【手続補正書】
【提出日】令和3年7月2日(2021.7.2)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
組成物であって、
（ａ）免疫細胞と、
（ｂ）前記免疫細胞にトランスフェクトされた、サイトカインもしくは成長因子分子またはそのバリアントをコードする１または複数のｍＲＮＡと
を含む、組成物。
【請求項２】
修飾された免疫細胞を調製する方法であって、免疫細胞にｉｎ  ｖｉｔｒｏで、サイトカインもしくは成長因子分子またはそのバリアントをコードする１または複数のｍＲＮＡをトランスフェクトするステップを含む、方法。
【請求項３】
前記１または複数のｍＲＮＡが、リポフェクションによって、電気穿孔によって、ヌクレオポレーションによって、流体力学的ショックによって、またはナノ粒子において、前記免疫細胞にトランスフェクトされる、請求項１に記載の組成物または請求項２に記載の方法。
【請求項４】
療法における使用のための組成物であって、サイトカインもしくは成長因子分子またはそのバリアントをコードする１または複数のｍＲＮＡを含み、
前記療法が、前記組成物を対象に投与して、免疫細胞のｉｎ  ｖｉｖｏトランスフェクション、およびそれに続く前記免疫細胞による前記サイトカインもしくは成長因子分子または前記そのバリアントの発現を可能にするステップを含み、
前記１または複数のｍＲＮＡから発現される前記サイトカインもしくは成長因子分子または前記そのバリアントが、前記対象における前記トランスフェクトされた免疫細胞および／または他の免疫細胞において、ｉｎ  ｖｉｖｏで、免疫応答を刺激するように作用する、組成物。
【請求項５】
前記サイトカインもしくは成長因子分子または前記そのバリアントが、必要に応じてペプチドリンカーを通じて、前記免疫細胞上の細胞表面抗原に対する完全または部分的な結合部位を含む免疫細胞標的化部分に連結されており、それにより、前記１または複数のｍＲＮＡによってコードされる融合タンパク質を形成する、請求項１〜４のいずれか１項に記載の組成物、方法、または使用のための組成物。
【請求項６】
発現された場合に、前記融合タンパク質が、前記免疫細胞から分泌される、請求項５に記載の組成物、方法、または使用のための組成物。
【請求項７】
前記ｍＲＮＡが、シグナルペプチドをコードする配列をさらに含む、請求項１〜６のいずれか１項に記載の組成物、方法、または使用のための組成物。
【請求項８】
前記ｍＲＮＡが、修飾されたｍＲＮＡである、請求項１〜７のいずれか１項に記載の組成物、方法、または使用のための組成物。
【請求項９】
前記サイトカインもしくは成長因子分子または前記そのバリアントが、２またはそれより多くのｍＲＮＡによって一緒にコードされる、請求項１〜８のいずれか１項に記載の組成物、方法、または使用のための組成物。
【請求項１０】
前記免疫細胞が、１または複数の操作されたポリヌクレオチドでさらにトランスフェクトされる、請求項１〜９のいずれか１項に記載の組成物、方法、または使用のための組成物。
【請求項１１】
前記１または複数の操作されたポリヌクレオチドが、前記１または複数のｍＲＮＡｓとともに、前記免疫細胞にコトランスフェクトされる、請求項１０に記載の組成物、方法、または使用のための組成物。
【請求項１２】
前記免疫細胞が、健康なおよび／または非悪性の免疫細胞である、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の組成物、方法、または使用のための組成物。
【請求項１３】
前記免疫細胞が、リンパ球であり、必要に応じて、Ｔ細胞であり、さらに必要に応じて、前記Ｔ細胞が、細胞傷害性Ｔ細胞、調節性Ｔ細胞、ＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、αβ  Ｔ細胞、γδ  Ｔ細胞、腫瘍浸潤Ｔ細胞、またはキメラ抗原受容体を発現するＴ細胞である、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の組成物、方法、または使用のための組成物。
【請求項１４】
前記免疫細胞が、調節性Ｔ細胞である、請求項１３に記載の組成物、方法、または使用のための組成物。
【請求項１５】
前記サイトカイン分子が、ＩＬ−２、ＩＬ−１５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−１２、ＩＬ−１８、ＩＬ−２１、ＩＬ−２３またはＩＬ−２７のうちの１または複数から選択される、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の組成物、方法、または使用のための組成物。
【請求項１６】
前記サイトカイン分子が、ＩＬ−１２および／またはＩＬ−１５である、請求項１５に記載の組成物、方法、または使用のための組成物。
【請求項１７】
前記免疫細胞標的化部分が、前記免疫細胞上の前記細胞表面抗原に結合する、抗体もしくはその抗原結合性断片、非抗体スキャフォールド、またはリガンドから選択される、請求項５〜１６のいずれか１項に記載の組成物、方法、または使用のための組成物。
【請求項１８】
前記免疫細胞上の前記細胞表面抗原が、ＣＤ４、ＣＤ２５、ＣＤ４５、ＣＤ８、ＣＤ３、ＣＤ１１ａ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１８、ＣＤ１２７、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＤ１９７、ＣＤ３８、ＣＤ２７、ＣＤ１９６、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ５、ＣＤ８４、ＣＤ２２９、ＣＣＲ１、ＣＣＲ５、ＣＣＲ４、ＣＣＲ６、ＣＣＲ８、ＣＣＲ１０、ＣＤ１６、ＣＤ５６、ＣＤ１３７、ＯＸ４０またはＧＩＴＲのうちの１または複数から選択される、請求項５〜１７のいずれか１項に記載の組成物、方法、または使用のための組成物。
【請求項１９】
前記免疫細胞標的化部分が、ＣＤ４５に結合する抗体またはその抗原結合性断片を含む、請求項１８に記載の組成物、方法、または使用のための組成物。
【請求項２０】
前記免疫細胞が、前記免疫細胞の表面上に結合した融合分子をさらに含み、前記融合分子が、前記免疫細胞によって発現されるかまたはそれ以外の方法で前記免疫細胞上に表される細胞表面抗原との親和性を有する免疫細胞標的化部分に作動可能に連結した、サイトカインもしくは成長因子分子またはそのバリアントを含む、請求項１〜１９のいずれか１項に記載の組成物、方法、または使用のための組成物。
【請求項２１】
前記１または複数のｍＲＮＡによってコードされる前記サイトカインもしくは成長因子分子または前記そのバリアントが、前記免疫細胞の表面上に結合した前記融合分子の前記サイトカインもしくは成長因子分子または前記そのバリアントと同じである、請求項２０に記載の組成物、方法、または使用のための組成物。
【請求項２２】
存在する場合、前記１または複数のｍＲＮＡによってコードされる前記免疫細胞標的化部分が、前記免疫細胞の表面上に結合した前記融合分子の前記免疫細胞標的化部分と同じである、請求項２０または２１に記載の組成物、方法、または使用のための組成物。
【請求項２３】
医薬組成物であって、
（ａ）請求項１、３および５〜２２のいずれか１項に記載の組成物と、
（ｂ）薬学的に許容される担体、賦形剤、または安定剤と
を含み、必要に応じて、前記医薬組成物が、非経口投与のために製剤化されている、医薬組成物。
【請求項２４】
細胞療法における使用のための、請求項１、３および５〜２３のいずれか１項に記載の組成物または医薬組成物。
【請求項２５】
前記１または複数のｍＲＮＡから発現される前記サイトカインもしくは成長因子分子または前記そのバリアントが、前記対象における前記トランスフェクトされる免疫細胞および／または他の免疫細胞において、ｉｎ  ｖｉｖｏで、免疫応答を刺激するように作用する、請求項２４に記載の使用のための組成物または医薬組成物。
【請求項２６】
前記療法または前記細胞療法が、がんの処置であり、前記１または複数のｍＲＮＡから発現される前記サイトカインもしくは成長因子分子または前記そのバリアントが、前記対象における前記トランスフェクトされる免疫細胞および／または他の免疫細胞において、ｉｎ  ｖｉｖｏで、前記がんに対する免疫応答を刺激するように作用する、請求項４〜２２、２４および２５のいずれか１項に記載の使用のための組成物または医薬組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１８１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１８１】
別途定義されない限り、本明細書において使用されるすべての技術用語および科学用語は、本開示が属する技術分野の当業者によって広く理解されているものと同じ意味を有する。本明細書に記載されるものに類似であるかまたはそれと同等である方法および材料を、本開示の実施または試験において使用することができるが、好適な方法および材料が、以下に記載されている。本明細書に記載されるすべての刊行物、特許出願、特許、および他の参考文献は、参照によりその全体が組み込まれる。加えて、材料、方法、および実施例は、例示に過ぎず、限定することを意図するものではない。
特定の実施形態では、例えば、以下が提供される：
（項目１）
（ａ）ｍＲＮＡを含む１つまたは複数の操作されたポリヌクレオチドであって、標的免疫細胞における細胞表面抗原に対する完全または部分的な結合部位を含む免疫細胞標的化部分にペプチドリンカーによって作動可能に連結した、サイトカインもしくは成長因子分子、またはそのバリアントを含む、融合タンパク質をコードする、１つまたは複数の操作されたポリヌクレオチドと、
（ｂ）前記標的免疫細胞と
を含む、組成物。
（項目２）
前記１つまたは複数の操作されたポリヌクレオチドのうちの少なくとも１つが、シグナルペプチドをコードする配列をさらに含む、項目１に記載の組成物。
（項目３）
前記ｍＲＮＡが、修飾されたｍＲＮＡである、項目１に記載の組成物。
（項目４）
前記１つまたは複数の操作されたポリヌクレオチドが、非組込みＲＮＡを含む、項目１に記載の操作されたポリヌクレオチド分子。
（項目５）
免疫細胞において一過的な遺伝子発現を誘導する方法であって、標的免疫細胞を、有効量の、ｍＲＮＡを含む１つまたは複数の操作されたポリヌクレオチドを含む第１の組成物と、前記ポリヌクレオチドを前記免疫細胞に導入するのに好適な条件下において接触させるステップを含み、前記１つまたは複数の操作されたポリヌクレオチドが、前記標的免疫細胞における細胞表面抗原に対する完全または部分的な結合部位を含む免疫細胞標的化部分にペプチドリンカーによって作動可能に連結した、サイトカインもしくは成長因子分子、またはそのバリアントを含む、融合タンパク質をコードする、方法。
（項目６）
前記免疫細胞が、その表面上に発現されるかまたはそれ以外の方法で表される前記細胞表面抗原を有する、項目５に記載の方法。
（項目７）
前記１つまたは複数の操作されたポリヌクレオチドが、リポフェクションによって、電気穿孔によって、ヌクレオポレーションによって、流体力学的ショックによって、またはナノ粒子において、前記免疫細胞に導入される、項目５に記載の方法。
（項目８）
サイトカインもしくは成長因子分子、またはそのバリアントを、免疫細胞において発現させる方法であって、標的免疫細胞を、ｍＲＮＡを含む１つまたは複数の操作されたポリヌクレオチドと、操作されたポリヌクレオチドを前記免疫細胞に導入するのに好適な条件下において接触させるステップを含み、前記１つまたは複数の操作されたポリヌクレオチドが、前記標的免疫細胞における細胞表面抗原に対する完全または部分的な結合部位を含む免疫細胞標的化部分にペプチドリンカーによって作動可能に連結した、サイトカインもしくは成長因子分子、またはそのバリアントを含む、融合タンパク質をコードする、方法。
（項目９）
前記接触させるステップが、ｉｎ  ｖｉｖｏまたはｅｘ  ｖｉｖｏで行われる、項目５または８に記載の方法。
（項目１０）
前記免疫細胞を、有効量の、１つまたは複数の操作されたポリヌクレオチドを含む第２の組成物と、前記第２の組成物中の前記１つまたは複数の操作されたポリヌクレオチドを前記免疫細胞に導入するのに好適な条件下において接触させるステップをさらに含む、項目５に記載の方法。
（項目１１）
前記第２の組成物が、サイトカイン分子、成長因子分子、共刺激性分子、および前述のもののいずれかのバリアントのうちの１つまたは複数を一緒にコードする、１つまたは複数の操作されたポリヌクレオチドを含む、項目１０に記載の方法。
（項目１２）
第１の組成物中の前記１つまたは複数の操作されたポリヌクレオチドおよび前記第２の組成物中の前記１つまたは複数の操作されたポリヌクレオチドが、免疫細胞にコトランスフェクトされる、項目１０に記載の方法。
（項目１３）
１つまたは複数の操作されたポリヌクレオチドが免疫細胞の中にトランスフェクトされている、該免疫細胞を含む、修飾された免疫細胞であって、
前記１つまたは複数の操作されたポリヌクレオチドが、ｍＲＮＡを含み、前記１つまたは複数の操作されたポリヌクレオチドが、サイトカインもしくは成長因子分子、またはそのバリアントをコードし、
必要に応じて、前記サイトカインもしくは成長因子分子が、免疫細胞によって発現されるかまたはそれ以外の方法で免疫細胞上に表される細胞表面抗原に対する完全または部分的な結合部位を有する免疫細胞標的化部分に作動可能に連結した融合分子として提供される、修飾された免疫細胞。
（項目１４）
前記免疫細胞が、健康なおよび／または非悪性の免疫細胞、リンパ球、またはＴ細胞である、項目１３に記載の修飾された免疫細胞。
（項目１５）
前記サイトカイン分子が、ＩＬ−１５、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−１２、ＩＬ−１８、ＩＬ−２１、ＩＬ−２３、またはＩＬ−２７のうちの１つまたは複数から選択される、項目１３に記載の修飾された免疫細胞。
（項目１６）
前記サイトカイン分子が、ＩＬ−１２および／またはＩＬ−１５である、項目１５に記載の修飾された免疫細胞。
（項目１７）
前記免疫細胞標的化部分が、免疫細胞表面受容体に結合する、抗体もしくはその抗原結合性断片、非抗体スキャフォールド、またはリガンドから選択され、前記免疫細胞表面受容体が、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ３、ＣＤ１１ａ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１８、ＣＤ２５、ＣＤ１２７、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＤ１９７、ＣＤ３８、ＣＤ２７、ＣＤ１９６、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ５、ＣＤ８４、ＣＤ２２９、ＣＣＲ１、ＣＣＲ５、ＣＣＲ４、ＣＣＲ６、ＣＣＲ８、ＣＣＲ１０、ＣＤ１６、ＣＤ５６、ＣＤ１３７、ＯＸ４０、またはＧＩＴＲのうちの１つまたは複数から選択される、項目１３に記載の修飾された免疫細胞。
（項目１８）
前記免疫細胞標的化部分が、ＣＤ４５に結合する抗体またはその抗原結合性断片を含む、項目１７に記載の修飾された免疫細胞。
（項目１９）
前記融合分子が、前記免疫細胞標的化部分および前記サイトカイン分子を作動可能に連結させるためのリンカーをさらに含む、項目１３に記載の修飾された免疫細胞。
（項目２０）
前記免疫細胞が、前記免疫細胞の表面上に結合した融合分子であって、前記免疫細胞によって発現されるかまたはそれ以外の方法で前記免疫細胞上に表される細胞表面抗原との親和性を有する免疫細胞標的化部分に作動可能に連結した、サイトカインもしくは成長因子分子、またはそのバリアントを含む、融合分子をさらに含む、項目１３に記載の修飾された免疫細胞。
（項目２１）
前記１つまたは複数の操作されたポリヌクレオチドによってコードされる前記サイトカインもしくは成長因子分子、またはそのバリアントが、前記免疫細胞の表面上に結合した前記融合分子の前記サイトカインもしくは成長因子分子、またはそのバリアントとは異なる、項目２０に記載の修飾された免疫細胞。
（項目２２）
前記１つまたは複数の操作されたポリヌクレオチドによってコードされる前記サイトカインもしくは成長因子分子、またはそのバリアントが、前記免疫細胞の表面上に結合した前記融合分子の前記サイトカインもしくは成長因子分子、またはそのバリアントと同じである、項目２０に記載の修飾された免疫細胞。
（項目２３）
前記１つまたは複数の操作されたポリヌクレオチドによってコードされる免疫細胞標的化部分が、前記免疫細胞の表面上に結合した前記融合分子の前記免疫細胞標的化部分とは異なる、項目２０に記載の修飾された免疫細胞。
（項目２４）
前記１つまたは複数の操作されたポリヌクレオチドによってコードされる免疫細胞標的化部分が、前記免疫細胞の表面上に結合した前記融合分子の前記免疫細胞標的化部分と同じである、項目２０に記載の修飾された免疫細胞。
（項目２５）
前記１つまたは複数の操作されたポリヌクレオチドを、前記免疫細胞にトランスフェクトするステップを含む、項目１３から２４のいずれか１項に記載の修飾された免疫細胞を調製するための方法。
（項目２６）
細胞療法を提供する方法であって、項目１３から２４のいずれか１項に記載の複数の修飾された免疫細胞を、それを必要とする対象に投与するステップを含む、方法。
（項目２７）
対象におけるがんの処置のための方法であって、ヒト対象に、項目１に記載の１つまたは複数の操作されたポリヌクレオチドを含む組成物を、Ｔ細胞のｉｎ  ｖｉｖｏトランスフェクション、およびそれに続く前記１つまたは複数の操作されたポリヌクレオチドによってコードされる前記サイトカインもしくは成長因子分子、またはそのバリアントの発現に好適な形式および条件下において投与するステップを含み、前記１つまたは複数の操作されたポリヌクレオチドによって発現される前記サイトカインもしくは成長因子分子、またはそのバリアントが、前記対象における前記トランスフェクトされたＴ細胞および／または他の免疫細胞において、ｉｎ  ｖｉｖｏで、前記がんに対する免疫応答を刺激するように作用する、方法。
（項目２８）
前記サイトカインもしくは成長因子分子、またはそのバリアントの前記発現が、一過的に発現される、項目２７に記載の方法。
（項目２９）
前記投与が、静脈内に、または腫瘍内注射によって行われる、項目２７に記載の方法。
（項目３０）
対象におけるがんの処置のための方法であって、
（ａ）ヒト対象に、細胞治療用組成物を投与するステップであって、前記組成物が、がん細胞またはがん細胞が存在する組織にホーミングするＴ細胞の集団を含み、前記Ｔ細胞が、複数の免疫刺激性融合分子であって、それぞれの融合分子が（ｉ）免疫刺激性サイトカインまたは成長因子分子、および（ｉｉ）前記Ｔ細胞における細胞表面抗原に対する親和性を有する免疫細胞標的化部分を含む、複数の免疫刺激性融合分子によって修飾されており、前記複数の免疫刺激性融合分子が、前記Ｔ細胞の表面に結合している、ステップと、（ｂ）前記ヒト対象に、項目１に記載の１つまたは複数の操作されたポリヌクレオチドを含む組成物を、ステップ（ａ）において投与される修飾されたＴ細胞のｉｎ  ｖｉｖｏトランスフェクション、およびそれに続く前記１つまたは複数の操作されたポリヌクレオチドによってコードされる前記サイトカインまたは成長因子分子の発現に好適な形式および条件下において投与するステップと
を含み、
ステップ（ａ）において投与される前記細胞治療用組成物中の、および／またはステップ（ｂ）において投与される前記１つもしくは複数の操作されたポリヌクレオチドによって発現される、前記サイトカインおよび／または成長因子分子が、前記対象におけるＴ細胞の前記集団および／または他の免疫細胞において、ｉｎ  ｖｉｖｏで、前記がんに対する免疫応答を刺激するように作用する、方法。