【手続補正書】
【提出日】令和3年4月30日(2021.4.30)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
血清型Ｃ、血清型Ｗ、及び血清型Ｙから選択されるナイセリア・メニンギティディス（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）から多糖類を単離する方法であって、当該方法は、以下の：
ａ）ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）を粗多糖類溶液に加える工程、ここで前記溶液中のＳＤＳの最終濃度は、１％未満である；
ｂ）水酸化ナトリウム（ＮａＯＨ）を溶液に加える工程；
ｃ）溶液のｐＨを中和する工程；
ｄ）溶液をアルコールベースの沈殿に供し、次いで遠心分離及び上清の保持を行う工程；
ｅ）前記上清中のＳＤＳを除去する工程；
ｆ）多糖類の濃縮及びダイアフィルトレーションを行う工程、
を含み、ここで、得られた精製多糖類の回収率は、６０〜８０％である、方法。
【請求項２】
前記方法が、さらに以下の：
ｇ）多糖類溶液とカチオン性界面活性剤を混合する工程；
ｈ）溶液を遠心分離に供し、ペレットを回収する工程；及び
ｉ）ペレットのアルコールへの溶解、次いで多糖類の塩ベースの沈殿に供する工程、
を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
（ｉ）ナイセリア・メニンギティディス血清型Ｃから精製された多糖類が、１．５ｍＭｏｌ／ｇｍ超のＯ−アセチル化レベル、１％未満のタンパク質不純物、１％未満の核酸不純物、５０ＥＵ／μｇ未満のエンドトキシン不純物を有し；
（ｉｉ）ナイセリア・メニンギティディス血清型Ｙから精製された多糖類が、０．３ｍＭｏｌ／ｇｍ未満のＯ−アセチル化レベル、５％未満のタンパク質不純物、２％未満の核酸不純物、６０ＥＵ／μｇ未満のエンドトキシン不純物を有し；及び
（ｉｉｉ）ナイセリア・メニンギティディス血清型Ｗから精製された多糖類が、０．３ｍＭｏｌ／ｇｍ未満のＯ−アセチル化レベル、５％未満のタンパク質不純物、２％未満の核酸不純物、５０ＥＵ／μｇ未満のエンドトキシン不純物を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
溶液中の水酸化ナトリウム（ＮａＯＨ）のの最終濃度が、５〜５０ｍＭの範囲、好ましくは５〜２０ｍＭの範囲、及び最も好ましくは８〜１５ｍＭの範囲である、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
ＮａＯＨを加えた後の前記溶液のｐＨが、ｐＨ９〜１１の範囲であり、好ましくはｐＨ１０．５である、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
ギ酸、酢酸、プロピオン酸、及びシュウ酸から選択されるマイルドな有機酸、好ましくは酢酸を加えることにより、溶液が中和（ｐＨ７．０）される、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記ＳＤＳの除去が、カリウム塩処理、ゲル濾過、エタノール処理、及びイオン交換樹脂／アンバーライトカラムの少なくとも１つ以上を使用して実行される、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記ＳＤＳの除去が、カリウム塩を使用したＳＤＳ沈殿により行われ、カリウム塩が、塩化カリウム、酢酸カリウム、硫酸カリウム、炭酸カリウム、重炭酸カリウム、リン酸カリウム、リン酸水素カリウム、リン酸二水素カリウム、硝酸カリウム、及び他のカリウム塩のうちの１つ、又はそれらの２つ以上の組み合わせである、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記ＳＤＳの除去が、カリウム塩を使用したＳＤＳ沈殿により行われ、前記溶液中の前記カリウム塩の最終濃度が、前記ＳＤＳが十分に沈殿される濃度以上である、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記ＳＤＳの除去が、カリウム塩を使用したＳＤＳ沈殿により行われ、前記溶液中のカリウム塩の最終濃度が、３００ｍＭ未満、好ましくは１００ｍＭである、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
前記多糖類が、シアル酸残基のポリマーである、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
前記カチオン性界面活性剤が、セチルトリメチルアンモニウムブロマイド（ＣＴＡＢ）であり、前記カチオン性界面活性剤の濃度が、３％未満、好ましくは１％である、請求項２に記載の方法。
【請求項１３】
前記アルコールが、メタノール、エタノール、ｎ−プロピルアルコール、イソプロピルアルコール、アセトン、ｔ−ブチルアルコールから選択される親水性アルコール、又はそれら２つ以上の組み合わせであり、その濃度が、６５％未満又は９５％超である、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項１４】
沈殿に使用される塩が、塩化ナトリウム、塩化アンモニウム、塩化カリウムのうちの１つ、又はそれらの２つ以上の組み合わせであり、その塩の濃度が、０．２５Ｍ〜２Ｍの範囲である、
請求項２に記載の方法。
【請求項１５】
血清型Ａ及び血清型Ｘから選択されるナイセリア・メニンギティディスから多糖類を単離する方法であって、当該方法が、以下の：
ａ）ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）を粗多糖類溶液に加える工程、ここで溶液中のＳＤＳの最終濃度は、１％未満である；
ｂ）ＥＤＴＡ及び酢酸ナトリウムを溶液に加える工程；
ｃ）溶液をアルコール沈殿に供した後、遠心分離し、上清を保持する工程；
ｄ）前記上清に存在するＳＤＳを除去する工程；
ｅ）細菌性多糖類の濃縮及びダイアフィルトレーションする工程；
を含み、ここで、得られた精製多糖類の回収率は、６０〜８０％であり； 当該方法が、さらに以下の：
ｆ）細菌性多糖類溶液をカチオン性界面活性剤と混合する工程、ここで、カチオン性界面活性剤は、０．５〜３．０％の範囲、好ましくは１％未満のセチルトリメチルアンモニウムブロマイド（ＣＴＡＢ）であり；
ｇ）溶液を遠心分離し、ペレットを回収する工程；
ｈ）ペレットをアルコールに溶解した後、塩ベースの沈殿に供する工程、
を含む方法。
【請求項１６】
請求項１〜１５の何れか１項に記載の方法によって得られた多糖類であって、ここで、多糖類が、キャリアタンパク質にコンジュゲートされ、キャリアタンパク質が、ＣＲＭ１９７、ニューモコッカル表面付着因子A（ＰｓａＡ）、ジフテリアトキソイド（ＤＴ）、破傷風トキソイド（ＴＴ）、破傷風トキソイドのフラグメントＣ、百日咳トキソイド、Ｈ．インフルエンザのＤタンパク質、Ｅ．ｃｏｌｉ ＬＴ、Ｅ．ｃｏｌｉ ＳＴ、シュードモナス・エルギノーサ由来の外毒素Ａ、外膜複合体ｃ（ＯＭＰＣ）、ポリン、トランスフェリン結合タンパク質、ニューモリシン、ニューモコッカル表面タンパク質Ａ（ＰｓｐＡ）、ニューモコッカル表面付着タンパク質（ＰｓａＡ）、ニューモコッカルＰｈｔＤ、ニューモコッカル表面タンパク質ＢＶＨ−３、ＢＶＨ−１１、バチルス・アントラシスの防御抗原（ＰＡ）、解毒浮腫因子（ＥＦ）、バチルス・アントラシスの致死因子（ＬＦ）、オボアルブミン、キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）、ヒト血清アルブミン、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、ツベルクリンの精製タンパク質誘導体（ＰＰＤ）のうちの１つ； 特にＣＲＭ１９７、破傷風トキソイド、ジフテリアトキソイド及び／又はＰｓａＡのうちの１つである、多糖類。
【請求項１７】
免疫原性組成物であって、
ａ）（ｉ）ナイセリア・メニンギティディス血清型Ａの莢膜多糖及び（ｉｉ）破傷風トキソイドのコンジュゲート；
ｂ）（ｉ）ナイセリア・メニンギティディス血清型Ｃの莢膜多糖及び（ｉｉ）ＣＲＭ１９７のコンジュゲート；
ｃ）（ｉ）ナイセリア・メニンギティディス血清型Ｙの莢膜多糖及び（ｉｉ）ＣＲＭ１９７のコンジュゲート；
ｄ）（ｉ）ナイセリア・メニンギティディス血清型Ｗ１３５の莢膜多糖及び（ｉｉ）ＣＲＭ１９７のコンジュゲート； 及び
ｅ）（ｉ）ナイセリア・メニンギティディス血清型Ｘの莢膜多糖及び（ｉｉ）破傷風トキソイドのコンジュゲート、
の少なくとも１つを含み、ここで、前記組成物が、
ａ）少なくとも１つの多糖類−タンパク質コンジュゲート；
ｂ）約３％ ｗ／ｖの濃度のスクロース； 及び
ｃ）約０．５％ ｗ／ｖの濃度のクエン酸ナトリウム、ここで、前記多糖類が、請求項１〜１６の何れか１項に記載の方法により精製される、
む免疫原性組成物。