【手続補正書】
【提出日】令和3年3月19日(2021.3.19)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒト胚性幹細胞（ＥＳ細胞）を形質細胞に分化させる方法であって、
前駆細胞を作製すること；及び
前記前駆細胞をＢ細胞に分化させること
を含む、方法。
【請求項２】
前記前駆細胞が、造血前駆細胞又は造血内皮細胞である；又は
前記形質細胞が、タンパク質、広範な中和抗体、若しくは酵素から選択される治療剤を生成する、
請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記前駆細胞をＢ細胞に分化させることが、
誘導性プロモーターによって促進されるＢ系統促進遺伝因子を発現すること；及び
前記前駆細胞を刺激で活性化し、Ｂ細胞の分化をもたらすこと
を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記遺伝因子が、ＰＡＸ５、ＥＢＦ１、ＦＯＸＯ１Ａ、ＢＣＬ１１Ａ、ＴＣＦ３、ＩＫＺＦ１、ＩＲＦ４、ＩＲＦ８、及びＳＰＩ１からなる群の１以上から選択される；又は前記刺激が、ドキシサイクリン又はテトラサイクリンから選択される、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
Ｂリンパ球生成を促進するのに十分な時間、（ｉ）Ｆｌｔ３Ｌ、ＳＣＦ、及びＩＬ−７からなる群の１以上から選択されるサイトカイン；並びに（ｉｉ）ＭＳ５間質細胞、と前記前駆細胞を共培養することを含む、請求項３に記載の方法。
【請求項６】
前記ヒトＥＳ細胞が、病原体特異的抗体遺伝子をコードするカセットでヌクレオフェクトされる、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記病原体特異的抗体カセットが、ｆｌｕ抗体、ＨＩＶ抗体、又はフラビウイルス抗体からなる群の１以上から選択されるＶＤＪ及びＶＪ配列を含む、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
ＶＤＪ及びＶＪ配列を含む前記病原体特異的抗体カセットが、ＦＩ６、ＶＲＣ０７、１０Ｅ８、Ｎ６、３ＢＮＣ１１７、ＥＤＥ１、及びＣ１０からなる群の１以上から選択される、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
長命形質細胞を作製する方法であって、
（ｉ）ヒトＥＳ細胞由来のＢ細胞にＩＦＮγ若しくはＩＬ−４を投与すること；又は
（ｉｉ）ＣＤ４０Ｌ及びＢＡＦＦを発現するように操作された３Ｔ３線維芽細胞にＩＬ−２１を投与すること
を含む、方法。
【請求項１０】
初代扁桃ナイーブＢ細胞を提供すること；及び前記初代扁桃ナイーブＢ細胞にＩＬ−４又はＩＦＮγを導入することを含む、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記長命形質細胞が、増加された抗体、タンパク質、又は酵素の分泌；呼吸のための増加されたミトコンドリアのピルビン酸；又は野生型の形質細胞に対し増加されたグルコース取り込みを有する、請求項９に記載の方法。
【請求項１２】
それを必要とする対象を治療する方法に使用するための、形質細胞を含む組成物であって、前記方法は、対象に治療有効量の形質細胞を投与することを含み、
前記対象が、ウイルスを有し、かつ前記形質細胞が、前記ウイルスを広範に中和する抗体由来の配列を発現し；
前記対象が、酵素欠損を有し、かつ前記形質細胞が、酵素を分泌し；又は
前記対象が、自己免疫疾患、神経変性疾患、若しくは癌を有し、かつ前記形質細胞が、アデュカヌマブ、リツキサン、若しくはエクリジマブから必要に応じて選択される、免疫療法剤を発現する、
組成物。
【請求項１３】
請求項１〜１１のいずれか一項に記載の方法に従って作製されるＢ細胞又は形質細胞。
【請求項１４】
（ｉ）野生型幹細胞に対し低下された１以上のＨＬＡ−Ｉ及びＨＬＡ−ＩＩの発現；又は
（ｉｉ）補体固定の回避、ＮＫ細胞認識の回避、若しくは食作用の回避をもたらす遺伝子をコードする構築物
を含む遺伝子操作幹細胞。
【請求項１５】
野生型幹細胞に対し増加された１以上の免疫回避因子の発現を含む、請求項１４に記載の遺伝子操作幹細胞。
【請求項１６】
前記免疫回避因子が、ＨＬＡ−Ｅ、ＨＬＡ−Ｇ、ＣＤ４６／Ｃｒｒｙ、ＣＤ４７、及びＣＤ５５からなる群の１以上から選択される、請求項１５に記載の遺伝子操作幹細胞。
【請求項１７】
前記免疫回避因子が、ＣＤ４６／Ｃｒｒｙ及びＣＤ５５からなる群の１以上から選択される、請求項１６に記載の遺伝子操作幹細胞。
【請求項１８】
前記免疫回避因子が、免疫拒絶反応を阻害するか又は免疫回避を促進する、請求項１５に記載の遺伝子操作幹細胞。
【請求項１９】
前記幹細胞が、ヒト幹細胞、胚性幹細胞、多能性幹細胞である、又は低免疫原性である、請求項１４〜１８のいずれか一項に記載の遺伝子操作幹細胞。
【請求項２０】
β２ミクログロブリン、ＴＡＰ１、ＣＤ７４、ＣＩＩＴＡ、及びＮＫＧ２Ｄのリガンドからなる群の１以上から選択されるコード遺伝子中に不活性化変異を含む、請求項１４に記載の遺伝子操作幹細胞。
【請求項２１】
（ｉ）前記不活性化変異が、ＴＡＰ１若しくはＣＤ７４のコード遺伝子中である；又は
（ｉｉ）前記ＮＫＧ２Ｄのリガンドが、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、Ｒａｅｔ１ｅ、Ｒａｅｔ１ｇ、Ｒａｅｔ１ｌ、Ｕｌｂｐ１、Ｕｌｂｐ２、及びＵｌｂｐ３からなる群の１以上から必要に応じて選択される、
請求項２０に記載の遺伝子操作幹細胞。
【請求項２２】
野生型幹細胞に対して増強されたＨＬＡ−Ｅ及びＨＬＡ−Ｇの１以上の発現を含む、請求項１５に記載の遺伝子操作幹細胞。
【請求項２３】
（ｉ）β２ミクログロブリン及びＴＡＰ１コード遺伝子が、ＨＬＡ−Ｉの発現を消失し、かつ同種ＣＤ８＋Ｔ細胞による直接認識を防止するように遺伝子改変され；
（ｉｉ）ＣＤ７４コード遺伝子が、ＨＬＡ−ＩＩ発現を消失するように遺伝子改変され；又は
（ｉｉｉ）ＮＫＧ２Ｄリガンドコード遺伝子が、ナチュラルキラー細胞認識を回避するように遺伝子改変され；
前記遺伝子操作幹細胞が、子孫を生成し、かつ前記子孫が、低下された免疫原性を示す、
請求項２０〜２１のいずれか一項に記載の遺伝子操作幹細胞。
【請求項２４】
（ｉ）ＨＬＡ−Ｅ単鎖三量体、ＨＬＡ−Ｇ単鎖三量体、Ｋ−ｂ単鎖三量体、ＣＤ４６／Ｃｒｒｙ、ＣＤ５５、及びＣＤ４７からなる群から選択される少なくとも１つの免疫回避遺伝子；又は
（ｉｉ）ＮＫＧ２Ａ＋ＮＫ細胞、ＩＬＴ２／ＫＩＲ２ＤＬ４＋ＮＫ細胞、Ｌｙ４９Ｃ＋ＮＫ細胞、補体／Ｃ３ｂ及びＣ４ｂ、補体／Ｃ３転換酵素、補体／Ｃ９、及び食作用からなる群から選択される経路若しくは細胞型を阻害する少なくとも１つの免疫回避遺伝子；並びに
（ｉｉｉ）必要に応じて、少なくとも１つの自殺遺伝子
を含む、請求項１４に記載の遺伝子操作幹細胞。
【請求項２５】
前記遺伝子操作幹細胞が、ｉＣａｓｐ９、ＨＳＶチミジンキナーゼ、シトシンデアミナーゼ、及び大腸菌ニトロレダクターゼからなる群の１以上から選択される薬剤誘導性自殺遺伝子を含み、かつ前記薬剤が、ＡＰ１９０３、ガンシクロビル、５−フルオロシトシン、及びＣＢ１９５４からなる群から選択される、請求項１４の遺伝子操作幹細胞。
【請求項２６】
（ｉ）免疫原性を低下させるために遺伝子改変若しくは不活性化変異を導入すること；又は
（ｉｉ）セーフハーバー遺伝子座へ、構築物及び補体固定、ＮＫ細胞認識、若しくは食作用の回避をもたらすコード遺伝子を送達すること
を含む遺伝子改変幹細胞を作製する方法。
【請求項２７】
（ｉ）前記細胞の免疫原性が、ＨＬＡ−Ｉ発現の消失、ＨＬＡ−ＩＩ発現の消失、及びナチュラルキラー細胞認識の消失により低下され；
（ｉｉ）前記不活性化変異が、β２ミクログロブリン、ＴＡＰ１、ＣＤ７４、ＣＩＩＴＡ、及びＮＫＧ２Ｄのリガンドからなる群の１以上から選択されるコード遺伝子中であり、前記ＮＫＧ２Ｄのリガンドが、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、Ｒａｅｔ１ｅ、Ｒａｅｔ１ｇ、Ｒａｅｔ１ｌ、Ｕｌｂｐ１、Ｕｌｂｐ２、及びＵｌｂｐ３からなる群の１以上から必要に応じて選択され；
（ｉｉｉ）補体固定の回避をもたらす遺伝子が、ＣＤ４６／Ｃｒｒｙ、ＣＤ５５、及びＣＤ５９からなる群の１以上から選択され；
（ｉｖ）ＮＫ細胞認識の回避をもたらす遺伝子が、ＨＬＡ−Ｅ及びＨＬＡ−Ｇからなる群の１以上から選択され；又は
（ｖ）食作用の回避をもたらす遺伝子が、ＣＤ４７である、
請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
その必要がある対象を治療する方法に使用するための、請求項１４〜２５のいずれか一項に記載の遺伝子操作幹細胞若しくは遺伝子操作幹細胞の子孫を含む組成物、又は請求項２６〜２７のいずれか一項に記載の方法により作製された遺伝子改変幹細胞を含む組成物。
【請求項２９】
（ｉ）前記幹細胞が、対象中に移植され；
（ｉｉ）対象の組織が、自己免疫疾患によって破壊され；
（ｉｉｉ）自己免疫疾患によって破壊された対象の組織が、再生され；
（ｉｖ）膵臓細胞若しくはオリゴデンドロサイトが、再生され；
（ｖ）前記対象が、自己免疫疾患、癌、神経変性疾患を有し；
（ｖｉ）前記対象が、Ｉ型糖尿病、多発性硬化症、病原体、若しくは感染症を有し；
（ｖｉｉ）体液性免疫が、生成され；又は
（ｖｉｉ）抗体媒介性免疫が、生成される、
請求項２８に記載の組成物。
【請求項３０】
宿主免疫抑制が存在しない、請求項１２に記載の組成物、請求項１３に記載のＢ細胞又は形質細胞、又は請求項２８〜２９のいずれか一項に記載の組成物。