(57)【要約】【課題】消化後の混合液をサンプリングすることなく、簡易かつ迅速に消化の程度を判定する。【解決手段】容器内に脂肪組織と消化酵素とを含む混合液を収容して攪拌する攪拌ステップＳ２，Ｓ３と、該攪拌ステップＳ２，Ｓ３による攪拌を停止してから前記混合液が脂肪層と液層とに分離するまでに要する時間を測定する分離時間測定ステップＳ４と、該分離時間測定ステップＳ４において測定された時間が所定時間を超える場合に、消化終了を判定する判定ステップＳ５とを含む脂肪消化方法を提供する。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
容器内に脂肪組織と消化酵素とを含む混合液を収容して攪拌する攪拌ステップと、
該攪拌ステップによる攪拌を停止してから前記混合液が脂肪層と液層とに分離するまでに要する時間を測定する分離時間測定ステップと、
該分離時間測定ステップにおいて測定された時間が所定時間を超える場合に、消化終了を判定する判定ステップとを含む脂肪消化方法。
【請求項２】
前記分離時間測定ステップが、攪拌後の容器内における脂肪層と液層との間の境界面の形成を検出する請求項１に記載の脂肪消化方法。
【請求項３】
前記分離時間測定ステップは、容器の下部における混合液の吸光度が所定の閾値を下回ったことにより、前記境界面の形成を検出する請求項２に記載の脂肪消化方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、脂肪消化方法に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
従来、容器内に脂肪組織と消化酵素とを含む混合液を収容して、容器を振動等させることにより脂肪組織を消化することが行われている（例えば、特許文献１参照。）。
この脂肪消化方法においては、予め設定された消化条件、消化酵素の濃度や温度条件等が達成されているものとして、攪拌時間を管理することで、消化の終了を判定していた。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
【特許文献１】国際公開第２００５／０１２４８０号パンフレット
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
しかしながら、脂肪組織の消化の終了を時間のみによって判定する場合、実際に得られた消化後の混合液をサンプリングして細胞数を数えることで初めて、消化が十分に行われたか否かが検証されるので、検証のために顕微鏡や細胞計測装置などの設備が必要であるとともに検証に手間がかかるという不都合がある。また、混合液のサンプリングを閉鎖系で行うことは困難であり、サンプリングのために開放すると細菌、塵埃等の混入のおそれもある。
【０００５】
本発明は上述した事情に鑑みてなされたものであって、消化後の混合液をサンプリングすることなく、簡易かつ迅速に消化の程度を判定することができる脂肪消化方法を提供することを目的としている。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
上記目的を達成するために、本発明は以下の手段を提供する。
本発明は、容器内に脂肪組織と消化酵素とを含む混合液を収容して攪拌する攪拌ステップと、該攪拌ステップによる攪拌を停止してから前記混合液が脂肪層と液層とに分離するまでに要する時間を測定する分離時間測定ステップと、該分離時間測定ステップにおいて測定された時間が所定時間を超える場合に、消化終了を判定する判定ステップとを含む脂肪消化方法を提供する。
【０００７】
本発明によれば、容器内に脂肪組織と消化酵素とを含む混合液を収容して攪拌すると、攪拌中は脂肪組織と消化酵素とを含む混合液が攪拌されて境界面が消失するが、攪拌ステップによる攪拌を停止して静置すると混合液が脂肪層と液層とに分離していく。この場合に、消化が十分ではない場合には、比較的早期に脂肪層と液層との間の境界面が現れるのに対し、消化が進んで脂肪組織から脂肪細胞等が単離されてくると、液層に脂肪細胞等の粒子が含まれるようになってエマルジョン形成が促進され、境界面が現れにくくなる。そこで、分離時間測定ステップにおいて、脂肪層と液層とが分離するのに要する時間を測定し、その時間が所定時間を超える場合には消化が十分に行われたものと判定して消化を終了することができる。
【０００８】
すなわち、本発明によれば、脂肪層と液層との分離に要する時間を測定するだけで、消化の終了を判定することができ、消化が行われないまま処理が行われる無駄をなくして患者の負担を軽減することができる。また、容器内から混合液をサンプリングしなくて済むので、混合液内への細菌、塵埃の混入等の不都合の発生を防止することができる。
【０００９】
上記発明においては、前記分離時間測定ステップが、攪拌後の容器内における脂肪層と液層との間の境界面の形成を検出することとしてもよい。
脂肪層と液層との間の境界面の形成は、脂肪の消化の度合いによって顕著に相違する。したがって、これを検出することで脂肪層と液層との分離を明確にすることができ、脂肪の消化が十分であるか否かを精度よく判定することができる。
【００１０】
また、上記発明においては、前記分離時間測定ステップは、容器の下部における混合液の吸光度が所定の閾値を下回ったことにより、前記境界面の形成を検出することとしてもよい。
消化の進行に伴って、脂肪組織から単離した脂肪細胞が液層内に分散するので、攪拌終了後の液層における混合液の吸光度は高いが、所定時間静置することで、脂肪細胞が浮上して境界面が形成されると、液層の吸光度は低下する。したがって、これを検出することで、簡易に境界面の形成を判定することができる。
【発明の効果】
【００１１】
本発明によれば、消化後の混合液をサンプリングすることなく、簡易かつ迅速に消化の程度を判定することができるという効果を奏する。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】本発明の一実施形態に係る脂肪消化方法を示すフローチャートである。
【図２】図１の脂肪消化方法における境界判定ルーチンを示すフローチャートである。
【図３】図１の脂肪消化方法における境界判定のための容器、発光部および受光部の構成を示す模式的な斜視図である。
【図４】図１の脂肪消化方法の変形例を示すフローチャートである。
【図５】図１の脂肪消化方法の他の変形例を示すフローチャートである。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
本発明の一実施形態に係る細胞消化方法について、図面を参照して以下に説明する。
本実施形態に係る脂肪消化方法は、図１および図２のフローチャートに示されるように、攪拌ステップと、分離時間測定ステップと、判定ステップとを含んでいる。
【００１４】
攪拌ステップは、図示しないフィルタのみによって外気の流入が可能とされた密閉容器内に脂肪組織と消化酵素とを含む混合液を収容し、密閉容器自体を振動させることにより、内部に収容されている混合液を揺動させることにより行われる。密閉容器自体を振動させることの他、マグネティックスターラ等によって攪拌することにしてもよい。
【００１５】
ステップＳ１は、初期値設定であり、後述する繰り返し処理のカウンタを初期化している。
図１に示す例では、攪拌ステップは、１５分間攪拌するステップＳ２と、５分間攪拌するステップＳ３とに形式的に分割されているが、攪拌時間はステップＳ２，Ｓ３を連続して行う場合の２０分と、ステップＳ３のみを行う場合の５分になっている。
【００１６】
分離時間測定ステップは、図１に示す例では、境界判定ルーチンＳ４により行われる。境界判定ルーチンは、図２に示されるように、攪拌終了時点からの時間計測を開始し（ステップＳ４１）、脂肪層と液層との境界面を検出動作を行う（ステップＳ４２）。計測時間が３０秒を超えたか否かを判定し（ステップＳ４３）、超えている場合には処理を終了し、超えていない場合には、境界面が検出されたか否かを判定し（ステップＳ４４）、検出されない場合にはステップＳ４２を繰り返し、検出された場合には時間計測を終了する（ステップＳ４５）ようになっている。
ここでいう液層とは、脂肪由来細胞を含む細胞懸濁液からなる。脂肪由来細胞には、血管内皮細胞、線維芽細胞、造血幹細胞、血球系の細胞、脂肪由来幹細胞などが含まれる。ここで、幹細胞は、細胞治療などの目的で、脂肪組織から採取される細胞であり、多分化能、自己再生能を有する細胞を指す。
【００１７】
脂肪層と液層との間の境界面の検出は、図３に示されるように、透明な容器１の一部に上下方向に伸びる突起部２を設け、該突起部２を容器１の下部において挟む位置に発光部３と受光部４とを配置し、発光部３から発せられ、突起部２内の混合液Ａを通過した光を受光部４により検出することにより行われる。
【００１８】
攪拌ステップにおいて攪拌された直後においては、受光部４により受光される光の強度は、脂肪組織から単離された脂肪細胞等の浮遊によって低下するが、攪拌ステップを停止して静置することにより、脂肪層と液層との境界面の形成に伴って回復する。脂肪組織の吸光度は０．８程度、細胞懸濁液の吸光度は０．１程度であるため、例えば、閾値を０．２程度に設定し、静置後の細胞懸濁液の吸光度が０．２を下回った場合には、境界面が形成されたと簡易に判定することができる。
【００１９】
判定ステップは、境界判定ルーチンＳ４において計測された、攪拌停止から境界面が検出されるまでの時間が３０秒以下であるか否かを判定し（ステップＳ５）、３０秒を超えている場合には、十分に消化が行われたものと判定して、５分間の静置（ステップＳ６）の後に、容器の底面に設けた排出口（図示略）から容器の下部の液層を排出することにより、脂肪由来細胞を含む細胞懸濁液を回収する（ステップＳ７）ようになっている。
【００２０】
攪拌停止から境界面が検出されるまでの時間が３０秒以下である場合には、判定が初回であるか否かが判定され（ステップＳ８）、初回である場合には、カウンタをｎ＝１にセットされ（ステップＳ９）、さらに、攪拌停止から境界面が検出されるまでの時間が１０秒以下であるか否かが判定される（ステップＳ１０）。２０分の攪拌後に、境界面が検出されるまでの時間が１０秒以下である場合には、全く消化が行われておらず、消化酵素が添加されていない可能性があるので、消化酵素を添加し（ステップＳ１１）、ステップＳ２からの工程を繰り返すようになっている。
【００２１】
境界面が検出されるまでの時間が１０秒を超える場合には、消化は徐々に行われているので、ステップＳ３からの工程を繰り返す。カウンタがＮ＝５となる前に境界面が検出されるまでの時間が３０秒を超えるようになった場合には、５分間の静置（ステップＳ６）後、細胞懸濁液の回収が行われる（ステップＳ７）。境界面が検出されるまでの時間が３０秒を超えない場合には、カウンタがＮ＝５となるまでは、カウンタをインクリメントしながら（ステップＳ１２，Ｓ１３）、ステップＳ３からの工程を繰り返し、カウンタがＮ＝５となったときには、エラーを報知して（ステップＳ１４）、処理を終了するようになっている。
【００２２】
このように、本実施形態に係る脂肪処理方法によれば、脂肪層と液層との境界面が検出されるまでの時間によって消化状態を判定するので、攪拌ステップ後に、脂肪組織と消化酵素液とを含む混合液をサンプリングして細胞数を数える必要がなく、簡易かつ迅速に消化を判定することができる。また、サンプリングせずに済むので、混合液への細菌、塵埃の混入を防止することができる。
【００２３】
なお、本実施形態においては、酵素添加忘れによる消化不良を解消するために、初回だけ酵素添加を行う処理と、５分間の攪拌と境界判定とを５回まで繰り返す処理とを行う場合について説明したが、これに限定されるものではなく、図４に示されるように、初回の酵素添加を行うことなく５分間の攪拌と境界判定とを５回まで繰り返す処理のみ、あるいは、図５に示されるように、酵素添加忘れによる不良解消を解消する処理のみを行うことにしてもよい。
【符号の説明】
【００２４】
Ｓ２，Ｓ３  攪拌ステップ
Ｓ４  境界判定ルーチン（分離時間測定ステップ）
Ｓ５  判定ステップ
Ａ  混合液
Ｂ  脂肪層
Ｃ  液層
Ｄ  境界面
１  容器
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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