【手続補正書】
【提出日】令和3年4月12日(2021.4.12)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
癌を治療、予防、または改善する方法においての使用のための、組換えファージミド粒子が形質導入された標的腫瘍細胞内で導入遺伝子を発現するための組換えファージミド粒子であって、前記ファージミド粒子が、１つ以上のサイトカインをコードする核酸配列を含む少なくとも１つの導入遺伝子発現カセットを含み、かつそのバクテリオファージゲノムの少なくとも５０％を欠くゲノムを含み、前記ファージミド粒子が原核宿主からの前記粒子の形成、パッケージング、または押し出しに必要なそのゲノム中にバクテリオファージ構造遺伝子を欠いており、ファージミド粒子ゲノムがバクテリオファージの複製起点を含み、前記方法が、１つ以上のサイトカインが発現されるように、前記腫瘍細胞に少なくとも隣接して前記核酸配列を送達することを含む、組換えファージミド粒子。
【請求項２】
前記導入遺伝子発現カセットが、前記腫瘍細胞におけるアポトーシス誘発、内因性抗腫瘍応答を促進するための前記腫瘍細胞の変化、他の治療を促進するための前記腫瘍細胞の変化、または治療を促進するための腫瘍微小環境の変化の効果を有するサイトカインをコードする、請求項１に記載の使用のための組換えファージミド粒子。
【請求項３】
前記サイトカインが、ＩＬ−４、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＴＮＦα、ＴＲＡＩＬ、ＩＦＮ−γ、またはそれらの任意の組み合わせであり、任意選択的に前記サイトカインがＩＬ−１５である、請求項１または２に記載の使用のための組換えファージミド粒子。
【請求項４】
前記サイトカインが、前記サイトカインの発現および／または分泌を増加させるように構成された非内因性シグナルペプチドを含むハイブリッドサイトカインであり、任意選択的に前記非内因性シグナルペプチドが、ＩＬ−２シグナルペプチドである、請求項１〜３のいずれか１項に記載の使用のための組換えファージミド粒子。
【請求項５】
前記ハイブリッドサイトカインが、ＴＮＦαの発現および／または分泌を増加させるように構成されたＩＬ−２シグナルペプチドを含むハイブリッドＴＮＦαであり、任意選択的に
ｉ）前記ハイブリッドＴＮＦαが、実質的に配列番号２２に示されるアミノ酸配列またはそのフラグメントもしくは変異体を含む；および／または
ｉｉ）前記ハイブリッドＴＮＦαが、配列番号２３を含む核酸配列またはそのフラグメントもしくは変異体によってコードされている、請求項４に記載の使用のための組換えファージミド粒子。
【請求項６】
小児脳腫瘍、任意選択的にびまん性内在性橋グリオーマ（ＤＩＰＧ）または髄芽腫の治療、予防、または改善に使用するための、請求項１〜５のいずれか１項に記載の使用のための組換えファージミド粒子。
【請求項７】
原核宿主から組換えファージミド粒子を産生するためのシステムであって、前記システムは、
（ｉ）原核宿主内に存続するように構成され、１つ以上のサイトカインをコードする核酸配列を含む少なくとも１つの導入遺伝子発現カセット、およびベクターの一本鎖ＤＮＡへの複製を可能にするためのパッケージングシグナルを含む、第１のベクター；ならびに
（ｉｉ）前記一本鎖ＤＮＡのパッケージングに必要な構造タンパク質をコードする核酸を含み、前記原核宿主からの組換えファージミド粒子を形成させおよび押し出させる第２のベクター
を含む、システム。
【請求項８】
原核宿主から組換えファージミド粒子を産生するための方法であって、前記方法が、
ｉ）前記原核宿主内に存続するように構成され、１つ以上のサイトカインをコードする核酸配列を含む少なくとも１つの導入遺伝子発現カセット、およびベクターの一本鎖ＤＮＡへの複製を可能にするためのパッケージングシグナルを含む第１のベクターを、原核宿主細胞に導入すること；
ｉｉ）バクテリオファージ構造タンパク質をコードする核酸を含むヘルパーファージを前記宿主に導入すること；ならびに
ｉｉｉ）前記原核宿主から組換えファージミド粒子を形成して押し出すように、前記一本鎖ＤＮＡが前記構造タンパク質によってパッケージングされることをもたらす条件下で前記宿主を培養する
ことを含む、方法。
【請求項９】
原核宿主から組換えファージミド粒子を産生するための方法であって、前記方法が、
ｉ）（ａ）前記原核宿主内に存続するように構成され、１つ以上のサイトカインをコードする核酸配列を含む少なくとも１つの導入遺伝子発現カセット、およびベクターの一本鎖ＤＮＡへの複製を可能にするためのパッケージングシグナルを含む、第１のベクター、ならびに（ｂ）前記一本鎖ＤＮＡのパッケージングに必要な構造タンパク質をコードする核酸を含む、第２のベクターを、原核宿主細胞に導入すること；ならびに
ｉｉ）前記原核宿主から組換えファージミド粒子を形成して押し出すように、前記一本鎖ＤＮＡが前記構造タンパク質によってパッケージングされることをもたらす条件下で前記宿主を培養する
ことを含む、方法。
【請求項１０】
組換えファージミド粒子が形質導入された標的腫瘍細胞内で導入遺伝子を発現するための組換えファージミド粒子であって、前記ファージミド粒子が、１つ以上のサイトカインをコードする核酸配列を含む少なくとも１つの導入遺伝子発現カセットを含み、かつそのバクテリオファージゲノムの少なくとも５０％を欠くゲノムを含み、前記ファージミド粒子が原核宿主からの前記粒子の形成、パッケージング、または押し出しに必要なそのゲノム中にバクテリオファージ構造遺伝子を欠いており、ファージミド粒子ゲノムがバクテリオファージの複製起点を含み、さらに、使用時に、前記粒子が、１つ以上のサイトカインが発現されるように、前記腫瘍細胞に少なくとも隣接して前記核酸配列を送達するように構成され、前記サイトカインが、ＩＬ−４、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＴＲＡＩＬ、ＩＦＮ−γ、ハイブリッドＴＮＦαのうちのいずれか１つ、またはそれらの任意の組み合わせであり、任意選択的に前記サイトカインがＩＬ−１５である、組換えファージミド粒子。
【請求項１１】
請求項１０に記載の組換えファージミド粒子、および薬学的に許容されるビヒクルを含む、医薬組成物。
【請求項１２】
治療または診断に使用するための、請求項１０に記載の組換えファージミド粒子。
【請求項１３】
請求項１０に記載の、もしくは請求項１〜６および１２のいずれか１項に記載の使用のための組換えファージミド粒子、または請求項１１に記載の医薬組成物であって、
ｉ）前記ファージミド粒子が、前記導入遺伝子発現カセットを前記標的腫瘍細胞に送達するように構成される；
ｉｉ）前記組換えファージミド粒子の前記ゲノムが、一本鎖ＤＮＡへの前記ファージミドゲノムの複製を可能にするためのパッケージングシグナルを含み、これに続いて、原核宿主内の前記ファージミド粒子にパッケージングされ得、任意選択的に前記パッケージングシグナルが、複製起点、任意選択的にＦ１  ｏｒｉを含む；
ｉｉｉ）前記組換えファージミド粒子の前記ゲノムが、原核宿主内への二本鎖ベクタ
ーの複製を可能にするための複製起点、任意選択的にｐＵＣ  ｏｒｉを含む；
ｉｖ）前記組換えファージミド粒子の前記ゲノムが、宿主ゲノムへの標的化された組込みに好ましい、１つ以上のＤＮＡ配列を含む；
ｖ）前記少なくとも１つの導入遺伝子発現カセットが、ウイルス導入遺伝子発現カセットを含む；および／または
ｖｉ）前記粒子が複数の導入遺伝子発現カセットを含む、
組換えファージミド粒子または医薬組成物。
【請求項１４】
請求項１０もしくは１３に記載の、もしくは請求項１〜６および１２のいずれか１項に記載の使用のための粒子、または請求項１１に記載の医薬組成物であって、
ｉ）前記少なくとも１つの導入遺伝子発現カセットが、哺乳動物のウイルス導入遺伝子発現カセットを含む；
ｉｉ）前記導入遺伝子発現カセットが、プロモーター、前記発現された物質に付着可能なポリＡテールをコードするための核酸、ならびに左および／または右末端逆位反復配列（ＩＴＲ）または左および／または右末端長反復配列（ＬＴＲ）のいずれかからなる群から選択される、前記標的細胞における前記核酸の発現に必要とされる１つ以上の機能的要素を含む；
ｉｉｉ）前記少なくとも１つの導入遺伝子発現カセットが、レンチウイルス導入遺伝子発現カセットを含む；
ｉｖ）前記少なくとも１つの導入遺伝子発現カセットが、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）導入遺伝子発現カセットを含む；
ｖ）前記導入遺伝子発現カセットが、前記標的細胞または組織において治療的または工業的有用性を有する、物質をコードする核酸をさらに含み、任意選択的に、前記核酸によってコードされる前記物質がポリペプチドまたはタンパク質である；
ｖｉ）前記組換えファージミド粒子が、１つ以上のカプシドマイナーコートタンパク質を含み、任意選択的に、前記組換えファージミド粒子が、前記粒子の前記標的腫瘍細胞への送達を可能にするための細胞標的化リガンドをディスプレイするように構成されるｐＩＩＩカプシドマイナーコートタンパク質を含む；
ｖｉｉ）前記組換えファージミド粒子が、１つ以上のカプシドメジャーコートタンパク質を含み、任意選択的に、前記組換えファージミド粒子が、その上に外来ペプチドをディスプレイするように構成される少なくとも１つのｐＶＩＩＩカプシドメジャーコートタンパク質を含む；および／または
ｖｉｉｉ）前記組換えファージミド粒子が、正味の正電荷を有する複合体を形成するようにカチオン性ポリマーと組み合わされ、任意選択的に、前記カチオン性ポリマーが、キトサン；ポリ−Ｄ−リジン（ＰＤＬ）；ジエチルアミノエチル（ＤＥＡＥ）；ジエチルアミノエチル−デキストラン（ＤＥＡＥ．ＤＥＸ）；ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）；ポリブレン；硫酸プロタミン；５およびカチオン性脂質からなる群から選択される、
粒子または医薬組成物。
【請求項１５】
請求項１０、１３もしくは１４に記載の、もしくは請求項１〜６および１２のいずれか１項に記載の使用のための粒子、または請求項１１に記載の医薬組成物であって、
ａ．前記組換えファージミド粒子の前記ゲノムが、それが由来する前記バクテリオファージゲノムの少なくとも６０％、７０％、もしくは少なくとも８０％を欠いている、
ｂ．前記組換えファージミド粒子の前記ゲノムが、それが由来する前記バクテリオファージゲノムの少なくとも９０％、９５％、もしくは少なくとも９９％を欠いている、または
ｃ．前記ファージミド粒子が、カプシドタンパク質をコードするバクテリオファージゲノム構造遺伝子を欠いている、粒子または医薬組成物。