【手続補正書】
【提出日】令和3年3月11日(2021.3.11)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
アデノ随伴ウイルス（AAV）ビリオンを形成するための条件下で、細胞を第1の核酸配列および第2の核酸配列と接触させる工程を含む、AAVビリオンを作製するための方法であって、
該AAVビリオンが、少なくともAAV8ウイルスタンパク質1（VP1）およびAAV2ウイルスタンパク質3（VP3）のウイルス構造タンパク質から形成され；該第1の核酸配列が、AAV8血清型に由来するVP1のみをコードし、VP3を発現することができず、かつ該第2の核酸配列が、AAV2血清型に由来するVP3のみをコードし、VP1を発現することができず；該AAVビリオンが、AAV8血清型に由来するVP1のみおよびAAV2血清型に由来するVP3のみを含み；かつウイルスタンパク質2（VP2）が発現される場合、それがAAV8血清型のみに由来する、前記方法。
【請求項２】
請求項1に記載の方法によって生成された、複数のAAVベクター粒子。
【請求項３】
AAV8ウイルスタンパク質1（VP1）、AAV8ウイルスタンパク質2（VP2）、およびAAV2ウイルスタンパク質3（VP3）を含む、アデノ随伴ウイルス（AAV）カプシドであって、
該カプシド中のVP1およびVP2がAAV8のみに由来し、かつ該カプシド中のVP3がAAV2のみに由来する、前記AAVカプシド。
【請求項４】
請求項3に記載のAAVカプシドおよび異種核酸分子を含む、アデノ随伴ウイルス（AAV）ベクター粒子。
【請求項５】
対象にポリペプチドまたは機能性RNAをコードする異種核酸分子を送達して、該対象における障害または疾患を処置および/または予防するための、請求項4に記載のAAVベクター粒子の使用。
【請求項６】
薬学的に許容される担体中に請求項3に記載のAAVカプシドタンパク質および/または請求項4に記載のAAVベクター粒子を含む、組成物。
【請求項７】
（a）アデノ随伴ウイルス（AAV）粒子を組み立てるために必要な全ての機能および遺伝子を一緒に提供する1種または複数種のプラスミドを、宿主細胞にトランスフェクトする工程であって、カプシドタンパク質が、AAV8ウイルスタンパク質1およびウイルスタンパク質2（VP1/VP2）のみ並びにAAV2ウイルスタンパク質2（VP3）のみを発現する1種または複数種のプラスミドによって排他的にコードされている、工程；
（b）1種または複数種の核酸構築物をパッケージング細胞株またはプロデューサー細胞株に導入して、AAV粒子を組み立てるためにヘルパーウイルス配列を含む必要な全ての機能および遺伝子を一緒に提供する工程であって、カプシドタンパク質が、AAV8 VP1/VP2のみおよびAAV2 VP3のみを発現する1種または複数種の核酸構築物によって排他的にコードされている、工程；
（c）AAV粒子を組み立てるために必要な全ての機能および遺伝子を一緒に提供する1種または複数種の組み換えバキュロウイルスベクターを、宿主細胞に導入する工程であって、カプシドタンパク質が、AAV8 VP1/VP2のみおよびAAV2 VP3のみを発現する1種または複数種のプラスミドによって排他的にコードされている、工程；並びに／または
（d）AAV粒子を組み立てるために必要な全ての機能および遺伝子を一緒に提供する1種または複数種の組み換えヘルペスウイルスベクターを、宿主細胞に導入する工程であって、カプシドタンパク質が、AAV8 VP1/VP2のみおよびAAV2 VP3のみを発現する1種または複数種のプラスミドによって排他的にコードされている、工程
を含む、AAVベクターを作製する方法。
【請求項８】
ヘルパーウイルス配列が、アデノウイルス、ヘルペスウイルス、アルファウイルス、ワクシニア、ポックスウイルス、バキュロウイルス、またはそれらの組み合わせに由来する配列を含む、請求項7に記載の方法。
【請求項９】
ヘルパーウイルス配列が、プラスミド、ウイルスベクター、ファージ、酵母人工染色体（YAC）、バクテリア人工染色体（BAC）、またはそれらの組み合わせ内に含まれる、請求項7または8に記載の方法。
【請求項１０】
請求項7〜9のいずれか一項に記載の方法によって生成された、複数のAAVベクター粒子。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２３】
[本発明1001]
カプシドタンパク質VP1およびカプシドタンパク質VP3を任意の組み合わせで含むアデノ随伴ウイルス（AAV）カプシドであって、カプシドタンパク質VP1が、1つまたは1つよりも多い第1のAAV血清型由来であり、カプシドタンパク質VP3が、1つまたは1つよりも多い第2のAAV血清型由来であり、第1のAAV血清型のうちの少なくとも1つが、第2のAAV血清型のうちの少なくとも1つと異なる、前記AAVカプシド。
[本発明1002]
1つまたは1つよりも多い第3のAAV血清型由来であるカプシドタンパク質VP2を任意の組み合わせで含み、1つまたは1つよりも多い第3のAAV血清型のうちの少なくとも1つが、第1のAAV血清型および／または第2のAAV血清型と異なる、本発明1001のAAVカプシド。
[本発明1003]
カプシドタンパク質VP1.5を含む、本発明1002のAAVカプシド。
[本発明1004]
1つまたは1つよりも多い第4のAAV血清型由来であるカプシドタンパク質VP1.5を任意の組み合わせで含み、1つまたは1つよりも多い第4のAAV血清型のうちの少なくとも1つが、第1のAAV血清型および／または第2のAAV血清型と異なる、本発明1001のAAVカプシド。
[本発明1005]
カプシドタンパク質VP2を含む、本発明1004のAAVカプシド。
[本発明1006]
カプシドタンパク質VP1およびカプシドタンパク質VP2を任意の組み合わせで含むアデノ随伴ウイルス（AAV）カプシドであって、カプシドタンパク質VP1が、1つまたは1つよりも多い第1のAAV血清型由来であり、カプシドタンパク質VP2が、1つまたは1つよりも多い第2のAAV血清型由来であり、第1のAAV血清型のうちの少なくとも1つが、第2のAAV血清型のうちの少なくとも1つと異なる、前記AAVカプシド。
[本発明1007]
1つまたは1つよりも多い第3のAAV血清型由来であるカプシドタンパク質VP3を任意の組み合わせで含み、1つまたは1つよりも多い第3のAAV血清型のうちの少なくとも1つが、第1のAAV血清型および／または第2のAAV血清型と異なる、本発明1006のAAVカプシド。
[本発明1008]
カプシドタンパク質VP1.5を含む、本発明1007のAAVカプシド。
[本発明1009]
カプシドタンパク質VP1およびカプシドタンパク質VP1.5を任意の組み合わせで含むアデノ随伴ウイルス（AAV）カプシドであって、カプシドタンパク質VP1が、1つまたは1つよりも多い第1のAAV血清型由来であり、カプシドタンパク質VP1.5が、1つまたは1つよりも多い第2のAAV血清型由来であり、第1のAAV血清型のうちの少なくとも1つが、第2のAAV血清型のうちの少なくとも1つと異なる、前記AAVカプシド。
[本発明1010]
1つまたは1つよりも多い第3のAAV血清型由来であるカプシドタンパク質VP3を任意の組み合わせで含み、1つまたは1つよりも多い第3のAAV血清型のうちの少なくとも1つが、第1のAAV血清型および／または第2のAAV血清型と異なる、本発明1009のAAVカプシド。
[本発明1011]
カプシドタンパク質VP2を含む、本発明1010のAAVカプシド。
[本発明1012]
1つまたは1つよりも多い第1のAAV血清型、1つまたは1つよりも多い第2のAAV血清型、1つまたは1つよりも多い第3のAAV血清型、および1つまたは1つよりも多い第4のAAV血清型が、表3に記載されるAAV血清型からなる群より任意の組み合わせで選択される、前記本発明のいずれかのAAVカプシド。
[本発明1013]
キメラカプシドVP1タンパク質、キメラカプシドVP2タンパク質、キメラカプシドVP3タンパク質、および／またはキメラカプシドVP1.5タンパク質を含む、前記本発明のいずれかのAAVカプシド。
[本発明1014]
カプシドタンパク質VP2を欠く、本発明1001、1003、1004、1009、または1010のいずれかのAAVカプシド。
[本発明1015]
AAV2/8/9である、本発明1001のAAVカプシド。
[本発明1016]
H-AAV82である、本発明1001のAAVカプシド。
[本発明1017]
H-AAV92である、本発明1001のAAVカプシド。
[本発明1018]
H-AAV82G9である、本発明1001のAAVカプシド。
[本発明1019]
AAV2/8 3：1である、本発明1001のAAVカプシド。
[本発明1020]
AAV2/8 1：1である、本発明1001のAAVカプシド。
[本発明1021]
AAV2/8 1：3である、本発明1001のAAVカプシド。
[本発明1022]
AAV8/9である、本発明1001のAAVカプシド。
[本発明1023]
LK3、LK0l-19、AAV-DJ、Olig001、rAAV2-レトロ、AAV-LiC、AAV0Keral、AAV-Kera2、AAV-Kera3、AAV 7m8、AAVl,9、AAVr3.45、AAVクローン32、AAVクローン83、AAV-U87R7-C5、AAV ShH13、AAV ShH19、AAV Ll-12、AAV HAE-1、AAV HAE-2、AAVバリアントShH10、AAV2.5T、AAV LSl-4、AAV Lsm、AAV1289、AAVHSC 1-17、AAV2 Rec 1-4、AAV8BP2、AAV-Bl、AAV-PHP.B、AAV9.45、AAV9.61、AAV9.47、AAVM41、AAV2ディスプレイ型ペプチド、AAV2-GMN、AAV9-ペプチドディスプレイ型、AAV8およびAAV9ペプチドディスプレイ型、AAVpo2.1、AAVpo4、AAVpo5、AAVpo6、AAV rh、AAV Hu、AAV-Go.1、AAV-1110.l、DAAV、AAAV、AAV8 K137R、AAV Anc80L65、AAV2G9、AAV2 265挿入型-AAV2/265D、AAV2.5、AAV3 SASTG、AAV2i8、AAV8G9、AAV2チロシン変異体AAV2 Y-F、AAV8 Y-F、AAV9 Y-F、AAV6 Y-F、AAV6.2、ならびにそれらの任意の組み合わせからなる群より選択されるAAVカプシドタンパク質を含む、本発明1001のAAVカプシド。
[本発明1024]
（a）前記本発明のいずれかのAAVカプシド；および
（b）少なくとも1つの末端反復配列を含む核酸であって、該AAVカプシドにより包まれている核酸
を含む、ウイルスベクター。
[本発明1025]
（a）AAV粒子を組み立てるために必要な全ての機能および遺伝子を一緒に提供する1種もしくは複数種のプラスミドを宿主細胞にトランスフェクトする工程；
（b）1種もしくは複数種の核酸構築物をパッケージング細胞株もしくはプロデューサー細胞株に導入して、AAV粒子を組み立てるために必要な全ての機能および遺伝子を一緒に提供する工程；
（c）AAV粒子を組み立てるために必要な全ての機能および遺伝子を一緒に提供する1種もしくは複数種の組み換えバキュロウイルスベクターを宿主細胞に導入する工程；ならびに／または
（d）AAV粒子を組み立てるために必要な全ての機能および遺伝子を一緒に提供する1種もしくは複数種の組み換えヘルペスウイルスベクターを宿主細胞に導入する工程
を含む、前記本発明のいずれかのAAVカプシドを含むAAV粒子を作製する方法。
[本発明1026]
カプシドタンパク質VP1およびカプシドタンパク質VP2を任意の組み合わせで含むアデノ随伴ウイルス（AAV）カプシドであって、カプシドタンパク質VP1が、1つまたは1つよりも多い第1のAAV血清型由来であり、カプシドタンパク質VP2が、1つまたは1つよりも多い第2のAAV血清型由来であり、カプシドタンパク質VP3が、1つまたは1つよりも多い第1のAAV血清型由来であり、第1のAAV血清型のうちの少なくとも1つが、第2のAAV血清型のうちの少なくとも1つおよび第3のAAV血清型のうちの1つと異なる、前記AAVカプシド。
[本発明1027]
Repタンパク質が、第1のアデノ随伴ウイルス（AAV）血清型由来であり、カプシドタンパク質VP1、VP2、およびVP3が、Repタンパク質と異なる第2のAAV血清型由来である、AAV。
[本発明1028]
Repタンパク質が、第1のアデノ随伴ウイルス（AAV）血清型由来であり、カプシドタンパク質VP1、VP2、およびVP3が、2つ以上の異なるAAV血清型由来であり、該カプシドタンパク質が、Repタンパク質のAAV血清型と異なる2つ以上の異なるAAV血清型由来である、AAV。
[本発明1029]
Repタンパク質が、第1のアデノ随伴ウイルス（AAV）血清型由来であり、カプシドタンパク質VP1、VP2、およびVP3が、2つ以上の異なるAAV血清型由来であり、Repタンパク質のAAV血清型が、カプシドタンパク質のAAV血清型のうちの1つと同じである、AAV。
[本発明1030]
Repタンパク質が、AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、または各AAVの任意のキメラのうちの1つより選択される、本発明1028のAAV。
[本発明1031]
Repタンパク質が、AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、または各AAVの任意のキメラのうちの1つより選択される、本発明1029のAAV。
[本発明1032]
VP1、VP2、およびVP3カプシドタンパク質が、AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、または各AAVの任意のキメラのうちの2つ以上より選択される、本発明1028のAAV。
[本発明1033]
VP1、VP2、およびVP3カプシドタンパク質が、AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、または各AAVの任意のキメラのうちの2つ以上より選択される、本発明1029のAAV。
[本発明1034]
Repタンパク質が、第1のアデノ随伴ウイルス（AAV）血清型由来であり、AAV中のカプシドタンパク質VP1が、2つ以上の異なるAAV血清型由来であり、該カプシドタンパク質が、Repタンパク質のAAV血清型と異なる2つ以上の異なるAAV血清型由来である、AAV。
[本発明1035]
AAV中の1つのAAV血清型のVP1カプシドと第2のAAV血清型のVP1カプシドとの比が、1：1である、本発明1034のAAV。
[本発明1036]
AAV中の1つのAAV血清型のVP1カプシドと第2のAAV血清型のVP1カプシドとの比が、1：1ではない、本発明1034のAAV。
[本発明1037]
AAV中の1つのAAV血清型のVP1カプシドと第2のAAV血清型のVP1カプシドとの比が、事前に決定されている、本発明1034のAAV。
[本発明1038]
VP1カプシドの3つ以上のAAV血清型が、事前に決定された比でAAV中に存在する、本発明1034のAAVカプシド。
[本発明1039]
Repタンパク質が、第1のアデノ随伴ウイルス（AAV）血清型由来であり、AAV中のカプシドタンパク質VP2が、2つ以上の異なるAAV血清型由来であり、該カプシドタンパク質が、Repタンパク質のAAV血清型と異なる2つ以上の異なるAAV血清型由来である、AAV。
[本発明1040]
AAV中の1つのAAV血清型のVP2カプシドと第2のAAV血清型のVP2カプシドとの比が、1：1である、本発明1034のAAV。
[本発明1041]
AAV中の1つのAAV血清型のVP2カプシドと第2のAAV血清型のVP2カプシドとの比が、1：1ではない、本発明1034のAAV。
[本発明1042]
AAV中の1つのAAV血清型のVP2カプシドと第2のAAV血清型のVP2カプシドとの比が、事前に決定されている、本発明1034のAAV。
[本発明1043]
VP2カプシドの3つ以上のAAV血清型が、事前に決定された比でAAV中に存在する、本発明1034のAAVカプシド。
[本発明1044]
Repタンパク質が、第1のアデノ随伴ウイルス（AAV）血清型由来であり、AAV中のカプシドタンパク質VP3が、2つ以上の異なるAAV血清型由来であり、該カプシドタンパク質が、Repタンパク質のAAV血清型と異なる2つ以上の異なるAAV血清型由来である、AAV。
[本発明1045]
AAV中の1つのAAV血清型のVP3カプシドと第2のAAV血清型のVP3カプシドとの比が、1：1である、本発明1034のAAV。
[本発明1046]
AAV中の1つのAAV血清型のVP3カプシドと第2のAAV血清型のVP3カプシドとの比が、1：1ではない、本発明1034のAAV。
[本発明1047]
AAV中の1つのAAV血清型のVP3カプシドと第2のAAV血清型のVP3カプシドとの比が、事前に決定されている、本発明1034のAAV。
[本発明1048]
VP3カプシドの3つ以上のAAV血清型が、事前に決定された比でAAV中に存在する、本発明1034のAAVカプシド。
[本発明1049]
AAVが、第1のAAV血清型由来のRepタンパク質ならびにRepタンパク質とは異なる第2のAAV血清型由来のカプシドタンパク質VP1、VP2、およびVP3を含有する第1のヘルパープラスミドと、疾患の処置のための遺伝子のコード領域を含有する第2のヘルパープラスミドとを使用して製造される、AAVの製造方法。
[本発明1050]
疾患が、ムコ多糖障害（例えば、スライ症候群［-グルクロニダーゼ］、ハーラー症候群［a-L-イズロニダーゼ］、シャイエ症候群［a-L-イズロニダーゼ］、ハーラー-シャイエ症候群［a-L-イズロニダーゼ］、ハンター症候群［イズロン酸スルファターゼ］、サンフィリッポ症候群A［ヘパランスルファミダーゼ］、B［N-アセチルグルコサミニダーゼ］、C［アセチル-CoA：a-グルコサミニドアセチルトランスフェラーゼ］、D［N-アセチルグルコサミン6-スルファターゼ］、モルキオ症候群A［ガラクトース-6-硫酸スルファターゼ］、B［-ガラクトシダーゼ］、マロトー-ラミー症候群［N-アセチルガラクトサミン-4-スルファターゼ］、その他）、ファブリー病（a-ガラクトシダーゼ）、ゴーシェ病（グルコセレブロシダーゼ）、またはグリコーゲン貯蔵障害（例えば、ポンペ病；リソソーム酸性a-グルコシダーゼ）などのリソソーム貯蔵障害より選択される、本発明1049の方法。
[本発明1051]
AAVが、第1のAAV血清型由来のRepタンパク質を含有する第1のヘルパープラスミド、Repタンパク質と異なる第2のAAV血清型由来のカプシドタンパク質VP1、VP2、およびVP3を含有する第2のヘルパープラスミド、ならびに疾患の処置のための遺伝子のコード領域を含有する第3のヘルパープラスミドを使用して製造される、AAVの製造方法。
[本発明1052]
疾患が、ムコ多糖障害（例えば、スライ症候群［-グルクロニダーゼ］、ハーラー症候群［a-L-イズロニダーゼ］、シャイエ症候群［a-L-イズロニダーゼ］、ハーラー-シャイエ症候群［a-L-イズロニダーゼ］、ハンター症候群［イズロン酸スルファターゼ］、サンフィリッポ症候群A［ヘパランスルファミダーゼ］、B［N-アセチルグルコサミニダーゼ］、C［アセチル-CoA：a-グルコサミニドアセチルトランスフェラーゼ］、D［N-アセチルグルコサミン6-スルファターゼ］、モルキオ症候群A［ガラクトース-6-硫酸スルファターゼ］、B［-ガラクトシダーゼ］、マロトー-ラミー症候群［N-アセチルガラクトサミン-4-スルファターゼ］、その他）、ファブリー病（a-ガラクトシダーゼ）、ゴーシェ病（グルコセレブロシダーゼ）、またはグリコーゲン貯蔵障害（例えば、ポンペ病；リソソーム酸性a-グルコシダーゼ）などのリソソーム貯蔵障害より選択される、本発明1052の方法。
[本発明1053]
AAVが、第1のAAV血清型由来のRepタンパク質を含有する第1のヘルパープラスミド、Repタンパク質のAAV血清型とは異なる2つ以上の異なるAAV血清型由来のカプシドタンパク質VP1、VP2、およびVP3を含有する第2のヘルパープラスミド、ならびに疾患の処置のための遺伝子のコード領域を含有する第3のヘルパープラスミドを使用して製造される、AAVの製造方法。
[本発明1054]
疾患が、ムコ多糖障害（例えば、スライ症候群［-グルクロニダーゼ］、ハーラー症候群［a-L-イズロニダーゼ］、シャイエ症候群［a-L-イズロニダーゼ］、ハーラー-シャイエ症候群［a-L-イズロニダーゼ］、ハンター症候群［イズロン酸スルファターゼ］、サンフィリッポ症候群A［ヘパランスルファミダーゼ］、B［N-アセチルグルコサミニダーゼ］、C［アセチル-CoA：a-グルコサミニドアセチルトランスフェラーゼ］、D［N-アセチルグルコサミン6-スルファターゼ］、モルキオ症候群A［ガラクトース-6-硫酸スルファターゼ］、B［-ガラクトシダーゼ］、マロトー-ラミー症候群［N-アセチルガラクトサミン-4-スルファターゼ］、その他）、ファブリー病（a-ガラクトシダーゼ）、ゴーシェ病（グルコセレブロシダーゼ）、またはグリコーゲン貯蔵障害（例えば、ポンペ病；リソソーム酸性a-グルコシダーゼ）などのリソソーム貯蔵障害より選択される、本発明1051の方法。
[本発明1055]
AAVが、第1のAAV血清型由来のRepタンパク質と、2つ以上の異なるAAV血清型由来であるカプシドタンパク質VP1、VP2、およびVP3とを含有する第1のヘルパープラスミド、ならびに疾患の処置のための遺伝子のコード領域を含有する第2のプラスミドを使用して製造され、さらに、Repタンパク質のAAV血清型が、カプシドタンパク質のAAV血清型のうちの1つと同じである、AAVの製造方法。
[本発明1056]
疾患が、ムコ多糖障害（例えば、スライ症候群［-グルクロニダーゼ］、ハーラー症候群［a-L-イズロニダーゼ］、シャイエ症候群［a-L-イズロニダーゼ］、ハーラー-シャイエ症候群［a-L-イズロニダーゼ］、ハンター症候群［イズロン酸スルファターゼ］、サンフィリッポ症候群A［ヘパランスルファミダーゼ］、B［N-アセチルグルコサミニダーゼ］、C［アセチル-CoA：a-グルコサミニドアセチルトランスフェラーゼ］、D［N-アセチルグルコサミン6-スルファターゼ］、モルキオ症候群A［ガラクトース-6-硫酸スルファターゼ］、B［-ガラクトシダーゼ］、マロトー-ラミー症候群［N-アセチルガラクトサミン-4-スルファターゼ］、その他）、ファブリー病（a-ガラクトシダーゼ）、ゴーシェ病（グルコセレブロシダーゼ）、またはグリコーゲン貯蔵障害（例えば、ポンペ病；リソソーム酸性a-グルコシダーゼ）などのリソソーム貯蔵障害より選択される、本発明1051の方法。
本発明のこれらおよび他の局面は、後述の本発明の説明に、より詳細に扱われる。