【手続補正書】
【提出日】令和3年4月14日(2021.4.14)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
第1ポリペプチドおよび第2ポリペプチドを含むキメラポリペプチドであって、第1ポリペプチドがキメラ抗原受容体 (CAR) をコードし、第2ポリペプチドが、第1ポリペプチドに対する切断活性を有するプロテアーゼを含む、キメラポリペプチド。
【請求項２】
プロテアーゼ活性が、前記キメラポリペプチドが産生される免疫細胞の表面におけるCARポリペプチドの提示を妨げる効果を有し（スイッチオフ）、且つ任意で、前記プロテアーゼ活性がプロテアーゼ阻害剤によって阻害される（スイッチオン）、請求項1記載のキメラポリペプチド。
【請求項３】
プロテアーゼ活性が、第2ポリペプチドの切除を可能にして第1ポリペプチドを放出させ、機能的なCARを形成し（スイッチオン）、且つ任意で、前記プロテアーゼ活性がプロテアーゼ阻害剤によって阻害される（スイッチオフ）、請求項1記載のキメラポリペプチド。
【請求項４】
前記プロテアーゼおよび前記プロテアーゼ阻害剤が表2のリストより選択される、請求項2または3記載のキメラポリペプチド。
【請求項５】
前記キメラポリペプチドの細胞内分解を強化するデグロンポリペプチド配列、例えばSEQ ID NO.32、38、41、または43を含む配列をさらに含む、請求項1〜4のいずれか一項記載のキメラポリペプチド。
【請求項６】
CARが、CD19、CD22、CD33、CD38、CD123、CS1、CLL1、ROR1、OGD2、BCMA、HSP70、およびEGFRvIIIより選択される抗原を標的化する、請求項1〜5のいずれか一項記載のキメラポリペプチド。
【請求項７】
請求項1〜6のいずれか一項記載のキメラポリペプチドをコードするポリヌクレオチド。
【請求項８】
請求項7記載のポリヌクレオチドを含むベクター。
【請求項９】
それぞれが第1ポリペプチドおよび第2ポリペプチドをコードする、ポリヌクレオチド配列のセットであって、第1ポリペプチドがキメラ抗原受容体 (CAR) をコードし、第2ポリペプチドがプロテアーゼをコードし、該プロテアーゼが第1ポリペプチドに対する切断活性を有する、ポリヌクレオチド配列のセット。
【請求項１０】
請求項9記載のポリヌクレオチド配列のセット、または請求項7記載のポリヌクレオチドで形質転換された、操作された免疫細胞。
【請求項１１】
前記免疫細胞が、初代細胞、例えばT細胞またはNK細胞である、請求項10記載の操作された免疫細胞。
【請求項１２】
がんの処置において使用するための医薬の調製における、請求項10〜11のいずれか一項記載の操作された免疫細胞の使用。
【請求項１３】
少なくとも以下の段階を含む、エフェクター細胞内で、膜貫通受容体に関連付けられた機能を不活性化（スイッチオフ）するための方法：
‐エフェクター細胞を提供する段階、
‐受容体ポリペプチド、プロテアーゼ、およびデグロンを含むキメラポリペプチドをコードするポリヌクレオチドまたはポリヌクレオチド配列のセットを、エフェクター細胞内に導入する段階；
‐プロテアーゼ活性がデグロンを除去しかつ該受容体ポリペプチドが細胞の表面において提示されるように、該キメラポリペプチドを該細胞内で発現させる段階；
‐デグロンがもはや除去されないようにおよび発現された該キメラポリペプチドがプロテアソームによって分解されるように、該プロテアーゼ活性を阻害するプロテアーゼ阻害剤を細胞の環境内に導入する段階であって、それにより該エフェクター細胞内で膜貫通受容体に関連づけられた機能をスイッチオフする、段階。
【請求項１４】
少なくとも以下の段階を含む、エフェクター細胞内で膜貫通受容体に関連づけられた機能を活性化（スイッチオン）するための方法：
‐エフェクター細胞を提供する段階、
‐(i) 膜貫通受容体ポリペプチドと (ii) 該膜貫通受容体ポリペプチドに対して向けられたプロテアーゼドメインとをコードするポリヌクレオチド配列のセットまたは特有のポリヌクレオチドを、該エフェクター細胞内に導入する段階、
‐該受容体ポリペプチド機能を不活性化するプロテアーゼ活性を有する該ポリペプチドを、該エフェクター細胞内で発現させる段階、
‐該プロテアーゼ活性を阻害するためにおよび膜貫通受容体が細胞表面において提示されることを可能にするために、プロテアーゼ阻害剤を免疫細胞の環境内に導入する段階であって、それにより該エフェクター細胞内で該受容体の機能を活性化する、段階。
【請求項１５】
膜貫通受容体がCARまたは組換えTCRである、請求項13〜14のいずれか一項記載の方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１４】
本発明はまた、そのようなキメラポリペプチドを免疫細胞内で発現させて、細胞療法において用いられるべき操作された免疫細胞を作出する方法、同種処置または自家処置の一環のいずれかとして、そのような操作された免疫細胞で患者を処置する方法、および免疫細胞の表面におけるCARの発現を制御するために、操作された免疫細胞をプロテアーゼ阻害剤と組み合わせて患者に注入し、そして最終的にその治療活性のより良い制御を得る方法を包含する。
[本発明1001]
第1ポリペプチドおよび第2ポリペプチドを含むキメラポリペプチドであって、第1ポリペプチドがキメラ抗原受容体 (CAR) をコードし、第2ポリペプチドが、第1ポリペプチドに対する切断活性を有するプロテアーゼを含む、キメラポリペプチド。
[本発明1002]
プロテアーゼ活性が、前記キメラポリペプチドが産生される免疫細胞の表面におけるCARポリペプチドの提示を妨げる効果を有する（スイッチオフ）、本発明1001のキメラポリペプチド。
[本発明1003]
前記プロテアーゼ活性がプロテアーゼ阻害剤によって阻害される（スイッチオン）、本発明1002のキメラポリペプチド。
[本発明1004]
プロテアーゼ活性が、第2ポリペプチドの切除を可能にして第1ポリペプチドを放出させ、機能的なCARを形成する（スイッチオン）、本発明1001のキメラポリペプチド。
[本発明1005]
前記プロテアーゼ活性がプロテアーゼ阻害剤によって阻害される（スイッチオフ）、本発明1004のキメラポリペプチド。
[本発明1006]
前記プロテアーゼおよび前記プロテアーゼ阻害剤が表2のリストより選択される、本発明1003または1005のキメラポリペプチド。
[本発明1007]
前記プロテアーゼ阻害剤が、シメプレビル、ダノプレビル、アスナプレビル、およびシルプレビルなどの小分子である、本発明1003または1005のキメラポリペプチド。
[本発明1008]
前記プロテアーゼが、非構造タンパク質3 (NS3)プロテアーゼと同一性を有する、本発明1007のキメラポリペプチド。
[本発明1009]
前記キメラポリペプチドの細胞内分解を強化するデグロンポリペプチド配列をさらに含む、本発明1001〜1008のいずれかのキメラポリペプチド。
[本発明1010]
デグロンがSEQ ID NO.32、38、41、または43を含む、本発明1009のキメラポリペプチド。
[本発明1011]
デグロンが第2ポリペプチドの配列中に含まれる、本発明1009のキメラポリペプチド。
[本発明1012]
第1ポリペプチドが、モノクローナル抗体由来のVHおよびVLを含む細胞外リガンド結合ドメインに連結された膜貫通ドメインを含む、本発明1001〜1011のいずれかのキメラポリペプチド。
[本発明1013]
前記膜貫通ドメインがCD8α膜貫通ドメインに由来する、本発明1001〜1012のいずれかのキメラポリペプチド。
[本発明1014]
第1ポリペプチドが、CD3ζシグナリングドメインを含む細胞質ドメインおよび4-1BB由来の共刺激ドメインを含む、本発明1001〜1013のいずれかのキメラポリペプチド。
[本発明1015]
第1ポリペプチドが、CD8αヒンジ、IgG1ヒンジ、またはFcγRIIIαヒンジなどのヒンジをさらに含む、本発明1001〜1014のいずれかのキメラポリペプチド。
[本発明1016]
第1ポリペプチドが、単鎖CARでまたは多鎖CARの膜貫通サブユニットで構成される、本発明1001〜1015のいずれかのキメラポリペプチド。
[本発明1017]
CARが、CD19、CD22、CD33、CD38、CD123、CS1、CLL1、ROR1、OGD2、BCMA、HSP70、およびEGFRvIIIより選択される抗原を標的化する、本発明1001〜1016のいずれかのキメラポリペプチド。
[本発明1018]
本発明1001〜1017のいずれかのキメラポリペプチドをコードするポリヌクレオチド。
[本発明1019]
本発明1018のポリヌクレオチドを含むベクター。
[本発明1020]
それぞれが第1ポリペプチドおよび第2ポリペプチドをコードする、ポリヌクレオチド配列のセットであって、第1ポリペプチドがキメラ抗原受容体 (CAR) をコードし、第2ポリペプチドがプロテアーゼをコードし、該プロテアーゼが第1ポリペプチドに対する切断活性を有する、ポリヌクレオチド配列のセット。
[本発明1021]
前記配列が同じポリヌクレオチド上に担持される、本発明1020のポリヌクレオチド配列のセット。
[本発明1022]
前記配列が本発明1001〜1017のキメラポリペプチドをコードする、本発明1021のポリヌクレオチド配列のセット。
[本発明1023]
前記ポリヌクレオチド配列が免疫細胞に同時トランスフェクトされる、本発明1020〜1022のいずれかのポリヌクレオチド配列のセット。
[本発明1024]
本発明1020〜1023のいずれかのポリヌクレオチド配列のセットで形質転換された、操作された免疫細胞。
[本発明1025]
エフェクターポリペプチド、プロテアーゼドメイン、およびデグロンを含むキメラポリペプチドをコードするポリヌクレオチドで形質転換された、操作された免疫細胞。
[本発明1026]
本発明1018のポリヌクレオチドで形質転換された、操作された免疫細胞。
[本発明1027]
前記免疫細胞が初代細胞である、本発明1024〜1026のいずれかの操作された免疫細胞。
[本発明1028]
前記細胞がT細胞またはNK細胞である、本発明1024〜1027のいずれかの操作された免疫細胞。
[本発明1029]
エフェクター免疫細胞においてTCRの発現が低減または抑制される、本発明1024〜1028のいずれかの操作された免疫細胞。
[本発明1030]
CARが、TCR遺伝子座において導入された外因性コード配列によってコードされる、本発明1024〜1029のいずれかの操作された免疫細胞。
[本発明1031]
前記免疫細胞において、少なくとも1つのMHCタンパク質、好ましくはβ2mまたはHLAの発現が抑制される、本発明1024〜1030のいずれかの操作された免疫細胞。
[本発明1032]
前記免疫細胞がドナーまたは患者から提供されたものである、本発明1024〜1031のいずれかの操作された免疫細胞。
[本発明1033]
がんの処置において使用するための、本発明1024〜1032のいずれかの操作された免疫細胞。
[本発明1034]
少なくとも以下の段階を含む、エフェクター細胞内で、膜貫通受容体に関連付けられた機能を不活性化（スイッチオフ）するための方法：
‐エフェクター細胞を提供する段階、
‐受容体ポリペプチド、プロテアーゼ、およびデグロンを含むキメラポリペプチドをコードするポリヌクレオチドまたはポリヌクレオチド配列のセットを、エフェクター細胞内に導入する段階；
‐プロテアーゼ活性がデグロンを除去しかつ該受容体ポリペプチドが細胞の表面において提示されるように、該キメラポリペプチドを該細胞内で発現させる段階；
‐デグロンがもはや除去されないようにおよび発現された該キメラポリペプチドがプロテアソームによって分解されるように、該プロテアーゼ活性を阻害するプロテアーゼ阻害剤を細胞の環境内に導入する段階であって、それにより該エフェクター細胞内で膜貫通受容体に関連づけられた機能をスイッチオフする、段階。
[本発明1035]
前記キメラポリペプチドが本発明1009のものである、本発明1034の方法。
[本発明1036]
少なくとも以下の段階を含む、エフェクター細胞内で膜貫通受容体に関連づけられた機能を活性化（スイッチオン）するための方法：
‐エフェクター細胞を提供する段階、
‐(i) 膜貫通受容体ポリペプチドと (ii) 該膜貫通受容体ポリペプチドに対して向けられたプロテアーゼドメインとをコードするポリヌクレオチド配列のセットまたは特有のポリヌクレオチドを、該エフェクター細胞内に導入する段階、
‐該受容体ポリペプチド機能を不活性化するプロテアーゼ活性を有する該ポリペプチドを、該エフェクター細胞内で発現させる段階、
‐該プロテアーゼ活性を阻害するためにおよび膜貫通受容体が細胞表面において提示されることを可能にするために、プロテアーゼ阻害剤を免疫細胞の環境内に導入する段階であって、それにより該エフェクター細胞内で該受容体の機能を活性化する、段階。
[本発明1037]
(i) 膜貫通受容体ポリペプチドと (ii) 該膜貫通受容体ポリペプチドに対して向けられたプロテアーゼドメインとをコードするポリヌクレオチド配列が、IRES（内部リボソーム侵入部位）または2Aペプチドによって好ましくは分離される、本発明1036の方法。
[本発明1038]
膜貫通受容体がCARである、本発明1034〜1037のいずれかの方法。
[本発明1039]
膜貫通受容体が組換えTCRである、本発明1034〜1037のいずれかの方法。
[本発明1040]
エフェクター免疫細胞が初代細胞である、本発明1034〜1039のいずれかの方法。
[本発明1041]
免疫細胞がT細胞またはNK細胞である、本発明1034〜1039のいずれかの方法。
[本発明1042]
エフェクター免疫細胞においてTCRの発現が低減または抑制される、本発明1034〜1041のいずれかの方法。
[本発明1043]
前記免疫細胞において、少なくとも1つのMHCタンパク質、好ましくはβ2mまたはHLAの発現が抑制される、本発明1034〜1042のいずれかの方法。
[本発明1044]
前記免疫細胞がドナーまたは患者から提供されたものである、本発明1034〜1043のいずれかの方法。
[本発明1045]
膜貫通受容体ポリペプチドが付与されたエフェクター免疫細胞が、病的細胞を除去するのに寄与する、疾患の処置のための本発明1034〜1043のいずれかの方法。
[本発明1046]
膜貫通受容体ポリペプチドが病的細胞と結合する、本発明1045の方法。
[本発明1047]
病的細胞が悪性細胞である、本発明1046の方法。