【手続補正書】
【提出日】令和2年11月19日(2020.11.19)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
セリンペプチダーゼ阻害剤、クレードＡ、メンバー１（Ｓｅｒｐｉｎａ１）遺伝子の発現を阻害する二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）剤であって、二本鎖領域を形成するセンス鎖およびアンチセンス鎖を含み、
ここで前記センス鎖が、配列番号１のヌクレオチド配列とは３以下のヌクレオチド分異なる少なくとも１５の隣接ヌクレオチドを含み、かつ前記アンチセンス鎖が、配列番号１５のヌクレオチド配列から３以下のヌクレオチド分異なる少なくとも１５の隣接ヌクレオチドを含み、
ここで前記アンチセンス鎖が、５’領域の最初の９つのヌクレオチド位置内に前記二本鎖領域の少なくとも１つの熱不安定化修飾またはその前駆物質を含み、
ここで前記センス鎖が、ＡＳＧＰＲリガンドを含み、また
ここで前記センス鎖および前記アンチセンス鎖の各々が、独立して１４〜４０ヌクレオチド長である、二本鎖ＲＮＡ剤。
【請求項２】
セリンペプチダーゼ阻害剤、クレードＡ、メンバー１（Ｓｅｒｐｉｎａ１）遺伝子の発現を阻害する二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）剤であって、二本鎖領域を形成するセンス鎖およびアンチセンス鎖を含み、前記アンチセンス鎖は、配列番号１５のヌクレオチド配列から３以下のヌクレオチド分異なる少なくとも１５の隣接ヌクレオチドを含み、
ここで前記アンチセンス鎖が、５’領域の最初の９つのヌクレオチド位置内に少なくとも１つの熱不安定化修飾またはその前駆物質を含み、
ここで前記センス鎖が、ＡＳＧＰＲリガンドを含み、
ここで前記センス鎖および前記アンチセンス鎖の各々が、独立して１４〜４０ヌクレオチド長である、二本鎖ＲＮＡ剤。
【請求項３】
以下の特徴：
ａ）前記熱不安定化修飾が、前記アンチセンス鎖の５’領域の４〜８位に位置する；
ｂ）前記センスおよびアンチセンス鎖の各々が、独立して、２’−フルオロ修飾を含む少なくとも２つのヌクレオチドを含む；および
ｃ）前記センス鎖の片末端に結合されたＡＳＧＰＲリガンド
を有する、請求項１または２に記載のｄｓＲＮＡ剤。
【請求項４】
前記アンチセンス鎖が、以下の特徴：
ａ）前記熱不安定化修飾が前記アンチセンス鎖の４〜８位に位置する；
ｂ）少なくとも２つのヌクレオチドが２’−フルオロ修飾を含む；
ｃ）ヌクレオチドの（５’末端から数えて）１および２位の間にホスホロチオエートヌクレオチド間結合；
ｄ）１８〜３５ヌクレオチド長
の少なくとも２つを有する、請求項１または２に記載のｄｓＲＮＡ剤。
【請求項５】
前記センス鎖が、以下の特徴：
ａ）前記センス鎖の片末端に結合された前記ＡＳＧＰＲリガンド；
ｂ）少なくとも２つのヌクレオチドが２’−フルオロ修飾を含む；
ｃ）前記二本鎖領域が少なくとも１９のヌクレオチド位置に及び、かつ前記熱不安定化修飾が前記二本鎖領域内に位置する、
の少なくとも１つを有する、請求項１または２に記載のｄｓＲＮＡ剤。
【請求項６】
前記熱不安定化修飾が、
【化１】
2020500929.tif 000001
（式中、Ｂは核酸塩基である）
からなる群から選択される、請求項１または２に記載のｄｓＲＮＡ剤。
【請求項７】
前記不安定化修飾が、前記アンチセンス鎖の７位に位置する、請求項１または２に記載のｄｓＲＮＡ剤。
【請求項８】
前記ＡＳＧＰＲリガンドが、二価または三価分岐状リンカーを通じて結合される１つ以上のＧａｌＮＡｃ誘導体である、請求項１または２に記載のｄｓＲＮＡ剤。
【請求項９】
前記ＡＳＧＰＲリガンドが、
【化２】
2020500929.tif 000002
である、請求項８に記載のｄｓＲＮＡ剤。
【請求項１０】
以下の模式図
【化３】
2020500929.tif 000003
（式中、ＸはＯまたはＳである）
に示されるようなリガンドにコンジュゲートされる、請求項９に記載のｄｓＲＮＡ剤。
【請求項１１】
各鎖が独立して１５〜３０ヌクレオチドまたは１９−３０ヌクレオチドを有する、請求項１または２に記載のｄｓＲＮＡ剤。
【請求項１２】
前記センス鎖が２１ヌクレオチド長であり、かつ前記アンチセンス鎖が２３ヌクレオチド長である、請求項１または２に記載のｄｓＲＮＡ剤。
【請求項１３】
前記アンチセンス鎖が、ヌクレオチド配列５’−ＵＵＵＵＧＵＵＣＡＡＵＣＡＵＵＡＡＧＡＡＧＡＣ−３’（配列番号４１９）とは３以下のヌクレオチド分異なる少なくとも１５の隣接ヌクレオチドを含む、請求項１または２に記載のｄｓＲＮＡ剤。
【請求項１４】
前記センス鎖が、ヌクレオチド配列５’−ＣＵＵＣＵＵＡＡＵＧＡＵＵＧＡＡＣＡＡＡＡ−３’（配列番号４１７）を含み、かつ前記アンチセンス鎖が、ヌクレオチド配列５’−ＵＵＵＵＧＵＵＣＡＡＵＣＡＵＵＡＡＧＡＡＧＡＣ−３’（配列番号４１９）を含む、請求項１または２に記載のｄｓＲＮＡ剤。
【請求項１５】
前記センス鎖が、ヌクレオチド配列５’−ｃｓｕｓｕｃｕｕＡｆａＵｆＧｆＡｆｕｕｇａａｃａａａａ−３’（配列番号３３）を含み、かつ前記アンチセンス鎖が、ヌクレオチド配列５’−ｕｓＵｆｓｕｕｇｕ（Ｔｇｎ）ｃａａｕｃａＵｆｕＡｆａｇａａｇｓａｓｃ−３’（配列番号３４）を含み、
ここでａ、ｇ、ｃ、およびｕは各々、２’−Ｏ−メチル（２’−ＯＭｅ）Ａ、Ｇ、Ｃ、およびＵであり；Ａｆ、Ｇｆ、ＣｆおよびＵｆは各々、２’−フルオロＡ、Ｇ、ＣおよびＵであり；ｓは、ホスホロチオエート結合であり；かつ（Ｔｇｎ）は、チミジン−グリコール核酸（ＧＮＡ）Ｓ−異性体である、
請求項１または２に記載のｄｓＲＮＡ剤。
【請求項１６】
セリンペプチダーゼ阻害剤、クレードＡ、メンバー１（Ｓｅｒｐｉｎａ１）遺伝子の発現を阻害する二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）剤であって、二本鎖領域を形成するセンス鎖およびアンチセンス鎖を含み、ここで前記センス鎖は、ヌクレオチド配列５’−ｃｓｕｓｕｃｕｕＡｆａＵｆＧｆＡｆｕｕｇａａｃａａａａＬ９６−３’（配列番号３５）を含み、かつ前記アンチセンス鎖は、ヌクレオチド配列５’−ｕｓＵｆｓｕｕｇｕ（Ｔｇｎ）ｃａａｕｃａＵｆｕＡｆａｇａａｇｓａｓｃ−３’（配列番号３４）を含み、
ここでａ、ｇ、ｃ、およびｕは各々、２’−Ｏ−メチル（２’−ＯＭｅ）Ａ、Ｇ、Ｃ、およびＵであり；Ａｆ、Ｇｆ、ＣｆおよびＵｆは各々、２’−フルオロＡ、Ｇ、ＣおよびＵであり；ｓは、ホスホロチオエート結合であり；（Ｔｇｎ）は、チミジン−グリコール核酸（ＧＮＡ）Ｓ−異性体であり；かつＬ９６は、Ｎ−［トリス（ＧａｌＮＡｃ−アルキル）−アミドデカノイル）］−４−ヒドロキシプロリノールである、ｄｓＲＮＡ剤。
【請求項１７】
セリンペプチダーゼ阻害剤、クレードＡ、メンバー１（Ｓｅｒｐｉｎａ１）遺伝子の発現を阻害する二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）剤であって、二本鎖領域を形成するセンス鎖およびアンチセンス鎖を含み、
ここで前記センス鎖が、ヌクレオチド配列５’−ｃｓｕｓｕｃｕｕＡｆａＵｆＧｆＡｆｕｕｇａａｃａａａａ−３’（配列番号３３）を含み、かつ前記アンチセンス鎖が、ヌクレオチド配列５’−ｕｓＵｆｓｕｕｇｕ（Ｔｇｎ）ｃａａｕｃａＵｆｕＡｆａｇａａｇｓａｓｃ−３’（配列番号３４）を含み、
ここでａ、ｇ、ｃ、およびｕは各々、２’−Ｏ−メチル（２’−ＯＭｅ）Ａ、Ｇ、Ｃ、およびＵであり；Ａｆ、Ｇｆ、ＣｆおよびＵｆは各々、２’−フルオロＡ、Ｇ、ＣおよびＵであり；ｓは、ホスホロチオエート結合であり；（Ｔｇｎ）は、チミジン−グリコール核酸（ＧＮＡ）Ｓ−異性体であり；かつ
ここで前記センス鎖の３’末端が以下の模式図
【化４】
2020500929.tif 000004
（式中、ＸはＯである）
に示されるようなリガンドにコンジュゲートされる、ｄｓＲＮＡ剤。
【請求項１８】
請求項１、２、１６または１７のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡ剤を有する単離細胞。
【請求項１９】
請求項１、２、１６または１７のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡ剤を含む医薬組成物。
【請求項２０】
インビトロで細胞におけるＳｅｒｐｉｎａ１発現を阻害する方法であって、前記細胞を、請求項１、２、１６または１７のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡ剤、または請求項１９に記載の医薬組成物と接触させ、それにより前記細胞における前記Ｓｅｒｐｉｎａ１遺伝子の発現を阻害することを含む、方法。
【請求項２１】
Ｓｅｒｐｉｎａ１関連疾患を有する対象を治療するための、請求項１、２、１６または１７のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡ剤または請求項１９に記載の医薬組成物、の使用。
【請求項２２】
前記対象がヒトである、請求項２１に記載の使用。
【請求項２３】
前記Ｓｅｒｐｉｎａ１関連疾患が、肝障害である、請求項２１に記載の使用。
【請求項２４】
前記肝障害が、慢性肝疾患、肝臓炎、硬変症、肝線維症、および／または肝細胞がんからなる群から選択される、請求項２３に記載の使用。
【請求項２５】
前記医薬組成物のｄｓＲＮＡ剤が、皮下投与に適している、請求項２１に記載の使用。
【請求項２６】
Ｓｅｒｐｉｎａ１欠損変異体を有する対象における肝細胞がんの発現を阻害するための、請求項１、２、１６または１７のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡ剤または請求項１９に記載の医薬組成物、の使用。
【請求項２７】
前記対象がヒトである、請求項２６に記載の使用。
【請求項２８】
前記医薬組成物のｄｓＲＮＡ剤が、皮下投与に適している、請求項２６に記載の方法。
【請求項２９】
Ｓｅｒｐｉｎａ１欠損変異体を有する対象の肝臓におけるミスフォールドしたＳｅｒｐｉｎａ１の蓄積を低減するための、請求項１、２、１６または１７のいずれか一項に記載のｄｓＲＮＡ剤または請求項１９に記載の医薬組成物、の使用。
【請求項３０】
前記対象がヒトである、請求項２９に記載の使用。
【請求項３１】
前記医薬組成物のｄｓＲＮＡ剤が、皮下投与に適している、請求項２９に記載の使用。