【手続補正書】
【提出日】令和2年11月30日(2020.11.30)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
薬剤を対象の血管外部位に送達するための、複数の除核赤血球系細胞を含んでなる製剤であって、前記複数の各細胞が、その表面上に、前記血管外部位に存在する抗原に対する結合剤を含んでなる、外因性ポリペプチドを含んでなり、
前記製剤が、前記対象の血流に送達されるように製剤化されている、製剤。
【請求項２】
対象の血管化固形腫瘍を治療するための、複数の除核赤血球系細胞を含んでなる製剤であって、
複数の各細胞が、その表面上に、腫瘍抗原に対する結合剤を含んでなる外因性ポリペプチドを含んでなり、
前記製剤が、前記対象の血流に送達されるように製剤化されている、製剤。
【請求項３】
前記外因性ポリペプチドが、膜貫通ドメインを含んでなり、前記結合剤が抗体である、請求項１または２に記載の製剤。
【請求項４】
前記抗体がｓｃＦｖである、請求項３に記載の製剤。
【請求項５】
前記外因性ポリペプチドが、膜貫通ドメインおよび抗体を含んでなり、前記抗体が抗ＣＤ２０抗体であり、前記抗原がＣＤ２０である、請求項１または２に記載の製剤。
【請求項６】
前記外因性ポリペプチドが、膜貫通ドメインおよび抗体を含んでなり、前記抗体が抗ＰＤ−Ｌ１抗体であり、前記抗原がＰＤ−Ｌ１である、請求項１または２に記載の製剤。
【請求項７】
前記外因性ポリペプチドが、１０４を超えるコピー数で存在する、請求項１〜６のいずれか一項に記載の製剤。
【請求項８】
前記赤血球系細胞が第２の外因性ポリペプチドをさらに含んでなる、請求項１〜７のいずれか一項に記載の製剤。
【請求項９】
（ａ）前記血管化固形腫瘍が機能的カスパーゼアポトーシス経路を欠いている、
（ｂ）前記血管化固形腫瘍が表８の変異を含んでなる、および
（ｃ）前記血管化固形腫瘍が表１の抗体治療薬に対して耐性である、
のうちの１つまたはそれより多くである、請求項２〜８のいずれか一項に記載の製剤。
【請求項１０】
前記製剤が、（ａ）腫瘍サイズの減少、（ｂ）腫瘍増殖速度の低下、（ｃ）腫瘍細胞死の増加、（ｄ）腫瘍進行の減少、（ｅ）転移数の減少、（ｆ）転移率の低下、（ｇ）腫瘍再発の減少、（ｈ）対象の生存率の増加、および（ｉ）対象の無増悪生存期間の延長の１つをもたらすのに有効な量および時間で投与される、請求項１〜９のいずれか一項に記載の製剤。
【請求項１１】
前記製剤が、標的がん細胞に、アポトーシスをもたらすのに有効な量および時間で投与される、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の製剤。
【請求項１２】
前記外因性ポリペプチドが、膜貫通ドメインおよび抗体を含んでなり、前記抗体が抗ＣＤ２０抗体であり、前記製剤ががん細胞の表面上のＣＤ２０の超架橋を誘導する、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の製剤。
【請求項１３】
前記対象がヒト対象である、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の製剤。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２６０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２６０】
実施例９：抗がん剤を発現するＲＣＴはシグナル伝達、増殖、サイトカイン分泌、および抗原免疫復活を促進する
図１４の表は、４−１ＢＢ−Ｌ、ＯＸ４０−Ｌ、ＧＩＴＲ−Ｌ、およびＩＣＯＳ−Ｌを発現するＲＣＴを用いて作成されたデータを要約する。シグナル伝達活性は、４−１ＢＢ−Ｌ、ＯＸ４０−Ｌ、およびＧＩＴＲ−Ｌ（それぞれＮＦｋＢ／Ｌｕｃを発現するジャーカット細胞と４−１ＢＢ、ＯＸ４０またはＧＩＴＲの受容体とを有する）について実施例５に記載のＮＦｋＢ／Ｌｕｃアッセイを指す。増殖アッセイおよびサイトカイン分泌アッセイを実施例５に記載されるように実施した。抗原免疫復活アッセイは、２ｕｇ／ｍＬのＣＭＶ感染細胞（Ａｓｔａｒｔｅ）の溶解物を使用して刺激した、ＣＭＶ陽性ドナー（Ａｓｔａｒｔｅ）由来の２００，０００個のＰＢＭＣを使用して実施した。次に、示される外因性タンパク質を発現する１００，０００個のＲＣＴと共に、ＰＢＭＣを４日間培養した。フローサイトメトリーを用いて、記憶Ｔ細胞集団の存在について細胞を分析し、ＣＤ４＋およびＣＤ４５ＲＯ＋である細胞を検出した。これらの実験からの上清を収集し、ＥＬＩＳＡを用いてＩＦＮｇについて分析した。これらの実験は、様々な共刺激分子を発現する赤血球系細胞がＴ細胞活性化を誘導することを示す。
本発明は、例えば、以下の項目を提供する。
(項目１)
複数の除核赤血球系細胞を含んでなる製剤の有効量を対象の血流に投与するステップを含んでなる、例えば結合剤などの薬剤を対象の血管外部位に送達する方法であって、前記複数の各細胞が、その表面上に、例えば腫瘍抗原などの前記血管外部位に存在する抗原に対する抗体などの結合剤を含んでなる、外因性ポリペプチドを含んでなり、
それによって例えば結合剤などの薬剤を前記血管外部位に送達する、方法。
(項目２)
複数の除核赤血球系細胞を含んでなる製剤を対象に（例えば対象の血流に）投与するステップを含んでなる、例えば難治性または再発性などの耐性のあるがんを有する対象を治療する方法であって、
前記複数の各細胞が、その表面上に、例えば腫瘍細胞抗原に対する抗体などの結合剤を含んでなる外因性ポリペプチドを前記がんを治療するのに十分な量で含んでなり、
それによって前記がんを治療する、方法。
(項目３)
複数の除核赤血球系細胞を含んでなる製剤を対象の血流に投与するステップを含んでなる、対象の血管化固形腫瘍を治療する方法であって、
複数の各細胞が、その表面上に、例えば腫瘍細胞抗原に対する抗体などの結合剤を含んでなる外因性ポリペプチドを前記血管化固形腫瘍を治療するのに十分な量で含んでなり、
それによって前記血管化固形腫瘍を治療する、方法。
(項目４)
前記外因性ポリペプチドが、膜貫通ドメインおよび抗体を含んでなる、項目１〜３のいずれか一項に記載の方法。
(項目５)
前記抗体がｓｃＦｖである、項目１〜４のいずれか一項に記載の方法。
(項目６)
前記抗体が抗ＣＤ２０抗体であり、前記腫瘍抗原がＣＤ２０である、項目１〜５のいずれか一項に記載の方法。
(項目７)
前記抗体が抗ＰＤ−Ｌ１抗体であり、前記腫瘍抗原がＰＤ−Ｌ１である、項目１〜６のいずれか一項に記載の方法。
(項目８)
前記外因性ポリペプチドが、１０４、１０５、または１０６を超えるコピー数で存在する、項目１〜７のいずれか一項に記載の方法。
(項目９)
前記赤血球系細胞が第２の外因性ポリペプチドをさらに含んでなる、項目１〜８のいずれか一項に記載の方法。
(項目１０)
前記がんが機能的カスパーゼアポトーシス経路を欠いている、項目１〜９のいずれか一項に記載の方法。
(項目１１)
前記がんが表８の変異を含んでなる、項目１〜１０のいずれか一項に記載の方法。
(項目１２)
前記がんが表１の抗体治療薬に対して耐性である、項目１〜１１のいずれか一項に記載の方法。
(項目１３)
前記複数の除核赤血球系細胞が、（ａ）腫瘍サイズの減少、（ｂ）腫瘍増殖速度の低下、（ｃ）腫瘍細胞死の増加、（ｄ）腫瘍進行の減少、（ｅ）転移数の減少、（ｆ）転移率の低下、（ｇ）腫瘍再発の減少、（ｈ）対象の生存率の増加、（ｉ）対象の無増悪生存期間の延長の１つ（またはそれ以上、例えば２つ以上、３つ以上、４つ以上）をもたらすのに有効な量および時間で投与される、項目１〜１２のいずれか一項に記載の方法。
(項目１４)
前記複数の除核赤血球系細胞が、例えばＢ細胞などの標的がん細胞に、例えばカスパーゼ非依存性アポトーシスおよび／またはカスパーゼ依存性アポトーシスなどのアポトーシスをもたらすのに有効な量および時間で投与される、項目１〜１３のいずれか一項に記載の方法。
(項目１５)
前記抗体が抗ＣＤ２０抗体であり、前記複数の除核赤血球系細胞が前記がん細胞の表面上のＣＤ２０の超架橋を誘導する、項目１〜１４のいずれか一項に記載の方法。
(項目１６)
（ｉ）前記腫瘍に内在する外因性タンパク質を発現する前記除核赤血球系細胞と、（ｉｉ）前記対象の血流中の外因性タンパク質を発現する前記除核赤血球系細胞の数との比率が、例えば前記腫瘍内の赤血球系細胞蓄積のピーク時に１：１を超える、項目１〜１５のいずれか一項に記載の方法。
(項目１７)
（ｉ）外因性タンパク質を発現する前記除核赤血球系細胞と、（ｉｉ）前記腫瘍内の内在性赤血球系細胞との比率が少なくとも２：１である、項目１〜１６のいずれか一項に記載の方法。
(項目１８)
前記腫瘍に存在する例えば抗体などの結合剤の量が、例えば遊離抗体などの、例えば赤血球系細胞に会合していない抗体などの、その他の点では類似した結合剤の量よりも少なくとも２倍多い、項目１〜１７のいずれか一項に記載の方法。
(項目１９)
外因性タンパク質を発現する前記除核赤血球系細胞の前記腫瘍内の持続性が、前記結合剤を欠くその他の点では類似した除核赤血球系細胞と比較して少なくとも２倍増加している、項目１〜１８のいずれか一項に記載の方法。
(項目２０)
前記対象がヒト対象である、項目１〜１９のいずれか一項に記載の方法。