【手続補正書】
【提出日】令和3年3月22日(2021.3.22)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
細胞集団を凍結保存する方法であって、 
（a）細胞集団を、1つまたは複数の極性ペプトイドモノマーを含むペプトイドポリマーまたはその塩と接触させる段階；および
（b）凍結保存された細胞集団を生成するために、該細胞集団を少なくとも約3時間の期間0℃〜約-20℃の温度に冷却する段階
を含み、
ここで、0℃超に加温した後に凍結保存された細胞集団の少なくとも約50％が生存する、方法。
【請求項２】
(i) 温度が約-5℃〜約-20℃、約-10℃〜約-20℃、または約-20℃である；
(ii) 凍結保存された細胞集団をその温度で解凍し、任意で、凍結保存された細胞集団は、その温度で、液体の、氷のない懸濁液中にある；
(iii) 期間が、少なくとも約8または16時間であるか、約2〜約5日間であるか、約1、2、3、4、または5日間であるか、または少なくとも約72時間である；
(iv) 37℃に加温した後に凍結保存された細胞集団の少なくとも約50％が生存する；および/または
(v) 加温した後に凍結保存された細胞集団の少なくとも約60％、少なくとも約70％、少なくとも約80％、少なくとも約90％が生存する、
請求項1記載の方法。
【請求項３】
(i) ペプトイドポリマーが、その温度で氷晶形成を低減または阻害するのに十分な量で存在し、任意で、ペプトイドポリマーが、約100nM〜約1000mMの量で存在する；
(ii) 細胞集団が組織、生物工学によって作製された組織、または臓器を構成する；
(iii) 細胞集団が、初代細胞、心臓細胞、肝細胞、肺細胞、腎細胞、膵細胞、胃細胞、腸細胞、筋細胞、皮膚細胞、神経細胞、血液細胞、免疫細胞、線維芽細胞、泌尿生殖器細胞、骨細胞、幹細胞、精細胞、卵母細胞、胚細胞、上皮細胞、内皮細胞、およびその組み合わせからなる群より選択される；
(iv) 前記方法が、凍結保存された細胞集団を0℃超に加温する段階（c）をさらに含む；
(v) ペプトイドポリマーが、少なくとも2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、またはそれ以上の極性ペプトイドモノマーを含む；
(vi) 少なくとも2つの極性ペプトイドモノマーが、独立に選択された置換されていてもよいC1-18ヒドロキシアルキル基を含む側鎖を有し、任意で、C1-18ヒドロキシアルキル基が、独立に選択された置換されていてもよいC1-6ヒドロキシアルキル基である；および/または
(vii) ペプトイドポリマーが、ペプトイドポリマーおよび1つまたは複数のアミノ酸を含むペプトイド-ペプチドハイブリッドまたはその塩であり、ここで、該1つまたは複数のアミノ酸が、ペプトイドポリマーの一端もしくは両端、および/または1つもしくは複数のペプトイドモノマーの間に位置する、
請求項1または2記載の方法。
【請求項４】
ペプトイドポリマーが式（I）の構造を有するか、その互変異性体またはその立体異性体である、請求項1〜3のいずれか一項記載の方法：
2020516652.tif 000001
式中：
各R1はH、置換されていてもよいC1-18アルキル、置換されていてもよいC2-18アルケニル、置換されていてもよいC2-18アルキニル、置換されていてもよいC1-18ヒドロキシアルキル、置換されていてもよいアルコキシ、置換されていてもよいC1-18アルキルアミノ、置換されていてもよいC1-18アルキルチオ、置換されていてもよいカルボキシアルキル、C3-10シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、(C3-10シクロアルキル)アルキル、(ヘテロシクロアルキル)アルキル、アリールアルキル、およびヘテロアリールアルキルからなる群より独立に選択され；
ここで、少なくとも1つの場合のR1は、置換されていてもよいC1-18ヒドロキシアルキルであり、かつ
ここで、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、およびヘテロアリール基のいずれかは1つまたは複数のR3基で独立に置換されていてもよく；
各R2はH、置換されていてもよいC1-18アルキル、置換されていてもよいC2-18アルケニル、置換されていてもよいC2-18アルキニル、置換されていてもよいC1-18ヒドロキシアルキル、置換されていてもよいC1-18アルキルアミノ、置換されていてもよいC1-18アルキルチオ、および置換されていてもよいカルボキシアルキルからなる群より独立に選択され；
各R3はハロゲン、オキソ、チオキソ、-OH、-SH、アミノ、C1-8アルキル、C1-8ヒドロキシアルキル、C1-8アルキルアミノ、およびC1-8アルキルチオからなる群より独立に選択され；
XおよびYは、H、置換されていてもよいC1-8アルキル、置換されていてもよいC1-8アシル、置換されていてもよいC1-8アルキルアミノ、-OH、-SH、-NH2、アセチル、カルボキシ、置換されていてもよいC1-8ヒドロキシアルキル、置換されていてもよいC1-8アルキルアミノ、置換されていてもよいC2-8アルキルチオ、置換されていてもよいC1-8カルボキシアルキル、およびハロゲンからなる群より独立に選択されるか、または
代わりにXおよびYは一緒になって共有結合を形成し；かつ
ポリマー中のモノマーの数を表す下付き文字nは、2〜50である。
【請求項５】
(i) 少なくとも2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、またはそれ以上の場合のR1が、独立に選択された置換されていてもよいC1-18ヒドロキシアルキル基であり、任意で、C1-18ヒドロキシアルキル基が、独立に選択された置換されていてもよいC1-6ヒドロキシアルキル基である；
(ii) 各R1が
2020516652.tif 000002
からなる群より独立に選択され、
式中：
mは1〜8であり；かつ
R3はH、C1-8アルキル、ハロゲン、ヒドロキシル、チオール、ニトロ、アミン、オキソ、およびチオキソからなる群より選択される；
(iii) 1つまたは複数のR1がR1b：
2020516652.tif 000003
の構造を有する；または
(iv) 各R1が
2020516652.tif 000004
からなる群より独立に選択される、
請求項4記載の方法。
【請求項６】
(i) 各場合のR2がHである；
(ii) nが6〜25、6〜20、または10〜25である；および/または
(iii) XがH、C1-8アルキル、およびC1-8アシルからなる群より選択され；かつYが-OHおよびアミノからなる群より選択される、
請求項4または5記載の方法。
【請求項７】
ペプトイドポリマーが、ペプトイドポリマーが配列[HaPb]nまたは[PbHa]nを有するように配置された1つまたは複数の第1の疎水性ペプトイドモノマーHと1つまたは複数の第1の極性ペプトイドモノマーPとを含むサブユニットを含み、ここで、
サブユニット内の連続した第1の疎水性ペプトイドモノマーの数を表す下付き文字aは、1〜10、任意で、1〜5であり；
サブユニット内の連続した第1の極性ペプトイドモノマーの数を表す下付き文字bは、1〜10、任意で、1〜5であり；かつ
ペプトイドポリマー内のサブユニットの数を表す下付き文字nは、2〜50、任意で、2〜10であり、
任意で、aは1〜3であり、かつbは1〜3である、
請求項1〜3のいずれか一項記載の方法。
【請求項８】
ペプトイドポリマーが配列X-[HaPb]n-YまたはX-[PbHa]n-Yを有するような置換基XおよびYをさらに含み、ここで、
XおよびYは、H、置換されていてもよいC1-8アルキル、置換されていてもよいC1-8アシル、置換されていてもよいC1-8アルキルアミノ、-OH、-SH、-NH2、カルボキシ、置換されていてもよいC1-8ヒドロキシアルキル、置換されていてもよいC1-8アルキルアミノ、置換されていてもよいC2-8アルキルチオ、置換されていてもよいC1-8カルボキシアルキル、およびハロゲンからなる群より独立に選択されるか、または
代わりにXおよびYは一緒になって共有結合を形成する、
請求項7記載の方法。
【請求項９】
サブユニットが、ペプトイドポリマーが配列[HaPbHcPd]nまたは[PbHaPdHc]nを有するような第2の疎水性ペプトイドモノマーおよび/または第2の極性ペプトイドモノマーをさらに含み、ここで、
サブユニット内の連続した第2の疎水性ペプトイドモノマーの数を表す下付き文字cは、0〜10、任意で、0〜5であり；
サブユニット内の連続した第2の極性ペプトイドモノマーの数を表す下付き文字dは、0〜10、任意で、0〜5であり；かつ
cおよびdの両方が0であることはなく、
任意で、配列X-[HaPbHcPd]n-YまたはX-[PbHaPdHc]n-Yを有するような置換基XおよびYをさらに含み、ここで、
XおよびYは、H、置換されていてもよいC1-8アルキル、置換されていてもよいC1-8アシル、置換されていてもよいC1-8アルキルアミノ、-OH、-SH、-NH2、カルボキシ、置換されていてもよいC1-8ヒドロキシアルキル、置換されていてもよいC1-8アルキルアミノ、置換されていてもよいC2-8アルキルチオ、置換されていてもよいC1-8カルボキシアルキル、およびハロゲンからなる群より独立に選択されるか、または
代わりにXおよびYは一緒になって共有結合を形成する、
請求項7記載の方法。
【請求項１０】
1つもしくは複数の疎水性ペプトイドモノマーおよび/または1つもしくは複数の極性ペプトイドモノマーを含む配列Zをさらに含み、ここで、Zは、第1のサブユニットの前、最後のサブユニットの後、および/または1つもしくは複数のサブユニットの間に位置する、請求項7〜9のいずれか一項記載の方法。
【請求項１１】
ペプトイドポリマーが、ペプトイドポリマーが配列[H2P2]nH2または[P2H2]nH2を有するように配置された
（a）2つの第1の疎水性ペプトイドモノマーHと2つの第1の極性ペプトイドモノマーPとを含むサブユニット、および
（b）ペプトイドポリマーのC末端に位置する2つの第2の疎水性ペプトイドモノマー
を含み、
ここで、ペプトイドポリマー内のサブユニットの数を表す下付き文字nは、1〜50または1〜10であり、
任意で、ペプトイドポリマーが、ペプトイドポリマーが配列X-[H2P2]nH2-YまたはX-[P2H2]nH2-Yを有するような置換基XおよびYをさらに含み、ここで、
XおよびYは、H、置換されていてもよいC1-8アルキル、置換されていてもよいC1-8アシル、置換されていてもよいC1-8アルキルアミノ、-OH、-SH、-NH2、カルボキシ、置換されていてもよいC1-8ヒドロキシアルキル、置換されていてもよいC1-8アルキルアミノ、置換されていてもよいC2-8アルキルチオ、置換されていてもよいC1-8カルボキシアルキル、およびハロゲンからなる群より独立に選択されるか、または
代わりにXおよびYは一緒になって共有結合を形成する、
請求項1〜3のいずれか一項記載の方法。
【請求項１２】
第1および/または第2の疎水性ペプトイドモノマーが下記からなる群より独立に選択される、請求項7〜11のいずれか一項記載の方法：
2020516652.tif 000005
式中、下付き文字mは反復単位の数であって、1〜10である。
【請求項１３】
(i) ペプトイドポリマーが、ヒドロキシル基を含む側鎖を有する極性ペプトイドモノマーを含む；
(ii) 第1および/または第2の極性ペプトイドモノマーが
2020516652.tif 000006
2020516652.tif 000007
からなる群より独立に選択され、式中、下付き文字mは反復単位の数であって、1〜10である；または
(iii) 第1および/または第2の極性ペプトイドモノマーがそれぞれ、(C1-6アルコキシ)(C1-6アルキレン)、オリゴ(エチレングリコール)、(4〜10員ヘテロシクロアルキル)(C1-6アルキレン)、および(5〜10員ヘテロアリール)(C1-6アルキレン)からなる群より独立に選択される側鎖を含む、
請求項7〜12のいずれか一項記載の方法。
【請求項１４】
(i) (4〜10員ヘテロシクロアルキル)(C1-6アルキレン)が4〜6員複素環を含み、ここで、少なくとも1つの構成員は、OおよびNからなる群より選択され、
任意で、(4〜10員ヘテロシクロアルキル)(C1-6アルキレン)がテトラヒドロフラニルまたはオキソピロリジニル部分を含み、
任意で、ペプトイドポリマーが
2020516652.tif 000008
を含み、
任意で、極性ペプトイドモノマーがすべて
2020516652.tif 000009
である；
(ii) (5〜10員ヘテロアリール)(C1-6アルキレン)が5〜6員芳香環を含み、ここで、少なくとも1つの環構成員は、OおよびNからなる群より選択され、
任意で、5〜10員ヘテロアリール)(C1-6アルキレン)がフラニル部分を含み、
任意で、ペプトイドポリマーが
2020516652.tif 000010
を含む；
(iii) 側鎖がメトキシエチル基を含み、任意で、ペプトイドポリマーが
2020516652.tif 000011
を含む；または
(iv) 側鎖が、2-(2-(2-メトキシエトキシ)エトキシ)エチル部分などのオリゴ(エチレングリコール)部分を含み、任意で、ペプトイドポリマーが
2020516652.tif 000012
を含む、請求項13記載の方法。
【請求項１５】
ペプトイドモノマーの約10、20、30、40、50、60、70、80、または90％が疎水性である、請求項7〜14のいずれか一項記載の方法。
【請求項１６】
(i) ペプトイドポリマー塩が塩酸塩、酢酸塩、硫酸塩、リン酸塩、マレイン酸塩、クエン酸塩、メシレート塩、硝酸塩、酒石酸塩、グルコン酸塩、およびその組み合わせからなる群より選択される；および/または
(ii) ペプトイドポリマーを凍結保存溶液に製剤化し、
任意で、凍結保存溶液が、イオン種、浸透性凍結保護剤、非浸透性凍結保護剤、抗酸化剤、細胞膜安定化化合物、アクアポリンまたは他のチャネル形成化合物、アルコール、糖、糖誘導体、非イオン性界面活性剤、タンパク質、ジメチルスルホキシド（DMSO）、ポリエチレングリコール（PEG）、ポリプロピレングリコール（PPG）、フィコール(登録商標)、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、ヒアルロナン、ホルムアミド、天然または合成ヒドロゲル、およびその組み合わせからなる群より選択される化合物をさらに含む、
請求項1〜15のいずれか一項記載の方法。
【請求項１７】
請求項1〜16のいずれか一項記載の方法によって生成した、凍結保存された細胞集団。