【手続補正書】
【提出日】平成17年5月11日(2005.5.11)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（Ａ）コエンザイムＱ10５〜４０質量％、（Ｂ）平均重合度１０のポリグリセリンとステアリン酸、オレイン酸またはリノール酸のモノエステル５〜３０質量％、（Ｃ）平均重合度３〜６のポリグリセリンとステアリン酸、オレイン酸またはリノール酸のモノ、ジ、トリまたはペンタエステル１〜１８質量％、および、（Ｄ）水、からなり、かつ平均粒子径が３８０ｎｍ以下であることを特徴とする水溶性組成物。
【請求項２】
さらに（Ｅ）可溶化助剤１０〜８０質量％を含む、請求項１記載の水溶性組成物。
【請求項３】
可溶化助剤が、ガム質、糖類または多価アルコールである、請求項２記載の水溶性組成物。
【請求項４】
成分（Ａ）／｛（Ｂ）＋（Ｃ）｝の質量比が１／５〜０.７であり、且つ成分（Ｂ）／（Ｃ）の質量比が１／０.２〜１である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の水溶性組成物。
【請求項５】
平均粒子径が１１０ｎｍ以下である請求項１〜４のいずれか１項に記載の水溶性組成物。
【請求項６】
次の工程：
（Ｉ）成分（Ｂ）、（Ｃ）および（Ｄ）、場合により成分（Ｅ）を加熱溶解する、
（II）成分（Ａ）を添加して混合する、次いで
（III）ホモミキサーを用いて攪拌羽の周速７５０ｍ／分以上のせん断力により均質化処理する、および／または
（IV）均質機を用いて９８ＭＰａ（１,０００ｋｇ／ｃｍ2）以上の均質化圧力により均質化処理する
ことからなり、上記工程により平均粒径を３８０ｎｍ以下にすることを特徴とする、請求項１〜４のいずれか１項に記載のコエンザイムＱ10を含有する水溶性組成物の製造方法。
【請求項７】
工程（III）もしくは（IV）を繰り返す、または工程（III）を行い、次いで工程（IV）を行う、請求項６記載の製造方法。
【請求項８】
平均粒径を１１０ｎｍ以下にする請求項６又は７記載の製造方法。
【請求項９】
請求項１〜５のいずれか１項に記載のコエンザイムＱ10を含有する水溶性組成物を含む医薬、飲食品、化粧料または飼料。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４４】
【表１】
2004196781.tif 000001
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５０】
【表２】
2004196781.tif 000002
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５３】
実施例１３
テトラグリセリンモノステアレート９質量部、デカグリセリンモノステアレート６質量部、グリセリン５質量部、水７０質量部を加温して完全に溶解し、水相部とした。油相部としてコエンザイムＱ10１０質量部を先の水相部へかき混ぜながら徐々に加えて、次いでホモミキサーを用いて５分間処理を行ない、平均粒径３８０ｎｍのコエンザイムＱ10の分散液を得た。製造直後の乳化状態は良好であったが、２週間後では一部上部に分離が見られた。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５４】
比較例５  コエンザイムＱ10を含有する乳化粉末
コエンザイムＱ10１００ｇを加温溶解し、予め６０℃に加温溶解したショ糖脂肪酸エステル２００ｇに添加し、乳化させる。さらに高圧ホモジナイザー（三和機械(株）製Ｈ−１１型）を通過させ、流動層型造粒装置（フロイント産業製ＦＬＯ−ＭＩＮＩ）にて乳糖１０００ｇ、デンプン７００ｇからなる賦形剤混合物を流動させた状態下でこの液を噴霧し、橙黄色の粉末〜顆粒状の組成物を得た。得られた粉末組成物１ｇを１００ｇの水中に投入すると、速やかに分散溶解し、淡黄色のコエンザイムＱ10分散液が得られた。この分散液のコエンザイムＱ10分散粒子径を測定すると５０％粒子径が２.６２μmであった。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５５】
比較例６  コエンザイムＱ10を含有するソフトカプセル
コエンザイムＱ10６０ｇ、大豆油２４０ｇ、グリセリン脂肪酸エステル（ココナードＭＴ）３００ｇを加温溶解し、６０℃でコエンザイムＱ10の溶解を確認後２５℃付近まで冷却し、カプセル充填液を得た。次いで、慣用の技術を用いて、１包当たりコエンザイムＱ10  ３０ｍｇを含有するソフトカプセルを得た。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５６】
比較試験１
前記実施例２と前記実施例１３で得られた水溶性組成物を用いて、動物実験によりコエンザイムＱ10の吸収性の比較を行った。
＜動物吸収実験＞
１群３頭のビーグル犬（雄）２群を用い、投与前日の夕方５時以降から絶食とし、実施例２で得られたコエンザイムＱ10可溶化液と前記比較例５で得られたコエンザイムＱ10の分散液をそれぞれ１頭当たり、９０ｍｇ／ｄｏｇの投与量となるようにハードカプセルに詰めたもの単回強制投与した。投与後２４時間まで、定期的に血液を採取して血漿中のコエンザイムＱ10濃度の推移を調べた。結果を表３に示す。
＜血漿中のコエンザイムＱ10濃度の測定方法＞
測定は、ＨＰＬＣを用い下記の条件でおこなった。なお、血清中には、酸化型および還元型のコエンザイムＱ10が存在するので、試料中に酸化鉄を加えて酸化型とし、ＨＰＬＣで測定した。
＜ＨＰＬＣの条件＞
カラム；Ｎｕｃｌｅｏｓｉｌ５Ｃ１８、４.６ｍｍφ×２５ｃｍ、
移動相；エタノール／アセトニトリル（＝６０／４０容量比）、
流速；１ｍｌ／分、
検出器；紫外分光光度計、検出波長２７５ｎｍ。
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５７】
【表３】
2004196781.tif 000003
【手続補正９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５９】
以上の結果から、実施例２で得られた粒径が小さい水溶性組成物を摂取した場合には、実施例１３の分散液に比べ、生体内吸収性が有意に高かった。これまで通常絶食時では、コエンザイムＱ10の吸収性が悪いと考えられていたが、粒径の小さいコエンザイムＱ10水溶性組成物を用いると吸収性が顕著に改善されることがわかる。
【手続補正１０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６０】
比較試験２  絶食時摂取における吸収性試験
実施例２の水性組成物、比較例５の乳化粉末組成物、比較例６のソフトカプセルについて、それぞれ３人の被験者による経口投与にて絶食時摂取における吸収試験を行った。
前日の２１時以降絶食とし、翌日朝８時に絶食条件にてコエンザイムＱ10を一人あたり６０ｍｇを経ロ投与した。経口投与を行った。投与後、２、４、６、８、１２、２４時間後に血液を採取してコエンザイムＱ10の血中濃度を測定した。
なお、測定はＨＰＬＣを用い下記の条件で行った。また血清中には酸化型および還元型のコエンザイムＱ１０が存在するので、両者を測定しその合計を求めた。カラム：Ｎｈｄｅｏｓｉｌ５Ｃ１８  ４.６ｍｍ＊２５ｃｍ
移動相：エタノ一ル：アセトニトリル（５５：４５）
流速：  １ｍ１／分
検出器：紫外分光光度計  ２７５ｎｍ
【手続補正１１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６１】
その結果、比較例５の乳化粉末組成物と比較例６のソフトカプセルでは投与した後の血中濃度の上昇はごく僅かでほとんど吸収されないのに対して、実施例２の水溶性組成物は絶食下で経口投与しても確実にしかも高濃度にコエンザイムＱ10が生体内に吸収されることが分かった。今までの知見では、食事と共に摂取しない限りコエンザイムＱ10の吸収は得られないとされていたが、本発明の水溶性組成物を摂取することにより、絶食下でも吸収性が顕著に改善されることが確認された。これらの結果を図１に示す。
【手続補正１２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６２】
比較試験３  食後摂取における吸収性試験
実施例２の水性組成物、比較例５の乳化粉末組成物、比較例６のソフトカプセルについて、それぞれ３人の被験者による経口投与にて食後摂取における吸収試験を行った。
前日、２２時までに食事を済ませ、翌日朝に血液を採取した後、朝食を摂取し、その１０分以内にコエンザイムＱ10６０ｍｇを経口投与した。投与後、２、４、６、８、１２、２４時間後に血液を採取してコエンザイムＱ10の血中濃度を測定した。なお、血中濃度は、比較試験２と同様に測定した。
【手続補正１３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６３】
その結果、比較例５の乳化粉末組成物と比較例６のソフトカプセルでは、摂取後２時間以降になって血中濃度が上昇し始めるが、実施例２の水溶組成物では摂取後直ぐに血中濃度が上昇し始め、吸収量の増加の立ち上がりが比較例と比較して非常に速いことが分かった。これは、本発明の水溶性組成物は、その吸収性が非常に優れていることを示す。これらの結果を図２に示す。