【手続補正書】
【提出日】令和3年4月2日(2021.4.2)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
融合毒素ペプチドを含む殺蚊毒素において、該融合毒素ペプチドは、毒素ペプチドに蚊標的化ペプチドが融合されたものを含み、該蚊標的化ペプチドは、デングウイルスの糖タンパク質のドメインIIIに由来する配列を含むペプチドであり、該融合毒素ペプチドは蚊に対して毒性である、殺蚊毒素。
【請求項２】
蚊標的化ペプチドが、アエデス属（Aedes）の蚊を標的とする、請求項１に記載の殺蚊毒素。
【請求項３】
蚊標的化ペプチドが、アエデス・アエギプティ（Aedes aegypti）蚊を標的とする、請求項１に記載の殺蚊毒素。
【請求項４】
蚊標的化ペプチドが、アエデス・アエギプティ蚊の腸上皮に結合する、請求項１に記載の殺蚊毒素。
【請求項５】
毒素ペプチドが、蚊に対する毒性を有するペプチドである、請求項１に記載の殺蚊毒素。
【請求項６】
毒素ペプチドが、蚊標的化ペプチドと融合されていなければ蚊に対する毒性を示さないペプチドである、請求項１に記載の殺蚊毒素。
【請求項７】
毒素ペプチドが、Ｈｖ１ａクモ毒ペプチドである、請求項１に記載の殺蚊毒素。
【請求項８】
融合毒素ペプチドが、他の生物に対して毒性を示さない、請求項１に記載の殺蚊毒素。
【請求項９】
担体をさらに含む、請求項１に記載の殺蚊毒素。
【請求項１０】
殺蚊毒素を発現する組換え植物を製造する方法において、
該植物の標的細胞において、融合毒素ペプチドをコードする外来遺伝子コンストラクトを発現させるよう誘導すること；ここで、該融合毒素ペプチドは、毒素ペプチドに蚊標的化ペプチドが融合されたものを含み、該蚊標的化ペプチドは、デングウイルスの糖タンパク質のドメインIIIに由来する配列を含むペプチドであり、該融合毒素ペプチドは蚊に対して毒性である；および
該融合毒素ペプチドを発現する組換え植物を製造すること
を含む方法。
【請求項１１】
植物が蜜分泌植物であり、植物の標的細胞が蜜産生細胞であり、組換え植物は融合毒素ペプチドを該植物の蜜中に発現する、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
植物がインパチェンス・ワレリアナ（Impatiens walleriana）である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
蚊標的化ペプチドが、アエデス属の蚊を標的とする、請求項１０に記載の方法。
【請求項１４】
蚊標的化ペプチドが、アエデス・アエギプティ蚊を標的とする、請求項１０に記載の方法。
【請求項１５】
蚊標的化ペプチドが、アエデス・アエギプティ蚊の腸上皮に結合する、請求項１０に記載の方法。
【請求項１６】
毒素ペプチドが、蚊に対する毒性を有するペプチドである、請求項１０に記載の方法。
【請求項１７】
毒素ペプチドが、蚊標的化ペプチドと融合されていなければ蚊に対する毒性を示さないペプチドである、請求項１０に記載の方法。
【請求項１８】
毒素ペプチドが、Ｈｖ１ａクモ毒ペプチドである、請求項１０に記載の方法。
【請求項１９】
融合毒素ペプチドが、他の生物に対して毒性を示さない、請求項１０に記載の方法。
【請求項２０】
外来遺伝子コンストラクトが、該植物に特異的なプロモーター、蚊標的化ペプチドをコードする遺伝子、および毒素ペプチドをコードする遺伝子を含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項２１】
外来遺伝子コンストラクトを発現させるよう誘導するステップが、該植物の少なくとも１つの細胞を該外来遺伝子コンストラクトで、融合毒素ペプチドを発現する組換え植物を生じるように形質転換することを含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項２２】
請求項１０に記載の方法により製造される組換え植物。
【請求項２３】
その蜜中に殺蚊毒素を発現する組換え植物を製造する方法において、
蜜を産生する該植物の細胞において、融合毒素ペプチドをコードする外来遺伝子コンストラクトを発現させるよう誘導すること；ここで、該融合毒素ペプチドは、毒素ペプチドに蚊標的化ペプチドが融合されたものを含み、該蚊標的化ペプチドが、デングウイルスの糖タンパク質のドメインIIIに由来する配列を含むペプチドであり、該毒素ペプチドが、Ｈｖ１ａクモ毒ペプチドであり、該植物がインパチェンス・ワレリアナである；および
蜜中に該融合毒素ペプチドを発現し、蜜以外の組織においては該融合毒素ペプチドを発現しない組換え植物を製造すること
を含む方法。
【請求項２４】
請求項２３に記載の方法により製造される組換え植物。
【請求項２５】
組換え殺蚊植物において、該組換え植物は、該植物の標的細胞において、融合毒素ペプチドをコードする外来遺伝子コンストラクトを発現させ、該融合毒素ペプチドは、毒素ペプチドに蚊標的化ペプチドが融合されたものを含み、該蚊標的化ペプチドは、デングウイルスの糖タンパク質のドメインIIIに由来する配列を含むペプチドであり、該融合毒素ペプチドは蚊に対して毒性である、組換え殺蚊植物。
【請求項２６】
植物が蜜分泌植物であり、植物の標的細胞が蜜産生細胞であり、組換え殺蚊植物は融合毒素ペプチドを該植物の蜜中に発現する、請求項２５に記載の組換え殺蚊植物。
【請求項２７】
植物がインパチェンス・ワレリアナである、請求項２６に記載の組換え殺蚊植物。
【請求項２８】
蚊標的化ペプチドが、アエデス属の蚊を標的とする、請求項２５に記載の組換え殺蚊植物。
【請求項２９】
蚊標的化ペプチドが、アエデス・アエギプティ蚊を標的とする、請求項２５に記載の組換え殺蚊植物。
【請求項３０】
蚊標的化ペプチドが、アエデス・アエギプティ蚊の腸上皮に結合する、請求項２５に記載の組換え殺蚊植物
【請求項３１】
毒素ペプチドが、蚊に対する毒性を有するペプチドである、請求項２５に記載の組換え殺蚊植物。
【請求項３２】
毒素ペプチドが、蚊標的化ペプチドと融合されていなければ蚊に対する毒性を示さないペプチドである、請求項２５に記載の組換え殺蚊植物。
【請求項３３】
毒素ペプチドが、Ｈｖ１ａクモ毒ペプチドである、請求項２５に記載の組換え殺蚊植物。
【請求項３４】
融合毒素ペプチドが、他の生物に対して毒性を示さない、請求項２５に記載の組換え殺蚊植物。
【請求項３５】
外来遺伝子コンストラクトが、該植物の蜜に特異的なプロモーター、蚊標的化ペプチドをコードする遺伝子、および毒素ペプチドをコードする遺伝子を含む、請求項２５に記載の組換え殺蚊植物。
【請求項３６】
請求項２５に記載の組換え植物の種子。
【請求項３７】
組換え殺蚊インパチェンス・ワレリアナ植物において、該組換え植物は、蜜を産生する該植物の細胞において、融合毒素ペプチドをコードする外来遺伝子コンストラクトを発現させ、該融合毒素ペプチドは、毒素ペプチドに蚊標的化ペプチドが融合されたものを含み、該蚊標的化ペプチドはデングウイルスの糖タンパク質のドメインIIIに由来する配列を含むペプチドであり、該毒素ペプチドはＨｖ１ａクモ毒ペプチドであり、該組換え植物は、蜜以外の組織においては該融合毒素ペプチドを発現しない、組換え殺蚊インパチェンス・ワレリアナ植物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３１】
本発明のさらなる好ましい態様は、組換え殺蚊インパチェンス・ワレリアナ植物を含み、ここで、該組換え植物は、
（ａ）該蜜産生植物の細胞において融合毒素ペプチドをコードする外来遺伝子コンストラクトを発現させ、ここで、該融合毒素ペプチドは、毒素ペプチドに蚊標的化ペプチドが融合されたものを含み、該蚊標的化ペプチドはアエデス・アエギプティ（Aedes aegypti）蚊の腸上皮に結合し、該毒素ペプチドはＨｖ１ａクモ毒ペプチドであり、かつ、
（ｂ）ターミネーターカセットを発現させ、ここで、該ターミネーターカセットは、該植物の蜜産生細胞以外の細胞中の核酸から、該外来遺伝子コンストラクトを排除し、該組換え植物は、蜜以外の組織においては該融合毒素ペプチドを発現しない。
本発明の態様を、以下さらに記載する：
［項１］
融合毒素ペプチドを含む殺蚊毒素において、該融合毒素ペプチドは、毒素ペプチドに蚊標的化ペプチドが融合されたものを含み、該融合毒素ペプチドは蚊に対して毒性である、殺蚊毒素。
［項２］
蚊標的化ペプチドが、アエデス属（Aedes）、アノフェレス属（Anopheles）またはクレクス属（Culex）の蚊を標的とする、上記項１に記載の殺蚊毒素。
［項３］
蚊標的化ペプチドが、アエデス・アエギプティ（Aedes aegypti）蚊を標的とする、上記項１に記載の殺蚊毒素。
［項４］
蚊標的化ペプチドが、アエデス・アエギプティ蚊の腸上皮に結合する、上記項１に記載の殺蚊毒素。
［項５］
蚊標的化ペプチドが、フラビウイルスのドメインIIIに由来するペプチドである、上記項１に記載の殺蚊毒素。
［項６］
蚊標的化ペプチドが、デングウイルスの糖タンパク質のドメインIIIに由来するペプチドである、上記項１に記載の殺蚊毒素。
［項７］
毒素ペプチドが、蚊に対する毒性を有するペプチドである、上記項１に記載の殺蚊毒素。
［項８］
毒素ペプチドが、蚊標的化ペプチドと融合されていなければ蚊に対する毒性を示さないペプチドである、上記項１に記載の殺蚊毒素。
［項９］
毒素ペプチドが、Ｈｖ１ａクモ毒ペプチドである、上記項１に記載の殺蚊毒素。
［項１０］
融合毒素ペプチドが、他の生物に対して毒性を示さない、上記項１に記載の殺蚊毒素。
［項１１］
担体をさらに含む、上記項１に記載の殺蚊毒素。
［項１２］
殺蚊毒素を発現する組換え植物を製造する方法において、
該植物の標的細胞において、融合毒素ペプチドをコードする外来遺伝子コンストラクト発現させるよう誘導すること；ここで、該融合毒素ペプチドは、毒素ペプチドに蚊標的化ペプチドが融合されたものを含み、該融合毒素ペプチドは蚊に対して毒性である；および
該融合毒素ペプチドを発現する組換え植物を製造すること
を含む方法。
［項１３］
植物が蜜分泌植物であり、植物の標的細胞が蜜産生細胞であり、組換え植物は融合毒素ペプチドを該植物の蜜中に発現する、上記項１２に記載の方法。
［項１４］
植物がインパチェンス・ワレリアナ（Impatiens walleriana）である、上記項１３に記載の方法。
［項１５］
蚊標的化ペプチドが、アエデス属、アノフェレス属またはクレクス属の蚊を標的とする、上記項１２に記載の方法。
［項１６］
蚊標的化ペプチドが、アエデス・アエギプティ蚊を標的とする、上記項１２に記載の方法。
［項１７］
蚊標的化ペプチドが、アエデス・アエギプティ蚊の腸上皮に結合する、上記項１２に記載の方法。
［項１８］
蚊標的化ペプチドが、フラビウイルスのドメインIIIに由来するペプチドである、上記項１２に記載の方法。
［項１９］
蚊標的化ペプチドが、デングウイルスの糖タンパク質のドメインIIIに由来するペプチドである、上記項１２に記載の方法。
［項２０］
毒素ペプチドが、蚊に対する毒性を有するペプチドである、上記項１２に記載の方法。
［項２１］
毒素ペプチドが、蚊標的化ペプチドと融合されていなければ蚊に対する毒性を示さないペプチドである、上記項１２に記載の方法。
［項２２］
毒素ペプチドが、Ｈｖ１ａクモ毒ペプチドである、上記項１２に記載の方法。
［項２３］
融合毒素ペプチドが、他の生物に対して毒性を示さない、上記項１２に記載の方法。
［項２４］
外来遺伝子コンストラクトが、該植物に特異的なプロモーター、蚊標的化ペプチドをコードする遺伝子、および毒素ペプチドをコードする遺伝子を含む、上記項１２に記載の方法。
［項２５］
外来遺伝子コンストラクトを発現させるよう誘導するステップが、該植物の少なくとも１つの細胞を該外来遺伝子コンストラクトで、融合毒素ペプチドを発現する組換え植物を生じるように形質転換することを含む、上記項１２に記載の方法。
［項２６］
上記項１２に記載の方法により製造される組換え植物。
［項２７］
その蜜中に殺蚊毒素を発現する組換え植物を製造する方法において、
蜜を産生する該植物の細胞において、融合毒素ペプチドをコードする外来遺伝子コンストラクトを発現させるよう誘導すること；ここで、該融合毒素ペプチドは、毒素ペプチドに蚊標的化ペプチドが融合されたものを含み、該蚊標的化ペプチドが、デングウイルスの糖タンパク質のドメインIIIに由来するペプチドであり、該毒素ペプチドが、Ｈｖ１ａクモ毒ペプチドであり、該植物がインパチェンス・ワレリアナである；および
蜜中に該融合毒素ペプチドを発現し、蜜以外の組織においては該融合毒素ペプチドを発現しない組換え植物を製造すること
を含む方法。
［項２８］
上記項２７に記載の方法により製造される組換え植物。
［項２９］
組換え殺蚊植物において、該組換え植物は、該植物の標的細胞において、融合毒素ペプチドをコードする外来遺伝子コンストラクトを発現させ、該融合毒素ペプチドは、毒素ペプチドに蚊標的化ペプチドが融合されたものを含み、該融合毒素ペプチドは蚊に対して毒性である、組換え殺蚊植物。
［項３０］
植物が蜜分泌植物であり、植物の標的細胞が蜜産生細胞であり、組換え殺蚊植物は融合毒素ペプチドを該植物の蜜中に発現する、上記項２９に記載の組換え殺蚊植物。
［項３１］
植物がインパチェンス・ワレリアナである、上記項３０に記載の組換え殺蚊植物。
［項３２］
蚊標的化ペプチドが、アエデス属、アノフェレス属またはクレクス属の蚊を標的とする、上記項２９に記載の組換え殺蚊植物。
［項３３］
蚊標的化ペプチドが、アエデス・アエギプティ蚊を標的とする、上記項２９に記載の組換え殺蚊植物。
［項３４］
蚊標的化ペプチドが、アエデス・アエギプティ蚊の腸上皮に結合する、上記項２９に記載の組換え殺蚊植物
［項３５］
蚊標的化ペプチドが、フラビウイルスのドメインIIIに由来するペプチドである、上記項２９に記載の組換え殺蚊植物。
［項３６］
蚊標的化ペプチドが、デングウイルスの糖タンパク質のドメインIIIに由来するペプチドである、上記項２９に記載の組換え殺蚊植物。
［項３７］
毒素ペプチドが、蚊に対する毒性を有するペプチドである、上記項２９に記載の組換え殺蚊植物。
［項３８］
毒素ペプチドが、蚊標的化ペプチドと融合されていなければ蚊に対する毒性を示さないペプチドである、上記項２９に記載の組換え殺蚊植物。
［項３９］
毒素ペプチドが、Ｈｖ１ａクモ毒ペプチドである、上記項２９に記載の組換え殺蚊植物。
［項４０］
融合毒素ペプチドが、他の生物に対して毒性を示さない、上記項２９に記載の組換え殺蚊植物。
［項４１］
外来遺伝子コンストラクトが、該植物の蜜に特異的なプロモーター、蚊標的化ペプチドをコードする遺伝子、および毒素ペプチドをコードする遺伝子を含む、上記項２９に記載の組換え殺蚊植物。
［項４２］
上記項２９に記載の組換え植物の種子。
［項４３］
組換え殺蚊インパチェンス・ワレリアナ植物において、該組換え植物は、蜜を産生する該植物の細胞において、融合毒素ペプチドをコードする外来遺伝子コンストラクトを発現させ、該融合毒素ペプチドは、毒素ペプチドに蚊標的化ペプチドが融合されたものを含み、該蚊標的化ペプチドは蚊の腸上皮に結合し、該毒素ペプチドはＨｖ１ａクモ毒ペプチドであり、該組換え植物は、蜜以外の組織においては該融合毒素ペプチドを発現しない、組換え殺蚊インパチェンス・ワレリアナ植物。
［項４４］
組換え殺蚊インパチェンス・ワレリアナ植物において、該組換え植物は、蜜を産生する該植物の細胞において、融合毒素ペプチドをコードする外来遺伝子コンストラクトを発現させ、該融合毒素ペプチドは、毒素ペプチドに蚊標的化ペプチドが融合されたものを含み、該蚊標的化ペプチドはデングウイルスの糖タンパク質のドメインIIIに由来するペプチドであり、該毒素ペプチドはＨｖ１ａクモ毒ペプチドであり、該組換え植物は、蜜以外の組織においては該融合毒素ペプチドを発現しない、組換え殺蚊インパチェンス・ワレリアナ植物。