【手続補正書】
【提出日】令和3年6月24日(2021.6.24)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記化学式ＶまたはＶＩで表される化合物またはその薬学的に許容可能な塩：
【化１】
2020531541.tif 000001
【化２】
2020531541.tif 000002
下記Ｒ４は、（ＣＨ２）ｐ−（ＯＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｑ−（ＣＨ２）ｒ、または−（ＣＨ２ＣＨ２）ｓ−である化合物（前記ｐおよびｒは、０〜５の整数であり、前記ｑおよびｓは、１〜５の整数である）。
【請求項２】
前記Ｒ４は、（ＯＣＨ２ＣＨ２Ｏ）−、−（ＣＨ２ＣＨ２）−、または−（ＣＨ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）２ＯＣＨ２）−のうちのいずれか１つであり、前記化学式ＶＩで表される化合物は、下記化学式ＶＩＩ〜化学式ＩＸのいずれか1つで表されるものである、請求項１に記載の化学式ＶまたはＶＩで表される化合物またはその薬学的に許容可能な塩：
【化３】
2020531541.tif 000003
【化４】
2020531541.tif 000004
【化５】
2020531541.tif 000005
【請求項３】
前記化学式Ｉで表される化合物は、フリー（ｆｒｅｅ）状態で５５０〜６８０ｎｍで最大放出波長を示し、チオールと結合した状態で４３０〜５５０ｎｍで最大放出波長を示すものである、請求項１に記載の化学式ＶまたはＶＩで表される化合物またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項４】
前記放出波長の蛍光強度は、４３０ｎｍ〜６８０ｎｍの範囲で増減するものである、請求項３に記載の化学式ＶまたはＶＩで表される化合物またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項５】
請求項１〜４のいずれか１項に記載の化学式ＶまたはＶＩの化合物またはその薬学的に許容可能な塩を有効成分として含む生細胞（ｌｉｖｉｎｇ  ｃｅｌｌ）における抗酸化能測定用組成物。
【請求項６】
前記抗酸化能の測定は、生細胞におけるチオール水準の測定である、請求項５に記載の生細胞における抗酸化能測定用組成物。
【請求項７】
前記チオール水準の測定は、細胞小器官におけるチオール水準の測定である、請求項６に記載の生細胞における抗酸化能測定用組成物。
【請求項８】
前記細胞小器官は、ミトコンドリアまたはゴルジ体である、請求項７に記載の生細胞における抗酸化能測定用組成物。
【請求項９】
前記ミトコンドリアにおける抗酸化能の測定は、化学式Ｖの化合物を使用するものである、請求項８に記載の生細胞における抗酸化能測定用組成物。
【請求項１０】
前記ゴルジ体における抗酸化能の測定は、化学式ＶＩ〜ＩＸのうちのいずれか１つの化合物を使用するものである、請求項８に記載の生細胞における抗酸化能測定用組成物。
【請求項１１】
前記チオール水準の測定において、チオールが増加するに伴い、５５０〜６８０ｎｍでの蛍光強度が減少し、４３０〜５５０ｎｍでの蛍光強度は増加するものである、請求項７に記載の生細胞における抗酸化能測定用組成物。
【請求項１２】
前記チオール水準の測定は、４３０〜５５０ｎｍでの蛍光強度および５５０〜６８０ｎｍでの蛍光強度の比率（ｒａｔｉｏ）を得て（ｏｂｔａｉｎｉｎｇ）実施するものである、請求項１１に記載の生細胞における抗酸化能測定用組成物。
【請求項１３】
前記比率は、前記４３０〜５５０ｎｍでの蛍光強度および５５０〜６８０ｎｍでの蛍光強度の関係（ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ）である、請求項１２に記載の生細胞における抗酸化能測定用組成物。
【請求項１４】
前記関係は、前記４３０〜５５０ｎｍでの蛍光強度および５５０〜６８０ｎｍでの蛍光強度の数学的比率関係であり、前記数学的比率関係は、ミトコンドリアにおけるチオールの量に応じて比率計量的（ｒａｔｉｏｍｅｔｒｉｃａｌｌｙ）かつ可逆的に増減して、細胞内小器官におけるチオール量をリアルタイムに示すものである、請求項１３に記載の生細胞における抗酸化能測定用組成物。
【請求項１５】
前記チオール水準の測定は、細胞小器官内のチオールの定性または定量的検出である、請求項７に記載の生細胞における抗酸化能測定用組成物。
【請求項１６】
前記チオール水準の測定は、リアルタイム定量的測定である、請求項７に記載の生細胞における抗酸化能測定用組成物。
【請求項１７】
前記チオール水準の測定は、細胞の酸化的ストレスまたは酸化度を示すものである、請求項７に記載の生細胞における抗酸化能測定用組成物。
【請求項１８】
前記チオール水準の測定は、細胞の老化度を示すものである、請求項７に記載の生細胞における抗酸化能測定用組成物。
【請求項１９】
前記チオールは、グルタチオン（ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ、ＧＳＨ）、ホモシステイン（ｈｏｍｏｃｙｓｔｅｉｎｅ、Ｈｃｙ）、システイン（ｃｙｓｔｅｉｎｅ、Ｃｙｓ）、またはタンパク質のシステイン残基にあるチオールである、請求項７に記載の生細胞における抗酸化能測定用組成物。
【請求項２０】
次の段階を含む生細胞内のチオール増加剤または抑制剤のスクリーニング方法：
（ａ）請求項５に記載の組成物および候補物質を同時にまたは順序にかかわらず順次に生細胞に投与するステップ；
（ｂ）４３０〜５５０ｎｍでの蛍光強度および５５０〜６８０ｎｍでの蛍光強度の比率（ｒａｔｉｏ）を得て標準データと比較するステップ；
（ｃ）前記試験物質をチオール増加剤または抑制剤として決定するステップ；および
（ｄ）４３０〜５５０ｎｍでの蛍光強度に対する５５０〜６８０ｎｍでの蛍光強度の比率が減少する場合にチオール増加剤として決定し、蛍光強度の比率が増加する場合にチオール抑制剤として決定するステップ。
【請求項２１】
前記蛍光比率の測定は、細胞小器官であるミトコンドリアまたはゴルジ体に対して測定するものである、請求項２０に記載の生細胞内のチオール増加剤または抑制剤のスクリーニング方法。
【請求項２２】
請求項１〜４のいずれか１項に記載の化合物またはその塩を含む酸化ストレス誘発疾患診断キット。
【請求項２３】
次のステップを含む生細胞における抗酸化能の測定方法：
（ａ）生細胞における４３０〜５５０ｎｍでの蛍光強度および５５０〜６８０ｎｍでの蛍光強度の比率（ｒａｔｉｏ）をリアルタイムに測定するステップ；
（ｂ）請求項５に記載の組成物を生細胞に投与するステップ；
（ｃ）酸化剤をステップ（ｂ）の細胞に投与するステップ；および
（ｄ）前記蛍光強度の比率値の変化を観察するステップ。
【請求項２４】
前記抗酸化能の測定方法は、前記ステップ（ｄ）の後、前記蛍光強度の比率値が前記酸化剤を投与しない生細胞の蛍光強度の比率値、または前記酸化剤を投与する前の蛍光強度の比率値に回復する時間を測定するステップを追加的に含み、前記時間が短いほど抗酸化能が高いと判断するものである、請求項２３に記載の生細胞における抗酸化能の測定方法。
【請求項２５】
前記抗酸化能の測定方法は、前記ステップ（ｄ）の後、前記酸化剤を投与しない生細胞の蛍光強度の比率値と前記酸化剤を投与した生細胞の蛍光強度の比率値との差の酸化剤投与時点から、前記酸化剤を投与する前の蛍光強度の比率値に回復する時点までの積分値を測定するステップを追加的に含み、前記積分値が小さいほど抗酸化能が高いと判断する、請求項２３に記載の生細胞における抗酸化能の測定方法。
【請求項２６】
前記抗酸化能の測定方法は、前記ステップ（ｄ）の後、前記酸化剤を投与した生細胞の蛍光強度の比率値が減少し始める前記酸化剤の最小濃度を滴定するステップを追加的に含み、前記最小濃度が高いほど抗酸化能が高いと判断する、請求項２３に記載の生細胞における抗酸化能の測定方法。
【請求項２７】
前記測定方法は、生細胞内小器官であるミトコンドリアまたはゴルジ体に対して測定するものである、請求項２３に記載の生細胞における抗酸化能の測定方法。