【手続補正書】
【提出日】令和3年7月7日(2021.7.7)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
細胞における標的遺伝子の発現を調節するためのシステムであって、
第１のリガンド結合ドメインおよび第１のシグナル伝達ドメインを含む第１の膜貫通受容体であって、第１のリガンドが前記第１のリガンド結合ドメインに結合すると、前記第１のシグナル伝達ドメインが前記細胞の第１のシグナル伝達経路を活性化する、第１の膜貫通受容体と、
第１のプロモーターの制御下に置かれた遺伝子モジュレーティングポリペプチド（ＧＭＰ）の少なくとも一部をコードする核酸配列を含む第１の発現カセットであって、前記ＧＭＰがアクチュエータ部分を含み、前記第１のリガンドが前記第１のリガンド結合ドメインに結合すると、前記第１のプロモーターが活性化されて前記ＧＭＰの前記少なくとも一部の発現を駆動する、第１の発現カセットとを含み、
発現されると、前記ＧＭＰの前記少なくとも一部が前記標的遺伝子の発現を調節する、システム。
【請求項２】
（ａ）前記システムが、第２のリガンド結合ドメインおよび第２のシグナル伝達ドメインを含む第２の膜貫通受容体であって、第２のリガンドが前記第２のリガンド結合ドメインに結合すると、前記第２のシグナル伝達ドメインが前記細胞の第２のシグナル伝達経路を活性化する、第２の膜貫通受容体をさらに含み、必要に応じて、
（１）前記第２のリガンドが前記第２のリガンド結合ドメインに結合すると、前記第１のプロモーターが活性化されて前記ＧＭＰの発現を駆動する；または
（２）前記システムが、第２のプロモーターの制御下に置かれた追加のＧＭＰをコードする核酸配列を含む第２の発現カセットであって、前記追加のＧＭＰが第２のアクチュエータ部分を含み、前記第２のリガンドが前記第２のリガンド結合ドメインに結合すると、前記第２のプロモーターが活性化されて前記第２のアクチュエータ部分の発現を駆動する、第２の発現カセットをさらに含み、
必要に応じて、前記追加のＧＭＰが、前記細胞における追加の標的遺伝子の発現を調節する；
（ｂ）前記第１の発現カセットの前記核酸配列が、前記第１のプロモーターの制御下に置かれた前記ＧＭＰの第１の部分であって、前記ＧＭＰの前記第１の部分が前記アクチュエータ部分の第１の部分を含み、前記第１のリガンドが前記第１のリガンド結合ドメインに結合すると、前記第１のプロモーターが活性化されて前記ＧＭＰの前記第１の部分の発現を駆動する、前記ＧＭＰの前記第１の部分をコードし；
前記システムが、第２のリガンド結合ドメインおよび第２のシグナル伝達ドメインを含む第２の膜貫通受容体であって、第２のリガンドが前記第２のリガンド結合ドメインに結合すると、前記第２のシグナル伝達ドメインが前記細胞の第２のシグナル伝達経路を活性化する、第２の膜貫通受容体をさらに含み；
前記システムが、第２のプロモーターの制御下に置かれた前記ＧＭＰの第２の部分をコードする核酸配列を含む第２の発現カセットであって、前記ＧＭＰの前記第２の部分が前記アクチュエータ部分の第２の部分を含み、前記第２のリガンドが前記第２のリガンド結合ドメインに結合すると、前記第２のプロモーターが活性化されて前記ＧＭＰの前記第２の部分の発現を駆動する、第２の発現カセットをさらに含み、
前記アクチュエータ部分の前記第１の部分および前記アクチュエータ部分の前記第２の部分が複合体を形成して、機能的であるアクチュエータ部分を形成し、前記機能的なアクチュエータ部分が前記標的遺伝子の発現を調節する、
（ｃ）前記第１の発現カセットの前記核酸配列が、前記第１のプロモーターの制御下に置かれた前記ＧＭＰの第１の部分であって、前記ＧＭＰの前記第１の部分が前記アクチュエータ部分の第１の部分を含み、前記第１のリガンドが前記第１のリガンド結合ドメインに結合すると、前記第１のプロモーターが活性化されて前記ＧＭＰの前記第１の部分の発現を駆動する、前記ＧＭＰの第１の部分をコードし；
前記システムが、第２のプロモーターの制御下に置かれた前記ＧＭＰの第２の部分をコードする核酸配列を含む第２の発現カセットであって、前記ＧＭＰの前記第２の部分が前記アクチュエータ部分の第２の部分を含み、前記第１のリガンドが前記第１のリガンド結合ドメインに結合すると、前記第２のプロモーターが活性化されて前記ＧＭＰの前記第２の部分の発現を駆動する、第２の発現カセットを含み、
前記アクチュエータ部分の前記第１の部分およびアクチュエータ部分の前記第２の部分が複合体を形成して、機能的であるアクチュエータ部分を形成し、前記機能的なアクチュエータ部分が前記標的遺伝子の発現を調節する；
（ｄ）（ｉ）前記第１の膜貫通受容体が、切断部分をさらに含み、（ｉｉ）前記第１の発現カセットの前記核酸配列が、核外輸送シグナルペプチドに連結された前記ＧＭＰを含む融合タンパク質をコードし、
前記融合タンパク質が前記切断部分の近位に存在する場合、前記切断部分が前記融合タンパク質の前記切断認識部位を切断して、前記アクチュエータ部分を放出し、放出された前記アクチュエータ部分が前記標的遺伝子の発現を調節し、
必要に応じて、前記切断部分が、前記膜貫通受容体の細胞内領域に連結されている；
（ｅ）前記第１の発現カセットの前記核酸配列が、核外輸送シグナルペプチドに連結された前記ＧＭＰを含む融合タンパク質であって、前記ＧＭＰが切断認識部位に連結された前記アクチュエータ部分を含む、融合タンパク質をコードし、
前記切断認識部位での切断部分による切断を介して前記アクチュエータ部分が放出されると、放出された前記アクチュエータ部分が前記標的遺伝子の発現を調節し、
必要に応じて、
（１）前記システムが、前記切断部分をさらに含む；または
（２）前記切断部分が、前記切断認識部位の近位に存在する場合、発現された前記融合タンパク質の前記切断認識部位を切断する；あるいは
（ｆ）前記第１の発現カセットの前記核酸配列が、核外輸送シグナルペプチドに連結された前記ＧＭＰを含む融合タンパク質であって、前記ＧＭＰが切断認識部位に連結された前記アクチュエータ部分を含む、融合タンパク質をコードし；
前記システムが、切断部分をコードする核酸配列を含む第２の発現カセットであって、前記第２の発現カセットの前記核酸配列は、前記第１のリガンドが前記第１のリガンド結合ドメインに結合すると、第１のシグナル伝達経路によって活性化されて前記切断部分の発現を駆動する第２のプロモーターの制御下に置かれている、第２の発現カセットをさらに含み；
発現された前記切断部分が、前記切断認識部位の近位に存在する場合、発現された前記融合タンパク質の前記切断認識部位を切断して前記アクチュエータ部分を放出し、放出された前記アクチュエータ部分が前記標的遺伝子の発現を調節する、
請求項１に記載のシステム。
【請求項３】
細胞における標的遺伝子の発現を調節するためのシステムであって、
第１のリガンド結合ドメインおよび第１のシグナル伝達ドメインを含む第１の膜貫通受容体であって、第１のリガンドが前記第１のリガンド結合ドメインに結合すると、前記第１のシグナル伝達ドメインが前記細胞の第１のシグナル伝達経路を活性化する、膜貫通受容体と、
遺伝子モジュレーティングポリペプチド（ＧＭＰ）であって、前記ＧＭＰが切断認識部位に連結されたアクチュエータ部分を含む、ＧＭＰと、
切断部分の少なくとも一部をコードする核酸配列を含む第１の発現カセットであって、前記核酸配列が、前記第１のリガンドが前記第１のリガンド結合ドメインに結合すると、前記第１のシグナル伝達経路によって活性化されて前記切断部分の発現を駆動する第１のプロモーターの制御下に置かれている、発現カセットとを含み、
発現された前記切断部分が、前記切断認識部位の近位に存在する場合、前記切断認識部位を切断して前記ＧＭＰから前記アクチュエータ部分を放出し、放出された前記アクチュエータ部分が前記標的遺伝子の発現を調節し、
（ａ）前記第１の膜貫通受容体が、前記ＧＭＰであって、発現された前記切断部分が、前記切断認識部位を切断して前記第１の膜貫通受容体から前記アクチュエータ部分を放出する、前記ＧＭＰを含む；
（ｂ）前記システムが、融合タンパク質であって、前記融合タンパク質が、核外輸送シグナルペプチドに連結された前記ＧＭＰを含み、発現された前記切断部分が、前記切断認識部位を切断して、前記融合タンパク質から前記アクチュエータ部分を放出する、融合タンパク質をさらに含む；または
（ｃ）前記第１の発現カセットの前記核酸配列が、核外輸送シグナルペプチドに連結された前記ＧＭＰを含む融合タンパク質であって、発現された前記切断部分が前記切断認識部位を切断して、前記融合タンパク質から前記アクチュエータ部分を放出する、融合タンパク質をさらにコードする、
システム。
【請求項４】
（ｂ）において、
（１）前記第１の発現カセットの前記核酸配列が、前記アクチュエータ部分の第１の部分をコードする；
（２）前記システムが、前記切断部分の第２の部分をコードする核酸配列を含む第２の発現カセットであって、前記第２の発現カセットの前記核酸配列は、前記第１のリガンドが前記第１のリガンド結合ドメインに結合すると、前記第１のシグナル伝達経路によって活性化されて前記切断部分の前記第２の部分の発現を駆動する第２のプロモーターの制御下に置かれている、第２の発現カセットをさらに含み、
（ｉ）前記切断部分の前記第１の部分および前記第２の部分が複合体を形成して、機能的である切断部分を形成し、（ｉｉ）前記機能的切断部分によって前記切断認識部位が切断されると、前記アクチュエータ部分が前記融合タンパク質の前記核外輸送シグナルペプチドから放出されて前記標的遺伝子の発現を調節する、
請求項３に記載のシステム。
【請求項５】
がん、感染性疾患または自己免疫疾患を処置する方法における使用のための組成物であって、前記組成物は、請求項１に記載のシステムを含み、前記方法は、
（ａ）前記第１のリガンド結合ドメインおよび前記第１のシグナル伝達ドメインを有する前記第１の膜貫通受容体を発現する細胞を提供するステップと、
（ｂ）前記第１のリガンドを、前記第１の膜貫通受容体の前記第１のリガンド結合ドメインに結合させるステップであって、前記結合が、前記細胞の前記第１のシグナル伝達経路を活性化し、次いで、前記第１のプロモーターが活性化される、ステップと、
（ｃ）前記第１のプロモーターが活性化されると、前記ＧＭＰの前記少なくとも一部を発現するステップと
を含み、
必要に応じて、前記方法は、前記ＧＭＰの前記少なくとも一部の結合を介して前記標的遺伝子の発現を増加または減少させ、それによって前記標的遺伝子の発現を調節するステップをさらに含む、組成物。
【請求項６】
がん、感染性疾患または自己免疫疾患を処置する方法における使用のための組成物であって、前記組成物は、請求項２に記載のシステムを含み、前記方法は、
（ｉ）（ｃ）において、
（１）前記第１のリガンドを、前記第１の膜貫通受容体に接触させるステップであって、前記第１のリガンドが前記第１のリガンド結合ドメインに接触すると、前記第１のシグナル伝達ドメインが前記細胞の前記第１のシグナル伝達経路を活性化する、ステップと、
（２）前記アクチュエータ部分の前記第１の部分を含む前記ＧＭＰの前記第１の部分を、前記第１の発現カセットから発現させるステップと、
（３）前記アクチュエータ部分の前記第２の部分を含む前記ＧＭＰの前記第２の部分を、前記第２の発現カセットから発現させるステップと、
（４）前記アクチュエータ部分の第１の部分および前記アクチュエータ部分の前記第２の部分の複合体を形成して、機能的であるアクチュエータ部分を形成するステップとを含み、
前記機能的なアクチュエータ部分が前記標的遺伝子の発現を調節する；
（ｉｉ）（ｄ）において、
（１）前記第１のリガンドを、前記第１のリガンド結合ドメイン、前記第１のシグナル伝達ドメイン、および前記切断部分を含む前記第１の膜貫通受容体に接触させるステップであって、前記第１のリガンドが前記第１のリガンド結合ドメインに接触すると、前記第１のシグナル伝達ドメインが前記細胞の前記第１のシグナル伝達経路を活性化するステップと、
（２）前記融合タンパク質を、前記第１の発現カセットから発現させるステップであって、前記融合タンパク質が、前記核外輸送シグナルペプチドに連結された前記ＧＭＰを含み、前記ＧＭＰが前記切断認識部位に連結された前記アクチュエータ部分を含む、ステップと、
（３）前記切断部分によって前記切断認識部位を切断して、前記アクチュエータ部分を前記ＧＭＰから放出するステップと
を含み、
放出された前記アクチュエータ部分が前記標的遺伝子の発現を調節する；
（ｉｉｉ）（ｅ）において、
（１）前記第１のリガンドを、前記第１のリガンド結合ドメインおよび前記第１のシグナル伝達ドメインを含む前記第１の膜貫通受容体に接触させるステップであって、前記第１のリガンドが前記第１のリガンド結合ドメインに接触すると、前記第１のシグナル伝達ドメインが前記細胞の前記第１のシグナル伝達経路を活性化するステップと、
（２）前記核外輸送シグナルペプチドに連結された前記ＧＭＰを含む前記融合タンパク質を、前記第１の発現カセットから発現させるステップであって、前記ＧＭＰが、前記切断認識配列に連結された前記アクチュエータ部分を含む、ステップと、
（３）前記切断部分によって前記融合タンパク質の前記切断認識部位を切断して、前記アクチュエータ部分を前記ＧＭＰから放出するステップとを含み、
放出された前記アクチュエータ部分が前記標的遺伝子の発現を調節する；あるいは
（ｉｖ）（ｆ）において、
（１）前記第１のリガンドを、前記第１のリガンド結合ドメインおよび前記第１のシグナル伝達ドメインを含む前記第１の膜貫通受容体に接触させるステップであって、前記第１のリガンドが前記第１のリガンド結合ドメインに接触すると、前記第１のシグナル伝達ドメインが前記細胞の前記第１のシグナル伝達経路を活性化する、ステップと、
（２）前記融合タンパク質を、前記第１の発現カセットから発現させるステップであって、前記融合タンパク質が、前記核外輸送シグナルペプチドに連結された前記ＧＭＰを含み、前記ＧＭＰが、前記切断認識配列に連結された前記アクチュエータ部分を含む、ステップと、
（３）前記切断部分を、前記第２の発現カセットから発現させるステップと、
（４）発現された前記切断部分を使用して、発現された前記融合タンパク質の前記切断認識部位を切断して、前記アクチュエータ部分を放出するステップとを含み、
放出された前記アクチュエータ部分が前記標的遺伝子の発現を調節する、組成物。
【請求項７】
がん、感染性疾患または自己免疫疾患を処置する方法における使用のための組成物であって、前記組成物は、請求項３に記載のシステムを含み、前記方法は、
（ｉ）（ａ）において、
（１）前記第１のリガンドを、前記第１のリガンド結合ドメイン、前記第１のシグナル伝達ドメイン、および前記ＧＭＰを含む前記第１の膜貫通受容体に接触させるステップであって、前記ＧＭＰが、前記切断認識部位に連結された前記アクチュエータ部分を含み、前記第１のリガンドが前記第１のリガンド結合ドメインに接触すると、前記第１のシグナル伝達ドメインが前記細胞の前記第１のシグナル伝達経路を活性化するステップと、
（２）前記切断部分を、前記第１の発現カセットから発現させるステップと、
（３）前記切断部分によって前記切断認識部位を切断して、前記アクチュエータ部分を前記第１の膜貫通受容体から放出するステップとを含み、
放出された前記アクチュエータ部分が前記標的遺伝子の発現を調節する；
（ｉｉ）（ｂ）において、
（１）前記第１のリガンドを、前記第１のリガンド結合ドメインおよび前記第１のシグナル伝達ドメインを含む前記第１の膜貫通受容体に接触させるステップであって、前記第１のリガンドが前記第１のリガンド結合ドメインに接触すると、前記第１のシグナル伝達ドメインが前記細胞の前記第１のシグナル伝達経路を活性化するステップと、
（２）前記切断部分を、前記第１の発現カセットから発現させるステップと、
（３）前記切断部分によって前記融合タンパク質の前記切断認識部位を切断して、前記アクチュエータ部分を前記融合タンパク質から放出するステップとを含み、
放出された前記アクチュエータ部分が前記標的遺伝子の発現を調節する；あるいは
（ｉｉｉ）（ｃ）において、
（１）前記第１のリガンドを、前記第１のリガンド結合ドメインおよび前記第１のシグナル伝達ドメインを含む前記第１の膜貫通受容体に接触させるステップであって、前記第１のリガンドが前記第１のリガンド結合ドメインに接触すると、前記第１のシグナル伝達ドメインが前記細胞の前記第１のシグナル伝達経路を活性化する、ステップと、
（２）（ｉ）前記切断部分および（ｉｉ）前記核外輸送シグナルペプチドに連結された前記ＧＭＰを含む前記融合タンパク質を発現させるステップと、
（３）前記切断部分による前記切断認識部位の切断によって、前記アクチュエータ部分を前記融合タンパク質から放出するステップとを含み、
放出された前記アクチュエータ部分が前記標的遺伝子の発現を調節する、組成物。
【請求項８】
がん、感染性疾患または自己免疫疾患を処置する方法における使用のための組成物であって、前記組成物は、請求項４に記載のシステムを含み、前記方法は、
（ａ）前記第１のリガンドを、前記第１のリガンド結合ドメインおよび前記第１のシグナル伝達ドメインを含む前記第１の膜貫通受容体に接触させるステップであって、前記第１のリガンドが前記第１のリガンド結合ドメインに結合すると、前記第１のシグナル伝達ドメインが前記細胞の前記第１のシグナル伝達経路を活性化する、ステップと、
（ｂ）前記切断部分の前記第１の部分を、前記第１の発現カセットから発現させるステップと、
（ｃ）前記切断部分の前記第２の部分を、前記第２の発現カセットから発現させるステップと、
（ｄ）前記切断部分の前記第１の部分および前記第２の部分の複合体を形成して、前記機能的な切断部分を生じるステップと、
（ｅ）前記機能的な切断部分によって前記切断認識部位を切断して、前記融合タンパク質の前記核外輸送シグナルペプチドから前記アクチュエータ部分を放出するステップとを含み、
放出された前記アクチュエータ部分が前記標的遺伝子の発現を調節する、組成物。
【請求項９】
（ａ）（ｉ）前記第１のプロモーターが、前記第１のリガンドが前記第１のリガンド結合ドメインに結合すると活性化される第１の内因性プロモーターを含み、かつ／または（ｉｉ）前記第２のプロモーターが、前記第２のリガンドが前記第２のリガンド結合ドメインに結合すると活性化される第２の内因性プロモーターを含み、必要に応じて、
（１）（ｉ）前記ＧＭＰをコードする前記核酸配列が、前記第１の内因性プロモーターに作動可能に連結され、かつ／または（ｉｉ）前記追加のＧＭＰをコードする前記核酸配列が、前記第２の内因性プロモーターに作動可能に連結される；あるいは
（２）（ｉ）前記第１の発現カセットが、第１の内因性タンパク質をコードする第１の遺伝子を含み、前記第１の遺伝子が、前記ＧＭＰをコードする前記核酸配列の上流に位置し、前記第１の内因性タンパク質の発現が、前記第１の内因性プロモーターによって駆動され、かつ／または（ｉｉ）前記第２の発現カセットが、第２の内因性タンパク質をコードする第２の遺伝子を含み、前記第２の遺伝子が、前記追加のＧＭＰをコードする前記核酸配列の上流に位置し、前記第２の内因性タンパク質の発現が、前記第２の内因性プロモーターによって駆動され、必要に応じて、
（Ａ）（ｉ）前記第１の遺伝子と前記ＧＭＰをコードする前記核酸配列とが、第１のペプチドリンカーをコードする核酸配列によって結合されており、かつ／または（ｉｉ）前記第２の遺伝子と前記追加のＧＭＰをコードする前記核酸配列とが、第２のペプチドリンカーをコードする核酸配列によって結合されており、必要に応じて、
（Ａ１）前記第１のペプチドリンカーおよび／または前記第２のペプチドリンカーが、プロテアーゼ認識配列を含む；あるいは
（Ａ２）前記第１のペプチドリンカーおよび／または前記第２のペプチドリンカーが、自己切断セグメントを含み、必要に応じて、前記自己切断セグメントが、２Ａペプチドを含み、必要に応じて、前記２Ａペプチドが、Ｔ２Ａ、Ｐ２Ａ、Ｅ２Ａ、またはＦ２Ａである；あるいは
（Ｂ）（ｉ）前記第１の遺伝子と前記ＧＭＰをコードする前記核酸配列とが、第１の配列内リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）を含む核酸配列によって結合されており、かつ／または（ｉｉ）前記第２の遺伝子と前記追加のＧＭＰをコードする前記核酸配列とが、第２のＩＲＥＳを含む核酸配列によって結合されている；あるいは、
（ｂ）（ｉ）前記第１のプロモーターが、前記第１のリガンドが前記第１のリガンド結合ドメインに結合すると活性化される第１の外因性プロモーターを含み、かつ／または（ｉｉ）前記第２のプロモーターが、前記第２のリガンドが前記第２のリガンド結合ドメインに結合すると活性化される第２の外因性プロモーターを含み、必要に応じて、
（１）（ｉ）前記第１の外因性プロモーターが合成プロモーター配列を含み、かつ／または（ｉｉ）前記第２の外因性プロモーターが合成プロモーター配列を含む；あるいは
（２）（ｉ）前記ＧＭＰをコードする前記核酸配列が前記第１の外因性プロモーターに作動可能に連結されており、かつ／または（ｉｉ）前記追加のＧＭＰをコードする前記核酸配列が前記第２の外因性プロモーターに作動可能に連結されている、請求項１〜４のいずれか一項に記載のシステム、または請求項５〜８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１０】
（ａ）（ｉ）前記第１の膜貫通受容体が内因性受容体を含み、かつ／または（ｉｉ）前記第２の膜貫通受容体が内因性受容体を含む；
（ｂ）（ｉ）前記第１の膜貫通受容体が合成受容体を含み、かつ／または（ｉｉ）前記第２の膜貫通受容体が合成受容体を含む；
（ｃ）（ｉ）前記第１の膜貫通受容体が、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、Ｇタンパク質共役受容体（ＧＰＣＲ）、インテグリン受容体、もしくはＮｏｔｃｈ受容体を含み、かつ／または（ｉｉ）前記第２の膜貫通受容体が、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、Ｇタンパク質共役受容体（ＧＰＣＲ）、インテグリン受容体、もしくはＮｏｔｃｈ受容体を含み、必要に応じて、
（１）（ｉ）前記第１の膜貫通受容体がＧＰＣＲを含み、かつ／または（ｉｉ）前記第２の膜貫通受容体がＧＰＣＲを含む；あるいは
（２）（ｉ）前記第１の膜貫通受容体がキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含み、かつ／または（ｉｉ）前記第２の膜貫通受容体がキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含み、必要に応じて、
（Ａ）前記ＣＡＲの前記リガンド結合ドメインが、Ｆａｂ、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、細胞外受容体ドメイン、およびＦｃ結合ドメインのうちの少なくとも１つを含む；
（Ｂ）前記ＣＡＲの前記シグナル伝達ドメインが、免疫受容体活性化チロシンモチーフ（ＩＴＡＭ）を含む；
（Ｃ）前記ＣＡＲの前記シグナル伝達ドメインが、免疫受容体抑制性チロシンモチーフ（ＩＴＩＭ）を含む；あるいは
（Ｄ）前記ＣＡＲの前記シグナル伝達ドメインが共刺激ドメインを含む；
（ｄ）前記ＧＭＰの前記アクチュエータ部分および／または前記追加のＧＭＰの前記アクチュエータ部分がＲＮＡ誘導型アクチュエータ部分であり、前記システムが、前記ＲＮＡ誘導型アクチュエータ部分と複合体を形成するガイドＲＮＡをさらに含み、必要に応じて、
（１）前記ＲＮＡ誘導型アクチュエータ部分がＣａｓ９であり、必要に応じて、
（Ａ）Ｃａｓ９が、Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ  Ｃａｓ９である；
（Ｂ）Ｃａｓ９が、Ｓ．ａｕｒｅｕｓ  Ｃａｓ９である；または
（Ｃ）Ｃａｓ９が、ヌクレアーゼ活性を実質的に欠如する；あるいは
（２）前記ＲＮＡ誘導型アクチュエータ部分がＣｐｆ１であり、必要に応じて、Ｃｐｆ１が、ヌクレアーゼ活性を実質的に欠如する；
（ｅ）前記ＧＭＰおよび／または前記追加のＧＭＰが、核局在化配列（ＮＬＳ）を含む；
（ｆ）前記ＧＭＰおよび／または前記追加のＧＭＰが、転写活性化因子または転写抑制因子を含む；
（ｇ）前記第１のプロモーターおよび／または前記第２のプロモーターが、ＩＬ−２、ＩＦＮ−γ、ＩＲＦ４、ＮＲ４Ａ１、ＰＲＤＭ１、ＴＢＸ２１、ＣＤ６９、ＣＤ２５、およびＧＺＭＢプロモーターから選択される；あるいは
（ｈ）前記標的遺伝子および／または前記追加の標的遺伝子が、サイトカイン、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、または免疫チェックポイント阻害剤をコードし、
必要に応じて、前記標的遺伝子および／または前記追加の標的遺伝子が、免疫チェックポイント阻害剤をコードし、必要に応じて、前記免疫チェックポイント阻害剤が、ＰＤ−１、ＣＴＬＡ−４、ＬＡＧ３、ＴＩＭ−３、Ａ２ＡＲ、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＢＴＬＡ、ＩＤＯ、ＫＩＲ、またはＶＩＳＴＡである、請求項１〜４および９のいずれか一項に記載のシステム、または請求項５〜９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１１】
前記細胞が、免疫細胞であり、前記第１のシグナル伝達経路が、前記免疫細胞の免疫細胞シグナル伝達経路であり、必要に応じて、
（ａ）前記免疫細胞がリンパ球である；
（ｂ）前記免疫細胞がＴ細胞である；または
（ｃ）前記免疫細胞がナチュラルキラー（ＮＫ）細胞である、請求項１〜４、９および１０のいずれか一項に記載のシステム、または請求項５〜１０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１２】
前記細胞が、造血前駆細胞または造血幹細胞である、請求項１〜４、９および１０のいずれか一項に記載のシステム、または請求項５〜１０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１３】
アクチュエータ部分を含む遺伝子モジュレーティングポリペプチド（ＧＭＰ）をコードする核酸配列に作動可能に連結されたプロモーターを含む発現カセットであって、リガンドが膜貫通受容体に結合することによって細胞の前記膜貫通受容体が活性化されると、前記プロモーターが活性化されて前記発現カセットからの前記ＧＭＰの発現を駆動できることを特徴とする発現カセット。
【請求項１４】
（ａ）前記膜貫通受容体がシグナル伝達ドメインを含み、前記膜貫通受容体が活性化されると、前記シグナル伝達ドメインが前記細胞のシグナル伝達経路を活性化する；
（ｂ）前記膜貫通受容体の前記シグナル伝達ドメインが、免疫細胞シグナル伝達経路を活性化する；
（ｃ）前記細胞の活性化された前記シグナル伝達経路の転写因子が、前記プロモーターに結合し、それによって前記プロモーターを活性化させて、前記発現カセットからの前記ＧＭＰの発現を駆動する；
（ｄ）前記プロモーターが内因性プロモーター配列を含む；
（ｅ）前記プロモーターが合成プロモーター配列を含む；
（ｆ）前記アクチュエータ部分がＲＮＡ誘導型アクチュエータ部分であり、必要に応じて、
（１）前記ＲＮＡ誘導型アクチュエータ部分がＣａｓ９であり、必要に応じて、
（Ａ）Ｃａｓ９が、Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ  Ｃａｓ９である；
（Ｂ）Ｃａｓ９が、Ｓ．ａｕｒｅｕｓ  Ｃａｓ９である；または
（Ｃ）Ｃａｓ９が、ヌクレアーゼ活性を実質的に欠如する；あるいは
（２）前記ＲＮＡ誘導型アクチュエータ部分がＣｐｆ１であり、必要に応じて、Ｃｐｆ１が、ヌクレアーゼ活性を実質的に欠如する；
（ｇ）前記プロモーターが、ＩＬ−２、ＩＦＮ−γ、ＩＲＦ４、ＮＲ４Ａ１、ＰＲＤＭ１、ＴＢＸ２１、ＣＤ６９、ＣＤ２５、またはＧＺＭＢプロモーターである；
（ｈ）前記ＧＭＰが核局在化配列（ＮＬＳ）を含む；
（ｉ）前記ＧＭＰが、転写活性化因子または転写抑制因子を含む；あるいは
（ｊ）前記発現カセットが、細胞ゲノムに組み込まれる、必要に応じて、
（１）前記発現カセットが、レンチウイルスを介して前記細胞ゲノムに組み込まれる；
（２）前記発現カセットが、セーフハーバー部位を含む領域で前記細胞ゲノムに組み込まれる；
（３）前記発現カセットが、第１９染色体のＡＡＶＳ１部位に組み込まれる；
（４）前記発現カセットが、第３染色体のＣＣＲ５部位に組み込まれる；あるいは
（５）前記発現カセットが、前記細胞ゲノムにプログラム可能なヌクレアーゼを介して組み込まれ、
必要に応じて、前記プログラム可能なヌクレアーゼが、ＲＮＡ誘導型ヌクレアーゼ、ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＮＦ）、または転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）である、請求項１３に記載の発現カセット。
【請求項１５】
前記発現カセットの細胞ゲノムへの組込みを容易にする少なくとも１つの組込み配列をさらに含む請求項１３に記載の発現カセットであって、
必要に応じて、リガンドが膜貫通受容体に結合することによって前記膜貫通受容体を活性化すると、プロモーターを活性化して前記発現カセットからの前記ＧＭＰの発現を駆動し、
（ａ）前記少なくとも１つの組込み配列が、前記細胞ゲノムの領域への前記発現カセットの組込みを容易にし、それによって前記ＧＭＰをコードする前記核酸配列が内因性プロモーターに作動可能に連結される、
必要に応じて、前記少なくとも１つの組込み配列が、前記細胞ゲノムの領域への前記発現カセットの組込みを容易にし、それによって前記ＧＭＰをコードする前記核酸配列が、（ｉ）内因性プロモーターに作動可能に連結され、（ｉｉ）内因性タンパク質をコードする遺伝子の下流に位置し、前記細胞における前記内因性タンパク質の発現が前記内因性プロモーターによって駆動され、必要に応じて、
（１）前記ＧＭＰをコードする前記核酸配列が、ペプチドリンカーをコードする核酸配列によって前記遺伝子に結合され、必要に応じて、
（Ａ）前記ＧＭＰをコードする前記核酸配列が、前記遺伝子にインフレームで結合される；
（Ｂ）前記ペプチドリンカーがプロテアーゼ認識配列を含む；または
（Ｃ）前記ペプチドリンカーが自己切断セグメントを含み、
必要に応じて、前記自己切断セグメントが２Ａペプチドを含み、必要に応じて、前記２Ａペプチドが、Ｔ２Ａ、Ｐ２Ａ、Ｅ２Ａ、またはＦ２Ａである；あるいは
（２）前記ＧＭＰをコードする前記核酸配列が、配列内リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）を含む核酸配列によって前記遺伝子に結合される；
（ｂ）前記少なくとも１つの組込み配列が、相同配列を含み、前記発現カセットが、相同性修復（ＨＤＲ）を介して前記細胞ゲノムに組み込まれ、必要に応じて、
（１）２つの組込み配列が、前記ＧＭＰをコードする前記核酸配列の両端に存在し、前記２つの各々の組込み配列が相同配列を含む；または
（２）前記相同配列が、前記細胞ゲノムの標的化領域への前記発現カセットの組込みを容易にする；あるいは
（ｃ）前記ＧＭＰをコードする前記核酸配列が、前記発現カセットの組込み後に前記プロモーターの下流に位置する、発現カセット。
【請求項１６】
請求項１〜４および９〜１２のいずれか一項に記載のシステム、請求項５〜１２のいずれか一項に記載の組成物、または請求項１３〜１５のいずれか一項に記載の発現カセットを含む細胞。
【請求項１７】
（ａ）前記細胞が、造血細胞、造血前駆細胞、または造血幹細胞であり、
必要に応じて、前記細胞が造血細胞であり、前記造血細胞が、リンパ球、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、単球、マクロファージ、または樹状細胞（ＤＣ）である；
（ｂ）前記システムの前記第１の発現カセットが、プラスミドの一部として前記細胞に存在する；あるいは
（ｃ）前記システムの前記第１の発現カセットが、細胞ゲノムに組み込まれ、必要に応じて、
（１）前記システムの前記第１の発現カセットが、ゲノムのセーフハーバー部位を含む領域で前記細胞ゲノムに組み込まれる；
（２）前記システムの前記第１の発現カセットが、第１９染色体のＡＡＶＳ１部位に組み込まれる；
（３）前記システムの前記第１の発現カセットが、第３染色体のＣＣＲ５部位に組み込まれる；あるいは
（４）前記第１の発現カセットが、前記細胞ゲノムにプログラム可能なヌクレアーゼを介して組み込まれ、
必要に応じて、前記プログラム可能なヌクレアーゼが、ＲＮＡ誘導型ヌクレアーゼ、ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＮＦ）、または転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）である、請求項１６に記載の細胞。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００８３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００８３】
一部の実施形態では、細胞は、免疫細胞、造血前駆細胞、または造血幹細胞である。一部の実施形態では、細胞は免疫細胞である。一部の実施形態では、免疫細胞はリンパ球である。一部の実施形態では、リンパ球はＴ細胞である。一部の実施形態では、リンパ球はナチュラルキラー（ＮＫ細胞）である。一部の実施形態では、標的遺伝子は、サイトカインをコードする。一部の実施形態では、標的遺伝子は、免疫チェックポイント阻害剤をコードする。一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−１、ＣＴＬＡ−４、ＬＡＧ３、ＴＩＭ−３、Ａ２ＡＲ、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＢＴＬＡ４、ＩＤＯ、ＫＩＲ、またはＶＩＳＴＡである。一部の実施形態では、標的遺伝子は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）アルファ、ベータ、デルタ、またはガンマ鎖をコードする。
特定の実施形態では、例えば、以下が提供される：
（項目１）
細胞における第１の標的遺伝子の発現を調節するためのシステムであって、
第１のリガンド結合ドメインおよび第１のシグナル伝達ドメインを含む第１の膜貫通受容体であって、第１のリガンドが前記第１のリガンド結合ドメインに結合すると、前記第１のシグナル伝達ドメインが前記細胞の第１のシグナル伝達経路を活性化する、第１の膜貫通受容体と、
第１のプロモーターの制御下に置かれた第１の遺伝子モジュレーティングポリペプチド（ＧＭＰ）をコードする核酸配列を含む第１の発現カセットであって、前記第１のＧＭＰが第１のアクチュエータ部分を含み、前記第１のリガンドが前記第１のリガンド結合ドメインに結合すると、前記第１のプロモーターが活性化されて前記第１のＧＭＰの発現を駆動する、第１の発現カセットとを含み、
発現された前記第１のＧＭＰが前記第１の標的遺伝子の発現を調節する、システム。
（項目２）
第２のリガンド結合ドメインおよび第２のシグナル伝達ドメインを含む第２の膜貫通受容体であって、第２のリガンドが前記第２のリガンド結合ドメインに結合すると、前記第２のシグナル伝達ドメインが前記細胞の第２のシグナル伝達経路を活性化する、第２の膜貫通受容体をさらに含む、項目１に記載のシステム。
（項目３）
（ｉ）前記第１のリガンドが前記第１のリガンド結合ドメインに結合し、かつ／または（ｉｉ）前記第２のリガンドが前記第２のリガンド結合ドメインに結合すると、前記第１のプロモーターが活性化されて前記第１のＧＭＰの発現を駆動する、項目２に記載のシステム。
（項目４）
第２のプロモーターの制御下に置かれた第２の遺伝子モジュレーティングポリペプチド（ＧＭＰ）をコードする核酸配列を含む第２の発現カセットであって、前記第２のＧＭＰが第２のアクチュエータ部分を含み、前記第２のリガンドが前記第２のリガンド結合ドメインに結合すると、前記第２のプロモーターが活性化されて前記第２のアクチュエータ部分の発現を駆動する、第２の発現カセットをさらに含む、項目２に記載のシステム。
（項目５）
前記第２のＧＭＰが、前記細胞における第２の標的遺伝子の発現を調節する、項目４に記載のシステム。
（項目６）
（ｉ）前記第１のプロモーターが、前記第１のリガンドが前記第１のリガンド結合ドメインに結合すると活性化される第１の内因性プロモーターを含み、かつ／または（ｉｉ）前記第２のプロモーターが、前記第２のリガンドが前記第２のリガンド結合ドメインに結合すると活性化される第２の内因性プロモーターを含む、項目１〜５のいずれか一項に記載のシステム。
（項目７）
（ｉ）前記第１のＧＭＰをコードする前記核酸配列が、前記第１の内因性プロモーターに作動可能に連結され、かつ／または（ｉｉ）前記第２のＧＭＰをコードする前記核酸配列が、前記第２の内因性プロモーターに作動可能に連結される、項目６に記載のシステム。
（項目８）
（ｉ）前記第１の発現カセットが、第１の内因性タンパク質をコードする第１の遺伝子を含み、前記第１の遺伝子が、前記第１のＧＭＰをコードする前記核酸配列の上流に位置し、前記第１の内因性タンパク質の発現が、前記第１の内因性プロモーターによって駆動され、かつ／または（ｉｉ）前記第２の発現カセットが、第２の内因性タンパク質をコードする第２の遺伝子を含み、前記第２の遺伝子が、前記第２のＧＭＰをコードする前記核酸配列の上流に位置し、前記第２の内因性タンパク質の発現が、前記第２の内因性プロモーターによって駆動される、項目６に記載のシステム。
（項目９）
（ｉ）前記第１の遺伝子と前記第１のＧＭＰをコードする前記核酸配列とが、第１のペプチドリンカーをコードする核酸配列によって結合されており、かつ／または（ｉｉ）前記第２の遺伝子と前記第２のＧＭＰをコードする前記核酸配列とが、第２のペプチドリンカーをコードする核酸配列によって結合されている、項目８に記載のシステム。
（項目１０）
前記第１のペプチドリンカーおよび／または前記第２のペプチドリンカーが、プロテアーゼ認識配列を含む、項目９に記載のシステム。
（項目１１）
前記第１のペプチドリンカーおよび／または前記第２のペプチドリンカーが、自己切断セグメントを含む、項目９に記載のシステム。
（項目１２）
前記自己切断セグメントが、２Ａペプチドを含む、項目１１に記載のシステム。
（項目１３）
前記２Ａペプチドが、Ｔ２Ａ、Ｐ２Ａ、Ｅ２Ａ、またはＦ２Ａである、項目１２に記載のシステム。
（項目１４）
（ｉ）前記第１の遺伝子と前記第１のＧＭＰをコードする前記核酸配列とが、第１の配列内リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）を含む核酸配列によって結合されており、かつ／または（ｉｉ）前記第２の遺伝子と前記第２のＧＭＰをコードする前記核酸配列とが、第２のＩＲＥＳを含む核酸配列によって結合されている、項目８に記載のシステム。
（項目１５）
（ｉ）前記第１のプロモーターが、前記第１のリガンドが前記第１のリガンド結合ドメインに結合すると活性化される第１の外因性プロモーターを含み、かつ／または（ｉｉ）前記第２のプロモーターが、前記第２のリガンドが前記第２のリガンド結合ドメインに結合すると活性化される第２の外因性プロモーターを含む、項目１〜５のいずれか一項に記載のシステム。
（項目１６）
（ｉ）前記第１の外因性プロモーターが合成プロモーター配列を含み、かつ／または（ｉｉ）前記第２の外因性プロモーターが合成プロモーター配列を含む、項目１５に記載のシステム。
（項目１７）
（ｉ）前記第１のＧＭＰをコードする前記核酸配列が前記第１の外因性プロモーターに作動可能に連結されており、かつ／または（ｉｉ）前記第２のＧＭＰをコードする前記核酸配列が前記第２の外因性プロモーターに作動可能に連結されている、項目１５に記載のシステム。
（項目１８）
（ｉ）前記第１の膜貫通受容体が内因性受容体を含み、かつ／または（ｉｉ）前記第２の膜貫通受容体が内因性受容体を含む、項目１〜１７のいずれか一項に記載のシステム。
（項目１９）
（ｉ）前記第１の膜貫通受容体が合成受容体を含み、かつ／または（ｉｉ）前記第２の膜貫通受容体が合成受容体を含む、項目１〜１７のいずれか一項に記載のシステム。
（項目２０）
（ｉ）前記第１の膜貫通受容体が、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、Ｇタンパク質共役受容体（ＧＰＣＲ）、インテグリン受容体、もしくはＮｏｔｃｈ受容体を含み、かつ／または（ｉｉ）前記第２の膜貫通受容体が、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、Ｇタンパク質共役受容体（ＧＰＣＲ）、インテグリン受容体、もしくはＮｏｔｃｈ受容体を含む、項目１〜１７のいずれか一項に記載のシステム。
（項目２１）
（ｉ）前記第１の膜貫通受容体がＧＰＣＲを含み、かつ／または（ｉｉ）前記第２の膜貫通受容体がＧＰＣＲを含む、項目２０に記載のシステム。
（項目２２）
（ｉ）前記第１の膜貫通受容体がキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含み、かつ／または（ｉｉ）前記第２の膜貫通受容体がキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含む、項目２０に記載のシステム。
（項目２３）
前記ＣＡＲの前記リガンド結合ドメインが、Ｆａｂ、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、細胞外受容体ドメイン、およびＦｃ結合ドメインのうちの少なくとも１つを含む、項目２２に記載のシステム。
（項目２４）
前記ＣＡＲの前記シグナル伝達ドメインが、免疫受容体活性化チロシンモチーフ（ＩＴＡＭ）を含む、項目２２または２３に記載のシステム。
（項目２５）
前記ＣＡＲの前記シグナル伝達ドメインが、免疫受容体抑制性チロシンモチーフ（ＩＴＩＭ）を含む、項目２２または２３に記載のシステム。
（項目２６）
前記ＣＡＲの前記シグナル伝達ドメインが共刺激ドメインを含む、項目２２〜２５のいずれか一項に記載のシステム。
（項目２７）
前記第１のＧＭＰの前記アクチュエータ部分および／または前記第２のＧＭＰの前記アクチュエータ部分がＲＮＡ誘導型アクチュエータ部分であり、前記システムが、前記ＲＮＡ誘導型アクチュエータ部分と複合体を形成するガイドＲＮＡをさらに含む、先行する項目のいずれか一項に記載のシステム。
（項目２８）
前記ＲＮＡ誘導型アクチュエータ部分がＣａｓ９である、項目２７に記載のシステム。
（項目２９）
Ｃａｓ９が、Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ  Ｃａｓ９である、項目２８に記載のシステム。
（項目３０）
Ｃａｓ９が、Ｓ．ａｕｒｅｕｓ  Ｃａｓ９である、項目２８に記載のシステム。
（項目３１）
Ｃａｓ９が、ヌクレアーゼ活性を実質的に欠如する、項目２８〜３０のいずれか一項に記載のシステム。
（項目３２）
前記ＲＮＡ誘導型アクチュエータ部分がＣｐｆ１である、項目２７に記載のシステム。
（項目３３）
Ｃｐｆ１が、ヌクレアーゼ活性を実質的に欠如する、項目３２に記載のシステム。
（項目３４）
前記第１のＧＭＰおよび／または前記第２のＧＭＰが、核局在化配列（ＮＬＳ）を含む、先行する項目のいずれか一項に記載のシステム。
（項目３５）
前記第１のＧＭＰおよび／または前記第２のＧＭＰが、転写活性化因子または転写抑制因子を含む、先行する項目のいずれか一項に記載のシステム。
（項目３６）
前記第１のプロモーターおよび／または前記第２のプロモーターが、ＩＬ−２、ＩＦＮ−γ、ＩＲＦ４、ＮＲ４Ａ１、ＰＲＤＭ１、ＴＢＸ２１、ＣＤ６９、ＣＤ２５、およびＧＺＭＢプロモーターから選択される、先行する項目のいずれか一項に記載のシステム。
（項目３７）
前記第１の標的遺伝子および／または前記第２の標的遺伝子が、サイトカイン、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、または免疫チェックポイント阻害剤をコードする、先行する項目のいずれか一項に記載のシステム。
（項目３８）
前記第１の標的遺伝子および／または前記第２の標的遺伝子が、免疫チェックポイント阻害剤をコードする、項目３７に記載のシステム。
（項目３９）
前記免疫チェックポイント阻害剤が、ＰＤ−１、ＣＴＬＡ−４、ＬＡＧ３、ＴＩＭ−３、Ａ２ＡＲ、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＢＴＬＡ、ＩＤＯ、ＫＩＲ、またはＶＩＳＴＡである、項目３８に記載のシステム。
（項目４０）
前記細胞が、免疫細胞、造血前駆細胞、または造血幹細胞である、先行する項目のいずれか一項に記載のシステム。
（項目４１）
前記細胞が免疫細胞である、項目４０に記載のシステム。
（項目４２）
前記免疫細胞がリンパ球である、項目４１に記載のシステム。
（項目４３）
前記リンパ球がＴ細胞である、項目４２に記載のシステム。
（項目４４）
前記リンパ球がナチュラルキラー（ＮＫ）細胞である、項目４２に記載のシステム。
（項目４５）
細胞における標的遺伝子の発現を調節するためのシステムであって、
第１のリガンド結合ドメインおよび第１のシグナル伝達ドメインを含む第１の膜貫通受容体であって、第１のリガンドが前記第１のリガンド結合ドメインに結合すると、前記第１のシグナル伝達ドメインが前記細胞の第１のシグナル伝達経路を活性化する、第１の膜貫通受容体と
第２のリガンド結合ドメインおよび第２のシグナル伝達ドメインを含む第２の膜貫通受容体であって、第２のリガンドが前記第２のリガンド結合ドメインに結合すると、前記第２のシグナル伝達ドメインが前記細胞の第２のシグナル伝達経路を活性化する、第２の膜貫通受容体と、
第１のプロモーターの制御下に置かれた第１の部分的遺伝子モジュレーティングポリペプチド（ＧＭＰ）をコードする核酸配列を含む第１の発現カセットであって、前記第１の部分的ＧＭＰがアクチュエータ部分の第１の部分を含み、前記第１のリガンドが前記第１のリガンド結合ドメインに結合すると、前記第１のプロモーターが活性化されて前記第１の部分的ＧＭＰの発現を駆動する、第１の発現カセットと、
第２のプロモーターの制御下に置かれた第２の部分的遺伝子モジュレーティングポリペプチド（ＧＭＰ）をコードする核酸配列を含む第２の発現カセットであって、前記第２の部分的ＧＭＰがアクチュエータ部分の第２の部分を含み、前記第２のリガンドが前記第２のリガンド結合ドメインに結合すると、前記第２のプロモーターが活性化されて前記第２の部分的ＧＭＰの発現を駆動する、第２の発現カセットとを含み、
前記アクチュエータ部分の前記第１および第２の部分が複合体を形成して、機能的アクチュエータ部分を含む再構成されたＧＭＰを形成し、前記再構成されたＧＭＰが前記標的遺伝子の発現を調節する、システム。
（項目４６）
前記機能的アクチュエータ部分がＲＮＡ誘導型アクチュエータ部分を含み、前記システムが、前記ＲＮＡ誘導型アクチュエータ部分と複合体を形成するガイドＲＮＡをさらに含む、項目４５に記載のシステム。
（項目４７）
前記ＲＮＡ誘導型アクチュエータ部分がＣａｓ９である、項目４６に記載のシステム。
（項目４８）
Ｃａｓ９が、Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ  Ｃａｓ９である、項目４７に記載のシステム。
（項目４９）
Ｃａｓ９が、Ｓ．ａｕｒｅｕｓ  Ｃａｓ９である、項目４７に記載のシステム。
（項目５０）
Ｃａｓ９が、ヌクレアーゼ活性を実質的に欠如する、項目４７〜４９のいずれか一項に記載のシステム。
（項目５１）
前記ＲＮＡ誘導型アクチュエータ部分がＣｐｆ１である、項目４６に記載のシステム。
（項目５２）
Ｃｐｆ１が、ヌクレアーゼ活性を実質的に欠如する、項目５１に記載のシステム。
（項目５３）
前記第１の部分的ＧＭＰおよび前記第２の部分的ＧＭＰのうちの少なくとも１つが核局在化配列（ＮＬＳ）を含む、項目４５〜５２のいずれか一項に記載のシステム。
（項目５４）
遺伝子モジュレーティングポリペプチド（ＧＭＰ）の発現を誘導する方法であって、
（ａ）リガンド結合ドメインおよびシグナル伝達ドメインを有する膜貫通受容体を発現する細胞を提供するステップと、
（ｂ）リガンドを、前記膜貫通受容体の前記リガンド結合ドメインに結合させるステップであって、前記結合が、前記細胞のシグナル伝達経路を活性化し、次いで、前記ＧＭＰをコードする核酸配列に作動可能に連結されたプロモーターが活性化される、ステップと、（ｃ）前記プロモーターが活性化されると、前記ＧＭＰを発現するステップと
を含む、方法。
（項目５５）
細胞における標的遺伝子の発現を調節する方法であって、
リガンドを、リガンド結合ドメインおよびシグナル伝達ドメインを含む膜貫通受容体に接触させるステップであって、接触すると、前記シグナル伝達ドメインが前記細胞のシグナル伝達経路を活性化する、ステップと、
アクチュエータ部分を含む遺伝子モジュレーティングポリペプチド（ＧＭＰ）を、プロモーターの制御下に置かれた前記ＧＭＰをコードする核酸配列を含む発現構築物から発現させるステップであって、前記リガンドが前記リガンド結合ドメインに結合すると、前記プロモーターが活性化されて前記ＧＭＰの発現を駆動する、ステップと、
発現された前記ＧＭＰの結合を介して前記標的遺伝子の発現を増加または減少させ、それによって前記標的遺伝子の発現を調節するステップと
を含む、方法。
（項目５６）
前記膜貫通受容体が内因性受容体を含む、項目５４または５５に記載の方法。
（項目５７）
前記膜貫通受容体が合成受容体を含む、項目５４または５５に記載の方法。
（項目５８）
前記膜貫通受容体が、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、Ｇタンパク質共役受容体（ＧＰＣＲ）、インテグリン受容体、またはＮｏｔｃｈ受容体を含む、項目５４または５５に記載の方法。
（項目５９）
前記膜貫通受容体がＧＰＣＲを含む、項目５８に記載の方法。
（項目６０）
前記膜貫通受容体がキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含む、項目５８に記載の方法。
（項目６１）
前記ＣＡＲの前記リガンド結合ドメインが、Ｆａｂ、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、細胞外受容体ドメイン、およびＦｃ結合ドメインのうちの少なくとも１つを含む、項目６０に記載の方法。
（項目６２）
前記ＣＡＲの前記シグナル伝達ドメインが、免疫受容体活性化チロシンモチーフ（ＩＴＡＭ）を含む、項目６０または６１に記載の方法。
（項目６３）
前記ＣＡＲのシグナル伝達ドメインが、免疫受容体抑制性チロシンモチーフ（ＩＴＩＭ）を含む、項目６０または６１に記載の方法。
（項目６４）
前記ＣＡＲの前記シグナル伝達ドメインが共刺激ドメインを含む、項目６０〜６３のいずれか一項に記載の方法。
（項目６５）
前記アクチュエータ部分がＲＮＡ誘導型アクチュエータ部分である、項目５４〜６４のいずれか一項に記載の方法。
（項目６６）
前記ＲＮＡ誘導型アクチュエータ部分がＣａｓ９である、項目６５に記載の方法。
（項目６７）
Ｃａｓ９が、Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ  Ｃａｓ９である、項目６６に記載の方法。
（項目６８）
Ｃａｓ９が、Ｓ．ａｕｒｅｕｓ  Ｃａｓ９である、項目６６に記載の方法。
（項目６９）
Ｃａｓ９が、ヌクレアーゼ活性を実質的に欠如する、項目６６〜６８のいずれか一項に記載の方法。
（項目７０）
前記ＲＮＡ誘導型アクチュエータ部分がＣｐｆ１である、項目６５に記載の方法。
（項目７１）
Ｃｐｆ１が、ヌクレアーゼ活性を実質的に欠如する、項目７０に記載の方法。
（項目７２）
前記ＧＭＰが核局在化配列（ＮＬＳ）を含む、項目５４〜７１のいずれか一項に記載の方法。
（項目７３）
前記ＧＭＰが転写活性化因子または転写抑制因子を含む、項目５４〜７２のいずれか一項に記載の方法。
（項目７４）
前記細胞が、免疫細胞、造血前駆細胞、または造血幹細胞である、項目５４〜７３のいずれか一項に記載の方法。
（項目７５）
前記細胞が免疫細胞である、項目７４に記載の方法。
（項目７６）
前記免疫細胞がリンパ球である、項目７５に記載の方法。
（項目７７）
前記リンパ球がＴ細胞である、項目７６に記載の方法。
（項目７８）
前記リンパ球がナチュラルキラー（ＮＫ）細胞である、項目７６に記載の方法。
（項目７９）
アクチュエータ部分を含む遺伝子モジュレーティングポリペプチド（ＧＭＰ）をコードする核酸配列に作動可能に連結されたプロモーターを含む発現カセットであって、リガンドが膜貫通受容体に結合することによって活性化されている前記膜貫通受容体を発現する細胞に前記発現カセットが存在する場合、前記プロモーターが活性化されて前記発現カセットからの前記ＧＭＰの発現を駆動することを特徴とする発現カセット。
（項目８０）
膜貫通受容体がシグナル伝達ドメインを含み、前記膜貫通受容体が活性化されると、前記シグナル伝達ドメインが前記細胞のシグナル伝達経路を活性化する、項目７９に記載の発現カセット。
（項目８１）
前記膜貫通受容体の前記シグナル伝達ドメインが、免疫細胞シグナル伝達経路を活性化する、項目８０に記載の発現カセット。
（項目８２）
前記細胞の活性化された前記シグナル伝達経路の転写因子が、前記プロモーターに結合し、それによって前記プロモーターを活性化させて、前記発現カセットからの前記ＧＭＰの発現を駆動する、項目８０に記載の発現カセット。
（項目８３）
前記プロモーターが内因性プロモーター配列を含む、項目７９に記載の発現カセット。
（項目８４）
前記プロモーターが合成プロモーター配列を含む、項目７９に記載の発現カセット。
（項目８５）
前記アクチュエータ部分がＲＮＡ誘導型アクチュエータ部分である、項目７９に記載の発現カセット。
（項目８６）
前記ＲＮＡ誘導型アクチュエータ部分がＣａｓ９である、項目８５に記載の発現カセット。
（項目８７）
Ｃａｓ９が、Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ  Ｃａｓ９である、項目８６に記載の発現カセット。
（項目８８）
Ｃａｓ９が、Ｓ．ａｕｒｅｕｓ  Ｃａｓ９である、項目８６に記載の発現カセット。
（項目８９）
Ｃａｓ９が、ヌクレアーゼ活性を実質的に欠如する、項目８６〜８８のいずれか一項に記載の発現カセット。
（項目９０）
前記ＲＮＡ誘導型アクチュエータ部分がＣｐｆ１である、項目８５に記載の発現カセット。
（項目９１）
Ｃｐｆ１が、ヌクレアーゼ活性を実質的に欠如する、項目９０に記載の発現カセット。
（項目９２）
前記プロモーターが、ＩＬ−２、ＩＦＮ−γ、ＩＲＦ４、ＮＲ４Ａ１、ＰＲＤＭ１、ＴＢＸ２１、ＣＤ６９、ＣＤ２５、またはＧＺＭＢプロモーターである、項目７９〜９１のいずれか一項に記載の発現カセット。
（項目９３）
前記ＧＭＰが核局在化配列（ＮＬＳ）を含む、項目７９〜９２のいずれか一項に記載の発現カセット。
（項目９４）
前記ＧＭＰが、転写活性化因子または転写抑制因子を含む、項目７９〜９３のいずれか一項に記載の発現カセット。
（項目９５）
細胞ゲノムに組み込まれる、項目７９〜９４に記載の発現カセット。
（項目９６）
レンチウイルスを介して前記細胞ゲノムに組み込まれる、項目９５に記載の発現カセット。
（項目９７）
セーフハーバー部位を含む領域で前記細胞ゲノムに組み込まれる、項目９５に記載の発現カセット。
（項目９８）
第１９染色体のＡＡＶＳ１部位に組み込まれる、項目９５に記載の発現カセット。
（項目９９）
第３染色体のＣＣＲ５部位に組み込まれる、項目９５に記載の発現カセット。
（項目１００）
前記細胞ゲノムにプログラム可能なヌクレアーゼを介して組み込まれる、項目９５に記載の発現カセット。
（項目１０１）
前記プログラム可能なヌクレアーゼが、ＲＮＡ誘導型ヌクレアーゼ、ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＮＦ）、または転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）である、項目１００に記載の発現カセット。
（項目１０２）
（ｉ）遺伝子モジュレーティングポリペプチド（ＧＭＰ）をコードする核酸配列と、（ｉｉ）発現カセットの細胞ゲノムへの組込みを容易にする少なくとも１つの組込み配列とを含む発現カセットであって、前記ＧＭＰがアクチュエータ部分を含み、前記発現カセットが前記少なくとも１つの組込み配列を介して前記細胞ゲノムに組み込まれている場合に、リガンドが膜貫通受容体に結合することによって前記膜貫通受容体を活性化すると、プロモーターを活性化して前記発現カセットからの前記ＧＭＰの発現を駆動することを特徴とする発現カセット。
（項目１０３）
前記少なくとも１つの組込み配列が、前記細胞ゲノムの領域への前記発現カセットの組込みを容易にし、それによって前記ＧＭＰをコードする前記核酸配列が内因性プロモーターに作動可能に連結される、項目１０２に記載の発現カセット。
（項目１０４）
前記少なくとも１つの組込み配列が、前記細胞ゲノムの領域への前記発現カセットの組込みを容易にし、それによって前記ＧＭＰをコードする前記核酸配列が、（ｉ）内因性プロモーターに作動可能に連結され、（ｉｉ）内因性タンパク質をコードする遺伝子の下流に位置し、細胞における前記内因性タンパク質の発現が前記内因性プロモーターによって駆動される、項目１０３に記載の発現カセット。
（項目１０５）
前記ＧＭＰをコードする前記核酸配列が、ペプチドリンカーをコードする核酸配列によって前記遺伝子に結合される、項目１０４に記載の発現カセット。
（項目１０６）
前記ＧＭＰをコードする前記核酸配列が、前記遺伝子にインフレームで結合される、項目１０５に記載の発現カセット。
（項目１０７）
前記ペプチドリンカーがプロテアーゼ認識配列を含む、項目１０５に記載の発現カセット。
（項目１０８）
前記ペプチドリンカーが自己切断セグメントを含む、項目１０５に記載の発現カセット。
（項目１０９）
前記自己切断セグメントが２Ａペプチドを含む、項目１０８に記載の発現カセット。
（項目１１０）
前記２Ａペプチドが、Ｔ２Ａ、Ｐ２Ａ、Ｅ２Ａ、またはＦ２Ａである、項目１０９に記載の発現カセット。
（項目１１１）
前記ＧＭＰをコードする前記核酸配列が、配列内リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）を含む核酸配列によって前記遺伝子に結合される、項目１０４に記載の発現カセット。
（項目１１２）
前記少なくとも１つの組込み配列が、相同配列を含み、前記発現カセットが、相同性修復（ＨＤＲ）を介して前記細胞ゲノムに組み込まれる、項目１０２〜１１１のいずれか一項に記載の発現カセット。
（項目１１３）
２つの組込み配列が、遺伝子モジュレーティングポリペプチド（ＧＭＰ）をコードする前記核酸配列の両端に存在し、２つの各々の組込み配列が相同配列を含む、項目１１２に記載の発現カセット。
（項目１１４）
前記相同配列が、前記細胞ゲノムの標的化領域への前記発現カセットの組込みを容易にする、項目１１２または１１３に記載の発現カセット。
（項目１１５）
遺伝子モジュレーティングポリペプチドをコードする前記核酸配列が、前記発現カセットの組込み後に前記プロモーターの下流に位置する、項目１０２〜１１４のいずれか一項に記載の発現カセット。
（項目１１６）
項目１〜５３のいずれか一項に記載のシステムを含む細胞。
（項目１１７）
造血細胞、造血前駆細胞、または造血幹細胞である、項目１１６に記載の細胞。
（項目１１８）
前記細胞が造血細胞であり、前記造血細胞が、リンパ球、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、単球、マクロファージ、または樹状細胞（ＤＣ）である、項目１１７に記載の細胞。
（項目１１９）
前記システムの発現カセットが、プラスミドの一部として前記細胞に存在する、項目１１６に記載の細胞。
（項目１２０）
前記システムの発現カセットが、細胞ゲノムに組み込まれる、項目１１６に記載の細胞。
（項目１２１）
前記システムの前記発現カセットが、ゲノムのセーフハーバー部位を含む領域で前記細胞ゲノムに組み込まれる、項目１２０に記載の細胞。
（項目１２２）
前記システムの前記発現カセットが、第１９染色体のＡＡＶＳ１部位に組み込まれる、項目１２０に記載の細胞。
（項目１２３）
前記システムの前記発現カセットが、第３染色体のＣＣＲ５部位に組み込まれる、項目１２０に記載の細胞。
（項目１２４）
前記発現カセットが、前記細胞ゲノムにプログラム可能なヌクレアーゼを介して組み込まれる、項目１２０に記載の細胞。
（項目１２５）
前記プログラム可能なヌクレアーゼが、ＲＮＡ誘導型ヌクレアーゼ、ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＮＦ）、または転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）である、項目１２４に記載の細胞。
（項目１２６）
項目７９〜１１５のいずれか一項に記載の発現カセットを含む細胞。
（項目１２７）
細胞における標的遺伝子の発現を調節するためのシステムであって、
リガンド結合ドメイン、シグナル伝達ドメイン、および遺伝子モジュレーティングポリペプチド（ＧＭＰ）を含む膜貫通受容体であって、前記ＧＭＰが切断認識部位に連結されたアクチュエータ部分を含み、リガンドが前記リガンド結合ドメインに結合すると、前記シグナル伝達ドメインが前記細胞のシグナル伝達経路を活性化する、膜貫通受容体と、
切断部分をコードする核酸配列を含む発現カセットであって、前記核酸配列が、前記リガンドが前記リガンド結合ドメインに結合すると、前記シグナル伝達経路によって活性化されて前記切断部分の発現を駆動するプロモーターの制御下に置かれる、発現カセットとを含み、
発現された前記切断部分が、前記切断認識部位の近位に存在する場合、前記切断認識部位を切断して前記アクチュエータ部分を放出し、放出された前記アクチュエータ部分が標的遺伝子の発現を調節する、システム。
（項目１２８）
細胞における標的遺伝子の発現を調節するためのシステムであって、
リガンド結合ドメイン、シグナル伝達ドメイン、および切断部分を含む膜貫通受容体であって、リガンドが前記リガンド結合ドメインに結合すると、前記シグナル伝達ドメインが前記細胞のシグナル伝達経路を活性化する、膜貫通受容体と、
核外輸送シグナルペプチドに連結された遺伝子モジュレーティングポリペプチド（ＧＭＰ）を含む融合タンパク質をコードする核酸配列を含む発現カセットであって、前記ＧＭＰが切断認識部位に連結されたアクチュエータ部分を含み、前記核酸配列が、前記リガンドが前記リガンド結合ドメインに結合すると、前記シグナル伝達経路によって活性化されて前記融合タンパク質の発現を駆動するプロモーターの制御下に置かれる、発現カセットとを含み、
前記融合タンパク質が前記切断部分の近位に存在する場合、前記切断部分が前記融合タンパク質の前記切断認識部位を切断して、前記アクチュエータ部分を放出し、放出された前記アクチュエータ部分が標的遺伝子の発現を調節する、システム。
（項目１２９）
前記切断部分が、前記膜貫通受容体の細胞内領域に連結されている、項目１２８に記載のシステム。
（項目１３０）
細胞における標的遺伝子の発現を調節するためのシステムであって、
リガンド結合ドメインおよびシグナル伝達ドメインを含む膜貫通受容体であって、リガンドが前記リガンド結合ドメインに結合すると、前記シグナル伝達ドメインが前記細胞のシグナル伝達経路を活性化する、膜貫通受容体と、
切断部分をコードする核酸配列を含む発現カセットであって、前記核酸配列が、前記リガンドが前記リガンド結合ドメインに結合すると、前記シグナル伝達経路によって活性化されて前記切断部分の発現を駆動するプロモーターの制御下に置かれる、発現カセットとを含み、
発現された前記切断部分が、核外輸送シグナルペプチドに連結された遺伝子モジュレーティングポリペプチド（ＧＭＰ）を含む融合タンパク質の切断認識部位を切断し、前記ＧＭＰが前記切断認識部位に連結されたアクチュエータ部分を含み、前記切断認識部位の切断が前記アクチュエータ部分を放出し、放出された前記アクチュエータ部分が標的遺伝子の発現を調節する、システム。
（項目１３１）
前記核外輸送シグナルペプチドに連結された前記遺伝子モジュレーティングポリペプチド（ＧＭＰ）を含む前記融合タンパク質をさらに含む、項目１３０に記載のシステム。
（項目１３２）
細胞における標的遺伝子の発現を調節するためのシステムであって、
リガンド結合ドメインおよびシグナル伝達ドメインを含む膜貫通受容体であって、リガンドが前記リガンド結合ドメインに結合すると、前記シグナル伝達ドメインが前記細胞のシグナル伝達経路を活性化する、膜貫通受容体と、
核外輸送シグナルペプチドに連結された遺伝子モジュレーティングポリペプチド（ＧＭＰ）を含む融合タンパク質をコードする核酸配列を含む発現カセットであって、前記ＧＭＰが切断認識配列に連結されたアクチュエータ部分を含み、前記核酸配列が、前記リガンドが前記リガンド結合ドメインに結合すると、前記シグナル伝達経路によって活性化されて前記融合タンパク質の発現を駆動するプロモーターの制御下に置かれる、発現カセットとを含み、
前記切断認識部位での切断部分による切断を介して前記アクチュエータ部分が放出されると、放出された前記アクチュエータ部分が標的遺伝子の発現を調節する、システム。
（項目１３３）
切断部分をさらに含む、項目１３２に記載のシステム。
（項目１３４）
前記切断部分が、前記切断認識部位の近位に存在する場合、発現された前記融合タンパク質の前記切断認識部位を切断する、項目１３２に記載のシステム。
（項目１３５）
細胞における標的遺伝子の発現を調節するためのシステムであって、
リガンド結合ドメインおよびシグナル伝達ドメインを含む膜貫通受容体であって、リガンドが前記リガンド結合ドメインに結合すると、前記シグナル伝達ドメインが前記細胞のシグナル伝達経路を活性化する、膜貫通受容体と、
核外輸送シグナルペプチドに連結された遺伝子モジュレーティングポリペプチド（ＧＭＰ）を含む融合タンパク質をコードする第１の核酸配列を含む第１の発現カセットであって、前記ＧＭＰが切断認識配列に連結されたアクチュエータ部分を含み、前記第１の核酸配列が、前記リガンドが前記リガンド結合ドメインに結合すると、前記シグナル伝達経路によって活性化されて前記融合タンパク質の発現を駆動する第１のプロモーターの制御下に置かれる、第１の発現カセットと、
切断部分をコードする第２の核酸配列を含む第２の発現カセットであって、前記第２の核酸配列が、前記リガンドが前記リガンド結合ドメインに結合すると、前記シグナル伝達経路によって活性化されて前記切断部分の発現を駆動する第２のプロモーターの制御下に置かれる、第２の発現カセットとを含み；
発現された前記切断部分が、前記切断認識部位の近位に存在する場合、発現された前記融合タンパク質の前記切断認識部位を切断してアクチュエータ部分を放出し、放出された前記アクチュエータ部分が標的遺伝子の発現を調節する、システム。
（項目１３６）
細胞における標的遺伝子の発現を調節するためのシステムであって、
リガンド結合ドメインおよびシグナル伝達ドメインを含む膜貫通受容体であって、リガンドが前記リガンド結合ドメインに結合すると、前記シグナル伝達ドメインが前記細胞のシグナル伝達経路を活性化する、膜貫通受容体と、
第１の部分的遺伝子モジュレーティングポリペプチド（ＧＭＰ）をコードする第１の核酸配列を含む第１の発現カセットであって、前記第１の部分的ＧＭＰが、アクチュエータ部分の第１の部分を含み、前記第１の核酸配列が、前記リガンドが前記リガンド結合ドメインに結合すると、前記シグナル伝達経路によって活性化されて前記第１の部分的ＧＭＰの発現を駆動する第１のプロモーターの制御下に置かれる、第１の発現カセットと；
第２の部分的遺伝子モジュレーティングポリペプチド（ＧＭＰ）をコードする第２の核酸配列を含む第２の発現カセットであって、前記第２の部分的ＧＭＰが、アクチュエータ部分の第２の部分を含み、前記第２の核酸配列が、前記リガンドが前記リガンド結合ドメインに結合すると、前記シグナル伝達経路によって活性化されて前記第２の部分的ＧＭＰの発現を駆動する第２のプロモーターの制御下に置かれる、第２の発現カセットとを含み、
前記第１の部分的ＧＭＰおよび前記第２の部分的ＧＭＰが複合体を形成して再構成されたアクチュエータ部分を形成し、前記再構成されたアクチュエータ部分が前記標的遺伝子の発現を調節する、システム。
（項目１３７）
細胞における標的遺伝子の発現を調節するためのシステムであって、
リガンド結合ドメインおよびシグナル伝達ドメインを含む膜貫通受容体であって、リガンドが前記リガンド結合ドメインに結合すると、前記シグナル伝達ドメインが前記細胞のシグナル伝達経路を活性化する、膜貫通受容体と、
第１の部分的切断部分をコードする第１の核酸配列を含む第１の発現カセットであって、前記第１の核酸配列が、前記リガンドが前記リガンド結合ドメインに結合すると、前記シグナル伝達経路によって活性化されて前記第１の部分的切断部分の発現を駆動する第１のプロモーターの制御下に置かれる、第１の発現カセットと、
第２の部分的切断部分をコードする第２の核酸配列を含む第２の発現カセットであって、前記第２の核酸配列が、前記リガンドが前記リガンド結合ドメインに結合すると、前記シグナル伝達経路によって活性化されて前記第２の部分的切断部分の発現を駆動する第２のプロモーターの制御下に置かれる、第２の発現カセットとを含み、
前記第１の部分的切断部分および前記第２の部分的切断部分が複合体を形成して、再構成された切断部分を形成し、前記再構成された切断部分によって切断認識部位で切断されると、核外輸送シグナルペプチドからアクチュエータ部分を放出し、前記アクチュエータ部分が前記標的遺伝子の発現を調節する、システム。
（項目１３８）
前記切断認識部位を介して前記アクチュエータ部分に連結された核外輸送シグナルペプチドを含む融合ポリペプチドをさらに含む、項目１３７に記載のシステム。
（項目１３９）
細胞における標的遺伝子の発現を調節するためのシステムであって、
リガンド結合ドメインおよびシグナル伝達ドメインを含む膜貫通受容体であって、リガンドが前記リガンド結合ドメインに結合すると、前記シグナル伝達ドメインが前記細胞のシグナル伝達経路を活性化する、膜貫通受容体と、
（ｉ）切断部分および（ｉｉ）核外輸送シグナルペプチドに連結された遺伝子モジュレーティングポリペプチド（ＧＭＰ）を含む融合タンパク質のうちの一方または両方をコードする核酸を含む発現カセットであって、前記ＧＭＰが切断認識部位に連結されたアクチュエータ部分を含む、発現カセットとを含み、
前記切断部分および前記融合タンパク質のうちの前記一方または両方の発現が、リガンドが前記リガンド結合ドメインに結合すると、前記シグナル伝達経路によって活性化されるプロモーターによって駆動され、前記アクチュエータ部分が、前記切断部分によって前記切断認識部位が切断されると放出され、放出された前記ＧＭＰが標的ポリヌクレオチドの発現を調節する、システム。
（項目１４０）
前記膜貫通受容体が、内因性受容体または合成受容体を含む、項目１２７〜１３９のいずれか一項に記載のシステム。
（項目１４１）
前記膜貫通受容体が、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、Ｇタンパク質共役受容体（ＧＰＣＲ）、インテグリン受容体、またはＮｏｔｃｈ受容体を含む、項目１２７〜１４０のいずれか一項に記載のシステム。
（項目１４２）
前記アクチュエータ部分がポリヌクレオチド誘導型エンドヌクレアーゼを含む、項目１２７〜１４１のいずれか一項に記載のシステム。
（項目１４３）
前記ポリヌクレオチド誘導型エンドヌクレアーゼがＲＮＡ誘導型エンドヌクレアーゼである、項目１４２に記載のシステム。
（項目１４４）
前記ＲＮＡ誘導型エンドヌクレアーゼがＣａｓタンパク質である、項目１４３に記載のシステム。
（項目１４５）
前記Ｃａｓタンパク質がＣａｓ９である、項目１４４に記載のシステム。
（項目１４６）
Ｃａｓ９が、Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ  Ｃａｓ９である、項目１４５に記載のシステム。
（項目１４７）
Ｃａｓ９が、Ｓ．ａｕｒｅｕｓ  Ｃａｓ９である、項目１４５に記載のシステム。
（項目１４８）
前記Ｃａｓタンパク質が、ヌクレアーゼ活性を実質的に欠如する、項目１４４に記載のシステム。
（項目１４９）
前記Ｃａｓタンパク質がＣｐｆ１である、項目１４４に記載のシステム。
（項目１５０）
Ｃｐｆ１が、ヌクレアーゼ活性を実質的に欠如する、項目１４９に記載のシステム。
（項目１５１）
前記アクチュエータ部分が転写活性化因子に連結されている、項目１２７〜１５０のいずれか一項に記載のシステム。
（項目１５２）
前記アクチュエータ部分が転写抑制因子に連結されている、項目１２７〜１５０のいずれか一項に記載のシステム。
（項目１５３）
前記プロモーターが、ＩＬ−２、ＩＦＮ−γ、ＩＲＦ４、ＮＲ４Ａ１、ＰＲＤＭ１、ＴＢＸ２１、ＣＤ６９、ＣＤ２５、およびＧＺＭＢプロモーターから選択される、項目１２７〜１５２のいずれか一項に記載のシステム。
（項目１５４）
前記細胞が、免疫細胞、造血前駆細胞、または造血幹細胞である、項目１２７〜１５３のいずれか一項に記載のシステム。
（項目１５５）
前記細胞が免疫細胞である、項目１５４に記載のシステム。
（項目１５６）
前記免疫細胞がリンパ球である、項目１５５に記載のシステム。
（項目１５７）
前記リンパ球がＴ細胞である、項目１５６に記載のシステム。
（項目１５８）
前記リンパ球がナチュラルキラー（ＮＫ細胞）である、項目１５６に記載のシステム。
（項目１５９）
細胞における標的遺伝子の発現を調節する方法であって、
リガンドを、リガンド結合ドメイン、シグナル伝達ドメイン、および遺伝子モジュレーティングポリペプチド（ＧＭＰ）を含む膜貫通受容体に接触させるステップであって、前記ＧＭＰが、切断認識部位に連結されたアクチュエータ部分を含み、前記リガンドが前記リガンド結合ドメインに接触すると、前記シグナル伝達ドメインが前記細胞のシグナル伝達経路を活性化する、ステップと、
切断部分を、前記切断部分をコードする核酸配列を含む発現カセットから発現させるステップであって、前記核酸配列が、前記リガンドが前記リガンド結合ドメインに結合すると、前記シグナル伝達経路によって活性化されて前記切断部分の発現を駆動するプロモーターの制御下に置かれる、ステップと、
前記切断部分によって前記切断認識部位を切断して、前記膜貫通受容体から前記アクチュエータ部分を放出するステップとを含み、
放出された前記アクチュエータ部分が前記標的遺伝子の発現を調節する、方法。
（項目１６０）
細胞における標的遺伝子の発現を調節する方法であって、
リガンドを、リガンド結合ドメイン、シグナル伝達ドメイン、および切断部分を含む膜貫通受容体に接触させるステップであって、前記リガンドが前記リガンド結合ドメインに接触すると、前記シグナル伝達ドメインが前記細胞のシグナル伝達経路を活性化するステップと、
核外輸送シグナルペプチドに連結された遺伝子モジュレーティングポリペプチド（ＧＭＰ）を含む融合タンパク質を、核酸配列を含む発現カセットから発現させるステップであって、前記ＧＭＰが切断認識部位に連結されたアクチュエータ部分を含み、前記核酸配列が、前記リガンドが前記リガンド結合ドメインに結合すると、前記シグナル伝達経路によって活性化されて前記融合タンパク質の発現を駆動するプロモーターの制御下に置かれる、ステップと、
前記切断部分によって前記切断認識部位を切断して、前記アクチュエータ部分を放出するステップとを含み、
放出された前記アクチュエータ部分が標的遺伝子の発現を調節する、方法。
（項目１６１）
前記切断部分が、前記膜貫通受容体の細胞内領域に連結されている、項目１６０に記載の方法。
（項目１６２）
細胞における標的遺伝子の発現を調節する方法であって、
リガンドを、リガンド結合ドメインおよびシグナル伝達ドメインを含む膜貫通受容体に接触させるステップであって、前記リガンドが前記リガンド結合ドメインに接触すると、前記シグナル伝達ドメインが前記細胞のシグナル伝達経路を活性化するステップと、
切断部分を、前記切断部分をコードする核酸配列を含む発現カセットから発現させるステップであって、前記核酸配列が、前記リガンドが前記リガンド結合ドメインに結合すると、前記シグナル伝達経路によって活性化されて前記切断部分の発現を駆動するプロモーターの制御下に置かれる、ステップと、
前記切断部分によって、核外輸送シグナルペプチドに連結された遺伝子モジュレーティングポリペプチド（ＧＭＰ）を含む融合タンパク質の切断認識部位を切断するステップであって、前記ＧＭＰが、前記切断認識部位に連結されたアクチュエータ部分を含み、切断されると、前記アクチュエータ部分が放出されるステップとを含み、
放出された前記アクチュエータ部分が標的遺伝子の発現を調節する、方法。
（項目１６３）
細胞における標的遺伝子の発現を調節する方法であって、
リガンドを、リガンド結合ドメインおよびシグナル伝達ドメインを含む膜貫通受容体に接触させるステップであって、前記リガンドが前記リガンド結合ドメインに接触すると、前記シグナル伝達ドメインが前記細胞のシグナル伝達経路を活性化するステップと、
核外輸送シグナルペプチドに連結された遺伝子モジュレーティングポリペプチド（ＧＭＰ）を含む融合タンパク質を、前記融合タンパク質をコードする核酸配列を含む発現カセットから発現させるステップであって、前記ＧＭＰが、切断認識配列に連結されたアクチュエータ部分を含み、前記核酸配列が、前記リガンドが前記リガンド結合ドメインに結合すると、前記シグナル伝達経路によって活性化されて前記融合タンパク質の発現を駆動するプロモーターの制御下に置かれる、ステップと、
切断部分によって前記融合タンパク質の前記切断認識部位を切断して、前記アクチュエータ部分を放出するステップとを含み、
放出された前記アクチュエータ部分が標的遺伝子の発現を調節する、方法。
（項目１６４）
前記切断部分が、前記切断認識部位の近位に存在する場合、発現された前記融合タンパク質の前記切断認識部位を切断する、項目１６３に記載の方法。
（項目１６５）
細胞における標的遺伝子の発現を調節する方法であって、
リガンドを、リガンド結合ドメインおよびシグナル伝達ドメインを含む膜貫通受容体に接触させるステップであって、前記リガンドが前記リガンド結合ドメインに接触すると、前記シグナル伝達ドメインが前記細胞のシグナル伝達経路を活性化する、ステップと、
核外輸送シグナルペプチドに連結された遺伝子モジュレーティングポリペプチド（ＧＭＰ）を含む融合タンパク質を、前記融合タンパク質をコードする第１の核酸配列を含む第１の発現カセットから発現させるステップであって、前記ＧＭＰが切断認識配列に連結されたアクチュエータ部分を含み、前記核酸配列が、前記リガンドが前記リガンド結合ドメインに結合すると、前記シグナル伝達経路によって活性化されて前記融合タンパク質の発現を駆動する第１のプロモーターの制御下に置かれる、ステップと、
切断部分を、前記切断部分をコードする核酸配列を含む第２の発現カセットから発現させるステップであって、核酸が、前記リガンドが前記リガンド結合ドメインに結合すると、前記シグナル伝達経路によって活性化されて前記切断部分の発現を駆動する第２のプロモーターの制御下に置かれる、ステップと、
発現された前記切断部分を使用して、発現された前記融合タンパク質の前記切断認識部位を切断して、前記アクチュエータ部分を放出するステップとを含み、
放出された前記アクチュエータ部分が標的遺伝子の発現を調節する、方法。
（項目１６６）
細胞における標的遺伝子の発現を調節する方法であって、
リガンドを、リガンド結合ドメインおよびシグナル伝達ドメインを含む膜貫通受容体に接触させるステップであって、前記リガンドが前記リガンド結合ドメインに接触すると、前記シグナル伝達ドメインが前記細胞のシグナル伝達経路を活性化する、ステップと、
第１の部分的遺伝子モジュレーティングポリペプチド（ＧＭＰ）を、前記第１の部分的ＧＭＰをコードする第１の核酸配列を含む第１の発現カセットから発現させるステップであって、前記第１の部分的ＧＭＰが、アクチュエータ部分の第１の部分を含み、前記第１の核酸配列が、前記リガンドが前記リガンド結合ドメインに結合すると、前記シグナル伝達経路によって活性化されて前記第１の部分的ＧＭＰの発現を駆動する第１のプロモーターの制御下に置かれる、ステップと、
第２の部分的遺伝子モジュレーティングポリペプチド（ＧＭＰ）を、前記第２の部分的ＧＭＰをコードする第２の核酸配列を含む第２の発現カセットから発現させるステップであって、前記第２の部分的ＧＭＰが、アクチュエータ部分の第２の部分を含み、前記第２の核酸配列が、前記リガンドが前記リガンド結合ドメインに結合すると、前記シグナル伝達経路によって活性化されて前記第２の部分的ＧＭＰの発現を駆動する第２のプロモーターの制御下に置かれる、ステップと、
前記第１の部分的ＧＭＰおよび前記第２の部分的ＧＭＰの複合体を形成して、再構成されたアクチュエータ部分を形成するステップとを含み、
前記再構成されたアクチュエータ部分が前記標的遺伝子の発現を調節する、方法。
（項目１６７）
細胞における標的遺伝子の発現を調節する方法であって、
リガンドを、リガンド結合ドメインおよびシグナル伝達ドメインを含む膜貫通受容体に接触させるステップであって、前記リガンドが前記リガンド結合ドメインに結合すると、前記シグナル伝達ドメインが前記細胞のシグナル伝達経路を活性化する、ステップと、
第１の部分的切断部分を、前記第１の部分的切断部分をコードする第１の核酸配列を含む第１の発現カセットから発現させるステップであって、前記第１の核酸配列が、前記リガンドが前記リガンド結合ドメインに結合すると、前記シグナル伝達経路によって活性化されて前記第１の部分的切断部分の発現を駆動する第１のプロモーターの制御下に置かれる、ステップと、
第２の部分的切断部分を、前記第２の部分的切断部分をコードする第２の核酸配列を含む第２の発現カセットから発現させるステップであって、前記第２の核酸配列が、前記リガンドが前記リガンド結合ドメインに結合すると、前記シグナル伝達経路によって活性化されて前記第２の部分的切断部分の発現を駆動する第２のプロモーターの制御下に置かれる、ステップと、
前記第１および前記第２の部分的切断部分の複合体を形成して、再構成された切断部分を生じるステップと、
前記再構成された切断部分によって切断認識部位を切断して、前記再構成された切断部分を使用して核外輸送シグナルペプチドからアクチュエータ部分を放出するステップとを含み、
放出された前記アクチュエータ部分が前記標的遺伝子の発現を調節する、方法。
（項目１６８）
細胞における標的遺伝子の発現を調節する方法であって、
リガンドを、リガンド結合ドメインおよびシグナル伝達ドメインを含む膜貫通受容体に接触させるステップであって、前記リガンドが前記リガンド結合ドメインに接触すると、前記シグナル伝達ドメインが前記細胞のシグナル伝達経路を活性化する、ステップと、
（ｉ）切断部分および（ｉｉ）核外輸送シグナルペプチドに連結された遺伝子モジュレーティングポリペプチド（ＧＭＰ）を含む融合タンパク質のうちの一方または両方を、（ｉ）および（ｉｉ）のうちの一方または両方をコードする核酸配列を含む発現カセットから発現させるステップであって、前記ＧＭＰが、切断認識部位に連結されたアクチュエータ部分を含み、前記核酸配列が、リガンドが前記リガンド結合ドメインに結合すると、前記シグナル伝達経路によって活性化されるプロモーターの制御下に置かれる、ステップと、
前記切断部分によって前記切断認識部位が切断されると、前記アクチュエータ部分を放出するステップとを含み、
放出された前記アクチュエータ部分が標的ポリヌクレオチドの発現を調節する、方法。
（項目１６９）
前記膜貫通受容体が、内因性受容体または合成受容体を含む、項目１５９〜１６８のいずれか一項に記載の方法。
（項目１７０）
前記膜貫通受容体が、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、Ｇタンパク質共役受容体（ＧＰＣＲ）、インテグリン受容体、またはＮｏｔｃｈ受容体を含む、項目１５９〜１６８のいずれか一項に記載の方法。
（項目１７１）
前記アクチュエータ部分がポリヌクレオチド誘導型エンドヌクレアーゼを含む、項目１５９〜１７０のいずれか一項に記載の方法。
（項目１７２）
前記ポリヌクレオチド誘導型エンドヌクレアーゼがＲＮＡ誘導型エンドヌクレアーゼである、項目１７１に記載の方法。
（項目１７３）
前記ＲＮＡ誘導型エンドヌクレアーゼがＣａｓタンパク質である、項目１７２に記載の方法。
（項目１７４）
前記Ｃａｓタンパク質がＣａｓ９である、項目１７３に記載の方法。
（項目１７５）
Ｃａｓ９が、Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ  Ｃａｓ９である、項目１７４に記載の方法。
（項目１７６）
Ｃａｓ９が、Ｓ．ａｕｒｅｕｓ  Ｃａｓ９である、項目１７４に記載の方法。
（項目１７７）
前記Ｃａｓタンパク質が、ヌクレアーゼ活性を実質的に欠如する、項目１７３に記載の方法。
（項目１７８）
前記Ｃａｓタンパク質がＣｐｆ１である、項目１７３に記載の方法。
（項目１７９）
Ｃｐｆ１が、ヌクレアーゼ活性を実質的に欠如する、項目１７８に記載の方法。
（項目１８０）
前記アクチュエータ部分が転写活性化因子に連結されている、項目１５９〜１７９のいずれか一項に記載の方法。
（項目１８１）
前記アクチュエータ部分が転写抑制因子に連結されている、項目１５９〜１７９のいずれか一項に記載の方法。
（項目１８２）
前記プロモーターが、ＩＬ−２、ＩＦＮ−γ、ＩＲＦ４、ＮＲ４Ａ１、ＰＲＤＭ１、ＴＢＸ２１、ＣＤ６９、ＣＤ２５、およびＧＺＭＢプロモーターから選択される、項目１５９〜１８１のいずれか一項に記載の方法。
（項目１８３）
前記細胞が、免疫細胞、造血前駆細胞、または造血幹細胞である、項目１５９〜１８２のいずれか一項に記載の方法。
（項目１８４）
前記細胞が免疫細胞である、項目１８３に記載の方法。
（項目１８５）
前記免疫細胞がリンパ球である、項目１８４に記載の方法。
（項目１８６）
前記リンパ球がＴ細胞である、項目１８５に記載の方法。
（項目１８７）
前記リンパ球がナチュラルキラー（ＮＫ細胞）である、項目１８５に記載の方法。
（項目１８８）
前記標的遺伝子がサイトカインをコードする、項目１５９〜１８７のいずれか一項に記載の方法。
（項目１８９）
前記標的遺伝子が、免疫チェックポイント阻害剤をコードする、項目１５９〜１８７のいずれか一項に記載の方法。
（項目１９０）
前記免疫チェックポイント阻害剤が、ＰＤ−１、ＣＴＬＡ−４、ＬＡＧ３、ＴＩＭ−３、Ａ２ＡＲ、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＢＴＬＡ４、ＩＤＯ、ＫＩＲ、またはＶＩＳＴＡである、項目１８９に記載の方法。
（項目１９１）
前記標的遺伝子が、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）アルファ、ベータ、デルタ、またはガンマ鎖をコードする、項目１５９〜１８７のいずれか一項に記載の方法。