【手続補正書】
【提出日】平成17年6月27日(2005.6.27)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
架橋したコラーゲン分子を含むコラーゲンマトリックスを得る方法において、該コラーゲンマトリックスの蛋白分解的減成に対する耐性が、コラーゲンマトリックスにおけるヒドロキシアリシン架橋とアリシン架橋との比を制御することにより制御されるところの方法。
【請求項２】
コラーゲンマトリックスにおけるヒドロキシアリシン架橋とアリシン架橋との比が、コラーゲンテロペプチドのリシルヒドロキシル化レベルを制御することにより制御される、請求項１記載の方法。
【請求項３】
コラーゲンテロペプチドのリシルヒドロキシル化レベルがテロペプチドリシルヒドロキシラーゼ活性のレベルを制御することにより制御される、請求項２記載の方法。
【請求項４】
テロペプチドリシルヒドロキシラーゼ活性のレベルが、ＰＬＯＤ２遺伝子の発現を制御することによって、またはＰＬＯＤ２発現産物のテロペプチドリシルヒドロキシラーゼ活性を制御することによって制御される、請求項３記載の方法。
【請求項５】
ヒドロキシアリシン架橋とアリシン架橋との高められた比を示す組織からコラーゲンを得ること、および蛋白分解的減成に対して高められた耐性を有するコラーゲンマトリックスを調製するために該コラーゲンを使用することを含む、請求項１〜４のいずれか１項記載の方法。
【請求項６】
アリシン架橋を主として示す組織からコラーゲンを得ること、およびコラーゲンマトリックスを調製するために該コラーゲンを使用することを含み、蛋白分解的減成に対して高められた耐性を有するコラーゲンマトリックスが、ヒドロキシアリシン架橋とアリシン架橋との高められた比を示す組織から得られたコラーゲンを添加混合することにより得られるところの、請求項１〜４のいずれか１項記載の方法。
【請求項７】
ヒドロキシリシン残基とリシン残基との高められた比を有するテロペプチドを有するコラーゲンを産生する細胞を培養すること、およびヒドロキシアリシン架橋とアリシン架橋との高められた比故に蛋白分解的減成に対して高められた耐性を有するコラーゲンマトリックスを調製するために、該産生されたコラーゲンを使用することを含む、請求項１〜４のいずれか１項記載の方法。
【請求項８】
該コラーゲン産生細胞が、構成的に発現されるＰＬＯＤ２遺伝子組換え体を含む、請求項７記載の方法。
【請求項９】
該コラーゲン産生細胞が、ＰＬＯＤ２遺伝子の発現を刺激する組成物の存在下で培養される、請求項７記載の方法。
【請求項１０】
ヒドロキシアリシン架橋とアリシン架橋との低められた比を示す組織からコラーゲンを得ること、および蛋白分解的減成に対して低められた耐性を有するコラーゲンマトリックスを調製するために該コラーゲンを使用することを含む、請求項１〜４のいずれか１項記載の方法。
【請求項１１】
ヒドロキシアリシン架橋を主として示す組織からコラーゲンを得ること、およびコラーゲンマトリックスを調製するために該コラーゲンを使用することを含み、蛋白分解的減成に対して低められた耐性を有するコラーゲンマトリックスが、ヒドロキシアリシン架橋とアリシン架橋との低められた比を示す組織から得られたコラーゲンを添加混合することにより得られるところの、請求項１〜４のいずれか１項記載の方法。
【請求項１２】
ヒドロキシリシン残基とリシン残基との低められた比を有するテロペプチドを有するコラーゲンを産生する細胞を培養すること、およびヒドロキシアリシン架橋とアリシン架橋との低められた比故に蛋白分解的減成に対して低められた耐性を有するコラーゲンマトリックスを調製するために、該産生されたコラーゲンを使用することを含む、請求項１〜４のいずれか１項記載の方法。
【請求項１３】
該コラーゲン産生細胞が、ＰＬＯＤ２によってコードされるテロペプチドリシルヒドロキシラーゼの活性または産生を抑制する組成物の存在下で培養される、請求項１２記載の方法。
【請求項１４】
該組成物が、リシルオキシダーゼのレベルに影響を及ぼさない、請求項１３記載の方法。
【請求項１５】
コラーゲンのテロペプチドのリシルヒドロキシル化レベルを低めることができ、それによって、ヒドロキシアリシン架橋とアリシン架橋との低められた比を有するコラーゲンマトリックスが得られるところの化合物または組成物を含有する、哺乳類の線維症の症状を治療するための薬剤。
【請求項１６】
該化合物または組成物が、ＰＬＯＤ２遺伝子によってコードされるテロペプチドリシルヒドロキシラーゼの活性または産生を抑制することができ、しかしリシルオキシダーゼの活性または産生を抑制することができない、請求項１５記載の薬剤。
【請求項１７】
該化合物または組成物が、共基質２−オキソグルタレートの結合のために予定され、それによって２−オキソグルタレートを置き換えるところの該テロペプチドリシルヒドロキシラーゼの活性部位の１以上のサブ部位に結合する化合物を含む、請求項１６記載の薬剤。
【請求項１８】
該化合物または組成物が、該テロペプチドリシルヒドロキシラーゼの活性部位において結合したＦｅ2+をキレート化し、それによって、該Ｆｅ2+の酸素原子受容機能を抑制しおよび／または２−オキソグルタレートに対して該Ｆｅ2+を抑制する化合物を含む、請求項１６記載の薬剤。
【請求項１９】
該化合物または組成物が、該テロペプチドリシルヒドロキシラーゼを共触媒的に不活性化するアントラサイクリンまたはクマル酸類似体を含む、請求項１６記載の薬剤。
【請求項２０】
該化合物または組成物が、該テロペプチドリシルヒドロキシラーゼを共触媒的に不活性化する、ヒドロキシル化性位置において非生理的リシン誘導体を含むペプチドまたはペプチド様物質を含む、請求項１６記載の薬剤。
【請求項２１】
該化合物または組成物が、該テロペプチドリシルヒドロキシラーゼの活性部位のための天然基質と競合するヒドロキシル化性ペプチドまたはペプチド様物質を含む、請求項１６記載の薬剤。
【請求項２２】
該化合物または組成物が、該テロペプチドリシルヒドロキシラーゼの活性部位のための天然基質と競合する非ヒドロキシル化性ペプチドまたはペプチド様物質を含む、請求項１６記載の薬剤。
【請求項２３】
該化合物または組成物が、該テロペプチドリシルヒドロキシラーゼの活性部位に結合し、それによってアスコルベートを置き換える非還元性アスコルベートである化合物を含む、請求項１６記載の薬剤。
【請求項２４】
該化合物または組成物が、該テロペプチドリシルヒドロキシラーゼの非結合反応を促進することができ、その結果、該テロペプチドリシルヒドロキシラーゼの不活性な自己酸化形態のレベルを高めることができる、非ヒドロキシル化性配列を有するペプチドまたはペプチド様物質を含む、請求項１６記載の薬剤。
【請求項２５】
該化合物または組成物が、化合物ライブラリーをスクリーニングすること（コンビナトリアル化学）によって見出される化合物を含む、請求項１６記載の薬剤。
【請求項２６】
該化合物または組成物が、テロペプチドリシルヒドロキシラーゼの活性を選択的に抑制する抗体またはアプタマーを含む、請求項１６記載の薬剤。
【請求項２７】
該抗体またはアプタマーが、該テロペプチドリシルヒドロキシラーゼの活性部位とまたはその近くで反応する、請求項２６記載の薬剤。
【請求項２８】
該抗体またはアプタマーがテロペプチドと反応し、それによって、該酵素の反応を立体的妨害によって抑制する、請求項２６記載の薬剤。
【請求項２９】
該化合物または組成物が、テロペプチドリシルヒドロキシラーゼ遺伝子の転写を選択的に抑制する化合物を含む、請求項１６記載の薬剤。
【請求項３０】
該化合物がミノキシジルまたはミノキシジル類似体である、請求項２９記載の薬剤。
【請求項３１】
該化合物または組成物が、テロペプチドリシルヒドロキシラーゼ遺伝子から誘導されるｍＲＮＡの翻訳を抑制するためにアンチセンスＲＮＡを含む、請求項１６記載の薬剤。
【請求項３２】
該化合物または組成物が、テロペプチドに対して活性を示さないが内因性テロペプチドリシルヒドロキシラーゼと、その天然基質（コラーゲンテロペプチド）に関して競合する、変異したテロペプチドリシルヒドロキシラーゼをコードする組換え遺伝子を含む、請求項１６記載の薬剤。
【請求項３３】
該化合物または組成物が、ヒドロキシル化性ペプチドまたは、テロペプチドリシルヒドロキシラーゼによって通常触媒される反応に関してコラーゲンテロペプチドと競合するペプチドをコードする配列である、請求項１６記載の薬剤。
【請求項３４】
該哺乳類がヒトである、請求項１５記載の薬剤。
【請求項３５】
哺乳類の線維症経過の発症または状態を診断および／または監視する方法において、該哺乳類からサンプルを採取し、該サンプルを分析してＰＬＯＤ２遺伝子の発現レベルを決定し、該発現レベルを標品と比較することを含む方法。
【請求項３６】
ＰＬＯＤ２遺伝子由来のｍＲＮＡのレベルを決定するために、ノーザンブロット法または定量的もしくは半定量的ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ法）によってサンプルが分析される、請求項３５記載の方法。
【請求項３７】
ＰＬＯＤ２によってコードされるテロペプチドリシルヒドロキシラーゼのレベルを決定するために、ＰＬＯＤ２特異的抗体またはアプタマーを使用してサンプルが分析される、請求項３５記載の方法。
【請求項３８】
ＰＬＯＤ２によってコードされるテロペプチドリシルヒドロキシラーゼの酵素活性レベルを決定するために、ＰＬＯＤ２によってコードされるテロペプチドリシルヒドロキシラーゼに適する基質である少なくとも１つのヒドロキシル化性リシンを含むペプチドまたはポリペプチドを使用してサンプルが分析される、請求項３５記載の方法。
【請求項３９】
化合物または組成物をスクリーニングしてテロペプチドリシルヒドロキシラーゼ活性に対するそれらの効果を決定するためのアッセイにおいて、試験されるべき化合物または組成物を、酵素的に機能する条件下で、ＰＬＯＤ２によってコードされるテロペプチドリシルヒドロキシラーゼ酵素およびこの酵素に適する基質と接触させること、および該基質のリシルヒドロキシル化レベルを、試験されるべき化合物または組成物の不存在下での該基質のリシルヒドロキシル化レベルと比較して決定することを含むアッセイ。
【請求項４０】
基質が、式Ｑ−Ｌ−Ｓ−Ｙ−Ｇ−Ｙ−Ｄ−Ｅ−Ｋ−Ｓ−Ｔ−Ｇ−Ｇ−Ｉ−Ｓ−Ｖ−Ｐのペプチド、または他の、内部リシンを含みかつＮ−末端セリンまたはスレオニンを有しないペプチド、特にビオチン標識された基質であるビオチン−Ｑ−Ｌ−Ｓ−Ｙ−Ｇ−Ｙ−Ｄ−Ｅ−Ｋ−Ｓ−Ｔ−Ｇ−Ｇ−Ｉ−Ｓ−Ｖ−Ｐである、請求項３９記載のアッセイ。
【請求項４１】
試験されるべき化合物または組成物を、ＰＬＯＤ２によってコードされるテロペプチドリシルヒドロキシラーゼ酵素およびこの酵素に適する基質と接触させた後に、反応混合物から該基質を分離すること、該基質を、Ｈｙｌのヒドロキシル基を酸化してアルデヒド部分にすることができる過ヨウ素酸塩または他の酸化剤、およびヒドラジド染料と順次反応させること、および基質からの蛍光を測定することをさらに含む、請求項４０記載のアッセイ。
【請求項４２】
化合物または組成物をスクリーニングしてテロペプチドリシルヒドロキシラーゼ発現に対するそれらの効果を決定するためのアッセイにおいて、試験されるべき化合物または組成物の存在下で、ＰＬＯＤ２によってコードされるテロペプチドリシルヒドロキシラーゼ酵素を発現する細胞を成長させること、およびＰＬＯＤ２発現のレベルを、試験されるべき化合物または組成物の不存在下でのＰＬＯＤ２発現レベルと比較して決定することを含むアッセイ。