【手続補正書】
【提出日】令和3年10月22日(2021.10.22)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号１の９８位、または配列番号１の９８位に対応する位置にＴｒｐからＧｌｙへの変異（Ｔｒｐ９８Ｇｌｙ）を有するジカウイルスを含む薬学的組成物。
【請求項２】
前記ジカウイルスが、エンベロープタンパク質（Ｅｎｖ）に変異を含まない、請求項１に記載の薬学的組成物。
【請求項３】
前記ジカウイルスが、配列番号２内の対応する配列によってコードされたアミノ酸配列と１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する、エンベロープタンパク質を含む、請求項１に記載の薬学的組成物。
【請求項４】
前記エンベロープタンパク質をコードする配列が、配列番号２内の対応する配列と同一である、請求項２に記載の薬学的組成物。
【請求項５】
前記ジカウイルスが、株ＰＲＶＡＢＣ５９由来であり、好ましくは、前記株ＰＲＶＡＢＣ５９は、配列番号２によるゲノム配列を含む、請求項１〜４のいずれか１項に記載の薬学的組成物。
【請求項６】
前記ジカウイルスが、不活化されている、請求項１〜５のいずれか１項に記載の薬学的組成物。
【請求項７】
アジュバントをさらに含む、請求項１〜６のいずれか１項に記載の薬学的組成物。
【請求項８】
前記アジュバントが、アルミニウム塩、トール様受容体（ＴＬＲ）アゴニスト、モノホスホリル脂質Ａ（ＭＬＡ）、合成脂質Ａ、脂質Ａ模倣物または類似体、ＭＬＡ誘導体、サイトカイン、サポニン、ムラミルジペプチド（ＭＤＰ）誘導体、ＣｐＧオリゴ、グラム陰性菌のリポ多糖類（ＬＰＳ）、ポリホスファゼン、エマルション、ビロソーム、コークレート、ポリ（ラクチド−コ−グリコリド）（ＰＬＧ）微粒子、ポロキサマー粒子、微粒子、リポソーム、完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）、及び不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ）からなる群から選択される、請求項７に記載の薬学的組成物。
【請求項９】
前記アジュバントが、アルミニウム塩であり、好ましくは前記アジュバントが、水酸化アルミニウム、ミョウバン、リン酸アルミニウム、硫酸アルミニウムカリウム、及びアルヒドロゲル８５からなる群から選択される、請求項７または８に記載の薬学的組成物。
【請求項１０】
ジカウイルス感染症の治療または予防を必要とする対象におけるジカウイルス感染症を治療または予防することにおける使用のための、請求項１〜９のいずれか１項に記載の薬学的組成物。
【請求項１１】
免疫応答の誘導を必要とする対象における免疫応答を誘導することにおける使用のための、好ましくは前記免疫応答が、防御免疫応答である、請求項１〜９のいずれか１項に記載の薬学的組成物。
【請求項１２】
前記対象がヒトである、請求項１０または１１に記載の薬学的組成物。
【請求項１３】
前記薬学的組成物の投与が、前記対象においてジカウイルスに対する中和抗体の生成を誘導する、請求項１０〜１２のいずれか１項に記載の薬学的組成物。
【請求項１４】
前記薬学的組成物が、皮下投与、経皮投与、皮内投与、真皮下投与、筋肉内投与、経口投与、鼻腔内投与、頬腔内投与、腹腔内投与、膣内投与、肛門内投与、及び頭蓋内投与からなる群から選択される経路で投与される、請求項１０〜１３のいずれか１項に記載の薬学的組成物。
【請求項１５】
前記薬学的組成物が、第１の（プライム）投与及び第２の（ブースト）投与として投与され、好ましくは、第１の（プライム）投与及び第２の（ブースト）投与が少なくとも１週間間隔を空けて、より好ましくは前記第２の（ブースト）投与が、前記第１の（プライム）投与から２５〜３０日後に、たとえば２８日後に投与される、請求項１０〜１４のいずれか１項に記載の薬学的組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２９９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２９９】
結論
ＰＩＺＶワクチンは、フラビウイルスナイーブコホートで評価された全ての抗原用量に対して忍容性が高く、安全であった。応答型全身性ＡＥは全ての群で報告され、用量強度の増加に伴う明らかな増加はなく、強度は軽度から中程度であった。報告された局所応答型ＡＥも、群全体で強度が軽度から中程度であった。４つの研究群で同様の頻度で非応答型症状が報告された。全体として、ワクチンはフラビウイルスナイーブの対象において免疫原性であり、陽性の用量範囲の応答が観察された。
本発明において考えられる好適な態様を、さらに以下の項目１〜１９５に示す。
（項目１）
ジカウイルス由来の１つ以上の抗原を含むワクチンまたは免疫原性組成物であって、前記ジカウイルスが、少なくとも１つの非ヒト細胞適応変異を含む、前記ワクチンまたは免疫原性組成物。
（項目２）
前記少なくとも１つの非ヒト細胞適応変異が、ジカウイルス非構造タンパク質１（ＮＳ１）に存在する、項目１に記載のワクチンまたは免疫原性組成物。
（項目３）
前記少なくとも１つの適応変異が、配列番号１の９８位、または配列番号１の９８位に対応する位置に起こる、項目２に記載のワクチンまたは免疫原性組成物。
（項目４）
前記少なくとも１つの適応変異が、Ｔｒｐ９８Ｇｌｙ変異である、項目３に記載のワクチンまたは免疫原性組成物。
（項目５）
前記少なくとも１つの適応変異が、前記少なくとも１つの適応変異を欠いたジカウイルスと比較して、遺伝的安定性を高める、項目１〜４のいずれか１つに記載のワクチンまたは免疫原性組成物。
（項目６）
前記少なくとも１つの適応変異が、前記少なくとも１つの適応変異を欠いたジカウイルスと比較して、ウイルス複製を増強する、項目１〜５のいずれか１つに記載のワクチンまたは免疫原性組成物。
（項目７）
前記ジカウイルスが、エンベロープタンパク質Ｅ（Ｅｎｖ）において変異を含まない、項目１〜６のいずれか１つに記載のワクチンまたは免疫原性組成物。
（項目８）
前記非ヒト細胞が哺乳動物細胞である、項目１〜７のいずれか１つに記載のワクチンまたは免疫原性組成物。
（項目９）
前記非ヒト細胞がサル細胞である、項目１〜８のいずれか１つに記載のワクチンまたは免疫原性組成物。
（項目１０）
前記サル細胞がＶｅｒｏ細胞株由来である、項目９に記載のワクチンまたは免疫原性組成物。
（項目１１）
前記Ｖｅｒｏ細胞株がＷＨＯ  Ｖｅｒｏ  １０−８７細胞株である、項目１０に記載のワクチンまたは免疫原性組成物。
（項目１２）
前記ジカウイルスが、アフリカ系統のウイルス、またはアジア系統のウイルスである、項目１〜１１のいずれか１つに記載のワクチンまたは免疫原性組成物。
（項目１３）
前記ジカウイルスがアジア系統のウイルスである、項目１〜１１のいずれか１つに記載のワクチンまたは免疫原性組成物。
（項目１４）
前記ジカウイルスが株ＰＲＶＡＢＣ５９由来である、項目１３に記載のワクチンまたは免疫原性組成物。
（項目１５）
前記ワクチンまたは免疫原性組成物が、精製抗原ワクチンもしくは免疫原性組成物、サブユニットワクチンもしくは免疫原性組成物、不活化全ウイルスワクチンもしくは免疫原性組成物、または弱毒化ウイルスワクチンもしくは免疫原性組成物である、項目１〜１４のいずれか１つに記載のワクチンまたは免疫原性組成物。
（項目１６）
前記ワクチンまたは免疫原性組成物が、不活化全ウイルスワクチンまたは免疫原性組成物である、項目１〜１５のいずれか１つに記載のワクチンまたは免疫原性組成物。
（項目１７）
前記ウイルスが化学的に不活化されていた、項目１〜１６のいずれか１つに記載のワクチンまたは免疫原性組成物。
（項目１８）
前記ウイルスが、界面活性剤、ホルマリン、過酸化水素、β−プロピオラクトン（ＢＰＬ）、バイナリーエチルアミン（ＢＥＩ）、アセチルエチレンイミン、メチレンブルー、及びソラレンのうちの１つ以上によって化学的に不活化されていた、項目１７に記載のワクチンまたは免疫原性組成物。
（項目１９）
前記ウイルスが、ホルマリンによって化学的に不活化されていた、項目１７に記載のワクチンまたは免疫原性組成物。
（項目２０）
アジュバントをさらに含む、項目１〜１９のいずれか１つに記載のワクチンまたは免疫原性組成物。
（項目２１）
前記アジュバントが、アルミニウム塩、トール様受容体（ＴＬＲ）アゴニスト、モノホスホリル脂質Ａ（ＭＬＡ）、合成脂質Ａ、脂質Ａ模倣物または類似体、ＭＬＡ誘導体、サイトカイン、サポニン、ムラミルジペプチド（ＭＤＰ）誘導体、ＣｐＧオリゴ、グラム陰性菌のリポ多糖類（ＬＰＳ）、ポリホスファゼン、エマルション、ビロソーム、コークレート、ポリ（ラクチド−コ−グリコリド）（ＰＬＧ）微粒子、ポロキサマー粒子、微粒子、リポソーム、完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）、及び不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ）からなる群から選択される、項目２０に記載のワクチンまたは免疫原性組成物。
（項目２２）
前記アジュバントが、アルミニウム塩である、項目２０または２１に記載のワクチンまたは免疫原性組成物。
（項目２３）
前記アジュバントが、ミョウバン、リン酸アルミニウム、水酸化アルミニウム、硫酸アルミニウムカリウム、及びアルヒドロゲル８５からなる群から選択される、項目２２に記載のワクチンまたは免疫原性組成物。
（項目２４）
少なくとも７５％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の前記１つ以上の抗原が前記アジュバントに吸着されている、項目２０〜２３のいずれか１つに記載のワクチンまたは免疫原性組成物。
（項目２５）
約０．１μｇのジカウイルスまたはＥｎｖ〜約１００μｇのジカウイルスまたはＥｎｖを含む、項目１〜２４のいずれか１つに記載のワクチンまたは免疫原性組成物。
（項目２６）
アジュバント化されていない、項目２５に記載のワクチンまたは免疫原性組成物。
（項目２７）
前記ジカウイルスが、クローン分離株である、項目１〜２６のいずれか１つに記載のワクチンまたは免疫原性組成物。
（項目２８）
前記クローン分離株が、１つ以上の外来性感染体を実質的に含まない、項目２７に記載のワクチンまたは免疫原性組成物。
（項目２９）
配列番号１の９８位、または配列番号１の９８位に対応する位置に変異を有するジカウイルスを含むワクチン。
（項目３０）
前記変異が、配列番号１のＴｒｐ９８Ｇｌｙ変異である、項目２９に記載のワクチン。
（項目３１）
前記ジカウイルスが、エンベロープタンパク質（Ｅｎｖ）に変異を含まない、項目２９または３０に記載のワクチン。
（項目３２）
前記エンベロープタンパク質をコードする配列が、配列番号２内の対応する配列と同一である、項目３１に記載のワクチン。
（項目３３）
前記ジカウイルスが、株ＰＲＶＡＢＣ５９由来である、項目２９〜３２のいずれか１つに記載のワクチン。
（項目３４）
株ＰＲＶＡＢＣ５９が、配列番号２によるゲノム配列を含む、項目３３に記載のワクチン。
（項目３５）
前記ジカウイルスが、不活化されている、項目２９〜３４のいずれか１つに記載のワクチン。
（項目３６）
アジュバントをさらに含む、項目２９〜３５のいずれか１つに記載のワクチン。
（項目３７）
前記アジュバントが、アルミニウム塩、トール様受容体（ＴＬＲ）アゴニスト、モノホスホリル脂質Ａ（ＭＬＡ）、合成脂質Ａ、脂質Ａ模倣物または類似体、ＭＬＡ誘導体、サイトカイン、サポニン、ムラミルジペプチド（ＭＤＰ）誘導体、ＣｐＧオリゴ、グラム陰性菌のリポ多糖類（ＬＰＳ）、ポリホスファゼン、エマルション、ビロソーム、コークレート、ポリ（ラクチド−コ−グリコリド）（ＰＬＧ）微粒子、ポロキサマー粒子、微粒子、リポソーム、完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）、及び不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ）からなる群から選択される、項目３６に記載のワクチン。
（項目３８）
前記アジュバントが、アルミニウム塩である、項目３６または３７に記載のワクチン。
（項目３９）
前記アジュバントが、ミョウバン、リン酸アルミニウム、水酸化アルミニウム、硫酸アルミニウムカリウム、及びアルヒドロゲル８５からなる群から選択される、項目３６〜３８のいずれか１つに記載のワクチン。
（項目４０）
ａ）アルミニウム塩アジュバント；及びｂ）精製された不活化全ジカウイルスを含み、前記ジカウイルスが、非ヒト細胞適応変異を含み、前記非ヒト細胞適応変異が、配列番号１の９８位の、または配列番号１の９８位に対応する位置のＴｒｐ９８Ｇｌｙ変異である、ワクチンまたは免疫原性組成物。
（項目４１）
ジカウイルス感染症の治療または予防を必要とする対象においてジカウイルス感染症を治療または予防する方法であって、治療有効量の項目１〜４０のいずれか１つに記載のワクチンまたは免疫原性組成物を前記対象に投与することを含む、前記方法。
（項目４２）
免疫応答の誘導を必要とする対象において免疫応答を誘導する方法であって、免疫原性量の項目１〜４０のいずれか１つに記載のワクチンまたは免疫原性組成物を前記対象に投与することを含む、前記方法。
（項目４３）
前記対象がヒトである、項目４１または４２に記載の方法。
（項目４４）
前記対象が妊娠している、または妊娠しようとしている、項目４１〜４３のいずれか１つに記載の方法。
（項目４５）
前記ワクチンまたは免疫原性組成物の投与が、前記対象において、防御免疫応答を誘導する、項目４１〜４４のいずれか１つに記載の方法。
（項目４６）
前記対象に誘導される前記防御免疫応答が、前記少なくとも１つの非ヒト細胞適応変異を欠くジカウイルス由来の１つ以上の抗原を含むワクチンまたは免疫原性組成物を投与された対応する対象に誘導される防御免疫応答よりも大きい、項目４５に記載の方法。
（項目４７）
前記ワクチンまたは免疫原性組成物の投与が、前記対象においてジカウイルスに対する中和抗体の生成を誘導する、項目４１〜４６のいずれか１つに記載の方法。
（項目４８）
前記対象で生成される中和抗体の濃度が、前記少なくとも１つの非ヒト細胞適応変異を欠くジカウイルス由来の１つ以上の抗原を含むワクチンまたは免疫原性組成物を投与された対応する対象で生成される中和抗体の濃度よりも高い、項目４７に記載の方法。
（項目４９）
前記ワクチンまたは免疫原性組成物が、皮下投与、経皮投与、皮内投与、皮下投与、筋肉内投与、経口投与、鼻腔内投与、頬腔内投与、腹腔内投与、膣内投与、肛門内投与、及び頭蓋内投与からなる群から選択される経路で投与される、項目４１〜４８のいずれか１つに記載の方法。
（項目５０）
前記ワクチンまたは免疫原性組成物が、第１の（プライム）投与及び第２の（ブースト）投与として投与される、項目４１〜４９に記載の方法。
（項目５１）
前記第２の（ブースト）投与が、前記第１の（プライム）投与から２８日後に投与される、項目５０に記載の方法。
（項目５２）
ジカウイルス感染症の治療または予防を必要とする対象におけるジカウイルス感染症を治療または予防することにおける使用のための、項目１〜４０のいずれか１つに記載のワクチンまたは免疫原性組成物。
（項目５３）
免疫応答の誘導を必要とする対象における免疫応答を誘導することにおける使用のための、項目１〜４０のいずれか１つに記載のワクチンまたは免疫原性組成物。
（項目５４）
前記対象がヒトである、項目５２または５３に記載の使用のためのワクチンまたは免疫原性組成物。
（項目５５）
前記対象が妊娠している、または妊娠しようとしている、項目５２〜５４のいずれか１つに記載のワクチンまたは免疫原性組成物。
（項目５６）
前記ワクチンまたは免疫原性組成物の投与が、前記対象において、防御免疫応答を誘導する、項目５２〜５５のいずれか１つに記載のワクチンまたは免疫原性組成物。
（項目５７）
前記対象に誘導される前記防御免疫応答が、前記少なくとも１つの非ヒト細胞適応変異を欠くジカウイルス由来の１つ以上の抗原を含むワクチンまたは免疫原性組成物を投与された対応する対象に誘導される防御免疫応答よりも大きい、項目５６に記載の使用のためのワクチンまたは免疫原性組成物。
（項目５８）
前記ワクチンまたは免疫原性組成物の投与が、前記対象においてジカウイルスに対する中和抗体の生成を誘導する、項目５２〜５７のいずれか１つに記載の使用のためのワクチンまたは免疫原性組成物。
（項目５９）
前記対象で生成される中和抗体の濃度が、前記少なくとも１つの非ヒト細胞適応変異を欠くジカウイルス由来の１つ以上の抗原を含むワクチンまたは免疫原性組成物を投与された対応する対象で生成される中和抗体の濃度よりも高い、項目５８に記載の使用のためのワクチンまたは免疫原性組成物。
（項目６０）
前記ワクチンまたは免疫原性組成物が、皮下投与、経皮投与、皮内投与、真皮下投与、筋肉内投与、経口投与、鼻腔内投与、頬腔内投与、腹腔内投与、膣内投与、肛門内投与、及び頭蓋内投与からなる群から選択される経路で投与される、項目５２〜５９のいずれか１つに記載の使用のためのワクチンまたは免疫原性組成物。
（項目６１）
前記ワクチンまたは免疫原性組成物が、第１の（プライム）投与及び第２の（ブースト）投与として投与される、項目５２〜６０のいずれか１つに記載の使用のためのワクチンまたは免疫原性組成物。
（項目６２）
前記第２の（ブースト）投与が、前記第１の（プライム）投与から２８日後に投与される、項目６１に記載の使用のためのワクチンまたは免疫原性組成物。
（項目６３）
ジカウイルス感染症の治療または予防を必要とする対象におけるジカウイルス感染症を治療または予防するための医薬の製造における、項目１〜４０のいずれか１つに記載のワクチンまたは免疫原性組成物の使用。
（項目６４）
免疫応答の誘導を必要とする対象における免疫応答を誘導するための医薬の製造における、項目１〜４０のいずれか１つに記載のワクチンまたは免疫原性組成物の使用。
（項目６５）
前記対象がヒトである、項目６３または６４に記載の使用。
（項目６６）
前記対象が妊娠している、または妊娠しようとしている、項目６３〜６５のいずれか１つに記載の使用。
（項目６７）
前記ワクチンまたは免疫原性組成物の投与が、前記対象において、防御免疫応答を誘導する、項目６３〜６６のいずれか１つに記載の使用。
（項目６８）
前記対象に誘導される前記防御免疫応答が、前記少なくとも１つの非ヒト細胞適応変異を欠くジカウイルス由来の１つ以上の抗原を含むワクチンまたは免疫原性組成物を投与された対応する対象に誘導される防御免疫応答よりも大きい、項目６７に記載の使用。
（項目６９）
前記ワクチンまたは免疫原性組成物の投与が、前記対象においてジカウイルスに対する中和抗体の生成を誘導する、項目６３〜６６のいずれか１つに記載の使用。
（項目７０）
前記対象で生成される中和抗体の濃度が、前記少なくとも１つの非ヒト細胞適応変異を欠くジカウイルス由来の１つ以上の抗原を含むワクチンまたは免疫原性組成物を投与された対応する対象で生成される中和抗体の濃度よりも高い、項目６９に記載の使用。
（項目７１）
前記ワクチンまたは免疫原性組成物が、皮下投与、経皮投与、皮内投与、皮下投与、筋肉内投与、経口投与、鼻腔内投与、頬腔内投与、腹腔内投与、膣内投与、肛門内投与、及び頭蓋内投与からなる群から選択される経路で投与される、項目６３〜７０のいずれか１つに記載の使用。
（項目７２）
前記ワクチンまたは免疫原性組成物が、第１の（プライム）投与及び第２の（ブースト）投与として投与される、項目６３〜７１のいずれか１つに記載の使用。
（項目７３）
前記第２の（ブースト）投与が、前記第１の（プライム）投与から２８日後に投与される、項目７２に記載の使用。
（項目７４）
ジカウイルス調製物を不活化するための方法であって、
（ａ）前記ウイルス調製物を生成するために使用される１以上の非ヒト細胞から前記ジカウイルス調製物を単離することであって、前記ジカウイルスは、少なくとも１つの非ヒト細胞適応変異を含む、前記単離することと、
（ｂ）前記ウイルス調製物を有効量のホルマリンで処理することと、
を含む、前記方法。
（項目７５）
（ｃ）前記ホルマリン処理したウイルス調製物をメタ重亜硫酸ナトリウムで中和することをさらに含む、項目７４に記載の方法。
（項目７６）
前記ウイルス調製物が、ホルマリン処理の少なくとも５日後、少なくとも７日後、少なくとも９日後、少なくとも１１日後、または少なくとも１４日後に中和される、項目７５に記載の方法。
（項目７７）
（ｄ）前記中和されたウイルス調製物を精製することをさらに含む、項目７４〜７６のいずれか１つに記載の方法。
（項目７８）
前記中和されたウイルス調製物が、クロスフロー濾過（ＣＦＦ）、マルチモーダルクロマトグラフィー、サイズ排除クロマトグラフィー、陽イオン交換クロマトグラフィー、及び陰イオン交換クロマトグラフィーからなる群から選択されるプロセスによって精製される、項目７７に記載の方法。
（項目７９）
前記ウイルス調製物が、アジュバントと混合される、項目７４〜７８のいずれか１つに記載の方法。
（項目８０）
前記アジュバントが、アルミニウム塩、トール様受容体（ＴＬＲ）アゴニスト、モノホスホリル脂質Ａ（ＭＬＡ）、合成脂質Ａ、脂質Ａ模倣物または類似体、ＭＬＡ誘導体、サイトカイン、サポニン、ムラミルジペプチド（ＭＤＰ）誘導体、ＣｐＧオリゴ、グラム陰性菌のリポ多糖類（ＬＰＳ）、ポリホスファゼン、エマルション、ビロソーム、コークレート、ポリ（ラクチド−コ−グリコリド）（ＰＬＧ）微粒子、ポロキサマー粒子、微粒子、リポソーム、完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）、及び不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ）からなる群から選択される、項目７９に記載の方法。
（項目８１）
前記アジュバントが、アルミニウム塩である、項目７９及び８０に記載の方法。
（項目８２）
前記アジュバントが、ミョウバン、リン酸アルミニウム、水酸化アルミニウム、硫酸アルミニウムカリウム、及びアルヒドロゲル８５からなる群から選択される、項目８１に記載の方法。
（項目８３）
前記ウイルス調製物中の少なくとも７５％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の１つ以上の抗原が前記アジュバントに吸着されている、項目７９〜８２のいずれか１つに記載の方法。
（項目８４）
前記少なくとも１つの非ヒト細胞適応変異が、ジカウイルスＮＳ１に存在する、項目７４〜８３のいずれか１つに記載の方法。
（項目８５）
前記少なくとも１つの適応変異が、配列番号１の９８位、または配列番号１の９８位に対応する位置に起こる、項目８４に記載の方法。
（項目８６）
前記少なくとも１つの適応変異が、Ｔｒｐ９８Ｇｌｙ変異である、項目８５に記載の方法。
（項目８７）
前記少なくとも１つの適応変異が、前記少なくとも１つの適応変異を欠いたジカウイルスと比較して、遺伝的安定性を高める、項目７４〜８６のいずれか１つに記載の方法。
（項目８８）
前記少なくとも１つの適応変異が、前記少なくとも１つの適応変異を欠いたジカウイルスと比較して、ウイルス複製を増強する、項目７４〜８６のいずれか１つに記載の方法。
（項目８９）
前記ジカウイルスが、エンベロープタンパク質Ｅ（Ｅｎｖ）において変異を含まない、項目７４〜８８のいずれか１つに記載の方法。
（項目９０）
ジカウイルス調製物を不活化するための方法であって、
（ａ）１つ以上の非ヒト細胞から前記ジカウイルス調製物を単離することであって、前記細胞が、前記ウイルス調製物を産生するために使用され、前記ジカウイルスが、配列番号１の９８位または配列番号１の９８位に対応する位置に変異を含む、前記単離することと、
（ｂ）前記ウイルス調製物を有効量のホルマリンで処理することと、
を含む、前記方法。
（項目９１）
前記変異が、配列番号１のＴｒｐ９８Ｇｌｙ変異である、項目９０に記載の方法。
（項目９２）
前記ジカウイルスが、エンベロープタンパク質（Ｅｎｖ）に変異を含まない、項目９０または９１に記載の方法。
（項目９３）
前記エンベロープタンパク質をコードする配列が、配列番号２内の対応する配列と同一である、項目９２に記載の方法。
（項目９４）
（ｃ）前記ホルマリン処理したウイルス調製物をメタ重亜硫酸ナトリウムで中和することをさらに含む、項目９０〜９３のいずれか１つに記載の方法。
（項目９５）
前記ウイルス調製物が、ホルマリン処理の少なくとも５日後、少なくとも７日後、少なくとも９日後、少なくとも１１日後、または少なくとも１４日後に中和される、項目９４に記載の方法。
（項目９６）
（ｄ）前記中和されたウイルス調製物を精製することをさらに含む、項目９０〜９５のいずれか１つに記載の方法。
（項目９７）
前記中和されたウイルス調製物が、クロスフロー濾過（ＣＦＦ）、マルチモーダルクロマトグラフィー、サイズ排除クロマトグラフィー、陽イオン交換クロマトグラフィー、及び陰イオン交換クロマトグラフィーからなる群から選択されるプロセスによって精製される、項目９６に記載の方法。
（項目９８）
前記ウイルス調製物が、アジュバントと混合される、項目９０〜９７のいずれか１つに記載の方法。
（項目９９）
前記アジュバントが、アルミニウム塩、トール様受容体（ＴＬＲ）アゴニスト、モノホスホリル脂質Ａ（ＭＬＡ）、合成脂質Ａ、脂質Ａ模倣物または類似体、ＭＬＡ誘導体、サイトカイン、サポニン、ムラミルジペプチド（ＭＤＰ）誘導体、ＣｐＧオリゴ、グラム陰性菌のリポ多糖類（ＬＰＳ）、ポリホスファゼン、エマルション、ビロソーム、コークレート、ポリ（ラクチド−コ−グリコリド）（ＰＬＧ）微粒子、ポロキサマー粒子、微粒子、リポソーム、完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）、及び不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ）からなる群から選択される、項目９８に記載の方法。
（項目１００）
前記アジュバントが、アルミニウム塩である、項目９９に記載の方法。
（項目１０１）
前記アジュバントが、ミョウバン、リン酸アルミニウム、水酸化アルミニウム、硫酸アルミニウムカリウム、及びアルヒドロゲル８５からなる群から選択される、項目１００に記載の方法。
（項目１０２）
前記ウイルス調製物中の少なくとも７５％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の１つ以上の抗原が前記アジュバントに吸着されている、項目９８〜１０１のいずれか１つに記載の方法。
（項目１０３）
ジカウイルスを精製する方法であって、
（ａ）ジカウイルスの集団を含む接種物を複数の細胞に接種することと、
（ｂ）前記接種した細胞の１つ以上からプラーク精製によってジカウイルスクローン分離株を取得することと、
を含む、前記方法。
（項目１０４）
前記細胞が非ヒト細胞である、項目１０３に記載の方法。
（項目１０５）
前記細胞が昆虫細胞である、項目１０３または項目１０４に記載の方法。
（項目１０６）
前記昆虫細胞が蚊細胞である、項目１０５に記載の方法。
（項目１０７）
前記細胞が哺乳動物細胞である、項目１０３または項目１０４に記載の方法。
（項目１０８）
前記哺乳動物細胞がサル細胞である、項目１０７に記載の方法。
（項目１０９）
前記サル細胞がＶｅｒｏ細胞株由来のものである、項目１０８に記載の方法。
（項目１１０）
前記Ｖｅｒｏ細胞株がＷＨＯ  Ｖｅｒｏ  １０−８７細胞株である、項目１０９に記載の方法。
（項目１１１）
前記ジカウイルスの集団が不均質である、項目１０３〜１１０のいずれか１つに記載の方法。
（項目１１２）
前記ジカウイルスの集団が、ジカウイルスクローン分離株を含む、項目１０３〜１１１のいずれか１つに記載の方法。
（項目１１３）
前記ジカウイルス臨床分離株が株ＰＲＶＡＢＣ５９由来である、項目１１２に記載の方法。
（項目１１４）
前記ジカウイルスの集団が、細胞培養においてそれまでに１回以上継代されているジカウイルスを含む、項目１０３〜１１３のいずれか１つに記載の方法。
（項目１１５）
前記接種物がヒト血清を含む、項目１０３〜１１４のいずれか１つに記載の方法。
（項目１１６）
前記接種物が、１つ以上の外来性感染体を含む、項目１０３〜１１５のいずれか１つに記載の方法。
（項目１１７）
前記ジカウイルスクローン分離株が、前記１つ以上の外来性感染体を実質的に含まない、項目１１６に記載の方法。
（項目１１８）
前記ジカウイルスクローン分離株の１回以上のさらなるプラーク精製をさらに含む、項目１０３〜１１７のいずれか１つに記載の方法。
（項目１１９）
前記ジカウイルスクローン分離株が、２回以上さらにプラーク精製される、項目１１８に記載の方法。
（項目１２０）
細胞培養中で前記ジカウイルスクローン分離株を１回以上継代することをさらに含む、項目１０３〜１１９のいずれか１つに記載の方法。
（項目１２１）
前記ジカウイルスクローン分離株が２回以上継代される、項目１２０に記載の方法。
（項目１２２）
前記ジカウイルスクローン分離株由来の１つ以上の抗原を含むワクチンまたは免疫原性組成物を製剤化することをさらに含む、項目１０３〜１２１のいずれか１つに記載の方法。
（項目１２３）
前記ワクチンまたは免疫原性組成物が、精製抗原ワクチンもしくは免疫原性組成物、サブユニットワクチンもしくは免疫原性組成物、不活化全ウイルスワクチンもしくは免疫原性組成物、または弱毒化ウイルスワクチンもしくは免疫原性組成物である、項目１２２に記載の方法。
（項目１２４）
前記ワクチンまたは免疫原性組成物が、不活化全ウイルスワクチンまたは免疫原性組成物である、項目１２２に記載の方法。
（項目１２５）
前記ジカウイルスクローン分離株が、化学的に不活化されていた、項目１０３〜１２４のいずれか１つに記載の方法。
（項目１２６）
前記ジカウイルスクローン分離株が、界面活性剤、ホルマリン、過酸化水素、β−プロピオラクトン（ＢＰＬ）、バイナリーエチルアミン（ＢＥＩ）、アセチルエチレンイミン、メチレンブルー、及びソラレンのうちの１つ以上によって化学的に不活化されていた、項目１２５に記載の方法。
（項目１２７）
前記ジカウイルスクローン分離株が、ホルマリンによって化学的に不活化されていた、項目１２５に記載の方法。
（項目１２８）
前記ワクチンまたは免疫原性組成物をアジュバントと混合することをさらに含む、項目１２２〜１２７のいずれか１つに記載の方法。
（項目１２９）
前記アジュバントが、アルミニウム塩、トール様受容体（ＴＬＲ）アゴニスト、モノホスホリル脂質Ａ（ＭＬＡ）、合成脂質Ａ、脂質Ａ模倣物または類似体、ＭＬＡ誘導体、サイトカイン、サポニン、ムラミルジペプチド（ＭＤＰ）誘導体、ＣｐＧオリゴ、グラム陰性菌のリポ多糖類（ＬＰＳ）、ポリホスファゼン、エマルション、ビロソーム、コークレート、ポリ（ラクチド−コ−グリコリド）（ＰＬＧ）微粒子、ポロキサマー粒子、微粒子、リポソーム、完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）、及び不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ）からなる群から選択される、項目１２８に記載の方法。
（項目１３０）
前記アジュバントが、アルミニウム塩である、項目１２８に記載の方法。
（項目１３１）
前記アジュバントが、ミョウバン、リン酸アルミニウム、水酸化アルミニウム、硫酸アルミニウムカリウム、及びアルヒドロゲル８５からなる群から選択される、項目１２８に記載の方法。
（項目１３２）
少なくとも７５％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の前記１つ以上の抗原が前記アジュバントに吸着されている、項目１２８〜１３１のいずれか１つに記載の方法。
（項目１３３）
前記ワクチンまたは免疫原性組成物が、約０．１μｇのジカウイルスまたはＥｎｖ〜約１００μｇのジカウイルスまたはＥｎｖを含む、項目１２２〜１２８のいずれか１つに記載の方法。
（項目１３４）
前記ワクチンまたは免疫原性組成物が、アジュバント化されていない、項目１３３に記載の方法。
（項目１３５）
前記ジカウイルスクローン分離株が、均質な遺伝的集団である、項目１０３〜１３４のいずれか１つに記載の方法。
（項目１３６）
前記ジカウイルスクローン分離株が、エンベロープタンパク質Ｅ（Ｅｎｖ）において変異を含まない、項目１０３〜１３５のいずれか１つに記載の方法。
（項目１３７）
前記ジカウイルスクローン分離株が、少なくとも１つの変異を含む、項目１０３〜１３５のいずれか１つに記載の方法。
（項目１３８）
前記少なくとも１つの変異が、ジカウイルス非構造タンパク質１（ＮＳ１）に存在する、項目１３７に記載の方法。
（項目１３９）
前記少なくとも１つの変異が、配列番号１の９８位、または配列番号１の９８位に対応する位置に起こる、項目１３８に記載の方法。
（項目１４０）
前記少なくとも１つの変異が、Ｔｒｐ９８Ｇｌｙ変異である、項目１３９に記載の方法。
（項目１４１）
前記少なくとも１つの変異が、エンベロープタンパク質Ｅ（Ｅｎｖ）に存在しない、項目１３７〜１４０のいずれか１つに記載の方法。
（項目１４２）
前記少なくとも１つの変異が、前記少なくとも１つの変異を欠いたジカウイルスと比較して、遺伝的安定性を高める、項目１３７〜１４１のいずれか１つに記載の方法。
（項目１４３）
前記少なくとも１つの変異が、前記少なくとも１つの変異を欠いたジカウイルスと比較して、ウイルス複製を増強する、項目１３７〜１４２のいずれか１つに記載の方法。
（項目１４４）
ワクチンまたは免疫原性組成物の調製のためのジカウイルスを精製する方法であって、
（ａ）ジカウイルスを含む試料を深層濾過に通して前記ジカウイルスを含む溶出液を生成するステップ、
（ｂ）クロスフロー濾過（ＣＦＦ）によって、ジカウイルスを含む試料を緩衝液交換及び／または希釈して前記ジカウイルスを含む保持液を生成するステップ、
（ｃ）ジカウイルスを含む試料をイオン交換膜に結合して前記ジカウイルスを含む結合画分を生成し、前記結合画分を前記イオン交換膜から溶出するステップ、
（ｄ）ジカウイルスを含む試料を、有効量の化学的不活化剤で処理するステップ、
（ｅ）化学的に不活化されたジカウイルスを含む試料を、メタ重亜硫酸ナトリウムで中和するステップ、及び
（ｆ）クロスフロー濾過（ＣＦＦ）によって、化学的に不活化されたジカウイルスを含む馴化試料を精製するステップ、
の群から選択される、１つ以上のステップを含む、前記方法。
（項目１４５）
（ａ）ジカウイルスを含む試料を深層濾過に通して前記ジカウイルスを含む溶出液を生成するステップ、
（ｂ）クロスフロー濾過（ＣＦＦ）によって、ジカウイルスを含む試料を緩衝液交換及び／または希釈して前記ジカウイルスを含む保持液を生成するステップ、
（ｃ）ジカウイルスを含む試料をイオン交換膜に結合して前記ジカウイルスを含む結合画分を生成し、前記結合画分を前記イオン交換膜から溶出するステップ、
（ｄ）ジカウイルスを含む試料を、有効量の化学的不活化剤で処理するステップ、
（ｅ）化学的に不活化されたジカウイルスを含む試料を、メタ重亜硫酸ナトリウムで中和するステップ、及び
（ｆ）クロスフロー濾過（ＣＦＦ）によって、化学的に不活化されたジカウイルスを含む馴化試料を精製するステップ、
を含む、項目１４４に記載の方法。
（項目１４６）
（ａ）ジカウイルスを含む試料を第１の深層濾過に通して、前記ジカウイルスを含む第１の溶出液を生成するステップ、
（ｂ）前記第１の溶出液を、クロスフロー濾過（ＣＦＦ）によって緩衝液交換及び／または希釈して、前記ジカウイルスを含む第１の保持液を精製するステップ、
（ｃ）前記第１の保持液をイオン交換膜に結合して、前記ジカウイルスを含む第１の結合画分を生成し、前記第１の結合画分を前記イオン交換膜から溶出して、前記ジカウイルスを含む第２の溶出液を生成するステップ、
（ｄ）前記第２の溶出液を第２の深層濾過に通して、前記ジカウイルスを含む第２の保持液を生成するステップ、
（ｅ）前記第２の保持液を有効量の化学的不活化剤で処理するステップ、
（ｆ）処理された前記第２の保持液をメタ重亜硫酸ナトリウムで中和するステップ、及び
（ｇ）前記中和された第２の保持液をクロスフロー濾過（ＣＦＦ）により精製するステップ、
を含む、項目１４４または項目１４５に記載の方法。
（項目１４７）
前記イオン交換膜が、陰イオン交換膜である、項目１４５〜１４６のいずれか１つに記載の方法。
（項目１４８）
前記陰イオン交換膜が、第四級アンモニウムリガンドを含む、項目１４７に記載の方法。
（項目１４９）
ステップ（ｃ）の前記結合画分が、各ステップが漸増塩濃度を含む複数のステップで溶出される、項目１４５〜１４８のいずれか１つに記載の方法。
（項目１５０）
前記塩が塩化ナトリウムである、項目１４９に記載の方法。
（項目１５１）
塩濃度を、２５０ｍＭから７５０ｍＭまで上昇させる、項目１５０に記載の方法。
（項目１５２）
前記化学的不活化剤が、界面活性剤、ホルマリン、過酸化水素、β−プロピオラクトン（ＢＰＬ）、バイナリーエチルアミン（ＢＥＩ）、アセチルエチレンイミン、メチレンブルー、及びソラレンの１つ以上である、項目１４５〜１５１のいずれか１つに記載の方法。
（項目１５３）
前記化学的不活化剤が、ホルマリンである、項目１４５〜１５１のいずれか１つに記載の方法。
（項目１５４）
少なくとも５日間、少なくとも７日間、少なくとも９日間、少なくとも１１日間、または少なくとも１４日間、前記中和が生ずる、項目１４５〜１５３のいずれか１つに記載の方法。
（項目１５５）
前記ジカウイルスが、項目１０３〜１４３のいずれかによって産生されるジカウイルスクローン分離株である、項目１４５〜１５４のいずれか１つに記載の方法。
（項目１５６）
プラーク精製されたクローンジカウイルス分離株由来の１つ以上の抗原を含むワクチンまたは免疫原性組成物。
（項目１５７）
前記プラーク精製されたクローンジカウイルス分離株は、ジカウイルス集団を含む接種物と接触した細胞からプラーク精製されていた、項目１５６に記載のワクチンまたは免疫原性組成物。
（項目１５８）
前記細胞が非ヒト細胞である、項目１５７に記載のワクチンまたは免疫原性組成物。
（項目１５９）
前記細胞が昆虫細胞である、項目１５７または項目１５８に記載のワクチンまたは免疫原性組成物。
（項目１６０）
前記昆虫細胞が蚊の細胞である、項目１５９に記載のワクチンまたは免疫原性組成物。
（項目１６１）
前記細胞が哺乳動物細胞である、項目１５７または項目１５８に記載のワクチンまたは免疫原性組成物。
（項目１６２）
前記哺乳動物細胞がサル細胞である、項目１６１に記載のワクチンまたは免疫原性組成物。
（項目１６３）
前記サル細胞がＶｅｒｏ細胞株由来である、項目１６２に記載のワクチンまたは免疫原性組成物。
（項目１６４）
前記Ｖｅｒｏ細胞株がＷＨＯ  Ｖｅｒｏ  １０−８７細胞株である、項目１６３に記載のワクチンまたは免疫原性組成物。
（項目１６５）
前記ジカウイルスの集団が不均質であった、項目１５７〜１６４のいずれか１つに記載のワクチンまたは免疫原性組成物。
（項目１６６）
前記ジカウイルスの集団がジカウイルス臨床分離株を含んでいた、項目１５７〜１６５のいずれか１つに記載のワクチンまたは免疫原性組成物。
（項目１６７）
前記ジカウイルス臨床分離株が株ＰＲＶＡＢＣ５９由来である、項目１６６に記載のワクチンまたは免疫原性組成物。
（項目１６８）
前記ジカウイルスの集団が、細胞培養においてそれまでに１回以上継代されているジカウイルスを含んでいた、項目１５７〜１６５のいずれか１つに記載のワクチンまたは免疫原性組成物。
（項目１６９）
前記接種物がヒト血清を含んでいた、項目１５７〜１６８のいずれか１つに記載のワクチンまたは免疫原性組成物。
（項目１７０）
前記接種物が、１つ以上の外来性感染体を含んでいた、項目１５７〜１６９のいずれか１つに記載のワクチンまたは免疫原性組成物。
（項目１７１）
前記プラーク精製されたジカウイルスクローン分離株が、前記１つ以上の外来性感染体を実質的に含まない、項目１７０に記載のワクチンまたは免疫原性組成物。
（項目１７２）
前記プラーク精製されたクローンジカウイルス分離株が、野生型ジカウイルスと比べて修飾されている、項目１５７〜１７１のいずれか１つに記載のワクチンまたは免疫原性組成物。
（項目１７３）
前記プラーク精製されたジカウイルスクローン分離株が、均質な遺伝的集団である、項目１５７〜１７２のいずれか１つに記載のワクチンまたは免疫原性組成物。
（項目１７４）
前記プラーク精製されたジカウイルスクローン分離株が、エンベロープタンパク質Ｅ（Ｅｎｖ）において変異を含まない、項目１５７〜１７３のいずれか１つに記載のワクチンまたは免疫原性組成物。
（項目１７５）
前記プラーク精製されたジカウイルスクローン分離株が、少なくとも１つの変異を含む、項目１５７〜１７３のいずれか１つに記載のワクチンまたは免疫原性組成物。
（項目１７６）
前記少なくとも１つの変異が、ジカウイルス非構造タンパク質１（ＮＳ１）に存在する、項目１７５に記載のワクチンまたは免疫原性組成物。
（項目１７７）
前記少なくとも１つの変異が、配列番号１の９８位、または配列番号１の９８位に対応する位置に起こる、項目１７６に記載のワクチンまたは免疫原性組成物。
（項目１７８）
前記少なくとも１つの変異が、Ｔｒｐ９８Ｇｌｙ変異である、項目１７７に記載のワクチンまたは免疫原性組成物。
（項目１７９）
前記少なくとも１つの変異が、エンベロープタンパク質Ｅ（Ｅｎｖ）に存在しない、項目１７５〜１７８のいずれか１つに記載のワクチンまたは免疫原性組成物。
（項目１８０）
前記少なくとも１つの変異が、前記少なくとも１つの変異を欠いたジカウイルスと比較して、遺伝的安定性を高める、項目１７４〜１７８のいずれか１つに記載のワクチンまたは免疫原性組成物。
（項目１８１）
前記少なくとも１つの変異が、前記少なくとも１つの変異を欠いたジカウイルスと比較して、ウイルス複製を増強する、項目１７４〜１８０のいずれか１つに記載のワクチンまたは免疫原性組成物。
（項目１８２）
前記プラーク精製されたジカウイルスクローン分離株が、アフリカ系統のウイルス、またはアジア系統のウイルスである、項目１５７〜１８１のいずれか１つに記載のワクチンまたは免疫原性組成物。
（項目１８３）
前記プラーク精製されたジカウイルスクローン分離株が、アジア系統のウイルスである、項目１５７〜１８２のいずれか１つに記載のワクチンまたは免疫原性組成物。
（項目１８４）
前記ワクチンまたは免疫原性組成物が、精製抗原ワクチンもしくは免疫原性組成物、サブユニットワクチンもしくは免疫原性組成物、不活化全ウイルスワクチンもしくは免疫原性組成物、または弱毒化ウイルスワクチンもしくは免疫原性組成物である、項目１５７〜１８３のいずれか１つに記載のワクチンまたは免疫原性組成物。
（項目１８５）
前記ワクチンまたは免疫原性組成物が、不活化全ウイルスワクチンまたは免疫原性組成物である、項目１５７〜１８３のいずれか１つに記載のワクチンまたは免疫原性組成物。
（項目１８６）
前記プラーク精製されたジカウイルスクローン分離株が、化学的に不活化されていた、項目１５７〜１８５のいずれか１つに記載のワクチンまたは免疫原性組成物。
（項目１８７）
前記プラーク精製されたジカウイルスが、界面活性剤、ホルマリン、過酸化水素、β−プロピオラクトン（ＢＰＬ）、バイナリーエチルアミン（ＢＥＩ）、アセチルエチレンイミン、メチレンブルー、及びソラレンのうちの１つ以上によって化学的に不活化されていた、項目１８６に記載のワクチンまたは免疫原性組成物。
（項目１８８）
前記プラーク精製されたジカウイルスクローン分離株が、ホルマリンによって化学的に不活化されていた、項目１８６に記載のワクチンまたは免疫原性組成物。
（項目１８９）
アジュバントをさらに含む、項目１５７〜１８８のいずれか１つに記載のワクチンまたは免疫原性組成物。
（項目１９０）
前記アジュバントが、アルミニウム塩、トール様受容体（ＴＬＲ）アゴニスト、モノホスホリル脂質Ａ（ＭＬＡ）、合成脂質Ａ、脂質Ａ模倣物または類似体、ＭＬＡ誘導体、サイトカイン、サポニン、ムラミルジペプチド（ＭＤＰ）誘導体、ＣｐＧオリゴ、グラム陰性菌のリポ多糖類（ＬＰＳ）、ポリホスファゼン、エマルション、ビロソーム、コークレート、ポリ（ラクチド−コ−グリコリド）（ＰＬＧ）微粒子、ポロキサマー粒子、微粒子、リポソーム、完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）、及び不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ）からなる群から選択される、項目１８９に記載のワクチンまたは免疫原性組成物。
（項目１９１）
前記アジュバントが、アルミニウム塩である、項目１８９に記載のワクチンまたは免疫原性組成物。
（項目１９２）
前記アジュバントが、ミョウバン、リン酸アルミニウム、水酸化アルミニウム、硫酸アルミニウムカリウム、及びアルヒドロゲル８５からなる群から選択される、項目１８９に記載のワクチンまたは免疫原性組成物。
（項目１９３）
少なくとも７５％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の前記１つ以上の抗原が前記アジュバントに吸着されている、項目１８９〜１９２のいずれか１つに記載のワクチンまたは免疫原性組成物。
（項目１９４）
約０．１μｇのジカウイルスまたはＥｎｖ〜約１００μｇのジカウイルスまたはＥｎｖを含む、項目１５７〜１８８のいずれか１つに記載のワクチンまたは免疫原性組成物。
（項目１９５）
前記ワクチンまたは免疫原性組成物が、アジュバント化されていない、項目１９４に記載のワクチンまたは免疫原性組成物。