【手続補正書】
【提出日】令和3年3月19日(2021.3.19)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
多能性幹細胞を分化させるためのインビトロ方法であって、少なくとも１つの神経幹細胞マーカーを発現する細胞の集団におけるＮＦＩＡシグナリングを促進して、少なくとも１つのグリアコンピテント細胞マーカーを発現する少なくとも約１０％の分化細胞を含む細胞集団を得ることを含む、インビトロ方法。
【請求項２】
幹細胞を分化させるためのインビトロ方法であって、幹細胞の集団をＳＭＡＤシグナリングの有効量の少なくとも１つのインヒビターに曝露すること、および該細胞におけるＮＦＩＡシグナリングを促進して、少なくとも１つのグリアコンピテント細胞マーカーを発現する少なくとも約１０％の分化細胞を含む細胞集団を得ることを含む、インビトロ方法。
【請求項３】
ＮＦＩＡシグナリングの初期促進が、ＳＭＡＤシグナリングの前記少なくとも１つのインヒビターへの前記幹細胞の該初期曝露から少なくとも約８日間である、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
ａ）検出可能レベルの前記少なくとも１つのグリアコンピテント細胞マーカーが、前記細胞におけるＮＦＩＡシグナリングの前記初期促進から少なくとも約５日間存在する；
ｂ）検出可能レベルの前記少なくとも１つのグリアコンピテント細胞マーカーの存在後、複数の細胞において、機能的ＮＦＩＡ活性の発現レベルが減少する；および／または
ｃ）前記分化細胞が、検出可能レベルの少なくとも１つのニューロンマーカーを発現しない、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
機能的ＮＦＩＡ活性の前記発現レベルが少なくとも約９０％減少する、および／または前記少なくとも１つのニューロンマーカーが、Ｔｕｊ１、ＭＡＰ２およびＤＣＸから選択される、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
ＮＦＩＡシグナリングを前記促進することが、
ｉ）前記細胞をＮＦＩＡの少なくとも１つのアクチベーターに曝露すること、または
ｉｉ）ＮＦＩＡの発現を増加させることを含む、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
ＮＦＩＡの前記少なくとも１つのアクチベーターが、ａ）前記幹細胞に外因的に曝露されたＮＦＩＡタンパク質、ｂ）前記幹細胞に発現された組換えＮＦＩＡタンパク質、またはｃ）ＮＦＩＡの上流アクチベーターを含む、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
ＮＦＩＡの前記上流アクチベーターがＴＧＦβ１である、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
ＮＦＩＡの発現を前記増加することが、ＮＦＩＡの過剰発現を誘導するようにＮＳＣを改変することを含む、請求項６に記載の方法。
【請求項１０】
過剰発現した前記ＮＦＩＡが、ＮＦＩＡ核酸により発現される組換えＮＦＩＡタンパク質である、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記ＮＦＩＡ核酸が、誘導性プロモーターに作動可能に連結されている、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
幹細胞を分化させるためのインビトロ方法であって、幹細胞の集団をＳＭＡＤシグナリングの少なくとも１つのインヒビターに曝露すること、および該細胞をウシ胎仔血清に曝露して、少なくとも１つの星状細胞マーカーを発現する少なくとも約１０％の分化細胞を含む細胞集団を得ることを含む、インビトロ方法。
【請求項１３】
前記ウシ胎仔血清への前記幹細胞の前記初期曝露から少なくとも約３０日間に、該幹細胞を前記細胞集団に分化させる、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
多能性幹細胞を分化させるためのインビトロ方法であって、少なくとも１つの神経幹細胞マーカーを発現する細胞の集団の細胞周期のＧ１期を延長して、少なくとも１つのグリアコンピテント細胞マーカーを発現する少なくとも約１０％の分化細胞を含む細胞集団を得ることを含む、インビトロ方法。
【請求項１５】
前記神経幹細胞マーカーが、ＰＡＸ６、ネスチン、ＳＯＸ１、ＳＯＸ２、ＰＬＺＦ、ＺＯ−１およびＢＲＮ２からなる群より選択される、請求項１または１４に記載の方法。
【請求項１６】
幹細胞を分化させるためのインビトロ方法であって、幹細胞の集団をＳＭＡＤシグナリングの少なくとも１つのインヒビターに曝露すること、および該細胞の細胞周期のＧ１期を延長して、少なくとも１つのグリアコンピテント細胞マーカーを発現する少なくとも約１０％の分化細胞を含む細胞集団を得ることを含む、インビトロ方法。
【請求項１７】
前記Ｇ１期の初期延長が、ＳＭＡＤシグナリングの該少なくとも１つのインヒビターへの前記細胞の初期曝露から少なくとも約８日間である、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
検出可能レベルの前記少なくとも１つのグリアコンピテント細胞マーカーが、前記Ｇ１期の前記初期延長から少なくとも約１０日間存在する、請求項１４〜１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
前記Ｇ１期の前記延長が、
ａ）前記細胞を少なくとも１つのＧ１期を延長させる化合物に曝露すること、または
ｂ）ＦＺＲ１の発現を増加させることを含む、請求項１４〜１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
前記少なくとも１つのＧ１を延長させる化合物が小分子化合物を含む、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記小分子化合物がオロモウシン（Ｏｌｏ）を含む、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
ａ）前記少なくとも１つのグリアコンピテント細胞マーカーが、ＣＤ４４、ＡＱＰ４、ＳＯＸ２およびネスチンから選択される；および／または
ｂ）少なくと１つのグリアコンピテント細胞マーカーを発現する前記細胞が、皮質グリアコピンテント細胞または脊髄グリアコンピテント細胞である、請求項１〜２１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
少なくとも１つのグリアコンピテント細胞マーカーを発現する少なくとも約１０％の細胞を含む前記細胞集団を、少なくとも１つの星状細胞マーカーを発現する細胞への該細胞の分化を促進するために適切な条件に供することをさらに含む、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２４】
（ａ）前記条件が、前記細胞集団を白血病抑制因子（ＬＩＦ）、少なくとも１つのその誘導体、少なくとも１つのその類似体および／または少なくとも１つのそのアクチベーターに曝露することを含む；（ｂ）前記少なくとも１つの星状細胞マーカーが、ＦＡＰ、ＡＱＰ４、ＣＤ４４、Ｓ１００ｂ、ＳＯＸ９、ＮＦＩＡ、ＧＬＴ−１およびＣＳＲＰ１から選択される；および／または（ｃ）少なくとも１つの星状細胞マーカーを発現する細胞が皮質星状細胞または脊髄星状細胞である、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
ＬＩＦ、少なくとも１つのその誘導体、少なくとも１つのその類似体および／または少なくとも１つのそのアクチベーターへの前記幹細胞の初期曝露が、ＳＭＡＤシグナリングの前記少なくとも１つのインヒビターへの該幹細胞の該初期曝露から少なくとも約１０日間である；および／または前記少なくとも１つの星状細胞マーカーがＧＦＡＰを含む、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
ＳＭＡＤシグナリングの前記少なくとも１つのインヒビターが、形質転換成長因子ベータ（ＴＧＦβ）／アクチビン−ノーダルシグナリングの少なくとも１つのインヒビターおよび骨形成タンパク質（ＢＭＰ）シグナリングの少なくとも１つのインヒビターを含む、請求項２〜１０および１６〜２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２７】
（ａ）ＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナリングの前記少なくとも１つのインヒビターが、ＳＢ４３１５４２、その誘導体およびその混合物からなる群より選択される化合物を含む；または前記少なくとも１つの骨形成タンパク質（ＢＭＰ）シグナリングの少なくとも１つのインヒビターが、ＬＤＮ１９３１８９、その誘導体およびその混合物から選択される化合物を含む、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
幹細胞を分化させるためのインビトロ方法であって、幹細胞の集団をＳＭＡＤシグナリングの有効量の少なくとも１つのインヒビターに曝露すること、ならびに該細胞をレチノイン酸（ＲＡ）シグナリングの有効量の少なくとも１つのアクチベーター（「ＲＡアクチベーター」）およびソニックヘッジホッグ（ＳＨＨ）シグナリングの有効量の少なくとも１つのアクチベーター（「ＳＨＨアクチベーター」）に曝露して、少なくとも１つの脊髄前駆体マーカーを発現する少なくとも約１０％の分化細胞を含む細胞集団を得ることを含む、インビトロ方法。
【請求項２９】
ＳＭＡＤシグナリングの前記少なくとも１つのインヒビターへの前記幹細胞の初期曝露から少なくとも１日間、該幹細胞の集団を少なくとも１つのＲＡアクチベーターおよび少なくとも１つのＳＨＨアクチベーターに初期曝露する、請求項１３に記載の方法。
【請求項３０】
検出可能レベルの前記少なくとも１つの脊髄前駆体マーカーが、前記少なくとも１つのＲＡアクチベーターおよび少なくとも１つのＳＨＨアクチベーターへの前記細胞の前記初期曝露から少なくとも約１２日間存在する、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
前記少なくとも１つの脊髄前駆体マーカーが、ＨＯＸＢ４、ＩＳＬ１およびＮＫＸ６．１からなる群より選択される、請求項２８〜３０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３２】
前記幹細胞が
ａ）ヒト幹細胞である；
ｂ）多能性幹細胞である；および／または
ｃ）胚性幹細胞、人工多能性幹細胞、ヒト単為生殖幹細胞、始原生殖細胞様多能性幹細胞、胚盤葉上層幹細胞、Ｆクラス多能性幹細胞およびそれらの組み合わせから選択される、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３３】
多能性幹細胞が、胚性幹細胞、人工多能性幹細胞およびそれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
少なくとも約１０％の少なくとも１つのグリアコンピテント細胞マーカーおよび／または少なくとも１つの星状細胞マーカーを発現するインビトロ分化細胞の集団であって、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の方法により誘導される、集団。
【請求項３５】
請求項３４に記載の集団を含む、組成物。
【請求項３６】
医薬組成物である、請求項３５に記載の組成物。
【請求項３７】
被験体における神経変性障害を処置するかまたは神経傷害による損傷を軽減することにおいて使用するための、請求項３４に記載の集団または請求項３５もしくは３６に記載の組成物。
【請求項３８】
（ａ）前記被験体が、神経変性障害と診断されているかまたはそれを有するリスクがある、および／または（ｂ）前記神経変性障害が、パーキンソン病、アルツハイマー病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）およびレット症候群から選択される、請求項３７に記載の集団または組成物。
【請求項３９】
幹細胞の分化を誘導するためのキットであって、
（ａ）形質転換成長因子ベータ（ＴＧＦβ）／アクチビン−ノーダルシグナリングの少なくとも１つのインヒビター、
（ｂ）ＢＭＰシグナリングの少なくとも１つのインヒビター；
（ｃ）ＮＦＩＡの少なくとも１つのアクチベーター；
（ｄ）ＬＩＦ、少なくとも１つのその誘導体、少なくとも１つのその類似体および／または少なくとも１つのそのアクチベーター；ならびに
（ｅ）少なくとも１つのグリアコンピテント細胞マーカーおよび／または少なくとも１つの星状細胞マーカーを発現する少なくとも約１０％の分化細胞を含む細胞集団への該幹細胞の分化を誘導するための指示
の１つまたはそれよりも多くを含む、キット。
【請求項４０】
インビトロ分化細胞の集団を含む組成物であって、細胞の該集団の少なくとも約５０％が少なくとも１つのＮＳＣマーカーを発現し、細胞の該集団の約２５％未満が少なくとも１つの幹細胞マーカーを発現する、組成物。
【請求項４１】
インビトロ分化細胞の集団を含む組成物であって、細胞の該集団の少なくとも約５０％が少なくとも１つのグリアコンピテントＮＳＣマーカーまたはグリアコンピテント細胞マーカーを発現し、細胞の該集団の約２５％未満が、幹細胞マーカー、ＮＳＣマーカーおよびニューロンマーカーから選択される少なくとも１つのマーカーを発現する、組成物。
【請求項４２】
インビトロ分化細胞の集団を含む組成物であって、細胞の該集団の少なくとも約５０％が少なくとも１つの星状細胞マーカーを発現し、細胞の該集団の約２５％未満が、幹細胞マーカー、ＮＳＣマーカー、ニューロンマーカーおよびグリアコンピテント細胞マーカー／グリアコンピテントＮＳＣマーカーから選択される少なくとも１つのマーカーを発現する、組成物。
【請求項４３】
ａ）前記少なくとも１つの幹細胞マーカーが、ＯＣＴ４、ＮＡＮＯＧ、ＳＯＸ２、ＬＩＮ２８、ＳＳＥＡ４およびＳＳＥＡ３から選択される；
ｂ）前記少なくとも１つのニューロンマーカーが、Ｔｕｊ１、ＭＡＰ２およびＤＣＸから選択される；
ｃ）前記少なくとも１つのＮＳＣマーカーが、ＡＸ６、ネスチン、ＳＯＸ１、ＳＯＸ２、ＰＬＺＦ、ＺＯ−１およびＢＲＮ２から選択される；
ｄ）前記少なくとも１つの神経幹細胞マーカーが、ＰＡＸ６、ＳＯＸ１、ＰＬＺＦおよびＺＯ−１から選択される；
ｅ）前記少なくとも１つのグリアコンピテント細胞マーカーが、ＣＤ４４、ＡＱＰ４、ＳＯＸ２およびネクチンから選択される；および／または
ｆ）前記少なくとも１つの星状細胞マーカーが、ＧＦＡＰ、ＡＱＰ４、ＣＤ４４、Ｓ１００ｂ、ＳＯＸ９、ＮＦＩＡ、ＧＬＴ−１およびＣＳＲＰ１から選択される、請求項４０〜４２のいずれか一項に記載の組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０３０８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０３０８】
特許文書、特許出願、刊行物、生成物の説明およびプロトコールが、本出願を通して引用されており、それらの開示は、すべての目的のためにその全体が参照により本明細書に組み込まれる。
本発明は、例えば以下の項目を提供する。
（項目１）
多能性幹細胞を分化させるためのインビトロ方法であって、１つまたはそれを超える神経幹細胞マーカーを発現する細胞の集団におけるＮＦＩＡシグナリングを促進して、１つまたはそれを超えるグリアコンピテント細胞マーカーを発現する少なくとも約１０％の分化細胞を含む細胞集団を得ることを含む、インビトロ方法。
（項目２）
幹細胞を分化させるためのインビトロ方法であって、幹細胞の集団をＳＭＡＤシグナリングの有効量の１つまたはそれを超えるインヒビターに曝露すること、および該細胞におけるＮＦＩＡシグナリングを促進して、１つまたはそれを超えるグリアコンピテント細胞マーカーを発現する少なくとも約１０％の分化細胞を含む細胞集団を得ることを含む、インビトロ方法。
（項目３）
ＮＦＩＡシグナリングの初期促進が、ＳＭＡＤシグナリングの前記１つまたはそれを超えるインヒビターへの前記幹細胞の該初期曝露から少なくとも約８日間である、項目２に記載の方法。
（項目４）
検出可能レベルの前記１つまたはそれを超えるグリアコンピテント細胞マーカーが、前記細胞におけるＮＦＩＡシグナリングの前記初期促進から少なくとも約５日間存在する、項目１〜３のいずれか一項に記載の方法。
（項目５）
検出可能レベルの前記１つまたはそれを超えるグリアコンピテント細胞マーカーの存在後、複数の細胞において、機能的ＮＦＩＡ活性の発現レベルが減少する、項目１〜４のいずれか一項に記載の方法。
（項目６）
機能的ＮＦＩＡ活性の前記発現レベルが少なくとも約９０％減少する、項目１〜５のいずれか一項に記載の方法。
（項目７）
前記分化細胞が、検出可能レベルの１つまたはそれを超えるニューロンマーカーを発現しない、項目１〜６のいずれか一項に記載の方法。
（項目８）
前記１つまたはそれを超えるニューロンマーカーが、Ｔｕｊ１、ＭＡＰ２およびＤＣＸからなる群より選択される、項目７に記載の方法。
（項目９）
ＮＦＩＡシグナリングを前記促進することが、前記細胞をＮＦＩＡの１つまたはそれを超えるアクチベーターに曝露することを含む、項目１〜８のいずれか一項に記載の方法。
（項目１０）
ＮＦＩＡの前記１つまたはそれを超えるアクチベーターが、前記幹細胞に外因的に曝露されたＮＦＩＡタンパク質を含む、項目９に記載の方法。
（項目１１）
ＮＦＩＡの前記１つまたはそれを超えるアクチベーターが、前記幹細胞により発現される組換えＮＦＩＡタンパク質を含む、項目９に記載の方法。
（項目１２）
ＮＦＩＡの前記１つまたはそれを超えるアクチベーターが、ＮＦＩＡの上流アクチベーターを含む、項目９に記載の方法。
（項目１３）
ＮＦＩＡの前記上流アクチベーターがＴＧＦβ１である、項目１２に記載の方法。
（項目１４）
ＮＦＩＡシグナリングを前記促進することが、ＮＦＩＡの発現を増加させることを含む、項目１〜８のいずれか一項に記載の方法。
（項目１５）
ＮＦＩＡの発現を前記増加することが、ＮＦＩＡの過剰発現を誘導するようにＮＳＣを改変することを含む、項目１４に記載の方法。
（項目１６）
過剰発現した前記ＮＦＩＡが、ＮＦＩＡ核酸により発現される組換えＮＦＩＡタンパク質である、項目１３に記載の方法。
（項目１７）
前記ＮＦＩＡ核酸が、誘導性プロモーターに作動可能に連結されている、項目１７に記載の方法。
（項目１８）
幹細胞を分化させるためのインビトロ方法であって、幹細胞の集団をＳＭＡＤシグナリングの１つまたはそれを超えるインヒビターに曝露すること、および該細胞をウシ胎仔血清に曝露して、１つまたはそれを超える星状細胞マーカーを発現する少なくとも約１０％の分化細胞を含む細胞集団を得ることを含む、インビトロ方法。
（項目１９）
前記ウシ胎仔血清への前記幹細胞の前記初期曝露から少なくとも約３０日間に、該幹細胞を前記細胞集団に分化させる、項目１８に記載の方法。
（項目２０）
多能性幹細胞を分化させるためのインビトロ方法であって、１つまたはそれを超える神経幹細胞マーカーを発現する細胞の集団の細胞周期のＧ１期を延長して、１つまたはそれを超えるグリアコンピテント細胞マーカーを発現する少なくとも約１０％の分化細胞を含む細胞集団を得ることを含む、インビトロ方法。
（項目２１）
前記神経幹細胞マーカーが、ＰＡＸ６、ネスチン、ＳＯＸ１、ＳＯＸ２、ＰＬＺＦ、ＺＯ−１およびＢＲＮ２からなる群より選択される、項目１または２０に記載の方法。
（項目２２）
前記神経幹細胞マーカーが、ＰＡＸ６、ＳＯＸ１、ＰＬＺＦおよびＺＯ−１からなる群より選択される、項目１〜２１に記載の方法。
（項目２３）
幹細胞を分化させるためのインビトロ方法であって、幹細胞の集団をＳＭＡＤシグナリングの１つまたはそれを超えるインヒビターに曝露すること、および該細胞の細胞周期のＧ１期を延長して、１つまたはそれを超えるグリアコンピテント細胞マーカーを発現する少なくとも約１０％の分化細胞を含む細胞集団を得ることを含む、インビトロ方法。
（項目２４）
前記Ｇ１期の初期延長が、ＳＭＡＤシグナリングの該１つまたはそれを超えるインヒビターへの前記細胞の初期曝露から少なくとも約８日間である、項目２３に記載の方法。
（項目２５）
検出可能レベルの前記１つまたはそれを超えるグリアコンピテント細胞マーカーが、前記Ｇ１期の前記初期延長から少なくとも約１０日間存在する、項目２０〜２４のいずれか一項に記載の方法。
（項目２６）
前記Ｇ１期の前記延長が、前記細胞を１つまたはそれを超えるＧ１期を延長させる化合物に曝露することを含む、項目２０〜２５のいずれか一項に記載の方法。
（項目２７）
前記１つまたはそれを超えるＧ１を延長させる化合物が小分子化合物を含む、項目２６に記載の方法。
（項目２８）
前記小分子化合物がオロモウシン（Ｏｌｏ）を含む、項目２７に記載の方法。
（項目２９）
前記細胞の前記細胞周期の前記Ｇ１期を前記延長させることが、ＦＺＲ１の発現を増加させることを含む、項目２０〜２５のいずれか一項に記載の方法。
（項目３０）
前記１つまたはそれを超えるグリアコンピテント細胞マーカーが、ＣＤ４４、ＡＱＰ４、ＳＯＸ２およびネスチンからなる群より選択される、項目１〜２９のいずれか一項に記載の方法。
（項目３１）
１つまたはそれを超えるグリアコンピテント細胞マーカーを発現する前記細胞が、皮質グリアコンピテント細胞または脊髄グリアコンピテント細胞である、項目１〜３０のいずれか一項に記載の方法。
（項目３２）
１つまたはそれを超えるグリアコンピテント細胞マーカーを発現する少なくとも約１０％の細胞を含む前記細胞集団を、１つまたはそれを超える星状細胞マーカーを発現する細胞への該細胞の分化を促進するために適切な条件に供することをさらに含む、項目１〜３１のいずれか一項に記載の方法。
（項目３３）
前記条件が、前記細胞集団を白血病抑制因子（ＬＩＦ）、１つもしくはそれを超えるその誘導体、１つもしくはそれを超えるその類似体および／または１つもしくはそれを超えるそのアクチベーターに曝露することを含む、項目３２に記載の方法。
（項目３４）
ＬＩＦ、１つもしくはそれを超えるその誘導体、１つもしくはそれを超えるその類似体および／または１つもしくはそれを超えるそのアクチベーターへの前記幹細胞の初期曝露が、ＳＭＡＤシグナリングの前記１つまたはそれを超えるインヒビターへの該幹細胞の該初期曝露から少なくとも約１０日間である、項目３３に記載の方法。
（項目３５）
前記１つまたはそれを超える星状細胞マーカーが、ＧＦＡＰ、ＡＱＰ４、ＣＤ４４、Ｓ１００ｂ、ＳＯＸ９、ＮＦＩＡ、ＧＬＴ−１およびＣＳＲＰ１からなる群より選択される、項目３２〜３４のいずれか一項に記載の方法。
（項目３６）
前記１つまたはそれを超える星状細胞マーカーがＧＦＡＰを含む、項目３５に記載の方法。
（項目３７）
１つまたはそれを超える星状細胞マーカーを発現する細胞が皮質星状細胞または脊髄星状細胞である、項目３３〜３６のいずれか一項に記載の方法。
（項目３８）
ＳＭＡＤシグナリングの前記１つまたはそれを超えるインヒビターが、形質転換成長因子ベータ（ＴＧＦβ）／アクチビン−ノーダルシグナリングの１つまたはそれを超えるインヒビターおよび骨形成タンパク質（ＢＭＰ）シグナリングの１つまたはそれを超えるインヒビターを含む、項目２〜１６および２３〜３７のいずれか一項に記載の方法。
（項目３９）
ＴＧＦβ／アクチビン−ノーダルシグナリングの前記１つまたはそれを超えるインヒビターが、ＳＢ４３１５４２、その誘導体およびその混合物からなる群より選択される化合物を含む、項目３８に記載の方法。
（項目４０）
骨形成タンパク質（ＢＭＰ）シグナリングの前記１つまたはそれを超えるインヒビターが、ＬＤＮ１９３１８９、その誘導体およびその混合物からなる群より選択される化合物を含む、項目３８または３９に記載の方法。
（項目４１）
幹細胞を分化させるためのインビトロ方法であって、幹細胞の集団をＳＭＡＤシグナリングの有効量の１つまたはそれを超えるインヒビターに曝露すること、ならびに該細胞をレチノイン酸（ＲＡ）シグナリングの有効量の１つまたはそれを超えるアクチベーター（「ＲＡアクチベーター」）およびソニックヘッジホッグ（ＳＨＨ）シグナリングの有効量の１つまたはそれを超えるアクチベーター（「ＳＨＨアクチベーター」）に曝露して、１つまたはそれを超える脊髄前駆体マーカーを発現する少なくとも約１０％の分化細胞を含む細胞集団を得ることを含む、インビトロ方法。
（項目４２）
ＳＭＡＤシグナリングの前記１つまたはそれを超えるインヒビターへの前記幹細胞の初期曝露から少なくとも１日間、該幹細胞の集団を１つまたはそれを超えるＲＡアクチベーターおよび１つまたはそれを超えるＳＨＨアクチベーターに初期曝露する、項目４１に記載の方法。
（項目４３）
検出可能レベルの前記１つまたはそれを超える脊髄前駆体マーカーが、前記１つまたはそれを超えるＲＡアクチベーターおよび１つまたはそれを超えるＳＨＨアクチベーターへの前記細胞の前記初期曝露から少なくとも約１２日間存在する、項目４２に記載の方法。
（項目４４）
前記１つまたはそれを超える脊髄前駆体マーカーが、ＨＯＸＢ４、ＩＳＬ１およびＮＫＸ６．１からなる群より選択される、項目４１〜４３のいずれか一項に記載の方法。
（項目４５）
前記幹細胞がヒト幹細胞である、項目１〜４４のいずれか一項に記載の方法。
（項目４６）
前記幹細胞が多能性幹細胞である、項目１〜４５のいずれか一項に記載の方法。
（項目４７）
多能性幹細胞が、胚性幹細胞、人工多能性幹細胞およびそれらの組み合わせからなる群より選択される、項目４６に記載の方法。
（項目４８）
前記幹細胞が、胚性幹細胞、人工多能性幹細胞、ヒト単為生殖幹細胞、始原生殖細胞様多能性幹細胞、胚盤葉上層幹細胞、Ｆクラス多能性幹細胞およびそれらの組み合わせからなる群より選択される、項目１〜４７のいずれか一項に記載の方法。
（項目４９）
少なくとも約１０％の１つもしくはそれを超えるグリアコンピテント細胞マーカーおよび／または１つもしくはそれを超える星状細胞マーカーを発現するインビトロ分化細胞の集団であって、項目１〜４０のいずれか一項に記載の方法により誘導される、集団。
（項目５０）
項目４９に記載の集団を含む、組成物。
（項目５１）
医薬組成物である、項目５０に記載の組成物。
（項目５２）
被験体における神経変性障害を処置するかまたは神経傷害による損傷を軽減する方法であって、有効量の項目４９に記載の集団または項目５０もしくは５１に記載の組成物を、それを必要とする被験体に投与することを含む、方法。
（項目５３）
前記被験体が、神経変性障害と診断されているかまたはそれを有するリスクがある、項目５２に記載の方法。
（項目５４）
前記神経変性障害が、パーキンソン病、アルツハイマー病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）およびレット症候群からなる群より選択される、項目５２または５３に記載の方法。
（項目５５）
神経変性障害を処置するためのまたは神経傷害による損傷を軽減するための医薬の製造における、項目４９に記載の集団または項目５０もしくは５１に記載の組成物の使用。
（項目５６）
幹細胞の分化を誘導するためのキットであって、
（ａ）形質転換成長因子ベータ（ＴＧＦβ）／アクチビン−ノーダルシグナリングの１つまたはそれを超えるインヒビター、
（ｂ）ＢＭＰシグナリングの１つまたはそれを超えるインヒビター；
（ｃ）ＮＦＩＡの１つまたはそれを超えるアクチベーター；
（ｄ）ＬＩＦ、１つもしくはそれを超えるその誘導体、１つもしくはそれを超えるその類似体および／または１つもしくはそれを超えるそのアクチベーター；ならびに
（ｅ）１つもしくはそれを超えるグリアコンピテント細胞マーカーおよび／または１つもしくはそれを超える星状細胞マーカーを発現する少なくとも約１０％の分化細胞を含む細胞集団への該幹細胞の分化を誘導するための指示
の１つまたはそれよりも多くを含む、キット。
（項目５７）
インビトロ分化細胞の集団を含む組成物であって、細胞の該集団の少なくとも約５０％が１つまたはそれを超えるＮＳＣマーカーを発現し、細胞の該集団の約２５％未満が１つまたはそれを超える幹細胞マーカーを発現する、組成物。
（項目５８）
インビトロ分化細胞の集団を含む組成物であって、細胞の該集団の少なくとも約５０％が１つまたはそれを超えるグリアコンピテントＮＳＣマーカーまたはグリアコンピテント細胞マーカーを発現し、細胞の該集団の約２５％未満が、幹細胞マーカー、ＮＳＣマーカーおよびニューロンマーカーからなる群より選択される１つまたはそれを超えるマーカーを発現する、組成物。
（項目５９）
インビトロ分化細胞の集団を含む組成物であって、細胞の該集団の少なくとも約５０％が１つまたはそれを超える星状細胞マーカーを発現し、細胞の該集団の約２５％未満が、幹細胞マーカー、ＮＳＣマーカー、ニューロンマーカーおよびグリアコンピテント細胞マーカー／グリアコンピテントＮＳＣマーカーからなる群より選択される１つまたはそれを超えるマーカーを発現する、組成物。
（項目６０）
前記１つまたはそれを超える幹細胞マーカーが、ＯＣＴ４、ＮＡＮＯＧ、ＳＯＸ２、ＬＩＮ２８、ＳＳＥＡ４およびＳＳＥＡ３からなる群より選択される、項目５７〜６０のいずれか一項に記載の組成物。
（項目６１）
前記１つまたはそれを超えるニューロンマーカーが、Ｔｕｊ１、ＭＡＰ２およびＤＣＸからなる群より選択される、項目５８〜６０のいずれか一項に記載の組成物。
（項目６２）
前記１つまたはそれを超えるＮＳＣマーカーが、ＰＡＸ６、ネスチン、ＳＯＸ１、ＳＯＸ２、ＰＬＺＦ、ＺＯ−１およびＢＲＮ２からなる群より選択される、項目５８〜６１のいずれか一項に記載の組成物。
（項目６３）
前記１つまたはそれを超える神経幹細胞マーカーが、ＰＡＸ６、ＳＯＸ１、ＰＬＺＦおよびＺＯ−１からなる群より選択される、項目５８〜６３のいずれか一項に記載の組成物。
（項目６４）
前記１つまたはそれを超えるグリアコンピテント細胞マーカーが、ＣＤ４４、ＡＱＰ４、ＳＯＸ２およびネクチンからなる群より選択される、項目５８〜６４のいずれか一項に記載の組成物。
（項目６５）
前記１つまたはそれを超える星状細胞マーカーが、ＧＦＡＰ、ＡＱＰ４、ＣＤ４４、Ｓ１００ｂ、ＳＯＸ９、ＮＦＩＡ、ＧＬＴ−１およびＣＳＲＰ１からなる群より選択される、項目５９〜６５のいずれか一項に記載の組成物。