【手続補正書】
【提出日】平成17年7月25日(2005.7.25)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
きのこ類及び酵母類の分解能に優れたキチナーゼ、Ｎ−アセチルグルコサミニダーゼ並
びに酵母類の分解能に優れたβ−１，３−グルカナーゼの生産能を有するトリコデルマ  
ｓｐ．  ＴＶ１（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｓｐ．  ＴＶ１）。
【請求項２】
請求項１記載のトリコデルマ  ｓｐ．  ＴＶ１によって生産され、キチンから機能性の
高い５〜８糖のキチンオリゴ糖生産能を有することを特徴とするキチナーゼ。
【請求項３】
請求項１記載のトリコデルマ  ｓｐ．  ＴＶ１によって生産され、キチンオリゴ糖から
機能性Ｎ−アセチルグルコサミン生産能を有することを特徴とするＮ−アセチルグルコサ
ミニダーゼ。
【請求項４】
請求項１記載のトリコデルマ  ｓｐ．  ＴＶ１によって生産され、きのこ類及び酵母ま
たはラミナランから機能性の高い５〜８糖のβ−１，３−グルカンオリゴ糖生産能を有す
ることを特徴とするβ−１，３−グルカナーゼ。
【請求項５】
請求項１記載のトリコデルマ  ｓｐ．  ＴＶ１を培養し、培養物中に分泌生産されたキ
チナーゼを分離精製することを特徴とするキチナーゼの製法。
【請求項６】
請求項１記載のトリコデルマ  ｓｐ．  ＴＶ１を培養し、培養物中に分泌生産されたＮ
−アセチルグルコサミニダーゼを分離精製することを特徴とするＮ−アセチルグルコサミ
ニダーゼの製法。
【請求項７】
請求項１記載のトリコデルマ  ｓｐ．  ＴＶ１を培養し、培養物中に分泌生産されたβ
−１，３−グルカナーゼを分離精製することを特徴とするβ−１，３−グルカナーゼの製
法。
【請求項８】
請求項１記載のトリコデルマ  ｓｐ．  ＴＶ１を培養し、培養物中に分泌生産されたキ
チナーゼを分離精製し、得られたキチナーゼによりキチンを分解することを特徴とする機
能性の高い５〜８糖のキチンオリゴ糖の製法。
【請求項９】
請求項１記載のトリコデルマ  ｓｐ．  ＴＶ１を培養し、培養物中に分泌生産されたＮ
−アセチルグルコサミニダーゼを分離精製し、得られたＮ−アセチルグルコサミニダーゼ
によりキチンオリゴ糖を分解することを特徴とする機能性Ｎ−アセチルグルコサミンの製
法。
【請求項１０】
請求項１記載のトリコデルマ  ｓｐ．  ＴＶ１を培養し、培養物中に分泌生産されたβ
−１，３−グルカナーゼを分離精製し、得られたβ−１，３−グルカナーゼによりきのこ
類及び酵母またはラミナランを分解することを特徴とする機能性の高い５〜８糖のβ−１
，３−グルカンオリゴ糖の製法。
【請求項１１】
請求項８で得られた機能性の高い５〜８糖からなるキチンオリゴ糖、請求項９で得られ
た機能性Ｎ−アセチルグルコサミン及び請求項１０で得られた機能性の高い５〜８糖から
なるβ−１，３−グルカンオリゴ糖からなる群から選ばれた少なくともひとつと、きのこ
類またはパン酵母分解液中のキチンオリゴ糖、Ｎ−アセチルグルコサミン、β−１，３−
グルカンオリゴ糖及びグアニル酸等の呈味成分からなる群から選ばれた少なくともひとつ
とを含むことを特徴とする機能性保健食品。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００５】
前記課題を解決した本発明の新規なトリコデルマ菌株は、きのこ類及び酵母の分解能に
優れたキチナーゼ、Ｎ−アセチルグルコサミニダーゼ、並びにきのこ類及び酵母またはラ
ミナランの分解能に優れたβ−１，３−グルカナーゼの生産能を有するトリコデルマ  ｓ
ｐ．  ＴＶ１（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｓｐ．  ＴＶ１）であることを特徴としている。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００６】
本発明のトリコデルマ  ｓｐ．  ＴＶ１によって生産される機能性糖類の生産酵素は、
キチンから機能性の高い５〜８糖のキチンオリゴ糖生産能を有するキチナーゼ、キチンオ
リゴ糖から機能性Ｎ−アセチルグルコサミン生産能を有するＮ−アセチルグルコサミニダ
ーゼ、並びにきのこ類及び酵母またはラミナランから機能性の高い５〜８糖のβ−１，３
−グルカンオリゴ糖生産能を有するβ−１，３−グルカナーゼからなることを特徴として
いる。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００７】
本発明の機能性糖類生産酵素の製法は、トリコデルマ  ｓｐ．  ＴＶ１を培養し、培養
物中に分泌生産されたキチナーゼを分離精製するキチナーゼの製法、トリコデルマｓｐ．
ＴＶ１を培養し、培養物中に分泌生産されたＮ−アセチルグルコサミニダーゼを分離精
製するＮ−アセチルグルコサミニダーゼの製法、及びトリコデルマ  ｓｐ．  ＴＶ１を培
養し、培養物中に分泌生産されたβ−１，３−グルカナーゼを分離精製するβ−１，３−
グルカナーゼの製法からなることを特徴としている。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００８】
本発明の酵素を用いた機能性糖類の製法は、トリコデルマ  ｓｐ．  ＴＶ１を培養し、
培養物中に分泌生産されたキチナーゼを分離精製し、得られたキチナーゼによりキチンを
分解することを特徴とする機能性が高く、代謝吸収の容易な５〜８糖のキチンオリゴ糖の
製法、トリコデルマ  ｓｐ．  ＴＶ１を培養し、培養物中に分泌生産されたＮ−アセチル
グルコサミニダーゼを分離精製し、得られたＮ−アセチルグルコサミニダーゼによりキチ
ンオリゴ糖を分解する機能性Ｎ−アセチルグルコサミンの製法、及びトリコデルマｓｐ．
ＴＶ１を培養し、培養物中に分泌生産されたβ−１，３−グルカナーゼを分離精製し、
得られたβ−１，３−グルカナーゼによりきのこ類及び酵母またはラミナランを分解する
能性が高く、代謝吸収の容易な５〜８糖のβ−１，３−グルカンオリゴ糖の製法からなる
ことを特徴としている。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１０】
本発明には、以下の産業上の効果または利点がある。
（１）本発明の新菌株トリコデルマ  ｓｐ．  ＴＶ１は、キチナーゼ、Ｎ−アセチルグル
コサミニダーゼ及びβ−１，３−グルカナーゼ生産能を有する。また、β−１，６−グル
カナーゼ活性もある。この新菌株は、シイタケ生産現場の菌床で発見されることから採取
が容易である。加えて、栄養源として炭素源、窒素源、無機塩類を適宜含有する培地であ
れば、天然培地でも合成培地でも使用でき培養も容易である。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１１】
（２）本発明のトリコデルマ  ｓｐ．  ＴＶ１により生産されるキチナーゼは、キチンか
ら機能性が高く、代謝吸収が容易な５〜８糖のキチンオリゴ糖を生産する能力を有する。
Ｎ−アセチルグルコサミニダーゼは、キチンオリゴ糖から機能性Ｎ−アセチルグルコサミ
ンの単糖を生産する能力を有する。β−１，３−グルカナーゼは、きのこ類及び酵母類ま
たはラミナランから制がん性等の機能性が高く、代謝吸収が容易なβ−１，３−グルカン
オリゴ糖を生産する能力を有する。
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１２】
（３）本発明のトリコデルマ  ｓｐ．  ＴＶ１によるキチナーゼの製法では、トリコデル
マ  ｓｐ．  ＴＶ１の培養液中に分泌生産されたキチナーゼを分離精製することにより、
高純度のキチナーゼを確実に得ることができる。トリコデルマ  ｓｐ．  ＴＶ１によるＮ
−アセチルグルコサミニダーゼの製法では、トリコデルマ  ｓｐ．  ＴＶ１の培養液中に
分泌生産されたＮ−アセチルグルコサミニダーゼを分離精製することにより、高純度のＮ
−アセチルグルコサミニダーゼを確実に得ることができる。トリコデルマ  ｓｐ．  ＴＶ
１によるβ−１，３−グルカナーゼの製法では、トリコデルマ  ｓｐ．  ＴＶ１の培養液
中に分泌生産されたβ−１，３−グルカナーゼを分離精製することにより、高純度のβ−
１，３−グルカナーゼを確実に得ることができる。
【手続補正９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１３】
（４）本発明のキチンオリゴ糖の製法では、トリコデルマ  ｓｐ．  ＴＶ１を培養し、培
養物中に分泌生産されたキチナーゼを分離精製し、得られたキチナーゼによりキチンを分
解することにより、高純度で、効率よく、容易に多量の機能性が高く、代謝吸収の容易な
５〜８糖のキチンオリゴ糖を得ることができる。Ｎ−アセチルグルコサミンの製法では、
トリコデルマ  ｓｐ．  ＴＶ１を培養し、培養物中に分泌生産されたＮ−アセチルグルコ
サミニダーゼを分離精製し、得られたＮ−アセチルグルコサミニダーゼによりキチンオリ
ゴ糖を分解することにより、高純度で、効率よく、容易に多量の機能性Ｎ−アセチルグル
コサミンを得ることができる。β−１，３−グルカンオリゴ糖の製法では、トリコデルマ
ｓｐ．  ＴＶ１を培養し、培養物中に分泌生産されたβ−１，３−グルカナーゼを分離
精製し、得られたβ−１，３−グルカナーゼによりきのこ類及び酵母またはラミナランを
分解することにより、高純度で、効率よく、容易に多量の機能性が高く、代謝吸収の容易
な５〜８糖のβ−１，３−グルカンオリゴ糖を得ることができる。加えて、キチナーゼ及
びβ−１，３−グルカナーゼは、きのこ類や酵母の細胞壁を分解することにより、高分子
β−１，３−グルカンを水溶性のオリゴ糖にしたり、グアニル酸などの呈味成分を抽出し
たりすることもできる。
【手続補正１０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１５】
本発明のトリコデルマ属に属する新菌株は、シイタケ菌床に発生した汚染菌の中から、
キチナーゼ、Ｎ−アセチルグルコサミニダーゼ、及びβ−１，３−グルカナーゼ生産能に
関するスクリーニングにより新規に見いだされたもので、トリコデルマ  ｓｐ．  ＴＶ１
（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｓｐ．  ＴＶ１）と命名して、平成１６年２月１２日に独立
行政法人産業技術総合研究所特許生物寄託センターに寄託した。寄託番号は［ＦＥＲＭ  
Ｐ−１９６８４］である。トリコデルマ  ｓｐ．  ＴＶ１の菌学的性質を下記に示す。
【手続補正１１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１６】
（１）培養的・形態的性質：トリコデルマ  ｓｐ．  ＴＶ１は、不完全菌類の一属で、集
落の色調は分生子の形成により緑色となる。分生子は楕円状を呈する。形態は分岐を繰り
返して不規則な輪生状となり、フィアライドを群生する。分生子は粘塊状に形成される。
【手続補正１２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１７】
トリコデルマ  ｓｐ．  ＴＶ１の培養には、通常の糸状菌無機塩類としての培養法を用
いる。培養のための栄養源としては、炭素源、窒素源、無機塩類を適宜含有する培地であ
れば、天然培地でも合成培地でも使用できる。炭素源としては、グルコース、蔗糖、キチ
ン、酵母細胞壁等を使用できる。窒素源としては、硫酸アンモニウム、硝酸アンモニウム
、硝酸カリウム、酵母エキス、ペプトン、米糠、シイタケ子実体、酵母細胞壁などを使用
できる。無機塩類としてはナトリウム、カリウム、マグネシウム、マンガン、鉄、亜鉛、
銅の塩類、例えばリン酸カルシウム、硫酸マグネシウム、硫酸マンガン、塩化カルシウム
、硫酸マンガン、硫酸鉄、硫酸亜鉛等を使用できる。これらの他、添加可能な栄養因子と
して、ビタミン類、アミノ酸、核酸及びその塩類等を使用できる。培養は、好気的条件、
例えば振とう培養法、通気攪拌培養法が好適であるが、固体培養法も可能で、ｐＨ等の条
件に応じて適宜選択すればよい。培養時間に特に制限はないが、好ましくは２０〜９６時
間、さらに好ましくは４０〜９６時間である。
【手続補正１３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１８】
（２）生理学的・化学分類学的性質：トリコデルマ  ｓｐ．  ＴＶ１は、優れたキチナー
ゼ、Ｎ−アセチルグルコサミニダーゼ及びβ−１，３−グルカナーゼ生産能を有する。得
られたキチナーゼ、Ｎ−アセチルグルコサミニダーゼ及びβ−１，３−グルカナーゼ生産
菌は、キチン及び酵母細胞壁（あるいはラミナラン）を重合度の高いキチンオリゴ糖、Ｎ
−アセチルグルコサミン、β−１，３−グルカンオリゴ糖に効率よく変換する。
【手続補正１４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１９】
トリコデルマ  ｓｐ．  ＴＶ１は、ポテトデキストロー寒天平板培地及びポテトキャロ
ット寒天培地に接種する。生育の範囲はｐＨ４．０〜６．０、温度２５〜３０℃、培養期
間は２〜４日間である。最適生育条件は、ｐＨ５．０〜５．５、温度約２５℃、培養期間
は４日である。培養後生育したカビの集落の色調及び組織を観察した結果、生育は早く、
集落の色調は分生子の形成により緑色となる。分生子は楕円状を呈する。形態は分岐を繰
り返して不規則な輪生状となり、フィアライドを群生する。分生子は粘塊状に形成される
。
【手続補正１５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２０】
（３）同種内の公知菌株との菌学的性質の相違点：後述の表１から明らかのように、本発
明のトリコデルマ  ｓｐ．  ＴＶ１は、公知菌株トリコデルマ・ｓｐ．Ｕに比較して、キ
チナーゼ、Ｎ−アセチルグルコサミニダーゼ、β−１，３−グルカナーゼ、β−１，６−
グルカナーゼ活性において顕著な差異があり、すぐれた生産能を示す。
【手続補正１６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２１】
本発明のトリコデルマ  ｓｐ．  ＴＶ１の選抜では、シイタケの菌床栽培において、シ
イタケ子実体の傘の表面に付着していて、傘を溶解した時に得られる分生子を滅菌水にて
系統的に希釈する。次いで、希釈液をもとにポテトデキストロー寒天平板培地を用いて純
粋培養を行い、単一集落を示すものを純粋菌として選抜する。同定は財団法人日本食品セ
ンターに依頼する。
【手続補正１７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２２】
本発明のトリコデルマ  ｓｐ．  ＴＶ１によるキチナーゼ、Ｎ−アセチルグルコサミニ
ダーゼ及びβ−１，３−グルカナーゼの製法として、トリコデルマ  ｓｐ．  ＴＶ１の通
気攪拌培養法または固体培養法を用いるのが実用的である。トリコデルマ  ｓｐ．  ＴＶ
１の培養物中には、キチナーゼ、Ｎ−アセチルグルコサミニダーゼ及びβ−１，３−グル
カナーゼが分泌される。分泌されたキチナーゼ、Ｎ−アセチルグルコサミニダーゼ及びβ
−１，３−グルカナーゼは、濾過または遠心分離等の操作で菌体を除き、培養液をそのま
ま粗キチナーゼ、Ｎ−アセチルグルコサミニダーゼ及びβ−１，３−グルカナーゼとして
回収する。
【手続補正１８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２８】
粗酵素液は、次のように調製した。トリコデルマ合成培地には、菌が旺盛に生育した。
この培地内から、トリコデルマ  ｓｐ．  ＴＶ１と、同時にトリコデルマ  ｓｐ．  ＴＶ
１から分泌生産されたキチナーゼ、Ｎ−アセチルグルコサミニダーゼ、β−１，３−グル
カナーゼ及びβ−１，６−グルカナーゼ等の酵素を含む粗酵素液が得られた。
【手続補正１９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２９】
（試験例１：トリコデルマ  ｓｐ．  ＴＶ１由来の酵素活性）
トリコデルマ合成培地で保存している溶菌酵素Ｕ菌株を対照例として、実施例１で培養
して得られた粗酵素液につき、キチナーゼ、Ｎ−アセチルグルコサミニダーゼ、β−１，
３−グルカナーゼ及びβ−１，６−グルカナーゼ活性を測定した。酵素活性の測定は、試
験例２の方法によった。その結果を表１に示す。
【手続補正２０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３５】
さらに、コロジオンバッグによる濃縮で部分的に精製したβ−１，３−グルカナーゼの
フラクションを０．０１ｍｏｌ酢酸塩緩衝液（ｐＨ４．０）で平衡化したＤＥＡＥ−セフ
ァロースＣＬ−６Ｂを充填したカラム（２．６×３０ｃｍ）に通して、β−１，３−グル
カナーゼを吸着させた後、０．１ｍｏｌ酢酸塩緩衝液（ｐＨ５．０）で溶出するとβ−１
，３−グルカナーゼのピークが得られた。β−１，３−グルカナーゼ活性の高いフラクシ
ョンを集め、コロジオンバッグによる濃縮を行った。このフラクションを透析し、セファ
クリルＳ１００−ＨＲカラムによるゲル濾過クロマトグラフィーを行った。このフラクシ
ョンについてＳＤＳ−ＰＡＧＥを行った結果、単一のバンドが確認されたので、これをト
リコデルマ  ｓｐ．  ＴＶ１由来の精製酵素であるβ−１，３−グルカナーゼとした。本
酵素の分子量は約３１，３００であると推定された。
【手続補正２１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３６】
キチナーゼの精製：前記β−１，３−グルカナーゼの精製過程で得たキチナーゼフラク
シヨンをコロジオンバッグにより濃縮した。すなわち、キチナーゼフラクションを０．０
１ｍｏｌ酢酸塩緩衝液（ｐＨ４．０）で平衡化したＤＥＡＥ−セファロースＣＬ−６Ｂを
充填したカラム（２．６×３０ｃｍ）に通じてキチナーゼを吸着させた後、０．０１ｍｏ
ｌ酢酸塩緩衝液（ｐＨ５．０）で溶出するとキチナーゼのピークが得られた。キチナーゼ
活性の高いフラクションを集め、コロジオンバッグによる濃縮を行った。このフラクショ
ンを透析し、セファクリルＳ１００−ＨＲカラムによるゲル濾過クロマトグラフィーを行
った。このフラクションについてＳＤＳ−ＰＡＧＥを行った結果、単一のバンドが確認さ
れたので、これをトリコデルマ  ｓｐ．  ＴＶ１由来の精製酵素であるキチナーゼとした
。本酵素の分子量は約３６，０００であると推定された。
【手続補正２２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４１】
Ｎ−アセチルグルコサミニダーゼの活性測定法（Ｒｏｎｄｏｌｅ−Ｍｏｌｇａｎ法）：
４５℃の恒温槽中で試験管に酵素液０．１ｍｌに０．３４％のｐ−ニトロフェニル−Ｎ−
アセチルグルコサミニド溶液（ｐＨ５．０）０．９ｍｌを加え、４５℃で３０分間反応さ
せた。この時のブランクには、基質に０．１ｍｏｌ酢酸緩衝液（ｐＨ５．０）を加えたも
のを使用した。反応後、１ｍｏｌの炭酸ナトリウム溶液２ｍｌを加え、５３０ｎｍにおけ
る吸光度を測定し、生成したｐ−ニトロフェノール量を求め、酵素力価を算出した。上記
条件下において、１分間に１μｍｏｌのｐ−ニトロフェノール量（１３９．１１）を生成
する酵素量を１単位とする。
【手続補正２３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４５】
（試験例４：最適基質の測定）
トリコデルマ  ｓｐ．  ＴＶ１株由来の酵素キチナーゼ、Ｎ−アセチルグルコサミニダ
ーゼ及びβ−１，３−グルカナーゼの基質との性質につき、下記の方法で試験した。
【手続補正２４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５０】
Ｎ−アセチルグルコサミニダーゼ：ｐＨ２．０〜ｐＨ７．０の各ｐＨの緩衝液で希釈し
た実施例２の精製酵素液に０．３４％のｐ−ニトロフェニル−Ｎ−アセチルグルコサミニ
ド溶液（ｐＨ５．０）を基質として加え、４５℃において反応させ、生成したｐ−ニトロ
フェノール量を求め、酵素活性を測定した。結果を図８に示す。図８から明らかなように
、最適ｐＨは５．０であった。
【手続補正２５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５３】
Ｎ−アセチルグルコサミニダーゼ：ｐＨ２．０〜ｐＨ７．０の各ｐＨの緩衝液で希釈し
た実施例２の精製酵素液に０．３４％のｐ−ニトロフェニル−Ｎ−アセチルグルコサミニ
ド溶液（ｐＨ５．０）を基質として加え、４５℃において反応させ、生成したｐ−ニトロ
フェノール量を求め酵素活性を測定した。結果を図１１に示す。図１１から明らかなよう
に、ｐＨは４．０〜６．０で安定性を保った。
【手続補正２６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５６】
Ｎ−アセチルグルコサミニダーゼ：実施例２の精製酵素液に０．３４％のｐ−ニトロフ
ェニル−Ｎ−アセチルグルコサミニド溶液（ｐＨ５．０）を基質として加え、２０〜７０
℃まで５〜１０℃毎に設定した恒温槽で反応させ、生成したｐ−ニトロフェノール量を求
め、酵素活性を測定した。結果を図１４に示す。図１４から明らかなように、最適温度は
５０℃附近であった。
【手続補正２７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５９】
Ｎ−アセチルグルコサミニダーゼ：２０〜７０℃まで５〜１０℃毎に設定した恒温槽に
、実施例２の精製酵素液を一定時間静置した後、実施例２の精製酵素液に０．３４％のｐ
−ニトロフェニル−Ｎ−アセチルグルコサミニド溶液（ｐＨ５．０）を基質として加えて
反応させ、生成したｐ−ニトロフェノール量を求め、酵素活性を測定した。結果を図１７
に示す。図１７から明らかなように、最適温度は５０℃附近であった。
【手続補正２８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６７】
本発明の新菌株トルコデルマ  ｓｐ．  ＴＶ１、新菌株により得られる酵素とその製法
、その酵素を用いた機能性糖類の製法、その糖類を含む機能性保健食品は、その機能の選
択により、機能性健康補助食品分野、医薬品分野、農業分野等に広く利用可能である。
【手続補正２９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６８】
【図１】本発明のトリコデルマ  ｓｐ．  ＴＶ１の生産するキチナーゼ、Ｎ−アセチルグルコサミニダーゼ、及びβ−１，３−グルカナーゼによるシイタケ子実体の分解結果を示す写真である。
【図２】本発明のトリコデルマ  ｓｐ．  ＴＶ１の生産するキチナーゼ、β−１，３−グルカナーゼをＤＥＡＥ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ  ＣＬ−６Ｂで分画した結果を示すグラフである。
【図３】本発明のトリコデルマ  ｓｐ．  ＴＶ１の生産するＮ−アセチルグルコサミニダーゼをＤＥＡＥ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ  ＣＬ−６Ｂで分画した結果を示すグラフである。
【図４】本発明のトリコデルマ  ｓｐ．  ＴＶ１の生産するキチナーゼの最適基質の測定結果を示すグラフである。
【図５】本発明のトリコデルマ  ｓｐ．  ＴＶ１の生産するＮ−アセチルグルコサミニダーゼの最適基質の測定結果を示す説明図である。
【図６】本発明のトリコデルマ  ｓｐ．  ＴＶ１の生産するβ−１，３−グルカナーゼの最適基質の測定結果を示すグラフである。
【図７】本発明のトリコデルマ  ｓｐ．  ＴＶ１の生産するキチナーゼの最適ｐＨの測定結果を示すグラフである。
【図８】本発明のトリコデルマ  ｓｐ．  ＴＶ１の生産するＮ−アセチルグルコサミニダーゼの最適ｐＨの測定結果を示すグラフである。
【図９】本発明のトリコデルマ  ｓｐ．  ＴＶ１の生産するβ−１，３−グルカナーゼの最適ｐＨの測定結果を示すグラフである。
【図１０】本発明のトリコデルマ  ｓｐ．  ＴＶ１の生産するキチナーゼの最適ｐＨ安定性の測定結果を示すグラフである。
【図１１】本発明のトリコデルマ  ｓｐ．  ＴＶ１の生産するＮ−アセチルグルコサミニダーゼの最適ｐＨ安定性の測定結果を示すグラフである。
【図１２】本発明のトリコデルマ  ｓｐ．  ＴＶ１の生産するβ−１，３−グルカナーゼの最適ｐＨ安定性の測定結果を示すグラフである。
【図１３】本発明のトリコデルマ  ｓｐ．  ＴＶ１の生産するキチナーゼの最適温度の測定結果を示すグラフである。
【図１４】本発明のトリコデルマ  ｓｐ．  ＴＶ１の生産するＮ−アセチルグルコサミニダーゼの最適温度の測定結果を示すグラフである。
【図１５】本発明のトリコデルマ  ｓｐ．  ＴＶ１の生産するβ−１，３−グルカナーゼの最適温度の測定結果を示すグラフである。
【図１６】本発明のトリコデルマ  ｓｐ．  ＴＶ１の生産するキチナーゼの温度安定性の測定結果を示すグラフである。
【図１７】本発明のトリコデルマ  ｓｐ．  ＴＶ１の生産するＮ−アセチルグルコサミニダーゼの温度安定性の測定結果を示すグラフである。
【図１８】本発明のトリコデルマ  ｓｐ．  ＴＶ１の生産するβ−１，３−グルカナーゼの温度安定性の測定結果を示すグラフである。
【図１９】本発明のトリコデルマ  ｓｐ．  ＴＶ１の生産するキチナーゼによる部分的脱アセチル化キチン分解産物の薄層クロマトグラフ法で分画した結果を示す説明図である。
【図２０】本発明のトリコデルマ  ｓｐ．  ＴＶ１の生産するβ−１，３−グルカナーゼによるラミナランの分解産物の薄層クロマトグラフ法で分画した結果を示す説明図である。
【図２１】本発明のトリコデルマ  ｓｐ．  ＴＶ１の生産する酵素製剤（原粉末）の溶液によるシイタケ子実体粉末の酵素無処理区分の分解結果を示す写真である。
【図２２】本発明のトリコデルマ  ｓｐ．  ＴＶ１の生産する酵素製剤（原粉末）の溶液によるシイタケ子実体粉末の酵素処理区分の分解結果を示す写真である。
【図２３】本発明のトリコデルマ  ｓｐ．  ＴＶ１の生産する酵素製剤（原粉末）の溶液によるビール酵母細胞壁の酵素無処理区分の分解結果を示す写真である。
【図２４】本発明のトリコデルマ  ｓｐ．  ＴＶ１の生産する酵素製剤（原粉末）の溶液によるビール酵母細胞壁の酵素処理区分の分解結果を示す写真である。
【図２５】本発明のトリコデルマ  ｓｐ．  ＴＶ１の生産する酵素製剤（原粉末）の溶液によるシイタケシイタケ子実体粉末及びビール酵母細胞壁の酵素処理区分によるアミノ酸類の増加を示す説明図である。