【手続補正書】
【提出日】令和3年1月6日(2021.1.6)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
模倣ガンマデルタＴ細胞を生成する方法であって、
（ａ）ガンマデルタＴ細胞からヒト多能性幹細胞を生成するステップと、
（ｂ）マクロファージコロニー刺激因子（Ｍ−ＣＳＦ）発現を欠損している間質細胞株と前記ヒト多能性幹細胞を共培養して、ガンマデルタＴ細胞前駆体を生成するステップと、
（ｃ）幹細胞因子（ＳＣＦ）、Ｆｍｓ関連チロシンキナーゼ３リガンド（ＦＬＴ３Ｌ）、インターロイキン７（ＩＬ７）及び／又はインターロイキン１５（ＩＬ１５）を含む培地中で、Ｍ−ＣＳＦ発現を欠損しており、Ｎｏｔｃｈリガンド、デルタ様１（ＤＬＬ１）を異所的に発現する間質細胞株と前記ガンマデルタＴ細胞前駆体を共培養して、分化した模倣ガンマデルタＴ細胞を生成するステップと、
（ｄ）前記分化した模倣ガンマデルタＴ細胞を毎週３〜５週間継代するステップと
を含む、方法。
【請求項２】
ステップ（ｂ）における前記ヒト多能性幹細胞が、Ｍ−ＣＳＦ発現を欠損している前記間質細胞株と１２日間共培養される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
ステップ（ｃ）における前記培地が、ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）、アルファ最小必須培地（αＭＥＭ）若しくは他の幹細胞分化培地、又はそれらの組合せをさらに含む、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
（ａ）において、再プログラム転写因子を、前記ガンマデルタＴ細胞に組み込み、成長させて、誘導多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）を生成する、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
再プログラム転写因子を前記ガンマデルタＴ細胞に組み込む前に、アミノビスホスホネート及びインターロイキン２（ＩＬ２）の存在下でガンマデルタＴ細胞を拡大して、誘導多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）を生成するステップをさらに含む、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記アミノビスホスホネートが、ゾレドロン酸又はその塩である、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記ｉＰＳＣが、ＴＣＲＧ遺伝子形態に配置されたＴＣＲ遺伝子又はＴＣＲＤ遺伝子形態に配置されたＴＣＲ遺伝子又はその両方を含む、請求５又は６に記載の方法。
【請求項８】
幹細胞因子（ＳＣＦ）、ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）、Ｆｍｓ関連チロシンキナーゼ３リガンド（ＦＬＴ３Ｌ）、インターロイキン１５（ＩＬ１５）及びインターロイキン７（ＩＬ７）を含む培地中で、フィーダー細胞の存在下で模倣ガンマデルタＴ細胞を拡大するステップをさらに含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
ＣＤ５６、ＣＤ１６、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ４６、ＮＫＧ２Ｄ、ＤＮＡＭ−１、ＦＡＳＬ、ＴＲＡＩＬ、ＮＫＧ２Ａ／ＣＤ９４のうち少なくとも１つ又はその組合せを発現し、キラー細胞免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ）を低く発現する又は発現しない細胞を含む、模倣ガンマデルタＴ細胞。
【請求項１０】
ＣＤ３を発現する細胞をさらに含む、請求項９に記載の模倣ガンマデルタＴ細胞。
【請求項１１】
γδＴＣＲを発現する細胞をさらに含む、請求項９又は１０に記載の模倣ガンマデルタＴ細胞。
【請求項１２】
前記γδＴＣＲが、Ｖガンマ９Ｖデルタ２（Ｖγ９Ｖδ２）を含む、請求項１１に記載の模倣ガンマデルタＴ細胞。
【請求項１３】
請求項９〜１２のいずれか一項に記載の模倣ガンマデルタＴ細胞を含む、処置のための薬剤。
【請求項１４】
請求項９〜１２のいずれか一項に記載の模倣ガンマデルタＴ細胞を含む、がんを処置するための薬剤。
【請求項１５】
前記がんが、固形腫瘍がん又は白血病である、請求項１４に記載のがんを処置するための薬剤。
【請求項１６】
前記固形腫瘍がんが、乳腺癌、結腸直腸腺癌、乳管癌、卵巣腺癌又は白血病を含む、請求項１５に記載のがんを処置するための薬剤。
【請求項１７】
がんを処置するための薬剤の製造における、請求項９〜１２のいずれか一項に記載の模倣ガンマデルタＴ細胞の使用。
【請求項１８】
前記がんが固形腫瘍がん又は白血病である、請求項１７に記載の使用。
【請求項１９】
前記固形腫瘍がんが、乳腺癌、結腸直腸腺癌、乳管癌、若しくは卵巣腺癌又は白血病を含む、請求項１８に記載の使用。
【請求項２０】
模倣ガンマデルタＴ細胞を生成するためのキットであって：
（ａ）ガンマデルタＴから誘導されるヒト多能性幹細胞株、
（ｂ）マクロファージコロニー刺激因子（Ｍ−ＣＳＦ）発現を欠損している間質細胞株、
（ｃ）マクロファージコロニー刺激因子発現を欠損しており、Ｎｏｔｃｈリガンド、デルタ様１（ＤＬＬ１）を異所的に発現する間質細胞株、
（ｄ）Ｍ−ＣＳＦ発現を欠損している前記間質細胞株とヒト多能性幹細胞を共培養するための第１の単純培地、並びに、
（ｅ）幹細胞因子（ＳＣＦ）、Ｆｍｓ関連チロシンキナーゼ３リガンド（ＦＬＴ３Ｌ）、インターロイキン７（ＩＬ７）及び／又はインターロイキン１５（ＩＬ１５）
を含む第２の培地を含むキット。
【請求項２１】
前記培地が、ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）、アルファ最小必須培地（αＭＥＭ）、幹細胞分化培地、若しくはリンパ球培養培地、又はそれらの組合せをさらに含む、請求項２０に記載のキット。
【請求項２２】
末梢血単核細胞から誘導多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）を生成する方法であって、
（ａ）末梢血単核細胞に再プログラム転写因子を組み込むステップと、
（ｂ）前記再プログラム転写因子を組み込んだ前記末梢血単核細胞を多能性幹細胞に成長させるステップと
を含む、方法。
【請求項２３】
前記末梢血単核細胞が、γδＴ細胞である、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
再プログラム転写因子を前記末梢血単核細胞に組み込む前に、アミノビスホスホネート及びインターロイキン２（ＩＬ２）の存在下で前記末梢血単核細胞を拡大するステップをさらに含む、請求項２２又は２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記アミノビスホスホネートが、ゾレドロン酸又はその塩である、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
前記ｉＰＳＣが、ＴＣＲＧ遺伝子形態に配置されたＴＣＲ遺伝子又はＴＣＲＤ遺伝子形態に配置されたＴＣＲ遺伝子又はその両方を含む、請求項２２〜２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２７】
ＴＣＲＧ遺伝子形態に配置されたＴＣＲ遺伝子又はＴＣＲＤ遺伝子形態に配置されたＴＣＲ遺伝子又はその両方を含む、誘導多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）株。
【請求項２８】
模倣ガンマデルタＴ細胞を生成する方法であって、
（ａ）ガンマデルタＴ細胞から多能性幹細胞を生成するステップと、
（ｂ）マクロファージコロニー刺激因子（Ｍ−ＣＳＦ）発現を欠損している間質細胞株と前記多能性幹細胞を共培養して、ガンマデルタＴ細胞前駆体を生成するステップと；
（ｃ）幹細胞因子（ＳＣＦ）、Ｆｍｓ関連チロシンキナーゼ３リガンド（ＦＬＴ３Ｌ）、インターロイキン７（ＩＬ７）及び／又はインターロイキン１５（ＩＬ１５）を含む培地中で、Ｍ−ＣＳＦ発現を欠損しており、Ｎｏｔｃｈリガンド、デルタ様１（ＤＬＬ１）を異所的に発現する間質細胞株と前記ガンマデルタＴ細胞前駆体を共培養して、分化した模倣ガンマデルタＴ細胞を生成するステップと；
（ｄ）前記分化したガンマデルタＴ免疫細胞を毎週３〜５週間継代するステップと
を含む、方法。
【請求項２９】
少なくともＣＤ５６、ＣＤ１６、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ４６、ＮＫＧ２Ｄ、ＤＮＡＭ−１、ＦＡＳＬ、ＴＲＡＩＬ、ＮＫＧ２Ａ／ＣＤ９４又はその組合せを発現し、キラー細胞免疫グロブリン様受容体ＫＩＲを低く発現する又は発現しない細胞を含む、模倣γδＴ細胞。
【請求項３０】
前記模倣γδＴ細胞が、γδＴＣＲ発現を含む、請求項２９に記載の模倣γδＴ細胞。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２２】
[0021]本発明の別の態様は、
（ａ）γδＴ細胞に再プログラム転写因子を組み込むステップと；
（ｂ）再プログラム転写因子を組み込んだγδＴ細胞を成長させて、多能性幹細胞にするステップと
を含む、ガンマデルタＴ細胞（γδＴ細胞）から誘導多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）を生成する方法を含む。