(57)【要約】【課題】  本発明は、ＲＡＳを標的とする新しい治療薬又は予防薬を提供することを目的とする。【解決手段】  下記の一般式（Ｉ）【化１】2010241710.tif 000019［式中、Ｒは、水酸基、アミノ基、カルボキシル基、チオール基であり、ｍは、３〜１０であり、ｎは、０又は１であり、ｏは、３〜９であり、（ｍ＋（２ｎ）＋ｏ）が１４以上である］で表される化合物、その薬理上許容されるエステル、あるいは、それらの薬理上許容される塩を有効成分として含有する２型アンギオテンシン変換酵素活性誘導剤等。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記の一般式（Ｉ）
【化１】
2010241710.tif 000016
［式中、Ｒは、水酸基、アミノ基、カルボキシル基、チオール基であり、ｍは、３〜１０であり、ｎは、０又は１であり、ｏは、３〜９であり、（ｍ＋（２ｎ）＋ｏ）が１４以上である］で表される化合物、その薬理上許容されるエステル、あるいは、それらの薬理上許容される塩を有効成分として含有する２型アンギオテンシン変換酵素活性誘導剤。
【請求項２】
Ｒが、カルボキシル基であり、ｍが、５〜７である、請求項１に記載の２型アンギオテンシン変換酵素活性誘導剤。
【請求項３】
パルミトレイン酸、オレイン酸、ｔｒａｎｓ−パルミエライジン酸、７−ヘキサデセン酸、１１−ヘキサデセン酸、パルミチン酸、又は、パルミトレイルアルコール、その薬理上許容されるエステル、あるいは、それらの薬理上許容される塩を有効成分として含有する２型アンギオテンシン変換酵素活性誘導剤。
【請求項４】
下記の一般式（ＩＩ）
【化２】
2010241710.tif 000017
［式中、Ｒは、水酸基、アミノ基、カルボキシル基、チオール基であり、ｍは、５〜７であり、ｏは、５〜７であり、ｍ＋ｏが１３以上である］で表される化合物、その薬理上許容されるエステル、あるいは、それらの薬理上許容される塩を有効成分として含有する速効性２型アンギオテンシン変換酵素活性誘導剤。
【請求項５】
１１−ヘキサデセン酸、その薬理上許容されるエステル、あるいは、それらの薬理上許容される塩を有効成分として含有する速効性２型アンギオテンシン変換酵素活性誘導剤。
【請求項６】
下記一般式（ＩＩ)
【化３】
2010241710.tif 000018
［式中、Ｒは、水酸基、アミノ基、カルボキシル基、チオール基であり、ｍは、１〜３であり、ｏは、８〜１０であり、ｍ＋ｏが１３以上である］で表される化合物、その薬理上許容されるエステル、あるいは、それらの薬理上許容される塩を有効成分として含有する遅効性２型アンギオテンシン変換酵素活性誘導剤。
【請求項７】
７−ヘキサデセン酸、その薬理上許容されるエステル、あるいは、それらの薬理上許容される塩を有効成分として含有する遅効性２型アンギオテンシン変換酵素活性誘導剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＡＣＥ２の活性を誘導する化合物に関する。
【背景技術】
【０００２】
血圧は主にレニン−アンギオテンシン系（以下、「ＲＡＳ」という）によって制御されている。アンギオテンシノーゲンがレニンにより分解されて生じるアンギオテンシンＩは、アンギオテンシン変換酵素（以下、「ＡＣＥ」という)とＡＣＥのホモログである２型アンギオテンシン変換酵素（以下、「ＡＣＥ２」という）の機能的バランスにより制御されている（図１）。ＡＣＥの活性上昇は、アンギオテンシンＩからアンギオテンシンＩＩ（アンギオテンシン（１−８））への変換を促進し、血管縮小、血圧上昇を促すことで脳心血管疾患や腎障害を惹起する「負」の制御を示す。一方、ＡＣＥ２の活性上昇は、アンギオテンシンＩＩからアンギオテンシン（１−７）への変換を促進し、血管拡張、血圧降下を促し、「正」の制御としてプロテクティブな作用を示す。即ち、ＡＣＥ２は、アンギオテンシン（１−７）−ＭＡＳ系を活性化することで、多くの疾患で悪性化を引き起こすアンギオテンシンＩＩ−ＡＴ１Ｒ系との拮抗作用を示すことが知られている（非特許文献１）。
【０００３】
日本の成人において、高血圧症は約５０％の割合で患う生活習慣病であり、ＲＡＳのシステム異常がその大きな要因となっている。また、本態性高血圧の約４０％がインスリン抵抗性を示し、これにもＲＡＳが関与していると考えられており、インスリン抵抗性も脳心血管疾患のリスクとなりうる。また、ＡＣＥ２及びアンギオテンシン（１−７）は、高血圧（非特許文献２）の他、心収縮機能（非特許文献３）、心不全（非特許文献４）、不整脈（非特許文献５）等の心機能、Ｎａ利尿等の腎機能（非特許文献６）、並びに、ＳＡＲＳ（特許文献１及び非特許文献７）との関係が報告されている（特許文献２及び非特許文献８）。
【０００４】
現在、ＲＡＳを標的とする治療薬としては、ＡＣＥ阻害剤、アンギオテンシンＩＩ受容体ＡＴ１Ｒ拮抗薬が知られているが、血圧を良好にコントロールできている症例は約３０％程度であり、ＲＡＳを標的とする新しい治療薬の開発が求められていた。特に、血圧下降能とインスリン抵抗性抑制能を有する化合物が見いだされれば、現代の生活習慣病全般に有効であると考えられていた。ＡＣＥ２を活性化する低分子化合物として、キサンテノン及びレソルシノールナフタレンが報告されている（特許文献３及び非特許文献９）。しかし、ＡＣＥ２の活性を誘導する化合物を医薬品として開発した例はなく、治療薬として利用可能な化合物の開発が望まれていた。
【０００５】
パルミトレイン酸（（Ｚ）−ｈｅｘａｄｅｃ−９−ｅｎｏｉｃ  ａｃｉｄ）は、炭素数１６のｃｉｓ−９モノ不飽和脂肪酸である。パルミトレイン酸は、イワシ油やマカダミアナッツに含まれることが知られており、１％のパルミトレイン酸を含む食事が脳梗塞を軽減することが報告されている（非特許文献１０）。また、脂肪酸結合タンパク質（ＦＡＢＰ）ノックアウトマウスの脂肪組織から血中に放出されたパルミトレイン酸が、肝臓においてＳＣＤ−１の発現を抑制し脂質合成を抑制すると共に、末梢においてインスリンの感受性を与えグルコースの取り込みを促進することを報告している（非特許文献１１）。当該文献では、パルミトレイン酸は、インスリンと同程度のグルコースの取り込みを刺激することが記載されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】国際公開公報ＷＯ２００６／１２２８１９号
【特許文献２】国際公開公報ＷＯ２００４／０００３６７号
【特許文献３】国際公開公報ＷＯ２００８／０６６７７０号
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Ｂｕｒｅｌｌら、Ｔｒａｎｄｓ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．Ｍｅｔｈａｂ．、Ｖｏｌ．１５、ｐｐ．１６６−１６９（２００４）
【非特許文献２】Ｋａｔｏｖｉｃｈら、Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ．Ｅｘｐ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．、Ｖｏｌ．９０、ｐｐ．２９９−３０５（２００５）
【非特許文献３】Ｃｒａｃｋｏｗｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ、Ｖｏｌ．４１７、ｐｐ．８２２−８２８（２００２）
【非特許文献４】Ｌｏｏｔら、Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ、Ｖｏｌ．１０５、ｐｐ．１５４８−１５５０（２００２）
【非特許文献５】Ｄｏｎｏｇｈｕｅら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｃａｒｄｉｏｌ、Ｖｏｌ．３５、ｐｐ．１０４３−１０５３（２００３）
【非特許文献６】鈴木ら、Ｊａｐａｎｅｓｅ  Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ、Ｖｏｌ．６２、Ｎｏ．Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ  Ｉ、ｐ．（１９９８）
【非特許文献７】Ｋｕｂａら、Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、Ｖｏｌ．１１、ｐｐ．８７５−８７９（２００５）
【非特許文献８】林ら、Ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、Ｖｏｌ．４、Ｎｏ．１、ｐｐ．１８−２２（２００７）
【非特許文献９】Ｐｒａｄａら、Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ、Ｖｏｌ．５１、ｐｐ．１３１２−１３１７（２００８）
【非特許文献１０】Ｙａｍｏｒｉら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ、Ｖｏｌ．４（ｓｕｐｐｌ  ３）、ｐｐ．Ｓ４４９−Ｓ４５２
【非特許文献１１】Ｃａｏら、Ｃｅｌｌ、Ｖｏｌ．１３４、ｐｐ．９３３−９４４（２００８）
【発明の概要】
【０００８】
本発明は、ＡＣＥ２の活性を誘導する化合物を見出し、ＲＡＳを標的とする新しい治療薬を提供することを目的とする。
【０００９】
本発明は、ＡＣＥ２活性誘導剤に関する。より具体的には、本発明は、以下の（１）〜（７）に関する。
（１）  下記の一般式（Ｉ）
【００１０】
【化１】
2010241710.tif 000002
【００１１】
［式中、Ｒは、水酸基、アミノ基、カルボキシル基、チオール基であり、ｍは、３〜１０であり、ｎは、０又は１であり、ｏは、３〜９であり、（ｍ＋（２ｎ）＋ｏ）が１４以上である］で表される化合物、その薬理上許容されるエステル、あるいは、それらの薬理上許容される塩を有効成分として含有する２型アンギオテンシン変換酵素活性誘導剤；
（２）  Ｒが、カルボキシル基であり、ｍが、５〜７である、（１）に記載の２型アンギオテンシン変換酵素活性化剤；
（３）  パルミトレイン酸、オレイン酸、ｔｒａｎｓ−パルミテライジン酸、７−ヘキサデセン酸、１１−ヘキサデセン酸、パルミチン酸、又は、パルミトレイルアルコール、その薬理上許容されるエステル、あるいは、それらの薬理上許容される塩を有効成分として含有する２型アンギオテンシン変換酵素活性誘導剤；
（４）  下記の一般式（ＩＩ）
【００１２】
【化２】
2010241710.tif 000003
【００１３】
［式中、Ｒは、水酸基、アミノ基、カルボキシル基、チオール基であり、ｍは、５〜７であり、ｏは、５〜７であり、ｍ＋ｏが１３以上である］で表される化合物、その薬理上許容されるエステル、あるいは、それらの薬理上許容される塩を有効成分として含有する速効性２型アンギオテンシン変換酵素活性誘導剤；
（５）  １１−ヘキサデセン酸、その薬理上許容されるエステル、あるいは、それらの薬理上許容される塩を有効成分として含有する速効性２型アンギオテンシン変換酵素活性誘導剤；
（６）  下記一般式（ＩＩ)
【００１４】
【化３】
2010241710.tif 000004
【００１５】
［式中、Ｒは、水酸基、アミノ基、カルボキシル基、チオール基であり、ｍは、１〜３であり、ｏは、８〜１０であり、ｍ＋ｏが１３以上である］で表される化合物、その薬理上許容されるエステル、あるいは、それらの薬理上許容される塩を有効成分として含有する遅効性２型アンギオテンシン変換酵素活性誘導剤；並びに、
（７）  ７−ヘキサデセン酸、その薬理上許容されるエステル、あるいは、それらの薬理上許容される塩を有効成分として含有する遅効性２型アンギオテンシン変換酵素活性誘導剤。
【００１６】
別の態様において、本願発明は、以下の発明に関する：
（１’）  下記の一般式（Ｉ）
【００１７】
【化４】
2010241710.tif 000005
【００１８】
［式中、Ｒは、水酸基、アミノ基、カルボキシル基、チオール基であり、ｍは、３〜１０であり、ｎは、０又は１であり、ｏは、３〜９であり、（ｍ＋（２ｎ）＋ｏ）が１４以上である］で表される化合物、その薬理上許容されるエステル、あるいは、それらの薬理上許容される塩を投与することを含む、２型アンギオテンシン変換酵素活性の誘導方法；
（２’）  Ｒが、カルボキシル基であり、ｍが、５〜７である、（１’）に記載の２型アンギオテンシン変換酵素活性の誘導方法；
（３’）  パルミトレイン酸、オレイン酸、ｔｒａｎｓ−パルミテライジン酸、７−ヘキサデセン酸、１１−ヘキサデセン酸、パルミチン酸、又は、パルミトレイルアルコール、その薬理上許容されるエステル、あるいは、それらの薬理上許容される塩を投与することを含む、２型アンギオテンシン変換酵素活性の誘導方法；
（４’）  下記の一般式（ＩＩ）
【００１９】
【化５】
2010241710.tif 000006
【００２０】
［式中、Ｒは、水酸基、アミノ基、カルボキシル基、チオール基であり、ｍは、５〜７であり、ｏは、５〜７であり、ｍ＋ｏが１３以上である］で表される化合物、その薬理上許容されるエステル、あるいは、それらの薬理上許容される塩を投与することを含む、即効的に２型アンギオテンシン変換酵素活性を誘導する方法；
（５’）  １１−ヘキサデセン酸、その薬理上許容されるエステル、あるいは、それらの薬理上許容される塩を投与することを含む、即効的に２型アンギオテンシン変換酵素活性を誘導する方法；
（６’）  下記一般式（ＩＩ)
【００２１】
【化６】
2010241710.tif 000007
【００２２】
［式中、Ｒは、水酸基、アミノ基、カルボキシル基、チオール基であり、ｍは、１〜３であり、ｏは、８〜１０であり、ｍ＋ｏが１３以上である］で表される化合物、その薬理上許容されるエステル、あるいは、それらの薬理上許容される塩を投与することを含む、遅効的に２型アンギオテンシン変換酵素活性を誘導する方法；並びに、
（７’）  ７−ヘキサデセン酸、その薬理上許容されるエステル、あるいは、それらの薬理上許容される塩を投与することを含む、遅効的に２型アンギオテンシン変換酵素活性を誘導する方法。
【００２３】
本発明の２型アンギオテンシン変換酵素活性誘導剤は、下記の一般式（Ｉ）
【００２４】
【化７】
2010241710.tif 000008
【００２５】
［式中、Ｒは、水酸基、アミノ基、カルボキシル基、チオール基であり、ｍは、３〜１０であり、ｎは、０又は１であり、ｏは、３〜９であり、（ｍ＋（２ｎ）＋ｏ）が１４以上である］で表される化合物を有効成分として含有する。Ｒは、好ましくは、水酸基又はカルボキシル基である。ｍは、好ましくは、３〜８であり、より好ましくは、３〜５である。ｎは、好ましくは、１である。ｏは、好ましくは、５〜９である。式（Ｉ）の化合物として、好ましくは、パルミトレイン酸、オレイン酸、ｔｒａｎｓ−パルミテライジン酸、７−ヘキサデセン酸、１１−ヘキサデセン酸、パルミチン酸、及び、パルミトレイルアルコールである。
【００２６】
また、上記式（Ｉ）で表される化合物は、その構造により、その薬効の発現が遅効型と速効型に分かれる。よって、一の態様において、本発明は速効性２型アンギオテンシン変換酵素活性誘導剤に関する。より具体的には、本発明は、下記の一般式（ＩＩ）
【００２７】
【化８】
2010241710.tif 000009
【００２８】
［式中、Ｒは、水酸基、アミノ基、カルボキシル基、チオール基であり、ｍは、５〜７であり、ｏは、５〜７であり、ｍ＋ｏが１３以上である］で表される化合物を有効成分として含有する速効性２型アンギオテンシン変換酵素活性誘導剤に関する。好ましくは、Ｒは、水酸基又はカルボキシル基である。
【００２９】
速効性２型アンギオテンシン変換酵素活性誘導剤に含有される式（ＩＩ）で表される化合物として、好ましくは、７−ヘキサデセン酸である。また、別の態様において、本発明は遅効性２型アンギオテンシン変換酵素活性誘導剤に関する。より具体的には、下記一般式（ＩＩ)
【００３０】
【化９】
2010241710.tif 000010
【００３１】
［式中、Ｒは、水酸基、アミノ基、カルボキシル基、チオール基であり、ｍは、１〜３であり、ｏは、８〜１０であり、ｍ＋ｏが１３以上である］で表される化合物を有効成分として含有する遅効性２型アンギオテンシン変換酵素活性誘導剤に関する。好ましくは、Ｒは、水酸基又はカルボキシル基である。遅効性２型アンギオテンシン変換酵素活性誘導剤に含有される式（ＩＩ）で表される化合物として、より好ましくは、１１−ヘキサデセン酸である。
【００３２】
本願発明の２型アンギオテンシン変換酵素活性誘導剤は、上記化合物の他、これらの化合物の薬理上許容されるエステルを包含する。ここで、「薬理上許容されるエステル」は、生体内において代謝されて、本願発明の化合物を与える基を含む化合物であって、医薬として体内に投与することが許容可能なエステルのことである。本明細書において、エステルは、エステル結合した化合物の他、アミド結合した化合物を含む。また、本願発明の化合物がアミノ基を有する場合、カルボン酸を含む化合物と反応させることにより、アミドを得ることができる。エステルは、生体内のエステラーゼにより分解されて活性型の化合物を与えてもよい。例えば、エステルとしては、置換され又は置換されていない、低級アルキルエステル、低級アルケニルエステル、低級アルキルアミノ低級アルキルエステル、アシルアミノ低級アルキルエステル、アシルオキシ低級アルキルエステル、アリールエステル、アリール低級アルキルエステル、アミド、低級アルキルアミド、水酸化アミドを挙げることができる。エステルとして、好ましくは、プロピオン酸エステル又はアシルエステルである。本明細書において、「低級」とは、炭素数１〜１０を意味し、好ましくは、炭素数１〜６であり、より好ましくは炭素数１〜３である。
【００３３】
本願発明の２型アンギオテンシン変換酵素活性誘導剤は、上記化合物、当該化合物のエステルの他、それらの薬理上許容される塩を包含する。「薬理上許容される塩」とは、上記化合物又はそのエステルが、無機又は有機の塩基又は酸と結合して形成した塩であって、医薬として体内に投与することが許容可能な塩のことである。このような塩は、例えば、Ｂｅｒｇｅら、Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．６６：１−１９（１９７７）等に記載されており、具体的には、酢酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、安息香酸エステル塩、重炭酸塩、酸性酒石酸塩、臭化物塩、カルシウムエデト酸塩、カンシル酸塩、炭酸塩、塩酸塩、クエン酸塩、二塩酸塩、エデト酸塩、エジシル酸塩、ラウリル硫酸塩、フマル酸塩、テオクル酸塩、グルコン酸塩、グルタミン酸塩、グリコリルアサニル酸塩、ヘキシルレゾルシン酸塩、ヒドラバミン、臭化水素酸塩、塩化水素酸塩、ヒドロキシナフトエ酸塩、ヨウ化物塩、イソチオン酸塩、乳酸塩、ラクトビオン酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マンデル酸塩、メシル酸塩、臭化メチル、硝酸メチル塩、硫酸メチル塩、粘液酸塩、ナプシル酸塩、硝酸塩、パモン酸塩、パントテン酸塩、リン酸塩／二リン酸塩、ポリガラクツロン酸塩、サリチル酸塩、ステアリン酸塩、塩基性酢酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、タンニン酸塩、酒石酸塩、テオクル酸塩、及び、トリエチオダイドを挙げることができる。なお、化合物（Ｉ）の水和物又は溶媒和物および化合物（Ｉ）の塩の水和物又は溶媒和物も本発明の化合物に包含される。
【００３４】
２型アンギオテンシン変換酵素（以下、「ＡＣＥ２」という）は、アンギオテンシン変換酵素（以下、「ＡＣＥ」という）と同じアンギオテンシンＩ（１−１０）（以下、「ＡＩ」という」を基質とすることから、ＡＣＥと拮抗してアンギオテンシン（１−７）を産生する。また、ＡＣＥ２は、アンギオテンシンＩＩ（１−８）（以下、「ＡＩＩ」という）を更に分解してアンギオテンシン（１−７）を産生することが知られている。また、アンギオテンシン（１−７）は、ＡＩＩに対して拮抗的に働くことが報告されている。よって、一の態様において、本願発明は、式（Ｉ）
【００３５】
【化１０】
2010241710.tif 000011
【００３６】
［式中、Ｒは、水酸基、アミノ基、カルボキシル基、チオール基であり、ｍは、３〜１０であり、ｎは、０又は１であり、ｏは、３〜９であり、（ｍ＋（２ｎ）＋ｏ）が１４以上である］で表される化合物を有効成分として含有するＡＩＩの産生又は活性化に基づく疾患の治療剤又は予防剤を提供するものである。ＡＩＩの産生又は活性化に基づく疾患としては、高血圧症、本態性高血圧症、腎（実質）性高血圧症、腎血管性高血圧症、悪性高血圧症、肺高血圧症、心不全、心肥大、脳卒中、糖尿病性腎症、腎線維症、骨粗鬆症、アルツハイマー病、急性肺損傷、各種炎症、自己免疫疾患における組織障害、臓器障害（特には、血圧上昇に伴う臓器障害）等が挙げられる。また、ＡＣＥ２は、ＡＩＩの阻害活性の他に、ブラジキニンの分解産物で血管拡張作用のある［Ｄｅｓ−Ａｒｇ］９ブラジキニンを不活性化すること、ａｐｅｌｉｎ−１３、ｄｙｎｏｒｐｈｉｎ  Ａ１−１３を分解すること等が知られている。従って、ある態様において、本願発明は、式（Ｉ）で表される化合物を有効成分として含有する、［Ｄｅｓ−Ａｒｇ］９ブラジキニン、ａｐｅｌｉｎ−１３、又はｄｙｎｏｒｐｈｉｎ  Ａ１−１３に基づく疾患の治療剤又は予防剤を提供するものである。更に、ＡＣＥ２は、ＳＡＲＳウィルスのＳｐｉｋｅタンパク質のレセプターであること（Ｋｕｂａら、Ｎａｔ  Ｍｅｄ  １１：８７５−８７９，２００５）、ＡＣＥ２の活性化がＳＡＲＳに治療効果をもたらすこと（Ｉｍａｉら、Ｎａｔｕｒｅ  ４３６：１１２−１１６，２００５）が報告されている。よって、別の態様において、本願発明は、式（Ｉ）で表される化合物を有効成分として含有する、ＳＡＲＳの治療剤又は予防剤を提供するものである。その他、本願発明は、式（Ｉ）で表される化合物を有効成分として含有する、糖尿病等のＡＣＥ２の活性向上により改善する疾患あるいはＡＣＥ２の活性低下又は機能不全に基づく疾患の治療剤又は予防剤を提供するものである。また、別の態様において、本願発明は、前記式（Ｉ）で表される化合物を投与することを含む、前記疾患の治療方法又は予防方法を提供するものである。
【００３７】
また、一の態様において、本願発明は、下記の一般式（ＩＩ）
【００３８】
【化１１】
2010241710.tif 000012
【００３９】
［式中、Ｒは、水酸基、アミノ基、カルボキシル基、チオール基であり、ｍは、５〜７であり、ｏは、５〜７であり、ｍ＋ｏが１３以上である］で表される化合物を有効成分として含有するＡＩＩの産生又は活性化に基づく疾患、［Ｄｅｓ−Ａｒｇ］９ブラジキニン、ａｐｅｌｉｎ−１３又はｄｙｎｏｒｐｈｉｎ  Ａ１−１３に基づく疾患、ＳＡＲＳ、ＡＣＥ２の活性向上により改善する疾患（例えば、糖尿病）、あるいは、ＡＣＥ２の活性低下又は機能不全に基づく疾患の速効性の治療剤又は予防剤を提供するものである。別の態様において、本願発明は、前記化合物を投与することを含む、ＡＩＩの産生又は活性化に基づく疾患の速効的な治療方法に関する。
【００４０】
また、別の態様において、本願発明は、下記一般式（ＩＩ)
【００４１】
【化１２】
2010241710.tif 000013
【００４２】
［式中、Ｒは、水酸基、アミノ基、カルボキシル基、チオール基であり、ｍは、１〜３であり、ｏは、８〜１０であり、ｍ＋ｏが１３以上である］で表される化合物を有効成分として含有するＡＩＩの産生又は活性化に基づく疾患、［Ｄｅｓ−Ａｒｇ］９ブラジキニン、ａｐｅｌｉｎ−１３又はｄｙｎｏｒｐｈｉｎ  Ａ１−１３に基づく疾患、ＳＡＲＳ、ＡＣＥ２の活性向上により改善する疾患（例えば、糖尿病）、あるいは、ＡＣＥ２の活性低下又は機能不全に基づく疾患の遅効性の治療剤又は予防剤を提供するものである。別の態様において、本願発明は、前記化合物を投与することを含む、ＡＩＩの産生又は活性化に基づく疾患の遅効的な治療方法に関する。
【発明の効果】
【００４３】
本発明の化合物は、ＡＣＥ２活性を誘導し、降圧効果のみならず高血圧により発症する脳卒中やインスリン抵抗性を抑制する。また、本発明の化合物は、血管系疾患や糖尿病に関与するＡＣＥ２の活性を誘導することから、これらの疾患に対する治療効果を有する。
【図面の簡単な説明】
【００４４】
【図１】ＡＣＥ２の作用メカニズムを表す模式図である。
【図２】パルミトレイン酸によるＡＣＥ２活性化を示す図である。図中、縦軸はＡＣＥ２を活性化したことを示す蛍光の強度（ＲＦＵ）を示し、横軸は基質との反応時間（分）を示す。図中、実線はパルミトレイン酸、破線はコントロールを示す。
【図３】パルミトレイン酸によるＡＣＥ活性抑制を示す図である。図中、縦軸はＡＣＥを活性化したことを示す蛍光の強度（ＲＦＵ）を示し、横軸は基質との反応時間（分）を示す。図中、実線はパルミトレイン酸、破線はコントロールを示す。
【図４】パルミトレイン酸類似化合物のＡＣＥ２の活性への影響を調べた結果を示す図である。図中、ひし形印（破線）はコントロール、丸印はパルミトレイン酸、星印は６−ＨＡ、三角印は７−ＨＡ、四角印は１１−ＨＡを示す。
【図５】自然発症高血圧ラット（Ｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓ  Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ  Ｒａｔｓ：ＳＨＲ）にパルミトレイン酸を尾静脈投与した結果を示す図である。図中、縦軸は平均血圧（ｍｍＨｇ）を、横軸は、パルミトレイン酸投与からの経過時間（時間）を示す。
【図６】ＳＨＲ  Ｓｔｒｏｋｅ  Ｐｒｏｎｅ（ＳＨＲＳＰ）ラットに、パルミトレイン酸を腹腔内持続投与し、収縮時血圧を測定した結果を示す図である。図中、縦軸は収縮時血圧（ｍｍＨｇ）を、横軸は投与後の経過期間（日）を示す。図中、四角印はパルミトレイン酸、ひし形印はコントロールを示す。
【図７】ＳＨＲＳＰ（ＳＨＲ  Ｓｔｒｏｋｅ  Ｐｒｏｎｅ）ラットに、パルミトレイン酸を腹腔内に持続投与し、生存率を調べた結果を示す図である。図中、縦軸は生存率（％）を、横軸は、投与後の経過期間（日）を示す。
【図８】ＷＫＹラットとＳＨＲラットの脳脊髄液中のＡＣＥ２活性を測定した結果を示す。図中、縦軸は、ＡＣＥ２を活性化したことを示す蛍光の強度（ＲＦＵ）を示す。
【図９】パルミトレイン酸の投与による、ＳＨＲラットの脳脊髄液中のＡＣＥ２活性の変化を示す。図中、縦軸は、ＡＣＥ２を活性化したことを示す蛍光の強度（ＲＦＵ）を示す。
【図１０】パルミトレイン酸を投与後、血糖値を継時的に測定した結果を示す図である。図中、縦軸は相対率（％）を、横軸はインスリン投与後の経過時間（分）を表す。図中、実線はパルミトレイン酸投与群を、破線はコントロールを示す。
【図１１】ＳＨＲＳＰにパルミトレイン酸を腹腔内に持続投与し、心臓をＨＥ染色した結果を示す写真である。図１１Ａは、コントロール（１％食塩水投与）、図１１Ｂは、パルミトレイン酸投与の結果を示す。
【図１２】ＳＨＲＳＰにパルミトレイン酸を腹腔内に持続投与し、腎臓の病理組織学的検査を行った結果を示す写真である。図１２Ａは、コントロール（１％食塩水投与）、図１２Ｂは、パルミトレイン酸投与の結果を示す。
【発明を実施するための形態】
【００４５】
本願発明の化合物は、市販品として入手することができ、又は、市販品を原料として当業者周知の方法により製造することができる。例えば、式（Ｉ）で表される化合物又は式（ＩＩ)で表されるにおいて、Ｒがカルボキシル基の化合物は、市販の脂肪酸として入手することができ、Ｒが水酸基である化合物は、当該脂肪酸を例えばＬｉＡｌＨ４ＢＨ３等の還元剤を用いて還元することにより得ることができる。また、Ｒがアミノ基又はチオール基である化合物は、Ｒが水酸基である化合物を原料として、ＳＯＣｌ２又はＰＢｒ３と反応させてハロゲン化化合物を得たのち、それぞれ（Ｈ２Ｎ）２Ｃ＝Ｓ又はＮａＮ３と反応させることにより得ることができる。
【００４６】
本願発明のエステルは、本願発明の化合物が水酸基を含む場合、常法によりカルボン酸を含む化合物と反応させることにより、エステルを得ることができる。また、本願発明の化合物がカルボキシル基を含む場合、常法により水酸基を含む化合物と反応させることにより、エステルを得ることができる。また、本願発明の化合物がカルボキシル基を含む場合、常法によりアミノ基を含む化合物と反応させることによりアミドを得ることができる。
【００４７】
本願発明の塩は、本願発明の化合物が水酸基又はカルボン酸を含む場合、常法により塩基と反応させることにより、塩を得ることができる。また、本願発明の化合物がアミノ基を含む場合、常法により酸と反応させることにより、塩を得ることができる。
【００４８】
本発明の化合物を医薬として使用する場合、投与部位としては、経口投与、口腔内投与、気道内投与、皮下投与、筋肉内投与、血管内（静脈内）投与等を挙げることができる。また、製剤としては、例えば、注射剤、カプセル剤、錠剤、シロップ剤、顆粒剤、貼布剤、点滴、軟膏等を挙げることができる。本発明の抗体は、単独で投与しても良いし、薬理学的に許容される単体（「医薬品添加物事典」薬事日報社、「Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ」ＡＰｈＡ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ社参照）と共に投与されてもよい。これらの製剤は、賦形剤（例えば、乳糖、白糖、ブドウ糖、マンニット、ソルビットのような糖誘導体；トウモロコシデンプン、馬鈴薯デンプン、α−デンプン、デキストリン、カルボキシメチルデンプンのようなデンプン誘導体；結晶セルロース、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースカルシウム、内部架橋カルボキシメチルセルロースナトリウムのようなセルロース誘導体；アラビアゴム；デキストラン；プルラン；軽質無水珪酸、合成珪酸アルミニウム、メタ珪酸アルミン酸マグネシウムのような珪酸塩誘導体；リン酸カルシウムのようなリン酸塩誘導体；炭酸カルシウムのような炭酸塩誘導体；硫酸カルシウムのような硫酸塩誘導体等）、結合剤（例えば、前記の賦形剤；ゼラチン；ポリビニルピロリドン；マクロゴール等）、崩壊剤（例えば、前記の賦形剤；クロスカルメロースナトリウム、カルボキシメチルスターチナトリウム、架橋ポリビニルピロリドンのような化学修飾された、デンプン、セルロース誘導体等）、滑沢剤（例えば、タルク；ステアリン酸；ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウムのようなステアリン酸金属塩；コロイドシリカ；ビーガム；ビ−ズワックス、ゲイロウのようなワックス類；硼酸；グリコール；フマル酸；アジピン酸のようなカルボン酸類：安息香酸ナトリウムのようなカルボン酸ナトリウム塩；硫酸ナトリウムのような硫酸類塩；ロイシン；ラウリル硫酸ナトリウム、ラウリル硫酸マグネシウムのようなラウリル硫酸塩；無水珪酸、珪酸水和物のような珪酸類；前記の賦形剤におけるデンプン誘導体等）、安定剤（例えば、メチルパラペン、プロピルパラペンのようなパラオキシ安息香酸エステル類；クロロブタノール、ベンジルアルコール、フェニルエチルアルコールのようなアルコール類；塩化ベンザルコニウム；フェノール；クレゾールのようなフェノール類；チメロサール；無水酢酸；ソルビン酸等）、矯味矯臭剤（例えば、通常使用される、甘味料、酸味料、香料等）、懸濁化剤（例えば、ポリソルベート８０、カルボキシメチルセルロースナトリウム等）、希釈剤、製剤用溶剤（例えば、水、エタノール、グリセリン等）等の添加物を用いて周知の方法で製造される。また、本発明の治療薬を注射剤として使用する場合、保存容器としては、アンプル、バイアル、プレフィルドシリンジ、ペン型注射器用カートリッジ、及び、点滴用バッグ等を挙げることができる。
【００４９】
本発明の化合物の投与方法は、所望の治療効果又は予防効果が得られる方法であれば特に限定はなく、好ましくは、血中に投与する。具体的には、血管内（例えば、静脈内、冠動脈内）に投与することができる。また、本発明の化合物は、一時的に投与してもよいし、持続的又は断続的に投与してもよい。例えば、本発明の化合物の投与は、１分間〜２週間の持続投与することもできる。本発明の化合物の投与方法として、好ましくは、１週間に１〜４回投与であり、より好ましくは、１週間に１回投与である。また、本発明の化合物は、２〜３週間に１回投与とすることもできる。
【００５０】
本発明の薬剤の投与量は、所望の治療効果又は予防効果が得られる投与量であれば特に限定は無く、症状、性別、年齢等により適宜決定することができる。本発明の治療薬又は予防薬の投与量は、例えば、虚血性疾患又は虚血／再灌流障害の治療効果又は予防効果を指標として決定することができる。本発明の治療薬又は予防薬の投与量として、好ましくは、１ｎｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇであり、より好ましくは、１０ｎｇ／ｋｇ〜１ｍｇ／ｋｇであり、更に好ましくは、５〜５００μｇ／ｋｇであり、より更に好ましくは、１０〜１００μｇ／ｋｇであり、最も好ましくは、１０〜３０μｇ／ｋｇである。
【００５１】
以下、本発明をより詳細に説明するため実施例を示すが、本発明はこれに限定されるものではない。なお、本願全体を通して引用される全文献は参照によりそのまま本願に組み込まれる。
【００５２】
実施例１．海洋微生物抽出物ライブラリーからのＡＣＥ２活性化化合物の抽出及び同化合物の同定
スクリーニングの対象サンプルとして、旧株式会社海洋バイオテクノロジー研究所より提供を受けた海洋微生物抽出物ライブラリー８００サンプルを用いた。当該サンプルを１）ＡＣＥ２活性上昇サンプルの探索、２）ＡＣＥ活性下降サンプルの探索、３）ＡＣＥ２に結合を示すサンプルの検定の３ステップからなる系を用いてスクリーニングした。
（１）ＡＣＥ２活性測定
ＡＣＥ２に対する蛍光基質である、７−Ｍｅｔｈｏｘｙｃｏｕｍａｒｉｎ−ＹＶＡＤＡＰＫ（２，４−Ｄｉｎｉｔｒｏｐｈｅｎｙｌ）−ＯＨ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ社）１０μＭ、組み換え体ヒトＡＣＥ２（ｒｈＡＣＥ２）（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ社）２５ｎｇ／ｍＬを混合し、２４０倍希釈した海洋エキスを加え３７℃で反応させた。反応開始から６０分間の、励起波長３２０ｎｍ、放出波長４０５ｎｍの蛍光を、蛍光プレートリーダー（Ｓａｆｉｒｅ２、ＴＥＣＡＮ社）を用いて測定した。６０％エタノールを使用したコントロールと比較して蛍光強度を上昇させる化合物をＡＣＥ２活性上昇サンプルとした。
（２）ＡＣＥ活性測定
ＡＣＥに対する蛍光基質である、７−Ｍｅｔｈｏｘｙｃｏｕｍａｒｉｎ−４−ｙｌ−ＲＰＰＧＦＳＡＦＫ（２，４−Ｄｉｎｉｔｒｏｐｈｅｎｙｌ）−ＯＨ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ社）１０μＭ、組み換え体ヒトＡＣＥ（ｒｈＡＣＥ）（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ社）２５ｎｇ／ｍＬを混合し、２４０倍希釈した海洋エキスを加え３７℃で反応させた。反応開始から６０分間の、励起波長３２０ｎｍ、放出波長４０５ｎｍの蛍光を、蛍光プレートリーダー（Ｓａｆｉｒｅ２、ＴＥＣＡＮ社）を用いて測定した。６０％エタノールを使用したコントロールと比較して蛍光強度を下降させる化合物をＡＣＥ活性下降サンプルとした。
【００５３】
（３）ＡＣＥ２の結合活性測定
（３−１）ｈＡＣＥ２タンパク質の調整及び精製
ＦｒｅｅＳｔｙｌｅＴＭ２９３−Ｆ細胞（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社）に、ヒトＡＣＥ２をコードしたプラスミドＤＮＡを、トランスフェクション試薬２９３ｆｅｃｔｉｎ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社）を用いてトランスフェクションし、３７℃、８％ＣＯ２条件下、１２０ｒｐｍで振とう培養した。培養開始から４８時間後及び９６時間後の培養上清を回収し、２５ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．５）の透析液で透析した。その後、エコノカラムＤＥＡＥ（セルファイン  Ａ５００−ｍ、生化学バイオビジネス株式会社）に充填し、ＮａＣｌ（１５０ｍＭ、２００ｍＭ、２５０ｍＭ、又は、３００ｍＭ）を含む緩衝液（２５ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．５））で溶出した。その後、サンプルを７．５％ＳＤＳ−ＰＡＧＥで電気泳動し、抗ＡＣＥ２抗体（モノクローナル抗ヒトＡＣＥ２抗体、Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ社）を用いてウェスタンブロットでＡＣＥ２を確認した。
精製したＡＣＥ２タンパク質をＳｐｅｃｔｒａ／Ｐｏｒ（登録商標）Ｄｉａｌｙｓｉｓ  Ｍｅｍｂｒａｎｅ（ＳＰＥＣＴＲＵＭＬＡＢＳ社）を用いてＰＢＳ溶液に透析置換した。
（３−２）ｈＡＣＥ２への結合測定
ＢＩＡｃｏｒｅＪ（ＢＩＡＣＯＲＥ社）及びＣＭ５センサーチップ（ＢＩＡＣＯＲＥ社）を用い、当該装置に添付の説明書に従って、海洋エキスのｈＡＣＥ２への結合を測定した。具体的には、センサーチップ表面のカルボキシル基をＮ−ｈｙｄｒｏｘｙｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｅ（ＮＨＳ）／Ｎ−ｅｔｙｌ−Ｎ’−（３−ｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏｐｒｏｐｙｌ）ｃａｒｂｏｄｉｉｍｉｄｅｈｙｄｒｏｃｈｒｏｒｉｄｅ（ＥＤＣ）の混合液で活性化させ、ｈＡＣＥ２を１０ｍＭ酢酸（ｐＨ４．０）下でセンサーチップに固定化した。ブロッキングには１Ｍ  ｅｔｈａｎｏｌａｍｉｎｅ  ｈｙｄｒｏｃｈｒｏｒｉｄｅ（ｐＨ８．５）を使用した。種々の化合物を濃度依存的にアプライし、結合性を示したサンプルを陽性とした。
【００５４】
上記３ステップと精製を繰り返した結果、１種類の化合物（パルミトレイン酸）を同定した。
【００５５】
実施例２．パルミトレイン酸のＡＣＥ２活性誘導能及びＡＣＥ活性抑制能測定
実施例１（１）及び（２）と同様の方法を用いて、パルミトレイン酸（ＭＰ−Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ社、以下同じ）のＡＣＥ２活性誘導能及びＡＣＥ活性抑制能を測定した。コントロールとして、パルミトレイン酸の溶媒として用いたジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）を使用して同様にＡＣＥ２活性誘導能を測定した。
ＡＣＥ２活性誘導能を測定した結果を図２に、ＡＣＥ活性抑制能を測定した結果を図３に示す。パルミトレイン酸は、コントロールと比較して顕著にＡＣＥ２活性を誘導し、かつ、ＡＣＥ活性を抑制することが示された。本結果から、パルミトレイン酸は優れたＡＣＥ２活性誘導剤であることがわかった。
【００５６】
実施例３．類似化合物に関する検討
パルミトレイン酸（Ｃ１６：１  ω９）と類似する化合物のＡＣＥ２への作用について検討を行った。具体的には、オレイン酸（和光純薬工業）、ｔｒａｎｓ−パルミテライジン酸（和光純薬工業）、７−ヘキサデセン酸（７−ＨＡ）（Ｃａｙｍａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙ社）、１１−ヘキサデセン酸（１１−ＨＡ）（Ｌａｒｏｄａｎ  Ｆｉｎｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ社）、パルミチン酸（和光純薬工業）、パルミトレイルアルコール（和光純薬工業）、及び、パルミトレイン酸（ＭＰ−Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ社）を使用し、実施例１（１）及び（２）と同様の方法を用いて、ＡＣＥ２活性誘導能を測定した。コントロールとして、ＤＭＳＯを使用して同様にＡＣＥ２活性誘導能を測定した。
結果を図４に示す。本実験の結果から、７−ＨＡ及び６−ＨＡが、速効性にＡＣＥ２の活性を誘導した。一方で、１１−ＨＡは、遅効性でＡＣＥ２の活性を誘導した。パルミトレイン酸は、速効性もあり、かつ、持続的なＡＣＥ２の活性誘導効果を有していた。
【００５７】
【表１】
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【００５８】
実施例４．降圧効果
自然発症高血圧ラット（Ｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓ  Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ  Ｒａｔｓ：ＳＨＲ）（日本チャールスリバー社）１７週令、オス、６匹に、パルミトレイン酸（ＭＰ−Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ社）（０．１ｍｇ／ｋｇ）を尾静脈投与した。また、コントロールとして、１７週令、オス、６匹に０．０２７％のＤＭＳＯを投与した。投与後、１、２、４、６、８及び１８時間における血圧を継時的に測定した。血圧は、ラット用非観血自動血圧測定装置（Ｓｏｆｔｒｏｎ社）を用いて、ｔａｉｌ−ｃｕｆｆ法で測定した。測定値は、毎回３回測定し、その平均値を算出した。
結果を図５に示す。パルミトレイン酸の投与により、２相性に血圧の減少が認められた。
【００５９】
実施例５．脳卒中抑制効果
自然発症高血圧ラット（ＳＨＲ）の亜系であり、１％食塩水を摂取させることにより高頻度で脳卒中を発症するＳＨＲＳＰ（ＳＨＲ  Ｓｔｒｏｋｅ  Ｐｒｏｎｅ）ラット（日本エスエルシー）オス、１３週令、１０匹に、パルミトレイン酸を腹腔内に持続投与し、収縮時血圧及び生存率を調べた。腹腔内投与には、パルミトレイン酸２．１８ｍＭを加えた浸透圧ポンプ（Ａｌｚｅｔ社）を３７℃の生理食塩水中で４８時間静置したものを腹腔内に埋め込むことにより使用した。本前処理により、腹腔内に埋め込んだ直後から化合物が体内に放出された（０．１５μＬ／時間；２．１８ｍＭパルミトレイン酸／時間）。ポンプを埋め込んでから約４０日経過後に新しいポンプと入れ替え、６週間の持続投与を行った。また、コントロールとして、１０匹に０．５％ＤＭＳＯを投与し、同様に生存率を調べた。
収縮時血圧を測定した結果を図６に示す。図６に示す通り、パルミトレイン酸投与群では血圧上昇が抑えられていた。また、生存曲線を図７に示す。コントロール群では投与３６日で全死亡したのに対し、パルミトレイン酸投与群では４０日を超えても１匹しか死亡しなかった。このことから、パルミトレイン酸は脳卒中を抑制し、生存期間を延長することが示唆された。
【００６０】
実施例６．脳脊髄液におけるＡＣＥ２活性
尾静脈から投与したパルミトレイン酸が脳で作用するのかを調べるために、脳脊髄液（ＣＳＦ）中のＡＣＥ２活性を測定した。具体的には、ＳＨＲラット（日本チャールスリバー社）及びＷｉｓｔａｒ−Ｋｙｏｔｏ（ＷＫＹ）ラット（日本チャールスリバー社）に麻酔（ジエチルエーテル、和光純薬工業）をかけ、後頭骨から大槽部分へ２３Ｇ針を刺してＣＳＦを採取し、生理食塩水で２倍希釈した後、実施例１（１）と同様の方法を用いて、ＡＣＥ２活性を測定した。
次いで、ＳＨＲラットに、パルミトレイン酸（ＭＰ−Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ社）（０．１ｍｇ／ｋｇ）又はコントロールとして溶媒（０．０２７％のＤＭＳＯ）を尾静脈から投与し、投与後、１時間及び６時間におけるＣＳＦを採取して、実施例１（１）と同様の方法を用いて、ＡＣＥ２活性を測定した。
結果を図８及び図９に示す。ＳＨＲラットのＣＳＦ中では、ＡＣＥ２活性が減少していた。ＳＨＲラットにパルミトレイン酸を投与した場合、投与後１時間では、コントロールと比較してＡＣＥ２活性に差は見られなかったが、投与後６時間では、パルミトレイン酸を投与したラットのＣＳＦ中のＡＣＥ２活性が顕著に上昇することを確認した。このことから、パルミトレイン酸は、静脈投与を行った場合にもＣＳＦ中に移行し、脳卒中等の、ＡＣＥ２の活性低下に起因する、又は、ＡＣＥ２の活性向上により治療効果がある疾患に対して、治療効果を有することが示された。
【００６１】
実施例７．インスリン抵抗性の回復
高血圧の約４０％がインスリン抵抗性を示すことから、インスリン抵抗性に対するパルミトレイン酸の効果について検討した。糖尿病モデル動物Ｃ５７ＢＬ／６ｊＤＩＯ（Ｄｉｅｔ  Ｉｎｄｕｃｅｄ  Ｏｂｅｓｉｔｙ）マウス（日本チャールスリバー社）に、パルミトレイン酸（０．１ｍｇ／ｋｇ）を尾静脈投与し、投与１時間後に、インスリン（０．７ｕｎｉｔｓ／ｋｇ）を腹腔内に投与した。インスリン投与後、１５分、３０分、６０分、及び１２０分における血糖値を自己グルコース測定器（アキュチェックアビバ、Ｒｏｃｈｅ社）により継時的に測定した。
また、同様に、ＳＨＲＳＰラット（日本チャールスリバー社）にパルミトレイン酸を腹腔内持続投与し、安定に血圧の下降が維持できていることを確認できた投与２０日後にインスリン（０．７ｕｎｉｔｓ／ｋｇ）を腹腔内に投与した。インスリン投与後、１５分、３０分、６０分、及び１２０分における血糖値を継時的に測定した。インスリン感受性は、｛（インスリン投与後血糖値）／（インスリン投与前血糖値）×１００｝により相対率（％）を求めることにより測定した。
結果を図１０に示す。Ｃ５７ＢＬ／６ｊＤＩＯマウス及びＳＨＲＳＰラットのいずれの実験においても、パルミトレイン酸投与により、有意にインスリンによる血糖値の減少が認められた。このことから、インスリン抵抗氏が抑制され、インスリン感受性が回復することが強く示唆された。
【００６２】
実施例８．パルミトレイン酸投与による臓器傷害の軽減
ＳＨＲＳＰ（日本エスエルシー、オス、１３週令）１匹にパルミトレイン酸を腹腔内に持続投与し、血圧上昇によって誘発される臓器傷害に対する効果を調べるため病理組織学的検査を行った。腹腔内投与には、パルミトレイン酸２．１８ｍＭを加えた浸透圧ポンプ（Ａｌｚｅｔ社）を３７℃の生理食塩水中で４８時間静置したものを腹腔内に埋め込むことにより使用した。本前処理により、腹腔内に埋め込んだ直後から化合物が体内に放出された（０．１５μＬ／時間；２．１８ｍＭパルミトレイン酸／時間）。また、コントロールとして、１匹に０．５％ＤＭＳＯを入れた浸透圧ポンプを埋め込んだ。ＳＨＲＳＰに１％食塩水を与えて、３０日前後で脳卒中が発症することから、本実験ではポンプを埋め込み、かつ１％食塩水を与えてから約３０日経過後に脳、心臓および腎臓を摘出し、ホルマリン固定を行った。
【００６３】
病理組織検査は株式会社化合物安全性研究所に依頼した。結果を表２（青字はパルミトレイン酸投与によって臓器傷害が軽減された項目）、図１１及び図１２に示す。
【００６４】
【表２】
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【００６５】
脳（大脳、小脳、および延髄）においては全匹とも著変は認められなかった。心臓においては、食塩水を与えることで認められた炎症細胞の浸潤やフィブリノイド変性および線維化が、パルミトレイン酸を投与したラットではそれらは観察できなかった（図１１）。また腎臓においてはメサンギウム細胞の増殖や輸入細動脈および小葉間動脈の壁肥厚、フィブリノイド壊死の程度がパルミトレイン酸を投与することで抑えられた（図１２）。以上の結果よりパルミトレイン酸による降圧効果が血圧上昇によって引き起こされる種々の臓器傷害を抑えていることが予測できる。
【産業上の利用可能性】
【００６６】
本発明の化合物は、ＡＣＥ２活性誘導能を示すことから、ＲＡＳを標的とする新しい治療薬又は予防薬として利用することができる。具体的には、本発明の化合物は、高血圧症、本態性高血圧症、腎（実質）性高血圧症、腎血管性高血圧症、悪性高血圧症、肺高血圧症、心不全、心肥大、脳卒中、糖尿病性腎症、腎線維症、骨粗鬆症、アルツハイマー病、急性肺損傷等の治療薬又は予防薬として利用することができる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図５】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図４】
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【図６】
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【図１１】
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【図１２】
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