【手続補正書】
【提出日】令和3年7月8日(2021.7.8)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
インサートであって、
（ｉ）上面及び底面を備える、透過性固体支持体であって、前記上面が、前記インサートの前記底面が置かれる表面に対して水平または実質的に水平であり、前記上面が、前記上面から垂直に延在する１つ以上の突起によって内側部と外側部に分けられ、前記上面の前記内側部の少なくとも１つの領域が、容器の底面を画定し、前記１つ以上の突起が、前記容器の１つ以上の連続する側壁を画定する、前記透過性固体支持体と、
（ｉｉ）前記透過性固体支持体の前記上面に物理的に取り付けられて、前記容器内に配置される、１つ以上の電極と、
（ｉｉｉ）前記上面の前記外側部の少なくとも１つの領域上に配置される、１つ以上の接触パッドと、
を含む、インサート。
【請求項２】
前記１つ以上の電極が、
（ｉ）上面及び底面を有する形状の平面であり、前記１つ以上の電極の前記底面が、前記容器の前記底面と隣接してまたは実質的に隣接して配置される、かつ／または
（ｉｉ）前記透過性固体支持体の上面の実質的に水平方向にある、
請求項１に記載のインサート。
【請求項３】
前記１つ以上の電極が、少なくとも１つの刺激電極、少なくとも１つの記録電極、及び少なくとも１つの接地電極を含む、請求項１または２に記載のインサート。
【請求項４】
（ｉ）前記少なくとも１つの刺激電極及び前記少なくとも１つの記録電極が、約１μｍ〜約１ｃｍ間隔で離れている、
（ｉｉ）前記少なくとも１つの刺激電極及び前記少なくとも１つの記録電極が、互いに対して実質的に平行に配向されて、互いから離間配置される、かつ／または
（ｉｉｉ）前記少なくとも１つの接地電極が、前記刺激電極に実質的に平行に配向されて、それから離間配置される第１部分を含み、前記接地電極が、前記刺激電極に対して実質的に垂直に配向される第２部分を含む、
請求項３に記載のインサート。
【請求項５】
前記１つ以上の電極が、
（ｉ）互いに実質的に平行に配向されて前記透過性固体支持体の一方の面に配置される第１刺激電極及び第１記録電極、第２刺激電極と、
（ｉｉ）互いに実質的に平行に配向されて前記透過性固体支持体の反対面に配置される第２刺激電極と、前記第１刺激電極と前記第２刺激電極との間に配置された接地電極と、
を含む、請求項１〜４のいずれかに記載のインサート。
【請求項６】
（ｉ）前記第１刺激及び記録電極の接触パッドが、前記第２刺激及び記録電極の接触パッドから離れて配向される、
（ｉｉ）前記第１刺激及び記録電極の接触パッドが、前記第２刺激及び記録電極の接触パッドから約１８０度離れて配向される、かつ／または
（ｉｉｉ）前記接地電極の接触パッドが、前記第１及び第２刺激及び記録電極の前記接触パッドから９０度離れて配向される、
請求項５に記載のインサート。
【請求項７】
前記透過性固体支持体が、
（ｉ）約０．２〜約２０ギガパスカル（ＧＰ）の曲げ弾性率を含む、
（ｉｉ）平坦また実質的に平坦である１つ以上の電極を含み、前記固体支持体の前記上面に隣接して配置され、長手方向軸が前記透過性固体支持体の前記上面と平行であり、前記インサートが、前記透過性固体支持体の前記外側部周辺に配置される、少なくとも２、３または４つの接触パッドを含む、かつ／または
（ｉｉｉ）直径約０．１μｍ〜約３μｍの複数の孔を含む、
請求項１〜６のいずれかに記載のインサート。
【請求項８】
前記固体支持体が、円形または半円形であり、前記インサートが、
（ｉ）前記透過性固体支持体に固着した円形または半円形の環であって、前記透過性固体支持体及び前記環が、約０．５〜約１５ミリメートルの高さを有する、円筒状または実質的に円筒状の容器を画定する、円形または半円形の環、及び／または
（ｉｉ）前記容器の前記底面全体に配置されるヒドロゲルマトリックス層であって、前記電極の少なくとも一部が、前記ヒドロゲルマトリックス層の上面下に配置される、または前記ヒドロゲルマトリックス層の表層の真上に突出している、ヒドロゲルマトリックス層
を更に含む、請求項１〜７のいずれかに記載のインサート。
【請求項９】
前記ヒドロゲルマトリックスが、
（ｉ）高さ約５〜約５００マイクロメートルの高さの層を形成し、前記ヒドロゲルマトリックスが、深さ約５〜約５００マイクロメートルの空隙を含み、前記空隙の底領域が、約５００〜約５０００平方マイクロメートルの表面積を有する、かつ／または
（ｉｉ）成長及び／または細胞遊走を防ぐのに十分な堅さを備える第１ポリマーのヒドロゲルと、軸索成長及び／または細胞遊走を可能にするのに十分な堅さを備える第２ポリマーのヒドロゲルと、を含む、
請求項８に記載のインサート。
【請求項１０】
前記第１ポリマーが、約１５％以下のＰＥＧ及び約０．０５％〜約５．０％のＲＡＤ１６−Ｉ、ＲＡＤ１６−ＩＩ、ＥＡＫ１６−Ｉ、ＥＡＫ１６−ＩＩ及びｄＥＡＫ１６から選択される自己組織化ペプチドのうちの１つまたはその組み合わせ、並びにメタクリル酸ゼラチンを含む、請求項９に記載のインサート。
【請求項１１】
（ｉ）１つ以上の単離されたシュワン細胞と、
（ｉｉ）１つ以上の後根神経節（ＤＲＧ）またはＤＲＧ片と、
を更に含む、請求項１〜１０のいずれかに記載のインサートであって、
前記インサートは、必要に応じて、前記上面全体で層状になり、少なくとも第１の空隙を含む第１ヒドロゲルマトリックスを含み、前記空隙が隣接する横領域及び底領域を含み、
前記電極のうちの少なくとも一部が、前記底領域下に配置される、または前記底領域上方に最小限に突出しており、前記１つ以上の単離されたシュワン細胞及び／または前記１つ以上のＤＲＧもしくはＤＲＧ片が、前記空隙の前記底領域上に配置され、前記シュワン細胞、ＤＲＧまたはＤＲＧ片が、前記１つ以上の電極上に配置される、またはそれと接触している、
インサート。
【請求項１２】
１つ以上の細胞および培養培地を更に含む、請求項１〜１１のいずれかに記載のインサートであって、前記１つ以上の細胞が、膠細胞、胚細胞、間葉系幹細胞、人工多能性幹細胞に由来する細胞、交感神経細胞、副交感神経細胞、脊髄運動神経細胞、中枢神経系神経細胞、末梢神経系神経細胞、腸神経系神経細胞、運動神経細胞、感覚神経細胞、コリン作動性神経細胞、ＧＡＢＡ作動性神経細胞、グルタミン酸作動性神経細胞、ドーパミン作動性神経細胞、セロトニン性神経細胞、介在神経細胞、アドレナリン作動性神経細胞、三叉神経節、星状膠細胞、乏突起膠細胞、シュワン細胞、小膠細胞、上衣細胞、放射状膠細胞、衛星細胞、消化器官膠細胞、下垂体細胞、免疫細胞、後根神経節、及びこれらの組み合わせから選択される、細胞及び／または組織のうちの１つまたはその組み合わせを含む、インサート。
【請求項１３】
システムであって、
（ｉ）請求項１〜１２のいずれかに記載の前記インサートと、
（ｉｉ）アダプタであって、
（ａ）上面及び底面を有する、実質的に平坦かつ平面構造を画定する本体と、
（ｂ）前記本体の前記上面の１つ以上の平坦電極と、
（ｃ）絶縁体層と、
（ｄ）前記本体を通って形成される中央開口部周囲のその縁に配置されて、前記本体を通って延在する円形または実質的に円筒状のカラーと、を含む、アダプタと
を含み、
前記アダプタは、前記中央開口部周囲に放射状に配置されて、前記本体を通って延在する、接続ピンパターンを含み、前記接続ピンのそれぞれが、前記平坦電極のうちの少なくとも１つに電気的に接続している、システム。
【請求項１４】
（ｉ）前記アダプタの前記本体が、ポリマー樹脂、第１側縁及び第２側縁、それぞれが約４９ｍｍの大きさに設定され、及び約１ｍｍの寸法の高さから選択される１つ以上を含み、
（ｉｉ）前記１つ以上の平坦電極が、
（ａ）前記本体の周辺部から離間配置される、実質的に正方形パターンで前記本体の前記上面に配置される、
（ｂ）前記中央開口部を囲む、
（ｃ）プランジャプレートの接点に取り付けられるように構成されており、前記１つ以上の平坦電極が、前記プランジャプレートの前記接点を介して増幅器及び電流供給源に操作可能かつ電気的に接続される、かつ／または
（ｄ）前記本体の前記上面に沿って連続する電気接続周辺部を形成する、
請求項１３に記載のシステム。
【請求項１５】
（ｉ）電流ジェネレータを含む増幅器と、
（ｉｉ）電圧計及び／または電流計と、
（ｉｉｉ）コントローラ、記録装置、コンピュータ記録装置及びスクリーンのうちの１つまたはその組み合わせと、
をさらに含む、請求項１３または１４に記載のシステムであって、
前記スクリーンが前記電圧計及び／または電流計に接続されると、前記１つ以上の電極からの記録測定値を示すことができ、
前記増幅器、電圧計及び／または電流計が、回路を介して互いに電気的に接続された電極を含み、請求項１〜１２のいずれかに記載の前記インサートは前記アダプタの前記中央開口部内に配置されている、
システム。
【請求項１６】
請求項１３〜１５のいずれかに記載のシステムであって、
（ｉ）請求項１〜１２のいずれかに記載の前記インサートと、
（ｉｉ）前記インサートを受容するように構成され、必要な大きさに設定される組織培養支持体と、
を含み、
必要に応じて、前記組織培養支持体が、１、６、１２、２４または４８つのウェルを含み、前記インサートが、１つのウェル内に少なくとも部分的に導入されるように構成され、必要な大きさに設定される、
システム。
【請求項１７】
電流ジェネレータを含む増幅器、電圧計または電流計のうちの少なくとも１つをさらに含む、請求項１３〜１６のいずれかに記載のシステムであって、
前記インサートの前記電極が前記アダプタの前記電極に電気的に接続されており、
前記アダプタの前記電極が、回路、及び前記増幅器、前記電圧計または前記電流計の少なくとも１つに操作可能に連結されている、
システム。
【請求項１８】
１つ以上の細胞からの反応を評価する方法であって、
（ａ）１つ以上の細胞を請求項１３〜１７のいずれかに記載の前記システムの前記インサートの前記透過性固体支持体で成長させることと、
（ｂ）前記アダプタ内に前記インサートを配置することと、
（ｃ）ステップ（ａ）及び／または（ｂ）の後に前記１つ以上の細胞へ１つ以上の刺激を加えることと、
（ｄ）前記１つ以上の細胞からの前記１つ以上の刺激への１つ以上の反応を測定することと、
を含む、方法。
【請求項１９】
（ｉ）前記１つ以上の細胞を成長させる前記ステップが、少なくとも１つの軸索を成長させるのに十分な時間及び条件下で、請求項１〜１２のいずれかに記載の前記インサートの前記透過性固体支持体上の１つ以上の神経細胞及び／または１つ以上の組織外植片を培養することを含み、
（ｉｉ）１つ以上の反応を測定する前記ステップが、前記１つ以上の神経細胞及び／または１つ以上の組織外植片の１つ以上の軸索の髄鞘形成の量を検出することを含む、
請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
薬剤の毒性を評価する方法であって、
（ａ）請求項１〜１２のいずれかに記載の前記インサートの前記透過性固体支持体上の１つ以上の細胞及び／または１つ以上の組織外植片を培養することと、
（ｂ）少なくとも１つの薬剤を、前記１つ以上の細胞及び／または１つ以上の組織外植片に曝露することと、
（ｃ）前記１つ以上の細胞及び／または１つ以上の組織外植片の１つ以上の形態的変化を測定及び／または観察することと、
（ｄ）前記形態的変化が減少した細胞の生存可能性を示す場合、前記薬剤が有毒として特徴付けられ、前記形態的変化が無変化のまたは増加した細胞の生存可能性を示す場合、前記薬剤は無毒として特徴付けられるように、前記１つ以上の細胞及び／または１つ以上の組織外植片の１つ以上の形態的変化を、前記薬剤の前記毒性に相関させることと、
を含む、方法。