(57)【要約】【課題】ポリマー微粒子を提供する。【解決手段】Ｏ／ＷエマルジョンまたはＳ／Ｏ／Ｗエマルジョンから油相分を除去する工程を含むポリマー微粒子の製造方法であって、除去する油相分が水非混和性のエステル系または炭酸系有機溶媒であり、Ｏ／ＷエマルジョンまたはＳ／Ｏ／Ｗエマルジョン調製時におけるＯ／Ｗ体積比が０．２５〜３である、ポリマー微粒子の製造方法。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｏ／ＷエマルジョンまたはＳ／Ｏ／Ｗエマルジョンから油相分を除去する工程を含むポリマー微粒子の製造方法であって、除去する油相分が水非混和性のエステル系または炭酸系有機溶媒であり、Ｏ／ＷエマルジョンまたはＳ／Ｏ／Ｗエマルジョン調製時におけるＯ／Ｗ体積比が０．２５〜３である、ポリマー微粒子の製造方法。
【請求項２】
前記ポリマーが生分解性ポリマーまたは生分解性ポリマーを構成成分として含む両親媒性ポリマーである、請求項１に記載のポリマー微粒子の製造方法。
【請求項３】
前記両親媒性ポリマーが生分解性の疎水部を含む、請求項２に記載のポリマー微粒子の製造方法。
【請求項４】
前記Ｓ／Ｏ／Ｗエマルジョンの製造方法が、水相中に親水性物質を含有するＷ／Ｏエマルジョンを脱水して固形分を得る工程、該固形分を前記水非混和性のエステル系または炭酸系有機溶媒に分散させてＳ／Ｏサスペンションを得る工程および該Ｓ／Ｏサスペンションを水系溶媒に乳化する工程を含む、請求項１〜３のいずれかに記載のポリマー微粒子の製造方法。
【請求項５】
前記水非混和性のエステル系有機溶媒が酢酸エチルである、請求項１〜４のいずれかに記載のポリマー微粒子の製造方法。
【請求項６】
前記水非混和性の炭酸系有機溶媒が炭酸ジメチルである、請求項１〜４のいずれかに記載のポリマー微粒子の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、Ｏ／ＷエマルジョンまたはＳ／Ｏ／Ｗエマルジョンからポリマー微粒子を製造する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
ポリマーを基材とした微粒子に薬剤を封入した微粒子製剤を薬剤のキャリアとして用いることが検討されており、薬剤を封入したポリマー微粒子を製造する方法としては、ポリマーを溶解させた揮発性の有機溶媒を油相として水相中に乳化させることでＯ／Ｗエマルジョンを形成し、該エマルジョンから有機溶媒を除去することでポリマー微粒子を得る方法が知られている。
【０００３】
具体的には、特許文献１では生分解性のポリマーであるポリ（乳酸―グリコール酸）共重合体を用いて、ポリペプチドを内包したポリマー微粒子の製造が開示されている。ここで、ポリマーを溶解させるための有機溶媒としてはジクロロメタンが例示されており、タービン型ミキサーを用いてＯ／Ｗエマルジョンの形成を行った後に液中乾燥法により粒子の製造が行われている。しかしながら、この方法により作成される粒子の平均粒子径について具体的な記載はない。
【０００４】
非特許文献１では、特許文献１と同様の方法によってポリ乳酸とポリエチレングリコールからなる両親媒性のブロックポリマーを用いてタンパク質を内包した粒子を製造する方法が開示されている。さらに非特許文献１では粒子の製造条件と平均粒子径の関係が検討されており、平均粒子径が１〜３μｍの間で変化することが示されている。
【０００５】
特許文献２では、両親媒性ポリマーを用いてタンパク質を効率的に内包できるポリマー微粒子の製造方法が開示されている。この文献では、両親媒性ポリマーを用いてＷ／Ｏエマルジョンを形成させることを特徴とし、これを凍結乾燥して得られる微粒子を含むＳ／Ｏ／Ｗエマルジョンからのポリマー微粒子の製造方法が開示されている。しかしながら、本方法により製造されるポリマー微粒子の平均粒子径に関して具体的に言及されていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特開平８−３０５５号公報
【特許文献２】特開２００８−８８１５８号公報
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】インターナショナル・ジャーナル・オブ・ファーマシューティクス（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊｏｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ）１９９９年、第 １７８巻 ｐ．２４５−２５５
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
薬剤を封入したポリマー微粒子に求められる粒子の平均粒子径は、その目的により大きく異なるが、皮膚への浸潤や組織細胞内への輸送を目的とする場合には、ポリマー微粒子の粒子径は１μｍ未満であることが求められる。しかし、従来のエマルジョンを介するポリマー微粒子の製造方法においては、平均粒子径が１μｍ未満のポリマー微粒子を製造することは困難である。したがって、本発明は平均粒子径が１μｍ未満のポリマー微粒子の製造方法を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者らは、上記の課題を解決するために鋭意研究を行った結果、以下の（１）〜（６）で構成される本発明を完成するに至った。
【００１０】
（１）Ｏ／ＷエマルジョンまたはＳ／Ｏ／Ｗエマルジョンから油相分を除去する工程を含むポリマー微粒子の製造方法であって、除去する油相分が水非混和性のエステル系または炭酸系有機溶媒であり、Ｏ／ＷエマルジョンまたはＳ／Ｏ／Ｗエマルジョン調製時におけるＯ／Ｗ体積比が０．２５〜３である、ポリマー微粒子の製造方法。
【００１１】
（２）前記ポリマーが生分解性ポリマーまたは生分解性ポリマーを構成成分として含む両親媒性ポリマーである、（１）に記載のポリマー微粒子の製造方法。
【００１２】
（３）前記両親媒性ポリマーが生分解性の疎水部を含む、（２）に記載のポリマー微粒子の製造方法。
【００１３】
（４）前記Ｓ／Ｏ／Ｗエマルジョンの製造方法が、水相中に親水性物質を含有するＷ／Ｏエマルジョンを脱水して固形分を得る工程、該固形分を前記水非混和性のエステル系または炭酸系有機溶媒に分散させてＳ／Ｏサスペンションを得る工程および該Ｓ／Ｏサスペンションを水系溶媒に乳化する工程を含む、（１）〜（３）のいずれかに記載のポリマー微粒子の製造方法。
【００１４】
（５）前記水非混和性のエステル系有機溶媒が酢酸エチルである、（１）〜（４）のいずれかに記載のポリマー微粒子の製造方法。
【００１５】
（６）前記水非混和性の炭酸系有機溶媒が炭酸ジメチルである、（１）〜（４）のいずれかに記載のポリマー微粒子の製造方法。
【発明の効果】
【００１６】
本発明により、薬剤キャリアとして適した、平均粒子径が１μｍ未満のポリマー微粒子を製造することができる。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
本発明で製造されるポリマー微粒子を構成するポリマーについては特に制限はないが、ポリマー微粒子を薬剤のキャリアとして使用する場合、生分解性であることが好ましい。また、両親媒性ポリマーを使用する場合には容易にＯ／ＷエマルジョンまたはＷ／Ｏエマルジョンを形成することができるため、好ましい。したがって、本発明で使用されるポリマーとしては、両親媒性ポリマーであって、その構成成分に生分解性ポリマーを含むポリマーがより好ましく使用される。さらに、両親媒性ポリマーを使用する場合においては、生分解性の疎水部を含む両親媒性ポリマーがさらに好ましく使用される。
【００１８】
前記ポリマー微粒子を構成する生分解性ポリマーとしては、ポリグリコール酸、ポリ乳酸、ポリ（乳酸−グリコール酸）の共重合体、ポリ（２−ヒドロキシ酪酸）、ポリ（２−ヒドロキシ吉草酸）、ポリ（２−ヒドロキシカプロン酸）、ポリ（２−ヒドロキシカプリン酸）、ポリ（リンゴ酸）またはこれらの高分子化合物の誘導体ならびに共重合体が好ましい例として挙げられるが、ポリ（乳酸−グリコール酸）の共重合体が好ましい。
【００１９】
また、前記ポリマー微粒子を構成する両親媒性ポリマーとしては、前記生分解性ポリマーを疎水部とし、親水部として生体適合性のポリマーを含むものが好ましい例として挙げられる。疎水部を構成する生分解性ポリマーとしてはポリグリコール酸、ポリ乳酸、ポリ（乳酸−グリコール酸）の共重合体、ポリ（２−ヒドロキシ酪酸）、ポリ（２−ヒドロキシ吉草酸）、ポリ（２−ヒドロキシカプロン酸）またはポリ（２−ヒドロキシカプリン酸）が挙げられ、ポリ（乳酸−グリコール酸）の共重合体であることが好ましい。また、親水部を構成する生体適合性のポリマーとしては、多糖（セルロース、キチン、キトサン、ジェランガム、アルギン酸、ヒアルロン酸、プルランもしくはデキストラン）、ポリプロピレングリコールまたはポリエチレングリコールが挙げられ、デキストランまたはポリエチレングリコールであることが好ましい。
【００２０】
本発明はＯ／ＷエマルジョンまたはＳ／Ｏ／Ｗエマルジョンから前記ポリマーを構成成分とするポリマー微粒子を製造することを特徴としている。Ｏ／Ｗエマルジョンとは、前記ポリマーを溶解させた油相を水相中に乳化させた状態である。同様に、Ｓ／Ｏ／Ｗエマルジョンとは、前記ポリマーを溶解させ、かつ固体成分を含有する油相を水相中に乳化させた状態である。
【００２１】
まず、Ｏ／Ｗエマルジョンからポリマー微粒子を製造する方法について説明する。
【００２２】
Ｏ／Ｗエマルジョンの油相として用いられる溶媒としては、水非混和性有機溶媒であって、エステル系または炭酸系の有機溶媒が使用される。エステル系の有機溶媒とは分子内にエステル骨格をもつ有機溶媒であり、酢酸メチル、酢酸エチル、酢酸プロピルまたは酢酸ブチルが挙げられるが、酢酸エチルが好ましい。炭酸系の有機溶媒とは分子内に炭酸骨格をもつ有機溶媒であり、炭酸ジメチル、炭酸メチルエチルまたは炭酸ジエチルが挙げられるが、炭酸ジメチルが好ましい。
【００２３】
Ｏ／Ｗエマルジョンの水相には、分散安定剤が含まれている方が好ましい。分散安定剤は、エマルジョンの水−油界面を安定化するものであることが好ましく、両親媒性化合物または親水性ポリマーであることがより好ましく、ポリエチレンオキシド−ポリプロピレンオキシド−ポリエチレンオキシドのブロックポリマー（例えばＢＡＳＦから市販されるPluronic（登録商標））がさらに好ましく使用される。
【００２４】
また本発明においては、Ｏ／ＷエマルジョンのＯ／Ｗ体積比を０．２５〜３、好ましくは０．２５〜０．５に調節することを特徴としている。Ｏ／Ｗ体積比とはポリマーを含む油相と水相の乳化前の体積比であり、Ｏ／ＷエマルジョンにおけるＯ／Ｗ体積比とは、ポリマーを水非混和性有機溶媒に溶解させたポリマー溶液（油相）と水相の体積比である。Ｏ／Ｗ体積比が０．２５未満である場合、得られるポリマー微粒子の平均粒子径が１μｍを上回るため好ましくない。また、Ｏ／Ｗ体積比が３を上回る場合、安定なＯ／Ｗエマルジョンが得られないため好ましくない。
【００２５】
Ｏ／Ｗエマルジョンの調製方法としては、まず、ポリマーを水非混和性有機溶媒に溶解させる。次に、ポリマー溶液（油相）と水相を、Ｏ／Ｗ体積比が０．２５〜３になるように配合し、高圧ホモジナイザー、高速ミキサーなどにより攪拌することにより、安定なＯ／Ｗエマルジョンが形成される。なお、本発明により得られるポリマー微粒子は、薬剤のキャリアとして使用されうるが、Ｏ／Ｗエマルジョンから薬剤のキャリアとしてのポリマー微粒子を製造する場合においては、疎水性の薬剤をポリマー溶液にあらかじめ溶解させておけばよい。
【００２６】
Ｏ／Ｗエマルジョンから油相分を除去することで、水相にポリマー微粒子が分散したポリマー微粒子分散液が得られる。Ｏ／Ｗエマルジョンから油相分を除去してポリマー微粒子を得る方法としては、液中乾燥、凍結乾燥、噴霧乾燥等が挙げられるが、薬剤キャリアとしての性能（例えば薬剤の徐放性）を保持する観点から液中乾燥が好ましく適用される。
【００２７】
次に、Ｓ／Ｏ／Ｗエマルジョンからポリマー微粒子を製造する方法について説明する。
【００２８】
Ｓ／Ｏ／Ｗエマルジョンは、Ｓ／Ｏ分散液（Ｓ／Ｏサスペンション）を水系溶媒（水相）に乳化させることで得られる。本発明においては、Ｓ／Ｏサスペンションを調製する際の溶媒として、前記水非混和性有機溶媒であって、エステル系または炭酸系有機溶媒を使用することを特徴としている。エステル系または炭酸系有機溶媒を使用しない場合、得られるポリマー微粒子の平均粒子径が１μｍを上回るため好ましくない。
【００２９】
Ｓ／Ｏサスペンションを調製する方法として、まず、ポリマー溶液（油相）と、Ｓ／Ｏ／Ｗエマルジョン中の固体成分の構成成分を水系溶媒に溶解させた溶液（水相）を混合していったんＷ／Ｏエマルジョンを調製し、Ｗ／Ｏエマルジョンを脱水することでＳ／Ｏ分散液を調製することが好ましい。この場合、水系溶媒に溶解させるＳ／Ｏ／Ｗエマルジョンの固体成分の構成成分はＷ／Ｏエマルジョンの水相中に溶解させる必要があることから、親水性物質であることが好ましい。
【００３０】
Ｗ／Ｏエマルジョンを調製する工程で油相として使用される溶媒としては、凍結乾燥等により揮散除去できるような水非混和性有機溶媒であれば特に制限はないが、前記エステル系または炭酸系の有機溶媒であることが好ましい。また、Ｗ／Ｏエマルジョンの水相としては、前記Ｏ／Ｗエマルジョンの水相で使用される水系溶媒が好ましく用いられる。なお、本発明により得られるポリマー微粒子は薬剤のキャリアとして使用されうるが、Ｓ／Ｏ／Ｗエマルジョンから薬剤のキャリアとしてのポリマー微粒子を製造する場合においては、Ｓ／Ｏ／Ｗエマルジョンの固体成分の構成成分として、親水性の薬剤をＷ／Ｏエマルジョンの水相にあらかじめ溶解させておけばよい。
【００３１】
Ｗ／Ｏエマルジョンは、水相を油相に添加し、Ｏ／Ｗエマルジョン調製時と同様に攪拌することで形成される。水相と油相の体積比（Ｗ／Ｏ体積比）は、好ましくは０．００１〜２であり、より好ましくは０．０１〜１である。Ｗ／Ｏ体積比を左記の範囲内に設定することで、安定したＷ／Ｏエマルジョンを調製することができる。
【００３２】
前記の通り調製されたＷ／Ｏエマルジョンを脱水して、Ｓ／Ｏ分散液（Ｓ／Ｏサスペンション）を調製する。Ｗ／Ｏエマルジョンを脱水してＳ／Ｏサスペンションを調製する方法としては、Ｗ／Ｏエマルジョンから水相および油相を除去して固形分を調製し、該固形分を油相に再分散させることが好ましい。Ｗ／Ｏエマルジョンから水相および油相を除去する方法としては、加熱、減圧乾燥、透析、凍結乾燥、遠心操作、濾過、再沈殿および、それらの組み合わせが挙げられるが、凍結乾燥は、Ｗ／Ｏエマルジョン中の粒子の合一などによる構造変化が少なく、また、親水性物質の高温による変性を回避しうるので、好ましい。
【００３３】
前記の通り調製されたＳ／Ｏサスペンションを水系溶媒に分散させることにより、Ｓ／Ｏ／Ｗエマルジョンが得られる。ここでいう水系溶媒としては、Ｏ／Ｗエマルジョンの水相で使用されるものが好ましく用いられる。なお、本発明においてはＳ／Ｏ／Ｗエマルジョンを調製時のＳ／Ｏサスペンション（油相）と水系溶媒（水相）の体積比（Ｏ／Ｗ体積比）を、Ｏ／ＷエマルジョンでのＯ／Ｗ体積比と同様に０．２５〜３、好ましくは０．２５〜０．５に調製することを特徴としている。Ｏ／Ｗ体積比が０．２５未満である場合、得られるポリマー微粒子の平均粒子径が１μｍを上回るため好ましくない。また、Ｏ／Ｗ体積比が３を上回る場合、安定なＳ／Ｏ／Ｗが得られないため好ましくない。
【００３４】
Ｓ／Ｏ／Ｗエマルジョンから油相分を除去し、水相にポリマー微粒子が分散したポリマー微粒子分散液が得られる。Ｓ／Ｏ／Ｗエマルジョンから油相分を除去してポリマー微粒子を得る方法としては、液中乾燥、凍結乾燥、噴霧乾燥等が挙げられるが、薬剤キャリアとしての性能（例えば薬剤の徐放性）を保持する観点から液中乾燥が好ましく適用される。
【実施例】
【００３５】
参考例１  ポリエチレングリコールおよびポリ（乳酸−グリコール酸）共重合体のブロックポリマーの合成
ポリエチレングリコールモノメチルエーテル（日本油脂製、ＳＵＮＢＲＩＧＨＴ  ＭＥＨ−２０Ｈ、数平均分子量５１２８、Ｍｗ／Ｍｎ＝１．０２）（０．３ｇ）、（ＤＬ）−ラクチド（２．１６ｇ）とグリコリド（１．７４ｇ）を混合し、１４０℃に加熱した。２０分攪拌後、オクチル酸すず（II）（ポリエチレングリコールモノメチルエーテルに対して０．０５重量％）を加え、１８０℃で３時間攪拌した。反応液を室温に戻した後、クロロホルム（約１００ｍｇ／ｍｌ濃度になるよう）に溶解し、０℃に冷却したジエチルエーテルで再沈殿精製し、得られた固体を濾別、減圧乾燥することでポリエチレングリコールおよびポリ（乳酸−グリコール酸）共重合体のブロックポリマーを白色固体として得た。
【００３６】
参考例２  デキストランおよびポリ（乳酸−グリコール酸）共重合体のグラフトポリマーの合成
デキストラン（ナカライテスク株式会社、ナカライ規格特級適合品、数平均分子量１３０００、５．０ｇ）をホルムアミド（１００ｍｌ）に加え、８０℃に加熱した。この溶液に１，１，１，３，３，３−ヘキサメチルジシラザン（１００ｍｌ）を２０分掛けて滴下した。滴下終了後、８０℃で２時間攪拌した。反応終了後、反応溶液を室温に戻し、分液漏斗で２層を分離した。上の層を減圧下濃縮した後、メタノール（３００ｍｌ）を加え、得られた固体をろ過、乾燥し、ＴＭＳ−デキストラン（１１．４ｇ）を白色固体として得た。ＴＭＳ−デキストランとｔｅｒｔ−ブトキシカリウム（３５ｍｇ）を減圧下１時間乾燥後、テトラヒドロフラン（１０ｍｌ）を加え、１時間室温で攪拌した。この溶液に（ＤＬ）−ラクチド（１．１２ｇ）とグリコリド（０．９ｇ）のテトラヒドロフラン（１５ｍｌ）溶液を滴下し、５分間攪拌した。反応終了後、溶媒を減圧下濃縮し、クロロホルム−メタノール系で再沈殿精製を行うことによってＴＭＳ−デキストランおよびポリ（乳酸−グリコール酸）共重合体のグラフトポリマー（１．９６ｇ）を白色固体として得た。ＴＭＳ−デキストラン−ＰＬＧＡ（１．９６ｇ）のクロロホルム（１４ｍｌ）溶液に、メタノール（６．３ｍｌ）と１２Ｎ塩酸（０．７ｍｌ）を加え、 室温で３０分間攪拌した。溶媒を減圧下留去後、残渣をクロロホルム（１０ｍｌ）に溶解し、０℃に冷却したジエチルエーテルに滴下することで生成物を析出させた。析出物をろ別後、減圧下濃縮しデキストランおよびポリ（乳酸−グリコール酸）共重合体のグラフトポリマー（１．２５ｇ）を得た。
【００３７】
実施例１  炭酸ジメチルを用いたポリ（乳酸−グリコール酸）共重合体からなる微粒子の製造
＜方法＞
ポリ（乳酸−グリコール酸）共重合体（シグマ社製（Ｐ２１９１）、平均分子量  ４０，０００−７５，０００、乳酸／グリコール酸比＝１／１） ５ｍｇを炭酸ジメチル５０μＬ、２００μＬもしくは５００μＬに溶解させた。該ポリマー溶液を１０％ Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｆ６８（ＢＡＳＦ社製）水溶液 ２ｍＬの入った共栓付き試験管に滴下し、ｖｏｒｔｅｘ ｍｉｘｅｒで３０秒間攪拌することでＯ／Ｗエマルジョン溶液を得た。該Ｏ／Ｗエマルジョン溶液を３７℃で減圧留去し炭酸ジメチルを除去することで、ポリマー微粒子分散液とした。該ポリマー微粒子分散液を液体窒素で予備凍結した後に１２時間凍結乾燥することで、ポリマー微粒子粉末を得た。
【００３８】
＜結果＞
該ポリマー微粒子の平均粒子径を走査型電子顕微鏡を用いて算出した結果、炭酸ジメチル５０μＬを用いた場合には１８．０μｍに、炭酸ジメチル２００μＬを用いた場合には３．５３μｍの粒子に、炭酸ジメチル５００μＬを用いた場合には４３３ｎｍとなった。すなわち、ポリマー微粒子の平均粒子径は、Ｏ／Ｗ体積比が０．２５となる場合には１μｍ未満であったが、Ｏ／Ｗ体積比が０．２５を下回る場合は１μｍを上回った（表１）。
【００３９】
実施例２  炭酸ジメチルを用いたポリエチレングリコールおよびポリ（乳酸−グリコール酸）共重合体のブロックポリマーからなる微粒子の製造
＜方法＞
参考例１のポリエチレングリコールおよびポリ（乳酸−グリコール酸）共重合体のブロックポリマー５ｍｇを炭酸ジメチル１００μＬに溶解し、５０ｍｇ／ｍＬのポリマー溶液を調製した。該ポリマー溶液にｔｅｒｔ−ブタノール２０μＬを添加後、１ｍｇ／ｍＬの蛍光標識デキストラン水溶液５０μＬを滴下し、ｖｏｒｔｅｘ ｍｉｘｅｒで１０秒間攪拌してＷ／Ｏエマルジョンを製造した。該Ｗ／Ｏエマルジョンを液体窒素で予備凍結した後、凍結乾燥機にて１２時間凍結乾燥した。得られた固形分を炭酸ジメチル５０μＬ、２００μＬもしくは５００μＬに分散させ、Ｓ／Ｏサスペンションを調製した。該Ｓ／Ｏサスペンションを１０％ Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｆ６８（ＢＡＳＦ社製）水溶液 ２ｍＬの入った共栓付き試験管に滴下し、ｖｏｒｔｅｘ  ｍｉｘｅｒで３０秒間攪拌することでＳ／Ｏ／Ｗエマルジョンを調製した。該Ｓ／Ｏ／Ｗエマルジョンから液中乾燥により炭酸ジメチルを除去して、ポリマー微粒子分散液とした。該ポリマー微粒子分散液を液体窒素で予備凍結した後に１２時間凍結乾燥することで、ポリマー微粒子粉末を得た。
【００４０】
＜結果＞
該ポリマー微粒子の平均粒子径を走査型電子顕微鏡を用いて算出した結果、炭酸ジメチル５０μＬを用いた場合には１２．１μｍに、炭酸ジメチル２００μＬを用いた場合には２．７６μｍに、炭酸ジメチル５００μＬを用いた場合には５５４ｎｍとなった。すなわち、ポリマー微粒子の平均粒子径は、Ｏ／Ｗ体積比が０．２５となる場合には１μｍ未満であったが、Ｏ／Ｗ体積比が０．２５を下回る場合は１μｍを上回った（表１）。
【００４１】
実施例３  炭酸ジメチルを用いたデキストランおよびポリ（乳酸−グリコール酸）共重合体のグラフトポリマーからなる微粒子の製造
＜方法＞
参考例２のデキストランおよびポリ（乳酸−グリコール酸）共重合体のグラフトポリマー５ｍｇを炭酸ジメチル１００μＬに溶解し、５０ｍｇ／ｍＬのポリマー溶液を調製した。該ポリマー溶液にｔｅｒｔ−ブタノール２０μＬを添加後、１ｍｇ／ｍＬの蛍光標識デキストラン水溶液５０μＬを滴下し、ｖｏｒｔｅｘ ｍｉｘｅｒで１０秒間攪拌してＷ／Ｏエマルジョンを製造した。該Ｗ／Ｏエマルジョンを液体窒素で予備凍結した後、凍結乾燥機にて12時間凍結乾燥した。得られた固形分を炭酸ジメチル５０μＬ、１００μＬ、２００μＬ、３５０μＬ、５００μＬ、１ｍＬ、２ｍＬまたは６ｍＬに分散させ、Ｓ／Ｏサスペンションを調製した。該Ｓ／Ｏサスペンションを１０％ Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｆ６８（ＢＡＳＦ社製）水溶液 ２ｍＬの入った共栓付き試験管に滴下し、ｖｏｒｔｅｘ  ｍｉｘｅｒで３０秒間攪拌することでＳ／Ｏ／Ｗエマルジョンを調製した。該Ｓ／Ｏ／Ｗエマルジョンから液中乾燥により炭酸ジメチルを除去して、ポリマー微粒子分散液とした。該ポリマー微粒子分散液を液体窒素で予備凍結した後に１２時間凍結乾燥することで、ポリマー微粒子粉末を得た。
【００４２】
＜結果＞
該ポリマー微粒子を走査型電子顕微鏡を用いて平均粒子径を算出した結果、炭酸ジメチル５０μＬを用いた場合には１１．６μｍに、炭酸ジメチル１００μＬを用いた場合には８．４５μｍに、炭酸ジメチル２００μＬを用いた場合には４．９４μｍに、炭酸ジメチル３５０μＬを用いた場合には１．５６μｍに、炭酸ジメチル５００μＬを用いた場合には４１０ｎｍに、炭酸ジメチル１ｍＬを用いた場合には２９０ｎｍに、炭酸ジメチル２ｍＬを用いた場合には４４０ｎｍに、炭酸ジメチル６ｍＬを用いた場合には２９０ｎｍと算出された。すなわち、ポリマー微粒子の平均粒子径は、Ｏ／Ｗ体積比が０．２５以上となるとなる場合には１μｍ未満であったが、Ｏ／Ｗ体積比が０．２５を下回る場合は１μｍを上回った（表１）。
【００４３】
実施例４  酢酸エチルを用いたデキストランおよびポリ（乳酸−グリコール酸）共重合体のグラフトポリマーからなる微粒子の製造
＜方法＞
参考例２のデキストランおよびポリ（乳酸−グリコール酸）共重合体のグラフトポリマー５ｍｇを炭酸ジメチル１００μＬに溶解し、５０ｍｇ／ｍＬのポリマー溶液を調製した。該ポリマー溶液にｔｅｒｔ−ブタノール２０μＬを添加後、１ｍｇ／ｍＬの蛍光標識デキストラン水溶液５０μＬを滴下しｖｏｒｔｅｘ ｍｉｘｅｒで１０秒間攪拌してＷ／Ｏエマルジョンを製造した。該Ｗ／Ｏエマルジョンを液体窒素で予備凍結した後、凍結乾燥機にて１２時間凍結乾燥した。得られた固形分を酢酸エチル５０μＬ、２００μＬもしくは５００μＬに分散させ、Ｓ／Ｏサスペンションを調製した。該Ｓ／Ｏサスペンションを１０％ Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｆ６８（ＢＡＳＦ社製）水溶液 ２ｍＬの入った共栓付き試験管に滴下し、ｖｏｒｔｅｘ  ｍｉｘｅｒで３０秒間攪拌することでＳ／Ｏ／Ｗエマルジョンを調製した。該Ｓ／Ｏ／Ｗエマルジョンから液中乾燥により酢酸エチルを除去して、ポリマー微粒子分散液とした。該ポリマー微粒子分散液を液体窒素で予備凍結した後に１２時間凍結乾燥することで、ポリマー微粒子粉末を得た。該ポリマー微粒子分散液を液体窒素で予備凍結した後に凍結乾燥することで、ポリマー微粒子粉末を得た。
【００４４】
＜結果＞
該ポリマー微粒子の平均粒子径を走査型電子顕微鏡を用いて算出した結果、酢酸エチル５０μＬを用いた場合には９．８μｍに、酢酸エチル２００μＬを用いた場合には５．９μｍに、酢酸エチル５００μＬを用いた場合には４３６ｎｍとなった。すなわち、ポリマー微粒子の平均粒子径は、Ｏ／Ｗ体積比が０．２５となる酢酸エチル５００μＬを用いた場合には１μｍ未満であったが、Ｏ／Ｗ体積比が０．２５を下回る場合は１μｍを上回った（表１）。
【００４５】
【表１】
2010265426.tif 000002
【００４６】
比較例１  クロロホルムを用いたデキストランおよびポリ（乳酸−グリコール酸）共重合体のグラフトポリマーからなる微粒子の製造
＜方法＞
デキストランおよびポリ（乳酸−グリコール酸)共重合体のグラフトポリマー５ｍｇを炭酸ジメチル１００μＬに溶解し、５０ｍｇ／ｍＬのポリマー溶液を調製した。該ポリマー溶液にｔｅｒｔ−ブタノール２０μＬを添加後、１ｍｇ／ｍＬの蛍光標識デキストラン水溶液５０μＬを滴下し、ｖｏｒｔｅｘ ｍｉｘｅｒで１０秒間攪拌してＷ／Ｏエマルジョンを製造した。該Ｗ／Ｏエマルジョンを液体窒素で予備凍結した後、凍結乾燥機にて12時間凍結乾燥した。得られた固形分をクロロホルム５０μＬ、２００μＬもしくは５００μＬに分散させ、Ｓ／Ｏサスペンションを調製した。該Ｓ／Ｏサスペンションを１０％ Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｆ６８（ＢＡＳＦ社製）水溶液 ２ｍＬの入った共栓付き試験管に滴下し、ｖｏｒｔｅｘ  ｍｉｘｅｒで３０秒間攪拌することでＳ／Ｏ／Ｗエマルジョンを調製した。該Ｓ／Ｏ／Ｗエマルジョンから液中乾燥によりクロロホルムを除去して、ポリマー微粒子分散液とした。該ポリマー微粒子分散液を液体窒素で予備凍結した後に１２時間凍結乾燥することで、ポリマー微粒子粉末を得た。
【００４７】
＜結果＞
該ポリマー微粒子の平均粒子径を走査型電子顕微鏡を用いて算出した結果、クロロホルム５０μＬを用いた場合には１．２μｍに、クロロホルム２００μＬを用いた場合には１．２μｍに、クロロホルム５００μＬを用いた場合は１．１μｍであった。ポリマー微粒子の平均粒子径は、Ｏ／Ｗ体積比に関わらず１μｍを上回った。
【産業上の利用可能性】
【００４８】
本発明により得られるポリマー微粒子の応用分野は広く、多岐の利用が可能であるが、ポリマー微粒子に薬剤を内包させることにより、医薬品組成物として利用することができる。