【手続補正書】
【提出日】平成17年5月20日(2005.5.20)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
キノレートホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＱＰＲＴａｓｅ）の生成が増加した形質転換植物細胞を生産する方法であって、
キノレートホスホリボシルトランスフェラーゼを生成することが知られているタイプの植物細胞を、外来の核酸構築物により形質転換するステップを含み、前記構築物は、５’から３’の方向に、植物細胞で機能可能なプロモーターと、キノレートホスホリボシルトランスフェラーゼをコードするヌクレオチド配列とを含み、前記ヌクレオチド配列は前記プロモーターに機能可能なように関連しており、それによって、形質転換植物細胞は、形質転換していない植物細胞と比較してキノレートホスホリボシルトランスフェラーゼの生成が増加していることを特徴とする方法。
【請求項２】
前記形質転換植物細胞が、タバコ（Ｎｉｃｏｔｉａｎａ ｔａｂａｃｕｍ）細胞である請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記プロモーターが、構成的に活性である請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記プロモーターが、植物の根組織細胞において選択的に活性である請求項１または２に記載の方法。
【請求項５】
前記プロモーターが、植物の根皮層組織細胞において選択的に活性である請求項１または２に記載の方法。
【請求項６】
前記形質転換ステップが、前記核酸構築物を担持する微粒子を、前記植物細胞に衝突させることにより実行される請求項１から５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
前記形質転換ステップが、前記核酸構築物を担持するＴｉプラスミドを含むＡｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓに前記植物細胞を感染させることにより実行される請求項１から５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
前記形質転換細胞から植物体を再生させるステップをさらに含む請求項１から７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
前記形質転換細胞からタバコ植物体を再生させるステップをさらに含む請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
請求項９に記載の方法により生産されたタバコ植物から種を集めるステップを含む、タバコの種を生産する方法。
【請求項１１】
キノレートホスホリボシルトランスフェラーゼを生成することが知られているタイプの植物細胞において、キノレートホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＱＰＲＴａｓｅ）の生成を増加させる方法であって、形質転換細胞においてキノレートホスホリボシルトランスフェラーゼをコードする外来のヌクレオチド配列が発現されてキノレートホスホリボシルトランスフェラーゼを生成するような条件下で、キノレートホスホリボシルトランスフェラーゼをコードする外来のヌクレオチド配列により前記植物細胞を形質転換するステップを含む方法。
【請求項１２】
前記形質転換植物細胞が、タバコ（Ｎｉｃｏｔｉａｎａ ｔａｂａｃｕｍ）細胞である請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
ａ）前記植物細胞において機能するプロモーターと、
ｂ）前記細胞において機能するキノレートホスホリボシルトランスフェラーゼをコードするヌクレオチド配列と、ここで、前記ヌクレオチド配列は前記プロモーターに機能的に関連している、
ｃ）前記細胞において機能する転写終止領域と
を転写の方向で含む外来の核酸構築物を、前記植物細胞のゲノムに組み込むステップを含む方法により、前記形質転換植物細胞が得られることを特徴とする、請求項１１に記載の方法。
【請求項１４】
前記プロモーターが、構成的に活性である請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記プロモーターが、植物の根組織細胞において選択的に活性である請求項１３に記載の方法。
【請求項１６】
前記プロモーターが、植物の根皮層組織細胞において選択的に活性である請求項１３に記載の方法。
【請求項１７】
前記形質転換細胞から植物体を再生させるステップをさらに含む請求項１１から１６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１８】
前記形質転換細胞からタバコ植物体を再生させるステップをさらに含む請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
請求項１８に記載の方法により生産されたタバコ植物から種を集めるステップを含む、タバコの種を生産する方法。
【請求項２０】
ニコチン生成が増加した形質転換植物細胞を生産する方法であって、
キノレートホスホリボシルトランスフェラーゼを生成することが知られているタイプの植物細胞を、外来の核酸構築物により形質転換するステップを含み、前記構築物は、５’から３’の方向に、植物細胞で機能可能なプロモーターと、キノレートホスホリボシルトランスフェラーゼをコードするヌクレオチド配列とを含み、前記ヌクレオチド配列は前記プロモーターに機能可能なように関連しており、それによって、形質転換植物細胞は、形質転換していない植物細胞と比較してニコチンの生成が増加していることを特徴とする方法。
【請求項２１】
前記形質転換植物細胞が、タバコ（Ｎｉｃｏｔｉａｎａ ｔａｂａｃｕｍ）細胞である請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記プロモーターが、構成的に活性である請求項２０または２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記プロモーターが、植物の根組織細胞において選択的に活性である請求項２０または２１に記載の方法。
【請求項２４】
前記プロモーターが、植物の根皮層組織細胞において選択的に活性である請求項２０または２１の方法。
【請求項２５】
前記形質転換ステップが、前記核酸構築物を担持する微粒子を、前記植物細胞に衝突させることにより実行される請求項２０から２４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２６】
前記形質転換ステップが、前記核酸構築物を担持するＴｉプラスミドを含むＡｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓに前記植物細胞を感染させることにより実行される請求項２０から２４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２７】
前記形質転換細胞から植物体を再生させるステップをさらに含む請求項２０から２６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２８】
前記形質転換細胞からタバコ植物体を再生させるステップをさらに含む請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
請求項２８に記載の方法により生産されたタバコ植物から種を集めるステップを含む、タバコの種を生産する方法。
【請求項３０】
キノレートホスホリボシルトランスフェラーゼを生成することが知られているタイプの植物細胞において、ニコチンの生成を増加させる方法であって、形質転換細胞においてキノレートホスホリボシルトランスフェラーゼをコードする外来のヌクレオチド配列が発現されてキノレートホスホリボシルトランスフェラーゼを生成するような条件下で、キノレートホスホリボシルトランスフェラーゼをコードする外来のヌクレオチド配列により前記植物細胞を形質転換するステップを含む方法。
【請求項３１】
前記形質転換植物細胞が、タバコ（Ｎｉｃｏｔｉａｎａ ｔａｂａｃｕｍ）細胞である請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
ａ）前記植物細胞において機能するプロモーターと
ｂ）前記細胞において機能するキノレートホスホリボシルトランスフェラーゼをコードするヌクレオチド配列と、ここで、前記ヌクレオチド配列は前記プロモーターに機能的に関連している、
ｃ）前記細胞において機能する転写終止領域と
を転写の方向で含む外来の核酸構築物を、前記植物細胞のゲノムに組み込むステップを含む方法により、前記形質転換植物細胞が得られることを特徴とする、請求項３０または３１に記載の方法。
【請求項３３】
前記プロモーターが、構成的に活性である請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
前記プロモーターが、植物の根組織細胞において選択的に活性である請求項３２に記載の方法。
【請求項３５】
前記プロモーターが、植物の根皮層組織細胞において選択的に活性である請求項３２の方法。
【請求項３６】
前記形質転換細胞から植物体を再生させるステップをさらに含む請求項３０から３５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３７】
前記形質転換細胞からタバコ植物体を再生させるステップをさらに含む請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
請求項３７に記載の方法により生産されたタバコ植物から種を集めるステップを含む、タバコの種を生産する方法。
【請求項３９】
キノレートホスホリボシルトランスフェラーゼをコードする前記ヌクレオチド配列が、
（ａ）配列番号１のヌクレオチド配列と、
（ｂ）配列番号２のアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列と、
（ｃ）上記（ａ）又は（ｂ）のヌクレオチド配列にハイブリッド形成し、キノレートホスホリボシルトランスフェラーゼをコードするヌクレオチド配列と、
（ｄ）遺伝コードの縮重により上記（ａ）、（ｂ）または（ｃ）とは異なるが、キノレートホスホリボシルトランスフェラーゼをコードするヌクレオチド配列と
からなる群から選択される、請求項１から３８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４０】
ヌクレオチド配列が、配列番号１のヌクレオチド配列である請求項１から３８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４１】
形質転換していない植物と比較して、キノレートホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＱＰＲＴａｓｅ）の生成が増加したＮｉｃｏｔｉａｎａ属のトランスジェニック植物であって、キノレートホスホリボシルトランスフェラーゼをコードする外来のヌクレオチド配列を含むトランスジェニック植物細胞を含むことを特徴とするトランスジェニック植物。
【請求項４２】
形質転換していない植物と比較して、キノレートホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＱＰＲＴａｓｅ）の生成が増加したＮｉｃｏｔｉａｎａ属のトランスジェニック植物であって、請求項４１の植物の子孫であることを特徴とするトランスジェニック植物。
【請求項４３】
形質転換していない植物と比較して、キノレートホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＱＰＲＴａｓｅ）の生成が増加したＮｉｃｏｔｉａｎａ属のトランスジェニック植物の種子であって、前記トランスジェニック植物が、請求項４１の植物の子孫であることを特徴とする種子。
【請求項４４】
形質転換していない植物と比較して、ニコチンの生成が増加したＮｉｃｏｔｉａｎａ属のトランスジェニック植物であって、キノレートホスホリボシルトランスフェラーゼをコードする外来のヌクレオチド配列を含む植物細胞を含むことを特徴とするトランスジェニック植物。
【請求項４５】
形質転換していない植物と比較して、ニコチンの生成が増加したＮｉｃｏｔｉａｎａ属のトランスジェニック植物であって、請求項４４の植物の子孫であることを特徴とするトランスジェニック植物。
【請求項４６】
形質転換していない植物と比較して、ニコチンの生成が増加したＮｉｃｏｔｉａｎａ属のトランスジェニック植物の種子であって、前記トランスジェニック植物が、請求項４４の植物の子孫であることを特徴とする種子。
【請求項４７】
請求項４１、４２、４４または４５のタバコ植物から得られたタバコ製品
【請求項４８】
請求項１から４０のいずれか１項に記載の方法により生産されたタバコ植物細胞を含むタバコ製品。
【請求項４９】
請求項９、１８、２８または３７の方法により生産されたタバコ植物から得られたタバコを含むタバコ製品。
【請求項５０】
キノレートホスホリボシルトランスフェラーゼ酵素をコードする外来のヌクレオチド配列を含むタバコ細胞を含むタバコ製品。
【請求項５１】
前記外来のヌクレオチド配列が、
（ａ）配列番号１のヌクレオチド配列と、
（ｂ）配列番号２のアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列と、
（ｃ）上記（ａ）又は（ｂ）のヌクレオチド配列にハイブリッド形成し、キノレートホスホリボシルトランスフェラーゼをコードするヌクレオチド配列と、
（ｄ）遺伝コードの縮重により上記（ａ）、（ｂ）または（ｃ）とは異なるが、キノレートホスホリボシルトランスフェラーゼをコードするヌクレオチド配列と
からなる群から選択される請求項４７または５０に記載のタバコ製品。
【請求項５２】
前記外来のヌクレオチド配列が、配列番号１のヌクレオチド配列である請求項５０または５１に記載のタバコ製品。
【請求項５３】
前記タバコ製品が、パイプ、葉巻、紙巻煙草、噛み煙草、葉煙草および刻み煙草からなる群から選択される請求項４７から５２のいずれか１項に記載のタバコ製品。
【請求項５４】
ニコチンのレベルが増加したタバコ製品を製造する方法であって、請求項４１、４２、４４又は４５のタバコ植物から前期タバコ製品を製造するステップを含む方法。