【手続補正書】
【提出日】令和3年6月29日(2021.6.29)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくとも１つの担体、賦形剤または希釈剤とともに、ヒト口腔粘膜幹細胞から分泌される物質（ｈＯＭＳＣ由来セクレトーム）を含む、無細胞組成物であって、前記無細胞組成物が：
（ｉ）間質細胞由来因子１（ＣＸＣＬ１２／ＳＤＦ１）、スーパーオキシドジスムターゼ［Ｃｕ−Ｚｎ］（ＳＯＤ１）、中脳星状膠細胞由来神経栄養因子（ＭＡＮＦ）、シスタチンＣ（ＣＳＴ３）、ガレクチン１（ＬＧＡＬＳ１）、グリア由来ネキシン（ＳＥＲＰＩＮＥ２）、インスリン様成長因子ＩＩ（ＩＧＦ２）、潜在型トランスフォーミング成長因子ベータ結合タンパク質１（ＬＴＢＰ１）、潜在型トランスフォーミング成長因子ベータ結合タンパク質２（ＬＴＢＰ２）、潜在型トランスフォーミング成長因子ベータ結合タンパク質３フラグメント（ＬＴＢＰ３）、潜在型トランスフォーミング成長因子ベータ結合タンパク質４（ＬＴＢＰ４）、神経芽細胞分化関連タンパク質（ＡＨＮＡＫ）および色素上皮由来因子（ＳＥＲＰＩＮＦ１／ＰＥＤＦ）からなる群からの少なくとも１つのタンパク質、または
（ｉｉ）肝細胞成長因子（ＨＧＦ）、胎盤成長因子（ＰＩＧＦ）、マクロファージコロニー刺激因子（ＭＣＳＦ）、血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）、顆粒球コロニー刺激因子（ＧＣＳＦ）、マクロファージ炎症性タンパク質３（ＭＩＰ−３ａ）、成長調節発癌遺伝子アルファ（ＧＲＯ−ａもしくはＣＸＣＬ１）、マクロファージ由来／ＣＣＬ２２ケモカイン（ＭＤＣもしくはＣＣＬ２２）、成長調節発癌遺伝子（ＧＲＯ）、ＩＧＦＢＰ−２、ニューロトロフィン４（ＮＴ−４）、単球化学誘引物質タンパク質２（ＭＣＰ−２／ＣＣＬ８）、インスリン成長因子１（ＩＧＦ−１）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、インターロイキン２（ＩＬ−２）および脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）からなる群より選択される少なくとも１つのタンパク質、または
（ｉｉｉ）１ＳＶ、３ＳＶ、ＡＣＴＧ２、ＡＤＡＭ１０、ＡＤＡＭＴＳＬ１、ＡＤＭ、ＡＮＸＡ４、ＡＰＯＤ、ＣＡＬＭ２、ＣＤ１０９、ＣＤ５９、ＣＤＨ６、ＣＦＤ、ＣＯＬ１５Ａ１、ＣＯＬ１Ａ２、ＣＯＬＥＣ１２、ＣＴＨＲＣ１、ＣＴＳＣ、ＣＴＳＬ、ＣＸＣＬ１２、ＤＣＤ、ＤＤＡＨ２、ＤＫＫ１、ＤＳＧ１、ＤＳＰ、ＤＳＴＮ、ＥＣＨ１、ＥＤＩＬ３、ＥＦＥＭＰ１、ＥＬＮ、ＦＬＧ、ＧＮＢ２、ＧＲＥＭ２、Ｈ３Ｆ３Ｂ、ＨＢＡ１、ＨＩＳＴ１Ｈ２ＡＨ、ＨＩＳＴ１Ｈ２ＢＫ、ＨＩＳＴ１Ｈ４Ａ、ＨＭＧＮ２、ＨＮＲＮＰＡＢ、ＨＳＰ９０ＡＡ１、ＨＳＰＡ１Ａ、ＨＳＰＧ２、ＩＧＦＢＰ５、ＪＵＰ、ＫＨＳＲＰ、ＬＤＨＡ、ＭＮＢ２、ＬＴＢＰ４、ＭＡＮ１Ａ１、ＭＦＡＰ４、ＭＭＰ１、ＭＭＰ１４、ＭＴ２Ａ、ＮＢＬ１、ＯＭＤ、ＰＦＮ１、ＰＩ１６、ＰＳＧ５、ＰＳＭＢ６、ＰＴＧＤＳ、ＲＡＲＲＥＳ２、ＳＬＩＴ３、ＳＰＯＣＫ１、ＳＰＴＢＮ４、ＳＴＯＭ、ＴＭＳＢ１０、ＴＭＳＢ４Ｘ、ＴＮＦＡＩＰ６、ＴＮＸＢ、ＴＰＩ１、ＴＵＢＡ１Ｃ、ＵＢＣ、ＶＩＴおよびＷＮＴ５Ａからなる群より選択される少なくとも１つのタンパク質、または
（ｉｖ）ｈｓａ−ｍｉＲ−４４５４＋ｈｓａ−ｍｉＲ−７９７５、ｈｓａ−ｍｉＲ−２３ａ−３ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６１２、ｈｓａ−ｍｉＲ−１２５ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３１４４−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９９ａ−３ｐ＋ｈｓａ−ｍｉＲ−１９９ｂ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１００−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１２７−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１２６０ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７８ｈ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７９−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７６ａ−３ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｉ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５２６ａ＋ｈｓａ−ｍｉＲ−５１８ｃ−５ｐ＋ｈｓａ−ｍｉＲ−５１８ｄ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５２０ｃ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２８−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−７５８−３ｐ＋ｈｓａ−ｍｉＲ−４１１−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ａ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１２０６、ｈｓａ−ｍｉＲ−１２８６、ｈｓａ−ｍｉＲ−５１４ａ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５４８ａｈ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８４、ｈｓａ−ｍｉＲ−５４３、ｈｓａ−ｍｉＲ−６２６、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３９−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１２３４−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−８８８−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５４２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５１４ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５４８ｍ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３０ｅ−５ｐおよびｈｓａ−ｍｉＲ−１２９０からなる群より選択される少なくとも１つのマイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、あるいは
その組合せ
を含む、無細胞組成物。
【請求項２】
少なくとも１つの（ｉ）からのタンパク質と、少なくとも１つの（ｉｉ）からのタンパク質と、少なくとも１つの（ｉｉｉ）のタンパク質と、少なくとも１つの（ｉｖ）からのｍｉＲＮＡとを含む、請求項１に記載の無細胞組成物。
【請求項３】
間質細胞由来因子１（ＣＸＣＬ１２／ＳＤＦ１）、中脳星状膠細胞由来神経栄養因子（ＭＡＮＦ）、スーパーオキシドジスムターゼ［Ｃｕ−Ｚｎ］（ＳＯＤ１）、肝細胞成長因子（ＨＧＦ）、胎盤成長因子（ＰＩＧＦ）、マクロファージコロニー刺激因子（ＭＣＳＦ）および血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）からなる群より選択される少なくとも１つの因子を含む、請求項１または２のいずれか１項に記載の無細胞組成物。
【請求項４】
ｈｓａ−ｍｉＲ−４４５４＋ｈｓａ−ｍｉＲ−７９７５、ｈｓａ−ｍｉＲ−２３ａ−３ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６１２、ｈｓａ−ｍｉＲ−１２５ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３１４４−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９９ａ−３ｐ＋ｈｓａ−ｍｉＲ−１９９ｂ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１００−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１２７−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１２６０ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７８ｈ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７９−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３７６ａ−３ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｉ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５２６ａ＋ｈｓａ−ｍｉＲ−５１８ｃ−５ｐ＋ｈｓａ−ｍｉＲ−５１８ｄ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５２０ｃ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２８−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−７５８−３ｐ＋ｈｓａ−ｍｉＲ−４１１−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２９ａ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１２０６、ｈｓａ−ｍｉＲ−１２８６、ｈｓａ−ｍｉＲ−５１４ａ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５４８ａｈ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８４、ｈｓａ−ｍｉＲ−５４３、ｈｓａ−ｍｉＲ−６２６、ｈｓａ−ｍｉＲ−３３９−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１２３４−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−８８８−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５４２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５１４ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−５４８ｍ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３０ｅ−５ｐおよびｈｓａ−ｍｉＲ−１２９０からなる群より選択される少なくとも６つのマイクロＲＮＡ分子を含む、請求項１〜３のいずれか１項に記載の無細胞組成物。
【請求項５】
前記少なくとも１つの（ｉ）、（ｉｉ）または（ｉｉｉ）のタンパク質が、皮膚幹細胞または骨髄幹細胞に由来するセクレトーム中より有意に高い濃度で存在し；
好ましくは、皮膚幹細胞または骨髄幹細胞に由来するセクレトーム中より有意に高い濃度で存在する前記少なくとも１つのタンパク質が、間質細胞由来因子１（ＣＸＣＬ１２／ＳＤＦ１、Ｐ４８０６１）、スーパーオキシドジスムターゼ［Ｃｕ−Ｚｎ］（ＳＯＤ１、Ｐ００４４１）、中脳星状膠細胞由来神経栄養因子（ＭＡＮＦ、Ｐ５５１４５）、肝細胞成長因子（ＨＧＦ）、胎盤成長因子（ＰＩＧＦ）、マクロファージコロニー刺激因子（ＭＣＳＦ）、および血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）からなる群より選択される、
請求項１〜４のいずれか１項に記載の無細胞組成物。
【請求項６】
皮膚幹細胞または骨髄幹細胞に由来するセクレトーム中より有意に低い濃度で少なくとも１つのタンパク質を含み；
好ましくは、有意に低い濃度で存在する前記少なくとも１つのタンパク質が、インターロイキン−８（ＩＬ−８）、ガンマインターフェロンによって誘導されるモノカイン（ＭＩＧ／ＣＸＣＬ９）、インターロイキン６（ＩＬ−６）、Ｆｍｓ関連チロシンキナーゼ３リガンド（Ｆｌｔ−３リガンド）、レプチン、上皮由来好中球活性化ペプチド７８（ＥＮＡ−７８／ＣＸＣＬ５）および単球走化性タンパク質３（ＭＣＰ−３／ＣＣＬ７）からなる群より選択される、
請求項１〜４のいずれか１項に記載の無細胞組成物。
【請求項７】
神経系のホメオスタシスに関与する少なくとも１つのタンパク質を含み、前記タンパク質が、シスタチンＣ、ガレクチン１、グリア由来ネキシン、インスリン様成長因子ＩＩ、（ＩＧＦ２）、潜在型トランスフォーミング成長因子ベータ結合タンパク質１（ＬＴＢＰ１）、潜在型トランスフォーミング成長因子ベータ結合タンパク質２（ＬＴＢＰ２）；潜在型トランスフォーミング成長因子ベータ結合タンパク質３（ＬＴＢＰ３）；潜在型トランスフォーミング成長因子ベータ結合タンパク質４（ＬＴＢＰ４）；中脳星状膠細胞由来神経栄養因子（ＭＡＮＦ）、神経芽細胞分化関連タンパク質（ＡＨＡＮＫ）、色素上皮由来因子（ＰＥＤＦ）、間質細胞由来因子１（ＳＤＦ１）、およびスーパーオキシドジスムターゼ［Ｃｕ−Ｚｎ］（ＳＯＤＣ）からなる群より選択される、請求項１〜６のいずれか１項に記載の無細胞組成物。
【請求項８】
１，０００ダルトン以上の分子の大きさを有する可溶性因子を含む、請求項１〜７のいずれか１項に記載の無細胞組成物。
【請求項９】
可溶性因子、微小胞、エキソソーム、またはその組み合わせを含む、請求項１〜８のいずれか１項に記載の無細胞組成物。
【請求項１０】
前記組成物が、薬学的に許容される担体、賦形剤もしくは希釈剤を含む医薬組成物である、または、前記組成物が美容用組成物である、請求項１〜９のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１１】
疾患または障害を予防するまたは治療することにおける使用のための、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１２】
前記疾患または障害が、炎症性疾患；自己免疫疾患；血管疾患；心疾患；呼吸器系疾患；骨格系疾患；消化管疾患；腎疾患；尿路疾患；皮膚疾患；老化関連疾患；末梢神経疾患、骨格筋疾患；中枢神経系の疾患；眼疾患；内分泌系の疾患；および歯科口腔疾患からなる群より選択される、請求項１１に記載の使用のための組成物。
【請求項１３】
組織リモデリング、組織修復または組織再生における使用のためであり；
好ましくは、組織リモデリング、組織修復または組織再生が、創傷治癒を促進すること、瘢痕形成を予防するまたは軽減すること；瘢痕治癒を促進すること、軟骨または骨形成を促進すること；中枢神経系または末梢神経系での損傷の修復または再生を促進すること；ならびに虚血器官の新血管新生および血管新生を促進することからなる群より選択される少なくとも１つの過程を含み；
任意選択で、前記損傷が、神経系の外傷、神経変性疾患または血管疾患により引き起こされ；または、前記組成物が、中枢神経系または末梢神経系での損傷の修復または再生を促進することにおける使用のためであり；または、前記組成物が、少なくとも１つの医原性損傷によって全体にまたは部分的に破壊された器官および組織の修復または再生における使用のためであり；または、前記障害が、糖尿病性創傷であり；または、前記障害が、美容障害である、
請求項１〜１０のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１４】
前記組成物が、損傷組織に局所的に投与される、または、前記組成物が、全身的に投与される、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１５】
前記セクレトームが、自家ｈＯＭＳＣもしくは同種ｈＯＭＳＣに由来する、または、前記ｈＯＭＳＣが、ナイーブ細胞である、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の無細胞組成物。
【請求項１６】
ｈＯＭＳＣから無細胞セクレトームを作製する方法であって、
ｉ．外植または酵素消化によってｈＯＭＳＣを単離する段階と、
ｉｉ．培養培地中でｈＯＭＳＣを拡大する段階と、
ｉｉｉ．前記培地を基本培地に置き換える段階と、
ｉｖ．１時間〜１２０時間の範囲の一定時間にわたって前記基本培地中でｈＯＭＳＣを培養する段階と、ここで、前記ｈＯＭＳＣが、前記セクレトームの内容に影響を及ぼす刺激または条件に任意選択で供される、
ｖ．培養物から前記培地を回収する段階と、
ｖｉ．任意選択で、前記培地を１．１〜１０，０００倍に濃縮する段階
を含む、方法。