(57)【要約】    【課題】  日常的に経口摂取でき、安全性に優れた抗インフルエンザウイルス組成物の製造方法を提供すること。    【解決手段】  ナガイモの可食部を擂り下ろし、これを１００００ｒｐｍ以下１時間以下で遠心分離することにより得られる上清液は、経口摂取可能な抗インフルエンザウイルス組成物である。これを適宜条件にて超音波処理することにより、粘度を低下させることができる。当該抗インフルエンザ組成物は、凍結乾燥などによって乾燥粉末化することができる。【選択図】  図３
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヤマノイモ属植物の地下茎もしくは担根体に含まれる成分、またはヤマノイモ属植物の地下茎もしくは担根体からの抽出物を有効成分として含有する、経口摂取可能な抗インフルエンザウイルス組成物。
【請求項２】
前記ヤマノイモ属植物はナガイモであることを特徴とする、請求項１に記載の抗インフルエンザウイルス組成物。
【請求項３】
ヤマノイモ属植物の地下茎または担根体に由来する貯蔵タンパク質ＤＢ２を含むことを特徴とする、抗インフルエンザウイルス組成物。
【請求項４】
ヤマノイモ属植物の地下茎または担根体を擂り下ろし、これを１００００ｒｐｍ以下１時間以下の遠心分離することにより上清液として得られる、経口摂取可能な抗インフルエンザウイルス組成物の製造方法。
【請求項５】
前記上清液の粘度を低下させるため、これを超音波処理することを特徴とする、請求項４に記載の抗インフルエンザウイルス組成物の製造方法。
【請求項６】
前記上清液の粘度を０．００５Ｐａ・ｓ以下とすることを特徴とする、請求項５に記載の抗インフルエンザウイルス組成物の製造方法。
【請求項７】
前記上清液を乾燥処理して得られることを特徴とする、請求項４ないし６のいずれかに記載の抗インフルエンザウイルス組成物の製造方法。
【請求項８】
前記ヤマノイモ属植物はナガイモであることを特徴とする、請求項４ないし７のいずれかに記載の抗インフルエンザウイルス組成物の製造方法。
【請求項９】
ヤマノイモ属植物の地下茎もしくは担根体に含まれる成分、またはヤマノイモ属植物の地下茎もしくは担根体からの抽出物を有効成分として含有する、インフルエンザ予防食品。
【請求項１０】
ヤマノイモ属植物の地下茎または担根体に由来する貯蔵タンパク質ＤＢ２を有効成分として含有する、インフルエンザ予防食品。
【請求項１１】
ヤマノイモ属植物の地下茎もしくは担根体に含まれる成分、またはヤマノイモ属植物の地下茎もしくは担根体からの抽出物を原料として用いるインフルエンザ予防食品の製造方法であって、該抽出物が配合される以後の工程においては温度６０℃以下かつｐＨ３．０以上に維持されることを特徴とする、インフルエンザ予防食品の製造方法。
【請求項１２】
前記ヤマノイモ属植物はナガイモであることを特徴とする、請求項１１に記載のインフルエンザ予防食品の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は抗インフルエンザウイルス組成物及びインフルエンザ予防食品に係り、特に、ナガイモに存在する抗インフルエンザウイルス活性を食品分野において利用する新規な発明に関する。
【背景技術】
【０００２】
インフルエンザウイルスにはＡ・Ｂ・Ｃの３型があり、このうちＡ型とＢ型が、ヒトのインフルエンザの主要な原因になる。今まで開発されたインフルエンザ治療薬としては、ノイラミニダーゼ阻害薬であるオセルタミビル（商品名：タミフル（登録商標））があり、これはＡ型・Ｂ型両方に効果がある。しかしながら小児等において、異常行動を誘発する例が報告されている。同じくノイラミニダーゼ阻害薬であるザナミビル（商品名：リレンザ（登録商標））は、Ａ型・Ｂ型両方に効果がある。また、Ｍ２蛋白阻害剤であるアマンタジン（商品名：シンメトレル（登録商標）など）は、Ａ型のみに効果がある。
【０００３】
一方、インフルエンザの予防方法としては、ワクチンの接種がある。ワクチンは、身体の免疫機構を利用して、ウイルスが入ってきても感染させないようにするものである。
【０００４】
また従来から、腸内細菌を利用して自然免疫を活性化させ、抵抗性を高める技術が実験動物レベルで提案されているが、最近はさらに、ビフィドバクテリウム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属に属する微生物を用いて、この細菌自体を有効成分とするインフルエンザ感染予防剤を製造し、これを有効成分として含有するインフルエンザ感染予防用飲食品の技術的提案もなされている（特許文献１）。
【特許文献１】特開２００７−１６９２００号公報「インフルエンザ感染予防のための医薬及び飲食品」
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
しかし、治療薬あるいは予防薬のいずれにせよ、医薬には本来、副作用や耐性株の出現などの危険性があり、場合によっては適用できない集団・利用者もある。もちろん、日常的に常食することができないことはいうまでもない。
【０００６】
また、ワクチンによる免疫力の賦活は、年齢層（幼児、高齢者など）や、身体状態（過労、ストレス、睡眠不足など）により大きく影響するため、ワクチン接種の効果に個人差が存在する。そもそも予防効果を得るためには、ワクチンを予め接種し、血中のインフルエンザウイルスに対する抗体を高めておく必要がある。
【０００７】
さらに、抗原となるインフルエンザワクチンは予め流行株を予測して製造するものであり、これには９ヶ月程度を要するために、実際に流行しているインフルエンザウイルスと、接種したインフルエンザワクチンの型が一致せず、有効性が見いだされない場合もあり、次の冬に流行するウイルス株を正確に予測することが難しいという問題点もある。
【０００８】
また、微生物を用いた予防技術には相応の製造態勢、管理態勢および事業規模が必要であり、たとえば地方の中小企業等にとっても、決して導入容易な技術ではない。
【０００９】
本発明の課題は上記従来技術の問題点を解決しようとするものであり、日常的に経口摂取でき、副作用もなく、安全性に優れ、その上製造容易・技術導入容易なインフルエンザ予防食品、その原料とする抗インフルエンザウイルス組成物、およびこれらの製造方法を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
さて本願発明者らは、抗インフルエンザウイルス作用を有し、主に食品として経口的に摂取することが可能な有効成分について、地場農産物を対照として探索を行っていたところ、ナガイモの抽出成分がＡ型（Ａ／Ｈ１Ｎ１、Ａ／Ｈ３Ｎ２）及びＢ型のインフルエンザウイルスに対して抗ウイルス作用を示すことを見出した。ここで発見されたナガイモの抽出成分による抗ウイルス活性の作用機序は、「Ａ型およびＢ型インフルエンザウイルスに接着することにより、ウイルスが細胞に感染するのを阻害する」というものであり、これは従来の治療薬や予防薬とは全く異なるものである。
【００１１】
つまり上記課題は、かかるナガイモの抗インフルエンザウイルス活性を利用することによって解決し得ることを見出し、本発明に至った。すなわち、本願において特許請求もしくは少なくとも開示される発明は、以下のとおりである。
【００１２】
（１）  ヤマノイモ属植物の地下茎もしくは担根体に含まれる成分、またはヤマノイモ属植物の地下茎もしくは担根体からの抽出物を有効成分として含有する、経口摂取可能な抗インフルエンザウイルス組成物。
（２）  前記ヤマノイモ属植物はナガイモであることを特徴とする、（１）に記載の抗インフルエンザウイルス組成物。
（３）  ヤマノイモ属植物の地下茎または担根体に由来する貯蔵タンパク質ＤＢ２を含むことを特徴とする、抗インフルエンザウイルス組成物。
（４）  ヤマノイモ属植物の地下茎または担根体を擂り下ろし、これを１００００ｒｐｍ以下１時間以下の遠心分離することにより上清液として得られる、経口摂取可能な抗インフルエンザウイルス組成物の製造方法。
【００１３】
（５）  前記上清液の粘度を低下させるため、これを超音波処理することを特徴とする、（４）に記載の抗インフルエンザウイルス組成物の製造方法。
（６）  前記上清液の粘度を０．００５Ｐａ・ｓ以下とすることを特徴とする、（５）に記載の抗インフルエンザウイルス組成物の製造方法。
（７）  前記上清液を乾燥処理して得られることを特徴とする、（４）ないし（６）のいずれかに記載の抗インフルエンザウイルス組成物の製造方法。
（８）  前記ヤマノイモ属植物はナガイモであることを特徴とする、（４）ないし（７）のいずれかに記載の抗インフルエンザウイルス組成物の製造方法。
【００１４】
（９）  ヤマノイモ属植物の地下茎もしくは担根体に含まれる成分、またはヤマノイモ属植物の地下茎もしくは担根体からの抽出物を有効成分として含有する、インフルエンザ予防食品。
（１０）  ヤマノイモ属植物の地下茎または担根体に由来する貯蔵タンパク質ＤＢ２を有効成分として含有する、インフルエンザ予防食品。
（１１）  ヤマノイモ属植物の地下茎もしくは担根体に含まれる成分、またはヤマノイモ属植物の地下茎もしくは担根体からの抽出物を原料として用いるインフルエンザ予防食品の製造方法であって、該抽出物が配合される以後の工程においては温度６０℃以下かつｐＨ３．０以上に維持されることを特徴とする、インフルエンザ予防食品の製造方法。
（１２）  前記ヤマノイモ属植物はナガイモであることを特徴とする、（１１）に記載のインフルエンザ予防食品の製造方法。
【００１５】
なお、ナガイモが属するヤマノイモ科（Ｄｉｏｓｃｏｒｅａｃｅａｅ）は単子葉植物の科で、８属、約８００種ほどがあるが、ナガイモを始めとしてそのほとんどはヤマノイモ属（Ｄｉｓｃｏｒｅａ）に属する。特に、地下茎または担根体（以下、これらを「いも」または「可食部」という。）が、古くから食用や薬用として利用されている。以下の説明はすべてナガイモによるものだが、今回ナガイモにおいて発見された抗ウイルス効果は、ヤマノイモ科の他の植物においても同様に存在する可能性が充分あるものと考えられる。
【発明の効果】
【００１６】
本発明の抗インフルエンザウイルス組成物、それを原料に用いたインフルエンザ予防食品およびこれらの製造方法は上述のように構成されるため、これによれば、経口摂取によって、有効にインフルエンザ（Ａ型、Ｂ型）感染を予防することができる。しかも本発明の抗インフルエンザウイルス組成物もインフルエンザ予防食品も医薬ではないため副作用もなく、安全性に優れている。
【００１７】
さらに、ナガイモやその他のヤマノイモ属の作物は食経験が豊富な食材であることから、消費者の安心感も強く、日常的な経口摂取つまり常食にも何ら問題がない。その上、製造容易、技術導入も容易である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１８】
以下、本発明についてより詳細に説明する。
本願発明の抗インフルエンザウイルス組成物の原料とするヤマノイモ属植物は、以下実施例で詳述するナガイモには限定されない。たとえば、イチョウイモ、ツクネイモ・丹波ヤマノイモ・大和イモ・伊勢イモ（以上、ツクネイモ群）、また、ヤマイモ（自然薯）であってもよい。いずれの場合も、利用する部位は可食部（いも）である。
【００１９】
本発明の抗インフルエンザウイルス組成物の製造方法において、可食部の擂り下ろし処理は、要するに可食部を擂り、潰して、流動性のある状態にできる処理であればよく、具体的な方法は問わない。
【００２０】
また、擂り下ろした可食部の遠心分離処理の条件も特に限定されるものでないが、たとえばナガイモの場合は、１００００ｒｐｍ以下１時間以下の処理によって、良好な上清液を得られる。ナガイモ以外の場合も適宜の条件により、遠心分離処理されればよい。
【００２１】
遠心分離処理により得られる上清液の粘度を低下させることにより、食品素材としての取扱い性を向上させることができる。粘度低下には超音波処理が簡単で適している。処理条件は特に限定されない。ナガイモの場合でも、上清液の粘度を０．００５Ｐａ・ｓ以下にすることは容易である。なお、他のいもの場合も、粘度低下を目的として、適宜の条件によって超音波処理することができる。
【００２２】
また、上清液のままではなく、これを適宜の方法によって乾燥処理し、乾燥粉末など固体化すれば、さらに取扱い性も保存性も向上する。具体的な乾燥手段も特に限定されるものではないが、熱をかけないようにするため、凍結乾燥処理は適している。なお本発明における抽出物には、上述のように可食部を処理して上清液とし、さらにこれを高度に精製してなるものの他、そこに至るまでの途中の形態のものも該当するものとする。また、上清液の形態以外のものも該当するものとする。なお、上述の抽出操作の一部または全部をせずに、ヤマノイモ属植物の地下茎または担根体（可食部）を用いることによっても、ヤマノイモ属植物の地下茎もしくは担根体に含まれる有効成分を利用することとなるため、一定程度の抗インフルエンザ効果の得られることが期待できる。たとえば、可食部を摺り下ろした全量を遠心分離することなく全て用いる場合などである。
【００２３】
ナガイモなどヤマノイモ属植物の可食部からの抽出物を原料の一部として添加することにより、インフルエンザ予防食品とすることができる。食品の形態は特に限定されない。たとえば、実施例のように固形状食品に適用する以外にも、流動状の食品や、あるいは飲料に添加してもよい。つまり本発明のインフルエンザ予防食品には、飲料品も含まれる。
【００２４】
インフルエンザ予防食品の製造にあたっては、その有効成分である抽出物の熱安定性、ｐＨ安定性等の特性を考慮した製造方法が必要である。具体的には、抽出物が配合される以後の工程においては温度６０℃以下で、さらにｐＨ３．０以上に維持されることが、抽出物の抗インフルエンザウイルス活性を維持する上で重要である。
【実施例】
【００２５】
以下、ナガイモについての実施例も紹介しつつ本発明をさらに詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例等に限定されるものではない。
まず、後述する実施例に用いた抗インフルエンザ活性の試験例を示す。
［試験例１］
本試験は、本発明の抗インフルエンザウイルス組成物の有効成分であるナガイモ抽出物がインフルエンザウイルス感染細胞における細胞変性効果（ＣＰＥ）を抑制するかを調べるために行った。
供試インフルエンザウイルスとしては、Ａ／Ｙａｍａｇａｔａ／１２０／８６（Ｈ１Ｎ１）、Ａ／Ｈ３Ｎ２及びＢ型を用いた。培養動物細胞として、イヌ腎株化（ＭＤＣＫ）細胞を用いた。細胞増殖には、１０％のウシ胎仔血清を添加したイーグルＭＥＭ培地を用い、細胞維持には、５μｇ／ｍｌトリプシン、１００μｇ／ｍｌカナマイシン及び１００μｇ／ｍｌゲンタマイシンを添加したイーグルＭＥＭ培地を用いた。
【００２６】
ナガイモ抽出液等の試料と上記インフルエンザウイルスのいずれかを含むウイルス液を等量混合後、３５℃で１時間放置した。この混合液を培養したＭＤＣＫ細胞に加えて１時間吸着後、試料液を除去した。試料液を除去した後のＭＤＣＫ細胞に維持培地を添加し、３５℃の５％ＣＯ２インキュベーターで培養を行った。顕微鏡によりＣＰＥの有無を観察し、ＣＰＥ抑制効果がある場合を陽性、ない場合を陰性とした。
【００２７】
［試験例２］
本試験（プラーク形成法）は、抗インフルエンザウイルス活性の強さを定量的に調べるために行った。
３０万個／３ｍｌのＭＤＣＫ細胞溶液を直径３ｃｍのプレートに入れ、３５℃のＣＯ２インキュベーター内で２日間培養した。０．１ｍｌのインフルエンザウイルス溶液と０．１ｍｌのナガイモ抽出溶液を混合後、培養したＭＤＣＫ細胞に添加し、３５℃のＣＯ２インキュベーター内で６０分間吸着を行った。次に、Ａ培地（イーグルＭＥＭ０．０９４ｇ、ノーブルアガー０．０８ｇ、蒸留水９．３６７ｍｌ、７．５％ＮａＨＣＯ３０．３ｍｌ、Ｌ−グルタミン０．１ｍｌ、１００ＸＭＥＭ用ビタミン液（１００倍濃度ＭＥＭ培地用補助ビタミン液）０．０１ｍｌ、３０％グルコース０．０３３ｍｌ、トリプシン（ＳＩＧＭＡ）０．１ｍｌ及び０．２％ＢＳＡ０．１ｍｌを含む）を重層した。
【００２８】
３５℃のＣＯ２インキュベーター内で２日間培養した後、Ｂ培地（イーグルＭＥＭ０．０９３ｇ、ノーブルアガー０．１ｇ、蒸留水９．５４ｍｌ、７．５％ＮａＨＣＯ３０．３ｍｌ、Ｌ−グルタミン０．１ｍｌ、１００ＸＭＥＭ用ビタミン液（１００倍濃度ＭＥＭ培地用補助ビタミン液）０．０１ｍｌ、０．２％ＢＳＡ０．１ｍｌ及び１％ニュートラルレッド０．０５ｍｌを含む）を重層した。３５℃のＣＯ２インキュベーター内で１日間培養した後、プラーク数を計測した。
【００２９】
＜実施例１  ナガイモ抽出物の調製＞
ナガイモ５本（５０６０ｇ）の皮を剥ぎ、可食部４１７０ｇを得た。この可食部をフードカッターで擂り下ろし、９０００ｒｐｍで４５分間、遠心分離を行い、２７８０ｍｌ（２８１５ｇ）の上清液（粗抽出液）を得た。上清液を凍結乾燥後、粉砕して乾燥粉末１２１．８ｇを得た。
【００３０】
ナガイモ（生）、粗抽出液及び凍結乾燥物の成分分析結果を表１に示した。粗抽出液及び凍結乾燥物の抗インフルエンザウイルス活性を試験例１により調べた結果、良好に活性を保持していた。また、粗抽出液及び乾燥物の抗インフルエンザウイルス活性は、種々の飲食品の製造において抗インフルエンザウイルス組成物として使用できる強さを有していた。
【００３１】
【表１】
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【００３２】
粗抽出液は、そのままでも抗インフルエンザウイルス組成物として使用できるが、超音波処理によって粘度を低下させることで、さらに広範囲な飲食品への適用が可能となる。粗抽出液の粘度は、３０分間以上超音波処理（周波数４０ｋＨｚ）することで、抗インフルエンザウイルス活性の機能を維持したまま、水に近い粘度まで低下させることが可能であった。
図１は、超音波処理時間によるナガイモ粗抽出液粘度変化を示すグラフである。
【００３３】
＜実施例２  ナガイモ粗抽出液の抗ウイルス活性＞
ナガイモ粗抽出液に含まれる抗インフルエンザウイルス活性をもつ成分の特性を、以下のように調べた。
（１）熱安定性
実施例１における粗抽出液を、２５、４０、５０、６０若しくは７０℃で６０分間の加熱、又は、１００℃で５分間の加熱後、試験例１により抗インフルエンザウイルス活性を調べた。その結果、２５、４０、５０若しくは６０℃で６０分間の加熱では活性を維持していたが、７０℃で６０分間若しくは１００℃で５分間の加熱では活性を失っていた。したがって活性成分は、６０℃以下で安定であることが示された。
【００３４】
（２）保存安定性
ナガイモ粗抽出液を、室温、冷蔵又は冷凍の温度帯で１ヶ月、３ヶ月又は６ヶ月間保存した後で抗インフルエンザウイルス活性を調べた。その結果、いずれの温度帯及び保存期間においても活性が保持されていた。したがって、活性成分は、室温で少なくとも６ヶ月間は安定であることが示された。
【００３５】
（３）ｐＨ安定性
塩酸溶液を用いてナガイモ粗抽出液（ｐＨ６．８）のｐＨを３．０に調整した場合、白濁して凝集体が生じた。この溶液をｐＨ６．８に戻すと透明な液となったが、活性は消失した。この結果から、活性成分はｐＨ３．０以下では不安定であることが示された。
【００３６】
（４）有効接触時間
ナガイモ粗抽出液とインフルエンザウイルス液を等量混合後、３５℃で１、５、１０、１５、３０、４５又は６０分間接触した。その後は、試験例１に従いＣＰＥ抑制効果を調べた。その結果、全ての接触時間でＣＰＥ抑制効果を観察できた。したがって、インフルエンザウイルスとナガイモ粗抽出液を１分間程度接触することにより、ウイルスが細胞に感染するのを抑制できることが示された。
【００３７】
＜実施例３  ナガイモ粗抽出液のインフルエンザ予防効果＞
試験例２（プラーク形成法）を用いて、インフルエンザウイルス感染の予防に必要なナガイモ粗抽出液の量を定量的に測定した。その結果、ナガイモ粗抽出液（タンパク質量として０．０３ｍｇ）で２０個のインフルエンザウイルスによる細胞感染を完全に阻害することができた。
【００３８】
人の１回のくしゃみによる飛沫で他人の口に吸入されるウイルス数は、約１００００個であることが推定されている。したがって、１００００個のインフルエンザウイルスの細胞感染を予防するナガイモ粗抽出物の量は、タンパク質として１５ｍｇ（１００００個／２０個＊０．０３ｍｇ）であると推定できる。前掲表１から、１ｍｌのナガイモ粗抽出液は、固形分として約４２ｍｇ、タンパク質として約２０ｍｇを含むことから、ナガイモ粗抽出液の１ｍｌでインフルエンザウイルスによる感染を予防できる。
【００３９】
＜実施例４  インフルエンザ予防食品の試作＞
実施例３の結果は、１ｍｌのナガイモ粗抽出液（乾燥物として約４２ｍｇ）がインフルエンザウイルスの感染を予防できることを示した。そこで、ナガイモ粗抽出液の乾燥物を含有する食品を試作し、その食品の抗インフルエンザウイルス活性を調べた。
【００４０】
＜４−１  錠剤＞
錠剤を、１錠の重さを約２００ｍｇに設定し、その１／４の５０ｍｇが粗抽出液乾燥物になるように配合した。配合例は２種類試みた。表２、３にそれぞれ、配合例１、２を示す。なお、配合例２では、ナガイモ粗抽出液を乾燥する際に、粗抽出液に含まれる固形分と同量のトレハロースを添加してから凍結乾燥して得た乾燥物を用いた。
【００４１】
【表２】
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【００４２】
【表３】
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【００４３】
試験例１に従い試作品の抗インフルエンザウイルス活性を調べた結果、配合例１の試作品は活性を示したが、配合例２では活性が認められなかった。配合例２では、使用したクエン酸の量が配合例１と比較して多いため、活性成分の安定ｐＨ領域以下になり、活性が消失したと考えられた。したがって、本発明飲食品の製造にあたっては、工程中のみならず最終製品のｐＨも考慮すべきことが示された。
【００４４】
＜４−２  錠菓＞
錠菓（ラムネ菓子）を、１個あたり４０ｍｇの粗抽出液乾燥物を含むように試作した。なお、錠菓配合例３では、ナガイモ粗抽出液を乾燥する際に、粗抽出液に含まれる固形分と同量のトレハロースを添加してから凍結乾燥して得た乾燥物を用いた。表４に、錠菓の配合例（配合例３）を示す。
【００４５】
【表４】
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【００４６】
試験例１に従い試作品の抗インフルエンザウイルス活性を調べた結果、錠菓の配合例３では活性が認められなかった。配合例では、使用したクエン酸の量が前記錠剤の配合例１と比較して多いため、活性成分の安定ｐＨ領域以下になり、活性が消失したと考えられた。したがって、本発明飲食品の製造にあたっては、工程中のみならず最終製品のｐＨも考慮すべきことが示された。
【００４７】
＜４−３  キャラメルゼリー＞
キャラメルゼリーは、生クリーム２００ｇ、水飴１００ｇ、砂糖７５ｇ及びゼラチン５０ｇを加熱・溶解した後、品温が６０℃以下になったところでナガイモ粗抽出液６０ｍｌを添加・混合し、プレートに流して放冷し、固めた。冷却後、ゼリー１個あたりナガイモ粗抽出液を１ｍｌ含むよう６０等分し、粉末オブラートをまぶして試作を完成した。
【００４８】
抗インフルエンザウイルス活性を測定した結果、活性が認められた。なお、製造時の温度管理を充分に行い、工程中６０℃以下を厳密に維持することによって、最終製品の抗インフルエンザウイルス活性を充分なものとできることが、示唆された。
【００４９】
＜実施例５  ナガイモの抗インフルエンザ機能物質の同定＞
１３００ｇのナガイモ（Ｄｉｏｓｃｏｒｅａ  ｂａｔａｔａｓ）をミキサーでホモゲナイズした。ホモゲナイズしたナガイモを遠心分離（１０５０００ｇ、４５分間）し、６２０ｍｌの上清液を得た。この上清液を４０ｍｌ程度に小分けにし、次の実験に使用するまで−４０℃で保存した。凍結した上清液（４０ｍｌ）を解凍後、トリス塩酸緩衝液（１０ｍＭ、ｐＨ７．６）に対して充分に透析した。１０ｍｌの透析内液（約１００ｍｇのタンパク質を含む）をＤＥＡＥセルロースカラム（８ｍｌ）に供した。その後、０ｍＭ、５０ｍＭ、１００ｍＭ及び１ＭのＮａＣｌを含むトリス塩酸緩衝液で段階的に溶出した。
【００５０】
図２は、実施例５のＤＥＡＥセルロースカラムクロマトグラムである。ここに示すように、ＤＥＡＥセルロースカラムクロマトグラフィーによって、Ｆ１〜Ｆ４の画分を得た。試験例１に従って各画分の抗インフルエンザウイルス活性を測定した結果、Ｆ２画分に抗インフルエンザ活性が認められた。Ｆ２画分の還元条件下でのＳＤＳ−ＰＡＧＥの結果、分子量３３０００に主要バンドが検出された。また同じく、非還元条件下でのＳＤＳ−ＰＡＧＥでは、分子量３００００に主要バンドが検出された。
【００５１】
Ｆ２画分を集めて、トリス塩酸緩衝液（１０ｍＭ、ｐＨ７．６）に透析後、ＤＥＡＥセルロースカラム（８ｍｌ）に供した。非吸着成分を溶出後、０〜１００ｍＭのＮａＣｌによるグラジエント溶出を行った。
【００５２】
図３は、Ｆ２画分のＤＥＡＥセルロースカラムクロマトグラムである。図示するように、Ｆ２−１画分に抗インフルエンザ活性が認められた。また、ＭＡＬＤＩ／ＴＯＦ−ＭＳ（マトリックス支援レーザー脱離イオン化飛行時間型質量分析法）により活性物質の分子量は、２７５９０と算定された。
なお図４は、Ｆ２−１画分他のＭＡＬＤＩ／ＴＯＦ−ＭＳ解析結果を示すグラフである。
【００５３】
Ｆ２−１画分を集めて、Ｎ末端からの１５アミノ酸配列を決定した結果、
Ｖａｌ，Ｇｌｕ，Ａｓｐ、Ｇｌｕ，Ｐｈｅ，Ｓｅｒ，Ｔｙｒ，Ｉｌｅ，Ｇｌｕ，Ｇｌｙ，Ａｓｎ，Ｐｒｏ，Ａｓｎ，Ｇｌｙ，Ｐｒｏ（ＶＥＤＥＦ  ＳＹＩＥＧ  ＮＰＮＧＰ）であった。この配列は、既知のＤｉｏｓｃｏｒｅａ  ｂａｔａｔａｓ由来のＤＢ２（Ｍａｒｉａｍ  Ｇａｉｄａｍａｓｈｖｉｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｙａｍ  ｔｕｂｅｒ  ｓｔｏｒａｇｅ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｆｒｏｍ  ｄｉｏｓｃｏｒｅａ  ｂａｔａｔａｓ  ｅｘｈｉｂｉｔｉｎｇ  ｕｎｉｑｕｅ  ｌｅｃｔｉｎ  ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７９（２５），２６０２８−２６０３５（２００４））と一致した。ＤＢ２は、Ｄｉｏｓｃｏｒｉｎ  Ａに分類される貯蔵タンパク質であり、総ナガイモタンパク質の約３０％を占めていた。
【産業上の利用可能性】
【００５４】
本発明の抗インフルエンザウイルス組成物等によれば、経口摂取によって、有効にインフルエンザ感染を予防できる。しかも安全性も問題がない。その上、製造容易でもあり、またインフルエンザ予防食品としての応用も広範に可能であり、産業上利用性が高い発明である。
【図面の簡単な説明】
【００５５】
【図１】超音波処理時間によるナガイモ粗抽出液粘度変化を示すグラフである。
【図２】実施例５のＤＥＡＥセルロースカラムクロマトグラムである。
【図３】実施例５のＦ２画分のＤＥＡＥセルロースカラムクロマトグラムである。
【図４】実施例５のＦ２−１画分他のＭＡＬＤＩ／ＴＯＦ−ＭＳ解析結果を示すグラフである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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