【手続補正書】
【提出日】令和3年8月19日(2021.8.19)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の工程を含む、標的細胞の集団を操作する方法：
ａ）標的細胞を粗流体組成物から単離する工程であって、単離手順が、マイクロ流体デバイス上で決定論的横置換（ＤＬＤ）を実施することを含み、前記デバイスが、
ｉ）試料注入口から１つまたは複数の流体出口へ延びる少なくとも１個のチャネルであって、前記チャネルが第１の壁および前記第１の壁と反対側の第２の壁によって囲まれている、チャネル；
ｉｉ）前記チャネルにおいて、いくつもの行（row）をなして配列された障害物のアレイであって、障害物のそれぞれの次の行が、前の行に対して横方向へシフトしており、前記障害物が、前記粗流体組成物が前記デバイスの注入口にアプライされ、前記チャネルを流体的に通過する時、標的細胞が、濃縮された産物が収集される１つまたは複数の収集出口へ流れ、前記標的細胞とは異なるサイズである混入細胞または粒子が、前記収集出口から切り離されているもう１つの廃棄物出口へ流れるような様式で配置されている、障害物のアレイ
を含む、工程；
ｂ）前記収集出口から得られた標的細胞を、所望の表現型を有するように遺伝子操作する工程。
【請求項２】
前記遺伝子操作する工程が、標的細胞をトランスフェクションまたは形質導入することを含み、遺伝子操作された標的細胞が、それらをインビトロで（in vitro）培養することにより増殖される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記所望の表現型を示す標的細胞の収率が、Ｆｉｃｏｌｌ遠心分離により単離され、かつＤＬＤに供されていない同一の細胞より少なくとも１０％高い、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記粗流体組成物が、血液、または血液にアフェレーシスもしくは白血球アフェレーシスを実施することにより取得されている組成物である、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記標的細胞が白血球である、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記標的細胞が、Ｂ細胞、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、単球、または前駆細胞である、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記標的細胞が樹状細胞である、請求項１〜４のいずれか一項記載の方法。
【請求項８】
前記粗流体組成物が患者から取得される、請求項１〜７のいずれか一項記載の方法。
【請求項９】
前記粗流体組成物における標的細胞が、形質導入またはトランスフェクションされる前に担体と結合していない、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
標的細胞に、ＤＬＤを実施する前に、ＤＬＤ分離を促進または補完するように、１つまたは複数の担体を結合させる、請求項８に記載の方法。
【請求項１１】
標的細胞に、ＤＬＤを実施した後で、かつそれらを形質導入またはトランスフェクションする前かまたは後のいずれかで、ＤＬＤ分離を促進または補完するように、１つまたは複数の担体を結合させる、請求項９に記載の方法。
【請求項１２】
前記１つまたは複数の担体が、前記標的細胞と特異的に結合する親和性物質を表面上に含む、請求項１０または１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記物質が、抗体、アクチベーター、ハプテン、またはアプタマーである、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記担体の直径が、標的細胞の直径と少なくとも同じ長さである、請求項１０〜１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
前記担体の全部の直径が、標的細胞の直径の５０％以下の長さである、請求項１０〜１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
前記担体の全部の直径が、標的細胞の直径の少なくとも２倍の長さである、請求項１０〜１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
前記担体の全部の直径が、標的細胞の直径の２５％以下の長さである、請求項１０〜１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
担体の１つの群が、標的細胞と少なくとも同じ長さの直径を有し、担体の第２の群が、標的細胞の直径の５０％以下の長さの直径を有する、請求項１０〜１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
担体の１つの群が、標的細胞の少なくとも２倍の長さの直径を有し、担体の第２の群が、標的細胞の２５％以下の長さの直径を有する、請求項１０〜１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
前記担体が、コラーゲンまたは多糖でできている、請求項１０〜１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
前記担体が、ゼラチンまたはアルギン酸塩でできている、請求項１０〜２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
粗流体組成物が患者から取得され、前記粗流体組成物の取得が完了した時点から、標的細胞に初めて担体を結合させるまで、４時間より長く経過していない、請求項１０〜２１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
粗流体組成物が、患者の血液から引き出されたアフェレーシスまたは白血球アフェレーシス産物であり、アフェレーシスまたは白血球アフェレーシスが完了した時点から標的細胞に初めて担体を結合させるまで、４時間より長く経過していない、請求項１０〜２１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２４】
粗流体組成物が患者から取得され、前記粗流体組成物の取得が完了した時点から、初めて標的細胞がトランスフェクションまたは形質導入される時まで、５時間より長く経過していない、請求項１〜２３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２５】
粗流体組成物が、患者の血液から引き出されたアフェレーシスまたは白血球アフェレーシス産物であり、アフェレーシスまたは白血球アフェレーシスが完了した時点から、初めて標的細胞がトランスフェクションまたは形質導入される時まで、５時間より長く経過していない、請求項１〜２３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２６】
初めて標的細胞がトランスフェクションまたは形質導入される時まで、４時間より長く経過していない、請求項２４または２５に記載の方法。
【請求項２７】
以下の工程を含む、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞を作製する方法：
ａ）Ｔ細胞を含む粗流体組成物を取得する工程；
ｂ）ｉ）試料注入口から１つまたは複数の流体出口へ延びる少なくとも１個のチャネルであって、前記チャネルが第１の壁および前記第１の壁と反対側の第２の壁によって囲まれている、チャネル；
ｉｉ）前記チャネルにおいて、いくつもの行をなして配列された障害物のアレイであって、障害物のそれぞれの次の行が、前の行に対して横方向へシフトしており、前記障害物が、前記粗流体組成物がデバイスの注入口にアプライされ、前記チャネルを流体的に通過する時、前記組成物中のＴ細胞が、濃縮された産物が収集される１つまたは複数の収集出口へ流れ、前記粗流体組成物中にあり、かつ前記Ｔ細胞とは異なるサイズである細胞または粒子が、前記収集出口から切り離されているもう１つの廃棄物出口へ流れるような様式で配置されている、障害物のアレイ
を含むマイクロ流体デバイスを用いて、前記粗流体組成物に決定論的横置換（ＤＬＤ）を実施する工程；
ｃ）工程ｂ）において取得された濃縮産物中のＴ細胞を、それらの表面上にキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を産生するように遺伝子操作する工程。
【請求項２８】
前記粗流体組成物が、患者由来の血液から取得されたアフェレーシス産物または白血球アフェレーシス産物であり、前記粗流体組成物が前記デバイスの注入口にアプライされ、前記チャネルを流体的に通過する時、前記組成物中のＴ細胞が、濃縮された産物が収集される１つまたは複数の収集出口へ流れ、前記粗流体組成物中にあり、かつ異なるサイズである赤血球、血小板、または他の粒子が、前記収集出口から切り離されているもう１つの廃棄物出口へ流れる、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記遺伝子操作が、標的細胞をトランスフェクションまたは形質導入することを含み、遺伝子操作された標的細胞が、インビトロで前記細胞を成長させることにより、さらに増殖される、請求項２７または２８に記載の方法。
【請求項３０】
表面上にキメラ受容体を発現するＴ細胞の収率が、粗流体組成物からＦｉｃｏｌｌ遠心分離により単離され、かつＤＬＤに供されていないＴ細胞より少なくとも１０％高い、請求項２７〜２９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３１】
表面上にキメラ受容体を発現するＴ細胞の収率が、粗流体組成物からＦｉｃｏｌｌ遠心分離により単離され、かつＤＬＤに供されていないＴ細胞より少なくとも２０％高い、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
表面上にキメラ受容体を発現するＴ細胞の収率が、粗流体組成物からＦｉｃｏｌｌ遠心分離により単離され、かつＤＬＤに供されていないＴ細胞より少なくとも５０％高い、請求項３０に記載の方法。
【請求項３３】
前記ＣＡＲが、ａ）抗原結合ドメインを含む細胞外領域；ｂ）膜貫通領域；ｃ）細胞内領域を含み、前記ＣＡＲ  Ｔ細胞が、トリガーされた時、ＣＡＲ  Ｔ細胞の数または活性を低下させる分子スイッチを前記細胞に提供する１つまたは複数の組換え配列を含んでもよい、請求項２７〜３２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３４】
前記抗原結合ドメインが、モノクローナル抗体の重鎖と軽鎖の両方の抗原結合領域由来の、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）である、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
前記ＣＡＲが、細胞外領域と膜貫通領域を接続する２〜２０個のアミノ酸のヒンジ領域を含む、請求項３３または３４に記載の方法。
【請求項３６】
前記膜貫通領域が、ＣＤ８またはＣＤ２８タンパク質配列を含む、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
前記細胞内領域が、ＣＤ３ζ、ＣＤ１３７、またはＣＤ２８細胞内ドメインに由来したシグナル伝達ドメインを含む、請求項３３〜３６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３８】
前記Ｔ細胞を含む粗流体組成物が、癌、自己免疫疾患、または感染性疾患を有する患者から取得される、請求項２７〜３７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３９】
Ｔ細胞を含む粗流体組成物を取得した後、前記流体組成物中のＴ細胞に、ＤＬＤ分離を促進するように、１つまたは複数の担体を結合させる、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
Ｔ細胞に、ＤＬＤを実施する前に、ＤＬＤ分離を促進するように、１つまたは複数の担体を結合させる、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
Ｔ細胞に、ＤＬＤを実施した後で、かつそれらが遺伝子操作される前かまたは後のいずれかで、ＤＬＤ分離を促進するように、１つまたは複数の担体を結合させる、請求項３９に記載の方法。
【請求項４２】
前記１つまたは複数の担体が、前記Ｔ細胞と特異的に結合する抗体またはアクチベーターを表面上に含む、請求項３９〜４１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４３】
前記担体の全部の直径が、Ｔ細胞の直径と少なくとも同じ長さである、請求項３９〜４２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４４】
前記担体の全部の直径が、Ｔ細胞の直径の５０％以下の長さである、請求項３９〜４２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４５】
前記担体の全部の直径が、Ｔ細胞の直径の少なくとも２倍の長さである、請求項３９〜４２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４６】
前記担体の全部の直径が、Ｔ細胞の直径の２５％以下の長さである、請求項３９〜４２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４７】
担体の１つの群が、Ｔ細胞と少なくとも同じ長さの直径を有し、担体の第２の群が、Ｔ細胞の直径の５０％以下の長さの直径を有する、請求項３９〜４２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４８】
担体の１つの群が、Ｔ細胞の少なくとも２倍の長さの直径を有し、担体の第２の群が、Ｔ細胞の２５％以下の長さの直径を有する、請求項３９〜４２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４９】
前記担体が、コラーゲンまたは多糖でできている、請求項３９〜４８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５０】
前記担体が、ゼラチンまたはアルギン酸塩でできている、請求項３９〜４９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５１】
Ｔ細胞を含む粗流体組成物の取得が完了した時点から、前記Ｔ細胞に担体を結合させるまで、４時間より長く経過していない、請求項３９〜５０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５２】
粗流体組成物が、患者の血液から引き出されたアフェレーシスまたは白血球アフェレーシス産物であり、アフェレーシスまたは白血球アフェレーシスが完了した時点から、標的細胞に担体を結合させるまで、４時間より長く経過していない、請求項３９〜５０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５３】
Ｔ細胞を含む粗流体組成物の取得が完了した時点から、初めてＴ細胞がトランスフェクションまたは形質導入される時まで、５時間より長く経過していない、請求項２７〜５０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５４】
粗流体組成物が、患者の血液から引き出されたアフェレーシスまたは白血球アフェレーシス産物であり、アフェレーシスまたは白血球アフェレーシスが完了した時点から、初めてＴ細胞がトランスフェクションまたは形質導入される時まで、５時間より長く経過していない、請求項２７〜５０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５５】
初めてＴ細胞がトランスフェクションまたは形質導入される時まで、４時間より長く経過していない、請求項５３または５４に記載の方法。
【請求項５６】
ＣＡＲ  Ｔ細胞を作製することにおける全工程が、Ｔ細胞を含む粗流体組成物が取得される同じ施設で実施され、全工程が、合計４時間以内に完了する、請求項２７〜５５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５７】
請求項２７〜５５のいずれか一項に記載の方法により作製されたＣＡＲ  Ｔ細胞。
【請求項５８】
癌、自己免疫疾患、または感染性疾患について患者を処置する方法であって、前記患者由来の癌細胞、自己免疫細胞、または感染細胞上の抗原を認識するキメラ抗原受容体を発現するように操作されたＣＡＲ  Ｔ細胞を前記患者に投与することを含み、前記ＣＡＲ  Ｔ細胞が、以下の工程を含むプロセスにより作製されている、方法：
ａ）Ｔ細胞を含む粗流体組成物を患者から取得する工程；
ｂ）ｉ）試料注入口から１つまたは複数の流体出口へ延びる少なくとも１個のチャネルであって、前記チャネルが第１の壁および前記第１の壁と反対側の第２の壁によって囲まれている、チャネル；
ｉｉ）前記チャネルにおいて、いくつもの行をなして配列された障害物のアレイであって、障害物のそれぞれの次の行が、前の行に対して横方向へシフトしており、前記障害物が、前記粗流体組成物がデバイスの注入口にアプライされ、前記チャネルを流体的に通過する時、前記組成物中のＴ細胞が、濃縮された産物が収集される１つまたは複数の収集出口へ流れ、前記粗流体組成物中にあり、かつ前記Ｔ細胞とは異なるサイズである細胞または粒子が、前記収集出口から切り離されているもう１つの廃棄物出口へ流れるような様式で配置されている、障害物のアレイ
を含むマイクロ流体デバイスを用いて、前記粗流体組成物に決定論的横置換（ＤＬＤ）を実施する工程；
ｃ）工程ｂ）において取得された前記Ｔ細胞を、それらの表面上にキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するように遺伝子操作する工程；
ｄ）操作されたＴ細胞の数を、前記細胞をインビトロで成長させることにより増加させる工程；ならびに
ｅ）前記粗流体組成物が取得された患者へ前記操作されたＴ細胞を投与する工程。
【請求項５９】
前記粗流体組成物が、前記患者由来の血液から取得されたアフェレーシス産物または白血球アフェレーシス産物であり、前記粗流体組成物がデバイスの注入口にアプライされ、前記チャネルを流体的に通過する時、前記組成物中のＴ細胞が、濃縮された産物が収集される１つまたは複数の収集出口へ流れ、前記粗流体組成物中にあり、かつ異なるサイズである赤血球、血小板、または他の粒子が、前記収集出口から切り離されているもう１つの廃棄物出口へ流れる、請求項５８に記載の方法。
【請求項６０】
遺伝子操作が、標的細胞をトランスフェクションまたは形質導入することを含む、請求項５８または５９に記載の方法。
【請求項６１】
表面上にキメラ受容体を発現する細胞の収率が、粗流体組成物からＦｉｃｏｌｌ遠心分離により単離され、かつＤＬＤに供されていないＴ細胞より少なくとも１０％高い、請求項６０に記載の方法。
【請求項６２】
表面上にキメラ受容体を発現する標的細胞の収率が、粗流体組成物からＦｉｃｏｌｌ遠心分離により単離され、かつＤＬＤに供されていないＴ細胞より少なくとも５０％高い、請求項６０に記載の方法。
【請求項６３】
前記ＣＡＲが、ａ）抗原結合ドメインを含む細胞外領域；ｂ）膜貫通領域；およびｃ）細胞内領域を含み、前記ＣＡＲ  Ｔ細胞が、トリガーされた時、ＣＡＲ  Ｔ細胞の数または活性を低下させる分子スイッチを前記細胞に提供する１つまたは複数の組換え配列を含んでもよい、請求項５８〜６２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６４】
前記抗原結合ドメインが、モノクローナル抗体の重鎖と軽鎖の両方の抗原結合領域由来の、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）である、請求項６３に記載の方法。
【請求項６５】
前記ＣＡＲが、細胞外領域と膜貫通領域を接続する２〜２０個のアミノ酸のヒンジ領域を含む、請求項６３または６４に記載の方法。
【請求項６６】
前記膜貫通領域が、ＣＤ８またはＣＤ２８タンパク質配列を含む、請求項６３〜６５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６７】
前記細胞内領域が、ＣＤ３ζ、ＣＤ１３７、またはＣＤ２８細胞内ドメインに由来したシグナル伝達ドメインを含む、請求項６３〜６６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６８】
前記患者が白血病を有する、請求項５８〜６７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６９】
前記白血病が急性リンパ芽球性白血病である、請求項６８に記載の方法。
【請求項７０】
前記ＣＡＲが抗原ＣＤ１９またはＣＤ２０を認識する、請求項６８または６９に記載の方法。
【請求項７１】
前記患者が固形腫瘍を有する、請求項５８〜６７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７２】
前記ＣＡＲが、ＣＤ２２；ＲＯＲＩ；メゾテリン；ＣＤ３３／ＩＬ３Ｒａ；ｃ−Ｍｅｔ；ＰＳＭＡ；糖脂質Ｆ７７；ＥＧＦＲｖＩＩＩ；ＧＤ−２；ＮＹ−ＥＳＯ−ｌ  ＴＣＲ；ＭＡＧＥ  Ａ３  ＴＣＲ；およびそれらの組合せからなる群から選択される抗原を認識する、請求項７１に記載の方法。
【請求項７３】
Ｔ細胞を含む粗流体組成物を取得した後に、前記流体中のＴ細胞に、ＤＬＤ分離を促進するように、担体を結合させる、請求項５８〜７２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７４】
ＤＬＤを実施する前に、Ｔ細胞に、ＤＬＤ分離を促進するように、１つまたは複数の担体を結合させる、請求項７３に記載の方法。
【請求項７５】
ＤＬＤを実施した後で、かつＴ細胞が、キメラ受容体を発現するように遺伝子操作される前かまたは後のいずれかで、Ｔ細胞に、ＤＬＤ分離を促進するように、１つまたは複数の担体を結合させる、請求項７３に記載の方法。
【請求項７６】
前記１つまたは複数の担体が、前記Ｔ細胞と特異的に結合する抗体またはアクチベーターを表面上に含む、請求項７３〜７５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７７】
前記担体の全部の直径が、Ｔ細胞の直径と少なくとも同じ長さである、請求項７３〜７６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７８】
前記担体の全部の直径が、Ｔ細胞の直径の５０％以下の長さである、請求項７３〜７６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７９】
前記担体の全部の直径が、Ｔ細胞の直径の少なくとも２倍の長さである、請求項７３〜７６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８０】
前記担体の全部の直径が、Ｔ細胞の直径の２５％以下の長さである、請求項７３〜７６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８１】
担体の１つの群が、Ｔ細胞と少なくとも同じ長さの直径を有し、担体の第２の群が、Ｔ細胞の直径の５０％以下の長さの直径を有する、請求項８０に記載の方法。
【請求項８２】
担体の１つの群が、Ｔ細胞の少なくとも２倍の長さの直径を有し、担体の第２の群が、Ｔ細胞の２５％以下の長さの直径を有する、請求項７３〜８１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８３】
前記担体が、コラーゲンまたは多糖でできている、請求項７３〜８２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８４】
前記担体が、ゼラチンまたはアルギン酸塩でできている、請求項７３〜８３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８５】
Ｔ細胞を含む粗流体組成物の取得が完了した時点から、前記Ｔ細胞に担体を結合させるまで、４時間より長く経過していない、請求項７３〜８４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８６】
粗流体組成物が、患者の血液から引き出されたアフェレーシスまたは白血球アフェレーシス産物であり、アフェレーシスまたは白血球アフェレーシスが完了した時点から、標的細胞に担体を結合させるまで、４時間より長く経過していない、請求項７３〜８４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８７】
Ｔ細胞を含む粗流体組成物の取得が完了した時点から、初めてＴ細胞がトランスフェクションまたは形質導入される時まで、５時間より長く経過していない、請求項７３〜８４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８８】
粗流体組成物が、患者の血液から引き出されたアフェレーシスまたは白血球アフェレーシス産物であり、アフェレーシスまたは白血球アフェレーシスが完了した時点から、初めてＴ細胞がトランスフェクションまたは形質導入される時まで、５時間より長く経過していない、請求項７３〜８４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８９】
初めてＴ細胞がトランスフェクションまたは形質導入される時まで、４時間より長く経過していない、請求項８７または８８に記載の方法。
【請求項９０】
Ｔ細胞が、ＤＬＤを含まない方法により処理された細胞についてより少なくとも１日早く、患者への投与に利用可能である、請求項５８〜８９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９１】
標的細胞が、ＤＬＤを含まない方法により処理された細胞についてより少なくとも３日早く、患者への投与に利用可能である、請求項５８〜８９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９２】
試料上でＤＬＤ、次にアフィニティー分離工程およびアクチベーターの存在下で培養することによるＴ細胞の拡張を実施することを含む、アフェレーシス試料からＴ細胞を精製するための方法であって、得られるＴ細胞の数が、ＤＬＤの代わりにＦｉｃｏｌｌ遠心分離を使用して実施される同じ手順によって産生される数の少なくとも２倍である、方法。
【請求項９３】
アフィニティー分離工程が、ＣＤ３に結合する抗体を含む磁気ビーズまたは粒子の使用を含む、請求項９２に記載の方法。
【請求項９４】
培養１４日後に得られるＴ細胞の数が、ＤＬＤの代わりにＦｉｃｏｌｌ遠心分離を使用して実施される同じ手順によって産生される数の少なくとも２倍である、請求項９２に記載の方法。
【請求項９５】
培養１４日後に得られるＴ細胞の数が、ＤＬＤの代わりにＦｉｃｏｌｌ遠心分離を使用して実施される同じ手順によって産生される数の少なくとも４倍である、請求項９２に記載の方法。
【請求項９６】
ＤＬＤ産物中の細胞が組換え表現型を発現するようにベクターで形質転換されているとき、所望の表現型を示す細胞の収量は、Ｆｉｃｏｌｌ遠心分離により単離され、ＤＬＤに付されない同一の細胞よりも少なくとも１０％高い、請求項９２〜９５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９７】
ＤＬＤ産物中の細胞が組換え表現型を発現するようにベクターで形質転換されているとき、所望の表現型を示すＴ細胞の収量は、Ｆｉｃｏｌｌ遠心分離により単離され、ＤＬＤに付されない同一の細胞よりも少なくとも２０％高い、請求項９２〜９６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９８】
Ｔ細胞の総数に対するＤＬＤ産物中のメモリーＴ細胞の割合が、ＤＬＤの代わりにＦｉｃｏｌｌ遠心分離で同じ手順を使用して産生される割合よりも少なくとも１０％高い、請求項９２に記載の方法。
【請求項９９】
方法が、ＣＡＲ  Ｔ細胞療法のためのＴ細胞を産生するために使用され、患者を処置するために十分な数の細胞を産生するために必要な時間がＦｉｃｏｌｌ遠心分離の代わりにＤＬＤを使用して少なくとも２０％減少される、請求項９２〜９８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１００】
ＣＡＲ  Ｔ細胞を産生するためのプロセスが、細胞が凍結される工程を含まない、請求項９９に記載の方法。
【請求項１０１】
Ｔ細胞の処理が、アフェレーシスが実施されるのと同じ部位で実施される、請求項９９または請求項１００のいずれかに記載の方法。
【請求項１０２】
Ｔ細胞が、アフェレーシスが実施されるのと同じ部位で遺伝的に形質転換される、請求項９９〜１０１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０３】
１時間未満が、アフェレーシス試料収集が完了される時間からＤＬＤが実施される時間までで経過する、請求項９２〜９６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０４】
標的細胞の集団を操作する方法であって、
ａ）粗液体組成物から標的細胞を単離すること、ここに単離は、細胞のサイズの相違に基づいて粗液体組成物中の他の細胞から標的細胞を分離する１つまたは複数の手段を用いて、マイクロ流体デバイス上で行われ、該単離プロセスにより標的細胞豊富な組成物が得られるものであり、
ｂ）工程ａ）から得られた標的細胞を、所望の表現形を有するように遺伝子操作すること
を含み、
標的細胞が遺伝子操作される前に遠心分離されないか、あるいは溶出処理されない、方法。
【請求項１０５】
該標的細胞が白血球または幹細胞である、請求項１０４記載の方法。
【請求項１０６】
該標的細胞がＴ細胞である、請求項１０４記載の方法。
【請求項１０７】
該粗液体組成物が患者から得られた血液またはアフェレーシス調製物である、請求項１０４〜１０６のいずれか一項記載の方法。
【請求項１０８】
標的細胞の単離が、標的細胞に富む組成物がアフェレーシス調製物よりも少なくとも７０％少ない血小板の総数を有するような条件下で行われる、請求項１０７記載の方法。
【請求項１０９】
標的細胞に富む組成物中の血小板の総数がアフェレーシス調製物よりも少なくとも９０％少ない、請求項１０８記載の方法。
【請求項１１０】
標的細胞に対する血小板の割合が、成分除去製剤よりも少なくとも５０％低い、請求項１０９記載の方法。
【請求項１１１】
該標的細胞が、単離後に再簿培養にて拡大されるＴ細胞である、請求項１０７記載の方法。
【請求項１１２】
培養１４日後に得られるＴ細胞の数が、遠心分離工程を含むプロセスによってＴ細胞が単離される手順よりも少なくとも２倍多い、請求項１１１記載の方法。
【請求項１１３】
培養１４日後に得られるＴ細胞の数が、遠心分離工程を含むプロセスによってＴ細胞が単離される手順よりも少なくとも４倍多い、請求項１１１記載の方法。
【請求項１１４】
培養中のＴ細胞の総数に対するメモリーＴ細胞のパーセンテージが、遠心分離工程を含むプロセスによってＴ細胞が単離される手順よりも少なくとも１０％高い、請求項１１３記載の方法。
【請求項１１５】
培養中のＴ細胞の総数に対するメモリーＴ細胞のパーセンテージが、遠心分離工程を含むプロセスによってＴ細胞が単離される手順よりも少なくとも２０％高い、請求項１１３記載の方法。
【請求項１１６】
標的細胞が富化された組成物中の細胞がベクターにて形質転換されて組換え表現形を示す場合、所望の表現形を示す標的細胞の収量が、遠心分離により単離された同じ細胞よりも少なくとも２０％高い、請求項１１４〜１１５のいずれか一項記載の方法。
【請求項１１７】
アフェレーシス試料の収集が完了した時から、マイクロ流体デバイスを用いる分離が行われるまでに１時間以内が経過する、請求項１０７〜１１６のいずれか一項記載の方法。
【請求項１１８】
患者からのアフェレーシス試料の取得が完了してから標的細胞の単離が完了するまでの経過時間が４時間以内である、請求項１０７〜１１６のいずれか一項記載の方法。
【請求項１１９】
患者からのアフェレーシス試料の取得が完了してから細胞が遺伝子操作されるまでの経過時間が４時間以内である、請求項１０７〜１１６のいずれか一項記載の方法。
【請求項１２０】
ＣＡＲ  Ｔ細胞の調製方法であって、
ａ）アフェレーシスにより患者から粗液体組成物を得ること、ここに該試料はＴ細胞を含むものであり、
ｂ）該粗液体組成部物からＴ細胞を単離すること、ここに該単離は、サイズの相違に基づいてＴ細胞を粗液体組成物中の血小板および他の細胞から分子する１つ以上の手順を用いて、マイクロ流体デバイス上で行われ、該単離によりＴ細胞が豊富化され血小板が減少した組成物が得られるものであり、
ｃ）工程ａ）で得られた標的細胞を遺伝子操作して、それらの表面上にキメラ抗原受容体（ＣＡＲｓ）を生成させること、ここに遺伝子操作前のいかなる工程においてもＴ細胞が遠心分離されないか、あるいは溶出処理されず、
ｄ）遺伝子操作されたＴ細胞の数を増大させること、
ｅ）工程ｄ）で得られた培養細胞を収集すること
を含む方法。
【請求項１２１】
工程ｃ）において、患者に投与するための医薬組成物中に移されることによりＴ細胞が収集される、請求項１２０記載の方法。
【請求項１２２】
収集前に細胞が凍結されない、請求項１２０または１２１記載の方法。
【請求項１２３】
血小板の少なくとも９０％が工程ｂ）で除去される、請求項１２０〜１２２のいずれか一項記載の方法。
【請求項１２４】
培養前または培養中に細胞がＴ細胞活性化因子または担体に曝露される、請求項１２０〜１２３のいずれか一項記載の方法。
【請求項１２５】
該活性化剤も該担体も、磁気ビーズにまたは粒子に結合されていない、請求項１２４記載の方法。
【請求項１２６】
マイクロ流体デバイスの使用を含まない方法によって細胞が単離または濃縮される手順と比較して、少なくとも１日前にＣＡＲ  Ｔ細胞が患者への投与に利用可能である、請求項１２０〜１２５のいずれか一項記載の方法。
【請求項１２７】
マイクロ流体デバイスの使用を含まない方法によって細胞が単離または濃縮される手順と比較して、少なくとも３日前にＣＡＲ  Ｔ細胞が患者への投与に利用可能である、請求項１２０〜１２５のいずれか一項記載の方法。
【請求項１２８】
工程ｄ）において、培養１４日後に得られるＣＡＲ  Ｔ細胞の数が、Ｆｉｃｏｌｌ遠心分離を用いて得られる数よりも少なくとも２倍多い、請求項１２０〜１２７のいずれか一項記載の方法。
【請求項１２９】
工程ｄ）において、培養１４日後に得られるＣＡＲ  Ｔ細胞の数が、Ｆｉｃｏｌｌ遠心分離を用いて得られる数よりも少なくとも４倍多い、請求項１２０〜１２７のいずれか一項記載の方法。
【請求項１３０】
Ｔ細胞およびＣＡＲ  Ｔ細胞が、患者に投与される前に決して凍結されない、請求項１２０〜１２９のいずれか一項記載の方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６４】
担体は、ポリプロピレン、ポリスチレン、ガラス、ゼラチン、コラーゲン、多糖、プラスチック、アクリルアミド、およびアルギン酸塩を含む、接着細胞の培養のための、当技術分野において知られている材料のいずれかで作られ得る。それらは、コーティングされなくてもよいし、接着および成長を促進する材料（例えば、血清、コラーゲン、タンパク質、またはポリマー）でコーティングされてもよく、表面に付着した作用物質（例えば、抗体、抗体断片、基質、アクチベーター、または他の材料）を有し得る。いくつかの実施形態において、希釈剤は、成長培地であり得、前記工程は逐次的に実施され得、工程（ｄ）の後に、バッファー交換を実施することができる。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００７４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００７４】
分泌性産物は、タンパク質、抗体、バイオ燃料、ポリマー、小分子、およびそれらの任意の組合せであり得、細胞は、細菌細胞、藻類細胞、哺乳類細胞、および腫瘍細胞であり得る。一つの好ましい実施形態において、分泌性産物は、治療上価値の高いタンパク質、抗体、ポリマー、または小分子である。加えて、工程（ａ）の流体組成物は、細胞が、担体において成長している培養物から取得され得る。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１０５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１０５】
図２２：図２２は、Ｆｉｃｏｌｌ遠心分離（無地の白い棒）およびＤＬＤ（白い棒に隣接する単一のストライプを有する棒）によるアフェレーシス試料の処理の結果として発生するＴ細胞の増殖を示す棒グラフである。棒は、左から右に移動して、アフェレーシス出発材料中に元々存在している血小板の１０％（二重ストライプの棒）、５０％（小さな斑点で覆われた棒）および１００％（小さな斑点で覆われた棒に隣接する暗く広い間隔の棒を有する棒）を、増殖の前にＤＬＤにより処理される細胞に添加して戻すことの効果を示す。図の左側は、ＥＤＴＡなしでＤＬＤを介して処理され、次いで０日目にＣＤ３／ＣＤ２８で刺激され、３、７および１４日目にＣＤ３陽性細胞がカウントされる細胞を示す。図の右側は、２ｍＭ  ＥＤＴＡで処理され、次いで０日目にＣＤ３／ＣＤ２８で刺激され、３、７および１４日目にＣＤ３陽性細胞がカウントされる細胞を示す。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１７０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１７０】
Ｆ.積み重ね可能なチップ
デバイスは、複数の積み重ね可能なチップを含み得る。デバイスは、約１〜５０個のチップを含み得る。場合によっては、デバイスは、直列に、または並列に、または両方で置かれた複数のチップを有し得る。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１７１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１７１】
ＶＩ．発明の概念
以下の番号付きの段落は、本願の一部である発明の概念を提示する。これらの概念は、段落例Ｅ１〜Ｅ２７３の形式で表される。
Ｅ１．  以下の工程を含む、標的細胞の集団を操作する方法：
ａ）標的細胞を粗流体組成物から単離する工程であって、単離手順が、マイクロ流体デバイス上で決定論的横置換（ＤＬＤ）を実施することを含み、前記デバイスが、
ｉ）試料注入口から１つまたは複数の流体出口へ延びる少なくとも１個のチャネルであって、前記チャネルが第１の壁および前記第１の壁と反対側の第２の壁によって囲まれている、チャネル；
ｉｉ）前記チャネルにおいて、いくつもの行（row）をなして配列された障害物のアレイであって、障害物のそれぞれの次の行が、前の行に対して横方向へシフトしており、前記障害物が、前記粗流体組成物が前記デバイスの注入口にアプライされ、前記チャネルを流体的に通過する時、標的細胞が、濃縮された産物が収集される１つまたは複数の収集出口へ流れ、前記標的細胞とは異なるサイズである混入細胞または粒子が、前記収集出口から切り離されている１つまたは複数の廃棄物出口へ流れるような様式で配置されている、障害物のアレイ
を含む、工程；
ｂ）前記収集出口から得られた標的細胞を、所望の表現型を有するように遺伝子操作する工程。
Ｅ２．  前記遺伝子操作する工程が、標的細胞をトランスフェクションまたは形質導入することを含み、遺伝子操作された標的細胞が、それらをインビトロで（in vitro）培養することにより増殖される、Ｅ１に記載の方法。
Ｅ３．  前記所望の表現型を示す標的細胞の収率が、Ｆｉｃｏｌｌ遠心分離により単離され、かつＤＬＤに供されていない同一の細胞より少なくとも１０％高い、Ｅ２に記載の方法。
Ｅ４．  前記粗流体組成物が、血液、または血液にアフェレーシスもしくは白血球アフェレーシスを実施することにより取得されている組成物である、Ｅ１に記載の方法。
Ｅ５．  前記標的細胞が白血球である、Ｅ１〜４のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ６．  前記標的細胞が、Ｂ細胞、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、単球、または前駆細胞である、Ｅ１〜４のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ７．  前記標的細胞が樹状細胞である、Ｅ１〜４のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ８．  前記粗流体組成物が患者から取得される、Ｅ１〜７のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ９．  前記粗流体組成物における標的細胞が、形質導入またはトランスフェクションされる前に担体と結合していない、Ｅ８に記載の方法。
Ｅ１０．  標的細胞に、ＤＬＤを実施する前に、ＤＬＤ分離を促進または補完するように、１つまたは複数の担体を結合させる、Ｅ８に記載の方法。
Ｅ１１．  標的細胞に、ＤＬＤを実施した後で、かつそれらを形質導入またはトランスフェクションする前かまたは後のいずれかで、ＤＬＤ分離を促進または補完するように、１つまたは複数の担体を結合させる、Ｅ９に記載の方法。
Ｅ１２．  前記１つまたは複数の担体が、前記標的細胞と特異的に結合する親和性物質を表面上に含む、Ｅ１０またはＥ１１に記載の方法。
Ｅ１３．  前記物質が、抗体、アクチベーター、ハプテン、またはアプタマーである、Ｅ１２に記載の方法。
Ｅ１４．  前記担体の直径が、標的細胞の直径と少なくとも同じ長さである、Ｅ１０〜１３のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ１５．  前記担体の全部の直径が、標的細胞の直径の５０％以下の長さである、Ｅ１０〜１３のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ１６．  前記担体の全部の直径が、標的細胞の直径の少なくとも２倍の長さである、Ｅ１０〜１３のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ１７．  前記担体の全部の直径が、標的細胞の直径の２５％以下の長さである、Ｅ１０〜１３のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ１８．  担体の１つの群が、標的細胞と少なくとも同じ長さの直径を有し、担体の第２の群が、標的細胞の直径の５０％以下の長さの直径を有する、Ｅ１０〜１３のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ１９．  担体の１つの群が、標的細胞の少なくとも２倍の長さの直径を有し、担体の第２の群が、標的細胞の２５％以下の長さの直径を有する、Ｅ１０〜１３のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ２０．  前記担体が、コラーゲンまたは多糖でできている、Ｅ１０〜１９のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ２１．  前記担体が、ゼラチンまたはアルギン酸塩でできている、Ｅ１０〜２０のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ２２．  粗流体組成物が患者から取得され、前記粗流体組成物の取得が完了した時点から、標的細胞に初めて担体を結合させるまで、４時間より長く経過していない、Ｅ１０〜２１のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ２３．  粗流体組成物が、患者の血液から引き出されたアフェレーシスまたは白血球アフェレーシス産物であり、アフェレーシスまたは白血球アフェレーシスが完了した時点から標的細胞に初めて担体を結合させるまで、４時間より長く経過していない、Ｅ１０〜２１のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ２４．  粗流体組成物が患者から取得され、前記粗流体組成物の取得が完了した時点から、初めて標的細胞がトランスフェクションまたは形質導入される時まで、５時間より長く経過していない、Ｅ１〜２３のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ２５．  粗流体組成物が、患者の血液から引き出されたアフェレーシスまたは白血球アフェレーシス産物であり、アフェレーシスまたは白血球アフェレーシスが完了した時点から、初めて標的細胞がトランスフェクションまたは形質導入される時まで、５時間より長く経過していない、Ｅ１〜２３のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ２６．  初めて標的細胞がトランスフェクションまたは形質導入される時まで、４時間より長く経過していない、Ｅ２４またはＥ２５に記載の方法。
Ｅ２７．  以下の工程を含む、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞を作製する方法：
ａ）Ｔ細胞を含む粗流体組成物を取得する工程；
ｂ）ｉ）試料注入口から１つまたは複数の流体出口へ延びる少なくとも１個のチャネルであって、前記チャネルが第１の壁および前記第１の壁と反対側の第２の壁によって囲まれている、チャネル；
ｉｉ）前記チャネルにおいて、いくつもの行をなして配列された障害物のアレイであって、障害物のそれぞれの次の行が、前の行に対して横方向へシフトしており、前記障害物が、前記粗流体組成物がデバイスの注入口にアプライされ、前記チャネルを流体的に通過する時、前記組成物中のＴ細胞が、濃縮された産物が収集される１つまたは複数の収集出口へ流れ、前記粗流体組成物中にあり、かつ前記Ｔ細胞とは異なるサイズである細胞または粒子が、前記収集出口から切り離されている１つまたは複数の廃棄物出口へ流れるような様式で配置されている、障害物のアレイ
を含むマイクロ流体デバイスを用いて、前記粗流体組成物に決定論的横置換（ＤＬＤ）を実施する工程；
ｃ）工程ｂ）において取得された濃縮産物中のＴ細胞を、それらの表面上にキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を産生するように遺伝子操作する工程。
Ｅ２８．  前記粗流体組成物が、患者由来の血液から取得されたアフェレーシス産物または白血球アフェレーシス産物であり、前記粗流体組成物が前記デバイスの注入口にアプライされ、前記チャネルを流体的に通過する時、前記組成物中のＴ細胞が、濃縮された産物が収集される１つまたは複数の収集出口へ流れ、前記粗流体組成物中にあり、かつ異なるサイズである赤血球、血小板、または他の粒子が、前記収集出口から切り離されている１つまたは複数の廃棄物出口へ流れる、Ｅ２７に記載の方法。
Ｅ２９．  前記遺伝子操作が、標的細胞をトランスフェクションまたは形質導入することを含み、遺伝子操作された標的細胞が、インビトロで前記細胞を成長させることにより、さらに増殖される、Ｅ２７またはＥ２８に記載の方法。
Ｅ３０．  表面上にキメラ受容体を発現するＴ細胞の収率が、粗流体組成物からＦｉｃｏｌｌ遠心分離により単離され、かつＤＬＤに供されていないＴ細胞より少なくとも１０％高い、Ｅ２７〜２９のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ３１．  表面上にキメラ受容体を発現するＴ細胞の収率が、粗流体組成物からＦｉｃｏｌｌ遠心分離により単離され、かつＤＬＤに供されていないＴ細胞より少なくとも２０％高い、Ｅ３０に記載の方法。
Ｅ３２．  表面上にキメラ受容体を発現するＴ細胞の収率が、粗流体組成物からＦｉｃｏｌｌ遠心分離により単離され、かつＤＬＤに供されていないＴ細胞より少なくとも５０％高い、Ｅ３０に記載の方法。
Ｅ３３．  前記ＣＡＲが、ａ）抗原結合ドメインを含む細胞外領域；ｂ）膜貫通領域；ｃ）細胞内領域を含み、前記ＣＡＲ  Ｔ細胞が、トリガーされた時、ＣＡＲ  Ｔ細胞の数または活性を低下させる分子スイッチを前記細胞に提供する１つまたは複数の組換え配列を含んでもよい、Ｅ２７〜３２のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ３４．  前記抗原結合ドメインが、モノクローナル抗体の重鎖と軽鎖の両方の抗原結合領域由来の、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）である、Ｅ３３に記載の方法。
Ｅ３５．  前記ＣＡＲが、細胞外領域と膜貫通領域を接続する２〜２０個のアミノ酸のヒンジ領域を含む、Ｅ３３またはＥ３４に記載の方法。
Ｅ３６．  前記膜貫通領域が、ＣＤ８またはＣＤ２８タンパク質配列を含む、Ｅ３５に記載の方法。
Ｅ３７．  前記細胞内領域が、ＣＤ３ζ、ＣＤ１３７、またはＣＤ２８細胞内ドメインに由来したシグナル伝達ドメインを含む、Ｅ３３〜３６のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ３８．  前記Ｔ細胞を含む粗流体組成物が、癌、自己免疫疾患、または感染性疾患を有する患者から取得される、Ｅ２７〜３７のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ３９．  Ｔ細胞を含む粗流体組成物を取得した後、前記流体組成物中のＴ細胞に、ＤＬＤ分離を促進するように、１つまたは複数の担体を結合させる、Ｅ３８に記載の方法。
Ｅ４０．  Ｔ細胞に、ＤＬＤを実施する前に、ＤＬＤ分離を促進するように、１つまたは複数の担体を結合させる、Ｅ３９に記載の方法。
Ｅ４１．  Ｔ細胞に、ＤＬＤを実施した後で、かつそれらが遺伝子操作される前かまたは後のいずれかで、ＤＬＤ分離を促進するように、１つまたは複数の担体を結合させる、Ｅ３９に記載の方法。
Ｅ４２．  前記１つまたは複数の担体が、前記Ｔ細胞と特異的に結合する抗体またはアクチベーターを表面上に含む、Ｅ３９〜４１のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ４３．  前記担体の全部の直径が、Ｔ細胞の直径と少なくとも同じ長さである、Ｅ３９〜４２のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ４４．  前記担体の全部の直径が、Ｔ細胞の直径の５０％以下の長さである、Ｅ３９〜４２のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ４５．  前記担体の全部の直径が、Ｔ細胞の直径の少なくとも２倍の長さである、Ｅ３９〜４２のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ４６．  前記担体の全部の直径が、Ｔ細胞の直径の２５％以下の長さである、Ｅ３９〜４２のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ４７．  担体の１つの群が、Ｔ細胞と少なくとも同じ長さの直径を有し、担体の第２の群が、Ｔ細胞の直径の５０％以下の長さの直径を有する、Ｅ３９〜４２のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ４８．  担体の１つの群が、Ｔ細胞の少なくとも２倍の長さの直径を有し、担体の第２の群が、Ｔ細胞の２５％以下の長さの直径を有する、Ｅ３９〜４２のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ４９．  前記担体が、コラーゲンまたは多糖でできている、Ｅ３９〜４８のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ５０．  前記担体が、ゼラチンまたはアルギン酸塩でできている、Ｅ３９〜４９のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ５１．  Ｔ細胞を含む粗流体組成物の取得が完了した時点から、前記Ｔ細胞に担体を結合させるまで、４時間より長く経過していない、Ｅ３９〜５０のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ５２．  粗流体組成物が、患者の血液から引き出されたアフェレーシスまたは白血球アフェレーシス産物であり、アフェレーシスまたは白血球アフェレーシスが完了した時点から、標的細胞に担体を結合させるまで、４時間より長く経過していない、Ｅ３９〜５０のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ５３．  Ｔ細胞を含む粗流体組成物の取得が完了した時点から、初めてＴ細胞がトランスフェクションまたは形質導入される時まで、５時間より長く経過していない、Ｅ２７〜５０のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ５４．  粗流体組成物が、患者の血液から引き出されたアフェレーシスまたは白血球アフェレーシス産物であり、アフェレーシスまたは白血球アフェレーシスが完了した時点から、初めてＴ細胞がトランスフェクションまたは形質導入される時まで、５時間より長く経過していない、Ｅ２７〜５０のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ５５．  初めてＴ細胞がトランスフェクションまたは形質導入される時まで、４時間より長く経過していない、Ｅ５３またはＥ５４に記載の方法。
Ｅ５６．  ＣＡＲ  Ｔ細胞を作製することにおける全工程が、Ｔ細胞を含む粗流体組成物が取得される同じ施設で実施され、全工程が、合計４時間以内に完了する、Ｅ２７〜５５のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ５７．  Ｅ２７〜５５のいずれか一つに記載の方法により作製されたＣＡＲ  Ｔ細胞。
Ｅ５８．  癌、自己免疫疾患、または感染性疾患について患者を処置する方法であって、前記患者由来の癌細胞、自己免疫細胞、または感染細胞上の抗原を認識するキメラ抗原受容体を発現するように操作されたＣＡＲ  Ｔ細胞を前記患者に投与することを含み、前記ＣＡＲ  Ｔ細胞が、以下の工程を含むプロセスにより作製されている、方法：
ａ）Ｔ細胞を含む粗流体組成物を患者から取得する工程；
ｂ）ｉ）試料注入口から１つまたは複数の流体出口へ延びる少なくとも１個のチャネルであって、前記チャネルが第１の壁および前記第１の壁と反対側の第２の壁によって囲まれている、チャネル；
ｉｉ）前記チャネルにおいて、いくつもの行をなして配列された障害物のアレイであって、障害物のそれぞれの次の行が、前の行に対して横方向へシフトしており、前記障害物が、前記粗流体組成物がデバイスの注入口にアプライされ、前記チャネルを流体的に通過する時、前記組成物中のＴ細胞が、濃縮された産物が収集される１つまたは複数の収集出口へ流れ、前記粗流体組成物中にあり、かつ前記Ｔ細胞とは異なるサイズである細胞または粒子が、前記収集出口から切り離されている１つまたは複数の廃棄物出口へ流れるような様式で配置されている、障害物のアレイ
を含むマイクロ流体デバイスを用いて、前記粗流体組成物に決定論的横置換（ＤＬＤ）を実施する工程；
ｃ）工程ｂ）において取得された前記Ｔ細胞を、それらの表面上にキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するように遺伝子操作する工程；
ｄ）操作されたＴ細胞の数を、前記細胞をインビトロで成長させることにより増加させる工程；ならびに
ｅ）前記粗流体組成物が取得された患者へ前記操作されたＴ細胞を投与する工程。
Ｅ５９．  前記粗流体組成物が、前記患者由来の血液から取得されたアフェレーシス産物または白血球アフェレーシス産物であり、前記粗流体組成物がデバイスの注入口にアプライされ、前記チャネルを流体的に通過する時、前記組成物中のＴ細胞が、濃縮された産物が収集される１つまたは複数の収集出口へ流れ、前記粗流体組成物中にあり、かつ異なるサイズである赤血球、血小板、または他の粒子が、前記収集出口から切り離されているもう１つの廃棄物出口へ流れる、Ｅ５８に記載の方法。
Ｅ６０．  遺伝子操作が、標的細胞をトランスフェクションまたは形質導入することを含む、Ｅ５８またはＥ５９に記載の方法。
Ｅ６１．  表面上にキメラ受容体を発現する細胞の収率が、粗流体組成物からＦｉｃｏｌｌ遠心分離により単離され、かつＤＬＤに供されていないＴ細胞より少なくとも１０％高い、Ｅ６０に記載の方法。
Ｅ６２．  表面上にキメラ受容体を発現する標的細胞の収率が、粗流体組成物からＦｉｃｏｌｌ遠心分離により単離され、かつＤＬＤに供されていないＴ細胞より少なくとも５０％高い、Ｅ６０に記載の方法。
Ｅ６３．  前記ＣＡＲが、ａ）抗原結合ドメインを含む細胞外領域；ｂ）膜貫通領域；およびｃ）細胞内領域を含み、前記ＣＡＲ  Ｔ細胞が、トリガーされた時、ＣＡＲ  Ｔ細胞の数または活性を低下させる分子スイッチを前記細胞に提供する１つまたは複数の組換え配列を含んでもよい、Ｅ５８〜６２のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ６４．  前記抗原結合ドメインが、モノクローナル抗体の重鎖と軽鎖の両方の抗原結合領域由来の、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）である、Ｅ６３に記載の方法。
Ｅ６５．  前記ＣＡＲが、細胞外領域と膜貫通領域を接続する２〜２０個のアミノ酸のヒンジ領域を含む、Ｅ６３またはＥ６４に記載の方法。
Ｅ６６．  前記膜貫通領域が、ＣＤ８またはＣＤ２８タンパク質配列を含む、Ｅ６３〜６５のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ６７．  前記細胞内領域が、ＣＤ３ζ、ＣＤ１３７、またはＣＤ２８細胞内ドメインに由来したシグナル伝達ドメインを含む、Ｅ６３〜６６のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ６８．  前記患者が白血病を有する、Ｅ５８〜６７のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ６９．  前記白血病が急性リンパ芽球性白血病である、Ｅ６８に記載の方法。
Ｅ７０．  前記ＣＡＲが抗原ＣＤ１９またはＣＤ２０を認識する、Ｅ６８またはＥ６９に記載の方法。
Ｅ７１．  前記患者が固形腫瘍を有する、Ｅ５８〜６７のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ７２．  前記ＣＡＲが、ＣＤ２２；ＲＯＲＩ；メゾテリン；ＣＤ３３／ＩＬ３Ｒａ；ｃ−Ｍｅｔ；ＰＳＭＡ；糖脂質Ｆ７７；ＥＧＦＲｖＩＩＩ；ＧＤ−２；ＮＹ−ＥＳＯ−ｌ  ＴＣＲ；ＭＡＧＥ  Ａ３  ＴＣＲ；およびそれらの組合せからなる群から選択される抗原を認識する、Ｅ７１に記載の方法。
Ｅ７３．  Ｔ細胞を含む粗流体組成物を取得した後に、前記流体中のＴ細胞に、ＤＬＤ分離を促進するように、担体を結合させる、Ｅ５８〜７２のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ７４．  ＤＬＤを実施する前に、Ｔ細胞に、ＤＬＤ分離を促進するように、１つまたは複数の担体を結合させる、Ｅ７３に記載の方法。
Ｅ７５．  ＤＬＤを実施した後で、かつＴ細胞が、キメラ受容体を発現するように遺伝子操作される前かまたは後のいずれかで、Ｔ細胞に、ＤＬＤ分離を促進するように、１つまたは複数の担体を結合させる、Ｅ７３に記載の方法。
Ｅ７６．  前記１つまたは複数の担体が、前記Ｔ細胞と特異的に結合する抗体またはアクチベーターを表面上に含む、Ｅ７３〜７５のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ７７．  前記担体の全部の直径が、Ｔ細胞の直径と少なくとも同じ長さである、Ｅ７３〜７６のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ７８．  前記担体の全部の直径が、Ｔ細胞の直径の５０％以下の長さである、Ｅ７３〜７６のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ７９．  前記担体の全部の直径が、Ｔ細胞の直径の少なくとも２倍の長さである、Ｅ７３〜７６のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ８０．  前記担体の全部の直径が、Ｔ細胞の直径の２５％以下の長さである、Ｅ７３〜７６のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ８１．  担体の１つの群が、Ｔ細胞と少なくとも同じ長さの直径を有し、担体の第２の群が、Ｔ細胞の直径の５０％以下の長さの直径を有する、Ｅ８０に記載の方法。
Ｅ８２．  担体の１つの群が、Ｔ細胞の少なくとも２倍の長さの直径を有し、担体の第２の群が、Ｔ細胞の２５％以下の長さの直径を有する、Ｅ７３〜８１のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ８３．  前記担体が、コラーゲンまたは多糖でできている、Ｅ７３〜８２のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ８４．  前記担体が、ゼラチンまたはアルギン酸塩でできている、Ｅ７３〜８３のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ８５．  Ｔ細胞を含む粗流体組成物の取得が完了した時点から、前記Ｔ細胞に担体を結合させるまで、４時間より長く経過していない、Ｅ７３〜８４のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ８６．  粗流体組成物が、患者の血液から引き出されたアフェレーシスまたは白血球アフェレーシス産物であり、アフェレーシスまたは白血球アフェレーシスが完了した時点から、標的細胞に担体を結合させるまで、４時間より長く経過していない、Ｅ７３〜８４のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ８７．  Ｔ細胞を含む粗流体組成物の取得が完了した時点から、初めてＴ細胞がトランスフェクションまたは形質導入される時まで、５時間より長く経過していない、Ｅ７３〜８４のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ８８．  粗流体組成物が、患者の血液から引き出されたアフェレーシスまたは白血球アフェレーシス産物であり、アフェレーシスまたは白血球アフェレーシスが完了した時点から、初めてＴ細胞がトランスフェクションまたは形質導入される時まで、５時間より長く経過していない、Ｅ７３〜８４のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ８９．  初めてＴ細胞がトランスフェクションまたは形質導入される時まで、４時間より長く経過していない、Ｅ８７または８８に記載の方法。
Ｅ９０．  Ｔ細胞が、ＤＬＤを含まない方法により処理された細胞についてより少なくとも１日早く、患者への投与に利用可能である、Ｅ５８〜８９のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ９１．  標的細胞が、ＤＬＤを含まない方法により処理された細胞についてより少なくとも３日早く、患者への投与に利用可能である、Ｅ５８〜８９のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ９２．  ａ）標的細胞を含む粗流体組成物を患者から取得する工程；
ｂ）マイクロ流体デバイスを用いて、前記標的細胞を含む粗流体組成物に決定論的横置換（ＤＬＤ）を実施して、標的細胞が濃縮された組成物を得る工程；
を含み、ＤＬＤの前かまたは後のいずれかに、標的細胞に、ＤＬＤ分離を促進するように、１つまたは複数の担体を結合させ、前記標的細胞を含む粗流体組成物の患者からの取得が完了した時点から、前記標的細胞に担体を結合させるまで、５時間より長く経過していない、患者から標的細胞を収集する方法。
Ｅ９３．  前記１つまたは複数の担体が、前記標的細胞と特異的に結合する抗体またはアクチベーターを表面上に含む、Ｅ９２に記載の方法。
Ｅ９４．  前記担体の全部の直径が、標的細胞の直径と少なくとも同じ長さである、Ｅ９２またはＥ９３に記載の方法。
Ｅ９５．  前記担体の全部の直径が、標的細胞の直径の５０％以下の長さである、Ｅ９２または９３に記載の方法。
Ｅ９６．  前記担体の全部の直径が、標的細胞の直径の少なくとも２倍の長さである、Ｅ９２またはＥ９３に記載の方法。
Ｅ９７．  前記担体の全部の直径が、標的細胞の直径の２５％以下の長さである、Ｅ９２またはＥ９３に記載の方法。
Ｅ９８．  担体の１つの群が、標的細胞と少なくとも同じ長さの直径を有し、担体の第２の群が、標的細胞の直径の５０％以下の長さの直径を有する、Ｅ９２またはＥ９３に記載の方法。
Ｅ９９．  担体の１つの群が、Ｔ細胞の少なくとも２倍の長さの直径を有し、担体の第２の群が、Ｔ細胞の２５％以下の長さの直径を有する、Ｅ９２またはＥ９３に記載の方法。
Ｅ１００．  前記担体が、コラーゲンまたは多糖でできている、Ｅ９２〜９９のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ１０１．  前記担体が、ゼラチンまたはアルギン酸塩でできている、Ｅ９２〜１００のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ１０２．  標的細胞を含む粗流体組成物の取得が完了した時点から、前記標的細胞に担体を結合させるまで、４時間より長く経過していない、Ｅ９２〜１０１のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ１０３．  標的細胞を含む粗流体組成物の取得が完了した時点から、前記標的細胞に担体を結合させるまで、３時間より長く経過していない、Ｅ９２〜１０１のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ１０４．  前記標的細胞を含む粗流体組成物が、患者由来の血液にアフェレーシスまたは白血球アフェレーシスを実施することにより、取得される、Ｅ９２〜１０３のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ１０５．  ＤＬＤにより標的細胞が濃縮された組成物中の標的細胞が、ウイルスベクターを用いて形質導入される、Ｅ９２〜１０４のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ１０６．  標的細胞が、電気的に、化学的に、またはナノ粒子を用いて、トランスフェクションされる、Ｅ１０５に記載の方法。
Ｅ１０７．  前記マイクロ流体デバイスが
ａ）試料注入口から１つまたは複数の流体出口へ延びる少なくとも１個のチャネルであって、前記チャネルが第１の壁および前記第１の壁と反対側の第２の壁によって囲まれている、チャネル；
ｂ）前記チャネルにおいて、いくつもの行をなして配列された障害物のアレイであって、障害物のそれぞれの次の行が、前の行に対して横方向へシフトしており、前記障害物が、前記標的細胞を含む粗流体組成物が前記デバイスの注入口にアプライされ、前記チャネルを流体的に通過する時、標的細胞が、濃縮された産物が収集される１つまたは複数の収集出口へ流れ、前記粗流体組成物中にあり、かつ前記標的細胞とは異なるサイズである混入細胞または粒子が、前記収集出口から切り離されている１つまたは複数の廃棄物出口へ流れるような様式で配置されている、障害物のアレイ
を含む、Ｅ９２〜１０６のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ１０８．  前記標的細胞がＴ細胞である、Ｅ９２〜１０７のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ１０９．  前記Ｔ細胞が、ナチュラルキラーＴ細胞、セントラルメモリーＴ細胞、ヘルパーＴ細胞、および制御性Ｔ細胞からなる群から選択される、Ｅ１０８に記載の方法。
Ｅ１１０．  前記標的細胞が幹細胞である、Ｅ９２〜１０７のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ１１１．  前記標的細胞が、Ｂ細胞、マクロファージ、樹状細胞、または顆粒球である、Ｅ９２〜１０７のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ１１２．  前記標的細胞を含む粗流体組成物が、抗凝固剤として働き、または血小板の活性化を防ぐ１つまたは複数の添加物を含む、Ｅ９２〜１１１のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ１１３．  前記添加物が、チクロピジン、イノシン、プロトカテキュ酸、アセチルサリチル酸、およびチロフィバンからなる群から選択される、Ｅ１１２に記載の方法。
Ｅ１１４．  工程ａ）およびｂ）がどちらも、標的細胞を含む粗流体組成物が患者から取得される現地で行われる、Ｅ９２〜１１３のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ１１５．  標的細胞を含む粗流体組成物の患者からの取得が完了した時点から、前記標的細胞に担体を結合させるまで、４時間より長く経過していない、Ｅ９２〜１１４のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ１１６．  粗流体組成物が、患者の血液から引き出されたアフェレーシスまたは白血球アフェレーシス産物であり、アフェレーシスまたは白血球アフェレーシスが完了した時点から、標的細胞に担体を結合させるまで、４時間より長く経過していない、Ｅ９２〜１１４のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ１１７．  ｃ）細胞を遺伝子操作し、および／もしくは数を増加させる工程；ならびに／または
ｄ）前記標的細胞が取得された同じ患者を、収集された標的細胞で処置する工程
をさらに含む、Ｅ９２〜１１６のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ１１８．  工程ｄ）後に、前記標的細胞が凍結保存される、Ｅ１１７に記載の方法。
Ｅ１１９．  工程ｃ）において培養される標的細胞が、アクチベーターの存在下で培養されるＴ細胞である、Ｅ１１７またはＥ１１８に記載の方法。
Ｅ１２０．  前記アクチベーターが担体に結合している、Ｅ１１９に記載の方法。
Ｅ１２１．  標的細胞が、ＤＬＤを含まない方法により処理された細胞についてより少なくとも１日早く、患者への投与に利用可能である、Ｅ５８〜８９のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ１２２．  標的細胞が、ＤＬＤを含まない方法により処理された細胞についてより少なくとも３日早く、患者への投与に利用可能である、Ｅ５８〜８９のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ１２３．  Ｅ９２〜１２２のいずれか一つに記載の方法により作製された標的細胞。
Ｅ１２４．  Ｅ１２３に記載の標的細胞を前記患者に投与することを含む、疾患または状態について患者を処置する方法。
Ｅ１２５．  以下の工程を含む、接着細胞を複数の他の細胞から分離する方法：
ａ）複数の他の細胞および接着細胞を含む粗流体組成物を、ＤＬＤ分離を促進するように結合する１つまたは複数の担体と接触させる工程であって、前記接着細胞が、接触により、または接触後に担体と少なくとも部分的に会合して、担体会合化接着細胞複合体を生成し、前記担体会合化接着細胞複合体が、前記複数の他の細胞における細胞に対して増加したサイズを含み、前記担体会合化接着細胞複合体のサイズが、臨界サイズ以上であり、かつ前記複数の他の細胞における細胞が前記臨界サイズ未満のサイズを含む、工程；
ｂ）前記粗流体組成物をデバイスにアプライする工程であって、前記デバイスが、行をなして配列された障害物のアレイを含み、前記行が、お互いに対して横方向へシフトされ、前記行が、前記臨界サイズ以上の粒子を第１の方向へ、および前記臨界サイズ未満の粒子を第２の方向へ偏向させるように構成される、工程；ならびに
ｃ）前記担体会合化接着細胞複合体を含む前記試料を前記デバイスに流す工程であって、前記担体会合化接着細胞複合体が前記障害物により前記第１の方向に偏向され、かつ前記複数の他の細胞における細胞が前記第２の方向に偏向され、それにより、前記担体会合化接着細胞複合体を前記複数の他の細胞から分離する、工程；
ｄ）分離された担体会合化接着細胞複合体を含む流体組成物を収集する工程。
Ｅ１２６．  前記接着細胞が、前記接着細胞および複数の他の細胞を含む粗流体組成物の一部として患者から収集され、前記粗流体組成物の患者からの取得が完了した時点から、前記接着細胞に初めて担体を結合させるまで、３時間より長く経過していない、Ｅ１２５に記載の方法。
Ｅ１２７．  前記粗流体組成物の患者からの取得が完了した時点から、前記接着細胞に初めて担体を結合させるまで、２時間より長く経過していない、Ｅ１２５に記載の方法。
Ｅ１２８．  前記粗流体組成物の患者からの取得が完了した時点から、前記接着細胞に初めて担体を結合させるまで、１時間より長く経過していない、Ｅ１２５に記載の方法。
Ｅ１２９．  前記粗流体組成物の患者からの取得が完了した時点から、前記接着細胞または前記担体接着細胞複合体が初めて前記デバイスから収集されるまで、４時間より長く経過していない、Ｅ１２５に記載の方法。
Ｅ１３０．  前記粗流体組成物の患者からの取得が完了した時点から、前記接着細胞または前記担体接着細胞複合体が初めて前記デバイスから収集されるまで、４時間より長く経過していない、Ｅ１２５に記載の方法。
Ｅ１３１．  前記担体が、前記接着細胞と特異的に結合する抗体またはアクチベーターを表面上に含む、Ｅ１２５〜１３０のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ１３２．  前記担体の直径が、前記接着細胞の直径と少なくとも同じ長さである、Ｅ１２５〜１３１のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ１３３．  前記担体の全部の直径が、前記接着細胞の直径の少なくとも２倍の長さである、Ｅ１２５〜１３１のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ１３４．  前記担体の全部の直径が、前記接着細胞の直径の少なくとも１０倍の長さである、Ｅ１２５〜１３１のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ１３５．  前記担体の全部の直径が、１０〜６００μｍである、Ｅ１２５〜１３１のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ１３６．  前記接着細胞が、ＭＲＣ−５細胞；ＨｅＬａ細胞；Ｖｅｒｏ細胞；ＮＩＨ  ３Ｔ３細胞；Ｌ９２９細胞；Ｓｆ２１細胞；Ｓｆ９細胞；Ａ５４９細胞；Ａ９細胞；ＡｔＴ−２０細胞；ＢＡＬＢ／３Ｔ３細胞；ＢＨＫ−２１細胞；ＢＨＬ−１００細胞；ＢＴ細胞；Ｃａｃｏ−２細胞；Ｃｈａｎｇ細胞；Ｃｌｏｎｅ  ９細胞；Ｃｌｏｎｅ  Ｍ−３細胞；ＣＯＳ−１細胞；ＣＯＳ−３細胞；ＣＯＳ−７細胞；ＣＲＦＫ細胞；ＣＶ−１細胞；Ｄ−１７細胞；Ｄａｕｄｉ細胞；ＧＨ１細胞；ＧＨ３細胞；ＨａＫ細胞；ＨＣＴ−１５細胞；ＨＬ−６０細胞；ＨＴ−１０８０細胞；ＨＥＫ細胞、ＨＴ−２９細胞；ＨＵＶＥＣ細胞；Ｉ−１０細胞；ＩＭ−９細胞；ＪＥＧ−２細胞；Ｊｅｎｓｅｎ細胞；Ｊｕｒｋａｔ細胞；Ｋ−５６２細胞；ＫＢ細胞；ＫＧ−１細胞；Ｌ２細胞；ＬＬＣ−ＷＲＣ  ２５６細胞；ＭｃＣｏｙ細胞；ＭＣＦ７細胞；ＷＩ−３８細胞；ＷＩＳＨ細胞；ＸＣ細胞；Ｙ−１細胞；ＣＨＯ細胞；Ｒａｗ  ２６４．７細胞；ＨＥＰ  Ｇ２細胞；ＢＡＥ−１細胞；ＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞、およびそれらの任意の誘導体からなる群から選択される、Ｅ１２５〜１３５のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ１３７．  前記接着細胞が幹細胞である、Ｅ１２５〜１３５のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ１３８．  以下の工程を含む、活性化細胞を複数の他の細胞から分離する方法：
ａ）活性化の能力がある細胞および複数の他の細胞を含む粗流体組成物を、１つまたは複数の担体と接触させる工程であって、少なくとも１つの担体が細胞アクチベーターを含み、前記細胞アクチベーターが、接触により、または接触後に、前記細胞アクチベーターによる活性化の能力がある細胞と少なくとも部分的に会合して、担体会合化細胞複合体を生成し、前記細胞アクチベーターによる活性化の能力がある細胞との前記細胞アクチベーターの会合が、前記活性化の能力がある細胞を少なくとも部分的に活性化し、前記担体会合化細胞複合体が、前記複数の他の細胞における細胞に対して増加したサイズを含み、前記担体会合化細胞複合体のサイズが臨界サイズ以上であり、かつ前記複数の他の細胞における細胞が前記臨界サイズ未満のサイズを含む、工程；
ｂ）前記試料をデバイスにアプライする工程であって、前記デバイスが、行をなして配列された障害物のアレイを含み、前記行が、お互いに対して横方向へシフトされ、前記行が、前記臨界サイズ以上の粒子を第１の方向へ、および前記臨界サイズ未満の粒子を第２の方向へ偏向させるように構成される、工程；ならびに
ｃ）前記試料を前記デバイスに流す工程であって、前記担体会合化細胞複合体が前記障害物により前記第１の方向に偏向され、かつ前記複数の他の細胞における細胞が前記第２の方向に偏向され、それにより、前記活性化細胞を前記複数の他の細胞から分離する、工程；
ｄ）分離された担体会合化細胞複合体を含む流体組成物を収集する工程。
Ｅ１３９．  前記活性化の能力がある細胞が、Ｔ細胞、Ｂ細胞、制御性Ｔ細胞、マクロファージ、樹状細胞、顆粒球、自然リンパ球系細胞、巨核球、ナチュラルキラー細胞、栓球、滑膜細胞、β細胞、肝臓細胞、膵臓細胞、ＤＥ３溶原化細胞、酵母細胞、植物細胞、および幹細胞からなる群から選択される、Ｅ１３８に記載の方法。
Ｅ１４０．  細胞アクチベーターがタンパク質である、Ｅ１３８またはＥ１３９に記載の方法。
Ｅ１４１．  前記タンパク質が抗体である、Ｅ１４０に記載の方法。
Ｅ１４２．  前記タンパク質が、ＣＤ３、ＣＤ２８、抗原、ヘルパーＴ細胞、受容体、サイトカイン、糖タンパク質、およびそれらの任意の組合せからなる群から選択される、Ｅ１４０に記載の方法。
Ｅ１４３．  前記細胞アクチベーターが、インスリン、ＩＰＴＧ、ラクトース、アロラクトース、脂質、グリコシド、テルペン、ステロイド、アルカロイド、およびそれらの任意の組合せからなる群から選択される、Ｅ１３８に記載の方法。
Ｅ１４４．  前記活性化の能力がある細胞が、前記活性化の能力がある細胞および複数の他の細胞を含む粗流体組成物の一部として患者から収集され、前記粗流体組成物の患者からの取得が完了した時点から、前記活性化の能力がある細胞に担体を結合させるまで、４時間より長く経過していない、Ｅ１３８〜１４３のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ１４５．  前記粗流体組成物の患者からの取得が完了した時点から、前記活性化の能力がある細胞に担体を結合させるまで、３時間より長く経過していない、Ｅ１３８〜１４３のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ１４６．  前記粗流体組成物の患者からの取得が完了した時点から、前記活性化の能力がある細胞に担体を結合させるまで、２時間より長く経過していない、Ｅ１３８〜１４３のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ１４７．  前記粗流体組成物の患者からの取得が完了した時点から、工程ｃ）が完了するまで、４時間より長く経過していない、Ｅ１３８〜１４３のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ１４８．  前記粗流体組成物の患者からの取得が完了した時点から、工程ｃ）が完了するまで、３時間より長く経過していない、Ｅ１３８〜１４３のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ１４９．  前記担体の全部の直径が、前記活性化の能力がある細胞と少なくとも同じ長さである、Ｅ１３８〜１４８のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ１５０．  前記担体の全部の直径が、前記活性化の能力がある細胞の直径の少なくとも２倍の長さである、Ｅ１３８〜１４８のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ１５１．  前記担体の全部の直径が、前記活性化の能力がある細胞の直径の少なくとも１０倍の長さである、Ｅ１３８〜１４８のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ１５２．  前記担体の直径が、１０〜６００μｍである、Ｅ１３８〜１４８のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ１５３．  以下の工程を含む、細胞から分泌性産物を連続的に精製する方法：
ａ）細胞を含む流体組成物を取得する工程であって、前記細胞が、前記流体組成物中に懸濁しており、前記細胞が分泌性産物を前記懸濁液へ分泌し、前記細胞が前記分泌性産物の既定サイズより大きい既定サイズを有し、前記細胞の既定サイズが臨界サイズ以上であり、かつ前記分泌性産物の既定サイズが、前記臨界サイズ未満である、工程；
ｂ）前記細胞を含む流体組成物をデバイスにアプライする工程であって、前記デバイスが、行をなして配列された障害物のアレイを含み、前記行が、お互いに対して横方向へシフトされ、前記行が、前記臨界サイズ以上の粒子を第１の方向へ、および前記臨界サイズ未満の粒子を第２の方向へ偏向させるように構成される、工程； 
ｃ）前記試料を前記デバイスに流す工程であって、前記細胞が前記障害物により前記第１の方向に偏向され、かつ前記分泌性産物が前記第２の方向に偏向され、それにより、前記分泌性産物を前記細胞から分離する、工程；
ｄ）前記分泌性産物を収集する工程であって、それにより、実質的に純粋である前記分泌性産物の試料を生じる、工程；
ｅ）分離された細胞を含む回収された流体組成物を収集する工程；ならびに
ｆ）分離された細胞を含む回収された流体組成物を、前記デバイスに再アプライし、工程（ａ）〜（ｅ）を繰り返す工程であって、それにより、分泌性産物を細胞から連続的に精製する、工程。
Ｅ１５４．  前記分泌性産物が、タンパク質、抗体、バイオ燃料、ポリマー、小分子、およびそれらの任意の組合せからなる群から選択される、Ｅ１５３に記載の方法。
Ｅ１５５．  前記細胞が、細菌細胞、藻類細胞、哺乳類細胞、および腫瘍細胞からなる群から選択される、Ｅ１５３に記載の方法。
Ｅ１５６．  遠心分離または水簸の非存在下で、試料上で決定論的横置換（ＤＬＤ）を実施することを含む、アフェレーシス試料中の血小板と白血球の比率を減少させる方法であって、産物が、血小板と白血球の比率がＤＬＤの代わりに遠心分離または水簸を使用して実施される同じ手順で得られる比率よりも少なくとも２０％低くで得られる、方法。
Ｅ１５７．  産物が、血小板と白血球の比率が密度勾配遠心分離または向流遠心分離を使用して実施される同じ手順で得られる比率よりも少なくとも２０％低くで得られる、Ｅ１５６に記載の方法。
Ｅ１５８．  産物が、血小板と白血球の比率が水簸を使用して実施される同じ手順で得られる比率よりも少なくとも２０％低くで得られる、Ｅ１５６に記載の方法。
Ｅ１５９．  産物が、血小板と白血球の比率がＤＬＤの代わりに遠心分離または水簸を使用して得られる比率よりも少なくとも５０％低くで得られる、Ｅ１５６に記載の方法。
Ｅ１６０．  ＤＬＤの前に、アフェレーシス試料に対して実施される分離工程がない、Ｅ１５６〜１５９のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ１６１．  ＤＬＤが、血小板のサイズを変えるインターカレーションを含まず、血小板凝集を促進しないバッファーにおいて実施される、Ｅ１５６〜１６０のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ１６２．  ＤＬＤが、デキストランまたは他の高電荷ポリマーを含まないバッファーにおいて実施される、Ｅ１５６〜１５９のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ１６３．  産物中の血小板の総数が、アフェレーシス試料中よりも少なくとも７０％低い、Ｅ１５６〜１６２のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ１６４．  産物中の血小板の総数が、アフェレーシス試料中よりも少なくとも９０％低い、Ｅ１５６〜１６３のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ１６５．  試料上でＤＬＤ、次にアフィニティー分離工程およびアクチベーターの存在下で培養することによるＴ細胞の拡張を実施することを含む、アフェレーシス試料からＴ細胞を精製するための方法であって、得られるＴ細胞の数が、ＤＬＤの代わりにＦｉｃｏｌｌ遠心分離を使用して実施される同じ手順によって産生される数の少なくとも２倍である、方法。
Ｅ１６６．  アフィニティー分離工程が、ＣＤ３に結合する抗体を含む磁気ビーズまたは粒子の使用を含む、Ｅ１６５に記載の方法。
Ｅ１６７．  培養１４日後に得られるＴ細胞の数が、ＤＬＤの代わりにＦｉｃｏｌｌ遠心分離を使用して実施される同じ手順によって産生される数の少なくとも２倍である、Ｅ１６５に記載の方法。
Ｅ１６８．  培養１４日後に得られるＴ細胞の数が、ＤＬＤの代わりにＦｉｃｏｌｌ遠心分離を使用して実施される同じ手順によって産生される数の少なくとも４倍である、Ｅ１６５に記載の方法。
Ｅ１６９．  ＤＬＤ産物中の細胞が組換え表現型を発現するようにベクターで形質転換されているとき、所望の表現型を示す細胞の収量は、Ｆｉｃｏｌｌ遠心分離により単離され、ＤＬＤに付されない同一の細胞よりも少なくとも１０％高い、Ｅ１５６〜１６８のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ１７０．  ＤＬＤ産物中の細胞が組換え表現型を発現するようにベクターで形質転換されているとき、所望の表現型を示すＴ細胞の収量は、Ｆｉｃｏｌｌ遠心分離により単離され、ＤＬＤに付されない同一の細胞よりも少なくとも２０％高い、Ｅ１５６〜１６９のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ１７１．  Ｔ細胞の総数に対するＤＬＤ産物中のメモリーＴ細胞の割合が、ＤＬＤの代わりにＦｉｃｏｌｌ遠心分離で同じ手順を使用して産生される割合よりも少なくとも１０％高い、Ｅ１６３〜１６５のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ１７２．  方法が、ＣＡＲ  Ｔ細胞療法のためのＴ細胞を産生するために使用され、患者を処置するために十分な数の細胞を産生するために必要な時間がＦｉｃｏｌｌ遠心分離の代わりにＤＬＤを使用して少なくとも２０％減少される、Ｅ１５６〜１７１のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ１７３．  ＣＡＲ  Ｔ細胞を産生するためのプロセスが、細胞が凍結される工程を含まない、Ｅ１７２に記載の方法。
Ｅ１７４．  Ｔ細胞の処理が、アフェレーシスが実施されるのと同じ部位で実施される、Ｅ１７２またはＥ１７３のいずれかに記載の方法。
Ｅ１７５．  Ｔ細胞が、アフェレーシスが実施されるのと同じ部位で遺伝的に形質転換される、Ｅ１７２〜１７４のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ１７６．  １時間未満が、アフェレーシス試料収集が完了される時間からＤＬＤが実施される時間までで経過する、Ｅ１５６〜１６９のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ１７７．  遠心分離または水簸の非存在下で、試料上で決定論的横置換（ＤＬＤ）を実施することを含む、アフェレーシス試料中の白血球に対する血小板の比率を減少させる方法であって、産物が、産物中の血小板の総数がアフェレーシス試料中よりも少なくとも９０％低くで得られる、方法。
Ｅ１７８．  ＤＬＤが、血小板のサイズを変えるインターカレーションを含まず、血小板凝集を促進しないバッファーにおいて実施される、Ｅ１７７に記載の方法。
Ｅ１７９．  ＤＬＤが、デキストランまたは他の高電荷ポリマーを含まないバッファーにおいて実施される、Ｅ１７７に記載の方法。
Ｅ１８０．  以下の工程を含む、ＣＡＲ  Ｔ細胞を操作する方法：
ａ）アフェレーシスにより患者から試料組成物を取得する工程であって、前記試料組成物がＴ細胞を含む、工程；
ｂ）存在する血小板の総数を少なくとも７０％減少させるように試料組成物上でＤＬＤを実施する工程であって、ＤＬＤは、
ｉ）試料注入口から１つまたは複数の流体出口へ延びる少なくとも１個のチャネルであって、前記チャネルが第１の壁および前記第１の壁と反対側の第２の壁によって囲まれている、チャネル；
ｉｉ）前記チャネルにおいて、いくつもの行（ｒｏｗ）をなして配列された障害物のアレイであって、障害物のそれぞれの次の行が、前の行に対して横方向へシフトしており、前記障害物が、粗流体組成物が前記デバイスの注入口にアプライされ、前記チャネルを流体的に通過する時、組成物中のＴ細胞が、濃縮産物が収集される１つまたは複数の収集出口へ流れ、血小板およびＴ細胞より小さい他の物質が、収集出口から切り離されている１つまたは複数の廃棄物出口へ流れる様式で配置されている、障害物のアレイ
を含むマイクロ流体デバイス上で実施される、工程；
ｃ）工程ｂ）において取得された濃縮産物中のＴ細胞を、それらの表面上にキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を産生するように遺伝子操作する工程；
ｄ）それらの数を拡張するようにＴ細胞を培養する工程；
ｅ）患者への投与のための医薬組成物にＴ細胞を移す工程。
Ｅ１８１．  血小板の少なくとも９０％が工程ｂ）において除去される、Ｅ１８０に記載の方法。
Ｅ１８２．  全ての単離工程および濃縮工程がＤＬＤを使用して実施される、Ｅ１８０またはＥ１８１のいずれかに記載の方法。
Ｅ１８３．  培養前または培養中に、細胞がＴ細胞アクチベーターに曝露される、Ｅ１８０〜１８２のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ１８４．  工程ｂ）中および工程ｃ）の前に、細胞が、Ｔ細胞アクチベーターが存在または添加されている培地に移される、Ｅ１８０〜１８３のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ１８５．  アクチベーターを含む培地をＤＬＤにより処理し、アクチベーターを細胞から分離し、細胞が、細胞を組み換え的に操作するためのベクターが存在または添加されている培地に移される、Ｅ１８４に記載の方法。
Ｅ１８６．  細胞が、患者への投与のために医薬組成物に移されるまで細胞が凍結されない、Ｅ１８０〜１８５のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ１８７．  細胞があらゆる工程で凍結されない、Ｅ１８０〜１８５のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ１８８．  細胞がＤＬＤ以外の方法によって単離または濃縮される手順と比較して、プロセスが少なくとも１日早く完了する、Ｅ１８０〜１８７のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ１８９．  細胞がＤＬＤ以外の方法によって単離または濃縮される手順と比較して、プロセスが少なくとも３日早く完了する、Ｅ１８０〜１８７のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ１９０．  細胞がＤＬＤ以外の方法によって単離または濃縮される手順と比較して、プロセスが少なくとも５日早く完了する、Ｅ１８０〜１８７のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ１９１．  細胞がＤＬＤ以外の方法によって単離または濃縮される手順と比較して、プロセスが少なくとも１０日早く完了する、Ｅ１８０〜１８７のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ１９２．  工程ｄ）において、培養１４日後に取得されるＴ細胞の数が、ＤＬＤの代わりにＦｉｃｏｌｌ遠心分離を使用して行われる同じ手順によって産生される数よりも少なくとも２倍高い、Ｅ１８０〜１９１のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ１９３．  工程ｄ）において、培養１４日後に取得されるＴ細胞の数が、ＤＬＤの代わりにＦｉｃｏｌｌ遠心分離を使用して行われる同じ手順によって産生される数よりも少なくとも４倍高い、Ｅ１８０〜１９１のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ１９４．  以下の工程を含む、ＣＡＲ  Ｔ細胞を調製する方法：
ａ）アフェレーシスにより患者から細胞を収集する；
ｂ）工程ａ）で得られた細胞にＤＬＤを実施して、白血球を他の細胞および粒子から分離し、白血球を、それらの増殖をサポートし、Ｔ細胞活性化因子を含むかまたは補充した培地に移す；
ｃ）ＤＬＤを実施して、工程ｂ）の培地から、その表面にキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するように組換え操作されたＴ細胞を分離し、培地に移す；
ｄ）ＤＬＤを実施してＴ細胞を試薬から分離し、増殖培地に移す；
ｅ）細胞を培養して細胞数を増やす；
ｆ）ＤＬＤを実施して、増やしたＴ細胞を患者に投与するための培地に移す。
Ｅ１９５．  細胞が、患者への投与のために医薬組成物に移されるまで凍結されない、Ｅ１９４に記載の方法。
Ｅ１９６．  細胞がいかなる段階においても凍結されていない、Ｅ１９４に記載の方法。
Ｅ１９７．  細胞がＤＬＤ以外の方法によって単離または濃縮される手順と比較して、プロセスが少なくとも３日早く完了する、Ｅ１９４〜１９６のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ１９８．  細胞がＤＬＤ以外の方法によって単離または濃縮される手順と比較して、プロセスが少なくとも５日早く完了する、Ｅ１９４〜１９６のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ１９９．  細胞がＤＬＤ以外の方法によって単離または濃縮される手順と比較して、プロセスが少なくとも１０日早く完了する、Ｅ１９４〜１９６のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ２００．  以下の工程を含む、患者の処置のためのＣＡＲ  Ｔ細胞を調製する方法：
ａ）アフェレーシスによって患者から細胞を収集すること；
ｂ）工程ａ）で得られた細胞にＤＬＤを実施して、白血球を他の細胞および粒子から分離し、白血球を、それらの増殖をサポートし、Ｔ細胞活性化因子を含むかまたは補充した培地に移す；
ｃ）工程ｂ）の培地からＴ細胞を、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を表面に生成するようにＴ細胞を遺伝子操作するためのベクターを含む培地に分離する；
ｄ）ＤＬＤを実施して、Ｔ細胞を試薬から分離し、患者に投与するための培地に移す。
Ｅ２０１．  細胞が、患者への投与のために医薬組成物に移されるまで凍結されない、Ｅ２００に記載の方法。
Ｅ２０２．  細胞がいかなる段階においても凍結されていない、Ｅ２００に記載の方法。
Ｅ２０３．  細胞がＤＬＤ以外の方法によって単離または濃縮される手順と比較して、プロセスが少なくとも３日早く完了する、Ｅ２００〜２０２のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ２０４．  細胞がＤＬＤ以外の方法によって単離または濃縮される手順と比較して、プロセスが少なくとも５日早く完了する、Ｅ２００〜２０２のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ２０５．  細胞がＤＬＤ以外の方法によって単離または濃縮される手順と比較して、プロセスが少なくとも１０日早く完了する、Ｅ２００〜２０２のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ２０６．  工程ｂ）において、白血球に対する血小板の比が、ＤＬＤの代わりに遠心分離またはエルトリエーション（ｅｌｕｔｒｉａｔｉｏｎ）を用いて得られる比よりも少なくとも５０％低い生成物が得られる、Ｅ１８０〜２０５のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ２０７．  所望のＣＡＲ  Ｔ表現型を示すＴ細胞の収量が、Ｆｉｃｏｌｌ遠心分離によって単離され、ＤＬＤに供されていない同一の細胞よりも少なくとも１０％高い、Ｅ１８０〜２０５のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ２０８．  所望のＣＡＲ  Ｔ表現型を示すＴ細胞の収量が、Ｆｉｃｏｌｌ遠心分離によって単離され、ＤＬＤに供されていない同一の細胞よりも少なくとも２０％高い、Ｅ１８０〜２０５のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ２０９．  患者の処置のために十分な数のＴ細胞を製造するのに必要な時間が、同じ方法がアフェレーシス開始材料から細胞を単離するためにＤＬＤではなくＦｉｃｏｌｌ遠心分離を使用して実施された場合よりも少なくとも５％短い、Ｅ１８０〜２０８のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ２１０．  患者の処置のために十分な数のＴ細胞を製造するのに必要な時間が、同じ方法がアフェレーシス開始材料から細胞を単離するためにＤＬＤではなくＦｉｃｏｌｌ遠心分離を使用して実施された場合よりも少なくとも１０％短い、Ｅ１８０〜２０９のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ２１１．  前記方法によって調製された細胞が患者に投与される場合に、細胞が、ＤＬＤの代わりに遠心分離またはエルトリエーション法を使用してアフェレーシス組成物から処理された細胞よりも少なくとも１０％少ない老化を示す、Ｅ１８０〜２０９のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ２１２．  前記方法によって調製された細胞が患者に投与される場合に、細胞が、ＤＬＤの代わりに遠心分離またはエルトリエーション法を使用してアフェレーシス組成物から処理された細胞よりも増大した効力を示す、Ｅ１８０〜２０９のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ２１３．  Ｅ１８０〜２０９のいずれか一つに記載の方法によって調製された治療有効量の細胞を前記患者に投与することを含む、疾患または症状について患者を処置する方法。
Ｅ２１４．  前記疾患または症状ががんである、Ｅ２１３に記載の方法。
Ｅ２１５．  以下の工程を含む、治療的に活性な細胞を製造する方法：
ａ）前記細胞を含む患者から試料組成物を得る；
ｂ）試料に対してＤＬＤを実施して、治療的に活性な細胞が濃縮された組成物を製造する、ここで、ＤＬＤは、以下を含むマイクロ流体デバイスで実施される：
ｉ）試料入口から１つまたは複数の流体出口まで延びる少なくとも１つのチャネルであって、第１の壁および第１の壁の反対側の第２の壁によって境界付けられている、チャネル；
ｉｉ）チャネル内の列に配置された障害物の配列、後続の各列の障害物は前の列に対して横方向にシフトされ、前記障害物は、粗流体組成物が装置の入口にアプライされ、流体的にチャネルを通過するときに、組成物中の治療的に活性な細胞は、濃縮生成物が収集される１つまたは複数の収集出口に流れ、ここで治療的に活性な細胞よりも小さい細胞および材料は、収集出口から分離されるもう１つの廃棄出口に流れる；
ｃ）任意に、工程ｂ）で得られた濃縮生成物中の治療活性細胞を遺伝子操作する；
ｄ）任意に、治療的に活性な細胞を培養してその数を増やす；
ｅ）治療的に活性な細胞を患者への投与のための医薬組成物に移す。
Ｅ２１６．  治療的に活性な細胞が幹細胞である、Ｅ２１５に記載の方法。
Ｅ２１７．  幹細胞が循環中に見出され、試料組成物がアフェレーシスによって調製される、Ｅ２１６に記載の方法
Ｅ２１８．  血小板の少なくとも７０％が工程ｂ）の濃縮生成物から除去される、Ｅ２１７に記載の方法。
Ｅ２１９．  血小板の少なくとも９０％が工程ｂ）の濃縮生成物から除去される、Ｅ２１７に記載の方法。
Ｅ２２０．  すべての単離工程および濃縮工程がＤＬＤを使用して実施される、Ｅ２１５〜２１９のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ２２１．  細胞が、患者への投与のために医薬組成物に移されるまで凍結されない、Ｅ２１５〜２２０のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ２２２．  細胞がいかなる段階においても凍結されていない、Ｅ２１５〜２２０のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ２２３．  細胞がＤＬＤ以外の方法によって単離または濃縮される手順と比較して、プロセスが少なくとも１日早く完了する、Ｅ２１５〜２２２のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ２２４．  細胞がＤＬＤ以外の方法によって単離または濃縮される手順と比較して、プロセスが少なくとも３日早く完了する、Ｅ２１５〜２２２のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ２２５．  細胞がＤＬＤ以外の方法によって単離または濃縮される手順と比較して、プロセスが少なくとも５日早く完了する、Ｅ２１５〜２２２のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ２２６．  試料組成物から得られる治療的に活性な細胞の収量が、細胞がＤＬＤ以外の方法によって単離または濃縮される手順によって得られる場合よりも少なくとも２５％高い、Ｅ２１５〜２２２のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ２２７．  細胞がＤＬＤ以外の方法によって単離または濃縮される手順と比較して、プロセスが少なくとも３日早く完了する、Ｅ２１５〜２２２のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ２２８．  細胞がＤＬＤ以外の方法によって単離または濃縮される手順と比較して、プロセスが少なくとも５日早く完了する、Ｅ２１５〜２２２のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ２２９．  患者の処置のために十分な数の治療的に活性な細胞を製造するのに必要な時間が、同じ方法が試料組成物から細胞を単離するためにＤＬＤではなくＦｉｃｏｌｌ遠心分離を使用して実施された場合よりも少なくとも５％短い、Ｅ２１５〜２２２のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ２３０．  患者の処置のために十分な数の治療的に活性な細胞を製造するのに必要な時間が、同じ方法が試料組成物から細胞を単離するためにＤＬＤではなくＦｉｃｏｌｌ遠心分離を使用して実施された場合よりも少なくとも１０％短い、Ｅ２１５〜２２２のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ２３１．  前記方法によって調製された治療的に活性な細胞が患者に投与される場合に、細胞が、ＤＬＤの代わりに遠心分離またはエルトリエーション法を使用してアフェレーシス組成物から処理された細胞よりも少なくとも１０％少ない老化を示す、Ｅ２１５〜２３０のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ２３２．  前記方法によって調製された治療的に活性な細胞が患者に投与される場合に、細胞が、ＤＬＤの代わりに遠心分離またはエルトリエーション法を使用して試料組成物から処理された細胞よりも増大した効力を示す、Ｅ２１５〜２３０のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ２３３．  Ｅ２１５〜２３０のいずれか一つに記載の方法によって調製された治療有効量の治療的に活性な細胞を前記患者に投与することを含む、疾患または症状について患者を処置する方法。
Ｅ２３４．  前記治療的に活性な細胞が幹細胞であり、前記疾患または症状が遺伝性疾患である、Ｅ２３３に記載の方法。
Ｅ２３５．  標的細胞の集団を操作する方法であって、
ａ）粗液体組成物から標的細胞を単離すること、ここに単離は、細胞のサイズの相違に基づいて粗液体組成物中の他の細胞から標的細胞を分離する１つまたは複数の手段を用いて、マイクロ流体デバイス上で行われ、該単離プロセスにより標的細胞豊富な組成物が得られるものであり、
ｂ）工程ａ）から得られた標的細胞を、所望の表現形を有するように遺伝子操作すること
を含み、
標的細胞が遺伝子操作される前に遠心分離されないか、あるいは溶出処理されない、方法。
Ｅ２３６．  該標的細胞が白血球または幹細胞である、Ｅ２３５記載の方法。
Ｅ２３７．  該標的細胞がＴ細胞である、Ｅ２３５記載の方法。
Ｅ２３８．  該粗液体組成物が患者から得られた血液またはアフェレーシス調製物である、Ｅ２３５〜２３７のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ２３９．  標的細胞の単離が、標的細胞に富む組成物がアフェレーシス調製物よりも少なくとも７０％少ない血小板の総数を有するような条件下で行われる、Ｅ２３８記載の方法。
Ｅ２４０．  標的細胞に富む組成物中の血小板の総数がアフェレーシス調製物よりも少なくとも９０％少ない、Ｅ２３９記載の方法。
Ｅ２４１．  標的細胞に対する血小板の割合が、成分除去製剤よりも少なくとも５０％低い、Ｅ２４０記載の方法。
Ｅ２４２．  該標的細胞が、単離後に再簿培養にて拡大されるＴ細胞である、Ｅ２３８記載の方法。
Ｅ２４３．  培養１４日後に得られるＴ細胞の数が、遠心分離工程を含むプロセスによってＴ細胞が単離される手順よりも少なくとも２倍多い、Ｅ２４２記載の方法。
Ｅ２４４．  培養１４日後に得られるＴ細胞の数が、遠心分離工程を含むプロセスによってＴ細胞が単離される手順よりも少なくとも４倍多い、Ｅ２４２記載の方法。
Ｅ２４５．  培養中のＴ細胞の総数に対するメモリーＴ細胞のパーセンテージが、遠心分離工程を含むプロセスによってＴ細胞が単離される手順よりも少なくとも１０％高い、Ｅ２４４記載の方法。
Ｅ２４６．  培養中のＴ細胞の総数に対するメモリーＴ細胞のパーセンテージが、遠心分離工程を含むプロセスによってＴ細胞が単離される手順よりも少なくとも２０％高い、Ｅ２４４記載の方法。
Ｅ２４７．  標的細胞が富化された組成物中の細胞がベクターにて形質転換されて組換え表現形を示す場合、所望の表現形を示す標的細胞の収量が、遠心分離により単離された同じ細胞よりも少なくとも２０％高い、Ｅ２３５〜２４６のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ２４８．  アフェレーシス試料の収集が完了した時から、マイクロ流体デバイスを用いる分離が行われるまでに１時間以内が経過する、Ｅ２３８〜２４７のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ２４９．  患者からのアフェレーシス試料の取得が完了してから標的細胞の単離が完了するまでの経過時間が４時間以内である、Ｅ２３８〜２４７のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ２５０．  患者からのアフェレーシス試料の取得が完了してから細胞が遺伝子操作されるまでの経過時間が４時間以内である、Ｅ２３８〜２４７のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ２５１．  ＣＡＲ  Ｔ細胞の調製方法であって、
ａ）アフェレーシスにより患者から粗液体組成物を得ること、ここに該試料はＴ細胞を含むものであり、
ｂ）該粗液体組成部物からＴ細胞を単離すること、ここに該単離は、サイズの相違に基づいてＴ細胞を粗液体組成物中の血小板および他の細胞から分子する１つ以上の手順を用いて、マイクロ流体デバイス上で行われ、該単離によりＴ細胞が豊富化され血小板が減少した組成物が得られるものであり、
ｃ）工程ａ）で得られた標的細胞を遺伝子操作して、それらの表面上にキメラ抗原受容体（ＣＡＲｓ）を生成させること、ここに遺伝子操作前のいかなる工程においてもＴ細胞が遠心分離されないか、あるいは溶出処理されず、
ｄ）遺伝子操作されたＴ細胞の数を増大させること、
ｅ）工程ｄ）で得られた培養細胞を収集すること
を含む方法。
Ｅ２５２．  工程ｃ）において、患者に投与するための医薬組成物中に移されることによりＴ細胞が収集される、Ｅ２５１記載の方法。
Ｅ２５３．  収集前に細胞が凍結されない、Ｅ２５１またはＥ２５２記載の方法。
Ｅ２５４．  血小板の少なくとも９０％が工程ｂ）で除去される、Ｅ２５１〜２５３のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ２５５．  培養前または培養中に細胞がＴ細胞活性化因子または担体に曝露される、Ｅ２５１〜２５４のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ２５６．  該活性化剤も該担体も、磁気ビーズにまたは粒子に結合されていない、Ｅ２５５記載の方法。
Ｅ２５７．  マイクロ流体デバイスの使用を含まない方法によって細胞が単離または濃縮される手順と比較して、少なくとも１日前にＣＡＲ  Ｔ細胞が患者への投与に利用可能である、Ｅ２５１〜２５６のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ２５８．  マイクロ流体デバイスの使用を含まない方法によって細胞が単離または濃縮される手順と比較して、少なくとも３日前にＣＡＲ  Ｔ細胞が患者への投与に利用可能である、Ｅ２５１〜２５６のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ２５９．  工程ｄ）において、培養１４日後に得られるＣＡＲ  Ｔ細胞の数が、Ｆｉｃｏｌｌ遠心分離を用いて得られる数よりも少なくとも２倍多い、Ｅ２５１〜２５８のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ２６０．  工程ｄ）において、培養１４日後に得られるＣＡＲ  Ｔ細胞の数が、Ｆｉｃｏｌｌ遠心分離を用いて得られる数よりも少なくとも４倍多い、Ｅ２５１〜２５８のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ２６１．  Ｔ細胞およびＣＡＲ  Ｔ細胞が、患者に投与される前に決して凍結されない、Ｅ２５１〜２６０のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ２６２．  患者の処置のためのＣＡＲ  Ｔ細胞を調製する方法であって、
ａ）アフェレーシスにより患者から粗液体組成物を得ること、ここに該試料はＴ細胞を含むものであり、
ｂ）該粗液体組成部物からＴ細胞を単離すること、ここに該単離は、サイズの相違に基づいてＴ細胞を粗液体組成物中の血小板および他の細胞から分子する１つ以上の手順を用いて、マイクロ流体デバイス上で行われ、該単離によりＴ細胞が豊富化され血小板が減少した組成物が得られるものであり、
ｃ）工程ａ）で得られた標的細胞を遺伝子操作して、それらの表面上にキメラ抗原受容体（ＣＡＲｓ）を生成させること、ここに遺伝子操作前のいかなる工程においてもＴ細胞が遠心分離されないか、あるいは溶出処理されず、
ｄ）遺伝子操作されたＴ細胞の数を増大させること、
ｅ）サイズの相違に基づいてＴ細胞を試薬から分離する１つ以上の手順を用いて、マイクロ流体デバイス上でＴ細胞を分離すること
を含む方法。
Ｅ２６３．  細胞が、患者への投与のために医薬組成物中に移されるまで凍結されない、Ｅ２６２記載の方法。
Ｅ２６４．  細胞がいかなる工程においても凍結されない、Ｅ２６２記載の方法。
Ｅ２６５．  マイクロ流体デバイスの使用を含まない方法によって細胞が単離または濃縮される手順と比較して、プロセスが少なくとも３日早く完了する、Ｅ２６２〜２６４のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ２６６．  マイクロ流体デバイスの使用を含まない方法によって細胞が単離または濃縮される手順と比較して、少なくとも１日前にＣＡＲ  Ｔ細胞が患者への投与に利用可能である、Ｅ２６２〜２６５のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ２６７．  マイクロ流体デバイスの使用を含まない方法によって細胞が単離または濃縮される手順と比較して、少なくとも３日前にＣＡＲ  Ｔ細胞が患者への投与に利用可能である、Ｅ２６２〜２６５のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ２６８．  工程ｂ）において、白血球に対する血小板の割合が、遠心分離または溶出処理を用いて得られる割合よりも少なくとも５０％低い生成物組成物が得られる、Ｅ２６２〜２６７のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ２６９．  患者の処置のための十分な数のＣＡＲ  Ｔ細胞を産生するのに必要な時間が、Ｆｉｃｏｌｌ遠心分離により単離された細胞を用いて同じ方法が行われる場合よりも少なくとも５％短い、Ｅ２６２〜２６８のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ２７０．  患者の処置のための十分な数のＣＡＲ  Ｔ細胞を産生するのに必要な時間が、アフェレーシス出発材料から細胞を単離するためにＦｉｃｏｌｌ遠心分離を用いて同じ方法が行われる場合よりも少なくとも１０％短い、Ｅ２６２〜２６９のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ２７１．  該方法によって調製された細胞が患者に投与されるとき、それらの細胞が、遠心分離または溶出処理を用いてアフェレーシス組成物から処理された細胞よりも少なくとも１０％少ない老化を示す、Ｅ２６２〜２７０のいずれか一つに記載の方法。
Ｅ２７２．  Ｅ２３５〜２７１のいずれか一つに記載の方法によって調製された治療上有効量の細胞を患者に投与することを含む、疾病または症状について患者を処置する方法。
Ｅ２７３．  該疾病または症状ががんである、Ｅ２７２記載の方法。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１８３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１８３】
活性化および磁気分離。増殖群におけるＴ細胞刺激について、ＤＬＤ産物、Ｆｉｃｏｌｌ産物、およびＬＲＳ産物を、１×１０７個のＴ細胞／ｍＬに希釈し、その後、洗浄し、平衡化した抗ＣＤ３／ＣＤ２８コンジュゲート化磁気ビーズ（５．０μｍ）（Ｔｈｅｒｍｏ−Ｆｉｓｈｅｒ、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ）と３．２：１のビーズ：細胞の比で６０分間、活性化し、その後、活性化Ｔ細胞を、５分間、磁気デプレションにより分離した。結合していない細胞を除去し、ビーズに結合した細胞を、完全培地（下記）中でさらに培養した。直接的磁石プロトコールにおいて、０．５ｍＬのＬＲＳ試料（ＤＬＤまたはＦｉｃｏｌｌにより処理されたのと同じドナー）を、免疫磁気ＣＤ３／ＣＤ２８ビーズと１時間、インキュベートした。その後、その混合物を、磁石につけて５分間、置いて、Ｔ細胞を捕獲した。磁気ビーズに結合した細胞（活性化細胞）を取り出し、その後、完全培地中での培養のために、上記のように０．５×１０６個／ｍＬに希釈した。
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１９４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１９４】
ＣＤ２５を評価することに加えて、メモリー細胞表現型への変換を、ＣＤ４５ＲＡ−およびＣＤ２５＋であるＣＤ３＋細胞のパーセンテージを用いて、追跡した。図４において示される結果は、ＤＬＤにより生成された場合、培養細胞のより高いパーセンテージが、Ｆｉｃｏｌｌおよび直接的磁石により処理された細胞と比較して、共刺激に対して応答性であったことを示す。さらに、ＣＤ２５−  ＣＤ４５ＲＡ−であったＣＤ３細胞のパーセントは、Ｆｉｃｏｌｌおよび直接的磁石、それぞれについての３３％および２９％と比較してＤＬＤ画分において１２％と最も低く、ＤＬＤ  ＣＤ３細胞に関して、ＣＤ２５＋  ＣＤ４５ＲＡ−集団へのより完全な変換を示している。ＤＬＤについての８日目におけるＣＤ４５ＲＡ−  ＣＤ２５＋集団の標準偏差は、Ｆｉｃｏｌｌについての２４．８％および直接的磁石についての５３．４％と比較して１０．１％であった。
【手続補正９】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図２５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図２５】
2020532298.tif 000001
【手続補正１０】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図２６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図２６】
2020532298.tif 000002
【手続補正１１】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図２７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図２７】
2020532298.tif 000003
【手続補正１２】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図２８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図２８】
2020532298.tif 000004
【手続補正１３】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図２９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図２９】
2020532298.tif 000005
【手続補正１４】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図３０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図３０】
2020532298.tif 000006
【手続補正１５】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図３１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図３１】
2020532298.tif 000007
【手続補正１６】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図３２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図３２】
2020532298.tif 000008