【手続補正書】
【提出日】令和3年4月27日(2021.4.27)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
６８９５７、７２６７８、７２７３２または７２７４８と呼ばれるＺＦＮ由来のＺＦＰ；
工学技術で作製されたＦｏｋＩ切断ドメイン；および
前記ＦｏｋＩ切断ドメインと前記ＺＦＰとの間のリンカー
を含む、ジンクフィンガーヌクレアーゼ。
【請求項２】
以下：５７５３１と呼ばれるＺＦＮおよび７２７３２と呼ばれるＺＦＮ；５７５３１と呼ばれるＺＦＮおよび７２７４８と呼ばれるＺＦＮ；６８９５７と呼ばれるＺＦＮおよび５７０７１と呼ばれるＺＦＮ；６８９５７と呼ばれるＺＦＮおよび７２７３２と呼ばれるＺＦＮ；６８９５７と呼ばれるＺＦＮおよび７２７４８と呼ばれるＺＦＮ；７２６７８と呼ばれるＺＦＮおよび５７０７１と呼ばれるＺＦＮ；７２６７８と呼ばれるＺＦＮおよび７２７３２と呼ばれるＺＦＮの通りの第１および第２のＺＦＮ；ならびに７２６７８と呼ばれるＺＦＮおよび７２７４８２と呼ばれるＺＦＮ  ＺＦＰを含む、請求項１に記載のジンクフィンガーヌクレアーゼ。
【請求項３】
以下：７２６７８と呼ばれる前記ＺＦＮ由来のＺＦＰを含むＺＦＮ、および７２７３２と呼ばれる前記ＺＦＮ由来のＺＦＰを含むＺＦＮの通りの請求項１または２に記載の第１および第２のＺＦＮを含む、ジンクフィンガーヌクレアーゼ。
【請求項４】
請求項１から３のいずれかに記載のジンクフィンガーヌクレアーゼをコードするポリヌクレオチド。
【請求項５】
第１のＺＦＮをコードする配列と第２のＺＦＮをコードする配列との間に２Ａ配列を含む、請求項４に記載のポリヌクレオチド。
【請求項６】
請求項１から３のいずれかに記載のジンクフィンガーヌクレアーゼまたは請求項４もしくは５に記載のポリヌクレオチドを含む細胞であって、前記細胞のゲノムが、前記ジンクフィンガーヌクレアーゼによって改変される、細胞。
【請求項７】
幹細胞または前駆細胞である、請求項６に記載の細胞。
【請求項８】
ヒト細胞である、請求項７に記載の細胞。
【請求項９】
ゲノム改変が、挿入、欠失およびそれらの組合せからなる群より選択される、請求項６から８のいずれかに記載の細胞。
【請求項１０】
１つまたは複数のさらなるゲノム改変をさらに含む、請求項６に記載の細胞。
【請求項１１】
前記さらなるゲノム改変が、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）遺伝子の改変、ＨＬＡ−Ａ遺伝子の改変、ＨＬＡ−Ｂ遺伝子の改変、ＨＬＡ−Ｃ遺伝子の改変、ＴＡＰ遺伝子の改変、ＣＴＬＡ−４遺伝子の改変、ＰＤ１遺伝子の改変、ＣＩＳＨ遺伝子の改変、ｔｅｔ−２遺伝子の改変、および／または前記ゲノムへの導入遺伝子の挿入を含む、請求項１０に記載の細胞。
【請求項１２】
前記導入遺伝子が少なくとも１つのキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする、請求項１１に記載の細胞。
【請求項１３】
エフェクターＴ細胞または制御Ｔ細胞である、請求項１２に記載の細胞。
【請求項１４】
請求項６から１３のいずれかに記載の細胞に由来する細胞または細胞株。
【請求項１５】
請求項４もしくは５に記載のポリヌクレオチドによるジンクフィンガーヌクレアーゼ、または請求項１２もしくは１３に記載の細胞を含む、医薬組成物。
【請求項１６】
細胞中の内因性ベータ−２−ミクログロブリン（Ｂ２Ｍ）遺伝子を改変する方法において使用するための、請求項４または５に記載のポリヌクレオチドを含む組成物であって、前記方法は、前記内因性Ｂ２Ｍ遺伝子が改変されるように請求項４または５に記載のポリヌクレオチドを前記細胞に投与するステップを含む、組成物。
【請求項１７】
前記方法は、外因性配列が前記内因性Ｂ２Ｍ遺伝子に挿入されるように前記外因性配列を前記細胞に導入するステップをさらに含む、請求項１６に記載の組成物。
【請求項１８】
前記改変が欠失を含む、請求項１６または１７に記載の組成物。
【請求項１９】
内因性Ｂ２Ｍ遺伝子内にゲノム改変を含む、遺伝的に改変された細胞を産生する方法において使用するための、請求項４または５に記載のポリヌクレオチドを含む組成物であって、前記方法は、
ａ）細胞を請求項４または５に記載のポリヌクレオチドと接触させるステップ；
ｂ）前記ポリヌクレオチドからの融合タンパク質の発現を促進する条件に前記細胞を供するステップ；および
ｃ）前記遺伝的に改変された細胞を産生するために十分に発現された前記融合タンパク質を用いて、前記内因性Ｂ２Ｍ遺伝子を改変するステップ
を含む、組成物。
【請求項２０】
請求項４または５に記載のポリヌクレオチドを含むキット。
【請求項２１】
被験体におけるがんを処置および予防するための、請求項６から１４のいずれかに記載の細胞または請求項１５に記載の医薬組成物。
【請求項２２】
被験体における自己免疫性疾患を処置または予防するための、請求項６から１４のいずれかに記載の細胞または請求項１５に記載の医薬組成物。
【請求項２３】
左のＺＦＮおよび右のＺＦＮを含むジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）であって、前記左のＺＦＮおよび前記右のＺＦＮは、以下：６８７９６と呼ばれるＺＦＮおよび６８８１３と呼ばれるＺＦＮ；６８７９６と呼ばれるＺＦＮおよび６８８６１と呼ばれるＺＦＮ；６８８１２と呼ばれるＺＦＮおよび６８８１３と呼ばれるＺＦＮ；６８８７６と呼ばれるＺＦＮおよび６８８７７と呼ばれるＺＦＮ；６８８１５と呼ばれるＺＦＮおよび５５２６６と呼ばれるＺＦＮ；６８８７９と呼ばれるＺＦＮおよび５５２６６と呼ばれるＺＦＮ；６８７９８と呼ばれるＺＦＮおよび６８８１５と呼ばれるＺＦＮ；または６８８４６と呼ばれるＺＦＮおよび５３８５３と呼ばれるＺＦＮの通りである、ＺＦＮ。
【請求項２４】
請求項２３に記載の１つまたは複数のジンクフィンガーヌクレアーゼをコードするポリヌクレオチドであって、必要に応じてｍＲＮＡである、ポリヌクレオチド。
【請求項２５】
左のＺＦＮをコードする配列と右のＺＦＮをコードする配列との間に２Ａ配列を含む、請求項２４に記載のポリヌクレオチド。
【請求項２６】
請求項２３から２５のいずれかに記載のジンクフィンガーヌクレアーゼを含む細胞であって、前記細胞のゲノムが前記ジンクフィンガーヌクレアーゼによって改変されている、細胞。
【請求項２７】
幹細胞または前駆細胞である、請求項２６に記載の細胞。
【請求項２８】
ヒト細胞である、請求項２６または２７に記載の細胞。
【請求項２９】
ゲノム改変が、挿入、欠失およびそれらの組合せからなる群より選択される、請求項２６から２８のいずれかに記載の細胞。
【請求項３０】
１つまたは複数のさらなるゲノム改変をさらに含む、請求項２９に記載の細胞。
【請求項３１】
前記さらなるゲノム改変が、Ｂ２Ｍ遺伝子の改変、ＨＬＡ−Ａ遺伝子の改変、ＨＬＡ−Ｂ遺伝子の改変、ＨＬＡ−Ｃ遺伝子の改変、ＴＡＰ遺伝子の改変、ＣＴＬＡ−４遺伝子の改変、ＰＤ１遺伝子の改変、および／または前記ゲノムへの導入遺伝子の挿入を含む、請求項３０に記載の細胞。
【請求項３２】
前記導入遺伝子が少なくとも１つのキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする、請求項３１に記載の細胞。
【請求項３３】
幹細胞である、請求項３１または３２に記載の細胞。
【請求項３４】
請求項２６から３３のいずれかに記載の細胞に由来する細胞または細胞株。
【請求項３５】
請求項２４もしくは２５に記載のポリヌクレオチドによるジンクフィンガーヌクレアーゼ、または請求項２６から３４のいずれかに記載の細胞を含む、医薬組成物。
【請求項３６】
細胞において内因性Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）遺伝子を改変する方法において使用するための、請求項２４または２５に記載のポリヌクレオチドを含む組成物であって、前記方法は、前記内因性ＴＣＲ遺伝子が改変されるように請求項２４または２５に記載のポリヌクレオチドを前記細胞に投与するステップを含む、組成物。
【請求項３７】
外因性配列が前記内因性ＴＣＲ遺伝子に挿入されるように、前記外因性配列を前記細胞に導入するステップをさらに含む、請求項３６に記載の組成物。
【請求項３８】
前記改変が欠失を含む、請求項３６に記載の組成物。
【請求項３９】
内因性ＴＣＲ遺伝子内にゲノム改変を含む遺伝的に改変された細胞を産生する方法において使用するための、請求項２４または２５に記載のポリヌクレオチドを含む組成物であって、前記方法は、
ａ）細胞を請求項２４または２５に記載のポリヌクレオチドと接触させるステップ；
ｂ）前記ポリヌクレオチドからの融合タンパク質の発現を促進する条件に前記細胞を供するステップ；および
ｃ）前記遺伝的に改変された細胞を産生するために十分に発現された前記融合タンパク質を用いて前記内因性ＴＣＲ遺伝子を改変するステップ
を含む、組成物。
【請求項４０】
請求項２４または２５に記載のポリヌクレオチドを含むキット。
【請求項４１】
がんまたは移植片対宿主病および被験体を処置および予防するための、請求項２６から３４のいずれかの細胞を含む組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２５０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２５０】
理解の明快性のために開示は例証および例として多少詳細に提供されたが、本開示の精神または範囲から逸脱せずに様々な変更および改変を実施することができることは当業者に明らかである。したがって、上記の記載および実施例は限定するものと解釈されるべきでない。
本発明は、例えば、以下の項目を提供する。
(項目１)
６８９５７、７２６７８、７２７３２または７２７４８と呼ばれるＺＦＮ由来のＺＦＰ；
工学技術で作製されたＦｏｋＩ切断ドメイン；および
前記ＦｏｋＩ切断ドメインと前記ＺＦＰとの間のリンカー
を含む、ジンクフィンガーヌクレアーゼ。
(項目２)
以下：５７５３１と呼ばれるＺＦＮおよび７２７３２と呼ばれるＺＦＮ；５７５３１と呼ばれるＺＦＮおよび７２７４８と呼ばれるＺＦＮ；６８９５７と呼ばれるＺＦＮおよび５７０７１と呼ばれるＺＦＮ；６８９５７と呼ばれるＺＦＮおよび７２７３２と呼ばれるＺＦＮ；６８９５７と呼ばれるＺＦＮおよび７２７４８と呼ばれるＺＦＮ；７２６７８と呼ばれるＺＦＮおよび５７０７１と呼ばれるＺＦＮ；７２６７８と呼ばれるＺＦＮおよび７２７３２と呼ばれるＺＦＮの通りの第１および第２のＺＦＮ；ならびに７２６７８と呼ばれるＺＦＮおよび７２７４８２と呼ばれるＺＦＮを含むＺＦＰを含む、項目１に記載のジンクフィンガーヌクレアーゼ。
(項目３)
以下：７２６７８と呼ばれる前記ＺＦＮ由来のＺＦＰを含むＺＦＮ、および７２７３２と呼ばれる前記ＺＦＮ由来のＺＦＰを含むＺＦＮの通りの項目１または２に記載の第１および第２のＺＦＮを含む、ジンクフィンガーヌクレアーゼ。
(項目４)
項目１から３のいずれかに記載のジンクフィンガーヌクレアーゼをコードするポリヌクレオチド。
(項目５)
第１のＺＦＮをコードする配列と第２のＺＦＮをコードする配列との間に２Ａ配列を含む、項目４に記載のポリヌクレオチド。
(項目６)
項目１から３のいずれかに記載のジンクフィンガーヌクレアーゼまたは項目４もしくは５に記載のポリヌクレオチドを含む細胞であって、前記細胞のゲノムが、前記ジンクフィンガーヌクレアーゼによって改変される、細胞。
(項目７)
幹細胞または前駆細胞である、項目６に記載の細胞。
(項目８)
ヒト細胞である、項目７に記載の細胞。
(項目９)
ゲノム改変が、挿入、欠失およびそれらの組合せからなる群より選択される、項目６から８のいずれかに記載の細胞。
(項目１０)
１つまたは複数のさらなるゲノム改変をさらに含む、項目６に記載の細胞。
(項目１１)
前記さらなるゲノム改変が、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）遺伝子の改変、ＨＬＡ−Ａ遺伝子の改変、ＨＬＡ−Ｂ遺伝子の改変、ＨＬＡ−Ｃ遺伝子の改変、ＴＡＰ遺伝子の改変、ＣＴＬＡ−４遺伝子の改変、ＰＤ１遺伝子の改変、ＣＩＳＨ遺伝子の改変、ｔｅｔ−２遺伝子の改変、および／または前記ゲノムへの導入遺伝子の挿入を含む、項目１０に記載の細胞。
(項目１２)
前記導入遺伝子が少なくとも１つのキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする、項目１１に記載の細胞。
(項目１３)
エフェクターＴ細胞または制御Ｔ細胞である、項目１２に記載の細胞。
(項目１４)
項目６から１３のいずれかに記載の細胞に由来する細胞または細胞株。
(項目１５)
項目４もしくは５に記載のポリヌクレオチドによるジンクフィンガーヌクレアーゼ、または項目１２もしくは１３に記載の細胞を含む、医薬組成物。
(項目１６)
細胞中の内因性ベータ−２−ミクログロブリン（Ｂ２Ｍ）遺伝子を改変する方法であって、前記内因性Ｂ２Ｍ遺伝子が改変されるように項目４または５に記載のポリヌクレオチドを前記細胞に投与するステップを含む、方法。
(項目１７)
外因性配列が前記内因性Ｂ２Ｍ遺伝子に挿入されるように前記外因性配列を前記細胞に導入するステップをさらに含む、項目１６に記載の方法。
(項目１８)
前記改変が欠失を含む、項目１６または１７に記載の方法。
(項目１９)
内因性Ｂ２Ｍ遺伝子内にゲノム改変を含む、遺伝的に改変された細胞を産生する方法であって、
ａ）細胞を項目４または５に記載のポリヌクレオチドと接触させるステップ；
ｂ）前記ポリヌクレオチドからの融合タンパク質の発現を促進する条件に前記細胞を供するステップ；および
ｃ）前記遺伝的に改変された細胞を産生するために十分な発現された前記融合タンパク質を用いて、前記内因性Ｂ２Ｍ遺伝子を改変するステップ
を含む、方法。
(項目２０)
項目４または５に記載のポリヌクレオチドを含むキット。
(項目２１)
被験体におけるがんを処置および予防する方法であって、項目６から１４のいずれかに記載の細胞または項目１５に記載の医薬組成物を前記被験体に投与するステップを含む、方法。
(項目２２)
被験体における自己免疫性疾患を処置または予防する方法であって、項目６から１４のいずれかに記載の細胞または項目１５に記載の医薬組成物を前記被験体に投与するステップを含む、方法。
(項目２３)
左のＺＦＮおよび右のＺＦＮを含むジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）であって、前記左のＺＦＮおよび前記右のＺＦＮは、以下：６８７９６と呼ばれるＺＦＮおよび６８８１３と呼ばれるＺＦＮ；６８７９６と呼ばれるＺＦＮおよび６８８６１と呼ばれるＺＦＮ；６８８１２と呼ばれるＺＦＮおよび６８８１３と呼ばれるＺＦＮ；６８８７６と呼ばれるＺＦＮおよび６８８７７と呼ばれるＺＦＮ；６８８１５と呼ばれるＺＦＮおよび５５２６６と呼ばれるＺＦＮ；６８８７９と呼ばれるＺＦＮおよび５５２６６と呼ばれるＺＦＮ；６８７９８と呼ばれるＺＦＮおよび６８８１５と呼ばれるＺＦＮ；または６８８４６と呼ばれるＺＦＮおよび５３８５３と呼ばれるＺＦＮの通りである、ＺＦＮ。
(項目２４)
項目２３に記載の１つまたは複数のジンクフィンガーヌクレアーゼをコードするポリヌクレオチドであって、必要に応じてｍＲＮＡである、ポリヌクレオチド。
(項目２５)
左のＺＦＮをコードする配列と右のＺＦＮをコードする配列との間に２Ａ配列を含む、項目２４に記載のポリヌクレオチド。
(項目２６)
項目２３から２５のいずれかに記載のジンクフィンガーヌクレアーゼを含む細胞であって、前記細胞のゲノムが前記ジンクフィンガーヌクレアーゼによって改変されている、細胞。
(項目２７)
幹細胞または前駆細胞である、項目２６に記載の細胞。
(項目２８)
ヒト細胞である、項目２６または２７に記載の細胞。
(項目２９)
ゲノム改変が、挿入、欠失およびそれらの組合せからなる群より選択される、項目２６から２８のいずれかに記載の細胞。
(項目３０)
１つまたは複数のさらなるゲノム改変をさらに含む、項目２９に記載の細胞。
(項目３１)
前記さらなるゲノム改変が、Ｂ２Ｍ遺伝子の改変、ＨＬＡ−Ａ遺伝子の改変、ＨＬＡ−Ｂ遺伝子の改変、ＨＬＡ−Ｃ遺伝子の改変、ＴＡＰ遺伝子の改変、ＣＴＬＡ−４遺伝子の改変、ＰＤ１遺伝子の改変、および／または前記ゲノムへの導入遺伝子の挿入を含む、項目３０に記載の細胞。
(項目３２)
前記導入遺伝子が少なくとも１つのキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする、項目３１に記載の細胞。
(項目３３)
幹細胞である、項目３１または３２に記載の細胞。
(項目３４)
項目２６から３３のいずれかに記載の細胞に由来する細胞または細胞株。
(項目３５)
項目２４もしくは２５に記載のポリヌクレオチドによるジンクフィンガーヌクレアーゼ、または項目２６から３４のいずれかに記載の細胞を含む、医薬組成物。
(項目３６)
細胞において内因性Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）遺伝子を改変する方法であって、前記内因性ＴＣＲ遺伝子が改変されるように項目２４または２５に記載のポリヌクレオチドを前記細胞に投与するステップを含む、方法。
(項目３７)
外因性配列が前記内因性ＴＣＲ遺伝子に挿入されるように、前記外因性配列を前記細胞に導入するステップをさらに含む、項目３６に記載の方法。
(項目３８)
前記改変が欠失を含む、項目３６に記載の方法。
(項目３９)
内因性ＴＣＲ遺伝子内にゲノム改変を含む遺伝的に改変された細胞を産生する方法であって、
ａ）細胞を項目２４または２５に記載のポリヌクレオチドと接触させるステップ；
ｂ）前記ポリヌクレオチドからの融合タンパク質の発現を促進する条件に前記細胞を供するステップ；および
ｃ）前記遺伝的に改変された細胞を産生するために十分な発現された前記融合タンパク質を用いて前記内因性ＴＣＲ遺伝子を改変するステップ
を含む、方法。
(項目４０)
項目２４または２５に記載のポリヌクレオチドを含むキット。
(項目４１)
がんまたは移植片対宿主病および被験体を処置および予防する方法であって、項目２６から３４のいずれかの細胞を前記被験体に投与するステップを含む、方法。