【手続補正書】
【提出日】令和3年8月5日(2021.8.5)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
i)ヘリックス-ターン-ヘリックス転写因子の炭水化物結合ドメイン、又は炭水化物結合ドメインの変種;
ii)化学発光ドナードメイン;及び
iii)アクセプタードメイン;
を含む、炭水化物を検出するためのセンサー分子であって、
炭水化物が炭水化物結合ドメインに結合すると、アクセプタードメインに対する化学発光ドナードメインの空間的位置及び/又は双極子配向が変化する、センサー分子。
【請求項２】
ヘリックス-ターン-ヘリックス転写因子が、細菌性ヘリックス-ターン-ヘリックス転写因子又はその変種であり、例えばGNTR転写因子、又はその変種である、請求項1に記載のセンサー分子。
【請求項３】
細菌性ヘリックス-ターン-ヘリックス転写因子又はその変種が、配列番号9及び56から74の任意の1つ又は複数に提供されるものと少なくとも30%同一であるアミノ酸配列を有する、請求項1又は2に記載のセンサー分子。
【請求項４】
炭水化物が二糖であり、例えば乳糖である、請求項1から3のいずれか一項に記載のセンサー分子。
【請求項５】
化学発光ドナードメインが生物発光タンパク質であり、例えばウミシイタケルシフェラーゼ、ホタルルシフェラーゼ、腔腸動物ルシフェラーゼ、北アメリカグローワームルシフェラーゼ、コメツキムシルシフェラーゼ、レイルロードワームルシフェラーゼ、細菌性ルシフェラーゼ、ガウシアルシフェラーゼ、エクオリン、アラキノカンパルシフェラーゼ、オプロフォラス・グラシリロストリス(Oplophorus gracilirostris)ルシフェラーゼ或いはそのいずれか1つの生物学的に活性な変種若しくは断片又は2つ以上のキメラからなる群から選択されるルシフェラーゼであり;及び/又は
アクセプタードメインが蛍光アクセプタードメインであり、例えば緑色蛍光タンパク質(GFP)、GFPの青色蛍光変種(BFP)、GFPのシアン蛍光変種(CFP)、GFPの黄色蛍光変種(YFP)、高感度GFP(EGFP)、高感度CFP(ECFP)、高感度YFP(EYFP)、GFPS65T、Emerald、Venus、mOrange、Topaz、GFPuv、不安定化EGFP(dEGFP)、不安定化ECFP(dECFP)、不安定化EYFP(dEYFP)、HcRed、t-HcRed、DsRed、DsRed2、t-ダイマー2、tダイマー2(12)、mRFP1、ポシロポリン、ウミシイタケGFP、モンスターGFP、paGFP、Kaedeタンパク質、tdTomato、mCherry、TagRFP、TurBoFB及びフィコビリンタンパク質並びにこれらのいずれか1つの生物学的に活性な変種又は断片からなる群から選択される蛍光アクセプタードメインである、請求項1から4のいずれか一項に記載のセンサー分子。
【請求項６】
単一ポリペプチドである、請求項1から5のいずれか一項に記載のセンサー分子。
【請求項７】
i)試料を請求項1から6のいずれか一項に記載のセンサー分子と接触させる工程;
ii)試料の存在下で、アクセプタードメインに対する化学発光ドナードメインの空間的位置及び/又は双極子配向が変化したかどうか決定する工程;及び
iii)任意選択で試料中の炭水化物の濃度を決定する工程
を含む、試料中の炭水化物を検出する方法であって、
アクセプタードメインに対する化学発光ドナードメインの空間的位置及び/又は双極子配向の変化が、炭水化物が試料中に存在することを示す、方法。
【請求項８】
試料が乳製品を含む、例えば乳である、請求項7に記載の方法。
【請求項９】
請求項6に記載のセンサー分子をコードするポリヌクレオチド、請求項6に記載のセンサー分子をコードするポリヌクレオチドを含むベクター、又は前記ポリヌクレオチド若しくは前記ベクターを含む宿主細胞。
【請求項１０】
共鳴エネルギー転移ドナードメイン及び共鳴エネルギー転移アクセプタードメインに共有結合的に連結されている細菌性BgaR転写因子又はその変種を含む、乳糖又はラクツロースを検出するためのセンサー分子であって、乳糖又はラクツロースが転写因子に結合すると、アクセプタードメインに対するドナードメインの空間的位置及び/又は双極子配向が変化する、センサー分子。
【請求項１１】
BgaR転写因子又はその変種が、配列番号1に提供されるものと少なくとも60%、70%、80%、85%、90%、95%、98%又は99%同一であるアミノ酸配列を有する、請求項10に記載のセンサー分子。
【請求項１２】
共鳴エネルギー転移ドナードメインが、蛍光タンパク質であり、例えば緑色蛍光タンパク質(GFP)、GFPの青色蛍光変種(BFP)、GFPのシアン蛍光変種(CFP)、GFPの黄色蛍光変種(YFP)、高感度GFP(EGFP)、高感度CFP(ECFP)、高感度YF(EYFP)、GFPS65T、Emerald、Venus、mOrange、Topaz、GFPuv、不安定化EGFP(dEGFP)、不安定化ECFP(dECFP)、不安定化EYFP(dEYFP)、HcRed、t-HcRed、DsRed、DsRed2、t-ダイマー2、tダイマー2(12)、mRFP1、ポシロポリン、ウミシイタケGFP、モンスターGFP、paGFP、Kaedeタンパク質、tdTomato、mCherry、TagRFP、TurBoFB及びフィコビリンタンパク質並びにこれらのいずれか1つの生物学的に活性な変種又は断片からなる群から選択される蛍光タンパク質であり、例えばCFP又はその変種であり;及び/又は
共鳴エネルギー転移アクセプタードメインが、蛍光タンパク質であり、例えば緑色蛍光タンパク質(GFP)、GFPの青色蛍光変種(BFP)、GFPのシアン蛍光変種(CFP)、GFPの黄色蛍光変種(YFP)、高感度GFP(EGFP)、高感度CFP(ECFP)、高感度YFP(EYFP)、GFPS65T、Emerald、Venus、mOrange、Topaz、GFPuv、不安定化EGFP(dEGFP)、不安定化ECFP(dECFP)、不安定化EYFP(dEYFP)、HcRed、t-HcRed、DsRed、DsRed2、t-ダイマー2、tダイマー2(12)、mRFP1、ポシロポリン、ウミシイタケGFP、モンスターGFP、paGFP、Kaedeタンパク質、tdTomato、mCherry、TagRFP、TurBoFB及びフィコビリンタンパク質並びにこれらのいずれか1つの生物学的に活性な変種又は断片からなる群から選択される蛍光タンパク質であり、例えばYFP又はその変種である、請求項10又は11に記載のセンサー分子。
【請求項１３】
配列番号23に提供されるポリペプチドと少なくとも60%、70%、80%、85%、90%、95%、98%、99%又は100%の配列同一性を有する、請求項12に記載のセンサー分子。
【請求項１４】
i)試料を請求項10から13のいずれか一項に記載のセンサー分子と接触させる工程;
ii)試料の存在下で、アクセプタードメインに対するドナードメインの空間的位置及び/又は双極子配向が変化したかどうかを決定する工程;及び
iii)任意選択で試料中の乳糖又はラクツロースの濃度を決定する工程
を含む、試料中の乳糖又はラクツロースを検出する方法であって、
アクセプタードメインに対する化学発光ドナードメインの空間的位置及び/又は双極子配向の変化が、乳糖又はラクツロースが試料中に存在することを示す、方法。
【請求項１５】
試料が乳製品を含む、請求項14に記載の方法。