【手続補正書】
【提出日】令和3年10月18日(2021.10.18)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
細胞におけるベータグロビン（ＨＢＢ）遺伝子の変異を修正するためのｅｘ  ｖｉｖｏ（エクスビボ）方法であって、前記細胞を、
ａ）ＡＡＶクレードＦカプシドタンパク質を含むＡＡＶカプシドと、
ｂ）（ｉ）標的遺伝子における標的遺伝子座を編集するための編集要素、（ｉｉ）前記標的遺伝子座の５’の第１のゲノム領域に対して相同性を有する前記編集要素の５’の５’相同アームヌクレオチド配列、および（ｉｉｉ）前記標的遺伝子座の３’の第２のゲノム領域に対して相同性を有する前記編集要素の３’の３’相同アームヌクレオチド配列を含む、修正ゲノムと、を含む、
複製欠損アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）で形質導入することを含み、
前記細胞は、外来性ヌクレアーゼまたは外来性ヌクレアーゼをコードするヌクレオチド配列を共形質導入または共投与することなく形質導入される、方法。
【請求項２】
前記細胞が、多能性幹細胞または造血幹細胞、任意にＣＤ３４＋造血幹細胞であり、任意に前記細胞が、哺乳類対象内にあり、前記ＡＡＶが、前記対象の前記細胞に形質導入するのに有効な量で、前記対象に投与される、請求項１に記載のエクスビボ方法。
【請求項３】
ＨＢＢ遺伝子変異に関連する疾患または障害を有する対象を治療するための方法において使用するための複製欠損アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）であって、前記方法は、
ａ）エクスビボで、前記対象由来の赤血球前駆細胞を、
（ｉ）ＡＡＶクレードＦカプシドタンパク質を含むＡＡＶカプシドと、
（ｉｉ）（Ａ）標的遺伝子における標的遺伝子座を編集するための編集要素、（Ｂ）前記標的遺伝子座の５’の第１のゲノム領域に対して相同性を有する前記編集要素の５’の５’相同アームヌクレオチド配列、および（Ｃ）前記標的遺伝子座の３’の第２のゲノム領域に対して相同性を有する前記編集要素の３’の３’相同アームヌクレオチド配列を含む、修正ゲノムと、を含む、複製欠損ＡＡＶで形質導入して、それにより、修正されたＨＢＢ遺伝子を有する形質導入された細胞を得ることと、
ｂ）前記形質導入された細胞を前記対象に投与することと、を含み、
前記細胞は、外来性ヌクレアーゼまたは外来性ヌクレアーゼをコードするヌクレオチド配列を共形質導入することなく形質導入される、ＡＡＶ。
【請求項４】
前記赤血球前駆細胞が、多能性幹細胞またはＣＤ３４＋造血幹細胞を含む造血幹細胞である、請求項３に記載のＡＡＶ。
【請求項５】
ＨＢＢ遺伝子変異に関連する疾患または障害を有する対象を治療するための方法において使用するための複製欠損アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）であって、前記方法は、前記対象に、
ａ）ＡＡＶクレードＦカプシドタンパク質を含むＡＡＶカプシドと、
ｂ）（ｉ）標的遺伝子における標的遺伝子座を編集するための編集要素、（ｉｉ）前記標的遺伝子座の５’の第１のゲノム領域に対して相同性を有する前記編集要素の５’の５’相同アームヌクレオチド配列、および（ｉｉｉ）前記標的遺伝子座の３’の第２のゲノム領域に対して相同性を有する前記編集要素の３’の３’相同アームヌクレオチド配列を含む、修正ゲノムと、を含む、有効量の複製欠損アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）を投与することを含み、
任意に、複製欠損アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）は、外来性ヌクレアーゼまたは外来性ヌクレアーゼをコードするヌクレオチド配列を共投与することなく投与され、
任意に、前記疾患又は障害が、サラセミアまたは鎌状赤血球症であり、
任意に、前記対象が、ヒト対象である、ＡＡＶ。
【請求項６】
前記標的遺伝子が、ＨＢＢ遺伝子である、請求項３〜５のいずれか一項に記載のＡＡＶ。
【請求項７】
前記標的遺伝子座が、
（ａ）前記ＨＢＢ遺伝子におけるヌクレオチド点変異、挿入、または欠失にあり、任意に前記ＨＢＢ遺伝子における前記ヌクレオチド点変異または欠失が、位置−８７のＧ、位置−３１のＧ、位置−３０のＡ、位置−２９のＧ、位置−２８のＧ、位置−１０のＴ、位置１のＣ、位置１のＡ、位置２のＧ、位置１７および１８のＣおよびＴの欠失、位置１９のＡ、位置２０のＡの欠失、位置２０のＴ、位置２５および２６のＡの欠失、位置２６の後のＧの追加、位置４７のＡ、位置４８のＡ、位置５１のＣの欠失、位置５２のＡ、位置５８のＧ、位置５９のＧ、位置７９のＡ、位置８２のＴ、位置８４の後のＣの追加、位置９３のＴ、位置９３のＡ、位置９７のＣ、位置９８のＣ、位置２０２のＧ、位置２０８のＧ、位置２２２のＣ、位置２４１または２４２のＴの欠失、位置２５４〜２５７のＴおよびＣの欠失、位置２６０のＴ、位置２６４または２６５のＣの欠失、位置３４３の後のＡの追加、位置３９９および４００のＧおよびＴの欠失、位置４０１のＴ、位置４１７の後のＡの追加、位置４４６のＡ、位置１０９９のＴ、位置１２９３のＡ、位置１３４４のＴからなる群から選択される、
（ｂ）ＡＡＶＳ１座である、
（ｃ）前記標的遺伝子のヌクレオチド３とヌクレオチド４との間のヌクレオチド間結合であり、それにより、前記標的遺伝子座の前記編集要素の組み込みが、前記標的遺伝子の開始コドンで始まるＨＢＢコード配列またはスタッファー挿入コード配列を含む前記標的遺伝子座をもたらす、
（ｄ）前記標的遺伝子のイントロンにあり、前記編集要素が、５’から３’スプライスアクセプター部位、リボソームスキッピング要素、およびＨＢＢコード配列またはスタッファー挿入コード配列を含む、
（ｅ）ＨＢＢ１遺伝子のイントロン１にある、
（ｆ）前記標的遺伝子のコードヌクレオチドに隣接して３’にあり、前記編集要素が、５’から３’にリボソームスキッピング要素、およびＨＢＢコード配列またはスタッファー挿入コード配列を含む、または
（ｇ）野生型標的遺伝子の終止コドン、または変異標的遺伝子の対応するヌクレオチドである、
請求項３〜５のいずれか一項に記載のＡＡＶ。
【請求項８】
前記編集要素が、
（ａ）前記変異に対応する前記野生型ＨＢＢ遺伝子の一部分を含む、
（ｂ）ＨＢＢ遺伝子の１つ以上のエクソンのコード領域であって、任意に、前記野生型ＨＢＢ遺伝子の対応するエクソンに１００％、９５％、９０％、８５％、８０％、７５％、７０％、６５％、６０％、５５％、または５０％未満同一であるように沈黙（ｓｉｌｅｎｔｌｙ）改変されているコード領域を含む、
（ｃ）エクソン１のコード領域、イントロン１全体、エクソン２全体、イントロン２全体、およびエクソン３のコード領域を含む、
（ｄ）配列番号４３〜４６および１０５〜１０７からなる群から選択されるヌクレオチド配列のうちの少なくとも１つを含む、
（ｅ）配列番号４８またはその一部分をコードするヌクレオチド配列を含み、任意に、配列番号４８をコードするヌクレオチド配列が、
（ｉ）配列番号２７のヌクレオチド４〜４４４からなる、
（ｉｉ）配列番号２７のヌクレオチド４〜４４４と７０％、７５％、８０％、８５％、または９０％未満同一であるように沈黙改変されている、
（ｉｉｉ）配列番号４７または１００の配列からなる、
（ｉｖ）ＨＢＢコード遺伝子のスタッファー挿入コード配列からなる、
（ｆ）５’から３’開始コドンおよび配列番号４８をコードするヌクレオチド配列からなるＨＢＢコード配列もしくはスタッファー挿入コード配列、または前記ＨＢＢコード配列もしくはスタッファー挿入コード配列の一部分を含む、
（ｇ）配列番号４８をコードするヌクレオチド配列の３’の外来性ポリアデニル化配列を含む、
（ｈ）配列番号２３〜２８のいずれか１つに記載の前記ヌクレオチド配列を含む、および／または
（ｉ）前記標的遺伝子に存在しない制限エンドヌクレアーゼ部位を含む、
請求項７に記載のＡＡＶ。
【請求項９】
（ａ）前記５’相同アームヌクレオチド配列が、前記第１のゲノム領域と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であり、任意に、前記５’相同アームが、配列番号１０１に記載の前記ヌクレオチド配列からなる、
（ｂ）前記３’相同アームヌクレオチド配列が、前記第２のゲノム領域と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であり、任意に、前記３’相同アームが、配列番号１０２に記載の前記ヌクレオチド配列からなる、および／または
（ｃ）前記５’および３’相同アームヌクレオチド配列の各々が、独立して、約１００〜約２０００ヌクレオチドの長さを有する、
請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記第１のゲノム領域が第１の編集枠に位置し、前記第２のゲノム領域が第２の編集枠に位置し、任意に、
（ａ）前記第１および第２の編集枠が異なる、
（ｂ）前記第１および第２の編集枠が同じである、
（ｃ）前記第１の編集枠が、配列番号１０１、１０２、または１０３に記載のヌクレオチド配列からなる、
（ｄ）前記第２の編集枠が、配列番号１０１、１０２、または１０３に記載のヌクレオチド配列からなる、
（ｅ）前記第１のゲノム領域が、配列番号１０１に記載のヌクレオチド配列からなる、および／もしくは
（ｆ）前記第２のゲノム領域が、配列番号１０２に記載のヌクレオチド配列からなる、
（ｇ）前記５’相同アームが、配列番号１０１に記載のヌクレオチド配列からなる、
（ｈ）前記３’相同アームが、配列番号１０２に記載のヌクレオチド配列からなる、
請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
前記修正ゲノムが、前記５’相同アームヌクレオチド配列の５’の５’逆位末端反復（５’ＩＴＲ）ヌクレオチド配列、および前記３’相同アームヌクレオチド配列の３’の３’逆位末端反復（３’ＩＴＲ）ヌクレオチド配列をさらに含み、任意に
（ａ）前記５’ＩＴＲヌクレオチド配列が、配列番号１８に対して少なくとも９５％の配列同一性を有し、前記３’ＩＴＲヌクレオチド配列が、配列番号１９に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する、または
（ｂ）前記５’ＩＴＲヌクレオチド配列が、配列番号２０に対して少なくとも９５％の配列同一性を有し、前記３’ＩＴＲヌクレオチド配列が、配列番号２１に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する、
請求項１〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
前記修正ゲノムが、配列番号２９〜４２および１０４のいずれか１つに記載の前記ヌクレオチド配列を含む、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
前記ＡＡＶクレードＦカプシドタンパク質が、配列番号２のアミノ酸２０３〜７３６のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、配列番号２のアミノ酸２０６に対応する前記カプシドタンパク質のアミノ酸がＣであるか、配列番号２のアミノ酸２９６に対応する前記カプシドタンパク質のアミノ酸がＨであるか、配列番号２のアミノ酸３１２に対応する前記カプシドタンパク質のアミノ酸がＱであるか、配列番号２のアミノ酸３４６に対応する前記カプシドタンパク質のアミノ酸がＡであるか、配列番号２のアミノ酸４６４に対応する前記カプシドタンパク質のアミノ酸がＮであるか、配列番号２のアミノ酸４６８に対応する前記カプシドタンパク質のアミノ酸がＳであるか、配列番号２のアミノ酸５０１に対応する前記カプシドタンパク質のアミノ酸がＩであるか、配列番号２のアミノ酸５０５に対応する前記カプシドタンパク質のアミノ酸がＲであるか、配列番号２のアミノ酸５９０に対応する前記カプシドタンパク質のアミノ酸がＲであるか、配列番号２のアミノ酸６２６に対応する前記カプシドタンパク質のアミノ酸が、ＧまたはＹであるか、配列番号２のアミノ酸６８１に対応する前記カプシドタンパク質のアミノ酸がＭであるか、配列番号２のアミノ酸６８７に対応する前記カプシドタンパク質のアミノ酸がＲであるか、配列番号２のアミノ酸６９０に対応する前記カプシドタンパク質のアミノ酸がＫであるか、配列番号２のアミノ酸７０６に対応する前記カプシドタンパク質のアミノ酸がＣであるか、または配列番号２のアミノ酸７１８に対応するカカプシドタンパク質のアミノ酸がＧであり、
任意に、
（ａ）配列番号２のアミノ酸６２６に対応する前記カプシドタンパク質のアミノ酸がＧであり、配列番号２のアミノ酸７１８に対応する前記カプシドタンパク質のアミノ酸がＧである、
（ｂ）配列番号２のアミノ酸２９６に対応する前記カプシドタンパク質のアミノ酸がＨであり、配列番号２のアミノ酸４６４に対応する前記カプシドタンパク質のアミノ酸がＮであり、配列番号２のアミノ酸５０５に対応する前記カプシドタンパク質のアミノ酸がＲであり、配列番号２のアミノ酸６８１に対応する前記カプシドタンパク質のアミノ酸がＭである、
（ｃ）配列番号２のアミノ酸５０５に対応する前記カプシドタンパク質のアミノ酸がＲであり、配列番号２のアミノ酸６８７に対応する前記カプシドタンパク質のアミノ酸がＲである、
（ｄ）配列番号２のアミノ酸３４６に対応する前記カプシドタンパク質のアミノ酸がＡであり、配列番号２のアミノ酸５０５に対応する前記カプシドタンパク質のアミノ酸がＲである、または
（ｅ）配列番号２のアミノ酸５０１に対応する前記カプシドタンパク質のアミノ酸がＩであり、配列番号２のアミノ酸５０５に対応する前記カプシドタンパク質のアミノ酸がＲであり、配列番号２のアミノ酸７０６に対応する前記カプシドタンパク質のアミノ酸がＣであり、
任意に、前記カプシドタンパク質が、配列番号２、３、４、６、７、１０、１１、１２、１３、１５、１６、または１７のアミノ酸２０３〜７３６のアミノ酸配列を含む、
請求項１〜１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
前記ＡＡＶクレードＦカプシドタンパク質が、配列番号２のアミノ酸１３８〜７３６のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、配列番号２のアミノ酸１５１に対応する前記カプシドタンパク質のアミノ酸がＲであるか、配列番号２のアミノ酸１６０に対応する前記カプシドタンパク質のアミノ酸がＤであるか、配列番号２のアミノ酸２０６に対応する前記カプシドタンパク質のアミノ酸がＣであるか、配列番号２のアミノ酸２９６に対応する前記カプシドタンパク質のアミノ酸がＨであるか、配列番号２のアミノ酸３１２に対応する前記カプシドタンパク質のアミノ酸がＱであるか、配列番号２のアミノ酸３４６に対応する前記カプシドタンパク質のアミノ酸がＡであるか、配列番号２のアミノ酸４６４に対応する前記カプシドタンパク質のアミノ酸がＮであるか、配列番号２のアミノ酸４６８に対応する前記カプシドタンパク質のアミノ酸がＳであるか、配列番号２のアミノ酸５０１に対応する前記カプシドタンパク質のアミノ酸がＩであるか、配列番号２のアミノ酸５０５に対応する前記カプシドタンパク質のアミノ酸がＲであるか、配列番号２のアミノ酸５９０に対応する前記カプシドタンパク質のアミノ酸がＲであるか、配列番号２のアミノ酸６２６に対応する前記カプシドタンパク質のアミノ酸が、ＧまたはＹであるか、配列番号２のアミノ酸６８１に対応する前記カプシドタンパク質のアミノ酸がＭであるか、配列番号２のアミノ酸６８７に対応する前記カプシドタンパク質のアミノ酸がＲであるか、配列番号２のアミノ酸６９０に対応する前記カプシドタンパク質のアミノ酸がＫであるか、配列番号２のアミノ酸７０６に対応する前記カプシドタンパク質のアミノ酸がＣであるか、または配列番号２のアミノ酸７１８に対応する前記カプシドタンパク質のアミノ酸がＧであり、
任意に、
（ａ）配列番号２のアミノ酸６２６に対応する前記カプシドタンパク質のアミノ酸がＧであり、配列番号２のアミノ酸７１８に対応する前記カプシドタンパク質のアミノ酸がＧである、
（ｂ）配列番号２のアミノ酸２９６に対応する前記カプシドタンパク質のアミノ酸がＨであり、配列番号２のアミノ酸４６４に対応する前記カプシドタンパク質のアミノ酸がＮであり、配列番号２のアミノ酸５０５に対応する前記カプシドタンパク質のアミノ酸がＲであり、配列番号２のアミノ酸６８１に対応する前記カプシドタンパク質のアミノ酸がＭである、
（ｃ）配列番号２のアミノ酸５０５に対応する前記カプシドタンパク質のアミノ酸がＲであり、配列番号２のアミノ酸６８７に対応する前記カプシドタンパク質のアミノ酸がＲである、
（ｄ）配列番号２のアミノ酸３４６に対応する前記カプシドタンパク質のアミノ酸がＡであり、配列番号２のアミノ酸５０５に対応する前記カプシドタンパク質のアミノ酸がＲである、または
（ｅ）配列番号２のアミノ酸５０１に対応する前記カプシドタンパク質のアミノ酸がＩであり、配列番号２のアミノ酸５０５に対応する前記カプシドタンパク質のアミノ酸がＲであり、配列番号２のアミノ酸７０６に対応する前記カプシドタンパク質のアミノ酸がＣである、
任意に、前記カプシドタンパク質が、配列番号２、３、４、５、６、７、９、１０、１１、１２、１３、１５、１６、または１７のアミノ酸１３８〜７３６のアミノ酸配列を含む、
請求項１〜１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
前記ＡＡＶクレードＦカプシドタンパク質が、配列番号２のアミノ酸１〜７３６のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、配列番号２のアミノ酸２に対応する前記カプシドタンパク質のアミノ酸がＴであるか、配列番号２のアミノ酸６５に対応する前記カプシドタンパク質のアミノ酸がＩであるか、配列番号２のアミノ酸６８に対応する前記カプシドタンパク質のアミノ酸がＶであるか、配列番号２のアミノ酸７７に対応する前記カプシドタンパク質のアミノ酸がＲであるか、配列番号２のアミノ酸１１９に対応する前記カプシドタンパク質のアミノ酸がＬであるか、配列番号２のアミノ酸１５１に対応する前記カプシドタンパク質のアミノ酸がＲであるか、配列番号２のアミノ酸１６０に対応する前記カプシドタンパク質のアミノ酸がＤであるか、配列番号２のアミノ酸２０６に対応する前記カプシドタンパク質のアミノ酸がＣであるか、配列番号２のアミノ酸２９６に対応する前記カプシドタンパク質のアミノ酸がＨであるか、配列番号２のアミノ酸３１２に対応する前記カプシドタンパク質のアミノ酸がＱであるか、配列番号２のアミノ酸３４６に対応する前記カプシドタンパク質のアミノ酸がＡであるか、配列番号２のアミノ酸４６４に対応する前記カプシドタンパク質のアミノ酸がＮであるか、配列番号２のアミノ酸４６８に対応する前記カプシドタンパク質のアミノ酸がＳであるか、配列番号２のアミノ酸５０１に対応する前記カプシドタンパク質の前記アミノ酸がＩであるか、配列番号２のアミノ酸５０５に対応する前記カプシドタンパク質のアミノ酸がＲであるか、配列番号２のアミノ酸５９０に対応する前記カプシドタンパク質のアミノ酸がＲであるか、配列番号２のアミノ酸６２６に対応する前記カプシドタンパク質のアミノ酸が、ＧまたはＹであるか、配列番号２のアミノ酸６８１に対応する前記カプシドタンパク質のアミノ酸がＭであるか、配列番号２のアミノ酸６８７に対応する前記カプシドタンパク質のアミノ酸がＲであるか、配列番号２のアミノ酸６９０に対応する前記カプシドタンパク質のアミノ酸がＫであるか、配列番号２のアミノ酸７０６に対応する前記カプシドタンパク質のアミノ酸がＣであるか、または配列番号２のアミノ酸７１８に対応する前記カプシドタンパク質のアミノ酸がＧであり、
任意に、（ａ）配列番号２のアミノ酸２に対応する前記カプシドタンパク質のアミノ酸がＴであり、配列番号２のアミノ酸３１２に対応する前記カプシドタンパク質のアミノ酸がＱである、
（ｂ）配列番号２のアミノ酸６５に対応する前記カプシドタンパク質のアミノ酸がＩであり、配列番号２のアミノ酸６２６に対応する前記カプシドタンパク質のアミノ酸がＹである、
（ｃ）配列番号２のアミノ酸７７に対応する前記カプシドタンパク質のアミノ酸がＲであり、配列番号２のアミノ酸６９０に対応する前記カプシドタンパク質のアミノ酸がＫである、
（ｄ）配列番号２のアミノ酸１１９に対応する前記カプシドタンパク質のアミノ酸がＬであり、配列番号２のアミノ酸４６８に対応する前記カプシドタンパク質のアミノ酸がＳである、
（ｅ）配列番号２のアミノ酸６２６に対応する前記カプシドタンパク質のアミノ酸がＧであり、配列番号２のアミノ酸７１８に対応する前記カプシドタンパク質のアミノ酸がＧである、
（ｆ）配列番号２のアミノ酸２９６に対応する前記カプシドタンパク質のアミノ酸がＨであり、配列番号２のアミノ酸４６４に対応する前記カプシドタンパク質のアミノ酸がＮであり、配列番号２のアミノ酸５０５に対応する前記カプシドタンパク質のアミノ酸がＲであり、配列番号２のアミノ酸６８１に対応する前記カプシドタンパク質のアミノ酸がＭである、
（ｇ）配列番号２のアミノ酸５０５に対応する前記カプシドタンパク質のアミノ酸がＲであり、配列番号２のアミノ酸６８７に対応する前記カプシドタンパク質のアミノ酸がＲである、
（ｈ）配列番号２のアミノ酸３４６に対応する前記カプシドタンパク質のアミノ酸がＡであり、配列番号２のアミノ酸５０５に対応する前記カプシドタンパク質のアミノ酸がＲである、または
（ｉ）配列番号２のアミノ酸５０１に対応する前記カプシドタンパク質のアミノ酸がＩであり、配列番号２のアミノ酸５０５に対応する前記カプシドタンパク質のアミノ酸がＲであり、配列番号２のアミノ酸７０６に対応する前記カプシドタンパク質のアミノ酸がＣであり、
任意に、前記カプシドタンパク質が、配列番号２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１５、１６、または１７のアミノ酸１〜７３６のアミノ酸配列を含む、
請求項１〜１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
前記ＡＡＶを、標準的なＡＡＶ形質導入条件下で、ＣＤ３４＋ヒト幹細胞集団と外来性ヌクレアーゼの不在下でインビトロで接触させた場合、前記標的遺伝子座への前記編集要素の組み込み効率が、少なくとも１％である、または、前記ＡＡＶを、標準的なＡＡＶ形質導入条件下で、ＣＤ３４＋ヒト幹細胞集団と外来性ヌクレアーゼの不在下でインビトロで接触させた場合、前記標的遺伝子座への前記編集要素の組み込みの対立遺伝子頻度が、少なくとも０．５％である、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
ａ）ＡＡＶクレードＦカプシドタンパク質を含むＡＡＶカプシドと、
ｂ）（ｉ）標的遺伝子における標的遺伝子座を編集するための編集要素、（ｉｉ）前記標的遺伝子座の５’の第１のゲノム領域に対して相同性を有する前記編集要素の５’の５’相同アームヌクレオチド配列、および（ｉｉｉ）前記標的遺伝子座の３’の第２のゲノム領域に対して相同性を有する前記編集要素の３’の３’相同アームヌクレオチド配列を含む、修正ゲノムと、
を含む、複製欠損アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）。
【請求項１８】
請求項１〜１７のいずれか一項に記載のＡＡＶを含む、医薬組成物。
【請求項１９】
ＡＡＶの組換え調製のためのパッケージングシステムであって、
ａ）１つ以上のＡＡＶ  Ｒｅｐタンパク質をコードするＲｅｐヌクレオチド配列と、
ｂ）請求項１７に記載の１つ以上のＡＡＶクレードＦカプシドタンパク質をコードするＣａｐヌクレオチド配列と、
ｃ）請求項１に記載の修正ゲノムと、
を含み、前記パッケージングシステムが、前記修正ゲノムを前記カプシドに封入して前記ＡＡＶを形成するために細胞内で作動可能である、パッケージングシステム。
【請求項２０】
ＡＡＶの組換え調製のためのエクスビボ方法であって、前記修正ゲノムを前記カプシドに封入して前記ＡＡＶを形成するように作動可能である条件下で、請求項１９に記載のパッケージングシステムを細胞内に導入することを含む、方法。