【手続補正書】
【提出日】令和3年8月16日(2021.8.16)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
１つまたは複数のアフィニティーマトリックスを含むアフェレシスを実行するように構成されたデバイスであって、前記１つまたは複数のアフィニティーマトリックスは、対象の血液または血漿から、ヌクレオソーム結合セルフリーＤＮＡ（ｃｆＤＮＡ）、エキソソーム結合ｃｆＤＮＡ、および非結合ｃｆＤＮＡを捕捉することができ、前記１つまたは複数のアフィニティーマトリックスのうちの少なくとも１つはヒストンを含む、デバイス。
【請求項２】
前記非結合ｃｆＤＮＡが、ｄｓＤＮＡ、ｓｓＤＮＡおよびオリゴヌクレオチドを含む、請求項１に記載のデバイス。
【請求項３】
２つ以上のアフィニティーマトリックスを含む、請求項１または２に記載のデバイス。
【請求項４】
（ｉ）第１の１つまたは複数のアフィニティーマトリックスが、ヌクレオソーム結合セルフリーＤＮＡ（ｃｆＤＮＡ）および／またはエキソソーム結合ｃｆＤＮＡを捕捉することができ、かつ（ｉｉ）第２の１つまたは複数のアフィニティーマトリックスが非結合ｃｆＤＮＡを捕捉することができ、前記第１および第２のアフィニティーマトリックスがデバイス内に任意の順序で配置されている、請求項３に記載のデバイス。
【請求項５】
単一のアフィニティーマトリックスを含む、請求項１または２に記載のデバイス。
【請求項６】
前記ヒストンがＨ１ヒストンである、請求項１〜５のいずれか一項に記載のデバイス。
【請求項７】
前記ヒストンがＨ１．３ヒストンである、請求項６に記載のデバイス。
【請求項８】
循環ｃｆＤＮＡのレベルを低下させることによる血液の体外処置のためのシステムであって、請求項１〜７のいずれか一項に記載のデバイスを含む体外回路を含む、システム。
【請求項９】
対象の血液中のセルフリーＤＮＡ（ｃｆＤＮＡ）のレベルを低下させる方法で使用するためのものであり、前記方法が、
（ａ）対象から血液または血漿を前記アフェレシスデバイスに迂回させてｃｆＤＮＡのレベルが低下した血液または血漿を生成することを含むアフェレシス処置を実行すること；および
（ｂ）ｃｆＤＮＡのレベルが低下した血液または血漿を対象に戻すこと；
を含み、前記アフェレシス処置により、対象の血液中のヌクレオソーム結合ｃｆＤＮＡ、エキソソーム結合ｃｆＤＮＡ、および非結合ｃｆＤＮＡのレベルが低下する、請求項１〜７のいずれか一項に記載のデバイス。
【請求項１０】
必要とする対象において疾患を治療する方法で使用するためのものであり、前記治療方法が、
（ａ）対象から血液または血漿を前記アフェレシスデバイスに迂回させてｃｆＤＮＡのレベルが低下した血液または血漿を生成することを含むアフェレシス処置を実行すること；および
（ｂ）ｃｆＤＮＡのレベルが低下した血液または血漿を対象に戻すこと；
を含み、前記アフェレシス処置により、対象の血液中のヌクレオソーム結合ｃｆＤＮＡ、エキソソーム結合ｃｆＤＮＡ、および非結合ｃｆＤＮＡのレベルが低下する、請求項１〜７のいずれか一項に記載のデバイス。
【請求項１１】
前記対象が、血液中のｃｆＤＮＡレベルの上昇を特徴とする疾患を有する、請求項９または１０に記載のデバイス。
【請求項１２】
前記疾患が、神経変性疾患、がん、化学療法関連毒性、放射線誘発毒性、臓器不全、臓器損傷、臓器梗塞、虚血、急性血管イベント、脳卒中、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、移植片拒絶、敗血症、全身性炎症反応症候群（ＳＩＲＳ）、多臓器不全症候群（ＭＯＤＳ）、外傷、老化、糖尿病、アテローム性動脈硬化症、自己免疫疾患、子癇、不妊症、妊娠関連合併症、凝固障害、および感染症からなる群より選択される、請求項１１に記載のデバイス。
【請求項１３】
前記方法が、対象の血液中のｃｆＤＮＡのレベルを監視することをさらに含む、請求項９〜１２のいずれか一項に記載のデバイス。
【請求項１４】
対象の血液中のｃｆＤＮＡのレベルが少なくとも２５％低下するまで前記アフェレシス処置が継続または繰り返される、請求項９〜１３のいずれか一項に記載のデバイス。
【請求項１５】
ｃｆＤＮＡのレベルが少なくとも５０％低下するまで、前記アフェレシス処置が継続または繰り返される、請求項１４に記載のデバイス。
【請求項１６】
ｃｆＤＮＡのレベルが少なくとも７５％低下するまで、前記アフェレシス処置が継続または繰り返される、請求項１５に記載のデバイス。
【請求項１７】
少なくとも３０ｍｇのｃｆＤＮＡが対象の血液から除去されるまで、前記アフェレシス処置が継続または繰り返される、請求項９〜１３のいずれか一項に記載のデバイス。
【請求項１８】
前記アフェレシス処置が２回以上繰り返される、請求項９〜１７のいずれか一項に記載のデバイス。
【請求項１９】
前記アフェレシス処置のための血液が門脈から供給される、請求項９〜１８のいずれか一項に記載のデバイス。
【請求項２０】
前記対象がヒトである、請求項９〜１９のいずれか一項に記載のデバイス。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１７７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１７７】
ＨＥＫ−Ｂｌｕｅ（商標）ｈＴＬＲ９レポーター細胞（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ）を培地ですすいで培養フラスコから剥がし、細胞を製造元のプロトコルで指定された細胞密度に再懸濁した。ウェルあたり１８０μＬの細胞懸濁液を、６０μＬの未処理患者血漿、あるいはレクチンアフィニティーカラムと抗ヒストン抗体アフィニティーカラムの両方で浄化したまたはＨ１．３アフィニティーカラムで（単一ステップとして）浄化した患者血漿で、２４時間（３７℃、５％ＣＯ）刺激した。インキュベーション後、製造元の説明書に記載されていようにＱｕａｎｔｉ−Ｂｌｕｅ検出媒体を使用して分泌型胚性アルカリホスファターゼ（ＳＥＡＰ）の分析を行った。マイクロプレートリーダーを使用して、６５０ｎｍでの吸光度の検出を測定した。
【表４】
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【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２０２
【補正方法】削除
【補正の内容】
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２１４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２１４】
６７歳の敗血症性ショック患者から得た２．０ｍＬの血漿サンプルを、ＡＮＡＭアフィニティーカラムおよびレクチンアフィニティーカラムを通して浄化した。ＡＮＡＭアフィニティーカラム（ヌクレオソーム結合ｃｆＤＮＡを捕捉する）は、１ｍＬのＨｉＴｒａｐ  ＮＨＳ活性化ＨＰカラム（実施例１５に記載）に基づき調製し、レクチンアフィニティーカラム（エキソソーム結合ｃｆＤＮＡを捕捉する）は、実施例２（ガランサス・ニバリス［スノードロップ］のレクチンを含むアフィニティーマトリックス）に記載のように調製した。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２２５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２２５】
生存率（膵炎の誘発から９６時間後）を治療効果の主要パラメータとして想定した。ラットのｃｆＤＮＡおよび細菌起源のｃｆＤＮＡ（すなわち、細菌負荷）の定量化のために、製造元の指示に従ってＱＩＡａｍｐ  ＤＮＡ  Ｍｉｎｉ  Ｋｉｔを使用して、２００μＬのラット血漿サンプルから総ｃｆＤＮＡを単離した。ＡＢＩ  ＰＲＩＳＭ  ７７００  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｄｅｔｅｃｔｏｒ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）およびＴａｑＭａｎ  Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ  ＰＣＲ  Ｍａｓｔｅｒ  Ｍｉｘ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を製造元のプロトコルに従って使用して、定量的ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）により血漿サンプルのｃｆＤＮＡ濃度を測定した。細菌由来のｃｆＤＮＡの定量化のために、細菌１６ＳｒＤＮＡの保存領域用に特異的プライマーおよびプローブを設計した：フォワードプライマー：５’−ＴＣＣＴＡＣＧＧＧＡＧＧＣＡＧＣＡＧＴ−３’、リバースプライマー：５’−ＧＧＡＣＴＡＣＣＡＧＧＧＴＡＴＣＴＡＡＴＣＣＴＧＴＴ−３’、およびプローブ：（６−ＦＡＭ）−５’−ＣＧＴＡＴＴＡＣＣＧＣＧＧＣＴＧＣＴＧＧＣＡＣ−３’−（ＴＡＭＲＡ）（参照: Mangala, A.; Nadkarni, A. Determination of bacterial load by real-time PCR using a broad-range (universal) probe and primers set. Microbiology, 2002, vol. 148, pp.257-266）。ＴａｑＭａｎ  Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ａｓｓａｙラットβ−アクチンＲｎ００６６７８６９＿ｍ１  （Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）をラットゲノムｃｆＤＮＡの増幅に使用した。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２３２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２３２】
ポリ−Ｌ−リジンアフィニティーマトリックス（ＰＬＬＡＭ）、ＰＡＭＡＭデンドリマーアフィニティーマトリックス（ＰＤＡＭ）、およびヒストンＨ１アフィニティーマトリックスを使用した、ｃｆＤＮＡ富化モデル血漿での体積吸着試験は、最低限のｃｆＤＮＡ含有量を有するほぼ同じ電気泳動写真をもたらした。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２３３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２３３】
ポリ−Ｌ−リジンアフィニティーマトリックス（ＰＬＬＡＭ）、ＰＡＭＡＭデンドリマーアフィニティーマトリックス（ＰＤＡＭ）、およびヒストンＨ１アフィニティーマトリックスを使用した、患者血漿での体積吸着試験は、ヒストンＨ１アフィニティーマトリックスとのインキュベーション後は最低限のｃｆＤＮＡ含有量を有するが、ポリ−Ｌ−リジンアフィニティーマトリックスおよびＰＡＭＡＭデンドリマーアフィニティーマトリックスとのインキュベーション後は有意なｃｆＤＮＡ含有量を有する、異なる電気泳動写真をもたらした。
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２３５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２３５】
特許、特許出願、刊行物、製品説明、およびプロトコルが本出願全体を通して引用されており、それらの開示は、あらゆる目的のためにその全体が参照により本明細書に組み込まれている。
最後に、本発明の好ましい実施態様を項分け記載する。
［実施態様１］
１つまたは複数のアフィニティーマトリックスを含むアフェレシスを実行するように構成されたデバイスであって、前記１つまたは複数のアフィニティーマトリックスは、対象の血液または血漿から、ヌクレオソーム結合セルフリーＤＮＡ（ｃｆＤＮＡ）、エキソソーム結合ｃｆＤＮＡ、および非結合ｃｆＤＮＡを捕捉することができる、デバイス。
［実施態様２］
前記非結合ｃｆＤＮＡが、ｄｓＤＮＡ、ｓｓＤＮＡおよびオリゴヌクレオチドを含む、実施態様１に記載のデバイス。
［実施態様３］
前記デバイスが２つ以上のアフィニティーマトリックスを含む、実施態様１または２に記載のデバイス。
［実施態様４］
（ｉ）第１の１つまたは複数のアフィニティーマトリックスが、ヌクレオソーム結合セルフリーＤＮＡ（ｃｆＤＮＡ）および／またはエキソソーム結合ｃｆＤＮＡを捕捉することができ、かつ（ｉｉ）第２の１つまたは複数のアフィニティーマトリックスが非結合ｃｆＤＮＡを捕捉することができ、前記第１および第２のアフィニティーマトリックスがデバイス内に任意の順序で配置されている、実施態様３に記載のデバイス。
［実施態様５］
（ｉ）前記第１の１つまたは複数のアフィニティーマトリックスが、ＤＮＡ結合タンパク質、抗ヒストン抗体、抗ヌクレオソーム抗体、ＤＮＡインターカレート剤、ＤＮＡ結合ポリマー、抗ＤＮＡ抗体、レクチン、またはその任意の組合せを含み、かつ（ｉｉ）前記第２の１つまたは複数のアフィニティーマトリックスが、ＤＮＡ結合タンパク質、ＤＮＡインターカレート剤、ＤＮＡ結合ポリマー、抗ＤＮＡ抗体、またはその任意の組合せを含む、実施態様４に記載のデバイス。
［実施態様６］
前記ＤＮＡ結合タンパク質がヒストンである、実施態様４または５に記載のデバイス。
［実施態様７］
前記ヒストンがＨ１ヒストンである、実施態様６に記載のデバイス。
［実施態様８］
前記ＤＮＡ結合ポリマーがポリアミドアミンデンドリマーである、実施態様５〜７のいずれかに記載のデバイス。
［実施態様９］
前記ＤＮＡ結合ポリマーがカチオン性ポリマーである、実施態様５〜７のいずれかに記載のデバイス。
［実施態様１０］
前記カチオン性ポリマーがポリ−Ｌ−リジンまたはポリエチレンイミンである、実施態様９に記載のデバイス。
［実施態様１１］
前記ポリ−Ｌ−リジンがハイパーブランチポリ−Ｌ−リジンである、実施態様１０に記載のデバイス。
［実施態様１２］
前記ポリエチレンイミンがハイパーブランチポリエチレンイミンである、実施態様１０に記載のデバイス。
［実施態様１３］
前記ＤＮＡインターカレート剤がＨｏｅｃｈｓｔ  ３３３４２である、実施態様５〜１２のいずれかに記載のデバイス。
［実施態様１４］
前記抗ヒストン抗体が抗ヒストンＨ２Ａ抗体である、実施態様５〜１３のいずれかに記載のデバイス。
［実施態様１５］
前記レクチンが、スノードロップレクチン（Galanthus nivalis Lectin）（ＧＮＡ）、ラッパズイセンレクチン（Narcissus Pseudonarcissus Lectin）（ＮＰＡ）、コンカナバリンＡ（Conconavalin A）、フィトヘマグルチニン（phytohemagluttanin）、またはシアノビリン（cyanovirin）である、実施態様５〜１４のいずれかに記載のデバイス。
［実施態様１６］
前記レクチンがスノードロップレクチン（ＧＮＡ）である、実施態様１５に記載のデバイス。
［実施態様１７］
前記２つ以上のアフィニティーマトリックスが、２つ以上のアフィニティーカラムとして連続的に配置されている、実施態様３〜１６のいずれかに記載のデバイス。
［実施態様１８］
配列の最初のアフィニティーマトリックスがＤＮＡ結合ポリマーまたはＤＮＡインターカレート剤を含む、実施態様３〜１７のいずれかに記載のデバイス。
［実施態様１９］
前記ＤＮＡ結合ポリマーがカチオン性ポリマーである、実施態様１８に記載のデバイス。
［実施態様２０］
前記カチオン性ポリマーがポリ−Ｌ−リジンまたはポリエチレンイミンである、実施態様１９に記載のデバイス。
［実施態様２１］
前記ポリ−Ｌ−リジンがハイパーブランチポリ−Ｌ−リジンである、実施態様２０に記載のデバイス。
［実施態様２２］
前記ポリエチレンイミンがハイパーブランチポリエチレンイミンである、実施態様２０に記載のデバイス。
［実施態様２３］
前記カチオン性ポリマーがポリアミドアミンデンドリマーである、実施態様１９に記載のデバイス。
［実施態様２４］
前記ＤＮＡインターカレート剤がＨｏｅｃｈｓｔ  ３３３４２である、実施態様１８に記載のデバイス。
［実施態様２５］
任意の順序で配置された以下のカラムの組合せの１つを含む、実施態様１７に記載のデバイス：
（ａ）（ｉ）ＤＮＡインターカレート剤Ｈｏｅｃｈｓｔ  ３３３４２アフィニティーカラム、および（ｉｉ）抗ＤＮＡ抗体アフィニティーカラム；または
（ｂ）（ｉ）抗ヌクレオソーム抗体アフィニティーマトリックス（ＡＮＡＭ）カラム、および（ｉｉ）抗ＤＮＡ抗体アフィニティーカラム；または
（ｃ）（ｉ）抗ヌクレオソーム抗体アフィニティーマトリックス（ＡＮＡＭ）カラム、および（ｉｉ）ポリアミドアミンデンドリマーアフィニティーマトリックス（ＰＤＡＭ）カラム；または
（ｄ）（ｉ）抗ヌクレオソーム抗体アフィニティーマトリックス（ＡＮＡＭ）カラム、および（ｉｉ）ハイパーブランチポリ−Ｌ−リジンアフィニティーマトリックス（ＰＬＬＡＭ）カラム；または
（ｅ）（ｉ）抗ヒストンＨ２Ａ抗体アフィニティーカラム、（ｉｉ）レクチンアフィニティーカラム、および（ｉｉｉ）ヒストンＨ１アフィニティーカラム、もしくはポリアミドアミンデンドリマーアフィニティーマトリックス（ＰＤＡＭ）カラム、もしくはハイパーブランチポリ−Ｌ−リジンアフィニティーマトリックス（ＰＬＬＡＭ）カラム、もしくはＤＮＡインターカレート剤Ｈｏｅｃｈｓｔ  ３３３４２アフィニティーカラム。
［実施態様２６］
単一のアフィニティーマトリックスを含む、実施態様１に記載のデバイス。
［実施態様２７］
前記アフィニティーマトリックスがヒストンを含む、実施態様２６に記載のデバイス。
［実施態様２８］
前記ヒストンがＨ１ヒストンである、実施態様２７に記載のデバイス。
［実施態様２９］
前記ヒストンがＨ１．３ヒストンである、実施態様２８に記載のデバイス。
［実施態様３０］
前記アフィニティーマトリックスがＤＮＡ結合ポリマーを含む、実施態様２６に記載のデバイス。
［実施態様３１］
前記ＤＮＡ結合ポリマーがポリアミドアミンデンドリマーである、実施態様３０に記載のデバイス。
［実施態様３２］
前記ＤＮＡ結合ポリマーがハイパーブランチポリ−Ｌ−リジンである、実施態様３０に記載のデバイス。
［実施態様３３］
前記アフィニティーマトリックスがＤＮＡインターカレート剤を含む、実施態様２６に記載のデバイス。
［実施態様３４］
前記ＤＮＡインターカレート剤がＨｏｅｃｈｓｔ  ３３３４２である、実施態様３３に記載のデバイス。
［実施態様３５］
前記アフィニティーマトリックスが抗ＤＮＡ抗体を含む、実施態様２６に記載のデバイス。
［実施態様３６］
前記デバイスが、単回のアフェレシス処置ごとに少なくとも３０ｍｇのｃｆＤＮＡを捕捉する、実施態様１〜３５のいずれかに記載のデバイス。
［実施態様３７］
前記デバイスが、単回のアフェレシス処置ごとに、ｃｆＤＮＡの血中レベルを少なくとも２５％低下させる、実施態様１〜３５のいずれかに記載のデバイス。
［実施態様３８］
前記デバイスが、単回のアフェレシス処置ごとにｃｆＤＮＡの血中レベルを少なくとも５０％低下させる、実施態様３７に記載のデバイス。
［実施態様３９］
前記デバイスは、単回のアフェレシス処置ごとにｃｆＤＮＡの血中レベルを少なくとも７５％低下させる、実施態様３８に記載のデバイス。
［実施態様４０］
対象の血液中のセルフリーＤＮＡ（ｃｆＤＮＡ）のレベルを低下させる方法であって、
（ａ）対象から血液または血漿を実施態様１〜３９のいずれかに記載のアフェレシスデバイスに迂回させてｃｆＤＮＡのレベルが低下した血液または血漿を生成することを含むアフェレシス処置を実行すること；および
（ｂ）ｃｆＤＮＡのレベルが低下した血液または血漿を対象に戻すこと；
を含み、前記アフェレシス処置により、対象の血液中のヌクレオソーム結合ｃｆＤＮＡ、エキソソーム結合ｃｆＤＮＡ、および非結合ｃｆＤＮＡのレベルが低下する、方法。
［実施態様４１］
前記対象が、血液中のｃｆＤＮＡレベルの上昇を特徴とする疾患を有する、実施態様４０に記載の方法。
［実施態様４２］
前記対象が、神経変性疾患、がん、化学療法関連毒性、放射線誘発毒性、臓器不全、臓器損傷、臓器梗塞、虚血、急性血管イベント、脳卒中、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、移植片拒絶、敗血症、全身性炎症反応症候群（ＳＩＲＳ）、多臓器不全症候群（ＭＯＤＳ）、外傷、老化、糖尿病、アテローム性動脈硬化症、自己免疫疾患、子癇、不妊症、妊娠関連合併症、凝固障害、および感染症からなる群より選択される疾患を有する、実施態様４０に記載の方法。
［実施態様４３］
必要とする対象において疾患を治療する方法であって、
（ａ）対象から血液または血漿を実施態様１〜３９のいずれかに記載のアフェレシスデバイスに迂回させてｃｆＤＮＡのレベルが低下した血液または血漿を生成することを含むアフェレシス処置を実行すること；および
（ｂ）ｃｆＤＮＡのレベルが低下した血液または血漿を対象に戻すこと；
を含み、前記アフェレシス処置により、対象の血液中のヌクレオソーム結合ｃｆＤＮＡ、エキソソーム結合ｃｆＤＮＡ、および非結合ｃｆＤＮＡのレベルが低下する、方法。
［実施態様４４］
前記疾患が、血液中のｃｆＤＮＡレベルの上昇を特徴とする、実施態様４３に記載の方法。
［実施態様４５］
前記疾患が、神経変性疾患、がん、化学療法関連毒性、放射線誘発毒性、臓器不全、臓器損傷、臓器梗塞、虚血、急性血管イベント、脳卒中、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、移植片拒絶、敗血症、全身性炎症反応症候群（ＳＩＲＳ）、多臓器不全症候群（ＭＯＤＳ）、外傷、老化、糖尿病、アテローム性動脈硬化症、自己免疫疾患、子癇、不妊症、妊娠関連合併症、凝固障害、および感染症からなる群より選択される、実施態様４３に記載の方法。
［実施態様４６］
対象の血液中のｃｆＤＮＡのレベルを監視することをさらに含む、実施態様４０〜４５のいずれかに記載の方法。
［実施態様４７］
対象の血液中のｃｆＤＮＡのレベルが少なくとも２５％低下するまで前記アフェレシス処置を継続または繰り返すことを含む、実施態様４０〜４６のいずれかに記載の方法。
［実施態様４８］
ｃｆＤＮＡのレベルが少なくとも５０％低下するまで、前記アフェレシス処置を継続または繰り返すことを含む、実施態様４７に記載の方法。
［実施態様４９］
ｃｆＤＮＡのレベルが少なくとも７５％低下するまで、前記アフェレシス処置を継続または繰り返すことを含む、実施態様４８に記載の方法。
［実施態様５０］
少なくとも３０ｍｇのｃｆＤＮＡが対象の血液から除去されるまで、前記アフェレシス処置を継続または繰り返すことを含む、実施態様４０〜４６のいずれかに記載の方法。
［実施態様５１］
前記アフェレシス処置が２回以上繰り返される、実施態様４０〜５０のいずれかに記載の方法。
［実施態様５２］
前記アフェレシス処置のための血液が門脈から供給される、実施態様４０〜５１のいずれかに記載の方法。
［実施態様５３］
前記非結合ｃｆＤＮＡが、ｄｓＤＮＡ、ｓｓＤＮＡおよびオリゴヌクレオチドを含む、実施態様４０〜５２のいずれかに記載の方法。
［実施態様５４］
前記対象がヒトである、請求項４０〜５３のいずれか一項に記載の方法。