【手続補正書】
【提出日】令和2年12月9日(2020.12.9)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式（１）で表される脳標的持続型結合体：
Ｘ−Ｌ1−Ｆ−Ｌ2−Ｙ  （１）
ここで、
Ｘが、生理活性物質であり、
Ｙが、脳標的ペプチドであり、
Ｌ1及びＬ2が、ペプチド性または非ペプチド性リンカーであり、
Ｌ1及びＬ2がペプチド性リンカーである時、前記ペプチド性リンカーが、０〜１０００個のアミノ酸を含み、
Ｆが、ＦｃＲｎ結合部位を含む免疫グロブリン不変領域である。
【請求項２】
前記持続型結合体が、血液脳関門を通過して、脳組織内に生理活性物質が伝達されることを特徴とする、請求項１に記載の脳標的持続型結合体。
【請求項３】
前記脳標的ペプチドが、血液脳関門を通過可能なアミノ酸配列を有する、ペプチド、タンパク質、または抗体を含むものである、請求項１に記載の脳標的持続型結合体。
【請求項４】
前記脳標的ペプチドが、受動輸送（passive transport）による経路または受容体媒介輸送（receptor-mediated transport）による経路を介して血液脳関門を通過するものである、請求項３に記載の脳標的持続型結合体。
【請求項５】
前記生理活性物質が、トキシン；またはＧＬＰ−１（Glucagon like peptide-1）受容体アゴニスト；グルカゴン受容体アゴニスト； ＧＩＰ（Gastric inhibitory polypeptide）受容体アゴニスト；ＦＧＦ（Fibroblast growth factor）受容体アゴニスト；コレシストキニン（Cholecystokinin）受容体アゴニスト；ガストリン（gastrin）受容体アゴニスト；メラノコルチン（melanocortin）受容体アゴニスト；ヒト成長ホルモン；成長ホルモン放出ホルモン；成長ホルモン放出ペプチド；インターフェロン；インターフェロン受容体；コロニー刺激因子；インターロイキン；インターロイキン受容体；酵素；インターロイキン結合タンパク質；サイトカイン結合タンパク質；マクロファージ活性因子；マクロファージペプチド；Ｂ細胞因子；Ｔ細胞因子；タンパク質Ａ；アレルギー抑制因子；細胞壊死糖タンパク質；免疫毒素；リンホトキシン；腫瘍壊死因子；腫瘍抑制因子；転移成長因子；α−１アンチトリプシン；アルブミン；α−ラクトアルブミン（alpha-lactalbumin）；アポリポタンパク質Ｅ；赤血球生成因子；高糖鎖化赤血球生成因子；アンジオポエチン（angiopoietin）；ヘモグロビン；トロンビン（thrombin）；トロンビン受容体活性ペプチド；トロンボモジュリン（thrombomodulin）；血液因子ＶＩＩ；血液因子ＶＩＩａ；血液因子ＶＩＩＩ；血液因子ＩＸ；血液因子ＸＩＩＩ；プラスミノーゲン活性因子；フィブリン結合ペプチド；ウロキナーゼ；ストレプトキナーゼ；ヒルディン（hirudin）；タンパク質Ｃ；Ｃ反応性タンパク質；レニン抑制剤；コラゲナーゼ抑制剤；スーパーオキシドジスムターゼ；レプチン；血小板由来成長因子；上皮細胞成長因子；表皮細胞成長因子；アンジオスタチン（angiostatin）；アンジオテンシン（angiotensin）；骨形成成長因子；骨形成促進タンパク質；カルシトニン；インスリン；アトリオペプチン；軟骨誘導因子；エルカトニン（elcatonin）；結合組織活性因子；組織因子経路インヒビター（tissue factor pathway inhibitor）；卵胞刺激ホルモン；黄体形成ホルモン；黄体形成ホルモン放出ホルモン；神経成長因子類；アキソジェネシス因子−１（axogenesis factor-1）；脳性ナトリウム利尿ペプチド（brain-natriuretic peptide）；グリア細胞由来神経栄養因子（glial derived neurotrophic factor）；ネトリン（netrin）；好中球抑制因子（neurophil inhibitor factor）；神経栄養因子；ニュールツリン（neuturin）；副甲状腺ホルモン；リラキシン；セクレチン；ソマトメジン；インスリン様成長因子；副腎皮質ホルモン；グルカゴン；コレシストキニン；膵臓ポリペプチド；ガストリン放出ペプチド；コルチコトロピン放出因子；甲状腺刺激ホルモン；オートタキシン（autotaxin）；ラクトフェリン（lactoferrin）；ミオスタチン（myostatin）； ＡＤＮＰ（activity-dependent neuroprotective protein）、ＢＡＣＥ１（beta-secretase1）、ＡＰＰ（Amyloid Precursor Protein）、ＮＣＡＭ（Neural cell adhesion molecule）、アミロイドβ（Amyloid beta）、タウ（Tau）、ＲＡＧＥ（receptor for advanced glycation endproducts ）、α−シヌクレイン（alpha-synuclein）、またはこれらのアゴニストまたはアンタゴニスト；受容体類、受容体アゴニスト；細胞表面抗原；モノクローナル抗体；ポリクローナル抗体；抗体断片；ウイルス由来ワクチン抗原；１つ以上の受容体アゴニストを活性化させるハイブリッドポリペプチドまたはキメラ（chimeric）ポリペプチド；及びこれらのアナログを含む群からなる群から選択された生理活性物質である、請求項１に記載の脳標的持続型結合体。
【請求項６】
前記トキシンが、メイタンシン（Maytansine）またはその誘導体、オーリスタチン（Auristatin）またはその誘導体、デュオカルマイシン（Duocarmycin）またはその誘導体、及びＰＢＤ（Pyrrolobenzodiazepine）またはその誘導体からなる群から選択され、ＧＬＰ−１（Glucagon like peptide-1）受容体アゴニストが、天然型エキセンジン−３または天然型エキセンジン−４、及びこれらのアナログからなる群から選択されたものであり、ＦＧＦ受容体アゴニストが、ＦＧＦ１またはそのアナログ、ＦＧＦ１９またはそのアナログ、ＦＧＦ２１またはそのアナログ、及びＦＧＦ２３またはそのアナログからなる群から選択され、
インターフェロンが、インターフェロンα、インターフェロンβ及びインターフェロンγからなる群から選択され、
インターフェロン受容体が、インターフェロンα受容体、インターフェロンβ受容体、インターフェロンγ受容体、及び水溶性タイプＩインターフェロン受容体からなる群から選択され、
インターロイキンが、インターロイキン−１、インターロイキン−２、インターロイキン−３、インターロイキン−４、インターロイキン−５、インターロイキン−６、インターロイキン−７、インターロイキン−８、インターロイキン−９、インターロイキン−１０、インターロイキン−１１、インターロイキン−１２、インターロイキン−１３、インターロイキン−１４、インターロイキン−１５、インターロイキン−１６、インターロイキン−１７、インターロイキン−１８、インターロイキン−１９、インターロイキン−２０、インターロイキン−２１、インターロイキン−２２、インターロイキン−２３、インターロイキン−２４、インターロイキン−２５、インターロイキン−２６、インターロイキン−２７、インターロイキン−２８、インターロイキン−２９、及びインターロイキン−３０からなる群から選択され、
インターロイキン受容体が、インターロイキン−１受容体またはインターロイキン−４受容体であり、
酵素が、β−グルコシダーゼ（beta-glucosidase）、α−ガラクトシダーゼ（alpha-galactosidase）、β−ガラクトシダーゼ（beta-galactosidase）、イズロニダーゼ（iduronidase）、イズロン酸−２−スルファターゼ（iduronate-2-sulfatase）、ガラクトース−6−スルファターゼ（Galactose-6-sulfatase）、酸性α−グルコシダーゼ（acid alpha-glucosidase）、酸性セラミダーゼ（acid ceramidase）、酸性スフィンゴミエリナーゼ（acid sphingomyelinsase）、ガラクトセレブロシダーゼ（galactocerebrosidsase）、アリールスルファターゼ（arylsulfatase）Ａ、アリールスルファターゼＢ、β−ヘキソサミニダーゼ（beta-hexosaminidase）Ａ、β−ヘキソサミニダーゼＢ、ヘパリンＮ−スルファターゼ（heparin N-sulfatase）、α−Ｄ−マンノシダーゼ（alpha-D-mannosidase）、β−グルクロニダーゼ（beta-glucuronidase）、Ｎ−アセチルガラクトサミン−６スルファターゼ（N-acetylgalactosamine-6 sulfatase）、リソソーム酸性リパーゼ（lysosomal acid lipase）、α−Ｎ−アセチルグルコサミニダーゼ（alpha-N-acetyl-glucosaminidase）、グルコセレブロシダーゼ（glucocerebrosidase）、ブチリルコリンエステラーゼ（butyrylcholinesterase）、キチナーゼ（Chitinase）、グルタミン酸デカルボキシラーゼ（glutamate decarboxylase）、イミグルセラーゼ（imiglucerase）、リパーゼ（lipase）、ウリカーゼ（Uricase）、血小板活性因子アセチルヒドロラーゼ（Platelet-Activating Factor Acetylhydrolase）、中性エンドペプチダーゼ（neutral endopeptidase）、ミエロペルオキシダーゼ（myeloperoxidase）、α−ガラクトシダーゼＡ、アガルシダーゼα（agalsidase alpha）、アガルシダーゼβ、α−Ｌ−イズロニダーゼ（alpha-L-iduronidase）、ブチリルコリンエステラーゼ（butyrylcholinesterase）、キチナーゼ（chitinase）、グルタミン酸デカルボキシラーゼ（glutamate decarboxylase）、及びイミグルセラーゼ（imiglucerase）からなる群から選択され、
インターロイキン結合タンパク質が、ＩＬ−１８ｂｐであり、
サイトカイン結合タンパク質が、ＴＮＦ（Tumor necrosis factor）結合タンパク質であり、
神経成長因子類が、神経成長因子、毛様体神経栄養因子（cilliary neurotrophic factor）、アキソジェネシス因子−１（axogenesis factor-1）、脳性ナトリウム利尿ペプチド（brain-natriuretic peptide）、グリア細胞由来神経栄養因子（glial derived neurotrophic factor）、ネトリン（netrin）、好中球抑制因子（neurophil inhibitor factor）、神経栄養因子、及びニュールツリン（neuturin）からなる群から選択され、
ミオスタチン受容体が、ＴＮＦＲ（Ｐ７５）、ＴＮＦＲ（Ｐ５５）、ＩＬ−１受容体、ＶＥＧＦ受容体、及びＢ細胞活性因子受容体からなる群から選択され、
ミオスタチン受容体アンタゴニストが、ＩＬ１−Ｒａであり、
細胞表面抗原が、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ７、ＣＤ１１ａ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１８、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２３、ＣＤ２５、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ４５、及びＣＤ６９からなる群から選択され、
抗体断片類が、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）2及びＦｄからなる群から選択される、請求項５に記載の脳標的持続型結合体。
【請求項７】
前記ＧＬＰ−１受容体アゴニストが、天然型エキセンジン−４、天然型エキセンジン−４のＮ末端アミン基が除去されたエキセンジン−４、天然型エキセンジン−４のＮ末端アミン基がヒドロキシル基に置換されたエキセンジン−４、天然型エキセンジン−４のＮ末端アミン基がジメチル基に修飾されたエキセンジン−４、天然型エキセンジン−４のＮ末端アミン基がカルボキシル基に置換されたエキセンジン−４、天然型エキセンジン−４の一番目のアミノ酸（ヒスチジン）のα炭素が除去されたエキセンジン−４；及び前記エキセンジン−４の１２番目のアミノ酸（リジン）がセリンに置換されたエキセンジン−４及び前記エキセンジン−４の１２番目のアミノ酸（リジン）がアルギニンに置換されたエキセンジン−４からなる群から選択される、請求項６に記載の脳標的持続型結合体。
【請求項８】
前記受容体媒介輸送による経路が、インスリン受容体（insulin receptor）、トランスフェリン受容体（transferrin receptor）、低密度リポタンパク質受容体（low density lipoprotein receptor）、低密度リポタンパク質受容体関連タンパク質（Low density lipoprotein receptor‐related protein）、レプチン受容体（leptin receptor）、ニコチン性アセチルコリン受容体（nicotinic acetylcholine receptor）、グルタチオン輸送体（Glutathione transporter）、カルシウム依存性カリウムチャネル（calcium-activated potassium channel）、及びＲＡＧＥ（receptor for advanced glycation endproducts）、及び前記受容体のリガンド及び前記受容体またはリガンドに結合する抗体からなる群から選択されたいずれか一つを介して受容体媒介輸送の経路によって血液脳関門を通過する、請求項４に記載の脳標的持続型結合体。
【請求項９】
前記Ｌ1が、ＦのＮ末端の領域に連結されて、Ｌ2が、ＦのＣ末端の領域に連結されたものである、請求項１に記載の脳標的持続型結合体。
【請求項１０】
前記式（１）のＦ−Ｌ2−Ｙが、
下記式（２）で表される構造である、請求項１に記載の脳標的持続型結合体：
2020501611.tif 000001
（２）
ここで、
Ｆa及びＦbが、それぞれのヒンジ領域、ＣＨ２ドメイン、及びＣＨ３ドメインを含む免疫グロブリンＦｃ領域を含む一本のポリペプチド鎖であって、Ｆa及びＦbが、ヒンジ領域でジスルフィド結合で互いに連結されて、これにより前記結合体が、Ｆｃ切片を含み、Ｆaが、Ｌ1と共有結合で連結され、
それぞれのＢＴＰa1、......、ＢＴＰanが、互いに同じか異なる脳標的ペプチドであり、
それぞれのＢＴＰb1、......、ＢＴＰbn’が、互いに同じか異なる脳標的ペプチドであり、
それぞれのＬ2a1、......、Ｌ2anが、互いに同じか異なるペプチド性リンカーであり、
それぞれのＬ2b1、......、Ｌ2bn’が、互いに同じか異なるペプチド性リンカーであり、
この時、ｎ及びｎ’が、それぞれ独立して自然数である。
【請求項１１】
前記Ｌ1が、ＦaのＮ末端に連結されたものであり、Ｌ2a1及びＬ2b1が、それぞれＦa及びＦbのＣ末端に連結されたものである、請求項１０に記載の脳標的持続型結合体。
【請求項１２】
ｎ＝ｎ’であって、それぞれＬ2a1＝Ｌ2b1、......、Ｌ2an＝Ｌ2bn’とＢＴＰa1＝ ＢＴＰb1、......、 ＢＴＰan＝ ＢＴＰbn’の条件を満足する、請求項１１に記載の脳標的持続型結合体。
【請求項１３】
前記Ｌ1が、ＸのＮ末端アミン基、リジンの側鎖に位置するアミン基、またはシステインの側鎖に位置する−ＳＨ基（チオール基）に連結されたものである、請求項１０に記載の脳標的持続型結合体。
【請求項１４】
前記生理活性物質であるＸが、２個〜１０００個のアミノ酸からなるポリペプチドである、請求項１０に記載の脳標的持続型結合体。
【請求項１５】
前記ｎ及びｎ’が、１〜５である、請求項１０に記載の脳標的持続型結合体。
【請求項１６】
前記Ｌ1が、０．５〜１００ｋＤａのサイズである非ペプチド性リンカーである、請求項１０に記載の脳標的持続型結合体。
【請求項１７】
前記非ペプチド性リンカーが、ポリエチレングリコールである、請求項１６に記載の脳標的持続型結合体。
【請求項１８】
前記Ｌ2が、ペプチド性リンカーであって、（ＧＳ）ｍ、（ＧＧＳ）ｍ、（ＧＧＧＳ）ｍ、または（ＧＧＧＧＳ）ｍであり、ｍが、１〜１０である、請求項１に記載の脳標的持続型結合体。
【請求項１９】
前記Ｌ1及びＬ2のいずれかが、ペプチド性リンカーであって、もう一つが、非ペプチド性リンカーである、請求項１に記載の脳標的持続型結合体。
【請求項２０】
前記Ｌ1が非ペプチド性リンカーであり、Ｌ2がペプチド性リンカーである時、ペプチド性リンカーが、０〜１０００個のアミノ酸を含むものである、請求項１に記載の脳標的持続型結合体。
【請求項２１】
前記Ｌ1及びＬ2のいずれかまたは両方が非ペプチド性リンカーである時、非ペプチド性リンカーが、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、エチレングリコール−プロピレングリコール共重合体、ポリオキシエチル化ポリオール、ポリビニルアルコール、多糖類、デキストラン、ポリビニルエチルエーテル、生分解性高分子、脂質重合体、キチン類、ヒアルロン酸、脂肪酸、高分子重合体、低分子化合物、ヌクレオチド及びこれらの組み合わせからなる群から選択されたものである、請求項１または１０に記載の脳標的持続型結合体。
【請求項２２】
前記Ｌ1及びＬ2のいずれかまたは両方がペプチド性リンカーである時、前記ＸとＦ、またはＦとＹが、共有化学結合、非共有化学結合、またはこれらの組み合わせでＬ1及びＬ2によって互いに結合され、Ｌ1及びＬ2が、０〜１０００個のアミノ酸を含むものである、請求項１に記載の脳標的持続型結合体。
【請求項２３】
Ｌ1及びＬ2のいずれかまたは両方がペプチド性リンカーである時、Ｌ1及びＬ2が、０個のアミノ酸からなるものであって、
（ｉ）ＸとＦ、またはＦとＹが、ペプチド結合によって結合されたものであり；または
（ｉｉ）ＸとＦ、及びＦとＹが、ペプチド結合によって結合されたものである、請求項１に記載の脳標的持続型結合体。
【請求項２４】
Ｌ1及びＬ2のいずれかはペプチド性リンカーであり、このうち他の一つは非ペプチド性リンカーである時、
ペプチド性リンカーが、０〜１０００個のアミノ酸を含むリンカーであり、
非ペプチド性リンカーが、ポリエチレングリコールである、請求項１に記載の脳標的持続型結合体。
【請求項２５】
Ｆが、免疫グロブリンＦｃ領域を含むものである、請求項１に記載の脳標的持続型結合体。
【請求項２６】
前記免疫グロブリンＦｃ領域が、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、及びＣＨ４ドメインからなる群から選択された１つ〜４つのドメインを含む、請求項２５に記載の脳標的持続型結合体。
【請求項２７】
前記免疫グロブリンＦｃ領域が、ヒンジ領域をさらに含むものである、請求項２５に記載の脳標的持続型結合体。
【請求項２８】
前記免疫グロブリンＦｃ領域が、ＩｇＧのＦｃ領域である、請求項２５または１０に記載の脳標的持続型結合体。
【請求項２９】
前記免疫グロブリンＦｃ領域が、ＩｇＧ４ Ｆｃ領域である、請求項２８に記載の脳標的持続型結合体。
【請求項３０】
前記免疫グロブリンＦｃ領域が、ヒト配列の非糖鎖化ＩｇＧ４ Ｆｃ領域である、請求項２９に記載の脳標的持続型結合体。
【請求項３１】
Ｌ1によってＸのＮ末端及びＦのＮ末端が連結されたものであり、Ｌ2によってＹのＮ末端及びＦのＣ末端が連結されたものである、請求項１に記載の脳標的持続型結合体。
【請求項３２】
Ｌ1の一末端が、Ｘのリジン残基またはシステイン残基に、Ｌ1の他の末端が、ＦのＮ末端に連結されたものであり、
Ｌ2によってＹのＮ末端及びＦのＣ末端が連結されたものである、請求項１に記載の脳標的持続型結合体。
【請求項３３】
下記段階を含む、請求項１に記載の脳標的持続型結合体を製造する方法：
（ｉ）（ａ）生理活性物質であるＸ、ペプチド性または非ペプチド性リンカーであるＬ1、及び免疫グロブリンＦｃ領域を含むＦが結合された、Ｘ−Ｌ1−Ｆ、及び（ｂ）脳標的ペプチドであるＹ 、ペプチド性または非ペプチド性リンカーであるＬ2が結合されたＬ2−Ｙを製造する段階；及び
（ｉｉ）前記（ａ）Ｘ−Ｌ1−Ｆ及び（ｂ）Ｌ2−Ｙを連結する段階。
【請求項３４】
下記段階を含む、請求項１に記載の脳標的持続型結合体を製造する方法：
（ｉ）（ａ）生理活性物質であるＸ、及びペプチド性または非ペプチド性リンカーであるＬ1が結合された、Ｘ−Ｌ1及び（ｂ）脳標的ペプチドであるＹ、ペプチド性または非ペプチド性リンカーであるＬ2、及び免疫グロブリンＦｃ領域を含むＦが結合されたＦ−Ｌ2−Ｙを製造する段階；及び
（ｉｉ）前記（ａ）Ｘ−Ｌ1及び（ｂ）Ｆ−Ｌ2−Ｙを連結する段階。
【請求項３５】
下記段階を含む、請求項１に記載の脳標的持続型結合体を製造する方法：
（ｉ）脳標的ペプチドであるＹ、ペプチド性または非ペプチド性リンカーであるＬ2、及び免疫グロブリンＦｃ領域を含むＦが結合されたＦ−Ｌ2−Ｙを製造する段階；及び
（ｉｉ）前記Ｆ−Ｌ2−ＹとＸとをペプチド性または非ペプチド性リンカーであるＬ1で連結する段階。
【請求項３６】
（ａ）のＬ1が、ペプチド性リンカーであり、（ｂ）のＬ2が、非ペプチド性リンカーである、請求項３３〜３５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３７】
（ａ）のＬ1が、非ペプチド性リンカーであり、（ｂ）のＬ2が、ペプチド性リンカーである、請求項３３〜３５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３８】
前記Ｌ1が、両末端官能基を有する非ペプチド性重合体であって、前記両末端官能基が、それぞれアミン反応基（amine‐reactive group）またはチオール反応基（thiol‐reactive group）であり、前記両末端官能基が、互いに同じ種類であるか、異なる種類である、請求項１に記載の脳標的持続型結合体。
【請求項３９】
非ペプチド性リンカー及びＸ及びＹが、それぞれの官能基によって連結され、この時、非ペプチド性リンカーの官能基がアルデヒド基、マレイミド（maleimide）基及びスクシンイミド誘導体（succinimide derivative）からなる群から選択されるものである、請求項３３〜３５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４０】
配列番号２、４、６、８、１０、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８及び４０で表されるアミノ酸配列の中で選択されるいずれか一つのアミノ酸配列からなる、脳標的ペプチド。
【請求項４１】
請求項４０に記載の脳標的ペプチドをコードする、分離されたポリヌクレオチド。
【請求項４２】
請求項４１に記載のポリヌクレオチドを含む、組換え発現ベクター。
【請求項４３】
請求項４２に記載の組換え発現ベクターを含む、形質転換体。