【手続補正書】
【提出日】令和3年8月26日(2021.8.26)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
WntとsFRPを含む単離されたタンパク質複合体であって、該タンパク質複合体が、HEK293 TCF9−分泌アルカリフォスファターゼ（SEAP） hFz4/hLRP5 Wntレポーターアッセイを用いた測定で、500ng/mL未満の50％有効量（ED50）を示す、前記タンパク質複合体。
【請求項２】
Wntが、Wnt1、Wnt2、Wnt2b、Wnt3、Wnt3a、Wnt4、Wnt5a、Wnt5b、Wnt6、Wnt7a、Wnt7b、Wnt8a、Wnt8b、Wnt9a、Wnt9b、Wnt10a、Wnt10b、Wnt11若しくはWnt16又はそれらの組み合わせを含む、請求項１に記載の単離されたタンパク質複合体。
【請求項３】
sFRPが、sFRP1、sFRP2、sFRP3、sFRP4若しくはsFRP5又はそれらの組み合わせを含む、請求項１又は２に記載の単離されたタンパク質複合体。
【請求項４】
タンパク質複合体が、実質的に界面活性剤を含まない、請求項１〜３のいずれか1項に記載の単離されたタンパク質複合体。
【請求項５】
WntがマウスWntを含み、sFRPがマウスsFRPを含む、請求項１〜４のいずれか1項に記載の単離されたタンパク質複合体。
【請求項６】
WntがマウスWnt1を含み、sFRPがマウスsFRP1を含む、請求項１〜５のいずれか１項に記載の単離されたタンパク質複合体。
【請求項７】
Wnt及びsFRPを含む組成物、ここで前記Wntは活性なWntを含み、前記組成物は実質的に界面活性剤を含まない、前記組成物。
【請求項８】
Wntが、Wnt1、Wnt2、Wnt2b、Wnt3、Wnt3a、Wnt4、Wnt5a、Wnt5b、Wnt6、Wnt7a、Wnt7b、Wnt8a、Wnt8b、Wnt9a、Wnt9b、Wnt10a、Wnt10b、Wnt11若しくはWnt16又はそれらの組み合わせを含む、請求項７に記載の組成物。
【請求項９】
活性なWntが、分泌アルカリフォスファターゼ（SEAP）レポーターアッセイを用いて測定されるWntレポーター活性を有するWntを含む、請求項７又は８に記載の組成物。
【請求項１０】
sFPRが、sFRP1、FRP2、sFRP3、sFRP4若しくはsFRP5又はそれらの組み合わせを含む、請求項７〜９のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１１】
WntがマウスWntを含み、sFRPがマウスsFRPを含む、請求項７〜１０のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１２】
WntがマウスWnt1を含み、sFRPがマウスsFRP1を含む、請求項７〜１１のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１３】
Wntが、HEK293 TCF9-SEAP hFz4/hLRP5 Wntレポーターアッセイを用いた測定で、100ng/mL未満の50％有効量（ED50）を示す、請求項７〜１２のいずれか1項に記載の組成物。
【請求項１４】
組成物が、R-スポンジン 1、R-スポンジン 2、R-スポンジン 3、R-スポンジン 4、リポカリン7若しくはWIF1又はそれらの組み合わせをさらに含む、請求項７〜１３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１５】
Wnt1及びsFRP1を過剰発現させる工程：
前記Wnt1とsFRP1を含む複合体を形成する工程、ここで前記Wntは活性なWntを含む：及び
前記の活性なWnt1を単離する工程を含み、
活性なWnt1を単離する工程が、水性精製手順を含み、前記Wntを単離する工程が、界面活性剤の使用を含まない、方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００８７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００８７】
本明細書中に引用される全ての特許、特許出願、及び刊行物、並びに電子的に利用可能な資料（例えば、GenBank及びRefSeqにおけるヌクレオチド配列の提示、並びに、例えば、SwissProt、PIR、PRF、PDBにおけるアミノ酸配列の提示、並びにGenBank及びRefSeqにおけるアノテーションされたコーディング領域からの翻訳を含む）の完成された開示は、参照により組み込まれる。本出願の開示と、参照により本明細書に組み込まれる任意の資料の開示との間に何らかの不一致が存在する場合は、本出願の開示が適用されるものとする。前述の詳細な説明及び実施例は、理解を明確にするためにのみ提供される。これらから、不必要な限定を解釈するべきではない。実施形態により定義される、本発明に含まれる当業者にとって明白なバリエーションについて、本発明は示された及び記載された詳細には厳密には限定されない。   
本開示は以下の実施形態を包含する。   
[１]  WntとsFRPを含む単離されたタンパク質複合体。   
[２]  Wntが、Wnt1、Wnt2、Wnt2b、Wnt3、Wnt3a、Wnt4, 、Wnt5a, 、Wnt5b、Wnt6、Wnt7a、Wnt7b、Wnt8a、Wnt8b、Wnt9a、Wnt9b、Wnt10a、Wnt10b、Wnt11及びWnt16のうちの１以上を含む、実施形態１に記載の単離されたタンパク質複合体。   
[３]  sFRPが、sFRP1、sFRP2、sFRP3、sFRP4及びsFRP5のうちの１以上を含む、実施形態１又は２に記載の単離されたタンパク質複合体。   
[４]  Wntが活性なWntを含む、実施形態１〜３のいずれかに記載の単離されたタンパク質複合体。   
[５]  活性なWntが、分泌アルカリフォスファターゼ（SEAP）レポーターアッセイを用いて測定されるWntレポーター活性を有するWntを含む、実施形態4に記載の単離されたタンパク質複合体。   
[６]  タンパク質複合体が、実質的に界面活性剤を含まない、実施形態１〜５のいずれかに記載の単離されたタンパク質複合体。   
[７]  WntがマウスWntを含み、sFRPがマウスsFRPを含む、実施形態１〜６のいずれかに記載の単離されたタンパク質複合体。   
[８]  WntがマウスWnt1を含み、sFRPがマウスsFRP1を含む、実施形態１〜７のいずれかに記載の単離されたタンパク質複合体。   
[９]  タンパク質複合体が、HEK293 TCF9-SEAP hFz4/hLRP5 Wntレポーターアッセイを用いた測定で、500ng/mL未満の50％有効量（ED50）を示す、実施形態１〜８のいずれかに記載の単離されたタンパク質複合体。   
[１０]  タンパク質複合体が、HEK293 TCF9-SEAP hFz4/hLRP5 Wntレポーターアッセイを用いた測定で、100ng/mL未満の50％有効量（ED50）を示す、実施形態１〜９のいずれかに記載の単離されたタンパク質複合体。   
[１１]  Wntを含む組成物であって、実質的に界面活性剤を含まない、組成物。   
[１２]  Wntが、Wnt1、Wnt2、Wnt2b、Wnt3、Wnt3a、Wnt4、Wnt5a、Wnt5b、Wnt6、Wnt7a、Wnt7b、Wnt8a、Wnt8b、Wnt9a、Wnt9b、Wnt10a、Wnt10b、Wnt11及びWnt16のうちの１以上を含む、実施形態１１に記載の組成物。   
[１３]  Wntが活性なWntを含む、実施形態１１又は１２に記載の組成物。   
[１４]  活性なWntが、分泌アルカリフォスファターゼ（SEAP）レポーターアッセイを用いて測定されるWntレポーター活性を有するWntを含む、実施形態１３に記載の組成物。   
[１５]  組成物が、さらにsFRPを含む、実施形態１１〜１４のいずれかに記載の組成物。   
[１６]  sFPRが、sFRP1、FRP2、sFRP3、sFRP4及び sFRP5のうちの１以上を含む、実施形態１５に記載の組成物。   
[１７]  WntがマウスWntを含み、sFRPがマウスsFRPを含む、実施形態１５又は１６に記載の組成物。   
[１８]  WntがマウスWnt1を含み、sFRPがマウスsFRP1を含む、実施形態１５〜１７のいずれかに記載の組成物。   
[１９]  Wntが、HEK293 TCF9-SEAP hFz4/hLRP5 Wntレポーターアッセイを用いた測定で、100ng/mL未満の50％有効量（ED50）を示す、実施形態１１〜１８のいずれかに記載の組成物。   
[２０]  組成物が、R-スポンジン 1、R-スポンジン 2、R-スポンジン 3、R-スポンジン 4、リポカリン7又はWIF1のうち１以上をさらに含む、実施形態１１〜１９のいずれかに記載の組成物。   
[２１]  Wnt及びsFRPを過剰発現させる工程：
WntとsFRPを含む複合体を形成する工程：及び
Wntを単離する工程を含み、Wntを単離する工程が、水性精製手順を含む、方法。   
[２２]  WntとsFRPを含む複合体が、Wntを単離する工程の前に形成される、実施形態２１に記載の方法。   
[２３]  Wntを単離する工程が、界面活性剤の使用する工程を含まない、実施形態２１又は２２に記載の方法。   
[２４]  Wntを単離する工程が、WntとsFRPを含む複合体から界面活性剤を除去する工程を含む、実施形態２１又は２２に記載の方法。   
[２５]  Wntが、Wnt1、Wnt2、Wnt2b、Wnt3、Wnt3a、Wnt4、Wnt5a、Wnt5b、Wnt6、Wnt7a、Wnt7b、Wnt8a、Wnt8b、Wnt9a、Wnt9b、Wnt10a、Wnt10b、Wnt11及び Wnt16のうちの1以上を含む、実施形態２１〜２４のいずれかに記載の方法。   
[２６]  sFRPが、sFRP1、sFRP2、sFRP3、sFRP4及びsFRP5のうちの１以上を含む、実施形態２１〜２５のいずれかに記載の方法。