【手続補正書】
【提出日】令和3年6月4日(2021.6.4)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号１３（ただし、配列番号１３には少なくとも１つのＮ結合グリコシル化部位の存在が示されていない）のアミノ酸配列を含むエリスロポエチン（ＥＰＯ）ポリペプチドであって、Ｎ結合グリコシル化部位が、アスパラギン−ｘａａ−セリンまたはアスパラギン−ｘａａ−スレオニン配列を含み、式中、ｘａａはプロリン以外の任意のアミノ酸であり、いずれのＮ結合グリコシル化部位も、別のＮ結合グリコシル化部位と重複しない、ＥＰＯポリペプチド。
【請求項２】
少なくとも１つのＮ結合グリコシル化部位のそれぞれが、
配列番号１３の位置２１〜２３、２９〜３１、３０〜３２、３４〜３６、３５〜３７、５３〜５５、５６〜５８、６５〜６７、６６〜６８、７１〜７３、７２〜７４、７３〜７５、８６〜８８、８７〜８９、８８〜９０、８９〜９１、９０〜９２、１１１〜１１３、１１４〜１１６、１１５〜１１７、１１６〜１１８、１１７〜１１９、１１８〜１２０、１１９〜１２１、１２０〜１２２、１２１〜１２３、１２２〜１２４、１２３〜１２５、１２４〜１２６、１３５〜１３７、１３６〜１３８、１５８〜１６０、および１６２〜１６４から選択される位置
に存在する、請求項１に記載のＥＰＯポリペプチド。
【請求項３】
配列番号１３の位置８７に相当する位置にバリンを含む、請求項１または請求項２に記載のＥＰＯポリペプチド。
【請求項４】
ａ）配列番号１３の位置２１に相当する位置にアスパラギン、配列番号１３の位置２２に相当する位置にプロリン以外の任意のアミノ酸、および配列番号１３の位置２３に相当する位置にセリンもしくはスレオニン；
ｂ）配列番号１３の位置２９に相当する位置にアスパラギン、配列番号１３の位置３０に相当する位置にプロリン以外の任意のアミノ酸、および配列番号１３の位置３１に相当する位置にセリンもしくはスレオニン；
ｃ）配列番号１３の位置３０に相当する位置にアスパラギン、配列番号１３の位置３１に相当する位置にプロリン以外の任意のアミノ酸、および配列番号１３の位置３２に相当する位置にセリンもしくはスレオニン；
ｄ）配列番号１３の位置３４に相当する位置にアスパラギン、配列番号１３の位置３５に相当する位置にプロリン以外の任意のアミノ酸、および配列番号１３の位置３６に相当する位置にセリンもしくはスレオニン；
ｅ）配列番号１３の位置３５に相当する位置にアスパラギン、配列番号１３の位置３６に相当する位置にプロリン以外の任意のアミノ酸、および配列番号１３の位置３７に相当する位置にセリンもしくはスレオニン；
ｆ）配列番号１３の位置５３に相当する位置にアスパラギン、配列番号１３の位置５４に相当する位置にプロリン以外の任意のアミノ酸、および配列番号１３の位置５５に相当する位置にセリンもしくはスレオニン；
ｇ）配列番号１３の位置５６に相当する位置にアスパラギン、配列番号１３の位置５７に相当する位置にプロリン以外の任意のアミノ酸、および配列番号１３の位置５８に相当する位置にセリンもしくはスレオニン；
ｈ）配列番号１３の位置６５に相当する位置にアスパラギン、配列番号１３の位置６６に相当する位置にプロリン以外の任意のアミノ酸、および配列番号１３の位置６７に相当する位置にセリンもしくはスレオニン；
ｉ）配列番号１３の位置６６に相当する位置にアスパラギン、配列番号１３の位置６７に相当する位置にプロリン以外の任意のアミノ酸、および配列番号１３の位置６８に相当する位置にセリンもしくはスレオニン；
ｊ）配列番号１３の位置７１に相当する位置にアスパラギン、配列番号１３の位置７２に相当する位置にプロリン以外の任意のアミノ酸、および配列番号１３の位置７３に相当する位置にセリンもしくはスレオニン；
ｋ）配列番号１３の位置７２に相当する位置にアスパラギン、配列番号１３の位置７３に相当する位置にプロリン以外の任意のアミノ酸、および配列番号１３の位置７４に相当する位置にセリンもしくはスレオニン；
ｌ）配列番号１３の位置７３に相当する位置にアスパラギン、配列番号１３の位置７４に相当する位置にプロリン以外の任意のアミノ酸、および配列番号１３の位置７５に相当する位置にセリンもしくはスレオニン；
ｍ）配列番号１３の位置８６に相当する位置にアスパラギン、配列番号１３の位置８７に相当する位置にプロリン以外の任意のアミノ酸、および配列番号１３の位置８８に相当する位置にセリンもしくはスレオニン；
ｎ）配列番号１３の位置８７に相当する位置にアスパラギン、配列番号１３の位置８８に相当する位置にプロリン以外の任意のアミノ酸、および配列番号１３の位置８９に相当する位置にセリンもしくはスレオニン；
ｏ）配列番号１３の位置８８に相当する位置にアスパラギン、配列番号１３の位置８９に相当する位置にプロリン以外の任意のアミノ酸、および配列番号１３の位置９０に相当する位置にセリンもしくはスレオニン；
ｐ）配列番号１３の位置８９に相当する位置にアスパラギン、配列番号１３の位置９０に相当する位置にプロリン以外の任意のアミノ酸、および配列番号１３の位置９１に相当する位置にセリンもしくはスレオニン；
ｑ）配列番号１３の位置９０に相当する位置にアスパラギン、配列番号１３の位置９１に相当する位置にプロリン以外の任意のアミノ酸、および配列番号１３の位置９２に相当する位置にセリンもしくはスレオニン；
ｒ）配列番号１３の位置１１１に相当する位置にアスパラギン、配列番号１３の位置１１２に相当する位置にプロリン以外の任意のアミノ酸、および配列番号１３の位置１１３に相当する位置にセリンもしくはスレオニン；
ｓ）配列番号１３の位置１１４に相当する位置にアスパラギン、配列番号１３の位置１１５に相当する位置にプロリン以外の任意のアミノ酸、および配列番号１３の位置１１６に相当する位置にセリンもしくはスレオニン；
ｔ）配列番号１３の位置１１５に相当する位置にアスパラギン、配列番号１３の位置１１６に相当する位置にプロリン以外の任意のアミノ酸、および配列番号１３の位置１１７に相当する位置にセリンもしくはスレオニン；
ｕ）配列番号１３の位置１１６に相当する位置にアスパラギン、配列番号１３の位置１１７に相当する位置にプロリン以外の任意のアミノ酸、および配列番号１３の位置１１８に相当する位置にセリンもしくはスレオニン；
ｖ）配列番号１３の位置１１７に相当する位置にアスパラギン、配列番号１３の位置１１８に相当する位置にプロリン以外の任意のアミノ酸、および配列番号１３の位置１１９に相当する位置にセリンもしくはスレオニン；
ｗ）配列番号１３の位置１１８に相当する位置にアスパラギン、配列番号１３の位置１１９に相当する位置にプロリン以外の任意のアミノ酸、および配列番号１３の位置１２０に相当する位置にセリンもしくはスレオニン；
ｘ）配列番号１３の位置１１９に相当する位置にアスパラギン、配列番号１３の位置１２０に相当する位置にプロリン以外の任意のアミノ酸、および配列番号１３の位置１２１に相当する位置にセリンもしくはスレオニン；
ｙ）配列番号１３の位置１２０に相当する位置にアスパラギン、配列番号１３の位置１２１に相当する位置にプロリン以外の任意のアミノ酸、および配列番号１３の位置１２２に相当する位置にセリンもしくはスレオニン；
ｚ）配列番号１３の位置１２１に相当する位置にアスパラギン、配列番号１３の位置１２２に相当する位置にプロリン以外の任意のアミノ酸、および配列番号１３の位置１２３に相当する位置にセリンもしくはスレオニン；
ａａ）配列番号１３の位置１２２に相当する位置にアスパラギン、配列番号１３の位置１２３に相当する位置にプロリン以外の任意のアミノ酸、および配列番号１３の位置１２４に相当する位置にセリンもしくはスレオニン；
ｂｂ）配列番号１３の位置１２３に相当する位置にアスパラギン、配列番号１３の位置１２４に相当する位置にプロリン以外の任意のアミノ酸、および配列番号１３の位置１２５に相当する位置にセリンもしくはスレオニン；
ｃｃ）配列番号１３の位置１２４に相当する位置にアスパラギン、配列番号１３の位置１２５に相当する位置にプロリン以外の任意のアミノ酸、および配列番号１３の位置１２６に相当する位置にセリンもしくはスレオニン；
ｄｄ）配列番号１３の位置１３５に相当する位置にアスパラギン、配列番号１３の位置１３６に相当する位置にプロリン以外の任意のアミノ酸、および配列番号１３の位置１３７に相当する位置にセリンもしくはスレオニン；
ｅｅ）配列番号１３の位置１３６に相当する位置にアスパラギン、配列番号１３の位置１３７に相当する位置にプロリン以外の任意のアミノ酸、および配列番号１３の位置１３８に相当する位置にセリンもしくはスレオニン；
ｆｆ）配列番号１３の位置１５８に相当する位置にアスパラギン、配列番号１３の位置１５９に相当する位置にプロリン以外の任意のアミノ酸、および配列番号１３の位置１６０に相当する位置にセリンもしくはスレオニン；及び／または
ｇｇ）配列番号１３の位置１６２に相当する位置にアスパラギン、配列番号１３の位置１６３に相当する位置にプロリン以外の任意のアミノ酸、および配列番号１３の位置１６４に相当する位置にセリンもしくはスレオニン
を含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。
【請求項５】
グリコシル化されている、ＰＥＧ化されている、及び／またはシアル酸付加されている、請求項１〜４のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド。
【請求項６】
等電点電気泳動法によって決定される、約１〜約３．５、約１．５〜約３．５、約２〜約３．５、約２．５〜約３．５、約３〜約３．５、約３．５もしくはそれ未満、または約３もしくはそれ未満の等電点の値域を有する、請求項１〜５のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチドを複数含む組成物であって、任意選択的にＥＰＯポリペプチドの高度シアル酸付加画分を含む、組成物。
【請求項７】
等電点電気泳動法によって決定される、約３．５〜約６、約４〜約６、約４．５〜約６、約５〜約６、約５．５〜約６、約３．５〜約５、約４〜約５、約４．５〜約５、約３．５もしくはそれを上回る、約４もしくはそれを上回る、または約４．５もしくはそれを上回る等電点の値域を有する、請求項１〜５のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチドを複数含む組成物であって、任意選択的にＥＰＯポリペプチドの低度シアル酸付加画分を含む、組成物。
【請求項８】
請求項１〜４のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチドをコードする単離された核酸。
【請求項９】
請求項８に記載の核酸を含むベクター。
【請求項１０】
請求項１〜４のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチドをコードする核酸を含む第１のベクター；および調節配列を含む第２のベクターを含む発現系。
【請求項１１】
請求項８に記載の核酸、請求項９に記載のベクター、または請求項１０に記載の発現系を含む宿主細胞。
【請求項１２】
ＥＰＯポリペプチドを含む組成物を生成する方法であって、請求項１１に記載の宿主細胞を培養することおよびＥＰＯポリペプチドを単離することを含む、方法。
【請求項１３】
請求項１〜５のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド、請求項６もしくは７に記載の組成物、請求項８に記載の核酸、請求項９に記載のベクター、または請求項１０に記載の発現系、および薬学的に許容される担体を含む、薬学的組成物。
【請求項１４】
ＥＰＯポリペプチドおよび薬学的に許容される担体を含む薬学的組成物であって、薬学的に許容される担体が、ａ）リン酸ナトリウム、塩化ナトリウム、およびポリソルベート８０；ｂ）リン酸ナトリウム、塩化ナトリウム、およびポリソルベート２０；ｃ）クエン酸ナトリウム、塩化ナトリウム、およびポリソルベート８０；またはｄ）クエン酸ナトリウム、塩化ナトリウム、およびポリソルベート２０を含む、薬学的組成物。
【請求項１５】
伴侶動物種にＥＰＯポリペプチドを送達する方法であって、請求項１〜５のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド、請求項６もしくは７に記載の組成物、または請求項１３もしくは１４に記載の薬学的組成物を非経口的に、任意選択的に筋肉内経路、腹腔内経路、脳脊髄内経路、皮下経路、動脈内経路、滑膜内経路、髄腔内経路または吸入経路で、投与することを含み、任意選択的に伴侶動物種が、ネコ、イヌまたはウマである、方法。
【請求項１６】
伴侶動物種にＥＰＯポリペプチドをコードする単離された核酸を送達する方法であって、請求項８に記載の核酸、請求項９に記載のベクター、または請求項１０に記載の発現系を非経口的に投与することを含み、任意選択的に伴侶動物種が、ネコ、イヌまたはウマである、方法。
【請求項１７】
貧血を有する伴侶動物種を治療する方法であって、請求項１〜５のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド、請求項６もしくは７に記載の組成物、請求項８に記載の核酸、請求項９に記載のベクター、請求項１０に記載の発現系、または請求項１３もしくは１４に記載の薬学的組成物の治療的有効量を前記伴侶動物種に投与することを含み、任意選択的にＥＰＯポリペプチド、組成物、核酸、ベクター、発現系、または薬学的組成物が非経口的に、任意選択的に筋肉内経路、腹腔内経路、脳脊髄内経路、皮下経路、動脈内経路、滑膜内経路、髄腔内経路または吸入経路で、投与され、任意選択的に伴侶動物種が、ネコ、イヌまたはウマであり、任意選択的に貧血が、慢性腎臓疾患、炎症性腸疾患または脊髄形成異常症によって引き起こされる、方法。
【請求項１８】
伴侶動物種が、ＥＰＯポリペプチド、組成物、核酸、ベクター、発現系または薬学的組成物の投与前に、約１５％〜約３０％、約１５％〜約２５％、約２０％〜約２５％、約２５％〜約３０％、約１５％を下回る、約１８％を下回る、約２０％を下回る、約２５％を下回る、約２９％を下回る、または約３０％を下回るベースラインヘマトクリットパーセンテージを有する、請求項１５〜１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
標的細胞においてＥＰＯポリペプチドを発現させる方法であって、
ａ）核酸、ベクターまたは発現系を標的細胞内に移入することであって、
ｉ）請求項１〜４のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチドをコードする核酸、および
ｉｉ）調節配列
を含む核酸、ベクターまたは発現系を移入すること；ならびに
ｂ）ＥＰＯポリペプチドの発現を助ける条件下で細胞を培養すること
を含む、方法。
【請求項２０】
ａ）配列番号１３の位置５、８、１０、１１、１４、１５、７８、９６、９７、９９、１００、１０３、１０４、１０７、１０８もしくは１１０から選択される位置に相当する位置に少なくとも１つのアミノ酸置換；
ｂ）配列番号１３の位置５、８、１０、１１、１４、１５、７８、９６、９７、９９、１００、１０３、１０４、１０７、１０８もしくは１１０から選択される位置に相当する、配列番号９の少なくとも１つのアミノ酸置換；
ｃ）配列番号１３の位置５、８、１０、１１、１４、１５、７８、９６、９７、９９、１００、１０３、１０４、１０７、１０８もしくは１１０から選択される位置に相当する、配列番号１０の少なくとも１つのアミノ酸置換；
ｄ）配列番号１３の位置５、８、１０、１１、１４、１５、７８、９６、９７、９９、１００、１０３、１０４、１０７、１０８もしくは１１０から選択される位置に相当する、配列番号１１の少なくとも１つのアミノ酸置換；または
ｅ）配列番号１３の位置５、８、１０、１１、１４、１５、７８、９６、９７、９９、１００、１０３、１０４、１０７、１０８もしくは１１０から選択される位置に相当する、配列番号１２の少なくとも１つのアミノ酸置換
を含み、任意選択的に、配列番号１３の位置１０３に相当する位置でアラニンが置換されている、エリスロポエチン（ＥＰＯ）ポリペプチド。
【請求項２１】
ＥＰＯポリペプチドが、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８または配列番号１９のアミノ酸配列を含む、請求項２０に記載のＥＰＯポリペプチド。
【請求項２２】
請求項２０または２１に記載のＥＰＯポリペプチドをコードする、単離された核酸。
【請求項２３】
請求項２２に記載の核酸を含む宿主細胞。
【請求項２４】
ＥＰＯポリペプチドを含む組成物を生成する方法であって、請求項２３に記載の宿主細胞を培養することおよびＥＰＯポリペプチドを単離することを含む、方法。
【請求項２５】
請求項２０または２１に記載のＥＰＯポリペプチドおよび薬学的に許容される担体を含む薬学的組成物。
【請求項２６】
配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０または配列番号３１のアミノ酸配列；および異種ポリペプチド配列を含むネコエリスロポエチン受容体（ＥＰＯＲ）ポリペプチドの細胞外ドメインを含むポリペプチド。
【請求項２７】
請求項２６に記載のポリペプチドをコードする単離された核酸。
【請求項２８】
請求項２７に記載の核酸を含む宿主細胞。
【請求項２９】
請求項２８に記載の宿主細胞を培養することおよびポリペプチドを単離することを含む、ポリペプチドを生成する方法。
【請求項３０】
請求項２６に記載のポリペプチドおよび薬学的に許容される担体を含む薬学的組成物。
【請求項３１】
多血症を有する対象を治療する方法であって、請求項２０もしくは２１に記載のＥＰＯポリペプチド、請求項２６に記載のポリペプチド、請求項２２もしくは２７に記載の核酸、または請求項２５もしくは３０に記載の薬学的組成物の治療的有効量を前記対象に投与することを含み、任意選択的にＥＰＯポリペプチド、ポリペプチド、核酸、または薬学的組成物が非経口的に、任意選択的に筋肉内経路、腹腔内経路、脳脊髄内経路、皮下経路、動脈内経路、滑膜内経路、髄腔内経路または吸入経路で、投与され、任意選択的に対象が伴侶動物種であり、任意選択的に伴侶動物種がネコ、イヌまたはウマである、方法。
【請求項３２】
貧血を有する伴侶動物種を治療するための医薬であって、請求項１〜５のいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチド、請求項６もしくは７に記載の組成物、請求項８に記載の核酸、請求項９に記載のベクター、請求項１０に記載の発現系、または請求項１３もしくは１４に記載の薬学的組成物を含み、任意選択的にＥＰＯポリペプチド、組成物、核酸、ベクター、発現系、または薬学的組成物が非経口的に、任意選択的に筋肉内経路、腹腔内経路、脳脊髄内経路、皮下経路、動脈内経路、滑膜内経路、髄腔内経路または吸入経路で、投与され、任意選択的に伴侶動物種が、ネコ、イヌまたはウマであり、任意選択的に貧血が、慢性腎臓疾患、炎症性腸疾患または脊髄形成異常症によって引き起こされる、医薬。
【請求項３３】
ＥＰＯポリペプチド、組成物、核酸、ベクター、発現系または薬学的組成物が、投与前に約１５％〜約３０％、約１５％〜約２５％、約２０％〜約２５％、約２５％〜約３０％、約１５％を下回る、約１８％を下回る、約２０％を下回る、約２５％を下回る、約２９％を下回る、または約３０％を下回るベースラインヘマトクリットパーセンテージを有する、伴侶動物種に投与される、請求項３２に記載の医薬。
【請求項３４】
多血症を有する対象を治療するための医薬であって、請求項２０もしくは２１に記載のＥＰＯポリペプチド、請求項２６に記載のポリペプチド、請求項２２もしくは２７に記載の核酸、または請求項２５もしくは３０に記載の薬学的組成物を含み、任意選択的にＥＰＯポリペプチド、ポリペプチド、核酸、または薬学的組成物が非経口的に、任意選択的に筋肉内経路、腹腔内経路、脳脊髄内経路、皮下経路、動脈内経路、滑膜内経路、髄腔内経路または吸入経路で、投与され、任意選択的に対象が伴侶動物種であり、任意選択的に伴侶動物種がネコ、イヌまたはウマであり、または任意選択的に対象がヒトである、医薬。