【手続補正書】
【提出日】令和3年2月9日(2021.2.9)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）第１の標的部位に対する第１の相同アーム対と、
（ｂ）第２の標的部位に対する第２の相同アーム対と、
（ｃ）１つ以上の導入遺伝子と、
を含む、ＤＮＡドナー修復鋳型。
【請求項２】
前記第１の相同アーム対が、前記第１の標的部位のＤＮＡ配列５’に対して相同である５’相同アームと、前記第１の標的部位のＤＮＡ配列３’に対して相同である３’相同アームと、を含む、請求項１に記載のＤＮＡドナー修復鋳型。
【請求項３】
前記第２の相同アーム対が、前記第２の標的部位のＤＮＡ配列５’に対して相同である５’相同アームと、前記第２の標的部位のＤＮＡ配列３’に対して相同である３’相同アームと、を含む、請求項１または請求項２に記載のＤＮＡドナー修復鋳型。
【請求項４】
前記第１の標的部位および／または前記第２の標的部位までの前記５’および３’相同アームの長さが独立して、約１００塩基対〜約５００塩基対から選択される、請求項１〜３のいずれか一項に記載のＤＮＡドナー修復鋳型。
【請求項５】
前記第１の標的部位の前記５’相同アームが、前記第２の標的部位の前記５’相同アームの５’に位置する、請求項１〜４のいずれか一項に記載のＤＮＡドナー修復鋳型。
【請求項６】
前記第１の標的部位の前記３’相同アームが、前記第２の標的部位の前記３’相同アームの５’に位置する、請求項１〜５のいずれか一項に記載のＤＮＡドナー修復鋳型。
【請求項７】
前記第１の標的部位の前記３’相同アームが、前記第２の標的部位の前記３’相同アームの３’に位置する、請求項１〜５のいずれか一項に記載のＤＮＡドナー修復鋳型。
【請求項８】
前記第１の標的部位の前記５’相同アームおよび前記３’相同アームが、第１の導入遺伝子に隣接し、前記第２の標的部位の前記５’相同アームおよび前記３’相同アームが、第２の導入遺伝子に隣接する、請求項１〜５のいずれか一項に記載のＤＮＡドナー修復鋳型。
【請求項９】
前記第１の標的部位および前記第２の標的部位が、異なる遺伝子中にある、請求項１〜８のいずれか一項に記載のＤＮＡドナー修復鋳型。
【請求項１０】
前記第１の標的部位または前記第２の標的部位が、ＴＣＲα遺伝子中または免疫系チェックポイント遺伝子中の操作されたヌクレアーゼ切断部位を含む、請求項１〜９のいずれか一項に記載のＤＮＡドナー修復鋳型。
【請求項１１】
前記第１の標的部位が、ＴＣＲα遺伝子中の操作されたヌクレアーゼ切断部位であり、前記第２の標的部位が、免疫系チェックポイント遺伝子中の操作されたヌクレアーゼ切断部位である、請求項１〜９のいずれか一項に記載のＤＮＡドナー修復鋳型。
【請求項１２】
前記第１の標的部位が、第１の免疫系チェックポイント遺伝子中の操作されたヌクレアーゼ切断部位であり、前記第２の標的部位が、第２の免疫系チェックポイント遺伝子中の操作されたヌクレアーゼ切断部位である、請求項１〜９のいずれか一項に記載のＤＮＡドナー修復鋳型。
【請求項１３】
前記免疫系チェックポイント遺伝子、または第１の免疫系チェックポイント遺伝子および第２の免疫系チェックポイント遺伝子がそれぞれ独立して、プログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ−１）、リンパ球活性化遺伝子３タンパク質（ＬＡＧ−３）、Ｔ細胞免疫グロブリンドメインおよびムチンドメインタンパク質３（ＴＩＭ−３）、細胞傷害性Ｔリンパ球抗原−４（ＣＴＬＡ−４）、バンドＴリンパ球アテニュエーター（ＢＴＬＡ）、Ｔ細胞免疫グロブリンおよび免疫受容体チロシン系阻害性モチーフドメイン（ＴＩＧＩＴ）、Ｔ細胞活性化のＶドメインＩｇ抑制因子（ＶＩＳＴＡ）、ならびにキラー細胞免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ）遺伝子からなる群から選択される、請求項１０〜１２のいずれか一項に記載のＤＮＡドナー修復鋳型。
【請求項１４】
任意で、組換えアデノ随伴ウイルスベクター（ｒＡＡＶ）またはレトロウイルスである、請求項１〜１３のいずれか一項に記載のＤＮＡドナー修復鋳型を含む、ウイルスベクター。
【請求項１５】
請求項１〜１３のいずれか一項に記載のＤＮＡドナー修復鋳型、または請求項１４に記載のウイルスベクターを含む、細胞。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００７１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００７１】
特定の実施形態において、血液学的悪性腫瘍は、白血病、リンパ腫、または多発性骨髄腫である。
[本発明1001]
ＤＮＡドナー修復鋳型であって、
（ａ）第1の標的部位に対する第1の相同アーム対と、
（ｂ）第2の標的部位に対する第2の相同アーム対と、
（ｃ）1つ以上の導入遺伝子と、を含む、ＤＮＡドナー修復鋳型。
[本発明1002]
前記第1の相同アーム対が、前記第1の標的部位のＤＮＡ配列5’に対して相同である5’相同アームと、前記第1の標的部位のＤＮＡ配列3’に対して相同である3’相同アームと、を含む、本発明1001のＤＮＡドナー修復鋳型。
[本発明1003]
前記第2の相同アーム対が、前記第2の標的部位のＤＮＡ配列5’に対して相同である5’相同アームと、前記第2の標的部位のＤＮＡ配列3’に対して相同である3’相同アームと、を含む、本発明1001または本発明1002のＤＮＡドナー修復鋳型。
[本発明1004]
前記第1の標的部位および／または前記第2の標的部位までの前記5’および3’相同アームの長さが独立して、約100塩基対〜約2500塩基対から選択される、本発明1001〜1003のいずれかのＤＮＡドナー修復鋳型。
[本発明1005]
前記第1の標的部位および／または前記第2の標的部位までの前記5’および3’相同アームの長さが独立して、約100塩基対〜約1500塩基対から選択される、本発明1001〜1004のいずれかのＤＮＡドナー修復鋳型。
[本発明1006]
前記第1の標的部位および／または前記第2の標的部位までの前記5’および3’相同アームの長さが独立して、約100塩基対〜約1000塩基対から選択される、本発明1001〜1005のいずれかのＤＮＡドナー修復鋳型。
[本発明1007]
前記第1の標的部位および／または前記第2の標的部位までの前記5’および3’相同アームの長さが独立して、約100塩基対〜約500塩基対から選択される、本発明1001〜1006のいずれかのＤＮＡドナー修復鋳型。
[本発明1008]
前記第1の標的部位および／または前記第2の標的部位までの前記5’および3’相同アームの長さが、約500塩基対である、本発明1001〜1007のいずれかのＤＮＡドナー修復鋳型。
[本発明1009]
前記第1の標的部位および／または前記第2の標的部位までの前記5’および3’相同アームの長さが、約300塩基対である、本発明1001〜1008のいずれかのＤＮＡドナー修復鋳型。
[本発明1010]
前記第1の標的部位および／または前記第2の標的部位までの前記5’および3’相同アームの長さが、約100塩基対である、本発明1001〜1009のいずれかのＤＮＡドナー修復鋳型。
[本発明1011]
前記第1の標的部位の前記5’相同アームが、前記第2の標的部位の前記5’相同アームの5’に位置する、本発明1001〜1010のいずれかのＤＮＡドナー修復鋳型。
[本発明1012]
前記第1の標的部位の前記3’相同アームが、前記第2の標的部位の前記3’相同アームの5’に位置する、本発明1001〜1011のいずれかのＤＮＡドナー修復鋳型。
[本発明1013]
前記第1の標的部位の前記3’相同アームが、前記第2の標的部位の前記3’相同アームの3’に位置する、本発明1001〜1011のいずれかのＤＮＡドナー修復鋳型。
[本発明1014]
前記第1の標的部位の前記5’相同アームおよび前記3’相同アームが、第1の導入遺伝子に隣接し、前記第2の標的部位の前記5’相同アームおよび前記3’相同アームが、第2の導入遺伝子に隣接する、本発明1001〜1011のいずれかのＤＮＡドナー修復鋳型。
[本発明1015]
前記第1の標的部位および前記第2の標的部位が、異なる遺伝子中にある、本発明1001〜1014のいずれかのＤＮＡドナー修復鋳型。
[本発明1016]
前記第1の標的部位または前記第2の標的部位が、ＴＣＲα遺伝子中の操作されたヌクレアーゼ切断部位を含む、本発明1001〜1015のいずれかのＤＮＡドナー修復鋳型。
[本発明1017]
前記第1の標的部位または前記第2の標的部位が、免疫系チェックポイント遺伝子中または免疫抑制シグナル伝達成分をコードする遺伝子中の操作されたヌクレアーゼ切断部位を含む、本発明1001〜1015のいずれかのＤＮＡドナー修復鋳型。
[本発明1018]
前記第1の標的部位が、ＴＣＲα遺伝子中の操作されたヌクレアーゼ切断部位であり、前記第2の標的部位が、免疫系チェックポイント遺伝子中または免疫抑制シグナル伝達成分をコードする遺伝子中の操作されたヌクレアーゼ切断部位である、本発明1001〜1015のいずれかのＤＮＡドナー修復鋳型。
[本発明1019]
前記第1の標的部位が、第1の免疫系チェックポイント遺伝子中または免疫抑制シグナル伝達成分をコードする遺伝子中の操作されたヌクレアーゼ切断部位であり、前記第2の標的部位が、第2の免疫系チェックポイント遺伝子中または免疫抑制シグナル伝達成分をコードする遺伝子中の操作されたヌクレアーゼ切断部位である、本発明1001〜1015のいずれかのＤＮＡドナー修復鋳型。
[本発明1020]
前記免疫系チェックポイント遺伝子が独立して、プログラム細胞死タンパク質1（ＰＤ−1）、リンパ球活性化遺伝子3タンパク質（ＬＡＧ−3）、Ｔ細胞免疫グロブリンドメインおよびムチンドメインタンパク質3（ＴＩＭ−3）、細胞傷害性Ｔリンパ球抗原−4（ＣＴＬＡ−4）、バンドＴリンパ球アテニュエーター（ＢＴＬＡ）、Ｔ細胞免疫グロブリンおよび免疫受容体チロシン系阻害性モチーフドメイン（ＴＩＧＩＴ）、Ｔ細胞活性化のＶドメインＩｇ抑制因子（ＶＩＳＴＡ）、ならびにキラー細胞免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ）遺伝子からなる群から選択される、本発明1017〜1019のいずれかのＤＮＡドナー修復鋳型。
[本発明1021]
免疫抑制シグナル伝達成分をコードする前記遺伝子が独立して、インターロイキン受容体10アルファ、形質転換成長因子β受容体Ｉ（ＴＧＦβＲＩ）、形質転換成長因子β受容体ＩＩ（ＴＧＦβＲＩＩ）、アリール炭化水素受容体（ＡＨＲ）、血清およびグルココルチコイド制御キナーゼ1（ＳＧＫ1）、結節性硬化症複合体2（ＴＳＣ2）、フォンヒッペル・リンダウ腫瘍抑制因子（ＶＨＬ）、アデノシンＡ2ａ受容体（Ａ2ＡＲ）、ならびにＣｂｌ癌原遺伝子Ｂ（ＣＢＬＢ）からなる群から選択される、本発明1017〜1019のいずれかのＤＮＡドナー修復鋳型。
[本発明1022]
前記操作されたヌクレアーゼが、メガヌクレアーゼ、メガＴＡＬ、ＴＡＬＥＮ、ＺＦＮ、およびＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓヌクレアーゼからなる群から選択される、本発明1016〜1021のいずれかのＤＮＡドナー修復鋳型。
[本発明1023]
前記操作されたヌクレアーゼが、Ｉ−ＡａｂＭＩ、Ｉ−ＡａｅＭＩ、Ｉ−ＡｎｉＩ、Ｉ−ＡｐａＭＩ、Ｉ−ＣａｐＩＩＩ、Ｉ−ＣａｐＩＶ、Ｉ−ＣｋａＭＩ、Ｉ−ＣｐａＭＩ、Ｉ−ＣｐａＭＩＩ、Ｉ−ＣｐａＭＩＩＩ、Ｉ−ＣｐａＭＩＶ、Ｉ−ＣｐａＭＶ、Ｉ−ＣｐａＶ、Ｉ−ＣｒａＭＩ、Ｉ−ＥｊｅＭＩ、Ｉ−ＧｐｅＭＩ、Ｉ−ＧｐｉＩ、Ｉ−ＧｚｅＭＩ、Ｉ−ＧｚｅＭＩＩ、Ｉ−ＧｚｅＭＩＩＩ、Ｉ−ＨｊｅＭＩ、Ｉ−ＬｔｒＩＩ、Ｉ−ＬｔｒＩ、Ｉ−ＬｔｒＷＩ、Ｉ−ＭｐｅＭＩ、Ｉ−ＭｖｅＭＩ、Ｉ−ＮｃｒＩＩ、Ｉ−Ｎｃｒｌ、Ｉ−ＮｃｒＭＩ、Ｉ−ＯｈｅＭＩ、Ｉ−ＯｎｕＩ、Ｉ−ＯｓｏＭＩ、Ｉ−ＯｓｏＭＩＩ、Ｉ−ＯｓｏＭＩＩＩ、Ｉ−ＯｓｏＭＩＶ、Ｉ−ＰａｎＭＩ、Ｉ−ＰａｎＭＩＩ、Ｉ−ＰａｎＭＩＩＩ、Ｉ−ＰｎｏＭＩ、Ｉ−ＳｃｕＭＩ、Ｉ−ＳｍａＭＩ、Ｉ−ＳｓｃＭＩ、およびＩ−Ｖｄｉ141Ｉからなる群から選択されるＬＡＧＬＩＤＡＤＧホーミングエンドヌクレアーゼ（ＬＨＥ）から操作されたメガヌクレアーゼである、本発明1016〜1022のいずれかのＤＮＡドナー修復鋳型。
[本発明1024]
前記操作されたヌクレアーゼが、Ｉ−ＣｐａＭＩ、Ｉ−ＨｊｅＭＩ、Ｉ−ＯｎｕＩ、Ｉ−ＰａｎＭＩ、およびＳｍａＭＩからなる群から選択されるＬＨＥから操作されたメガヌクレアーゼである、本発明1016〜1023のいずれかのＤＮＡドナー修復鋳型。
[本発明1025]
前記操作されたヌクレアーゼが、Ｉ−ＯｎｕＩ  ＬＨＥである、本発明1016〜1024のいずれかのＤＮＡドナー修復鋳型。
[本発明1026]
前記操作されたヌクレアーゼが、Ｉ−ＳｍａＭＩ  ＬＨＥである、本発明1016〜1024のいずれかのＤＮＡドナー修復鋳型。
[本発明1027]
前記操作されたヌクレアーゼが、ＴＡＬＥ  ＤＮＡ結合ドメインおよび本発明1022〜1026のいずれかの操作されたメガヌクレアーゼを含むメガＴＡＬである、本発明1016〜1022のいずれかのＤＮＡドナー修復鋳型。
[本発明1028]
前記ＴＡＬＥ結合ドメインが、約9．5個のＴＡＬＥ反復単位〜約15．5個のＴＡＬＥ反復単位を含む、本発明1027のＤＮＡドナー修復鋳型。
[本発明1029]
前記ＴＡＬＥ結合ドメインが、約9．5個のＴＡＬＥ反復単位、約10．5個のＴＡＬＥ反復単位、約11．5個のＴＡＬＥ反復単位、約12．5個のＴＡＬＥ反復単位、約13．5個のＴＡＬＥ反復単位、約14．5個のＴＡＬＥ反復単位、または約15．5個のＴＡＬＥ反復単位を含む、本発明1027のＤＮＡドナー修復鋳型。
[本発明1030]
前記1つ以上の導入遺伝子が、免疫能エンハンサー、免疫抑制シグナルダンパー、または操作された抗原受容体をコードするポリヌクレオチドを含む、本発明1001〜1029のいずれかのＤＮＡドナー修復鋳型。
[本発明1031]
前記1つ以上の導入遺伝子が、前記免疫能エンハンサー、前記免疫抑制シグナルダンパー、または前記操作された抗原受容体をコードする前記ポリヌクレオチドに操作可能に連結したＲＮＡポリメラーゼＩＩプロモーターを更に含む、本発明1001〜1030のいずれかのＤＮＡドナー修復鋳型。
[本発明1032]
前記1つ以上の導入遺伝子が、1つ以上のＣＡＲをコードする、本発明1030または本発明1031のＤＮＡドナー修復鋳型。
[本発明1033]
前記1つ以上のＣＡＲが、抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲおよび抗ＣＤ19  ＣＡＲからなる群から選択される、本発明1032のＤＮＡドナー修復鋳型。
[本発明1034]
前記ＲＮＡポリメラーゼＩＩプロモーターが、短いＥＦ1αプロモーター、長いＥＦ1αプロモーター、ヒトＲＯＳＡ26遺伝子座、ユビキチンＣ（ＵＢＣ）プロモーター、ホスホグリセリン酸キナーゼ−1（ＰＧＫ）プロモーター、サイトメガロウイルスエンハンサー／ニワトリβ−アクチン（ＣＡＧ）プロモーター、β−アクチンプロモーターおよび骨髄増殖性肉腫ウイルスエンハンサー、負の制御領域欠失、ｄｌ587ｒｅｖプライマー結合部位置換（ＭＮＤ）プロモーターからなる群から選択される、本発明1031のＤＮＡドナー修復鋳型。
[本発明1035]
前記ポリヌクレオチドが、1つ以上の免疫能エンハンサー、免疫抑制シグナルダンパー、または操作された抗原受容体に操作可能に連結した、それらの間に散在した、かつ／またはそれらに隣接する、1つ以上の自己切断ウイルスペプチドを更にコードする、本発明1030のＤＮＡドナー修復鋳型。
[本発明1036]
前記自己切断ウイルスペプチドが、2Ａペプチドである、本発明1035のＤＮＡドナー修復鋳型。
[本発明1037]
前記ポリヌクレオチドが、異種ポリアデニル化シグナルを更に含む、本発明1030〜1036のいずれかのＤＮＡドナー修復鋳型。
[本発明1038]
前記1つ以上の免疫抑制シグナルダンパーが、免疫抑制因子に対抗する酵素機能；免疫抑制因子に結合するエキソドメイン（任意で、前記エキソドメインが、抗体もしくはその抗原結合断片である）；免疫抑制因子に結合するエキソドメインおよび膜貫通ドメイン；または免疫抑制因子に結合するエキソドメイン、膜貫通ドメイン、および免疫抑制シグナルを伝達することができない修飾エンドドメインを含む、本発明1030〜1037のいずれかのＤＮＡドナー修復鋳型。
[本発明1039]
前記1つ以上の免疫能エンハンサーが独立して、二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー分子（ＢｉＴＥ）、免疫増強因子、およびフリップ受容体からなる群から選択される、本発明1030〜1037のいずれかのＤＮＡドナー修復鋳型。
[本発明1040]
前記1つ以上の免疫能エンハンサーが独立して、サイトカイン、ケモカイン、細胞毒、サイトカイン受容体、およびそれらのバリアントからなる群から選択される、本発明1030〜1037のいずれかのＤＮＡドナー修復鋳型。
[本発明1041]
前記1つ以上の操作された抗原受容体が独立して、操作されたＴＣＲ、ＣＡＲ、ＤＡＲＩＣ、またはゼータカインからなる群から選択される、本発明1030〜1035のいずれかのＤＮＡドナー修復鋳型。
[本発明1042]
前記1つ以上の操作された抗原受容体が、ＣＡＲである、本発明1041のＤＮＡドナー修復鋳型。
[本発明1043]
前記1つ以上のＣＡＲが、抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲおよび抗ＣＤ19  ＣＡＲからなる群から選択される、本発明1042のＤＮＡドナー修復鋳型。
[本発明1044]
本発明1001〜1043のいずれかのＤＮＡドナー修復鋳型を含む、ウイルスベクター。
[本発明1045]
前記ウイルスベクターが、組換えアデノ随伴ウイルスベクター（ｒＡＡＶ）またはレトロウイルスである、本発明1044のウイルスベクター。
[本発明1046]
前記ｒＡＡＶが、ＡＡＶ2由来の1つ以上のＩＴＲを有する、本発明1045のウイルスベクター。
[本発明1047]
前記ｒＡＡＶが、ＡＡＶ1、ＡＡＶ2、ＡＡＶ3、ＡＡＶ4、ＡＡＶ5、ＡＡＶ6、ＡＡＶ7、ＡＡＶ8、ＡＡＶ9、およびＡＡＶ10からなる群から選択される血清型を有する、本発明1045または本発明1046のウイルスベクター。
[本発明1048]
前記ｒＡＡＶが、ＡＡＶ6血清型を有する、本発明1045のウイルスベクター。
[本発明1049]
前記レトロウイルスが、レンチウイルスである、本発明1045のウイルスベクター。
[本発明1050]
前記レンチウイルスが、インテグラーゼ欠損レンチウイルスである、本発明1049のウイルスベクター。
[本発明1051]
本発明1001〜1043のいずれかのＤＮＡドナー修復鋳型、または本発明1044〜1050のいずれかのウイルスベクターを含む、細胞。
[本発明1052]
前記1つ以上の導入遺伝子が、相同性指向性修復によって前記第1の標的部位および前記第2の標的部位に挿入されている、本発明1051の細胞。
[本発明1053]
前記細胞が、造血細胞である、本発明1051または本発明1052の細胞。
[本発明1054]
前記細胞が、免疫エフェクター細胞である、本発明1051〜1053のいずれかの細胞。
[本発明1055]
前記細胞が、ＣＤ3＋、ＣＤ4＋、ＣＤ8＋、またはそれらの組み合わせである、本発明1051〜1054のいずれかの細胞。
[本発明1056]
前記細胞が、Ｔ細胞である、本発明1051〜1055のいずれかの細胞。
[本発明1057]
前記細胞が、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、またはヘルパーＴ細胞である、本発明1051〜1056のいずれかの細胞。
[本発明1058]
前記細胞の供給源が、末梢血単核球、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織、感染部位由来の組織、腹水、胸水、脾臓組織、または腫瘍である、本発明1051〜1057のいずれかの細胞。
[本発明1059]
本発明1001〜1043のいずれかのＤＮＡドナー修復鋳型、本発明1044〜1050のいずれかのウイルスベクター、または本発明1051〜1058のいずれかの細胞を含む、組成物。
[本発明1060]
生理学的に許容される賦形剤と、本発明1001〜1043のいずれかのＤＮＡドナー修復鋳型、本発明1044〜1050のいずれかのウイルスベクター、または本発明1051〜1058のいずれかの細胞と、を含む、組成物。
[本発明1061]
癌、感染性疾患、自己免疫疾患、炎症性疾患、および免疫不全、またはそれらに関連する病態の少なくとも1つの症状を治療、予防、または寛解する方法であって、有効量の本発明1059または本発明1060の組成物を対象に投与することと、任意で、前記第1の標的部位にＤＳＢを、および前記第2の標的部位にＤＳＢを導入するように設計された、1つ以上の操作されたヌクレアーゼをコードする、有効量の1つ以上のポリヌクレオチドを前記対象に投与することと、を含む、方法。
[本発明1062]
固形癌を治療する方法であって、有効量の本発明1059または本発明1060の組成物を前記対象に投与することと、任意で、前記第1の標的部位および前記第2の標的部位にＤＳＢを導入するように設計された、1つ以上の操作されたヌクレアーゼをコードする、有効量の1つ以上のポリヌクレオチドを前記対象に投与することと、を含む、方法。
[本発明1063]
前記固形癌が、肝臓癌、膵臓癌、肺癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、精巣癌、膀胱癌、脳癌、肉腫、頭頸部癌、骨癌、甲状腺癌、腎臓癌、または皮膚癌を含む、本発明1062の方法。
[本発明1064]
血液学的悪性腫瘍を治療する方法であって、有効量の本発明1059または本発明1060の組成物を前記対象に投与することと、任意で、前記第1の標的部位および前記第2の標的部位にＤＳＢを導入するように設計された、1つ以上の操作されたヌクレアーゼをコードする、有効量の1つ以上のポリヌクレオチドを前記対象に投与することと、を含む、方法。
[本発明1065]
前記血液学的悪性腫瘍が、白血病、リンパ腫、または多発性骨髄腫である、本発明1064の方法。
[本発明1066]
前記第1の標的部位または前記第2の標的部位が、ＴＣＲα遺伝子中の操作されたヌクレアーゼ切断部位を含む、本発明1001〜1015のいずれかのＤＮＡドナー修復鋳型。
[本発明1067]
前記第1の標的部位または前記第2の標的部位が、ＢＣＬ11Ａ遺伝子座、ＫＬＦ1遺伝子座、ＳＯＸ6遺伝子座、ＧＡＴＡ1遺伝子座、およびＬＳＤ1遺伝子座を含むがこれらに限定されない、γ−グロビン遺伝子発現およびＨｂＦの抑圧に寄与する遺伝子、β−グロビン遺伝子座のサラセミア対立遺伝子、またはβ−グロビン遺伝子座の鎌状化対立遺伝子中の操作されたヌクレアーゼ切断部位を含む、本発明1001〜1015のいずれかのＤＮＡドナー修復鋳型。
[本発明1068]
前記操作されたヌクレアーゼが、メガヌクレアーゼ、メガＴＡＬ、ＴＡＬＥＮ、ＺＦＮ、およびＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓヌクレアーゼからなる群から選択される、本発明1067のＤＮＡドナー修復鋳型。
[本発明1069]
前記操作されたヌクレアーゼが、Ｉ−ＡａｂＭＩ、Ｉ−ＡａｅＭＩ、Ｉ−ＡｎｉＩ、Ｉ−ＡｐａＭＩ、Ｉ−ＣａｐＩＩＩ、Ｉ−ＣａｐＩＶ、Ｉ−ＣｋａＭＩ、Ｉ−ＣｐａＭＩ、Ｉ−ＣｐａＭＩＩ、Ｉ−ＣｐａＭＩＩＩ、Ｉ−ＣｐａＭＩＶ、Ｉ−ＣｐａＭＶ、Ｉ−ＣｐａＶ、Ｉ−ＣｒａＭＩ、Ｉ−ＥｊｅＭＩ、Ｉ−ＧｐｅＭＩ、Ｉ−ＧｐｉＩ、Ｉ−ＧｚｅＭＩ、Ｉ−ＧｚｅＭＩＩ、Ｉ−ＧｚｅＭＩＩＩ、Ｉ−ＨｊｅＭＩ、Ｉ−ＬｔｒＩＩ、Ｉ−ＬｔｒＩ、Ｉ−ＬｔｒＷＩ、Ｉ−ＭｐｅＭＩ、Ｉ−ＭｖｅＭＩ、Ｉ−ＮｃｒＩＩ、Ｉ−Ｎｃｒｌ、Ｉ−ＮｃｒＭＩ、Ｉ−ＯｈｅＭＩ、Ｉ−ＯｎｕＩ、Ｉ−ＯｓｏＭＩ、Ｉ−ＯｓｏＭＩＩ、Ｉ−ＯｓｏＭＩＩＩ、Ｉ−ＯｓｏＭＩＶ、Ｉ−ＰａｎＭＩ、Ｉ−ＰａｎＭＩＩ、Ｉ−ＰａｎＭＩＩＩ、Ｉ−ＰｎｏＭＩ、Ｉ−ＳｃｕＭＩ、Ｉ−ＳｍａＭＩ、Ｉ−ＳｓｃＭＩ、およびＩ−Ｖｄｉ141Ｉからなる群から選択されるＬＡＧＬＩＤＡＤＧホーミングエンドヌクレアーゼ（ＬＨＥ）から操作されたメガヌクレアーゼである、本発明1067または1068のＤＮＡドナー修復鋳型。
[本発明1070]
前記操作されたヌクレアーゼが、Ｉ−ＣｐａＭＩ、Ｉ−ＨｊｅＭＩ、Ｉ−ＯｎｕＩ、Ｉ−ＰａｎＭＩ、およびＳｍａＭＩからなる群から選択されるＬＨＥから操作されたメガヌクレアーゼである、本発明1067〜1069のいずれかのＤＮＡドナー修復鋳型。
[本発明1071]
前記操作されたヌクレアーゼが、Ｉ−ＯｎｕＩ  ＬＨＥである、本発明1067〜1070のいずれかのＤＮＡドナー修復鋳型。
[本発明1072]
前記操作されたヌクレアーゼが、Ｉ−ＳｍａＭＩ  ＬＨＥである、本発明1067〜1070のいずれかのＤＮＡドナー修復鋳型。
[本発明1073]
前記操作されたヌクレアーゼが、ＴＡＬＥ  ＤＮＡ結合ドメインおよび本発明1068〜1072のいずれかの操作されたメガヌクレアーゼを含むメガＴＡＬである、本発明1067〜1072のいずれかのＤＮＡドナー修復鋳型。
[本発明1074]
前記ＴＡＬＥ結合ドメインが、約9．5個のＴＡＬＥ反復単位〜約15．5個のＴＡＬＥ反復単位を含む、本発明1073のＤＮＡドナー修復鋳型。
[本発明1075]
前記ＴＡＬＥ結合ドメインが、約9．5個のＴＡＬＥ反復単位、約10．5個のＴＡＬＥ反復単位、約11．5個のＴＡＬＥ反復単位、約12．5個のＴＡＬＥ反復単位、約13．5個のＴＡＬＥ反復単位、約14．5個のＴＡＬＥ反復単位、または約15．5個のＴＡＬＥ反復単位を含む、本発明1073のＤＮＡドナー修復鋳型。
[本発明1076]
前記1つ以上の導入遺伝子が、β−グロビン、δ−グロビン、γ−グロビン、β−グロビンＡ−Ｔ87Ｑ、β−グロビンＡ−Ｔ87Ｑ／Ｋ120Ｅ／Ｋ95Ｅ、またはβ−グロビンＡ−Ｔ87Ｑ／Ｇ16Ｄ／Ｅ22Ａをコードするポリヌクレオチドを含む、本発明1067〜1075のいずれかのＤＮＡドナー修復鋳型。
[本発明1077]
前記1つ以上の導入遺伝子が、前記グロビンまたは抗鎌状化グロビンをコードする前記ポリヌクレオチドに操作可能に連結したＲＮＡポリメラーゼＩＩプロモーターを更に含む、本発明1067〜1076のいずれかのＤＮＡドナー修復鋳型。
[本発明1078]
前記ＲＮＡポリメラーゼＩＩプロモーターが、ヒトβ−グロビンＬＣＲおよびプロモーター、短いＥＦ1αプロモーター、長いＥＦ1αプロモーター、ヒトＲＯＳＡ26遺伝子座、ユビキチンＣ（ＵＢＣ）プロモーター、ホスホグリセリン酸キナーゼ−1（ＰＧＫ）プロモーター、サイトメガロウイルスエンハンサー／ニワトリβ−アクチン（ＣＡＧ）プロモーター、β−アクチンプロモーターおよび骨髄増殖性肉腫ウイルスエンハンサー、負の制御領域欠失、ｄｌ587ｒｅｖプライマー結合部位置換（ＭＮＤ）プロモーターからなる群から選択される、本発明1077のＤＮＡドナー修復鋳型。
[本発明1079]
前記ポリヌクレオチドが、1つ以上のグロビンまたは抗鎌状化グロビンに操作可能に連結した、それらの間に散在した、かつ／またはそれらに隣接する、1つ以上の自己切断ウイルスペプチドを更にコードする、本発明1078のＤＮＡドナー修復鋳型。
[本発明1080]
本発明1067〜1079のいずれかのＤＮＡドナー修復鋳型を含む、ウイルスベクター。
[本発明1081]
前記ウイルスベクターが、組換えアデノ随伴ウイルスベクター（ｒＡＡＶ）またはレトロウイルスである、本発明1080のウイルスベクター。
[本発明1082]
前記ｒＡＡＶが、ＡＡＶ2由来の1つ以上のＩＴＲを有する、本発明1081のウイルスベクター。
[本発明1083]
前記ｒＡＡＶが、ＡＡＶ1、ＡＡＶ2、ＡＡＶ3、ＡＡＶ4、ＡＡＶ5、ＡＡＶ6、ＡＡＶ7、ＡＡＶ8、ＡＡＶ9、およびＡＡＶ10からなる群から選択される血清型を有する、本発明1081または本発明1082のウイルスベクター。
[本発明1084]
前記レトロウイルスが、レンチウイルスである、本発明1081のウイルスベクター。
[本発明1085]
前記レンチウイルスが、インテグラーゼ欠損レンチウイルスである、本発明1081のウイルスベクター。
[本発明1086]
本発明1067〜1079のいずれかのＤＮＡドナー修復鋳型、または本発明1080〜1085のいずれかのウイルスベクターを含む、細胞。
[本発明1087]
前記1つ以上の導入遺伝子が、相同性指向性修復によって前記第1の標的部位および前記第2の標的部位に挿入されている、本発明1086の細胞。
[本発明1088]
前記細胞が、造血細胞である、本発明1086または本発明1087の細胞。
[本発明1089]
前記細胞が、ＣＤ34＋細胞である、本発明1086〜1088のいずれかの細胞。
[本発明1090]
前記細胞が、ＣＤ133＋細胞である、本発明1086〜1089のいずれかの細胞。
[本発明1091]
本発明1067〜1079のいずれかのＤＮＡドナー修復鋳型、本発明1080〜1085のいずれかのウイルスベクター、または本発明1086〜1090のいずれかの細胞を含む、組成物。
[本発明1092]
生理学的に許容される賦形剤と、本発明1067〜1079のいずれかのＤＮＡドナー修復鋳型、本発明1080〜1085のいずれかのウイルスベクター、または本発明1086〜1090のいずれかの細胞と、を含む、組成物。
[本発明1093]
対象におけるヘモグロビン異常症を治療する方法であって、本発明1086〜1090のいずれかの細胞または本発明1091または本発明1092の組成物を前記対象に投与することを含む、方法。
[本発明1094]
対象におけるヘモグロビン異常症の少なくとも1つの症状を寛解する方法であって、本発明1086〜1090のいずれかの細胞または本発明1091または本発明1092の組成物を前記対象に投与することを含む、方法。
[本発明1095]
対象におけるサラセミアを治療する方法であって、有効量の本発明1086〜1090のいずれかの細胞または本発明1091または本発明1092の組成物を前記対象に投与することを含む、方法。
[本発明1096]
前記サラセミアが、β−サラセミアである、本発明1095の方法。
[本発明1097]
対象における鎌状赤血球症を治療する方法であって、有効量の本発明1086〜1090のいずれかの細胞または本発明1091または本発明1092の組成物を前記対象に投与することを含む、方法。
[本発明1098]
対象におけるβ−サラセミアを治療する方法であって、有効量の本発明1086〜1090のいずれかの細胞または本発明1091または本発明1092の組成物を前記対象に投与することを含む、方法。