【手続補正書】
【提出日】令和3年9月3日(2021.9.3)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
互いに可逆的に架橋された複数の治療用タンパク質単量体を含み、動的光散乱によって測定されるサイズが直径３０ｎｍ〜１０００ｎｍの間であるタンパク質クラスターであって、前記タンパク質クラスターは、前記治療用タンパク質単量体上の求核性基と反応し、それによって前記治療用タンパク質単量体を架橋させて前記タンパク質クラスターを生成することのできる、２つ、３つ、または４つの官能基をそれぞれが有し、それを必要とする対象に投与された後、生理的条件下で分解されて、前記タンパク質クラスターから前記治療用タンパク質単量体を放出する、複数の生分解性架橋剤と前記治療用タンパク質単量体を反応させることによって入手されうる、タンパク質クラスターと、
薬学的に許容される担体または賦形剤と、
必要に応じて、ポリカチオンであることが好ましい、前記タンパク質クラスター上の表面修飾と
を含む治療用組成物であって、
ただし、前記生分解性架橋剤が、前記治療用タンパク質単量体上の求核性基と反応しうる２つの官能基をそれぞれ有する場合、それぞれの架橋剤は、式（Ｉ）または式（ＩＩ）の式を有する、治療用組成物：
【化２６】
2020532568.tif 000001
［式中、
ＬＧ１およびＬＧ２は、それぞれ、トリフレート、トシル、Ｃｌ、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド、およびイミダゾリドから独立に選択される脱離基であり、
Ｙ１およびＹ２は、ＯおよびＳからそれぞれ独立に選択され、
Ｘは、出現する毎に、Ｏ、Ｓ、およびＮＨから独立に選択され、
Ｌは、
【化２７】
2020532568.tif 000002
が生分解性であるようなリンカーであり、
ｍは、出現する毎に、１〜６から選択される整数、好ましくは、２である］；あるいは
【化３１】
2020532568.tif 000003
［式中、
Ｘ１およびＸ２は、トリフレート、トシル、およびＮ−ヒドロキシスクシンイミドからそれぞれ独立に選択され、
Ａ１およびＡ３は、それぞれ独立に、−（ＣＲ１Ｒ２）ｎ−であり、
Ａ２は、−（ＣＲ１Ｒ２）ｍ−であり、
Ｙ１およびＹ２は、ＮＲ３、Ｏ、およびＳからそれぞれ独立に選択され、
Ｒ１およびＲ２は、出現する毎に、水素、ハロゲン、ヒドロキシル、Ｃ１〜１２アルキル、Ｃ２〜１２アルケニル、Ｃ３〜１２シクロアルキル、Ｃ２〜１２ヘテロシクリル；１つまたは複数のハロ、ヒドロキシル、Ｃ１〜６アルキル、および／またはＣ１〜６アルコキシルで必要に応じて置換されているＣ６〜１２アリール；および１つまたは複数のハロ、ヒドロキシル、Ｃ１〜６アルキル、および／またはＣ１〜６アルコキシルで必要に応じて置換されているＣ４〜１２ヘテロアリールから独立に選択され、
Ｒ３は、水素、Ｃ１〜１２アルキル、Ｃ２〜１２アルケニル、Ｃ３〜１２シクロアルキル、Ｃ２〜１２ヘテロシクリル；１つまたは複数のハロ、ヒドロキシル、Ｃ１〜６アルキル、および／またはＣ１〜６アルコキシルで必要に応じて置換されているＣ６〜１２アリール；および１つまたは複数のハロ、ヒドロキシル、Ｃ１〜６アルキル、および／またはＣ１〜６アルコキシルで必要に応じて置換されているＣ４〜１２ヘテロアリールから選択され、
ｎは、出現する毎に、１〜１２から独立に選択される整数であり、
ｍは、０〜１２から選択される整数である］。
【請求項２】
前記架橋剤が対称である、請求項１に記載の治療用組成物。
【請求項３】
式（Ｉ）において、
（ｉ）ＬＧ１およびＬＧ２が、タンパク質、薬物、および／または粒子と反応しうる、
（ｉｉ）ＬＧ１およびＬＧ２が、両方ともイミダゾリドまたはＮ−ヒドロキシスクシンイミドである、
（ｉｉｉ）
【化２８】
2020532568.tif 000004
が加水分解可能である、ならびに／あるいは
（ｉｖ）Ｌが、
（ａ）  −（ＣＨ２）ｎ−［式中、ｎは、０〜５から選択される整数である］、
（ｂ）
【化２９】
2020532568.tif 000005
［式中、ｎは、０〜５から選択される整数である］、または
（ｃ）
【化３０】
2020532568.tif 000006
［式中、Ｘは、出現する毎に、Ｏ、Ｓ、およびＮＨから独立に選択される］
から選択される、請求項１または２に記載の治療用組成物。
【請求項４】
式（ＩＩ）において、
（ｉ）Ｘ１およびＸ２が、それぞれ、タンパク質、薬物、および／または粒子と反応しうる脱離基であり、必要に応じて、Ｘ１およびＸ２が、両方ともＮ−ヒドロキシスクシンイミドである、
（ｉｉ）Ｒ１およびＲ２が、両方とも水素であり、必要に応じてＡ１およびＡ３が、両方とも−（ＣＨ２）２−である、
（ｉｉｉ）Ａ２が−（ＣＨ２）２−である、ならびに／あるいは
（ｉｖ）Ｙ１およびＹ２が、両方ともＯである、請求項１または２に記載の治療用組成物。
【請求項５】
前記架橋剤が
【化３２】
2020532568.tif 000007
である、請求項４に記載の治療用組成物。
【請求項６】
Ａ２が結合であり、必要に応じてＹ１およびＹ２が、両方ともＮＨである、請求項１または２に記載の治療用組成物。
【請求項７】
前記架橋剤が
【化３３】
2020532568.tif 000008
である、請求項６に記載の治療用組成物。
【請求項８】
前記架橋剤が、Ａ−Ｂ−Ｃの式を有し、Ｂは、任意であり、Ａは、構造テンプレートを表し、Ｂは、ポリマースペーサーを表し、Ｃは、加水分解可能な連結と、求核性基と反応しうる官能基とを表し、必要に応じてＡが、ジオール、トリオール、テトラオール、ポリオール、ジチオール、トリチオール、テトラチオール、ポリチオール、ジアミン、トリアミン、テトラアミン、またはポリアミンから選択され、
Ｂが、ポリエチレングリコール、糖、ポリオール、ポリエーテル、ポリチオエーテル、ポリアミン、ポリエステル、アルカン、フェニル、またはアミノ酸から選択され、
Ｃが、式（Ｉａ）：
【化２４】
2020532568.tif 000009
［式中、
ＬＧ２は、トリフレート、トシル、Ｃｌ、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド、およびイミダゾリドから選択される脱離基であり、
Ｙ２は、ＯおよびＳから選択され、
Ｘは、出現する毎に、Ｏ、Ｓ、およびＮＨから独立に選択され、
Ｌは、任意であり、
【化２５】
2020532568.tif 000010
が生分解性であるようなリンカーであり、
ｍは、１〜６から選択される整数、好ましくは、２である］
を有する、請求項１に記載の治療用組成物。
【請求項９】
前記タンパク質クラスターの形成を最適化する薬剤をさらに含み、必要に応じて前記薬剤が、（ｉ）前記薬剤なしの組成物に比べて、未反応タンパク質を減らすことにより、または（ｉｉ）前記薬剤なしの組成物に比べて、サイズが１０００ｎｍより大きいクラスターの形成を減らすことにより、前記タンパク質クラスター形成の収量を増大させる、請求項１から８のいずれか一項に記載の治療用組成物。
【請求項１０】
前記治療用タンパク質単量体が、１種または複数のサイトカイン分子および／または１種または複数の共刺激性分子を含み、
（ｉ）前記１種または複数のサイトカイン分子は、ＩＬ１５、ＩＬ２、ＩＬ７、ＩＬ１０、ＩＬ１２、ＩＬ１８、ＩＬ２１、ＩＬ−２３、ＩＬ−４、ＩＬ１アルファ、ＩＬ１ベータ、ＩＬ−５、ＩＦＮガンマ、ＴＮＦａ、ＩＦＮアルファ、ＩＦＮベータ、ＧＭ−ＣＳＦ、またはＧＣＳＦから選択され、
（ｉｉ）前記１種または複数の共刺激性分子は、ＣＤ１３７、ＯＸ４０、ＣＤ２８、ＧＩＴＲ、ＶＩＳＴＡ、抗ＣＤ４０、またはＣＤ３から選択される、
請求項１から９のいずれか一項に記載の治療用組成物。
【請求項１１】
前記治療用タンパク質単量体が、ＩＬ−１５と、ＩＬ−１５受容体アルファの細胞外ＩＬ−１５結合ドメインとを含む、請求項１０に記載の治療用組成物。
【請求項１２】
前記治療用タンパク質単量体が、ＩＬ−１５と、Ｆｃに融合された可溶性ＩＬ−１５受容体アルファドメインとを含む、請求項１０に記載の治療用組成物。
【請求項１３】
タンパク質クラスターを含む治療用組成物を調製する方法であって、動的光散乱によって測定されるサイズが直径３０ｎｍ〜１０００ｎｍの間である前記タンパク質クラスターを形成するために、複数の治療用タンパク質単量体を複数の生分解性架橋剤と反応させることを含み、
前記架橋剤は、前記治療用タンパク質単量体上の求核性基と反応しうる２つ、３つ、または４つの官能基をそれぞれが有し、前記架橋剤は、それを必要とする対象に投与された後、生理的条件下で分解されて、前記タンパク質クラスターから前記治療用タンパク質単量体を放出し、
ただし、前記架橋剤が、前記治療用タンパク質単量体上の求核性基と反応しうる２つの官能基をそれぞれ有する場合、それぞれの架橋剤は、式（Ｉ）または式（ＩＩ）の式を有する、方法：
【化２６】
2020532568.tif 000011
［式中、
ＬＧ１およびＬＧ２は、それぞれ、トリフレート、トシル、Ｃｌ、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド、およびイミダゾリドから独立に選択される脱離基であり、
Ｙ１およびＹ２は、ＯおよびＳからそれぞれ独立に選択され、
Ｘは、出現する毎に、Ｏ、Ｓ、およびＮＨから独立に選択され、
Ｌは、
【化２７】
2020532568.tif 000012
が生分解性であるようなリンカーであり、
ｍは、出現する毎に、１〜６から選択される整数、好ましくは、２である］；あるいは
【化３１】
2020532568.tif 000013
［式中、
Ｘ１およびＸ２は、トリフレート、トシル、およびＮ−ヒドロキシスクシンイミドからそれぞれ独立に選択され、
Ａ１およびＡ３は、それぞれ独立に、−（ＣＲ１Ｒ２）ｎ−であり、
Ａ２は、−（ＣＲ１Ｒ２）ｍ−であり、
Ｙ１およびＹ２は、ＮＲ３、Ｏ、およびＳからそれぞれ独立に選択され、
Ｒ１およびＲ２は、出現する毎に、水素、ハロゲン、ヒドロキシル、Ｃ１〜１２アルキル、Ｃ２〜１２アルケニル、Ｃ３〜１２シクロアルキル、Ｃ２〜１２ヘテロシクリル；１つまたは複数のハロ、ヒドロキシル、Ｃ１〜６アルキル、および／またはＣ１〜６アルコキシルで必要に応じて置換されているＣ６〜１２アリール；および１つまたは複数のハロ、ヒドロキシル、Ｃ１〜６アルキル、および／またはＣ１〜６アルコキシルで必要に応じて置換されているＣ４〜１２ヘテロアリールから独立に選択され、
Ｒ３は、水素、Ｃ１〜１２アルキル、Ｃ２〜１２アルケニル、Ｃ３〜１２シクロアルキル、Ｃ２〜１２ヘテロシクリル；１つまたは複数のハロ、ヒドロキシル、Ｃ１〜６アルキル、および／またはＣ１〜６アルコキシルで必要に応じて置換されているＣ６〜１２アリール；および１つまたは複数のハロ、ヒドロキシル、Ｃ１〜６アルキル、および／またはＣ１〜６アルコキシルで必要に応じて置換されているＣ４〜１２ヘテロアリールから選択され、
ｎは、出現する毎に、１〜１２から独立に選択される整数であり、
ｍは、０〜１２から選択される整数である］
方法。
【請求項１４】
（ｉ）前記の反応させるステップが、約５℃〜約４０℃の間の温度で実施される、
（ｉｉ）前記反応させるステップが、約１分間〜約８時間実施される、
（ｉｉｉ）前記方法が、前記タンパク質クラスターに前記表面修飾を提供することをさらに含む、ならびに／あるいは
（ｉｖ）前記方法が、前記タンパク質クラスターを精製することをさらに含む、
請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
細胞療法組成物を調製する方法であって、
請求項１から１２のいずれか一項に記載の治療用組成物を提供することと、
前記タンパク質クラスターを、有核細胞と共に、好ましくは約３０〜６０分間インキュベートすることとを含み、必要に応じて前記有核細胞が、Ｔ細胞またはＮＫ細胞である、方法。
【請求項１６】
有核細胞と会合された、請求項１から１２のいずれか一項に記載の治療用組成物を含む細胞療法組成物であって、必要に応じて前記有核細胞が、Ｔ細胞またはＮＫ細胞である、細胞療法組成物。
【請求項１７】
細胞療法において使用するための請求項１６に記載の細胞療法組成物であって、前記細胞療法が、前記細胞療法組成物を、それを必要とする対象に投与することを含むことを特徴とする、細胞療法組成物。
【請求項１８】
本願明細書中に記載の発明。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２７】
なおさらなる態様は、細胞療法を提供する方法であって、本明細書で開示する細胞療法組成物を、それを必要とする対象に投与することを含む方法に関する。
特定の実施形態では、例えば、以下が提供される：
（項目１）
互いに可逆的に架橋された複数の治療用タンパク質単量体を含み、動的光散乱によって測定されるサイズが直径３０ｎｍ〜１０００ｎｍの間であるタンパク質クラスターと、
前記治療用タンパク質単量体上の求核性基と反応し、それによって前記治療用タンパク質単量体を架橋させて前記タンパク質クラスターにすることのできる、２つ、３つ、または４つの官能基をそれぞれが有し、それを必要とする対象に投与された後、生理的条件下で分解されて、前記タンパク質クラスターから前記治療用タンパク質単量体を放出する、複数の生分解性架橋剤と、
薬学的に許容される担体または賦形剤と、
必要に応じて、ポリカチオンであることが好ましい、前記タンパク質クラスター上の表面修飾と
を含む治療用組成物。
（項目２）
前記架橋剤が、Ａ−Ｂ−Ｃの式を有し、Ｂは、任意であり、Ａは、構造テンプレートを表し、Ｂは、ポリマースペーサーを表し、Ｃは、加水分解可能な連結と、求核性基と反応しうる官能基とを表す、項目１に記載の組成物。
（項目３）
Ａが、ジオール、トリオール、テトラオール、ポリオール、ジチオール、トリチオール、テトラチオール、ポリチオール、ジアミン、トリアミン、テトラアミン、またはポリアミンから選択され、
Ｂが、ポリエチレングリコール、糖、ポリオール、ポリエーテル、ポリチオエーテル、ポリアミン、ポリエステル、アルカン、フェニル、またはアミノ酸から選択され、
Ｃが、式（Ｉａ）：
【化２４】
2020532568.tif 000014
［式中、
ＬＧ２は、トリフレート、トシル、Ｃｌ、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド、およびイミダゾリドから選択される脱離基であり、
Ｙ２は、ＯおよびＳから選択され、
Ｘは、出現する毎に、Ｏ、Ｓ、およびＮから独立に選択され、
Ｌは、任意であり、
【化２５】
2020532568.tif 000015
が生分解性であるようなリンカーであり、
ｍは、１〜６から選択される整数、好ましくは、２である］
を有する、項目２に記載の組成物。
（項目４）
前記架橋剤が、式（Ｉ）：
【化２６】
2020532568.tif 000016
［式中、
ＬＧ１およびＬＧ２は、それぞれ、トリフレート、トシル、Ｃｌ、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド、およびイミダゾリドから独立に選択される脱離基であり、
Ｙ１およびＹ２は、ＯおよびＳからそれぞれ独立に選択され、
Ｘは、出現する毎に、Ｏ、Ｓ、およびＮから独立に選択され、
Ｌは、
【化２７】
2020532568.tif 000017
が生分解性であるようなリンカーであり、
ｍは、出現する毎に、１〜６から選択される整数、好ましくは、２である］
を有する、項目１から３のいずれか一項に記載の組成物。
（項目５）
前記架橋剤が対称である、項目４に記載の組成物。
（項目６）
ＬＧ１およびＬＧ２が、タンパク質、薬物、および／または粒子と反応しうる、項目４に記載の組成物。
（項目７）
ＬＧ１およびＬＧ２が、両方ともイミダゾリドまたはＮ−ヒドロキシスクシンイミドである、項目４から６のいずれか一項に記載の組成物。
（項目８）
【化２８】
2020532568.tif 000018
が加水分解可能である、項目４から７のいずれか一項に記載の組成物。
（項目９）
Ｌが、
（ａ）  −（ＣＨ２）ｎ−［式中、ｎは、０〜５から選択される整数である］、
（ｂ）
【化２９】
2020532568.tif 000019
［式中、ｎは、０〜５から選択される整数である］、または
（ｃ）
【化３０】
2020532568.tif 000020
［式中、Ｘは、出現する毎に、Ｏ、Ｓ、およびＮから独立に選択される］
から選択される、項目４から８のいずれか一項に記載の組成物。
（項目１０）
前記架橋剤が、式（ＩＩ）：
【化３１】
2020532568.tif 000021
［式中、
Ｘ１およびＸ２は、トリフレート、トシル、Ｃｌ、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド、およびイミダゾリドからそれぞれ独立に選択され、
Ａ１およびＡ３は、それぞれ独立に、−（ＣＲ１Ｒ２）ｎ−であり、
Ａ２は、−（ＣＲ１Ｒ２）ｍ−であり、
Ｙ１およびＹ２は、ＮＲ３、Ｏ、およびＳからそれぞれ独立に選択され、
Ｒ１およびＲ２は、出現する毎に、水素、ハロゲン、ヒドロキシル、Ｃ１〜１２アルキル、Ｃ２〜１２アルケニル、Ｃ３〜１２シクロアルキル、Ｃ２〜１２ヘテロシクリル；１つまたは複数のハロ、ヒドロキシル、Ｃ１〜６アルキル、および／またはＣ１〜６アルコキシルで必要に応じて置換されているＣ６〜１２アリール；および１つまたは複数のハロ、ヒドロキシル、Ｃ１〜６アルキル、および／またはＣ１〜６アルコキシルで必要に応じて置換されているＣ４〜１２ヘテロアリールから独立に選択され、
Ｒ３は、水素、Ｃ１〜１２アルキル、Ｃ２〜１２アルケニル、Ｃ３〜１２シクロアルキル、Ｃ２〜１２ヘテロシクリル；１つまたは複数のハロ、ヒドロキシル、Ｃ１〜６アルキル、および／またはＣ１〜６アルコキシルで必要に応じて置換されているＣ６〜１２アリール；および１つまたは複数のハロ、ヒドロキシル、Ｃ１〜６アルキル、および／またはＣ１〜６アルコキシルで必要に応じて置換されているＣ４〜１２ヘテロアリールから選択され、
ｎは、出現する毎に、１〜１２から独立に選択される整数であり、
ｍは、０〜１２から選択される整数である］
を有する、項目１から３のいずれか一項に記載の組成物。
（項目１１）
前記架橋剤が対称である、項目１０に記載の組成物。
（項目１２）
Ｘ１およびＸ２が、それぞれ、タンパク質、薬物、および／または粒子と反応しうる脱離基である、項目１０または１１に記載の組成物。
（項目１３）
Ｘ１およびＸ２が、両方ともイミダゾリドまたはＮ−ヒドロキシスクシンイミドである、項目１２に記載の組成物。
（項目１４）
Ｒ１およびＲ２が、両方とも水素である、項目１０または１１に記載の組成物。
（項目１５）
Ａ１およびＡ３が、両方とも−（ＣＨ２）２−である、項目１４に記載の組成物。
（項目１６）
Ａ２が−（ＣＨ２）２−である、項目１０、１１、１３、および１５のいずれか一項に記載の組成物。
（項目１７）
Ｙ１およびＹ２が、両方ともＯである、項目１０から１６のいずれか一項に記載の組成物。
（項目１８）
前記架橋剤が
【化３２】
2020532568.tif 000022
である、項目１７に記載の組成物。
（項目１９）
Ａ２が結合である、項目１０、１１、１３、および１５のいずれか一項に記載の組成物。
（項目２０）
Ｙ１およびＹ２が、両方ともＮＨである、項目１９に記載の組成物。
（項目２１）
前記架橋剤が
【化３３】
2020532568.tif 000023
である、項目２０に記載の組成物。
（項目２２）
前記タンパク質クラスターの形成を最適化する薬剤をさらに含む、前記項目のいずれかに記載の組成物。
（項目２３）
前記薬剤が、未反応タンパク質を減らすことにより、前記薬剤なしの組成物に比べて前記タンパク質クラスター形成の収量を増大させる、項目２２に記載の組成物。
（項目２４）
前記薬剤が、サイズが１０００ｎｍより大きいクラスターの形成を減らすことにより、前記薬剤なしの組成物に比べて前記タンパク質クラスター形成の収量を増大させる、項目２２に記載の組成物。
（項目２５）
前記治療用タンパク質単量体が、１種または複数のサイトカイン分子および／または１種または複数の共刺激性分子を含み、
（ｉｉｉ）前記１種または複数のサイトカイン分子は、ＩＬ１５、ＩＬ２、ＩＬ７、ＩＬ１０、ＩＬ１２、ＩＬ１８、ＩＬ２１、ＩＬ−２３、ＩＬ−４、ＩＬ１アルファ、ＩＬ１ベータ、ＩＬ−５、ＩＦＮガンマ、ＴＮＦａ、ＩＦＮアルファ、ＩＦＮベータ、ＧＭ−ＣＳＦ、またはＧＣＳＦから選択され、
（ｉｖ）前記１種または複数の共刺激性分子は、ＣＤ１３７、ＯＸ４０、ＣＤ２８、ＧＩＴＲ、ＶＩＳＴＡ、抗ＣＤ４０、またはＣＤ３から選択される、
前記項目のいずれかに記載の組成物。
（項目２６）
項目１から２５のいずれか一項に記載の組成物を調製する方法であって、前記タンパク質クラスターを形成するために、前記複数の治療用タンパク質単量体を前記複数の架橋剤と反応させることを含む方法。
（項目２７）
前記の反応させるステップが、約５℃〜約４０℃の間の温度で実施される、項目２６に記載の方法。
（項目２８）
前記反応させるステップが、約１分間〜約８時間実施される、項目２６または２７に記載の方法。
（項目２９）
前記タンパク質クラスターに前記表面修飾を提供することをさらに含む、項目２６から２８のいずれか一項に記載の方法。
（項目３０）
前記タンパク質クラスターを精製することをさらに含む、項目２６から２９のいずれか一項に記載の方法。
（項目３１）
細胞療法組成物を調製する方法であって、
項目１から２５のいずれか一項に記載の組成物を提供することと、
前記タンパク質クラスターを、Ｔ細胞やＮＫ細胞などの有核細胞と共に、好ましくは約３０〜６０分間インキュベートすることとを含む方法。
（項目３２）
Ｔ細胞やＮＫ細胞などの有核細胞と会合された、項目１から２５のいずれか一項に記載の組成物を含む細胞療法組成物。
（項目３３）
細胞療法を提供する方法であって、項目３２に記載の細胞療法組成物を、それを必要とする対象に投与することを含む方法。