【手続補正書】
【提出日】令和3年6月4日(2021.6.4)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
被験体における網膜疾患または状態の処置において使用するための製剤、製造品または組成物であって、
前記製剤、前記製造品または前記組成物が、不死ではないヒト網膜前駆細胞を含む細胞集団を含み、
前記製剤、前記製造品または前記組成物が、
約１２週〜約２８週の在胎齢のヒトから得られた網膜組織の試料を機械的にかつ／または酵素的に消化して、細胞および細胞塊の解離した懸濁物を作製すること、
異種成分不含フィブロネクチン、オルニチン、ポリリジン、またはラミニンで被覆した培養フラスコまたはプレート中の無血清培地において前記懸濁物を標準酸素レベルで約４〜６継代の間、培養すること、および
その後無血清培地において前記懸濁物を低酸素レベルでさらに約３〜６継代の間、培養することであって、
前記細胞は、４０％〜９０％コンフルエンスの間で継代させ、継代ごとに酵素で処理して前記細胞を解離させ、新たな培養培地を添加し、
それによって不死ではないヒト網膜前駆細胞を作製する、培養すること
によって作製され、
ネスチンが、前記集団中の前記不死ではないヒト網膜前駆細胞の９０％超によって発現され、
Ｓｏｘ２が、前記集団中の前記不死ではないヒト網膜前駆細胞の８０％超によって発現され、
ＭＨＣクラスＩが、前記集団中の前記不死ではないヒト網膜前駆細胞の７０％超によって発現される、
またはこれらの組み合わせである、
製剤、製造品または組成物。
【請求項２】
Ｋｉ−６７が、前記集団中の前記不死ではないヒト網膜前駆細胞の３０％超によって発現され、
Ｆａｓ／ＣＤ９５が、前記集団中の前記不死ではないヒト網膜前駆細胞の３０％超によって発現され、
ＭＨＣクラスＩＩが、前記集団中の前記不死ではないヒト網膜前駆細胞の２％未満によって発現され、
オステオポンチン（ＯＰＮ）が、前記集団中の前記不死ではないヒト網膜前駆細胞により約２０ｎｇ／１０６細胞／２４時間よりも多い量で発現され、
塩基性線維芽細胞成長因子（ｂＦＧＦ）が、前記細胞がベースラインでｂＦＧＦを含まなかった担体中に存在する場合、前記集団中の前記不死ではないヒト網膜前駆細胞により、約５０〜約３００ｐｇ／１０６細胞／時間の量で発現される、
またはこれらの組み合わせである、
請求項１に記載の使用するための製剤、製造品または組成物。
【請求項３】
前記集団中の前記細胞が、
中脳星状細胞由来神経栄養因子（ＭＡＮＦ）を約０．５〜約２．５ｎｇ／１０６細胞／２４時間の量で、
色素上皮由来成長因子（ＰＥＤＦ）を最大約３０ｎｇ／１０６細胞／２４時間の量で、
プレイオトロフィン（ＰＴＮ）を約５０〜約６００ｐｇ／１０６細胞／２４時間の量で、および／または
ミッドカイン（ＭＤＫ）を最大約１２ｎｇ／１０６細胞／２４時間の量で
発現する、請求項１または２に記載の使用のための製剤、製造品または組成物。
【請求項４】
前記懸濁物を低酸素レベルで培養するその後の培養に続いて、前記細胞を標準酸素レベルで継代せずにある期間、成長させる、請求項１または２に記載の使用のための製剤、製造品または組成物。
【請求項５】
前記ある期間が約１時間〜５日間を含む、請求項４に記載の使用のための製剤、製造品または組成物。
【請求項６】
前記低酸素レベルが、０．５％、１％、１．５％、２％、２．５％、３％、３．５％、４％、４．５％、５％、５．５％、６％、６．５％、７％、７．５％、８％、８．５％、９％、９．５％、または１０％酸素からなる群より選択される、請求項１〜４のいずれか一項に記載の使用のための製剤、製造品または組成物。
【請求項７】
１〜２日ごとに交換される前記培養培地に、０．０１ｍｇ／ｍｌ〜０．５ｍｇ／ｍｌのビタミンＣが含まれる、請求項１〜６のいずれか一項に記載の使用のための製剤、製造品または組成物。
【請求項８】
前記被験体がヒトである、請求項１〜７のいずれか一項に記載の使用のための製剤、製造品または組成物。
【請求項９】
前記製剤、前記製造品または前記組成物が、前記被験体の硝子体腔または網膜下腔中への注射用に製剤化されている、請求項１〜８のいずれか一項に記載の使用のための製剤、製造品または組成物。
【請求項１０】
前記網膜疾患または状態が、網膜色素変性（ＲＰ）、レーバー先天性黒内障（ＬＣＡ）、シュタルガルト病、アッシャー症候群、コロイデレミア、杆体錐体または錐体杆体ジストロフィー、繊毛関連疾患、ミトコンドリア障害、進行性網膜萎縮、変性網膜疾患、加齢黄斑変性（ＡＭＤ）、ウェット型ＡＭＤ、ドライ型ＡＭＤ、地図状萎縮、家族性または後天性黄斑症、網膜光受容体疾患、網膜色素上皮ベースの疾患、糖尿病性網膜症、類嚢胞黄斑浮腫、ぶどう膜炎、網膜剥離、外傷性網膜損傷、医原性網膜損傷、黄斑円孔、黄斑毛細血管拡張症、神経節細胞疾患、視神経細胞疾患、緑内障、視神経症、虚血性網膜疾患、未熟児網膜症、網膜血管閉塞、家族性細動脈瘤、網膜血管疾患、眼血管疾患、血管疾患、または虚血性視神経症を含む、請求項１〜９のいずれか一項に記載の使用のための製剤、製造品または組成物。
【請求項１１】
前記製剤、前記製造品または前記組成物中の前記細胞が、ビメンチン、ＣＤ９、ＣＤ８１、ＡＱＰ４、ＣＸＣＲ４、ＣＤ１５／ＬｅＸ／ＳＳＥＡ１、ＧＤ２ガングリオシド、ＣＤ１３３、β３−チューブリン、ＭＡＰ２、ＧＦＡＰ、ＯＰＮ／ＳＰＰ１、ＰＴＮ、ＫＤＲ、およびＴＥＫからなる群より選択される１つまたは複数のマーカーをさらに発現する、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の使用のための製剤、製造品または組成物。
【請求項１２】
約０．３〜約０．５×１０６の有効量の細胞を有する、または有効量が約０．５〜約３×１０６細胞である、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の使用のための製剤、製造品または組成物。
【請求項１３】
不死ではないヒト胎児神経網膜細胞の不均一混合物を含む製剤、製造品または組成物を製造する方法であって、
（ａ）約１２週〜約２８週の在胎齢のヒトから得られたヒト網膜組織細胞の試料を機械的にかつ／または酵素的に解離させて、細胞および／または細胞塊の解離した懸濁物を作製することであって、
細胞および／または小さな細胞塊の収穫された試料は、トリプシンまたは等価物を使用して酵素的に解離される、作製すること；
（ｂ）異種成分不含フィブロネクチン、オルニチン、ポリリジン、またはラミニンで被覆した培養フラスコまたはプレート中の無血清培地において前記懸濁物を標準酸素レベルで約４〜６継代の間、培養すること；および
（ｃ）その後無血清培地において前記懸濁物を低酸素レベルでさらに約３〜６継代の間、培養することであって、
前記細胞は、４０％〜９０％コンフルエンスの間で継代させ、継代ごとに酵素で処理して前記細胞を解離させ、前記細胞培地は、約１〜２日ごとに交換される、培養すること
を含む、方法。
【請求項１４】
前記懸濁物を低酸素レベルで培養するその後の培養に続いて、前記細胞を標準酸素レベルで継代せずにある期間、成長させ、必要に応じて前記ある期間が約１時間〜５日間を含む、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記低酸素レベルが、０．５％、１％、１．５％、２％、２．５％、３％、３．５％、４％、４．５％、５％、５．５％、６％、６．５％、７％、７．５％、８％、８．５％、９％、９．５％、または１０％酸素からなる群より選択される、請求項１３または１４に記載の方法。
【請求項１６】
１〜２日ごとに交換される前記培養培地に、０．０１ｍｇ／ｍｌ〜０．５ｍｇ／ｍｌのビタミンＣが含まれる、請求項１３〜１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
前記細胞および／または前記細胞塊が基本培養培地で培養される、請求項１３〜１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
前記細胞および／または前記細胞塊が、細胞生存または成長を支援する補足物または添加物と一緒に培養され、必要に応じて前記補足物または前記添加物が、Ｌ−グルタミン、ＥＧＦおよびｂＦＧＦからなるヒト組換え成長因子（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）ならびに他の成長因子からなる群より選択される、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記培地に、アルブミン、または組換えアルブミンが約１．０ｍｇ／ｍｌの初期濃度を有する量で追加補充される、請求項１３〜１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
（ａ）細胞の前記試料が、病原体、細菌、エンドトキシン、真菌、マイコプラズマ、ウイルス、肝炎ウイルスまたはＨＩＶウイルスの存在についてスクリーニングされる、
（ｂ）細胞の前記試料が、正常核型の存在についてスクリーニングされる、
（ｃ）細胞の前記試料が上昇したテロメラーゼ活性を示さない、
（ｄ）細胞の前記試料が生存度についてスクリーニングされる、かつ／または
（ｅ）細胞の前記試料が腫瘍原性についてスクリーニングされる、
請求項１３〜１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
不死ではないヒト胎児神経網膜細胞の前記不均一混合物を製造するための前記方法が、
（ａ）細胞表面または遺伝子マーカーに基づいてヒト胎児神経網膜細胞を選択すること、または
（ｂ）ヒト胎児神経網膜細胞トランスクリプトームプロファイル、プロテオームプロファイルまたはゲノムプロファイルに基づいてヒト胎児神経網膜細胞を選択すること
をさらに含み、
必要に応じてステップ（ａ）が、前記細胞を培養前に（事前に）または培養後にまたは培養前と培養後との両方において選択することをさらに含み、あるいは必要に応じて前記細胞表面または遺伝子マーカーが、ＣＤ１５／ＬｅＸ／ＳＳＥＡ１もしくはＧＤ２ガングリオシドを含む、あるいは必要に応じて前記細胞表面または遺伝子マーカーが、ＣＤ９、ＣＤ８１、ＣＤ１３３もしくはＡＱＰ４および／もしくはＣＸＣＲ４を含む、
請求項１３〜２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
不死ではないヒト網膜前駆細胞の集団を単離するための方法であって、
網膜が形成された後であるが、光受容体外節が網膜全体で完全に形成される前であり、網膜血管新生が実質的に完了するまたは完了する前の段階に由来するヒト網膜組織の試料を機械的にかつ／または酵素的に解離して、細胞および細胞塊の解離した懸濁物を作製すること；
異種成分不含フィブロネクチン、オルニチン、ポリリジン、またはラミニンで被覆した培養フラスコまたはプレート中の無血清培地において前記懸濁物を標準酸素レベルで約４〜６継代の間、培養すること；
その後無血清培地において前記懸濁物を低酸素レベルでさらに約３〜６継代の間、培養することであって、
前記細胞は、４０％〜９０％コンフルエンスの間で継代させ、継代ごとに酵素で処理して前記細胞を解離させる、培養することを含み、
ネスチンが、前記集団中の前記不死ではないヒト網膜前駆細胞の９０％超により発現され、
Ｓｏｘ２が、前記集団中の前記不死ではないヒト網膜前駆細胞の８０％超により発現され、
ＭＨＣクラスＩが、前記集団中の前記不死ではないヒト網膜前駆細胞の７０％超により発現される、
またはこれらの組合せである、
方法。
【請求項２３】
（ａ）（ｉ）Ｋｉ−６７が、前記集団中の前記不死ではないヒト網膜前駆細胞の３０％超により発現され、（ｉｉ）Ｆａｓ／ＣＤ９５が、前記集団中の前記不死ではないヒト網膜前駆細胞の３０％超により発現され、（ｉｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩが、前記集団中の前記不死ではないヒト網膜前駆細胞の２％未満により発現され、（ｉｖ）オステオポンチン（ＯＰＮ）が、前記集団中の前記不死ではないヒト網膜前駆細胞により約２０ｎｇ／１０６細胞／２４時間よりも多い量で発現され、（ｖ）塩基性線維芽細胞成長因子（ｂＦＧＦ）が、前記細胞がベースラインでｂＦＧＦを含まなかった担体中に存在する場合、前記集団中の前記不死ではないヒト網膜前駆細胞により、約５０〜約３００ｐｇ／１０６細胞／時間の量で発現される、またはこれらの組合せである、
（ｂ）前記集団中の前記細胞が、中脳星状細胞由来神経栄養因子（ＭＡＮＦ）を約０．５〜約２．５ｎｇ／１０６細胞／２４時間の量で、色素上皮由来成長因子（ＰＥＤＦ）を最大約３０ｎｇ／１０６細胞／２４時間の量で、プレイオトロフィン（ＰＴＮ）を約５０〜約６００ｐｇ／１０６細胞／２４時間の量で、および／またはミッドカイン（ＭＤＫ）を最大約１２ｎｇ／１０６細胞／２４時間の量で発現する、
（ｃ）前記懸濁物を低酸素レベルで培養するその後の培養に続いて、前記細胞を標準酸素レベルで継代せずにある期間、成長させ、必要に応じて前記ある期間が約１時間〜５日間を含む、
（ｄ）前記低酸素レベルが、０．５％、１％、１．５％、２％、２．５％、３％、３．５％、４％、４．５％、５％、５．５％、６％、６．５％、７％、７．５％、８％、８．５％、９％、９．５％、または１０％酸素からなる群より選択される、
（ｅ）前記培養培地が１〜２日ごとに交換される、
（ｆ）１〜２日ごとに交換される前記培養培地に、０．０１ｍｇ／ｍｌ〜約０．５ｍｇ／ｍｌのビタミンＣが含まれる、
（ｇ）前記ヒト網膜組織が、約１２週〜約２８週の在胎齢のヒト胎児網膜から得られる、
（ｈ）前記細胞が、無血清または低血清の細胞培養培地で培養される、
（ｉ）前記培地がアルブミンをさらに含む、かつ／または
（ｊ）前記集団中の前記細胞が、ビメンチン、ＣＤ９、ＣＤ８１、ＡＱＰ４、ＣＸＣＲ４、ＣＤ１５／ＬｅＸ／ＳＳＥＡ１、ＧＤ２ガングリオシド、ＣＤ１３３、β３−チューブリン、ＭＡＰ２、ＧＦＡＰ、ＯＰＮ／ＳＰＰ１、ＰＴＮ、ＫＤＲ、およびＴＥＫからなる群より選択される１つまたは複数のマーカーをさらに発現する、
請求項２２に記載の方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１８６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１８６】
本発明の実施形態のいくつかが説明されている。にもかかわらず、本発明の精神および範囲から逸脱することなく種々の改変を加えてもよいことは理解することが可能である。したがって、他の実施形態は以下の特許請求の範囲内である。
特定の実施形態では、例えば以下の項目が提供される。
（項目１）
網膜疾患または状態の処置に有用である、医薬として、被験体において使用するための製剤、製造品または組成物であって、
前記製剤、前記製造品または前記組成物が、不死ではないヒト網膜前駆細胞を含む細胞集団を含み、
前記製剤、前記製造品または前記組成物が、
約１２週〜約２８週の在胎齢のヒトから得られたヒト網膜組織の試料を機械的にかつ／または酵素的に消化して、細胞および細胞塊の解離した懸濁物を作製すること、
異種成分不含フィブロネクチン、オルニチン、ポリリジン、またはラミニンで被覆した培養フラスコまたはプレート中の無血清培地において前記懸濁物を標準酸素レベルで約４〜６継代の間、培養すること、および
その後無血清培地において前記懸濁物を低酸素レベルでさらに約３〜６継代の間、培養することであって、
前記細胞は、４０％〜９０％コンフルエンスの間で継代させ、継代ごとに酵素で処理して前記細胞を解離させ、新たな培養培地を添加し、
それによって不死ではないヒト網膜前駆細胞を作製する、培養すること
によって作製され、
前記不死ではないヒト網膜前駆細胞が、ネスチン、Ｓｏｘ２、Ｋｉ−６７、ＭＨＣクラスＩ、ＭＨＣクラスＩＩ、オステオポンチン（ＯＰＮ）、塩基性線維芽細胞成長因子（ｂＦＧＦ）、およびＦａｓ／ＣＤ９５からなる群より選択される１つまたは複数のマーカーを発現し、
ネスチンが、前記集団中の前記細胞の９０％超によって発現され、
Ｓｏｘ２が、前記集団中の前記細胞の８０％超によって発現され、
Ｋｉ−６７が、前記集団中の前記細胞の３０％超によって発現され、
ＭＨＣクラスＩが、前記集団中の前記細胞の７０％超によって発現され、
Ｆａｓ／ＣＤ９５が、前記集団中の前記細胞の３０％超によって発現され、
ＭＨＣクラスＩＩが、前記集団中の前記細胞の２％未満によって発現され、
オステオポンチン（ＯＰＮ）が、前記集団中の前記細胞により２０ｎｇ／１０６細胞／２４時間よりも多い量で発現され、
塩基性線維芽細胞成長因子（ｂＦＧＦ）が、前記細胞がベースラインでｂＦＧＦを含まなかった担体中に存在する場合、前記集団中の前記細胞により、５０〜３００ｐｇ／１０６細胞／時間の量で発現される、
製剤、製造品または組成物。
（項目２）
前記集団中の前記細胞が、
中脳星状細胞由来神経栄養因子（ＭＡＮＦ）を０．５〜２．５ｎｇ／１０６細胞／２４時間の量で、
色素上皮由来成長因子（ＰＥＤＦ）を最大３０ｎｇ／１０６細胞／２４時間の量で、
プレイオトロフィン（ＰＴＮ）を５０〜６００ｐｇ／１０６細胞／２４時間の量で、および／または
ミッドカイン（ＭＤＫ）を最大１２ｎｇ／１０６細胞／２４時間の量で
発現する、項目１に記載の方法。
（項目３）
前記懸濁物を低酸素レベルで培養するその後の培養に続いて、前記細胞を標準酸素レベルで継代せずにある期間、成長させる、項目１に記載の製剤、製造品または組成物。
（項目４）
前記ある期間が１時間〜５日間を含む、項目３に記載の製剤、製造品または組成物。
（項目５）
前記低酸素レベルが、０．５％、１％、１．５％、２％、２．５％、３％、３．５％、４％、４．５％、５％、５．５％、６％、６．５％、７％、７．５％、８％、８．５％、９％、９．５％、または１０％酸素からなる群より選択される、項目１〜３のいずれか一項に記載の使用のための製剤、製造品または組成物。
（項目６）
１〜２日ごとに交換される前記培養培地に、０．０１ｍｇ／ｍｌ〜０．５ｍｇ／ｍｌのビタミンＣが含まれる、項目１〜５のいずれか一項に記載の使用のための製剤、製造品または組成物。
（項目７）
前記被験体がヒトである、項目１〜６のいずれか一項に記載の使用のための製剤、製造品または組成物。
（項目８）
前記製剤、前記製造品または前記組成物が、前記被験体の硝子体腔または網膜下腔中への注射用に製剤化されている、項目１〜７のいずれか一項に記載の使用のための製剤、製造品または組成物。
（項目９）
前記網膜疾患または状態が、網膜色素変性（ＲＰ）、レーバー先天性黒内障（ＬＣＡ）、シュタルガルト病、アッシャー症候群、コロイデレミア、杆体錐体または錐体杆体ジストロフィー、繊毛関連疾患、ミトコンドリア障害、進行性網膜萎縮、変性網膜疾患、加齢黄斑変性（ＡＭＤ）、ウェット型ＡＭＤ、ドライ型ＡＭＤ、地図状萎縮、家族性または後天性黄斑症、網膜光受容体疾患、網膜色素上皮ベースの疾患、糖尿病性網膜症、類嚢胞黄斑浮腫、ぶどう膜炎、網膜剥離、外傷性網膜損傷、医原性網膜損傷、黄斑円孔、黄斑毛細血管拡張症、神経節細胞疾患、視神経細胞疾患、緑内障、視神経症、虚血性網膜疾患、未熟児網膜症、網膜血管閉塞、家族性細動脈瘤、網膜血管疾患、眼血管疾患、血管疾患、または虚血性視神経症を含む、項目１〜８のいずれか一項に記載の使用のための製剤、製造品または組成物。
（項目１０）
前記製剤、前記製造品または前記組成物中の前記細胞が、ビメンチン、ＣＤ９、ＣＤ８１、ＡＱＰ４、ＣＸＣＲ４、ＣＤ１５／ＬｅＸ／ＳＳＥＡ１、ＧＤ２ガングリオシド、ＣＤ１３３、β３−チューブリン、ＭＡＰ２、ＧＦＡＰ、ＯＰＮ／ＳＰＰ１、ＰＴＮ、ＫＤＲ、およびＴＥＫからなる群より選択される１つまたは複数のマーカーをさらに発現する、項目１〜９のいずれか一項に記載の使用のための製剤、製造品または組成物。
（項目１１）
不死ではないヒト胎児神経網膜細胞の不均一混合物を含む製剤、製造品または組成物を製造する方法であって、
（ａ）約１２週〜約２８週の在胎齢のヒトから得られたヒト網膜組織細胞の試料を機械的にかつ／または酵素的に解離させて、細胞および／または細胞塊の解離した懸濁物を作製することであって、
細胞および／または小さな細胞塊の収穫された試料は、トリプシンまたは等価物を使用して酵素的に解離される、作製すること；
（ｂ）異種成分不含フィブロネクチン、オルニチン、ポリリジン、またはラミニンで被覆した培養フラスコまたはプレート中の無血清培地において前記懸濁物を標準酸素レベルで約４〜６継代の間、培養すること；および
（ｃ）その後無血清培地において前記懸濁物を低酸素レベルでさらに約３〜６継代の間、培養することであって、
前記細胞は、４０％〜９０％コンフルエンスの間で継代させ、継代ごとに酵素で処理して前記細胞を解離させ、前記細胞培地は、約１〜２日ごとに交換される、培養すること
を含む、方法。
（項目１２）
前記懸濁物を低酸素レベルで培養するその後の培養に続いて、前記細胞を標準酸素レベルで継代せずにある期間、成長させる、項目１１に記載の方法。
（項目１３）
前記ある期間が１時間〜５日間を含む、項目１２に記載の方法。
（項目１４）
前記低酸素レベルが、０．５％、１％、１．５％、２％、２．５％、３％、３．５％、４％、４．５％、５％、５．５％、６％、６．５％、７％、７．５％、８％、８．５％、９％、９．５％、または１０％酸素からなる群より選択される、項目１１または１２に記載の方法。
（項目１５）
１〜２日ごとに交換される前記培養培地に、０．０１ｍｇ／ｍｌ〜０．５ｍｇ／ｍｌのビタミンＣが含まれる、項目１０〜１３のいずれか一項に記載の方法。
（項目１６）
前記細胞および／または前記細胞塊が基本培養培地で培養される、項目１１〜１５のいずれか一項に記載の方法。
（項目１７）
前記細胞および／または前記細胞塊が、細胞生存または成長を支援する補足物または添加物と一緒に培養される、項目１６に記載の方法。
（項目１８）
細胞生存または成長を支援する前記補足物または前記添加物が、Ｌ−グルタミン、ＥＧＦおよびｂＦＧＦからなるヒト組換え成長因子（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）ならびに他の成長因子からなる群より選択される、項目１７に記載の方法。
（項目１９）
前記培地に、アルブミン、または組換えアルブミンが約１．０ｍｇ／ｍｌの初期濃度を有する量で追加補充される、項目１１〜１８のいずれか一項に記載の方法。
（項目２０）
細胞の前記試料が、病原体、細菌、エンドトキシン、真菌、マイコプラズマ、ウイルス、肝炎ウイルスまたはＨＩＶウイルスの存在についてスクリーニングされる、項目１１〜１９のいずれか一項に記載の方法。
（項目２１）
細胞の前記試料が、正常核型の存在についてスクリーニングされる、項目１１〜２０のいずれか一項に記載の方法。
（項目２２）
細胞の前記試料が上昇したテロメラーゼ活性を示さない、項目１１〜２１のいずれか一項に記載の方法。
（項目２３）
細胞の前記試料が生存度についてスクリーニングされる、項目１１〜２２のいずれか一項に記載の方法。
（項目２４）
細胞の前記試料が腫瘍原性についてスクリーニングされる、項目１１〜２３のいずれか一項に記載の方法。
（項目２５）
不死ではないヒト胎児神経網膜細胞の前記不均一混合物を製造するための前記方法が、
（ａ）細胞表面または遺伝子マーカーに基づいてヒト胎児神経網膜細胞を選択すること、または
（ｂ）ヒト胎児神経網膜細胞トランスクリプトームプロファイル、プロテオームプロファイルまたはゲノムプロファイルに基づいてヒト胎児神経網膜細胞を選択すること
をさらに含む、項目１１〜２４のいずれか一項に記載の方法。
（項目２６）
（ｉ）ステップ（ａ）が、前記細胞を培養前に（事前に）または培養後にまたは培養前と培養後との両方において選択することをさらに含み；
（ｉｉ）前記細胞表面または遺伝子マーカーが、ＣＤ１５／ＬｅＸ／ＳＳＥＡ１および／もしくはＧＤ２ガングリオシドを含み；または
（ｉｉｉ）前記細胞表面または遺伝子マーカーが、ＣＤ９、ＣＤ８１、ＣＤ１３３もしくはＡＱＰ４および／もしくはＣＸＣＲ４を含む、項目２５に記載の方法。
（項目２７）
不死ではないヒト網膜前駆細胞の集団を単離するための方法であって、
網膜が形成された後であるが、光受容体外節が網膜全体で完全に形成される前であり、網膜血管新生が実質的に完了するまたは完了する前の段階に由来するヒト網膜組織の試料を機械的にかつ／または酵素的に解離して、細胞および細胞塊の解離した懸濁物を作製すること；
異種成分不含フィブロネクチン、オルニチン、ポリリジン、またはラミニンで被覆した培養フラスコまたはプレート中の無血清培地において前記懸濁物を標準酸素レベルで約４〜６継代の間、培養すること；
その後無血清培地において前記懸濁物を低酸素レベルでさらに約３〜６継代の間、培養することであって、
前記細胞は、４０％〜９０％コンフルエンスの間で継代させ、継代ごとに酵素で処理して前記細胞を解離させる、培養することを含み、
前記ヒト網膜前駆細胞が、ネスチン、Ｓｏｘ２、Ｋｉ−６７、ＭＨＣクラスＩ、ＭＨＣクラスＩＩ、オステオポンチン（ＯＰＮ）、およびＦａｓ／ＣＤ９５からなる群より選択される１つまたは複数のマーカーを発現し、ネスチンが、前記集団中の前記細胞の９０％超により発現され、Ｓｏｘ２が、前記集団中の前記細胞の８０％超により発現され、Ｋｉ−６７が、前記集団中の前記細胞の３０％超により発現され、ＭＨＣクラスＩが、前記集団中の前記細胞の７０％超により発現され、Ｆａｓ／ＣＤ９５が、前記集団中の前記細胞の３０％超により発現され、ＭＨＣクラスＩＩが、前記集団中の前記細胞の２％未満により発現され、オステオポンチン（ＯＰＮ）が、前記集団中の細胞により２０ｎｇ／１０６細胞／２４時間よりも多い量で発現され、塩基性線維芽細胞成長因子（ｂＦＧＦ）が、前記細胞がベースラインでｂＦＧＦを含まなかった担体中に存在する場合、前記集団中の細胞により、５０〜３００ｐｇ／１０６細胞／時間の量で発現される、方法。
（項目２８）
前記集団中の前記細胞が、中脳星状細胞由来神経栄養因子（ＭＡＮＦ）を０．５〜２．５ｎｇ／１０６細胞／２４時間の量で、色素上皮由来成長因子（ＰＥＤＦ）を最大約３０ｎｇ／１０６細胞／２４時間の量で、プレイオトロフィン（ＰＴＮ）を５０〜６００ｐｇ／１０６細胞／２４時間の量で、および／またはミッドカイン（ＭＤＫ）を最大１２ｎｇ／１０６細胞／２４時間の量で発現する、項目２７に記載の方法。
（項目２９）
前記懸濁物を低酸素レベルで培養するその後の培養に続いて、前記細胞を標準酸素レベルで継代せずにある期間、成長させる、項目２７に記載の方法。
（項目３０）
前記ある期間が１時間〜５日間を含む、項目２９に記載の方法。
（項目３１）
前記低酸素レベルが、０．５％、１％、１．５％、２％、２．５％、３％、３．５％、４％、４．５％、５％、５．５％、６％、６．５％、７％、７．５％、８％、８．５％、９％、９．５％、または１０％酸素からなる群より選択される、項目２７または２８に記載の方法。
（項目３２）
前記培養培地が１〜２日ごとに交換される、項目２７〜３１のいずれか一項に記載の方法。
（項目３３）
１〜２日ごとに交換される前記培養培地に、０．０１ｍｇ／ｍｌ〜０．５ｍｇ／ｍｌのビタミンＣが含まれる、項目２７〜３２のいずれか一項に記載の方法。
（項目３４）
前記ヒト網膜組織が、約１２週〜約２８週の在胎齢のヒト胎児網膜から得られる、項目２７〜３３のいずれか一項に記載の方法。
（項目３５）
前記細胞が、無血清または低血清の細胞培養培地で培養される、項目２７〜３３のいずれか一項に記載の方法。
（項目３６）
前記培地がアルブミンをさらに含む、項目２７〜３５のいずれか一項に記載の方法。
（項目３７）
前記集団中の前記細胞が、ビメンチン、ＣＤ９、ＣＤ８１、ＡＱＰ４、ＣＸＣＲ４、ＣＤ１５／ＬｅＸ／ＳＳＥＡ１、ＧＤ２ガングリオシド、ＣＤ１３３、β３−チューブリン、ＭＡＰ２、ＧＦＡＰ、ＯＰＮ／ＳＰＰ１、ＰＴＮ、ＫＤＲ、およびＴＥＫからなる群より選択される１つまたは複数のマーカーをさらに発現する、項目２７〜３６のいずれか一項に記載の方法。
（項目３８）
使用するための有効量の製剤、製造品または組成物を投与することを含む、患者において網膜疾患または状態を処置する、好転させる、予防するまたはその進行を遅らせるための方法であって、
前記製剤、前記製造品または前記組成物が、不死ではないヒト網膜前駆細胞を含む細胞集団を含み、
前記製剤、前記製造品または前記組成物が、以下：
約１２週〜約２８週の在胎齢のヒトから得られたヒト網膜組織の試料を機械的にかつ／または酵素的に消化して、細胞および細胞塊の解離した懸濁物を作製すること；
異種成分不含フィブロネクチン、オルニチン、ポリリジン、またはラミニンで被覆した培養フラスコまたはプレート中の無血清培地において前記懸濁物を標準酸素レベルで約４〜６継代の間、培養すること；および
その後無血清培地において前記懸濁物を低酸素レベルでさらに約３〜６継代の間、培養することであって、
前記細胞は、４０％〜９０％コンフルエンスの間で継代させ、継代ごとに酵素で処理して前記細胞を解離させ、新たな培養培地を添加し、
それによって不死ではないヒト網膜前駆細胞を作製する、培養すること
によって作製され、
前記不死ではないヒト網膜前駆細胞が、ネスチン、Ｓｏｘ２、Ｋｉ−６７、ＭＨＣクラスＩ、ＭＨＣクラスＩＩ、オステオポンチン（ＯＰＮ）、およびＦａｓ／ＣＤ９５からなる群より選択される１つまたは複数のマーカーを発現し、
ネスチンが、前記集団中の前記細胞の９０％超により発現され、
Ｓｏｘ２が、前記集団中の前記細胞の８０％超により発現され、
Ｋｉ−６７が、前記集団中の前記細胞の３０％超により発現され、
ＭＨＣクラスＩが、前記集団中の前記細胞の７０％超により発現され、
Ｆａｓ／ＣＤ９５が、前記集団中の前記細胞の３０％超により発現され、
ＭＨＣクラスＩＩが、前記集団中の前記細胞の２％未満により発現され、
オステオポンチン（ＯＰＮ）が、前記集団中の細胞により２０ｎｇ／１０６細胞／２４時間よりも多い量で発現され、
塩基性線維芽細胞成長因子（ｂＦＧＦ）が、前記細胞がベースラインでｂＦＧＦを含まなかった担体中に存在する場合、前記集団中の細胞により、５０〜３００ｎｇ／１０６細胞／時間の量で発現される、方法。
（項目３９）
前記集団中の前記細胞が、
中脳星状細胞由来神経栄養因子（ＭＡＮＦ）を０．５〜２．５ｎｇ／１０６細胞／２４時間の量で、
色素上皮由来成長因子（ＰＥＤＦ）を最大約３０ｎｇ／１０６細胞／２４時間の量で、プレイオトロフィン（ＰＴＮ）を５０〜６００ｐｇ／１０６細胞／２４時間の量で、および／または
ミッドカイン（ＭＤＫ）を最大約１２ｎｇ／１０６細胞／２４時間の量で
発現する、項目３８に記載の方法。
（項目４０）
前記懸濁物を低酸素レベルで培養するその後の培養に続いて、前記細胞を標準酸素レベルで継代せずにある期間、成長させる、項目３８に記載の方法。
（項目４１）
前記ある期間が１時間〜５日間を含む、項目４０に記載の方法。
（項目４２）
前記低酸素レベルが、０．５％、１％、１．５％、２％、２．５％、３％、３．５％、４％、４．５％、５％、５．５％、６％、６．５％、７％、７．５％、８％、８．５％、９％、９．５％、または１０％酸素からなる群より選択される、項目３８〜４０のいずれか一項に記載の方法。
（項目４３）
１〜２日ごとに交換される前記培養培地に、０．０１ｍｇ／ｍｌ〜０．５ｍｇ／ｍｌのビタミンＣが含まれる、項目３８〜４２のいずれか一項に記載の方法。
（項目４４）
前記患者がヒトである、項目３８〜４３のいずれか一項に記載の方法。
（項目４５）
前記製剤、前記製造品または前記組成物が、前記患者の硝子体腔または網膜下腔中に注射される、項目３８〜４４のいずれか一項に記載の方法。
（項目４６）
前記製剤、前記製造品または前記組成物が、前記硝子体腔の前部領域中に注射される、項目４５に記載の方法。
（項目４７）
前記製剤、前記製造品または前記組成物が、前記硝子体腔の後部領域中に注射される、項目４１に記載の方法。
（項目４８）
網膜疾患または状態が、網膜色素変性（ＲＰ）、レーバー先天性黒内障（ＬＣＡ）、シュタルガルト病、アッシャー症候群、コロイデレミア、杆体錐体または錐体杆体ジストロフィー、繊毛関連疾患、ミトコンドリア障害、進行性網膜萎縮、変性網膜疾患、加齢黄斑変性（ＡＭＤ）、ウェット型ＡＭＤ、ドライ型ＡＭＤ、地図状萎縮、家族性または後天性黄斑症、網膜光受容体疾患、網膜色素上皮ベースの疾患、糖尿病性網膜症、類嚢胞黄斑浮腫、ぶどう膜炎、網膜剥離、外傷性網膜損傷、医原性網膜損傷、黄斑円孔、黄斑毛細血管拡張症、神経節細胞疾患、視神経細胞疾患、緑内障、視神経症、虚血性網膜疾患、未熟児網膜症、網膜血管閉塞、家族性細動脈瘤、網膜血管疾患、眼血管疾患、血管疾患、または虚血性視神経症を含む、項目３８〜４７のいずれか一項に記載の方法。
（項目４９）
前記有効量が０．３〜０．５×１０６細胞である、項目３８〜４８のいずれか一項に記載の方法。
（項目５０）
前記有効量が０．５〜３×１０６細胞である、項目３８〜４８のいずれか一項に記載の方法。
（項目５１）
使用のための有効量の前記製剤、前記製造品または前記組成物の投与と併せた、外科的硝子体切除、中心部硝子体切除、硝子体溶解薬、またはそれらの組み合わせの使用をさらに含む、項目３８〜５０のいずれか一項に記載の方法。
（項目５２）
前記患者に、使用するための前記製剤、前記製造品または前記組成物の少なくとも１回の後続用量を施す、項目３８〜５１のいずれか一項に記載の方法。
（項目５３）
前記後続用量が前記患者の同じ眼に投与される、項目５２に記載の方法。
（項目５４）
前記後続用量が前記患者の他眼に投与される、項目５２に記載の方法。
（項目５５）
使用するための前記製剤、前記製造品または前記組成物の投与に続いて、前記患者において明所（昼光）視、視力、黄斑機能、視野、暗所（夜）視、またはその任意の組み合わせが改善される、項目３８〜５４のいずれか一項に記載の方法。
（項目５６）
使用するための前記製剤、前記製造品または前記組成物の投与により、以下：
（ｉ）ミューラー細胞の増強された活性化；
（ｉｉ）グルタミン合成酵素の局所的発現の増加；
（ｉｉｉ）血管透過性の低下；
（ｉｖ）虚血の発生の低下；
（ｖ）網膜変性におけるマクロファージ動員の増強；
（ｖｉ）網膜変性におけるｂＦＧＦの局所的発現の増加；または
（ｖｉｉ）カスパーゼ３の発現の減少
のうちの１つまたは複数がもたらされる、項目３８〜５４のいずれか一項に記載の方法。