【手続補正書】
【提出日】令和3年9月24日(2021.9.24)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象におけるＴＴＲと関連付けられるアミロイドーシス（ＡＴＴＲ）の治療において使用するための組成物であって、
前記組成物が、（ｉ）ＲＮＡガイドＤＮＡ結合剤またはＲＮＡガイドＤＮＡ結合剤をコードする核酸および（ｉｉ）ガイドＲＮＡを含み、前記ガイドＲＮＡが、
ａ．配列番号：５〜８２から選択されるガイド配列；
ｂ．配列番号：５〜８２から選択される配列の少なくとも１７、１８、１９、もしくは２０の連続するヌクレオチド；または
ｃ．配列番号：５〜８２から選択される配列と少なくとも９０％同一のガイド配列
を含む、
前記組成物。
【請求項２】
ＴＴＲ遺伝子内の二本鎖切断（ＤＳＢ）を誘導するまたはＴＴＲ遺伝子を改変する方法であって、組成物を細胞に送達することを含み、前記組成物が、
ａ．配列番号：５〜８２から選択されるガイド配列を含むガイドＲＮＡ；
ｂ．配列番号：５〜８２から選択される配列の少なくとも１７、１８、１９、もしくは２０の連続するヌクレオチドを含むガイドＲＮＡ；または
ｃ．配列番号：５〜８２から選択される配列と少なくとも９０％同一のガイド配列を含むガイドＲＮＡ
を含む、
前記方法。
【請求項３】
対象におけるＴＴＲの血清濃度の低減において使用するための組成物であって、
前記組成物が、（ｉ）ＲＮＡガイドＤＮＡ結合剤またはＲＮＡガイドＤＮＡ結合剤をコードする核酸および（ｉｉ）ガイドＲＮＡを含み、前記ガイドＲＮＡが、
ａ．配列番号：５〜８２から選択されるガイド配列；
ｂ．配列番号：５〜８２から選択される配列の少なくとも１７、１８、１９、もしくは２０の連続するヌクレオチド；または
ｃ．配列番号：５〜８２から選択される配列と少なくとも９０％同一のガイド配列
を含む、
前記組成物。
【請求項４】
対象の肝臓におけるＴＴＲを含むアミロイドまたはアミロイド原線維の蓄積の低減または予防において使用するための組成物であって、
前記組成物が、（ｉ）ＲＮＡガイドＤＮＡ結合剤またはＲＮＡガイドＤＮＡ結合剤をコードする核酸および（ｉｉ）ガイドＲＮＡを含み、前記ガイドＲＮＡが、
ａ．配列番号：５〜８２から選択されるガイド配列；
ｂ．配列番号：５〜８２から選択される配列の少なくとも１７、１８、１９、もしくは２０の連続するヌクレオチド；または
ｃ．配列番号：５〜８２から選択される配列と少なくとも９０％同一のガイド配列
を含む、
前記組成物。
【請求項５】
ガイドＲＮＡまたは前記ガイドＲＮＡをコードするベクターを含む組成物であって、前記ガイドＲＮＡが、
ａ．配列番号：５〜８２から選択されるガイド配列；
ｂ．配列番号：５〜８２から選択される配列の少なくとも１７、１８、１９、もしくは２０の連続するヌクレオチド；または
ｃ．配列番号：５〜８２から選択される配列と少なくとも９０％同一のガイド配列
を含む、
前記組成物。
【請求項６】
細胞または対象におけるＴＴＲ遺伝子内の二本鎖切断（ＤＳＢ）の誘導；
細胞または対象におけるＴＴＲ遺伝子の改変；
対象におけるＴＴＲと関連付けられるアミロイドーシス（ＡＴＴＲ）の治療；
対象におけるＴＴＲの血清濃度の低減；および
対象におけるアミロイドまたはアミロイド原線維の蓄積の低減または予防
のうちの少なくとも１つにおいて使用するための、請求項５に記載の組成物。
【請求項７】
前記組成物が血清ＴＴＲレベルを低減させるか、場合により、前記血清ＴＴＲレベルが少なくとも５０％低減される、請求項１〜４および６のいずれか１項に記載の方法または使用のための組成物。
【請求項８】
前記組成物がＴＴＲ遺伝子の編集を結果としてもたらすか、場合により、前記編集が、編集される集団のパーセンテージ（編集パーセント）として算出されるか、場合により、前記編集パーセントが前記集団の３０〜９９％である、請求項１〜４および７のいずれか１項に記載の方法または使用のための組成物。
【請求項９】
前記組成物が少なくとも１つの組織においてアミロイド沈着を低減させる、請求項１〜４、７及び８のいずれか１項に記載の方法または使用のための組成物。
【請求項１０】
前記ガイド配列が配列番号：５〜８２から選択される、請求項１〜９のいずれか１項に記載の方法または組成物。
【請求項１１】
第２のガイド配列をさらに含み、第１のガイド配列がＴＴＲ遺伝子の正鎖中の第１の標的配列に相補的であり、かつ、第２のガイド配列が、ＴＴＲ遺伝子の負鎖中の第２の標的配列に相補的である、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法または組成物。
【請求項１２】
前記ガイドＲＮＡが、前記ガイド配列を含みかつ配列番号：１２６のヌクレオチド配列をさらに含むｃｒＲＮＡを含み、配列番号：１２６の前記ヌクレオチドが前記ガイド配列にその３’末端において後続する、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の方法または組成物。
【請求項１３】
前記ガイドＲＮＡがデュアルガイド（ｄｇＲＮＡ）である、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の方法または組成物。
【請求項１４】
前記デュアルガイドＲＮＡが、ｃｒＲＮＡおよびｔｒＲＮＡを含み、前記ｃｒＲＮＡが、配列番号：１２６のヌクレオチド配列を含み、配列番号：１２６の前記ヌクレオチドが前記ガイド配列にその３’末端において後続する、請求項１３に記載の方法または組成物。
【請求項１５】
前記ガイドＲＮＡがシングルガイド（ｓｇＲＮＡ）である、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の方法または組成物。
【請求項１６】
前記ｓｇＲＮＡが、前記ガイド配列の３’末端に続く配列番号：１２５の前記ヌクレオチドを含む、請求項１５に記載の方法または組成物。
【請求項１７】
前記ｓｇＲＮＡが、５’末端修飾および３’末端修飾を含む、請求項１５または１６に記載の方法または組成物。
【請求項１８】
前記ｓｇＲＮＡが、配列番号：３のパターンを含む、場合により、配列番号：３における各Ｎが任意の天然または非天然ヌクレオチドであり、前記Ｎが前記ガイド配列を形成し、かつ、前記ガイド配列がＣａｓ９をＴＴＲ遺伝子に標的化する、請求項１５〜１７のいずれか１項に記載の方法または組成物。
【請求項１９】
前記ｓｇＲＮＡが、配列番号：８７〜１２４から選択される配列または配列番号：８７〜１２４から選択される配列と少なくとも９０％同一のガイド配列を含む、請求項１５〜１８のいずれか１項に記載の方法または組成物。
【請求項２０】
前記ガイドＲＮＡが少なくとも１つの修飾を含む、場合により、前記少なくとも１つの修飾が、
ａ．２’−Ｏ−メチル（２’−Ｏ−Ｍｅ）修飾ヌクレオチド；
ｂ．ヌクレオチド間のホスホロチオエート（ＰＳ）結合；
ｃ．２’−フルオロ（２’−Ｆ）修飾ヌクレオチド；
ｄ．５’末端における最初の５つのヌクレオチドの１つまたは複数における修飾；
ｅ．３’末端における最後の５つのヌクレオチドの１つまたは複数における修飾；
ｆ．最初の４つのヌクレオチドの間のＰＳ結合；
ｇ．最後の４つのヌクレオチドの間のＰＳ結合；
ｈ．５’末端における最初の３つのヌクレオチドにおける２’−Ｏ−Ｍｅ修飾ヌクレオチド；および／または
ｉ．３’末端における最後の３つのヌクレオチドにおける２’−Ｏ−Ｍｅ修飾ヌクレオチド
から選択される、
請求項１〜１９のいずれか１項に記載の方法または組成物。
【請求項２１】
前記ガイドＲＮＡが配列番号：３の修飾ヌクレオチドを含む、請求項２０のいずれか１項に記載の方法または組成物。
【請求項２２】
前記ガイドＲＮＡが脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）と会合している、場合により、前記ＬＮＰが、
ａ．ＣＣＤ脂質、場合により、リピドＡ；
ｂ．中性脂質、場合により、ＤＳＰＣ；
ｃ．ヘルパー脂質、場合により、コレステロール；および
ｄ．ステルス脂質、場合により、ＰＥＧ２ｋ−ＤＭＧ
から選択される少なくとも１つを含む、
請求項１〜２１のいずれか１項に記載の方法または組成物。
【請求項２３】
前記組成物がＲＮＡガイドＤＮＡ結合剤またはＲＮＡガイドＤＮＡ結合剤をコードするｍＲＮＡをさらに含む、請求項１〜２２のいずれか１項に記載の方法または組成物。
【請求項２４】
前記ＲＮＡガイドＤＮＡ結合剤がＣａｓクリベースである、場合により、前記Ｃａｓクリベースが、Ｃａｓ９クリベース；修飾されているＲＮＡガイドＤＮＡ結合剤；またはニッカーゼである、請求項２３に記載の方法または組成物。
【請求項２５】
前記組成物が医薬配合物であり、かつ薬学的に許容される担体または賦形剤をさらに含む、請求項１〜２５のいずれか１項に記載の方法または組成物。
【請求項２６】
前記組成物が、ＴＴＲを含むアミロイドまたはアミロイド原線維を低減させまたは予防する、場合により、前記アミロイドまたはアミロイド原線維が、神経、心臓、または胃腸管（ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  ｔｒａｃｋ）にある、請求項１〜４および６〜２５のいずれか１項に記載の方法または使用のための組成物。
【請求項２７】
非相同末端結合（ＮＨＥＪ）が、ＴＴＲ遺伝子における前記ＤＳＢの修復の間に突然変異をもたらす、場合により、ＮＨＥＪが、ＴＴＲ遺伝子におけるＤＳＢの修復の間にヌクレオチドの欠失または挿入をもたらす、場合により、ヌクレオチドの前記欠失または挿入が、ＴＴＲ遺伝子におけるフレームシフトまたはナンセンス突然変異を誘導する、請求項１〜４および６〜２６のいずれか１項に記載の方法または使用のための組成物。
【請求項２８】
前記ガイドＲＮＡの配列が、
ａ）配列番号：９２もしくは１０４；
ｂ）配列番号：８７、８９、９６、もしくは１１３；
ｃ）配列番号：１００、１０２、１０６、１１１、もしくは１１２；または
ｄ）配列番号：８８、９０、９１、９３、９４、９５、９７、１０１、１０３、１０８、もしくは１０９
であり、任意選択的に、前記ガイドＲＮＡが、初代ヒト肝細胞のゲノムにおけるタンパク質コーディング領域において起こるオフターゲット部位においてインデルを生成しない、請求項１〜１０及び１５〜２７のいずれか１項に記載の方法または組成物。
【請求項２９】
前記組成物が、前記対象においてＴＴＲのレベルを低減させる、場合により、ＴＴＲの前記レベルが少なくとも５０％低減される、請求項１、３、４および６〜２８のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項３０】
前記対象がヒトである、請求項１、３、４および６〜２９のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項３１】
前記対象が遺伝性ＡＴＴＲを有する、場合により、前記対象がＡＴＴＲｗｔまたは遺伝性ＡＴＴＲを有する；
前記対象がＡＴＴＲの家族歴を有する；
前記対象が家族性アミロイド多発ニューロパチーを有する；
前記対象が、ＡＴＴＲの神経症状のみを有するか、または主にＡＴＴＲの神経症状を有する；
前記対象が家族性アミロイド心筋症を有する；および／または
前記対象が、ＡＴＴＲの心臓症状のみを有するか、または主にＡＴＴＲの心臓症状を有する、
請求項１、３、４および６〜３０のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項３２】
前記対象が、Ｖ３０突然変異を有するＴＴＲを発現する、場合により、前記Ｖ３０突然変異が、Ｖ３０Ａ、Ｖ３０Ｇ、Ｖ３０Ｌ、またはＶ３０Ｍである；
前記前記対象が、Ｔ６０突然変異を有するＴＴＲを発現する、場合により、前記Ｔ６０突然変異がＴ６０Ａである；
前記対象が、Ｖ１２２突然変異を有するＴＴＲを発現する、場合により、前記Ｖ１２２突然変異が、Ｖ１２２Ａ、Ｖ１２２Ｉ、またはＶ１２２（−）である；
前記対象が野生型ＴＴＲを発現する；
前記対象が、Ｖ３０、Ｔ６０、またはＶ１２２突然変異を有するＴＴＲを発現しない、場合により、前記対象が野生型ＴＴＲについてホモ接合である；および／または
前記対象が、病理学的突然変異を有するＴＴＲを発現しない、
請求項１、３、４および６〜３１のいずれか１項に記載の方法または使用のための組成物。
【請求項３３】
前記組成物または医薬配合物がウイルスベクターを介して送達または投与される、請求項１〜４および６〜３２のいずれか１項に記載の方法または使用のための組成物。
【請求項３４】
前記組成物または医薬配合物が脂質ナノ粒子を介して送達または投与される、請求項１〜４および６〜３２のいずれか１項に記載の方法または使用のための組成物。
【請求項３５】
前記細胞が、肝細胞である、場合により、ヘパトサイト（Hepatocyte）である、請求項１〜４および６〜３４のいずれか１項に記載の方法または使用のための組成物。