【手続補正書】
【提出日】令和3年4月15日(2021.4.15)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
試料において、酢酸（Ｃ２）、プロピオン酸（Ｃ３）、酪酸（Ｃ４）、イソ酪酸（Ｃ４）、２−メチル−酪酸（Ｃ５）、イソ吉草酸（Ｃ５）、吉草酸（Ｃ５）、カプロン酸（ヘキサン酸、Ｃ６）、３−メチル吉草酸、４−メチル吉草酸（イソカプロン酸）、乳酸、ピルビン酸、フマル酸、コハク酸、リンゴ酸、アルファ―ケトグルタル酸、アコニット酸、クエン酸、イソクエン酸、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される１つ以上の分析物の存在、非存在、または量を質量分析によって判定する方法であって、実行時間は、６分未満であり、
ａ）前記１つ以上の分析物の各々から質量分析によって検出可能な１つ以上のイオンを生成するのに適した条件下で、前記試料をイオン化源にさらすことであって、前記１つ以上の分析物は、イオン化の前に誘導体化される、さらすことと、
ｂ）単独の注入において、前記１つ以上の分析物の各々からの前記１つ以上のイオンの量を質量分析によって測定することと、
ｃ）前記１つ以上のイオンの前記測定された量を用いて、前記試料における前記１つ以上の分析物の各々の前記量を判定することとを含む、方法。
【請求項２】
前記方法が、試料において、酢酸（Ｃ２）、プロピオン酸（Ｃ３）、酪酸（Ｃ４）、イソ酪酸（Ｃ４）、２−メチル−酪酸（Ｃ５）、イソ吉草酸（Ｃ５）、吉草酸（Ｃ５）、カプロン酸（ヘキサン酸、Ｃ６）、３−メチル吉草酸、４−メチル吉草酸（イソカプロン酸）、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される１つ以上の分析物の存在、非存在、または量を質量分析によって判定する方法である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
ピバル酸の干渉が排除される、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
２つ以上の分析物の前記量が判定される、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
前記２つ以上の分析物の１つが、酢酸（Ｃ２）、プロピオン酸（Ｃ３）、酪酸（Ｃ４）、イソ酪酸（Ｃ４）、２−メチル−酪酸（Ｃ５）、イソ吉草酸（Ｃ５）、吉草酸（Ｃ５）、カプロン酸（ヘキサン酸、Ｃ６）、３−メチル吉草酸、４−メチル吉草酸（イソカプロン酸）からなる群から選択され、
前記２つ以上の分析物の１つが、乳酸、ピルビン酸、フマル酸、コハク酸、リンゴ酸、アルファ−ケトグルタル酸、アコニット酸、クエン酸、イソクエン酸、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記試料が、少なくとも２，４−ジフルオロフェニルヒドラジン塩酸塩または３−ニトロフェニルヒドラジン塩酸塩を用いて誘導体化される、請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
酢酸（Ｃ２）、プロピオン酸（Ｃ３）、および酪酸（Ｃ４）の前記量が判定される、請求項４に記載の方法。
【請求項８】
酢酸（Ｃ２）、プロピオン酸（Ｃ３）、酪酸（Ｃ４）、および乳酸の前記量が判定される、請求項４に記載の方法。
【請求項９】
酢酸（Ｃ２）、プロピオン酸（Ｃ３）、イソ酪酸（Ｃ４）、および酪酸（Ｃ４）の前記量が判定される、請求項４に記載の方法。
【請求項１０】
酢酸（Ｃ２）、プロピオン酸（Ｃ３）、イソ酪酸（Ｃ４）、酪酸（Ｃ４）、２−メチル−酪酸（Ｃ５）、イソ吉草酸（Ｃ５）、吉草酸（Ｃ５）、およびカプロン酸（ヘキサン酸、Ｃ６）の前記量が判定される、請求項４に記載の方法。
【請求項１１】
前記質量分析計がネガティブモードで動作する、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
前記試料が、イオン化源にさらされる前に、液体クロマトグラフィによって精製されている、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
前記１つ以上の分析物の各々の前記量を判定するのに用いられる前記１つ以上のイオンが、表４および５のイオンから選択される１つ以上のイオンである、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の方法。
【表４−１】
2020517929.tif 000001
【表４−２】
2020517929.tif 000002
【表４−３】
2020517929.tif 000003
【表５−１】
2020517929.tif 000004
【表５−２】
2020517929.tif 000005
【請求項１４】
キットであって、酢酸（Ｃ２）、プロピオン酸（Ｃ３）、イソ酪酸（Ｃ４）、酪酸（Ｃ４）、２−メチル−酪酸（Ｃ５）、イソ吉草酸（Ｃ５）、吉草酸（Ｃ５）、カプロン酸（ヘキサン酸、Ｃ６）、乳酸、ピルビン酸、フマル酸、コハク酸、リンゴ酸、アルファ−ケトグルタル酸、アコニット酸、クエン酸、イソクエン酸、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される１つ以上の分析物の各々に対する内部標準として１つ以上の同位体標識された類似物質、および包装材料および前記キットの使用説明を備える、キット。
【請求項１５】
誘導体化試薬、触媒試薬、校正標準、または品質管理試料をさらに備える、請求項１４に記載のキット。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１０３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１０３】
別の例では、８のＳＣＦＡ分析物が、１０２の細菌培養上清試料において測定された。代表的な試料の結果を表６に提示する。
【表６】
2020517929.tif 000006
本発明に関連して、以下の内容を更に開示する。
［１］
試料において、酢酸（Ｃ２）、プロピオン酸（Ｃ３）、酪酸（Ｃ４）、イソ酪酸（Ｃ４）、２−メチル−酪酸（Ｃ５）、イソ吉草酸（Ｃ５）、吉草酸（Ｃ５）、カプロン酸（ヘキサン酸、Ｃ６）、３−メチル吉草酸、４−メチル吉草酸（イソカプロン酸）、乳酸、ピルビン酸、フマル酸、コハク酸、リンゴ酸、アルファ―ケトグルタル酸、アコニット酸、クエン酸、イソクエン酸、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される１つ以上の分析物の存在、非存在、または量を質量分析によって判定する方法であって、実行時間は、６分未満であり、
ａ）前記１つ以上の分析物の各々から質量分析によって検出可能な１つ以上のイオンを生成するのに適した条件下で、前記試料をイオン化源にさらすことであって、前記１つ以上の分析物は、イオン化の前に誘導体化される、さらすことと、
ｂ）単独の注入において、前記１つ以上の分析物の各々からの前記１つ以上のイオンの量を質量分析によって測定することと、
ｃ）前記１つ以上のイオンの前記測定された量を用いて、前記試料における前記１つ以上の分析物の各々の前記量を判定することとを含む、方法。
［２］
試料において、酢酸（Ｃ２）、プロピオン酸（Ｃ３）、酪酸（Ｃ４）、イソ酪酸（Ｃ４）、２−メチル−酪酸（Ｃ５）、イソ吉草酸（Ｃ５）、吉草酸（Ｃ５）、カプロン酸（ヘキサン酸、Ｃ６）、３−メチル吉草酸、４−メチル吉草酸（イソカプロン酸）、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される１つ以上の分析物の存在、非存在、または量を質量分析によって判定する方法であって、実行時間は、６分未満であり、
ａ）前記１つ以上の分析物の各々から質量分析によって検出可能な１つ以上のイオンを生成するのに適した条件下で、前記試料をイオン化源にさらすことであって、前記１つ以上の分析物は、イオン化の前に誘導体化される、さらすことと、
ｂ）単独の注入において、前記１つ以上の分析物の各々からの前記１つ以上のイオンの量を質量分析によって測定することと、
ｃ）前記１つ以上のイオンの前記測定された量を用いて、前記試料における前記１つ以上の分析物の各々の前記量を判定することとを含む、方法。
［３］
試料において、酢酸（Ｃ２）、プロピオン酸（Ｃ３）、酪酸（Ｃ４）、イソ酪酸（Ｃ４）、２−メチル−酪酸（Ｃ５）、イソ吉草酸（Ｃ５）、吉草酸（Ｃ５）、カプロン酸（ヘキサン酸、Ｃ６）、３−メチル吉草酸、４−メチル吉草酸（イソカプロン酸）、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される１つ以上の分析物の存在、非存在、または量を質量分析によって判定する方法であって、ピバル酸の干渉が排除され、
ａ）前記１つ以上の分析物の各々から質量分析によって検出可能な１つ以上のイオンを生成するのに適した条件下で、前記試料をイオン化源にさらすことであって、前記１つ以上の分析物は、イオン化の前に誘導体化される、さらすことと、
ｂ）単独の注入において、前記１つ以上の分析物の各々からの前記１つ以上のイオンの前記量を質量分析によって測定することと、
ｃ）前記１つ以上のイオンの前記測定された量を用いて、前記試料における前記１つ以上の分析物の各々の前記量を判定することとを含む、方法。
［４］
試料において、乳酸、ピルビン酸、フマル酸、コハク酸、リンゴ酸、アルファ−ケトグルタル酸、アコニット酸、クエン酸、イソクエン酸、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される１つ以上の分析物の存在、非存在、または量を質量分析によって判定する方法であって、実行時間は、６分未満であり、
ａ）前記１つ以上の分析物の各々から質量分析によって検出可能な１つ以上のイオンを生成するのに適した条件下で、前記試料をイオン化源にさらすことであって、前記１つ以上の分析物は、イオン化の前に誘導体化される、さらすことと、
ｂ）単独の注入において、前記１つ以上の分析物の各々からの前記１つ以上のイオンの前記量を質量分析によって測定することと、
ｃ）前記１つ以上のイオンの前記測定された量を用いて、前記試料における前記１つ以上の分析物の各々の前記量を判定することとを含む、方法。
［５］
２つ以上の分析物の前記量が判定される、［１］、［２］、［３］、または［４］のいずれかに記載の方法。
［６］
３つ以上の分析物の前記量が判定される、［１］、［２］、［３］、または［４］のいずれかに記載の方法。
［７］
４つ以上の分析物の前記量が判定される、［１］、［２］、［３］、または［４］のいずれかに記載の方法。
［８］
５つ以上の分析物の前記量が判定される、［１］、［２］、［３］、または［４］のいずれかに記載の方法。
［９］
前記２つ以上の分析物の１つが、酢酸（Ｃ２）、プロピオン酸（Ｃ３）、酪酸（Ｃ４）、イソ酪酸（Ｃ４）、２−メチル−酪酸（Ｃ５）、イソ吉草酸（Ｃ５）、吉草酸（Ｃ５）、カプロン酸（ヘキサン酸、Ｃ６）、３−メチル吉草酸、４−メチル吉草酸（イソカプロン酸）からなる群から選択され、
前記２つ以上の分析物の１つが、乳酸、ピルビン酸、フマル酸、コハク酸、リンゴ酸、アルファ−ケトグルタル酸、アコニット酸、クエン酸、イソクエン酸、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される、［５］に記載の方法。
［１０］
前記２つ以上の分析物の１つが、ピルビン酸である、［５］に記載の方法。
［１１］
前記試料が、少なくとも２，４−ジフルオロフェニルヒドラジン塩酸塩または３−ニトロフェニルヒドラジン塩酸塩を用いて誘導体化される、［１］、［２］、［３］、または［４］のいずれかに記載の方法。
［１２］
前記試料が、少なくとも２，４−ジフルオロフェニルヒドラジン塩酸塩を用いて誘導体化され、前記試料が、糞便試料である、［１］、［２］、［３］、または［４］のいずれかに記載の方法。
［１３］
前記試料が、少なくとも３−ニトロフェニルヒドラジン塩酸塩を用いて誘導体化され、前記試料が、血漿試料である、［１］、［２］、［３］、または［４］のいずれかに記載の方法。
［１４］
ＥＣＤ塩酸塩、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール、Ｎ，Ｎ’ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）、およびジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）からなる群から選択される１つ以上のカップリング触媒も誘導体化に用いられる、［１１］に記載の方法。
［１５］
酢酸（Ｃ２）、プロピオン酸（Ｃ３）、および酪酸（Ｃ４）の前記量が判定される、［６］に記載の方法。
［１６］
酢酸（Ｃ２）、プロピオン酸（Ｃ３）、酪酸（Ｃ４）、および乳酸の前記量が判定される、［７］に記載の方法。
［１７］
酢酸（Ｃ２）、プロピオン酸（Ｃ３）、イソ酪酸（Ｃ４）、および酪酸（Ｃ４）の前記量が判定される、［７］に記載の方法。
［１８］
酢酸（Ｃ２）、プロピオン酸（Ｃ３）、イソ酪酸（Ｃ４）、酪酸（Ｃ４）、２−メチル−酪酸（Ｃ５）、イソ吉草酸（Ｃ５）、吉草酸（Ｃ５）、およびカプロン酸（ヘキサン酸、Ｃ６）の前記量が判定される、［７］に記載の方法。
［１９］
前記質量分析計がネガティブモードで動作する、［１］、［２］、［３］、または［４］のいずれかに記載の方法。
［２０］
前記試料が、イオン化源にさらされる前に、液体クロマトグラフィによって精製されている、［１］、［２］、［３］、または［４］のいずれかに記載の方法。
［２１］
前記液体クロマトグラフィが、高速液体クロマトグラフィ、超高速液体クロマトグラフィ、および乱流液体クロマトグラフィからなる群から選択される、［２０］に記載の方法。
［２２］
前記試料が、イオン化源にさらされる前に、高速液体クロマトグラフィまたは超高速液体クロマトグラフィのいずれかによって精製されている、［２０］に記載の方法。
［２３］
内部標準が、前記試料における前記１つ以上の分析物の前記量を判定するのに用いられる、［１］、［２］、［３］、または［４］のいずれかに記載の方法。
［２４］
前記内部標準が、測定される前記１つ以上の分析物のうちの少なくとも１つの同位体標識された類似物質を備える、［２３］に記載の方法。
［２５］
前記試料が、生体試料を備える、［１］、［２］、［３］、または［４］のいずれかに記載の方法。
［２６］
前記試料が、血液、血漿、尿、糞便、細菌培養上清、血清、母乳、唾液、および組織からなる群から選択される、［２５］に記載の方法。
［２７］
前記１つ以上の分析物の各々の前記量を判定するのに用いられる前記１つ以上のイオンが、表４および５のイオンから選択される１つ以上のイオンである、［１］、［２］、［３］、または［４］のいずれかに記載の方法。
［２８］
前記質量分析がタンデム質量分析である、［１］、［２］、［３］、または［４］のいずれかに記載の方法。
［２９］
キットであって、酢酸（Ｃ２）、プロピオン酸（Ｃ３）、イソ酪酸（Ｃ４）、酪酸（Ｃ４）、２−メチル−酪酸（Ｃ５）、イソ吉草酸（Ｃ５）、吉草酸（Ｃ５）、カプロン酸（ヘキサン酸、Ｃ６）、乳酸、ピルビン酸、フマル酸、コハク酸、リンゴ酸、アルファ−ケトグルタル酸、アコニット酸、クエン酸、イソクエン酸、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される１つ以上の分析物の各々に対する内部標準として１つ以上の同位体標識された類似物質、および包装材料および前記キットの使用説明を備える、キット。
［３０］
誘導体化試薬、触媒試薬、校正標準、または品質管理試料をさらに備える、［２９］に記載のキット。