【手続補正書】
【提出日】令和3年9月16日(2021.9.16)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
鳥の卵における雄のヒヨコ胚の致死表現型を誘導可能な様式で誘発するための第１の核酸配列と、前記致死表現型をもたらすための前記第１の核酸配列を前記鳥の細胞のＺ染色体に向けるための第２の核酸配列と、を含むＤＮＡ編集剤。
【請求項２】
前記第１の核酸配列が、致死性タンパク質の発現を制御するスイッチをコードするヌクレオチド配列に操作可能に連結された前記致死性タンパク質をコードし、前記スイッチがインデューサーによって調節される、又は前記第１の核酸配列が、ゲノム編集を行うことができるエンドヌクレアーゼ酵素をコードし、かつ、該エンドヌクレアーゼ酵素の発現を制御するスイッチをコードするヌクレオチド配列と操作可能に連結され、前記スイッチがインデューサーによって調節される、請求項１に記載のＤＮＡ編集剤。
【請求項３】
前記致死性タンパク質が、毒素、アポトーシス促進タンパク質、Ｗｎｔシグナル伝達経路の阻害剤、ＢＭＰアンタゴニストおよびＦＧＦアンタゴニストからなる群から選択される、又は前記エンドヌクレアーゼ酵素がジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）およびカスパーゼ９から成る群より選ばれるＲＮＡ誘導ＤＮＡエンドヌクレアーゼ酵素であり、前記第１の核酸配列がエンドヌクレアーゼ酵素をコードする場合には、前記ＤＮＡ編集剤は鳥の必須遺伝子を標的とする誘導ＲＮＡをコードするヌクレオチド配列をさらに含み、該ヌクレオチド配列は、前記スイッチをコードするヌクレオチド配列と操作可能に連結されている、
請求項２に記載のＤＮＡ編集剤。
【請求項４】
単一分子である、請求項１に記載のＤＮＡ編集剤。
【請求項５】
前記第１の核酸配列および前記第２の核酸配列が非同一分子に含まれる、請求項１に記載のＤＮＡ編集剤。
【請求項６】
前記第２の核酸配列が、
（ｉ）前記鳥の前記Ｚ染色体における標的遺伝子座に隣接する５’領域に実質的に相同である左相同性アーム（ＬＨＡ）ヌクレオチド配列と、
（ｉｉ）前記鳥の前記Ｚ染色体における前記標的遺伝子座に隣接する３’領域に実質的に相同である右相同性アーム（ＲＨＡ）ヌクレオチド配列と、を含む、請求項１に記載のＤＮＡ編集剤。
【請求項７】
前記インデューサーが、熱、超音波、電磁エネルギーおよび化学物質からなる群から選択される、請求項２に記載のＤＮＡ編集剤。
【請求項８】
前記スイッチが、(a)前記インデューサーの存在下で結合して活性酵素を形成するスプリットリコンビナーゼ酵素及び(b) 誘導性プロモーターの少なくとも１つを含む、請求項２に記載のＤＮＡ編集剤。
【請求項９】
前記必須遺伝子がＢＭＰＲ１Ａ、ＢＭＰ２、ＢＭＰ４およびＦＧＦＲ１からなる群から選択される、請求項２に記載のＤＮＡ編集剤。
【請求項１０】
前記電磁エネルギーが可視光の成分であり、任意に、該可視光の成分が青色光である、請求項７に記載のＤＮＡ編集剤。
【請求項１１】
前記鳥が、ニワトリ、シチメンチョウ、アヒルおよびウズラからなる群から選択される、請求項１〜１０のいずれか一項に記載のＤＮＡ編集剤。
【請求項１２】
鳥の細胞のＺ染色体に安定に組み込まれた外因性ポリヌクレオチドを含む前記鳥の細胞を含む細胞集団であって、前記外因性ポリヌクレオチドは、前記鳥の雄の子孫において致死表現型を誘発するためのものである、細胞集団。
【請求項１３】
前記誘発は誘導可能な様式でもたらされる、請求項１２に記載の細胞集団。
【請求項１４】
前記細胞は始原生殖細胞（ＰＧＣ）又は配偶子を含み、任意に、前記ＰＧＣは生殖腺ＰＧＣ、血液ＰＧＣおよび生殖三日月環ＰＧＣからなる群から選択される、請求項１２又は１３に記載の細胞集団。
【請求項１５】
請求項１２〜１４のいずれか１項に記載の細胞集団を含むキメラ鳥。
【請求項１６】
キメラ鳥を生成する方法であって、請求項２２に記載の細胞集団をレシピエント鳥胚に、前記細胞集団の前記ＰＧＣの少なくとも１つが前記レシピエント鳥胚の生殖腺に定着することを可能にするのに十分な条件下で投与し、これによってキメラ鳥を生成することを含み、前記方法は、任意に、前記投与に続いて前記キメラ鳥をインキュベートして孵化させることをさらに含み、任意に、前記キメラ鳥を性的成熟まで飼育することをさらに含み、前記キメラ鳥はドナーＰＧＣに由来する配偶子を産生する、請求項１２〜１４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１７】
前記投与がｉｎ−ｏｖｏ注射によるものである、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記細胞集団が、前記レシピエント鳥と同じ鳥類種又は異なる鳥類種に由来する、請求項１６又は１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記レシピエント胚がＥｙａｌ−Ｇｉｌａｄｉ  ＆  Ｋｏｃｈａｖステージ分類システムによるおよそステージＩＸとＨａｍｂｕｒｇｅｒ  ＆  Ｈａｍｉｌｔｏｎステージ分類システムによるおよそステージ３０との間にあるときに、前記細胞集団が投与される、請求項１６〜１８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２０】
前記レシピエント胚がＨａｍｂｕｒｇｅｒ  ＆  Ｈａｍｉｌｔｏｎステージ分類システムによるステージ１４後にあるときに、前記細胞集団が投与される、請求項１９記載の方法。
【請求項２１】
請求項１６〜２０のいずれか一項に記載の方法に従って生成されるキメラ鳥。
【請求項２２】
請求項１６〜２０のいずれか１項に記載のキメラ鳥の配偶子を使用して生成されるトランスジェニックトリ。
【請求項２３】
鳥の受精卵から孵化する雄のヒヨコの数を減らす方法であって、外因性ポリヌクレオチドが前記鳥のＺ染色体に安定して組み込まれ、前記外因性ポリヌクレオチドは前記鳥の雄の子孫において致死表現型を誘導可能な様式で誘発するためのものであり、
前記方法は、前記致死表現型を誘発するインデューサーに前記卵をさらし、これによって鳥の前記受精卵から孵化する雄のヒヨコの数を減らすことを含む、方法。
【請求項２４】
ＤＮＡ編集システムであって、
（ｉ）リコンビナーゼ認識部位に操作可能に連結された鳥の卵において致死表現型を誘発するための第１の核酸配列と、前記致死表現型をもたらすための前記第１の核酸配列を前記鳥の細胞のＺ染色体に向けるための配列と、を含む第１の薬剤と、
（ｉｉ）リコンビナーゼ酵素をコードする第２の核酸配列と、前記第２の核酸配列を前記鳥の細胞のＺ染色体に向けるための配列と、を含む第２の薬剤と、を含む、ＤＮＡ編集システム。
【請求項２５】
前記第１の核酸配列が、致死性タンパク質またはゲノム編集を実行できるエンドヌクレアーゼ酵素をコードする、請求項２４に記載のＤＮＡ編集システム。
【請求項２６】
前記第１の核酸配列または前記第２の核酸配列をＸ染色体に向けるための前記配列が、
（ｉ）前記鳥の前記Ｚ染色体における標的遺伝子座に隣接する５’領域に実質的に相同である左相同性アーム（ＬＨＡ）ヌクレオチド配列と、
（ｉｉ）前記鳥の前記Ｚ染色体における前記標的遺伝子座に隣接する３’領域に実質的に相同である右相同性アーム（ＲＨＡ）ヌクレオチド配列と、を含む、請求項２４又は２５に記載のＤＮＡ編集システム。
【請求項２７】
鳥の受精卵から孵化する雄のヒヨコの数を減らす方法であって、
雌鳥を雄鳥と交配させることであって、リコンビナーゼ認識部位に操作可能に連結された第１の外因性ポリヌクレオチドは、前記雄鳥のＺ染色体に安定的に組み込まれ、前記外因性ポリヌクレオチドは、鳥の卵の致死表現型を誘発するためのものであり、リコンビナーゼ酵素をコードする第２の外因性ポリヌクレオチドは、前記雌鳥のＺ染色体に安定して組み込まれているか、または、
リコンビナーゼ認識部位に操作可能に連結された前記第１の外因性ポリヌクレオチドは、前記雌鳥のＺ染色体に安定的に組み込まれ、前記外因性ポリヌクレオチドは、鳥の卵の致死表現型を誘発するためのものであり、リコンビナーゼ酵素をコードする第２の外因性ポリヌクレオチドは前記雄鳥のＺ染色体に安定的に組み込まれていて、
これによって、鳥の受精卵から孵化する雄のヒヨコの数を減らす、交配させること、を含む、方法。