【手続補正書】
【提出日】令和3年1月8日(2021.1.8)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
非マメ科植物での窒素固定を増加させる方法であって、
前記植物に、複数の非属間細菌を適用するステップを含み、前記複数の非属間細菌が、
ｉ．植物根組織の生重量１グラム当たり少なくとも約１．０×１０４細菌細胞の植物根組織１単位当たりの平均コロニー化能力を有し、かつ
ｉｉ．１時間当たり１細菌細胞当たり少なくとも約１×１０−１７ｍｍｏｌ  Ｎの固定Ｎを産生する非属間細菌を含み、
前記複数の非属間細菌が、前記植物における固定窒素の１％またはそれよりも多くを植物内で産生し、
前記複数の非属間細菌の各メンバーが、前記非属間細菌が外因性窒素の存在下で大気窒素を固定できるように、窒素固定または同化遺伝子調節ネットワークの少なくとも１つの遺伝子または非コードポリヌクレオチドに導入された少なくとも１つの遺伝子変異を含む、方法。
【請求項２】
前記複数の非属間細菌が、組成物に製剤化される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記複数の非属間細菌が、農業的に許容される担体を含む組成物に製剤化される、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記複数の非属間細菌が、前記植物の種子が植栽される畝間内に適用される、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記複数の非属間細菌が、１ミリリットル当たり約１×１０７〜約１×１０１０ｃｆｕの濃度の細菌を含む液体畦間組成物に製剤化される、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記複数の非属間細菌が、前記植物の種子に適用される、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記複数の非属間細菌が、種子コーティングに製剤化され、前記植物の種子に適用される、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記複数の非属間細菌が、種子コーティングに製剤化され、１種子当たり約１×１０５〜約１×１０７ｃｆｕの濃度で前記植物の種子に適用される、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記植物が、穀類作物である、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記植物が、トウモロコシ、米、小麦、大麦、モロコシ、雑穀、オート麦、ライ麦、およびライ小麦からなる群より選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
前記植物が、トウモロコシである、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
前記植物が、農業作物植物である、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
前記複数の非属間細菌が、少なくとも２つの異なる種の細菌を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
前記複数の非属間細菌が、同じ種の細菌の少なくとも２つの異なる菌株を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１５】
前記複数の非属間細菌が、Ｒａｈｎｅｌｌａ  ａｑｕａｔｉｌｉｓ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｖａｒｉｉｃｏｌａ、Ａｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒ  ｓｐｉｒｉｔｉｎｕｓ、Ａｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒ  ｍａｒｐｌａｔｅｎｓｉｓ、Ｍｉｃｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｍｕｒａｌｅ、Ｋｌｕｙｖｅｒａ  ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａ、Ｋｏｓａｋｏｎｉａ  ｐｓｅｕｄｏｓａｃｃｈａｒｉ、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ  ｓｐ．、Ａｚｏｓｐｉｒｉｌｌｕｍ  ｌｉｐｏｆｅｒｕｍ、Ｋｏｓａｋｏｎｉａ  ｓａｃｃｈａｒｉ、およびそれらの組合せから選択される細菌を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１６】
前記複数の非属間細菌が、内部寄生性、着生性、または根圏性である、請求項１に記載の方法。
【請求項１７】
前記複数の非属間細菌が、ＰＴＡ−１２２２９３として寄託された細菌、ＰＴＡ−１２２２９４として寄託された細菌、ＮＣＭＡ２０１７０１００２として寄託された細菌、ＮＣＭＡ２０１７０８００４として寄託された細菌、ＮＣＭＡ２０１７０８００３として寄託された細菌、ＮＣＭＡ２０１７０８００２として寄託された細菌、ＮＣＭＡ２０１７１２００１として寄託された細菌、ＮＣＭＡ２０１７１２００２として寄託された細菌、およびそれらの組合せから選択される細菌を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１８】
前記細菌が、外因性窒素が存在する場合、１時間当たり１細菌細胞当たり少なくとも約１×１０−１７ｍｍｏｌ  Ｎの固定Ｎを産生する、請求項１に記載の方法。
【請求項１９】
前記複数の非属間細菌が、前記植物における固定窒素の５％またはそれよりも多くを植物内で産生する、請求項１に記載の方法。
【請求項２０】
前記複数の非属間細菌が、前記植物における固定窒素の１０％またはそれよりも多くを植物内で産生する、請求項１に記載の方法。
【請求項２１】
前記複数の非属間細菌が、前記植物における固定窒素の１５％またはそれよりも多くを植物内で産生する、請求項１に記載の方法。
【請求項２２】
前記複数の非属間細菌が、前記植物における固定窒素の２０％またはそれよりも多くを植物内で産生する、請求項１に記載の方法。
【請求項２３】
（ｉ）前記植物根組織１単位当たりの平均コロニー化能力および（ｉｉ）１時間当たり１細菌細胞当たりの産生される固定Ｎの積が、１時間当たり植物根組織の生重量１グラム当たり少なくとも約２．０×１０−７ｍｍｏｌ  Ｎである、請求項１に記載の方法。
【請求項２４】
（ｉ）前記植物根組織１単位当たりの平均コロニー化能力および（ｉｉ）１時間当たり１細菌細胞当たりの産生される固定Ｎの積が、１時間当たり植物根組織の生重量１グラム当たり少なくとも約２．０×１０−６ｍｍｏｌ  Ｎである、請求項１に記載の方法。
【請求項２５】
１季節当たり１エーカー当たり少なくとも１ポンドの窒素を生産することができる細菌株を同定する方法であって、
ａ）コロニー化能力および１時間当たり微生物当たりの生産されるＮについて複数の候補細菌株をアッセイするステップ；および
ｂ）前記複数の候補細菌株から、１時間当たり植物根組織の生重量１グラム当たり少なくとも約２．５×１０−８ｍｍｏｌ  Ｎの（ｉ）コロニー化能力および（ｉｉ）１時間当たり１微生物当たりの生産されるＮの積を有する少なくとも１種の前記細菌株を同定するステップ
を含む、方法。
【請求項２６】
圃場条件下で前記複数の候補細菌株をアッセイするステップを含む、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
Ｋｏｓａｋｏｎｉａ  ｓａｃｃｈａｒｉ、Ｒａｈｎｅｌｌａ  ａｑｕａｔｉｌｉｓ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｖａｒｉｉｃｏｌａおよびＫｏｓａｋｏｎｉａ  ｐｓｅｕｄｏｓａｃｃｈａｒｉからなる群から選択される少なくとも１種の細菌株を同定することを含む、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
前記Ｋｏｓａｋｏｎｉａ  ｓａｃｃｈａｒｉ株が、特許寄託指定番号２０１７０１００２、２０１７０８００４、２０１７０８００３または２０１７０８００２で寄託された細菌を含む、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記Ｒａｈｎｅｌｌａ  ａｑｕａｔｉｌｉｓ株が、アクセッション番号ＰＴＡ−１２２２９３で寄託された細菌を含む、請求項２７に記載の方法。
【請求項３０】
前記Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｖａｒｉｉｃｏｌａ株が、特許寄託指定番号２０１７１２００１または２０１７１２００２で寄託された細菌を含む、請求項２７に記載の方法。
【請求項３１】
実験室および／または温室条件下で前記複数の候補細菌株をアッセイするステップを含む、請求項２５に記載の方法。
【請求項３２】
Ｋｏｓａｋｏｎｉａ  ｓａｃｃｈａｒｉ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｖａｒｉｉｃｏｌａ、Ｋｏｓａｋｏｎｉａ  ｐｓｅｕｄｏｓａｃｃｈａｒｉ、Ａｚｏｓｐｉｒｉｌｌｕｍ  ｌｉｐｏｆｅｒｕｍ、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ  ｓｐ．およびＫｌｕｙｖｅｒａ  ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａからなる群から選択される少なくとも１種の細菌株を同定することを含む、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
前記細菌株がトウモロコシ植物に付随するときに前記複数の候補細菌株をアッセイするステップを含む、請求項２５に記載の方法。
【請求項３４】
アセチレン還元アッセイを使用して生産される窒素をアッセイするステップを含む、請求項２５に記載の方法。
【請求項３５】
外来性窒素の存在下で前記複数の候補細菌株をアッセイするステップを含む、請求項２５に記載の方法。
【請求項３６】
少なくとも１種の細菌株を同定することが、遺伝子操作された細菌株を同定することを含む、請求項２５に記載の方法。
【請求項３７】
圃場において非マメ科植物における窒素固定を増大させるための方法であって、前記方法は、前記圃場において前記非マメ科植物に複数の細菌株を適用するステップを含み、前記複数は、１時間当たり植物根組織の生重量１グラム当たり少なくとも約２．５×１０−８ｍｍｏｌ  Ｎの（ｉ）コロニー化能力および（ｉｉ）１時間当たり１微生物当たりの生産されるＮの積を有する細菌株を含む、方法。
【請求項３８】
前記複数の細菌株が、前記非マメ科植物における固定窒素の５％またはそれよりも多く
を植物内で産生する、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
Ｋｏｓａｋｏｎｉａ  ｓａｃｃｈａｒｉ、Ｒａｈｎｅｌｌａ  ａｑｕａｔｉｌｉｓ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｖａｒｉｉｃｏｌａおよびＫｏｓａｋｏｎｉａ  ｐｓｅｕｄｏｓａｃｃｈａｒｉからなる群から選択される少なくとも１種の細菌株を適用するステップを含む、請求項３７に記載の方法。
【請求項４０】
前記Ｋｏｓａｋｏｎｉａ  ｓａｃｃｈａｒｉ株が、特許寄託指定番号２０１７０１００２、２０１７０８００４、２０１７０８００３または２０１７０８００２で寄託された細菌を含む、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
前記Ｒａｈｎｅｌｌａ  ａｑｕａｔｉｌｉｓ株が、アクセッション番号ＰＴＡ−１２２２９３で寄託された細菌を含む、請求項３９に記載の方法。
【請求項４２】
前記Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｖａｒｉｉｃｏｌａ株が、特許寄託指定番号２０１７１２００１または２０１７１２００２で寄託された細菌を含む、請求項３９に記載の方法。
【請求項４３】
１時間当たり植物根組織の生重量１グラム当たり少なくとも約２．５×１０−８ｍｍｏｌ  Ｎの（ｉ）コロニー化能力および（ｉｉ）１時間当たり１微生物当たりの生産されるＮの積を有する細菌株とコロニー化された非マメ科植物。
【請求項４４】
前記植物が、トウモロコシ、米、小麦、大麦、モロコシ、雑穀、オート麦、ライ麦、およびライ小麦からなる群より選択される、請求項４３に記載の非マメ科植物。
【請求項４５】
ａ）１時間当たり植物根組織の生重量１グラム当たり少なくとも約２．５×１０−８ｍｍｏｌ  Ｎの（ｉ）コロニー化能力および（ｉｉ）１時間当たり１微生物当たりの生産されるＮの積を有する複数の細菌株；および
ｂ）非マメ科植物種子であって、前記複数の細菌株が圃場において１季節当たり１エーカー当たり少なくとも１ポンドの窒素を前記植物種子から生産された非マメ科植物に提供することができる、非マメ科植物種子
を含む、組成物。
【請求項４６】
２種またはそれより多くの種の細菌株を含む、請求項４５に記載の組成物。
【請求項４７】
前記複数の細菌株が、Ｋｏｓａｋｏｎｉａ  ｓａｃｃｈａｒｉ、Ｒａｈｎｅｌｌａ  ａｑｕａｔｉｌｉｓ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｖａｒｉｉｃｏｌａおよびＫｏｓａｋｏｎｉａ  ｐｓｅｕｄｏｓａｃｃｈａｒｉからなる群から選択される少なくとも１種の細菌株を含む、請求項４５に記載の組成物。
【請求項４８】
前記Ｋｏｓａｋｏｎｉａ  ｓａｃｃｈａｒｉ株が、特許寄託指定番号２０１７０１００２、２０１７０８００４、２０１７０８００３または２０１７０８００２で寄託された細菌を含む、請求項４７に記載の組成物。
【請求項４９】
前記Ｒａｈｎｅｌｌａ  ａｑｕａｔｉｌｉｓ株が、アクセッション番号ＰＴＡ−１２２２９３で寄託された細菌を含む、請求項４７に記載の組成物。
【請求項５０】
前記Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｖａｒｉｉｃｏｌａ株が、特許寄託指定番号２０１７１２００１または２０１７１２００２で寄託された細菌を含む、請求項４７に記載の組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４４】
本発明の新規な特徴は、特に添付の特許請求の範囲に示される。本発明の特徴および利点は、本発明の原理が利用されている例示的な実施形態を示す以下の詳細な記載および添付の図面を参照すればより良好に理解されると予想される。
本発明の実施形態において、例えば以下の項目が提供される。
（項目１）
非マメ科植物での窒素固定を増加させる方法であって、
前記植物に、複数の非属間細菌を適用するステップを含み、前記複数の非属間細菌が、
ｉ．植物根組織の生重量１グラム当たり少なくとも約１．０×１０４細菌細胞の植物根組織１単位当たりの平均コロニー化能力を有し、かつ
ｉｉ．１時間当たり１細菌細胞当たり少なくとも約１×１０−１７ｍｍｏｌ  Ｎの固定Ｎを産生する非属間細菌を含み、
前記複数の非属間細菌が、前記植物における固定窒素の１％またはそれよりも多くを植物内で産生し、
前記複数の非属間細菌の各メンバーが、前記非属間細菌が外因性窒素の存在下で大気窒素を固定できるように、窒素固定または同化遺伝子調節ネットワークの少なくとも１つの遺伝子または非コードポリヌクレオチドに導入された少なくとも１つの遺伝子変異を含む、方法。
（項目２）
前記複数の非属間細菌が、植物根組織の生重量１グラム当たり少なくとも約１．０×１０４細菌細胞の植物根組織１単位当たりの平均コロニー化能力を有する細菌を含む、項目１に記載の方法。
（項目３）
前記複数の非属間細菌が、１時間当たり１細菌細胞当たり少なくとも約１×１０−１７ｍｍｏｌ  Ｎの固定Ｎを産生する細菌を含む、項目１に記載の方法。
（項目４）
前記複数の非属間細菌が、植物根組織の生重量１グラム当たり少なくとも約１．０×１０４細菌細胞の植物根組織１単位当たりの平均コロニー化能力を有し、１時間当たり１細菌細胞当たり少なくとも約１×１０−１７ｍｍｏｌ  Ｎの固定Ｎを産生する細菌を含む、項目１に記載の方法。
（項目５）
前記少なくとも１つの遺伝子変異が、窒素固定または同化遺伝子調節ネットワークの前記少なくとも１つの遺伝子と作動可能に連結した導入制御配列を含む、項目１に記載の方法。
（項目６）
前記少なくとも１つの遺伝子変異が、窒素固定または同化遺伝子調節ネットワークの前記少なくとも１つの遺伝子と作動可能に連結したプロモーターを含む、項目１に記載の方法。
（項目７）
前記少なくとも１つの遺伝子変異が、窒素固定または同化遺伝子調節ネットワークの前記少なくとも１つの遺伝子と作動可能に連結した誘導可能なプロモーターを含む、項目１に記載の方法。
（項目８）
前記複数の非属間細菌が、窒素固定または同化遺伝子調節ネットワークの遺伝子と作動可能に連結した構成的プロモーターを含まない、項目１に記載の方法。
（項目９）
前記複数の非属間細菌が、ｎｉｆ遺伝子クラスターの遺伝子と作動可能に連結した構成的プロモーターを含まない、項目１に記載の方法。
（項目１０）
前記複数の非属間細菌は、窒素固定の窒素含有産物を植物内で排出する、項目１に記載の方法。
（項目１１）
前記植物に適用される前記複数の非属間細菌が、外因性非大気窒素の取込み増加を刺激しない、項目１に記載の方法。
（項目１２）
前記植物が、１エーカー当たり少なくとも約５０ｌｂの窒素含有肥料が投与された圃場に由来する土壌で栽培され、前記窒素含有肥料が、少なくとも約５重量％の窒素を含む、項目１に記載の方法。
（項目１３）
前記植物が、１エーカー当たり少なくとも約５０ｌｂの窒素含有肥料が投与された圃場に由来する土壌で栽培され、前記窒素含有肥料が、少なくとも約５重量％の窒素を含み、前記窒素含有肥料が、アンモニウムまたはアンモニウム含有分子を含む、項目１に記載の方法。
（項目１４）
前記外因性窒素が、グルタミン、アンモニア、アンモニウム、尿素、硝酸塩、亜硝酸塩、アンモニウム含有分子、硝酸塩含有分子、および亜硝酸塩含有分子の１つまたは複数を含む肥料から選択される、項目１に記載の方法。
（項目１５）
前記複数の非属間細菌が、前記植物における固定窒素の５％またはそれよりも多くを植物内で産生する、項目１に記載の方法。
（項目１６）
前記複数の非属間細菌が、前記植物における固定窒素の１０％またはそれよりも多くを植物内で産生する、項目１に記載の方法。
（項目１７）
前記複数の非属間細菌が、非窒素制限条件で大気窒素を植物内で固定する、項目１に記載の方法。
（項目１８）
前記複数の非属間細菌が、窒素固定の窒素含有産物を植物内で排出する、項目１に記載の方法。
（項目１９）
前記複数の非属間細菌により産生される前記固定窒素が、植物組織での大気Ｎ２ガスによる濃縮肥料の希釈により測定される、項目１に記載の方法。
（項目２０）
窒素固定または同化遺伝子調節ネットワークの前記少なくとも１つの遺伝子または非コードポリヌクレオチドが、ｎｉｆＡ、ｎｉｆＬ、ｎｔｒＢ、ｎｔｒＣ、グルタミン合成酵素をコードするポリヌクレオチド、ｇｌｎＡ、ｇｌｎＢ、ｇｌｎＫ、ｄｒａｔ、ａｍｔＢ、グルタミナーゼをコードするポリヌクレオチド、ｇｌｎＤ、ｇｌｎＥ、ｎｉｆＪ、ｎｉｆＨ、ｎｉｆＤ、ｎｉｆＫ、ｎｉｆＹ、ｎｉｆＥ、ｎｉｆＮ、ｎｉｆＵ、ｎｉｆＳ、ｎｉｆＶ、ｎｉｆＷ、ｎｉｆＺ、ｎｉｆＭ、ｎｉｆＦ、ｎｉｆＢ、ｎｉｆＱ、およびニトロゲナーゼ酵素の生合成に関連する遺伝子からなる群より選択される、項目１に記載の方法。
（項目２１）
前記少なくとも１つの遺伝子変異が、ＮｉｆＡまたはグルタミナーゼの発現または活性の増加；ＮｉｆＬ、ＮｔｒＢ、グルタミン合成酵素、ＧｌｎＢ、ＧｌｎＫ、ＤｒａＴ、ＡｍｔＢの発現または活性の減少；ＧｌｎＥのアデニリル除去活性の減少；またはＧｌｎＤのウリジリル除去活性の減少の１つまたは複数をもたらす突然変異である、項目１に記載の方法。
（項目２２）
前記少なくとも１つの遺伝子変異が、（Ａ）ノックアウト突然変異、（Ｂ）標的遺伝子の調節配列を変更もしくは消失させるか、または（Ｃ）異種調節配列の挿入もしくは（Ｄ）ドメイン欠失を含む、から選択される、項目１に記載の方法。
（項目２３）
前記少なくとも１つの遺伝子変異が、ｎｉｆＬ遺伝子に挿入された異種プロモーターを含むように変更されている突然変異ｎｉｆＬ遺伝子である、項目１に記載の方法。
（項目２４）
前記少なくとも１つの遺伝子変異が、アデニリル除去（ＡＲ）ドメインを欠如する短縮ＧｌｎＥタンパク質をもたらす突然変異ｇｌｎＥ遺伝子である、項目１に記載の方法。
（項目２５）
前記少なくとも１つの遺伝子変異が、ａｍｔＢ遺伝子の発現の欠如をもたらす突然変異ａｍｔＢ遺伝子である、項目１に記載の方法。
（項目２６）
前記少なくとも１つの遺伝子変異が、ｎｉｆＬ遺伝子に挿入された異種プロモーターを含むように変更されている突然変異ｎｉｆＬ遺伝子、アデニリル除去（ＡＲ）ドメインを欠如する短縮ＧｌｎＥタンパク質をもたらす突然変異ｇｌｎＥ遺伝子、ａｍｔＢ遺伝子の発現の欠如をもたらす突然変異ａｍｔＢ遺伝子、およびそれらの組合せから選択される、項目１に記載の方法。
（項目２７）
前記少なくとも１つの遺伝子変異が、ｎｉｆＬ遺伝子に挿入された異種プロモーターを含むように変更されている突然変異ｎｉｆＬ遺伝子、およびアデニリル除去（ＡＲ）ドメインを欠如する短縮ＧｌｎＥタンパク質をもたらす突然変異ｇｌｎＥ遺伝子である、項目１に記載の方法。
（項目２８）
前記少なくとも１つの遺伝子変異が、ｎｉｆＬ遺伝子に挿入された異種プロモーターを含むように変更されている突然変異ｎｉｆＬ遺伝子、およびアデニリル除去（ＡＲ）ドメインを欠如する短縮ＧｌｎＥタンパク質をもたらす突然変異ｇｌｎＥ遺伝子、およびａｍｔＢ遺伝子の発現の欠如をもたらす突然変異ａｍｔＢ遺伝子である、項目１に記載の方法。
（項目２９）
前記植物が、種子、茎、花、果実、葉、または根茎を含む、項目１に記載の方法。
（項目３０）
前記複数の非属間細菌が、組成物に製剤化される、項目１に記載の方法。
（項目３１）
前記複数の非属間細菌が、農業的に許容される担体を含む組成物に製剤化される、項目１に記載の方法。
（項目３２）
前記複数の非属間細菌が、前記植物の種子が植栽される畝間内に適用される、項目１に記載の方法。
（項目３３）
前記複数の非属間細菌が、１ミリリットル当たり約１×１０７〜約１×１０１０ｃｆｕの濃度の細菌を含む液体畦間組成物に製剤化される、項目１に記載の方法。
（項目３４）
前記複数の非属間細菌が、前記植物の種子に適用される、項目１に記載の方法。
（項目３５）
前記複数の非属間細菌が、種子コーティングに製剤化され、前記植物の種子に適用される、項目１に記載の方法。
（項目３６）
前記複数の非属間細菌が、種子コーティングに製剤化され、１種子当たり約１×１０５〜約１×１０７ｃｆｕの濃度で前記植物の種子に適用される、項目１に記載の方法。
（項目３７）
前記植物が、穀類作物である、項目１に記載の方法。
（項目３８）
前記植物が、トウモロコシ、米、小麦、大麦、モロコシ、雑穀、オート麦、ライ麦、およびライ小麦からなる群より選択される、項目１に記載の方法。
（項目３９）
前記植物が、トウモロコシである、項目１に記載の方法。
（項目４０）
前記植物が、農業作物植物である、項目１に記載の方法。
（項目４１）
前記植物が、遺伝子改変生物である、項目１に記載の方法。
（項目４２）
前記植物が、遺伝子改変生物ではない、項目１に記載の方法。
（項目４３）
前記植物が、効率的な窒素使用のために遺伝子操作されているかまたは品種改良されている、項目１に記載の方法。
（項目４４）
前記複数の非属間細菌が、少なくとも２つの異なる種の細菌を含む、項目１に記載の方法。
（項目４５）
前記複数の非属間細菌が、同じ種の細菌の少なくとも２つの異なる菌株を含む、項目１に記載の方法。
（項目４６）
前記複数の非属間細菌が、Ｒａｈｎｅｌｌａ  ａｑｕａｔｉｌｉｓ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｖａｒｉｉｃｏｌａ、Ａｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒ  ｓｐｉｒｉｔｉｎｕｓ、Ａｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒ  ｍａｒｐｌａｔｅｎｓｉｓ、Ｍｉｃｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｍｕｒａｌｅ、Ｋｌｕｙｖｅｒａ  ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａ、Ｋｏｓａｋｏｎｉａ  ｐｓｅｕｄｏｓａｃｃｈａｒｉ、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ  ｓｐ．、Ａｚｏｓｐｉｒｉｌｌｕｍ  ｌｉｐｏｆｅｒｕｍ、Ｋｏｓａｋｏｎｉａ  ｓａｃｃｈａｒｉ、およびそれらの組合せから選択される細菌を含む、項目１に記載の方法。
（項目４７）
前記複数の非属間細菌が、内部寄生性、着生性、または根圏性である、項目１に記載の方法。
（項目４８）
前記複数の非属間細菌が、ＰＴＡ−１２２２９３として寄託された細菌、ＰＴＡ−１２２２９４として寄託された細菌、ＮＣＭＡ２０１７０１００２として寄託された細菌、ＮＣＭＡ２０１７０８００４として寄託された細菌、ＮＣＭＡ２０１７０８００３として寄託された細菌、ＮＣＭＡ２０１７０８００２として寄託された細菌、ＮＣＭＡ２０１７１２００１として寄託された細菌、ＮＣＭＡ２０１７１２００２として寄託された細菌、およびそれらの組合せから選択される細菌を含む、項目１に記載の方法。
（項目４９）
前記細菌が、外因性窒素が存在する場合、１時間当たり１細菌細胞当たり少なくとも約１×１０−１７ｍｍｏｌ  Ｎの固定Ｎを産生する、項目１に記載の方法。
（項目５０）
前記複数の非属間細菌が、前記植物における固定窒素の５％またはそれよりも多くを植物内で産生する、項目１に記載の方法。
（項目５１）
前記複数の非属間細菌が、前記植物における固定窒素の１０％またはそれよりも多くを植物内で産生する、項目１に記載の方法。
（項目５２）
前記複数の非属間細菌が、前記植物における固定窒素の１５％またはそれよりも多くを植物内で産生する、項目１に記載の方法。
（項目５３）
前記複数の非属間細菌が、前記植物における固定窒素の２０％またはそれよりも多くを植物内で産生する、項目１に記載の方法。
（項目５４）
（ｉ）前記植物根組織１単位当たりの平均コロニー化能力および（ｉｉ）１時間当たり１細菌細胞当たりの産生される固定Ｎの積が、１時間当たり植物根組織の生重量１グラム当たり少なくとも約２．０×１０−７ｍｍｏｌ  Ｎである、項目１に記載の方法。
（項目５５）
（ｉ）前記植物根組織１単位当たりの平均コロニー化能力および（ｉｉ）１時間当たり１細菌細胞当たりの産生される固定Ｎの積が、１時間当たり植物根組織の生重量１グラム当たり少なくとも約２．０×１０−６ｍｍｏｌ  Ｎである、項目１に記載の方法。