【手続補正書】
【提出日】令和3年8月20日(2021.8.20)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｌｉｓｔｅｒｉａ株を含む凍結乾燥された組成物を生産する方法であって、
（ａ）緩衝液とスクロースとを含む製剤中においてＬｉｓｔｅｒｉａ株を含む組成物を提供するステップ、
（ｂ）ステップ（ａ）で提供された組成物を凍結ステップにおいて約−３２℃〜約−８０℃の間の保持温度で冷却するステップ、
（ｃ）ステップ（ｂ）により生産された組成物を一次乾燥ステップにおいて約−１０℃〜約−３０℃の間の保持温度で真空に曝露するステップ、および
（ｄ）ステップ（ｃ）により生産された組成物を二次乾燥ステップにおいて約−５℃〜約２５℃の間の保持温度で真空に曝露するステップ
を含み、それによって凍結乾燥された組成物を生産する方法。
【請求項２】
ステップ（ａ）の前に、前記Ｌｉｓｔｅｒｉａ株を低下した温度に曝露することにより前記Ｌｉｓｔｅｒｉａ株においてストレス応答が誘導される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
ステップ（ａ）の前に、前記Ｌｉｓｔｅｒｉａ株を低下した温度に曝露することにより前記Ｌｉｓｔｅｒｉａ株においてストレス応答が誘導されない、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
（Ｉ）ステップ（ａ）における前記組成物に使用される前記Ｌｉｓｔｅｒｉａ株が、ステップ（ａ）の前に解凍される凍結されたＬｉｓｔｅｒｉａ株であり、必要に応じて、解凍される前記凍結されたＬｉｓｔｅｒｉａ株の濃度が、１ミリリットル当たり約１×１０９〜約１×１０１０コロニー形成単位（ＣＦＵ）の間である、または
（ＩＩ）ステップ（ａ）における前記組成物に使用される前記Ｌｉｓｔｅｒｉａ株が、ステップ（ａ）の前に新鮮培養される、
前記いずれかの請求項に記載の方法。
【請求項５】
前記凍結されたＬｉｓｔｅｒｉａ株が、約２℃〜約３７℃で解凍され、
好ましくは、前記凍結されたＬｉｓｔｅｒｉａ株が、約２０℃〜約３７℃で解凍され、
より好ましくは、前記凍結されたＬｉｓｔｅｒｉａ株が、約３２℃および約３７℃で解凍され、
最も好ましくは、前記凍結されたＬｉｓｔｅｒｉａ株が、約３７℃で解凍される、
請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記凍結されたＬｉｓｔｅｒｉａ株が、８時間以下の間、解凍される、かつ／または
前記凍結されたＬｉｓｔｅｒｉａ株が、解凍後２４時間以下の間、約２℃〜約８℃で保持される、
請求項４または５に記載の方法。
【請求項７】
前記緩衝液が、リン酸緩衝液である、前記いずれかの請求項に記載の方法。
【請求項８】
前記製剤が、約１％〜約５％  ｗ／ｖ  スクロースを含み、
好ましくは、前記製剤が、約２％〜約３％  ｗ／ｖ  スクロースを含み、
より好ましくは、前記製剤が、約２．５％  ｗ／ｖ  スクロースを含む、
前記いずれかの請求項に記載の方法。
【請求項９】
前記製剤が、１ミリリットル当たり約１×１０９〜約１×１０１０コロニー形成単位（ＣＦＵ）のＬｉｓｔｅｒｉａを含む、前記いずれかの請求項に記載の方法。
【請求項１０】
前記製剤が、トレハロース、グルタミン酸一ナトリウム（ＭＳＧ）および組換えヒト血清アルブミン（ｒＨＳＡ）のうちの１つまたは複数を含まず、
必要に応じて、前記製剤が、トレハロースも、ＭＳＧも、ｒＨＳＡも含まない、
前記いずれかの請求項に記載の方法。
【請求項１１】
前記凍結ステップ（ｂ）における前記保持温度が、約−４０℃〜約−５０℃の間であり、
必要に応じて、前記凍結ステップ（ｂ）における前記保持温度が、約−４５℃である、
前記いずれかの請求項に記載の方法。
【請求項１２】
前記凍結ステップ（ｂ）が、温度を毎分約１℃の速度で前記保持温度に低下させることを含む、かつ／または
前記凍結ステップ（ｂ）における前記冷却が、約２時間〜約４時間の冷却である、かつ／または
前記凍結ステップ（ｂ）における前記冷却が、前記組成物を約２時間、前記保持温度で保持することを含む、
前記いずれかの請求項に記載の方法。
【請求項１３】
前記一次乾燥ステップ（ｃ）における前記保持温度が、約−１２℃〜約−２２℃の間であり、
好ましくは、前記一次乾燥ステップ（ｃ）における前記保持温度が、約−１７℃〜約−１９℃の間であり、
より好ましくは、前記一次乾燥ステップ（ｃ）における前記保持温度が、約−１８℃である、
前記いずれかの請求項に記載の方法。
【請求項１４】
前記一次乾燥ステップ（ｃ）が、温度を毎分約１℃の速度で前記保持温度に上昇させることを含む、かつ／または
前記一次乾燥ステップ（ｃ）が、約２５時間〜約３５時間である、かつ／または
前記一次乾燥ステップ（ｃ）の終了が、前記組成物が保持温度に達した約１２〜約１６時間後である、かつ／または
前記一次乾燥ステップ（ｃ）が、約０．０９ｍｂａｒの真空圧である、
前記いずれかの請求項に記載の方法。
【請求項１５】
前記二次乾燥ステップ（ｄ）における前記保持温度が、約−５℃〜約２０℃の間であり、
好ましくは、前記二次乾燥ステップ（ｄ）における前記保持温度が、約−５℃〜約５℃の間である、
より好ましくは、前記二次乾燥ステップ（ｄ）における前記保持温度が、約０℃である、
前記いずれかの請求項に記載の方法。
【請求項１６】
前記二次乾燥ステップ（ｄ）が、温度を毎分約０．２℃の速度で前記保持温度に上昇させることを含む、かつ／または
前記二次乾燥ステップ（ｄ）が、約１時間〜約１０時間である、
前記いずれかの請求項に記載の方法。
【請求項１７】
前記二次乾燥ステップ（ｄ）が、前記組成物を約２時間〜約６時間、前記保持温度で保持することを含み、
必要に応じて、前記二次乾燥ステップ（ｄ）が、前記組成物を約５時間〜約６時間、前記保持温度で保持することを含む、
前記いずれかの請求項に記載の方法。
【請求項１８】
前記二次乾燥ステップ（ｄ）が、約０．０９ｍｂａｒの真空圧である、前記いずれかの請求項に記載の方法。
【請求項１９】
前記凍結乾燥された組成物中の残留水分が、約１％〜約５％の間であり、
必要に応じて、前記凍結乾燥された組成物中の前記残留水分が、約２％〜約４％の間である、
前記いずれかの請求項に記載の方法。
【請求項２０】
前記凍結乾燥された組成物中の前記残留水分が、少なくとも約２．５％であり、
必要に応じて、前記凍結乾燥された組成物中の前記残留水分が、少なくとも約３％である、
前記いずれかの請求項に記載の方法。
【請求項２１】
前記凍結乾燥された組成物が、約−２０℃〜約４℃の間で約１２カ月保管された後、少なくとも約６０％の生存率を示し、
好ましくは、前記凍結乾燥された組成物が、約−２０℃〜約４℃の間で約１２カ月保管された後、少なくとも約７５％の生存率を示し、
より好ましくは、前記凍結乾燥された組成物が、約−２０℃〜約４℃の間で約１２カ月保管された後、少なくとも約８０％の生存率を示す、
前記いずれかの請求項に記載の方法。
【請求項２２】
前記Ｌｉｓｔｅｒｉａ株が、組換えＬｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ株である、前記いずれかの請求項に記載の方法。
【請求項２３】
前記Ｌｉｓｔｅｒｉａ株が、組換えＬｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ株であり、
前記緩衝液が、リン酸緩衝液であり、
前記製剤が、約２％〜約３％  ｗ／ｖ  スクロースを含み、
前記製剤が、トレハロースも、ＭＳＧも、ｒＨＳＡも含まず、
前記製剤が、１ミリリットル当たり約１×１０９〜約１×１０１０コロニー形成単位（ＣＦＵ）のＬｉｓｔｅｒｉａを含み、
前記凍結ステップ（ａ）における前記保持温度が、約−４０℃〜約−５０℃の間であり、
前記一次乾燥ステップ（ｃ）における前記保持温度が、−１７℃〜−１９℃の間であり、
前記二次乾燥ステップ（ｄ）における前記保持温度が、−１℃〜１℃の間であり、
前記凍結乾燥された組成物中の前記残留水分が、約２．５％〜約４％の間である、
前記いずれかの請求項に記載の方法。
【請求項２４】
ステップ（ａ）における前記組成物に使用される前記Ｌｉｓｔｅｒｉａ株が、ステップ（ａ）の前に解凍される凍結されたＬｉｓｔｅｒｉａ株であり、
解凍される前記凍結されたＬｉｓｔｅｒｉａ株の濃度が、１ミリリットル当たり約１×１０９〜約１×１０１０コロニー形成単位（ＣＦＵ）の間であり、
前記凍結されたＬｉｓｔｅｒｉａ株が、約３７℃で解凍され、
前記凍結されたＬｉｓｔｅｒｉａ株が、８時間以下の間、解凍され、
前記凍結されたＬｉｓｔｅｒｉａ株が、解凍後２４時間以下の間、約２℃〜約８℃で保持される、
請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記Ｌｉｓｔｅｒｉａ株が、融合ポリペプチドをコードする第１のオープンリーディングフレームを含む核酸を含む組換えＬｉｓｔｅｒｉａ株であり、前記融合ポリペプチドが、疾患関連抗原ペプチドに融合されたＰＥＳＴ含有ペプチドを含み、ここで、
（Ｉ）前記組換えＬｉｓｔｅｒｉａ株が、ｐｒｆＡ中の欠失または不活性化突然変異を含む弱毒化Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ株であり、前記核酸が、エピソームプラスミドにあり、Ｄ１３３Ｖ  ＰｒｆＡ突然変異タンパク質をコードする第２のオープンリーディングフレームを含む、または
（ＩＩ）前記組換えＬｉｓｔｅｒｉａ株が、ａｃｔＡ、ｄａｌおよびｄａｔ中の欠失または不活性化突然変異を含む弱毒化Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ株であり、前記核酸が、エピソームプラスミドにあり、アラニンラセマーゼ酵素またはＤ−アミノ酸アミノトランスフェラーゼ酵素をコードする第２のオープンリーディングフレームを含み、前記ＰＥＳＴ含有ペプチドが、ＬＬＯのＮ末端断片である、
前記いずれかの請求項に記載の方法。
【請求項２６】
（１）Ｌｉｓｔｅｒｉａ株と、（２）リン酸緩衝液と、（３）スクロースとを含む、Ｌｉｓｔｅｒｉａ株の凍結乾燥用の製剤。
【請求項２７】
前記Ｌｉｓｔｅｒｉａ株が、前記Ｌｉｓｔｅｒｉａ株を低下した温度に曝露することによりストレス応答が誘導された株である、請求項２６に記載の製剤。
【請求項２８】
前記Ｌｉｓｔｅｒｉａ株が、凍結されたＬｉｓｔｅｒｉａストックからである、または前記Ｌｉｓｔｅｒｉａ株が、新鮮培養されたＬｉｓｔｅｒｉａストックからである、請求項２６または２７に記載の製剤。
【請求項２９】
約１％〜約５％  ｗ／ｖ  スクロースを含み、
好ましくは、約２％〜約３％  ｗ／ｖ  スクロースを含み、
より好ましくは、約２．５％  ｗ／ｖ  スクロースを含む、
請求項２６〜２８のいずれか一項に記載の製剤。
【請求項３０】
トレハロース、グルタミン酸一ナトリウム（ＭＳＧ）および組換えヒト血清アルブミン（ｒＨＳＡ）のうちの１つまたは複数を含まず、
必要に応じて、トレハロースも、ＭＳＧも、ｒＨＳＡも含まない、
請求項２６〜２９のいずれか一項に記載の製剤。
【請求項３１】
前記Ｌｉｓｔｅｒｉａ株が、組換えＬｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ株である、請求項２６〜３０のいずれか一項に記載の製剤。
【請求項３２】
前記Ｌｉｓｔｅｒｉａ株が、組換えＬｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ株であり、
前記製剤が、約２％〜約３％  ｗ／ｖ  スクロースを含み、
前記製剤が、トレハロースも、ＭＳＧも、ｒＨＳＡも含まない、
請求項２６〜３１のいずれか一項に記載の製剤。
【請求項３３】
前記Ｌｉｓｔｅｒｉａ株が、融合ポリペプチドをコードする第１のオープンリーディングフレームを含む核酸を含む組換えＬｉｓｔｅｒｉａ株であり、前記融合ポリペプチドが、疾患関連抗原ペプチドに融合されたＰＥＳＴ含有ペプチドを含み、ここで、
（Ｉ）前記組換えＬｉｓｔｅｒｉａ株が、ｐｒｆＡ中の欠失または不活性化突然変異を含む弱毒化Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ株であり、前記核酸が、エピソームプラスミドにあり、Ｄ１３３Ｖ  ＰｒｆＡ突然変異タンパク質をコードする第２のオープンリーディングフレームを含む、
（ＩＩ）前記組換えＬｉｓｔｅｒｉａ株が、ａｃｔＡ、ｄａｌおよびｄａｔ中の欠失または不活性化突然変異を含む弱毒化Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ株であり、前記核酸が、エピソームプラスミドにあり、アラニンラセマーゼ酵素またはＤ−アミノ酸アミノトランスフェラーゼ酵素をコードする第２のオープンリーディングフレームを含み、前記ＰＥＳＴ含有ペプチドが、ＬＬＯのＮ末端断片である、
請求項２６〜３２のいずれか一項に記載の製剤。
【請求項３４】
請求項１〜２５のいずれか一項に記載の方法により生産される、凍結乾燥された組成物。
【請求項３５】
Ｌｉｓｔｅｒｉａ株と、リン酸緩衝液と、スクロースとを含む、凍結乾燥された組成物。
【請求項３６】
トレハロース、グルタミン酸一ナトリウム（ＭＳＧ）および組換えヒト血清アルブミン（ｒＨＳＡ）のうちの１つまたは複数を含まず、
必要に応じて、トレハロースも、ＭＳＧも、ｒＨＳＡも含まない、
請求項３５に記載の凍結乾燥された組成物。
【請求項３７】
前記凍結乾燥された組成物中の前記残留水分が、約１％〜約５％の間であり、
必要に応じて、前記凍結乾燥された組成物中の前記残留水分が、約２％〜約４％の間である、
請求項３４〜３６のいずれか一項に記載の凍結乾燥された組成物。
【請求項３８】
前記凍結乾燥された組成物中の前記残留水分が、少なくとも約２．５％であり、
必要に応じて、前記凍結乾燥された組成物中の前記残留水分が、少なくとも約３％である、
請求項３４〜３７のいずれか一項に記載の凍結乾燥された組成物。
【請求項３９】
凍結乾燥された組成物中の前記残留水分が、少なくとも約２．５％である、Ｌｉｓｔｅｒｉａ株を含む凍結乾燥された組成物。
【請求項４０】
約−２０℃〜約４℃の間で約１２カ月保管された後、少なくとも約６０％の生存率を示し、
好ましくは、約−２０℃〜約４℃の間で約１２カ月保管された後、少なくとも約７５％の生存率を示し、
より好ましくは、約−２０℃〜約４℃の間で約１２カ月保管された後、少なくとも約８０％の生存率を示す、
請求項３４〜３９のいずれか一項に記載の凍結乾燥された組成物。
【請求項４１】
前記Ｌｉｓｔｅｒｉａ株が、組換えＬｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ株である、請求項３４〜４０のいずれか一項に記載の凍結乾燥された組成物。
【請求項４２】
前記Ｌｉｓｔｅｒｉａ株が、組換えＬｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ株であり、
前記凍結乾燥された組成物が、トレハロースも、ＭＳＧも、ｒＨＳＡも含まず、
前記凍結乾燥された組成物中の前記残留水分が、２．５％〜４％の間である、
請求項３４〜４１のいずれか一項に記載の凍結乾燥された組成物。
【請求項４３】
前記Ｌｉｓｔｅｒｉａ株が、融合ポリペプチドをコードする第１のオープンリーディングフレームを含む核酸を含む組換えＬｉｓｔｅｒｉａ株であり、前記融合ポリペプチドが、疾患関連抗原ペプチドに融合されたＰＥＳＴ含有ペプチドを含み、ここで、
（Ｉ）前記組換えＬｉｓｔｅｒｉａ株が、ｐｒｆＡ中の欠失または不活性化突然変異を含む弱毒化Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ株であり、前記核酸が、エピソームプラスミドにあり、Ｄ１３３Ｖ  ＰｒｆＡ突然変異タンパク質をコードする第２のオープンリーディングフレームを含む、
（ＩＩ）前記組換えＬｉｓｔｅｒｉａ株が、ａｃｔＡ、ｄａｌおよびｄａｔ中の欠失または不活性化突然変異を含む弱毒化Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ株であり、前記核酸が、エピソームプラスミドにあり、アラニンラセマーゼ酵素またはＤ−アミノ酸アミノトランスフェラーゼ酵素をコードする第２のオープンリーディングフレームを含み、前記ＰＥＳＴ含有ペプチドが、ＬＬＯのＮ末端断片である、
請求項３４〜４２のいずれか一項に記載の凍結乾燥された組成物。
【請求項４４】
凍結されたＬｉｓｔｅｒｉａ株を凍結乾燥用に調製する方法であって、前記凍結されたＬｉｓｔｅｒｉａ株を約２０℃〜約３７℃の間の温度で解凍するステップを含む方法。
【請求項４５】
前記温度が、約３２℃〜約３７℃の間であり、
必要に応じて、前記温度が、約３７℃である、
請求項４４に記載の方法。
【請求項４６】
前記凍結されたＬｉｓｔｅｒｉａ株が、８時間以下の間、解凍される、かつ／または
前記凍結されたＬｉｓｔｅｒｉａ株が、解凍後２４時間以下の間、約２℃〜約８℃で保持される、
請求項４４または４５に記載の方法。
【請求項４７】
前記凍結されたＬｉｓｔｅｒｉａ株が、緩衝液とスクロースとを含む製剤中において解凍され、
好ましくは、前記製剤が、約１％〜約５％  ｗ／ｖ  スクロースを含み、
より好ましくは、前記製剤が、約２％〜約３％  ｗ／ｖ  スクロースを含み、
最も好ましくは、前記製剤が、約２．５％  ｗ／ｖ  スクロースを含む、
請求項４４〜４６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４８】
前記製剤が、トレハロース、グルタミン酸一ナトリウム（ＭＳＧ）および組換えヒト血清アルブミン（ｒＨＳＡ）のうちの１つまたは複数を含まず、
必要に応じて、前記製剤が、トレハロースも、ＭＳＧも、ｒＨＳＡも含まない、
請求項４７に記載の方法。
【請求項４９】
前記Ｌｉｓｔｅｒｉａ株が、組換えＬｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ株である、請求項４７または４８に記載の方法。
【請求項５０】
前記Ｌｉｓｔｅｒｉａ株が、組換えＬｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ株であり、
前記製剤が、約２％〜約３％  ｗ／ｖ  スクロースを含み、
前記製剤が、トレハロースも、ＭＳＧも、ｒＨＳＡも含まない、
請求項４７〜４９のいずれか一項に記載の方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１６】
別の態様では、凍結されたＬｉｓｔｅｒｉａ株を凍結乾燥用に調製する方法であって、凍結されたＬｉｓｔｅｒｉａ株を約２０℃〜約３７℃の間の温度で解凍するステップを含む方法が、提供される。必要に応じて、そのような方法は、次の要素の１つまたは複数または全てを有する：解凍される凍結されたＬｉｓｔｅｒｉａ株の濃度は、１ミリリットル当たり約１×１０９〜約１×１０１０コロニー形成単位（ＣＦＵ）である；凍結されたＬｉｓｔｅｒｉａ株は、約３７℃で解凍される；凍結されたＬｉｓｔｅｒｉａ株は、８時間以下の間、解凍される；および凍結されたＬｉｓｔｅｒｉａ株は、解凍後２４時間以下の間、約２℃〜約８℃で保持される。
本発明の実施形態において、例えば以下の項目が提供される。
（項目１）
Ｌｉｓｔｅｒｉａ株を含む凍結乾燥された組成物を生産する方法であって、
（ａ）緩衝液とスクロースとを含む製剤中においてＬｉｓｔｅｒｉａ株を含む組成物を提供するステップ、
（ｂ）ステップ（ａ）で提供された組成物を凍結ステップにおいて約−３２℃〜約−８０℃の間の保持温度で冷却するステップ、
（ｃ）ステップ（ｂ）により生産された組成物を一次乾燥ステップにおいて約−１０℃〜約−３０℃の間の保持温度で真空に曝露するステップ、および
（ｄ）ステップ（ｃ）により生産された組成物を二次乾燥ステップにおいて約−５℃〜約２５℃の間の保持温度で真空に曝露するステップ
を含み、それによって凍結乾燥された組成物を生産する方法。
（項目２）
ステップ（ａ）の前に、前記Ｌｉｓｔｅｒｉａ株を低下した温度に曝露することにより前記Ｌｉｓｔｅｒｉａ株においてストレス応答が誘導される、項目１に記載の方法。
（項目３）
ステップ（ａ）の前に、前記Ｌｉｓｔｅｒｉａ株を低下した温度に曝露することにより前記Ｌｉｓｔｅｒｉａ株においてストレス応答が誘導されない、項目１に記載の方法。
（項目４）
ステップ（ａ）における前記組成物に使用される前記Ｌｉｓｔｅｒｉａ株が、ステップ（ａ）の前に解凍される凍結されたＬｉｓｔｅｒｉａ株である、前記いずれかの項目に記載の方法。
（項目５）
解凍される前記凍結されたＬｉｓｔｅｒｉａ株の濃度が、１ミリリットル当たり約１×１０９〜約１×１０１０コロニー形成単位（ＣＦＵ）の間である、項目４に記載の方法。
（項目６）
前記凍結されたＬｉｓｔｅｒｉａ株が、約２℃〜約３７℃で解凍される、項目４または５に記載の方法。
（項目７）
前記凍結されたＬｉｓｔｅｒｉａ株が、約２０℃〜約３７℃で解凍される、項目６に記載の方法。
（項目８）
前記凍結されたＬｉｓｔｅｒｉａ株が、約３２℃および約３７℃で解凍される、項目７に記載の方法。
（項目９）
前記凍結されたＬｉｓｔｅｒｉａ株が、約３７℃で解凍される、項目８に記載の方法。
（項目１０）
前記凍結されたＬｉｓｔｅｒｉａ株が、８時間以下の間、解凍される、項目４〜９のいずれか一項に記載の方法。
（項目１１）
前記凍結されたＬｉｓｔｅｒｉａ株が、解凍後２４時間以下の間、約２℃〜約８℃で保持される、項目４〜１０のいずれか一項に記載の方法。
（項目１２）
ステップ（ａ）における前記組成物に使用される前記Ｌｉｓｔｅｒｉａ株が、ステップ（ａ）の前に新鮮培養される、項目１〜３のいずれか一項に記載の方法。
（項目１３）
前記緩衝液が、リン酸緩衝液である、前記いずれかの項目に記載の方法。
（項目１４）
前記製剤が、約１％〜約５％  ｗ／ｖ  スクロースを含む、前記いずれかの項目に記載の方法。
（項目１５）
前記製剤が、約２％〜約３％  ｗ／ｖ  スクロースを含む、項目１４に記載の方法。
（項目１６）
前記製剤が、約２．５％  ｗ／ｖ  スクロースを含む、項目１５に記載の方法。
（項目１７）
前記製剤が、１ミリリットル当たり約１×１０９〜約１×１０１０コロニー形成単位（ＣＦＵ）のＬｉｓｔｅｒｉａを含む、前記いずれかの項目に記載の方法。
（項目１８）
前記製剤が、トレハロース、グルタミン酸一ナトリウム（ＭＳＧ）および組換えヒト血清アルブミン（ｒＨＳＡ）のうちの１つまたは複数を含まない、前記いずれかの項目に記載の方法。
（項目１９）
前記製剤が、トレハロース、ＭＳＧ、またはｒＨＳＡを含まない、項目１８に記載の方法。
（項目２０）
前記凍結ステップ（ｂ）における前記保持温度が、約−４０℃〜約−５０℃の間である、前記いずれかの項目に記載の方法。
（項目２１）
前記凍結ステップ（ｂ）における前記保持温度が、約−４５℃である、項目２０に記載の方法。
（項目２２）
前記凍結ステップ（ｂ）が、温度を毎分約１℃の速度で前記保持温度に低下させることを含む、前記いずれかの項目に記載の方法。
（項目２３）
前記凍結ステップ（ｂ）における前記冷却が、約２時間〜約４時間の冷却である、前記いずれかの項目に記載の方法。
（項目２４）
前記凍結ステップ（ｂ）における前記冷却が、前記組成物を約２時間、前記保持温度で保持することを含む、前記いずれかの項目に記載の方法。
（項目２５）
前記一次乾燥ステップ（ｃ）における前記保持温度が、約−１２℃〜約−２２℃の間である、前記いずれかの項目に記載の方法。
（項目２６）
前記一次乾燥ステップ（ｃ）における前記保持温度が、約−１７℃〜約−１９℃の間である、項目２５に記載の方法。
（項目２７）
前記一次乾燥ステップ（ｃ）における前記保持温度が、約−１８℃である、項目２６に記載の方法。
（項目２８）
前記一次乾燥ステップ（ｃ）が、温度を毎分約１℃の速度で前記保持温度に上昇させることを含む、前記いずれかの項目に記載の方法。
（項目２９）
前記一次乾燥ステップ（ｃ）が、約２５時間〜約３５時間である、前記いずれかの項目に記載の方法。
（項目３０）
前記一次乾燥ステップ（ｃ）の終了が、前記組成物が保持温度に達した約１２〜約１６時間後である、前記いずれかの項目に記載の方法。
（項目３１）
前記一次乾燥ステップ（ｃ）が、約０．０９ｍｂａｒの真空圧である、前記いずれかの項目に記載の方法。
（項目３２）
前記二次乾燥ステップ（ｄ）における前記保持温度が、約−５℃〜約２０℃の間である、前記いずれかの項目に記載の方法。
（項目３３）
前記二次乾燥ステップ（ｄ）における前記保持温度が、約−５℃〜約５℃の間である、項目３２に記載の方法。
（項目３４）
前記二次乾燥ステップ（ｄ）における前記保持温度が、約０℃である、項目３３に記載の方法。
（項目３５）
前記二次乾燥ステップ（ｄ）が、温度を毎分約０．２℃の速度で前記保持温度に上昇させることを含む、前記いずれかの項目に記載の方法。
（項目３６）
前記二次乾燥ステップ（ｄ）が、約１時間〜約１０時間である、前記いずれかの項目に記載の方法。
（項目３７）
前記二次乾燥ステップ（ｄ）が、前記組成物を約２時間〜約６時間、前記保持温度で保持することを含む、前記いずれかの項目に記載の方法。
（項目３８）
前記二次乾燥ステップ（ｄ）が、前記組成物を約５時間〜約６時間、前記保持温度で保持することを含む、項目３７に記載の方法。
（項目３９）
前記二次乾燥ステップ（ｄ）が、約０．０９ｍｂａｒの真空圧である、前記いずれかの項目に記載の方法。
（項目４０）
前記凍結乾燥された組成物中の残留水分が、約１％〜約５％の間である、前記いずれかの項目に記載の方法。
（項目４１）
前記凍結乾燥された組成物中の前記残留水分が、約２％〜約４％の間である、項目４０に記載の方法。
（項目４２）
前記凍結乾燥された組成物中の前記残留水分が、少なくとも約２．５％である、前記いずれかの項目に記載の方法。
（項目４３）
前記凍結乾燥された組成物中の前記残留水分が、少なくとも約３％である、項目４２に記載の方法。
（項目４４）
前記凍結乾燥された組成物が、約−２０℃〜約４℃の間で約１２カ月保管された後、少なくとも約６０％の生存率を示す、前記いずれかの項目に記載の方法。
（項目４５）
前記凍結乾燥された組成物が、約−２０℃〜約４℃の間で約１２カ月保管された後、少なくとも約７５％の生存率を示す、項目４４に記載の方法。
（項目４６）
前記凍結乾燥された組成物が、約−２０℃〜約４℃の間で約１２カ月保管された後、少なくとも約８０％の生存率を示す、項目４５に記載の方法。
（項目４７）
前記Ｌｉｓｔｅｒｉａ株が、組換えＬｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ株である、前記いずれかの項目に記載の方法。
（項目４８）
前記Ｌｉｓｔｅｒｉａ株が、組換えＬｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ株であり、
前記緩衝液が、リン酸緩衝液であり、
前記製剤が、約２％〜約３％  ｗ／ｖ  スクロースを含み、
前記製剤が、トレハロース、ＭＳＧ、またはｒＨＳＡを含まず、
前記製剤が、１ミリリットル当たり約１×１０９〜約１×１０１０コロニー形成単位（ＣＦＵ）のＬｉｓｔｅｒｉａを含み、
前記凍結ステップ（ａ）における前記保持温度が、約−４０℃〜約−５０℃の間であり、
前記一次乾燥ステップ（ｃ）における前記保持温度が、−１７℃〜−１９℃の間であり、
前記二次乾燥ステップ（ｄ）における前記保持温度が、−１℃〜１℃の間であり、
前記凍結乾燥された組成物中の前記残留水分が、約２．５％〜約４％の間である、
前記いずれかの項目に記載の方法。
（項目４９）
ステップ（ａ）における前記組成物に使用される前記Ｌｉｓｔｅｒｉａ株が、ステップ（ａ）の前に解凍される凍結されたＬｉｓｔｅｒｉａ株であり、
解凍される前記凍結されたＬｉｓｔｅｒｉａ株の濃度が、１ミリリットル当たり約１×１０９〜約１×１０１０コロニー形成単位（ＣＦＵ）の間であり、
前記凍結されたＬｉｓｔｅｒｉａ株が、約３７℃で解凍され、
前記凍結されたＬｉｓｔｅｒｉａ株が、８時間以下の間、解凍され、
前記凍結されたＬｉｓｔｅｒｉａ株が、解凍後２４時間以下の間、約２℃〜約８℃で保持される、
項目４８に記載の方法。
（項目５０）
前記Ｌｉｓｔｅｒｉａ株が、融合ポリペプチドをコードする第１のオープンリーディングフレームを含む核酸を含む組換えＬｉｓｔｅｒｉａ株であり、前記融合ポリペプチドが、疾患関連抗原ペプチドに融合されたＰＥＳＴ含有ペプチドを含む、前記いずれかの項目に記載の方法。
（項目５１）
前記組換えＬｉｓｔｅｒｉａ株が、ｐｒｆＡ中の欠失または不活性化突然変異を含む弱毒化Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ株であり、前記核酸が、エピソームプラスミドにあり、Ｄ１３３Ｖ  ＰｒｆＡ突然変異タンパク質をコードする第２のオープンリーディングフレームを含む、項目５０に記載の方法。
（項目５２）
前記組換えＬｉｓｔｅｒｉａ株が、ａｃｔＡ、ｄａｌおよびｄａｔ中の欠失または不活性化突然変異を含む弱毒化Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ株であり、前記核酸が、エピソームプラスミドにあり、アラニンラセマーゼ酵素またはＤ−アミノ酸アミノトランスフェラーゼ酵素をコードする第２のオープンリーディングフレームを含み、前記ＰＥＳＴ含有ペプチドが、ＬＬＯのＮ末端断片である、項目５０に記載の方法。
（項目５３）
（１）Ｌｉｓｔｅｒｉａ株と、（２）リン酸緩衝液と、（３）スクロースとを含む、Ｌｉｓｔｅｒｉａ株の凍結乾燥用の製剤。
（項目５４）
前記Ｌｉｓｔｅｒｉａ株が、前記Ｌｉｓｔｅｒｉａ株を低下した温度に曝露することによりストレス応答が誘導された株である、項目５３に記載の製剤。
（項目５５）
前記Ｌｉｓｔｅｒｉａ株が、凍結されたＬｉｓｔｅｒｉａストックからである、項目５３または５４に記載の製剤。
（項目５６）
前記Ｌｉｓｔｅｒｉａ株が、新鮮培養されたＬｉｓｔｅｒｉａストックからである、項目５３または５４に記載の製剤。
（項目５７）
約１％〜約５％  ｗ／ｖ  スクロースを含む、項目５３〜５６のいずれか一項に記載の製剤。
（項目５８）
約２％〜約３％  ｗ／ｖ  スクロースを含む、項目５７に記載の製剤。
（項目５９）
約２．５％  ｗ／ｖ  スクロースを含む、項目５８に記載の製剤。
（項目６０）
トレハロース、グルタミン酸一ナトリウム（ＭＳＧ）および組換えヒト血清アルブミン（ｒＨＳＡ）のうちの１つまたは複数を含まない、項目５３〜５９のいずれか一項に記載の製剤。
（項目６１）
トレハロース、ＭＳＧ、またはｒＨＳＡを含まない、項目６０に記載の製剤。
（項目６２）
前記Ｌｉｓｔｅｒｉａ株が、組換えＬｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ株である、項目５３〜６１のいずれか一項に記載の製剤。
（項目６３）
前記Ｌｉｓｔｅｒｉａ株が、組換えＬｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ株であり、
前記製剤が、約２％〜約３％  ｗ／ｖ  スクロースを含み、
前記製剤が、トレハロース、ＭＳＧ、またはｒＨＳＡを含まない、
項目５３〜６２のいずれか一項に記載の製剤。
（項目６４）
前記Ｌｉｓｔｅｒｉａ株が、融合ポリペプチドをコードする第１のオープンリーディングフレームを含む核酸を含む組換えＬｉｓｔｅｒｉａ株であり、前記融合ポリペプチドが、疾患関連抗原ペプチドに融合されたＰＥＳＴ含有ペプチドを含む、項目５３〜６３のいずれか一項に記載の製剤。
（項目６５）
前記組換えＬｉｓｔｅｒｉａ株が、ｐｒｆＡ中の欠失または不活性化突然変異を含む弱毒化Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ株であり、前記核酸が、エピソームプラスミドにあり、Ｄ１３３Ｖ  ＰｒｆＡ突然変異タンパク質をコードする第２のオープンリーディングフレームを含む、項目６４に記載の製剤。
（項目６６）
前記組換えＬｉｓｔｅｒｉａ株が、ａｃｔＡ、ｄａｌおよびｄａｔ中の欠失または不活性化突然変異を含む弱毒化Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ株であり、前記核酸が、エピソームプラスミドにあり、アラニンラセマーゼ酵素またはＤ−アミノ酸アミノトランスフェラーゼ酵素をコードする第２のオープンリーディングフレームを含み、前記ＰＥＳＴ含有ペプチドが、ＬＬＯのＮ末端断片である、項目６４に記載の製剤。
（項目６７）
項目１〜５２のいずれか一項に記載の方法により生産される、凍結乾燥された組成物。
（項目６８）
Ｌｉｓｔｅｒｉａ株と、リン酸緩衝液と、スクロースとを含む、凍結乾燥された組成物。
（項目６９）
トレハロース、グルタミン酸一ナトリウム（ＭＳＧ）および組換えヒト血清アルブミン（ｒＨＳＡ）のうちの１つまたは複数を含まない、項目６８に記載の凍結乾燥された組成物。
（項目７０）
トレハロース、ＭＳＧ、またはｒＨＳＡを含まない、項目６９に記載の凍結乾燥された組成物。
（項目７１）
前記凍結乾燥された組成物中の前記残留水分が、約１％〜約５％の間である、項目６７〜７０のいずれか一項に記載の凍結乾燥された組成物。
（項目７２）
前記凍結乾燥された組成物中の前記残留水分が、約２％〜約４％の間である、項目７１に記載の凍結乾燥された組成物。
（項目７３）
前記凍結乾燥された組成物中の前記残留水分が、少なくとも約２．５％である、項目６７〜７２のいずれか一項に記載の凍結乾燥された組成物。
（項目７４）
前記凍結乾燥された組成物中の前記残留水分が、少なくとも約３％である、項目７３に記載の凍結乾燥された組成物。
（項目７５）
凍結乾燥された組成物中の前記残留水分が、少なくとも約２．５％である、Ｌｉｓｔｅｒｉａ株を含む凍結乾燥された組成物。
（項目７６）
約−２０℃〜約４℃の間で約１２カ月保管された後、少なくとも約６０％の生存率を示す、項目６７〜７５のいずれか一項に記載の凍結乾燥された組成物。
（項目７７）
約−２０℃〜約４℃の間で約１２カ月保管された後、少なくとも約７５％の生存率を示す、項目７６に記載の凍結乾燥された組成物。
（項目７８）
約−２０℃〜約４℃の間で約１２カ月保管された後、少なくとも約８０％の生存率を示す、項目７７に記載の凍結乾燥された組成物。
（項目７９）
前記Ｌｉｓｔｅｒｉａ株が、組換えＬｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ株である、項目６７〜７８のいずれか一項に記載の凍結乾燥された組成物。
（項目８０）
前記Ｌｉｓｔｅｒｉａ株が、組換えＬｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ株であり、
前記凍結乾燥された組成物が、トレハロース、ＭＳＧ、またはｒＨＳＡを含まず、
前記凍結乾燥された組成物中の前記残留水分が、２．５％〜４％の間である、
項目６７〜７９のいずれか一項に記載の凍結乾燥された組成物。
（項目８１）
前記Ｌｉｓｔｅｒｉａ株が、融合ポリペプチドをコードする第１のオープンリーディングフレームを含む核酸を含む組換えＬｉｓｔｅｒｉａ株であり、前記融合ポリペプチドが、疾患関連抗原ペプチドに融合されたＰＥＳＴ含有ペプチドを含む、項目６７〜８０のいずれか一項に記載の凍結乾燥された組成物。
（項目８２）
前記組換えＬｉｓｔｅｒｉａ株が、ｐｒｆＡ中の欠失または不活性化突然変異を含む弱毒化Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ株であり、前記核酸が、エピソームプラスミドにあり、Ｄ１３３Ｖ  ＰｒｆＡ突然変異タンパク質をコードする第２のオープンリーディングフレームを含む、項目８１に記載の凍結乾燥された組成物。
（項目８３）
前記組換えＬｉｓｔｅｒｉａ株が、ａｃｔＡ、ｄａｌおよびｄａｔ中の欠失または不活性化突然変異を含む弱毒化Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ株であり、前記核酸が、エピソームプラスミドにあり、アラニンラセマーゼ酵素またはＤ−アミノ酸アミノトランスフェラーゼ酵素をコードする第２のオープンリーディングフレームを含み、前記ＰＥＳＴ含有ペプチドが、ＬＬＯのＮ末端断片である、項目８１に記載の凍結乾燥された組成物。
（項目８４）
凍結されたＬｉｓｔｅｒｉａ株を凍結乾燥用に調製する方法であって、前記凍結されたＬｉｓｔｅｒｉａ株を約２０℃〜約３７℃の間の温度で解凍するステップを含む方法。
（項目８５）
前記温度が、約３２℃〜約３７℃の間である、項目８４に記載の方法。
（項目８６）
前記温度が、約３７℃である、項目８５に記載の方法。
（項目８７）
前記凍結されたＬｉｓｔｅｒｉａ株が、８時間以下の間、解凍される、項目８４〜８６のいずれか一項に記載の方法。
（項目８８）
前記凍結されたＬｉｓｔｅｒｉａ株が、解凍後２４時間以下の間、約２℃〜約８℃で保持される、項目８４〜８７のいずれか一項に記載の方法。
（項目８９）
前記凍結されたＬｉｓｔｅｒｉａ株が、緩衝液とスクロースとを含む製剤中において解凍される、項目８４〜８８のいずれか一項に記載の方法。
（項目９０）
前記製剤が、約１％〜約５％  ｗ／ｖ  スクロースを含む、項目８９に記載の方法。
（項目９１）
前記製剤が、約２％〜約３％  ｗ／ｖ  スクロースを含む、項目９０に記載の方法。
（項目９２）
前記製剤が、約２．５％  ｗ／ｖ  スクロースを含む、項目９１に記載の方法。
（項目９３）
前記製剤が、トレハロース、グルタミン酸一ナトリウム（ＭＳＧ）および組換えヒト血清アルブミン（ｒＨＳＡ）のうちの１つまたは複数を含まない、項目８９〜９２のいずれか一項に記載の方法。
（項目９４）
前記製剤が、トレハロース、ＭＳＧ、またはｒＨＳＡを含まない、項目９３に記載の方法。
（項目９５）
前記Ｌｉｓｔｅｒｉａ株が、組換えＬｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ株である、項目８９〜９４のいずれか一項に記載の方法。
（項目９６）
前記Ｌｉｓｔｅｒｉａ株が、組換えＬｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ株であり、
前記製剤が、約２％〜約３％  ｗ／ｖ  スクロースを含み、
前記製剤が、トレハロース、ＭＳＧ、またはｒＨＳＡを含まない、
項目８９〜９５のいずれか一項に記載の方法。