【手続補正書】
【提出日】令和3年10月28日(2021.10.28)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
形質転換成長因子β受容体II（TGFBR2）遺伝子の標的配列と相補的なターゲティングドメインを含むgRNAと、
RNAガイドヌクレアーゼと、
を含み、
30％以上の頻度で挿入または欠失を導入することができる、
ゲノム編集システム。
【請求項２】
請求項1記載のゲノム編集システムであって、
前記TGFBR2遺伝子の標的配列が、SEQ ID NO：1、2および3からなる群より選択される配列を含む、もしくは、
前記TGFBR2遺伝子の標的配列が、SEQ ID NO：4〜10からなる群より選択される配列を含む、もしくは、
前記ターゲティングドメインが、前記TGFBR2遺伝子の前記標的配列に対して少なくとも85％の相補性を有する、もしくは、
前記ターゲティングドメインが、前記TGFBR2標的位置の約500bp、約450bp、約400bp、約350bp、約300bp、約250bp、約200bp、約150bp、約100bp、約50bp、約25bp、または約10bp以内に二本鎖切断または一本鎖切断を形成するように構成され、それにより前記TGFBR2遺伝子を改変し、任意で、前記TGFBR2遺伝子発現がノックアウトまたはノックダウンされている、もしくは、
前記gRNAが、前記TGFBR2遺伝子のコード領域または非コード領域を標的とし、前記非コード領域が、前記TGFBR2遺伝子のプロモーター領域、エンハンサー領域、イントロン、3’UTR、5’UTR、またはポリアデニル化シグナル領域を含み、任意で、前記コード領域が、エクソン3、エクソン4、およびエクソン5から選択される、もしくは、
前記ターゲティングドメインが、SEQ ID NO：5036〜5096からなる群より選択されるヌクレオチド配列と同一であるか、または約3ヌクレオチド以下だけ異なるヌクレオチド配列を含む、もしくは、
前記RNAガイドヌクレアーゼが、化膿性連鎖球菌（S.pyogenes）Cas9ヌクレアーゼであり、前記ターゲティングドメインが、（a）SEQ ID NO：5041、（b）SEQ ID NO：5042、（c）SEQ ID NO：5047、（d）SEQ ID NO：5050、（e）SEQ ID NO：5052、（f）SEQ ID NO：5092、および（g）SEQ ID NO：5093からなる群より選択されるヌクレオチド配列と同一であるか、または3ヌクレオチド以下だけ異なるヌクレオチド配列を含み、任意で、前記化膿性連鎖球菌Cas9ヌクレアーゼが、NGGのプロトスペーサー隣接モチーフ（PAM）を認識し、
前記RNAガイドヌクレアーゼが、黄色ブドウ球菌（S.aureus）Cas9ヌクレアーゼであり、任意で、前記黄色ブドウ球菌Cas9ヌクレアーゼが、NNNRRTまたはNNNRRVのいずれかのPAMを認識し、前記ゲノム編集システムがTGFBR2を標的とする、もしくは、
前記RNAガイドヌクレアーゼが変異体Cas9ヌクレアーゼである、もしくは、
前記gRNAが、モジュラーgRNAまたはキメラgRNAである、もしくは、
前記ターゲティングドメインが、約16、約17、約18、約19、約20、約21、約22、約23、約24、約25、または約26ヌクレオチドの長さを有し、任意で、前記ターゲティングドメインが、前記TGFBR2遺伝子に相補的な少なくとも約18個の連続したヌクレオチドを含む、もしくは、
前記ゲノム編集システムが2つ、3つまたは4つのgRNAを含む、もしくは、
TGFBR2の発現が、ベースライン測定値と比較して30％以上低下し、任意で、前記TGFBR2タンパク質の発現が、ウエスタンブロットまたは間接的細胞内染色フローサイトメトリーによって決定される、もしくは、
フレームシフト変異が前記TGFBR2遺伝子に導入される、
ゲノム編集システム。
【請求項３】
少なくとも1つの化膿性連鎖球菌Cas9ヌクレアーゼ；および
SEQ ID NO：5042と5041との組合せ、または5042と5092との組合せ、またはSEQ ID NO：5042と5093との組合せ、またはSEQ ID NO：5093と5041との組合せを含む、gRNA
を含む、請求項1記載のゲノム編集システム。
【請求項４】
細胞内の前記TGFBR2遺伝子を改変するのに使用するための、請求項1〜3のいずれか一項記載のゲノム編集システムであって、任意で、前記細胞が、癌に罹患している対象に由来する、ゲノム編集システム。
【請求項５】
TGFBR2遺伝子の標的配列と相補的なターゲティングドメインを含むgRNAを含み、RNAガイドヌクレアーゼと組み合わせたときに、前記gRNAが30％以上の頻度で挿入または欠失を導入することができる、組成物。
【請求項６】
請求項5記載の組成物であって、
前記TGRBR2遺伝子の標的配列が、SEQ ID NO：1、2、および3からなる群より選択される配列を含む、
前記TGRBR2遺伝子の標的配列が、SEQ ID NO：4〜10からなる群より選択される配列を含む、もしくは、
前記ターゲティングドメインが、TGRBR2遺伝子の標的配列に対して少なくとも85％の相補性を有する、もしくは、
前記ターゲティングドメインが、約16、約17、約18、約19、約20、約21、約22、約23、約24、約25、または約26ヌクレオチドの長さを有し、任意で、前記ターゲティングドメインが、前記TGFBR2遺伝子に相補的な少なくとも約18個の連続したヌクレオチドを含む、もしくは、
前記ターゲティングドメインが、SEQ ID NO：5036〜5096からなる群より選択されるヌクレオチド配列と同一であるか、または約3ヌクレオチド以下だけ異なるヌクレオチド配列を含む、もしくは、
1つ、2つ、3つ、または4つのgRNAを含む、
組成物。
【請求項７】
請求項5または6記載の組成物であって、
Cas9ヌクレアーゼをさらに含む、もしくは、野生型Cas9ヌクレアーゼおよび変異体Cas9ヌクレアーゼの一方または両方をさらに含み、任意で、
前記Cas9ヌクレアーゼが、化膿性連鎖球菌Cas9ヌクレアーゼまたは黄色ブドウ球菌Cas9ヌクレアーゼであり、
前記Cas9ヌクレアーゼが化膿性連鎖球菌Cas9ヌクレアーゼであり、前記ターゲティングドメインが、（a）SEQ ID NO：5041、（b）SEQ ID NO：5042、（c）SEQ ID NO：5047、（d）SEQ ID NO：5050、（e）SEQ ID NO：5052、（f）SEQ ID NO：5092、および（g）SEQ ID NO：5093からなる群より選択されるヌクレオチド配列と同一であるか、または約3ヌクレオチド以下だけ異なるヌクレオチド配列を含み、任意で、前記化膿性連鎖球菌Cas9ヌクレアーゼが、NGGのプロトスペーサー隣接モチーフ（PAM）を認識し、もしくは、
前記黄色ブドウ球菌Cas9ヌクレアーゼが、NNNRRTまたはNNNRRVのいずれかのPAMを認識し、前記組成物がTGFBR2を標的とする、
組成物。
【請求項８】
少なくとも1つの化膿性連鎖球菌Cas9ヌクレアーゼ；および
SEQ ID NO：5042と5041との組合せ、または5042と5092との組合せ、またはSEQ ID NO：5042と5093との組合せ、またはSEQ ID NO：5093と5041との組合せを含む、gRNA
を含む、請求項5〜7のいずれか一項記載の組成物。
【請求項９】
細胞内のTGFBR2遺伝子発現を低下させるかまたは排除するのに使用するための、請求項5〜8のいずれか一項記載の組成物であって、任意で、前記細胞が、癌に罹患している対象に由来する、組成物。
【請求項１０】
TGFBR2遺伝子の標的配列と相補的なターゲティングドメインを含むgRNAをコードするポリヌクレオチドを含む、ベクター。
【請求項１１】
請求項10記載のベクターであって、
前記ターゲティングドメインが、SEQ ID NO：5036〜5096からなる群より選択されるヌクレオチド配列と同一であるか、または約3ヌクレオチド以下だけ異なるヌクレオチド配列を含む、もしくは、
前記ベクターがCas9ヌクレアーゼをコードするポリヌクレオチドをさらに含み、任意で、
前記Cas9ヌクレアーゼが、化膿性連鎖球菌Cas9ヌクレアーゼまたは黄色ブドウ球菌Cas9ヌクレアーゼである、もしくは、
前記Cas9ヌクレアーゼが化膿性連鎖球菌Cas9ヌクレアーゼであり、前記ターゲティングドメインが、（a）SEQ ID NO：5041、（b）SEQ ID NO：5042、（c）SEQ ID NO：5047、（d）SEQ ID NO：5050、（e）SEQ ID NO：5052、（f）SEQ ID NO：5092、および（g）SEQ ID NO：5093からなる群より選択されるヌクレオチド配列と同一であるか、または約3ヌクレオチド以下だけ異なるヌクレオチド配列を含む、
ベクター。
【請求項１２】
前記ベクターがウイルスベクターであり、任意で、前記ウイルスベクターが、アデノ随伴ウイルス（AAV）ベクターまたはレンチウイルス（LV）ベクターである、請求項10または11記載のベクター。
【請求項１３】
細胞内のTGFBR2遺伝子発現を低下させるかまたは排除するのに使用するための、請求項10〜12のいずれか一項記載のベクターであって、任意で、前記細胞が、癌に罹患している対象に由来する、ベクター。
【請求項１４】
（i）TGFBR2遺伝子の標的配列と相補的なターゲティングドメインを含むgRNAと、RNAガイドヌクレアーゼとを含む、ゲノム編集システム、または
（ii）TGFBR2遺伝子の標的配列と相補的なターゲティングドメインを含むgRNAをコードするポリヌクレオチドと、RNAガイドヌクレアーゼをコードするポリヌクレオチドとを含む、ベクター
のうちの1つを細胞に投与する工程を含む、細胞内のTGFBR2遺伝子の発現を改変する方法。
【請求項１５】
請求項14記載の方法であって、
前記改変が、TGFBR2遺伝子発現のノックアウトまたはTGFBR2遺伝子発現のノックダウンを含む、もしくは、
前記細胞が、癌に罹患している対象に由来する、もしくは、
前記gRNAおよびRNAガイドヌクレアーゼが、リボ核タンパク質（RNP）複合体を構成し、任意で、前記方法が、様々なターゲティングドメインを有するgRNAを含む2つ以上のRNP複合体を細胞に投与する工程を含み、任意で、
前記RNP複合体が、酵素的に活性なCas9（eaCas9）ヌクレアーゼを含む、もしくは、
前記RNP複合体が、標的核酸に二本鎖切断または標的核酸に一本鎖切断を形成するeaCas9ヌクレアーゼを含む、もしくは、
別個のgRNAを含む2つのRNP複合体を使用して、細胞内のTGFBR2遺伝子にオフセット一本鎖切断を形成する、
方法。
【請求項１６】
請求項1〜4のいずれか一項記載のゲノム編集システム、請求項5〜9のいずれか一項記載の組成物、または請求項10〜13のいずれか一項記載のベクターを含む、細胞であって、任意で、
前記細胞がTGFBR2を発現する、もしくは、
前記細胞が、T細胞またはナチュラルキラー（NK）細胞であり、任意で、前記細胞が、操作されたT細胞受容体（eTCR）またはキメラ抗原受容体（CAR）をさらに含む、
細胞。
【請求項１７】
請求項14または15に従って改変された細胞。
【請求項１８】
a）TGFBR2を標的とする十分な量のgRNA、およびRNAガイドヌクレアーゼと、細胞とを接触させる工程、ならびに
b）細胞のTGFBR2遺伝子内のTGFBR2標的位置の近くに第1のDNA二本鎖切断を形成する工程であって、前記第1のDNA二本鎖切断がNHEJによって修復され、修復がTGFBR2遺伝子の発現を改変する、工程
を含む、細胞内のTGFBR2遺伝子発現を改変するRNAガイドヌクレアーゼ媒介方法であって、任意で、
前記第1の二本鎖切断が、前記TGFBR2標的位置の約500bp、約450bp、約400bp、約350bp、約300bp、約250bp、約200bp、約150bp、約100bp、約50bp、約25bp、または約10bp以内に形成される、もしくは、
前記第1の二本鎖切断が、前記TGFBR2遺伝子のコード領域または非コード領域に形成され、前記非コード領域が、前記TGFBR2遺伝子のプロモーター領域、エンハンサー領域、イントロン、3’UTR、5’UTR、またはポリアデニル化シグナル領域を含む、
方法。
【請求項１９】
請求項18記載の方法であって、
前記TGFBR2標的位置の近くに第2のDNA二本鎖切断を形成する工程をさらに含み、任意で、
前記第1および第2の二本鎖切断が、前記TGFBR2標的位置の約500bp、約450bp、約400bp、約350bp、約300bp、約250bp、約200bp、約150bp、約100bp、約50bp、約25bp、または約10bp以内に形成される、もしくは、
前記第1および第2の二本鎖切断が、前記TGFBR2遺伝子のコード領域または非コード領域に形成され、前記非コード領域が、前記TGFBR2遺伝子のプロモーター領域、エンハンサー領域、イントロン、3’UTR、5’UTR、またはポリアデニル化シグナル領域を含む、
方法。
【請求項２０】
請求項18または19記載の方法であって、
前記コード領域が、エクソン3、エクソン4、およびエクソン5から選択される、もしくは、
前記ターゲティングドメインが、SEQ ID NO：5036〜5096からなる群より選択されるヌクレオチド配列と同一であるか、または約3ヌクレオチド以下だけ異なるヌクレオチド配列を含む、もしくは、
前記RNAガイドヌクレアーゼが、化膿性連鎖球菌Cas9ヌクレアーゼであり、前記ターゲティングドメインが、（a）SEQ ID NO：5041、（b）SEQ ID NO：5042、（c）SEQ ID NO：5047、（d）SEQ ID NO：5050、（e）SEQ ID NO：5052、（f）SEQ ID NO：5092、および（g）SEQ ID NO：5093からなる群より選択されるヌクレオチド配列と同一であるか、または約3ヌクレオチド以下だけ異なるヌクレオチド配列を含む、もしくは、
前記RNAガイドヌクレアーゼが黄色ブドウ球菌Cas9ヌクレアーゼである、もしくは、
前記RNAガイドヌクレアーゼが変異体Cas9ヌクレアーゼである、もしくは、
前記NHEJ修復が、20％以上の頻度で挿入または欠失をもたらし、任意で、前記挿入または欠失の頻度が、30％以上、40％以上、または50％以上である、
方法。
【請求項２１】
TGFBR2遺伝子の標的位置の近くまたはTGFBR2遺伝子の標的位置に挿入または欠失を含むゲノム操作された細胞であって、
前記標的位置が、SEQ ID NO：5036〜5096から選択されるヌクレオチド配列に対して相補的であるか、または約3ヌクレオチド以下だけ異なるヌクレオチド配列を含み、任意で、
前記挿入または欠失が、前記TGFBR2標的位置の約500bp、約450bp、約400bp、約350bp、約300bp、約250bp、約200bp、約150bp、約100bp、約50bp、約25bp、または約10bp以内にある、もしくは、
前記細胞がT細胞またはNK細胞であり、任意で、eTCRまたはCARをさらに含む、
細胞。
【請求項２２】
a. TGFBR2遺伝子の標的位置の近くまたはTGFBR2遺伝子の標的位置に挿入または欠失を含むゲノム操作された細胞の集団であって、前記標的位置が、SEQ ID NO：5036〜5096から選択されるヌクレオチド配列に対して相補的であるかまたは約3ヌクレオチド以下だけ異なるヌクレオチド配列を含む、ゲノム操作された細胞の集団と、
b. 薬学的に許容される緩衝液と
を含む、組成物であって、
任意で、前記細胞の集団が、T細胞またはNK細胞を含み、
任意で、前記T細胞またはNK細胞が、eTCRまたはCARをさらに含む、
組成物。
【請求項２３】
操作された免疫細胞を対象に投与する工程を含む、対象の癌を治療する方法であって、
前記操作された免疫細胞ではTGFBR2の発現が低下しており、前記操作された免疫細胞が、操作されたT細胞受容体（eTCR）またはキメラ抗原受容体（CAR）を任意で発現し、前記操作された免疫細胞が、TGFBR2遺伝子の標的位置の近くまたはTGFBR2遺伝子の標的位置に挿入または欠失を有する、
方法。
【請求項２４】
請求項23記載の方法であって、
前記操作された免疫細胞が、T細胞またはNK細胞を含み、任意で、前記T細胞が、CD4+T細胞および/またはCD8+T細胞である、もしくは、
前記eTCRまたはCARが、癌細胞に対して抗原特異性を有する、もしくは、
前記癌が、白血病、リンパ腫、例えば、慢性リンパ性白血病（CLL）、急性リンパ芽球性白血病（ALL）、非ホジキンリンパ腫、急性骨髄性白血病、多発性骨髄腫、難治性濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、低悪性度B細胞性リンパ腫、B細胞悪性腫瘍、大腸癌、肺癌、肝癌、乳癌、前立腺癌、卵巣癌、皮膚癌、黒色腫、骨癌、および脳癌、卵巣癌、上皮性癌、腎細胞癌、膵臓腺癌、ホジキンリンパ腫、子宮頸癌、結腸直腸癌、神経膠芽腫、神経芽腫、ユーイング肉腫、髄芽腫、骨肉腫、滑膜肉腫、中皮腫、および/またはTGF-βを発現する任意の癌タイプからなる群より選択される、もしくは
前記操作された免疫細胞が、操作されていない免疫細胞と比較して、標的癌細胞に対する溶解活性を維持するか、または増強されている、もしくは、
前記操作された免疫細胞が、操作されていない免疫細胞と比較して、TGFβの存在下でグランザイムBおよび/またはインターフェロンγの発現を維持するか、または増加されている、もしくは、
前記操作された免疫細胞が、操作されていない免疫細胞と比較して、反復抗原刺激に対する持続性を維持するか、または改善されている、もしくは、
前記操作された免疫細胞が、操作されていない免疫細胞と比較して、CD25の発現を維持するか、または増加されている、もしくは、
前記操作された免疫細胞が、操作されていない免疫細胞と比較して、PD-1の発現を維持するか、または低下されている、もしくは、
前記操作された免疫細胞が、操作されていない免疫細胞と比較して、増殖を維持するか、または増加されている、
方法。
【請求項２５】
複数の操作されたT細胞を含む組成物であって、前記操作されたT細胞が、操作されていないT細胞と比較してTGFBR2遺伝子発現の低下を示す、組成物。
【請求項２６】
請求項25記載の組成物であって、
前記操作されたT細胞が、操作されていないT細胞内のTGFBR2発現レベルの約50％、約40％、約30％、約20％、約10％、または約5％であるTGFBR2遺伝子発現レベルを示す、もしくは、
a）操作されていないT細胞と比較して、標的癌細胞に対する増強された溶解活性、
b）操作されていないT細胞と比較して、TGFβの存在下で、グランザイムBおよび/もしくはインターフェロンγの維持されたかもしくは増加した発現、
c）操作されていないT細胞と比較して、反復抗原刺激に対する維持されたかもしくは増加した持続性、
d）操作されていないT細胞と比較して、CD25の維持されたかもしくは増加した発現、
e）操作されていないT細胞と比較して、PD-1の維持されたかもしくは低下した発現、および/または
f）操作されていないT細胞と比較して、維持されたかもしくは増加した増殖
を有することによって、操作されたT細胞がさらに特徴付けられる、
組成物。
【請求項２７】
複数の操作されたT細胞を含む組成物であって、
前記操作されたT細胞が、操作されていないT細胞と比較してTGFBR2遺伝子発現の低下を示し、
前記操作されたT細胞が、
TGFBR2遺伝子の標的配列と相補的なターゲティングドメインを含むgRNA、および
RNAガイドヌクレアーゼ
を含むゲノム編集システムと、操作されていないT細胞を接触させることにより生成される、
組成物。
【請求項２８】
請求項27記載の組成物であって、
前記操作されたT細胞が、eTCRまたはCARを発現するベクターを用いてさらに形質導入され、任意で、前記ベクターがウイルスベクターであり、任意で、前記ウイルスベクターが、アデノ随伴ウイルス（AAV）ベクターまたはレンチウイルス（LV）ベクターである、もしくは、
前記RNAガイドヌクレアーゼが、化膿性連鎖球菌Cas9ヌクレアーゼであり、前記ターゲティングドメインが、（a）SEQ ID NO：5041、（b）SEQ ID NO：5042、（c）SEQ ID NO：5047、（d）SEQ ID NO：5050、（e）SEQ ID NO：5052、（f）SEQ ID NO：5092、および（g）SEQ ID NO：5093からなる群より選択されるヌクレオチド配列と同一であるか、または約3ヌクレオチド以下だけ異なるヌクレオチド配列
を含む、
組成物。
【請求項２９】
複数の操作されたT細胞を含む組成物であって、前記操作されたT細胞では、TGFBR2シグナル伝達が欠損しており、欠損したTGFBR2シグナル伝達が、前記操作されたT細胞内にドミナントネガティブ（DN）型のTGFBR2を発現させることにより媒介され、任意で、
前記操作されたT細胞が、eTCRまたはCARを発現するベクターを用いてさらに形質導入される、もしくは、
前記T細胞が、CD4+T細胞および/またはCD8+T細胞である、もしくは、
a）操作されていないT細胞と比較して、標的癌細胞に対する増強された溶解活性、
b）操作されていないT細胞と比較して、TGFβの存在下で、グランザイムBおよび/もしくはインターフェロンγの維持されたかもしくは増加した発現、
c）操作されていないT細胞と比較して、反復抗原刺激に対する維持されたかもしくは増加した持続性、
d）操作されていないT細胞と比較して、CD25の維持されたかもしくは増加した発現、
e）操作されていないT細胞と比較して、PD-1の維持されたかもしくは低下した発現、および/または
f）操作されていないT細胞と比較して、維持されたかもしくは増加した増殖
を有することによって、前記操作されたT細胞がさらに特徴付けられる、
組成物。
【請求項３０】
TGFBR2遺伝子の標的配列と相補的なターゲティングドメインを含むgRNAと、RNAガイドヌクレアーゼとを含む、リボ核タンパク質（RNP）複合体であって、任意で、
前記RNAガイドヌクレアーゼがCas9ヌクレアーゼである、または、
前記RNPが細胞にエレクトロポレーションされる、
RNP。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００７３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００７３】
[本発明1001]
形質転換成長因子β受容体II（TGFBR2）遺伝子の標的配列と相補的なターゲティングドメインを含むgRNAと、
RNAガイドヌクレアーゼと、
を含む、ゲノム編集システム。
[本発明1002]
TGFBR2遺伝子の標的配列が、SEQ ID NO：1、2および3からなる群より選択される配列を含む、本発明1001のゲノム編集システム。
[本発明1003]
TGFBR2遺伝子の標的配列が、SEQ ID NO：4〜10からなる群より選択される配列を含む、本発明1001のゲノム編集システム。
[本発明1004]
ターゲティングドメインが、TGFBR2遺伝子の標的配列に対して少なくとも85％の相補性を有する、本発明1001のゲノム編集システム。
[本発明1005]
ターゲティングドメインが、TGFBR2標的位置の約500bp、約450bp、約400bp、約350bp、約300bp、約250bp、約200bp、約150bp、約100bp、約50bp、約25bp、または約10bp以内に二本鎖切断または一本鎖切断を形成するように構成され、それによりTGFBR2遺伝子を改変する、本発明1001のゲノム編集システム。
[本発明1006]
TGFBR2遺伝子発現がノックアウトまたはノックダウンされている、本発明1005のゲノム編集システム。
[本発明1007]
gRNAが、TGFBR2遺伝子のコード領域または非コード領域を標的とし、非コード領域が、TGFBR2遺伝子のプロモーター領域、エンハンサー領域、イントロン、3’UTR、5’UTR、またはポリアデニル化シグナル領域を含む、本発明1001〜1006のいずれかのゲノム編集システム。
[本発明1008]
コード領域が、エクソン3、エクソン4、およびエクソン5から選択される、本発明1007のゲノム編集システム。
[本発明1009]
ターゲティングドメインが、
SEQ ID NO：5036〜5096からなる群より選択されるヌクレオチド配列と同一であるか、または約3ヌクレオチド以下だけ異なるヌクレオチド配列
を含む、本発明1001〜1008のいずれかのゲノム編集システム。
[本発明1010]
RNAガイドヌクレアーゼが、化膿性連鎖球菌（S.pyogenes）Cas9ヌクレアーゼであり、
ターゲティングドメインが、
（a）SEQ ID NO：5041、
（b）SEQ ID NO：5042、
（c）SEQ ID NO：5047、
（d）SEQ ID NO：5050、
（e）SEQ ID NO：5052、
（f）SEQ ID NO：5092、および
（g）SEQ ID NO：5093
からなる群より選択されるヌクレオチド配列と同一であるか、または3ヌクレオチド以下だけ異なるヌクレオチド配列
を含む、本発明1001〜1009のいずれかのゲノム編集システム。
[本発明1011]
化膿性連鎖球菌Cas9ヌクレアーゼが、NGGのプロトスペーサー隣接モチーフ（PAM）を認識し、
ゲノム編集システムがTGFBR2を標的とし、
ターゲティングドメインが、
SEQ ID NO：5041〜5042、5047、5050、5052および5092〜5093からなる群より選択されるヌクレオチド配列と同一であるか、または3ヌクレオチド以下だけ異なるヌクレオチド配列
を含む、
本発明1010のゲノム編集システム。
[本発明1012]
RNAガイドヌクレアーゼが、黄色ブドウ球菌（S.aureus）Cas9ヌクレアーゼである、本発明1001〜1009のいずれかのゲノム編集システム。
[本発明1013]
黄色ブドウ球菌Cas9ヌクレアーゼが、NNNRRTまたはNNNRRVのいずれかのPAMを認識し、ゲノム編集システムがTGFBR2を標的とする、本発明1012のゲノム編集システム。
[本発明1014]
RNAガイドヌクレアーゼが変異体Cas9ヌクレアーゼである、本発明1001〜1013のいずれかのゲノム編集システム。
[本発明1015]
gRNAが、モジュラーgRNAまたはキメラgRNAである、本発明1001〜1014のいずれかのゲノム編集システム。
[本発明1016]
ターゲティングドメインが、約16、約17、約18、約19、約20、約21、約22、約23、約24、約25、または約26ヌクレオチドの長さを有する、本発明1001〜1015のいずれかのゲノム編集システム。
[本発明1017]
ターゲティングドメインが、TGFBR2遺伝子に相補的な少なくとも約18個の連続したヌクレオチドを含む、本発明1016のゲノム編集システム。
[本発明1018]
2つ、3つまたは4つのgRNAを含む、本発明1001〜1017のいずれかのゲノム編集システム。
[本発明1019]
少なくとも1つの化膿性連鎖球菌Cas9ヌクレアーゼ；および
SEQ ID NO：5042と5041との組合せ、または5042と5092との組合せ、またはSEQ ID NO：5042と5093との組合せ、またはSEQ ID NO：5093と5041との組合せを含む、gRNA
を含む、本発明1009のゲノム編集システム。
[本発明1020]
細胞内のTGFBR2遺伝子を改変するのに使用するための、本発明1001〜1019のいずれかのゲノム編集システム。
[本発明1021]
細胞が、癌に罹患している対象に由来する、本発明1020のゲノム編集システム。
[本発明1022]
TGFBR2の発現が、ベースライン測定値と比較して30％以上低下する、本発明1001のゲノム編集システム。
[本発明1023]
TGFBR2タンパク質の発現が、ウエスタンブロットまたは間接的細胞内染色フローサイトメトリーによって決定される、本発明1022のゲノム編集システム。
[本発明1024]
フレームシフト変異がTGFBR2遺伝子に導入される、本発明1001のゲノム編集システム。
[本発明1025]
TGFBR2遺伝子の標的配列と相補的なターゲティングドメインを含むgRNAを含む、組成物。
[本発明1026]
TGRBR2遺伝子の標的配列が、SEQ ID NO：1、2、および3からなる群より選択される配列を含む、本発明1025の組成物。
[本発明1027]
TGRBR2遺伝子の標的配列が、SEQ ID NO：4〜10からなる群より選択される配列を含む、本発明1025の組成物。
[本発明1028]
ターゲティングドメインが、TGRBR2遺伝子の標的配列に対して少なくとも85％の相補性を有する、本発明1025の組成物。
[本発明1029]
ターゲティングドメインが、約16、約17、約18、約19、約20、約21、約22、約23、約24、約25、または約26ヌクレオチドの長さを有する、本発明1025の組成物。
[本発明1030]
ターゲティングドメインが、TGFBR2遺伝子に相補的な少なくとも約18個の連続したヌクレオチドを含む、本発明1029の組成物。
[本発明1031]
ターゲティングドメインが、
SEQ ID NO：5036〜5096からなる群より選択されるヌクレオチド配列と同一であるか、または約3ヌクレオチド以下だけ異なるヌクレオチド配列
を含む、本発明1025の組成物。
[本発明1032]
1つ、2つ、3つ、または4つのgRNAを含む、本発明1025または1031の組成物。
[本発明1033]
Cas9ヌクレアーゼをさらに含む、本発明1025〜1032のいずれかの組成物。
[本発明1034]
Cas9ヌクレアーゼが、化膿性連鎖球菌Cas9ヌクレアーゼまたは黄色ブドウ球菌Cas9ヌクレアーゼである、本発明1033の組成物。
[本発明1035]
野生型Cas9ヌクレアーゼおよび変異体Cas9ヌクレアーゼの一方または両方をさらに含む、本発明1033の組成物。
[本発明1036]
Cas9分子が化膿性連鎖球菌Cas9分子であり、
ターゲティングドメインが、
（a）SEQ ID NO：5041、
（b）SEQ ID NO：5042、
（c）SEQ ID NO：5047、
（d）SEQ ID NO：5050、
（e）SEQ ID NO：5052、
（f）SEQ ID NO：5092、および
（g）SEQ ID NO：5093
からなる群より選択されるヌクレオチド配列と同一であるか、または約3ヌクレオチド以下だけ異なるヌクレオチド配列
を含む、
本発明1033の組成物。
[本発明1037]
化膿性連鎖球菌Cas9ヌクレアーゼが、NGGのプロトスペーサー隣接モチーフ（PAM）を認識し、
前記組成物がTGFBR2を標的とし、
ターゲティングドメインが、
SEQ ID NO：5041〜5042、5047、5050、5052、5092、および5093から選択されるヌクレオチド配列と同一であるか、または3ヌクレオチド以下だけ異なるヌクレオチド配列
を含む、
本発明1036の組成物。
[本発明1038]
黄色ブドウ球菌Cas9ヌクレアーゼが、NNNRRTまたはNNNRRVのいずれかのPAMを認識し、前記組成物がTGFBR2を標的とする、本発明1034の組成物。
[本発明1039]
少なくとも1つの化膿性連鎖球菌Cas9ヌクレアーゼ；および
SEQ ID NO：5042と5041との組合せ、または5042と5092との組合せ、またはSEQ ID NO：5042と5093との組合せ、またはSEQ ID NO：5093と5041との組合せを含む、gRNA
を含む、本発明1025〜1038のいずれかの組成物。
[本発明1040]
細胞内のTGFBR2遺伝子発現を低下させるかまたは排除するのに使用するための、本発明1025〜1039のいずれかの組成物。
[本発明1041]
細胞が、癌に罹患している対象に由来する、本発明1040の組成物。
[本発明1042]
TGFBR2遺伝子の標的配列と相補的なターゲティングドメインを含むgRNAをコードするポリヌクレオチドを含む、ベクター。
[本発明1043]
ターゲティングドメインが、
SEQ ID NO：5036〜5096からなる群より選択されるヌクレオチド配列と同一であるか、または約3ヌクレオチド以下だけ異なるヌクレオチド配列
を含む、本発明1042のベクター。
[本発明1044]
Cas9ヌクレアーゼをコードするポリヌクレオチドをさらに含む、本発明1042または1043のベクター。
[本発明1045]
Cas9ヌクレアーゼが、化膿性連鎖球菌Cas9ヌクレアーゼまたは黄色ブドウ球菌Cas9ヌクレアーゼである、本発明1044のベクター。
[本発明1046]
Cas9ヌクレアーゼが、野生型Cas9ヌクレアーゼおよび変異体Cas9ヌクレアーゼの一方または両方をさらに含む、本発明1044または1045のベクター。
[本発明1047]
Cas9ヌクレアーゼが化膿性連鎖球菌Cas9ヌクレアーゼであり、
ターゲティングドメインが、
（a）SEQ ID NO：5041、
（b）SEQ ID NO：5042、
（c）SEQ ID NO：5047、
（d）SEQ ID NO：5050、
（e）SEQ ID NO：5052、
（f）SEQ ID NO：5092、および
（g）SEQ ID NO：5093
からなる群より選択されるヌクレオチド配列と同一であるか、または約3ヌクレオチド以下だけ異なるヌクレオチド配列
を含む、
本発明1044のベクター。
[本発明1048]
化膿性連鎖球菌Cas9ヌクレアーゼが、NGGのプロトスペーサー隣接モチーフ（PAM）を認識し、
ベクターが、TGFBR2を標的とするgRNAをコードし、
ターゲティングドメインが、
SEQ ID NO：5041〜5042、5047、5050、5052および5092〜5093から選択されるヌクレオチド配列と同一であるか、または約3ヌクレオチド以下だけ異なるヌクレオチド配列
を含む、
本発明1047のベクター。
[本発明1049]
黄色ブドウ球菌Cas9ヌクレアーゼが、NNNRRTまたはNNNRRVのいずれかのPAMを認識し、ベクターが、TGFBR2を標的とするgRNAをコードする、本発明1045のベクター。
[本発明1050]
ベクターがウイルスベクターである、本発明1042〜1049のいずれかのベクター。
[本発明1051]
ウイルスベクターが、アデノ随伴ウイルス（AAV）ベクターまたはレンチウイルス（LV）ベクターである、本発明1050のベクター。
[本発明1052]
細胞内のTGFBR2遺伝子発現を低下させるかまたは排除するのに使用するための、本発明1042〜1051のいずれかのベクター。
[本発明1053]
細胞が、癌に罹患している対象に由来する、本発明1052のベクター。
[本発明1054]
（i）TGFBR2遺伝子の標的配列と相補的なターゲティングドメインを含むgRNAと、RNAガイドヌクレアーゼとを含む、ゲノム編集システム、または
（ii）TGFBR2遺伝子の標的配列と相補的なターゲティングドメインを含むgRNAをコードするポリヌクレオチドと、RNAガイドヌクレアーゼをコードするポリヌクレオチドとを含む、ベクター
のうちの1つを細胞に投与する工程を含む、細胞内のTGFBR2遺伝子の発現を改変する方法。
[本発明1055]
改変が、TGFBR2遺伝子発現のノックアウトまたはTGFBR2遺伝子発現のノックダウンを含む、本発明1054の方法。
[本発明1056]
細胞が、癌に罹患している対象に由来する、本発明1054または1055の方法。
[本発明1057]
gRNAおよびRNAガイドヌクレアーゼが、リボ核タンパク質（RNP）複合体を構成する、本発明1054の方法。
[本発明1058]
様々なターゲティングドメインを有するgRNAを含む2つ以上のRNP複合体を細胞に投与する工程を含む、本発明1057の方法。
[本発明1059]
RNP複合体が、酵素的に活性なCas9（eaCas9）ヌクレアーゼを含む、本発明1057の方法。
[本発明1060]
RNP複合体が、標的核酸に二本鎖切断または標的核酸に一本鎖切断を形成するeaCas9ヌクレアーゼを含む、本発明1059の方法。
[本発明1061]
別個のgRNAを含む2つのRNP複合体を使用して、細胞内のTGFBR2遺伝子にオフセット一本鎖切断を形成する、本発明1058の方法。
[本発明1062]
本発明1001〜1024のいずれかのゲノム編集システム、本発明1024〜1041のいずれかの組成物、または本発明1042〜1053のいずれかのベクターを含む、細胞。
[本発明1063]
TGFBR2を発現する、本発明1062の細胞。
[本発明1064]
T細胞またはナチュラルキラー（NK）細胞である、本発明1062または1063の細胞。
[本発明1065]
操作されたT細胞受容体（eTCR）またはキメラ抗原受容体（CAR）をさらに含む、本発明1064の細胞。
[本発明1066]
本発明1054〜1061のいずれかに従って改変された細胞。
[本発明1067]
a）TGFBR2を標的とする十分な量のgRNA、およびRNAガイドヌクレアーゼと、細胞とを接触させる工程、ならびに
b）細胞のTGFBR2遺伝子内のTGFBR2標的位置の近くに第1のDNA二本鎖切断を形成する工程であって、第1のDNA二本鎖切断がNHEJによって修復され、修復がTGFBR2遺伝子の発現を改変する、工程
を含む、細胞内のTGFBR2遺伝子発現を改変するRNAガイドヌクレアーゼ媒介方法。
[本発明1068]
TGFBR2標的位置の近くに第2のDNA二本鎖切断を形成する工程をさらに含む、本発明1068の方法。
[本発明1069]
第1の二本鎖切断が、TGFBR2標的位置の約500bp、約450bp、約400bp、約350bp、約300bp、約250bp、約200bp、約150bp、約100bp、約50bp、約25bp、または約10bp以内に形成される、本発明1067の方法。
[本発明1070]
第1および第2の二本鎖切断が、TGFBR2標的位置の約500bp、約450bp、約400bp、約350bp、約300bp、約250bp、約200bp、約150bp、約100bp、約50bp、約25bp、または約10bp以内に形成される、本発明1068の方法。
[本発明1071]
第1の二本鎖切断が、TGFBR2遺伝子のコード領域または非コード領域に形成され、非コード領域が、TGFBR2遺伝子のプロモーター領域、エンハンサー領域、イントロン、3’UTR、5’UTR、またはポリアデニル化シグナル領域を含む、本発明1067の方法。
[本発明1072]
第1および第2の二本鎖切断が、TGFBR2遺伝子のコード領域または非コード領域に形成され、非コード領域が、TGFBR2遺伝子のプロモーター領域、エンハンサー領域、イントロン、3’UTR、5’UTR、またはポリアデニル化シグナル領域を含む、本発明1068の方法。
[本発明1073]
コード領域が、エクソン3、エクソン4、およびエクソン5から選択される、本発明1067〜1072のいずれかの方法。
[本発明1074]
ターゲティングドメインが、
SEQ ID NO：5036〜5096からなる群より選択されるヌクレオチド配列と同一であるか、または約3ヌクレオチド以下だけ異なるヌクレオチド配列
を含む、本発明1067〜1073のいずれかの方法。
[本発明1075]
RNAガイドヌクレアーゼが、化膿性連鎖球菌Cas9ヌクレアーゼであり、
ターゲティングドメインが、
（a）SEQ ID NO：5041、
（b）SEQ ID NO：5042、
（c）SEQ ID NO：5047、
（d）SEQ ID NO：5050、
（e）SEQ ID NO：5052、
（f）SEQ ID NO：5092、および
（g）SEQ ID NO：5093
からなる群より選択されるヌクレオチド配列と同一であるか、または約3ヌクレオチド以下だけ異なるヌクレオチド配列
を含む、
本発明1067〜1074のいずれかの方法。
[本発明1076]
RNAガイドヌクレアーゼが黄色ブドウ球菌Cas9ヌクレアーゼである、本発明1067〜1074のいずれかの方法。
[本発明1077]
RNAガイドヌクレアーゼが変異体Cas9ヌクレアーゼである、本発明1075または1076の方法。
[本発明1078]
NHEJ修復が、20％以上の頻度で挿入または欠失をもたらす、本発明1067の方法。
[本発明1079]
挿入または欠失の頻度が、30％以上、40％以上、または50％以上である、本発明1078の方法。
[本発明1080]
TGFBR2遺伝子の標的位置の近くまたはTGFBR2遺伝子の標的位置に挿入または欠失を含むゲノム操作された細胞であって、
標的位置が、
SEQ ID NO：5036〜5096から選択されるヌクレオチド配列に対して相補的であるか、または約3ヌクレオチド以下だけ異なるヌクレオチド配列
を含む、
ゲノム操作された細胞。
[本発明1081]
挿入または欠失が、TGFBR2標的位置の約500bp、約450bp、約400bp、約350bp、約300bp、約250bp、約200bp、約150bp、約100bp、約50bp、約25bp、または約10bp以内にある、本発明1080の細胞。
[本発明1082]
T細胞またはNK細胞である、本発明1080の細胞。
[本発明1083]
eTCRまたはCARをさらに含む、本発明1082の細胞。
[本発明1084]
a. TGFBR2遺伝子の標的位置の近くまたはTGFBR2遺伝子の標的位置に挿入または欠失を含むゲノム操作された細胞の集団であって、標的位置が、SEQ ID NO：5036〜5096から選択されるヌクレオチド配列に対して相補的であるかまたは約3ヌクレオチド以下だけ異なるヌクレオチド配列を含む、ゲノム操作された細胞の集団と、
b. 薬学的に許容される緩衝液と
を含む、組成物。
[本発明1085]
細胞の集団が、T細胞またはNK細胞を含む、本発明1084の組成物。
[本発明1086]
T細胞またはNK細胞が、eTCRまたはCARをさらに含む、本発明1085の組成物。
[本発明1087]
操作された免疫細胞を対象に投与する工程を含む、対象の癌を治療する方法であって、
操作された免疫細胞ではTGFBR2の発現が低下しており、操作された免疫細胞が、操作されたT細胞受容体（eTCR）またはキメラ抗原受容体（CAR）を任意で発現し、操作された免疫細胞が、TGFBR2遺伝子の標的位置の近くまたはTGFBR2遺伝子の標的位置に挿入または欠失を有する、
方法。
[本発明1088]
操作された免疫細胞が、T細胞またはNK細胞を含む、本発明1087の方法。
[本発明1089]
eTCRまたはCARが、癌細胞に対して抗原特異性を有する、本発明1087の方法。
[本発明1090]
癌が、白血病、リンパ腫、例えば、慢性リンパ性白血病（CLL）、急性リンパ芽球性白血病（ALL）、非ホジキンリンパ腫、急性骨髄性白血病、多発性骨髄腫、難治性濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、低悪性度B細胞性リンパ腫、B細胞悪性腫瘍、大腸癌、肺癌、肝癌、乳癌、前立腺癌、卵巣癌、皮膚癌、黒色腫、骨癌、および脳癌、卵巣癌、上皮性癌、腎細胞癌、膵臓腺癌、ホジキンリンパ腫、子宮頸癌、結腸直腸癌、神経膠芽腫、神経芽腫、ユーイング肉腫、髄芽腫、骨肉腫、滑膜肉腫、中皮腫、および/またはTGF-βを発現する任意の癌タイプからなる群より選択される、本発明1087の方法。
[本発明1091]
T細胞が、CD4+T細胞および/またはCD8+T細胞である、本発明1088の方法。
[本発明1092]
操作された免疫細胞が、操作されていない免疫細胞と比較して、標的癌細胞に対する溶解活性を維持するか、または増強されている、本発明1087の方法。
[本発明1093]
操作された免疫細胞が、操作されていない免疫細胞と比較して、TGFβの存在下でグランザイムBおよび/またはインターフェロンγの発現を維持するか、または増加されている、本発明1087の方法。
[本発明1094]
操作された免疫細胞が、操作されていない免疫細胞と比較して、反復抗原刺激に対する持続性を維持するか、または改善されている、本発明1087の方法。
[本発明1095]
操作された免疫細胞が、操作されていない免疫細胞と比較して、CD25の発現を維持するか、または増加されている、本発明1087の方法。
[本発明1096]
操作された免疫細胞が、操作されていない免疫細胞と比較して、PD-1の発現を維持するか、または低下されている、本発明1087の方法。
[本発明1097]
操作された免疫細胞が、操作されていない免疫細胞と比較して、増殖を維持するか、または増加されている、本発明1087の方法。
[本発明1098]
複数の操作されたT細胞を含む組成物であって、操作されたT細胞が、操作されていないT細胞と比較してTGFBR2遺伝子発現の低下を示す、組成物。
[本発明1099]
操作されたT細胞が、操作されていないT細胞内のTGFBR2発現レベルの約50％、約40％、約30％、約20％、約10％、または約5％であるTGFBR2遺伝子発現レベルを示す、本発明1098の組成物。
[本発明1100]
操作されたT細胞が、eTCRまたはCARの発現をさらに含む、本発明1098の組成物。
[本発明1101]
T細胞が、CD4+T細胞および/またはCD8+T細胞である、本発明1098の組成物。
[本発明1102]
a）操作されていないT細胞と比較して、標的癌細胞に対する増強された溶解活性、
b）操作されていないT細胞と比較して、TGFβの存在下で、グランザイムBおよび/もしくはインターフェロンγの維持されたかもしくは増加した発現、
c）操作されていないT細胞と比較して、反復抗原刺激に対する維持されたかもしくは増加した持続性、
d）操作されていないT細胞と比較して、CD25の維持されたかもしくは増加した発現、
e）操作されていないT細胞と比較して、PD-1の維持されたかもしくは低下した発現、および/または
f）操作されていないT細胞と比較して、維持されたかもしくは増加した増殖
を有することによって、操作されたT細胞がさらに特徴付けられる、本発明1098の組成物。
[本発明1103]
複数の操作されたT細胞を含む組成物であって、
操作されたT細胞が、操作されていないT細胞と比較してTGFBR2遺伝子発現の低下を示し、
操作されたT細胞が、
TGFBR2遺伝子の標的配列と相補的なターゲティングドメインを含むgRNA、および
RNAガイドヌクレアーゼ
を含むゲノム編集システムと、操作されていないT細胞を接触させることにより生成される、
組成物。
[本発明1104]
操作されたT細胞が、eTCRまたはCARを発現するベクターを用いてさらに形質導入される、本発明1103の組成物。
[本発明1105]
ベクターがウイルスベクターである、本発明1104の組成物。
[本発明1106]
ウイルスベクターが、アデノ随伴ウイルス（AAV）ベクターまたはレンチウイルス（LV）ベクターである、本発明1105の組成物。
[本発明1107]
RNAガイドヌクレアーゼが、化膿性連鎖球菌Cas9ヌクレアーゼであり、
ターゲティングドメインが、
（a）SEQ ID NO：5041、
（b）SEQ ID NO：5042、
（c）SEQ ID NO：5047、
（d）SEQ ID NO：5050、
（e）SEQ ID NO：5052、
（f）SEQ ID NO：5092、および
（g）SEQ ID NO：5093
からなる群より選択されるヌクレオチド配列と同一であるか、または約3ヌクレオチド以下だけ異なるヌクレオチド配列
を含む、
本発明1103の組成物。
[本発明1108]
複数の操作されたT細胞を含む組成物であって、操作されたT細胞では、TGFBR2シグナル伝達が欠損している、組成物。
[本発明1109]
欠損したTGFBR2シグナル伝達が、操作されたT細胞内にドミナントネガティブ（DN）型のTGFBR2を発現させることにより媒介される、本発明1108の組成物。
[本発明1110]
操作されたT細胞が、eTCRまたはCARを発現するベクターを用いてさらに形質導入される、本発明1109の組成物。
[本発明1111]
ベクターがウイルスベクターである、本発明1110の組成物。
[本発明1112]
ウイルスベクターが、アデノ随伴ウイルス（AAV）ベクターまたはレンチウイルス（LV）ベクターである、本発明1111の組成物。
[本発明1113]
T細胞が、CD4+T細胞および/またはCD8+T細胞である、本発明1108の組成物。
[本発明1114]
a）操作されていないT細胞と比較して、標的癌細胞に対する増強された溶解活性、
b）操作されていないT細胞と比較して、TGFβの存在下で、グランザイムBおよび/もしくはインターフェロンγの維持されたかもしくは増加した発現、
c）操作されていないT細胞と比較して、反復抗原刺激に対する維持されたかもしくは増加した持続性、
d）操作されていないT細胞と比較して、CD25の維持されたかもしくは増加した発現、
e）操作されていないT細胞と比較して、PD-1の維持されたかもしくは低下した発現、および/または
f）操作されていないT細胞と比較して、維持されたかもしくは増加した増殖
を有することによって、操作されたT細胞がさらに特徴付けられる、本発明1108の組成物。
[本発明1115]
操作された免疫細胞が、野生型TGFBR2の発現低下をさらに含む、本発明1109の組成物。
[本発明1116]
野生型TGFBR2発現が、
TGFBR2遺伝子の標的配列と相補的なターゲティングドメインを含むgRNA、および
RNAガイドヌクレアーゼ
を含むゲノム編集システムと、操作された免疫細胞を接触させることによって低下される、本発明1115の組成物。
[本発明1117]
TGFBR2遺伝子の標的配列と相補的なターゲティングドメインを含むgRNAと、RNAガイドヌクレアーゼとを含む、リボ核タンパク質（RNP）複合体。
[本発明1118]
RNAガイドヌクレアーゼがCas9ヌクレアーゼである、本発明1117のRNP。
[本発明1119]
RNPが細胞にエレクトロポレーションされる、本発明1117のRNP。
本発明の他の特徴および利点は、詳細な説明、実施例、図面、および特許請求の範囲から明らかになるであろう。