【手続補正書】
【提出日】令和3年10月28日(2021.10.28)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
内因性T細胞受容体アルファサブユニット定常遺伝子(TRAC)、および
内因性T細胞受容体ベータサブユニット定常遺伝子(TRBC)
の一方または両方に非ウイルス的に挿入された、少なくとも1つの異種遺伝子を含む少なくとも1つの核酸配列
を含む、単離された初代ヒトT細胞であって、
該少なくとも1つの異種遺伝子が、(1)異種ヒトT細胞受容体アルファ(TCR-α)鎖遺伝子の可変領域、および(2)異種ヒトT細胞受容体ベータ(TCR-β)鎖遺伝子の可変領域の少なくとも1つを含む、
単離された初代ヒトT細胞。
【請求項２】
前記少なくとも1つの核酸配列をT細胞に導入するためのウイルスベクターを含まない、請求項1記載のT細胞。
【請求項３】
内因性T細胞受容体アルファサブユニット定常遺伝子(TRAC)、および
内因性T細胞受容体ベータサブユニット定常遺伝子(TRBC)
の一方または両方に挿入された、少なくとも1つの異種遺伝子を含む少なくとも1つの核酸配列
を含む、単離された初代ヒトT細胞であって、
該少なくとも1つの異種遺伝子が、(1)異種ヒトT細胞受容体アルファ(TCR-α)鎖遺伝子の可変領域、および(2)異種ヒトT細胞受容体ベータ(TCR-β)鎖遺伝子の可変領域の少なくとも1つを含み、かつ
該T細胞が、該少なくとも1つの核酸配列をT細胞に導入するためのウイルスベクターを含まない、
単離された初代ヒトT細胞。
【請求項４】
前記少なくとも1つの核酸配列が、少なくとも1.5 kbのサイズである、請求項1〜3のいずれか一項記載のT細胞。
【請求項５】
前記少なくとも1つの核酸配列が、少なくとも500 bpのサイズである、請求項1〜4のいずれか一項記載のT細胞。
【請求項６】
前記少なくとも1つの核酸配列が、TRACのエクソン1、エクソン2、またはエクソン3中に挿入されている、請求項1〜5のいずれか一項記載のT細胞。
【請求項７】
前記少なくとも1つの核酸配列が、TRBCのエクソン1、エクソン2、またはエクソン3中に挿入されている、請求項1〜6のいずれか一項記載のT細胞。
【請求項８】
CD8+ T細胞またはCD4+ T細胞である、請求項1〜7のいずれか一項記載のT細胞。
【請求項９】
前記少なくとも1つの異種遺伝子が、
(1)(a)異種T細胞受容体アルファ(TCR-α)鎖遺伝子の可変領域、または(b)異種T細胞受容体アルファ(TCR-α)鎖遺伝子の可変領域および定常領域、ならびに
(2)(a)異種T細胞受容体ベータ(TCR-β)鎖遺伝子の可変領域、または(b)異種T細胞受容体ベータ(TCR-β)鎖遺伝子の可変領域および定常領域
の少なくとも一方を含む、請求項1〜8のいずれか一項記載のT細胞。
【請求項１０】
前記少なくとも1つの異種遺伝子が、
(1)(a)異種T細胞受容体アルファ(TCR-α)鎖遺伝子の可変領域、または(b)異種T細胞受容体アルファ(TCR-α)鎖遺伝子の可変領域および定常領域、ならびに
(2)(a)異種T細胞受容体ベータ(TCR-β)鎖遺伝子の可変領域、または(b)異種T細胞受容体ベータ(TCR-β)鎖遺伝子の可変領域および定常領域
のそれぞれを含む、請求項9記載のT細胞。
【請求項１１】
(1)(a)異種TCR-α鎖遺伝子の可変領域、または(b)異種TCR-α鎖遺伝子の可変領域および定常領域、ならびに
(2)(a)異種TCR-β鎖遺伝子の可変領域、または(b)異種TCR-β鎖遺伝子の可変領域および定常領域
のそれぞれを含む、請求項1〜10のいずれか一項記載のT細胞。
【請求項１２】
発現された場合に、異種TCR-α鎖と異種TCR-βが抗原特異的T細胞受容体(TCR)を形成する、請求項11記載のT細胞。
【請求項１３】
異種TCR-α鎖遺伝子と異種TCR-β鎖遺伝子とが、リンカー配列によって機能的に連結されており、任意で、該リンカー配列が、切断可能なリンカー配列またはマルチシストロニック要素である、請求項11または12記載のT細胞。
【請求項１４】
異種TCR-α鎖遺伝子および異種TCR-β鎖遺伝子が、TRACに挿入されている、請求項13記載のT細胞。
【請求項１５】
前記少なくとも1つの異種遺伝子の発現が、内因性プロモーターによって制御される、請求項1〜14のいずれか一項記載のT細胞。
【請求項１６】
細胞における内因性TRACおよび内因性TRBCの一方または両方の発現が、対照T細胞と比べて低減されており、該対照T細胞が、非ウイルス挿入がない初代ヒトT細胞である、請求項1〜15のいずれか一項記載のT細胞。
【請求項１７】
請求項1〜16のいずれか一項記載の初代ヒトT細胞の単離された集団であって、該集団中の初代ヒトT細胞の少なくとも20%のゲノムが、前記少なくとも1つの核酸配列を含む、単離された集団。
【請求項１８】
内因性T細胞受容体アルファサブユニット定常遺伝子(TRAC)、および
内因性T細胞受容体ベータサブユニット定常遺伝子(TRBC)
の一方または両方に非ウイルス的に挿入された、少なくとも1つの異種遺伝子を含む少なくとも1つの核酸配列
を含む、改変初代ヒトT細胞であって、該少なくとも1つの異種遺伝子が、癌に発現されている標的抗原に特異的に結合する少なくとも1つの抗原特異的受容体をコードし、かつ該少なくとも1つの異種遺伝子が、(1)異種ヒトT細胞受容体アルファ(TCR-α)鎖遺伝子の可変領域、および(2)異種ヒトT細胞受容体ベータ(TCR-β)鎖遺伝子の可変領域の少なくとも1つを含む、改変初代ヒトT細胞
を含む、標的抗原を発現する癌を有する対象を治療するための医薬。
【請求項１９】
前記改変ヒトT細胞が、ウイルスベクターを含まない、請求項18記載の医薬。
【請求項２０】
前記少なくとも1つの核酸配列が、少なくとも1.5 kbのサイズである、請求項18または19記載の医薬。
【請求項２１】
前記少なくとも1つの核酸配列が、T細胞受容体アルファサブユニット定常遺伝子(TRAC)のエクソンまたはT細胞受容体ベータサブユニット定常遺伝子(TRBC)のエクソンに非ウイルス的に挿入されている、請求項18〜20のいずれか一項記載の医薬。
【請求項２２】
前記少なくとも1つの核酸配列が、少なくとも500 bpのサイズである、請求項18〜21のいずれか一項記載の医薬。
【請求項２３】
前記少なくとも1つの異種遺伝子が、
(1)(a)異種T細胞受容体アルファ(TCR-α)鎖の可変領域、または(b)異種TCR-α鎖の可変領域および定常領域、ならびに
(2)(a)異種T細胞受容体ベータ(TCR-β)鎖の可変領域、または(b)異種TCR-β鎖の可変領域および定常領域
の少なくとも一方を含む、請求項18〜22のいずれか一項記載の医薬。
【請求項２４】
前記少なくとも1つの異種遺伝子が、
(1)(a)異種TCR-α鎖の可変領域、または(b)異種TCR-α鎖の可変領域および定常領域、ならびに
(2)(a)異種TCR-β鎖の可変領域、または(b)異種TCR-β鎖の可変領域および定常領域
のそれぞれを含む、請求項23記載の医薬。
【請求項２５】
異種TCR-α鎖および異種TCR-β鎖の1つまたは複数のコード配列が、リンカー配列またはマルチシストロニック要素によって連結されている、請求項24記載の医薬。
【請求項２６】
前記リンカー配列が、切断されて異種TCR-α鎖遺伝子および異種TCR-β鎖遺伝子を生じる切断可能なリンカー配列である、請求項25記載の医薬。
【請求項２７】
前記異種遺伝子が、TCR-α鎖および異種TCR-β鎖をコードし、該異種遺伝子がTRACに挿入されている、請求項25または26記載の医薬。
【請求項２８】
前記少なくとも1つの異種遺伝子が非ウイルス的に内因性TRACに挿入されており、該少なくとも1つの異種遺伝子が、
(1)(a)異種TCR-α鎖の可変領域、または(b)異種TCR-α鎖の可変領域および定常領域、ならびに
(2)(a)異種TCR-β鎖の可変領域、または(b)異種TCR-β鎖の可変領域および定常領域
のそれぞれを含み、
該異種TCR-α鎖および異種TCR-β鎖が、切断されて異種TCR-α鎖および異種TCR-β鎖を生じる切断可能なリンカー配列によって機能的に連結されており、かつ
該異種TCR-α鎖および異種TCR-βが、癌に発現されている標的抗原を認識する抗原特異的T細胞受容体(TCR)を形成する、
請求項18〜27のいずれか一項記載の医薬。
【請求項２９】
前記少なくとも1つの異種遺伝子の発現が、内因性プロモーターの制御下にある、請求項18〜28のいずれか一項記載の医薬。
【請求項３０】
前記改変ヒトT細胞が、CD8+ T細胞またはCD4+ T細胞である、請求項18〜29のいずれか一項記載の医薬。
【請求項３１】
前記CD8+ T細胞またはCD4+ T細胞が、エフェクターT細胞またはナイーブT細胞である、請求項30記載の医薬。
【請求項３２】
初代ヒトT細胞が、癌を有する対象から得られたものであり、かつ対象への改変初代ヒトT細胞の投与前に、少なくとも1つの異種遺伝子を含む少なくとも1つの核酸配列を含むように改変されたものである、請求項18〜31のいずれか一項記載の医薬。
【請求項３３】
前記改変ヒトT細胞が、癌に発現されている標的抗原に特異的に結合する受容体をコードする少なくとも1つの異種遺伝子の発現を可能にする条件下で培養されたものである、請求項18〜32のいずれか一項記載の医薬。
【請求項３４】
前記改変ヒトT細胞が、該改変ヒトT細胞を増殖させるのに有効な条件下で培養されたものである、請求項33記載の医薬。
【請求項３５】
前記受容体を発現する改変ヒトT細胞が、精製されたものである、請求項18〜34のいずれか一項記載の医薬。