【手続補正書】
【提出日】令和3年2月12日(2021.2.12)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ジストログリカンの細胞外部分に結合する第１の結合性ドメインと、ラミニン２に結合する第２の結合性ドメインとを含む二特異性結合性分子であって、該二特異性結合性分子は、１つまたはそれ以上のポリペプチド鎖を含む二特異性結合性タンパク質であり、該二特異性結合性分子は、式：
ＶL1−Ｌ5−ＶL2−Ｌ6−ＣL  ［ＩＩＩ］
により表される構造を含む２つの軽鎖と、式：
ＶH1−Ｌ7−ＶH2−Ｌ8−ＣH1−ヒンジ−ＣH2−ＣH3  ［ＩＶ］
により表される構造を含む２つの重鎖とを含み、
式中、
ＶL1は、第１の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶL2は、第２の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであり；
ＶH1は、第１の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＶH2は、第２の免疫グロブリン重鎖可変ドメインであり；
ＣLは、免疫グロブリン軽鎖定常ドメインであり；
ＣH1は、免疫グロブリンＣH1重鎖定常ドメインであり；
ＣH2は、免疫グロブリンＣH2重鎖定常ドメインであり；
ＣH3は、免疫グロブリンＣH3重鎖定常ドメインであり；
ヒンジは、該ＣH1ドメインとＣH2ドメインとを接続する免疫グロブリンヒンジ領域であり；
Ｌ5、Ｌ6、Ｌ7、およびＬ8は、アミノ酸リンカーであり；
該ＶH1ドメインおよびＶL1ドメインは、ＶH1／ＶL1結合対を形成し、該ＶH2ドメインおよびＶL2ドメインは、ＶH2／ＶL2結合対を形成する、前記二特異性結合性分子。
【請求項２】
4  Ｌ5、Ｌ6、Ｌ7、およびＬ8は各々、０〜５０アミノ酸残基の長さである、請求項１に記載の二特異性結合性分子。
【請求項３】
Ｌ5、Ｌ6、Ｌ7、およびＬ8は各々、０〜２５アミノ酸残基の長さである、請求項１または２に記載の二特異性結合性分子。
【請求項４】
Ｌ5、Ｌ6、Ｌ7、およびＬ8は各々、０〜１４アミノ酸残基の長さである、請求項１〜３
のいずれか１項に記載の二特異性結合性分子。
【請求項５】
Ｌ5およびＬ7リンカーは、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳのアミノ酸配列（配列番号２９４）を含み、Ｌ6およびＬ8リンカーは各々、０アミノ酸残基の長さである、請求項１〜４のいずれか１項に記載の二特異性結合性分子。
【請求項６】
式ＩＩＩおよび／または式ＩＶのポリペプチドの可変ドメインの一方または両方は、ヒト可変ドメイン、ヒト化可変ドメイン、またはマウス可変ドメインである、請求項１〜５のいずれか１項に記載の二特異性結合性分子。
【請求項７】
ＶH1／ＶL1結合対は、ジストログリカンの細胞外部分に結合し、ＶH2／ＶL2結合対は、ラミニン２に結合する、請求項１〜６のいずれか１項に記載の二特異性結合性分子。
【請求項８】
ＶH1／ＶL1結合対は、ヒトジストログリカンの細胞外部分に結合する、請求項７に記載の二特異性結合性分子。
【請求項９】
ＶH1／ＶL1結合対は、ヒトジストログリカンの細胞外部分に約１μＭより低い平衡解離定数（ＫD）で結合する、請求項８に記載の二特異性結合性分子。
【請求項１０】
ＶH1／ＶL1結合対は、ヒトジストログリカンおよびマウスジストログリカンの細胞外部分に結合する、請求項７〜９のいずれか１項に記載の二特異性結合性分子。
【請求項１１】
ＶH1／ＶL1結合対は、ベータ−ジストログリカンに結合する、請求項７〜１０のいずれか１項に記載の二特異性結合性分子。
【請求項１２】
ＶH1／ＶL1結合対は、アルファ−ジストログリカンに結合する、請求項７〜１０のいずれか１項に記載の二特異性結合性分子。
【請求項１３】
ＶH2／ＶL2結合対は、ヒトラミニン２に結合する、請求項７〜１２のいずれか１項に記載の二特異性結合性分子。
【請求項１４】
ＶH2／ＶL2結合対は、ヒトラミニン２に約１μＭより低い平衡解離定数（ＫD）で結合する、請求項１３に記載の二特異性結合性分子。
【請求項１５】
ＶH2／ＶL2結合対は、マウスラミニン２およびヒトラミニン２に結合する、請求項７〜１４のいずれか１項に記載の二特異性結合性分子。
【請求項１６】
ＶH2／ＶL2結合対は、ラミニン２のラミニンＧ様（ＬＧ）ドメイン４、ラミニン２のラミニンＧ様（ＬＧ）ドメイン５、または両方を含むポリペプチドに結合する、請求項７〜１５のいずれか１項に記載の二特異性結合性分子。
【請求項１７】
ＶH2／ＶL2結合対は、ラミニン２のラミニンＧ様（ＬＧ）ドメイン４およびラミニンＧ様（ＬＧ）ドメイン５を含むポリペプチドに結合する、請求項１６に記載の二特異性結合性分子。
【請求項１８】
ＶH2／ＶL2結合対は、ラミニン２のラミニンＧ様（ＬＧ）ドメイン５を含むポリペプチドに結合する、請求項１６に記載の二特異性結合性分子。
【請求項１９】
ＶH1ドメインは、配列番号１〜８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号９〜１７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２、
および配列番号１８〜２７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；かつ／またはＶL1ドメインは、配列番号２８〜３７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号３８〜４２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２、および配列番号４３〜５０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ここで場合により、ＶH1ドメインは、配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２、および配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；かつＶL1ドメインは、配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２、および配列番号４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む、請求項７に記載の二特異性結合性分子。
【請求項２０】
ＶH1ドメインは、配列番号１７０、１７２、１７４、１７６、１７８、１８０、１８２、１８４、１８６、および１８８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み；ここで場合により、ＶH1ドメインは、配列番号１７０のアミノ酸配列を含む、請求項１９に記載の二特異性結合性分子。
【請求項２１】
ＶL1ドメインは、配列番号１７１、１７３、１７５、１７７、１７９、１８１、１８３、１８５、１８７、および１８９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み；ここで場合により、ＶL1ドメインは、配列番号１７１のアミノ酸配列を含む、請求項１９または２０に記載の二特異性結合性分子。
【請求項２２】
ＶH2ドメインは、配列番号５１〜５５および８１〜９５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号５６〜６０および９６〜１１０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２、および配列番号６１〜６５および１１１〜１２５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；かつ／またはＶL2ドメインは、配列番号６６〜７０および１２６〜１４０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号３８、７１〜７５、および１４１〜１５４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２、および配列番号７６〜８０および１５５〜１６９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ここで場合により、ＶH2ドメインは、配列番号５２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号５７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２、および配列番号６２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；かつ／またはＶL2ドメインは、配列番号６７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号７２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２、および配列番号７７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む、請求項７および１９〜２１のいずれか１項に記載の二特異性結合性分子。
【請求項２３】
ＶH2ドメインは、配列番号１９０、１９２、１９４、１９６、１９８、２００、２０２、２０４、２０６、２０８、２１０、２１２、２１４、２１６、２１８、２２０、２２２、２２４、２２６、および２２８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み；ここで場合により、ＶH2ドメインは、配列番号１９２のアミノ酸配列を含む、請求項２２に記載の二特異性結合性分子。
【請求項２４】
ＶL2ドメインは、配列番号１９１、１９３、１９５、１９７、１９９、２０１、２０３、２０５、２０７、２０９、２１１、２１３、２１５、２１７、２１９、２２１、２２３、２２５、２２７、および２２９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み；ここで場合により、ＶL2ドメインは、配列番号１９３のアミノ酸配列を含む、請求項２２または２３に記載の二特異性結合性分子。
【請求項２５】
ＶH1ドメインは、配列番号１７０のアミノ酸配列を含み、ＶL1ドメインは、配列番号１７１のアミノ酸配列を含み、ＶH2ドメインは、配列番号１９２のアミノ酸配列を含み、お
よびＶL2ドメインは、配列番号１９３のアミノ酸配列を含む、請求項７に記載の二特異性結合性分子。
【請求項２６】
ＶH1／ＶL1結合対は、ラミニン２に結合し、ＶH2／ＶL2結合対は、ジストログリカンの細胞外部分に結合する、請求項１〜６のいずれか１項に記載の二特異性結合性分子。
【請求項２７】
ＶH2／ＶL2結合対は、ヒトジストログリカンの細胞外部分に結合する、請求項２６に記載の二特異性結合性分子。
【請求項２８】
ＶH2／ＶL2結合対は、ヒトジストログリカンの細胞外部分に約１μＭより低い平衡解離定数（ＫD）で結合する、請求項２７に記載の二特異性結合性分子。
【請求項２９】
ＶH2／ＶL2結合対は、ヒトジストログリカンおよびマウスジストログリカンの細胞外部分に結合する、請求項２６〜２８のいずれか１項に記載の二特異性結合性分子。
【請求項３０】
ＶH2／ＶL2結合対は、ベータ−ジストログリカンに結合する、請求項２６〜２９のいずれか１項に記載の二特異性結合性分子。
【請求項３１】
ＶH2／ＶL2結合対は、アルファ−ジストログリカンに結合する、請求項２６〜２９のいずれか１項に記載の二特異性結合性分子。
【請求項３２】
ＶH1／ＶL1結合対は、ヒトラミニン２に結合する、請求項２６〜３１のいずれか１項に記載の二特異性結合性分子。
【請求項３３】
ＶH1／ＶL1結合対は、ヒトラミニン２に約１μＭより低い平衡解離定数（ＫD）で結合する、請求項３２に記載の二特異性結合性分子。
【請求項３４】
ＶH1／ＶL1結合対は、マウスラミニン２およびヒトラミニン２に結合する、請求項２６〜３３のいずれか１項に記載の二特異性結合性分子。
【請求項３５】
ＶH1／ＶL1結合対は、ラミニン２のラミニンＧ様（ＬＧ）ドメイン４、ラミニン２のラミニンＧ様（ＬＧ）ドメイン５、または両方を含むポリペプチドに結合する、請求項２６〜３４のいずれか１項に記載の二特異性結合性分子。
【請求項３６】
ＶH1／ＶL1結合対は、ラミニン２のラミニンＧ様（ＬＧ）ドメイン４およびラミニンＧ様（ＬＧ）ドメイン５を含むポリペプチドに結合する、請求項３５に記載の二特異性結合性分子。
【請求項３７】
ＶH1／ＶL1結合対は、ラミニン２のラミニンＧ様（ＬＧ）ドメイン５を含むポリペプチドに結合する、請求項３５に記載の二特異性結合性分子。
【請求項３８】
ＶH2ドメインは、配列番号１〜８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号９〜１７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２、および配列番号１８〜２７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；かつ／またはＶL1ドメインは、配列番号２８〜３７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号３８〜４２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２、および配列番号４３〜５０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ここで場合により、ＶH2ドメインは、配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２、および配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；かつＶL1ドメインは、配列番号２８
のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２、および配列番号４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む、請求項３８に記載の二特異性結合性分子。
【請求項３９】
ＶH2ドメインは、配列番号１７０、１７２、１７４、１７６、１７８、１８０、１８２、１８４、１８６、および１８８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み；ここで場合により、ＶH2ドメインは、配列番号１７０のアミノ酸配列を含む、請求項１９に記載の二特異性結合性分子。
【請求項４０】
ＶL2ドメインは、配列番号１７１、１７３、１７５、１７７、１７９、１８１、１８３、１８５、１８７、および１８９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み；ここで場合により、ＶL2ドメインは、配列番号１７１のアミノ酸配列を含む、請求項３８または３９に記載の二特異性結合性分子。
【請求項４１】
ＶH1ドメインは、配列番号５１〜５５および８１〜９５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号５６〜６０および９６〜１１０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２、および配列番号６１〜６５および１１１〜１２５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；かつ／またはＶL2ドメインは、配列番号６６〜７０および１２６〜１４０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号３８、７１〜７５、および１４１〜１５４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２、および配列番号７６〜８０および１５５〜１６９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含み；ここで場合により、ＶH1ドメインは、配列番号５２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号５７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２、および配列番号６２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含み；かつ／またはＶL2ドメインは、配列番号６７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号７２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２、および配列番号７７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む、請求項２６および３８〜４０のいずれか１項に記載の二特異性結合性分子。
【請求項４２】
ＶH1ドメインは、配列番号１９０、１９２、１９４、１９６、１９８、２００、２０２、２０４、２０６、２０８、２１０、２１２、２１４、２１６、２１８、２２０、２２２、２２４、２２６、および２２８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み；ここで場合により、ＶH1ドメインは、配列番号１９２のアミノ酸配列を含む、請求項４１に記載の二特異性結合性分子。
【請求項４３】
ＶL1ドメインは、配列番号１９１、１９３、１９５、１９７、１９９、２０１、２０３、２０５、２０７、２０９、２１１、２１３、２１５、２１７、２１９、２２１、２２３、２２５、２２７、および２２９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み；ここで場合により、ＶL1ドメインは、配列番号１９３のアミノ酸配列を含む、請求項４１または４２に記載の二特異性結合性分子。
【請求項４４】
ＶH1ドメインは、配列番号１９２のアミノ酸配列を含み、ＶL1ドメインは、配列番号１９３のアミノ酸配列を含み、ＶH2ドメインは、配列番号１７０のアミノ酸配列を含み、およびＶL2ドメインは、配列番号１７１のアミノ酸配列を含む、請求項２６に記載の二特異性結合性分子。
【請求項４５】
請求項１〜４４のいずれか１項に記載の二特異性結合性分子をコードするヌクレオチド配列を含む単離核酸分子。
【請求項４６】
請求項４５に記載の核酸分子を含む発現ベクター。
【請求項４７】
請求項４５に記載の核酸分子を含む単離宿主細胞。
【請求項４８】
請求項４６に記載の発現ベクターを含む単離宿主細胞。
【請求項４９】
請求項１に記載の二特異性結合性分子の２つの軽鎖および２つの重鎖をコードする１つまたはそれ以上のベクターを含むベクター系。
【請求項５０】
請求項４９に記載のベクター系を含む単離宿主細胞。
【請求項５１】
二特異性結合性分子を作製する方法であって、
ａ）請求項４７、４８、および５０のいずれか１項に記載の宿主細胞を、該宿主細胞が該二特異性結合性分子を発現するような条件下で培養する工程と；
ｂ）該二特異性結合性分子を該宿主細胞から単離する工程と
を含む前記方法。
【請求項５２】
個体におけるアルファ−ジストログリカノパチーを処置または防止するための方法で使用するための、請求項１〜４４のいずれか１項に記載の二特異性結合性分子。
【請求項５３】
個体におけるラミニン２とジストログリカンの細胞外部分との連結をもたらすための方法で使用するための、請求項１〜４４のいずれか１項に記載の二特異性結合性分子。
【請求項５４】
個体は、アルファ−ジストログリカンの発現が低減されている、請求項５２または５３に記載の二特異性結合性分子。
【請求項５５】
個体において発現するアルファ−ジストログリカンは、Ｏ−グリコシル化が損なわれているか、または異常である、請求項５２または５３に記載の二特異性結合性分子。
【請求項５６】
個体は、ジストログリカン（ＤＡＧ１）、タンパク質Ｏ−マンノシルトランスフェラーゼ１（ＰＯＭＴ１）、タンパク質Ｏ−マンノシルトランスフェラーゼ２（ＰＯＭＴ２）、タンパク質Ｏ結合型マンノースベータ１，２−Ｎ−アセチルグルコシルアミニルトランスフェラーゼサブユニット１（ＰＯＭＧＮＴ１）、タンパク質Ｏ結合型マンノースベータ１，４−Ｎ−アセチルグルコシルアミニルトランスフェラーゼサブユニット２（ＰＯＭＧＮＴ２）、キシロシルおよびグルクロニルトランスフェラーゼ１（ＬＡＲＧＥ１）、キシロシルおよびグルクロニルトランスフェラーゼ２（ＬＡＲＧＥ２）、ドリキル−リン酸マンノシルトランスフェラーゼサブユニット１（ＤＰＭ１）、ドリキル−リン酸マンノシルトランスフェラーゼサブユニット２（ＤＰＭ２）、ドリキル−リン酸マンノシルトランスフェラーゼサブユニット３（ＤＰＭ３）、フクチン、フクチン関連タンパク質（ＦＫＲＰ）、イソプレノイドシンターゼドメイン含有（ＩＳＰＤ）、タンパク質Ｏ−マンノースキナーゼ（ＰＯＭＫ）、ベータ−１，３−Ｎ−アセチルガラクトサミニルトランスフェラーゼ２（Ｂ３ＧＡＬＮＴ２）、ベータ−１，４−グルクロニルトランスフェラーゼ１（Ｂ４ＧＡＴ１）、ドリコールキナーゼ（ＤＯＬＫ）、膜貫通タンパク質５（ＴＭＥＭ５）、およびＧＤＰ−マンノースピロホスホリラーゼＢ（ＧＭＰＰＢ）からなる群から選択される遺伝子内に突然変異を有する、請求項５２または５３に記載の二特異性結合性分子。
【請求項５７】
個体は、ヒトである、請求項５２〜５６のいずれか１項に記載の二特異性結合性分子。
【請求項５８】
請求項１〜４４のいずれか１項に記載の二特異性結合性分子と、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物。
【請求項５９】
請求項１〜４４のいずれか１項に記載の二特異性結合性分子と、個体におけるアルファ−ジストログリカノパチーの処置または防止における使用のための指示書とを含むキット。
【請求項６０】
個体は、アルファ−ジストログリカンの発現が低減されている、請求項５９に記載のキット。
【請求項６１】
個体において発現するアルファ−ジストログリカンは、Ｏ−グリコシル化が損なわれているか、または異常である、請求項５９に記載のキット。
【請求項６２】
個体は、ジストログリカン（ＤＡＧ１）、タンパク質Ｏ−マンノシルトランスフェラーゼ１（ＰＯＭＴ１）、タンパク質Ｏ−マンノシルトランスフェラーゼ２（ＰＯＭＴ２）、タンパク質Ｏ結合型マンノースベータ１，２−Ｎ−アセチルグルコシルアミニルトランスフェラーゼサブユニット１（ＰＯＭＧＮＴ１）、タンパク質Ｏ結合型マンノースベータ１，４−Ｎ−アセチルグルコシルアミニルトランスフェラーゼサブユニット２（ＰＯＭＧＮＴ２）、キシロシルおよびグルクロニルトランスフェラーゼ１（ＬＡＲＧＥ１）、キシロシルおよびグルクロニルトランスフェラーゼ２（ＬＡＲＧＥ２）、ドリキル−リン酸マンノシルトランスフェラーゼサブユニット１（ＤＰＭ１）、ドリキル−リン酸マンノシルトランスフェラーゼサブユニット２（ＤＰＭ２）、ドリキル−リン酸マンノシルトランスフェラーゼサブユニット３（ＤＰＭ３）、フクチン、フクチン関連タンパク質（ＦＫＲＰ）、イソプレノイドシンターゼドメイン含有（ＩＳＰＤ）、タンパク質Ｏ−マンノースキナーゼ（ＰＯＭＫ）、ベータ−１，３−Ｎ−アセチルガラクトサミニルトランスフェラーゼ２（Ｂ３ＧＡＬＮＴ２）、ベータ−１，４−グルクロニルトランスフェラーゼ１（Ｂ４ＧＡＴ１）、ドリコールキナーゼ（ＤＯＬＫ）、膜貫通タンパク質５（ＴＭＥＭ５）、およびＧＤＰ−マンノースピロホスホリラーゼＢ（ＧＭＰＰＢ）からなる群から選択される遺伝子内に突然変異を有する、請求項５９に記載のキット。
【請求項６３】
個体は、ヒトである、請求項５９〜６２のいずれか１項に記載のキット。