【手続補正書】
【提出日】令和3年9月7日(2021.9.7)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
イオン化脂質と、共有結合性閉端を有する非ウイルス性カプシド不含ＤＮＡベクター（ｃｅＤＮＡベクター）とを含む、脂質ナノ粒子であって、前記ｃｅＤＮＡベクターが、非対称逆位末端反復（非対称ＩＴＲ）の間に操作可能に位置付けられた少なくとも１つの異種ヌクレオチド配列を含み、前記非対称ＩＴＲのうちの少なくとも１つが、機能的末端分解部位およびＲｅｐ結合部位を含む、脂質ナノ粒子。
【請求項２】
前記ｃｅＤＮＡベクターが、前記ｃｅＤＮＡベクター上に単一認識部位を有する制限酵素で消化され、未変性ゲルおよび変性ゲルの両方の電気泳動によって分析されたときに、直鎖状で非連続的なＤＮＡ対照と比較して特徴的な直鎖状で連続的なＤＮＡのバンドを示す、請求項１に記載の脂質ナノ粒子。
【請求項３】
前記非対称ＩＴＲのうちの１つ以上が、パルボウイルス、ディペンドウイルス、およびアデノ関連ウイルス（ＡＡＶ）から選択されるウイルスに由来する、請求項１または２に記載の脂質ナノ粒子。
【請求項４】
前記非対称ＩＴＲが、異なるウイルス血清型に由来する、請求項３に記載の脂質ナノ粒子。
【請求項５】
前記１つ以上の非対称ＩＴＲが、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、およびＡＡＶ１２から選択されるＡＡＶ血清型に由来する、請求項４に記載の脂質ナノ粒子。
【請求項６】
前記非対称ＩＴＲのうちの１つ以上が、合成である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の脂質ナノ粒子。
【請求項７】
前記ＩＴＲのうちの１つ以上が、野生型ＩＴＲではない、請求項１〜６のいずれか一項に記載の脂質ナノ粒子。
【請求項８】
前記ＩＴＲのうちの１つ以上が、野生型ＩＴＲである、請求項１〜７のいずれか一項に記載の脂質ナノ粒子。
【請求項９】
前記非対称ＩＴＲのうちの１つ以上両方が、Ａ、Ａ’、Ｂ、Ｂ’、Ｃ、Ｃ’、Ｄ、およびＤ’から選択される領域のうちの少なくとも１つにおける欠失、挿入、および／または置換によって修飾されている、請求項１〜８のいずれか一項に記載の脂質ナノ粒子。
【請求項１０】
前記ｃｅＤＮＡベクターが、
ａ．配列番号１および配列番号５２、ならびに
ｂ．配列番号２および配列番号５１
から選択される少なくとも２つの非対称ＩＴＲを含む、請求項１〜９のいずれか一項に記載の脂質ナノ粒子。
【請求項１１】
前記ｃｅＤＮＡベクターが、
ａ．少なくとも１つのＲｅｐタンパク質の存在下、ｃｅＤＮＡ発現構築物を内包する昆虫細胞の集団を、前記昆虫細胞内で前記ｃｅＤＮＡベクターの産生を誘導するために効果的な条件下、かつそのために十分な時間にわたってインキュベートするステップであって、前記ｃｅＤＮＡ発現構築物が、前記ｃｅＤＮＡベクターをコードする、ステップと、
ｂ．前記ｃｅＤＮＡベクターを前記昆虫細胞から単離するステップと、を含むプロセスから取得される、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の脂質ナノ粒子。
【請求項１２】
前記ｃｅＤＮＡ発現構築物が、ｃｅＤＮＡプラスミド、ｃｅＤＮＡバクミド、およびｃｅＤＮＡバキュロウイルスから選択される、請求項１１に記載の脂質ナノ粒子。
【請求項１３】
前記昆虫細胞が、少なくとも１つのＲｅｐタンパク質を発現する、請求項１１または請求項１２に記載の脂質ナノ粒子。
【請求項１４】
前記ＤＮＡベクターが、ベクターポリヌクレオチドから取得され、前記ベクターポリヌクレオチドが、２つの逆位末端反復（ＩＴＲ）の間に操作可能に位置付けられた異種核酸をコードし、前記２つのＩＴＲが、互いに異なり（非対称）、前記ＩＴＲのうちの少なくとも１つが、機能的末端分解部位およびＲｅｐ結合部位を含む機能的ＩＴＲであり、前記ＩＴＲのうちの１つが、前記機能的ＩＴＲに対して欠失、挿入、および／または置換を含み、Ｒｅｐタンパク質の存在が、昆虫細胞における前記ベクターポリヌクレオチドの複製および前記ＤＮＡベクターの産生を誘導し、前記ＤＮＡベクターが、
ａ．Ｒｅｐタンパク質の存在下、ウイルスカプシドコード配列を欠いた前記ベクターポリヌクレオチドを内包する昆虫細胞の集団を、前記昆虫細胞内の前記カプシド不含非ウイルス性ＤＮＡベクターの産生を誘導するために効果的な条件下、かつそのために十分な時間にわたって、インキュベートするステップであって、前記昆虫細胞が、前記ベクターの非存在下では、前記昆虫細胞内のカプシド不含非ウイルス性ＤＮＡの産生を含まない、ステップと、
ｂ．前記カプシド不含非ウイルス性ＤＮＡを前記昆虫細胞から採取し、単離するステップと、を含むプロセスから取得可能である、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の脂質ナノ粒子。
【請求項１５】
前記ＤＮＡベクターが、ベクターポリヌクレオチドから取得され、前記ベクターポリヌクレオチドが、第１および第２のＡＡＶ２逆位末端反復（ＩＴＲ）の間に操作可能に位置付けられた異種核酸をコードし、前記ＩＴＲのうちの少なくとも１つが、配列番号１または配列番号５１の対応するＡＡＶ２野生型ＩＴＲに関して少なくとも１つのポリヌクレオチド欠失、挿入、および／または置換を有し、Ｒｅｐタンパク質の存在下で昆虫細胞中の前記ＤＮＡベクターの複製を誘導し、前記ＤＮＡベクターが、
ａ．Ｒｅｐタンパク質の存在下、ウイルスカプシドコード配列を欠いた前記ベクターポリヌクレオチドを内包する昆虫細胞の集団を、前記昆虫細胞内の前記カプシド不含非ウイルス性ＤＮＡベクターの産生を誘導するために効果的な条件下、かつそのために十分な時間にわたって、インキュベートするステップであって、前記昆虫細胞が、ウイルスカプシドコード配列を含まない、ステップと、
ｂ．前記カプシド不含非ウイルス性ＤＮＡを前記昆虫細胞から採取し、単離するステップと、を含むプロセスから取得可能である、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の脂質ナノ粒子。
【請求項１６】
前記脂質ナノ粒子が、非カチオン性脂質、ＰＥＧ複合脂質、およびステロールのうちの１つ以上をさらに含む、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の脂質ナノ粒子。
【請求項１７】
前記脂質ナノ粒子が、非カチオン性脂質をさらに含み、前記非イオン性脂質が、ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−ホスホエタノールアミン、ジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）、ジオレオイルホスファチジルコリン（ＤＯＰＣ）、ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）、ジオレオイルホスファチジルグリセロール（ＤＯＰＧ）、ジパルミトイルホスファチジルグリセロール（ＤＰＰＧ）、ジオレオイル−ホスファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、パルミトイルオレオイルホスファチジルコリン（ＰＯＰＣ）、パルミトイルオレオイルホスファチジルエタノールアミン（ＰＯＰＥ）、ジオレオイル−ホスファチジルエタノールアミン４−（Ｎ−マレイミドメチル）−シクロヘキサン−１−カルボキシレート（ＤＯＰＥ−ｍａｌ）、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＰＰＥ）、ジミリストイルホスホエタノールアミン（ＤＭＰＥ）、ジステアロイル−ホスファチジル−エタノールアミン（ＤＳＰＥ）、モノメチル−ホスファチジルエタノールアミン、ジメチル−ホスファチジルエタノールアミン、１８−１−トランスＰＥ、１−ステアロイル−２−オレオイル−ホスファチジエタノールアミン（ＳＯＰＥ）、水素化ダイズホスファチジルコリン（ＨＳＰＣ）、卵ホスファチジルコリン（ＥＰＣ）、ジオレオイルホスファチジルセリン（ＤＯＰＳ）、スフィンゴミエリン（ＳＭ）、ジミリストイルホスファチジルコリン（ＤＭＰＣ）、ジミリストイルホスファチジルグリセロール（ＤＭＰＧ）、ジステアロイルホスファチジルグリセロール（ＤＳＰＧ）、ジエルコイルホスファチジルコリン（ＤＥＰＣ）、パルミトイルオレオイルホスファチジルグリセロール（ＰＯＰＧ）、ジエライドイル−ホスファチジルエタノールアミン（ＤＥＰＥ）、レシチン、ホスファチジルエタノールアミン、リソレシチン、リソホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルイノシトール、スフィンゴミエリン、卵スフィンゴミエリン（ＥＳＭ）、セファリン、カルジオリピン、ホスファチジカシド、セレブロシド、ジセチルホスフェート、リソホスファチジルコリン、およびジリノレオイルホスファチジルコリンからなる群から選択される、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の脂質ナノ粒子。
【請求項１８】
前記脂質ナノ粒子が、複合脂質をさらに含み、前記複合脂質が、ＰＥＧ−ジアシルグリセロール（ＤＡＧ）、ＰＥＧ−ジアルキルオキシプロピル（ＤＡＡ）、ＰＥＧ−リン脂質、ＰＥＧ−セラミド（Ｃｅｒ）、ペグ化ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥＧ−ＰＥ）、ＰＥＧコハク酸ジアシルグリセロール（ＰＥＧＳ−ＤＡＧ）、ＰＥＧジアルコキシプロピルカルバム、およびＮ−（カルボニル−メトキシポリエチレングリコール２０００）−１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンナトリウム塩からなる群から選択される、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の脂質ナノ粒子。
【請求項１９】
前記脂質ナノ粒子が、コレステロールまたはコレステロール誘導体をさらに含む、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の脂質ナノ粒子。
【請求項２０】
前記脂質ナノ粒子が、
（ｖ）イオン化脂質と、
（ｖｉ）非カチオン性脂質と、
（ｖｉｉ）粒子の凝集を阻害する複合脂質と、
（ｖｉｉｉ）ステロールと、を含む、請求項１〜１９のいずれか一項に記載の脂質ナノ粒子。
【請求項２１】
前記脂質ナノ粒子が、
（ｅ）前記粒子中に存在する全脂質の約２０ｍｏｌ％〜約９０ｍｏｌ％の量のイオン化脂質と、
（ｆ）前記粒子中に存在する全脂質の約５ｍｏｌ％〜約３０ｍｏｌ％の量の非カチオン性脂質と、
（ｇ）前記粒子中に存在する全脂質の約０．５ｍｏｌ％〜約２０ｍｏｌ％の量の、粒子の凝集を阻害する複合脂質と、
（ｈ）前記粒子中に存在する全脂質の約２０ｍｏｌ％〜約５０ｍｏｌ％の量のステロールと、を含む、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の脂質ナノ粒子。
【請求項２２】
全脂質とＤＮＡベクターとの（質量または重量）比が、約１０：１〜約３０：１である、請求項１〜２１のいずれか一項に記載の脂質ナノ粒子。
【請求項２３】
第１の脂質ナノ粒子および追加の化合物を含む組成物であって、前記第１の脂質ナノ粒子が、第１のカプシド不含非ウイルス性ベクターを含み、請求項１〜２２のいずれか一項に記載の脂質ナノ粒子である、組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０３９５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０３９５】
参照文献
特許、特許出願、国際特許出願および公開を含む、明細書および実施例に列挙され、開示されるすべての参照文献は、参照によりそれら全体が本明細書に組み込まれる。
本発明は、例えば以下の項目を提供する。
（項目１）
イオン化脂質と、共有結合性閉端を有する非ウイルス性カプシド不含ＤＮＡベクター（ｃｅＤＮＡベクター）とを含む、脂質粒子であって、前記ｃｅＤＮＡベクターが、非対称逆位末端反復配列（非対称ＩＴＲ）の間に操作可能に位置付けられた少なくとも１つの異種ヌクレオチド配列を含み、前記非対称ＩＴＲのうちの少なくとも１つが、機能的末端分解部位およびＲｅｐ結合部位を含む、脂質粒子。
（項目２）
前記ｃｅＤＮＡベクターが、前記ｃｅＤＮＡベクター上に単一認識部位を有する制限酵素で消化され、未変性ゲルおよび変性ゲルの両方の電気泳動によって分析されたときに、直鎖状で非連続的なＤＮＡ対照と比較して特徴的な直鎖状で連続的なＤＮＡのバンドを示す、項目１に記載の脂質ナノ粒子。
（項目３）
前記非対称ＩＴＲ配列のうちの１つ以上が、パルボウイルス、ディペンドウイルス、およびアデノ関連ウイルス（ＡＡＶ）から選択されるウイルスに由来する、項目１または２に記載の脂質ナノ粒子。
（項目４）
前記非対称ＩＴＲが、異なるウイルス血清型に由来する、項目３に記載の脂質ナノ粒子。
（項目５）
前記１つ以上の非対称ＩＴＲが、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、およびＡＡＶ１２から選択されるＡＡＶ血清型に由来する、項目４に記載の脂質ナノ粒子。
（項目６）
前記非対称ＩＴＲ配列のうちの１つ以上が、合成である、項目１〜３のいずれか一項に記載の脂質ナノ粒子。
（項目７）
前記ＩＴＲのうちの１つ以上が、野生型ＩＴＲではない、項目１〜６のいずれか一項に記載の脂質ナノ粒子。
（項目８）
前記非対称ＩＴＲのうちの１つ以上両方が、Ａ、Ａ’、Ｂ、Ｂ’、Ｃ、Ｃ’、Ｄ、およびＤ’から選択されるＩＴＲ領域のうちの少なくとも１つにおける欠失、挿入、および／または置換によって修飾されている、項目１〜７のいずれか一項に記載の脂質ナノ粒子。
（項目９）
前記ｃｅＤＮＡベクターが、
ｃ．配列番号１および配列番号５２、ならびに
ｄ．配列番号２および配列番号５１から選択される少なくとも２つの非対称ＩＴＲを含む、項目１〜８のいずれか一項に記載の脂質ナノ粒子。
（項目１０）
前記ｃｅＤＮＡベクターが、
ａ．少なくとも１つのＲｅｐタンパク質の存在下、ｃｅＤＮＡ発現構築物を内包する昆虫細胞の集団をインキュベートするステップであって、前記ｃｅＤＮＡ発現構築物が、前記昆虫細胞内で前記ｃｅＤＮＡベクターの産生を誘導するために効果的な条件下、かつそのために十分な時間にわたって、前記ｃｅＤＮＡベクターをコードする、ステップと、
ｂ．前記ｃｅＤＮＡベクターを前記昆虫細胞から単離するステップと、を含むプロセスから取得される、項目１〜９のいずれか一項に記載の脂質ナノ粒子。
（項目１１）
前記ｃｅＤＮＡ発現構築物が、ｃｅＤＮＡプラスミド、ｃｅＤＮＡバクミド、およびｃｅＤＮＡバキュロウイルスから選択される、項目１０に記載の脂質ナノ粒子。
（項目１２）
前記昆虫細胞が、少なくとも１つのＲｅｐタンパク質を発現する、項目１０または項目１１に記載の脂質ナノ粒子。
（項目１３）
少なくとも１つのＲｅｐタンパク質が、パルボウイルス、ディペンドウイルス、およびアデノ関連ウイルス（ＡＡＶ）から選択されるウイルスに由来する、項目１０に記載の脂質ナノ粒子。
（項目１４）
少なくとも１つのＲｅｐタンパク質が、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、およびＡＡＶ１２から選択されるＡＡＶ血清型に由来する、項目１３に記載の脂質ナノ粒子。
（項目１５）
前記ＤＮＡベクターが、ベクターポリヌクレオチドから取得され、前記ベクターポリヌクレオチドが、２つの逆位末端反復配列（ＩＴＲ）の間に操作可能に位置付けられた異種核酸をコードし、前記２つのＩＴＳが、互いに異なり（非対称）、前記ＩＴＲのうちの少なくとも１つが、機能的末端分解部位およびＲｅｐ結合部位を含む機能的ＩＴＲであり、前記ＩＴＲのうちの１つが、前記機能的ＩＴＲに対して欠失、挿入、および／または置換を含み、Ｒｅｐタンパク質の存在が、昆虫細胞における前記ベクターポリヌクレオチドの複製および前記ＤＮＡベクターの産生を誘導し、前記ＤＮＡベクターが、
ａ．Ｒｅｐタンパク質の存在下、ウイルスカプシドコード配列を欠いた前記ベクターポリヌクレオチドを内包する昆虫細胞の集団を、前記昆虫細胞内の前記カプシド不含非ウイルス性ＤＮＡベクターの産生を誘導するために効果的な条件下、かつそのために十分な時間にわたって、インキュベートするステップであって、前記昆虫細胞が、前記ベクターの非存在下では、前記昆虫細胞内のカプシド不含非ウイルス性ＤＮＡの産生を含まない、ステップと、
ｂ．前記カプシド不含非ウイルス性ＤＮＡを前記昆虫細胞から採取し、単離するステップと、を含むプロセスから取得可能である、項目１〜１５のいずれか一項に記載の脂質粒子。
（項目１６）
前記昆虫細胞から単離された前記カプシド不含非ウイルス性ＤＮＡの存在が、確認され得る、項目１０〜１５のいずれか一項に記載の脂質粒子。
（項目１７）
前記昆虫細胞から単離された前記カプシド不含非ウイルス性ＤＮＡの存在が、前記昆虫細胞から単離されたＤＮＡを、前記ＤＮＡベクター上に単一認識部位を有する制限酵素で消化すること、および前記消化されたＤＮＡ材料を非変性ゲル上で分析して、直鎖状で非連続的なＤＮＡと比較して特徴的な直鎖状で連続的なＤＮＡのバンドの存在を確認することによって確認され得る、項目１６に記載の脂質粒子。
（項目１８）
前記ＤＮＡベクターが、ベクターポリヌクレオチドから取得され、前記ベクターポリヌクレオチドが、第１および第２のＡＡＶ２逆位末端反復ＤＮＡポリヌクレオチド配列（ＩＴＲ）の間に操作可能に位置付けられた異種核酸をコードし、前記ＩＴＲのうちの少なくとも１つが、配列番号１または配列番号５１の対応するＡＡＶ２野生型ＩＴＲに関して少なくとも１つのポリヌクレオチド欠失、挿入、および／または置換を有し、Ｒｅｐタンパク質の存在下で昆虫細胞中の前記ＤＮＡベクターの複製を誘導し、前記ＤＮＡベクターが、
ａ．Ｒｅｐタンパク質の存在下、ウイルスカプシドコード配列を欠いた前記ベクターポリヌクレオチドを内包する昆虫細胞の集団を、前記昆虫細胞内の前記カプシド不含非ウイルス性ＤＮＡベクターの産生を誘導するために効果的な条件下、かつそのために十分な時間にわたって、インキュベートするステップであって、前記昆虫細胞が、ウイルスカプシドコード配列を含まない、ステップと、
ｂ．前記カプシド不含非ウイルス性ＤＮＡを前記昆虫細胞から採取し、単離するステップと、を含むプロセスから取得可能である、項目１〜１７のいずれか一項に記載の脂質粒子。
（項目１９）
前記昆虫細胞から単離された前記カプシド不含非ウイルス性ＤＮＡの存在が、確認され得る、項目１８に記載の脂質粒子。
（項目２０）
前記昆虫細胞から単離された前記カプシド不含非ウイルス性ＤＮＡの存在が、前記昆虫細胞から単離されたＤＮＡを、前記ＤＮＡベクター上に単一認識部位を有する制限酵素で消化すること、および前記消化されたＤＮＡ材料を非変性ゲル上で分析して、直鎖状で非連続的なＤＮＡと比較して特徴的な直鎖状で連続的なＤＮＡのバンドの存在を確認することによって確認され得る、項目１９に記載の脂質粒子。
（項目２１）
前記脂質粒子が、非カチオン性脂質、ＰＥＧ複合脂質、およびステロールのうちの１つ以上をさらに含む、項目１〜２０のいずれか一項に記載の脂質粒子。
（項目２２）
前記イオン化脂質が、表１に記載の脂質である、項目１〜２１のいずれか一項に記載の脂質粒子。
（項目２３）
前記脂質粒子が、非カチオン性脂質をさらに含み、前記非イオン性脂質が、ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−ホスホエタノールアミン、ジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）、ジオレオイルホスファチジルコリン（ＤＯＰＣ）、ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）、ジオレオイルホスファチジルグリセロール（ＤＯＰＧ）、ジパルミトイルホスファチジルグリセロール（ＤＰＰＧ）、ジオレオイル−ホスファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、パルミトイルオレオイルホスファチジルコリン（ＰＯＰＣ）、パルミトイルオレオイルホスファチジルエタノールアミン（ＰＯＰＥ）、ジオレオイル−ホスファチジルエタノールアミン４−（Ｎ−マレイミドメチル）−シクロヘキサン−１−カルボキシレート（ＤＯＰＥ−ｍａｌ）、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＰＰＥ）、ジミリストイルホスホエタノールアミン（ＤＭＰＥ）、ジステアロイル−ホスファチジル−エタノールアミン（ＤＳＰＥ）、モノメチル−ホスファチジルエタノールアミン、ジメチル−ホスファチジルエタノールアミン、１８−１−トランスＰＥ、１−ステアロイル−２−オレオイル−ホスファチジエタノールアミン（ＳＯＰＥ）、水素化ダイズホスファチジルコリン（ＨＳＰＣ）、卵ホスファチジルコリン（ＥＰＣ）、ジオレオイルホスファチジルセリン（ＤＯＰＳ）、スフィンゴミエリン（ＳＭ）、ジミリストイルホスファチジルコリン（ＤＭＰＣ）、ジミリストイルホスファチジルグリセロール（ＤＭＰＧ）、ジステアロイルホスファチジルグリセロール（ＤＳＰＧ）、ジエルコイルホスファチジルコリン（ＤＥＰＣ）、パルミトイルオレオイルホスファチジルグリセロール（ＰＯＰＧ）、ジエライドイル−ホスファチジルエタノールアミン（ＤＥＰＥ）、レシチン、ホスファチジルエタノールアミン、リソレシチン、リソホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルイノシトール、スフィンゴミエリン、卵スフィンゴミエリン（ＥＳＭ）、セファリン、カルジオリピン、ホスファチジカシド、セレブロシド、ジセチルホスフェート、リソホスファチジルコリン、およびジリノレオイルホスファチジルコリンからなる群から選択される、項目１〜２２のいずれか一項に記載の脂質粒子。
（項目２４）
前記脂質粒子が、複合脂質をさらに含み、前記複合脂質、前記複合脂質が、ＰＥＧ−ジアシルグリセロール（ＤＡＧ）、ＰＥＧ−ジアルキルオキシプロピル（ＤＡＡ）、ＰＥＧ−リン脂質、ＰＥＧ−セラミド（Ｃｅｒ）、ペグ化ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥＧ−ＰＥ）、ＰＥＧコハク酸ジアシルグリセロール（ＰＥＧＳ−ＤＡＧ）、ＰＥＧジアルコキシプロピルカルバム、およびＮ−（カルボニル−メトキシポリエチレングリコール２０００）−１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンナトリウム塩からなる群から選択される、項目１〜２３のいずれか一項に記載の脂質粒子。
（項目２５）
前記脂質粒子が、コレステロールまたはコレステロール誘導体をさらに含む、項目１〜２４のいずれか一項に記載の脂質粒子。
（項目２６）
前記脂質粒子が、
（ｖ）イオン化脂質と、
（ｖｉ）非カチオン性脂質と、
（ｖｉｉ）粒子の凝集を阻害する複合脂質と、
（ｖｉｉｉ）ステロールと、を含む、項目１〜２５のいずれか一項に記載の脂質粒子。
（項目２７）
前記脂質粒子が、
（ｅ）前記粒子中に存在する全脂質の約２０ｍｏｌ％〜約９０ｍｏｌ％の量のイオン化脂質と、
（ｆ）前記粒子中に存在する全脂質の約５ｍｏｌ％〜約３０ｍｏｌ％の量の非カチオン性脂質と、
（ｇ）前記粒子中に存在する全脂質の約０．５ｍｏｌ％〜約２０ｍｏｌ％の量の、粒子の凝集を阻害する複合脂質と、
（ｈ）前記粒子中に存在する全脂質の約２０ｍｏｌ％〜約５０ｍｏｌ％の量のステロールと、を含む、項目１〜２６のいずれか一項に記載の脂質粒子。
（項目２８）
全脂質とＤＮＡベクターとの（質量または重量）比が、約１０：１〜約３０：１である、項目１〜２７のいずれか一項に記載の脂質粒子。
（項目２９）
第１の脂質ナノ粒子および追加の化合物を含む組成物であって、前記第１の脂質ナノ粒子が、第１のカプシド不含非ウイルス性ベクターを含み、項目１〜２８のいずれか一項に記載の脂質ナノ粒子である、組成物。
（項目３０）
前記追加の化合物が、第２の脂質ナノ粒子中に包含され、前記第１および第２の脂質ナノ粒子が異なる、項目２９に記載の組成物。
（項目３１）
前記追加の化合物が、第１の脂質ナノ粒子中に包含される、項目２８または２９に記載の組成物。
（項目３２）
前記追加の化合物が、治療剤である、項目２８〜３０のいずれか一項に記載の組成物。
（項目３３）
前記追加の化合物が、第２のカプシド不含非ウイルス性ベクターであり、前記第１および第２のカプシド不含非ウイルス性ベクターが異なる、項目２８に記載の組成物。