【手続補正書】
【提出日】令和3年11月12日(2021.11.12)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
間葉間質細胞（ＭＳＣ）、羊膜上皮（ＡＥ）細胞または胎盤由来細胞から入手可能な細胞外小胞（ＥＶ）であって、少なくとも１つのリソソームタンパク質を含む複数のポリペプチド構築物を含む、ＥＶ。
【請求項２】
前記ポリペプチド構築物が、少なくとも１つのＥＶ富化ポリペプチドをさらに含む、請求項１に記載のＥＶ。
【請求項３】
前記リソソームタンパク質が、アルファ−Ｄ−マンノシダーゼ、Ｎ−アスパルチル−ベータ−グルコサミニダーゼ、リソソーム酸リパーゼ、シスチノシン、リソソーム関連膜タンパク質−２、アルファガラクトシダーゼＡ、酸性セラミダーゼ、アルファフコシダーゼ、カテプシンＡ、酸性ベータグルコシダーゼ、ベータガラクトシダーゼ、ベータヘキソサミニダーゼＡ、ベータヘキソサミニダーゼＢ、ＧｌｃＮＡｃ−１−ホスホトランスフェラーゼ、ベータガラクトシルセラミダーゼ、リソソーム酸リパーゼ、アリールスルファターゼＡ、アルファ−Ｌ−イズロニダーゼ、イズロン酸−２−スルファターゼ、パランスルファミダーゼ、アセチルアルファ−グルコサミニダーゼ、アセチルＣｏＡ：アルファ−グルコサミニド−Ｎ−アセチルトランスフェラーゼ、Ｎ−アセチルグルコサミン−６−スルファターゼ、Ｎ−アセチルガラクトサミン−６−スルファターゼ、ヒアルロニダーゼ、アセチルガラクトサミン−４−スルファターゼ、ベータ−グルクロニダーゼ、アルファ−Ｎ−アセチルノイラミニダーゼ、Ｎ−アセチルグルコサミン−１−ホスホトランスフェラーゼ、ムコリピン−１、ホルミルグリシン生成酵素、パルミトイルタンパク質チオエステラーゼ−１、トリペプチジルペプチダーゼＩ、システインストリングタンパク質、ＣＬＮ３ｐ、ＣＬＮ５ｐ、ＣＬＮ６ｐ、ＣＬＮ７ｐ、ＣＬＮ８ｐ、酸性スフィンゴミエリナーゼ、ＮＰＣ１、ＮＰＣ２、酸性アルファ−グルコシダーゼ、カテプシンＫ、シアリン、アルファ−Ｎ−アセチルガラクトサミニダーゼ、ＧＭ２アクチベーター、リソソーム酸リパーゼ、およびそれらの誘導体、領域、ドメイン、および／任意の組合せからなる群から選択される、請求項１〜２のいずれか１項に記載のＥＶ。
【請求項４】
前記ＥＶ富化ポリペプチドが、ＣＤ９、ＣＤ５３、ＣＤ６３、ＣＤ８１、ＣＤ５４、ＣＤ５０、ＦＬＯＴ１、ＦＬＯＴ２、ＣＤ４９ｄ、ＣＤ７１、ＣＤ１３３、ＣＤ１３８、ＣＤ２３５ａ、ＡＬＩＸ、シンテニン（配列番号１）、シンテニンのＮ末端部分（配列番号２）、シンテニン−２、Ｌａｍｐ２ｂ、ＴＳＰＡＮ８、ＴＳＰＡＮ１４、ＣＤ３７、ＣＤ８２、ＣＤ１５１、ＣＤ２３１、ＣＤ１０２、ＮＯＴＣＨ１、ＮＯＴＣＨ２、ＮＯＴＣＨ３、ＮＯＴＣＨ４、ＤＬＬ１、ＤＬＬ４、ＪＡＧ１、ＪＡＧ２、ＣＤ４９ｄ／ＩＴＧＡ４、ＩＴＧＢ５、ＩＴＧＢ６、ＩＴＧＢ７、ＣＤ１１ａ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１８／ＩＴＧＢ２、ＣＤ４１、ＣＤ４９ｂ、ＣＤ４９ｃ、ＣＤ４９ｅ、ＣＤ５１、ＣＤ６１、ＣＤ１０４、Ｆｃ受容体、インターロイキン受容体、免疫グロブリン、ＣＤ２、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ３ゼータ、ＣＤ１３、ＣＤ１８、ＣＤ１９、ＣＤ３０、ＣＤ３４、ＣＤ３６、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ４４、ＣＤ４５、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＤ４７、ＣＤ８６、ＣＤ１１０、ＣＤ１１１、ＣＤ１１５、ＣＤ１１７、ＣＤ１２５、ＣＤ１３５、ＣＤ１８４、ＣＤ２００、ＣＤ２７９、ＣＤ２７３、ＣＤ２７４、ＣＤ３６２、ＣＯＬ６Ａ１、ＡＧＲＮ、ＥＧＦＲ、ＧＡＰＤＨ、ＧＬＵＲ２、ＧＬＵＲ３、ＨＬＡ−ＤＭ、ＨＳＰＧ２、Ｈｓｐ７０、Ｌ１ＣＡＭ、ＬＡＭＢ１、ＬＡＭＣ１、ＬＦＡ−１、ＬＧＡＬＳ３ＢＰ、Ｍａｃ−１アルファ、Ｍａｃ−１ベータ、ＭＦＧＥ８、ＳＬＩＴ２、ＳＴＸ３、ＴＣＲＡ、ＴＣＲＢ、ＴＣＲＤ、ＴＣＲＧ、ＶＴＩ１Ａ、ＶＴＩ１Ｂ、それらの任意の誘導体および／またはドメイン、ならびにそれらの任意の組合せからなる群から選択される、請求項１〜３のいずれか１項に記載のＥＶ。
【請求項５】
前記ＥＶ富化ポリペプチドが、シンテニン、シンテニンのＮ−端子部分、またはＣＤ６３である、請求項２〜４のいずれか１項に記載のＥＶ。
【請求項６】
前記リソソームタンパク質がリソソーム膜タンパク質である、請求項１〜５のいずれか１項に記載のＥＶ。
【請求項７】
前記ＥＶが、以下のポリペプチド：ＣＤ６３、ＣＤ８１、ＣＤ４４、ＳＳＥＡ４、ＣＤ１３３、ＣＤ２４、およびヒートショック７０ｋＤａタンパク質８のうちの１つ以上に対して陽性である、請求項１〜６のいずれか１項に記載のＥＶ。
【請求項８】
前記ＥＶが、少なくとも１つのヒートショックタンパク質をさらに含む、請求項１〜７のいずれか１項に記載のＥＶ。
【請求項９】
前記少なくとも１つのヒートショックタンパク質がヒートショック７０ｋＤａタンパク質８である、請求項８に記載のＥＶ。
【請求項１０】
組織標的化ペプチドおよび／またはポリペプチドをさらに含む、請求項１〜９のいずれか１項に記載のＥＶ。
【請求項１１】
前記組織標的化ペプチドおよび／またはポリペプチドが、前記ポリペプチド構築物中に含まれ、および／または別個のポリペプチド構築物として存在する、請求項１０に記載のＥＶ。
【請求項１２】
少なくとも１つのリソソームタンパク質からなる前記ポリペプチド構築物が、正しく折り込まれている、請求項１〜１１のいずれか１項に記載のＥＶ。
【請求項１３】
単一のＥＶが、
（ｉ）前記ポリペプチド構築物の少なくとも１０コピー、
（ｉｉ）前記ポリペプチド構築物の少なくとも５０コピー、および／または
（ｉｉｉ）前記ポリペプチド構築物の少なくとも１００コピー、を含む、請求項１〜１２のいずれか１項に記載のＥＶ。
【請求項１４】
（ｉ）少なくとも１つのリソソームタンパク質を含むポリペプチド構築物をコードするポリヌクレオチド構築物をＥＶ産生ＭＳＣ、ＡＥまたは胎盤由来細胞に導入する工程、および（ｉｉ）少なくとも１つのリソソームタンパク質を含む複数のポリペプチド構築物を含むＥＶをＥＶ産生細胞から得る工程を含む、請求項１〜１３のいずれか１項に記載のＥＶの産生方法。
【請求項１５】
少なくとも１つのリソソームタンパク質を含む複数のポリペプチド構築物を含む前記ＥＶであって、少なくとも１つのリソソームタンパク質は、
（ｉ）前記リソソームタンパク質の少なくとも１０コピー、
（ｉｉ）前記リソソームタンパク質の少なくとも５０コピー、および／または
（ｉｉｉ）前記リソソームタンパク質の少なくとも１００コピー、を含む、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
少なくとも１つのリソソームタンパク質を含む前記ポリペプチド構築物がまた、少なくとも１つのＥＶ富化ポリペプチドを含む、請求項１４または１５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１７】
少なくとも１つのリソソームタンパク質を含む少なくとも１つのポリペプチド構築物、少なくとも１つのリソソームタンパク質をコードする少なくとも１つのポリヌクレオチド構築物、および／または少なくとも１つのリソソームタンパク質をコードするポリヌクレオチド構築物を含む少なくとも１つのベクターを含む、ＥＶ産生ＭＳＣ、ＡＥ、または胎盤由来細胞。
【請求項１８】
少なくとも１つのリソソームタンパク質を含むポリペプチド構築物をコードするポリヌクレオチド構築物、および／またはそのような構築物を含むベクターは、ＥＶ産生細胞に安定して挿入される、請求項１７に記載のＥＶ産生ＭＳＣ、ＡＥ、または胎盤由来細胞。
【請求項１９】
少なくとも１つのリソソームタンパク質を含む前記ポリペプチド構築物がまた、少なくとも１つのＥＶ富化ポリペプチドを含む、請求項１７または１８のいずれか１項に記載のＥＶ産生ＭＳＣ、ＡＥまたは胎盤由来細胞。
【請求項２０】
細胞により産生される前記ＥＶのうちの
（ｉ）少なくとも５０％、
（ｉｉ）少なくとも７０％、および／または
（ｉｉｉ）少なくとも９０％、
は、少なくとも１つのリソソームタンパク質を含む前記ポリペプチド構築物を含む、請求項１７〜１９のいずれか１項に記載のＥＶ産生ＭＳＣ、ＡＥまたは胎盤由来細胞。
【請求項２１】
前記細胞によって産生される前記ＥＶが、
（ｉ）前記リソソームタンパク質の少なくとも１０コピー、
（ｉｉ）前記リソソームタンパク質の少なくとも５０コピー、および／または
（ｉｉｉ）前記リソソームタンパク質を含む前記ポリペプチド構築物の少なくとも１００コピー、を含む、請求項１７〜２０のいずれか１項に記載のＥＶ産生ＭＳＣ、ＡＥまたは胎盤由来細胞。
【請求項２２】
前記細胞が不死化されている、請求項１７〜２１のいずれか１項に記載のＥＶ産生ＭＳＣ、ＡＥまたは胎盤由来細胞。
【請求項２３】
前記細胞および前記細胞によって産生される前記ＥＶが、以下の天然タンパク質：ＣＤ６３、ＣＤ８１、ＣＤ４４、ＣＤ４９ｅ、ＣＤ１０５、ＳＳＥＡ４、ＣＤ１３３、ＣＤ２４、および／またはヒートショック７０ｋＤａタンパク質８のうちの１つ以上を含む、請求項１７〜２２のいずれか１項に記載のＥＶ産生ＭＳＣ、ＡＥ、または胎盤由来細胞。
【請求項２４】
前記細胞および前記細胞によって産生される前記ＥＶが、以下の天然タンパク質：ＣＤ６３、ＣＤ８１、およびヒートショック７０ｋＤａタンパク質８を含む、請求項１７〜２３のいずれか１項に記載のＥＶ産生ＭＳＣ、ＡＥ、または胎盤由来細胞。
【請求項２５】
請求項１〜１３のいずれか１項に記載の複数のＥＶと、薬学的に許容可能な担体とを含む医薬組成物。
【請求項２６】
ミグルスタット、アリモクロモール、ヘパリン、トレハロース、および／またはシクロデキストリンおよび／またはそれらの誘導体をさらに含む、請求項２５に記載の医薬組成物。
【請求項２７】
１つ以上のリソソーム蓄積障害の治療に使用するための、請求項１〜１３のいずれか１項に記載のＥＶおよび／または請求項２５または２６に記載の医薬組成物。