【手続補正書】
【提出日】令和3年1月8日(2021.1.8)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
組織特異的Ｗｎｔ（「ウィングレス関連統合部位」または「ウィングレスおよびＩｎｔ−１」または「ウィングレス−Ｉｎｔ」）シグナル増強分子、またはその薬学的に許容される塩であって、ジンクリングフィンガー３（ＺＮＲＦ３）およびリングフィンガータンパク質４３（ＲＮＦ４３）から選択される１つ以上の膜貫通型Ｅ３ユビキチンリガーゼに特異的に結合する第１のドメインと、組織特異的細胞表面分子に特異的に結合する第２のドメインとを含み、前記化合物が、前記組織特異的細胞表面分子を含む前記組織においてＷｎｔシグナル伝達を増加させる、組織特異的Ｗｎｔシグナル増強分子、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項２】
前記組織が、骨組織、肝臓組織、皮膚組織、胃組織、腸管組織、口腔粘膜組織、腎臓組織、中枢神経系組織、乳腺組織、味蕾組織、卵巣組織、内耳組織（蝸牛および前庭組織を含む）、毛包、膵臓組織、網膜組織、角膜組織、心臓組織および肺組織からなる群から選択される、請求項１に記載の分子。
【請求項３】
前記第１のドメインが、第１のポリペプチド配列を含み、かつ／または前記第２のドメインが、第２のポリペプチド配列を含む、請求項１または請求項２に記載の分子。
【請求項４】
前記化合物が、前記第１のポリペプチド配列および前記第２のポリペプチド配列を含む融合タンパク質または抗体である、請求項３に記載の分子。
【請求項５】
前記第１のポリペプチド配列が、
ａ）Ｒ−スポンジンポリペプチド配列であって、前記Ｒ−スポンジンが、場合により、Ｒ−スポンジン−１、Ｒ−スポンジン−２、Ｒ−スポンジン−３、またはＲ−スポンジン−４である、Ｒ−スポンジンポリペプチド配列またはその断片もしくはバリアント、あるいは
ｂ）Ｒ−スポンジンフリンドメイン１配列および、場合により、野生型もしくは変異型フリンドメイン２またはそれらの断片もしくはバリアントを含み、前記第１のポリペプチド配列は、場合により、全長Ｒ−スポンジンと比較してロイシンリッチリピート含有Ｇタンパク質共役受容体４〜６（ＬＧＲ４〜６）への結合が減少している、請求項３または請求項４に記載の分子。
【請求項６】
前記Ｒ−スポンジンフリンドメイン１が、配列番号１〜４に存在するフリン１ドメインのうちのいずれかと少なくとも９０％の同一性を有する、請求項５に記載の分子。
【請求項７】
前記第２のポリペプチド配列が、ペプチド、ポリペプチド、抗体もしくはその断片、あるいはリガンドまたはその断片もしくはバリアントである、請求項３〜６のいずれかに記載の分子。
【請求項８】
ａ）前記組織が、骨組織であり、前記細胞表面分子が、副甲状腺ホルモン受容体１（ＰＴＨ１Ｒ）であるか、
ｂ）前記組織が、肝臓組織であり、前記細胞表面分子が、アシアロ糖タンパク質受容体１（ＡＳＧＲ１）、アシアロ糖タンパク質受容体２（ＡＳＧＲ２）、トランスフェリン受容体２（ＴＦＲ２）もしくは溶質キャリアファミリー１０メンバー１（ＳＬＣ１０Ａ１）であるか、または
ｃ）前記組織が、口腔粘膜であり、前記細胞表面分子が、Ｌｙ６／ＰＬＡＵＲドメイン含有３（ＬＹＰＤ３）もしくはデスモグレイン（ＤＳＧ３）である、請求項１〜７のいずれか一項に記載の分子。
【請求項９】
ａ）前記細胞表面分子が、副甲状腺ホルモン受容体１（ＰＴＨ１Ｒ）であり、前記第２のポリペプチド配列が、ＰＴＨ１Ｒに特異的に結合するか、
ｂ）前記細胞表面分子が、アシアロ糖タンパク質受容体１（ＡＳＧＲ１）であり、前記第２のポリペプチド配列が、ＡＳＧＲ１に特異的に結合するか、
ｃ）前記細胞表面分子が、アシアロ糖タンパク質受容体２（ＡＳＧＲ２）であり、前記第２のポリペプチド配列が、ＡＳＧＲ２に特異的に結合するか、
ｄ）前記細胞表面分子が、溶質キャリアファミリー１０メンバー１（ＳＬＣ１０Ａ１）であり、前記第２のポリペプチド配列が、溶質キャリアファミリー１０メンバー１（ＳＬＣ１０Ａ１）に特異的に結合するか、
ｅ）前記細胞表面分子が、トランスフェリン受容体２（ＴＦＲ２）であり、前記第２のポリペプチド配列が、ＴＦＲ２に特異的に結合するか、
ｆ）前記細胞表面分子が、Ｌｙ６／ＰＬＡＵＲドメイン含有３（ＬＹＰＤ３）であり、前記第２のポリペプチド配列が、ＬＹＰＤ３に特異的に結合するか、または
ｇ）前記細胞表面分子が、デスモグレイン（ＤＳＧ３）であり、前記第２のポリペプチド配列が、ＤＳＧ３に特異的に結合し、
前記第２のポリペプチドが、抗体もしくはその断片または抗体とは異なるペプチドもしくはポリペプチド、低分子、あるいは前記細胞表面分子のリガンドまたはその断片もしくはバリアントである、請求項３〜８のいずれかに記載の分子。
【請求項１０】
前記第１のドメインおよび前記第２のドメインが、リンカー部分によって結合している、請求項１〜９のいずれかに記載の分子。
【請求項１１】
前記リンカー部分が、ペプチジルリンカー配列である、請求項１０に記載の分子。
【請求項１２】
前記リンカー配列が、グリシン、アスパラギン、セリン、トレオニンおよびアラニンからなる群から選択される１つ以上のアミノ酸を含む、請求項１１に記載の分子。
【請求項１３】
請求項４〜１２のいずれかに記載の融合タンパク質をコードする核酸配列。
【請求項１４】
前記核酸配列が、ＤＮＡまたはｍＲＮＡである、請求項１３に記載の核酸配列。
【請求項１５】
請求項１３に記載の核酸配列を含むベクター。
【請求項１６】
前記ベクターが、前記核酸配列に機能的に連結されたプロモーター配列を含む発現ベクターである、請求項１５に記載のベクター。
【請求項１７】
前記ベクターが、前記核酸配列に機能的に連結されたプロモーター配列を含むウイルスである、請求項１５に記載のベクター。
【請求項１８】
請求項１６に記載のベクターを含む宿主細胞。
【請求項１９】
請求項４〜１２のいずれかに記載の融合ポリペプチドを生成するための方法であって、前記融合ポリペプチドが前記発現ベクターによって発現される条件下で請求項１８に記載の宿主細胞を培養することを含む、方法。
【請求項２０】
生成された前記融合ポリペプチドを単離する工程をさらに含む、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
（ｉ）有効量の、請求項１〜１２のいずれかに記載の分子、請求項１３〜１４のいずれかに記載の核酸配列、請求項１５〜１７のいずれかに記載のベクター、または請求項１８に記載の宿主細胞と、
（ｉｉ）薬学的に許容される希釈剤、アジュバントまたは担体と、を含む、薬学的組成物。
【請求項２２】
有効量の請求項１〜１２のいずれかに記載の分子と、有効量のＷｎｔポリペプチド、ノリンポリペプチド、またはＷｎｔシグナル伝達アゴニスト分子とを含む、請求項２１に記載の薬学的組成物。
【請求項２３】
有効量の請求項１３〜１４のいずれかに記載の核酸配列と、Ｗｎｔポリペプチド、ノリンポリペプチド、またはＷｎｔシグナル伝達アゴニスト分子をコードする有効量の核酸配列とを含み、前記Ｗｎｔポリペプチド、前記ノリンポリペプチド、または前記Ｗｎｔシグナル伝達アゴニスト分子をコードする前記核酸配列が、場合によりＤＮＡまたはｍＲＮＡである、請求項２１に記載の薬学的組成物。
【請求項２４】
請求項１３〜１４のいずれかに記載の核酸配列および／または前記Ｗｎｔポリペプチド、前記ノリンポリペプチド、もしくは前記Ｗｎｔシグナル伝達アゴニスト分子をコードする前記核酸配列が、修飾ｍＲＮＡである、請求項２３に記載の薬学的組成物。
【請求項２５】
有効量の請求項１５〜１７のいずれかに記載のベクターと、Ｗｎｔポリペプチド、ポリペプチド、またはＷｎｔシグナル伝達アゴニスト分子をコードする核酸配列を含む有効量のベクターとを含み、ノリン前記Ｗｎｔポリペプチド、前記ノリンポリペプチド、または前記Ｗｎｔシグナル伝達アゴニスト分子をコードする前記核酸配列を含む前記ベクターが、場合により発現ベクターである、請求項２２に記載の薬学的組成物。
【請求項２６】
（ｉ）Ｗｎｔポリペプチド、ノリンポリペプチド、またはＷｎｔシグナル伝達アゴニスト分子をコードする有効量の核酸と、
（ｉｉ）薬学的に許容される希釈剤、アジュバントまたは担体と、を含む、薬学的組成物。
【請求項２７】
前記核酸が、ＤＮＡまたはｍＲＮＡ、場合により修飾ｍＲＮＡである、請求項２６に記載の薬学的組成物。
【請求項２８】
前記核酸が、発現ベクター、場合によりウイルスベクター中に存在する、請求項２６に記載の薬学的組成物。
【請求項２９】
前記Ｗｎｔポリペプチドが、Ｗｎｔ１、Ｗｎｔ２、Ｗｎｔ２Ｂ、Ｗｎｔ３、Ｗｎｔ３Ａ、Ｗｎｔ４、Ｗｎｔ５Ａ、Ｗｎｔ５Ｂ、Ｗｎｔ６、Ｗｎｔ７Ａ、Ｗｎｔ７Ｂ、Ｗｎｔ８Ａ、Ｗｎｔ８Ｂ、Ｗｎｔ９Ａ、Ｗｎｔ９Ｂ、Ａｎｔ１０Ａ、Ｗｎｔ１０Ｂ、Ｗｎｔ１１、およびＷｎｔ１６、ならびにこれらのうちのいずれかの機能的バリアントおよび断片から選択される哺乳動物Ｗｎｔポリペプチドである、請求項２２〜２８のいずれかに記載の薬学的組成物。
【請求項３０】
前記ノリンポリペプチドが、哺乳動物ノリンポリペプチドまたはその機能的バリアントもしくは断片である、請求項２２〜２８のいずれかに記載の薬学的組成物。
【請求項３１】
前記Ｗｎｔシグナル伝達アゴニスト分子が、フリズルド（Ｆｚｄ）受容体をＬｒｐ５／６と二量体化させる水溶性Ｗｎｔシグナル伝達アゴニストである、請求項２２〜２８のいずれかに記載の薬学的組成物。
【請求項３２】
前記Ｗｎｔシグナル伝達アゴニスト分子が、ポリペプチドを含む、請求項３１に記載の薬学的組成物。
【請求項３３】
前記ポリペプチドが、１つ以上のＦｚｄタンパク質に対して高い親和性を有する結合ドメインと、Ｌｒｐ５／Ｌｒｐ６タンパク質に対して高い親和性を有する結合ドメインとを含み、前記結合ドメインが、場合により、直接結合しているか、またはリンカーにより結合している、請求項３２に記載の薬学的組成物。
【請求項３４】
ａ）請求項１〜１２のいずれかに記載の分子、請求項１３〜１４のいずれかに記載の核酸、請求項１５〜１７のいずれかに記載のベクター、または請求項１８に記載の宿主細胞であって、前記第２のドメインが前記標的組織上の細胞特異的表面分子に特異的に結合し、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の分子が前記標的組織に結合して、前記標的組織におけるジンクリングフィンガー３（ＺＮＲＦ３）およびリングフィンガータンパク質４３（ＲＮＦ４３）から選択される１つ以上の膜貫通型Ｅ３ユビキチンリガーゼを隔離またはそのエンドサイトーシスを増加させるもの、および／または
ｂ）Ｗｎｔポリペプチド、ノリンポリペプチド、もしくはＷｎｔシグナル伝達アゴニスト分子；Ｗｎｔポリペプチド、ノリンポリペプチド、もしくはＷｎｔシグナル伝達アゴニスト分子をコードする核酸配列；Ｗｎｔポリペプチド、ノリンポリペプチド、もしくはＷｎｔシグナル伝達アゴニスト分子をコードする核酸配列を含むベクター；またはＷｎｔポリペプチド、ノリンポリペプチド、もしくはＷｎｔシグナル伝達アゴニスト分子をコードする核酸配列を含む発現ベクターを含む宿主細胞であって、前記Ｗｎｔポリペプチド、前記ノリンポリペプチド、または前記Ｗｎｔシグナル伝達アゴニスト分子をコードする前記核酸配列が、場合によりＤＮＡまたはｍＲＮＡ、場合により修飾ｍＲＮＡであるもの
を含む、標的組織においてＷｎｔ（「ウィングレス関連統合部位」または「ウィングレスおよびＩｎｔ−１」または「ウィングレス−Ｉｎｔ」）シグナル伝達を増加させるための方法において使用するための組成物であって、前記方法が、前記標的組織をａ）および／またはｂ）と接触させることを含む、組成物。
【請求項３５】
前記方法が、前記標的組織を請求項１〜１２のいずれかに記載の分子と接触させることを含む、請求項３４に記載の組成物。
【請求項３６】
前記方法が、前記標的組織を請求項１３〜１４のいずれかに記載の核酸と接触させることを含む、請求項３４に記載の組成物。
【請求項３７】
前記方法が、前記標的組織を請求項１５〜１７のいずれかに記載のベクターと接触させることを含む、請求項３４に記載の組成物。
【請求項３８】
前記方法が、前記標的組織を、前記Ｗｎｔポリペプチド、前記ノリンポリペプチド、または前記Ｗｎｔシグナル伝達アゴニスト分子をコードする前記核酸配列と接触させることを含む、請求項３４に記載の組成物。
【請求項３９】
ａ）前記組織が、骨組織であり、前記細胞表面分子が、副甲状腺ホルモン受容体１（ＰＴＨ１Ｒ）であるか、
ｂ）前記組織が、肝臓組織であり、前記細胞表面分子が、アシアロ糖タンパク質受容体１（ＡＳＧＲ１）、アシアロ糖タンパク質受容体２（ＡＳＧＲ２）、トランスフェリン受容体２（ＴＦＲ２）、もしくは溶質キャリアファミリー１０メンバー１（ＳＬＣ１０Ａ１）であるか、または
ｃ）前記組織が、口腔粘膜組織であり、前記細胞表面分子が、Ｌｙ６／ＰＬＡＵＲドメイン含有３（ＬＹＰＤ３）もしくはデスモグレイン（ＤＳＧ３）である、請求項３４〜３９のいずれかに記載の組成物。
【請求項４０】
疾患または状態の治療または予防を必要とする対象においてそれを行うための、請求項２１〜３３のいずれかに記載の薬学的組成物であって、前記疾患または障害が、Ｗｎｔ（「ウィングレス関連統合部位」または「ウィングレスおよびＩｎｔ−１」または「ウィングレス−Ｉｎｔ」）シグナル伝達の減少と関連しているか、またはＷｎｔシグナル伝達の増加による恩恵を受けるであろうものである、組成物。
【請求項４１】
前記組成物が、薬学的に許容される希釈剤と、アジュバントまたは担体と、
（ａ）Ｗｎｔポリペプチド、ノリンポリペプチド、もしくはＷｎｔシグナル伝達アゴニスト分子、
（ｂ）Ｗｎｔポリペプチド、ノリンポリペプチド、もしくはＷｎｔシグナル伝達アゴニスト分子をコードする核酸配列であって、場合によりＤＮＡもしくはｍＲＮＡである、前記Ｗｎｔポリペプチド、前記ノリンポリペプチド、もしくは前記Ｗｎｔシグナル伝達アゴニスト分子をコードする核酸配列、
（ｃ）Ｗｎｔポリペプチド、ノリンポリペプチド、もしくはＷｎｔシグナル伝達アゴニスト分子をコードする核酸配列を含むベクターであって、場合により発現ベクターである、前記Ｗｎｔポリペプチド、前記ノリンポリペプチド、もしくは前記Ｗｎｔシグナル伝達アゴニスト分子をコードする前記核酸配列を含むベクター、または
（ｄ）Ｗｎｔポリペプチド、ノリンポリペプチド、もしくはＷｎｔシグナル伝達アゴニスト分子をコードする核酸を含む発現ベクターを含む宿主細胞と、を含む薬学的組成物と組み合わせて提供されることを特徴とする、請求項４０に記載の組成物。
【請求項４２】
請求項１〜１２のいずれかに記載の分子を含む薬学的組成物が、Ｗｎｔポリペプチド、ノリンポリペプチド、またはＷｎｔシグナル伝達アゴニスト分子を含む薬学的組成物と組み合わせて提供されることを特徴とする、請求項４１に記載の組成物。
【請求項４３】
請求項１３〜１４のいずれかに記載の核酸配列を含む薬学的組成物が、Ｗｎｔポリペプチド、ノリンポリペプチド、またはＷｎｔシグナル伝達アゴニスト分子をコードする核酸配列を含む薬学的組成物と組み合わせて提供されることを特徴とし、前記核酸配列のうちの一方または両方が、場合によりＤＮＡまたはｍＲＮＡ、場合により修飾ｍＲＮＡである、請求項４１に記載の組成物。
【請求項４４】
請求項１５〜１７のいずれかに記載のベクターを含む薬学的組成物が、Ｗｎｔポリペプチド、ノリンポリペプチド、またはＷｎｔシグナル伝達アゴニスト分子をコードする核酸配列を含むベクターを含む薬学的組成物と組み合わせて提供されることを特徴とし、前記ベクターのうちの一方または両方が、場合により発現ベクターまたはウイルスベクターである、請求項４１に記載の組成物。
【請求項４５】
薬学的に許容される希釈剤と、アジュバントまたは担体と、
ａ）Ｗｎｔポリペプチド、ノリンポリペプチド、もしくはＷｎｔシグナル伝達アゴニスト分子をコードする核酸配列であって、場合によりＤＮＡもしくはｍＲＮＡ、場合により修飾ｍＲＮＡである、前記Ｗｎｔポリペプチド、前記ノリンポリペプチド、もしくは前記Ｗｎｔシグナル伝達アゴニスト分子をコードする核酸配列、
ｂ）Ｗｎｔポリペプチド、ノリンポリペプチド、もしくはＷｎｔシグナル伝達アゴニスト分子をコードする核酸配列を含むベクターであって、場合により発現ベクターである、前記Ｗｎｔポリペプチド、前記ノリンポリペプチド、もしくは前記Ｗｎｔシグナル伝達アゴニスト分子をコードする前記核酸配列を含むベクター、または
ｃ）Ｗｎｔポリペプチド、ノリンポリペプチド、もしくはＷｎｔシグナル伝達アゴニスト分子をコードする核酸を含む発現ベクターを含む宿主細胞と、
を含む、疾患または状態の治療または予防を必要とする対象においてそれを行うための薬学的組成物であって、前記疾患または障害が、Ｗｎｔ（「ウィングレス関連統合部位」または「ウィングレスおよびＩｎｔ−１」または「ウィングレス−Ｉｎｔ」）シグナル伝達の減少と関連しているか、またはＷｎｔシグナル伝達の増加による恩恵を受けるであろうものである、組成物。
【請求項４６】
前記Ｗｎｔポリペプチドが、Ｗｎｔ１、Ｗｎｔ２、Ｗｎｔ２Ｂ、Ｗｎｔ３、Ｗｎｔ３Ａ、Ｗｎｔ４、Ｗｎｔ５Ａ、Ｗｎｔ５Ｂ、Ｗｎｔ６、Ｗｎｔ７Ａ、Ｗｎｔ７Ｂ、Ｗｎｔ８Ａ、Ｗｎｔ８Ｂ、Ｗｎｔ９Ａ、Ｗｎｔ９Ｂ、Ａｎｔ１０Ａ、Ｗｎｔ１０Ｂ、Ｗｎｔ１１、およびＷｎｔ１６、ならびにこれらのうちのいずれかの機能的バリアントおよび断片から選択される哺乳動物Ｗｎｔポリペプチドである、請求項４１〜４５のいずれかに記載の組成物。
【請求項４７】
前記ノリンポリペプチドが、哺乳動物ノリンポリペプチドまたはその機能的バリアントもしくは断片である、請求項４１〜４５のいずれかに記載の組成物。
【請求項４８】
前記Ｗｎｔシグナル伝達アゴニスト分子が、フリズルド（Ｆｚｄ）受容体をＬｒｐ５／６と二量体化させる水溶性Ｗｎｔシグナル伝達アゴニストである、請求項４１〜４５のいずれかに記載の組成物。
【請求項４９】
前記Ｗｎｔシグナル伝達アゴニスト分子が、ポリペプチドを含む、請求項４１に記載の組成物。
【請求項５０】
前記ポリペプチドが、１つ以上のＦｚｄタンパク質に対して高い親和性を有する結合ドメインと、Ｌｒｐ５／Ｌｒｐ６タンパク質に対して高い親和性を有する結合ドメインとを含み、前記結合ドメインが、場合により、直接結合しているか、またはリンカーにより結合している、請求項４２に記載の組成物。
【請求項５１】
前記疾患または障害が、骨組織、肝臓組織、皮膚組織、胃組織、腸管組織、口腔粘膜組織、腎臓組織、中枢神経系組織、乳腺組織、味蕾組織、卵巣組織、内耳組織（蝸牛および前庭組織を含む）、毛包、膵臓組織、網膜組織、角膜組織、心臓組織および肺組織からなる群から選択される組織の疾患または障害である、請求項４０〜５０のいずれかに記載の組成物。
【請求項５２】
前記疾患または障害が、
ａ）骨組織の疾患または障害であり、細胞表面受容体が、副甲状腺ホルモン受容体１（ＰＴＨ１Ｒ）であるか、
ｂ）肝臓組織の疾患または障害であり、細胞表面受容体が、アシアロ糖タンパク質受容体１（ＡＳＧＲ１）、アシアロ糖タンパク質受容体２（ＡＳＧＲ２）、トランスフェリン受容体２（ＴＦＲ２）、もしくは溶質キャリアファミリー１０メンバー１（ＳＬＣ１０Ａ１）であるか、あるいは
ｃ）口腔粘膜組織の疾患または障害であり、細胞表面受容体が、Ｌｙ６／ＰＬＡＵＲドメイン含有３（ＬＹＰＤ３）またはデスモグレイン（ＤＳＧ３）である、請求項５１に記載の組成物。
【請求項５３】
前記疾患または状態が、骨折、骨粗鬆症、骨粗鬆症性骨折、脊椎固定術、整形外科用装置の骨結合、腱と骨の統合、歯の成長と再生、歯科インプラント術、歯周病、顎顔面再建、顎骨壊死、脱毛症、難聴、前庭機能低下、黄斑変性、硝子体網膜症、網膜変性症、フックスジストロフィー、脳卒中、外傷性脳損傷、アルツハイマー病、多発性硬化症、脊髄損傷、口腔粘膜炎、短腸症候群、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、メタボリックシンドローム、糖尿病、膵炎、外分泌膵機能不全、創傷治癒、糖尿病性足部潰瘍、冠状動脈疾患、急性腎臓病、慢性腎臓病、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、急性肝不全、急性アルコール性肝障害、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）による慢性肝疾患、ＨＣＶ患者の抗ウイルス薬治療後、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）による慢性肝疾患、ＨＢＶ患者の抗ウイルス薬治療後、慢性アルコール性肝疾患、非アルコール性脂肪性肝疾患および非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、肝硬変、ならびにあらゆる原因による慢性肝不全からなる群から選択される、請求項４０〜５０のいずれかに記載の組成物。
【請求項５４】
前記薬学的組成物が、非経口的に、経口的に、筋肉内に、局所的に、または局部的に提供される、請求項４０〜５３のいずれかに記載の組成物。
【請求項５５】
前記対象が、哺乳動物、場合によりヒトである、請求項４０〜５４のいずれか一項に記載の組成物。