【手続補正書】
【提出日】令和3年9月24日(2021.9.24)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
RNA誘導型DNA結合剤をコードするオープンリーディングフレームを含むmRNAであって、
前記オープンリーディングフレームは、その最小アデニン含有量から、前記最小アデニン含有量の150％の範囲のアデニン含有量を有する、または、
前記オープンリーディングフレームは、その最小ウリジン含有量から、前記最小ウリジン含有量の150％の範囲のウリジン含有量を有する、または、
前記オープンリーディングフレームは、その最小ウリジンジヌクレオチド含有量から、前記最小ウリジンジヌクレオチド含有量の150％の範囲のウリジンジヌクレオチド含有量を有する、または、
前記オープンリーディングフレームは、その最小アデニンジヌクレオチド含有量から、前記最小アデニンジヌクレオチド含有量の150％の範囲のアデニンジヌクレオチド含有量を有する、または、
前記オープンリーディングフレームが、コドンのセットからなり、前記コドンの少なくとも75％は、（i）表1、表2または表3に列記されるコドン、もしくは（ii）表4に列記されるコドンのセット、である、
前記mRNA。
【請求項２】
mRNAであって、
(1)配列番号1、4、7、9、10、11、12、14、15、17、18、20、21、23、24、26、27、29、30、50、52、54、65、66または107〜175のいずれか1つに対し少なくとも90％の同一性を有する配列を含み、前記mRNAは、RNA誘導型DNA結合剤をコードするオープンリーディングフレームを含む、または、
(2)RNA誘導型DNA結合剤をコードするオープンリーディングフレームを含み、前記オープンリーディングフレームは、少なくともその最初の30、50、70、100、150、200、250または300ヌクレオチドにわたり、配列番号1、4、7、9、10、11、12、14、15、17、18、20、21、23、24、26、27、29、30、50、52、54、65、66または107〜175のいずれか1つに対し少なくとも90％の同一性を有する、
前記mRNA。
【請求項３】
前記オープンリーディングフレームが、コドンのセットからなり、前記コドンの少なくとも75％は、(i)表4の低U1セットのコドン、(ii)表4の低Aセットのコドン、(iii)表4の低A/Uセットのコドン、または(iv)表4の長半減期セットのコドンである、請求項1または2に記載のmRNA。
【請求項４】
前記オープンリーディングフレームが、少なくともその最初の30、50、70、100、150、200、250または300ヌクレオチドにわたり、または、その配列の少なくとも最初の10%、12%、15%、20%、25%、30%または35%にわたり、配列番号1、4、7、9、10、11、12、14、15、17、18、20、21、23、24、26、27、29、30、50、52、54、65、66または107〜175のいずれか1つに対し少なくとも90％の同一性を有する、請求項1〜3のいずれか1項に記載のmRNA。
【請求項５】
前記mRNAが、配列番号1、4、7、9、10、11、12、14、15、17、18、20、21、23、24、26、27、29、30、50、52、54、65、66または107〜175のいずれか1つに対し少なくとも90％の同一性を有する配列、あるいは、配列番号111、113〜119、128、146、148〜154または163のいずれか1つに対し少なくとも95％の同一性を有する配列を含む、請求項1〜4のいずれか1項に記載のmRNA。
【請求項６】
前記オープンリーディングフレームが、
(i)その最小ウリジンジヌクレオチド含有量から、前記最小ウリジンジヌクレオチド含有量の101%、102%、103%、105%、110%、115%、120%、125%、130%、135%、140%、145%または150%の範囲のウリジンジヌクレオチド含有量；
(ii)その最小ウリジン含有量から、前記最小ウリジン含有量の101%、102%、103%、105%、110%、115%、120%、125%、130%、135%、140%、145%または150%の範囲のウリジン含有量；
(iii)その最小ウリジン含有量から、最小アデニン含有量の101%、102%、103%、105%、110%、115%、120%、125%、130%、135%、140%、145%または150%の範囲のアデニン含有量；または
(iv)その最小アデニンジヌクレオチド含有量から、前記最小アデニンジヌクレオチド含有量の101%、102%、103%、105%、110%、115%、120%、125%、130%、135%、140%、145%または150%の範囲のアデニンジヌクレオチド含有量
のうちの１つまたは複数を有する、請求項1〜5のいずれか1項に記載のmRNA。
【請求項７】
前記オープンリーディングフレームが、その最小アデニン含有量から、最小アデニン含有量のの範囲のアデニン含有量を有する、請求項1〜6のいずれか1項に記載のmRNA。
【請求項８】
配列番号32、34、36、38、41または75-77のいずれか1つに対し、少なくとも90％の同一性を有する5’UTRを含む、請求項1〜7のいずれか1項に記載のmRNA。
【請求項９】
配列番号33、35、37、39または40のいずれか1つに対し、少なくとも90％の同一性を有する3’UTRを含む、請求項1〜8のいずれか1項に記載のmRNA。
【請求項１０】
Cap0、Cap1およびCap2から選択される5’キャップを含む、請求項1〜9のいずれか1項に記載のmRNA。
【請求項１１】
前記オープンリーディングフレームが、哺乳動物におけるmRNAの翻訳を増加させるコドンを有する、場合により、前記哺乳動物が、ヒト、もしくはその特定の器官、または肝臓である、請求項1〜10のいずれか1項に記載のmRNA。
【請求項１２】
前記コドンが、配列番号5からなる配列を有するORFを含むmRNAの翻訳と比較して、前記哺乳動物におけるmRNAの翻訳を増加させる、請求項11に記載のmRNA。
【請求項１３】
前記mRNAが、医薬組成物中で哺乳動物に投与されたときに、前記哺乳動物が、最小ウリジン含有量の150％よりも高い、Cas9ヌクレアーゼをコードするORFを含むmRNAを投与された哺乳動物よりも少なくとも5倍低いサイトカイン反応を呈する、場合により、最小ウリジン含有量の150％よりも高い、Cas9ヌクレアーゼをコードする前記ORFを含む前記mRNAが、配列番号5からなる配列を有する、請求項1〜12のいずれか1項に記載のmRNA。
【請求項１４】
前記RNA誘導型DNA結合剤が、二本鎖エンドヌクレアーゼ活性を有する、場合により、前記RNA誘導型DNA結合剤が、Casクリベースを含む、請求項1〜13のいずれか1項に記載のmRNA。
【請求項１５】
前記RNA誘導型DNA結合剤が、ニッカーゼ活性を有する、場合により、前記RNA誘導型DNA結合剤が、Casニッカーゼを含む、請求項1〜14のいずれか1項に記載のmRNA。
【請求項１６】
前記RNA誘導型DNA結合剤が、dCas DNA結合ドメインを含む、請求項1〜14のいずれか1項に記載のmRNA。
【請求項１７】
前記Casクリベース、CasニッカーゼまたはdCas DNA結合ドメインが、Cas9クリベース、Cas9ニッカーゼまたはdCas9 DNA結合ドメインである、請求項14〜16のいずれか1項に記載のmRNA。
【請求項１８】
前記コードされるRNA誘導型DNA結合剤が、核局在シグナル（NLS）を含む、場合により、前記NLSが、前記RNA誘導型DNA結合剤のC末端または前記RNA誘導型DNA結合剤のN末端に結合されている、請求項1〜17のいずれか1項に記載のmRNA。
【請求項１９】
前記NLSが、配列番号78〜91のいずれか1つに対し、少なくとも80%、85%、90%または95%の同一性を有する配列を含む、または、前記NLSが、配列番号92〜104のいずれか1つの配列に対し、少なくとも80%、85%、90%、95%、98%または100%の同一性を有する配列によりコードされる、請求項18に記載のmRNA。
【請求項２０】
前記mRNAが、配列番号4、7または9に対し、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも98%、または100%の同一性を有する配列を含む、請求項17〜19のいずれか1項に記載のmRNA。
【請求項２１】
前記mRNAが、配列番号111、114または117に対し、少なくとも95%、少なくとも98%、または100%の同一性を有する配列を含む、請求項17〜19のいずれか1項に記載のmRNA。
【請求項２２】
前記mRNAが、配列番号112、122または125に対し、少なくとも90%、少なくとも95%、または100%の同一性を有する配列を含む、請求項17〜19のいずれか1項に記載のmRNA。
【請求項２３】
前記mRNAが、配列番号10、11、12、14、15、17、18、20、21、23、24、26、27、29、30、50、52、54、65、66、107〜110、112、120〜127、129〜145、147、155〜162または164〜175に対し少なくとも90％の同一性を有する配列、または、配列番号111、113〜119、128、146、148〜154または163に対し少なくとも95％の同一性を有する配列を含む、請求項17〜19のいずれか1項に記載のmRNA。
【請求項２４】
前記RNA誘導型DNA結合剤が、異種機能性ドメインをさらに含む、場合により、前記異種機能性ドメインが、Foklヌクレアーゼまたは転写制御ドメインである、請求項1〜23のいずれか1項に記載のmRNA。
【請求項２５】
前記mRNAの有効量が、脂質ナノ粒子を含有する医薬組成物中で哺乳動物のTTR遺伝子を標的とするガイドRNAとともに前記哺乳動物に投与されたときに、前記哺乳動物の肝細胞から取得されたゲノムDNAの少なくとも50％において、TTR座位中にindelが形成される、請求項1〜24のいずれか1項に記載のmRNA。
【請求項２６】
前記mRNAの有効量が、脂質ナノ粒子を含有する医薬組成物中で哺乳動物のTTR遺伝子を標的とするガイドRNAとともに前記哺乳動物に投与されたときに、前記哺乳動物の血清中のTTR濃度が少なくとも50％減少する、請求項1〜25のいずれか1項に記載のmRNA。
【請求項２７】
ウリジンの少なくとも10％が、改変ウリジンで置換される、場合により、前記改変ウリジンが、N1-メチル-シュードウリジン、シュードウリジン、5-メトキシウリジン、または5-ヨードウリジンのうちの1つまたは複数である、請求項1〜26のいずれか1項に記載のmRNA。
【請求項２８】
前記動物が、マウスであり、前記ガイドRNAが、配列番号42からなる配列を有する、または、前記動物が、ラットであり、前記ガイドRNAが、配列番号69からなる配列を有する、請求項26または27に記載のmRNA。
【請求項２９】
前記mRNAが、配列番号43、44、51、53、55〜61または176〜185のいずれか1つに対し、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも98%、少なくとも99%、または100%の同一性を有する配列を含む、請求項1〜28のいずれか1項に記載のmRNA。
【請求項３０】
請求項1〜29のいずれか1項に記載のmRNAを含む脂質ナノ粒子。
【請求項３１】
請求項1〜29のいずれか1つに記載のmRNAと、薬学的に許容可能な担体を含む医薬組成物。
【請求項３２】
少なくとも1つのガイドRNAをさらに含む、場合により、前記少なくとも1つのガイドRNAが、TTRを標的とする、請求項30に記載の脂質ナノ粒子、または請求項31に記載の医薬組成物。
【請求項３３】
ゲノム編集または標的遺伝子の改変において使用されるための、請求項1〜32のいずれか1項に記載のmRNA、脂質ナノ粒子、または医薬組成物であり、場合により、前記ゲノム編集または前記標的遺伝子の改変が、肝臓の細胞中である、場合により、前記肝臓の細胞が、肝細胞（ヘパトサイト）である、前記mRNA、脂質ナノ粒子、または医薬組成物。
【請求項３４】
前記ゲノム編集または前記標的遺伝子の改変が、インビボである、請求項33に記載の使用のためのmRNA、脂質ナノ粒子、または医薬組成物。
【請求項３５】
前記ゲノム編集または前記標的遺伝子の改変が、単離細胞中または培養細胞中である、請求項33に記載の使用のためのmRNA、脂質ナノ粒子、または医薬組成物。