【手続補正書】
【提出日】令和3年5月31日(2021.5.31)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
トランスジェニック鳥類の卵であって、
i）Z染色体上にあってその卵の中で検出可能なマーカーをコードしている第1の遺伝子改変と；
ii）同じZ染色体上にあって、その卵の中、および／またはその卵から生まれた鳥類の中で産生形質を変化させる第2の遺伝子改変を、その第2の遺伝子改変が欠けた同質遺伝子型の卵または鳥類と比べたときに含んでいる、トランスジェニック鳥類の卵。
【請求項２】
以下の：
i) 前記遺伝子改変が母系遺伝し、
ii) 前記マーカーを、前記卵の殻の完全性を損なうことなく検出することができ、
iii) 前記マーカーが、産卵時点から2日以内に前記卵の殻を破損することなく検出可能であり、
iv) 前記マーカーが、蛍光タンパク質、発光タンパク質、可聴（振動）タンパク質、音響タンパク質、代謝マーカー、又は選択的キレート化タンパク質であり；
ｖ）  前記第1及び/又は第2の遺伝的改変がトランス遺伝子であり；そして
vi)  前記遺伝子改変が、単一の外来遺伝子コンストラクト中に存在する
のうちの１又は複数を含む、請求項1に記載のトランスジェニック鳥類の卵。
【請求項３】
前記蛍光タンパク質の選択が、緑色蛍光タンパク質（GFP)、増強型緑色蛍光タンパク質（EGFP）、Emerald、Superfolder GFP、Azami Green、mWasabi、TagGFP、TurboGFP、mNeonGreen、mUKG、AcGFP、ZsGreen、Cloverm Sapphire、T-Sapphire、増強型青色蛍光タンパク質（EBFP)、EBFP2、Azurite、TagBFP、mTagBFP、mKalama1、シアン色蛍光タンパク質（CFP）、mCFP、増強型シアン色蛍光タンパク質（ECFP）、mECFP、Cerulean、SCFP3A、mTurquoise、mTurquoise2、CyPet、AmCyan1、Midori-Ishi Cyan、TagCFP、mTFP1（Teal）、黄色蛍光タンパク質（YFP）、増強型黄色蛍光タンパク質（EYFP）、スーパー黄色蛍光タンパク質（SYFP）、Topaz、Venus、Citrine、mCitrine、YPet、TagYFP、TurboYFP、PhiYFP、ZsYellow1、mBanana、Kusabira Orange、Kusabira Orange2、mOrange、mOrange2、dTomato、dTomato-Tandem、赤色蛍光タンパク質（RFP）、TurboRFP、TurboFP602、TurboFP635、Tag ref蛍光タンパク質（RFP）、TagRFP-T、DsRed、DsRed2、DsRed-Express（T1）、DsRed-Monomer、mTangerine、mKeima-Red、mRuby、mRuby2、mApple、mStrawberry、AsRed2、mRFP1、JRed、mCherry、mKate2、mKate（TagFP635）、HcRed1、mRaspberry、dKeima-Tandem、HcRed-Tandem、mPlum、mNeptune、NirFP、Sirius、TagRFP657、AQ143、Kaede、KikGR1、PX-CFP2、mEos2、IrisFP、mEOS3.2、PSmOrange、PAGFP、Dronpa、アロフィコシアニン、GFPuv、R-フィコエリトリン（RPE)、ペリジニンクロロフィル（PerCP）、P3、Katusha、B-フィコエリトリン（BPE）、mKO、J-Redからなされる、請求項１又は２に記載のトランスジェニック鳥類の卵。
【請求項４】
前記産生形質の選択が、ウイルス産生、組み換えタンパク質産生、筋肉質量、栄養含量、繁殖力からなされる、請求項1〜3のいずれか1項に記載のトランスジェニック鳥類の卵。
【請求項５】
前記産生形質がウイルス産生であり、前記第2の遺伝子改変により、その第2の遺伝子改変が欠けた同質遺伝子型の卵と比べて前記卵の中での抗ウイルス遺伝子および／または抗ウイルスタンパク質の発現が低下し、その卵が、同質遺伝子型の卵よりも多くのウイルスを産生することができる、請求項4に記載のトランスジェニック鳥類の卵。
【請求項６】
前記抗ウイルス遺伝子および／または抗ウイルスタンパク質の選択が、IFNAR1、IL-6、CNOT4、MDA5、IFNα、IFNβ、IFNγ、IFNλ、IFNAR2、UBE1DC1、GNAZ、CDX2、LOC100859339、IL28RA、ZFPM2、TRIM50、DNASEIL2、PHF21A、GAPDH、BACE2、HSBP1、PCGF5、IL-1RA、DDI2、CAPN13、UBA5、NPR2、IFIH1、LAMP1、EFR3A、ARRDC3、ABI1、SCAF4、GADL1、ZKSCAN7、PLVAP、RPUSD1、CYYR1、UPF3A、ASAP1、NXF1、TOP1MT、RALGAPB、SUCLA2、GORASP2、NSUN6、CELF1、ANGPTL7、SLC26A6、WBSCR27：siL1、HTT、MYOC、TM9SF2,CEP250、FAM188A、BCAR3、GOLPH3L、HN1、ADCY7、AKAP10、ALX1、CBLN4、CRK、CXORF56、DDX10、EIF2S3、ESF1、GBF1、GCOM1、GTPBP4、HOXB9、IFT43、IMP4、ISY1、KIAA0586、KPNA3、LRRIQ1、LUC7L、MECR、MRPL12、POLR3E、PWP2、RPL7A、SERPINH1、SLC47A2、SMYD2、STAB1、TTK、WNT3、IFNGR1、IFNGR2、IL-10R2、IFNκ、IFNΩ、IL-1RB、XPO1からなされる、請求項5に記載のトランスジェニック鳥類の卵。
【請求項７】
前記産生形質がウイルス産生であり、前記第2の遺伝子改変により、以下の：
i) その第2の遺伝子改変が欠けた同質遺伝子型の卵と比べて前記卵の中でのSIAT1遺伝子および／またはSIAT1タンパク質の発現が増加し、その卵が産生するウイルスでは、同質遺伝子型の卵が産生するウイルスと比べて免疫原性が増大し
ii) 前記産生形質がウイルス産生であり、前記第2の遺伝子改変により、その第2の遺伝子改変が欠けた同質遺伝子型の卵と比べて卵の中でのα-2,6-結合シアル酸の量が増加するとともにα-2,3-結合シアル酸の量が減少し、その卵が産生するウイルスでは、前記同質遺伝子型の卵が産生するウイルスと比べて免疫原性が増大し、
iii) 前記産生形質がウイルス産生であり、前記第2の遺伝子改変により、その第2の遺伝子改変が欠けた同質遺伝子型の卵と比べて卵の中での抗微生物タンパク質の発現が増加し、その卵が、前記同質遺伝子型の卵よりも多くのウイルスを産生することができる、
のうちの１又は複数を増加させる、請求項4に記載のトランスジェニック鳥類の卵。
【請求項８】
前記鳥類がニワトリである、請求項1〜7のいずれか1項に記載のトランスジェニック鳥類の卵。
【請求項９】
雄である、請求項1〜8のいずれか1項に記載のトランスジェニック鳥類の卵。
【請求項１０】
トランスジェニック鳥類であって、
i）Z染色体上にあってその鳥類が産んだ卵の中で検出可能なマーカーをコードしている第1の遺伝子改変と；
ii）同じZ染色体上にあってその卵の中、および／またはその卵から生まれた鳥類の中で産生形質を変化させる第2の遺伝子改変を、その第2の遺伝子改変が欠けた同質遺伝子型の卵または鳥類と比べて含む鳥類。
【請求項１１】
雌である、請求項10に記載のトランスジェニック鳥類。
【請求項１２】
雄である、請求項10に記載のトランスジェニック鳥類。
【請求項１３】
請求項10〜12のいずれか1項に記載のトランスジェニック鳥類が産んだ鳥類の卵または子孫。
【請求項１４】
第2の遺伝子改変が欠けた同質遺伝子型の卵と比べてウイルスの産生が増加した雄性卵である、請求項13に記載の鳥類。
【請求項１５】
鳥類の雄性卵を検出する方法であって、
i）請求項11に記載の雌のトランスジェニック鳥類を、前記第1の遺伝子改変が欠けた雄の鳥類と交配させることによって産まれた鳥類の卵を取得し、
ii）その卵をマーカーに関してスクリーニングすることを含んでいて、
前記卵がマーカーを有する場合に雄である方法。
【請求項１６】
工程i）の雄がトランスジェニックではなく、及び/又は前記マーカーが蛍光タンパク質であり、前記卵を第1の波長の光に曝露することによってそのマーカーをスクリーニングし、第2の波長の光で蛍光を評価する、請求項15に記載の方法。
【請求項１７】
鳥類の卵を生産する方法であって、請求項11に記載の雌の鳥類を雄の鳥類と交配させることを含む方法。
【請求項１８】
ウイルスを複製する方法であって、
1）請求項1〜9のいずれか1項に記載の鳥類の卵を取得し、
2）その卵にウイルスを接種し、
3）その卵を所定の期間にわたって孵卵してそのウイルスを複製することを含む方法。
【請求項１９】
前記第2の遺伝子改変により、その第2の遺伝子改変が欠けた同質遺伝子型の卵と比べて前記卵の中での抗ウイルス遺伝子の発現が低下する、請求項18に記載の方法。
【請求項２０】
請求項1〜9のいずれか1項に記載の鳥類の卵を利用して、および／または請求項18又は19に記載の方法を利用して作製されたウイルス。
【請求項２１】
ワクチン組成物を製造する方法であって、
1）請求項18又は19に記載の方法を利用してウイルスを複製し、
2）複製されたそのウイルスまたはその粒子を前記卵から回収し、
3）回収されたそのウイルスからワクチン組成物を調製することを含む方法。
【請求項２２】
工程2）または工程3）が前記ウイルスの不活化を含む、請求項21に記載の方法。
【請求項２３】
請求項21または22に記載の方法を利用して製造されたワクチン組成物。
【請求項２４】
トランスジェニック鳥類の卵、またはその卵から生まれる鳥類を作り出す方法であって、その卵または鳥類が、
i）Z染色体上にあって鳥類の卵の中で検出可能なマーカーをコードしている第1の遺伝子改変と；
ii）同じZ染色体上にあってその卵の中、および／またはその卵から生まれた鳥類の中で産生形質を変化させる第2の遺伝子改変を、その第2の遺伝子改変が欠けた同質遺伝子型の卵または鳥類と比べて含んでいて、
この方法が、以下の：
1)前記遺伝子改変に関してヘテロ接合型である雄の鳥類を、Z染色体上に前記遺伝子改変を含む雌の鳥類と交配させて、前記遺伝子改変に関してホモ接合型である雄性卵を産ませること、またはその卵から鳥類を生まれさせることを含み、
2）前記遺伝子改変に関してホモ接合型である雄の鳥類を、前記遺伝子改変が欠けた雌の鳥類と交配させて、Z染色体上に前記遺伝子改変を含む雌性卵を産ませること、またはその卵から鳥類を生まれさせること
3）Z染色体上に前記遺伝子改変を含む雌の鳥類を、前記遺伝子改変が欠けた雄の鳥類と交配させて、前記遺伝子改変に関してヘテロ接合型である雄性卵を産ませること、またはその卵から鳥類を生まれさせることを含み、この交配から産まれた雌性卵、またはこの卵から生まれた鳥類は、前記遺伝子改変を欠いている、及び
4）a)前記遺伝子改変に関してヘテロ接合型である雄の鳥類を、Z染色体上に前記遺伝子改変を含む雌の鳥類と交配させて、前記遺伝子改変に関してヘテロ接合型である雄の鳥類を生まれさせ、
b）工程a）で生まれた雄の鳥類を、前記遺伝子改変が欠けた雌の鳥類と交配させて、Z染色体上に前記遺伝子改変を含む雌の鳥類を生まれさせ、
c）工程b）で生まれた雌の鳥類を、前記遺伝子改変が欠けた雄の鳥類と交配させて、前記遺伝子改変に関してヘテロ接合型である雄性卵を産ませ、またはその卵から鳥類を生まれさせ、この交配から産まれた雌性卵、またはこの卵から生まれた鳥類は、前記遺伝子改変を欠いている、
のうちの１を含む、前記方法。
【請求項２５】
請求項24に記載の方法であって、この方法で作り出した前記雌の鳥類を卵産業で利用し、この方法によって作り出した雄性卵をワクチン産業で利用する方法。