【手続補正書】
【提出日】令和3年4月19日(2021.4.19)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ブルトン型チロシンキナーゼ（BTK）の発現維持用ポリヌクレオチドであって、
遍在性クロマチンオープニングエレメント（UCOE）をコードする第１の配列；
プロモーターをコードする第２の配列；および
BTKをコードする第３の配列
を含むポリヌクレオチド。
【請求項２】
前記UCOEが、２ｋｂ、１．５ｋｂ、１ｋｂ、０．７５ｋｂ、０．５ｋｂもしくは０．２５ｋｂ、またはこれらの数値のいずれか２つによって定義される範囲内の長さ（ｋｂ）である、請求項１に記載のポリヌクレオチド。
【請求項３】
第１の配列が、配列番号１および／または配列番号２に示される核酸配列を含む、請求項１または２に記載のポリヌクレオチド。
【請求項４】
前記プロモーターがBTKプロモーターである、請求項１〜４のいずれか１項に記載のポリヌクレオチド。
【請求項５】
前記BTKプロモーターが、配列番号５に示される核酸配列を含む、請求項４に記載のポリヌクレオチド。
【請求項６】
第３の配列が、ヒトにおける発現用にコドン最適化されている、請求項１〜５のいずれか１項に記載のポリヌクレオチド。
【請求項７】
第３の配列が、配列番号６または配列番号７に示される配列を含む、請求項６に記載のポリヌクレオチド。
【請求項８】
前記プロモーターがＢ細胞特異的プロモーターである、請求項１〜７のいずれか１項に記載のポリヌクレオチド。
【請求項９】
前記Ｂ細胞特異的プロモーターが、Ｂ細胞特異的プロモーターB29を含む、請求項８に記載のポリヌクレオチド。
【請求項１０】
前記Ｂ細胞特異的プロモーターが内在性プロモーターである、請求項８または９に記載のポリヌクレオチド。
【請求項１１】
前記UCOEが逆方向である、請求項１〜１０のいずれか１項に記載のポリヌクレオチド。
【請求項１２】
前記UCOEが順方向である、請求項１〜１０のいずれか１項に記載のポリヌクレオチド。
【請求項１３】
請求項１〜１２のいずれか１項に記載のポリヌクレオチドを含むベクター。
【請求項１４】
ウイルスベクターである、請求項１３に記載のベクター。
【請求項１５】
レンチウイルスベクターである、請求項１３または１４に記載のベクター。
【請求項１６】
請求項１〜１２のいずれか１項に記載のポリヌクレオチドまたは請求項１３〜１５のいずれか１項に記載のベクターを含む細胞。
【請求項１７】
Ｂ細胞である、請求項１６に記載の細胞。
【請求項１８】
骨髄系細胞である、請求項１６に記載の細胞。
【請求項１９】
造血幹細胞である、請求項１６に記載の細胞。
【請求項２０】
ＣＤ３４＋造血幹細胞である、請求項１６に記載の細胞。
【請求項２１】
Ｂ細胞の生存、増殖および／または分化の促進を必要とする対象において、Ｂ細胞の生存、増殖および／または分化を促進する方法における、請求項１６〜２０のいずれか１項に記載の細胞の使用。
【請求項２２】
対象において、Ｘ連鎖無γグロブリン血症（XLA）またはXLAに伴う症状を治療、抑制または緩和するための、請求項１６〜２０のいずれか１項に記載の細胞の使用。
【請求項２３】
前記細胞が、前記対象の自家細胞である、請求項２１または２２に記載の使用。
【請求項２４】
前記細胞が、養子細胞移入により前記対象に投与される、請求項２１〜２３のいずれか１項に記載の使用。
【請求項２５】
免疫グロブリン置換療法および抗微生物剤から選択される別の治療法と併用して、前記細胞が前記対象に投与される、請求項２１〜２４のいずれか１項に記載の使用。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１１】
第４の態様において、Ｂ細胞の生存、増殖および／または分化の促進または増強を必要とする対象において、Ｂ細胞の生存、増殖および／または分化を促進または増強する方法であって、本発明の実施形態のいずれか１つに記載の細胞、または本発明の実施形態のいずれか１つに記載のポリヌクレオチドもしくは本発明の実施形態のいずれか１つに記載のベクターを含む細胞を前記対象に投与すること、任意で、前記細胞を投与する前に、Ｂ細胞の生存、増殖および／もしくは分化を促進し得る治療法の恩恵を受け得る対象として前記対象を特定もしくは選択すること、ならびに／または任意で、前記細胞を投与した後に、前記対象もしくは該対象から得られた生体試料において、Ｂ細胞の生存、増殖および／もしくは分化を測定することを含む方法を提供する。いくつかの実施形態において、前記細胞は前記対象から得られたものであり、該細胞は、本発明の実施形態のいずれか１つに記載のポリヌクレオチドまたは本発明の実施形態のいずれか１つに記載のベクターを導入することによって遺伝子組換えされている。いくつかの実施形態において、前記投与は養子細胞移入によって行われる。いくつかの実施形態において、前記細胞はＢ細胞である。いくつかの実施形態において、前記細胞は骨髄系細胞である。いくつかの実施形態において、前記細胞は造血幹細胞である。いくつかの実施形態において、前記細胞はＣＤ３４＋造血幹細胞である。いくつかの実施形態において、前記対象は雄性である。いくつかの実施形態において、前記対象はＸ連鎖無γグロブリン血症（XLA）に罹患している。いくつかの実施形態において、前記対象は、免疫グロブリン置換療法を受けるべき対象として選択された対象である。いくつかの実施形態において、前記対象は、標的化抗微生物剤を投与すべき対象として選択された対象である。いくつかの実施形態において、0.7UCOEは、配列番号２に示される配列を含む。いくつかの実施形態において、前記エンハンサーは、配列番号３または配列番号４に示される配列を含む。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１２】
第５の態様において、Ｘ連鎖無γグロブリン血症（XLA）またはXLAに伴う症状の治療、抑制または緩和を必要とする対象において、XLAまたはXLAに伴う症状を治療、抑制または緩和する方法であって、本発明の実施形態のいずれか１つに記載の細胞、または本発明の実施形態のいずれか１つに記載のポリヌクレオチドもしくは本発明の実施形態のいずれか１つに記載のベクターを含む細胞を前記対象に投与すること、任意で、XLAもしくはXLAに伴う症状に対する治療法の恩恵を受け得る対象として前記対象を特定もしくは選択すること、および／または任意で、前記対象において、XLAの進行の改善もしくはXLAに伴う症状の改善を測定することを含む方法を提供する。いくつかの実施形態において、前記細胞は前記対象から得られたものであり、該細胞は、本発明の実施形態のいずれか１つに記載のポリヌクレオチドまたは本発明の実施形態のいずれか１つに記載のベクターを導入することによって遺伝子組換えされている。いくつかの実施形態において、前記投与は養子細胞移入によって行われる。いくつかの実施形態において、前記細胞はＢ細胞である。いくつかの実施形態において、前記細胞は骨髄系細胞である。いくつかの実施形態において、前記細胞は造血幹細胞である。いくつかの実施形態において、前記細胞はＣＤ３４＋造血幹細胞である。いくつかの実施形態において、前記対象は雄性である。いくつかの実施形態において、前記対象は、免疫グロブリン置換療法を受けるべき対象として選択された対象である。いくつかの実施形態において、前記対象は、標的化抗微生物剤を投与すべき対象として選択された対象である。いくつかの実施形態において、0.7UCOEは、配列番号２に示される配列を含む。いくつかの実施形態において、前記エンハンサーは、配列番号３または配列番号４に示される配列を含む。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２５７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２５７】
いくつかの実施形態において、Ｂ細胞の生存、増殖および／または分化の促進を必要とする対象において、Ｂ細胞の生存、増殖および／または分化を促進する方法であって、本発明の実施形態のいずれか１つに記載の細胞、または本発明の実施形態のいずれか１つに記載のポリヌクレオチドもしくは本発明の実施形態のいずれか１つに記載のベクターを含む細胞を前記対象に投与すること、任意で、前記細胞を投与する前に、Ｂ細胞の生存、増殖および／もしくは分化を促進し得る治療法の恩恵を受け得る対象として前記対象を特定すること、ならびに／または任意で、前記対象もしくは該対象から得られた生体試料において、Ｂ細胞の生存、増殖および／もしくは分化を測定することを含む方法を提供する。前記ベクターは、遍在性クロマチンオープニングエレメント（UCOE）をコードする第１の配列；プロモーターをコードする第２の配列；およびBTKをコードする第３の配列を含んでいてもよい。いくつかの実施形態において、第１の配列は、配列番号１および／または配列番号２に示される核酸配列を含む。いくつかの実施形態において、前記プロモーターはBTKプロモーターである。いくつかの実施形態において、前記プロモーターは、配列番号５に示される核酸配列を含む。いくつかの実施形態において、第３の配列は、ヒトにおける発現用にコドン最適化されている。いくつかの実施形態において、第３の配列は、配列番号６または配列番号７に示される配列を含む。いくつかの実施形態において、前記ベクターはＢ細胞特異的プロモーターをさらに含む。いくつかの実施形態において、前記Ｂ細胞特異的プロモーターは、Ｂ細胞特異的プロモーターB29を含む。いくつかの実施形態において、前記B29プロモーター配列は、配列番号４６に示される配列を含む。いくつかの実施形態において、前記Ｂ細胞特異的プロモーターは内在性プロモーターである。いくつかの実施形態において、前記ベクターは１つ以上のエンハンサーエレメントをさらに含む。いくつかの実施形態において、前記１つ以上のエンハンサーエレメントは、少なくとも１つのイントロン領域を含む。いくつかの実施形態において、前記１つ以上のエンハンサーエレメントは、DNase高感受性領域（DHS）を含む。いくつかの実施形態において、前記DNase高感受性領域は、DNase高感受性領域１（DHS1）、DNase高感受性領域２（DHS2）、DNase高感受性領域３（DHS3）、DNase高感受性領域４（DHS4）および／またはDNase高感受性領域５（DHS5）である。いくつかの実施形態において、前記DNase高感受性領域は、配列番号３に示される配列を含む。いくつかの実施形態において、前記少なくとも１つのイントロン領域は、ヒトBTK近位プロモーターと関連するヒトBTK遺伝子座に由来するものである。いくつかの実施形態において、前記少なくとも１つのイントロン領域は、ヒトBTK近位プロモーターと関連するヒトBTK遺伝子座のイントロン４、イントロン５および／またはイントロン１３である。いくつかの実施形態において、前記イントロン領域は、配列番号９に示される配列（イントロン４）、配列番号１０に示される配列（イントロン５）および／または配列番号１１に示される配列（イントロン１３）を含む。いくつかの実施形態において、前記１つ以上のエンハンサーエレメ��トは、配列番号４（配列番号４：イントロン４〜５）、配列番号１４または配列番号１５に示される配列を含む。いくつかの実施形態において、前記UCOEは逆方向または順方向である。いくつかの実施形態において、前記UCOEは順方向である。いくつかの実施形態において、前記ベクターは、Ｂ細胞系特異的レンチウイルスベクターを用いたベクターである。いくつかの実施形態において、前記細胞はＢ細胞である。いくつかの実施形態において、前記細胞は骨髄系細胞である。いくつかの実施形態において、前記細胞は造血幹細胞である。いくつかの実施形態において、前記細胞はＣＤ３４＋造血幹細胞である。いくつかの実施形態において、前記１つ以上のエンハンサーエレメントは、配列番号１６に示される配列、配列番号１７に示される配列、配列番号１８に示される配列、配列番号１９に示される配列、および／または配列番号２０に示される配列を含む。いくつかの実施形態において、前記ポリヌクレオチドは、BTKプロモーターの上流の遺伝子をさらに含む。いくつかの実施形態において、BTKプロモーターの上流の前記遺伝子は、BTKエンハンサーである。いくつかの実施形態において、前記BTKエンハンサーは、配列番号２１または配列番号２２に示される配列を含む。いくつかの実施形態において、前記細胞は前記対象から得られたものであり、該細胞は、本発明の実施形態のいずれか１つに記載のポリヌクレオチドまたはベクターを導入することによって遺伝子組換えされている。いくつかの実施形態において、前記投与は養子細胞移入によって行われる。いくつかの実施形態において、前記細胞はＢ細胞である。いくつかの実施形態において、前記細胞は骨髄系細胞である。いくつかの実施形態において、前記細胞は造血幹細胞である。いくつかの実施形態において、前記細胞はＣＤ３４＋造血幹細胞である。いくつかの実施形態において、前記対象は雄性である。いくつかの実施形態において、前記対象はＸ連鎖無γグロブリン血症（XLA）に罹患している。いくつかの実施形態において、前記対象は、免疫グロブリン置換療法を受けるべき対象として選択された対象である。いくつかの実施形態において、前記対象は、標的化抗微生物剤を投与すべき対象として選択された対象である。いくつかの実施形態において、前記ポリペプチドまたはベクターは、配列番号３３、３４、３５、４１、４２、４３、４４または４５に示される配列を含む。いくつかの実施形態において、前記ポリペプチドまたはベクターは、配列番号３３、３４、３５、４１、４２、４３、４４または４５に示される配列を含む。いくつかの実施形態において、0.7UCOEは、配列番号２に示される配列を含む。いくつかの実施形態において、前記エンハンサーは、配列番号３または配列番号４に示される配列を含む。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２５８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２５８】
いくつかの実施形態において、Ｘ連鎖無γグロブリン血症（XLA）またはXLAに伴う症状の治療、抑制または緩和を必要とする対象において、XLAまたはXLAに伴う症状を治療、抑制または緩和する方法であって、本発明の実施形態のいずれか１つに記載の細胞、または本発明の実施形態のいずれか１つに記載のポリヌクレオチドもしくは本発明の実施形態のいずれか１つに記載のベクターを含む細胞を前記対象に投与すること、任意で、XLAもしくはXLAに伴う症状に対する治療法の恩恵を受け得る対象として前記対象を特定すること、および／または任意で、前記対象において、XLAの進行の改善もしくはXLAに伴う症状の改善を測定することを含む方法を提供する。前記ベクターは、遍在性クロマチンオープニングエレメント（UCOE）をコードする第１の配列；プロモーターをコードする第２の配列；およびBTKをコードする第３の配列を含んでいてもよい。いくつかの実施形態において、第１の配列は、配列番号１および／または配列番号２に示される核酸配列を含む。いくつかの実施形態において、前記プロモーターはBTKプロモーターである。いくつかの実施形態において、前記プロモーターは、配列番号５に示される核酸配列を含む。いくつかの実施形態において、第３の配列は、ヒトにおける発現用にコドン最適化されている。いくつかの実施形態において、第３の配列は、配列番号６または配列番号７に示される配列を含む。いくつかの実施形態において、前記ベクターはＢ細胞特異的プロモーターをさらに含む。いくつかの実施形態において、前記Ｂ細胞特異的プロモーターは、Ｂ細胞特異的プロモーターB29を含む。いくつかの実施形態において、前記B29プロモーター配列は、配列番号４６に示される配列を含む。いくつかの実施形態において、前記Ｂ細胞特異的プロモーターは内在性プロモーターである。いくつかの実施形態において、前記ベクターは１つ以上のエンハンサーエレメントをさらに含む。いくつかの実施形態において、前記１つ以上のエンハンサーエレメントは、少なくとも１つのイントロン領域を含む。いくつかの実施形態において、前記１つ以上のエンハンサーエレメントは、DNase高感受性領域（DHS）を含む。いくつかの実施形態において、前記DNase高感受性領域は、DNase高感受性領域１（DHS1）、DNase高感受性領域２（DHS2）、DNase高感受性領域３（DHS3）、DNase高感受性領域４（DHS4）および／またはDNase高感受性領域５（DHS5）である。いくつかの実施形態において、前記DNase高感受性領域は、配列番号３に示される配列を含む。いくつかの実施形態において、前記少なくとも１つのイントロン領域は、ヒトBTK近位プロモーターと関連するヒトBTK遺伝子座に由来するものである。いくつかの実施形態において、前記少なくとも１つのイントロン領域は、ヒトBTK近位プロモーターと関連するヒトBTK遺伝子座のイントロン４、イントロン５および／またはイントロン１３である。いくつかの実施形態において、前記イントロン領域は、配列番号９に示される配列（イントロン４）、配列番号１０に示される配列（イントロン５）および／または配列番号１１に示される配列（イントロン１３）を含む。いくつかの実施形態において、前記１つ以上のエンハンサーエレメントは、配列番号４（配列番号４：イントロン４〜５）、配列番号１４または配列番号１５に示される配列を含む。いくつかの実施形態において、前記UCOEは逆方向または順方向である。いくつかの実施形態において、前記UCOEは順方向である。いくつかの実施形態において、前記ベクターは、Ｂ細胞系特異的レンチウイルスベクターを用いたベクターである。いくつかの実施形態において、前記細胞はＢ細胞である。いくつかの実施形態において、前記細胞は骨髄系細胞である。いくつかの実施形態において、前記細胞は造血幹細胞である。いくつかの実施形態において、前記細胞はＣＤ３４＋造血幹細胞である。いくつかの実施形態において、前記１つ以上のエンハンサーエレメントは、配列番号１６に示される配列、配列番号１７に示される配列、配列番号１８に示される配列、配列番号１９に示される配列、および／または配列番号２０に示される配列を含む。いくつかの実施形態において、前記ポリヌクレオチドは、BTKプロモーターの上流の遺伝子をさらに含む。いくつかの実施形態において、BTKプロモーターの上流の前記遺伝子は、BTKエンハンサーである。いくつかの実施形態において、前記BTKエンハンサーは、配列番号２１または配列番号２２に示される配列を含む。いくつかの実施形態において、前記ベクターは、Ｂ細胞系特異的レンチウイルスベクターを用いたベクターである。いくつかの実施形態において、前記細胞はＢ細胞である。いくつかの実施形態において、前記細胞は骨髄系細胞である。いくつかの実施形態において、前記細胞は造血幹細胞である。いくつかの実施形態において、前記細胞はＣＤ３４＋造血幹細胞である。いくつかの実施形態において、前記細胞は前記対象から得られたものであり、該細胞は、本発明の実施形態のいずれか１つに記載のポリヌクレオチドまたは本発明の実施形態のいずれか１つに記載のベクターを導入することによって遺伝子組換えされている。いくつかの実施形態において、前記投与は養子細胞移入によって行われる。いくつかの実施形態において、前記細胞はＢ細胞である。いくつかの実施形態において、前記細胞は骨髄系細胞である。いくつかの実施形態において、前記細胞は造血幹細胞である。いくつかの実施形態において、前記細胞はＣＤ３４＋造血幹細胞である。いくつかの実施形態において、前記対象は雄性である。いくつかの実施形態において、前記対象は、免疫グロブリン置換療法を受けるべき対象として選択された対象である。いくつかの実施形態において、前記対象は、標的化抗微生物剤を投与すべき対象として選択された対象である。いくつかの実施形態において、前記ポリペプチドまたはベクターは、配列番号３３、３４、３５、４１、４２、４３、４４または４５に示される配列を含む。いくつかの実施形態において、0.7UCOEは、配列番号２に示される配列を含む。いくつかの実施形態において、前記エンハンサーは、配列番号３または配列番号４に示される配列を含む。