【手続補正書】
【提出日】令和3年6月14日(2021.6.14)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
細胞に生物活性剤を送達するためのナノ構造脂質担体（ＮＬＣ）粒子を含む組成物であって、
（ａ）液相脂質と固相脂質との混合物を含む油性コア、
（ｂ）陽イオン性脂質を含む陽イオン性成分、
（ｃ）ソルビタンエステルを含む疎水性界面活性剤、および
（ｄ）親水性界面活性剤であって、前記陽イオン性成分に対するモル比が約0.2から約1.5である、親水性界面活性剤
（ｅ）生物活性剤
を含む、前記ＮＬＣ粒子。
【請求項２】
前記生物活性剤が前記ＮＬＣ粒子と結合している、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記細胞に前記生物活性剤を送達する、請求項１または請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
前記疎水性界面活性剤がソルビタンエステルであり、ソルビタンエステルを含まない対照組成物と比較した場合に前記生物活性剤を前記細胞に送達する前記組成物の能力を増強するのに十分な量でソルビタンエステルが存在する、請求項１〜３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５】
前記生物活性剤がタンパク質であるか、前記生物活性剤がタンパク質をコードしているか、前記生物活性剤がタンパク質抗原であるか又は前記生物活性剤がタンパク質抗原をコードしている、請求項１〜４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項６】
前記細胞が対象内の細胞であり、前記生物活性剤が抗原であり、前記組成物が前記抗原に対する前記対象の免疫応答を誘発させる、請求項１〜４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項７】
前記対象に有効量で投与された場合に、前記生物活性剤を前記ＮＬＣ無しで前記対象に投与した場合に誘発される免疫応答と同等以上の前記抗原に対する免疫応答を誘発させる、請求項１〜６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項８】
前記生物活性剤がＲＮＡ、ｍＲＮＡ、腫瘍溶解性ウイルスＲＮＡまたはＤＮＡである、請求項１〜７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項９】
前記液相脂質が代謝可能なものである、請求項１〜８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１０】
前記液相脂質が植物油、動物油、または合成により作製された油である、請求項１〜９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１１】
前記液相脂質が魚油である、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１２】
前記液相脂質がトリ（カプリル酸／カプリン酸）グリセリル、ビタミンＥ、ラウロイルポリオキシルグリセリド、モノアシルグリセロール、ダイズレシチン、スクアレン、もしくはスクアラン、またはこれらの組み合わせである、請求項１〜９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１３】
前記液相脂質がスクアレン、ヒマワリ油、ダイズ油、オリーブ油、ブドウ種子油、スクアラン、トリ（カプリル酸／カプリン酸）グリセリル、またはこれらの組み合わせである、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１４】
前記液相脂質が天然テルペノイドまたは合成テルペノイドである、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１５】
前記液相脂質がスクアレンである、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１６】
前記固相脂質がグリセロ脂質である、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１７】
前記固相脂質が微結晶トリグリセリドである、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１８】
前記微結晶トリグリセリドがトリミリスチンである、請求項１７に記載の組成物。
【請求項１９】
前記陽イオン性成分が、１，２−ジオレオイルオキシ−３−（トリメチルアンモニオ）プロパン（ＤＯＴＡＰ）、３β−［Ｎ−（Ｎ′，Ｎ′−ジメチルアミノエタン）−カルバモイル］コレステロール（ＤＣコレステロール）、ジメチルジオクタデシルアンモニウム（ＤＤＡ）、１，２−ジミリストイル−３−トリメチルアンモニウムプロパン（ＤＭＴＡＰ）、ジパルミトイル（Ｃ１６：０）トリメチルアンモニウムプロパン（ＤＰＴＡＰ）、ジステアロイルトリメチルアンモニウムプロパン（ＤＳＴＡＰ）、Ｎ−［１−（２，３−ジオレイルオキシ）プロピル］−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＴＭＡ）、Ｎ，Ｎ−ジオレオイル−Ｎ，Ｎ−ジメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＤＡＣ）、１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−エチルホスホコリン（ＤＯＥＰＣ）、１，２−ジオレオイル−３−ジメチルアンモニウム−プロパン（ＤＯＤＡＰ）、および１，２−ジリノレイルオキシ−３−ジメチルアミノプロパン（ＤＬｉｎＤＭＡ）、並びにこれらの組み合わせ、から選択される陽イオン性脂質である、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２０】
前記陽イオン性脂質が１，２−ジオレオイルオキシ−３−（トリメチルアンモニオ）プロパン（ＤＯＴＡＰ）である、請求項１９に記載の組成物。
【請求項２１】
前記親水性界面活性剤がポリエチレングリコールである、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２２】
前記親水性界面活性剤がポリオキシエチレンソルビタンエステルである、請求項２１に記載の組成物。
【請求項２３】
前記ポリオキシエチレンソルビタンエステルが、ポリソルベート８０である、請求項２２記載の組成物。
【請求項２４】
前記ＮＬＣ粒子の平均多分散指数が０．１〜約０．５である、請求項１〜２３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２５】
前記ＮＬＣ粒子のｚ平均粒径が約２０ｎｍ〜約２００ｎｍ、約２０ｎｍ〜約１５０、約２０ｎｍ〜約１００ｎｍ、約２０ｎｍ〜約８０ｎｍ、約２０ｎｍ〜約６０ｎｍ、約４０ｎｍ〜約２００ｎｍ、約４０ｎｍ〜約１５０、約４０ｎｍ〜約１００ｎｍ、約４０ｎｍ〜約８０ｎｍ、または約４０ｎｍ〜約６０ｎｍである、請求項１〜２４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２６】
前記疎水性界面活性剤が１〜５の親水性親油性バランス（ＨＬＢ）値を有するソルビタンエステルである、請求項１〜２５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２７】
前記疎水性界面活性剤がソルビタンエステルであり、前記ソルビタンエステルがソルビタンモノエステルである、請求項１〜２６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２８】
前記疎水性界面活性剤がソルビタンエステルであり、前記ソルビタンエステルがソルビタンモノステアレート又はソルビタンモノオレートである、請求項１〜２６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２９】
前記ＮＬＣ粒子のｚ平均粒径が約４０ｎｍ〜約８０ｎｍである、請求項１〜２８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３０】
油：界面活性剤モル比が約０．０５〜約１２である、請求項１〜４６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３１】
親水性界面活性剤：陽イオン性成分比が約０．５〜約１である、請求項１〜３０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３２】
約０．２ｗ／ｖ％〜約４０ｗ／ｖ％の液相脂質、約０．１ｗ／ｖ％〜約１０ｗ／ｖ％の固相脂質、約０．２ｗ／ｖ％〜約１０ｗ／ｖ％の陽イオン性脂質、約０．２５ｗ／ｖ％〜約５ｗ／ｖ％のソルビタンモノエステル、および約０．５ｗ／ｖ％〜約１０ｗ／ｖ％の親水性界面活性剤を含む、請求項１〜３１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３３】
前記油性コアが、スクアレン及びトリミリスチンを含み、前記陽イオン性脂質がDOTAPであり、前記ソルビタンエステルがソルビタンモノステアレートであり、前記親水性界面活性剤がポリソルベート８０である、請求項１〜３２のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３４】
対象において免疫応答を発生させる方法であって、それを必要とする対象に、治療有効量の請求項１〜３３のいずれか一項に記載の組成物を投与することを含み、前記生物活性剤がタンパク質抗原またはタンパク質抗原をコードする核酸分子である、前記方法。
【請求項３５】
請求項１〜３３のいずれか一項に記載の組成物を作製する方法であって、
（ａ）前記固相脂質と、前記液相脂質と、前記陽イオン性脂質と、前記疎水性界面活性剤とを混合して、油相混合物を形成させること；
（ｂ）前記親水性界面活性剤と、水とを混合して、水相混合物を形成させること；
（ｃ）前記油相混合物を前記水相混合物と混合して、前記ＮＬＣ粒子を形成させること；および
（ｄ）所望により、前記生物活性剤が非共有結合相互作用または可逆的共有結合相互作用によって前記ＮＬＣ粒子の表面と結合するように、前記生物活性剤を前記ＮＬＣ粒子と組み合わせること、
を含む、前記方法。
【請求項３６】
前記生物活性剤がＲＮＡであり、前記ＲＮＡが１または複数のＴＢ抗原をコードしている、請求項１〜３３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３７】
アジュバントをさらに含む、請求項１〜３３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３８】
前記アジュバントがＴＬＲ作動薬、Ｒｉｇ−Ｉ作動薬、サポニン、糖、糖ポリマー、複合糖質、全ウイルス粒子、ウイルス様粒子、ウイルス断片、および細胞断片から選択される、請求項３７に記載の組成物。