【誤訳訂正書】
【提出日】令和3年8月25日(2021.8.25)
【誤訳訂正１】
【訂正対象書類名】特許請求の範囲
【訂正対象項目名】全文
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
流体試料中の標的核酸の存在を検出するための方法であって、
増幅によって前記試料中の前記標的核酸を増幅させて、増幅産物を生成することであって、
前記増幅によって、タグを前記増幅産物に組み込み、
前記増幅が、１５サイクル未満の増幅を含む、増幅産物を生成することと、
前記タグに特異的に結合する結合メンバーを含む複数の捕捉物上で前記増幅産物を捕捉し、それによって捕捉物−増幅産物を含む複合体を生成することと、
前記複合体中の前記増幅産物を検出可能に標識して、検出可能に標識された複合体を生成することと、
各ウェルが１つ以下の捕捉物を含有するように、前記捕捉物を複数のウェルに空間的に分離することと、
前記複数のウェル中の前記検出可能に標識された複合体の存在を検出することと、を含み、
前記タグと当該タグに特異的に結合する結合メンバーとの組み合わせは、抗体−抗原、抗体−ハプテン、レセプター−リガンド、タンパク質−補因子、酵素−補因子、およびタンパク質−リガンドからなる群から選択される、方法。
【請求項２】
前記増幅が、１４サイクル未満の増幅を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記増幅が、１３サイクル未満の増幅を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記増幅が、１２サイクル未満の増幅を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記増幅が、１１サイクル未満の増幅を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記増幅が、１０サイクル未満の増幅を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記増幅が、５〜１５サイクルの増幅を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記増幅が、５〜１３サイクルの増幅を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記増幅が、６〜１５サイクルの増幅を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記増幅が、６〜１０サイクルの増幅を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
前記増幅が、８〜１５サイクルの増幅を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
前記増幅が、８〜１３サイクルの増幅を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
前記増幅が、８〜１０サイクルの増幅を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
前記増幅が、少なくとも１０００分子の前記増幅産物を生成する、請求項１に記載の方法。
【請求項１５】
前記増幅が、少なくとも３０００分子の前記増幅産物を生成する、請求項１に記載の方法。
【請求項１６】
前記増幅が、少なくとも６０００分子の前記増幅産物を生成する、請求項１に記載の方法。
【請求項１７】
流体試料中の標的核酸の存在を検出するための方法であって、
増幅産物を生成するために、増幅によって前記試料中の前記標的核酸を増幅することであって、
前記増幅によって、タグを前記増幅産物に組み込み、
前記増幅が、１０分未満の時間行われる、増幅することと、
前記タグに特異的に結合する結合メンバーを含む複数の捕捉物上で前記増幅産物を捕捉し、それによって捕捉物−増幅産物を含む複合体を生成することと、
前記複合体中の前記増幅産物を検出可能に標識して、検出可能に標識された複合体を生成することと、
各ウェルが１つ以下の捕捉物を含有するように、前記捕捉物を複数のウェルに空間的に分離することと、
前記複数のウェル中の前記検出可能に標識された複合体の存在を検出することと、を含み、
前記タグと当該タグに特異的に結合する結合メンバーとの組み合わせは、抗体−抗原、抗体−ハプテン、レセプター−リガンド、タンパク質−補因子、酵素−補因子、およびタンパク質−リガンドからなる群から選択される、方法。
【請求項１８】
前記増幅が、１〜５分の間行われる、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
流体試料中の標的核酸の存在を検出するための方法であって、
少なくとも１０００分子の増幅産物を生成するために、前記試料中の前記標的核酸を増幅によって増幅することであって、
前記増幅によって、タグを前記増幅産物に組み込み、
前記タグに特異的に結合する結合メンバーを含む複数の捕捉物上で前記増幅産物を捕捉し、それによって捕捉物−増幅産物を含む複合体を生成することと、
前記複合体中の前記増幅産物を検出可能に標識して、検出可能に標識された複合体を生成することと、
各ウェルが１つ以下の捕捉物を含有するように、前記捕捉物を複数のウェルに空間的に分離することと、
前記複数のウェル中の前記検出可能に標識された複合体の存在を検出することと、を含み、
前記タグと当該タグに特異的に結合する結合メンバーとの組み合わせは、抗体−抗原、抗体−ハプテン、レセプター−リガンド、タンパク質−補因子、酵素−補因子、およびタンパク質−リガンドからなる群から選択される、方法。
【請求項２０】
前記方法が、少なくとも２０００分子の増幅産物の存在を検出する、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記方法が、少なくとも３０００分子の増幅産物の存在を検出する、請求項１９に記載の方法。
【請求項２２】
前記方法が、少なくとも６０００分子の増幅産物の存在を検出する、請求項１９に記載の方法。
【請求項２３】
流体試料中の標的核酸の存在を検出するための方法であって、
少なくとも１０ａＭの濃度の増幅産物を生成するために、前記試料中の前記標的核酸を増幅によって増幅することであって、
前記増幅によって、タグを前記増幅産物に組み込み、
前記タグに特異的に結合する結合メンバーを含む複数の捕捉物上で前記増幅産物を捕捉し、それによって捕捉物−増幅産物を含む複合体を生成する、増幅することと、
前記複合体中の前記増幅産物を検出可能に標識して、検出可能に標識された複合体を生成することと、
各ウェルが１つ以下の捕捉物を含有するように、前記捕捉物を複数のウェルに空間的に分離することと、
前記複数のウェル中の前記検出可能に標識された複合体の存在を検出することと、を含み、
前記タグと当該タグに特異的に結合する結合メンバーとの組み合わせは、抗体−抗原、抗体−ハプテン、レセプター−リガンド、タンパク質−補因子、酵素−補因子、およびタンパク質−リガンドからなる群から選択される、方法。
【請求項２４】
前記増幅産物の濃度が、少なくとも２０ａＭである、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記増幅産物の濃度が、少なくとも３０ａＭである、請求項２３に記載の方法。
【請求項２６】
前記増幅産物の濃度が、少なくとも１００ａＭである、請求項２３に記載の方法。
【請求項２７】
前記方法が、前記検出可能に標識された複合体を含有するウェルの割合を決定することをさらに含み、前記ウェルの割合が、前記流体試料中の前記標的核酸の濃度を決定するために使用される、請求項１から２６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２８】
前記方法が、前記ウェル中の前記検出可能に標識された複合体の信号の測定された強度レベルに少なくとも部分的に基づいて、前記流体試料中の前記標的核酸の濃度の測定値を決定することをさらに含む、請求項１から２６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２９】
前記方法が、前記増幅産物の複数の捕捉物上での前記捕捉の前に、
第１の核酸鎖および第２の核酸鎖を生成するために、前記増幅産物を変性することであって、前記第１の核酸鎖が、前記タグを含み、前記タグが、第１のタグである、変性することと、
前記第１の核酸鎖のセグメントに相補的であるプローブを前記第１の核酸鎖にアニールして、二重タグ付き増幅産物を生成することであって、
前記プローブが、前記第１のタグとは異なる第２のタグを含む、二重タグ付き増幅産物を生成することと、
前記第１のタグに特異的に結合する第１の結合メンバーである、前記結合メンバーを含む前記複数の捕捉物上で、前記第１のタグを含む前記第１の核酸鎖を含む前記二重タグ付き増幅産物を捕捉して、捕捉物−第１の核酸複合体を生成することと、
前記捕捉物−第１の核酸複合体を、前記プローブ中の前記第２のタグに特異的に結合する第２の結合メンバーであって、検出可能に標識される、前記第２の結合メンバーと接触させ、それによって前記検出可能に標識された複合体を生成することと、を含む、請求項１から２８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３０】
前記増幅産物が、第１の核酸鎖および第２の核酸鎖を含み、前記増幅によって、第１のタグを前記第１の核酸鎖に、そして第２のタグを前記第２の核酸鎖に組み込み、前記増幅産物の前記捕捉が、
ａ．前記第１のタグに特異的に結合する第１の結合メンバーを含む複数の捕捉物上で前記第１の核酸鎖を捕捉し、それによって捕捉物−増幅産物を含む複合体を生成することであって、
前記検出可能に標識された複合体を生成するために、前記複合体中の前記増幅産物を検出可能に標識することが、
前記複合体を、前記第２のタグに特異的に結合する第２の結合メンバーであって、検出可能に標識される、第２の結合メンバーと接触させ、それによって前記検出可能に標識された複合体を生成することを含む、複合体を生成すること、または
ｂ．前記第２のタグに特異的に結合する第２の結合メンバーを含む複数の捕捉物上で前記第２の核酸鎖を捕捉し、それによって捕捉物−増幅産物を含む複合体を生成することであって、
前記複合体中の前記増幅産物を検出可能に標識して、前記検出可能に標識された複合体を生成することが、
前記複合体を、前記第１のタグに特異的に結合する第１の結合メンバーであって、検出可能に標識される、第１の結合メンバーと接触させ、それによって前記検出可能に標識された複合体を生成することを含む、複合体を生成すること、を含む、請求項１から２８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３１】
前記増幅産物中の第１の核酸鎖が、第１のタグを含み、前記複数の捕捉物が、前記第１のタグに特異的に結合する第１の結合メンバーを含み、前記第１の核酸鎖が、第２のタグを含む複数のヌクレオチドを含み、
前記増幅産物を捕捉することが、前記増幅産物を、第１の結合メンバーを含む複数の捕捉物と接触させて、前記捕捉物−増幅産物を含む前記複合体を生成することを含み、
検出可能に標識された複合体を生成するために、前記複合体中の前記増幅産物を前記検出可能に標識することが、
前記複合体を、前記第２のタグに特異的に結合する第２の結合メンバーであって、検出可能に標識される、第２の結合メンバーと接触させ、それによって前記検出可能に標識された複合体を生成することを含む、請求項１から２８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３２】
前記検出可能に標識された複合体が、検出可能な信号を生成する信号伝達部分を含む、請求項１から２８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３３】
前記信号伝達部分が、基板に作用して検出可能な信号を生成する酵素である、請求項３２に記載の方法。
【誤訳訂正２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０００６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０００６】
特定の実施形態では、増幅は、１４サイクル未満、１３サイクル未満、１１サイクル未満、または１０サイクル未満の増幅を含む。特定の実施形態では、増幅は、５〜１５サイクル、５〜１３サイクル、６〜１５サイクル、６〜１０サイクル、８〜１５サイクル、８〜１３サイクル、８〜１０サイクル、２〜１０サイクル、３〜１０サイクル、４〜１０サイクル、５〜１０サイクル、または３〜５サイクルの増幅を含む。各増幅サイクルは、増幅サイクルの始めに存在する標的核酸の数を２倍にする。特定の場合には、増幅は、約６０００個の標的核酸分子を生成し、それらは次に検出される。特定の場合には、増幅サイクルによって生成され、かつ本明細書に記載される方法によって検出可能な標的核酸分子の数は、１０，０００〜１００、８０００〜３０００、７０００〜５０００、または６５００〜５５００個などの、９０００、８０００、７０００、６０００、５０００、４０００、３０００、１０００個など、１００００個未満である。本方法を使用して、増幅前に、試料中に存在する少なくとも１００、５０、３０、１０、または５個の標的核酸を検出し得る。特定の実施形態では、本方法は、わずか１５回以下の増幅ラウンド後の、試料中の５〜１００または５〜５０分子などの試料中の少数の標的核酸分子の検出に好適である。
【誤訳訂正３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０００９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０００９】
特定の実施形態では、試料中の標的核酸の存在を検出するための方法は、試料中の標的核酸を増幅によって増幅させて、少なくとも１０００分子の増幅産物分子を生成することであって、増幅させることにより、タグを増幅産物分子に組み込む、増幅産物を生成することと、タグに特異的に結合する結合メンバーを含む複数の捕捉物上で増幅産物を捕捉し、それによって捕捉物−増幅産物を含む複合体を生成することと、複合体中の増幅産物を検出可能に標識して、検出可能に標識された複合体を生成することと、捕捉物を、複数のウェルであって、１ウェル当たり１つ以下の捕捉物を含有するようにサイズ決めされる、ウェルに空間的に分離することと、複数のウェル中の検出可能に標識された複合体の存在を検出することと、を含む。
【誤訳訂正４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１０】
特定の実施形態では、増幅は、少なくとも１５００分子、少なくとも２０００分子、少なくとも３０００分子、少なくとも４０００分子、少なくとも５０００分子、または、少なくとも６０００分子、少なくとも７０００分子、少なくとも８０００分子、少なくとも１０，０００分子の増幅産物分子を生成する。
【誤訳訂正５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１１】
特定の実施形態では、試料中の標的核酸の存在を検出するための方法は、試料中の標的核酸を増幅によって増幅させて、少なくとも１０ａＭの濃度である増幅産物分子を生成することであって、増幅によって、タグを増幅産物分子に組み込む、増幅産物を生成することと、タグに特異的に結合する結合メンバーを含む複数の捕捉物上で増幅産物を捕捉し、それによって捕捉物−増幅産物を含む複合体を生成することと、複合体中の増幅産物を検出可能に標識して、検出可能に標識された複合体を生成することと、捕捉物を、複数のウェルであって、１ウェル当たり１つ以下の捕捉物を含有するようにサイズ決めされる、ウェルに空間的に分離することと、複数のウェル中の検出可能に標識された複合体の存在を検出することと、を含む。
【誤訳訂正６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１２】
特定の実施形態では、増幅産物は、少なくとも２０ａＭ〜３０ａＭ、少なくとも３０ａＭ〜１００ａＭ、少なくとも１００ａＭ〜１ｆＭ、少なくとも１ｆＭ〜１０ｆＭ、少なくとも１０ｆＭ〜１００ｆＭ、または少なくとも１００ｆＭ〜１ｐＭ、少なくとも１ｐＭ〜１０ｐＭ、少なくとも１０ｐＭ〜１００ｐＭ、または少なくとも１００ｐＭ、少なくとも２０ａＭ、少なくとも３０ａＭ、少なくとも１００ａＭ、少なくとも１ｆＭ、少なくとも１０ｆＭ、または少なくとも１００ｆＭ、少なくとも１ｐＭ、少なくとも１０ｐＭの濃度を有する。
【誤訳訂正７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２３７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２３７】
特定の実施形態では、本明細書に開示されるＮＡＴ法は、少なくとも１ａＭの濃度で存在する標的核酸を検出する。特定の実施形態では、本明細書に開示されるＮＡＴ法は、少なくとも１ａＭ以上、例えば、１０ａＭ、１００ａＭ、１ｆＭ、１０ｆＭ、１００ｆＭ、１ｐＭ、１０ｐＭ、１００ｐＭ以上の濃度で存在する標的核酸を検出する。特定の実施形態では、本明細書に開示されるＮＡＴ法は、標的核酸から生成された増幅産物を検出し、ここで増幅産物は、２５ａＭ〜１０ｆＭの濃度で存在する。したがって、本開示の検出方法は、増幅前に、試料中に１ａＭ未満の濃度で存在する標的核酸を検出することができる。ほとんどの場合、検出に十分な量の標的核酸を提供するためには、わずか１５倍、１０倍、５倍、２倍の増幅の増幅が必要であるか、または全く増幅が必要ではない。
特定の実施形態では、開示される方法は、増幅によって標的核酸の複製数が増加することから生成される増幅生成物を検出することができ、その場合、少なくとも１０００分子の増幅生成物が生成される。したがって、特定の実施形態では、流体試料中の標的核酸の存在を検出するための方法は、試料中の標的核酸を増幅によって増幅させて、少なくとも１０００分子の増幅産物を生成することであって、増幅により、増幅産物にタグを組み込む、増幅産物を生成することと、タグに特異的に結合する結合メンバーを含む複数の捕捉物上で増幅産物を捕捉し、それによって捕捉物−増幅産物を含む複合体を生成することと、複合体中の増幅産物を検出可能に標識して、検出可能に標識された複合体を生成することと、各ウェルが１つ以下の捕捉物を含有するように捕捉物を空間的に複数のウェルに分離することと、複数のウェル中の検出可能に標識された複合体の存在を検出することと、を含む。