【手続補正書】
【提出日】令和3年6月2日(2021.6.2)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
非天然アミノ酸をタンパク質に組み込むための細胞株を作製する方法であって、前記方法は、細胞内の１つ以上の標的部位または領域を不活性化する工程を含み、前記１つ以上の標的部位または領域はアポトーシス経路に関与しており、前記細胞はセレクターコドンを含有する目的の遺伝子を発現し、前記細胞は、直交アミノアシルｔＲＮＡシンセターゼ（Ｏ−ＲＳ）および直交サプレッサーｔＲＮＡ（Ｏ−ｔＲＮＡ）を含む、方法。
【請求項２】
前記細胞内の前記１つ以上の標的部位または領域を不活性化することができる核酸分子を提供する工程と、前記核酸分子を前記細胞内に導入する工程とをさらに含み、前記核酸分子は前記１つ以上の標的部位または領域を不活性化し、任意に前記核酸分子は、配列番号１〜１８および２８〜３６から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記１つ以上の標的部位または領域は、アポトーシス促進遺伝子である、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記細胞株が、真核生物細胞株であり；任意に前記細胞株が、ＣＯＳ、ＣＨＯ、ＶＥＲＯ、ＭＤＣＫ、ＷＩ３８、Ｖ７９、Ｂ１４ＡＦ２８−Ｇ３、ＢＨＫ、ＨａＫ、ＮＳ０、ＳＰ２／０−Ａｇ１４、ＨｅＬａ、またはＨＥＫ２９３から選択される、請求項１から３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
前記細胞株が一過性の細胞株、安定な細胞株集団、または安定なクローン細胞株であり；任意に前記安定な細胞株集団はプラットフォームまたは産生細胞株である、請求項１から４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
前記非天然アミノ酸が、パラ−アセチルフェニルアラニン、ｐ−ニトロフェニルアラニン、ｐ−スルホチロシン、ｐ−カルボキシフェニルアラニン、Ｏ−ニトロフェニルアラニン、ｍ−ニトロフェニルアラニン、ｐ−ボロニルフェニルアラニン、ｏ−ボロニルフェニルアラニン、ｍ−ボロニルフェニルアラニン、ｐ−アミノフェニルアラニン、ｏ−アミノフェニルアラニン、ｍ−アミノフェニルアラニン、ｐ−アシルフェニルアラニン、ｏ−アシルフェニルアラニン、ｍ−アシルフェニルアラニン、ｐ−ＯＭｅフェニルアラニン、ｏ−ＯＭｅフェニルアラニン、ｍ−ＯＭｅフェニルアラニン、ｐ−スルホフェニルアラニン、ｏ−スルホフェニルアラニン、ｍ−スルホフェニルアラニン、５−ニトロＨｉｓ、３−ニトロＴｙｒ、２−ニトロＴｙｒ、ニトロ置換されたＬｅｕ、ニトロ置換されたＨｉｓ、ニトロ置換されたＤｅ、ニトロ置換されたＴｒｐ、２−ニトロＴｒｐ、４−ニトロＴｒｐ、５−ニトロＴｒｐ、６−ニトロＴｒｐ、７−ニトロＴｒｐ、３−アミノチロシン、２−アミノチロシン、Ｏ−スルホチロシン、２−スルホオキシフェニルアラニン、３−スルホオキシフェニルアラニン、Ｏ−カルボキシフェニルアラニン、ｍ−カルボキシフェニルアラニン、ｐ−アセチル−Ｌ−フェニルアラニン、ｐ−プロパルギル−フェニルアラニン、Ｏ−メチル−Ｌ−チロシン、Ｌ−３−（２−ナフチル）アラニン、３−メチル−フェニルアラニン、Ｏ−４−アリル−Ｌ−チロシン、４−プロピル−Ｌ−チロシン、トリ−Ｏ−アセチル−ＧｌｃＮＡｃβ−セリン、Ｌ−Ｄｏｐａ、フッ化フェニルアラニン、イソプロピル−Ｌ−フェニルアラニン、ｐ−アジド−Ｌ−フェニルアラニン、ｐ−アシル−Ｌ−フェニルアラニン、ｐ−ベンゾイル−Ｌ−フェニルアラニン、Ｌ−ホスホセリン、ホスホノセリン、ホスホノチロシン、ｐ−ヨード−フェニルアラニン、ｐ−ブロモフェニルアラニン、ｐ−アミノ−Ｌ−フェニルアラニン、イソプロピル−Ｌ−フェニルアラニン、およびｐ−プロパルギルオキシ−Ｌ−フェニルアラニンから選択される、請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
前記非天然アミノ酸が部位特異的に前記タンパク質に組み込まれている、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
前記目的の遺伝子が、生物学的治療遺伝子または生物学的治療産物であり、任意に前記生物学的治療遺伝子または生物学的治療産物が、ワクチンである請求項１〜７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
前記目的の遺伝子が、抗体、ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ融合タンパク質、Ｆｃ融合タンパク質、第ＶＩＩ因子、第ＶＩＩＩ因子、または第ＩＶ因子をコードし、任意に前記目的の遺伝子が抗体をコードする、請求項１〜８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
前記目的の遺伝子が、
ａ）サイトカイン、インターロイキン、インターフェロン、ケモカイン、成長因子、ホルモン、またはこれらのレセプター、類似体、二重特異性またはこれらの断片をコードする；または、
ｂ）ＨＥＲ２、ＣＤ−７０、ＰＳＭＡ、５Ｔ４、ＥＧＦＲ、ＴＲＯＰ２、ＣＤ３、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−１０、ＩＬ−１５、ＧＰＣ３、ＤＬＬ３、ＲＯＲ１、レプチン、ＦＧＦ−２１、ＦＧＦ−２３、ＨＧＨ、ＦｃＲ、インスリン、ＴＮＦＲ１、ＴＲＡＩＬ、ＥＰＯ、またはこれらの類似体、二重特異性またはフラグメントをコードする、請求項１〜９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
前記１つ以上の標的部位または領域が、
ａ）Ｂｃｌ−２ファミリー部位または領域であり；任意にＢｃｌ−２ファミリー部位または領域が、Ｂｃｌ−ｘｌ、Ｂａｋ、Ｂａｘ、Ｂｃｌ−ｘｓ、Ｂｉｄ、Ｂｉｍ、ＢａｄおよびＢｉｋから選択され；または
ｂ）Ｂａｘであり；任意に、前記目的の遺伝子が抗体をコードし；または
ｃ）Ｂａｋであり；任意に、前記目的の遺伝子が抗体をコードし；または
ｄ）ＢａｘおよびＢａｋであり；任意に、前記目的の遺伝子が抗体をコードする、
請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
前記１つ以上の標的部位または領域が、完全にまたは部分的に不活性化されている、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
前記１つ以上の標的部位または領域が、同じであるかまたは異なる、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４】
前記セレクターコドンが、
ａ）ナンセンスコドン、希少コドン、または４塩基コドン；または
ｂ）オーカーコドン、オパールコドン、またはアンバーコドンである、
請求項１〜１３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１５】
細胞株における非天然アミノ酸含有タンパク質の収率を最適化するための方法であって；任意に、非天然アミノ酸含有タンパク質の収率は、１つ以上の標的部位または領域を不活性化しない場合の少なくとも０．５倍以上大きい、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１６】
細胞におけるアポトーシスを減少または低減させる方法であって、前記細胞はセレクターコドンを含有する目的の遺伝子を発現し、前記細胞は直交アミノアシルｔＲＮＡシンセターゼ（Ｏ−ＲＳ）および直交サプレッサーｔＲＮＡ（Ｏ−ｔＲＮＡ）を含み、前記細胞における１つ以上のアポトーシス促進標的部位または領域を、不活性化する工程を含む、方法。
【請求項１７】
直交アミノアシルｔＲＮＡシンセターゼ（Ｏ−ＲＳ）および直交サプレッサーｔＲＮＡ（Ｏ−ｔＲＮＡ）を含み、セレクターコドンを含有する目的の遺伝子を発現する細胞または細胞株を提供する工程、
前記細胞または細胞株におけるアポトーシス経路に関与する１つ以上の標的部位または領域を不活性化することができる核酸分子を、前記細胞株へ導入する工程、および
任意に、非天然アミノ酸を前記細胞または細胞株に提供する工程
を含む、非天然アミノ酸をタンパク質に組み込むための細胞または細胞株を作製する方法。
【請求項１８】
請求項１〜１７のいずれか１項に記載の方法により製造された単離された細胞または細胞株。
【請求項１９】
非天然アミノ酸含有タンパク質を製造するための、請求項１８に記載の単離された細胞または細胞株。
【請求項２０】
非天然アミノ酸をタンパク質に組み込むための細胞または細胞株であって、
前記細胞はセレクターコドンを含有する目的の遺伝子を発現し、前記細胞は直交アミノアシルｔＲＮＡシンセターゼ（Ｏ−ＲＳ）および直交サプレッサーｔＲＮＡ（Ｏ−ｔＲＮＡ）を含み；前記細胞は１つ以上の不活性化された標的部位または領域を含有し、前記１つ以上の不活性化された標的部位または領域は、アポトーシス経路に関与する、細胞または細胞株。
【請求項２１】
請求項１〜１７のいずれか１項に記載の方法によって製造された、非天然アミノ酸を含む単離されたタンパク質。
【請求項２２】
請求項１〜１７のいずれか１項に記載の方法によって製造されたワクチン。