【手続補正書】
【提出日】令和3年5月24日(2021.5.24)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
第１の不飽和官能基を含有する生体分子を、第２の不飽和官能基を含むペイロードとコンジュゲートさせる工程を含む生体コンジュゲーション方法であって、前記第１の不飽和官能基及び前記第２の不飽和官能基が、コンジュゲーションがシクロヘキセン環を形成するディールス−アルダー反応を介した前記官能基同士の反応であるように、互いと相補的であり、前記第１の官能基がジエンであり、前記第２の官能基がジエノフィルである、生体コンジュゲーション方法。
【請求項２】
前記ジエノフィルが、マレイミド、マレイン酸のエステル、フマル酸のエステル、アクリル酸のエステル、メタクリル酸、アクリロニトリル、アクリルアミド、メタクリルアミド、メチルビニルケトン、２−ブチン二酸のアミド及びエステル、キノン、及びアセチレンから選択される、請求項１に記載の生体コンジュゲーション方法。
【請求項３】
前記ジエンが、直鎖状ジエン、炭素環ジエン、又は複素環ジエンである、請求項１又は２に記載の生体コンジュゲーション方法。
【請求項４】
前記ジエンが、ブタジエン、シクロペンタジエン、１，３−シクロヘキサジエン、フラン、又はアントラセンを含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の生体コンジュゲーション方法。
【請求項５】
前記ジエンが、非天然のアミノ酸内に含有される、請求項１〜４のいずれか一項に記載の生体コンジュゲーション方法。
【請求項６】
前記ジエンが、アミノ酸の側鎖内にある、請求項５に記載の生体コンジュゲーション方法。
【請求項７】
前記ジエンが、リシン、システイン、セレノシステイン、アスパラギン酸、グルタミン酸、セリン、トレオニン、及びチロシンに由来する非天然のアミノ酸である、請求項５又は６に記載の生体コンジュゲーション方法。
【請求項８】
前記非天然のアミノ酸が：
【化１】
2020521735.tif 000001
を含む群から選択される、請求項７に記載の生体コンジュゲーション方法。
【請求項９】
前記方法が、前記生体分子内のアミノ酸残基にリンカーを介してジエン又はジエノフィルをコンジュゲートさせるプレ工程を含む、請求項１〜８のいずれか一項に記載の生体コンジュゲーション方法。
【請求項１０】
前記方法が、前記生体分子内のアミノ酸残基にリンカーを介してジエンをコンジュゲートさせるプレ工程を含む、請求項１〜９のいずれか一項に記載の生体コンジュゲーション方法。
【請求項１１】
前記アミノ酸が、システイン又はリシンである、請求項１０に記載の生体コンジュゲーション方法。
【請求項１２】
前記ジエンが：
【化２】
2020521735.tif 000002
の構造を有する、請求項９〜１１のいずれか一項に記載の生体コンジュゲーション方法。
【請求項１３】
前記反応が、１０〜４０℃の範囲の温度にて実行される、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の生体コンジュゲーション方法。
【請求項１４】
前記反応が、周囲温度にて実行される、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の生体コンジュゲーション方法。
【請求項１５】
前記反応が、水性溶媒、バッファ、又はそれらの組合せ中で実行される、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の生体コンジュゲーション方法。
【請求項１６】
前記水性溶媒が、水性有機溶媒系であり、前記バッファが、ＰＢＳである、請求項１５に記載の生体コンジュゲーション方法。
【請求項１７】
前記バッファが、極性非プロトン性溶媒または界面活性剤を含んでいる、請求項１５又は１６に記載の生体コンジュゲーション方法。
【請求項１８】
前記極性非プロトン性溶媒が、ＤＭＳＯであり、前記界面活性剤が、ポリソルベート８０である、請求項１７に記載の生体コンジュゲーション方法。
【請求項１９】
前記生体分子が、ポリペプチドである、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の生体コンジュゲーション方法。
【請求項２０】
前記ポリペプチドが、リガンド、受容体、抗体分子を含む群から選択される、請求項１９に記載の生体コンジュゲーション反応。
【請求項２１】
前記生体分子が、治療分子である、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の生体コンジュゲーション方法。
【請求項２２】
前記ペイロードが
ａ．オーリスタチン、
ｂ．マイタンシノイド、
ｃ．毒物、
ｄ．ポリマー
から選択される、請求項１〜２１のいずれか一項に記載の生体コンジュゲーション反応。
【請求項２３】
前記オーリスタチンが、チューブリシン又はピロロベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）ＭＭＡＥ（モノメチルオーリスタチンＥ）、ＭＭＡＦ（モノメチルオーリスタチンＦ）、ドキソルビシン、チューブリシン、及びデュオカルマイシンを含む群から選択され、前記マイタンシノイドが、Ｎ  ２’−デアセチル−Ｎ  ２’−（３−メルカプト−１−オキソプロピル）−マイタンシン（ＤＭ１）、Ｎ  ２’−デアセチル−Ｎ２’−（４−メルカプト−１−オキソペンチル）−マイタンシン（ＤＭ３）、及びＮ  ２’−デアセチル−Ｎ  ２’（４−メチル−４−メルカプト−１−オキソペンチル）−マイタンシン（ＤＭ４）を含む群から選択され、前記ポリマーが、天然のポリマー又は合成ポリマーである、請求項２２に記載の生体コンジュゲーション反応。
【請求項２４】
前記天然のポリマーが、デンプン、ポリ（グルタミン酸）、ポリ（アスパラギン酸）、ポリ（リシン）、又はアルブミンであり、前記合成ポリマーが、ＰＥＧである、請求項２３に記載の生体コンジュゲーション反応。
【請求項２５】
式（ＩＶａ）：
【化３】
2020521735.tif 000003
［式中、
ＲＹは、ペイロードを表し；
ＲＺは、生体分子を表す］
又は式（ＩＶｂ）：
【化４】
2020521735.tif 000004
［式中、
ＲＹは、ペイロードを表し；
ＲＺは、生体分子を表し；
Ｘ４は、−Ｏ−又は−ＣＨ２−を表す］
で示されるペイロードにコンジュゲートした生体分子であって、前記生体分子を前記ペイロードに連結するコンジュゲーション反応が、ジエンを含む生体分子とジエノフィルを含むペイロードとの間のディールス−アルダー反応を介していて、シクロヘキセン環を形成する、ペイロードにコンジュゲートした生体分子。
【請求項２６】
前記生体分子が、抗体、又はその結合フラグメントである、請求項２５に記載のペイロードにコンジュゲートした生体分子。
【請求項２７】
前記ペイロードが
ａ．オーリスタチン、
ｂ．マイタンシノイド、
ｃ．毒物、
ｄ．ポリマー
から選択される、請求項２５又は２６に記載のペイロードにコンジュゲートした生体分子。
【請求項２８】
前記オーリスタチンが、チューブリシン又はピロロベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）ＭＭＡＥ（モノメチルオーリスタチンＥ）、ＭＭＡＦ（モノメチルオーリスタチンＦ）、ドキソルビシン、及びデュオカルマイシンを含む群から選択され、前記マイタンシノイドが、Ｎ  ２’−デアセチル−Ｎ  ２’−（３−メルカプト−１−オキソプロピル）−マイタンシン（ＤＭ１）、Ｎ  ２’−デアセチル−Ｎ２’−（４−メルカプト−１−オキソペンチル）−マイタンシン（ＤＭ３）、及びＮ  ２’−デアセチル−Ｎ  ２’（４−メチル−４−メルカプト−１−オキソペンチル）−マイタンシン（ＤＭ４）を含む群から選択され、前記ポリマーが、天然ポリマー又は合成ポリマーである、請求項２７に記載のペイロードにコンジュゲートした生体分子。
【請求項２９】
前記天然ポリマーが、デンプン、ポリ（グルタミン酸）、又はアルブミンであり、前記合成ポリマーが、ＰＥＧである、請求項２８に記載のペイロードにコンジュゲートした生体分子。
【請求項３０】
請求項２７〜２９のいずれか一項に規定のペイロードにコンジュゲートした生体分子、並びに希釈剤、キャリア、及び／又は賦形剤を含む医薬組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０４７１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０４７１】
ＣＰ１−ＮＮＡＡを組み込んだ抗体を、ディールス−アルダー反応を介して、マレイミド官能化ナノ粒子にコンジュゲートさせた。
本願は以下の態様も包含する。
［態様１］
第１の不飽和官能基を含有する生体分子を、第２の不飽和官能基を含むペイロードとコンジュゲートさせる工程を含む生体コンジュゲーション方法であって、前記第１の不飽和官能基及び前記第２の不飽和官能基は、コンジュゲーションが、シクロヘキセン環を形成するディールス−アルダー反応を介した前記官能基同士の反応であるように、互いと相補的である、生体コンジュゲーション方法。
［態様２］
前記第１の官能基はジエンである、態様１に記載の生体コンジュゲーション方法。
［態様３］
前記第２の官能基は、ジエノフィルであり、例えば、マレイミド、マレイン酸のエステル、フマル酸のエステル、アクリル酸のエステル、メタクリル酸、アクリロニトリル、アクリルアミド、メタクリルアミド、メチルビニルケトン、２−ブチン二酸のアミド及びエステル、キノン、アセチレンである、態様２に記載の生体コンジュゲーション方法。
［態様４］
前記第２の官能基はジエンである、態様１に記載の生体コンジュゲーション方法。
［態様５］
前記第１の官能基は、マレイン酸のエステル、マレイミド、フマル酸のエステル、アクリル酸のエステル、メタクリル酸、アクリロニトリル、アクリルアミド、メタクリルアミド、メチルビニルケトン、２−ブチン二酸のアミド及びエステル、キノン、アセチレンから選択されるジエノフィルである、態様４に記載の生体コンジュゲーション方法。
［態様６］
前記ジエノフィルは、非天然のアミノ酸、例えばノルボルネンを含む非天然のアミノ酸内に含有される、態様３又は５に記載の生体コンジュゲーション方法。
［態様７］
前記ジエンは、直鎖状ジエン、炭素環ジエン、又は複素環ジエンである、態様２〜６のいずれか一つに記載の生体コンジュゲーション方法。
［態様８］
前記ジエンは、ブタジエン、シクロペンタジエン、１，３−シクロヘキサジエン、フラン、又はアントラセンを含む、態様７に記載の生体コンジュゲーション方法。
［態様９］
前記ジエンは、非天然のアミノ酸内に含有される、態様２〜８のいずれか一つに記載の生体コンジュゲーション方法。
［態様１０］
前記ジエンは、リシン、システイン、セレノシステイン、アスパラギン酸、グルタミン酸、セリン、トレオニン、及びチロシンに由来する非天然のアミノ酸である、態様９に記載の生体コンジュゲーション方法。
［態様１１］
前記ジエンは、アミノ酸の側鎖内にある、態様８又は９に記載の生体コンジュゲーション方法。
［態様１２］
前記非天然のアミノは、式（Ｉ）を有し：
ＲＸ−Ｘ１−Ｏ０〜１Ｃ（Ｏ）−アミノ残基  （Ｉ）
式中：
ＲＸは：
ｉｖ）Ｃ４〜９直鎖状共役ジエンと、
ｖ）共役ジエンを含むＣ５〜１４カルボシクリルと、
ｖｉ）Ｏ、Ｎ、及びＳから選択される１、２、又は３つのヘテロ原子、並びに共役ジエンを含む５〜１４員のヘテロシクリルと
から選択される不飽和基を表し、
ｉ）、ｉｉ）、及びｉｉｉ）は、最大５つの置換基（例えば、１、２、又は３つの置換基）を有してよく、例えば前記置換基は、Ｃ１〜３アルキル、オキソ、ハロゲン、スルホ、スルフヒドリル、アミノ、−Ｃ１〜３アルキレンＮ３、又は−Ｃ２〜５アルキニルから独立して選択され；
Ｘ１は
ｉ）飽和若しくは不飽和の、分枝状若しくは枝状に分かれていないＣ１〜８アルキレン鎖を表し、少なくとも１つの炭素（例えば、１、２、若しくは３つの炭素）は、Ｏ、Ｎ、Ｓ（Ｏ）０〜３から選択されるヘテロ原子によって置換されており、前記鎖は、場合によっては、オキソ、ハロゲン、アミノ、−Ｃ１〜３アルキレンＮ３、若しくは−Ｃ２〜５アルキニルから独立して選択される１つ以上の基によって置換されており；又は
ｉｉ）カルボシクリル若しくはヘテロシクリル由来の炭素と一緒に、飽和若しくは不飽和（特に、飽和）の、分枝状若しくは枝状に分かれていないＣ１〜６アルキレン鎖に連結されたシクロプロパン環を表し、少なくとも１つの炭素（例えば、１、２、若しくは３つの炭素）は、Ｏ、Ｎ、Ｓ（Ｏ）０〜３から選択されるヘテロ原子によって置換されており、前記鎖は、場合によっては、オキソ、ハロゲン、アミノ、−Ｃ１〜３アルキレンＮ３、若しくは−Ｃ２〜５アルキニルから独立して選択される１つ以上の基によって置換されており、
Ｏ０〜１Ｃ（Ｏ）は、アミノ酸の側鎖を介して連結されている、態様８〜１０のいずれか一つに記載の生体コンジュゲーション方法。
［態様１３］
前記置換基は、オキソ、ハロゲン、スルホ、スルフヒドリル、アミノ、−Ｃ１〜３アルキレンＮ３、又は−Ｃ２〜５アルキニルから独立して選択される、態様１２に記載の生体コンジュゲーション方法。
［態様１４］
前記非天然のアミノ酸は、式（ＩＩ）の構造の残基であり：
【化５２】
2020521735.tif 000005
式中、
Ｘ２は、−Ｃ−、−Ｃ（Ｒ’）−、−ＣＨ２、又はＯを表し；
Ｒａは、
ｉ）飽和若しくは不飽和の、分枝状若しくは枝状に分かれていないＣ１〜８アルキレン鎖を表し、少なくとも１つの炭素（例えば、１、２、若しくは３つの炭素）は、Ｏ、Ｎ、Ｓ（Ｏ）０〜３から選択されるヘテロ原子によって置換されており、前記鎖は、場合によっては、オキソ、ハロゲン、アミノから独立して選択される１つ以上の基によって置換されており；又は
ｉｉ）式（ＩＩ）において定義される５員環由来の炭素と一緒に、飽和若しくは不飽和の、分枝状若しくは枝状に分かれていないＣ１〜６アルキレン鎖に連結されたシクロプロパン環を表し、少なくとも１つの炭素（例えば、１、２、若しくは３つの炭素）は、Ｏ、Ｎ、Ｓ（Ｏ）０〜３から選択されるヘテロ原子によって置換されており、前記鎖は、場合によっては、オキソ、ハロゲン、アミノから独立して選択される１つ以上（例えば、１、２、若しくは３つ）の基によって置換されており；
Ｒｂは、Ｈ、−ＯＣ１〜３アルキル、場合によってはヒドロキシル置換基を有するＣ１〜６アルキル、−Ｃ１〜３アルキレンＮ３、又は−Ｃ２〜５アルキニルを表し；
Ｒｃは、Ｈ、−ＯＣ１〜３アルキル、場合によってはヒドロキシル置換基を有するＣ１〜６アルキル、−Ｃ１〜３アルキレンＮ３、又は−Ｃ２〜５アルキニルを表し；
Ｒｄは、Ｈ、−ＯＣ１〜３アルキル、場合によってはヒドロキシル置換基を有するＣ１〜６アルキル、−Ｃ１〜３アルキレンＮ３、又は−Ｃ２〜５アルキニルを表し；
Ｒｅは、Ｈ、飽和又は不飽和の、分枝状又は枝状に分かれていないＣ１〜８アルキレン鎖を表し、１つ以上の炭素は、場合によっては、−Ｏ−によって置換されており、前記鎖は、場合によっては、１つ以上のハロゲン原子（例えばヨード）、Ｎ３、又は−Ｃ２〜５アルキニルによって置換されている、態様１２又は１３に記載の生体コンジュゲーション方法。
［態様１５］
Ｒａは、−ＣＨ（ＣＨ２）ＣＨ２ＣＯＣ（Ｏ）−、−ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＯＣ（Ｏ）−、−（ＣＨ２）ｍＣＨ２ＯＣ（Ｏ）−、−ＣＨ（ＣＨ２）Ｃ（Ｏ）−、−（ＣＨ２）ｍＣＨ２Ｃ（Ｏ）−、−ＣＨ（ＣＨ３）Ｃ（Ｏ）−、Ｃ１〜６アルキレン（例えば−ＣＨ２ＣＨ２−）であり、ｍは、０又は１を表す、態様１４に記載の生体コンジュゲーション方法。
［態様１６］
Ｒｂは、Ｈ、−ＯＣ１〜３アルキル、−ＣＨ３、−ＣＨ（ＣＨ３）２、ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ２Ｎ３、又は−ＣＣＨである、態様１４又は１５に記載の生体コンジュゲーション方法。
［態様１７］
Ｒｃは、Ｈ、−ＯＣ１〜３アルキル、−ＣＨ３、−ＣＨ（ＣＨ３）２、ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ２Ｎ３、又は−ＣＣＨである、態様１４〜１６のいずれか一つに記載の生体コンジュゲーション方法。
［態様１８］
Ｒｄは、Ｈ、−ＯＣ１〜３アルキル、−ＣＨ３、−ＣＨ（ＣＨ３）２、ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ２Ｎ３、又は−ＣＣＨである、態様１４〜１７のいずれか一つに記載の生体コンジュゲーション方法。
［態様１９］
Ｒｅは、Ｈ又は−ＣＨ２ＯＣＨ２ＣＨ２Ｎ３を表す、態様１４〜１８のいずれか一つに記載の生体コンジュゲーション方法。
［態様２０］
前記非天然のアミノ酸は、式（ＩＩａ）の構造の残基であり：
【化５３】
2020521735.tif 000006
式中、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｒｅ、及びＸ２は、上に定義されている、態様１４〜１９のいずれか一つに記載の生体コンジュゲーション方法。
［態様２１］
前記非天然のアミノ酸は、式（ＩＩｂ）の構造を有し：
【化５４】
2020521735.tif 000007
式中、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｒｅ、及びＸ２は、上に定義されている、態様１４〜１９のいずれか一つに記載の生体コンジュゲーション方法。
［態様２２］
前記非天然のアミノ酸は、式（ＩＩｃ）の構造を有し：
【化５５】
2020521735.tif 000008
式中、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｒｅは、上に定義されており、Ｘ２’は、−Ｃ−又は−ＣＲ’である、態様１４〜１９のいずれか一つに記載の生体コンジュゲーション方法。
［態様２３］
前記非天然のアミノ酸は：
【化５６】
2020521735.tif 000009
を含む群から選択される、態様９〜２２のいずれか一つに記載の生体コンジュゲーション方法。
［態様２４］
前記ジエノフィルは、非天然のアミノ酸の側鎖である、態様１〜２３のいずれか一つに記載の生体コンジュゲーション方法。
［態様２５］
前記方法は、前記生体分子内のアミノ酸残基にリンカーを介してジエン又はジエノフィル（特にジエン）をコンジュゲートさせるプレ工程を含む、態様１〜２４のいずれか一つに記載の生体コンジュゲーション方法。
［態様２６］
前記アミノ酸は、システイン又はリシンである、態様２５に記載の生体コンジュゲーション方法。
［態様２７］
前記生体分子内の前記アミノ酸残基への付加前の前記ジエンは、式（ＩＩＩ）の構造：
ＲＸ−Ｂｎ−Ｘ３ｍ−Ｙｐ−Ｚ  （ＩＩＩ）
又はその、Ｏ若しくはＮ結合糖を有する誘導体を有し、
ｎは、０又は１を表し；
ｍは、０又は１を表し；
ｐは、０又は１を表し；
ＲＸは：
ｉ）Ｃ４〜９直鎖状共役ジエンと、
ｉｉ）共役ジエンを含むＣ５〜１４カルボシクリルと、
ｉｉｉ）Ｏ、Ｎ、及びＳから選択される１、２、又は３つのヘテロ原子、並びに共役ジエンを含む５〜１４員のヘテロシクリルと
から選択される不飽和基を表し、
ｉ）、ｉｉ）、及びｉｉｉ）は、最大５つの置換基（例えば、１、２、又は３つの置換基）を有してよく、例えば前記置換基は、Ｃ１〜３アルキル、オキソ、ハロゲン、スルホ、スルフヒドリル、アミノ、−Ｃ１〜３アルキレンＮ３、又は−Ｃ２〜５アルキニルから独立して選択され；
Ｂは、Ｃ１〜６アルキレン、−Ｃ３〜４シクロアルキルＣ１〜６アルキレン−を表し；場合によっては、糖残基（例えば、グルコース、グルコサミン、ガラクトース、ガラクトサミン、ラクトース、マンノース、及びフルクトース）が、Ｃ１〜６アルキレン、−Ｃ３〜４シクロアルキルＣ１〜６アルキレン−の任意の１つのアルキレン鎖内に含有され、Ｂについて定義された前記可変部分の任意の１つの前記アルキレン鎖は、場合によっては、Ｎ−及びＯ−結合糖残基（例えば、グルコース、グルコサミン、ガラクトース、ガラクトサミン、ラクトース、マンノース、及びフルクトース）から独立して選択される１つ又は２つの置換基を有し：
Ｘ３は、−（Ｒ１）ＮＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１）−、−ＯＣ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ−を表し；
Ｒ１は、Ｈ又は−ＣＨ２ＯＣＨ２ＣＨ２Ｒ２を表し；
Ｒ２は、−Ｎ３、Ｃ２〜５アルキニル、又はハロゲン、例えばヨードを表し；
Ｙは、−（ＯＣＨ２）ｑＣ２〜６アルキレン、又は場合によっては−ＮＲ３Ｒ４で置換されている−Ｃ２〜６アルキレンを表し、
ｑは、１〜７０００であり；
Ｒ３及びＲ４は、独立して、Ｈ又はＣ１〜３アルキルを表し；
Ｚは、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ５、Ｒ５’、−ＮＣ（Ｏ）Ｒ６、−Ｃ２〜５アルキレン、ＣＨ２−Ｏ−ＮＨ２、アルキン、アジド、３−アリールプロピオロニトリル、又はハロゲン、例えばヨードを表し；
Ｒ５は、Ｃ１〜６アルキル、スクシンイミド、Ｃ６Ｆ４Ｈ（テトラフルオロヘキシル）、又はＨを表し：
Ｒ５’は、硫黄架橋基、例えば、ジブロモマレイミド、ジクロロアセトン、又はそれらの任意の１つの誘導体を表し、
Ｒ６は：
【化５７】
2020521735.tif 000010
を表し、
式中、
Ｒ７は、場合によっては、ヒドロキシル、スルホ、アミノ、及び−（ＯＣＨ２）ｖＣ２〜６アルキレンから選択される１つ以上（例えば、１、２、又は３つ）の基を有するＣ１〜６アルキレン、並びに、場合によっては、ヒドロキシル、スルホ、アミノ、及び−（ＯＣＨ２）ｖＣ２〜６アルキレンから選択される１つ以上（例えば、１、２、又は３つ）の基を有するフェニルであり、
ｖは、整数１、２、３、４、又は５であり、
【化５８】
2020521735.tif 000011
は、フラグメントが、残りの前記分子に連結される場所を表す、態様２５又は２６に記載の生体コンジュゲーション反応。
［態様２８］
前記ジエンは：
【化５９】
2020521735.tif 000012
の構造を有する、態様２５〜２７のいずれか一つに記載の生体コンジュゲーション方法。
［態様２９］
前記反応は、１０〜４０℃の範囲の温度、例えば周囲温度にて実行される、態様１〜２８のいずれか一つに記載の生体コンジュゲーション方法。
［態様３０］
前記反応は、水性溶媒、例えば水性有機溶媒系、バッファ、例えば、場合によっては、極性非プロトン性溶媒、例えばＤＭＳＯ、若しくは界面活性剤、例えばポリソルベート８０を含むＰＢＳ、又はそれらの組合せ中で実行される、態様１〜２９のいずれか一つに記載の生体コンジュゲーション方法。
［態様３１］
前記生体分子はポリペプチドである、態様１〜３０のいずれか一つに記載の生体コンジュゲーション方法。
［態様３２］
前記ポリペプチドは、リガンド、受容体、抗体分子を含む群から選択される、態様３１に記載の生体コンジュゲーション反応。
［態様３３］
前記生体分子は治療分子である、態様１〜３２のいずれか一つに記載の生体コンジュゲーション方法。
［態様３４］
前記生体分子は、１つ以上のリジン残基を、元の、又は天然の配列から除去するように操作されている、態様１〜３３のいずれか一つに記載の生体コンジュゲーション反応。
［態様３５］
前記ペイロードは：
ａ．例えば、チューブリシン又はピロロベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）ＭＭＡＥ（モノメチルオーリスタチンＥ）、ＭＭＡＦ（モノメチルオーリスタチンＦ）、ドキソルビシン、チューブリシン、及びデュオカルマイシンを含む群から選択される、オーリスタチン；
ｂ．マイタンシノイド、例えば、Ｎ  ２’−デアセチル−Ｎ  ２’−（３−メルカプト−１−オキソプロピル）−マイタンシン（ＤＭ１）、Ｎ  ２’−デアセチル−Ｎ２’−（４−メルカプト−１−オキソペンチル）−マイタンシン（ＤＭ３）、及びＮ  ２’−デアセチル−Ｎ  ２’（４−メチル−４−メルカプト−１−オキソペンチル）−マイタンシン（ＤＭ４）、
ｃ．毒物、
ｄ．ポリマー、例えば天然のポリマー、例えば、デンプン、ポリ（グルタミン酸）、ポリ（アスパラギン酸）、ポリ（リシン）、若しくはアルブミン、又は合成ポリマー、例えばＰＥＧ
から選択される、態様１〜３４のいずれか一つに記載の生体コンジュゲーション反応。
［態様３６］
態様１〜３５のいずれか一つに記載の方法から得られた、又は入手可能な、ペイロードにコンジュゲートした生体分子。
［態様３７］
ペイロードにコンジュゲートした生体分子であって、前記生体分子を前記ペイロードに連結するコンジュゲーション反応は、ジエンとジエノフィル間のディールス−アルダー反応を介して、シクロヘキセン環を形成する、ペイロードにコンジュゲートした生体分子。
［態様３８］
前記シクロヘキセン環は、例えば最大２０個の原子を含む、縮合環系の一部である、態様３７に記載のペイロードにコンジュゲートした生体分子。
［態様３９］
式（ＩＶａ）の、態様３８に記載のペイロードにコンジュゲートした生体分子であって：
【化６０】
2020521735.tif 000013
式中、
ＲＹは、前記ペイロードを表し；
ＲＺは、前記生体分子を表す、
ペイロードにコンジュゲートした生体分子。
［態様４０］
式（ＩＶｂ）の、態様３８に記載のペイロードにコンジュゲートした生体分子であって：
【化６１】
2020521735.tif 000014
式中、
ＲＹは、前記ペイロードを表し；
ＲＺは、前記生体分子を表し；
Ｘ４は、−Ｏ−又は−ＣＨ２−を表す、
ペイロードにコンジュゲートした生体分子。
［態様４１］
前記生体分子は、抗体、又はその結合フラグメントである、態様３６〜４０のいずれか一つに記載のペイロードにコンジュゲートした生体分子。
［態様４２］
前記ペイロードは：
ａ．例えば、チューブリシン又はピロロベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）ＭＭＡＥ（モノメチルオーリスタチンＥ）、ＭＭＡＦ（モノメチルオーリスタチンＦ）、ドキソルビシン、及びデュオカルマイシンを含む群から選択される、オーリスタチン；
ｂ．マイタンシノイド、例えばＮ  ２’−デアセチル−Ｎ  ２’−（３−メルカプト−１−オキソプロピル）−マイタンシン（ＤＭ１）、Ｎ  ２’−デアセチル−Ｎ２’−（４−メルカプト−１−オキソペンチル）−マイタンシン（ＤＭ３）、及びＮ  ２’−デアセチル−Ｎ  ２’（４−メチル−４−メルカプト−１−オキソペンチル）−マイタンシン（ＤＭ４）、
ｃ．毒物、
ｄ．ポリマー、例えば天然ポリマー、例えば、デンプン、ポリ（グルタミン酸）、若しくはアルブミン、又は合成ポリマー、例えばＰＥＧ
から選択される、態様３６〜４１のいずれか一つに記載のペイロードにコンジュゲートした生体分子。
［態様４３］
態様３６〜４２のいずれか一つに規定のペイロードにコンジュゲートした生体分子、並びに希釈剤、キャリア、及び／又は賦形剤を含む医薬組成物。
［態様４４］
前記組成物は、非経口製剤である、態様４３に記載の医薬組成物。
［態様４５］
治療的に有効な量の、態様３６〜４２のいずれか一つに規定のペイロードにコンジュゲートした生体分子、又は態様４３若しくは４４に規定の医薬組成物を投与することを含む、患者を処置する方法。
［態様４６］
処置に用いるための、態様３６〜４２のいずれか一つに規定のペイロードにコンジュゲートした生体分子、及び希釈剤、又は態様４３若しくは４４に規定の医薬組成物。
［態様４７］
医薬の製造のための、態様３６〜４２のいずれか一つに規定のペイロードにコンジュゲートした生体分子、及び希釈剤、又は態様４３若しくは４４に規定の医薬組成物の使用。
［態様４８］
ジエン又はジエノフィルを含む非天然のアミノ酸。
［態様４９］
前記ジエン又は前記ジエノフィルは、側鎖内にある、非天然のアミノ酸。
［態様５０］
リシンアスパラギン、グルタミン、システイン、アスパラギン酸、グルタミン酸に由来する、態様４８又は４９に記載の非天然のアミノ酸。
［態様５１］
式（Ｉ）を有し：
ＲＸ−Ｘ１−Ｏ０〜１Ｃ（Ｏ）−アミノ残基  （Ｉ）
式中：
ＲＸは：
ｉｖ）Ｃ４〜９直鎖状共役ジエンと、
ｖ）共役ジエンを含むＣ５〜１４カルボシクリルと、
ｖｉ）Ｏ、Ｎ、及びＳから選択される１、２、又は３つのヘテロ原子、並びに共役ジエンを含む５〜１４員のヘテロシクリルと
から選択される不飽和基を表し、
ｉ）、ｉｉ）、及びｉｉｉ）は、最大５つの置換基（例えば、１、２、又は３つの置換基）を有してよく、例えば置換基は、Ｃ１〜３アルキル、オキソ、ハロゲン、スルホ、スルフヒドリル、アミノ、−Ｃ１〜３アルキレンＮ３、又は−Ｃ２〜５アルキニルから独立して選択され；
Ｘ１は
ｉｉｉ）飽和若しくは不飽和の、分枝状若しくは枝状に分かれていないＣ１〜８アルキレン鎖を表し、少なくとも１つの炭素（例えば、１、２、若しくは３つの炭素）は、Ｏ、Ｎ、Ｓ（Ｏ）０〜３から選択されるヘテロ原子によって置換されており、前記鎖は、場合によっては、オキソ、ハロゲン、アミノ、−Ｃ１〜３アルキレンＮ３、若しくは−Ｃ２〜５アルキニルから独立して選択される１つ以上の基によって置換されており；又は
ｉｖ）カルボシクリル若しくはヘテロシクリル由来の炭素と一緒に、飽和若しくは不飽和（特に、飽和）の、分枝状若しくは枝状に分かれていないＣ１〜６アルキレン鎖に連結されたシクロプロパン環を表し、少なくとも１つの炭素（例えば、１、２、若しくは３つの炭素）は、Ｏ、Ｎ、Ｓ（Ｏ）０〜３から選択されるヘテロ原子によって置換されており、前記鎖は、場合によっては、オキソ、ハロゲン、アミノ、−Ｃ１〜３アルキレンＮ３、若しくは−Ｃ２〜５アルキニルから独立して選択される１つ以上の基によって置換されており、
−Ｏ０〜１Ｃ（Ｏ）−は、アミノ酸の側鎖を介して連結されている、
態様４８〜５０のいずれか一つに記載の非天然のアミノ酸。
［態様５２］
前記非天然のアミノ酸は、式（ＩＩ）：
【化６２】
2020521735.tif 000015
又はその塩を有し、式中、
Ｘ２は、−Ｃ−、−ＣＨ２、又はＯを表し；
Ｒａは、
ｉ）飽和若しくは不飽和の、分枝状若しくは枝状に分かれていないＣ１〜８アルキレン鎖を表し、少なくとも１つの炭素（例えば、１、２、若しくは３つの炭素）は、Ｏ、Ｎ、Ｓ（Ｏ）０〜３から選択されるヘテロ原子によって置換されており、前記鎖は、場合によっては、オキソ、ハロゲン、アミノから独立して選択される１つ以上の基によって置換されており；又は
ｉｉ）５員環由来の炭素と一緒に、飽和若しくは不飽和の、分枝状若しくは枝状に分かれていないＣ１〜６アルキレン鎖に連結されたシクロプロパン環を表し、少なくとも１つの炭素（例えば、１、２、若しくは３つの炭素）は、Ｏ、Ｎ、Ｓ（Ｏ）ｐから選択されるヘテロ原子によって置換されており、前記鎖は、場合によっては、オキソ、ハロゲン、スルホ、スルフヒドリル、アミノから独立して選択される１つ以上の基によって置換されており；
Ｒｂは、Ｈ、−ＯＣ１〜３アルキル、場合によってはヒドロキシル置換基を有するＣ１〜６アルキル、−Ｃ１〜３アルキレンＮ３、又は−Ｃ２〜５アルキニルを表し；
Ｒｃは、Ｈ、−ＯＣ１〜３アルキル、場合によってはヒドロキシル置換基を有するＣ１〜６アルキル、−Ｃ１〜３アルキレンＮ３、又は−Ｃ２〜５アルキニルを表し；
Ｒｄは、Ｈ、−ＯＣ１〜３アルキル、場合によってはヒドロキシル置換基を有するＣ１〜６アルキル、−Ｃ１〜３アルキレンＮ３、又は−Ｃ２〜５アルキニルを表し；
Ｒｅは、Ｈ、飽和又は不飽和の、分枝状又は枝状に分かれていないＣ１〜８アルキレン鎖を表し、１つ以上の炭素は、場合によっては、−Ｏ−によって置換されており、前記鎖は、場合によっては、１つ以上のハロゲン原子（例えばヨード）、Ｎ３、又は−Ｃ２〜５アルキニルによって置換されている、
態様５１に記載の非天然のアミノ酸。
［態様５３］
Ｒａは、−（ＣＨ２）ｍＣ（Ｏ）−、−ＣＨ２（ＣＨ３）Ｃ（Ｏ）−、−（ＣＨ２）ｍＣＨ２ＯＣ（Ｏ）−、−ＣＨＣＨＣＨ２ＯＣ（Ｏ）−、−ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＯＣ（Ｏ）−であり、ｍは、０又は１を表す、態様５２に記載の非天然のアミノ酸。
［態様５４］
Ｒｂは、Ｈ、−ＯＣ１〜３アルキル、−ＣＨ３、−ＣＨ（ＣＨ３）２、ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ２Ｎ３、又は−ＣＣＨである、態様５２又は５３に記載の非天然のアミノ酸。
［態様５５］
Ｒｃは、Ｈ、−ＯＣ１〜３アルキル、−ＣＨ３、−ＣＨ（ＣＨ３）２、ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ２Ｎ３、又は−ＣＣＨである、態様５２又は５３に記載の非天然のアミノ酸。
［態様５６］
Ｒｄは、Ｈ、−ＯＣ１〜３アルキル、−ＣＨ３、−ＣＨ（ＣＨ３）２、ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ２Ｎ３、又は−ＣＣＨである、態様５２〜５５のいずれか一つに記載の非天然のアミノ酸。
［態様５７］
Ｒｅは、Ｈ又は−ＣＨ２ＯＣＨ２ＣＨ２Ｎ３を表す、態様５２〜５６のいずれか一つに記載の非天然のアミノ酸。
［態様５８］
前記非天然のアミノ酸は、式（ＩＩａ）：
【化６３】
2020521735.tif 000016
又はその塩の構造の残基であり、式中、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｒｅ、及びＸ２は、上の式（ＩＩ）の化合物で定義されている、態様５２〜５７のいずれか一つに記載の非天然のアミノ酸。
［態様５９］
前記非天然のアミノ酸は、式（ＩＩｂ）：
【化６４】
2020521735.tif 000017
又はその塩の構造を有し、式中、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｒｅ、及びＸ２は、上の式（ＩＩ）の化合物で定義されている、態様５２〜５８のいずれか一つに記載の非天然のアミノ酸。
［態様６０］
前記非天然のアミノ酸は、式（ＩＩｃ）：
【化６５】
2020521735.tif 000018
又はその塩の構造を有し、式中、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｒｅは、上に定義されており、Ｘ２’は、−Ｃ−、又は上に定義される−ＣＲ’である、態様５２〜５８のいずれか一つに記載の非天然のアミノ酸。
［態様６１］
前記非天然のアミノ酸は：
【化６６】
2020521735.tif 000019
又はそれらの任意の１つの塩を含む群から選択される、態様６０に記載の非天然のアミノ酸。
［態様６２］
態様５１〜６１のいずれか一つに記載の非天然のアミノ酸を含むポリペプチド。