【手続補正書】
【提出日】令和3年6月28日(2021.6.28)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
被験体において、老化細胞を検出し、そして／または老化細胞除去治療の成功を監視するｉｎ  ｖｉｔｒｏ法であって：
ａ）前記被験体からの細胞不含試料における、表１９に列挙するｍｉＲＮＡまたはそのアイソフォームからなる群より選択される１つまたはそれより多いｍｉＲＮＡのレベルを定量化し、そして
ｂ）随意に、ａ）のレベルを、参照試料中の前記の１つまたはそれより多いｍｉＲＮＡの参照レベルと比較する、ここで前記レベル間の相違が、老化細胞または細胞性老化の存在の指標である
工程を含む、前記方法。
【請求項２】
ｌｅｔ−７ａ−５ｐ、ｌｅｔ−７ｂ−５ｐ、ｍｉＲ−１９９ａ−５ｐ、ｍｉＲ−３４５−５ｐ、ｍｉＲ−４２３−３ｐ、およびｍｉＲ−１２５ａ−５ｐからなる群より選択されるｍｉＲＮＡの１つまたはそれより多くのレベルを定量化する、請求項１の方法。
【請求項３】
老化細胞を検出するかまたは細胞性老化を診断するための請求項１または２の方法であって、ｌｅｔ−７ａ−５ｐ、ｌｅｔ−７ｂ−５ｐ、ｍｉＲ−３４ａ−５ｐ、ｍｉＲ−３４ａ−３ｐ、ｍｉＲ−１５１−５ｐ、ｍｉＲ−１５５−５ｐ、ｍｉＲ−１９９ａ−５ｐ、ｍｉＲ−１９９ｂ−５ｐおよびｍｉＲ−３４５−５ｐからなる群より選択される１つまたはそれより多いｍｉＲＮＡのレベルを定量化する、前記方法。
【請求項４】
老化細胞除去治療を監視するための請求項１または２の方法であって、ｍｉＲ−２３ａ−３ｐ、ｍｉＲ−２３ｂ−３ｐ、ｍｉＲ−２４−３ｐ、ｍｉＲ−２７ａ−３ｐ、ｍｉＲ−１４６ａ−５ｐ、ｍｉＲ−４２３−３ｐ、ｍｉＲ−１８１ｂ−５ｐ、ｍｉＲ−１８３−３ｐ、ｍｉＲ−２１５−５ｐ、ｍｉＲ−３１−５ｐ、ｍｉＲ−３７５−５ｐ、ｍｉＲ−４０９−３ｐ、ｍｉＲ−１２５ａ−５ｐ、ｍｉＲ−４８３−５ｐ、およびｍｉＲ−１５０−５ｐからなる群より選択される１つまたはそれより多いｍｉＲＮＡのレベルを定量化する、前記方法。
【請求項５】
被験体において、老化細胞を検出し、そして／または老化細胞除去治療の成功を監視するｉｎ  ｖｉｔｒｏ法であって：
ａ）前記被験体からの細胞不含試料における、表１に列挙するｍｉＲＮＡまたはそのアイソフォームからなる群より選択される１つまたはそれより多いｍｉＲＮＡのレベルを定量化し、そして
ｂ）随意に、ａ）のレベルを、参照試料中の前記の１つまたはそれより多いｍｉＲＮＡの参照レベルと比較する、ここで前記レベル間の相違が、老化細胞または細胞性老化の存在の指標である
工程を含む、前記方法。
【請求項６】
（ｉ）ｍｉＲ−３４ａ−５ｐ、（ｉｉ）ｍｉＲ−２７ａ−３ｐ、および（ｉｉｉ）表１に列挙する１つまたはそれより多いさらなるｍｉＲＮＡのレベルを定量化する、請求項５の方法。
【請求項７】
表２に列挙するｍｉＲＮＡからなる群より選択される１つまたはそれより多いさらなるｍｉＲＮＡのレベルを定量化する、請求項１〜６のいずれか一項の方法。
【請求項８】
表３〜１５の任意の１つに列挙するｍｉＲＮＡからなる群より選択される１つまたはそれより多いさらなるｍｉＲＮＡのレベルを定量化する、請求項１〜７のいずれか一項の方法。
【請求項９】
表２〜１５および１９〜２２の任意の１つに列挙する少なくとも２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０および最大１５の異なる群由来の２つまたはそれより多いｍｉＲＮＡのレベルを定量化する、請求項１〜８のいずれか一項の方法。
【請求項１０】
２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４またはそれより多いｍｉＲＮＡのレベルを定量化する、請求項１〜９のいずれか一項の方法。
【請求項１１】
参照レベルが、健康な被験体の、あるいは薬理学的、食餌的またはライフスタイル干渉またはその群に供された被験体の試料における、対応する１つまたはそれより多いｍｉＲＮＡのレベルである、請求項１〜１０のいずれか一項記載の方法。
【請求項１２】
レベル比較の１標準偏差より大きい相違が、老化細胞または細胞性老化の存在の指標である、請求項１〜１１のいずれか一項記載の方法。
【請求項１３】
請求項１〜１１のいずれか一項記載の、被験体において、老化細胞除去治療反応を監視するための方法であって
ａ）前記被験体からの細胞不含試料における、表１、１９または２１に列挙するｍｉＲＮＡまたはそのアイソフォームからなる群より選択される１つまたはそれより多いｍｉＲＮＡのレベルを定量化し、そして
ｂ）ａ）のレベルを、前記被験体由来のより早期の試料中の前記の１つまたはそれより多いｍｉＲＮＡの参照レベルと比較する、ここで前記レベル間の１．５倍より大きい相違が、老化細胞除去治療に対する反応の指標である
工程を含む、前記方法。
【請求項１４】
ｍｉＲＮＡレベルが、定量的またはデジタルＰＣＲ、シーケンシング、マイクロアレイ、Ｌｕｍｉｎｅｘ核酸アッセイ、または他のハイブリダイゼーションに基づく技術によって決定される、請求項１〜１３のいずれか一項の方法。
【請求項１５】
被験体が、年齢少なくとも３０、４０、５０、６０、７０、８０または９０歳であり、特に、加齢関連疾患のリスクがあるおよび／またはＳＡＳＰのリスクがある被験体である、請求項１〜１４のいずれか一項の方法。
【請求項１６】
試料が血液試料、特に細胞不含血液試料である、請求項１〜１５のいずれか一項の方法。
【請求項１７】
老化細胞の低下または細胞性老化の減少を検出するための、請求項１〜１６のいずれか一項の方法であって、前記ｍｉＲＮＡのレベルを、老化細胞除去剤、抗加齢剤または任意の抗加齢介入での治療の前の対応するｍｉＲＮＡのレベルと比較する、前記方法。
【請求項１８】
老化細胞によって分泌される１つまたはそれより多いタンパク質のさらなるレベルを測定し、そしてタンパク質参照レベルに比較する、請求項１〜１７のいずれか一項の方法であって、タンパク質参照レベルに比較した際の前記タンパク質レベルの相違の度合いが、老化細胞または細胞性老化の存在の指標である、前記方法。
【請求項１９】
ｍｉＲＮＡ  ｌｅｔ−７ａ−５ｐ、ｌｅｔ−７ｂ−５ｐ、ｍｉＲ−１９９ａ−５ｐ、ｍｉＲ−３４５−５ｐ、ｍｉＲ−４２３−３ｐ、ｍｉＲ−１２５ａ−５ｐを含み、そして随意に、表１９、２０および／または２１に列挙するｍｉＲＮＡの１つまたはそれより多くをさらに含む、老化細胞を検出し、細胞性老化を診断し、そして／または老化細胞除去治療の成功を監視するための、ｍｉＲＮＡのパネルを含む、診断デバイス。
【請求項２０】
表１９、２０および／または２１に列挙するｍｉＲＮＡの１つまたはそれより多くを含む、老化細胞を検出し、細胞性老化を診断し、そして／または老化細胞除去治療の成功を監視するための、ｍｉＲＮＡのパネルを含む、診断デバイス。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００１】
本発明は、ＮＩＨにより付与された許可番号Ｐ０１−ＡＧ０１７２４２に基づいて、米国政府の支援を受けてなされたものである。米国政府は、本発明に一定の権利を有する。
本発明は、被験体において、老化細胞を検出するかまたは細胞性老化を診断する方法、特にｉｎ  ｖｉｔｒｏ法であって、１つまたはそれより多い選択されたｍｉＲＮＡのレベルを、前記被験体由来の試料において定量化する、前記方法を提供する。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２２９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２２９】
非限定的に、本発明は以下の態様を含む。
［態様１］
被験体において、老化細胞を検出し、細胞性老化を診断し、そして／または老化細胞除去治療の成功を監視するｉｎ  ｖｉｔｒｏ法であって：
ａ）前記被験体から細胞不含試料を提供し、
ｂ）前記試料における、表１９に列挙するｍｉＲＮＡまたはそのアイソフォームからなる群より選択される１つまたはそれより多いｍｉＲＮＡのレベルを定量化し、そして
ｃ）随意に、ｂ）のレベルを、参照試料中の前記の１つまたはそれより多いｍｉＲＮＡの参照レベルと比較する、ここで前記レベル間の相違が、老化細胞または細胞性老化の存在の指標である
工程を含む、前記方法。
［態様２］
ｌｅｔ−７ａ−５ｐ、ｌｅｔ−７ｂ−５ｐ、ｍｉＲ−１９９ａ−５ｐ、ｍｉＲ−３４５−５ｐ、ｍｉＲ−４２３−３ｐ、およびｍｉＲ−１２５ａ−５ｐからなる群より選択されるｍｉＲＮＡの１つまたはそれより多くのレベルを定量化する、態様１の方法。
［態様３］
老化細胞を検出するかまたは細胞性老化を診断するための態様１または２の方法であって、ｌｅｔ−７ａ−５ｐ、ｌｅｔ−７ｂ−５ｐ、ｍｉＲ−３４ａ−５ｐ、ｍｉＲ−３４ａ−３ｐ、ｍｉＲ−１５１−５ｐ、ｍｉＲ−１５５−５ｐ、ｍｉＲ−１９９ａ−５ｐ、ｍｉＲ−１９９ｂ−５ｐおよびｍｉＲ−３４５−５ｐからなる群より選択される１つまたはそれより多いｍｉＲＮＡのレベルを定量化する、前記方法。
［態様４］
老化細胞除去治療を監視するための態様１または２の方法であって、ｍｉＲ−２３ａ−３ｐ、ｍｉＲ−２３ｂ−３ｐ、ｍｉＲ−２４−３ｐ、ｍｉＲ−２７ａ−３ｐ、ｍｉＲ−１４６ａ−５ｐ、ｍｉＲ−４２３−３ｐ、ｍｉＲ−１８１ｂ−５ｐ、ｍｉＲ−１８３−３ｐ、ｍｉＲ−２１５−５ｐ、ｍｉＲ−３１−５ｐ、ｍｉＲ−３７５−５ｐ、ｍｉＲ−４０９−３ｐ、ｍｉＲ−１２５ａ−５ｐ、ｍｉＲ−４８３−５ｐ、およびｍｉＲ−１５０−５ｐからなる群より選択される１つまたはそれより多いｍｉＲＮＡのレベルを定量化する、前記方法。
［態様５］
被験体において、老化細胞を検出し、細胞性老化を診断し、そして／または老化細胞除去治療の成功を監視するｉｎ  ｖｉｔｒｏ法であって：
ａ）前記被験体から細胞不含試料を提供し、
ｂ）前記試料における、表１に列挙するｍｉＲＮＡまたはそのアイソフォームからなる群より選択される１つまたはそれより多いｍｉＲＮＡのレベルを定量化し、そして
ｃ）随意に、ｂ）のレベルを、参照試料中の前記の１つまたはそれより多いｍｉＲＮＡの参照レベルと比較する、ここで前記レベル間の相違が、老化細胞または細胞性老化の存在の指標である
工程を含む、前記方法。
［態様６］
（ｉ）ｍｉＲ−３４ａ−５ｐ、（ｉｉ）ｍｉＲ−２７ａ−３ｐ、および（ｉｉｉ）表１に列挙する１つまたはそれより多いさらなるｍｉＲＮＡのレベルを定量化する、態様５の方法。
［態様７］
表２に列挙するｍｉＲＮＡからなる群より選択される１つまたはそれより多いさらなるｍｉＲＮＡのレベルを定量化する、態様１〜６のいずれか一項の方法。
［態様８］
表３〜１５の任意の１つに列挙するｍｉＲＮＡからなる群より選択される１つまたはそれより多いさらなるｍｉＲＮＡのレベルを定量化する、態様１〜７のいずれか一項の方法。
［態様９］
表２〜１５および１９〜２２の任意の１つに列挙する少なくとも２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０および最大１５の異なる群由来の２つまたはそれより多いｍｉＲＮＡのレベルを定量化する、態様１〜８のいずれか一項の方法。
［態様１０］
２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４またはそれより多いｍｉＲＮＡのレベルを定量化する、態様１〜９のいずれか一項の方法。
［態様１１］
参照レベルが、健康な被験体の、あるいは薬理学的、食餌的またはライフスタイル干渉またはその群に供された被験体の試料における、対応する１つまたはそれより多いｍｉＲＮＡのレベルである、態様１〜１０のいずれか一項記載の方法。
［態様１２］
レベル比較の１標準偏差より大きい相違が、老化細胞または細胞性老化の存在の指標である、態様１〜１１のいずれか一項記載の方法。
［態様１３］
態様１〜１１のいずれか一項記載の、被験体において、老化細胞除去治療反応を監視するための方法であって
ａ）前記被験体から細胞不含試料を提供し、
ｂ）前記試料における、表１、１９または２１に列挙するｍｉＲＮＡまたはそのアイソフォームからなる群より選択される１つまたはそれより多いｍｉＲＮＡのレベルを定量化し、そして
ｃ）ｂ）のレベルを、前記被験体由来のより早期の試料中の前記の１つまたはそれより多いｍｉＲＮＡの参照レベルと比較する、ここで前記レベル間の１．５倍より大きい相違が、老化細胞除去治療に対する反応の指標である
工程を含む、前記方法。
［態様１４］
ｍｉＲＮＡレベルが、定量的またはデジタルＰＣＲ、シーケンシング、マイクロアレイ、Ｌｕｍｉｎｅｘ核酸アッセイ、または他のハイブリダイゼーションに基づく技術によって決定される、態様１〜１３のいずれか一項の方法。
［態様１５］
被験体が、年齢少なくとも３０、４０、５０、６０、７０、８０または９０歳であり、特に、加齢関連疾患のリスクがあるおよび／またはＳＡＳＰのリスクがある被験体である、態様１〜１４のいずれか一項の方法。
［態様１６］
試料が血液試料、特に細胞不含血液試料である、態様１〜１５のいずれか一項の方法。
［態様１７］
老化細胞の低下または細胞性老化の減少を検出するための、態様１〜１６のいずれか一項の方法であって、前記ｍｉＲＮＡのレベルを、老化細胞除去剤、抗加齢剤または任意の抗加齢介入での治療の前の対応するｍｉＲＮＡのレベルと比較する、前記方法。
［態様１８］
老化細胞によって分泌される１つまたはそれより多いタンパク質のさらなるレベルを測定し、そしてタンパク質参照レベルに比較する、態様１〜１７のいずれか一項の方法であって、タンパク質参照レベルに比較した際の前記タンパク質レベルの相違の度合いが、老化細胞または細胞性老化の存在の指標である、前記方法。
［態様１９］
ｍｉＲＮＡ  ｌｅｔ−７ａ−５ｐ、ｌｅｔ−７ｂ−５ｐ、ｍｉＲ−１９９ａ−５ｐ、ｍｉＲ−３４５−５ｐ、ｍｉＲ−４２３−３ｐ、ｍｉＲ−１２５ａ−５ｐを含み、そして随意に、表１９、２０および／または２１に列挙するｍｉＲＮＡの１つまたはそれより多くをさらに含む、老化細胞を検出し、細胞性老化を診断し、そして／または老化細胞除去治療の成功を監視するための、ｍｉＲＮＡのパネルを含む、診断デバイス。
［態様２０］
表１９、２０および／または２１に列挙するｍｉＲＮＡの１つまたはそれより多くを含む、老化細胞を検出し、細胞性老化を診断し、そして／または老化細胞除去治療の成功を監視するための、ｍｉＲＮＡのパネルを含む、診断デバイス。
引用参考文献