【手続補正書】
【提出日】令和3年2月15日(2021.2.15)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
非筋細胞を含む、関心対象の遺伝子を筋細胞に送達して病的表現型を修正するための薬学的組成物であって、
前記非筋細胞が、外因性ミオミキサータンパク質および外因性ミオメーカータンパク質を発現し、かつ関心対象の遺伝子をさらに含み、かつ
前記非筋細胞が、筋細胞と接触し、前記筋細胞と融合し、かつ前記関心対象の遺伝子を前記筋細胞に送達し、前記関心対象の遺伝子により前記表現型が修正される、
前記薬学的組成物。
【請求項２】
非筋細胞が、インビトロで筋細胞と接触する、請求項1記載の薬学的組成物。
【請求項３】
非筋細胞が、インビボで筋細胞と接触する、請求項1記載の薬学的組成物。
【請求項４】
病的表現型が、正常遺伝子産物の低発現または非存在である、請求項1〜3のいずれか1項記載の薬学的組成物。
【請求項５】
病的表現型が、欠陥遺伝子産物の発現である、請求項1〜3のいずれか1項記載の薬学的組成物。
【請求項６】
病的表現型が、先天性ミオパシー、サルコペニア、筋萎縮性側索硬化症、筋ジストロフィー、ポンペ病、または横紋筋肉腫に関連する、請求項1〜5のいずれか1項記載の薬学的組成物。
【請求項７】
非筋細胞を含む、対象における細胞内の遺伝的欠陥を修正するための薬学的組成物であって、
前記非筋細胞が対象由来であり、
前記非筋細胞が、1つまたは複数の発現カセットを導入されており、かつ前記1つまたは複数の発現カセットが、（i）外因性ミオミキサータンパク質および外因性ミオメーカータンパク質ならびに（ii）1つまたは複数の治療遺伝子を発現し、かつ
前記非筋細胞が、遺伝的欠陥を有する筋細胞と接触し、前記筋細胞と融合し、かつ前記1つまたは複数の治療遺伝子を前記筋細胞に送達し、それによって遺伝的欠陥が修正される、
前記薬学的組成物。
【請求項８】
（a）対象由来の非筋細胞を用意すること、
（b）（i）外因性ミオミキサータンパク質および外因性ミオメーカータンパク質ならびに（ii）1つまたは複数の治療遺伝子を発現する1つまたは複数の発現カセットを、前記非筋細胞に導入すること、ならびに
（c）前記非筋細胞を、遺伝的欠陥を有する筋細胞と接触させること
を含む、対象における細胞内の遺伝的欠陥を修正するための医薬の製造のための非筋細胞の使用であって、
ミオミキサーおよびミオメーカータンパク質を発現する前記非筋細胞が、筋細胞と融合し、かつ1つまたは複数の治療遺伝子を前記筋細胞に送達し、それによって遺伝的欠陥を修正することになる、
前記使用。
【請求項９】
非筋細胞が、ヒト細胞である、請求項1〜7のいずれか1項記載の薬学的組成物。
【請求項１０】
非筋細胞が、線維芽細胞、骨髄細胞、または血液細胞である、請求項1〜7および9のいずれか1項記載の薬学的組成物。
【請求項１１】
1つまたは複数の発現カセットの導入および／または筋細胞への接触が、インビトロまたはインビボで実施される、請求項7および9〜10のいずれか1項記載の薬学的組成物。
【請求項１２】
1つまたは複数の発現カセットの導入がインビトロで実施され、かつ筋細胞への接触がインビボで実施される、請求項7および9〜11のいずれか1項記載の薬学的組成物。
【請求項１３】
非筋細胞が、検出マーカーまたは選択マーカーを発現する、請求項1〜7および9〜12のいずれか1項記載の薬学的組成物。
【請求項１４】
1つまたは複数の治療遺伝子が、Cas9と、少なくとも1つの治療sgRNAとを含む、請求項7および9〜13のいずれか1項記載の薬学的組成物。
【請求項１５】
筋細胞が、単離された筋細胞である、請求項7記載の薬学的組成物。
【請求項１６】
筋細胞が、インタクトな筋組織内に存在する、請求項1または12記載の薬学的組成物。
【請求項１７】
遺伝的欠陥が、デュシェンヌ型筋ジストロフィー変異である、請求項7および9〜16のいずれか1項記載の薬学的組成物。
【請求項１８】
遺伝的欠陥が、先天性ミオパシーである、請求項7および9〜16のいずれか1項記載の薬学的組成物。
【請求項１９】
遺伝的欠陥が、ポンペ病である、請求項7および9〜16のいずれか1項記載の薬学的組成物。
【請求項２０】
遺伝的欠陥が、筋萎縮性側索硬化症である、請求項7および9〜16のいずれか1項記載の薬学的組成物。
【請求項２１】
非筋細胞が、対象内の、筋肉を含む罹患した筋組織に送達される、請求項1〜7および9〜20のいずれか1項記載の薬学的組成物。
【請求項２２】
筋肉内注射によって投与される、請求項21記載の薬学的組成物。
【請求項２３】
薬学的組成物の投与が、少なくとも1回繰り返される、請求項21記載の薬学的組成物。
【請求項２４】
前記対象への二次療法の実施と組み合わせて使用される、請求項21〜23のいずれか1項記載の薬学的組成物。
【請求項２５】
非筋細胞が、エクスビボで筋細胞と接触し、その後、対象に移植される、請求項1または12記載の薬学的組成物。
【請求項２６】
筋細胞が、インタクトな筋組織に含まれる、請求項1または12記載の薬学的組成物。
【請求項２７】
筋細胞が、筋芽細胞である、請求項1〜7および9〜26のいずれか1項記載の薬学的組成物。
【請求項２８】
1つまたは複数の発現カセットが、構成性プロモーターまたは誘導性プロモーターを含む、請求項7記載の薬学的組成物。
【請求項２９】
1つまたは複数の発現カセットが、検出マーカーおよび／または選択マーカーをコードする、請求項7記載の薬学的組成物。
【請求項３０】
発現カセットが、複製可能ベクター内に含まれる、請求項7記載の薬学的組成物。
【請求項３１】
複製可能ベクターが、ウイルスベクターである、請求項30記載の薬学的組成物。
【請求項３２】
ウイルスベクターが、レトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター、アデノウイルスベクター、またはアデノ随伴ウイルスベクターである、請求項31記載の薬学的組成物。
【請求項３３】
複製可能ベクターが、非ウイルスベクターである、請求項32記載の薬学的組成物。
【請求項３４】
非ウイルスベクターが、リポソームまたはナノ粒子中に配合されている、請求項33記載の薬学的組成物。
【請求項３５】
（a）（i）非筋細胞において外因性のミオミキサータンパク質および
（ii）非筋細胞において外因性のミオメーカータンパク質
を発現する非筋細胞を用意する工程、ならびに
（b）非筋細胞を筋肉と接触させる工程であって、インビトロまたはエクスビボで実施される工程
を含む、インビトロまたはエクスビボで非筋細胞を筋細胞に融合する方法であって、
ミオミキサータンパク質を発現する非筋細胞が、筋細胞と融合することになる、
前記方法。
【請求項３６】
非筋細胞がヒト細胞である、請求項35記載の方法。
【請求項３７】
非筋細胞が線維芽細胞、骨髄細胞、または血液細胞である、請求項35または36記載の方法。
【請求項３８】
非筋細胞が、検出マーカーまたは選択マーカーを発現する、請求項35〜37のいずれか1項記載の方法。
【請求項３９】
筋細胞が、単離された筋細胞である、請求項35〜38のいずれか1項記載の方法。
【請求項４０】
筋細胞が、インタクトな筋組織内に存在する、請求項35〜39のいずれか1項記載の方法。
【請求項４１】
筋細胞が、筋芽細胞である、請求項35〜40のいずれか1項記載の方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１６】
[本発明1001]
細胞内で活性なプロモーターの制御下にあるミオミキサー（Myomixer）ポリペプチドをコードする外因性核酸で形質転換された細胞。
[本発明1002]
ヒト細胞である、本発明1001の細胞。
[本発明1003]
非筋細胞である、本発明1001の細胞。
[本発明1004]
線維芽細胞、骨髄細胞、または血液細胞である、本発明1001の細胞。
[本発明1005]
外因性核酸が、構成性プロモーターまたは誘導性プロモーターの制御下にある、本発明1001の細胞。
[本発明1006]
細胞内で活性なプロモーターの制御下にあるミオメーカー（Myomaker）ポリペプチドをコードする外因性核酸でさらに形質転換されている、本発明1001の細胞。
[本発明1007]
外因性核酸が、前記細胞の染色体に組み込まれている、本発明1001の細胞。
[本発明1008]
外因性核酸が、前記細胞によりエピソーム的に保持されている、本発明1001の細胞。
[本発明1009]
検出マーカーおよび／または選択マーカーを発現する、本発明1001の細胞。
[本発明1010]
ミオミキサー以外の関心対象の遺伝子を発現するよう形質転換されている、本発明1001の細胞。
[本発明1011]
細胞内で活性なプロモーターの制御下にある外因性ミオミキサータンパク質をコードする核酸を、非筋細胞に移入する工程を含む、非筋細胞融合パートナーを調製する方法。
[本発明1012]
前記細胞が安定的に形質転換される、本発明1011の方法。
[本発明1013]
前記細胞が一過的にトランスフェクトされる、本発明1011の方法。
[本発明1014]
検出マーカーをコードする核酸または検出マーカーを生成するのに十分な核酸を前記細胞に移入する工程をさらに含む、本発明1011の方法。
[本発明1015]
外因性核酸が、構成性プロモーターまたは誘導性プロモーターの制御下にある、本発明1011の方法。
[本発明1016]
前記細胞が、細胞内で活性なプロモーターの制御下にあるミオメーカーポリペプチドをコードする外因性核酸でさらに形質転換される、本発明1011の方法。
[本発明1017]
前記細胞がヒト細胞である、本発明1011の方法。
[本発明1018]
前記細胞が線維芽細胞、骨髄細胞、または血液細胞である、本発明1011の方法。
[本発明1019]
外因性核酸が、選択マーカーをさらにコードする、本発明1011の方法。
[本発明1020]
前記細胞が、ミオミキサー以外の関心対象の遺伝子を発現するよう形質転換される、本発明1011の方法。
[本発明1021]
（a）（i）非筋細胞において外因性のミオミキサータンパク質および
（ii）ミオメーカータンパク質
を発現する非筋細胞を用意する工程、ならびに
（b）非筋細胞を筋肉と接触させる工程
を含む、非筋細胞を筋細胞に融合する方法であって、
ミオミキサータンパク質を発現する非筋細胞が、筋細胞と融合することになる、
前記方法。
[本発明1022]
非筋細胞がヒト細胞である、本発明1021の方法。
[本発明1023]
非筋細胞が線維芽細胞、骨髄細胞、または血液細胞である、本発明1021の方法。
[本発明1024]
工程（b）がインビトロで実施される、本発明1021の方法。
[本発明1025]
工程（b）がインビボで実施される、本発明1021の方法。
[本発明1026]
非筋細胞が、検出マーカーまたは選択マーカーを発現する、本発明1021の方法。
[本発明1027]
非筋細胞が、細胞内で活性なプロモーターの制御下にあるミオメーカーポリペプチドをコードする外因性核酸でさらに形質転換される、本発明1021の方法。
[本発明1028]
筋細胞が、単離された筋細胞である、本発明1024の方法。
[本発明1029]
筋細胞が、インタクトな筋組織内に存在する、本発明1021の方法。
[本発明1030]
筋細胞が、筋芽細胞である、本発明1021の方法。
[本発明1031]
（a）外因性ミオミキサータンパク質およびミオメーカータンパク質を発現する非筋細胞を用意する工程であって、非筋細胞が、関心対象の遺伝子をさらに含む、工程、ならびに
（b）非筋細胞を筋細胞と接触させる工程
を含む、関心対象の遺伝子を筋細胞に送達する方法であって、
ミオミキサーおよびミオメーカータンパク質を発現する非筋細胞が、筋細胞と融合し、かつ前記関心対象の遺伝子を筋細胞に送達することになる、
前記方法。
[本発明1032]
非筋細胞が、ヒト細胞である、本発明1031の方法。
[本発明1033]
非筋細胞が、線維芽細胞、骨髄細胞、または血液細胞である、本発明1031の方法。
[本発明1034]
工程（b）が、インビトロで実施される、本発明1031の方法。
[本発明1035]
工程（b）が、インビボで実施される、本発明1031の方法。
[本発明1036]
非筋細胞が、検出マーカーまたは選択マーカーを発現する、本発明1031の方法。
[本発明1037]
非筋細胞が、細胞内で活性なプロモーターの制御下にあるミオメーカーポリペプチドをコードする外因性核酸でさらに形質転換される、本発明1031の方法。
[本発明1038]
筋細胞が、単離された筋細胞である、本発明1034の方法。
[本発明1039]
筋細胞が、インタクトな筋組織内に存在する、本発明1031の方法。
[本発明1040]
筋細胞が病的表現型を示し、かつ前記関心対象の遺伝子がその遺伝子型を修正する、本発明1031の方法。
[本発明1041]
病的表現型が、正常遺伝子産物の低発現または非存在である、本発明1040の方法。
[本発明1042]
病的表現型が、欠陥遺伝子産物の発現である、本発明1040の方法。
[本発明1043]
筋細胞が、先天性ミオパシー、サルコペニア、筋萎縮性側索硬化症、筋ジストロフィー、ポンペ病、または横紋筋肉腫に関連する病的表現型を有する、本発明1040の方法。
[本発明1044]
非筋細胞が、対象内の、筋肉を含む罹患した筋組織に送達される、本発明1040の方法。
[本発明1045]
送達が、筋肉内注射によって行われる、本発明1044の方法。
[本発明1046]
送達が、少なくとも1回繰り返される、本発明1044の方法。
[本発明1047]
前記対象に二次療法が施される、本発明1044の方法。
[本発明1048]
非筋細胞が、エクスビボで筋細胞に送達され、その後、対象に移植される、本発明1040の方法。
[本発明1049]
筋細胞が、インタクトな筋組織内に含まれる、本発明1048の方法。
[本発明1050]
筋細胞が、筋芽細胞である、本発明1031の方法。
[本発明1051]
真核生物細胞内で活性なプロモーターの制御下にあるミオミキサーポリペプチドをコードする外因性核酸を含む、発現カセット。
[本発明1052]
外因性核酸が、構成性プロモーターまたは誘導性プロモーターの制御下にある、本発明1051の発現カセット。
[本発明1053]
真核生物細胞内で活性なプロモーターの制御下にあるミオメーカーポリペプチドをコードする外因性核酸をさらに含む、本発明1051の発現カセット。
[本発明1054]
検出マーカーおよび／または選択マーカーをコードする、本発明1051の発現カセット。
[本発明1055]
ミオミキサーまたはミオメーカー以外の関心対象の遺伝子をコードする外因性核酸を含む、本発明1051または1053の発現カセット。
[本発明1056]
複製可能ベクター内に含まれる、本発明1051の発現カセット。
[本発明1057]
複製可能ベクターが、ウイルスベクターである、本発明1056の発現カセット。
[本発明1058]
ウイルスベクターが、レトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター、アデノウイルスベクター、またはアデノ随伴ウイルスベクターである、本発明1057の発現カセット。
[本発明1059]
複製可能ベクターが、非ウイルスベクターである、本発明1056の発現カセット。
[本発明1060]
非ウイルスベクターが、リポソームまたはナノ粒子中に配合されている、本発明1059の発現カセット。
[本発明1061]
（a）対象由来の非筋細胞を用意する工程、
（b）（i）非筋細胞において外因性のミオミキサーおよびミオメーカータンパク質ならびに
（ii）1つまたは複数の治療遺伝子
を発現する1つまたは複数の発現カセットを、非筋細胞に導入する工程、ならびに
（c）非筋細胞を、遺伝的欠陥を有する筋細胞と接触させる工程
を含む、対象における細胞内の遺伝的欠陥を修正する方法であって、
ミオミキサーおよびミオメーカータンパク質を発現する非筋細胞が、筋細胞と融合し、かつ1つまたは複数の治療遺伝子を筋細胞に送達し、それによって遺伝的欠陥を修正することになる、
前記方法。
[本発明1062]
非筋細胞が、ヒト細胞である、本発明1061の方法。
[本発明1063]
非筋細胞が、線維芽細胞、骨髄細胞、または血液細胞である、本発明1061の方法。
[本発明1064]
工程（b）および／または（c）が、インビトロまたはインビボで実施される、本発明1061の方法。
[本発明1065]
工程（b）がインビトロで実施され、かつ工程（c）がインビボで実施される、本発明1061の方法。
[本発明1066]
非筋細胞が、検出マーカーまたは選択マーカーを発現する、本発明1061の方法。
[本発明1067]
1つまたは複数の治療遺伝子が、Cas9と、少なくとも1つの治療sgRNAとを含む、本発明1061の方法。
[本発明1068]
筋細胞が、単離された筋細胞である、本発明1061の方法。
[本発明1069]
筋細胞が、インタクトな筋組織内に存在する、本発明1065の方法。
[本発明1070]
遺伝的欠陥が、デュシェンヌ型筋ジストロフィー変異である、本発明1061の方法。
[本発明1071]
遺伝的欠陥が、先天性ミオパシーである、本発明1061の方法。
[本発明1072]
遺伝的欠陥が、ポンペ病である、本発明1061の方法。
[本発明1073]
遺伝的欠陥が、筋萎縮性側索硬化症である、本発明1061の方法。
[本発明1074]
非筋細胞が、対象内の、筋肉を含む罹患した筋組織に送達される、本発明1065の方法。
[本発明1075]
送達が、筋肉内注射によって行われる、本発明1074の方法。
[本発明1076]
送達が、少なくとも1回繰り返される、本発明1074の方法。
[本発明1077]
前記対象に二次療法が施される、本発明1074の方法。
[本発明1078]
非筋細胞が、エクスビボで筋細胞と接触し、その後、対象に移植される、本発明1065の方法。
[本発明1079]
筋細胞が、インタクトな筋組織に含まれる、本発明1065の方法。
[本発明1080]
筋細胞が、筋芽細胞である、本発明1061の方法。
[本発明1081]
1つまたは複数の発現カセットが、構成性プロモーターまたは誘導性プロモーターを含む、本発明1061の方法。
[本発明1082]
1つまたは複数の発現カセットが、検出マーカーおよび／または選択マーカーをコードする、本発明1061の方法。
[本発明1083]
発現カセットが、複製可能ベクター内に含まれる、本発明1061の方法。
[本発明1084]
複製可能ベクターが、ウイルスベクターである、本発明1083の方法。
[本発明1085]
ウイルスベクターが、レトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター、アデノウイルスベクター、またはアデノ随伴ウイルスベクターである、本発明1084の方法。
[本発明1086]
複製可能ベクターが、非ウイルスベクターである、本発明1083の方法。
[本発明1087]
非ウイルスベクターが、リポソームまたはナノ粒子中に配合されている、本発明1086の方法。
本明細書で使用される場合、「a」または「an」は、1つまたは複数を意味し得る。特許請求の範囲で使用される場合、「含む」という単語と共に使用されるとき、「a」または「an」という単語は、1つまたは2つ以上を意味し得る。本明細書で使用される場合、「別の」は、少なくとも第2またはそれ以上を意味し得る。本開示の他の目的、特徴および利点は、以下の詳細な説明から明らかとなるであろう。しかし、詳細な説明および具体的な実施例は、本開示の好ましい態様を示すものであるが、例にすぎず、本開示の精神および範囲内での様々な変更および改変が詳細な説明から当業者に明らかとなることが理解されるべきである。