【手続補正書】
【提出日】令和3年6月3日(2021.6.3)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号１と、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一の核酸配列を含む単離された核酸分子であって、前記核酸配列が、配列番号１の５３５７５〜５３５７７位に対応してセリンをコードするコドンを含むことを条件とする、前記単離された核酸分子、またはその相補体。
【請求項２】
前記核酸配列が、配列番号２の５３５７５〜５３５７７位に対応するヌクレオチドを含む、請求項１に記載の単離された核酸分子。
【請求項３】
前記核酸配列が、Ｂ４ＧＡＬＴ１遺伝子のエクソン１〜６を含む配列番号２の部分と、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一である、請求項１または２に記載の単離された核酸分子。
【請求項４】
前記核酸配列が、配列番号２を含む、請求項１または２に記載の単離された核酸分子。
【請求項５】
請求項１〜４のいずれか一項に記載の単離された核酸分子を含むベクター。
【請求項６】
請求項１〜４のいずれか一項に記載の単離された核酸分子もしくは請求項５に記載のベクターと、担体とを含む、組成物。
【請求項７】
請求項１〜４のいずれか一項に記載の単離された核酸分子もしくは請求項５に記載のベクターを含む、宿主細胞。
【請求項８】
配列番号４と、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一の核酸配列を含む単離された核酸分子であって、前記核酸配列が、完全長／成熟型Ｂ４ＧＡＬＴ１ポリペプチドの３５２位に対応する位置にセリンをコードするコドンを含むことを条件とする、前記単離された核酸分子、またはその相補体。
【請求項９】
前記核酸配列が、Ｂ４ＧＡＬＴ１遺伝子のエクソン１〜６を含む配列番号４の部分と、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一である、請求項８に記載の単離された核酸分子。
【請求項１０】
前記核酸配列が、配列番号４を含む、請求項８または９に記載の単離された核酸分子。
【請求項１１】
請求項８〜１０のいずれか一項に記載の単離された核酸分子を含む、ベクター。
【請求項１２】
請求項８〜１０のいずれか一項に記載の単離された核酸分子もしくは請求項１１に記載のベクターと、担体とを含む、組成物。
【請求項１３】
請求項８〜１０のいずれか一項に記載の単離された核酸分子もしくは請求項１１に記載のベクターを含む、宿主細胞。
【請求項１４】
配列番号８と、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であるポリペプチドをコードする核酸配列を含む単離された核酸分子であって、前記ポリペプチドが、３５２位にセリンを含むことを条件とする、前記核酸分子、またはその相補体。
【請求項１５】
前記核酸配列が、配列番号８のポリペプチド配列をコードする、請求項１４に記載の単離された核酸分子。
【請求項１６】
請求項１４または１５に記載の単離された核酸分子を含む、ベクター。
【請求項１７】
請求項１４または１５に記載の単離された核酸分子もしくは請求項１６に記載のベクターと、担体とを含む、組成物。
【請求項１８】
請求項１４または１５に記載の単離された核酸分子もしくは請求項１６に記載のベクターを含む、宿主細胞。
【請求項１９】
配列番号６と、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一の核酸配列を含み、ヒトβ−１，４−ガラクトシルトランスフェラーゼ１（Ｂ４ＧＡＬＴ１）タンパク質をコードするｃＤＮＡであって、前記核酸配列が、完全長／成熟型Ｂ４ＧＡＬＴ１ポリペプチドの３５２位に対応する位置でセリンをコードすることを条件とする、前記ｃＤＮＡ、またはその相補体。
【請求項２０】
前記核酸配列が、配列番号６を含む、請求項１９に記載のｃＤＮＡ。
【請求項２１】
請求項１９または２０に記載のｃＤＮＡを含む、ベクター。
【請求項２２】
請求項１９または２０に記載のｃＤＮＡもしくは請求項２１に記載のベクターと、担体とを含む、組成物。
【請求項２３】
請求項１９または２０に記載のｃＤＮＡもしくは請求項２１に記載のベクターを含む、宿主細胞。
【請求項２４】
配列番号８を有するＢ４ＧＡＬＴ１バリアントポリペプチドと、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含む単離されたポリペプチドであって、前記ポリペプチドが、配列番号８の３５２位に対応するセリンを含むことを条件とする、前記単離されたポリペプチド。
【請求項２５】
前記Ｂ４ＧＡＬＴ１バリアントポリペプチドが、配列番号８を含む、請求項２４に記載のポリペプチド。
【請求項２６】
請求項２４または請求項２５に記載のポリペプチドと、担体または賦形剤とを含む、組成物。
【請求項２７】
請求項２４または請求項２５に記載のポリペプチドを発現する、宿主細胞。
【請求項２８】
前記ポリペプチドをコードする核酸分子を含む宿主細胞を培養し、それにより前記細胞に前記ポリペプチドを発現させ、前記発現させたポリペプチドを回収することを含む、請求項２４または請求項２５に記載のポリペプチドの製造方法。
【請求項２９】
ヒト対象におけるＢ４ＧＡＬＴ１バリアント核酸分子の検出方法であって、前記対象から採取した試料をアッセイして、前記試料中の核酸分子が、完全長／成熟型Ｂ４ＧＡＬＴ１ポリペプチドの３５２位に対応する位置にセリンをコードする核酸配列を含むかどうかを判定することを含む、前記検出方法。
【請求項３０】
前記アッセイが：
前記試料中の核酸分子のＢ４ＧＡＬＴ１ゲノム配列の部分を配列決定することであって、配列決定される前記部分が、配列番号２の５３５７５〜５３５７７位に対応する位置を含む、前記配列決定すること、
前記試料中の核酸分子のＢ４ＧＡＬＴ１  ｍＲＮＡ配列の部分を配列決定することであって、配列決定される前記部分が、配列番号４の１２４３〜１２４５位に対応する位置を含む、前記配列決定すること、または
前記試料中の核酸分子のＢ４ＧＡＬＴ１  ｃＤＮＡ配列の部分を配列決定することであって、配列決定される前記部分が、配列番号６の１０５４〜１０５６位に対応する位置を含む、前記配列決定すること、を含む、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
前記アッセイが：
ａ）前記試料を：ｉ）配列番号２の５３５７５〜５３５７７位に対応するＢ４ＧＡＬＴ１ゲノム配列の位置に近接するＢ４ＧＡＬＴ１ゲノム配列の部分、ｉｉ）配列番号４の１２４３〜１２４５位に対応するＢ４ＧＡＬＴ１  ｍＲＮＡの位置に近接するＢ４ＧＡＬＴ１  ｍＲＮＡ配列の部分、またはｉｉｉ）配列番号６の１０５４〜１０５６位に対応するＢ４ＧＡＬＴ１  ｃＤＮＡの位置に近接するＢ４ＧＡＬＴ１  ｃＤＮＡ配列の部分にハイブリダイズするプライマーと接触させること、
ｂ）少なくとも：ｉ）５３５７５〜５３５７７位に対応するＢ４ＧＡＬＴ１ゲノム配列の位置、ｉｉ）１２４３〜１２４５位に対応するＢ４ＧＡＬＴ１  ｍＲＮＡの位置、またはｉｉｉ）１０５４〜１０５６位に対応するＢ４ＧＡＬＴ１  ｃＤＮＡの位置を介して前記プライマーを伸長すること、及び
ｃ）前記プライマーの伸長産物が：配列番号８の３５２位でセリンをコードするヌクレオチドをｉ）Ｂ４ＧＡＬＴ１ゲノム配列の５３５７５〜５３５７７位に対応する、ｉｉ）Ｂ４ＧＡＬＴ１  ｍＲＮＡの１２４３〜１２４５位に対応する、またはｉｉｉ）Ｂ４ＧＡＬＴ１  ｃＤＮＡの１０５４〜１０５６位に対応する位置に含むかどうかを判定することを含む、請求項２９に記載の方法。
【請求項３２】
前記アッセイが、前記試料を、ストリンジェントな条件下で、Ｂ４ＧＡＬＴ１バリアントゲノム配列、ｍＲＮＡ配列、またはｃＤＮＡ配列に特異的にハイブリダイズし、対応する野生型Ｂ４ＧＡＬＴ１配列にはハイブリダイズしないプライマーまたはプローブと接触させること、及びハイブリダイゼーションが生じたかどうかを判定することを含む、請求項２９に記載の方法。
【請求項３３】
ヒト対象におけるＢ４ＧＡＬＴ１  Ａｓｎ３５２Ｓｅｒの存在の検出方法であって、前記ヒト対象から採取した試料に対してアッセイを行い、前記試料中のＢ４ＧＡＬＴ１タンパク質が３５２位にセリン残基を含むかどうかを判定することを含む、前記検出方法。
【請求項３４】
心血管病態の発症に対するヒト対象の感受性をインビトロで判定する方法であって：
ａ）前記対象から採取した試料をアッセイして、前記試料中の核酸分子が、完全長／成熟型Ｂ４ＧＡＬＴ１ポリペプチドの３５２位に対応する位置にセリンをコードする核酸配列を含むかどうかを判定すること、及び
ｂ）前記核酸分子が完全長／成熟型Ｂ４ＧＡＬＴ１ポリペプチドの３５２位に対応する位置にセリンをコードする核酸配列を含む場合、前記心血管病態を発症するリスクが低いと前記ヒト対象を分類するか、または前記核酸分子が完全長／成熟型Ｂ４ＧＡＬＴ１ポリペプチドの３５２位に対応する位置にセリンをコードする核酸配列を含まない場合、前記心血管病態を発症するリスクが高いと前記ヒト対象を分類することを含む、方法。
【請求項３５】
前記アッセイが：
前記試料中の核酸分子のＢ４ＧＡＬＴ１ゲノム配列の部分を配列決定することであって、配列決定される前記部分が、配列番号２の５３５７５〜５３５７７位に対応する位置を含む、前記配列決定すること、
前記試料中の核酸分子のＢ４ＧＡＬＴ１  ｍＲＮＡ配列の部分を配列決定することであって、配列決定される前記部分が、配列番号４の１２４３〜１２４５位に対応する位置を含む、前記配列決定すること、または
前記試料中の核酸分子のＢ４ＧＡＬＴ１  ｃＤＮＡ配列の部分を配列決定することであって、配列決定される前記部分が、配列番号６の１０５４〜１０５６位に対応する位置を含む、前記配列決定すること、を含む、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
前記アッセイが：
ａ）前記試料を：ｉ）配列番号２の５３５７５〜５３５７７位に対応するＢ４ＧＡＬＴ１ゲノム配列の位置に近接するＢ４ＧＡＬＴ１ゲノム配列の部分、ｉｉ）配列番号４の１２４３〜１２４５位に対応するＢ４ＧＡＬＴ１  ｍＲＮＡの位置に近接するＢ４ＧＡＬＴ１  ｍＲＮＡ配列の部分、またはｉｉｉ）配列番号６の１０５４〜１０５６位に対応するＢ４ＧＡＬＴ１  ｃＤＮＡの位置に近接するＢ４ＧＡＬＴ１  ｃＤＮＡ配列の部分にハイブリダイズするプライマーと接触させること、
ｂ）少なくとも：ｉ）５３５７５〜５３５７７位に対応するＢ４ＧＡＬＴ１ゲノム配列の位置、ｉｉ）１２４３〜１２４５位に対応するＢ４ＧＡＬＴ１  ｍＲＮＡの位置、またはｉｉｉ）１０５４〜１０５６位に対応するＢ４ＧＡＬＴ１  ｃＤＮＡの位置を介して前記プライマーを伸長すること、及び
ｃ）前記プライマーの伸長産物が：配列番号８の３５２位でセリンをコードするヌクレオチドをｉ）Ｂ４ＧＡＬＴ１ゲノム配列の５３５７５〜５３５７７位に対応する、ｉｉ）Ｂ４ＧＡＬＴ１  ｍＲＮＡの１２４３〜１２４５位に対応する、またはｉｉｉ）Ｂ４ＧＡＬＴ１  ｃＤＮＡの１０５４〜１０５６位に対応する位置に含むかどうかを判定することを含む、請求項３４に記載の方法。
【請求項３７】
前記アッセイが、前記試料を、ストリンジェントな条件下で、Ｂ４ＧＡＬＴ１バリアントゲノム配列、ｍＲＮＡ配列、またはｃＤＮＡ配列に特異的にハイブリダイズし、対応する野生型Ｂ４ＧＡＬＴ１配列にはハイブリダイズしないプライマーまたはプローブと接触させること、及びハイブリダイゼーションが生じたかどうかを判定することを含む、請求項３４に記載の方法。
【請求項３８】
心血管病態の発症に対するヒト対象の感受性をインビトロで判定する方法であって：
ａ）前記ヒト対象から採取した試料に対してアッセイを行い、前記試料中のＢ４ＧＡＬＴ１タンパク質が３５２位にセリン残基を含むかどうかを判定すること、及び
ｂ）Ｂ４ＧＡＬＴ１ポリペプチドが完全長／成熟型Ｂ４ＧＡＬＴ１ポリペプチドの３５２位に対応する位置にセリンを含む場合、前記心血管病態を発症するリスクが低いと前記ヒト対象を分類するか、またはＢ４ＧＡＬＴ１ポリペプチドが完全長／成熟型Ｂ４ＧＡＬＴ１ポリペプチドの３５２位に対応する位置にセリンを含まない場合、前記心血管病態を発症するリスクが高いと前記ヒト対象を分類することを含む、方法。
【請求項３９】
前記心血管病態が、１つ以上の血清脂質レベルの上昇を含む、請求項３４〜３８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４０】
前記血清脂質が、コレステロール、ＬＤＬ、ＨＤＬ、トリグリセリド、ＨＤＬコレステロール、及び非ＨＤＬコレステロールの１つ以上を含む、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
前記心血管病態が、冠動脈石灰化レベルの上昇を含む、請求項３４〜３８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４２】
前記心血管病態が、心膜脂肪レベルの上昇を含む、請求項３４〜３８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４３】
前記心血管病態が、アテローム血栓性病態を含む、請求項３４〜３８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４４】
前記アテローム血栓性病態が、フィブリノーゲンレベルの上昇を含む、請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
前記アテローム血栓性病態が、フィブリノーゲン活性の関与から形成される血餅を含む、請求項４３または請求項４４に記載の方法。
【請求項４６】
前記心血管病態が、フィブリノーゲンレベルの上昇を含む、請求項３４〜３８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４７】
前記心血管病態が、フィブリノーゲン活性の関与から形成される血餅を含む、請求項４６に記載の方法。
【請求項４８】
内在性Ｂ４ＧＡＬＴ１遺伝子に結合または切断するようにＣａｓ酵素を誘導するのに有効なガイドＲＮＡであって、前記ガイドＲＮＡが、配列番号１の５３５７５〜５３５７７位に対応する位置を含むかまたはそれに近接する前記内在性Ｂ４ＧＡＬＴ１遺伝子内のガイドＲＮＡ認識配列にハイブリダイズするＤＮＡターゲティングセグメントを含む、前記ガイドＲＮＡ。
【請求項４９】
前記ガイドＲＮＡ認識配列が、配列番号９〜１２から選択される、請求項４８に記載のガイドＲＮＡ。
【請求項５０】
Ｂ４ＧＡＬＴ１バリアントの保因者ではなく、心血管病態を発症しているか、または発症しやすい対象を治療するための医薬組成物であって、前記医薬組成物は：
ａ）Ｃａｓタンパク質または前記Ｃａｓタンパク質をコードする核酸、
ｂ）ガイドＲＮＡまたは前記ガイドＲＮＡをコードする核酸であって、前記ガイドＲＮＡが、前記Ｃａｓタンパク質と複合体を形成し、内在性Ｂ４ＧＡＬＴ１遺伝子内のガイドＲＮＡ認識配列にハイブリダイズし、前記ガイドＲＮＡ認識配列が、配列番号１の５３５７５〜５３５７７位に対応する位置を含むかまたはそれに近接する、前記ガイドＲＮＡまたは前記ガイドＲＮＡをコードする前記核酸、及び
ｃ）配列番号１の５３５７５〜５３５７７に対応する位置の５’の標的配列にハイブリダイズする５’相同性アーム、配列番号１の５３５７５〜５３５７７位に対応する位置の３’の標的配列にハイブリダイズする３’相同性アーム、ならびに前記５’相同性アーム及び前記３’相同性アームに隣接し、配列番号２の５３５７５〜５３５７７位に対応する位置にセリンをコードするヌクレオチド配列を含む核酸インサートを含む外来性ドナー配列、を含み、
前記医薬組成物は、前記対象に導入されるものである、医薬組成物。
【請求項５１】
Ｂ４ＧＡＬＴ１バリアントの保因者ではなく、心血管病態を発症しているか、または発症しやすい対象を治療するための医薬組成物であって、前記医薬組成物は：
ａ）Ｃａｓタンパク質または前記Ｃａｓタンパク質をコードする核酸、
ｂ）第１のガイドＲＮＡまたは前記第１のガイドＲＮＡをコードする核酸であって、前記第１のガイドＲＮＡが、前記Ｃａｓタンパク質と複合体を形成し、内在性Ｂ４ＧＡＬＴ１遺伝子内の第１のガイドＲＮＡ認識配列にハイブリダイズし、前記第１のガイドＲＮＡ認識配列が、内在性Ｂ４ＧＡＬＴ１遺伝子の開始コドンを含むか、または開始コドンから約１，０００ヌクレオチド以内にあるか、または配列番号９〜１２から選択される、前記第１のガイドＲＮＡまたは前記第１のガイドＲＮＡをコードする前記核酸、及び
ｃ）配列番号２の５３５７５〜５３５７７位に対応する位置にセリンをコードするヌクレオチド配列を含む組換えＢ４ＧＡＬＴ１遺伝子を含む発現ベクター、を含み、
前記医薬組成物は、前記対象に導入されるものである、医薬組成物。
【請求項５２】
Ｂ４ＧＡＬＴ１バリアントの保因者ではなく、心血管病態を発症しているか、または発症しやすい対象を治療するための医薬組成物であって、前記医薬組成物は、前記対象の細胞の内在性Ｂ４ＧＡＬＴ１遺伝子内の配列にハイブリダイズしてＢ４ＧＡＬＴ１ポリペプチドの発現を低下させるアンチセンスＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、またはｓｈＲＮＡを含む、医薬組成物。
【請求項５３】
前記心血管病態が、１つ以上の血清脂質レベルの上昇を含む、請求項５２に記載の医薬組成物。
【請求項５４】
前記血清脂質が、コレステロール、ＬＤＬ、ＨＤＬ、トリグリセリド、ＨＤＬコレステロール、及び非ＨＤＬコレステロールの１つ以上を含む、請求項５３に記載の医薬組成物。
【請求項５５】
前記心血管病態が、冠動脈石灰化レベルの上昇を含む、請求項５２に記載の医薬組成物。
【請求項５６】
前記心血管病態が、心膜脂肪レベルの上昇を含む、請求項５２に記載の医薬組成物。
【請求項５７】
前記心血管病態が、アテローム血栓性病態を含む、請求項５２に記載の医薬組成物。
【請求項５８】
前記アテローム血栓性病態が、フィブリノーゲンレベルの上昇を含む、請求項５７に記載の医薬組成物。
【請求項５９】
前記アテローム血栓性病態が、フィブリノーゲン活性の関与から形成される血餅を含む、請求項５８に記載の医薬組成物。
【請求項６０】
前記心血管病態が、フィブリノーゲンレベルの上昇を含む、請求項５２に記載の医薬組成物。
【請求項６１】
前記心血管病態が、フィブリノーゲン活性の関与から形成される血餅を含む、請求項６０に記載の医薬組成物。
【請求項６２】
Ｂ４ＧＡＬＴ１バリアントの保因者ではなく、心血管病態を発症しているか、または発症しやすい対象を治療するための医薬組成物であって、前記医薬組成物は、配列番号２の５３５７５〜５３５７７位に対応する位置にセリンをコードするヌクレオチド配列を含む組換えＢ４ＧＡＬＴ１遺伝子を含む発現ベクターを含み、前記医薬組成物は、前記対象に導入されるものである、医薬組成物。
【請求項６３】
Ｂ４ＧＡＬＴ１バリアントの保因者ではなく、心血管病態を発症しているか、または発症しやすい対象を治療するための医薬組成物であって、前記医薬組成物は、配列番号８（Ｂ４ＧＡＬＴ１  Ａｓｎ３５２Ｓｅｒ）と、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＢ４ＧＡＬＴ１ポリペプチドをコードする核酸を含む発現ベクターを含み、前記医薬組成物は、前記対象に導入されるものである、医薬組成物。
【請求項６４】
Ｂ４ＧＡＬＴ１バリアントの保因者ではなく、心血管病態を発症しているか、または発症しやすい対象を治療するための医薬組成物であって、前記医薬組成物は、配列番号８（Ｂ４ＧＡＬＴ１  Ａｓｎ３５２Ｓｅｒ）と、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるＢ４ＧＡＬＴ１ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含み、前記医薬組成物は、前記対象に導入されるものである、医薬組成物。
【請求項６５】
Ｂ４ＧＡＬＴ１バリアントの保因者ではなく、心血管病態を発症しているか、または発症しやすい対象を治療するための医薬組成物であって、前記医薬組成物はＢ４ＧＡＬＴ１  Ａｓｎ３５２Ｓｅｒタンパク質またはその断片を含み、前記Ｂ４ＧＡＬＴ１ポリペプチドが、配列番号８（Ｂ４ＧＡＬＴ１  Ａｓｎ３５２Ｓｅｒ）と、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であり、前記医薬組成物は、前記対象に導入されるものである、医薬組成物。