【手続補正書】
【提出日】令和3年10月18日(2021.10.18)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｂ細胞を遺伝子操作して、選択された抗体を発現させる方法であって、該方法はＢ細胞に、
遺伝子構築物の挿入のために標的にされるＢ細胞における遺伝子領域を切断する遺伝子編集剤及び、
５’から３’に向かって
（ｉ）重鎖プロモーターのヌクレオチド配列、
（ｉｉ）シグナルペプチドをコードするヌクレオチド配列、
（ｉｉｉ）選択された抗体の軽鎖をコードするヌクレオチド配列
（ｉｖ）（ａ）柔軟なリンカー又は自己切断ペプチドをコードするヌクレオチド配列又は（ｂ）スキッピングエレメントのヌクレオチド配列、
（ｖ）選択された抗体の重鎖の可変領域をコードするヌクレオチド配列、及び
（ｖｉ）スプライスジャンクションを含むヌクレオチド配列
を含む遺伝子構築物、を送達することを含み、
遺伝子領域は、
（Ａ）配列番号１、
（Ｂ）配列番号２、
（Ｃ）配列番号３又は
（Ｄ）配列番号４
の配列を含み、
遺伝子編集剤による切断後、（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）又は（Ｄ）の遺伝子領域に遺伝子構築物が挿入され、それによりＢ細胞が選択された抗体を発現するように遺伝子操作して、選択された抗体を発現させる方法。
【請求項２】
Ｂ細胞の内因性可変重鎖コードゲノムが切り出されない、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
遺伝子編集剤が、ガイドＲＮＡ（ｇＲＮＡ）と会合したヌクレアーゼを含み、
該ガイドＲＮＡ（ｇＲＮＡ）が、
遺伝子領域が（Ａ）であるとき、配列番号88、89、290、291、292、293、294、295、296、297、298、299、300、301、302、303、304、305、306又は307の配列を有し、
遺伝子領域が（Ｂ）であるとき、配列番号308、309、310、311、312、313、314、315、316、317、318、319、320、321、322、、323、324、325、326又は327の配列を有し、
遺伝子領域が（Ｃ）であるとき、配列番号87、328、329、330、331、332、333、334、335、336、337、338、339、340、341、342、343、344、345又は346の配列を有し、又は
遺伝子領域が（Ｄ）であるとき、配列番号347、348、349、350、351、352、353、354、355、356、357、358、359、360、361、362、363、364、365又は366の配列を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
送達することが電気穿孔、ナノ粒子又はウイルス媒介送達を通じてである、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
ｇＲＮＡ及びヌクレアーゼが電気穿孔を通じて送達され、遺伝子構築物がウイルスベクターの一部として送達される、請求項３に記載の方法。
【請求項６】
ヌクレアーゼがＣａｓ９又はＣｐｆ１である、請求項３に記載の方法。
【請求項７】
重鎖プロモーターが、
遺伝子領域が（Ａ）又は（Ｂ）のとき、配列番号１１１で表される配列を有し、又は
遺伝子領域が（Ｃ）又は（Ｄ）のとき、配列番号１２８で表される配列を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
シグナルペプチドが、
配列番号185、186、187、188、189、190、191又は192で表されるアミノ酸配列を有し、
配列番号193又は194で表されるアミノ酸配列を有し、
遺伝子領域が（Ａ）又は（Ｂ）のとき、配列番号１１８で表されるアミノ酸配列を有し、又は
遺伝子領域が（Ｃ）又は（Ｄ）のとき、配列番号１３４で表されるアミノ酸配列を有する、
請求項１に記載の方法。
【請求項９】
柔軟なリンカーが配列番号１１６で表されるヌクレオチド配列によりコードされ、配列番号122、180、181、182、183又は184で表されるアミノ酸配列を有し、及び／又は
５０〜８０アミノ酸を含むＧｌｙ−Ｓｅｒリンカーである、
請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
自己切断ペプチドが配列番号１７６、１７７、１７８又は１７９で表される配列を有し、又はスキッピングエレメントが内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）である、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
スプライスジャンクションを含むヌクレオチド配列が、
遺伝子領域が（Ａ）又は（Ｂ）のとき、配列番号１２４又は１５１で表され、又は
遺伝子領域が（Ｃ）又は（Ｄ）のとき、配列番号１３９で表される、
請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
遺伝子構築物が、配列番号195、196、197、198、199、200、201、202、203又は204で表される配列を有するタグをコードする、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
遺伝子構築物が、アデノ随伴ウイルスベクターの一部である、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
遺伝子構築物の挿入の後、
（Ａ）の遺伝子領域が配列番号１０９で表される配列を含み、又は
（Ｃ）の遺伝子領域が配列番号１０８で表される配列を含む、
請求項１に記載の方法。
【請求項１５】
選択された抗体が、
（ａ）配列番号１３８で表される配列と少なくとも９０％の配列同一性を有する可変重鎖及び、配列番号１３６で表される配列と少なくとも９０％の配列同一性を有する可変軽鎖、
（ｂ）配列番号１３８で表される配列と少なくとも９０％の配列同一性を有する可変重鎖及び、配列番号２０５で表される配列と少なくとも９０％の配列同一性を有する可変軽鎖、
（ｃ）配列番号１２３で表される配列と少なくとも９０％の配列同一性を有する可変重鎖及び、配列番号１２０で表される配列と少なくとも９０％の配列同一性を有する可変軽鎖、又は
（ｄ）配列番号１２３で表される配列と少なくとも９０％の配列同一性を有する可変重鎖及び、配列番号２０６で表される配列と少なくとも９０％の配列同一性を有する可変軽鎖、
を含む、抗呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）抗体、
配列番号１５０で表される配列と少なくとも９０％の配列同一性を有する可変重鎖及び、配列番号１４９で表される配列と少なくとも９０％の配列同一性を有する可変軽鎖、を含む抗ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）抗体、
配列番号２３５で表される配列と少なくとも９０％の配列同一性を有する可変重鎖及び、配列番号２３６で表される配列と少なくとも９０％の配列同一性を有する可変軽鎖、を含む抗百日咳抗体、
配列番号１５９で表される配列と少なくとも９０％の配列同一性を有する可変重鎖及び、配列番号１５８で表される配列と少なくとも９０％の配列同一性を有する可変軽鎖、を含む抗インフルエンザ抗体、
配列番号１６８で表される配列と少なくとも９０％の配列同一性を有する可変重鎖及び、配列番号１６６で表される配列と少なくとも９０％の配列同一性を有する可変軽鎖、を含む抗エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）抗体、又は
配列番号２５４で表される配列と少なくとも９０％の配列同一性を有する可変重鎖及び、配列番号２５５で表される配列と少なくとも９０％の配列同一性を有する可変軽鎖、を含む抗腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）抗体
を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１６】
選択された抗体が、Ｋａｂａｔ番号付けに従い、
配列番号２０７を含むＣＤＲＨ１、配列番号２０８を含むＣＤＲＨ２、配列番号２０９を含むＣＤＲＨ３、配列番号２１０を含むＣＤＲＬ１、配列番号２１１を含むＣＤＲＬ２及び配列番号２１２を含むＣＤＲＬ３、
配列番号２１３を含むＣＤＲＨ１、配列番号２１４を含むＣＤＲＨ２、配列番号２１５を含むＣＤＲＨ３、配列番号２１６を含むＣＤＲＬ１、配列番号２１７を含むＣＤＲＬ２及び配列番号２１８を含むＣＤＲＬ３、
配列番号２１９を含むＣＤＲＨ１、配列番号２２０を含むＣＤＲＨ２、配列番号２２１を含むＣＤＲＨ３、ＱＹＧＳを含むＣＤＲＬ１、ＳＧＳを含むＣＤＲＬ２及び配列番号２２２を含むＣＤＲＬ３、
配列番号２２３を含むＣＤＲＨ１、配列番号２２４を含むＣＤＲＨ２、配列番号２２５を含むＣＤＲＨ３、配列番号２２６を含むＣＤＲＬ１、配列番号２２７を含むＣＤＲＬ２及び配列番号２２８を含むＣＤＲＬ３、
配列番号２２９を含むＣＤＲＨ１、配列番号２３０を含むＣＤＲＨ２、配列番号２３１を含むＣＤＲＨ３、配列番号２３２を含むＣＤＲＬ１、配列番号２３３を含むＣＤＲＬ２及び配列番号２３４を含むＣＤＲＬ３、
配列番号２３７を含むＣＤＲＨ１、配列番号２３８を含むＣＤＲＨ２、配列番号２３９を含むＣＤＲＨ３、配列番号２４０を含むＣＤＲＬ１、配列番号２４１を含むＣＤＲＬ２及び配列番号２４２を含むＣＤＲＬ３、
配列番号２４３を含むＣＤＲＨ１、配列番号２４４を含むＣＤＲＨ２、配列番号２４５を含むＣＤＲＨ３、配列番号２４６を含むＣＤＲＬ１、ＫＴＳを含むＣＤＲＬ２及び配列番号２４７を含むＣＤＲＬ３、
配列番号２４８を含むＣＤＲＨ１、配列番号２４９を含むＣＤＲＨ２、配列番号２５０を含むＣＤＲＨ３、配列番号２５１を含むＣＤＲＬ１、配列番号２５２を含むＣＤＲＬ２及び配列番号２５３を含むＣＤＲＬ３、
配列番号２５６を含むＣＤＲＨ１、配列番号２５７を含むＣＤＲＨ２、配列番号２５８を含むＣＤＲＨ３、配列番号２５９を含むＣＤＲＬ１、配列番号２６０を含むＣＤＲＬ２及び配列番号２６１を含むＣＤＲＬ３、
配列番号２６２を含むＣＤＲＨ１、配列番号２６３を含むＣＤＲＨ２、配列番号２６４を含むＣＤＲＨ３、配列番号２６５を含むＣＤＲＬ１、配列番号２６６を含むＣＤＲＬ２及び配列番号２６７を含むＣＤＲＬ３、又は
配列番号２６８を含むＣＤＲＨ１、配列番号２６９を含むＣＤＲＨ２、配列番号２７０を含むＣＤＲＨ３、配列番号２７１を含むＣＤＲＬ１、配列番号２７２を含むＣＤＲＬ２及び配列番号２７３を含むＣＤＲＬ３、
を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１７】
選択された抗体が、抗呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）抗体、抗ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）抗体、抗デングウイルス抗体、抗ボルデテラ・ペルツシス（Ｂｏｒｄａｔｅｌｌａ  ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）抗体、抗Ｃ型肝炎抗体、抗インフルエンザウイルス抗体、抗パラインフルエンザウイルス抗体、抗メタニューモウイルス（ＭＰＶ）抗体、抗サイトメガロウイルス抗体、抗エプスタイン・バーウイルス抗体、抗単純ヘルペスウイルス抗体、抗クロストリジウム・ディフィシル（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）細菌毒素抗体、又は抗腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）抗体である、請求項１に記載の方法。
【請求項１８】
選択された抗体が、
パリビズマブ、ＡＢ１１２８及びａｂ２０７４５から選択される抗ＲＳＶ抗体である、
１０Ｅ８、ＶＲＣ０１、ａｂ１８６３３及び３９／５．４Ａから選択される抗ＨＩＶ抗体である、
抗体５５、ＤＢ２−３、ａｂ１５５０４２及びａｂ８０９１４から選択される抗デングウイルス抗体、
ＭＡＢ８６９４及びＣ７−５０から選択される抗Ｃ型肝炎抗体、
Ｃ１０２を含む抗インフルエンザウイルス抗体、
ＭＰＥ８を含む抗ＭＰＶ抗体、
ＭＣＭＶ５３２２Ａ、ＭＣＭＶ３０６８Ａ、ＬＪＰ５３８及びＬＪＰ５３９から選択される抗ＣＭＶ抗体、
ＨＳＶ８−Ｎ及びＭＢ６６から選択される抗ＨＳＶ抗体、
アクトクスマブ及びベズロトクスマブから選択される抗クロストリジウム・ディフィシル抗体、又は
インフリキシマブ、アダリムマブ、エタネルセプト及びセルトリズマブから選択される抗ＴＮＦ抗体、である、請求項１に記載の方法。
【請求項１９】
遺伝子構築物が、重鎖プロモーターの相同性アーム５’及びスプライスジャンクションの相同性アーム３’を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項２０】
遺伝子構築物が、
配列番号１２６で表されるアミノ酸配列を有する抗ＲＳＶ抗体をコードするコード配列を含む、配列番号１０２で表されるヌクレオチド配列、
配列番号１４１で表されるアミノ酸配列を有する抗ＲＳＶ抗体をコードするコード配列を含む、配列番号１０３で表されるヌクレオチド配列、
配列番号１４１で表されるアミノ酸配列を有する抗ＲＳＶ抗体をコードするコード配列を含む、配列番号１０４で表されるヌクレオチド配列、
配列番号１５２で表されるアミノ酸配列を有する抗ＨＩＶ抗体をコードするコード配列を含む、配列番号１０５で表されるヌクレオチド配列、
配列番号１６０で表されるアミノ酸配列を有する抗インフルエンザ抗体をコードするコード配列を含む、配列番号１０６で表されるヌクレオチド配列、
配列番号１６９で表されるアミノ酸配列を有する抗ＥＢＶ抗体をコードするコード配列を含む、配列番号１０７で表されるヌクレオチド配列、
を含む、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
遺伝子領域が（Ａ）であるとき、
５’相同性アームが配列番号１１０又は１５３で表され、３’相同性アームが配列番号１２５で表され、
５’相同性アームが配列番号９２で表され、３’相同性アームが配列番号９３で表され、もしくは
５’相同性アームが配列番号９４で表され、３’相同性アームが配列番号９５で表され、又は
遺伝子領域が（Ｃ）であるとき、
５’相同性アームが配列番号１２７で表され、３’相同性アームが配列番号１４０で表され、
５’相同性アームが配列番号９０で表され、３’相同性アームが配列番号９１で表され、もしくは
５’相同性アームが配列番号１４２で表され、３’相同性アームが配列番号１４３で表される、
請求項１９に記載の方法。
【請求項２２】
遺伝子領域が（Ａ）を含むとき、遺伝子構築物は、
（ｉ）配列番号１１０で表される５’相同性アーム配列、
（ｉｉ）配列番号１１１で表される配列を有する重鎖プロモーター、
（ｉｉｉ）配列番号１１８で表されるアミノ酸配列を有するシグナルペプチドをコードするコード配列、
（ｉｖ）配列番号２８５で表されるアミノ酸配列を有する選択された抗体の軽鎖をコードするコード配列、
（ｖ）配列番号１２２で表されるアミノ酸配列を有する柔軟なリンカーをコードするコード配列、
（ｖｉ）配列番号１２３で表されるアミノ酸配列を有する選択された抗体の重鎖の可変領域をコードするコード配列、
（ｖｉｉ）配列番号１２４で表される配列を有するスプライスジャンクション、及び
（ｖｉｉｉ）配列番号１２５で表される３’相同性アーム配列、を含む、又は
遺伝子領域が（Ａ）を含むとき、遺伝子構築物は、
（ｉ）配列番号１１０で表される５’相同性アーム配列、
（ｉｉ）配列番号１１１で表される配列を有する重鎖プロモーター、
（ｉｉｉ）配列番号１１８で表されるアミノ酸配列を有するシグナルペプチドをコードするコード配列、
（ｉｖ）配列番号２８７で表されるアミノ酸配列を有する選択された抗体の軽鎖をコードするコード配列、
（ｖ）配列番号１２２で表されるアミノ酸配列を有する柔軟なリンカーをコードするコード配列、
（ｖｉ）配列番号１５０で表されるアミノ酸配列を有する選択された抗体の重鎖の可変領域をコードするコード配列、
（ｖｉｉ）配列番号１５１で表される配列を有するスプライスジャンクション、及び
（ｖｉｉｉ）配列番号１２５で表される３’相同性アーム配列、を含む、又は
遺伝子領域が（Ａ）を含むとき、遺伝子構築物は、
（ｉ）配列番号１５３で表される５’相同性アーム配列、
（ｉｉ）配列番号１１１で表される配列を有する重鎖プロモーター、
（ｉｉｉ）配列番号１１８で表されるアミノ酸配列を有するシグナルペプチドをコードするコード配列、
（ｉｖ）配列番号２８８で表されるアミノ酸配列を有する選択された抗体の軽鎖をコードするコード配列、
（ｖ）配列番号１２２で表されるアミノ酸配列を有する柔軟なリンカーをコードするコード配列、
（ｖｉ）配列番号１５９で表されるアミノ酸配列を有する選択された抗体の重鎖の可変領域をコードするコード配列、
（ｖｉｉ）配列番号１５１で表される配列を有するスプライスジャンクション、及び
（ｖｉｉｉ）配列番号１２５で表される３’相同性アーム配列、を含む、又は
遺伝子領域が（Ａ）を含むとき、遺伝子構築物は、
（ｉ）配列番号１５３で表される５’相同性アーム配列、
（ｉｉ）配列番号１１１で表される配列を有する重鎖プロモーター、
（ｉｉｉ）配列番号１１８で表されるアミノ酸配列を有するシグナルペプチドをコードするコード配列、
（ｉｖ）配列番号２８９で表されるアミノ酸配列を有する選択された抗体の軽鎖をコードするコード配列、
（ｖ）配列番号１２２で表されるアミノ酸配列を有する柔軟なリンカーをコードするコード配列、
（ｖｉ）配列番号１６８で表されるアミノ酸配列を有する選択された抗体の重鎖の可変領域をコードするコード配列、
（ｖｉｉ）配列番号１５１で表される配列を有するスプライスジャンクション、及び
（ｖｉｉｉ）配列番号１２５で表される３’相同性アーム配列、を含む、又は
遺伝子領域が（Ｃ）を含むとき、遺伝子構築物は、
（ｉ）配列番号１２７で表される５’相同性アーム配列、
（ｉｉ）配列番号１２８で表される配列を有する重鎖プロモーター、
（ｉｉｉ）配列番号１３４で表されるアミノ酸配列を有するシグナルペプチドをコードするコード配列、
（ｉｖ）配列番号２８６で表されるアミノ酸配列を有する選択された抗体の軽鎖をコードするコード配列、
（ｖ）配列番号１２２で表されるアミノ酸配列を有する柔軟なリンカーをコードするコード配列、
（ｖｉ）配列番号１３８で表されるアミノ酸配列を有する選択された抗体の重鎖の可変領域をコードするコード配列、
（ｖｉｉ）配列番号１３９で表される配列を有するスプライスジャンクション、及び
（ｖｉｉｉ）配列番号１４０で表される３’相同性アーム配列、を含む、又は
遺伝子領域が（Ｃ）を含むとき、遺伝子構築物は、
（ｉ）配列番号１４２で表される５’相同性アーム配列、
（ｉｉ）配列番号１２８で表される配列を有する重鎖プロモーター、
（ｉｉｉ）配列番号１３４で表されるアミノ酸配列を有するシグナルペプチドをコードするコード配列、
（ｉｖ）配列番号２８６で表されるアミノ酸配列を有する選択された抗体の軽鎖をコードするコード配列、
（ｖ）配列番号１２２で表されるアミノ酸配列を有する柔軟なリンカーをコードするコード配列、
（ｖｉ）配列番号１３８で表されるアミノ酸配列を有する選択された抗体の重鎖の可変領域をコードするコード配列、
（ｖｉｉ）配列番号１３９で表される配列を有するスプライスジャンクション、及び
（ｖｉｉｉ）配列番号１４３で表される３’相同性アーム配列、を含む、
請求項１９に記載の方法。
【請求項２３】
Ｂ細胞が、抗体産生Ｂ細胞、記憶Ｂ細胞、ナイーブＢ細胞、Ｂ１  Ｂ細胞又は周辺帯Ｂ細胞である、請求項１に記載の方法。
【請求項２４】
遺伝子操作され、選択された抗体を発現するＢ細胞であって、該Ｂ細胞には、
遺伝子構築物の挿入のために標的にされるＢ細胞における遺伝子領域を切断する遺伝子編集剤、及び
５’から３’に向かって
（ｉ）重鎖プロモーターのヌクレオチド配列、
（ｉｉ）シグナルペプチドをコードするヌクレオチド配列、
（ｉｉｉ）選択された抗体の軽鎖をコードするヌクレオチド配列
（ｉｖ）（ａ）柔軟なリンカー又は自己切断ペプチドをコードするヌクレオチド配列又は（ｂ）スキッピングエレメントのヌクレオチド配列、
（ｖ）選択された抗体の重鎖の可変領域をコードするヌクレオチド配列、及び
（ｖｉ）スプライスジャンクションを含むヌクレオチド配列
を含む遺伝子構築物、が送達され、
遺伝子領域は、
（Ａ）配列番号１、
（Ｂ）配列番号２、
（Ｃ）配列番号３又は
（Ｄ）配列番号４
の配列を含み、
遺伝子編集剤による切断後、（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）又は（Ｄ）の遺伝子領域に遺伝子構築物が挿入されたＢ細胞。
【請求項２５】
Ｂ細胞が、抗体分泌Ｂ細胞、記憶Ｂ細胞、ナイーブＢ細胞、Ｂ１  Ｂ細胞又は周辺帯Ｂ細胞である、請求項２４に記載のＢ細胞。
【請求項２６】
抗感染効果を必要とする対象において抗感染効果を提供するための、治療有効量の請求項２４に記載のＢ細胞を含む医薬組成物。
【請求項２７】
ワクチン接種の必要を取り除く、請求項２６に記載の医薬組成物。
【請求項２８】
ワクチン接種プロトコールに取って代わる、請求項２６に記載の医薬組成物。
【請求項２９】
対象が免疫抑制された対象である、請求項２６に記載の医薬組成物。
【請求項３０】
対象が、骨髄移植、造血幹細胞移植又は遺伝子改変造血幹細胞の投与を含む処置レジメンの一部として免疫抑制された対象である、請求項２６に記載の医薬組成物。
【請求項３１】
抗炎症効果を必要とする対象において抗炎症効果を提供するための、治療有効量の請求項２４に記載のＢ細胞を含む医薬組成物。