【手続補正書】
【提出日】令和3年3月17日(2021.3.17)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
レンチウイルスベクターであって、
（ａ）ＨＩＶ−１株ＮＬ４−３の５’長末端反復（ＬＴＲ）と、
（ｂ）プサイ（Ψ）パッケージングシグナルと、
（ｃ）ＨＩＶ−１株ＮＬ４−３のセントラルポリプリン配列ｃＰＰＴ／ＦＬＡＰエレメントと、
（ｄ）ＲＮＡ核外輸送因子と、
（ｅ）ＨＩＶ−１  ｅｎｖスプライスアクセプター配列と、
（ｆ）ヒトＢＣＬ１１Ａ  ｍＲＮＡにハイブリダイズするアンチセンス配列を含むｓｈｍｉＲをコードするポリヌクレオチドに作動可能に連結された赤血球特異的プロモーターと、
（ｇ）ＨＩＶ−１株ＮＬ４−３の３’ＬＴＲと、を含む、レンチウイルスベクター。
【請求項２】
前記５’ＬＴＲが、改変された５’ＬＴＲである、請求項１に記載のレンチウイルスベクター。
【請求項３】
前記改変された５’ＬＴＲがＣＭＶプロモーターを含む、請求項２に記載のレンチウイルスベクター。
【請求項４】
前記ＨＩＶ−１株ＮＬ４−３の３’ ＬＴＲが自己不活性化（ＳＩＮ）ＬＴＲである、請求項１〜３のいずれか一項に記載のレンチウイルスベクター。
【請求項５】
前記ＲＮＡ核外輸送因子が、ＨＩＶ−１株ＨＸＢ３由来のＲＲＥ  ＲＮＡ核外輸送因子である、請求項１〜４のいずれか一項に記載のレンチウイルスベクター。
【請求項６】
前記赤血球特異的プロモーターが、ヒトβグロビンプロモーターを含む、請求項１〜５のいずれか一項に記載のレンチウイルスベクター。
【請求項７】
ヒトβグロビンＬＣＲをさらに含む、請求項１〜６のいずれか一項に記載のレンチウイルスベクター。
【請求項８】
前記ヒトβグロビンＬＣＲが、ＨＳ３およびＨＳ２  ＤＮＡｓｅ  Ｉ過敏性部位を含む、請求項７に記載のレンチウイルスベクター。
【請求項９】
前記ＬＣＲが、ＨＳ４  ＤＮＡｓｅ  Ｉ過敏性部位を欠く、請求項７または請求項８に記載のレンチウイルスベクター。
【請求項１０】
ａ．前記ＨＳ４  ＤＮＡｓｅ  Ｉ過敏性部位が、約６３８ヌクレオチドである；および／または
ｂ．前記ＨＳ４  ＤＮＡｓｅ  Ｉ過敏性部位が、約８４７ヌクレオチドである、請求項８または請求項９に記載のレンチウイルスベクター。
【請求項１１】
ａ．１つ以上の変異ＡＴＧ開始コドンを含むｇａｇタンパク質をコードする約４５９ヌクレオチドのポリヌクレオチド；および／または
ｂ．ＨＩＶ−１  ｅｎｖスプライスアクセプター配列と前記ｓｈｍｉＲとの間に配置された合成ポリ（Ａ）配列
をさらに含む、請求項１〜１０のいずれか一項に記載のレンチウイルスベクター。
【請求項１２】
ａ．前記ｃＰＰＴ／ＦＬＡＰエレメントは約３８１ヌクレオチドである；
ｂ．前記ＨＩＶ−１  ｅｎｖスプライスアクセプター配列は約１７６ヌクレオチドである；および／または
ｃ．前記ｓｈｍｉＲは、配列番号１もしくは配列番号２に記載の配列を含む、請求項１〜１１のいずれか一項に記載のレンチウイルスベクター。
【請求項１３】
前記ベクターが、前記レンチウイルスゲノムＲＮＡの転写と比較して逆配向である、前記赤血球特異的プロモーターと、前記ｓｈｍｉＲをコードする前記ポリヌクレオチドとを含む発現カセットを含む、請求項１〜１２のいずれか一項に記載のレンチウイルスベクター。
【請求項１４】
前記ベクターが、配列番号４に記載のポリヌクレオチド配列を含む、請求項１〜１３のいずれか一項に記載のレンチウイルスベクター。
【請求項１５】
請求項１〜１４のいずれか一項に記載のレンチウイルスベクターを含む細胞であって、前記細胞が、造血幹細胞または前駆細胞である、細胞。
【請求項１６】
請求項１〜１５のいずれか一項に記載のレンチウイルスベクターを含む細胞であって、前記細胞が、ＣＤ３４＋、ＣＤ１３３＋、および／またはＣＤ３４＋ＣＤ３８ＬｏＣＤ９０＋ＣＤ４５ＲＡ−である、細胞。
【請求項１７】
請求項１５または請求項１６に記載の複数の細胞を含む細胞集団を含む、組成物。
【請求項１８】
対象におけるヘモグロビン異常症を治療する際に使用するための、請求項１７に記載の組成物。
【請求項１９】
前記ヘモグロビン異常症が、αサラセミア、βサラセミアまたは鎌状赤血球症である、請求項１８に記載の組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００７７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００７７】
特定の実施形態において、造血幹細胞集団は、静脈内に投与される。
特定の実施形態では、例えば、以下が提供される：
（項目１）
ＨＩＶ−１株ＮＬ４−３の５’長末端反復（ＬＴＲ）と、ヒトＢＣＬ１１Ａ  ｍＲＮＡにハイブリダイズするアンチセンス配列を含むｓｈｍｉＲをコードするポリヌクレオチドに作動可能に連結された赤血球特異的プロモーターと、ＨＩＶ−１株ＮＬ４−３の３’ＬＴＲと、を含む、レンチウイルスベクター。
（項目２）
５’から３’に向かって、プサイ（Ψ）パッケージングシグナルと、ＨＩＶ−１株ＮＬ４−３のセントラルポリプリン配列（ｃＰＰＴ）／ＦＬＡＰエレメントと、ＲＮＡ核外輸送因子と、ＨＩＶ−１  ｅｎｖスプライスアクセプター配列と、をさらに含む、項目１に記載のレンチウイルスベクター。
（項目３）
改変された５’ＬＴＲと、ＨＩＶ−１の３’ＳＩＮ  ＬＴＲと、をさらに含む、項目１または項目２に記載のレンチウイルスベクター。
（項目４）
改変された５’ＬＴＲであって、前記改変された５’ＬＴＲのプロモーターがＣＭＶプロモーターで置換されている、改変された５’ＬＴＲと、ＨＩＶ−１の３’ＳＩＮ  ＬＴＲと、をさらに含む、項目１〜３のいずれか一項に記載のレンチウイルスベクター。
（項目５）
レンチウイルスベクターであって、
（ａ）ＨＩＶ−１の５’ＬＴＲと、
（ｂ）プサイ（Ψ）パッケージングシグナルと、
（ｃ）レンチウイルスｃＰＰＴ／ＦＬＡＰエレメントと、
（ｄ）ＲＮＡ核外輸送因子と、
（ｅ）ＨＩＶ−１  ｅｎｖスプライスアクセプター配列と、
（ｆ）ヒトＢＣＬ１１Ａ  ｍＲＮＡにハイブリダイズするアンチセンス配列をコードするｓｈｍｉＲに作動可能に連結された赤血球特異的プロモーターと、
（ｇ）ＨＩＶ−１の３’ＬＴＲと、を含む、レンチウイルスベクター。
（項目６）
改変された５’ＬＴＲであって、前記改変された５’ＬＴＲのプロモーターがＣＭＶプロモーターで置換されている、改変された５’ＬＴＲと、ＨＩＶ−１の３’ＳＩＮ  ＬＴＲと、をさらに含む、項目５に記載のレンチウイルスベクター。
（項目７）
ＨＩＶ−１株ＨＸＢ３由来のＲＲＥ  ＲＮＡ核外輸送因子をさらに含む、項目１〜６のいずれか一項に記載のレンチウイルスベクター。
（項目８）
前記赤血球特異的プロモーターが、βグロビンプロモーターを含む、項目１〜７のいずれか一項に記載のレンチウイルスベクター。
（項目９）
前記赤血球特異的プロモーターが、ヒトβグロビンプロモーターを含む、項目１〜８のいずれか一項に記載のレンチウイルスベクター。
（項目１０）
βグロビンＬＣＲをさらに含む、項目１〜９のいずれか一項に記載のレンチウイルスベクター。
（項目１１）
ヒトβグロビンＬＣＲをさらに含む、項目１〜１０のいずれか一項に記載のレンチウイルスベクター。
（項目１２）
自己不活性化（ＳＩＮ）レンチウイルスベクターであって、
（ａ）改変されたＨＩＶ−１株ＮＬ４−３の５’ＬＴＲであって、前記改変された５’ＬＴＲのプロモーターがＣＭＶプロモーターで置換されている、改変されたＨＩＶ−１株ＮＬ４−３の５’ＬＴＲと、
（ｂ）プサイ（Ψ）パッケージングシグナルと、
（ｃ）ＨＩＶ−１株ＮＬ４−３のｃＰＰＴ／ＦＬＡＰエレメントと、
（ｄ）ＨＩＶ−１株ＨＸＢ３のＲＲＥ  ＲＮＡ核外輸送因子と、
（ｅ）ＨＩＶ−１株ＮＬ４−３  ｅｎｖスプライスアクセプター配列と、
（ｆ）ヒトＢＣＬ１１Ａ  ｍＲＮＡにハイブリダイズするアンチセンス配列をコードするｓｈｍｉＲに作動可能に連結されたβグロビンプロモーターと、
（ｇ）βグロビンＬＣＲと、
（ｇ）ＨＩＶ−１株ＮＬ４−３の３’ＳＩＮ  ＬＴＲと、を含む、自己不活性化（ＳＩＮ）レンチウイルスベクター。
（項目１３）
ＨＳ３およびＨＳ２  ＤＮＡｓｅ  Ｉ過敏性部位を含むヒトβグロビンＬＣＲをさらに含む、項目１〜１２のいずれか一項に記載のレンチウイルスベクター。
（項目１４）
ＨＳ３およびＨＳ２  ＤＮＡｓｅ  Ｉ過敏性部位を含むヒトβグロビンＬＣＲをさらに含むが、ＨＳ４  ＤＮＡｓｅ  Ｉ過敏性部位を欠く、項目１〜１３のいずれか一項に記載のレンチウイルスベクター。
（項目１５）
ｇａｇタンパク質をコードする約４５９ヌクレオチドのポリヌクレオチドをさらに含む、項目１〜１４のいずれか一項に記載のレンチウイルスベクター。
（項目１６）
１つ以上の変異ＡＴＧ配列を含む前記ｇａｇタンパク質をコードするポリヌクレオチドをさらに含む、項目１〜１５のいずれか一項に記載のレンチウイルスベクター。
（項目１７）
約１７６ヌクレオチドのＨＩＶ−１  ｅｎｖスプライスアクセプター配列をさらに含む、項目１〜１６のいずれか一項に記載のレンチウイルスベクター。
（項目１８）
約３８１ヌクレオチドのｃＰＰＴ／ＦＬＡＰエレメントをさらに含む、項目１〜１７のいずれか一項に記載のレンチウイルスベクター。
（項目１９）
約６３８ヌクレオチドのＨＳ２  ＤＮＡｓｅ  Ｉ過敏性部位をさらに含む、項目１〜１８のいずれか一項に記載のレンチウイルスベクター。
（項目２０）
約８４７ヌクレオチドのＨＳ３  ＤＮＡｓｅ  Ｉ過敏性部位をさらに含む、項目１〜１９のいずれか一項に記載のレンチウイルスベクター。
（項目２１）
ＨＩＶ−１  ｅｎｖスプライスアクセプター配列と前記ｓｈｍｉＲとの間に配置された合成ポリ（Ａ）配列をさらに含む、項目１〜２０のいずれか一項に記載のレンチウイルスベクター。
（項目２２）
前記ｓｈｍｉＲが、配列番号１に記載の配列をコードする、項目１〜２１のいずれか一項に記載のレンチウイルスベクター。
（項目２３）
前記ｓｈｍｉＲが、配列番号２に記載のガイド鎖配列を含む、項目１〜２２のいずれか一項に記載のレンチウイルスベクター。
（項目２４）
前記ｓｈｍｉＲが、配列番号３に記載の標的配列にハイブリダイズするガイド鎖配列を含む、項目１〜２３のいずれか一項に記載のレンチウイルスベクター。
（項目２５）
前記赤血球特異的プロモーターと、前記ｓｈｍｉＲをコードする前記ポリヌクレオチドとを含む発現カセットが、前記レンチウイルスゲノムＲＮＡの転写と比較して逆配向である、項目１〜２４のいずれか一項に記載のレンチウイルスベクター。
（項目２６）
配列番号４に記載のポリヌクレオチド配列を含む、レンチウイルス導入ベクター。
（項目２７）
項目１〜２６のいずれか一項に記載のレンチウイルスベクターを含む、細胞。
（項目２８）
ＨＩＶ−１のｇａｇおよびｐｏｌをコードする１つ以上のポリヌクレオチドと、ＶＳＶ−Ｇと、項目１〜２６のいずれか一項に記載のレンチウイルスベクターと、を含む、細胞。
（項目２９）
項目２８に記載の細胞から産生された、レンチウイルスベクター粒子。
（項目３０）
項目１〜２６のいずれか一項に記載のレンチウイルスベクターで形質導入された、細胞。
（項目３１）
前記細胞が、ポロキサマー２８８、ポロキサマー３３５、ポロキサマー３３８、およびポロキサマー４０７からなる群から選択される有効量のポロキサマー、ならびにＰＧＥ２受容体アゴニストの存在下で形質導入される、項目３０に記載の細胞。
（項目３２）
項目２９に記載のレンチウイルスベクター粒子で形質導入された、細胞。
（項目３３）
前記細胞が、ポロキサマー２８８、ポロキサマー３３５、ポロキサマー３３８、およびポロキサマー４０７からなる群から選択される有効量のポロキサマー、ならびにＰＧＥ２受容体アゴニストの存在下で形質導入される、項目３２に記載の細胞。
（項目３４）
前記細胞が、造血幹細胞または造血前駆細胞である、項目３０〜３３のいずれか一項に記載の細胞。
（項目３５）
前記細胞が、造血幹細胞または前駆細胞である、項目３０〜３４のいずれか一項に記載の細胞。
（項目３６）
前記細胞が、ＣＤ３４＋である、項目３０〜３５のいずれか一項に記載の細胞。
（項目３７）
前記細胞が、ＣＤ１３３＋である、項目３０〜３６のいずれか一項に記載の細胞。
（項目３８）
前記細胞が、ＣＤ３４＋ＣＤ３８ＬｏＣＤ９０＋ＣＤ４５ＲＡ−である、項目３０〜３７のいずれか一項に記載の細胞。
（項目３９）
前記細胞が、ヘモグロビン異常症に関連する１つ以上の変異βグロビン対立遺伝子を含む、項目３０〜３８のいずれか一項に記載の細胞。
（項目４０）
前記細胞が、βＥ／β０、βＣ／β０、β０／β０、βＥ／βＥ、βＣ／β＋、βＥ／β＋、β０／β＋、β＋／β＋、βＣ／βＣ、βＥ／βＳ、β０／βＳ、βＣ／βＳ、β＋／βＳおよびβＳ／βＳからなる群から選択される１つ以上の変異βグロビン対立遺伝子を含む、項目３０〜３９のいずれか一項に記載の細胞。
（項目４１）
前記細胞が、βＥ／β０、βＣ／β０、β０／β０、βＣ／βＣ、βＥ／βＥ、βＥ／β＋、βＣ／βＥ、βＣ／β＋、β０／β＋、およびβ＋／β＋からなる群から選択される１つ以上の変異βグロビン対立遺伝子を含む、項目３０〜３９のいずれか一項に記載の細胞。
（項目４２）
前記細胞が、βＥ／βＳ、β０／βＳ、βＣ／βＳ、β＋／βＳおよびβＳ／βＳからなる群から選択される１つ以上の変異βグロビン対立遺伝子を含む、項目３０〜３９のいずれか一項に記載の細胞。
（項目４３）
項目３０〜４２のいずれか一項に記載の複数の細胞を含む、細胞集団。
（項目４４）
項目３０〜４２のいずれか一項に記載の複数の細胞を含む細胞集団を含む、組成物。
（項目４５）
薬学的に許容される担体と、項目３０〜４２のいずれか一項に記載の複数の細胞を含む細胞集団と、を含む、薬学的組成物。
（項目４６）
造血細胞集団を形質導入する方法であって、項目１〜２６のいずれか一項に記載のレンチウイルスベクター、ポロキサマー、およびＰＧＥ２受容体アゴニストの存在下で、培地中で細胞を培養することを含む、方法。
（項目４７）
前記ポロキサマーが、ポロキサマー２８８、ポロキサマー３３５、ポロキサマー３３８、およびポロキサマー４０７からなる群から選択される、項目４６に記載の方法。
（項目４８）
前記ＰＧＥ２受容体アゴニストが、１５ｄ−ＰＧＪ２、Δ１２−ＰＧＪ２、２−ヒドロキシヘプタデカトリエン酸（ＨＨＴ）、トロンボキサンＡ２、トロンボキサンＢ２、イロプロスト、トレプロスチニル、トラボプロスト、カルボプロストトロメタミン、タフルプロスト、ラタノプロスト、ビマトプロスト、ウノプロストンイソプロピル、クロプロステノール、エストロファン、スーパーファン、ミソプロストール、ブタプロスト、リノール酸、１３（ｓ）−ＨＯＤＥ、ＬＹ１７１８８３、ミード酸、エイコサトリエン酸、エポキシエイコサトリエン酸、ＯＮＯ−２５９、Ｃａｙ１０３９、ＰＧＥ２受容体アゴニスト、１６，１６−ジメチルＰＧＥ２、１９（Ｒ）−ヒドロキシＰＧＥ２、１６，１６−ジメチルＰＧＥ２ｐ−（ｐ−アセトアミドベンズアミド）フェニルエステル、１１−デオキシ−１６，１６−ジメチルＰＧＥ２、９−デオキシ−９−メチレン−１６，１６−ジメチルＰＧＥ２、９−デオキシ−９−メチレンＰＧＥ２、スルプロストン、ＰＧＥ２セリノールアミド、ＰＧＥ２メチルエステル、１６−フェニルテトラノルＰＧＥ２、１５（Ｓ）−１５−メチルＰＧＥ２、および１５（Ｒ）−１５−メチルＰＧＥ２からなる群から選択される、項目４６または項目４７に記載の方法。
（項目４９）
前記ＰＧＥ２受容体アゴニストが、ＰＧＥ２または１６，１６−ジメチルＰＧＥ２である、項目４６〜４８のいずれか一項に記載の方法。
（項目５０）
前記レンチウイルスベクターが、約１０〜約３０のＭＯＩまたは約１０〜約２５のＭＯＩで存在する、項目４６〜４９のいずれか一項に記載の方法。
（項目５１）
前記レンチウイルスベクターが、約１０〜約２０のＭＯＩで存在する、項目４６〜５０のいずれか一項に記載の方法。
（項目５２）
前記レンチウイルスベクターが、約１０、約１１、約１２、約１３、約１４、約１５、約１６、約１７、約１８、約１９、約２０、約２１、約２２、約２３、約２４、約２５、約２６、約２７、約２８、約２９、または約３０のＭＯＩで存在する、項目４６〜４９のいずれか一項に記載の方法。
（項目５３）
項目４３に記載の細胞集団、項目４４に記載の組成物、または項目４５に記載の薬学的組成物の有効量を、対象に投与することを含む、前記対象におけるヘモグロビン異常症を治療する方法。
（項目５４）
対象におけるヘモグロビン異常症の少なくとも１つの症状を寛解させる方法であって、項目４３に記載の細胞集団、項目４４に記載の組成物、または項目４５に記載の薬学的組成物の有効量を、前記対象に投与することを含む、方法。
（項目５５）
前記対象の前記βグロビン対立遺伝子が、βＥ／β０、βＣ／β０、β０／β０、βＥ／βＥ、βＣ／β＋、βＥ／β＋、β０／β＋、β＋／β＋、βＣ／βＣ、βＥ／βＳ、β０／βＳ、βＣ／βＳ、β＋／βＳまたはβＳ／βＳである、項目５４に記載の方法。
（項目５６）
対象におけるサラセミアを治療する方法であって、項目４３に記載の細胞集団、項目４４に記載の組成物、または項目４５に記載の薬学的組成物の有効量を、前記対象に投与することを含む、方法。
（項目５７）
前記サラセミアが、αサラセミアである、項目５６に記載の方法。
（項目５８）
前記サラセミアが、βサラセミアである、項目５６に記載の方法。
（項目５９）
前記対象の前記βグロビン対立遺伝子が、βＥ／β０、βＣ／β０、β０／β０、βＣ／βＣ、βＥ／βＥ、βＥ／β＋、βＣ／βＥ、βＣ／β＋、β０／β＋、またはβ＋／β＋である、項目５６に記載の方法。
（項目６０）
対象における鎌状赤血球症を治療する方法であって、項目４３に記載の細胞集団、項目４４に記載の組成物、または項目４５に記載の薬学的組成物の有効量を、前記対象に投与することを含む、方法。
（項目６１）
前記対象の前記βグロビン対立遺伝子は、βＥ／βＳ、β０／βＳ、βＣ／βＳ、β＋／βＳまたはβＳ／βＳである、項目６０に記載の方法。
（項目６２）
対象におけるβサラセミアを治療する方法であって、有効量の項目４３に記載の細胞集団、項目４４に記載の組成物、または項目４５に記載の薬学的組成物を前記対象に投与することを含む、方法。
（項目６３）
前記対象の前記βグロビン対立遺伝子が、βＥ／β０、βＣ／β０、β０／β０、βＣ／βＣ、βＥ／βＥ、βＥ／β＋、βＣ／βＥ、βＣ／β＋、β０／β＋、またはβ＋／β＋である、項目６２に記載の方法。
（項目６４）
前記造血幹細胞集団が、静脈内経路、髄内経路、または骨内経路で投与される、項目５３〜６３のいずれか一項に記載の方法。
（項目６５）
前記造血幹細胞集団が、静脈内に投与される、項目５３〜６４のいずれか一項に記載の方法。