(57)【要約】【課題】オリーブ果実エキス、該エキスを配合してなるヒト白血球エラスターゼ阻害剤及びオリーブ果実エキスの製造方法を提供する。【解決手段】本発明は、凍結後に粉砕されたオリーブ果実粕より抽出されたオリーブ果実抽出物と、１，３−ブチレングリコールと、水とを含むオリーブ果実エキスであって、前記オリーブ果実抽出物は、ポリフェノールとして、チロソール及びヒドロキシチロソールを含有することを特徴とするオリーブ果実エキスに関する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
凍結後に粉砕されたオリーブ果実粕より抽出されたオリーブ果実抽出物と、１，３−ブチレングリコールと、水とを含むオリーブ果実エキスであって、
前記オリーブ果実抽出物は、ポリフェノールとして、チロソール及びヒドロキシチロソールを含有することを特徴とするオリーブ果実エキス。
【請求項２】
前記オリーブ果実抽出物は、その他のポリフェノールをも含有し、ポリフェノールの総質量に基いて、それぞれ、チロソールの含有量は１．５ないし３．５質量％であり、ヒドロキシチロソールの含有量は０．１ないし１．０質量％であり、そして、オレウロペインの含有量は０．１質量％未満であることを特徴とする請求項１記載のオリーブ果実エキス。
【請求項３】
凍結後に粉砕されたオリーブ果実粕は、オリーブ果実を搾油し、続いて得られた果実粕を−１０℃以下の温度にて凍結し、そして得られた凍結粕を、粉砕片の最大長さが１ｍｍ以下となるまで粉砕することにより作られたものであることを特徴とする、請求項１又は２記載のオリーブ果実エキス。
【請求項４】
オリーブ果実の品種がミッション（Ｍｉｓｓｏｎ）である請求項３記載のオリーブ果実エキス。
【請求項５】
請求項１ないし４の何れか１項に記載のオリーブ果実エキスを配合してなるヒト白血球エラスターゼ阻害剤。
【請求項６】
凍結後に粉砕されたオリーブ果実粕を１，３−ブチレングリコールと水との混合液にて抽出する段階を含む、オリーブ果実エキスの製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、オリーブ果実エキス、該エキスを配合してなるヒト白血球エラスターゼ阻害剤及びオリーブ果実エキスの製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
オリーブは、地中海沿岸を原産地とするモクセイ科の植物で、古くから食用および搾油用として栽培されている植物である。オリーブの果実は、通常１０月頃から大きくなって淡緑色となり、紫紅色の斑点を帯びてくるとグリーンピクルスへの加工に適した時期となる。その後、１１月頃には全体が紫黒色を帯びた所謂ライブオリーブスとなり塩漬け加工に適したものとなる。１２月頃の熟したオリーブ果実は１５〜３０％程度の油分を含み、この時期のオリーブ果実からオリーブ油が搾油される。こうして得られるオリーブ果実およびオリーブ油には、動脈硬化、胃潰瘍および便秘の軽減、骨の強化、老化の防止、美肌作用等、様々な優れた効果があることが知られている。
【０００３】
なかんずくオリーブ油は、オレイン酸、プロビタミンＡ、ビタミンＢ、ビタミンＫ類、ポリフェノール類等の様々な有効成分を含有する植物油であって、健康状態の改善効果について最近注目されており、特に、ビタミンＫ類およびポリフェノール類に基く癌発生の抑制効果、プロビタミンＡ、ビタミンＤおよびビタミンＫに基く骨形成の促進効果が報告されている。また、オリーブ油には、肌荒れを軽減する、皮膚を健やかに保つ、皮膚に潤いを与える、皮膚を保護する、皮膚の乾燥を防ぐ等の美肌効果もあり、化粧品、外用薬等への配合がなされている。
【０００４】
また、オリーブ果実から得られるオリーブ果実抽出物としては、オリーブ植物の実および／または種子を水および／または有機溶媒で抽出して得られるものが知られている（例えば、特許文献１参照。）この抽出物は、活性酸素除去作用、メラニン生成抑制作用および腫瘍細胞増殖抑制・死滅作用を奏することが報告されており、また抽出に用いる溶媒は、得られる抽出物について人体への安全性を付与しかつその作用を増大する観点から、水とアルコールとの混合溶媒を用いることが望ましいとされている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開２００１−１８１１９７号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
上記したようにオリーブ果実や該果実の抽出物は、生体に有益な作用を奏する様々な有効成分を含有している。しかし、これらの作用は必ずしも十分なものとはいえなかった。
従って、本発明は、高い生理活性を有するオリーブ果実エキス、該エキスを配合してなるヒト白血球エラスターゼ阻害剤及びオリーブ果実エキスの製造方法の提供を課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者等は鋭意研究を行った結果、凍結後に粉砕されたオリーブ果実粕より抽出されたオリーブ果実抽出物と、１，３−ブチレングリコールと、水とを含むオリーブ果実エキスであって、特定のポリフェノールを含むオリーブ果実エキスが、優れたヒト白血球エラスターゼ阻害作用を示すことを見出した。また、オリーブ果実エキスが、凍結後に粉砕さ
れたオリーブ果実粕として、オリーブ果実を搾油し、続いて得られた果実粕を−１０℃以下の温度にて凍結し、そして得られた凍結粕を、粉砕片の最大長さが１ｍｍ以下となるまで粉砕することにより作られたものを用いた場合に、優れたヒト白血球エラスターゼ阻害作用を示すことも見出して、本発明を完成させた。
【０００８】
即ち、本発明は、
（１）凍結後に粉砕されたオリーブ果実粕より抽出されたオリーブ果実抽出物と、１，３−ブチレングリコールと、水とを含むオリーブ果実エキスであって、
前記オリーブ果実抽出物は、ポリフェノールとして、チロソール及びヒドロキシチロソールを含有することを特徴とするオリーブ果実エキス、
（２）前記オリーブ果実抽出物は、その他のポリフェノールをも含有し、ポリフェノールの総質量に基いて、それぞれ、チロソールの含有量は１．５ないし３．５質量％であり、ヒドロキシチロソールの含有量は０．１ないし１．０質量％であり、そして、オレウロペインの含有量は０．１質量％未満であることを特徴とする前記（１）記載のオリーブ果実エキス、
（３）凍結後に粉砕されたオリーブ果実粕は、オリーブ果実を搾油し、続いて得られた果実粕を−１０℃以下の温度にて凍結し、そして得られた凍結粕を、粉砕片の最大長さが１ｍｍ以下となるまで粉砕することにより作られたものであることを特徴とする、前記（１）又は（２）記載のオリーブ果実エキス、
（４）オリーブ果実の品種がミッション（Ｍｉｓｓｏｎ）である前記（３）記載のオリーブ果実エキス、
（５）前記（１）ないし（４）の何れか１つに記載のオリーブ果実エキスを配合してなるヒト白血球エラスターゼ阻害剤、
（６）凍結後に粉砕されたオリーブ果実粕を１，３−ブチレングリコールと水との混合液にて抽出する段階を含む、オリーブ果実エキスの製造方法、
に関するものである。
【発明を実施するための形態】
【０００９】
更に詳細に本発明を説明する。
本発明のオリーブ果実エキスは、凍結後に粉砕されたオリーブ果実粕より抽出されたオリーブ果実抽出物と、１，３−ブチレングリコールと、水とを含み、チロソールの含有量が前記抽出物中のポリフェノールの総質量に基づき、１．５ないし３．５質量％、ヒドロキシチロソールの含有量が前記抽出物中のポリフェノールの総質量に基づき、０．１ないし１．０質量％であり、オレウロペインの含有量が前記抽出物中のポリフェノールの総質量に基づき、０．１質量％未満であることを特徴とするものであるが、凍結後に粉砕されたオリーブ果実粕は、オリーブ果実を搾油し、続いて得られた果実粕を凍結し、そして得られた凍結粕を粉砕することにより作られる。
使用するオリーブ果実としては、例えばミッション（Ｍｉｓｓｏｎ）、マンザニロ（Ｍａｎｚａｎｉｌｌｏ）、ネバディロ・ブランコ（Ｎｅｖａｄｉｌｏ Ｂｌａｎｃｏ）、ピ
クアル（Ｐｉｃｕａｌ）、オヒブランカ（Ｈｏｊｉｂｌａｎｃａ）、アルベキナ（Ａｒｂｅｑｕｉｎａ）、コルニカブラ（Ｃｏｒｎｉｃａｂｒａ）マンザニリャ（Ｍａｎｚａｎｉｌｌａ）、ゴルダル（Ｇｏｒｄａｌ）、フラントイオ（Ｆｒａｎｔｏｉｏ）、モロイオロ（Ｍｏｒａｉｏｌｏ）、レッチーノ（Ｌｅｃｃｉｎｏ）、コラティーナ（Ｃｏｒａｔｉｎａ）、アスコラーナ・テレナ（Ａｓｃｏｌａｎａ Ｔｅｒｅｎａ）、オリヴェール（Ｏｌ
ｉｖｉｅｒｅ）、ＦＳ１７（フラントイストック１７）、ルッカ（Ｌｕｃｃａ）等が挙げられる。
好ましいオリーブ果実の品種としては、例えば、ミッション（Ｍｉｓｓｏｎ）が挙げられる。
凍結は、−１０℃以下の温度にて行うのが好ましい。
凍結粕は、粉砕片の最大長さが１ｍｍ以下となるまで粉砕するのが好ましい。
尚、凍結粕の粉砕は、食品分野で使用される通常の粉砕機を使用することができるが、粉砕中に熱がかからないものが好ましく、また、冷却しながら粉砕できる粉砕機を使用するのが好ましい。
【００１０】
抽出操作は、まず、上記凍結後に粉砕されたオリーブ果実粕を、抽出溶媒である１，３−ブチレングリコールと水との混合液とを抽出容器中に仕込む。
粉砕されたオリーブ果実粕は、凍結状態或いは解凍した状態のいずれの状態でも抽出操作に使用することができる。
【００１１】
抽出溶媒には、他の補助溶媒を全く含まない１００％１，３−ブチレングリコール溶媒を用いることができる。しかしながら、抽出溶媒を水と１，３−ブチレングリコールからなる混合溶媒とすることもできる。混合溶媒を採用する場合には、その濃度は例えば３０体積％である。
【００１２】
オリーブ果実粕と抽出溶媒を抽出容器に仕込んだ後、次いで抽出を行う。抽出は、抽出作用を促進するために室温よりもやや昇温して行うことができる、例えば抽出温度を５０〜６０℃とした場合、抽出時間は５時間程度となる。
【００１３】
抽出終了後、オリーブ果実粕と抽出液とを分離する。オリーブ果実粕の分離は濾過で行うことができる。得られた濾液は、その後の固形分分離に都合が良い場合には、全量を数倍程度に希釈してもよい。
【００１４】
次いで再度濾過を行い、抽出液中に含まれる固形分をさらに分離する。固形分分離に先立ち、珪藻土等の吸着材を濾過対象の液に添加して微細な固形分を吸着して分離するのが好ましい。吸着材の添加量は特に制限されないが、例えば濾過対象の液に対して１０体積％の量である。
【００１５】
こうして固形分を分離した後、得られた濾液を殺菌する。殺菌は通常の加熱殺菌で行うことができ、例えば８０〜９０℃で１時間程度保持する低温殺菌が好ましい。１００℃を超える温度を採用する高温殺菌は、殺菌時間を短くすることができるが、オリーブ果実粕が含有する有効成分の分解を引き起こすため好ましい方法でない。
【００１６】
殺菌済みの液を再度濾過することにより、オリーブ抽出物が得られる。この最終の濾過は、例えば０．５μｍカットオフの目が細かいフィルターを用いて行うのが好ましい。このような濾過により、オリーブ抽出物中に含まれる固形分の量を０．５％以下に低減することができる。
上記オリーブ抽出物は、ポリフェノールとして、チロソール及びヒドロキシチロソールを含有する。
また、上記オリーブ抽出物は、その他のポリフェノールをも含有し、ポリフェノールの総質量に基いて、それぞれ、チロソールの含有量は１．５ないし３．５質量％であり、ヒドロキシチロソールの含有量は０．１ないし１．０質量％であり、そして、オレウロペインの含有量は０．１質量％未満である。
上記で得られたオリーブ抽出物をそのまま或いは必要に応じて１，３−ブチレングリコールと水とで希釈することにより本発明のオリーブ果実エキスが製造される。
【００１７】
こうして製造される本発明のオリーブ果実エキスは、優れたヒト白血球エラスターゼ阻害作用を奏する。これらの作用について、以下に簡単に説明する。
【００１８】
・ヒト白血球エラスターゼ阻害作用
エラスチンは皮膚中に含まれる弾力組織であり、これが分解されると皮膚は次第に張り
と弾力性を失ってしまう。エラスチンの分解はエラスターゼにより行われ、またエラスターゼは加齢により、および紫外線等の外的、内的刺激により活性化する。従って、エラスチンの分解酵素であるエラスターゼの活性を阻害してエラスチンの分解を抑制することができれば、皮膚の弾力性をキープし張りと潤いのある肌を保つことができる。
また、ヒトにおけるエラスターゼによるエラスチン分解、コラーゲン繊維の分解および／またはプロテオグリカン分解の異常亢進に起因する疾患、例えば、肺気腫等の慢性閉塞性肺疾患、慢性関節リウマチ、アテローム性動脈硬化、成人呼吸窮迫症（ＡＲＤＳ）、糸球体腎炎、心筋梗塞、潰瘍性大腸炎、歯根膜病等の治療および／または予防にも有用である。
【００１９】
本発明のオリーブ果実エキスは、様々な剤形とすることができる。例えば、経口で摂取される食品、飲料、医薬品等に配合することができる。なかんずく、優秀な美肌作用を奏するので、直接皮膚に適用する外用薬、例えば軟膏、クリーム、乳液、懸濁液、溶液等に配合することが好ましい。これらへの配合量は、例えば１〜５０重量％である。
【実施例】
【００２０】
以下の例で本発明をより詳細に説明するが、これらの例は本発明をある特定の態様に制限することを意図しない。
【００２１】
実施例１ないし３：オリーブ果実エキスの製造
以下のようにして、オリーブ果実エキスを製造した。
仕込み：品種ミッション（Ｍｉｓｓｏｎ）のオリーブ果実を搾油した後のオリーブ果実粕１００ｇを食品用の冷凍機（−１５℃）にて凍結させた。得られたオリーブ凍結果実粕を食品用の粉砕機にて粉砕片の最大長さが１ｍｍ以下となるまで粉砕した。得られた粉砕品と、３０％１，３−ブチレングリコール水溶液１０００ｇを抽出容器に仕込んだ。
抽出：抽出容器を加熱して内部を５０〜６０℃に保った。この温度で５時間、攪拌しながら抽出を行った。
オリーブ果実粕分離：抽出終了後、オリーブ果実粕を除去し、３０％１，３−ブチレングリコール水溶液１０００ｇ添加して、抽出液を２倍に希釈した。
固形分分離：希釈液に珪藻土（ラジオライト＃２００）２００ｇを添加し、１時間攪拌して微細な固形物を吸着させた。その後、希釈液を濾過し、固形分および珪藻土を分離した。
殺菌：濾液を８０〜９０℃に加熱し、１時間、攪拌しながら加熱殺菌を行った。
最終濾過：殺菌後の濾液を、０．４５μｍカットオフのフィルターを用いて最終濾過した。
上記の手順により、固形分０．３８％を含むオリーブ果実エキス１５４１．２ｇを得た。
上記と同様の操作を行い、計３ロットのオリーブ果実エキスを製造した。
以下に製造した３ロットの定量結果を纏めた表を記載した。
尚、ポリフェノール量（総量）の測定は、フォリン−チオカルト法を用い、オレウロペイン、ヒドロキシチロソール及びチロソール量はＨＰＬＣ法により決定した。
【表１】
2010265183.tif 000002
【００２２】
試験例１：エラスターゼ活性阻害作用の評価
実施例１で得たオリーブ果実エキスの代わりに、抽出に３０％１，３−ブチレングリコール水溶液でなく水を用いた以外は実施例１と全く同様な工程で得たオリーブ果実水抽出物について、そのエラスターゼ活性阻害作用を評価した。抽出に水を用いた理由は、試料がアルコールを含む場合、エラスターゼ活性の測定が不可能だからである。
オリーブ果実水抽出物５０μＬ、１２μｇ／ｍＬのヒト白血球由来エラスターゼ（ＥＬＡＳＴＩＮ ＰＲＯＤＵＣＴ ＣＯ． ＩＮＣ製）２５μＬ、および８ｍＭに調製したメト
キシ−スクシニル−アラニル−アラニル−プロピルバリン−ｐ−ニトロアニリド２５μＬを混和し、３７℃で２０分間反応させた。反応後の溶液について４０５ｎｍの吸光度を測定し、生成したニトロアニリンを定量した。
結果として、３７．９％のヒト白血球エラスターゼ活性阻害能を示した。
水抽出物について得られた結果はそれ自体良好なものである。しかしながら、エラスターゼ活性阻害能を有する物質はペプチン等の多糖類であることが従来技術で知られており、また多糖類は一般にエタノールよりも水および１，３−ブチレングリコールを用いた方が効率良く抽出し得ることも知られている。従って、実施例１のオリーブ果実エキスは、本試験例で試験した水抽出物と同程度またはむしろそれよりも高く、エタノール抽出物よりも格段に優れたエラスターゼ活性を奏するものと予測される。
【００２３】
試験例２：オリーブ果実エキス配合ハンドクリームの製造
以下の基本成分に加え、実施例１のオリーブ果実エキスをその他の成分の合計に対して３重量％配合して、ハンドクリームを得た。
基本成分：水、ミネラルオイル、ワセリン、グリセリン、水添ポリイソブテン、マイクロクリスタリンワックス、シクロメチコン、ラノリンアルコール、パラフィン、スクワラン、ホホバ油、オレイン酸デシル、オクチルドデカノール、ジステアリン酸アルミニウム、ステアリン酸マグネシウム、硫酸マグネシウム、クエン酸、安息香酸塩、トコフェロール、ブチルヒドロキシアニソール、ジブチルヒドロキシトルエン、香料。
比較として、搾油後のオリーブ果実粕１００ｇを凍結後に粉砕した粉砕品の代わりに、凍結させたオリーブ果実１００ｇを用いた以外は、実施例１と同様の操作を行って、オリーブ果実エキスを得、上述と同様の配合のハンドクリームを製造した。
こうして製造したハンドクリームおよび比較のハンドクリームを被験者の皮膚に１日１回塗布し、１０日後の塗布部の変化を潤い、張りおよび艶の３項目について観察した。
結果を表２に示す。表２の結果は、それぞれの項目について改善された被験者の数を示す。
【表２】
2010265183.tif 000003
表２から解るように、本発明のオリーブ果実エキスを配合したハンドクリームは、比較のハンドクリームを越える著しい美肌作用を奏した。
【００２４】
試験例３：オリーブ果実エキス配合ボディーソープの製造
以下の基本成分に加え、実施例１のオリーブ果実エキスをその他の成分の合計に対して２重量％配合して、ボディーソープを得た。
基本成分：
ラウリル硫酸アンモニウム ８％
ポリオキシエチレンラウリルエーテル硫酸ナトリウム ２％
椰子油脂肪酸アミドプロピルベタイン ７％
椰子油脂肪酸モノエタノールアミド ４％
エデト酸２ナトリウム ０．２％
安息香酸ナトリウム ０．２％
クエン酸 ０．２％
水 残部
こうして製造したボディーソープおよび試験例２と同様にして得た比較のオリーブ果実エキスを用いた同一の組成を有する比較のボディーソープを被験者に１日１回使用させ、１０日後の皮膚の変化を潤い、張りおよび艶の３項目について観察した。
結果を表３に示す。表３の結果は、それぞれの項目について改善された被験者の数を示す。
【表３】
2010265183.tif 000004
表３から解るように、本発明のオリーブ果実エキスを配合したボディーソープは、比較のボディーソープを越える著しい美肌作用を奏した。
【００２５】
試験例４：オリーブ果実エキス配合美容液の製造
（処方）
（Ａ相）
エチルアルコール（９５％） １０．０ 質量％
ポリオキシエチレン（20モル）オクチルドデカノール １．０
パントテニールエチルエーテル ０．１
本発明のオリーブ果実エキス ３．０
メチルパラベン ０．１５
（Ｂ相）
水酸化カリウム ０．１
（Ｃ相）
グリセリン ５．０
ジプロピレングリコール １０．０
亜硫酸水素ナトリウム ０．０３
カルボキシビニルポリマー ０．２
精製水 残余
（製法）
Ａ相、Ｃ相をそれぞれ均一に溶解し、Ｃ相にＡ相を加えて可溶化し、次いでＢ相を加えることにより美容液を得た。
こうして製造した美容液および試験例２と同様にして得た比較のオリーブ果実エキスを用いた同一の組成を有する比較の美容液を被験者の皮膚に１日１回塗布し、１０日後の塗布部の変化を潤い、張りおよび艶の３項目について観察した。
結果を表４に示す。表４の結果は、それぞれの項目について改善された被験者の数を示す。
【表４】
2010265183.tif 000005
表４から解るように、本発明のオリーブ果実エキスを配合した美容液は、比較の美容液を越える著しい美肌作用を奏した。
【００２６】
試験例５：オリーブ果実エキス配合シャンプーの製造
− ラウリルエーテル硫酸ナトリウム(28%A.M.) ６０ｇ
− ココイルベタイン ９ｇ
− 本発明のオリーブ果実エキス２ｇ
− 防腐剤、香料 適量
− ＨＣｌ ｐＨを６にする量
− 水 全体を１００ｇにする量
上記の成分を配合することにより乳白色のシャンプーを得た。
こうして製造したシャンプーおよび試験例２と同様にして得た比較のオリーブ果実エキスを用いた同一の組成を有する比較のシャンプーを被験者に１日１回使用して洗髪させ、１０日後の頭皮及び髪の総合的な変化を潤い、張りおよび艶の３項目について観察した。
結果を表５に示す。表５の結果は、それぞれの項目について改善された被験者の数を示す。
【表５】
2010265183.tif 000006
表５から解るように、本発明のオリーブ果実エキスを配合したシャンプーは、比較のシャンプーを越える優れた効果を示した。
【産業上の利用可能性】
【００２７】
本発明によれば、凍結後に粉砕された搾油後のオリーブ果実粕を、１，３−ジブチルエーテル−水で抽出することにより、エラスターゼ活性阻害作用について、従来品と比較して格段に優れたオリーブ果実エキスを提供することができる。係るオリーブ果実エキスは、特に軟膏、クリーム、乳液、懸濁液、溶液等の外用薬に好ましく配合することができる。