(57)【要約】【課題】クロマトグラフィにおける展開性に優れる磁性体内包粒子を提供する。また、本発明は、該磁性体内包粒子の製造方法、該磁性体内包粒子を用いる免疫測定用粒子、及び、該磁性体内包粒子を用いたイムノクロマトグラフィ法を提供する。【解決手段】無機酸化物又はポリマーを含有するコア粒子の表面にシェル層を有する磁性体内包粒子であって、前記シェル層はマグネタイト粒子とケイ酸ナトリウムとを含有し、体積平均粒径が１０〜５００ｎｍ、数平均粒径のＣＶ値が８％以下、かつ、２５℃における飽和磁化が１５ｅｍｕ／ｇ以上である磁性体内包粒子。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
無機酸化物又はポリマーを含有するコア粒子の表面にシェル層を有する磁性体内包粒子であって、
前記シェル層はマグネタイト粒子とケイ酸ナトリウムとを含有し、
体積平均粒径が１０〜５００ｎｍ、数平均粒径のＣＶ値が８％以下、かつ、２５℃における飽和磁化が１５ｅｍｕ／ｇ以上である
ことを特徴とする磁性体内包粒子。
【請求項２】
請求項１記載の磁性体内包粒子を製造する方法であって、
無機酸化物又はポリマーを含有するコア粒子を分散させた分散液と、マグネタイト粒子とを混合し、前記コア粒子の表面に前記マグネタイト粒子を吸着させ、前記マグネタイト粒子を表面に有する複合粒子を得る工程１と、
前記マグネタイト粒子を表面に有する複合粒子の懸濁液と、ケイ酸ナトリウムとを混合し、前記マグネタイト粒子を表面に有する複合粒子を前記ケイ酸ナトリウムで被覆し、ケイ酸ナトリウムで被覆した複合粒子を得る工程２とを有することを特徴とする磁性体内包粒子の製造方法。
【請求項３】
分散液、及び、懸濁液が水を含有することを特徴とする請求項２記載の磁性体内包粒子の製造方法。
【請求項４】
更に、ケイ酸ナトリウムで被覆した複合粒子の懸濁液と、マグネタイト粒子とを混合し、前記ケイ酸ナトリウムで被覆した複合粒子の表面に前記マグネタイト粒子を吸着させ、次いで、前記マグネタイト粒子を吸着させた前記ケイ酸ナトリウムで被覆した複合粒子の懸濁液と、ケイ酸ナトリウムとを混合し、前記マグネタイト粒子を吸着させた前記ケイ酸ナトリウムで被覆した複合粒子を前記ケイ酸ナトリウムで更に被覆する工程３を有することを特徴とする請求項２記載の磁性体内包粒子の製造方法。
【請求項５】
懸濁液が水を含有することを特徴とする請求項４記載の磁性体内包粒子の製造方法。
【請求項６】
工程３を繰り返すことを特徴とする請求項４又は５記載の磁性体内包粒子の製造方法。
【請求項７】
請求項１記載の磁性体内包粒子に抗原又は抗体が吸着していることを特徴とする免疫測定用粒子。
【請求項８】
請求項１記載の磁性体内包粒子を担体として用い、請求項１記載の磁性体内包粒子の磁性量を標識として分析することを特徴とするイムノクロマトグラフィ法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、クロマトグラフィにおける展開性に優れる磁性体内包粒子に関する。また、本発明は、該磁性体内包粒子の製造方法、該磁性体内包粒子を用いる免疫測定用粒子、及び、該磁性体内包粒子を用いたイムノクロマトグラフィ法に関する。
【背景技術】
【０００２】
測定試料中に含有される被検物質を検出する方法として、例えば、抗原−抗体反応を利用した酵素免疫測定法、蛍光免疫測定法、ラテックス凝集法、免疫クロマト法等の生物学的反応を利用した種々の方法が提案されている。なかでも、簡便かつ迅速であることから、免疫クロマト法が多用される。
【０００３】
免疫クロマト法では、通常、少なくとも２種類の抗体を利用したサンドイッチ法が採用される。すなわち、金属コロイドや着色粒子等の担体の表面に、酵素、蛍光物質等で標識された抗体を吸着させた試薬と測定試料とを反応させ、測定試料中に含まれる抗原と標識抗体とを結合し、これをもう一つの抗体が固定化されたクロマト支持体に流すことにより、クロマト支持体中に抗原を捕捉し、捕捉された抗原量を分析する方法である。
【０００４】
免疫クロマト法等に供するための担体として、磁性体内包粒子が注目されている。磁性体内包粒子は、免疫測定法等において効率よく簡便にＢ／Ｆ分離を行うための担体として提案されている。磁性体内包粒子の磁性量を標識とすることにより、他の標識物質で標識せずに分析できる等の利点がある（特許文献１〜３）。
【０００５】
しかしながら、従来の磁性体内包粒子は自己凝集しやすく、二次粒径が大きくなることがあった。実際に磁性体内包粒子を免疫クロマト法に用いると、磁性体内包粒子がクロマト支持体中に滞留する等、金属コロイドや着色粒子に比べてクロマトグラフィにおける展開性が大きく劣るという問題があった。
【０００６】
磁性体内包粒子の製造方法として、懸濁重合やミニエマルション重合等で磁性粒子をポリマーで被覆する方法、磁性粒子をケイ酸ナトリウム等の無機物で包含する方法、無機酸化物又はポリマー表面に磁性粒子を物理的に凝集（以下、ヘテロ凝集ともいう）させる方法等が挙げられる。
【０００７】
磁性粒子をポリマーで被覆する方法で得られる磁性体内包粒子は粒径がミクロンサイズと大きすぎるため、免疫クロマト法に用いると、磁性体内包粒子がクロマト支持体中に滞留したり、単位重量あたりの表面積が小さくなり、精度が低下したりする等の問題があった（特許文献４）。
【０００８】
磁性粒子をケイ酸ナトリウム等の無機物で包含する方法で得られる磁性体内包粒子は粒径にばらつきが生じたり、磁性体内包粒子１個あたりの磁化特性にばらつきが生じたりすることがある。この磁性体内包粒子を免疫クロマト法に用いると、精度を上げることができなくなるといった問題があった（特許文献５）。
【０００９】
無機酸化物又はポリマー表面に磁性粒子をヘテロ凝集させる方法で得られる磁性体内包粒子は、均一な粒径を持つ複合粒子が得られるものの、表面に磁性粒子が存在しているため、複合粒子同士が凝集しやすいため、取扱いが困難となる問題があった。
【００１０】
複合粒子の凝集を防止するために、無機酸化物又はポリマー表面に磁性粒子をヘテロ凝集させた粒子をテトラエチルオルトシリケート（ＴＥＯＳ）等で被覆する方法がある。しかし、上記粒子をＴＥＯＳ等で被覆する方法では、水及びエタノールを含有する分散液中で被覆する必要があるため、磁性粒子の分散安定性が低下してしまうという問題があった。
【特許文献１】特開平６−１４８１８９号公報
【特許文献２】特開平７−２２５２３３号公報
【特許文献３】特表２００１−５２４６７５公報
【特許文献４】特開２０００−０４０６０８公報
【特許文献５】特開２００６−０２３１４０公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
本発明は、クロマトグラフィにおける展開性に優れる磁性体内包粒子を提供することを目的とする。また、本発明は、該磁性体内包粒子の製造方法、該磁性体内包粒子を用いる免疫測定用粒子、及び、該磁性体内包粒子を用いたイムノクロマトグラフィ法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明は、無機酸化物又はポリマーを含有するコア粒子の表面にシェル層を有する磁性体内包粒子であって、上記シェル層はマグネタイト粒子とケイ酸ナトリウムとを含有し、体積平均粒径が１０〜５００ｎｍ、数平均粒径のＣＶ値が８％以下、かつ、２５℃における飽和磁化が１５ｅｍｕ／ｇ以上である磁性体内包粒子である。
以下に本発明を詳述する。
【００１３】
本発明者らは、表面電荷を利用して無機酸化物又はポリマーを含有するコア粒子の表面にマグネタイト粒子をヘテロ凝集させ、更にマグネタイト粒子をヘテロ凝集させた粒子の表面をケイ酸ナトリウムで被覆することで、飽和磁化が大きく、極めて粒径が揃ったサブミクロンサイズの磁性体内包粒子を得ることができることを見出し、本発明を完成させるに至った。
【００１４】
本発明の磁性体内包粒子は、無機酸化物又はポリマーを含有するコア粒子の表面にシェル層を有する。
上記コア粒子は表面に電荷を有していることが好ましい。上記コア粒子が表面に電荷を有することで、後述する上記コア粒子と反対の電荷を有するマグネタイト粒子が上記コア粒子の表面に容易に吸着できる。
【００１５】
上記無機酸化物は特に限定されず、単一の無機酸化物、無機酸化物の混合物、又は、複合無機酸化物を挙げることができ、例えば、Ａｌ２Ｏ３、ＳｉＯ２、ＴｉＯ２、ＺｒＯ２、Ｆｅ２Ｏ３、Ｓｂ２Ｏ５、ＺｎＯ、ＭｇＯ、ＣａＯ、ＣｕＯ、ＳｉＯ２−Ａｌ２Ｏ３、ＴｉＯ２−Ａｌ２Ｏ３、ＳｎＯ２−Ｓｂ２Ｏ３、ＴｉＯ２−ＺｒＯ２、ＳｉＯ２−ＴｉＯ２、ＳｉＯ２−Ａｌ２Ｏ３−ＭｇＯ、ＳｉＯ２−Ａｌ２Ｏ３−Ａｇ２Ｏ、ＳｉＯ２−ＴｉＯ２−Ｆｅ２Ｏ３、ＳｉＯ２−Ａｌ２Ｏ３−ＣａＯ、ＳｉＯ２−ＴｉＯ２−Ａｌ２Ｏ３、ＳｉＯ２−Ａｌ２Ｏ３−ＺｎＯ等が挙げられる。
【００１６】
上記ポリマーは特に限定されず、例えば、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリスチレン、ポリ塩化ビニル、ポリアクリロニトリル、ポリ酢酸ビニル、ポリアクリル酸メチル、ポリメタクリル酸メチル、ポリ塩化ビニリデン、ポリテトラフルオロエチレン、ポリブタジエン、ポリクロロプレン、ポリイソプレン、ポリイソブチレン、ポリオキシメチレン、ナイロン−６６、ナイロン−１１、ナイロン−６、ポリエチレンテレフタレート、ポリカーボネート、フェノール樹脂、ユリア樹脂、メラミン樹脂、ポリエステル樹脂、シリコーン樹脂、エポキシ樹脂、ポリイミド樹脂、ポリウレタン、ポリエチレンオキシド、ポリビスクロルメチルシクロオキサブタン、シリコーンゴム等のポリマーが挙げられ、これらは単独で使用してもよく、また２種以上を使用してもよい。
なお、上記コア粒子は、無機酸化物とポリマーとを含有する有機無機ハイブリッド粒子であってもよい。また、上記コア粒子の形状は特に限定されないが、球状であることが好ましい。
【００１７】
上記シェル層はマグネタイト粒子とケイ酸ナトリウムとを含有する。
上記マグネタイト粒子は表面に上記コア粒子と反対の電荷を有していることが好ましい。表面に上記コア粒子と反対の電荷を有することで、上記マグネタイト粒子は上記コア粒子の表面に容易に吸着できる。
上記マグネタイト粒子の表面に上記コア粒子と反対の電荷を帯電させる方法は特に限定されず、例えば、上記コア粒子と反対の電荷を有する化合物を用いて表面修飾する方法等が挙げられる。
【００１８】
上記ケイ酸ナトリウムは、マグネタイト粒子同士の凝集を抑制する役割を有し、更に、マグネタイト粒子の落脱、マグネタイト粒子の酸化を防止する保護層としての役割も有する。
【００１９】
本発明の磁性体内包粒子の体積平均粒径の下限は１０ｎｍ、上限は５００ｎｍである。上記体積平均粒径が１０ｎｍ未満であると、マグネタイト粒子の含有量が少なく磁気応答性が低く、免疫クロマト法等において使用するのが困難である。
上記体積平均粒径が５００ｎｍを超えると、磁性体内包粒子がクロマト支持体の孔を通過しにくくなり、クロマトグラフィにおける展開性が劣ることがある。上記体積平均粒径の好ましい下限は５０ｎｍ、好ましい上限は４００ｎｍである。上記体積平均粒径のより好ましい下限は６０ｎｍ、より好ましい上限は３００ｎｍである。
なお、上記体積平均粒径は、下記式（１）で表される。
体積平均粒径＝（ΣＤｉ３）１／３  （１）
ここで、Ｄｉは測定した粒子の粒径であり、ｉは測定した粒子の個数である。
上記磁性体内包粒子の体積平均粒径は、例えば、透過型電子顕微鏡（ＴＥＭ）（カールツァイス社製、「ＬＥＯ９１２ＡＢ」）を用いて、２００個の磁性体内包粒子の粒径を観察することにより、算出できる。
【００２０】
本発明の磁性体内包粒子の数平均粒径のＣＶ値の上限は８％である。上記数平均粒径のＣＶ値が８％を超えると、粒子１個あたりに含有されているマグネタイト粒子量にばらつきが生じてしまうため、免疫クロマト法等に用いても精度良く分析することができない。上記数平均粒径のＣＶ値の好ましい上限は６％である。
また、本発明の磁性体内包粒子の数平均粒径のＣＶ値は、上記コア粒子の数平均粒径のＣＶ値の５倍以下であることが好ましい。本発明の磁性体内包粒子の数平均粒径のＣＶ値が上記コア粒子の数平均粒径のＣＶ値の５倍を超えると、粒子１個あたりの飽和磁化にばらつきが生じ、免疫クロマト法等に用いても精度良く分析することができなくなることがある。
なお、上記数平均粒径のＣＶ値は、下記式（２）で表される。
数平均粒径のＣＶ値＝（粒径の標準偏差σ／数平均粒径Ｄｎ）×１００  （２）
上記磁性体内包粒子の数平均粒径は、例えば、透過型電子顕微鏡（ＴＥＭ）（カールツァイス社製、「ＬＥＯ９１２ＡＢ」）を用いて、２００個の磁性体内包粒子の粒径を観察し、得られた粒径の平均値を算出することにより、求めることができる。
【００２１】
本発明の磁性体内包粒子の２５℃における飽和磁化の下限は１５ｅｍｕ／ｇである。上記２５℃における飽和磁化が１５ｅｍｕ／ｇ未満であると、本発明の磁性体内包粒子の磁性が不足し、磁気応答性が悪くなる。上記２５℃における飽和磁化の好ましい下限は２０ｅｍｕ／ｇ、より好ましい下限は２５ｅｍｕ／ｇである。
上記磁性体内包粒子の飽和磁化は、例えば、振動試料型磁力計（ＶＳＭ）（理研電子社製、「ＢＨＶ−５０ＨＭ」）を用いて測定できる。
【００２２】
本発明の磁性体内包粒子を製造する方法もまた、本発明の１つである。
本発明の磁性体内包粒子を製造する方法は、無機酸化物又はポリマーを含有するコア粒子を分散させた分散液と、マグネタイト粒子とを混合し、上記コア粒子の表面に上記マグネタイト粒子を吸着させ、上記マグネタイト粒子を表面に有する複合粒子を得る工程１と、上記マグネタイト粒子を表面に有する複合粒子の懸濁液と、ケイ酸ナトリウムとを混合し、上記マグネタイト粒子を表面に有する複合粒子を上記ケイ酸ナトリウムで被覆し、ケイ酸ナトリウムで被覆した複合粒子を得る工程２とを有する。
なお、上記工程１において、上記マグネタイト粒子は懸濁液として上記コア粒子を分散させた分散液と混合することが好ましい。また、上記工程２において、上記ケイ酸ナトリウムは溶液として上記マグネタイト粒子を表面に有する複合粒子の懸濁液と混合することが好ましい。
【００２３】
本発明の磁性体内包粒子を製造する方法において、上記コア粒子と上記マグネタイト粒子とは表面にそれぞれ反対の電荷を有していることが好ましい。上記コア粒子と上記マグネタイト粒子とは表面にそれぞれ反対の電荷を有することで、上記マグネタイト粒子を上記コア粒子の表面に容易に吸着させることができる。
表面にそれぞれ反対の電荷を有する上記コア粒子と上記マグネタイト粒子との組み合わせは特に限定されず、例えば、上記コア粒子としてマイナスの電荷を有するシリカ粒子と、上記マグネタイト粒子としてＮ−ｔｒｉｍｅｔｈｏｘｙｓｉｌｙｌｐｒｏｐｙｌ−Ｎ，Ｎ，Ｎ−ｔｒｉｍｅｔｈｙｌａｍｍｏｎｉｕｍ  ｃｈｌｏｒｉｄｅ（ＴＳＡ）で表面修飾したプラスの電荷を有するマグネタイト粒子との組み合わせ等が挙げられる。
【００２４】
本発明の磁性体内包粒子を製造する方法は、更に、ケイ酸ナトリウムで被覆した複合粒子の懸濁液と、マグネタイト粒子とを混合し、上記ケイ酸ナトリウムで被覆した複合粒子の表面に上記マグネタイト粒子を吸着させ、次いで、上記マグネタイト粒子を吸着させた上記ケイ酸ナトリウムで被覆した複合粒子の懸濁液と、ケイ酸ナトリウムとを混合し、上記マグネタイト粒子を吸着させた上記ケイ酸ナトリウムで被覆した複合粒子を上記ケイ酸ナトリウムで更に被覆する工程３を有することが好ましい。上記工程３を有することで、本発明の磁性体内包粒子に含有されるマグネタイト粒子の含有量が増加し、本発明の磁性体内包粒子の飽和磁化を更に大きくすることができる。本発明の磁性体内包粒子を製造する方法は、上記工程３を繰り返すことがより好ましい。
なお、上記工程３において、上記マグネタイト粒子は懸濁液として上記ケイ酸ナトリウムで被覆した複合粒子の懸濁液と混合し、かつ、上記ケイ酸ナトリウムは溶液として上記マグネタイト粒子を吸着させた上記ケイ酸ナトリウムで被覆した複合粒子の懸濁液と混合することが好ましい。
【００２５】
上記工程１〜３において、分散液、及び、懸濁液は水を含有することが好ましい。上記工程１〜３において、分散液、及び、懸濁液が水を含有することにより、マグネタイト粒子が凝集することを抑制できる。また、上記工程１〜３において、分散液、及び、懸濁液の媒体は実質的に水のみであることが好ましい。
【００２６】
本発明の磁性体内包粒子に抗原又は抗体が吸着している免疫測定用粒子もまた、本発明の１つである。なお、吸着とは、磁性体内包粒子と、抗原又は抗体とが化学的に結合していてもよく、化学結合を介さずに、磁性体内包粒子の表面に、抗原又は抗体が付着していてもよい。
【００２７】
本発明の磁性体内包粒子を担体として用い、本発明の磁性体内包粒子の磁性量を標識として分析するイムノクロマトグラフィ法もまた、本発明の１つである。
【発明の効果】
【００２８】
本発明によれば、クロマトグラフィにおける展開性に優れる磁性体内包粒子を提供することができる。また、本発明によれば、該磁性体内包粒子の製造方法、該磁性体内包粒子を用いる免疫測定用粒子、及び、該磁性体内包粒子を用いたイムノクロマトグラフィ法を提供することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２９】
以下に実施例を掲げて本発明を更に詳しく説明するが、本発明はこれら実施例のみに限定されない。
【００３０】
（実施例１）
（マグネタイト粒子懸濁液の調製）
撹拌翼がセットされた５００ｍＬのセパラブルフラスコに、３０分間窒素でバブリングした抵抗値１８ＭΩ以上の脱イオン水２００ｇと、２価及び３価のモル比が１：２である塩化鉄とを加えて、塩化鉄を溶解させた。その後、反応器内部を窒素ガスで満たして３５℃に保った水浴中に設置し、フラスコ内部の溶液の温度が３５℃で一定になるまで３００ｒｐｍで撹拌し、塩化鉄水溶液を得た。
マグネタイトを析出させるためのｐＨ調整剤であるアンモニア水溶液は、２５重量％アンモニア水溶液１１．９ｇに水３７．３ｇを加えることで調整した。
調整したアンモニア水溶液全量を得られた塩化鉄水溶液に加え、アンモニア水溶液を添加してから３０秒後にＮ−ｔｒｉｍｅｔｈｏｘｙｓｉｌｙｌｐｒｏｐｙｌ−Ｎ，Ｎ，Ｎ−ｔｒｉｍｅｔｈｙｌａｍｍｏｎｉｕｍ  ｃｈｌｏｒｉｄｅ（ＴＳＡ）１．９３ｇを添加し、３時間撹拌することで体積平均粒径が１０ｎｍ、及び、数平均粒径のＣＶ値が２０％のＴＳＡ修飾マグネタイト粒子を得た。
ここで、粒子の体積平均粒径及び数平均粒径のＣＶ値は、透過型電子顕微鏡（ＴＥＭ）（カールツァイス社製、「ＬＥＯ９１２ＡＢ」）を用いて観察し、２００個の粒子の粒径を測定することで算出した。
得られたＴＳＡ修飾マグネタイト粒子の懸濁液に、懸濁液の重量の２倍量のエタノールを加えて遠心分離を行い、上澄み液を除去し、乾燥させた。乾燥後、ＴＳＡ修飾マグネタイト粒子の濃度が０．９重量％になるように水を加えて、ＴＳＡ修飾マグネタイト粒子を分散させ、マグネタイト粒子懸濁液を得た。
【００３１】
（ヘテロ凝集粒子の作製（工程１））
得られた０．９重量％のＴＳＡ修飾マグネタイト粒子懸濁液４４ｇに無機酸化物として１５体積％のシリカ粒子（体積平均粒径が１５２ｎｍ、及び、数平均粒径のＣＶ値が３．９％）を水に分散させた懸濁液６．４ｇを加えて撹拌することでヘテロ凝集粒子を作製した。その後、遠心分離を行って遊離したマグネタイト粒子を除去し、ヘテロ凝集粒子の懸濁液を得た。
【００３２】
（ヘテロ凝集粒子へのケイ酸ナトリウム被覆（工程２））
２００ｍＬのビーカーに、ケイ酸ナトリウム１．８５２ｇと、全量が７０ｇとなるように水を添加した。この溶液に陽イオン交換樹脂を加えてｐＨを１０．０に調整し、その後陽イオン交換樹脂を取り除き、ケイ酸ナトリウム溶液を得た。得られたケイ酸ナトリウム溶液に工程１で得られたヘテロ凝集粒子の懸濁液３０ｇを加えて撹拌した。このとき、ｐＨが９．０になるように塩酸を添加した。
この溶液を撹拌翼がセットされた５００ｍＬのセパラブルフラスコに投入し、室温下、１００ｒｐｍで１時間撹拌した。その後、エタノールを２００ｇ加えて撹拌速度を３００ｒｐｍに増加させ１時間撹拌した。その後、遠心分離を行い、上澄み液を廃棄して水に置換することで、ケイ酸ナトリウムで被覆した複合粒子の懸濁液を得た。
【００３３】
（複合粒子へのヘテロ凝集及びケイ酸ナトリウム被覆（工程３））
得られたケイ酸ナトリウムで被覆した複合粒子の懸濁液中における複合粒子の粒子表面積を算出し、粒子表面積２０ｍ２に対して４００ｍｇのマグネタイト粒子がヘテロ凝集するように、得られたケイ酸ナトリウムで被覆した複合粒子の懸濁液をマグネタイト粒子の懸濁液に添加し、遠心分離を行って遊離したマグネタイト粒子を除去し、マグネタイト粒子をヘテロ凝集させた複合粒子の懸濁液を得た。次いで、得られたマグネタイト粒子をヘテロ凝集させた複合粒子の懸濁液を、工程２と同様にして得られたケイ酸ナトリウム溶液に加えて撹拌し、工程２と同様にしてマグネタイト粒子をヘテロ凝集させた複合粒子をケイ酸ナトリウムで被覆し、体積平均粒径が２０３ｎｍ、数平均粒径のＣＶ値が６．２％、及び、２５℃における飽和磁化が２２．８ｅｍｕ／ｇの磁性体内包粒子を得た。
ここで、粒子の飽和磁化は、振動試料型磁力計（ＶＳＭ）（理研電子社製、「ＢＨＶ−５０ＨＭ」）を用いて測定した。
作製した磁性体内包粒子の透過型電子顕微鏡（ＴＥＭ）による写真を図１に示した。
【００３４】
（実施例２）
工程３を合計２回繰り返したこと以外は、実施例１と同様にして体積平均粒径２３４ｎｍ、数平均粒径のＣＶ値が６．７％、及び、２５℃における飽和磁化が２６．８ｅｍｕ／ｇの磁性体内包粒子を得た。
作製した磁性体内包粒子の透過型電子顕微鏡（ＴＥＭ）による写真を図２に示した。
【００３５】
（実施例３）
工程１において、体積平均粒径が２５２ｎｍ、及び、数平均粒径のＣＶ値が３．７％のシリカ粒子を用いたこと以外は実施例１と同様にして体積平均粒径が２９９ｎｍ、数平均粒径のＣＶ値が５．７％、及び、２５℃における飽和磁化が１５．３ｅｍｕ／ｇの磁性体内包粒子を得た。
作製した磁性体内包粒子の透過型電子顕微鏡（ＴＥＭ）による写真を図３に示した。
【００３６】
（実施例４）
工程３を合計２回繰り返したこと以外は、実施例３と同様にして体積平均粒径が３２１ｎｍ、数平均粒径のＣＶ値が５．２％、及び、２５℃における飽和磁化が２０．９ｅｍｕ／ｇの磁性体内包粒子を得た。
作製した磁性体内包粒子の透過型電子顕微鏡（ＴＥＭ）による写真を図４に示した。
【００３７】
（比較例１）
実施例１で得られたマグネタイト粒子を水に分散させ、７．７重量％のマグネタイト粒子懸濁液１５０ｇを得た。得られたマグネタイト粒子懸濁液に、ケイ酸ナトリウム２１．９ｇを溶解し水溶液を得た。
また、４７０ｍｌのヘキサンに、界面活性剤として７．０ｇのソルビタンモノラウレートを溶解し界面活性剤溶液を得た。
水溶液と界面活性剤溶液とを混合し、得られた混合液に、超音波ホモジナイザーを２０分間照射し、エマルション分散液を調製した。
次に、３００ｇの硫酸アンモニウムを、１５００ｇの水に溶解した。これに上記エマルション分散液を２０分間かけ滴下した。滴下終了後、さらに超音波ホモジナイザーを用いて３０分間乳化し、磁性体内包粒子を作製した。得られた磁性体内包粒子の体積平均粒径は３６０ｎｍ、数平均粒径のＣＶ値は２０．５％、及び、２５℃における飽和磁化は８．７ｅｍｕ／ｇであった。
【００３８】
（比較例２）
実施例１で得られたマグネタイト粒子を水に分散させ、７．７重量％のマグネタイト粒子分散液１ｇを常温で乾燥させた後、ａｍｉｎｏ−ｐｒｏｐｙｌｔｒｉｍｅｔｏｘｙ−ｓｉｌａｎｅ（ＡＰＴＭＳ）０．５ｍＬを溶解したエタノール混合液３０ｍＬを添加しマグネタイト粒子懸濁液を得た。次いで、水１５ｍＬにテトラエチルオルトシリケート（ＴＥＯＳ）５ｍＬを溶解しＴＥＯＳ水溶液を得た。また、エタノール１００ｍＬと水１０ｍＬとの混合液に２５重量％アンモニア水溶液３０ｍＬを添加しアンモニア水溶液を得た。
ＴＥＯＳ水溶液とアンモニア水溶液を８００ｒｐｍで撹拌しているマグネタイト粒子懸濁液中に添加し、室温で２日間撹拌することで、磁性体内包粒子を作製した。得られた磁性体内包粒子の体積平均粒径は２８０ｎｍ、数平均粒径のＣＶ値は３．４％、及び、２５℃における飽和磁化は２．３ｅｍｕ／ｇであった。
【産業上の利用可能性】
【００３９】
本発明によれば、クロマトグラフィにおける展開性に優れる磁性体内包粒子を提供することができる。また、本発明によれば、該磁性体内包粒子の製造方法、該磁性体内包粒子を用いる免疫測定用粒子、及び、該磁性体内包粒子を用いたイムノクロマトグラフィ法を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００４０】
【図１】実施例１で作製した磁性体内包粒子の透過型電子顕微鏡（ＴＥＭ）による写真である。
【図２】実施例２で作製した磁性体内包粒子の透過型電子顕微鏡（ＴＥＭ）による写真である。
【図３】実施例３で作製した磁性体内包粒子の透過型電子顕微鏡（ＴＥＭ）による写真である。
【図４】実施例４で作製した磁性体内包粒子の透過型電子顕微鏡（ＴＥＭ）による写真である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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