【手続補正書】
【提出日】令和3年11月10日(2021.11.10)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
原始腸管細胞の集団を、骨形成タンパク質（ＢＭＰ）シグナル伝達経路阻害剤を含む組成物と接触させることを含む、インビトロの方法であって、
ＢＭＰシグナル伝達経路阻害剤が式Ａで表される化合物：
【化１】
2021502830.tif 000001
又はその誘導体、類似体若しくは変異体である方法。
【請求項２】
接触が、約１日、約２日、または約３日間行われる、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
組成物が、形質転換増殖因子β（ＴＧＦ−β）スーパーファミリーからの増殖因子をさらに含む、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
形質転換増殖因子β（ＴＧＦ−β）スーパーファミリーからの増殖因子がアクチビンＡを含む、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
組成物が約２ｎｇ／ｍＬ〜約５０ｎｇ／ｍＬのアクチビンＡを含む、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
組成物が、約０．１５μＭ〜約０．５μＭのＢＭＰシグナル伝達経路阻害剤を含む、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
組成物が、線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）ファミリーからの増殖因子、ソニックヘッジホグ（ＳＨＨ）経路阻害剤、レチノイン酸（ＲＡ）シグナル伝達経路活性化因子、プロテインキナーゼＣ活性化因子、およびＲｈｏ関連プロテインキナーゼ（ＲＯＣＫ）阻害剤からなる群から選択される分化因子をさらに含む、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
原始腸管細胞を、Ｐｄｘ１陽性、ＮＫＸ６．１陰性膵臓前駆細胞に分化させる、請求項１〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
Ｐｄｘ１陽性、ＮＫＸ６．１陰性膵臓前駆細胞を分化することによって、Ｐｄｘ１陽性、ＮＫＸ６．１陽性膵臓前駆細胞を含む細胞クラスターを生成すること、をさらに含む、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
細胞クラスターが、フローサイトメトリーによって測定して最大約３０％のＣＨＧＡ陽性細胞及び最大約３０％のＣＤＸ２陽性細胞を含む、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
Ｐｄｘ１陽性、ＮＫＸ６．１陽性膵臓前駆細胞を、膵臓β細胞を含む細胞クラスターに分化することをさらに含む、請求項９又は１０に記載の方法。
【請求項１２】
膵臓β細胞を含む細胞クラスターが、ＢＭＰシグナル伝達経路阻害剤及びＴＧＦ−βスーパーファミリーからの増殖因子と接触されずに生成された比較可能な細胞クラスターと比較してより高いグルコース刺激インスリン分泌（ＧＳＩＳ）刺激指数を示す、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
細胞クラスターのＧＳＩＳ刺激指数が、比較可能な細胞クラスターのものより少なくとも約１．２倍、少なくとも約１．５倍、少なくとも約１．８倍、少なくとも約２倍、少なくとも約２．２倍、少なくとも約２．４倍、少なくとも約２．８倍、または少なくとも約３倍高い、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
ＧＳＩＳ刺激指数は、第１のグルコース濃度に応答してのインスリン分泌の、第２のグルコース濃度に応答してのインスリン分泌に対する比として計算される、請求項１２又は１３に記載の方法。
【請求項１５】
第１のグルコース濃度が、約１０ｍＭ〜約５０ｍＭであり、第２のグルコース濃度が、約１ｍＭ〜５ｍＭである、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
第１のグルコース濃度が、約２０ｍＭであり、第２のグルコース濃度が、約２．８ｍＭである、請求項１４に記載の方法。
【請求項１７】
細胞クラスターが、フローサイトメトリーによって測定して比較可能な細胞クラスターより高いパーセンテージの膵臓β細胞を含む、請求項１１〜１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
細胞クラスターが、比較可能な細胞クラスターより少なくとも約１．５倍高いパーセンテージの膵臓β細胞を含む、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
細胞クラスターが、比較可能な細胞クラスターと比較して少なくとも５倍多いインスリン分泌をグルコース負荷に応答して示す、請求項１１〜１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
原始腸管細胞の集団及び骨形成タンパク質（ＢＭＰ）シグナル伝達経路阻害剤を含む組成物であって、
ＢＭＰシグナル伝達経路阻害剤が式Ａで表される化合物：
【化２】
2021502830.tif 000002
又はその誘導体、類似体若しくは変異体である組成物。
【請求項２１】
約０．１５μＭ〜約０．５μＭの式Ａで表される化合物を含む、請求項２０に記載の組成物。
【請求項２２】
ＴＧＦ−βスーパーファミリーからの増殖因子をさらに含む、請求項２０又は２１に記載の組成物。
【請求項２３】
ＴＧＦ−βスーパーファミリーからの増殖因子がアクチビンＡを含む、請求項２２に記載の組成物。
【請求項２４】
約５ｎｇ／ｍＬ〜約３０ｎｇ／ｍＬのアクチビンＡを含む、請求項２３に記載の組成物。
【請求項２５】
線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）ファミリーからの増殖因子、ソニックヘッジホグ（ＳＨＨ）経路阻害剤、レチノイン酸（ＲＡ）シグナル伝達経路活性化因子、プロテインキナーゼＣ活性化因子、およびＲｈｏ関連プロテインキナーゼ（ＲＯＣＫ）阻害剤からなる群から選択される薬剤をさらに含む、請求項２０〜２４のいずれか一項に記載の組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０３２３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０３２３】
[00370]本開示の好ましい実施形態を本明細書に示し、説明したが、このような実施形
態が例として提供されていることは当業者には明白であろう。非常に多くの変形、変更および置換が、本開示から逸脱することなく、今や当業者の心に浮かぶことであろう。本明細書に記載する本開示の実施形態の様々な代替形態を、本開示を実施する際に用いることができることは、理解されるはずである。以下の請求項が本開示の範囲を規定すること、ならびにこれらの請求項の範囲内の方法および構造ならびにそれらの均等法／均等物が以
下の請求項によってカバーされることを、意図している。
本明細書は本発明の下記の態様を包含する。
［１］  Ｐｄｘ１陽性、ＮＫＸ６．１陽性膵臓前駆細胞を含む細胞クラスターを生成するための方法であって、
Ｐｄｘ１陰性、ＮＫＸ６．１陰性原始腸管細胞の集団を、骨形成タンパク質（ＢＭＰ）シグナル伝達経路阻害剤と形質転換増殖因子β（ＴＧＦ−β）スーパーファミリーからの増殖因子とを含む組成物と接触させることによって、前記Ｐｄｘ１陽性、ＮＫＸ６．１陽性膵臓前駆細胞を含む細胞クラスターを生成するステップを含み、前記クラスターが、フローサイトメトリーによって測定して最大約３０％のＣＨＧＡ陽性細胞および最大約３０％のＣＤＸ２陽性細胞を含む、方法。
［２］  前記ＰＤＸ１陽性／ＮＫＸ６．１陰性膵臓前駆細胞を膵臓β細胞に分化させるステップをさらに含む、［１］に記載の方法。
［３］  前記ＰＤＸ１陽性／ＮＫＸ６．１陰性膵臓前駆細胞をＰＤＸ１陽性／ＮＫＸ６．１陽性膵臓前駆細胞に分化させるステップをさらに含む、［１］に記載の方法。
［４］  前記ＮＫＸ６．１陽性膵臓前駆細胞をインスリン陽性内分泌細胞に分化させるステップをさらに含む、［３］に記載の方法。
［５］  前記インスリン陽性内分泌細胞を膵臓β細胞に分化させるステップをさらに含む、［４］に記載の方法。
［６］  （ａ）Ｐｄｘ１陽性、ＮＫＸ６．１陽性原始腸管細胞を含む細胞の集団を、ＢＭＰシグナル伝達経路阻害剤とＴＧＦ−βスーパーファミリーからの増殖因子とを含む組成物と接触させることによって、Ｐｄｘ１陽性、ＮＫＸ６．１陽性膵臓前駆細胞を含む細胞クラスターを生成するステップ；および
（ｂ）前記ＰＤＸ１陽性／ＮＫＸ６．１陽性膵臓前駆細胞を含む前記細胞クラスターを、非ネイティブ膵臓β細胞を含む細胞クラスターに分化させるステップ
を含み、
非ネイティブ膵臓β細胞を含む前記細胞クラスターが、前記ＢＭＰシグナル伝達経路阻害剤およびＴＧＦ−βスーパーファミリーからの前記増殖因子との前記接触なしで生成された比較可能な細胞クラスターより高いグルコース刺激インスリン分泌（ＧＳＩＳ）刺激指数を有する、方法。
［７］  前記細胞クラスターの前記ＧＳＩＳ刺激指数が、前記比較可能な細胞クラスターのものより少なくとも約１．２倍、少なくとも約１．５倍、少なくとも約１．８倍、少なくとも約２倍、少なくとも約２．２倍、少なくとも約２．４倍、少なくとも約２．８倍、または少なくとも約３倍高い、［６］に記載の方法。
［８］  前記細胞クラスターの前記ＧＳＩＳ刺激指数が、前記比較可能な集団のものより少なくとも約３倍高い、［６］に記載の方法。
［９］  前記ＧＳＩＳ刺激指数が、第１のグルコース濃度に応答してのインスリン分泌の、第２のグルコース濃度に応答してのインスリン分泌に対する比として計算される、［６］〜［８］のいずれか一項に記載の方法。
［１０］  前記第１のグルコース濃度が、約１０〜約５０ｍＭであり、前記第２のグルコース濃度が、約１ｍＭ〜５ｍＭである、［９］に記載の方法。
［１１］  前記第１のグルコース濃度が、約２０ｍＭであり、前記第２のグルコース濃度が、約２．８ｍＭである、［９］に記載の方法。
［１２］  前記細胞クラスターが、フローサイトメトリーによって測定して前記比較可能な細胞クラスターより高いパーセンテージの前記非ネイティブ膵臓β細胞を含む、［６］〜［１１］のいずれか一項に記載の方法。
［１３］  前記細胞クラスターが、フローサイトメトリーによって測定して前記比較可能な細胞クラスターより少なくとも約１．１倍、少なくとも約１．２倍、少なくとも約１．３倍、少なくとも約１．４倍、または少なくとも約１．５倍高いパーセンテージの前記非ネイティブ膵臓β細胞を含む、［６］〜［１１］のいずれか一項に記載の方法。
［１４］  前記細胞クラスターが、フローサイトメトリーによって測定して前記比較可能な細胞クラスターより約１．５倍高いパーセンテージの前記非ネイティブ膵臓β細胞を含む、［６］〜［１１］のいずれか一項に記載の方法。
［１５］  （ａ）Ｐｄｘ１陽性、ＮＫＸ６．１陽性原始腸管細胞を含む細胞の集団を、ＢＭＰシグナル伝達経路阻害剤とＴＧＦ−βスーパーファミリーからの増殖因子とを含む組成物と接触させることによって、Ｐｄｘ１陽性、ＮＫＸ６．１陽性膵臓前駆細胞を含む細胞クラスターを生成するステップ；および
（ｂ）前記ＰＤＸ１陽性／ＮＫＸ６．１陽性膵臓前駆細胞を含む前記細胞クラスターを、非ネイティブ膵臓β細胞を含む細胞クラスターに分化させるステップ
を含み、
非ネイティブ膵臓β細胞を含む前記細胞クラスターが、フローサイトメトリーによって測定して、前記ＢＭＰシグナル伝達経路阻害剤およびＴＧＦ−βスーパーファミリーからの前記増殖因子との前記接触なしで生成された比較可能な細胞クラスターと比較してより高いパーセンテージの前記非ネイティブ膵臓β細胞を含む、方法。
［１６］  前記非ネイティブ膵臓β細胞を含む前記細胞クラスターが、フローサイトメトリーによって測定して前記比較可能な細胞クラスターより少なくとも約１．１倍、少なくとも約１．２倍、少なくとも約１．３倍、少なくとも約１．４倍、または少なくとも約１．５倍高いパーセンテージの前記非ネイティブ膵臓β細胞を含む、［１５］に記載の方法。
［１７］  前記非ネイティブ膵臓β細胞を含む前記細胞クラスターが、フローサイトメトリーによって測定して前記比較可能な細胞クラスターより約１．５倍高いパーセンテージの前記非ネイティブ膵臓β細胞を含む、［１５］または［１６］に記載の方法。
［１８］  前記非ネイティブ膵臓β細胞を含む前記細胞クラスターが、前記比較可能な細胞クラスターと比較してより多いインスリン分泌をグルコース負荷に応答して示す、［６］〜［１７］のいずれか一項に記載の方法。
［１９］  前記非ネイティブ膵臓β細胞を含む前記細胞クラスターが、前記比較可能な細胞クラスターと比較して少なくとも約１．２、１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５、または５倍多いインスリン分泌をグルコース負荷に応答して示す、［６］〜［１７］のいずれか一項に記載の方法。
［２０］  前記非ネイティブ膵臓β細胞を含む前記細胞クラスターが、前記比較可能な細胞クラスターと比較してより高いＧＳＩＳ刺激指数を示す、［６］〜［１９］のいずれか一項に記載の方法。
［２１］  前記非ネイティブ膵臓β細胞を含む前記細胞クラスターの前記ＧＳＩＳ刺激指数が、前記比較可能な細胞クラスターのものより少なくとも約１．２倍、少なくとも約１．５倍、少なくとも約１．８倍、少なくとも約２倍、少なくとも約２．２倍、少なくとも約２．４倍、少なくとも約２．８倍、または少なくとも約３倍高い、［６］〜［１９］のいずれか一項に記載の方法。
［２２］  前記非ネイティブ膵臓β細胞を含む前記細胞クラスターの前記ＧＳＩＳ刺激指数が、前記比較可能な細胞クラスターのものより少なくとも約３倍高い、［６］〜［２１］のいずれか一項に記載の方法。
［２３］  前記ＧＳＩＳ刺激指数が、第１のグルコース濃度に応答してのインスリン分泌の、第２のグルコース濃度に応答してのインスリン分泌に対する比として計算される、［２０］〜［２２］のいずれか一項に記載の方法。
［２４］  前記第１のグルコース濃度が、約１０〜約５０ｍＭであり、前記第２のグルコース濃度が、約１ｍＭ〜５ｍＭである、［２３］に記載の方法。
［２５］  前記第１のグルコース濃度が、約２０ｍＭであり、前記第２のグルコース濃度が、約２．８ｍＭである、［２３］に記載の方法。
［２６］  前記非ネイティブ膵臓β細胞が、グルコース負荷に曝露されたときにｉｎ  ｖｉｔｒｏグルコース刺激インスリン分泌応答を示す、［６］〜［２５］のいずれか一項に記載の方法。
［２７］  前記非ネイティブ膵臓β細胞が、第１のＫ＋濃度に応答してインスリン分泌を示す、［６］〜［２６］のいずれか一項に記載の方法。
［２８］  前記非ネイティブ膵臓β細胞を含む前記細胞クラスターが、前記比較可能な細胞クラスターと比較してより多いインスリン分泌を第１のＫ＋濃度に応答して示す、［６］〜［２７］のいずれか一項に記載の方法。
［２９］  前記非ネイティブ膵臓β細胞を含む前記細胞クラスターが、前記比較可能な細胞クラスターと比較して少なくとも約１．２倍、少なくとも約１．５倍、少なくとも約１．８倍、少なくとも約２倍、少なくとも約２．２倍、少なくとも約２．４倍、少なくとも約２．８倍、少なくとも約３倍、少なくとも約３．２倍、少なくとも約３．４倍、少なくとも約３．６倍、少なくとも約３．８倍、少なくとも約４倍多いインスリン分泌を第１のＫ＋濃度に応答して示す、［６］〜［２７］のいずれか一項に記載の方法。
［３０］  前記ＢＭＰシグナル伝達経路の前記阻害剤が、ＤＭＨ−１、その誘導体、類似体または変異体を含む、［１］〜［２９］のいずれか一項に記載の方法。
［３１］  前記組成物が、約０．０１μＭ〜約１０μＭ、約０．０５μＭ〜約５μＭ、約０．１μＭ〜約１μＭ、または約０．１５μＭ〜約０．５μＭのＤＭＨ−１を含む、［３０］に記載の方法。
［３２］  前記組成物が、約０．２５μＭのＤＭＨ−１を含む、［３０］に記載の方法。
［３３］  ＴＧＦ−βスーパーファミリーからの前記増殖因子が、アクチビンＡを含む、［１］〜［３２］のいずれか一項に記載の方法。
［３４］  前記組成物が、約０．５ｎｇ／ｍＬ〜約２００ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ〜約１００ｎｇ／ｍＬ、約２ｎｇ／ｍＬ〜約５０ｎｇ／ｍＬ、または約５ｎｇ／ｍＬ〜約３０ｎｇ／ｍＬのアクチビンＡを含む、［３３］に記載の方法。
［３５］  前記組成物が、少なくとも約５ｎｇ／ｍＬまたは少なくとも約１０ｎｇ／ｍＬのアクチビンＡを含む、［３３］または［３４］に記載の方法。
［３６］  前記組成物が、約２０ｎｇ／ｍＬのアクチビンＡを含む、［３３］に記載の方法。
［３７］  前記組成物が、ＦＧＦファミリーからの増殖因子、ＳＨＨ経路阻害剤、ＲＡシグナル伝達経路活性化因子、プロテインキナーゼＣ活性化因子、およびＲＯＣＫ阻害剤からなる群から選択される分化因子をさらに含む、［１］〜［３６］のいずれか一項に記載の方法。
［３８］  Ｐｄｘ１陰性、ＮＫＸ６．１陰性原始腸管細胞を含む細胞の集団を、約０．０１％（ｗ／ｖ）〜約０．５％（ｗ／ｖ）ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）を含む培養培地中で分化させることによって、Ｐｄｘ１陽性、ＮＫＸ６．１陰性膵臓前駆細胞を含む細胞クラスターを生成する方法。
［３９］  前記Ｐｄｘ１陽性、ＮＫＸ６．１陰性膵臓前駆細胞を含む前記細胞クラスター中の細胞の少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、または少なくとも約８５％が、フローサイトメトリーによって測定してＰｄｘ１陽性である、［３８］に記載の方法。
［４０］  前記Ｐｄｘ１陽性、ＮＫＸ６．１陰性膵臓前駆細胞を含む前記細胞クラスター中の細胞の少なくとも約８５％が、フローサイトメトリーによって測定してＰｄｘ１陽性である、［３８］または［３９］に記載の方法。
［４１］  前記Ｐｄｘ１陽性、ＮＫＸ６．１陰性膵臓前駆細胞を含む前記細胞クラスター中の細胞の最大約４０％、最大約３０％、最大約２０％、または最大約１５％が、フローサイトメトリーによって測定してＣＤＸ２陽性細胞である、［３８］〜［４０］のいずれか一項に記載の方法。
［４２］  前記Ｐｄｘ１陽性、ＮＫＸ６．１陰性膵臓前駆細胞を含む前記細胞クラスター中の細胞の最大約１５％が、フローサイトメトリーによって測定してＣＤＸ２陽性細胞である、［３８］〜［４１］のいずれか一項に記載の方法。
［４３］  前記培養培地が、ＢＭＰシグナル伝達経路阻害剤、ＴＧＦ−βスーパーファミリーからの増殖因子、ＦＧＦファミリーからの増殖因子、ＳＨＨ経路阻害剤、ＲＡシグナル伝達経路活性化因子、プロテインキナーゼＣ活性化因子、およびＲＯＣＫ阻害剤からなる群から選択される分化因子をさらに含む、［３８］〜［４２］のいずれか一項に記載の方法。
［４４］  前記培養培地が、ＢＭＰシグナル伝達経路阻害剤、およびＴＧＦ−βスーパーファミリーからの増殖因子をさらに含む、［３８］〜［４２］のいずれか一項に記載の方法。
［４５］  （ａ）原始腸管細胞を含む細胞の集団を、骨形成タンパク質（ＢＭＰ）シグナル伝達経路阻害剤と、形質転換増殖因子β（ＴＧＦ−β）スーパーファミリーからの増殖因子と、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）とを含む培養培地中で培養することによって、Ｐｄｘ１陽性、ＮＫＸ６．１陽性膵臓前駆細胞を含む細胞クラスターを生成するステップ；および
（ｂ）前記ＰＤＸ１陽性、ＮＫＸ６．１陽性膵臓前駆細胞を含む前記細胞クラスターを、非ネイティブ膵臓β細胞を含む細胞クラスターに分化させるステップ
を含む方法。
［４６］  フローサイトメトリーによって測定して、少なくとも約５０％Ｐｄｘ１陽性、ＮＫＸ６．１陽性膵臓前駆細胞、最大約３０％クロモグラニンＡ（ＣＨＧＡ）陽性細胞、および最大約３０％ＣＤＸ２陽性細胞を含む細胞クラスター。
［４７］  フローサイトメトリーによって測定して最大約２５％前記ＣＤＸ２陽性、ＮＫＸ６．１陽性細胞を含む、［４６］に記載の細胞クラスター。
［４８］  フローサイトメトリーによって測定して最大約２０％前記ＣＤＸ２陽性、ＮＫＸ６．１陽性細胞を含む、［４６］に記載の細胞クラスター。
［４９］  フローサイトメトリーによって測定して最大約２５％前記ＣＨＧＡ陽性細胞を含む、［４６］〜［４８］のいずれか一項に記載の細胞クラスター。
［５０］  フローサイトメトリーによって測定して最大約１０％前記ＣＨＧＡ陽性細胞を含む、［４６］〜［４８］のいずれか一項に記載の細胞クラスター。
［５１］  フローサイトメトリーによって測定して最大約５％前記ＣＨＧＡ陽性細胞を含む、［４６］〜［４８］のいずれか一項に記載の細胞クラスター。
［５２］  フローサイトメトリーによって測定して少なくとも約６０％前記Ｐｄｘ１陽性、ＮＫＸ６．１陽性膵臓前駆細胞を含む、［４６］〜［５１］のいずれか一項に記載の細胞クラスター。
［５３］  フローサイトメトリーによって測定して少なくとも約６５％前記Ｐｄｘ１陽性、ＮＫＸ６．１陽性膵臓前駆細胞を含む、［４６］〜［５１］のいずれか一項に記載の細胞クラスター。
［５４］  前記細胞クラスターのさらなる分化の結果として、非ネイティブ膵臓β細胞を含む第１の細胞クラスターであって、フローサイトメトリーによって測定して少なくとも約５０％前記Ｐｄｘ１陽性、ＮＫＸ６．１陽性膵臓前駆細胞と３０％より多くの前記クロモグラニンＡ（ＣＨＧＡ）陽性細胞または３０％より多くの前記ＣＤＸ２陽性細胞とを含む比較可能な細胞クラスターから分化した前記非ネイティブ膵臓β細胞を含む第２の細胞クラスターより高いグルコース刺激インスリン分泌（ＧＳＩＳ）刺激指数を有する第１の細胞クラスターが生じる、［４６］〜［５３］のいずれか一項に記載の細胞クラスター。
［５５］  ［４６］〜［５４］のいずれか一項に記載の細胞クラスターと、骨形成タンパク質（ＢＭＰ）シグナル伝達経路阻害剤と、形質転換増殖因子β（ＴＧＦ−β）スーパーファミリーからの増殖因子とを含む組成物。
［５６］  ＢＭＰシグナル伝達経路の前記阻害剤が、ＤＭＨ−１またはその誘導体を含む、［５５］に記載の組成物。
［５７］  約０．０１μＭ〜約１０μＭ、約０．０５μＭ〜約５μＭ、約０．１μＭ〜約１μＭ、または約０．１５μＭ〜約０．５μＭのＤＭＨ−１を含む、［５６］に記載の組成物。
［５８］  約０．２５μＭのＤＭＨ−１を含む、［５６］に記載の組成物。
［５９］  ＴＧＦ−βスーパーファミリーからの前記増殖因子が、アクチビンＡを含む、［５５］〜［５８］のいずれか一項に記載の組成物。
［６０］  約０．５ｎｇ／ｍＬ〜約２００ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ〜約１００ｎｇ／ｍＬ、約２ｎｇ／ｍＬ〜約５０ｎｇ／ｍＬ、または約５ｎｇ／ｍＬ〜約３０ｎｇ／ｍＬのアクチビンＡを含む、［５９］に記載の組成物。
［６１］  少なくとも約５ｎｇ／ｍＬまたは少なくとも約１０ｎｇ／ｍＬのアクチビンＡを含む、［５９］に記載の組成物。
［６２］  約２０ｎｇ／ｍＬのアクチビンＡを含む、［５９］に記載の組成物。
［６３］  線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）ファミリーからの増殖因子、ソニックヘッジホグ（ＳＨＨ）経路阻害剤、レチノイン酸（ＲＡ）シグナル伝達経路活性化因子、プロテインキナーゼＣ活性化因子、およびＲｈｏ関連プロテインキナーゼ（ＲＯＣＫ）阻害剤からなる群から選択される分化因子をさらに含む、［５５］〜［６２］のいずれか一項に記載の組成物。
［６４］  前記細胞クラスターが、培養培地中にある、［５５］〜［６３］のいずれか一項に記載の組成物。
［６５］  約０．０１％（ｗ／ｖ）〜約０．５％（ｗ／ｖ）ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）をさらに含む、［５５］〜［６４］のいずれか一項に記載の組成物。
［６６］  約０．０５％（ｗ／ｖ）ＨＳＡをさらに含む、［５５］〜［６４］のいずれか一項に記載の組成物。
［６７］  フローサイトメトリーによって測定して少なくとも約６０％Ｐｄｘ１陽性、ＮＫＸ６．１陰性膵臓前駆細胞および最大約４０％ＣＤＸ２陽性細胞を含む細胞クラスター。
［６８］  フローサイトメトリーによって測定して少なくとも約７０％前記Ｐｄｘ１陽性、ＮＫＸ６．１陰性膵臓前駆細胞を含む、［６７］に記載の細胞クラスター。
［６９］  フローサイトメトリーによって測定して少なくとも約８５％前記Ｐｄｘ１陽性、ＮＫＸ６．１陰性膵臓前駆細胞を含む、［６７］に記載の細胞クラスター。
［７０］  フローサイトメトリーによって測定して最大約３０％前記ＣＤＸ２陽性細胞を含む、［６７］〜［６９］のいずれか一項に記載の細胞クラスター。
［７１］  フローサイトメトリーによって測定して最大約２０％前記ＣＤＸ２陽性細胞を含む、［６７］〜［６９］のいずれか一項に記載の細胞クラスター。
［７２］  フローサイトメトリーによって測定して最大約１５％前記ＣＤＸ２陽性細胞を含む、［６７］〜［６９］のいずれか一項に記載の細胞クラスター。
［７３］  前記細胞クラスターのさらなる分化の結果として、非ネイティブ膵臓β細胞を含む第１の細胞クラスターであって、フローサイトメトリーによって測定して少なくとも約６０％前記Ｐｄｘ１陽性、ＮＫＸ６．１陰性膵臓前駆細胞と４０％より多くの前記ＣＤＸ２陽性細胞とを含む比較可能な細胞クラスターから分化した前記非ネイティブ膵臓β細胞を含む第２の細胞クラスターより高いグルコース刺激インスリン分泌（ＧＳＩＳ）刺激指数を有する第１の細胞クラスターが生じる、［６７］〜［７２］のいずれか一項に記載の細胞クラスター。
［７４］  ヒト血清アルブミンを含む培養培地中の［６７］〜［７３］のいずれか一項に記載の細胞クラスターを含む組成物。
［７５］  前記培養培地が、約０．０１％（ｗ／ｖ）〜約０．５％（ｗ／ｖ）ＨＳＡを含む、［７４］に記載の組成物。
［７６］  前記培養培地が、ＢＭＰシグナル伝達経路阻害剤、ＴＧＦ−βスーパーファミリーからの増殖因子、ＦＧＦファミリーからの増殖因子、ＳＨＨ経路阻害剤、ＲＡシグナル伝達経路活性化因子、プロテインキナーゼＣ活性化因子、およびＲＯＣＫ阻害剤からなる群から選択される分化因子をさらに含む、［７４］または［７５］に記載の組成物。
［７７］  原始腸管細胞を、骨形成タンパク質（ＢＭＰ）シグナル伝達経路阻害剤、および形質転換増殖因子β（ＴＧＦ−β）スーパーファミリーからの増殖因子と接触させることにより、前記原始腸管細胞の分化から得られる、非ネイティブ膵臓β細胞を含む細胞クラスターであって、前記接触を伴わない原始腸管細胞の分化から得られた比較可能な細胞クラスターと比較してより多い１立方マイクロメートル当たりの前記非ネイティブ膵臓β細胞の数を有する細胞クラスター。
［７８］  前記比較可能な細胞クラスターと比較して少なくとも約１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、または１．６倍多い、１立方マイクロメートル当たりの前記非ネイティブ膵臓β細胞の数を有する、［７７］に記載の細胞クラスター。
［７９］  原始腸管細胞を、骨形成タンパク質（ＢＭＰ）シグナル伝達経路阻害剤、および形質転換増殖因子β（ＴＧＦ−β）スーパーファミリーからの増殖因子と接触させることにより、前記原始腸管細胞の分化から得られる、非ネイティブ膵臓β細胞を含む細胞クラスターであって、前記接触を伴わない原始腸管細胞の分化から得られた比較可能な細胞クラスターと比較してより多いインスリン分泌をグルコース負荷に応答して示す細胞クラスター。
［８０］  前記比較可能な細胞クラスターと比較して少なくとも約１．２、１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５、または５倍多いインスリン分泌を示す、［７９］に記載の細胞クラスター。
［８１］  前記比較可能な細胞クラスターと比較してより高いＧＳＩＳ刺激指数を示す、［７９］または［８０］に記載の細胞クラスター。
［８２］  前記細胞クラスターの前記ＧＳＩＳ刺激指数が、前記比較可能な細胞クラスターのものより少なくとも約１．２倍、少なくとも約１．５倍、少なくとも約１．８倍、少なくとも約２倍、少なくとも約２．２倍、少なくとも約２．４倍、少なくとも約２．８倍、または少なくとも約３倍高い、［７９］〜［８１］のいずれか一項に記載の細胞クラスター。
［８３］  前記非ネイティブ膵臓β細胞を含む前記細胞クラスターの前記ＧＳＩＳ刺激指数が、前記比較可能な細胞クラスターのものより少なくとも約３倍高い、［７９］〜［８１］のいずれか一項に記載の細胞クラスター。
［８４］  前記ＧＳＩＳ刺激指数が、第１のグルコース濃度に応答してのインスリン分泌の、第２のグルコース濃度に応答してのインスリン分泌に対する比として計算される、［８１］〜［８３］のいずれか一項に記載の細胞クラスター。
［８５］  前記第１のグルコース濃度が、約１０〜約５０ｍＭであり、前記第２のグルコース濃度が、約１ｍＭ〜５ｍＭである、［８４］に記載の細胞クラスター。
［８６］  前記第１のグルコース濃度が、約２０ｍＭであり、前記第２のグルコース濃度が、約２．８ｍＭである、［８４］に記載の細胞クラスター。
［８７］  前記非ネイティブ膵臓β細胞が、グルコース負荷に曝露されたときにｉｎ  ｖｉｔｒｏグルコース刺激インスリン分泌応答を示す、［７７］〜［８６］のいずれか一項に記載の細胞クラスター。
［８８］  前記非ネイティブ膵臓β細胞が、第１のＫ＋濃度に応答してインスリン分泌を示す、［７７］〜［８７］のいずれか一項に記載の細胞クラスター。
［８９］  前記比較可能な細胞クラスターと比較してより多いインスリン分泌を第１のＫ＋濃度に応答して示す、［７７］〜［８７］のいずれか一項に記載の細胞クラスター。
［９０］  前記比較可能な細胞クラスターと比較して少なくとも約１．２倍、少なくとも約１．５倍、少なくとも約１．８倍、少なくとも約２倍、少なくとも約２．２倍、少なくとも約２．４倍、少なくとも約２．８倍、少なくとも約３倍、少なくとも約３．２倍、少なくとも約３．４倍、少なくとも約３．６倍、少なくとも約３．８倍、少なくとも約４倍多いインスリン分泌を第１のＫ＋濃度に応答して示す、［７７］〜［８７］のいずれか一項に記載の細胞クラスター。
［９１］  ［１］〜［４５］のいずれか一項に記載の方法に従って産生された非ネイティブ膵臓β細胞を含む細胞クラスター。
［９２］  ［１］〜［４５］のいずれか一項に記載の方法に従って産生された非ネイティブ膵臓β細胞を含む細胞クラスターを含む医薬組成物。
［９３］  ［７７］〜［９０］のいずれか一項に記載の細胞クラスターを含む医薬組成物。
［９４］  ［４６］〜［９０］のいずれか一項に記載の細胞クラスターまたは［１］〜［４５］のいずれか一項に記載の方法に従って産生された非ネイティブ膵臓β細胞を含む細胞クラスターを含むデバイスであって、対象に植え込まれたときインスリンを産生および放出するように構成されているデバイス。
［９５］  半透膜をさらに含み、前記半透膜が、細胞を前記デバイス内に保持するように、および前記細胞により分泌されるインスリンの透過を可能にするように構成されている、［９４］に記載のデバイス。
［９６］  前記細胞が、前記半透膜によりカプセル化されている、［９５］に記載のデバイス。
［９７］  前記半透膜が、多糖またはポリカチオンで製造されている、［９５］または［９６］に記載のデバイス。
［９８］  前記半透膜が、ポリ（ラクチド）（ＰＬＡ）、ポリ（グリコール酸）（ＰＧＡ）、ポリ（ラクチド−ｃｏ−グリコリド）（ＰＬＧＡ）、他のポリヒドロキシ酸、ポリ（カプロラクトン）、ポリカーボネート、ポリアミド、ポリ無水物、ポリホスファゼン、ポリアミノ酸、ポリオルトエステル、ポリアセタール、ポリシアノアクリレート、ポリテトラフルオロエチレン（ＰＴＦＥ）、生分解性ポリウレタン、アルブミン、コラーゲン、フィブリン、ポリアミノ酸、プロラミン、アルギネート、アガロース、アガロースとゼラチン、デキストラン、ポリアクリレート、エチレン−酢酸ビニルポリマーおよび他のアシル置換酢酸セルロースならびにそれらの誘導体、ポリウレタン、ポリスチレン、ポリ塩化ビニル、ポリフッ化ビニル、ポリ（ビニルイミダゾール）、クロロスルホン化ポリオレフィン、ポリエチレンオキシド、ならびにそれらの任意の組合せからなる群から選択される材料で製造されている、［９５］〜［９７］のいずれか一項に記載のデバイス。
［９９］  前記半透膜が、アルギネートを含む、［９５］〜［９８］のいずれか一項に記載のデバイス。
［１００］  前記細胞クラスターが、前記半透膜により包囲されたアルギン酸コアを含むマイクロカプセルに封入されている、［９５］〜［９９］のいずれか一項に記載のデバイス。
［１０１］  対象を処置する方法であって、［１］〜［４５］のいずれか一項に記載の方法に従って産生された非ネイティブ膵臓β細胞、［４６］〜［９０］のいずれか一項に記載の細胞クラスター、［９２］もしくは９３に記載の医薬組成物、または［９４］〜［１００］のいずれか一項に記載のデバイスを前記対象に投与するステップを含む方法。
［１０２］  前記対象が、代謝障害を有するかまたは代謝障害を発症するリスクが高い、［１０１］に記載の方法。
［１０３］  前記対象が、Ｉ型糖尿病、ＩＩ型糖尿病、および１．５型糖尿病からなる群から選択される糖尿病を有する、［１０１］または［１０２］に記載の方法。