【手続補正書】
【提出日】令和3年8月30日(2021.8.30)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
核酸脂質ナノ粒子組成物の生成方法であって、
イオン化可能脂質を含む脂質溶液を核酸を含む溶液と混合し、それにより前駆体核酸脂質ナノ粒子を形成することであって、前記前駆体核酸脂質ナノ粒子が第１のＰＥＧ脂質をさらに含む、ことと；
第２のＰＥＧ脂質を前記前駆体核酸脂質ナノ粒子に添加し、それにより修飾された核酸脂質ナノ粒子を形成することと；
前記前駆体核酸脂質ナノ粒子または前記修飾された核酸脂質ナノ粒子を処理することにより、前記核酸脂質ナノ粒子組成物を形成することと、を含む、方法。
【請求項２】
前記前駆体核酸脂質ナノ粒子が、前記第２のＰＥＧ脂質を添加する前に処理される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記前駆体核酸脂質ナノ粒子がリン脂質または構造脂質をさらに含む、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記第１のＰＥＧ脂質対前記第２のＰＥＧ脂質のモル比が、約１：１００〜約１：１、約１：５０〜約１：１、約１：２５〜約１：１、または約１：１０〜約１：１の範囲内である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
イオン化可能脂質を含む脂質溶液を核酸を含む溶液と混合することが、乱流混合または微小流体混合を含む、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
前記前駆体核酸脂質ナノ粒子または前記修飾された核酸脂質ナノ粒子を処理することが濾過；凍結及び／または凍結乾燥；または前記核酸脂質ナノ粒子組成物を包装することを含む、請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
前記前駆体核酸脂質ナノ粒子組成物が、
約４０〜６０ｍｏｌ％のイオン化可能脂質と；
約５〜１５ｍｏｌ％のリン脂質と；
約３５〜４５ｍｏｌ％の構造脂質と；
約０．５〜３．０ｍｏｌ％の総量の前記第１のＰＥＧ脂質及び前記第２のＰＥＧ脂質と、を含む、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
前記第１のＰＥＧ脂質及び前記第２のＰＥＧ脂質が、各々独立して、ＰＥＧ修飾ホスファチジルエタノールアミン、ＰＥＧ修飾ホスファチジン酸、ＰＥＧ修飾セラミド、ＰＥＧ修飾ジアルキルアミン、ＰＥＧ修飾ジアシルグリセロール、及びＰＥＧ修飾ジアルキルグリセロールから選択される少なくとも１つのＰＥＧ脂質を含む、請求項１〜７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
前記第１のＰＥＧ脂質及び前記第２のＰＥＧ脂質が、各々独立して、式（ＰＬ−Ｉ）：
【化１】
2020532528.tif 000001
の化合物
またはその塩であり、式中：
Ｒ３は、−ＯＲＯであり；
ＲＯは、水素、必要に応じて置換されたアルキル、または酸素保護基であり；
ｒは１〜１００の整数であり、両端を含み；
Ｌ１は、必要に応じて置換されたＣ１−１０アルキレンであり、前記必要に応じて置換されたＣ１−１０アルキレンの少なくとも１つのメチレンは、必要に応じて置換されたカルボシクリレン、必要に応じて置換されたヘテロシクリレン、必要に応じて置換されたアリーレン、必要に応じて置換されたヘテロアリーレン、Ｏ、Ｎ（ＲＮ）、Ｓ、Ｃ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、ＮＲＮＣ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）、ＯＣ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｏ、またはＮＲＮＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）によって独立して置き換えられ；
Ｄは、クリックケミストリーによって得られる部分または生理学的条件下で切断可能な部分であり；
ｍは、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０であり；
Ａは、式：
【化２】
2020532528.tif 000002
であり；
Ｌ２の各々の例は、独立して、結合または必要に応じて置換されたＣ１−６アルキレンであり、前記必要に応じて置換されたＣ１−６アルキレンの１つのメチレン単位は、Ｏ、Ｎ（ＲＮ）、Ｓ、Ｃ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、ＮＲＮＣ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）、ＯＣ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｏ、またはＮＲＮＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）によって必要に応じて置き換えられ；
Ｒ２の各々の例は、独立して、必要に応じて置換されたＣ１−３０アルキル、必要に応じて置換されたＣ１−３０アルケニル、または必要に応じて置換されたＣ１−３０アルキニルであり；必要に応じて、Ｒ２の１つ以上のメチレン単位は、必要に応じて置換されたカルボシクリレン、必要に応じて置換されたヘテロシクリレン、必要に応じて置換されたアリーレン、必要に応じて置換されたヘテロアリーレン、Ｎ（ＲＮ）、Ｏ、Ｓ、Ｃ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、ＮＲＮＣ（Ｏ）、ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、Ｃ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）、−ＯＣ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｏ、Ｃ（Ｏ）Ｓ、ＳＣ（Ｏ）、Ｃ（＝ＮＲＮ）、Ｃ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）、ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）、ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）、Ｃ（Ｓ）、Ｃ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）、ＮＲＮＣ（Ｓ）、ＮＲＮＣ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）、Ｓ（Ｏ）、ＯＳ（Ｏ）、Ｓ（Ｏ）Ｏ、−ＯＳ（Ｏ）Ｏ、ＯＳ（Ｏ）２、Ｓ（Ｏ）２Ｏ、ＯＳ（Ｏ）２Ｏ、Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）、Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、ＯＳ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｏ、Ｓ（Ｏ）２、Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２、Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）、Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）、ＯＳ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）、または−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｏによって独立して置き換えられ；
ＲＮの各々の例は、独立して、水素、必要に応じて置換されたアルキル、または窒素保護基であり；
環Ｂは、必要に応じて置換されたカルボシクリル、必要に応じて置換されたヘテロシクリル、必要に応じて置換されたアリール、または必要に応じて置換されたヘテロアリールであり；
ｐは１または２である、
請求項１〜８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
前記第１のＰＥＧ脂質及び前記第２のＰＥＧ脂質が、各々独立して、式（ＰＬ−Ｉ−ＯＨ）：
【化３】
2020532528.tif 000003
の化合物またはその塩である、
請求項１〜９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
前記第１のＰＥＧ脂質及び前記第２のＰＥＧ脂質が、各々独立して、式（ＰＬ−ＩＩ）：
【化４】
2020532528.tif 000004
の化合物またはその塩であり、式中：
Ｒ３は−ＯＲＯであり；
ＲＯは、水素、必要に応じて置換されたアルキル、または酸素保護基であり；
ｒは１〜１００の整数であり；
Ｒ５は、必要に応じて置換されたＣ１０−４０アルキル、必要に応じて置換されたＣ１０−４０アルケニル、または必要に応じて置換されたＣ１０−４０アルキニルであり；必要に応じて、Ｒ５の１つ以上のメチレン基は、必要に応じて置換されたカルボシクリレン、必要に応じて置換されたヘテロシクリレン、必要に応じて置換されたアリーレン、必要に応じて置換されたヘテロアリーレン、Ｎ（ＲＮ）、Ｏ、Ｓ、Ｃ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、ＮＲＮＣ（Ｏ）、ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、Ｃ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）、ＯＣ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｏ、Ｃ（Ｏ）Ｓ、ＳＣ（Ｏ）、Ｃ（＝ＮＲＮ）、Ｃ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）、ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）、ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）、Ｃ（Ｓ）、Ｃ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）、ＮＲＮＣ（Ｓ）、−ＮＲＮＣ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）、Ｓ（Ｏ）、ＯＳ（Ｏ）、Ｓ（Ｏ）Ｏ、ＯＳ（Ｏ）Ｏ、ＯＳ（Ｏ）２、Ｓ（Ｏ）２Ｏ、ＯＳ（Ｏ）２Ｏ、Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）、−Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、ＯＳ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｏ、Ｓ（Ｏ）２、Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２、Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）、ＯＳ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）、またはＮ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｏによって置き換えられ；
ＲＮの各々の例は、独立して、水素、必要に応じて置換されたアルキル、または窒素保護基である、
請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
前記第１のＰＥＧ脂質及び前記第２のＰＥＧ脂質が、各々独立して、式（ＰＬ−ＩＩ−ＯＨ）：
【化５】
2020532528.tif 000005
の化合物またはその塩であり、式中：
ｒは１〜１００の整数であり；
Ｒ５は、必要に応じて置換されたＣ１０−４０アルキル、必要に応じて置換されたＣ１０−４０アルケニル、または必要に応じて置換されたＣ１０−４０アルキニルであり；必要に応じて、Ｒ５の１つ以上のメチレン基は、必要に応じて置換されたカルボシクリレン、必要に応じて置換されたヘテロシクリレン、必要に応じて置換されたアリーレン、必要に応じて置換されたヘテロアリーレン、Ｎ（ＲＮ）、Ｏ、Ｓ、Ｃ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、−ＮＲＮＣ（Ｏ）、ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、Ｃ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）、ＯＣ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｏ、Ｃ（Ｏ）Ｓ、ＳＣ（Ｏ）、Ｃ（＝ＮＲＮ）、Ｃ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）、ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）、ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）、Ｃ（Ｓ）、Ｃ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）、ＮＲＮＣ（Ｓ）、−ＮＲＮＣ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）、Ｓ（Ｏ）、ＯＳ（Ｏ）、Ｓ（Ｏ）Ｏ、ＯＳ（Ｏ）Ｏ、ＯＳ（Ｏ）２、Ｓ（Ｏ）２Ｏ、ＯＳ（Ｏ）２Ｏ、Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）、−Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、ＯＳ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｏ、Ｓ（Ｏ）２、Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２、Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）、ＯＳ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）、またはＮ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｏによって置き換えられ；
ＲＮの各々の例は、独立して、水素、必要に応じて置換されたアルキル、または窒素保護基である、
請求項１〜１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
前記第１のＰＥＧ脂質及び前記第２のＰＥＧ脂質が、各々独立して、式（ＰＬ−ＩＩ）：
【化６】
2020532528.tif 000006
の化合物またはその塩である、
請求項１〜１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４】
前記第１のＰＥＧ脂質及び前記第２のＰＥＧ脂質が、各々独立して、式（ＰＬ−ＩＩ）：
【化７】
2020532528.tif 000007
である、
請求項１〜１３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１５】
前記第１のＰＥＧ脂質及び前記第２のＰＥＧ脂質が、各々独立して、式（ＰＬ−ＩＩＩ）：
【化８】
2020532528.tif 000008
の化合物、またはその塩もしくは異性体であり、式中、ｓが１〜１００の整数である、
請求項１〜１４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１６】
前記第１のＰＥＧ脂質及び前記第２のＰＥＧ脂質が、各々独立して、以下の式：
【化９】
2020532528.tif 000009
の化合物である、
請求項１〜１５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１７】
前記構造脂質が、コレステロール、フェコステロール、シトステロール、エルゴステロール、カンペステロール、スチグマステロール、ブラシカステロール、トマチジン、ウルソール酸、及びアルファ−トコフェロールから選択される少なくとも１つの脂質である、請求項１〜１６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１８】
前記リン脂質が、
１，２−ジリノレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＬＰＣ）、
１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−ホスホコリン（ＤＭＰＣ）、
１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＯＰＣ）、
１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＰＰＣ）、
１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＳＰＣ）、
１，２−ジウンデカノイル−ｓｎ−グリセロ−ホスホコリン（ＤＵＰＣ）、
１−パルミトイル−２−オレイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＰＯＰＣ）、
１，２−ジ−Ｏ−オクタデセニル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１８：０  Ｄｉｅｔｈｅｒ  ＰＣ）、
１−オレオイル−２−コレステリルヘミスクシノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＯＣｈｅｍｓＰＣ）、
１−ヘキサデシル−ｓｎ−グリセロ−３ホスホコリン（Ｃ１６  Ｌｙｓｏ  ＰＣ）、
１，２−ジリノレノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン、
１，２−ジアラキドノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン、
１，２−ジドコサヘキサエノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン、
１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、
１，２−ジフィタノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＭＥ  １６．０  ＰＥ）、
１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン、
１，２−ジリノレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン、
１，２−ジリノレノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン、
１，２−ジアラキドノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン、
１，２−ジドコサヘキサエノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン、
１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−ｒａｃ−（１−グリセロール）ナトリウム塩（ＤＯＰＧ）、及び
スフィンゴミエリン
から選択される少なくとも１つの脂質である、請求項１〜１７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１９】
前記イオン化可能脂質が式（ＩＬ−ＩＩａ）：
【化１０】
2020532528.tif 000010
の化合物、またはそれらのＮ−オキシド、またはその塩もしくは異性体であり、式中、Ｒ４は本明細書において記載されるものである、
請求項１〜１８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２０】
前記イオン化可能脂質が式（ＩＬ−ＩＩｂ）：
【化１１】
2020532528.tif 000011
の化合物、またはそれらのＮ−オキシド、またはその塩もしくは異性体であり、式中、Ｒ４は本明細書において記載されるものである、
請求項１〜１９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２１】
前記イオン化可能脂質が式（ＩＬ−ＩＩｃ）または（ＩＬ−ＩＩｅ）：
【化１２】
2020532528.tif 000012
の化合物、またはそれらのＮ−オキシド、またはその塩もしくは異性体であり、式中、Ｒ４は本明細書において記載されるものである、
請求項１〜２０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２２】
前記イオン化可能脂質が、
【化１３】
2020532528.tif 000013
、またはその塩である、請求項１〜２１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２３】
前記イオン化可能脂質が、
【化１４】
2020532528.tif 000014
、またはその塩である、請求項１〜２２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２４】
前記イオン化可能脂質が
【化１５】
2020532528.tif 000015
、またはその塩である、請求項１〜２３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２５】
前記イオン化可能脂質が、
【化１６】
2020532528.tif 000016
、またはその塩である、請求項１〜２４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２６】
前記イオン化可能脂質が、
【化１７】
2020532528.tif 000017
、またはその塩である、請求項１〜２５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２７】
前記イオン化可能脂質が、
３−（ジドデシルアミノ）−Ｎ１，Ｎ１，４−トリドデシル−１−ピペラジンエタンアミン（ＫＬ１０）、
Ｎ１−［２−（ジドデシルアミノ）エチル］−Ｎ１，Ｎ４，Ｎ４−トリドデシル−１，４−ピペラジンジエタンアミン（ＫＬ２２）、
１４，２５−ジトリデシル−１５，１８，２１，２４−テトラアザ−オクタトリアコンタン（ＫＬ２５）、
１，２−ジリノレイルオキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプロパン（ＤＬｉｎ−ＤＭＡ）、
２，２−ジリノレイル−４−ジメチルアミノメチル−［１，３］−ジオキソラン（ＤＬｉｎ−Ｋ−ＤＭＡ）、
ヘプタトリアコンタ−６，９，２８，３１−テトラエン−１９−イル４−（ジメチルアミノ）ブタノエート（ＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡ）、
２，２−ジリノレイル−４−（２−ジメチルアミノエチル）−［１，３］−ジオキソラン（ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ）、
１，２−ジオレイルオキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプロパン（ＤＯＤＭＡ）、
２−（｛８−［（３β）−コレスタ−５−エン−３−イルオキシ］オクチル｝オキシ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−［（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン−１−イルオキシ］プロパン−１−アミン（Ｏｃｔｙｌ−ＣＬｉｎＤＭＡ）、
（２Ｒ）−２−（｛８−［（３β）−コレスタ−５−エン−３−イルオキシ］オクチル｝オキシ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−［（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン−１−イルオキシ］プロパン−１−アミン（Ｏｃｔｙｌ−ＣＬｉｎＤＭＡ（２Ｒ））、及び
（２Ｓ）−２−（｛８−［（３β）−コレスタ−５−エン−３−イルオキシ］オクチル｝オキシ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−［（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン−１−イルオキシ］プロパン−１−アミン（Ｏｃｔｙｌ−ＣＬｉｎＤＭＡ（２Ｓ））
から選択される少なくとも１つの脂質である、請求項１〜２６のいずれか１項に記載の方法。