【手続補正書】
【提出日】令和3年2月5日(2021.2.5)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヘテロ二官能性化合物によって結合され得るヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質をコードするゲノム的に組み込まれた核酸配列
を含む形質転換細胞であって；
前記ｄＴＡＧがＥＧＦＲ、ＢＣＲ−ＡＢＬ、ＡＬＫ、ＪＡＫ２、ＢＲＡＦ、Ｓｒｃ、ＬＲＲＫ２、ＰＤＧＦＲαまたはＲＥＴに由来するアミノ酸配列を含み；
前記ｄＴＡＧをコードする前記核酸配列が、内因性タンパク質をコードする遺伝子の核酸配列と５’または３’配向でゲノム的にインフレームで組み込まれており；
内因性タンパク質をコードする前記遺伝子の発現が内因性タンパク質−ｄＴＡＧハイブリッドタンパク質をもたらし；
前記ヘテロ二官能性化合物が、ａ）前記ｄＴＡＧを通して前記内因性タンパク質−ｄＴＡＧハイブリッドタンパク質、およびｂ）ユビキチンリガーゼに、前記内因性タンパク質−ｄＴＡＧハイブリッドタンパク質を前記ユビキチンリガーゼに近接させるように結合することができ；
前記内因性タンパク質−ｄＴＡＧハイブリッドタンパク質がユビキチン化され、次いで、プロテアソームによって分解される、
形質転換細胞。
【請求項２】
対象の遺伝子発現を調節することを特徴とする、請求項１に記載の形質転換細胞であって、
前記対象が、１つまたは複数の前記形質転換細胞を有し；および
前記対象に、有効量のヘテロ二官能性化合物が投与され；
前記ヘテロ二官能性化合物が、ａ）前記ｄＴＡＧを通して前記内因性タンパク質−ｄＴＡＧハイブリッドタンパク質、およびｂ）ユビキチンリガーゼに、前記内因性タンパク質−ｄＴＡＧハイブリッドタンパク質を前記ユビキチンリガーゼに近接させる様式で結合し、
前記内因性タンパク質−ｄＴＡＧハイブリッドタンパク質がユビキチン化され、次いで、プロテアソームによって分解される、
形質転換細胞。
【請求項３】
前記細胞がヒト細胞である、請求項１または２に記載の形質転換細胞。
【請求項４】
前記ヒト細胞が肝細胞である、請求項３に記載の形質転換細胞。
【請求項５】
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、非内因性タンパク質由来のアミノ酸配列を含むか、または、配列番号５３〜６３から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１または２に記載の形質転換細胞。
【請求項６】
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質をコードする前記核酸配列が、機能獲得型変異、増幅または発現増加、単遺伝性疾患、プロテオパシーまたはこれらの組み合わせの結果である疾患に関連する内因性タンパク質をコードする遺伝子とインフレームで挿入される、請求項１から５のいずれか一項に記載の形質転換細胞。
【請求項７】
ＣＲＩＳＰＲ  ＲＮＡガイドエンドヌクレアーゼをコードする核酸配列をさらに含み、前記ＣＲＩＳＰＲ  ＲＮＡガイドエンドヌクレアーゼが、Ｃａｓ１、ＣａｓＩＢ、Ｃａｓ２、Ｃａｓ３、Ｃａｓ４、Ｃａｓ５、Ｃａｓ６、Ｃａｓ７、Ｃａｓ８、Ｃａｓ９、Ｃａｓ１０、Ｃｓｙ１、Ｃｓｙ２、Ｃｓｙ３、Ｃｓｅ１、Ｃｓｅ２、Ｃｓｃ１、Ｃｓｃ２、Ｃｓａ５、Ｃｓｎ２、Ｃｓｍ２、Ｃｓｍ３、Ｃｓｍ４、Ｃｓｍ５、Ｃｓｍ６、Ｃｍｒ１、Ｃｍｒ３、Ｃｍｒ４、Ｃｍｒ５、Ｃｍｒ６、Ｃｓｂ１、Ｃｓｂ２、Ｃｓｂ３、Ｃｓｘ１７、Ｃｓｘ１４、Ｃｓｘ１０、Ｃｓｘ１６、ＣｓａＸ、Ｃｓｘ３、Ｃｓｘ１、Ｃｓｘ１５、Ｃｓｆ１、Ｃｓｆ２、Ｃｓｆ３、Ｃｓｆ４およびＣｐｆ１から選択される、請求項１から６のいずれか一項に記載の形質転換細胞。
【請求項８】
前記核酸が配列番号５２のアミノ酸配列で構成されるＣａｓ９エンドヌクレアーゼをコードする、請求項７に記載の形質転換細胞。
【請求項９】
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、前記内因性発現タンパク質の機能を実質的に妨害しない、請求項１から８のいずれか一項に記載の形質転換細胞。
【請求項１０】
対象の遺伝子過剰発現を減少させるための、ヘテロ二官能性化合物を含む医薬組成物であって、
前記対象が、ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質（ｄＴＡＧ）をコードする核酸配列で形質転換された１つまたは複数の形質転換細胞を有し；
前記ｄＴＡＧが、ＥＧＦＲ、ＢＣＲ−ＡＢＬ、ＡＬＫ、ＪＡＫ２、ＢＲＡＦ、Ｓｒｃ、ＬＲＲＫ２、ＰＤＧＦＲαまたはＲＥＴに由来するアミノ酸配列を含み；
前記ｄＴＡＧをコードする前記核酸配列が、タンパク質の過剰発現による疾患に関連する内因性タンパク質の核酸配列と５’または３’配向でゲノム的にインフレームで組み込まれ；
前記ｄＴＡＧをコードする前記核酸配列のゲノム配列への挿入によって、発現時に内因性タンパク質−ｄＴＡＧハイブリッドタンパク質がもたらされ；
前記ヘテロ二官能性化合物が、ａ）前記ｄＴＡＧを通して前記内因性タンパク質−ｄＴＡＧハイブリッドタンパク質、およびｂ）ユビキチンリガーゼに、前記内因性タンパク質−ｄＴＡＧハイブリッドタンパク質を前記ユビキチンリガーゼに近接させるように結合し、
前記内因性タンパク質−ｄＴＡＧハイブリッドタンパク質がユビキチン化され、次いで、プロテアソームによって分解される、
医薬組成物。
【請求項１１】
前記細胞がヒト細胞である、請求項１０に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
前記ヒト細胞が肝細胞である、請求項１１に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、非内因性タンパク質由来のアミノ酸配列を含むか；または配列番号５３〜６３から選択されるアミノ酸配列を含む、
請求項１０から１２のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１４】
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質をコードする前記核酸配列が、機能獲得型変異、増幅または発現増加、単遺伝性疾患、プロテオパシーまたはこれらの組み合わせの結果である疾患に関連する内因性タンパク質をコードする遺伝子とインフレームで挿入される、請求項１０から１３のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
ＣＲＩＳＰＲ  ＲＮＡガイドエンドヌクレアーゼをコードする核酸配列をさらに含み、前記ＣＲＩＳＰＲ  ＲＮＡガイドエンドヌクレアーゼが、Ｃａｓ１、ＣａｓＩＢ、Ｃａｓ２、Ｃａｓ３、Ｃａｓ４、Ｃａｓ５、Ｃａｓ６、Ｃａｓ７、Ｃａｓ８、Ｃａｓ９、Ｃａｓ１０、Ｃｓｙ１、Ｃｓｙ２、Ｃｓｙ３、Ｃｓｅ１、Ｃｓｅ２、Ｃｓｃ１、Ｃｓｃ２、Ｃｓａ５、Ｃｓｎ２、Ｃｓｍ２、Ｃｓｍ３、Ｃｓｍ４、Ｃｓｍ５、Ｃｓｍ６、Ｃｍｒ１、Ｃｍｒ３、Ｃｍｒ４、Ｃｍｒ５、Ｃｍｒ６、Ｃｓｂ１、Ｃｓｂ２、Ｃｓｂ３、Ｃｓｘ１７、Ｃｓｘ１４、Ｃｓｘ１０、Ｃｓｘ１６、ＣｓａＸ、Ｃｓｘ３、Ｃｓｘ１、Ｃｓｘ１５、Ｃｓｆ１、Ｃｓｆ２、Ｃｓｆ３、Ｃｓｆ４およびＣｐｆ１から選択される、請求項１０から１４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１６】
前記核酸が配列番号５２のアミノ酸配列で構成されるＣａｓ９エンドヌクレアーゼをコードする、請求項１５に記載の使用のための医薬組成物。
【請求項１７】
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、前記内因性発現タンパク質の機能を実質的に妨害しない、請求項１０から１６のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１４】
不可逆的変化を目的の遺伝子に組み込むＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ９ゲノム編集と比較して、ｄＴＡＧと内因性発現タンパク質を標的化するためのヘテロ二官能性化合物の使用は、目的の内因性発現タンパク質の可逆的制御を可能にする。したがって、ヘテロ二官能性化合物をタンパク質発現のレオスタットとして使用して、ヘテロ二官能性化合物の用量調整時に内因性タンパク質発現をオンおよびオフにする能力を与えることができる。さらに、内因性タンパク質の遺伝子に対して５’または３’でインフレームでｄＴＡＧをコードする核酸配列をゲノム的かつ安定的に組み込むことによって、遺伝子を恒久的に編集することに関連する負の下流結果などのＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ９に関連する副作用を回避することができる。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２１】
したがって、この様式で内因性タンパク質の発現を調節することによって、タンパク質発現を調節することの下流の効果を、多種多様なタンパク質および細胞型にわたって、ならびに種々の生理学的条件において試験することができる。細胞内のヘテロ二官能性化合物濃度を用量調整することができるので、細胞内のタンパク質−ｄＴＡＧハイブリッドタンパク質濃度を微調整することができ、細胞内のタンパク質存在量の条件付き変更および要求に応じて細胞内の表現型を変更する能力が可能になる。一実施形態では、細胞内のタンパク質発現減衰を評価する方法であって、目的のタンパク質をコードするゲノム配列に対して５’または３’でインフレームでｄＴＡＧをコードする核酸配列を挿入し、ｄＴＡＧをコードする核酸のゲノム配列への挿入によって、発現時に内因性タンパク質−ｄＴＡＧハイブリッドまたは融合タンパク質がもたらされ、内因性タンパク質−ｄＴＡＧが、ａ）挿入されたｄＴＡＧおよびｂ）ユビキチンリガーゼに結合するヘテロ二官能性化合物によって、ｄＴＡＧ（したがって内因性タンパク質−ｄＴＡＧハイブリッドタンパク質）をユビキチンリガーゼに近接させるように分解され得、結果として内因性タンパク質−ｄＴＡＧハイブリッドタンパク質がユビキチン化され、次いで、プロテアソームによって分解されるステップを含む方法が本明細書で提供される。一実施形態では、ヘテロ二官能性化合物が、細胞内のタンパク質−ｄＴＡＧハイブリッドタンパク質の濃度が部分的に低下するように、細胞に投与される。一実施形態では、ヘテロ二官能性化合物が、細胞内の内因性タンパク質−ｄＴＡＧハイブリッドタンパク質の濃度が完全に低下するように、細胞に投与される。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】１７６５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【１７６５】
本明細書を、本発明の実施形態を参照して説明してきた。しかしながら、当業者であれば、以下の特許請求の範囲に示される本発明の範囲から逸脱することなく、種々の修正および変更を行うことができることを理解するだろう。したがって、本明細書は限定的な意味ではなくむしろ例示的な意味で考えられるべきであり、このような修正は全て本発明の範囲内に含まれることが意図されている。
本発明は以下の実施形態を含む。
［１］
ヘテロ二官能性化合物によって結合され得るヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質をコードするゲノム的に組み込まれた核酸配列
を含む形質転換細胞であって；
前記ｄＴＡＧがＥＧＦＲ、ＢＣＲ−ＡＢＬ、ＡＬＫ、ＪＡＫ２、ＢＲＡＦ、Ｓｒｃ、ＬＲＲＫ２、ＰＤＧＦＲαまたはＲＥＴに由来するアミノ酸配列を含み；
前記ｄＴＡＧをコードする前記核酸配列が、内因性タンパク質をコードする遺伝子の核酸配列と５’または３’配向でゲノム的にインフレームで組み込まれており；
内因性タンパク質をコードする前記遺伝子の発現が内因性タンパク質−ｄＴＡＧハイブリッドタンパク質をもたらし；
前記ヘテロ二官能性化合物が、ａ）前記ｄＴＡＧを通して前記内因性タンパク質−ｄＴＡＧハイブリッドタンパク質、およびｂ）前記内因性タンパク質−ｄＴＡＧハイブリッドタンパク質をユビキチンリガーゼに近接させるようにユビキチンリガーゼに結合することができ；
前記内因性タンパク質−ｄＴＡＧハイブリッドタンパク質がユビキチン化され、次いで、プロテアソームによって分解される、
形質転換細胞。
［２］
ヒト細胞である、［１］に記載の形質転換細胞。
［３］
前記ヒト細胞が肝細胞である、［２］に記載の形質転換細胞。
［４］
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、非内因性タンパク質由来のアミノ酸配列を含む、［１］から［３］のいずれか一項に記載の形質転換細胞。
［５］
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、配列番号５３〜６３から選択されるアミノ酸配列を含む、［１］から［４］のいずれか一項に記載の形質転換細胞。
［６］
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、ＥＧＦＲ由来のアミノ酸配列である、［１］から［４］のいずれか一項に記載の形質転換細胞。
［７］
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、配列番号５３のアミノ酸配列である、［６］に記載の形質転換細胞。
［８］
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、配列番号５４のアミノ酸配列である、［６］に記載の形質転換細胞。
［９］
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、配列番号５５のアミノ酸配列である、［６］に記載の形質転換細胞。
［１０］
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、配列番号５６のアミノ酸配列である、［６］に記載の形質転換細胞。
［１１］
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、ＢＣＲ−ＡＢＬ由来のアミノ酸配列である、［１］から［４］のいずれか一項に記載の形質転換細胞。
［１２］
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、配列番号５７のアミノ酸配列である、［１１］に記載の形質転換細胞。
［１３］
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、配列番号５８のアミノ酸配列である、［１１］に記載の形質転換細胞。
［１４］
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、ＡＬＫ由来のアミノ酸配列である、［１］から［４］のいずれか一項に記載の形質転換細胞。
［１５］
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、配列番号５９のアミノ酸配列である、［１４］に記載の形質転換細胞。
［１６］
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、ＪＡＫ２由来のアミノ酸配列である、［１］から［４］のいずれか一項に記載の形質転換細胞。
［１７］
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、配列番号６０のアミノ酸配列である、［１６］に記載の形質転換細胞。
［１８］
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、ＢＲＡＦ由来のアミノ酸配列である、［１］から［４］のいずれか一項に記載の形質転換細胞。
［１９］
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、配列番号６１のアミノ酸配列である、［１８］に記載の形質転換細胞。
［２０］
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、Ｓｒｃ由来のアミノ酸配列である、［１］から［４］のいずれか一項に記載の形質転換細胞。
［２１］
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、配列番号６２のアミノ酸配列である、［２０］に記載の形質転換細胞。
［２２］
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、配列番号６３のアミノ酸配列である、［２０］に記載の形質転換細胞。
［２３］
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、ＬＫＫＲ２由来のアミノ酸配列である、［１］から［４］のいずれか一項に記載の形質転換細胞。
［２４］
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、ＰＤＧＦＲα由来のアミノ酸配列である、［１］から［４］のいずれか一項に記載の形質転換細胞。
［２５］
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、ＲＥＴ由来のアミノ酸配列である、［１］から［４］のいずれか一項に記載の形質転換細胞。
［２６］
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質をコードする前記核酸配列が、機能獲得型変異、増幅または発現増加、単遺伝性疾患、プロテオパシーまたはこれらの組み合わせの結果である疾患に関連する内因性タンパク質をコードする遺伝子とインフレームで挿入される、［１］から［２５］のいずれか一項に記載の形質転換細胞。
［２７］
ＣＲＩＳＰＲ  ＲＮＡガイドエンドヌクレアーゼをコードする核酸配列をさらに含む、［１］から［２６］のいずれか一項に記載の形質転換細胞。
［２８］
前記ＣＲＩＳＰＲ  ＲＮＡガイドエンドヌクレアーゼが、Ｃａｓ１、ＣａｓＩＢ、Ｃａｓ２、Ｃａｓ３、Ｃａｓ４、Ｃａｓ５、Ｃａｓ６、Ｃａｓ７、Ｃａｓ８、Ｃａｓ９、Ｃａｓ１０、Ｃｓｙ１、Ｃｓｙ２、Ｃｓｙ３、Ｃｓｅ１、Ｃｓｅ２、Ｃｓｃ１、Ｃｓｃ２、Ｃｓａ５、Ｃｓｎ２、Ｃｓｍ２、Ｃｓｍ３、Ｃｓｍ４、Ｃｓｍ５、Ｃｓｍ６、Ｃｍｒ１、Ｃｍｒ３、Ｃｍｒ４、Ｃｍｒ５、Ｃｍｒ６、Ｃｓｂ１、Ｃｓｂ２、Ｃｓｂ３、Ｃｓｘ１７、Ｃｓｘ１４、Ｃｓｘ１０、Ｃｓｘ１６、ＣｓａＸ、Ｃｓｘ３、Ｃｓｘ１、Ｃｓｘ１５、Ｃｓｆ１、Ｃｓｆ２、Ｃｓｆ３、Ｃｓｆ４およびＣｐｆ１から選択される、［２７］に記載の形質転換細胞。
［２９］
前記核酸が配列番号５２のアミノ酸配列で構成されるＣａｓ９エンドヌクレアーゼをコードする、［２８］に記載の形質転換細胞。
［３０］
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、前記内因性発現タンパク質の機能を実質的に妨害しない、［１］から［２９］のいずれか一項に記載の形質転換細胞。
［３１］
対象の遺伝子発現を調節する方法であって、
有効量のヘテロ二官能性化合物を前記対象に投与するステップを含み；
前記対象が、ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質（ｄＴＡＧ）をコードする核酸配列で形質転換された１つまたは複数の形質転換細胞を有し；
前記ｄＴＡＧが、ＥＧＦＲ、ＢＣＲ−ＡＢＬ、ＡＬＫ、ＪＡＫ２、ＢＲＡＦ、Ｓｒｃ、ＬＲＲＫ２、ＰＤＧＦＲαまたはＲＥＴに由来するアミノ酸配列を含み；
前記ｄＴＡＧをコードする前記核酸配列が、疾患に関連する内因性タンパク質の核酸配列と５’または３’配向でゲノム的にインフレームで組み込まれ；
前記ｄＴＡＧをコードする前記核酸配列のゲノム配列への挿入によって、発現時に内因性タンパク質−ｄＴＡＧハイブリッドタンパク質がもたらされ；
前記ヘテロ二官能性化合物が、ａ）前記ｄＴＡＧを通して前記内因性タンパク質−ｄＴＡＧハイブリッドタンパク質、およびｂ）前記内因性タンパク質−ｄＴＡＧハイブリッドタンパク質をユビキチンリガーゼに近接させるようにユビキチンリガーゼに結合し、
前記内因性タンパク質−ｄＴＡＧハイブリッドタンパク質がユビキチン化され、次いで、プロテアソームによって分解される、
方法。
［３２］
前記細胞がヒト細胞である、［３１］に記載の方法。
［３３］
前記ヒト細胞が肝細胞である、［３２］に記載の方法。
［３４］
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、非内因性タンパク質由来のアミノ酸配列を含む、［３１］から［３３］のいずれか一項に記載の方法。
［３５］
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、配列番号５３〜６３から選択されるアミノ酸配列を含む、［３１］から［３４］のいずれか一項に記載の方法。
［３６］
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、ＥＧＦＲ由来のアミノ酸配列である、［３１］から［３４］のいずれか一項に記載の方法。
［３７］
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、配列番号５３のアミノ酸配列である、［３６］に記載の方法。
［３８］
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、配列番号５４のアミノ酸配列である、［３６］に記載の方法。
［３９］
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、配列番号５５のアミノ酸配列である、［３６］に記載の方法。
［４０］
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、配列番号５６のアミノ酸配列である、［３６］に記載の方法。
［４１］
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、ＢＣＲ−ＡＢＬ由来のアミノ酸配列である、［３１］から［３４］のいずれか一項に記載の方法。
［４２］
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、配列番号５７のアミノ酸配列である、［４１］に記載の方法。
［４３］
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、配列番号５８のアミノ酸配列である、［４１］に記載の方法。
［４４］
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、ＡＬＫ由来のアミノ酸配列である、［３１］から［３４］のいずれか一項に記載の方法。
［４５］
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、配列番号５９のアミノ酸配列である、［４４］に記載の方法。
［４６］
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、ＪＡＫ２由来のアミノ酸配列である、［３１］から［３４］のいずれか一項に記載の方法。
［４７］
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、配列番号６０のアミノ酸配列である、［４６］に記載の方法。
［４８］
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、ＢＲＡＦ由来のアミノ酸配列である、［３１］から［３４］のいずれか一項に記載の方法。
［４９］
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、配列番号６１のアミノ酸配列である、［４８］に記載の方法。
［５０］
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、Ｓｒｃ由来のアミノ酸配列である、［３１］から［３４］のいずれか一項に記載の方法。
［５１］
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、配列番号６２のアミノ酸配列である、［５０］に記載の方法。
［５２］
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、配列番号６３のアミノ酸配列である、［５０］に記載の方法。
［５３］
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、ＬＫＫＲ２由来のアミノ酸配列である、［３１］から［３４］のいずれか一項に記載の方法。
［５４］
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、ＰＤＧＦＲα由来のアミノ酸配列である、［３１］から［３４］のいずれか一項に記載の方法。
［５５］
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、ＲＥＴ由来のアミノ酸配列である、［３１］から［３４］のいずれか一項に記載の方法。
［５６］
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質をコードする前記核酸配列が、機能獲得型変異、増幅または発現増加、単遺伝性疾患、プロテオパシーまたはこれらの組み合わせの結果である疾患に関連する内因性タンパク質をコードする遺伝子とインフレームで挿入される、［３１］から［５５］のいずれか一項に記載の方法。
［５７］
ＣＲＩＳＰＲ  ＲＮＡガイドエンドヌクレアーゼをコードする核酸配列をさらに含む、［３１］から［５６］のいずれか一項に記載の方法。
［５８］
前記ＣＲＩＳＰＲ  ＲＮＡガイドエンドヌクレアーゼが、Ｃａｓ１、ＣａｓＩＢ、Ｃａｓ２、Ｃａｓ３、Ｃａｓ４、Ｃａｓ５、Ｃａｓ６、Ｃａｓ７、Ｃａｓ８、Ｃａｓ９、Ｃａｓ１０、Ｃｓｙ１、Ｃｓｙ２、Ｃｓｙ３、Ｃｓｅ１、Ｃｓｅ２、Ｃｓｃ１、Ｃｓｃ２、Ｃｓａ５、Ｃｓｎ２、Ｃｓｍ２、Ｃｓｍ３、Ｃｓｍ４、Ｃｓｍ５、Ｃｓｍ６、Ｃｍｒ１、Ｃｍｒ３、Ｃｍｒ４、Ｃｍｒ５、Ｃｍｒ６、Ｃｓｂ１、Ｃｓｂ２、Ｃｓｂ３、Ｃｓｘ１７、Ｃｓｘ１４、Ｃｓｘ１０、Ｃｓｘ１６、ＣｓａＸ、Ｃｓｘ３、Ｃｓｘ１、Ｃｓｘ１５、Ｃｓｆ１、Ｃｓｆ２、Ｃｓｆ３、Ｃｓｆ４およびＣｐｆ１から選択される、［５７］に記載の方法。
［５９］
前記核酸が配列番号５２のアミノ酸配列で構成されるＣａｓ９エンドヌクレアーゼをコードする、［５８］に記載の方法。
［６０］
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、前記内因性発現タンパク質の機能を実質的に妨害しない、［３１］から［５９］のいずれか一項に記載の方法。
［６１］
対象の遺伝子過剰発現を減少させる方法であって、
有効量のヘテロ二官能性化合物を前記対象に投与するステップを含み；
前記対象が、ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質（ｄＴＡＧ）をコードする核酸配列で形質転換された１つまたは複数の形質転換細胞を有し；
前記ｄＴＡＧが、ＥＧＦＲ、ＢＣＲ−ＡＢＬ、ＡＬＫ、ＪＡＫ２、ＢＲＡＦ、Ｓｒｃ、ＬＲＲＫ２、ＰＤＧＦＲαまたはＲＥＴに由来するアミノ酸配列を含み；
前記ｄＴＡＧをコードする前記核酸配列が、タンパク質の過剰発現による疾患に関連する内因性タンパク質の核酸配列と５’または３’配向でゲノム的にインフレームで組み込まれ；
前記ｄＴＡＧをコードする前記核酸配列のゲノム配列への挿入によって、発現時に内因性タンパク質−ｄＴＡＧハイブリッドタンパク質がもたらされ；
前記ヘテロ二官能性化合物が、ａ）前記ｄＴＡＧを通して前記内因性タンパク質−ｄＴＡＧハイブリッドタンパク質、およびｂ）前記内因性タンパク質−ｄＴＡＧハイブリッドタンパク質をユビキチンリガーゼに近接させるようにユビキチンリガーゼに結合し、
前記内因性タンパク質−ｄＴＡＧハイブリッドタンパク質がユビキチン化され、次いで、プロテアソームによって分解される、
方法。
［６２］
前記細胞がヒト細胞である、［６１］に記載の方法。
［６３］
前記ヒト細胞が肝細胞である、［６２］に記載の方法。
［６４］
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、非内因性タンパク質由来のアミノ酸配列を含む、［６１］から［６３］のいずれか一項に記載の方法。
［６５］
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、配列番号５３〜６３から選択されるアミノ酸配列を含む、［６１］から［６４］のいずれか一項に記載の方法。
［６６］
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、ＥＧＦＲ由来のアミノ酸配列である、［６１］から［６４］のいずれか一項に記載の方法。
［６７］
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、配列番号５３のアミノ酸配列である、［６６］に記載の方法。
［６８］
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、配列番号５４のアミノ酸配列である、［６６］に記載の方法。
［６９］
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、配列番号５５のアミノ酸配列である、［６６］に記載の方法。
［７０］
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、配列番号５６のアミノ酸配列である、［６６］に記載の方法。
［７１］
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、ＢＣＲ−ＡＢＬ由来のアミノ酸配列である、［６１］から［６４］のいずれか一項に記載の方法。
［７２］
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、配列番号５７のアミノ酸配列である、［７１］に記載の方法。
［７３］
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、配列番号５８のアミノ酸配列である、［７１］に記載の方法。
［７４］
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、ＡＬＫ由来のアミノ酸配列である、［６１］から［６４］のいずれか一項に記載の方法。
［７５］
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、配列番号５９のアミノ酸配列である、［７４］に記載の方法。
［７６］
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、ＪＡＫ２由来のアミノ酸配列である、［６１］から［６４］のいずれか一項に記載の方法。
［７７］
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、配列番号６０のアミノ酸配列である、［７６］に記載の方法。
［７８］
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、ＢＲＡＦ由来のアミノ酸配列である、［６１］から［６４］のいずれか一項に記載の方法。
［７９］
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、配列番号６１のアミノ酸配列である、［７８］に記載の方法。
［８０］
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、Ｓｒｃ由来のアミノ酸配列である、［６１］から［６４］のいずれか一項に記載の方法。
［８１］
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、配列番号６２のアミノ酸配列である、［８０］に記載の方法。
［８２］
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、配列番号６３のアミノ酸配列である、［８０］に記載の方法。
［８３］
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、ＬＫＫＲ２由来のアミノ酸配列である、［６１］から［６４］のいずれか一項に記載の方法。
［８４］
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、ＰＤＧＦＲα由来のアミノ酸配列である、［６１］から［６４］のいずれか一項に記載の方法。
［８５］
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、ＲＥＴ由来のアミノ酸配列である、［６１］から［６４］のいずれか一項に記載の方法。
［８６］
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質をコードする前記核酸配列が、機能獲得型変異、増幅または発現増加、単遺伝性疾患、プロテオパシーまたはこれらの組み合わせの結果である疾患に関連する内因性タンパク質をコードする遺伝子とインフレームで挿入される、［６１］から［８５］のいずれか一項に記載の方法。
［８７］
ＣＲＩＳＰＲ  ＲＮＡガイドエンドヌクレアーゼをコードする核酸配列をさらに含む、［３１］から［５６］のいずれか一項に記載の方法。
［８８］
前記ＣＲＩＳＰＲ  ＲＮＡガイドエンドヌクレアーゼが、Ｃａｓ１、ＣａｓＩＢ、Ｃａｓ２、Ｃａｓ３、Ｃａｓ４、Ｃａｓ５、Ｃａｓ６、Ｃａｓ７、Ｃａｓ８、Ｃａｓ９、Ｃａｓ１０、Ｃｓｙ１、Ｃｓｙ２、Ｃｓｙ３、Ｃｓｅ１、Ｃｓｅ２、Ｃｓｃ１、Ｃｓｃ２、Ｃｓａ５、Ｃｓｎ２、Ｃｓｍ２、Ｃｓｍ３、Ｃｓｍ４、Ｃｓｍ５、Ｃｓｍ６、Ｃｍｒ１、Ｃｍｒ３、Ｃｍｒ４、Ｃｍｒ５、Ｃｍｒ６、Ｃｓｂ１、Ｃｓｂ２、Ｃｓｂ３、Ｃｓｘ１７、Ｃｓｘ１４、Ｃｓｘ１０、Ｃｓｘ１６、ＣｓａＸ、Ｃｓｘ３、Ｃｓｘ１、Ｃｓｘ１５、Ｃｓｆ１、Ｃｓｆ２、Ｃｓｆ３、Ｃｓｆ４およびＣｐｆ１から選択される、［８７］に記載の方法。
［８９］
前記核酸が配列番号５２のアミノ酸配列で構成されるＣａｓ９エンドヌクレアーゼをコードする、［８８］に記載の方法。
［９０］
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、前記内因性発現タンパク質の機能を実質的に妨害しない、［６１］から［８９］のいずれか一項に記載の方法。