７の何れか１項に記載の方法。
（項目４９）
前記測定が、約２０ｋＨｚ〜約１００ｋＨｚの１３ＣでのＲＦスピンロックパルスを含む、項目４８に記載の方法。
（項目５０）
１Ｈでのランプパルスが一致する、項目４９に記載の方法。
（項目５１）
前記試料中の生体分子の含量を定量することを含む、項目３５〜５０の何れか１項に記載の方法。
（項目５２）
前記結晶性生体分子が、非晶質生体分子とは異なる分光学的特徴を示す、項目３５〜５１の何れか１項に記載の方法。
（項目５３）
前記結晶性生体分子が、非晶質生体分子よりも高い分子運動性の分光学的特徴を示す、項目３５〜５２の何れか１項に記載の方法。
（項目５４）
前記結晶性生体分子がバイ−レフリガント（ｂｉ−ｒｅｆｒｉｎｇａｎｔ）である、項目３５〜５３の何れか１項に記載の方法。
（項目５５）
前記結晶性生体分子が回折しない、項目３５〜５４の何れか１項に記載の方法。
（項目５６）
前記生体分子が、タンパク質を含むか又は１つ以上のポリペプチド鎖を含む、項目３５〜５５の何れか１項に記載の方法。
（項目５７）
前記タンパク質が抗体又はその断片である、項目５６に記載の方法。
（項目５８）
前記試料中の前記生体分子が１つ以上のグリカンを含む、項目３５〜５７の何れか１項に記載の方法。