【手続補正書】
【提出日】令和3年4月6日(2021.4.6)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）亜種を、ＦＶＩＩＩを含む組成物から精製するための方法であって、前記ＦＶＩＩＩ亜種が、ＦＶＩＩＩ軽鎖と会合したＦＶＩＩＩ重鎖であり、前記方法が、
（１）前記ＦＶＩＩＩを含む組成物をアニオン交換クロマトグラフィーに供し、前記ＦＶＩＩＩ亜種を含む溶出液を収集するステップと、
（２）前記ＦＶＩＩＩ亜種を含むステップ（１）の溶出液をサイズ排除クロマトグラフィーに供し、前記ＦＶＩＩＩ亜種を含む溶出液を収集するステップと、
（３）前記ＦＶＩＩＩ亜種を含むステップ（２）の溶出液を濃縮するステップと
を含み、
ここで、前記ＦＶＩＩＩ亜種の前記組成物に含まれる他の全てのＦＶＩＩＩ亜種に対する重量比が増大する、方法。
【請求項２】
前記濃縮ステップ（３）が、前記ＦＶＩＩＩ亜種を含むステップ（２）の溶出液をアニオン交換クロマトグラフィーに供し、前記ＦＶＩＩＩ亜種を含む溶出液を収集するステップである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
ステップ（３）において、ＳｏｕｒｃｅＱ樹脂をアニオン交換クロマトグラフィーに使用する、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
ＦＶＩＩＩが組換えＦＶＩＩＩ（ｒＦＶＩＩＩ）であり、ＦＶＩＩＩ亜種が組換えＦＶＩＩＩ（ｒＦＶＩＩＩ）亜種である、請求項１から３までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
前記ＦＶＩＩＩ亜種が、ＦＶＩＩＩ軽鎖と会合したＦＶＩＩＩ  １８０ｋＤａ重鎖、またはＦＶＩＩＩ軽鎖と会合したＦＶＩＩＩ  １５０ｋＤａ重鎖、またはＦＶＩＩＩ軽鎖と会合したＦＶＩＩＩ  １１０ｋＤａ重鎖、またはＦＶＩＩＩ軽鎖と会合したＦＶＩＩＩ  ９０ｋＤａ重鎖である、請求項１から４までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
ステップ（１）において、ビーズサイズが２０μｍ未満の高分解能Ｑ−樹脂をアニオン交換クロマトグラフィーに使用する、請求項１から５までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
ステップ（２）において、分解能が１００００Ｄａ〜６００００Ｄａにわたるサイズ排除クロマトグラフィー樹脂をサイズ排除クロマトグラフィーに使用する、請求項１から６までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
ステップ（１）の前に以下のステップ（０）
（０）前記組成物中に含まれるＦＶＩＩＩをフューリンプロテアーゼ処理に供するステップ
をさらに含む、請求項１から７までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記ＦＶＩＩＩ軽鎖が、ＦＶＩＩＩ  ８０ｋＤａ軽鎖である、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
ステップ（１）の溶出をリニアグラジエント溶出によって実施し、前記リニアグラジエント溶出のグラジエントの長さが、少なくとも約１６カラム体積、少なくとも約２４カラム体積、または少なくとも約３２カラム体積である、請求項１から９までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）亜種を、ＦＶＩＩＩを含む組成物から精製するための方法であって、前記ＦＶＩＩＩ亜種が、ＦＶＩＩＩ軽鎖と会合したＦＶＩＩＩ重鎖であり、前記方法が、
（１）前記ＦＶＩＩＩを含む組成物をアニオン交換クロマトグラフィーに供し、前記ＦＶＩＩＩ亜種を含む溶出液を収集するステップと、
（２）前記ＦＶＩＩＩ亜種を含むステップ（１）の溶出液を疎水性相互作用クロマトグラフィーに供するステップであって、前記疎水性相互作用クロマトグラフィーが、ネガティブモードクロマトグラフィーであるステップと、
（３）前記ＦＶＩＩＩ亜種を含むステップ（２）の溶出液を濃縮するステップと
を含み、
ここで、前記ＦＶＩＩＩ亜種の前記組成物に含まれる他の全てのＦＶＩＩＩ亜種に対する重量比が増大する、方法。
【請求項１２】
第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）亜種を、ＦＶＩＩＩを含む組成物から精製するための方法であって、前記ＦＶＩＩＩ亜種が、ＦＶＩＩＩ軽鎖と会合したＦＶＩＩＩ  ９０ｋＤａ重鎖であり、前記方法が、
（１）前記ＦＶＩＩＩを含む組成物をアニオン交換クロマトグラフィーに供し、前記ＦＶＩＩＩ亜種を含む溶出液を収集するステップと、
（２）前記ＦＶＩＩＩ亜種を含むステップ（１）の溶出液を濃縮するステップと、
を含み、
ここで、前記ＦＶＩＩＩ亜種の前記組成物に含まれる他の全てのＦＶＩＩＩ亜種に対する重量比が増大する、方法。
【請求項１３】
精製された第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）亜種を含む組成物であって、前記ＦＶＩＩＩ亜種が、ＦＶＩＩＩ軽鎖と会合したＦＶＩＩＩ重鎖であり、前記組成物中の前記精製されたＦＶＩＩＩ亜種の前記組成物中の他の全てのＦＶＩＩＩ亜種に対する重量比が、少なくとも８である、組成物。
【請求項１４】
前記組成物中の前記精製されたＦＶＩＩＩ亜種の前記組成物中の他の全てのＦＶＩＩＩ亜種に対する重量比が、少なくとも９である、請求項１３に記載の組成物。
【請求項１５】
前記精製されたＦＶＩＩＩ亜種の濃度が、少なくとも０．１ｍｇ／ｍＬ、または少なくとも０．３ｍｇ／ｍＬである、請求項１３または１４に記載の組成物。
【請求項１６】
出血性障害の処置に使用するための、請求項１３から１５までのいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１７】
前記組成物が血友病Ａの処置に使用するためのものである、請求項１６に記載の使用するための組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１１６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１１６】
８６．血友病Ａの処置に使用するための、項目８３から８５までのいずれか１つに記載のＦＶＩＩＩを含む組成物。
特定の実施形態では、例えば、以下が提供される：
（項目１）
第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）亜種を、ＦＶＩＩＩを含む組成物から精製するための方法であって、前記ＦＶＩＩＩ亜種が、ＦＶＩＩＩ軽鎖と会合したＦＶＩＩＩ重鎖であり、前記方法が、
（１）前記ＦＶＩＩＩを含む組成物をアニオン交換クロマトグラフィーに供し、前記ＦＶＩＩＩ亜種を含む溶出液を収集するステップと、
（２）前記ＦＶＩＩＩ亜種を含むステップ（１）の溶出液をサイズ排除クロマトグラフィーに供し、前記ＦＶＩＩＩ亜種を含む溶出液を収集するステップと、
（３）前記ＦＶＩＩＩ亜種を含むステップ（２）の溶出液を濃縮するステップと
を含む、方法。
（項目２）
ステップ（１）の前に以下のステップ（０）
（０）前記組成物中に含まれるＦＶＩＩＩをフューリンプロテアーゼ処理に供するステップ
をさらに含む、項目１に記載の方法。
（項目３）
前記ＦＶＩＩＩ軽鎖が、ＦＶＩＩＩ  ８０ｋＤａ軽鎖である、項目２に記載の方法。
（項目４）
前記濃縮ステップ（３）が、前記ＦＶＩＩＩ亜種を含むステップ（２）の溶出液をアニオン交換クロマトグラフィーに供し、前記ＦＶＩＩＩ亜種を含む溶出液を収集するステップである、項目１から３までのいずれか一項に記載の方法。
（項目５）
ステップ（３）において、ＳｏｕｒｃｅＱ樹脂をアニオン交換クロマトグラフィーに使用する、項目４に記載の方法。
（項目６）
ＦＶＩＩＩが組換えＦＶＩＩＩ（ｒＦＶＩＩＩ）であり、ＦＶＩＩＩ亜種が組換えＦＶＩＩＩ（ｒＦＶＩＩＩ）亜種である、項目１から５までのいずれか一項に記載の方法。
（項目７）
前記ＦＶＩＩＩ亜種が、ＦＶＩＩＩ軽鎖と会合したＦＶＩＩＩ  １８０ｋＤａ重鎖、またはＦＶＩＩＩ軽鎖と会合したＦＶＩＩＩ  １５０ｋＤａ重鎖、またはＦＶＩＩＩ軽鎖と会合したＦＶＩＩＩ  １１０ｋＤａ重鎖、またはＦＶＩＩＩ軽鎖と会合したＦＶＩＩＩ  ９０ｋＤａ重鎖である、項目１から６までのいずれか一項に記載の方法。
（項目８）
ステップ（１）において、ビーズサイズが２０μｍ未満の高分解能Ｑ−樹脂をアニオン交換クロマトグラフィーに使用する、項目１から７までのいずれか一項に記載の方法。
（項目９）
ステップ（２）において、分解能が１００００Ｄａ〜６００００Ｄａにわたるサイズ排除クロマトグラフィー樹脂をサイズ排除クロマトグラフィーに使用する、項目１から８までのいずれか一項に記載の方法。
（項目１０）
ステップ（１）の溶出をリニアグラジエント溶出によって実施し、前記リニアグラジエント溶出のグラジエントの長さが、少なくとも約１６カラム体積、少なくとも約２４カラム体積、または少なくとも約３２カラム体積である、項目１から９までのいずれか一項に記載の方法。
（項目１１）
精製された第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）亜種を含む組成物であって、前記ＦＶＩＩＩ亜種が、ＦＶＩＩＩ軽鎖と会合したＦＶＩＩＩ重鎖である、組成物。
（項目１２）
前記組成物中の前記精製されたＦＶＩＩＩ亜種の前記組成物中の他の全てのＦＶＩＩＩ亜種に対する重量比が、少なくとも９、または少なくとも８である、項目１１に記載の組成物。
（項目１３）
前記精製されたＦＶＩＩＩ亜種の濃度が、少なくとも０．１ｍｇ／ｍＬ、または少なくとも０．３ｍｇ／ｍＬである、項目１１または１２に記載の組成物。
（項目１４）
出血性障害の処置に使用するための、項目１１から１３までのいずれか一項に記載の組成物。
（項目１５）
血友病Ａの処置に使用するための、項目１１から１４までのいずれか一項に記載の組成物。