【手続補正書】
【提出日】令和3年3月15日(2021.3.15)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｋ５２６、Ｋ３７７、Ｅ３８７、Ｄ３９７、Ｒ４００、Ｄ４０６、Ａ４２１、Ｌ４２３、Ｒ４２４、Ｑ４２６、Ｙ４３０、Ｋ４４２、Ｐ４４９、Ｖ４５２、Ａ４５６、Ｒ４５７、Ｗ４６４、Ｍ４６５、Ｋ４６８、Ｅ４７０、Ｔ４７４、Ｐ４７５、Ｗ４７６、Ｆ４７８、Ｋ４８４、Ｓ４８７、Ａ４８８、Ｔ４９６、Ｆ４９８、Ｌ５０２、Ｎ５０４、Ｋ５０６、Ｐ５０９、Ｆ５１８、Ｎ５２２、Ｅ５２３、Ｌ５４０、Ｓ５４１、Ｉ５４８、Ｄ５５０、Ｆ５５３、Ｖ５６１、Ｋ５６２、Ｅ５７３、Ａ５８９、Ｌ５９８、Ｄ６０５、Ｌ６０７、Ｎ６０９、Ｎ６１２、Ｅ６１７、Ｄ６１８、Ｄ６２８、Ｒ６２９、Ｒ６３５、Ｋ６３７、Ｌ６５１、Ｋ６５２、Ｒ６５４、Ｔ６５７、Ｇ６５８、Ｌ６６６、Ｋ６７３、Ｓ６７５、Ｉ６７９、Ｌ６８０、Ｌ６８３、Ｎ６９０、Ｒ６９１、Ｎ６９２、Ｆ６９３、Ｓ７０１、Ｆ７０４、Ｑ７１２、Ｇ７１５、Ｑ７１６、Ｈ７２３、Ｉ７２４、Ｌ７２７、Ｉ７３３、Ｌ７３８、およびＱ７３９から選択される１つ以上のアミノ酸残基位置に位置する１つ以上の変異を含む単離した改変Ｃａｓ９タンパク質であって、ここで、前記変異の位置は、配列番号１に記載の非改変の成熟ストレプトコッカス・ピオゲネス（streptococcus pyogenes）Ｃａｓ９（ＳｐＣａｓ９）におけるアミノ酸番号付けを参照して同定される、改変Ｃａｓ９タンパク質。
【請求項２】
Ｋ５２６位に変異を含む、請求項１に記載の改変Ｃａｓ９タンパク質。
【請求項３】
Ｋ５２６位における前記変異がＫ５２６ＥまたはＫ５２６Ｎである、請求項２に記載の改変Ｃａｓ９タンパク質。
【請求項４】
Ｋ５２６位における前記変異がＫ５２６Ｅである、請求項３に記載の改変Ｃａｓ９タンパク質。
【請求項５】
Ｋ３７７、Ｅ３８７、Ｄ３９７、Ｒ４００、Ｑ４０２、Ｒ４０３、Ｆ４０５、Ｄ４０６、Ｎ４０７、Ａ４２１、Ｌ４２３、Ｒ４２４、Ｑ４２６、Ｙ４３０、Ｋ４４２、Ｐ４４９、Ｙ４５０、Ｖ４５２、Ａ４５６、Ｒ４５７、Ｗ４６４、Ｍ４６５、Ｋ４６８、Ｅ４７０、Ｔ４７２、Ｉ４７３、Ｔ４７４、Ｐ４７５、Ｗ４７６、Ｆ４７８、Ｋ４８４、Ｓ４８７、Ａ４８８、Ｍ４９５、Ｔ４９６、Ｎ４９７、Ｆ４９８、Ｌ５０２、Ｎ５０４、Ｋ５０６、Ｐ５０９、Ｙ５１５、Ｆ５１８、Ｎ５２２、Ｅ５２３、Ｌ５４０、Ｓ５４１、Ｉ５４８、Ｄ５５０、Ｆ５５３、Ｖ５６１、Ｋ５６２、Ｅ５７３、Ａ５８９、Ｌ５９８、Ｄ６０５、Ｌ６０７、Ｎ６０９、Ｎ６１２、Ｅ６１７、Ｄ６１８、Ｄ６２８、Ｒ６２９、Ｒ６３５、Ｋ６３７、Ｌ６５１、Ｋ６５２、Ｒ６５４、Ｔ６５７、Ｇ６５８、Ｗ６５９、Ｒ６６１、Ｌ６６６、Ｋ６７３、Ｓ６７５、Ｉ６７９、Ｌ６８０、Ｌ６８３、Ｎ６９０、Ｒ６９１、Ｎ６９２、Ｆ６９３、Ｑ６９５、Ｈ６９８、Ｓ７０１、Ｆ７０４、Ｑ７１２、Ｇ７１５、Ｑ７１６、Ｈ７２１、Ｈ７２３、Ｉ７２４、Ｌ７２７、Ａ７２８、Ｉ７３３、Ｌ７３８、およびＱ７３９から選択される１つ以上のアミノ酸残基位置に位置する１つ以上のさらなる変異をさらに含み、ここで、前記１つ以上のさらなる変異の位置は、配列番号１におけるアミノ酸番号付けを参照して同定される、請求項２〜４のいずれか一項に記載の改変Ｃａｓ９タンパク質。
【請求項６】
前記１つ以上のさらなる変異が、
Ｋ３７７Ｅ、Ｅ３８７Ｖ、Ｄ３９７Ｅ、Ｒ４００Ｈ、Ｑ４０２Ｒ、Ｒ４０３Ｈ、Ｆ４０５Ｌ、Ｄ４０６Ｙ、Ｄ４０６Ｖ、Ｎ４０７Ｐ、Ｎ４０７Ｈ、Ａ４２１Ｖ、Ｌ４２３Ｐ、Ｒ４２４Ｇ、Ｑ４２６Ｒ、Ｙ４３０Ｃ、Ｋ４４２Ｎ、Ｐ４４９Ｓ、Ｙ４５０Ａ、Ｙ４５０Ｓ、Ｙ４５０Ｈ、Ｙ４５０Ｎ、Ｖ４５２Ｉ、Ａ４５６Ｔ、Ｒ４５７Ｐ、Ｒ４５７Ｑ、Ｗ４６４Ｌ、Ｍ４６５Ｒ、Ｋ４６８Ｎ、Ｅ４７０Ｄ、Ｔ４７２Ａ、Ｉ４７３Ｆ、Ｉ４７３Ｖ、Ｔ４７４Ａ、Ｐ４７５Ｈ、Ｗ４７６Ｒ、Ｆ４７８Ｙ、Ｆ４７８Ｖ、Ｋ４８４Ｍ、Ｓ４８７Ｙ、Ａ４８８Ｖ、Ｍ４９５Ｖ、Ｍ４９５Ｔ、Ｔ４９６Ａ、Ｎ４９７Ａ、Ｆ４９８Ｉ、Ｆ４９８Ｙ、Ｌ５０２Ｐ、Ｎ５０４Ｓ、Ｋ５０６Ｎ、Ｐ５０９Ｌ、Ｙ５１５Ｎ、Ｆ５１８Ｌ、Ｆ５１８Ｉ、Ｎ５２２Ｋ、Ｎ５２２Ｉ、Ｅ５２３Ｋ、Ｅ５２３Ｄ、Ｌ５４０Ｑ、Ｓ５４１Ｐ、Ｉ５４８Ｖ、Ｄ５５０Ｎ、Ｆ５５３Ｌ、Ｖ５６１Ｍ、Ｖ５６１Ａ、Ｋ５６２Ｅ、Ｅ５７３Ｄ、Ａ５８９Ｔ、Ｌ５９８Ｐ、Ｄ６０５Ｖ、Ｌ６０７Ｐ、Ｎ６０９Ｄ、Ｎ６０９Ｓ、Ｎ６１２Ｙ、Ｎ６１２Ｋ、Ｅ６１７Ｋ、Ｄ６１８Ｎ、Ｄ６２８Ｇ、Ｒ６２９Ｇ、Ｒ６３５Ｇ、Ｋ６３７Ｎ、Ｌ６５１Ｐ、Ｌ６５１Ｈ、Ｋ６５２Ｅ、Ｒ６５４Ｈ、Ｔ６５７Ａ、Ｇ６５８Ｅ、Ｗ６５９Ｒ、Ｒ６６１Ａ、Ｒ６６１Ｗ、Ｒ６６１Ｌ、Ｒ６６１Ｑ、Ｒ６６１Ｓ、Ｌ６６６Ｐ、Ｋ６７３Ｍ、Ｓ６７５Ｃ、Ｉ６７９Ｖ、Ｌ６８０Ｐ、Ｌ６８３Ｐ、Ｎ６９０Ｉ、Ｒ６９１Ｑ、Ｒ６９１Ｌ、Ｎ６９２Ｉ、Ｆ６９３Ｙ、Ｑ６９５Ａ、Ｑ６９５Ｈ、Ｑ６９５Ｌ、Ｈ６９８Ｑ、Ｈ６９８Ｐ、Ｓ７０１Ｆ、Ｆ７０４Ｓ、Ｑ７１２Ｒ、Ｇ７１５Ｓ、Ｑ７１６Ｈ、Ｈ７２１Ｒ、Ｈ７２３Ｌ、Ｉ７２４Ｖ、Ｌ７２７Ｈ、Ａ７２８Ｇ、Ａ７２８Ｔ、Ｉ７３３Ｖ、Ｌ７３８Ｐ、Ｑ７３９Ｅ、Ｑ７３９ＰおよびＱ７３９Ｋから選択される、請求項５に記載の改変Ｃａｓ９タンパク質。
【請求項７】
前記１つ以上のさらなる変異が、Ｙ４５０、Ｍ４９５、Ｙ５１５、Ｒ６６１、Ｎ６９０、Ｒ６９１、Ｑ６９５、およびＨ６９８から選択される１つ以上の位置にある、請求項５に記載の改変Ｃａｓ９タンパク質。
【請求項８】
前記１つ以上のさらなる変異が、Ｙ４５０Ｓ、Ｍ４９５Ｖ、Ｙ５１５Ｎ、Ｒ６６１Ｘ、Ｎ６９０Ｉ、Ｒ６９１Ｑ、Ｑ６９５Ｈ、およびＨ６９８Ｑから選択され、ＸがＬ、ＱまたはＳである、請求項７に記載の改変Ｃａｓ９タンパク質。
【請求項９】
(a)  Ｋ５２６Ｅ＋Ｙ４５０Ｓの変異；
(b)  Ｋ５２６Ｅ＋Ｍ４９５Ｖの変異；
(c)  Ｋ５２６Ｅ＋Ｙ５１５Ｎの変異；
(d)  Ｋ５２６Ｅ＋Ｒ６６１Ｌの変異；
(e)  Ｋ５２６Ｅ＋Ｎ６９０Ｉの変異；
(f)  Ｋ５２６Ｅ＋Ｒ６９１Ｑの変異；
(g)  Ｋ５２６Ｅ＋Ｑ６９５Ｈの変異；
(h)  Ｋ５２６Ｅ＋Ｈ６９８Ｑの変異；
(i)  Ｋ５２６Ｅ＋Ｙ５１５Ｎ＋Ｒ６６１Ｘの変異；
(j)  Ｋ５２６Ｅ＋Ｒ６６１Ｌ＋Ｈ６９８Ｑの変異；
(k)  Ｋ５２６Ｅ＋Ｍ４９５Ｖ＋Ｙ５１５Ｎの変異；
(l)  Ｋ５２６Ｅ＋Ｍ４９５Ｖ＋Ｒ６６１Ｌの変異；
(m)  Ｋ５２６Ｅ＋Ｍ４９５Ｖ＋Ｒ６６１Ｘ＋Ｈ６９８Ｑの変異；
(n)  Ｋ５２６Ｅ＋Ｍ４９５Ｖ＋Ｙ５１５Ｎ＋Ｒ６６１Ｘの変異；または
(o)  Ｋ５２６Ｅ＋Ｒ４０３Ｈ＋Ｎ６１２Ｙ＋Ｌ６５１Ｐ＋Ｋ６５２Ｅ＋Ｇ７１５Ｓの変異
を含み、ＸがＬ、ＱまたはＳである、請求項７に記載の改変Ｃａｓ９タンパク質。
【請求項１０】
(p)  Ｋ５２６Ｅ＋Ｙ５１５Ｎ＋Ｒ６６１Ｌの変異；
(q)  Ｋ５２６Ｅ＋Ｙ５１５Ｎ＋Ｒ６６１Ｑの変異；
(r)  Ｋ５２６Ｅ＋Ｙ５１５Ｎ＋Ｒ６６１Ｓの変異；
(s)  Ｋ５２６Ｅ＋Ｍ４９５Ｖ＋Ｒ６６１Ｌ＋Ｈ６９８Ｑの変異；
(t)  Ｋ５２６Ｅ＋Ｍ４９５Ｖ＋Ｒ６６１Ｑ＋Ｈ６９８Ｑの変異；
(u)  Ｋ５２６Ｅ＋Ｍ４９５Ｖ＋Ｒ６６１Ｓ＋Ｈ６９８Ｑの変異；
(v)  Ｋ５２６Ｅ＋Ｍ４９５Ｖ＋Ｙ５１５Ｎ＋Ｒ６６１Ｌの変異；
(w)  Ｋ５２６Ｅ＋Ｍ４９５Ｖ＋Ｙ５１５Ｎ＋Ｒ６６１Ｑの変異；または
(x)  Ｋ５２６Ｅ＋Ｍ４９５Ｖ＋Ｙ５１５Ｎ＋Ｒ６６１Ｓの変異
を含む、請求項９に記載の改変Ｃａｓ９タンパク質。
【請求項１１】
Ｋ５２６Ｅ＋Ｍ４９５Ｖ＋Ｙ５１５Ｎ＋Ｒ６６１Ｑの変異を含む、請求項１０に記載の改変Ｃａｓ９タンパク質。
【請求項１２】
Ｋ５２６Ｅ＋Ｍ４９５Ｖ＋Ｙ５１５Ｎ＋Ｒ６６１Ｓの変異を含む、請求項１０に記載の改変Ｃａｓ９タンパク質。
【請求項１３】
Ｋ３７７Ｅ、Ｅ３８７Ｖ、Ｄ３９７Ｅ、Ｒ４００Ｈ、Ｑ４０２Ｒ、Ｒ４０３Ｈ、Ｆ４０５Ｌ、Ｄ４０６Ｙ、Ｄ４０６Ｖ、Ｎ４０７Ｐ、Ｎ４０７Ｈ、Ａ４２１Ｖ、Ｌ４２３Ｐ、Ｒ４２４Ｇ、Ｑ４２６Ｒ、Ｙ４３０Ｃ、Ｋ４４２Ｎ、Ｐ４４９Ｓ、Ｙ４５０Ｓ、Ｙ４５０Ｈ、Ｙ４５０Ｎ、Ｖ４５２Ｉ、Ａ４５６Ｔ、Ｒ４５７Ｐ、Ｒ４５７Ｑ、Ｗ４６４Ｌ、Ｍ４６５Ｒ、Ｋ４６８Ｎ、Ｅ４７０Ｄ、Ｔ４７２Ａ、Ｉ４７３Ｆ、Ｉ４７３Ｖ、Ｔ４７４Ａ、Ｐ４７５Ｈ、Ｗ４７６Ｒ、Ｆ４７８Ｙ、Ｆ４７８Ｖ、Ｋ４８４Ｍ、Ｓ４８７Ｙ、Ａ４８８Ｖ、Ｍ４９５Ｖ、Ｍ４９５Ｔ、Ｔ４９６Ａ、Ｆ４９８Ｉ、Ｆ４９８Ｙ、Ｌ５０２Ｐ、Ｎ５０４Ｓ、Ｋ５０６Ｎ、Ｐ５０９Ｌ、Ｙ５１５Ｎ、Ｆ５１８Ｌ、Ｆ５１８Ｉ、Ｎ５２２Ｋ、Ｎ５２２Ｉ、Ｅ５２３Ｋ、Ｅ５２３Ｄ、Ｋ５２６Ｅ、Ｋ５２６Ｎ、Ｌ５４０Ｑ、Ｓ５４１Ｐ、Ｉ５４８Ｖ、Ｄ５５０Ｎ、Ｆ５５３Ｌ、Ｖ５６１Ｍ、Ｖ５６１Ａ、Ｋ５６２Ｅ、Ｅ５７３Ｄ、Ａ５８９Ｔ、Ｌ５９８Ｐ、Ｄ６０５Ｖ、Ｌ６０７Ｐ、Ｎ６０９Ｄ、Ｎ６０９Ｓ、Ｎ６１２Ｙ、Ｎ６１２Ｋ、Ｅ６１７Ｋ、Ｄ６１８Ｎ、Ｄ６２８Ｇ、Ｒ６２９Ｇ、Ｒ６３５Ｇ、Ｋ６３７Ｎ、Ｌ６５１Ｐ、Ｌ６５１Ｈ、Ｋ６５２Ｅ、Ｒ６５４Ｈ、Ｔ６５７Ａ、Ｇ６５８Ｅ、Ｗ６５９Ｒ、Ｒ６６１Ｗ、Ｒ６６１Ｌ、Ｒ６６１Ｑ、Ｒ６６１Ｓ、Ｌ６６６Ｐ、Ｋ６７３Ｍ、Ｓ６７５Ｃ、Ｉ６７９Ｖ、Ｌ６８０Ｐ、Ｌ６８３Ｐ、Ｎ６９０Ｉ、Ｒ６９１Ｑ、Ｒ６９１Ｌ、Ｎ６９２Ｉ、Ｆ６９３Ｙ、Ｑ６９５Ｈ、Ｑ６９５Ｌ、Ｈ６９８Ｑ、Ｈ６９８Ｐ、Ｓ７０１Ｆ、Ｆ７０４Ｓ、Ｑ７１２Ｒ、Ｇ７１５Ｓ、Ｑ７１６Ｈ、Ｈ７２１Ｒ、Ｈ７２３Ｌ、Ｉ７２４Ｖ、Ｌ７２７Ｈ、Ａ７２８Ｇ、Ａ７２８Ｔ、Ｉ７３３Ｖ、Ｌ７３８Ｐ、Ｑ７３９Ｅ、Ｑ７３９ＰおよびＱ７３９Ｋから選択される少なくとも１つの変異を含む、請求項１に記載の改変Ｃａｓ９タンパク質。
【請求項１４】
(a) Ｄ４０６Ｙ、Ｗ４６４Ｌ、Ｔ４７４Ａ、Ｎ６１２Ｋ、Ｌ６８３Ｐから選択される１ヵ所変異；または
(b) Ｒ４００Ｈ＋Ｙ４５０Ｓ、Ｄ４０６Ｖ＋Ｅ５２３Ｋ、Ａ４２１Ｖ＋Ｒ６６１Ｗ、Ｒ４２４Ｇ＋Ｑ７３９Ｐ、Ｗ４７６Ｒ＋Ｌ７３８Ｐ、Ｐ４４９Ｓ＋Ｆ７０４Ｓ、Ｎ５２２Ｋ＋Ｇ６５８Ｅ、Ｅ５２３Ｄ＋Ｅ６１７Ｋ、Ｌ５４０Ｑ＋Ｌ６０７Ｐ、Ｗ６５９Ｒ＋Ｒ６６１Ｗ、Ｓ６７５Ｃ＋Ｑ６９５ＬおよびＩ６７９Ｖ＋Ｈ７２３Ｌから選択される２重変異；または
(c) Ｋ３７７Ｅ＋Ｌ５９８Ｐ＋Ｌ６５１Ｈ、Ｄ３９７Ｅ＋Ｙ４３０Ｃ＋Ｌ６６６Ｐ、Ｑ４０２Ｒ＋Ｖ５６１Ｍ＋Ｑ６９５Ｌ、Ｎ４０７Ｐ＋Ｆ４９８Ｉ＋Ｐ５０９Ｌ、Ｎ４０７Ｈ＋Ｋ６３７Ｎ＋Ｎ６９０Ｉ、Ｙ４５０Ｈ＋Ｆ５５３Ｌ＋Ｑ７１６Ｈ、Ｙ４５０Ｎ＋Ｈ６９８Ｐ＋Ｑ７３９Ｋ、Ｔ４７２Ａ＋Ｐ４７５Ｈ＋Ａ４８８Ｖ、Ｉ４７３Ｆ＋Ｄ５５０Ｎ＋Ｑ７３９Ｅ、Ｆ４７８Ｙ＋Ｎ５２２Ｉ＋Ｌ７２７Ｈ、Ｋ４８４Ｍ＋Ｑ６９５Ｈ＋Ｑ７１２Ｒ、Ｓ４８７Ｙ＋Ｎ５０４Ｓ＋Ｅ５７３Ｄ、Ｔ４９６Ａ＋Ｎ６０９Ｄ＋Ａ７２８Ｇ、Ｒ６５４Ｈ＋Ｒ６９１Ｑ＋Ｈ６９８ＱおよびＲ６９１Ｌ＋Ｈ７２１Ｒ＋Ｉ７３３Ｖから選択される３重変異；
(d) Ｆ４０５Ｌ＋Ｆ５１８Ｌ＋Ｌ６５１Ｐ＋Ｉ７２４Ｖ、Ｌ４２３Ｐ＋Ｍ４６５Ｒ＋Ｙ５１５Ｎ＋Ｋ６７３Ｍ、Ｒ４５７Ｐ＋Ｋ４６８Ｎ＋Ｒ６６１Ｗ＋Ｇ７１５Ｓ、Ｅ４７０Ｄ＋Ｉ５４８Ｖ＋Ａ５８９Ｔ＋Ｑ６９５Ｈ、Ａ４８８Ｖ＋Ｄ６０５Ｖ＋Ｒ６２９Ｇ＋Ｔ６５７ＡおよびＭ４９５Ｖ＋Ｋ５２６Ｎ＋Ｓ５４１Ｐ＋Ｋ５６２Ｅから選択される４重の変異；または
(e) Ｒ４０３Ｈ＋Ｎ６１２Ｙ＋Ｌ６５１Ｐ＋Ｋ６５２Ｅ＋Ｇ７１５Ｓから選択される５ヵ所変異；
(f) Ｅ３８７Ｖ＋Ｖ５６１Ａ＋Ｄ６１８Ｎ＋Ｄ６２８Ｇ＋Ｌ６８０Ｐ＋Ｓ７０１Ｆ、
Ｒ４０３Ｈ＋Ｋ５２６Ｅ＋Ｎ６１２Ｙ＋Ｌ６５１Ｐ＋Ｋ６５２Ｅ＋Ｇ７１５Ｓ、
Ｒ４０３Ｈ＋Ｍ４９５Ｔ＋Ｎ６１２Ｙ＋Ｌ６５１Ｐ＋Ｋ６５２Ｅ＋Ｇ７１５Ｓ、
Ｒ４０３Ｈ＋Ｌ５０２Ｐ＋Ｎ６１２Ｙ＋Ｌ６５１Ｐ＋Ｋ６５２Ｅ＋Ｇ７１５Ｓ、
Ｒ４０３Ｈ＋Ｋ５０６Ｎ＋Ｎ６１２Ｙ＋Ｌ６５１Ｐ＋Ｋ６５２Ｅ＋Ｇ７１５Ｓ、および
Ｒ４０３Ｈ＋Ｎ６１２Ｙ＋Ｌ６５１Ｐ＋Ｋ６５２Ｅ＋Ｎ６９２Ｉ＋Ｇ７１５Ｓ
から選択される６ヵ所変異；または
(g) Ｒ４０３Ｈ＋Ａ４５６Ｔ＋Ｎ６１２Ｙ＋Ｌ６５１Ｐ＋Ｋ６５２Ｅ＋Ｇ７１５Ｓ＋Ｇ７２８Ｔ、
Ｒ４０３Ｈ＋Ｆ４９８Ｙ＋Ｎ６１２Ｙ＋Ｌ６５１Ｐ＋Ｋ６５２Ｅ＋Ｒ６６１Ｌ＋Ｇ７１５Ｓ、および
Ｒ４０３Ｈ＋Ｑ４２６Ｒ＋Ｆ４７８Ｖ＋Ｎ６１２Ｙ＋Ｌ６５１Ｐ＋Ｋ６５２Ｅ＋Ｇ７１５Ｓ
から選択される７ヵ所変異；または
(h) Ｒ４０３Ｈ＋Ｒ４４２Ｎ＋Ｖ４５２Ｉ＋Ｎ６０９Ｓ＋Ｎ６１２Ｙ＋Ｒ６３５Ｇ＋Ｌ６５１Ｐ＋Ｋ６５２Ｅ＋Ｆ６９３Ｙ＋Ｇ７１５Ｓの変異；または
(i) Ｒ４０３Ｈ＋Ｒ４５７Ｑ＋Ｆ５１８Ｉ＋Ｎ６１２Ｙ＋Ｒ６３５Ｇ＋Ｌ６５１Ｐ＋Ｋ６５２Ｅ＋Ｆ６９３Ｙ＋Ｇ７１５Ｓの変異
を含み、前記変異の位置は配列番号１に記載の非改変の成熟ストレプトコッカス・ピオゲネス（streptococcus pyogenes）Ｃａｓ９（ＳｐＣａｓ９）におけるアミノ酸番号付けを参照して同定される、改変Ｃａｓ９タンパク質。
【請求項１５】
Ｄ１０、Ｅ７６２、Ｄ８３９、Ｈ８４０、Ｎ８６３、Ｈ９８３およびＤ９８６から選択される位置においてヌクレアーゼ活性を減少させる少なくとも１つのさらなる変異をさらに含む、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の改変Ｃａｓ９タンパク質。
【請求項１６】
Ｄ１１３５、Ｇ１２１８、Ｒ１３３５、Ｔ１３３７から選択される位置においてＰＡＭ認識特異性を変更する少なくとも１つのさらなる変異をさらに含む、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の改変Ｃａｓ９タンパク質。
【請求項１７】
ストレプトコッカス・ピオゲネス（S. pyogenes）のＣａｓ９タンパク質である、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の改変Ｃａｓ９タンパク質。
【請求項１８】
ストレプトコッカス・ピオゲネス（S. pyogenes）のＣａｓ９タンパク質のオルソログである、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の改変Ｃａｓ９タンパク質。
【請求項１９】
請求項１〜１８のいずれか一項に記載の改変Ｃａｓ９タンパク質を生成する方法であって、前記改変Ｃａｓ９タンパク質を１つまたは複数の断片から再構築することを含む、方法。
【請求項２０】
請求項１〜１８のいずれか一項に記載の改変Ｃａｓ９タンパク質を含有する、タンパク質、またはリボヌクレオタンパク質(ＲＮＰ)複合体、または混合されたタンパク質、リボヌクレオタンパク質もしくは脂質複合体。
【請求項２１】
請求項１から１８のいずれか一項に記載の改変Ｃａｓ９タンパク質を含む融合タンパク質。
【請求項２２】
請求項１から１８のいずれか一項に記載の改変Ｃａｓ９タンパク質をコードする核酸。
【請求項２３】
請求項２２に記載の核酸を含むベクター。
【請求項２４】
請求項１８のいずれか一項に記載の改変Ｃａｓ９タンパク質を生成する方法であって、前記改変Ｃａｓ９タンパク質を請求項２２に記載の核酸によって発現することを含む、方法。
【請求項２５】
請求項２２に記載の核酸または請求項２３に記載のベクターを使用して工学的に操作された細胞、動物または植物。
【請求項２６】
遺伝子治療の医薬としての使用のための、請求項２２に記載の核酸または請求項２３に記載のベクター。
【請求項２７】
請求項１〜１８のいずれか１項に記載の改変Ｃａｓ９タンパク質、請求項２０に記載のタンパク質またはリボヌクレオタンパク質(ＲＮＰ)複合体または混合されたタンパク質、リボヌクレオタンパク質もしくは脂質複合体、請求項２１に記載の融合タンパク質、請求項２２に記載の核酸、または請求項２３に記載のベクター、および少なくとも１つの薬学的に許容される賦形剤を含む、医薬組成物。
【請求項２８】
ゲノム工学、細胞工学、タンパク質発現または他のバイオテクノロジー利用のための、ガイドＲＮＡ（ｇＲＮＡ）と一緒の請求項１〜１８のいずれか１項に記載の組換え改変Ｃａｓ９タンパク質、または請求項２２に記載の核酸、または請求項２３に記載のベクターの、インビトロでの使用。
【請求項２９】
ｇＲＮＡと一緒の請求項１〜１８のいずれか１項に記載の組換え改変Ｃａｓ９タンパク質、または請求項２２に記載の核酸、または請求項２３に記載のベクターを含む、同時に、別々に、または順に使用するためのキットオブパーツ。
【請求項３０】
細胞のゲノムを変更するインビトロでの方法であって、特定のゲノム配列を標的化するガイドＲＮＡと一緒に、請求項１〜１８のいずれか１項に記載の改変Ｃａｓ９タンパク質を細胞内で発現させることを含む、方法。