【手続補正書】
【提出日】令和3年3月25日(2021.3.25)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ナノ構造であって、
（ａ）複数の第１のアセンブリであって、各々の第１のアセンブリが複数の同一の第１のポリペプチドを含む、複数の第１のアセンブリ；
（ｂ）複数の第２のアセンブリであって、各々の第２のアセンブリが複数の同一の第２のポリペプチドを含み、前記第２のポリペプチドが前記第１のポリペプチドと異なる、複数の第２のアセンブリ；
を含み、
前記複数の第１のアセンブリが前記複数の第２のアセンブリと非共有結合的に相互作用してナノ構造を形成し；
前記ナノ構造が、１つまたは複数のパラミクソウイルスおよび／もしくはニューモウイルスのＦタンパク質、またはその抗原フラグメントの複数のコピーを前記ナノ構造の外面に表示し、任意で
（ａ）前記第１のポリペプチドが、配列番号１〜５１からなる群から選択されるポリペプチドのアミノ酸配列に対してその全長に沿って少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性を有するポリペプチドを含み；かつ
（ｂ）前記第２のポリペプチドが、配列番号１〜５１からなる群から選択されるポリペプチドのアミノ酸配列に対してその全長に沿って少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性を有するポリペプチドを含み、
任意で、前記１つまたは複数のパラミクソウイルスおよび／もしくはニューモウイルスのＦタンパク質、またはその抗原フラグメントが、配列番号５３、６１〜６８、および１０１からなる群から選択されるポリペプチドに対してその全長に沿って少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性を有するポリペプチドを含むか、
前記１つまたは複数のパラミクソウイルスおよび／もしくはニューモウイルスのＦタンパク質、またはその抗原フラグメントが、配列番号５３および６１〜６４からなる群から選択されるＲＳＶ  Ｆタンパク質またはその変異体に対してその全長に沿って少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性を有するポリペプチドを含み、前記ポリペプチドは、以下の残基：６７Ｉ、１４９Ｃ、４５８Ｃ、４６Ｇ、４６５Ｑ、２１５Ｐ、９２Ｄ、および４８７Ｑのうちの１つまたは複数を含むか、あるいは
前記１つまたは複数のパラミクソウイルスおよび／もしくはニューモウイルスのＦタンパク質、またはその抗原フラグメントが、配列番号６５〜６８および１０１からなる群から選択されるＭＰＶ  Ｆタンパク質またはその変異体に対してその全長に沿って少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性を有するポリペプチドを含み、前記ポリペプチドが、以下の残基：１１３Ｃ、１２０Ｃ、３３９Ｃ、１６０Ｆ、１７７Ｌ、１８５Ｐ、および４２６Ｃのうちの１つまたは複数を含む、ナノ構造。
【請求項２】
前記第１のポリペプチドおよび前記第２のポリペプチドは、以下の対：
配列番号１および配列番号２（Ｉ５３−３４ＡおよびＩ５３−３４Ｂ）；
配列番号３および配列番号４（Ｉ５３−４０ＡおよびＩ５３−４０Ｂ）；
配列番号３および配列番号２４（Ｉ５３−４０ＡおよびＩ５３−４０Ｂ．１）；
配列番号２３および配列番号４（Ｉ５３−４０Ａ．１およびＩ５３−４０Ｂ）；
配列番号３５および配列番号３６（Ｉ５３−４０Ａ属およびＩ５３−４０Ｂ属）；
配列番号５および配列番号６（Ｉ５３−４７ＡおよびＩ５３−４７Ｂ）；
配列番号５および配列番号２７（Ｉ５３−４７ＡおよびＩ５３−４７Ｂ．１）；
配列番号５および配列番号２８（Ｉ５３−４７ＡおよびＩ５３−４７Ｂ．１ＮｅｇＴ２）；
配列番号２５および配列番号６（Ｉ５３−４７Ａ．１およびＩ５３−４７Ｂ）；
配列番号２５および配列番号２７（Ｉ５３−４７Ａ．１およびＩ５３−４７Ｂ．１）；
配列番号２５および配列番号２８（Ｉ５３−４７Ａ．１およびＩ５３−４７Ｂ．１ＮｅｇＴ２）；
配列番号２６および配列番号６（Ｉ５３−４７Ａ．１ＮｅｇＴ２およびＩ５３−４７Ｂ）；
配列番号２６および配列番号２７（Ｉ５３−４７Ａ．１ＮｅｇＴ２およびＩ５３−４７Ｂ．１）；
配列番号２６および配列番号２８（Ｉ５３−４７Ａ．１ＮｅｇＴ２およびＩ５３−４７Ｂ．１ＮｅｇＴ２）；
配列番号３７および配列番号３８（Ｉ５３−４７Ａ属およびＩ５３−４７Ｂ属）；
配列番号７および配列番号８（Ｉ５３−５０ＡおよびＩ５３−５０Ｂ）；
配列番号７および配列番号３２（Ｉ５３−５０ＡおよびＩ５３−５０Ｂ．１）；
配列番号７および配列番号３３（Ｉ５３−５０ＡおよびＩ５３−５０Ｂ．１ＮｅｇＴ２）；
配列番号７および配列番号３４（Ｉ５３−５０ＡおよびＩ５３−５０Ｂ．４ＰｏｓＴ１）；
配列番号２９および配列番号８（Ｉ５３−５０Ａ．１およびＩ５３−５０Ｂ）；
配列番号２９および配列番号３２（Ｉ５３−５０Ａ．１およびＩ５３−５０Ｂ．１）；
配列番号２９および配列番号３３（Ｉ５３−５０Ａ．１およびＩ５３−５０Ｂ．１ＮｅｇＴ２）；
配列番号２９および配列番号３４（Ｉ５３−５０Ａ．１およびＩ５３−５０Ｂ．４ＰｏｓＴ１）；
配列番号３０および配列番号８（Ｉ５３−５０Ａ．１ＮｅｇＴ２およびＩ５３−５０Ｂ）；
配列番号３０および配列番号３２（Ｉ５３−５０Ａ．１ＮｅｇＴ２およびＩ５３−５０Ｂ．１）；
配列番号３０および配列番号３３（Ｉ５３−５０Ａ．１ＮｅｇＴ２およびＩ５３−５０Ｂ．１ＮｅｇＴ２）；
配列番号３０および配列番号３４（Ｉ５３−５０Ａ．１ＮｅｇＴ２およびＩ５３−５０Ｂ．４ＰｏｓＴ１）；
配列番号３１および配列番号８（Ｉ５３−５０Ａ．１ＰｏｓＴ１およびＩ５３−５０Ｂ）；
配列番号３１および配列番号３２（Ｉ５３−５０Ａ．１ＰｏｓＴ１およびＩ５３−５０Ｂ．１）；
配列番号３１および配列番号３３（Ｉ５３−５０Ａ．１ＰｏｓＴ１およびＩ５３−５０Ｂ．１ＮｅｇＴ２）；
配列番号３１および配列番号３４（Ｉ５３−５０Ａ．１ＰｏｓＴ１およびＩ５３−５０Ｂ．４ＰｏｓＴ１）；
配列番号３９および配列番号４０（Ｉ５３−５０Ａ属およびＩ５３−５０Ｂ属）；
配列番号９および配列番号１０（Ｉ５３−５１ＡおよびＩ５３−５１Ｂ）；
配列番号１１および配列番号１２（Ｉ５２−０３ＡおよびＩ５２−０３Ｂ）；
配列番号１３および配列番号１４（Ｉ５２−３２ＡおよびＩ５２−３２Ｂ）；
配列番号１５および配列番号１６（Ｉ５２−３３ＡおよびＩ５２−３３Ｂ）
配列番号１７および配列番号１８（Ｉ３２−０６ＡおよびＩ３２−０６Ｂ）；
配列番号１９および配列番号２０（Ｉ３２−１９ＡおよびＩ３２−１９Ｂ）；
配列番号２１および配列番号２２（Ｉ３２−２８ＡおよびＩ３２−２８Ｂ）；
配列番号２３および配列番号２４（Ｉ５３−４０Ａ．１およびＩ５３−４０Ｂ．１）；
配列番号４１および配列番号４２（Ｔ３２−２８ＡおよびＴ３２−２８Ｂ）；
配列番号４３および配列番号４４（Ｔ３３−０９ＡおよびＴ３３−０９Ｂ）；
配列番号４５および配列番号４６（Ｔ３３−１５ＡおよびＴ３３−１５Ｂ）；
配列番号４７および配列番号４８（Ｔ３３−２１ＡおよびＴ３３−２１Ｂ）；
配列番号４９および配列番号５０（Ｔ３３−２８ＡおよびＴ３２−２８Ｂ）；および
配列番号５１および配列番号４４（Ｔ３３−３１ＢおよびＴ３３−０９Ｂ（Ｔ３３−３１Ｂとも呼ばれる））から選択されるアミノ酸配列に対してその全長に沿って少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性を有するポリペプチドを含み、
任意で、前記第１のポリペプチドが、Ｔ３３−３１Ａ（配列番号５１）のアミノ酸配列に対してその全長に沿って少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性を有するポリペプチドを含み、前記第２のポリペプチドが、Ｔ３３−０９Ｂ／Ｔ３３−３１Ｂ（配列番号４４）のアミノ酸配列に対してその全長に沿って少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性を有するポリペプチドを含むか、
前記第１のポリペプチドが、Ｔ３３−１５Ｂ（配列番号４６）のアミノ酸配列に対してその全長に沿って少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性を有するポリペプチドを含み、前記第２のポリペプチドが、Ｔ３３−１５Ａ（配列番号４５）のアミノ酸配列に対してその全長に沿って少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性を有するポリペプチドを含むか、
前記第１のポリペプチドが、Ｉ５３−５０Ａ（配列番号７）、Ｉ５３−５０Ａ．１（配列番号２９）、Ｉ５３−５０Ａ．１ＮｅｇＴ２（配列番号３０）、およびＩ５３−５０Ａ．１ＰｏｓＴ１（配列番号３１）からなる群から選択されるアミノ酸配列に対してその全長に沿って少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性を有するポリペプチドを含み、前記第２のポリペプチドが、Ｉ５３−５０Ｂ（配列番号８）、Ｉ５３−５０Ｂ．１（配列番号３２）、Ｉ５３−５０Ｂ．１ＮｅｇＴ２（配列番号３３）、およびＩ５３−５０Ｂ．４ＰｏｓＴ１（配列番号３４）からなる群から選択されるアミノ酸配列に対してその全長に沿って少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性を有するポリペプチドを含むか、あるいは
前記第１のポリペプチドが、Ｉ３２−２８Ａ（配列番号２１）のアミノ酸配列に対してその全長に沿って少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性を有するポリペプチドを含み、前記第２のポリペプチドが、Ｉ３２−２８Ｂ（配列番号２２）のアミノ酸配列に対してその全長に沿って少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性を有するポリペプチドを含み、
任意で、前記第１のポリペプチドが、Ｉ５３−５０Ａ（配列番号７）、Ｉ５３−５０Ａ．１（配列番号２９）、Ｉ５３−５０Ａ．１ＮｅｇＴ２（配列番号３０）、およびＩ５３−５０Ａ．１ＰｏｓＴ１（配列番号３１）からなる群から選択されるアミノ酸配列に対してその全長に沿って少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性を有するポリペプチドを含み、前記第２のポリペプチドが、Ｉ５３−５０Ｂ（配列番号８）、Ｉ５３−５０Ｂ．１（配列番号３２）、Ｉ５３−５０Ｂ．１ＮｅｇＴ２（配列番号３３）、およびＩ５３−５０Ｂ．４ＰｏｓＴ１（配列番号３４）からなる群から選択されるアミノ酸配列に対してその全長に沿って少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性を有するポリペプチドを含む、請求項１に記載のナノ構造。
【請求項３】
前記１つまたは複数のパラミクソウイルスおよび／もしくはニューモウイルスのＦタンパク質、またはその抗原フラグメントが、前記第１のポリペプチドとの融合タンパク質として発現され、
任意で、前記複数の第１のアセンブリの各々が同一の融合タンパク質を含み、および／または前記第１のポリペプチドのサブセットのみが、Ｆタンパク質またはその抗原フラグメントとの融合タンパク質を含み、あるいは前記複数の第１のアセンブリが、合計で２つ以上のパラミクソウイルスおよび／もしくはニューモウイルスのＦタンパク質、またはその抗原フラグメントを含む、請求項１または２に記載のナノ構造。
【請求項４】
各々の第１のアセンブリが、前記第１のポリペプチドのホモ三量体を含む、請求項１〜３のいずれか１項に記載のナノ構造。
【請求項５】
前記１つまたは複数のパラミクソウイルスおよび／もしくはニューモウイルスのＦタンパク質、またはその抗原フラグメントが、ＤＳ−Ｃａｖ１（配列番号５３）のアミノ酸配列に対してその全長に沿って少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性を有するポリペプチドを含む、請求項１〜４のいずれか１項に記載のナノ構造。
【請求項６】
各々の融合タンパク質が、前記第１のポリペプチドと前記１つまたは複数のパラミクソウイルスおよび／もしくはニューモウイルスのＦタンパク質、またはその抗原フラグメントとの間に配置されたアミノ酸リンカーを含み、
任意で、前記アミノ酸リンカー配列が、１つまたは複数の三量体化ドメインを含み、および／または前記アミノ酸リンカー配列が、アミノ酸配列ＧＹＩＰＥＡＰＲＤＧＱＡＹＶＲＫＤＧＥＷＶＬＬＳＴＦＬ（配列番号５４）を含み、あるいは前記アミノ酸リンカー配列がＧｌｙ−Ｓｅｒリンカーを含む、請求項３〜５のいずれか１項に記載のナノ構造。
【請求項７】
前記融合タンパク質が、配列番号６９〜１００からなる群から選択されるアミノ酸配列に対してその全長に沿って少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性を有するポリペプチドを含み、任意で
（ａ）各々の融合タンパク質がＤＳ−Ｃａｖ１−ｆｏｌｄｏｎ−Ｔ３３−３１Ａ（配列番号６９）またはＤＳ−Ｃａｖ１−Ｔ３３−３１Ａ（配列番号７０）であるとき、各々の第２のポリペプチドはＴ３３−３１Ｂ（配列番号４４）であり；
（ｂ）各々の融合タンパク質がＤＳ−Ｃａｖ１−ｆｏｌｄｏｎ−Ｔ３３−１５Ｂ（配列番号７１）またはＤＳ−Ｃａｖ１−Ｔ３３−１５Ｂ（配列番号７２）であるとき、各々の第２のポリペプチドはＴ３３−１５Ａ（配列番号４５）であり；
（ｃ）各々の融合タンパク質がＤＳ−Ｃａｖ１−ｆｏｌｄｏｎ−Ｉ５３−５０Ａ（配列番号７３）またはＤＳ−Ｃａｖ１−Ｉ５３−５０Ａ（配列番号７４）であるとき、各々の第２のポリペプチドはＩ５３−５０Ｂ（配列番号８）、Ｉ５３−５０Ｂ．１（配列番号３２）、Ｉ５３−５０Ｂ．１ＮｅｇＴ２（配列番号３３）、またはＩ５３−５０Ｂ．４ＰｏｓＴ１（配列番号３４）であり；あるいは
（ｄ）各々の融合タンパク質がＤＳ−Ｃａｖ１−Ｉ３２−２８Ａ（配列番号７５）であるとき、各々の第２のポリペプチドはＩ３２−２８Ｂ（配列番号２２）である、請求項３〜６のいずれか１項に記載のナノ構造。
【請求項８】
各々の第１のポリペプチドが、アミノ酸リンカーを介して配列番号７（Ｉ５３−５０Ａ）に連結したＤＳ−Ｃａｖ１（配列番号５３）の融合タンパク質を含み、
任意で、前記アミノ酸リンカーが、Ｇｌｙ−Ｓｅｒリンカーおよび／またはヘリックス伸張ドメインを含み、および／または各々の融合タンパク質が、配列番号７６（Ｆ１０）のアミノ酸配列を含む、請求項５に記載のナノ構造。
【請求項９】
各々の融合タンパク質が、配列番号６９〜７７および８１〜９０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項３〜４のいずれか１項に記載のナノ構造。
【請求項１０】
各々の第２のポリペプチドが、Ｉ５３−５０Ｂ（配列番号８）、Ｉ５３−５０Ｂ．１（配列番号３２）、Ｉ５３−５０Ｂ．１ＮｅｇＴ２（配列番号３３）、またはＩ５３−５０Ｂ．４ＰｏｓＴ１（配列番号３４）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、
任意で、各々の第２のポリペプチドが、Ｉ５３−５０Ｂ．４ＰｏｓＴ１（配列番号３４）のアミノ酸配列を含む、請求項８〜９のいずれか１項に記載のナノ構造。
【請求項１１】
前記ナノ構造が、
（ａ）融合前Ｆ特異的抗体（モノクローナル抗体Ｄ２５が含まれるが、これに限定されない）に結合し；
（ｂ）対称構造（正二十面体構造が含まれるが、これに限定されない）を形成し；
（ｃ）５０℃で安定であり；かつ／または
（ｄ）２．２５Ｍ塩酸グアニジン中で安定である、請求項１〜１０のいずれか１項に記載のナノ構造。
【請求項１２】
請求項３〜１１のいずれか１項に引用された第１のポリペプチド融合タンパク質をコードする組換え核酸、プロモーターに作動可能に連結された前記組換え核酸を含む組換え発現ベクター、または、前記組換え発現ベクターを含むか、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の第１のポリペプチドおよび第２のポリペプチドを発現することができる１つまたは複数の組換え発現ベクターを含む、組換え宿主細胞。
【請求項１３】
請求項１〜１１のいずれか１項に記載のナノ構造、および薬学的に許容され得る担体を含む免疫原性組成物であって、任意で前記免疫原性組成物がアジュバントをさらに含み、
または、被験体においてパラミクソウイルスおよび／またはニューモウイルスのＦタンパク質に対する免疫応答を生じさせる方法において使用するための免疫原性組成物であって、それを必要とする前記被験体に、請求項１〜１１のいずれか１項に記載のナノ構造または免疫原性組成物の有効量を投与して免疫応答を生じさせることを含み、任意で前記投与により前記被験体におけるパラミクソウイルスおよび／またはニューモウイルスの中和抗体が産生され、任意で前記中和抗体が、少なくとも１，０００の力価（１／ＩＤ５０）で前記被験体の血清中に存在する、免疫原性組成物。
【請求項１４】
被験体においてパラミクソウイルスおよび／またはニューモウイルスの感染を治療または予防に使用するための、請求項１〜１１および１３のいずれか１項に記載のナノ構造または免疫原性組成物であって、
任意で前記治療が、被験体対象におけるパラミクソウイルスおよび／またはニューモウイルスの中和抗体の産生を含み、任意で前記中和抗体が、少なくとも１，０００の力価（１／ＩＤ５０）で前記被験体の血清中に存在する、ナノ構造または免疫原性組成物。
【請求項１５】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏで請求項１〜１１のいずれか１項に記載のナノ構造をアセンブリさせるプロセスであって、２つ以上のナノ構造の構成成分を水性条件で混合して、前記所望のナノ構造の自発的アセンブリを駆動する工程を含む、プロセスであって、
任意で、前記混合する工程が、各々がＦタンパク質またはその抗原フラグメント（「Ｆタンパク質」）を含む第１のポリペプチド（三量体の第１のポリペプチドなど）を含む第１のアセンブリを、第２のポリペプチドを含む適切な第２のアセンブリと、第１のポリペプチド：第２のポリペプチドのモル比およそ１：１にて、前記第１のアセンブリおよび前記第２のアセンブリが相互作用して前記ナノ構造を形成するのに適切な条件下および時間で混合する工程を含むか、
前記混合する工程が、全数未満の第１のポリペプチド（例えば、７５％、５０％、２５％など）がＦタンパク質を含んでいる第１のポリペプチド（三量体の第１のポリペプチドなど）を含む第１のアセンブリを、第２のポリペプチドを含む適切な第２のアセンブリと、第１のポリペプチド：第２のポリペプチドのモル比およそ１：１にて、前記第１のアセンブリおよび前記第２のアセンブリが相互作用して前記ナノ構造を形成するのに適切な条件下および時間で混合する工程を含むか、あるいは
前記混合する工程が、各々がＦタンパク質を含む第１のポリペプチド（三量体の第１のポリペプチドなど）を含む第１のアセンブリであって、前記第１のポリペプチド全体で複数の異なるＦタンパク質（例えば、２、３、４、またはそれを超える）を含む、第１のポリペプチドを、第２のポリペプチドを含む適切な第２のアセンブリと、第１のポリペプチド：第２のポリペプチドのモル比およそ１：１にて、前記第１のアセンブリおよび前記第２のアセンブリが相互作用して複数のＦタンパク質またはその抗原フラグメントを含む前記ナノ構造を形成するのに適切な条件下および時間で混合する工程を含む、プロセス。