(57)【要約】      （修正有）【課題】高齢コンパニオンペットの精神能力衰退開始を阻害する。【解決手段】コンパニオンペット用食餌であって、該ペットの通常の栄養所要量を満たし、前記コンパニオンペットの高齢期における精神能力の衰退開始を阻害するのに足る量の酸化防止剤またはその混合物を含んでなる食餌として与える。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
成体ペットに関する通常の栄養所要量を満たすコンパニオンペット用食餌であって、前記コンパニオンペットの高齢期における精神能力の衰退開始を阻害するのに足る量の酸化防止剤またはその混合物をさらに含んでなる、前記食餌。
【請求項２】
ペットがイヌである、請求項１に記載の食餌。
【請求項３】
イヌが１〜６歳である、請求項２に記載の食餌。
【請求項４】
ペットがネコである、請求項１に記載の食餌。
【請求項５】
ネコが１〜６歳である、請求項４に記載の食餌。
【請求項６】
ビタミンＥが食餌の少なくとも約１００ｐｐｍで存在する、請求項１に記載の食餌。
【請求項７】
ビタミンＣ、Ｌ−カルニチン、α−リポ酸又はその混合物からなる群より選択される酸化防止剤が食餌中に存在する、請求項６に記載の食餌。
【請求項８】
ビタミンＣ、Ｌ−カルニチン、α−リポ酸又はその混合物からなる群より選択される酸化防止剤が食餌中に存在する、請求項１に記載の食餌。
【請求項９】
少なくとも約５０ｐｐｍのビタミンＣが食餌中にある、請求項８に記載の食餌。
【請求項１０】
少なくとも約２５ｐｐｍのα−リポ酸が食餌中にある、請求項８に記載の食餌。
【請求項１１】
少なくとも約５０ｐｐｍのＬ−カルニチンが食餌中に存在する、請求項８に記載の食餌。
【請求項１２】
高齢コンパニオンペットの精神能力の衰退開始の阻害方法であって、成体期にある前記ペットに、この阻害を達成するのに足る量の酸化防止剤またはその混合物を与えることを含んでなる方法。
【請求項１３】
ペットがイヌである、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
イヌが１〜６歳である、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
ペットがネコである、請求項１２に記載の方法。
【請求項１６】
ネコが少なくとも１〜６歳である、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
ビタミンＥを、食餌で測定して少なくとも約１００ｐｐｍでペットに与える、請求項１２に記載の方法。
【請求項１８】
ビタミンＣ、Ｌ−カルニチン、α−リポ酸又はその混合物からなる群より選択される酸化防止剤をペットに与える、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
ビタミンＣ、Ｌ−カルニチン、α−リポ酸又はその混合物からなる群より選択される酸化防止剤をペットに与える、請求項１２に記載の方法。
【請求項２０】
少なくとも約５０ｐｐｍのビタミンＣが食餌中にある、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
少なくとも約２５ｐｐｍのα−リポ酸が食餌中にある、請求項１９に記載の方法。
【請求項２２】
少なくとも約５０ｐｐｍのＬ−カルニチンが食餌中に存在する、請求項１９に記載の方法。
【請求項２３】
成体ペットの通常の栄養所要量を満たすコンパニオンペット用食餌であって、該食餌中に少なくとも約１００ｐｐｍのビタミンＥ、少なくとも約５０ｐｐｍのビタミンＣ、少なくとも約２５ｐｐｍのα−リポ酸および少なくとも約５０ｐｐｍのＬ−カルニチンをさらに含んでなる、前記食餌。
【請求項２４】
成体ペットが１〜６歳のイヌである、請求項２３に記載の食餌。
【請求項２５】
成体ペットが１〜６歳のネコである、請求項２３に記載の食餌。
【請求項２６】
成体コンパニオンペットの精神能力の向上方法であって、該ペットに、前記ペットの精神能力を向上させるのに足る量の酸化防止剤またはその混合物を与えることを含んでなる方法。
【請求項２７】
成体ペットの通常の栄養所要量を満たし、前記ペットの精神能力を向上させるのに足る量の酸化防止剤またはその混合物をさらに含んでなる、コンパニオンペット用食餌。
【請求項２８】
コンパニオンペットの高齢期における酸化的傷害に対する抵抗能の改善方法であって、成体期にある前記ペットに、栄養所要量を満たす食餌を与えることを含んでなり、前記食餌が少なくとも約２５ｐｐｍのリポ酸を有し、そして前記食餌を少なくとも１カ月間与える、前記改善方法。
【請求項２９】
コンパニオンペットの高齢期における酸化的傷害に対する抵抗能の改善方法であって、高齢期にある前記ペットに、栄養所要量を満たす食餌を与えることを含んでなり、前記食餌が少なくとも約２５ｐｐｍのリポ酸を有し、そして前記食餌を少なくとも１カ月間与える、前記改善方法。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
発明の背景
犬および猫などのコンパニオンアニマルは、高齢化により不具合を生じると考えられる。これら不具合のいくつかは、一般的な格言に示されている。これらの一つは、“老犬に新しい芸は教えられない”である。この格言は、犬は、高齢化するにつれ、精神能力および体力が低下すると考えられる、という観察に起因する。思考、学習および記憶に関連づけられる精神活動が減退すると考えられる（Ｃｕｍｍｉｎｇｓ  ＢＪ，Ｈｅａｄ  Ｅ，Ｒｕｅｈｌ  Ｗ，Ｍｉｌｇｒａｍ  ＮＷ，Ｃｏｔｍａｎ  ＣＷ  １９９６：Ｔｈｅ  ｃａｎｉｎｅ  ａｓ  ａｎ  ａｎｉｍａｌ  ｍｏｄｅｌ  ｏｆ  ａｇｉｎｇ  ａｎｄ  ｄｅｍｅｎｔｉａ；Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  ａｇｉｎｇ  １７：２５９−２６８）。これに加えて、高齢動物では、精神能力の変化により行動変化が現れることがある。多くの原因として、この能力減退が特定されてきた。
【０００２】
これらの能力損失は、高齢のイヌおよびネコで一般に観察されている。７歳以上の犬および７歳以上のネコは高齢とみなされ、この不具合に直面している可能性がある。
著しいレベルの少なくとも１種の酸化防止剤を、成体コンパニオンペットの食餌中に存在させるか、または食餌の他にペットに与えると、高齢コンパニオンペットの精神能力の衰退開始を阻害し、および／または成体コンパニオンペットの精神能力を高齢期までさらに維持することができる。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００３】
【非特許文献１】Ｃｕｍｍｉｎｇｓ  ＢＪ，Ｈｅａｄ  Ｅ，Ｒｕｅｈｌ  Ｗ，Ｍｉｌｇｒａｍ  ＮＷ，Ｃｏｔｍａｎ  ＣＷ  １９９６：Ｔｈｅ  ｃａｎｉｎｅ  ａｓ  ａｎ  ａｎｉｍａｌ  ｍｏｄｅｌ  ｏｆ  ａｇｉｎｇ  ａｎｄ  ｄｅｍｅｎｔｉａ；Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  ａｇｉｎｇ  １７：２５９−２６８
【発明の概要】
【０００４】
発明の概要
本発明に従い、成体ペットの通常の栄養所要量を満たすコンパニオンペット用食餌であって、前記コンパニオンペットの高齢期における精神能力の衰退開始を阻害するのに足る量の酸化防止剤またはその混合物をさらに含んでなる食餌がある。
【０００５】
本発明の他の観点は、高齢コンパニオンペットの精神能力の衰退の阻害方法であって、該方法は、成体期にある前記ペットに、この阻害を達成するのに足るレベルで酸化防止剤またはその混合物を与えることを含んでなる。
【０００６】
さらに本発明に従い、成体コンパニオンペットの通常の栄養所要量を満たし、そしてビタミンＥ、ビタミンＣ、α−リポ酸、Ｌ−カルニチンからなる群より選択される酸化防止剤およびその任意の混合物を、前記ペットの高齢期における精神能力の衰退を阻害するのに足る量でさらに含んでなる、コンパニオン成体ペット用食餌である。
【０００７】
本発明のさらに他の観点は、高齢コンパニオンペットの精神能力の向上方法であって、該方法は、成体期にある該ペットに、精神能力を向上させるのに足る量の酸化防止剤またはその混合物を与えることを含んでなる。
【０００８】
本発明の他の観点は、成体コンパニオンペットの精神能力の向上方法であって、該ペットに、前記ペットの精神能力を向上させるのに足る量の酸化防止剤またはその混合物を与えることを含んでなる方法である。
【０００９】
これらの方法のすべてにおいて、酸化防止剤またはその混合物を、動物の食餌中に投与することが望ましい。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
発明の詳細な説明
成体コンパニオンペット、例えばイヌおよびネコに与えられる食餌は、同年齢の動物に与えられる標準的普通食である。以下は、年齢１〜６歳のイヌ用の典型的食餌である。
【００１１】
【表１】
2010279357.tif 000002
【００１２】
コンパニオン成体ペットの食餌に著しい量の酸化防止剤またはその混合物を加えると、高齢ペットにおいて、行動の明確な変化の開始、詳細には、問題解決能力によって具体的に示される精神能力の衰退の開始を遅らせることができる。成体という用語は、一般に少なくとも１〜６歳のイヌおよび少なくとも１〜６歳のネコを意味するものとする。高齢の犬または猫は、７歳以上である。
【００１３】
イヌおよびネコに関する精神能力の損失は、何年もの間観察されてきた。この精神能力の損失は、非常に多くの様式で発現する。例えばイヌの場合、見当識障害、屋内での粗相(house soiling)、変容した睡眠−覚醒パターン、ヒトおよび他のペットとの低下または
変容した相互関係、ならびに学習および集中不能として発現することができる。これらの状態は、ネコでも同様に発現することができる。人で示されるようなアルツハイマー病は、イヌおよびネコではみられない。
【００１４】
この精神能力の損失について、多くの理論が唱えられてきた。今までのところ、本発明者らは、この精神能力の損失を阻害するか、または客観的パラメーターにより測定される精神能力の肯定的変化を犬および猫に実際にもたらすことができる、食餌の作用経路を認識していない。
【００１５】
本発明者らは、この衰退開始の遅延を達成することに成功している。本発明者らの発明の食餌を成体コンパニオンペットに用いることにより、高齢ペットの精神能力をより長期間維持できることを示すことができる。実質的に、精神能力の衰退は、停止または遅延させることができる。記憶および学習能を改善することができる。全体的な精神的敏捷性を高めることができる。年齢に関連する認知的衰弱を遅らせうる。認知的機能不全症候群に関しては、その進行を高齢犬において遅らせることができ、この症候群による臨床徴候を制御することができる。適切な場合の予防と、これらの成分を必要とするペットが、標的グループ(target group)である。
【００１６】
これを達成する食餌中成分は、酸化防止剤またはその混合物である。酸化防止剤は、フリーラジカルを失活させる材料である。そのような材料の例には、イチョウ、シトラスパルプ、ブドウの搾りかす、トマトの搾りかす、ニンジンおよびホウレンソウなどの食物（好ましくはすべて乾燥させたもの）、ならびに、β−カロテン、セレン、補酵素Ｑ１０（ユビキノン）、ルテイン、トコトリエノール、大豆イソフラボン、Ｓ−アデノシルメチオニン、グルタチオン、タウリン、Ｎ−アセチルシステイン、ビタミンＥ、ビタミンＣ、α−リポ酸、Ｌ−カルニチンなどのようなさまざまな他の材料が含まれる。ビタミンＥは、トコフェロールまたはトコフェロールの混合物およびそのさまざまな誘導体、例えばビタミンＥの酢酸エステル、コハク酸エステル、パルミチン酸エステルなどのようなエステル
として、投与することができる。α体が好ましいが、β、γおよびδ体が含まれてもよい。ｄ体が好ましいが、ラセミ混合物は許容しうる。それらの形および誘導体は、ペットによって摂取された後、ビタミンＥ様の活動において作用することになる。ビタミンＣは、この食餌中に、アスコルビン酸およびそのさまざまな誘導体として投与することができる、その誘導体は、例えばカルシウムリン酸塩、コレステリル(cholesteryl)塩、２−モノ
ホスフェートなどであり、ペットによって摂取された後、ビタミンＣ様の活動において作用することになる。それらは、液体、半固体、固体および熱安定形のような任意の形であることができる。α−リポ酸は、食餌中に、αリポ酸またはそのリポエート(lipoate)誘
導体（米国特許第５６２１１１７号にあるようなもの）、ラセミ混合物、塩、エステルもしくはアミドとして、投与することができる。Ｌ−カルニチンは、食餌中に投与することができ、カルニチンのさまざまな誘導体、例えば塩酸塩、フマル酸塩およびコハク酸塩のような塩ならびにアセチル化カルニチンなどを用いることができる。
【００１７】
食餌中に投与する量を、すべて食餌の重量％（乾燥物質基準）で、遊離材料として測定される活性材料自体として算出する。使用する最大量により、毒性がもたらされるべきでない。少なくとも約１００ｐｐｍまたは少なくとも約１５０ｐｐｍのビタミンＥを用いることができる。約５００〜約１０００ｐｐｍの好ましい範囲を使用することができる。必須ではないが、約２０００ｐｐｍまたは約１５００ｐｐｍの最大値を通常は超えない。ビタミンＣについては、少なくとも約５０ｐｐｍ、望ましくは少なくとも約７５ｐｐｍおよびより望ましくは少なくとも約１００ｐｐｍを用いる。非毒性の最大値を使用することができる。α−リポ酸の量は、少なくとも約２５、望ましくは少なくとも約５０ｐｐｍ、より望ましくは約１００ｐｐｍから変動させることができる。最大量は、約１００ｐｐｍ〜６００ｐｐｍから、ペットに対する非毒性が維持される量まで、変動させることができる。好ましい範囲は、約１００ｐｐｍ〜約２００ｐｐｍである。Ｌ−カルニチンの場合、イヌに関しては約５０ｐｐｍ、望ましくは約２００ｐｐｍ、より望ましくは約３００ｐｐｍが有用な最小値である。ネコに関しては、約１００ｐｐｍ、２００ｐｐｍおよび５００ｐｐｍなど、わずかに高い最小値のＬ−カルニチンを使用することができる。非毒性最大量、例えば約５０００ｐｐｍ未満を使用することができる。イヌでは、より少ない量、例えば約５０００ｐｐｍ未満を使用することができる。イヌの場合、好ましい範囲は約２００ｐｐｍ〜約４００ｐｐｍである。ネコの場合、好ましい範囲は約４００ｐｐｍ〜約６００ｐｐｍである。
【００１８】
約１〜１５ｐｐｍのβ−カロテンを使用することができる。
約０．１〜最高約５ｐｐｍのセレンを使用することができる。
少なくとも約５ｐｐｍのルテインを使用することができる。
【００１９】
少なくとも約２５ｐｐｍのトコトリエノールを使用することができる。
少なくとも約２５ｐｐｍの補酵素Ｑ１０を使用することができる。
少なくとも約５０ｐｐｍのＳ−アデノシルメチオニンを使用することができる。
【００２０】
少なくとも約１０００ｐｐｍのタウリンを使用することができる。
少なくとも約２５ｐｐｍの大豆イソフラボンを用いることができる。
少なくとも約５０ｐｐｍのＮ−アセチルシステインを用いることができる。
【００２１】
少なくとも約５０ｐｐｍのグルタチオンを用いることができる。
少なくとも５０ｐｐｍのイチョウの抽出物を用いることができる。
以下は、ＯＲＡＣ（酸素ラジカル吸収能力）含量の高い原料成分である。１％混在物として食餌に加えると（トウモロコシなどの低ＯＲＡＣ成分を合計５％置換するため）、食餌全体のＯＲＡＣ含量が増加し、これらの成分を含有する食餌を摂食した動物の血漿のＯＲＡＣ含量が増加した。好ましくは、１％で加えて他の４種の１％成分と組合わせて食餌への添加を合計５％にする場合、Ｔｒｏｌｏｘ等価物の乾燥物質１ｇあたりのＯＲＡＣ含量が＞２５ｕｍｏｌであるあらゆる成分を用いることができる。
ホウレンソウの搾りかす
トマトの搾りかす  
シトラスパルプ
ブドウの搾りかす
ニンジンの顆粒
ブロッコリ
緑茶
イチョウ
トウモロコシグルテン穀粉
【実施例】
【００２２】
実施例１
２〜４歳の成体ビーグル犬１７匹（対照ｎ＝８、酸化防止剤強化ｎ＝９）を、無作為に対照群または強化食餌群においた。対照食餌は、５９ｐｐｍのビタミンＥおよび＜３２ｐｐｍのビタミンＣを含有していた。試験食餌は、９００ｐｐｍのビタミンＥおよび１２１ｐｐｍのビタミンＣ、２６０ｐｐｍのＬ−カルニチンおよび１３５ｐｐｍのαリポ酸を有していた。その食餌を開始して約１カ月後、犬に与えた最初の問題解決課題はランドマーク識別学習課題(landmark discrimination learning task)であり、これは空間的注意の
試験であった（Ｍｉｌｇｒａｍ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９  Ｍｉｌｇｒａｍ，Ｎ．Ｗ．，Ａｄａｍｓ，Ｂ．，Ｃａｌｌａｈａｎ，Ｈ．，Ｈｅａｄ，Ｅ．，Ｍａｃｋａｙ，Ｂ．，Ｔｈｉｒｌｗｅｌｌ，Ｃ．，  ＆  Ｃｏｔｍａｎ（１９９９），Ｃ．Ｗ．  Ｌａｎｄｍａｒｋ  Ｄｉｓｃｒｉｍｉｎａｔｉｏｎ  Ｌｅａｒｎｉｎｇ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｄｏｇ．Ｌｅａｒｎｉｎｇ  ＆  Ｍｅｍｏｒｙ，６：５４−６１）。
【００２３】
ランドマーク識別学習では、被験体が、ある目的物への接近度に基づき特定の目的物を選択することが求められる。しかしながら、初期学習は、犬の目的物識別課題の学習能に基づいている。われわれはこれまでに、識別学習に対する年齢の影響は、課題の難易度に依存することを見いだしている。
【００２４】
ランドマーク０試験を学習させたとき、強化食餌の成犬は、対照食物の成犬より誤りが少なかった（対照群の平均＝３１．１、強化群の平均＝１５．１）。それらの成犬を、ランドマークがポジティブウェル(positive well)からさらに離れているランドマーク１および２の試験に進ませた。強化食餌の成犬は、対照の成犬に比べて、少ない誤りでランドマーク０〜２を学習した（対照でのランドマーク０＋１＋２の平均誤り数＝１３２．９；強化食餌の犬でのランドマーク０＋１＋２の平均誤り数＝８７．１）。
実施例２
この試験では、無作為な発生源の成犬を３０匹使用した。犬は、試験開始前に、少なくとも１０カ月齢であり、妊娠しておらず、授乳しておらず、適度な体重を有していた。動物を、食餌で処置するために、各群雄３匹および雌３匹で無作為に５群に分けた。
【００２５】
すべての犬に、２週間の予備給餌期間中、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｆｅｅｄ  Ｃｏｎｔｒｏｌ  Ｏｆｆｉｃｉａｌｓ（ＡＡＦＣＯ  ２０００）により提唱されているすべての栄養勧告量を満たすかそれを超える対照食物（０ｐｐｍのｄｌ−α−リポ酸を加えたもの）を与えた（表１）。予備給餌期間に続き、犬を、以下のｄｌ−α−リポ酸標的混在率（乾燥物質基準）の一つを有する５処置群に無作為に分けた：０ｐｐｍ、１５０ｐｐｍ、１５００ｐｐｍ、３０００ｐｐｍ、４５００ｐｐｍ。すべての食餌、対照およびα−リポ酸において、ビタミンＥを加えて６００〜１０００国際単位のレベルで存在させ、ビタミンＣを１００〜２００ｐｐｍのレベルで加えた。
【００２６】
試験食物は、水を除き唯一の栄養源であった。新鮮な水を適宜提供した。犬を選択して初期体重を測定した後、食物の予想ＭＥに基づき、各犬について食物投与量を算出した。初期食物投与量の算出は、以下の式により算出されるような、標準活動度をもたらす因子により修正されている犬に関する維持エネルギー必要量（ＭＥＲ）に基づいていた：
ＭＥＲ（ｋｃａｌ／日）＝１．６×ＲＥＲ（静止エネルギー必要量）
式中、ＲＥＲ（ｋｃａｌ／日）＝７０×体重（ｋｇ）０．７５
犬の体重を毎週測定し、最適体重を維持するのに十分な食物を与えるために、必要に応じて食物投与量を調整した。最適体重を、５点目盛りの３に決定した。犬の体重が初期体重の−１０％以内に維持されなかった場合、食物投与量の調整後、その犬を試験から除外した。体重および食物摂取量の測定値をすべて記録した。
【００２７】
試料を粉砕し、０．１００±０．００１ｇの試料を５．０ｍＬのリン酸緩衝液（１０ｍＭ  Ｎａ２ＨＰＯ４、２ｍＭ  エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、０．９％  ＮａＣｌ、ｐＨ  ７．４）４中に２回抽出した。２５０μＬの抽出物を、Ｔｅｆｌｏｎライニングを施した蓋付きの５ｍＬのガラス製遠心分離管内に入れた。１５μＬのＥＤＴＡ溶液（１００ｍＭ  ＥＤＴＡ、約１ＭのＮａＯＨでｐＨを７．８に調整したもの）および５０μＬの新たに調製した５ｍＭ  ジチオエリトリトール（ＤＴＥ）を加えた。それらの溶液をボルテックスし、室温で５分間インキュベートした。その後、１０μＬの１Ｍ  Ｈ３ＰＯ４および２．０ｍＬのジエチルエーテルを加えた。管の蓋を閉め、ボルテックスし、室温において１５００×ｇで３分間遠心分離した。エーテル層を別個の５ｍＬのガラス製遠心分離管に移し、水層を１．５ｍＬのエーテルでさらに２回抽出した。同一試料からの抽出物をすべて合わせた。その後、抽出物を、室温において水浴中の窒素蒸発器中で乾燥する。この時点で試料の蓋を閉め、一晩凍結させた。
【００２８】
その後、乾燥した抽出物を解凍し、７０μＬのＳＤＳ／ＥＤＴＡ溶液（０．１１％ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）、１５ｍＭ  ＥＤＴＡ、０．９％  ＮａＣｌ）および５μＬの新たに調製した１ｍＭ  ＤＴＥで再構成した。その後、各管に、新たに調製したＮａＢＨ４を５０μＬ加えた。それらの管をボルテックスし、室温で１０分間インキュベートした。１０分後、試料を−７０℃で凍結させた。溶液を解凍する前に、２０μＬの２Ｍ  ＨＣｌを加えた。溶液を解凍した後、８００μＬの１００ｍＭ  ＮＨ４ＨＣＯ３を加えた。それらの溶液をボルテックスし、アセトニトリル中の１００ｍＭ  モノブロモビマン(momobromobimane)溶液（ｍＢＢｒ）を５μＬ加えた。その後、溶液を室温の遮光下で９０分間インキュベートした。
【００２９】
１．５ｍＬのジクロロメタンでの抽出によりインキュベートした後、過剰のｍＢＢｒおよびＤＴＥ誘導体を試料から除去した。水層をＨＰＬＣに付した。３０％アセトニトリルと１％酢酸からなり約２ＭのＮＨ４ＯＨでｐＨ  ３．９５に調整した移動相を用い、これを流速１．０ｍＬ／分でポンプで送って１回の注入につき１５分間のアイソクラチック溶出を行い、リポ酸を分離した。この調製では、押出された食物の密度が１ｇ／ｍＬに等しいと仮定している。
【００３０】
全血球計算および血液生化学分析のために、試験の開始２週間前と、さらに試験の０、２８、５６、８４、１１２、１４０および１６８日目に、血液を無菌で採取した。これに加えて、リンパ球を分離するために、食餌療法(dietary intervention)の０、２８および８４日目に１５ｍＬの全血を採取した。
【００３１】
ヘパリン添加(heparainzed)全血を５０ｍＬのＡｃｃｕｓｐｉｎ円錐形遠心分離管（Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ）上に層状に入れ、等容量のリン酸緩衝食塩液（ＰＢＳ）を加えた。試料を、７００ｇで３０分間、ブレーキを使用せずに遠心分離した。単球層を回収し、１５ｍＬの円錐形遠心分離管に移し、１〜３ｍＬのＰＢ中に再懸濁させ、前記のように遠心分離した（第１の洗浄）。第２の洗浄を、第１の洗浄のように実施した。最後に、細胞を回収し、過塩素酸（１０％  ｗ／ｖ）中に懸濁させ、分析まで−７０℃で凍結させた。
【００３２】
試料を、−７０℃の冷凍庫から、ドライアイスを入れた冷却器に移した。バイアルを、冷却遠心器中、１２００ｒｐｍで５分間遠心分離した。グルタチオン（ＧＳＨ）を分析するための上澄みの一部を、円錐形試験管に移した。
【００３３】
酸可溶性抽出物の誘導体化は、Ｊｏｎｅｓ（Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ）により修正された、Ｒｅｅｄおよび共同研究者（Ｆａｒｉｓｓ  ｅｔ  ａｌ）の方法によっていた。
簡潔にいうと、１５０μＬの抽出物または外部標準を１．５ｍＬのエッペンドルフチューブ内に加え、続いて２０μＬのγ−ｇｌｕ−ｇｌｕ内部標準を加え、５０μＬのＩＡＡを加えた後、混合した。その溶液を、ＫＯＨ−ＫＨＣＯ３希釈標準溶液を用いて約１０のｐＨ（紫色）に調整した。溶液を、遮光下の室温で１時間インキュベートした。サンガー試薬を総容量と同容量で加え、その溶液を室温の遮光下で一晩（２０時間）インキュベートした。
【００３４】
インキュベートした後、溶液を１２０００ｒｐｍで５分間遠心分離し、上澄みを別の１．５ｍＬのエッペンドルフチューブ内に移した。２００μＬの上澄みを、３００μＬの入口部を有する褐色オートバイアル内に加え、その上端にＨＰＬＣ分析用クリンパーを取りつけた。
【００３５】
溶媒および分離条件は、記載されているとおりであった（Ｆａｒｉｓｓ，Ｊｏｎｅｓ）。ＧＳＨおよびＧＳＳＧのレベルを、標準試料に関して定量した。γ−グルタミル−グルタメートを内部標準として用いて、誘導体化効率を評価した。
【００３６】
ベースラインに対する臨床化学、血液学および体重の値の比較を、ウィンドウズ版ＳＡＳ上で有意性をＰ＜０．０５に設定して、対応のあるｔ検定(paired t-test)として解析した。各測定時間の値の平均を、有意性をＰ＜０．０５に設定した一元配置ＡＮＯＶＡにより分離した。８４日目とベースラインのＧＳＨ：ＧＳＳＧの差を、有意性をＰ＜０．０５に設定したウィンドウズ版ＳＡＳでの一元配置ＡＮＯＶＡにより、群間解析した。
結果
７回にわたる逐次アッセイ（０、２８、５６、８４、１１２、１４０、１６８日目）で決定した食物中のリポ酸濃度（ｐｐｍ）は、期待されるアッセイ感度と、われわれの設備で典型的に生じる生成パラメーターの範囲内であった（表１）。
【００３７】
食物摂取データに目立つ点はなかった。すべての群において大半の動物は、平均して、６カ月目に試験開始時より多くの食物を摂取した。４５００ｐｐｍ混在群で初期に若干の体重減少が起こったが、その変化は６カ月目の時点までに反転したと思われる点を除き、体重データに目立つ点はなかった。体調の評点は、この軽度の体重減少による影響を受けなかったと思われる。
【００３８】
日常的な身体検査は、栄養に関連する異常またはｄｌ−α−リポ酸の毒性の証拠を示さなかった。試験母集団のすべての動物が、試験の経過全体の期間中、正常を維持した。試験の経過中に、一部の動物で嘔吐が時折観察されたが、嘔吐がリポ酸に帰因しうるという結論が導かれるような傾向は観察されなかった。最高混在群の動物１匹を、体重減少および白血球増加症のため、２１日目に試験から除外した。この動物の白血球増加症は、試験終了時までに消退しなかった。これは、他のいくつかの疾患過程に帰因すると推測される。
【００３９】
２８、５６、８４、１１２、１４０および１６８日目の血清の生化学的値を同一群の犬
に関する初期値と比較すると、いくつかの統計的な差が認められた。しかしながら、これらの値は実験室での参照範囲(laboratory reference range)内にあるかそれに非常に近く、数カ月にわたり一貫した傾向が認められたので、これらの差はすべて生物学的に重要でないと判断した。各期間における対照群と他の処置群との比較もいくつかの統計的差を示したが、これらの値は臨床検査室での参照範囲内にあるかそれに非常に近く、傾向が存在しなかったので、これらの差はすべて生物学的に重要でないと判断した。
【００４０】
２８、５６、８４、１１２、１４０および１６８日目の血液学的値を同一群の犬に関する初期値と比較すると、いくつかの統計的な差が認められた；しかしながら、これらの値は実験室での参照範囲内にあるかそれに非常に近く、傾向が存在しなかったので、これらの差はすべて生物学的に重要でないと判断した。各期間における対照群と他の処置群との比較は、いくつかの統計的差を示した；しかしながら、これらの値は臨床検査室での参照範囲内にあるかそれに非常に近く、傾向が存在しなかったので、これらの差はすべて生物学的に重要でないと判断した。
ＧＳＨ：ＧＳＳＧ比
８４日間にわたる給餌でのＧＳＨ：ＧＳＳＧ比の変化は、すべての補強群で比が増大し、食餌による著しい全体的作用を示していた（Ｐ＝０．０２４）（表２）。ＡＮＯＶＡでは、最低および最高混在群に関し基礎食物群と比較しての有意差が示されたが、もっとも大きな数値的増加は、最低混在レベルにおいてであった。すなわち、最高および最低混在群に関するＧＳＨ：ＧＳＳＧ比の変化は、この同一期間中に基礎食物群で観察された変化と有意に異なっていた。８４日目の４点に関する比は、これらの試料のすべて（対照群で１匹、処置群で３匹）でＧＳＳＧが検出されなかったため、決定することができなかった。したがって、補強群に関する値は、アッセイの感度が十分に高く、８４日目の低レベルのＧＳＳＧを検出できていたならば、さらに高いＧＳＨ：ＧＳＳＧ比を示していた可能性がある。
【００４１】
【表２】
2010279357.tif 000003
【００４２】
【表３】
2010279357.tif 000004
【００４３】
αリポ酸に関し、さらに観察を適用することができる。食餌中のαリポ酸の長期給餌は、安全かつ有効である。還元型グルタチオン（ＧＳＨ）対酸化型グルタチオン（ＧＳＳＧ）の比が向上する。食餌中のαリポ酸の長期投与は、最低１、２、３、４、５または６カ月間から、１、２、３、４、５年間または動物の一生涯を含むさらに長期間までであることができる。αリポ酸は、食餌中でカプセル化など特別な保護をしなくても機能し、医薬に用いられるような単位剤形、例えば錠剤、丸剤、カプセル剤などの状態で食餌中に存在する必要はない。リポ酸は、食餌中に、食餌の最低約２５、５０、７５または１００ｐｐｍで提供される。最高範囲はその毒性レベルをほんの少し下回り、食餌の約４００、３００または２００ｐｐｍと幅広い。一般に、１日あたり約６または７ｍｇ／動物の体重１ｋｇを超えることはなく、より一般には約５ｍｇ／ｋｇを超えない。αリポ酸は、酸化的傷害に対する動物の抵抗能を改善するほか、酸化防止剤の防御能力を改善する。このすべては、適量存在する他の酸化防止剤、例えばビタミンＥおよびビタミンＣと共にもたらされる。このことは、αリポ酸の作用が、ビタミンＣおよび／またはビタミンＥの作用を超えることを実証している。
【手続補正書】
【提出日】平成22年7月16日(2010.7.16)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
成体コンパニオンペットペットに関する通常の栄養所要量を満たすコンパニオンペット用食餌であって、前記コンパニオンペットの高齢期における精神能力の衰退開始を阻害するのに足る量のビタミンＣ、Ｌ−カルニチン、およびα−リポ酸を含む酸化防止剤混合物を含んでなる、前記食餌。
【請求項２】
ペットがイヌである、請求項１に記載の食餌。
【請求項３】
イヌが１〜６歳である、請求項２に記載の食餌。
【請求項４】
ペットがネコである、請求項１に記載の食餌。
【請求項５】
ネコが１〜６歳である、請求項４に記載の食餌。
【請求項６】
少なくとも約１００ｐｐｍのビタミンＥを更に含む、請求項１に記載の食餌。
【請求項７】
少なくとも約５０ｐｐｍのビタミンＣを含む、請求項１に記載の食餌。
【請求項８】
少なくとも約２５ｐｐｍのα−リポ酸を含む、請求項１に記載の食餌。
【請求項９】
少なくとも約５０ｐｐｍのＬ−カルニチンを含む、請求項１に記載の食餌。
【請求項１０】
高齢コンパニオンペットの精神能力の衰退開始の阻害方法であって、成体期にある前記ペットに、この阻害を達成するのに足る量の酸化防止剤またはその混合物を与えることを含んでなる方法。
【請求項１１】
ペットがイヌである、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
イヌが１〜６歳である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
ペットがネコである、請求項１０に記載の方法。
【請求項１４】
ネコが少なくとも１〜６歳である、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
ビタミンＥを、食餌で測定して少なくとも約１００ｐｐｍでペットに与える、請求項１０に記載の方法。
【請求項１６】
ビタミンＣ、Ｌ−カルニチン、α−リポ酸又はその混合物からなる群より選択される酸化防止剤をペットに与える、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
ビタミンＣ、Ｌ−カルニチン、α−リポ酸又はその混合物からなる群より選択される酸化防止剤をペットに与える、請求項１０に記載の方法。
【請求項１８】
少なくとも約５０ｐｐｍのビタミンＣが食餌中にある、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
少なくとも約２５ｐｐｍのα−リポ酸が食餌中にある、請求項１７に記載の方法。
【請求項２０】
少なくとも約５０ｐｐｍのＬ−カルニチンが食餌中に存在する、請求項１７に記載の方法。
【請求項２１】
成体ペットの通常の栄養所要量を満たすコンパニオンペット用食餌であって、該食餌中に少なくとも約１００ｐｐｍのビタミンＥ、少なくとも約５０ｐｐｍのビタミンＣ、少なくとも約２５ｐｐｍのα−リポ酸および少なくとも約５０ｐｐｍのＬ−カルニチンをさらに含んでなる、前記食餌。
【請求項２２】
成体ペットが１〜６歳のイヌである、請求項２１に記載の食餌。
【請求項２３】
成体ペットが１〜６歳のネコである、請求項２１に記載の食餌。
【請求項２４】
成体コンパニオンペットの精神能力の向上方法であって、該ペットに、前記ペットの精神能力を向上させるのに足る量の酸化防止剤またはその混合物を与えることを含んでなる方法。
【請求項２５】
成体ペットの通常の栄養所要量を満たし、前記ペットの精神能力を向上させるのに足る量の酸化防止剤またはその混合物をさらに含んでなる、コンパニオンペット用食餌。
【請求項２６】
コンパニオンペットの成体期における酸化的傷害に対する抵抗能の改善方法であって、成体期にある前記ペットに、栄養所要量を満たす食餌を与えることを含んでなり、前記食餌が少なくとも約２５ｐｐｍのリポ酸を有し、前記コンパニオンペットの酸化的傷害に対する抵抗能を改善する、前記改善方法。
【請求項２７】
高齢期のコンパニオンペットの学習能力を増加させる方法であって、成体期にある前記ペットに、高齢期のコンパニオンペットの学習能力を増加させるのに足る量の、ビタミンＥ、ビタミンＣ、α−リポ酸、およびＬ−カルニチンからなる群から選択される酸化防止剤ならびにその混合物を与えることを含む、前記方法。