【手続補正書】
【提出日】令和3年6月29日(2021.6.29)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
形質転換した哺乳類細胞集団を含む骨関節炎の予防または治療用の薬学的組成物であって、前記集団に含まれる細胞または細胞群は、２００μｍ未満のＤ９０粒子径を有するものである、薬学的組成物。
【請求項２】
前記形質転換した哺乳類細胞集団は、追加的に放射線照射（irradiate）したものである、請求項１に記載の薬学的組成物。
【請求項３】
前記組成物は、前記形質転換した哺乳類細胞集団のほか、形質転換していない哺乳類細胞集団をさらに含む、請求項１に記載の薬学的組成物。
【請求項４】
前記形質転換していない哺乳類細胞集団に含まれる細胞または細胞群は、３００μｍ未満のＤ９０粒子径を有する、請求項３に記載の薬学的組成物。
【請求項５】
前記組成物は、「形質転換していない哺乳類細胞集団」対「形質転換した哺乳類細胞集団」が、細胞数を基準に１〜１０対１の割合で混合されたものである、請求項３に記載の薬学的組成物。
【請求項６】
前記哺乳類細胞は、ｈＣｈｏｎＪｂ＃７である、請求項１に記載の薬学的組成物。
【請求項７】
前記哺乳類細胞は、ＴＧＦ−β（Transforming growth factor beta）で形質転換したものである、請求項１に記載の薬学的組成物。
【請求項８】
ＴＧＦ−β（Transforming growth factor beta）で形質転換した哺乳類細胞集団を含む、細胞治療剤製造用キットであって、
前記集団に含まれる細胞または細胞群は、２００μｍ未満のＤ９０粒子径を有するものである、キット。
【請求項９】
前記キットは、前記形質転換した哺乳類細胞集団のほか、形質転換していない哺乳類細胞集団をさらに含む、請求項８に記載のキット。
【請求項１０】
前記形質転換していない哺乳類細胞集団に含まれる細胞または細胞群は、３００μｍ未満のＤ９０粒子径を有する、請求項９に記載のキット。
【請求項１１】
前記キットは、「形質転換していない哺乳類細胞集団」対「形質転換した哺乳類細胞集団」が、細胞数を基準に１〜１０対１の割合で混合されたものである、請求項９に記載のキット。
【請求項１２】
次のステップを含む骨関節炎治療剤を製造する方法：
（１）ＴＧＦ−β（Transforming growth factor beta）で形質転換した哺乳類細胞集団および形質転換していない哺乳類細胞集団をそれぞれ用意するステップと、
（２）前記ステップ（１）のＴＧＦ−βで形質転換した哺乳類細胞集団の中で２００μｍ未満のＤ９０粒子径を有する細胞または細胞群と、形質転換していない哺乳類細胞集団の中で３００μｍ未満のＤ９０粒子径を有する細胞または細胞群をそれぞれ選別するステップと、
（３）前記ステップ（２）のそれぞれ選別された細胞集団を分離されたバイアル内にそれぞれ充填するステップと、
（４）前記ステップ（３）のバイアル内にそれぞれの細胞集団を混合するステップ。
【請求項１３】
前記ステップ（４）の混合は、前記ステップ（２）の形質転換していない哺乳類細胞集団と形質転換した哺乳類細胞集団が、細胞数を基準に１〜１０対１の割合で混合されるものである、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記ステップ（１）のＴＧＦ−βで形質転換した哺乳類細胞集団は、追加的に放射線照射（irradiate）したものである、請求項１２に記載の方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００４】
軟骨の成長に関連する調節因子（modulator）及び生化学的因子（biochemical factor）を標的とした研究が進行中である。これらの因子は、骨形成の効果的な刺激因子であるＢＭＰ（bone morphogenetic protein）、及び細胞成長と細胞外基質（extracellular matrix、ＥＣＭ）の形成を刺激するＴＧＦ−β（Transforming growth factor beta）を含む。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３８】
本発明で哺乳類細胞は、軟骨細胞または軟骨前駆細胞であってもよい。形質転換した哺乳類細胞は、ｈＣｈｏｎＪｂ＃７であってもよい。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６４】
前記ＨＣ及びＴＣは、ヒト由来の細胞であって、ＨＣは正常軟骨細胞であり、ＴＣはＴＧＦ−β１が分泌されるように形質転換された細胞である。ＨＣ及びＴＣの作製方法は、［Ｃｙｔｏｔｈｅｒａｐｙ，２０１２ Ｆｅｂ；１４（２）：２４７−２５６］、並びに米国特許第７，００５，１２７号および米国特許第７，２８２，２００号に開示されている。ＴＣは、ｈＣｈｏｎＪｂ♯７である。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１０５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１０５】
結論として、本発明に基づいて選別された、３００μｍ未満のＤ９０粒子径を有するＨＣ細胞と２００μｍ未満のＤ９０粒子径を有するＴＣ細胞とが３：１の割合で混合された混合細胞は、塊状の細胞がない状態でも優れた痛みの緩和及び軟骨生成の効果を示すので、優れた骨関節炎治療剤として用いることができる。
本発明の例示的な態様を以下に記載する。
＜１＞
形質転換した哺乳類細胞集団を含む骨関節炎の予防または治療用の薬学的組成物であって、前記集団に含まれる細胞または細胞群は、２００μｍ未満のＤ９０粒子径を有するものである、薬学的組成物。
＜２＞
前記形質転換した哺乳類細胞集団は、追加的に放射線照射（irradiate）したものである、＜１＞に記載の薬学的組成物。
＜３＞
前記組成物は、前記形質転換した哺乳類細胞集団のほか、形質転換していない哺乳類細胞集団をさらに含む、＜１＞に記載の薬学的組成物。
＜４＞
前記形質転換していない哺乳類細胞集団に含まれる細胞または細胞群は、３００μｍ未満のＤ９０粒子径を有する、＜３＞に記載の薬学的組成物。
＜５＞
前記組成物は、「形質転換していない哺乳類細胞集団」対「形質転換した哺乳類細胞集団」が、細胞数を基準に１〜１０対１の割合で混合されたものである、＜３＞に記載の薬学的組成物。
＜６＞
前記哺乳類細胞は、ｈＣｈｏｎＪｂ＃７である、＜１＞に記載の薬学的組成物。
＜７＞
前記哺乳類細胞は、ＴＧＦ−β（Transforming growth factor beta）で形質転換したものである、＜１＞に記載の薬学的組成物。
＜８＞
ＴＧＦ−β（Transforming growth factor beta）で形質転換した哺乳類細胞集団を含む、細胞治療剤製造用キットであって、
前記集団に含まれる細胞または細胞群は、２００μｍ未満のＤ９０粒子径を有するものである、キット。
＜９＞
前記キットは、前記形質転換した哺乳類細胞集団のほか、形質転換していない哺乳類細胞集団をさらに含む、＜８＞に記載のキット。
＜１０＞
前記形質転換していない哺乳類細胞集団に含まれる細胞または細胞群は、３００μｍ未満のＤ９０粒子径を有する、＜９＞に記載のキット。
＜１１＞
前記キットは、「形質転換していない哺乳類細胞集団」対「形質転換した哺乳類細胞集団」が、細胞数を基準に１〜１０対１の割合で混合されたものである、＜９＞に記載のキット。
＜１２＞
次のステップを含む骨関節炎治療剤を製造する方法：
（１）ＴＧＦ−β（Transforming growth factor beta）で形質転換した哺乳類細胞集団および形質転換していない哺乳類細胞集団をそれぞれ用意するステップと、
（２）前記ステップ（１）のＴＧＦ−βで形質転換した哺乳類細胞集団の中で２００μｍ未満のＤ９０粒子径を有する細胞または細胞群と、形質転換していない哺乳類細胞集団の中で３００μｍ未満のＤ９０粒子径を有する細胞または細胞群をそれぞれ選別するステップと、
（３）前記ステップ（２）のそれぞれ選別された細胞集団を分離されたバイアル内にそれぞれ充填するステップと、
（４）前記ステップ（３）のバイアル内にそれぞれの細胞集団を混合するステップ。
＜１３＞
前記ステップ（４）の混合は、前記ステップ（２）の形質転換していない哺乳類細胞集団と形質転換した哺乳類細胞集団が、細胞数を基準に１〜１０対１の割合で混合されるものである、＜１２＞に記載の方法。
＜１４＞
前記ステップ（１）のＴＧＦ−βで形質転換した哺乳類細胞集団は、追加的に放射線照射（irradiate）したものである、＜１２＞に記載の方法。