【手続補正書】
【提出日】令和3年7月14日(2021.7.14)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
血液試料中の凝固を評価する方法であって、
第１の凝固因子を血液試料の少なくとも２つのポーションに添加するステップであって、それぞれのポーションが異なる濃度で第１の凝固因子を受け取るステップ；
第２の凝固因子を血液試料の少なくとも２つのさらなるポーションに添加するステップであって、それぞれのさらなるポーションが異なる濃度で第２の凝固因子を受け取り、ここで第２の凝固因子は凝固経路における第１の凝固因子の上流で作用する凝固因子であるステップ；および
血液試料のそれぞれのポーションおよびそれぞれのさらなるポーションについて、血塊形成を測定するステップ；および
血液試料のそれぞれのポーションおよびそれぞれのさらなるポーションについて測定された血塊形成に基づいて、血液試料が凝固経路における凝固阻害または凝固欠損を有するか否かを決定するステップ
を含む方法。
【請求項２】
血液試料が、全血または血漿である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
血液試料が、全血であり、血液試料のそれぞれのポーションおよびそれぞれのさらなるポーションが、約１ｍＬ未満である、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
第１の凝固因子が、内因性経路の因子、外因性経路の因子、および共通経路の因子から選択され、第２の凝固因子が、内因性経路の因子、外因性経路の因子、および共通経路の因子から選択される、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
第１および第２の凝固因子が、第Ｉ因子〜第ＸＩＩＩ因子、およびそれらの活性型から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
第１の凝固因子が第ＩＩａ因子であり、第２の凝固因子が第Ｘａ因子である、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
第１および第２の凝固因子の少なくとも１つが、フォン・ヴィレブランド因子、プレカリクレイン（フレッチャー因子）、高分子量キニノーゲン（ＨＭＷＫ）（フィッツジェラルド因子）、フィブロネクチン、アンチトロンビンＩＩＩ、ヘパリンコファクターＩＩ、プロテインＣ、プロテインＳ、プロテインＺ、プロテインＺ関連プロテアーゼ阻害剤（ＺＰＩ）、プラスミノーゲンもしくはその活性型、アルファ２−抗プラスミン、組織プラスミノーゲン活性化因子（ｔＰＡ）、ウロキナーゼ、プラスミノーゲン活性化因子阻害剤−１（ＰＡＩ１）、プラスミノーゲン活性化因子阻害剤−２（ＰＡＩ２）、組織因子経路阻害剤（ＴＦＰＩ）またはがんプロコアグラントである、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
第１の凝固因子が、０．１ｎｇ／ｍＬ〜１０μｇ／ｍＬの範囲の濃度で血液試料のそれぞれのポーションに添加される、請求項１〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
第１の凝固因子の濃度が、血液試料のポーションの間で少なくとも２倍異なる、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
血塊形成を測定するステップが、血塊形成時間を測定するステップを含む、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
血塊形成が：電気インピーダンス、ビーズの添加ならびにビーズの流量および／もしくは数の定量化、流速および／もしくは圧力の変化、トロンボエラストグラフィー、蛍光フィブリノーゲンを使用する蛍光検出、濁度、赤外分光法、画像センサー、光吸収、蛍光マーカー検出、音響センサーおよび／もしくはフォトニックセンサーを使用する検出、フローサイトメトリー、ならびに視覚的な凝固検出の１つまたは複数によって測定される、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
血塊形成時間を１つまたは複数の正常参照範囲および／または１つまたは複数の異常参照範囲と比較するステップをさらに含む、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
血液試料の少なくとも２つのポーションが、マイクロ流体デバイスの第１の系列のチャネルを流れ、血液試料のそれぞれのポーションが別個のチャネルを流れ、ここで第１の系列のチャネルが、血塊形成を引き起こし、および／または局所化させるように構成された、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
チャネルが、同一の形状を有するマイクロチャネルである、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
第１の系列のチャネルが、異なる量の第１の凝固因子でコーティングされているか、または異なる量の第１の凝固因子を含有する、請求項１３に記載の方法。
【請求項１６】
第１の系列のチャネルが、第１の系列のチャネルにわたる漸増量で第１の凝固因子でコーティングされているか、または第１の系列のチャネルの諸チャネルにわたる漸増量で第１の凝固因子を含有する、請求項１３または１４に記載の方法。
【請求項１７】
血液試料の少なくとも２つのさらなるポーションが、マイクロ流体デバイスの第２の系列のチャネルを流れ、血液試料のそれぞれのさらなるポーションが別個のチャネルを流れ、ここで第２の系列のチャネルが、第２の系列のチャネルにわたる漸増量で第２の凝固因子でコーティングされているか、または第２の系列のチャネルにわたる漸増量で第２の凝固因子を含有し、ここで第１の系列のチャネルのそれぞれおよび第２の系列のチャネルのそれぞれが同一の形状を有する、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
第１の凝固因子が懸濁液もしくは溶液中にあるかまたは凍結乾燥されていて、第２の凝固因子が懸濁液もしくは溶液中にあるかまたは凍結乾燥されている、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
第１の系列のチャネルのそれぞれにおける血塊形成の程度が、定められた時点（複数可）で測定される、請求項１３〜１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
血液試料が、抗凝固剤による治療を受けている対象からの血液試料である、請求項１〜１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
抗凝固剤が、ＦＸａ阻害剤、ＦＩＩａ阻害剤、ＦＸＩ阻害剤、ＦＸＩａ阻害剤、ＦＸＩＩ阻害剤およびＦＸＩＩａ阻害剤から選択される因子特異的阻害剤である、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
抗凝固剤が、第ＩＩａ因子および／または第Ｘａ因子の阻害をもたらす、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
血塊形成を測定するステップが、血塊形成時間を測定するステップを含み、
血液試料の少なくとも２つのポーションに第１の凝固因子を添加することが正常化された血塊形成時間を達成しない場合、血液試料が、第１の凝固因子が凝固経路で作用するところの下流に凝固阻害もしくは凝固欠損を有すると決定されるか；または
血液試料の少なくとも２つのポーションに第１の凝固因子を添加することが、第１の凝固因子の濃度依存性の様式で血塊形成時間を減少させる場合、血液試料が、第１の凝固因子が凝固経路で作用するところの上流もしくはその点において凝固阻害もしくは凝固欠損を有すると決定される、
請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２４】
凝固阻害もしくは凝固欠損の下流またはその点で作用する選択された凝固因子の活性型を、血液試料の参照ポーションに添加するステップ、および、血液試料の参照ポーションについて血塊形成時間を測定するステップによって、正常化された血塊形成時間が決定される、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
血塊形成を測定するステップが、血塊形成時間を測定するステップを含み、
血液試料の少なくとも２つのさらなるポーションに第２の凝固因子を添加することが正常化された血塊形成時間を達成せず、かつ、血液試料の少なくとも２つのポーションに第１の凝固因子を添加することが第１の凝固因子の濃度依存性の様式で血塊形成時間を減少させる場合に、血液試料が、第２の凝固因子が凝固経路で作用するところの下流および第１の凝固因子が凝固経路で作用する点である凝固阻害もしくは凝固欠損を有すると決定されるか；
血液試料の少なくとも２つのさらなるポーションに第２の凝固因子を添加することが、第２の凝固因子の濃度依存性の様式で血塊形成時間を減少させ、かつ血液試料の少なくとも２つのポーションに第１の凝固因子を添加することが正常化された血塊形成時間を達成する場合に、血液試料が、第２の凝固因子が凝固経路で作用する点である凝固阻害もしくは凝固欠損を有すると決定されるか；または
血液試料の少なくとも２つのさらなるポーションに第２の凝固因子を添加することが正常化された血塊形成時間を達成し、かつ血液試料の少なくとも２つのポーションに第１の凝固因子を添加することが正常化された血塊形成時間を達成する場合に、血液試料が、第２の凝固因子が凝固経路で作用するところの上流である凝固阻害もしくは凝固欠損を有すると決定される、請求項１に記載の方法。
【請求項２６】
血液試料において第Ｘａ因子の機能を評価する方法であって、以下のステップを含む方法：
血液試料の複数の第１のポーションに第１の凝固因子を提供するステップであって、血液試料のそれぞれの第１のポーションが異なる濃度で第１の凝固因子を受け取り、ここで第１の凝固因子が、凝固経路における第Ｘａ因子の下流である点において作用する、ステップ；
血液試料の複数の第２のポーションに第２の凝固因子を提供するステップであって、血液試料のそれぞれの第２のポーションが異なる濃度で第２の凝固因子を受け取り、ここで第２の凝固因子が、凝固経路における第Ｘａ因子の上流である点において作用する、ステップ；
血液試料の複数の第３のポーションに第Ｘａ因子を提供するステップであって、血液試料のそれぞれの第３のポーションが異なる濃度で第Ｘａ因子を受け取るステップ；
血液試料のそれぞれの第１のポーション、それぞれの第２のポーション、およびそれぞれの第３のポーションにおいて血塊形成時間を測定するステップ、および凝固因子が提供されていなかった血液試料の第４のポーションにおいて血塊形成時間を測定するステップ；ならびに
血液試料が第Ｘａ因子の機能の阻害または欠損を有するか否かを検出するステップ。
【請求項２７】
血液試料の少なくとも１つの第２のポーションについて測定された血塊形成時間が、血液試料の少なくとも１つの第１のポーションについて測定された血塊形成時間より長く、かつ血液試料の第３のポーションについて測定された血塊形成時間が、第Ｘａ因子の濃度依存性の様式で減少する場合に、血液試料が第Ｘａ因子の機能の阻害または欠損を有すると検出される、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
血液試料において第Ｘａ因子の機能を評価する方法であって、以下のステップを含む方法：
血液試料の複数の第１のポーションに第１の凝固因子を提供するステップであって、血液試料のそれぞれの第１のポーションが異なる濃度で第１の凝固因子を受け取り、ここで第１の凝固因子が、凝固経路における第Ｘａ因子の下流である点において作用する、ステップ；
血液試料の複数の第２のポーションに第Ｘａ因子を提供するステップであって、血液試料のそれぞれの第２のポーションが異なる濃度で第Ｘａ因子を受け取る、ステップ；
血液試料のそれぞれの第１のポーションにおいて、および血液試料のそれぞれの第２のポーションにおいて、血塊形成時間を測定するステップ、および凝固因子が提供されていなかった血液試料の第３のポーションにおいて血塊形成時間を測定するステップ；ならびに
血液試料が第Ｘａ因子の機能の阻害または欠損を有するか否かを検出するステップ。
【請求項２９】
血液試料の少なくとも１つの第１のポーションについて測定された血塊形成時間が、血液試料の第３のポーションについて測定された血塊形成時間より短く、かつ血液試料の第２のポーションについて測定された血塊形成時間が、第Ｘａ因子の濃度依存性の様式で減少する場合に、血液試料が第Ｘａ因子の機能の阻害または欠損を有すると検出される、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
血液試料において第ＩＩａ因子の機能を評価する方法であって、以下のステップを含む方法：
血液試料の複数の第１のポーションに第１の凝固因子を提供するステップであって、血液試料のそれぞれの第１のポーションが異なる濃度で第１の凝固因子を受け取り、ここで第１の凝固因子が、凝固経路における第ＩＩａ因子の上流である点において作用する、ステップ；
血液試料の複数の第２のポーションに第ＩＩａ因子を提供するステップであって、血液試料のそれぞれの第２のポーションが異なる濃度で第ＩＩａ因子を受け取る、ステップ；
血液試料のそれぞれの第１のポーションにおいて、および血液試料のそれぞれの第２のポーションにおいて血塊形成時間を測定するステップ、および、凝固因子が提供されていなかった血液試料の第３のポーションにおいて血塊形成時間を測定するステップ；ならびに、
血液試料が第ＩＩａ因子の機能の阻害または欠損を有するか否かを検出するステップ。
【請求項３１】
血液試料の少なくとも１つの第１のポーションについて測定された血塊形成時間が、血液試料の少なくとも１つの第２のポーションについて測定された血塊形成時間より長く、かつ血液試料の第２のポーションについて測定された血塊形成時間が、第ＩＩａ因子の濃度依存性の様式で減少する場合に、血液試料が第ＩＩａ因子の機能の阻害または欠損を有すると検出される、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
血液試料の少なくとも１つの第２のポーションについて測定された血塊形成時間が、血液試料の第３のポーションについて測定された血塊形成時間より短く、かつ血液試料の第２のポーションについて測定された血塊形成時間が、第ＩＩａ因子の濃度依存性の様式で減少する場合に、血液試料が第ＩＩａ因子の機能の阻害または欠損を有すると検出される、請求項３０に記載の方法。
【請求項３３】
血液試料において第Ｘａ因子の機能および第ＩＩａ因子の機能を評価する方法であって、以下のステップを含む方法：
血液試料の複数の第１のポーションに第Ｘａ因子を提供するステップであって、血液試料のそれぞれの第１のポーションが異なる濃度で第Ｘａ因子を受け取る、ステップ；
血液試料の複数の第２のポーションに第ＩＩａ因子を提供するステップであって、血液試料のそれぞれの第２のポーションが異なる濃度で第ＩＩａ因子を受け取る、ステップ；
血液試料のそれぞれの第１のポーションにおいて、および血液試料のそれぞれの第２のポーションにおいて血塊形成時間を測定するステップ、および凝固因子が提供されていなかった血液試料の第３のポーションにおいて血塊形成時間を測定するステップ；
血液試料が第Ｘａ因子の機能の阻害または欠損を有するか否かを検出するステップ；ならびに
血液試料が第ＩＩａ因子の機能の阻害または欠損を有するか否かを検出するステップ。
【請求項３４】
血液試料の少なくとも１つの第２のポーションについて測定された血塊形成時間が、血液試料の第３のポーションについて測定された血塊形成時間より短く、かつ血液試料の第１のポーションについて測定された血塊形成時間が、第Ｘａ因子の濃度依存性の様式で減少する場合に、血液試料が第Ｘａ因子の機能の阻害または欠損を有すると検出される、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
血液試料の第１のポーションについて測定された血塊形成時間が、第Ｘａ因子の濃度依存性の様式で減少せず、血液試料の第２のポーションについて測定された血塊形成時間が、第ＩＩａ因子の濃度依存性の様式で減少する場合に、血液試料が第ＩＩａ因子の機能の阻害または欠損を有すると検出される、請求項３３に記載の方法。
【請求項３６】
血塊形成時間を測定するステップが、定められた時間（複数可）で血塊形成時間を測定するステップを含む、請求項２６〜３５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３７】
凝固を検出するためのマイクロ流体デバイスであって、
基材に形成された第１の系列のチャネルを含み、それぞれの第１の系列のチャネルが、血塊の形成を引き起こし、および／または局在化させるように構成された形状を有する血塊形成区域を含み、
ここで第１の系列のチャネルが、同じ形状を有する、
マイクロ流体デバイス。
【請求項３８】
第１の系列のチャネルが、異なる量の第１の凝固因子でコーティングされているか、または異なる量の第１の凝固因子を含有する、請求項３７に記載のマイクロ流体デバイス。
【請求項３９】
第１の凝固因子が、内因性経路の因子、外因性経路の因子および共通経路の因子から選択される、請求項３８に記載のマイクロ流体デバイス。
【請求項４０】
第１の凝固因子が、フォン・ヴィレブランド因子、プレカリクレイン（フレッチャー因子）、高分子量キニノーゲン（ＨＭＷＫ）（フィッツジェラルド因子）、フィブロネクチン、アンチトロンビンＩＩＩ、ヘパリンコファクターＩＩ、プロテインＣ、プロテインＳ、プロテインＺ、プロテインＺ関連プロテアーゼ阻害剤（ＺＰＩ）、プラスミノーゲンもしくはその活性型、アルファ２−抗プラスミン、組織プラスミノーゲン活性化因子（ｔＰＡ）、ウロキナーゼ、プラスミノーゲン活性化因子阻害剤−１（ＰＡＩ１）、プラスミノーゲン活性化因子阻害剤−２（ＰＡＩ２）、組織因子経路阻害剤（ＴＦＰＩ）またはがんプロコアグラントである、請求項３８に記載のマイクロ流体デバイス。
【請求項４１】
第１の凝固因子の量が、第１の系列のチャネルの間で少なくとも２倍異なる、請求項３８〜４０のいずれか一項に記載のマイクロ流体デバイス。
【請求項４２】
いかなる凝固因子でもコーティングされておらず、いかなる凝固因子も含有しない少なくとも１つのチャネルをさらに含む、請求項３８〜４１のいずれか一項に記載のマイクロ流体デバイス。
【請求項４３】
マイクロ流体デバイスが、第１の系列のチャネルのそれぞれにおける血塊形成を、定められた時点（複数可）で測定するように構成される、請求項３８〜４２のいずれか一項に記載のマイクロ流体デバイス。
【請求項４４】
前記マイクロ流体デバイスが、電気インピーダンス、ビーズの添加およびビーズの流量および／もしくは数の定量化、流速および／もしくは圧力の変化、トロンボエラストグラフィー、蛍光フィブリノーゲンを使用する蛍光検出、濁度、赤外分光法、画像センサー、光吸収、蛍光マーカー検出、音響センサーおよび／もしくはフォトニックセンサーを使用する検出、フローサイトメトリー、ならびに視覚的な凝固検出の１つまたは複数によって、第１の系列のチャネルにおいて血塊形成を測定するように構成される、請求項４３に記載のマイクロ流体デバイス。
【請求項４５】
基材中に形成された第２の系列のチャネルをさらに含み、それぞれの第２の系列のチャネルが、血塊の形成を引き起こしおよび／または局在化させるように構成された形状を有する血塊形成区域を含み、第２の系列のチャネルが同じ形状を有し、
ここで第１の系列のチャネルが、第１の系列のチャネルにわたる漸増量の第１の凝固因子でコーティングされているかまたは第１の系列のチャネルにわたる漸増量の第１の凝固因子を含有し、
第２の系列のチャネルが、第２の系列のチャネルにわたる漸増量の第２の凝固因子でコーティングされているかまたは第２の系列のチャネルにわたる漸増量の第２の凝固因子を含有する、
請求項３８〜４４のいずれか一項に記載のマイクロ流体デバイス。
【請求項４６】
第１の凝固因子が第ＩＩａ因子であり、第２の凝固因子が第Ｘａ因子である、請求項４５に記載のマイクロ流体デバイス。
【請求項４７】
第２の凝固因子の量が、第２の系列のチャネルの間で少なくとも２倍異なる、請求項４５または４６に記載のマイクロ流体デバイス。
【請求項４８】
前記マイクロ流体デバイスが、第２の系列のチャネルのそれぞれにおける血塊形成を、定められた時点（複数可）で測定するように構成される、請求項４５〜４７のいずれか一項に記載のマイクロ流体デバイス。
【請求項４９】
前記マイクロ流体デバイスが、電気インピーダンス、ビーズの添加およびビーズの流量および／もしくは数の定量化、流速および／もしくは圧力の変化、トロンボエラストグラフィー、蛍光フィブリノーゲンを使用する蛍光検出、濁度、赤外分光法、画像センサー、光吸収、蛍光マーカー検出、音響センサーおよび／もしくはフォトニックセンサーを使用する検出、フローサイトメトリー、ならびに視覚的な凝固検出の１つまたは複数によって、第２の系列のチャネルにおいて血塊形成を測定するように構成される、請求項４８に記載のマイクロ流体デバイス。
【請求項５０】
凝固を検出するためのマイクロ流体デバイスであって、
基材に形成された複数のチャネルを含み、それぞれのチャネルが、血塊の形成を引き起こし、および／または局在化させるように構成された形状を有する血塊形成区域を含み、
複数のチャネルが、異なる量の凝固因子でコーティングされているか、または異なる量の凝固因子を含有する、
マイクロ流体デバイス。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１０】
[0011]外因的に添加された凝固因子の濃度の増加に対して血塊形成（例えば、血塊形成時間）を測定することによって、治療剤の存在および／または治療剤による阻害点を決定することができる。例えば、凝固阻害剤に対して陽性である試料は、阻害剤の標的である凝固因子が試料に添加されるにつれて、凝固時間の濃度依存性の減少を示す。その一方で、阻害点の上流の凝固因子が添加されると（漸増量で）、凝固時間は、阻害点の下流の凝固因子の添加の際の凝固時間と比較して、長くなる。図９〜１３を参照のこと。