【手続補正書】
【提出日】令和3年6月9日(2021.6.9)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（ＩＩ）の化合物：
2020526521.tif 000001
（ＩＩ）
［式中、Ａｒ1、Ａｒ2、及びＡｒ3は、アリール及びヘテロアリールからなる群からそれぞれ独立して選択され、Ａｒ1、Ａｒ2、及びＡｒ3は、それぞれ置換されていてもよく、Ａｒ4は、アルキル、アルコキシ、アリール、シクロアルキル、ヘテロアリール、及び複素環からなる群から選択される１つ以上の置換基で置換されていてもよい、アリール、フラン、またはチオフェンである］。
【請求項２】
Ａｒ1がフェニルであり、Ａｒ2がフリルであり、Ａｒ3がフェニルである、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ａｒ4が、１つ以上のアルコキシで置換されていてもよい、フェニル、フラン、チオフェンである、請求項１又は２に記載の化合物。
【請求項４】
前記式（ＩＩ）の化合物が下式（ＩＩ−ａ）を有するか
2020526521.tif 000002
（ＩＩ−ａ）
［式中、Ａｒ1、及びＡｒ2は、アリール及びヘテロアリールからなる群からそれぞれ独立して選択され、Ａｒ4は、１つ以上のアルコキシで置換されていてもよい、フェニル、フラン、チオフェンである］；又は、
前記式（ＩＩ）の化合物が下式（ＩＩ−ｂ）を有するか
2020526521.tif 000003
（ＩＩ−ｂ）
［式中、Ａｒ2は、アリール及びヘテロアリールからなる群から選択され、Ａｒ4は、１つ以上のアルコキシで置換されていてもよい、フェニル、フラン、チオフェンである］；又は、
前記式（ＩＩ）の化合物が下式（ＩＩ−ｃ）を有する
2020526521.tif 000004
（ＩＩ−ｃ）
［式中、Ａｒ4は、１つ以上のアルコキシで置換されていてもよい、フェニル、フラン、チオフェンである］、請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
（（８−ベンジル−２−（フラン−２−イルメチル）−６−フェニルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３−イル）オキシ）メチルフラン−２−カルボキシレート、
（（８−ベンジル−２−（フラン−２−イルメチル）−６−フェニルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３−イル）オキシ）メチルフラン−３−カルボキシレート、及び
（（８−ベンジル−２−（フラン−２−イルメチル）−６−フェニルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３−イル）オキシ）メチルベンゾエート
からなる群から選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項６】
式（ＩＩＩ）の化合物：
2020526521.tif 000005
（ＩＩＩ）
［式中、Ａｒ1、Ａｒ2、及びＡｒ3は、アリール及びヘテロアリールからなる群からそれぞれ独立して選択され、Ａｒ1、Ａｒ2、及びＡｒ3は、それぞれ置換されていてもよく、ＲCは、Ｃ1〜Ｃ9の直鎖または分枝鎖のアルキル、アルコキシアルキル、メチルエーテルポリエチレングリコキシアルキル、ハロアルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヒドロキシルアルキル、ヒドロキシルポリエチレングリコキシアルキル、カルボキシアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、複素環、及び複素環式アルキルからなる群から選択される］。
【請求項７】
Ａｒ1がフェニルであり、Ａｒ2がフリルであり、Ａｒ3がフェニルであり、及び／又は、任意に、ＲCが、Ｃ1〜Ｃ9の直鎖または分枝鎖のアルキル、アルコキシアルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヒドロキシルアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、複素環、及び複素環式アルキルからなる群から選択されてもよい、請求項６に記載の化合物。
【請求項８】
前記式（ＩＩＩ）の化合物が下式（ＩＩＩ−ａ）を有するか
2020526521.tif 000006
（ＩＩＩ−ａ）
［式中、Ａｒ1、及びＡｒ2は、アリール及びヘテロアリールからなる群からそれぞれ独立して選択され、ＲCは、Ｃ1〜Ｃ9の直鎖または分枝鎖のアルキル、アルコキシアルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヒドロキシルアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、複素環、及び複素環式アルキルからなる群から選択される］；又は、
前記式（ＩＩＩ）の化合物が下式（ＩＩＩ−ｂ）を有するか
2020526521.tif 000007
（ＩＩＩ−ｂ）
［式中、Ａｒ2は、アリール及びヘテロアリールからなる群から選択され、ＲCは、Ｃ1〜Ｃ9の直鎖または分枝鎖のアルキル、アルコキシアルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヒドロキシルアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、複素環、及び複素環式アルキルからなる群から選択される］；又は、
前記式（ＩＩＩ）の化合物が下式（ＩＩＩ−ｃ）を有する
2020526521.tif 000008
（ＩＩＩ−ｃ）
［式中、ＲCは、Ｃ1〜Ｃ9の直鎖または分枝鎖のアルキル、アルコキシアルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヒドロキシルアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、複素環、及び複素環式アルキルからなる群から選択される］、請求項６に記載の化合物。
【請求項９】
（（８−ベンジル−２−（フラン−２−イルメチル）−６−フェニルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３−イル）オキシ）メチルメチルカーボネートからなる群から選択される、請求項６に記載の化合物。
【請求項１０】
１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）の存在下で少なくとも１２時間の血清中安定性を示す、請求項１〜９のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１１】
請求項１〜９のいずれか１項に記載の化合物を含むキットであって、任意に前記キットがルシフェラーゼまたはフラグメント相補性ルシフェラーゼをさらに含み、及び／又は、任意に、緩衝試薬をさらに含む、キット。
【請求項１２】
脱保護酵素をさらに含み、かつ、任意に、前記脱保護酵素がエステラーゼを含んでもよい、請求項１１に記載のキット。
【請求項１３】
試料中の発光を検出するための方法であって、試料を請求項１〜９のいずれか１項に記載の化合物と接触させることと、前記試料中に脱保護酵素が存在しない場合、前記試料を脱保護酵素と接触させることと、前記試料中にセレンテラジン利用ルシフェラーゼが存在しない場合、前記試料をセレンテラジン利用ルシフェラーゼと接触させることと、発光を検出することと、を含み、任意に脱保護酵素がエステラーゼを含む、前記方法。
【請求項１４】
前記試料が生細胞を含み、任意に、前記試料が、セレンテラジン利用ルシフェラーゼまたはフラグメント相補性ルシフェラーゼを含んでもよい、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
トランスジェニック動物の発光を検出するための方法であって、請求項１〜９のいずれか１項に記載の化合物をトランスジェニック動物に投与することと、発光を検出することとを含み、前記トランスジェニック動物がセレンテラジン利用ルシフェラーゼを発現する、前記方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１７３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１７３】
開示される実施形態に対するさまざまな変更及び改変は、当業者には自明となろう。限定されるものではないが、化学構造、置換基、誘導体、中間体、合成法、組成物、配合物、または発明の使用方法に関するものを含む、そのような変更及び改変は、発明の趣旨及び範囲から逸脱することなく行うことが可能である。
本発明のまた別の態様は、以下のとおりであってもよい。
〔１〕式（Ｉ）の化合物：
2020526521.tif 000009
（Ｉ）、
または、その互変異性体、またはその塩［式中、
Ａｒ1、Ａｒ2、及びＡｒ3は、アリール及びヘテロアリールからなる群からそれぞれ独立して選択され、Ａｒ1、Ａｒ2、及びＡｒ3は、それぞれ置換されていてもよく、
ＲAは、Ｃ2〜Ｃ10の直鎖または分枝鎖のアルキル、アルコキシ、アルコキシアルキル、アミド、アセトキシ、メチルエーテルポリエチレングリコキシ、メチルエーテルポリエチレングリコキシアルキル、ハロアルキル、ハロアルコキシ、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヒドロキシルアルキル、ヒドロキシルポリエチレングリコキシル、カルボキシアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、複素環、及び複素環式アルキルからなる群から選択され、
Ｒx1、Ｒx2は、それぞれの出現において、アルコキシ、アリール、シクロアルキル、ヘテロアリール、及び複素環からなる群から選択される１つ以上の置換基で置換されていてもよいＣ1〜Ｃ6の直鎖または分枝鎖のアルキルからなる群からそれぞれ独立して選択される］。
〔２〕Ａｒ1がフェニルであり、Ａｒ2がフリルであり、Ａｒ3がフェニルである、前記〔１〕に記載の化合物。
〔３〕Ｒx1、Ｒx2がメチルである、前記〔１〕に記載の化合物。
〔４〕ＲAがＲBＣＨ2−であり、ＲBが、Ｃ1〜Ｃ9の直鎖または分枝鎖のアルキル、アルコキシ、アルコキシアルキル、アミド、アセトキシ、メチルエーテルポリエチレングリコキシ、メチルエーテルポリエチレングリコキシアルキル、ハロアルキル、ハロアルコキシ、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヒドロキシルアルキル、ヒドロキシルポリエチレングリコキシル、カルボキシアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、複素環、及び複素環式アルキルからなる群から選択される、前記〔３〕に記載の化合物。
〔５〕ＲAがＲCＯ−であり、ＲCが、Ｃ1〜Ｃ9の直鎖または分枝鎖のアルキル、アルコキシアルキル、メチルエーテルポリエチレングリコキシアルキル、ハロアルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヒドロキシルアルキル、ヒドロキシルポリエチレングリコキシアルキル、カルボキシアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、複素環、及び複素環式アルキルからなる群から選択される、前記〔３〕に記載の化合物。
〔６〕ＲAがＲCＣ（Ｏ）ＮＨ−であり、ＲCが、Ｃ1〜Ｃ9の直鎖または分枝鎖のアルキル、アルコキシアルキル、メチルエーテルポリエチレングリコキシアルキル、ハロアルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヒドロキシルアルキル、ヒドロキシルポリエチレングリコキシアルキル、カルボキシアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、複素環、及び複素環式アルキルからなる群から選択される、前記〔３〕に記載の化合物。
〔７〕ＲAがＲCＣ（Ｏ）Ｏ−であり、ＲCが、Ｃ1〜Ｃ9の直鎖または分枝鎖のアルキル、アルコキシアルキル、メチルエーテルポリエチレングリコキシアルキル、ハロアルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヒドロキシルアルキル、ヒドロキシルポリエチレングリコキシアルキル、カルボキシアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、複素環、及び複素環式アルキルからなる群から選択される、前記〔３〕に記載の化合物。
〔８〕ＲAがＲBＣＨ2−であり、ＲBがＣＨ3（ＯＣＨ2ＣＨ2）nＯ−であり、ｎが０〜１０の任意の数である、前記〔４〕に記載の化合物。
〔９〕ＲCが直鎖または分枝鎖のＣ1〜Ｃ5アルキル、またはＣＨ3（ＯＣＨ2ＣＨ2）n−であり、ｎが０〜１０の任意の数である、前記〔５〕に記載の化合物。
〔１０〕ＲCが直鎖または分枝鎖のＣ1〜Ｃ5アルキルである、前記〔６〕に記載の化合物。
〔１１〕ＲCが直鎖または分枝鎖のＣ1〜Ｃ5アルキルである、前記〔７〕に記載の化合物。
〔１２〕Ａｒ1がフェニルであり、Ａｒ2がフリルであり、Ａｒ3がフェニルである、前記〔８〕に記載の化合物。
〔１３〕Ａｒ1がフェニルであり、Ａｒ2がフリルであり、Ａｒ3がフェニルである、前記〔９〕に記載の化合物。
〔１４〕Ａｒ1がフェニルであり、Ａｒ2がフリルであり、Ａｒ3がフェニルである、前記〔１０〕に記載の化合物。
〔１５〕Ａｒ1がフェニルであり、Ａｒ2がフリルであり、Ａｒ3がフェニルである、前記〔１１〕に記載の化合物。
〔１６〕ＲA−Ｃ（Ｒx1Ｒx2）−が下式である、前記〔１〕に記載の化合物：
2020526521.tif 000010
〔１７〕前記式（Ｉ）の化合物が下式（Ｉ−ｄ）を有する、前記〔１〕に記載の化合物：
2020526521.tif 000011
（Ｉ−ｄ）
〔１８〕前記式（Ｉ）の化合物が下式（Ｉ−ｅ）を有する、前記〔１〕に記載の化合物：
2020526521.tif 000012
（Ｉ−ｅ）
〔１９〕ＲA−Ｃ（Ｒx1Ｒx2）−が下式である、前記〔１〕に記載の化合物：
2020526521.tif 000013
〔２０〕前記式（Ｉ）の化合物が下式（Ｉ−ｆ）を有する、前記〔１〕に記載の化合物：
2020526521.tif 000014
（Ｉ−ｆ）
〔２１〕前記式（Ｉ）の化合物が下式（Ｉ−ｇ）を有する、前記〔１〕に記載の化合物：
2020526521.tif 000015
（Ｉ−ｇ）
〔２２〕前記式（Ｉ）の化合物が下式（Ｉ−ｈ）を有する、前記〔１〕に記載の化合物：
2020526521.tif 000016
（Ｉ−ｈ）
〔２３〕前記式（Ｉ）の化合物が下式（Ｉ−ｉ）を有する、前記〔１〕に記載の化合物：
2020526521.tif 000017
（Ｉ−ｉ）
〔２４〕前記式（Ｉ）の化合物が下式（Ｉ−ｊ）を有する、前記〔１〕に記載の化合物：
2020526521.tif 000018
（Ｉ−ｊ）
〔２５〕前記式（Ｉ）の化合物が下式（Ｉ−ｋ）を有する、前記〔１〕に記載の化合物：
2020526521.tif 000019
（Ｉ−ｋ）
〔２６〕式（ＩＩ）の化合物：
2020526521.tif 000020
（ＩＩ）
［式中、Ａｒ1、Ａｒ2、及びＡｒ3は、アリール及びヘテロアリールからなる群からそれぞれ独立して選択され、Ａｒ1、Ａｒ2、及びＡｒ3は、それぞれ置換されていてもよく、Ａｒ4は、アルキル、アルコキシ、アリール、シクロアルキル、ヘテロアリール、及び複素環からなる群から選択される１つ以上の置換基で置換されていてもよい、アリール、フラン、またはチオフェンである］。
〔２７〕Ａｒ1がフェニルであり、Ａｒ2がフリルであり、Ａｒ3がフェニルである、前記〔２６〕に記載の化合物。
〔２８〕Ａｒ4が、１つ以上のアルコキシで置換されていてもよい、フェニル、フラン、チオフェンである、前記〔２６〕に記載の化合物。
〔２９〕前記式（ＩＩ）の化合物が下式（ＩＩ−ａ）を有する、前記〔２６〕に記載の化合物：
2020526521.tif 000021
（ＩＩ−ａ）
［式中、Ａｒ1、及びＡｒ2は、アリール及びヘテロアリールからなる群からそれぞれ独立して選択され、Ａｒ4は、１つ以上のアルコキシで置換されていてもよい、フェニル、フラン、チオフェンである］。
〔３０〕前記式（ＩＩ）の化合物が下式（ＩＩ−ｂ）を有する、前記〔２６〕に記載の化合物：
2020526521.tif 000022
（ＩＩ−ｂ）
［式中、Ａｒ2は、アリール及びヘテロアリールからなる群から選択され、Ａｒ4は、１つ以上のアルコキシで置換されていてもよい、フェニル、フラン、チオフェンである］。
〔３１〕前記式（ＩＩ）の化合物が下式（ＩＩ−ｃ）を有する、前記〔２６〕に記載の化合物：
2020526521.tif 000023
（ＩＩ−ｃ）
［式中、Ａｒ4は、１つ以上のアルコキシで置換されていてもよい、フェニル、フラン、チオフェンである］。
〔３２〕式（ＩＩＩ）の化合物：
2020526521.tif 000024
（ＩＩＩ）
［式中、Ａｒ1、Ａｒ2、及びＡｒ3は、アリール及びヘテロアリールからなる群からそれぞれ独立して選択され、Ａｒ1、Ａｒ2、及びＡｒ3は、それぞれ置換されていてもよく、ＲCは、Ｃ1〜Ｃ9の直鎖または分枝鎖のアルキル、アルコキシアルキル、メチルエーテルポリエチレングリコキシアルキル、ハロアルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヒドロキシルアルキル、ヒドロキシルポリエチレングリコキシアルキル、カルボキシアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、複素環、及び複素環式アルキルからなる群から選択される］。
〔３３〕Ａｒ1がフェニルであり、Ａｒ2がフリルであり、Ａｒ3がフェニルである、前記〔３２〕に記載の化合物。
〔３４〕ＲCが、Ｃ1〜Ｃ9の直鎖または分枝鎖のアルキル、アルコキシアルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヒドロキシルアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、複素環、及び複素環式アルキルからなる群から選択される、前記〔３２〕に記載の化合物。
〔３５〕前記式（ＩＩＩ）の化合物が下式（ＩＩＩ−ａ）を有する、前記〔３２〕に記載の化合物：
2020526521.tif 000025
（ＩＩＩ−ａ）
［式中、Ａｒ1、及びＡｒ2は、アリール及びヘテロアリールからなる群からそれぞれ独立して選択され、ＲCは、Ｃ1〜Ｃ9の直鎖または分枝鎖のアルキル、アルコキシアルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヒドロキシルアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、複素環、及び複素環式アルキルからなる群から選択される］。
〔３６〕前記式（ＩＩＩ）の化合物が下式（ＩＩＩ−ｂ）を有する、前記〔３２〕に記載の化合物：
2020526521.tif 000026
（ＩＩＩ−ｂ）
［式中、Ａｒ2は、アリール及びヘテロアリールからなる群から選択され、ＲCは、Ｃ1〜Ｃ9の直鎖または分枝鎖のアルキル、アルコキシアルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヒドロキシルアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、複素環、及び複素環式アルキルからなる群から選択される］。
〔３７〕前記式（ＩＩＩ）の化合物が下式（ＩＩＩ−ｃ）を有する、前記〔３２〕に記載の化合物：
2020526521.tif 000027
（ＩＩＩ−ｃ）
［式中、ＲCは、Ｃ1〜Ｃ9の直鎖または分枝鎖のアルキル、アルコキシアルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヒドロキシルアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、複素環、及び複素環式アルキルからなる群から選択される］。
〔３８〕（（８−ベンジル−２−（フラン−２−イルメチル）−６−フェニルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３−イル）オキシ）メチル３−メトキシ−２，２−ジメチルプロパノエート、
（（８−ベンジル−２−（フラン−２−イルメチル）−６−フェニルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３−イル）オキシ）メチル３−（２−（２−メトキシエトキシ）エトキシ）−２，２−ジメチルプロパノエート、
（（８−ベンジル−２−（フラン−２−イルメチル）−６−フェニルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３−イル）オキシ）メチル３−（２−メトキシエトキシ）−２，２−ジメチルプロパノエート、
（（８−ベンジル−２−（フラン−２−イルメチル）−６−フェニルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３−イル）オキシ）メチル１３，１３−ジメチル−２，５，８，１１−テトラオキサテトラデカン−１４−エート、
（（８−ベンジル−２−（フラン−２−イルメチル）−６−フェニルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３−イル）オキシ）メチル１６，１６−ジメチル−２，５，８，１１，１４−ペンタオキサヘプタデカン−１７−エート、
（（８−ベンジル−２−（フラン−２−イルメチル）−６−フェニルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３−イル）オキシ）メチル２−メトキシ−２−メチルプロパノエート、及び
（（８−ベンジル−２−（フラン−２−イルメチル）−６−フェニルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３−イル）オキシ）メチル２−アセトアミド−２−メチルプロパノエート
からなる群から選択される、前記〔１〕に記載の化合物。
〔３９〕（（８−ベンジル−２−（フラン−２−イルメチル）−６−フェニルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３−イル）オキシ）メチルフラン−２−カルボキシレート、
（（８−ベンジル−２−（フラン−２−イルメチル）−６−フェニルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３−イル）オキシ）メチルフラン−３−カルボキシレート、及び
（（８−ベンジル−２−（フラン−２−イルメチル）−６−フェニルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３−イル）オキシ）メチルベンゾエート
からなる群から選択される、前記〔２６〕に記載の化合物。
〔４０〕（（８−ベンジル−２−（フラン−２−イルメチル）−６−フェニルイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３−イル）オキシ）メチルメチルカーボネートからなる群から選択される、前記〔３２〕に記載の化合物。
〔４１〕１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）の存在下で少なくとも１２時間の血清中安定性を示す、前記〔１〕〜〔４０〕のいずれか１項に記載の化合物。
〔４２〕前記〔１〕〜〔３３〕のいずれか１項に記載の化合物を含むキット。
〔４３〕脱保護酵素をさらに含む、前記〔４２〕に記載のキット。
〔４４〕前記脱保護酵素がエステラーゼを含む、前記〔４３〕に記載のキット。
〔４５〕ルシフェラーゼまたはフラグメント相補性ルシフェラーゼをさらに含む、前記〔４２〕に記載のキット。
〔４６〕緩衝試薬をさらに含む、前記〔４２〕に記載のキット。
〔４７〕試料中の発光を検出するための方法であって、試料を前記〔１〕〜〔４０〕のいずれか１項に記載の化合物と接触させることと、前記試料中に脱保護酵素が存在しない場合、前記試料を脱保護酵素と接触させることと、前記試料中にセレンテラジン利用ルシフェラーゼが存在しない場合、前記試料をセレンテラジン利用ルシフェラーゼと接触させることと、発光を検出することと、を含む、前記方法。
〔４８〕前記試料が生細胞を含む、前記〔４７〕に記載の方法。
〔４９〕前記試料が、セレンテラジン利用ルシフェラーゼまたはフラグメント相補性ルシフェラーゼを含む、前記〔４７〕に記載の方法。
〔５０〕前記脱保護酵素がエステラーゼを含む、前記〔４７〕に記載の方法。
〔５１〕トランスジェニック動物の発光を検出するための方法であって、前記〔１〕〜〔４０〕のいずれか１項に記載の化合物をトランスジェニック動物に投与することと、発光を検出することとを含み、前記トランスジェニック動物がセレンテラジン利用ルシフェラーゼを発現する、前記方法。