(57)【要約】【課題】  多糖類を化学修飾するための容易な反応方法を提供すること。【解決手段】  有機溶剤又は水を含む有機溶剤混合液中において、多糖類と化学物質とを反応させることを特徴とする化学修飾多糖類の製造方法によって達成される。多糖類としては、例えばセルロース、キチン、デンプン、ペクチン、カラギーナンが使用できる。化学物質としては、例えばアミノ酸、アミノ酸塩、カルボン酸、カルボン酸塩、アミノ糖、アミノ糖塩酸塩、アミノ酸エステル、カルボン酸エステル、脂肪酸、脂肪酸塩、脂肪酸エステルなどが使用できる。また、有機溶剤としては、例えばアセトン、メタノール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコールなどが使用できる。【選択図】          図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
有機溶剤又は水を含む有機溶剤混合液中において、多糖類と化学物質とを反応させることを特徴とする化学修飾多糖類の製造方法。
【請求項２】
前記多糖類が、硫酸基又はカルボキシル基を含む酸性多糖類であることを特徴とする請求項１に記載の化学修飾多糖類の製造方法。
【請求項３】
前記多糖類が、グルコサミン又はガラクトサミンを構成分子として含むことを特徴とする請求項１または請求項２に記載の化学修飾多糖類の製造方法。
【請求項４】
前記化学物質が、一つ以上のアミノ基を有するアミノ酸であることを特徴とする請求項１〜請求項３のいずれか一つに記載の化学修飾多糖類の製造方法。
【請求項５】
前記化学物質が、一つ以上のカルボキシル基を有するカルボン酸であることを特徴とする請求項１〜請求項４のいずれか一つに記載の化学修飾多糖類の製造方法。
【請求項６】
前記化学物質が、グルコサミン又はガラクトサミンであることを特徴とする請求項１〜請求項５のいずれか一つに記載の化学修飾多糖類の製造方法。
【請求項７】
前記多糖類と化学物質とを反応させる際に、多糖類を多量の有機溶剤又は水を含む有機溶剤混合液存在下で沈殿した不溶化物を用いることを特徴とする請求項１〜請求項６のいずれか一つに記載の化学修飾多糖類の製造方法。
【請求項８】
前記多糖類と化学物質とを反応させる際に、多糖類を少量の有機溶剤又は水を含む有機溶剤混合液とを混ぜて分散させた懸濁物質を用いることを特徴とする請求項１〜請求項６のいずれか一つに記載の化学修飾多糖類の製造方法。
【請求項９】
前記有機溶剤が、アセトン、メタノール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコールからなる群から選択された１種類又は２種類以上のものであることを特徴とする請求項１〜請求項８のいずれか一つに記載の化学修飾多糖類の製造方法。
【請求項１０】
有機溶剤又は水を含む有機溶剤混合液中において、多糖類と化学物質とを反応させた後に、不溶化物又は懸濁物質を乾燥処理することを特徴とする請求項１〜請求項９のいずれか一つに記載の化学修飾多糖類の製造方法。
【請求項１１】
前記乾燥処理が、凍結乾燥又は乾熱乾燥であることを特徴とする請求項１０に記載の化学修飾多糖類の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、多糖類の化学修飾法に関し、特に、有機溶媒存在下において多糖類と、アミノ酸・カルボン酸・又はアミノ糖を混合した後、不溶化物又は懸濁物質を乾燥処理することを特徴とする多糖類の化学修飾法等に関する。
【背景技術】
【０００２】
従来、水溶性の多糖類を化学修飾する場合、多糖類を水に溶解した後で反応する原料を加えて反応を行っていたが、その水溶液の粘度が高く、反応速度が遅くなることが問題であった。また、反応を進めるために攪拌力の大きな攪拌機を必要とすること、さらには溶解してからも複雑な工程により化学修飾が行われているため、製造コストがかかるという問題も存在していた。一般に、水溶性多糖類は親水性が高いことから、粉体表面から浸水し、粉体中心部へ水の浸透が妨げられてママコ（ダマ）を生じ、水に溶解するのに時間がかかるなどの問題もあった。これらの技術的課題を解消する化学修飾法がないことから、水溶性多糖類の化学修飾に関する研究は、水に易溶性のタンパク質の化学修飾に関する研究に比べると、それほど多く行われていない。
【０００３】
例えば、特許文献１では、硫酸化多糖及び繊維状のタンパク質の共沈殿ゲルを形成させ、無水エタノールを使用して凝集性生体高分子を沈殿物として分離している。しかしながら、沈殿形成が多糖と低分子(例えば、カルボン酸やアミノ酸など)との反応を行うための条件と捉えていない。また、ペースト状物質での化学修飾反応についても行われていない。
【０００４】
特許文献２には、多糖類の架橋反応を行うために、まず多糖類水溶液を乾燥処理してシート状とし、アルデヒド基を有する有機化合物を含有した水と有機溶媒の混合液中に浸漬して、架橋多糖類を製造している。この様に、最初から多糖類を沈殿物としての反応に利用していない。また、架橋反応にはアルデヒドだけを利用し、カルボン酸などの利用は行っていない。
【０００５】
特許文献３には、物質又は物質の混合物がほとんど溶けない分散液内で溶液の乳化を行って分散相を形成した後、ほとんど溶解又は混和できない薬剤を添加して、微粒子を形成、回収している。本発明では敢えて乳化せずに、微粒子を形成して回収することでその工程を簡易化できる。
また、水不溶性多糖類についても、例えばキトサンにカルボン酸を導入する場合、キトサンのアミノ基とグリオキシル酸のアルデヒド基のシッフ塩基を形成して還元する方法など、その操作が煩雑であることや使用する薬剤の安全性が問題となっている。
【特許文献１】特表２００６−５０６１１０号公報
【特許文献２】特開平８−３３３４０２号公報
【特許文献３】特表平８−５０２９２２号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、上記問題に鑑みてなされたものであり、その目的は、多糖類を化学修飾する際の粘性及び溶解性の課題を解消し、容易な反応方法等を提供することである。本発明では、有機溶剤存在下で多糖類の化学修飾反応を行うために、粘度を低く抑えられると共に、敢えて多糖類を溶解させることなく反応させる。この方法は、極めて簡単に行えることから、修飾多糖の製造コストを抑えることができる。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
一般に、多糖類の分離は、有機溶剤を添加して多糖類を沈殿物として回収する方法が行われている。しかしながら、この多糖類の沈殿物を分離・回収し、その工程を反応として利用した例はない。本発明は、有機溶剤中に多糖類が沈殿を形成する際に、アミノ酸、カルボン酸などの低分子化合物と共沈することを利用したものである。この沈殿物を乾燥するだけで化学修飾された多糖類を得ることが可能である。また、粉末の多糖類と反応させる粉末物質を有機溶剤で懸濁・分散させた後、単に乾燥するだけで多糖類を化学修飾させる方法を提供する。
【０００８】
上記課題を達成するための化学修飾多糖類の製造方法は、有機溶剤又は水を含む有機溶剤混合液中において、多糖類と化学物質とを反応させることを特徴とする。
本発明において、前記多糖類が、硫酸基又はカルボキシル基を含む酸性多糖類であることが好ましい。
また、前記多糖類が、グルコサミン又はガラクトサミンを構成分子として含むことが好ましい。
また、前記化学物質が、一つ以上のアミノ基を有するアミノ酸であることが好ましい。また、前記化学物質が、一つ以上のカルボキシル基を有するカルボン酸であることが好ましい。
また、前記化学物質が、グルコサミン又はガラクトサミンであることが好ましい。
【０００９】
また、多糖類と化学物質とを反応させるときに、多糖類を多量の有機溶剤又は水を含む有機溶剤混合液中で沈殿させた不溶化物を用いる場合と、多糖類を少量の有機溶剤又は水を含む有機溶剤混合液中で分散させた懸濁物質を用いる場合とがあり得る。ここで不溶化物とは、多糖類（例えば原料粉末）を多量の有機溶剤又は水を含む有機溶剤混合液と混ぜたときに、沈殿したものを意味する。また、懸濁物質とは、多糖類（例えば原料粉末）を少量の有機溶剤又は水を含む有機溶剤混合液と混ぜて分散させたもの（例えばペースト状となったもの）を意味する。本発明においては、不溶化物または懸濁物質のいずれの形態を用いても化学修飾多糖類を得ることができる。
こうして、本発明においては、多糖類と化学物質とを反応させる際に、多糖類を多量の有機溶剤又は水を含む有機溶剤混合液存在下で沈殿した不溶化物を用いることが好ましい。
また、多糖類と化学物質とを反応させる際に、多糖類を少量の有機溶剤又は水を含む有機溶剤混合液とを混ぜて分散させた懸濁物質を用いることが好ましい。
また、前記有機溶剤が、アセトン、メタノール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコールからなる群から選択された１種類又は２種類以上のものであることが好ましい。
また、有機溶剤又は水を含む有機溶剤混合液中において、多糖類と化学物質とを反応させた後に、不溶化物又は懸濁物質を乾燥処理することが好ましい。このとき、乾燥処理が、凍結乾燥又は乾熱乾燥であることが好ましい。
【００１０】
多糖類とは、単糖分子がグリコシド結合によって多数重合した糖のことを意味する。多糖類は、構成単位となる単糖とは異なる性質を示す。多糖類は、一般に親水性であり水を吸着しやすいものの、様々の物性を示す。例えば、水に不溶性のもの（セルロース、キチンなど）、可溶性のもの（デンプン、グリコーゲン、アガロース、ペクチンなど）がある。多糖類は、水中でゲル化しやすいものが多いことから、増粘安定剤として、食品（または食品添加物）として用いられる。多糖類は、生物による生合成産物として得られ、細胞壁や外骨格（植物のセルロース・ペクチン、節足動物や菌類のキチン、藻類のアガロース・カラギーナン）、エネルギー貯蔵物質（デンプン、グリコーゲン）、あるいは微生物が分泌するゲル状物質（キサンタンガム）などが知られている。本発明の多糖類には、上記多糖類のいずれも用いることができる。
【００１１】
本発明では、多糖類の中にある水酸基・カルボキシル基、又はアミノ基を有する多糖を原料として用いる。また、多糖と反応する物質として、その多糖の有する官能基と脱水縮合が可能なものを用いる。具体的には、多糖のカルボキシル基と、アミノ糖グルコサミンのアミノ基及びアミノ酸のアミノ基との反応、多糖の水酸基とカルボン酸のカルボキシル基との反応、多糖のアミノ基とアミノ酸のカルボキシル基との反応が挙げられる。
本発明による多糖類と選択した化学物質との共沈殿形成の程度は、それら物質の組み合わせに依存するが、当業者であれば後述の実施例を参考として、容易にそれらの条件を決定することが可能である。
【００１２】
多糖と反応させる化学物質には、アミノ酸、アミノ酸塩、カルボン酸、カルボン酸塩、アミノ糖、アミノ糖塩酸塩、アミノ酸エステル、カルボン酸エステル、脂肪酸、脂肪酸塩、脂肪酸エステルなどが例示される。これらの化学物質は、水に可溶のもの、或いは不溶のもののいずれも使用できる。
【発明の効果】
【００１３】
本発明は、水を含む有機溶剤存在下での多糖類の沈殿物又は水を含む有機溶剤の懸濁物質を、単に乾燥するだけで多糖類に官能基を導入できるため、エネルギーコストが低い利点がある。また、反応物質が多糖類に結合したことによる架橋反応物、または反応による分解物を製造することもできる。本発明により化学修飾された多糖類は、反応前の性質とは異なる物理化学的性質を有する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１４】
本発明の方法について以下に説明する。まず、原料として使用される粉末状の多糖類を０.１％〜３０％（ｗ／ｖ）、好ましくは１％〜５％（ｗ／ｖ）の割合で極性を示す有機溶剤に分散させる。有機溶剤の濃度は５０％〜１００％（ｖ／ｖ）で、好ましくは６０％〜８０％（ｖ／ｖ）である。
次に、反応物質を０.０１〜２Ｍとなるように加えて攪拌し、室温で静置する。好ましくは沈殿物の堆積時間が短いほどよく、沈殿形成が遅い場合には有機溶剤の濃度、又は反応物の濃度を高くするか、食塩や硫酸ナトリウムなどの無機塩類を加える。
１時間程度静置後、沈殿物を回収し乾燥する。乾燥には、凍結乾燥又は加熱乾燥を用いることができる。反応後、多糖に未反応の反応物質を除去するために、透析を行う。その後、凍結乾燥又は加熱乾燥により修飾された多糖類を得る。
【００１５】
なお、反応物質を加えた懸濁液のｐＨは、ｐＨ４.５〜ｐＨ９.０の範囲で使用できる。また、カチオン性多糖についてはｐＨ６.５〜ｐＨ７.５が、アニオン性多糖についてはｐＨ５.５〜ｐＨ６.５の範囲が好ましい。
また、加熱乾燥については３０℃〜８０℃で使用でき、好ましくは４０℃〜６０℃である。乾燥時間としては、有機溶剤の揮発及び脱水を行う必要から１２時間以上が好ましい。
【００１６】
本発明のもう一つの形態としては、ペースト状の反応方法が提供される。具体的には、多糖類粉末に対して反応物質を１０％〜２００％（ｗ／ｗ）加え、この固体状粉末が均一になるように混合した後、２０％〜１００％（ｖ／ｖ）の有機溶剤を粉体重量に対して０.８〜２倍容量加えて良く混合し、ペースト状物質を調製する。このペースト状物質を凍結乾燥又は加熱乾燥する。
次に、未反応の反応物質を除去するために、透析を行う。
その後、凍結乾燥又は加熱乾燥により修飾された多糖類を得る。
この様に、本発明では少量の有機溶剤で化学修飾をできるため、製造コストの面で優れている。
【００１７】
ペースト状での反応の場合、反応物質の好ましい濃度は、多糖類粉末に対して２０％〜８０％（ｗ/ｗ）である。水分含量が高くなるとママコを生成しやすくなることから、加える有機溶剤の濃度は４０％〜８０％（ｖ／ｖ）が好ましい。また、均一な混合物を作製する必要があるため、反応物質の重量は、粉体ペーストにする有機溶剤の容量重量に対して、１.０〜１.５倍容であることが好ましい。
以下実施例により、本発明を更に具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されない。
【実施例１】
【００１８】
アルギン酸ナトリウムとグルコサミンとの反応
０.２Ｍのグルコサミン塩酸塩を含む６０％エタノール溶液（ｐＨ４.７）に粉末アルギン酸ナトリウムを１％（ｗ／ｖ）となるように加え、攪拌し室温で１時間静置した。沈殿物（不溶化物）を遠心分離により回収し、沈殿物を−７０℃で１時間凍結した。そして、その凍結した沈殿物を真空凍結乾燥機により凍結乾燥粉末とした。
次に、乾燥品を水に溶解・懸濁し、分子量１４,０００カットの透析膜を用いて１昼夜透析を行った。透析終了後、真空凍結乾燥機により修飾された反応物を得た。
【００１９】
対照として、一般に行われているカルボジイミド法によるカルボキシル基のアミド化反応を実施した。すなわち、実施例１において、６０％エタノール溶液の代わりに、０.１Ｍの１-エチル-３-(３-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド塩酸塩及び０.２Ｍのグルコサミン塩酸塩を含む溶液（ｐＨ４.７）にアルギン酸ナトリウムを、室温で１時間攪拌しながら反応した後、直ちに透析を行い、凍結乾燥粉末とした。
各試料を４Ｍトリフルオロ酢酸で加水分解した後、その分解物をエルソン・モルガン（Elson-morgan）法を用いてアミノ糖を定量することにより、グルコサミン結合量を計算した。
表1には、対照および実施例１でアルギン酸ナトリウムに修飾させたグルコサミン結合量を示した。実施例１は、対照であるカルボジイミド法によるカルボキシル基のアミド化反応よりも多くのグルコサミンが結合していた。
【００２０】
【表１】
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【実施例２】
【００２１】
ペクチンとクエン酸との反応
クエン酸を含む６０％エタノール溶液（ｐＨ５.３）にカンキツ由来ペクチン粉末を２％（ｗ／ｖ）となるよう加え、攪拌し室温で１時間静置した。クエン酸濃度として、０.０５Ｍ及び０.１６Ｍの二つの濃度を用いた。沈殿物（不溶化物）を遠心分離により回収し、沈殿物を−７０℃で１時間凍結した。そして、その凍結した沈殿物を真空凍結乾燥機により凍結乾燥粉末とした。
【００２２】
次に、乾燥品を水に溶解・懸濁し、分子量１４,０００カットの透析膜を用いて１昼夜透析を行った。透析終了後、真空凍結乾燥機により乾燥し、修飾された反応物を得た。
図１には、クエン酸を用いて化学修飾したペクチンのゲル濾過クロマトグラフィーを示した。図に示すように、処理するクエン酸濃度を高くした場合、得られる多糖類の化学修飾物の分子量は増加した。また、その化学修飾物は未処理のものに比べて粘度が増加していた。この様に、本発明により製造された多糖類は未処理の多糖類と容易に区別された。
【実施例３】
【００２３】
κ−カラギーナンとクエン酸との反応
クエン酸及びクエン酸三ナトリウムよりなる０.４Ｍのクエン酸緩衝液（ｐＨ６.２）を１２.５％〜４０％（ｖ／ｖ）となる様にエタノールに加え、最終アルコール濃度が６０％エタノール（ｖ／ｖ）となる溶液を調製した。そして、κ−カラギーナン粉末を５％（ｗ／ｖ）となるように加え、攪拌し室温で１時間静置した。
沈殿物（不溶化物）を遠心分離により回収し、沈殿物を−７０℃で１時間凍結した。そして、その凍結した沈殿物を真空凍結乾燥機により凍結乾燥粉末とした。
【００２４】
次に、乾燥品を水に溶解・懸濁し、分子量１４,０００カットの透析膜を用いて１昼夜透析を行った。透析終了後、真空凍結乾燥機により乾燥し、修飾された反応物を得た。
各反応物について、６Ｎ塩酸で加水分解した分解物を中和後、酵素法により定量することにより、クエン酸結合量を求めた。
図２には、各種クエン酸濃度で反応した化学修飾κ−カラギーナンのクエン酸結合量を示した。添加するクエン酸の増加と共にκ−カラギーナンへのクエン酸結合量は増加することが分かった。
【実施例４】
【００２５】
キトサンとクエン酸又はアスパラギン酸との反応
０.２Ｍクエン酸又はアスパラギン酸を含む６０％アセトン溶液（ｖ／ｖ）にキトサン粉末を２％（ｗ／ｖ）となるよう加え、攪拌し室温で１時間静置した。沈殿物（不溶化物）を遠心分離により回収し、６０℃で１４時間乾燥した。
次に、乾燥品を水に懸濁し、分子量１４,０００カットの透析膜を用いて１昼夜透析を行った。透析終了後、真空凍結乾燥機により乾燥し、修飾された反応物を得た。
【００２６】
各反応物の赤外吸収スペクトルを測定した。
図３には、クエン酸又はアスパラギン酸と反応した化学修飾キトサンの赤外吸収スペクトルを示した。化学修飾されたキトサンでは、キトサン内のアミノ基由来の吸収ピーク１６４４ｃｍ−１が減少した。また、化学修飾されたキトサンでは、カルボキシルアニオンの対称伸縮の吸収ピーク１３８０ｃｍ−１が増加した。この様に、化学修飾キトサンの赤外吸収スペクトルは、未処理のキトサンの赤外吸収スペクトルから容易に区別された。
【実施例５】
【００２７】
ペースト状でのペクチンとクエン酸又はクエン酸塩との反応
粉末ペクチン２ｇに対し、クエン酸、クエン酸二水素ナトリウム、クエン酸水素ナトリウム、又はクエン酸三ナトリウム粉末を５ｍｍｏｌ加え、均一になるように混合した。この粉末に対して、粉末重量に対して１.５倍容量の６０％エタノール溶液を加え、さらに混合した。このペースト状の懸濁物質を−７０℃で１時間凍結した。
【００２８】
次に、この凍結物を真空凍結乾燥機により凍結乾燥粉末とした。次に、乾燥品を水に溶解・懸濁し、分子量１４,０００カットの透析膜を用いて１昼夜透析を行った。
透析終了後、真空凍結乾燥機により乾燥し、修飾された反応物を得た。
表２には、化学物質として、クエン酸、クエン酸二水素ナトリウム、クエン酸水素ナトリウム、又はクエン酸三ナトリウムを選択し、ペクチンに結合させたときの反応物中のクエン酸含量を示した。クエン酸含量は、実施例３に記載の方法により求めた。
【００２９】
【表２】
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【００３０】
表に示す様に、ペースト状の反応方法により、ペクチンと化学物質とを反応させた後、乾燥処理した反応物には、多くのクエン酸が含まれていることが分かった。このように、本発明の方法によれば、大容量の有機溶剤で沈殿を形成させることなくペースト状においても、多糖類が化学物質で化学修飾されることが分かった。
【実施例６】
【００３１】
ペースト状でのκ−カラギーナンとクエン酸塩との反応
粉末キトサン０.５ｇに対し、クエン酸二水素ナトリウムを０.２９ｇ加え、均一になるように混合した後、粉末重量に対して１.５倍容量の２０％アセトン水溶液〜１００％アセトン溶液を加え、さらに混合した。このペースト状の懸濁物質を５０℃で１４時間乾燥した。
次に、乾燥品を水に溶解・懸濁し、分子量１４,０００カットの透析膜を用いて１昼夜透析を行った。透析終了後、遠心分離により不溶化物を回収し、６０℃で熱風乾燥して脱水し、修飾された反応物を得た。
表３には、κ−カラギーナンとクエン酸とを結合させたときの反応物中のクエン酸含量を示した。クエン酸含量は、実施例３に記載の方法により求めた。
【００３２】
【表３】
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表３に示すように、アセトン濃度を２０％〜１００％としたときのいずれにおいても、κ−カラギーナンにクエン酸が結合したことが分かった。こうして、本発明の方法によれば、極めて広範囲の有機溶剤濃度で多糖類の化学修飾物が得られることが分かった。
【実施例７】
【００３３】
キトサンとクエン酸との反応
クエン酸とクエン酸三ナトリムからなる０.４Ｍクエン酸緩衝液（ｐＨ５.３）を２０％（ｖ／ｖ）となるようエタノールに加え、最終エタノール濃度が６０％（ｖ／ｖ）となる溶液を調製した。そして、キトサン粉末を５％（ｗ／ｖ）となるように加え、攪拌し室温で１時間静置した。
沈殿物（不溶化物）を遠心分離により回収し、沈殿物を−７０℃で１時間凍結した。そして、その凍結した沈殿物を真空凍結乾燥機又は熱風乾燥機にて乾燥した。熱風乾燥は３０℃、６０℃で１６時間行った。
【００３４】
次に、乾燥品を水に溶解・懸濁し、分子量１４,０００カットの透析膜を用いて１昼夜透析を行った。透析終了後、真空凍結乾燥機により乾燥し、修飾された反応物を得た。
表４には、キトサンとクエン酸とを反応させたときの乾燥物中のクエン酸含量を示した。クエン酸含量は、実施例３に記載の方法により求めた。
【００３５】
【表４】
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表４に示すように、凍結乾燥、加熱乾燥させたときのいずれも、キトサンにクエン酸が結合したことが分かった。こうして、本発明の方法によれば、凍結乾燥、加熱乾燥ともに多糖類の化学修飾反応を行うことができることが分かった。
【実施例８】
【００３６】
ペースト状でのペクチンとクエン酸との反応
粉末ペクチン２ｇに対し、クエン酸二水素ナトリウムを１.１６ｇ加え、均一になるように混合した後、粉末重量に対して１.５倍容量の水で希釈した６０％（ｖ／ｖ）の各種有機溶媒（メタノール、エタノール、１−プロパノール、２−プロパノール、およびアセトン）を加え、さらに混合した。このペースト状の懸濁物質を−７０℃で１時間凍結した。
【００３７】
次に、この凍結物を真空凍結乾燥機により凍結乾燥粉末とした。次に、乾燥品を水に溶解・懸濁し、分子量１４,０００カットの透析膜を用いて１昼夜透析を行った。
透析終了後、真空凍結乾燥機により乾燥し、修飾された反応物を得た。
表５には、各種有機溶媒を用いて、ペクチンとクエン酸とを反応させたときの反応物中のクエン酸含量を示した。クエン酸含量は、実施例３に記載の方法により求めた。
【００３８】
【表５】
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表５に示すように、メタノール、エタノール、１−プロパノール、２−プロパノール、およびアセトンのいずれの極性有機溶媒を用いたときにもペクチンのクエン酸修飾物を得ることができた。こうして、本発明の方法によれば、水に溶解する各種の極性有機溶媒を用いて、多糖類の化学修飾物を得ることができることが分かった。
【実施例９】
【００３９】
アルギン酸ナトリウムとプロピレングリコールとの反応
０.５Ｍプロピレングリコールを含む６０％エタノール溶液（ｖ/ｖ）にアルギン酸ナトリウム粉末を２％（ｗ／ｖ）となるよう加えｐH５に調整し、室温で１時間静置した。沈殿物（不溶化物）を遠心分離により回収し、６０℃で１５時間乾燥した。
次に、乾燥品を水に懸濁し、分子量１４,０００カットの透析膜を用いて１昼夜透析を行った。
透析終了後、真空凍結乾燥機により乾燥し、修飾された反応物を得た。
【実施例１０】
【００４０】
アラビアガムとグリシン及びグリシンエステルとの反応
０.２Ｍグリシン又はグリシンエチルエステルを含む７５％エタノール溶液（ｖ/ｖ）にアラビアガム粉末を５％(ｗ/ｖ)となるよう加えてｐH６に調整し、室温で１時間静置した。沈殿物（不溶化物）を遠心分離により回収し、６０℃で１５時間乾燥した。
次に、乾燥品を水に懸濁し、分子量１４,０００カットの透析膜を用いて１昼夜透析を行った。
透析終了後、真空凍結乾燥機により乾燥し、修飾された反応物を得た。
【実施例１１】
【００４１】
ペクチンとグリシンとの反応（その１）
０.２Ｍグリシン含む６０％アセトン溶液（ｖ/ｖ）にペクチン粉末を５％（ｗ／ｖ）となるよう加えて、室温で０.５時間、２時間、６時間、および１８時間静置した。沈殿物（不溶化物）を遠心分離により回収し、６０℃で１５時間乾燥した。
次に、乾燥品を水に懸濁し、分子量１４,０００カットの透析膜を用いて１昼夜透析を行った。透析終了後、真空凍結乾燥機により乾燥し、修飾された反応物を得た。
表６には、室温での反応時間を変えて、ペクチンとグリシンとを反応させたときの乾燥物を１％水溶液としたときの粘度を測定した結果を示した。
【００４２】
【表６】
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表６に示すように、アセトン水溶液存在下でのペクチンとグリシンとの沈殿放置時間を延長することにより、ペクチン化学修飾物の水溶液の粘度が低くなることが分かった。これは、反応時間の延長に応じて、グリシンのペクチンへの結合量が増加し、反応物の水溶液の粘性が低下したものと考えられた。
【実施例１２】
【００４３】
ペクチンとグリシンとの反応（その２）
０，０.０５，０.２および０.５Ｍグリシン含む６０％アセトン溶液（ｖ／ｖ）にペクチン粉末を５％（ｗ／ｖ）となるよう加えて、室温で１５時間静置した。沈殿物（不溶化物）を遠心分離により回収し、６０℃で１５時間乾燥した。
次に、乾燥品を水に懸濁し、分子量１４,０００カットの透析膜を用いて１昼夜透析を行った。透析終了後、真空凍結乾燥機により乾燥し、修飾された反応物を得た。
表７には、グリシン濃度を変えて、ペクチンとグリシンとを反応させたときの乾燥物を１％水溶液としたときの粘度を測定した結果を示した。
【００４４】
【表７】
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【００４５】
表７に示すように、アセトン水溶液存在下でのペクチンとグリシンとの反応において、グリシン濃度を高くすることにより、ペクチン化学修飾物の水溶液の粘度が低くなることが分かった。これは、化学物質の濃度を高くすることで、グリシンのペクチンへの結合量が増加し、反応物の水溶液の粘性が低下したものと考えられた。
このように本発明の方法によれば、有機溶媒存在下において、多糖類を各種の化学物質で修飾した化学修飾多糖類を容易に得られることが分かった。
【図面の簡単な説明】
【００４６】
【図１】本発明の方法を用いて、ペクチンをクエン酸で化学修飾した後、沈殿物を凍結乾燥した試料をゲル濾過したときのクロマトグラフィーである。グラフは、（Ａ）未処理のペクチン、（Ｂ）０.０５Ｍクエン酸とペクチンとをエタノール溶液中で反応させたときの試料、（Ｃ）０.１６Ｍクエン酸とペクチンとをエタノール溶液中で反応させたときの試料の三種類のものを示す。
【図２】本発明の方法を用いて、κ−カラギーナンをクエン酸で化学修飾した後、沈殿物を凍結乾燥した試料のクエン酸結合量を測定した結果を示す棒グラフである。反応時のクエン酸濃度が高くなると、κ−カラギーナンへのクエン酸結合量が増加することが分かった。
【図３】本発明の方法を用いて、キトサンと、クエン酸又はアスパラギン酸とを反応させたときに得られた化学修飾キトサンの赤外吸収スペクトルを示す図である。スペクトルは、（Ａ）未処理のキトサン、（Ｂ）クエン酸とキトサンとをアセトン溶液中で反応させたときの試料、（Ｃ）アスパラギン酸とキトサンとをアセトン溶液中で反応させたときの試料の三種類のものを示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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