【手続補正書】
【提出日】令和3年8月31日(2021.8.31)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１９】
関連する実施形態では、本発明は、１つ以上の赤血球細胞を、有効量の組み換えウイルスベクターと接触させることを含む、赤血球細胞中で導入遺伝子を発現するための方法を提供し、このベクターは、ヒトＰＧＫプロモーター、ヒトＰＫＬＲ  ｃＤＮＡ導入遺伝子のコドン最適化バージョン、および突然変異したｗＰＲＥを含み、該接触後に、ＰＫＬＲが、１つ以上の赤血球細胞中で検出可能なレベルで発現される。
[本発明1001]
ピルビン酸キナーゼ欠損症（ＰＫＤ）のための発現カセットであって、
（ａ）プロモーター配列、および
（ｂ）ヒトＰＫＬＲ遺伝子産物をコードするコドン最適化配列
を5’から3’の順に含むポリヌクレオチド配列を含み、
前記プロモーター配列が、前記ヒトＰＫＬＲ遺伝子産物をコードするコドン最適化配列に作動可能に連結されており、
前記ヒトＰＫＬＲ遺伝子産物をコードするコドン最適化配列が、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：8と少なくとも95％の同一性を共有する、
発現カセット。
[本発明1002]
前記プロモーターが、ホスホグリセリン酸キナーゼ（ＰＧＫ）プロモーターである、本発明1001の発現カセット。
[本発明1003]
突然変異したウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ｗＰＲＥ）をさらに含む、本発明1001または本発明1002の発現カセット。
[本発明1004]
前記突然変異したｗＰＲＥが、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：24と少なくとも99％の同一性を有する配列を含むキメラｗＰＲＥである、本発明1003の発現カセット。
[本発明1005]
ポリプリントラクト（ＰＰＴ）をさらに含む、本発明1001〜1004のいずれかの発現カセット。
[本発明1006]
ポリアデニル化（ポリＡ）シグナル配列をさらに含む、本発明1001〜1005のいずれかの発現カセット。
[本発明1007]
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：26と少なくとも95％の同一性を共有する、本発明1001〜1006のいずれかの発現カセット。
[本発明1008]
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：26と少なくとも99％の同一性を共有する、本発明1007の発現カセット。
[本発明1009]
レンチウイルスベクターである、本発明1001〜1008のいずれかの発現カセットを含む組み換え遺伝子送達ベクター。
[本発明1010]
以下の配列：
（ａ）5’ＬＴＲ、任意に、修飾5’ＬＴＲ、
（ｂ）ＨＩＶ−1ψ配列、
（ｃ）ＲＲＥ、
（ｄ）ｃＰＰＴ／ＣＴＳ配列、
（ｅ）ＰＧＫプロモーター配列、任意に、ヒトＰＧＫプロモーター配列、
（ｆ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：8と少なくとも99％の同一性を有するヒトＰＫＬＲ遺伝子産物をコードするコドン最適化配列、
（ｇ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：24と少なくとも100％の同一性を有する突然変異ｗＰＲＥ配列、
（ｉ）修飾3’ＬＴＲ、
（ｊ）ＳＶ40ポリ（Ａ）シグナル、
（ｋ）ＳＶ40複製起点（ｏｒｉ）、
（ｕ）ＣＭＶエンハンサー配列、および
（ｖ）ＣＭＶプロモーター配列
を5’から3’の順に含む、本発明1009の組み換え遺伝子送達ベクター。
[本発明1011]
治療遺伝子送達ベクターである、本発明1009の組み換え遺伝子送達ベクター。
[本発明1012]
臨床使用において長期安定性および安全性能力を有する、本発明1011の組み換え遺伝子送達ベクター。
[本発明1013]
本発明1001〜1008のいずれかの発現カセットまたは本発明1009〜1012のいずれかの組み換え遺伝子送達ベクターを含む、細胞。
[本発明1014]
造血幹細胞である、本発明1013の細胞。
[本発明1015]
コミットされた造血赤血球前駆細胞である、本発明1014の細胞。
[本発明1016]
薬学的に許容される賦形剤と、本発明1009〜1012のいずれかの組み換え遺伝子送達ベクターまたは本発明1013〜1015のいずれかの細胞と、を含む、薬学的組成物。
[本発明1017]
ピルビン酸キナーゼ欠損症（ＰＫＤ）の治療または予防を必要とする対象におけるピルビン酸キナーゼ欠損症（ＰＫＤ）を治療または予防する方法であって、前記対象に本発明1016の薬学的組成物を提供することを含む、方法。
[本発明1018]
前記薬学的組成物が、前記組み換え遺伝子送達ベクターを含む、本発明1017の方法。
[本発明1019]
前記薬学的組成物が、前記細胞を含む、本発明1017の方法。
[本発明1020]
前記細胞が、前記対象に対して自家性である、本発明1019の方法。
[本発明1021]
赤血球細胞においてヒトＰＫＬＲ遺伝子を発現させるための方法であって、1つ以上の赤血球細胞を組み換えウイルスベクターの有効量と接触させることを含み、前記ベクターが、ヒトホスホグリセリン酸キナーゼプロモーター、コドン最適化ＰＫＬＲ導入遺伝子、および突然変異したウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメントを含み、前記コドン最適化ＰＫＬＲ導入遺伝子が、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：8と少なくとも95％の同一性を共有し、前記接触後、ＰＫＬＲが前記1つ以上の赤血球細胞において検出可能なレベルで発現する、方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２１】
【図１】例示的なＬＶベクターの骨格鎖に存在する異なるエレメントの位置を反映するスキームを表示する。
【図２】図２Ａは、対照ベクター中のＥＧＦＰ導入遺伝子の発現を調節する（上図）か、または治療ベクター中のＰＫＬＲ遺伝子ｃＤＮＡのコドン最適化配列（ｃｏＲＰＫ）の発現を調節する（下図）、ヒトＰＧＫプロモーターを有する、遺伝子治療実験全体で使用される例示的な自己不活性化（ＳＩＮ）型ＬＶベクターの概略図である。図２Ｂは、開発されたＰＧＫ−ｃｏＲＰＫ  ＬＶベクターの機能性に対処するために実施される遺伝子治療プロトコルの概略図である。
【図３Ａ】図３Ａ〜３Ｄは、遺伝子修復後の一次レシピエントの末梢血におけるＰＫＤ表現型の修復を示すデータを表示する。図３Ａおよび３Ｂは、健常なマウス（黒バー、ｎ＝５）およびＰＫＤ貧血マウス（灰色バー、ｎ＝６）、ならびにＥＧＦＰを移植した（白バー、ｎ＝９）またはｃｏＲＰＫ形質導入細胞を移植した（スクラッチドバー、ｎ＝１７）ＰＫＤ貧血マウスにおけるＲＢＣおよび網状赤血球レベルを示す。データは、平均値±ＳＥＭとして表され、ノンパラメトリッククラスカル・ウォリス検定によって分析された。図３Ｃは、ビオチン標識ＲＢＣを検出するために全時間にわたって使用されたフローサイトメトリー戦略を示し、図３Ｄは、健常なマウス（黒線、ｎ＝２）、貧血マウス（灰色線、ｎ＝２）、および遺伝子修復されたマウス（不連続線、ｎ＝４）におけるＲＢＣの生存動態を示す。データは、平均値±ＳＥＭとして表され、両側ＡＮＯＶＡ検定によって分析された。健常な非移植の対照マウス；ＰＫＤ、非移植のＰＫＤマウス；ｃｏＲＰＫ、治療導入遺伝子を発現するＰＫＤマウス。
【図３Ｂ】図３Ａの説明を参照のこと。
【図３Ｃ】図３Ａの説明を参照のこと。
【図３Ｄ】図３Ａの説明を参照のこと。
【図４Ａ】図４Ａ〜４Ｃは、二次移植マウスにおける多系統造血再構成を示す。図４Ａは、ＣＤ３−ＰＥ、Ｂ２２０−ＰＥ、Ｂ２２０−ＰＥＣｙ５、Ｇｒ１−ビオチン、およびＭａｃ１−ビオチン抗体＋ＳＡＶ−ＰＥ−Ｃｙ５で標識化することによって、異なる造血系統を特定するために使用されたフローサイトメトリー戦略の図である。図４Ｂは、代表的なドットプロットを表示し、図４Ｃは、移植後１４０日目でのＰＢの各系統の比率を表示する。バーは、健常なマウス（ｎ＝２、黒バー）およびＰＫＤマウス（ｎ＝２、灰色バー）対照ならびにｃｏＲＰＫ治療導入遺伝子を発現する二次移植マウス（ｎ＝４、スクラッチドバー）の平均比率±ＳＥＭを表す。
【図４Ｂ】図４Ａの説明を参照のこと。
【図４Ｃ】図４Ａの説明を参照のこと。
【図５Ａ】図５Ａ〜５Ｄは、二次移植マウスにおけるＰＫＤ表現型の修復を表示する。図５Ａは、網状赤血球を特定する（青色で）ための、非移植マウスおよび二次レシピエントからの血液塗抹標本のブリリアントクレシルブルー染色を示す。図５Ｂは、末梢血中の網状赤血球レベルのフローサイトメトリー分析である。図５Ｃは、ＲＢＣの比率を表し、図５Ｄは、ｃｏＲＰＫ導入遺伝子を発現する二次移植マウス（スクラッチドバー、ｎ＝４）、健常マウス（黒バー、ｎ＝３）および貧血対照マウス（灰色バー、ｎ＝３）における網状赤血球の比率を表す。データは、平均値±ＳＥＭとして表され、ノンパラメトリック両側マン・ホイットニー検定によって分析された。
【図５Ｂ】図５Ａの説明を参照のこと。
【図５Ｃ】図５Ａの説明を参照のこと。
【図５Ｄ】図５Ａの説明を参照のこと。
【図６Ａ】図６Ａ〜６Ｃは、プロウイルス組み込みの定量化を示す。図６Ａは、移植後１２０日目および１７０日目での個々の移植マウスからの細胞当たりのベクターコピー数をＢＭ  ＣＦＵで示す。形質導入およびキメラ現象の比率も示されている。図６Ｂは、異なる造血区画からの細胞におけるプロウイルスコピー数を示す。欄は、移植マウスの異なる群の平均値±ＳＥＭを表す。図６Ｃは、個々の移植ＥＧＦＰ発現マウス（灰色線）およびｃｏＲＰＫ導入遺伝子を担持するマウス（黒線）からのＢＭ細胞におけるプロウイルス組み込みの動態を示す。
【図６Ｂ】図６Ａの説明を参照のこと。
【図６Ｃ】図６Ａの説明を参照のこと。
【図７Ａ】図７Ａ〜７Ｃは、遺伝子修復されたマウスにおける赤血球分化パターンの正常化を表示する。図７Ａは、移植後１４０日目での骨髄および脾臓における異なる赤血球亜集団の比率を示す。図７Ｂは、使用されたフローサイトメトリー戦略の代表的なドットプロットを表示する。ＣＤ７１およびＴｅｒ１１９マーカーの発現強度は、４つの赤血球亜集団の特定を可能にする。集団Ｉは、初期前赤血球（Ｔｅｒ１１９ｍｅｄＣＤ７１ｈｉｇｈ）であり、集団ＩＩは、好塩基性赤芽球（Ｔｅｒ１１９ｈｉｇｈＣＤ７１ｈｉｇｈ）であり、集団ＩＩＩは、後期好塩基性および多染性赤芽球（Ｔｅｒ１１９ｈｉｇｈＣＤ７１ｍｅｄ）であり、集団ＩＶは、正染性赤芽球、網状赤血球および成熟赤血球細胞（Ｔｅｒ１１９ｈｉｇｈＣＤ７１ｌｏｗ）である。図７Ｃは、非移植マウスおよび移植マウスにおいてＥＬＩＳＡにより測定された血漿Ｅｐｏレベルを示す。点は、個々のマウスの値を表す。線は、平均値±ＳＥＭを表し、これはノンパラメトリッククラスカル・ウォリス検定によって分析された。健常な非移植の対照マウス；ＰＫＤ、非移植のＰＫＤマウス；ＥＧＦＰ、ＥＧＦＰ導入遺伝子を発現するＰＫＤマウス；ｃｏＲＰＫ、治療導入遺伝子を発現するＰＫＤマウス。
【図７Ｂ】図７Ａの説明を参照のこと。
【図７Ｃ】図７Ａの説明を参照のこと。
【図８】図８Ａ〜８Ｂは、対照マウスおよび形質導入細胞を移植したマウスにおける造血前駆細胞アッセイを示す。データは、移植後１４０日目での脾臓（図８Ａ）および骨髄（図８Ｂ）からの総ＣＦＵを例証している。点は、分析されたマウス当たりのコロニーの数を表し、線は、各群における平均値±ＳＥＭを表す。データを、ノンパラメトリッククラスカル・ウォリス検定によって統計的に分析した。
【図９Ａ】図９Ａ〜９Ｃは、移植後１４０日目での遺伝子修復されたマウスにおける脾腫大および臓器病理の復帰を例証する。図９Ａは、代表的な脾臓の写真を示し、図９Ｂは、一次および二次移植ＰＫＤマウスからの全体重に対する脾臓重量の比を示す。点は、個々のマウスの値を表す。線は、群ごとの平均値±ＳＥＭを表す。データを、ノンパラメトリッククラスカル・ウォリス検定によって分析した。図９Ｃは、一次移植ＰＫＤマウスからの脾臓および肝臓の組織学的試験を示す。第１欄および第２欄は、ヘマトキシリン−エオシンで染色された脾臓および肝臓の代表的な組織片で、光学顕微鏡において、それぞれ、４倍および１０倍の対物レンズを使用して撮影された組織片を示す。矢印は、髄外赤血球産生を示す赤血球細胞クラスターを指し示す。第３欄は、矢じりで示された鉄沈着物を検出するための、肝臓片のプルシアンブルー染色（Ｆｅ）を示す。写真は、２０倍の対物レンズを使用して撮影した。群は、図７に説明した通りである。二次ｃｏＲＰＫ、二次レシピエント。
【図９Ｂ】図９Ａの説明を参照のこと。
【図９Ｃ】図９Ａの説明を参照のこと。
【図１０Ａ】図１０Ａ〜１０Ｇは、遺伝子修復された細胞を移植したマウスからのＲＢＣ試料における代謝プロファイリングを表示する。有意な代謝プロファイルの分析は、２つの独立した実験においてＰＫＤ動物を比較することによって、健常なマウスおよび移植マウスで変化する。図１０Ａは、非標的プロファイリングによって得られた完全なＲＢＣヒートマップを示し、ここでは、より高い代謝産物レベルおよびより低い代謝産物レベルが、それぞれ赤色および青色で表されている。列挙された代謝産物は、以下の基準：絶対変化倍率＞１．５；最小シグナル＞２０００；調整されたｐ値＜０．０１を使用して有意である少なくとも１つの比較を有する。ブラックボックスは、群間ではっきりとしたプロファイルを有する代謝産物変化のクラスターを強調表示する。図１０Ｂ、１０Ｃ、および１０Ｄは、移植後１４０日目のＰＫＤマウスを比較することによる非標的プロファイリングによって測定された、それぞれＡＴＰ、ＡＤＰおよびピルビン酸レベルを表示する。アッセイ１：健常なマウス（黒バー）ｎ＝１、ＰＫＤ（灰色バー）ｎ＝１、ｈＰＧＫ−ＥＧＦＰ（白バー）ｎ＝２、ｈＰＧＫ−ｃｏＲＰＫ（スクラッチドバー）ｎ＝３。アッセイ２：健常なマウス  ｎ＝２、ＰＫＤ  ｎ＝２、ｈＰＧＫ−ＥＧＦＰ  ｎ＝６、ｈＰＧＫ−ｃｏＲＰＫ  ｎ＝１０。図１０Ｅｅ、１０Ｆ、および１０Ｇは、移植後２８０日目での、解糖経路に関与する選択された数の代謝産物のＲＢＣ標的代謝プロファイリングを表示する（それぞれ、ＰＥＰ、３−ホスホグリセリン酸、およびＤ−乳酸）。点は、個々のマウスの値を表す。線は、平均値±ＳＥＭを表し、これはノンパラメトリッククラスカル・ウォリス検定によって分析された。アッセイ２：健常なマウス  ｎ＝７、ＰＫＤ  ｎ＝５、ｈＰＧＫ−ＥＧＦＰ  ｎ＝３、ｈＰＧＫ−ｃｏＲＰＫ  ｎ＝５。
【図１０Ｂ】図１０Ａの説明を参照のこと。
【図１０Ｃ】図１０Ａの説明を参照のこと。
【図１０Ｄ】図１０Ａの説明を参照のこと。
【図１０Ｅ】図１０Ａの説明を参照のこと。
【図１０Ｆ】図１０Ａの説明を参照のこと。
【図１０Ｇ】図１０Ａの説明を参照のこと。
【図１１】図１１Ａ〜１１Ｃは、対照マウスおよび形質導入細胞を移植したマウスからのＲＢＣにおける、それぞれ、ピルビン酸キナーゼ活性、ヘキソキナーゼ活性、およびピルビン酸キナーゼとヘキソキナーゼ酵素活性との比を表示する。ＲＢＣは、白血球のＰＫ活性の混入を回避するためにセルロースカラムを通して血液試料から精製して、酵素活性評価にかけられた。黒バーは健常なマウス（ｎ＝２）であり、白バーは、ＥＧＦＰ発現ベクターで形質導入された細胞を移植したマウス（ｎ＝３）であり、スクラッチドバーは、ｃｏＲＰＫ発現ベクターで形質導入された細胞を移植したマウス（ｎ＝３）である。格子縞のバーは、健常なボランティア（ｎ＝１）からの値を表す。データは、各群の平均値±ＳＥＭを表す。
【図１２】図１２Ａ〜１２Ｄは、遺伝子修復された細胞を移植したマウスからのＷＢＣ試料におけるメタボリックプロファイリングを示す。図１２Ａは、対照および移植マウスにおける、ＲＢＣ（赤点左側および中央）ならびにＷＢＣ（青点；右側のクラスター）での非標的代謝産物プロファイルの主成分分析を表す。図１２Ｂ、１２Ｃ、および１２Ｄ、ＰＫＤマウスに対して比較することによる、ＷＢＣにおける、それぞれ、ＡＴＰ、ＡＤＰ、およびピルビン酸レベルを表示する。アッセイ１：健常なマウス（黒バー）ｎ＝１、ＰＫＤ（灰色バー）ｎ＝１、ｈＰＧＫ−ＥＧＦＰ（白バー）ｎ＝２、ｈＰＧＫ−ｃｏＲＰＫ（スクラッチドバー）ｎ＝３。アッセイ２：健常なマウス  ｎ＝２、ＰＫＤ  ｎ＝２、ｈＰＧＫ−ＥＧＦＰ  ｎ＝６、ｈＰＧＫ−ｃｏＲＰＫ  ｎ＝１０。データは、群ごとの平均値±ＳＥＭを表し、これはノンパラメトリッククラスカル・ウォリス検定によって分析された。
【図１３】異なる時点および組織で全てのマウスから採取された試料についてのＴｓｐ５０９Ｉ酵素を用いて生成されたＬＡＭ−ＰＣＲ産物のゲル画像を示す。ベクター組み込み部位を、３’ベクターＬＴＲ−ゲノムジャンクションのＬＡＭ−ＰＣＲ増幅によって特定した。いくつかのバンドによって特性化されたパターンを生成するＭｕｌｔｉＮＡ自動化システムを使用した。ベクター骨格由来のＴｓｐ５０９Ｉ内部対照バンド（ＩＣ）は、矢印で示されている。
【図１４】異なる時点および組織で全てのマウスから採取された試料についてのＨｐｙＣＨ４ＩＶ５酵素を用いて生成されたＬＡＭ−ＰＣＲ産物のゲル画像を示す。ベクター組み込み部位を、３’ベクターＬＴＲ−ゲノムジャンクションのＬＡＭ−ＰＣＲ増幅によって特定した。いくつかのバンドによって特性化されるパターンを生成するＭｕｌｔｉＮＡ自動化システムを使用した。ベクター骨格由来のＨｐｙＣＨ４ＩＶ５のＩＣは、矢印で示されている。
【図１５】遺伝子改変された造血前駆細胞で移植したマウスにおいて実施された組み込み部位マッピングの分析の一般的なスキームを表示する。２つの独立した実験（表３）に属する移植マウスに由来し、移植後に異なる時点で採取された骨髄および白血球試料を、示されたルートに従って捕足的方法に記載されているように分析した。
【図１６Ａ】図１６Ａ〜１６Ｂは、移植マウスのゲノムに沿ってのＬＶ組み込みの分布を示す。図１６Ａは、ＴＳＳの５００ｋｂ上流および下流にわたる、直近のＲｅｆＳｅｑ遺伝子の転写開始点（ＴＳＳ）の周りの組み込み部位（ＩＳ）頻度分布を表示する。上部上の数字は、全ての試料および時点について検出されたＩＳの数である。図１６Ｂは、ＥＧＦＰ導入遺伝子を発現する移植マウス（黒バー）またはｃｏＲＰＫ治療導入遺伝子を発現する移植マウス（灰色バー）におけるＬＶ組み込み部位の染色体分布を表示し、任意の特定の染色体への偏りがないことを示している。
【図１６Ｂ】図１６Ａの説明を参照のこと。
【図１７Ａ】図１７Ａ〜１７Ｃは、ｃｏＲＰＫ−ＬＶ形質導入細胞のクローン存在量分析を例証する。アッセイ１（図１７Ａ）およびアッセイ２（図１７Ｂおよび１７Ｃ）からの各マウスにおけるプールされた組み込みのクローン存在量のドットプロット表現である。各ＩＳについての相対比率（ｙ軸）は、各データセットで得られた配列読み取りの総数に対するものである。ＢＭは、骨髄であり、ＰＢは、末梢血であり、ｃｏＲＰＫ１〜１４は、治療ベクターで形質導入された造血細胞を移植したマウスである。
【図１７Ｂ】図１７Ａの説明を参照のこと。
【図１７Ｃ】図１７Ａの説明を参照のこと。
【図１８】治療ＰＧＫ−ｃｏＲＰＫ  ＬＶベクターを担持する一次および二次レシピエントマウスの間の追跡された共有組み込みを提示する。任意の臓器および任意の時間でいずれかのマウスで検出された組み込みがプールされる。二次レシピエントは、移植マウスｃｏＲＰＫ１１〜１４からのプールされたＢＭを受容した。検出されたＩＳの残りは、一次または二次レシピエントで検出された。ボックス内の数字は、言及されたマウスにおける対応する組み込みの比率の代表値を示す。組み込み分析に適用された≧５％のフィルターに加えて、＜３の配列カウントを有する全ての組み込みを排除した。
【図１９】ＥＧＦＰ−ＬＶ形質導入細胞のクローン存在量分析を例証する。骨髄における各マウスのプールされた組み込みのクローン存在量のドットプロット表現である。各ＩＳについての相対比率（ｙ軸）は、各データセットで得られた配列読み取りの総数に対するものである。ｃｏ−ＲＰＫ形質導入細胞（図１７）と同様に、グラフは、圧倒的大部分の移植マウスが、造血細胞再増殖のポリクローナルパターンを示すことを指示している。
【図２０】ＬＶゲノム組み込みプロファイルを表示する。移植したマウスからの試料に対してＧＲＥＡＴソフトウェアを使用して、遺伝子オントコジー（ＧＯ）分析を実施した。この試験（Ｎ＝２２２０）から取得した全ての組み込みは、図の左側部分に示された遺伝子機能の過剰提示を示した。最も豊富な組み込みが特異的遺伝子クラスで富化されたかを解決するために、データセット全体の＞５％の相対配列カウントを有する全てのＩＳ（図１７に示された）を選択し、ＧＯ遺伝子クラスが過剰提示されていないことを示した。
【図２１】ＰＧＫ−ｃｏＲＰＫ  ＬＶレンチウイルスベクターの概略図を表示する。
【図２２】ＰＧＫ−ｃｏＲＰＫ  ＬＶレンチウイルスベクターを含むプラスミド（ＣＰｃｏＲＰＫＷ−１７）の図を表示する。
【図２３Ａ】図２３Ａ〜２３Ｆは、様々な機能的エレメントの場所を示すように注釈を付けられた、ＰＧＫ−ｃｏＲＰＫ  ＬＶレンチウイルスベクターのヌクレオチド配列を表す。
【図２３Ｂ】図２３Ａの説明を参照のこと。
【図２３Ｃ】図２３Ａの説明を参照のこと。
【図２３Ｄ】図２３Ａの説明を参照のこと。
【図２３Ｅ】図２３Ａの説明を参照のこと。
【図２３Ｆ】図２３Ａの説明を参照のこと。
【図２４Ａ】図２４Ａ〜２４Ｂは、ＰＧＫ−ｃｏＲＰＫ  ＬＶレンチウイルスベクターの作用機序を表示する。図２４Ａは、ＰＧＫ−ｃｏＲＰＫ  ＬＶベクター異所性発現が、そうでなければ、機能的ＲＰＫタンパク質を生成して、それらの機能を実行するのに十分なエネルギーを作り出すことができない、ＰＫＤ赤血球の野生型表現型を救済するであろうことを表示している。図２４Ｂは、ＲＰＫ欠損ＣＤ３４＋造血前駆細胞のＰＧＫ−ｃｏＲＰＫ  ＬＶレンチウイルスベクターによるエクスビボ形質導入およびその後の患者への移植に基づく、ＰＫＤ患者に対する遺伝子治療戦略を示している。治療ヒトＰＫＬＲ遺伝子ｃＤＮＡを担持する開発されたＰＧＫ−ｃｏＲＰＫ  ＬＶレンチウイルスベクターは、エクスビボ形質導入時に、患者のＣＤ３４＋細胞のゲノム中に組み込まれるであろう。これらの遺伝子修復された細胞は、次いで患者の体内に戻されることになり、ここで、これらは治療導入遺伝子を発現するＲＢＣを産生し、したがって、ＰＫＤ病理学的表現型を修復するであろう機能的ＲＰＫタンパク質を産生する。図は、ボストン子供病院のブログから修正された。
【図２４Ｂ】図２４Ａの説明を参照のこと。