【手続補正書】
【提出日】令和3年2月1日(2021.2.1)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号１に記載の野生型ＮｉｃＡ２酵素のアミノ酸配列の変異体であるアミノ酸配列を含むニコチン分解酵素変異体であって、前記変異体配列が、前記変異体のニコチン分解活性を増加させる配列番号１の９１、１０４、１０６、１０７、２１７、２５０、３４０、３５５、３６６、３８１、４２７、４６２、及び４６３から選択されるアミノ酸位置に少なくとも１つの置換を含む、ニコチン分解酵素変異体。
【請求項２】
前記変異体配列が、
ｉ．Ｒ９１Ａ、Ｒ９１Ｑ、Ｒ９１Ｆ、Ｒ９１Ｇ、Ｒ９１Ｔ、Ｒ９１Ｌ、Ｒ９１Ｓ、及びＲ９１Ｎ；
ｉｉ．Ｆ１０４Ｌ；
ｉｉｉ．Ｇ１０６Ｓ；
ｉｖ．Ａ１０７Ｈ、Ａ１０７Ｐ、Ａ１０７Ｒ、Ａ１０７Ｋ、及びＡ１０７Ｔ；
ｖ．Ｌ２１７Ｑ、Ｌ２１７Ｇ、Ｌ２１７Ｅ、Ｌ２１７Ｉ、Ｌ２１７Ｃ、及びＬ２１７Ｓ；
ｖｉ．Ｔ２５０Ｐ、Ｔ２５０Ｇ、Ｔ２５０Ｌ、Ｔ２５０Ｒ、及びＴ２５０Ｖ；
ｖｉｉ．Ｋ３４０Ｐ、Ｋ３４０Ｉ、Ｋ３４０Ｖ、Ｋ３４０Ｄ、及びＫ３４０Ｅ；
ｖｉｉｉ．Ｆ３５５Ｃ、及びＦ３５５Ｖ；
ｉｘ．Ｑ３６６Ｋ、Ｑ３６６Ｅ、Ｑ３６６Ｖ、Ｑ３６６Ｌ、Ｑ３６６Ｉ、及びＱ３６６Ｙ；
ｘ．Ｔ３８１Ｐ、Ｔ３８１Ｉ、Ｔ３８１Ｖ、Ｔ３８１Ｑ、Ｔ３８１Ｎ、Ｔ３８１Ｌ、及びＴ３８１Ｍ；
ｘｉ．Ｗ４２７Ｒ、Ｗ４２７Ｈ、Ｗ４２７Ｌ、Ｗ４２７Ｑ、Ｗ４２７Ｅ、Ｗ４２７Ｓ、及びＷ４２７Ｍ；
ｘｉｉ．Ｎ４６２Ｍ、Ｎ４６２Ｌ、Ｎ４６２Ｙ、Ｎ４６２Ｓ、Ｎ４６２Ｆ、Ｎ４６２Ｇ、Ｎ４６２Ｅ、及びＮ４６２Ａ；並びに
ｘｉｉｉ．Ｉ４６３Ｆ、Ｉ４６３Ｙ、Ｉ４６３Ａ、Ｉ４６３Ｖ、及びＩ４６３Ｌ
から選択される少なくとも１つの置換を含む、請求項１に記載の変異体。
【請求項３】
前記変異体配列が、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号１３５、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１２９、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号１３６、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号１３０、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３８、配列番号１３１、配列番号３９、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４２、配列番号４３、配列番号４４、配列番号４５、配列番号１３２、配列番号１３３、配列番号４６、配列番号４７、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５０、配列番号５１、配列番号５２、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号５６、配列番号１２４、配列番号１２５、配列番号１２６、配列番号１３４、配列番号１４２、配列番号１４３、配列番号１２７、配列番号１２８、配列番号６２、配列番号６３、配列番号１３７、配列番号１３８、配列番号１４０、及び配列番号１４１から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の変異体。
【請求項４】
前記変異体のニコチン分解活性が、前記野生型ＮｉｃＡ２酵素のニコチン分解活性の少なくとも３００％である、請求項１に記載の変異体。
【請求項５】
前記野生型ＮｉｃＡ２酵素と比較して免疫原性が７５％以上減少される、請求項１〜４のいずれか一項に記載の変異体。
【請求項６】
配列番号１のアミノ酸１０〜３２、６８〜９４、１８９〜２２５、２４８〜２８５、２９６〜３２７、３３６〜３９１、及び４３５〜４５９から選択される領域内の免疫原性Ｔ細胞エピトープ中に少なくとも１つの置換、付加、又は欠失を含む、請求項５に記載の変異体。
【請求項７】
前記変異体配列が、配列番号１のアミノ酸７４、７７、７８、８０、２６２−２６６、３０３、３０４、３０６、３１０、３７４、３７７、３７８、３８２、３８３、４５０−４５２、及び４５７から選択される、又は、配列番号１のアミノ酸１６〜２４、７３〜８１、２５８〜２６６、３０２〜３１０、３７３〜３８１、及び４４７〜４５５から選択される免疫原性Ｔ細胞エピトープ中に少なくとも１つの置換、付加、若しくは欠失を含む、請求項６に記載の変異体。
【請求項８】
前記変異体配列が、
（ａ）配列番号１のアミノ酸残基７４、７７、７８、若しくは８０、
（ｂ）配列番号１のアミノ酸残基２６２、２６３、２６４、若しくは２６６、
（ｃ）配列番号１のアミノ酸残基３０３、３０４、３０６、若しくは３１０、
（ｄ）配列番号１のアミノ酸残基３７４、３７７、３７８、３８２、若しくは３８３、及び／又は
（ｅ）配列番号１のアミノ酸残基４５０、４５１、４５２、若しくは４５７
から選択される位置に、少なくとも１つの置換、付加、又は欠失を含む、請求項６又は７に記載の変異体。
【請求項９】
前記変異体配列が、
（ａ）Ｌ７４Ｎ及びＹ７７Ｒ；
（ｂ）Ｌ７４Ｎ及びＹ７７Ｋ；
（ｃ）Ｌ７４Ｑ及びＹ７７Ｒ；
（ｄ）Ｌ７４Ｑ及びＹ７７Ｎ；
（ｅ）Ｌ７４Ｎ及びＹ７７Ｑ；
（ｆ）Ｌ７４Ｎ及びＹ７７Ｈ；
（ｇ）Ｌ７４Ｎ及びＬ８０Ｈ；
（ｈ）Ｌ８０Ｆ；
（ｉ）Ｙ７７Ｒ；
（ｊ）Ｒ７８Ｑ；
（ｋ）Ｉ２６２Ａ及びＡ２６４Ｑ；
（ｌ）Ｉ２６２Ｋ及びＬ２６６Ｄ；
（ｍ）Ｉ２６２Ｔ；
（ｎ）Ｉ２６２Ｓ；
（ｏ）Ｉ２６２Ｄ及びＬ２６６Ｋ；
（ｐ）Ｉ２６２Ａ；
（ｑ）Ｉ２６２Ｔ及びＡ２６４Ｌ；
（ｒ）Ｉ２６２Ｔ及びＮ２６３Ｒ；
（ｓ）Ｍ２６５Ｈ；
（ｔ）Ｉ２６２Ａ及びＡ２６４Ｎ；
（ｕ）Ｖ３０３Ｔ、Ｖ３０４Ｎ、及びＭ３０６Ｉ；
（ｖ）Ｖ３０４Ａ及びＭ３０６Ｑ；
（ｗ）Ｖ３０４Ａ、Ｍ３０６Ｎ；
（ｘ）Ｖ３０４Ａ；
（ｙ）Ｖ３０４Ａ及びＭ３０６Ｈ；
（ｚ）Ｖ３０４Ｎ及びＭ３０６Ｈ；
（ａａ）Ｖ３０４Ｑ及びＭ３０６Ｈ；
（ｂｂ）Ｖ３０４Ｎ、Ｍ３０６Ｉ；
（ｃｃ）Ｖ３０４Ｔ及びＭ３０６Ｉ；
（ｄｄ）Ｍ３０６Ｉ及びＬ３１０Ｒ
（ｅｅ）Ｌ３７４Ｑ及びＩ３７７Ｓ；
（ｆｆ）Ｌ３７４Ａ及びＩ３７７Ａ；
（ｇｇ）Ｌ３７４Ｑ及びＩ３７７Ａ；
（ｈｈ）Ｌ３７４Ｎ及びＩ３７７Ａ；
（ｉｉ）Ｌ３７４Ｎ及びＩ３８２Ｑ；
（ｊｊ）Ｉ３７７Ａ及びＩ３８２Ｔ；
（ｋｋ）Ｉ３７７Ａ及びＬ３７８Ｎ；
（ｌｌ）Ｉ３７７Ｔ及びＩ３８２Ｔ；
（ｍｍ）Ｉ３７７Ｔ；
（ｎｎ）Ｌ３７４Ｎ及びＡ３８３Ｑ；
（ｏｏ）Ｉ４４８Ｑ及びＦ４５０Ｓ；
（ｐｐ）Ｉ４４８Ｅ及びＦ４５０Ｎ；
（ｑｑ）Ｉ４４８Ａ及びＦ４５０Ｎ；
（ｒｒ）Ｉ４４８Ｑ及びＦ４５０Ｑ；
（ｓｓ）Ｉ４４８Ｔ及びＦ４５０Ｑ；
（ｔｔ）Ｉ４４８Ｅ及びＦ４５０Ｌ；
（ｕｕ）Ｔ４５５Ｋ；
（ｖｖ）Ｌ４４９Ｈ及びＦ４５０Ａ；
（ｗｗ）Ｆ４５０Ａ；
（ｘｘ）Ｉ４４８Ａ及びＦ４５０Ｙ；
（ｙｙ）Ｉ２６２Ｔ；
（ｚｚ）Ｉ２６２Ｓ；
（ａａａ）Ｉ２６２Ａ；
（ｂｂｂ）Ｉ２６２Ｔ及びＡ２６４Ｌ；並びに
（ｃｃｃ）Ｉ２６２Ｔ及びＮ２６３Ｒ
から選択される少なくとも１つの置換又は置換の組み合わせを含む、請求項６〜８のいずれか一項に記載の変異体。
【請求項１０】
配列番号１に、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９５％、若しくは少なくとも約９７％の配列同一性を有する、請求項１に記載の変異体、又は、配列番号１の５２個までのＮ末端アミノ酸残基の欠失を有するそのＮ末端欠失変異体。
【請求項１１】
配列番号５〜５６、６２、６３、１２４〜１３８、及び１４０〜１４３からなる群から選択される配列に少なくとも約９５％、又は少なくとも９７％の配列同一性を有する、請求項１に記載の変異体。
【請求項１２】
配列番号１の少なくともアミノ酸１〜３８の欠失、又は、配列番号１のアミノ酸１〜５０の欠失をさらに含む、請求項１〜９のいずれか一項に記載の変異体。
【請求項１３】
前記変異体が長時間作用型変異体である、請求項１〜９のいずれか一項に記載の変異体。
【請求項１４】
前記長時間作用型変異体が、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）に融合している、請求項１３に記載の変異体。
【請求項１５】
前記変異体配列が、配列番号１に対する
（ａ）ｉ．Ｒ９１Ａ、Ｒ９１Ｑ、Ｒ９１Ｆ、Ｒ９１Ｇ、Ｒ９１Ｔ、Ｒ９１Ｌ、Ｒ９１Ｓ、及びＲ９１Ｎ；
ｉｉ．Ｆ１０４Ｌ；
ｉｉｉ．Ｇ１０６Ｓ；
ｉｖ．Ａ１０７Ｈ、Ａ１０７Ｐ、Ａ１０７Ｒ、Ａ１０７Ｋ、及びＡ１０７Ｔ；
ｖ．Ｌ２１７Ｑ、Ｌ２１７Ｇ、Ｌ２１７Ｅ、Ｌ２１７Ｉ、Ｌ２１７Ｃ、及びＬ２１７Ｓ；
ｖｉ．Ｔ２５０Ｐ、Ｔ２５０Ｇ、Ｔ２５０Ｌ、Ｔ２５０Ｒ、及びＴ２５０Ｖ；
ｖｉｉ．Ｋ３４０Ｐ、Ｋ３４０Ｉ、Ｋ３４０Ｖ、Ｋ３４０Ｄ及びＫ３４０Ｅ；
ｖｉｉｉ．Ｆ３５５Ｃ、及びＦ３５５Ｖ；
ｉｘ．Ｑ３６６Ｋ、Ｑ３６６Ｅ、Ｑ３６６Ｖ、Ｑ３６６Ｌ、Ｑ３６６Ｉ、及びＱ３６６Ｙ；
ｘ．Ｔ３８１Ｐ、Ｔ３８１Ｉ、Ｔ３８１Ｖ、Ｔ３８１Ｑ、Ｔ３８１Ｎ、Ｔ３８１Ｌ、及びＴ３８１Ｍ；
ｘｉ．Ｗ４２７Ｒ、Ｗ４２７Ｈ、Ｗ４２７Ｌ、Ｗ４２７Ｑ、Ｗ４２７Ｅ、Ｗ４２７Ｓ、及びＷ４２７Ｍ；
ｘｉｉ．Ｎ４６２Ｍ、Ｎ４６２Ｌ、Ｎ４６２Ｙ、Ｎ４６２Ｓ、Ｎ４６２Ｆ、Ｎ４６２Ｇ、Ｎ４６２Ｅ、及びＮ４６２Ａ；並びに
ｘｉｉｉ．Ｉ４６３Ｆ、Ｉ４６３Ｙ、Ｉ４６３Ａ、Ｉ４６３Ｖ、及びＩ４６３Ｌ；
から選択される少なくとも１つの置換、
（ｂ）配列番号１のアミノ酸１〜３８の欠失、又は、配列番号１のアミノ酸１〜５０の欠失、並びに
（ｃ）任意選択的に、配列番号１のアミノ酸７４、７７、７８、８０、２６２〜２６６、３０３、３０４、３０６、３１０、３７４、３７７、３７８、３８２、３８３、４５０〜４５２及び４５７から選択される免疫原性Ｔ細胞エピトープにおける少なくとも１つの置換、付加、又は欠失を含む、
の修飾を含む、請求項１に記載の変異体。
【請求項１６】
前記変異体配列が、配列番号１に対する
（ａ）ｉ．Ｒ９１Ａ、Ｒ９１Ｑ、Ｒ９１Ｆ、Ｒ９１Ｇ、Ｒ９１Ｔ、Ｒ９１Ｌ、Ｒ９１Ｓ、及びＲ９１Ｎ；
ｉｉ．Ｆ１０４Ｌ；
ｉｉｉ．Ｇ１０６Ｓ；
ｉｖ．Ａ１０７Ｈ、Ａ１０７Ｐ、Ａ１０７Ｒ、Ａ１０７Ｋ、及びＡ１０７Ｔ；
ｖ．Ｌ２１７Ｑ、Ｌ２１７Ｇ、Ｌ２１７Ｅ、Ｌ２１７Ｉ、Ｌ２１７Ｃ、及びＬ２１７Ｓ；
ｖｉ．Ｔ２５０Ｐ、Ｔ２５０Ｇ、Ｔ２５０Ｌ、Ｔ２５０Ｒ、及びＴ２５０Ｖ；
ｖｉｉ．Ｋ３４０Ｐ、Ｋ３４０Ｉ、Ｋ３４０Ｖ、Ｋ３４０Ｄ及びＫ３４０Ｅ；
ｖｉｉｉ．Ｆ３５５Ｃ、及びＦ３５５Ｖ；
ｉｘ．Ｑ３６６Ｋ、Ｑ３６６Ｅ、Ｑ３６６Ｖ、Ｑ３６６Ｌ、Ｑ３６６Ｉ、及びＱ３６６Ｙ；
ｘ．Ｔ３８１Ｐ、Ｔ３８１Ｉ、Ｔ３８１Ｖ、Ｔ３８１Ｑ、Ｔ３８１Ｎ、Ｔ３８１Ｌ、及びＴ３８１Ｍ；
ｘｉ．Ｗ４２７Ｒ、Ｗ４２７Ｈ、Ｗ４２７Ｌ、Ｗ４２７Ｑ、Ｗ４２７Ｅ、Ｗ４２７Ｓ、及びＷ４２７Ｍ；
ｘｉｉ．Ｎ４６２Ｍ、Ｎ４６２Ｌ、Ｎ４６２Ｙ、Ｎ４６２Ｓ、Ｎ４６２Ｆ、Ｎ４６２Ｇ、Ｎ４６２Ｅ、及びＮ４６２Ａ；並びに
ｘｉｉｉ．Ｉ４６３Ｆ、Ｉ４６３Ｙ、Ｉ４６３Ａ、Ｉ４６３Ｖ、及びＩ４６３Ｌ；
から選択される少なくとも１つの置換、並びに
（ｂ）配列番号１のアミノ酸１〜３８の欠失、又は、配列番号１のアミノ酸１〜５０の欠失
の修飾を含む、請求項１に記載の変異体。
【請求項１７】
ＰＥＧと融合している請求項１５又は１６に記載の変異体。
【請求項１８】
前記変異体配列が、（ａ）アミノ酸位置１０４、１０７又は３５５におけるアミノ酸置換であって、ニコチン分解活性を増加させる置換、及び（ｂ）配列番号１のアミノ酸１〜５０の欠失、を含む請求項１に記載の変異体。
【請求項１９】
任意選択的にＰＥＧに融合している、配列番号１３４のアミノ酸配列からなる、請求項１８の変異体。
【請求項２０】
配列番号１に対応するアミノ酸１〜５０の欠失を有する配列番号１２６のアミノ酸配列からなる、請求項１８に記載の変異体。
【請求項２１】
請求項１〜２０のいずれか一項に記載のニコチン分解酵素変異体と、薬学的に許容される担体とを含む、医薬組成物。
【請求項２２】
ニコチン嗜癖を治療するか、若しくは禁煙を促進するための、又は、ニコチン中毒若しくはニコチン毒性を治療するための、請求項２１に記載の医薬組成物。
【請求項２３】
前記ニコチン嗜癖が、タバコ製品及び電子タバコから選択されるニコチン製品の消費と関連している、請求項２２の医薬組成物。