【手続補正書】
【提出日】令和3年4月7日(2021.4.7)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（i）脆弱なＣＤ３４＋造血幹細胞（ＨＳＣ）集団及び／又はＣＤ３４＋ＬｏＨＳＣ集団を有する対象から取得したＣＤ３４＋細胞を含む生体試料から、ＣＤ３＋、ＣＤ１４＋、ＣＤ１６＋及びＣＤ１９＋細胞のみを除去する工程；
(ii)前記生体試料内に残ったＣＤ３４＋細胞を、治療用遺伝子を含むウイルスベクターを前記残ったＣＤ３４＋細胞のゲノムに挿入することによって遺伝子改変する工程；並びに
(iii)前記遺伝子改変されたＣＤ３４＋細胞を、前記対象への投与のために製剤化する工程を含む、方法。
【請求項２】
前記対象がファンコーニ貧血を有するヒト患者である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
治療用遺伝子が、ＦａｎｃＡ、ＦａｎｃＢ、ＦａｎｃＣ、ＦａｎｃＤ１、ＦａｎｃＤ２、ＦａｎｃＥ、ＦａｎｃＦ、ＦａｎｃＧ、ＦａｎｃＩ、ＦａｎｃＪ、ＦａｎｃＬ、ＦａｎｃＭ、ＦａｎｃＮ、ＦａｎｃＯ、ＦａｎｃＰ、ＦａｎｃＱ、ＦａｎｃＲ、ＦａｎｃＳ、ＦａｎｃＴ、ＦａｎｃＵ、ＦａｎｃＶ又はＦａｎｃＷを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記除去する工程が、ＣＤ３に結合する結合タンパク質、ＣＤ１４に結合する結合タンパク質、ＣＤ１６に結合する結合タンパク質及びＣＤ１９に結合する結合タンパク質からなる結合タンパク質と、前記生体試料を接触させる工程を含み、結合タンパク質が、磁気ビーズ、フルオロフォア及び／又は親和性タグに結合されている、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記除去する工程が、磁気分離、蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣｓ）、ナノ選別、アフィニティークロマトグラフィー、パニング及び／又は選択的凝集を実施する工程を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記ウイルスベクターが、レンチウイルスベクターである、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記レンチウイルスベクターが、配列番号５６で表される配列を有する、ヒトホスホグリセリン酸キナーゼ（ＰＧＫ）プロモータを含む、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記生体試料が、骨髄試料又は動員末梢血試料である、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
治療的又は実験的目的のために、アクセサリー細胞を含むＣＤ３４＋細胞集団を形成する工程を含む方法であって、
該方法は、脆弱なＣＤ３４＋細胞及び／又はＣＤ３４＋Ｌｏ細胞集団を含む骨髄試料又は動員末梢血試料から、赤血球を除去する工程；及びその後、
（i）ＣＤ４５ＲＡ＋細胞のみ、
（ii）ＣＤ３＋、ＣＤ１４＋及びＣＤ１９＋細胞のみ、又は
（iii）ＣＤ３＋、ＣＤ１４＋、ＣＤ１６＋及び及びＣＤ１９＋細胞のみ
を試料から除去する工程；
を含み、
これにより、治療的又は実験的目的のために、アクセサリー細胞を含むＣＤ３４＋細胞集団を形成する方法。
【請求項１０】
アクセサリー細胞が間葉系幹細胞である、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
ＣＤ３４＋細胞集団内のＣＤ３４＋細胞が、ＣＤ３４＋、ＣＤ４５ＲＡ−及びＣＤ９０＋である、請求項９に記載の方法。
【請求項１２】
ＣＤ３４＋細胞集団内のＣＤ３４＋細胞を遺伝子改変する工程をさらに含む、請求項９に記載の方法。
【請求項１３】
前記遺伝子改変する工程が、レンチウイルスベクターをＣＤ３４＋細胞に形質導入する工程を含む、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記レンチウイルスベクターが、配列番号３１、３２、３３、３４、３５、４１、４２、４３、４６、４７、４８、４９又は５０で表される配列を含む、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記レンチウイルスベクターが、配列番号３６、３７、３８、３９、４０、４４、４５、５１、５２、５３、５４又は５５で表される配列を有するタンパク質をコードする配列を含む、請求項１３に記載の方法。
【請求項１６】
前記レンチウイルスベクターが、治療用遺伝子を含む、請求項１３に記載の方法。
【請求項１７】
前記治療用遺伝子が、ＦａｎｃＡ、ＦａｎｃＢ、ＦａｎｃＣ、ＦａｎｃＤ１、ＦａｎｃＤ２、ＦａｎｃＥ、ＦａｎｃＦ、ＦａｎｃＧ、ＦａｎｃＩ、ＦａｎｃＪ、ＦａｎｃＬ、ＦａｎｃＭ、ＦａｎｃＮ、ＦａｎｃＯ、ＦａｎｃＰ、ＦａｎｃＱ、ＦａｎｃＲ、ＦａｎｃＳ、ＦａｎｃＴ、ＦａｎｃＵ、ＦａｎｃＶ、ＦａｎｃＷ、γＣ、ＪＡＫ３、ＩＬ７ＲＡ、ＲＡＧ１、ＲＡＧ２、ＤＣＬＲＥ１Ｃ、ＰＲＫＤＣ、ＬＩＧ４、ＮＨＥＪ１、ＣＤ３Ｄ、ＣＤ３Ｅ、ＣＤ３Ｚ、ＣＤ３Ｇ、ＰＴＰＲＣ、ＺＡＰ７０、ＬＣＫ、ＡＫ２、ＡＤＡ、ＰＮＰ、ＷＨＮ、ＣＨＤ７、ＯＲＡＩ１、ＳＴＩＭ１、ＣＯＲＯ１Ａ、ＣＩＩＴＡ、ＲＦＸＡＮＫ、ＲＦＸ５、ＲＦＸＡＰ、ＲＭＲＰ、ＤＫＣ１、ＴＥＲＴ、ＴＩＮＦ２、ＤＣＬＲＥ１Ｂ、ＳＬＣ４６Ａ１、Ｆ８、Ｆ９、ＩＤＵＡ、イズロニダーゼ、ＩＤＳ、ＧＮＳ、ＨＧＳＮＡＴ、ＳＧＳＨ、ＮＡＧＬＵ、ＧＵＳＢ、ＧＡＬＮＳ、ＧＬＢ１、ＡＲＳＢ、ＨＹＡＬ１、１０１Ｆ６、１２３Ｆ２、５３ＢＰ２、ａｂｌ、ＡＢＬＩ、ＡＤＰ、ａＦＧＦ、ＡＰＣ、ＡｐｏＡＩ、ＡｐｏＡＩＶ、ＡｐｏＥ、ＡＴＭ、ＢＡＩ−１、ＢＤＮＦ、Ｂｅｔａ＊（ＢＬＵ）、ｂＦＧＦ、ＢＬＣ１、ＢＬＣ６、ＢＲＣＡ１、ＢＲＣＡ２、ＣＢＦＡ１、ＣＢＬ、Ｃ−ＣＡＭ、ＣＦＴＲ、ＣＮＴＦ、ＣＯＸ−１、ＣＳＦＩＲ、ＣＴＳ−１、シトシンデアミナーゼ、ＤＢＣＣＲ−１、ＤＣＣ、Ｄｐ、ＤＰＣ−４、Ｅ１Ａ、Ｅ２Ｆ、ＥＢＲＢ２、ｅｒｂ、ＥＲＢＡ、ＥＲＢＢ、ＥＴＳ１、ＥＴＳ２、ＥＴＶ６、Ｆａｂ、ＦＣＣ、ＦＧＦ、ＦＧＲ、ＦＨＩＴ、ｆｍｓ、ＦＯＸ、ＦＵＳ  １、ＦＵＳ１、ＦＹＮ、Ｇ−ＣＳＦ、ＧＤＡＩＦ、Ｇｅｎｅ  ２１、Ｇｅｎｅ  ２６、ＧＭ−ＣＳＦ、ＧＭＦ、ｇｓｐ、ＨＣＲ、ＨＩＣ−１、ＨＲＡＳ、ｈｓｔ、ＩＧＦ、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１  ＩＬ−１２、ＩＮＧ１、インターフェロンα、インターフェロンβ、インターフェロンγ、ＩＲＦ−１、ＪＵＮ、ＫＲＡＳ、ＬＣＫ、ＬＵＣＡ−１、ＬＵＣＡ−２、ＬＹＮ、ＭＡＤＨ４、ＭＡＤＲ２、ＭＣＣ、ｍｄａ７、ＭＤＭ２、ＭＥＮ−Ｉ、ＭＥＮ−ＩＩ、ＭＬＬ、ＭＭＡＣ１、ＭＹＢ、ＭＹＣ、ＭＹＣＬ１、ＭＹＣＮ、ｎｅｕ、ＮＦ−１、ＮＦ−２、ＮＧＦ、ＮＯＥＹ１、ＮＯＥＹ２、ＮＲＡＳ、ＮＴ３、ＮＴ５、ＯＶＣＡ１、ｐ１６、ｐ２１、ｐ２７、ｐ５３、ｐ５７、ｐ７３、ｐ３００、ＰＧＳ、ＰＩＭ１、ＰＬ６、ＰＭＬ、ＰＴＥＮ、ｒａｆ、Ｒａｐ１Ａ、ｒａｓ、Ｒｂ、ＲＢ１、ＲＥＴ、ｒｋｓ−３、ＳｃＦｖ、ｓｃＦＶ  ｒａｓ、ＳＥＭ  Ａ３、ＳＲＣ、ＴＡＬ１、ＴＣＬ３、ＴＦＰＩ、トロンボスポンジン、チミジンキナーゼ、ＴＮＦ、ＴＰ５３、ｔｒｋ、Ｔ−ＶＥＣ、ＶＥＧＦ、ＶＨＬ、ＷＴ１、ＷＴ−１、ＹＥＳ、ｚａｃ１、α２β１、αｖβ３、αｖβ５、αｖβ６３、ＢＯＢ／ＧＰＲ１５、Ｂｏｎｚｏ／ＳＴＲＬ−３３／ＴＹＭＳＴＲ、ＣＣＲ２、ＣＣＲ３、ＣＣＲ５、ＣＣＲ８、ＣＤ４、ＣＤ４６、ＣＤ５５、ＣＸＣＲ４、アミノペプチダーゼ−Ｎ、ＨＨＶ−７、ＩＣＡＭ、ＩＣＡＭ−１、ＰＲＲ２／ＨｖｅＢ、ＨｖｅＡ、α−ジストログリカン、ＬＤＬＲ／α２ＭＲ／ＬＲＰ、ＰＶＲ、ＰＲＲ１／ＨｖｅＣ、ラミニン受容体、可溶性ＣＤ４��、ＣＴＬＡ、Ｆａｓ  Ｌ、グロビンファミリー遺伝子、ＷＡＳ、ｐｈｏｘ、ジスロトフィン、ピルビン酸キナーゼ、ＣＬＮ３、ＡＢＣＤ１、アリールスルファターゼＡ、ＳＦＴＰＢ、ＳＦＴＰＣ、ＮＬＸ２．１、ＡＢＣＡ３、ＧＡＴＡ１、リボソームタンパク質遺伝子、ＴＥＲＴ、ＴＥＲＣ、ＤＫＣ１、ＴＩＮＦ２、ＣＦＴＲ、ＬＲＲＫ２、ＰＡＲＫ２、ＰＡＲＫ７、ＰＩＮＫ１、ＳＮＣＡ、ＰＳＥＮ１、ＰＳＥＮ２、ＡＰＰ、ＳＯＤ１、ＴＤＰ４３、ＦＵＳ、ユビキリン２、Ｃ９ＯＲＦ７２及び／又はＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ７、ＣＤ５２、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−６に対する抗体；ＴＮＦ；Ｐ５３、ＰＴＰＮ２２、ＤＲＢ１＊１５０１／ＤＱＢ１＊０６０２若しくは自己反応性Ｔ細胞に特異的に存在するＴＣＲ；ＩＬ−４；ＩＬ−１０；ＩＬ−１２；ＩＬ−１３；ＩＬ−１Ｒａ、ｓＩＬ−１ＲＩ、ｓＩＬ−１ＲＩＩ；ｓＴＮＦＲＩ；及び／又はｓＴＮＦＲＩＩを含む、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
硫酸プロタミン、幹細胞因子、トロンボポエチン、Ｆｌｔ−３リガンド及びＮ−アセチルシステインを補填した培地におけるＣＤ３４＋細胞集団内のＣＤ３４＋細胞を培養する工程をさらに含む、請求項９に記載の方法。
【請求項１９】
請求項９に記載の方法により形成されたＣＤ３４＋細胞集団を含む、治療用細胞製剤。
【請求項２０】
ＣＤ３４＋細胞集団内のＣＤ３４＋細胞が遺伝子改変されている、請求項１９に記載された治療用細胞製剤。