【手続補正書】
【提出日】令和3年10月11日(2021.10.11)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ａ）挿入配列；
ｂ）前記挿入配列に作動可能に連結された未変性コード配列、または
ｃ）前記挿入配列に作動可能に連結された窒素固定または窒素同化コード配列
を含む、遺伝子操作された細菌であって、前記挿入配列は配列番号５、１、２、３、４および６〜７２からなる群から選択される配列に対して少なくとも約８０％の配列同一性を有する、前記遺伝子操作された細菌。
【請求項２】
前記挿入配列が、配列番号５、１、２、３、４および６〜７２からなる群から選択される配列に対して少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有する、かつ/または、未変性プロモーター配列に置き換わる、請求項１に記載の遺伝子操作された細菌。
【請求項３】
前記未変性コード配列が、ｃｙｓＺ、ｏｔｓＢ、ｂｃｓ遺伝子、ｔｒｅＺ、トランスポーター遺伝子、イオントランスポーター遺伝子、エキソポリサッカライド生合成遺伝子、セルロース生合成遺伝子、およびトレハロース生合成遺伝子からなる群から選択される、請求項１〜２のいずれか一項に記載の遺伝子操作された細菌。
【請求項４】
前記窒素固定または窒素同化コード配列が、ｎｉｆＡ、ｎｉｆＬ、ｎｔｒＢ、ｎｔｒＣ、グルタミンシンテターゼをコードするポリヌクレオチド、ｇｌｎＡ、ｇｌｎＢ、ｇｌｎＫ、ｄｒａＴ、ａｍｔＢ、グルタミナーゼをコードするポリヌクレオチド、ｇｌｎＤ、ｇｌｎＥ、ｎｉｆＪ、ｎｉｆＨ、ｎｉｆＤ、ｎｉｆＫ、ｎｉｆＹ、ｎｉｆＥ、ｎｉｆＮ、ｎｉｆＵ、ｎｉｆＳ、ｎｉｆＶ、ｎｉｆＷ、ｎｉｆＺ、ｎｉｆＭ、ｎｉｆＦ、ｎｉｆＢ、ｎｉｆＱ、およびニトロゲナーゼ酵素の生合成に関連する遺伝子からなる群から選択される、請求項１〜２のいずれか一項に記載の遺伝子操作された細菌。
【請求項５】
非属間または属間である遺伝子操作されたジアゾ栄養細菌である、任意で、非窒素制限条件下で空中窒素を固定する、かつ/または、同じ種の遺伝子操作されていない細菌よりも多くの空中窒素を固定する、請求項１〜４のいずれか一項に記載の遺伝子操作された細菌。
【請求項６】
ラーニア・アクアティリス（Ｒａｈｎｅｌｌａ  ａｑｕａｔｉｌｉｓ）、クレブシエラ・バリコラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｖａｒｉｉｃｏｌａ）、コサコニア・シュードサッカリ（Ｋｏｓａｋｏｎｉａ  ｐｓｅｕｄｏｓａｃｃｈａｒｉ）、クルイベラ・インテルメディア（Ｋｌｕｙｖｅｒａ  ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａ）、クレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）ｓｐ．、エンテロバクター（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ）ｓｐ．、およびコサコニア・サッカリ（Ｋｏｓａｋｏｎｉａ  ｓａｃｃｈａｒｉ）からなる群から選択される、請求項１〜５のいずれか一項に記載の遺伝子操作された細菌。
【請求項７】
前記遺伝子操作された細菌が、
ａ）ラーニア（Ｒａｈｎｅｌｌａ）属のものであり、前記挿入配列が、配列番号４１〜５９および６３〜６６からなる群から選択される配列に対して少なくとも約８０％の配列同一性を含む、
ｂ）コサコニア（Ｋｏｓａｋｏｎｉａ）属のものであり、前記挿入配列が、配列番号１〜１０からなる群から選択される配列に対して少なくとも約８０％の配列同一性を含む、
ｃ）クレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）属のものであり、前記挿入配列が、配列番号１１〜４０からなる群から選択される配列に対して少なくとも約８０％の配列同一性を含む、
ｄ）クルイベラ（Ｋｌｕｙｖｅｒａ）属のものであり、前記挿入配列が、配列番号６０に対して少なくとも約８０％の配列同一性を含む、
ｅ）エンテロバクター（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ）種であり、前記挿入配列が、配列番号６２に対して少なくとも約８０％の配列同一性を含む、
ｆ）クレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）種であり、前記挿入配列が、配列番号６７〜６９からなる群から選択される配列に対して少なくとも約８０％の配列同一性を含む、
ｇ）ラーニア・アクアティリス（Ｒａｈｎｅｌｌａ  ａｑｕａｔｉｌｉｓ）であり、前記挿入配列が、配列番号４１〜５９および６３〜６６からなる群から選択される配列に対して少なくとも約８０％の配列同一性を含む、
ｈ）コサコニア・サッカリ（Ｋｏｓａｋｏｎｉａ  ｓａｃｃｈａｒｉ）であり、前記挿入配列が、配列番号１〜１０からなる群から選択される配列に対して少なくとも約８０％の配列同一性を含む、
ｉ）クレブシエラ・バリコラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｖａｒｉｉｃｏｌａ）であり、前記挿入配列が、配列番号１１〜４０からなる群から選択される配列に対して少なくとも約８０％の配列同一性を含む、
ｊ）クルイベラ・インテルメディア（Ｋｌｕｙｖｅｒａ  ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａ）であり、前記挿入配列が、配列番号６０に対して少なくとも約８０％の配列同一性を含む、または
ｋ）コサコニア・シュードサッカリ（Ｋｏｓａｋｏｎｉａ  ｐｓｅｕｄｏｓａｃｃｈａｒｉ）であり、前記挿入配列が、配列番号６１および７０〜７２からなる群から選択される配列に対して少なくとも約８０％の配列同一性を含む、
請求項１〜６のいずれか一項に記載の遺伝子操作された細菌。
【請求項８】
前記挿入配列が、非天然の状況で挿入された未変性配列である、請求項１〜７のいずれか一項に記載の遺伝子操作された細菌。
【請求項９】
植物種子、植物苗、または植物、および請求項１〜８のいずれか一項に記載の遺伝子操作された細菌を含む、組成物であって、任意で、前記植物種子、植物苗、または植物がトウモロコシ、小麦、稲、大麦、大豆、モロコシ、およびライ麦からなる群から選択される、前記組成物。
【請求項１０】
微生物遺伝子の未変性プロモーター配列を、配列番号５、１、２、３、４および６〜７２からなる群から選択される配列に対して少なくとも８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を含むプロモーター配列で置き換えることによって、微生物における微生物遺伝子の発現を増加させる方法。
【請求項１１】
前記微生物遺伝子の発現を増加させることが、前記微生物によるアンモニウム排泄、窒素固定、または植物のコロニー形成を増加させる、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
ａ）窒素の固定または同化に関連するタンパク質、またはｂ）目的のタンパク質のコード配列、および配列番号５、１、２、３、４および６〜７２からなる群から選択される配列に対して少なくとも８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を含む配列を含む、ポリヌクレオチド。
【請求項１３】
窒素の固定または同化に関連するタンパク質の前記コード配列が、ｎｉｆＡ、ｎｉｆＬ、ｎｔｒＢ、ｎｔｒＣ、グルタミンシンテターゼをコードするポリヌクレオチド、ｇｌｎＡ、ｇｌｎＢ、ｇｌｎＫ、ｄｒａＴ、ａｍｔＢ、グルタミナーゼをコードするポリヌクレオチド、ｇｌｎＤ、ｇｌｎＥ、ｎｉｆＪ、ｎｉｆＨ、ｎｉｆＤ、ｎｉｆＫ、ｎｉｆＹ、ｎｉｆＥ、ｎｉｆＮ、ｎｉｆＵ、ｎｉｆＳ、ｎｉｆＶ、ｎｉｆＷ、ｎｉｆＺ、ｎｉｆＭ、ｎｉｆＦ、ｎｉｆＢ、ｎｉｆＱ、およびニトロゲナーゼ酵素の生合成に関連する遺伝子からなる群から選択される、または
目的のタンパク質のコード配列が、トランスポーター遺伝子、イオントランスポーター遺伝子、エキソポリサッカライド生合成遺伝子、セルロース生合成遺伝子、トレハロース生合成遺伝子、ＣｙｓＺ遺伝子、ｂｃｓ遺伝子、ｔｒｅＺ遺伝子、およびｏｔｓＢ遺伝子からなる群から選択される、請求項１２に記載のポリヌクレオチド。
【請求項１４】
植物中の大気由来窒素の量を増加させる方法であって、前記植物を遺伝子操作された細菌と接触させる工程を含み、前記遺伝子操作された細菌が、配列番号５、１、２、３、４および６〜７２からなる群から選択される配列に対して少なくとも８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を含むプロモーターに作動可能に連結された窒素固定コード配列を含み、任意で、前記遺伝子操作された細菌が、ラーニア・アクアティリス（Ｒａｈｎｅｌｌａ  ａｑｕａｔｉｌｉｓ）、クレブシエラ・バリコラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｖａｒｉｉｃｏｌａ）、アクロモバクター・スピリチヌス（Ａｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒ  ｓｐｉｒｉｔｉｎｕｓ）、アクロモバクター・マープラテンシス（Ａｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒ  ｍａｒｐｌａｔｅｎｓｉｓ）、マイコバクテリウム・ムラレ（Ｍｉｃｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｍｕｒａｌｅ）、クルイベラ・インテルメディア（Ｋｌｕｙｖｅｒａ  ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａ）、コサコニア・シュードサッカリ（Ｋｏｓａｋｏｎｉａ  ｐｓｅｕｄｏｓａｃｃｈａｒｉ）、エンテロバクター（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ）ｓｐ．、アゾスピリルム・リポフェルム（Ａｚｏｓｐｉｒｉｌｌｕｍ  ｌｉｐｏｆｅｒｕｍ）、およびコサコニア・サッカリ（Ｋｏｓａｋｏｎｉａ  ｓａｃｃｈａｒｉ）からなる群から選択される、前記方法。
【請求項１５】
作物の植え付けと収穫の間に必要とされる窒素肥料の量を減少させる方法であって、請求項１〜８のいずれか一項に記載の遺伝子組み換え細菌を前記作物に接種する工程を含む、方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１５】
いくつかの実施形態では、本開示は、作物の植え付けと収穫との間に必要な窒素肥料の量を減少させる方法を提供し、この方法は、本明細書に記載の遺伝子操作された細菌を当該作物に接種することを含む。
[本発明1001]
配列番号1〜72からなる群から選択される配列に対して少なくとも約80％の配列同一性を有する挿入配列を含む、遺伝子操作された細菌。
[本発明1002]
前記挿入配列が、未変性プロモーター配列に置き換わる、本発明1001の遺伝子操作された細菌。
[本発明1003]
前記挿入配列が、配列番号1〜72からなる群から選択される配列に対して少なくとも約85％の配列同一性を含む、本発明1001の遺伝子操作された細菌。
[本発明1004]
前記挿入配列が、配列番号1〜72からなる群から選択される配列に対して少なくとも約90％の配列同一性を含む、本発明1001の遺伝子操作された細菌。
[本発明1005]
前記挿入配列が、配列番号1〜72からなる群から選択される配列に対して少なくとも約95％の配列同一性を含む、本発明1001の遺伝子操作された細菌。
[本発明1006]
前記挿入配列が、配列番号1〜72からなる群から選択される配列に対して少なくとも約97％の配列同一性を含む、本発明1001の遺伝子操作された細菌。
[本発明1007]
前記挿入配列が、配列番号1〜72からなる群から選択される配列に対して少なくとも約98％の配列同一性を含む、本発明1001の遺伝子操作された細菌。
[本発明1008]
前記挿入配列が、配列番号1〜72からなる群から選択される配列に対して少なくとも約99％の配列同一性を含む、本発明1001の遺伝子操作された細菌。
[本発明1009]
配列番号1〜72からなる群から選択される配列に対して少なくとも80％の配列同一性を有する挿入配列に作動可能に連結された未変性コード配列を含む、遺伝子操作された細菌。
[本発明1010]
前記挿入配列が、未変性プロモーター配列に置き換わる、本発明1009の遺伝子操作された細菌。
[本発明1011]
前記挿入配列が、配列番号1〜72からなる群から選択される配列に対して少なくとも約85％の配列同一性を含む、本発明1009の遺伝子操作された細菌。
[本発明1012]
前記配列が、配列番号1〜72からなる群から選択される配列に対して少なくとも約90％の配列同一性を含む、本発明1009の遺伝子操作された細菌。
[本発明1013]
前記挿入配列が、配列番号1〜72からなる群から選択される配列に対して少なくとも約95％の配列同一性を含む、本発明1009の遺伝子操作された細菌。
[本発明1014]
前記挿入配列が、配列番号1〜72からなる群から選択される配列に対して少なくとも約97％の配列同一性を含む、本発明1009の遺伝子操作された細菌。
[本発明1015]
前記挿入配列が、配列番号1〜72からなる群から選択される配列に対して少なくとも約98％の配列同一性を含む、本発明1009の遺伝子操作された細菌。
[本発明1016]
前記挿入配列が、配列番号1〜72からなる群から選択される配列に対して少なくとも約99％の配列同一性を含む、本発明1009の遺伝子操作された細菌。
[本発明1017]
前記未変性コード配列が、ｃｙｓＺ、ｏｔｓＢ、ｂｃｓ遺伝子、およびｔｒｅＺからなる群から選択される、本発明1009〜1016のいずれかの遺伝子操作された細菌。
[本発明1018]
前記未変性コード配列が、トランスポーター遺伝子、イオントランスポーター遺伝子、エキソポリサッカライド生合成遺伝子、セルロース生合成遺伝子、およびトレハロース生合成遺伝子からなる群から選択される、本発明1009〜1016のいずれかの遺伝子操作された細菌。
[本発明1019]
配列番号1〜72からなる群から選択される配列に対して少なくとも約80％の配列同一性を有する挿入配列に作動可能に連結された窒素固定または窒素同化コード配列を含む、遺伝子操作された細菌。
[本発明1020]
配列番号1〜72からなる群から選択される配列に対して少なくとも約80％の配列同一性を有する前記挿入配列が、未変性プロモーター配列に置き換わる、本発明1019の遺伝子操作された細菌。
[本発明1021]
前記挿入配列が、配列番号1〜72からなる群から選択される配列に対して少なくとも約85％の配列同一性を含む、本発明1019の遺伝子操作された細菌。
[本発明1022]
前記挿入配列が、配列番号1〜72からなる群から選択される配列に対して少なくとも約90％の配列同一性を含む、本発明1019の遺伝子操作された細菌。
[本発明1023]
前記挿入配列が、配列番号1〜72からなる群から選択される配列に対して少なくとも約95％の配列同一性を含む、本発明1019の遺伝子操作された細菌。
[本発明1024]
前記挿入配列が、配列番号1〜72からなる群から選択される配列に対して少なくとも約97％の配列同一性を含む、本発明1019の遺伝子操作された細菌。
[本発明1025]
前記挿入配列が、配列番号1〜72からなる群から選択される配列に対して少なくとも約98％の配列同一性を含む、本発明1019の遺伝子操作された細菌。
[本発明1026]
前記挿入配列が、配列番号1〜72からなる群から選択される配列に対して少なくとも約99％の配列同一性を含む、本発明1019の遺伝子操作された細菌。
[本発明1027]
前記窒素固定または窒素同化コード配列が、ｎｉｆＡ、ｎｉｆＬ、ｎｔｒＢ、ｎｔｒＣ、グルタミンシンテターゼをコードするポリヌクレオチド、ｇｌｎＡ、ｇｌｎＢ、ｇｌｎＫ、ｄｒａｔ、ａｍｔＢ、グルタミナーゼをコードするポリヌクレオチド、ｇｌｎＤ、ｇｌｎＥ、ｎｉｆＪ、ｎｉｆＨ、ｎｉｆＤ、ｎｉｆＫ、ｎｉｆＹ、ｎｉｆＥ、ｎｉｆＮ、ｎｉｆＵ、ｎｉｆＳ、ｎｉｆＶ、ｎｉｆＷ、ｎｉｆＺ、ｎｉｆＭ、ｎｉｆＦ、ｎｉｆＢ、ｎｉｆＱ、およびニトロゲナーゼ酵素の生合成に関連する遺伝子からなる群から選択される、本発明1019〜1026のいずれかの遺伝子操作された細菌。
[本発明1028]
遺伝子操作されたジアゾ栄養細菌である、本発明1001〜1027のいずれかの遺伝子操作された細菌。
[本発明1029]
非属間である、本発明1001〜1028のいずれかの遺伝子操作された細菌。
[本発明1030]
属間である、本発明1001〜1028のいずれかの遺伝子操作された細菌。
[本発明1031]
非窒素制限条件下で空中窒素を固定する、本発明1001〜1030のいずれかの遺伝子操作された細菌。
[本発明1032]
同じ種の遺伝子操作されていない細菌よりも多くの空中窒素を固定する、本発明1001〜1031のいずれかの遺伝子操作された細菌。
[本発明1033]
ラーニア・アクアティリス（Ｒａｈｎｅｌｌａ  ａｑｕａｔｉｌｉｓ）、クレブシエラ・バリコラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｖａｒｉｉｃｏｌａ）、コサコニア・シュードサッカリ（Ｋｏｓａｋｏｎｉａ  ｐｓｅｕｄｏｓａｃｃｈａｒｉ）、クルイベラ・インテルメディア（Ｋｌｕｙｖｅｒａ  ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａ）、クレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）ｓｐ．、エンテロバクター（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ）ｓｐ．、およびコサコニア・サッカリ（Ｋｏｓａｋｏｎｉａ  ｓａｃｃｈａｒｉ）からなる群から選択される、本発明1001〜1032のいずれかの遺伝子操作された細菌。
[本発明1034]
前記遺伝子操作された細菌が、ラーニア（Ｒａｈｎｅｌｌａ）属のものであり、前記挿入配列が、配列番号41〜59および63〜66からなる群から選択される配列に対して少なくとも約80％の配列同一性を含む、本発明1001〜1032のいずれかの遺伝子操作された細菌。
[本発明1035]
前記遺伝子操作された細菌が、ラーニア・アクアティリス（Ｒａｈｎｅｌｌａ  ａｑｕａｔｉｌｉｓ）であり、前記挿入配列が、配列番号41〜59および63〜66からなる群から選択される配列に対して少なくとも約80％の配列同一性を含む、本発明1001〜1032のいずれかの遺伝子操作された細菌。
[本発明1036]
前記遺伝子操作された細菌が、コサコニア（Ｋｏｓａｋｏｎｉａ）属のものであり、前記挿入配列が、配列番号1〜10からなる群から選択される配列に対して少なくとも約80％の配列同一性を含む、本発明1001〜1032のいずれかの遺伝子操作された細菌。
[本発明1037]
前記遺伝子操作された細菌が、コサコニア・サッカリ（Ｋｏｓａｋｏｎｉａ  ｓａｃｃｈａｒｉ）であり、前記挿入配列が、配列番号1〜10からなる群から選択される配列に対して少なくとも約80％の配列同一性を含む、本発明1001〜1032のいずれかの遺伝子操作された細菌。
[本発明1038]
前記遺伝子操作された細菌が、クレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）属のものであり、前記挿入配列が、配列番号11〜40からなる群から選択される配列に対して少なくとも約80％の配列同一性を含む、本発明1001〜1032のいずれかの遺伝子操作された細菌。
[本発明1039]
前記遺伝子操作された細菌が、クレブシエラ・バリコラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｖａｒｉｉｃｏｌａ）であり、前記挿入配列が、配列番号11〜40からなる群から選択される配列に対して少なくとも約80％の配列同一性を含む、本発明1001〜1032のいずれかの遺伝子操作された細菌。
[本発明1040]
前記遺伝子操作された細菌が、クルイベラ（Ｋｌｕｙｖｅｒａ）属のものであり、前記挿入配列が、配列番号60に対して少なくとも約80％の配列同一性を含む、本発明1001〜1032のいずれかの遺伝子操作された細菌。
[本発明1041]
前記遺伝子操作された細菌が、クルイベラ・インテルメディア（Ｋｌｕｙｖｅｒａ  ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａ）であり、前記挿入配列が、配列番号60に対して少なくとも約80％の配列同一性を含む、本発明1001〜1032のいずれかの遺伝子操作された細菌。
[本発明1042]
前記遺伝子操作された細菌が、コサコニア・シュードサッカリ（Ｋｏｓａｋｏｎｉａ  ｐｓｅｕｄｏｓａｃｃｈａｒｉ）であり、前記挿入配列が、配列番号61および70〜72からなる群から選択される配列に対して少なくとも約80％の配列同一性を含む、本発明1001〜1032のいずれかの遺伝子操作された細菌。
[本発明1043]
前記遺伝子操作された細菌が、エンテロバクター（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ）種であり、前記挿入配列が、配列番号62に対して少なくとも約80％の配列同一性を含む、本発明1001〜1032のいずれかの遺伝子操作された細菌。
[本発明1044]
前記遺伝子操作された細菌が、クレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）種であり、前記挿入配列が、配列番号67〜69からなる群から選択される配列に対して少なくとも約80％の配列同一性を含む、本発明1001〜1032のいずれかの遺伝子操作された細菌。
[本発明1045]
前記挿入配列が、非天然の状況で挿入された未変性配列である、本発明1001〜1044のいずれかの遺伝子操作された細菌。
[本発明1046]
植物種子および本発明1001〜1045のいずれかの遺伝子操作された細菌を含む、組成物。
[本発明1047]
前記植物種子が、トウモロコシ種子、小麦種子、稲種子、大麦種子、大豆種子、モロコシ種子、およびライ麦種子からなる群から選択される、本発明1046の組成物。
[本発明1048]
植物および本発明1001〜1045のいずれかの遺伝子操作された細菌を含む、組成物。
[本発明1049]
前記植物が、苗である、本発明1048の組成物。
[本発明1050]
前記植物が、トウモロコシ、小麦、稲、大麦、ライ麦、大豆、およびモロコシからなる群から選択される、本発明1048の組成物。
[本発明1051]
微生物遺伝子の未変性プロモーター配列を、配列番号1〜72からなる群から選択される配列に対して少なくとも80％の配列同一性を含むプロモーター配列で置き換えることによって、微生物における微生物遺伝子の発現を増加させる方法。
[本発明1052]
前記プロモーター配列が、配列番号1〜72からなる群から選択される配列に対して少なくとも85％の配列同一性を含む、本発明1051の方法。
[本発明1053]
前記プロモーター配列が、配列番号1〜72からなる群から選択される配列に対して少なくとも90％の配列同一性を含む、本発明1051の方法。
[本発明1054]
前記プロモーター配列が、配列番号1〜72からなる群から選択される配列に対して少なくとも95％の配列同一性を含む、本発明1051の方法。
[本発明1055]
前記プロモーター配列が、配列番号1〜72からなる群から選択される配列に対して少なくとも97％の配列同一性を含む、本発明1051の方法。
[本発明1056]
前記プロモーター配列が、配列番号1〜72からなる群から選択される配列に対して少なくとも98％の配列同一性を含む、本発明1051の方法。
[本発明1057]
前記プロモーター配列が、配列番号1〜72からなる群から選択される配列に対して少なくとも99％の配列同一性を含む、本発明1051の方法。
[本発明1058]
前記微生物遺伝子の発現を増加させることが、前記微生物によるアンモニウム排泄を増加させる、本発明1051〜1057のいずれかの方法。
[本発明1059]
前記微生物遺伝子の発現を増加させることが、前記微生物による窒素固定を増加させる、本発明1051〜1057のいずれかの方法。
[本発明1060]
前記微生物遺伝子の発現を増加させることが、前記微生物による植物のコロニー形成を増加させる、本発明1051〜1057のいずれかの方法。
[本発明1061]
窒素の固定または同化に関連するタンパク質のコード配列、および配列番号1〜72からなる群から選択される配列に対して少なくとも80％の配列同一性を含む配列を含む、ポリヌクレオチド。
[本発明1062]
窒素の固定または同化に関連するタンパク質の前記コード配列が、ｎｉｆＡ、ｎｉｆＬ、ｎｔｒＢ、ｎｔｒＣ、グルタミンシンテターゼをコードするポリヌクレオチド、ｇｌｎＡ、ｇｌｎＢ、ｇｌｎＫ、ｄｒａｔ、ａｍｔＢ、グルタミナーゼをコードするポリヌクレオチド、ｇｌｎＤ、ｇｌｎＥ、ｎｉｆＪ、ｎｉｆＨ、ｎｉｆＤ、ｎｉｆＫ、ｎｉｆＹ、ｎｉｆＥ、ｎｉｆＮ、ｎｉｆＵ、ｎｉｆＳ、ｎｉｆＶ、ｎｉｆＷ、ｎｉｆＺ、ｎｉｆＭ、ｎｉｆＦ、ｎｉｆＢ、ｎｉｆＱ、およびニトロゲナーゼ酵素の生合成に関連する遺伝子からなる群から選択される、本発明1061のポリヌクレオチド。
[本発明1063]
目的のタンパク質のコード配列、および配列番号1〜72からなる群から選択される配列に対して少なくとも80％の配列同一性を含む配列を含む、ポリヌクレオチド。
[本発明1064]
前記目的のタンパク質が、トランスポーター遺伝子、イオントランスポーター遺伝子、エキソポリサッカライド生合成遺伝子、セルロース生合成遺伝子、およびトレハロース生合成遺伝子からなる群から選択される、本発明1063のポリヌクレオチド。
[本発明1065]
前記目的のタンパク質が、ＣｙｓＺ遺伝子、ｂｃｓ遺伝子、ｔｒｅＺ遺伝子、およびｏｔｓＢ遺伝子からなる群から選択される、本発明1063のポリヌクレオチド。
[本発明1066]
配列番号1〜72からなる群から選択される配列に対して少なくとも85％の配列同一性を有する配列を含む、本発明1061〜1065のいずれかのポリヌクレオチド。
[本発明1067]
配列番号1〜72からなる群から選択される配列に対して少なくとも90％の配列同一性を有する配列を含む、本発明1061〜1065のいずれかのポリヌクレオチド。
[本発明1068]
配列番号1〜72からなる群から選択される配列に対して少なくとも95％の配列同一性を有する配列を含む、本発明1061〜1065のいずれかのポリヌクレオチド。
[本発明1069]
配列番号1〜72からなる群から選択される配列に対して少なくとも97％の配列同一性を有する配列を含む、本発明1061〜1065のいずれかのポリヌクレオチド。
[本発明1070]
配列番号1〜72からなる群から選択される配列に対して少なくとも98％の配列同一性を有する配列を含む、本発明1061〜1065のいずれかのポリヌクレオチド。
[本発明1071]
配列番号1〜72からなる群から選択される配列に対して少なくとも99％の配列同一性を有する配列を含む、本発明1061〜1065のいずれかのポリヌクレオチド。
[本発明1072]
植物中の大気由来窒素の量を増加させる方法であって、前記植物を遺伝子操作された細菌と接触させる工程を含み、前記遺伝子操作された細菌が、配列番号1〜72からなる群から選択される配列に対して少なくとも80％の配列同一性を含むプロモーターに作動可能に連結された窒素固定コード配列を含む、方法。
[本発明1073]
前記プロモーターが、配列番号1〜72からなる群から選択される配列に対して少なくとも85％の配列同一性を含む、本発明1072の方法。
[本発明1074]
前記プロモーターが、配列番号1〜72からなる群から選択される配列に対して少なくとも90％の配列同一性を含む、本発明1072の方法。
[本発明1075]
前記プロモーターが、配列番号1〜72からなる群から選択される配列に対して少なくとも95％の配列同一性を含む、本発明1072の方法。
[本発明1076]
前記プロモーターが、配列番号1〜72からなる群から選択される配列に対して少なくとも97％の配列同一性を含む、本発明1072の方法。
[本発明1077]
前記プロモーターが、配列番号1〜72からなる群から選択される配列に対して少なくとも98％の配列同一性を含む、本発明1072の方法。
[本発明1078]
前記プロモーターが、配列番号1〜72からなる群から選択される配列に対して少なくとも99％の配列同一性を含む、本発明1072の方法。
[本発明1079]
前記遺伝子操作された細菌が、ラーニア・アクアティリス（Ｒａｈｎｅｌｌａ  ａｑｕａｔｉｌｉｓ）、クレブシエラ・バリコラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｖａｒｉｉｃｏｌａ）、アクロモバクター・スピリチヌス（Ａｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒ  ｓｐｉｒｉｔｉｎｕｓ）、アクロモバクター・マープラテンシス（Ａｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒ  ｍａｒｐｌａｔｅｎｓｉｓ）、マイコバクテリウム・ムラレ（Ｍｉｃｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｍｕｒａｌｅ）、クルイベラ・インテルメディア（Ｋｌｕｙｖｅｒａ  ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａ）、コサコニア・シュードサッカリ（Ｋｏｓａｋｏｎｉａ  ｐｓｅｕｄｏｓａｃｃｈａｒｉ）、エンテロバクター（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ）ｓｐ．、アゾスピリルム・リポフェルム（Ａｚｏｓｐｉｒｉｌｌｕｍ  ｌｉｐｏｆｅｒｕｍ）、およびコサコニア・サッカリ（Ｋｏｓａｋｏｎｉａ  ｓａｃｃｈａｒｉ）からなる群から選択される、本発明1072〜1078のいずれかの方法。
[本発明1080]
作物の植え付けと収穫の間に必要とされる窒素肥料の量を減少させる方法であって、本発明1001〜1045のいずれかの遺伝子組み換え細菌を前記作物に接種する工程を含む、方法。