【手続補正書】
【提出日】令和3年2月26日(2021.2.26)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
非天然の改変アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）カプシドタンパク質であって、対応する親ＡＡＶカプシドタンパク質と比較してペプチド挿入を含み、前記ペプチド挿入は、アミノ酸配列ＬＧＥＴＴＲＰ（配列番号６）またはアミノ酸配列ＬＡＬＧＥＴＴＲＰＡ（配列番号１４）を含み、前記挿入部位は、ＡＡＶＳｈＨ１０のＶＰ１のアミノ酸残基４５６および４５７、アミノ酸残基４５７および４５８、もしくはアミノ酸残基４５８および４５９の間に含まれる位置、またはＡＡＶ１またはＡＡＶ６のカプシドタンパク質の対応する位置に位置する、非天然の改変ＡＡＶカプシドタンパク質。
【請求項２】
請求項１に記載の改変ＡＡＶカプシドタンパク質をコードする核酸配列を含む、ポリヌクレオチド。
【請求項３】
前記改変ＡＡＶカプシドタンパク質をコードする前記核酸配列は、プロモーター配列に作動可能に連結されている、請求項２に記載のポリヌクレオチドを含む発現ベクター。
【請求項４】
請求項３に記載の発現ベクターを含む、細胞であって、任意選択的に、治療用タンパク質をコードするポリヌクレオチドをさらに含み、および／または任意選択的に、ｒｅｐタンパク質をコードするポリヌクレオチドをさらに含む、細胞。
【請求項５】
請求項１に記載の改変カプシドタンパク質を含む、組換えウイルスまたはウイルスベクターであって、前記組換えウイルスは、任意選択的に、約０．２Ｍ〜約０．４Ｍの塩濃度でヘパランカラムから溶出される、または前記組換えウイルスまたはウイルスベクターは、哺乳動物に硝子体内注射されると、内境界膜（ＩＬＭ）に結合し、かつそれを横断することができる、組換えウイルスまたはウイルスベクター。
【請求項６】
前記組換えウイルスまたはウイルスベクターは、治療用遺伝子産物をコードするポリヌクレオチド配列を含み、任意選択的に、前記治療用遺伝子産物は、抗血管内皮増殖因子（抗ＶＥＧＦ）剤である、あるいは前記治療用遺伝子産物は、α１アンチトリプシン、第ＩＸ因子、第ＶＩＩＩ因子、Ｃ１エステラーゼ抑制因子、βグロビン、またはγグロビンである、請求項５に記載の組換えウイルスまたはウイルスベクター。
【請求項７】
前記組換えウイルスまたはウイルスベクターは、ＡＡＶＳｈＨ１０またはＡＡＶ６と比較して変更された細胞指向性を有する、または前記組換えウイルスまたはウイルスベクターは、ＡＡＶＳｈＨ１０、ＡＡＶ１、またはＡＡＶ６と比較して網膜細胞または肝細胞のより高い感染性を有する、請求項５および６のいずれか一項に記載の組換えウイルスまたはウイルスベクター。
【請求項８】
薬学的に許容される賦形剤と、請求項６および７のいずれか一項に記載の組換えウイルスまたはウイルスベクターと、を含む、薬学的組成物。
【請求項９】
眼疾患の治療または予防を必要とする対象において眼疾患を治療または予防する方法において使用するための、請求項８に記載の薬学的組成物であって、前記方法が、硝子体内注射により請求項８に記載の薬学的組成物を前記対象に投与することを含む、薬学的組成物。
【請求項１０】
疾患または障害の治療または予防を必要とする対象において疾患または障害を治療または予防する方法における使用のための、第１および第２の薬学的組成物を含む組み合わせ物であって、前記方法が、
（ｉ）薬学的に許容される賦形剤と、第１の組換えウイルスまたはウイルスベクターと、を含む、第１の薬学的組成物であって、
（ａ）第１の改変カプシドタンパク質であって、前記第１の改変カプシドタンパク質は、対応する親ＡＡＶＳｈＨ１０、ＡＡＶ１、またはＡＡＶ６カプシドタンパク質と比較してペプチド挿入を含む改変ＡＡＶＳｈＨ１０、ＡＡＶ１、またはＡＡＶ６カプシドタンパク質であり、前記ペプチド挿入は、アミノ酸配列ＬＧＥＴＴＲＰ（配列番号６）を含み、前記挿入部位は、ＡＡＶＳｈＨ１０カプシドタンパク質のＶＰ１のアミノ酸残基４５６および４５７、アミノ酸残基４５７および４５８、もしくはアミノ酸残基４５８および４５９の間、または前記ＡＡＶ１もしくはＡＡＶ６カプシドタンパク質の対応する残基に位置する、第１の改変カプシドタンパク質と、
（ｂ）第１の治療用遺伝子産物をコードする第１のポリヌクレオチド配列と、を含む、第１の薬学的組成物と、
（ｉｉ）薬学的に許容される賦形剤と、第２の組換えウイルスまたはウイルスベクターと、を含む、第２の薬学的組成物であって、
（ａ）第２の改変カプシドタンパク質であって、前記改変カプシドタンパク質は、前記改変ＡＡＶＳｈＨ１０、ＡＡＶ１、またはＡＡＶ６カプシドタンパク質ではない、第２の改変カプシドタンパク質と、
（ｂ）第２の治療用遺伝子産物をコードする第２のポリヌクレオチド配列と、を含む、第２の薬学的組成物と、を前記対象に投与することを含む、組み合わせ物。
【請求項１１】
前記第２の改変カプシドタンパク質は、ＡＡＶ２カプシドタンパク質、または改変ＡＡＶ２カプシドタンパク質、任意選択的にＡＡＶ２．７ｍ８カプシドタンパク質である、ならびに／あるいは前記第１の薬学的組成物および前記第２の薬学的組成物は、いずれかの順序で逐次的に投与され、前記逐次投与の間に一定の期間が経過し、任意選択的に、前記一定の期間は、少なくとも１ヶ月、少なくとも３ヶ月、少なくとも６ヶ月、少なくとも１年、少なくとも１８ヶ月、少なくとも２年、または少なくとも３年である、請求項１０に記載の組み合わせ物。
【請求項１２】
前記第１および第２の治療用遺伝子産物は、同じであるかまたは異なる、請求項１０および１１のいずれかに記載の組み合わせ物。
【請求項１３】
前記疾患または障害は眼疾患または眼障害であり、前記第１および第２の薬学的組成物は硝子体内に投与され、任意選択的に、前記第１および第２の治療用遺伝子産物の一方または両方は、抗血管内皮増殖因子（抗ＶＥＧＦ）剤であり、ならびに／あるいは前記疾患または障害は、任意選択的に、加齢性黄斑変性症（ＡＭＤ）、湿潤型ＡＭＤ、乾燥型ＡＭＤ、網膜血管新生、脈絡膜血管新生、糖尿病網膜症、増殖性糖尿病網膜症、網膜静脈閉塞症、網膜中心静脈閉塞症、網膜静脈分岐閉塞症、糖尿病黄斑浮腫、糖尿病性網膜虚血、虚血性網膜症、および糖尿病性網膜浮腫からなる群から選択される、請求項１０〜１２のいずれかに記載の組み合わせ物。
【請求項１４】
前記疾患または障害は、肝疾患または肝障害であり、前記第１および第２の薬学的組成物は、非経口的に、任意選択的に静脈内に投与され、任意選択的に、前記第１および第２の治療用遺伝子産物の一方または両方は、α１アンチトリプシン、第ＩＸ因子、第ＶＩＩＩ因子、Ｃ１エステラーゼ抑制因子、βグロビン、またはγグロビンであり、ならびに／あるいは前記疾患または障害は、任意選択的に、α１アンチトリプシン欠損症、血友病Ｂ、血友病Ａ、遺伝性血管性浮腫、またはβサラセミアからなる群から選択される、請求項１０〜１２のいずれかに記載の組み合わせ物。
【請求項１５】
疾患または障害の治療または予防を必要とする対象において疾患または障害を治療または予防するための薬学的組成物であって、前記薬学的組成物が、薬学的に許容される賦形剤と、第１の組換えウイルスまたはウイルスベクターと、を含み、
（ａ）第１の改変カプシドタンパク質であって、前記第１の改変カプシドタンパク質は、対応する親ＡＡＶＳｈＨ１０、ＡＡＶ１、またはＡＡＶ６カプシドタンパク質と比較してペプチド挿入を含む改変ＡＡＶＳｈＨ１０、ＡＡＶ１、またはＡＡＶ６カプシドタンパク質であり、前記ペプチド挿入は、アミノ酸配列ＬＧＥＴＴＲＰ（配列番号６）を含み、前記挿入部位は、ＡＡＶＳｈＨ１０カプシドタンパク質のＶＰ１のアミノ酸残基４５６および４５７、アミノ酸残基４５７および４５８、もしくはアミノ酸残基４５８および４５９の間、または前記ＡＡＶ１もしくはＡＡＶ６カプシドタンパク質の対応する残基に位置する、第１の改変カプシドタンパク質と、
（ｂ）第１の治療用遺伝子産物をコードする第１のポリヌクレオチド配列と、を含み、
前記薬学的組成物が、第２の薬学的組成物と一緒に投与されることを特徴とし、前記第２の薬学的組成物が、薬学的に許容される賦形剤と、第２の組換えウイルスまたはウイルスベクターと、を含み、
（ａ）第２の改変カプシドタンパク質であって、前記改変カプシドタンパク質は、前記改変ＡＡＶＳｈＨ１０、ＡＡＶ１、またはＡＡＶ６カプシドタンパク質ではない、第２の改変カプシドタンパク質と、
（ｂ）第２の治療用遺伝子産物をコードする第２のポリヌクレオチド配列と、を含む、薬学的組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１９】
本発明は、ウイルスまたはウイルスベクターのカプシドタンパク質、例えば、例えば、アミノ酸残基４５６および４５７、アミノ酸残基４５７および４５８、またはアミノ酸残基４５８および４５９のいずれかの間に７ｍ８挿入を導入することを含む、ＡＡＶＳｈＨ１０、ＡＡＶ１、またはＡＡＶ６ウイルスまたはウイルスベクターの指向性を変化させる方法をさらに提供する。
本願発明は、例えば、以下の項目を提供する。
（項目１）
非天然の改変アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）カプシドタンパク質であって、対応する親ＡＡＶカプシドタンパク質と比較してペプチド挿入を含み、前記ペプチド挿入は、アミノ酸配列ＬＧＥＴＴＲＰ（配列番号６）またはアミノ酸配列ＬＡＬＧＥＴＴＲＰＡ（配列番号１４）を含み、前記挿入部位は、ＡＡＶＳｈＨ１０のＶＰ１のアミノ酸残基４５６および４５７、アミノ酸残基４５７および４５８、もしくはアミノ酸残基４５８および４５９の間、または別のＡＡＶ血清型のカプシドタンパク質の対応する位置に位置する、非天然の改変ＡＡＶカプシドタンパク質。
（項目２）
前記ＡＡＶは、ＡＡＶＳｈＨ１０、ＡＡＶ１、またはＡＡＶ６である、項目１に記載の改変ＡＡＶカプシドタンパク質。
（項目３）
項目１または項目２に記載の改変ＡＡＶカプシドタンパク質をコードする核酸配列を含む、ポリヌクレオチド。
（項目４）
前記改変ＡＡＶカプシドタンパク質をコードする前記核酸配列は、プロモーター配列に作動可能に連結されている、項目３に記載のポリヌクレオチドを含む発現ベクター。
（項目５）
項目４に記載の発現ベクターを含む、細胞。
（項目６）
治療用タンパク質をコードするポリヌクレオチドをさらに含む、項目５に記載の細胞。
（項目７）
ｒｅｐタンパク質をコードするポリヌクレオチドをさらに含む、項目５または項目６に記載の細胞。
（項目８）
項目１または項目２に記載の改変カプシドタンパク質を含む、組換えウイルスまたはウイルスベクター。
（項目９）
前記組換えウイルスまたはウイルスベクターはＡＡＶである、項目８に記載の組換えウイルスまたはウイルスベクター。
（項目１０）
前記ＡＡＶは、ＡＡＶＳｈＨ１０、ＡＡＶ１、またはＡＡＶ６である、項目９に記載の組換えウイルスまたはウイルスベクター。
（項目１１）
前記組換えウイルスは、約０．２Ｍ〜約０．４Ｍの塩濃度でヘパランカラムから溶出される、項目８〜１０のいずれかに記載の組換えウイルスまたはウイルスベクター。
（項目１２）
前記組換えウイルスまたはウイルスベクターは、哺乳動物に硝子体内注射されると、内境界膜（ＩＬＭ）に結合し、かつそれを横断することができる、項目８〜１１のいずれかに記載の組換えウイルスまたはウイルスベクター。
（項目１３）
前記組換えウイルスまたはウイルスベクターは、治療用遺伝子産物をコードするポリヌクレオチド配列を含む、項目８〜１２のいずれか一項に記載の組換えウイルスまたはウイルスベクター。
（項目１４）
前記治療用遺伝子産物は、抗血管内皮増殖因子（抗ＶＥＧＦ）剤である、項目１３に記載の組換えウイルスまたはウイルスベクター。
（項目１５）
前記治療用遺伝子産物は、α１アンチトリプシン、第ＩＸ因子、第ＶＩＩＩ因子、Ｃ１エステラーゼ抑制因子、βグロビン、またはγグロビンである、項目１３に記載の組換えウイルスまたはウイルスベクター。
（項目１６）
前記組換えウイルスまたはウイルスベクターは、ＡＡＶＳｈＨ１０またはＡＡＶ６と比較して変更された細胞指向性を有する、項目８〜１５のいずれか一項に記載の組換えウイルスまたはウイルスベクター。
（項目１７）
前記組換えウイルスまたはウイルスベクターは、ＡＡＶＳｈＨ１０、ＡＡＶ１、またはＡＡＶ６と比較して網膜細胞または肝細胞のより高い感染性を有する、項目８〜１６のいずれか一項に記載の組換えウイルスまたはウイルスベクター。
（項目１８）
薬学的に許容される賦形剤と、項目１３〜１７のいずれか一項に記載の組換えウイルスまたはウイルスベクターと、を含む、薬学的組成物。
（項目１９）
眼疾患の治療または予防を必要とする対象において眼疾患を治療または予防する方法であって、硝子体内注射により項目１８に記載の薬学的組成物を前記対象に投与することを含む、方法。
（項目２０）
前記組換えウイルスまたはウイルスベクターは、改変ＡＡＶＳｈＨ１０、ＡＡＶ１、またはＡＡＶ６カプシドタンパク質を含む、項目１９に記載の方法。
（項目２１）
疾患または障害の治療または予防を必要とする対象において疾患または障害を治療または予防する方法であって、
（ｉ）薬学的に許容される賦形剤と、第１の組換えウイルスまたはウイルスベクターと、を含む、第１の薬学的組成物であって、
（ａ）第１の改変カプシドタンパク質であって、前記第１の改変カプシドタンパク質は、対応する親ＡＡＶＳｈＨ１０、ＡＡＶ１、またはＡＡＶ６カプシドタンパク質と比較してペプチド挿入を含む改変ＡＡＶＳｈＨ１０、ＡＡＶ１、またはＡＡＶ６カプシドタンパク質であり、前記ペプチド挿入は、アミノ酸配列ＬＧＥＴＴＲＰ（配列番号６）を含み、前記挿入部位は、ＡＡＶＳｈＨ１０カプシドタンパク質のＶＰ１のアミノ酸残基４５６および４５７、アミノ酸残基４５７および４５８、もしくはアミノ酸残基４５８および４５９の間、または前記ＡＡＶ１もしくはＡＡＶ６カプシドタンパク質の対応する残基に位置する、第１の改変カプシドタンパク質と、
（ｂ）第１の治療用遺伝子産物をコードする第１のポリヌクレオチド配列と、を含む、第１の薬学的組成物と、
（ｉｉ）薬学的に許容される賦形剤と、第２の組換えウイルスまたはウイルスベクターと、を含む、第２の薬学的組成物であって、
（ａ）第２の改変カプシドタンパク質であって、前記改変カプシドタンパク質は、前記改変ＡＡＶＳｈＨ１０、ＡＡＶ１、またはＡＡＶ６カプシドタンパク質ではない、第２の改変カプシドタンパク質と、
（ｂ）第２の治療用遺伝子産物をコードする第２のポリヌクレオチド配列と、を含む、第２の薬学的組成物と、を前記対象に投与することを含む、方法。
（項目２２）
前記第２の改変カプシドタンパク質は、ＡＡＶ２カプシドタンパク質、または改変ＡＡＶ２カプシドタンパク質、任意選択的にＡＡＶ２．７ｍ８カプシドタンパク質である、項目２１に記載の方法。
（項目２３）
前記第１の薬学的組成物および前記第２の薬学的組成物は、いずれかの順序で逐次的に投与され、前記逐次投与の間に一定の期間が経過する、項目２１または項目２２に記載の方法。
（項目２４）
前記一定の期間は、少なくとも１ヶ月、少なくとも３ヶ月、少なくとも６ヶ月、少なくとも１年、少なくとも１８ヶ月、少なくとも２年、または少なくとも３年である、項目２３に記載の方法。
（項目２５）
前記第１および第２の治療用遺伝子産物は、同じであるかまたは異なる、項目２１〜２４のいずれかに記載の方法。
（項目２６）
前記疾患または障害は眼疾患または眼障害であり、前記第１および第２の薬学的組成物は硝子体内に投与される、項目２１〜２５のいずれかに記載の方法。
（項目２７）
前記第１および第２の治療用遺伝子産物の一方または両方は、抗血管内皮増殖因子（抗ＶＥＧＦ）剤である、項目２６に記載の方法。
（項目２８）
前記疾患または障害は、加齢性黄斑変性症（ＡＭＤ）、湿潤型ＡＭＤ、乾燥型ＡＭＤ、網膜血管新生、脈絡膜血管新生、糖尿病網膜症、増殖性糖尿病網膜症、網膜静脈閉塞症、網膜中心静脈閉塞症、網膜静脈分岐閉塞症、糖尿病黄斑浮腫、糖尿病性網膜虚血、虚血性網膜症、および糖尿病性網膜浮腫からなる群から選択される、項目２６または項目２７に記載の方法。
（項目２９）
前記疾患または障害は、肝疾患または肝障害であり、前記第１および第２の薬学的組成物は、非経口的に、任意選択的に静脈内に投与される、項目２１〜２５のいずれかに記載の方法。
（項目３０）
前記第１および第２の治療用遺伝子産物の一方または両方は、α１アンチトリプシン、第ＩＸ因子、第ＶＩＩＩ因子、Ｃ１エステラーゼ抑制因子、βグロビン、またはγグロビンである、項目２９に記載の方法。
（項目３１）
前記疾患または障害は、α１アンチトリプシン欠損症、血友病Ｂ、血友病Ａ、遺伝性血管性浮腫、またはβサラセミアからなる群から選択される、項目２９または項目３０に記載の方法。