【手続補正書】
【提出日】令和3年10月25日(2021.10.25)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
試験化合物の選択性を決定する方法であって、以下の工程：
（ａ）細胞の合計集団において、細胞の少なくとも２つの区別することができるサブ集団を含む試料を提供すること；
（ｂ）前記試料を少なくとも２つの部分に分けること；
（ｃ）試験化合物の非存在下の工程（ｂ）で得られる少なくとも１つの部分及び試験化合物の存在下の工程（ｂ）で得られる少なくとも１つの部分をインキュベートすること；
（ｄ）
（ｉ）前記試験化合物の存在下でインキュベートされた前記少なくとも１つの部分及び
（ｉｉ）前記試験化合物の非存在下でインキュベートされた前記少なくとも１つの部分
において、同じ表現型を示す細胞の合計集団の細胞数に対して、区別することができる表現型を示す前記少なくとも２つのサブ集団の１つにおける細胞の数を決定すること；並びに
（ｅ）前記試験化合物の選択性を決定して、（ｉ）を（ｉｉ）で割ることによって、全てのその他のサブ集団におけるステップ（ｄ）に参照される前記１つのサブ集団の（ｄ）において参照される前記表現型を誘導し、ここで（ｉ）を（ｉｉ）で割った値が１より大きい場合、前記試験化合物は、（ｄ）に参照される前記表現型を選択的に誘導し、及び（ｉ）を（ｉｉ）で割った値が１未満である場合、（ｄ）に参照される前記表現型を選択的に阻害又は減少すること、
を含む、方法。
【請求項２】
前記工程（ｅ）において、（ｉ）を（ｉｉ）で割った値が、１．０５、１．１、１．５、２、３又は５より大きい場合、前記試験化合物は、（ｄ）に参照される前記表現型を選択的に誘導する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記工程（ｅ）において、（ｉ）を（ｉｉ）で割った値が、０．９５、０．９、０．７、０．５、０．３又は０．２未満である場合、前記試験化合物は、（ｄ）に参照される前記表現型を選択的に阻害又は減少する、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
工程（ｄ）の前記区別することができる表現型が生存率であり、ここで
（ｉ）工程（ｅ）で決定される前記選択性が１未満である場合、前記試験化合物は、工程（ｄ）の前記１つのサブ集団の生細胞の数を選択的に減少することが決定され、及び
（ｉｉ）工程（ｅ）において決定される前記選択性が１より大きい場合、前記試験化合物は、前記１つのサブ集団の生存率を選択的に改善すること、及び／又は工程（ｄ）の前記１つのサブ集団以外の前記サブ集団（複数可）の１つ以上の生存率を選択的に減少することが決定される、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
癌を罹患している対象が試験化合物による治療に応答する又は応答性があるかどうかを決定する方法であって、以下の工程：
（ａ）合計集団細胞において、細胞の少なくとも２つのサブ集団を含む対象から得られる試料を提供することであり、ここで少なくとも１つのサブ集団は、癌性細胞に対応し、かつ、少なくとも１つのサブ集団は非癌性細胞に対応する；
（ｂ）前記試料を少なくとも２つの部分に分けること；
（ｃ）試験化合物の非存在下の工程（ｂ）で得られる少なくとも１つの部分及び試験化合物の存在下の少なくとも１つの部分をインキュベートすること；
（ｄ）
（ｉ）前記試験化合物の存在下でインキュベートされた前記少なくとも１つの部分及び
（ｉｉ）前記試験化合物の非存在下でインキュベートされた前記少なくとも１つの部分
における細胞の前記合計集団の生細胞の数に対して、癌細胞に対応する前記サブ集団の少なくとも１つにおいて、生細胞の数を決定すること；並びに
（ｅ）（ｉ）を（ｉｉ）で割ることによって、前記対象が前記試験化合物による治療に応答する又は応答性があるかどうかを決定することであり、ここで前記対象は、前記得られる値が１未満である場合、治療に応答する又は応答性がある、
を含む、方法。
【請求項６】
前記工程（ｅ）において、前記対象は、前記得られる値が０．９５、０．９、０．８、０．６、０．４又は０．２未満である場合、治療に応答する又は応答性がある、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記方法は少なくとも２つの試験化合物について繰り返され、前記対象が前記少なくとも２つの試験化合物の組み合わせによる治療に応答する又は応答性であるかどうかは、１．０から少なくとも前記２つの試験化合物のそれぞれについての（ｅ）で得られる値を引き、前記少なくとも２つの試験化合物についての得られる値の和を出し、前記得られる和が−１より大きい場合、前記対象は、前記少なくとも２つの試験化合物の組み合わせによる治療に応答する又は応答性であることが決定される、請求項５に記載の方法。
【請求項８】
前記方法は少なくとも２つの試験化合物について繰り返され、前記対象が前記少なくとも２つの試験化合物の組み合わせによる治療に応答する又は応答性であるかどうかは、１．０から少なくとも前記２つの試験化合物のそれぞれについての（ｅ）で得られる値を引き、前記少なくとも２つの試験化合物についての得られる値の和を出し、前記得られる和が−０．５、０、０．５又は１より大きい場合、前記対象は、前記少なくとも２つの試験化合物の組み合わせによる治療に応答する又は応答性であることが決定される、請求項５に記載の方法。
【請求項９】
前記試験化合物（複数可）が１つ以上の化学物質を含む、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
工程（ｂ）で得られる少なくとも１つの部分がさらに少なくとも２つの部分に分けられ、ここで前記少なくとも２つの部分のそれぞれが異なる濃度の前記試験化合物で工程（ｃ）においてインキュベートされ、工程（ｄ）及び（ｅ）は、独立して前記試験化合物の各濃度で繰り返されて、前記試験化合物の各濃度の選択性／値を決定し、それによって全ての濃度の平均選択性／値が工程（ｅ）の後に計算され、前記最終選択性／値を決定するために使用される、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
工程（ｂ）において、前記試料が少なくとも３つの部分に分けられ、工程（ｃ）において、少なくとも２つの部分が試験化合物の非存在下でインキュベートされる及び／又は少なくとも２つの部分が試験化合物の存在下でインキュベートされ、それによって、前記試験化合物の存在下でインキュベートされる各部分が、同じ濃度の前記試験化合物の存在下でインキュベートされ、工程（ｄ）において、同区別することができる表現型を示す前記細胞の合計集団の数に対して、前記区別することができる表現型を示す前記少なくとも２つのサブ集団の１つの細胞数が、
（ｉ）独立して前記試験化合物の存在下でインキュベートされた各部分、及び／又は
（ｉｉ）独立して前記試験化合物の非存在下でインキュベートされた各部分について決定され、並びに（ｉ）で得られる前記相対数の平均及び／又は（ｉｉ）で得られる前記相対数の平均が使用される、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
工程（ｂ）において、前記試料が少なくとも３つの部分に分けられ、工程（ｃ）において、少なくとも１つの部分が試験化合物の非存在下でインキュベートされ、及び／又は少なくとも２つの部分が前記試験化合物の少なくとも２つの異なる濃度の存在下でインキュベートされ、並びに工程（ｄ）において、同区別することができる表現型を示す細胞の前記合計集団の細胞数に対して前記区別することができる表現型を示す前記少なくとも２つのサブ集団の１つの細胞の数が、
（ｉ）前記試験化合物の存在下でインキュベートされた各部分について独立して決定され及び／又は
（ｉｉ）前記試験化合物の非存在下でインキュベートされた各部分について独立して決定され、ここで（ｉ）の平均が各濃度について独立して決定され、及び／又は前記（ｉｉ）の平均がさらなる工程のために決定され、及び使用され、ここで工程（ｅ）において、前記選択性／値が、各濃度について（ｉ）の平均を（ｉｉ）の平均で割ることによって、前記試験化合物のそれぞれの濃度について決定され、前記最終選択性／値が、各濃度についての前記選択性／値を平均することによって得られる、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
前記方法が少なくとも２つの試験化合物について繰り返され、工程（ｅ）で得られる最も低い値を有する前記試験化合物が癌を罹患している前記対象の治療に選択される、請求項５又は９〜１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
前記方法が少なくとも３つの試験化合物について繰り返され、前記組み合わせの少なくとも２つの試験化合物のそれぞれについて、（ｅ）で得られる値を１．０から引き、前記組み合わせの前記少なくとも２つの試験化合物についての得られる結果の値を足すことによって得られる最も高い値を有する前記少なくとも３つの試験化合物の少なくとも２つの組み合わせが、癌を罹患している前記対象の治療のために選択される、請求項７〜１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
前記癌がＰＢＭＣ又は骨髄細胞又はＰＢＭＣ若しくは骨髄細胞に由来する細胞に関連する癌である、請求項５〜１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
前記試料が少なくとも１％の癌性細胞及び／又は少なくとも１％の非癌性細胞を含む組織試料である、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
前記組織試料が非接着性細胞単層として培養される、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
前記生存癌性及び非癌性細胞が、自動顕微鏡を使用して決定される、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記生存細胞の数が断片化されていない核の数として決定される、請求項１８に記載の方法。