【手続補正書】
【提出日】令和3年2月19日(2021.2.19)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
リボスイッチを含む、標的遺伝子の発現の調節のためのポリヌクレオチドカセットであって、リボスイッチが、エフェクターステムループ及びアプタマーを含み、エフェクターステムが、ポリアデニル化シグナルを含み、アプタマーとエフェクターステムループとが、アプタマーステムの非共有アームに及びエフェクターステムループの非共有アームに相補的な配列を含む択一的に共有されるステムアームによって連結されている、ポリヌクレオチドカセット。
【請求項２】
アプタマーが、小分子リガンドに結合する、請求項1に記載のポリヌクレオチドカセット。
【請求項３】
アプタマーステムの配列に及びエフェクターステムループの配列に相補的である、択一的に共有されるステムアームの部分が、4〜8個のヌクレオチド、5〜7個のヌクレオチド、5個のヌクレオチド又は6個のヌクレオチドである、請求項1に記載のポリヌクレオチドカセット。
【請求項４】
アプタマーステムが、6〜12塩基対、7〜10塩基対、8塩基対又は9塩基対である、請求項1に記載のポリヌクレオチドカセット。
【請求項５】
エフェクターステムループのステムが、4〜24塩基対、5〜20塩基対、9〜14塩基対、9塩基対、10塩基対、11塩基対又は12塩基対である、請求項1に記載のポリヌクレオチドカセット。
【請求項６】
択一的に共有されるステムアームが、3'アプタマーステムアームのすべて又は一部及びエフェクターステムの5'アームのすべて又は一部を含むように、エフェクターステムループが、アプタマーの3'に位置する、請求項1から5のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドカセット。
【請求項７】
ポリアデニル化シグナルが、AATAAA又はATTAAAである、請求項6に記載のポリヌクレオチドカセット。
【請求項８】
択一的に共有されるステムアームが、5'アプタマーステムアームのすべて又は一部及びエフェクターステムの3'アームのすべて又は一部を含むように、エフェクターステムループが、アプタマーの5'に位置する、請求項1から5のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドカセット。
【請求項９】
ポリアデニル化シグナルが、下流エレメント(DSE)である、請求項8に記載のポリヌクレオチドカセット。
【請求項１０】
第1のリボスイッチのエフェクターステムループが、ポリアデニル化シグナルAATAAA又はATTAAAのすべて又は部分を含み、第2のリボスイッチのエフェクターステムループが、下流エレメント(DSE)のすべて又は部分を含む、請求項1から5のいずれか一項に記載の2つのリボスイッチを含むポリヌクレオチドカセット。
【請求項１１】
2つのリボスイッチ各々が、同じリガンドに結合するアプタマーを含む、請求項10に記載のポリヌクレオチドカセット。
【請求項１２】
2つのリボスイッチが、異なるリガンドに結合する異なるアプタマーを含む、請求項10に記載のポリヌクレオチドカセット。
【請求項１３】
標的遺伝子の発現を調整する方法であって:
a.1つ又は複数の、請求項1から5のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドカセットを標的遺伝子の3'非翻訳領域に挿入する工程と、
b.ポリヌクレオチドカセットを含む標的遺伝子を細胞に導入する工程と、
c.細胞を、標的遺伝子の発現を増大するのに有効な量で、アプタマーに結合するリガンドに曝露する工程と
を含む方法。
【請求項１４】
リガンドが、小分子である、請求項13に記載の方法。
【請求項１５】
択一的に共有されるステムアームが、3'アプタマーステムアームのすべて又は一部及びエフェクターステムの5'アームのすべて又は一部を含むように、エフェクターステムループが、アプタマーの3'に位置する、請求項13に記載の方法。
【請求項１６】
ポリアデニル化シグナルが、AATAAA又はATTAAAである、請求項15に記載の方法。
【請求項１７】
択一的に共有されるステムアームが、5'アプタマーステムアームのすべて又は一部及びエフェクターステムの3'アームのすべて又は一部を含むように、エフェクターステムループが、アプタマーの5'に位置する、請求項13に記載の方法。
【請求項１８】
ポリアデニル化シグナルが、下流エレメント(DSE)である、請求項17に記載のポリヌクレオチドカセット。
【請求項１９】
2つのリボスイッチが、標的遺伝子の3'UTRに挿入され、第1のリボスイッチのエフェクターステムループが、ポリアデニル化シグナルAATAAA又はATTAAAのすべて又は部分を含み、第2のリボスイッチのエフェクターステムループが、下流エレメント(DSE)のすべて又は部分を含む、請求項13又は14に記載の方法。
【請求項２０】
2つのリボスイッチ各々が、同じリガンドに結合するアプタマーを含む、請求項19に記載の方法。
【請求項２１】
2つのリボスイッチが、異なるリガンドに結合する異なるアプタマーを含む、請求項19に記載の方法。
【請求項２２】
2つ又はそれよりも多いポリヌクレオチドカセットが、同じアプタマーを含む、請求項19に記載の方法。
【請求項２３】
ポリヌクレオチドカセットを含む標的遺伝子が、標的遺伝子の発現のためのベクターに組み込まれる、請求項13から22のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２４】
標的遺伝子が、アプタマーが媒介する選択的スプライシングの調節によって標的遺伝子発現を調整する遺伝子調節カセットを更に含む、請求項13から22のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２５】
ベクターが、ウイルスベクターである、請求項23に記載の方法。
【請求項２６】
ウイルスベクターが、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター及びレンチウイルスベクターからなる群から選択される、請求項25に記載の方法。
【請求項２７】
請求項1から12のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドカセットを含有する標的遺伝子を含むベクター。
【請求項２８】
ウイルスベクターである、請求項27に記載のベクター。
【請求項２９】
ウイルスベクターが、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター及びレンチウイルスベクターからなる群から選択される、請求項28に記載のベクター。
【請求項３０】
標的遺伝子が、アプタマーが媒介する選択的スプライシングの調節によって標的遺伝子発現を調整する遺伝子調節カセットを更に含む、請求項27に記載のベクター。
【請求項３１】
請求項1から4及び6から9のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドカセット又は請求項13若しくは15に記載のベクターを含む、がん、免疫障害、代謝疾患、PNH等の奇病、眼球血管新生、乾燥AMD、I型糖尿病、II型糖尿病、代謝症候群、成長障害若しくは成長ホルモン不足、慢性腎疾患を原因とする貧血、骨髄形成異常症を原因とする貧血、がん化学療法を原因とする貧血、嚢胞性線維症、血友病、筋ジストロフィー、地中海貧血症、鎌状赤血球貧血症、血友病A又は血友病Bの治療剤。
【請求項３２】
請求項1から4及び6から9のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドカセット又は請求項13若しくは15に記載のベクターを含む、標的遺伝子の発現の調節剤。
【請求項３３】
請求項1から4及び6から9のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドカセット又は請求項13若しくは15に記載のベクターを含む、医薬。
【請求項３４】
請求項1から4及び6から9のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドカセット又は請求項13若しくは15に記載のベクター、及び薬学的に許容される担体を含む、医薬組成物。