【手続補正書】
【提出日】令和3年10月22日(2021.10.22)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
アルボウイルス調製物の不活化の完全性を決定する方法であって、以下のステップ：
（ｉ）培養昆虫細胞に不活化ステップを施したアルボウイルス調製物を接種し、前記昆虫細胞を第１の期間インキュベートして、それによって昆虫細胞上清を生成すること；
（ｉｉ）（ｉ）で生産された前記昆虫細胞上清を培養哺乳動物細胞に接種し、前記哺乳動物細胞を第２の期間インキュベートすること；
（ｉｉｉ）前記アルボウイルス調製物が前記哺乳動物細胞に細胞変性効果をもたらす残留複製ウイルスを含むか否かを決定すること、を含む、前記方法。
【請求項２】
前記昆虫細胞が、ＣＣＬ−１２５細胞、Ａａｇ−２細胞、ＲＭＬ−１２細胞、Ｃ６／３６細胞、Ｃ７−１０細胞、ＡＰ−６１細胞、Ａ．ｔ．ＧＲＩＰ−１細胞、Ａ．ｔ．ＧＲＩＰ−２細胞、Ａ．ｔ．ＧＲＩＰ−３細胞、ＵＭ−ＡＶＥ１細胞、Ｍｏｓ．５５細胞、Ｓｕａ１Ｂ細胞、４ａ−３Ｂ細胞、Ｍｏｓ．４２細胞、ＭＳＱ４３細胞、ＬＳＢ−ＡＡ６９５ＢＢ細胞、ＮＩＩＤ−ＣＴＲ細胞、及びＴＲＡ−１７１細胞、例えば、Ｃ６／３６細胞から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記第１の期間が３から７日である、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記哺乳動物細胞が、ＶＥＲＯ細胞、ＬＬＣ−ＭＫ２細胞、ＭＤＢＫ細胞、ＭＤＣＫ細胞、ＡＴＣＣ  ＣＣＬ３４  ＭＤＣＫ（ＮＢＬ２）細胞、ＭＤＣＫ３３０１６（ＷＯ９７／３７００１に記載されている寄託番号ＤＳＭ  ＡＣＣ  ２２１９）細胞、ＢＨＫ２１−Ｆ細胞、ＨＫＣＣ細胞、及びチャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ細胞）、例えば、ＶＥＲＯ細胞から選択される、請求項１から３までのいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
前記第２の期間が３〜１４日である、請求項１から４までのいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
前記アルボウイルス調製物が、界面活性剤、ホルムアルデヒド、過酸化水素、ベータプロピオラクトン（ＢＰＬ）、バイナリーエチルアミン（ＢＥＩ）、アセチルエチレンイミン、メチレンブルー、またはソラレンでの処理を受けたものである、請求項１から５までのいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
前記アルボウイルスがフラビウイルスまたはアルファウイルスであり、好ましくは、前記アルボウイルスがジカウイルス、西ナイルウイルス、黄熱病ウイルス、日本脳炎ウイルス、ダニ媒介脳炎ウイルス、デング熱ウイルス、セントルイス脳炎ウイルス、チクングニアウイルス、オニョンニョンウイルスまたはマヤロウイルスである、請求項１から６までのいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
ジカウイルス調製物の不活化の完全性を決定するための、請求項１から７までのいずれか１項に記載の方法であって、以下のステップ：
（ｉ）Ｃ６／３６細胞に、不活性化ステップを施したジカウイルス調製物を接種し、前記Ｃ６／３６細胞を第１の期間、好ましくは３〜７日間インキュベートして、それによってＣ６／３６細胞上清を生成すること；
（ｉｉ）（ｉ）で生産された前記Ｃ６／３６細胞上清をＶｅｒｏ細胞に接種し、前記Ｖｅｒｏ細胞を第２の期間、好ましくは３〜１４日間インキュベートすること；
（ｉｉｉ）前記ジカウイルス調製物が前記Ｖｅｒｏ細胞に細胞変性効果をもたらす残留複製ウイルスを含むか否かを決定すること、を含む、前記方法。
【請求項９】
前記方法が、１．０ＴＣＩＤ５０未満の前記アルボウイルスを検出し得る、請求項１から８までのいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
ジカウイルス調製物を不活化する方法であって：
（ａ）インビトロで培養された１つ以上の細胞、好ましくは非ヒト細胞から前記ジカウイルス調製物を単離することであって、前記細胞が前記ジカウイルス調製物を産生するために使用される、前記単離をすること； 
（ｂ）前記ジカウイルス調製物を０．００５％〜０．０２％ｗ／ｖのホルムアルデヒド、好ましくは０．０１％ｗ／ｖのホルムアルデヒドで処理すること；及び
残留する未反応ホルムアルデヒドを除去し、かつ、請求項１から９までのいずれか１項に記載の方法による不活性化の完全性を決定すること；をさらに含み、その際、アルボウイルス調製物は、工程（ｂ）で処理されたジカウイルス調製物である、前記方法。
【請求項１１】
前記ジカウイルス調製物が８〜１２日間処理され、好ましくは前記ジカウイルス調製物が１０日間処理される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記ジカウイルス調製物が１５℃〜３０℃の温度で、好ましくは２２℃の温度で処理される、請求項１０または１１に記載の方法。
【請求項１３】
ホルムアルデヒドで処理されたジカウイルス調製物を、メタ重亜硫酸ナトリウムで中和することによって、透析によって、バッファー交換によって、あるいはクロスフロー濾過（ＴＦＦ）によって、残存する未反応ホルムアルデヒドを除去する、請求項１０から１２までのいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４】
前記不活化ジカウイルス調製物を含む薬学的組成物を調製するステップ（ｃ）をさらに含む、請求項１０から１３までのいずれか１項に記載の方法。
【請求項１５】
前記ジカウイルス調製物がアジュバントと混合させ、好ましくは、前記アジュバントが、アルミニウム塩、トール様受容体（ＴＬＲ）アゴニスト、モノホスホリルリピドＡ（ＭＬＡ）、合成リピドＡ、リピドＡ模倣物または類似体、ＭＬＡ誘導体、サイトカイン、サポニン、ムラミルジペプチド（ＭＤＰ）誘導体、ＣｐＧオリゴ、グラム陰性菌のリポ多糖（ＬＰＳ）、ポリホスファゼン、エマルジョン、ヴィロソーム、渦巻状物、ポリ（ラクチド−コ−グリコリド）（ＰＬＧ）微粒子、ポロキサマー粒子、微粒子、リポソーム、フロイント完全アジュバント（ＣＦＡ）、及びフロイント不完全アジュバント（ＩＦＡ）からなる群より選択され、より好ましくは、前記アジュバントが、水酸化アルミニウム、リン酸アルミニウム、硫酸カリウムアルミニウム、及びＡｌｈｙｄｒｏｇｅｌ  ８５などのアルミニウム塩である、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記ジカウイルス調製物中の１つ以上の抗原の少なくとも７５％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％が前記アジュバントに吸着されている、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
請求項１０から１６までのいずれか１項に記載の方法により取得可能な不活化ジカウイルスを含む薬学的組成物。
【請求項１８】
０．５μｇ／ｍｌ未満の残留ホルマリン含量を有する、請求項１７に記載の薬学的組成物。
【請求項１９】
不活性化されたジカウイルス調製物を含む薬学的組成物であって、前記不活性化されたジカウイルス調製物が１．０ＴＣＩＤ５０未満の残留複製ウイルスを含む、薬学的組成物。
【請求項２０】
前記残留複製ウイルスが、請求項１から９までのいずれか１項に記載の方法を用いて検出される、請求項１９に記載の薬学的組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２３１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２３１】
２．４  ロバスト性
この方法のロバスト性を評価して、試料調製中の実験パラメータの変動が試料中のホルムアルデヒド濃度にどのように影響するかを決定した。誘導体化の有効性への影響を考慮して、ＤＮＰＨとリン酸の濃度を、この研究においてモニターされたパラメータとして選択した。ＤＮＰＨ及びリン酸の濃度をそれぞれ±０．１ｍｇ／ｍＬ及び±５％変化させることにより、効果を調べた。ホルムアルデヒドは、各条件下で２つの開発医薬品製品ロットで決定され、表１５に示す結果により、ＤＮＰＨ及びリン酸濃度の変動が、ホルムアルデヒドの決定に有意な影響を及ぼさないことが示唆されている。
【表１７】
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（＊）この方法の定義された条件
本発明において考えられる好適な態様を、さらに以下の項目１〜３６に示す。
（項目１）
ジカウイルス調製物を不活化する方法であって：
（ａ）インビトロで培養された１つ以上の細胞から前記ジカウイルス調製物を単離することであって、前記細胞が前記ジカウイルス調製物を産生するために使用される前記単離すること；及び
（ｂ）前記ジカウイルス調製物を０．００５％〜０．０２％ｗ／ｖのホルムアルデヒドで処理すること、を含む前記方法。
（項目２）
前記細胞が非ヒト細胞である、項目１に記載の方法。
（項目３）
前記ジカウイルス調製物が、０．０１％ホルムアルデヒドで処理される、項目１または２に記載の方法。
（項目４）
前記ジカウイルス調製物が８〜１２日間処理される、項目１〜３のいずれか１つに記載の方法。
（項目５）
前記ジカウイルス調製物が１０日間処理される、項目４に記載の方法。
（項目６）
前記ジカウイルス調製物が１５℃〜３０℃の温度で処理される、先行項目のいずれか１つに記載の方法。
（項目７）
前記ジカウイルス調製物が２２℃の温度で処理される、項目６に記載の方法。
（項目８）
不活化の完全性を判定するステップ（ｃ）をさらに含む、先行項目いずれか１つに記載の方法。
（項目９）
項目８に記載の方法であって、ステップ（ｃ）が以下：
（ｉ）培養昆虫細胞にステップ（ｂ）に従って処理されたジカウイルス調製物を接種し、前記昆虫細胞を第１の期間インキュベートし、それによって昆虫細胞上清を生成すること；
（ｉｉ）培養哺乳動物細胞に、（ｉ）で生成された昆虫細胞上清を接種し、前記哺乳動物細胞を第２の期間インキュベートすること；及び
（ｉｉｉ）前記ジカウイルス調製物に、前記哺乳動物細胞に細胞変性効果をもたらす残留複製ウイルスが含まれているか否かを判断すること、を含む、前記方法。
（項目１０）
項目９に記載の方法であって、前記昆虫細胞が、ＣＣＬ−１２５細胞、Ａａｇ−２細胞、ＲＭＬ−１２細胞、Ｃ６／３６細胞、Ｃ７−１０細胞、ＡＰ−６１細胞、Ａ．ｔ．ＧＲＩＰ−１細胞、Ａ．ｔ．ＧＲＩＰ−２細胞、Ａ．ｔ．ＧＲＩＰ−３細胞、ＵＭ−ＡＶＥ１細胞、Ｍｏｓ．５５細胞、Ｓｕａ１Ｂ細胞、４ａ−３Ｂ細胞、Ｍｏｓ．４２細胞、ＭＳＱ４３細胞、ＬＳＢ−ＡＡ６９５ＢＢ細胞、ＮＩＩＤ−ＣＴＲ細胞、及びＴＲＡ−１７１細胞、例えば、Ｃ６／３６細胞から選択される、前記方法。
（項目１１）
前記第１の期間が３〜７日である、項目９または１０に記載の方法。
（項目１２）
前記哺乳動物細胞が、ＶＥＲＯ細胞、ＬＬＣ−ＭＫ２細胞、ＭＤＢＫ細胞、ＭＤＣＫ細胞、ＡＴＣＣ  ＣＣＬ３４  ＭＤＣＫ（ＮＢＬ２）細胞、ＭＤＣＫ３３０１６（ＷＯ９７／３７００１に記載されている寄託番号ＤＳＭ  ＡＣＣ  ２２１９）細胞、ＢＨＫ２１−Ｆ細胞、ＨＫＣＣ細胞、及びチャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ細胞）、例えば、ＶＥＲＯ細胞から選択される、項目９〜１１のいずれか１つに記載の方法。
（項目１３）
前記第２の期間が３〜１４日である、項目９〜１２のいずれか１つに記載の方法。
（項目１４）
ホルムアルデヒド処理ジカウイルス調製物をメタ重亜硫酸ナトリウムで中和するステップ（ｄ）をさらに含む、先行項目のいずれか１つに記載の方法。
（項目１５）
前記ホルムアルデヒド処理ジカウイルス調製物が、ホルムアルデヒド処理後少なくとも５日、少なくとも７日、少なくとも９日、少なくとも１１日、または少なくとも１４日で中和される、項目１４に記載の方法。
（項目１６）
前記不活化ジカウイルス調製物を含む薬学的組成物を調製するステップ（ｅ）をさらに含む、先行項目のいずれか１つに記載の方法。
（項目１７）
前記ジカウイルス調製物がアジュバントと混合される、項目１６に記載の方法。
（項目１８）
前記アジュバントが、アルミニウム塩、トール様受容体（ＴＬＲ）アゴニスト、モノホスホリルリピドＡ（ＭＬＡ）、合成リピドＡ、リピドＡ模倣物または類似体、ＭＬＡ誘導体、サイトカイン、サポニン、ムラミルジペプチド（ＭＤＰ）誘導体、ＣｐＧオリゴ、グラム陰性菌のリポ多糖（ＬＰＳ）、ポリホスファゼン、エマルジョン、ヴィロソーム、渦巻状物、ポリ（ラクチド−コ−グリコリド）（ＰＬＧ）微粒子、ポロキサマー粒子、微粒子、リポソーム、フロイント完全アジュバント（ＣＦＡ）、及びフロイント不完全アジュバント（ＩＦＡ）からなる群より選択される、項目１７に記載の方法。
（項目１９）
前記アジュバントが、リン酸アルミニウム、水酸化アルミニウム、硫酸カリウムアルミニウム、及びＡｌｈｙｄｒｏｇｅｌ  ８５などのアルミニウム塩である、項目１７に記載の方法。
（項目２０）
前記ジカウイルス調製物中の１つ以上の抗原の少なくとも７５％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％が前記アジュバントに吸着されている、項目１７〜１９のいずれか１つに記載の方法。
（項目２１）
前記ジカウイルスが、配列番号１の位置９８または配列番号１の位置９８に相当する位置に変異を含む、先行項目のいずれか１つに記載の方法。
（項目２２）
前記変異が配列番号１のＴｒｐ９８Ｇｌｙ変異である、項目２１に記載の方法。
（項目２３）
前記ジカウイルスがエンベロープタンパク質（Ｅ）に変異を含まない、項目２１または２２記載の方法。
（項目２４）
前記エンベロープタンパク質をコードする配列が、配列番号２の対応する配列と同じである、項目２３に記載の方法。
（項目２５）
項目１〜２４のいずれか１つに記載の方法により取得可能な不活化ジカウイルスを含む薬学的組成物。
（項目２６）
不活化ジカウイルスを含み、かつ０．５μｇ／ｍｌ未満の残留ホルマリン含量を有する薬学的組成物。
（項目２７）
項目１〜２４のいずれか１つに記載の方法により取得可能である、項目２６に記載の薬学的組成物。
（項目２８）
アルボウイルス調製物の不活化の完全性を決定する方法であって、以下のステップ：
（ｉ）培養昆虫細胞に不活化ステップを施したアルボウイルス調製物を接種し、前記昆虫細胞を第１の期間インキュベートして、それによって昆虫細胞上清を生成すること；
（ｉｉ）（ｉ）で生産された前記昆虫細胞上清を培養哺乳動物細胞に接種し、前記哺乳動物細胞を第２の期間インキュベートすること；
（ｉｉｉ）前記アルボウイルス調製物が前記哺乳動物細胞に細胞変性効果をもたらす残留複製ウイルスを含むか否かを決定すること、を含む、前記方法。
（項目２９）
前記アルボウイルスがフラビウイルスまたはアルファウイルスである、項目２８に記載の方法。
（項目３０）
前記アルボウイルスが、ジカウイルス、西ナイルウイルス、黄熱病ウイルス、日本脳炎ウイルス、ダニ媒介脳炎ウイルス、デング熱ウイルス、セントルイス脳炎ウイルス、チクングニアウイルス、オニョンニョンウイルスまたはマヤロウイルスである、項目２８または２９に記載の方法。
（項目３１）
前記アルボウイルス調製物が、界面活性剤、ホルマリン、過酸化水素、ベータプロピオラクトン（ＢＰＬ）、バイナリーエチルアミン（ＢＥＩ）、アセチルエチレンイミン、メチレンブルー、またはソラレンでの処理を受けた、項目２８〜３０のいずれか１つに記載の方法。
（項目３２）
前記昆虫細胞が、ＣＣＬ−１２５細胞、Ａａｇ−２細胞、ＲＭＬ−１２細胞、Ｃ６／３６細胞、Ｃ７−１０細胞、ＡＰ−６１細胞、Ａ．ｔ．ＧＲＩＰ−１細胞、Ａ．ｔ．ＧＲＩＰ−２細胞、Ａ．ｔ．ＧＲＩＰ−３細胞、ＵＭ−ＡＶＥ１細胞、Ｍｏｓ．５５細胞、Ｓｕａ１Ｂ細胞、４ａ−３Ｂ細胞、Ｍｏｓ．４２細胞、ＭＳＱ４３細胞、ＬＳＢ−ＡＡ６９５ＢＢ細胞、ＮＩＩＤ−ＣＴＲ細胞、及びＴＲＡ−１７１細胞、例えば、Ｃ６／３６細胞から選択される、項目２８〜３１のいずれか１つに記載の方法。
（項目３３）
前記第１の期間が３から７日である、項目２８〜３２のいずれか１つに記載の方法。
（項目３４）
前記哺乳動物細胞が、ＶＥＲＯ細胞、ＬＬＣ−ＭＫ２細胞、ＭＤＢＫ細胞、ＭＤＣＫ細胞、ＡＴＣＣ  ＣＣＬ３４  ＭＤＣＫ（ＮＢＬ２）細胞、ＭＤＣＫ３３０１６（ＷＯ９７／３７００１に記載されている寄託番号ＤＳＭ  ＡＣＣ  ２２１９）細胞、ＢＨＫ２１−Ｆ細胞、ＨＫＣＣ細胞、及びチャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ細胞）、例えば、ＶＥＲＯ細胞から選択される、項目２８〜３３のいずれか１つに記載の方法。
（項目３５）
前記第２の期間が３〜１４日である、項目２８〜３４のいずれか１つに記載の方法。
（項目３６）
前記方法が、１．０ＴＣＩＤ５０未満の前記アルボウイルスを検出し得る、項目２８〜３５のいずれか１つに記載の方法。