【手続補正書】
【提出日】令和3年7月2日(2021.7.2)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくとも１つのコード領域を含む人工核酸分子であって、前記少なくとも１つのコード領域が、
ＫＲＡＳに由来する少なくとも１つの抗原性ペプチド又はタンパク質と、
外部原形質膜に位置する少なくとも１つの免疫応答活性化シグナル伝達タンパク質（ＩＲＳＴｅｐｍ）に由来する少なくとも１つの更なるアミノ酸配列とをコードし、
前記外部原形質膜に位置する少なくとも１つの免疫応答活性化シグナル伝達タンパク質はＣＴＬＡ４であり、
前記少なくとも１つの更なるアミノ酸配列が、少なくとも１つの膜貫通ドメインを含む又はからなることを特徴とする人工核酸分子。
【請求項２】
前記少なくとも１つの更なるアミノ酸配列が、少なくとも１つの細胞質ドメインを更に含む請求項１に記載の人工核酸分子。
【請求項３】
前記少なくとも１つのコード領域が、少なくとも１つのシグナルペプチドを更にコードし、
前記シグナルペプチドが、配列番号１４８に対応するアミノ酸配列、又はその断片、変異体、若しくは誘導体を含む又はからなり、任意に、配列番号１４８、３５６、５６４、７７２、９８０、１１８８、１３９６、１６０４、１８１２、２０２０、２２２８、２４３６、２６４４、２８５２のいずれかに係る核酸配列、又はその断片、変異体、若しくは誘導体によってコードされる請求項１から２のいずれかに記載の人工核酸分子。
【請求項４】
ＫＲＡＳが、配列番号７６４４２に対応するアミノ酸配列、又はその断片、変異体、若しくは誘導体を含む又はからなり、配列番号７６５１７、７６５９２のいずれかに係る核酸配列、又は前記配列のいずれかの断片、変異体、若しくは誘導体によってコードされる請求項１に記載の人工核酸分子。
【請求項５】
ＫＲＡＳが、Ｇ１２Ａ、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１２Ｆ、Ｇ１２Ｒ、Ｇ１２Ｓ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１３Ｃ、Ｇ１３Ｄ、Ｋ１１７Ｎ、Ｑ６１Ｈ、Ｑ６１Ｋ、Ｑ６１Ｌ、Ｑ６１Ｒ、又はＡ１４６Ｔから選択される少なくとも１つのアミノ酸変異を含む請求項３に記載の人工核酸分子。
【請求項６】
前記変異ＫＲＡＳが、配列番号２４３５２、２７９０４〜２７９２０のいずれかに対応するアミノ酸配列、又はその断片、変異体、若しくは誘導体を含む又はからなり、配列番号４８８７９、５２１３１〜５２１４７、７２８０６、７６３５８〜７６３７４のいずれかに係る核酸配列、又は前記配列のいずれかの断片、変異体、若しくは誘導体によってコードされる請求項３から４のいずれかに記載の人工核酸分子。
【請求項７】
前記変異ＫＲＡＳが、配列番号２７９０５、２７９０６、２７９０９〜２７９１９のいずれかに対応するアミノ酸配列、又はその断片、変異体、若しくは誘導体を含む又はからなり、配列番号５２１３２、５２１３３、５２１３６〜５２１４６、７６３５９、７６３６０、７６３６３〜７６３７３のいずれかに係る核酸配列、又は前記配列のいずれかの断片、変異体、若しくは誘導体によってコードされる請求項４から５のいずれかに記載の人工核酸分子。
【請求項８】
前記ＩＲＳＴｅｐｍが、配列番号１５７〜１７９のいずれかに対応するアミノ酸配列、又はその断片、変異体、若しくは誘導体を含む又はからなり、任意に、配列番号３６５〜３８７、５７３〜５９５、７８１〜８０３、９８９〜１０１１、１１９７〜１２１９、１４０５〜１４２７、１６１３〜１６３５、１８２１〜１８４３、２０２９〜２０５１、２２３７〜２２５９、２４４５〜２４６７、２６５３〜２６７５、２８６１〜２８８３のいずれかに対応する核酸配列、又は前記配列のいずれかの断片、変異体、若しくは誘導体によってコードされる請求項１から７のいずれかに記載の人工核酸分子。
【請求項９】
前記少なくとも１つの更なるアミノ酸配列が、少なくとも１つの膜貫通ドメインと、配列番号７６６３６に対応するアミノ酸配列、又はその断片、変異体、若しくは誘導体を含む又はからなる少なくとも１つの細胞質ドメインとを含む又はからなり、配列番号７６６５９、７６６８２、７６７０５、７６７２８、７６７５１、７６７７４、７６７９７、７６８２０、７６８４３、７６８６６、７６８８９、７６９１２、７６９３５、７６９４７、７７０６６、７７００４〜７７０１７のいずれかに対応する核酸配列、又は前記配列のいずれかの断片、変異体、又は誘導体、好ましくは配列番号７７０６６によってコードされる請求項１から８のいずれかに記載の人工核酸分子。
【請求項１０】
前記膜貫通ドメインが、配列番号２００に対応するアミノ酸配列、又はその断片、変異体、若しくは誘導体を含む又はからなり、配列番号４０８、６１６、８２４、１０３２、１２４０、１４４８、１６５６、１８６４、２０７２、２２８０、２４８８、２６９６、２９０４のいずれかに対応する核酸配列、又は前記配列のいずれかの断片、変異体、若しくは誘導体によってコードされる請求項１から８のいずれかに記載の人工核酸分子。
【請求項１１】
前記少なくとも１つのコード領域に、少なくとも１つのリンカーを更にコードし、
前記リンカーが、非免疫原性リンカーであり、前記非免疫原性リンカーが、配列番号２９３６、７６４９４、７６５６９、７６４７５〜７６４９３、７６５５０〜７６５６８、７７０５９〜７７０６１のいずれかに係る核酸配列、又は前記配列のいずれかの断片、変異体、若しくは誘導体によって任意にコードされる配列番号２９３７、７６４００〜７６４１８、７７０１８〜７７０５８のいずれかに係るアミノ酸配列を任意に含む又はからなる請求項１から１０のいずれかに記載の人工核酸分子。
【請求項１２】
前記少なくとも１つのコード領域が、少なくとも１つのＴヘルパーエピトープを更にコードし、
前記ヘルパーエピトープ配列が、配列番号２９２６に対応するアミノ酸配列、又はその断片、変異体、若しくは誘導体を含む又はからなり、任意に、配列番号２９２１、３２９５、及び３５０７のいずれかに係る核酸配列、又は前記配列のいずれかの断片、変異体、若しくは誘導体によってコードされる請求項１から１１のいずれかに記載の人工核酸分子。
【請求項１３】
以下の式（Ｉ）の少なくとも１つのコード領域を好ましくは５’→３’方向に含む請求項１から１２のいずれかに記載の人工核酸分子。
【化１】
2020530980.tif 000001
（式中、
「ＳＩＧ」は、好ましくは請求項３で定義される、シグナルペプチドをコードし、
「Ｌ」は、好ましくは請求項１１で定義される、リンカー配列をコードし、
各「ＡＮ」は、好ましくは請求項４、５、６、及び７のいずれかで定義される、同一又は異なる抗原性ペプチド又はタンパク質をコードし、
「ＩＭ」は、好ましくは請求項１２で定義される、ヘルパーエピトープをコードし、
「ＴＭＤ／ＴＭＣＤ」は、外部原形質膜に位置する免疫応答シグナル伝達タンパク質に由来するアミノ酸配列、好ましくは請求項１０で定義される好ましくは膜貫通ドメイン、及び任意に、好ましくは請求項９で定義される細胞質ドメインをコードし、
ｂ、ｄ、ｍ、ｎ、ｏはそれぞれ独立して、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、及び１０から選択される整数であり、
ａ、ｃ、ｅ、ｐはそれぞれ独立して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、及び１０から選択される整数である。）
【請求項１４】
前記人工核酸分子が、ＲＮＡであり、
前記ＲＮＡが、ｍＲＮＡ、ウイルスＲＮＡ、レプリコンＲＮＡ、又は環状ＲＮＡ、好ましくはｍＲＮＡである請求項１から１３のいずれかに記載の人工核酸分子。
【請求項１５】
前記人工核酸分子が修飾され、好ましくは安定化され、
前記少なくとも１つのコード領域のＧ／Ｃ含量が、対応する野生型人工核酸の対応するコード配列のＧ／Ｃ含量と比較して増加している、及び／又は、
前記少なくとも１つのコード領域のＣ含量が、対応する野生型人工核酸の対応するコード配列のＣ含量と比較して増加している、及び／又は
前記少なくとも１つのコード領域のコドンが、ヒトのコドン使用に適合されており、コドン適合度指数（ＣＡＩ）が、好ましくは、前記人工核酸の前記少なくとも１つのコード配列において増加又は最大化されており、
前記人工核酸によってコードされるアミノ酸配列が、好ましくは、前記対応する野生型人工核酸によってコードされるアミノ酸配列と比較して変化しない請求項１から１４のいずれかに記載の人工核酸分子、好ましくはＲＮＡ。
【請求項１６】
前記少なくとも１つのコード領域が、配列番号４１７〜２９１２、７６６７１〜７６９４７、７７００４〜７７０１７、７７０６６のいずれかに対応する核酸配列を含む又はからなる請求項１５に記載の人工核酸分子、好ましくはＲＮＡ。
【請求項１７】
以下のエレメントを好ましくは５’→３’方向に含む請求項１から１６のいずれかに記載の人工核酸分子、好ましくはＲＮＡ。
ａ）５’−キャップ構造、好ましくはｍ７ＧｐｐｐＮ、ＡＲＣＡ  Ｃａｐ、又はＣａｐ１、
ｂ）任意に、好ましくは配列番号３０６１又は３０６３に係る核酸配列に対応する核酸配列、又はその断片、変異体、若しくは対応するＲＮＡ配列を含む又はからなる５’−ＵＴＲエレメント、
ｃ）請求項１から１６のいずれかで定義される少なくとも１つのコード配列、
ｄ）任意に、好ましくは配列番号３０６５、３０６７、３０６９、３０７１、３０７３、３０７５、又は３０７７に係る核酸配列、又はその断片、変異体、若しくは対応するＲＮＡ配列に対応する核酸配列を含む又はからなる３’−ＵＴＲエレメント、
ｅ）任意に、好ましくは１０〜１０００個、１０〜５００個、１０〜３００個、１０〜２００個、１０〜１００個、４０〜８０個、又は５０〜７０個のアデノシンヌクレオチドからなるポリ（Ａ）テール、
ｆ）任意に、好ましくは１０〜２００個、１０〜１００個、２０〜７０個、２０〜６０個、又は１０〜４０個のシトシンヌクレオチドからなるポリ（Ｃ）テール、及び
ｇ）任意に、配列番号３０７９又は３０８０に対応する核酸配列を任意に含む又はからなるヒストンステムループ。
【請求項１８】
請求項１から１７のいずれかに記載の少なくとも１つの人工核酸分子、好ましくはＲＮＡ、及び薬学的に許容される担体及び／又は賦形剤を含み、
前記人工核酸分子、好ましくはＲＮＡが、好ましくは１つ以上のカチオン性又はポリカチオン性化合物、より好ましくはカチオン性又はポリカチオン性ポリマー、カチオン性又はポリカチオン性ペプチド又はタンパク質、例えば、プロタミン、カチオン性又はポリカチオン性多糖、及び／又はカチオン性又はポリカチオン性脂質と複合体化され、
前記カチオン性又はポリカチオン性化合物が、好ましくはポリマー担体であることを特徴とする組成物、好ましくは医薬組成物又はワクチン。
【請求項１９】
請求項１から１７のいずれかに記載の少なくとも２つの複数の人工核酸分子を含み、好ましくは前記複数の人工核酸分子の少なくとも２つは、異なる抗原性ペプチド又はタンパク質をコードし、前記抗原性ペプチド又はタンパク質は、任意に、請求項４、５、６、及び７のいずれかで定義される抗原性ペプチド又はタンパク質、又はその断片、変異体、若しくは誘導体から選択される請求項１８に記載の組成物。
【請求項２０】
前記人工核酸分子、好ましくはＲＮＡの、前記１つ以上のカチオン性又はポリカチオン性化合物に対するＮ／Ｐ比が、約０．３〜４、約０．５〜２、約０．７〜２、及び約０．７〜１．５の範囲を含む約０．１〜１０の範囲である請求項１８に記載の（医薬）組成物又はワクチン。
【請求項２１】
前記人工核酸分子、好ましくはＲＮＡが、１つ以上の脂質と複合体を形成して、脂質ナノ粒子、リポプレックス、及び／又は好ましくはリポソームを形成する請求項１８から２０のいずれかに記載の（医薬）組成物又はワクチン。
【請求項２２】
請求項１から１７のいずれかに記載の人工核酸分子、好ましくはＲＮＡ、又は請求項１８から２１のいずれかに記載の（医薬）組成物又はワクチンと、任意に液体ビヒクル及び／又は任意に前記人工核酸分子又は前記組成物の用法及び用量に関する情報を含む技術的指示とを含むことを特徴とするキット、好ましくはキットオブパーツ。
【請求項２３】
がんの治療又は予防のための医薬としての使用のための、請求項１から１７のいずれかに記載の人工核酸分子、好ましくはＲＮＡ、請求項１８から２１のいずれかに記載の（医薬）組成物又はワクチン、又は請求項２２に記載のキット。
【請求項２４】
投与が、非経口、好ましくは皮内、皮下、静脈内、筋肉内、結節内、経皮、又は腫瘍内で行われる請求項２３に係る使用のための人工核酸分子、好ましくはＲＮＡ。
【請求項２５】
前記患者を以下の追加療法の少なくとも１つ以上に供することを更に含む請求項２３から２４のいずれかに係る使用のための人工核酸分子、好ましくはＲＮＡ：化学療法（例えば、第１選択又は第２選択化学療法）、放射線療法、化学放射線療法（化学療法と放射線療法の組合せ）、キナーゼ阻害剤、抗体療法及び／又はチェックポイントモジュレーター（例えば、ＣＴＬＡ４阻害剤、ＰＤ１経路阻害剤）又はペプチドプロセシング障害に関連するＴ細胞エピトープ（ＴＥＩＰＰ）の発現を誘導する阻害剤。
【請求項２６】
インビトロ細胞培養又は細胞処理方法であって、（ａ）細胞をインビトロで提供すること、（ｂ）前記細胞を、請求項１から１７のいずれかに記載の人工核酸分子、好ましくはＲＮＡ、請求項１８から２１のいずれかに記載の（医薬）組成物又はワクチン、又は請求項２２に記載のキットと接触させることを含むインビトロ細胞培養又は細胞処理方法。