【手続補正書】
【提出日】令和2年11月20日(2020.11.20)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒト結腸オルガノイドの形成を誘導する方法であって、
ａ．胚体内胚葉（ＤＥ）をＦＧＦシグナル伝達経路活性化因子およびＷＮＴシグナル伝達経路活性化因子と、前記ＤＥが中後腸スフェロイドを形成するのに十分な期間、接触させるステップと、
ｂ．ステップ（ａ）の前記中後腸スフェロイドをＢＭＰ活性化因子およびＥＧＦシグナル伝達経路活性化因子と、前記ヒト結腸オルガノイドを形成するのに十分な期間、接触させるステップとを含み、前記ヒト結腸オルガノイドがＳＡＴＢ２を発現する、方法。
【請求項２】
前記ＤＥが、胚性幹細胞、胚性生殖細胞、人工多能性幹細胞、中胚葉細胞、胚体内胚葉細胞、後部内胚葉細胞、後腸細胞またはこれらの組み合わせから選択される前駆細胞に由来する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記ＦＧＦシグナル伝達経路活性化因子が、小分子ＦＧＦシグナル伝達経路活性化因子、タンパク質ベースのＦＧＦシグナル伝達経路活性化因子、ＦＧＦ１、ＦＧＦ２、ＦＧＦ３、ＦＧＦ４、ＦＧＦ１０、ＦＧＦ１１、ＦＧＦ１２、ＦＧＦ１３、ＦＧＦ１４、ＦＧＦ１５、ＦＧＦ１６、ＦＧＦ１７、ＦＧＦ１８、ＦＧＦ１９、ＦＧＦ２０、ＦＧＦ２１、ＦＧＦ２２、ＦＧＦ２３、またはこれらの組み合わせから選択される、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記ＷＮＴシグナル伝達経路活性化因子が、タンパク質Ｗｎｔシグナル伝達経路活性化因子、小分子Ｗｎｔシグナル伝達経路活性化因子、塩化リチウム、２−アミノ−４，６−二置換ピリミジン（ヘテロ）アリールピリミジン、ＩＱ１、ＱＳ１１、ＮＳＣ６６８０３６、ＤＣＡベータ−カテニン、２−アミノ−４−［３，４−（メチレンジオキシ）−ベンジル−アミノ］−６−（３−メトキシフェニル）ピリミジン、Ｗｎｔ１、Ｗｎｔ２、Ｗｎｔ２ｂ、Ｗｎｔ３、Ｗｎｔ３ａ、Ｗｎｔ４、Ｗｎｔ５ａ、Ｗｎｔ５ｂ、Ｗｎｔ６、Ｗｎｔ７ａ、Ｗｎｔ７ｂ、Ｗｎｔ８ａ、Ｗｎｔ８ｂ、Ｗｎｔ９ａ、Ｗｎｔ９ｂ、Ｗｎｔ１０ａ、Ｗｎｔ１０ｂ、Ｗｎｔ１１、Ｗｎｔ１６、ＧＳＫ３阻害剤、ＣＨＩＲＯＮ、またはこれらの組み合わせから選択される、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
前記ＢＭＰ活性化因子が、ＢＭＰ２、ＢＭＰ４、ＢＭＰ７、ＢＭＰ９、ＢＭＰ経路を活性化する小分子、ＢＭＰ経路を活性化するタンパク質、ノギン、ドルソモルフィン、ＬＤＮ１８９、ＤＭＨ−１、ベントロモフィン（ｖｅｎｔｒｏｍｏｐｈｉｎ）、およびこれらの組み合わせから選択される、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
前記ＤＥが中後腸スフェロイドを形成するのに十分な前記期間が、ステップ（ａ）の前記中後腸スフェロイドによるＣＤＸ２の発現によって決定される、請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
前記中後腸スフェロイドが、前記ヒト結腸オルガノイドを形成するのに十分な前記期間、前記ヒト結腸オルガノイドの細胞によるＳＡＴＢ２およびＣＤＸ２の発現による、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
前記ＨＣＯが結腸腸内分泌細胞（ＥＥＣ）の存在を特徴とする、請求項１〜７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
前記ＨＣＯが陰窩の存在を特徴とし、絨毛を含まない、請求項１〜８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
前記ＨＣＯが結腸特異的杯細胞を含む、請求項１〜９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
前記ＨＣＯが、パネート細胞を含まない、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
前記ＨＣＯが結腸特異的ホルモンＩＮＳＬ５を分泌する、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
請求項１〜７のいずれか１項に記載の方法によって得られるＨＣＯ。
【請求項１４】
請求項１〜７のいずれか１項に記載のＨＣＯを、ヒト以外の哺乳類、げっ歯類、免疫無防備状態のげっ歯類、または、免疫無防備状態のマウスの腎被膜下に生着させることを含む、結腸組織を形成する方法。
【請求項１５】
大腸炎、結腸癌、ポリポーシス症候群、および／または過敏性腸症候群から選択される疾患に対して有望な治療薬の有効性および／または毒性を決定する方法であって、前記有望な治療薬を請求項１〜１２のいずれか１項に記載のＨＣＯと、前記有望な治療薬の有効性および／または毒性を決定するのに十分な期間、接触させることを含む、方法。
【請求項１６】
請求項１〜１５のいずれか１項に記載のＨＣＯを含む免疫無防備状態のげっ歯類。
【請求項１７】
請求項１〜１６のいずれか１項に記載のＨＣＯに由来する腸管結腸オルガノイド。
【請求項１８】
前記腸管オルガノイドが、免疫機能、神経支配、血管、絨毛、およびパネート細胞のうちの１つ以上を含まない、請求項１７に記載の腸管オルガノイド。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００２】
多能性幹細胞（ＰＳＣ）からの胃および小腸のオルガノイドの作製がヒト消化管（ＧＩ）の発生および疾患の研究に革命をもたらしたが、大腸オルガノイドを作製するための尽力は、一部後腸管発生の強固な理解の欠如により、後れを取っている。
この出願の発明に関連する先行技術文献情報としては、以下のものがある（国際出願日以降国際段階で引用された文献及び他国に国内移行した際に引用された文献を含む）。
（先行技術文献）
（特許文献）
（特許文献１）  米国特許出願公開第２０１３／０１３７１３０号明細書
（特許文献２）  国際公開第２０１５／１８３９２０号
（特許文献３）  国際公開第２０１５１１７３４２５号
（非特許文献）
（非特許文献１）  ＬＩ  ｅｔ  ａｌ．"ＳＡＴＢ２  ｉｓ  ａ  ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ  ｍａｒｋｅｒ  ｆｏｒ  ｌｏｗｅｒ  ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  ｗｅｌｌ−ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅｄ  ｎｅｕｒｏｅｎｄｏｃｒｉｎｅ  ｔｕｍｏｒｓ，"  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  &  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ，０１  Ｊｕｎｅ  ２０１５  （０１．０６．２０１５），Ｖｏｌ．８，Ｎｏ．６，Ｐｇｓ．７０７２−７０８２．ｅｎｔｉｒｅ  ｄｏｃｕｍｅｎｔ
（非特許文献２）  ＥＢＥＲＨＡＲＤ  ｅｔ  ａｌ．"Ａ  ｃｏｈｏｒｔ  ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ  ａｎｄ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｐｒｅｄｉｃｔｉｖｅ  ｖａｌｕｅ  ｏｆ  ＳＡＴＢ２  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎ  ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ  ｃａｎｃｅｒ，"  Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ，２８  Ｆｅｂｒｕａｒｙ  ２０１２  （２６．０２．２０１２），Ｖｏｌ．１０６，Ｎｏ．５，Ｐｇｓ．９３１−９３８．ｅｎｔｉｒｅ  ｄｏｃｕｍｅｎｔ
（非特許文献３）  ＺＡＣＨＯＳ  ｅｔ  ａｌ．"Ｈｕｍａｎ  Ｅｎｔｅｒｏｉｄｓ／Ｃｏｌｏｎｎｉｄｓ  ａｎｄ  Ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  Ｏｒｇａｎｏｉｄｓ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｌｙ  Ｒｅｃａｐｉｔｕｌａｔｅ  Ｎｏｒｍａｌ  Ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｐａｔｈｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ，"  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１６  Ｄｅｃｅｍｂｅｒ  ２０１５  （１６．１２．２０１５），Ｖｏｌ．２９１，Ｎｏ．８，Ｐｇｓ．３７５９−３７６６．ｅｎｔｉｒｅ  ｄｏｃｕｍｅｎｔ