【手続補正書】
【提出日】令和3年11月1日(2021.11.1)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６３】
【図１】化合物（Ｉ）と、化合物（Ｉｄ−ｉａ）、（Ｉｄ−ｉｂ）、（Ｉｄ−ｉｉａ）及び（Ｉｄ−ｉｉｂ）との間の体内での抱合及び脱抱合の平衡状態の図示である。
【図２】実施例４による経口投与後に得られる、ウィスターラットにおけるＰＫプロファイルである。プロファイルは、それぞれの化合物に対して対象３匹からの平均血漿中濃度に基づく。Ｘ軸：時間（時）；Ｙ軸：以下の化合物の投与後に得られた化合物（Ｉ）（ｐｇ／ｍＬ）の血漿中濃度。
【数１】
2021504345.tif 000001
：化合物（Ｉａ）；
【数２】
2021504345.tif 000002
：化合物（Ｉｂ）；
【数３】
2021504345.tif 000003
：化合物（Ｉｄ−ｉａ）；
【数４】
2021504345.tif 000004
：化合物（Ｉｄ−ｉｂ）；
【数５】
2021504345.tif 000005
：化合物（Ｉｄ−ｉｉａ）；
【数６】
2021504345.tif 000006
：化合物（Ｉｄ−ｉｉｂ）、
【数７】
2021504345.tif 000007
：化合物（Ｉｄ−ｉａｂ）、及び
【数８】
2021504345.tif 000008
：化合物（Ｉｄ−ｉｉａｂ）。
【図３−４】賦形剤（Ｈ２Ｏ、経口）又は化合物（Ｉｄ−ｉａ）（１０、３０、１００又は３００μｇ／ｋｇ、経口）での治療後の、且つ標準治療（ＳｏＣ）：アポモルヒネ（ＡＰＯ、３ｍｇ／ｋｇ、皮下）、プラミペキソール（ＰＰＸ、０．３ｍｇ／ｋｇ、皮下）と比較した歩行活動時間経過（図３）及び総移動距離（図４）である。６０分の試験チャンバ内の習慣化期間後にｔ＝６０分において動物に投与し、その後、活動を３５０分間モニターした。ダン多重比較検定と共にクラスカル−ウォリス検定を用いてデータを評価し、全体のＰ値＜０．０００１が得られた。図３：Ｘ軸：時間（分）；Ｙ軸：移動距離（ｃｍ）±ＳＥＭ／５分−ｂｉｎｓ。図４：Ｙ軸：総移動距離（ｃｍ）±ＳＥＭ。ポストホック比較（賦形剤群に対する）の有意性レベルが示される：＊＜０．０５、＊＊＜０．０１、＊＊＊＜０．００１、＊＊＊＊＜０．０００１。
【図５−６】化合物（Ｉｄ−ｉａ）と化合物（Ｉ）との血漿中濃度間の関係及び化合物（Ｉｄ−ｉａ）（１００μｇ／ｋｇ、経口）によって誘発される機能亢進（図５）、並びに血漿アポモルヒネ濃度とアポモルヒネ（３ｍｇ／ｋｇ、皮下）によって誘発される機能亢進との対応する関係（図６）である。Ｘ軸時間（分）；Ｙ軸左：移動距離（ｃｍ）±ＳＥＭ／５−分−ｂｉｎｓ；Ｙ軸右（図５）：化合物（Ｉ）の血漿中濃度（ｐｇ／ｍＬ）；Ｙ軸右（図６）：アポモルヒネの血漿中濃度（ｎｇ／ｍＬ）。□：移動距離（ｃｍ）●血漿濃度。
【図７】ラット（７ａ）及びヒト（７ｂ）肝細胞における化合物（Ｉ）への化合物（Ｉｄ−ｉａ）、（Ｉｄ−ｉｂ）、（Ｉｄ−ｉｉａ）、（Ｉｄ−ｉｉｂ）及び（Ｉｄ−ｉａｂ）の転化である。Ｘ軸時間（分）；Ｙ軸：化合物（Ｉ）の濃度（ｐｇ／ｍＬ）。
【数９】
2021504345.tif 000009
：化合物（Ｉｄ−ｉａ）；
【数１０】
2021504345.tif 000010
：化合物（Ｉｄ−ｉｂ）；
【数１１】
2021504345.tif 000011
：化合物（Ｉｄ−ｉｉａ）；
【数１２】
2021504345.tif 000012
：化合物（Ｉｄ−ｉｉｂ）；
【数１３】
2021504345.tif 000013
：化合物（Ｉｄ−ｉａｂ）。
【図８】ラット（８ａ）及びヒト（８ｂ）全血における化合物（Ｉ）への化合物（Ｉｄ−ｉａ）、（Ｉｄ−ｉｂ）、（Ｉｄ−ｉｉａ）及び（Ｉｄ−ｉｉｂ）の転化である。Ｘ軸時間（分）；Ｙ軸：化合物（Ｉ）の濃度（ｐｇ／ｍＬ）。
【数１４】
2021504345.tif 000014
：化合物（Ｉｄ−ｉａ）；
【数１５】
2021504345.tif 000015
：化合物（Ｉｄ−ｉｂ）；
【数１６】
2021504345.tif 000016
：化合物（Ｉｄ−ｉｉａ）；
【数１７】
2021504345.tif 000017
：化合物（Ｉｄ−ｉｉｂ）。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１２１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１２１】
Ｅ４３．実施形態１〜２３のいずれかによる前記化合物又はその薬剤として許容される塩は、Ｌ−ＤＯＰＡ、セレジリン若しくはラサギリンなどのＭＡＯ−Ｂ阻害剤、エンタカポン若しくはトルカポンなどのＣＯＭＴ阻害剤、イストラデフィリンなどのアデノシン２ａアンタゴニスト、アマンタジン若しくはメマンチンなどの抗グルタミン酸剤、リバスチグミン、ドネペジル若しくはガランタミンなどのアセチルコリンエステラーゼ阻害剤及びクエチアピン、クロザピン、リスペリドン、ピマバンセリン、オランザピン、ハロペリドール、アリピプラゾール若しくはブレクスピプラゾールなどの抗精神病薬からなる群から選択される化合物と併せて、又は抗体標的化α−シヌクレイン、Ｔａｕ若しくはＡ−βタンパク質と併せて使用される、実施形態４０〜４１のいずれかによる方法。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１３７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１３７】
【表１】
2021504345.tif 000018
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１４５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１４５】
方法２２２：１９０〜８００ｎＭで動作するＰＤＡ検出器及びポジティブモードで動作するＥＳＩ源を備えたＭＳからなるＳｈｉｍａｄｚｕ  ＬＣＭＳ−２０２０でＬＣ−ＭＳを実施した。
ＬＣ条件：カラムは、水＋０．１％ギ酸（Ａ）及びアセトニトリル（Ｂ）からなる勾配０．５ｍｌ／分を用いて、２５℃で動作するＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｋｉｎｅｔｅｘ  ＥＶＯ  Ｃ１８  ２．６？ｍ；２．１×１００ｍｍであった。
勾配：
０．００分  ２％Ｂ
１．００分  ２％Ｂ
１０．００分  ９０％Ｂ
１３．００分  ９０％Ｂ
１３．１０分  ２％Ｂ
１８．００分  ２％Ｂ
合計実施時間：１８分
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１７４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１７４】
マイクロプレートのウェルに試験化合物を添加した（３８４フォーマット）。ヒトＤ１受容体を発現するＨＥＫ−２９３細胞を１０００細胞／ウェルでプレーティングし、室温で３０分間インキュベートした。ｃＡＭＰ−ｄ２トレーサーをウェルに添加し、続いて抗ｃＡＭＰ抗体−クリプテート調製物を添加し、暗所で室温において１時間インキュベートした。３３７ｎｍレーザー（「ＴＲＦライトユニット」）でドナーを励起し、続いて２００マイクロ秒の時間窓にわたる６１５ｎｍ及び６６５ｎｍでのクリプテート及びｄ２発光（繰り返し間の時間窓２０００マイクロ秒／１００フラッシュを測定することによってＨＴＲＦ  ｃＡＭＰを測定した（遅延時間１００マイクロ秒）。Ｅｎｖｉｓｉｏｎマイクロプレートリーダー（パーキンエルマー（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ））でのＨＴＲＦ測定を実施した。６１５ｎｍに対して６６５ｎｍにおいて発光比としてＨＴＲＦシグナルを計算した。ＤＭＳＯ溶媒又は３０ｕＭドーパミンを含むコントロールウェルを使用して、試験化合物について読み取られたＨＴＲＦ比を０％及び１００％刺激に正規化した。Ｘｌｆｉｔ４（ＩＤＢＳ，Ｇｕｉｌｄｆｏｒｄ，Ｓｕｒｒｅｙ，ＵＫ，モデル２０５）を使用して、シグモイド型用量反応（可変勾配）を用いて、非線形回帰によって試験化合物効力（ＥＣ５０）を推定した。
ｙ＝（Ａ＋（（Ｂ−Ａ）／（１＋（（Ｃ／ｘ）＾Ｄ））））
式中、ｙは、試験化合物の所定の濃度に対する正規化されたＨＴＲＦ比測定値であり、ｘは、試験化合物の濃度であり、Ａは、無限化合物希釈での推定効力であり、Ｂは、最大効力である。Ｃは、ＥＣ５０値であり、Ｄは、ヒル（Ｈｉｌｌ）勾配係数である。ＥＣ５０推定値は、非依存的実験から得られ、対数平均が計算された。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１７８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１７８】
【表２】
2021504345.tif 000019
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１８５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１８５】
【表３】
2021504345.tif 000020
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１８８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１８８】
【表４】
2021504345.tif 000021