【手続補正書】
【提出日】令和3年5月14日(2021.5.14)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
単一種の殺線虫結晶タンパク質から形成された、単離された天然の生物活性殺線虫結晶を含む医薬組成物において、該結晶タンパク質は芽胞不形成形態の宿主細菌によって産生され、該医薬組成物は、細菌芽胞、または結晶の形態の殺線虫結晶タンパク質以外の宿主細菌タンパク質を実質的に含まない、医薬組成物。
【請求項２】
ヒト対象への経口投与のために適当な賦形剤をさらに含む、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
宿主細菌がBacillus種である、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項４】
宿主細菌がBacillus thuringiensis（Ｂｔ）である、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項５】
宿主細菌がE. coliまたはP. fluorescens種である、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項６】
芽胞不形成宿主細菌が、前記天然の生物活性殺線虫結晶が該細菌のサイトゾル中に捕らえられるように、芽胞形成の欠失をもたらす遺伝子変異を持つよう遺伝子組換えされている、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項７】
芽胞形成の欠失をもたらす遺伝子変異が、下記のものからなる群から選択される１つまたはそれ以上の遺伝子の欠失または不活性化である、請求項６に記載の医薬組成物：kinA、kinB、spo0A、spo0B、spo0E、spo0F、spo0J、spo0M spoIIB、spoIID、spoIIE、spoIIF、spoIIG、spoIIL、spoIIM、spoIIIA、spoIIIB、spoIIIE、spoIVA、spoIVC、spoIVD、spoVG、spoVK、spoVL、spoVM、spoVN、spoVP、spoVQ、spoVID、σH、σF、σE、σG、およびσK。
【請求項８】
芽胞形成の欠失をもたらす遺伝子変異が、spo0A遺伝子の欠失または不活性化である、請求項６に記載の医薬組成物。
【請求項９】
宿主細菌が、前記単一種の殺線虫結晶タンパク質を芽胞不形成特異的プロモーターの制御下に発現するように遺伝子組換えされている、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
芽胞不形成特異的プロモーターが、Ｃｒｙ３Ａ、ＧｅｒＡ、ＧＮＡＴ、またはＴａｄＡプロモーターである、請求項９に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
単一種の殺線虫結晶タンパク質が、Ｃｒｙ５Ｂ、Ｃｒｙ５Ｃ、Ｃｒｙ５Ｄ、Ｃｒｙ６Ａ、Ｃｒｙ１３Ａ、Ｃｒｙ１４Ａ、Ｃｒｙ２１Ａ、Ｃｒｙ２１Ｂ、Ｃｒｙ５５Ｂ、ならびにそれらのバリアントおよびトランケーションからなる群から選択される、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
殺線虫結晶タンパク質が、Ｃｒｙ５Ｂまたはそのバリアントもしくはフラグメントである、請求項１１に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
殺線虫結晶タンパク質が、Ｃｒｙ５ＢバリアントＳｅｒ４０７Ｃｙｓである、請求項１２に記載の医薬組成物。
【請求項１４】
単離された天然の生物活性殺線虫結晶の形態の第２の結晶タンパク質をさらに含み、該結晶は該第２の結晶タンパク質のみから形成される、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
医薬組成物が、単離された天然の生物活性殺線虫結晶を少なくとも９５％の含量で含む、請求項１〜１４のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項１６】
単離された天然の生物活性殺線虫結晶が、経口投与で利用可能な投与形態にある、請求項１〜１５のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項１７】
医薬組成物が、乾燥粉末形態であり、医薬用カプセルに封入されている、請求項１〜１６のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項１８】
（ａ）単一種の殺線虫結晶タンパク質を発現するように遺伝子組換えされた芽胞不形成形態の宿主細菌を増殖させること；ここで、該芽胞不形成宿主細菌は、単一種の殺線虫結晶タンパク質から形成される天然の生物活性殺線虫結晶を産生し、該宿主細菌は増殖培地中で増殖され、場合により、該芽胞不形成宿主細菌は該天然の生物活性殺線虫結晶を該増殖培地中に放出する；
および
（ｂ）該天然の生物活性殺線虫結晶を単離および濃縮して、単離された天然の生物活性殺線虫結晶を形成すること
を含む、医薬組成物の製造方法。
【請求項１９】
宿主細菌がBacillus種である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
宿主細菌がBacillus thuringiensis（Ｂｔ）である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２１】
宿主細菌がE. coliまたはP. fluorescens種である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２２】
芽胞不形成宿主細菌が、前記天然の生物活性殺線虫結晶が該細菌のサイトゾル中に捕らえられるように、芽胞形成の欠失をもたらす遺伝子変異を持つよう遺伝子組換えされている、請求項１８に記載の方法。
【請求項２３】
芽胞形成の欠失をもたらす遺伝子変異が、下記のものからなる群から選択される１つまたはそれ以上の遺伝子の欠失または不活性化である、請求項２２に記載の方法：kinA、kinB、spo0A、spo0B、spo0E、spo0F、spo0J、spo0M spoIIB、spoIID、spoIIE、spoIIF、spoIIG、spoIIL、spoIIM、spoIIIA、spoIIIB、spoIIIE、spoIVA、spoIVC、spoIVD、spoVG、spoVK、spoVL、spoVM、spoVN、spoVP、spoVQ、spoVID、σH、σF、σE、σG、およびσK。
【請求項２４】
芽胞形成の欠失をもたらす遺伝子変異が、spo0A遺伝子の欠失または不活性化である、請求項２２に記載の方法。
【請求項２５】
宿主細菌が、単一種の殺線虫結晶タンパク質を芽胞不形成特異的プロモーターの制御下に発現するように遺伝子組換えされている、請求項１８に記載の方法。
【請求項２６】
芽胞不形成特異的プロモーターが、Ｃｒｙ３Ａ、ＧｅｒＡ、ＧＮＡＴ、またはＴａｄＡプロモーターである、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
単一種の殺線虫結晶タンパク質が、Ｃｒｙ５Ｂ、Ｃｒｙ５Ｃ、Ｃｒｙ５Ｄ、Ｃｒｙ６Ａ、Ｃｒｙ１３Ａ、Ｃｒｙ１４Ａ、Ｃｒｙ２１Ａ、Ｃｒｙ２１Ｂ、Ｃｒｙ５５Ｂ、ならびにそれらのバリアントおよびトランケーションからなる群から選択される、請求項１８に記載の方法。
【請求項２８】
殺線虫結晶タンパク質が、Ｃｒｙ５Ｂまたはそのバリアントもしくはフラグメントである、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
殺線虫結晶タンパク質が、Ｃｒｙ５ＢバリアントＳｅｒ４０７Ｃｙｓである、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
前記芽胞不形成宿主細菌を、該宿主細菌を不活化するために抗菌化合物に暴露するステップをさらに含む、請求項１８に記載の方法。
【請求項３１】
抗菌化合物が沃素である、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
抗菌化合物が抗生物質医薬である、請求項３０に記載の方法。
【請求項３３】
抗菌化合物がβ−ラクタム抗生物質である、請求項３０に記載の方法。
【請求項３４】
抗菌化合物が、テルペン、ヘキサンおよびホルムアルデヒドからなる群から選択される有機溶媒である、請求項３０に記載の方法。
【請求項３５】
抗菌化合物がテルペンである、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
テルペンが、チモール、オイゲノール、ゲラニオール、カルバクロールおよびシトラールまたはそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
テルペンがカルバクロールである、請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
抗菌化合物がヘキサンである、請求項３４に記載の方法。
【請求項３９】
前記殺線虫結晶タンパク質から前記抗菌化合物、可溶性細胞成分、脂質および細胞壁デブリを抽出するために、前記不活化された宿主細菌に食用油を加えるステップをさらに含む、請求項３０に記載の方法。
【請求項４０】
食用油がトウモロコシ油である、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
前記殺線虫結晶タンパク質から前記抗菌化合物を抽出するために、前記不活化された宿主細菌に有機溶媒を加えるステップをさらに含む、請求項３０に記載の方法。
【請求項４２】
有機溶媒がヘキサンである、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
ヘキサンが、不活化宿主細菌に５０％ v/vまで加えられる、請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】
有機溶媒と不活化宿主細菌の混合物を遠心分離して前記殺線虫結晶タンパク質をペレット化するステップをさらに含む、請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
前記不活化された宿主細菌をホモジナイズして、天然の生物活性殺線虫結晶を含む細菌溶解物を形成するステップをさらに含む、請求項３０に記載の方法。
【請求項４６】
前記細菌溶解物を濃縮するステップをさらに含む、請求項４５に記載の方法。
【請求項４７】
細菌溶解物を濃縮するステップが、遠心分離、限外濾過および透析からなる群から選択される、請求項４６に記載の方法。
【請求項４８】
前記単離された天然の生物活性殺線虫結晶に、薬学的に許容しうる賦形剤；助剤および佐剤；または等張化剤を加えるステップをさらに含む、請求項１８に記載の方法。
【請求項４９】
前記単離された天然の生物活性殺線虫結晶を凍結乾燥または噴霧乾燥することをさらに含む、請求項４８に記載の方法。
【請求項５０】
前記単離された天然の生物活性殺線虫結晶を医薬用カプセルに充填することをさらに含む、請求項４８に記載の方法。
【請求項５１】
（ａ）単一種の殺線虫結晶タンパク質を発現するように組換えられた芽胞不形成形態の宿主細菌を増殖させること；ここで、該芽胞不形成宿主細菌は、単一種の殺線虫結晶タンパク質から形成される天然の生物活性殺線虫結晶を産生する；
（ｂ）該増殖した芽胞不形成宿主細菌を、抗菌化合物への暴露により不活化すること；
（ｃ）該不活化した芽胞不形成宿主細菌をホモジナイズして、細菌溶解物を形成すること；および
（ｄ）該細菌溶解物中の天然の生物活性殺線虫結晶を濃縮して、単離された天然の生物活性殺線虫結晶を形成すること
を含む、医薬組成物の製造方法。
【請求項５２】
前記増殖した芽胞不形成宿主細菌を不活化の前に濃縮するステップをさらに含む、請求項５１に記載の方法。
【請求項５３】
宿主細菌がBacillus種である、請求項５１に記載の方法。
【請求項５４】
宿主細菌がBacillus thuringiensis（Ｂｔ）である、請求項５１に記載の方法。
【請求項５５】
宿主細菌がE. coliまたはP. fluorescens種である、請求項５１に記載の方法。
【請求項５６】
芽胞不形成宿主細菌が、前記天然の生物活性殺線虫結晶が該細菌のサイトゾル中に捕らえられるように、芽胞形成の欠失をもたらす遺伝子変異を持つよう遺伝子組換えされている、請求項５１に記載の方法。
【請求項５７】
芽胞形成の欠失をもたらす遺伝子変異が、下記のものからなる群から選択される１つまたはそれ以上の遺伝子の欠失または不活性化である、請求項５６に記載の方法：kinA、kinB、spo0A、spo0B、spo0E、spo0F、spo0J、spo0M spoIIB、spoIID、spoIIE、spoIIF、spoIIG、spoIIL、spoIIM、spoIIIA、spoIIIB、spoIIIE、spoIVA、spoIVC、spoIVD、spoVG、spoVK、spoVL、spoVM、spoVN、spoVP、spoVQ、spoVID、σH、σF、σE、σG、およびσK。
【請求項５８】
芽胞形成の欠失をもたらす遺伝子変異が、spo0A遺伝子の欠失または不活性化である、請求項５６に記載の方法。
【請求項５９】
宿主細菌が、前記単一種の殺線虫結晶タンパク質を芽胞不形成特異的プロモーターの制御下に発現するように遺伝子組換えされている、請求項５６に記載の方法。
【請求項６０】
芽胞不形成特異的プロモーターが、Ｃｒｙ３Ａ、ＧｅｒＡ、ＧＮＡＴ、またはＴａｄＡプロモーターである、請求項５９に記載の方法。
【請求項６１】
単一種の細胞質結晶タンパク質が、Ｃｒｙ５Ｂ、Ｃｒｙ６Ａ、Ｃｒｙ５Ｃ、Ｃｒｙ５Ｄ、Ｃｒｙ１３Ａ、Ｃｒｙ１４Ａ、Ｃｒｙ２１Ａ、Ｃｒｙ２１Ｂ、およびＣｒｙ５５Ｂからなる群から選択される、請求項５１に記載の方法。
【請求項６２】
殺線虫結晶タンパク質が、Ｃｒｙ５Ｂまたはそのバリアントもしくはフラグメントである、請求項６１に記載の方法。
【請求項６３】
殺線虫結晶タンパク質が、Ｃｒｙ５ＢバリアントＳｅｒ４０７Ｃｙｓである、請求項６２に記載の方法。
【請求項６４】
抗菌化合物が沃素である、請求項５１に記載の方法。
【請求項６５】
抗菌化合物が抗生物質医薬である、請求項５１に記載の方法。
【請求項６６】
抗菌化合物がβ−ラクタム抗生物質である、請求項５１に記載の方法。
【請求項６７】
抗菌化合物が、テルペン、ヘキサンおよびホルムアルデヒドからなる群から選択される有機溶媒である、請求項５１に記載の方法。
【請求項６８】
抗菌化合物がテルペンである、請求項６７に記載の方法。
【請求項６９】
テルペンが、チモール、オイゲノール、ゲラニオール、カルバクロールおよびシトラールまたはそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項６８に記載の方法。
【請求項７０】
テルペンがカルバクロールである、請求項６９に記載の方法。
【請求項７１】
抗菌化合物がヘキサンである、請求項７０に記載の方法。
【請求項７２】
前記不活化された宿主細菌から前記抗菌化合物および細胞壁デブリを抽出するステップをさらに含む、請求項５１に記載の方法。
【請求項７３】
前記殺線虫結晶タンパク質から前記不活化剤を抽出するために、前記不活化された宿主細菌に食用油を加えるステップをさらに含む、請求項５１に記載の方法。
【請求項７４】
食用油がトウモロコシ油である、請求項７３に記載の方法。
【請求項７５】
前記殺線虫結晶タンパク質から前記抗菌化合物、可溶性細胞成分、脂質および細胞壁デブリを抽出するために、前記不活化された宿主細菌に有機溶媒を加えるステップをさらに含む、請求項５１に記載の方法。
【請求項７６】
有機溶媒がヘキサンである、請求項７５に記載の方法。
【請求項７７】
ヘキサンが、不活化宿主細菌に５０％ v/vまで加えられる、請求項７６に記載の方法。
【請求項７８】
有機溶媒と不活化宿主細菌の混合物を遠心分離して前記殺線虫結晶タンパク質をペレット化するステップをさらに含む、請求項７５に記載の方法。
【請求項７９】
前記単離された天然の生物活性殺線虫結晶を、経口的に利用可能な投与形態に製剤化するステップをさらに含む、請求項５１〜７８のいずれかに記載の方法。
【請求項８０】
製剤化ステップが、前記単離された天然の生物活性殺線虫結晶を凍結乾燥または噴霧乾燥することを含む、請求項７９に記載の方法。
【請求項８１】
製剤化ステップが、前記単離され精製された天然の生物活性殺線虫結晶を医薬用カプセルに充填するステップことを含む、請求項７９に記載の方法。
【請求項８２】
対象における寄生虫または蠕虫感染の処置用である、請求項１〜１７のいずれかに記載の医薬組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３１】
前記処置方法のいくつかの態様において、前記組成物は、第２の結晶タンパク質のみから形成される単離された天然の生物活性殺線虫結晶の形態の第２の結晶タンパク質をさらに含む。いくつかの態様において、前記医薬組成物は、少なくとも約９５％の、単離された天然の生物活性殺線虫結晶を含む。いくつかの態様において、前記組成物は、乾燥粉末形態であり、医薬用カプセルに充填される。
本発明の実施形態をさらに記載する：
［項１］
単一種の殺線虫結晶タンパク質から形成された、単離された天然の生物活性殺線虫結晶を含む医薬組成物において、該結晶タンパク質は芽胞不形成形態の宿主細菌によって産生され、該医薬組成物は、細菌芽胞、または結晶の形態の殺線虫結晶タンパク質以外の宿主細菌タンパク質を実質的に含まない、医薬組成物。
［項２］
ヒト対象への経口投与のために適当な賦形剤をさらに含む、上記項１に記載の医薬組成物。
［項３］
宿主細菌がBacillus種である、上記項１に記載の医薬組成物。
［項４］
宿主細菌がBacillus thuringiensis（Ｂｔ）である、上記項１に記載の医薬組成物。
［項５］
宿主細菌がE. coliまたはP. fluorescens種である、上記項１に記載の医薬組成物。
［項６］
芽胞不形成宿主細菌が、前記天然の生物活性殺線虫結晶が該細菌のサイトゾル中に捕らえられるように、芽胞形成の欠失をもたらす遺伝子変異を持つよう遺伝子組換えされている、上記項１に記載の医薬組成物。
［項７］
芽胞形成の欠失をもたらす遺伝子変異が、下記のものからなる群から選択される１つまたはそれ以上の遺伝子の欠失または不活性化である、上記項６に記載の医薬組成物：kinA、kinB、spo0A、spo0B、spo0E、spo0F、spo0J、spo0M spoIIB、spoIID、spoIIE、spoIIF、spoIIG、spoIIL、spoIIM、spoIIIA、spoIIIB、spoIIIE、spoIVA、spoIVC、spoIVD、spoVG、spoVK、spoVL、spoVM、spoVN、spoVP、spoVQ、spoVID、σH、σF、σE、σG、およびσK。
［項８］
芽胞形成の欠失をもたらす遺伝子変異が、spo0A遺伝子の欠失または不活性化である、上記項６に記載の医薬組成物。
［項９］
宿主細菌が、前記単一種の殺線虫結晶タンパク質を芽胞不形成特異的プロモーターの制御下に発現するように遺伝子組換えされている、上記項１に記載の医薬組成物。
［項１０］
芽胞不形成特異的プロモーターが、Ｃｒｙ３Ａ、ＧｅｒＡ、ＧＮＡＴ、またはＴａｄＡプロモーターである、上記項９に記載の医薬組成物。
［項１１］
単一種の殺線虫結晶タンパク質が、Ｃｒｙ５Ｂ、Ｃｒｙ５Ｃ、Ｃｒｙ５Ｄ、Ｃｒｙ６Ａ、Ｃｒｙ１３Ａ、Ｃｒｙ１４Ａ、Ｃｒｙ２１Ａ、Ｃｒｙ２１Ｂ、Ｃｒｙ５５Ｂ、ならびにそれらのバリアントおよびトランケーションからなる群から選択される、上記項１に記載の医薬組成物。
［項１２］
殺線虫結晶タンパク質が、Ｃｒｙ５Ｂまたはそのバリアントもしくはフラグメントである、上記項１１に記載の医薬組成物。
［項１３］
殺線虫結晶タンパク質が、Ｃｒｙ５ＢバリアントＳｅｒ４０７Ｃｙｓである、上記項１２に記載の医薬組成物。
［項１４］
単離された天然の生物活性殺線虫結晶の形態の第２の結晶タンパク質をさらに含み、該結晶は該第２の結晶タンパク質のみから形成される、上記項１に記載の医薬組成物。
［項１５］
医薬組成物が、単離された天然の生物活性殺線虫結晶を少なくとも９５％の含量で含む、上記項１〜１４のいずれかに記載の医薬組成物。
［項１６］
単離された天然の生物活性殺線虫結晶が、経口投与で利用可能な投与形態にある、上記項１〜１５のいずれかに記載の医薬組成物。
［項１７］
医薬組成物が、乾燥粉末形態であり、医薬用カプセルに封入されている、上記項１〜１６のいずれかに記載の医薬組成物。
［項１８］
（ａ）単一種の殺線虫結晶タンパク質を発現するように遺伝子組換えされた芽胞不形成形態の宿主細菌を増殖させること；ここで、該芽胞不形成宿主細菌は、単一種の殺線虫結晶タンパク質から形成される天然の生物活性殺線虫結晶を産生し、該宿主細菌は増殖培地中で増殖され、場合により、該芽胞不形成宿主細菌は該天然の生物活性殺線虫結晶を該増殖培地中に放出する；
および
（ｂ）該天然の生物活性殺線虫結晶を単離および濃縮して、単離された天然の生物活性殺線虫結晶を形成すること
を含む、医薬組成物の製造方法。
［項１９］
宿主細菌がBacillus種である、上記項１８に記載の方法。
［項２０］
宿主細菌がBacillus thuringiensis（Ｂｔ）である、上記項１８に記載の方法。
［項２１］
宿主細菌がE. coliまたはP. fluorescens種である、上記項１８に記載の方法。
［項２２］
芽胞不形成宿主細菌が、前記天然の生物活性殺線虫結晶が該細菌のサイトゾル中に捕らえられるように、芽胞形成の欠失をもたらす遺伝子変異を持つよう遺伝子組換えされている、上記項１８に記載の方法。
［項２３］
芽胞形成の欠失をもたらす遺伝子変異が、下記のものからなる群から選択される１つまたはそれ以上の遺伝子の欠失または不活性化である、上記項２２に記載の方法：kinA、kinB、spo0A、spo0B、spo0E、spo0F、spo0J、spo0M spoIIB、spoIID、spoIIE、spoIIF、spoIIG、spoIIL、spoIIM、spoIIIA、spoIIIB、spoIIIE、spoIVA、spoIVC、spoIVD、spoVG、spoVK、spoVL、spoVM、spoVN、spoVP、spoVQ、spoVID、σH、σF、σE、σG、およびσK。
［項２４］
芽胞形成の欠失をもたらす遺伝子変異が、spo0A遺伝子の欠失または不活性化である、上記項２２に記載の方法。
［項２５］
宿主細菌が、単一種の殺線虫結晶タンパク質を芽胞不形成特異的プロモーターの制御下に発現するように遺伝子組換えされている、上記項１８に記載の方法。
［項２６］
芽胞不形成特異的プロモーターが、Ｃｒｙ３Ａ、ＧｅｒＡ、ＧＮＡＴ、またはＴａｄＡプロモーターである、上記項２５に記載の方法。
［項２７］
単一種の殺線虫結晶タンパク質が、Ｃｒｙ５Ｂ、Ｃｒｙ５Ｃ、Ｃｒｙ５Ｄ、Ｃｒｙ６Ａ、Ｃｒｙ１３Ａ、Ｃｒｙ１４Ａ、Ｃｒｙ２１Ａ、Ｃｒｙ２１Ｂ、Ｃｒｙ５５Ｂ、ならびにそれらのバリアントおよびトランケーションからなる群から選択される、上記項１８に記載の方法。
［項２８］
殺線虫結晶タンパク質が、Ｃｒｙ５Ｂまたはそのバリアントもしくはフラグメントである、上記項２７に記載の方法。
［項２９］
殺線虫結晶タンパク質が、Ｃｒｙ５ＢバリアントＳｅｒ４０７Ｃｙｓである、上記項２８に記載の方法。
［項３０］
前記芽胞不形成宿主細菌を、該宿主細菌を不活化するために抗菌化合物に暴露するステップをさらに含む、上記項１８に記載の方法。
［項３１］
抗菌化合物が沃素である、上記項３０に記載の方法。
［項３２］
抗菌化合物が抗生物質医薬である、上記項３０に記載の方法。
［項３３］
抗菌化合物がβ−ラクタム抗生物質である、上記項３０に記載の方法。
［項３４］
抗菌化合物が、テルペン、ヘキサンおよびホルムアルデヒドからなる群から選択される有機溶媒である、上記項３０に記載の方法。
［項３５］
抗菌化合物がテルペンである、上記項３４に記載の方法。
［項３６］
テルペンが、チモール、オイゲノール、ゲラニオール、カルバクロールおよびシトラールまたはそれらの組み合わせからなる群から選択される、上記項３５に記載の方法。
［項３７］
テルペンがカルバクロールである、上記項３６に記載の方法。
［項３８］
抗菌化合物がヘキサンである、上記項３４に記載の方法。
［項３９］
前記殺線虫結晶タンパク質から前記抗菌化合物、可溶性細胞成分、脂質および細胞壁デブリを抽出するために、前記不活化された宿主細菌に食用油を加えるステップをさらに含む、上記項３０に記載の方法。
［項４０］
食用油がトウモロコシ油である、上記項３９に記載の方法。
［項４１］
前記殺線虫結晶タンパク質から前記抗菌化合物を抽出するために、前記不活化された宿主細菌に有機溶媒を加えるステップをさらに含む、上記項３０に記載の方法。
［項４２］
有機溶媒がヘキサンである、上記項４１に記載の方法。
［項４３］
ヘキサンが、不活化宿主細菌に５０％ v/vまで加えられる、上記項４２に記載の方法。
［項４４］
有機溶媒と不活化宿主細菌の混合物を遠心分離して前記殺線虫結晶タンパク質をペレット化するステップをさらに含む、上記項４３に記載の方法。
［項４５］
前記不活化された宿主細菌をホモジナイズして、天然の生物活性殺線虫結晶を含む細菌溶解物を形成するステップをさらに含む、上記項３０に記載の方法。
［項４６］
前記細菌溶解物を濃縮するステップをさらに含む、上記項４５に記載の方法。
［項４７］
細菌溶解物を濃縮するステップが、遠心分離、限外濾過および透析からなる群から選択される、上記項４６に記載の方法。
［項４８］
前記単離された天然の生物活性殺線虫結晶を、経口的に利用可能な投与形態に製剤化するステップをさらに含む、上記項１８に記載の方法。
［項４９］
製剤化ステップが、単離された天然の生物活性殺線虫結晶を凍結乾燥または噴霧乾燥することを含む、上記項４８に記載の方法。
［項５０］
製剤化ステップが、単離された天然の生物活性殺線虫結晶を医薬用カプセルに充填することを含む、上記項４８に記載の方法。
［項５１］
（ａ）単一種の殺線虫結晶タンパク質を発現するように組換えられた芽胞不形成形態の宿主細菌を増殖させること；ここで、該芽胞不形成宿主細菌は、単一種の殺線虫結晶タンパク質から形成される天然の生物活性殺線虫結晶を産生する；
（ｂ）該増殖した芽胞不形成宿主細菌を、抗菌化合物への暴露により不活化すること；
（ｃ）該不活化した芽胞不形成宿主細菌をホモジナイズして、細菌溶解物を形成すること；および
（ｄ）該細菌溶解物中の天然の生物活性殺線虫結晶を濃縮して、単離された天然の生物活性殺線虫結晶を形成すること
を含む、医薬組成物の製造方法。
［項５２］
前記増殖した芽胞不形成宿主細菌を不活化の前に濃縮するステップをさらに含む、上記項５１に記載の方法。
［項５３］
宿主細菌がBacillus種である、上記項５１に記載の方法。
［項５４］
宿主細菌がBacillus thuringiensis（Ｂｔ）である、上記項５１に記載の方法。
［項５５］
宿主細菌がE. coliまたはP. fluorescens種である、上記項５１に記載の方法。
［項５６］
芽胞不形成宿主細菌が、前記天然の生物活性殺線虫結晶が該細菌のサイトゾル中に捕らえられるように、芽胞形成の欠失をもたらす遺伝子変異を持つよう遺伝子組換えされている、上記項５１に記載の方法。
［項５７］
芽胞形成の欠失をもたらす遺伝子変異が、下記のものからなる群から選択される１つまたはそれ以上の遺伝子の欠失または不活性化である、上記項５６に記載の方法：kinA、kinB、spo0A、spo0B、spo0E、spo0F、spo0J、spo0M spoIIB、spoIID、spoIIE、spoIIF、spoIIG、spoIIL、spoIIM、spoIIIA、spoIIIB、spoIIIE、spoIVA、spoIVC、spoIVD、spoVG、spoVK、spoVL、spoVM、spoVN、spoVP、spoVQ、spoVID、σH、σF、σE、σG、およびσK。
［項５８］
芽胞形成の欠失をもたらす遺伝子変異が、spo0A遺伝子の欠失または不活性化である、上記項５６に記載の方法。
［項５９］
宿主細菌が、前記単一種の殺線虫結晶タンパク質を芽胞不形成特異的プロモーターの制御下に発現するように遺伝子組換えされている、上記項５６に記載の方法。
［項６０］
芽胞不形成特異的プロモーターが、Ｃｒｙ３Ａ、ＧｅｒＡ、ＧＮＡＴ、またはＴａｄＡプロモーターである、上記項５９に記載の方法。
［項６１］
単一種の細胞質結晶タンパク質が、Ｃｒｙ５Ｂ、Ｃｒｙ６Ａ、Ｃｒｙ５Ｃ、Ｃｒｙ５Ｄ、Ｃｒｙ１３Ａ、Ｃｒｙ１４Ａ、Ｃｒｙ２１Ａ、Ｃｒｙ２１Ｂ、Ｃｒｙ５５Ｂ、ならびにそれらのバリアントおよびトランケーションからなる群から選択される、上記項５１に記載の方法。
［項６２］
殺線虫結晶タンパク質が、Ｃｒｙ５Ｂまたはそのバリアントもしくはフラグメントである、上記項６１に記載の方法。
［項６３］
殺線虫結晶タンパク質が、Ｃｒｙ５ＢバリアントＳｅｒ４０７Ｃｙｓである、上記項６２に記載の方法。
［項６４］
抗菌化合物が沃素である、上記項５１に記載の方法。
［項６５］
抗菌化合物が抗生物質医薬である、上記項５１に記載の方法。
［項６６］
抗菌化合物がβ−ラクタム抗生物質である、上記項５１に記載の方法。
［項６７］
抗菌化合物が、テルペン、ヘキサンおよびホルムアルデヒドからなる群から選択される有機溶媒である、上記項５１に記載の方法。
［項６８］
抗菌化合物がテルペンである、上記項６７に記載の方法。
［項６９］
テルペンが、チモール、オイゲノール、ゲラニオール、カルバクロールおよびシトラールまたはそれらの組み合わせからなる群から選択される、上記項６８に記載の方法。
［項７０］
テルペンがカルバクロールである、上記項６９に記載の方法。
［項７１］
抗菌化合物がヘキサンである、上記項７０に記載の方法。
［項７２］
前記不活化された宿主細菌から前記抗菌化合物および細胞壁デブリを抽出するステップをさらに含む、上記項５１に記載の方法。
［項７３］
前記殺線虫結晶タンパク質から前記不活化剤を抽出するために、前記不活化された宿主細菌に食用油を加えるステップをさらに含む、上記項５１に記載の方法。
［項７４］
食用油がトウモロコシ油である、上記項７３に記載の方法。
［項７５］
前記殺線虫結晶タンパク質から前記抗菌化合物、可溶性細胞成分、脂質および細胞壁デブリを抽出するために、前記不活化された宿主細菌に有機溶媒を加えるステップをさらに含む、上記項５１に記載の方法。
［項７６］
有機溶媒がヘキサンである、上記項７５に記載の方法。
［項７７］
ヘキサンが、不活化宿主細菌に５０％ v/vまで加えられる、上記項７６に記載の方法。
［項７８］
有機溶媒と不活化宿主細菌の混合物を遠心分離して前記殺線虫結晶タンパク質をペレット化するステップをさらに含む、上記項７５に記載の方法。
［項７９］
前記単離された天然の生物活性殺線虫結晶を、経口的に利用可能な投与形態に製剤化するステップをさらに含む、上記項５１〜７８のいずれかに記載の方法。
［項８０］
製剤化ステップが、前記単離された天然の生物活性殺線虫結晶を凍結乾燥または噴霧乾燥することを含む、上記項７９に記載の方法。
［項８１］
製剤化ステップが、前記単離され精製された天然の生物活性殺線虫結晶を医薬用カプセルに充填するステップことを含む、上記項７９に記載の方法。
［項８２］
対象において寄生虫または蠕虫感染を処置するための方法であって、
単一種の殺線虫結晶タンパク質から形成される、単離された天然の生物活性殺線虫結晶を含む医薬組成物を処置有効量で対象に投与することを含み、ここで、該医薬組成物は、細菌芽胞、または結晶の形態の殺線虫結晶タンパク質以外の宿主細菌タンパク質を実質的に含まない、方法。
［項８３］
殺線虫結晶タンパク質が、Ｃｒｙ５Ｂ、Ｃｒｙ５Ｃ、Ｃｒｙ５Ｄ、Ｃｒｙ６Ａ、Ｃｒｙ１３Ａ、Ｃｒｙ１４Ａ、Ｃｒｙ２１Ａ、Ｃｒｙ２１Ｂ、Ｃｒｙ５５Ｂ、ならびにそれらのバリアントおよびトランケーションからなる群から選択される、上記項８２に記載の方法。
［項８４］
殺線虫結晶タンパク質がＣｒｙ５Ｂである、上記項８２に記載の方法。
［項８５］
殺線虫結晶タンパク質が、Ｃｒｙ５ＢバリアントＳｅｒ４０７Ｃｙｓである、上記項８２に記載の方法。
［項８６］
医薬組成物が、単離された天然の生物活性殺線虫結晶の形態の第２の結晶タンパク質をさらに含み、該結晶は該第２の結晶タンパク質のみから形成される、上記項８２に記載の方法。
［項８７］
医薬組成物が、単離された天然の生物活性殺線虫結晶を少なくとも約９５％の含量で含む、上記項８２に記載の方法。
［項８８］
医薬組成物が、乾燥粉末形態であり、医薬用カプセルに封入されている、上記項８２に記載の方法。