(57)【要約】      （修正有）【課題】哺乳類のＢ細胞関連疾患、Ｔ細胞関連疾患または自己免疫疾患を治療および診断するための方法を提供する。【解決手段】非放射性標識抗体の前投与を行わず、薬学上許容されるビヒクルと少なくとも一種のコンジュゲート抗体もしくはそのフラグメント、またはコンジュゲート抗体融合タンパク質もしくはそのフラグメントとを含んでなる治療組成物であって、哺乳類に同時または逐次投与する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
哺乳類の疾病の治療に用いるための薬剤の製造における、薬学上許容されるビヒクルと少なくとも一種のコンジュゲート抗体もしくはそのフラグメント、またはコンジュゲート抗体融合タンパク質もしくはそのフラグメントとを含んでなる治療組成物の使用であって、非放射性標識抗体の前投与が行われず、該治療組成物が該哺乳類に同時または逐次投与される、使用。
【請求項２】
増殖腫瘍または自己免疫疾患細胞が標的逸出しないようにするための維持療法として、前記コンジュゲート抗体もしくはそのフラグメントまたは前記コンジュゲート抗体融合タンパク質もしくはそのフラグメントに加え、場合により、非コンジュゲート抗体もしくはフラグメントまたは非コンジュゲート抗体融合タンパク質もしくはそのフラグメントが加えられる、請求項１に記載の使用。
【請求項３】
前記コンジュゲートおよび非コンジュゲート抗体、抗体融合タンパク質、またはそのフラグメントが、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１４、ＣＤ１５、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２５、ＣＤ３３、ＣＤ３７、Ｄ３８、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ４６、ＣＤ５２、ＣＤ５４、ＣＤ７４、ＣＤ８０、ＣＤ１２６、ＭＵＣ１、テネイシン、Ｉａ、ＨＭＩ．２４、ＨＬＡ−ＤＲ、および腫瘍関連抗原からなる群から選択される抗原に向けられたものである、請求項１または２に記載の使用。
【請求項４】
前記腫瘍関連抗原が血管内皮抗原である、請求項３に記載の使用。
【請求項５】
前記哺乳類がヒトおよび家畜または伴侶動物からなる群から選択される、請求項３に記載の使用。
【請求項６】
前記コンジュゲートおよび非コンジュゲート抗体、抗体融合タンパク質、またはそのフラグメントが、ヒト、ネズミ、キメラ、霊長類化またはヒト化抗体である、請求項３に記載の方法。
【請求項７】
前記抗体、抗体融合タンパク質、またはそのフラグメントが、薬物、毒素、免疫調節剤、キレート剤、ホウ素化合物、光活性剤、および放射性核種からなる群から選択される治療薬と結合されてなるものである、請求項３に記載の使用。
【請求項８】
薬学上許容されるビヒクルと少なくとも一種の抗体、抗体融合タンパク質またはそのフラグメントとを含んでなる治療組成物を、前記哺乳類に同時または逐次投与することをさらに含み、前記抗体、抗体融合タンパク質またはそのフラグメントが少なくとも一種の治療薬と結合されてなるものである、請求項３に記載の使用。
【請求項９】
増殖腫瘍または自己免疫疾患細胞が標的逸出しないようにするための維持療法として、前記コンジュゲート抗体、抗体融合タンパク質またはそのフラグメントに加え、場合により、非コンジュゲート抗体、抗体融合タンパク質またはそのフラグメントが加えられる、請求項８に記載の使用。
【請求項１０】
前記コンジュゲートおよび非コンジュゲート抗体、抗体融合タンパク質、またはそのフラグメントが、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１４、ＣＤ１５、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２５、ＣＤ３３、ＣＤ３７、Ｄ３８、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ４６、ＣＤ５２、ＣＤ５４、ＣＤ７４、ＣＤ８０、ＣＤ１２６、ＭＵＣ１、テネイシン、Ｉａ、ＨＭＩ．２４、ＨＬＡ−ＤＲ、および腫瘍関連抗原からなる群から選択される抗原に向けられたものである、請求項８または９に記載の使用。
【請求項１１】
前記腫瘍関連抗原が血管内皮抗原である、請求項１０に記載の使用。
【請求項１２】
前記哺乳類がヒトおよび家畜または伴侶動物からなる群から選択される、請求項１０に記載の使用。
【請求項１３】
前記コンジュゲートおよび非コンジュゲート抗体、抗体融合タンパク質、またはそのフラグメントが、ヒト、ネズミ、キメラ、霊長類化またはヒト化抗体である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１４】
前記抗体、抗体融合タンパク質、またはそのフラグメントが薬物、毒素、免疫調節剤、キレート剤、ホウ素化合物、光活性剤、および放射性核種からなる群から選択される治療薬と結合されてなるものである、請求項１０に記載の使用。
【請求項１５】
薬学上許容されるビヒクルと、少なくとも二種の抗体またはそのフラグメントを含んでなる抗体融合タンパク質またはそのフラグメントとを含んでなる治療組成物を前記哺乳類に同時または逐次投与することをさらに含む、請求項１に記載の使用。
【請求項１６】
増殖腫瘍またはその他の罹患細胞が標的逸出しないようにするための維持療法として、前記抗体融合タンパク質またはそのフラグメントに加え、場合により、非コンジュゲート抗体が加えられる、請求項１５に記載の使用。
【請求項１７】
前記コンジュゲートおよび非コンジュゲート抗体が、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１４、ＣＤ１５、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２５、ＣＤ３３、ＣＤ３７、Ｄ３８、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ４６、ＣＤ５２、ＣＤ５４、ＣＤ７４、ＣＤ８０、ＣＤ１２６、ＭＵＣ１、テネイシン、Ｉａ、ＨＭＩ．２４、ＨＬＡ−ＤＲ、および腫瘍関連抗原からなる群から選択される抗原に向けられたものである、請求項１５または１６に記載の使用。
【請求項１８】
前記腫瘍関連抗原が血管内皮抗原である、請求項１７に記載の使用。
【請求項１９】
前記哺乳類がヒトおよび家畜または伴侶動物からなる群から選択される、請求項１７に記載の使用。
【請求項２０】
前記コンジュゲートおよび非コンジュゲート抗体がヒト、ネズミ、キメラ、霊長類化またはヒト化抗体である、請求項１７に記載の方法。
【請求項２１】
前記抗体が薬物、毒素、免疫調節剤、キレート剤、ホウ素化合物、光活性剤、および放射性核種からなる群から選択される治療薬と結合されてなるものである、請求項１７に記載の使用。
【請求項２２】
前記薬物が抗有糸分裂薬、アルキル化薬、代謝拮抗薬、抗脈管形成薬、アポトーシス薬、アルカロイド薬、および抗生物質、ならびにそれらの組合せからなる群から選択される薬理特性を有する、請求項７に記載の使用。
【請求項２３】
前記薬物がナイトロジェンマスタード、エチレンイミン誘導体、スルホン酸アルキル、ニトロソ尿素、トリアゼン、葉酸類似体、アントラサイクリン、タキサン、ＣＯＸ−２阻害剤、ピリミジン類似体、プリン類似体、抗生物質、酵素、エピポドフィロトキシン、プラチナ錯体、ビンカアルカロイド、置換尿素、メチルヒドラジン誘導体、副腎皮質抑制剤、アンタゴニスト、エンドスタチン、タキソール、カンプトテシン、ドキソルビシンおよびそれらの類似体、ならびにそれらの組合せからなる群から選択される、請求項７に記載の使用。
【請求項２４】
前記薬物がシクロホスファミド、エトポシド、ビンクリスチン、プロカルバジン、プレドニゾン、カルムスチン、ドキソルビシン、メトトレキサート、ブレオマイシン、デキサメタゾン、酪酸フェニル、ブリオスタチン−１、およびロイコボリンからなる群から選択される、請求項７に記載の使用。
【請求項２５】
前記毒素がリシン、アブリン、アルファトキシン、サポリン、リボヌクレアーゼ（ＲＮアーゼ）、ＤＮアーゼＩ、ブドウ球菌腸毒素−Ａ、アメリカヤマゴボウ抗ウイルスタンパク質、ゲロニン、ジフテリア毒、シュードモナス外毒素、およびシュードモナス内毒素からなる群から選択される、請求項７に記載の使用。
【請求項２６】
前記免疫調節剤がサイトカイン、幹細胞増殖因子、リンホトキシン、造血系増殖因子、コロニー刺激因子（ＣＳＦ）、インターフェロン（ＩＦＮ）、エリスロポエチン、トロンボポエチンおよびそれらの組合せからなる群から選択される、請求項７に記載の使用。
【請求項２７】
前記免疫調節剤が本質的にＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１８、Ｇ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、インターフェロン−γ、−α、−βまたは−γ、ＴＮＦ−α、および「Ｓ１因子」からなる、請求項７に記載の使用。
【請求項２８】
前記キレート剤がＤＴＰＡ、ＤＯＴＡ、ＴＥＴＡ、ＮＯＴＡおよび検出可能な標識または細胞傷害性薬剤が結合可能な好適なペプチドからなる群から選択される、請求項７に記載の使用。
【請求項２９】
前記検出可能な標識が蛍光分子であり、かつ、前記細胞傷害性薬剤が重金属または放射性核種である、請求項２８に記載の使用。
【請求項３０】
前記リンホトキシンが腫瘍壊死因子、造血系増殖因子、コロニー刺激因子、インターフェロン、幹細胞増殖因子からなる群から選択される、請求項２６に記載の使用。
【請求項３１】
前記光活性剤が色素原または色素である、請求項７に記載の使用。
【請求項３２】
（Ａ）前記放射性核種が実質的にβ粒子の放出により崩壊し、Ｐ−３２、Ｐ−３３、Ｓｃ−４７、Ｆｅ−５９、Ｃｕ−６４、Ｃｕ−６７、Ｓｅ−７５、Ａｓ−７７、Ｓｒ−８９、Ｙ−９０、Ｍｏ−９９、Ｒｈ−１０５、Ｐｄ−１０９、Ａｇ−１１１、Ｉ−１２５、Ｉ−１３１、Ｐｒ−１４２、Ｐｒ−１４３、Ｐｍ−１４９、Ｓｍ−１５３、Ｔｂ−１６１、Ｈｏ−１６６、Ｅｒ−１６９、Ｌｕ−１７７、Ｒｅ−１８６、Ｒｅ−１８８、Ｒｅ−１８９、Ｉｒ−１９４、Ａｕ−１９８、Ａｕ−１９９、Ｐｂ−２１１、Ｐｂ−２１２、およびＢｉ−２１３からなる群から選択されるか；
（Ｂ）前記放射性核種が実質的にオージェ粒子の放出により崩壊し、Ｃｏ−５８、Ｇａ−６７、Ｂｒ−８０ｍ、Ｔｃ−９９ｍ、Ｒｈ−１０３ｍ、Ｐｔ−１０９、Ｉｎ−１１１、Ｓｂ−１１９、Ｉ−１２５、Ｈｏ−１６１、Ｏｓ−１８９ｍおよびＩｒ−１９２からなる群から選択されるか；または
（Ｃ）前記放射性核種が実質的にα粒子の放出により崩壊し、Ａｃ−２２５、Ｄｙ−１５２、Ａｔ−２１１、Ｂｉ−２１２、Ｒａ−２２３、Ｒｎ−２１９、Ｐｏ−２１５、Ｂｉ−２１１、Ａｃ−２２５、Ｆｒ−２２１、Ａｔ−２１７、Ｂｉ−２１３およびＦｍ−２５５からなる群から選択される、
請求項７に記載の使用。
【請求項３３】
前記治療薬が光線力学療法および中性子捕捉法で用いられる、請求項７に記載の使用。
【請求項３４】
前記光線力学療法が金属錯体を用い、かつ、前記金属錯体が亜鉛、アルミニウム、ガリウム、ルテチウムおよびパラジウムからなる群から選択される、請求項３３に記載の使用。
【請求項３５】
前記中性子捕捉法がＢ−１０、Ｇｄ−１５７およびＵ−２３５からなる群から選択される放射性核種を用いる、請求項３３に記載の使用。
【請求項３６】
前記疾病がＢ細胞関連疾患、Ｔ細胞関連疾患または自己免疫疾患である、請求項１に記載の使用。
【請求項３７】
前記Ｂ細胞関連疾患が緩徐進行型Ｂ細胞リンパ腫、急速進行型Ｂ細胞リンパ腫、慢性リンパ性白血病、急性リンパ性白血病、ワルデンストロームマクログロブリン血症、または多発性骨髄腫である、請求項３７に記載の使用。
【請求項３８】
前記Ｂ細胞関連疾患がヒトまたは家畜疾患である、請求項３７に記載の使用。
【請求項３９】
前記Ｂ細胞リンパ腫が非ホジキンリンパ腫である、請求項３７に記載の使用。
【請求項４０】
前記Ｔ細胞関連疾患がヒトまた家畜Ｔ細胞白血病または菌状息肉腫である、請求項３７に記載の使用。
【請求項４１】
前記自己免疫疾患が急性特発性血小板減少性紫斑病、慢性特発性血小板減少性紫斑病、皮膚筋炎、シドナム舞踏病、重症筋無力症、全身性紅斑性狼瘡、ループス腎炎、リウマチ熱、多腺性症候群、水疱性類天疱瘡、真性糖尿病、ヘノッホ−シェンライン紫斑病、溶連菌感染後腎炎、結節性紅斑、高安動脈炎、アジソン病、慢性関節リウマチ、多発性硬化症、サルコイドーシス、潰瘍性大腸炎、多形性紅斑、ＩｇＡ腎症、結節性多発性動脈炎、強直性脊椎炎、グッドパスチャー症候群、閉塞性血栓性血管炎、シェーグレン症候群、原発性胆汁性肝硬変、橋本甲状腺炎、甲状腺中毒症、硬皮症、慢性活動性肝炎、多発性筋炎／皮膚筋炎、多発性軟骨炎、尋常性天疱瘡、ウェゲナー肉芽腫、膜性腎症、筋萎縮性側索硬化症、脊髄ろう、巨細胞性動脈炎／多発性筋痛、悪性貧血、急速進行性糸球体腎炎、乾癬、および繊維性肺胞炎からなる群から選択される、請求項３７に記載の使用。
【請求項４２】
罹患組織上の標的抗原の比率が正常組織上の標的抗原の比率を、１．６：１の比率より超える、請求項１に記載の使用。
【請求項４３】
罹患組織上の標的抗原の比率が正常組織上の標的抗原の比率を、５：１の比率より超える、請求項１に記載の使用。
【請求項４４】
前記コンジュゲートおよび非コンジュゲート抗体、抗体融合タンパク質またはそのフラグメントが同じ、または異なる標的に向けられている、請求項１に記載の使用。
【請求項４５】
前記コンジュゲートおよび非コンジュゲート抗体、抗体融合タンパク質、またはそのフラグメントが完全ＩｇＧ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆ（ａｂ）２、Ｆａｂ’、Ｆａｂ、ｓｃＦｖ、ダイアボディー、トリアボディーまたはテトラボディーからなる群から選択される、請求項１に記載の使用。
【請求項４６】
前記コンジュゲートおよび非コンジュゲート抗体が抗ＣＤ２２モノクローナル抗体である、請求項１に記載の使用。
【請求項４７】
前記コンジュゲートおよび非コンジュゲート抗体がヒト化ＬＬ２モノクローナル抗体である、請求項１に記載の使用。
【請求項４８】
前記ヒト化ＬＬ２抗体がイットリウム−９０で放射性標識されている、請求項４７に記載の使用。
【請求項４９】
前記抗ＣＤ２２モノクローナル抗体がヒト抗体である、請求項４６に記載の使用。
【請求項５０】
前記コンジュゲート抗体が１回当たり２０〜６００ミリグラムタンパク質の用量で非経口投与される、請求項４４に記載の使用。
【請求項５１】
前記コンジュゲート抗体が１回当たり２０〜１５０ミリグラムタンパク質の用量で非経口投与される、請求項４４に記載の使用。
【請求項５２】
前記コンジュゲート抗体が１回当たり２０〜１００ミリグラムタンパク質の用量で非経口投与される、請求項４４に記載の使用。
【請求項５３】
前記哺乳類が前記抗ＣＤ２２モノクローナル抗体を１回当たり２０〜１５０ミリグラムタンパク質の反復非経口用量として受容する、請求項４６に記載の使用。
【請求項５４】
前記哺乳類が前記抗ＣＤ２２モノクローナル抗体を１回当たり２０〜１００ミリグラムタンパク質の反復非経口用量として受容する、請求項４６に記載の使用。
【請求項５５】
哺乳類の疾病の治療に用いるための薬剤の製造における、薬学上許容されるビヒクルと、少なくとも一つの標的抗原および治療薬と結合する多重特異性多価抗体、フラグメントまたは融合タンパク質複合体を含んでなる治療組成物の使用であって、非放射性標識抗体の前投与が行われず、該治療組成物が該哺乳類に同時または逐次投与される、使用。
【請求項５６】
哺乳類の疾病の治療に用いるための薬剤の製造における、
（Ａ）少なくとも一つの標的抗原と結合する多重特異性多価抗体、フラグメントまたは融合タンパク質；
（Ｂ）場合により、その組成物に非局在抗体を循環から排除させるためのクリアリング剤；および
（Ｃ）該多重特異性多価抗体、フラグメントまたは融合タンパク質と結合する、薬学上有効な量の治療複合体
を含んでなる治療組成物の使用であって、非放射性標識抗体の前投与が行われず、該治療組成物が該哺乳類に同時または逐次投与される、使用。
【発明の詳細な説明】
【発明の分野】
【０００１】
本発明は、Ｂ細胞関連悪性腫瘍、特に急速進行型非ホジキンリンパ腫を治療するための免疫療法的方法に関する。特に本発明は、哺乳類におけるＢ細胞関連疾患、Ｔ細胞関連疾患または自己免疫疾患を、非放射性標識抗体の前投与を行わずに、哺乳類に治療組成物を投与することにより治療および診断するための方法を対象とする。
【発明の背景】
【０００２】
Ｂ細胞リンパ腫は、モノクローナル抗体（Ｍａｂ）による治療の良好な標的となるとされている表面抗原を発現する。抗体は、単独で用いる場合でも、（裸の抗体）化学療法と併用する場合でも、毒素と、または放射免疫療法（ＲＡＩＴ）用の放射性核種と結合させることができる。放射性標識抗体は、線量分布を改善するために、非標識抗体の後(Kaminski, M. S. et al., J Clin. Oncol. 19: 3918-3928, 2001)またはともに(Press, O. W. et al, New Engl. J. Med. 329: 1219-24, 1993)投与される。ほとんどの研究者は、放射性標識マウス抗体を非標識抗体（マウスまたはキメラ）と併用する。その半減期がキメラ抗体よりも短いため、毒物学の観点から、マウス抗体を放射性標識する方が有利であると考えられている。半減期の長いＭａｂは、血中および骨髄中の放射性免疫複合体の滞留時間が長くなり、従っておそらくより大きな毒性を誘導する。抗体はそれ自体で毒性を誘導することはほとんどないことから、マウスおよびキメラ非標識抗体は双方とも、主張されていることによると、身体の正常細胞および組織の抗原を飽和させることにより線量分布を改善するために用いられる（Kaminski, 米国特許第５，５９５，７２１号; Wiseman et al., Crit. Rev. Oncol. Hematol. 39: 181-194, 2001参照）。
【０００３】
癌の標的放射線療法（放射免疫療法；ＲＡＩＴ）におけるモノクローナル抗体の使用は、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）などの血液病で著しい臨床的効果をもたらしている。現在、循環放射性核種の全身毒性および放射線による腫瘍の増感を最小限にする努力において、新しい戦略が検討されている。前者はプレターゲッティングにより、また、後者は放射線増感薬との併用療法により行われている。Govindan, S. V et al., Current Trends, Pharmaceutical Science and Technology Today 3: 90-98, 2000参照。
【０００４】
ＲＡＩＴの抗腫瘍活性は、主として、不均一線量付与による、連続し、かつ指数関数的に減衰する低線量比放射線を発する、抗体に結合させた放射性標識の結合型放射活性による。ＮＨＬに対するＲＡＩＴの商業化に向け、４腫の放射性標識抗体製品が開発中である。これらには１３１Ｉ−トシツモマブ（ベキサール（商標））、９０Ｙ−イブリツモマブ・チウキセタン（ゼバリン（商標））、９０Ｙ−エプラツズマブ（ｈＬＬ２）および１３１Ｉ−Ｌｙｍ−１が含まれる。これらの製品の詳細については、Goldenberg, D. M., Critical Reviews in Oncology/Hematology 39: 195-201,2001、およびGoldenberg, D. M., J. Nucl. Med. 43: 693-713, 2002参照。
【０００５】
ベキサール(Corixa Corp., Seattle, WA)およびゼバリン(IDEC-Y2B8; IDEC Pharmaceuticals, San Diego, CA)は双方とも、正常および悪性Ｂリンパ球の表面で発現するＣＤ２０抗原に対するネズミモノクローナル抗体（Ｍａｂ）である。ベキサールは非放射性ネズミ抗体が付加されたＩｇＧ２ａネズミＭａｂとして用いられ、一方、ゼバリンは標識されたネズミ抗体と、製品に付加された非放射性ヒト・マウスキメラリツキシマブ（リツキサン（商標），IDEC-Genentech）を含んでいる。両製品とも、腫瘍標的を向上させるために前療法として非放射性抗体の投与を設けるものであり、非標識ベキサール抗体４５０ｍｇの１時間の点滴、およびゼバリンを伴うリツキシマブ４５０ｍｇの４〜６時間の点滴を必要とする。両製品とも裸の抗体よりも高く、かつ、長い応答が示されているが、用量制限毒性、主として骨髄毒性も有する。ゼバリンは再発性低悪性度または悪性転換Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫の処置に関して米国食品医薬品局（ＦＤＡ）に認可されている。これらの放射性標識抗ＣＤ−２０Ｍａｂには、良好な腫瘍局在を可能とするための非放射性抗体の投与が先行しなければならない。実際に、前投与が含まれる場合、１１１インジウム−ゼバリンの特異的局在数は、特定の腫瘍部位における腫瘍取り込みを７８％から１５％に低下させる（Wiseman et al.,同書）。
【０００６】
エプラツズマブ（９０Ｙ−エプラツズマブ）は抗ＣＤ２２抗原に対するヒト化ＩｇＧ１抗体である。抗原はまず、抗体結合時にインターナライズされる。裸の抗体は濾胞性ならびにびまん性大Ｂ細胞リンパ腫に効力を示すことが報告されている（Leonard,J. P. et al.）。エプラツズマブ（ｈＬＬ２、抗ＣＤ２２ヒト化モノクローナル抗体）は難治性／再発性びまん性大Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）に対して有効かつ耐容性に優れた療法である。Blood (Suppl) 96: 578a [abstr. 2482], 2000; Press, O. W. et al., Immunotherapy of Non-Hodgkin’s Lymphomas. Hematology (Am. Soc. Hematol. Educ. Program), p. 221-40, 2001。エプラツズマブはヒト抗ヒト抗体（ＨＡＨＡ）を生じさせないとされており、これにより反復投与に好適なものとなる。マウス親抗体ｍＬＬ２は１３１Ｉで標識され、種々のサブタイプのＢ細胞リンパ腫で効力が示されている(Linden, O. et al. Clin. Cancer Res. 5: 3287s-3291s, 1999)。インターナリゼーション後、１３１Ｉ標識抗体は脱ハロゲン化され、細胞から放射性核種が放出される。イットリウムのような放射性金属はインターナリゼーションの際に細胞内に留まる(Sharkey, R. M., et al. Cancer Immunol. Immunother. 44: 179-88, 1997)。９０Ｙの短い物理的半減期はエプラツズマブの長い半減期をある程度埋め合わせ、それらの組合せの合理性をもたらす。
【０００７】
ＲＡＩＴは通常、１回の点滴として投与する。しかし、O’Donoghue, J. A., Dosimetric Principles of Targeted Radiotherapy, in Radioimmunotherapy of Cancer, A. R. Fritzberg (ed.), Marcel Dekker, Inc., p. 1-20, New York, Basel, 2000に概要が示されているように、線量分割は吸収量の不均一性の問題をよりよく扱えることから、線量分割アプローチは理論的利点がある。また、放射性標識抗体の多量単回投与を数回の少量投与に分割することにより治療効果が改善可能であることを支持する試験データもある（Schlom, J. et al. J. Natl. Cancer Inst. 82: 763-71, 1990)。マウス抗体を用い、二回ならびに多回点滴によるアプローチが臨床上探求されている(DeNardo, G. L., et al. Cancer Biother. Radiopharm. 13: 239-54, 1998 ; Vose, J. M., et al. J Clin. Oncol. 18: 1316-23, 2000)。
【０００８】
ＣＤ２２抗原の発現の腫瘍間変動が報告されている。５人の患者からの新鮮腫瘍サンプルでは、５２〜８９％のリンパ腫細胞が抗ＣＤ２２ＭＡｂ  ＨＤ６の抗原を有することが判明している(Press, O. W. et al. Cancer Res. 49: 4906-12, 1989)。長距離β放射体を用いるＲＡＩＴの、主張されている一つの利点は、それらが標的細胞の近傍の抗原陰性腫瘍細胞を死滅させることができることである。治療前に腫瘍細胞の抗原発現を評価することにより、抗ＣＤ２２  ９０Ｙ標識エプラツズマブを用いるＲＡＩＴの状況下で、この主張の臨床的妥当性を検討することができよう。
【０００９】
線量分割の理論的利点とそれを支持する公表試験データを確認するために研究を行った。この研究は放射性標識ヒト化抗体を用いて線量分割ＲＡＩＴの実現可能性を検討することを意図したものであった。線量測定のために、１１１Ｉｎで標識したヒト化ＣＤ２２  Ｍａｂであるエプラツズマブを１００ｍｇ前投与した後、９０Ｙ標識エプラツズマブを７．５ｍＣｉ／ｍ２までの線量で、１週間に１回、最長２〜３週間、分割投与したところ、耐容性に優れ、かつ、有効な放射免疫療法が得られた(Linden et al., Cancer Biother Radiopharm 2002; 17: 490 [abstract 47])。これらの臨床試験は、放射性免疫複合体の分割療法が実現可能であることを示唆するが、安全性と効力の点で単回高用量の放射性免疫複合体の投与との比較にはならなかった。１１１Ｉｎを伴う最初の「線量測定」用量は抗体１００ｍｇを含んでおり、連続注射の各々もまたこの裸の抗体の用量を含んでいたので、少なくとも３００ｍｇとなるエプラツズマブの用量が、ＣＤ２０抗体に関する、挙げられている他の試験で示唆されたような前投与効果としても役立つかどうかも決定することができなかった。従って、これらの試験からは、このような放射免疫療法、特にＣＤ２２抗体を用いるものに前投与の必要があるかどうか説明することができなかった。
【００１０】
本発明者らは今般、先行技術で実施されているように正常組織および脾臓の抗原部位を飽和させるために、他の公開研究およびＫａｍｉｎｓｋｉの米国特許第５，５９５，７２１号とは対照的に、本発明では前投与を用いないことを見出した。本明細書に開示される発明は、先行技術で実施されているような高用量抗体前投与の必要はないことを明らかに示す。
【発明の概要】
【００１１】
よって、本発明の目的は、非放射性標識抗体、フラグメントまたは融合タンパク質の前投与を行わず、治療組成物を投与することにより哺乳類の疾病を治療するための方法を提供することである。
【００１２】
また、本発明の目的は、投与が簡単かつ容易なだけでなく、それ自体、治療活性を保持し、かつ、高用量の裸の抗体が腫瘍に影響を及ぼすことなく同等の奏功率を有する上記方法を作出することである。
【００１３】
本発明のさらなる目的は、緩徐進行型リンパ腫においてのみ効果が示されている先行技術が実証するものとは対照的に、急速進行型非ホジキンリンパ腫により有効な効果を示す方法を提供することである。
【００１４】
これら、およびその他の目的は、本発明の一つの実施形態に従い、薬学上許容されるビヒクルと少なくとも一種のコンジュゲート抗体もしくはそのフラグメント、またはコンジュゲート抗体融合タンパク質もしくはそのフラグメントとを含んでなる治療組成物を哺乳類に同時または逐次投与することを含み、非放射性標識抗体、フラグメントまたは融合タンパク質の前投与が行われない、哺乳類の疾患を治療するための方法の提供によって達成される。腫瘍細胞が標的逸出しないようにするための維持療法としては、この非コンジュゲート抗体、フラグメントまたは融合タンパク質を、場合により、コンジュゲート抗体、フラグメントまたは融合タンパク質とともに加えてもよい。
【００１５】
好ましい実施形態では、本発明は、Ｂ細胞関連悪性腫瘍などの疾病の処置法を対象とする。さらにまた、本発明は、自己免疫疾患ならびにＴ細胞関連悪性腫瘍の治療にも有用である。
【００１６】
もう一つの好ましい実施形態では、本発明のコンジュゲートおよび非コンジュゲート抗体、フラグメント、および融合タンパク質は、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１４、ＣＤ１５、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２５、ＣＤ３３、ＣＤ３７、Ｄ３８、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ５２、ＣＤ５４、ＣＤ７４、ＣＤ８０、ＣＤ１２６、Ｉａ、ＨＭＩ．２４、ＨＬＡ−ＤＲ、テネイシン、ＭＵＣ１およびＢ細胞腫瘍関連抗原（血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）および胎盤増殖因子（ＰｌＧＦ）などの血管内皮抗原を含む）からなる群から選択される抗原に向けることができる。これに関して、本発明のコンジュゲートおよび／または非コンジュゲート抗体、フラグメントまたは融合タンパク質は同じであっても異なっていてもよい。さらに、これらの抗体はヒト、ネズミ、キメラ、類人霊長類化またはヒト化抗体であってもよい。さらにまた、これらの抗体、フラグメントまたは融合タンパク質は完全ＩｇＧ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆ（ａｂ）２、Ｆａｂ’、Ｆａｂ、ｓｃＦｖｓ、ダイアボディー(diabody)、トリアボディー(triabody)またはテトラボディー(tetrabody)からなる群から選択されてよく、少なくとも一腫の治療薬と結合させることができる。
【００１７】
本発明のもう一つの態様によれば、上記のように、ヒトおよび家畜または伴侶動物などの哺乳類被験体が、薬物、毒素、免疫調節剤、キレート剤、ホウ素化合物、光力学剤、および放射性核種からなる群から選択される一以上の治療薬と結合されている一以上の抗体で治療される方法が提供される。
【００１８】
さらにもう一つの実施形態では、本発明の治療組成物は抗体または免疫調節剤を伴う抗体の前記組合せの融合タンパク質を含んでなる。これらの融合抗体は異なる抗原に対する抗体ならびに同じ抗原の異なるエピトープに対する抗体を含んでもよい。
【００１９】
本発明は、コンジュゲートおよび非コンジュゲート抗体が１回当たり２０〜６００ミリグラムタンパク質、より好ましくは１回当たり２０〜１５０ミリグラムタンパク質、最も好ましくは１回当たり２０〜１００ミリグラムタンパク質の好ましい用量で哺乳類に非経口投与される抗ＣＤ２２モノクローナルである上記方法を意図する。さらに、哺乳類は抗ＣＤ２２抗体を、好ましくは１回当たり２０〜１５０ミリグラムタンパク質、より好ましくは１回当たり２０〜１００ｍｇタンパク質の反復非経口投与として受容してよい。このような用量は、例えば、Juweid et al., Clin. Cancer Res. 5: 3292s-3303s, 1999がこれまでの実施しているように（１１１Ｉｎまたは他の診断用同位元素を結合させたＣＤ２２  Ｍａｂ５０ｍｇの事前の投与が必要であった）、ターゲッティングの改善または線量測定のいずれかの目的で前投与する必要のない実際の治療用量として投与されることを認識することが重要である。これまでに事前投与なく、種々のタンパク質用量の抗体による治療用放射性免疫複合体の直接有効性を評価するような研究はなかった。
【００２０】
もう一つの好ましい実施形態では、この哺乳類の疾病の治療方法は、薬学上許容されるビヒクルと、少なくとも一つの標的抗原および治療薬と結合する多重特異性多価抗体、フラグメントまたは融合タンパク質複合体を含んでなる治療組成物を哺乳類に投与することを含み、非放射性標識抗体の前投与を行わない。
【００２１】
さらにもう一つの好ましい実施形態では、この哺乳類の疾病の治療方法は、
（ａ）少なくとも一つの標的抗原と結合する多重特異性多価抗体、フラグメントまたは融合タンパク質を含んでなる組成物を哺乳類に投与すること；
（ｂ）場合により、その組成物に非局在抗体を循環から排除させるためのクリアリング剤；および
（ｃ）該多重特異性多価抗体、フラグメントまたは融合タンパク質と結合する、薬学上有効な量の治療複合体を該哺乳類に投与すること
を含んでなり、非放射性標識抗体の前投与を行わない。
本発明の他の目的、特徴および利点は以下の詳細な説明および添付の特許請求の範囲から明らかになる。
【好ましい実施形態の詳細な説明】
【００２２】
特に断りのない限り、単数としての用語への言及はその一以上を意味する。
【００２３】
１．定義
以下の説明では多数の専門用語が使用されているが、以下、本発明の理解を容易にするために定義を示す。
【００２４】
非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）とは、リンパ節、脾臓、他の臓器およびしばしば骨髄が関わるリンパ腫疾患の一群を意味する。少なくとも３０の異なるＮＨＬの種類が存在する。二つの一般型として濾胞性（低悪性度または緩徐進行型）と急速進行型びまん性大細胞（中悪性度または高悪性度）リンパ腫がある。
【００２５】
本明細書において抗体とは、全長（すなわち、天然に存在するまたは通常の免疫グロブリン遺伝子フラグメント組換えプロセスにより形成される）免疫グロブリン分子（例えばＩｇＧ抗体）、または抗体フラグメントのような、免疫学的に有効な（すなわち、特異的に結合する）免疫グロブリン分子の部分を意味する。
【００２６】
抗体フラグメントとは、Ｆ（ａｂ'）２、Ｆ（ａｂ）２、Ｆａｂ’、 Ｆａｂ、Ｆｖ、ｓｃＦｖなどのような抗体の部分を意味する。構造に関係なく、抗体フラグメントは完全な抗体により認識される同じ抗原と結合する。例えば、抗ＣＤ２２モノクローナル抗体フラグメントは、ＣＤ２２のエピトープと結合する。「抗体フラグメント」とはまた、特定の抗原に結合して複合体を形成することにより抗体のようにふるまういずれの合成または遺伝子操作タンパク質も含む。例えば、抗体フラグメントとしては、重鎖および軽鎖の可変領域からなる「Ｆｖ」フラグメントのような可変領域からなる単離されたフラグメント、軽鎖および重鎖可変領域がペプチドリンカーにより接続されている組換え単鎖ポリペプチド分子（「ｓｃＦｖタンパク質」）、および超過変領域を模倣したアミノ酸残基からなる最小認識ユニットが挙げられる。
【００２７】
裸のまたは非放射性抗体は一般に治療薬とコンジュゲートしていない（非コンジュゲート）完全な抗体である。これは抗体分子のＦｃ部分が、細胞溶解を引き起こす作用をするようメカニズムを設定する補体結合およびＡＤＣＣ（抗体依存性細胞傷害）のようなエフェクター機能を提供するためである。しかし、治療機能のためにはこのＦｃ部分は必要なく、アポトーシスなどの他のメカニズムによって役割を果たす可能性がある。裸の抗体として、また、ポリクローナルおよびモノクローナル抗体の双方、ならびにヒト以外の霊長類化、キメラ、ヒト化またはヒト抗体のようなある種の組換え抗体を含む非放射性標識抗体である。
【００２８】
キメラ抗体は、一つの種、好ましくは齧歯類の抗体由来の抗体の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む可変ドメインを含み、この抗体分子の定常ドメインはヒト抗体の定常領域に由来する組換えタンパク質である。獣医学領域への適用のためには、このキメラ抗体の定常ドメインは、ネコまたはイヌのような他の種由来のものであってもよい。
【００２９】
ヒト化抗体は、一つの種、例えば齧歯類抗体由来の抗体のＣＤＲが齧歯類抗体の重鎖および軽鎖可変鎖からヒト重鎖および軽鎖可変ドメインに移された組換えタンパク質である。抗体分子の定常ドメインは、ヒト抗体の定常ドメインに由来する。
【００３０】
ヒト抗体は、抗原刺激に応答して特定のヒト抗体を産生するために「操作された」トランスジェニックマウスから得られる抗体である。この技術では、ヒト重鎖および軽鎖遺伝子座のエレメントが、内在性重鎖および軽鎖遺伝子座が標的破壊されている胚幹細胞株由来のマウス系統に導入される。このトランスジェニックマウスはヒト抗原に特異的なヒト抗体を合成することができ、このマウスをヒト抗体を分泌するハイブリドーマを作製するために使用することができる。トランスジェニックマウスからヒト抗体を得るための方法は、Green et al., Nature Genet. 7:13 (1994), Lonberg et al., Nature 368:856 (1994),およびTaylor et al., Int. Immun. 6:579(1994)に記載されている。完全ヒト抗体はまた、遺伝子または染色体トランスフェクション法ならびにファージディスプレイ技術により構築でき、これらは総て当技術分野で公知である。例えば、非免疫ドナー由来の免疫グロブリン可変ドメイン遺伝子レパートリーからのイン・ビトロにおけるヒト抗体およびそのフラグメントの産生に関しては、McCafferty et al., Nature 348:552-553（1990）を参照することができる。この技術では、抗体可変ドメイン遺伝子がフレーム内で糸状バクテリオファージの主要または微量コートタンパク質遺伝子へクローニングされ、機能的抗体フラグメントとしてファージ粒子表面上に提示される。この糸状粒子はファージゲノムの単鎖ＤＮＡコピーを含み、抗体の機能特性に基づいて選択すれば、それらの特性を示す抗体をコードする遺伝子が選択されることになる。このように、ファージはＢ細胞のいくつかの特性を模倣する。ファージディスプレイはさまざまな形式で行うことが可能であり、総説としては例えば、Johnson and Chiswell, Current Opinion in Structural Biology 3:5564-571 (1993)を参照することができる。
【００３１】
ヒト抗体はまた、イン・ビトロで活性化されたＢ細胞により産生させることができる。引用することによりその全開示内容を本明細書の一部とする、米国特許第５，５６７，６１０号および同第５，２２９，２７５号を参照することができる。
【００３２】
治療薬は、個別に、同時にまたは逐次に、抗体部分とともにまたは抗体部分（すなわち抗体、または抗体フラグメント、またはサブフラグメント）と結合させて投与される分子または原子であり、疾病の治療に有用である。治療薬の例としては、抗体、抗体フラグメント、薬物、毒素、ヌクレアーゼ、ホルモン、免疫調節剤、キレート剤、ホウ素化合物、光力学剤または色素および放射性同位元素が挙げられる。
【００３３】
免疫調節剤は、存在すれば、身体の免疫系を変更、抑制または刺激する、本発明で定義されたような治療薬である。通常、本発明で有用な免疫調節剤は免疫細胞の増殖を刺激するか、またはマクロファージ、Ｂ細胞、および／またはＴ細胞など、免疫応答カスケードにおいて活性化される。
【００３４】
免疫複合体は抗体成分と治療薬または診断薬との複合体である。この診断薬は放射性または非放射性標識、造影剤（例えば、磁気共鳴イメージング、コンピューター断層撮影法または超音波診断法などに用いられる）を含んでもよく、この放射性核種はγ、β、α、オージェ電子、または陽電子放射性同位元素であり得る。
【００３５】
発現ベクターは、宿主細胞中で発現される遺伝子を含んでなるＤＮＡ分子である。通常、遺伝子発現は構成または誘導プロモーター、組織特異的調節エレメントおよびエンハンサーをはじめとする、特定の調節エレメントの制御下に置かれる。このような遺伝子は調節エレメントに「作動可能なように連結されている」といわれる。
【００３６】
組換え宿主は、クローニングベクターまたは発現ベクターのどちらかを含む任意の原核または真核細胞であってもよい。この語はまた、それらの原核または真核細胞、ならびに宿主細胞の染色体もしくはゲノム、または宿主細胞の細胞中にクローニングされた遺伝子を含むように遺伝子操作されたトランスジェニック動物も含む。好適な哺乳類宿主細胞としては、ＳＰ２／０細胞およびＮＳ０細胞のような骨髄腫細胞、ならびにチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ハイブリドーマ細胞株および抗体発現に有用な他の哺乳類宿主細胞が挙げられる。また、ｍＡｂおよび他の融合タンパク質の発現に特に有用なものはＷＯ ００６３４０３ Ａ２に開示されているヒト細胞株ＰＥＲ．Ｃ６であり、ＣＨＯ、ＣＯＳ、 Ｖｅｒｏ、 ＨｅＬａ、 ＢＨＫおよびＳＰ２などの従来の哺乳類細胞株に比べて２〜２００倍の組換えタンパク質を産生する。免疫系が改変された特別なトランスジェニック動物は完全なヒト抗体を作製するために特に有用である。
【００３７】
本明細書において、抗体融合タンパク質とは、特異性が同じまたは異なる二以上の同じまたは異なる単鎖抗体または抗体フラグメントのセグメントが連結されている、組換えにより生産された抗原結合分子である。融合タンパク質の原子価は、この融合タンパク質が単一の抗原またはエピトープに対して結合アームまたは結合部位をいくつ有しているかを示し、すなわち、一価、二価、三価または多価などである。抗体融合タンパク質が多価であるということは、抗原に対する結合において複数の相互作用を利用でき、従って、その抗原に結合する結合力が高まることを意味する。特異性は、抗体融合タンパク質がいくつの抗原またはエピトープと結合できるかを示し、すなわち、一重特異性、二重特異性、三重特異性、多重特異性などである。これらの定義により、例えばＩｇＧのような天然の抗体は、結合アームを二本持つために二価であるといえるが、この抗体は一つのエピトープにしか結合しないので一重特異性である。一重特異性、多価融合タンパク質の一つのエピトープに対して一を超える結合部位を有するが、一つのエピトープとしか結合せず、例えば、同じ抗原と反応性のある二つの結合部位を有するダイアボディーがある。この融合タンパク質は、単一の抗体成分、異なる抗体成分の多価もしくは多重特異性の組合せ、または同じ抗体成分の複数のコピーを含んでもよい。この融合タンパク質はさらに抗体または抗体フラグメントおよび治療薬を含んでもよい。このような融合タンパク質に好適な治療薬の例としては、免疫調節剤（「抗体-免疫調節剤融合タンパク質」）および毒素（「抗体-毒素融合タンパク質」）が挙げられる。好ましい一つの毒素としては、リボヌクレアーゼ（ＲＮアーゼ）であり、好ましくは組換えＲＮアーゼである。
【００３８】
多重特異性抗体は、同時に少なくとも二つの異なる構造の標的、例えば二つの異なる抗原、同じ抗原上の二つの異なるエピトープ、またはハプテンおよび／または抗原、もしくはエピトープ、に結合できる抗体である。一つの特異性は、Ｂ細胞、Ｔ細胞、骨髄性細胞、形質細胞または肥満細胞抗原もしくはエピトープに対するものであろう。もう一つの特異性は、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１４、ＣＤ１５、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２５、ＣＤ３３、ＣＤ３７、Ｄ３８、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ５２、ＣＤ５４、ＣＤ７４、ＣＤ８０、ＣＤ１２６、Ｉａ、ＨＭＩ．２４、ＨＬＡ−ＤＲ、テネイシン、ＭＵＣ１およびＢ細胞腫瘍関連抗原（ＶＥＧＦおよびＰｌＧＦなどの血管内皮抗原を含む）など、同じ細胞種上の異なる抗原に対するものであり得る。多重特異性、多価抗体は一を超える結合部位を有する構築体であり、その結合部位は異なる特異性を有する。例えばダイアボディーでは、一つの結合部位は一つの抗原と反応し、もう一方は他の抗原と反応する。
【００３９】
二重特異性抗体は、同時に二つの異なる構造の標的に結合できる抗体である。二重特異性抗体（ｂｓＡｂ）および二重特異性抗体フラグメント（ｂｓＦａｂ）は、例えば、Ｂ細胞、Ｔ細胞、骨髄性細胞、形質細胞および肥満細胞抗原またはエピトープに特異的に結合する少なくとも一つのアーム、および治療薬または診断薬を担持するターゲッティング可能な複合体に特異的に結合する少なくとも一つの他のアームを有する。分子工学技術を用いて種々の二重特異性融合タンパク質を作製できる。一つの形態においては、二重特異性融合タンパク質は一価であり、例えば一つの抗原に対する一つの結合部位を有するｓｃＦｖと第二の抗原に対する単一結合部位を有するＦａｂフラグメントからなる。もう一つの形態においては、この二重特異性融合タンパク質は二価であり、例えば一つの抗原に対して一つの結合部位を有するＩｇＧと第二の抗原に対して二つの結合部位を有する二つのｓｃＦｖからなる。
【００４０】
イヌ化またはネコ化抗体は、齧歯類（または他の種）のモノクローナル抗体の相補性決定領域が、齧歯類（または他の種）免疫グロブリンの重鎖および軽鎖可変領域から、それぞれイヌまたはネコの免疫グロブリン可変ドメイン中に移されている組換えタンパク質である。
【００４１】
類人霊長類化抗体は、類人霊長類（例えばサル）のモノクローナル抗体の相補性決定領域が齧歯類（または他の種）免疫グロブリンの重鎖および軽鎖可変領域から、類人霊長類の免疫グロブリン可変ドメイン中に移されている組換えタンパク質である。
【００４２】
家畜は、ウマ、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ラマ、アルパカおよびブタのような大型動物、ならびに伴侶動物を含む。好ましい実施形態においては、家畜はウマである。
【００４３】
伴侶動物は、ペットとして飼われる動物を含む。これらは主としてイヌおよびネコであるが、モルモット、ハムスター、ラットおよびフェレットのような小型齧歯類、またサルのような類人霊長類も含まれる。好ましい実施形態において、伴侶動物とはイヌまたはネコである。
【００４４】
「クリアリング剤」とは、ターゲッティング部分の結合部位と結合する抗体を意味し、ここで、ターゲッティング部分は抗体、抗原結合抗体フラグメントまたは非抗体ターゲティング部分であり得る。より好ましい方法では、クリアリング剤は、米国出願出願番号０８／４８６，１６６に記載のように、第一の工程で用いる複合体のモノクローナル抗体に対する抗イディオタイプのモノクローナル抗体である。もう一つの好ましい実施形態では、クリアリング剤は、クリアリング剤を肝臓中のアシアロ糖タンパク質受容体によって循環から急速に排除させるガラクトースなどの炭水化物の複数の残基で置き換えられる。
【００４５】
２．キメラ、ヒト化およびヒト抗体をはじめとするモノクローナル抗体の作製
モノクローナル抗体（ＭＡｂ）は特定の抗原に対する抗体の均質な集団であり、その抗体はただ一種の抗原結合部位を含んでなり、抗原決定基上のただ一つのエピトープに結合する。特定の抗原に対する齧歯類モノクローナル抗体は、当業者に公知の方法により得ることができる。例えば、Kohler and Milstein, Nature 256:495（1975）、およびColigan et al.(eds.), CURRENT PROTOCOLS IN IMMUNOLOGY, VOL. 1, pages 2.5.1-2.6.7（John Wiley & Sons 1991）[以下「Coligan」]を参照することができる。要するに、マウスに抗原を含む組成物を注射し、血清サンプルを採取して抗体産生を確認し、脾臓を摘出してＢリンパ球を採取し、そのＢリンパ球と骨髄腫細胞を融合させてハイブリドーマを作製し、そのハイブリドーマをクローニングし、抗原に対する抗体を産生する陽性クローンを選択し、抗原に対する抗体を産生するクローンを培養して、その抗体をハイブリドーマ培養物から単離することによりモノクローナル抗体を得ることができる。
【００４６】
ＭＡｂは、ハイブリドーマ培養液から種々の十分確立された技術により単離、精製できる。このような単離技術としては、プロテインＡセファロースを用いるアフィニティークロマトグラフィー、サイズ排除クロマトグラフィーおよびイオン交換クロマトグラフィーが挙げられる。例えば、Coligan at pages 2.7.1-2.7.12およびpages 2.9.1-2.9.3.を参照することができる。また、Baines et al.,"Purification of Immunogloburin G (IgG),"in METHODS IN MOLECULAR BIOLOGY, VOL. 10, pages 79-104（The Humana Press, Inc. 1992）も参照することができる。
【００４７】
免疫原に対してまず抗体を惹起させた後、それらの抗体の配列を決定し、次いで組換え技術により作製することができる。マウス抗体および抗体フラグメントのヒト化およびキメラ化は当業者に周知である。例えば、ヒト化モノクローナル抗体は、マウス免疫グロブリンの重鎖および軽鎖可変鎖由来のマウス相補性決定領域をヒト可変ドメインに移し、次いでフレームワーク領域中のヒト残基をマウスの対応物で置換することにより作製する。ヒト化モノクローナル抗体由来の抗体成分を使用することによってマウス定常領域の免疫原性に伴う潜在的な問題が防げる。
【００４８】
マウス免疫グロブリン可変ドメインのクローニングのための一般的な技術は、例えば、引用することによりその全開示内容が本明細書の一部とされる、Orlandi et al., Proc. Natl Acad. Sci. USA 86:3833 (1989)に記載されている。キメラ抗体構築のための技術は当業者に周知である。例えば、Leung et al., Hybridoma 13:469 (1994)は、ＬＬ２モノクローナル抗体、抗ＣＤ２２抗体のＶκおよびＶＨドメインをコードするＤＮＡ配列をそれぞれのヒトκおよびＩｇＧ１定常領域ドメインと組み合わせることでＬＬ２キメラをいかに作製したかが記載されている。この公報はまた、ＬＬ２の軽鎖および重鎖可変領域のヌクレオチド配列、ＶＫおよびＶＨをそれぞれ提供する。ヒト化ＭＡｂを産生する技術は、例えばJones et al., Nature 321:522 (1986), Riechmann et al., Nature 332:323 (1988), Verhoeyen et al., Science 239:1534 (1988), Carter et al., Proc. Natl Acad. Sci. USA 89:4285 (1992), Sandhu, Crit. Rev. Biotech. 12:437 (1992),およびSinger et al., J Immun. 150:2844 (1993)に記載されており、これらはそれぞれ引用することによりその全開示内容を本明細書の一部とする。
【００４９】
キメラ抗体は、齧歯類抗体のような一種の動物由来のＣＤＲを含む可変ドメインを含む組換えタンパク質であり、抗体分子の残りの部分、すなわち定常ドメインはヒト抗体に由来する。従って、キメラモノクローナル抗体はまた、キメラｍＡｂの可変ドメイン中のマウスＦＲ配列を、一以上の異なるヒトＦＲと置換することによりヒト化することができる。具体的には、マウスＣＤＲをマウス免疫グロブリンの重鎖および軽鎖可変鎖からヒト抗体の相当する可変ドメインに転移させる。マウスＣＤＲをヒトＦＲに単に転移させるだけでは、しばしば抗体親和性の低下または損失さえ起こるために、マウス抗体の元の親和性を回復させるためにはさらなる修飾が必要となる。これは、そのエピトープに対して良好な結合親和性を有する抗体を得るために、ＦＲ領域の一以上のいくつかのヒト残基をマウスの相当部分と置換することにより行うことができる。例えば、Tempest et al., Biotechnology 9:266（1991）およびVerhoeyen et al., Science 239:1534 (1988)を参照することができる。さらに、ヒト化、キメラおよびヒトＭＡｂの特定のエピトープに対する親和性は、ＣＤＲの突然変異誘発により高めることができ、その結果、より低用量の抗体が突然変異前の高用量の低親和性ＭＡｂと同等の有効性を示し得る。例えば、ＷＯ００２９５８４Ａ１を参照することができる。
【００５０】
本発明の抗体を作製するもう一つの方法は、トランスジェニック家畜の乳汁中での産生によるものがある。例えば、Colman, A., Biochem. Soc. Symp., 63:141-147,1998; 米国特許第５，８２７，６９０号を参照することができる。なお、双方とも引用することによりその全開示内容を本明細書の一部とする。対をなす免疫グロブリン重鎖および軽鎖をコードするＤＮＡセグメントをそれぞれ含む二つのＤＮＡ構築物体を作製する。このＤＮＡセグメントを、哺乳類上皮細胞中で選択的に発現されるプロモーター配列を含む発現ベクターへクローニングする。例としては、限定されるものではないが、ウサギ、ウシおよびヒツジのカゼイン遺伝子、ウシα−ラクトグロブリン遺伝子、ヒツジβ−ラクトグロブリン遺伝子、およびマウスホエー酸タンパク質遺伝子由来のプロモーターが挙げられる。好ましくは、挿入されたフラグメントの３’側に哺乳類特異的遺伝子由来の同族ゲノム配列が隣接する。これによりポリアデニル化部位および転写安定化配列が提供される。この発現カセットを受精した哺乳類の卵子の前核に同時注入し、次いでレシピエント雌の子宮に着床させて妊娠させる。出産後、サザン分析により導入遺伝子の存在に関してその後代をスクリーニングする。抗体が存在するためには、重鎖および軽鎖双方の遺伝子が同時に同じ細胞で発現されなければならない。トランスジェニック雌動物から得た乳汁を当技術分野で公知の標準的な免疫学的方法により、該抗体または抗体フラグメントの存在と機能に関して分析する。この抗体は当技術分野で公知の標準的方法により、乳汁から精製することができる。
【００５１】
ヒト化、キメラまたはヒト抗ＣＤ２０抗体との併用療法のための、本発明の完全なヒト抗体、すなわちヒト抗ＣＤ２０  ＭＡｂ、または他のヒト抗体、例えば抗ＣＤ１９、抗ＣＤ２２、抗ＣＤ２１もしくは抗ＣＤ２３  ＭＡｂは、トランスジェニック非ヒト動物から得ることができる。例えば、双方とも引用することによりその全開示内容が本明細書の一部とされるMendez et al., Nature Genetics, 15: 146-156 (1997); 米国特許第５，６３３，４２５号を参照することができる。例えば、ヒト抗体はヒト免疫グロブリン遺伝子座を有するトランスジェニックマウスから回収することができる。このマウス体液性免疫系は、内在する免疫グロブリン遺伝子を不活化し、ヒト免疫グロブリン遺伝子座を導入することによりヒト化する。ヒト免疫グロブリン遺伝子座は極めて複雑で、多数の離散セグメントを含み、これらはヒトゲノムのほぼ０．２％を占める。トランスジェニックマウスが十分な抗体レパートリーを産生できることを保証するには、ヒト重鎖および軽鎖遺伝子座の大きな部分をマウスゲノムに導入しなければならない。これは、生殖系構造においてヒト重鎖または軽鎖免疫グロブリン遺伝子座のいずれかを含む酵母人工染色体（ＹＡＣ）の形成に始まる段階的なプロセスで達成される。それぞれの挿入配列はほぼ１Ｍｂのサイズなので、ＹＡＣ構築体は免疫グロブリン遺伝子座の重複フラグメントの相同的組換えを必要とする。一つは重鎖遺伝子座、もう一つは軽鎖遺伝子座を含む二つのＹＡＣを、ＹＡＣ含有酵母スフェロプラストとマウス胚幹細胞の融合を通じてマウスに個々に導入する。次いで、胚幹細胞クローンをマウス胚盤胞にマイクロインジェクションする。得られたキメラ雄動物を、生殖細胞系を通じてＹＡＣを伝達する能力に関してスクリーニングし、マウス抗体産生を欠損しているマウスと交配させる。一種はヒト重鎖遺伝子座を含み、もう一種はヒト軽鎖遺伝子座を含む二種のトランスジェニック系統を繁殖させ、免疫感作に応答してヒト抗体を産生する子孫を作出する。
【００５２】
二重特異性ｍＡｂを産生するさらなる最新の方法は、付加的なシステイン残基を有し、よって一般的な免疫グロブリンアイソタイプよりも強く架橋結合している人工的組換えｍＡｂを含む。例えば、FitzGerald et al., Protein Eng. 10（10）:1221-1225, 1997を参照することができる。もう一つのアプローチは、二以上の異なる単鎖抗体または必要とされる二重特異性を有する抗体フラグメントセグメントを連結する組換え融合タンパク質を設計することである。例えば、Coloma et al., Nature Biotech. 15:159-163, 1997を参照することができる。分子工学技術を用いて様々な二重特異性融合タンパク質を作製できる。一つの形態においては、二重特異性融合タンパク質は一価であり、例えば一つの抗原に対する単一結合部位を有するｓｃＦｖと、第二の抗原に対する単一結合部位を有するＦａｂフラグメントからなる。もう一つの形態においては、二重特異性融合タンパク質は二価であり、例えば、一つの抗原に対する二つの結合部位を有するＩｇＧと、第二の抗原に対する二つの結合部位を有する二つのｓｃＦｖからなる。
【００５３】
二以上の異なる単鎖抗体または抗体フラグメントを連結している二重特異性融合タンパク質も、同様の方法で作製する。種々の融合タンパク質を作製するためには組換え法を用いることができる。例えば、ヒト化モノクローナル抗ＣＤ２０抗体由来のＦａｂフラグメントおよびマウス抗ｄｉＤＴＰＡ由来のｓｃＦｖを含んでなる融合タンパク質を作製することができる。ＧＧＧＳのような柔軟なリンカーは、ｓｃＦｖを抗ＣＤ２０抗体の重鎖の定常領域に結合させる。あるいは、ｓｃＦｖを別のヒト化抗体の軽鎖の定常領域に結合させることができる。重鎖ＦｄのｓｃＦｖとのフレーム内結合のために必要な適当なリンカー配列は、ＰＣＲ反応を介してＶＬおよびＶＫドメインに導入される。次に、ｓｃＦｖをコードするＤＮＡフラグメントをＣＨ１ドメインをコードするＤＮＡ配列を含む足場ベクターに連結する。これにより得られたｓｃＦｖ−ＣＨ１構築物を切り出して、抗ＣＤ２０抗体のＶＨ領域をコードするＤＮＡ配列を含むベクターに連結する。得られたベクターは、二重特異性融合タンパク質の発現のための哺乳類細胞のような適当な宿主細胞をトランスフェクトするために使用することができる。
【００５４】
このような二価、二重特異性抗体の例は、米国特許出願２００２年８月１日出願の６０／３９９，７０７；２００２年３月１日出願の６０／３６０，２２９；２００２年６月１４日出願の６０／３８８，３１４；および２００２年４月５日出願の１０／１１６に見出せる。なお、これらは総て、引用することにより本明細書の一部とされる。
【００５５】
３．抗体フラグメントの製造
特定のエピトープを認識する抗体フラグメントは、公知の技術により作製し得る。抗体フラグメントは、Ｆ（ａｂ'）２、Ｆａｂ'、Ｆａｂ、Ｆｖ、ｓＦｖなどの抗体の抗原結合部分である。他の抗体フラグメントとしては、限定されるものではないが、抗体分子のペプシン消化により作製できるＦ（ａｂ）'２フラグメント、およびＦ（ａｂ）'２フラグメントのジスルフィド結合を還元することにより作製できるＦａｂ'フラグメントが挙げられる。あるいは、所望の特異性を有するモノクローナルＦａｂ’フラグメントの迅速で容易な同定を可能にするには、Ｆａｂ’発現ライブラリーを構築することができる（Huse et al., 1989, Science, 246:1274-1281）。本発明は抗体および抗体フラグメントを包含する。
【００５６】
単鎖Ｆｖ分子（ｓｃＦｖ）は、ＶＬドメインおよびＶＨドメインを含んでなる。このＶＬおよびＶＨドメインは組み合わさって標的結合部位を形成している。これらの二つのドメインはペプチドリンカー（Ｌ）によりさらに共有結合されている。ｓｃＦｖ分子は、ＶＬドメインがｓｃＦｖ分子のＮ末端部である場合、ＶＬ−Ｌ−ＶＨ、またはＶＨドメインがｓｃＦｖ分子のＮ末端部である場合、ＶＨ−Ｌ−ＶＬと表される。ｓｃＦｖ分子の作製方法、および好適なペプチドリンカーの設計方法は、米国特許第４，７０４，６９２号、同第４，９４６，７７８号、R. Raag and M. Whitlow,"Single Chain Fvs."FASEB 9:73-80（1995）およびR. E. Bird and B. W. Walker,"Single Chain Antibody Variable Regions,"TIBTECH, 9:132-137(1991)に記載されている。これらの参照文献は引用することにより本明細書の一部とされる。
【００５７】
抗体フラグメントは、全長抗体のタンパク質加水分解、またはフラグメントをコードするＤＮＡの、大腸菌もしくは他の宿主中での発現により調製することができる。抗体フラグメントは、常法により全長抗体のペプシンまたはパパイン消化により得られる。例えば、抗体フラグメントは抗体をペプシンで酵素的に切断して、Ｆ（ａｂ’）２で示される５Ｓのフラグメントを得ることにより作製することができる。このフラグメントはチオール還元剤、および所望によりジスルフィド結合の切断により生じるスルフヒドリル基の遮断基を用いてさらに切断することができ、３．５Ｓ  Ｆａｂ’一価フラグメントが得られる。あるいは、パパインを用いる酵素的切断により二つの一価Ｆａｂフラグメントと一つのＦｃフラグメントが直接的に生じる。これらの方法は、例えば、Goldenbergの米国特許第４，０３６，９４５号および同第４，３３１，６４７号、ならびにそこに含まれる参照文献に記載されており、これらの特許は引用することによりその全開示内が本明細書の一部とされる。また、Nisonoff et al., Arch Biochem. Biophys. 89:230(1960); Porter, Biochem. J 73:119(1959)、Edelman et al., in METHODS IN ENZYMOLOGY volume 1, page 422(Academic Press 1967)、および Coligan at pages 2.8.1-2.8.10および2.10.-2.10.4.も参照することができる。
【００５８】
抗体フラグメントのもう一つの形態は、単一の相補性決定領域（ＣＤＲ）をコードするペプチドである。ＣＤＲは抗体の可変領域のセグメントであり、抗体が結合するエピトープに対し相補的な構造であり、残りの可変領域よりもさらに変化に富んでいる。従って、ＣＤＲはしばしば超過変領域と呼ばれる。可変領域は三つのＣＤＲを含んでなる。ＣＤＲペプチドは、対象となる抗体のＣＤＲをコードする遺伝子を構築することにより得られる。このような遺伝子は、例えば抗体産生細胞のＲＮＡから可変領域を合成するためのポリメラーゼ連鎖反応を用いて調製される。例えば、Larrick et al., Methods:A Companion to Methods in Enzymology 2:106(1991); Courtenay-Luck,"Genetic Manipulation of Monoclonal Antibodies, "in MONOCLONAL ANTIBODIES:PRODUCTION, ENGINEERING AND CLINICAL APPLICATION, Ritter et al.(eds.), pages 166-179 (Cambridge University Press 1995);およびWard et al.,"Genetic Manipulation and Expression of Antibodies, "in MONOCLONAL ANTIBODIES:PRINCIPLES AND APPLICATIONS, Birch et al., (eds.), pages 137-185（Wiley-Liss, Inc. 1995）を参照することができる。
【００５９】
重鎖を分離して一価の軽鎖−重鎖フラグメントを形成し、さらにフラグメントを切断するような抗体を切断する他の方法、または他の酵素学的、化学的または遺伝学的技術も、それらのフラグメントが無傷の抗体により認識される抗原に結合する限り用いてよい。
【００６０】
４．多重特異性および多価抗体
本明細書に記載の併用療法に用いられる、同じ特異性を有する抗体も異なる特異性を有する抗体も多重特異性抗体（ＣＤ２０エピトープまたは抗原に対する少なくとも一つの結合部位とＣＤ２０または他の抗原上の別のエピトープに対する少なくとも一つの結合部位を含む）および多価抗体（同じエピトープまたは抗原に対して複数の結合部位を含む）
として作製することができる。
【００６１】
本発明は、標的細胞マーカーと特異的に結合する少なくとも一つの結合領域と、ターゲッティング可能な複合体と特異的に結合する少なくとも一つの他の結合領域を有する二重特異性抗体または抗体フラグメントを提供する。このターゲッティング可能な複合体は、この二重特異性抗体または抗体フラグメントの少なくとも一つの結合領域によって認識される少なくとも一つのエピトープを含んでなる、または担持する担体部分を含んでなる。
【００６２】
上記のような二重特異性抗体および抗体フラグメントを生産するには、様々な組換え法を使用できる。
本発明では多価抗体も意図される。この多価標的結合タンパク質は、第一および第二のポリペプチドの結合により構築される。第一のポリペプチドは、好ましくは免疫グロブリン軽鎖可変領域ドメインである第一の免疫グロブリン様ドメインに共有結合された第一の単鎖Ｆｖ分子を含んでなる。第二のポリペプチドは、好ましくは免疫グロブリン重鎖可変領域ドメインである第二の免疫グロブリン様ドメインに共有結合された第二の単鎖Ｆｖ分子を含んでなる。第一および第二の単鎖Ｆｖ分子は各々、標的結合部位を形成し、第一および第二の免疫グロブリン様ドメインは結合して第三の標的結合部位を形成する。
【００６３】
ＶＬ−Ｌ−ＶＨ立体配置を有する単鎖Ｆｖ分子（ただしＬはリンカー）は、ＶＨ−Ｌ−ＶＬ立体配置を有する別の単鎖Ｆｖ分子と結合し、二価の二量体を形成し得る。この場合、第一のｓｃＦｖのＶＬドメインおよび第二のｓｃＦｖ分子のＶＨドメインは結合して一つの標的結合部位を形成し、一方、第一のｓｃＦｖのＶＨドメインおよび第二のｓｃＦｖのＶＬドメインは結合して他の標的結合部位を形成する。
【００６４】
本発明のもう一つの実施形態は、非共有結合して三つの結合部位を形成し、そのうちの二つが一つの標的に対して親和性を有し、第三の結合部位は作製可能で診断薬および／または治療薬のための担体に結合しているハプテンに親和性を有する、二つの異種ポリペプチド鎖を含んでなる二重特異性、三価ターゲッティングタンパク質である。好ましくは、この結合タンパク質は二つの同じ抗原結合部位と一つの異なる抗原結合部位を有する。この二重特異性、三価ターゲッティング剤は二つの異なるｓｃＦｖを有し、第一のｓｃＦｖは短いリンカーにより別の抗体のＶＬドメインに連結された一つの抗体由来の二つのＶＨドメインを含み、第二のｓｃＦｖは短いリンカーにより他の抗体のＶＨドメインに連結された第一の抗体由来の二つのＶＬドメインを含む。ＶＨおよびＶＬドメインから多価、多重特異的薬剤を生成するこれらの方法によれば、一つのＶＨ鎖と一つのＶＬ鎖の非共有結合により多価および多重特異的ないずれの薬物でも生成できるという方法で、宿主生物中でＤＮＡプラスミドから合成された個々の鎖が完全なＶＨドメイン（ＶＨ鎖）または完全なＶＬドメイン（ＶＬ鎖）から構成されることになる。例えば、三価の三重特異性薬剤の形成では、ＶＨ鎖は三つのＶＨドメインのアミノ酸配列からなり、それぞれのドメインは特異性の異なる抗体に由来し、種々の長さのペプチドリンカーにより連結され、またＶＬ鎖は相補的ＶＬドメインからなり、ＶＨ鎖に使用されたものと同様のペプチドリンカーにより連結されている。抗体のＶＨおよびＶＬドメインは逆平行に結合しているため、本発明の好ましい方法では、ＶＬ鎖のＶＬドメインはＶＨ鎖のＶＨドメインとは逆の順序で配置されている。
【００６５】
５．ダイアボディー、トリアボディーおよびテトラボディー
本発明の抗体はまた、ダイアボディーとも呼ばれる、機能的二重特異性単鎖抗体（ｂｓｃＡｂ）の調製に使用でき、組換え法により哺乳類細胞において生産させることができる。例えば、引用することにより本明細書の一部とされる、Mack et al., Proc. Natl. Acad. Sci., 92:7021-7025,1995を参照することができる。例えば、ｂｓｃＡｂは組換え法によりグリシン−セリンリンカーを介して二つの単鎖Ｆｖフラグメントを結合することで作製する。問題の二つの抗体のＶ軽鎖（ＶＬ）およびＶ重鎖（ＶＨ）ドメインは、標準的ＰＣＲ法により単離される。次に、それぞれのハイブリドーマから得られたＶＬおよびＶＨのｃＤＮＡは二段階の融合ＰＣＲにおいて結合されて単鎖フラグメントを形成する。第一のＰＣＲ工程では（Ｇｌｙ４−Ｓｅｒ１）３リンカーを導入し、第二の工程ではＶＬおよびＶＨアンプリコンを結合させる。次いでそれぞれの単鎖分子を細菌発現ベクターへクローニングする。増幅後に単鎖分子の一つを切り出して問題の第二の単鎖分子を含む他のベクターへサブクローニングする。得られたｂｓｃＡｂフラグメントを真核細胞発現ベクターへサブクローニングする。機能性タンパク質の発現は、そのベクターをチャイニーズハムスター卵巣細胞へトランスフェクトすることにより得られる。二重特異性融合タンパク質も同様の方法で調製される。二重特異性単鎖抗体および二重特異性融合タンパク質は本発明の範囲内に含まれる。
【００６６】
例えば、ヒト化、キメラ、またはヒト抗ＣＤ２２モノクローナル抗体を、抗原特異的ダイアボディー、トリアボディー、およびテトラボディーを作製するために使用することができる。この単一特異性ダイアボディー、トリアボディー、およびテトラボディーは選択的に標的抗原に結合し、分子上の結合部位数が増加すると標的細胞に対する親和性が高まり、所望の位置における滞留時間が長くなるのが観察される。ダイアボディーに関しては、５つのアミノ酸残基のリンカーによりヒト化ＣＤ２２  ＭＡｂのＶKポリペプチドに連結されたヒト化ＣＤ２２  ＭＡｂのＶＨポリペプチドを含んでなる二つの鎖が利用される。各々の鎖はヒト化ＣＤ２２ダイアボディーの１／２を形成する。トリアボディーの場合、ヒト化ＣＤ２２  ＭＡｂのＶＫポリペプチドにリンカーは介さずに連結されたヒト化ＣＤ２２  ＭＡｂのＶＨポリペプチドを含んでなる三つの鎖が利用される。各々の鎖はｈＣＤ２２トリアボディーの１／３を形成する。
【００６７】
本明細書に記載の二重特異性ダイアボディーの好ましい使用は、その後の診断薬または治療薬の特異的送達のためにＣＤ２２陽性腫瘍をプレターゲッティングすることを目的とする。これらのダイアボディーは標的抗原に選択的に結合し、親和性を高め、所望の場所における滞留時間を延長する。さらに、抗原と結合していないダイアボディーは体内から迅速に排泄され、正常組織の曝露は最小限に抑えられる。診断薬および治療薬としては、同位元素、薬物、毒素、サイトカイン、ホルモン、増殖因子、複合体、放射性核種および金属が挙げられる。例えば、磁気共鳴イメージング（ＭＲＩ）にはガドリニウム金属が用いられる。放射性核種の例としては、２２５Ａｃ、１８Ｆ、６８Ｇａ、６７Ｇａ、９０Ｙ、８６Ｙ、１１１Ｉｎ、１３１Ｉ、１２５Ｉ、１２３Ｉ、９９ｍＴｃ、９４ｍＴｃ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、１７７Ｌｕ、６２Ｃｕ、６４Ｃｕ、６７Ｃｕ、２１２Ｂｉ、２１３Ｂｉ、３２Ｐ、１１Ｃ、１３Ｎ、１５Ｏ、７６Ｂｒ、および２１１Ａｔが挙げられる。診断薬および治療薬としては、特に６０〜４，０００ｋｅＶのエネルギー範囲の他の放射性核種が利用できる。
【００６８】
より最近では、二重特異性を有する四価直列ダイアボディー（ｔａｎｄａｂと呼ばれる）も報告されている(Cochlovius et al., Cancer Research (2000) 60:4336-4341)。この二重特異性ｔａｎｄａｂは同一の二つのポリペプチドの二量体であり、それぞれが二つの異なる抗体の四つの可変ドメインを含み（ＶＨ１、ＶＬ１、ＶＨ２、ＶＬ２）、これは自己会合に際してそれぞれの二つの異なる特異性のための二つの潜在的な結合部位の形成が容易となる方向に連結されている。
【００６９】
６．結合多価および多ｘ重特異性抗体
本発明のもう一つの実施形態は、コンジュゲート多価抗体である。第一または第二のポリペプチドのＮ末端またはＣ末端のいずれかに、さらなるアミノ酸残基を付加してもよい。このさらなるアミノ酸残基は、ペプチドタグ、シグナルペプチド、サイトカイン、酵素（例えば、プロドラッグ活性化酵素）、ホルモン、シュードモナス外毒素のようなペプチド毒素、ペプチド薬、細胞傷害性タンパク質または他の機能性タンパク質を含んでよい。本明細書において機能性タンパク質とは、生物学的機能を有するタンパク質である。
【００７０】
ある一つの実施形態では、薬物、毒素、放射性化合物、酵素、ホルモン、細胞傷害性タンパク質、キレート剤、サイトカインおよび他の機能性薬剤を多価標的結合タンパク質に、好ましくはこの多価標的結合タンパク質のアミノ酸残基の側鎖、例えばアミン、カルボキシル、フェニル、チオールまたはヒドロキシル基に対する共有結合を介して、結合させてもよい。例えば、ジイソシアネート、ジイソチオシアネート、ビス（ヒドロキシスクシンイミド）エステル、カルボジイミド、マレイミド−ヒドロキシスクシンイミドエステル、グルタルアルデヒドなど、種々の慣用されるリンカーをこの目的のために用いてよい。多価タンパク質への薬剤の結合は、該タンパク質のその標的に対する結合特異性または親和性に有意な影響を及ぼさないことが好ましい。本明細書において機能性薬剤とは、生物学的機能を有する薬剤である。好ましい機能性薬剤は細胞傷害剤である。
【００７１】
さらに他の実施形態では、二重特異性抗体に向けられた治療薬またはプロドラッグポリマーのイン・ビボ標的への送達は、放射性核種の二重特異性抗体送達と組み合わせることが可能なので、化学療法と放射免疫療法を組み合わせることができる。各々の治療法は標的化可能な複合体と結合させて同時に投与することができ、また、核種は第一の標的化可能な複合体の一部として投与し、薬物は後の工程で第二の標的化可能な複合体の一部として投与することができる。
【００７２】
もう一つの実施例では、細胞傷害剤は高分子担体と結合させ、次いでその高分子担体を多価標的結合タンパク質に結合させればよい。この方法に関しては、引用することによりその全開示内容を本明細書の一部とする、Ryser et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 75:3867-3870 (1978)、米国特許第４，６９９，７８４号および同第４，０４６，７２２号を参照することができる。複合体化は多価結合タンパク質の結合特異性または親和性に有意な影響を及ぼさないことが好ましい。
【００７３】
７．治療または診断のための類人霊長類化、ヒト化、キメラおよびヒト抗体の使用
本発明に従う類人霊長類化、ヒト化、キメラおよびヒトモノクローナル抗体、すなわち本明細書に記載の抗ＣＤ２０  ＭＡｂおよびその他のＭＡｂは治療法および診断法で用いるのに好適である。従って本発明は、本発明の類人霊長類化、ヒト化、キメラおよびヒト抗体の裸の抗体としての単独投与、または多様式療法として、治療薬とは結合させないが、投与計画に従った一時的投与を意図する。裸の抗ＣＤ２０  ＭＡｂの効力は、一以上の他の裸の抗体、すなわちＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ１４、ＣＤ１５、ＣＤ１９、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２５、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ４６、ＣＤ５２、ＣＤ５４、ＣＤ７４、ＣＤ８０、ＣＤ１２６、Ｂ７、Ｉａ、ＨＭ１．２４、テネイシン、ＭＵＣ１、またはＨＬＡ−ＤＲ等の特異抗原に対するＭＡｂ、ならびに一以上の抗ＣＤ２０の免疫複合体を含む抗血管形成抗体（例えば、ＶＥＧＦおよびＰｌＧＦ抗体）を含む裸の抗体、あるいは薬物、毒素、免疫調節剤、ホルモン、治療用放射性核種などをはじめとする治療薬と結合され、同時または逐次または指示された投与計画に従って投与される薬物、毒素、免疫調節剤、ホルモン、治療用放射性核種などをはじめとする一以上の治療薬を含むこれら挙げられた抗原に対する抗体であって、ＭＡｂを含むものを補足することにより増強させることができる。好ましいＢ細胞抗原としては、ヒトＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ４６、ＣＤ５２、ＣＤ７４、ＣＤ８０およびＣＤ５抗原と同等なものが挙げられる。好ましいＴ細胞抗原としては、ヒトＣＤ４、ＣＤ８およびＣＤ２５（ＩＬ−２受容体）抗原と同等なものが挙げられる。ＨＬＡ−ＤＲ抗原と同等なものは、Ｂ細胞およびＴ細胞性疾患の双方の治療に使用できる。特に好ましいＢ細胞抗原はヒトＣＤ１９、ＣＤ２２、ＣＤ２１、ＣＤ２３、ＣＤ７４、ＣＤ８０およびＨＬＡ−ＤＲ抗原と同等なものである。特に好ましいＴ細胞抗原は、ヒトＣＤ４、ＣＤ８およびＣＤ２５抗原と同等なものである。ＣＤ４６は癌細胞表面上の抗原であり、補体依存性溶解（ＣＤＣ）を阻害する。
【００７４】
さらに、本発明はＢ細胞リンパ腫および他の疾病または疾患の治療に用いられる免疫複合体の投与も意図する。本明細書に記載のように、免疫複合体は抗体成分および治療薬を担持するペプチドをはじめとする、治療薬を含んでなる分子である。免疫複合体は、抗体成分の免疫反応性を保持しており、すなわち抗体部分の複合体形成前と複合体形成後の同族抗原に対する結合能力はほぼ同等か、わずかに低下しているだけである。
【００７５】
また、本発明は、骨髄性白血病の治療に用いられる免疫複合体の投与も意図し、ここではＣＤ３３、ＣＤ４５、ＣＤ６６および他の顆粒球結合抗原がターゲッティングされる。
多種多様な治療薬が、本発明の抗体と有利に結合できる。本明細書に列挙された治療薬は、上記のように裸の抗体とは別に投与しても有用である薬剤である。治療薬としては、例えば、ビンカアルカロイド、アントラサイクリン、エピトフィロトキシン、タキサン、抗代謝剤、アルキル化剤、抗生物質、Ｃｏｘ−２阻害剤、抗有糸分裂剤、抗血管形成剤およびアポトーシス剤、特にドキソルビシン、メトトレキサート、タキソール、ＣＰＴ−１１、カンプトテカン、およびこれらまたは他の種類の抗癌剤由来の他のものなどの化学療法薬が挙げられる。免疫複合体および抗体融合タンパク質の調製に有用な他の癌化学療法薬としては、ナイトロジェンマスタード、アルキルスルホネート、ニトロソウレア、トリアゼン、葉酸類似体、ＣＯＸ−２阻害剤、ピリミジン類似体、プリン類似体、プラチナ錯体（オキサリプラチンを含む）、ホルモンなどが挙げられる。好適な化学療法薬はREMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCES,19th Ed.(Mack Publishing Co., 1995)およびGOODMAN AND GILMAN'S THE PHARMACOLOGICAL BASIS OF THERAPEUTICS, 7th Ed. (MacMillan Publishing Co., 1985)、ならびにこれらの刊行物の改訂版に記載されている。実験薬のような他の好適な化学療法薬も、当業者に公知である。
【００７６】
これに加えて、ＤＴＰＡ、ＤＯＴＡ、ＴＥＴＡまたはＮＯＴＡのようなキレート剤または好適なペプチドに、蛍光分子のような検出可能な標識または、重金属もしくは放射性核種のような細胞傷害性薬剤を結合させることができる。例えば、治療上有用な免疫複合体は、光活性薬または色素を抗体混成物に結合させることにより得られる。蛍光色素のような蛍光組成物、および他の色素原、または可視光線に感受性のあるポルフィリンのような色素は、好適な光線を病巣に当てることにより病巣の検出および治療に使用されてきた。治療においては、これは光照射、光療法または光線力学療法と呼ばれている（Jori et al. (eds.), PHOTODYNAMIC THERAPY OF TUMORS AND OTHER DISEASES（Libreria Progetto 1985）; van den Bergh, Chem. Britain 22:430（1986））。さらに、光療法を行うためにはモノクローナル抗体は光活性化色素と結合されてきた。Mew et al., J.Immunol. 130:1473(1983);前掲, Cancer Res. 45:4380 (1985); Oseroff et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 83:8744 (1986);前掲, Photochem. Photobiol. 46:83 (1987); Hasan et al., Prog. Clin. Biol. Res. 288:471 (1989); Tatsuta et al., Lasers Surg. Med.9:422 (1989); Pelegrin et al., Cancer 67:2529（1991）。しかし、これらの初期の研究には、特に抗体フラグメントまたはサブフラグメントの使用を伴った内視鏡療法の適用は含まれていなかった。従って本発明は、光活性薬または色素を含んでなる免疫複合体の治療的使用を意図する。
【００７７】
シュードモナス外毒素のような毒素は、本発明の抗ＣＤ２０抗体の抗体融合タンパク質の治療薬部分と複合化し得るし、あるいは本発明の抗ＣＤ２０抗体の抗体融合タンパク質の治療薬部分を形成することができる。このような複合体または他の融合タンパク質の調製に適切に使用される他の毒素としては、リシン、アブリン、リボヌクレアーゼ（ＲＮアーゼ）、ＤＮアーゼ Ｉ、ブドウ球菌腸毒素−Ａ、アメリカヤマゴボウ抗ウイルスタンパク質、ゲロニン、ジフテリア毒、シュードモナス外毒素、およびシュードモナス内毒素が挙げられる。例えば、Pastan et al., Cell 47:641(1986)、およびGoldenberg, CA-A Cancer Journal for Clinicians 44:43(1994)を参照することができる。本発明で用いるのに好適なさらなる毒素は当業者に公知であり、引用することによりその全開示内容を本明細書の一部とする米国特許第６，０７７，４９９号に開示されている。
【００７８】
サイトカインのような免疫調節剤は、また、抗体融合タンパク質の治療薬部分と結合され得るし、あるいは抗体融合タンパク質の治療薬部分を形成することができ、あるいは本発明のヒト化抗ＣＤ２０抗体またはその他のリンパ腫抗体とともに投与してもよい。本発明に好適なサイトカインとしては、限定されるものではないが、後述のようにインターフェロンおよびインターロイキンが挙げられる。
【００７９】
８．免疫複合体の作製
本発明のいずれの抗体または抗体融合タンパク質も、一種以上の治療薬と結合させることができる。一般に、一種の治療薬を各々抗体または抗体フラグメントに結合させるが、二種以上の治療薬を同じ抗体または抗体フラグメントに結合させることもできる。本発明の抗体融合タンパク質は二以上の抗体またはそのフラグメントを含んでなり、この融合タンパク質を含んでなる抗体各々が治療薬を含み得る。また、一以上の抗体融合タンパク質の抗体には、二種以上の治療薬を結合させることができる。さらに、この治療薬は同じである必要はなく、異なる治療薬であってもよい。例えば、同じ融合タンパク質に薬物と放射性同位元素を結合させることができる。特に、ＩｇＧは１３１Ｉで放射性標識し、薬物に結合させることができる。この１３１Ｉは、ＩｇＧのチロシンに組み込むことができ、薬物はＩｇＧリジンのεアミノ酸に結合させることができる。治療薬は、還元ＳＨ基および炭化水素側鎖に結合させることもできる。
【００８０】
本発明の二重特異性抗体はプレターゲッティング法において有用であり、二種の治療薬を被検体に送達する好ましい方法を提供する。米国出願番号０９／３８２，１８６は、二重特異性抗体を用いるプレターゲッティング法を開示しており、そこでは二重特異性抗体を１２５Ｉで標識して被検体に送達し、次に９９ｍＴｃで標識した二価のペプチドを送達する。送達の結果、１２５Ｉおよび９９ｍＴｃに関して腫瘍／正常組織比は良好となることから、二つの診断用放射性同位元素の有用性が示されている。抗体および抗体融合タンパク質を標識するには公知の治療薬のいずれの組合せでも使用できる。ｍＡｂ複合体の抗体成分の結合特異性、治療薬または診断薬の有効性および抗体のＦｃ部分のエフェクター活性は、複合体の標準的な試験により判定することができる。
【００８１】
治療薬は、ジスルフィド結合形成を介して還元された抗体成分のヒンジ領域に結合することができる。あるいは、このようなペプチドはＮ−スクシニル３−（２−ピリジルジチオ）プロピオネート（ＳＰＤＰ）のようなヘテロ二官能性架橋剤を用いて抗体成分に結合することができる。Yu et al., Int. J. Cancer 56 : 244(1994)。このような結合に関する一般的な技術は当技術分野で周知である。例えば、Wong, CHEMISTRY OF PROTEIN CONJUGATION AND CROSS-LINKING (CRC Press, 1991); Upeslacis et al.,"Modification of Antibodies by Chemical Methods, "in MONOCLONAL ANTIBODIES: PRINCIPLES AND APPLICATIONS, Birch et al.(eds), pages 187-230（Wiley-Liss, Inc. 1995）; Price, "Production and Characterization of Synthetic Peptide-Derived Antibodies, "in MONOCLONAL ANTIBODIES: PRODUCTION, ENGINEERING AND CLINICAL APPLICATION, Ritter et al.(eds.), pages 60-84（Cambridge University Press 1995）を参照することができる。あるいは、治療薬は抗体のＦｃ領域の炭化水素部分を介して結合させることもできる。この炭化水素基は、チオール基に結合している同じペプチドの付加量を増大させるためにも使用できるし、あるいはこの炭化水素部分は異なるペプチドを結合するためにも使用できる。
【００８２】
抗体の炭水化物部分を介して抗体成分にペプチドを結合させる方法は当業者に周知である。例えば、Shih et al., Int. J. Cancer 41: 832 (1988); Shih et al., Int. J. Cancer 46: 1101 (1990);およびShih et al., 米国特許第５，０５７，３１３号を参照することができる（なお、これらは総て、引用することによりその全開示内容を本明細書の一部とする）。一般的な方法としては、炭水化物部分が酸化された抗体成分を、少なくとも一つの遊離アミン基を有し、かつ、複数のペプチドが付加された担体ポリマーと反応させることを含む。この反応により最初のシッフ塩基（イミン）結合が生じ、これは第二級アミンへの還元により安定化され最終の複合体を形成し得る。
【００８３】
免疫複合体の抗体成分として用いられる抗体が抗体フラグメントである場合にはＦｃ領域は存在しない。しかし、炭化水素部分を全長抗体または抗体フラグメントの軽鎖可変領域へ導入することが可能である。例えば、Leung et al., J. Immunol. 154:5919 (1995); Hansen et al., 米国特許第５，４４３，９５３号(1995), Leung et al., 米国特許第６，２５４，８６８号を参照することができる（なお、これらは総て引用することにより本明細書の一部とする）。この操作された炭化水素部分は、治療薬または診断薬を結合させるために用いられる。
【００８４】
９．医薬上許容されるビヒクル
被検体に送達される類人霊長類化、ヒト化、キメラまたはヒト放射性標識抗体は、ｍＡｂ単独、免疫複合体、融合タンパク質から構成されるか、または一以上の薬学上好適なビヒクル、一以上の付加的成分またはこれらのある組合せを含み得る。
本発明の免疫複合体抗体は、薬学上有用な組成物を調製するための公知の方法に従って調剤され、この免疫複合体または裸の抗体は混合物中で薬学上好適なビヒクルと結合する。滅菌リン酸緩衝生理食塩水は薬学上好適なビヒクルの一例である。他の好適なビヒクルも当業者に周知である。例えば、Ansel et al., PHARMACEUTICAL DOSAGE FORMS AND DRUG DELIVERY SYSTEMS, 5th Edition （Lea & Febiger 1990）、およびGennaro(ed.), REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCES, 18th Edition (Mack Publishing Company 1990)およびそれらの改訂版を参照することができる。
【００８５】
本発明の免疫複合体または裸の抗体は、例えばボーラス注射または点滴による静脈内投与などの非経口適用向けに調剤できる。注射製剤は、例えばアンプルのような単位投与形、または保存剤を加えた複数回投与用容器で提供することができる。この組成物は油性または水性ビヒクル中の懸濁液、溶液またはエマルジョンの形態をとってもよく、懸濁化剤、安定剤および／または分散剤のような処方剤を含むことができる。あるいは、その活性成分は使用前に例えば滅菌パイロジェンフリー水のような好適なビヒクルで構成するための粉末形態であってもよい。
【００８６】
治療用複合体または裸の抗体の作用時間を制御するために、その他の製薬法を用いてもよい。徐放性製剤は、免疫複合体または裸の抗体と複合体形成するか、または免疫複合体または裸の抗体を吸着する、ポリマーの使用を通じて調製することができる。例えば、生体適合性ポリマーとしては、ポリ（エチレン−ｃｏ−酢酸ビニル）マトリックスおよびステアリン酸二量体とセバシン酸の無水共重合体マトリックスが挙げられる。Sherwood et al., Bio/Technology 10:1446(1992)。このようなマトリックスからの免疫複合体または抗体の放出速度は、免疫複合体または抗体の分子量、マトリックス内の免疫複合体、抗体の量、および分散している粒子の大きさによって異なる。Saltzman et al., Biophys. J. 55:163(1989); Sherwood et al.,前掲。他の固形投与形は、Ansel et al., PHARMACEUTICAL DOSAGE FORMS AND DRUG DELIVERY SYSTEMS, 5th Edition（Lea & Febiger 1990）、およびGennaro(ed.), REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCES, 18th Edition (Mack Publishing Company 1990)およびその改定版に記載されている。
【００８７】
また、免疫複合体、抗体融合タンパク質または裸の抗体は哺乳類に皮下投与または他の非経口経路でも投与できる。さらに、投与は点滴でも単回または複数回のボーラス注射によってもよい。一般に、ヒトにおいては投与される免疫複合体、融合タンパク質または裸の抗体の用量は、患者の年齢、体重、身長、性別、全身の健康状態、および以前の病歴といった因子によって異なる。通常、単回の静脈点滴として約１ｍｇ／ｋｇ〜２０ｍｇ／ｋｇの範囲の用量の免疫複合体、抗体融合タンパク質または裸の抗体をレシピエントに与えるのが望ましいが、状況によってはより低い、またはより高い用量を投与してもよい。この用量は必要に応じで繰り返してもよく、例えば、１週間に１回の投与を４〜１０週間、好ましくは１週間に１回の投与を８週間、そしてより好ましくは、１週間に１回の投与を４週間繰り返してもよい。また、１週間おきの投与を数ヶ月といったように低い頻度で投与してもよい。用量および日程を適宜調節して、種々の非経口経路により投与してよい。
【００８８】
治療目的では、治療上有効な量の免疫複合体、融合タンパク質または裸の抗体を哺乳類に投与する。ヒト以外の動物被検体もまた意図されるが、本発明の好適な被検体は通常ヒトである。抗体製剤は、投与される量が生理学上有意であれば、「治療上有効量」で投与されると言われる。薬物は、その存在が受容哺乳類の生理機能に検出可能な変化をもたらす場合に、生理学上有意である。特に、本発明の抗体製剤は、その存在が抗腫瘍応答を誘起するか、または自己免疫疾患の徴候および症候を緩和する場合に、生理学上有意である。また、生理学上有意な効果は、受容哺乳類における体液性および／または細胞性免疫応答を誘起することであり得る。
【００８９】
１０．治療方法
本発明はＢ細胞関連悪性腫瘍、Ｔ細胞関連悪性腫瘍または他種のリンパ腫などの疾病の治療のための基本組成物としての本発明の抗体の使用を意図する。さらに、本発明はまた、自己免疫疾患の治療にも有用である。特に、本明細書に記載の組成物は、種々の自己免疫疾患、ならびに緩徐進行型Ｂ細胞リンパ腫、急速進行型Ｂ細胞リンパ腫、慢性リンパ性白血病、急性リンパ性白血病、およびワルデンストロームマクログロブリン血症、多発性骨髄腫の治療に特に有用である。また、Ｔ細胞白血病または菌状息肉腫などのＴ細胞疾患も治療できる。例えば、ヒト化抗ＣＤ２２抗体成分および免疫複合体は緩徐進行型と急速進行型の双方の非ホジキンリンパ腫の治療に使用できる。自己免疫疾患は、急性特発性血小板減少性紫斑病、慢性特発性血小板減少性紫斑病、皮膚筋炎、シドナム舞踏病、重症筋無力症、全身性紅斑性狼瘡、ループス腎炎、リウマチ熱、多腺性症候群、水疱性類天疱瘡、真性糖尿病、ヘノッホ−シェンライン紫斑病、溶連菌感染後腎炎、結節性紅斑、高安動脈炎、アジソン病、慢性関節リウマチ、多発性硬化症、サルコイドーシス、潰瘍性大腸炎、多形性紅斑、ＩｇＡ腎症、結節性多発性動脈炎、強直性脊椎炎、グッドパスチャー症候群、閉塞性血栓性血管炎、シェーグレン症候群、原発性胆汁性肝硬変、橋本甲状腺炎、甲状腺中毒症、硬皮症、慢性活動性肝炎、多発性筋炎／皮膚筋炎、多発性軟骨炎、尋常性天疱瘡、ウェゲナー肉芽腫、膜性腎症、筋萎縮性側索硬化症、脊髄ろう、巨細胞性動脈炎／多発性筋痛、悪性貧血、急速進行性糸球体腎炎、乾癬、および繊維性肺胞炎からなる群から選択される。
【００９０】
治療用組成物は少なくとも一種のヒト化、キメラまたはヒトモノクローナル抗体を単独で、あるいは他のヒト化、キメラ、もしくはヒト抗体などの他の抗体、または治療薬もしくは免疫調節剤と組み合わせて含む。特に完全なヒト抗体との併用療法も意図され、これは上記に示される方法によって行われる。
【００９１】
また、同じもしくは異なるエピトープまたは抗原とコンジュゲート抗体を本発明の一以上の抗体と組み合わせてもよい。例えば、ヒト化、キメラまたはヒトコンジュゲート抗ＣＤ２２抗体を他の類人霊長類化、ヒト化、キメラまたはヒトコンジュゲート抗ＣＤ２２と組み合わせてよく、類人霊長類化、ヒト化、キメラまたはヒトコンジュゲート抗ＣＤ２２抗体を抗ＣＤ２２免疫複合体と組み合わせてもよい。あるいは、上記のような種々のリンパ腫結合抗体を用いてこのような種々の組合せを作ることもできる。また、類人霊長類化、ヒト化、キメラまたはヒトＣＤ２２抗体と、毒素もしくは免疫調節剤との融合タンパク質、または少なくとも二種の異なるＢ細胞抗体の融合タンパク質（例えばＣＤ２０とＣＤ２２ｍＡｂ）を本発明で用いてもよい。上記ですでに挙げたようなＢ細胞もしくはその他のリンパ腫または自己免疫疾患に関連する少なくとも二つの異なる抗原をターゲッティングする多くの異なる抗体の組合せが、治療薬もしくは免疫調節剤と部分的に結合させて、または細胞傷害剤などの他の治療薬または放射線と単に組み合わせて構成することができる。
【００９２】
本明細書において「免疫調節剤」としては、サイトカイン、幹細胞増殖因子、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）などのリンホトキシン、ならびにインターロイキン（例えば、インターロイキン−１（ＩＬ−１）、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２およびＩＬ−１８）、コロニー刺激因子（例えば、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）および顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ））、インターフェロン（例えば、インターフェロン−α、−βおよび−γ）、「Ｓ１因子」と呼ばれる幹細胞増殖因子、エリスロポエチンおよびトロンボポエチンなどの造血因子が挙げられる。好適な免疫調節剤部分の例としては、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１８、インターフェロン−γ、ＴＮＦ−αなどが挙げられる。あるいは、被検体にコンジュゲート抗ＣＤ２０抗体を投与してもよく、別にサイトカインを投与することもでき、これは裸のまたはコンジュゲート抗ＣＤ２０抗体を投与する前、投与する際または投与した後に投与することができる。上記に述べたように、抗ＣＤ２２抗体はまた、免疫調節剤と結合させてもよい。この免疫調節剤はまた、異なる抗原と結合する一以上の抗体またはサブフラグメントからなるハイブリッド抗体またはハイブリッド抗体フラグメントもしくはサブフラグメント（単鎖結合タンパク質、またはｓＦｖ）と結合させてもよい。
【００９３】
本発明の多様式療法はさらに、融合タンパク質の形態で、または免疫複合体として、抗ＣＤ２０、抗ＣＤ１９、抗ＣＤ２１、抗ＣＤ７４、抗ＣＤ８０、抗ＣＤ２３、抗ＣＤ４６またはＨＬＡ−ＤＲ（不変鎖を含む）抗体の投与を補った、コンジュゲート抗ＣＤ２２抗体による免疫療法も含む。これらの抗体としては、これらの抗原決定基上の少なくとも一つのエピトープを認識するポリクローナル、モノクローナル、類人霊長類化、キメラ、ヒトまたはヒト化抗体が挙げられる。抗ＣＤ１９および抗ＣＤ２２抗体は当業者に公知である。例えば、引用することによりそれらの全開示内容を本明細書の一部とする、Ghetie et al., Cancer Res. 48:2610 (1988); Hekman et al., Cancer Immunol. Immunother. 32:364 (1991); Longo, Curr. Opin. Oncol. 8:353 (1996)、ならびに米国特許第５，７９８，５５４号および同第６，１８７，２８７号を参照することができる。
【００９４】
多様式療法の別の形態では、被検体にコンジュゲート抗体および／または免疫複合体を、標準的な癌の化学療法と組み合わせて投与する。例えば、「ＣＶＢ」（１．５ｇ／ｍ２シクロホスファミド、２００〜４００ｍｇ／ｍ２エトポシド、および１５０〜２００ｍｇ／ｍ２カルムスチン）は、非ホジキンリンパ腫の治療に用いられる投与計画である。Patti et al., Eur. J. Haematol. 51:18 (1993)。その他の好適な組み合わせ化学療法計画も当業者に周知である。例えば、Freedman et al., "Non-Hodgkin's Lymphomas," CANCER MEDICINE, VOLUME 2, 3rd Edition, Holland et al. (eds. ), pages 2028-2068 (Lea & Febiger 1993)を参照することができる。示したように、中悪性度非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）の治療のための第一世代化学療法計画としては、Ｃ−ＭＯＰＰ（シクロホスファミド、ビンクリスチン、プロカルバジンおよびプレドニソン）およびＣＨＯＰ（シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチンおよびプレドニソン）が挙げられる。有用な第二世代の化学療法計画としては、ｍ−ＢＡＣＯＤ（メトトレキサート、ブレオマイシン、ドキソルビシン、シクロホスファミド、ビンクリスチン、デキサメタゾンおよびロイコボリン）があり、好適な第三世代の計画としては、ＭＡＣＯＰ−Ｂ（メトトレキサート、ドキソルビシン、シクロホスファミド、ビンクリスチン、プレドニソン、ブレオマイシンおよびロイコボリン）がある。さらなる有用な薬物としては、フェニルブチレートおよびブロスタチン−１がある。好ましい多様式療法では、化学療法薬とサイトカインの双方を本発明の抗体、免疫複合体または融合タンパク質と同時に投与する。サイトカイン、化学療法薬および抗体または免疫複合体はいずれの順序で投与してもよく、一緒に投与してもよい。
【００９５】
β粒子の放出により実質的に崩壊する治療薬として有用な放射性核種としては、限定されるものではないが、Ａｃ−２２５、Ｐ−３２、Ｐ−３３、Ｓｃ−４７、Ｆｅ−５９、Ｃｕ−６４、Ｃｕ−６７、Ｓｅ−７５、Ａｓ−７７、Ｓｒ−８９、Ｙ−９０、Ｍｏ−９９、Ｒｈ−１０５、Ｐｄ−１０９、Ａｇ−１１１、Ｉ−１２５、Ｉ−１３１、Ｐｒ−１４２、Ｐｒ−１４３、Ｐｍ−１４９、Ｓｍ−１５３、Ｔｂ−１６１、Ｈｏ−１６６、Ｅｒ−１６９、Ｌｕ−１７７、Ｒｅ−１８６、Ｒｅ−１８８、Ｒｅ−１８９、Ｉｒ−１９４、Ａｕ−１９８、Ａｕ−１９９、Ｐｂ−２１１、Ｐｂ−２１２、およびＢｉ−２１３が挙げられる。有用なβ粒子放出核種の最大崩壊エネルギーは好ましくは２０〜５，０００ｋｅＶ、より好ましくは１００〜４，０００ｋｅＶ、最も好ましくは５００〜２，５００ｋｅＶである。
【００９６】
オージェ粒子の放出により実質的に崩壊する治療薬として有用な放射性核種としては、限定されるものではないが、Ｃｏ−５８、Ｇａ−６７、Ｂｒ−８０ｍ、Ｔｃ−９９ｍ、Ｒｈ−１０３ｍ、Ｐｔ−１０９、Ｉｎ−１１１、Ｓｂ−１１９、Ｉ−１２５、Ｈｏ−１６１、Ｏｓ−１８９ｍおよびＩｒ−１９２が挙げられる。これらの放射性核種の最大崩壊エネルギーは好ましくは１，０００ｋｅＶ未満、より好ましくは１００ｋｅＶ未満、最も好ましくは７０ｋｅＶ未満である。
【００９７】
α粒子の形成により実質的に崩壊する治療薬として有用な放射性核種としては、限定されるものではないが、Ｄｙ−１５２、Ａｔ−２１１、Ｂｉ−２１２、Ｒａ−２２３、Ｒｎ−２１９、Ｐｏ−２１５、Ｂｉ−２１１、Ａｃ−２２５、Ｆｒ−２２１、Ａｔ−２１７、Ｂｉ−２１３およびＦｍ−２５５が挙げられる。有用なα粒子放出放射性核種の崩壊エネルギーは好ましくは２，０００〜９，０００ｋｅＶ、より好ましくは３，０００〜８，０００ｋｅＶ、最も好ましくは４，０００〜７，０００ｋｅＶである。
【００９８】
中性子捕捉法に基づく療法に有用な放射性核種としては、限定されるものではないが、Ｂ−１０、Ｇｄ−１５７およびＵ−２３５が挙げられる。
本発明の実施形態を、本発明の態様を詳しく示す実施例によりさらに説明する。これらの実施例は本発明の特定の構成要素を示すものであり、その範囲を限定するものではない。
【実施例】
【００９９】
抗体
エプラツズマブはヒト化ＬＬ２抗体であり、Immunomedics Inc., Morris Plains, NJが開発したものである。ヒト化のプロセスでは、ネズミＩｇ配列の約９５％がヒトＩｇＧ１配列に置き換わる。エプラツズマブは、三番目のＩｇドメイン(Kehrl, J. H. B6 CD22 Workshop Panel Report, in Leukocyte Typing V. White Cell Differentiation Antigens., S. F. Schlossman (ed.), Oxford University Press, p. 523-5, 1995)に相当するＣＤ２２抗原のＢエピトープ(Stein, R. et al., Cancer Immunol. Immunother. 37 (5): 293-8, 1993)にひと度結合するとインターナライズされる。イン・ビトロインターナリゼーションが５分後に見られ、５時間後に５０％といった量の抗原の再発現が起こることが報告されている(Shih, L. B. et al.Int J Cancer 56(4):538-45, 1994)。
【０１００】
ヒト化抗ＣＤ２０抗体、ｈＡ２０はImmunomedics, Inc., Morris Plains, NJが開発したものである。このＭａｂはＣＤ２０と結合し、キメラ抗ＣＤ２０  ＭＡｂ、リツキシマブとは対照的に、キメラ型よりもネズミタンパク質が少ないＣＤＲグラフトＭＡｂである。このｈＡ２０  ＭＡｂはＩｇＧ１（κ）定常領域と、ＣＤ２２ヒト化ＭＡｂ、エプラツズマブと同じヒトＶフレームワーク領域を有する。ｈＡ２０のＣＤＲグラフトＶＨおよびＶｋ鎖の遺伝子を、ＤＨＦＲに基づき増幅可能な発現系ｐｄＨＬ２プラスミドベクターに挿入し、Ｓｐ２／０ネズミ骨髄腫細胞系統にトランスフェクトしてｈＡ２０産生クローンを作製した。分子の同定を行ったところ、ｈＡ２０は、ＶＨ領域のアミノ酸が一つ違うこと以外は、そのＣＤＲがリツキシマブと同じであることが示された。しかし、ヒト構築物がより多く含まれているために、ｈＡ２０のＶＨおよびＶｋフレームワーク領域には違いが存在する。このｈＡ２０抗体は種々のリンパ腫細胞とリツキシマブの結合に関して競合すると思われ、リツキシマブと同じ解離定数を有するばかりか、ＣＤ２０を発現するヒトリンパ腫細胞系統に対してイン・ビボおよびイン・ビトロで同じ作用を有する。
【０１０１】
非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）の治療
６６歳の男性、第ＩＶ病期びまん性大細胞ＮＨＬ患者は２年前に３コースの化学療法を受けた後に再発していた。この患者は１週間あけて、７．５ｍＣｉ／ｍ２の９０Ｙを含む９０Ｙ−ＤＯＴＡ−エプラツズマブ（Govinden,同書に従って標識）の二回注射量を施し、これは各回全用量３０ｍｇの抗体タンパク質を静脈点滴することで投与した。６週間後、患者の頸部リンパ節および巨脾腫に顕著な退縮があったことが明らかになり、この患者は症状改善を見せ、フルタイムの仕事に復帰した。この患者は完全緩解には至らなかったので、１週間おきに計４回の点滴で投与するエプラツズマブ（３６０ｍｇ／ｍ２）およびｈＡ２０（２５０ｍｇ／ｍ２）の組合せを含む継続治療を設定し、次に、組合せ抗体療法コースをその後１２週間繰り返した。裸のＣＤ２２およびＣＤ２０抗体の組合せによる二回目の治療コースが完了してから３ヶ月後、放射線走査または骨髄生検によって患者に疾病の証拠はなかったことから、完全緩解であるとみなされた。次の評価時である３ヶ月後においても、患者はまだ疾病の完全緩解の状態にあった。
【０１０２】
Ｔ細胞白血病の治療
従来の化学療法に不応の、進行したＴ細胞白血病患者に、２０ｍＣｉ９０Ｙ−ＤＯＴＡと結合させた５０ｍｇ抗ＣＤ２５ヒト化Ｍａｂの点滴を行った後、１週間後に２００ｍｇ／ｍ２用量のＣＤ２５Ｍａｂ（抗ＴＡＣヒト化抗体）の点滴を行った。４週間後、この患者の血球計数および骨髄生検を行ったところ、疾病の部分緩解が示された。
【０１０３】
不応性慢性関節リウマチの治療
多くの関節、特に膝を侵す進行した重度の慢性関節リウマチを示し、その時点で化学療法に不応の患者を、線量１０ｍＣｉ／ｍ２の９０Ｙで標識したＣＤ４およびＣＤ２０ヒト化Ｍａｂ混合物、計５０ｍｇの一回点滴で治療した。２週間後、この患者に１００ｍｇＣＤ４および２５０ｍｇＣＤ２０抗体からなる裸のヒト化抗体を投与し、２週間後にこれをもう一度繰り返した。患者は４週間後、特に膝において関節炎の軽減を感じ、歩行が楽になり、階段を登ることさえもできるようになり、主治医が診たところ関節の炎症もほとんどなかった。３ヶ月後、この放射性標識抗体混合物の点滴一回、その後、裸のＣＤ４およびＣＤ２０抗体の二回の点滴を含む治療コースを繰り返し、６週間後に患者を再評価した。医師は著しい改善を認め、患者は関節に最小の痛みしかなく、手足の動きが相当よくなったとうったえた。
【０１０４】
以上は特に好ましい実施形態を表すが、本発明はこれに限定されないことが分かるであろう。当業者ならば、開示されている実施形態に種々の変形を行うことができ、そのような変形も以下の実施形態により定義される本発明の範囲内であるものとされることが分かるであろう。
本明細書に引用されている刊行物ならびに特許出願および特許は総て、引用することによりその全開示内容が本明細書の一部とされる。
【手続補正書】
【提出日】平成22年5月10日(2010.5.10)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
哺乳類の疾病の治療に用いるための、薬学上許容されるビヒクルと少なくとも一種のコンジュゲート抗体もしくはそのフラグメント、またはコンジュゲート抗体融合タンパク質もしくはそのフラグメントとを含んでなる治療組成物であって、非放射性標識抗体の前投与が行われない、治療組成物。
【請求項２】
増殖腫瘍または自己免疫疾患細胞が標的逸出しないようにするための維持療法として、前記コンジュゲート抗体もしくはそのフラグメントまたは前記コンジュゲート抗体融合タンパク質もしくはそのフラグメントに加え、場合により、非コンジュゲート抗体もしくはフラグメントまたは非コンジュゲート抗体融合タンパク質もしくはそのフラグメントが加えられる、請求項１に記載の治療組成物。
【請求項３】
前記コンジュゲートおよび非コンジュゲート抗体、抗体融合タンパク質、またはそのフラグメントが、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１４、ＣＤ１５、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２５、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ４６、ＣＤ５２、ＣＤ５４、ＣＤ７４、ＣＤ８０、ＣＤ１２６、ＭＵＣ１、テネイシン、Ｉａ、ＨＭＩ．２４、ＨＬＡ−ＤＲ、および腫瘍関連抗原からなる群から選択される抗原に向けられたものである、請求項１または２に記載の治療組成物。
【請求項４】
前記抗体、抗体融合タンパク質またはそのフラグメントが少なくとも一種の治療薬と結合されてなるものである、請求項３に記載の治療組成物。
【請求項５】
増殖腫瘍または自己免疫疾患細胞が標的逸出しないようにするための維持療法として、前記コンジュゲート抗体、抗体融合タンパク質またはそのフラグメントに加え、場合により、非コンジュゲート抗体、抗体融合タンパク質またはそのフラグメントが加えられる、請求項４に記載の治療組成物。
【請求項６】
前記コンジュゲートおよび非コンジュゲート抗体、抗体融合タンパク質、またはそのフラグメントが、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１４、ＣＤ１５、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２５、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ４６、ＣＤ５２、ＣＤ５４、ＣＤ７４、ＣＤ８０、ＣＤ１２６、ＭＵＣ１、テネイシン、Ｉａ、ＨＭＩ．２４、ＨＬＡ−ＤＲ、および腫瘍関連抗原からなる群から選択される抗原に向けられたものである、請求項４または５に記載の治療組成物。
【請求項７】
前記コンジュゲートおよび非コンジュゲート抗体、抗体融合タンパク質、またはそのフラグメントが、ヒト、ネズミ、キメラ、霊長類化またはヒト化抗体である、請求項６に記載の治療組成物。