【手続補正書】
【提出日】令和3年8月5日(2021.8.5)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
抗体−薬物複合体を含む試料における薬物／抗体比（ＤＡＲ）を決定する方法であって：
前記試料を、サイズ排除クロマトグラフマトリックスに適用する；
第１の光波長（λ１）で、前記試料の吸光度応答の検出を行い、前記第１の光波長は、前記抗体の所定の吸光度最大値である；
第２の光波長（λ２）で、前記試料の吸光度応答の検出を行い、前記第２の光波長は、前記薬物の所定の吸光度最大値である；
前記第１の光波長での前記試料の全吸光度を決定し、そして前記第２の光波長での前記試料の全吸光度を決定し、ここで各全吸光度が、高分子量（ＨＭＷ）ピーク、低分子量（ＬＭＷ）ピーク、及びメインピークの領域を合計することにより、時間間隔に渡って、吸光度応答のピークを統合することにより計算される；
及び、
以下の式１を使用して、前記ＤＡＲを計算する、ことを含み：
【数１】
2020533565.tif 000001
式中、
【数２】
2020533565.tif 000002
は、前記第１の光波長での前記抗体の吸光係数であり；
【数３】
2020533565.tif 000003
は、前記第２の光波長での前記抗体の吸光係数であり；
【数４】
2020533565.tif 000004
は、前記第１の光波長での前記薬物の吸光係数であり；
【数５】
2020533565.tif 000005
は、前記第２の光波長での前記薬物の吸光係数であり；
総面積λ1は、前記第１の光波長での前記試料の総吸光度であり；及び、
総面積λ2は、前記第２の光波長での前記試料の総吸光度である、前記方法。
【請求項２】
既知濃度の前記抗体の溶液の吸光度に基づいて、第１の光波長又は第２の光波長での前記抗体の吸光係数を計算することをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
既知濃度の前記薬物の溶液の吸光度に基づいて、第１の光波長又は第２の光波長での前記薬物の吸光係数を計算することをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記サイズ排除クロマトグラフが、超高速液体クロマトグラフィー（ＵＰＬＣ）、逆相（ＲＰ）ＵＰＬＣ、又は高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記試料が、１μｇ／μＬ〜５００μｇ／μＬの抗体−薬物−複合体（ＡＤＣ）を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記抗体が抗−腫瘍抗体である、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記薬物が、アポトーシス促進、細胞増殖抑制、又は細胞障害剤である、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
吸光度応答のピークの統合が、吸光度応答の各ピークのピーク肩を検出することを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記時間間隔が３〜９分である、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
抗体−薬物複合体を含む第１の試料における薬物／抗体比（ＤＡＲ）を決定する方法であって：
前記抗体−薬物複合体を含む第１の試料の全吸光度を測定するものであって：
前記抗体−薬物複合体を含む前記第１の試料を、サイズ排除クロマトグラフマトリックスに適用する；
第１の光波長（λ１）で、前記第１の試料の吸光度応答の検出を行い、前記第１の波長は、前記抗体の所定の吸光度最大値である；
第２の光波長（λ２）で、前記第１の試料の吸光度応答の検出を行い、前記第２の波長は、前記薬物の所定の吸光度最大値である；
前記第１光波長での前記第１の試料の全吸光度及び第２の波長での前記第１の試料の全吸光度を決定することで、前記全吸光度を測定する、ここで各全吸光度が、高分子量（ＨＭＷ）ピーク、低分子量（ＬＭＷ）ピーク、及びメインピークの領域を合計することにより、時間間隔に渡って、吸光度応答のピークを統合することにより計算される；
前記抗体を含む第２の試料の全吸光度を測定するものであって：
前記抗体を含む前記第２の試料を、サイズ排除クロマトグラフマトリックスに適用する；
前記第１の光波長（λ１）で、前記抗体を含む第２の試料の吸光度を検出する；
前記第２の光波長（λ２）で、前記抗体を含む第２の試料の吸光度を検出する；
前記第１の光波長での前記抗体を含む第２の試料の全吸光度及び第２の光波長での前記抗体を含む第２の試料の全吸光度を決定することで、前記全吸光度を測定する、ここで各全吸光度が、高分子量（ＨＭＷ）ピーク、低分子量（ＬＭＷ）ピーク、及びメインピークの領域を合計することにより、時間間隔に渡って、吸光度応答のピークを統合することにより計算される；及び
以下の式２を使用して、ＤＡＲを計算する、ことを含み：
【数６】
2020533565.tif 000006
式中、
【数７】
2020533565.tif 000007
は、前記第１の光波長での前記抗体の吸光係数であり；
【数８】
2020533565.tif 000008
は、前記第１の光波長での前記薬物の吸光係数であり；
【数９】
2020533565.tif 000009
は、前記第２の光波長での前記抗体の吸光係数であり；
【数１０】
2020533565.tif 000010
は、前記第１の光波長での前記抗体を含む前記第２の試料の総吸光度であり；
【数１１】
2020533565.tif 000011
は、前記第２の光波長での前記抗体を含む前記第２の試料の総吸光度であり；
【数１２】
2020533565.tif 000012
は、前記第１の光波長での前記抗体−薬物複合体を含む前記第１の試料の総吸光度であり；及び、
【数１３】
2020533565.tif 000013
は、前記第２の波長での前記抗体−薬物複合体を含む前記第１の試料の総吸光度である、前記方法。
【請求項１１】
既知濃度の前記抗体の溶液の吸光度に基づいて、第１の光波長又は第２の光波長での前記抗体の吸光係数を計算することをさらに含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
既知濃度の前記薬物の溶液の吸光度に基づいて、第１の光波長又は第２の光波長での前記薬物の吸光係数を計算することをさらに含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１３】
前記サイズ排除クロマトグラフが、超高速液体クロマトグラフィー（ＵＰＬＣ）、逆相（ＲＰ）ＵＰＬＣ、又は高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１４】
前記第１の試料が、１μｇ／μＬ〜５００μｇ／μＬの抗体−薬物−複合体（ＡＤＣ）を含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１５】
前記抗体が抗−腫瘍抗体である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１６】
前記薬物が、アポトーシス促進、細胞増殖抑制、又は細胞障害剤である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１７】
吸光度応答のピークの統合が、吸光度応答の各ピークのピーク肩を検出することを含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１８】
前記時間間隔が３〜９分である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１９】
抗体−薬物複合体を含む試料における薬物／抗体比（ＤＡＲ）を決定する方法であって：
前記試料を容器に入れる；
プローブを前記容器の底部に接触させる；
前記溶液を通る事前に選択した光路長を充足する所定の増分に従って、前記プローブを前記容器の底部から前記試料を通るようにして移動させる；
第１の光波長（λ１）で、前記試料の吸光度の検出を行い、前記第１の波長は、前記抗体の所定の吸光度最大値である；
前記試料に対して前記プローブを移動させ、そして、前記第１の波長で測定するステップを反復する；
前記第１の光波長と光路長での吸光度から回帰直線を生成して、前記回帰直線の勾配を得る；
前記回帰直線の勾配を、前記第１の波長での前記抗体の吸光係数で割って、前記抗体の濃度を決定する；
第２の光波長（λ２）で、前記試料の吸光度の検出を行い、前記第２の波長は、前記薬物の所定の吸光度最大値である；
前記試料に対して前記プローブを移動させ、そして、前記第２の波長で測定するステップを反復する；
前記第２の光波長と光路長での吸光度から回帰直線を生成して、前記回帰直線の勾配を得る；
前記回帰直線の勾配を、前記第２の波長での前記薬物の吸光係数で割って、前記薬物の濃度を決定する；及び
決定した薬物の濃度と、決定した抗体の濃度とを使用して、ＤＡＲを算出する；
ことを含む前記方法。
【請求項２０】
前記サイズ排除クロマトグラフが、超高速液体クロマトグラフィー（ＵＰＬＣ）、逆相（ＲＰ）ＵＰＬＣ、又は高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を含む、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記第１の試料が、１μｇ／μＬ〜５００μｇ／μＬの抗体−薬物−複合体（ＡＤＣ）を含む、請求項１９に記載の方法。
【請求項２２】
前記抗体が抗−腫瘍抗体である、請求項１９に記載の方法。
【請求項２３】
前記薬物が、アポトーシス促進、細胞増殖抑制、又は細胞障害剤である、請求項１９に記載の方法。