【手続補正書】
【提出日】令和3年9月22日(2021.9.22)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
バイオリアクタに細胞培養物を供給することであって、前記バイオリアクタ中の条件により、前記細胞培養物が目的のタンパク質（ＰＯＩ）を産生できるようにする、前記細胞培養物を供給すること、
前記バイオリアクタ内の前記培養物の１つ以上のプロセスパラメータ（ＰＰ）を、ラマンプローブによって測定することであって、前記プロセスパラメータが、栄養素濃度、生細胞濃度、及びタンパク質属性からなる群から選択される、前記ＰＰを測定すること、
細胞培養内容物を含む前記バイオリアクタの重量を測定すること、
第１の排出導管を使用して、第１の指定された速度で、前記細胞培養物から無細胞の使用済み培地を除去すること、
第２の排出導管を使用して、第２の指定された速度で、前記細胞培養物から細胞を除去すること、
投入導管を使用して、第３の指定された速度で、前記細胞培養物に新鮮培地または栄養素の一方または両方を導入することを含み、ならびに
（ｉ）前記プロセスパラメータの１つ以上を、所定の範囲内に維持すること、（ｉｉ）前記細胞培養物を含む前記バイオリアクタの前記重量を、所定の範囲内に維持すること、及び（ｉｉｉ）前記投入導管の前記第３の指定された速度と、前記排出導管のそれぞれの前記第１の指定された速度と前記第２の指定された速度とを、それらの速度のそれぞれ所定の範囲内に維持することのために、前記投入導管及び前記排出導管が、前記ラマンプローブ測定値と前記バイオリアクタの重量測定値とに基づいて調節される、バイオリアクタシステムの制御方法。
【請求項２】
ラマンによる前記バイオリアクタ内の前記培養物の前記１つ以上のプロセスパラメータの測定は、少なくとも１時間に１回行われる、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記方法は、定常状態で３０日間、１ｍＬ当たり少なくとも３０００万細胞の平均生細胞濃度で、前記細胞培養物を維持するように構成されている、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記バイオリアクタは少なくとも１０Ｌの容積を有しており、前記方法は、前記バイオリアクタ及び前記細胞培養物の前記重量を２０ｇの範囲内に維持するように構成されている、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
前記バイオリアクタは少なくとも１０Ｌの容積を有しており、前記方法は、前記細胞培養物を含む前記バイオリアクタの前記重量を、前記細胞培養物を含む前記バイオリアクタの初期重量の０．１パーセント以内に維持するように構成されている、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
プロセスパラメータがそれぞれの所望の範囲内の設定点の値からずれる場合には、前記ずれを減らすように、無細胞培地の除去、細胞の除去、または新鮮培地もしくは栄養素の一方もしくは両方の導入の１つ以上が調節される、請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
１日当たり少なくとも２バイオリアクタ容積の使用済み培地が前記第１の排出導管を通して除去される、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
１日当たり最大３バイオリアクタ容積の使用済み培地が前記第１の排出導管を通して除去される、請求項１〜７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
前記プロセスパラメータは、前記細胞培養物の温度と前記細胞培養物のｐＨとを含み、前記温度は３５〜３６℃に維持され、前記ｐＨは６．８５〜７．１５に維持される、請求項１〜８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
前記プロセスパラメータは、細胞特異的生産性を含み、前記方法は、少なくとも２５〜３７日間、少なくとも１５〜２５ｐｇ／細胞／日の細胞特異的生産性で、前記細胞培養物中の細胞を維持するように構成されている、請求項１〜９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
前記プロセスパラメータは、グルコース濃度を含み、前記方法は、グルコース濃度を約５ｍＭ〜約８５ｍＭ、または約１ｇ／Ｌ〜約１５．５ｇ／Ｌに維持するように構成されている、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
前記プロセスパラメータは、乳酸塩濃度を含み、前記方法は、約６０ｍＭ未満、または約６ｇ／Ｌ未満の乳酸塩濃度を維持するように構成されている、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
前記プロセスパラメータは、アンモニア濃度を含み、前記方法は、約１５ｍＭ未満のアンモニア濃度を維持するように構成されている、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４】
無細胞の使用済み培地の除去、細胞の除去、及び新鮮培地または栄養素の一方または両方の導入のそれぞれは、それぞれのポンプによって制御される、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１５】
前記バイオリアクタは、細胞を保留し、液体が通過できるように構成されたフィルタを含む、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１６】
灌流バイオリアクタの灌流速度を一定の灌流速度設定値に維持するために、前記指定された速度のうち少なくとも一方を前記指定された速度の他方の対応する変化に応じて調節すること、をさらに含み、
前記少なくとも一方の指定された速度が調節されるときに前記灌流バイオリアクタを通る全体的な灌流の速度が一定のままであるように、前記灌流速度は、前記全体的な灌流の速度を定義する、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１７】
灌流バイオリアクタの前記灌流速度を前記一定の灌流速度設定値に維持するために、前記投入導管及び前記排出導管が、前記ラマンプローブ測定値と前記灌流バイオリアクタの重量測定値とに基づいて調節される、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
システムを通る灌流速度は、所与の設定値に維持されて、前記リアクタ内の濃度に基づいて変動しない、請求項１〜１７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１９】
システムを通る灌流速度は、一定に維持される、請求項１〜１８のいずれか１項に記載の方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１１５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１１５】
さらに、上記のように、本明細書で「例示的」として説明される実施形態または実施態様が、例えば他の実施形態または実施態様よりも好ましいとまたは有利であると解釈されるべきではなく、１つまたは複数の実施形態が例示的な実施形態（複数可）であることを伝えること、または示すことを意図している。
（付記）
好ましい実施形態として、上記実施形態から把握できる技術的思想について、以下に記載する。
［項目１］
バイオリアクタに細胞培養物を供給することであって、前記バイオリアクタ中の条件により、前記細胞培養物が目的のタンパク質（ＰＯＩ）を産生できるようにする、前記細胞培養物を供給すること、
前記バイオリアクタ内の前記培養物の１つ以上のプロセスパラメータ（ＰＰ）を、ラマンプローブによって測定することであって、前記プロセスパラメータが、栄養素濃度、生細胞濃度、及びタンパク質属性からなる群から選択される、前記ＰＰを測定すること、
細胞培養内容物を含む前記バイオリアクタの重量を測定すること、
第１の排出導管を使用して、第１の指定された速度で、前記細胞培養物から無細胞の使用済み培地を除去すること、
第２の排出導管を使用して、第２の指定された速度で、前記細胞培養物から細胞を除去すること、
投入導管を使用して、第３の指定された速度で、前記細胞培養物に新鮮培地または栄養素の一方または両方を導入することを含み、ならびに
（ｉ）前記プロセスパラメータの１つ以上を、所定の範囲内に維持すること、（ｉｉ）前記細胞培養物を含む前記バイオリアクタの前記重量を、所定の範囲内に維持すること、及び（ｉｉｉ）前記投入導管の前記第３の指定された速度と、前記排出導管のそれぞれの前記第１の指定された速度と前記第２の指定された速度とを、それらの速度のそれぞれ所定の範囲内に維持することのために、前記投入導管及び前記排出導管が、前記ラマンプローブ測定値と前記バイオリアクタの重量測定値とに基づいて調節される、バイオリアクタシステムの制御方法。
［項目２］
ラマンによる前記バイオリアクタ内の前記培養物の前記１つ以上のプロセスパラメータの測定は、少なくとも１時間に１回行われる、項目１に記載の方法。
［項目３］
前記方法は、定常状態で３０日間、１ｍＬ当たり少なくとも３０００万細胞の平均生細胞濃度で、前記細胞培養物を維持するように構成されている、先行項目のいずれか１項に記載の方法。
［項目４］
前記バイオリアクタは少なくとも１０Ｌの容積を有しており、前記方法は、前記バイオリアクタ及び前記細胞培養物の前記重量を２０ｇの範囲内に維持するように構成されている、先行項目のいずれか１項に記載の方法。
［項目５］
前記バイオリアクタは少なくとも１０Ｌの容積を有しており、前記方法は、前記細胞培養物を含む前記バイオリアクタの前記重量を、前記細胞培養物を含む前記バイオリアクタの初期重量の０．１パーセント以内に維持するように構成されている、先行項目のいずれか１項に記載の方法。
［項目６］
プロセスパラメータがそれぞれの所望の範囲内の設定点の値からずれる場合には、前記ずれを減らすように、無細胞培地の除去、細胞の除去、または新鮮培地もしくは栄養素の一方もしくは両方の導入の１つ以上が調節される、先行項目のいずれか１項に記載の方法。
［項目７］
１日当たり少なくとも２バイオリアクタ容積の使用済み培地が前記第１の排出導管を通して除去される、先行項目のいずれか１項に記載の方法。
［項目８］
１日当たり最大３バイオリアクタ容積の使用済み培地が前記第１の排出導管を通して除去される、先行項目のいずれか１項に記載の方法。
［項目９］
前記プロセスパラメータは、前記細胞培養物の温度と前記細胞培養物のｐＨとを含み、前記温度は３５〜３６℃に維持され、前記ｐＨは６．８５〜７．１５に維持される、先行項目のいずれか１項に記載の方法。
［項目１０］
前記プロセスパラメータは、細胞特異的生産性を含み、前記方法は、少なくとも２５〜３７日間、少なくとも１５〜２５ｐｇ／細胞／日の細胞特異的生産性で、前記細胞培養物中の細胞を維持するように構成されている、先行項目のいずれか１項に記載の方法。
［項目１１］
前記プロセスパラメータは、グルコース濃度を含み、前記方法は、グルコース濃度を約５ｍＭ〜約８５ｍＭ、または約１ｇ／Ｌ〜約１５．５ｇ／Ｌに維持するように構成されている、先行項目のいずれか１項に記載の方法。
［項目１２］
前記プロセスパラメータは、乳酸塩濃度を含み、前記方法は、約６０ｍＭ未満、または約６ｇ／Ｌ未満の乳酸塩濃度を維持するように構成されている、先行項目のいずれか１項に記載の方法。
［項目１３］
前記プロセスパラメータは、アンモニア濃度を含み、前記方法は、約１５ｍＭ未満のアンモニア濃度を維持するように構成されている、先行項目のいずれか１項に記載の方法。
［項目１４］
無細胞の使用済み培地の除去、細胞の除去、及び新鮮培地または栄養素の一方または両方の導入のそれぞれは、それぞれのポンプによって制御される、先行項目のいずれか１項に記載の方法。
［項目１５］
前記バイオリアクタは、細胞を保留し、液体が通過できるように構成されたフィルタを含む、先行項目のいずれか１項に記載の方法。
［項目１６］
バイオリアクタに細胞培養物を供給すること、
前記バイオリアクタ内の前記細胞培養物の１つ以上のプロセスパラメータを、ラマンプローブによって測定すること、
第１の排出導管を使用して、第１の指定された速度で、前記細胞培養物から無細胞の使用済み培地を除去すること、
第２の排出導管を使用して、第２の指定された速度で、前記細胞培養物から細胞を除去すること、
投入導管を使用して、第３の指定された速度で、前記細胞培養物に新鮮培地または栄養素の一方または両方を導入することを含み、及び
前記ラマンプローブの測定値に基づいて、前記第１の指定された速度、前記第２の指定された速度、または前記第３の指定された速度の１つ以上を変更することを含む、バイオリアクタシステムの制御方法。
［項目１７］
投入導管及び少なくとも１つの排出導管を有するタンクと、
少なくとも１つのポンプと、
前記タンクに結合されたフィルタと、
前記タンクに結合されたラマンプローブと、
前記少なくとも１つのポンプ及び前記ラマンプローブに結合されたコントローラであって、前記コントローラが、前記ラマンプローブからの入力に基づいて前記少なくとも１つのポンプを制御するように構成されている、前記コントローラとを備える、バイオリアクタ培養システム。
［項目１８］
前記少なくとも１つの排出導管は、前記タンクからの流体の除去を制御するように構成された第２のポンプに接続するための第１の排出導管と、前記タンクからの細胞の除去を制御するように構成された第３のポンプに接続するための第２の排出導管とを含む、項目１７に記載のバイオリアクタ培養システム。
［項目１９］
前記フィルタは、前記タンク内に細胞を保留し、液体が前記フィルタを通過できるように構成されている、項目１７または項目１８に記載のバイオリアクタ培養システム。
［項目２０］
前記ラマンプローブは前記タンク内に配置されている、項目１７〜１９のいずれか１項に記載のバイオリアクタ培養システム。
［項目２１］
前記コントローラは、第１のポンプ、前記第２のポンプ、及び前記第３のポンプに結合されている、項目１７〜２０のいずれか１項に記載のバイオリアクタ培養システム。
［項目２２］
前記タンク内の細胞培養物を含む前記タンクの重量を測定するように構成されたスケールをさらに含み、前記コントローラは、前記スケールから重量データを受け取るように構成されている、項目１７〜２１のいずれか１項に記載のバイオリアクタ培養システム。
［項目２３］
前記コントローラは、前記タンクの前記重量を、前記重量の設定点と比較すること、及び前記比較に基づいて、前記第１のポンプ、前記第２のポンプ、及び前記第３のポンプの出力の１つ以上を調節することを行うように構成されている、項目２２に記載のバイオリアクタ培養システム。
［項目２４］
前記コントローラは、前記ラマンプローブからスペクトルデータを受け取ること、受け取った前記スペクトルデータに基づいて、前記細胞培養物のパラメータを判定すること、判定した前記パラメータを、前記パラメータの設定点と比較すること、ならびに前記比較に基づいて、前記第１のポンプ、前記第２のポンプ、または前記第３のポンプの出力の１つ以上を調節することを行うように構成されている、項目１７〜２３のいずれか１項に記載のバイオリアクタ培養システム。
［項目２５］
前記第１のポンプ、前記第２のポンプ、及び前記第３のポンプの１つ以上の前記出力を調節することが、判定した前記パラメータと前記パラメータの前記設定点との間のずれ、または受け取った前記重量と前記重量の前記設定点との間のずれを減らす、項目２４に記載のバイオリアクタ培養システム。
［項目２６］
前記方法は、定常状態で３０日間、１ｍＬ当たり少なくとも３０００万細胞の平均生細胞濃度で、前記細胞培養物を維持するように構成されている、項目１７〜２５のいずれか１項に記載のバイオリアクタ培養システム。
［項目２７］
前記タンクは少なくとも１０Ｌの容積を有しており、前記方法は、前記細胞培養物を含む前記タンクの前記重量を２０ｇの範囲内に維持するように構成されている、項目１７〜２６のいずれか１項に記載のバイオリアクタ培養システム。
［項目２８］
前記タンクは少なくとも１０Ｌの容積を有しており、前記方法は、前記細胞培養物を含む前記バイオリアクタの前記重量を、前記細胞培養物を含む前記タンクの初期重量の０．１パーセント以内に維持するように構成されている、項目１７〜２７のいずれか１項に記載のバイオリアクタ培養システム。
［項目２９］
前記コントローラは、
受け取った前記スペクトルデータに基づいて、前記バイオリアクタ培養物の複数のパラメータを判定すること、
複数の前記パラメータのそれぞれを、複数の前記パラメータのそれぞれの設定点とそれぞれ比較すること、ならびに
前記比較に基づいて、前記第１のポンプ、前記第２のポンプ、及び前記第３のポンプの１つ以上の出力を調節して、判定した前記パラメータとそれぞれの前記設定点との間のずれを減らすことを行うように構成されている、項目２８に記載のバイオリアクタ培養システム。
［項目３０］
複数の前記パラメータは、温度、ｐＨ、栄養素濃度、乳酸塩濃度、アンモニア濃度、及び細胞特異的生産性を含む、項目２９に記載のバイオリアクタ培養システム。
［項目３１］
前記フィルタは、細胞を保留し、液体が通過できるように構成されている、項目１７〜３０のいずれか１項に記載のバイオリアクタ培養システム。
［項目３２］
スケールをさらに含み、前記タンク及び前記フィルタが前記スケール上に載っている、項目１７〜３１に記載のバイオリアクタ培養システム。
［項目３３］
スケールをさらに含み、前記タンクが前記スケール上に載っている、項目１７〜３１のいずれか１項に記載のバイオリアクタ培養システム。
［項目３４］
スケールをさらに含み、前記タンクが前記スケールと物理的に接触している、項目１７〜３１のいずれか１項に記載のバイオリアクタ培養システム。
［項目３５］
投入導管及び少なくとも１つの排出導管を有するタンクと、
少なくとも１つのポンプと、
前記タンクに結合されたフィルタと、
前記タンクと接触しているスケールと、
前記タンクに結合されたラマンプローブと、
前記少なくとも１つのポンプ、前記スケール、及び前記ラマンプローブに結合されたコントローラであって、前記コントローラが、前記ラマンプローブからの入力と前記スケールからの入力とに基づいて、前記少なくとも１つのポンプを制御するように構成されている、前記コントローラとを備える、バイオリアクタ培養システム。
［項目３６］
タンクであって、前記タンクへの流体送出を制御するように構成された第１のポンプに接続するための投入導管と、前記タンクからの流体の除去を制御するように構成された第２のポンプに接続するための第１の排出導管と、前記タンクからの細胞の除去を制御するように構成された第３のポンプに接続するための第２の排出導管とを有する前記タンクと、
前記タンクに結合されたフィルタであって、前記フィルタは、前記タンク内の細胞を保留し、液体が前記フィルタを通過できるように構成されている、前記フィルタと、
前記タンク内の細胞培養物を含む前記タンクの重量を測定するように構成されたスケールと、
前記タンク内に配置されたラマンプローブと、
前記第１のポンプ、前記第２のポンプ、前記第３のポンプ、前記スケール、及び前記ラマンプローブに結合されたコントローラであって、前記コントローラは、
前記スケールから重量データを受け取ること、
前記タンクの前記重量を前記重量の設定点と比較すること、
前記ラマンプローブからスペクトルデータを受け取ること、
受け取った前記スペクトルデータに基づいて、前記細胞培養物のパラメータを判定すること、
判定された前記パラメータを前記パラメータの設定点と比較すること、ならびに
前記比較に基づいて、前記第１のポンプ、前記第２のポンプ、及び前記第３のポンプのスループットの１つ以上を調節することを行うように構成されている前記コントローラと
を備える、バイオリアクタ培養システム。
［項目３７］
前記第１のポンプ、前記第２のポンプ、及び前記第３のポンプの１つ以上の前記スループットを調節することが、判定した前記パラメータと前記パラメータの前記設定点との間のずれ、または受け取った前記重量と前記重量の前記設定点との間のずれを減らす、項目３６に記載のバイオリアクタ培養システム。
［項目３８］
前記方法は、定常状態で３０日間、１ｍＬ当たり少なくとも３０００万細胞の平均生細胞濃度で、前記細胞培養物を維持するように構成されている、項目３６〜３７のいずれか１項に記載のバイオリアクタ培養システム。
［項目３９］
前記タンクは少なくとも１０Ｌの容積を有しており、前記方法は、前記細胞培養物を含む前記タンクの前記重量を２０ｇの範囲内に維持するように構成されている、項目３６〜３８のいずれか１項に記載のバイオリアクタ培養システム。
［項目４０］
前記タンクは少なくとも１０Ｌの容積を有しており、前記方法は、前記細胞培養物を含む前記バイオリアクタの前記重量を、前記細胞培養物を含む前記タンクの初期重量の０．１パーセント以内に維持するように構成されている、項目３６〜３９のいずれか１項に記載のバイオリアクタ培養システム。
［項目４１］
前記コントローラは、
受け取った前記スペクトルデータに基づいて、前記バイオリアクタ培養物の複数のパラメータを判定すること、
複数の前記パラメータのそれぞれを、複数の前記パラメータのそれぞれの設定点とそれぞれ比較すること、ならびに
前記比較に基づいて、前記第１のポンプ、前記第２のポンプ、及び前記第３のポンプの１つ以上の前記スループットを調節して、判定した前記パラメータとそれぞれの前記設定点との間のずれを減らすことを行うように構成されている、項目３６〜４０のいずれか１項に記載のバイオリアクタ培養システム。
［項目４２］
複数の前記パラメータは、温度、ｐＨ、栄養素濃度、乳酸塩濃度、アンモニア濃度、及び細胞特異的生産性を含む、項目４１に記載のバイオリアクタ培養システム。
［項目４３］
細胞を保留し、液体が通過できるように構成されているフィルタをさらに含む、項目３６〜４２のいずれか１項に記載のバイオリアクタ培養システム。
［項目４４］
前記タンク及び前記フィルタが前記スケール上に載っている、項目４３に記載のバイオリアクタ培養システム。
［項目４５］
前記タンクが前記スケール上に載っている、項目３６〜４４のいずれか１項に記載のバイオリアクタ培養システム。
［項目４６］
前記タンクが前記スケールと物理的に接触している、項目３６〜４５のいずれか１項に記載のバイオリアクタ培養システム。
［項目４７］
投入導管及び少なくとも１つの排出導管を有するタンクと、
少なくとも１つのポンプと、
前記タンクに結合されたフィルタと、
前記タンクに結合されたラマンプローブと、
前記少なくとも１つのポンプ及び前記ラマンプローブに結合されたコントローラであって、前記コントローラが、前記ラマンプローブからの入力に基づいて前記少なくとも１つのポンプを制御するように構成されている、前記コントローラとを備える、バイオリアクタ培養システム。
［項目４８］
タンクであって、前記タンクへの流体送出を制御するように構成された第１のポンプに接続するための投入導管と、前記タンクからの流体の除去を制御するように構成された第２のポンプに接続するための第１の排出導管と、前記タンクからの細胞の除去を制御するように構成された第３のポンプに接続するための第２の排出導管とを有する前記タンクと、
前記タンクに結合されたフィルタであって、前記フィルタは、前記タンク内の細胞を保留し、液体が前記フィルタを通過できるように構成されている、前記フィルタと、
前記タンク内の細胞培養物を含む前記タンクの重量を測定するように構成されたスケールと、
前記タンク内に配置されたラマンプローブと、
前記第１のポンプ、前記第２のポンプ、前記第３のポンプ、前記スケールに結合されたコントローラとを備える、バイオリアクタ培養システム。
［項目４９］
本開示の図１及び図２に示される、バイオリアクタシステム。
［項目５０］
本開示の図３に示される、バイオリアクタシステムの制御方法。