【手続補正書】
【提出日】令和3年11月2日(2021.11.2)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の工程：
（a）患者の血中の単位体積当たりのTregの数を得る工程；および
（b）該数が、単位体積当たりのTregの処置閾値を超えていることを確認する工程
を含む方法によって選択される癌を有する患者に、抗原を負荷されたPME-CD40L成熟DCを含む樹状細胞ワクチンを投与するように用いられることを特徴とする、該樹状細胞ワクチンを含む、癌を処置するための医薬。
【請求項２】
前記DCが、前記抗原をコードするRNAによるトランスフェクションによって前記抗原を負荷されている、請求項１記載の医薬。
【請求項３】
前記RNAが、前記患者の癌細胞から調製されている、請求項2記載の医薬。
【請求項４】
前記Treg細胞が、CD4+、CD25+、およびFoxP3+またはCD127-の一方として同定される、請求項1乃至3のいずれか一項記載の医薬。
【請求項５】
前記Treg細胞が、CD4+、CD25+、FoxP3+、およびCD127-として同定される、請求項4記載の医薬。
【請求項６】
前記閾値が、500個のTreg/100マイクロリットル全血または同等の測定値を超える、請求項1乃至5のいずれか一項記載の医薬。
【請求項７】
前記閾値が、650個のTreg/100マイクロリットル全血または同等の測定値を超える、請求項6記載の医薬。
【請求項８】
前記癌が、腎細胞癌であり、および前記閾値が、650個のTreg/100マイクロリットル全血を超える、請求項7記載の医薬。
【請求項９】
以下の工程を含む、患者において処置によって免疫応答が誘導されたか否かを判定する方法：
（a）ベースライン読み取り値を確立するために、患者から採取された血液試料中に存在するTreg細胞および/またはTreg/eff細胞の個数を定量する工程；
（b）処置後読み取り値を確立するために、抗原を負荷されたPME-CD40L成熟DCを含む樹状細胞ワクチンで処置を受けた該患者から採取された血液試料中に存在するTreg細胞および/またはTreg/eff細胞の個数を定量する工程；および
（c）該患者の血液試料中に存在するTreg細胞および/またはTreg/eff細胞の頻度または量が増加したか否かを判定するために、該ベースライン読み取り値と該処置後読み取り値とを比較する工程であって、
Treg細胞の頻度もしくは量の顕著な減少および/またはTreg/eff細胞の頻度もしくは量の顕著な増加が、該患者において免疫応答が誘導されたことを示す、
工程。
【請求項１０】
前記PME-CD40L成熟DCが、自己末梢血単核細胞（PBMC）からインビトロで調製される、請求項9記載の方法。
【請求項１１】
以下の工程：
（a）患者から採取された血液試料中で、
（i）血漿リンパ球値；
（ii）CD8+CD28+および/もしくはCD8+CD28+PD-1+である細胞ならびに/またはIFNγを分泌するCD8+CD28+PD-1+細胞の数；
（iii）TregであるCD4+細胞のパーセント；
（iv）血小板数；
（v）C反応性タンパク質値；
（vi）リンパ球/単球比；
（vii）単球数（Elutra前）；および
（viii）単球/白血球比
からなるリストより選択される1種または複数種の処置指標についての測定値または値を得る工程；ならびに
（b）該測定値または値が、適宜、処置閾値より高いまたは低いことを確認する工程
を含む方法によって選択される患者に、抗原を負荷されたPME-CD40L成熟DCを含む樹状細胞ワクチンを投与するように用いられることを特徴とする、該樹状細胞ワクチンを含む、樹状細胞治療のための医薬。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２０】
いくつかの態様において、樹状細胞治療による患者の処置は、例えば、患者の血中の単位体積当たりのTregの個数の低下によって測定されるように、免疫応答を刺激する。本発明は、処置後の患者における免疫応答の刺激を評価する方法、例えば、以下にさらに記載されるように、Treg/eff細胞のような細胞集団の増加を検出する方法も提供する。
[本発明1001]
以下の工程を含む、癌患者を樹状細胞ワクチンによって処置するための方法：
（a）患者の血中の単位体積当たりのTregの数を得る工程；
（b）該数が、単位体積当たりのTregの処置閾値を超えていることを確認する工程；および
（c）樹状細胞ワクチンを該患者へ投与する工程。
[本発明1002]
前記樹状細胞ワクチンが、抗原を負荷されたPME-CD40L成熟DCを含む、本発明1001の方法。
[本発明1003]
前記DCが、前記抗原をコードするRNAによるトランスフェクションによって前記抗原を負荷されている、本発明1002の方法。
[本発明1004]
前記RNAが前記患者の癌細胞から調製されている、本発明1003の方法。
[本発明1005]
前記Treg細胞が、CD4+、CD25+、およびFoxP3+またはCD127-の一方として同定される、本発明1001の方法。
[本発明1006]
前記Treg細胞が、CD4+、CD25+、FoxP3+、およびCD127-として同定される、本発明1001の方法。
[本発明1007]
前記閾値が、500個のTreg/100マイクロリットル全血または同等の測定値を超える、本発明1001の方法。
[本発明1008]
前記閾値が、650個のTreg/100マイクロリットル全血または同等の測定値を超える、本発明1001の方法。
[本発明1009]
少なくとも650個のTreg/100マイクロリットル全血の全血Treg数を有する患者において使用するための、腎細胞癌の処置のための樹状細胞ワクチン。
[本発明1010]
以下の工程を含む、患者において処置によって免疫応答が誘導されたか否かを判定する方法：
（a）ベースライン読み取り値を確立するために、患者の血液試料中に存在するTreg細胞および/またはTreg/eff細胞の個数を定量化する工程；
（b）処置後読み取り値を確立するために、該患者へ処置を施した後、該患者の血液試料中に存在するTreg細胞および/またはTreg/eff細胞の個数を定量化する工程；
（c）該患者の血液試料中に存在するTreg細胞および/またはTreg/eff細胞の頻度または量が増加したか否かを判定するために、該ベースライン読み取り値と該処置後読み取り値とを比較する工程であって、
Treg細胞の頻度もしくは量の顕著な減少および/またはTreg/eff細胞の頻度もしくは量の顕著な増加が、該患者において免疫応答が誘導されたことを示す、
工程。
[本発明1011]
前記処置が、インビトロで調製された自己成熟DCを前記患者へ投与することを含む、本発明1010の方法。
[本発明1012]
以下の工程を含む、患者へ樹状細胞治療を施すための方法：
（a）（i）血漿リンパ球値；
（ii）CD8+CD28+および/もしくはCD8+CD28+PD-1+である細胞ならびに/またはIFNγを分泌するCD8+CD28+PD-1+細胞の数；
（iii）TregであるCD4+細胞のパーセント；
（iv）血小板数；
（v）C反応性タンパク質値；
（vi）リンパ球/単球比；
（vii）単球数（Elutra前）；ならびに
（viii）単球/白血球比
からなるリストより選択される1種または複数種の処置指標についての測定値または値を得る工程；
（b）該測定値または値が、適宜、処置閾値より高いまたは低いことを確認する工程；ならびに
（c）樹状細胞ワクチンを該患者へ投与する工程。