【手続補正書】
【提出日】令和2年12月28日(2020.12.28)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
胃腸（ＧＩ）バリア状態を、患者の腸管壁漏洩症候群の指標とする方法であって、
（ａ）前記ＧＩバリアの状況を決定するために、前記患者によって提供された前記ＧＩバリアの試料を分析することと、
（ｂ）前記患者のＧＩバリア状況を正常または異常と分類することと
を含み、異常なＧＩバリア状況が、前記患者が腸管壁漏洩症候群を有していることを示す、方法。
【請求項２】
前記患者が、メタボリック症候群、がん／新生物、特発性炎症状態、神経障害および代謝性骨疾患からなる群より選択される疾患を有しているか、または発症する可能性が高い、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記患者の前記ＧＩバリアの状況が、前記患者の腸管バリアの腸管上皮細胞における活性化されたカスパーゼの量を測定することによって分析される、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
活性化されたカスパーゼが、前記患者のＧＩバリアの細胞を、カスパーゼ−１特異的抗体で、またはカスパーゼ−１阻害剤を含むプローブで染色することによって測定される、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記活性化されたカスパーゼが、活性化されたカスパーゼ１、活性化されたカスパーゼ３、または活性化されたカスパーゼ１および活性化されたカスパーゼ３の組み合わせである、請求項３に記載の方法。
【請求項６】
１名または複数の健康な被験体の腸管バリアの腸管上皮細胞における活性化されたカスパーゼの量との比較での、前記患者における活性化されたカスパーゼの量の約２〜４倍の増加が、前記患者のＧＩバリア状況が異常であることを示す、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記活性化されたカスパーゼが、活性化されたカスパーゼ１の発現の量の活性化されたカスパーゼ３の発現の量に対する比として表される、請求項３に記載の方法。
【請求項８】
１．５：１より大きい、活性化されたカスパーゼ１の活性化されたカスパーゼ３に対する比が、前記患者のＧＩバリア状況が異常であることを示す、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記患者の前記ＧＩバリアの状況が、腸管バリアでの腸管表面の組織学的染色により視覚化されたギャップの数を数えることによって分析される、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
１名または複数の健康な被験体の腸管バリアでの腸管表面におけるギャップの数との比較での、前記患者におけるギャップの数の約２〜４倍の増加が、前記患者のＧＩバリア状況が異常であることを示す、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記ＧＩバリアの状況が、前記ＧＩバリアの共焦点レーザー内視鏡法または多光子共焦点顕微鏡法を使用して分析される、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
前記ＧＩバリアが、頬粘膜バリア、中咽頭バリアおよび腸管バリアからなる群より選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
前記腸管壁漏洩症候群が結腸直腸新生物である、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
患者の腸管壁漏洩症候群を検出または同定する方法において使用するための、カスパーゼ−１特異的抗体を含む組成物であって、前記方法が、
ａ．前記患者の胃腸（ＧＩ）細胞を、前記組成物で染色することと、
ｂ．前記患者の染色された前記ＧＩ細胞を、前記患者のＧＩバリア細胞に付随する正常より高いレベルのカスパーゼ−１の証拠としての、健康な個体由来の同様に染色されたＧＩ細胞と比べ上昇したレベルの結合した抗体の存在について検査することと
を含み、
上昇したレベルのカスパーゼ−１により、前記患者が腸管壁漏洩症候群を有していると同定される、組成物。
【請求項１５】
前記ＧＩバリアが、頬粘膜バリア、中咽頭バリアおよび腸管バリアからなる群より選択される、請求項１４に記載の組成物。
【請求項１６】
前記染色することが、（ｉ）患者の腸管上皮細胞を前記患者から生検または吸引によって得るステップと、（ｉｉ）前記細胞をｉｎ  ｖｉｔｒｏで染色するステップとを含む、請求項１４に記載の組成物。
【請求項１７】
前記方法が、前記ＧＩバリア細胞を、カスパーゼ−３特異的抗体で染色することをさらに含む、請求項１４に記載の組成物。
【請求項１８】
前記検査することが、前記細胞に結合した抗体の指標として蛍光マーカーを検出することを含み、前記検査することが、蛍光顕微鏡法、多光子顕微鏡法、共焦点レーザー内視鏡法、蛍光フローサイトメトリーにより、または蛍光プレートリーダーを使用することにより実施される、請求項１４に記載の組成物。
【請求項１９】
前記染色することが、前記組成物を前記患者の腸管内の腸管上皮細胞に適用することを含み、前記検査することが、染色された細胞を内視鏡的に視覚化することを含むことを特徴とする、請求項１４に記載の組成物。
【請求項２０】
検出可能な蛍光マーカーが量子ドットである、請求項１７に記載の組成物。
【請求項２１】
前記量子ドットが、６２５ｎｍ、または５２５ｎｍ〜８００ｎｍの範囲、または６０５ｎｍおよび６１２ｎｍの発光スペクトルを有する、請求項２０に記載の組成物。
【請求項２２】
前記方法が、死細胞または死につつある細胞を同定するステップをさらに含む、請求項１４に記載の組成物。
【請求項２３】
死細胞または死につつある細胞が、ＴＵＮＥＬアッセイを使用して同定される、請求項２２に記載の組成物。
【請求項２４】
１名または複数の健康な被験体のＧＩバリアのＧＩバリア細胞におけるカスパーゼ−１の量との比較での、前記患者におけるカスパーゼ−１の量の約２〜４倍の増加が、前記患者が腸管壁漏洩症候群を有していることを示す、請求項１４に記載の組成物。
【請求項２５】
前記患者がヒトである、請求項１４に記載の組成物。
【請求項２６】
前記腸管壁漏洩症候群が結腸直腸新生物である、請求項１４に記載の組成物。
【請求項２７】
前記患者が、メタボリック症候群、がん／新生物、特発性炎症状態、神経障害および代謝性骨疾患からなる群より選択される疾患を有しているか、または発症する可能性が高い、請求項１４に記載の組成物。
【請求項２８】
患者の腸管壁漏洩症候群を検出または同定する方法において使用するための、カスパーゼ−１阻害剤を含む組成物であって、前記方法が、
ａ．前記患者の胃腸（ＧＩ）細胞を、前記組成物で染色することと、
ｂ．前記患者の染色された前記ＧＩ細胞を、前記患者のＧＩバリア細胞に付随する正常より高いレベルのカスパーゼ−１の証拠としての、健康な個体由来の同様に染色されたＧＩ細胞と比べ上昇したレベルの結合した検出可能な抗体の存在について検査することと
を含み、
上昇したレベルのカスパーゼ−１により、前記患者が腸管壁漏洩症候群を有していると同定される、組成物。
【請求項２９】
前記カスパーゼ−１特異的抗体が、検出可能なマーカーにコンジュゲートされる、請求項１４に記載の組成物。
【請求項３０】
前記カスパーゼ−１阻害剤が、検出可能なマーカーにコンジュゲートされる、請求項２８に記載の組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２０６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２０６】
上記の本発明の実施形態は、単なる例示を意図しており、多くの変形および変更は、当業者には明白であろう。そのようなすべての変形および変更は、あらゆる添付の特許請求の範囲に定義されている本発明の範囲内にあることを意図している。
特定の実施形態では、例えば以下の項目が提供される。
（項目１）
患者の腸管壁漏洩症候群を検出または同定するための方法であって、
（ａ）前記患者の胃腸（ＧＩ）バリアの試料を提供することと、
（ｂ）前記ＧＩバリアの状況を決定するために前記試料を分析することと、
（ｃ）前記患者のＧＩバリア状況を正常または異常と分類することと
を含み、異常なＧＩバリア状況により、前記患者が腸管壁漏洩症候群を有していると同定される、方法。
（項目２）
前記患者が、メタボリック症候群、がん／新生物、特発性炎症状態、神経障害および代謝性骨疾患からなる群より選択される疾患を有しているか、または発症する可能性が高い、項目１に記載の方法。
（項目３）
前記患者の前記ＧＩバリアの状況が、前記患者の腸管バリアの腸管上皮細胞における活性化されたカスパーゼの量を測定することによって分析される、項目１に記載の方法。
（項目４）
活性化されたカスパーゼが、前記患者のＧＩバリアの細胞を、カスパーゼ−１特異的抗体にコンジュゲートされた検出可能なマーカーで、またはカスパーゼ−１阻害剤にコンジュゲートされた検出可能なマーカーを含むプローブで染色することによって測定される、項目３に記載の方法。
（項目５）
前記活性化されたカスパーゼが、活性化されたカスパーゼ１、活性化されたカスパーゼ３、または活性化されたカスパーゼ１および活性化されたカスパーゼ３の組み合わせである、項目３に記載の方法。
（項目６）
１名または複数の健康な被験体の腸管バリアの腸管上皮細胞における活性化されたカスパーゼの量との比較での、前記患者における活性化されたカスパーゼの量の約２〜４倍の増加が、前記患者のＧＩバリア状況が異常であることを示す、項目５に記載の方法。
（項目７）
前記活性化されたカスパーゼが、活性化されたカスパーゼ１の発現の量の活性化されたカスパーゼ３の発現の量に対する比として表される、項目３に記載の方法。
（項目８）
１．５：１より大きい、活性化されたカスパーゼ１の活性化されたカスパーゼ３に対する比が、前記患者のＧＩバリア状況が異常であることを示す、項目７に記載の方法。
（項目９）
前記患者の前記ＧＩバリアの状況が、腸管バリアでの腸管表面の組織学的染色により視覚化されたギャップの数を数えることによって分析される、項目１に記載の方法。
（項目１０）
１名または複数の健康な被験体の腸管バリアでの腸管表面におけるギャップの数との比較での、前記患者におけるギャップの数の約２〜４倍の増加が、前記患者のＧＩバリア状況が異常であることを示す、項目９に記載の方法。
（項目１１）
前記ＧＩバリアの状況が、前記ＧＩバリアの共焦点レーザー内視鏡法または多光子共焦点顕微鏡法を使用して分析される、項目１に記載の方法。
（項目１２）
前記ＧＩバリアが、頬粘膜バリア、中咽頭バリアおよび腸管バリアからなる群より選択される、項目１に記載の方法。
（項目１３）
前記腸管壁漏洩症候群が結腸直腸新生物である、項目１に記載の方法。
（項目１４）
患者の腸管壁漏洩症候群を検出または同定するための方法であって、
ａ．前記患者の胃腸（ＧＩ）細胞を、カスパーゼ−１特異的抗体にコンジュゲートされた検出可能なマーカーで染色することと、
ｂ．前記患者の染色された前記ＧＩ細胞を、前記患者のＧＩバリア細胞に付随する正常より高いレベルのカスパーゼ−１の証拠としての、健康な個体由来の同様に染色されたＧＩ細胞と比べ上昇したレベルの結合した検出可能な抗体の存在について検査することと
を含み、
上昇したレベルのカスパーゼ−１により、前記患者が腸管壁漏洩症候群を有していると同定される、方法。
（項目１５）
前記ＧＩバリアが、頬粘膜バリア、中咽頭バリアおよび腸管バリアからなる群より選択される、項目１４に記載の方法。
（項目１６）
前記染色することが、（ｉ）患者の腸管上皮細胞を前記患者から生検または吸引によって得るステップと、（ｉｉ）前記細胞をｉｎ  ｖｉｔｒｏで染色するステップとを含む、項目１４に記載の方法。
（項目１７）
前記ＧＩバリア細胞を、カスパーゼ−３特異的抗体にコンジュゲートされた検出可能なマーカーで染色することをさらに含む、項目１４に記載の方法。
（項目１８）
前記検出可能なマーカーが蛍光性であり、前記検査することが、蛍光顕微鏡法、多光子顕微鏡法、共焦点レーザー内視鏡法、蛍光フローサイトメトリーにより、または蛍光プレートリーダーを使用することにより実施される、項目１７に記載の方法。
（項目１９）
染色することが、カスパーゼ−１抗体にコンジュゲートされた検出可能なマーカーを前記患者の腸管内の腸管上皮細胞に適用することを含み、検査することが、染色された細胞を内視鏡的に視覚化することを含む、項目１に記載の方法。
（項目２０）
検出可能なマーカーが量子ドットである、項目１に記載の方法。
（項目２１）
前記量子ドットが、６２５ｎｍ、または５２５ｎｍ〜８００ｎｍの範囲、または６０５ｎｍおよび６１２ｎｍの発光スペクトルを有する、項目２０に記載の方法。
（項目２２）
死細胞または死につつある細胞を同定するステップをさらに含む、項目１４に記載の方法。
（項目２３）
死細胞または死につつある細胞が、ＴＵＮＥＬアッセイを使用して同定される、項目２２に記載の方法。
（項目２４）
１名または複数の健康な被験体のＧＩバリアのＧＩバリア細胞におけるカスパーゼ−１の量との比較での、前記患者におけるカスパーゼ−１の量の約２〜４倍の増加が、前記患者が腸管壁漏洩症候群を有していることを示す、項目１に記載の方法。
（項目２５）
前記患者がヒトである、項目１に記載の方法。
（項目２６）
前記腸管壁漏洩症候群が結腸直腸新生物である、項目１４に記載の方法。
（項目２７）
前記患者が、メタボリック症候群、がん／新生物、特発性炎症状態、神経障害および代謝性骨疾患からなる群より選択される疾患を有しているか、または発症する可能性が高い、項目１４に記載の方法。
（項目２８）
患者の腸管壁漏洩症候群を検出または同定するための方法であって、
ａ．前記患者の胃腸（ＧＩ）細胞を、カスパーゼ−１阻害剤にコンジュゲートされた検出可能なマーカーで染色することと、
ｂ．前記患者の染色された前記ＧＩ細胞を、前記患者のＧＩバリア細胞に付随する正常より高いレベルのカスパーゼ−１の証拠としての、健康な個体由来の同様に染色されたＧＩ細胞と比べ上昇したレベルの結合した検出可能な抗体の存在について検査することと
を含み、
上昇したレベルのカスパーゼ−１により、前記患者が腸管壁漏洩症候群を有していると同定される、方法。