【手続補正書】
【提出日】令和3年4月7日(2021.4.7)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象の癌を治療する方法に使用するための組合せ物であって、
ＮＫ細胞および抗ＰＤＬ１抗体を含み、
前記方法が、前記対象に前記ＮＫ細胞および前記抗ＰＤＬ１抗体を投与することを含む、組合せ物。
【請求項２】
前記ＮＫ細胞がＸＭ  ＮＫ細胞である、請求項１に記載の組合せ物。
【請求項３】
ナイーブＮＫ細胞集団をＰＭ２１粒子、ＥＸ２１エキソソームまたはＦＣ２１フィーダー細胞と接触させることにより前記ＮＫ細胞を活性化または拡大する、請求項１に記載の組合せ物。
【請求項４】
ＰＭ２１粒子、ＥＸ２１エキソソームまたはＦＣ２１細胞によるＮＫ細胞の活性化または拡大をｅｘ  ｖｉｖｏで実施する、請求項３に記載の組合せ物。
【請求項５】
前記対象に前記ＮＫ細胞を投与する１〜２１日前にＰＭ２１粒子、ＥＸ２１エキソソームまたはＦＣ２１細胞によるＮＫ細胞の拡大または活性化を実施する、請求項４に記載の組合せ物。
【請求項６】
前記ＮＫ細胞が、末梢血、臍帯血または幹細胞に由来するものであり得る、請求項１に記載の組合せ物。
【請求項７】
前記ＮＫ細胞が、ＮＫ９２などのＮＫ細胞様細胞系に由来するものである、請求項１に記載の組合せ物。
【請求項８】
前記抗ＰＤＬ１抗体を投与する１〜１４日前に前記ＮＫ細胞を投与する、請求項１に記載の組合せ物。
【請求項９】
前記ＮＫ細胞および抗ＰＤＬ１抗体を同時に投与する、請求項１に記載の組合せ物。
【請求項１０】
前記ＮＫ細胞が、自家ＮＫ細胞、ハプロタイプ一致ＮＫ細胞または同種ＮＫ細胞である、請求項１に記載の組合せ物。
【請求項１１】
前記対象に前記ＮＫ細胞を投与する前に、前記ＮＫ細胞をＩＬ−１２、ＩＬ−１５およびＩＬ−１８のうちの１つまたは複数のものと接触させることをさらに含む、請求項１に記載の組合せ物。
【請求項１２】
前記対象にＩＬ−１２、ＩＬ−１５およびＩＬ−１８のうちの１つまたは複数のものを投与することをさらに含む、請求項１に記載の組合せ物。
【請求項１３】
前記ＩＬ−１２、ＩＬ−１５およびＩＬ−１８を前記ＮＫ細胞と同時に投与する、請求項１２に記載の組合せ物。
【請求項１４】
前記ＮＫ細胞を投与する前に前記ＩＬ−１２、ＩＬ−１５およびＩＬ−１８を投与する、請求項１２に記載の組合せ物。
【請求項１５】
前記ＮＫ細胞を投与した後に前記ＩＬ−１２、ＩＬ−１５およびＩＬ−１８を投与する、請求項１２に記載の組合せ物。
【請求項１６】
前記対象にＰＭ２１粒子またはＥＸ２１エキソソームを投与することをさらに含む、請求項１に記載の組合せ物。
【請求項１７】
前記ＰＭ２１粒子またはＥＸ２１エキソソームを前記ＮＫ細胞と同時に投与する、請求項１６に記載の組合せ物。
【請求項１８】
前記ＮＫ細胞を投与した後、前記ＰＭ２１粒子またはＥＸ２１エキソソームを少なくとも１週間に１回、２回、３回投与する、請求項１６に記載の組合せ物。
【請求項１９】
対象の癌を治療する方法に使用するための組合せ物であって、
ＰＭ２１粒子またはＥＸ２１エキソソームおよび抗ＰＤＬ１抗体を含み、
前記方法は、前記対象に前記ＰＭ２１粒子または前記ＥＸ２１エキソソームおよび前記抗ＰＤＬ１抗体を投与することを含む、組合せ物。
【請求項２０】
前記抗ＰＤＬ１抗体を投与する１〜１４日前に前記ＰＭ２１粒子またはＥＸ２１エキソソームを投与する、請求項１９に記載の組合せ物。
【請求項２１】
前記ＰＭ２１粒子またはＥＸ２１エキソソームおよび前記抗ＰＤＬ１抗体を同時に投与する、請求項１９に記載の組合せ物。
【請求項２２】
ＩＬ−１２、ＩＬ−１５およびＩＬ−１８のうちの１つまたは複数のものを投与することをさらに含む、請求項１９に記載の組合せ物。
【請求項２３】
前記ＩＬ−１２、ＩＬ−１５およびＩＬ−１８を前記ＰＭ２１粒子またはＥＸ２１エキソソームと同時に投与する、請求項２２に記載の組合せ物。
【請求項２４】
前記ＰＭ２１粒子またはＥＸ２１エキソソームを投与する前に前記ＩＬ−１２、ＩＬ−１５およびＩＬ−１８を投与する、請求項２２に記載の組合せ物。
【請求項２５】
前記ＰＭ２１粒子またはＥＸ２１エキソソームを投与した後に前記ＩＬ−１２、ＩＬ−１５およびＩＬ−１８を投与する、請求項２２に記載の組合せ物。
【請求項２６】
ＰＭ２１粒子またはＥＸ２１エキソソームの初回投与後、前記ＰＭ２１粒子またはＥＸ２１エキソソームを少なくとも１週間に１回、２回、３回投与する、請求項１９に記載の組合せ物。
【請求項２７】
ＰＭ２１、ＥＸ２１またはＦＣ２１  ＮＫ細胞と、抗ＰＤＬ１抗体とを含む、抗癌療法に使用するための組合せ物。
【請求項２８】
ＰＭ２１粒子またはＥＸ２１エキソソームをさらに含む、請求項２７に記載の組合せ物。
【請求項２９】
ＩＬ−１２、ＩＬ−１５およびＩＬ−１８のうちの１つまたは複数のものをさらに含む、請求項２７に記載の組合せ物。
【請求項３０】
ＰＭ２１粒子またはＥＸ２１エキソソームと、抗ＰＤＬ１抗体とを含む、抗癌療法に使用するための組合せ物。
【請求項３１】
ＩＬ−１２、ＩＬ−１５およびＩＬ−１８のうちの１つまたは複数のものをさらに含む、請求項３０に記載の組合せ物。
【請求項３２】
ＮＫ細胞と、抗ＰＤＬ１抗体とを含む、対象の癌を治療する方法に使用するための医薬組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００９４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００９４】
新規な抗ＰＤ−Ｌ１／抗ＰＤ−１療法は、ＰＤ−Ｌ１の誘導およびそれに続く免疫抑制カスケードによって腫瘍に対する初期免疫応答が停止した癌において機能が停止した免疫系を開放することができる。細胞傷害性の高いＮＫ細胞、例えばＰＭ２１粒子で拡大したＮＫ細胞（ＰＭ２１−ＮＫ）などを用いて養子細胞療法を実施すると、腫瘍がその細胞表面にＰＤ−Ｌ１を発現する同様の応答が観察される。このＰＭ２１−ＮＫ細胞は、腫瘍標的および腫瘍床に通常存在するサイトカイン（ＩＬ−１２、ＩＬ−１８）に応答して、拡大していないＮＫ細胞またはＩＬ−２で活性化したＮＫ細胞よりはるかに大量にＩＦＮ−γを分泌する（図１）。ＮＫ細胞は、悪性細胞のみを標的とし健常細胞は標的としないという点で選択性も示す。このため、養子移植したＰＭ２１−ＮＫ細胞は、ＩＦＮ−γの全身投与を実施しなくても腫瘍細胞に特異的にＩＦＮγを送達してＰＤ−Ｌ１を誘導し、健常な正常細胞が温存される。図２に示されるように、ＰＭ２１粒子で拡大したＮＫ細胞はＳＫＯＶ−３細胞に対して細胞傷害性を示した。この細胞傷害性は少なくとも部分的には、サイトカインであるＩＦＮ−γおよびＴＮＦ−αが発現した結果であり、ＳＫＯＶ−３細胞に曝露し、さらにＩＬ−１２および／またはＩＬ−１８の投与による追加の刺激を加えると、これらのサイトカインの産生が増大した。ＰＤ−Ｌ１発現の誘導はＩＦＮγに曝露した様々な腫瘍細胞系に観察された。ヒト化ＮＳＧ−卵巣癌担持マウスを用いた前臨床試験から、養子移植したＰＭ２１  ＮＫ細胞および大量のＩＦＮ−γを分泌するＰＭ２１−ＮＫ細胞とともに拡大したＮＫ細胞がヒト卵巣腫瘍にＰＤ−Ｌ１を誘導することを示す証拠が得られる（図３Ａ）。ＰＭ２１−ＮＫ細胞またはＦＣ−ＮＫ細胞が腫瘍に対する特異的ＰＤ−Ｌ１誘導因子であることをさらに示すため、養子移植したＮＫ細胞は純度が高く（ＮＫ細胞９９．９９％）、実質的にＴ細胞は含まれていないことを明らかにした。腹膜にみられた細胞のうち、Ｔ細胞にはＰＤ−１が発現したが、ＮＫ細胞にはＰＤ−１が発現しなかった（図３Ｂ）。また、養子移植後にマウスから採取した血液中のｈＣＤ４５＋ヒトリンパ球のうち９９％超がＮＫ細胞であった。腫瘍がＰＭ２１−ＮＫ細胞またはＦＣ２１−ＮＫ細胞に攻撃されている際にＰＤ−Ｌ１を発現していることを裏付けるため、腹水が蓄積したマウスにはさらに大量の調節Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）がみられることを明らかにした（図３Ｃ）。ＴｒｅｇはＰＤ−Ｌ１によって誘導されることが知られており、ＮＫ細胞のＩＦＮγにより刺激された腫瘍でのＰＤ−Ｌ１発現に応答して急速に増殖する。腫瘍でのＰＭ２１−ＮＫ細胞によるこの免疫抑制性のＰＤ−Ｌ１誘導は腫瘍に免疫系を回避させるものであるが、この機序は、多種多様な腫瘍タイプを標識し得る汎用性の標的化可能な抗原の発現を誘導するのに有利に利用することが可能である（図４）。ＰＭ２１−ＮＫ細胞とともにヒト化ＰＤ−Ｌ１抗体を用いて治療すれば、抗ＰＤ−Ｌ１  ＡｂとＣＤ１６（ＩｇＧ受容体ＦｃγＲＩＩＩ）との結合によって惹起する抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）により、ＮＫ細胞から極めて強力な標的化抗腫瘍応答を引き出すことができる（図４）。
本発明は以下の態様を含みうる。
[１]
対象の癌を治療する方法であって、前記対象にＮＫ細胞および抗ＰＤＬ１抗体を投与することを含む、方法。
[２]
前記ＮＫ細胞がＸＭ  ＮＫ細胞である、上記[１]に記載の方法。
[３]
ナイーブＮＫ細胞集団をＰＭ２１粒子、ＥＸ２１エキソソームまたはＦＣ２１フィーダー細胞と接触させることにより前記ＮＫ細胞を活性化または拡大する、上記[１]に記載の方法。
[４]
ＰＭ２１粒子、ＥＸ２１エキソソームまたはＦＣ２１細胞によるＮＫ細胞の活性化または拡大をｅｘ  ｖｉｖｏで実施する、上記[３]に記載の方法。
[５]
前記対象に前記ＮＫ細胞を投与する１〜２１日前にＰＭ２１粒子、ＥＸ２１エキソソームまたはＦＣ２１細胞によるＮＫ細胞の拡大の活性化を実施する、上記[４]に記載の方法。
[６]
前記ＮＫ細胞が、末梢血、臍帯血または幹細胞に由来するものであり得る、上記[１]に記載の方法。
[７]
前記ＮＫ細胞が、ＮＫ９２などのＮＫ細胞様細胞系に由来するものである、上記[１]に記載の方法。
[８]
前記抗ＰＤＬ１抗体を投与する１〜１４日前に前記ＮＫ細胞を投与する、上記[１]に記載の癌を治療する方法。
[９]
前記ＮＫ細胞および抗ＰＤＬ１抗体を同時に投与する、上記[１]に記載の癌を治療する方法。
[１０]
前記ＮＫ細胞が、自家ＮＫ細胞、ハプロタイプ一致ＮＫ細胞または同種ＮＫ細胞である、上記[１]に記載の癌を治療する方法。
[１１]
前記対象に前記ＮＫ細胞を投与する前に、前記ＮＫ細胞をＩＬ−１２、ＩＬ−１５およびＩＬ−１８のうちの１つまたは複数のものと接触させることをさらに含む、上記[１]に記載の癌を治療する方法。
[１２]
前記対象にＩＬ−１２、ＩＬ−１５およびＩＬ−１８のうちの１つまたは複数のものを投与することをさらに含む、上記[１]に記載の癌を治療する方法。
[１３]
前記ＩＬ−１２、ＩＬ−１５およびＩＬ−１８を前記ＮＫ細胞と同時に投与する、上記[１２]に記載の癌を治療する方法。
[１４]
前記ＮＫ細胞を投与する前に前記ＩＬ−１２、ＩＬ−１５およびＩＬ−１８を投与する、上記[１２]に記載の癌を治療する方法。
[１５]
前記ＮＫ細胞を投与した後に前記ＩＬ−１２、ＩＬ−１５およびＩＬ−１８を投与する、上記[１２]に記載の癌を治療する方法。
[１６]
前記対象にＰＭ２１粒子またはＥＸ２１エキソソームを投与することをさらに含む、上記[１]に記載の癌を治療する方法。
[１７]
前記ＰＭ２１粒子またはＥＸ２１エキソソームを前記ＮＫ細胞と同時に投与する、上記[１６]に記載の癌を治療する方法。
[１８]
前記ＮＫ細胞を投与した後、前記ＰＭ２１粒子またはＥＸ２１エキソソームを少なくとも１週間に１回、２回、３回投与する、上記[１６]に記載の癌を治療する方法。
[１９]
対象の癌を治療する方法であって、対象にＰＭ２１粒子またはＥＸ２１エキソソームおよび抗ＰＤＬ１抗体を投与することを含む、方法。
[２０]
前記抗ＰＤＬ１抗体を投与する１〜１４日前に前記ＰＭ２１粒子またはＥＸ２１エキソソームを投与する、上記[１９]に記載の癌を治療する方法。
[２１]
前記ＰＭ２１粒子またはＥＸ２１エキソソームおよび前記抗ＰＤＬ１抗体を同時に投与する、上記[１９]に記載の癌を治療する方法。
[２２]
ＩＬ−１２、ＩＬ−１５およびＩＬ−１８のうちの１つまたは複数のものを投与することをさらに含む、上記[１９]に記載の癌を治療する方法。
[２３]
前記ＩＬ−１２、ＩＬ−１５およびＩＬ−１８を前記ＰＭ２１粒子またはＥＸ２１エキソソームと同時に投与する、上記[２２]に記載の癌を治療する方法。
[２４]
前記ＰＭ２１粒子またはＥＸ２１エキソソームを投与する前に前記ＩＬ−１２、ＩＬ−１５およびＩＬ−１８を投与する、上記[２２]に記載の癌を治療する方法。
[２５]
前記ＰＭ２１粒子またはＥＸ２１エキソソームを投与した後に前記ＩＬ−１２、ＩＬ−１５およびＩＬ−１８を投与する、上記[２２]に記載の癌を治療する方法。
[２６]
ＰＭ２１粒子またはＥＸ２１エキソソームの初回投与後、前記ＰＭ２１粒子またはＥＸ２１エキソソームを少なくとも１週間に１回、２回、３回投与する、上記[１９]に記載の癌を治療する方法。
[２７]
ＰＭ２１、ＥＸ２１またはＦＣ２１  ＮＫ細胞と、抗ＰＤＬ１抗体とを含む、抗癌療法。
[２８]
ＰＭ２１粒子またはＥＸ２１エキソソームをさらに含む、上記[２７]に記載の抗癌療法。
[２９]
ＩＬ−１２、ＩＬ−１５およびＩＬ−１８のうちの１つまたは複数のものをさらに含む、上記[２７]に記載の抗癌療法。
[３０]
ＰＭ２１粒子またはＥＸ２１エキソソームと、抗ＰＤＬ１抗体とを含む、抗癌療法。
[３１]
ＩＬ−１２、ＩＬ−１５およびＩＬ−１８のうちの１つまたは複数のものをさらに含む、上記[３０]に記載の抗癌療法。