【手続補正書】
【提出日】令和3年10月6日(2021.10.6)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ゲノムに、変異したＳｌｃ３０ａ８遺伝子を含む内因性Ｓｌｃ３０ａ８遺伝子座が含まれる非ヒト動物であって、前記変異したＳｌｃ３０ａ８遺伝子が、短縮されたＳＬＣ３０Ａ８タンパク質をコードし、前記変異を有さない非ヒト動物と比べてインスリン分泌能の増強を有する非ヒト動物を結果としてもたらす、非ヒト動物。
【請求項２】
前記インスリン分泌能の増強が、高血糖に応答するものである、請求項１に記載の非ヒト動物。
【請求項３】
前記変異を有さない非ヒト動物と比べて、インスリン受容体の阻害によって誘導される高血糖に応答したインスリン分泌の増大を有する、請求項２に記載の非ヒト動物。
【請求項４】
前記インスリン受容体の阻害によって誘導される高血糖に応答したインスリン分泌の増大が、前記変異を有さない非ヒト動物と比べたベータ細胞増殖またはベータ細胞質量の増大に関連しない、請求項３に記載の非ヒト動物。
【請求項５】
前記インスリン分泌能の増強が、高脂肪食を摂食させた場合のものである、請求項１から４のいずれか一項に記載の非ヒト動物。
【請求項６】
高脂肪食を摂食させた場合、前記変異を有さない非ヒト動物と比べてインスリン分泌の増大を有し、前記インスリン分泌の増大が、前記変異を有さない非ヒト動物と比べたベータ細胞増殖またはベータ細胞質量の増大に関連する、請求項５に記載の非ヒト動物。
【請求項７】
前記ベータ細胞増殖の増大が、インスリン受容体依存性である、請求項６に記載の非ヒト動物。
【請求項８】
前記変異したＳｌｃ３０ａ８遺伝子が、中途終止コドンを有する、請求項１から７のいずれかに記載の非ヒト動物。
【請求項９】
前記変異したＳｌｃ３０ａ８遺伝子が、Ｓｌｃ３０ａ８遺伝子の第３のエクソンに変異を含む、請求項１から８のいずれか一項に記載の非ヒト動物。
【請求項１０】
前記変異が、Ｓｌｃ３０ａ８遺伝子の第３のエクソンの３’末端にある、請求項９に記載の非ヒト動物。
【請求項１１】
前記変異したＳｌｃ３０ａ８遺伝子が、ナンセンス変異を含む、請求項１から１０のいずれか一項に記載の非ヒト動物。
【請求項１２】
前記ナンセンス変異が、前記変異したＳｌｃ３０ａ８遺伝子によってコードされるＳＬＣ３０Ａ８タンパク質を配列番号１４と最適にアラインメントした場合、配列番号１４のＲ１３８をコードするコドンに対応するコドンにある、請求項１１に記載の非ヒト動物。
【請求項１３】
前記ナンセンス変異が、前記変異したＳｌｃ３０ａ８遺伝子のコード配列を配列番号２１と最適にアラインメントした場合、配列番号２１の残基４１２に対応する位置にある、請求項１１または１２に記載の非ヒト動物。
【請求項１４】
前記変異したＳｌｃ３０ａ８遺伝子が、前記非ヒト動物に対して内因性である、請求項１から１３のいずれか一項に記載の非ヒト動物。
【請求項１５】
ラットまたはマウスである、請求項１から１４のいずれか一項に記載の非ヒト動物。
【請求項１６】
マウスである、請求項１５に記載の非ヒト動物。
【請求項１７】
前記変異したＳｌｃ３０ａ８遺伝子が、配列番号１３に記載の配列を含むＳＬＣ３０Ａ８タンパク質をコードする、請求項１６に記載の非ヒト動物。
【請求項１８】
前記変異したＳｌｃ３０ａ８遺伝子が、配列番号２２に記載のコード配列を含む、請求項１６または１７に記載の非ヒト動物。
【請求項１９】
前記変異を有さない非ヒト動物と比べてミトコンドリア遺伝子発現の低減を有する、請求項１から１８のいずれか一項に記載の非ヒト動物。
【請求項２０】
前記変異を有さない非ヒト動物と比べてＨｖｃｎ１発現の増大を有する、請求項１から１９のいずれか一項に記載の非ヒト動物。
【請求項２１】
対照固形飼料食では、前記変異を有さない非ヒト動物と比べて正常なグルコース恒常性およびグルコース誘導性インスリン分泌を有する、請求項１から２０のいずれか一項に記載の非ヒト動物。
【請求項２２】
対照固形飼料食では、前記変異を有さない非ヒト動物と比べて正常な代謝表現型を有する、請求項１から２１のいずれか一項に記載の非ヒト動物。
【請求項２３】
前記変異を有さない非ヒト動物と比べて、以下の特徴：
（ａ）高脂肪食を摂食させた場合のグルコース誘導性インスリン分泌の増大；
（ｂ）高脂肪食を摂食させた場合の膵ベータ細胞増殖の増大；
（ｃ）高脂肪食を摂食させた場合の膵ベータ細胞の数の増大；および
（ｄ）インスリン受容体の遮断後の摂食下血漿インスリンレベルの増大
のうちの１つまたは複数を有する、請求項１から２２のいずれか一項に記載の非ヒト動物。
【請求項２４】
前記変異を有さない非ヒト動物と比べて、以下の特徴：
（ａ）高脂肪食を摂食させた場合のグルコース誘導性インスリン分泌の増大；
（ｂ）高脂肪食を摂食させた場合の膵ベータ細胞増殖の増大；
（ｃ）高脂肪食を摂食させた場合の膵ベータ細胞の数の増大；および
（ｄ）インスリン受容体の遮断後の摂食下血漿インスリンレベルの増大
の全てを有する、請求項１から２３のいずれか一項に記載の非ヒト動物。
【請求項２５】
前記変異を有さない非ヒト動物と比べて、以下の特徴：
（ａ）２０週間高脂肪食を摂食させた後の循環インスリンレベルの増大；
（ｂ）２０週間高脂肪食を摂食させた後の膵ベータ細胞の数の増大；
（ｃ）高脂肪食を摂食させた場合のプロインスリン対インスリン比の低減；および
（ｄ）インスリン受容体の遮断後の摂食下血漿インスリンレベルの増大
のうちの１つまたは複数を有する、請求項１から２４のいずれか一項に記載の非ヒト動物。
【請求項２６】
前記変異を有さない非ヒト動物と比べて、以下の特徴：
（ａ）２０週間高脂肪食を摂食させた後の循環インスリンレベルの増大；
（ｂ）２０週間高脂肪食を摂食させた後の膵ベータ細胞の数の増大；
（ｃ）高脂肪食を摂食させた場合のプロインスリン対インスリン比の低減；および
（ｄ）インスリン受容体の遮断後の摂食下血漿インスリンレベルの増大
の全てを有する、請求項１から２５のいずれか一項に記載の非ヒト動物。
【請求項２７】
前記非ヒト動物の島におけるＳｌｃ３０ａ８  ｍＲＮＡ発現レベルが、前記変異を有さない非ヒト動物の島におけるＳｌｃ３０ａ８  ｍＲＮＡ発現レベルの少なくとも２５％である、請求項１から２６のいずれか一項に記載の非ヒト動物。
【請求項２８】
前記変異についてヘテロ接合性である、請求項１から２７のいずれか一項に記載の非ヒト動物。
【請求項２９】
前記変異についてホモ接合性である、請求項１から２７のいずれか一項に記載の非ヒト動物。
【請求項３０】
雄である、請求項１から２９のいずれか一項に記載の非ヒト動物。
【請求項３１】
雌である、請求項１から２９のいずれか一項に記載の非ヒト動物。
【請求項３２】
請求項１から３１のいずれか一項に記載の非ヒト動物を作製する方法であって、
（ａ）非ヒト動物胚性幹（ＥＳ）細胞のゲノムを、変異したＳｌｃ３０ａ８遺伝子を含むように改変するステップ、
（ｂ）前記変異したＳｌｃ３０ａ８遺伝子を含む遺伝子改変された非ヒト動物ＥＳ細胞を同定または選択するステップ、
（ｃ）前記遺伝子改変された非ヒト動物ＥＳ細胞を非ヒト動物宿主胚に導入するステップ、および
（ｄ）前記非ヒト動物宿主胚を代理母に妊娠させて、前記変異したＳｌｃ３０ａ８遺伝子を含む、遺伝子改変されたＦ０世代非ヒト動物を作出するステップであって、前記変異は、高脂肪食を摂食させた場合、前記変異を有さない非ヒト動物と比べてインスリン分泌能の増大を有する前記Ｆ０世代非ヒト動物を結果としてもたらす、ステップ
を含む、方法。
【請求項３３】
請求項３２に記載の方法であって、ステップ（ａ）が、
（ａ）前記非ヒト動物ＥＳ細胞のゲノムを、
（ｉ）Ｓｌｃ３０ａ８遺伝子座の５’標的配列にハイブリダイズする５’相同アームと前記Ｓｌｃ３０ａ８遺伝子座の３’標的配列にハイブリダイズする３’相同アームに挟まれた挿入核酸を含む外因性修復鋳型であって、前記挿入核酸が変異を含む、外因性修復鋳型；
（ｉｉ）Ｃａｓ９タンパク質；および
（ｉｉｉ）前記Ｓｌｃ３０ａ８遺伝子座内のガイドＲＮＡ認識配列にハイブリダイズするガイドＲＮＡ
と接触させることであって、
Ｓｌｃ３０ａ８遺伝子が、前記変異を含むように改変される、こと
を含む、方法。
【請求項３４】
前記外因性修復鋳型が、少なくとも１０ｋｂの長さである大型標的化ベクターであるか、または前記外因性修復鋳型が、前記５’相同アームと前記３’相同アームの合計が少なくとも１０ｋｂの長さである大型標的化ベクターである、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
請求項１から３１のいずれか一項に記載の非ヒト動物を作製する方法であって、
（ａ）非ヒト動物１細胞期胚のゲノムを、変異したＳｌｃ３０ａ８遺伝子を含むように改変するステップ、
（ｂ）前記変異したＳｌｃ３０ａ８遺伝子を含む遺伝子改変された非ヒト動物１細胞期胚を選択するステップ、
（ｃ）前記遺伝子改変された非ヒト動物１細胞期胚を代理母に妊娠させて、前記変異したＳｌｃ３０ａ８遺伝子を含む、遺伝子改変されたＦ０世代非ヒト動物を作出するステップであって、前記変異は、高脂肪食を摂食させた場合、前記変異を有さない非ヒト動物と比べてインスリン分泌能の増大を有する前記Ｆ０世代非ヒト動物を結果としてもたらす、ステップ
を含む、方法。
【請求項３６】
請求項３５に記載の方法であって、ステップ（ａ）が、
（ａ）前記非ヒト動物１細胞期胚のゲノムを、
（ｉ）Ｓｌｃ３０ａ８遺伝子座の５’標的配列にハイブリダイズする５’相同アームと前記Ｓｌｃ３０ａ８遺伝子座の３’標的配列にハイブリダイズする３’相同アームに挟まれた挿入核酸を含む外因性修復鋳型であって、前記挿入核酸が変異を含む、外因性修復鋳型；
（ｉｉ）Ｃａｓ９タンパク質；および
（ｉｉｉ）前記Ｓｌｃ３０ａ８遺伝子座内のガイドＲＮＡ認識配列にハイブリダイズするガイドＲＮＡ
と接触させることであって、
Ｓｌｃ３０ａ８遺伝子が、前記変異を含むように改変される、こと、
を含む、方法。
【請求項３７】
前記外因性修復鋳型が、一本鎖オリゴデオキシヌクレオチドである、請求項３３または３６に記載の方法。
【請求項３８】
化合物を、２型糖尿病を好転させるまたは増悪させる活性についてスクリーニングする方法であって、
（Ｉ）
（ａ）請求項１から３１のいずれか一項に記載の対象非ヒト動物を前記化合物と接触させるステップと、
（ｂ）前記化合物と接触させていない対照非ヒト動物と比べて、前記対象非ヒト動物における以下：（１）高脂肪食を摂食させた場合のグルコース誘導性インスリン分泌；（２）高脂肪食を摂食させた場合の膵ベータ細胞増殖レベル；（３）高脂肪食を摂食させた場合の膵ベータ細胞の数；および（４）インスリン受容体の遮断後の摂食下血漿インスリンレベルのうちの１つまたは複数を測定するステップであって、前記対照非ヒト動物が、前記対象非ヒト動物と同じＳｌｃ３０ａ８変異を含む、ステップと
を含み、
前記対象非ヒト動物において、前記対照非ヒト動物と比較して、以下：（１）高脂肪食を摂食させた場合のグルコース誘導性インスリン分泌の増大；（２）高脂肪食を摂食させた場合の膵ベータ細胞増殖の増大；（３）高脂肪食を摂食させた場合の膵ベータ細胞の数の増大；および（４）インスリン受容体の遮断後の摂食下血漿インスリンレベルの増大のうちの１つまたは複数により、２型糖尿病を好転させる活性が同定され、
前記対象非ヒト動物において、前記対照非ヒト動物と比較して、以下：（１）高脂肪食を摂食させた場合のグルコース誘導性インスリン分泌の低減；（２）高脂肪食を摂食させた場合の膵ベータ細胞増殖の低減；（３）高脂肪食を摂食させた場合の膵ベータ細胞の数の低減、および（４）インスリン受容体の遮断後の摂食下血漿インスリンレベルの低減のうちの１つまたは複数により、２型糖尿病を増悪させる活性が同定される、あるいは
（ＩＩ）
（ａ）請求項１から３１のいずれか一項に記載の対象非ヒト動物を前記化合物と接触させるステップと、
（ｂ）前記化合物と接触させていない対照非ヒト動物と比べて、前記対象非ヒト動物における以下：（１）高血糖に応答したインスリンを分泌する能力；（２）インスリンクリアランス；（３）ミトコンドリア遺伝子発現；および（４）Ｈｖｃｎ１発現のうちの１つまたは複数を測定するステップであって、前記対照非ヒト動物が、前記対象非ヒト動物と同じＳｌｃ３０ａ８変異を含む、ステップと
を含み、
前記対象非ヒト動物において、前記対照非ヒト動物と比較して、以下：（１）高血糖に応答したインスリンを分泌する能力の増大；（２）インスリンクリアランスの増大；（３）ミトコンドリア遺伝子発現の低減；および（４）Ｈｖｃｎ１発現の増大のうちの１つまたは複数により、２型糖尿病を好転させる活性が同定され、
前記対象非ヒト動物において、前記対照非ヒト動物と比較して、以下：（１）高血糖に応答したインスリンを分泌する能力の低減；（２）インスリンクリアランスの低減；（３）ミトコンドリア遺伝子発現の増大；および（４）Ｈｖｃｎ１発現の低減のうちの１つまたは複数により、２型糖尿病を増悪させる活性が同定される、方法。
【請求項３９】
ゲノムに、変異したＳｌｃ３０ａ８遺伝子を含む内因性Ｓｌｃ３０ａ８遺伝子座が含まれる非ヒト動物細胞であって、前記変異したＳｌｃ３０ａ８遺伝子が、短縮されたＳＬＣ３０Ａ８タンパク質をコードし、前記変異したＳｌｃ３０ａ８遺伝子を含む非ヒト動物が、前記変異を有さない非ヒト動物と比べてインスリン分泌能の増強を有する、非ヒト動物細胞。
【請求項４０】
非ヒト動物における内因性Ｓｌｃ３０ａ８遺伝子座において変異したＳｌｃ３０ａ８遺伝子を生成するための標的化ベクターであって、前記標的化ベクターは、前記内因性Ｓｌｃ３０ａ８遺伝子座の５’標的配列を標的化する５’相同アームおよび前記内因性Ｓｌｃ３０ａ８遺伝子座の３’標的配列を標的化する３’相同アームを含み、前記標的化ベクターは、Ｓｌｃ３０ａ８遺伝子に変異を含み、前記変異したＳｌｃ３０ａ８遺伝子が、短縮されたＳＬＣ３０Ａ８タンパク質をコードし、そして前記変異したＳｌｃ３０ａ８遺伝子を含む非ヒト動物が、前記変異を有さない非ヒト動物と比べてインスリン分泌能の増強を有する、標的化ベクター。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２０２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２０２】
データ解析。データを平均±ＳＥＭとして報告する。Ｐｒｉｓｍ  ６．０（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ）を使用して統計解析を実施した。全てのパラメーターを、示されている通り、常に無処理の遺伝子型と比較して二元配置ＡＮＯＶＡ（＊ｐ）およびスチューデントのＴ検定（＃ｐ）によって解析した；閾値Ｐ＜０．０５を統計的に有意であるとみなした。二元配置ＡＮＯＶＡによる遺伝子型間の有意差をグラフの上に示す。特定のデータ点の有意差を点／グラフの上に示す。＊ｐ／＃ｐ＜０．５、＊＊ｐ／＃＃ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ／＃＃＃ｐ＜０．００１、＊＊＊＊ｐ／＃＃＃＃ｐ＜０．０００１。
本発明は、例えば、以下の項目を提供する。
(項目１)
ゲノムに、変異したＳｌｃ３０ａ８遺伝子を含む内因性Ｓｌｃ３０ａ８遺伝子座が含まれる非ヒト動物であって、前記変異したＳｌｃ３０ａ８遺伝子が、短縮されたＳＬＣ３０Ａ８タンパク質をコードし、前記変異を有さない非ヒト動物と比べてインスリン分泌能の増強を有する非ヒト動物を結果としてもたらす、非ヒト動物。
(項目２)
前記インスリン分泌能の増強が、高血糖に応答するものである、項目１に記載の非ヒト動物。
(項目３)
前記変異を有さない非ヒト動物と比べて、インスリン受容体の阻害によって誘導される高血糖に応答したインスリン分泌の増大を有する、項目２に記載の非ヒト動物。
(項目４)
前記インスリン受容体の阻害によって誘導される高血糖に応答したインスリン分泌の増大が、前記変異を有さない非ヒト動物と比べたベータ細胞増殖またはベータ細胞質量の増大に関連しない、項目３に記載の非ヒト動物。
(項目５)
前記インスリン分泌能の増強が、高脂肪食を摂食させた場合のものである、前記項目のいずれかに記載の非ヒト動物。
(項目６)
高脂肪食を摂食させた場合、前記変異を有さない非ヒト動物と比べてインスリン分泌の増大を有し、前記インスリン分泌の増大が、前記変異を有さない非ヒト動物と比べたベータ細胞増殖またはベータ細胞質量の増大に関連する、項目５に記載の非ヒト動物。
(項目７)
前記ベータ細胞増殖の増大が、インスリン受容体依存性である、項目６に記載の非ヒト動物。
(項目８)
前記変異したＳｌｃ３０ａ８遺伝子が、中途終止コドンを有する、前記項目のいずれかに記載の非ヒト動物。
(項目９)
前記変異したＳｌｃ３０ａ８遺伝子が、Ｓｌｃ３０ａ８遺伝子の第３のエクソンに変異を含む、前記項目のいずれかに記載の非ヒト動物。
(項目１０)
前記変異が、Ｓｌｃ３０ａ８遺伝子の第３のエクソンの３’末端にある、項目９に記載の非ヒト動物。
(項目１１)
前記変異したＳｌｃ３０ａ８遺伝子が、ナンセンス変異を含む、前記項目のいずれかに記載の非ヒト動物。
(項目１２)
前記ナンセンス変異が、前記変異したＳｌｃ３０ａ８遺伝子によってコードされるＳＬＣ３０Ａ８タンパク質を配列番号１４と最適にアラインメントした場合、配列番号１４のＲ１３８をコードするコドンに対応するコドンにある、項目１１に記載の非ヒト動物。
(項目１３)
前記ナンセンス変異が、前記変異したＳｌｃ３０ａ８遺伝子のコード配列を配列番号２１と最適にアラインメントした場合、配列番号２１の残基４１２に対応する位置にある、項目１１または１２に記載の非ヒト動物。
(項目１４)
前記変異したＳｌｃ３０ａ８遺伝子が、前記非ヒト動物に対して内因性である、前記項目のいずれかに記載の非ヒト動物。
(項目１５)
ラットまたはマウスである、前記項目のいずれかに記載の非ヒト動物。
(項目１６)
マウスである、項目１５に記載の非ヒト動物。
(項目１７)
前記変異したＳｌｃ３０ａ８遺伝子が、配列番号１３に記載の配列を含むＳＬＣ３０Ａ８タンパク質をコードする、項目１６に記載の非ヒト動物。
(項目１８)
前記変異したＳｌｃ３０ａ８遺伝子が、配列番号２２に記載のコード配列を含む、項目１６または１７に記載の非ヒト動物。
(項目１９)
前記変異を有さない非ヒト動物と比べてミトコンドリア遺伝子発現の低減を有する、前記項目のいずれかに記載の非ヒト動物。
(項目２０)
前記変異を有さない非ヒト動物と比べてＨｖｃｎ１発現の増大を有する、前記項目のいずれかに記載の非ヒト動物。
(項目２１)
対照固形飼料食では、前記変異を有さない非ヒト動物と比べて正常なグルコース恒常性およびグルコース誘導性インスリン分泌を有する、前記項目のいずれかに記載の非ヒト動物。
(項目２２)
対照固形飼料食では、前記変異を有さない非ヒト動物と比べて正常な代謝表現型を有する、前記項目のいずれかに記載の非ヒト動物。
(項目２３)
前記変異を有さない非ヒト動物と比べて、以下の特徴：
（ａ）高脂肪食を摂食させた場合のグルコース誘導性インスリン分泌の増大；
（ｂ）高脂肪食を摂食させた場合の膵ベータ細胞増殖の増大；
（ｃ）高脂肪食を摂食させた場合の膵ベータ細胞の数の増大；および
（ｄ）インスリン受容体の遮断後の摂食下血漿インスリンレベルの増大
のうちの１つまたは複数を有する、前記項目のいずれかに記載の非ヒト動物。
(項目２４)
前記変異を有さない非ヒト動物と比べて、以下の特徴：
（ａ）高脂肪食を摂食させた場合のグルコース誘導性インスリン分泌の増大；
（ｂ）高脂肪食を摂食させた場合の膵ベータ細胞増殖の増大；
（ｃ）高脂肪食を摂食させた場合の膵ベータ細胞の数の増大；および
（ｄ）インスリン受容体の遮断後の摂食下血漿インスリンレベルの増大
の全てを有する、前記項目のいずれかに記載の非ヒト動物。
(項目２５)
前記変異を有さない非ヒト動物と比べて、以下の特徴：
（ａ）２０週間高脂肪食を摂食させた後の循環インスリンレベルの増大；
（ｂ）２０週間高脂肪食を摂食させた後の膵ベータ細胞の数の増大；
（ｃ）高脂肪食を摂食させた場合のプロインスリン対インスリン比の低減；および
（ｄ）インスリン受容体の遮断後の摂食下血漿インスリンレベルの増大
のうちの１つまたは複数を有する、前記項目のいずれかに記載の非ヒト動物。
(項目２６)
前記変異を有さない非ヒト動物と比べて、以下の特徴：
（ａ）２０週間高脂肪食を摂食させた後の循環インスリンレベルの増大；
（ｂ）２０週間高脂肪食を摂食させた後の膵ベータ細胞の数の増大；
（ｃ）高脂肪食を摂食させた場合のプロインスリン対インスリン比の低減；および
（ｄ）インスリン受容体の遮断後の摂食下血漿インスリンレベルの増大
の全てを有する、前記項目のいずれかに記載の非ヒト動物。
(項目２７)
前記非ヒト動物の島におけるＳｌｃ３０ａ８  ｍＲＮＡ発現レベルが、前記変異を有さない非ヒト動物の島におけるＳｌｃ３０ａ８  ｍＲＮＡ発現レベルの少なくとも２５％である、前記項目のいずれかに記載の非ヒト動物。
(項目２８)
前記変異についてヘテロ接合性である、前記項目のいずれかに記載の非ヒト動物。
(項目２９)
前記変異についてホモ接合性である、項目１から２７のいずれか一項に記載の非ヒト動物。
(項目３０)
雄である、前記項目のいずれかに記載の非ヒト動物。
(項目３１)
雌である、項目１から２９のいずれか一項に記載の非ヒト動物。
(項目３２)
前記項目のいずれかに記載の非ヒト動物を作製する方法であって、
（ａ）１細胞期胚ではない非ヒト動物多能性細胞のゲノムを、
（ｉ）Ｓｌｃ３０ａ８遺伝子座の５’標的配列にハイブリダイズする５’相同アームと前記Ｓｌｃ３０ａ８遺伝子座の３’標的配列にハイブリダイズする３’相同アームに挟まれた挿入核酸を含む外因性修復鋳型であって、前記挿入核酸が変異を含む、外因性修復鋳型；
（ｉｉ）Ｃａｓ９タンパク質；および
（ｉｉｉ）前記Ｓｌｃ３０ａ８遺伝子座内のガイドＲＮＡ認識配列にハイブリダイズするガイドＲＮＡ
と接触させるステップであって、
Ｓｌｃ３０ａ８遺伝子が、前記変異を含むように改変される、ステップと、
（ｂ）改変された前記非ヒト動物多能性細胞を宿主胚に導入するステップと、
（ｃ）前記宿主胚を代理母に移植して、前記Ｓｌｃ３０ａ８遺伝子が前記変異を含むように改変された遺伝子改変Ｆ０世代非ヒト動物を作出するステップであって、前記変異が、高脂肪食を摂食させた場合、前記変異を有さない非ヒト動物と比べてインスリン分泌能の増強を有するＦ０世代非ヒト動物を結果としてもたらす、ステップと
を含む、方法。
(項目３３)
前記多能性細胞が、胚性幹（ＥＳ）細胞である、項目３２に記載の方法。
(項目３４)
前記外因性修復鋳型が、少なくとも１０ｋｂの長さである大型標的化ベクターであるか、または前記外因性修復鋳型が、前記５’相同アームと前記３’相同アームの合計が少なくとも１０ｋｂの長さである大型標的化ベクターである、項目３２または３３に記載の方法。
(項目３５)
項目１から３１のいずれか一項に記載の非ヒト動物を作製する方法であって、
（ａ）非ヒト動物１細胞期胚のゲノムを、
（ｉ）Ｓｌｃ３０ａ８遺伝子座の５’標的配列にハイブリダイズする５’相同アームと前記Ｓｌｃ３０ａ８遺伝子座の３’標的配列にハイブリダイズする３’相同アームに挟まれた挿入核酸を含む外因性修復鋳型であって、前記挿入核酸が変異を含む、外因性修復鋳型；
（ｉｉ）Ｃａｓ９タンパク質；および
（ｉｉｉ）前記Ｓｌｃ３０ａ８遺伝子座内のガイドＲＮＡ認識配列にハイブリダイズするガイドＲＮＡ
と接触させるステップであって、
Ｓｌｃ３０ａ８遺伝子が、前記変異を含むように改変される、ステップと、
（ｂ）改変された前記非ヒト動物１細胞期胚を代理母に移植して、前記Ｓｌｃ３０ａ８遺伝子が前記変異を含むように改変された遺伝子改変Ｆ０世代非ヒト動物を作出するステップであって、前記変異が、高脂肪食を摂食させた場合、前記変異を有さない非ヒト動物と比べてインスリン分泌能の増強を有するＦ０世代非ヒト動物を結果としてもたらす、ステップと
を含む、方法。
(項目３６)
ステップ（ａ）が、前記非ヒト動物多能性細胞または前記非ヒト１細胞期胚のゲノムを前記Ｓｌｃ３０ａ８遺伝子座内の第２のガイドＲＮＡ認識配列にハイブリダイズする第２のガイドＲＮＡと接触させることをさらに含む、項目３２から３５のいずれか一項に記載の方法。
(項目３７)
前記外因性修復鋳型が、一本鎖オリゴデオキシヌクレオチドである、項目３２、３３、３５、および３６のいずれか一項に記載の方法。
(項目３８)
前記外因性修復鋳型が、約８０ヌクレオチド〜約２００ヌクレオチドの間の長さである、項目３７に記載の方法。
(項目３９)
化合物を、２型糖尿病を好転させるまたは増悪させる活性についてスクリーニングする方法であって、
（ａ）項目１から３１のいずれか一項に記載の対象非ヒト動物を前記化合物と接触させるステップと、
（ｂ）前記化合物と接触させていない対照非ヒト動物と比べて、前記対象非ヒト動物における以下：（１）高脂肪食を摂食させた場合のグルコース誘導性インスリン分泌；（２）高脂肪食を摂食させた場合の膵ベータ細胞増殖レベル；（３）高脂肪食を摂食させた場合の膵ベータ細胞の数；および（４）インスリン受容体の遮断後の摂食下血漿インスリンレベルのうちの１つまたは複数を測定するステップであって、前記対照非ヒト動物が、前記対象非ヒト動物と同じＳｌｃ３０ａ８変異を含む、ステップと
を含み、
前記対象非ヒト動物において、前記対照非ヒト動物と比較して、以下：（１）高脂肪食を摂食させた場合のグルコース誘導性インスリン分泌の増大；（２）高脂肪食を摂食させた場合の膵ベータ細胞増殖の増大；（３）高脂肪食を摂食させた場合の膵ベータ細胞の数の増大；および（４）インスリン受容体の遮断後の摂食下血漿インスリンレベルの増大のうちの１つまたは複数により、２型糖尿病を好転させる活性が同定され、
前記対象非ヒト動物において、前記対照非ヒト動物と比較して、以下：（１）高脂肪食を摂食させた場合のグルコース誘導性インスリン分泌の低減；（２）高脂肪食を摂食させた場合の膵ベータ細胞増殖の低減；（３）高脂肪食を摂食させた場合の膵ベータ細胞の数の低減、および（４）インスリン受容体の遮断後の摂食下血漿インスリンレベルの低減のうちの１つまたは複数により、２型糖尿病を増悪させる活性が同定される、方法。
(項目４０)
化合物を、２型糖尿病を好転させるまたは増悪させる活性についてスクリーニングする方法であって、
（ａ）項目１から３１のいずれか一項に記載の対象非ヒト動物を前記化合物と接触させるステップと、
（ｂ）前記化合物と接触させていない対照非ヒト動物と比べて、前記対象非ヒト動物における以下：（１）高血糖に応答したインスリンを分泌する能力；（２）インスリンクリアランス；（３）ミトコンドリア遺伝子発現；および（４）Ｈｖｃｎ１発現のうちの１つまたは複数を測定するステップであって、前記対照非ヒト動物が、前記対象非ヒト動物と同じＳｌｃ３０ａ８変異を含む、ステップと
を含み、
前記対象非ヒト動物において、前記対照非ヒト動物と比較して、以下：（１）高血糖に応答したインスリンを分泌する能力の増大；（２）インスリンクリアランスの増大；（３）ミトコンドリア遺伝子発現の低減；および（４）Ｈｖｃｎ１発現の増大のうちの１つまたは複数により、２型糖尿病を好転させる活性が同定され、
前記対象非ヒト動物において、前記対照非ヒト動物と比較して、以下：（１）高血糖に応答したインスリンを分泌する能力の低減；（２）インスリンクリアランスの低減；（３）ミトコンドリア遺伝子発現の増大；および（４）Ｈｖｃｎ１発現の低減のうちの１つまたは複数により、２型糖尿病を増悪させる活性が同定される、方法。
(項目４１)
ゲノムに、変異したＳｌｃ３０ａ８遺伝子を含む内因性Ｓｌｃ３０ａ８遺伝子座が含まれる非ヒト動物細胞であって、前記変異したＳｌｃ３０ａ８遺伝子が、短縮されたＳＬＣ３０Ａ８タンパク質をコードし、前記変異したＳｌｃ３０ａ８遺伝子を含む非ヒト動物が、前記変異を有さない非ヒト動物と比べてインスリン分泌能の増強を有する、非ヒト動物細胞。
(項目４２)
変異したＳｌｃ３０ａ８遺伝子を含む内因性Ｓｌｃ３０ａ８遺伝子座を含む非ヒト動物ゲノムであって、前記変異したＳｌｃ３０ａ８遺伝子が、短縮されたＳＬＣ３０Ａ８タンパク質をコードし、前記変異したＳｌｃ３０ａ８遺伝子を含む非ヒト動物が、前記変異を有さない非ヒト動物と比べてインスリン分泌能の増強を有する、非ヒト動物ゲノム。
(項目４３)
非ヒト動物における内因性Ｓｌｃ３０ａ８遺伝子座において変異したＳｌｃ３０ａ８遺伝子を生成するための標的化ベクターであって、前記標的化ベクターは、前記内因性Ｓｌｃ３０ａ８遺伝子座の５’標的配列を標的化する５’相同アームおよび前記内因性Ｓｌｃ３０ａ８遺伝子座の３’標的配列を標的化する３’相同アームを含み、前記標的化ベクターは、Ｓｌｃ３０ａ８遺伝子に変異を含み、前記変異したＳｌｃ３０ａ８遺伝子が、短縮されたＳＬＣ３０Ａ８タンパク質をコードし、そして前記変異したＳｌｃ３０ａ８遺伝子を含む非ヒト動物が、前記変異を有さない非ヒト動物と比べてインスリン分泌能の増強を有する、標的化ベクター。