【手続補正書】
【提出日】令和3年9月28日(2021.9.28)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
脂質ナノ粒子（「ＬＮＰ」）組成物であって、
ＲＮＡ成分と、
脂質成分と
を含み、
ここで、
ａ）前記脂質成分は、
約４０〜６０モル％のイオン化され得るアミン脂質と、
約５〜１５モル％の中性脂質と、
約２〜４モル％のＰＥＧ脂質と
を含み、
ここで、前記脂質成分の残部はヘルパー脂質であり、
前記ＬＮＰ組成物のＮ／Ｐ比は約５〜７である、または
ｂ）前記脂質成分は、
約４０〜６０モル％のイオン化され得るアミン脂質と、
約５〜１５モル％の中性脂質と、
約２．５〜４モル％のＰＥＧ脂質と
を含み、
ここで、前記脂質成分の残部はヘルパー脂質であり、
前記ＬＮＰ組成物のＮ／Ｐ比は約３〜１０であり、
前記イオン化され得るアミン脂質は、以下の構造式：
【化１】
2020536125.tif 000001
（式中、Ｒ１とＲ２はそれぞれ独立してＣ４−Ｃ１２アルキルである）
で表される、
前記ＬＮＰ組成物。
【請求項２】
前記脂質成分は、約５０〜６０モル％のイオン化され得るアミン脂質を含む、請求項１に記載のＬＮＰ組成物。
【請求項３】
前記脂質成分は、約５０〜６０モル％のイオン化され得るアミン脂質と、約２．５〜４モル％のＰＥＧ脂質とを含む、請求項１または２に記載のＬＮＰ組成物。
【請求項４】
前記脂質成分は、約５０〜６０モル％のイオン化され得るアミン脂質と、約８〜１０モル％の中性脂質と、約２．５〜４モル％のＰＥＧ脂質とを含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載のＬＮＰ組成物。
【請求項５】
ＬＮＰ組成物であって、
ＲＮＡ成分と、
脂質成分と
を含み、ここで、
ａ）前記脂質成分は、
約４０〜６０モル％のイオン化され得るアミン脂質と、
約０〜１０モル％の中性脂質と、
約１．５〜１０モル％のＰＥＧ脂質と
を含み、
ここで、前記脂質成分の残部はヘルパー脂質であり、
前記ＬＮＰ組成物のＮ／Ｐ比は約５〜７である、または
ｂ）前記脂質成分は、
約５０〜６０モル％のイオン化され得るアミン脂質と、
約０〜１０モル％の中性脂質と、
約１．５〜１０モル％のＰＥＧ脂質と
を含み、
ここで、前記脂質成分の残部はヘルパー脂質であり、
前記ＬＮＰ組成物のＮ／Ｐ比は約３〜１０であり、
前記イオン化され得るアミン脂質は、以下の構造式：
【化２】
2020536125.tif 000002
（式中、Ｒ１とＲ２はそれぞれ独立してＣ４−Ｃ１２アルキルである）
で表される、
前記ＬＮＰ組成物。
【請求項６】
前記脂質成分は、約１モル％未満の中性脂質を含む、請求項５に記載のＬＮＰ組成物。
【請求項７】
前記中性リン脂質を本質的に含まないかまたは含まない、請求項５または６に記載のＬＮＰ組成物。
【請求項８】
前記ＬＮＰ組成物のＮ／Ｐ比は約６である、請求項１〜７のいずれか一項に記載のＬＮＰ組成物。
【請求項９】
前記ＲＮＡ成分はｍＲＮＡを含む、請求項１〜８のいずれか一項に記載のＬＮＰ組成物。
【請求項１０】
前記ＲＮＡ成分は、ＲＮＡ誘導型ＤＮＡ結合因子をコードする、請求項１〜９のいずれか一項に記載のＬＮＰ組成物。
【請求項１１】
前記ＲＮＡ成分はクラス２ＣａｓヌクレアーゼｍＲＮＡを含む、請求項１〜１０のいずれか一項に記載のＬＮＰ組成物。
【請求項１２】
前記ＲＮＡ成分はＣａｓ９ヌクレアーゼｍＲＮＡを含む、請求項１〜１１のいずれか一項に記載のＬＮＰ組成物。
【請求項１３】
前記ｍＲＮＡは修飾ｍＲＮＡである、請求項９〜１２のいずれか一項に記載のＬＮＰ組成物。
【請求項１４】
前記ＲＮＡ成分は、ＲＮＡ誘導型ＤＮＡ結合因子をコードするオープンリーディングフレームを含むＲＮＡを含み、
ここで、
前記オープンリーディングフレームはウリジン含量が、その最小ウリジン含量から、前記最小ウリジン含量の１５０％までの範囲である、または
前記オープンリーディングフレームはウリジンジヌクレオチド含量が、その最小ウリジンジヌクレオチド含量から、前記最小ウリジンジヌクレオチド含量の１５０％までの範囲である、
請求項１〜１３のいずれか一項に記載のＬＮＰ組成物。
【請求項１５】
前記ＲＮＡ成分は、配列番号１、４、７、９、１０、１１、１２、１４、１５、１７、１８、２０、２１、２３、２４、２６、２７、２９、３０、５０、５２、５４、６５、または６６のいずれか１つに対する同一性が少なくとも９０％である配列を含むｍＲＮＡを含み、ここで、前記ｍＲＮＡは、ＲＮＡ誘導型ＤＮＡ結合因子をコードするオープンリーディングフレームを含む、請求項１〜１４のいずれか一項に記載のＬＮＰ組成物。
【請求項１６】
前記ＲＮＡ成分はｇＲＮＡを含む、請求項１〜１５のいずれか一項に記載のＬＮＰ組成物。
【請求項１７】
前記ｇＲＮＡは、２’−Ｏ−メチル（２’−Ｏ−Ｍｅ）修飾ヌクレオチド、ヌクレオチド間のホスホロチオアート（ＰＳ）結合、及び２’−フルオロ（２’−Ｆ）修飾ヌクレオチドから選択される修飾を含む、請求項１６に記載のＬＮＰ組成物。
【請求項１８】
前記ｇＲＮＡは、５’末端の最初の５ヌクレオチドの１つ以上における修飾を含み、及び／または
前記ｇＲＮＡは、３’末端の最後の５ヌクレオチドの１つ以上における修飾を含む、
請求項１６又は１７に記載のＬＮＰ組成物。
【請求項１９】
前記ＲＮＡ成分はクラス２ＣａｓヌクレアーゼｍＲＮＡを含み、前記ｇＲＮＡ及び前記クラス２ＣａｓヌクレアーゼｍＲＮＡは、重量基準で約２：１〜約１：１の比で存在する、請求項１６〜１８のいずれか一項に記載のＬＮＰ組成物。
【請求項２０】
少なくとも１つの鋳型核酸をさらに含む、請求項１〜１９のいずれか一項に記載のＬＮＰ組成物。
【請求項２１】
前記脂質成分は、約３のモル％のＰＥＧ脂質を含む、請求項１〜２０のいずれか一項に記載のＬＮＰ組成物。
【請求項２２】
前記脂質成分は、４７〜５３モル％の前記イオン化され得るアミン脂質を含む、請求項１〜２１のいずれか一項に記載のＬＮＰ組成物。
【請求項２３】
前記脂質成分は、５３〜５７モル％の前記イオン化され得るアミン脂質を含む、請求項１〜２２のいずれか一項に記載のＬＮＰ組成物。
【請求項２４】
前記イオン化され得るアミン脂質はリピドＡであり、
ここで、リピドＡは、以下の構造式：
【化３】
2020536125.tif 000003
で表される、
請求項１〜２３のいずれか一項に記載のＬＮＰ組成物。
【請求項２５】
前記Ｒ１とＲ２はそれぞれ独立して、Ｃ４アルキル、Ｃ５アルキル、Ｃ６アルキル、Ｃ７アルキル、Ｃ９アルキル、Ｃ１０アルキル、Ｃ１１アルキル、及びＣ１２アルキルから選択される、請求項１〜２３のいずれか一項に記載のＬＮＰ組成物。
【請求項２６】
前記ヘルパー脂質はステロイド、ステロールまたはアルキルレソルシノールである、請求項１〜２５のいずれか一項に記載のＬＮＰ組成物。
【請求項２７】
前記ヘルパー脂質はコレステロールである、請求項１〜２６のいずれか一項に記載のＬＮＰ組成物。
【請求項２８】
前記中性脂質は中性リン脂質である、請求項１〜２７のいずれか一項に記載のＬＮＰ組成物。
【請求項２９】
前記中性脂質はＤＳＰＣまたはＤＰＰＣである、請求項１〜２８のいずれか一項に記載のＬＮＰ組成物。
【請求項３０】
前記ＰＥＧ脂質はジミリストイルグリセロール（ＤＭＧ）を含む、請求項１〜２９のいずれか一項に記載のＬＮＰ組成物。
【請求項３１】
前記ＰＥＧ脂質はＰＥＧ−２ｋを含む、請求項１〜３０のいずれか一項に記載のＬＮＰ組成物。
【請求項３２】
前記ＰＥＧ−ＤＭＧはＰＥＧ２ｋ−ＤＭＧである、請求項３０に記載のＬＮＰ組成物。
【請求項３３】
細胞を、請求項１〜３２のいずれか一項に記載のＬＮＰ組成物と接触させることを含む、遺伝子編集方法。
【請求項３４】
少なくとも１つの鋳型核酸を前記細胞に導入することをさらに含む、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
前記ＲＮＡ成分はｍＲＮＡ及びｇＲＮＡを含み、
ここで、前記ＬＮＰ組成物は第１のＬＮＰ及び第２のＬＮＰを含み、
前記ｍＲＮＡを前記第１のＬＮＰに封入し、
前記ｇＲＮＡを前記第２のＬＮＰに封入する、
請求項３３または３４に記載の方法。
【請求項３６】
前記ＲＮＡ成分はｍＲＮＡ及びｇＲＮＡを含み、前記ｍＲＮＡ及び前記ｇＲＮＡを前記ＬＮＰ組成物に共に封入する、請求項３３または３４に記載の方法。
【請求項３７】
細胞を前記ＬＮＰ組成物と接触させることを含む遺伝子編集方法のための医薬の製造のための、請求項１〜３２のいずれか一項に記載のＬＮＰ組成物の使用。
【請求項３８】
細胞を前記ＬＮＰ組成物と接触させることを含む遺伝子編集方法において使用するための、請求項１〜３２のいずれか一項に記載のＬＮＰ組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１７３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１７３】
上記明細書で特に断りがない限り、明細書中、さまざまな成分を「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という記述がある実施形態は、記述の成分「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｏｆ）」かまたはそれ「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ  ｏｆ）」ことも意図され、明細書中、さまざまな成分「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｏｆ）」という記述がある実施形態は、記述の成分を「含む（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ）」かまたはそれ「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ  ｏｆ）」ことも意図され、明細書中、さまざまな成分「について（ａｂｏｕｔ）」という記述がある実施形態は、記述の成分「にて（ａｔ）」であることも意図され、また、明細書中、さまざまな成分「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ  ｏｆ）」という記述がある実施形態は、記述の成分「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｏｆ）」かまたはそれを「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」ことも意図される（このような互換性は請求項内でこれらの用語を使用する際には適用されない）。
本発明は、例えば以下の実施形態を包含する：
［実施形態１］ＲＮＡ成分と、
脂質成分とを含み、ここで、前記脂質成分は、
約５０〜６０モル％のアミン脂質と、
約８〜１０モル％の中性脂質と、
約２．５〜４モル％のＰＥＧ脂質と
を含み、ここで、前記脂質成分の残部はヘルパー脂質であり、
ＬＮＰ組成物のＮ／Ｐ比は約６である、前記脂質ナノ粒子（「ＬＮＰ」）組成物。
［実施形態２］ＲＮＡ成分と、
約５０〜６０モル％のアミン脂質と、
約２７〜３９．５モル％のヘルパー脂質と、
約８〜１０モル％の中性脂質と、
約２．５〜４モル％のＰＥＧ脂質と
を含み、ここで、ＬＮＰ組成物のＮ／Ｐ比は約５〜７である、前記ＬＮＰ組成物。
［実施形態３］前記Ｎ／Ｐ比は約６である、実施形態２に記載のＬＮＰ組成物。
［実施形態４］ＲＮＡ成分と、
脂質成分とを含み、ここで、前記脂質成分は、
約５０〜６０モル％のアミン脂質と、
約５〜１５モル％の中性脂質と、
約２．５〜４モル％のＰＥＧ脂質と
を含み、ここで、前記脂質成分の残部はヘルパー脂質であり、
ＬＮＰ組成物のＮ／Ｐ比は約３〜１０である、前記ＬＮＰ組成物。
［実施形態５］ＲＮＡ成分と、
脂質成分とを含み、ここで、前記脂質成分は、
約４０〜６０モル％のアミン脂質と、
約５〜１５モル％の中性脂質と、
約２．５〜４モル％のＰＥＧ脂質と
を含み、ここで、前記脂質成分の残部はヘルパー脂質であり、
ＬＮＰ組成物のＮ／Ｐ比は約６である、前記ＬＮＰ組成物。
［実施形態６］ＲＮＡ成分と、
脂質成分とを含み、ここで、前記脂質成分は、
約５０〜６０モル％のアミン脂質と、
約５〜１５モル％の中性脂質と、
約１．５〜１０モル％のＰＥＧ脂質と
を含み、ここで、前記脂質成分の残部はヘルパー脂質であり、
ＬＮＰ組成物のＮ／Ｐ比は約６である、前記ＬＮＰ組成物。
［実施形態７］ＲＮＡ成分と、
脂質成分とを含み、ここで、前記脂質成分は、
約４０〜６０モル％のアミン脂質と、
約０〜１０モル％の中性脂質と、
約１．５〜１０モル％のＰＥＧ脂質と
を含み、ここで、前記脂質成分の残部はヘルパー脂質であり、
ＬＮＰ組成物のＮ／Ｐ比は約３〜１０である、前記ＬＮＰ組成物。
［実施形態８］ＲＮＡ成分と、
脂質成分とを含み、ここで、前記脂質成分は、
約４０〜６０モル％のアミン脂質と、
約１モル％未満の中性脂質と、
約１．５〜１０モル％のＰＥＧ脂質と
を含み、ここで、前記脂質成分の残部はヘルパー脂質であり、
ＬＮＰ組成物のＮ／Ｐ比は約３〜１０である、前記ＬＮＰ組成物。
［実施形態９］ＲＮＡ成分と、
脂質成分とを含み、ここで、前記脂質成分は、
約４０〜６０モル％のアミン脂質と、
約１．５〜１０モル％のＰＥＧ脂質と
を含み、ここで、前記脂質成分の残部はヘルパー脂質であり、
ＬＮＰ組成物のＮ／Ｐ比は約３〜１０であり、かつ
前記ＬＮＰ組成物は中性リン脂質を本質的に含まないかまたは含まない、前記ＬＮＰ組成物。
［実施形態１０］ＲＮＡ成分と、
脂質成分とを含み、ここで、前記脂質成分は、
約５０〜６０モル％のアミン脂質と、
約８〜１０モル％の中性脂質と、
約２．５〜４モル％のＰＥＧ脂質と
を含み、ここで、前記脂質成分の残部はヘルパー脂質であり、
ＬＮＰ組成物のＮ／Ｐ比は約３〜７である、前記ＬＮＰ組成物。
［実施形態１１］前記ＲＮＡ成分はｍＲＮＡを含む、先行実施形態いずれかに記載の組成物。
［実施形態１２］前記ＲＮＡ成分は、ＲＮＡ誘導型ＤＮＡ結合因子、例えば、ＣａｓヌクレアーゼｍＲＮＡなどを含む、先行実施形態いずれかに記載の組成物。
［実施形態１３］前記ＲＮＡ成分はクラス２ＣａｓヌクレアーゼｍＲＮＡを含む、先行実施形態いずれかに記載の組成物。
［実施形態１４］前記ＲＮＡ成分はＣａｓ９ヌクレアーゼｍＲＮＡを含む、先行実施形態いずれかに記載の組成物。
［実施形態１５］前記ｍＲＮＡは修飾ｍＲＮＡである、実施形態１１〜１４のいずれかに記載の組成物。
［実施形態１６］前記ＲＮＡ成分は、ＲＮＡ誘導型ＤＮＡ結合因子をコードするオープンリーディングフレームを含むＲＮＡを含み、ここで、前記オープンリーディングフレームはウリジン含量が、その最小ウリジン含量から、前記最小ウリジン含量の１５０％までの範囲である、先行実施形態いずれかに記載の組成物。
［実施形態１７］前記ＲＮＡ成分は、ＲＮＡ誘導型ＤＮＡ結合因子をコードするオープンリーディングフレームを含むｍＲＮＡを含み、ここで、前記オープンリーディングフレームはウリジンジヌクレオチド含量が、その最小ウリジンジヌクレオチド含量から、前記最小ウリジンジヌクレオチド含量の１５０％までの範囲である、先行実施形態いずれかに記載の組成物。
［実施形態１８］前記ＲＮＡ成分は、配列番号１、４、７、９、１０、１１、１２、１４、１５、１７、１８、２０、２１、２３、２４、２６、２７、２９、３０、５０、５２、５４、６５、または６６のいずれか１つに対する同一性が少なくとも９０％である配列を含むｍＲＮＡを含み、ここで、前記ｍＲＮＡは、ＲＮＡ誘導型ＤＮＡ結合因子をコードするオープンリーディングフレームを含む、先行実施形態いずれかに記載の組成物。
［実施形態１９］前記ＲＮＡ成分はｇＲＮＡ核酸を含む、先行実施形態のいずれかに記載の組成物。
［実施形態２０］前記ｇＲＮＡ核酸はｇＲＮＡである、実施形態１９に記載の組成物。
［実施形態２１］前記ＲＮＡ成分はクラス２ＣａｓヌクレアーゼｍＲＮＡ及びｇＲＮＡを含む、先行実施形態いずれかに記載の組成物。
［実施形態２２］前記ｇＲＮＡ核酸は、二重ガイドＲＮＡ（ｄｇＲＮＡ）であるかまたはそれをコードする、実施形態１９〜２１のいずれかに記載の組成物。
［実施形態２３］前記ｇＲＮＡ核酸は、ｓｇＲＮＡであるかまたはそれをコードする、実施形態１９〜２１のいずれかに記載の組成物。
［実施形態２４］前記ｇＲＮＡは修飾されている、実施形態１９〜２３のいずれかに記載の組成物。
［実施形態２５］前記ｇＲＮＡは、２’−Ｏ−メチル（２’−Ｏ−Ｍｅ）修飾ヌクレオチド、ヌクレオチド間のホスホロチオアート（ＰＳ）結合、及び２’−フルオロ（２’−Ｆ）修飾ヌクレオチドから選ばれる修飾を含む、実施形態２４に記載の組成物。
［実施形態２６］前記ｇＲＮＡは、５’末端の最初の５ヌクレオチドの１つ以上における修飾を含む、実施形態２４〜２５のいずれかに記載の組成物。
［実施形態２７］前記ｇＲＮＡは、３’末端の最後の５ヌクレオチドの１つ以上における修飾を含む、実施形態２４〜２６のいずれかに記載の組成物。
［実施形態２８］前記ｇＲＮＡは、最初の４ヌクレオチド間にＰＳ結合を含む、実施形態２４〜２７のいずれかに記載の組成物。
［実施形態２９］前記ｇＲＮＡは、最後の４ヌクレオチド間にＰＳ結合を含む、実施形態２４〜２８のいずれかに記載の組成物。
［実施形態３０］５’末端の最初の３ヌクレオチドに２’−Ｏ−Ｍｅ修飾ヌクレオチドをさらに含む、実施形態２４〜２９のいずれかに記載の組成物。
［実施形態３１］３’末端の最後の３ヌクレオチドに２’−Ｏ−Ｍｅ修飾ヌクレオチドをさらに含む、実施形態２４〜３０のいずれかに記載の組成物。
［実施形態３２］前記ｇＲＮＡ及びクラス２ＣａｓヌクレアーゼｍＲＮＡは、重量基準で約１０：１〜約１：１０の範囲の比で存在する、実施形態１９〜３１のいずれかに記載の組成物。
［実施形態３３］前記ｇＲＮＡ及びクラス２ＣａｓヌクレアーゼｍＲＮＡは、重量基準で約５：１〜約１：５の範囲の比で存在する、実施形態１９〜３１のいずれかに記載の組成物。
［実施形態３４］前記ｇＲＮＡ及びクラス２ＣａｓヌクレアーゼｍＲＮＡは、重量基準で約３：１〜約１：１の範囲の比で存在する、実施形態１９〜３３のいずれかに記載の組成物。
［実施形態３５］前記ｇＲＮＡ及びクラス２ＣａｓヌクレアーゼｍＲＮＡは、重量基準で約２：１〜約１：１の範囲の比で存在する、実施形態１９〜３４のいずれかに記載の組成物。
［実施形態３６］前記ｇＲＮＡ及びクラス２ＣａｓヌクレアーゼｍＲＮＡは、重量基準で約２：１の比で存在する、実施形態１９〜３５のいずれかに記載の組成物。
［実施形態３７］前記ｇＲＮＡ及びクラス２ＣａｓヌクレアーゼｍＲＮＡは、重量基準で約１：１の比で存在する、実施形態１９〜３５のいずれかに記載の組成物。
［実施形態３８］少なくとも１つの鋳型をさらに含む、先行実施形態いずれかに記載の組成物。
［実施形態３９］前記ＰＥＧ脂質のモル％は約３である、先行実施形態いずれかに記載の組成物。
［実施形態４０］前記アミン脂質のモル％は約５０である、先行実施形態いずれかに記載の組成物。
［実施形態４１］前記アミン脂質のモル％は約５５である、先行実施形態いずれかに記載の組成物。
［実施形態４２］前記アミン脂質のモル％は±３モル％である、先行実施形態いずれかに記載の組成物。
［実施形態４３］前記アミン脂質のモル％は±２モル％である、先行実施形態いずれかに記載の組成物。
［実施形態４４］前記アミン脂質のモル％は４７〜５３モル％である、先行実施形態いずれかに記載の組成物。
［実施形態４５］前記アミン脂質のモル％は４８〜５３モル％である、先行実施形態いずれかに記載の組成物。
［実施形態４６］前記アミン脂質のモル％は５３〜５７モル％である、先行実施形態いずれかに記載の組成物。
［実施形態４７］前記Ｎ／Ｐ比は６±１である、先行実施形態いずれかに記載の組成物。
［実施形態４８］前記Ｎ／Ｐ比は６±０．５である、先行実施形態いずれかに記載の組成物。
［実施形態４９］前記アミン脂質はリピドＡである、先行実施形態いずれかに記載の組成物。
［実施形態５０］前記アミン脂質はリピドＡの類似体である、先行実施形態いずれかに記載の組成物。
［実施形態５１］前記類似体はアセタール類似体である、実施形態５０に記載の組成物。
［実施形態５２］前記アセタール類似体はＣ４−Ｃ１２アセタール類似体である、実施形態５１に記載の組成物。
［実施形態５３］前記アセタール類似体はＣ５−Ｃ１２アセタール類似体である、実施形態５０に記載の組成物。
［実施形態５４］前記アセタール類似体はＣ５−Ｃ１０アセタール類似体である、実施形態５０に記載の組成物。
［実施形態５５］前記アセタール類似体は、Ｃ４類似体、Ｃ５類似体、Ｃ６類似体、Ｃ７類似体、Ｃ９類似体、Ｃ１０類似体、Ｃ１１類似体、及びＣ１２類似体から選ばれる、実施形態５０に記載の組成物。
［実施形態５６］前記ヘルパー脂質はコレステロールである、先行実施形態いずれかに記載の組成物。
［実施形態５７］前記中性脂質はＤＳＰＣである、先行実施形態いずれかに記載の組成物。
［実施形態５８］前記中性脂質はＤＰＰＣである、先行実施形態いずれかに記載の組成物。
［実施形態５９］前記ＰＥＧ脂質はジミリストイルグリセロール（ＤＭＧ）を含む、先行実施形態いずれかに記載の組成物。
［実施形態６０］前記ＰＥＧ脂質はＰＥＧ−２ｋを含む、先行実施形態いずれかに記載の組成物。
［実施形態６１］前記ＰＥＧ脂質はＰＥＧ−ＤＭＧである、先行実施形態いずれかに記載の組成物。
［実施形態６２］前記ＰＥＧ−ＤＭＧはＰＥＧ２ｋ−ＤＭＧである、実施形態６１に記載の組成物。
［実施形態６３］前記ＬＮＰ組成物は中性脂質を本質的に含まない、実施形態９に記載の組成物。
［実施形態６４］前記中性脂質はリン脂質である、実施形態６３に記載の組成物。
［実施形態６５］細胞を、実施形態１２〜６４のいずれかに記載のＬＮＰ組成物と接触させることを含む、遺伝子編集方法。
［実施形態６６］クラス２ＣａｓヌクレアーゼｍＲＮＡ及びガイドＲＮＡ核酸を細胞に送達することを含む遺伝子編集方法であって、前記クラス２Ｃａｓ  ｍＲＮＡ及び前記ガイドＲＮＡ核酸は、実施形態１３〜６４のいずれかに記載の少なくとも１つのＬＮＰ組成物として製剤化される、前記方法。
［実施形態６７］細胞を、実施形態１２〜６４のいずれかに記載の少なくとも１つのＬＮＰ組成物と接触させることを含む、遺伝子操作された細胞を作製する方法。
［実施形態６８］前記ＬＮＰ組成物を少なくとも２回投与する、実施形態６５〜６７のいずれかに記載の方法。
［実施形態６９］前記ＬＮＰ組成物を２〜５回投与する、実施形態６８に記載の方法。
［実施形態７０］再投与時に編集が改善する、実施形態６８または６９に記載の方法。
［実施形態７１］少なくとも１つの鋳型核酸を前記細胞に導入することをさらに含む、実施形態６５〜７０のいずれかに記載の方法。
［実施形態７２］前記ｍＲＮＡを第１のＬＮＰ組成物に製剤化し、前記ガイドＲＮＡ核酸を第２のＬＮＰ組成物に製剤化する、実施形態６５〜７１のいずれかに記載の方法。
［実施形態７３］前記第１及び第２のＬＮＰ組成物を同時に投与する、実施形態７２に記載の方法。
［実施形態７４］前記第１及び第２のＬＮＰ組成物を順次投与する、実施形態７２に記載の方法。
［実施形態７５］前記ｍＲＮＡ及び前記ガイドＲＮＡ核酸を単一のＬＮＰ組成物に製剤化する、実施形態６５〜７３のいずれかに記載の方法。