【手続補正書】
【提出日】令和3年8月27日(2021.8.27)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象の組織の保存方法であって、
水溶液を含む洗浄流体で前記組織を灌流することにより、前記組織を洗浄すること；
アルデヒドを含む固定流体で前記組織を灌流することにより、前記組織を固定すること；および
ガラス化剤を含む凍結保護流体で前記組織を灌流することにより、前記組織を凍結保護すること
を含み、
前記洗浄することは、前記組織内で虚血の発症後に開始される、保存方法。
【請求項２】
対象の組織の保存方法であって、
水溶液を含む洗浄流体で前記組織を灌流することにより、前記組織を洗浄すること；
アルデヒドを含む固定流体で前記組織を灌流することにより、前記組織を固定すること；および
ガラス化剤を含む凍結保護流体で前記組織を灌流することにより、前記組織を凍結保護すること
を含み、
前記凍結保護流体は約−８０℃またはそれより高いガラス化温度を有する、保存方法。
【請求項３】
対象の組織の保存方法であって、
（１）水溶液、および（２）イオンチャネル遮断剤、カルシウムキレート剤、血栓溶解剤、抗血小板物質、呼吸器毒、またはシナプス毒のうち、任意の１またはそれを超えるものを含む洗浄流体で、前記組織を灌流することにより、前記組織を洗浄すること；
アルデヒドを含む固定流体で前記組織を灌流することにより、前記組織を固定すること；および
ガラス化剤を含む凍結保護流体で前記組織を灌流することにより、前記組織を凍結保護すること
を含む、保存方法。
【請求項４】
対象の組織の保存方法であって、
水溶液を含む洗浄流体で前記組織を灌流することにより、前記組織を洗浄すること；
アルデヒドを含む固定流体で前記組織を灌流することにより、前記組織を固定すること；および
ガラス化剤を含む凍結保護流体で前記組織を灌流することにより、前記組織を凍結保護すること
を含み、
前記洗浄流体、前記固定化流体、または前記凍結保護流体は、色素または造影剤を含む、保存方法。
【請求項５】
対象の組織の保存方法であって、
水溶液を含む洗浄流体で前記組織を灌流することにより、前記組織を洗浄すること；
アルデヒドを含む固定流体で前記組織を灌流することにより、前記組織を固定すること；ガラス化剤を含む凍結保護流体で前記組織を灌流することにより、前記組織を凍結保護すること；および
前記組織内の前記洗浄流体、前記固定流体、または前記凍結保護流体の分布を画像化することにより、モニターすること
を含む、保存方法。
【請求項６】
対象由来の保存組織の分析方法であって、前記保存組織を画像化することまたは前記保存組織の微小解剖学的分析を実行することを含み、前記組織は、
水溶液を含む洗浄流体で前記組織を灌流することにより、前記組織を洗浄すること；
アルデヒドを含む固定流体で前記組織を灌流することにより、前記組織を固定すること；
ガラス化剤を含む凍結保護流体で前記組織を灌流することにより、前記組織を凍結保護すること；および
前記組織の前記灌流中に、前記洗浄流体、前記固定流体、または前記凍結保護流体の分布をモニターすること
により保存されている、分析方法。
【請求項７】
対象由来の保存組織の分析方法であって、前記保存組織を画像化することまたは前記保存組織の微小解剖学的分析を実行することを含み、前記組織は、
水溶液を含む洗浄流体で前記組織を灌流することにより、前記組織を洗浄すること；
アルデヒドを含む固定流体で前記組織を灌流することにより、前記組織を固定すること；および
ガラス化剤を含む凍結保護流体で前記組織を灌流することにより、前記組織を凍結保護すること
により保存されており、
前記凍結保護流体は約−８０℃またはそれより高いガラス化温度を有する、分析方法。
【請求項８】
対象由来の保存組織の分析方法であって、前記保存組織を画像化することまたは前記保存組織の微小解剖学的分析を実行することを含み、前記組織は、
（１）水溶液、および（２）イオンチャネル遮断剤、カルシウムキレート剤、血栓溶解剤、抗血小板物質、呼吸器毒、またはシナプス毒のうち、任意の１またはそれを超えるものを含む洗浄流体で前記組織を灌流することにより、前記組織を洗浄すること；
アルデヒドを含む固定流体で前記組織を灌流することにより、前記組織を固定すること；および
ガラス化剤を含む凍結保護流体で前記組織を灌流することにより、前記組織を凍結保護すること
により保存されている、分析方法。
【請求項９】
（１）アルデヒド、および（２）色素または造影剤を含み、灌流により組織を固定するための固定流体。
【請求項１０】
（１）ガラス化剤、および（２）色素または造影剤を含み、組織を凍結保存するための凍結保護流体。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５１】
（１）ガラス化剤、および（２）色素または造影剤を含み、組織を凍結保存するための凍結保護流体が本明細書にさらに提供される。いくつかの実施形態では、凍結保護流体は、アルデヒドを含む。いくつかの実施形態では、凍結保護流体は、エチレングリコール、グリセロール、ジメチルスルホキシド、またはポリエチレングリコールを含む。いくつかの実施形態では、凍結保護流体は、約−１９５℃〜約＋５０℃のガラス化温度を有する。
本発明の実施形態において、例えば以下の項目が提供される。
（項目１）
対象の組織の保存方法であって、
水溶液を含む洗浄流体で前記組織を灌流することにより、前記組織を洗浄すること；
アルデヒドを含む固定流体で前記組織を灌流することにより、前記組織を固定すること；および
ガラス化剤を含む凍結保護流体で前記組織を灌流することにより、前記組織を凍結保護すること
を含み、
前記洗浄することは、前記組織内で虚血の発症後に開始される、保存方法。
（項目２）
対象の組織の保存方法であって、
水溶液を含む洗浄流体で前記組織を灌流することにより、前記組織を洗浄すること；
アルデヒドを含む固定流体で前記組織を灌流することにより、前記組織を固定すること；および
ガラス化剤を含む凍結保護流体で前記組織を灌流することにより、前記組織を凍結保護すること
を含み、
前記凍結保護流体は約−８０℃またはそれより高いガラス化温度を有する、保存方法。
（項目３）
対象の組織の保存方法であって、
（１）水溶液、および（２）イオンチャネル遮断剤、カルシウムキレート剤、血栓溶解剤、抗血小板物質、呼吸器毒、またはシナプス毒のうち、任意の１またはそれを超えるものを含む洗浄流体で、前記組織を灌流することにより、前記組織を洗浄すること；
アルデヒドを含む固定流体で前記組織を灌流することにより、前記組織を固定すること；および
ガラス化剤を含む凍結保護流体で前記組織を灌流することにより、前記組織を凍結保護すること
を含む、保存方法。
（項目４）
前記洗浄流体、前記固定流体、または前記凍結保護流体は、色素または造影剤を含む、項目１〜３のいずれか一項に記載の保存方法。
（項目５）
対象の組織の保存方法であって、
水溶液を含む洗浄流体で前記組織を灌流することにより、前記組織を洗浄すること；
アルデヒドを含む固定流体で前記組織を灌流することにより、前記組織を固定すること；および
ガラス化剤を含む凍結保護流体で前記組織を灌流することにより、前記組織を凍結保護すること
を含み、
前記洗浄流体、前記固定化流体、または前記凍結保護流体は、色素または造影剤を含む、保存方法。
（項目６）
前記洗浄流体、前記固定流体、または前記凍結保護流体は、放射線不透過性色素を含む、項目４または５に記載の保存方法。
（項目７）
前記組織内の前記洗浄流体、前記固定流体、または前記凍結保護流体の分布を画像化することにより、モニターすることをさらに含む、項目１〜６のいずれか一項に記載の保存方法。
（項目８）
対象の組織の保存方法であって、
水溶液を含む洗浄流体で前記組織を灌流することにより、前記組織を洗浄すること；
アルデヒドを含む固定流体で前記組織を灌流することにより、前記組織を固定すること；ガラス化剤を含む凍結保護流体で前記組織を灌流することにより、前記組織を凍結保護すること；および
前記組織内の前記洗浄流体、前記固定流体、または前記凍結保護流体の分布を画像化することにより、モニターすること
を含む、保存方法。
（項目９）
前記モニターすることが、コンピューター断層撮影（ＣＴ）、マイクロコンピューター断層撮影（ｍｉｃｒｏＣＴ）、Ｘ線、またはＭＲＩによって実行される、項目７または８に記載の保存方法。
（項目１０）
前記洗浄流体、前記固定流体、または前記凍結保護流体での前記組織の灌流が灌流スケジュールに従って行われ、前記灌流スケジュールが、前記洗浄流体、前記固定流体、または前記凍結保護流体の前記モニターされた分布に基づいて変更される、項目１〜９のいずれか一項に記載の保存方法。
（項目１１）
前記組織をガラス化することをさらに含む、項目１〜１０のいずれか一項に記載の保存方法。
（項目１２）
前記組織が、約−１００℃またはそれより低い温度でガラス化される、項目１〜１１のいずれか一項に記載の保存方法。
（項目１３）
前記ガラス化組織を約７２時間またはそれより長く保管することを含む、項目１１または項目１２に記載の保存方法。
（項目１４）
前記ガラス化組織を解凍することを含む、項目１１〜１３のいずれか一項に記載の保存方法。
（項目１５）
前記保存組織の少なくとも一部を画像化することを含む、項目１〜１４のいずれか一項に記載の保存方法。
（項目１６）
微小解剖学的分析を使って、前記保存組織の少なくとも一部の特性を明らかにすることを含む、項目１〜１５のいずれか一項に記載の保存方法。
（項目１７）
前記保存組織の少なくとも一部が、電子顕微鏡法、拡大顕微鏡法、または蛍光インサイチュハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）拡大顕微鏡法を使用して画像化される、項目１〜１６のいずれか一項に記載の保存方法。
（項目１８）
対象由来の保存組織の分析方法であって、前記保存組織を画像化することまたは前記保存組織の微小解剖学的分析を実行することを含み、前記組織は、
水溶液を含む洗浄流体で前記組織を灌流することにより、前記組織を洗浄すること；
アルデヒドを含む固定流体で前記組織を灌流することにより、前記組織を固定すること；
ガラス化剤を含む凍結保護流体で前記組織を灌流することにより、前記組織を凍結保護すること；および
前記組織の前記灌流中に、前記洗浄流体、前記固定流体、または前記凍結保護流体の分布をモニターすること
により保存されている、分析方法。
（項目１９）
対象由来の保存組織の分析方法であって、前記保存組織を画像化することまたは前記保存組織の微小解剖学的分析を実行することを含み、前記組織は、
水溶液を含む洗浄流体で前記組織を灌流することにより、前記組織を洗浄すること；
アルデヒドを含む固定流体で前記組織を灌流することにより、前記組織を固定すること；および
ガラス化剤を含む凍結保護流体で前記組織を灌流することにより、前記組織を凍結保護すること
により保存されており、
前記凍結保護流体は約−８０℃またはそれより高いガラス化温度を有する、分析方法。
（項目２０）
対象由来の保存組織の分析方法であって、前記保存組織を画像化することまたは前記保存組織の微小解剖学的分析を実行することを含み、前記組織は、
（１）水溶液、および（２）イオンチャネル遮断剤、カルシウムキレート剤、血栓溶解剤、抗血小板物質、呼吸器毒、またはシナプス毒のうち、任意の１またはそれを超えるものを含む洗浄流体で前記組織を灌流することにより、前記組織を洗浄すること；
アルデヒドを含む固定流体で前記組織を灌流することにより、前記組織を固定すること；および
ガラス化剤を含む凍結保護流体で前記組織を灌流することにより、前記組織を凍結保護すること
により保存されている、分析方法。
（項目２１）
前記組織中の前記洗浄流体、前記固定流体、または前記凍結保護流体は、前記組織の灌流中にモニターされた、項目１９または２０に記載の分析方法。
（項目２２）
前記組織の灌流は、ＣＴ、マイクロＣＴ、Ｘ線、またはＭＲＩを使用してモニターされた、項目１８または項目２１に記載の分析方法。
（項目２３）
前記保存組織を解凍することを含む、項目１８〜２２のいずれか一項に記載の分析方法。
（項目２４）
前記保存組織を画像化することまたは前記保存組織の微小解剖学的分析を実行することが、電子顕微鏡法、拡大顕微鏡法、または蛍光インサイチュハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）拡大顕微鏡法を使用して、前記保存組織を画像化することを含む、項目１８〜２３のいずれか一項に記載の分析方法。
（項目２５）
前記洗浄流体、前記固定流体、または前記凍結保護流体での前記組織の灌流が灌流スケジュールに従って行われ、前記灌流スケジュールが、前記組織の灌流中に、前記洗浄流体、前記固定流体、または前記凍結保護流体の前記モニターされた分布に基づいて変更された、項目１６〜２４のいずれか一項に記載の方法。
（項目２６）
前記凍結保護流体が、前記固定流体に対する勾配として前記組織へ灌流される、項目１〜２５のいずれか一項に記載の方法。
（項目２７）
前記洗浄流体、前記固定流体、または前記凍結保護流体は、イオンチャネル遮断剤またはイオン受容体遮断剤を含む、項目１〜２６のいずれか一項に記載の方法。
（項目２８）
前記洗浄流体、前記固定流体、または前記凍結保護流体は、カルシウムキレート剤を含む、項目１〜２７のいずれか一項に記載の方法。
（項目２９）
前記洗浄流体、前記固定流体、または前記凍結保護流体は、呼吸器毒を含む、項目１〜２８のいずれか一項に記載の方法。
（項目３０）
前記洗浄流体、前記固定流体、または前記凍結保護流体は、シナプス毒を含む、項目１〜２９のいずれか一項に記載の方法。
（項目３１）
前記洗浄流体、前記固定流体、または前記凍結保護流体は、血管拡張薬を含む、項目１〜３０のいずれか一項に記載の方法。
（項目３２）
前記洗浄流体、前記固定流体、または前記凍結保護流体は、膨脹剤を含む、項目１〜３１のいずれか一項に記載の方法。
（項目３３）
前記洗浄流体または前記固定流体は、イオン性界面活性剤を含む、項目１〜３２のいずれか一項に記載の方法。
（項目３４）
前記洗浄流体は、麻酔薬を含む、項目１〜３３のいずれか一項に記載の方法。
（項目３５）
前記洗浄流体は、血栓溶解剤を含む、項目１〜３４のいずれか一項に記載の方法。
（項目３６）
前記洗浄流体は、凝固阻止剤を含む、項目１〜３５のいずれか一項に記載の方法。
（項目３７）
前記洗浄流体は、抗血小板剤を含む、項目１〜３６のいずれか一項に記載の方法。
（項目３８）
前記固定流体は、ホルムアルデヒドまたはグルタルアルデヒドを含む、項目１〜３７のいずれか一項に記載の方法。
（項目３９）
前記凍結保護流体は、アルデヒドを含む、項目１〜３８のいずれか一項に記載の方法。
（項目４０）
前記凍結保護流体は、エチレングリコール、ジメチルスルホキシド、またはポリエチレングリコールを含む、項目１〜３９のいずれか一項に記載の方法。
（項目４１）
前記凍結保護流体は、約−１９５℃〜約＋５０℃のガラス化温度を有する、項目１〜４０のいずれか一項に記載の方法。
（項目４２）
前記組織は、前記対象の死亡の８時間以内に保存される、項目１〜４１のいずれか一項に記載の方法。
（項目４３）
前記対象はヒトである、項目１〜４２のいずれか一項に記載の方法。
（項目４４）
前記対象は非ヒト動物である、項目１〜４２のいずれか一項に記載の方法。
（項目４５）
前記非ヒト動物はげっ歯類である、項目４４に記載の方法。
（項目４６）
前記組織は、器官またはその一部である、項目１〜４５のいずれか一項に記載の方法。
（項目４７）
前記組織は、脳またはその一部である、項目１〜４６のいずれか一項に記載の方法。
（項目４８）
前記組織の体積は、約１００ｃｍ３であるかまたはそれより大きい、項目１〜４７のいずれか一項に記載の方法。
（項目４９）
前記洗浄流体の水溶液は、生理食塩水溶液である、項目１〜４８のいずれか一項に記載の方法。
（項目５０）
前記洗浄流体の水溶液は、緩衝化生理食塩水溶液である、項目１〜４９のいずれか一項に記載の方法。
（項目５１）
項目１〜１７および２６〜５０のいずれか一項に記載の方法に従って形成された保存組織。
（項目５２）
（１）アルデヒド、および（２）色素または造影剤を含み、灌流により組織を固定するための固定流体。
（項目５３）
前記アルデヒドは、ホルムアルデヒドまたはグルタルアルデヒドである、項目５２に記載の固定流体。
（項目５４）
（１）ガラス化剤、および（２）色素または造影剤を含み、組織を凍結保存するための凍結保護流体。
（項目５５）
前記凍結保護流体は、アルデヒドを含む、項目５４記載の凍結保護流体。
（項目５６）
前記凍結保護流体は、エチレングリコール、グリセロール、ジメチルスルホキシド、またはポリエチレングリコールを含む、項目５４または５５に記載の凍結保護流体。
（項目５７）
前記凍結保護流体は、約−１９５℃〜約＋５０℃のガラス化温度を有する、項目５４〜５６のいずれか一項に記載の凍結保護流体。