【手続補正書】
【提出日】令和3年4月5日(2021.4.5)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
細胞外小胞を単離する方法であって、
血液又は骨髄のうちの１つ以上を、濃縮システムの入力ポートに装填することと、
前記濃縮システムの遠心分離デバイスによって、前記血液又は骨髄のうちの１つ以上を遠心分離して、赤血球、乏血小板血漿、又は多血小板血漿／骨髄濃縮物分画のうちの１つ以上を分離することと、
骨髄／多血小板血漿分画及び乏血小板血漿分画のうちの１つ以上を、前記濃縮システムの第１の容器に集めることと、
前記骨髄濃縮物／多血小板血漿分画及び乏血小板血漿分画のうちの１つ以上に、濃縮水性二相溶液を加えることと、
前記濃縮水性二相溶液と、前記骨髄濃縮物／多血小板血漿分画又は乏血小板血漿分画のうちの１つ以上とを、前記遠心分離デバイスに戻し、細胞外小胞及び多血小板血漿／骨髄濃縮物分画のうちの１つ以上を単離することと、
を含む、方法。
【請求項２】
前記骨髄濃縮物／多血小板血漿分画及び乏血小板血漿分画のうちの１つ以上に、濃縮水性二相溶液を加えることが、前記骨髄濃縮物／多血小板血漿分画及び乏血小板血漿分画のうちの１つ以上に、濃縮ＰＥＧ−ＤＥＸ溶液を加えることを含み、前記方法が、前記骨髄濃縮物／多血小板血漿分画及び乏血小板血漿分画のうちの１つ以上に、前記濃縮水性二相溶液を加える前に、前記濃縮水性二相溶液を所定の濃度で予混合することをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記骨髄濃縮物／多血小板血漿分画及び乏血小板血漿分画のうちの１つ以上に、前記濃縮水性二相溶液を加えた後に、室温インキュベーションのための時間を与えることをさらに含む、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
前記濃縮水性二相溶液と、前記骨髄濃縮物／多血小板血漿分画又は乏血小板血漿分画のうちの１つ以上とを、遠心分離のために前記遠心分離デバイスに戻した後、前記濃縮水性二相溶液と、乏細胞外小胞血漿とを、前記第１の容器に集めることをさらに含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
前記濃縮水性二相溶液と、前記骨髄濃縮物／多血小板血漿分画又は乏血小板血漿分画のうちの１つ以上とを、遠心分離のために前記遠心分離デバイスに戻すことが、前記乏血小板血漿分画から細胞外小胞を単離して、注射用の細胞外小胞ペレットを作成することを含む、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記骨髄濃縮物／多血小板血漿分画及び乏血小板血漿分画のうちの１つ以上に、濃縮水性二相溶液を加えることが、前記第１の容器内の、前記骨髄濃縮物／多血小板血漿分画及び乏血小板血漿分画のうちの１つ以上の量に基づいて、前記骨髄濃縮物／多血小板血漿分画及び乏血小板血漿分画のうちの１つ以上に、前記濃縮水性二相溶液を加えることを含む、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
骨髄／多血小板血漿分画及び乏血小板血漿分画のうちの１つ以上を、前記濃縮システムの第１の容器に集めることが、前記乏血小板血漿分画のみを前記第１の容器に集め、その後前記骨髄／多血小板血漿分画をシリンジに集めることを含む、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
（１）骨髄濃縮物／多血小板血漿分画及び乏血小板血漿分画のうちの１つ以上に、濃縮水性二相溶液を加えることが、前記乏血小板血漿分画のみに濃縮水性二相溶液を加えることを含み、（２）前記濃縮水性二相溶液と、前記骨髄濃縮物／多血小板血漿分画又は乏血小板血漿分画のうちの１つ以上とを、遠心分離のために前記遠心分離デバイスに戻すことが、前記濃縮水性二相溶液及び前記乏血小板血漿分画を、遠心分離のために前記遠心分離デバイスに戻すことと、前記濃縮水性二相溶液及び前記乏血小板血漿分画を、遠心分離することとを含み、又は（３）前記骨髄濃縮物／多血小板血漿分画及び細胞外小胞のうちの１つ以上を、注射用シリンジにポンプ注入することをさらに含み、前記骨髄濃縮物／多血小板血漿分画及び細胞外小胞のうちの１つ以上を、前記注射用シリンジにポンプ注入することが、前記細胞外小胞を前記注射用シリンジにポンプ注入することを含み、前記シリンジが、１回目の遠心分離の後の、前記骨髄濃縮物／多血小板血漿を含む、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記乏血小板血漿のみに前記濃縮水性二相溶液を加え、次いで前記細胞外小胞を前記注射用シリンジにポンプ注入することと、前記シリンジが前記骨髄濃縮物／多血小板血漿を含むことにより、前記シリンジにおける残留濃縮水性二相溶液が希釈される、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
注射する水性二相溶液の量を、前記シリンジ内の単離した前記骨髄／多血小板血漿分画の前記量に基づいて決定し、使用する水性二相溶液の濃度を減少させ、前記骨髄／多血小板血漿分画中の有核細胞に対する前記水性二相溶液の影響を最小にすることをさらに含む、請求項７に記載の方法。
【請求項１１】
前記細胞外小胞の量を、前記シリンジ内の単離した前記骨髄／多血小板血漿分画の前記量に基づいて決定することをさらに含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
細胞外小胞を単離する方法であって、
濃縮水性二相溶液を、シリンジ又は容器内に配置することと、
乏血小板血漿分画又は骨髄／多血小板血漿分画のうちの１つ以上を、前記濃縮水性二相溶液に加えることと、
前記シリンジ又は前記容器内に配置された前記濃縮水性二相溶液と、前記乏血小板血漿分画又は前記骨髄／多血小板血漿分画のうちの１つ以上とを、遠心分離し、細胞外小胞及び骨髄／多血小板血漿分画のうちの１つ以上を単離することと、
前記濃縮水性二相溶液と、前記乏血小板血漿分画及び前記骨髄／多血小板血漿分画のうちの１つ以上との遠心分離から、細胞外小胞及び骨髄／多血小板血漿分画のうちの１つ以上を作成することと、を含む、方法。
【請求項１３】
（１）濃縮水性二相溶液を、シリンジ又は容器内に配置することが、濃縮ＰＥＧ−ＤＥＸ溶液をシリンジ又は容器内に配置することを含み、又は（２）乏血小板血漿分画又は骨髄／多血小板血漿分画のうちの１つ以上を、前記濃縮水性二相溶液に加えることが、前記濃縮水性二相溶液の前記量が希釈されるように、ある量の乏血小板血漿を加えることを含む、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
乏血小板血漿分画又は骨髄／多血小板血漿分画のうちの１つ以上を、前記濃縮水性二相溶液に加えた後に、室温インキュベーションのための時間を与えることをさらに含む、請求項１２又は１３に記載の方法。
【請求項１５】
作成された前記細胞外小胞を、多血小板血漿、骨髄濃縮物、又は乏血小板血漿のうちの１つ以上を含む生体液と混合することをさらに含む、請求項１２〜１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
細胞外小胞を単離するシステムであって、
血液又は骨髄のうちの１つ以上を受け入れる第１の入力ポートと、
赤血球、乏血小板血漿、及び／又は骨髄濃縮物／多血小板血漿のうちの１つ以上の分画を分離するために、前記第１の入力ポートに結合された遠心分離デバイスと、
前記遠心分離デバイスから遠心分離された、骨髄濃縮物分画／多血小板血漿分画又は乏血小板血漿分画のうちの１つ以上を収集するための容器であって、前記容器が、前記遠心分離デバイスに結合されている、容器と、
前記第１の容器に結合され、第２の入力ポートに結合されたシリンジを用いて水性二相溶液を受け入れる第２の入力ポートと、を含み、
前記水性二相溶液、及び前記骨髄濃縮物分画／多血小板血漿分画又は乏血小板血漿分画のうちの前記１つ以上が、遠心分離のために前記遠心分離デバイスに戻され、細胞外小胞又は前記骨髄濃縮物／多血小板血漿分画のうちの１つ以上が注射用に単離されるように構成される、システム。
【請求項１７】
前記第２の入口ポート、したがって前記第１の容器に結合されたシリンジをさらに含み、前記シリンジが、前記第１の容器内に配置された、前記骨髄濃縮物分画／多血小板血漿分画又は乏血小板血漿分画のうちの１つ以上に加えられる、予混合済みの水性二相溶液を含む、請求項１６に記載のシステム。
【請求項１８】
前記骨髄濃縮物／多血小板血漿分画又は乏血小板血漿分画に加えられる前記水性二相溶液の量が、前記容器内に配置される前記骨髄濃縮物／多血小板血漿分画又は乏血小板血漿分画のうちの１つ以上の出力量に基づく、請求項１６又は１７に記載のシステム。
【請求項１９】
（１）単離した前記細胞外小胞、又は遠心分離後に作成した前記骨髄濃縮物分画／多血小板血漿分画のうちの１つ以上を受け入れる単離シリンジをさらに含み、（２）前記遠心分離デバイスに結合された出口ポートと、単離した細胞外小胞、又は遠心分離後に作成した前記骨髄濃縮物／多血小板血漿分画のうちの１つ以上を受け入れるために前記出口ポートに結合された単離シリンジとをさらに含み、又は（３）前記水性二相溶液が、濃縮ＰＥＧ−ＤＥＸ溶液である、請求項１６〜１８のいずれか一項に記載のシステム。
【請求項２０】
前記容器が第１の容器であり、前記システムが、前記遠心分離デバイスから遠心分離された赤血球分画を収集するための第２の容器をさらに含んでおり、前記第２の容器が前記遠心分離デバイスに結合される、請求項１６〜１９のいずれか一項に記載のシステム。
【請求項２１】
細胞外小胞を単離する方法であって、
乏血小板血漿分画又は骨髄濃縮物／多血小板血漿分画の１つ以上を濃縮水性二相溶液に添加し、
前記濃縮水性二相溶液及び前記乏血小板血漿分画又は前記骨髄濃縮物／多血小板血漿分画の前記１つ以上を遠心分離して細胞外小胞及び骨髄濃縮物／多血小板血漿分画のうちの１つ以上を単離し、及び
前記濃縮水性二相溶液と前記乏血小板血漿分画及び前記骨髄濃縮物／多血小板血漿分画の前記１つ以上との遠心分離から、注射のための細胞外小胞及び骨髄濃縮物／多血小板血漿分画のうちの１つ以上を作製すること
を含む方法。
【請求項２２】
前記濃縮水性二相溶液と前記乏血小板血漿分画及び前記骨髄濃縮物／多血小板血漿分画の前記１つ以上との遠心分離から、注射のための細胞外小胞及び骨髄濃縮物／多血小板血漿分画のうちの１つ以上を作製することが、前記濃縮水性二相溶液と前記乏血小板血漿分画及び前記骨髄濃縮物／多血小板血漿分画の前記１つ以上との遠心分離から、注射のための細胞外小胞を作製することを含む、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記濃縮水性二相溶液と前記乏血小板血漿分画及び前記骨髄濃縮物／多血小板血漿分画の前記１つ以上との遠心分離から、注射のための細胞外小胞及び骨髄濃縮物／多血小板血漿分画のうちの１つ以上を作製することが、細胞外小胞を含む沈殿物を作製することを含む、請求項２１又は２２に記載の方法。
【請求項２４】
濃縮水性二相溶液を乏血小板血漿分画又は前記骨髄濃縮物／多血小板血漿分画の１つ以上に添加した後に、所定時間にわたって室温インキュベーションを行うことをさらに含む、請求項２１〜２３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２５】
作製された前記細胞外小胞と多血小板血漿、骨髄濃縮物又は乏血小板血漿の１つ以上を含む生体液とを混合させることをさらに含む、請求項２１〜２４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２６】
濃縮水性二相溶液をシリンジ又は容器に分与することをさらに含み、前記濃縮水性二相溶液をシリンジ又は容器に分与することが濃縮ＰＥＧ−ＤＥＸ溶液をシリンジ又は容器に分与することを含む、請求項２１〜２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２７】
前記濃縮水性二相溶液を前記乏血小板血漿分画に添加し、遠心分離によって沈殿した細胞外小胞を前記骨髄濃縮物／多血小板血漿分画に添加し、残留する濃縮水性二相溶液を減少させることをさらに含む、請求項２１〜２６のいずれか一項に記載の方法。