【手続補正書】
【提出日】令和3年5月10日(2021.5.10)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の工程：
ａ）標識粒子とリガンドを溶液中に含んでなる試料を提供する工程（ここで標識粒子は、該溶液中に溶解又は分散しているか又は固体支持体上に固定されている）；
ｂ）標識粒子を蛍光で励起させて、励起粒子の蛍光を所定温度で検出する工程；
ｃ）工程（ａ）と工程（ｂ）をリガンドの該溶液中の異なる濃度で複数回繰り返す工程；及び
ｄ）標識粒子の蛍光のリガンド濃度依存性の変化に基づいて、標識粒子とリガンドの間の相互作用について決定する工程を含んでなる、標識粒子とリガンドの間の相互作用を測定するための方法であって、
ここで、工程（ｂ）が以下の工程：
ｂ１）標識粒子を蛍光で励起させて、励起粒子の蛍光を第一所定温度で検出する工程；
ｂ２）該溶液を第二所定温度まで加熱するか又は冷却する工程；
ｂ３）標識粒子を蛍光で励起させて、励起粒子の蛍光を第二所定温度で検出する工程を含み、
標識粒子は、一般式（Ｉ）、（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）又は（ＩＩＩ）：
【化１】
2020527696.tif 000001
[式中：
Ｘ１は、Ｏ、Ｓ、又はＣＲ５Ｒ６であり；
Ｘ２は、Ｏ、Ｓ、又はＣＲ７Ｒ８であり；
Ｒ１とＲ２は、それぞれ独立して、水素と置換されてよいアルキル基からなる群より選択され；
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、及びＲ８は、それぞれ独立して、ヒドロキシ、カルボキシ、スルホン酸、チオール又はその塩、水素、ハロゲン、置換されてよいカルボン酸エステル基、ニトロ基、アミン、アミド、置換されてよいアルキル基、置換されてよいアルコキシ基、及び置換されてよいアルケニル基からなる群より選択され；
但し、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、及びＲ８の少なくとも１つは、それによって色素が粒子へコンジュゲートされるスペーサー基であり（ここで該スペーサー基は、２個のＣＨ２基より長い）；
ａは、０〜４の整数であり；
ｂは、０〜４の整数であり；そして
ｎは、１〜３の整数、好ましくは１又は２である］；
【化２】
2020527696.tif 000002
【化３】
2020527696.tif 000003
［式中：
Ｘ３とＸ４の一方はＮＲ９であって、Ｘ３とＸ４の他方は、Ｏ、Ｓ、又はＣＲ１３Ｒ１４であり；
Ｒ９は、水素と置換されてよいアルキル基からなる群より選択され；
Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、及びＲ１４は、それぞれ独立して、ヒドロキシ、カルボキシ、スルホン酸、チオール又はその塩、水素、ハロゲン、置換されてよいカルボン酸エステル基、ニトロ基、アミン、アミド、置換されてよいアルキル基、置換されてよいアルコキシ基、及び置換されてよいアルケニル基からなる群より選択され；
但し、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、及びＲ１４の少なくとも１つは、それによって色素が粒子へコンジュゲートされるスペーサー基であり（ここで該スペーサー基は、２個のＣＨ２基より長い）；
ｃは、０〜４の整数であり；
ｄは、０〜２の整数であり；
ｅは、０〜４の整数であり；そして
ｍは、１〜３の整数、好ましくは１又は２である］；及び
【化４】
2020527696.tif 000004
［式中：
Ｙは、ＯＲ１８又はＮＲ１９Ｒ２０であり；
Ｚは、Ｏ又は＋ＮＲ２１Ｒ２２であり；
Ｒ１５、Ｒ１６、及びＲ１７は、それぞれ独立して、ヒドロキシ、カルボキシ、スルホン酸、チオール又はその塩、水素、ハロゲン、置換されてよいカルボン酸エステル基、ニトロ基、アミン、アミド、置換されてよいアルキル基、置換されてよいアルコキシ基、及び置換されてよいアルケニル基からなる群より選択され；
但し、Ｒ１７の少なくとも１つは、それによって色素が粒子へコンジュゲートされるスペーサー基であり；
Ｒ１８は、Ｈ又はアルカリ金属イオンであり、
Ｒ１９、Ｒ２０、Ｒ２１、及びＲ２２は、それぞれ独立して、水素と置換されてよいアルキル基からなる群より選択され、好ましくは、Ｒ１９、Ｒ２０、Ｒ２１、及びＲ２２は、それぞれ同じであり；
ｆは、０〜３の整数であり；
ｇは、０〜３の整数であり；そして
ｈは、１〜５の整数である］によって表される色素からなる群より選択される１種以上の色素で標識される、前記方法。
【請求項２】
式（Ｉ）の前記色素が一般式（Ｉ’）：
【化５】
2020527696.tif 000005
[式中：
Ｘ１は、Ｏ又はＣＲ５Ｒ６であり；
Ｘ２は、Ｏ又はＣＲ７Ｒ８であり；
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、及びＲ８は、それぞれ独立して、置換されてよいＣ１−２０アルキル基であり；
Ｒ３とＲ４は、それぞれ独立して、水素とスルホン酸又はその塩からなる群より選択され；
但し、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、及びＲ８の１つは、それによって色素が粒子へコンジュゲートされるスペーサー基であり（ここで該スペーサー基は、２個のＣＨ２基より長い）；そして
ｎは、１又は２に等しい整数である］によって表される色素である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
式（ＩＩａ）又は（ＩＩｂ）の前記色素が一般式（ＩＩａ’）又は（ＩＩｂ’）：
【化６】
2020527696.tif 000006
【化７】
2020527696.tif 000007
［式中：
Ｘ３とＸ４の一方はＮＲ９であって、Ｘ３とＸ４の他方はＣＲ１３Ｒ１４であり；
スルホネート基は、ＮＲ９に対して４位にあり；
Ｒ９は、置換されてよいＣ１〜Ｃ２０アルキル基であり；
Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、及びＲ１４は、それぞれ独立して、ヒドロキシ、カルボキシ、スルホン酸、チオール又はその塩、水素、ハロゲン、置換されてよいカルボン酸エステル基、ニトロ基、アミン、アミド、置換されてよいアルキル基、置換されてよいアルコキシ基、及び置換されてよいアルケニル基からなる群より選択され；
但し、Ｒ９、Ｒ１３、及びＲ１４の１つは、それによって色素が粒子へコンジュゲートされるスペーサー基であり（ここで該スペーサー基は、２個のＣＨ２基より長い）；
ｄは、０〜２の整数であり；
ｅは、０〜３の整数であり；そして
ｍは、１又は２に等しい整数である］によって表される色素である、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
一般式（Ｉ）、（Ｉ’）、（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）、（ＩＩａ’）、（ＩＩｂ’）の前記色素中のスペーサー基が置換されてよいＣ４〜Ｃ２０アルキレン鎖であり、ここで該アルキレン鎖の１個以上の炭素原子は、独立して、脂環式基、アリール基、複素環式基、ヘテロアリール基、又はＯ、Ｎ、及びＳからなる群より選択されるヘテロ原子に置き換わってよい、請求項１〜請求項３のいずれかに記載の方法。
【請求項５】
式（ＩＩＩ）の前記色素が一般式（ＩＩＩ’）：
【化８】
2020527696.tif 000008
［式中：
Ｙは、ＯＨ又はＮ（ＣＨ３）２であり；
Ｚは、Ｏ又は＋Ｎ（ＣＨ３）２であり；
Ｒ１５とＲ１６は、それぞれ独立して、水素又はハロゲンであり；
Ｒ１７は、それによって色素が粒子へコンジュゲートされるスペーサー基であり；そして
Ｒ１７ａは、カルボキシ基又はその塩である］によって表される色素である、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
一般式（ＩＩＩ）又は（ＩＩＩ’）の前記色素中のスペーサー基が置換されてよいＣ２〜Ｃ１０アルキレン鎖であり、ここで該アルキレン鎖の１個以上の炭素原子は、独立して、脂環式基、アリール基、ヘテロアリール基、複素環式基、又はＯ、Ｎ、及びＳからなる群より選択されるヘテロ原子に置き換わってよい、請求項１又は請求項５に記載の方法。
【請求項７】
加熱するか又は冷却する工程が、加熱又は冷却液、加熱又は冷却ガス、加熱素子（element）、ペルティエ素子、電磁放射、及びこれらの組合せからなる群より選択される加熱又は冷却源を使用して行われる、請求項１〜請求項６のいずれかに記載の方法。
【請求項８】
第一所定温度と第二所定温度が、−２０℃〜１１５℃、好ましくは０．１℃〜１００℃の範囲、より好ましくは５℃〜６０℃の範囲、なおより好ましくは１０℃〜６０℃の範囲、最も好ましくは１０℃〜４０℃の範囲にある、請求項１〜請求項７のいずれかに記載の方法。
【請求項９】
第一所定温度と第二所定温度が＋／−１Ｋ以内、好ましくは＋／−０．５Ｋ以内に制御される、請求項１〜請求項８のいずれかに記載の方法。
【請求項１０】
第二所定温度と第一所定温度の間の差が＋／−０．１Ｋ〜＋／−９０Ｋの範囲、好ましくは＋／−１Ｋと＋／−４０Ｋの範囲、より好ましくは＋／−１Ｋ〜＋／−２０Ｋの範囲にある、請求項１〜請求項９のいずれかに記載の方法。
【請求項１１】
粒子が、有機分子、生体分子、ナノ粒子、ミクロ粒子、小胞、生体細胞又は細胞内フラグメント、生体組織、ウイルス粒子、ウイルス、及び細胞小器官からなる群より選択される、請求項１〜請求項１０のいずれかに記載の方法。
【請求項１２】
前記生体分子が、タンパク質、ペプチド、酵素、核酸、及びこれらの組合せからなる群より選択される、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記リガンドが、イオン、金属、化合物、薬物フラグメント、炭水化物、低分子、薬物、プロドラッグ、脂質、タンパク質、ペプチド、ペプトイド、酵素、核酸、ナノ粒子、リポソーム、ＳＵＶ、ＧＵＶ、ポリマー、有機分子、無機分子、金属錯体、ホルモン、フレーバー、着臭剤（odorants）、粒子、及び（マイクロ）ビーズからなる群より選択される、請求項１〜請求項１２のいずれかに記載の方法。
【請求項１４】
粒子とリガンドが、粒子→リガンドとして示される以下の組合せ：酵素→脂質、受容体→ホルモン、受容体→ケモカイン、酵素→阻害剤、受容体→神経伝達物質、受容体→サイトカイン、酵素→イオン、受容体→イオン、受容体→アミノ酸、酵素→補因子、受容体→脂質、受容体→ステロール、酵素→フラグメント、受容体→ペプチド、受容体→フラグメント、酵素→代謝産物、受容体→受容体、受容体→糖脂質、酵素→ＤＮＡ、受容体→着臭剤、受容体→プロドラッグ、酵素→ＲＮＡ、受容体→薬物、酵素→単糖類／二糖類／多糖類、酵素→脂肪酸、酵素→ビタミン、酵素→プロドラッグ、酵素→薬物、リポソーム→タンパク質、輸送タンパク質→基質、抗体→抗原、ウイルス粒子→受容体、ウイルス→構造タンパク質、抗体→Ｆｃ受容体、シャペロン→ＡＴＰ、ｓｓＤＮＡ→ｓｓＤＮＡ、アプタマー→リガンド、シャペロン→イオン、ＲＮＡ→低分子、多糖類→低分子、シャペロン→タンパク質、ＤＮＡ→低分子、構造タンパク質→構造タンパク質、シグナル伝達タンパク質→シグナル伝達タンパク質、シグナル伝達タンパク質→低分子、シグナル伝達タンパク質→プロドラッグ、シグナル伝達タンパク質→薬物、シグナル伝達タンパク質→脂質、構造タンパク質→イオン、ナノ粒子→タンパク質、細胞小器官→タンパク質、ナノ粒子→ＤＮＡ、細胞小器官→脂質、ナノ粒子→ＲＮＡからなる群より選択される、請求項１〜請求項１３のいずれかの方法。
【請求項１５】
標識粒子とリガンドの間の相互作用を測定する方法が粒子とリガンドの解離定数を測定する方法である、請求項１〜請求項１４のいずれかの方法。