【手続補正書】
【提出日】平成17年3月4日(2005.3.4)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
表皮基底細胞を、発生しうる神経細胞の形態学的、生理学的および／または免疫学的特徴を有する細胞に分化転換する方法であって、
（ａ）患者の皮膚に由来する増殖表皮基底細胞集団から表皮基底細胞を取得し、
（ｂ）ＮｅｕｒｏＤ１（ＮｅｕｒｏＤ１）、ＮｅｕｒｏＤ２（ＮｅｕｒｏＤ２）、ＡＳＨ１、Ｚｉｃ１、Ｚｉｃ３およびＭｙＴ１よりなる群からの、ヒト神経原性転写因子または相同的な非ヒト対応物をコードする少なくとも１つのｃＤＮＡを含有する１つまたはそれ以上の真核生物発現ベクターにより、該表皮基底細胞をインビトロでトランスフェクションすることにより、該細胞中で少なくとも１つの神経原性転写因子が発現されるようにし、
（ｃ）ヒトＭＳＸ１遺伝子またはヒトＨＥＳ１遺伝子の１つのセグメント、またはこれらのいずれかの相同的な非ヒト対応物を含む少なくとも１つのアンチセンスオリゴヌクレオチドをインビトロ増殖培地に加え、こうしてニューロン分化の少なくとも１つの負の調節因子を抑制し、および
（ｄ）レチノイド、並びにＢＤＮＦ、ＮＧＦ、ＮＴ−３およびＮＴ−４からなる群からの少なくとも１つのニューロトロフィン、またはＩＬ−６を含むサイトカインと一緒に、該分化転換した表皮細胞を増殖させ、こうして該表皮細胞を、長さが少なくとも約５０マイクロメートルの１つまたはそれ以上の形態学的な軸索突起様突起を含み、かつニューロフィラメントＭ、神経特異的チューブリン、神経特異的エノラーゼおよび微小管結合タンパク質２からなる群から選択される少なくとも１つの神経特異的抗原を発現する細胞に分化転換する、
工程を含む、方法。
【請求項２】
該トランスフェクション工程の真核生物発現ベクターが、ＮｅｕｒｏＤ１、ＮｅｕｒｏＤ２、ＡＳＨ１、Ｚｉｃ１、Ｚｉｃ３およびＭｙＴ１からなる群からの神経原性転写因子をコードするＤＮＡに機能的に結合したサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター配列を含み、かつ該神経原性転写因子をコードするＤＮＡは、ヒト由来であるか、またはこれらのいずれかをコードする遺伝子の相同的な非ヒト対応物である、請求項１記載の方法。
【請求項３】
発生しうる神経細胞の形態学的、生理学的および／または免疫学的特徴を有する分化転換した細胞であって、
神経原性転写因子ＮｅｕｒｏＤ１、ＮｅｕｒｏＤ２、ＡＳＨ１、Ｚｉｃ１、Ｚｉｃ３またはＭｙＴ１をコードするＤＮＡに機能的に結合したＣＭＶプロモーター配列を含む１つまたはそれ以上の発現ベクターでトランスフェクションした表皮基底細胞であり、該神経原性転写因子をコードするＤＮＡは、ヒト由来であるか、またはこれらのいずれかをコードする遺伝子の相同的な非ヒト対応物であり、該細胞は、ヒトＭＳＸ１遺伝子またはヒトＨＥＳ１遺伝子のセグメント、または相同的なその非ヒト対応物を含む少なくとも１つのアンチセンスオリゴヌクレオチドで処理され、そして該細胞は、レチノイドと少なくとも１つのニューロトロフィンの存在下で増殖させ、こうして該表皮基底細胞を、長さが少なくとも約５０マイクロメートルの１つまたはそれ以上の形態学的な軸索突起様突起を含み、かつニューロフィラメントＭ、神経特異的チューブリン、神経特異的エノラーゼおよび微小管結合タンパク質２からなる群から選択される少なくとも１つの神経特異的抗原を発現する細胞に分化転換する、細胞。
【請求項４】
請求項１の方法によって産生された発生しうる神経細胞の形態学的、生理学的および／または免疫学的特徴を有する分化転換した細胞。
【請求項５】
表皮基底細胞を、長さが少なくとも約５０マイクロメートルの１つまたはそれ以上の形態学的な軸索突起様突起を含み、かつニューロフィラメントＭ、神経特異的チューブリン、神経特異的エノラーゼおよび微小管結合タンパク質２からなる群から選択される少なくとも１つの神経特異的抗原を発現する細胞に変換するキットであって、
ＮｅｕｒｏＤ１、ＮｅｕｒｏＤ２、ＡＳＨ１、Ｚｉｃ１、Ｚｉｃ３およびＭｙＴ１、またはこれらのいずれかの相同的な非ヒト対応物からなる群からの、神経原性転写因子またはその断片をコードするｃＤＮＡを含有する１つまたはそれ以上の真核生物発現ベクター、
ヒトＭＳＸ１遺伝子、ヒトＨＥＳ１遺伝子、またはこれらのいずれかの相同的な非ヒト対応物に相当する少なくとも１つのアンチセンスオリゴヌクレオチド、
レチノイド、並びにＢＤＮＦ、ＮＧＦ、ＮＴ−３およびＮＴ−４からなる群からの少なくとも１つのニューロトロフィン、
を含む、キット。
【請求項６】
患者の皮膚細胞と共に使用するための使用説明書をさらに含む請求項５記載のキット。
【請求項７】
新規な神経成長因子を単離するための、発生しうる神経細胞の形態学的、生理学的および／または免疫学的特徴を有する分化転換した表皮基底細胞の使用方法であって、
（ａ）請求項１に記載のように、表皮基底細胞を、発生しうる神経細胞の形態学的、生理学的および／または免疫学的特徴を有する細胞に分化転換し、
（ｂ）分化転換した細胞をインビトロで培養し、
（ｃ）可能性ある神経成長因子にインビトロで培養細胞を暴露し、および
（ｄ）細胞の生存、または該分化転換した表皮基底細胞の形態学的または電気生理学的特性および／または分子生物学的性質に及ぼす、可能性ある神経成長因子の作用の存在または非存在を検出し、それによって、細胞の生存、細胞の形態学的または電気生理学的特性および／または分子生物学的性質を変化させる作用は、新規な神経成長因子の活性を指示する、
工程を含む、方法。
【請求項８】
神経系障害を治療するための新しい薬物候補をスクリーニングするための、発生しうる神経細胞の形態学的、生理学的および／または免疫学的特徴を有する分化転換した表皮基底細胞の使用方法であって、
（ａ）請求項１に記載のように、神経系障害の患者からの表皮基底細胞を、発生しうる神経細胞の形態学的、生理学的および／または免疫学的特徴を有する細胞に分化転換し、
（ｂ）分化転換した細胞をインビトロで培養し、
（ｃ）新しい薬物候補にインビトロで培養細胞を暴露し、および
（ｄ）インビトロでの細胞の生存、または該分化転換した表皮基底細胞の形態学的または電気生理学的特性および／または分子生物学的性質に及ぼす、新しい薬物候補の作用の存在または非存在を検出し、それによって、インビトロでの細胞の生存、細胞の形態学的または電気生理学的特性および／または分子生物学的性質を変化させる作用は、新しい薬物候補因子の活性を指示する、
工程を含む、方法。
【請求項９】
発生しうる神経細胞の形態学的、生理学的および／または免疫学的特徴を有する分化転換した表皮基底細胞であって、
長さが少なくとも約５０マイクロメートルの１つまたはそれ以上の形態学的な軸索突起様突起を呈し、かつニューロフィラメントＭ、神経特異的チューブリン、神経特異的エノラーゼおよび微小管結合タンパク質２からなる群から選択される少なくとも１つの神経特異的抗原を発現する表皮基底細胞起源の細胞からなる、細胞。
【請求項１０】
該細胞が、分化を誘導する条件下では増殖の欠落をさらに呈する請求項９記載の細胞。
【請求項１１】
該細胞がＧＡＢＡ作動性である請求項９記載の細胞。
【請求項１２】
該細胞がドーパミン作動性である請求項９記載の細胞。
【請求項１３】
星状膠細胞の形態学的、生理学的および／または免疫学的特徴を呈する表皮基底細胞起源の細胞からなる分化転換した細胞であって、該免疫学的特徴が神経膠線維酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）の発現である、細胞。
【請求項１４】
表皮基底細胞を取得することが、無カルシウム培地を使用して角化細胞から基底細胞を選択することからなる請求項１記載の方法。
【請求項１５】
該アンチセンスオリゴヌクレオチドが、１つまたはそれ以上のチオ基で修飾されている請求項１記載の方法。