【手続補正書】
【提出日】令和3年11月15日(2021.11.15)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下垂体前駆体の分化を誘導するためのｉｎ  ｖｉｔｒｏ方法であって、少なくとも１つの下垂体前駆体マーカーを発現する細胞を、少なくとも１つの背方化剤および少なくとも１つの腹方化剤と接触させるステップと；前記細胞を、Ｗｉｎｇｌｅｓｓ（Ｗｎｔ）シグナル伝達の少なくとも１つの活性化剤（Ｗｎｔ活性化剤）および成長ホルモンの発現を誘導することが可能である少なくとも１つの分子（ＧＨ誘導剤）と接触させて、分化細胞の細胞集団を得るステップであって、前記分化細胞のうちの少なくとも約５０％が、成長ホルモンを産生することが可能である成長ホルモン産生細胞（ＧＨ産生成長ホルモン産生細胞）であるステップとを含む、方法。
【請求項２】
前記ＧＨ産生成長ホルモン産生細胞が、低レベルのＧＨＲＨＲ免疫反応性を発現する細胞（ＧＨＲＨＲｌｏｗ細胞）、高レベルのＧＨＲＨＲ免疫反応性を発現する細胞（ＧＨＲＨＲｈｉｇｈ細胞）、およびその組合せを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
（ａ）少なくとも１つの下垂体前駆体マーカーを発現する前記細胞の、前記少なくとも１つの背方化剤との最初の接触から少なくとも約１０日、約２週間、約３週間もしくは約１５日で、少なくとも約５０％のＧＨＲＨＲｌｏｗ細胞を含む細胞集団を得るステップ、または
（ｂ）１つまたは複数の下垂体前駆体マーカーを発現する前記細胞の、前記１つまたは複数の背方化剤との最初の接触から少なくとも約１０日、約３週間、約２５日もしくは約３５日で、少なくとも約５０％のＧＨＲＨＲｈｉｇｈ細胞を含む細胞集団を得るステップ
を含む、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
幹細胞の分化を誘導するためのｉｎ  ｖｉｔｒｏ方法であって、幹細胞を、少なくとも１つのＢＭＰ分子およびＴＧＦβ／Ａｃｔｉｖｉｎ−Ｎｏｄａｌシグナル伝達の少なくとも１つの阻害剤と接触させるステップと；前記細胞を、ＳＨＨシグナル伝達の少なくとも１つの活性化剤、ＦＧＦシグナル伝達の少なくとも１つの活性化剤、少なくとも１つの背方化剤、少なくとも１つの腹方化剤、Ｗｉｎｇｌｅｓｓ（Ｗｎｔ）シグナル伝達の少なくとも１つの活性化剤（Ｗｎｔ活性化剤）および少なくとも１つの成長ホルモン（ＧＨ）誘導剤と接触させて、分化細胞の細胞集団を得るステップであって、前記分化細胞の少なくとも約５０％が、成長ホルモンを産生することが可能である成長ホルモン産生細胞（ＧＨ産生成長ホルモン産生細胞）であるステップとを含む、方法。
【請求項５】
前記ＧＨ産生成長ホルモン産生細胞が、低レベルのＧＨＲＨＲ免疫反応性を発現する細胞（ＧＨＲＨＲｌｏｗ細胞）、高レベルのＧＨＲＨＲ免疫反応性を発現する細胞（ＧＨＲＨＲｈｉｇｈ細胞）、およびその組合せを含み、必要に応じて、前記方法は、
（ａ）前記幹細胞の、ＴＧＦβ／Ａｃｔｉｖｉｎ−Ｎｏｄａｌシグナル伝達の前記１つまたは複数の阻害剤との最初の接触から少なくとも約３週間、約２４日、もしくは約４週間で、少なくとも約５０％のＧＨＲＨＲｌｏｗ細胞を含む細胞集団を得るステップ、および／または
（ｂ）前記幹細胞の、ＴＧＦβ／Ａｃｔｉｖｉｎ−Ｎｏｄａｌシグナル伝達の前記１つまたは複数の阻害剤との最初の接触から少なくとも約４週間、約６週間、約３０日、もしくは３３日で、少なくとも約５０％のＧＨＲＨＲｈｉｇｈ細胞を含む細胞集団を得るステップ
を含む、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
下垂体前駆体の分化を誘導するためのｉｎ  ｖｉｔｒｏ方法であって、少なくとも１つの下垂体前駆体マーカーを発現する細胞を、少なくとも１つの背方化剤および少なくとも１つの腹方化剤と接触させるステップと；前記細胞を、Ｗｉｎｇｌｅｓｓ（Ｗｎｔ）シグナル伝達の少なくとも１つの活性化剤と接触させて、分化細胞の細胞集団を得るステップであって、前記分化細胞の少なくとも約５０％が、Ｐｉｔ１を発現するステップとを含む、方法。
【請求項７】
前記少なくとも１つの下垂体前駆体マーカーを発現する前記細胞の、前記少なくとも１つの背方化剤との最初の接触から少なくとも約５日、約７日または約１１日で、前記細胞集団を得るステップを含む、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
幹細胞の分化を誘導するためのｉｎ  ｖｉｔｒｏ方法であって、幹細胞を、少なくとも１つのＢＭＰ分子およびＴＧＦβ／Ａｃｔｉｖｉｎ−Ｎｏｄａｌシグナル伝達の少なくとも１つの阻害剤と接触させるステップと；前記細胞を、ＳＨＨシグナル伝達の少なくとも１つの活性化剤、ＦＧＦシグナル伝達の少なくとも１つの活性化剤、少なくとも１つの背方化剤、少なくとも１つの腹方化剤、およびＷｉｎｇｌｅｓｓ（Ｗｎｔ）シグナル伝達の少なくとも１つの活性化剤（Ｗｎｔ活性化剤）と接触させて、分化細胞の細胞集団を得るステップであって、前記分化細胞の少なくとも約５０％が、Ｐｉｔ１を発現するステップとを含み、必要に応じて、前記方法は、前記幹細胞の、ＴＧＦβ／Ａｃｔｉｖｉｎ−Ｎｏｄａｌシグナル伝達の前記少なくとも１つの阻害剤との最初の接触から少なくとも約１０日、少なくとも約１５日、約１５日、または約２０日で、前記細胞集団を得るステップを含む、方法。
【請求項９】
（ａ）前記細胞の、前記少なくとも１つのＷｎｔ活性化剤との最初の接触が、前記少なくとも１つの下垂体前駆体マーカーを発現する前記細胞の、前記少なくとも１つの背方化剤との最初の接触から５日以内、最初の接触と同じ日に起こる、最初の接触から４日以内である、
（ｂ）前記細胞を、少なくとも約５日間および／もしくは最長約１５日間、もしくは少なくとも７日間、前記少なくとも１つのＷｎｔ活性化剤と接触させる、
（ｃ）前記細胞を、少なくとも約３日間および／もしくは最長約１０日間、約４日間、もしくは約７日間、前記少なくとも１つの背方化剤と接触させる、
（ｄ）前記細胞を、少なくとも約５日間および／もしくは最長約１５日間、少なくとも約７日間、もしくは約１１日間、前記少なくとも１つの腹方化剤と接触させる、
（ｅ）前駆少なくとも１つの下垂体前駆体マーカーを発現する前記細胞を、ＴＧＦβ／Ａｃｔｉｖｉｎ−Ｎｏｄａｌシグナル伝達の少なくとも１つの阻害剤と接触させ、必要に応じて、
（ｉ）前記細胞を、少なくとも約３日間および／もしくは最長約１０日間、ならびに／または約４日間もしくは約７日間、ＴＧＦβ／Ａｃｔｉｖｉｎ−Ｎｏｄａｌシグナル伝達の前記少なくとも１つの阻害剤と接触させる、ならびに／または
（ｉｉ）前記細胞を、前記少なくとも１つの背方化剤およびＴＧＦβ／Ａｃｔｉｖｉｎ−Ｎｏｄａｌシグナル伝達の前記少なくとも１つの阻害剤と、同時に接触させる、
請求項１から８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記細胞を、少なくとも１つのエストロゲン受容体（ＥＲ）アゴニストと接触させるステップをさらに含み、必要に応じて、前記細胞を、前記少なくとも１つのＥＲアゴニストおよび前記少なくとも１つのＷｎｔ活性化剤と、同時に接触させる、請求項１から９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
（ａ）前記細胞の、前記少なくとも１つのＥＲアゴニストとの最初の接触が、前記少なくとも１つの下垂体前駆体マーカーを発現する前記細胞の、前記少なくとも１つの背方化剤との最初の接触から１０日以内、最初の接触と同じ日に起こる、もしくは最初の接触から４日以内である、ならびに／または
（ｂ）前記細胞を、少なくとも約５日間および／もしくは最長約１５日間、少なくとも約７日間、もしくは約８日間、前記１つまたは複数のＥＲアゴニストと接触させる、
請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記少なくとも１つの下垂体前駆体マーカーを発現する前記細胞が、幹細胞のｉｎ  ｖｉｔｒｏでの分化によって得られ、必要に応じて、幹細胞の前記ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの分化が、幹細胞を、少なくとも１つのＢＭＰ分子およびＴＧＦβ／Ａｃｔｉｖｉｎ−Ｎｏｄａｌシグナル伝達の少なくとも１つの阻害剤と接触させるステップ、前記細胞を、ＳＨＨシグナル伝達の少なくとも１つの活性化剤およびＦＧＦシグナル伝達の１つ、２つ、またはそれより多い活性化剤と接触させるステップを含む、請求項１から３、６、７および９から１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
（ａ）前記幹細胞を、少なくとも約２日間および／または約４日以内、前記少なくとも１つのＢＭＰ分子と、
（ｂ）前記幹細胞を、少なくとも約５日間もしくは約８日間、ＴＧＦβ／Ａｃｔｉｖｉｎ−Ｎｏｄａｌシグナル伝達の前記少なくとも１つの阻害剤と、
（ｃ）前記幹細胞を、少なくとも約２日間もしくは約５日間、ＳＨＨシグナル伝達の前記少なくとも１つの活性化剤、およびＦＧＦシグナル伝達の１つ、２つ、またはそれより多い活性化剤と、ならびに／または
（ｄ）ＳＭＡＤシグナル伝達の少なくとも１つの阻害剤と、必要に応じて前記幹細胞を、少なくとも約２日間または約５日間、ＳＭＡＤシグナル伝達の前記少なくとも１つの阻害剤と
接触させる、請求項４、５、８および１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
前記少なくとも１つの下垂体前駆体マーカーを発現する前記細胞を、Ｐｉｔ１を発現する細胞へと分化させるステップと、Ｐｉｔ１を発現する前記細胞を、ＧＨＲＨＲｌｏｗ細胞へと分化させるステップと、前記ＧＨＲＨＲｌｏｗ細胞を、ＧＨＲＨＲｈｉｇｈ細胞へと分化させるステップとを含む、請求項１から３および９から１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
前記幹細胞を、少なくとも１つの下垂体前駆体マーカーを発現する細胞へと分化させるステップと、少なくとも１つ数の下垂体前駆体マーカーを発現する前記細胞を、Ｐｉｔ１を発現する細胞へと分化させるステップと、Ｐｉｔ１を発現する前記細胞を、ＧＨＲＨＲｌｏｗ細胞へと分化させるステップと、前記ＧＨＲＨＲｌｏｗ細胞を、ＧＨＲＨＲｈｉｇｈ細胞へと分化させるステップとを含む、請求項４から６および９から１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
前記幹細胞を、少なくとも１つの下垂体前駆体マーカーを発現する細胞へと分化させるステップと、前記少なくとも１つの下垂体前駆体マーカーを発現する前記細胞を、Ｐｉｔ１を発現する細胞へと分化させるステップとを含む、請求項８から１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
Ｐｉｔ１を発現する前記細胞の、ＧＨＲＨＲｌｏｗ細胞への分化が、Ｐｉｔ１を発現する細胞を、ＧＨ誘導剤の第１の組合せと接触させることを含み、必要に応じて、ＧＨ誘導剤の前記第１の組合せが、レチノイン酸（ＲＡ）、コルチコステロイド、甲状腺ホルモン、ＧＨＲＨシグナル伝達のアゴニスト、ＥＲアゴニスト、およびＧｈｒｅｌｉｎシグナル伝達経路のアゴニストからなる群から選択され、さらに必要に応じて、
（ａ）Ｈ誘導剤の前記第１の組合せが、レチノイン酸（ＲＡ）、コルチコステロイド、甲状腺ホルモン、およびＧＨＲＨシグナル伝達のアゴニストを含み、必要に応じて、ＧＨ誘導剤の前記第１の組合せが、ＲＡ、デキサメタゾン、Ｔ３、およびＧＨＲＨを含む、
（ｂ）ＧＨ誘導剤の前記第１の組合せが、レチノイン酸（ＲＡ）、コルチコステロイド、甲状腺ホルモン、２種のＧＨＲＨシグナル伝達のアゴニスト、およびＥＲアゴニストを含み、必要に応じて、ＧＨ誘導剤の前記第１の組合せが、ＲＡ、デキサメタゾン、Ｔ３、ＧＨＲＨ、ｃＡＭＰ、およびＤＰＮを含み、または
（ｃ）ＧＨ誘導剤の前記第１の組合せが、レチノイン酸（ＲＡ）、コルチコステロイド、甲状腺ホルモン、ＧＨＲＨシグナル伝達のアゴニスト、ＥＲアゴニスト、およびＧｈｒｅｌｉｎシグナル伝達経路のアゴニストを含み、必要に応じて、ＧＨ誘導剤の前記第１の組合せが、ＲＡ、デキサメタゾン、Ｔ３、ＧＨＲＨ、ＤＰＮ、およびＧｈｒｅｌｉｎを含む、
請求項１４または１５に記載の方法。
【請求項１８】
Ｐｉｔ１を発現する前記細胞を、少なくとも約３日間、約５日間、または約２週間、ＧＨ誘導剤の前記第１の組合せと接触させて、少なくとも約５０％のＧＨＲＨＲｌｏｗ細胞を含む細胞集団を得るステップを含む、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記ＧＨＲＨＲｌｏｗ細胞のＧＨＲＨＲｈｉｇｈ細胞への分化が、前記ＧＨＲＨｌｏｗ細胞を、ＧＨ誘導剤の第２の組合せと接触させることを含み、必要に応じて、ＧＨ誘導剤の前記第２の組合せが、レチノイン酸（ＲＡ）、コルチコステロイド、甲状腺ホルモン、ＧＨＲＨシグナル伝達のアゴニスト、ＥＲアゴニスト、インターロイキン、およびＧｈｒｅｌｉｎシグナル伝達経路のアゴニストからなる群から選択され、さらに必要に応じて、
（ａ）ＧＨ誘導剤の前記第２の組合せが、レチノイン酸（ＲＡ）、コルチコステロイド、甲状腺ホルモン、およびＧＨＲＨシグナル伝達のアゴニストを含み、さらに必要に応じて、ＧＨ誘導剤の前記第２の組合せが、ＲＡ、デキサメタゾン、Ｔ３、およびＧＨＲＨを含み、
（ｂ）ＧＨ誘導剤の前記第２の組合せが、レチノイン酸（ＲＡ）、コルチコステロイド、甲状腺ホルモン、２種のＧＨＲＨシグナル伝達のアゴニスト、およびＥＲアゴニストを含み、さらに必要に応じて、ＧＨ誘導剤の前記第２の組合せが、ＲＡ、デキサメタゾン、Ｔ３、ＧＨＲＨ、ｃＡＭＰ、およびＤＰＮを含み、または
（ｃ）ＧＨ誘導剤の前記第２の組合せが、コルチコステロイド、甲状腺ホルモン、ＧＨＲＨシグナル伝達のアゴニスト、ＥＲアゴニスト、インターロイキン、およびＧｈｒｅｌｉｎシグナル伝達経路のアゴニストを含み、さらに必要に応じて、ＧＨ誘導剤の前記第２の組合せが、デキサメタゾン、Ｔ３、ＧＨＲＨ、ＩＬ−６、Ｇｈｒｅｌｉｎ、およびＤＰＮを含む、
請求項１４または１５に記載の方法。
【請求項２０】
前記ＧＨＲＨＲｌｏｗ細胞を、少なくとも約５日間、約１０日間、または約４週間、ＧＨ誘導剤の前記第２の組合せと接触させて、少なくとも約５０％のＧＨＲＨＲｈｉｇｈ細胞を含む細胞集団を得るステップを含む、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記少なくとも１つの下垂体前駆体マーカーが、ＳＩＸ１、ＬＨＸ３、ＬＨＸ４、ＰＩＴＸ１、ＰＩＴＸ２、ＨＥＳＸ１、ＰＲＯＰ１、ＳＩＸ６、ＴＢＸ１９、ＰＡＸ６、ＧＡＴＡ２、ＳＦ１、およびそれらの組合せからなる群から選択される、請求項１から３、６、７および９から２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
前記少なくとも１つの背方化剤が、ＦＧＦシグナル伝達の少なくとも１つの活性化剤を含み、請求項１から２１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
ＦＧＦシグナル伝達の前記少なくとも１つの活性化剤が、ＦＧＦ１、ＦＧＦ２、ＦＧＦ３、ＦＧＦ４、ＦＧＦ７、ＦＧＦ８、ＦＧＦ１０、ＦＧＦ１８、その誘導体、およびそれらの混合物からなる群から選択され、必要に応じて、ＦＧＦシグナル伝達の前記少なくとも１つの活性化剤が、ＦＧＦ８を含み、必要に応じて、ＦＧＦシグナル伝達の前記少なくとも１つの活性化剤が、（ａ）ＦＧＦ８およびＦＧＦ１０、ならびに／またはＦＧＦ８、ＦＧＦ１０、およびＦＧＦ１８を含む、請求項４、５および８から２２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２４】
前記少なくとも１つの腹方化剤が、少なくとも１つのＢＭＰ分子を含む、請求項１から２３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２５】
前記少なくとも１つのＢＭＰ分子が、ＢＭＰ１、ＢＭＰ２、ＢＭＰ３、ＢＭＰ４、ＢＭＰ５、ＢＭＰ６、ＢＭＰ７、ＢＭＰ８ａ、ＢＭＰ８ｂ、ＢＭＰ１０、ＢＭＰ１１、ＢＭＰ１５、その誘導体、およびそれらの混合物からなる群から選択され、必要に応じて、前記少なくとも１つのＢＭＰ分子が、ＢＭＰ２またはＢＭＰ４を含む、請求項４、５および８から２４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２６】
前記少なくとも１つのＷｎｔ活性化剤が、ＣＨＩＲ９９０２１、Ｗｎｔ−１、ＷＮＴ３Ａ、Ｗｎｔ４、Ｗｎｔ５ａ、ＷＡＹ−３１６６０６、ＩＱ１、ＱＳ１１、ＳＢ−２１６７６３、ＢＩＯ（６−ブロモインジルビン−３’−オキシム）、ＬＹ２０９０３１４、ＤＣＡ、２−アミノ−４−［３，４−（メチレンジオキシ）ベンジル−アミノ］−６−（３−メトキシフェニル）ピリミジン、（ヘテロ）アリールピリミジン、その誘導体、およびそれらの組合せからなる群から選択され、必要に応じて、前記少なくとも１つのＷｎｔ活性化剤が、ＣＨＩＲ９９０２１を含む、請求項１から２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２７】
前記少なくとも１つのＧＨ誘導剤が、レチノイン酸（ＲＡ）、コルチコステロイド、甲状腺ホルモン、ＥＲアゴニスト、ＧＨＲＨシグナル伝達経路のアゴニスト、Ｇｈｒｅｌｉｎシグナル伝達経路のアゴニスト、インターロイキン、その誘導体、およびそれらの混合物からなる群から選択される、請求項１から５および１７から２６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２８】
（ａ）前記コルチコステロイドが、デキサメタゾン、コルチゾン、ヒドロコルチゾン、その誘導体、およびそれらの混合物からなる群から選択され、必要に応じて、前記コルチコステロイドが、デキサメタゾンであり、
（ｂ）前記甲状腺ホルモンが、Ｔ３、Ｔ４、その誘導体、およびそれらの混合物からなる群から選択され、必要に応じて、前記甲状腺ホルモンが、Ｔ３であり、
（ｃ）前記ＧＨＲＨシグナル伝達経路のアゴニストが、ＧＨＲＨ、ｃ−ＡＭＰ（例えば、ジブチリル−ｃＡＭＰ）、ＰＫＡ、ＣＲＥＢ、ＭＡＰＫ活性化剤、その誘導体、およびそれらの混合物からなる群から選択され、必要に応じて、前記ＧＨＲＨシグナル伝達経路のアゴニストが、ＧＨＲＨ、ｃ−ＡＭＰ、およびそれらの組合せからなる群から選択され、
（ｄ）前記Ｇｈｒｅｌｉｎシグナル伝達経路のアゴニストが、Ｇｈｒｅｌｉｎ、ＧＨＳＲアゴニスト、その誘導体およびそれらの混合物からなる群から選択され、ならびに／または
（ｅ）前記インターロイキンが、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、およびそれらの組合せからなる群から選択され、必要に応じて、前記インターロイキンが、ＩＬ−１、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、およびそれらの組合せからなる群から選択され、必要に応じて、前記インターロイキンが、ＩＬ−６である、
請求項１７から２７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２９】
前記少なくとも１つのＥＲアゴニストが、ジアリールプロピオニトリル（ＤＰＮ）、エストラジオール（Ｅ２）、プロピルピラゾール−トリオール（ＰＰＴ）、その誘導体、およびそれらの混合物からなる群から選択され、必要に応じて、前記少なくとも１つのＥＲアゴニストが、ＤＰＮを含む、請求項１０から２８に記載の方法。
【請求項３０】
（ａ）ＴＧＦβ／Ａｃｔｉｖｉｎ−Ｎｏｄａｌシグナル伝達の前記少なくとも１つの阻害剤が、ＳＢ４３１５４２、その誘導体、およびそれらの混合物からなる群から選択され、
（ｂ）ＳＨＨシグナル伝達の前記少なくとも１つの活性化剤が、ＳＨＨ、Ｃ２５ＩＩおよびパルモルファミンなどのスムーズンド（ＳＭＯ）受容体小分子アゴニスト、ＳＡＧ（例えば、Ｓｔａｎｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ，  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｓｙｓｔ．  ２０１０  Ｊａｎ；６（１）：４４−５４に開示されているような）、その誘導体、およびそれらの混合物からなる群から選択され、
（ｃ）ＳＨＨシグナル伝達の前記少なくとも１つの活性化剤が、ＳＨＨを含み、ならびに／または
（ｄ）ＳＨＨシグナル伝達の前記少なくとも１つの活性化剤が、ＳＡＧを含む、
請求項４、５および８から２９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３１】
ＳＭＡＤシグナル伝達の前記少なくとも１つの阻害剤が、ＬＤＮ１９３１８９、Ｎｏｇｇｉｎ、Ｄｏｒｓｏｍｏｒｐｈｉｎ、Ｋ０２２８８、ＤＭＨ１、ＭＬ３４７、ＬＤＮ２１２８５４、その誘導体、およびそれらの混合物からなる群から選択され、必要に応じて、ＳＭＡＤシグナル伝達の前記少なくとも１つの阻害剤が、ＬＤＮ１９３１８９を含む、請求項１３から３０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３２】
前記細胞を、約１０ｎｇ／ｍＬから２００ｎｇ／ｍＬの間の濃度の前記少なくとも１つの背方化剤と接触させ、必要に応じて、前記細胞を、約１ｎｇ／ｍＬから３０ｎｇ／ｍＬの間の濃度の前記１つまたは複数の腹方化剤と接触させる、請求項１から３１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３３】
（ａ）前記細胞を、約１０ｎｇ／ｍｌから２００ｎｇ／ｍＬの間の濃度のＦＧＦシグナル伝達の前記少なくとも１つの活性化剤と接触させ、
（ｂ）前記細胞を、約０．１ｎｇ／ｍｌから１０ｎｇ／ｍｌの間の濃度のＢＭＰ分子の前記少なくとも１つの活性化剤と接触させ、ならびに／または
（ｃ）前記細胞を、約５０ｎｇ／ｍｌから２００ｎｇ／ｍｌの間、または約５０ｎＭから２００ｎＭの間の濃度のＳＨＨシグナル伝達の前記少なくとも１つの活性化剤と接触させる、
請求項４、５および８から３２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３４】
（ａ）前記細胞を、約１μＭから２０μＭの間の濃度のＴＧＦβ／Ａｃｔｉｖｉｎ−Ｎｏｄａｌシグナル伝達の前記少なくとも１つの阻害剤と接触させ、および／または
（ｂ）前記細胞を、約１μＭから１０μＭの濃度の前記少なくとも１つのＷｎｔ活性化剤と接触させる、
請求項１から３３いずれか一項に記載の方法。
【請求項３５】
前記細胞を、約０．１ｎＭから２０ｎＭの間の濃度の前記少なくとも１つのＥＲアゴニストと接触させる、請求項１０から３４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３６】
（ａ）前記細胞を、約０．１μＭから１μＭの濃度のＲＡと接触させ、
（ｂ）前記細胞を、約１ｎＭから２０ｎＭの間の濃度の少なくとも１つの甲状腺ホルモンと接触させ、
（ｃ）前記細胞を、約０．１μＭから１０μＭの濃度の少なくとも１つのコルチコステロイドと接触させ、
（ｄ）前記細胞を、約０．１μＭから１０μＭまたは約０．１μＭ未満、または１０ｎＭの濃度の少なくとも１つのＧＨＲＨシグナル伝達経路のアゴニストと接触させ、
（ｅ）前記細胞を、約１ｎＭから５０ｎＭの間の濃度の少なくとも１つのＧｈｒｅｌｉｎシグナル伝達経路のアゴニストと接触させ、
（ｆ）前記細胞を、約１ｎｇ／ｍｌから５０ｎｇ／ｍｌの間の濃度の少なくとも１つのインターロイキンと接触させ、および／または
（ｇ）前記細胞を、約１００ｎＭから３００ｎＭの間の濃度のＳＭＡＤシグナル伝達の前記少なくとも１つの阻害剤と接触させる、
請求項１７から３５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３７】
成長ホルモンを産生することが可能であるｉｎ  ｖｉｔｒｏ分化細胞（ＧＨ産生成長ホルモン産生細胞）の細胞集団であって、前記ｉｎ  ｖｉｔｒｏ分化細胞が、（ａ）請求項４、５および８から３６のいずれか一項に記載の方法に従って、幹細胞から、または（ｂ）請求項１から３、６、７および９から３６のいずれか一項に記載の方法に従って、下垂体前駆体から生じる、細胞集団。
【請求項３８】
請求項３７に記載の細胞集団を含む組成物。
【請求項３９】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏ分化細胞の集団を含む組成物であって、前記分化細胞の少なくとも約５０％が、成長ホルモンを産生することが可能（ＧＨ産生成長ホルモン産生細胞）であり、前記分化細胞の約２５％未満が、プロラクチン産生細胞マーカー、甲状腺刺激ホルモン産生細胞マーカー、下垂体前駆体マーカー、Ｐｉｔ１、幹細胞マーカー、ＮＮＥマーカー、神経堤（ＮＣ）系統マーカー、および非下垂体プラコードマーカーからなる群から選択される少なくとも１つのマーカーを発現し、必要に応じて、前記非下垂体プラコードマーカーが、頭蓋プラコードマーカー、上鰓プラコードマーカー、三叉神経プラコードマーカー、および耳プラコードマーカーからなる群から選択される、組成物。
【請求項４０】
（ａ）少なくとも１つの背方化剤；
（ｂ）少なくとも１つの腹方化剤；
（ｃ）Ｗｉｎｇｌｅｓｓ（Ｗｎｔ）シグナル伝達の少なくとも１つの活性化剤（Ｗｎｔ活性化剤）；および
（ｄ）少なくとも１つの成長ホルモン（ＧＨ）誘導剤、ならびに、必要に応じて、
（ｅ）少なくとも１つのＥＲアゴニスト
を含む、下垂体前駆体のＧＨ産生成長ホルモン産生細胞への分化を誘導するためのキット。
【請求項４１】
（ａ）少なくとも１つのＢＭＰ分子；
（ｂ）ＴＧＦβ／Ａｃｔｉｖｉｎ−Ｎｏｄａｌシグナル伝達の少なくとも１つの阻害剤；
（ｃ）ＦＧＦシグナル伝達の少なくとも１つの活性化剤；
（ｄ）ＳＨＨシグナル伝達の少なくとも１つの活性化剤
（ｅ）少なくとも１つの背方化剤；
（ｆ）少なくとも１つの腹方化剤；
（ｇ）Ｗｉｎｇｌｅｓｓ（Ｗｎｔ）シグナル伝達の少なくとも１つの活性化剤（Ｗｎｔ活性化剤）；および
（ｈ）少なくとも１つの成長ホルモン（ＧＨ）誘導剤、ならびに、必要に応じて、
（ｉ）少なくとも１つのＥＲアゴニスト
を含む、幹細胞のＧＨ産生成長ホルモン産生細胞への分化を誘導するためのキット。
【請求項４２】
療法における使用のための、請求項３８または３９に記載の組成物。
【請求項４３】
対象におけるＧＨの発現および／もしくは分泌を増加させる、ＧＨ、インスリン様成長因子１（ＩＧＦ−１）、およびＩＧＦ−２のうちの少なくとも１つの動的放出を回復させる、ならびに／またはＧＨ欠損症を処置することにおける使用のための、請求項３８または３９に記載の組成物。
【請求項４４】
ＧＨ欠損症に関連する少なくとも１つの細胞表現型を克服することが可能である治療用化合物をスクリーニングするための方法であって、
（ａ）請求項３７に記載のｉｎ  ｖｉｔｒｏで分化したＧＨ産生成長ホルモン産生細胞の細胞集団を、試験化合物と接触させるステップと；（ｂ）前記ＧＨ産生成長ホルモン産生細胞の機能的活性および／または遺伝子発現を測定するステップであって、前記ＧＨ産生成長ホルモン産生細胞が、ＧＨ欠損症を有する対象の幹細胞またはＧＨ欠損症を有する対象の少なくとも１つの下垂体前駆体マーカーを発現する細胞から得られるステップとを含む方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０３５９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０３５９】
特許、特許出願、刊行物、製品説明およびプロトコールが本出願全体を通して引用されており、その開示は、すべての目的のために、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
本発明は、例えば、以下の項目を提供する。
(項目１)
下垂体前駆体の分化を誘導するためのｉｎ  ｖｉｔｒｏ方法であって、１つまたは複数の下垂体前駆体マーカーを発現する細胞を、１つまたは複数の背方化剤および１つまたは複数の腹方化剤と接触させるステップと；前記細胞を、Ｗｉｎｇｌｅｓｓ（Ｗｎｔ）シグナル伝達の１つまたは複数の活性化剤（Ｗｎｔ活性化剤）および成長ホルモンの発現を誘導することが可能である１つまたは複数の分子（ＧＨ誘導剤）と接触させて、分化細胞の細胞集団を得るステップであって、分化細胞のうちの少なくとも約５０％が、成長ホルモンを産生することが可能である成長ホルモン産生細胞（ＧＨ産生成長ホルモン産生細胞）であるステップとを含む、方法。
(項目２)
前記ＧＨ産生成長ホルモン産生細胞が、低レベルのＧＨＲＨＲ免疫反応性を発現する細胞（ＧＨＲＨＲｌｏｗ細胞）、高レベルのＧＨＲＨＲ免疫反応性を発現する細胞（ＧＨＲＨＲｈｉｇｈ細胞）、およびその組合せを含む、項目１に記載の方法。
(項目３)
１つまたは複数の下垂体前駆体マーカーを発現する前記細胞の、前記１つまたは複数の背方化剤との最初の接触から少なくとも約１０日で、少なくとも約５０％のＧＨＲＨＲｌｏｗ細胞を含む細胞集団を得るステップを含む、項目２に記載の方法。
(項目４)
１つまたは複数の下垂体前駆体マーカーを発現する前記細胞の、前記１つまたは複数の背方化剤との最初の接触から約２週間または３週間で、少なくとも約５０％のＧＨＲＨＲｌｏｗ細胞を含む細胞集団を得るステップを含む、項目２または３に記載の方法。
(項目５)
１つまたは複数の下垂体前駆体マーカーを発現する前記細胞の、前記１つまたは複数の背方化剤との最初の接触から約１５日で、少なくとも約５０％のＧＨＲＨＲｌｏｗ細胞を含む細胞集団を得るステップを含む、項目２または３に記載の方法。
(項目６)
１つまたは複数の下垂体前駆体マーカーを発現する前記細胞の、前記１つまたは複数の背方化剤との最初の接触から少なくとも約１０日で、少なくとも約５０％のＧＨＲＨＲｈｉｇｈ細胞を含む細胞集団を得るステップを含む、項目２に記載の方法。
(項目７)
１つまたは複数の下垂体前駆体マーカーを発現する前記細胞の、前記１つまたは複数の背方化剤との最初の接触から約３週間で、少なくとも約５０％のＧＨＲＨＲｈｉｇｈ細胞を含む細胞集団を得るステップを含む、項目２から６のいずれか一項に記載の方法。
(項目８)
１つまたは複数の下垂体前駆体マーカーを発現する前記細胞の、前記１つまたは複数の背方化剤との最初の接触から約２５日で、少なくとも約５０％のＧＨＲＨＲｈｉｇｈ細胞を含む細胞集団を得るステップを含む、項目２から７のいずれか一項に記載の方法。
(項目９)
１つまたは複数の下垂体前駆体マーカーを発現する前記細胞の、前記１つまたは複数の背方化剤との最初の接触から約３５日で、少なくとも約５０％のＧＨＲＨＲｈｉｇｈ細胞を含む細胞集団を得るステップを含む項目２から７のいずれか一項に記載の方法。
(項目１０)
幹細胞の分化を誘導するためのｉｎ  ｖｉｔｒｏ方法であって、幹細胞を、１つまたは複数のＢＭＰ分子およびＴＧＦβ／Ａｃｔｉｖｉｎ−Ｎｏｄａｌシグナル伝達の１つまたは複数の阻害剤と接触させるステップと；前記細胞を、ＳＨＨシグナル伝達の１つまたは複数の活性化剤、ＦＧＦシグナル伝達の１つまたは複数の活性化剤、１つまたは複数の背方化剤、１つまたは複数の腹方化剤、Ｗｉｎｇｌｅｓｓ（Ｗｎｔ）シグナル伝達の１つまたは複数の活性化剤（Ｗｎｔ活性化剤）および１つまたは複数の成長ホルモン（ＧＨ）誘導剤と接触させて、分化細胞の細胞集団を得るステップであって、分化細胞の少なくとも約５０％が、成長ホルモンを産生することが可能である成長ホルモン産生細胞（ＧＨ産生成長ホルモン産生細胞）であるステップとを含む、方法。
(項目１１)
前記ＧＨ産生成長ホルモン産生細胞が、低レベルのＧＨＲＨＲ免疫反応性を発現する細胞（ＧＨＲＨＲｌｏｗ細胞）、高レベルのＧＨＲＨＲ免疫反応性を発現する細胞（ＧＨＲＨＲｈｉｇｈ細胞）、およびその組合せを含む、項目１０に記載の方法。
(項目１２)
前記幹細胞の、ＴＧＦβ／Ａｃｔｉｖｉｎ−Ｎｏｄａｌシグナル伝達の前記１つまたは複数の阻害剤との最初の接触から少なくとも約３週間で、少なくとも約５０％のＧＨＲＨＲｌｏｗ細胞を含む細胞集団を得るステップを含む、項目１１に記載の方法。
(項目１３)
前記幹細胞の、ＴＧＦβ／Ａｃｔｉｖｉｎ−Ｎｏｄａｌシグナル伝達の前記１つまたは複数の阻害剤との最初の接触から約２４日で、少なくとも約５０％のＧＨＲＨＲｌｏｗ細胞を含む細胞集団を得るステップを含む、項目１１または１２に記載の方法。
(項目１４)
前記幹細胞の、ＴＧＦβ／Ａｃｔｉｖｉｎ−Ｎｏｄａｌシグナル伝達の前記１つまたは複数の阻害剤との最初の接触から約４週間で、少なくとも約５０％のＧＨＲＨＲｌｏｗ細胞を含む細胞集団を得るステップを含む、項目１１または１２に記載の方法。
(項目１５)
前記幹細胞の、ＴＧＦβ／Ａｃｔｉｖｉｎ−Ｎｏｄａｌシグナル伝達の前記１つまたは複数の阻害剤との最初の接触から少なくとも約４週間で、少なくとも約５０％のＧＨＲＨＲｈｉｇｈ細胞を含む細胞集団を得るステップを含む、項目１１から１４のいずれか一項に記載の方法。
(項目１６)
前記幹細胞の、ＴＧＦβ／Ａｃｔｉｖｉｎ−Ｎｏｄａｌシグナル伝達の前記１つまたは複数の阻害剤との最初の接触から約６週間で、少なくとも約５０％のＧＨＲＨＲｈｉｇｈ細胞を含む細胞集団を得るステップを含む、項目１２から１５のいずれか一項に記載の方法。
(項目１７)
前記幹細胞の、ＴＧＦβ／Ａｃｔｉｖｉｎ−Ｎｏｄａｌシグナル伝達の前記１つまたは複数の阻害剤との最初の接触から約３０日で、少なくとも約５０％のＧＨＲＨＲｈｉｇｈ細胞を含む細胞集団を得るステップを含む、項目１２から１５のいずれか一項に記載の方法。
(項目１８)
前記幹細胞の、ＴＧＦβ／Ａｃｔｉｖｉｎ−Ｎｏｄａｌシグナル伝達の前記１つまたは複数の阻害剤との最初の接触から３３日で、少なくとも約５０％のＧＨＲＨＲｈｉｇｈ細胞を含む細胞集団を得るステップを含む、項目１２から１５のいずれか一項に記載の方法。
(項目１９)
下垂体前駆体の分化を誘導するためのｉｎ  ｖｉｔｒｏ方法であって、１つまたは複数の下垂体前駆体マーカーを発現する細胞を、１つまたは複数の背方化剤および１つまたは複数の腹方化剤と接触させるステップと；前記細胞を、Ｗｉｎｇｌｅｓｓ（Ｗｎｔ）シグナル伝達の１つまたは複数の活性化剤と接触させて、分化細胞の細胞集団を得るステップであって、分化細胞の少なくとも約５０％が、Ｐｉｔ１を発現するステップとを含む、方法。
(項目２０)
１つまたは複数の下垂体前駆体マーカーを発現する前記細胞の、前記１つまたは複数の背方化剤との最初の接触から少なくとも約５日で、前記細胞集団を得るステップを含む、項目１９に記載の方法。
(項目２１)
１つまたは複数の下垂体前駆体マーカーを発現する前記細胞の、前記１つまたは複数の背方化剤との最初の接触から約７日または約１１日で、前記細胞集団を得るステップを含む、項目１９または２０に記載の方法。
(項目２２)
幹細胞の分化を誘導するためのｉｎ  ｖｉｔｒｏ方法であって、幹細胞を、１つまたは複数のＢＭＰ分子およびＴＧＦβ／Ａｃｔｉｖｉｎ−Ｎｏｄａｌシグナル伝達の１つまたは複数の阻害剤と接触させるステップと；前記細胞を、ＳＨＨシグナル伝達の１つまたは複数の活性化剤、ＦＧＦシグナル伝達の１つまたは複数の活性化剤、１つまたは複数の背方化剤、１つまたは複数の腹方化剤、およびＷｉｎｇｌｅｓｓ（Ｗｎｔ）シグナル伝達の１つまたは複数の活性化剤（Ｗｎｔ活性化剤）と接触させて、分化細胞の細胞集団を得るステップであって、分化細胞の少なくとも約５０％が、Ｐｉｔ１を発現するステップとを含む、方法。
(項目２３)
前記幹細胞の、ＴＧＦβ／Ａｃｔｉｖｉｎ−Ｎｏｄａｌシグナル伝達の前記１つまたは複数の阻害剤との最初の接触から少なくとも約１０日で、前記細胞集団を得るステップを含む、項目２２に記載の方法。
(項目２４)
前記幹細胞の、ＴＧＦβ／Ａｃｔｉｖｉｎ−Ｎｏｄａｌシグナル伝達の前記１つまたは複数の阻害剤との最初の接触から少なくとも約１５日で、前記細胞集団を得るステップを含む、項目２２または２３に記載の方法。
(項目２５)
前記幹細胞の、ＴＧＦβ／Ａｃｔｉｖｉｎ−Ｎｏｄａｌシグナル伝達の前記１つまたは複数の阻害剤との最初の接触から約１５日で、前記細胞集団を得るステップを含む、項目２２から２４のいずれか一項に記載の方法。
(項目２６)
前記幹細胞の、ＴＧＦβ／Ａｃｔｉｖｉｎ−Ｎｏｄａｌシグナル伝達の前記１つまたは複数の阻害剤との最初の接触から約２０日で、前記細胞集団を得るステップを含む、項目２２から２４のいずれか一項に記載の方法。
(項目２７)
前記細胞の、前記１つまたは複数のＷｎｔ活性化剤との最初の接触が、１つまたは複数の下垂体前駆体マーカーを発現する前記細胞の、前記１つまたは複数の背方化剤との最初の接触から５日以内である、項目１から２６のいずれか一項に記載の方法。
(項目２８)
前記細胞の、前記１つまたは複数のＷｎｔ活性化剤との最初の接触が、１つまたは複数の下垂体前駆体マーカーを発現する前記細胞の、前記１つまたは複数の背方化剤との最初の接触と同じ日に起こる、項目１から２７のいずれか一項に記載の方法。
(項目２９)
前記細胞の、前記１つまたは複数のＷｎｔ活性化剤との最初の接触が、１つまたは複数の下垂体前駆体マーカーを発現する前記細胞の、前記１つまたは複数の背方化剤との最初の接触から約４日である、項目１から２８のいずれか一項に記載の方法。
(項目３０)
前記細胞を、少なくとも約５日間および／または最長約１５日間、前記１つまたは複数のＷｎｔ活性化剤と接触させるステップを含む、項目１から２９のいずれか一項に記載の方法。
(項目３１)
前記細胞を、少なくとも約７日間、前記１つまたは複数のＷｎｔ活性化剤と接触させるステップを含む、項目１から３０のいずれか一項に記載の方法。
(項目３２)
前記細胞を、少なくとも約３日間および／または最長約１０日間、前記１つまたは複数の背方化剤と接触させるステップを含む、項目１から３１のいずれか一項に記載の方法。
(項目３３)
前記細胞を、約４日間または約７日間、前記１つまたは複数の背方化剤と接触させるステップを含む、項目１から３２のいずれか一項に記載の方法。
(項目３４)
前記細胞を、少なくとも約５日間および／または最長約１５日間、前記１つまたは複数の腹方化剤と接触させるステップを含む、項目１から３３のいずれか一項に記載の方法。
(項目３５)
前記細胞を、少なくとも約７日間または約１１日間、前記１つまたは複数の腹方化剤と接触させるステップを含む、項目１から３４のいずれか一項に記載の方法。
(項目３６)
１つまたは複数の下垂体前駆体マーカーを発現する前記細胞を、ＴＧＦβ／Ａｃｔｉｖｉｎ−Ｎｏｄａｌシグナル伝達の１つまたは複数の阻害剤と接触させるステップをさらに含む、項目１から３５のいずれか一項に記載の方法。
(項目３７)
前記細胞を、少なくとも約３日間および／または最長約１０日間、ＴＧＦβ／Ａｃｔｉｖｉｎ−Ｎｏｄａｌシグナル伝達の前記１つまたは複数の阻害剤と接触させるステップを含む、項目３６に記載の方法。
(項目３８)
前記細胞を、約４日間または約７日間、ＴＧＦβ／Ａｃｔｉｖｉｎ−Ｎｏｄａｌシグナル伝達の前記１つまたは複数の阻害剤と接触させるステップを含む、項目３６または３７に記載の方法。
(項目３９)
前記細胞を、前記１つまたは複数の背方化剤およびＴＧＦβ／Ａｃｔｉｖｉｎ−Ｎｏｄａｌシグナル伝達の前記１つまたは複数の阻害剤と、同時に接触させるステップを含む、項目３６から３８のいずれか一項に記載の方法。
(項目４０)
前記細胞を、１つまたは複数のエストロゲン受容体（ＥＲ）アゴニストと接触させるステップをさらに含む、項目１から３９のいずれか一項に記載の方法。
(項目４１)
前記細胞を、１つまたは複数のＥＲアゴニストおよび前記１つまたは複数のＷｎｔ活性化剤と、同時に接触させるステップを含む、項目４０に記載の方法。
(項目４２)
前記細胞の、前記１つまたは複数のＥＲアゴニストとの最初の接触が、１つまたは複数の下垂体前駆体マーカーを発現する前記細胞の、前記１つまたは複数の背方化剤との最初の接触から１０日以内である、項目４０または４１に記載の方法。
(項目４３)
前記細胞の、前記１つまたは複数のＥＲアゴニストとの最初の接触が、１つまたは複数の下垂体前駆体マーカーを発現する前記細胞の、前記１つまたは複数の背方化剤との最初の接触と同じ日に起こる、項目４０から４２のいずれか一項に記載の方法。
(項目４４)
前記細胞の、前記１つまたは複数のＥＲアゴニストとの最初の接触が、１つまたは複数の下垂体前駆体マーカーを発現する前記細胞の、前記１つまたは複数の背方化剤との最初の接触から約４日である、項目４０から４２のいずれか一項に記載の方法。
(項目４５)
前記細胞を、少なくとも約５日間および／または最長約１５日間、前記１つまたは複数のＥＲアゴニストと接触させるステップを含む、項目４０から４４のいずれか一項に記載の方法。
(項目４６)
前記細胞を、少なくとも約７日間または約８日間、前記１つまたは複数のＥＲアゴニストと接触させるステップを含む、項目４０から４５のいずれか一項に記載の方法。
(項目４７)
１つまたは複数の下垂体前駆体マーカーを発現する前記細胞が、幹細胞のｉｎ  ｖｉｔｒｏでの分化によって得られる、項目１から９、１９から２１、および２７から４５のいずれか一項に記載の方法。
(項目４８)
幹細胞の前記ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの分化が、幹細胞を、１つまたは複数のＢＭＰ分子およびＴＧＦβ／Ａｃｔｉｖｉｎ−Ｎｏｄａｌシグナル伝達の１つまたは複数の阻害剤と接触させるステップ、前記細胞を、ＳＨＨシグナル伝達の１つまたは複数の活性化剤およびＦＧＦシグナル伝達の１つ、２つ、またはそれより多い活性化剤と接触させるステップを含む、項目４７に記載の方法。
(項目４９)
前記幹細胞を、少なくとも約２日間および／または約４日以内、前記１つまたは複数のＢＭＰ分子と接触させる、項目１０から１８、２２から２６、４７、および４８のいずれか一項に記載の方法。
(項目５０)
前記幹細胞を、少なくとも約５日間、ＴＧＦβ／Ａｃｔｉｖｉｎ−Ｎｏｄａｌシグナル伝達の前記１つまたは複数の阻害剤と接触させる、項目１０から１８、２２から２６、および４７から４９のいずれか一項に記載の方法。
(項目５１)
前記幹細胞を、約８日間、ＴＧＦβ／Ａｃｔｉｖｉｎ−Ｎｏｄａｌシグナル伝達の前記１つまたは複数の阻害剤と接触させる、項目１０から１８、２２から２６、および４７から５０のいずれか一項に記載の方法。
(項目５２)
前記幹細胞を、少なくとも約２日間、ＳＨＨシグナル伝達の前記１つまたは複数の活性化剤、およびＦＧＦシグナル伝達の１つ、２つ、またはそれより多い活性化剤と接触させる、項目１０から１８、２２から２６、および４７から５１のいずれか一項に記載の方法。
(項目５３)
前記幹細胞を、約５日間、ＳＨＨシグナル伝達の前記１つまたは複数の活性化剤、およびＦＧＦシグナル伝達の１つ、２つ、またはそれより多い活性化剤と接触させる、項目１０から１８、２２から２６、および４７から５２のいずれか一項に記載の方法。
(項目５４)
幹細胞の前記ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの分化が、前記細胞を、ＳＭＡＤシグナル伝達の１つまたは複数の阻害剤と接触させるステップをさらに含む、項目１０から１８、２２から２６、および４７から５３のいずれか一項に記載の方法。
(項目５５)
前記幹細胞を、少なくとも約２日間、ＳＭＡＤシグナル伝達の前記１つまたは複数の阻害剤と接触させる、項目５４に記載の方法。
(項目５６)
前記幹細胞を、約５日間、ＳＭＡＤシグナル伝達の前記１つまたは複数の阻害剤と接触させる、項目５４または５５に記載の方法。
(項目５７)
１つまたは複数の下垂体前駆体マーカーを発現する前記細胞を、Ｐｉｔ１を発現する細胞へと分化させるステップと、Ｐｉｔ１を発現する前記細胞を、ＧＨＲＨＲｌｏｗ細胞へと分化させるステップと、前記ＧＨＲＨＲｌｏｗ細胞を、ＧＨＲＨＲｈｉｇｈ細胞へと分化させるステップとを含む、項目１から９および２７から５６のいずれか一項に記載の方法。
(項目５８)
前記幹細胞を、１つまたは複数の下垂体前駆体マーカーを発現する細胞へと分化させるステップと、１つまたは複数の下垂体前駆体マーカーを発現する前記細胞を、Ｐｉｔ１を発現する細胞へと分化させるステップと、Ｐｉｔ１を発現する前記細胞を、ＧＨＲＨＲｌｏｗ細胞へと分化させるステップと、前記ＧＨＲＨＲｌｏｗ細胞を、ＧＨＲＨＲｈｉｇｈ細胞へと分化させるステップとを含む、項目１０から１８および２７から５６のいずれか一項に記載の方法。
(項目５９)
前記幹細胞を、１つまたは複数の下垂体前駆体マーカーを発現する細胞へと分化させるステップと、１つまたは複数の下垂体前駆体マーカーを発現する前記細胞を、Ｐｉｔ１を発現する細胞へと分化させるステップとを含む、項目２２から５６のいずれか一項に記載の方法。
(項目６０)
Ｐｉｔ１を発現する前記細胞の、ＧＨＲＨＲｌｏｗ細胞への分化が、Ｐｉｔ１を発現する細胞を、ＧＨ誘導剤の第１の組合せと接触させることを含む、項目５７または５８に記載の方法。
(項目６１)
ＧＨ誘導剤の前記第１の組合せが、レチノイン酸（ＲＡ）、コルチコステロイド、甲状腺ホルモン、ＧＨＲＨシグナル伝達のアゴニスト、ＥＲアゴニスト、およびＧｈｒｅｌｉｎシグナル伝達経路のアゴニストからなる群から選択される、項目６０に記載の方法。
(項目６２)
ＧＨ誘導剤の前記第１の組合せが、レチノイン酸（ＲＡ）、コルチコステロイド、甲状腺ホルモン、およびＧＨＲＨシグナル伝達のアゴニストを含む、項目６０または６１に記載の方法。
(項目６３)
ＧＨ誘導剤の前記第１の組合せが、ＲＡ、デキサメタゾン、Ｔ３、およびＧＨＲＨを含む、項目６２に記載の方法。
(項目６４)
ＧＨ誘導剤の前記第１の組合せが、レチノイン酸（ＲＡ）、コルチコステロイド、甲状腺ホルモン、２種のＧＨＲＨシグナル伝達のアゴニスト、およびＥＲアゴニストを含む、項目６０または６１に記載の方法。
(項目６５)
ＧＨ誘導剤の前記第１の組合せが、ＲＡ、デキサメタゾン、Ｔ３、ＧＨＲＨ、ｃＡＭＰ、およびＤＰＮを含む、項目６４に記載の方法。
(項目６６)
ＧＨ誘導剤の前記第１の組合せが、レチノイン酸（ＲＡ）、コルチコステロイド、甲状腺ホルモン、ＧＨＲＨシグナル伝達のアゴニスト、ＥＲアゴニスト、およびＧｈｒｅｌｉｎシグナル伝達経路のアゴニストを含む、項目６０または６１に記載の方法。
(項目６７)
ＧＨ誘導剤の前記第１の組合せが、ＲＡ、デキサメタゾン、Ｔ３、ＧＨＲＨ、ＤＰＮ、およびＧｈｒｅｌｉｎを含む、項目６６に記載の方法。
(項目６８)
Ｐｉｔ１を発現する前記細胞を、少なくとも約３日間、ＧＨ誘導剤の前記第１の組合せと接触させて、少なくとも約５０％のＧＨＲＨＲｌｏｗ細胞を含む細胞集団を得るステップを含む、項目６０から６７のいずれか一項に記載の方法。
(項目６９)
Ｐｉｔ１を発現する前記細胞を、約５日間、ＧＨ誘導剤の前記第１の組合せと接触させて、少なくとも約５０％のＧＨＲＨＲｌｏｗ細胞を含む細胞集団を得るステップを含む、項目６０から６８のいずれか一項に記載の方法。
(項目７０)
Ｐｉｔ１を発現する前記細胞を、約２週間、ＧＨ誘導剤の前記第１の組合せと接触させて、少なくとも約５０％のＧＨＲＨＲｌｏｗ細胞を含む細胞集団を得るステップを含む、項目６０から６９のいずれか一項に記載の方法。
(項目７１)
前記ＧＨＲＨＲｌｏｗ細胞のＧＨＲＨＲｈｉｇｈ細胞への分化が、前記ＧＨＲＨｌｏｗ細胞を、ＧＨ誘導剤の第２の組合せと接触させることを含む、項目５７または５８に記載の方法。
(項目７２)
ＧＨ誘導剤の前記第２の組合せが、レチノイン酸（ＲＡ）、コルチコステロイド、甲状腺ホルモン、ＧＨＲＨシグナル伝達のアゴニスト、ＥＲアゴニスト、インターロイキン、およびＧｈｒｅｌｉｎシグナル伝達経路のアゴニストからなる群から選択される、項目７１に記載の方法。
(項目７３)
ＧＨ誘導剤の前記第２の組合せが、レチノイン酸（ＲＡ）、コルチコステロイド、甲状腺ホルモン、およびＧＨＲＨシグナル伝達のアゴニストを含む、項目７１または７２に記載の方法。
(項目７４)
ＧＨ誘導剤の前記第２の組合せが、ＲＡ、デキサメタゾン、Ｔ３、およびＧＨＲＨを含む、項目７３に記載の方法。
(項目７５)
ＧＨ誘導剤の前記第２の組合せが、レチノイン酸（ＲＡ）、コルチコステロイド、甲状腺ホルモン、２種のＧＨＲＨシグナル伝達のアゴニスト、およびＥＲアゴニストを含む、項目７１または７２に記載の方法。
(項目７６)
ＧＨ誘導剤の前記第２の組合せが、ＲＡ、デキサメタゾン、Ｔ３、ＧＨＲＨ、ｃＡＭＰ、およびＤＰＮを含む、項目７５に記載の方法。
(項目７７)
ＧＨ誘導剤の前記第２の組合せが、コルチコステロイド、甲状腺ホルモン、ＧＨＲＨシグナル伝達のアゴニスト、ＥＲアゴニスト、インターロイキン、およびＧｈｒｅｌｉｎシグナル伝達経路のアゴニストを含む、項目７１または７２に記載の方法。
(項目７８)
ＧＨ誘導剤の前記第２の組合せが、デキサメタゾン、Ｔ３、ＧＨＲＨ、ＩＬ−６、Ｇｈｒｅｌｉｎ、およびＤＰＮを含む、項目７７に記載の方法。
(項目７９)
前記ＧＨＲＨＲｌｏｗ細胞を、少なくとも約５日間、ＧＨ誘導剤の前記第２の組合せと接触させて、少なくとも約５０％のＧＨＲＨＲｈｉｇｈ細胞を含む細胞集団を得るステップを含む、項目７１から７８のいずれか一項に記載の方法。
(項目８０)
前記ＧＨＲＨＲｌｏｗ細胞を、約１０日間、ＧＨ誘導剤の前記第２の組合せと接触させて、少なくとも約５０％のＧＨＲＨＲｈｉｇｈ細胞を含む細胞集団を得るステップを含む、項目７１から７９のいずれか一項に記載の方法。
(項目８１)
前記ＧＨＲＨＲｌｏｗ細胞を、約４週間、ＧＨ誘導剤の前記第２の組合せと接触させて、少なくとも約５０％のＧＨＲＨＲｈｉｇｈ細胞を含む細胞集団を得るステップを含む、項目７１から８０のいずれか一項に記載の方法。
(項目８２)
前記１つまたは複数の下垂体前駆体マーカーが、ＳＩＸ１、ＬＨＸ３、ＬＨＸ４、ＰＩＴＸ１、ＰＩＴＸ２、ＨＥＳＸ１、ＰＲＯＰ１、ＳＩＸ６、ＴＢＸ１９、ＰＡＸ６、ＧＡＴＡ２、ＳＦ１、およびそれらの組合せからなる群から選択される、項目１から９、１９から２１、および２７から８１のいずれか一項に記載の方法。
(項目８３)
前記１つまたは複数の背方化剤が、ＦＧＦシグナル伝達の１つまたは複数の活性化剤を含み、項目１から８２のいずれか一項に記載の方法。
(項目８４)
ＦＧＦシグナル伝達の前記１つまたは複数の活性化剤が、ＦＧＦ１、ＦＧＦ２、ＦＧＦ３、ＦＧＦ４、ＦＧＦ７、ＦＧＦ８、ＦＧＦ１０、ＦＧＦ１８、その誘導体、およびそれらの混合物からなる群から選択される、項目１０から１８および２２から８３のいずれか一項に記載の方法。
(項目８５)
ＦＧＦシグナル伝達の前記１つまたは複数の活性化剤が、ＦＧＦ８を含む、項目１０から１８および２２から８４のいずれか一項に記載の方法。
(項目８６)
ＦＧＦシグナル伝達の前記１つまたは複数の活性化剤が、ＦＧＦ８およびＦＧＦ１０を含む、項目１０から１８、２２から８２、８４、および８５のいずれか一項に記載の方法。
(項目８７)
ＦＧＦシグナル伝達の前記１つまたは複数の活性化剤が、ＦＧＦ８、ＦＧＦ１０、およびＦＧＦ１８を含む、項目１０から１８、２２から８２、８４から８６のいずれか一項に記載の方法。
(項目８８)
前記１つまたは複数の腹方化剤が、１つまたは複数のＢＭＰ分子を含む、項目１から８７のいずれか一項に記載の方法。
(項目８９)
前記１つまたは複数のＢＭＰ分子が、ＢＭＰ１、ＢＭＰ２、ＢＭＰ３、ＢＭＰ４、ＢＭＰ５、ＢＭＰ６、ＢＭＰ７、ＢＭＰ８ａ、ＢＭＰ８ｂ、ＢＭＰ１０、ＢＭＰ１１、ＢＭＰ１５、その誘導体、およびそれらの混合物からなる群から選択される、項目１０から１８および２２から８８のいずれか一項に記載の方法。
(項目９０)
前記１つまたは複数のＢＭＰ分子が、ＢＭＰ２を含む、項目１０から１８および２２から８９のいずれか一項に記載の方法。
(項目９１)
前記１つまたは複数のＢＭＰ分子が、ＢＭ４を含む、項目１０から１８、２２から８７、８９、および９０のいずれか一項に記載の方法。
(項目９２)
前記１つまたは複数のＷｎｔ活性化剤が、ＣＨＩＲ９９０２１、Ｗｎｔ−１、ＷＮＴ３Ａ、Ｗｎｔ４、Ｗｎｔ５ａ、ＷＡＹ−３１６６０６、ＩＱ１、ＱＳ１１、ＳＢ−２１６７６３、ＢＩＯ（６−ブロモインジルビン−３’−オキシム）、ＬＹ２０９０３１４、ＤＣＡ、２−アミノ−４−［３，４−（メチレンジオキシ）ベンジル−アミノ］−６−（３−メトキシフェニル）ピリミジン、（ヘテロ）アリールピリミジン、その誘導体、およびそれらの組合せからなる群から選択される、項目１から９１のいずれか一項に記載の方法。
(項目９３)
前記１つまたは複数のＷｎｔ活性化剤が、ＣＨＩＲ９９０２１である、項目１から９２のいずれか一項に記載の方法。
(項目９４)
前記１つまたは複数のＧＨ誘導剤が、レチノイン酸（ＲＡ）、コルチコステロイド、甲状腺ホルモン、ＥＲアゴニスト、ＧＨＲＨシグナル伝達経路のアゴニスト、Ｇｈｒｅｌｉｎシグナル伝達経路のアゴニスト、インターロイキン、その誘導体、およびそれらの混合物からなる群から選択される、項目１から１８および６０から９３のいずれか一項に記載の方法。
(項目９５)
前記コルチコステロイドが、デキサメタゾン、コルチゾン、ヒドロコルチゾン、その誘導体、およびそれらの混合物からなる群から選択される、項目６１から９４のいずれか一項に記載の方法。
(項目９６)
前記コルチコステロイドが、デキサメタゾンである、項目６１から９５のいずれか一項に記載の方法。
(項目９７)
前記甲状腺ホルモンが、Ｔ３、Ｔ４、その誘導体、およびそれらの混合物からなる群から選択される、項目６１から９６のいずれか一項に記載の方法。
(項目９８)
前記甲状腺ホルモンが、Ｔ３である、項目６１から９７のいずれか一項に記載の方法。
(項目９９)
前記ＧＨＲＨシグナル伝達経路のアゴニストが、ＧＨＲＨ、ｃ−ＡＭＰ（例えば、ジブチリル−ｃＡＭＰ）、ＰＫＡ、ＣＲＥＢ、ＭＡＰＫ活性化剤、その誘導体、およびそれらの混合物からなる群から選択される、項目６１から９８のいずれか一項に記載の方法。
(項目１００)
前記ＧＨＲＨシグナル伝達経路のアゴニストが、ＧＨＲＨ、ｃ−ＡＭＰ、およびそれらの組合せからなる群から選択される、項目６１から９９のいずれか一項に記載の方法。
(項目１０１)
前記Ｇｈｒｅｌｉｎシグナル伝達経路のアゴニストが、Ｇｈｒｅｌｉｎ、ＧＨＳＲアゴニスト、その誘導体およびそれらの混合物からなる群から選択される、項目６１から１００のいずれか一項に記載の方法。
(項目１０２)
前記インターロイキンが、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、およびそれらの組合せからなる群から選択される、項目６１から１０１のいずれか一項に記載の方法。
(項目１０３)
前記インターロイキンが、ＩＬ−１、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、およびそれらの組合せからなる群から選択される、項目６１から１０２のいずれか一項に記載の方法。
(項目１０４)
前記インターロイキンが、ＩＬ−６である、項目６１から１０３のいずれか一項に記載の方法。
(項目１０５)
前記１つまたは複数のＥＲアゴニストが、ジアリールプロピオニトリル（ＤＰＮ）、エストラジオール（Ｅ２）、プロピルピラゾール−トリオール（ＰＰＴ）、その誘導体、およびそれらの混合物からなる群から選択される、項目４０から１０４に記載の方法。
(項目１０６)
前記１つまたは複数のＥＲアゴニストが、ＤＰＮを含む、項目４０から１０５のいずれか一項に記載の方法。
(項目１０７)
ＴＧＦβ／Ａｃｔｉｖｉｎ−Ｎｏｄａｌシグナル伝達の前記１つまたは複数の阻害剤が、ＳＢ４３１５４２、その誘導体、およびそれらの混合物からなる群から選択される、項目１０から１８および２２から１０６のいずれか一項に記載の方法。
(項目１０８)
ＳＨＨシグナル伝達の前記１つまたは複数の活性化剤が、ＳＨＨ、Ｃ２５ＩＩおよびパルモルファミンなどのスムーズンド（ＳＭＯ）受容体小分子アゴニスト、ＳＡＧ（例えば、Ｓｔａｎｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ，  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｓｙｓｔ．  ２０１０  Ｊａｎ；６（１）：４４−５４に開示されているような）、その誘導体、およびそれらの混合物からなる群から選択される、項目１０から１８および２２から１０７のいずれか一項に記載の方法。
(項目１０９)
ＳＨＨシグナル伝達の前記１つまたは複数の活性化剤が、ＳＨＨを含む、項目１０から１８および２２から１０８のいずれか一項に記載の方法。
(項目１１０)
ＳＨＨシグナル伝達の前記１つまたは複数の活性化剤が、ＳＡＧを含む、項目１０から１８および２２から１０９のいずれか一項に記載の方法。
(項目１１１)
ＳＭＡＤシグナル伝達の前記１つまたは複数の阻害剤が、ＬＤＮ１９３１８９、Ｎｏｇｇｉｎ、Ｄｏｒｓｏｍｏｒｐｈｉｎ、Ｋ０２２８８、ＤＭＨ１、ＭＬ３４７、ＬＤＮ２１２８５４、その誘導体、およびそれらの混合物からなる群から選択される、項目５４から１１０のいずれか一項に記載の方法。
(項目１１２)
ＳＭＡＤシグナル伝達の前記１つまたは複数の阻害剤が、ＬＤＮ１９３１８９を含む、項目５４から１１１のいずれか一項に記載の方法。
(項目１１３)
前記細胞を、約１０ｎｇ／ｍＬから２００ｎｇ／ｍＬの間の濃度の前記１つまたは複数の背方化剤と接触させる、項目１から１１２のいずれか一項に記載の方法。
(項目１１４)
前記細胞を、約１ｎｇ／ｍＬから３０ｎｇ／ｍＬの間の濃度の前記１つまたは複数の腹方化剤と接触させる、項目１から１１３のいずれか一項に記載の方法。
(項目１１５)
前記細胞を、約１０ｎｇ／ｍｌから２００ｎｇ／ｍＬの間の濃度のＦＧＦシグナル伝達の前記１つまたは複数の活性化剤と接触させる、項目１０から１８および２２から１１４のいずれか一項に記載の方法。
(項目１１６)
前記細胞を、約０．１ｎｇ／ｍｌから１０ｎｇ／ｍｌの間の濃度のＢＭＰ分子の前記１つまたは複数の活性化剤と接触させる、項目１０から１８および２２から１１５のいずれか一項に記載の方法。
(項目１１７)
前記細胞を、約１μＭから２０μＭの間の濃度のＴＧＦβ／Ａｃｔｉｖｉｎ−Ｎｏｄａｌシグナル伝達の前記１つまたは複数の阻害剤と接触させる、項目１から１１６のいずれか一項に記載の方法。
(項目１１８)
前記細胞を、約５０ｎｇ／ｍｌから２００ｎｇ／ｍｌの間、または約５０ｎＭから２００ｎＭの間の濃度のＳＨＨシグナル伝達の前記１つまたは複数の活性化剤と接触させる、項目１０から１８および２２から１１７のいずれか一項に記載の方法。
(項目１１９)
前記細胞を、約１μＭから１０μＭの濃度の前記１つまたは複数のＷｎｔ活性化剤と接触させる、項目１から１１８のいずれか一項に記載の方法。
(項目１２０)
前記細胞を、約０．１ｎＭから２０ｎＭの間の濃度の前記１つまたは複数のＥＲアゴニストと接触させる、項目４０から１１９のいずれか一項に記載の方法。
(項目１２１)
前記細胞を、約０．１μＭから１μＭの濃度のＲＡと接触させる、項目６１から１２０のいずれか一項に記載の方法。
(項目１２２)
前記細胞を、約１ｎＭから２０ｎＭの間の濃度の１つまたは複数の甲状腺ホルモンと接触させる、項目６１から１２１のいずれか一項に記載の方法。
(項目１２３)
前記細胞を、約０．１μＭから１０μＭの濃度の１つまたは複数のコルチコステロイドと接触させる、項目６１から１２２のいずれか一項に記載の方法。
(項目１２４)
前記細胞を、約０．１μＭから１０μＭまたは約０．１μＭ未満、または１０ｎＭの濃度の１つまたは複数のＧＨＲＨシグナル伝達経路のアゴニストと接触させる、項目６１から１２３のいずれか一項に記載の方法。
(項目１２５)
前記細胞を、約１ｎＭから５０ｎＭの間の濃度の１つまたは複数のＧｈｒｅｌｉｎシグナル伝達経路のアゴニストと接触させる、項目６１から１２４のいずれか一項に記載の方法。
(項目１２６)
前記細胞を、約１ｎｇ／ｍｌから５０ｎｇ／ｍｌの間の濃度の１つまたは複数のインターロイキンと接触させる、項目６１から１２５のいずれか一項に記載の方法。
(項目１２７)
前記細胞を、約１００ｎＭから３００ｎＭの間の濃度のＳＭＡＤシグナル伝達の前記１つまたは複数の阻害剤と接触させる、項目６１から１２６のいずれか一項に記載の方法。
(項目１２８)
成長ホルモンを産生することが可能であるｉｎ  ｖｉｔｒｏ分化細胞（ＧＨ産生成長ホルモン産生細胞）の細胞集団であって、前記ｉｎ  ｖｉｔｒｏ分化細胞が、項目１０から１８および２２から１２７のいずれか一項に記載の方法に従って、幹細胞から生じる、細胞集団。
(項目１２９)
成長ホルモンを産生することが可能であるｉｎ  ｖｉｔｒｏ分化細胞（ＧＨ産生成長ホルモン産生細胞）の細胞集団であって、前記ｉｎ  ｖｉｔｒｏ分化細胞が、項目１から９、１９から２１、および２７から１２８のいずれか一項に記載の方法に従って、下垂体前駆体から生じる、細胞集団。
(項目１３０)
項目１２８または１２９に記載の細胞集団を含む組成物。
(項目１３１)
ｉｎ  ｖｉｔｒｏ分化細胞の集団を含む組成物であって、前記分化細胞の少なくとも約５０％が、成長ホルモンを産生することが可能（ＧＨ産生成長ホルモン産生細胞）であり、前記分化細胞の約２５％未満が、プロラクチン産生細胞マーカー、甲状腺刺激ホルモン産生細胞マーカー、下垂体前駆体マーカー、Ｐｉｔ１、幹細胞マーカー、ＮＮＥマーカー、神経堤（ＮＣ）系統マーカー、および非下垂体プラコードマーカーからなる群から選択される１つまたは複数のマーカーを発現する、組成物。
(項目１３２)
前記非下垂体プラコードマーカーが、頭蓋プラコードマーカー、上鰓プラコードマーカー、三叉神経プラコードマーカー、および耳プラコードマーカーからなる群から選択される、項目１３１に記載の組成物。
(項目１３３)
（ａ）１つまたは複数の背方化剤；
（ｂ）１つまたは複数の腹方化剤；
（ｃ）Ｗｉｎｇｌｅｓｓ（Ｗｎｔ）シグナル伝達の１つまたは複数の活性化剤（Ｗｎｔ活性化剤）；および
（ｄ）１つまたは複数の成長ホルモン（ＧＨ）誘導剤
を含む、下垂体前駆体のＧＨ産生成長ホルモン産生細胞への分化を誘導するためのキット。
(項目１３４)
（ａ）１つまたは複数のＢＭＰ分子；
（ｂ）ＴＧＦβ／Ａｃｔｉｖｉｎ−Ｎｏｄａｌシグナル伝達の１つまたは複数の阻害剤；
（ｃ）ＦＧＦシグナル伝達の１つまたは複数の活性化剤；
（ｄ）ＳＨＨシグナル伝達の１つまたは複数の活性化剤
（ｅ）１つまたは複数の背方化剤；
（ｆ）１つまたは複数の腹方化剤；
（ｇ）Ｗｉｎｇｌｅｓｓ（Ｗｎｔ）シグナル伝達の１つまたは複数の活性化剤（Ｗｎｔ活性化剤）；および
（ｈ）１つまたは複数の成長ホルモン（ＧＨ）誘導剤
を含む、幹細胞のＧＨ産生成長ホルモン産生細胞への分化を誘導するためのキット。
(項目１３５)
１つまたは複数のＥＲアゴニストをさらに含む、項目１３３または１３４に記載のキット。
(項目１３６)
対象におけるＧＨの発現および／もしくは分泌を増加させる、ＧＨ、インスリン様成長因子１（ＩＧＦ−１）、およびＩＧＦ−２のうちの１つもしくは複数の動的放出を回復させる、ならびに／またはＧＨ欠損症を処置する方法であって、前記対象に、以下の：
（ａ）項目１２８または１２９に記載の細胞集団；および
（ｂ）項目１３０から１３２のいずれか一項に記載の組成物
のうちの１つを投与するステップを含む方法。
(項目１３７)
対象におけるＧＨの発現および／もしくは分泌を増加させる、ＧＨ、インスリン様成長因子１（ＩＧＦ−１）、およびＩＧＦ−２のうちの１つもしくは複数の動的放出を回復させる、ならびに／またはＧＨ欠損症を処置するための医薬の製造における、項目１２８または１２９に記載の細胞集団の使用。
(項目１３８)
対象におけるＧＨの発現および／もしくは分泌を増加させる、ＧＨ、インスリン様成長因子１（ＩＧＦ−１）、およびＩＧＦ−２のうちの１つもしくは複数の動的放出を回復させる、ならびに／またはＧＨ欠損症を処置するための医薬の製造における、項目１３０から１３２のいずれか一項に記載の組成物の使用。
(項目１３９)
療法における使用のための、項目１２８または１２９に記載の細胞集団。
(項目１４０)
療法における使用のための、項目１３０から１３２のいずれか一項に記載の組成物。
(項目１４１)
対象におけるＧＨの発現および／もしくは分泌を増加させる、ＧＨ、インスリン様成長因子１（ＩＧＦ−１）、およびＩＧＦ−２のうちの１つもしくは複数の動的放出を回復させる、ならびに／またはＧＨ欠損症を処置することにおける使用のための、項目１２８または１２９に記載の細胞集団。
(項目１４２)
対象におけるＧＨの発現および／もしくは分泌を増加させる、ＧＨ、インスリン様成長因子１（ＩＧＦ−１）、およびＩＧＦ−２のうちの１つもしくは複数の動的放出を回復させる、ならびに／またはＧＨ欠損症を処置することにおける使用のための、項目１３０から１３２のいずれか一項に記載の組成物。
(項目１４３)
ＧＨ欠損症に関連する１つまたは複数の細胞表現型を克服することが可能である治療用化合物をスクリーニングするための方法であって、
（ａ）項目１２８または１２９に記載のｉｎ  ｖｉｔｒｏで分化したＧＨ産生成長ホルモン産生細胞の細胞集団を、試験化合物と接触させるステップと；（ｂ）前記ＧＨ産生成長ホルモン産生細胞の機能的活性および／または遺伝子発現を測定するステップであって、前記ＧＨ産生成長ホルモン産生細胞が、ＧＨ欠損症を有する対象の幹細胞またはＧＨ欠損症を有する対象の１つまたは複数の下垂体前駆体マーカーを発現する細胞から得られるステップとを含む方法。