【誤訳訂正書】
【提出日】令和3年1月18日(2021.1.18)
【誤訳訂正１】
【訂正対象書類名】特許請求の範囲
【訂正対象項目名】全文
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
患者内の目的の心臓バイオマーカーをインピーダンス測定で検出するためのポータブルｅｘ−ｓｉｔｕシステムであって、
表面を有する導電性物質界面であって、エポキシ基板と、前記エポキシ基板内にキャスティングされた垂直配向のプラチナワイヤのマルチアレイとを含む導電性物質界面と、
前記導電性物質界面の表面に付着した生物学的センサ物質であって、固定化物質と、前記固定化物質と相互作用するように選択されるとともに目的の心臓バイオマーカーと結合するように選択された少なくとも１のアプタマーとを含む生物学的センサ物質と、
アプタマーと目的の心臓バイオマーカーとの結合によって生成された電気化学的インピーダンス信号を含むシグナル媒介因子と、
アプタマーと接触する、患者から採取した体液サンプルとを備え、
前記電気化学的インピーダンスの変化が、体液サンプル中に目的の心臓バイオマーカーが存在することを示し、
前記電気化学的インピーダンスの変化がないことが、体液サンプル中に目的の心臓バイオマーカーが存在しないことを示していることを特徴とするシステム。
【請求項２】
請求項１に記載のシステムにおいて、
前記体液サンプルが血液サンプルであることを特徴とするシステム。
【請求項３】
請求項１に記載のシステムにおいて、
前記心臓バイオマーカーが、Ｃ反応性タンパク質、クレアチニンキナーゼ、トロポニンＴ、ミオグロビン、ＩＬ−６、ＩＬ−１８、脳性ナトリウム利尿ペプチドおよびＤダイマーのなかから選択されることを特徴とするシステム。
【請求項４】
請求項１に記載のシステムにおいて、
前記アプタマーがビオチンとコンジュゲートされることを特徴とするシステム。
【請求項５】
請求項１に記載のシステムにおいて、
前記固定化物質が、アビジン、ストレプトアビジン、ニュートラアビジンおよびそれらの混合物からなる群のなかから選択されることを特徴とするシステム。
【請求項６】
請求項１に記載のシステムにおいて、
前記固定化物質が処理物質に加えられ、当該処理物質が、前記垂直配向のプラチナワイヤのマルチアレイを含む導電性物質界面の表面に付着していることを特徴とするシステム。
【請求項７】
請求項１に記載のシステムにおいて、
前記アプタマーが、体液サンプル中の複数の心臓バイオマーカーをインピーダンス測定で同時に検出するのに有効であることを特徴とするシステム。
【請求項８】
請求項１に記載のシステムにおいて、
前記垂直配向のプラチナワイヤのマルチアレイが、円形状に配列されていることを特徴とするシステム。
【請求項９】
患者の体液サンプル中の心臓バイオマーカーを検出する方法であって、
検出デバイスを形成するステップであって、
エポキシ基板を提供することを含む、表面を有する導電性物質界面を形成すること、
垂直に配向されたプラチナワイヤのマルチアレイを得ること、並びに、
前記エポキシ基板内に前記垂直に配向されたプラチナワイヤのマルチアレイをキャスティングすることを含むステップと、
導電性物質界面の表面を研磨するステップと、
生物学的センサ物質を形成するステップであって、
前記導電性物質界面の表面に固定化物質を付着すること、
目的の心臓バイオマーカーと選択的に結合するアプタマーを選択すること、並びに、
アプタマーを固定化物質と相互作用させることを含むステップと、
アプタマーを患者から採取された体液サンプルと接触させるステップと、
アプタマーが目的の心臓バイオマーカーと結合する結果として電気化学的インピーダンス信号を生成するステップと、
電気化学的インピーダンスの変化の有無を評価するステップとを含み、
電気化学的インピーダンスの変化が有ることが、体液サンプル中に目的の心臓バイオマーカーが存在することを示し、
電気化学的インピーダンスの変化が無いことが、体液サンプル中に目的の心臓バイオマーカーが存在していないことを示していることを特徴とする方法。
【請求項１０】
請求項９に記載の方法において、
前記電気化学的インピーダンス信号が、読み出し値に変換されることを特徴とする方法。
【請求項１１】
請求項１０に記載の方法において、
前記電気化学的インピーダンス信号が、前記読み出し値を表示するのに有効なハンドヘルドデバイスのようなポータブルデバイスに接続されることを特徴とする方法。
【請求項１２】
請求項９に記載の方法において、
前記検出デバイスが試験ストリップの形態であり、前記方法が、
体液サンプルを前記試験ストリップに接触させるステップと、
前記試験ストリップに対する視覚的変化を評価するステップと、
前記視覚的変化を、前記試験ストリップに表示される結果を解釈するために使用されるチャートと相関させるステップと、
前記相関に基づいて、前記視覚的変化が、電気化学的インピーダンスの変化の存在および体液サンプル中の心臓バイオマーカーの存在を示しているか否かを判定するステップとを含むことを特徴とする方法。
【請求項１３】
請求項１２に記載の方法において、
前記視覚的変化が色彩の変化であることを特徴とする方法。
【請求項１４】
請求項９に記載の方法において、
約３２０グリット〜約２４００グリットの範囲のグリットサイズで研磨が行われることを特徴とする方法。
【誤訳訂正２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】発明の名称
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【発明の名称】心臓バイオマーカーのインピーダンス測定による検出のための垂直配向のプラチナワイヤ・アプタセンサアレイの作成およびパラメータ評価
【誤訳訂正３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０００２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０００２】
発明の属する技術分野
本発明は、生物学的サンプル中の心臓バイオマーカーのインピーダンス測定による検出、並びに、患者の心血管疾患リスクの評価を含む心血管疾患の診断および予後診断を行うためのマルチアレイ垂直配向プラチナワイヤ・アプタセンサ（aptasensors）に関する。より詳細には、本発明は、オンデマンドのポイントオブケアスクリーニング、分析および結果を提供するためのアプタセンサデバイスに関する。
【誤訳訂正４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１０】
一態様では、本発明は、患者内の目的の心臓バイオマーカーをインピーダンス測定で検出するためのポータブルｅｘ−ｓｉｔｕシステムを提供する。このシステムは、表面を有する導電性物質界面であって、エポキシ基板と、エポキシ基板内にキャスティングされた垂直配向のプラチナワイヤのマルチアレイとを含む導電性物質界面と、導電性物質界面の表面に付着された生物学的センサ物質とを備える。生物学的センサ物質は、固定化物質と、少なくとも１のアプタマーとを含み、少なくとも１のアプタマーが、固定化物質と相互作用するように選択されるとともに目的の心臓バイオマーカーと結合するように選択される。また、このシステムは、アプタマーと目的の心臓バイオマーカーとの結合によって生成された電気化学的インピーダンス信号から構成されるシグナル媒介因子と、患者から採取した体液サンプルも含み、体液サンプルがアプタマーと接触する。電気化学的インピーダンスの変化は、体液サンプル中に目的の心臓バイオマーカーが存在することを示し、電気化学的インピーダンスの変化がないことは、体液サンプル中に目的の心臓バイオマーカーが存在しないことを示している。
【誤訳訂正５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１３】
アプタマーは、ビオチンとコンジュゲートすることができる。固定化物質は、アビジン、ストレプトアビジン、ニュートラアビジンおよびそれらの混合物からなる群のなかから選択することができる。固定化物質は処理物質に加えることができ、処理物質は、垂直配向されたプラチナワイヤのマルチアレイを含む導電性物質界面の表面に付着させることができる。
【誤訳訂正６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１４】
垂直配向されたプラチナワイヤのマルチアレイは、基板の表面上で円形状に配列させることができる。
【誤訳訂正７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１６】
別の態様では、本発明は、患者の体液サンプル中の心臓バイオマーカーを検出する方法を含む。この方法は、患者から体液サンプルを採取するステップと；検出デバイスを形成するステップであって、表面を有する導電性物質界面を形成すること、エポキシ基板を提供すること、垂直に配向されたプラチナワイヤのマルチアレイを得ること、並びに、前記エポキシ基板内に前記垂直に配向されたプラチナワイヤのマルチアレイをキャスティングすることを含むステップと；導電性物質界面の表面を研磨するステップと；生物学的センサ物質を形成するステップであって、導電性物質界面の表面に固定化物質を付着すること、目的の心臓バイオマーカーと選択的に結合するアプタマーを選択すること、並びに、アプタマーを固定化物質と相互作用させることを含むステップと；アプタマーを体液サンプルと接触させるステップと；アプタマーが目的の心臓バイオマーカーと結合する結果として電気化学的インピーダンス信号を生成するステップと；電気化学的インピーダンスの変化の有無を評価するステップとを含む。電気化学的インピーダンスの変化が有ることは、体液サンプル中に目的の心臓バイオマーカーが存在することを示し、電気化学的インピーダンスの変化が無いことは、体液サンプル中に目的の心臓バイオマーカーが存在していないことを示している。
【誤訳訂正８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２１】
本発明は、例えば、アテローム性動脈硬化症および／または心臓組織の炎症および／または心筋梗塞および／または心臓機能不全の発症を知らせる、血液などの体液中に存在する少なくとも１の心臓バイオマーカーのインピーダンス測定による検出およびスクリーニング、または複数の心臓バイオマーカーのインピーダンス測定による同時検出およびスクリーニングのためのマルチアレイのインピーダンス測定による垂直配向プラチナ・アプタセンサに関する。より具体的には、本発明は、例えば定量的に、抗体のアプタセンサへの結合時に生じるインピーダンス変化を測定することにより、最小量の血液、例えば数滴の血液中に存在する心臓バイオマーカーの濃度を電気化学的に検出する電気化学的アッセイを含む。さらに、本発明は、対象とする標的分析物に特異的および選択的に結合するアプタセンサを合成し、合成したアプタセンサを利用して患者の筋細胞の負荷および損傷を検出および診断する方法を含む。
【誤訳訂正９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２７】
本発明のシステム（例えば、バイオセンサ）および方法は、少なくとも１の生物学的センサ物質および少なくとも１のシグナル媒介因子を含むことができ、１または複数の生物学的センサ物質および１または複数のシグナル媒介因子は協働して、血液などの体液中の目的の標的化合物を検出、シグナル媒介および／または定量する手段を提供する。生物学的センサ物質は、標的検体／バイオマーカー分子（のみ）と特異的かつ選択的に相互作用および結合する能力によって選択される。本発明によれば、生物学的センサ物質は、導電性物質界面の表面に付着される。生物学的センサ物質は、導電性物質界面の表面の機能化によって導入することができる。生物学的センサ物質は、導電性物質界面に直接的に付着させることができ、或いはそれに限定されるものではないないが、タンパク質などのリンカー分子を用いて間接的に付着させることができる。導電性物質は、エポキシ基板内にキャスティングされた垂直配向のプラチナワイヤのマルチアレイである。生物学的センサ物質はアプタマーの形態である。例えば、アプタマー結合タンパク質は、導電性物質界面の表面上に固定化することができる。アプタマーは、シグナル媒介因子、例えば、電気化学的インピーダンス信号にコンジュゲートすることができる。シグナル媒介因子は、予め選択された条件下で、例えば、目的の検体／バイオマーカーにアプタマーが結合した後に検出可能である。本発明によれば、シグナル媒介は、アプタマーが目的の検体／バイオマーカーと結合したときの、インピーダンスの変化に関連する。プラチナワイヤの一端は、電気化学的インピーダンス信号を解釈可能な読み出し値に変換するための接点を提供する。
【誤訳訂正１０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３０】
本発明に係るマルチアレイ・アプタセンサの合成には、適切なリンカーおよびタンパク質を使用して、心臓マーカーに特異的なアプタマーをプラチナワイヤの表面に固定化することが含まれる。プラチナワイヤのアレイ、例えば垂直に配向されたものは、例えば円形の形状またはパターンで、エポキシモールドに埋め込まれ、エポキシモールドの表面が、表面露出のために、例えば約５０ｎｍまで研磨される。その後、表面を、アミノチオールのようなチオールベースの化合物で処理することができ、そのような化合物には、システインおよび／またはグルタルアルデヒドが含まれるが、それらに限定されるものではない。その上には、アビジンなどの固定化物質が吸着される。１またはそれ以上のアプタマーは、ビオチンとコンジュゲートされる。上述した心臓マーカーのためのビオチン化アプタマーは、固定化物質と相互作用して、バイオセンシング面を形成する。処理物質および固定化物質の適用、並びに、ビオチン化アプタマーの相互作用は、バイオセンシング面を作り出すために、順次行うことができる。前述したように、アプタマーは、指定された抗原に対して高度に特異的なオリゴヌクレオチド配列であるという点で、抗体と類似している。しかしながら、抗体とは異なり、アプタマーは変性および再生することができる。すなわち、アプタセンサは特定の溶媒の存在下で再生することができ、よって（商業的に知られているグルコースセンサにおけるような）１回の検出ではなく、潜在的に連続的な使用のための再使用可能な再生式センサを提供することができる。したがって、アプタマーは、長期保存が可能でより強力であり、より重要なことには、１回限りの単回使用アッセイではなく、アプタマーを再使用可能にすることができる。
【誤訳訂正１１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３２】
本発明によれば、垂直に配向された修飾プラチナワイヤベースのアプタセンサが、心臓マーカーのインピーダンス測定による検出のために提供される。アプタセンサは、エポキシ内に直立プラチナワイヤをキャスティングすることによって合成される。ワイヤは、様々な構成およびパターンでキャスティングすることができる。特定の実施形態では、ワイヤは円形パターンでキャスティングされる。ワイヤの直径は変えることができ、約０．２５ｍｍ〜約１．０ｍｍの範囲とすることができる。特定の実施形態では、直径が約０．２５ｍｍ、約０．５ｍｍまたは約１．０ｍｍである。
【誤訳訂正１２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００４９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００４９】
本発明では、心臓マーカーＢＮＰおよびＴｎＴを検出するためのインピーダンス測定による垂直配向プラチナワイヤベースのアプタセンサを作成し、パラメータ（具体的には、ワイヤの直径および表面研磨）の評価を行った。様々な直径の直立したプラチナワイヤをエポキシ中にキャスティングして、一方の端部を機能化に利用し、他方の端部を電気的接続の確立に使用した。得られたプラチナ電極を種々の異なるグリットに研磨し、機能化してＢＮＰおよびＴｎＴに特異的なアプタマーをその表面に結合させ、ＢＮＰおよびＴｎＴの種々の臨床的に関連する濃度について試験し、バイオセンサおよび医療デバイス作成に理想的なパラメータ（ワイヤ直径および研磨グリット）を決定した。
【誤訳訂正１３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００５０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００５０】
１．実施例
３種類の表面研磨（５０μｍ、５μｍ、５０ｎｍ）および３種類のプラチナワイヤ直径（０．２５ｍｍ、０．５ｍｍ、１．０ｍｍ）を特徴付け、機能化した後、臨床的に関連する濃度のＢＮＰおよびＴｎＴについて試験し、精度や感度を損なうことなくＢＮＰとＴｎＴを検出するのにどのパラメータが最適であったのかを評価した。垂直に配向されたプラチナワイヤアレイの理想的なパラメータは、５μｍに研磨された直径０．５ｍｍのワイヤであることが分かった。すなわち、作成されたプラチナアプタセンサの実現可能性、およびアプタセンサに必要な理想的なパラメーターが実証された。
【誤訳訂正１４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００５２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００５２】
２．２．電極の準備
非導電性エポキシ樹脂ディスク（Ｂｕｅｈｌｅｒ社）に、垂直に配向したプラチナワイヤ（直径０．２５ｍｍ、直径０．５ｍｍ、直径１．０ｍｍ、金属基準で９９．９％、Ａｌｆａ  Ａｅｓａｒ社）を円形のパターンでキャスティングし、３２０グリットの炭化ケイ素紙（Ａｌｌｉｅｄ  Ｈｉｇｈ  Ｔｅｃｈ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ社）で５０μｍに、１２００グリッドで５μｍに、２４００グリッドで５０ｎｍにそれぞれ研磨した。電気化学的特性評価および機能化の前に、得られたディスクを脱イオン水、続いて９５％ＥｔＯＨ中でそれぞれ５分間、超音波処理した。
【誤訳訂正１５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００５６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００５６】
３．結果と考察
３．１  電極パラメータの特性評価
垂直に配向されたプラチナワイヤ電極の３枚のディスク−直径０．２５ｍｍ、直径０．５ｍｍ、直径１．０ｍｍのプラチナワイヤ電極−を用意し、各ディスクを５０μｍ、５μｍ、５０ｎｍのグリットまで研磨した。すなわち、合計９個のパラメータについて、特徴付け、機能化、抗原検出の試験を行った。９個の可能性のあるパラメータに対する裸のプラチナ電極の電気化学的特性評価は（図１に示すように）、直径の増加が（図１のａ−ｃに示すように）電極を通る電流通路を増加させ、よって（図１のｄ−ｆに示すように）電荷移動抵抗を減少させることを実証した。電極の直径が増加するに連れて、ピーク電流が集まる傾向があるが、これは研磨が電流通路に与える影響がより少ないことを証明している。しかしながら、５０μｍの研磨された電極は常に最も高いピーク電流を有するのに対して、５μｍは常に最も低いピーク電流を有していた。５０μｍの研磨された電極は最も低い電荷移動抵抗を有し、５μｍの研磨された電極は最も高い電荷移動抵抗を有していた。研磨それぞれの電荷移動抵抗の範囲は減少したが、研磨間、特に５０μｍと５μｍとの間には実質的な差異があった。これにより、サイクリックボルタンメトリーのような既知の技術と比較して、非常に感度の高い技術としてＥＩＳが確立された。