【手続補正書】
【提出日】令和3年7月6日(2021.7.6)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくとも１つの免疫イニシエーターおよび少なくとも１つの免疫サステナーを産生することができる、改変された微生物。
【請求項２】
前記改変された微生物が、前記免疫イニシエーターを産生する酵素をコードする少なくとも１つの遺伝子配列を含み、前記免疫イニシエーターが、ＳＴＩＮＧアゴニスト、アルギニン、５−ＦＵ、ＴＮＦα、ＩＦＮγ、ＩＦＮβ１、アゴニスト抗ＣＤ４０抗体、ＣＤ４０Ｌ、ＳＩＲＰα、ＧＭＣＳＦ、アゴニスト抗ＯＸＯ４０抗体、ＯＸＯ４０Ｌ、アゴニスト抗４−１ＢＢ抗体、４−１ＢＢＬ、アゴニスト抗ＧＩＴＲ抗体、ＧＩＴＲＬ、抗ＰＤ１抗体、抗ＰＤＬ１抗体、またはアズリンである、請求項１に記載の改変された微生物。
【請求項３】
前記免疫イニシエーターを産生することができる前記酵素をコードする前記少なくとも１つの遺伝子配列が、ｄａｃＡ遺伝子配列またはｃＧＡＳ遺伝子配列であり、必要に応じて、前記ｃＧＡＳ遺伝子配列が、ヒトｃＧＡＳ遺伝子配列、Ｖｅｒｍｉｎｅｐｈｒｏｂａｃｔｅｒ  ｅｉｓｅｎｉａｅ  ｃＧＡＳ遺伝子配列、Ｋｉｎｇｅｌｌａ  ｄｅｎｉｔｒｉｆｉｃａｎｓ  ｃＧＡＳ遺伝子配列、およびＮｅｉｓｓｅｒｉａ  ｂａｃｉｌｌｉｆｏｒｍｉｓ  ｃＧＡＳ遺伝子配列から選択される、請求項１または請求項２に記載の改変された微生物。
【請求項４】
前記免疫イニシエーターを産生することができる前記酵素をコードする前記少なくとも１つの遺伝子配列が、前記改変された微生物の染色体に組み込まれているか、またはプラスミド上に存在し、必要に応じて、前記免疫イニシエーターを産生することができる前記酵素をコードする前記少なくとも１つの遺伝子配列が、誘導性プロモーターに作動可能に連結されており、必要に応じて、前記誘導性プロモーターが、温度、低酸素、嫌気、またはハイポキシック条件によって誘導される、請求項３に記載の改変された微生物。
【請求項５】
前記改変された微生物が、前記免疫サステナーを産生する酵素をコードする少なくとも１つの遺伝子配列を含み、前記免疫サステナーが、代謝変換因子、アルギニン、ＳＴＩＮＧアゴニスト、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、抗ＰＤ１抗体、抗ＰＤＬ１抗体、抗ＣＴＬＡ４抗体、アゴニスト抗ＧＩＴＲ抗体もしくはＧＩＴＲＬ、アゴニスト抗ＯＸ４０抗体もしくはＯＸ４０Ｌ、アゴニスト抗４−１ＢＢ抗体もしくは４−１ＢＢＬ、ＩＬ−１５、ＩＬ−１５  ｓｕｓｈｉ、ＩＦＮγ、またはＩＬ−１２である、請求項１または請求項２に記載の改変された微生物。
【請求項６】
前記免疫サステナーが、代謝変換因子であり、必要に応じて、前記代謝変換因子が、キヌレニン消費経路の少なくとも１つの酵素またはアデノシン消費経路の少なくとも１つの酵素である、請求項５に記載の改変された微生物。
【請求項７】
前記キヌレニン消費経路の前記少なくとも１つの酵素をコードする少なくとも１つの遺伝子配列を含み、必要に応じて、前記キヌレニン消費経路の前記少なくとも１つの酵素をコードする前記少なくとも１つの遺伝子配列が、キヌレニナーゼ遺伝子配列であり、必要に応じて、前記少なくとも１つの遺伝子配列が、ｋｙｎＵであり、必要に応じて、前記少なくとも１つの遺伝子配列が、構成的プロモーターに作動可能に連結されており、必要に応じて、前記キヌレニン消費経路の前記少なくとも１つの酵素をコードする前記少なくとも１つの遺伝子配列が、前記微生物の染色体に組み込まれているか、またはプラスミド上に存在し、必要に応じて、ｔｒｐＥの欠失または突然変異をさらに含む、請求項６に記載の改変された微生物。
【請求項８】
アデノシン消費経路の少なくとも１つの酵素をコードする少なくとも１つの遺伝子配列を含み、必要に応じて、前記アデノシン消費経路の前記少なくとも１つの酵素をコードする前記少なくとも１つの遺伝子配列が、ａｄｄ、ｘａｐＡ、ｄｅｏＤ、ｘｄｈＡ、ｘｄｈＢ、およびｘｄｈＣから選択され、必要に応じて、前記アデノシン消費経路の前記少なくとも１つの酵素をコードする前記少なくとも１つの遺伝子配列が、温度、低酸素、嫌気、またはハイポキシック条件によって誘導されるプロモーターに作動可能に連結されており、必要に応じて、前記アデノシン消費経路の前記少なくとも１つの酵素をコードする前記少なくとも１つの遺伝子配列が、前記微生物の染色体に組み込まれているか、またはプラスミド上に存在し、必要に応じて、前記微生物にアデノシンを移入するための酵素をコードする少なくとも１つの遺伝子配列を含み、必要に応じて、前記微生物にアデノシンを移入するための前記酵素をコードする前記少なくとも１つの遺伝子配列が、ｎｕｐＣまたはｎｕｐＧである、請求項５または請求項６に記載の改変された微生物。
【請求項９】
免疫サステナーが、アルギニンであり、必要に応じて、アルギニン生合成経路の少なくとも１つの酵素をコードする少なくとも１つの遺伝子配列を含み、必要に応じて、前記アルギニン生合成経路の前記少なくとも１つの酵素が、フィードバック耐性ａｒｇＡを含み、必要に応じて、前記アルギニン生合成経路の前記少なくとも１つの酵素をコードする前記少なくとも１つの遺伝子配列が、ａｒｇＡ、ａｒｇＢ、ａｒｇＣ、ａｒｇＤ、ａｒｇＥ、ａｒｇＦ、ａｒｇＧ、ａｒｇＨ、ａｒｇＩ、ａｒｇＪ、ｃａｒＡ、およびｃａｒＢからなる群から選択され、必要に応じて、前記アルギニン生合成経路の前記少なくとも１つの酵素をコードする前記少なくとも１つの遺伝子配列が、温度、低酸素、嫌気、またはハイポキシック条件によって誘導されるプロモーターに作動可能に連結されており、必要に応じて、前記アルギニン生合成経路の前記少なくとも１つの酵素をコードする前記少なくとも１つの遺伝子配列が、前記改変された微生物の染色体に組み込まれているか、またはプラスミド上に存在し、必要に応じて、アルギニンリプレッサー遺伝子（ａｒｇＲ）の欠失または突然変異をさらに含む、請求項５または請求項６に記載の改変された微生物。
【請求項１０】
細菌または酵母であり、必要に応じて、Ｅ．  ｃｏｌｉ細菌であり、必要に応じて、Ｅ．  ｃｏｌｉ  Ｎｉｓｓｌｅ細菌である、請求項１〜９のいずれか一項に記載の改変された微生物。
【請求項１１】
１つまたは複数の栄養要求体をもたらす遺伝子において少なくとも１つの突然変異または欠失を含み、必要に応じて、前記少なくとも１つの欠失または突然変異が、ｄａｐＡ遺伝子および／またはｔｈｙＡ遺伝子におけるものである、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の改変された微生物。
【請求項１２】
ファージ欠失を含む、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の改変された微生物。
【請求項１３】
ａ）請求項１〜１２のいずれか一項に記載の改変された微生物または
ｂ）免疫イニシエーターを産生する酵素をコードする少なくとも１つの遺伝子配列を含む少なくとも１つの改変された微生物および免疫サステナーを含む、組成物であって、前記免疫イニシエーターがＳＴＩＮＧアゴニストであり、前記ＳＴＩＮＧアゴニストはｃ−ジＡＭＰ、ｃ−ＧＡＭＰ、またはｃ−ジＧＭＰであり、前記免疫サステナーが、代謝変換因子、アルギニン、ＳＴＩＮＧアゴニスト、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、抗ＰＤ１抗体、抗ＰＤＬ１抗体、抗ＣＴＬＡ４抗体、アゴニスト抗ＧＩＴＲ抗体もしくはＧＩＴＲＬ、アゴニスト抗ＯＸ４０抗体もしくはＯＸ４０Ｌ、アゴニスト抗４−１ＢＢ抗体もしくは４−１ＢＢＬ、ＩＬ−１５、ＩＬ−１５  ｓｕｓｈｉ、ＩＦＮγ、またはＩＬ−１２である、組成物であって、必要に応じて、（ｉ）前記改変された微生物が前記免疫イニシエーターおよび前記免疫サステナーを産生することができ、（ｉｉ）前記少なくとも１つの改変された微生物が前記免疫イニシエーターを産生することができ、少なくとも第２の改変された微生物が、前記免疫サステナーを産生することができ、または（ｉｉｉ）前記免疫サステナーが、前記組成物中の改変された微生物によって産生されない、組成物、または
ｃ）免疫サステナーを産生する酵素をコードする少なくとも１つの遺伝子配列を含む少なくとも１つの改変された微生物および免疫イニシエーターを含む、組成物であって、前記免疫サステナーが、代謝変換因子、アルギニン、ＳＴＩＮＧアゴニスト、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、抗ＰＤ１抗体、抗ＰＤＬ１抗体、抗ＣＴＬＡ４抗体、アゴニスト抗ＧＩＴＲ抗体もしくはＧＩＴＲＬ、アゴニスト抗ＯＸ４０抗体もしくはＯＸ４０Ｌ、アゴニスト抗４−１ＢＢ抗体もしくは４−１ＢＢＬ、ＩＬ−１５、ＩＬ−１５  ｓｕｓｈｉ、ＩＦＮγ、またはＩＬ−１２であり、前記免疫イニシエーターがＳＴＩＮＧアゴニストであり、前記ＳＴＩＮＧアゴニストはｃ−ジＡＭＰ、ｃ−ＧＡＭＰ、またはｃ−ジＧＭＰである、組成物であって、必要に応じて、（ｉ）前記少なくとも１つの改変された微生物が前記免疫サステナーおよび前記ＳＴＩＮＧアゴニストを産生することができ、（ｉｉ）前記少なくとも１つの改変された微生物が前記免疫サステナーを産生することができ、少なくとも第２の改変された微生物が、前記免疫イニシエーターを産生することができ、または（ｉｉｉ）前記免疫イニシエーターが、前記組成物中の改変された微生物によって産生されない、組成物と、
薬学的に許容される担体とを含む、薬学的に許容される組成物であって、必要に応じて、前記組成物が腫瘍内投与のために製剤化される、組成物。
【請求項１４】
請求項１３に記載の薬学的に許容される組成物と、その使用のための説明書とを含む、キット。
【請求項１５】
対象を処置する方法において使用するための組成物であって、前記方法は、請求項１３に記載の薬学的に許容される組成物を前記対象に投与するステップを含み、
（ａ）それによって、前記対象におけるがんを処置する；
（ｂ）それによって、前記対象において前記免疫応答を誘導および維持する：
（ｃ）それによって、前記対象において前記アブスコパル効果を誘導する；
（ｄ）それによって、前記対象において前記免疫学的記憶を誘導する；
（ｅ）それによって、前記対象において前記腫瘍の前記部分的な退縮を誘導し、必要に応じて、前記部分的な退縮が、前記腫瘍のサイズの少なくとも約１０％、少なくとも約２５％、少なくとも約５０％、または少なくとも約７５％の減少である；または
（ｆ）それによって、前記対象において前記腫瘍の前記完全な退縮を誘導し、必要に応じて、前記腫瘍が、前記薬学的に許容される組成物の投与後に、前記対象において検出可能ではない、
組成物。
【請求項１６】
（ｉ）対象におけるがんを処置する、または（ｉｉ）対象において免疫応答を誘導および維持する方法において使用するための組成物であって、前記方法は、
（ａ）第１の改変された微生物を前記対象に投与するステップであって、前記第１の改変された微生物が、免疫イニシエーターを産生することができる少なくとも１つの酵素を発現することができ、前記免疫イニシエーターがＳＴＩＮＧアゴニストであり、前記ＳＴＩＮＧアゴニストはｃ−ジＡＭＰ、ｃ−ＧＡＭＰ、またはｃ−ジＧＭＰである、ステップと、
第２の改変された微生物を前記対象に投与するステップであって、前記第２の改変された微生物が、免疫サステナーを産生することができる少なくとも１つの酵素を発現することができ、前記免疫サステナーが、代謝変換因子、アルギニン、ＳＴＩＮＧアゴニスト、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、抗ＰＤ１抗体、抗ＰＤＬ１抗体、抗ＣＴＬＡ４抗体、アゴニスト抗ＧＩＴＲ抗体もしくはＧＩＴＲＬ、アゴニスト抗ＯＸ４０抗体もしくはＯＸ４０Ｌ、アゴニスト抗４−１ＢＢ抗体もしくは４−１ＢＢＬ、ＩＬ−１５、ＩＬ−１５  ｓｕｓｈｉ、ＩＦＮγ、またはＩＬ−１２である、ステップと、を含み、
必要に応じて、前記投与するステップが、同時に行われるか、前記第１の改変された微生物を前記対象に投与するステップが、前記第２の改変された微生物を前記対象に投与するステップの前に生じるか、または前記第２の改変された微生物を前記対象に投与するステップが、前記第１の改変された微生物を前記対象に投与するステップの前に生じる；
（ｂ）第１の改変された微生物を前記対象に投与するステップであって、前記第１の改変された微生物が、免疫イニシエーターを産生することができる少なくとも１つの酵素を発現することができ、前記免疫イニシエーターがＳＴＩＮＧアゴニストであり、前記ＳＴＩＮＧアゴニストはｃ−ジＡＭＰ、ｃ−ＧＡＭＰ、またはｃ−ジＧＭＰである、ステップと、
免疫サステナーを前記対象に投与するステップであって、前記免疫サステナーが、代謝変換因子、アルギニン、ＳＴＩＮＧアゴニスト、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、抗ＰＤ１抗体、抗ＰＤＬ１抗体、抗ＣＴＬＡ４抗体、アゴニスト抗ＧＩＴＲ抗体もしくはＧＩＴＲＬ、アゴニスト抗ＯＸ４０抗体もしくはＯＸ４０Ｌ、アゴニスト抗４−１ＢＢ抗体もしくは４−１ＢＢＬ、ＩＬ−１５、ＩＬ−１５  ｓｕｓｈｉ、ＩＦＮγ、またはＩＬ−１２である、ステップと、を含み、
必要に応じて、前記投与するステップが、同時に行われるか、前記第１の改変された微生物を前記対象に投与するステップが、前記免疫サステナーを前記対象に投与するステップの前に生じるか、または前記免疫サステナーを前記対象に投与するステップが、前記第１の改変された微生物を前記対象に投与するステップの前に生じる、または
（ｃ）免疫イニシエーターを前記対象に投与するステップであって、前記免疫イニシエーターがＳＴＩＮＧアゴニストであり、前記ＳＴＩＮＧアゴニストはｃ−ジＡＭＰ、ｃ−ＧＡＭＰ、またはｃ−ジＧＭＰである、ステップと、
第１の改変された微生物を前記対象に投与するステップであって、前記第１の改変された微生物が、免疫サステナーを産生することができる少なくとも１つの酵素を発現することができ、前記免疫サステナーが、代謝変換因子、アルギニン、ＳＴＩＮＧアゴニスト、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、抗ＰＤ１抗体、抗ＰＤＬ１抗体、抗ＣＴＬＡ４抗体、アゴニスト抗ＧＩＴＲ抗体もしくはＧＩＴＲＬ、アゴニスト抗ＯＸ４０抗体もしくはＯＸ４０Ｌ、アゴニスト抗４−１ＢＢ抗体もしくは４−１ＢＢＬ、ＩＬ−１５、ＩＬ−１５  ｓｕｓｈｉ、ＩＦＮγ、またはＩＬ−１２である、ステップと、を含み、
必要に応じて、前記投与するステップが、同時に行われるか、前記第１の改変された微生物を前記対象に投与する前記ステップが前記免疫イニシエーターを前記対象に投与する前記ステップの前に生じるか、または前記免疫イニシエーターを前記対象に投与する前記ステップが、前記第１の改変された微生物を前記対象に投与する前記ステップの前に生じる、
組成物。
【請求項１７】
前記投与するステップが、腫瘍内注射である、請求項１５または請求項１６に記載の組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】１５７７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【１５７７】
次に、機能アッセイを行って、ＳＹＮ４７３７（デルタファージ、デルタＤａｐ、ＨＡ９／１０：：ＦＮＲ−ｄａｃＡ）の活性をさらに確認した。抗原提示細胞集団においてＳＴＩＮＧ経路を活性化するＳＹＮ４７３７の能力をアセスメントした。細菌（ＷＴ  ＮｉｓｓｌｅまたはＳＹＮ４７３７）を様々な感染多重度（ＭＯＩ）で０．５×１０６個ＲＡＷ  ２６４．７細胞（不死化マウスマクロファージ細胞系）とともに共培養した。ＳＹＮ４７３７を２５０ｒｐｍで振とうさせながら３７Ｃで１時間インキュベートし、実験前に４〜５時間、嫌気的チャンバーで誘導した。共培養物を、述べたように４時間インキュベートし、タンパク質抽出物をＩＦＮβ１産生について分析した。図３２は、ＷＴ  ＮｉｓｓｌｅではなくＳＹＮ４７３７が、ＭＯＩ依存的にＩＦＮβ１産生を誘導することができることを示す。
本発明は、例えば、以下の項目を提供する。
(項目１)
少なくとも１つの免疫イニシエーターおよび少なくとも１つの免疫サステナーを産生することができる、改変された微生物。
(項目２)
前記免疫イニシエーターが、腫瘍溶解を増強すること、抗原提示細胞（ＡＰＣ）を活性化すること、ならびに／またはＴ細胞をプライミングおよび活性化することができる、項目１に記載の改変された微生物。
(項目３)
前記免疫イニシエーターが、少なくとも１つの遺伝子によってコードされる治療用分子、少なくとも１つの遺伝子によってコードされる酵素によって産生される治療用分子、少なくとも１つの遺伝子によってコードされる生合成もしくは異化経路の少なくとも１つの酵素、少なくとも１つの遺伝子によってコードされる生合成もしくは異化経路の少なくとも１つの酵素によって産生される少なくとも１つの治療用分子、またはＲＮＡ干渉、マイクロＲＮＡ応答もしくは阻害、ＴＬＲ応答、アンチセンス遺伝子調節、標的タンパク質結合、もしくは遺伝子編集を媒介する核酸分子である、項目１または項目２に記載の改変された微生物。
(項目４)
前記免疫イニシエーターが、サイトカイン、ケモカイン、単鎖抗体、リガンド、代謝変換因子、Ｔ細胞共刺激受容体、Ｔ細胞共刺激受容体リガンド、操作化学療法、または溶解性ペプチドである、項目１〜３のいずれか一項に記載の改変された微生物。
(項目５)
前記免疫イニシエーターが、ＳＴＩＮＧアゴニスト、アルギニン、５−ＦＵ、ＴＮＦα、ＩＦＮγ、ＩＦＮβ１、アゴニスト抗ＣＤ４０抗体、ＣＤ４０Ｌ、ＳＩＲＰα、ＧＭＣＳＦ、アゴニスト抗ＯＸＯ４０抗体、ＯＸＯ４０Ｌ、アゴニスト抗４−１ＢＢ抗体、４−１ＢＢＬ、アゴニスト抗ＧＩＴＲ抗体、ＧＩＴＲＬ、抗ＰＤ１抗体、抗ＰＤＬ１抗体、またはアズリンである、項目１〜４のいずれか一項に記載の改変された微生物。
(項目６)
前記免疫イニシエーターが、ＳＴＩＮＧアゴニストである、項目５に記載の改変された微生物。
(項目７)
前記ＳＴＩＮＧアゴニストが、ｃ−ジＡＭＰ、ｃ−ＧＡＭＰ、またはｃ−ジＧＭＰである、項目６に記載の改変された微生物。
(項目８)
前記免疫イニシエーターを産生する酵素をコードする少なくとも１つの遺伝子配列を含む、項目５〜７のいずれか一項に記載の改変された微生物。
(項目９)
前記免疫イニシエーターをコードする前記少なくとも１つの遺伝子配列が、ｄａｃＡ遺伝子配列である、項目８に記載の改変された微生物。
(項目１０)
前記免疫イニシエーターをコードする前記少なくとも１つの遺伝子配列が、ｃＧＡＳ遺伝子配列である、項目８に記載の改変された微生物。
(項目１１)
前記ｃＧＡＳ遺伝子配列が、ヒトｃＧＡＳ遺伝子配列、Ｖｅｒｍｉｎｅｐｈｒｏｂａｃｔｅｒ  ｅｉｓｅｎｉａｅ  ｃＧＡＳ遺伝子配列、Ｋｉｎｇｅｌｌａ  ｄｅｎｉｔｒｉｆｉｃａｎｓ  ｃＧＡＳ遺伝子配列、およびＮｅｉｓｓｅｒｉａ  ｂａｃｉｌｌｉｆｏｒｍｉｓ  ｃＧＡＳ遺伝子配列から選択される、項目１０に記載の改変された微生物。
(項目１２)
前記免疫イニシエーターをコードする前記少なくとも１つの遺伝子配列が、前記改変された微生物の染色体に組み込まれているか、またはプラスミド上に存在する、項目８〜１１のいずれか一項に記載の改変された微生物。
(項目１３)
前記免疫イニシエーターをコードする前記少なくとも１つの遺伝子配列が、誘導性プロモーターに作動可能に連結されている、項目８〜１１のいずれか一項に記載の改変された微生物。
(項目１４)
前記誘導性プロモーターが、低酸素、嫌気、またはハイポキシック条件によって誘導される、項目１３に記載の改変された微生物。
(項目１５)
前記免疫イニシエーターが、アルギニンである、項目５に記載の改変された微生物。
(項目１６)
アルギニン生合成経路の少なくとも１つの酵素をコードする少なくとも１つの遺伝子配列を含む、項目１５に記載の改変された微生物。
(項目１７)
前記アルギニン生合成経路の前記少なくとも１つの酵素をコードする前記少なくとも１つの遺伝子配列が、フィードバック耐性ａｒｇＡを含む、項目１５に記載の改変された微生物。
(項目１８)
前記アルギニン生合成経路の前記少なくとも１つの酵素をコードする前記少なくとも１つの遺伝子配列が、ａｒｇＡ、ａｒｇＢ、ａｒｇＣ、ａｒｇＤ、ａｒｇＥ、ａｒｇＦ、ａｒｇＧ、ａｒｇＨ、ａｒｇＩ、ａｒｇＪ、ｃａｒＡ、およびｃａｒＢからなる群から選択される、項目１６に記載の改変された微生物。
(項目１９)
アルギニンリプレッサー遺伝子（ａｒｇＲ）の欠失または突然変異をさらに含む、項目１７または項目１８に記載の改変された微生物。
(項目２０)
アルギニンの産生のための前記少なくとも１つの遺伝子配列が、前記改変された微生物の染色体に組み込まれているか、またはプラスミド上に存在する、項目１６〜１９のいずれか一項に記載の改変された微生物。
(項目２１)
前記アルギニンの産生のための前記少なくとも１つの遺伝子配列が、誘導性プロモーターに作動可能に連結されている、項目１６〜２０のいずれか一項に記載の改変された微生物。
(項目２２)
前記誘導性プロモーターが、低酸素、嫌気、またはハイポキシック条件によって誘導される、項目２１に記載の改変された微生物。
(項目２３)
前記免疫イニシエーターが、５−ＦＵである、項目５に記載の改変された微生物。
(項目２４)
５−ＦＣを５−ＦＵに変換することができる酵素をコードする少なくとも１つの遺伝子配列を含む、項目２３に記載の改変された微生物。
(項目２５)
前記少なくとも１つの遺伝子配列が、ｃｏｄＡである、項目２４に記載の改変された微生物。
(項目２６)
前記少なくとも１つの遺伝子配列が、前記改変された微生物の染色体に組み込まれているか、またはプラスミド上に存在する、項目２４または項目２５に記載の改変された微生物。
(項目２７)
前記免疫イニシエーターをコードする前記少なくとも１つの遺伝子配列が、誘導性プロモーターに作動可能に連結されている、項目２４〜２６のいずれか一項に記載の改変された微生物。
(項目２８)
前記誘導性プロモーターが、低酸素、嫌気、またはハイポキシック条件によって誘導される、項目２７に記載の改変された微生物。
(項目２９)
前記免疫サステナーが、Ｔ細胞の移動および浸潤を増強すること、Ｔ細胞によるがん細胞の認識を増強すること、エフェクターＴ細胞応答を増強すること、および／または免疫抑制を克服することができる、項目１に記載の改変された微生物。
(項目３０)
前記免疫サステナーが、少なくとも１つの遺伝子によってコードされる治療用分子、少なくとも１つの遺伝子によってコードされる酵素によって産生される治療用分子、少なくとも１つの遺伝子によってコードされる生合成もしくは異化経路の少なくとも１つの酵素、少なくとも１つの遺伝子によってコードされる生合成もしくは異化経路の少なくとも１つの酵素によって産生される少なくとも１つの治療用分子、またはＲＮＡ干渉、マイクロＲＮＡ応答もしくは阻害、ＴＬＲ応答、アンチセンス遺伝子調節、標的タンパク質結合、もしくは遺伝子編集を媒介する核酸分子である、項目１または項目２９に記載の改変された微生物。
(項目３１)
前記免疫サステナーが、サイトカイン、ケモカイン、単鎖抗体、リガンド、代謝変換因子、Ｔ細胞共刺激受容体、またはＴ細胞共刺激受容体リガンドである、項目１、２９、または３０のいずれか一項に記載の改変された微生物。
(項目３２)
前記免疫サステナーが、代謝変換因子、アルギニン、ＳＴＩＮＧアゴニスト、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、抗ＰＤ１抗体、抗ＰＤＬ１抗体、抗ＣＴＬＡ４抗体、アゴニスト抗ＧＩＴＲ抗体もしくはＧＩＴＲＬ、アゴニスト抗ＯＸ４０抗体もしくはＯＸ４０Ｌ、アゴニスト抗４−１ＢＢ抗体もしくは４−１ＢＢＬ、ＩＬ−１５、ＩＬ−１５  ｓｕｓｈｉ、ＩＦＮγ、またはＩＬ−１２である、項目１または２９〜３１のいずれか一項に記載の改変された微生物。
(項目３３)
前記免疫サステナーが、代謝変換因子である、項目３２に記載の改変された微生物。
(項目３４)
前記代謝変換因子が、キヌレニン消費経路の少なくとも１つの酵素またはアデノシン消費経路の少なくとも１つの酵素である、項目３３に記載の改変された微生物。
(項目３５)
前記キヌレニン消費経路の前記少なくとも１つの酵素をコードする少なくとも１つの遺伝子配列を含む、項目３３または項目３４に記載の改変された微生物。
(項目３６)
前記キヌレニン消費経路の前記少なくとも１つの酵素をコードする前記少なくとも１つの遺伝子配列が、キヌレニナーゼ遺伝子配列である、項目３５に記載の改変された微生物。
(項目３７)
前記少なくとも１つの遺伝子配列が、ｋｙｎＵである、項目３６に記載の改変された微生物。
(項目３８)
前記少なくとも１つの遺伝子配列が、構成的プロモーターに作動可能に連結されている、項目３７に記載の改変された微生物。
(項目３９)
前記キヌレニン消費経路の前記少なくとも１つの酵素をコードする前記少なくとも１つの遺伝子配列が、前記微生物の染色体に組み込まれているか、またはプラスミド上に存在する、項目３５〜３８のいずれか一項に記載の改変された微生物。
(項目４０)
ｔｒｐＥの欠失または突然変異を含む、項目３５〜３９のいずれか一項に記載の改変された微生物。
(項目４１)
アデノシン消費経路の少なくとも１つの酵素をコードする少なくとも１つの遺伝子配列を含む、項目３２または項目３３に記載の改変された微生物。
(項目４２)
前記アデノシン消費経路の前記少なくとも１つの酵素をコードする前記少なくとも１つの遺伝子配列が、ａｄｄ、ｘａｐＡ、ｄｅｏＤ、ｘｄｈＡ、ｘｄｈＢ、およびｘｄｈＣから選択される、項目４１に記載の改変された微生物。
(項目４３)
前記アデノシン消費経路の前記少なくとも１つの酵素をコードする前記少なくとも１つの遺伝子配列が、低酸素、嫌気、またはハイポキシック条件によって誘導されるプロモーターに作動可能に連結されている、項目４２に記載の改変された微生物。
(項目４４)
前記アデノシン消費経路の前記少なくとも１つの酵素をコードする前記少なくとも１つの遺伝子配列が、前記微生物の染色体に組み込まれているか、またはプラスミド上に存在する、項目４１〜４３のいずれか一項に記載の改変された微生物。
(項目４５)
前記微生物にアデノシンを移入するための酵素をコードする少なくとも１つの遺伝子配列を含む、項目４１〜４４のいずれか一項に記載の改変された微生物。
(項目４６)
前記微生物にアデノシンを移入するための前記酵素をコードする前記少なくとも１つの遺伝子配列が、ｎｕｐＣまたはｎｕｐＧである、項目４５に記載の改変された微生物。
(項目４７)
免疫サステナーが、アルギニンである、項目３２または項目３３に記載の改変された微生物。
(項目４８)
アルギニン生合成経路の少なくとも１つの酵素をコードする少なくとも１つの遺伝子配列を含む、項目４７に記載の改変された微生物。
(項目４９)
前記アルギニン生合成経路の前記少なくとも１つの酵素が、フィードバック耐性ａｒｇＡを含む、項目４８に記載の改変された微生物。
(項目５０)
前記アルギニン生合成経路の前記少なくとも１つの酵素をコードする前記少なくとも１つの遺伝子配列が、ａｒｇＡ、ａｒｇＢ、ａｒｇＣ、ａｒｇＤ、ａｒｇＥ、ａｒｇＦ、ａｒｇＧ、ａｒｇＨ、ａｒｇＩ、ａｒｇＪ、ｃａｒＡ、およびｃａｒＢからなる群から選択される、項目４８または項目４９に記載の改変された微生物。
(項目５１)
前記アルギニン生合成経路の前記少なくとも１つの酵素をコードする前記少なくとも１つの遺伝子配列が、低酸素、嫌気、またはハイポキシック条件によって誘導されるプロモーターに作動可能に連結されている、項目４８〜５０のいずれか一項に記載の改変された微生物。
(項目５２)
前記アルギニン生合成経路の前記少なくとも１つの酵素をコードする前記少なくとも１つの遺伝子配列が、前記改変された微生物の染色体に組み込まれているか、またはプラスミド上に存在する、項目４８〜５１のいずれか一項に記載の改変された微生物。
(項目５３)
アルギニンリプレッサー遺伝子（ａｒｇＲ）の欠失または突然変異をさらに含む、項目４７〜５２のいずれか一項に記載の改変された微生物。
(項目５４)
前記免疫サステナーが、ＳＴＩＮＧアゴニストである、項目３２または項目３３に記載の改変された微生物。
(項目５５)
前記ＳＴＩＮＧアゴニストが、ｃ−ジＡＭＰ、ｃ−ＧＡＭＰ、またはｃ−ジＧＭＰである、項目５４に記載の改変された微生物。
(項目５６)
前記ＳＴＩＮＧアゴニストを産生する酵素をコードする少なくとも１つの遺伝子配列を含む、項目５４〜５５のいずれか一項に記載の改変された微生物。
(項目５７)
前記免疫サステナーをコードする前記少なくとも１つの遺伝子配列が、ｄａｃＡ遺伝子配列である、項目５６に記載の改変された微生物。
(項目５８)
前記免疫サステナーをコードする前記少なくとも１つの遺伝子配列が、ｃＧＡＳ遺伝子配列である、項目５６に記載の改変された微生物。
(項目５９)
前記ｃＧＡＳ遺伝子配列が、ヒトｃＧＡＳ遺伝子配列、Ｖｅｒｍｉｎｅｐｈｒｏｂａｃｔｅｒ  ｅｉｓｅｎｉａｅ  ｃＧＡＳ遺伝子配列、Ｋｉｎｇｅｌｌａ  ｄｅｎｉｔｒｉｆｉｃａｎｓ  ｃＧＡＳ遺伝子配列、およびＮｅｉｓｓｅｒｉａ  ｂａｃｉｌｌｉｆｏｒｍｉｓ  ｃＧＡＳ遺伝子配列から選択される、項目５８に記載の改変された微生物。
(項目６０)
細菌または酵母である、先行する項目のいずれか一項に記載の改変された微生物。
(項目６１)
Ｅ．  ｃｏｌｉ細菌である、先行する項目のいずれか一項に記載の改変された微生物。
(項目６２)
Ｅ．  ｃｏｌｉ  Ｎｉｓｓｌｅ細菌である、先行する項目のいずれか一項に記載の改変された微生物。
(項目６３)
１つまたは複数の栄養要求体をもたらす遺伝子において少なくとも１つの突然変異または欠失を含む、先行する項目のいずれか一項に記載の改変された微生物。
(項目６４)
前記少なくとも１つの欠失または突然変異が、ｄａｐＡ遺伝子および／またはｔｈｙＡ遺伝子におけるものである、項目６３に記載の改変された微生物。
(項目６５)
ファージ欠失を含む、先行する項目のいずれか一項に記載の改変された微生物。
(項目６６)
免疫イニシエーターを産生することができる少なくとも１つの改変された微生物と、免疫サステナーとを含む、組成物。
(項目６７)
前記少なくとも１つの改変された微生物が、前記免疫イニシエーターおよび前記免疫サステナーを産生することができる、項目６６に記載の組成物。
(項目６８)
前記少なくとも１つの改変された微生物が、前記免疫イニシエーターを産生することができ、少なくとも第２の改変された微生物が、前記免疫サステナーを産生することができる、項目６６に記載の組成物。
(項目６９)
前記免疫サステナーが、前記組成物中の改変された微生物によって産生されない、項目６６に記載の組成物。
(項目７０)
免疫サステナーを産生することができる少なくとも１つの改変された微生物と、免疫イニシエーターとを含む、組成物。
(項目７１)
前記少なくとも１つの改変された微生物が、前記免疫イニシエーターおよび前記免疫サステナーを産生することができる、項目７０に記載の組成物。
(項目７２)
前記少なくとも１つの改変された微生物が、前記免疫サステナーを産生することができ、少なくとも第２の改変された微生物が、前記免疫イニシエーターを産生することができる、項目７０に記載の組成物。
(項目７３)
前記免疫イニシエーターが、前記組成物中の改変された微生物によって産生されない、項目７０に記載の組成物。
(項目７４)
項目１〜６５のいずれか一項に記載の改変された微生物または項目６６〜７３のいずれか一項に記載の組成物と、薬学的に許容される担体とを含む、薬学的に許容される組成物。
(項目７５)
腫瘍内投与のために製剤化される、項目７４に記載の薬学的に許容される組成物。
(項目７６)
項目７４または項目７５に記載の薬学的に許容される組成物と、その使用のための説明書とを含む、キット。
(項目７７)
対象におけるがんを処置する方法であって、項目７４または項目７５に記載の薬学的に許容される組成物を前記対象に投与するステップを含み、それによって、前記対象におけるがんを処置する、方法。
(項目７８)
対象において免疫応答を誘導および維持する方法であって、項目７４または項目７５に記載の薬学的に許容される組成物を前記対象に投与するステップを含み、それによって、前記対象において前記免疫応答を誘導および維持する、方法。
(項目７９)
腫瘍を有する対象においてアブスコパル効果を誘導する方法であって、項目７４または項目７５に記載の薬学的に許容される組成物を前記対象に投与するステップを含み、それによって、前記対象において前記アブスコパル効果を誘導する、方法。
(項目８０)
腫瘍を有する対象において免疫学的記憶を誘導する方法であって、項目７４または項目７５に記載の薬学的に許容される組成物を前記対象に投与するステップを含み、それによって、前記対象において前記免疫学的記憶を誘導する、方法。
(項目８１)
対象において腫瘍の部分的な退縮を誘導する方法であって、項目７４または項目７５に記載の薬学的に許容される組成物を前記対象に投与するステップを含み、それによって、前記対象において前記腫瘍の前記部分的な退縮を誘導する、方法。
(項目８２)
前記部分的な退縮が、前記腫瘍のサイズの少なくとも約１０％、少なくとも約２５％、少なくとも約５０％、または少なくとも約７５％の減少である、項目８１に記載の方法。
(項目８３)
対象において腫瘍の完全な退縮を誘導する方法であって、項目７４または項目７５に記載の薬学的に許容される組成物を前記対象に投与するステップを含み、それによって、前記対象において前記腫瘍の前記完全な退縮を誘導する、方法。
(項目８４)
前記腫瘍が、前記薬学的に許容される組成物の投与後に、前記対象において検出可能ではない、項目８３に記載の方法。
(項目８５)
対象におけるがんを処置する方法であって、
第１の改変された微生物を前記対象に投与するステップであって、前記第１の改変された微生物が、免疫イニシエーターを産生することができる、ステップと、
第２の改変された微生物を前記対象に投与するステップであって、前記第２の改変された微生物が、免疫サステナーを産生することができる、ステップと、を含み、
それによって、前記対象におけるがんを処置する、方法。
(項目８６)
対象において免疫応答を誘導および維持する方法であって、
第１の改変された微生物を前記対象に投与するステップであって、前記第１の改変された微生物が、免疫イニシエーターを産生することができる、ステップと、
第２の改変された微生物を前記対象に投与するステップであって、前記第２の改変された微生物が、免疫サステナーを産生することができる、ステップと、を含み、
それによって、前記対象において前記免疫応答を誘導および維持する、方法。
(項目８７)
前記投与するステップが、同時に行われるか、前記第１の改変された微生物を前記対象に投与するステップが、前記第２の改変された微生物を前記対象に投与するステップの前に生じるか、または前記第２の改変された微生物を前記対象に投与するステップが、前記第１の改変された微生物を前記対象に投与するステップの前に生じる、項目８５または項目８６に記載の方法。
(項目８８)
対象におけるがんを処置する方法であって、
第１の改変された微生物を前記対象に投与するステップであって、前記第１の改変された微生物が、免疫イニシエーターを産生することができる、ステップと、
免疫サステナーを前記対象に投与するステップと、を含み、
それによって、前記対象におけるがんを処置する、方法。
(項目８９)
対象において免疫応答を誘導および維持する方法であって、
第１の改変された微生物を前記対象に投与するステップであって、前記第１の改変された微生物が、免疫イニシエーターを産生することができる、ステップと、
免疫サステナーを前記対象に投与するステップと、を含み、
それによって、前記対象において前記免疫応答を誘導および維持する、方法。
(項目９０)
前記投与するステップが、同時に行われるか、前記第１の改変された微生物を前記対象に投与するステップが、前記免疫サステナーを前記対象に投与するステップの前に生じるか、または前記免疫サステナーを前記対象に投与するステップが、前記第１の改変された微生物を前記対象に投与するステップの前に生じる、項目８８または項目８９に記載の方法。
(項目９１)
対象におけるがんを処置する方法であって、
免疫イニシエーターを前記対象に投与するステップと、
第１の改変された微生物を前記対象に投与するステップであって、前記第１の改変された微生物が、免疫サステナーを産生することができる、ステップと、を含み、
それによって、前記対象におけるがんを処置する、方法。
(項目９２)
対象において免疫応答を誘導および維持する方法であって、
免疫イニシエーターを前記対象に投与するステップと、
第１の改変された微生物を前記対象に投与するステップであって、前記第１の改変された微生物が、免疫サステナーを産生することができる、ステップと、を含み、
それによって、前記対象において前記免疫応答を誘導および維持する、方法。
(項目９３)
前記投与するステップが、同時に行われるか、前記第１の改変された微生物を前記対象に投与する前記ステップが前記免疫イニシエーターを前記対象に投与する前記ステップの前に生じるか、または前記免疫イニシエーターを前記対象に投与する前記ステップが、前記第１の改変された微生物を前記対象に投与する前記ステップの前に生じる、項目９１または項目９２に記載の方法。
(項目９４)
前記投与するステップが、腫瘍内注射である、項目７７〜９３のいずれか一項に記載の方法。