【手続補正書】
【提出日】令和2年12月18日(2020.12.18)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）約５％〜約６０％ｗ／ｗのｎ−３ＰＵＦＡ部分含量を有する油であって、前記ｎ−３ＰＵＦＡ部分が前記油中に含有される遊離酸として、またはグリセリドおよび／もしくは極性脂質のアシル基として存在する油を用意するステップと；
（ｂ）前記油に、前記油の０．２〜１０％ｗ／ｗの量で水またはアルカリ性水性緩衝液を添加して、ｐＨ約５〜約９の混合物を得るステップと；
（ｃ）ステップ（ｂ）で得られた前記混合物にリパーゼを添加するステップであって、前記リパーゼが疎水性脂肪族樹脂支持体または、架橋ジビニルベンゼン（ＤＶＢ）もしくはスチレンもしくは架橋スチレン−ＤＶＢのいずれかである疎水性芳香族樹脂のいずれかである疎水性多孔質ポリマー樹脂支持体上に固定化され、前記リパーゼが飽和脂肪酸、モノ−、ジ−およびトリ−不飽和脂肪酸またはその脂肪酸アシル基に対して高い選択性を示し、前記油を同時または連続的にエステル交換および／またはエステル化することができるステップと；
（ｄ）アルキルアルコールまたはアルコールドナー、ここで該短鎖アルキルアルコールはエタノール又はメタノールであり、または該アルコールドナーはジエチルもしくはジメチルカーボネートのいずれかである、を用意し、前記アルコールまたはアルコールドナーを、ステップ（ｃ）で得られた前記油と前記酵素調製物の前記混合物に段階的に添加して、前記油、前記リパーゼ調製物、前記水またはアルカリ性水性緩衝液および前記アルコール又はアルコールドナーを含む反応系を形成し（前記油は前記アルコール又はアルコールドナーと反応する）、前記反応を、前記反応系に使用される油の、少なくとも４０重量％の前記油の脂肪酸エチルエステル（ＦＡＥＥ）および脂肪酸メチルエステル（ＦＡＭＥ）、１０重量％未満の遊離脂肪酸（ＦＦＡ）および約１５重量％〜約６０重量％のグリセリドへの転換率に到達させるステップと；
（ｅ）前記反応系から前記反応媒体を除去することによって前記反応を停止させ、引き続いて蒸発、所望によりフラッシュ蒸発、させて、過剰なアルコールおよび水を除去して、ＦＡＥＥ、ＦＡＭＥ、ＦＦＡならびにモノ−、ジ−およびトリ−グリセリドの混合物、ならびに場合により極性脂質を含む生成物を得るステップと；
（ｆ）ステップ（ｅ）で得られた前記生成物から前記脂肪酸エチルおよびメチルエステルおよび遊離脂肪酸を分子蒸留、短行程または薄膜蒸留のうちのいずれか１つで留去することによって前記ＦＡＥＥ、ＦＡＭＥおよびＦＦＡから前記グリセリドを単離して、ＦＡＥＥ、ＦＡＭＥおよびＦＦＡを含む留出物ならびにグリセリド混合物および場合により極性脂質を含む残渣を得るステップであって、前記混合物が前記油と比較して高いオメガ−３脂肪酸含量を含有し、回収率が６０％より高いステップと
を含む、グリセリドとしてのｎ−３多価不飽和脂肪酸（ｎ−３ＰＵＦＡ）を濃縮するための酵素的方法。
【請求項２】
（ａ）約５％〜約６０％ｗ／ｗであってもよいｎ−３多価不飽和脂肪酸を含む油を用意するステップであって、前記ｎ−３脂肪酸が前記油中のグリセリドもしくは極性脂質のグリセロール骨格に結合した脂肪酸アシル基として、および／または遊離脂肪酸として存在し、前記油が遊離またはエステル化飽和脂肪酸、モノ−、ジ−およびトリ−不飽和脂肪酸も含むステップと；
（ｂ）前記油に、前記油の０．２〜１０％ｗ／ｗの量で水またはアルカリ性水性緩衝液を添加して、ｐＨ約５〜約９の混合物を得るステップと；
（ｃ）ステップ（ｂ）で得られた前記混合物にリパーゼを添加するステップであって、前記リパーゼがポリマー樹脂支持体上に固定化され、前記樹脂が交互の疎水性ドメインと温和な親水性ドメインを含み、ここで該疎水性ドメインは疎水性脂肪族または芳香族モノマーで構成され、該温和な親水性ドメインはアクリルおよび／またはメタクリル酸エステルで構成され、前記リパーゼが飽和脂肪酸、モノ−、ジ−およびトリ−不飽和脂肪酸またはその脂肪酸アシル基に対して高い選択性を示し、前記油を同時または連続的にエステル交換および／またはエステル化することができるステップと；
（ｄ）エタノール又はメタノールのいずれか一つであるアルキルアルコールまたはジエチルカーボネート又はジメチルカーボネートのいずれか一つであるアルコールドナーを用意し、前記アルコールまたはアルコールドナーを、ステップ（ｃ）で得られた前記油と前記酵素調製物の前記混合物に段階的に添加して、前記油、前記水または水性アルカリ性緩衝液、前記リパーゼ調製物および前記アルコールを含む反応系を形成し（前記油は前記アルコールと反応する）、前記反応を、前記反応系に使用される油の、少なくとも４０重量％の前記油の脂肪酸エチルエステル（ＦＡＥＥ）および脂肪酸メチルエステル（ＦＡＭＥ）、１０重量％未満の遊離脂肪酸（ＦＦＡ）および約１５重量％〜約６０重量％のグリセリドへの転換率に到達させるステップと；
（ｅ）前記反応系から前記反応媒体を除去することによって前記反応を停止させ、引き続いて前記反応物を蒸発させて過剰なアルコールおよび水を除去して、ＦＡＥＥ、ＦＡＭＥ、ＦＦＡならびにモノ−、ジ−およびトリ−グリセリドの混合物、ならびに場合により極性脂質を含む生成物を得るステップと；
（ｆ）ステップ（ｅ）で得られた前記生成物から前記脂肪酸エチルおよびメチルエステルおよび遊離脂肪酸を分子蒸留、短行程または薄膜蒸留のうちのいずれか１つで留去することによって前記ＦＡＥＥ、ＦＡＭＥおよびＦＦＡから前記グリセリド混合物を単離して、ＦＡＥＥ、ＦＡＭＥおよびＦＦＡを含む留出物ならびにグリセリド混合物を含む残渣を得るステップであって、前記グリセリド混合物が場合により極性脂質をさらに含み、前記油と比較して高いオメガ−３脂肪酸含量を含有し、回収率が６０％より高いステップと
を含む、約３０％〜約８０％ｗ／ｗ、又は約５０％〜８０％ｗ／ｗ、又は約５０％〜７０％ｗ／ｗ、のｎ−３多価不飽和脂肪酸部分を有するグリセリドの混合物を調製する方法。
【請求項３】
前記油が、魚油または藻油、真菌油、またはｎ−３脂肪酸を含有する適切な油性物質のいずれか一つである食用油である、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記ｎ−３脂肪酸部分がＤＨＡ、ＤＰＡおよびＥＰＡ部分のうちのいずれか１つ、ならびにそれらの少なくとも２つの任意の混合物である、請求項１から３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
前記リパーゼがカンジダ・アンタークティカＡ（Ｃａｎｄｉｄａ  ａｎｔａｒｃｔｉｃａ  Ａ）（ＣＡＬＡ）、リゾムコール・ミエヘイ（Ｒｈｉｚｏｍｕｃｏｒ  ｍｉｅｈｅｉ）、シュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）種、サーモミセス・ラヌギノス（Ｔｈｅｒｍｏｍｙｃｅｓ  ｌａｎｕｇｉｎｏｓｅ）、リゾプス・ニベウス（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ｎｉｖｅｕｓ）、ムコール・ジャバニクス（Ｍｕｃｏｒ  ｊａｖａｎｉｃｕｓ）、リゾプス・オリゼ（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ｏｒｙｚａｅ）、カンジダ・アンタークティカＢ（Ｃａｎｄｉｄａ  ａｎｔａｒｃｔｉｃａ  Ｂ）（ＣＡＬＢ）、クロコウジカビ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ）、ペニシリウム・カメンベルティ（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｃａｍｅｍｂｅｒｔｉｉ）、アルカリゲネス属（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ）種、バークホルデリア属（Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ）種またはクロモバクテリウム・ヴィスコスム（Ｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｖｉｓｃｏｓｕｍ）のいずれか１つに由来する、請求項１から４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記疎水性芳香族モノマーがジビニルベンゼン（ＤＶＢ）および／またはスチレンであり、場合により前記温和な親水性モノマーがアクリル酸もしくはメタクリル酸エステル、または組み合わせたアクリル／メタクリル酸エステルである、請求項２から５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記疎水性樹脂ドメインと前記温和な親水性ドメインとの間の重量比が、それぞれ約１０：０．１〜約１：１０である、請求項２から６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
ステップ（ｆ）で得られた前記グリセリド混合物を、反応混合物中でその遊離形態にある、またはポリマー樹脂支持体上に固定化された適切なリパーゼ、ここで該リパーゼは、カンジダ・アンタークティカＢ（Ｃａｎｄｉｄａ  ａｎｔａｒｃｔｉｃａ  Ｂ）（ＣＡＬＢ）由来のリパーゼであってよい、の存在下で、（ｉ）ｎ−３遊離脂肪酸濃縮物、または（ｉｉ）ｎ−３脂肪酸短鎖アルキルエステル濃縮物の少なくとも１つと反応させて、前記反応混合物からの過剰な脂肪酸エチルエステルおよび／または脂肪酸、ならびにエタノールおよび／または水副産物の蒸留後に６０％超の、６０％超のｎ−３脂肪酸を含有するトリグリセリドを含むグリセリド混合物を得る、請求項２から７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
（ａ）約５％〜約６０％ｗ／ｗの、ＤＨＡ、ＤＰＡおよびＥＰＡのうちのいずれか１つ、ならびにそれらの少なくとも２つの任意の混合物である、ｎ−３多価不飽和脂肪酸を含む油を用意するステップであって、前記ｎ−３脂肪酸が前記油中のグリセリドおよび場合により極性脂質のグリセロール骨格に結合した脂肪酸アシル基として、ならびに／または遊離脂肪酸として存在し、前記油が遊離またはエステル化飽和脂肪酸、モノ−、ジ−およびトリ−不飽和脂肪酸も含むステップと；
（ｂ）前記油に、前記油の０．２〜１０％ｗ／ｗの量で水またはアルカリ性水性緩衝液を添加して、ｐＨ約５〜約９の混合物を得るステップと；
（ｃ）ステップ（ｂ）で得られた前記混合物にシュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）種リパーゼ（ＰＳリパーゼ）調製物を添加するステップであって、前記ＰＳリパーゼが、ポリマー支持体１ｇ当たり５０００ユニットより高い前記ＰＳリパーゼの充填量でポリマー樹脂支持体上に固定化され、前記樹脂が交互の疎水性ドメインと温和な親水性ドメインを含み、ここで該疎水性ドメインは疎水性脂肪族または芳香族モノマーで構成され、該温和な親水性ドメインはアクリルおよび／またはメタクリル酸エステルで構成され、前記リパーゼＰＳが、その遊離形態でまたはグリセロールもしくは極性脂質に結合している場合に飽和、モノ−、ジ−およびトリ−不飽和脂肪酸に対して高い選択性を示し、前記脂肪酸を同時または連続的にエステル交換／エステル化することができるステップと；
（ｄ）エタノール又はメタノールを用意し、前記エタノール又はメタノールを、ステップ（ｃ）で得られた前記油、前記水またはアルカリ性水性緩衝液および前記酵素調製物の前記混合物に段階的に添加、して、前記油、前記リパーゼ調製物、前記水または水性緩衝液および前記アルコールを含む反応系を形成し（前記油は前記アルコールと反応する）、前記反応を、約７０％の前記油の脂肪酸アルキルエステルへの転換率に到達させるステップと；
（ｅ）前記第１のリパーゼ調製物を除去することによって前記反応を停止させ、遊離脂肪酸副産物および過剰なエタノール又はメタノールに加えて、脂肪酸エチルエステル（ＦＡＥＥ）又はメチルエステル（ＦＡＭＥ）、モノ−、ジ−および残留トリ−グリセリドを含有する前記反応混合物の有機上相／画分を回収するステップと；
（ｆ）ステップ（ｅ）で得られた前記有機相を、ポリマー樹脂支持体上に固定化されたサーモミセス・ラヌギノサ（Ｔｈｅｒｍｏｍｙｃｅｓ  ｌａｎｕｇｉｎｏｓａ）リパーゼ（ＴＬ）の存在下で、エタノール又はメタノール、と反応させ（前記樹脂は交互の疎水性ドメインと温和な親水性ドメインを含み、ここで該疎水性ドメインは疎水性脂肪族または芳香族モノマーで構成され、該温和な親水性ドメインはアクリルおよび／またはメタクリル酸エステルで構成される）、前記反応を、前記油中少なくとも９７％ｗ／ｗ、少なくとも９８％ｗ／ｗ、少なくとも９９％ｗ／ｗおよび最大１００％の、脂肪酸アシル基がそのエチルエステル又はメチルエステル、に転換されるまで継続させるステップと；
（ｇ）前記反応混合物から前記リパーゼ調製物を除去することによって前記反応を停止させ、引き続いて前記反応媒体を蒸発させて、過剰なエタノール及びメタノールおよび水を除去するステップと；
（ｈ）分別蒸留によって前記反応混合物から前記ｎ−３多価不飽和脂肪酸エタノール及びメタノールエステル濃縮物を単離するステップと
を含む、ｎ−３脂肪酸エチル又はメチルエステルを酵素的に調製する方法。
【請求項１０】
前記ＰＳリパーゼと前記ＴＬリパーゼの両方のための前記樹脂支持体が、交互の架橋ジビニルベンゼンモノマー、架橋スチレンモノマーまたは架橋スチレンおよびジビニルベンゼンモノマーで構成される疎水性ドメインとアクリル酸および／またはメタクリル酸エステルで構成される前記温和な親水性ドメインを含む、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記疎水性樹脂ドメインと前記温和な親水性ドメインとの間の重量比が、それぞれ約１０：０．１〜約１：１０である、請求項９又は１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記ＰＳリパーゼ調製物および前記ＴＬリパーゼ調製物が、同じバッチの各前記ＰＳリパーゼ調製物およびＴＬリパーゼ調製物を使用して少なくとも２０反応サイクルにわたってそれらの触媒活性の少なくとも７０％を維持する、請求項９から１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
ステップ（ｈ）で得られた前記単離された３−ｎ多価不飽和脂肪酸エチル及びメチルエステルを、前記エステルの前記ｎ−３脂肪酸アシル部分をグリセロールとエステル交換することができるリパーゼ、所望によりカンジダ・アンタークティカＢ（Ｃａｎｄｉｄａ  ａｎｔａｒｃｔｉｃａ  Ｂ）（ＣＡＬＢ）由来のリパーゼ、の存在下で、グリセロールとさらに反応させ（前記リパーゼは場合により適切なポリマー樹脂支持体上に固定化され、前記反応系は前記単離された３−ｎ多価不飽和脂肪酸エステル１重量当たり最大約１％の水を含む）、未反応グリセロールの除去および過剰な脂肪酸／脂肪酸エチル及びメチルエステル、および副産物としてのエタノール、メタノール、および／または水の蒸留後に、全形成グリセリドの５０％超のトリグリセリドを含むグリセリドの混合物が形成されるまで、前記反応を進行させる、請求項９から１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
前記ポリマー樹脂支持体、前記樹脂が交互の疎水性ドメインと温和な親水性ドメインを含み、ここで該疎水性ドメインは、ジビニルベンゼンおよび／またはスチレンのいずれか一つである疎水性脂肪族または芳香族モノマーで構成され、該温和な親水性ドメインは、アクリルおよび／またはメタクリル酸エステルで構成される、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記ｎ−３脂肪酸が遊離形態で、またはモノ−、ジ−もしくはトリグリセリドの脂肪酸部分として、魚油および油性油、の極性脂質として存在する、請求項９から１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
（ａ）リパーゼを適切な緩衝液に溶解してリパーゼ溶液を得るステップと；
（ｂ）適量の微孔性ポリマー樹脂を前記リパーゼ溶液に添加して混合物を得るステップであって、前記微孔性ポリマー樹脂は交互の疎水性モノマードメインと温和な親水性モノマーの、ドメインを含むステップと；
（ｃ）ステップ（ｂ）の前記得られた混合物を、混合／振盪しながら適切な時間、適切な温度で維持し、それによって前記リパーゼを前記微孔性ポリマー樹脂上に固定化するステップと；
（ｄ）前記樹脂上に固定化された前記得られたリパーゼを濾別して固定化リパーゼ調製物を得るステップと；
（ｅ）場合により前記固定化リパーゼ調製物を適当な溶媒で洗浄するステップと；
（ｆ）前記洗浄した固定化リパーゼ調製物を５％ｗ／ｗ未満の水のレベルまで乾燥させるステップと
を含む、微孔性ポリマー樹脂上にリパーゼを固定化する方法。
【請求項１７】
微孔性ポリマー樹脂支持体上に固定化されたリパーゼを含む固定化リパーゼ調製物であって、前記巨大網状多孔質ポリマー樹脂は混合の疎水性ドメインと温和な親水性ドメインを含み、前記疎水性ドメインは疎水性脂肪族または芳香族モノマーで構成され、前記親水性ドメインはアクリル酸もしくはメタクリル酸エステル、またはこれらの任意の組み合わせである温和な親水性モノマーで構成される、固定化リパーゼ調製物。
【請求項１８】
交互の疎水性ドメインと親水性ドメインを有する前記巨大網状多孔質ポリマーが、メタクリル酸メチルと架橋したジビニルベンゼンであり、ジビニルベンゼンドメインとメタクリル酸メチルドメインの比がそれぞれ１０−９９％〜９０−１％である、請求項１７に記載の固定化リパーゼ調製物。
【請求項１９】
前記リパーゼが、遊離脂肪酸としてまたは脂肪酸アシル基の形態の飽和脂肪酸、モノ−、ジ−およびトリ−不飽和脂肪酸のエステル交換／エステル化／加水分解に対する高い選択性、ならびに遊離脂肪酸としてまたは脂肪酸アシル基としてのｎ−３脂肪酸のエステル交換／エステル化／加水分解に対する低い選択性を有する、請求項１７または１８に記載の固定化リパーゼ調製物。
【請求項２０】
前記リパーゼがカンジダ・アンタークティカＡ（Ｃａｎｄｉｄａ  ａｎｔａｒｃｔｉｃａ  Ａ）（ＣＡＬＡ）、リゾムコール・ミエヘイ（Ｒｈｉｚｏｍｕｃｏｒ  ｍｉｅｈｅｉ）、カンジダ・アンタークティカＢ（Ｃａｎｄｉｄａ  ａｎｔａｒｃｔｉｃａ  Ｂ）（ＣＡＬＢ）、シュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）種、リゾプス・ニベウス（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ｎｉｖｅｕｓ）、ムコール・ジャバニクス（Ｍｕｃｏｒ  ｊａｖａｎｉｃｕｓ）、リゾプス・オリゼ（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ｏｒｙｚａｅ）、クロコウジカビ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ）、ペニシリウム・カメンベルティ（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｃａｍｅｍｂｅｒｔｉｉ）、アルカリゲネス属（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ）種、バークホルデリア属（Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ）種、サーモミセス・ラヌギノサ（Ｔｈｅｒｍｏｍｙｃｅｓ  ｌａｎｕｇｉｎｏｓａ）またはクロモバクテリウム・ヴィスコスム（Ｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｖｉｓｃｏｓｕｍ）のいずれか１つに由来するリパーゼである、請求項１７から１９のいずれか一項に記載の固定化リパーゼ調製物。
【請求項２１】
少なくとも１０回の反応サイクルにわたってその触媒活性の少なくとも７０％を保持する、請求項１７から２０のいずれか一項に記載の固定化リパーゼ調製物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６１】
本明細書に開示される主題をよりよく理解し、それを実際にどのように行うことができるかを例示するために、添付の図面を参照しながら、単なる非限定的な例として実施形態をここで説明する。
なお、下記［１］から［４５］は、いずれも本発明の一形態又は一態様である。
［１］
（ａ）約５％〜約６０％ｗ／ｗのｎ−３ＰＵＦＡ部分含量を有する油であって、前記ｎ−３ＰＵＦＡ部分が前記油中に含有される遊離酸として、またはグリセリドおよび／もしくは極性脂質のアシル基として存在する油を用意するステップと；
（ｂ）前記油に、前記油の０．２〜１０％ｗ／ｗの量で水またはアルカリ性水性緩衝液を添加して、ｐＨ約５〜約９の混合物を得るステップと；
（ｃ）ステップ（ｂ）で得られた前記混合物にリパーゼを添加するステップであって、前記リパーゼが適切なポリマー支持体上に固定化され、前記リパーゼが飽和脂肪酸、モノ−、ジ−およびトリ−不飽和脂肪酸またはその脂肪酸アシル基に対して高い選択性を示し、前記油を同時または連続的にエステル交換、加水分解および／またはエステル化することができるステップと；
（ｄ）アルキルアルコールまたはアルコールドナー、特に短鎖アルキルアルコールまたはアルコールドナー、を用意し、前記アルコールまたはアルコールドナーを、ステップ（ｃ）で得られた前記油と前記酵素調製物の前記混合物に添加、特に段階的に添加、して、前記油、前記リパーゼ調製物、前記水またはアルカリ性水性緩衝液および前記アルコールを含む反応系を形成し（前記油は前記アルコールと反応する）、前記反応を、前記反応系に使用される油の、少なくとも４０重量％の前記油の脂肪酸アルキルエステル（ＦＡＥＥ）、１０重量％未満の遊離脂肪酸（ＦＦＡ）および約１５重量％〜約６０重量％のグリセリドへの転換率に到達させるステップと；
（ｅ）前記反応系から前記反応媒体を除去することによって前記反応を停止させ、引き続いて蒸発、特にフラッシュ蒸発、させて、過剰なアルコールおよび水を除去して、ＦＡＥＥ、ＦＦＡならびにモノ−、ジ−およびトリ−グリセリドの混合物、ならびに場合により極性脂質を含む生成物を得るステップと；
（ｆ）ステップ（ｅ）で得られた前記生成物から前記脂肪酸アルキルエステルおよび遊離脂肪酸を留去することによって前記ＦＡＥＥおよびＦＦＡから前記グリセリドを単離して、ＦＡＥＥおよびＦＦＡを含む留出物ならびにグリセリド混合物および場合により極性脂質を含む残渣を得るステップであって、前記混合物が前記油と比較して高いオメガ−３脂肪酸含量を含有し、回収率が６０％より高いステップと
を含む、グリセリドとしてのｎ−３多価不飽和脂肪酸（ｎ−３ＰＵＦＡ）を濃縮するための酵素的方法。
［２］
前記反応生成物から留去された脂肪酸アルキルエステルと遊離脂肪酸の前記混合物が、前記油中に存在する全ｎ−３脂肪酸のうちの４０％未満のｎ−３脂肪酸部分を含む、［１］に記載の方法。
［３］
前記アルコールがエタノールまたはメタノールのいずれか１つであり、前記短鎖アルキルアルコールドナーがアルコールドナーがジメチルまたはジエチルカーボナートのいずれか１つである、［１］または［２］に記載の方法。
［４］
前記蒸留が分子蒸留、短行程または薄膜蒸留のうちのいずれか１つである、［１］から［３］のいずれか一項に記載の方法。
［５］
前記ｎ−３脂肪酸部分がＤＨＡ、ＤＰＡおよびＥＰＡ部分のうちのいずれか１つ、ならびにそれらの少なくとも２つの任意の混合物である、［１］から［４］のいずれか一項に記載の方法。
［６］
前記リパーゼがカンジダ・アンタークティカＡ（Ｃａｎｄｉｄａ  ａｎｔａｒｃｔｉｃａ  Ａ）（ＣＡＬＡ）、リゾムコール・ミエヘイ（Ｒｈｉｚｏｍｕｃｏｒ  ｍｉｅｈｅｉ）、シュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）種、リゾプス・ニベウス（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ｎｉｖｅｕｓ）、ムコール・ジャバニクス（Ｍｕｃｏｒ  ｊａｖａｎｉｃｕｓ）、リゾプス・オリゼ（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ｏｒｙｚａｅ）、カンジダ・アンタークティカＢ（Ｃａｎｄｉｄａ  ａｎｔａｒｃｔｉｃａ  Ｂ）（ＣＡＬＢ）、クロコウジカビ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ）、ペニシリウム・カメンベルティ（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｃａｍｅｍｂｅｒｔｉｉ）、アルカリゲネス属（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ）種、バークホルデリア属（Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ）種、サーモミセス・ラヌギノサ（Ｔｈｅｒｍｏｍｙｃｅｓ  ｌａｎｕｇｉｎｏｓａ）またはクロモバクテリウム・ヴィスコスム（Ｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｖｉｓｃｏｓｕｍ）のいずれか１つに由来し、特に前記リパーゼがカンジダ・アンタークティカＡ（Ｃａｎｄｉｄａ  ａｎｔａｒｃｔｉｃａ  Ａ）（ＣＡＬＡ）、シュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）種、アルカリゲネス属（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ）種またはサーモミセス・ラヌギノサ（Ｔｈｅｒｍｏｍｙｃｅｓ  ｌａｎｕｇｉｎｏｓｅ）のいずれか１つに由来する、［１］から［５］のいずれか一項に記載の方法。
［７］
前記リパーゼが、疎水性多孔質ポリマー樹脂支持体、特に疎水性脂肪族または芳香族樹脂支持体、上に固定化され、特に疎水性芳香族樹脂が架橋ジビニルベンゼン（ＤＶＢ）またはスチレンまたは架橋スチレン−ＤＶＢである、［１］から［６］のいずれか一項に記載の方法。
［８］
ステップ（ｆ）で得られた前記グリセリド混合物を、真空下および温度３０〜８０℃で、反応混合物中適切なリパーゼ、特にその遊離形態のまたはポリマー樹脂支持体上に固定化されたカンジダ・アンタークティカＢ（Ｃａｎｄｉｄａ  ａｎｔａｒｃｔｉｃａ  Ｂ）（ＣＡＬＢ）由来のリパーゼ、の存在下で、（ｉ）ｎ−３ＦＦＡ濃縮物、または（ｉｉ）ｎ−３脂肪酸短鎖アルキルエステル濃縮物の少なくとも１つとさらに反応させて、前記反応混合物からの過剰な脂肪酸エチルエステルおよび／または脂肪酸、ならびにアルコールおよび／または水副産物の蒸留後に６０％超の、６０％超のｎ−３脂肪酸を含有するトリグリセリドを含むグリセリド混合物を得る、［１］から［７］のいずれか一項に記載の方法。
［９］
前記油が食用油、特に魚油または藻油、真菌油、またはｎ−３脂肪酸を含有する適切な油性物質、である、［１］から［８］のいずれか一項に記載の方法。
［１０］
（ａ）特に約５％〜約６０％ｗ／ｗの、ｎ−３多価不飽和脂肪酸を含む油を用意するステップであって、前記ｎ−３脂肪酸が前記油中のグリセリドもしくは極性脂質のグリセロール骨格に結合した脂肪酸アシル基として、および／または遊離脂肪酸として存在し、前記油が遊離またはエステル化飽和脂肪酸、モノ−、ジ−およびトリ−不飽和脂肪酸も含むステップと；
（ｂ）前記油に、前記油の０．２〜１０％ｗ／ｗの量で水またはアルカリ性水性緩衝液を添加して、ｐＨ約５〜約９の混合物を得るステップと；
（ｃ）ステップ（ｂ）で得られた前記混合物にリパーゼを添加するステップであって、前記リパーゼがポリマー樹脂支持体上に固定化され、前記樹脂が交互の疎水性ドメインと温和な親水性ドメイン、特に疎水性脂肪族または芳香族モノマーで構成される疎水性ドメインとアクリルおよび／またはメタクリル酸エステルで構成される温和な親水性ドメイン、を含み、前記リパーゼが飽和脂肪酸、モノ−、ジ−およびトリ−不飽和脂肪酸またはその脂肪酸アシル基に対して高い選択性を示し、前記油を同時または連続的にエステル交換、加水分解および／またはエステル化することができるステップと；
（ｄ）アルキルアルコールまたはアルコールドナー、特に短鎖アルキルアルコールまたはアルコールドナー、を用意し、前記アルコールまたはアルコールドナーを、ステップ（ｃ）で得られた前記油と前記酵素調製物の前記混合物に添加、特に段階的に添加、して、前記油、前記水または水性アルカリ性緩衝液、前記リパーゼ調製物および前記アルコールを含む反応系を形成し（前記油は前記アルコールと反応する）、前記反応を、前記反応系に使用される油の、少なくとも４０重量％の前記油の脂肪酸アルキルエステル（ＦＡＥＥ）、１０重量％未満の遊離脂肪酸（ＦＦＡ）および約１５重量％〜約６０重量％のグリセリドへの転換率に到達させるステップと；
（ｅ）前記反応系から前記反応媒体を除去することによって前記反応を停止させ、引き続いて前記反応物を蒸発、特にフラッシュ蒸発、させて過剰なアルコールおよび水を除去して、ＦＡＥＥ、ＦＦＡならびにモノ−、ジ−およびトリ−グリセリドの混合物、ならびに場合により極性脂質を含む生成物を得るステップと；
（ｆ）ステップ（ｅ）で得られた前記生成物から前記脂肪酸アルキルエステルおよび遊離脂肪酸を留去することによって前記ＦＡＥＥおよびＦＦＡから前記グリセリド混合物を単離して、ＦＡＥＥおよびＦＦＡを含む留出物ならびにグリセリド混合物を含む残渣を得るステップであって、前記グリセリド混合物が場合により極性脂質をさらに含み、前記油と比較して高いオメガ−３脂肪酸含量を含有し、回収率が６０％より高いステップと
を含む、約３０％〜約８０％ｗ／ｗ、特に約５０％〜８０％ｗ／ｗ、より具体的には約５０％〜７０％ｗ／ｗ、のｎ−３多価不飽和脂肪酸部分を有するグリセリドの混合物を調製する方法。
［１１］
前記油が食用油、特に魚油または藻油、真菌油、またはｎ−３脂肪酸、を含有する適切な油性物質である、［１０］に記載の方法。
［１２］
前記反応生成物から留去された脂肪酸アルキルエステルと遊離脂肪酸の前記混合物が、供給原料中に存在する全ｎ−３脂肪酸のうちの４０％未満のｎ−３脂肪酸部分を含む、［１０］または［１１］に記載の方法。
［１３］
前記アルコールがエタノールまたはメタノールのいずれか１つであり、前記短鎖アルキルアルコールドナーがアルコールドナーがジメチルまたはジエチルカーボナートのいずれか１つである、［１０］から［１２］のいずれか一項に記載の方法。
［１４］
前記蒸留が分子蒸留、短行程または薄膜蒸留のうちのいずれか１つである、［１０］から［１３］のいずれか一項に記載の方法。
［１５］
前記ｎ−３脂肪酸部分がＤＨＡ、ＤＰＡおよびＥＰＡ部分のうちのいずれか１つ、ならびにそれらの少なくとも２つの任意の混合物である、［１０］から［１４］のいずれか一項に記載の方法。
［１６］
前記リパーゼがカンジダ・アンタークティカＡ（Ｃａｎｄｉｄａ  ａｎｔａｒｃｔｉｃａ  Ａ）（ＣＡＬＡ）、リゾムコール・ミエヘイ（Ｒｈｉｚｏｍｕｃｏｒ  ｍｉｅｈｅｉ）、シュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）種、リゾプス・ニベウス（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ｎｉｖｅｕｓ）、ムコール・ジャバニクス（Ｍｕｃｏｒ  ｊａｖａｎｉｃｕｓ）、リゾプス・オリゼ（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ｏｒｙｚａｅ）、カンジダ・アンタークティカＢ（Ｃａｎｄｉｄａ  ａｎｔａｒｃｔｉｃａ  Ｂ）（ＣＡＬＢ）、クロコウジカビ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ）、ペニシリウム・カメンベルティ（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｃａｍｅｍｂｅｒｔｉｉ）、アルカリゲネス属（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ）種、バークホルデリア属（Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ）種、サーモミセス・ラヌギノサ（Ｔｈｅｒｍｏｍｙｃｅｓ  ｌａｎｕｇｉｎｏｓａ）またはクロモバクテリウム・ヴィスコスム（Ｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｖｉｓｃｏｓｕｍ）のいずれか１つに由来し、特に前記リパーゼがカンジダ・アンタークティカＡ（Ｃａｎｄｉｄａ  ａｎｔａｒｃｔｉｃａ  Ａ）（ＣＡＬＡ）、シュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）種、アルカリゲネス属（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ）種またはサーモミセス・ラヌギノサ（Ｔｈｅｒｍｏｍｙｃｅｓ  ｌａｎｕｇｉｎｏｓｅ）のいずれか１つに由来する、［１０］から［１５］のいずれか一項に記載の方法。
［１７］
前記疎水性芳香族モノマーがジビニルベンゼン（ＤＶＢ）および／またはスチレンであり、場合により前記温和な親水性モノマーがアクリル酸もしくはメタクリル酸エステル、または組み合わせたアクリル／メタクリル酸エステルである、［１０］から［１６］のいずれか一項に記載の方法。
［１８］
前記疎水性樹脂ドメインと前記温和な親水性ドメインとの間の重量比が、それぞれ約１０：０．１〜約１：１０である、［１０］から［１７］のいずれか一項に記載の方法。
［１９］
ステップ（ｆ）で得られた前記グリセリド混合物を、反応混合物中適切なリパーゼ、特にその遊離形態のまたはポリマー樹脂支持体上に固定化されたカンジダ・アンタークティカＢ（Ｃａｎｄｉｄａ  ａｎｔａｒｃｔｉｃａ  Ｂ）（ＣＡＬＢ）由来のリパーゼ、の存在下で、（ｉ）ｎ−３遊離脂肪酸濃縮物、または（ｉｉ）ｎ−３脂肪酸短鎖アルキルエステル濃縮物の少なくとも１つと反応させて、前記反応混合物からの過剰な脂肪酸エチルエステルおよび／または脂肪酸、ならびにエタノールおよび／または水副産物の蒸留後に６０％超の、６０％超のｎ−３脂肪酸を含有するトリグリセリドを含むグリセリド混合物を得る、［１０］から［１８］のいずれか一項に記載の方法。
［２０］
（ａ）特に約５％〜約６０％ｗ／ｗの、ｎ−３多価不飽和脂肪酸を含む油を用意するステップであって、前記ｎ−３脂肪酸が前記油中のグリセリドおよび場合により極性脂質のグリセロール骨格に結合した脂肪酸アシル基として、ならびに／または遊離脂肪酸として存在し、前記油が遊離またはエステル化飽和脂肪酸、モノ−、ジ−およびトリ−不飽和脂肪酸も含むステップと；
（ｂ）前記油に、前記油の０．２〜１０％ｗ／ｗの量で水またはアルカリ性水性緩衝液を添加して、ｐＨ約５〜約９の混合物を得るステップと；
（ｃ）ステップ（ｂ）で得られた前記混合物にシュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）種リパーゼ（ＰＳリパーゼ）調製物を添加するステップであって、前記ＰＳリパーゼが、特にポリマー支持体１ｇ当たり１００００ユニットより高い前記ＰＳリパーゼの、高充填量でポリマー樹脂支持体上に固定化され、前記樹脂が交互の疎水性ドメインと温和な親水性ドメイン、特に疎水性脂肪族または芳香族モノマーで構成される疎水性ドメインとアクリルおよび／またはメタクリル酸エステルで構成される温和な親水性ドメイン、を含み、前記リパーゼＰＳが、その遊離形態でまたはグリセロールもしくは極性脂質に結合している場合に飽和、モノ−、ジ−およびトリ−不飽和脂肪酸に対して高い選択性を示し、前記脂肪酸を同時または連続的にエステル交換／エステル化することができるステップと；
（ｄ）短鎖アルキルアルコール、特にエタノール、を用意し、前記アルコールを、ステップ（ｃ）で得られた前記油、前記水またはアルカリ性水性緩衝液および前記酵素調製物の前記混合物に添加、特に段階的に添加、して、前記油、前記リパーゼ調製物、前記水または水性緩衝液および前記アルコールを含む反応系を形成し（前記油は前記アルコールと反応する）、前記反応を、約７０％の前記油の脂肪酸アルキルエステルへの転換率に到達させるステップと；
（ｅ）前記第１のリパーゼ調製物を除去することによって前記反応を停止させ、遊離脂肪酸副産物および過剰なアルコールに加えて、脂肪酸アルキルエステル（ＦＡＥＥ）、モノ−、ジ−および残留トリ−グリセリドを含有する前記反応混合物の有機上相／画分を回収するステップと；
（ｆ）ステップ（ｅ）で得られた前記有機相を、ポリマー樹脂支持体上に固定化されたサーモミセス・ラヌギノサ（Ｔｈｅｒｍｏｍｙｃｅｓ  ｌａｎｕｇｉｎｏｓａ）リパーゼ（ＴＬ）の存在下で、短鎖アルキルアルコール、特にエタノール、と反応させ（前記樹脂は交互の疎水性ドメインと温和な親水性ドメイン、特に疎水性脂肪族または芳香族モノマーで構成される疎水性ドメインとアクリルおよび／またはメタクリル酸エステルで構成される温和な親水性ドメイン、を含む）、前記反応を、前記油中少なくとも９７％ｗ／ｗ、特に９８％ｗ／ｗ、９９％ｗ／ｗおよび最大１００％の、脂肪酸アシル基がその低級アルキルエステル、特にエチルエステル、に転換されるまで継続させるステップと；
（ｇ）前記反応混合物から前記リパーゼ調製物を除去することによって前記反応を停止させ、引き続いて前記反応媒体を蒸発、特にフラッシュ蒸発、させて、過剰なアルコールおよび水を除去するステップと；
（ｈ）分別蒸留によって前記反応混合物から前記ｎ−３多価不飽和脂肪酸アルキルエステル濃縮物を単離するステップと
を含む、ｎ−３脂肪酸短鎖アルキルエステル、特にｎ−３脂肪酸エチルエステル、を酵素的に調製する方法。
［２１］
前記ＰＳリパーゼと前記ＴＬリパーゼの両方のための前記樹脂支持体が、交互の架橋ジビニルベンゼンモノマー、架橋スチレンモノマーまたは架橋スチレンおよびジビニルベンゼンモノマーで構成される疎水性ドメインとアクリル酸および／またはメタクリル酸エステルで構成される前記温和な親水性ドメインを含む、［２０］に記載の方法。
［２２］
前記ＰＳリパーゼを、前記支持体１ｇ当たり約５０００〜約５００００ユニット、特に前記支持体１ｇ当たり約１５０００〜３００００ユニット、より具体的には前記支持体１ｇ当たり約２００００〜２５０００、の充填量で前記ポリマー樹脂支持体上に固定化する、［２０］または［２１］に記載の方法。
［２３］
前記疎水性樹脂ドメインと前記温和な親水性ドメインとの間の重量比が、それぞれ約１０：０．１〜約１：１０である、［２０］から［２２］のいずれか一項に記載の方法。
［２４］
前記ＰＳリパーゼ調製物および前記ＴＬリパーゼ調製物が、同じバッチの各前記ＰＳリパーゼ調製物およびＴＬリパーゼ調製物を使用して少なくとも２０反応サイクルにわたってそれらの触媒活性の少なくとも７０％を維持する、［２０］から［２３］のいずれか一項に記載の方法。
［２５］
前記有機上相／画分を、比重分離、遠心分離、またはグリセロール／水吸着樹脂を充填したカラムに前記反応混合物を通過させることのいずれかによって回収する、［２０］から［２４］のいずれか一項に記載の方法。
［２６］
ステップ（ｈ）で得られた前記単離された３−ｎ多価不飽和脂肪酸アルキルエステル、特にエチルエステル、を、前記アルキルエステルの前記ｎ−３脂肪酸アシル部分をグリセロールとエステル交換することができるリパーゼ、特にカンジダ・アンタークティカＢ（Ｃａｎｄｉｄａ  ａｎｔａｒｃｔｉｃａ  Ｂ）（ＣＡＬＢ）由来のリパーゼ、の存在下で、グリセロールとさらに反応させ（前記リパーゼは場合により適切なポリマー樹脂支持体上に固定化され、前記反応系は前記単離された３−ｎ多価不飽和脂肪酸アルキルエステル１重量当たり最大約１％の水を含む）、未反応グリセロールの除去および過剰な脂肪酸／脂肪酸アルキルエステル、および副産物としてのアルキルアルコール、特にエタノール、および／または水の蒸留後に、全形成グリセリドの５０％超のトリグリセリドを含むグリセリドの混合物が形成されるまで、前記反応を進行させる、［２０］から［２５］のいずれか一項に記載の方法。
［２７］
前記ポリマー樹脂支持体、前記樹脂が交互の疎水性ドメインと温和な親水性ドメイン、特に疎水性脂肪族または芳香族モノマー、特にジビニルベンゼンおよび／またはスチレンで構成される疎水性ドメインとアクリルおよび／またはメタクリル酸エステルで構成される温和な親水性ドメイン、を含む、［２６］に記載の方法。
［２８］
前記油中前記ｎ−３脂肪酸部分がＤＨＡ、ＤＰＡおよびＥＰＡ部分のうちのいずれか１つ、ならびにそれらの少なくとも２つの任意の混合物である、［２０］から［２７］のいずれか一項に記載の方法。
［２９］
前記ｎ−３脂肪酸が遊離形態で、またはモノ−、ジ−もしくはトリグリセリドの脂肪酸部分として、または油、特に魚油および油性油、の極性脂質として存在する、［２０］から［２８］のいずれか一項に記載の方法。
［３０］
（ａ）リパーゼを適切な緩衝液に溶解してリパーゼ溶液を得るステップと；
（ｂ）適量の微孔性ポリマー樹脂を前記リパーゼ溶液に添加して混合物を得るステップであって、前記微孔性ポリマー樹脂は交互の疎水性モノマードメインと親水性、特に温和な親水性モノマーの、ドメインを含むステップと；
（ｃ）ステップ（ｂ）の前記得られた混合物を、混合／振盪しながら適切な時間、適切な温度で維持し、それによって前記リパーゼを前記微孔性ポリマー樹脂上に固定化するステップと；
（ｄ）前記樹脂上に固定化された前記得られたリパーゼを濾別して固定化リパーゼ調製物を得るステップと；
（ｅ）場合により前記固定化リパーゼ調製物を適当な溶媒で洗浄するステップと；
（ｆ）前記洗浄した固定化リパーゼ調製物を５％ｗ／ｗ未満の水のレベルまで乾燥させるステップと
を含む、微孔性ポリマー樹脂上にリパーゼを固定化する方法。
［３１］
前記樹脂が、交互の疎水性ドメインと親水性ドメイン、特に疎水性脂肪族または芳香族モノマーで構成される疎水性ドメインとアクリルまたはメタクリル酸エステルで構成される温和な親水性ドメイン、を有する巨大網状多孔質ポリマー、例えばメタクリル酸メチルと架橋したジビニルベンゼンである、［３０］に記載の方法。
［３２］
前記疎水性ドメインと前記温和な親水性ドメインとの間の重量比が、それぞれ約１０：０．１〜約１：１０である、［３０］または［３１］に記載の方法。
［３３］
交互の疎水性ドメインと親水性ドメインを有する前記巨大網状多孔質ポリマーが、メタクリル酸メチルと架橋したジビニルベンゼンであり、ジビニルベンゼンドメインとメタクリル酸メチルドメインの比がそれぞれ１０−９９〜９０−１である、［３２］に記載の方法。
［３４］
前記リパーゼが、遊離脂肪酸としてまたは脂肪酸アシル基の形態の飽和脂肪酸、モノ−、ジ−およびトリ−不飽和脂肪酸のエステル交換／エステル化／加水分解に対する高い選択性、ならびに遊離脂肪酸としてまたは脂肪酸アシル基としてのｎ−３脂肪酸のエステル交換／エステル化／加水分解に対する低い選択性を有する、［３０］から［３３］のいずれか一項に記載の方法。
［３５］
前記リパーゼがカンジダ・アンタークティカＡ（Ｃａｎｄｉｄａ  ａｎｔａｒｃｔｉｃａ  Ａ）（ＣＡＬＡ）、リゾムコール・ミエヘイ（Ｒｈｉｚｏｍｕｃｏｒ  ｍｉｅｈｅｉ）、シュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）種、リゾプス・ニベウス（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ｎｉｖｅｕｓ）、ムコール・ジャバニクス（Ｍｕｃｏｒ  ｊａｖａｎｉｃｕｓ）、リゾプス・オリゼ（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ｏｒｙｚａｅ）、クロコウジカビ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ）、ペニシリウム・カメンベルティ（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｃａｍｅｍｂｅｒｔｉｉ）、アルカリゲネス属（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ）種、カンジダ・アンタークティカＢ（Ｃａｎｄｉｄａ  ａｎｔａｒｃｔｉｃａ  Ｂ）（ＣＡＬＢ）、バークホルデリア属（Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ）種、サーモミセス・ラヌギノサ（Ｔｈｅｒｍｏｍｙｃｅｓ  ｌａｎｕｇｉｎｏｓａ）またはクロモバクテリウム・ヴィスコスム（Ｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｖｉｓｃｏｓｕｍ）のいずれか１つに由来するリパーゼである、［３０］から［３４］のいずれか一項に記載の方法。
［３６］
前記適切な温度が１０〜５０℃であり、前記適切な時間が約０．５〜４８時間、特に約６時間であり、前記固定化リパーゼ調製物を洗浄するのに適した前記溶媒がアセトンまたは水であり、前記乾燥がデシケーターまたは凍結乾燥器中である、［３０］から［３５］のいずれか一項に記載の方法。
［３７］
前記固定化リパーゼ調製物を、５％ｗ／ｗ未満、特に２％ｗ／ｗ未満、より具体的には１．５％ｗ／ｗ未満、とりわけ１％ｗ／ｗ未満、の含水量まで乾燥させる、［３０］から［３６］のいずれか一項に記載の方法。
［３８］
エステル交換（ｔｒａｎｓｅｓｔｅｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ）、エステル交換（ｉｎｔｅｒｅｓｔｅｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ）、エステル化または加水分解反応のいずれにおいても、グリセリドまたはアルキルエステルのように遊離形態またはエステル化形態であり得るｎ−３脂肪酸に対する前記リパーゼの選択性が調節される、特に、前記リパーゼの触媒活性を維持しながら、前記活性が低下される、［３０］から［３７］のいずれか一項に記載の方法。
［３９］
前記ｎ−３脂肪酸が、遊離形態で、またはモノ−、ジ−もしくはトリグリセリドの脂肪酸部分として、または油、特に食用油、より具体的には魚油、真菌油もしくはｎ−３脂肪酸を含有する食用油性物質の極性脂質として存在する、［３８］に記載の方法。
［４０］
前記固定化リパーゼが、少なくとも１０回の反応サイクルにわたってその触媒活性の少なくとも７０％を保持する、［３０］から［３９］のいずれか一項に記載の方法。
［４１］
微孔性ポリマー樹脂支持体上に固定化されたリパーゼを含む固定化リパーゼ調製物であって、前記巨大網状多孔質ポリマー樹脂は混合の疎水性ドメインと温和な親水性ドメインを含み、前記疎水性ドメインは疎水性脂肪族または芳香族モノマーで構成され、前記親水性ドメインは温和な親水性モノマー、特にアクリル酸もしくはメタクリル酸エステル、またはこれらの任意の組み合わせで構成される、固定化リパーゼ調製物。
［４２］
交互の疎水性ドメインと親水性ドメインを有する前記巨大網状多孔質ポリマーが、メタクリル酸メチルと架橋したジビニルベンゼンであり、ジビニルベンゼンドメインとメタクリル酸メチルドメインの比がそれぞれ１０−９９％〜９０−１％である、［４１］に記載の固定化リパーゼ調製物。
［４３］
前記リパーゼが、遊離脂肪酸としてまたは脂肪酸アシル基の形態の飽和脂肪酸、モノ−、ジ−およびトリ−不飽和脂肪酸のエステル交換／エステル化／加水分解に対する高い選択性、ならびに遊離脂肪酸としてまたは脂肪酸アシル基としてのｎ−３脂肪酸のエステル交換／エステル化／加水分解に対する低い選択性を有する、［４１］または［４２］に記載の固定化リパーゼ調製物。
［４４］
前記リパーゼがカンジダ・アンタークティカＡ（Ｃａｎｄｉｄａ  ａｎｔａｒｃｔｉｃａ  Ａ）（ＣＡＬＡ）、リゾムコール・ミエヘイ（Ｒｈｉｚｏｍｕｃｏｒ  ｍｉｅｈｅｉ）、カンジダ・アンタークティカＢ（Ｃａｎｄｉｄａ  ａｎｔａｒｃｔｉｃａ  Ｂ）（ＣＡＬＢ）、シュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）種、リゾプス・ニベウス（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ｎｉｖｅｕｓ）、ムコール・ジャバニクス（Ｍｕｃｏｒ  ｊａｖａｎｉｃｕｓ）、リゾプス・オリゼ（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ｏｒｙｚａｅ）、クロコウジカビ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ）、ペニシリウム・カメンベルティ（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｃａｍｅｍｂｅｒｔｉｉ）、アルカリゲネス属（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ）種、バークホルデリア属（Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ）種、サーモミセス・ラヌギノサ（Ｔｈｅｒｍｏｍｙｃｅｓ  ｌａｎｕｇｉｎｏｓａ）またはクロモバクテリウム・ヴィスコスム（Ｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｖｉｓｃｏｓｕｍ）のいずれか１つに由来するリパーゼである、［４１］から［４３］のいずれか一項に記載の固定化リパーゼ調製物。
［４５］
少なくとも１０回の反応サイクルにわたってその触媒活性の少なくとも７０％を保持する、［４１］から［４４］のいずれか一項に記載の固定化リパーゼ調製物。