【手続補正書】
【提出日】令和3年3月9日(2021.3.9)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒトＡＰＯＥ４ｐおよびマウスＴｒｅｍ２ｐの発現を伴う、非家族性遅発型アルツハイマー病に関係する１つまたは複数の症状または徴候を特徴とする遺伝子改変マウスであって、前記マウスのゲノムが、１）プロモーターに動作可能に連結されたヒトＡＰＯＥ４タンパク質（ＡＰＯＥ４ｐ）をコードするＤＮＡ配列、および２）プロモーターに動作可能に連結された、ｐ．Ｒ４７Ｈ変異を有するマウスＴｒｅｍ２タンパク質（Ｔｒｅｍ２ｐ）をコードするＤＮＡ配列を含み、前記マウスが、ヒトＡＰＯＥ４ｐおよびマウスＴｒｅｍ２ｐを発現する、遺伝子改変マウス。
【請求項２】
前記ＡＰＯＥ４ｐが、配列番号１のアミノ酸配列を含むか、または前記ＡＰＯＥ４ｐが、高度にストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で配列番号２とハイブリダイズする核酸の相補体によりコードされる、請求項１に記載の遺伝子改変マウス。
【請求項３】
前記マウスＴｒｅｍ２ｐが、配列番号３のアミノ酸配列を含むか、または前記マウスＴｒｅｍ２ｐが、高度にストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で配列番号４とハイブリダイズする核酸の相補体によりコードされる、請求項１に記載の遺伝子改変マウス。
【請求項４】
前記マウスのゲノムが、１）プロモーターに動作可能に連結されたヒトＡＰＯＥ４タンパク質（ＡＰＯＥ４ｐ）をコードするＤＮＡ配列、および２）プロモーターに動作可能に連結された、ｐ．Ｒ４７Ｈ変異を有するマウスＴｒｅｍ２タンパク質（Ｔｒｅｍ２ｐ）をコードするＤＮＡ配列を含む、Ｂ６（ＳＪＬ）−Ａｐｏｅｔｍ１．１（ＡＰＯＥ＊４）ＡｄｉｕｊＴｒｅｍ２ｅｍ１Ａｄｉｕｊ／Ｊマウスであり、前記マウスが、ＡＰＯＥ４ｐをコードするＤＮＡ配列について、およびＴｒｅｍ２ｐをコードするＤＮＡ配列についてホモ接合性であり、ヒトＡＰＯＥ４ｐおよびマウスＴｒｅｍ２ｐを発現する、請求項１に記載の遺伝子改変マウス。
【請求項５】
アルツハイマー病の処置における使用のための化合物についてスクリーニングするための方法であって、
請求項１〜４のいずれか一項に記載の遺伝子改変マウスに化合物を投与するステップと、
非家族性遅発型アルツハイマー病に関係する、ヒトＡＰＯＥ４ｐおよびマウスＴｒｅｍ２ｐの発現を伴う１つまたは複数の症状または徴候の処置に対する前記化合物の作用をマウスにおいて評価するステップと
を含む、方法。
【請求項６】
前記化合物の作用を評価するステップが、請求項１〜４のいずれか一項に記載の遺伝子改変マウスに対する前記化合物の作用を、対照と比較することを含む、請求項５に記載のアルツハイマー病の処置における使用のための化合物についてスクリーニングするための方法。
【請求項７】
前記対照が、
ヒトＡＰＯＥ４ｐおよびマウスＴｒｅｍ２ｐを発現しないマウスに前記化合物を投与するステップと、
前記化合物の作用を前記マウスにおいて評価するステップと
を含む、請求項６に記載のアルツハイマー病の処置における使用のための化合物についてスクリーニングするための方法。
【請求項８】
前記対照が、
野生型Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスに前記化合物を投与するステップと、
前記化合物の作用を前記野生型Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスにおいて評価するステップと
を含む、請求項６または７に記載のアルツハイマー病の処置における使用のための化合物についてスクリーニングするための方法。
【請求項９】
前記対照が、
ＡＰＯＥ３発現マウスに前記化合物を投与するステップと、
前記化合物の作用を前記ＡＰＯＥ３発現マウスにおいて評価するステップと
を含む、請求項６または７に記載のアルツハイマー病の処置における使用のための化合物についてスクリーニングするための方法。
【請求項１０】
ヒトＡＰＯＥ４ｐおよびマウスＴｒｅｍ２ｐの発現を伴う、実質的に本明細書で記載される非家族性遅発型アルツハイマー病に関係する１つまたは複数の症状または徴候を特徴とする遺伝子改変マウス。
【請求項１１】
実質的に本明細書で記載されるアルツハイマー病の処置における使用のための化合物についてスクリーニングするための方法。
【請求項１２】
ＡＰＯＥ４ｐおよびＴｒｅｍ２ｐを発現する遺伝子改変マウスを作製する方法であって、
遺伝子改変をマウスゲノム内に導入し、ＡＰＯＥ４ｐおよびＴｒｅｍ２ｐを発現する前記遺伝子改変マウスを作製するステップ
を含み、前記遺伝子改変マウスが、ヒトＡＰＯＥ４タンパク質（ＡＰＯＥ４ｐ）をコードする核酸配列に動作可能に連結されたプロモーター、およびｐ．Ｒ４７Ｈ変異を有するマウスＴｒｅｍ２タンパク質（Ｔｒｅｍ２ｐ）をコードする核酸配列に動作可能に連結されたプロモーターを含み、
前記遺伝子改変マウスが、ヒトＡＰＯＥ４ｐおよびマウスＴｒｅｍ２ｐを発現する、方法。
【請求項１３】
ヒトＡＰＯＥ４ｐおよびマウスＴｒｅｍ２ｐの発現を伴う、非家族性遅発型アルツハイマー病に関係する１つまたは複数の症状または徴候を特徴とする遺伝子改変マウスを作製する方法であって、
ｉ）ヒトＡＰＯＥ４をコードするＤＮＡ配列をそのゲノムに有する第１の改変マウスを作製するステップと、
ｉｉ）ｐ．Ｒ４７Ｈに変異を有するマウスＴｒｅｍ２ｐタンパク質をコードするＤＮＡ配列をそのゲノムに有する第２の改変マウスを作製するステップと、
ｉｉｉ）ｉ）の前記第１の改変マウスの近交系統を、ｉｉ）の前記第２の改変マウスの近交系統と交雑するステップと
を含み、前記交雑から得られた前記遺伝子改変マウスが、ヒトＡＰＯＥ４ｐおよびＲ４７Ｈ変異を含むマウスＴｒｅｍ２ｐを発現する、方法。
【請求項１４】
遺伝子改変マウスを作製する方法であって、近交マウス系統であるＢ６（ＳＪＬ）−Ａｐｏｅｔｍ１．１（ＡＰＯＥ＊４）Ａｄｐｍｃ／Ｊ（ＡＰＯＥ＊４  ＫＩ（ＪＡＸ））を、近交マウス系統であるＣ５７ＢＬ／６Ｊ−Ｔｒｅｍ２ｅｍ１Ａｄｐｍｃ／Ｊ（Ｔｒｅｍ２  Ｒ４７Ｈ  ＫＩ（ＪＡＸ））と交雑するステップを含み、前記遺伝子改変マウスが、ヒトＡＰＯＥ４ｐおよびＲ４７Ｈ変異を含むマウスＴｒｅｍ２ｐを発現する、方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２１０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２１０】
本明細書に記載の遺伝子改変マウスおよび使用方法は、現在のところ、例示的な好ましい実施形態の代表的なものであり、本発明の範囲を限定することを意図しない。その範囲内の変化や他の使用は、当業者であれば思いつくものと予想される。このような変化および他の使用は、特許請求の範囲に記載される本発明の範囲を逸脱することなくなされ得る。
特定の実施形態では、例えば以下の項目が提供される。
（項目１）
ヒトＡＰＯＥ４ｐおよびマウスＴｒｅｍ２ｐの発現を伴う、非家族性遅発型アルツハイマー病に関係する１つまたは複数の症状または徴候を特徴とする遺伝子改変マウスであって、前記マウスのゲノムが、１）プロモーターに動作可能に連結されたヒトＡＰＯＥ４タンパク質（ＡＰＯＥ４ｐ）をコードするＤＮＡ配列、および２）プロモーターに動作可能に連結された、ｐ．Ｒ４７Ｈ変異を有するマウスＴｒｅｍ２タンパク質（Ｔｒｅｍ２ｐ）をコードするＤＮＡ配列を含み、前記マウスが、ヒトＡＰＯＥ４ｐおよびマウスＴｒｅｍ２ｐを発現する、遺伝子改変マウス。
（項目２）
前記ＡＰＯＥ４ｐが、配列番号１のアミノ酸配列を含むか、または前記ＡＰＯＥ４ｐが、高度にストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で配列番号２とハイブリダイズする核酸の相補体によりコードされる、項目１に記載の遺伝子改変マウス。
（項目３）
前記マウスＴｒｅｍ２ｐが、配列番号３のアミノ酸配列を含むか、または前記マウスＴｒｅｍ２ｐが、高度にストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で配列番号４とハイブリダイズする核酸の相補体によりコードされる、項目１に記載の遺伝子改変マウス。
（項目４）
前記マウスのゲノムが、１）プロモーターに動作可能に連結されたヒトＡＰＯＥ４タンパク質（ＡＰＯＥ４ｐ）をコードするＤＮＡ配列、および２）プロモーターに動作可能に連結された、ｐ．Ｒ４７Ｈ変異を有するマウスＴｒｅｍ２タンパク質（Ｔｒｅｍ２ｐ）をコードするＤＮＡ配列を含む、Ｂ６（ＳＪＬ）−Ａｐｏｅｔｍ１．１（ＡＰＯＥ＊４）ＡｄｉｕｊＴｒｅｍ２ｅｍ１Ａｄｉｕｊ／Ｊマウスであり、前記マウスが、ＡＰＯＥ４ｐをコードするＤＮＡ配列について、およびＴｒｅｍ２ｐをコードするＤＮＡ配列についてホモ接合性であり、ヒトＡＰＯＥ４ｐおよびマウスＴｒｅｍ２ｐを発現する、項目１に記載の遺伝子改変マウス。
（項目５）
アルツハイマー病の処置における使用のための化合物についてスクリーニングするための方法であって、
項目１〜４のいずれか一項に記載の遺伝子改変マウスに化合物を投与するステップと、
非家族性遅発型アルツハイマー病に関係する、ヒトＡＰＯＥ４ｐおよびマウスＴｒｅｍ２ｐの発現を伴う１つまたは複数の症状または徴候の処置に対する前記化合物の作用をマウスにおいて評価するステップと
を含む、方法。
（項目６）
前記化合物の作用を評価するステップが、項目１〜４のいずれか一項に記載の遺伝子改変マウスに対する前記化合物の作用を、対照と比較することを含む、項目５に記載のアルツハイマー病の処置における使用のための化合物についてスクリーニングするための方法。
（項目７）
前記対照が、
ヒトＡＰＯＥ４ｐおよびマウスＴｒｅｍ２ｐを発現しないマウスに前記化合物を投与するステップと、
前記化合物の作用を前記マウスにおいて評価するステップと
を含む、項目６に記載のアルツハイマー病の処置における使用のための化合物についてスクリーニングするための方法。
（項目８）
前記対照が、
野生型Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスに前記化合物を投与するステップと、
前記化合物の作用を前記野生型Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスにおいて評価するステップと
を含む、項目６または７に記載のアルツハイマー病の処置における使用のための化合物についてスクリーニングするための方法。
（項目９）
前記対照が、
ＡＰＯＥ３発現マウスに前記化合物を投与するステップと、
前記化合物の作用を前記ＡＰＯＥ３発現マウスにおいて評価するステップと
を含む、項目６または７に記載のアルツハイマー病の処置における使用のための化合物についてスクリーニングするための方法。
（項目１０）
ヒトＡＰＯＥ４ｐおよびマウスＴｒｅｍ２ｐの発現を伴う、実質的に本明細書で記載される非家族性遅発型アルツハイマー病に関係する１つまたは複数の症状または徴候を特徴とする遺伝子改変マウス。
（項目１１）
実質的に本明細書で記載されるアルツハイマー病の処置における使用のための化合物についてスクリーニングするための方法。