【手続補正書】
【提出日】令和3年2月8日(2021.2.8)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下：
（i）全長神経成長因子（NGF）ポリペプチド配列、又はその生物学的活性を有する断片を含む第1の部分；及び
（ii）ヒトの血流中で、NGFポリペプチド配列、又はその生物学的活性を有する断片の半減期を増大させる追加のポリペプチドを含む第2の部分
を含むポリペプチド。
【請求項２】
第1の部分が全長NGFポリペプチド配列を含む、請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項３】
第1の部分がNGFの生物学的活性を有する断片を含む、請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項４】
第1の部分がヒトNGF配列を含む、請求項１〜３のいずれか１項に記載のポリペプチド。
【請求項５】
ヒトNGF配列が配列番号5と少なくとも95％同一である、請求項４に記載のポリペプチド。
【請求項６】
ヒトNGF配列が配列番号5を含む、請求項５に記載のポリペプチド。
【請求項７】
第1の部分がNGFの少なくとも1つの結合パートナーと結合可能なものであり、場合によりNGFの少なくとも1つの結合パートナーがトロポミオシン受容体キナーゼA（TrkA）又は低アフィニティNGF受容体（LNGFR/p75NTR）である、請求項３に記載のポリペプチド。
【請求項８】
第1の部分が配列番号5の122位から241位のアミノ酸残基を含む、請求項７に記載のポリペプチド。
【請求項９】
第2の部分が、全長ヒト絨毛性ゴナドトロピン（HCG）、又はその生物学的活性を有する断片を含む、請求項１〜８のいずれか１項に記載のポリペプチド。
【請求項１０】
ヒト絨毛性ゴナドトロピン（HCG）が配列番号10〜12から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１〜９のいずれか１項に記載のポリペプチド。
【請求項１１】
第2の部分がHCGのカルボキシ末端部分（CTP）を含む、請求項１〜１０のいずれか１項に記載のポリペプチド。
【請求項１２】
第2の部分が、配列番号13と少なくとも70％同一であるアミノ酸配列を含むものであり、場合により第2の部分が、配列番号13と少なくとも75％、80％、90％、95％、99％又はそれ以上同一であるアミノ酸配列を含む、請求項１〜１１のいずれか１項に記載のポリペプチド。
【請求項１３】
第2の部分が配列番号13のアミノ酸配列を含む、請求項１〜１２のいずれか１項に記載のポリペプチド。
【請求項１４】
第1の部分が第2の部分のN末端に融合している、請求項１〜１３のいずれか１項に記載のポリペプチド。
【請求項１５】
配列番号2又は3と少なくとも70％同一のアミノ酸配列を含み、場合により配列番号2又は3と少なくとも75％、80％、90％、95％、99％又は100％同一のアミノ酸配列を含む、請求項１〜１４のいずれか１項に記載のポリペプチド。
【請求項１６】
ポリペプチドが、NGFポリペプチド配列単独のin vivo半減期の少なくとも2.5倍のin vivo半減期を有する、請求項１〜１５のいずれか１項に記載のポリペプチド。
【請求項１７】
ヒトの血流中で、NGFポリペプチド配列又はその生物学的活性を有する断片の機能及び/若しくは安定性を増大する融合ドメインを含む第3の部分をさらに含む、請求項１〜１６のいずれか１項に記載のポリペプチド。
【請求項１８】
請求項１〜１７のいずれか１項に記載のポリペプチドをコードするポリヌクレオチド。
【請求項１９】
配列番号1と少なくとも95％同一である核酸配列を含む、請求項１８に記載のポリヌクレオチド。
【請求項２０】
配列番号1の核酸配列を含む、請求項１８に記載のポリヌクレオチド。
【請求項２１】
請求項１〜１７のいずれか１項に記載のポリペプチドを発現可能な発現ベクター、及び／又は請求項１８〜２０のいずれか１項に記載のポリヌクレオチドを含む発現ベクター。
【請求項２２】
請求項２１に記載の発現ベクターを含む宿主細胞。
【請求項２３】
以下：
（i）請求項２２に記載の宿主細胞を細胞培養培地において培養するステップ；及び
（ii）請求項１〜１７のいずれか１項に記載のポリペプチドを発現させるステップ
を含む方法。
【請求項２４】
さらに
（iii）細胞培養培地から請求項１〜１７のいずれか１項に記載のポリペプチドを精製するステップ
を含む、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
請求項１〜１７のいずれか１項に記載のポリペプチド、請求項１８〜２０のいずれか１項に記載のポリヌクレオチド、請求項２１に記載の発現ベクター、又は請求項２２に記載の宿主細胞を含む組成物。
【請求項２６】
請求項２５に記載の組成物及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物。
【請求項２７】
神経成長因子（NGF）の欠損及び/又は欠陥に関連する疾患又は障害を処置する方法であって、請求項１〜１７のいずれか１項に記載のポリペプチド、請求項１８〜２０のいずれか１項に記載のポリヌクレオチド、請求項２５に記載の組成物、又は請求項２６に記載の医薬組成物の治療上有効量をその必要がある対象に投与することを含む方法。
【請求項２８】
上記疾患又は障害を処置するための追加の薬剤及び/又は治療を対象に投与することをさらに含む、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
上記疾患又は障害が神経障害である、請求項２７又は２８に記載の方法。
【請求項３０】
神経障害が、筋萎縮性側索硬化症（ルー・ゲーリック病）、アルツハイマー病、ベル麻痺、認知症、ダウン症候群、癲癇、ハンチントン舞踏病、メニエール病、多発性硬化症、神経難聴、卒中、低酸素性虚血性脳症、脳性まひ、麻痺、パーキンソン病、末梢神経障害、視神経障害又は脊髄性筋萎縮症である、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
神経障害が末梢神経障害であり、末梢神経障害が多発神経障害又は単神経障害である、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
神経障害が視神経障害であり、視神経障害が、前眼部若しくは後眼部変性疾患、眼表面の慢性アレルギー性炎症性障害、外傷性視神経障害、緑内障、神経栄養性角膜症、単純ヘルペス角膜炎、又は角膜治癒である、請求項３０に記載の方法。
【請求項３３】
神経障害が、中央ニューロン、末梢ニューロン、運動ニューロン若しくは感覚ニューロンの壊死若しくは欠損、外傷、腎機能障害、損傷、手術、虚血、感染、代謝性疾患、栄養不足、悪性腫瘍、毒性物質、又は化学療法により引き起こされる、請求項２９〜３２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３４】
対象が哺乳動物である、請求項２７〜３３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３５】
その必要がある対象においてニューロンの成長及び/又は増殖を促進する方法であって、請求項１〜１７のいずれか１項に記載のポリペプチド、請求項２５に記載の組成物、又は請求項２６に記載の医薬組成物の有効量を対象に投与することを含む方法。
【請求項３６】
対象が哺乳動物である、請求項３５に記載の方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１１１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１１１】
均等物
当業者は、本明細書に記載の本発明の特定の実施形態に対する多くの均等物を認識するか、又は日常的な実験のみを使用して確認することができる。そのような均等物は、添付の特許請求の範囲に含まれることが意図されている。
本発明は、例えば以下の実施形態を包含する：
［実施形態１］以下：
（i）全長神経成長因子（NGF）ポリペプチド配列、又はその生物学的活性を有する断片を含む第1の部分；及び
（ii）ヒトの血流中で、NGFポリペプチド配列、又はその生物学的活性を有する断片の半減期を増大させる追加のポリペプチドを含む第2の部分
を含むポリペプチド。
［実施形態２］第1の部分が全長NGFポリペプチド配列を含む、実施形態１に記載のポリペプチド。
［実施形態３］第1の部分がNGFの生物学的活性を有する断片を含む、実施形態１に記載のポリペプチド。
［実施形態４］第1の部分がヒトNGF配列を含む、実施形態１〜３のいずれかに記載のポリペプチド。
［実施形態５］ヒトNGF配列が配列番号5と少なくとも70％同一である、実施形態４に記載のポリペプチド。
［実施形態６］ヒトNGF配列が配列番号5と少なくとも80％同一である、実施形態５に記載のポリペプチド。
［実施形態７］ヒトNGF配列が配列番号5と少なくとも90％同一である、実施形態６に記載のポリペプチド。
［実施形態８］ヒトNGF配列が配列番号5と少なくとも95％同一である、実施形態７に記載のポリペプチド。
［実施形態９］ヒトNGF配列が配列番号5と少なくとも99％同一である、実施形態８に記載のポリペプチド。
［実施形態１０］ヒトNGF配列が配列番号5を含む、実施形態９に記載のポリペプチド。
［実施形態１１］第1の部分がNGFの少なくとも1つの結合パートナーと結合可能なものであり、場合によりNGFの少なくとも1つの結合パートナーがトロポミオシン受容体キナーゼA（TrkA）又は低アフィニティNGF受容体（LNGFR/p75NTR）である、実施形態３に記載のポリペプチド。
［実施形態１２］第1の部分が配列番号5の122位から241位のアミノ酸残基を含む、実施形態１１に記載のポリペプチド。
［実施形態１３］第2の部分が、全長ヒト絨毛性ゴナドトロピン（HCG）、又はその生物学的活性を有する断片を含む、実施形態１〜１２のいずれかに記載のポリペプチド。
［実施形態１４］ヒト絨毛性ゴナドトロピン（HCG）が配列番号10〜12から選択されるアミノ酸配列を含む、実施形態１〜１３のいずれかに記載のポリペプチド。
［実施形態１５］第2の部分がHCGのカルボキシ末端部分（CTP）を含む、実施形態１〜１４のいずれかに記載のポリペプチド。
［実施形態１６］第2の部分が、配列番号13と少なくとも70％同一であるアミノ酸配列を含むものであり、場合により第2の部分が、配列番号13と少なくとも75％、80％、90％、95、99％又はそれ以上同一であるアミノ酸配列を含む、実施形態１〜１５のいずれかに記載のポリペプチド。
［実施形態１７］第2の部分が配列番号13のアミノ酸配列を含む、実施形態１〜１６のいずれかに記載のポリペプチド。
［実施形態１８］第2の部分が少なくとも1つのグリコシル化部位を含む、実施形態１〜１７のいずれかに記載のポリペプチド。
［実施形態１９］第1の部分及び第2の部分が、リンカーあり又はなしで互いに融合している、実施形態１〜１８のいずれかに記載のポリペプチド。
［実施形態２０］第1の部分が第2の部分のN末端に融合している、実施形態１９に記載のポリペプチド。
［実施形態２１］第1の部分が第2の部分のC末端に融合している、実施形態１９に記載のポリペプチド。
［実施形態２２］配列番号2又は3と少なくとも70％同一のアミノ酸配列を含み、場合により配列番号2又は3と少なくとも75％、80％、90％、95、99％又は100％同一のアミノ酸配列を含む、実施形態１〜２０のいずれかに記載のポリペプチド。
［実施形態２３］ポリペプチドが、NGFポリペプチド配列単独のin vivo半減期の少なくとも2.5倍のin vivo半減期を有する、実施形態１〜２２のいずれかに記載のポリペプチド。
［実施形態２４］標識、例えば精製用標識及び/又は蛍光タグなどをさらに含む、実施形態１〜２３のいずれかに記載のポリペプチド。
［実施形態２５］ヒトの血流中で、NGFポリペプチド配列又はその生物学的活性を有する断片の機能及び/若しくは安定性を増大する融合ドメインを含む第3の部分をさらに含む、実施形態１〜２４のいずれかに記載のポリペプチド。
［実施形態２６］実施形態１〜２５のいずれかに記載のポリペプチドをコードするポリヌクレオチド。
［実施形態２７］配列番号1と少なくとも70％同一である核酸配列を含む、実施形態２６に記載のポリヌクレオチド。
［実施形態２８］配列番号1と少なくとも80％同一である核酸配列を含む、実施形態２６又は２７に記載のポリヌクレオチド。
［実施形態２９］配列番号1と少なくとも90％同一である核酸配列を含む、実施形態２６〜２８のいずれかに記載のポリヌクレオチド。
［実施形態３０］配列番号1と少なくとも95％同一である核酸配列を含む、実施形態２６〜２９のいずれかに記載のポリヌクレオチド。
［実施形態３１］配列番号1と少なくとも99％同一である核酸配列を含む、実施形態２６〜３０のいずれかに記載のポリヌクレオチド。
［実施形態３２］配列番号1の核酸配列を含む、実施形態２６〜３１のいずれかに記載のポリヌクレオチド。
［実施形態３３］ポリ核酸が配列番号1に相補的な核酸配列とストリンジェントな条件下でハイブリダイズすることができ、場合によりストリンジェントな条件が50％v/vホルムアミド、5 x SSC、2％w/vブロッキング剤、0.1％N-ラウロイルサルコシン、0.3％SDS中での65℃にて一晩のハイブリダイゼーション、及び5 x SSC中での約65℃での洗浄を含む、実施形態２６〜３２のいずれかに記載のポリヌクレオチド。
［実施形態３４］標識、例えば精製用標識及び/又は蛍光タグなどをさらに含む、実施形態２６〜３３のいずれかに記載のポリヌクレオチド。
［実施形態３５］実施形態１〜２５のいずれかに記載のポリペプチドを発現可能な発現ベクター、及び／又は実施形態２６〜３４のいずれかに記載のポリヌクレオチドを含む発現ベクター。
［実施形態３６］発現ベクターが、プラスミド、コスミド、ウイルスベクター、組換え発現ベクター、又は標的化リポソームである、実施形態３５に記載の発現ベクター。
［実施形態３７］発現ベクターがウイルスベクターであり、ウイルスベクターが、アデノウイルスベクター、ヘルペスウイルスベクター、ワクシニアウイルスベクター、キメラウイルス、コロイド分散系、又はRNAベクターである、実施形態３６に記載の発現ベクター。
［実施形態３８］RNAベクターがレトロウイルスベクターである、実施形態３７に記載の発現ベクター。
［実施形態３９］レトロウイルスベクターがマウスレトロウイルス又はその誘導体である、実施形態３８に記載の発現ベクター。
［実施形態４０］レトロウイルスベクターがトリレトロウイルス又はその誘導体である、実施形態３８に記載の発現ベクター。
［実施形態４１］実施形態３５〜４０のいずれかに記載の発現ベクターを含む宿主細胞。
［実施形態４２］以下：
（i）実施形態４１に記載の宿主細胞を細胞培養培地において培養するステップ；及び
（ii）実施形態１〜２５のいずれかに記載のポリペプチドを発現させるステップ
を含む方法。
［実施形態４３］さらに
（iii）細胞培養培地から実施形態１〜２５のいずれかに記載のポリペプチドを精製するステップ
を含む、実施形態４２に記載の方法。
［実施形態４４］実施形態１〜２５のいずれかに記載のポリペプチド、実施形態２６〜３４のいずれかに記載のポリヌクレオチド、実施形態３５〜４０のいずれかに記載の発現ベクター、又は実施形態４１に記載の宿主細胞を含む組成物。
［実施形態４５］実施形態４４に記載の組成物及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物。
［実施形態４６］薬学的に許容される担体が、コロイド分散系又は標的化リポソームである、実施形態４５に記載の医薬組成物。
［実施形態４７］組成物が 固体又は液体形態での投与用に製剤化される、実施形態４５又は４６に記載の医薬組成物。
［実施形態４８］組成物が、動脈内、脳内、病変内、筋内、鼻腔内、眼内、腹腔内、肺内、直腸内、髄腔内、膣内、静脈内、脳室内、経口、非経口、皮下、又は局所的の投与用に製剤化される、実施形態４５〜４７のいずれかに記載の医薬組成物。
［実施形態４９］組成物が、水性懸濁液若しくは溶液、非水性懸濁液若しくは溶液、滅菌溶液、錠剤、ボーラス、粉末、顆粒、ペースト、クリーム、軟膏、点眼薬、局所噴霧剤、ペッサリー、泡状物、エアゾール、リポソーム製剤、又は固形粒子の形態である、実施形態４５〜４８のいずれかに記載の医薬組成物。
［実施形態５０］組成物が持続投与される、実施形態４５〜４９のいずれかに記載の医薬組成物。
［実施形態５１］神経成長因子（NGF）の欠損及び/又は欠陥に関連する疾患又は傷害を処置する方法であって、実施形態１〜２５のいずれかに記載のポリペプチド、実施形態２６〜３４のいずれかに記載のポリヌクレオチド、実施形態４４に記載の組成物、又は実施形態４５〜５０のいずれかに記載の医薬組成物の治療上有効量をその必要がある対象に投与することを含む方法。
［実施形態５２］上記疾患又は障害を処置するための追加の薬剤及び/又は治療を対象に投与することをさらに含む、実施形態５１に記載の方法。
［実施形態５３］上記疾患又は障害が神経障害である、実施形態５１又は５２に記載の方法。
［実施形態５４］神経障害が、筋萎縮性側索硬化症（ルー・ゲーリック病）、アルツハイマー病、ベル麻痺、認知症、ダウン症候群、癲癇、ハンチントン舞踏病、メニエール病、多発性硬化症、神経難聴、卒中、低酸素性虚血性脳症、脳性まひ、麻痺、パーキンソン病、末梢神経障害、視神経障害又は脊髄性筋萎縮症である、実施形態５３に記載の方法。
［実施形態５５］神経障害が末梢神経障害であり、末梢神経障害が多発神経障害又は単神経障害である、実施形態５４に記載の方法。
［実施形態５６］神経障害が視神経障害であり、視神経障害が、前眼部若しくは後眼部変性疾患、眼表面の慢性アレルギー性炎症性障害、外傷性視神経障害、緑内障、神経栄養性角膜症、単純ヘルペス角膜炎、又は角膜治癒である、実施形態５４に記載の方法。
［実施形態５７］神経障害が、中央ニューロン、末梢ニューロン、運動ニューロン若しくは感覚ニューロンの壊死若しくは欠損、外傷、腎機能障害、損傷、手術、虚血、感染、代謝性疾患、栄養不足、悪性腫瘍、毒性物質、又は化学療法により引き起こされる、実施形態５３〜５６のいずれかに記載の方法。
［実施形態５８］対象が哺乳動物である、実施形態５１〜５７のいずれかに記載の方法。
［実施形態５９］その必要がある対象においてニューロンの成長及び/又は増殖を促進する方法であって、実施形態１〜２５のいずれかに記載のポリペプチド、実施形態４４に記載の組成物、又は実施形態４５〜５０のいずれかに記載の医薬組成物の有効量を対象に投与することを含む方法。
［実施形態６０］対象が哺乳動物である、実施形態５９に記載の方法。