【手続補正書】
【提出日】令和3年3月2日(2021.3.2)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＡＡＶ調製物の用量を定量化する方法であって、ＡＡＶ特異的ＥＬＩＳＡアッセイにより、ＡＡＶ調製物中のＡＡＶカプシドの総数を定量化すること、及び低温透過型電子顕微鏡法（ＣｒｙｏＴＥＭ）により、ＡＡＶ調製物又はＡＡＶ画分中の完全ＡＡＶカプシドの空ＡＡＶカプシドと対比したパーセンテージ又は比を評価することを含む、方法。
【請求項２】
ＡＡＶ調製物中の完全ＡＡＶカプシドの濃度を測定する方法であって、ＡＡＶ特異的ＥＬＩＳＡアッセイにより、ＡＡＶ調製物中のＡＡＶカプシドの総数を定量化すること、及び低温透過型電子顕微鏡法（ＣｒｙｏＴＥＭ）により、ＡＡＶ調製物中の完全ＡＡＶカプシドの空ＡＡＶカプシドと対比したパーセンテージを評価することを含む、方法。
【請求項３】
特定用量のＡＡＶ調製物を調製する方法であって、
（ｉ）精製ＡＡＶ画分を得ること、
（ｉｉ）ＡＡＶ特異的ＥＬＩＳＡアッセイを用いて、前記精製ＡＡＶ画分中のＡＡＶカプシドの濃度を測定すること、
（ｉｉｉ）ＡＡＶカプシドの総数に基づき所望の濃度を有するＡＡＶ調製物を調製すること、及び
（ｉｖ）低温透過型電子顕微鏡法（ＣｒｙｏＴＥＭ）により、前記ＡＡＶ調製物又は前記ＡＡＶ画分中の完全ＡＡＶカプシドの空ＡＡＶカプシドと対比したパーセンテージ又は比を評価すること
を含む、方法。
【請求項４】
ＡＡＶ調製物を作成する方法であって、
（ｉ）目的遺伝子を含む少なくとも１つのプラスミドで宿主細胞をトランスフェクトすること、
（ｉｉ）ＡＡＶカプシドを含む細胞培養物の上清又は細胞懸濁液を収集してＡＡＶ画分を作成すること、
（ｉｉｉ）ＡＡＶ特異的ＥＬＩＳＡアッセイを用いて、前記ＡＡＶ画分中のＡＡＶカプシドの総数を定量化すること、
（ｉｖ）ＡＡＶカプシドの総数に基づき、所望の濃度を有するＡＡＶ調製物を調製すること、及び
（ｖ）低温透過型電子顕微鏡法（ＣｒｙｏＴＥＭ）により、前記ＡＡＶ調製物又は前記ＡＡＶ画分中の完全ＡＡＶカプシドの空ＡＡＶカプシドと対比したパーセンテージ又は比を評価すること、
を含む、方法。
【請求項５】
前記評価するステップが、そのＡＡＶ調製物又はＡＡＶ画分が以前のＡＡＶ調製物又はＡＡＶ画分と一貫した完全ＡＡＶカプシドの空ＡＡＶカプシドと対比したパーセンテージ又は比を有することを試験するために１回行われる、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
ＡＡＶ画分を濃縮する及び／又はＡＡＶ画分から空カプシドの少なくとも一部を除去することをさらに含む、請求項３〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
ＡＡＶ調製物を凍結乾燥することをさらに含む、請求項３〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記評価するステップが、ネガティブ染色ＴＥＭ、キャピラリー電気泳動、分析用超遠心法、ネイティブアガロースゲル、アルカリアガロースゲル、サザンブロット、ドットブロットハイブリダイゼーション、ＵＶ分光測光法、弱陰イオン交換クロマトグラフィ、又は質量分析により、前記パーセンテージ又は比を決定することを含む、請求項１〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記ＣｒｙｏＴＥＭが、
（ｉ）不活性支持体中の基材にＡＡＶ調製物又はＡＡＶ画分を包埋すること、
（ｉｉ）包埋ＡＡＶ調製物又はＡＡＶ画分を瞬間凍結すること、
（ｉｉｉ）低温透過型電子顕微鏡法を用いて包埋ＡＡＶ調製物又はＡＡＶ画分を画像化すること、及び
（ｉｖ）ＡＡＶ調製物又はＡＡＶ画分中の完全ＡＡＶカプシドの空ＡＡＶカプシドと対比したパーセンテージを定量化すること
を含む、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記基材が非結晶性の非晶質氷である、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
ＡＡＶ調製物又はＡＡＶ画分が細胞破片を含まない、請求項９又は１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記評価するステップが、ＥＬＩＳＡアッセイの前に行われる、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
前記評価するステップが、ＥＬＩＳＡアッセイの後に行われる、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
前記ＥＬＩＳＡアッセイが、ＡＡＶ抗原特異的な、サンドイッチＥＬＩＳＡ、直接ＥＬＩＳＡ、間接ＥＬＩＳＡ、又は競合ＥＬＩＳＡアッセイである、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
ＡＡＶ抗原が、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、キメラＡＡＶ、遺伝子操作されたＡＡＶ、又は化学修飾されたＡＡＶに由来する、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
定量ＰＣＲを含まない、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
完全ＡＡＶカプシドのパーセンテージが約４０％〜約１００％である、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
少なくとも６０％のＡＡＶカプシドが完全ＡＡＶカプシドである、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
前記濃度が約１ｘ１０１０ｃｐ／ｍｌ〜約１ｘ１０２０ｃｐ／ｍｌの間である、請求項２〜１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
ＡＡＶが、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、又はキメラＡＡＶベクターである、請求項１〜１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
ＡＡＶが、ＡＡＶ６、ＡＡＶ８、又はＡＡＶ９である、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
ＡＡＶが、遺伝子操作されたＡＡＶ、化学修飾されたＡＡＶ、又はその両方である、請求項１〜２１のいずれか一項に記載の方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１５５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１５５】
本明細書に記載されているものに加えて、本発明の様々な修飾が上記の記載から当業者に明らかとなるであろう。そのような修飾も添付の特許請求の範囲内に含まれることが意図されている。すべての特許、特許出願、及び非特許文献を含む、本出願において挙げられている各参考文献は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
最後に、本発明の好ましい実施態様を項分け記載する。
［実施態様１］
ＡＡＶ調製物の用量を定量化する方法であって、ＡＡＶ特異的ＥＬＩＳＡアッセイにより、ＡＡＶ調製物中のＡＡＶカプシドの総数を定量化するステップを含む、方法。
［実施態様２］
ＡＡＶ調製物の用量を定量化する方法であって、ＡＡＶ特異的ＥＬＩＳＡアッセイにより、ＡＡＶ調製物中のＡＡＶカプシドの総数を定量化するステップ、及び低温透過型電子顕微鏡法（ＣｒｙｏＴＥＭ）により、ＡＡＶ調製物中の完全対空（完全：空）ＡＡＶカプシドのパーセンテージ又は比を評価するステップを含む、方法。
［実施態様３］
ＡＡＶ調製物中の完全ＡＡＶカプシドの濃度を測定する方法であって、ＡＡＶ特異的ＥＬＩＳＡアッセイにより、ＡＡＶ調製物中のＡＡＶカプシドの総数を定量化するステップ、及び低温透過型電子顕微鏡法（ＣｒｙｏＴＥＭ）により、ＡＡＶ調製物中の完全対空ＡＡＶカプシドのパーセンテージを評価するステップを含む、方法。
［実施態様４］
前記ＥＬＩＳＡアッセイが、ＡＡＶ抗原特異的な、サンドイッチＥＬＩＳＡ、直接ＥＬＩＳＡ、間接ＥＬＩＳＡ、又は競合ＥＬＩＳＡアッセイである、実施態様１〜３のいずれかに記載の方法。
［実施態様５］
前記ＥＬＩＳＡアッセイが、ＡＡＶ抗原に特異的なサンドイッチＥＬＩＳＡアッセイである、実施態様１〜４のいずれかに記載の方法。
［実施態様６］
ＡＡＶ調製物中の完全対空（完全：空）ＡＡＶカプシドのパーセンテージ又は比を評価するステップをさらに含む、実施態様１に記載の方法。
［実施態様７］
前記評価するステップが、ＥＬＩＳＡアッセイの前又は後に行われる、実施態様１〜６のいずれかに記載の方法。
［実施態様８］
前記評価するステップが、低温透過型電子顕微鏡法（ＣｒｙｏＴＥＭ）、ネガティブ染色ＴＥＭ、キャピラリー電気泳動、分析用超遠心法、ネイティブアガロースゲル、アルカリアガロースゲル、サザンブロット、ドットブロットハイブリダイゼーション、ＵＶ分光測光法、弱陰イオン交換クロマトグラフィ、又は質量分析により、完全：空ＡＡＶカプシドのパーセンテージ又は比を決定することを含む、実施態様６又は７に記載の方法。
［実施態様９］
前記評価するステップが、ＣｒｙｏＴＥＭを使用することを含む、実施態様６〜８のいずれかに記載の方法。
［実施態様１０］
ＣｒｙｏＴＥＭステップが：
（ｉ）不活性支持体中の基材にＡＡＶ調製物を包埋する；
（ｉｉ）包埋ＡＡＶ調製物を瞬間凍結する；
（ｉｉｉ）低温透過型電子顕微鏡法を用いて包埋ＡＡＶ調製物を画像化する；及び
（ｉｖ）ＡＡＶ調製物中の完全ＡＡＶカプシド対空ＡＡＶカプシドのパーセンテージを定量化することを含む、実施態様８又は９に記載の方法。
［実施態様１１］
前記基材が非結晶性の非晶質氷である、実施態様１０に記載の方法。
［実施態様１２］
ＡＡＶ調製物が細胞破片を含まない、実施態様１０に記載の方法。
［実施態様１３］
定量ＰＣＲを含まない、実施態様１〜１２のいずれかに記載の方法。
［実施態様１４］
ＡＡＶ調製物をそれを必要とする対象に投与する方法であって、
（ｉ）精製ＡＡＶ調製物を得るステップ；
（ｉｉ）ＡＡＶ特異的ＥＬＩＳＡアッセイを用いて、精製ＡＡＶ調製物中のＡＡＶカプシドの濃度を測定するステップ；及び
（ｉｉｉ）治療有効量の精製ＡＡＶ調製物を対象に投与するステップ
を含む、方法。
［実施態様１５］
前記ＥＬＩＳＡアッセイが、ＡＡＶ抗原特異的な、サンドイッチＥＬＩＳＡ、直接ＥＬＩＳＡ、間接ＥＬＩＳＡ、又は競合ＥＬＩＳＡアッセイである、実施態様１４に記載の方法。
［実施態様１６］
前記ＥＬＩＳＡアッセイが、ＡＡＶ抗原に特異的なサンドイッチＥＬＩＳＡアッセイである、実施態様１４又は１５に記載の方法。
［実施態様１７］
ＡＡＶ調製物中の完全対空（完全：空）ＡＡＶカプシドのパーセンテージ又は比を評価するステップをさらに含む、実施態様１４〜１６のいずれかに記載の方法。
［実施態様１８］
前記評価するステップが、ＥＬＩＳＡアッセイの前又は後に行われる、実施態様１７に記載の方法。
［実施態様１９］
前記評価するステップが、ＣｒｙｏＴＥＭ、分析用超遠心法、ネイティブアガロースゲル、アルカリアガロースゲル、サザンブロット、ドットブロットハイブリダイゼーション、ＵＶ分光測光法、弱陰イオン交換クロマトグラフィ、又は質量分析により、完全：空ＡＡＶカプシドのパーセンテージ又は比を決定することを含む、実施態様１７又は１８に記載の方法。
［実施態様２０］
前記評価するステップが、ＣｒｙｏＴＥＭを使用することを含む、実施態様１７〜１９のいずれかに記載の方法。
［実施態様２１］
精製ＡＡＶ調製物の濃度が、約１ｘ１０１０ｃｐ／ｍｌ〜約１ｘ１０２０ｃｐ／ｍｌである、実施態様１４〜２０のいずれかに記載の方法。
［実施態様２２］
ＡＡＶ調製物の治療有効量が、約１ｘ１０１０ｃｐ／ｋｇ〜約１ｘ１０１６ｃｐ／ｋｇの間の用量である、実施態様１４〜２１のいずれかに記載の方法。
［実施態様２３］
定量ＰＣＲを含まない、実施態様１４〜２２のいずれかに記載の方法。
［実施態様２４］
前記対象がヒトである、実施態様１４〜２３のいずれかに記載の方法。
［実施態様２５］
ＡＡＶ調製物をそれを必要とする対象に特定用量で投与する方法であって、
（ｉ）精製ＡＡＶ調製物を得るステップ；
（ｉｉ）ＡＡＶ特異的ＥＬＩＳＡアッセイを用いて、精製ＡＡＶ調製物中のＡＡＶカプシドの濃度を測定するステップ；及び
（ｉｉｉ）特定用量の精製ＡＡＶ調製物を対象に投与するステップ
を含む、方法。
［実施態様２６］
前記ＥＬＩＳＡアッセイが、ＡＡＶ抗原特異的な、サンドイッチＥＬＩＳＡ、直接ＥＬＩＳＡ、間接ＥＬＩＳＡ、又は競合ＥＬＩＳＡアッセイである、実施態様２５に記載の方法。
［実施態様２７］
前記ＥＬＩＳＡアッセイが、ＡＡＶ抗原に特異的なサンドイッチＥＬＩＳＡアッセイである、実施態様２５又は２６に記載の方法。
［実施態様２８］
ＡＡＶ調製物中の完全対空（完全：空）ＡＡＶカプシドのパーセンテージ又は比を評価するステップをさらに含む、実施態様２５又は２７に記載の方法。
［実施態様２９］
前記評価するステップが、ＥＬＩＳＡアッセイの前又は後に行われる、実施態様２８に記載の方法。
［実施態様３０］
前記評価するステップが、ＣｒｙｏＴＥＭ、分析用超遠心法、ネイティブアガロースゲル、アルカリアガロースゲル、サザンブロット、ドットブロットハイブリダイゼーション、ＵＶ分光測光法、弱陰イオン交換クロマトグラフィ、又は質量分析により、完全：空ＡＡＶカプシドのパーセンテージ又は比を決定することを含む、実施態様２８又は２９に記載の方法。
［実施態様３１］
前記評価するステップが、ＣｒｙｏＴＥＭを使用することを含む、実施態様２８〜３０のいずれかに記載の方法。
［実施態様３２］
定量ＰＣＲを含まない、実施態様２５〜３１のいずれかに記載の方法。
［実施態様３３］
精製ＡＡＶ調製物の濃度が、約１ｘ１０１０ｃｐ／ｍｌ〜約１ｘ１０２０ｃｐ／ｍｌである、実施態様２５〜３２のいずれかに記載の方法。
［実施態様３４］
ＡＡＶ調製物の治療有効量が、約１ｘ１０１０ｃｐ／ｋｇ〜約１ｘ１０１６ｃｐ／ｋｇの間の用量である、実施態様２５〜３３のいずれかに記載の方法。
［実施態様３５］
前記対象がヒトである、実施態様２５〜３４のいずれかに記載の方法。
［実施態様３６］
ＡＡＶ調製物を生成する方法であって、
（ｉ）目的遺伝子を含む少なくとも１つのプラスミドで宿主細胞をトランスフェクトするステップ；
（ｉｉ）ＡＡＶカプシドを含む細胞培養物の上清又は細胞懸濁液を収集してＡＡＶ画分を作成するステップ；
（ｉｉｉ）ＡＡＶ特異的ＥＬＩＳＡアッセイを用いて、ＡＡＶ画分中のＡＡＶカプシドの総数を定量化するステップ；及び
（ｉｖ）前記ＡＡＶカプシドの総数に基づき、所望の濃度を有するＡＡＶ調製物を調製するステップ
を含む、方法。
［実施態様３７］
ＡＡＶ画分を濃縮するステップをさらに含む、実施態様３６に記載の方法。
［実施態様３８］
ＡＡＶ画分から空カプシドの少なくとも一部を除去するステップをさらに含む、実施態様３６又は３７に記載の方法。
［実施態様３９］
前記ＥＬＩＳＡアッセイが、ＡＡＶ抗原特異的な、サンドイッチＥＬＩＳＡ、直接ＥＬＩＳＡ、間接ＥＬＩＳＡ、又は競合ＥＬＩＳＡアッセイである、実施態様３６〜３８のいずれかに記載の方法。
［実施態様４０］
前記ＥＬＩＳＡアッセイが、ＡＡＶ抗原に特異的なサンドイッチＥＬＩＳＡアッセイである、実施態様３６〜３９のいずれかに記載の方法。
［実施態様４１］
ＡＡＶ調製物中の完全対空（完全：空）ＡＡＶカプシドのパーセンテージ又は比を評価するステップをさらに含む、実施態様３６〜４０のいずれかに記載の方法。
［実施態様４２］
前記評価するステップが、ＥＬＩＳＡアッセイの前又は後に行われる、実施態様４１に記載の方法。
［実施態様４３］
前記評価するステップが、ＣｒｙｏＴＥＭ、分析用超遠心法、ネイティブアガロースゲル、アルカリアガロースゲル、サザンブロット、ドットブロットハイブリダイゼーション、ＵＶ分光測光法、弱陰イオン交換クロマトグラフィ、又は質量分析により、完全：空ＡＡＶカプシドのパーセンテージ又は比を決定することを含む、実施態様４１又は４２に記載の方法。
［実施態様４４］
前記評価するステップが、ＣｒｙｏＴＥＭを使用することを含む、実施態様４１〜４３のいずれかに記載の方法。
［実施態様４５］
定量ＰＣＲを含まない、実施態様３６〜４４のいずれかに記載の方法。
［実施態様４６］
完全ＡＡＶカプシドのパーセンテージは約４０％〜約１００％である、実施態様３６〜４５のいずれかに記載の方法。
［実施態様４７］
少なくとも６０％のＡＡＶカプシドが完全ＡＡＶカプシドである、実施態様３６〜４６のいずれかに記載の方法。
［実施態様４８］
前記濃度は約１ｘ１０１０ｃｐ／ｍｌ〜約１ｘ１０２０ｃｐ／ｍｌの間である、実施態様３６〜４７のいずれかに記載の方法。
［実施態様４９］
ＡＡＶ調製物を凍結乾燥するステップをさらに含む。実施態様３６〜４８のいずれかに記載の方法。
［実施態様５０］
ＡＡＶは、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、又はキメラＡＡＶベクターである、実施態様１〜４９のいずれかに記載の方法。
［実施態様５１］
ＡＡＶはＡＡＶ８である、実施態様５０に記載の方法。
［実施態様５２］
ＡＡＶはＡＡＶ９である、実施態様５０に記載の方法。
［実施態様５３］
ＡＡＶは、遺伝子操作ＡＡＶ、化学修飾ＡＡＶ、又はその両方である、実施態様１〜５２のいずれかに記載の方法。
［実施態様５４］
ＡＡＶ抗原は、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、キメラＡＡＶ、遺伝子操作ＡＡＶ、又は化学修飾ＡＡＶに由来する、実施態様４〜１３、１５〜２４、２６〜３５、及び３９〜５３のいずれかに記載の方法。
［実施態様５５］
実施態様３６〜５４のいずれかに記載の方法により生成されたＡＡＶ調製物。
［実施態様５６］
特定の効力を有し、該効力が、ｉｎ  ｖｉｔｒｏシステム、ｉｎ  ｖｉｖｏシステム、又はその両方の組合せを用いて確認される、実施態様５５に記載のＡＡＶ調製物。