【手続補正書】
【提出日】令和3年7月29日(2021.7.29)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象における、網膜破損の治療、網膜破損の進行の緩慢化、網膜破損の予防、網膜組織の置換、および破損網膜組織の回復のうち1つまたは複数のための医薬であって、多能性幹細胞由来網膜組織グラフトを含む、医薬。
【請求項２】
前記多能性幹細胞由来網膜組織が、網膜色素上皮（RPE）細胞、網膜神経節細胞（RGC）、および光受容体（PR）細胞を含む、請求項1記載の医薬。
【請求項３】
前記多能性幹細胞由来網膜組織が、バイオ補綴網膜パッチを形成するための生体適合性足場をさらに含む、請求項1または2記載の医薬。
【請求項４】
前記バイオ補綴網膜グラフトが、約1万個〜10万個の光受容体細胞を含む、請求項3記載の医薬。
【請求項５】
前記多能性幹細胞由来網膜組織グラフト、または前記多能性幹細胞由来網膜組織グラフトの解離細胞が、神経栄養因子、神経栄養性エキソソーム、およびマイトジェンのうち1つまたは複数を前記対象に送達することができる、請求項2記載の医薬。
【請求項６】
前記神経栄養因子および前記マイトジェンが、脳由来神経栄養因子（BDNF）、グリア由来神経栄養因子（GDNF）、ニューロトロフィン-34（NT34）、ニューロトロフィン4/5、神経成長因子-ベータ（βNGF）、proNGF、PEDF、CNTF、生存促進性マイトジェン塩基性線維芽細胞増殖因子（bFGF=FGF-2）、およびWNTファミリーの生存促進性メンバーのうち1つまたは複数を含む、請求項5記載の医薬。
【請求項７】
前記網膜組織の適用の前、途中、および／または後の、眼圧の調節と組み合わせて用いられる、請求項1〜6のいずれか一項記載の医薬。
【請求項８】
前記多能性幹細胞由来網膜組織が、網膜下または網膜上に適用されるように用いられる、請求項1〜7のいずれか一項記載の医薬。
【請求項９】
対象の眼球への移植用網膜組織グラフトであって、
網膜色素上皮（RPE）細胞、網膜神経節細胞（RGC）、二次網膜ニューロン、および光受容体（PR）細胞の1または複数を含み、前記RPE細胞、前記RGC細胞、および前記PR細胞が中心コアを形成するように構成されている、網膜組織グラフト。
【請求項１０】
約1,000個〜25万個の光受容体がある、請求項9記載の網膜組織グラフト。
【請求項１１】
1,000個〜約25万個の細胞を含む、請求項9または10記載の網膜組織グラフト。
【請求項１２】
網膜下スペースまたは網膜上スペースへの移植用である、請求項9〜11のいずれか一項記載の網膜組織グラフト。
【請求項１３】
シナプス形成の増加が電気活性の増加と同時に生じる、請求項9〜12のいずれか一項記載の網膜組織グラフト。
【請求項１４】
移植後、ニューロンが前記グラフトを既存組織と結合させる、請求項9〜13のいずれか一項記載の網膜組織グラフト。
【請求項１５】
前記ニューロンがCALB2陽性である、請求項14記載の網膜組織グラフト。
【請求項１６】
結合性が、WGA-HRP経シナプストレーサーにより実証される、請求項14または15記載の網膜組織。
【請求項１７】
移植後、軸索が前記グラフトを既存組織と結合させる、請求項9〜16のいずれか一項記載の網膜組織グラフト。
【請求項１８】
前記軸索がCALB2陽性である、請求項17記載の網膜組織。
【請求項１９】
移植後、前記グラフトの細胞がRGCへと成熟する、請求項9〜18のいずれか一項記載の網膜組織グラフト。
【請求項２０】
移植後、既存ニューロンとシナプスを形成する、請求項9〜19のいずれか一項記載の網膜組織グラフト。
【請求項２１】
移植後、既存組織と結合を形成する、請求項9〜20のいずれか一項記載の網膜組織グラフト。
【請求項２２】
前記結合が、移植後１日〜約5週間で形成する、請求項21記載の網膜組織。
【請求項２３】
移植後、既存組織ONLにかかる軸索を形成する、請求項9〜22のいずれか一項記載の網膜組織グラフト。
【請求項２４】
神経栄養因子を生産する、請求項9〜23のいずれか一項記載の網膜組織グラフト。
【請求項２５】
神経栄養因子を、適用の前または後に生産する、請求項24記載の網膜組織グラフト。
【請求項２６】
前記神経栄養因子が、BDNS、GDNF、bNGF、NT4、bFGF、NT34、NT4/5、CNTF、PEDF、セルピン、またはWNTファミリーメンバーのうち1つまたは複数を含む、請求項24または25記載の網膜組織。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５４】
[本発明1001]
網膜破損の治療、網膜破損の進行の緩慢化、網膜破損の予防、網膜組織の置換、および破損網膜組織の回復のうち1つまたは複数のための方法であって、hESC由来網膜組織グラフトを対象に適用することを含む、方法。
[本発明1002]
網膜変性疾患の進行の緩慢化、外傷性損傷後の網膜変性疾患の進行の緩慢化、加齢黄斑変性（AMD）の進行の緩慢化、遺伝性網膜疾患の進行の緩慢化、網膜疾患の安定化、網膜変性疾患の予防、外傷性損傷後の網膜変性疾患の予防、視覚もしくは視知覚の改善、AMDの予防、疾患、損傷、もしくは遺伝子異常により喪失された網膜色素上皮（RPE）、光受容体細胞（PRC）、および網膜神経節細胞（RGC）の回復、RPE、PRC、およびRCGの増加、またはRPE、PRC、およびRCG欠損の治療のうち1つまたは複数のための方法であって、hESC由来網膜組織グラフトを対象に適用することを含む、方法。
[本発明1003]
網膜破損が、爆風曝露、遺伝子障害、網膜疾患、および網膜損傷のうち1つまたは複数を原因とする、本発明1001の方法。
[本発明1004]
網膜疾患が、網膜変性疾患を含む、本発明1003の方法。
[本発明1005]
網膜破損が、加齢黄斑変性（AMD）、網膜色素変性（RP）、およびレーバー先天黒内障（LCA）のうち1つまたは複数を原因とする、本発明1001の方法。
[本発明1006]
前記hESC由来網膜組織が、網膜色素上皮（RPE）細胞、網膜神経節細胞（RGC）、および光受容体（PR）細胞を含む、本発明1001または1002の方法。
[本発明1007]
網膜色素上皮（RPE）細胞の中心層があり、かつ該RPE細胞層から半径方向外側に向かうように、網膜神経節細胞（RGC）層、二次網膜ニューロン層（成熟網膜の内顆粒層に相当）、光受容体（PR）細胞層、およびRPE細胞の外層が存在するように、前記RPE細胞、前記RGC細胞、および前記PR細胞が構成される、本発明1006の方法。
[本発明1008]
前記層のそれぞれが、相当するヒト網膜組織層内の細胞の特徴である分化細胞を含む、本発明1007の方法。
[本発明1009]
前記層のそれぞれが前駆細胞を含み、適用後、前記前駆細胞の一部または全部が、相当するヒト網膜組織層の成熟細胞へと分化する、本発明1007の方法。
[本発明1010]
前記層が、実質的に完全に分化した細胞を含む、本発明1007の方法。
[本発明1011]
前記hESC由来網膜組織が、バイオ補綴網膜パッチを形成するための生体適合性足場をさらに含む、本発明1001または1002の方法。
[本発明1012]
前記バイオ補綴網膜グラフトが、約1万個〜10万個の光受容体細胞を含む、本発明1007の方法。
[本発明1013]
いくつかの前記hESC由来網膜組織片が前記生体適合性足場に付加されて、大きなバイオ補綴パッチが形成される、本発明1011の方法。
[本発明1014]
前記hESC由来網膜組織グラフト、または前記hESC由来網膜組織グラフトの解離細胞が、神経栄養因子、神経栄養性エキソソーム、およびマイトジェンのうち1つまたは複数を対象に送達することができる、本発明1006の方法。
[本発明1015]
前記神経栄養因子および前記マイトジェンが、脳由来神経栄養因子（BDNF）、グリア由来神経栄養因子（GDNF）、ニューロトロフィン-34（NT34）、ニューロトロフィン4/5、神経成長因子-ベータ（βNGF）、proNGF、PEDF、CNTF、生存促進性マイトジェン塩基性線維芽細胞増殖因子（bFGF=FGF-2）、およびWNTファミリーの生存促進性メンバーのうち1つまたは複数を含む、本発明1014の方法。
[本発明1016]
前記hESC由来網膜組織グラフトを適用すると、適用した場所で、網膜層の厚さが約1〜約3カ月間保存される、本発明1001または1002の方法。
[本発明1017]
免疫抑制剤の投与をさらに含む、本発明1001または1002の方法。
[本発明1018]
前記網膜グラフト適用の前、途中、および／または後に、エピネフリン投与をさらに含む、本発明1001または1002の方法。
[本発明1019]
前記免疫抑制剤が、前記適用の前、途中、および／または後に投与される、本発明1017の方法。
[本発明1020]
眼圧の調節をさらに含む、本発明1001の方法。
[本発明1021]
前記眼圧の調節が、前記網膜組織の適用の前、途中、および／または後に行われる、本発明1020の方法。
[本発明1022]
前記組織が、眼内移植ツールを用いて適用される、本発明1001の方法。
[本発明1023]
前記hESC由来網膜組織が、網膜下または網膜上に適用される、本発明1001または1002の方法。
[本発明1024]
前記hESC由来網膜組織グラフトを適用すると、前記hESC由来網膜組織と前記対象の網膜組織との、腫瘍無しでの統合が得られる、本発明1001または1002の方法。
[本発明1025]
網膜グラフトの統合が、適用後約2〜10週間で生じる、本発明1024の方法。
[本発明1026]
統合が、構造的統合を含む、本発明1025の方法。
[本発明1027]
統合が、構造的統合を含み、適用後約1〜6カ月で生じる、本発明1024の方法。
[本発明1028]
適用が、網膜の炎症を引き起こさない、本発明1001の方法。
[本発明1029]
適用後、前記網膜組織が積層を生じる、本発明1026の網膜組織グラフト。
[本発明1030]
適用後、前記網膜組織ニューロンが、Na+、K+および／またはCa++電流の兆候を示す、本発明1001の方法。
[本発明1031]
前記網膜組織と既存組織との結合性を実証することをさらに含む、本発明1001の方法。
[本発明1032]
前記結合が、WGA-HRP経シナプストレーサー、組織学、IHC、または電気生理学のうち1つまたは複数により実証される、本発明1031の方法。
[本発明1033]
機能回復レベルの測定をさらに含む、本発明1001の方法。
[本発明1034]
機能回復レベルが、少なくともベースラインの10%の電気生理学的応答の増大を含む、本発明1033の方法。
[本発明1035]
対象の眼球に移植される網膜組織グラフトであって、
網膜色素上皮（RPE）細胞、網膜神経節細胞（RGC）、二次網膜ニューロン、および光受容体（PR）細胞を含み、前記RPE細胞、前記RGC細胞、および前記PR細胞が中心コアを形成するように構成されている、網膜組織グラフト。
[本発明1036]
約1,000個〜25万個の光受容体がある、本発明1035の網膜組織グラフト。
[本発明1037]
前記二次網膜ニューロンが、成熟網膜の内顆粒層に相当する、本発明1035の網膜組織グラフト。
[本発明1038]
前記細胞が、前記コアから半径方向外側に向かうように配置され、前記網膜組織が、網膜神経節細胞（RGC）層、二次網膜ニューロン層、光受容体（PR）細胞層、およびRPE細胞の外層を含む、本発明1035の網膜組織グラフト。
[本発明1039]
1,000個〜約25万個の細胞を含む、本発明1035の網膜組織グラフト。
[本発明1040]
網膜下スペースまたは網膜上スペースに移植される、本発明1035の網膜組織グラフト。
[本発明1041]
黄斑付近の網膜下スペースまたは網膜上スペースに移植される、本発明1040の網膜組織グラフト。
[本発明1042]
シナプス形成の増加が電気活性の増加と同時に生じる、本発明1035の網膜組織グラフト。
[本発明1043]
移植後、ニューロンが前記グラフトを既存組織と結合させる、本発明1035の網膜組織グラフト。
[本発明1044]
前記ニューロンがCALB2陽性である、本発明1043の網膜組織グラフト。
[本発明1045]
結合性が、WGA-HRP経シナプストレーサーにより実証される、本発明1043の網膜組織。
[本発明1046]
移植後、軸索が前記グラフトを既存組織と結合させる、本発明1035の網膜組織グラフト。
[本発明1047]
前記軸索がCALB2陽性である、本発明1046の網膜組織。
[本発明1048]
移植後、前記グラフトの細胞がRGCへと成熟する、本発明1035の網膜組織グラフト。
[本発明1049]
移植後、既存ニューロンとシナプスを形成する、本発明1035の網膜組織グラフト。
[本発明1050]
移植後、既存組織と結合を形成する、本発明1035の網膜組織グラフト。
[本発明1051]
前記結合が、移植後1日〜約5週間で形成する、本発明1050の網膜組織。
[本発明1052]
移植後、既存組織ONLにかかる軸索を形成する、本発明1035の網膜組織グラフト。
[本発明1053]
パラクリン因子を生産する、本発明1035の網膜組織グラフト。
[本発明1054]
前記パラクリン因子が、適用の前および／または後に生産される、本発明1053の網膜組織グラフト。
[本発明1055]
神経栄養因子を生産する、本発明1035の網膜組織グラフト。
[本発明1056]
神経栄養因子を、適用の前または後に生産する、本発明1055の網膜組織グラフト。
[本発明1057]
前記神経栄養因子が、BDNS、GDNF、bNGF、NT4、bFGF、NT34、NT4/5、CNTF、PEDF、セルピン、またはWNTファミリーメンバーのうち1つまたは複数を含む、本発明1055の網膜組織。
[本発明1058]
移植後、機能回復レベルが、電気生理学的応答の増大として測定される、本発明1035の網膜組織グラフト。
[本発明1059]
機能回復レベルが、少なくともベースラインの10%までの電気生理学的応答の増大として測定される、本発明1058の網膜組織グラフト。
[本発明1060]
移植後、前記グラフトの軸索が、既存組織を穿通してそれに統合される、本発明1035の網膜組織グラフト。
[本発明1061]
前記組織が、ヒト多能性幹細胞に由来する、本発明1035の網膜組織グラフト。
[本発明1062]
対象の、網膜変性疾患の進行の緩慢化、外傷性損傷後の網膜変性疾患の進行の緩慢化、加齢黄斑変性（AMD）の進行の緩慢化、遺伝性網膜疾患の進行の緩慢化、網膜疾患の安定化、網膜変性疾患の予防、外傷性損傷後の網膜変性疾患の予防、視覚もしくは視知覚の改善、AMDの予防、疾患、損傷、もしくは遺伝子異常により喪失された網膜色素上皮（RPE）、光受容体細胞（PRC）、および網膜神経節細胞（RGC）の回復、RPE、PRC、およびRCGの増加、またはRPE、PRC、およびRCG欠損の治療に有用である、本発明1035の網膜組織グラフト。
[本発明1063]
レシピエントの眼内スペースへの植え込み後、PR層およびRPE層が積層しかつ発達し、PR外節の伸長、シナプス形成、電気生理学的活性、およびレシピエントの網膜細胞との結合性を含め、少なくとも約6〜24カ月は腫瘍無しで生着することができる、本発明1035の網膜組織グラフト。
[本発明1064]
レシピエントの眼の眼内スペースへの植え込み後5週間で、前記レシピエントの外顆粒層（ONL）、内顆粒層（INL）、および神経節細胞層（GCL）内に軸索を伸ばすことができ、かつ前記軸索を前記層に統合させることができる、本発明1035の網膜組織グラフト。
さらなる局面および態様を以下に記載する。