(57)【要約】      （修正有）【課題】関節リウマチに罹患している被検者に白血球除去療法を施行する好ましい時期を判定する方法及び該方法を実施するためのキットを提供する。【解決手段】次の工程を含む、関節リウマチに罹患している被検者に白血球除去療法を施行する時期を判定する方法。（１）白血球除去療法を受ける前の関節リウマチ患者から得た単核球を含む検体にサイトカイン産生刺激剤を加えて、インターフェロン−γ、腫瘍壊死因子−α、インターロイキン−４からなる群から選択されるサイトカインの産生量を測定する工程、（２）測定された基準患者のサイトカイン産生量に基づいて基準値を設定する工程、基準値とサイトカイン産生量とを比較して、被検者に白血球除去療法を施行する時期を判定する工程。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
次の工程を含む、関節リウマチに罹患している被検者に白血球除去療法を施行する時期を判定する方法。
（１）白血球除去療法を受ける前の関節リウマチ患者から得た単核球を含む検体にサイトカイン産生刺激剤を加えて、インターフェロン−γ、腫瘍壊死因子−α、インターロイキン−４からなる群から選択されるサイトカインの産生量を測定する工程；
（２）白血球除去療法を受けた後の前記関節リウマチ患者の中から、白血球除去療法の治療効果が顕著であった複数の基準患者を選択する工程；
（３）工程（１）で測定された前記基準患者のサイトカイン産生量に基づいて基準値を設定する工程；
（４）関節リウマチに罹患している被検者から得た単核球を含む検体について、上記工程（１）と実質的に同一の工程で、インターフェロン−γ、腫瘍壊死因子−α、インターロイキン−４からなる群から選択されるサイトカインの産生量を測定する工程；及び
（５）工程（３）で算出された基準値と、工程（４）で測定されたサイトカイン産生量とを比較して、前記被検者に白血球除去療法を施行する時期を判定する工程：
【請求項２】
前記工程（１）で測定されるサイトカインが、インターフェロン−γまたは腫瘍壊死因子−αまたはインターロイキン−４のいずれか１種類であり、前記工程（３）の基準値が、工程（１）で測定された前記基準患者のサイトカイン産生量の平均値に標準偏差を加えた値であって、前記工程（５）が、前記基準値より前記被験者のサイトカイン産生量が小さい場合、前記被検者に白血球除去療法を施行する時期であると判定する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記工程（４）の前に、工程（１）〜（３）が実施されて前記基準値が設定されている、請求項１〜２のいずれかに記載の方法。
【請求項４】
前記単核球を含む検体が末梢血から分離された単核球を含む細胞懸濁液であり、前記サイトカイン産生量が、前記サイトカイン産生刺激剤を加えた後の前記細胞懸濁液の上清に含まれるサイトカイン量である、請求項１から３のいずれかに記載の方法。
【請求項５】
前記単核球を含む検体が血液であり、前記サイトカイン産生量が、前記サイトカイン産生刺激剤を加えた後の前記血液中の単核球内サイトカイン量である、請求項１から３のいずれかに記載の方法。
【請求項６】
前記サイトカイン産生刺激剤がフォルボール−１２−ミリステート−１３−アセテート及びイオノマイシンである、請求項１から５のいずれかに記載の方法。
【請求項７】
フォルボール−１２−ミリステート−１３−アセテートとイオノマイシンを含む、請求項１から６のいずれかに記載の方法により関節リウマチに罹患している被検者に白血球除去療法を施行する時期を判定するためのキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、関節リウマチ患者に白血球除去療法を施行する時期を判定する方法、並びに該方法を実施するためのキットに関する。
【背景技術】
【０００２】
白血球除去療法は、末梢血のリンパ球、顆粒球、単球などの白血球を体外循環によって除去することにより、免疫あるいは炎症を制御して、病態の改善を図る治療方法であり、関節リウマチや潰瘍性大腸炎などの疾患の治療に有効であり、既に有力な治療方法として医療現場において利用されている。しかしながら、初回の白血球除去療法で非常に有効であったリウマチ患者であっても、再発で、再び白血球除去療法を施行した際、効果が減じた例もあり、治療開始時期や、関節リウマチ患者の病態により白血球除去療法の有効性が異なるのも事実である。関節リウマチ患者血液中のある種のサイトカイン濃度は、疾患活動度によって変動することが知られている（非特許文献１）。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００３】
【非特許文献１】Matei I et al. Cytokine patterns and pathogenicity in autoimmune diseases. Rom J Intern Med. 2002; 40(1-4):27-41.
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明の課題は、関節リウマチの治療において、関節リウマチに罹患している被検者に白血球除去療法を施行する時期を判定する方法を提供することにある。また、本発明の課題は、前記方法を容易に実施するためのキットを提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
白血球除去療法は白血球の機能を制御して治療効果を発揮しており、その治療効果は関節リウマチ患者のサイトカン産生能の変化に伴って変動する可能性が考えられた。この仮説に立って白血球除去療法の有効性とサイトカイン産生能の関係を調べたところ、本発明者らは単核球のサイトカイン産生能によって白血球除去療法を施行する好ましい時期を決定できることを見出し、本発明を完成するに至った。即ち、本発明は下記に関する。
【０００６】
［１］  次の工程を含む、関節リウマチに罹患している被検者に白血球除去療法を施行する時期を判定する方法。
（１）白血球除去療法を受ける前の関節リウマチ患者から得た単核球を含む検体にサイトカイン産生刺激剤を加えて、インターフェロン−γ、腫瘍壊死因子−α、インターロイキン−４からなる群から選択されるサイトカインの産生量を測定する工程；
（２）白血球除去療法を受けた後の前記関節リウマチ患者の中から、白血球除去療法の治療効果が顕著であった複数の基準患者を選択する工程；
（３）工程（１）で測定された前記基準患者のサイトカイン産生量に基づいて基準値を設定する工程；
（４）関節リウマチに罹患している被検者から得た単核球を含む検体について、上記工程（１）と実質的に同一の工程で、インターフェロン−γ、腫瘍壊死因子−α、インターロイキン−４からなる群から選択されるサイトカインの産生量を測定する工程；及び
（５）工程（４）で算出された基準値と、工程（４）で測定されたサイトカイン産生量とを比較して、前記被検者に白血球除去療法を施行する時期を判定する工程：
［２］  前記工程（１）で測定されるサイトカインが、インターフェロン−γまたは腫瘍壊死因子−αまたはインターロイキン−４のいずれか１種類であり、前記工程（３）の基準値が、工程（１）で測定された前記基準患者のサイトカイン産生量の平均値に標準偏差を加えた値であって、前記工程（５）が、前記基準値より前記被験者のサイトカイン産生量が小さい場合、前記被検者に白血球除去療法を施行する時期であると判定する、［１］に記載の方法。
［３］  前記工程（４）の前に、工程（１）〜（３）が実施されて前記基準値が設定されている、［１］〜［２］のいずれかに記載の方法。
［４］  前記単核球を含む検体が末梢血から分離された単核球を含む細胞懸濁液であり、前記サイトカイン産生量が、前記サイトカイン産生刺激剤を加えた後の前記細胞懸濁液の上清に含まれるサイトカイン量である、［１］から［３］のいずれかに記載の方法。
［５］  前記単核球を含む検体が血液であり、前記サイトカイン産生量が、前記サイトカイン産生刺激剤を加えた後の前記血液中の単核球内サイトカイン量である、［１］から［３］のいずれかに記載の方法。
［６］  前記サイトカイン産生刺激剤がフォルボール−１２−ミリステート−１３−アセテート及びイオノマイシンである、［１］から［５］のいずれかに記載の方法。
［７］  フォルボール−１２−ミリステート−１３−アセテートとイオノマイシンを含む、［１］から［６］のいずれかに記載の方法により関節リウマチに罹患している被検者に白血球除去療法を施行する時期を判定するためのキット。
【発明の効果】
【０００７】
本発明の方法によれば、関節リウマチ患者に白血球除去療法を施行する時期を判定することが可能である。
【発明を実施するための形態】
【０００８】
以下、本発明による関節リウマチ患者に白血球除去療法を施行する時期を判定する方法及びキットについて詳細に説明する。
本発明でいう白血球除去療法とは、末梢血のリンパ球、顆粒球、単球などの白血球を体外循環して除去することにより、免疫あるいは炎症を制御して、病態の改善を図る治療法のことをいう。顆粒球と単球に選択性が高い除去方法は、特に顆粒球除去療法と呼ばれる。
【０００９】
白血球除去療法は、白血球の除去方法により吸着式と遠心式に大別される。吸着式はビーズ或いは不織布カラムに血液を直接灌流し、ビーズ表面或いは不織布表面に対する親和性の違いにより、白血球系細胞を吸着除去する方法である。遠心式は遠心式血球成分分離装置を用いて、比重の違いにより白血球系細胞を遠心除去する方法である。
【００１０】
本発明において、関節リウマチ患者に白血球除去療法を施行する時期は以下のような手順で決めることができる。白血球除去療法を受ける前の複数のリウマチ患者から得られた単核球を含む検体にサイトカイン産生刺激剤を加え、インターフェロン−γ、腫瘍壊死因子−α、インターロイキン−４からなる群から選択されるサイトカイン産生量を測定する。白血球除去療法後、前記患者のうち、白血球除去療法の治療効果が顕著であった患者を基準患者として、該基準患者から得られたサイトカイン産生量の平均値及びその標準偏差などを用いて、基準値を算出する。基準値算出の方法は特に限定されないが、前記基準患者が３名以上いれば、統計学的に信頼できる基準値を得ることができる。白血球除去療法を施行する好ましい時期は、関節リウマチに罹患している被験者から得られた単核球を含む検体のサイトカイン産生量を前記と同様の手順により測定し、前記基準値と比較することによって行われる。
【００１１】
本発明の白血球除去療法を施行する時期の判定方法では、関節リウマチ患者から採血された末梢血が使用される。本発明でいう末梢血とは、血管の中を流れている血液のことをいう。血液の採血方法は特に限定されないが、血液の凝固を防止するために、血液抗凝固剤を血液に添加してもよい。採血量は特に限定されず、後述のサイトカイン産生量の測定に必要十分な量であれば良い。
【００１２】
本発明でいう単核球を含む細胞懸濁液とは、関節リウマチ患者の末梢血から分離した単核球を培地に懸濁して調製される。本発明でいう単核球とは、白血球中の顆粒球以外の細胞、すなわち単球及びリンパ球のことをいう。本発明で用いる単核球分離法は公知の分離剤、例えばＦｉｃｏｌｌ等で行うことができる。また、本発明で用いる培地は、公知の培地、例えばＲＰＭＩ−１６４０培地などを使用することができる。細胞懸濁液の単核球濃度と液量は、特に限定されず、後述のサイトカイン産生量を測定し得るのに十分な濃度と量があれば良い。単核球数の計数は、公知の自動血球計算装置、血球計算盤、フローサイトメーター等で求めることができ、測定精度及び簡便さの点より、血球計算盤や自動血球計算装置等が用いられる。
【００１３】
本発明で用いるサイトカイン産生刺激剤は、単核球を含む検体からインターフェロン−γ、腫瘍壊死因子−α又はインターロイキン−４の産生、遊離もしくは誘導を引き起こす薬剤をいい、フォルボール-１２-ミリステート-１３-アセテートやイオノマイシが挙げられる。また、その他のサイトカイン産生刺激剤としては、Ｔリンパ球に幼若化、サイトカイン産生など様々な活性を誘導することが知られているフィトヘマグルチニン（ＰＨＡ−Ｌ、Phytohemagglutinin-L）や、グラム陰性菌の内毒素として知られるリポポリサッカリドや、Ｔ細胞受容体に対する刺激活性を有することが知られている抗ＣＤ３抗体や抗ＣＤ２８抗体など研究用試薬として市販されているものを、単核球を含む検体にサイトカイン産生刺激を与えることのできる濃度で使用することができる。
【００１４】
本発明で用いるフォルボール−１２−ミリステート−１３−アセテートは、プロテインキナーゼＣを強力に活性化する化学物質として多くの研究に用いられている。本発明で使用するフォルボール-１２-ミリステート-１３ -アセテートは、研究用試薬として市販されているものを使用すればよく、使用濃度は、単核球を含む検体にサイトカイン産生刺激を与えることのできる濃度であれば特に制限はないが、低濃度ではサイトカイン産生刺激を与えることができず、また高濃度で使用すると細胞に対する毒性が現れるため、１０ｎｇ／ｍＬから１００ｎｇ／ｍＬの範囲、好ましくは１０ｎｇ／ｍＬから７０ｎｇ／ｍＬ、より好ましくは２０ｎｇ／ｍＬから７０ｎｇ／ｍＬ、特に好ましくは２０ｎｇ／ｍＬから５０ｎｇ／ｍＬの範囲で使用される。
【００１５】
本発明で用いるイオノマイシンは、Streptomyces conglobatusの産生するポリエーテル系抗生物質であり、細胞内のカルシウムイオン濃度を上昇させる作用があることから広く細胞に刺激を与える研究に用いられている。本発明で使用するイオノマイシンは、研究用試薬として市販されているものを使用すればよく、使用濃度は、単核球を含む検体にサイトカイン産生刺激を与えることのできる濃度であれば特に制限はないが、低濃度ではサイトカイン産生刺激を与えることができず、また、高濃度で使用すれば、使用細胞に対する毒性が現れるため、５００ｎｇ／ｍＬから５μg／ｍＬの範囲、好ましくは５００ｎｇ／ｍＬから３μg／ｍＬ、より好ましくは１μg／ｍＬから３μg／ｍＬ、特に好ましくは１μg／ｍＬから２μg／ｍＬの範囲で使用される。
【００１６】
本発明では、白血球除去療法を受ける前の、関節リウマチに罹患している被検者から得た単核球を含む検体にサイトカイン産生刺激剤を加え、産生されたインターフェロン−γ、腫瘍壊死因子−α、インターロイキン−４の産生量を測定し、予め定められた基準値と比較して、前記被検者に白血球除去療法を施行する好ましい時期を判定する。サイトカイン産生刺激剤の添加方法は、特には限定されず、適当な容器に単核球を含む検体を添加し、その中にサイトカイン産生刺激剤を加えて混合することによって行うことができる。例えば、９６穴マイクロプレートに末梢血から分離された単核球を含む細胞懸濁液又は血液を添加し、そこにサイトカイン産生刺激剤を加える等を例に挙げることができる。
【００１７】
また、単核球を含む検体とサイトカイン産生刺激剤との接触は、３７℃  ５％炭酸ガス中で行われ、一定時間（１時間から１０時間、好ましくは２時間から６時間、より好ましくは４時間）培養する。培養後、遠心分離により回収した培養上清中又は血液中に含まれる細胞内に産生されたインターフェロン−γ、腫瘍壊死因子−α又はインターロイキン−４の量を測定し、本発明記載の白血除去療法を施行する好ましい時期の判定に用いることができる。
【００１８】
本発明で用いる培養上清中のインターフェロン−γ、腫瘍壊死因子−α又はインターロイキン−４の産生量の測定は、公知の酵素免疫測定法（Enzyme Linked Immuno-Sorbent Assay；ＥＬIＳＡ）や蛍光免疫測定法（Fluorescent Immuno Assay； ＦＩＡ）等を使用することができ、各社より測定キットが販売されており、これらを使用すれば、簡便に上記サイトカインの産生量を測定することができる。
【００１９】
本発明で用いる細胞内の前記サイトカン産生量は、超音波や界面活性剤などを用いて細胞膜を破壊、溶解することにより、公知の酵素免疫測定法や蛍光免疫測定法、 Western Blot法等で細胞内サイトカン濃度を測定することができる（Wewers  MD et al. Alveolar Macrophages Differ From Blood Monocytes in Human IL-1β Release. J Immunol. 1989; 143: 1635-41.）。
【００２０】
また、フローサイトメーターを使用して、前記サイトカインを産生している細胞数比率の測定や、標準化ビーズで蛍光量（ＭＥＳＦ：可溶性蛍光色素分子等量）を測定し、細胞内の前記サイトカイン量測定に用いた蛍光色素量を定量化することにより、細胞内サイトカンの産生量を求めることもできる。細胞外に放出されたサイトカイン濃度とＭＥＳＦで求めた細胞内サイトカイン産生量は相関することが示されている（Schuerwegh AJ et al. Comparison of Intracellular Cytokine Production with Extracellular Cytokine Levels Using Two Flow Cytometric Techniques. Cytometry 2003; 558:52-58.）。
【００２１】
白血球除去療法の治療効果判定方法には、ＥＵＬＡＲ（欧州リウマチ学会）で提唱され、疾患活動性の指標として全世界で広く用いられている、ＤＡＳ(Disease Activity Score)２８−ＣＲＰを用いることができる。ＤＡＳ２８−ＣＲＰは、２８関節における圧痛関節数（Ｔ２８）、腫脹関節数（Ｓ２８）とＣＲＰと患者による全般評価（ＧＨ）を用いて疾患の活動性を定量的に示す指標であり、下記の計算式でＤＡＳ２８−ＣＲＰスコアを算出できる（Arthritis Rheum,1995 Jan;38(1):44-8.）。
【００２２】
【化１】
2010233455.tif 000002
【００２３】
ＤＡＳ２８−ＣＲＰ改善基準で治療効果を判定する。ＤＡＳ２８−ＣＲＰ改善基準とは、白血球除去療法終了後のＤＡＳ２８−ＣＲＰスコアが３．２より小さく、治療前から治療後のＤＡＳ２８−ＣＲＰスコアの改善が１．２より大きい場合をgood response、白血球除去療法終了後のＤＡＳ２８−ＣＲＰスコアが３．２以上５．１以下で、ＤＡＳ２８−ＣＲＰスコアの改善が０．６以上１．２以下の場合をmoderate response、白血球除去療法終了後のＤＡＳ２８−ＣＲＰスコアが５．１より大きく、ＤＡＳ２８−ＣＲＰスコアの改善が０．６より小さい場合をno responseとして治療効果を判定する。本発明では、白血球除去療法終了８週間後のＤＡＳ２８−ＣＰＲ改善基準で、good responseまたはmoderate responseを示した症例を治療効果が顕著であった基準患者とした。
【００２４】
本発明で用いる基準値は、白血球除去療法を実施した関節リウマチ患者のうち治療効果が顕著であった複数の患者（基準患者）において、白血球除去療法を受ける前の前記患者の単核球を含む検体にサイトカイン産生刺激剤を加え、産生したインターフェロン−γ、腫瘍壊死因子−α、インターロイキン−４の産生量に基づき算出される。基準値は、サイトカイン産生量の平均値及びその標準偏差を用いて、統計学的手法にて定めることができる。すなわち、白血球除去療法により治療効果が顕著であった複数の関節リウマチ患者（基準患者）について、治療開始前に求めたインターフェロン−γ、腫瘍壊死因子−α、又はインターロイキン−４産生量の平均値＋標準偏差や平均値＋２×標準偏差を上記基準値として用いることができる。また、本発明で用いる基準値は、一施設に限定されるものではなく、多施設間で基準値を設定し、共有して使用することができる。
【００２５】
本発明で用いる基準値の例を以下に述べるが、サイトカインの産生量は血液の保存条件やサイトカイン産生の刺激条件、及び測定条件などにより変動するので、基準値はこれらに限定されるものではない。インターフェロン−γの産生量の基準値としては、１×１０6単核球当たり、５００ｐｇ以下の値、好ましくは３００ｐｇ以下の値とすることができる。腫瘍壊死因子−αの産生量の基準値としては、１×１０6単核球当たり、３５０ｐｇ以下の値、好ましくは３００ｐｇ以下の値とすることができる。インターロイキン−４の産生量としては、５０ｐｇ以下の値、好ましくは３０ｐｇ以下の値とすることができる。
【００２６】
具体的判定方法としては、例えば、治療開始前に求めたインターフェロン−γ、腫瘍壊死因子−α、インターロイキン−４のいずれかの産生量の平均値＋標準偏差を基準値として用い、該基準値より被験者のサイトカイン産生量が小さい場合、被検者に白血球除去療法を施行する好ましい時期であると判定する方法を採用できる。
【００２７】
さらに、本発明は、フォルボール−１２−ミリステート−１３−アセテートとイオノマイシンを含む、関節リウマチ患者に白血球除去療法を施行する時期を判定するキットに関する。本発明のキットには、少なくともフォルボール−１２−ミリステート−１３−アセテートとイオノマイシンが含まれていればよい。即ち、本発明のキットは、フォルボール−１２−ミリステート−１３−アセテートとイオノマイシンのみから構成されていてもよいし、フォルボール−１２−ミリステート−１３−アセテートとイオノマイシンに加えてさらにそれ以外の成分を適宜含めることもできる。フォルボール-１２ -ミリステート-１３ -アセテートとイオノマイシン以外の成分としては、例えば、単核球を分離するための分離剤、インターフェロン−γ、腫瘍壊死因子−α又はインターロイキン−４を測定するための試薬などを挙げることができる。また、キットには、アッセイを行うためのマイクロプレートを含めてもよい。
【００２８】
以下、実施例により本発明を具体的に説明することにより、本発明を明らかにするが、本発明は実施例によって限定されるものではない。
【実施例】
【００２９】
（１）基準値の設定
白血球除去治療を受ける前の関節リウマチ患者５名から採取した末梢血より、常法に従って単核球分離剤Ｆｉｃｏｌｌ Ｐａｑｕｅ Ｐｌｕｓ（ＧＥヘルスケアバイオサイエンス株式会社製）を用いて単核球を分離し、１．０×１０6個／ｍＬの濃度となるよう１０％ウシ胎仔血清を含むＲＰＭＩ−１６４０培地（インビトロジェン社製）に懸濁させた。上記単核球浮遊液を１ウェル当り１００μLずつ、すなわち１．０×１０5個ずつ９６穴マイクロプレートに播種し、最終濃度でそれぞれ５０ｎｇ／ｍＬ及び１μｇ／ｍＬとなるように、フォルボール−１２−ミリステート−１３−アセテート（シグマ社製）及びイオノマイシン（シグマ社製）を添加し、３７℃、５％炭酸ガス培養器（サーモフィッシャーサイエンティフィック社製）にて培養を行った。培養４時間後の培養上清を遠心分離により回収した。
【００３０】
培養上清中のサイトカイン産生量は、Ｃｙｔｏｍｅｔｒｉｃ Ｂｅａｄ Ａｒｒａｙ Ｔｈ１／Ｔｈ２サイトカインキットII（日本ベクトン・ディキンソン社製）及びフローサイトメーター（ＦＡＣＳ Ｃａｌｉｂｕｒ 日本ベクトン・ディキンソン社製）を用いて測定した。
【００３１】
前記５名の関節リウマチ患者に旭化成クラレメディカル社製の白血球除去治療器セルソーバ（登録商標）により１回／週の間隔で、計５回の白血球除去療法を施行した。
【００３２】
治療効果は、白血球除去療法終了８週間後のＤＡＳ２８−ＣＲＰ改善基準により判定した。白血球除去療法終了８週間後のＤＡＳ２８−ＣＲＰ改善基準で、good responseまたはmoderate responseを示した症例を治療効果が顕著であった基準患者とした。前記５名の関節リウマチ患者のうち、基準患者の条件を満たす者は患者１、４、５（３名）であった。治療開始前のサイトカイン産生量とＤＡＳ２８−ＣＲＰ改善基準の判定結果を表1に示す。治療開始前に測定した、３名の基準患者の各サイトカイン産生量の平均値と標準偏差から設定した基準値（平均値＋標準偏差）を表２に示す。
【００３３】
【表１】
2010233455.tif 000003
【００３４】
【表２】
2010233455.tif 000004
【００３５】
（２）被験者のサイトカイン産生量に基づく判定
関節リウマチ患者３名を被験者として、（１）と同様に末梢血から単核球を分離してサイトカインの産生量を測定した。患者毎の各サイトカイン産生量を表３に示した。
表２の各サイトカインの基準値と被験者の各サイトカイン産生量を比較して、サイトカイン産生量が基準値より小さい場合、白血球除去療法を施行する好ましい時期であり、白血球除去療法を施行すればgood responseまたはmoderate responseが得られると判定して、○と表記した（表４）。サイトカイン産生量が基準値以上の場合、白血球除去療法を施行するには好ましくない時期であり、白血球除去療法を施行してもno responseしか得られないと判定して、×と表記した。
【００３６】
【表３】
2010233455.tif 000005
【００３７】
【表４】
2010233455.tif 000006
【００３８】
インターフェロン−γ、腫瘍壊死因子−α、インターロイキン−４のいずれの産生量に基づいても、患者７、８は白血球除去療法を施行する好ましい時期であり、患者６は白血球除去療法を施行するには好ましくない時期であると判定された。
【００３９】
（３）被験者の治療結果
上記被験者のうち、白血球除去療法を施行する好ましい時期であると判定された患者７、８に対して、（１）と同様に旭化成クラレメディカル社製の白血球除去治療器セルソーバ（登録商標）により１回／週の間隔で、計５回の白血球除去療法を施行した。治療効果は、（１）と同様に白血球除去療法終了８週間後のＤＡＳ２８−ＣＲＰ改善基準により判定した。結果を表５に示す。白血球除去療法の結果、患者７，８共にmoderate responseが得られた。
【００４０】
【表５】
2010233455.tif 000007
【００４１】
表４と表５に示すように、サイトカインの産生量による判定結果と実際の治療効果が一致した。
【産業上の利用可能性】
【００４２】
本発明によれば、関節リウマチ患者に白血球除去療法を施行する好ましい時期は、患者の末梢血単核球を含む検体にサイトカイン産生刺激剤を加えた時のインターフェロン−γ、腫瘍壊死因子−α、インターロイキン−４の産生量と関連していることから、これらサイトカイン群の産生量を測定することにより、白血球除去療法を施行する好ましい時期を判定することができる。したがって、本発明を関節リウマチの治療に先立って用いれば、白血球除去療法による治療を効率的に実施することができる。