【手続補正書】
【提出日】令和3年9月1日(2021.9.1)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくとも１つのヘテロ二量体を含む、Ｔ細胞調節多量体ポリペプチド（ＴＭＭＰ）であって、
前記少なくとも１つのヘテロ二量体が、
（ａ）
（ｉ）ペプチドエピトープであって、ペプチドは、約４アミノ酸〜約２０アミノ酸の長さを有する、ペプチドエピトープ；および
（ｉｉ）β２ミクログロブリン（β２М）ポリペプチドである第１のクラスＩ主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）ポリペプチド
を含む第１のポリペプチド、
（ｂ）
クラスＩ  ＭＨＣ重鎖ポリペプチドである第２のクラスＩ  ＭＨＣポリペプチド
を含む第２のポリペプチド、ならびに
（ｃ）２つの免疫調節ポリペプチド
を含み、
前記第１のポリペプチドおよび／または第２のポリペプチドが、前記２つの免疫調節ポリペプチドを含み、
前記２つの免疫調節ポリペプチドが、それぞれＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％のアミノ酸配列同一性を有しかつＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５に記載のアミノ酸配列に対して１つまたは複数のアミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含む変異インターロイキン２（ＩＬ−２）ポリペプチドを含み、
前記変異ＩＬ−２ポリペプチドが、ＩＬ−２受容体（ＩＬ−２Ｒ）に結合し、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）アッセイにおいて同一の条件下でアッセイした場合に、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５に記載のアミノ酸配列を含む対照ＩＬ−２ポリペプチドのＩＬ−２Ｒポリペプチドに対する結合親和性と比較して、ヒト野生型ＩＬ−２Ｒに対する低下した結合親和性を示し、かつ
前記ペプチドエピトープが、ＷＴ−１ポリペプチド、ＮＹ−ＥＳＯ−１ポリペプチド、サバイビンポリペプチド、変異ｐ５３ポリペプチド、Ｒａｓポリペプチド、ＭＡＧＥ−Ａ３ポリペプチド、ＭＡＲＴ１ポリペプチド、サイクリンＢ１ポリペプチド、Ｎ−ｍｙｃがん原遺伝子（ＭＹＣＮ）ポリペプチド、Ｒａｓホモログ遺伝子ファミリーメンバーＣ（ＲｈｏＣ）ポリペプチド、チロシナーゼ関連タンパク質−２（ＴＲＰ−２）、ＥＴＶ６−ＡＭＬポリペプチド、および前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）ポリペプチドからなる群より選択されるポリペプチドのエピトープを提示し、
任意で、前記ＴＭＭＰが、免疫グロブリン（Ｉｇ）Ｆｃポリペプチドまたは非Ｉｇスキャフォールドを含む、
前記Ｔ細胞調節多量体ポリペプチド（ＴＭＭＰ）。
【請求項２】
（ａ１）第１のポリペプチドが、Ｎ末端からＣ末端の順に、
（ｉ）ペプチドエピトープ、
（ｉｉ）任意のリンカー、および
（ｉｉｉ）β２Мポリペプチド
を含み、かつ
（ｂ１）第２のポリペプチドが、Ｎ末端からＣ末端の順に、
（ｉ）第１の低親和性ＩＬ−２変異ポリペプチド、
（ｉｉ）任意のリンカー、
（ｉｉｉ）第２の低親和性ＩＬ−２変異ポリペプチド、
（ｉｖ）任意のリンカー、
（ｖ）ＭＨＣ重鎖ポリペプチド、
（ｖｉ）任意のリンカー、および
（ｖｉｉ）変異Ｉｇ  Ｆｃポリペプチド
を含む、
請求項１に記載のＴＭＭＰ。
【請求項３】
（ａ１）第１のポリペプチドが、Ｎ末端からＣ末端の順に、
（ｉ）ペプチドエピトープ、
（ｉｉ）任意のリンカー、および
（ｉｉｉ）β２Мポリペプチド
を含み、かつ
（ｂ１）第２のポリペプチドが、Ｎ末端からＣ末端の順に、
（ｉ）ＭＨＣ重鎖ポリペプチド、
（ｉｉ）任意のリンカー、
（ｉｉｉ）変異Ｉｇ  Ｆｃポリペプチド、
（ｉｖ）任意のリンカー、
（ｖ）第１の低親和性ＩＬ−２変異ポリペプチド、
（ｖｉ）任意のリンカー、および
（ｖｉｉ）第２の低親和性ＩＬ−２変異ポリペプチド
を含む、
請求項１に記載のＴＭＭＰ。
【請求項４】
ＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドが、ＨＬＡ−Ａ重鎖アミノ酸配列、任意で、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５３に記載のＨＬＡ−Ａ重鎖配列に対して少なくとも８５％のアミノ酸配列を有するＨＬＡ−Ａ重鎖アミノ酸配列を含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載のＴＭＭＰ。
【請求項５】
少なくとも１つの低親和性ＩＬ−２変異ポリペプチドが、１〜１０のアミノ酸置換を有するＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５のアミノ酸配列を含む、請求項１〜４のいずれか一項に記載のＴＭＭＰ。
【請求項６】
少なくとも１つの低親和性ＩＬ−２変異ポリペプチドが、Ｘ１がＨｉｓ以外の任意のアミノ酸であり、かつＸ２がＰｈｅ以外の任意のアミノ酸であり、任意で、Ｘ１がＡｌａであるか、Ｘ２がＡｌａであるか、またはＸ１がＡｌａでありかつＸ２がＡｌａである、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２５のアミノ酸配列
を含む、請求項１〜５のいずれか一項に記載のＴＭＭＰ。
【請求項７】
少なくとも１つの低親和性ＩＬ−２変異ポリペプチドが、残基１６および残基４２にＡｌａを含む、請求項６に記載のＴＭＭＰ。
【請求項８】
β２Мポリペプチド中のＣｙｓ残基と、ＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチド中のＣｙｓ残基との間にジスルフィド結合を含む、請求項１〜７のいずれか一項に記載のＴＭＭＰ。
【請求項９】
β２Мポリペプチド中の１２位におけるＣｙｓ残基と、ＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチド中の２３６位におけるＣｙｓ残基との間にジスルフィド結合を含む、請求項１〜８のいずれか一項に記載のＴＭＭＰ。
【請求項１０】
第１のポリペプチドが、エピトープとβ２Мポリペプチドとの間にＣｙｓ含有リンカーを含み、ＴＭＭＰが、Ｃｙｓ含有リンカー中のＣｙｓとＭＨＣ重鎖中のＣｙｓとの間にジスルフィド結合を含む、請求項１〜７のいずれか一項に記載のＴＭＭＰ。
【請求項１１】
Ｉｇ  Ｆｃポリペプチドが、図２−１〜図２−４のＡ〜Ｇのいずれか１つに記載されたヒトＩｇＧ１  Ｆｃポリペプチドに対して少なくとも約８５％のアミノ酸配列同一性を含む、請求項１〜１０のいずれか一項に記載のＴＭＭＰ。
【請求項１２】
Ｉｇ  Ｆｃポリペプチドが、ヒトＩｇＧ１  Ｆｃポリペプチドの変異体、任意で、図２−１〜図２−４のＡ〜Ｇのいずれか１つに記載されたヒトＩｇＧ１  Ｆｃポリペプチドに対して少なくとも約９５％のアミノ酸配列同一性を含むヒトＩｇＧ１  Ｆｃポリペプチドの変異体を含み、任意で、Ｉｇ  Ｆｃポリペプチドが図２−４のＧのアミノ酸配列を含む、請求項１〜１１のいずれか一項に記載のＴＭＭＰ。
【請求項１３】
ペプチドエピトープが、ＷＴ−１ポリペプチドのエピトープを提示する、請求項１〜１１のいずれか一項に記載のＴＭＭＰ。
【請求項１４】
ペプチドエピトープが、ＮＹ−ＥＳＯ−１ポリペプチドのエピトープを提示する、請求項１〜１１のいずれか一項に記載のＴＭＭＰ。
【請求項１５】
ペプチドエピトープが、サバイビンポリペプチドのエピトープを提示する、請求項１〜１１のいずれか一項に記載のＴＭＭＰ。
【請求項１６】
請求項１〜１５のいずれか一項に記載の第１および第２のヘテロ二量体を含むＴＭＭＰであって、第１および第２のヘテロ二量体が、同一でありかつ第１および第２のヘテロ二量体のＩｇ  Ｆｃポリペプチド間の１つまたは複数のジスルフィド結合によって互いに共有結合している、前記ＴＭＭＰ。
【請求項１７】
請求項１〜１６のいずれか一項に記載のＴＭＭＰを含む、薬学的組成物。
【請求項１８】
請求項１〜１６のいずれか一項に記載の第１および第２のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む、核酸。
【請求項１９】
請求項１８に記載の核酸を含む、発現ベクター。
【請求項２０】
請求項１８に記載の核酸または請求項１９に記載のベクターで形質転換された宿主細胞。
【請求項２１】
Ｔ細胞を、請求項１〜１６のいずれか一項に記載のＴＭＭＰと接触させる段階を含む、インビトロでＴ細胞の活性を選択的に調節する方法。
【請求項２２】
個体における癌を治療する方法において使用するための、請求項１〜１６のいずれか一項に記載のＴＭＭＰまたは請求項１７に記載の薬学的組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００３】
概要
本開示は、関連共免疫調節ポリペプチドに対する低い結合親和性を示す免疫調節ポリペプチドを含むＴ細胞調節多量体ポリペプチド（ＴＭＭＰ）を提供する。ＴＭＭＰは、Ｔ細胞の活性を調節するのに、また個体における免疫応答を調節するのに有用である。
[本発明1001]
（ａ）第1のポリペプチドおよび（ｂ）第2のポリペプチドを含む、Ｔ細胞調節多量体ポリペプチドであって、
（ａ）第1のポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端の順に、（ｉ）エピトープおよび（ｉｉ）第1の主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）ポリペプチドを含み、
（ｂ）第2のポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端の順に、（ｉ）第2のＭＨＣポリペプチドおよび（ｉｉ）任意選択的に免疫グロブリン（Ｉｇ）Ｆｃポリペプチドまたは非Ｉｇスキャフォールドを含み、
前記多量体ポリペプチドは1つまたは複数の免疫調節ドメインを含み、前記1つまたは複数の免疫調節ドメインのうちの少なくとも1つは、
（Ａ）前記第1のポリペプチドのＣ末端にあるか、
（Ｂ）前記第2のポリペプチドのＮ末端にあるか、
（Ｃ）前記第2のポリペプチドのＣ末端にあるか、または、
（Ｄ）前記第1のポリペプチドのＣ末端および前記第2のポリペプチドのＮ末端にあり、
前記1つまたは複数の免疫調節ドメインのうちの少なくとも1つは、関連共免疫調節ポリペプチドに対する対応する野生型免疫調節ポリペプチドの親和性と比較して、前記関連共免疫調節ポリペプチドに対する低い親和性を示す変異免疫調節ポリペプチドであり、
前記エピトープは、
（ｉ）前記Ｔ細胞調節多量体ポリペプチドが第2のＴ細胞に結合する親和性よりも少なくとも25％高い親和性で、前記Ｔ細胞調節多量体ポリペプチドが第1のＴ細胞に結合し、ここで、第1のＴ細胞は、前記関連共免疫調節ポリペプチドと、前記エピトープに少なくとも10−7Ｍの親和性で結合するＴ細胞受容体（ＴＣＲ）とを、その表面上に発現し、ここで、第2のＴ細胞は、前記関連共免疫調節ポリペプチドをその表面上に発現するが、前記エピトープに少なくとも10−7Ｍの親和性で結合するＴＣＲをその表面上に発現しない
ように、かつ／または、
（ｉｉ）関連共免疫調節ポリペプチドに対する、野生型免疫調節ポリペプチドを含む対照Ｔ細胞調節多量体ポリペプチドの結合親和性と、前記関連共免疫調節ポリペプチドに対する、前記野生型免疫調節ポリペプチドの変異体を含む前記Ｔ細胞調節多量体ポリペプチドの結合親和性の比率が、バイオレイヤー干渉法で測定して1．5：1〜106：1の範囲内である
ように、Ｔ細胞上のＴＣＲに少なくとも10−7Ｍの親和性で結合する、
前記Ｔ細胞調節多量体ポリペプチド。
[本発明1002]
（ａ）前記Ｔ細胞調節多量体ポリペプチドが、それが前記第2のＴ細胞に結合する親和性よりも少なくとも50％、少なくとも2倍、少なくとも5倍、もしくは少なくとも10倍高い親和性で、前記第1のＴ細胞に結合する、および／または、
（ｂ）前記変異免疫調節ポリペプチドが、約10−4Ｍ〜約10−7Ｍ、約10−4Ｍ〜約10−6Ｍ、約10−4Ｍ〜約10−5Ｍの親和性で、前記共免疫調節ポリペプチドに結合する、および／または、
（ｃ）関連共免疫調節ポリペプチドに対する、野生型免疫調節ポリペプチドを含む対照Ｔ細胞調節多量体ポリペプチドの結合親和性と、前記関連共免疫調節ポリペプチドに対する、前記野生型免疫調節ポリペプチドの変異体を含む前記Ｔ細胞調節多量体ポリペプチドの結合親和性の比率が、バイオレイヤー干渉法で測定して少なくとも10：1、少なくとも50：1、少なくとも102：1、もしくは、少なくとも103：1である、
本発明1001のＴ細胞調節多量体ポリペプチド。
[本発明1003]
前記第2のポリペプチドがＩｇ  Ｆｃポリペプチドを含み、任意選択的に、前記Ｉｇ  Ｆｃポリペプチド、任意選択的に、ＩｇＧ1  Ｆｃポリペプチドが、Ｎ297Ａ、Ｌ234Ａ、Ｌ235Ａ、Ｌ234Ｆ、Ｌ235Ｅ、およびＰ331Ｓから選択される1つまたは複数のアミノ酸置換を含む、本発明1001または本発明1002のＴ細胞調節多量体ポリペプチド。
[本発明1004]
前記第1のポリペプチドが、前記エピトープと前記第1のＭＨＣポリペプチドとの間にペプチドリンカーを含む、および／または、前記第1のポリペプチドが、前記変異免疫調節ポリペプチドと前記第2のＭＨＣポリペプチドとの間にペプチドリンカーを含む、本発明1001〜1003のいずれかのＴ細胞調節多量体ポリペプチド。
[本発明1005]
前記変異免疫調節ポリペプチドの2つ以上のコピーを含む、本発明1001〜1004のいずれかのＴ細胞調節多量体ポリペプチド。
[本発明1006]
前記野生型免疫調節ポリペプチドが、ＩＬ−2、4−1ＢＢＬ、ＰＤ−Ｌ1、ＣＤ80、ＣＤ86、ＩＣＯＳ−Ｌ、ＯＸ−40Ｌ、ＦａｓＬ、ＪＡＧ1、ＴＧＦβ、ＣＤ70、およびＩＣＡＭからなる群から選択される、本発明1001〜1005のいずれかのＴ細胞調節多量体ポリペプチド。
[本発明1007]
（ａ）前記第1のＭＨＣポリペプチドがβ2−ミクログロブリンポリペプチドであり、前記第2のＭＨＣポリペプチドがＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドである、または、
（ｂ）前記第1のＭＨＣポリペプチドがＭＨＣクラスＩＩα鎖ポリペプチドであり、前記第2のＭＨＣポリペプチドがＭＨＣクラスＩＩβ鎖ポリペプチドである、
本発明1001〜1006のいずれかのＴ細胞調節多量体ポリペプチド。
[本発明1008]
多量体ポリペプチドがＦｃポリペプチドを含み、前記Ｉｇ  Ｆｃポリペプチドが、ＩｇＧ1  Ｆｃポリペプチド、ＩｇＧ2  Ｆｃポリペプチド、ＩｇＧ3  Ｆｃポリペプチド、ＩｇＧ4  Ｆｃポリペプチド、ＩｇＡ  Ｆｃポリペプチド、またはＩｇＭ  Ｆｃポリペプチドである、本発明1001〜1007のいずれかのＴ細胞調節多量体ポリペプチド。
[本発明1009]
（ａ）前記第1のポリペプチドと前記第2のポリペプチドが非共有結合している、または、
（ｂ）前記第1のポリペプチドと前記第2のポリペプチドが互いに共有結合しており、任意選択的に、前記共有結合はジスルフィド結合を介している、
本発明1001〜1008のいずれかのＴ細胞調節多量体ポリペプチド。
[本発明1010]
前記エピトープががんエピトープである、本発明1001〜1009のいずれかのＴ細胞調節多量体ポリペプチド。
[本発明1011]
前記第1のポリペプチドと前記第2のポリペプチドの一方がＩｇ  Ｆｃポリペプチドを含み、前記Ｉｇ  Ｆｃポリペプチドには薬物がコンジュゲートしている、本発明1001〜1010のいずれかのＴ細胞調節多量体ポリペプチド。
[本発明1012]
結合親和性がバイオレイヤー干渉法で測定される、本発明1001〜1011のいずれかのＴ細胞調節多量体ポリペプチド。
[本発明1013]
（Ａ）第1のヘテロ二量体および（Ｂ）第2のヘテロ二量体を含む、多量体Ｔ細胞調節ポリペプチドであって、
（Ａ）第1のヘテロ二量体は、（ａ）第1のポリペプチドおよび（ｂ）第2のポリペプチドを含み、
（ａ）第1のポリペプチドは、（ｉ）ペプチドエピトープおよび（ｉｉ）第1の主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）ポリペプチドを含み、
（ｂ）第2のポリペプチドは、（ｉ）第2のＭＨＣポリペプチドを含み、
前記第1のヘテロ二量体は、1つまたは複数の免疫調節ポリペプチドを含み、
（Ｂ）第2のヘテロ二量体は、（ａ）第1のポリペプチドおよび（ｂ）第2のポリペプチドを含み、
（ａ）第1のポリペプチドは、（ｉ）ペプチドエピトープおよび（ｉｉ）第1のＭＨＣポリペプチドを含み、
（ｂ）第2のポリペプチドは、（ｉ）第2のＭＨＣポリペプチドを含み、
前記第2のヘテロ二量体は、1つまたは複数の免疫調節ポリペプチドを含み、
前記第1のヘテロ二量体と第2のヘテロ二量体は互いに共有結合している、
前記多量体Ｔ細胞調節ポリペプチド。
[本発明1014]
前記第1のヘテロ二量体の前記免疫調節ポリペプチドと前記第2のヘテロ二量体の前記免疫調節ポリペプチドの両方が、ＩＬ−2、4−1ＢＢＬ、ＰＤ−Ｌ1、ＣＤ80、ＣＤ86、ＩＣＯＳ−Ｌ、ＯＸ−40Ｌ、ＦａｓＬ、ＪＡＧ1、ＴＧＦβ、ＣＤ70、およびＩＣＡＭからなる群から選択される、本発明1013の多量体Ｔ細胞調節ポリペプチド。
[本発明1015]
本発明1001〜1014のいずれかのＴ細胞調節多量体ポリペプチドの前記第1および前記第2のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む、1種または複数種の核酸。
[本発明1016]
（ａ1）本発明1001〜1014のいずれかのＴ細胞調節多量体ポリペプチドと、
（ｂ1）薬学的に許容される賦形剤と
を含む、または、
（ａ2）本発明1015の1種または複数種の核酸と、
（ｂ2）薬学的に許容される賦形剤と
を含む、
組成物。
[本発明1017]
本発明1001〜1014のいずれかのＴ細胞調節多量体ポリペプチドの有効量を個体に投与する段階を含む、個体における免疫応答を調節するための方法であって、
前記投与する段階は、エピトープ特異的Ｔ細胞応答およびエピトープ非特異的Ｔ細胞応答を誘導し、
前記エピトープ特異的Ｔ細胞応答と前記エピトープ非特異的Ｔ細胞応答の比率が少なくとも2：1である、
前記方法。
[本発明1018]
標的Ｔ細胞および非標的Ｔ細胞を含むＴ細胞の混合集団を本発明1001〜1014のいずれかの多量体ポリペプチドと接触させる段階を含む、共刺激ポリペプチドを標的Ｔ細胞へと選択的に送達するための方法であって、
前記標的Ｔ細胞は、前記多量体ポリペプチド内に存在するエピトープに特異的であり、
前記接触させる段階は、前記多量体ポリペプチド内に存在する前記共刺激ポリペプチドを前記標的Ｔ細胞へと送達する、
前記方法。
[本発明1019]
個体から得たＴ細胞の混合集団において、目的のエピトープに結合する標的Ｔ細胞の存在を検出するための方法であって、
（ａ）Ｔ細胞の前記混合集団を本発明1001〜1014のいずれかの多量体ポリペプチドとインビトロで接触させる段階であって、前記多量体ポリペプチドは前記目的のエピトープを含む、段階と、
（ｂ）前記接触させる段階に応答したＴ細胞の活性化および／または増殖を検出する段階であって、活性化および／または増殖Ｔ細胞は前記標的Ｔ細胞の存在を示す、段階と、
を含む、前記方法。
[本発明1020]
関連共免疫調節ポリペプチドに対する対応する親野生型免疫調節ポリペプチドの親和性と比較して、前記関連共免疫調節ポリペプチドに対する低い親和性を示す1つまたは複数の変異免疫調節ポリペプチドを含むＴ細胞調節多量体ポリペプチドを得るための方法であって、
前記方法は、複数のメンバーを含むＴ細胞調節多量体ポリペプチドのライブラリから、前記関連共免疫調節ポリペプチドに対する低い親和性を示すメンバーを選択する段階を含み、
前記複数のメンバーは、（ａ）第1のポリペプチドおよび（ｂ）第2のポリペプチドを含み、
（ａ）第1のポリペプチドは、（ｉ）エピトープおよび（ｉｉ）第1の主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）ポリペプチドを含み、
（ｂ）第2のポリペプチドは、（ｉ）第2のＭＨＣポリペプチドおよび（ｉｉ）任意選択的に免疫グロブリン（Ｉｇ）Ｆｃポリペプチドまたは非Ｉｇスキャフォールドを含み、
前記ライブラリの前記メンバーは、前記第1のポリペプチド、前記第2のポリペプチド、または、前記第1のポリペプチドと前記第2のポリペプチドの両方の内部に存在する複数の変異免疫調節ポリペプチドを含む、
前記方法。
[本発明1021]
関連共免疫調節ポリペプチドに対する対応する親野生型免疫調節ポリペプチドの親和性と比較して、前記関連共免疫調節ポリペプチドに対する低い親和性を示す1つまたは複数の変異免疫調節ポリペプチドを含むＴ細胞調節多量体ポリペプチドを得るための方法であって、
（Ａ）複数のメンバーを含むＴ細胞調節多量体ポリペプチドのライブラリを提供する段階であって、
前記複数のメンバーは、（ａ）第1のポリペプチドおよび（ｂ）第2のポリペプチドを含み、
（ａ）第1のポリペプチドは、（ｉ）エピトープおよび（ｉｉ）第1の主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）ポリペプチドを含み、
（ｂ）第2のポリペプチドは、（ｉ）第2のＭＨＣポリペプチドおよび（ｉｉ）任意選択的に免疫グロブリン（Ｉｇ）Ｆｃポリペプチドまたは非Ｉｇスキャフォールドを含み、
前記ライブラリの前記メンバーは、前記第1のポリペプチド、前記第2のポリペプチド、または、前記第1のポリペプチドと前記第2のポリペプチドの両方の内部に存在する複数の変異免疫調節ポリペプチドを含む、
段階、および
（Ｂ）前記関連共免疫調節ポリペプチドに対する低い親和性を示すメンバーを前記ライブラリから選択する段階
を含む、前記方法。