(57)【要約】【課題】副作用のない、眼への生物学的活性分子の送達のための装置および方法を提供すること。【解決手段】本発明は、眼に生物学的に活性な分子を送達するための医療用デバイスの製造におけるカプセルの使用であって、このカプセルは、眼内にインプラントされるのに適合しており、そしてこのカプセルは、その生物学的に活性な分子の細胞の供給源を含むコアおよび周囲の生体適合性の外被を備え、その外被が、その生物学的に活性な分子の眼への拡散を可能にし、その結果、５０ｐｇ／眼／患者／日〜５００ｎｇ／眼／患者／日のその生物学的に活性な分子の投薬量が送達される、使用、を提供する。【選択図】図３
2010265314.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
生物学的に活性な分子を眼内または眼周囲に送達するためのカプセルであって、以下：
生物学的に活性な分子を産生する被包性細胞を含むコア、
該コアを覆う生体適合性の外被であって、該外被は眼への該生物学的に活性な分子の拡散を可能にする、外被、および
縫合用の小穴を備え、該カプセルを適所に固定するように適合したテザー、
を備え、
該カプセルは、１ｍｍ未満または１ｍｍの外径、および０．４ｃｍと１．５ｃｍとの間の長さを有する中空繊維として構成される、カプセル。
【請求項２】
前記カプセルが、該カプセルを眼の構造に固定するように適合したテザーをさらに備える、請求項１に記載のカプセル。
【請求項３】
前記テザーが縫合用の円板を備える、請求項１または２に記載のカプセル。
【請求項４】
前記テザーは、前記カプセルと一端で繋がっており、そして他端で予め糸を通した縫合針を形成する、請求項１〜３のいずれか１項に記載のカプセル。
【請求項５】
前記縫合用の小穴は、２ｍｍのループを備える、請求項１〜４のいずれか１項に記載のカプセル。
【請求項６】
眼への生物学的に活性な分子の眼周囲または眼内の送達のための被包性細胞システムであって、以下：
少なくとも１つのカプセルであって、各カプセルが、生物学的に活性な分子の細胞の供給源を含むコアおよび周囲の生体適合性の外被を備え、該外被が、該生物学的に活性な分子の眼への拡散を可能にし、該被包性細胞システムが、５０ｐｇ／眼／患者／日〜５００ｎ
ｇ／眼／患者／日の該生物学的に活性な分子を眼内に、または１μｇ／眼／患者／日までを眼周囲に送達し、該カプセルはさらに縫合用の小穴を有し、該カプセルを適所に固定するように適合したテザーを備える、システム。
【請求項７】
前記テザーが、縫合用の円板を備える、請求項６に記載のシステム。
【請求項８】
前記テザーは、前記カプセルと一端で繋がっており、そして他端で予め糸を通した縫合針を形成する、請求項６または７に記載のシステム。
【請求項９】
前記縫合用の小穴は、２ｍｍループを備える、請求項６〜８のいずれか１項に記載のシステム。
【請求項１０】
前記外被が、透過選択性の免疫的隔離膜を備える、請求項６〜９のいずれか１項に記載のシステム。
【請求項１１】
前記外被が、微細孔膜を備える、請求項６〜１０のいずれか１項に記載のシステム。
【請求項１２】
前記カプセルが、テノン嚢の下の空間にインプラントされる、請求項６〜１１のいずれか１項に記載のシステム。
【請求項１３】
前記カプセルが、中空繊維または平板として構成される、請求項６〜１２のいずれか１項に記載のシステム。
【請求項１４】
前記生物学的に活性な分子が、抗血管因子、神経栄養因子、増殖因子、抗体および抗体フラグメント、神経伝達物質、ホルモン、酵素、サイトカインおよびリンホカインからなる群から選択される、請求項６〜１３のいずれか１項に記載のシステム。
【請求項１５】
前記生物学的に活性な分子が、抗血管因子、抗炎症因子、神経栄養因子およびそれらの組合せからなる群より選択される、請求項１４に記載のシステム。
【請求項１６】
インプラントされる前記カプセルの数が、１カプセル／眼と５カプセル／眼との間である、請求項６〜１５のいずれか１項に記載のシステム。
【請求項１７】
第２の生物学的に活性な分子またはペプチドが、前記カプセルから眼に同時送達される、請求項６〜１６のいずれか１項に記載のシステム。
【請求項１８】
送達される前記第２の生物学的に活性な分子またはペプチドの投薬量は、眼内に５０ｐｇ／眼／患者／日〜５００ｎｇ／眼／患者／日、または眼周囲に１μｇ／眼／患者／日である、請求
項１７に記載のシステム。
【請求項１９】
前記カプセルは、硝子体にインプラントされるためのものである、請求項６〜１８のいずれか１項に記載のシステム。
【請求項２０】
前記カプセルは、前房にインプラントされるためのものである、請求項６〜１８のいずれか１項に記載のシステム。
【請求項２１】
前記カプセルは、後房にインプラントされるためのものである、請求項６〜１８のいずれか１項に記載のシステム。
【請求項２２】
前記生物学的に活性な分子が、バスキュロスタチン、アンジオスタチン、エンドスタチン、抗インテグリン、血管内皮細胞増殖因子インヒビター（ＶＥＧＦインヒビター）、血小板第４因子、ヘパリナーゼ、ｂＦＧＦ結合分子、ＶＥＧＦレセプターＦｌｔおよびＶＥＧＦレセプターＦｌｋからなる群から選択される抗血管因子を含む、請求項１５に記載のシステム。
【請求項２３】
前記生物学的に活性な分子が、ＢＤＮＦ、ＴＧＦ−β、ＧＤＮＦ、ＮＧＦ、ＣＮＴＦ、ｂＦＧＦ、ａＦＧＦ、ＩＬ−１β、ＩＬ−１０、ＩＦＮ−βおよびＩＦＮ−αからなる群から選択される、請求項１４に記載のシステム。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（発明の技術分野）
本発明は、生物学的に活性分子の眼内のおよび眼周囲への送達のために、被包性細胞を使用する眼の疾患および障害の処置のための装置および方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
（発明の背景）
現在良好な治療が存在しない、多数の眼の視覚を脅かす障害がある。このような疾患の処置の１つの主要な問題は、眼に治療薬を送達し、そして治療的に効果的濃度で治療薬をそこで維持することが出来ない点である。
【０００３】
薬剤の経口摂取または眼以外の部位での薬剤の注射は、薬剤を全身に提供し得る。しかし、このような全身への投与は、薬剤の効果的なレベルを眼に特異的には提供しない。網膜、後索および視神経を含んでいる多くの眼の障害において、薬剤の適切なレベルが、達成され得ないかまたは投与の経口であるか非経口の経路により維持され得ない。さらに、これらの濃度を達成するために、反復された薬剤投与が必要であり得る。しかし、これは所望でない全身の毒性を生じ得る。例えば、成体の皮下または筋肉内に投与されたαインターフェロンは、合併症（例えば疲労を伴うインフルエンザのような症状、食欲低下、吐き気、嘔吐、血小板減少症および白血球減少症）を生じ得る。
【０００４】
眼の症状はまた、液体または軟膏のいずれかの形態で眼に直接適用する薬剤を使用して処置されている。しかし、この投与経路は、角膜および眼の前部を含む眼の表皮表面に関連する問題および疾患を処置する際にのみ、効果的である。薬剤の局所投与は、強膜、硝子体または眼の後部において薬剤の適切な濃度を成し遂げる際には、無効である。さらに、局所点眼液は、眼から鼻涙管を通って体循環へと流れ、さらに薬物投与を薄め、そして不必要な全身の副作用を危険にさらす。さらに、薬剤は、薬物投与を必要とし得ず、そして事実不必要な副作用を被り得る組織区画を含む眼の全組織区画に無差別に投与される。
【０００５】
局所点眼液の形態の薬剤の送達はまた、薬剤が角膜を透過し、そして硝子体、網膜または他の網膜下構造（例えば、網膜色素上皮（「ＲＰＥ」）または脈絡膜血管系）で利用可能にされ得る能力を欠くタンパク質またはペプチドである場合、ほとんど役に立たない。さらに、多くのタンパク質またはペプチドは、非常に不安定であり、それゆえに、局所的送達のために容易に処方されない。
【０００６】
局所的挿入による眼への薬剤の直接送達もまた、試みられている。しかし、この方法は、所望されない。局所的挿入は、挿入および除去の際、患者による自己注射、そして、それゆえ教育を必要とする。これはある程度の手の機敏性を要求する。これは、老人患者にとって、問題であり得る。多くの例において、このような挿入は、眼刺激を引き起こし得る。これらの装置は、蓋の不正確さのため不注意になる傾向がある。さらに、これらの装置は、角膜および前房だけに薬剤を提供し、そして点眼液におけるどんな薬理学的利点も提供しない。
【０００７】
別の眼球外の挿入は、延長された期間にわたって薬物投与を放出するコンタクトレンズ送達系である。例えば、非特許文献１を参照のこと。レンズは、一般に、数時間または数日のみのあいだ全ての治療的化合物を持続し、その後溶解するかまたは放出する。頻繁な再投与が必要なため、薬物投与の持続性の送達は不便である。さらに、これらのコンタクトレンズは、薬剤を角膜および前房に提供するだけである。
【０００８】
まれな症例において、薬剤の直接送達はまた、外面化された管を使用して達成されている。これは、患者の眼の角膜に、管の１端の挿入を必要とする。管の他端は、患者の額にテープ貼付され、そして薬物投与が送達される隔壁を終端として接続する。この方法は、不快でおよび不便であるので所望でない。薬物投与が隔壁により注射されなければならないため、装置は薬物投与の持続性送達をし得ない。さらに、このような管は、感染し得、そしていくつかの場合、最終的に患者の視覚を脅し得る。
【０００９】
薬剤の直接送達はまた、薬剤の眼内注射または薬剤を含有する微粒子によって、達成され得る。しかし、微粒子は、視軸または隣接の組織部位のいずれかにおいて、眼内で移動する傾向がある。
【００１０】
それらは、長期的使用のために不適切であるかまたは使用するのに不快であるので、眼への薬剤の直接送達のための最近の眼内挿入は首尾良く行われていない。例えば、特許文献１で開示される眼の装置は、固定されないので、装置が動く場合、痛覚、刺激、異物感覚、網膜剥離および流涙を引き起こす。特許において開示される他の眼球挿入は、挿入の長期的保持を可能にするサイズも形態も開示しない。例えば、特許文献２、特許文献３、特許文献４を参照のこと。改良された保持および延長された使用期間を主張している特許においてさえも、意図された期間は、数日（例えば７〜１４日）と評価される。例えば、特許文献５を参照のこと。
【００１１】
１つの眼内挿入は、ガンシクロビル（ｇａｎｃｉｃｌｏｖｉｒ）の送達のために眼に現在利用可能である。Ｖｉｔｒａｓｅｒｔとして知られる装置は、ガンシクロビル（非蛋白性のヌクレオシド類似体）を含有する非腐食性でポリマーベースの、持続放出パッケージから成る。この装置は、サイトメガロウィルス網膜炎を処置するために外科的に眼の硝子体液にインプラントされる。例えば、非特許文献２を参照のこと。
【００１２】
別の眼内挿入は、特許文献６により開示される。粘着面頭部が、強膜表面に接して、眼の外部にあるように、この粘着形態装置は、外科的にインプラントされる。粘着面の後部は、強膜を交差し、そして硝子体液に達し、そこで、硝子体の薬物放出を提供する。
【００１３】
しかし、このような装置（または他の腐食性であるか非腐食性のポリマー）からのタンパク質の放出は、タンパク質が不安定なため短期間の時間だけ保持され得る。このような装置は、ほとんどのタンパク質分子（もし全てでなければ）の長期的な送達のためには不適切である。
【００１４】
網膜および脈絡膜血管新生のための臨床的処置は、光凝固法または寒冷療法を使用する新しい血管の破壊を含む。しかし、副作用は多数あり、そして血管新生を制御することの欠如、斑紋および中心視の破壊、および周辺視覚の減少を含む。例えば、非特許文献３を参照のこと。
【００１５】
多数の増殖因子は、眼疾患の処置において見込みを示す。例えば、ＢＤＮＦおよびＣＮＴＦは、多様な動物モデルにおける網膜神経節細胞および光レセプターの変性を遅滞することが示されている。例えば、非特許文献４を参照のこと。神経増殖因子は、視神経切片の後、網膜神経節細胞生存を改良することが示され、そしてまた、虚血後の網膜ニューロンの回復を促進することが示されている。例えば、非特許文献５を参照のこと。
【００１６】
眼の硝子体液への神経栄養因子の直接注射は、網膜疾患の種々の実験的に誘導された外傷ならびに遺伝性モデルにおける網膜ニューロンおよび光レセプターの生残を促進することが示されている。例えば、非特許文献６；非特許文献７；非特許文献８；非特許文献９を参照のこと。
【００１７】
しかし、このような神経伝達物質、増殖因子および神経栄養因子の送達の以前の方法は、著しい欠点を有する。いくつかの問題は、増殖因子がよく脳血液関門を交差せず、そして血流において、容易に分解するという事実に起因する。さらに、問題は、硝子体への直接注射で起こる。例えば、ｂＦＧＦの直接注射は、網膜マクロファージおよび白内障の発生率の増大を生じた。非特許文献８を参照のこと。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１８】
【特許文献１】米国特許第３，８２８，７７７号明細書
【特許文献２】米国特許第４，３４３，７８７号明細書
【特許文献３】米国特許第４，７３０，０１３号明細書
【特許文献４】米国特許第４，１６４，５５９号明細書
【特許文献５】米国特許第５，３９５，６１８号明細書
【特許文献６】米国特許第５，４６６，２３３号明細書
【非特許文献】
【００１９】
【非特許文献１】ＪＡＭＡ、（１９８８）２６０：２４、３５５６頁
【非特許文献２】Ａｎａｎｄ，  Ｒ．ら、（１９９３）Ａｒｃｈ．  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．，  １１１、２２３〜２２７頁
【非特許文献３】Ａｉｅｌｌｏ，  Ｌ．Ｐ．ら、（１９９５）ＰＮＡＳ、９２、１０４５７〜ｌ０４６１頁
【非特許文献４】Ｇｅｎｅｔｉｃ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｎｅｗｓ、（１９９３年１月）第１３巻、第１号
【非特許文献５】Ｓｉｌｉｐｒａｎｄｉら、（１９９３）Ｉｎｖｅｓｔ．  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．＆  Ｖｉｓ．  Ｓｃｉ．，  ３４、ｐｐ．  ３２３２−３２４５
【非特許文献６】Ｆａｋｔｏｒｏｖｉｃｈら、Ｎａｔｕｒｅ、（１９９０年９月６日）第３４７巻８３頁
【非特許文献７】Ｓｉｌｉｐｒａｎｄｉら、Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｖｅ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｖｉｓｕａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ、（１９９３）３４、３２２２頁
【非特許文献８】ＬａＶａｉｌら，ＰＮＡＳ、（１９９２）８９、１１２４９頁、
【非特許文献９】Ｆａｋｔｏｒｏｖｉｃｈら、Ｎａｔｕｒｅ、（１９９０）３４７、ｐｐ．８３−８６
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００２０】
従って、副作用のない眼への生物学的活性分子の送達は、主要な課題のままである。
【課題を解決するための手段】
【００２１】
（発明の要旨）
上記目的を達成するために、本発明は、例えば、以下の手段を提供する。
（項目１）カプセルを眼周辺にインプラントする工程であって、そのカプセルは、生物学的に活性な分子の細胞の供給源を含有し、そして生体適合性の外被で囲まれるコアを含み、その外被は、眼へのその生物学的に活性な分子の拡散を可能にする工程を包含する、眼に生物学的に活性な分子を送達するための方法。
（項目２）上記外被が透過選択性の免疫的隔離膜を含む、項目１に記載の方法。
（項目３）上記カプセルがテノン嚢の下の空間にインプラントされる、項目１に記載の方法。
（項目４）上記カプセルが中空繊維または平板として構成される、項目１に記載の方法。（項目５）上記生物学的に活性な分子が、抗血管因子、神経栄養因子、増殖因子、抗体および抗体フラグメント、神経伝達物質、ホルモン、酵素、サイトカインおよびリンホカインから成る群から選択される、項目１に記載の方法
（項目６）上記生物学的に活性な分子が、抗血管因子、抗炎症因子、神経栄養因子およびそれらの組合せから成る群から選択される、項目１に記載の方法。
（項目７）上記送達される生物学的に活性な分子の用量が５０ｐｇ〜１ＯＯＯｎｇ／眼／患者／日である、項目１に記載の方法。
（項目８）上記インプラントされるカプセルの数が眼１つあたり１〜５カプセルである、項目１に記載の方法。
（項目９）第２の生物学的に活性な分子またはペプチドが上記カプセルから眼まで同時送達される、項目１に記載の方法。
（項目１０）眼内にカプセルをインプラントする工程であって、そのカプセルは、生物学的に活性な分子の細胞の供給源を含有し、そして生体適合性の外被で囲まれるコアを含み、その外被は、眼へのその生物学的に活性な分子の拡散を可能にする工程を包含する、眼に生物学的に活性な分子を送達するための方法。
（項目１１）上記外被が透過選択性の免疫的隔離膜を含む、項目１０に記載の方法。
（項目１２）上記外被が微細孔膜を含む、項目１０に記載の方法。
（項目１３）上記カプセルが硝子体にインプラントされている、項目１０に記載の方法。（項目１４）上記カプセルが前房にインプラントされている、項目１０に記載の方法。
（項目１５）上記カプセルが後房にインプラントされている、項目１０に記載の方法。
（項目１６）上記カプセルが中空繊維または平板として構成されている、項目１０に記載の方法。
（項目１７）上記生物学的に活性な分子が、抗血管因子、神経栄養因子、増殖因子、抗体および抗体フラグメント、神経伝達物質、ホルモン、酵素、サイトカインおよびリンホカインからなる群から選択される、項目１０に記載の方法。
（項目１８）上記生物学的に活性な分子が、抗血管因子、抗炎症因子、神経栄養因子およびそれらの組合せから成る群から成る群から選択される、項目１０に記載の方法。
（項目１９）上記送達される生物学的に活性な分子の用量が、５０ｐｇ〜５００ｎｇ／眼／患者／
日である、項目１０に記載の方法。
（項目２０）上記インプラントされるカプセルの数が眼１つ当たり１〜５のカプセルである、項目１０に記載の方法。
（項目２１）第２の生物学的に活性な分子またはペプチドが上記カプセルから眼に同時送達される、項目１０に記載の方法。
（項目２２）第１のカプセルを眼内にインプラントする工程であって、その第１のカプセルは、第１の生物学的に活性な分子の細胞の供給源を含有し、そして生体適合性の外被で囲まれるコアを含み、その外被は、眼へのその第１の生物学的に活性な分子の拡散を可能にする工程、
第２のカプセルを眼周囲にインプラントする工程であって、その第２のカプセルは、第２の生物学的に活性な分子の細胞の供給源を含有し、そして生体適合性で免疫的隔離された外被で囲まれるコアを含み、その外被は、眼へのその第２の生物学的に活性な分子の拡散を可能にする工程、
を包含する、生物学的に活性な分子を眼に送達する方法。
（項目２３）上記第１のカプセルが硝子体にインプラントされ、そして上記第２のカプセルが、テノン嚢の下の空間にインプラントされている、項目２２に記載の方法。
（項目２４）眼の障害を患う患者においてその眼の障害を処置するための方法であって、その患者の眼に生体適合性のカプセルをインプラントする工程であって、そのカプセルが、
ａ）生物学的に活性な分子の細胞の供給源を含んでいるコア、および
ｂ）そのコアを囲む外被であって、その外被は、治療有効量のその生物学的に活性な分
子のその眼への拡散を可能にする生体適合性物質を含む、工程、
を包含する、方法。
（項目２５）上記生物学的に活性な分子が、抗血管因子、神経栄養因子、増殖因子、抗体および抗体フラグメント、神経伝達物質、ホルモン、酵素、サイトカインおよびリンホカインから成る群から選択される、項目２４に記載の方法。
（項目２６）上記生物学的に活性な分子が抗血管因子、抗炎症因子、神経栄養因子およびそれらの組合せから成る群から選択される、項目２４に記載の方法。
（項目２７）上記眼の障害が血管由来の障害、炎症性障害、変性障害およびそれらの組み合わせから成る群から選択される、項目２４に記載の方法。
（項目２８）上記眼の障害が、ブドウ膜炎、網膜性色素症、加齢関連黄斑変性、および糖尿性網膜症から成る群から選択される、項目２４に記載の方法。
（項目２９）上記生物学的に活性な分子がＢＤＮＦ、ＴＧＦ−β、ＧＤＮＦ、ＮＧＦ、ＣＮＴＦ、ｂＦＧＦ、ａＦＧＦ
、ＩＬ−１β、ＩＬ−１０、ＩＦＮ−β、ＩＦＮ−αおよびＶＥＧＦインヒビターからなる群から選択される、
項目２４に記載の方法。
（項目３０）上記カプセルが免疫的隔離である、項目２４に記載の方法。
（項目３１）第２の生物学的に活性な分子が眼に同時送達される、項目２４に記載の方法。
（項目３２）カプセルを含む眼に生物学的に活性な分子を送達するための装置であって、そのカプセルが以下を含み：
生物学的に活性な分子を産生するカプセル化した細胞を含むコア
そのコアを囲む生体適合性の外被であって、その外被は眼へのその生物学的に活性な分子の拡散を可能にする外被；
そのカプセルは、１ｍｍ以下の外径で長さ０．４〜１．５ｃｍである中空繊維として構成される、
装置。
（項目３３）カプセルを含む眼に生物学的に活性な分子を送達するための装置であって、そのカプセルが以下を含み：
生物学的に活性な分子を産生するカプセル化細胞を含むコア、
そのコアを囲む生体適合性の外被であって、その外被は眼へのその生物学的に活性な分子の拡散を可能にする、外被；
そのカプセルは、表面積２５ｍｍ２以下を有する平板として構成される、装置。
（項目３４）上記カプセルが、眼の構造対してカプセルを固定するために適合したテザーをさらに含む項目３２または３３に記載の装置。
（項目３５）以下を含む、眼への生物学的に活性な分子の眼周囲の送達のためのカプセル化細胞システム：
少なくとも１つのカプセル、各々のカプセルが生物学的に活性な分子の細胞の供給源および周りの生体適合性外被を含有するコアを含み、その外被が、眼へのその生物学的に活性な分子の拡散を可能にし、そのカプセル化細胞システムが、眼の周囲にその生物学的に活性な分子５０ｐｇ〜１０００ｎｇ／眼／患者／日を送達する。
（項目３６）上記外被が透過選択性の免疫的隔離膜を含む、項目３５に記載のシステム。（項目３７）上記外被が微細孔膜を含む、項目３５に記載のシステム。
（項目３８）上記カプセルがテノン嚢の下の空間にインプラントされる、項目３５に記載のシステム。
（項目３９）上記カプセルが中空繊維または平板として構成される、項目３５に記載のシステム。
（項目４０）上記生物学的に活性な分子が、抗血管因子、神経栄養因子、増殖因子、抗体および抗体フラグメント、神経伝達物質、ホルモン、酵素、サイトカインおよびリンホカインから成る群から選択される、項目３５に記載のシステム。
（項目４１）上記生物学的に活性な分子が抗血管因子、抗炎症因子、神経栄養因子およびそれらの組合せから成る群から選択される、項目３５に記載のシステム。
（項目４２）上記インプラントされるカプセルの数が眼１つ当たり１〜５のカプセルである、項目３５に記載のシステム。
（項目４３）第２の生物学的に活性な分子またはペプチドが上記カプセルから眼に同時送達される、項目３５に記載のシステム。
（項目４４）上記送達される第２の生物学的に活性な分子またはペプチドの用量が、５０ｐｇ〜１０００ｎｇ／眼／患者／日である、項目４３に記載のシステム。
（項目４５）眼に生物学的に活性な分子を眼内送達するためのカプセル化細胞システムであって、そのシステムは以下を含む：
少なくとも１つのカプセル、各々のカプセルが生物学的に活性な分子の細胞の供給源および周りの生体適合性外被を含有するコアを含み、その外被が、眼へのその生物学的に活性な分子の拡散を可能にし、そのカプセル化細胞システムが、眼内にその生物学的に活性な分子５０ｐｇ〜５００ｎｇ／眼／患者／日を送達する。
（項目４６）上記外被が透過選択性の免疫的隔離膜を含む、項目４５に記載のシステム。（項目４７）上記外被が微細孔膜を含む、項目４５に記載のシステム。
（項目４８）上記カプセルが硝子体にインプラントされる、項目４５に記載のシステム。（項目４９）上記カプセルが前房にインプラントされる、項目４５に記載のシステム。
（項目５０）上記カプセルが後房にインプラントされる、項目４５に記載のシステム。
（項目５１）上記カプセルが中空繊維または平板として構成される、項目４５に記載のシステム。
（項目５２）上記生物学的に活性な分子が、抗血管因子、神経栄養因子、増殖因子、抗体および抗体フラグメント、神経伝達物質、ホルモン、酵素、サイトカインおよびリンホカインから成る群から選択される、項目４５に記載のシステム。
（項目５３）上記生物学的に活性な分子が抗血管因子、抗炎症因子、神経栄養因子およびそれらの組合せから成る群から選択される、項目４５に記載のシステム。
（項目５４）上記インプラントされるカプセルの数が眼１つ当たり１〜５のカプセルである、項目４５に記載のシステム。
（項目５５）第２の生物学的に活性な分子またはペプチドが上記カプセルから眼に同時送達される、項目４５に記載のシステム。
（項目５６）上記送達される第２の生物学的に活性な分子またはペプチドの用量が、５０ｐｇ〜５００ｎｇ／眼／患者／日である、項目５５に記載のシステム。
【００２２】
本発明は、適切な生物学的活性分子（「ＢＡＭ」）の連続的に産生された供給源の眼内および眼周辺部の送達による、眼の疾患および障害を処置する新しい方法を提供する。
【００２３】
ＢＡＭの細胞の供給源を含有するカプセルは、眼内の所望の位置に外科的に配置される。
【００２４】
カプセル外被は、カプセル化細胞を囲む膜を含み、そして細胞と患者との間に物理的なバリアを配置する。カプセルは、患者から再び取り出され得る。
【発明の効果】
【００２５】
本発明は、副作用のない、眼への生物学的活性分子の送達のための装置および方法を提供する。
【図面の簡単な説明】
【００２６】
【図１】図１は、硝子体にインプラントされるマクロカプセルを示した、眼の水平横断切片の模式図である。図は一定の比率ではなく、そして明白性のために適切な配置におけるカプセルを示す。実際に、ヒトの眼に配置される場合、好ましい硝子体での配置は、硝子体の前部である。文字「Ａ」は、強膜をいい、「Ｂ」はテノン嚢をいい、そして「Ｃ」は結膜をいう。
【図２】図２は、テノン嚢の下にインプラントされたカプセルを示す、眼の側面図の模式図である。
【図３】図３Ａは、脆いハブアセンブリを有するロードのための装置を示す。図３Ｂは、脆いハブの離脱後の装置を示す。装置は、眼内の装置をつなぐために小穴を有する。
【図４】図４Ａは、脆いハブアセンブリを有する、ロードのための装置を示す。図４Ｂは、脆いハブの離脱後の装置を示す。装置は、装置をつなぐために円板を有する。
【発明を実施するための形態】
【００２７】
（発明の詳細な説明）
本発明は、眼内（例えば、前房、後房または硝子体内）、または眼周囲（例えば、テノン嚢内または下での）の、またはその両方での、生物学的活性分子（「ＢＡＭ」）の送達に関する。本発明は、多様な眼の障害、眼の疾患または眼への影響を有する疾患を処置する際に効果的なＢＡＭの、制御されたおよび持続性の放出を提供する際に、有用であり得る。
【００２８】
本発明の装置および技術は、他の送達経路にまさる多数の利点を提供する。
【００２９】
薬剤は、不必要な末梢の副作用を低減するかまたは最小にして、眼に直接送達され得る；非常に小さい用量の（ミリグラムよりむしろナノグラムまたは低いマイクログラム数量）薬剤は、局所投与と比較して、潜在的に副作用を少なくするように、送達され得る；薬剤の注射送達を特徴づける薬剤用量内の揺らぎを回避するように、装置の生菌は、新しく合成された産物を連続的に産生する；そして、本発明の装置および方法は、多数の網膜剥離を生じる多数の従来技術の装置および外科の技術より侵襲性ではない。
【００３０】
ほとんどの（もし全てでない場合）眼の疾患および障害は（１）脈管形成、（２）炎症、および（３）変性の３つの型の症状の１つ以上と関連する。これらの障害を処置するために、本発明の装置は、抗血管因子；抗炎症因子；細胞分解を遅らせ、細胞分裂を促進するかまたは細胞増殖を促進する因子、および以上のものの組合せの送達を可能にする。特別な障害の症状に基づいて、当業者は、以下で指示される用量で３つの群からの任意の適切な分子または分子の組合せを、投与し得る。
【００３１】
例えば、糖尿病性網膜症は、脈管形成により特徴づけられる。本発明が、眼内に、好ましくは硝子体内、または眼周囲好ましくはテノン嚢の下の領域でのいずれかに、１つ以上の抗血管因子を送達する装置をインプラントすることにより、糖尿病性網膜症を処置することを意図する。本研究者らは、この症状のための硝子体への送達を最も好む。眼内または眼周囲のいずれかに、好ましくは眼内におよび最も好ましくは硝子体内に１つ以上の神経栄養因子を同時送達することはまた、望ましい。
【００３２】
ブドウ膜炎は、炎症に関与する。本発明は、眼内、好ましくは硝子体内または前房での、１つ以上の抗炎症因子を分泌している装置のインプラントにより、ブドウ膜炎を処置することを意図する。
【００３３】
比較すると、色素性網膜炎は、網膜変性によって、特徴づけられる。本発明は、１つ以上の神経栄養因子を分泌している装置の、眼内、好ましくは硝子体への配置により、色素性網膜炎を処置することを意図する。
【００３４】
加齢に関連した黄斑部変性は、脈管形成および網膜変性に関連する。本発明は、眼内に、好ましくは硝子体に１つ以上の神経栄養因子を送達する、および／または眼内もしくは眼周囲に、好ましくは眼周囲に、最も好ましくはテノン嚢の下の領域に１つ以上の抗血管因子を送達する本発明の装置を使用することによって、この障害を処置することを意図する。
【００３５】
緑内障は、増大された眼圧および網膜神経節細胞の減失によって、特徴づけられる。本発明において意図される緑内障のための処置は、細胞を興奮毒性の損傷から保護する、１つ以上の神経保護的薬剤の送達を含む。このような薬剤は、眼内に好ましくは硝子体内に送達される、Ｎ−メチルＤ−アスパルテート（ＮＭＤＡ）アンタゴニスト、サイトカインおよび神経栄養因子を含む。
【００３６】
任意の適切なＢＡＭは、本発明の装置、システムおよび方法に従って送達し得る。このような分子は、神経伝達物質、サイトカイン、リンホカイン、神経保護薬剤、神経栄養因子、ホルモン、酵素、抗体およびその活性フラグメントを含む。ＢＡＭの３つの好ましい型は、本発明の装置を使用した送達のために意図される：（１）抗血管因子、（２）抗炎症因子、および（３）細胞分解を遅らせる因子は、細胞分裂を促進するかまたは細胞増殖を促進する。
【００３７】
使用のために意図される抗血管因子は、バスキュロスタチン（ｖａｓｃｕｌｏｓｔａｔｉｎ）、アンジオスタチン（ａｎｇｉｏｓｔａｔｉｎ）、エンドスタチン（ｅｎｄｏｓｔａｔｉｎ）、抗インテグリン、血管内皮細胞増殖因子インヒビター（ＶＥＧＦインヒビター）、血小板第４因子、ヘパリナーゼおよびｂＦＧＦ結合分子を含む。ＶＥＧＦレセプターＦｌｔおよびＦｌｋもまた、意図される。可溶な形態において送達される場合、これらの分子は、血管内皮細胞上のＶＥＧＦレセプターと競合し、血管内皮細胞増殖を阻害する。
【００３８】
ＶＥＧＦインヒビターは、可溶なＶＥＧＦレセプターのようなＶＥＧＦ中和キメラタンパク質を含み得る。Ａｉｅｌｌｏ、ＰＮＡＳ、９２、１０４５７（１９９５）を参照のこと。特に、それらはＶＥＧＦ−レセプター−ＩｇＧキメラタンパク質であり得る。本発明における使用のために意図される別のＶＥＧＦインヒビターは、アンチセンスホスホロチオタックオリゴデオキシヌクレオチド（ＰＳ−ＯＤＮ）である。
【００３９】
眼内、好ましくは硝子体内に、本発明者らは、５０ｐｇ〜５００ｎｇ、好ましくは１００ｐｇ〜１００ｎｇ、および最も好ましくは１ｎｇ〜５０ｎｇ／眼／患者／日の用量範囲の抗血管因子の送達を意図する。眼周囲、好ましくはテノン嚢の下の空間または領域への送達のために、わずかにより高い投薬範囲、最高１μｇ／患者／日が意図される。
【００４０】
本発明における使用のために意図される抗炎症因子は、抗フラミン（例えば、米国特許第５，２６６，５６２号を参照のこと。本明細書にて援用した）、βインターフェロン（ＩＦＮ−β）、αインターフェロン（ＩＦＮ−α）、ＴＧＦベータ、インターロイキン−１０（ＩＬ−１０）およびグルココルチコイドおよび副腎皮質細胞からのミネラルコルチコイドを含む。その特定のＢＡＭは、複数の活性を有し得る点に留意するべきである。例えば、ＩＦＮ−αおよびＩＦＮ−βは、
両方とも抗炎症分子として、そして抗血管分子としての活性を有し得ると考えられる。
【００４１】
眼内、好ましくは硝子体に、本発明者らは、５０ｐｇ〜５００ｎｇ、好ましくは１００ｐｇ〜１００ｎｇ、および最も好ましくは１ｎｇ〜５０ｎｇ／眼／患者／日の投薬範囲での抗炎症因子の送達を意図する。眼周囲、好ましくはテノン嚢の下の空間または領域での送達のために、わずかにより高い投薬範囲、多くとも１μｇ／患者／日が意図される。
【００４２】
細胞分解の遅滞、細胞分裂の促進、または新しい細胞増殖の促進での使用のために意図した因子は、集合的に本明細書中で「神経栄養因子」という。意図される神経栄養因子は、ニューロトロフィン４／５（ＮＴ−４／５）、カルジオトロフィン−１（ｃａｒｄｉｏｔｒｏｐｈｉｎ−１）（ＣＴ−１）、シリア線毛神経栄養因子（ＣＮＴＦ）、グリア細胞株由来神経栄養因子（ＧＤＮＦ）、神経増殖因子（ＮＧＦ）、インスリン様増殖因子−１（ＩＧＦ−１）、ニューロトロフィン３（ＮＴ−３）、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、ＰＤＧＦ、ニュールチュリン（ｎｅｕｒｔｕｒｉｎ）、酸性線維芽細胞成長因子（ａＦＧＦ）、塩基性線維芽細胞成長因子（ｂＦＧＦ）、ＥＧＦ、ニューレグリン（ｎｅｕｒｅｇｕｌｉｎ）、ヘレグリン（ｈｅｒｅｇｕｌｉｎ）、ＴＧＦ−α、骨形成性タンパク質（ＢＭＰ−１、ＢＭＰ−２、ＢＭＰ−７など）、ハリネズミ科（音速ハリネズミ、インドハリネズミおよび砂漠ハリネズミなど）、変形する増殖因子ファミリー（例えば、ＴＧＦβ−１、ＴＧＦβ−２およびＴＧＦβ−３を含む）、インターロイキン１−Ｂ（ＩＬｌ−β）、およびインターロイキン−６（ＩＬ−６）、ＩＬ−ｌＯ、ＣＤＦ／ＬＩＦ、およびβインターフェロン（ＩＦＮ−β）のようなサイトカインを含む。好ましい神経栄養因子は、ＧＤＮＦ、ＢＤＮＦ、ＮＴ−４／５、ニュールチュリン、ＣＮＴＦおよびＣＴ−１である。
【００４３】
眼内、好ましくは硝子体内に、本発明者らは、５０ｐｇ〜５００ｎｇ、好ましくは１００ｐｇ〜１００ｎｇ、および最も好ましくは１ｎｇ〜５０ｎｇ／眼／患者／日の投薬範囲の神経栄養因子の送達を意図する。眼周囲、好ましくはテノン嚢の下の空間または領域への送達のために、わずかに高い投薬範囲、最高１μｇ／患者／日が意図される。
【００４４】
上記の分子の改変、短縮、および突然変異タンパク質形態もまた、意図される。さらに、これらの増殖因子の活性なフラグメント（すなわち治療効果を達成するのに十分な生物学的活性度を有する増殖因子のそれらのフラグメント）もまた、意図される。また、１つ以上のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）または他の反復するポリマー部分の付加により改
変される増殖因子分子も、意図される。これらのタンパク質および多シストロン性のそのバージョンの組合せもまた、意図される。
【００４５】
目的の遺伝子（すなわち適切なＢＡＭをコードする遺伝子）は、適切な発現ベクターのクローン化部位に、標準的な技術を使用することにより挿入され得る。上記の同定されたＢＡＭをコードするヒト（および他の哺乳動物）遺伝子の核酸およびアミノ酸配列は、公知である。例えば、米国特許第４，９９７，９２９号、同第５，１４１，８５６号；同第５，３６４，７６９号；同第５，４５３，３６１号；ＷＯ  ９３／０６１１６；ＷＯ  ９５／３０６８６（これらは、本明細書中で参考として援用する）を参照のこと。
【００４６】
次いで目的の遺伝子を含有する発現ベクターを使用して、所望の細胞株をトランスフェクトし得る。リン酸カルシウム共沈澱、ＤＥＡＥデキストラントランスフェクションまたはエレクトロポレーションのような標準的なトランスフェクション技術は、利用され得る。市販の哺乳動物のトランスフェクションキットが、例えばＳｔｒａｔａｇｅｎｅから購入され得る。トランスジェニックマウス由来細胞株もまた、使用され得る。例えば、Ｈａｍｍａｎｇら、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．，  ２１、２８１頁（１９９４）を参照のこと。
【００４７】
多種多様な宿主／発現ベクターの組合せを使用して、目的の増殖因子または他のＢＡＭをコードする遺伝子を発現し得る。
【００４８】
例えば、適切なプロモーターは、ＳＶ４０またはアデノウィルスの初期および後期のプロモーターおよび遺伝子発現を制御し得る他の公知の非レトロウイルスプロモーターを含む。
【００４９】
例えば、多様な公知のＳＶ４０の誘導体および公知の細菌性プラスミド（例えば、ｐＵＣ、ｐＢＲ３２２を含むＥ．ｃｏｌｉからのｐＢｌｕｅＳｃｒｉｐｔＴＭプラスミド、ｐＣＲｌ、ｐＭＢ９およびそれらの誘導体）のような、有用な発現ベクターは、染色体、非染色体性および合成のＤＮＡ配列のセグメントからなり得る。
【００５０】
ゲネチシン（ｇｅｎｅｔｉｃｉｎ）（Ｇ４１８）またはハイグロマイシン薬物選択遺伝子を含有する発現ベクター（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ，  Ｐ．Ｊ．，  Ｉｎ  Ｖｉｔｒｏ、１８、３１５頁（１９８１）、Ｓｏｕｔｈｅｒｎ，  Ｐ．Ｊ．およびＢｅｒｇ，  Ｐ．，  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ａｐｐｌ．  Ｇｅｎｅｔ．，  ｌ，  ３２７頁、（１９８２））もまた、有用である。これらのベクターは、種々の異なるエンハンサー／プロモーター領域を、目的の生物学的遺伝子（例えばＮＧＦ）および／または毒素（例えばＧ４１８またはハイグロマイシンＢ）での選択に対する耐性を与える遺伝子の発現を駆動するために使用し得る。種々の異なる哺乳動物プロモーターは、Ｇ４１８およびハイグロマイシンＢのための遺伝子および／または目的の生物学的遺伝子の発現を指向するために使用され得る。
【００５１】
使用され得る発現ベクターの例は、市販のｐＲＣ／ＣＭＶ、ｐＲＣ／ＲＳＶおよびｐＣＤＮＡ１ＮＥＯ（ＩｎＶｉｔｒｏｇｅｎ）である。
【００５２】
ＣＮＳ起源の細胞が使用される場合、好ましくは、プロモーターは以下から成る群から選択される：
ｈＤＢＨ（ヒトドーパミンβヒドロキシラーゼ）（Ｍｅｒｃｅｒら、Ｎｅｕｒｏｎ、７、７０３−７１６頁（１９９１））、ｈＴＨ（ヒトチロシンヒドロキシラーゼ）（Ｋａｎｅｄａら、Ｎｅｕｒｏｎ、６、５８３−５９４頁（１９９１））、ｈＰＮＭＴ（ヒトフェニルエタノールアミンＮ−メチルトランスフェラーゼ）（Ｂａｅｔｇｅら、ＰＮＡＳ、８５、３６４８〜３６５２頁（１９８８））、ｍＧＦＡＰ（マウスグリア原線維酸性タンパク質）（Ｂｅｓｎａｒｄら、Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．，  ２６６、１８８７７〜１８８８３頁（１９９１））、ミエリン塩基性タンパク質（ＭＢＰ）、ｍＮＦ−Ｌ（マウス神経フィラメント光サブユニット）（Ｎａｋａｈｉｒａら、Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．，  ２６５、１９７８６〜１９７９１頁（１９９０））、ｈＰｏ（ヒトＰ０、末梢神経系の主要なミエリン糖タンパク質をコードする遺伝子のためのプロモーター）（Ｌｅｍｋｅら、Ｎｅｕｒｏｎ、１、７３〜８３頁（１９８８））、ｍＭｔ−１（マウスメタロチオネインＩ）、ｒＮＳＥ（ラットニューロン特異的エノラーゼ）（Ｓａｋｉｍｕｒａら、Ｇｅｎｅ、６０、１０３〜１１３頁（１９８７））などのプロモーター。
【００５３】
１つの好ましい実施態様において、ホスホグリセリン酸キナーゼ（ＰＧＫ）プロモーターが、使用される。例えば、Ａｄｒａら、Ｇｅｎｅ、６０、６５〜７４頁（１９８７）を参照のこと。ｐＰＩベクターは、目的の遺伝子（すなわちＢＡＭをコードする遺伝子）の発現を駆動するためにＰＧＫプロモーターを使用する１つの好ましい発現ベクターである。このベクターも、ネオホスホトランスフェラーゼ（選択可能なマーカー）の発現を駆動するために、ＳＶ４０初期プロモーターを使用する。Ｋｏｚａｋ配列および／またはＩｇシグナルペプチドを挿入することによって、ｐＰＩベクターからのＢＡＭの発現を最適化し得るかまたは改良し得る。ｐＰＩベクターも、ＭＴＸ増幅に適切な変異ＤＨＦＲ遺伝子を含有する。
【００５４】
別の実施態様において、ｐＮＵＴ発現ベクター（それは変異ＤＨＦＲのｃＤＮＡおよびポリリンカーを含む全ｐＵＣ１８の配列を含有する）は、使用され得る。例えば、Ａｅｂｉｓｃｈｅｒ，  Ｐ．ら、Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ、５８、１２７５〜１２７７頁（１９９４）、Ｂａｅｔｇｅら、ＰＮＡＳ、８３、５４５４〜５８頁（１９８６）を参照のこと。ＤＨＦＲコード配列が、Ｇ４１８またはハイグロマイシン薬剤耐性のためのコード配列によって置き換えられるように、ｐＮＵＴ発現ベクターは改変され得る。ｐＮＵＴ発現ベクター内のＳＶ４０プロモーターはまた、任意の適切な構成的に発現された哺乳動物プロモーター（例えば上記のプロモーター）でも置き換えられ得る。
【００５５】
発現増加は、当該分野で周知の増幅方法を使用して、所望の分子をコードする導入遺伝子のコピー数を増大するかまたは増幅することによって、達成され得る。このような増幅方法は、例えば、ＤＨＦＲ増幅（例えば、Ｋａｕｆｍａｎら米国特許第４，４７０，４６１号を参照のこと）またはグルタミン合成酵素（「ＧＳ」）増幅（例えば、米国特許第５，１２２，４６４号および欧州公開特許出願ＥＰ  ３３８，８４１を参照のこと）を含む。
【００５６】
多種多様な細胞が、使用され得る。これらは、周知な、公に利用できる不死化細胞株ならびに分割された初代細胞培養を含む。適切な公に利用し得る細胞株の例は、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）、マウス線維芽細胞（Ｌ−Ｍ）、ＮＩＨ  Ｓｗｉｓｓマウス胚（ＮＩＨ／３Ｔ３）、アフリカミドリザル細胞株（ＣＯＳ−１、ＣＯＳ−７、ＢＳＣ−１、ＢＳＣ−４Ｏ、ＢＭＴ−１ＯおよびＶｅｒｏを含む）、ラット副腎褐色細胞腫（ＰＣ１２およびＰＣｌ２Ａ）、ＡＴ３、ラットグリア細胞腫瘍（Ｃ６）、星状細胞および他の線維芽細胞細胞株を含む。使用され得る初代細胞は、ＥＧＦ応答性神経幹細胞およびそれらの分化した継代細胞（ＲｅｙｎｏｌｄｓおよびＷｅｉｓｓ、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２５５、１７０７〜１７１０頁、１９９２）、哺乳動物のＣＮＳ由来ｂＦＧＦ応答性神経前駆幹細胞（Ｒｉｃｈａｒｄｓら、ＰＮＡＳ  ８９、８５９１〜８５９５頁、（１９９２）；Ｒａｙら、ＰＮＡＳ  ９０、３６０２〜３６０６頁（１９９３））、ＥＧＦ応答性およびｂＦＧＦ応答性の両方であるＣＮＳ神経幹細胞、初代線維芽細胞、シュワン細胞、β−ＴＣ細胞、Ｈｅｐ−Ｇ２細胞、オリゴ突起細胞およびそれらの前駆体、筋芽細胞（Ｌ６およびＣ２Ｃ１２細胞を含む）、軟骨細胞または軟骨芽細胞などを含む。
【００５７】
条件的に不死化した細胞もまた、使用され得る。このような細胞は、温度感受性ガン遺伝子を有する細胞または誘導性のプロモーターエレメントの方向で、ガン遺伝子から成るキメラ遺伝子を有するように設計された細胞を含む。
【００５８】
遺伝子導入技術のために選ばれる１つの好ましい細胞型は、ベビーハムスター腎臓（ＢＨＫ）細胞である。それらが非常に機能的なＤＨＦＲ遺伝子を発現しないので、ＢＨＫ細胞は特にＭＴＸ増幅に最適である。
【００５９】
適切な細胞型は、同種のおよび異種の供給源からの細胞を含む。異種の細胞を使用する特別な利点は、ありそうもない膜または装置の事故において存在し、このような細胞は免疫系による破壊のための標的によりされそうであるということである。
【００６０】
眼内への送達のために、初代細胞（マイトジェン（例えばＥＧＦまたはｂＦＧＦ等）を使用して分割するために誘導され得る初代細胞を含む）または条件的に不死化してまたはそうでなければ眼の種々の領域から誘導した細胞株を使用することは特に有益であり得る。潜在的に有用な細胞型は、レンズ上皮細胞、神経の網膜のグリアおよびニューロンのエレメント、光受容細胞、網膜染色上皮細胞、シュワン細胞および他の毛様体細胞などを含む。このような細胞は、同種であり得るか異種であり得る。
【００６１】
本明細書で使用する「生体適合性のカプセル」は、カプセルが、宿主哺乳類内のインプラントの際に、カプセルの拒絶反応を生じるかまたはカプセルを機能不全（例えば、分解による）にするのに充分な有害宿主応答を惹起しないことを意味する。
【００６２】
本明細書中で使用する「免疫的隔離カプセル」は、哺乳動物宿主へのインプラントの際に、カプセルが、そのコア内で細胞に対する宿主の免疫系の有害な影響を最小にすることを意味する。免疫的隔離であるために、カプセルは単離された細胞および宿主の免疫系の間の有害な免疫学的な接触を防ぐのに十分な物理的障害を提供するべきである。この物理的障害の厚さは変化させ得るが、障害のいずれかの側に細胞および／または物質の間の直接の接触を防ぐのに、常に十分に厚い。この領域の厚さは、一般に５と２００ミクロンとの間を変動する；１０〜１００ミクロンの厚さは好ましい、そして２０〜７５ミクロンの厚さは特に好ましい。
【００６３】
ほとんどの場合、ＩｇＧは、標的細胞または組織の細胞分解を生じるためには単独では不充分であるので、ビヒクルコアからのＩｇＧの排除は免疫的隔離の基準でない。従って、免疫的隔離カプセルについて、５０〜２０００ｋＤの間の外被の名目上の分子量カットオフ（ＭＷＣＯ）値が、意図される。好ましくは、ＭＷＣＯは５０〜７００ｋＤの間である。最も好ましくは、ＭＷＣＯは、７０〜３００ｋＤの間である。例えば、ＷＯ  ９２／１９１９５を参照のこと。もし免疫的隔離が必要でない場合、外被は微孔であり得る。例えば、米国特許第４，９６８，７３３号、同第４，９７６，８５９号、および同第４，６２９，５６３号を参照のこと。これら全ては、本明細書中で参考として援用する。
【００６４】
種々の生体適合性のカプセルは、本発明に従う分子の送達のために適切である。有用な生体適合性のポリマーカプセルは、（ａ）液体培地に懸濁したかまたは生体適合性マトリックス内で固体化されたかのいずれかの細胞（単数または複数）を含有するコア（ｂ）生体適合性でそして眼への細胞産生ＢＡＭの拡散を可能にする、単離された細胞を含有しない膜を含む周囲の外被、を含む。
【００６５】
多くの形質転換細胞または細胞株は、例えば、細胞生存性および機能を支えるために栄養培地および必要に応じてさらなる因子の供給源を含有する液体コアを有するカプセル内で都合良く単離される。
【００６６】
あるいは、コアは、ヒドロゲルの生体適合性マトリックスまたは細胞の位置を安定させる他の生体適合性マトリックス物質を含み得る。用語「ヒドロゲル」は、本明細書中において架橋親水性ポリマーの３つの次元のネットワークをいう。ネットワークは、ゲル（好ましくは実質的に水から成る、好ましくは９０％より多い水から成るゲル）の形態である。
【００６７】
任意の適切なマトリックスまたはスペーサーは、沈澱させたキトサン、合成ポリマーおよびポリマーブレンド、マイクロキャリアなどを含むコア内で使用され得、これは、カプセル化されるべき細胞の増殖特性に依存する。あるいは、カプセルは、内部の足場を有し得る。足場は、細胞が凝集するのを妨ぎ得、そして装置内での細胞分布を改善する。ＰＣＴ公開番号ＷＯ  ９６／０２６４６を参照のこと。
【００６８】
好ましくは、眼周囲の部位のような免疫的に特権のないインプラント部位のために、カプセルは免疫的隔離である。
【００６９】
カプセルは、柱形、矩形、ディスク型、パッチ型、卵形、星状、または球形を含む任意の適切な構造であり得る。インプラントの部位からカプセルを移動させる傾向がある構造（例えば球形）は、好ましくない。硝子体内のインプラントについては、網膜への視覚の経路を遮断し得るので、平板は好ましく得ない。
【００７０】
好ましくは、装置はインプラントする間の装置配置を維持するのを補助し、そして再取り出しを補助するテザー（ｔｅｔｈｅｒ）を有する。このようなテザーは、カプセルを所定の位置に固定するのに適した任意の適切な形状を有し得る。１つの実施態様において、テザーは小穴様の形状にされ、その縫合は強膜または他の適切な眼の構造にテザー（そして、従ってカプセル）を固定するために使用され得る。別の実施態様において、テザーは、カプセルの一端で繋がっており、そして他端で予め糸を通した縫合針を形成する。本明細書で意図されるカプセルは、約１〜２０μｌの最小コア体積を有し、最も好ましくは約１〜１０μｌである。
【００７１】
中空繊維構造において、繊維は１０００ミクロン未満（好ましくは９５０ミクロン未満の）の内径を有する。１つのシリーズの実施態様において、装置は、８７０μｍの内径および約８．５ｍｍの長さを有するように構成される。別の実施態様のシリーズにおいて、装置は、５００μｍの内径および長さ１０．５ｍｍを有するように構成される。眼内へのインプラントについて、中空繊維構成において、カプセルは、０．４〜１．５ｃｍの間の長さが好ましく、最も好ましくは、０．５〜１．Ｏｃｍの間の長さである。より長い装置は、眼内に配置され得る。しかし、カーブさせたり、または弓形の形が確実かつ適切な配置のために要求され得る。中空繊維構成は、眼内の配置のために好ましい。
【００７２】
眼周囲の配置について、中空繊維構成（実質的に上記のような寸法）または平板構成のいずれかが意図される。平板のために企図される上限は、およそ５ｍｍ×５ｍｍ（正方形と仮定して）である。ほぼ同じ表面積で他の形もまた、意図される。
【００７３】
液圧透過性は、代表的に、１〜１００ｍｌ／分／Ｍ２／ｍｍＨｇの範囲であり、好ましくは２５〜７０ｍｌ／分／Ｍ２／ｍｍＨｇの範囲内であり得る。Ｄｉｏｎｎｅら、ＡＳＡＩＯ  Ａｂｓｔｒａｃｔｓ、９９頁（１９９３）およびＣｏｌｔｏｎら、Ｔｈｅ  Ｋｉｄｎｅｙ、Ｂｒｅｎｎｅｒ  ＢＭおよびＲｅｃｔｏｒ  ＦＣ編、２４２５〜８９頁（１９８１）に記載されるように定義され、測定され、そして計算されたカプセルのグルコース物質移動係数は、１０−６ｃｍ／秒より大きく、好ましくは１０−４ｃｍ／秒より大きい。
【００７４】
カプセル外被は、ポリアクリレート（アクリル共重合体を含む）、ポリビニリデン、ポリ塩化ビニル共重合体、ポリウレタン、ポリスチレン、ポリアミド、酢酸セルロース、硝酸セルロース、ポリスルホン（ポリエーテルスルホンを含む）、ポリホスファゼン、ポリアクリロニトリル、ポリ（アクリロニトリル／コ塩化ビニル）ならびにそれらの誘導体、共重合体および混合物を含む種々のポリマーおよびポリマーブレンドから製造され得る。例えば、このような物質から製造されるカプセルは、米国特許第５，２８４，７６１号および同第５，１５８，８８１号に記載される。（これらは、本明細書中で参考として援用する）。ポリエーテルスルホン（ＰＥＳ）繊維（例えば、米国特許第４，９７６，８５９号および同第４，９６８，７３３号に記載される繊維）（本明細書中で参考として援用する）から形成されたカプセルもまた、使用され得る。
【００７５】
外部表面形態学に依存して、カプセルは、タイプ１（Ｔｌ）、タイプ２（Ｔ２）、タイプｌ／２（Ｔｌ／２）またはタイプ４（Ｔ４）のように分類される。例えば、このような膜は、Ｌａｃｙら、「Ｍａｉｎｔｅｎａｎｃｅ  ｏｆ  Ｎｏｒｍｏｇｌｙｃｅｍｉａ  Ｉｎ  Ｄｉａｂｅｔｉｃ  Ｍｉｃｅ  Ｂｙ  Ｓｕｂｃｕｔａｎｅｏｕｓ  Ｘｅｎｏｇｒａｆｔｓ  Ｏｆ  Ｅｎｃａｐｓｕｌａｔｅｄ  Ｉｓｌｅｔｓ」、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２５４、１７８２〜８４頁（１９９１）、Ｄｉｏｎｎｅら、ＷＯ  ９２／１９１９５およびＢａｅｔｇｅ、ＷＯ  ９５／０５４５２に記載される。本発明者らには、平滑な外部表面形態学が好ましい。
【００７６】
免疫学的に特権のない部位については、透過選択性の免疫的隔離の膜を有するカプセル外被が、好ましい。対照的に、微細孔膜または透過選択性膜は、免疫学的な特権部位のために適切であり得る。免疫学的な特権部位へのインプラントについて、本発明者らには、ＰＥＳ膜から製作されたカプセルが好ましい。
【００７７】
カプセルを封止する任意の適切な方法（ポリマー接着剤の使用、および／またはクリンピング（ｃｒｉｍｐｉｎｇ）、結節および熱封止（ｈｅａｔ  ｓｅａｌｉｎｇ）を含む）が、使用され得る。これらの封止技術は、当該分野で公知である。さらに、任意の適切な「乾式の」封止方法もまた、使用され得る。このような方法において、実質的に無孔である取付けが提供され、これを介して細胞含有溶液が導入される。充填後、カプセルは封止される。このような方法は、同時係属中の米国出願番号第０８／０８２，４０７号（本明細書中で参考として援用する（ＰＣＴ／ＵＳ９４／０７０１５もまた参照のこと））に記載される。この出願は、簡便に本発明の装置をロードし、そして封止するために使用され得る図３および４に概略的に示される脆いハブアセンブリを記載する。
【００７８】
本発明者らは、脈管形成、炎症、変性、またはいくつかのその組合せにより特徴づけられる（しかし、これらに限定されない）多種多様な眼の疾患および障害を処置する本発明の使用を意図する。
【００７９】
本発明の多様な実施態様により処置され得る眼の障害のいくつかの例は、ブドウ膜炎、色素性網膜炎、加齢関連黄斑部変性および他の後天性網膜障害、網膜症、網膜血管疾患、他の血管異常、眼内炎、感染症、感染性でない炎症疾患、眼の虚血遺伝的症候群、末梢の網膜変性、網膜変性および腫瘍、脈絡膜障害および腫瘍、硝子体障害、網膜剥離、非貫通性のおよび貫通性の外傷、白内障後合併症および炎症性眼の神経疾患を含む。
【００８０】
加齢関連黄斑部変性は、乾式の加齢関連黄斑変性、滲出性加齢関連黄斑部変性および近視性の変性を含むが、これらに制限されない。
【００８１】
網膜症は、糖尿病性網膜症、増殖性硝子体網膜症および中毒性網膜症を含むが、これらに制限されない。
【００８２】
本発明は、眼の血管新生、多くの眼の疾患および障害と関連がありそして重篤な視覚喪失の大多数の原因である症状の処置のために有用であり得る。例えば、本発明者らは網膜の虚血関連の眼の血管新生（糖尿病および多くの他の疾患での失明の主要な原因）；患者への角膜移植の失敗の素因を作る角膜血管新生；および糖尿病性網膜症、中央網膜静脈閉塞およびおそらく加齢に関連した黄斑部変性に関連する血管新生の処置を意図する。
【００８３】
本発明はまた、眼のおよび眼でない症候を有する疾患または症状から生じている眼の症候を処置するために使用され得る。いくつかの例は、サイトメガロウィルス網膜炎および硝子体の障害のようなＡＩＤＳに関連した障害；網膜内の高血圧性変化のような妊娠に関連した障害；および種々の感染症（例えば、結核症、梅毒、ライム病、寄生虫症、イヌ回虫症（ｔｏｘｏｃａｒａ  ｃａｎｉｓ）、眼ハエウジ病（ｏｐｈｔｈａｌｍｏｎｙｉａｓｉｓ）、嚢中症（ｃｙｓｔ  ｃｅｒｃｏｓｉｓ）
および真菌感染）の眼への影響を含む。
【００８４】
本発明の１つの実施態様において、生きている細胞は、カプセルに入れられ、そして眼の硝子体に外科的に挿入される（球後麻酔下）。硝子体の配置のために、強膜を通って突き出ている装置の一部を用いて、この装置は、強膜を介してインプラントされ得る。最も好ましくは、装置の全体が、装置の全てが強膜中にまたは強膜を通って突き出ていない条件で、硝子体にインプラントされる。好ましくは、装置は強膜（または他の適切な眼の構造）にテザーでつながれる。テザーは、小穴（図３）または円板（図４）または他の任意の適切な固着手段による縫合を含み得る。装置は、所望の予防法または治療を達成するのに必要な限り、硝子体に残留し得る。このような治療は、例えば、ニューロンまたは光レセプターの生残または回復の促進、あるいはブドウ膜、網膜および視神経炎症の阻害と同様に網膜または脈絡膜血管新生の阻害および／または反転を含む。この実施態様は、網膜にＢＡＭを送達することのために好ましい。
【００８５】
硝子体の配置で、ＢＡＭ（好ましくは栄養因子）は網膜またはＲＰＥに送達され得る。さらに、網膜血管新生は、硝子体に抗血管因子を送達することにより最も良好に処置され得る。
【００８６】
別の実施態様において、テノン嚢として公知の空間内でまたはその下で、細胞をロードする装置は、眼周囲にインプラントされる。この実施態様は、硝子体へのインプラントより侵襲性でなく、従って、一般に好ましい。この投与経路はまた、ＲＰＥまたは網膜へのＢＡＭ（例えば栄養因子など）の送達を可能にする。この実施態様は、特に視神経およびブドウ膜管の脈絡膜血管新生および炎症を処置するために好ましい。一般に、このインプラント部位からの送達は、脈絡膜血管系、網膜血管系および視神経への所望のＢＡＭの循環を可能にする。
【００８７】
この実施態様に従って、本発明者らには、黄斑部変性（脈絡膜血管新生）を処置するために、抗血管分子、抗炎症分子（例えばサイトカインおよびホルモン）および神経栄養因子の脈絡膜血管系への眼周囲の送達（テノン嚢の下へのインプラント）が好ましい。
【００８８】
本発明の装置および方法を使用した、脈絡膜血管系（眼周囲に）または硝子体（眼内）への抗血管因子の直接送達は、上記の問題を低減し得、そして満足に定義されないかまたは潜在性の脈絡膜血管新生の処置を可能にし得る。また、付加的または維持治療を介して回帰性の脈絡膜血管新生を低減するかまたは防ぐ方法を提供し得る。
【００８９】
好ましい実施態様において、所望の遺伝子を有するｐＮＵＴベクターは、標準リン酸カルシウムトランスフェクション手順を使用して、ベビーハムスター腎臓（ＢＨＫ）細胞またはＣ２Ｃ１２筋芽細胞細胞にトランスフェクトされ、そしてメトトレキセート（１μＭ〜最高２００μＭ）の濃度増大で選択され、８週間かけて、安定な、増幅された細胞株を産生する。この選択に続いて、カプセル化の前に、操作された細胞は、インビトロで５０〜２００μＭメトトレキセート中で維持され得る。
【００９０】
本発明は、異なる因子の同時送達を意図する。当業者は、特別な眼の障害の症状に依存して、１つ以上の抗血管因子、抗炎症因子または、細胞変性を遅延させ、細胞分裂を促進し、または細胞増殖を促進する因子を送達し得る。例えば、１つ以上の抗血管因子または１つ以上の抗炎症分子と共に１つ以上の神経栄養因子を送達することは、好ましくあり得る。
【００９１】
１つの例は、ＮＴ−４／５とエンドスタチンの同時送達である。この場合、ヘパリナーゼが抗血管因子として作用する間、神経栄養因子は光レセプター生残を促進し得る。
【００９２】
同時送達は、多数の方法で達成され得る。第１に、細胞は、記載された分子をコードする遺伝子を含有する分離した構築物でトランスフェクトされ得る。第２に、細胞は２つ以上の遺伝子を含有する単一の構築物および必要な制御エレメントでトランスフェクトされ得る。本発明者らには、倍数転写単位からの発現をこえる単一転写産物からの倍数遺伝子発現が好ましい。例えば、Ｍａｃｅｊａｋ、Ｎａｔｕｒｅ、３５３、９０〜９４頁（１９９１）；ＷＯ  ９４／２４８７０；ＭｏｕｎｔｆｏｒｄおよびＳｍｉｔｈ、ＴｒｅｎｄｓＧｅｎｅｔ．、１１、１７９−８４頁（１９９５）；Ｄｉｒｋｓら、Ｇｅｎｅ、１２８、２４７〜４９頁（１９９３）；Ｍａｒｔｉｎｅｚ−Ｓａｌａｓら、Ｊ．  Ｖｉｒｏｌｏｇｙ、６７、３７４８〜５５頁（１９９３）およびＭｏｕｎｔｆｏｒｄら、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ，  ９１，  ４３０３〜０７頁（１９９４）を参照のこと。
【００９３】
第３に、２つまたはそれ以上の別々に操作された細胞株は、同時カプセル化され得、または、１つ以上の装置は目的の部位にインプラントされ得る。そして、第４に、同じまたは異なるＢＡＭを送達するために、装置は同時に眼内の２つ以上の異なる部位にインプラントされ得る。例えば、神経の網膜（ＲＰＥに対する神経節細胞）を送達するために硝子体に神経栄養因子を送達し、そして脈絡膜血管系を供給するためにテノン嚢の下の空間を介して抗血管因子を送達することは、望ましくあり得る。１つを超える装置を使用した処置および眼１つ当たり五つまでの装置が意図される場合、本発明者らには、眼１つあたり３つ以下の装置のインプラントが好ましい。
【００９４】
用量は、当該分野で公知の任意の適切な方法によっても変化され得る。これは、（１）
装置あたりの細胞の数、（２）眼１つあたりの装置の数、または（３）細胞あたりのＢＡＭ産生レベルの変化を含む。例えば、形質転換された細胞内のＢＡＭのための遺伝子のコピー数またはＢＡＭの発現を駆動しているプロモーターの効率を変化することによって、細胞の産生は、変化させられ得る。本発明者らには、装置あたり１０３〜１０８個の細胞の使用が好ましく、より好ましくは、装置あたり５×１０４〜５×１０６個の細胞である。
【００９５】
本発明はまた、処置養生の経過の間の異なる細胞型の使用を意図する。例えば、患者が最初の細胞型（例えば、ＢＨＫ細胞）を含有するカプセル装置を用いてインプラントされ得る。ある時間の後、患者がその細胞型に対して免疫応答を発現する場合、カプセルが再び取り出され得るか、またはエクスプラントされ得、そして第２の細胞型（例えば、ＣＨＯ細胞）を含有する第２のカプセルがインプラントされ得る。このように、患者がカプセル化細胞型の１つに対して免疫応答を発現させる場合であっても、治療分子の持続的提供は可能である。
【００９６】
あるいは、より少ないＭＷＣＯを有するカプセルは、カプセル化細胞を用いて、患者の免疫系分子の相互作用をさらに防ぐために使用され得る。
【００９７】
本発明の方法および装置は、霊長類の、好ましくはヒト宿主、レシピエント、患者、被検体または個体における使用を意図する。
【実施例】
【００９８】
実施例１：細胞の調製およびカプセル化
ＢＨＫ−ｈＮＧＦ細胞（Ｗｉｎｎら、ＰＮＡＳ，  １９９４）を、以下のように生成した：
Ｈｏｙｌｅらにより記載されるように、ラットインシュリンイントロンを用いてヒトＮＧＦ（ｈＮＧＦ）遺伝子を、ｐＮＵＴのＢａｍＨＩおよびＳｍａＩ部位の間に挿入し、メタロチオネインＩプロモーターにより駆動させた。ｐＮＵＴ−ｈＮＧＦ構築物を、標準リン酸カルシウム−媒介トランスフェクション方法を使用してＢＨＫ細胞に導入した。ＢＨＫ細胞を、Ｄｕｌｂｅｃｃｏ改変Ｅａｇｌｅ培地／１０％ウシ胎児血清／抗生物質／抗カビ剤／Ｌ−グルタミン（ＧＩＢＣＯ）で５％  ＣＯ２／９５％空気中で３７℃にて増殖させた。トランスフェクトしたＢＨＫ細胞を、２００μＭメトトレキセート（Ｓｉｇｍａ）を含有する培地中で３〜４週間選択し、そして耐性細胞をポリクローナル集団として、２００μＭ  メトトレキセートの存在下または非存在下のいずれかで維持した。
【００９９】
細胞は、これらの実験の前に１０％ＦＢＳ、Ｌ−グルタミン、５０μＭメトトレキセート添加ＤＭＥＭにおいて維持した。細胞は、メトトレキセート存在下で、１〜２回／週で継代した。ＢＨＫ−ｈＮＧＦ細胞およびＢＨＫコントロール細胞は、ハンクの緩衝液で洗浄し、次いでトリプシン処理し、そしてＺｙｄｅｒｍ（登録商標）コラーゲンマトリックスと混合した。平滑化した２５ゲージの針を装備した別々のハミルトン注射器に、細胞株およびマトリックスをロードした。
【０１００】
カプセル化手順は、以下のようであった：中空繊維を、ポリエーテルスルホン（ＰＥＳ）から、約７２０μｍの外径およびおよそ１００μｍの壁厚を有するように組み立てた（ＡＫＺＯ−Ｎｏｂｅｌ  Ｗｕｐｐｅｒｔａｌ，  Ｇｅｒｍａｎｙ）。これらの繊維は、米国特許第４，９７６，８５９号および第４，９６８，７３３号（これらは、本明細書中で参考として援用する）に記載される。
【０１０１】
装置は以下を含む：
ＡＫＺＯ  Ｎｏｂｅｌ  Ｆａｓｅｒ  ＡＧによって、組み立てられた半透過性のポリ（エーテルスルホン）中空繊維膜；
ハブ膜セグメント；
端部へと導く光硬化メタクリレート（ＬＣＭ）樹脂；および
シリコーンテザー。
【０１０２】
装置は、細胞ロード接近のための近位端での隔壁取付具を有し、そして遠位端で密封した。ＢＨＫ細胞を、単個細胞懸濁液として調製し、そして生理学的コラーゲン（Ｖｉｔｒｏｇｅｎ：ＰＣ−１）と１：１で混合後、隔壁ポートに１μｌあたり１５Ｋ細胞の密度で注入した。１．５μ１の細胞懸濁液の注入後、隔壁を除去し、そして、接近ポートを、ＬＣＭ２３の樹脂で密封した。
【０１０３】
装置の構成部分は、市販されている。ＬＣＭ接着剤は、Ａｂｌｅｓｔｉｋ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｎｅｗａｒｋ，  ＤＥ）；Ｌｕｘｔｒａｋ  Ａｄｈｅｓｉｖｅｓ  ＬＣＭ２３およびＬＣＭ２４）から入手可能である。
【０１０４】
実施例２：カプセル化細胞のテノン嚢の下の空間（テノン嚢下）へのインプラント
患者を用意し、そして３ｃｃの２％キシロカイン（ｘｙｌｏｃａｉｎｅ）の延髄後注射を眼に与えた後、普通の様式で覆った。反射鏡を、上下の蓋の下に挿入する。手術用顕微鏡は、定位置に持ってくる。垂直な切開を、側頭上の（ｓｕｐｅｒｏｔｅｍｐｏｒａｌ）四分円内に、結膜およびテノン嚢の両方を通って、縁からおよそ４ｍｍ前に、なす。切開は、縁からおよそ４〜５ｍｍ前に延長する。その点において、鈍い平滑チップのはさみを切開を通して挿入し、そして使用して強膜の表面上でさらに５ｍｍくらい平滑に切り裂いて戻す。その点において、実施例１に記載の膜装置を、この切開を通してある位置に配置し、強膜の表面上に静止させた。縁に最も近い装置の端は、細胞ロード装置に取付けられる小さなループを有する。この点において、＃１０−０ナイロン縫合をこのループを通し、そして強膜表面に、膜を強膜へと固定するために縫い合わせる。その点で、テノン嚢および結膜は、＃６−０平滑な腸縫合で閉鎖される。反射鏡を除去し、そして手順を終える。
【０１０５】
実施例３：硝子体へのカプセル化細胞のインプラント
患者を用意し、そして２％のキシロカインの延髄後注射を眼に与えた後、普通の様式で覆う。その点で、反射鏡を上下の蓋へと挿入し、そして顕微鏡を定位置に持ってくる。小さい切開を、鼻上の四分円内に平行にそしておよそ縁から４ｍｍにある結膜およびテノン嚢の両方を通してなす。露出した領域は、ウェットフィールド麻痺装置で麻痺させる。次いで、３ｍｍ切開術を、縁からおよそ４ｍｍ前に、縁に垂直になす。切開は、強膜を通って、そして硝子体腔に、＃６５ブレードを用いてなす。切開内に存在する任意の硝子体を、切り離し、そして除去する。この点で、実施例１に記載の膜装置は、切開を通して、硝子体腔に挿入する。膜の端に、膜に付けられる小さい２ｍｍループがある。ループは、強膜の外側に残留する。強膜は、中断した＃９−０ナイロン縫合で閉鎖される。＃９−０ナイロン縫合はまた、強膜に装置のこのループを固定するために使用する。結膜は、＃６−０平滑な腸縫合で閉鎖する。
【０１０６】
実施例４：加齢関連黄斑変性の処置におけるインターフェロンα（ＩＦＮα−２ＡまたはＩＦＮα−２Ｂ）の送達
候補の細胞株を、遺伝子的に操作して、インターフェロン分子を発現する。多様なインターフェロンが、使用され得るが、しかし、本発明者らはＩＦＮα−２Ａまたはα−２Ｂを使用するのを好む。１つを超えるインターフェロン分子を、一度に送達し得る。多様な細胞株をまた、利用し得る、本発明者らはＢＨＫ細胞を好む。
【０１０７】
細胞株を、実施例１に実質的に従って予め組み立てられた装置において、カプセル化する。装置製造に続いて、テザーを適用する。このテザーは、縫合材料が通過し得る小穴を含む。次いで、テザーを使用して、装置浮動または損失を避けるために定位置に装置を固定する。細胞ロード装置は、標準的な期間の間、装置の無菌性を保証するために保たれる。カプセルを、実施例２に従ってテノン嚢の下にインプラントする。
【０１０８】
中心窩の無血管のゾーンの任意の部分を含んでいる血管造影的に証明された中心窩下の脈絡膜血管新生を用いて診断した患者を、この治療のために選択する。
【０１０９】
ＩＦＮα−２ａ治療の効果は、視力、臨床的外観およびフルオレセイン血管造影的外観により評価する。基底部の臨床的外観は、網膜下の流体による黄斑の隆起および網膜内の出血の存在を特に参照して、主観的に評価する。
【０１１０】
装置を、上記と同じ調製物および外科の手順を使用して除去する。装置を、インビトロに配置し、そしてＩＦＮ−αの放出について２４時間アッセイする。アッセイ期間の後、装置を日常的な組織の分析に供し、細胞生存の範囲を決定する。
【０１１１】
実施例５：カプセル化ＢＨＫ−ｈＮＧＦ細胞株を介する新生ネコ眼へのｈＮＧＦの送達
ＢＨＫ−ｈＮＧＦクローンの３６細胞を、実施例１に従って産生した。次いで、細胞を、実施例１に従ってＡＫＺＯ微孔性１０／１０膜から作製した４ｍｍ  ＬＣＭ２４光硬化カプセルにカプセル化した。カプセルを、実質的に実施例４に従って一ヶ月間、新生児のネコの眼にインプラントした。
【０１１２】
結果
ＮＧＦ−誘導神経突起成長のためにインビトロ試験を、ネコの目中のインプラントの前後で実施した。カプセル化していないＢＨＫコントロールおよびＢＨＫ−ｈＮＧＦ細胞由来の条件化した培地（ＣＭ）を０．２μｍのフィルターに通し、そして６−または２４ウェルプレート上で１ｍｌあたり２０万細胞の密度にまで増殖したＰＣ１２細胞サブクローンＰＣｌ２Ａの培養液に加え、ｈＮＧＦの存在について試験した。ポリマー性装置中のカプセル化細胞をまた、生物活性のあるｈＮＧＦを放出するそれらの能力について、２４ウェルプレートの個々のウェルに装置を配置すること、およびそれらを血清のない定義されたＰＣ１培地（Ｈｙｃｏｒ，  Ｐｏｒｔｌａｎｄ，  ＭＥ）中で１〜２日間、平衡化を可能にすることにより試験した；次いで、培地を除去し、そしてさらに２４時間、１ｍｌの新鮮なＰＣ１で置換した。このＣＭを、回収し、ＰＣ１２Ａ細胞に配置し、そして評価した。細胞体直径の長さの３倍以上の大きさの神経突起誘導をポジティブとして計数した。さらに、神経突起誘導の速度および突起の安定性を試験した。
【０１１３】
ＮＧＦ分泌のレベルもまた、ＥＬＩＳＡによって試験した。カプセル化および非カプセル化の両方のＢＨＫ−ｈＮＧＦ細胞から放出されるｈＮＧＦの定量化は、２部位酵素イムノアッセイにより実行した。プロトコルは、Ｎｕｎｃ−Ｉｍｍｕｎｏ  Ｍａｘｉｓｏｒｐ  ＥＬＩＳＡプレートを使用してＢｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｍａｎｎｈｅｉｍにより記載するプロトコルの改変であった。発色（３０分）後、試料をプレートリーダーで分析し、そして組換え体マウスＮＧＦタンパク質標準と比較した。
【０１１４】
結果は、以下のようであった：
【０１１５】
【表１】
2010265314.tif 000003
＊装置をインプラントの前に２回アッセイし、１回は共同実験者の実験室への搬送前、および２回目はインプラントの直後で、２つのアッセイの間に４８時間の間隔を伴う。「Ｐｒｅ−１」は、最初のアッセイの結果をいい、そして「Ｐｒｅ−２」は、第２のアッセイの結果をいう＊＊「ｎｄ」は、「検出されなかった」の略号である。
【０１１６】
エクスプラント後ＮＧＦ生物活性アッセイにおいて、強力な神経突起成長が装置１および２（ＮＧＦ）について見い出されたが、装置３および４（コントロール）についてはそうではなかった。
【０１１７】
第２の同様の実験を、実施した。結果は、以下のようである：
【０１１８】
【表２】
2010265314.tif 000004
＊「ｎｄ」は、「検出されなかった」の略語である。
【０１１９】
さらなる実験において、ｈＣＮＴＦまたはＮＴ４／５を分泌したＢＨＫ細胞を産生し、そして実質的に実施例１に従ってカプセル化した。しかし、本発明者らは、これらの装置の出荷および取り扱いに主に関連した、カプセルにおいて貧弱な細胞生存を導くような、困難を経験した。従って、これらのカプセルについてのデータは、ここで提示されない。出荷の困難さは、乾燥、ねじれ、破損および低温に対する長時間曝露を含む。
【０１２０】
継続実験を、正常および遺伝子導入ブタの眼に多様なＢＡＭを送達するために進行中である。ブタモデルは、大きさおよび血管系に基づく、ヒトの眼のために最も適切な動物モデルの１つと考えられる。
【図１】
2010265314.tif 000005
【図２】
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【図３】
2010265314.tif 000007
【図４】
2010265314.tif 000008