【手続補正書】
【提出日】令和3年10月11日(2021.10.11)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）（ｉ）インテインのＮ末端断片をコードするヌクレオチド配列の上流にある、選択可能マーカータンパク質のＮ末端断片をコードするヌクレオチド配列、および（ｉｉ）第１の目的の分子をコードするヌクレオチド配列を含む、第１のベクターと、
（ｂ）（ｉ）前記選択可能マーカータンパク質のＣ末端断片の上流にある、前記インテインのＣ末端断片をコードするヌクレオチド配列、および（ｉｉ）第２の目的の分子をコードするヌクレオチド配列を含む、第２のベクターと
含む、組み合わせ物であって、
前記インテインの前記Ｎ末端断片および前記Ｃ末端断片が、前記選択可能マーカータンパク質の前記Ｎ末端断片および前記Ｃ末端断片の結合を触媒して、全長選択可能マーカータンパク質を産生し、
前記組み合わせ物を真核生物細胞の送達することを含む方法において使用するための、
組み合わせ物。
【請求項２】
前記方法が、前記真核生物細胞を、前記第１および第２のベクターの前記真核生物細胞への導入を許容する条件下で維持して、トランスジェニック真核生物細胞を産生することをさらに含む、請求項１に記載の組み合わせ物。
【請求項３】
前記方法が、前記全長選択可能マーカータンパク質を含む前記トランスジェニック真核生物細胞を選択することをさらに含む、請求項２に記載の組み合わせ物。
【請求項４】
前記真核生物細胞が、哺乳動物細胞である、請求項１から３のいずれか１項に記載の組み合わせ物。
【請求項５】
前記選択可能マーカータンパク質が、抗生物質耐性タンパク質である、請求項１から４のいずれか１項に記載の組み合わせ物。
【請求項６】
前記抗生物質耐性タンパク質が、ハイグロマイシン、Ｇ４１８、ピューロマイシン、フレオマイシンＤ１、またはブラストサイジンに対する耐性を付与する、請求項５に記載の組み合わせ物。
【請求項７】
前記抗生物質耐性タンパク質が、ｈｙｇＢ遺伝子、ｂｓｒ遺伝子、ｐａｃ遺伝子、またはｎｅｏ遺伝子によってコードされる、請求項５または６に記載の組み合わせ物。
【請求項８】
前記選択可能マーカータンパク質が、蛍光タンパク質である、請求項１から４のいずれか１項に記載の組み合わせ物。
【請求項９】
前記蛍光タンパク質が、ＴａｇＣＦＰ、ｍＴａｇＣＦＰ２、Ｃｚｕｒｉｔｅ、ＥＣＦＰ２、ｍＫａｌａｍａ１、Ｓｉｒｉｕｓ、Ｓａｐｐｈｉｒｅ、Ｔ−Ｓａｐｐｈｉｒｅ、ＥＣＦＰ、Ｃｅｒｕｌｅａｎ、ＳＣＦＰ３Ｃ、ｍＴｕｒｑｕｏｉｓｅ、ｍＴｕｒｑｕｏｉｓｅ２、モノマーＭｉｄｏｒｉｉｓｈｉ−Ｃｙａｎ、ＴａｇＣＦＰ、ｍＴＦＰ１、ＥＧＦＰ、Ｅｍｅｒａｌｄ、Ｓｕｐｅｒｆｏｌｄｅｒ  ＧＦＰ、モノマーＣｚａｍｉ  Ｇｒｅｅｎ、ＴａｇＧＦＰ２、ｍＵＫＧ、ｍＷａｓａｂｉ、Ｃｌｏｖｅｒ、ｍＮｅｏｎＧｒｅｅｎ、ＥＹＦＰ、Ｃｉｔｒｉｎｅ、Ｖｅｎｕｓ、ＳＹＦＰ２、ＴａｇＹＦＰ、モノマーＫｕｓａｂｉｒａ−Ｏｒａｎｇｅ、ｍＫＯκ、ｍＫＯ２、ｍＯｒａｎｇｅ、ｍＯｒａｎｇｅ２、ｍＲａｓｐｂｅｒｒｙ、ｍＣｈｅｒｒｙ、ｍＳｔｒａｗｂｅｒｒｙ、ｍＳｃａｒｌｅｔ、ｍＴａｎｇｅｒｉｎｅ、ｔｄＴｏｍａｔｏ、ＴａｇＲＦＰ、ＴａｇＲＦＰ−Ｔ、ｍＣｐｐｌｅ、ｍＲｕｂｙ、ｍＲｕｂｙ２、ｍＰｌｕｍ、ＨｃＲｅｄ−Ｔａｎｄｅｍ、ｍＫａｔｅ２、ｍＮｅｐｔｕｎｅ、ＮｉｒＦＰ、ＴａｇＲＦＰ６５７、ＩＦＰ１．４、およびｉＲＦＰから選択される、請求項８に記載の組み合わせ物。
【請求項１０】
前記インテインが、スプリットインテインである、請求項１から９のいずれか１項に記載の組み合わせ物。
【請求項１１】
前記スプリットインテインが、天然のスプリットであり、必要に応じて、天然のスプリットインテインが、ＤｎａＥインテインから選択され、必要に応じて、前記ＤｎａＥインテインが、Ｓｙｎｅｃｈｏｃｙｓｔｉｓ  ｓｐ．ＤｎａＥ（ＳｓｐＤｎａＥ）インテインおよびＮｏｓｔｏｃ  ｐｕｎｃｔｉｆｏｒｍｅ（ＮｐｕＤｎａＥ）インテインから選択される、請求項１０に記載の組み合わせ物。
【請求項１２】
前記スプリットインテインが、操作されたスプリットインテインであり、必要に応じて、前記操作されたスプリットインテインが、ＤｎａＢインテインまたはＧｙｒＢインテインから操作され、必要に応じて、前記操作されたスプリットインテインが、ＳｓｐＤｎａＢ  Ｓ１インテインまたはＳｓｐＧｙｒＢ  Ｓ１１インテインである、請求項１０に記載の組み合わせ物。
【請求項１３】
前記第１および／または第２の分子が、タンパク質または非コーディングリボ核酸（ＲＮＡ）であり、必要に応じて、前記非コーディングＲＮＡが、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、アンチセンスＲＮＡ、短い干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、または短いヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）である、請求項１から１２のいずれか１項に記載の組み合わせ物。
【請求項１４】
前記第１および／または第２のベクターが、プラスミドベクターまたはウイルスベクターである、請求項１から１３のいずれか１項に記載の組み合わせ物。
【請求項１５】
（ａ）（ｉ）インテインのＮ末端断片をコードするヌクレオチド配列の上流にある、選択可能マーカータンパク質のＮ末端断片をコードするヌクレオチド配列、および（ｉｉ）第１の目的の分子をコードするヌクレオチド配列を含む、第１のベクターと、
（ｂ）（ｉ）前記選択可能マーカータンパク質のＣ末端断片の上流にある、前記インテインのＣ末端断片をコードするヌクレオチド配列、および（ｉｉ）第２の目的の分子をコードするヌクレオチド配列を含む、第２のベクターと
を含む真核生物細胞であって、
前記インテインの前記Ｎ末端断片および前記Ｃ末端断片が、前記選択可能マーカータンパク質の前記Ｎ末端断片および前記Ｃ末端断片の結合を触媒して、全長抗生物質耐性タンパク質を産生する、真核生物細胞。
【請求項１６】
キットであって、
（ａ）インテインのＮ末端断片をコードするヌクレオチド配列の上流にある、選択可能マーカータンパク質のＮ末端断片をコードするヌクレオチド配列を含む、第１のベクターと、
（ｂ）前記選択可能マーカータンパク質のＣ末端断片の上流にある、前記インテインのＣ末端断片をコードするヌクレオチド配列を含む、第２のベクターとを含み、
前記インテインの前記Ｎ末端断片および前記Ｃ末端断片が、前記選択可能マーカータンパク質の前記Ｎ末端断片および前記Ｃ末端断片の結合を触媒して、全長選択可能マーカータンパク質を産生する、キット。
【請求項１７】
（ａ）（ｉ）第１のインテインのＮ末端断片をコードするヌクレオチド配列の上流にある、選択可能マーカータンパク質のＮ末端断片をコードするヌクレオチド配列、および（ｉｉ）第１の目的の分子をコードするヌクレオチド配列を含む、第１のベクターと、
（ｂ）（ｉ）第２のインテインのＮ末端断片をコードするヌクレオチド配列の上流にある、前記選択可能マーカータンパク質の中央断片をコードするヌクレオチド配列の上流にある、前記第１のインテインのＣ末端断片をコードするヌクレオチド配列、および（ｉｉ）第２の目的の分子をコードするヌクレオチド配列を含む、第２のベクターと、
（ｃ）（ｉ）前記選択可能マーカータンパク質のＣ末端断片をコードするヌクレオチド配列の上流にある、前記第２のインテインのＣ末端断片をコードするヌクレオチド配列、および（ｉｉ）第３の目的の分子をコードするヌクレオチド配列を含む、第３のベクターとを含む組み合わせ物であって、
前記第１のインテインの前記Ｎ末端断片および前記Ｃ末端断片が、前記選択可能マーカータンパク質のＮ末端断片の、前記選択可能マーカータンパク質の前記中央断片への結合を触媒し、前記第２のインテインの前記Ｎ末端断片および前記Ｃ末端断片が、前記選択可能マーカータンパク質の中央断片の、前記選択可能マーカータンパク質の前記Ｃ末端断片への結合を触媒して、全長選択可能マーカータンパク質を産生し、
前記組み合わせ物を真核生物細胞に送達することをと含む方法において使用するための、
組み合わせ物。
【請求項１８】
前記方法が、前記真核生物細胞を、前記第１、第２、および第３のベクターの前記真核生物細胞への導入を許容する条件下で維持して、トランスジェニック真核生物細胞を産生することをさらに含む、請求項１９に記載の組み合わせ物。
【請求項１９】
前記方法が、前記全長選択可能マーカータンパク質を含む前記トランスジェニック真核生物細胞を選択することをさらに含む、請求項１８に記載の組み合わせ物。
【請求項２０】
（ａ）（ｉ）第１のインテインのＮ末端断片をコードするヌクレオチド配列の上流にある、選択可能マーカータンパク質のＮ末端断片をコードするヌクレオチド配列、および（ｉｉ）第１の目的の分子をコードするヌクレオチド配列を含む、第１のベクターと、
（ｂ）（ｉ）第２のインテインのＮ末端断片をコードするヌクレオチド配列の上流にある、前記選択可能マーカータンパク質の中央断片をコードするヌクレオチド配列の上流にある、前記第１のインテインのＣ末端断片をコードするヌクレオチド配列、および（ｉｉ）第２の目的の分子をコードするヌクレオチド配列を含む、第２のベクターと、
（ｃ）（ｉ）前記選択可能マーカータンパク質のＣ末端断片をコードするヌクレオチド配列の上流にある、前記第２のインテインのＣ末端断片をコードするヌクレオチド配列、および（ｉｉ）第３の目的の分子をコードするヌクレオチド配列を含む、第３のベクターとを含む真核生物細胞であって、
前記第１のインテインの前記Ｎ末端断片および前記Ｃ末端断片が、前記選択可能マーカータンパク質のＮ末端断片の、前記選択可能マーカータンパク質の前記中央断片への結合を触媒し、前記第２のインテインの前記Ｎ末端断片および前記Ｃ末端断片が、前記選択可能マーカータンパク質の中央断片の、前記選択可能マーカータンパク質の前記Ｃ末端断片への結合を触媒して、全長選択可能マーカータンパク質を産生する、真核生物細胞。
【請求項２１】
キットであって、
（ａ）第１のインテインのＮ末端断片をコードするヌクレオチド配列の上流にある、選択可能マーカータンパク質のＮ末端断片をコードするヌクレオチド配列を含む、第１のベクターと、
（ｂ）第２のインテインのＮ末端断片をコードするヌクレオチド配列の上流にある、前記選択可能マーカータンパク質の中央断片をコードするヌクレオチド配列の上流にある、前記第１のインテインのＣ末端断片をコードするヌクレオチド配列を含む、第２のベクターと、
（ｃ）前記選択可能マーカータンパク質のＣ末端断片をコードするヌクレオチド配列の上流にある、前記第２のインテインのＣ末端断片をコードするヌクレオチド配列を含む、第３のベクターとを含み、
前記第１のインテインの前記Ｎ末端断片および前記Ｃ末端断片が、前記選択可能マーカータンパク質のＮ末端断片の、前記選択可能マーカータンパク質の前記中央断片への結合を触媒し、前記第２のインテインの前記Ｎ末端断片および前記Ｃ末端断片が、前記選択可能マーカータンパク質の中央断片の、前記選択可能マーカータンパク質の前記Ｃ末端断片への結合を触媒して、全長選択可能マーカータンパク質を産生する、キット。
【請求項２２】
（ａ）（ｉ）インテインのＮ末端断片をコードするヌクレオチド配列の上流にある、選択可能マーカータンパク質のＮ末端断片をコードするヌクレオチド配列、および（ｉｉ）第１の目的の分子をコードするヌクレオチド配列を含む、第１のベクター
を含む組成物であって、前記組成物を真核生物細胞の送達することを含む方法において使用するための組成物であり、前記組成物が、
（ｂ）（ｉ）前記選択可能マーカータンパク質のＣ末端断片の上流にある、前記インテインのＣ末端断片をコードするヌクレオチド配列、および（ｉｉ）第２の目的の分子をコードするヌクレオチド配列を含む、第２のベクターと
組み合わせて送達されることを特徴とし、
前記インテインの前記Ｎ末端断片および前記Ｃ末端断片が、前記選択可能マーカータンパク質の前記Ｎ末端断片および前記Ｃ末端断片の結合を触媒して、全長選択可能マーカータンパク質を産生する、
組成物。
【請求項２３】
（ｂ）（ｉ）選択可能マーカータンパク質のＣ末端断片の上流にある、インテインのＣ末端断片をコードするヌクレオチド配列、および（ｉｉ）第２の目的の分子をコードするヌクレオチド配列を含む、第２のベクター
を含む組成物であって、前記組成物を真核生物細胞の送達することを含む方法において使用するための組成物であり、前記組成物が、
（ａ）（ｉ）前記インテインのＮ末端断片をコードするヌクレオチド配列の上流にある、前記選択可能マーカータンパク質のＮ末端断片をコードするヌクレオチド配列、および（ｉｉ）第１の目的の分子をコードするヌクレオチド配列を含む、第１のベクターと
組み合わせて送達されることを特徴とし、
前記インテインの前記Ｎ末端断片および前記Ｃ末端断片が、前記選択可能マーカータンパク質の前記Ｎ末端断片および前記Ｃ末端断片の結合を触媒して、全長選択可能マーカータンパク質を産生する、
組成物。
【請求項２４】
（ａ）（ｉ）第１のインテインのＮ末端断片をコードするヌクレオチド配列の上流にある、選択可能マーカータンパク質のＮ末端断片をコードするヌクレオチド配列、および（ｉｉ）第１の目的の分子をコードするヌクレオチド配列を含む、第１のベクター
を含む組成物であって、前記組成物を真核生物細胞の送達することを含む方法において使用するための組成物であり、前記組成物が、
（ｂ）（ｉ）第２のインテインのＮ末端断片をコードするヌクレオチド配列の上流にある、前記選択可能マーカータンパク質の中央断片をコードするヌクレオチド配列の上流にある、前記第１のインテインのＣ末端断片をコードするヌクレオチド配列、および（ｉｉ）第２の目的の分子をコードするヌクレオチド配列を含む、第２のベクターと、
（ｃ）（ｉ）前記選択可能マーカータンパク質のＣ末端断片をコードするヌクレオチド配列の上流にある、前記第２のインテインのＣ末端断片をコードするヌクレオチド配列、および（ｉｉ）第３の目的の分子をコードするヌクレオチド配列を含む、第３のベクターと
組み合わせて送達されることを特徴とし、
前記第１のインテインの前記Ｎ末端断片および前記Ｃ末端断片が、前記選択可能マーカータンパク質のＮ末端断片の、前記選択可能マーカータンパク質の前記中央断片への結合を触媒し、前記第２のインテインの前記Ｎ末端断片および前記Ｃ末端断片が、前記選択可能マーカータンパク質の中央断片の、前記選択可能マーカータンパク質の前記Ｃ末端断片への結合を触媒して、全長選択可能マーカータンパク質を産生する、
組成物。
【請求項２５】
（ｂ）（ｉ）第２のインテインのＮ末端断片をコードするヌクレオチド配列の上流にある、選択可能マーカータンパク質の中央断片をコードするヌクレオチド配列の上流にある、第１のインテインのＣ末端断片をコードするヌクレオチド配列、および（ｉｉ）第２の目的の分子をコードするヌクレオチド配列を含む、第２のベクター
を含む組成物であって、前記組成物を真核生物細胞の送達することを含む方法において使用するための組成物であり、前記組成物が、
（ａ）（ｉ）前記第１のインテインのＮ末端断片をコードするヌクレオチド配列の上流にある、前記選択可能マーカータンパク質のＮ末端断片をコードするヌクレオチド配列、および（ｉｉ）第１の目的の分子をコードするヌクレオチド配列を含む、第１のベクターと、
（ｃ）（ｉ）前記選択可能マーカータンパク質のＣ末端断片をコードするヌクレオチド配列の上流にある、前記第２のインテインのＣ末端断片をコードするヌクレオチド配列、および（ｉｉ）第３の目的の分子をコードするヌクレオチド配列を含む、第３のベクターと
組み合わせて送達されることを特徴とし、
前記第１のインテインの前記Ｎ末端断片および前記Ｃ末端断片が、前記選択可能マーカータンパク質のＮ末端断片の、前記選択可能マーカータンパク質の前記中央断片への結合を触媒し、前記第２のインテインの前記Ｎ末端断片および前記Ｃ末端断片が、前記選択可能マーカータンパク質の中央断片の、前記選択可能マーカータンパク質の前記Ｃ末端断片への結合を触媒して、全長選択可能マーカータンパク質を産生する、
組成物。
【請求項２６】
（ｃ）（ｉ）選択可能マーカータンパク質のＣ末端断片をコードするヌクレオチド配列の上流にある、第２のインテインのＣ末端断片をコードするヌクレオチド配列、および（ｉｉ）第３の目的の分子をコードするヌクレオチド配列を含む、第３のベクター
を含む組成物であって、前記組成物を真核生物細胞の送達することを含む方法において使用するための組成物であり、前記組成物が、
（ａ）（ｉ）第１のインテインのＮ末端断片をコードするヌクレオチド配列の上流にある、前記選択可能マーカータンパク質のＮ末端断片をコードするヌクレオチド配列、および（ｉｉ）第１の目的の分子をコードするヌクレオチド配列を含む、第１のベクターと、
（ｂ）（ｉ）前記第２のインテインのＮ末端断片をコードするヌクレオチド配列の上流にある、前記選択可能マーカータンパク質の中央断片をコードするヌクレオチド配列の上流にある、前記第１のインテインのＣ末端断片をコードするヌクレオチド配列、および（ｉｉ）第２の目的の分子をコードするヌクレオチド配列を含む、第２のベクターと
組み合わせて送達されることを特徴とし、
前記第１のインテインの前記Ｎ末端断片および前記Ｃ末端断片が、前記選択可能マーカータンパク質のＮ末端断片の、前記選択可能マーカータンパク質の前記中央断片への結合を触媒し、前記第２のインテインの前記Ｎ末端断片および前記Ｃ末端断片が、前記選択可能マーカータンパク質の中央断片の、前記選択可能マーカータンパク質の前記Ｃ末端断片への結合を触媒して、全長選択可能マーカータンパク質を産生する、
組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００８１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００８１】
値の範囲が提供される場合、その範囲の上限と下限との間のそれぞれの値が、本明細書において具体的に企図され、記載される。
本発明は、例えば、以下の項目を提供する。
(項目１)
真核生物細胞に、
（ａ）（ｉ）インテインのＮ末端断片をコードするヌクレオチド配列の上流にある、選択可能マーカータンパク質のＮ末端断片をコードするヌクレオチド配列、および（ｉｉ）第１の目的の分子をコードするヌクレオチド配列を含む、第１のベクターと、
（ｂ）（ｉ）前記選択可能マーカータンパク質のＣ末端断片の上流にある、前記インテインのＣ末端断片をコードするヌクレオチド配列、および（ｉｉ）第２の目的の分子をコードするヌクレオチド配列を含む、第２のベクターと
を送達することを含む方法であって、
前記インテインの前記Ｎ末端断片および前記Ｃ末端断片が、前記選択可能マーカータンパク質の前記Ｎ末端断片および前記Ｃ末端断片の結合を触媒して、全長選択可能マーカータンパク質を産生する、方法。
(項目２)
前記真核生物細胞を、前記第１および第２のベクターの前記真核生物細胞への導入を許容する条件下で維持して、トランスジェニック真核生物細胞を産生することをさらに含む、項目１に記載の方法。
(項目３)
前記全長選択可能マーカータンパク質を含む前記トランスジェニック真核生物細胞を選択することをさらに含む、項目２に記載の方法。
(項目４)
前記真核生物細胞が、哺乳動物細胞である、項目１から３のいずれか１項に記載の方法。
(項目５)
前記選択可能マーカータンパク質が、抗生物質耐性タンパク質である、項目１から４のいずれか１項に記載の方法。
(項目６)
前記抗生物質耐性タンパク質が、ハイグロマイシン、Ｇ４１８、ピューロマイシン、フレオマイシンＤ１、またはブラストサイジンに対する耐性を付与する、項目５に記載の方法。
(項目７)
前記抗生物質耐性タンパク質が、ｈｙｇＢ遺伝子、ｂｓｒ遺伝子、ｐａｃ遺伝子、またはｎｅｏ遺伝子によってコードされる、項目５または６に記載の方法。
(項目８)
前記選択可能マーカータンパク質が、蛍光タンパク質である、項目１から４のいずれか１項に記載の方法。
(項目９)
前記蛍光タンパク質が、ＴａｇＣＦＰ、ｍＴａｇＣＦＰ２、Ｃｚｕｒｉｔｅ、ＥＣＦＰ２、ｍＫａｌａｍａ１、Ｓｉｒｉｕｓ、Ｓａｐｐｈｉｒｅ、Ｔ−Ｓａｐｐｈｉｒｅ、ＥＣＦＰ、Ｃｅｒｕｌｅａｎ、ＳＣＦＰ３Ｃ、ｍＴｕｒｑｕｏｉｓｅ、ｍＴｕｒｑｕｏｉｓｅ２、モノマーＭｉｄｏｒｉｉｓｈｉ−Ｃｙａｎ、ＴａｇＣＦＰ、ｍＴＦＰ１、ＥＧＦＰ、Ｅｍｅｒａｌｄ、Ｓｕｐｅｒｆｏｌｄｅｒ  ＧＦＰ、モノマーＣｚａｍｉ  Ｇｒｅｅｎ、ＴａｇＧＦＰ２、ｍＵＫＧ、ｍＷａｓａｂｉ、Ｃｌｏｖｅｒ、ｍＮｅｏｎＧｒｅｅｎ、ＥＹＦＰ、Ｃｉｔｒｉｎｅ、Ｖｅｎｕｓ、ＳＹＦＰ２、ＴａｇＹＦＰ、モノマーＫｕｓａｂｉｒａ−Ｏｒａｎｇｅ、ｍＫＯκ、ｍＫＯ２、ｍＯｒａｎｇｅ、ｍＯｒａｎｇｅ２、ｍＲａｓｐｂｅｒｒｙ、ｍＣｈｅｒｒｙ、ｍＳｔｒａｗｂｅｒｒｙ、ｍＳｃａｒｌｅｔ、ｍＴａｎｇｅｒｉｎｅ、ｔｄＴｏｍａｔｏ、ＴａｇＲＦＰ、ＴａｇＲＦＰ−Ｔ、ｍＣｐｐｌｅ、ｍＲｕｂｙ、ｍＲｕｂｙ２、ｍＰｌｕｍ、ＨｃＲｅｄ−Ｔａｎｄｅｍ、ｍＫａｔｅ２、ｍＮｅｐｔｕｎｅ、ＮｉｒＦＰ、ＴａｇＲＦＰ６５７、ＩＦＰ１．４、およびｉＲＦＰから選択される、項目８に記載の方法。
(項目１０)
前記インテインが、スプリットインテインである、項目１から９のいずれか１項に記載の方法。
(項目１１)
前記スプリットインテインが、天然のスプリットであり、必要に応じて、天然のスプリットインテインが、ＤｎａＥインテインから選択され、必要に応じて、前記ＤｎａＥインテインが、Ｓｙｎｅｃｈｏｃｙｓｔｉｓ  ｓｐ．ＤｎａＥ（ＳｓｐＤｎａＥ）インテインおよびＮｏｓｔｏｃ  ｐｕｎｃｔｉｆｏｒｍｅ（ＮｐｕＤｎａＥ）インテインから選択される、項目１０に記載の方法。
(項目１２)
前記スプリットインテインが、操作されたスプリットインテインであり、必要に応じて、前記操作されたスプリットインテインが、ＤｎａＢインテインまたはＧｙｒＢインテインから操作され、必要に応じて、前記操作されたスプリットインテインが、ＳｓｐＤｎａＢ  Ｓ１インテインまたはＳｓｐＧｙｒＢ  Ｓ１１インテインである、項目１０に記載の方法。
(項目１３)
前記第１および／または第２の分子が、タンパク質または非コーディングリボ核酸（ＲＮＡ）であり、必要に応じて、前記非コーディングＲＮＡが、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、アンチセンスＲＮＡ、短い干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、または短いヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）である、項目１から１２のいずれか１項に記載の方法。
(項目１４)
前記第１および／または第２のベクターが、プラスミドベクターまたはウイルスベクターである、項目１から１３のいずれか１項に記載の方法。
(項目１５)
（ａ）（ｉ）インテインのＮ末端断片をコードするヌクレオチド配列の上流にある、選択可能マーカータンパク質のＮ末端断片をコードするヌクレオチド配列、および（ｉｉ）第１の目的の分子をコードするヌクレオチド配列を含む、第１のベクターと、
（ｂ）（ｉ）前記選択可能マーカータンパク質のＣ末端断片の上流にある、前記インテインのＣ末端断片をコードするヌクレオチド配列、および（ｉｉ）第２の目的の分子をコードするヌクレオチド配列を含む、第２のベクターと
を含む真核生物細胞であって、
前記インテインの前記Ｎ末端断片および前記Ｃ末端断片が、前記選択可能マーカータンパク質の前記Ｎ末端断片および前記Ｃ末端断片の結合を触媒して、全長抗生物質耐性タンパク質を産生する、真核生物細胞。
(項目１６)
キットであって、
（ａ）インテインのＮ末端断片をコードするヌクレオチド配列の上流にある、選択可能マーカータンパク質のＮ末端断片をコードするヌクレオチド配列を含む、第１のベクターと、
（ｂ）前記選択可能マーカータンパク質のＣ末端断片の上流にある、前記インテインのＣ末端断片をコードするヌクレオチド配列を含む、第２のベクターとを含み、
前記インテインの前記Ｎ末端断片および前記Ｃ末端断片が、前記選択可能マーカータンパク質の前記Ｎ末端断片および前記Ｃ末端断片の結合を触媒して、全長選択可能マーカータンパク質を産生する、キット。
(項目１７)
真核生物細胞に、
（ａ）（ｉ）第１のインテインのＮ末端断片をコードするヌクレオチド配列の上流にある、選択可能マーカータンパク質のＮ末端断片をコードするヌクレオチド配列、および（ｉｉ）第１の目的の分子をコードするヌクレオチド配列を含む、第１のベクターと、
（ｂ）（ｉ）第２のインテインのＮ末端断片をコードするヌクレオチド配列の上流にある、前記選択可能マーカータンパク質の中央断片をコードするヌクレオチド配列の上流にある、前記第１のインテインのＣ末端断片をコードするヌクレオチド配列、および（ｉｉ）第２の目的の分子をコードするヌクレオチド配列を含む、第２のベクターと、
（ｃ）（ｉ）前記選択可能マーカータンパク質のＣ末端断片をコードするヌクレオチド配列の上流にある、前記第２のインテインのＣ末端断片をコードするヌクレオチド配列、および（ｉｉ）第３の目的の分子をコードするヌクレオチド配列を含む、第３のベクターとを送達することを含む方法であって、
前記第１のインテインの前記Ｎ末端断片および前記Ｃ末端断片が、前記選択可能マーカータンパク質のＮ末端断片の、前記選択可能マーカータンパク質の前記中央断片への結合を触媒し、前記第２のインテインの前記Ｎ末端断片および前記Ｃ末端断片が、前記選択可能マーカータンパク質の中央断片の、前記選択可能マーカータンパク質の前記Ｃ末端断片への結合を触媒して、全長選択可能マーカータンパク質を産生する、方法。
(項目１８)
前記真核生物細胞を、前記第１、第２、および第３のベクターの前記真核生物細胞への導入を許容する条件下で維持して、トランスジェニック真核生物細胞を産生することをさらに含む、項目１９に記載の方法。
(項目１９)
前記全長選択可能マーカータンパク質を含む前記トランスジェニック真核生物細胞を選択することをさらに含む、項目１８に記載の方法。
(項目２０)
（ａ）（ｉ）第１のインテインのＮ末端断片をコードするヌクレオチド配列の上流にある、選択可能マーカータンパク質のＮ末端断片をコードするヌクレオチド配列、および（ｉｉ）第１の目的の分子をコードするヌクレオチド配列を含む、第１のベクターと、
（ｂ）（ｉ）第２のインテインのＮ末端断片をコードするヌクレオチド配列の上流にある、前記選択可能マーカータンパク質の中央断片をコードするヌクレオチド配列の上流にある、前記第１のインテインのＣ末端断片をコードするヌクレオチド配列、および（ｉｉ）第２の目的の分子をコードするヌクレオチド配列を含む、第２のベクターと、
（ｃ）（ｉ）前記選択可能マーカータンパク質のＣ末端断片をコードするヌクレオチド配列の上流にある、前記第２のインテインのＣ末端断片をコードするヌクレオチド配列、および（ｉｉ）第３の目的の分子をコードするヌクレオチド配列を含む、第３のベクターとを含む真核生物細胞であって、
前記第１のインテインの前記Ｎ末端断片および前記Ｃ末端断片が、前記選択可能マーカータンパク質のＮ末端断片の、前記選択可能マーカータンパク質の前記中央断片への結合を触媒し、前記第２のインテインの前記Ｎ末端断片および前記Ｃ末端断片が、前記選択可能マーカータンパク質の中央断片の、前記選択可能マーカータンパク質の前記Ｃ末端断片への結合を触媒して、全長選択可能マーカータンパク質を産生する、真核生物細胞。
(項目２１)
キットであって、
（ａ）第１のインテインのＮ末端断片をコードするヌクレオチド配列の上流にある、選択可能マーカータンパク質のＮ末端断片をコードするヌクレオチド配列を含む、第１のベクターと、
（ｂ）第２のインテインのＮ末端断片をコードするヌクレオチド配列の上流にある、前記選択可能マーカータンパク質の中央断片をコードするヌクレオチド配列の上流にある、前記第１のインテインのＣ末端断片をコードするヌクレオチド配列を含む、第２のベクターと、
（ｃ）前記選択可能マーカータンパク質のＣ末端断片をコードするヌクレオチド配列の上流にある、前記第２のインテインのＣ末端断片をコードするヌクレオチド配列を含む、第３のベクターとを含み、
前記第１のインテインの前記Ｎ末端断片および前記Ｃ末端断片が、前記選択可能マーカータンパク質のＮ末端断片の、前記選択可能マーカータンパク質の前記中央断片への結合を触媒し、前記第２のインテインの前記Ｎ末端断片および前記Ｃ末端断片が、前記選択可能マーカータンパク質の中央断片の、前記選択可能マーカータンパク質の前記Ｃ末端断片への結合を触媒して、全長選択可能マーカータンパク質を産生する、キット。