【手続補正書】
【提出日】令和3年7月30日(2021.7.30)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
第１および第２のガイドＲＮＡ標的配列の間の核酸のＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ誘導性切り出しを評価するためのＣＲＩＳＰＲリポーターを含む非ヒト動物であって、前記ＣＲＩＳＰＲリポーターが、標的ゲノム遺伝子座に組み込まれ、前記第１および第２のガイドＲＮＡ標的配列によって挟まれた第１のポリアデニル化シグナル、次いで、第１のリポータータンパク質のコード配列と、第２のリポータータンパク質のコード配列とを任意の順序で含むリポーターカセットを含み、前記第１のリポータータンパク質と前記第２のリポータータンパク質とが異なっている、非ヒト動物。
【請求項２】
前記ＣＲＩＳＰＲリポーターが、前記非ヒト動物内での発現に好適なプロモーターに作動可能に連結されており、
前記第１のポリアデニル化シグナルは、前記第１のリポータータンパク質および前記第２のリポータータンパク質の転写および発現を防止し、前記第１および第２のガイドＲＮＡ標的配列の切断ならびに前記第１のポリアデニル化シグナルを含む介在配列の切り出しの際に、前記第１のリポータータンパク質の前記コード配列および前記第２のリポータータンパク質の前記コード配列によって転写を進行させることができる、請求項１に記載の非ヒト動物。
【請求項３】
前記ＣＲＩＳＰＲリポーターが、前記ＣＲＩＳＰＲリポーターの外因性ドナー核酸とのＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ誘導性組換えを評価するためのものでもある、請求項１または２に記載の非ヒト動物。
【請求項４】
前記第１のリポータータンパク質が、第３のガイドＲＮＡ標的配列を含み、前記ＣＲＩＳＰＲリポーターの前記外因性ドナー核酸との組換えが、前記第１のリポータータンパク質の前記コード配列を、第３のリポータータンパク質のコード配列に変化させる、請求項３に記載の非ヒト動物。
【請求項５】
前記第１のリポータータンパク質の前記コード配列を、単一のコドンを変化させることによって、前記第３のリポータータンパク質の前記コード配列に変化させる、請求項４に記載の非ヒト動物。
【請求項６】
前記第３のガイドＲＮＡ標的配列が、前記外因性ドナー核酸によって改変された前記第１のリポータータンパク質の前記コード配列の一部と重複する、請求項４または５に記載の非ヒト動物。
【請求項７】
前記第１および第２のリポータータンパク質の１つが、蛍光リポータータンパク質を含む、請求項１から６のいずれかに記載の非ヒト動物。
【請求項８】
前記蛍光リポータータンパク質が、強化型緑色蛍光タンパク質（ｅＧＦＰ）または強化型青色蛍光タンパク質（ｅＢＦＰ）を含む、請求項７に記載の非ヒト動物。
【請求項９】
前記第１および第２のリポータータンパク質が、前記蛍光リポータータンパク質および非蛍光リポータータンパク質を含み、前記蛍光リポータータンパク質を、フローサイトメトリーアッセイにおいて検出することができ、前記非蛍光タンパク質を、組織化学的アッセイにおいて検出することができる、請求項７または８に記載の非ヒト動物。
【請求項１０】
前記第１および第２のリポータータンパク質の１つが、ベータ−ガラクトシダーゼタンパク質を含む、請求項１から９のいずれかに記載の非ヒト動物。
【請求項１１】
前記第１のポリアデニル化シグナルも、第１のリコンビナーゼのためのリコンビナーゼ認識部位によって挟まれており、必要に応じて、前記第１のリコンビナーゼのための前記リコンビナーゼ認識部位が、ｌｏｘＰ配列である、請求項１から１０のいずれかに記載の非ヒト動物。
【請求項１２】
前記リポーターカセットが、介在内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）または介在２Ａペプチドコード配列によって隔てられた、前記第１のリポータータンパク質の前記コード配列と、前記第２のリポータータンパク質の前記コード配列とを含む多シストロン性核酸を含む、請求項１から１１のいずれかに記載の非ヒト動物。
【請求項１３】
前記多シストロン性核酸が、介在Ｐ２Ａペプチドコード配列によって隔てられた、ベータ−ガラクトシダーゼコード配列と、強化型青色蛍光タンパク質（ｅＢＦＰ）コード配列または強化型緑色蛍光タンパク質（ｅＧＦＰ）コード配列とを含む、請求項１２に記載の非ヒト動物。
【請求項１４】
前記ＣＲＩＳＰＲリポーターが、前記標的ゲノム遺伝子座で内因性プロモーターに作動可能に連結されている、請求項１から１３のいずれかに記載の非ヒト動物。
【請求項１５】
前記ＣＲＩＳＰＲリポーターの５’末端が、３’スプライシング配列をさらに含む、請求項１から１４のいずれかに記載の非ヒト動物。
【請求項１６】
前記ＣＲＩＳＰＲリポーターが、選択カセットをさらに含み、必要に応じて、前記選択カセットが、第２のリコンビナーゼのためのリコンビナーゼ認識部位によって挟まれており、そして必要に応じて、前記選択カセットが、薬物耐性遺伝子を含む、請求項１から１５のいずれかに記載の非ヒト動物。
【請求項１７】
前記第１のガイドＲＮＡ標的配列と、前記第２のガイドＲＮＡ標的配列との距離が、約５００塩基対未満である、請求項１から１６のいずれかに記載の非ヒト動物。
【請求項１８】
前記第１のガイドＲＮＡ標的配列と、前記第２のガイドＲＮＡ標的配列が同一であり、それぞれ、配列番号４１を含む、請求項１から１７のいずれかに記載の非ヒト動物。
【請求項１９】
ラットまたはマウスである、請求項１から１８のいずれかに記載の非ヒト動物。
【請求項２０】
前記マウスである、請求項１９に記載の非ヒト動物。
【請求項２１】
前記標的ゲノム遺伝子座が、セーフハーバー遺伝子座である、請求項１から２０のいずれかに記載の非ヒト動物。
【請求項２２】
前記セーフハーバー遺伝子座が、Ｒｏｓａ２６遺伝子座であり、前記ＣＲＩＳＰＲリポーターが、前記Ｒｏｓａ２６遺伝子座の第１のイントロンに挿入される、請求項２１に記載の非ヒト動物。
【請求項２３】
前記非ヒト動物がマウスであり、
前記標的ゲノム遺伝子座がＲｏｓａ２６遺伝子座であり、
前記ＣＲＩＳＰＲリポーターが内因性Ｒｏｓａ２６プロモーターに作動可能に連結され、前記Ｒｏｓａ２６遺伝子座の第１のイントロンに挿入され、５’から３’に向かって、
（ａ）３’スプライシング配列；
（ｂ）（ｉ）第１および第２のｌｏｘＰ部位；ならびに
（ｉｉ）第１のガイドＲＮＡ標的配列と、第２のガイドＲＮＡ標的配列が同一であり、それぞれ、配列番号４１を含む、前記第１および第２のガイドＲＮＡ標的配列によって挟まれた第１のポリアデニル化シグナル；ならびに
（ｃ）５’から３’に向かって、
（ｉ）ベータ−ガラクトシダーゼコード配列；
（ｉｉ）Ｐ２Ａコード配列；
（ｉｉｉ）配列番号４２を含む第３のガイドＲＮＡ標的配列を含む、強化型青色蛍光タンパク質（ｅＢＦＰ）コード配列；および
（ｉｖ）前記第１のポリアデニル化シグナルと第２のポリアデニル化シグナルとが異なる、前記第２のポリアデニル化シグナルを含むリポーターカセット
を含む、請求項１から２２のいずれかに記載の非ヒト動物。
【請求項２４】
前記ＣＲＩＳＰＲリポーターが、
（ｄ）前記リポーターカセットの３’側の選択カセット
をさらに含み、前記選択カセットは、ＦＲＴ部位によって挟まれており、５’から３’に向かって、
（ｉ）ヒトユビキチンプロモーターに作動可能に連結されたネオマイシンホスホトランスフェラーゼコード配列；および
（ｉｉ）第３のポリアデニル化シグナル
を含む、請求項２３に記載の非ヒト動物。
【請求項２５】
前記標的ゲノム遺伝子座で前記ＣＲＩＳＰＲリポーターについてヘテロ接合性である、請求項１から２４のいずれかに記載の非ヒト動物。
【請求項２６】
前記標的ゲノム遺伝子座で前記ＣＲＩＳＰＲリポーターについてホモ接合性である、請求項１から２４のいずれか一項に記載の非ヒト動物。
【請求項２７】
ｉｎ  ｖｉｖｏでゲノム核酸を切り出すＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓヌクレアーゼの能力を試験する方法であって、
（ａ）請求項１から２６のいずれか一項に記載の非ヒト動物に、
（ｉ）前記ＣＲＩＳＰＲリポーター中の前記第１のガイドＲＮＡ標的配列にハイブリダイズするように設計された第１のガイドＲＮＡまたは前記第１のガイドＲＮＡをコードするＤＮＡ；
（ｉｉ）前記ＣＲＩＳＰＲリポーター中の前記第２のガイドＲＮＡ標的配列にハイブリダイズするように設計された第２のガイドＲＮＡまたは前記第２のガイドＲＮＡをコードするＤＮＡ；および
（ｉｉｉ）Ｃａｓタンパク質または前記Ｃａｓタンパク質をコードする核酸
を導入するステップ；ならびに
（ｂ）前記第１および第２のリポータータンパク質の少なくとも１つの活性または発現を測定するステップ
を含む、方法。
【請求項２８】
前記Ｃａｓタンパク質がＣａｓ９タンパク質である；ならびに／あるいは
（Ｉ）前記Ｃａｓタンパク質が、タンパク質の形態で前記非ヒト動物に導入される；
（ＩＩ）前記Ｃａｓタンパク質が、前記Ｃａｓタンパク質をコードするメッセンジャーＲＮＡの形態で前記非ヒト動物に導入される；あるいは
（ＩＩＩ）前記Ｃａｓタンパク質が、前記Ｃａｓタンパク質をコードするＤＮＡの形態で前記非ヒト動物に導入され、前記ＤＮＡが、前記非ヒト動物中の１つまたは複数の細胞型において活性なプロモーターに作動可能に連結されている、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記第１のガイドＲＮＡと、前記第２のガイドＲＮＡが同一であり、それぞれ、配列番号２に記載の配列を含む、請求項２７または２８に記載の方法。
【請求項３０】
（Ｉ）ステップ（ｂ）において測定された前記リポータータンパク質が、蛍光リポータータンパク質であり、ステップ（ｂ）が、フローサイトメトリーアッセイを含む；あるいは
（ＩＩ）ステップ（ｂ）において測定された前記リポータータンパク質が、ベータ−ガラクトシダーゼタンパク質であり、ステップ（ｂ）が、組織化学染色アッセイを含む、請求項２７から２９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３１】
（Ｉ）ステップ（ａ）における前記ガイドＲＮＡがＲＮＡの形態で導入される；あるいは
（ＩＩ）ステップ（ａ）における前記ガイドＲＮＡが、前記ガイドＲＮＡをコードするＤＮＡの形態で前記非ヒト動物にそれぞれ導入され、前記ＤＮＡが、前記非ヒト動物中の１つまたは複数の細胞型において活性なプロモーターに作動可能に連結されている、請求項２７から３０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３２】
前記導入するステップが、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）媒介性送達、脂質ナノ粒子媒介性送達、または流体力学的送達を含む、請求項２７から３１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３３】
前記導入するステップが、ＡＡＶ８媒介性送達を含み、ステップ（ｂ）が、前記非ヒト動物の肝臓中の前記リポータータンパク質の活性を測定することを含む、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
ｉｎ  ｖｉｖｏでゲノム核酸を切り出すＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓヌクレアーゼの能力を最適化する方法であって、
（Ｉ）第１の非ヒト動物において１回目の請求項２７から３３のいずれか一項に記載の方法を実施するステップ；
（ＩＩ）変数を変化させ、第２の非ヒト動物において変化した変数を用いて２回目のステップ（Ｉ）に記載の方法を実施するステップ；および
（ＩＩＩ）ステップ（Ｉ）における前記リポータータンパク質の活性または発現と、ステップ（ＩＩ）における少なくとも１つの前記リポータータンパク質の活性または発現とを比較し、前記リポータータンパク質のより高い活性または発現をもたらす方法を選択するステップ
を含む、方法。
【請求項３５】
（Ｉ）ステップ（ＩＩ）における前記変化した変数が、前記ガイドＲＮＡおよび／または前記Ｃａｓタンパク質を前記非ヒト動物に導入する送達方法である；
（ＩＩ）ステップ（ＩＩ）における前記変化した変数が、前記ガイドＲＮＡおよび／または前記Ｃａｓタンパク質を前記非ヒト動物に導入する投与経路である；
（ＩＩＩ）ステップ（ＩＩ）における前記変化した変数が、前記非ヒト動物に導入される前記ガイドＲＮＡおよび／または前記Ｃａｓタンパク質の濃度または量である；
（ＩＶ）ステップ（ＩＩ）における前記変化した変数が、前記非ヒト動物に導入されるＣａｓタンパク質の濃度または量と比較した、前記非ヒト動物に導入された前記ガイドＲＮＡの濃度または量である；
（Ｖ）ステップ（ＩＩ）における前記変化した変数が、前記非ヒト動物に導入される前記ガイドＲＮＡである；あるいは
（ＶＩ）ステップ（ＩＩ）における前記変化した変数が、前記非ヒト動物に導入される前記Ｃａｓタンパク質である、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
ｉｎ  ｖｉｖｏでゲノム核酸の外因性ドナー核酸とのＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ誘導性組換えを試験する方法であって、
（ａ）前記ＣＲＩＳＰＲリポーターが、前記ＣＲＩＳＰＲリポーターの外因性ドナー核酸とのＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ誘導性組換えを評価するためのものでもあり、前記第１のポリアデニル化シグナルが、前記ＣＲＩＳＰＲリポーターから除去されており、前記第１のリポータータンパク質の前記コード配列が、第３のガイドＲＮＡ標的配列を含む、請求項１から２６のいずれか一項に記載の非ヒト動物を提供し、前記非ヒト動物に、
（ｉ）前記ＣＲＩＳＰＲリポーター中の前記第３のガイドＲＮＡ標的配列にハイブリダイズするように設計されたガイドＲＮＡまたは前記ガイドＲＮＡをコードするＤＮＡ；
（ｉｉ）Ｃａｓタンパク質または前記Ｃａｓタンパク質をコードする核酸；および
（ｉｉｉ）前記ＣＲＩＳＰＲリポーターと組み換わり、前記第１のリポータータンパク質の前記コード配列を、第３のリポータータンパク質のコード配列に変化させることができる外因性ドナー核酸
を導入するステップ；ならびに
（ｂ）前記第３のリポータータンパク質の活性または発現を測定するステップ
を含む、方法。
【請求項３７】
前記Ｃａｓタンパク質がＣａｓ９タンパク質である；ならびに／あるいは
（Ｉ）前記Ｃａｓタンパク質が、タンパク質の形態で前記非ヒト動物に導入される；
（ＩＩ）前記Ｃａｓタンパク質が、前記Ｃａｓタンパク質をコードするメッセンジャーＲＮＡの形態で前記非ヒト動物に導入される；あるいは
（ＩＩＩ）前記Ｃａｓタンパク質が、前記Ｃａｓタンパク質をコードするＤＮＡの形態で前記非ヒト動物に導入され、前記ＤＮＡが、前記非ヒト動物中の１つまたは複数の細胞型において活性なプロモーターに作動可能に連結されている、請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
ステップ（ｂ）において測定された前記第３のリポータータンパク質が、蛍光リポータータンパク質であり、ステップ（ｂ）が、フローサイトメトリーアッセイを含む、請求項３６または３７に記載の方法。
【請求項３９】
前記第１のリポータータンパク質が、強化型青色蛍光タンパク質（ｅＢＦＰ）であり、前記第３のガイドＲＮＡが、配列番号１４に記載の配列を含む、請求項３６から３８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４０】
前記第１のリポータータンパク質が、強化型青色蛍光タンパク質（ｅＢＦＰ）であり、前記第３のリポータータンパク質が、強化型緑色蛍光タンパク質（ｅＧＦＰ）であり、必要に応じて、前記外因性ドナー核酸が、配列番号１５または配列番号１６に記載の配列を含む、請求項３６から３９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４１】
前記外因性ドナー核酸が、一本鎖デオキシヌクレオチドである、請求項３６から４０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４２】
（Ｉ）ステップ（ａ）における前記ガイドＲＮＡがＲＮＡの形態で導入される；あるいは
（ＩＩ）ステップ（ａ）における前記ガイドＲＮＡが、前記ガイドＲＮＡをコードするＤＮＡの形態で前記非ヒト動物に導入され、前記ＤＮＡが、前記非ヒト動物中の１つまたは複数の細胞型において活性なプロモーターに作動可能に連結されている、請求項３６から４１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４３】
前記導入するステップが、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）媒介性送達、脂質ナノ粒子媒介性送達、または流体力学的送達を含む、請求項３６から４２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４４】
前記導入するステップが、ＡＡＶ８媒介性送達を含み、ステップ（ｂ）が、前記非ヒト動物の肝臓中の前記リポータータンパク質の活性を測定することを含む、請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
ｉｎ  ｖｉｖｏでゲノム核酸の外因性ドナー核酸との組換えを誘導するＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓの能力を最適化する方法であって、
（Ｉ）第１の非ヒト動物において１回目の請求項３６から４４のいずれか一項に記載の方法を実施するステップ；
（ＩＩ）変数を変化させ、第２の非ヒト動物において前記変化した変数を用いて２回目のステップ（Ｉ）に記載の方法を実施するステップ；および
（ＩＩＩ）ステップ（Ｉ）における前記第３のリポータータンパク質の活性または発現と、ステップ（ＩＩ）における前記第３のリポータータンパク質の活性または発現とを比較し、前記第３のリポータータンパク質のより高い活性または発現をもたらす方法を選択するステップ
を含む、方法。
【請求項４６】
（Ｉ）ステップ（ＩＩ）における前記変化した変数が、前記ガイドＲＮＡ、前記Ｃａｓタンパク質、および前記外因性ドナー核酸のうちの１つまたは複数を前記非ヒト動物に導入する送達方法である；
（ＩＩ）ステップ（ＩＩ）における前記変化した変数が、前記ガイドＲＮＡ、前記Ｃａｓタンパク質、および前記外因性ドナー核酸のうちの１つまたは複数を前記非ヒト動物に導入する投与経路である；
（ＩＩＩ）ステップ（ＩＩ）における前記変化した変数が、前記非ヒト動物に導入される前記ガイドＲＮＡ、前記Ｃａｓタンパク質、および前記外因性ドナー核酸のうちの１つまたは複数の濃度または量である；
（ＩＶ）ステップ（ＩＩ）における前記変化した変数が、前記非ヒト動物に導入される前記外因性ドナー核酸である；
（Ｖ）ステップ（ＩＩ）における前記変化した変数が、前記非ヒト動物に導入されるＣａｓタンパク質の濃度または量と比較した、前記非ヒト動物に導入された前記ガイドＲＮＡの濃度または量である；
（ＶＩ）ステップ（ＩＩ）における前記変化した変数が、前記非ヒト動物に導入される前記ガイドＲＮＡである；あるいは
（ＶＩＩ）ステップ（ＩＩ）における前記変化した変数が、前記非ヒト動物に導入されるＣａｓタンパク質である、請求項４５に記載の方法。
【請求項４７】
第１および第２のガイドＲＮＡ標的配列の間の核酸のＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ誘導性切り出しを評価するためのＣＲＩＳＰＲリポーターを含む非ヒト動物細胞であって、前記ＣＲＩＳＰＲリポーターが、標的ゲノム遺伝子座に組み込まれ、前記第１および第２のガイドＲＮＡ標的配列によって挟まれた第１のポリアデニル化シグナル、次いで、第１のリポータータンパク質のコード配列と、第２のリポータータンパク質のコード配列とを任意の順序で含むリポーターカセットを含み、前記第１のリポータータンパク質と前記第２のリポータータンパク質とが異なっている、非ヒト動物細胞。
【請求項４８】
相同アームによって挟まれたＣＲＩＳＰＲリポーターを含む標的化ベクターであって、前記ＣＲＩＳＰＲリポーターが、第１および第２のガイドＲＮＡ標的配列の間の核酸のＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ誘導性切り出しを評価するためのものであり、前記ＣＲＩＳＰＲリポーターが、前記第１および第２のガイドＲＮＡ標的配列によって挟まれた第１のポリアデニル化シグナル、次いで、第１のリポータータンパク質のコード配列と、第２のリポータータンパク質のコード配列とを任意の順序で含むリポーターカセットを含み、前記第１のリポータータンパク質と前記第２のリポータータンパク質とが異なっており、前記相同アームが、ゲノム組込みを容易にするための所望の標的ゲノム遺伝子座との組換えを方向付けるのに好適である、標的化ベクター。
【請求項４９】
請求項１から２６のいずれか一項に記載の非ヒト動物を作製するための方法であって、
（ａ）標的ゲノム遺伝子座に組み込まれたＣＲＩＳＰＲリポーターを含むように多能性非ヒト動物細胞のゲノムを改変するステップであって、前記ＣＲＩＳＰＲリポーターが、第１および第２のガイドＲＮＡ標的配列の間の核酸のＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ誘導性切り出しを評価するためのものであり、前記ＣＲＩＳＰＲリポーターが、前記第１および第２のガイドＲＮＡ標的配列によって挟まれた第１のポリアデニル化シグナル、次いで、第１のリポータータンパク質のコード配列と、第２のリポータータンパク質のコード配列とを任意の順序で含むリポーターカセットを含み、前記第１のリポータータンパク質と前記第２のリポータータンパク質とが異なっている、ステップ；
（ｂ）前記ＣＲＩＳＰＲリポーターを含む遺伝子改変された多能性非ヒト動物細胞を同定または選択するステップ；
（ｃ）前記遺伝子改変された多能性非ヒト動物細胞を、非ヒト動物宿主胚に導入するステップ；および
（ｄ）非ヒト動物代理母に前記非ヒト動物宿主胚を埋め込み、懐胎させるステップ
を含む、方法。
【請求項５０】
請求項１から２６のいずれか一項に記載の非ヒト動物を作製するための方法であって、
（ａ）標的ゲノム遺伝子座に組み込まれたＣＲＩＳＰＲリポーターを含むように非ヒト動物の１細胞期胚のゲノムを改変するステップであって、前記ＣＲＩＳＰＲリポーターが、第１および第２のガイドＲＮＡ標的配列の間の核酸のＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ誘導性切り出しを評価するためのものであり、前記ＣＲＩＳＰＲリポーターが、前記第１および第２のガイドＲＮＡ標的配列によって挟まれた第１のポリアデニル化シグナル、次いで、第１のリポータータンパク質のコード配列と、第２のリポータータンパク質のコード配列とを任意の順序で含むリポーターカセットを含み、前記第１のリポータータンパク質と前記第２のリポータータンパク質とが異なっている、ステップ；
（ｂ）遺伝子改変された非ヒト動物の１細胞期胚を選択するステップ；および
（ｃ）非ヒト動物代理母に前記遺伝子改変された非ヒト動物の１細胞期胚を埋め込み、懐胎させるステップ
を含む、方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３３】
一部のそのような方法では、ステップ（ＩＩ）における変化した変数は、送達方法である。一部のそのような方法では、ステップ（ＩＩ）における変化した変数は、ガイドＲＮＡ、Ｃａｓタンパク質、および外因性ドナー核酸のうちの１つまたは複数を非ヒト動物に導入する送達方法である。一部のそのような方法では、ステップ（ＩＩ）における変化した変数は、投与経路である。一部のそのような方法では、ステップ（ＩＩ）における変化した変数は、ガイドＲＮＡ、Ｃａｓタンパク質、および外因性ドナー核酸のうちの１つまたは複数を非ヒト動物に導入する投与経路である。一部のそのような方法では、ステップ（ＩＩ）における変化した変数は、非ヒト動物に導入されたガイドＲＮＡ、Ｃａｓタンパク質、および外因性ドナー核酸のうちの１つまたは複数の濃度または量である。一部のそのような方法では、ステップ（ＩＩ）における変化した変数は、非ヒト動物に導入された外因性ドナー核酸（例えば、外因性ドナー核酸の形態または配列）である。一部のそのような方法では、ステップ（ＩＩ）における変化した変数は、非ヒト動物に導入されたＣａｓタンパク質の濃度または量と比較した、非ヒト動物に導入されたガイドＲＮＡの濃度または量である。一部のそのような方法では、ステップ（ＩＩ）における変化した変数は、非ヒト動物に導入されたガイドＲＮＡ（例えば、ガイドＲＮＡの形態または配列）である。一部のそのような方法では、ステップ（ＩＩ）における変化した変数は、非ヒト動物に導入されたＣａｓタンパク質（例えば、Ｃａｓタンパク質の形態または配列）である。
特定の実施形態では、例えば、以下が提供される：
（項目１）
第１および第２のガイドＲＮＡ標的配列の間の核酸のＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ誘導性切り出しを評価するためのＣＲＩＳＰＲリポーターを含む非ヒト動物であって、前記ＣＲＩＳＰＲリポーターが、標的ゲノム遺伝子座に組み込まれ、前記第１および第２のガイドＲＮＡ標的配列によって挟まれた第１のポリアデニル化シグナル、次いで、第１のリポータータンパク質のコード配列と、第２のリポータータンパク質のコード配列とを任意の順序で含むリポーターカセットを含み、前記第１のリポータータンパク質と前記第２のリポータータンパク質とが異なっている、非ヒト動物。
（項目２）
前記ＣＲＩＳＰＲリポーターが、前記ＣＲＩＳＰＲリポーターの外因性ドナー核酸とのＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ誘導性組換えを評価するためのものでもある、項目１に記載の非ヒト動物。
（項目３）
前記第１のリポータータンパク質が、第３のガイドＲＮＡ標的配列を含み、前記ＣＲＩＳＰＲリポーターの前記外因性ドナー核酸との組換えが、前記第１のリポータータンパク質の前記コード配列を、第３のリポータータンパク質のコード配列に変化させる、項目２に記載の非ヒト動物。
（項目４）
前記第１のリポータータンパク質の前記コード配列を、単一のコドンを変化させることによって、前記第３のリポータータンパク質の前記コード配列に変化させる、項目３に記載の非ヒト動物。
（項目５）
前記第３のガイドＲＮＡ標的配列が、前記外因性ドナー核酸によって改変された前記第１のリポータータンパク質の前記コード配列の一部と重複する、項目３または４に記載の非ヒト動物。
（項目６）
前記第１および第２のリポータータンパク質の１つが、蛍光リポータータンパク質を含む、前記項目のいずれかに記載の非ヒト動物。
（項目７）
前記蛍光リポータータンパク質が、強化型緑色蛍光タンパク質（ｅＧＦＰ）または強化型青色蛍光タンパク質（ｅＢＦＰ）を含む、項目６に記載の非ヒト動物。
（項目８）
前記第１および第２のリポータータンパク質が、前記蛍光リポータータンパク質および非蛍光リポータータンパク質を含む、項目６または７に記載の非ヒト動物。
（項目９）
前記蛍光リポータータンパク質を、フローサイトメトリーアッセイにおいて検出することができ、前記非蛍光タンパク質を、組織化学的アッセイにおいて検出することができる、項目８に記載の非ヒト動物。
（項目１０）
前記第１および第２のリポータータンパク質の１つが、ベータ−ガラクトシダーゼタンパク質を含む、前記項目のいずれかに記載の非ヒト動物。
（項目１１）
前記第１のポリアデニル化シグナルも、第１のリコンビナーゼのためのリコンビナーゼ認識部位によって挟まれている、前記項目のいずれかに記載の非ヒト動物。
（項目１２）
前記第１のリコンビナーゼのための前記リコンビナーゼ認識部位が、ｌｏｘＰ配列である、項目１１に記載の非ヒト動物。
（項目１３）
前記リポーターカセットが、介在内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）または介在２Ａペプチドコード配列によって隔てられた、前記第１のリポータータンパク質の前記コード配列と、前記第２のリポータータンパク質の前記コード配列とを含む多シストロン性核酸を含む、前記項目のいずれかに記載の非ヒト動物。
（項目１４）
前記多シストロン性核酸が、介在Ｐ２Ａペプチドコード配列によって隔てられた、ベータ−ガラクトシダーゼコード配列と、強化型青色蛍光タンパク質（ｅＢＦＰ）コード配列または強化型緑色蛍光タンパク質（ｅＧＦＰ）コード配列とを含む、項目１３に記載の非ヒト動物。
（項目１５）
前記ＣＲＩＳＰＲリポーターが、前記標的ゲノム遺伝子座で内因性プロモーターに作動可能に連結されている、前記項目のいずれかに記載の非ヒト動物。
（項目１６）
前記ＣＲＩＳＰＲリポーターの５’末端が、３’スプライシング配列をさらに含む、前記項目のいずれかに記載の非ヒト動物。
（項目１７）
前記ＣＲＩＳＰＲリポーターが、選択カセットをさらに含む、前記項目のいずれかに記載の非ヒト動物。
（項目１８）
前記選択カセットが、第２のリコンビナーゼのためのリコンビナーゼ認識部位によって挟まれている、項目１７に記載の非ヒト動物。
（項目１９）
前記選択カセットが、薬物耐性遺伝子を含む、項目１７または１８に記載の非ヒト動物。
（項目２０）
前記第１のガイドＲＮＡ標的配列と、前記第２のガイドＲＮＡ標的配列との距離が、約５００塩基対未満である、前記項目のいずれかに記載の非ヒト動物。
（項目２１）
前記第１のガイドＲＮＡ標的配列と、前記第２のガイドＲＮＡ標的配列が同一であり、それぞれ、配列番号４１を含む、前記項目のいずれかに記載の非ヒト動物。
（項目２２）
ラットまたはマウスである、前記項目のいずれかに記載の非ヒト動物。
（項目２３）
マウスである、項目２２に記載の非ヒト動物。
（項目２４）
前記標的ゲノム遺伝子座が、セーフハーバー遺伝子座である、前記項目のいずれかに記載の非ヒト動物。
（項目２５）
前記セーフハーバー遺伝子座が、Ｒｏｓａ２６遺伝子座である、項目２４に記載の非ヒト動物。
（項目２６）
前記ＣＲＩＳＰＲリポーターが、前記Ｒｏｓａ２６遺伝子座の第１のイントロンに挿入される、項目２５に記載の非ヒト動物。
（項目２７）
前記非ヒト動物がマウスであり、
前記標的ゲノム遺伝子座がＲｏｓａ２６遺伝子座であり、
前記ＣＲＩＳＰＲリポーターが内因性Ｒｏｓａ２６プロモーターに作動可能に連結され、前記Ｒｏｓａ２６遺伝子座の第１のイントロンに挿入され、５’から３’に向かって、
（ａ）３’スプライシング配列；
（ｂ）（ｉ）第１および第２のｌｏｘＰ部位；ならびに
（ｉｉ）第１のガイドＲＮＡ標的配列と、第２のガイドＲＮＡ標的配列が同一であり、それぞれ、配列番号４１を含む、前記第１および第２のガイドＲＮＡ標的配列によって挟まれた第１のポリアデニル化シグナル；ならびに
（ｃ）５’から３’に向かって、
（ｉ）ベータ−ガラクトシダーゼコード配列；
（ｉｉ）Ｐ２Ａコード配列；
（ｉｉｉ）配列番号４２を含む第３のガイドＲＮＡ標的配列を含む、強化型青色蛍光タンパク質（ｅＢＦＰ）コード配列；および
（ｉｖ）前記第１のポリアデニル化シグナルと第２のポリアデニル化シグナルとが異なる、前記第２のポリアデニル化シグナルを含むリポーターカセット
を含む、前記項目のいずれかに記載の非ヒト動物。
（項目２８）
前記ＣＲＩＳＰＲリポーターが、
（ｄ）前記リポーターカセットの３’側の選択カセット
をさらに含み、前記選択カセットは、ＦＲＴ部位によって挟まれており、５’から３’に向かって、
（ｉ）ヒトユビキチンプロモーターに作動可能に連結されたネオマイシンホスホトランスフェラーゼコード配列；および
（ｉｉ）第３のポリアデニル化シグナル
を含む、項目２７に記載の非ヒト動物。
（項目２９）
前記標的ゲノム遺伝子座で前記ＣＲＩＳＰＲリポーターについてヘテロ接合性である、前記項目のいずれかに記載の非ヒト動物。
（項目３０）
前記標的ゲノム遺伝子座で前記ＣＲＩＳＰＲリポーターについてホモ接合性である、項目１から２８のいずれか一項に記載の非ヒト動物。
（項目３１）
ｉｎ  ｖｉｖｏでゲノム核酸を切り出すＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓヌクレアーゼの能力を試験する方法であって、
（ａ）項目１から３０のいずれか一項に記載の非ヒト動物に、
（ｉ）前記ＣＲＩＳＰＲリポーター中の前記第１のガイドＲＮＡ標的配列にハイブリダイズするように設計された第１のガイドＲＮＡ；
（ｉｉ）前記ＣＲＩＳＰＲリポーター中の前記第２のガイドＲＮＡ標的配列にハイブリダイズするように設計された第２のガイドＲＮＡ；および
（ｉｉｉ）Ｃａｓタンパク質
を導入するステップ；ならびに
（ｂ）前記第１および第２のリポータータンパク質の少なくとも１つの活性または発現を測定するステップ
を含む、方法。
（項目３２）
前記Ｃａｓタンパク質がＣａｓ９タンパク質である、項目３１に記載の方法。
（項目３３）
前記Ｃａｓタンパク質が、タンパク質の形態で前記非ヒト動物に導入される、項目３１または３２に記載の方法。
（項目３４）
前記Ｃａｓタンパク質が、前記Ｃａｓタンパク質をコードするメッセンジャーＲＮＡの形態で前記非ヒト動物に導入される、項目３１または３２に記載の方法。
（項目３５）
前記Ｃａｓタンパク質が、前記Ｃａｓタンパク質をコードするＤＮＡの形態で前記非ヒト動物に導入され、前記ＤＮＡが、前記非ヒト動物中の１つまたは複数の細胞型において活性なプロモーターに作動可能に連結されている、項目３１または３２に記載の方法。
（項目３６）
前記第１のガイドＲＮＡと、前記第２のガイドＲＮＡが同一であり、それぞれ、配列番号２に記載の配列を含む、項目３１から３５のいずれか一項に記載の方法。
（項目３７）
ステップ（ｂ）において測定された前記リポータータンパク質が、蛍光リポータータンパク質であり、ステップ（ｂ）が、フローサイトメトリーアッセイを含む、項目３１から３６のいずれか一項に記載の方法。
（項目３８）
ステップ（ｂ）において測定された前記リポータータンパク質が、ベータ−ガラクトシダーゼタンパク質であり、ステップ（ｂ）が、組織化学染色アッセイを含む、項目３１から３６のいずれか一項に記載の方法。
（項目３９）
ステップ（ａ）における前記ガイドＲＮＡがＲＮＡの形態で導入される、項目３１から３８のいずれか一項に記載の方法。
（項目４０）
ステップ（ａ）における前記ガイドＲＮＡが、前記ガイドＲＮＡをコードするＤＮＡの形態で前記非ヒト動物にそれぞれ導入され、前記ＤＮＡが、前記非ヒト動物中の１つまたは複数の細胞型において活性なプロモーターに作動可能に連結されている、項目３１から３８のいずれか一項に記載の方法。
（項目４１）
前記導入するステップが、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）媒介性送達、脂質ナノ粒子媒介性送達、または流体力学的送達を含む、項目３１から４０のいずれか一項に記載の方法。
（項目４２）
前記導入するステップが、ＡＡＶ媒介性送達を含む、項目４１に記載の方法。
（項目４３）
前記導入するステップが、ＡＡＶ８媒介性送達を含み、ステップ（ｂ）が、前記非ヒト動物の肝臓中の前記リポータータンパク質の活性を測定することを含む、項目４２に記載の方法。
（項目４４）
ｉｎ  ｖｉｖｏでゲノム核酸を切り出すＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓヌクレアーゼの能力を最適化する方法であって、
（Ｉ）第１の非ヒト動物において１回目の項目３１から４３のいずれか一項に記載の方法を実施するステップ；
（ＩＩ）変数を変化させ、第２の非ヒト動物において変化した変数を用いて２回目のステップ（Ｉ）に記載の方法を実施するステップ；および
（ＩＩＩ）ステップ（Ｉ）における前記リポータータンパク質の活性または発現と、ステップ（ＩＩ）における少なくとも１つの前記リポータータンパク質の活性または発現とを比較し、前記リポータータンパク質のより高い活性または発現をもたらす方法を選択するステップ
を含む、方法。
（項目４５）
ステップ（ＩＩ）における前記変化した変数が、前記ガイドＲＮＡおよび／または前記Ｃａｓタンパク質を前記非ヒト動物に導入する送達方法である、項目４４に記載の方法。
（項目４６）
ステップ（ＩＩ）における前記変化した変数が、前記ガイドＲＮＡおよび／または前記Ｃａｓタンパク質を前記非ヒト動物に導入する投与経路である、項目４４に記載の方法。
（項目４７）
ステップ（ＩＩ）における前記変化した変数が、前記非ヒト動物に導入される前記ガイドＲＮＡおよび／または前記Ｃａｓタンパク質の濃度または量である、項目４４に記載の方法。
（項目４８）
ステップ（ＩＩ）における前記変化した変数が、前記非ヒト動物に導入されるＣａｓタンパク質の濃度または量と比較した、前記非ヒト動物に導入された前記ガイドＲＮＡの濃度または量である、項目４４に記載の方法。
（項目４９）
ステップ（ＩＩ）における前記変化した変数が、前記非ヒト動物に導入される前記ガイドＲＮＡである、項目４４に記載の方法。
（項目５０）
ステップ（ＩＩ）における前記変化した変数が、前記非ヒト動物に導入される前記Ｃａｓタンパク質である、項目４４に記載の方法。
（項目５１）
ｉｎ  ｖｉｖｏでゲノム核酸の外因性ドナー核酸とのＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ誘導性組換えを試験する方法であって、
（ａ）前記ＣＲＩＳＰＲリポーターが、前記ＣＲＩＳＰＲリポーターの外因性ドナー核酸とのＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ誘導性組換えを評価するためのものでもあり、前記第１のポリアデニル化シグナルが、前記ＣＲＩＳＰＲリポーターから除去されており、前記第１のリポータータンパク質の前記コード配列が、第３のガイドＲＮＡ標的配列を含む、項目１から３０のいずれか一項に記載の非ヒト動物を提供し、前記非ヒト動物に、
（ｉ）前記ＣＲＩＳＰＲリポーター中の前記第３のガイドＲＮＡ標的配列にハイブリダイズするように設計されたガイドＲＮＡ；
（ｉｉ）Ｃａｓタンパク質；および
（ｉｉｉ）前記ＣＲＩＳＰＲリポーターと組み換わり、前記第１のリポータータンパク質の前記コード配列を、第３のリポータータンパク質のコード配列に変化させることができる外因性ドナー核酸
を導入するステップ；ならびに
（ｂ）前記第３のリポータータンパク質の活性または発現を測定するステップ
を含む、方法。
（項目５２）
前記Ｃａｓタンパク質がＣａｓ９タンパク質である、項目５１に記載の方法。
（項目５３）
前記Ｃａｓタンパク質が、タンパク質の形態で前記非ヒト動物に導入される、項目５１に記載の方法。
（項目５４）
前記Ｃａｓタンパク質が、前記Ｃａｓタンパク質をコードするメッセンジャーＲＮＡの形態で前記非ヒト動物に導入される、項目５１に記載の方法。
（項目５５）
前記Ｃａｓタンパク質が、前記Ｃａｓタンパク質をコードするＤＮＡの形態で前記非ヒト動物に導入され、前記ＤＮＡが、前記非ヒト動物中の１つまたは複数の細胞型において活性なプロモーターに作動可能に連結されている、項目５１に記載の方法。
（項目５６）
ステップ（ｂ）において測定された前記第３のリポータータンパク質が、蛍光リポータータンパク質であり、ステップ（ｂ）が、フローサイトメトリーアッセイを含む、項目５１から５５のいずれか一項に記載の方法。
（項目５７）
前記第１のリポータータンパク質が、強化型青色蛍光タンパク質（ｅＢＦＰ）であり、前記第３のガイドＲＮＡが、配列番号１４に記載の配列を含む、項目５１から５６のいずれか一項に記載の方法。
（項目５８）
前記第１のリポータータンパク質が、強化型青色蛍光タンパク質（ｅＢＦＰ）であり、前記第３のリポータータンパク質が、強化型緑色蛍光タンパク質（ｅＧＦＰ）である、項目５１から５７のいずれか一項に記載の方法。
（項目５９）
前記外因性ドナー核酸が、配列番号１５または配列番号１６に記載の配列を含む、項目５８に記載の方法。
（項目６０）
前記外因性ドナー核酸が、一本鎖デオキシヌクレオチドである、項目５１から５９のいずれか一項に記載の方法。
（項目６１）
ステップ（ａ）における前記ガイドＲＮＡがＲＮＡの形態で導入される、項目５１から６０のいずれか一項に記載の方法。
（項目６２）
ステップ（ａ）における前記ガイドＲＮＡが、前記ガイドＲＮＡをコードするＤＮＡの形態で前記非ヒト動物に導入され、前記ＤＮＡが、前記非ヒト動物中の１つまたは複数の細胞型において活性なプロモーターに作動可能に連結されている、項目５１から６０のいずれか一項に記載の方法。
（項目６３）
前記導入するステップが、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）媒介性送達、脂質ナノ粒子媒介性送達、または流体力学的送達を含む、項目５１から６２のいずれか一項に記載の方法。
（項目６４）
前記導入するステップが、ＡＡＶ媒介性送達を含む、項目６３に記載の方法。
（項目６５）
前記導入するステップが、ＡＡＶ８媒介性送達を含み、ステップ（ｂ）が、前記非ヒト動物の肝臓中の前記リポータータンパク質の活性を測定することを含む、項目６４に記載の方法。
（項目６６）
ｉｎ  ｖｉｖｏでゲノム核酸の外因性ドナー核酸との組換えを誘導するＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓの能力を最適化する方法であって、
（Ｉ）第１の非ヒト動物において１回目の項目５１から６５のいずれか一項に記載の方法を実施するステップ；
（ＩＩ）変数を変化させ、第２の非ヒト動物において前記変化した変数を用いて２回目のステップ（Ｉ）に記載の方法を実施するステップ；および
（ＩＩＩ）ステップ（Ｉ）における前記第３のリポータータンパク質の活性または発現と、ステップ（ＩＩ）における前記第３のリポータータンパク質の活性または発現とを比較し、前記第３のリポータータンパク質のより高い活性または発現をもたらす方法を選択するステップ
を含む、方法。
（項目６７）
ステップ（ＩＩ）における前記変化した変数が、前記ガイドＲＮＡ、前記Ｃａｓタンパク質、および前記外因性ドナー核酸のうちの１つまたは複数を前記非ヒト動物に導入する送達方法である、項目６６に記載の方法。
（項目６８）
ステップ（ＩＩ）における前記変化した変数が、前記ガイドＲＮＡ、前記Ｃａｓタンパク質、および前記外因性ドナー核酸のうちの１つまたは複数を前記非ヒト動物に導入する投与経路である、項目６６に記載の方法。
（項目６９）
ステップ（ＩＩ）における前記変化した変数が、前記非ヒト動物に導入される前記ガイドＲＮＡ、前記Ｃａｓタンパク質、および前記外因性ドナー核酸のうちの１つまたは複数の濃度または量である、項目６６に記載の方法。
（項目７０）
ステップ（ＩＩ）における前記変化した変数が、前記非ヒト動物に導入される前記外因性ドナー核酸である、項目６６に記載の方法。
（項目７１）
ステップ（ＩＩ）における前記変化した変数が、前記非ヒト動物に導入されるＣａｓタンパク質の濃度または量と比較した、前記非ヒト動物に導入された前記ガイドＲＮＡの濃度または量である、項目６６に記載の方法。
（項目７２）
ステップ（ＩＩ）における前記変化した変数が、前記非ヒト動物に導入される前記ガイドＲＮＡである、項目６６に記載の方法。
（項目７３）
ステップ（ＩＩ）における前記変化した変数が、前記非ヒト動物に導入されるＣａｓタンパク質である、項目６６に記載の方法。
（項目７４）
第１および第２のガイドＲＮＡ標的配列の間の核酸のＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ誘導性切り出しを評価するためのＣＲＩＳＰＲリポーターを含む非ヒト動物細胞であって、前記ＣＲＩＳＰＲリポーターが、標的ゲノム遺伝子座に組み込まれ、前記第１および第２のガイドＲＮＡ標的配列によって挟まれた第１のポリアデニル化シグナル、次いで、第１のリポータータンパク質のコード配列と、第２のリポータータンパク質のコード配列とを任意の順序で含むリポーターカセットを含み、前記第１のリポータータンパク質と前記第２のリポータータンパク質とが異なっている、非ヒト動物細胞。
（項目７５）
第１および第２のガイドＲＮＡ標的配列の間の核酸のＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ誘導性切り出しを評価するためのＣＲＩＳＰＲリポーターを含む非ヒト動物ゲノムであって、前記ＣＲＩＳＰＲリポーターが、標的ゲノム遺伝子座に組み込まれ、前記第１および第２のガイドＲＮＡ標的配列によって挟まれた第１のポリアデニル化シグナル、次いで、第１のリポータータンパク質のコード配列と、第２のリポータータンパク質のコード配列とを任意の順序で含むリポーターカセットを含み、前記第１のリポータータンパク質と前記第２のリポータータンパク質とが異なっている、非ヒト動物ゲノム。
（項目７６）
相同アームによって挟まれたＣＲＩＳＰＲリポーターを含む標的化ベクターであって、前記ＣＲＩＳＰＲリポーターが、第１および第２のガイドＲＮＡ標的配列の間の核酸のＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ誘導性切り出しを評価するためのものであり、前記ＣＲＩＳＰＲリポーターが、前記第１および第２のガイドＲＮＡ標的配列によって挟まれた第１のポリアデニル化シグナル、次いで、第１のリポータータンパク質のコード配列と、第２のリポータータンパク質のコード配列とを任意の順序で含むリポーターカセットを含み、前記第１のリポータータンパク質と前記第２のリポータータンパク質とが異なっており、前記相同アームが、ゲノム組込みを容易にするための所望の標的ゲノム遺伝子座との組換えを方向付けるのに好適である、標的化ベクター。
（項目７７）
項目１から３０のいずれか一項に記載の非ヒト動物を作製するための方法であって、
（ａ）標的ゲノム遺伝子座に組み込まれたＣＲＩＳＰＲリポーターを含むように多能性非ヒト動物細胞のゲノムを改変するステップであって、前記ＣＲＩＳＰＲリポーターが、第１および第２のガイドＲＮＡ標的配列の間の核酸のＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ誘導性切り出しを評価するためのものであり、前記ＣＲＩＳＰＲリポーターが、前記第１および第２のガイドＲＮＡ標的配列によって挟まれた第１のポリアデニル化シグナル、次いで、第１のリポータータンパク質のコード配列と、第２のリポータータンパク質のコード配列とを任意の順序で含むリポーターカセットを含み、前記第１のリポータータンパク質と前記第２のリポータータンパク質とが異なっている、ステップ；
（ｂ）前記ＣＲＩＳＰＲリポーターを含む遺伝子改変された多能性非ヒト動物細胞を同定または選択するステップ；
（ｃ）前記遺伝子改変された多能性非ヒト動物細胞を、非ヒト動物宿主胚に導入するステップ；および
（ｄ）代理母に前記非ヒト動物宿主胚を埋め込み、懐胎させるステップ
を含む、方法。
（項目７８）
項目１から３０のいずれか一項に記載の非ヒト動物を作製するための方法であって、
（ａ）標的ゲノム遺伝子座に組み込まれたＣＲＩＳＰＲリポーターを含むように非ヒト動物の１細胞期胚のゲノムを改変するステップであって、前記ＣＲＩＳＰＲリポーターが、第１および第２のガイドＲＮＡ標的配列の間の核酸のＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ誘導性切り出しを評価するためのものであり、前記ＣＲＩＳＰＲリポーターが、前記第１および第２のガイドＲＮＡ標的配列によって挟まれた第１のポリアデニル化シグナル、次いで、第１のリポータータンパク質のコード配列と、第２のリポータータンパク質のコード配列とを任意の順序で含むリポーターカセットを含み、前記第１のリポータータンパク質と前記第２のリポータータンパク質とが異なっている、ステップ；
（ｂ）遺伝子改変された非ヒト動物の１細胞期胚を選択するステップ；および
（ｃ）代理母に前記遺伝子改変された非ヒト動物の１細胞期胚を埋め込み、懐胎させるステップ
を含む、方法。