【手続補正書】
【提出日】平成17年4月5日(2005.4.5)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
４，４'，５，５'，６，６'−ヘキサヒドロキシジフェネートと糖とのエステル結合物の少なくとも２種を含有することを特徴とする、抗酸化用の組成物。
【請求項２】
４，４'，５，５'，６，６'−ヘキサヒドロキシジフェネートと糖とのエステル結合物の少なくとも２種が、α−Ｄ−グルコース−２，３−サイクリック（４，４'，５，５'，６，６'−ヘキサヒドロキシジフェネート）とペデュンクラジンの２種の組合せであることを特徴とする、請求項１に記載の抗酸化用の組成物。
【請求項３】
起源がナッツ類の可食部であることを特徴とする、請求項１又は２に記載の抗酸化用の組成物。
【請求項４】
その製造過程において、脱脂工程を含むことを特徴とする、請求項３に記載の抗酸化用の組成物。
【請求項５】
食品用であることを特徴とする、請求項１〜４何れか１項に記載の抗酸化用の組成物。
【請求項６】
請求項１〜５何れか１項に記載の抗酸化用の組成物を含有する食品又は皮膚外用剤。
【請求項７】
ナッツ及び／又はその微細化加工物を脱脂し、しかる後に中極性溶剤で抽出することを特徴とする、抗酸化用の組成物の製造法。
【請求項８】
ナッツ及び／又はその微細化加工物を水及び／又は低級アルコールで抽出し、低級アルコール分を除去した後、非極性溶剤を加えて液液抽出し、水層を濃縮してなる、抗酸化用の組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００５】
【課題の解決手段】この様な状況に鑑みて、本発明者らは、新規の抗酸化成分を求めて、鋭意研究努力を重ねた、４，４'，５，５'，６，６'−ヘキサヒドロキシジフェネートと糖とのエステル結合物の少なくとも２種を含有する組成物に著しい抗酸化作用を認め、発明を完成させるに至った。即ち、本発明は以下に示す技術に関するものである。
（１）４，４'，５，５'，６，６'−ヘキサヒドロキシジフェネートと糖とのエステル結合物の少なくとも２種を含有することを特徴とする、抗酸化用の組成物。
（２）４，４'，５，５'，６，６'−ヘキサヒドロキシジフェネートと糖とのエステル結
合物の少なくとも２種が、α−Ｄ−グルコース−２，３−サイクリック（４，４'，５，５'，６，６'−ヘキサヒドロキシジフェネート）とペデュンクラジンの２種の組合せであることを特徴とする、（１）に記載の抗酸化用の組成物。
（３）起源がナッツ類の可食部であることを特徴とする、（１）又は（２）に記載の抗酸化用の組成物。
（４）その製造過程において、脱脂工程を含むことを特徴とする、（３）に記載の抗酸化用の組成物。
（５）食品用であることを特徴とする、（１）〜（４）何れか１項に記載の抗酸化用の組成物。
（６）（１）〜（５）何れか１項に記載の抗酸化用の組成物を含有する食品又は皮膚外用剤。
（７）ナッツ及び／又はその微細化加工物を脱脂し、しかる後に中極性溶剤で抽出することを特徴とする、抗酸化用の組成物の製造法。
（８）ナッツ及び／又はその微細化加工物を水及び／又は低級アルコールで抽出し、低級アルコール分を除去した後、非極性溶剤を加えて液液抽出し、水層を濃縮してなる、抗酸化用の組成物。
以下、本発明について更に詳細に説明を加える。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００６】
【化１】
2003292952.tif 000001
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００８】
【発明の実施の形態】（１）本発明の抗酸化用の組成物本発明の抗酸化用の組成物は、少なくとも２種の４，４'，５，５'，６，６'−ヘキサヒドロキシジフェネートの配糖体を含有することを特徴とする。かかる少なくとも２種の４，４'，５，５'，６，６'−ヘキサヒドロキシジフェネートの配糖体としては、該４，４'，５，５'，６，６'−ヘキサヒドロキシジフェネートの２つのカルボキシル基の一方のみが糖の水酸基とエステル結合したものでも良いし、２つが同一の糖と結合した、シクロエステル配糖体でも、異なる糖に結合したブリッジ型の配糖体でも構わない。又、通常グルコシド等の配糖体としては、α
体とβ体とが存在するが、本発明の抗酸化用の組成物ではこれらの何れもが使用可能である。特に好ましいものは、α体とβ体の等量混合物であるアノマーである。これは、天然存在形であるからである。これらを少なくとも２種含むことが本発明の抗酸化用の組成物の特徴である。これらの配糖体の内、特に好ましいのはシクロエステル配糖体であり、該配糖体を構成する糖としては、グルコースが特に好ましく例示できる。具体的には、４，４'，５，５'，６，６'−ヘキサヒドロキシジフェネートの配糖体が、α−Ｄ−グルコース−２，３−サイクリック（４，４'，５，５'，６，６'−ヘキサヒドロキシジフェネート）とペデュンクラジンの２種が好ましく例示でき、この２種を組み合わせて含有させることが特に好ましい。かかる組合せにおいて、好ましい量比としては、ペデュンクラジンの重量：α−Ｄ−グルコース−２，３−サイクリック（４，４'，５，５'，６，６'−ヘキサヒドロキシジフェネート）の重量＝２０：１〜５：１が好ましい。これは、この割合において、優れた抗酸化作用を発揮するためである。かかるα−Ｄ−グルコース−２，３−サイクリック（４，４'，５，５'，６，６'−ヘキサヒドロキシジフェネート）とペデュンクラジンとは、それぞれを予め合成した後、含有させることもできるし、これらの２種を含むように生薬などの抽出物を調整することもできる。この様な生薬の抽出物としては、例えば、クルミやペカンナッツ等のナッツ類の可食部から、非極性部分を除去した後、酢酸エチル、蟻酸メチル、ブタノールなどの中極性溶剤乃至はエタノール、イソプロパノール、アセトン、テトラヒドロフラン等の水と任意の割合で混合しうる溶剤及び／又は水で抽出することにより、得ることができる。この様な抽出は、１〜１００倍量の溶剤を加え、室温であれば数日、沸点付近の温度であれば数時間浸漬すればよい。必要に応じて不要物を濾過して除去し、濃縮することができる。非極性部分の除去、即ち、脱脂工程は、物理的圧搾などによっても行うことができるし、ノルマルヘキサン等の溶剤を用いて抽出して行うこともできる。物理的に圧搾によって脱脂する場合には、ナッツ類の油かすを利用することができ、産業廃棄物を利用できる意味において好ましい。かかる圧搾はナッツ類に１〜１０００Ｋｇ／ｃｍ2程度の圧力をかけ、油脂を圧搾除去すればよい。又、抗酸化能を高めたい場合においては、ヘキサンなどの非極性溶剤で抽出、脱脂を行うことが好ましい。かかる抽出脱脂は、ナッツ類に対して１〜１００倍量の溶剤を加え、室温であれば、数日間、沸点付近の温度であれば数時間浸漬すればよい。かかる製造工程で作成される組成物は、ペデュンクラジンの重量：α−Ｄ−グルコース−２，３−サイクリック（４，４'，５，５'，６，６'−ヘキサヒドロキシジフェネート）の重量＝２０：１〜５：１の範囲内にこの両者を含有する。かかる抗酸化用の組成物は、化粧料や食品などに含有させることにより、優れた抗酸化作用を発揮する。これは、かかる組成物が適度な割合で親水性部分と親油性部分を有するため、水溶性物質に対しても油溶性物質に対しても有効であるからである。具体的な効果としては、経口投与においては、消化管の炎症の発生を抑え、発ガンの危険性を下げることができる。又、組織が酸化ストレスにより老化するのを防ぐことができる。かかる組成物を食品に含有させる場合、好ましい含有量は、食品の種類により異なるが、食品全量に対して、０．１〜３０重量％が好ましく、０．５〜２０重量％が特に好ましい。又、化粧品などの皮膚外用剤に含有させる場合においては、０．０５〜１０重量％が好ましく、更に好ましくは、０．１〜５重量％である。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１３】
＜実施例１＞オニグルミの可食部５００ｇを圧搾用の型にいれ、３５℃条件下、１００Ｋｇ／ｃｍ2で４時間加圧して、油脂分を除去した。圧搾した残りを５０％エタノール水溶液で抽出し、濾過して不溶物を除去した後、減圧濃縮して残査１６．５ｇ（本発明の抗酸化用の組成物１）を得た。これを全て、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒；クロロホルム：メタノール＝１００：０〜９０：１０）で精製し、ペデュンクラジン（アノマー）１２．２ｇとα−Ｄ−グルコース−２，３−サイクリック（４，
４'，５，５'，６，６'−ヘキサヒドロキシジフェネート）（アノマー）１．３ｇを得た。同定はＮＭＲスペクトルとＭａｓｓスペクトルより行った。これより、脱脂して、５０％エタノール水溶液で抽出し、減圧濃縮して得た残査の殆どが、ペデュンクラジンとα−Ｄ−グルコース−２，３−サイクリック（４，４'，５，５'，６，６'−ヘキサヒドロキシジフェネート）で構成されていることがわかる。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１５】
＜実施例３＞化３に示す反応式に基づき、キサンチン−キサンチンオキシダーゼ（ＸＯＤ）系により活性酸素のひとつであるスーパーオキシドアニオン（Ｏ2-）を発生させ、発生したＯ2-の生成率を亜硝酸法により測定し、この値をキサンチンオキシダーゼ阻害活性値で補正して抗酸化作用値を求めた。下記の表２に示す、ペデュンクラジン（ＰＤと表２に表記）とα−Ｄ−グルコース−２，３−サイクリック（４，４'，５，５'，６，６'−ヘキサヒドロキシジフェネート）（ＧＨＤと表２に表記）との混合物である、本発明の抗酸化用の組成物と実施例１、２で得られた本発明の抗酸化用の組成物を５０μｇ／ｍｌの割合で含有する抗酸化組成物水溶液０．１ｍｌを、６５ｍＭリン酸２水素カリウム、３５ｍＭホウ酸ナトリウム、０．５ｍＭＥＤＴＡ２ナトリウム水溶液（以下、緩衝液Ａという）０．２ｍｌ、０．５ｍＭキサンチン溶液０．２ｍｌ、１０ｍＭヒドロキシルアミン塩酸塩水溶液０．１ｍｌ、純水０．２ｍｌの混合液に、加えてよく撹拌し試験液とした。同様にして、抗酸化用の組成物の代わりに純水０．１ｍｌを用いたコントロールの溶液を作製した上記各試験液及びコントロール溶液に、キサンチンオキシダーゼを１μｌ／ｍｌ濃度で含有する緩衝液Ａを０．２ｍｌ加えて撹拌した後、３７℃で３０分インキュベーションした。ブランクとして、上記と同様に調整された試験液及びコントロール溶液に、キサンチンオキシダーゼを含まない緩衝液Ａを０．２ｍｌ加え、上記と同様に処理した溶液を用意した。このようにして得られた各溶液のそれぞれに、３０μＭＮ−１−ナフチルエチレンジアミン塩酸塩、３ｍＭスルファニル酸、２５％氷酢酸混液２ｍｌを加え、３０分間室温で放置した後、各溶液について、５５０ｎｍでの吸光度で活性酸素の発生量を、２９５ｎｍの吸光度で尿酸の発生量を測定した。得られた値を用いて、以下の式に基づき、抗酸化作用値を算出した。又、比較として、実施例２のヘキサン層の減圧濃縮物（比較例１）、ペデュンクラジン（ＰＤ）のみ、α−Ｄ−グルコース−２，３−サイクリック（４，４'，５，５'，６，６'−ヘキサヒドロキシジフェネート）（ＧＨＤ）のみも同様に測定した。結果を表２に示す。