【手続補正書】
【提出日】平成16年4月28日(2004.4.28)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００８】
（吸着工程）
前記茶抽出液を吸着剤を充填した容器に流し込み、前記茶抽出液中のテアニンを吸着剤に吸着させる。吸着剤としてはテアニンが吸着されるものであれば特に限定されることなく従来公知の合成吸着剤を用いることができる。合成吸着剤としては、その母体がスチレンジビニルベンゼン系、例えばＳＥＰＡＢＥＡＤＳ ＳＰ２０５（三菱化学（株）製）、ＳＥＰＡＢＥＡＤＳ ＳＰ２０６（三菱化学（株）製）、ＳＥＰＡＢＥＡＤＳ ＳＰ２０７（三菱化学（株）製）、ＸＡＤ−２（ローム・アンド・ハース社製）、ＸＡＤ−４（ローム・アンド・ハース社製）、ＸＡＤ−２０００（日本有機化学工業（株）製）、ＸＡＤ−２０１０（日本有機化学工業（株）製）、ＸＡＤ−２００５（日本有機化学工業（株）製）、スチレン系、例えばＳＥＰＡＢＥＡＤＳ ＨＰ２０（三菱化学（株）製）、ＳＥＰＡＢＥＡＤＳ ＨＰ２１（三菱化学（株）製）、ＳＥＰＡＢＥＡＤＳ ＳＰ８００（三菱化学（株）製）、ＳＥＰＡＢＥＡＤＳ ＳＰ８２５（三菱化学（株）製）、ＳＥＰＡＢＥＡＤＳ ＳＰ８５０（三菱化学（株）製）、ＳＥＰＡＢＥＡＤＳ ＳＰ８７５（三菱化学（株）製）等が使用できその種類は問わない。
なかでも、テアニンと他のアミノ酸との分離が良好であり、また比重が大きいため濃縮液を流した場合も取扱いが容易である観点からＳＥＰＡＢＥＡＤＳ ＳＰ２０５、ＳＥＰＡＢＥＡＤＳ ＳＰ２０６、ＳＥＰＡＢＥＡＤＳ ＳＰ２０７（いずれも三菱化学（株）製）を用いることが好ましい。
前記茶抽出液の供給量は、容積比（茶抽出液／吸着剤）＝１．５以下で、さらに好ましくは１以下で通液することが望ましい。吸着剤が充填される容器としては、特に限定されることなく従来公知の容器もしくは装置が用いられる。前記容器としては、例えばクロマトカラムが挙げられる。
前記茶抽出液の供給速度（線速度ＬＶ：ｍ／ｈ）はテアニンが吸着されるのであれば特に限定されることなく周知技術に基づいて定まる。ＬＶ＝１．３程度で行うことが好ましい。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００９】
（通液工程）
前記茶抽出液の通液終了後、溶出液としての水を前記容器に流し込む。その際、溶出液としての水を吸着剤に通液すると共に吸着剤を通液した溶出液を排出液として所定の画分毎に回収する。溶出液の供給量は、後に説明するように夾雑成分群が分離され、かつ吸着剤に吸着したテアニンが溶出されるに十分な量で供給されるのであれば特に限定されない。
テアニンの回収率を７０％以上にするには、溶出液の供給量を好ましくは容積比（水／吸着剤）＝６以上で供給することが望ましい。容積比が６よりも低いとテアニンの溶出が終了せず、テアニンの回収率低下につながり、さらに大量に流し続けるとテアニンの溶出が終了するため無駄な画分が増え、また濃縮工程において効率が悪くなるため好ましくない。
回収する排出液の画分の単位量は、夾雑成分群を好適に除去できるのであれば特に限定されない。後に説明する除去工程で得られる夾雑成分群を含有する排出溶液量により適宜定められるものである。
前記溶出液の供給速度（線速度ＬＶ：ｍ／ｈ）は後に説明するように夾雑成分群が分離され、かつ吸着剤に吸着したテアニンが溶出されるのであれば特に限定されることなく周知技術に基づいて定まる。ＬＶ＝１．３を超えない程度で行うことが好ましい。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１５】
【実施例】
以下に実施例及び比較例を示して本発明について具体的に説明するが、本発明が以下の実施例に限定されるものでないことは言うまでもない。
（実施例１）
茶抽出物ｌ．２５ｇ（カテキン２８．７ｗｔ％、力フェイン７．１ｗｔ％、テアニン３ｗｔ％）をそれぞれ１２．５、２５，５０，７５，１００ｍｌの蒸留水に溶解して茶抽出液を得た。芳香族重合体（スチレン−ジビニルベンゼン）を母体とする合成吸着剤セパビーズＳＰ２０７（ＳＥＰＡＢＥＡＤＳ ＳＰ２０７／三菱化学（株）製）５０ｍｌをガラスカラム（２０ｍｍＩ．Ｄ．×１６５ｍｍ）に充填した。そして前記茶抽出液を前記合成吸着剤を備えるガラスカラムにＬＶ＝１．３で通液した。上記の茶抽出液の注入量は、合成吸着剤の充填容積に対して、即ち容積比（茶抽出液／合成吸着剤）＝ｌ／４、１／２、１、３／２、２倍量の水準に相当する。
次に、前記茶抽液を充填したガラスカラムにさらに蒸留水を通液すると共に、排出液を０．５ｂｅｄ毎に回収した。得られた各排出液中のアミノ酸含有量を表１に示される分析条件で高速液体クロマトグラフ（以下「ＨＰＬＣ」）により分折を行った。得られた分析結果を基に作成した溶出挙動を示すグラフを図１〜５に示す。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１７】
図１〜５より、水によるカラムの洗浄過程においてテアニンと夾雑アミノ酸（グルタミン酸、グルタミン、アスパラギン酸、アスパラギン、セリン等）の溶出挙動に差があることを確認し、最適処理容量の設定によってテアニンと夾雑アミノ酸を良好に分離できることが分かった。また、図３より、最適条件を超える容量の茶抽出液をクロマトカラムに通液した場合、テアニンと夾雑アミノ酸の分離が十分ではないことが確認された。このことからテアニンの回収率は低下し、純度に影響すると思われる。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２３】
次に、前記容積比＝１／４の排出液の画分１〜１０を各５ｍｌずつ採取し、１：１の割合でエタノール５ｍｌを添加しよく混ぜた後、遠心分離機で１５分間遠心分離を行った。得られた沈降物を目視によって確認した結果を表４に示す。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２５】
表４より、排出液１、２では沈降物が確認されアルコール不溶性の高分子成分が排出されていると考えられ、これはテアニン溶出画分とは異なるためこのことから本発明によればテアニンとアルコール不溶性高分子成分の分離が可能であることが分かった。
また、容積比＝１／４の前記排出液ｌ〜ｌ０を以下の表５に示される条件下でイオンクロマトグラフィーにて分析した結果を表６に示す。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３１】
得られたＨＰＬＣの分析結果からテアニン含有率が２６．１％であることが分かった。尚、表７中カテキン類とはエピカテキン、エピガロカテキン、エピカテキンガレート、エピガロカテキンガレート、カテキン、ガロカテキン、カテキンガレート、ガロカテキンガレートの合計量で示されている。
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３２】
またテアニン溶出画分にカテキン及びカフェインの溶出は認められなかった（表７）。初期テアニン含有率が３％から本発明処理後２６．１％に向上した。
得られた粗テアニンと初期テアニン含有混合溶液に用いた茶抽出エキスを各１０００ｐｐｍの濃度に調整し、陰イオンについて表８に示す条件でイオンクロマトグラフィーにて分析した。その結果を表９に示す。