【手続補正書】
【提出日】令和3年4月20日(2021.4.20)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
カンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を産生するための遺伝子組換え酵母細胞であって、該遺伝子組換え酵母細胞の染色体に組み込まれた、配列番号１１０または配列番号１００と少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むゲラニルピロリン酸：オリベトール酸ゲラニルトランスフェラーゼポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸を含む、前記遺伝子組換え酵母細胞。
【請求項２】
カンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を産生する遺伝子組換え酵母細胞であって、該酵母細胞が以下の：
ａ）生物学的に活性なテトラケチドシンターゼ（ＴＫＳ）ポリペプチドおよび生物学的に活性なオリベトール酸シクラーゼ（ＯＡＣ）ポリペプチドを含む融合ポリペプチドをコードする１つまたは複数の組込み異種核酸；および
ｂ）配列番号１１０または配列番号１００と少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む生物学的に活性なゲラニルピロリン酸：オリベトール酸ゲラニルトランスフェラーゼポリペプチドをコードする１つまたは複数の組込み異種核酸、
により遺伝子組換えされている、前記遺伝子組換え酵母細胞。
【請求項３】
カンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を産生する遺伝子組換え酵母細胞であって、該酵母細胞が以下の：
ａ）生物学的に活性なテトラケチドシンターゼ（ＴＫＳ）ポリペプチドをコードする１つまたは複数の組込み異種核酸；
ｂ）生物学的に活性なオリベトール酸シクラーゼ（ＯＡＣ）ポリペプチドをコードする１つまたは複数の組込み異種核酸；
ｃ）配列番号１１０または配列番号１００と少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む生物学的に活性なゲラニルピロリン酸：オリベトール酸ゲラニルトランスフェラーゼポリペプチドをコードする１つまたは複数の組込み異種核酸；並びに
ｄ）以下のうちの少なくとも１つ、
ｉ）生物学的に活性なＥＲＧ８ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸；
ｉｉ）生物学的に活性なＥＲＧ１０ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸；
ｉｉｉ）生物学的に活性なＥＲＧ１２ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸；および
ｉｖ）生物学的に活性なＥＲＧ１３ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、
により遺伝子組換えされている、前記遺伝子組換え酵母細胞。
【請求項４】
前記ゲラニルピロリン酸：オリベトール酸ゲラニルトランスフェラーゼポリペプチドが以下の：
ａ）配列番号１１０と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列；
ｂ）配列番号１００と少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列；
ｃ）配列番号１１０と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列；
ｄ）配列番号１００と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列；
ｅ）配列番号１１０と１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列；または
ｆ）配列番号１００と１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列、
を含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の遺伝子組換え酵母細胞。
【請求項５】
請求項２〜４のいずれか一項に記載の遺伝子組換え酵母細胞であって、
ａ）前記生物学的に活性なテトラケチドシンターゼ（ＴＫＳ）ポリペプチドが配列番号１１または配列番号７６と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；および
ｂ）前記生物学的に活性なオリベトール酸シクラーゼ（ＯＡＣ）ポリペプチドが配列番号１０または配列番号７８と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、
前記遺伝子組換え酵母細胞。
【請求項６】
前記遺伝子組換え酵母細胞が、配列番号９０、配列番号９２または配列番号１４９と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む生物学的に活性なアシル活性化酵素（ＡＡＥ）ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸をさらに含む、請求項１〜５のいずれか一項に記載の遺伝子組換え酵母細胞。
【請求項７】
前記遺伝子組換え酵母細胞が、配列番号１４５または配列番号１４７と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む生物学的に活性な脂肪酸アシル−ＣｏＡリガーゼポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸をさらに含む、請求項１〜６のいずれか一項に記載の遺伝子組換え酵母細胞。
【請求項８】
前記遺伝子組換え酵母細胞が、配列番号１６９、配列番号１９２、配列番号１９４、配列番号１９６、配列番号１９８または配列番号２００と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む生物学的に活性な脂肪酸アシル−ＣｏＡシンテターゼ（ＦＡＡ）ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸をさらに含む、請求項１〜７のいずれか一項に記載の遺伝子組換え酵母細胞。
【請求項９】
前記遺伝子組換え酵母細胞が、配列番号７、配列番号８または配列番号６０と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む生物学的に活性なゲラニルピロリン酸シンテターゼ（ＧＰＰＳ）ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸をさらに含む、請求項１〜８のいずれか一項に記載の遺伝子組換え酵母細胞。
【請求項１０】
前記遺伝子組換え酵母細胞が、配列番号９、配列番号９７または配列番号２０７と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む生物学的に活性なアセチル−ＣｏＡカルボキシラーゼ−１（ＡＣＣ１）ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸をさらに含む、請求項１〜９のいずれか一項に記載の遺伝子組換え酵母細胞。
【請求項１１】
前記遺伝子組換え酵母細胞が、以下のうちの１つまたは複数：
ａ）配列番号２３、配列番号２４または配列番号１１５と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む生物学的に活性なＨＭＧ−ＣｏＡシンターゼ（ＨＭＧＳ）ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸；
ｂ）生物学的に活性な３−ヒドロキシ−３−メチル−グルタリル−ＣｏＡレダクターゼ（ＨＭＧＲ）ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸：
ｃ）配列番号６４と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む生物学的に活性なメバロン酸キナーゼ（ＭＫ）ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸；
ｄ）配列番号６２または配列番号２０５と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む生物学的に活性なホスホメバロン酸キナーゼ（ＰＭＫ）ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸；
ｅ）配列番号６６と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む生物学的に活性なメバロン酸二リン酸脱炭酸酵素（ＭＶＤ）ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸；および
ｆ）配列番号５８と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む生物学的に活性なイソペンテニル二リン酸イソメラーゼ（ＩＤＩ）ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸、
をさらに含む、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の遺伝子組換え酵母細胞。
【請求項１２】
前記生物学的に活性なＨＭＧＲポリペプチドが、配列番号２２と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１１に記載の遺伝子組換え酵母細胞。
【請求項１３】
前記生物学的に活性なＨＭＧＲポリペプチドが、配列番号１７、配列番号５２、配列番号１１３または配列番号２０８と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む切断型ＨＭＧＲ（ｔＨＭＧＲ）ポリペプチドである、請求項１１に記載の遺伝子組換え酵母細胞。
【請求項１４】
前記遺伝子組換え酵母細胞が、配列番号２５と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む生物学的に活性なアセトアセチル−ＣｏＡチオラーゼポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸をさらに含む、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の遺伝子組換え酵母細胞。
【請求項１５】
前記遺伝子組換え酵母細胞が、配列番号１１７と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む生物学的に活性なピルビン酸デカルボキシラーゼ（ＰＤＣ）ポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸をさらに含む、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の遺伝子組換え酵母細胞。
【請求項１６】
前記遺伝子組換え酵母細胞がカンナビノイドシンターゼポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸をさらに含み、該カンナビノイドシンターゼポリペプチドが配列番号１４、配列番号８６、配列番号１０４または配列番号１５３と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む生物学的に活性なテトラヒドロカンナビノール酸（ＴＨＣＡ）シンターゼポリペプチドである、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の遺伝子組換え酵母細胞。
【請求項１７】
前記遺伝子組換え酵母細胞がカンナビノイドシンターゼポリペプチドをコードする１つまたは複数の異種核酸をさらに含み、該カンナビノイドシンターゼポリペプチドが配列番号８８または配列番号１５１と少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む生物学的に活性なカンナビジオール酸（ＣＢＤＡ）シンターゼポリペプチドである、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の遺伝子組換え酵母細胞。
【請求項１８】
少なくとも１つの前記異種核酸が誘導性プロモーターまたは構成的プロモーターと作動可能に連結している、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の遺伝子組換え酵母細胞。
【請求項１９】
前記酵母細胞がサッカロミセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）またはサッカロミセス・セレビシエのプロテアーゼ欠損株である、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の遺伝子組換え酵母細胞。
【請求項２０】
遺伝子組換え酵母細胞でカンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を産生する方法であって、
ａ）請求項１〜１９のいずれか一項に記載の遺伝子組換え酵母細胞を適切な培地で培養すること；および
ｂ）産生されたカンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を回収すること、
を含む方法。
【請求項２１】
前記適切な培地が、以下の：
ａ）カルボン酸；
ｂ）発酵性糖；
ｃ）前処理されたセルロース供給原料；
ｄ）非発酵性炭素源；
ｅ）オリベトール酸もしくはオリベトール酸誘導体；または
ｆ）エタノール、
を含む、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
カンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体を産生する方法であって、該方法は配列番号１１０または配列番号１００と少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む生物学的に活性なゲラニルピロリン酸：オリベトール酸ゲラニルトランスフェラーゼ（ＧＯＴ）ポリペプチドの使用を含み、該方法が前記ＧＯＴポリペプチドをオリベトール酸およびゲラニルピロリン酸（ＧＰＰ）と混合させることを含み、カンナビゲロール酸がカンナビノイドまたはカンナビノイド誘導体の前駆体として生産される、前記方法。
。
【請求項２３】
前記ゲラニルピロリン酸：オリベトール酸ゲラニルトランスフェラーゼポリペプチドが以下の：
ａ）  配列番号１１０と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列；
ｂ）  配列番号１００と少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列；
ｃ）  配列番号１１０と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列；
ｄ）  配列番号１００と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列；
ｅ）  配列番号１１０と１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列；または
ｆ）  配列番号１００と１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列、
を含む、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記カンナビノイドがカンナビゲロール酸、カンナビゲロール、Δ９−テトラヒドロカンナビノール酸、Δ９−テトラヒドロカンナビノール、Δ８−テトラヒドロカンナビノール酸、Δ８−テトラヒドロカンナビノール、カンナビジオール酸、カンナビジオール、カンナビクロメン酸、カンナビクロメン、カンナビノール酸、カンナビノール、カンナビジバリン酸、カンナビジバリン、テトラヒドロカンナビバリン酸、テトラヒドロカンナビバリン、カンナビクロメバリン酸、カンナビクロメバリン、カンナビゲロバリン酸、カンナビゲロバリン、カンナビシクロール酸、カンナビシクロール、カンナビエルソイン酸、カンナビエルソイン、カンナビシトラン酸またはカンナビシトランである、請求項２０〜２３のいずれか一項に記載の方法。