【手続補正書】
【提出日】令和3年9月27日(2021.9.27)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
a）1つまたは複数の弱毒生デング熱（DEN）ウイルスと、
b）3〜6％（w/v）のスクロースと、
c）3〜6％（w/v）のグリシンと、
を含む、免疫原性組成物。
【請求項２】
1つまたは複数の弱毒生デング熱（DEN）ウイルスが、DEN-1、DEN-2、DEN-3およびDEN-4の群から選択される異なる血清型の複数の弱毒生デング熱（DEN）ウイルスを含む、請求項1に記載の免疫原性組成物。
【請求項３】
デング熱ウイルス血清型DEN-1、DEN-2、DEN-3及びDEN-4を含む弱毒生デング熱（DEN）ウイルスが4価である、請求項1に記載の免疫原性組成物。
【請求項４】
弱毒生デング熱（DEN）ウイルスが、第1のデング熱ウイルスから少なくとも1つの構造タンパク質をコード化する第1のヌクレオチド配列と、第2のデング熱ウイルスから非構造タンパク質をコード化する第2のヌクレオチド配列とを含む、組み換えデング熱ウイルスおよび/またはキメラデング熱ウイルスである、請求項1に記載の免疫原性組成物。
【請求項５】
前記弱毒生デング熱ウイルス血清型DEN-1、DEN-2、DEN-3、およびDEN-4が、Δ30変異を示す30のヌクレオチド欠失および/またはΔ31変異を示す31のヌクレオチド欠失を、デング熱ウイルスゲノムの3'非翻訳領域において伝達する、請求項1〜4のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
【請求項６】
前記弱毒生デング熱ウイルス血清型DEN-1、DEN-2、DEN-3、おおびDEN-4が、ベロ細胞またはヒト肝細胞株HuH-7において温度感受性の表現型を持つ、請求項1〜5のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
【請求項７】
前記組成物が凍結乾燥（フリーズドライ）されている、請求項1〜6のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
【請求項８】
凍結乾燥組成物が、食塩水およびWFI（注射用水）から選択される水溶液で再構成され、再構成された免疫原性組成物の最終pHが7〜8である、請求項7に記載の免疫原性組成物。
【請求項９】
デング熱ウイルスが、0.5mlあたり2.5 log10PFU以上の用量で存在する、請求項1〜8のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
【請求項１０】
a）デング熱ウイルス血清型1（rDEN1Δ30）、
b）デング熱ウイルス血清型2（rDEN2/4Δ30）、
c）デング熱ウイルス血清型3（rDEN3Δ30/31）、
d）デング熱ウイルス血清型4（rDEN4Δ30）、
e）スクロース3〜6％（w/v）、および
f）グリシン3〜6％（w/v）、
を含む、免疫原性組成物。
【請求項１１】
a）デング熱ウイルス血清型1（rDEN1Δ30）、
b）デング熱ウイルス血清型2（rDEN2/4Δ30）、
c）デング熱ウイルス血清型3（rDEN3Δ30/31）、
d）デング熱ウイルス血清型4（rDEN4Δ30）、
e）スクロース4〜5%（w/v）、および
f）グリシン4〜5%（w/v）、
を含む、請求項10に記載の免疫原性組成物。
【請求項１２】
a）デング熱ウイルス血清型1（rDEN1Δ30）、0.5 mlあたりNLT 2.5 log10 PFU、
b）デング熱ウイルス血清型2（rDEN2/4Δ30）、0.5 mlあたりNLT 3.0 log10 PFU、
c）デング熱ウイルス血清型3（rDEN3Δ30/31）、0.5 mlあたりNLT 2.5 log10 PFU、
d)デング熱ウイルス血清型4（rDEN4Δ30）、0.5 mlあたりNLT 2.5 log10 PFU、
e）スクロース5％（w/v）、および
f）グリシン5％（w/v）、
を含む、請求項10に記載の免疫原性組成物。
【請求項１３】
a）デング熱ウイルス血清型1（rDEN1Δ30）、0.5 mlあたりNLT 2.5 log10PFU、
b）デング熱ウイルス血清型2（rDEN2/4Δ30）、0.5 mlあたりNLT 3.0 log10 PFU、
c）デング熱ウイルス血清型3（rDEN3Δ30/31）、0.5 mlあたりNLT 2.5 log10 PFU、
d)デング熱ウイルス血清型4（rDEN4Δ30）、0.5 mlあたりNLT 2.5 log10 PFU、
e）スクロース4.5%（w/v）、および
f）グリシン5％（w/v）、
を含む、請求項10に記載の免疫原性組成物。
【請求項１４】
a）デング熱ウイルス血清型1（rDEN1Δ30）、0.5 mlあたりNLT 2.5 log10PFU、
b）デング熱ウイルス血清型2（rDEN2/4Δ30）、0.5 mlあたりNLT 3.0 log10 PFU、
c）デング熱ウイルス血清型3（rDEN3Δ30/31）、0.5 mlあたりNLT 2.5 log10 PFU、
d）デング熱ウイルス血清型4（rDEN4Δ30）、0.5 mlあたりNLT 2.5 log10 PFU、
e）スクロース6%（w/v）、および
f）グリシン6%（w/v）、
を含む、請求項10に記載の免疫原性組成物。
【請求項１５】
A）1つまたは複数の弱毒生デング熱（DEN）ウイルスと、
B）3〜6％（w/v）のスクロースと、
C）3〜6％（w/v）のグリシンと、
を含む免疫原性組成物の製造方法であって、
a）ブドウ糖、L-グルタミン、および重炭酸ナトリウムを追加的に含む、ハンク塩溶液を含むMEM中のデング熱ウイルス血清型を少なくとも1つ含む上清の多回採集し、
b）6〜0.45マイクロメートルの孔径を持つ少なくとも1つの清澄化フィルターを通した直線流濾過（DFF）によるウイルス採集物の濾過し、
c）ウイルス採集物を、0.5〜5単位/ミリリットル範囲の濃度を持つベンゾナーゼを用いて34±1℃で少なくとも2時間処理し、
d）分子量カットオフ（MWCO）が100 kDaの膜を使用した接線流濾過（TFF）により、ウイルス採集物を濃縮し、
e）3〜6％（w/v）濃度のスクロースおよび3〜6％（w/v）濃度のグリシンを含む安定剤でウイルス採集物を安定化させることにより、安定化ウイルス採集物を形成し、
f）0.8〜0.2マイクロメートルの孔径を持つ少なくとも1つの清澄化フィルターを通してDFFによって安定化されたウイルス採集物を滅菌することにより、精製されたウイルスの滅菌ウイルス採集物を形成し、
ここで、精製されたウイルスの総回収率は少なくとも50％であり、
g）必要に応じて、滅菌したウイルス採集物を凍結乾燥し、該凍結乾燥が凍結、1次乾燥と2次乾燥の段階を含み、
i)前記凍結の段階が、−45℃で690〜930分間凍結することを含み、
ii)前記1次乾燥の段階が、＋0.5〜1.0℃/分の温度傾斜で、−25℃の棚温度に到達し、1800〜1980分維持することを含み、
iii）前記2次乾燥の段階が、＋0.5〜1.0℃/分の温度傾斜で、＋25℃の棚温度に到達し、420〜540分維持することを含む、
方法。
【請求項１６】
前記ウイルス採集物が、1.25単位/ミリリットルの範囲の濃度を持つベンゾナーゼで処理される、請求項15に記載の方法。
【請求項１７】
前記ウイルス採集物が接線流濾過（TFF）されることにより、少なくとも10倍の濃度のウイルス採集物をもたらす、請求項15に記載の方法。
【請求項１８】
前記安定剤が、4〜5%（w/v）濃度のスクロースと4〜5%（w/v）濃度のグリシンを含む、請求項15に記載の方法。
【請求項１９】
前記安定剤が5％（w/v）濃度のスクロースと5％（w/v）濃度のグリシンを含む、請求項15に記載の方法。
【請求項２０】
前記安定剤が、4.5％（w/v）濃度のスクロースと5％（w/v）濃度のグリシンを含む、請求項15に記載の方法。
【請求項２１】
前記安定剤が6%（w/v）濃度のスクロースと6%（w/v）濃度のグリシンを含む、請求項15に記載の方法。
【請求項２２】
前記凍結の段階が、−45℃で60分間凍結することを含む、請求項15に記載の方法。
【請求項２３】
前記1次乾燥の段階が、＋0.5〜1.0℃/分の温度傾斜で、-32℃の棚温度に到達し、600〜1800分維持することを含む、請求項15に記載の方法。
【請求項２４】
前記2次乾燥の段階が、＋0.5〜1.0℃/分の温度傾斜で、＋25℃の棚温度に到達し、360〜600分維持することを含む、請求項15に記載の方法。
【請求項２５】
凍結乾燥された免疫原性組成物が25℃で6カ月間保存される、請求項15〜24のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２６】
凍結乾燥された免疫原性組成物が37℃で14日間保存される、請求項15〜24のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２７】
凍結乾燥された免疫原性組成物が42℃で2日間保存される、請求項15〜24のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２８】
a)免疫原性組成物を収容する第1の容器であって、
前記免疫原性組成物が、
i）1つまたは複数の弱毒生デング熱（DEN）ウイルスと、
ii）3〜6％（w/v）のスクロースと、
iii）3〜6％（w/v）のグリシンと、
を含む、第1の容器と、
b)凍結乾燥（フリーズドライ）免疫原性組成物の再構成用の食塩水およびWFI（注射用水）から選択される水溶液を収容する第2の容器と、
を含む、キット。