【手続補正書】
【提出日】令和3年1月6日(2021.1.6)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
異種遺伝子発現のリガンド誘導性制御のための遺伝子スイッチ系をコードする、１または複数のポリヌクレオチドを含む組成物であって、前記遺伝子スイッチ系が、
ａ）トランス活性化ドメインを含む、第１の遺伝子スイッチポリペプチド；
ｂ）リガンド結合性ドメインへと融合させたＤＮＡ結合性ドメインを含む、第２の遺伝子スイッチポリペプチド；および
ｃ）少なくとも１つの異種遺伝子ポリペプチド
を含み、前記第１の遺伝子スイッチポリペプチド、前記第２の遺伝子スイッチポリペプチド、および前記異種遺伝子ポリペプチドのうちの１つが、ポリペプチドリンカーにより、前記第１の遺伝子スイッチポリペプチド、前記第２の遺伝子スイッチポリペプチド、および前記異種遺伝子ポリペプチドのうちの別の１つへと連結されており、前記ポリペプチドリンカーが、切断型リンカーまたはリボソームスキッピングリンカー配列を含む、組成物。
【請求項２】
前記切断型リンカーまたは前記リボソームスキッピングリンカー配列が、２Ａリンカー、ｐ２Ａリンカー、Ｔ２Ａリンカー、Ｆ２Ａリンカー、Ｅ２Ａリンカー、ＧＳＧ−２Ａリンカー、ＧＳＧリンカー、ＳＧＳＧリンカー、フューリンリンクリンカー変異体およびこれらの誘導体のうちの１または複数を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記切断型リンカーまたは前記リボソームスキッピングリンカー配列が、配列番号１４６〜１６２のうちのいずれか１つに示される配列を有する、請求項１または２に記載の組成物。
【請求項４】
前記ポリヌクレオチドまたは前記１または複数のポリヌクレオチドが、抗原結合性ポリペプチドをさらにコードする、請求項１〜３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５】
前記抗原結合性ポリペプチドが、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）およびＴ細胞受容体のうちの少なくとも１つを含む、請求項４に記載の組成物。
【請求項６】
前記抗原結合性ポリペプチドが、ＣＡＲを含み、前記ＣＡＲが、ＣＤ１９、ＣＤ３３、ＢＣＭＡ、ＣＤ４４、α−葉酸受容体、ＣＡＩＸ、ＣＤ３０、ＲＯＲ１、ＣＥＡ、ＥＧＰ−２、ＥＧＰ−４０、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３、葉酸結合性タンパク質、ＧＤ２、ＧＤ３、ＩＬ−１３Ｒ−ａ２、ＫＤＲ、ＥＤＢ−Ｆ、メソテリン、ＣＤ２２、ＥＧＦＲ、ＭＵＣ−１、ＭＵＣ−１６、ＭＡＧＥ−Ａ１、ｈ５Ｔ４、ＰＳＭＡ、ＴＡＧ−７２、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＣＤ１２３、およびＶＥＧＦ−Ｒ２のうちの少なくとも１つに結合することが可能である、請求項５に記載の組成物。
【請求項７】
前記ポリヌクレオチドまたは前記１または複数のポリヌクレオチドが、細胞タグをさらにコードする、請求項４〜６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項８】
前記細胞タグが、ＨＥＲ１切断型変異体またはＣＤ２０切断型変異体のうちの少なくとも１つを含む、請求項７に記載の組成物。
【請求項９】
前記第１の遺伝子スイッチポリペプチド、前記第２の遺伝子スイッチポリペプチド、前記抗原結合性ポリペプチド、および前記細胞タグのうちの少なくとも１つの発現が、プロモーターによりモジュレートされ、前記プロモーターが、組織特異的プロモーターもしくはＥＦ１Ａプロモーター、またはこれらの機能的な変異体である、請求項７に記載の組成物。
【請求項１０】
前記組成物が、異種遺伝子ポリペプチドをコードする、第２のポリヌクレオチドをさらに含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項１１】
前記異種遺伝子ポリペプチドが、サイトカイン、細胞タグ、およびキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）のうちの少なくとも１つを含む、請求項１または１０に記載の組成物。
【請求項１２】
前記サイトカインは、１つのサイトカインを含み、前記サイトカインが、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１２、ＩＬ−２１、ＩＬ−１５、ＩＬ−１５Ｒα、またはＩＬ−１５変異体の融合体のうちの少なくとも１つを含む、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１３】
前記少なくとも１つの異種遺伝子ポリペプチドの発現が、誘導性プロモーターによりモジュレートされる、請求項１および１０〜１２のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１４】
前記誘導性プロモーターが、前記第１の遺伝子スイッチポリペプチド、および前記第２の遺伝子スイッチポリペプチドのうちの少なくとも１つによりモジュレートされる、請求項１３に記載の組成物。
【請求項１５】
請求項１に記載の、１もしくは複数のポリヌクレオチドのうちの少なくとも１つを含むベクター。
【請求項１６】
前記ベクターが、レンチウイルスベクター、レトロウイルスベクター、または非ウイルスベクターである、請求項１５に記載のベクター。
【請求項１７】
前記非ウイルスベクターが、Ｓｌｅｅｐｉｎｇ  Ｂｅａｕｔｙトランスポゾンである、請求項１６に記載のベクター。
【請求項１８】
エフェクター細胞内の異種遺伝子の発現を調節する方法であって、
前記エフェクター細胞へと、（ｉ）リガンド結合性ドメインへと融合させたＤＮＡ結合性ドメインを含む、第１の遺伝子スイッチポリペプチド、（ｉｉ）トランス活性化ドメインを含む、第２の遺伝子スイッチポリペプチド、（ｉｉｉ）前記異種遺伝子によりコードされる異種遺伝子ポリペプチド、ならびに（ｉｖ）切断型リンカー配列またはリボソームスキッピングリンカー配列を含むポリペプチドリンカーをコードする、１または複数のポリヌクレオチドを導入するステップであって、前記ポリペプチドリンカーが、前記第１の遺伝子スイッチポリペプチド、前記第２の遺伝子スイッチポリペプチド、および前記異種遺伝子ポリペプチドのうちの１つを、前記第１の遺伝子スイッチポリペプチド、前記第２の遺伝子スイッチポリペプチド、および前記異種遺伝子ポリペプチドのうちの別の１つへと連結する、ステップと；
前記エフェクター細胞を、前記異種遺伝子の発現を誘導するのに十分な量のリガンドと接触させるステップと
を含む方法。
【請求項１９】
１または複数の発現カセットを含む、異種遺伝子発現のリガンド誘導性制御のための遺伝子スイッチ系であって、前記１または複数の発現カセットが、
ａ）トランス活性化ドメインを含む、第１の遺伝子スイッチポリペプチドをコードする配列；
ｂ）リガンド結合性ドメインへと融合させたＤＮＡ結合性ドメインを含む、第２の遺伝子スイッチポリペプチドをコードする配列；および
ｃ）異種遺伝子ポリペプチドをコードする配列
を含み、
前記リガンド結合性ドメインへと融合させた前記トランス活性化ドメイン、ＤＮＡ結合性ドメイン、および前記異種遺伝子ポリペプチドのうちの１つが、ポリペプチドリンカーにより、前記リガンド結合性ドメインへと融合させた前記トランス活性化ドメイン、ＤＮＡ結合性ドメイン、および前記異種遺伝子ポリペプチドのうちの別の１つへと連結されており、前記ポリペプチドリンカーが、切断型リンカー配列またはリボソームスキッピングリンカー配列を含む、
遺伝子スイッチ系。
【請求項２０】
第１の遺伝子スイッチポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、
第２の遺伝子スイッチポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、および
目的の遺伝子（ＧＯＩ）をコードするポリヌクレオチド
を含むポリヌクレオチド構築物であって、
前記ＧＯＩをコードする前記ポリヌクレオチドが、前記第１の遺伝子スイッチポリペプチドをコードする前記ポリヌクレオチドと、前記第２の遺伝子スイッチポリペプチドをコードする前記ポリヌクレオチドとの間に位置する、連続オープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を含み、前記ポリヌクレオチド構築物が、リンカーをコードするポリヌクレオチドをさらに含み、前記ＧＯＩが、前記リンカーにより、前記第１の遺伝子スイッチポリペプチドおよび第２の遺伝子スイッチポリペプチドの各々へと連結されている、
ポリヌクレオチド構築物。
【請求項２１】
（ｉ）第１の核内受容体リガンド結合性ドメインへと融合させたＤＮＡ結合性ドメインを含む、第１の遺伝子スイッチポリペプチドをコードする、第１の配列；および（ｉｉ）第２の核内受容体リガンド結合性ドメインへと融合させたトランス活性化ドメインを含む、第２の遺伝子スイッチポリペプチドをコードする、第２の配列のうちの少なくとも１つを含み；
前記第１の配列および前記第２の配列のうちの少なくとも１つの発現が、１または複数のＮＦＡＴ応答エレメントによりモジュレートされる、
ポリヌクレオチド。
【請求項２２】
操作細胞の増殖および／または生存を刺激する方法であって、
（ａ）細胞試料を、対象から得るステップと、
（ｂ）前記細胞試料の細胞に、１または複数のトランスポゾンを含む、１または複数のポリヌクレオチドをトランスフェクトするステップであって、前記１または複数のトランスポゾンが、
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）またはＴＣＲ、サイトカイン、１または複数の細胞タグ、前記サイトカインのリガンド誘導性制御のための遺伝子スイッチポリペプチド、および前記１または複数のポリヌクレオチドを、前記細胞のゲノムへと組み込んで、操作細胞の集団をもたらすのに有効なトランスポザーゼ
をコードする、ステップと
を含み、
前記遺伝子スイッチポリペプチドが、ｉ）第１の核内受容体リガンド結合性ドメインへと融合させたＤＮＡ結合性ドメインを含む、第１の遺伝子スイッチポリペプチド、およびｉｉ）第２の核内受容体リガンド結合性ドメインへと融合させたトランス活性化ドメインを含む、第２の遺伝子スイッチポリペプチドを含み、前記第１の遺伝子スイッチポリペプチドと、前記第２の遺伝子スイッチポリペプチドとが、リンカーにより連結されている、方法。
【請求項２３】
それを必要とする対象の、ｉｎ  ｖｉｖｏにおける操作細胞の存続を増強する方法であって、
（ａ）細胞試料を、対象から得るステップと、
（ｂ）前記細胞試料の細胞に、１または複数のトランスポゾンを含む、１または複数のポリヌクレオチドをトランスフェクトするステップであって、前記１または複数のトランスポゾンが、
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）またはＴＣＲ、サイトカイン、１または複数の細胞タグ、前記サイトカインのリガンド誘導性制御のための遺伝子スイッチポリペプチド、および前記ＤＮＡを、前記細胞のゲノムへと組み込んで、操作細胞の集団をもたらすのに有効なトランスポザーゼ
をコードする、ステップと
を含み、
前記遺伝子スイッチポリペプチドが、ｉ）第１の核内受容体リガンド結合性ドメインへと融合させたＤＮＡ結合性ドメインを含む、第１の遺伝子スイッチポリペプチド、およびｉｉ）第２の核内受容体リガンド結合性ドメインへと融合させたトランス活性化ドメインを含む、第２の遺伝子スイッチポリペプチドを含み、前記第１の遺伝子スイッチポリペプチドと、前記第２の遺伝子スイッチポリペプチドとが、リンカーにより連結されている、方法。
【請求項２４】
充実性腫瘍を伴う対象を処置するための、操作細胞の集団を含む医薬組成物であって、前記操作細胞の前縦集団が、
（ａ）細胞試料を、対象から得るステップと、
（ｂ）前記細胞試料の細胞に、１または複数のトランスポゾンを含む、１または複数のポリヌクレオチドをトランスフェクトするステップであって、前記１または複数のトランスポゾンが、
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）またはＴＣＲ、サイトカイン、１または複数の細胞タグ、前記サイトカインのリガンド誘導性制御のための遺伝子スイッチポリペプチド、および前記ＤＮＡを、前記細胞のゲノムへと組み込んで、操作細胞の集団をもたらすのに有効なトランスポザーゼ
をコードし、
前記遺伝子スイッチポリペプチドが、ｉ）第１の核内受容体リガンド結合性ドメインへと融合させたＤＮＡ結合性ドメインを含む、第１の遺伝子スイッチポリペプチド、およびｉｉ）第２の核内受容体リガンド結合性ドメインへと融合させたトランス活性化ドメインを含む、第２の遺伝子スイッチポリペプチドを含み、前記第１の遺伝子スイッチポリペプチドと、前記第２の遺伝子スイッチポリペプチドとが、リンカーにより連結されている、
ステップとにより得られる、
医薬組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０４７２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０４７２】
本明細書では、本開示の好ましい実施形態を示し、それらについて記載してきたが、当業者には、このような実施形態が、例だけを目的として提示されていることが明らかであろう。今や、本開示から逸脱しない限りにおいて、当業者は、多数の変更、変化、および代用に想到するであろう。本明細書で記載される実施形態、またはこれらの実施形態、もしくはその中で記載される態様のうちの１または複数の組合せに対する、多様な代替物を、本開示の実施において利用しうることを理解されたい。以下の特許請求の範囲は、本開示の範囲を規定するものであり、これらの特許請求の範囲の範囲内にある方法および構造、ならびにそれらの均等物は、その対象となることが意図される。
本発明は以下の態様を含み得る。
［１］
異種遺伝子発現のリガンド誘導性制御のための、遺伝子スイッチポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む組成物であって、前記遺伝子スイッチポリペプチドが、
ａ）第１の核内受容体リガンド結合性ドメインへと融合させたＤＮＡ結合性ドメインを含む、第１の遺伝子スイッチポリペプチド、および
ｂ）第２の核内受容体リガンド結合性ドメインへと融合させたトランス活性化ドメインを含む、第２の遺伝子スイッチポリペプチドを含み、前記第１の遺伝子スイッチポリペプチドと、前記第２の遺伝子スイッチポリペプチドとが、リンカーにより連結されている、組成物。
［２］
異種遺伝子発現のリガンド誘導性制御のための遺伝子スイッチ系をコードする、１または複数のポリヌクレオチドを含む組成物であって、前記遺伝子スイッチ系が、
ａ）トランス活性化ドメインを含む、第１の遺伝子スイッチポリペプチド；
ｂ）リガンド結合性ドメインへと融合させたＤＮＡ結合性ドメインを含む、第２の遺伝子スイッチポリペプチド；および
ｃ）少なくとも１つの異種遺伝子ポリペプチド
を含み、前記第１の遺伝子スイッチポリペプチド、前記第２の遺伝子スイッチポリペプチド、および前記異種遺伝子ポリペプチドのうちの１つが、ポリペプチドリンカーにより、前記第１の遺伝子スイッチポリペプチド、前記第２の遺伝子スイッチポリペプチド、および前記異種遺伝子ポリペプチドのうちの別の１つへと連結されており、前記ポリペプチドリンカーが、切断型リンカーまたはリボソームスキッピングリンカー配列を含む、組成物。
［３］
前記ＤＮＡ結合性ドメインが、ＧＡＬ４（ＧＡＬ４  ＤＢＤ）、ＬｅｘＡ  ＤＢＤ、転写因子ＤＢＤ、ステロイド／甲状腺ホルモン核内受容体スーパーファミリーメンバーＤＢＤ、細菌ＬａｃＺ  ＤＢＤ、および酵母ＤＢＤのうちの少なくとも１つを含む、請求項１または２に記載の組成物。
［４］
前記ＤＮＡ結合性ドメインが、配列番号１８４に示される配列を有する、請求項１から３のいずれか一項に記載の組成物。
［５］
前記トランス活性化ドメインが、ＶＰ１６トランス活性化ドメインおよびＢ４２酸性活性化因子トランス活性化ドメインのうちの少なくとも１つを含む、請求項１から４のいずれか一項に記載の組成物。
［６］
前記トランス活性化ドメインが、配列番号１８１に示される配列を有する、請求項１から５のいずれか一項に記載の組成物。
［７］
前記第１の核内受容体リガンド結合性ドメイン、前記第２の核内受容体リガンド結合性ドメイン、および前記リガンド結合性ドメインのうちの少なくとも１つが、エクジソン受容体（ＥｃＲ）、ユビキタス受容体、オーファン受容体１、ＮＥＲ−１、ステロイドホルモン核内受容体１、レチノイドＸ受容体相互作用性タンパク質１５、肝臓Ｘ受容体β、ステロイドホルモン受容体様タンパク質、肝臓Ｘ受容体、肝臓Ｘ受容体α、ファルネソイドＸ受容体、受容体相互作用性タンパク質１４、およびファルネソール受容体のうちの少なくとも１つを含む、請求項１から６のいずれか一項に記載の組成物。
［８］
前記第１の核内受容体リガンド結合性ドメイン、前記第２の核内受容体リガンド結合性ドメイン、および前記リガンド結合性ドメインのうちの少なくとも１つが、配列番号１８５〜１８６のうちのいずれか１つに示される配列を有する、請求項１から７のいずれか一項に記載の組成物。
［９］
前記第１の遺伝子スイッチポリペプチドが、ＥｃＲ核内受容体リガンド結合性ドメインへと融合させたＧＡＬ４  ＤＢＤを含み、前記第２の遺伝子スイッチポリペプチドが、レチノイド受容体Ｘ（ＲＸＲ）核内受容体リガンド結合性ドメインへと融合させたＶＰ１６トランス活性化ドメインを含む、請求項１に記載の組成物。
［１０］
前記ＥｃＲ核内受容体リガンド結合性ドメインへと融合させた前記Ｇａｌ４  ＤＢＤが、配列番号１８５〜１８６または１８７〜１８８のうちのいずれか１つに示される配列を有し、前記レチノイド受容体Ｘ（ＲＸＲ）核内受容体リガンド結合性ドメインへと融合させた前記ＶＰ１６トランス活性化ドメインが、配列番号１８３に示される配列を有する、請求項９に記載の組成物。
［１１］
前記リンカーが、切断型リンカー、リボソームスキッピングリンカー配列、またはＩＲＥＳリンカーである、請求項１に記載の組成物。
［１２］
前記リンカーが、ＩＲＥＳリンカーであり、前記ＩＲＥＳリンカーが、配列番号１８〜１９のうちのいずれか１つに示される配列を有する、請求項１１に記載の組成物。
［１３］
前記リンカーが、切断型リンカーまたはリボソームスキッピングリンカー配列である、請求項１１に記載の組成物。
［１４］
前記切断型リンカーまたは前記リボソームスキッピングリンカー配列が、２Ａリンカー、ｐ２Ａリンカー、Ｔ２Ａリンカー、Ｆ２Ａリンカー、Ｅ２Ａリンカー、ＧＳＧ−２Ａリンカー、ＧＳＧリンカー、ＳＧＳＧリンカー、フューリンリンクリンカー変異体およびこれらの誘導体のうちの１または複数を含む、請求項２または１３に記載の組成物。
［１５］
前記切断型リンカーまたは前記リボソームスキッピングリンカー配列が、配列番号１４６〜１６２のうちのいずれか１つに示される配列を有する、請求項２または１３に記載の組成物。
［１６］
前記ポリヌクレオチドまたは前記１または複数のポリヌクレオチドが、抗原結合性ポリペプチドをさらにコードする、請求項１から１５のいずれか一項に記載の組成物。
［１７］
前記抗原結合性ポリペプチドが、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）およびＴ細胞受容体のうちの少なくとも１つを含む、請求項１６に記載の組成物。
［１８］
前記抗原結合性ポリペプチドが、ＣＡＲを含み、前記ＣＡＲが、ＣＤ１９、ＣＤ３３、ＢＣＭＡ、ＣＤ４４、α−葉酸受容体、ＣＡＩＸ、ＣＤ３０、ＲＯＲ１、ＣＥＡ、ＥＧＰ−２、ＥＧＰ−４０、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３、葉酸結合性タンパク質、ＧＤ２、ＧＤ３、ＩＬ−１３Ｒ−ａ２、ＫＤＲ、ＥＤＢ−Ｆ、メソテリン、ＣＤ２２、ＥＧＦＲ、ＭＵＣ−１、ＭＵＣ−１６、ＭＡＧＥ−Ａ１、ｈ５Ｔ４、ＰＳＭＡ、ＴＡＧ−７２、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＣＤ１２３、およびＶＥＧＦ−Ｒ２のうちの少なくとも１つに結合することが可能である、請求項１７に記載の組成物。
［１９］
前記抗原結合性ポリペプチドが、ＣＡＲを含み、前記ＣＡＲが、配列番号２１０〜２４４のうちのいずれか１つに示される配列を有する、請求項１７に記載の組成物。
［２０］
前記ポリヌクレオチドまたは前記１または複数のポリヌクレオチドが、細胞タグをさらにコードする、請求項１６から１９のいずれか一項に記載の組成物。
［２１］
前記細胞タグが、ＨＥＲ１切断型変異体またはＣＤ２０切断型変異体のうちの少なくとも１つを含む、請求項２０に記載の組成物。
［２２］
前記細胞タグが、配列番号１８９〜２０２のうちのいずれか１つに示される配列を有する、請求項２０に記載の組成物。
［２３］
前記第１の遺伝子スイッチポリペプチド、前記第２の遺伝子スイッチポリペプチド、前記抗原結合性ポリペプチド、および前記細胞タグのうちの少なくとも１つの発現が、プロモーターによりモジュレートされ、前記プロモーターが、組織特異的プロモーターもしくはＥＦ１Ａプロモーター、またはこれらの機能的な変異体である、請求項２０に記載の組成物。
［２４］
前記プロモーターが、配列番号５８〜６０のうちのいずれか１つに示される配列を有するＥＦ１Ａプロモーター、またはこの機能的な変異体である、請求項２３に記載の組成物。
［２５］
前記プロモーターが、組織特異的プロモーターであり、前記組織特異的プロモーターが、Ｔ細胞特異的応答エレメントを含む、請求項２３に記載の組成物。
［２６］
前記組織特異的プロモーターが、１または複数のＮＦＡＴ応答エレメントを含む、請求項２５に記載の組成物。
［２７］
前記ＮＦＡＴ応答エレメントが、配列番号５１〜５７のうちのいずれか１つに示される配列を有する、請求項２６に記載の組成物。
［２８］
前記組成物が、異種遺伝子ポリペプチドをコードする、第２のポリヌクレオチドをさらに含む、請求項１に記載の組成物。
［２９］
前記異種遺伝子ポリペプチドが、サイトカイン、細胞タグ、およびキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）のうちの少なくとも１つを含む、請求項２または２８に記載の組成物。
［３０］
前記サイトカインは、１つのサイトカインを含み、前記サイトカインが、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１２、ＩＬ−２１、ＩＬ−１５、ＩＬ−１５Ｒα、またはＩＬ−１５変異体の融合体のうちの少なくとも１つを含む、請求項２９に記載の組成物。
［３１］
前記サイトカインが、分泌形態にある、請求項３０に記載の組成物。
［３２］
前記サイトカインが、膜結合形態にある、請求項３０に記載の組成物。
［３３］
前記サイトカインが、配列番号２０３〜２０９のうちのいずれか１つに示される配列を有する、請求項３０から３２のいずれか一項に記載の組成物。
［３４］
前記少なくとも１つの異種遺伝子ポリペプチドの発現が、誘導性プロモーターによりモジュレートされる、請求項２および２８から３３のいずれか一項に記載の組成物。
［３５］
前記誘導性プロモーターが、配列番号４０〜６４のうちのいずれかにおいて示される配列を有する、請求項３３に記載の組成物。
［３６］
前記誘導性プロモーターが、前記第１の遺伝子スイッチポリペプチド、および前記第２の遺伝子スイッチポリペプチドのうちの少なくとも１つによりモジュレートされる、請求項３４または３５に記載の組成物。
［３７］
請求項１に記載のポリヌクレオチド、または請求項２に記載の、１もしくは複数のポリヌクレオチドのうちの少なくとも１つを含むベクター。
［３８］
前記ベクターが、レンチウイルスベクター、レトロウイルスベクター、または非ウイルスベクターである、請求項３７に記載のベクター。
［３９］
前記非ウイルスベクターが、Ｓｌｅｅｐｉｎｇ  Ｂｅａｕｔｙトランスポゾンである、請求項３８に記載のベクター。
［４０］
エフェクター細胞内の異種遺伝子の発現を調節する方法であって、
前記エフェクター細胞へと、（ｉ）リガンド結合性ドメインへと融合させたＤＮＡ結合性ドメインを含む、第１の遺伝子スイッチポリペプチド、（ｉｉ）トランス活性化ドメインを含む、第２の遺伝子スイッチポリペプチド、（ｉｉｉ）前記異種遺伝子によりコードされる異種遺伝子ポリペプチド、ならびに（ｉｖ）切断型リンカー配列またはリボソームスキッピングリンカー配列を含むポリペプチドリンカーをコードする、１または複数のポリヌクレオチドを導入するステップであって、前記ポリペプチドリンカーが、前記第１の遺伝子スイッチポリペプチド、前記第２の遺伝子スイッチポリペプチド、および前記異種遺伝子ポリペプチドのうちの１つを、前記第１の遺伝子スイッチポリペプチド、前記第２の遺伝子スイッチポリペプチド、および前記異種遺伝子ポリペプチドのうちの別の１つへと連結する、ステップと；
前記エフェクター細胞を、前記異種遺伝子の発現を誘導するのに十分な量のリガンドと接触させるステップとを含む方法。
［４１］
前記１または複数のポリヌクレオチドのうちの少なくとも１つが、抗原結合性ポリペプチドをさらにコードする、請求項４０に記載の方法。
［４２］
前記抗原結合性ポリペプチドが、標的細胞の、所定の細胞表面タンパク質に選択的に結合する、請求項４１に記載の方法。
［４３］
前記標的細胞が、哺乳動物細胞である、請求項４２に記載の方法。
［４４］
前記標的細胞が、腫瘍細胞である、請求項４２または４３に記載の方法。
［４５］
前記所定の細胞表面タンパク質が、腫瘍抗原である、請求項４４に記載の方法。
［４６］
前記エフェクター細胞を、前記リガンドと接触させる前記ステップの前に、前記抗原結合性ポリペプチドが、前記標的細胞の、前記所定の細胞表面タンパク質に選択的に結合する、請求項４２から４５のいずれか一項に記載の方法。
［４７］
前記エフェクター細胞を、前記リガンドと接触させる前記ステップの前に、少なくとも７日間にわたり、前記エフェクター細胞を、前記標的細胞の、前記所定の細胞表面タンパク質へと曝露する、請求項４６に記載の方法。
［４８］
前記抗原結合性ポリペプチドによる、前記所定の細胞表面タンパク質への結合が、前記エフェクター細胞を活性化させる、請求項４２から４７のいずれか一項に記載の方法。
［４９］
前記抗原結合性ポリペプチドが、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）およびＴ細胞受容体のうちの少なくとも１つを含む、請求項３８から４８のいずれか一項に記載の方法。
［５０］
前記抗原結合性ポリペプチドが、ＣＡＲを含み、前記ＣＡＲが、ＣＤ１９、ＣＤ３３、ＢＣＭＡ、ＣＤ４４、α−葉酸受容体、ＣＡＩＸ、ＣＤ３０、ＲＯＲ１、ＣＥＡ、ＥＧＰ−２、ＥＧＰ−４０、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３、葉酸結合性タンパク質、ＧＤ２、ＧＤ３、ＩＬ−１３Ｒ−ａ２、ＫＤＲ、ＥＤＢ−Ｆ、メソテリン、ＣＤ２２、ＥＧＦＲ、ＭＵＣ−１、ＭＡＧＥ−Ａ１、ＭＵＣ−１６、ｈ５Ｔ４、ＰＳＭＡ、ＴＡＧ−７２、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＣＤ１２３、およびＶＥＧＦ−Ｒ２のうちの少なくとも１つに結合することが可能である、請求項４９に記載の方法。
［５１］
前記抗原結合性ポリペプチドが、ＣＡＲを含み、前記ＣＡＲが、配列番号２１０〜２４４のうちのいずれか１つに示される配列を有する、請求項４９に記載の方法。
［５２］
前記異種遺伝子ポリペプチドが、前記抗原結合性ポリペプチドを含む、請求項３８から５１のいずれか一項に記載の方法。
［５３］
前記１または複数のポリヌクレオチドのうちの少なくとも１つが、細胞タグをさらにコードする、請求項３７から５２のいずれか一項に記載の方法。
［５４］
前記細胞タグが、ＨＥＲ１切断型変異体およびＣＤ２０切断型変異体のうちの少なくとも１つを含む、請求項５３に記載の方法。
［５５］
前記細胞タグが、配列番号１８９〜２０２のうちのいずれか１つに示される配列を有する、請求項５３に記載の方法。
［５６］
前記異種遺伝子ポリペプチドが、前記細胞タグを含む、請求項５３から５５のいずれか一項に記載の方法。
［５７］
前記１または複数のポリヌクレオチドのうちの少なくとも１つが、サイトカインをさらにコードする、請求項３７から５６のいずれか一項に記載の方法。
［５８］
前記サイトカインが、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１２、ＩＬ−２１、ＩＬ−１５、ＩＬ−１５Ｒα、またはＩＬ−１５変異体の融合体のうちの少なくとも１つを含む、請求項５７に記載の方法。
［５９］
前記サイトカインが、分泌形態にある、請求項５８に記載の方法。
［６０］
前記サイトカインが、膜結合形態にある、請求項５８に記載の方法。
［６１］
前記サイトカインが、配列番号２０３〜２０９のうちのいずれか１つに示される配列を有する、請求項５７から６０のいずれか一項に記載の方法。
［６２］
前記異種遺伝子ポリペプチドが、前記サイトカインを含む、請求項５７から６１のいずれか一項に記載の方法。
［６３］
前記異種遺伝子ポリペプチドの発現が、誘導性プロモーターによりモジュレートされる、請求項３７から６２のいずれか一項に記載の方法。
［６４］
前記誘導性プロモーターが、配列番号４０〜６４のうちのいずれか１つに示される配列を有する、請求項６３に記載の方法。
［６５］
前記ＤＮＡ結合性ドメインが、ＧＡＬ４（ＧＡＬ４  ＤＢＤ）、ＬｅｘＡ  ＤＢＤ、転写因子ＤＢＤ、ステロイド／甲状腺ホルモン核内受容体スーパーファミリーメンバーＤＢＤ、細菌ＬａｃＺ  ＤＢＤ、および酵母ＤＢＤのうちの少なくとも１つを含む、請求項３７から６４のいずれか一項に記載の方法。
［６６］
前記ＤＮＡ結合性ドメインが、配列番号１８４に示される配列を有する、請求項６４に記載の方法。
［６７］
前記トランス活性化ドメインが、ＶＰ１６トランス活性化ドメインおよびＢ４２酸性活性化因子トランス活性化ドメインのうちの少なくとも１つを含む、請求項３７から６６のいずれか一項に記載の方法。
［６８］
前記トランス活性化ドメインが、配列番号１８１に示される配列を有する、請求項６７に記載の方法。
［６９］
前記第１の遺伝子スイッチポリペプチドおよび第２の遺伝子スイッチポリペプチドのうちの少なくとも１つが、前記ＤＮＡ結合性ドメインに結合することが可能な応答エレメントをさらに含む、請求項３７から６８のいずれか一項に記載の方法。
［７０］
前記リガンド結合性ドメインが、エクジソン受容体（ＥｃＲ）、ユビキタス受容体、オーファン受容体１、ＮＥＲ−１、ステロイドホルモン核内受容体１、レチノイドＸ受容体相互作用性タンパク質１５、肝臓Ｘ受容体β、ステロイドホルモン受容体様タンパク質、肝臓Ｘ受容体、肝臓Ｘ受容体α、ファルネソイドＸ受容体、受容体相互作用性タンパク質１４、およびファルネソール受容体のうちの少なくとも１つを含む、請求項３７から６９のいずれか一項に記載の方法。
［７１］
前記リガンド結合性ドメインが、配列番号１８５〜１８６のうちのいずれか１つに示される配列を有する、請求項７０に記載の方法。
［７２］
前記第１の遺伝子スイッチポリペプチドが、ＥｃＲ核内受容体リガンド結合性ドメインへと融合させたＧＡＬ４  ＤＢＤを含み、前記第２の遺伝子スイッチポリペプチドが、レチノイド受容体Ｘ（ＲＸＲ）核内受容体リガンド結合性ドメインへと融合させたＶＰ１６トランス活性化ドメインを含む、請求項３７から７１のいずれか一項に記載の方法。
［７３］
ＥｃＲへと融合させた前記Ｇａｌ４  ＤＢＤが、配列番号１８５〜１８６のうちのいずれか１つに示される配列を有し、前記レチノイド受容体Ｘ（ＲＸＲ）核内受容体リガンド結合性ドメインへと融合させたＶＰ１６トランス活性化ドメインが、配列番号１８３に示される配列を有する、請求項７２に記載の方法。
［７４］
前記リガンドが、
（２Ｓ，３Ｒ，５Ｒ，９Ｒ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）−１７−［（２Ｓ，３Ｒ）−３，６−ジヒドロキシ−６−メチルヘプタン−２−イル］−２，３，１４−トリヒドロキシ−１０，１３−ジメチル−２，３，４，５，９，１１，１２，１５，１６，１７−デカヒドロ−１Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−６−オン；Ｎ’−（３，５−ジメチルベンゾイル）−Ｎ’−［（３Ｒ）−２，２−ジメチル−３−ヘキサニル］−２−エチル−３−メトキシベンゾヒドラジド；５−メチル−２，３−ジヒドロ−ベンゾ［１，４］ジオキシン−６−カルボン酸Ｎ’−（３，５−ジメチル−ベンゾイル）−Ｎ’−（１−エチル−２，２−ジメチル−プロピル）−ヒドラジド；５−メチル−２，３−ジヒドロ−ベンゾ［１，４］ジオキシン−６−カルボン酸Ｎ’−（３，５−ジメトキシ−４−メチル−ベンゾイル）−Ｎ’−（１−エチル−２，２−ジメチル−プロピル）−ヒドラジド；５−メチル−２，３−ジヒドロ−ベンゾ［１，４］ジオキシン−６−カルボン酸Ｎ’−（１−ｔｅｒｔ−ブチル−ブチル）−Ｎ’−（３，５−ジメチル−ベンゾイル）−ヒドラジド；５−メチル−２，３−ジヒドロ−ベンゾ［１，４］ジオキシン−６−カルボン酸Ｎ’−（１−ｔｅｒｔ−ブチル−ブチル）−Ｎ’−（３，５−ジメトキシ−４−メチル−ベンゾイル）−ヒドラジド；５−エチル−２，３−ジヒドロ−ベンゾ［１，４］ジオキシン−６−カルボン酸Ｎ’−（３，５−ジメチル−ベンゾイル）−Ｎ’−（１−エチル−２，２−ジメチル−プロピル）−ヒドラジド；５−エチル−２，３−ジヒドロ−ベンゾ［１，４］ジオキシン−６−カルボン酸Ｎ’−（３，５−ジメトキシ−４−メチル−ベンゾイル）−Ｎ’−（１−エチル−２，２−ジメチル−プロピル）−ヒドラジド；５−エチル−２，３−ジヒドロ−ベンゾ［１，４］ジオキシン−６−カルボン酸Ｎ’−（１−ｔｅｒｔ−ブチル−ブチル）−Ｎ’−（３，５−ジメチル−ベンゾイル）−ヒドラジド；５−エチル−２，３−ジヒドロ−ベンゾ［１，４］ジオキシン−６−カルボン酸Ｎ’−（１−ｔｅｒｔ−ブチル−ブチル）−Ｎ’−（３，５−ジメトキシ−４−メチル−ベンゾイル）−ヒドラジド；３，５−ジメチル−安息香酸Ｎ−（１−エチル−２，２−ジメチル−プロピル）−Ｎ’−（３−メトキシ−２−メチル−ベンゾイル）−ヒドラジド；３，５−ジメトキシ−４−メチル−安息香酸Ｎ−（１−エチル−２，２−ジメチル−プロピル）−Ｎ’−（３−メトキシ−２−メチル−ベンゾイル）−ヒドラジド；３，５−ジメチル−安息香酸Ｎ−（１−ｔｅｒｔ−ブチル−ブチル）−Ｎ’−（３−メトキシ−２−メチル−ベンゾイル）−ヒドラジド；３，５−ジメトキシ−４−メチル−安息香酸Ｎ−（１−ｔｅｒｔ−ブチル−ブチル）−Ｎ’−（３−メトキシ−２−メチル−ベンゾイル）−ヒドラジド；３，５−ジメチル−安息香酸Ｎ−（１−エチル−２，２−ジメチル−プロピル）−Ｎ’−（２−エチル−３−メトキシ−ベンゾイル）−ヒドラジド；３，５−ジメトキシ−４−メチル−安息香酸Ｎ−（１−エチル−２，２−ジメチル−プロピル）−Ｎ’−（２−エチル−３−メトキシ−ベンゾイル）−ヒドラジド；３，５−ジメチル−安息香酸Ｎ−（１−ｔｅｒｔ−ブチル−ブチル）−Ｎ’−（２−エチル−３−メトキシ−ベンゾイル）−ヒドラジド；３，５−ジメトキシ−４−メチル−安息香酸Ｎ−（１−ｔｅｒｔ−ブチル−ブチル）−Ｎ’−（２−エチル−３−メトキシ−ベンゾイル）−ヒドラジド；２−メトキシ−ニコチン酸Ｎ−（１−ｔｅｒｔ−ブチル−ペンチル）−Ｎ’−（４−エチル−ベンゾイル）−ヒドラジド；３，５−ジメチル−安息香酸Ｎ−（２，２−ジメチル−１−フェニル−プロピル）−Ｎ’−（４−エチル−ベンゾイル）−ヒドラジド；３，５−ジメチル−安息香酸Ｎ−（１−ｔｅｒｔ−ブチル−ペンチル）−Ｎ’−（３−メトキシ−２−メチル−ベンゾイル）−ヒドラジド；および３，５−ジメトキシ−４−メチル−安息香酸Ｎ−（１−ｔｅｒｔ−ブチル−ペンチル）−Ｎ’−（３−メトキシ−２−メチル−ベンゾイル）−ヒドラジドのうちの少なくとも１つを含む、請求項３７から７３のいずれか一項に記載の方法。
［７５］
前記異種遺伝子の前記発現が、前記リガンドの非存在下において、前記リガンドの存在下における発現と比較して低減されるか、または消失する、請求項３７から７４のいずれか一項に記載の方法。
［７６］
前記異種遺伝子の前記発現が、さらなる量の前記リガンドを施すことにより回復する、請求項７５に記載の方法。
［７７］
前記第１の遺伝子スイッチポリペプチドおよび第２の遺伝子スイッチポリペプチドのうちの少なくとも１つの発現が、プロモーターによりモジュレートされ、前記プロモーターが、組織特異的プロモーターもしくはＥＦ１Ａプロモーター、またはこれらの機能的な変異体である、請求項３７から７６のいずれか一項に記載の方法。
［７８］
前記プロモーターが、配列番号５８〜６０のうちのいずれか１つに示される配列を有するＥＦ１Ａプロモーター、またはこの機能的な変異体である、請求項７７に記載の方法。
［７９］
前記プロモーターが、組織特異的プロモーターであり、前記組織特異的プロモーターが、Ｔ細胞特異的応答エレメントを含む、請求項７７に記載の方法。
［８０］
前記組織特異的プロモーターが、１または複数のＮＦＡＴ応答エレメントを含む、請求項７９に記載の方法。
［８１］
前記ＮＦＡＴ応答エレメントが、配列番号５０〜５７のうちのいずれか１つに示される配列を有する、請求項８０に記載の方法。
［８２］
前記１または複数のポリヌクレオチドが、ベクター内に含まれる、請求項４０から８１のいずれか一項に記載の方法。
［８３］
前記ベクターが、レンチウイルスベクター、レトロウイルスベクター、または非ウイルスベクターである、請求項８２に記載の方法。
［８４］
前記非ウイルスベクターが、Ｓｌｅｅｐｉｎｇ  Ｂｅａｕｔｙトランスポゾンである、請求項８３に記載の方法。
［８５］
１または複数の発現カセットを含む、異種遺伝子発現のリガンド誘導性制御のための遺伝子スイッチ系であって、前記１または複数の発現カセットが、
ａ）第１の核内受容体リガンド結合性ドメインへと融合させたＤＮＡ結合性ドメインを含む、第１の遺伝子スイッチポリペプチドをコードする配列；
ｂ）第２の核内受容体リガンド結合性ドメインへと融合させたトランス活性化ドメインを含む、第２の遺伝子スイッチポリペプチドをコードする配列を含み、
前記第１の遺伝子スイッチポリペプチドと、前記第２の遺伝子スイッチポリペプチドとが、ポリペプチドリンカーにより連結されている、遺伝子スイッチ系。
［８６］
１または複数の発現カセットを含む、異種遺伝子発現のリガンド誘導性制御のための遺伝子スイッチ系であって、前記１または複数の発現カセットが、
ａ）トランス活性化ドメインを含む、第１の遺伝子スイッチポリペプチドをコードする配列；
ｂ）リガンド結合性ドメインへと融合させたＤＮＡ結合性ドメインを含む、第２の遺伝子スイッチポリペプチドをコードする配列；および
ｃ）異種遺伝子ポリペプチドをコードする配列
を含み、
前記リガンド結合性ドメインへと融合させた前記トランス活性化ドメイン、ＤＮＡ結合性ドメイン、および前記異種遺伝子ポリペプチドのうちの１つが、ポリペプチドリンカーにより、前記リガンド結合性ドメインへと融合させた前記トランス活性化ドメイン、ＤＮＡ結合性ドメイン、および前記異種遺伝子ポリペプチドのうちの別の１つへと連結されており、前記ポリペプチドリンカーが、切断型リンカー配列またはリボソームスキッピングリンカー配列を含む、遺伝子スイッチ系。
［８７］
前記１または複数の発現カセットが、異種遺伝子ポリペプチドをコードする配列をさらに含む、請求項８５に記載の遺伝子スイッチ系。
［８８］
前記１または複数の発現カセットが、以下：
ａ）１または複数のリコンビナーゼ接合部位；および
ｂ）セリンリコンビナーゼをコードする配列
のうちの１または複数をさらに含む、請求項８５から８７のいずれか一項に記載の遺伝子スイッチ系。
［８９］
前記１または複数の発現カセットが、以下：
ａ）非誘導性プロモーター；および
ｂ）誘導性プロモーター
のうちの１または複数をさらに含む、請求項８５から８８のいずれか一項に記載の遺伝子スイッチ系。
［９０］
前記ＤＮＡ結合性ドメインが、配列番号１８４に示される配列を有する、請求項８５から８９のいずれか一項に記載の遺伝子スイッチ系。
［９１］
前記トランス活性化ドメインが、配列番号１８１に示される配列を有する、請求項８５から９０のいずれか一項に記載の遺伝子スイッチ系。
［９２］
前記第１の核内受容体リガンド結合ドメイン、および第２の核内受容体リガンド結合ドメイン、ならびに前記リガンド結合性ドメインのうちの少なくとも１つが、配列番号１８５〜１８６のうちのいずれか１つに示される配列を有する、請求項８５から９１のいずれか一項に記載の遺伝子スイッチ系。
［９３］
前記非誘導性プロモーターが、配列番号４０〜６４のうちのいずれか１つに示される配列を有する、請求項８９に記載の遺伝子スイッチ系。
［９４］
前記誘導性プロモーターが、配列番号４０〜６４のうちのいずれか１つに示される配列を有する、請求項８９に記載の遺伝子スイッチ系。
［９５］
前記ポリペプチドリンカーが、配列番号１４６〜１６２のうちのいずれか１つに示される配列を有する、請求項８５に記載の遺伝子スイッチ系。
［９６］
前記ポリペプチドリンカーが、配列番号１８〜１９および１４６〜１６２のうちのいずれか１つに示される配列を伴う切断型リンカー、リボソームスキッピングリンカー、またはＩＲＥＳリンカーである、請求項８６に記載の遺伝子スイッチ系。
［９７］
前記１または複数の発現カセットが、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする配列を含む発現カセットを含み、前記キメラ抗原受容体の発現が、非誘導性プロモーターによりモジュレートされる、請求項８５に記載の遺伝子スイッチ系。
［９８］
前記ＣＡＲが、ＣＤ１９、ＣＤ３３、ＢＣＭＡ、ＣＤ４４、α−葉酸受容体、ＣＡＩＸ、ＣＤ３０、ＲＯＲ１、ＣＥＡ、ＥＧＰ−２、ＥＧＰ−４０、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３、葉酸結合性タンパク質、ＧＤ２、ＧＤ３、ＩＬ−１３Ｒ−ａ２、ＫＤＲ、ＥＤＢ−Ｆ、メソテリン、ＣＤ２２、ＥＧＦＲ、ＭＵＣ−１、ＭＡＧＥ−Ａ１、ＭＵＣ−１６、ｈ５Ｔ４、ＰＳＭＡ、ＴＡＧ−７２、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＣＤ１２３、およびＶＥＧＦ−Ｒ２のうちの少なくとも１つに結合することが可能である、請求項９７に記載の遺伝子スイッチ系。
［９９］
前記非誘導性プロモーターが、ＥＦ１Ａまたはこれらの変異体を含む、請求項９７に記載の遺伝子スイッチ系。
［１００］
前記発現カセットが、配列番号１３１に示される配列を有する、請求項９７に記載の遺伝子スイッチ系。
［１０１］
前記発現カセットが、細胞タグをコードする配列をさらに含み、前記細胞タグが、リンカーにより、前記ＣＡＲへと連結されている、請求項９７に記載の遺伝子スイッチ系。
［１０２］
前記細胞タグが、ＨＥＲ１切断型変異体およびＣＤ２０切断型変異体のうちの少なくとも１つを含む、請求項１０１に記載の遺伝子スイッチ系。
［１０３］
前記発現カセットが、配列番号１３２に示される配列を有する、請求項１０２に記載の遺伝子スイッチ系。
［１０４］
前記発現カセットが、前記第１の遺伝子スイッチポリペプチドをコードする前記配列および前記第２の遺伝子スイッチポリペプチドをコードする前記配列をさらに含み、前記第１の遺伝子スイッチポリペプチドおよび第２の遺伝子スイッチポリペプチドのうちの１つが、リンカーにより、前記ＣＡＲへと連結されている、請求項９７に記載の遺伝子スイッチ系。
［１０５］
前記第１の遺伝子スイッチポリペプチドと、第２の遺伝子スイッチポリペプチドとが、前記ポリペプチドリンカーにより連結されており、前記ポリペプチドリンカーが、切断型リンカーである、請求項１０４に記載の遺伝子スイッチ系。
［１０６］
前記発現カセットが、配列番号１３３に示される配列を有する、請求項１０５に記載の遺伝子スイッチ系。
［１０７］
前記第１の遺伝子スイッチポリペプチドと、第２の遺伝子スイッチポリペプチドとが、前記ポリペプチドリンカーにより連結されており、前記ポリペプチドリンカーが、ＩＲＥＳリンカーである、請求項１０６に記載の遺伝子スイッチ系。
［１０８］
前記発現カセットが、配列番号１３４に示される配列を有する、請求項１０７に記載の遺伝子スイッチ系。
［１０９］
前記１または複数の発現カセットが、前記異種遺伝子ポリペプチドをコードする前記配列を含む発現カセットを含み、前記異種遺伝子ポリペプチドの発現が、誘導性プロモーターによりモジュレートされる、請求項８６または８７に記載の遺伝子スイッチ系。
［１１０］
前記異種遺伝子ポリペプチドが、サイトカインを含む、請求項１０９に記載の遺伝子スイッチ系。
［１１１］
前記サイトカインが、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１２、ＩＬ−２１、ＩＬ−１５、ＩＬ−１５Ｒα、またはＩＬ−１５変異体の融合体のうちの少なくとも１つを含む、請求項１１０に記載の遺伝子スイッチ系。
［１１２］
前記発現カセットが、配列番号１３５に示される配列を有する、請求項１０９に記載の遺伝子スイッチ系。
［１１３］
前記発現カセットが、第２の異種遺伝子ポリペプチドをコードする配列を含み、前記第２の異種遺伝子ポリペプチドが、細胞タグを含む、請求項１０９に記載の遺伝子スイッチ系。
［１１４］
前記細胞タグが、ＨＥＲ１切断型変異体およびＣＤ２０切断型変異体のうちの少なくとも１つを含む、請求項１１３に記載の遺伝子スイッチ系。
［１１５］
前記細胞タグが、リンカーにより、前記サイトカインへと連結されている、請求項１１４に記載の遺伝子スイッチ系。
［１１６］
前記発現カセットが、配列番号１３６に示される配列を有する、請求項１１５に記載の遺伝子スイッチ系。
［１１７］
異種遺伝子を、宿主細胞内に組み込むための遺伝子スイッチ系であり、前記宿主細胞を、前記セリンリコンビナーゼ、および前記１または複数のリコンビナーゼ接合部位の存在下で、前記１または複数の発現カセットと接触させると、前記異種遺伝子が、前記宿主細胞内に組み込まれる、請求項８８に記載の遺伝子スイッチ系。
［１１８］
前記系が、リガンドをさらに含み、前記宿主細胞を、前記リガンドと接触させると、前記異種遺伝子が、前記宿主細胞内で発現する、請求項１１７に記載の遺伝子スイッチ系。
［１１９］
前記宿主細胞が、Ｔ細胞またはＮＫ細胞である、請求項１１７または１１８に記載の遺伝子スイッチ系。
［１２０］
前記誘導性プロモーターが、前記トランス活性化ドメインにより活性化する、請求項８９に記載の遺伝子スイッチ系。
［１２１］
１または複数のベクター内に含有される、請求項８５から１２０のいずれか一項に記載の遺伝子スイッチ系。
［１２２］
１つのベクター内に含有される、請求項１２１に記載の遺伝子スイッチ系。
［１２３］
請求項８５から８９のいずれか一項に記載の遺伝子スイッチ系の構成要素のうちの１または複数をコードするポリヌクレオチド。
［１２４］
請求項１２３に記載のポリヌクレオチドを含むベクター。
［１２５］
前記ベクターが、レンチウイルスベクター、レトロウイルスベクター、または非ウイルスベクターのうちのいずれか１つである、請求項１２４に記載のベクター。
［１２６］
前記ベクターが、非ウイルスベクターであり、前記非ウイルスベクターが、Ｓｌｅｅｐｉｎｇ  Ｂｅａｕｔｙトランスポゾンである、請求項１２５に記載のベクター。
［１２７］
第１の遺伝子スイッチポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、
第２の遺伝子スイッチポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、および
目的の遺伝子（ＧＯＩ）をコードするポリヌクレオチド
を含むポリヌクレオチド構築物であって、
前記ＧＯＩをコードする前記ポリヌクレオチドが、前記第１の遺伝子スイッチポリペプチドをコードする前記ポリヌクレオチドと、前記第２の遺伝子スイッチポリペプチドをコードする前記ポリヌクレオチドとの間に位置する、連続オープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を含み、前記ポリヌクレオチド構築物が、リンカーをコードするポリヌクレオチドをさらに含み、前記ＧＯＩが、前記リンカーにより、前記第１の遺伝子スイッチポリペプチドおよび第２の遺伝子スイッチポリペプチドの各々へと連結されている、ポリヌクレオチド構築物。
［１２８］
（ｉ）第１の核内受容体リガンド結合性ドメインへと融合させたＤＮＡ結合性ドメインを含む、第１の遺伝子スイッチポリペプチドをコードする、第１の配列；および（ｉｉ）第２の核内受容体リガンド結合性ドメインへと融合させたトランス活性化ドメインを含む、第２の遺伝子スイッチポリペプチドをコードする、第２の配列のうちの少なくとも１つを含み；
前記第１の配列および前記第２の配列のうちの少なくとも１つの発現が、１または複数のＮＦＡＴ応答エレメントによりモジュレートされる、ポリヌクレオチド。
［１２９］
操作細胞の増殖および／または生存を刺激する方法であって、
（ａ）細胞試料を、対象から得るステップと、
（ｂ）前記細胞試料の細胞に、１または複数のトランスポゾンを含む、１または複数のポリヌクレオチドをトランスフェクトするステップであって、前記１または複数のトランスポゾンが、
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）またはＴＣＲ、サイトカイン、１または複数の細胞タグ、前記サイトカインのリガンド誘導性制御のための遺伝子スイッチポリペプチド、および前記１または複数のポリヌクレオチドを、前記細胞のゲノムへと組み込んで、操作細胞の集団をもたらすのに有効なトランスポザーゼをコードする、ステップと
を含み、
前記遺伝子スイッチポリペプチドが、ｉ）第１の核内受容体リガンド結合性ドメインへと融合させたＤＮＡ結合性ドメインを含む、第１の遺伝子スイッチポリペプチド、およびｉｉ）第２の核内受容体リガンド結合性ドメインへと融合させたトランス活性化ドメインを含む、第２の遺伝子スイッチポリペプチドを含み、前記第１の遺伝子スイッチポリペプチドと、前記第２の遺伝子スイッチポリペプチドとが、リンカーにより連結されている、方法。
［１３０］
それを必要とする対象の、ｉｎ  ｖｉｖｏにおける操作細胞の存続を増強する方法であって、
（ａ）細胞試料を、対象から得るステップと、
（ｂ）前記細胞試料の細胞に、１または複数のトランスポゾンを含む、１または複数のポリヌクレオチドをトランスフェクトするステップであって、前記１または複数のトランスポゾンが、
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）またはＴＣＲ、サイトカイン、１または複数の細胞タグ、前記サイトカインのリガンド誘導性制御のための遺伝子スイッチポリペプチド、および前記ＤＮＡを、前記細胞のゲノムへと組み込んで、操作細胞の集団をもたらすのに有効なトランスポザーゼをコードする、ステップと
を含み、
前記遺伝子スイッチポリペプチドが、ｉ）第１の核内受容体リガンド結合性ドメインへと融合させたＤＮＡ結合性ドメインを含む、第１の遺伝子スイッチポリペプチド、およびｉｉ）第２の核内受容体リガンド結合性ドメインへと融合させたトランス活性化ドメインを含む、第２の遺伝子スイッチポリペプチドを含み、前記第１の遺伝子スイッチポリペプチドと、前記第２の遺伝子スイッチポリペプチドとが、リンカーにより連結されている、方法。
［１３１］
前記細胞にトランスフェクトするステップが、前記細胞に電気穿孔することを含む、請求項１２９または１３０に記載の方法。
［１３２］
前記１または複数のポリヌクレオチドのうちの、少なくとも１つのポリヌクレオチドが、前記遺伝子スイッチポリペプチドをコードし、前記少なくとも１つのポリヌクレオチドが、プロモーターによりモジュレートされ、前記プロモーターが、組織特異的プロモーターもしくはＥＦ１Ａプロモーター、またはこれらの機能的な変異体である、請求項１２９から１３１のいずれか一項に記載の方法。
［１３３］
前記プロモーターが、配列番号５８〜６０のうちのいずれか１つに示される配列を有するＥＦ１Ａプロモーター、またはこの機能的な変異体である、請求項１３２に記載の方法。
［１３４］
前記プロモーターが、組織特異的プロモーターであり、前記組織特異的プロモーターが、Ｔ細胞特異的応答エレメントを含む、請求項１３２に記載の方法。
［１３５］
前記プロモーターが、組織特異的プロモーターであり、前記組織特異的プロモーターが、１または複数のＮＦＡＴ応答エレメントを含む、請求項１３２に記載の方法。
［１３６］
前記ＮＦＡＴ応答エレメントが、配列番号５０〜５７のうちのいずれか１つに示される配列を有する、請求項１３５に記載の方法。
［１３７］
前記サイトカインが、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１２、ＩＬ−２１、ＩＬ−１５、ＩＬ−１５Ｒα、またはＩＬ−１５変異体の融合体のうちの少なくとも１つを含む、請求項１２９から１３６のいずれか一項に記載の方法。
［１３８］
前記サイトカインが、分泌形態にある、請求項１３７に記載の方法。
［１３９］
前記サイトカインが、膜結合形態にある、請求項１３７に記載の方法。
［１４０］
前記サイトカインが、配列番号２０３〜２０９のうちのいずれか１つに示される配列を有する、請求項１３７から１３９のいずれか一項に記載の方法。
［１４１］
前記細胞が、ＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞、Ｔ細胞、またはＴ細胞前駆細胞である、請求項１２９から１４０のいずれか一項に記載の方法。
［１４２］
前記方法が、有効量の前記操作細胞を、それを必要とする対象へと投与するステップをさらに含む、請求項１２９から１４１のいずれか一項に記載の方法。
［１４３］
投与する前記ステップが、前記対象に、前記操作細胞を、速やかに輸注することを含む、請求項１４２に記載の方法。
［１４４］
前記方法が、有効量の前記リガンドを投与して、前記サイトカインの発現を誘導するステップをさらに含む、請求項１４２または１４３に記載の方法。
［１４５］
前記リガンドが、ベレジメクスである、請求項１４４に記載の方法。
［１４６］
前記ＣＡＲが、ＣＤ１９、ＣＤ３３、ＢＣＭＡ、ＣＤ４４、α−葉酸受容体、ＣＡＩＸ、ＣＤ３０、ＲＯＲ１、ＣＥＡ、ＥＧＰ−２、ＥＧＰ−４０、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３、葉酸結合性タンパク質、ＧＤ２、ＧＤ３、ＩＬ−１３Ｒ−ａ２、ＫＤＲ、ＥＤＢ−Ｆ、メソテリン、ＣＤ２２、ＥＧＦＲ、ＭＵＣ−１、ＭＡＧＥ−Ａ１、ＭＵＣ−１６、ｈ５Ｔ４、ＰＳＭＡ、ＴＡＧ−７２、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＣＤ１２３、およびＶＥＧＦ−Ｒ２のうちの少なくとも１つに結合することが可能である、請求項１２９から１４５のいずれか一項に記載の方法。
［１４７］
前記ＣＡＲが、前記ＣＤ１９に結合することが可能である、請求項１４６に記載の方法。
［１４８］
前記ＣＡＲが、前記ＣＤ３３に結合することが可能である、請求項１４６に記載の方法。
［１４９］
前記トランスポザーゼが、サケ科型Ｔｃ１様トランスポザーゼである、請求項１２９から１４８のいずれか一項に記載の方法。
［１５０］
前記トランスポザーゼが、ＳＢ１１またはＳＢ１００ｘトランスポザーゼである、請求項１２９から１４９のいずれか一項に記載の方法。
［１５１］
前記１または複数の細胞タグが、ＨＥＲ１切断型変異体およびＣＤ２０切断型変異体のうちの少なくとも１つを含む、請求項１２９から１５０のいずれか一項に記載の方法。
［１５２］
前記１または複数の細胞タグが、配列番号１８９〜２０２のうちのいずれか１つに示される配列を有する、請求項１２９から１５１のいずれか一項に記載の方法。
［１５３］
充実性腫瘍を伴う対象を処置する方法であって、
（ａ）細胞試料を、対象から得るステップと、
（ｂ）前記細胞試料の細胞に、１または複数のトランスポゾンを含む、１または複数のポリヌクレオチドをトランスフェクトするステップであって、前記１または複数のトランスポゾンが、
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）またはＴＣＲ、サイトカイン、１または複数の細胞タグ、前記サイトカインのリガンド誘導性制御のための遺伝子スイッチポリペプチド、および前記ＤＮＡを、前記細胞のゲノムへと組み込んで、操作細胞の集団をもたらすのに有効なトランスポザーゼをコードし、
前記遺伝子スイッチポリペプチドが、ｉ）第１の核内受容体リガンド結合性ドメインへと融合させたＤＮＡ結合性ドメインを含む、第１の遺伝子スイッチポリペプチド、およびｉｉ）第２の核内受容体リガンド結合性ドメインへと融合させたトランス活性化ドメインを含む、第２の遺伝子スイッチポリペプチドを含み、前記第１の遺伝子スイッチポリペプチドと、前記第２の遺伝子スイッチポリペプチドとが、リンカーにより連結されている、ステップと、
（ｃ）操作細胞の前記集団を、前記対象へと投与するステップと
を含む方法。
［１５４］
前記サイトカインが、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１２、ＩＬ−２１、ＩＬ−１５、ＩＬ−１５Ｒα、またはＩＬ−１５変異体の融合体のうちの少なくとも１つを含む、請求項１５３に記載の方法。
［１５５］
前記サイトカインが、ＩＬ−１２を含む、請求項１５４に記載の方法。
［１５６］
前記１または複数のポリヌクレオチドのうちの、少なくとも１つのポリヌクレオチドが、前記遺伝子スイッチポリペプチドをコードし、前記少なくとも１つのポリヌクレオチドが、プロモーターによりモジュレートされ、前記プロモーターが、組織特異的プロモーターもしくはＥＦ１Ａプロモーター、またはこれらの機能的な変異体である、請求項１５３に記載の方法。
［１５７］
前記プロモーターが、配列番号５８〜６０のうちのいずれか１つに示される配列を有するＥＦ１Ａプロモーター、またはこの機能的な変異体である、請求項１５６に記載の方法。
［１５８］
前記プロモーターが、組織特異的プロモーターであり、前記組織特異的プロモーターが、Ｔ細胞特異的応答エレメントを含む、請求項１５６に記載の方法。
［１５９］
前記プロモーターが、組織特異的プロモーターであり、前記組織特異的プロモーターが、１または複数のＮＦＡＴ応答エレメントを含む、請求項１５６に記載の方法。
［１６０］
前記ＮＦＡＴ応答エレメントが、配列番号５０〜５７のうちのいずれか１つに示される配列を有する、請求項１５９に記載の方法。