【手続補正書】
【提出日】令和3年4月28日(2021.4.28)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）ビリオンであって、（ａ）変異アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）キャプシドタンパク質であって、対応する親ＡＡＶキャプシドタンパク質に対して前記キャプシドタンパク質のＧＨループにおけるペプチド挿入を含み、前記ペプチド挿入が、アミノ酸配列ＩＳＤＱＴＫＨ（配列番号１４）を含む、変異アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）キャプシドタンパク質と、（ｂ）血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）の活性を阻害するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む、異種核酸であって、前記ヌクレオチド配列が、
（ｉ）配列番号６５として示されるヌクレオチド配列（アフリベルセプト）、
（ｉｉ）配列番号６９として示されるヌクレオチド配列（ｓｃ−ラニビズマブ−ＬＨ１）、
（ｉｉｉ）配列番号７４として示されるヌクレオチド配列（ブロルシズマブ）、および
（ｉｖ）（ｉ）〜（ｉｉｉ）のいずれかと少なくとも９０％同一のヌクレオチド配列からなる群から選択される、異種核酸と、を含む、組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）ビリオン。
【請求項２】
前記ペプチド挿入が、７〜１１アミノ酸長であり、アミノ酸配列Ｙ１Ｙ２ＩＳＤＱＴＫＨＹ３を含み、Ｙ１〜Ｙ３の各々が独立して、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、およびＰｒｏから選択される、請求項１に記載のｒＡＡＶ。
【請求項３】
前記ペプチド挿入が、アミノ酸配列ＬＡＩＳＤＱＴＫＨＡ（配列番号２８）を含む、請求項２に記載のｒＡＡＶ。
【請求項４】
前記挿入部位が、ＡＡＶ２（配列番号２）のＶＰ１のアミノ酸５８７および５８８に対応するアミノ酸の間、または別のＡＡＶ血清型のキャプシドタンパク質中の対応する位置にある、請求項１〜３のいずれか１項に記載のｒＡＡＶ。
【請求項５】
前記キャプシドタンパク質が、ＡＡＶ２（配列番号２）のＶＰ１キャプシドに対する１つ以上のアミノ酸置換、または別のＡＡＶ血清型における１つ以上の対応する置換を含む、請求項１〜４のいずれか１項に記載のｒＡＡＶ。
【請求項６】
前記キャプシドタンパク質が、ＡＡＶ２（配列番号２）のＶＰ１キャプシドに対するＰ３４Ａアミノ酸置換、または別のＡＡＶ血清型における対応する置換を含む、請求項１〜５のいずれか１項に記載のｒＡＡＶ。
【請求項７】
前記キャプシドタンパク質が、（ｉ）アミノ酸配列ＩＳＤＱＴＫＨ（配列番号１４）および（ｉｉ）Ｐ３４Ａアミノ酸置換を含み、かつ配列番号４２として示される配列と少なくとも９０％同一である、請求項１〜６のいずれか１項に記載のｒＡＡＶ。
【請求項８】
前記キャプシドタンパク質が、配列番号４２として示されるアミノ酸配列から本質的になる、請求項７に記載のｒＡＡＶ。
【請求項９】
前記ヌクレオチド配列が、配列番号６９として示される配列（ｓｃ−ラニビズマブＬＨ）の全長または配列番号６９のヌクレオチド６１〜１５７８と少なくとも９０％同一であり、かつ配列番号７１として示されるアミノ酸配列をコードするか、または配列番号７１のアミノ酸２１〜５２５のアミノ酸配列をコードする、請求項８に記載のｒＡＡＶ。
【請求項１０】
前記ヌクレオチド配列が、配列番号６９のヌクレオチド６１〜１５７８を含む、請求項９に記載のｒＡＡＶ。
【請求項１１】
前記ヌクレオチド配列が、配列番号６５として示される配列（アフリベルセプト）の全長または配列番号６５のヌクレオチド７９〜１３７７と少なくとも９０％同一であり、かつ配列番号６６として示されるアミノ酸配列をコードするか、または配列番号６６のアミノ酸２７〜４５８のアミノ酸配列をコードする、請求項８に記載のｒＡＡＶ。
【請求項１２】
前記ヌクレオチド配列が、配列番号６５のヌクレオチド７９〜１３７７を含む、請求項１１に記載のｒＡＡＶ。
【請求項１３】
前記異種核酸が、配列番号７４として示されるヌクレオチド配列（ブロルシズマブ）もしくはそれと少なくとも９０％同一の配列を含みかつ配列番号７５として示されるアミノ酸配列をコードするか、または配列番号７４のヌクレオチド６１〜８１６もしくはそれと少なくとも９０％同一の配列を含みかつ配列番号７５のアミノ酸２１〜２７１のアミノ酸配列をコードする、請求項８に記載のｒＡＡＶ。
【請求項１４】
前記ヌクレオチド配列が、配列番号７４のヌクレオチド６１〜８１６を含むか、または配列番号７４のヌクレオチド１〜８１６を含む、請求項１３に記載のｒＡＡＶ。
【請求項１５】
前記異種核酸が、配列番号６５として示されるヌクレオチド配列またはそれと少なくとも９０％同一の配列を含み、かつ配列番号６６として示されるアミノ酸配列をコードする、請求項８に記載のｒＡＡＶ。
【請求項１６】
前記異種核酸が、配列番号６５として示されるヌクレオチド配列またはそれと少なくとも９８％同一の配列を含み、かつ配列番号６６として示されるアミノ酸配列をコードする、請求項１５に記載のｒＡＡＶ。
【請求項１７】
前記異種核酸が、血管新生を阻害するポリペプチドまたは干渉ＲＮＡをコードするヌクレオチド配列をさらに含む、請求項１〜１６のいずれか１項に記載のｒＡＡＶ。
【請求項１８】
前記ポリペプチドが、エンドスタチン；タムスタチン；アンジオスタチン；および色素上皮由来因子（ＰＥＤＦ）から選択される、ならびに／あるいは前記干渉ＲＮＡが、ＶＥＧＦａ、ＶＥＧＦｂ、ＶＥＧＦｃ、ＶＥＧＦｄ、ＶＥＧＦＲ１、ＶＥＧＦＲ２、ＰＧＦ、ＰＤＧＦおよびアンジオポエチンからなる群から選択される血管新生促進遺伝子産物の発現を減少させる、請求項１７に記載のｒＡＡＶ。
【請求項１９】
血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）の活性を阻害するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列が、発現制御配列に作動可能に連結される、請求項１〜１８のいずれか１項に記載のｒＡＡＶ。
【請求項２０】
前記発現制御配列が、ＣＭＶ、ＣＡＧおよびＣＢＡプロモーターから選択される、請求項１９に記載のｒＡＡＶ。
【請求項２１】
前記変異キャプシドタンパク質が、網膜細胞に対する前記対応する親ＡＡＶキャプシドタンパク質の感染性と比較して、前記網膜細胞の増加した感染性を付与する、請求項１〜２０のいずれか１項に記載のｒＡＡＶ。
【請求項２２】
請求項１〜２１のいずれか１項に記載のｒＡＡＶおよび薬学的に許容される担体を含む、薬学的組成物。
【請求項２３】
対象の網膜細胞、脈絡膜細胞、レンズ細胞、毛様細胞、虹彩細胞、視神経細胞、および／または角膜細胞にＶＥＧＦ阻害剤を送達するための方法における使用のための、請求項１〜２１のいずれか１項に記載のｒＡＡＶを含む組成物または請求項２２に記載の薬学的組成物。
【請求項２４】
滲出型（新生血管、滲出性）加齢黄斑変性；網膜静脈閉塞後の黄斑浮腫；網膜静脈閉塞に起因する網膜血管新生；糖尿病性黄斑浮腫、糖尿病性網膜症；近視性黄斑変性；網膜静脈分枝閉塞、半網膜静脈閉塞、および網膜中心静脈閉塞；未熟児網膜症；特発性脈絡膜新生血管；近視黄斑変性ならびに続発性網膜および脈絡膜新生血管；網膜毛細血管拡張症；血管新生緑内障；硝子体出血；ならびに網膜疾患に続発する網膜および脈絡膜新生血管から選択される、ＶＥＧＦａ関連眼疾患の治療のための医薬の製造における、請求項１〜１９のいずれか１項に記載のｒＡＡＶまたは有効量の請求項２２に記載の薬学的組成物の使用。
【請求項２５】
前記ＶＥＧＦａ関連眼疾患が、滲出型（新生血管、滲出性）加齢黄斑変性、糖尿病性黄斑浮腫、網膜静脈閉塞後の黄斑浮腫、糖尿病性網膜症、および近視性脈絡膜血管新生から選択される、請求項２４に記載の使用。
【請求項２６】
前記ｒＡＡＶビリオンまたは薬学的組成物が、硝子体内投与に適切である、請求項２４または２５に記載の使用。
【請求項２７】
滲出型（新生血管、滲出性）加齢黄斑変性；網膜静脈閉塞後の黄斑浮腫；網膜静脈閉塞に起因する網膜血管新生；糖尿病性黄斑浮腫、糖尿病性網膜症；近視性黄斑変性；網膜静脈分枝閉塞、半網膜静脈閉塞、および網膜中心静脈閉塞；未熟児網膜症；特発性脈絡膜新生血管；近視黄斑変性ならびに続発性網膜および脈絡膜新生血管；網膜毛細血管拡張症；血管新生緑内障；硝子体出血；ならびに網膜疾患に続発する網膜および脈絡膜新生血管から選択される、ＶＥＧＦａ関連眼疾患の治療における使用のための薬学的組成物であって、請求項１〜１９のいずれか１項に記載のｒＡＡＶビリオンを含む、薬学的組成物。
【請求項２８】
前記ＶＥＧＦａ関連眼疾患が、滲出型（新生血管、滲出性）加齢黄斑変性、糖尿病性黄斑浮腫、網膜静脈閉塞後の黄斑浮腫、糖尿病性網膜症、および近視性脈絡膜血管新生から選択される、請求項２７に記載の薬学的組成物。
【請求項２９】
薬学的に許容される担体およびｒＡＡＶビリオンを含む薬学的組成物であって、前記ｒＡＡＶビリオンは、（ｉ）配列番号４２として示されるアミノ酸配列から本質的になるキャプシドタンパク質と、（ｉｉ）配列番号６５として示されるヌクレオチド配列またはそれと少なくとも９９％同一の配列を含む異種核酸とを含み、前記ヌクレオチド配列が、ＣＭＶ、ＣＡＧまたはＣＢＡプロモーターを含む発現制御配列に作動可能に連結される、薬学的組成物。
【請求項３０】
前記異種核酸が、血管新生を阻害するポリペプチドまたは干渉ＲＮＡをコードするヌクレオチド配列をさらに含むことを特徴とする、請求項２９に記載の薬学的組成物。
【請求項３１】
前記ポリペプチドが、エンドスタチン；タムスタチン；アンジオスタチン；および色素上皮由来因子（ＰＥＤＦ）から選択される、ならびに／あるいは前記干渉ＲＮＡが、ＶＥＧＦａ、ＶＥＧＦｂ、ＶＥＧＦｃ、ＶＥＧＦｄ、ＶＥＧＦＲ１、ＶＥＧＦＲ２、ＰＧＦ、ＰＤＧＦおよびアンジオポエチンからなる群から選択される血管新生促進遺伝子産物の発現を減少させる、請求項３０に記載の薬学的組成物。
【請求項３２】
滲出型（新生血管、滲出性）加齢黄斑変性、糖尿病性黄斑浮腫、網膜静脈閉塞後の黄斑浮腫、糖尿病性網膜症、または近視性脈絡膜血管新生の治療における使用のための、請求項３０または３１に記載の薬学的組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３２】
本明細書で考察される刊行物は、専ら本出願の出願日前のそれらの開示のために提供される。本明細書中のいかなるものも、本発明が先行発明によりそのような刊行物に先行する資格を有さないことを認めるものとして解釈されるべきではない。さらに、提供される公開日は、実際の公開日とは異なる可能性があり、これは独立して確認する必要があり得る。
特定の実施形態では、例えば、以下が提供される：
（項目１）
組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）ビリオンであって、（ａ）変異アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）キャプシドタンパク質であって、対応する親ＡＡＶキャプシドタンパク質に対して前記キャプシドタンパク質のＧＨループにおけるペプチド挿入を含み、前記ペプチド挿入が、アミノ酸配列ＩＳＤＱＴＫＨ（配列番号１４）を含む、変異アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）キャプシドタンパク質と、（ｂ）血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）の活性を阻害するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む、異種核酸であって、前記ヌクレオチド配列が、
（ｉ）配列番号６９として示されるヌクレオチド配列（ｓｃ−ラニビズマブ−ＬＨ１）、
（ｉｉ）配列番号６５として示されるヌクレオチド配列（アフリベルセプト）、
（ｉｉｉ）配列番号７４として示されるヌクレオチド配列（ブロルシズマブ）、
（ｉｖ）配列番号６７として示されるヌクレオチド配列（ｓｃ−ラニビズマブ−ＨＬ）、
（ｖ）配列番号７０として示されるヌクレオチド配列（ｓｃ−ラニビズマブ−ＬＨ２）、
（ｖｉ）配列番号７２として示されるヌクレオチド配列（ｓｃ−ラニビズマブ−ＬＨ−Ｆｃ）、
（ｖｉｉ）配列番号７６として示されるヌクレオチド配列（ブロルシズマブ−Ｆｃ）、および
（ｖｉｉｉ）（ｉ）〜（ｖｉｉ）のいずれかと少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一のヌクレオチド配列からなる群から選択される、異種核酸と、を含む、組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）ビリオン。
（項目２）
前記ペプチド挿入が、アミノ酸配列Ｙ１Ｙ２ＩＳＤＱＴＫＨＹ３を含み、Ｙ１〜Ｙ３の各々が独立して、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、およびＰｒｏから選択される、項目１に記載のｒＡＡＶ。
（項目３）
前記ペプチド挿入が、アミノ酸配列ＬＡＩＳＤＱＴＫＨＡ（配列番号２８）を含む、項目２に記載のｒＡＡＶ。
（項目４）
前記挿入部位が、ＡＡＶ２（配列番号２）のＶＰ１のアミノ酸５８７および５８８に対応するアミノ酸の間、または別のＡＡＶ血清型のキャプシドタンパク質中の対応する位置にある、項目１〜３のいずれか１項に記載のｒＡＡＶ。
（項目５）
前記キャプシドタンパク質が、ＡＡＶ２（配列番号２）のＶＰ１キャプシドに対する１つ以上のアミノ酸置換、または別のＡＡＶ血清型における１つ以上の対応する置換を含む、項目１〜４のいずれか１項に記載のｒＡＡＶ。
（項目６）
前記キャプシドタンパク質が、ＡＡＶ２（配列番号２）のＶＰ１キャプシドに対するＰ３４Ａアミノ酸置換、または別のＡＡＶ血清型における対応する置換を含む、項目１〜５のいずれか１項に記載のｒＡＡＶ。
（項目７）
前記キャプシドタンパク質が、（ｉ）アミノ酸配列ＩＳＤＱＴＫＨ（配列番号１４）および（ｉｉ）Ｐ３４Ａアミノ酸置換を含み、かつ配列番号４２として示される配列と少なくとも９０％同一、少なくとも９５％同一、または少なくとも９９％同一である、項目１〜６のいずれか１項に記載のｒＡＡＶ。
（項目８）
前記キャプシドタンパク質が、配列番号４２として示されるアミノ酸配列から本質的になる、項目７に記載のｒＡＡＶ。
（項目９）
前記ヌクレオチド配列が、配列番号６９として示される配列（ｓｃ−ラニビズマブＬＨ）の全長または配列番号６９のヌクレオチド６１〜１５７８と少なくとも９０％同一、少なくとも９５％同一、少なくとも９８％同一、少なくとも９９％同一、または１００％同一であり、かつ配列番号７１として示されるアミノ酸配列をコードするか、または配列番号７１のアミノ酸２１〜５２５のアミノ酸配列をコードする、項目８に記載のｒＡＡＶ。
（項目１０）
前記ヌクレオチド配列が、配列番号６９のヌクレオチド６１〜１５７８を含み、好ましくは配列番号６９のヌクレオチド１〜１５７８を含む、項目９に記載のｒＡＡＶ。
（項目１１）
前記ヌクレオチド配列が、配列番号６５として示される配列（アフリベルセプト）の全長または配列番号６５のヌクレオチド７９〜１３７７と少なくとも９０％同一、少なくとも９５％同一、少なくとも９８％同一、少なくとも９９％同一、または１００％同一であり、かつ配列番号６６として示されるアミノ酸配列をコードするか、または配列番号６６のアミノ酸２７〜４５８のアミノ酸配列をコードする、項目８に記載のｒＡＡＶ。
（項目１２）
前記ヌクレオチド配列が、配列番号６５のヌクレオチド７９〜１３７７を含み、好ましくは配列番号６５のヌクレオチド１〜１３７７を含む、項目１１に記載のｒＡＡＶ。
（項目１３）
前記ヌクレオチド配列が、配列番号７４として示される配列（ブロルシズマブ）の全長または配列番号７４のヌクレオチド６１〜８１６と少なくとも９０％同一、少なくとも９５％同一、少なくとも９８％同一、少なくとも９９％同一、または１００％同一であり、かつ配列番号７５として示されるアミノ酸配列をコードするか、または配列番号７５のアミノ酸２１〜２７１のアミノ酸配列をコードする、項目８に記載のｒＡＡＶ。
（項目１４）
前記ヌクレオチド配列が、配列番号７４のヌクレオチド６１〜８１６を含み、好ましくは配列番号７４のヌクレオチド１〜８１６を含む、項目１３に記載のｒＡＡＶ。
（項目１５）
前記ヌクレオチド配列が、配列番号６７として示される配列（ｓｃ−ラニビズマブ−ＨＬ）の全長または配列番号６７のヌクレオチド５８〜１５７５と少なくとも９０％同一、少なくとも９５％同一、少なくとも９８％同一、少なくとも９９％同一、または１００％同一であり、かつ配列番号６８として示されるアミノ酸配列をコードするか、または配列番号６８のアミノ酸２０〜５２４のアミノ酸配列をコードする、項目８に記載のｒＡＡＶ。
（項目１６）
前記ヌクレオチド配列が、配列番号６７のヌクレオチド５８〜１５７５を含み、好ましくは配列番号６７のヌクレオチド１〜１５７５を含む、項目１５に記載のｒＡＡＶ。
（項目１７）
前記異種核酸が、（ｉ）配列番号６５として示される核酸配列と少なくとも９０％同一、少なくとも９５％同一、少なくとも９８％同一、少なくとも９９％同一、または１００％同一であり、配列番号６６として示されるアミノ酸配列をコードする、ヌクレオチド配列、および（ｉｉ）配列番号７４として示される核酸配列と少なくとも９０％同一、少なくとも９５％同一、少なくとも９８％同一、少なくとも９９％同一、または１００％同一であり、配列番号７５として示されるアミノ酸配列をコードする、ヌクレオチド配列を含む、項目８に記載のｒＡＡＶ。
（項目１８）
血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）の活性を阻害するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列が、発現制御配列に作動可能に連結される、項目１〜１７のいずれか１項に記載のｒＡＡＶ。
（項目１９）
前記変異キャプシドタンパク質が、網膜細胞に対する前記対応する親ＡＡＶキャプシドタンパク質の感染性と比較して、前記網膜細胞の増加した感染性を付与する、項目１〜１８のいずれかに記載のｒＡＡＶ。
（項目２０）
項目１〜１９のいずれか１項に記載のｒＡＡＶおよび薬学的に許容される担体を含む、薬学的組成物。
（項目２１）
対象の網膜細胞、脈絡膜細胞、レンズ細胞、毛様細胞、虹彩細胞、視神経細胞、および／または角膜細胞にＶＥＧＦ阻害剤を送達するための方法であって、項目１〜１９のいずれか１項に記載のｒＡＡＶビリオンまたは項目２０に記載の薬学的組成物を前記対象に投与することを含む、方法。
（項目２２）
前記ｒＡＡＶビリオンまたは薬学的組成物が、前記対象に硝子体内投与される、項目２１に記載の方法。
（項目２３）
有効量の項目１〜１９のいずれか１項に記載のｒＡＡＶまたは有効量の項目２０に記載の組成物を前記対象に投与することによる、ＶＥＧＦａ関連眼疾患の治療を必要とする対象における、滲出型（新生血管、滲出性）加齢黄斑変性；網膜静脈閉塞後の黄斑浮腫；網膜静脈閉塞に起因する網膜血管新生；糖尿病性黄斑浮腫、糖尿病性網膜症（非増殖性糖尿病性網膜症および増殖性糖尿病性網膜症の全段階を含む）；近視性黄斑変性；網膜静脈分枝閉塞、半網膜静脈閉塞、および網膜中心静脈閉塞；未熟児網膜症；特発性脈絡膜新生血管；近視黄斑変性ならびに続発性網膜および脈絡膜新生血管；網膜毛細血管拡張症；血管新生緑内障；硝子体出血；ぶどう膜炎（ｕｖｅｔｉｓ）、外傷、網膜変性障害、遺伝性網膜および／または脈絡膜疾患、眼腫瘍、角膜および虹彩血管新生を含むがこれらに限定されない、網膜疾患に続発する網膜および脈絡膜新生血管から選択される、ＶＥＧＦａ関連眼疾患を治療するための方法。
（項目２４）
前記ＶＥＧＦａ関連眼疾患が、滲出型（新生血管、滲出性）加齢黄斑変性、糖尿病性黄斑浮腫、網膜静脈閉塞後の黄斑浮腫、糖尿病性網膜症、および近視性脈絡膜血管新生から選択される、項目２３に記載の方法。
（項目２５）
前記ｒＡＡＶまたは薬学的組成物が、前記対象に硝子体内投与される、項目２３または２４に記載の方法。
（項目２６）
前記対象が、ヒトである、項目２１〜２５のいずれか１項に記載の方法。