【手続補正書】
【提出日】令和3年9月1日(2021.9.1)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ベクターのキットであって、該キットは、
（ｉ）第１のマーカー構成要素をコードする核酸配列を含む第１のベクター；および
（ｉｉ）第２のマーカー構成要素をコードする核酸配列を含む第２のベクター、
を含み、ここで細胞が、該第１のおよび第２のベクターの両方で形質導入される場合、該第１のおよび第２のマーカー構成要素は、該細胞によって発現され、会合して、細胞ソート試薬によって認識されるヘテロマルチマーマーカーを形成するのに対して、
細胞が、該第１のまたは第２のベクターのいずれか単独で形質導入される場合、該第１のまたは第２のマーカー構成要素単独の発現は、該細胞ソート試薬によって認識されない、キット。
【請求項２】
前記第１のマーカー構成要素は、前記第２のマーカー構成要素と会合しなかった場合に不安定であり、前記細胞ソート試薬は、該第１のマーカー構成要素を認識する、請求項１に記載のキット。
【請求項３】
前記第１のおよび第２のマーカー構成要素の両方は、会合しなかった場合に不安定であり、前記細胞ソート試薬は、前記第１のまたは第２のマーカー構成要素のいずれかを認識する、請求項１または２に記載のキット。
【請求項４】
前記第１のマーカー構成要素は、膜結合され、前記第２のマーカー構成要素は、該第１のマーカー構成要素の非存在下で分泌され、前記細胞ソート試薬は、該第２のマーカー構成要素を認識する、請求項１〜３のいずれかに記載のキット。
【請求項５】
一方のマーカー構成要素は、κ定常ドメインを含み、他方のマーカー構成要素は、ＩｇＧ１のＣＨ１ドメインを含む、請求項１〜４のいずれかに記載のキット。
【請求項６】
一方のマーカー構成要素は、ＣＤ７９ａエクトドメインを含み、他方のマーカー構成要素は、ＣＤ７９ｂエクトドメインを含む、請求項１〜４のいずれかに記載のキット。
【請求項７】
第３のマーカー構成要素をコードする核酸配列を含む第３のベクターを含み、
ここで細胞が、前記第１の、前記第２の、および該第３のベクターで形質導入される場合、該第１の、第２のおよび第３のマーカー構成要素は、該細胞によって発現され、会合して、細胞ソート試薬によって認識されるヘテロマルチマーマーカーを形成するのに対して、
細胞が該第１の、第２のまたは第３のベクターのうちの１つまたは２つで形質導入される場合、該第１の、第２のまたは第３のマーカー構成要素のうちの１つまたは２つの発現は、該細胞ソート試薬によって認識されない、
請求項１に記載のキット。
【請求項８】
前記第１の、第２のおよび／または第３のマーカー構成要素は、前記ヘテロマルチマーマーカーとして会合しなかった場合に不安定である、請求項７に記載のキット。
【請求項９】
前記第１のマーカー構成要素は膜結合され；前記第２のマーカー構成要素は、該第１のマーカー構成要素の非存在下で分泌され；前記第３のマーカー構成要素は、該第１のおよび第２のマーカー構成要素が同様に発現されなければ分泌され；前記細胞ソート試薬は、該第３のマーカー構成要素を認識する、請求項８に記載のキット。
【請求項１０】
前記第１のマーカー構成要素は、膜結合ＣＤ７９ａエクトドメインを含み、前記第２のマーカーは、ＩｇＧ１のＣＨ１ドメインおよびＣＤ７９ａエクトドメインを含み、前記第３のマーカーは、κ定常ドメインを含む、請求項９に記載のキット。
【請求項１１】
前記ベクターのうちの少なくとも１つは、キメラ抗原レセプターをコードする核酸配列をさらに含む、請求項１〜１０のいずれかに記載のベクターのキット。
【請求項１２】
一方のマーカー構成要素の前記細胞における発現レベルは、もう一方のマーカー構成要素の該細胞における発現レベルに対して異なる、請求項１〜１１のいずれかに記載のキット。
【請求項１３】
前記２つのマーカー構成要素をコードするベクターは、異なるシグナル配列を含む、請求項１２に記載のキット。
【請求項１４】
形質導入した細胞集団を検出することにおける使用のための細胞表面ヘテロマルチマーマーカーを含む組成物であって、ここで該ヘテロマルチマーマーカーは、少なくとも２つのマーカー構成要素を含み、その第１のマーカー構成要素は、第１のベクター中の核酸配列によってコードされ、その第２のマーカー構成要素は、第２のベクター中の核酸配列によってコードされ、該第１のマーカーおよび第２のマーカー構成要素は会合する、組成物。
【請求項１５】
前記第１のマーカーおよび／または第２のマーカー構成要素は、会合しなかった場合に不安定である、請求項１４に記載の組成物。
【請求項１６】
前記第２のマーカー構成要素は、前記第１のマーカー構成要素の非存在下で前記細胞によって分泌される、請求項１４に記載の組成物。
【請求項１７】
請求項１４〜１６のいずれかに記載の組成物を含む細胞。
【請求項１８】
請求項１〜１３のいずれかに記載のベクターのキットで形質導入された細胞。
【請求項１９】
免疫細胞である、請求項１７または１８に記載の細胞。
【請求項２０】
Ｔ細胞またはナチュラルキラー（ＮＫ）細胞である、請求項１９に記載の細胞。
【請求項２１】
請求項１７〜２０のいずれかに記載の細胞を作製するための方法であって、該方法は、請求項１〜１３のいずれかに記載のベクターのキットで細胞を形質導入またはトランスフェクトする工程を包含する方法。
【請求項２２】
請求項１７〜２０のいずれか１項に記載の細胞の組成物を調製するための方法であって、該方法は、以下の工程：
（ｉ）細胞サンプルを、請求項１〜１３のいずれかに記載のベクターのキットで形質導入またはトランスフェクトする工程；
（ｉｉ）細胞ソート試薬を使用して、ヘテロマルチマーマーカーの発現を検出する工程；および
（ｉｉｉ）該検出した細胞を選択またはソートして、該ヘテロマルチマーマーカーを発現する細胞の組成物を調製する工程、
を包含する方法。
【請求項２３】
前記細胞ソート試薬は、可溶性組換えタンパク質であり、前記細胞は、該可溶性組換えタンパク質を認識するマトリクスを使用して、工程（ｉｉｉ）において選択またはソートされる、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記細胞ソート試薬は、蛍光標識された可溶性組換えタンパク質であり、前記細胞は、フローサイトメトリーによって、工程（ｉｉｉ）において選択またはソートされる、請求項２２に記載の方法。
【請求項２５】
前記細胞ソート試薬は、ビーズに付着した可溶性組換えタンパク質であり、前記細胞は、前記形質導入／トランスフェクトされた細胞サンプルから該ビーズを分離することによって、工程（ｉｉｉ）において選択またはソートされる、請求項２２に記載の方法。
【請求項２６】
請求項１７〜２０のいずれかに記載の複数の細胞を含む薬学的組成物。
【請求項２７】
疾患を処置および／または防止する方法における使用のための、請求項２６に記載の薬学的組成物。
【請求項２８】
前記方法が、以下の工程：
Ｉ．細胞含有サンプルを被験体から単離する工程、
ＩＩ．該細胞含有サンプルを、請求項１〜１３のいずれかに記載のベクターのキットで形質導入またはトランスフェクトする工程、
ＩＩＩ．細胞ソート試薬を使用して、ヘテロマルチマーマーカーの発現を検出し、それによって、形質導入／トランスフェクトされた細胞集団を該サンプルから識別する工程、
ＩＶ．該（ＩＩＩ）の細胞集団を選択またはソートして、形質導入／トランスフェクトされた細胞の精製された亜集団を達成する工程、および
Ｖ．該ヘテロマルチマーマーカーを発現する該（ＩＶ）の亜集団を該被験体に投与する工程、
を包含する、請求項２７に記載の薬学的組成物。
【請求項２９】
疾患を処置および／または防止するための医薬の製造における請求項２６に記載の薬学的組成物の使用。
【請求項３０】
前記疾患はがんである、請求項２９に記載の薬学的組成物または請求項２７もしくは２８に記載の薬学的組成物の使用。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１８５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１８５】
上記の明細書で言及される全ての刊行物は、本明細書に参考として援用される。本発明の記載される方法およびシステムの種々の改変およびバリエーションは、本発明の範囲および趣旨から逸脱することなく、当業者に明らかである。本発明は、具体的な好ましい実施形態に関連して記載されてきたが、請求項に記載されるとおりの発明が、このような具体的実施形態に過度に限定されるべきではないことは、理解されるべきである。実際に、分子生物学または関連分野の当業者に自明である、発明を実施するために記載される態様の種々の改変は、以下の請求項の範囲内にあることが意図される。
特定の実施形態では、例えば以下の項目が提供される。
（項目１）
ベクターのキットであって、該キットは、
（ｉ）第１のマーカー構成要素をコードする核酸配列を含む第１のベクター；および
（ｉｉ）第２のマーカー構成要素をコードする核酸配列を含む第２のベクター、
を含み、ここで細胞が、該第１のおよび第２のベクターの両方で形質導入される場合、該第１のおよび第２のマーカー構成要素は、該細胞によって発現され、会合して、細胞ソート試薬によって認識されるヘテロマルチマーマーカーを形成するのに対して、
細胞が、該第１のまたは第２のベクターのいずれか単独で形質導入される場合、該第１のまたは第２のマーカー構成要素単独の発現は、該細胞ソート試薬によって認識されない、キット。
（項目２）
前記第１のマーカー構成要素は、前記第２のマーカー構成要素と会合しなかった場合に不安定であり、前記細胞ソート試薬は、該第１のマーカー構成要素を認識する、項目１に記載のキット。
（項目３）
前記第１のおよび第２のマーカー構成要素の両方は、会合しなかった場合に不安定であり、前記細胞ソート試薬は、前記第１のまたは第２のマーカー構成要素のいずれかを認識する、項目１または２に記載のキット。
（項目４）
前記第１のマーカー構成要素は、膜結合され、前記第２のマーカー構成要素は、該第１のマーカー構成要素の非存在下で分泌され、前記細胞ソート試薬は、該第２のマーカー構成要素を認識する、項目１〜３のいずれかに記載のキット。
（項目５）
一方のマーカー構成要素は、κ定常ドメインを含み、他方のマーカー構成要素は、ＩｇＧ１のＣＨ１ドメインを含む、前述の項目のいずれかに記載のキット。
（項目６）
一方のマーカー構成要素は、ＣＤ７９ａエクトドメインを含み、他方のマーカー構成要素は、ＣＤ７９ｂエクトドメインを含む、項目１〜４のいずれかに記載のキット。
（項目７）
第３のマーカー構成要素をコードする核酸配列を含む第３のベクターを含み、
ここで細胞が、前記第１の、前記第２の、および該第３のベクターで形質導入される場合、該第１の、第２のおよび第３のマーカー構成要素は、該細胞によって発現され、会合して、細胞ソート試薬によって認識されるヘテロマルチマーマーカーを形成するのに対して、
細胞が該第１の、第２のまたは第３のベクターのうちの１つまたは２つで形質導入される場合、該第１の、第２のまたは第３のマーカー構成要素のうちの１つまたは２つの発現は、該細胞ソート試薬によって認識されない、
項目１に記載のキット。
（項目８）
前記第１の、第２のおよび／または第３のマーカー構成要素は、前記ヘテロマルチマーマーカーとして会合しなかった場合に不安定である、項目７に記載のキット。
（項目９）
前記第１のマーカー構成要素は膜結合され；前記第２のマーカー構成要素は、該第１のマーカー構成要素の非存在下で分泌され；前記第３のマーカー構成要素は、該第１のおよび第２のマーカー構成要素が同様に発現されなければ分泌され；前記細胞ソート試薬は、該第３のマーカー構成要素を認識する、項目８に記載のキット。
（項目１０）
前記第１のマーカー構成要素は、膜結合ＣＤ７９ａエクトドメインを含み、前記第２のマーカーは、ＩｇＧ１のＣＨ１ドメインおよびＣＤ７９ａエクトドメインを含み、前記第３のマーカーは、κ定常ドメインを含む、項目９に記載のキット。
（項目１１）
前記ベクターのうちの少なくとも１つは、キメラ抗原レセプターをコードする核酸配列をさらに含む、前述の項目のいずれかに記載のベクターのキット。
（項目１２）
一方のマーカー構成要素の前記細胞における発現レベルは、もう一方のマーカー構成要素の該細胞における発現レベルに対して異なる、前述の項目のいずれかに記載のキット。
（項目１３）
前記２つのマーカー構成要素をコードするベクターは、異なるシグナル配列を含む、項目１２に記載のキット。
（項目１４）
形質導入した細胞集団を検出することにおける使用のための細胞表面ヘテロマルチマーマーカーであって、ここで該ヘテロマルチマーマーカーは、少なくとも２つのマーカー構成要素を含み、その第１のマーカー構成要素は、第１のベクター中の核酸配列によってコードされ、その第２のマーカー構成要素は、第２のベクター中の核酸配列によってコードされ、該第１のマーカーおよび第２のマーカー構成要素は会合する、細胞表面ヘテロマルチマーマーカー。
（項目１５）
前記第１のマーカーおよび／または第２のマーカー構成要素は、会合しなかった場合に不安定である、項目１４に記載のヘテロマルチマーマーカー。
（項目１６）
前記第２のマーカー構成要素は、前記第１のマーカー構成要素の非存在下で前記細胞によって分泌される、項目１４に記載のヘテロマルチマーマーカー。
（項目１７）
項目１４〜１６のいずれかに記載のヘテロマルチマーマーカーを含む細胞。
（項目１８）
項目１〜１３のいずれかに記載のベクターのキットで形質導入された細胞。
（項目１９）
免疫細胞である、項目１７または１８に記載の細胞。
（項目２０）
Ｔ細胞またはナチュラルキラー（ＮＫ）細胞である、項目１９に記載の細胞。
（項目２１）
項目１７〜２０のいずれかに記載の細胞を作製するための方法であって、該方法は、項目１〜１３のいずれかに記載のベクターのキットで細胞を形質導入またはトランスフェクトする工程を包含する方法。
（項目２２）
項目１７〜２０のいずれか１項に記載の細胞の組成物を調製するための方法であって、該方法は、以下の工程：
（ｉ）細胞サンプルを、項目１〜１３のいずれかに記載のベクターのキットで形質導入またはトランスフェクトする工程；
（ｉｉ）細胞ソート試薬を使用して、ヘテロマルチマーマーカーの発現を検出する工程；および
（ｉｉｉ）該検出した細胞を選択またはソートして、該ヘテロマルチマーマーカーを発現する細胞の組成物を調製する工程、
を包含する方法。
（項目２３）
前記細胞ソート試薬は、可溶性組換えタンパク質であり、前記細胞は、該可溶性組換えタンパク質を認識するマトリクスを使用して、工程（ｉｉｉ）において選択またはソートされる、項目２２に記載の方法。
（項目２４）
前記細胞ソート試薬は、蛍光標識された可溶性組換えタンパク質であり、前記細胞は、フローサイトメトリーによって、工程（ｉｉｉ）において選択またはソートされる、項目２２に記載の方法。
（項目２５）
前記細胞ソート試薬は、ビーズに付着した可溶性組換えタンパク質であり、前記細胞は、前記形質導入／トランスフェクトされた細胞サンプルから該ビーズを分離することによって、工程（ｉｉｉ）において選択またはソートされる、項目２２に記載の方法。
（項目２６）
項目１７〜２０のいずれかに記載の複数の細胞を含む薬学的組成物。
（項目２７）
疾患を処置および／または防止することにおける使用のための、項目２６に記載の薬学的組成物。
（項目２８）
疾患を処置および／または防止するための方法であって、該方法は、項目２６に記載の薬学的組成物を被験体に投与する工程を包含する方法。
（項目２９）
以下の工程：
Ｉ．細胞含有サンプルを被験体から単離する工程、
ＩＩ．該細胞含有サンプルを、項目１〜１３のいずれかに記載のベクターのキットで形質導入またはトランスフェクトする工程、
ＩＩＩ．細胞ソート試薬を使用して、ヘテロマルチマーマーカーの発現を検出し、それによって、形質導入／トランスフェクトされた細胞集団を該サンプルから識別する工程、
ＩＶ．該（ＩＩＩ）の細胞集団を選択またはソートして、形質導入／トランスフェクトされた細胞の精製された亜集団を達成する工程、および
Ｖ．該ヘテロマルチマーマーカーを発現する該（ＩＶ）の亜集団を該被験体に投与する工程、
を包含する、項目２８に記載の方法。
（項目３０）
疾患を処置および／または防止するための医薬の製造における項目２６に記載の薬学的組成物の使用。
（項目３１）
前記疾患はがんである、項目３０に記載の薬学的組成物または項目２８もしくは２９に記載の方法の使用。