【手続補正書】
【提出日】令和3年1月27日(2021.1.27)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
軟骨下骨硬化症、外傷関節傷害、および／または変形性関節疾患（ＤＪＤ）の予防および／または治療での使用のためのＭＳＣの濃縮インテグリンα１０高集団であって、
前記集団の細胞の少なくとも６０％がインテグリンα１０サブユニットを発現し、前記ＭＳＣがＭＨＣＩＩ陰性およびＣＤ４５陰性であり、ならびに
前記ＭＳＣが間葉系幹細胞、間葉系前駆細胞、および間葉系間質細胞からなる群から選択される、ＭＳＣの濃縮インテグリンα１０高集団。
【請求項２】
前記変形性関節疾患（ＤＪＤ）が軟骨下骨の疾患、軟骨変性、外傷後変形性関節症、炎症性関節炎、および先天性奇形および／または筋骨格系の変形からなる群から選択され、前記外傷関節傷害が骨軟骨損傷、腱損傷、靭帯損傷、および筋損傷からなる群から選択され、前記外傷関節傷害がスポーツ傷害を含む、請求項１に記載のＭＳＣの濃縮インテグリンα１０高集団。
【請求項３】
前記骨軟骨損傷が関節軟骨損傷および／または骨損傷を含む、請求項２に記載のＭＳＣの濃縮インテグリンα１０高集団。
【請求項４】
骨折治癒を促進するまたは誘導する方法における使用のためのＭＳＣの濃縮インテグリンα１０高集団であって、前記集団の細胞の少なくとも６０％がインテグリンα１０サブユニットを発現し、前記ＭＳＣがＭＨＣＩＩ陰性およびＣＤ４５陰性であり、ならびに前記ＭＳＣが間葉系幹細胞、間葉系前駆細胞、および間葉系間質細胞からなる群から選択される、ＭＳＣの濃縮インテグリンα１０高集団。
【請求項５】
前記集団に含まれる総細胞の少なくとも６５％、例えば少なくとも７０％、例えば少なくとも７５％、例えば少なくとも８０％、例えば少なくとも８５％、例えば少なくとも９０％、例えば少なくとも９５％、例えば少なくとも９６％、例えば少なくとも９７％、例えば少なくとも９８％、例えば少なくとも９９％、例えば１００％がインテグリンα１０サブユニットを発現する、請求項１〜４のいずれか１項に記載のＭＳＣの濃縮インテグリンα１０高集団。
【請求項６】
前記細胞がインテグリンα１０サブユニットを発現するよう誘導される、請求項１〜５のいずれか１項に記載のＭＳＣの濃縮インテグリンα１０高集団。
【請求項７】
前記細胞が哺乳動物血清およびＦＧＦ−２を含む培地中で培養される、請求項１〜６のいずれか１項に記載のＭＳＣの濃縮インテグリンα１０高集団。
【請求項８】
前記細胞が血小板溶解物および／または血小板溶解物成分を含む培地中で培養される、請求項１〜７のいずれか１項に記載のＭＳＣの濃縮インテグリンα１０高集団。
【請求項９】
前記細胞が血小板溶解物および／または血小板溶解物成分を含む無血清培地中で培養される、または、前記細胞が哺乳動物血清ならびに血小板溶解物および／または血小板溶解物成分を含む培地中で培養され、前記血清がウシ胎仔血清である、請求項１〜８のいずれか１項に記載のＭＳＣの濃縮インテグリンα１０高集団。
【請求項１０】
前記細胞がＦＧＦ２および／またはＴＧＦβのような増殖因子を含む無血清培地中で培養される、請求項１〜９のいずれか１項に記載のＭＳＣの濃縮インテグリンα１０高集団。
【請求項１１】
前記細胞がＦＧＦ２ならびに血小板溶解物および／または血小板溶解物成分を含む培地中で培養される、請求項１〜１０のいずれか１項に記載のＭＳＣの濃縮インテグリンα１０高集団。
【請求項１２】
前記細胞がＴＧＦβを含む培地中で培養される、請求項１〜１１のいずれか１項に記載のＭＳＣの濃縮インテグリンα１０高集団。
【請求項１３】
前記集団がｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞培養物である、請求項１〜１２のいずれか１項に記載のＭＳＣの濃縮インテグリンα１０高集団。
【請求項１４】
前記インテグリンα１０がインテグリンβ１サブユニットとの組み合わせでヘテロ二量体として発現される、請求項１〜１３のいずれか１項に記載のＭＳＣの濃縮インテグリンα１０高集団。
【請求項１５】
インテグリンα１０を発現する前記細胞が抗インテグリンα１０抗体によって単離される、請求項１〜１４のいずれか１項に記載のＭＳＣの濃縮インテグリンα１０高集団。
【請求項１６】
前記抗インテグリンα１０抗体がモノクローナル抗体である、請求項１５に記載のＭＳＣの濃縮インテグリンα１０高集団。
【請求項１７】
前記ＭＳＣがＣＤ４４、ＣＤ９０およびＣＤ１０５の存在によってさらに特徴づけられ、例えば、前記ＭＳＣがＣＤ４４、ＣＤ９０およびＣＤ１０５を発現する、請求項１〜１６のいずれか１項に記載のＭＳＣの濃縮インテグリンα１０高集団。
【請求項１８】
前記細胞が脂肪組織、骨髄、滑膜、末梢血、臍帯血（ｃｏｒｄ  ｂｌｏｏｄ）、臍帯血（ｕｍｂｉｌｉｃａｌ  ｃｏｒｄ  ｂｌｏｏｄ）、ワルトン膠様質、または羊水に由来する、請求項１〜１７のいずれか１項に記載のＭＳＣの濃縮インテグリンα１０高集団。
【請求項１９】
対象が骨軟骨損傷、軟骨損傷、または関節もしくは骨への傷害を有する、またはこれまでに有した、請求項１〜１８のいずれか１項に記載のＭＳＣの濃縮インテグリンα１０高集団。
【請求項２０】
前記骨軟骨損傷、軟骨損傷または傷害が、破損、捻挫、挫傷、裂傷、骨折、断裂、軟骨亀裂、軟骨微小骨折、軟骨欠損、腱断裂、靭帯断裂、または骨折であり、および／または、前記骨軟骨損傷、軟骨損傷または傷害が、筋肉、腱、骨、靭帯、軟骨、または半月板におけるものである、請求項１９に記載のＭＳＣの濃縮インテグリンα１０高集団。
【請求項２１】
対象が骨の不整列を有する、請求項１〜２０のいずれか１項に記載のＭＳＣの濃縮インテグリンα１０高集団。
【請求項２２】
前記骨軟骨損傷、軟骨損傷または傷害が人工器官の装着の結果である、請求項１９または２０に記載のＭＳＣの濃縮インテグリンα１０高集団。
【請求項２３】
軟骨下骨の疾患または骨軟骨損傷に起因する外傷後変形性関節症（ＰＴＯＡ）の予防における使用のための、請求項１〜２２のいずれか１項に記載のＭＳＣの濃縮インテグリンα１０高集団。
【請求項２４】
前記ＭＳＣが同種異系または自己由来である、または、
前記ＭＳＣおよび対象が、同じ種または属に由来し、または、異なる種または属に由来する、請求項１〜２３のいずれか１項に記載のＭＳＣの濃縮インテグリンα１０高集団。
【請求項２５】
前記集団が関節腔に投与され、例えば、前記集団が注射によって投与される、請求項１〜２４のいずれか１項に記載のＭＳＣの濃縮インテグリンα１０高集団。
【請求項２６】
前記集団が薬学的に許容される賦形剤と共に細胞懸濁液中で投与される、または、前記集団が投与前に細胞凝集体に調製される、請求項１〜２５のいずれか１項に記載のＭＳＣの濃縮インテグリンα１０高集団。
【請求項２７】
前記集団が損傷した関節および／または骨を修復するための手術中に投与される、または、破損後の接骨と同時に投与される、請求項１〜２６のいずれか１項に記載のＭＳＣの濃縮インテグリンα１０高集団。
【請求項２８】
対象がヒト、ウマ、ポニー、雄ウシ、ロバ、ラバ、ラクダ、ネコ、イヌ、ブタ、または雌ウシである、請求項１〜２７のいずれか１項に記載のＭＳＣの濃縮インテグリンα１０高集団。
【請求項２９】
前記投与が投与の部位での増加されたコラーゲン産生、プロテオグリカン産生、および／またはラブリシンをもたらす、請求項２５〜２７のいずれか１項に記載のＭＳＣの濃縮インテグリンα１０高集団。
【請求項３０】
ＭＳＣの濃縮インテグリンα１０高集団であって、
前記集団の細胞の少なくとも６０％がインテグリンα１０サブユニットを発現し、前記ＭＳＣがＭＨＣＩＩ陰性およびＣＤ４５陰性であり、ならびに
前記ＭＳＣが間葉系幹細胞、間葉系前駆細胞、および間葉系間質細胞からなる群から選択される、ＭＳＣの濃縮インテグリンα１０高集団。
【請求項３１】
請求項１〜３０のいずれか１項に記載のＭＳＣの濃縮インテグリンα１０高集団から、抗インテグリンα１０抗体によって単離された、ＭＳＣ。
【請求項３２】
ＭＳＣの濃縮インテグリンα１０高集団を製造する方法であって、
ａ．脂肪組織、骨髄、滑膜、臍帯血、ワルトン膠様質、または羊水から幹細胞の集団を単離すること、
ｂ．単離された細胞をプラスチック培養容器中で培養すること、
ｃ．非付着細胞を廃棄すること、
ｄ．培地を加えることによってインテグリンα１０発現を誘導することであって、前記培地が無血清培地または哺乳動物血清を含む培地であり、ならびに前記培地が血小板溶解物を含む、インテグリンα１０発現を誘導すること、
ｅ．インテグリンα１０を発現する細胞を選択すること、ならびに
ｆ．選択した細胞を拡張し、それによってＭＳＣの濃縮インテグリンα１０高集団を生成すること
を含み、
前記ＭＳＣの濃縮インテグリンα１０高集団の細胞の少なくとも６０％がインテグリンα１０サブユニットを発現する、方法。
【請求項３３】
ステップｄ．における前記培地が増殖因子ＦＧＦ２および／またはＴＧＦβを含む、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
前記ＭＳＣの濃縮インテグリンα１０高集団が請求項１〜３０のいずれか１項に記載のＭＳＣの濃縮インテグリンα１０高集団である、請求項３２または３３に記載の方法。