【誤訳訂正書】
【提出日】令和3年7月20日(2021.7.20)
【誤訳訂正１】
【訂正対象書類名】特許請求の範囲
【訂正対象項目名】全文
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
２つ以上の標的核酸分子を第１のエキソヌクレアーゼで処理すること、処理がされた後２つ以上の標的核酸分子を第２のエキソヌクレアーゼおよびアニーリングタンパク質の存在下で組換えすることを含み、組換えされた標的核酸分子が少なくとも１つの相同配列を共有することを特徴とする、相同組換え方法。
【請求項２】
第１の核酸分子および第２の核酸分子を第１のエキソヌクレアーゼで処理すること、第２のエキソヌクレアーゼおよびアニーリングタンパク質の存在下で処理した後に第１の核酸分子および第２の核酸分子を組換えることを含み、第１の核酸分子および第２の核酸分子が少なくとも１つの相同配列を共有することを特徴とする、相同組換え方法。
【請求項３】
２つ以上の核酸分子を第１のエキソヌクレアーゼで処理すること、２つ以上の核酸分子を第２のエキソヌクレアーゼおよびアニーリングタンパク質の存在下で処理した後に組換えすることを含み、各核酸分子が、結果として生じる構築産物における隣接する核酸分子で少なくとも１つの相同配列を共有することを特徴とする、核酸分子構築方法。
【請求項４】
直鎖クローニングベクターおよびゲノムDNA断片の混合物を第１のエキソヌクレアーゼで処理すること、第２のエキソヌクレアーゼおよびアニーリングタンパク質の存在下で処理した後に直鎖クローニングベクターおよびゲノムDNA断片の混合物を組換えすることを含み、直鎖クローニングベクターがゲノムDNA断片の混合物の標的DNA断片と少なくとも１つの相同配列を共有することを特徴とする、ゲノムDNAのクローニング方法。
【請求項５】
少なくとも１つの相同配列が２つ以上の標的核酸分子のそれぞれの内側または一端にある、特に、少なくとも１つの相同配列が標的核酸分子の一端にある、より具体的には、標的核酸分子の一端にあるすべての相同配列は、２つ以上の標的核酸分子の内側または一端に位置することができることを特徴とする、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
少なくとも１つの相同配列の長さは、少なくとも6、少なくとも10、少なくとも20、少なくとも25、少なくとも30、少なくとも40、少なくとも50、少なくとも60、少なくとも70、少なくとも80ヌクレオチド、特に25、40 または80ヌクレオチド、より具体的には80ヌクレオチドを含むことを特徴とする、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
第１のエキソヌクレアーゼが、5’-3’エキソヌクレアーゼ、特に、T4 DNA ポリメラーゼ、DNAポリメラーゼIのクレノウ断片、T5エキソヌクレアーゼ、T7 エキソヌクレアーゼ、より具体的には、T4 DNA ポリメラーゼまたはT5エキソヌクレアーゼであることを特徴とする、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
in vitro結合を含む第１のエキソヌクレアーゼの存在下で処理することを特徴とするものであって、前記in vitro結合は、２つ以上の標的核酸分子を結合することができる、または第１の核酸分子を第２の核酸分子に結合することができる、または処理された直鎖クローニングベクターをゲノムDNA断片混合物の標的DNA断片に結合することができることを特徴とする、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
第１のエキソヌクレアーゼの存在下での処理には、酵素消化とアニーリングが含まれ、異なる核酸分子の酵素消化は、例えばサンプルの混合物中において、個別にまたは同時に実行することができることを特徴とする、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
第１のエキソヌクレアーゼの存在下での処理には、酵素消化とアニーリングが含まれ、異なる核酸分子の酵素消化は、例えばサンプルの混合物中において、個別にまたは同時に実行することができることを特徴とする、請求項８または９に記載の方法。
【請求項１１】
第１のエキソヌクレアーゼの存在下での処理には、3’-5’エキソヌクレアーゼ活性を有するＤＮＡポリメラーゼの添加をさらに含むことを特徴とする、請求項８または９に記載の方法。
【請求項１２】
第１のエキソヌクレアーゼの存在下での処理には、dNTPの添加が除外されることを特徴とする、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
第１のエキソヌクレアーゼの存在下での処理には、T4 DNAポリメラーゼ処理またはギブソン構築を含むことを特徴とする、請求項８または９または１０に記載の方法。
【請求項１４】
第２のエキソヌクレアーゼはRecEであり、特にRecEは組換え発現産物であることを特徴とする、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１５】
一本鎖アニーリングタンパク質には、RecA、RAD51、Redβ、RecT、PluβまたはRAD52が含まれ、特に、アニーリングタンパク質はRecTであり、より具体的にはRecTは組換え発現産物であることを特徴とする、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１６】
相同組換えは、in vitroまたは宿主細胞中で行われることを特徴とする、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１７】
宿主細胞が酵母細胞、特にサッカロマイセス・セレビシエ（Saccharomyces cerevisiae）細胞または細菌細胞、特に枯草菌または大腸菌であることを特徴とする、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
宿主細胞がエキソヌクレアーゼ、特に第２のエキソヌクレアーゼとアニーリングタンパク質を発現することを特徴とする、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
宿主細胞が完全長RecEおよび／またはRecTを発現する大腸菌細胞であり、特に、宿主細胞は、全長RecE、RecTおよびRedγを発現する大腸菌細胞であり、より具体的には、宿主細胞は、全長RecE、RecT、RedγおよびRecAを発現する大腸菌細胞であることを特徴とする、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
宿主細胞は、切断されたRecEおよびRecTを発現する大腸菌細胞であることを特徴とする、請求項１８に記載の方法。
【請求項２１】
宿主細胞は、RedαおよびRedβを発現する大腸菌細胞であることを特徴とする、請求項１８に記載の方法。
【請求項２２】
宿主細胞は、プラスミドベクターおよび／または染色体上でエキソヌクレアーゼを発現し、特に、第２のエキソヌクレアーゼ、アニーリングタンパク質、Redγおよび／またはRecAを発現し、特に、プラスミドベクターによる発現、より具体的には、プラスミドベクターと染色体によって同時に発現することを特徴とする、請求項１８に記載の方法。
【請求項２３】
標的核酸分子または標的DNA断片がエンドヌクレアーゼで消化されたDNA断片、PCR増幅DNA断片、ゲノムDNA断片、ｃDNAライブラリーのメンバー、細菌人工染色体（BAC）由来の断片およびクローニングベクターの断片から選択される直鎖DNAセグメントであることを特徴とする、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２４】
エンドヌクレアーゼは、制限酵素またはプログラム可能なエンドヌクレアーゼであることを特徴とする、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
標的核酸分子またはDNA断片の数は、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20またはそれ以上であることを特徴とする、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２６】
標的核酸分子は0.5 kb以上（例えば、1kb以上、2.5kb以上、4kb以上、5kb以上、7.5kb以上、10kb以上、15kb以上、20kb以上、25kb以上、40kb以上、50kb以上、75kb以上または100kb以上）の配列を含むことを特徴とする、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２７】
２つ以上の標的核酸分子、第１の標的核酸分子、および第２の標的核酸分子または標的DNA断片は、１つ以上のPCR増幅DNA断片、ゲノムDNA断片、cDNAライブラリーメンバー、および／またはBAC由来の断片を含み、
第１のエキソヌクレアーゼは3’-5’エキソヌクレアーゼ活性を有し、特にT4 DNAポリメラーゼであり、
エキソヌクレアーゼでの２つ以上の標的核酸分子の切断は、dNTPの非存在下でin vitroで行われ、
第２のエキソヌクレアーゼは全長RecEであり、
アニーリングタンパク質はRecTであり、および
相同組換えは、全長RecEとRecTを発現する細菌宿主細胞、特に大腸菌で行われる、
ことを特徴とする、請求項８または９に記載の方法。
【請求項２８】
２つ以上の標的核酸分子は、３つ以上のPCR増幅DNA断片、ゲノムDNA断片、cDNAライブラリーメンバー、および／またはBAC由来の断片、直鎖プラスミド、および／またはクローニングベクター断片、および、特に、３つ以上の直鎖プラスミドおよび／またはクローニングベクター断片を含み、
第１のエキソヌクレアーゼはギブソン構築を含み、
第２のエキソヌクレアーゼは全長RecEであり、
アニーリングタンパク質はRecTであり、および
相同組換えは、全長RecEとRecTを発現する細菌宿主細胞、特に大腸菌で行われる、
ことを特徴とする、請求項８または９に記載の方法。
【請求項２９】
請求項１〜２８のいずれか１項に記載の方法の第１のエキソヌクレアーゼおよび第２のエキソヌクレアーゼ、または請求項１〜２８のいずれか１項に記載の方法の第１のエキソヌクレアーゼおよび第２のエキソヌクレアーゼをコードする核酸を含むキット。
【請求項３０】
第１のエキソヌクレアーゼが、3’-5’エキソヌクレアーゼ活性を有するDNAポリメラーゼ、例えば、T4 DNA ポリメラーゼ、DNAポリメラーゼIのクレノウ断片、T5エキソヌクレアーゼ、またはT7 エキソヌクレアーゼであり、第２のエキソヌクレアーゼは全長RecEであることを特徴とする、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
キットは第２のエキソヌクレアーゼを発現する宿主細胞をさらに含み、特に、宿主細胞は、全長RecE、RecT、RedγおよびRecAをコードする核酸を含むことを特徴とする、請求項２９または３０に記載の方法。
【請求項３２】
キットは１つ以上の事前に調製された直鎖ベクターをさらに含むことを特徴とする、請求項２９、３０または３１に記載の方法。
【請求項３３】
ターゲティングベクターの構築における請求項１〜２８のいずれか１項に記載の方法または請求項２９〜３２のいずれか１項に記載のキットの使用。
【請求項３４】
哺乳類細胞の遺伝子型判定における請求項１〜２８のいずれか１項に記載の方法または請求項２９〜３２のいずれか１項に記載のキットの使用。
【請求項３５】
DNA合成における請求項１〜２８のいずれか１項に記載の方法または請求項２９〜３２のいずれか１項に記載のキットの使用。