【手続補正書】
【提出日】令和3年5月28日(2021.5.28)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
低密度リポタンパク質受容体様タンパク質５（LRP5）に結合するポリペプチドであって、免疫グロブリン単一可変ドメイン（ISVD）（ｉ）〜（iv）：
（ｉ）以下の相補性決定領域（CDR）配列：
CDR1：TYVMG（配列番号１）
CDR2：AISWSGGSTYYADSVKG（配列番号２）
CDR3：SRGTSTPSRASGVSRYDY（配列番号３）
を含むISVD、
（ii）以下のCDR配列：
CDR1：RYAVA（配列番号４）
CDR2：AITWSSGRIDYADSVKG（配列番号５）
CDR3：DRRPRSTGRSGTGSPSTYDY（配列番号６）
を含むISVD、
（iii）以下のCDR配列：
CDR1：IGAMG（配列番号７）
CDR2：AVSSGGSTYYVDSVKG（配列番号８）
CDR3：ETGPYGPPKRDY（配列番号９）
を含むISVD、及び
（iv）以下のCDR配列：
CDR1：INAMG（配列番号１０）
CDR2：AVSSGGSTYYVDSVKG（配列番号８）
CDR3：ETGPYGPPKRDY（配列番号９）
を含むISVD
からなる群から選択されるISVDを含む、ポリペプチド。
【請求項２】
ISVD（ｉ）及び（ii）から選択される第１のISVDと、ISVD（iii）及び（iv）から選択される第２のISVDとを含む、請求項１記載のポリペプチド。
【請求項３】
前記第１のISVDがISVD（ｉ）であり、そして、前記第２のISVDがISVD（iii）であるか；
前記第１のISVDがISVD（ｉ）であり、そして、前記第２のISVDがISVD（iv）であるか；  前記第１のISVDがISVD（ii）であり、そして、前記第２のISVDがISVD（iii）であるか；又は
前記第１のISVDがISVD（ii）であり、そして、前記第２のISVDがISVD（iv）である、
請求項２記載のポリペプチド。
【請求項４】
前記ISVDが、VHHドメイン、好ましくはヒト化VHHドメインである、請求項１〜３のいずれか一項記載のポリペプチド。
【請求項５】
ISVD（ｉ）が、配列番号１１の配列若しくは配列番号２３の配列を含む、
ISVD（ii）が、配列番号１２の配列を含む、
ISVD（iii）が、配列番号１３の配列若しくは配列番号２２の配列を含む、及び／又は
ISVD（iv）が、配列番号１４の配列を含む、請求項１記載のポリペプチド。
【請求項６】
第１のISVD及び第２のISVDを含み、前記第１のISVDが、配列番号１１、配列番号１２、又は配列番号２３の配列を含み、そして、前記第２のISVDが、配列番号１３、配列番号１４、又は配列番号２２の配列を含む、請求項５記載のポリペプチド。
【請求項７】
前記第１のISVDが、配列番号１１の配列を含み、そして、前記第２のISVDが、配列番号２２の配列を含むか；
前記第１のISVGが、配列番号１２の配列を含み、そして、前記第２のISVDが、配列番号１３の配列を含むか；
前記第１のISVDが、配列番号２３の配列を含み、そして、前記第２のISVDが、配列番号１４の配列を含む、
請求項６記載のポリペプチド。
【請求項８】
前記第１のISVD及び前記第２のISVDが、リンカーペプチドによって共有結合的に連結しており、前記リンカーペプチドが、場合により、第３のISVDを含むか又はからなる、請求項２〜７のいずれか一項記載のポリペプチド。
【請求項９】
半減期延長部分を更に含み、前記半減期延長部分が、ポリペプチドに共有結合的に連結しており、そして、
前記半減期延長部分が、場合により、アルブミン結合部分、例えば、アルブミン結合ペプチド又はアルブミン結合免疫グロブリンドメイン、トランスフェリン結合部分、例えば、抗トランスフェリン免疫グロブリンドメイン、ポリエチレングリコール分子、ヒト血清アルブミン、及びヒト血清アルブミンの断片からなる群から選択されるか、又は場合により、アルブミン結合部分、好ましくは、アルブミン結合ISVD、より好ましくは、配列番号２１の配列を含むAlb11ドメインである、
請求項２〜８のいずれか一項記載のポリペプチド。
【請求項１０】
第１及び第２のLRP5結合ISVDと、１つのアルブミン結合ISVDとを含むポリペプチドであって、
−  前記第１のLRP5結合ISVDが、ISVD（ｉ）及び（ii）：
（ｉ）以下のCDR配列：
CDR1：TYVMG（配列番号１）
CDR2：AISWSGGSTYYADSVKG（配列番号２）
CDR3：SRGTSTPSRASGVSRYDY（配列番号３）
を含むISVD、
（ii）以下のCDR配列：
CDR1：RYAVA（配列番号４）
CDR2：AITWSSGRIDYADSVKG（配列番号５）
CDR3：DRRPRSTGRSGTGSPSTYDY（配列番号６）
を含むISVD
からなる群から選択され、
−  前記第２のISVDが、ISVD（iii）及び（iv）：
（iii）以下のCDR配列：
CDR1：IGAMG（配列番号７）
CDR2：AVSSGGSTYYVDSVKG（配列番号８）
CDR3：ETGPYGPPKRDY（配列番号９）
を含むISVD、及び
（iv）以下のCDR配列：
CDR1：INAMG（配列番号１０）
CDR2：AVSSGGSTYYVDSVKG（配列番号８）
CDR3：ETGPYGPPKRDY（配列番号９）
を含むISVD
からなる群から選択され、
−  前記アルブミン結合ISVDが、以下のCDR配列：
CDR1：SFGMS（配列番号１５）
CDR2：SISGSGSDTLYADSVKG（配列番号１６）
CDR3：GGSLSR（配列番号１７）
を含むことによって定義される、ポリペプチド。
【請求項１１】
前記第１のISVDがISVD（ｉ）であり、そして、前記第２のISVDがISVD（iii）であるか；
前記第１のISVDがISVD（ｉ）であり、そして、前記第２のISVDがISVD（iv）であるか；  前記第１のISVDがISVD（ii）であり、そして、前記第２のISVDがISVD（iii）であるか；
前記第１のISVDがISVD（ii）であり、そして、前記第２のISVDがISVD（iv）である、
請求項１０記載のポリペプチド。
【請求項１２】
配列番号１８、１９、及び２０から選択される配列を含むか又はからなる、LRP5に結合するポリペプチド。
【請求項１３】
LRP5に対する結合について参照ISVDと競合するISVDを含む、LRP5に結合するポリペプチドであって、前記参照ISVDが、配列番号１１、１２、１３、１４、２２、又は２３によって同定される配列を有し；好ましくは、前記ISVDが、LRP5のWnt1又はWnt3aの結合部位をブロックし、具体的には、前記ISVDが、Wnt1によって駆動されるか又はWnt3aによって駆動される標的遺伝子の転写を阻害する、ポリペプチド。
【請求項１４】
LRP5に対する結合について第１の参照ISVDと競合する第１のISVDであって、前記第１の参照ISVDが配列番号１１、２３、又は１２によって同定される配列を有する、第１のISVDと、LRP5に対する結合について第２の参照ISVDと競合する第２のISVDであって、前記第２の参照ISVDが配列番号１３、２２、又は１４によって同定される配列を有する、第２のISVDとを含み；好ましくは、前記第１のISVDが、LRP5のWnt3a結合部位をブロックし、具体的には、Wnt3aによって駆動される標的遺伝子の転写を阻害する、及び／又は好ましくは、前記第２のISVDが、LRP5のWnt1結合部位をブロックし、具体的には、Wnt1によって駆動される標的遺伝子の転写を阻害する、請求項１３記載のポリペプチド。
【請求項１５】
リンカーペプチドが、前記第１のISVDを前記第２のISVDに共有結合的に連結し、前記リンカーペプチドが、場合により、更なるISVD、好ましくはアルブミン結合ISVD、特に請求項１６記載のアルブミン結合ISVDを含むか又はからなる、請求項１４記載のポリペプチド。
【請求項１６】
前記第１及び／又は前記第２のISVDが、VHHドメイン、好ましくはヒト化VHHドメインである、請求項１４又は１５記載のポリペプチド。
【請求項１７】
第１のLRP5結合ドメイン、好ましくはISVDと、第２のLRP5結合ドメイン、好ましくはISVDとを含む、LRP5に結合するポリペプチドであって、前記第１のLRP5結合ドメインが、前記第２のLRP5結合ドメインが結合するLRP5領域とは異なるLRP5の領域に結合する、ポリペプチド。
【請求項１８】
前記第１のドメインが、LRP5のWnt3a結合部位をブロックし、そして、好ましくは、Wnt3aによって駆動される標的遺伝子の転写を阻害する、及び／又は前記第２のドメインが、LRP5のWnt1結合部位をブロックし、そして、好ましくは、Wnt1によって駆動される標的遺伝子の転写を阻害する、請求項１７記載のポリペプチド。
【請求項１９】
半減期延長部分を更に含み、前記半減期延長部分が、ポリペプチドに共有結合的に連結しており、そして、好ましくは、アルブミン結合部分、例えば、アルブミン結合ペプチド又はアルブミン結合免疫グロブリンドメイン（例えば、アルブミン結合ISVD）、トランスフェリン結合部分、例えば、抗トランスフェリン免疫グロブリンドメイン、ポリエチレングリコール分子、ヒト血清アルブミン、及びヒト血清アルブミンの断片からなる群から選択される、請求項１３〜１８のいずれか一項記載のポリペプチド。
【請求項２０】
LRP6、具体的にはヒトLRP6に対する親和性及び／又は結合活性よりも少なくとも１０倍、好ましくは少なくとも１００倍、より好ましくは少なくとも１０００倍、更により好ましくは少なくとも１００００倍、更により好ましくは少なくとも１０００００倍強い、LRP5、特にヒトLRP5に対する親和性及び／又は結合活性を有する、請求項１〜１９のいずれか一項記載のポリペプチド。
【請求項２１】
LRP6、具体的にはヒトLRP6との交差反応性がない、請求項１〜１９のいずれか一項記載のポリペプチド。
【請求項２２】
請求項１〜２１のいずれか一項記載のポリペプチドをコードしている、好ましくは単離された形態の、核酸分子。
【請求項２３】
請求項２２記載の核酸を含む発現ベクター。
【請求項２４】
請求項２３記載の発現ベクターを保有している宿主細胞。
【請求項２５】
請求項１〜２１のいずれか一項記載のポリペプチドを製造する方法であって、
−  請求項１〜２１のいずれか一項記載のポリペプチドを発現させる条件下で、請求項２４記載の宿主細胞を培養する工程と、
−  前記ポリペプチドを回収する工程と、
を含む、方法。
【請求項２６】
−  前記ポリペプチドを精製する工程
を更に含む、請求項２５記載の方法。
【請求項２７】
請求項１〜２１のいずれか一項記載のポリペプチドを含む、医薬組成物。
【請求項２８】
ヒト又は動物における疾患、障害、又は状態を治療、予防、又は緩和する方法において医薬として使用するための、請求項２７記載の医薬組成物。
【請求項２９】
癌、好ましくは、乳癌、肺癌、具体的には非小細胞肺癌（NSCLC）、膵臓癌、結腸直腸癌、肉腫、卵巣癌、若しくは肝細胞癌の処置において使用するための、又は特発性肺疾患の処置において使用するための、又は網膜症、好ましくは、異常なWntシグナル伝達によって引き起こされる網膜症の処置において使用するための、又はトリプルネガティブ乳癌（TNBC）の処置において使用するための、請求項２７記載の医薬組成物。
【請求項３０】
化学療法剤、血管新生を阻害する処置活性化合物、シグナル伝達経路阻害剤、EGFR阻害剤、免疫調節剤、免疫チェックポイント阻害剤、又はホルモン療法剤と組み合わせて使用するための、請求項２７記載の医薬組成物。
【請求項３１】
請求項１〜２１のいずれか一項記載のポリペプチドと組み合わせて使用するための、化学療法剤、血管新生を阻害する処置活性化合物、シグナル伝達経路阻害剤、EGFR阻害剤、免疫調節剤、免疫チェックポイント阻害剤、及びホルモン療法剤からなる群から選択される処置剤を含む医薬組成物。
【請求項３２】
樹状細胞におけるWnt1及びWnt3aによって駆動される標的遺伝子の転写を阻害することによって腫瘍微小環境を調節するための、請求項１〜２１のいずれか一項記載のポリペプチドのエキソビボ使用であって、好ましくはインビトロにおける使用である、使用。
【請求項３３】
抗PD1抗体、抗PDL1抗体、抗CTLA4抗体、抗BTLA抗体、抗LAG3抗体、及び抗TIM3抗体からなる群から選択される免疫チェックポイント阻害剤と組み合わせて、又は癌ワクチンと組み合わせて、癌の処置において使用するための、請求項２７記載の医薬組成物。
【請求項３４】
癌の処置における医薬の製造における、請求項１〜２１のいずれか一項記載のポリペプチドの使用。
【請求項３５】
抗PD1抗体、抗PDL1抗体、抗CTLA4抗体、抗BTLA抗体、抗LAG3抗体、及び抗TIM3抗体からなる群から選択される免疫チェックポイント阻害剤と組み合わせた、又は癌ワクチンと組み合わせた、癌の処置における医薬の製造における、請求項１〜２１のいずれか一項記載のポリペプチドの使用。