【手続補正書】
【提出日】令和3年6月17日(2021.6.17)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
細胞膜透過ペプチドおよびウイルスを含む、ウイルスの細胞内送達のためのウイルス送達複合体であって、前記細胞膜透過ペプチドが、ＡＤＧＮ−１００ペプチド、ＶＥＰＥＰ−６ペプチド、ＰＥＰ−１ペプチド、ＰＥＰ−２ペプチド、ＰＥＰ−３ペプチド、ＶＥＰＥＰ−３ペプチド、およびＶＥＰＥＰ−９ペプチドからなる群から選択される、ウイルス送達複合体。
【請求項２】
前記細胞膜透過ペプチドが、ＡＤＧＮ−１００ペプチドである、請求項１に記載のウイルス送達複合体。
【請求項３】
前記細胞膜透過ペプチドが、配列番号５３〜７０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項２に記載のウイルス送達複合体。
【請求項４】
前記細胞膜透過ペプチドが、配列番号７９または８０のアミノ酸配列を含む、請求項２に記載のウイルス送達複合体。
【請求項５】
前記細胞膜透過ペプチドが、ＶＥＰＥＰ−６ペプチドである、請求項１に記載のウイルス送達複合体。
【請求項６】
前記細胞膜透過ペプチドが、配列番号１５〜４０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項５に記載のウイルス送達複合体。
【請求項７】
前記細胞膜透過ペプチドが、配列番号７７のアミノ酸配列を含む、請求項５に記載のウイルス送達複合体。
【請求項８】
前記細胞膜透過ペプチドが、ＶＥＰＥＰ−９ペプチドである、請求項１に記載のウイルス送達複合体。
【請求項９】
前記細胞膜透過ペプチドが、配列番号４１〜５２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項８に記載のウイルス送達複合体。
【請求項１０】
前記細胞膜透過ペプチドが、配列番号７８のアミノ酸配列を含む、請求項８に記載のウイルス送達複合体。
【請求項１１】
前記細胞膜透過ペプチドが、ＶＥＰＥＰ−３ペプチドである、請求項１に記載のウイルス送達複合体。
【請求項１２】
前記細胞膜透過ペプチドが、配列番号１〜１４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１１に記載のウイルス送達複合体。
【請求項１３】
前記細胞膜透過ペプチドが、配列番号７５または７６のアミノ酸配列を含む、請求項１１に記載のウイルス送達複合体。
【請求項１４】
前記細胞膜透過ペプチドが、ＰＥＰ−１、ＰＥＰ−２またはＰＥＰ−３ペプチドである、請求項１に記載のウイルス送達複合体。
【請求項１５】
前記細胞膜透過ペプチドが、配列番号７１〜７３のうちいずれか１つのアミノ酸配列を含む、請求項１４に記載のウイルス送達複合体。
【請求項１６】
前記細胞膜透過ペプチドが、前記ウイルスに共有結合によって連結している、請求項１に記載のウイルス送達複合体。
【請求項１７】
前記細胞膜透過ペプチドが、前記細胞膜透過ペプチドのＮ末端に共有結合によって連結している１つまたは複数の部分をさらに含み、前記１つまたは複数の部分が、アセチル、脂肪酸、コレステロール、ポリエチレングリコール、核内局在化シグナル、核外輸送シグナル、抗体、多糖類およびターゲティング分子からなる群から選択される、請求項１から１６のいずれか一項に記載のウイルス送達複合体。
【請求項１８】
前記細胞膜透過ペプチドが、前記細胞膜透過ペプチドのＣ末端に共有結合によって連結している１つまたは複数の部分をさらに含み、前記１つまたは複数の部分が、システアミド、システイン、チオール、アミド、必要に応じて置換されているニトリロ三酢酸、カルボキシル、必要に応じて置換されている直鎖状または分枝状Ｃ１〜Ｃ６アルキル、一級または二級アミン、オシド誘導体、脂質、リン脂質、脂肪酸、コレステロール、ポリエチレングリコール、核内局在化シグナル、核外輸送シグナル、抗体、多糖類およびターゲティング分子からなる群から選択される、請求項１から１７のいずれか一項に記載のウイルス送達複合体。
【請求項１９】
前記ウイルス送達複合体中の前記細胞膜透過ペプチドの少なくとも一部が、連結によりターゲティング部分に連結している、請求項１から１８のいずれか一項に記載のウイルス送達複合体。
【請求項２０】
前記ウイルスが、組換えウイルスである、請求項１〜１９のいずれか一項に記載のウイルス送達複合体。
【請求項２１】
前記組換えウイルスが、組換えアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）、アデノウイルス、レンチウイルス、レトロウイルス、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）、ポックスウイルス、エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）、ワクシニアウイルスまたはヒトサイトメガロウイルス（ｈＣＭＶ）である、請求項２０に記載のウイルス送達複合体。
【請求項２２】
前記細胞膜透過ペプチドの前記ウイルス（Ｖｇ、ｐｆｕまたはＭＯＩ単位）に対するモル比が、約１：１〜約１×１０８：１の間である、請求項１〜２１のいずれか一項に記載のウイルス送達複合体。
【請求項２３】
前記ウイルス送達複合体の平均直径が、約２０ｎｍ〜約１０００ｎｍの間である、請求項１から２２のいずれか一項に記載のウイルス送達複合体。
【請求項２４】
請求項１から２３のいずれか一項に記載のウイルス送達複合体を含むコアを含むナノ粒子。
【請求項２５】
前記コアが、１つまたは複数の追加の、請求項１から２３のいずれか一項に記載のウイルス送達複合体をさらに含む、請求項２４に記載のナノ粒子。
【請求項２６】
前記ナノ粒子中の前記細胞膜透過ペプチドの少なくとも一部が、連結によりターゲティング部分に連結している、請求項２４または２５に記載のナノ粒子。
【請求項２７】
前記コアが、周囲細胞膜透過ペプチドを含むシェルにより被覆されている、請求項２４から２６のいずれか一項に記載のナノ粒子。
【請求項２８】
請求項１から２３のいずれか一項に記載のウイルス送達複合体または請求項２４から２７のいずれか一項に記載のナノ粒子と、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物。
【請求項２９】
請求項１から２３のいずれか一項に記載のウイルス送達複合体を調製する方法であって、前記細胞膜透過ペプチドを前記１つまたは複数のウイルスと組み合わせるステップを含み、それによって前記ウイルス送達複合体を形成する方法。
【請求項３０】
１つまたは複数のウイルスを細胞に送達するための組成物であって、請求項１から２３のいずれか一項に記載のウイルス送達複合体または請求項２４から２７のいずれか一項に記載のナノ粒子を含み、前記ウイルス送達複合体または前記ナノ粒子が、前記１つまたは複数のウイルスを含み、前記組成物は、前記細胞と接触されることを特徴とする、組成物。
【請求項３１】
前記細胞が、顆粒球、マスト細胞、単球、樹状細胞、Ｂ細胞、Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞、線維芽細胞、筋肉細胞、心臓細胞、肝細胞、肺前駆細胞または神経細胞である、請求項３０に記載の組成物。
【請求項３２】
前記ウイルスが、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＴＩＭ−３、ＢＴＬＡ、ＶＩＳＴＡ、ＬＡＧ−３、ＣＴＬＡ−４、ＴＩＧＩＴ、４−１ＢＢ、ＯＸ４０、ＣＤ２７、ＴＩＭ−１、ＣＤ２８、ＨＶＥＭ、ＧＩＴＲおよびＩＣＯＳからなる群から選択される遺伝子内の配列を標的とする、請求項３１に記載の組成物。
【請求項３３】
個体の疾患を処置するための、請求項２８に記載の医薬組成物。
【請求項３４】
前記疾患が、がん、糖尿病、自己免疫性疾患、血液疾患、心疾患、血管性疾患、炎症性疾患、線維性疾患、ウイルス感染性疾患、遺伝性疾患、眼疾患、肝臓疾患、肺疾患、筋肉疾患、酵素欠損疾患、リソソーム蓄積症、神経学的疾患、腎臓疾患、老化および変性疾患、ならびにコレステロールレベル異常によって特徴付けられる疾患からなる群から選択される、請求項３３に記載の医薬組成物。
【請求項３５】
前記疾患が、がんであり、前記がんが、固形腫瘍であり、前記医薬組成物が、成長因子およびサイトカイン、細胞表面受容体、シグナル伝達分子およびキナーゼ、転写因子および他の転写調節因子、タンパク質発現および修飾の制御因子、腫瘍抑制因子、ならびにアポトーシスおよび転移の制御因子からなる群から選択される１つまたは複数のタンパク質の発現を調節する１つまたは複数のウイルスを含む、ウイルス送達複合体またはナノ粒子を含む、請求項３３に記載の医薬組成物。
【請求項３６】
前記疾患が、ウイルス感染症であり、前記医薬組成物が、前記ウイルス感染性疾患の発症および／または進行に関与する１つまたは複数のタンパク質の発現を調節する１つまたは複数のウイルスを含む、ウイルス送達複合体またはナノ粒子を含む、請求項３３に記載の医薬組成物。
【請求項３７】
前記疾患が、遺伝性疾患であり、前記医薬組成物が、前記遺伝性疾患の発症および／または進行に関与する１つまたは複数のタンパク質の発現を調節する１つまたは複数のウイルスを含む、ウイルス送達複合体またはナノ粒子を含む、請求項３３に記載の医薬組成物。
【請求項３８】
前記疾患が、老化または変性疾患であり、前記医薬組成物が、前記老化または変性疾患の発症および／または進行に関与する１つまたは複数のタンパク質の発現を調節する１つまたは複数のウイルスを含む、ウイルス送達複合体またはナノ粒子を含む、請求項３３に記載の医薬組成物。
【請求項３９】
前記疾患が、線維性または炎症性疾患であり、前記医薬組成物が、前記線維性または炎症性疾患の発症および／または進行に関与する２つまたはそれより多いタンパク質の発現を調節する１つまたは複数のウイルスを含む、ウイルス送達複合体またはナノ粒子を含む、請求項３３に記載の医薬組成物。
【請求項４０】
前記個体がヒトである、請求項３３から３９のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項４１】
請求項１から２３のいずれか一項に記載のウイルス送達複合体および／または請求項２４から２７のいずれか一項に記載のナノ粒子を含む組成物を含むキット。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３０】
一部の実施形態では、上記の実施形態のいずれかによるウイルス送達複合体および／または上記の実施形態のいずれかによるナノ粒子を含む組成物を含むキットが提供される。
本発明は、例えば以下の項目を提供する。
（項目１）
細胞膜透過ペプチドおよびウイルスを含む、ウイルスの細胞内送達のためのウイルス送達複合体であって、前記細胞膜透過ペプチドが、ＰＥＰ−１ペプチド、ＰＥＰ−２ペプチド、ＰＥＰ−３ペプチド、ＶＥＰＥＰ−３ペプチド、ＶＥＰＥＰ−６ペプチド、ＶＥＰＥＰ−９ペプチドおよびＡＤＧＮ−１００ペプチドからなる群から選択される、ウイルス送達複合体。
（項目２）
前記細胞膜透過ペプチドが、ＶＥＰＥＰ−３ペプチドである、項目１に記載のウイルス送達複合体。
（項目３）
前記細胞膜透過ペプチドが、配列番号１〜１４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、項目２に記載のウイルス送達複合体。
（項目４）
前記細胞膜透過ペプチドが、配列番号７５または７６のアミノ酸配列を含む、項目２に記載のウイルス送達複合体。
（項目５）
前記細胞膜透過ペプチドが、ＶＥＰＥＰ−６ペプチドである、項目１に記載のウイルス送達複合体。
（項目６）
前記細胞膜透過ペプチドが、配列番号１５〜４０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、項目５に記載のウイルス送達複合体。
（項目７）
前記細胞膜透過ペプチドが、配列番号７７のアミノ酸配列を含む、項目５に記載のウイルス送達複合体。
（項目８）
前記細胞膜透過ペプチドが、ＶＥＰＥＰ−９ペプチドである、項目１に記載のウイルス送達複合体。
（項目９）
前記細胞膜透過ペプチドが、配列番号４１〜５２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、項目８に記載のウイルス送達複合体。
（項目１０）
前記細胞膜透過ペプチドが、配列番号７８のアミノ酸配列を含む、項目８に記載のウイルス送達複合体。
（項目１１）
前記細胞膜透過ペプチドが、ＡＤＧＮ−１００ペプチドである、項目１に記載のウイルス送達複合体。
（項目１２）
前記細胞膜透過ペプチドが、配列番号５３〜７０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、項目１１に記載のウイルス送達複合体。
（項目１３）
前記細胞膜透過ペプチドが、配列番号７９または８０のアミノ酸配列を含む、項目１１に記載のウイルス送達複合体。
（項目１４）
前記細胞膜透過ペプチドが、ＰＥＰ−１、ＰＥＰ−２またはＰＥＰ−３ペプチドである、項目１に記載のウイルス送達複合体。
（項目１５）
前記細胞膜透過ペプチドが、配列番号７１〜７３のうちいずれか１つのアミノ酸配列を含む、項目１４に記載のウイルス送達複合体。
（項目１６）
前記細胞膜透過ペプチドが、前記ウイルスに共有結合によって連結している、項目１に記載のウイルス送達複合体。
（項目１７）
前記細胞膜透過ペプチドが、前記細胞膜透過ペプチドのＮ末端に共有結合によって連結している１つまたは複数の部分をさらに含み、前記１つまたは複数の部分が、アセチル、脂肪酸、コレステロール、ポリエチレングリコール、核内局在化シグナル、核外輸送シグナル、抗体、多糖類およびターゲティング分子からなる群から選択される、項目１から１６のいずれか一項に記載のウイルス送達複合体。
（項目１８）
前記細胞膜透過ペプチドが、前記細胞膜透過ペプチドのＣ末端に共有結合によって連結している１つまたは複数の部分をさらに含み、前記１つまたは複数の部分が、システアミド、システイン、チオール、アミド、必要に応じて置換されているニトリロ三酢酸、カルボキシル、必要に応じて置換されている直鎖状または分枝状Ｃ１〜Ｃ６アルキル、一級または二級アミン、オシド誘導体、脂質、リン脂質、脂肪酸、コレステロール、ポリエチレングリコール、核内局在化シグナル、核外輸送シグナル、抗体、多糖類およびターゲティング分子からなる群から選択される、項目１から１７のいずれか一項に記載のウイルス送達複合体。
（項目１９）
前記ウイルス送達複合体中の前記細胞膜透過ペプチドの少なくとも一部が、連結によりターゲティング部分に連結している、項目１から１８のいずれか一項に記載のウイルス送達複合体。
（項目２０）
前記ウイルスが、組換えウイルスである、項目１〜１９のいずれか一項に記載のウイルス送達複合体。
（項目２１）
前記組換えウイルスが、組換えアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）、アデノウイルス、レンチウイルス、レトロウイルス、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）、ポックスウイルス、エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）、ワクシニアウイルスまたはヒトサイトメガロウイルス（ｈＣＭＶ）である、項目２０に記載のウイルス送達複合体。
（項目２２）
前記細胞膜透過ペプチドの前記ウイルス（Ｖｇ、ｐｆｕまたはＭＯＩ単位）に対するモル比が、約１：１〜約１×１０８：１の間である、項目１〜２１のいずれか一項に記載のウイルス送達複合体。
（項目２３）
前記ウイルス送達複合体の平均直径が、約２０ｎｍ〜約１０００ｎｍの間である、項目１から２２のいずれか一項に記載のウイルス送達複合体。
（項目２４）
項目１から２３のいずれか一項に記載のウイルス送達複合体を含むコアを含むナノ粒子。
（項目２５）
前記コアが、１つまたは複数の追加の、項目１から２３のいずれか一項に記載のウイルス送達複合体をさらに含む、項目２４に記載のナノ粒子。
（項目２６）
前記ナノ粒子中の前記細胞膜透過ペプチドの少なくとも一部が、連結によりターゲティング部分に連結している、項目２４または２５に記載のナノ粒子。
（項目２７）
前記コアが、周囲細胞膜透過ペプチドを含むシェルにより被覆されている、項目２４から２６のいずれか一項に記載のナノ粒子。
（項目２８）
項目１から２３のいずれか一項に記載のウイルス送達複合体または項目２４から２７のいずれか一項に記載のナノ粒子と、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物。
（項目２９）
項目１から２３のいずれか一項に記載のウイルス送達複合体を調製する方法であって、前記細胞膜透過ペプチドを前記１つまたは複数のウイルスと組み合わせるステップを含み、それによって前記ウイルス送達複合体を形成する方法。
（項目３０）
１つまたは複数のウイルスを細胞に送達する方法であって、前記細胞を項目１から２３のいずれか一項に記載のウイルス送達複合体または項目２４から２７のいずれか一項に記載のナノ粒子と接触させるステップを含み、前記ウイルス送達複合体または前記ナノ粒子が、前記１つまたは複数のウイルスを含む、方法。
（項目３１）
前記細胞が、顆粒球、マスト細胞、単球、樹状細胞、Ｂ細胞、Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞、線維芽細胞、筋肉細胞、心臓細胞、肝細胞、肺前駆細胞または神経細胞である、項目３０に記載の方法。
（項目３２）
前記ウイルスが、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＴＩＭ−３、ＢＴＬＡ、ＶＩＳＴＡ、ＬＡＧ−３、ＣＴＬＡ−４、ＴＩＧＩＴ、４−１ＢＢ、ＯＸ４０、ＣＤ２７、ＴＩＭ−１、ＣＤ２８、ＨＶＥＭ、ＧＩＴＲおよびＩＣＯＳからなる群から選択される遺伝子内の配列を標的とする、項目３１に記載の方法。
（項目３３）
個体の疾患を処置する方法であって、前記個体に項目２８に記載の医薬組成物の有効量を投与するステップを含む方法。
（項目３４）
前記疾患が、がん、糖尿病、自己免疫性疾患、血液疾患、心疾患、血管性疾患、炎症性疾患、線維性疾患、ウイルス感染性疾患、遺伝性疾患、眼疾患、肝臓疾患、肺疾患、筋肉疾患、酵素欠損疾患、リソソーム蓄積症、神経学的疾患、腎臓疾患、老化および変性疾患、ならびにコレステロールレベル異常によって特徴付けられる疾患からなる群から選択される、項目３３に記載の方法。
（項目３５）
前記疾患が、がんであり、前記がんが、固形腫瘍であり、前記医薬組成物が、成長因子およびサイトカイン、細胞表面受容体、シグナル伝達分子およびキナーゼ、転写因子および他の転写調節因子、タンパク質発現および修飾の制御因子、腫瘍抑制因子、ならびにアポトーシスおよび転移の制御因子からなる群から選択される１つまたは複数のタンパク質の発現を調節する１つまたは複数のウイルスを含む、ウイルス送達複合体またはナノ粒子を含む、項目３３に記載の方法。
（項目３６）
前記疾患が、ウイルス感染症であり、前記医薬組成物が、前記ウイルス感染性疾患の発症および／または進行に関与する１つまたは複数のタンパク質の発現を調節する１つまたは複数のウイルスを含む、ウイルス送達複合体またはナノ粒子を含む、項目３３に記載の方法。
（項目３７）
前記疾患が、遺伝性疾患であり、前記医薬組成物が、前記遺伝性疾患の発症および／または進行に関与する１つまたは複数のタンパク質の発現を調節する１つまたは複数のウイルスを含む、ウイルス送達複合体またはナノ粒子を含む、項目３３に記載の方法。
（項目３８）
前記疾患が、老化または変性疾患であり、前記医薬組成物が、前記老化または変性疾患の発症および／または進行に関与する１つまたは複数のタンパク質の発現を調節する１つまたは複数のウイルスを含む、ウイルス送達複合体またはナノ粒子を含む、項目３３に記載の方法。
（項目３９）
前記疾患が、線維性または炎症性疾患であり、前記医薬組成物が、前記線維性または炎症性疾患の発症および／または進行に関与する２つまたはそれより多いタンパク質の発現を調節する１つまたは複数のウイルスを含む、ウイルス送達複合体またはナノ粒子を含む、項目３３に記載の方法。
（項目４０）
前記個体がヒトである、項目３３から３９のいずれか一項に記載の方法。
（項目４１）
項目１から２３のいずれか一項に記載のウイルス送達複合体および／または項目２４から２７のいずれか一項に記載のナノ粒子を含む組成物を含むキット。