【手続補正書】
【提出日】令和3年10月29日(2021.10.29)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
１種またはこれより多くの異種核酸を含むナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を生成する方法であって、前記方法は、
活性化ＮＫ細胞の集団を生成するために、単離されたＮＫ細胞の集団を、インターロイキン−２（ＩＬ−２）の存在下で少なくとも２日間培養する工程；
形質導入されたＮＫ細胞の集団を生成するために、前記活性化ＮＫ細胞の集団を、１種またはこれより多くの異種核酸を含むウイルスベクターで形質導入する工程であって、前記形質導入する工程は、ｔｏｌｌ様レセプター（ＴＬＲ）もしくはＲＩＧ−Ｉ様レセプター（ＲＬＲ）の１種もしくはこれより多くのインヒビター、および／またはＴＢＫ１／ＩＫＫεの１種もしくはこれより多くのインヒビターの存在下で行われる、工程；ならびに
形質導入されたＮＫ細胞の拡大増殖された集団を生成するために、前記形質導入されたＮＫ細胞の集団を、ＩＬ−２および照射されたフィーダー細胞の存在下で培養する工程、を包含する、方法。
【請求項２】
ａ）前記ＮＫ細胞の集団は、ＩＬ−２の存在下でかつ照射されたフィーダー細胞の非存在下で培養される、および／もしくは前記活性化ＮＫ細胞は、照射されたフィーダー細胞の非存在下で、前記ウイルスベクターで形質導入される；または
ｂ）前記ＮＫ細胞の集団は、ＩＬ−２の存在下でかつ照射されたフィーダー細胞の存在下で培養される、および／もしくは前記活性化ＮＫ細胞は、照射されたフィーダー細胞の存在下で、前記ウイルスベクターで形質導入される、
請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記単離されたＮＫ細胞の集団を、ＩＬ−２の存在下で培養する工程は、前記単離されたＮＫ細胞の集団を、５００  ＩＵ／ｍｌ  ＩＬ−２を含む細胞培養培地中で培養することを包含する、請求項１または請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記単離されたＮＫ細胞の集団は、ＩＬ−２の存在下でかつ他のサイトカインは添加されずに培養される、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
ＴＬＲおよび／もしくはＲＬＲの１種もしくはこれより多くのインヒビター、ならびに／またはＴＢＫ１／ＩＫＫεの１種もしくはこれより多くのインヒビターは、ＢＸ７９５、２−アミノプリン、ＢＡＹ１１−７０８２、セラストロール、ＣＬＩ−０９５、Ｈ−８９、ノルハルマン、ＩＲＡＫ１／４インヒビター、ＭＲＴ６７３０７、ＡＺ１３１０２９０９、ＭＰＩ−０４８５５２０、アレキサノクス、化合物ＩＩ、およびＳＲ８１８５の１種もしくはこれより多くである、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
ＴＬＲおよび／もしくはＲＬＲの１種もしくはこれより多くのインヒビターならびに／またはＴＢＫ１／ＩＫＫεの１種もしくはこれより多くのインヒビターは、ＢＸ７９５である、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記１種またはこれより多くの異種核酸を含むウイルスベクターは、レンチウイルスベクターである、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
前記レンチウイルスベクターは、配列番号８〜１９のいずれか１つと少なくとも９０％  配列同一性を有する核酸配列を含むかまたはからなる、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記照射されたフィーダー細胞  対  前記形質導入されたＮＫ細胞の比は、約１０：１である、請求項１〜８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
前記照射されたフィーダー細胞は、エプスタイン・バーウイルスで形質転換されたリンパ芽球系細胞株またはＫ５６２細胞を含む、請求項１〜９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
前記異種核酸は、
高親和性ＣＤ１６（ＣＤ１６−Ｖ１５８）、ＣＸＣＲ４、ＣＣＲ７、ＣＸＣＲ３、ＣＤ３４、ダブルネガティブＴＧＦβタイプＩＩレセプター、ＶＬＡ−４、ＬＦＡ−１、ＣＤ１９、もしくはＣＤ４；
腫瘍細胞上で発現される抗原に特異的に結合するキメラ抗原レセプター（ＣＡＲ）であって、ここで前記異種核酸は、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ３３、ＣＤ１３８、ＣＳ１、ＧＤ２、ＨＥＲ２、ｅｒｂＢ２−、ＣＥＡ、ＥｐＣＡＭ、ＮＫＧ２Ｄ−Ｌ、もしくはＴＲＡＩＬ−Ｒ１に特異的に結合するＣＡＲをコードするＣＡＲ；
細胞内ドメインを欠く短縮型ＣＤ３４タンパク質をコードする核酸分子；および／または
低分子ヘアピン型ＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、もしくはアンチセンス核酸、
をコードする、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
前記ＮＫ細胞の集団は、ＩＬ−２の存在下かつ照射されたフィーダー細胞の存在下で培養されて、活性化ＮＫ細胞の集団を生成し、前記フィーダー細胞は、ＣＤ１９免疫除去および／またはＣＤ５６免疫選択を使用して、前記活性化ＮＫ細胞から実質的に分離される、請求項２ｂに記載の方法。
【請求項１３】
腫瘍、過剰増殖性疾患、またはウイルス感染を有する被験体を処置する方法において使用するための、形質導入されたＮＫ細胞の拡大増殖された集団を含む組成物であって、前記方法は、
単離されたナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の集団を、前記被験体またはドナーから得る工程；
活性化ＮＫ細胞の集団を生成するために、単離されたＮＫ細胞の集団を、インターロイキン−２（ＩＬ−２）の存在下で少なくとも２日間培養する工程；
形質導入されたＮＫ細胞の集団を生成するために、前記活性化ＮＫ細胞の集団を、１種またはこれより多くの異種核酸を含むウイルスベクターで形質導入する工程であって、前記形質導入する工程は、ｔｏｌｌ様レセプター（ＴＬＲ）もしくはＲＩＧ−Ｉ様レセプター（ＲＬＲ）の１種もしくはこれより多くのインヒビターおよび／またはＴＢＫ１／ＩＫＫεの１種もしくはこれより多くのインヒビターの存在下で行われる、工程；
前記形質導入されたＮＫ細胞の拡大増殖された集団を生成するために、前記形質導入されたＮＫ細胞の集団を、ＩＬ−２および照射されたフィーダー細胞の存在下で培養する工程；ならびに
前記組成物を、前記被験体に投与する工程、
を包含する、組成物。
【請求項１４】
ａ）前記ＮＫ細胞の集団は、ＩＬ−２の存在下かつ照射されたフィーダー細胞の非存在下で培養される；および／もしくは前記活性化ＮＫ細胞は、照射されたフィーダー細胞の非存在下で、前記ウイルスベクターで形質導入される；または
ｂ）前記ＮＫ細胞の集団は、ＩＬ−２の存在下かつ照射されたフィーダー細胞の存在下で培養される；および／もしくは前記活性化ＮＫ細胞は、照射されたフィーダー細胞の存在下で、前記ウイルスベクターで形質導入される、
請求項１３に記載の組成物。
【請求項１５】
前記単離されたＮＫ細胞の集団を、ＩＬ−２の存在下で培養する工程は、前記単離されたＮＫ細胞の集団を、５００  ＩＵ／ｍｌ  ＩＬ−２を含む細胞培養培地中で培養することを包含する、請求項１３または請求項１４に記載の組成物。
【請求項１６】
前記単離されたＮＫ細胞の集団は、ＩＬ−２の存在下でかつ他のサイトカインは添加されずに培養される、請求項１３〜１５のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１７】
ＴＬＲおよび／もしくはＲＬＲの１種もしくはこれより多くのインヒビターならびに／またはＴＢＫ１／ＩＫＫεの１種もしくはこれより多くのインヒビターは、ＢＸ７９５、２−アミノプリン、ＢＡＹ１１−７０８２、セラストロール、ＣＬＩ−０９５、Ｈ−８９、ノルハルマン、ＩＲＡＫ１／４インヒビター、ＭＲＴ６７３０７、ＡＺ１３１０２９０９、ＭＰＩ−０４８５５２０、アレキサノクス、化合物ＩＩ、およびＳＲ８１８５の１種またはこれより多くである、請求項１３〜１６のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１８】
ＴＬＲおよび／もしくはＲＬＲの１種もしくはこれより多くのインヒビターならびに／またはＴＢＫ１／ＩＫＫεの１種もしくはこれより多くのインヒビターは、ＢＸ７９５である、請求項１７に記載の組成物。
【請求項１９】
前記１種またはこれより多くの異種核酸を含むウイルスベクターは、レンチウイルスベクターである、請求項１３〜１８のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２０】
前記レンチウイルスベクターは、配列番号８〜１９のいずれか１つと少なくとも９０％  配列同一性を有する核酸配列を含むかまたはからなる、請求項１９に記載の組成物。
【請求項２１】
前記レンチウイルスベクターは、ＰＧＫ、ＥＦＳ、またはＳＶ４０プロモーターに作動可能に連結された１種またはこれより多くの異種核酸を含む、請求項１９または請求項２０に記載の組成物。
【請求項２２】
前記照射されたフィーダー細胞  対  前記形質導入されたＮＫ細胞の比は、１０：１である、請求項１３〜２１のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２３】
前記照射されたフィーダー細胞は、エプスタイン・バーウイルスで形質転換されたリンパ芽球系細胞株またはＫ５６２細胞を含む、請求項１３〜２２のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２４】
前記異種核酸は、
高親和性ＣＤ１６（ＣＤ１６−Ｖ１５８）、ＣＸＣＲ４、ＣＣＲ７、ＣＸＣＲ３、ＣＤ３４、ダブルネガティブＴＧＦβタイプＩＩレセプター、ＶＬＡ−４、ＬＦＡ−１、ＣＤ１９、もしくはＣＤ４；
腫瘍細胞上で発現される抗原に特異的に結合するキメラ抗原レセプター（ＣＡＲ）であって、ここで前記異種核酸は、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ３３、ＣＤ１３８、ＣＳ１、ＧＤ２、ＨＥＲ２、ｅｒｂＢ２−、ＣＥＡ、ＥｐＣＡＭ、ＮＫＧ２Ｄ−Ｌ、もしくはＴＲＡＩＬ−Ｒ１に特異的に結合するＣＡＲをコードするＣＡＲ；
細胞内ドメインを欠く短縮型ＣＤ３４タンパク質をコードする核酸分子；および／または
低分子ヘアピン型ＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、もしくはアンチセンス核酸、
をコードする、請求項１３〜２３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２５】
前記ＮＫ細胞の集団は、ＩＬ−２の存在下かつ照射されたフィーダー細胞の存在下で培養されて、活性化ＮＫ細胞の集団を生成し、前記フィーダー細胞は、ＣＤ１９免疫除去および／またはＣＤ５６免疫選択を使用して、前記活性化ＮＫ細胞から実質的に分離される、請求項１４ｂに記載の組成物。
【請求項２６】
薬学的に受容可能なキャリアをさらに含む、請求項１３〜２５のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２７】
請求項１〜１２のいずれか１項に記載の方法によって生成される、１種またはこれより多くの異種核酸を含むナチュラルキラー細胞。
【請求項２８】
１種またはこれより多くの異種核酸を含むナチュラルキラー細胞および薬学的に受容可能なキャリアを含む組成物であって、ここで前記ナチュラルキラー細胞は、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の方法によって生成される、組成物。
【請求項２９】
１種またはこれより多くの異種核酸を含むナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を生成する方法であって、前記方法は、
活性化ＮＫ細胞の集団を生成するために、単離されたＮＫ細胞の集団を、インターロイキン−２（ＩＬ−２）および照射されたフィーダー細胞の存在下で少なくとも２日間培養する工程；
形質導入されたＮＫ細胞の集団を生成するために、ＢＸ７９５の存在下で前記活性化ＮＫ細胞の集団を、１種またはこれより多くの異種核酸を含むウイルスベクターで形質導入する工程；ならびに
前記１種またはこれより多くの異種核酸を含む形質導入されたＮＫ細胞の拡大増殖された集団を生成するために、前記形質導入されたＮＫ細胞の集団を、ＩＬ−２および照射されたフィーダー細胞の存在下で培養する工程、
を包含する、方法。
【請求項３０】
前記単離されたＮＫ細胞の集団は、ＩＬ−２の存在下でかつ他のサイトカインは添加されずに培養される、請求項２９に記載の方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１７１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１７１】
本開示の原理が適用され得る多くの考えられる実施形態に鑑みて、例証される実施形態が例示に過ぎず、本発明の範囲を限定すると理解されるべきではないことは、認識されるべきである。むしろ、本発明の範囲は、以下の特許請求の範囲によって定義される。本発明者らは、従って、これらの請求項の範囲および趣旨の範囲内に入る全てを、本発明者らの発明として特許請求する。
特定の実施形態では、例えば以下の項目が提供される。
（項目１）
１種またはこれより多くの異種核酸を含むナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を生成する方法であって、前記方法は、
活性化ＮＫ細胞の集団を生成するために、単離されたＮＫ細胞の集団を、インターロイキン−２（ＩＬ−２）の存在下で少なくとも２日間培養する工程；
形質導入されたＮＫ細胞の集団を生成するために、前記活性化ＮＫ細胞の集団を、１種またはこれより多くの異種核酸を含むウイルスベクターで形質導入する工程；ならびに
形質導入されたＮＫ細胞の拡大増殖された集団を生成するために、前記形質導入されたＮＫ細胞の集団を、ＩＬ−２および照射されたフィーダー細胞の存在下で培養する工程、を包含する、方法。
（項目２）
ａ）前記ＮＫ細胞の集団は、ＩＬ−２の存在下でかつ照射されたフィーダー細胞の非存在下で培養される、および／もしくは前記活性化ＮＫ細胞は、照射されたフィーダー細胞の非存在下で、前記ウイルスベクターで形質導入される；または
ｂ）前記ＮＫ細胞の集団は、ＩＬ−２の存在下でかつ照射されたフィーダー細胞の存在下で培養される、および／もしくは前記活性化ＮＫ細胞は、照射されたフィーダー細胞の存在下で、前記ウイルスベクターで形質導入される、
項目１に記載の方法。
（項目３）
前記単離されたＮＫ細胞の集団を、１種またはこれより多くのサイトカインの存在下で培養する工程は、前記単離されたＮＫ細胞の集団を、５００  ＩＵ／ｍｌ  ＩＬ−２を含む細胞培養培地中で培養することを包含する、項目１または項目２に記載の方法。
（項目４）
前記単離されたＮＫ細胞の集団は、ＩＬ−２の存在下でかつ他のサイトカインは添加されずに培養される、項目１〜３のいずれか１項に記載の方法。
（項目５）
前記活性化ＮＫ細胞の集団を形質導入する工程は、ｔｏｌｌ様レセプター（ＴＬＲ）もしくはＲＩＧ−Ｉ様レセプター（ＲＬＲ）の１種もしくはこれより多くのインヒビター、および／またはＴＢＫ１／ＩＫＫεの１種もしくはこれより多くのインヒビターの存在下で行われる、項目１〜４のいずれか１項に記載の方法。
（項目６）
ＴＬＲおよび／もしくはＲＬＲの１種もしくはこれより多くのインヒビター、ならびに／またはＴＢＫ１／ＩＫＫεの１種もしくはこれより多くのインヒビターは、ＢＸ７９５、２−アミノプリン、ＢＡＹ１１−７０８２、セラストロール、ＣＬＩ−０９５、Ｈ−８９、ノルハルマン、ＩＲＡＫ１／４インヒビター、ＭＲＴ６７３０７、ＡＺ１３１０２９０９、ＭＰＩ−０４８５５２０、アレキサノクス、化合物ＩＩ、およびＳＲ８１８５の１種もしくはこれより多くである、項目５に記載の方法。
（項目７）
ＴＬＲおよび／もしくはＲＬＲの１種もしくはこれより多くのインヒビターならびに／またはＴＢＫ１／ＩＫＫεの１種もしくはこれより多くのインヒビターは、ＢＸ７９５である、項目６に記載の方法。
（項目８）
前記１種またはこれより多くの異種核酸を含むウイルスベクターは、レンチウイルスベクターである、項目１〜７のいずれか１項に記載の方法。
（項目９）
前記レンチウイルスベクターは、配列番号８〜１９のいずれか１つと少なくとも９０％  配列同一性を有する核酸配列を含むかまたはからなる、項目８に記載の方法。
（項目１０）
前記照射されたフィーダー細胞  対  前記形質導入されたＮＫ細胞の比は、約１０：１である、項目１〜９のいずれか１項に記載の方法。
（項目１１）
前記照射されたフィーダー細胞は、エプスタイン・バーウイルスで形質転換されたリンパ芽球系細胞株またはＫ５６２細胞を含む、項目１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
（項目１２）
前記異種核酸は、
高親和性ＣＤ１６（ＣＤ１６−Ｖ１５８）、ＣＸＣＲ４、ＣＣＲ７、ＣＸＣＲ３、ＣＤ３４、ダブルネガティブＴＧＦβタイプＩＩレセプター、ＶＬＡ−４、ＬＦＡ−１、ＣＤ１９、もしくはＣＤ４；
腫瘍細胞上で発現される抗原に特異的に結合するキメラ抗原レセプター（ＣＡＲ）であって、ここで前記異種核酸は、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ３３、ＣＤ１３８、ＣＳ１、ＧＤ２、ＨＥＲ２、ｅｒｂＢ２−、ＣＥＡ、ＥｐＣＡＭ、ＮＫＧ２Ｄ−Ｌ、もしくはＴＲＡＩＬ−Ｒ１に特異的に結合するＣＡＲをコードするＣＡＲ；
細胞内ドメインを欠く短縮型ＣＤ３４タンパク質をコードする核酸分子；および／または
低分子ヘアピン型ＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、もしくはアンチセンス核酸、
をコードする、項目１〜１１のいずれか１項に記載の方法。
（項目１３）
前記ＮＫ細胞の集団は、ＩＬ−２の存在下かつ照射されたフィーダー細胞の存在下で培養されて、活性化ＮＫ細胞の集団を生成し、前記フィーダー細胞は、ＣＤ１９免疫除去および／またはＣＤ５６免疫選択を使用して、前記活性化ＮＫ細胞から実質的に分離される、項目２ｂに記載の方法。
（項目１４）
腫瘍、過剰増殖性疾患、またはウイルス感染を有する被験体を処置する方法であって、前記方法は、
単離されたナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の集団を、前記被験体またはドナーから得る工程；
活性化ＮＫ細胞の集団を生成するために、単離されたＮＫ細胞の集団を、インターロイキン−２（ＩＬ−２）の存在下で少なくとも２日間培養する工程；
形質導入されたＮＫ細胞の集団を生成するために、前記活性化ＮＫ細胞の集団を、１種またはこれより多くの異種核酸を含むウイルスベクターで形質導入する工程；
形質導入されたＮＫ細胞の拡大増殖された集団を生成するために、前記形質導入されたＮＫ細胞の集団を、ＩＬ−２および照射されたフィーダー細胞の存在下で培養する工程；ならびに
前記形質導入されたＮＫ細胞の拡大増殖された集団を含む組成物を、前記被験体に投与する工程、
を包含する、方法。
（項目１５）
ａ）前記ＮＫ細胞の集団は、ＩＬ−２の存在下かつ照射されたフィーダー細胞の非存在下で培養される；および／もしくは前記活性化ＮＫ細胞は、照射されたフィーダー細胞の非存在下で、前記ウイルスベクターで形質導入される；または
ｂ）前記ＮＫ細胞の集団は、ＩＬ−２の存在下かつ照射されたフィーダー細胞の存在下で培養される；および／もしくは前記活性化ＮＫ細胞は、照射されたフィーダー細胞の存在下で、前記ウイルスベクターで形質導入される、
項目１４に記載の方法。
（項目１６）
前記単離されたＮＫ細胞の集団を、１種またはこれより多くのサイトカインの存在下で培養する工程は、前記単離されたＮＫ細胞の集団を、５００  ＩＵ／ｍｌ  ＩＬ−２を含む細胞培養培地中で培養することを包含する、項目１４または項目１５に記載の方法。
（項目１７）
前記単離されたＮＫ細胞の集団は、ＩＬ−２の存在下でかつ他のサイトカインは添加されずに培養される、項目１４〜１６のいずれか１項に記載の方法。
（項目１８）
前記活性化ＮＫ細胞の集団を形質導入する工程は、ｔｏｌｌ様レセプター（ＴＬＲ）もしくはＲＩＧ−Ｉ様レセプター（ＲＬＲ）の１種もしくはこれより多くのインヒビターおよび／またはＴＢＫ１／ＩＫＫεの１種もしくはこれより多くのインヒビターの存在下で行われる、項目１４〜１７のいずれか１項に記載の方法。
（項目１９）
ＴＬＲおよび／もしくはＲＬＲの１種もしくはこれより多くのインヒビターならびに／またはＴＢＫ１／ＩＫＫεの１種もしくはこれより多くのインヒビターは、ＢＸ７９５、２−アミノプリン、ＢＡＹ１１−７０８２、セラストロール、ＣＬＩ−０９５、Ｈ−８９、ノルハルマン、ＩＲＡＫ１／４インヒビター、ＭＲＴ６７３０７、ＡＺ１３１０２９０９、ＭＰＩ−０４８５５２０、アレキサノクス、化合物ＩＩ、およびＳＲ８１８５の１種またはこれより多くである、項目１８に記載の方法。
（項目２０）
ＴＬＲおよび／もしくはＲＬＲの１種もしくはこれより多くのインヒビターならびに／またはＴＢＫ１／ＩＫＫεの１種もしくはこれより多くのインヒビターは、ＢＸ７９５である、項目１９に記載の方法。
（項目２１）
前記１種またはこれより多くの異種核酸を含むウイルスベクターは、レンチウイルスベクターである、項目１４〜２０のいずれか１項に記載の方法。
（項目２２）
前記レンチウイルスベクターは、配列番号８〜１９のいずれか１つと少なくとも９０％  配列同一性を有する核酸配列を含むかまたはからなる、項目２１に記載の方法。
（項目２３）
前記レンチウイルスベクターは、ＰＧＫ、ＥＦＳ、またはＳＶ４０プロモーターに作動可能に連結された目的の核酸を含む、項目２１または項目２２に記載の方法。
（項目２４）
前記照射されたフィーダー細胞  対  前記形質導入されたＮＫ細胞の比は、１０：１である、項目１４〜２３のいずれか１項に記載の方法。
（項目２５）
前記照射されたフィーダー細胞は、エプスタイン・バーウイルスで形質転換されたリンパ芽球系細胞株またはＫ５６２細胞を含む、項目１４〜２４のいずれか１項に記載の方法。
（項目２６）
前記異種核酸は、
高親和性ＣＤ１６（ＣＤ１６−Ｖ１５８）、ＣＸＣＲ４、ＣＣＲ７、ＣＸＣＲ３、ＣＤ３４、ダブルネガティブＴＧＦβタイプＩＩレセプター、ＶＬＡ−４、ＬＦＡ−１、ＣＤ１９、もしくはＣＤ４；
腫瘍細胞上で発現される抗原に特異的に結合するキメラ抗原レセプター（ＣＡＲ）であって、ここで前記異種核酸は、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ３３、ＣＤ１３８、ＣＳ１、ＧＤ２、ＨＥＲ２、ｅｒｂＢ２−、ＣＥＡ、ＥｐＣＡＭ、ＮＫＧ２Ｄ−Ｌ、もしくはＴＲＡＩＬ−Ｒ１に特異的に結合するＣＡＲをコードするＣＡＲ；
細胞内ドメインを欠く短縮型ＣＤ３４タンパク質をコードする核酸分子；および／または
低分子ヘアピン型ＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、もしくはアンチセンス核酸、
をコードする、項目１４〜２５のいずれか１項に記載の方法。
（項目２７）
前記ＮＫ細胞の集団は、ＩＬ−２の存在下かつ照射されたフィーダー細胞の存在下で培養されて、活性化ＮＫ細胞の集団を生成し、前記フィーダー細胞は、ＣＤ１９免疫除去および／またはＣＤ５６免疫選択を使用して、前記活性化ＮＫ細胞から実質的に分離される、項目１５ｂに記載の方法。
（項目２８）
前記形質導入されたＮＫ細胞の拡大増殖された集団を含む組成物は、薬学的に受容可能なキャリアをさらに含む、項目１４〜２７のいずれか１項に記載の方法。
（項目２９）
項目１〜１３のいずれか１項に記載の方法によって生成される、１種またはこれより多くの異種核酸を含むナチュラルキラー細胞。
（項目３０）
１種またはこれより多くの異種核酸を含むナチュラルキラー細胞および薬学的に受容可能なキャリアを含む組成物であって、ここで前記ナチュラルキラー細胞は、項目１〜１３のいずれか１項に記載の方法によって生成される、組成物。
（項目３１）
１種またはこれより多くの異種核酸を含むナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を生成する方法であって、前記方法は、
活性化ＮＫ細胞の集団を生成するために、単離されたＮＫ細胞の集団を、インターロイキン−２（ＩＬ−２）および照射されたフィーダー細胞の存在下で少なくとも２日間培養する工程；
形質導入されたＮＫ細胞の集団を生成するために、ＢＸ７９５の存在下で前記活性化ＮＫ細胞の集団を、１種またはこれより多くの異種核酸を含むウイルスベクターで形質導入する工程；ならびに
前記１種またはこれより多くの異種核酸を含む形質導入されたＮＫ細胞の拡大増殖された集団を生成するために、前記形質導入されたＮＫ細胞の集団を、ＩＬ−２および照射されたフィーダー細胞の存在下で培養する工程、
を包含する、方法。
（項目３２）
前記単離されたＮＫ細胞の集団は、ＩＬ−２の存在下でかつ他のサイトカインは添加されずに培養される、項目３１に記載の方法。