【手続補正書】
【提出日】令和3年3月24日(2021.3.24)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）Ｉ分子を発現しない、遺伝子操作された細胞集団であって、
前記操作された細胞集団が、不死化細胞に由来し、
前記操作された細胞集団が、膜結合型インターロイキン−１５（ｍｂＩＬ１５）を発現するように改変され、
前記操作された細胞集団が、膜結合型４−１ＢＢリガンド（４−１ＢＢＬ）を発現するように改変され、
前記操作された細胞集団が、免疫細胞の活性化を刺激する、少なくとも１つの追加の膜結合型インターロイキンを発現するように改変され、
前記操作された細胞集団が、主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）Ｉ分子を発現せず、及び
前記操作された細胞集団と免疫細胞集団の共培養が、結果として少なくとも１つの免疫細胞の亜集団の活性化及び拡大を引き起こす、操作された細胞集団。
【請求項２】
主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）Ｉ分子を発現しない、遺伝子操作された細胞集団であって、
前記操作された細胞集団が、癌細胞に由来し、
前記操作された細胞集団が、膜結合型インターロイキン−１５（ｍｂＩＬ１５）を発現するように改変され、
前記操作された細胞集団が、膜結合型４−１ＢＢリガンド（４−１ＢＢＬ）を発現するように改変され、
前記操作された細胞集団が、免疫細胞の活性化を刺激する、少なくとも１つの追加の膜結合型インターロイキンを発現するように改変され、及び
前記操作された細胞集団と免疫細胞集団の共培養が、少なくとも１つの免疫細胞の亜集団の活性化及び拡大を引き起こす、操作された細胞集団。
【請求項３】
前記ｍｂＩＬ１５が、配列番号１に対して少なくとも９５％の配列相同性を有する核酸配列にコードされ、前記４−１ＢＢＬが、配列番号１３に対して少なくとも９５％の配列相同性を有する核酸配列にコードされ、及び各々の前記膜結合型分子が、ヒトＣＤ８αの膜貫通ドメインに結合する、請求項１又は２に記載の操作された細胞集団。
【請求項４】
前記ヒトＣＤ８αの膜貫通ドメインが、配列番号１８に対して少なくとも９５％の配列相同性を有するアミノ酸配列を含む、請求項３に記載の操作された細胞集団。
【請求項５】
前記操作された細胞集団が、Ｋ５６２細胞、ウイルムス腫瘍細胞株ＨＦＷＴ、子宮内膜腫瘍細胞株ＨＨＵＡ、黒色腫細胞株ＨＭＶ−ＩＩ、肝芽腫細胞株ＨｕＨ−６、肺小細胞癌細胞株Ｌｕ−１３０又はＬｕ−１３４−Ａ、神経芽細胞腫細胞株ＮＢ１９又はＮＢ６９、胎児性精巣癌細胞株ＮＥＣ１４、子宮頸癌細胞株ＴＣＯ−２、及び神経芽細胞腫細胞株ＴＮＢ１からなる群から選択される細胞株に由来する、請求項１〜４のいずれか一項に記載の操作された細胞集団。
【請求項６】
前記操作された細胞集団が、ＭＨＣＩＩ分子の発現を欠く、請求項１〜５のいずれか一項に記載の操作された細胞集団。
【請求項７】
前記少なくとも１つの追加の膜結合型インターロイキンが、配列番号４に対して少なくとも９５％の配列相同性を有するアミノ酸配列を含むＩＬ１２Ａ、又はその断片を含む、請求項１から６のいずれか一項に記載の操作された細胞集団。
【請求項８】
前記少なくとも１つの追加の膜結合型インターロイキンが、配列番号６に対して少なくとも９５％の配列相同性を有するアミノ酸配列を含むＩＬ１２Ｂ、又はその断片を含む、請求項１から７のいずれか一項に記載の操作された細胞集団。
【請求項９】
前記少なくとも１つの追加の膜結合型インターロイキンが、ＩＬ１２Ａ及びＩＬ１２Ｂ、又はそれら断片を含む、請求項７又は８に記載の操作された細胞集団。
【請求項１０】
前記操作された細胞集団が、配列番号８に対して少なくとも９５％の配列相同性を有するアミノ酸配列を含む膜結合型ＩＬ１８（ｍｂＩＬ１８）、又はその断片をさらに発現する、請求項１から９のいずれか一項に記載の操作された細胞集団。
【請求項１１】
前記操作された細胞集団が、配列番号１０に対して少なくとも９５％の配列相同性を有するアミノ酸配列を含む膜結合型ＩＬ２１（ｍｂＩＬ２１）、又はその断片をさらに発現する、請求項１から１０のいずれか一項に記載の操作された細胞集団。
【請求項１２】
前記操作された細胞集団が、配列番号１２に対して少なくとも９５％の配列相同性を有するアミノ酸配列を含む膜結合型ＩＬ２２（ｍｂＩＬ２２）、又はその断片をさらに発現する、請求項１から１１のいずれか一項に記載の操作された細胞集団。
【請求項１３】
前記操作された細胞集団が、モノクローナル抗体であり、及び配列番号１５のＣＤ３イプシロンの核酸配列内のエピトープを標的とする膜結合型抗ＣＤ３抗体（ｍｂα−ＣＤ３）、又はその断片をさらに含む、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の操作された細胞集団。
【請求項１４】
前記細胞が、膜結合型抗ＣＤ３  ｓｃＦｖをさらに含み、前記ｓｃＦｖが、配列番号１７に対して少なくとも９５％の配列相同性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の操作された細胞集団。
【請求項１５】
免疫細胞を含む血液試料を、請求項１から１４のいずれか一項に記載の操作された細胞集団とともに共培養する工程を含む、免疫細胞を拡大させる方法。
【請求項１６】
前記免疫細胞が、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞である、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
操作された細胞集団を調製する方法であって、
細胞集団に、ｍｂＩＬ１５をコードする第１のコンストラクトを用いて形質導入し、それにより第１の形質導入細胞集団を生成する工程、
前記第１の形質導入細胞集団を拡大させる工程、
前記第１の形質導入細胞集団に、４−１ＢＢＬをコードする第２のコンストラクトを用いて形質導入し、それにより第２の形質導入細胞集団を生成する工程、
前記第２の形質導入細胞集団に、免疫細胞を刺激可能な少なくとも１つの追加の分子をコードする第３のコンストラクトを用いて形質導入し、それにより第３の形質導入細胞集団を生成する工程、及び
前記第３の形質導入細胞集団を拡大させる工程、
を含む、方法。
【請求項１８】
前記操作された細胞が、主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）Ｉ分子を発現せず、及び前記操作された細胞集団と免疫細胞集団の共培養が、結果として少なくとも１つの免疫細胞の亜集団の活性化及び拡大を引き起こす、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
操作された細胞集団の調製に使用するための複数の核酸であって、
ｍｂＩＬ１５をコードする核酸、
４−１ＢＢＬをコードする核酸、
ｍｂＩＬ１２Ａをコードする核酸
ｍｂＩＬ１２Ｂをコードする核酸、
ｍｂＩＬ１８をコードする核酸、
ｍｂＩＬ２１をコードする核酸、
ｍｂＩＬ２２をコードする核酸、及び
ｍｂα−ＣＤ３をコードする核酸、
の少なくとも３つを含む、核酸。
【請求項２０】
前記複数の核酸が、単一のコンストラクトとして設計される、請求項１９に記載の複数の核酸。
【請求項２１】
ｍｂＩＬ１５が、配列番号１に対して少なくとも９５％の配列相同性を有する核酸配列又はその断片によりコードされ、４−１ＢＢＬが、配列番号１３に対して少なくとも９５％の配列相同性を有する核酸配列又はその断片によりコードされ、ｍｂＩＬ１２Ａが、配列番号３に対して少なくとも９５％の配列相同性を有する核酸配列又はその断片によりコードされ、ｍｂＩＬ１２Ｂが、配列番号５に対して少なくとも９５％の配列相同性を有する核酸配列又はその断片によりコードされ、ｍｂＩＬ１８が、配列番号７に対して少なくとも９５％の配列相同性を有する核酸配列又はその断片によりコードされ、ｍｂＩＬ２１が、配列番号９に対して少なくとも９５％の配列相同性を有する核酸配列又はその断片によりコードされ、ｍｂＩＬ２２が、配列番号１１に対して少なくとも９５％の配列相同性を有する核酸配列又はその断片によりコードされ、及びｍｂα−ＣＤ３が、配列番号１６に対して少なくとも９５％の配列相同性を有する核酸配列によりコードされる、請求項１９又は２０に記載の複数の核酸。
【請求項２２】
各々の前記複数の核酸が、ＧＦＰタグをさらに含む、請求項１９〜２１のいずれか一項に記載の複数の核酸。
【請求項２３】
前記調製された操作された細胞集団が、膜結合型インターロイキン−１５（ｍｂＩＬ１５）を発現し、膜結合型４−１ＢＢリガンド（４−１ＢＢＬ）を発現し、及び免疫細胞の活性化を刺激する、少なくとも１つの追加の膜結合型インターロイキンを発現する、請求項１９〜２２のいずれか一項に記載の複数の核酸。
【請求項２４】
ＮＫ細胞を拡大させる方法であって、
ａ）ＮＫ細胞及びＴ細胞を含む混合免疫細胞集団を含む、末梢血試料を得る工程、
ｂ）混合細胞集団を、ＭＨＣＩの減少した発現を示し、かつ
ｉ）膜結合型インターロイキン−１５（ｍｂＩＬ１５）、
ｉｉ）４−１ＢＢリガンド（４−１ＢＢＬ）、及び、
ｉｉｉ）免疫細胞の活性化を刺激する、少なくとも１つの追加の分子、
を発現するように改変された、操作された細胞集団に接触させる工程、並びに、
ｃ）前記混合細胞集団を、前記操作された細胞とともに、前記混合免疫細胞集団の前記ＮＫ細胞を拡大させるのに十分な期間共培養し、それにより前記ＮＫ細胞を拡大させる工程、
を含む、方法。
【請求項２５】
共培養の前又は後に、前記混合集団からＴ細胞を除去する工程を任意でさらに含む、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
ＮＫ細胞を拡大させる方法であって、
ａ）ＮＫ細胞及びＴ細胞を含む混合免疫細胞集団を、ＭＨＣＩの減少した発現を示し、かつ
ｉ）膜結合型インターロイキン−１５（ｍｂＩＬ１５）、
ｉｉ）４−１ＢＢリガンド（４−１ＢＢＬ）、及び、
ｉｉｉ）免疫細胞の活性化を刺激する、少なくとも１つの追加の分子、
を発現するように改変された、操作された細胞集団に接触させる工程、並びに、
ｃ）前記混合細胞集団を、前記操作された細胞とともに、前記混合免疫細胞集団の前記ＮＫ細胞を拡大させるのに十分な期間共培養し、それにより前記ＮＫ細胞を拡大させる工程、
を含む、方法。
【請求項２７】
主要組織適合遺伝子複合体Ｉ分子を欠くＫ５６２骨髄性白血病細胞を含む改変された細胞株であって、前記Ｋ５６２骨髄性白血病細胞が、膜結合型インターロイキン−１５、４−１ＢＢリガンド、及び膜結合型抗ＣＤ３抗体を発現するように遺伝子改変された、細胞株。
【請求項２８】
主要組織適合遺伝子複合体Ｉ分子を欠くＫ５６２骨髄性白血病細胞を含む改変された細胞株であって、前記Ｋ５６２骨髄性白血病細胞が、膜結合型インターロイキン−１５、膜結合型４−１ＢＢリガンド、及び少なくとも１つの追加の膜結合型インターロイキンを発現するように遺伝子改変された、細胞株。
【請求項２９】
前記発現する追加の膜結合型インターロイキンが、インターロイキン−１２、インターロイキン−１８、又はインターロイキン−１２及びインターロイキン−１８である、請求項２８に記載の改変された細胞株。
【請求項３０】
膜結合型抗ＣＤ３抗体をさらに含む、請求項２８又は２９に記載の改変された細胞株。
【請求項３１】
ＮＫ細胞及びＴリンパ球を含む混合細胞培養物を、請求項２７から３０のいずれか一項に記載の改変された細胞株とともに培養することにより拡大した、ＮＫ細胞集団。
【請求項３２】
癌又は感染症の治療のための、請求項３１に記載のＮＫ細胞集団の使用。
【請求項３３】
請求項１から１４のいずれか一項に記載の操作された細胞集団の、免疫細胞集団の拡大のための使用であって、前記免疫細胞集団が癌又は感染症の治療における使用に適し、及び前記免疫細胞集団がＮＫ細胞を含む、使用。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００８０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００８０】
冠詞「その（ａ）」、「その（ａｎ）」、「その（ｔｈｅ）」などは、反対の示唆がない限り、又はそうでなければ文脈から明らかでない限り、１以上の意味を有し得る。明細書及び特許請求の範囲において、ここで使用する語句「及び／又は」は、そのように結合された要素の「いずれか又は両方」を意味すると理解されるべきである。「及び／又は」で挙げられた複数の要素は、同じように解釈する必要があり、即ちそのように結合された「１以上」の要素である。「及び／又は」句で具体的に特定される要素以外に、任意で他の要素が存在し得る。明細書及び特許請求の範囲において、ここで使用するように、「又は」は上で定義した「及び／又は」と同じ意味を有すると理解されるべきである。例えば、要素のリストで使用される場合、「又は」又は「及び／又は」は包括的、即ち、要素のリスト及び任意でさらなるリストされていない要素を少なくとも１つ、しかし任意で複数含むと解釈されるものとする。「ただ１つ」又は「正確に１つ」などの明らかに反対を示す用語のみが、数字又は要素のリストの正確に１つの要素を含むことを指す。したがって、反対に示唆されない限り、特定の製品又は方法に１つ、１以上、又は全ての群のメンバーが存在し、利用され、又はそうでなければ関連している場合、群の１以上のメンバーの間に「又は」を包含する特許請求の範囲は、充足されているとみなされる。群の正確に１つのメンバーが存在し、利用され、又はそうでなければ所定の製品又は方法に関連する実施形態が提供される。１以上の、又は全ての群のメンバーが存在し、利用され、又はそうでなければ所定の製品又は方法に関連する実施形態が提供される。実施形態、態様、特徴、要素、若しくは特性、又はそれらの組み合わせのいずれかを明示的に除外するために、いずれの１以上の請求項も補正することができる。薬剤、組成物、量、用量、投与経路、細胞型、標的、細胞マーカー、抗原、標的化部分、又はそれらの組み合わせを除外するために、いずれの１以上の請求項も補正することができる。
本発明のまた別の態様は、以下のとおりであってもよい。
〔１〕主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）Ｉ分子を発現しない、遺伝子操作された細胞集団であって、
前記操作された細胞集団が、不死化細胞に由来し、
前記操作された細胞集団が、膜結合型インターロイキン−１５（ｍｂＩＬ１５）を発現するように改変され、
前記操作された細胞集団が、膜結合型４−１ＢＢリガンド（４−１ＢＢＬ）を発現するように改変され、
前記操作された細胞集団が、免疫細胞の活性化を刺激する、少なくとも１つの追加の膜結合型インターロイキンを発現するように改変され、
前記操作された細胞集団が、主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）Ｉ分子を発現せず、及び
前記操作された細胞集団と免疫細胞集団の共培養が、結果として少なくとも１つの免疫細胞の亜集団の活性化及び拡大を引き起こす、操作された細胞集団。
〔２〕前記ｍｂＩＬ１５が、配列番号１を含む核酸配列にコードされる、前記〔１〕に記載の操作された細胞集団。
〔３〕前記４−１ＢＢＬが、配列番号１３を含む核酸配列にコードされる、前記〔１〕に記載の操作された細胞集団。
〔４〕各々の前記膜結合型分子が、ヒトＣＤ８αの膜貫通ドメインに結合する、前記〔１〕に記載の操作された細胞集団。
〔５〕前記ヒトＣＤ８αの膜貫通ドメインが、配列番号１８の配列を含む、前記〔４〕に記載の操作された細胞集団。
〔６〕前記操作された細胞集団が、Ｋ５６２細胞、ウイルムス腫瘍細胞株ＨＦＷＴ、子宮内膜腫瘍細胞株ＨＨＵＡ、黒色腫細胞株ＨＭＶ−ＩＩ、肝芽腫細胞株ＨｕＨ−６、肺小細胞癌細胞株Ｌｕ−１３０又はＬｕ−１３４−Ａ、神経芽細胞腫細胞株ＮＢ１９又はＮＢ６９、胎児性精巣癌細胞株ＮＥＣ１４、子宮頸癌細胞株ＴＣＯ−２、及び神経芽細胞腫細胞株ＴＮＢ１からなる群から選択される細胞株に由来する、前記〔１〕に記載の操作された細胞集団。
〔７〕前記操作された細胞集団が、ＭＨＣＩＩ分子の発現を欠く、前記〔１〕に記載の操作された細胞集団。
〔８〕前記操作された細胞集団が、Ｋ５６２細胞に由来する、前記〔１〕に記載の操作された細胞集団。
〔９〕前記インターロイキンが、ＩＬ１２Ａ、又はその断片を含む、前記〔１〕から〔８〕のいずれか一項に記載の操作された細胞集団。
〔１０〕前記ＩＬ１２Ａが、配列番号４の配列を含む、前記〔９〕に記載の操作された細胞集団。
〔１１〕前記インターロイキンが、ＩＬ１２Ｂ、又はその断片を含む、前記〔１〕から〔８〕のいずれか一項に記載の操作された細胞集団。
〔１２〕前記ＩＬ１２Ｂが、配列番号６の配列を含む、前記〔１１〕に記載の操作された細胞集団。
〔１３〕前記インターロイキンが、ＩＬ１２Ａ及びＩＬ１２Ｂ、又はその断片を含む、前記〔１〕から〔８〕のいずれか一項に記載の操作された細胞集団。
〔１４〕前記操作された細胞集団が、膜結合型ＩＬ１８（ｍｂＩＬ１８）、又はその断片をさらに発現する、前記〔１〕から〔８〕のいずれか一項に記載の操作された細胞集団。
〔１５〕前記ＩＬ１８が、配列番号８の配列を含む、前記〔１４〕に記載の操作された細胞集団。
〔１６〕前記操作された細胞集団が、膜結合型ＩＬ２１（ｍｂＩＬ２１）、又はその断片をさらに発現する、前記〔１〕から〔８〕のいずれか一項に記載の操作された細胞集団。
〔１７〕前記ＩＬ２１が、配列番号１０の配列、又はその断片を含む、前記〔１６〕に記載の操作された細胞集団。
〔１８〕前記細胞が、膜結合型ＩＬ２２（ｍｂＩＬ２２）、又はその断片を発現する、前記〔１〕に記載の操作された細胞集団。
〔１９〕前記ＩＬ２２が、配列番号１２の配列、又はその断片を含む、前記〔１８〕に記載の操作された細胞集団。
〔２０〕前記細胞が、膜結合型抗ＣＤ３抗体（ｍｂα−ＣＤ３）、その抗体断片、又はｓｃＦｖをさらに含む、前記〔１〕から〔８〕のいずれか一項に記載の操作された細胞集団。
〔２１〕前記ｍｂα−ＣＤ３が、モノクローナル抗体である、前記〔２０〕に記載の操作された細胞集団。
〔２２〕前記ｍｂα−ＣＤ３が、配列番号１５のＣＤ３イプシロンの核酸配列内のエピトープを標的とする、前記〔２１〕に記載の操作された細胞集団。
〔２３〕前記ｍｂα−ＣＤ３が、ｓｃＦｖである、前記〔２０〕に記載の操作された細胞集団。
〔２４〕前記ｓｃＦｖが、配列番号１７の配列を含む、前記〔２３〕に記載の操作された細胞集団。
〔２５〕免疫細胞を含む血液試料を、前記〔１〕から〔２４〕のいずれか一項に記載の操作された細胞集団とともに共培養する工程を含む、免疫細胞を拡大させる方法。
〔２６〕前記免疫細胞が、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞である、前記〔２５〕に記載の方法。
〔２７〕主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）Ｉ分子を発現しない、遺伝子操作された細胞集団であって、
前記操作された細胞集団が、癌細胞に由来し、
前記操作された細胞集団が、膜結合型インターロイキン−１５（ｍｂＩＬ１５）を発現するように改変され、
前記操作された細胞集団が、膜結合型４−１ＢＢリガンド（４−１ＢＢＬ）を発現するように改変され、
前記操作された細胞集団が、免疫細胞の活性化を刺激する、少なくとも１つの追加の膜結合型インターロイキンを発現するように改変され、及び
前記操作された細胞集団と免疫細胞集団の共培養が、少なくとも１つの免疫細胞の亜集団の活性化及び拡大を引き起こす、操作された細胞集団。
〔２８〕前記インターロイキンが、ＩＬ１２Ａ、又はその断片を含む、前記〔２７〕に記載の操作された細胞集団。
〔２９〕前記ＩＬ１２Ａが、配列番号４の配列を含む、前記〔２８〕に記載の操作された細胞集団。
〔３０〕前記インターロイキンが、ＩＬ１２Ｂ、又はその断片を含む、前記〔２８〕に記載の操作された細胞集団。
〔３１〕前記ＩＬ１２Ｂが、配列番号６の配列を含む、前記〔３０〕に記載の操作された細胞集団。
〔３２〕前記インターロイキンが、ＩＬ１２Ａ及びＩＬ１２Ｂ、又はその断片を含む、前記〔２７〕に記載の操作された細胞集団。
〔３３〕前記操作された細胞集団が、膜結合型ＩＬ１８（ｍｂＩＬ１８）、又はその断片をさらに発現する、前記〔２７〕から〔３２〕のいずれか一項に記載の操作された細胞集団。
〔３４〕前記ＩＬ１８が、配列番号８の配列を含む、前記〔３３〕に記載の操作された細胞集団。
〔３５〕前記操作された細胞集団が、膜結合型ＩＬ２１（ｍｂＩＬ２１）、又はその断片を発現する、前記〔２７〕から〔３４〕のいずれか一項に記載の操作された細胞集団。
〔３６〕前記ＩＬ２１が、配列番号１０の配列、又はその断片を含む、前記〔３５〕に記載の操作された細胞集団。
〔３７〕前記操作された細胞集団が、膜結合型ＩＬ２２（ｍｂＩＬ２２）、又はその断片を発現する、前記〔２７〕から〔３６〕のいずれか一項に記載の操作された細胞集団。
〔３８〕前記ＩＬ２２が、配列番号１２の配列、又はその断片を含む、前記〔３７〕に記載の操作された細胞集団。
〔３９〕前記操作された細胞集団が、膜結合型抗ＣＤ３抗体（ｍｂα−ＣＤ３）、その抗体断片、又はｓｃＦｖをさらに含む、前記〔２７〕から〔３８〕のいずれか一項に記載の操作された細胞集団。
〔４０〕前記ｍｂα−ＣＤ３が、モノクローナル抗体である、前記〔３９〕に記載の操作された細胞集団。
〔４１〕前記ｍｂα−ＣＤ３が、配列番号１５のＣＤ３イプシロンの核酸配列内のエピトープを標的とする、前記〔３９〕又は〔４０〕に記載の操作された細胞集団。
〔４２〕前記ｍｂα−ＣＤ３が、ｓｃＦｖである、前記〔３９〕に記載の操作された細胞集団。
〔４３〕前記ｓｃＦｖが、配列番号１７の配列を含む、前記〔４２〕に記載の操作された細胞集団。
〔４４〕前記操作された細胞集団が、Ｋ５６２細胞、ウイルムス腫瘍細胞株ＨＦＷＴ、子宮内膜腫瘍細胞株ＨＨＵＡ、黒色腫細胞株ＨＭＶ−ＩＩ、肝芽腫細胞株ＨｕＨ−６、肺小細胞癌細胞株Ｌｕ−１３０又はＬｕ−１３４−Ａ、神経芽細胞腫細胞株ＮＢ１９又はＮＢ６９、胎児性精巣癌細胞株ＮＥＣ１４、子宮頸癌細胞株ＴＣＯ−２、及び神経芽細胞腫細胞株ＴＮＢ１からなる群から選択される細胞株に由来する、前記〔２７〕から〔４３〕のいずれか一項に記載の操作された細胞集団。
〔４５〕前記操作された細胞が、ＭＨＣＩＩ分子の発現を欠く、前記〔２７〕から〔４４〕のいずれか一項に記載の操作された細胞集団。
〔４６〕前記操作された細胞が、Ｋ５６２細胞に由来する、前記〔４５〕に記載の操作された細胞集団。
〔４７〕各々の前記膜結合型分子が、ヒトＣＤ８αの膜貫通ドメインに結合する、前記〔２７〕から〔４６〕のいずれか一項に記載の操作された細胞集団。
〔４８〕前記ヒトＣＤ８αの膜貫通ドメインが、配列番号１８の配列を含む、前記〔４７〕に記載の操作された細胞集団。
〔４９〕前記ｍｂＩＬ１５が、配列番号１を含む核酸配列にコードされる、前記〔２７〕から〔４８〕のいずれか一項に記載の操作された細胞集団。
〔５０〕前記ｍｂ４−１ＢＢＬが、配列番号１３を含む核酸配列にコードされる、前記〔２７〕から〔４９〕のいずれか一項に記載の操作された細胞集団。
〔５１〕主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）Ｉ分子を発現しない、遺伝子操作された細胞集団であって、
前記操作された細胞集団が、癌細胞に由来し、
前記操作された細胞集団が、膜結合型インターロイキン−１５（ｍｂＩＬ１５）を発現するように改変され、
前記操作された細胞集団が、膜結合型４−１ＢＢリガンド（４−１ＢＢＬ）を発現するように改変され、
前記操作された細胞集団が、免疫細胞の活性化を刺激する、膜結合型抗ＣＤ３抗体（ｍｂα−ＣＤ３）を発現するように改変され、及び
前記操作された細胞集団と免疫細胞集団の共培養が、少なくとも１つの免疫細胞の亜集団の活性化及び拡大を引き起こす、操作された細胞集団。
〔５２〕前記ｍｂα−ＣＤ３が、モノクローナル抗体である、前記〔５１〕に記載の操作された細胞集団。
〔５３〕前記ｍｂα−ＣＤ３が、配列番号１５のＣＤ３イプシロンの核酸配列内のエピトープを標的とする、前記〔５１〕又は〔５２〕に記載の操作された細胞集団。
〔５４〕前記ｍｂα−ＣＤ３が、ｓｃＦｖである、前記〔５１〕に記載の操作された細胞集団。
〔５５〕前記ｓｃＦｖが、配列番号１７の配列を含む、前記〔５４〕に記載の操作された細胞集団。
〔５６〕前記細胞が、少なくとも１つの膜結合型インターロイキン、又はその断片をさらに発現する、前記〔５１〕から〔５５〕のいずれか一項に記載の操作された細胞集団。
〔５７〕前記インターロイキンが、ＩＬ１２Ａ、又はその断片を含む、前記〔５６〕に記載の操作された細胞集団。
〔５８〕前記ＩＬ１２Ａが、配列番号４の配列を含む、前記〔５７〕に記載の操作された細胞集団。
〔５９〕前記少なくとも１つの膜結合型インターロイキン、又はその断片が、ＩＬ１２Ｂ、又はその断片を含む、前記〔５６〕から〔５８〕のいずれか一項に記載の操作された細胞集団。
〔６０〕前記ＩＬ１２Ｂが、少なくとも１つの膜結合型インターロイキン、又はその断片の配列番号６の配列である、前記〔５９〕に記載の操作された細胞集団。
〔６１〕前記少なくとも１つの膜結合型インターロイキン、又はその断片が、ＩＬ１２Ａ及びＩＬ１２Ｂ、又はその断片を含む、前記〔５６〕から〔６０〕のいずれか一項に記載の操作された細胞集団。
〔６２〕前記細胞が、膜結合型ＩＬ１８（ｍｂＩＬ１８）、又はその断片をさらに発現する、前記〔５６〕から〔６７〕のいずれか一項に記載の操作された細胞集団。
〔６３〕前記ＩＬ１８が、配列番号８の配列を含む、前記〔６２〕に記載の操作された細胞集団。
〔６４〕前記細胞が、膜結合型ＩＬ２１（ｍｂＩＬ２１）、又はその断片を発現する、前記〔５６〕から〔６３〕のいずれか一項に記載の操作された細胞集団。
〔６５〕前記ＩＬ２１が、配列番号１０の配列、又はその断片を含む、前記〔６４〕に記載の操作された細胞集団。
〔６６〕前記細胞が、膜結合型ＩＬ２２（ｍｂＩＬ２２）、又はその断片を発現する、前記〔５６〕から〔６５〕のいずれか一項に記載の操作された細胞集団。
〔６７〕前記ＩＬ２２が、配列番号１２の配列、又はその断片を含む、前記〔６６〕に記載の操作された細胞集団。
〔６８〕前記操作された細胞が、免疫細胞の拡大に適している、前記〔２５〕から〔６７〕のいずれか一項に記載の操作された細胞集団。
〔６９〕拡大された免疫細胞がＮＫ細胞である、前記〔６８〕に記載の操作された細胞集団。
〔７０〕ＮＫ細胞を含む試料を、前記〔２５〕から〔６９〕のいずれか一項に記載の操作された細胞集団とともに共培養する工程を含む、ＮＫ細胞を拡大させる方法。
〔７１〕前記〔２５〕から〔６９〕のいずれか一項に記載の操作された細胞集団を調製する方法であって、
前記細胞に、ｍｂＩＬ１５をコードする第１のコンストラクトを用いて形質導入し、それにより第１の形質導入細胞集団を生成する工程、
前記第１の形質導入細胞集団を拡大させる工程、
前記第１の形質導入細胞集団に、４−１ＢＢＬをコードする第２のコンストラクトを用いて形質導入し、それにより第２の形質導入細胞集団を生成する工程、
前記第２の形質導入細胞集団に、免疫細胞を刺激可能な少なくとも１つの追加の分子をコードする第３のコンストラクトを用いて形質導入し、それにより第３の形質導入細胞集団を生成する工程、及び
前記第３の形質導入細胞集団を拡大させる工程、
を含む、方法。
〔７２〕前記〔２５〕から〔６９〕のいずれか一項に記載の操作された細胞集団の調製に使用するための複数の核酸であって、
ｍｂＩＬ１５をコードする核酸、
４−１ＢＢＬをコードする核酸、
ｍｂＩＬ１２Ａをコードする核酸
ｍｂＩＬ１２Ｂをコードする核酸、
ｍｂＩＬ１８をコードする核酸、
ｍｂＩＬ２１をコードする核酸、
ｍｂＩＬ２２をコードする核酸、及び
ｍｂα−ＣＤ３をコードする核酸、
の少なくとも３つを含む、核酸。
〔７３〕前記複数の核酸が、単一のコンストラクトとして設計される、前記〔７２〕に記載の複数の核酸。
〔７４〕ｍｂＩＬ１５が、配列番号１を含む核酸配列によりコードされる、前記〔７２〕に記載の複数の核酸。
〔７５〕４−１ＢＢＬが、配列番号１３を含む核酸配列によりコードされる、前記〔７２〕に記載の複数の核酸。
〔７６〕ｍｂＩＬ１２Ａが、配列番号３を含む核酸配列によりコードされる、前記〔７２〕に記載の複数の核酸。
〔７７〕ｍｂＩＬ１２Ｂが、配列番号５を含む核酸配列によりコードされる、前記〔７２〕に記載の複数の核酸。
〔７８〕ｍｂＩＬ１８が、配列番号７を含む核酸配列によりコードされる、前記〔７２〕に記載の複数の核酸。
〔７９〕ｍｂＩＬ２１が、配列番号９、又はその断片を含む核酸配列によりコードされる、前記〔７２〕に記載の複数の核酸。
〔８０〕ｍｂＩＬ２２が、配列番号１１、又はその断片を含む核酸配列によりコードされる、前記〔７２〕に記載の複数の核酸。
〔８１〕ｍｂα−ＣＤ３が、配列番号１６を含む核酸配列によりコードされる、前記〔７２〕に記載の複数の核酸。
〔８２〕各々の前記複数の核酸が、ＧＦＰタグをさらに含む、前記〔７２〕に記載の複数の核酸。
〔８３〕ＮＫ細胞を拡大させる方法であって、
ａ）ＮＫ細胞及びＴ細胞を含む混合免疫細胞集団を含む、末梢血試料を得る工程、
ｂ）混合細胞集団を、ＭＨＣＩの減少した発現を示し、かつ
ｉ）膜結合型インターロイキン−１５（ｍｂＩＬ１５）、
ｉｉ）４−１ＢＢリガンド（４−１ＢＢＬ）、及び、
ｉｉｉ）免疫細胞の活性化を刺激する、少なくとも１つの追加の分子、
を発現するように改変された、操作された細胞集団に接触させる工程、並びに、
ｃ）前記混合細胞集団を、前記操作された細胞とともに、前記混合免疫細胞集団の前記ＮＫ細胞を拡大させるのに十分な期間共培養し、それにより前記ＮＫ細胞を拡大させる工程、
を含む、方法。
〔８４〕共培養の前又は後に、前記混合集団からＴ細胞を除去する工程を任意でさらに含む、前記〔８３〕に記載の方法。
〔８５〕主要組織適合遺伝子複合体Ｉ分子を欠くＫ５６２骨髄性白血病細胞を含む改変された細胞株であって、前記Ｋ５６２骨髄性白血病細胞が、膜結合型インターロイキン−１５、４−１ＢＢリガンド、及び膜結合型抗ＣＤ３抗体を発現するように遺伝子改変された、細胞株。
〔８６〕主要組織適合遺伝子複合体Ｉ分子を欠くＫ５６２骨髄性白血病細胞を含む改変された細胞株であって、前記Ｋ５６２骨髄性白血病細胞が、膜結合型インターロイキン−１５、膜結合型４−１ＢＢリガンド、及び少なくとも１つの追加の膜結合型インターロイキンを発現するように遺伝子改変された、細胞株。
〔８７〕前記発現する追加の膜結合型インターロイキンが、インターロイキン−１２である、前記〔８６〕に記載の改変された細胞株。
〔８８〕前記発現する追加の膜結合型インターロイキンが、インターロイキン−１８である、前記〔８６〕に記載の改変された細胞株。
〔８９〕前記発現する追加の膜結合型インターロイキンが、インターロイキン−１２及びインターロイキン−１８である、前記〔８６〕に記載の改変された細胞株。
〔９０〕膜結合型抗ＣＤ３抗体をさらに含む、前記〔８６〕から〔８９〕のいずれか一項に記載の改変された細胞株。
〔９１〕ｍｂＩＬ１２Ａ、ｍｂＩＬ１２Ｂ、ｍｂＩＬ１８、ｍｂＩＬ２１、ｍｂＩＬ２２、及びｍｂα−ＣＤ３の１以上をさらに含む、前記〔８６〕から〔９０〕のいずれか一項に記載の改変された細胞株。
〔９２〕主要組織適合遺伝子複合体Ｉ分子を欠くＫ５６２骨髄性白血病細胞を含む改変された細胞株であって、前記Ｋ５６２骨髄性白血病細胞が、膜結合型インターロイキン−１５、膜結合型４−１ＢＢリガンド、膜結合型抗ＣＤ３抗体、及び少なくとも１つの追加の膜結合型インターロイキンを発現するように遺伝子改変された、細胞株。
〔９３〕前記発現する追加の膜結合型インターロイキンが、インターロイキン−１２である、前記〔９２〕に記載の改変された細胞株。
〔９４〕前記発現する追加の膜結合型インターロイキンが、インターロイキン−１８である、前記〔９２〕に記載の改変された細胞株。
〔９５〕前記発現する追加の膜結合型インターロイキンが、インターロイキン−１２及びインターロイキン−１８である、前記〔９２〕に記載の改変された細胞株。
〔９６〕前記少なくとも１つの追加のインターロイキンが、ｍｂＩＬ１２Ａ、ｍｂＩＬ１２Ｂ、ｍｂＩＬ１８、ｍｂＩＬ２１、及びｍｂＩＬ２２の１以上を含む、前記〔９２〕に記載の細胞株。
〔９７〕ＮＫ細胞及びＴリンパ球を含む混合細胞培養物を、前記〔８５〕から〔８６〕のいずれか一項に記載の改変された細胞株とともに培養することにより拡大した、ＮＫ細胞集団。
〔９８〕癌又は感染症の治療のための、前記〔９７〕に記載のＮＫ細胞集団の使用。
〔９９〕前記〔２５〕から〔６９〕のいずれか一項に記載の操作された細胞集団の、免疫細胞集団の拡大のための使用であって、前記免疫細胞集団が癌又は感染症の治療における使用に適し、及び前記免疫細胞集団がＮＫ細胞を含む、使用。
〔１００〕癌又は感染症の治療方法であって、
癌又は感染症を有する対象に、拡大した免疫細胞集団を含む組成物を投与する工程を含み、
前記免疫細胞が、前記免疫細胞を操作された細胞集団と共培養することにより拡大され、
前記操作された細胞集団が、癌細胞に由来し、
前記操作された細胞集団が、膜結合型インターロイキン−１５（ｍｂＩＬ１５）を発現するように改変され、
前記操作された細胞集団が、膜結合型４−１ＢＢリガンド（４−１ＢＢＬ）を発現するように改変され、
前記操作された細胞集団が、免疫細胞の活性化を刺激する、少なくとも１つの追加の膜結合型インターロイキンを発現するように改変され、
前記操作された細胞集団と免疫細胞集団の共培養が、少なくとも１つの免疫細胞の亜集団の活性化及び拡大を引き起こし、及び、
前記免疫細胞の少なくとも１つの亜集団が、前記対象に投与される、
方法。
〔１０１〕前記投与される細胞の亜集団が、ＮＫ細胞を含む、前記〔１００〕に記載の方法。
〔１０２〕癌又は感染症の治療方法であって、
癌又は感染症を有する対象に、拡大した免疫細胞集団を含む組成物を投与する工程を含み、
前記免疫細胞が、前記免疫細胞を操作された細胞集団と共培養することにより拡大され、
前記操作された細胞集団が、癌細胞に由来し、
前記操作された細胞集団が、膜結合型インターロイキン−１５（ｍｂＩＬ１５）を発現するように改変され、
前記操作された細胞集団が、膜結合型４−１ＢＢリガンド（４−１ＢＢＬ）を発現するように改変され、
前記操作された細胞集団が、抗ＣＤ−３抗体を発現するように改変され、
前記操作された細胞集団と免疫細胞集団の共培養が、少なくとも１つの免疫細胞の亜集団の活性化及び拡大を引き起こし、及び、
前記免疫細胞の少なくとも１つの亜集団が、前記対象に投与される、
方法。