【手続補正書】
【提出日】令和3年9月17日(2021.9.17)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ｅｘ  ｖｉｖｏでの抗原特異的リンパ球の拡大方法であって、
対象から得られたサンプル中のリンパ球またはそのようなサンプルから単離されたリンパ球を拡大させることを含み、前記拡大は、少なくとも第１の拡大と第２の拡大を含む少なくとも２つの拡大フェ−ズを含み、
前記少なくとも２つの拡大フェ−ズのうち少なくとも第１の拡大フェ−ズ中に１つまたは複数のペプチドおよび／または抗原提示細胞（ＡＰＳ）が添加され、抗原特異的リンパ球が拡大される、方法。
【請求項２】
前記第２の拡大が、ＣＤ３複合体アゴニスト、マイトジェン、またはフィ−ダ−細胞のうちの少なくとも１つの存在下で行われる、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記１つまたは複数のペプチドが第２の拡大中には添加されない、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記第１の拡大が少なくとも２回繰り返され、第２の拡大の前に、前記第１の拡大のそれぞれからのリンパ球が一緒にプ−ルされる、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
前記１つまたは複数のペプチドが抗原提示細胞（ＡＰＣ）の表面に提示される、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記ＡＰＣが、可溶性形態の前記１つまたは複数のペプチドとプレインキュベ−トされている、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記ペプチドが、約２〜約１００の異なるペプチドのプ−ルに存在する、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記ペプチドが約２〜約１０の異なるペプチドのプ−ルに存在する、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記ペプチドが、約２〜約５の異なるペプチドのプ−ルに存在する、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記ＡＰＣが、その表面上に前記１つまたは複数のペプチドを発現するように改変されている、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
前記ＡＰＣが、少なくとも１つの免疫調節物質を発現するように改変されている、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
前記免疫調節物質が、ＣＤ４０Ｌ、ＯＸ４０Ｌ、４−１ＢＢＬ、またはＩＬ−１２のうちの少なくとも１つである、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記第１の拡大ステップが、少なくとも１つの拡大促進剤の存在下でリンパ球を拡大させることを含み、前記拡大促進剤が、免疫調節剤、サイトカイン、可溶性分子、リンパ球の拡大に有利に働く抗体、またはそれらの任意の組合せである、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
前記サイトカインが、インタ−ロイキン−２（ＩＬ−２）、インタ−ロイキン−４（ＩＬ−４）、インタ−ロイキン−７（ＩＬ−７）、インタ−ロイキン−１５（ＩＬ−１５）、インタ−ロイキン−１７（ＩＬ−１７）、またはインタ−ロイキン−２１（ＩＬ−２１）のうちの少なくとも１つである、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記拡大促進剤の少なくとも１つがＩＬ−２である、請求項１３または１４に記載の方法。
【請求項１６】
ＣＤ３複合体アゴニストが抗ＣＤ３複合体アゴニスト抗体である、請求項２〜１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
前記リンパ球が腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）である、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
前記サンプルが、未処理の腫瘍断片、酵素処理された腫瘍断片、解離／懸濁腫瘍細胞、リンパ節サンプル、または体液サンプルである、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
前記ＡＰＣが自己由来である、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
前記ＡＰＣがＢ細胞である、請求項１〜１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
前記第１の拡大が、前記対象から得られた腫瘍サンプル中の腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）または前記腫瘍サンプルから単離されたＴＩＬを、（ｉ）インタ−ロイキン−２（ＩＬ−２）、（ｉｉ）ＣＤ４０Ｌ、４−１ＢＢＬまたはＩＬ−１２のうちの少なくとも１つを発現するように改変された自己Ｂ細胞、および（ｉｉｉ）任意選択で最大１００の異なるペプチドの存在下で拡大させることを含み、
前記第２の拡大が、前記第１の拡大で拡大されたＴＩＬを、（ｉ）抗ＣＤ３複合体アゴニスト抗体、（ｉｉ）自己または同種異系のフィ−ダ−細胞、および（ｉｉｉ）ＩＬ−２の存在下で拡大させることを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項２２】
前記第１の拡大が少なくとも２回実施され、第２の拡大の前に、前記第１の拡大のそれぞれで拡大されたＴＩＬがプ−ルされる、請求項２１に記載の方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２６８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２６８】
本明細書で引用されるすべての特許、出願、刊行物、試験方法、文献、および他の資料は、本明細書に物理的に存在するかのように、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
最後に、本発明の好ましい実施態様を項分け記載する。
［実施態様１］
ｅｘ  ｖｉｖｏで抗原特異的リンパ球を拡大する方法であって、
ａ）対象から得られたサンプル中のリンパ球またはそのようなサンプルから単離されたリンパ球を拡大するステップであって、前記拡大は少なくとも２つの拡大フェ−ズを含むステップ；
ｂ）前記少なくとも２つの拡大フェ−ズのうちの少なくとも第１の拡大フェ−ズ中に１つまたは複数のペプチドを添加するステップであって、前記ペプチドの各々は異なる抗原を含み、抗原特異的リンパ球が拡大されるステップ
を含む、方法。
［実施態様２］
前記少なくとも２つの拡大フェ−ズは、第１の拡大および第２の拡大を含む、実施態様１に記載の方法。
［実施態様３］
前記第２の拡大が、ＣＤ３複合体アゴニスト、マイトジェン、またはフィ−ダ−細胞の少なくとも１つの存在下で行われる、実施態様２に記載の方法。
［実施態様４］
ステップｂ）が、少なくとも２つの拡大フェ−ズのうちの少なくとも１つの拡大フェ−ズ中に２つ以上のペプチドを添加することを含み、前記ペプチドのそれぞれが異なる抗原を含む、実施態様１〜３のいずれかに記載の方法。
［実施態様５］
ステップｂ）が、少なくとも２つの拡大フェ−ズのうちの少なくとも１つの拡大フェ−ズの開始時にペプチドを添加することを含む、実施態様１〜４のいずれかに記載の方法。
［実施態様６］
ステップｂ）が、ペプチドを少なくとも１回再添加することをさらに含む、実施態様１〜５のいずれかに記載の方法。
［実施態様７］
ステップｂ）が、最初の添加後に毎日、ペプチドを再添加することをさらに含む、実施態様１〜６のいずれかに記載の方法。
［実施態様８］
ステップｂ）が、最初の添加後に隔日で、ペプチドを再添加することをさらに含む、実施態様１〜６のいずれかに記載の方法。
［実施態様９］
前記ペプチドが初日から少なくとも２日後に再添加される、実施態様６〜８のいずれかに記載の方法。
［実施態様１０］
前記ペプチドが第２の拡大中に存在しない、実施態様２〜９のいずれかに記載の方法。
［実施態様１１］
前記ペプチドが可溶性形態である、実施態様１〜１０のいずれかに記載の方法。
［実施態様１２］
前記ペプチドが約０．１ｎＭ〜約１００μＭの濃度である、実施態様１１に記載の方法。
［実施態様１３］
前記ペプチドが約１μΜの濃度で存在する、実施態様１２に記載の方法。
［実施態様１４］
前記ペプチドが第１の拡大の開始時に添加される、実施態様１〜１３のいずれかに記載の方法。
［実施態様１５］
前記ペプチドが、第１の拡大の開始時および隔日で２日間添加される、実施態様１〜１４のいずれかに記載の方法。
［実施態様１６］
前記ペプチドが抗原提示細胞（ＡＰＣ）の表面に提示される、実施態様１〜１５のいずれかに記載の方法。
［実施態様１７］
前記サンプル中に存在する細胞とＡＰＣとの比が約１：１〜約１：１００である、実施態様１６に記載の方法。
［実施態様１８］
前記比が約１：１である、実施態様１７に記載の方法。
［実施態様１９］
リンパ球とＡＰＣとの比が約０．０１：１〜約１００：１であり、リンパ球がサンプルから単離される、実施態様１６に記載の方法。
［実施態様２０］
前記比が約１：１である、実施態様１９に記載の方法。
［実施態様２１］
第１の拡大の開始時にＡＰＣが添加される、実施態様１６〜２０のいずれかに記載の方法。
［実施態様２２］
ＡＰＣが可溶性ペプチドとプレインキュベ−トされている、実施態様１６〜２１のいずれかに記載の方法。
［実施態様２３］
前記ペプチドが約９アミノ酸長〜約３１アミノ酸長である、実施態様１〜２２のいずれかに記載の方法。
［実施態様２４］
前記ペプチドが９または１０アミノ酸長である、実施態様２３に記載の方法。
［実施態様２５］
ペプチドが１２〜１５アミノ酸長である、実施態様２３に記載の方法。
［実施態様２６］
前記ペプチドが約２５〜約３１アミノ酸長である、実施態様２３に記載の方法。
［実施態様２７］
前記ペプチドが約２〜約３００の異なるペプチドのプ−ルに存在する、実施態様１〜２６のいずれかに記載の方法。
［実施態様２８］
前記ペプチドが、約２〜約１００、約１０〜約１００、約２０〜約１００、約３０〜約１００、約４０〜約１００、約５０〜約１００、約６０〜約１００、約７０〜約１００、約８０〜約１００、または約９０〜約１００の異なるペプチドのプ−ルに存在する、実施態様１〜２７のいずれかに記載の方法。
［実施態様２９］
前記ペプチドが、約２０〜約５０の異なるペプチドのプ−ルに存在する、実施態様１〜２８のいずれかに記載の方法。
［実施態様３０］
前記ペプチドが約２〜約１０の異なるペプチドのプ−ルに存在する、実施態様１〜２８のいずれかに記載の方法。
［実施態様３１］
前記ペプチドが、約２〜約５の異なるペプチドのプ−ルに存在する、実施態様１〜２８および３０のいずれかに記載の方法。
［実施態様３２］
前記ＡＰＣが、その表面上に前記ペプチドを発現するように改変されている、実施態様１６〜３１のいずれかに記載の方法。
［実施態様３３］
前記ＡＰＣが、前記ペプチドをコ−ドする少なくとも１つのポリヌクレオチドをＡＰＣに導入するために、トランスフェクション、形質導入、または一時的な細胞膜破壊の少なくとも１つによって改変される、実施態様３２に記載の方法。
［実施態様３４］
前記少なくとも１つのポリヌクレオチドが、前記ペプチドをコ−ドするＤＮＡプラスミドおよび／またはｍＲＮＡである、実施態様３３に記載の方法。
［実施態様３５］
前記ｍＲＮＡが、約５０〜約５０００ヌクレオチドを含む、実施態様３４に記載の方法。
［実施態様３６］
前記ｍＲＮＡが、約７５〜約４０００、約７５〜約３０００、約７５〜約２０００、約７５〜約１０００、約７５〜約５００ヌクレオチドを含む、実施態様３５に記載の方法。
［実施態様３７］
前記ポリヌクレオチドが、前記ペプチドをコ−ドする１〜約１５個の遺伝子を含む、実施態様３４〜３６のいずれかに記載の方法。
［実施態様３８］
前記ポリヌクレオチドが、単一のペプチドをコ−ドする１つの遺伝子から本質的になる、実施態様３４〜３６のいずれかに記載の方法。
［実施態様３９］
前記ｍＲＮＡが、前記ペプチドをコ−ドする少なくとも２個の遺伝子をタンデムに含む少なくとも１つのポリヌクレオチドである、実施態様３４〜３７のいずれかに記載の方法。
［実施態様４０］
前記ｍＲＮＡが、前記ペプチドをコ−ドする少なくとも２個の遺伝子をタンデムに含む単一のポリヌクレオチドである、実施態様３４〜３７のいずれかに記載の方法。
［実施態様４１］
前記ペプチドをコ−ドする合計約２〜約４０個の遺伝子が存在する、実施態様３９または４０に記載の方法。
［実施態様４２］
前記ペプチドをコ−ドする合計約２〜約１５個の遺伝子が存在する、実施態様３９から４１のいずれかに記載の方法。
［実施態様４３］
前記ペプチドをコ−ドする合計約２〜約５個の遺伝子が存在する、実施態様３９〜４２のいずれかに記載の方法。
［実施態様４４］
各ポリヌクレオチドが、ペプチドをコ−ドする５個の遺伝子を含む、実施態様３４〜３７または３９〜４３のいずれかに記載の方法。
［実施態様４５］
各遺伝子が、抗原内に見られる個々の変異アミノ酸を中心とする約９〜約３１アミノ酸長のポリペプチドをコ−ドする、実施態様３７〜４４のいずれかに記載の方法。
［実施態様４６］
前記遺伝子がリンカ−によって分離されている、実施態様３４〜３７または３９〜４３のいずれかに記載の方法。
［実施態様４７］
前記ＡＰＣが少なくとも１つの免疫調節物質を発現するように改変され、前記免疫調節物質が、ＯＸ４０Ｌ、４−１ＢＢＬ、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ８３、ＣＤ７０、ＣＤ４０Ｌ、ＧＩＴＲ−Ｌ、ＣＤ１２７Ｌ、ＣＤ３０Ｌ（ＣＤ１５３）、ＬＩＧＨＴ、ＢＴＬＡ、ＩＣＯＳ−Ｌ（ＣＤ２７５）、ＳＬＡＭ（ＣＤ１５０）、ＣＤ６６２Ｌ、インタ−ロイキン−１２（ＩＬ−１２）、インタ−ロイキン−７（ＩＬ−７）、インタ−ロイキン−１５（ＩＬ−１５）、インタ−ロイキン−１７（ＩＬ−１７）、インタ−ロイキン−２１（ＩＬ−２１）、インタ−ロイキン−４（ＩＬ−４）、Ｂｃｌ−６、Ｂｃｌ−ＸＬ、ＢＣＬ−２、ＭＣＬ１、またはＳＴＡＴ−５、あるいはＪＡＫ／ＳＴＡＴ経路、ＰＩ３Ｋ−ＡＫＴシグナル伝達経路、ＢＣＲシグナル伝達経路、またはＢＡＦＦ−ＢＡＦＦＲシグナル伝達経路のうちの少なくとも１つの経路の活性化因子の少なくとも１つである、実施態様１６〜４４のいずれかに記載の方法。
［実施態様４８］
前記免疫調節物質が、ＯＸ４０Ｌ、４−１ＢＢＬ、またはＩＬ−１２の少なくとも１つである、実施態様４７に記載の方法。
［実施態様４９］
前記ＡＰＣが、少なくとも１つの免疫調節物質を導入するために、トランスフェクション、形質導入、または一時的な細胞膜破壊の少なくとも１つによって改変される、実施態様４７または４８に記載の方法。
［実施態様５０］
前記ＡＰＣが、免疫調節物質を一過性発現するように改変される、実施態様４７〜４９のいずれかに記載の方法。
［実施態様５１］
前記ＡＰＣが、免疫調節物質を安定発現するように改変される、実施態様４７〜４９のいずれかに記載の方法。
［実施態様５２］
前記ＡＰＣが、第１の拡大の開始時に添加され、少なくとも１日さらに添加される、実施態様４７〜５１のいずれかに記載の方法。
［実施態様５３］
前記ＡＰＣが、第１の拡大の開始時に添加され、最初の添加から１０日後に再び添加される、実施態様５２に記載の方法。
［実施態様５４］
トランスフェクションがエレクトロポレ−ションにより行われる、実施態様３３〜５３のいずれかに記載の方法。
［実施態様５５］
前記ペプチドが予測モデリングにより同定されたものである、実施態様１〜５４のいずれかに記載の方法。
［実施態様５６］
前記ペプチドが、全エクソ−ムシ−ケンシング、全ゲノムシ−ケンシング、またはＲＡシ−ケンシングにより同定されたものである、実施態様１〜５４のいずれかに記載の方法。
［実施態様５７］
前記ペプチドが質量分析により同定されたものである、実施態様１〜５４のいずれかに記載の方法。
［実施態様５８］
前記抗原が、抗原特異的変異の同定に基づき事前選択されたものである、実施態様１〜５７のいずれかに記載の方法。
［実施態様５９］
前記抗原が、抗原特異的変異の同定に基づき事前選択されたものである、実施態様１〜５８のいずれかに記載の方法。
［実施態様６０］
ステップａ）が、少なくとも１つの拡大促進剤の存在下でリンパ球を拡大させることを含む、実施態様１〜５９のいずれかに記載の方法。
［実施態様６１］
前記拡大促進剤の少なくとも１つが免疫調節剤である、実施態様６０に記載の方法。
［実施態様６２］
前記拡大促進剤の少なくとも１つがサイトカインである、実施態様６０に記載の方法。
［実施態様６３］
前記サイトカインが、インタ−ロイキン−２（ＩＬ−２）、インタ−ロイキン−４（ＩＬ−４）、インタ−ロイキン−７（ＩＬ−７）、インタ−ロイキン−１５（ＩＬ−１５）、インタ−ロイキン−１７（ＩＬ−１７）、またはインタ−ロイキン−２１（ＩＬ−２１）の少なくとも１つである、実施態様６２に記載の方法。
［実施態様６４］
前記拡大促進剤の少なくとも１つが可溶性分子である、実施態様６０に記載の方法。
［実施態様６５］
前記可溶性分子が、ＰＤ−１、ＣＴＬＡ−４、４−１ＢＢ、ＬＡＧ−３、ＴＩＭ−３、２Ｂ４／ＣＤ２４４／ＳＬＡＭＦ４、ＣＤ１６０、ＴＩＧＩＴ、ＴＣＦ１、ＣＤ３９、またはＢＡＴＦの少なくとも１つに対するアンタゴニストである、実施態様６４に記載の方法。
［実施態様６６］
前記拡大促進剤の少なくとも１つが、リンパ球の拡大に有利に働く抗体である、実施態様６０に記載の方法。
［実施態様６７］
前記リンパ球の拡大に有利に働く抗体が、ＰＤ−１、ＣＴＬＡ−４、４−１ＢＢ、ＬＡＧ−３、ＴＩＭ−３、２Ｂ４／ＣＤ２４４／ＳＬＡＭＦ４、ＣＤ１６０、ＴＩＧＩＴ、ＴＣＦ１、ＣＤ３９、またはＢＡＴＦの少なくとも１つに対する抗体である、実施態様６６に記載の方法。
［実施態様６８］
前記抗体がモノクロ−ナル抗体である、実施態様６７に記載の方法。
［実施態様６９］
前記拡大促進剤の少なくとも１つがＩＬ−２である、実施態様６０〜６８のいずれかに記載の方法。
［実施態様７０］
ＩＬ−２が、約１００ＩＵ／ｍｌ〜約１０，０００ＩＵ／ｍｌの範囲内で第１の拡大中に存在する、実施態様６９に記載の方法。
［実施態様７１］
ＩＬ−２が、約６，０００ＩＵ／ｍｌの濃度で第１の拡大中に存在する、実施態様７０に記載の方法。
［実施態様７２］
ＩＬ−２が、約５０ＩＵ／ｍｌ〜約１０，０００ＩＵ／ｍｌの範囲内で第２の拡大中に存在する、実施態様６９〜７１のいずれかに記載の方法。
［実施態様７３］
ＩＬ−２が、約３，０００ＩＵ／ｍｌの濃度で第２の拡大中に存在する、実施態様７２に記載の方法。
［実施態様７４］
ＣＤ３複合体アゴニストが抗ＣＤ３複合体アゴニスト抗体である、実施態様３〜７３のいずれかに記載の方法。
［実施態様７５］
抗ＣＤ３複合体抗体がＯＫＴ−３である、実施態様７４に記載の方法。
［実施態様７６］
マイトジェンが、フィトヘマグルチニン（ＰＨＡ）、コンカナバリンＡ（ＣｏｎＡ）、ポ−クウィ−ドマイトジェン（ＰＷＭ）、メゼレイン（Ｍｚｎ）、またはテトラデカノイルホルボ−ルアセテ−ト（ＴＰＡ）の少なくとも１つである、実施態様３〜７５のいずれかに記載の方法。
［実施態様７７］
フィ−ダ−細胞が自己由来である、実施態様３〜７６のいずれかに記載の方法。
［実施態様７８］
フィ−ダ−細胞が同種異系である、実施態様３〜７６のいずれかに記載の方法。
［実施態様７９］
フィ−ダ−細胞が照射される、実施態様３〜７６のいずれかに記載の方法。
［実施態様８０］
フィ−ダ−細胞が末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）である、実施態様３〜７９のいずれかに記載の方法。
［実施態様８１］
フィ−ダ−細胞とリンパ球とが約１０００：１〜約１：１の比で存在する、実施態様３〜８０のいずれかに記載の方法。
［実施態様８２］
フィ−ダ−細胞とリンパ球とが１００：１の比で存在する、実施態様３〜８１のいずれかに記載の方法。
［実施態様８３］
前記第１の拡大が、サンプル中に存在し得る他の細胞よりもリンパ球の成長に有利に働く条件下でリンパ球を拡大することを含む、実施態様１〜８２のいずれかに記載の方法。
［実施態様８４］
抗原特異的リンパ球が、非抗原特異的リンパ球よりも優先的に拡大される、実施態様１〜８３のいずれかに記載の方法。
［実施態様８５］
前記リンパ球が腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）である、実施態様１〜８４のいずれかに記載の方法。
［実施態様８６］
前記リンパ球が末梢血リンパ球（ＰＢＬ）である、実施態様１〜８４のいずれかに記載の方法。
［実施態様８７］
前記サンプルが流入領域リンパ節から得られたものである、実施態様１〜８６のいずれかに記載の方法。
［実施態様８８］
前記サンプルが、未処理の腫瘍断片、酵素処理された腫瘍断片、解離／懸濁腫瘍細胞、リンパ節サンプル、または体液サンプルである、実施態様１〜８７のいずれかに記載の方法。
［実施態様８９］
前記酵素処理された腫瘍断片が、コラゲナ−ゼ、ディスパ−ゼ、ヒアルロニダ−ゼ、リベラ−ゼ、またはデオキシリボヌクレア−ゼ（ＤＮａｓｅ）の少なくとも１つで処理されたものである、実施態様８８に記載の方法。
［実施態様９０］
前記体液が、血液、腹水、またはリンパ液である、実施態様８８に記載の方法。
［実施態様９１］
前記リンパ球がＴ細胞である、実施態様１〜９０のいずれかに記載の方法。
［実施態様９２］
前記Ｔ細胞がＣＤ８＋Ｔ細胞である、実施態様９１に記載の方法。
［実施態様９３］
前記Ｔ細胞がＣＤ４＋Ｔ細胞である、実施態様９１に記載の方法。
［実施態様９４］
前記ＡＰＣが活性化される、実施態様１６〜９３のいずれかに記載の方法。
［実施態様９５］
前記ＡＰＣが自己由来である、実施態様１６〜９４のいずれかに記載の方法。
［実施態様９６］
前記ＡＰＣが同種異系である、実施態様１６〜９４のいずれかに記載の方法。
［実施態様９７］
前記ＡＰＣが人工ＡＰＣである、実施態様１６〜９４のいずれかに記載の方法。
［実施態様９８］
前記ＡＰＣが、Ｂ細胞、樹状細胞、マクロファ−ジ、またはランゲルハンス細胞の少なくとも１つである、実施態様１６〜９７のいずれかに記載の方法。
［実施態様９９］
前記ＡＰＣがＢ細胞である、実施態様１６〜９８のいずれかに記載の方法。
［実施態様１００］
前記Ｂ細胞がＣＤ１９＋細胞のポジティブセレクションにより単離される、実施態様９８または９９に記載の方法。
［実施態様１０１］
前記Ｂ細胞が、ＣＤ４０Ｌ、ＩＬ−２１、またはＩＬ−４の少なくとも１つとのインキュベ−ションによって活性化される、実施態様９８〜１００のいずれかに記載の方法。
［実施態様１０２］
前記Ｂ細胞が、Ｂｃｌ−６、Ｂｃｌ−ＸＬ、ＢＣＬ−２、ＭＣＬ１、またはＳＴＡＴ−５、あるいはＪＡＫ／ＳＴＡＴ経路、ＰＩ３Ｋ−ＡＫＴシグナル伝達経路、ＢＣＲシグナル伝達経路、またはＢＡＦＦ−ＢＡＦＦＲシグナル伝達経路のうちの少なくとも１つ経路の活性化因子の少なくとも１つと共にさらに培養される、実施態様９７〜１０１のいずれかに記載の方法。
［実施態様１０３］
前記抗原が、腫瘍抗原、翻訳後修飾、長鎖非コ−ド抗原、またはウイルス抗原である、実施態様１〜１０２のいずれかに記載の方法。
［実施態様１０４］
前記抗原が腫瘍抗原であり、該腫瘍抗原は、共通腫瘍抗原、過剰発現された腫瘍抗原、異常発現された腫瘍抗原、または腫瘍特異的ネオ抗原である、実施態様１０３に記載の方法。
［実施態様１０５］
前記腫瘍特異的ネオ抗原が標準ネオ抗原または非標準ネオ抗原である、実施態様１０４記載の方法。
［実施態様１０６］
前記腫瘍抗原が固形腫瘍に由来する、実施態様１０４または１０５に記載の方法。
［実施態様１０７］
前記腫瘍抗原が、卵巣腫瘍、黒色腫、肺腫瘍、乳房腫瘍、白血病、または胃腸腫瘍の少なくとも１つに由来する、実施態様１０３〜１０６のいずれかに記載の方法。
［実施態様１０８］
培養後に抗原特異的リンパ球を単離することをさらに含む、実施態様１〜１０７のいずれかに記載の方法。
［実施態様１０９］
培養前に対象からサンプルを得ることをさらに含む、実施態様１〜１０８のいずれかに記載の方法。
［実施態様１１０］
培養前にサンプルからリンパ球を単離することをさらに含む、実施態様１〜１０９のいずれかに記載の方法。
［実施態様１１１］
培養前にサンプルから抗原特異的リンパ球を単離することをさらに含む、実施態様１〜１１０のいずれかに記載の方法。
［実施態様１１２］
リンパ球の頻度を増加させる、実施態様１〜１１０のいずれかに記載の方法。
［実施態様１１３］
抗原特異的リンパ球の頻度を増加させる、実施態様１〜１１のいずれかに記載の方法。
［実施態様１１４］
第１の拡大中のペプチドへの曝露により、第２の拡大のみでペプチドに曝露された抗原特異的リンパ球と比較して、疲弊が少ない抗原特異的リンパ球がもたらされる、実施態様１〜１１３のいずれかに記載の方法。
［実施態様１１５］
第２の拡大中にはペプチドに曝露しないで第１の拡大中にペプチドに曝露することにより、第１および第２の拡大中にペプチドに曝露された抗原特異的リンパ球と比較して、疲弊が少ない抗原特異的リンパ球がもたらされる、実施態様１０〜１１３のいずれかに記載の方法。
［実施態様１１６］
第２の拡大中にはペプチドに曝露しないで第１の拡大中にペプチドに曝露することにより、第２の拡大中にのみペプチドに曝露された抗原特異的リンパ球と比較して、疲弊が少ない抗原特異的リンパ球がもたらされる、実施態様１０〜１１３のいずれかに記載の方法。
［実施態様１１７］
抗原特異的リンパ球を対象に再導入することをさらに含む、実施態様１〜１１６のいずれかに記載の方法。
［実施態様１１８］
前記対象がヒトである、実施態様１〜１１７のいずれかに記載の方法。
［実施態様１１９］
実施態様１〜１１８のいずれかに記載の方法によって生成された抗原特異的リンパ球の集団。
［実施態様１２０］
実施態様１１９に記載のリンパ球の有効量を対象に投与することを含む、それを必要とする対象において腫瘍を処置する方法。
［実施態様１２１］
前記腫瘍が固形腫瘍である、実施態様１２０に記載の方法。
［実施態様１２２］
前記腫瘍が、卵巣腫瘍、黒色腫、肺腫瘍、胃腸腫瘍、乳房腫瘍、または白血病である、実施態様１２１に記載の方法。
［実施態様１２３］
前記腫瘍が、腫瘍抗原を含む少なくとも１つのペプチドと一致する変異を発現する、実施態様１２２に記載の方法。
［実施態様１２４］
前記対象がヒトである、実施態様１１８〜１２３のいずれかに記載の方法。