(57)【要約】【課題】神経幹細胞増殖および分化剤のための有効な投与レジメン、神経幹細胞増殖および分化剤のための有効な投与レジメンを含むキット、およびその使用を提供すること。【解決手段】本明細書では、神経幹細胞増殖および分化剤のための有効な投与レジメン、神経幹細胞増殖および分化剤のための有効な投与レジメンを含むキット、およびその使用を提供する。こうしたキットおよび方法を短期的または長期的に用いて、神経変性疾患または病態を治療することができる。さらに、その組成物および方法を、各種投与レジメンにおいて連続的にまたは断続的に使用することができる。本発明は特に、哺乳類における神経変性疾患または病態の治療または改善用のキットであって、ＥＰＯおよび少なくとも３用量単位のｈＣＧまたはＬＨを含むキットを提供する。【選択図】図１
2010138202.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
明細書中に記載の発明。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
（関連出願への相互参照）
本願は、２００６年３月１７日に出願された米国仮特許出願第６０／７８３，５００号；２００６年４月５日に出願された米国仮特許出願第６０／７８９，１３２号；２００６年１０月２４日に出願された米国仮特許出願第６０／８６２，６６９号に対する優先権および利益を主張する。これらの出願は、本明細書中に、その全体が参考として援用される。
【０００２】
（背景）
多能性神経幹細胞（例えば、特許文献１、特許文献２、特許文献３を参照のこと）の単離技術およびｉｎ  ｖｉｔｒｏ培養技術の開発により、神経変性疾患および病態の治療の見通しが著明に改善された。胎児脳を用いて、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで多能性神経幹細胞を単離し培養できることが発見された。さらに、成体脳細胞は脳細胞を複製または再生することができないという長年抱かれていた考えに反して、神経幹細胞は、成体哺乳類の脳からも単離しうることが判明した。胎児脳または成体脳に由来するこれらの幹細胞は、自己複製が可能である。子孫細胞は、ニューロン、星状膠細胞、および希突起膠細胞を含む、神経細胞系列内のいずれの細胞にも増殖または分化することができる。したがって、これらの知見は、移植に用いることのできる神経細胞源を提供するだけでなく、成体脳における多能性神経幹細胞の存在をも示すものである。
【０００３】
神経幹細胞増殖剤など、ある種の薬剤が、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏにおける神経幹細胞数を増大させることが判明している。こうした増大の機構は、神経幹細胞の増殖の刺激、分化の抑制、および／または死滅の阻害を含みうる。追加の薬剤である幹細胞分化剤が、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏにおけるニューロン前駆細胞またはグリア前駆細胞の産生を選択的に促進することが判明している。したがって、これらの増殖剤および分化剤を使用して、ニューロンおよびグリア細胞を増大させ選択的に促進することができる。
【特許文献１】米国特許第５，７５０，３７６号明細書
【特許文献２】米国特許第５，９８０，８８５号明細書
【特許文献３】米国特許第５，８５１，８３２号明細書
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００４】
（要旨）
本明細書では、神経幹細胞増殖剤および分化剤のための有効な投与レジメン、キット、およびその使用を提供する。こうした物質組成物および方法は、短期的（例えば、神経損傷後または神経症状の出現後数日以内）に用いることもでき、または長期的（例えば、持続性神経損傷または進行性神経症状用）に用いることもできる。さらに、その組成物および方法は、連続的にまたは断続的に使用することができる。
【０００５】
したがって、哺乳類における神経変性疾患または病態を治療または改善する方法を提供する。その方法は、哺乳類に有効量のｈＣＧまたはＬＨおよび有効量のＥＰＯを投与するステップを含み、場合によってはキットの使用により、ｈＣＧまたはＬＨを少なくとも３回全身投与する。ｈＣＧまたはＬＨおよび／またはＥＰＯは、連続的にまたは断続的に投与することができる。さらに、ｈＣＧまたはＬＨを第１治療期間に投与し、ＥＰＯを第２治療期間に投与することができる。例えば、ｈＣＧまたはＬＨを第１治療期間の第１、第３、および第５日に断続的に投与し、次いでＥＰＯを第２治療期間の第１、第２、および第３日に連続的に投与することができる。
【０００６】
本明細書では、哺乳類における神経変性疾患または病態を治療または改善する、さらなる方法も提供する。その方法は、場合によってはキットの使用により、哺乳類に、第１治療期間に有効量のｈＣＧまたはＬＨを投与した後、第２治療期間に有効量のＥＰＯを投与するステップを含む。第１治療期間中ｈＣＧまたはＬＨを断続的に送達し、第２治療期間中ＥＰＯを連続的に送達することができる。例えば、第１治療期間の第１、第３、および第５日にｈＣＧまたはＬＨを断続的に投与し、次いで第２治療期間の第１、第２、および第３日にＥＰＯを連続的に投与することができる。
【０００７】
その方法およびキットにおいて、治療期間は、例えば、少なくとも３日間である。その投与方法は、第２、第３、第４、第５その他の治療期間を用いて、数回または多数回反復することができる。その投与方法は、投与回数が１回、２回、数回、または多数回のいずれであれ、１つまたは複数のキットの形をとることができる。
【０００８】
方法およびキットの詳細を、添付した図面および以下の説明に示す。その方法およびキットの他の特徴、目的、および利点は、その説明および図面、ならびに請求項から明らかとなるであろう。
【０００９】
（項目１）
哺乳類における神経変性疾患または病態を治療または改善する方法であって、哺乳類に有効量のｈＣＧまたはＬＨおよび有効量のＥＰＯを投与するステップを含み、該ｈＣＧまたはＬＨを少なくとも３回全身投与する方法。
（項目２）
上記神経変性疾患または病態の症状の出現または診断から０〜約１４日以内に、ｈＣＧまたはＬＨの初回用量を上記哺乳類に投与する、項目１に記載の方法。
（項目３）
上記神経変性疾患または病態の症状の出現または診断から０〜約５日以内に、ｈＣＧまたはＬＨの初回用量を上記哺乳類に投与する、項目１に記載の方法。
（項目４）
少なくとも約３、４、５、６、７、または１４日間の治療期間にわたって上記ｈＣＧまたはＬＨを上記哺乳類に投与する、項目１に記載の方法。
（項目５）
ｈＣＧの用量単位が、上記哺乳類において約０．０３ＩＵ／Ｌ〜約５，０００，０００ＩＵ／Ｌの血中血清ｈＣＧレベルをもたらす、項目１または４に記載の方法。
（項目６）
ｈＣＧの用量単位が、上記哺乳類において約０．００３ＩＵ／Ｌ〜約５，０００ＩＵ／Ｌの脳脊髄液ｈＣＧレベルをもたらす、項目１または４に記載の方法。
（項目７）
上記哺乳類に投与するｈＣＧの量が約０．５ＩＵ／ｋｇ／日〜約３，０００，０００ＩＵ／ｋｇ／日である、項目１または４に記載の方法。
（項目８）
上記哺乳類に投与するｈＣＧの量が約１０，０００ＩＵ／日である、項目１または４に記載の方法。
（項目９）
上記哺乳類に投与するＬＨの量が約０．５ＩＵ／ｋｇ／日〜約３００，０００ＩＵ／ｋｇ／日である、項目１または４に記載の方法。
（項目１０）
上記哺乳類に投与するＬＨの量が約１０，０００ＩＵ／日である、項目１または４に記載の方法。
（項目１１）
上記哺乳類に投与するＥＰＯの量が約１００ＩＵ／ｋｇ／日〜約１０００ＩＵ／ｋｇ／日である、項目１または４に記載の方法。
（項目１２）
上記哺乳類に投与するＥＰＯの量が約５７０ＩＵ／ｋｇ／日〜約９５０ＩＵ／ｋｇ／日である、項目１または４に記載の方法。
（項目１３）
上記哺乳類に投与するＥＰＯの量が約７６５ＩＵ／ｋｇ／日である、項目１または４に記載の方法。
（項目１４）
上記哺乳類に投与するＥＰＯの量が約３０，０００ＩＵ／日である、項目１または４に記載の方法。
（項目１５）
治療期間中上記ｈＣＧまたはＬＨを連続的に投与する、項目１または４に記載の方法。
（項目１６）
治療期間中上記ｈＣＧまたはＬＨを断続的に投与する、項目１に記載の方法。
（項目１７）
治療期間の第１日、第３日、および第５日に上記ｈＣＧまたはＬＨを投与する、項目１６に記載の方法。
（項目１８）
第１治療期間に上記ｈＣＧまたはＬＨを投与し、第２治療期間に上記ＥＰＯを投与する、項目１に記載の方法。
（項目１９）
第１治療期間中上記ｈＣＧまたはＬＨを断続的に投与し、第２治療期間中上記ＥＰＯを連続的に投与する、項目１８に記載の方法。
（項目２０）
第１治療期間の第１日、第３日、および第５日に上記ｈＣＧまたはＬＨを送達し、第２治療期間の第１日、第２日、および第３日に上記ＥＰＯを送達する、項目１９に記載の方法。
（項目２１）
上記哺乳類に、約１０，０００ＩＵ／日のｈＣＧと、約３０，０００ＩＵ／日のＥＰＯとを投与する、項目２０に記載の方法。
（項目２２）
上記神経変性疾患または病態が脳卒中である、項目２１に記載の方法。
（項目２３）
上記第１治療期間が少なくとも約３、４、５、６、７、または１４日間である、項目１９に記載の方法。
（項目２４）
上記第２治療期間が少なくとも約３、４、５、６、７、または１４日間である、項目１９に記載の方法。
（項目２５）
上記第２治療期間が上記第１治療期間の少なくとも１日後に始まる、項目１９に記載の方法。
（項目２６）
上記神経変性疾患または病態が、アルツハイマー病、ハンチントン病、筋委縮性側索硬化症、パーキンソン病、ＣＮＳ損傷、多発性硬化症、および統合失調症からなる群から選択される、項目１、２、４、１６、または１７に記載の方法。
（項目２７）
上記神経変性疾患または病態がＣＮＳ損傷である、項目１に記載の方法。
（項目２８）
上記ＣＮＳ損傷が脳卒中、脳または脊髄損傷、脳震盪、薬剤により生じる損傷、冠動脈バイパス術に関連する損傷、あるいは出産時の虚血である、項目２７に記載の方法。
（項目２９）
ＣＮＳ損傷の少なくとも１日後に神経幹細胞増殖剤の初回用量を哺乳類に投与する、項目２７に記載の方法。
（項目３０）
哺乳類における神経変性疾患または病態を治療または改善する方法であって、第１治療期間に有効量のｈＣＧまたはＬＨを哺乳類に投与した後で、第２治療期間に有効量のＥＰＯを該哺乳類に投与するステップを含む方法。
（項目３１）
上記神経変性疾患または病態の症状の出現または診断から０〜約１４日以内に、ｈＣＧまたはＬＨの初回用量を上記上記哺乳類に投与する、項目３０に記載の方法。
（項目３２）
上記神経変性疾患または病態の症状の出現または診断から０〜約５日以内に、ｈＣＧまたはＬＨの初回用量を上記哺乳類に投与する、項目３０に記載の方法。
（項目３３）
上記第１治療期間が少なくとも約３、４、５、６、７、または１４日間である、項目３０に記載の方法。
（項目３４）
上記第２治療期間が少なくとも約３、４、５、６、７、または１４日間である、項目３０に記載の方法。
（項目３５）
上記第２治療期間が上記第１治療期間の少なくとも１日後に始まる、項目３０、３１、３２、３３、または３４に記載の方法。
（項目３６）
上記第１治療期間に上記ｈＣＧまたはＬＨを断続的に送達し、上記第２治療期間に上記ＥＰＯを連続的に送達する、項目３０に記載の方法。
（項目３７）
上記第１治療期間の第１日、第３日、および第５日に上記ｈＣＧまたはＬＨを送達し、上記第２治療期間の第１日、第２日、および第３日に上記ＥＰＯを送達する、項目３６に記載の方法。
（項目３８）
哺乳類における神経変性疾患または病態の治療または改善用のキットであって、ＥＰＯおよび少なくとも３用量単位のｈＣＧまたはＬＨを含むキット。
（項目３９）
さらに、上記ｈＣＧまたはＬＨの全身投与用の説明書を含む、項目３８に記載のキット。
（項目４０）
上記説明書が上記ｈＣＧまたはＬＨの断続的投与用である、項目３９に記載のキット。
（項目４１）
上記ＥＰＯが少なくとも３用量単位である、項目３８、３９、または４０に記載のキット。
（項目４２）
さらに、ＥＰＯの連続的投与用の説明書を含む、項目３８、３９、または４０に記載のキット。
（項目４３）
さらに、第１治療期間における神経幹細胞増殖剤投与、および第２治療期間におけるＥＰＯ投与用の説明書を含む、項目３８、３９、または４０に記載のキット。
（項目４４）
さらに、少なくとも１つの薬剤送達機器を含む、項目３８、３９、または４０に記載のキット。
（項目４５）
さらに、ヘマクリットレベルをモニターするための機器を含む、項目３８、３９、または４０に記載のキット。
（項目４６）
さらに、対象から血液試料を採取するための機器を含む、項目３８、３９、または４０に記載のキット。
（項目４７）
医療施設において使用するための、項目３８、３９、または４０に記載のキット。
（項目４８）
医療施設からの退院後に使用するための、項目３８、３９、または４０に記載のキット。
（項目４９）
上記ＬＨまたはｈＣＧの用量単位が単一の容器内にある、項目３８、３９、または４０に記載のキット。
（項目５０）
上記ＬＨまたはｈＣＧの用量単位が複数の容器内にある、項目３８、３９、または４０に記載のキット。
（項目５１）
分化剤の用量単位が単一の容器内にある、項目３８、３９、または４０に記載のキット。
（項目５２）
分化剤の用量単位が複数の容器内にある、項目３８、３９、または４０に記載のキット。
種々の図面中の同種の参照記号は、同種の要素を示す。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】中大脳動脈閉塞（ＭＣＡｏ）による脳卒中に罹患したラットの機能回復に対し、ｈＣＧ用量を増加させるｈＣＧの筋肉内（ＩＭ）投与後に、１日あたり１４４０ＩＵのＥＰＯを静脈内（ＩＶ）投与した場合の効果を示す図である。
【図２】ＭＣＡｏ脳卒中に罹患したラットの機能回復に対する、１日あたり４４０ＩＵのｈＣＧと１４４０ＩＵ  ＥＰＯの静脈内投与との併用、ｈＣＧ単剤、またはＥＰＯ単剤の効果の差異を、非投与対照と比べて示す図である。
【図３】ＭＣＡｏ脳卒中に罹患したラットにおける百分率による組織喪失（非脳卒中の脳半球と比較）を、１日あたり４４０ＩＵのｈＣＧと１４４０ＩＵ  ＥＰＯの静脈内投与との併用、ｈＣＧ単剤、またはＥＰＯ単剤の各場合について、非投与対照の場合と比べて示すグラフである。
【図４】ＭＣＡｏ脳卒中に罹患したラットにおける組織喪失の代表的な画像を、１日あたり４４０ＩＵのｈＣＧと１４４０ＩＵ  ＥＰＯの静脈内投与との併用、ｈＣＧ単剤、またはＥＰＯ単剤の各場合について、非投与対照の場合と比べて示す図である。
【図５】実施例２において、ｈＣＧの第３回筋肉内投与後に測定した、血清ｈＣＧレベルを示す棒グラフである。
【図６】脳室内注入に用いた濃度の１０、１５、および２０倍の濃度で、雄ラットにプロラクチンを６日間皮下注入した時の結果を示す図である。ラット各例からの８切片について、脳室下帯（ＳＶＺ）におけるブロモデオキシウリジン陽性（ＢｒｄＵ＋）細胞総数を提示する。ＳＶＺ増殖レベルは、１５倍投与（６日間にわたり１７０μｇ／日）時に最大の増加が観察された（１０倍＝１１３μｇ／日、２０倍＝２２６μｇ／日、対照＝ラット血清アルブミン（ＲＳＡ）のみ）。対照と比べた有意性：１０×＝＊ｐ＜０．０５、１５×＝＊＊ｐ＜０．０１、２０×＝ｐ＜０．０５、いずれの条件についてもｎ＝３、テューキーポストホック検定による一元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ）。
【図７】毎日の単回腹腔内注射を用いて、雄ラットにプロラクチンを投与した結果を示す図である。各投与計画について、切片あたりのＢｒｄＵ＋細胞総数を示す。（Ａ）３日間の高用量投与では、ＳＶＺ増殖のわずかな増加が観察された。（Ｂ）６日間にわたり毎日１７０μｇ／日の低用量を用いる投与条件が、ＳＶＺ増殖レベルの増加にもっとも頑健であった。有意性は、ＲＳＡ対照と比べた。ｎ＝３、＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、テューキーポストホック検定による一元配置ＡＮＯＶＡ。
【図８】脳卒中後第１、第３、第５日（脳卒中＝第０日）におけるｈＣＧの単回筋肉内注射が、前脳ＳＶＺにおける増殖を著明に増大させることを示す図である。１０００μｇの投与条件（ｎ＝３、＊ｐ＜０．０５、テューキーポストホックによる一元配置ＡＮＯＶＡ）において、脳室あたりのホスホヒストンＨ３陽性（ｐＨＨ３＋）細胞数の著明な増加が観察された。画像は、軟膜を剥離したＲＳＡ対照ラット側脳室の背側角における核標識ヘキストおよびｐＨＨ３発現を、１０００μｇ  ｈＣＧ投与ラットと比べて示す図であり、１０００μｇ投与ラットのＳＶＺにおける総細胞数およびｐＨＨ３発現の増大を意味する。
【図９】脳卒中後第１、第３、第５日（脳卒中＝第０日）におけるｈＣＧの１日あたり１０００μｇ単回筋肉内注射が、前脳ＳＶＺにおけるニューロン発生を増大させることを示す図である。投与ラットにおけるダブルコルチン＋のニューロン数を測定したところ、１０００μｇ投与ラット（ｎ＝３、＊＊ｐ＜０．０１）において倍増した。
【図１０Ａ】脳卒中後２４時間から７日間（脳卒中＝第０日）にわたり毎日、ｈＣＧの単回筋肉内注射を投与した結果を示す図である。（Ａ）毎日３３０μｇ／回の投与計画が、ＳＶＺにおける増殖数（ｐＨＨ３＋細胞）を、他のすべての投与条件および対照と比べて有意に増加させた（ｎ＝３、＊ｐ＜０．０１、テューキーポストホックによる一元配置ＡＮＯＶＡ）。（Ｂ）投与ラットの運動皮質における虚血性病変を観察したところ、毎日３３０μｇ／回の投与計画を受けるラットが、新たな組織成長および組織プラグによる病変部位の充填を示すことが明らかとなった。
【図１０Ｂ】脳卒中後２４時間から７日間（脳卒中＝第０日）にわたり毎日、ｈＣＧの単回筋肉内注射を投与した結果を示す図である。（Ａ）毎日３３０μｇ／回の投与計画が、ＳＶＺにおける増殖数（ｐＨＨ３＋細胞）を、他のすべての投与条件および対照と比べて有意に増加させた（ｎ＝３、＊ｐ＜０．０１、テューキーポストホックによる一元配置ＡＮＯＶＡ）。（Ｂ）投与ラットの運動皮質における虚血性病変を観察したところ、毎日３３０μｇ／回の投与計画を受けるラットが、新たな組織成長および組織プラグによる病変部位の充填を示すことが明らかとなった。
【図１１】ＢｒｄＵ＋細胞カウントで確認した通り、毎日３３０μｇ／回のｈＣＧを投与したラットのＳＶＺにおける増殖の増大を示す図である。脳室あたりのＢｒｄＵ＋細胞数は、３３０μｇ／回の条件において、対照および１００μｇ／回の場合と比べ有意に増大した（ｐ＜０．０１、ｎ＝３、テューキーポストホック検定による一元配置ＡＮＯＶＡ）。以上の結果は、ｐＨＨ３染色により観察される増殖の増大をさらに裏付けた。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
（詳細な説明）
現在のところ、神経疾患または病態の治療における使用が臨床的に承認されている神経幹細胞増殖剤および分化剤は存在しない。これらの薬剤は、神経疾患または病態の治療に有用であるため、これらの薬剤を用いる有効な投与レジメンが必要である。神経幹細胞増殖剤および分化剤のための有効な投与レジメン、神経幹細胞増殖剤のための有効な投与レジメンを含むキット、およびその使用を、本明細書で提供する。こうしたキットおよび方法は、短期的（例えば、外傷後または神経変性疾患または病態の出現後数日以内）あるいは長期的（例えば、慢性の神経変性疾患または病態用）に用いることができる。さらに、その組成物および方法は、以下でさらに説明するように、連続的にまたは断続的に使用することができる。
【００１２】
本明細書に記載の方法は、神経変性疾患または病態の治療または改善のために神経幹細胞増殖剤を用いる。これらの方法において、神経幹細胞増殖剤は、第１治療期間に投与する。神経幹細胞増殖剤は、第１治療期間にわたって、連続的にまたは断続的に投与することができる。第１治療期間に、さらに神経幹細胞分化剤を追加することができる。実施例および説明は、神経幹細胞増殖剤（例えば、プロラクチン、ｈＣＧ、ＬＨ、ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＶＥＧＦ）および神経幹細胞分化剤（例えば、ＥＰＯ、ＢＤＮＦ、ＢＭＰ、ＰＡＣＡＰ）の使用を含むが、本明細書で教示する方法、機器、またはキットのいずれにおいても、こうした薬剤の類似体、断片、または変異体を同様に用いることができる。特殊な実施例として、有効量のｈＣＧまたはＬＨ、および有効量のＥＰＯを哺乳類に投与するに際し、ｈＣＧまたはＬＨを少なくとも３回、全身投与する方法を開示する。
【００１３】
神経変性疾患または病態の治療または改善のために神経幹細胞増殖剤を用いるこれらの方法は、さらに、第１治療期間の終了後に開始する第２治療期間において、神経細胞分化剤の投与を含むことができる。第２治療期間は、少なくとも３日間でありうる。神経幹細胞分化剤は、第２治療期間中連続的にまたは断続的に投与することができる。第２治療期間は、第２治療期間の少なくとも１日後に開始することができる。特殊な実施例として、第１治療期間に神経幹細胞増殖剤を少なくとも３回、全身に連続的に投与し、第２治療期間に神経幹細胞分化剤を投与する方法を開示する。さらなる実施例として、第１治療期間が５日間で神経幹細胞増殖剤を断続的に投与し、第２治療期間が第１治療期間終了の１日後に開始して、神経幹細胞分化剤を少なくとも３日間連続的に投与する方法を開示する。追加の実施例として、第１治療期間に有効量のｈＣＧまたはＬＨを投与した後、第２治療期間に有効量のＥＰＯを投与することができる。
【００１４】
本明細書で用いる、対象に物質を連続的に送達するまたは連続的に投与するとは、連続する一定日数において、１日に少なくとも１回、その物質を送達または投与することを意味する。例えば、その物質は、注射（例えば、筋肉内または皮下）により全身投与してもよく、または１日に１回毎日経口投与してもよく、または対象の組織もしくは血流内に毎日送達するよう注入により投与してもよい。場合によっては、その物質は、注入または注入以外の方法で送達する。本明細書で用いる、全身にという用語は、脳室内注入を含まない。その物質を連続的に送達または投与する期間または治療期間は、３日間から数年間にわたって継続する可能性があり、対象の残りの生涯にわたって継続する可能性もある。例えば、その期間は、３〜６日間、３〜１４日間、３〜２１日間、３〜２８日間、１〜４カ月間、１〜６カ月間、１〜９カ月間、１〜１２カ月間、１〜２年間、１〜３年間、１〜５年間、１〜１０年間などでよい。さらなる例として、連続的送達のための治療期間は、少なくとも３日間、少なくとも４日間、少なくとも５日間、少なくとも６日間、少なくとも７日間、少なくとも１４日間でありうる。さらに、その物質は、投与期間の第１、第２、および第３日に連続的に送達することができる。
【００１５】
本明細書で用いる、対象に物質を断続的に送達するまたは断続的に投与するとは、例えば、ある期間にわたり２、３、４、５、または７日ごとに１回を含む、毎日より少ない頻度で、その物質を送達または投与することを意味する。例えば、治療期間の隔日、例えば、治療期間の第１、第３、または第５日に、その物質を送達または投与してよい。その物質を断続的に送達または投与する期間または治療期間は、３日間から数年間にわたって継続する可能性があり、対象の残りの生涯にわたって継続する可能性もある。例えば、その期間は、３〜６日間、３〜１４日間、３〜２１日間、３〜２８日間、１〜４カ月間、１〜６カ月間、１〜９カ月間、１〜１２カ月間、１〜２年間、１〜３年間、１〜５年間、１〜１０年間、などであってよい。さらなる例として、断続的送達の治療期間は、少なくとも３日間、少なくとも４日間、少なくとも５日間、少なくとも６日間、少なくとも７日間、少なくとも１４日間でありうる。
【００１６】
本明細書で提供する方法は、神経変性疾患または病態を示す対象に対して有効量の神経幹細胞増殖剤を投与することで、神経変性疾患または病態を治療するために、例えば、プロラクチン、ｈＣＧ、ＬＨ、ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、またはＶＥＧＦなどの増殖剤を用いることができる。実施例として、増殖剤ｈＣＧおよびＬＨは、同一の受容体に結合するので、本明細書で提供する特殊な実施例における等効力用量において、互換的に用いることができる。さらなる例として、増殖剤ｈＣＧを約１２０〜２００ＩＵ／ｋｇ／日の用量で筋肉内（ＩＭ）投与した後で、約５７０〜９５０ＩＵ／ｋｇ／日のＥＰＯを静脈内（ＩＶ）投与することができる。さらなる例として、ｈＣＧを約１６０ＩＵ／ｋｇ／日の用量で筋肉内投与した後で、７６５ＩＵ／ｋｇ／日のＥＰＯを静脈内投与することができる。ｈＣＧおよびＬＨの断続的投与は、場合によって、数日間のｈＣＧまたはＬＨ投与（例えば、第１、第３、または第５日）を含む。神経幹細胞刺激剤のこうした投与の後に、数日間にわたりＥＰＯなどの分化剤を、断続的投与（例えば、第７、第９、第１１日）または連続的投与（例えば、第７、第８、および第９日）することができる。同様のレジメンで、等効力用量の他の神経幹細胞増殖剤をも用いることができる。
【００１７】
こうして、実施例４は、プロラクチン（別の増殖剤）の投与レジメンを示す。各量のプロラクチンを６日間にわたり毎日投与し、神経幹細胞数に対する効果を検討した。結果は、約１５０〜２００μｇ／日（例えば、１７０μｇ／日を含む）が、本投与スケジュールにおける最適量であることを示した。次いで、６日間にわたり１７０μｇ／日の本投与レジメンを投与期間を短縮し（１７０μｇ／日で３日間）または毎日の高用量と期間の短縮とを組み合わせて同様の総用量（３日間で約３９６μｇ）を実現することにより変化させた。結果は、長期間における低用量の連続的送達の方が、有効であることを示した。
【００１８】
本明細書で提供する連続的送達または断続的送達を含む方法が、神経学的状態を改善することができる。意味を限定することなく、この改善は、哺乳類における神経幹細胞数の増大と関連しうる。有効量の神経幹細胞増殖剤の有効性を最適化して、哺乳類における神経幹細胞数、または神経学的状態を増大させることができる。その方法は、一定期間にわたり哺乳類に神経幹細胞増殖剤を連続的にまたは断続的に投与するステップを含み、前記期間に投与する神経幹細胞増殖剤の総用量が有効量に等しく、第１治療期間にわたって少なくとも３回その薬剤を投与する。
【００１９】
本明細書に記載の方法を最適化し、哺乳類における神経変性疾患または病態の治療または改善において、有効量の神経幹細胞増殖剤の有効性を増大させることができる。その方法は、一定期間にわたり哺乳類に神経幹細胞増殖剤を連続的にまたは断続的に投与するステップを含み、前記期間に投与する神経幹細胞増殖剤の総用量が有効量に等しく、第１治療期間に少なくとも３回その薬剤を投与する。
【００２０】
中枢神経系（ＣＮＳ）の損傷、症状の出現、または診断から約１４日以内（例えば、０〜約１４日間）に、神経幹細胞増殖剤を哺乳類に投与することができる。本明細書で用いる０日間とは、ＣＮＳの損傷、症状の出現、または診断の時点を指す。場合によって、ＣＮＳの損傷、症状の出現、または診断から約１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、１日以内（例えば、０〜約５日間）に、神経幹細胞増殖剤を哺乳類に投与することができる。場合によって、ＣＮＳの損傷、症状の出現、または診断から２４時間以内に、神経幹細胞増殖剤を哺乳類に投与することができる。場合によって、ＣＮＳの損傷、症状の出現、または診断から１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、１時間以内に、神経幹細胞増殖剤を哺乳類に投与することができる。
【００２１】
断続的治療のために高用量の薬剤を用いることができ、または連続的治療を用いることができる。とくに、高用量の断続的投与と対照的に、神経幹細胞増殖剤は、哺乳類対象に低用量で連続的に送達できる。神経幹細胞増殖剤は、場合によって、神経損傷または神経症状の出現から２４〜７２時間以内に送達する。場合によって、神経幹細胞増殖剤の連続的投与は、２〜５日間にわたる。例えば、プロラクチン、またはプロラクチンの類似体、断片、もしくは変異体の所与の総有効用量に対して、総量の１／６を６日間毎日送達することを含む投与レジメンの方が、総量の１／３を３日間毎日送達することよりも有効であった。同様の枠組みで、等効力用量の他の神経幹細胞増殖剤をも用いることができる。
【００２２】
本明細書に記載の方法は、哺乳類の体液中における神経幹細胞増殖剤または神経幹細胞分化剤のレベルをモニターするステップをも含む。モニターされる体液は、例えば、脳脊髄液または血液でありうる。例えば、治療期間中または治療期間後のいずれかの投与後に、血清中のｈＣＧ（または別の神経幹細胞増殖剤もしくは神経幹細胞分化剤）レベルを測定することができる。等効力レベルの各種神経幹細胞増殖剤または神経幹細胞分化剤を、体液中において測定かつモニターすることができる。
【００２３】
本明細書では、哺乳類における神経変性疾患または病態の治療または改善用のキットをも提供する。そのキットは、第１治療期間における投与のために、少なくとも３用量単位の神経幹細胞増殖剤を含む。その第１治療期間において投与する神経幹細胞増殖剤の総用量は、有効量と等しくすることができる。治療期間は、少なくとも３日間でありうる。そのキットは、キットの説明書を含むことができる。その説明書は、神経幹細胞増殖剤の連続的投与用、または断続的投与用でありうる。
【００２４】
そのキットは、さらに、少なくとも３用量単位の分化剤を提供することができる。分化剤は、第１治療期間にわたって用いることができる。第１治療期間において投与する分化剤の総用量は、有効量に等しくすることができる。治療期間は、少なくとも３日間でありうる。分化剤の治療期間は、場合によっては、神経幹細胞増殖剤による１つまたは複数の治療期間に後続する第２またはそれ以降の治療期間である。そのキットは、分化剤を使用するための説明書を含むことができる。その説明書は、神経幹細胞増殖剤の連続的投与用、または断続的投与用でありうる。
【００２５】
そのキット中の各神経幹細胞増殖剤、同分化剤、または他の薬剤の総用量は、１つの容器、複数の容器、またはその任意の組合せでありうる。例えば、１つまたは複数の神経幹細胞増殖剤の総用量は、例えば、被投与者、または介護者などの他者が計量する用量を提供するのに好適な、または用量を抽出するのに好適な１つの容器に封入しうる。単一の容器の代わりに、毎日、毎週、毎月などの投与に好適な用量のために一定量ずつを提供する複数の容器において、１つまたは複数の神経幹細胞増殖剤を提供することができる。分化剤または他の薬剤のための単一の容器または複数の容器も、そのキットにおいて同様に提供することができる。そのキットには、神経幹細胞増殖剤は一容器であるが分化剤は複数容器である組合せをも含めてよく、またはその逆の組合せを含めてもよい。また、第１治療期間のための神経幹細胞増殖因子の総用量が単一の容器もしくは複数の容器内にあってもよく、または第２治療期間のための総用量が単一の容器もしくは複数の容器内にあってもよく、あるいはその任意の組合せでもよい。
【００２６】
神経幹細胞増殖剤または分化剤は、場合によっては、１つまたは複数の治療期間に送達すべき神経幹細胞増殖剤および分化剤の総量をキット中に含むよう、キットにパッケージ化することができる。そのキットは、場合によって、例えば、血液試料採取機器またはその構成成分を含む、他の構成成分または他の構成成分の組合せを含むことができる。
【００２７】
そのキットは、さらに、患者におけるヘマトクリットレベルをモニターするための機器または手段、あるいは患者から一定量の血液を採取するために好適な機器、あるいはモニターおよび血液試料採取機器の両方を含むことができる。ヘマトクリットレベルが許容できるレベルを超えて上昇することがあるので、血液試料採取およびモニターが望ましい。許容できるヘマトクリットレベルは、当技術分野において確立したいずれの基準によっても判定することができる。
【００２８】
場合によって、１つまたは複数の神経幹細胞増殖剤および／または１つまたは複数の分化剤を含むキット中に、投与のための薬剤送達機器を含めることができる。
【００２９】
そのキットは、入院患者治療施設または救急患者治療施設などの医療施設における使用に好適でありうる。医療施設は、例えば、病院を含む。そのキットは、入院患者治療施設からの退院後の使用またはその施設への入院なしでの使用にも好適である。キットの形でパッケージ化することは、例えば、自己治療、外来治療、または自宅、長期ケア施設などでの介護者もしくは医療提供者による投与により、長期ケア施設または自宅での患者治療を可能とすることで、医療施設からの患者の早期退院を促進する利点を有する。同様に、キットの形でパッケージ化することは、救急治療室を含む緊急の状況における、または現場の救急ケア提供者による（例えば、救急医療技術者、アスレチックトレーナーなどによる）患者の即時治療を可能とする。
【００３０】
その方法およびキットにおいて、期間は、例えば、少なくとも３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１４、２１、２８、または３〜２８日間の任意の日数であってよい。場合によっては、その方法およびキットは、第２治療期間において哺乳類に神経幹細胞増殖剤を連続的に投与するステップを含んでよく、第２治療期間がその期間の終了後少なくとも１、２、または３日間の間隔を置いて開始し、第２治療期間が少なくとも３日間である。第２治療期間は、第１治療期間と同様に、例えば、少なくとも３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１４、２１、または２８日間であってよい。第１治療期間と次の治療期間との間隔は、例えば、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１４、２１、または２８日間であってもよい。この治療スケジュールは、複数回または多数回反復することができる。第２以降の治療期間で使用する神経幹細胞増殖剤は、第１治療期間で使用する神経幹細胞増殖剤または他の治療期間で使用する神経幹細胞増殖剤と同じかまたは異なっていてよい。さらに、単一の治療期間において、複数の神経幹細胞増殖剤を用いてよい。こうして、その方法で有用なキットは、１つまたは複数の治療期間のために１つまたは複数の神経幹細胞増殖剤を含むことがある。
【００３１】
静脈内、動脈内、結腸内、気管内、腹腔内、鼻腔内、血管内、髄腔内、頭蓋内、骨髄内、胸膜内、皮内、皮下、筋肉内、経口、外用投与、肺内投与、またはその任意の組合せなど、当技術分野で確立された任意の方法により、１つまたは複数の神経幹細胞増殖剤あるいは他の薬剤（例えば、分化剤）を投与することができる。場合によって、神経幹細胞増殖剤を含むキットに、投与のための薬剤送達機器またはその構成成分を含めることができる。
【００３２】
神経幹細胞増殖剤は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏにおいて、哺乳類の神経幹細胞数を増大させることのできる任意の物質であってよい。本明細書で用いる促進剤は、増殖剤と同じ意味を有する。神経幹細胞数を増大させることのできる薬剤は、以下を含むがこれに限定されない。
１．ＬＨと呼応して作用し、ＬＨ受容体の発現を誘発することが多いために、ＬＨシグナル伝達効果を高める濾胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）。
２．神経幹細胞増殖を刺激することができる成長ホルモン（ＧＨ）。
３．ＧＨに応答して多数の組織から放出され、ＧＨの成長増殖効果の多くを媒介し、神経幹細胞増殖を刺激するソマトメジンである、ＩＧＦ−１を含むインスリン成長因子（ＩＧＦ）。
４．視床下部から分泌され、下垂体前葉からのＧＨ放出を誘発し、循環ＧＨレベルの上昇を生じるホルモン放出成長ホルモン（ＧＨＲＨ）。
５．下垂体前葉から分泌され、神経幹細胞増殖を促進するプロラクチン（ＰＲＬ）。
６．プロラクチン放出の誘因となるプロラクチン放出ペプチド（ＰＲＰ）。
７．神経幹細胞の分裂促進剤である線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ）。
８．例えば視床下部内を含む神経幹細胞の増殖を促進するエストロゲン。
９．視床下部における神経幹細胞の増殖を促進するセロトニン。
１０．神経幹細胞の分裂促進剤である上皮細胞成長因子（ＥＧＦ）。
１１．神経幹細胞の分裂促進剤である形質転換成長因子アルファ（ＴＧＦα）。
１２．ＬＨ放出の誘因となるゴナドトロピン放出ホルモン（ＧｎＲＨ）。
１３．ｇｐ１３０サブユニット経由で神経幹細胞の自己再生を刺激するシグナル伝達経路によりシグナル伝達することで、脳の神経幹細胞集団を増大させる毛様体神経栄養因子（ＣＮＴＦ）および白血病抑制因子（ＬＩＦ）。
１４．コロニー刺激因子（ＣＳＦ）。
１５．顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）。
１６．顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）。
１７．血管内皮細胞成長因子（ＶＥＧＦ）。
１８．黄体形成ホルモン（ＬＨ）。
１９．ヒト絨毛性ゴナドトロピン（ｈＣＧ）。
【００３３】
さらに、神経細胞分化剤を投与して、ニューロン発生またはグリア細胞発生を選択的に促進することができる。これらの分化剤は、投与レジメンおよびキットに従って送達することもできる。典型的な分化剤は、以下を含むがこれに限定されない。
１．神経幹細胞の神経細胞系列へのコミットメントを促進し、脳卒中のマウスおよびラットモデルへの投与に有用であるエリスロポエチン（ＥＰＯ）。
２．既知の生存因子であり、神経細胞系列を促進する分化剤である脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）。
３．神経細胞系列および特定の神経細胞表現型（例えば、脊髄における知覚介在ニューロン）の発生を促進する分化剤である形質転換成長因子ベータおよび骨形成タンパク質（ＢＭＰ）。
４．希突起膠細胞の成熟および発生を促進する分化剤である甲状腺ホルモン（Ｔ３およびＴ４のいずれの形態をも含むＴＨ）。例えば、Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ−Ｐｅｎａ、１９９９年を参照のこと。
５．下垂体前葉からのＴＨ放出を促進し、循環ＴＨレベルを増大させる、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）および甲状腺放出ホルモン（ＴＲＨ）。本剤は、ＬＨまたはｈＣＧと併用して、神経幹細胞からの希突起膠細胞発生を促進しうると考えられる。
６．発達段階における発達中のＣＮＳのパターンを定め、異なる濃度で、特定の種類のニューロン（例えば、脊髄における運動ニューロン）および希突起膠細胞の発生を促進するモルフォゲンであるソニックヘッジホッグ（ＳＨＨ）。本剤は、ＬＨまたはｈＣＧと併用して、神経幹細胞からのニューロン発生および／または希突起膠細胞発生を促進しうると考えられる。
７．神経幹細胞からの希突起膠細胞発生および分化を促進する血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）。本剤は、ＬＨまたはｈＣＧと併用して、神経幹細胞からの希突起膠細胞発生を促進しうると考えられる。
８．サイクリックＡＭＰ、およびニューロン産生を選択的に促進する下垂体アデニル酸シクラーゼ活性化ポリペプチド（ＰＡＣＡＰ）やセロトニンなど、ｃＡＭＰ経路を促進する薬剤。
【００３４】
その方法およびキットのいずれもが、複数の神経幹細胞増殖剤および／または神経細胞分化剤を含みうる。こうして、１つまたは複数の神経幹細胞増殖剤を同時または順次投与することができ、別個の組成物により、または単一の組成物内で組み合わせて投与することができる。さらに、１つまたは複数の神経幹細胞増殖剤、および１つまたは複数の神経幹細胞分化剤を、同時または順次投与することができ、別個の組成物により、または単一の組成物内で組み合わせて投与することができる。例えば、ＰＲＬとＬＨまたはｈＣＧとを併用することにより、神経幹細胞増殖を最大化することができる；ＰＲＰとＬＨまたはｈＣＧとを併用することにより、神経幹細胞増殖を最大化することができる；ＧｎＲＨをＬＨまたはｈＣＧと組み合わせて、あるいはＬＨまたはｈＣＧの代わりに用いることにより、ＬＨの循環レベルを増大させ、神経幹細胞増殖を促進することができる；ならびにＣＮＴＦおよびＬＩＦとＬＨまたはｈＣＧとを併用することにより、神経幹細胞増殖を促進し、ＣＮＳ内における神経幹細胞集団の規模を増大させることができる。さらに、例えば、プロラクチンをＥＰＯと併用することができ、ＬＨをＥＰＯと併用することができ、ｈＣＧをＥＰＯと併用することができる。明示しないが、他のすべての組合せをも用いることができる。
【００３５】
当技術分野で確立された方法に従い、その因子に適切な用量を定めることができる。例として、プロラクチンの用量は、例えば、約０．５１０〜約１００，０００、約０．５１０〜約７５，０００、約０．５１０〜約５０，０００、約０．５１０〜約２５，０００、約０．５１０〜約１０，０００、約１００〜約５，０００、約１００〜約２，０００、約５００〜約２，０００、約１，０００〜約２，０００、約１００〜約１，０００、約２００〜約８００ＩＵ／ｋｇ／日など、約０．５１０ＩＵ／ｋｇ／日〜約１００，０００ＩＵ／ｋｇ／日の範囲であってよい。ｈＣＧの用量は、例えば、約０．５〜約２，０００，０００、約０．５〜約１，０００，０００、約０．５〜約５００，０００、約０．５〜約２５０，０００、約０．５〜約１００，０００、約０．５〜約５０，０００、約１０〜約２５，０００、約１０〜約１０，０００、約２４０〜約２１６，０００、約１，２００〜約２，０００、約２，１６０、または約１，６００ＩＵ／ｋｇ／日など、約０．５ＩＵ／ｋｇ／日〜約３，０００，０００ＩＵ／ｋｇ／日の範囲であってよい。ｈＣＧは、１０，０００ＩＵ／日の用量で投与することもできる。ＬＨの用量は、例えば、約０．５〜約３００，０００、約０．５〜約２００，０００、約０．５〜約１００，０００、約０．５〜約５０，０００、約０．５〜約２５，０００、約２４〜約２１，６００、約１０００、約１２０〜約２００、約２１６、または約１６０ＩＵ／ｋｇ／日など、約０．５ＩＵ／ｋｇ／日〜約５００，０００ＩＵ／ｋｇ／日の範囲であってよい。ＬＨは、１０，０００ＩＵ／日の用量で投与することもできる。ＥＰＯの用量は、例えば、約１００〜約１５００、約１００〜約１０００、約１６０〜約１０００、約５７０〜約９５０、約７６５、または約１０２０ＩＵ／ｋｇ／日など、約１００ＩＵ／ｋｇ／日〜約２０００ＩＵ／ｋｇ／日の範囲であってよい。ＥＰＯは、３０，０００ＩＵ／日の用量で投与することもできる。等効力用量の他の薬剤をも用いることができる。本明細書における用量は、全治療期間中に毎日または断続的に送達する平均用量を指す。例えば、神経幹細胞増殖剤または分化剤を毎日送達しない場合は、治療期間に送達する薬剤の総量を、間隔日数を含む治療期間の総日数で割ることにより、１日あたりの用量が得られる。
【００３６】
神経幹細胞増殖剤または分化剤用に、特定の用量単位（すなわち、治療期間の一連の投与内における投与量または単回投与）を定め、本明細書で開示する方法と併用することができる。これらの用量単位は、本明細書で定める特定の用量および用量範囲内でありうる。用量単位は、対象において神経幹細胞増殖または分化剤の所望のレベルを達成するために投与しなければならない量との関係で定めることができる。例えば、血清中の神経幹細胞増殖または分化剤レベルとして０．０３ＩＵ／Ｌ〜５，０００，０００ＩＵ／Ｌを与える神経幹細胞増殖剤の用量単位。または、さらなる例として、脳脊髄液中の増殖剤レベルとして約０．００３ＩＵ／Ｌ〜約５，０００ＩＵ／Ｌを与える神経幹細胞増殖または分化剤の用量単位。
【００３７】
神経幹細胞増殖剤または分化剤を全身投与する場合、場合によっては、血液脳関門透過促進剤をそのキットに含める、またはその方法で用いることにより、脳内への侵入を容易にすることができる。血液脳関門透過促進剤は、当技術分野では知られており、例えば、米国特許第５，６８６，４１６号、同第５，５０６，２０６号、および同第５，２６８，１６４号に記載のブラジキニンおよびブラジキニンアゴニスト（ＮＨ２−アルギニン−プロリン−ヒドロキシプロキシプロリン−グリシン−チエニルアラニン−セリン−プロリン−４−Ｍｅ−チロシンΨ（−ＣＨ２ＮＨ）−アルギニン−ＣＯＯＨなど）を含む。
【００３８】
あるいは、送達すべき神経幹細胞増殖剤または分化剤は、米国特許第６，３２９，５０８号、同第６，０１５，５５５号、同第５，８３３，９８８号、または同第５，５２７，５２７号に記載のトランスフェリン受容体抗体に結合させることができる。神経幹細胞増殖剤および分化剤は、神経幹細胞増殖剤または分化剤と、トランスフェリン受容体（例えば、米国特許第５，９７７，３０７号を参照のこと）など脳毛細血管内皮細胞受容体と反応性のリガンドと、を含む融合タンパク質としても送達することができる。
【００３９】
薬剤組成物は、所望の治療用薬剤と、目的の投与経路に好適な、場合によっては、適切な薬剤送達機器における使用に好適な賦形剤と、を混合することによって調製することができる。本発明の薬剤組成物を作製するに際し、治療用薬剤は通常、賦形剤と混合し、賦形剤により希釈し、またはカプセル、サシェ、紙、もしくは他の容器の形態でありうる担体内に封入する。薬学的に許容できる賦形剤が希釈剤の役割を果たす場合、その賦形剤は、固体、半固体、または液体の材料でありえ、治療用薬剤の賦形剤、担体、または媒体として作用する。こうして、その組成物は、例えば、重量で最大１０％の治療用薬剤、硬軟のゼラチンカプセル、坐薬、滅菌注射溶液、および滅菌包装済み粉末を含む、錠剤、丸薬、粉末、トローチ剤、サシェ、カプセル、エリキシル剤、懸濁液、乳化剤、溶液、シロップ剤、エアゾール剤（固体として、または液体媒体中）、軟膏の形態でありうる。
【００４０】
好適な賦形剤の一部の例は、人工脳脊髄液、ラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、デンプン、アラビアゴム、リン酸カルシウム、アルギニン酸、トラガカント、ゼラチン、ケイ酸カルシウム、微小質セルロース、ポリビニルピロリドン、セルロース、滅菌水、シロップ、およびメチルセルロースを含む。その製剤は、さらに、以下を含む。タルク、ステアリン酸マグネシウム、およびミネラル油などの潤滑剤；保湿剤；乳化剤および懸濁剤；メチルヒドロキシ−ベンゾエートおよびプロピルヒドロキシ−ベンゾエートなどの防腐剤；甘味剤；ならびに芳香剤。本発明の組成物は、当技術分野において知られた手順を用いての患者への投与後、治療用薬剤の即時放出、持続放出、または遅延放出をもたらすように製剤することができる。
【００４１】
錠剤などの固体組成物を調製する場合、その治療用薬剤を薬剤賦形剤と混合して、本発明の化合物の均一な混合物を含む、固体のプレフォーミュレーション組成物を形成する。これらのプレフォーミュレーション組成物が均一であるとは、その治療用薬剤が、その組成物中に均等に分散するため、その組成物を、錠剤、丸薬、およびカプセルなど、等しく有効な単位剤形に容易に分割してよいことを意味する。本発明の錠剤または丸薬は、コーティングし、または別の方法で合成することにより、持続性作用の利点をもたらす剤形を提供してよい。例えば、錠剤または丸薬は、内側および外側の用量成分を含み、後者は前者を覆う外皮の形態でありうる。２つの成分は、胃における分解に抗し、内側の成分を無変化のまま十二指腸へ通過させる、または放出を遅延させるために役立つ腸溶性層により分離することができる。こうした腸溶性層または腸溶性コーティングには各種の材料を用いることができ、こうした材料は、多数のポリマー酸、ならびにポリマー酸と、セラック、セチルアルコール、および酢酸セルロースなどの材料と、の多数の混合物を含む。
【００４２】
経口または注射による投与のために、本発明の新規の組成物を組み込んでよい液体の剤形は、水溶液、好適な香料を添加したシロップ、水性または油性の懸濁液、およびエリキシル剤および同様の薬剤用賦形剤のほか、コーン油、綿実油、ゴマ油、ココナッツ油、またはピーナッツ油などの食用油をともなう、香料入り乳化剤を含む。
【００４３】
吸入または注気用の組成物は、薬学的に許容できる水性または有機性溶媒中の溶液および懸濁液、あるいはこれらの混合物、ならびに粉末を含む。液体または固体の組成物は、本明細書に記載の、好適で薬学的に許容できる賦形剤を含んでよい。その組成物は、口腔または鼻腔の気管経路により投与し、局所性または全身性の効果を得る。好適で薬学的に許容できる溶媒中の組成物は、不活性ガスを用いて噴霧してよい。噴霧化した溶液は、噴霧器から直接に吸入してもよく、または噴霧器を顔面マスク付きテント、もしくは断続的陽圧呼吸器に取り付けてもよい。
【００４４】
溶液、懸濁液、または粉末の組成物を、製剤を適切なやり方で送達する薬剤送達機器から、好ましくは、経口または経鼻で投与してよい。本発明のその方法において用いる別の製剤は、経皮送達機器（「パッチ」）を用いる。こうした経皮パッチを用いて、制御された量における本発明の治療用薬剤を、連続注入または不連続注入してよい。薬剤送達用の経皮パッチの構成および使用は、当技術分野においてよく知られている。例えば、参照に
より本明細書に組み込む、米国特許第５，０２３，２５２号を参照のこと。薬剤の連続的送達、パルス送達、または必要に応じた送達のために、こうしたパッチを構成する場合がある。本発明において用いるための他の好適な製剤は、「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ」、第２１版、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ編、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ社、ペンシルベニア州フィラデルフィア、２００５年、中に見出すことができる。
【００４５】
本明細書に記載の方法およびキットを用いて投与を受ける哺乳類は、仔体、幼若体、または成体のいずれの年齢でもありうる。
【００４６】
本出願で用いる用語は、とくに示さない限り、以下の通りに定義する。
【００４７】
神経幹細胞とは、神経細胞系列内の幹細胞である。幹細胞とは、自己再生が可能な細胞である。言い換えれば、幹細胞分裂から生じる娘細胞は、幹細胞を含む。神経幹細胞は、最終的には、ニューロン、星状膠細胞、および希突起膠細胞を含む、神経細胞系列内のすべての細胞種別に分化することができる。星状膠細胞および希突起膠細胞は、グリアまたはグリア細胞と総称される。こうして、本明細書で言及する神経幹細胞は、多能性神経幹細胞である。
【００４８】
神経幹細胞増殖剤とは、例えば、増殖の刺激、分化の抑制、および／または神経幹細胞死の阻害により、神経幹細胞数を増加させることのできる物質である。
【００４９】
神経変性疾患または病態とは、ニューロンの喪失または機能不全をともなう疾患または病態である。神経変性疾患または病態の例は、神経変性疾患、中枢神経系の損傷または機能不全を含む。神経変性疾患は、例えば、アルツハイマー病または他の認知症、多発性硬化症（ＭＳ）、統合失調症、黄斑変性症、緑内障、糖尿病性網膜症、末梢神経障害、ハンチントン病、筋委縮性側索硬化症、およびパーキンソン病を含む。ＣＮＳ損傷は、例えば、脳卒中などの脳血管事象（例えば、出血性脳卒中、限局性虚血性脳卒中、または広範性虚血性脳卒中）、眼虚血症、および硬膜静脈洞血栓症；外傷性脳損傷または外傷性脊髄損傷（例えば、脳または脊髄の手術または物理的事故により生じる損傷）；脳震盪；薬剤により生じる損傷（例えば、化学療法剤、レクリエーショナルドラッグ、および神経遮断薬）；冠動脈バイパスグラフト（ＣＡＢＧ）術；および出産時の虚血を含む。ＣＮＳ機能不全は、例えば、うつ病、てんかん、神経症、および精神病を含む。神経変性病態の例は、老化を含む。脳室下帯における神経幹細胞数は、老化マウスにおいて著明に減少する。したがって、老化に関連する問題の改善は、その方法およびキットに従う神経幹細胞増殖剤の投与、場合によっては、神経幹細胞分化剤の投与によって達せられる。
【００５０】
治療および改善とは、疾患または病態の１つまたは複数の症状（神経症状または行動能力を含む）の抑制または完全な除去を意味する。こうした治療または改善は、疾患または病態の危険性にある患者への投与時における、１つまたは複数の症状の出現の遅延または除去を含む。治療または改善の成功を調べる試験は、当技術分野においてよく知られている。
【００５１】
天然因子と実質的な配列類似性を共有するポリペプチドは、アミノ酸レベルで、天然因子と少なくとも約３０％相同である。そのポリペプチドは、アミノ酸レベルで、天然因子と少なくとも約４０％相同であることが好ましく、少なくとも約６０％相同であることがより好ましく、少なくとも約７０％相同であることがさらにより好ましく、少なくとも約８０％相同であることがもっとも好ましい。こうして、実質的な類似性は、約３０〜約９９％の同一性を構成しうる。
【００５２】
類似体または変異体と天然因子とのパーセント相同性または％相同性という語句は、２つの配列を整列したとき、類似体または変異体中でも見出される天然因子中のアミノ酸配列の百分率を指す。パーセント同一性は、ＬＡＬＩＧＮまたはＢＬＡＳＴなど、当技術分野で確立された任意の方法またはアルゴリズムにより決定することができる。
【００５３】
ポリペプチドは、天然因子の受容体に結合可能、または天然因子に対して作製したポリクローナル抗体により認識可能である場合、天然因子の生物活性を有する。そのポリペプチドは、受容体結合アッセイにおいて、天然因子の受容体に特異的に結合できることが好ましい。
【００５４】
天然因子の機能的アゴニストは、天然因子との実質的な配列類似性を必ずしも共有しないが、天然因子の受容体に結合し、これを活性化する化合物である。
【００５５】
黄体形成ホルモンまたはＬＨは、天然哺乳類（例えば、ヒト）ＬＨまたは天然哺乳類ＬＨと同等なペプチド配列を含むタンパク質である。本明細書で用いるＬＨ類似体、同変異体、または同断片は、（１）天然哺乳類ＬＨ、好ましくは、天然のヒトＬＨと実質的な配列類似性を共有するポリペプチドを含み（２）天然哺乳類ＬＨの生物活性を有する。天然哺乳類ＬＨは、下垂体前葉が分泌するゴナドトロピンである。ＬＨは、非共有的に結合するアルファおよびベータサブユニットからなるヘテロダイマーである。アルファサブユニットは、ＬＨ、ＦＳＨおよびｈＣＧの間で共通であり、ベータサブユニットは、各ホルモンに特殊である。本方法およびキットにおいて有用なＬＨは、天然哺乳類ＬＨと実質的な配列類似性を共有するベータサブユニットとともに、天然のアルファサブユニットを有してよい。あるいは、ＬＨは、天然哺乳類ＬＨと実質的な配列類似性を共有するアルファサブユニットとともに、天然のベータサブユニットを有してよい。ＬＨ類似体、同変異体、または同断片は、対応する天然のサブユニットと実質的な配列類似性を共有する、アルファおよびベータのいずれのサブユニットを有してもよい。こうして、ＬＨ類似体または変異体という用語は、天然ＬＨサブユニットの欠失的、挿入的、または置換的突然変異体を含む。さらに、ＬＨという用語は、他の種からのＬＨおよびその天然の変異体を包含する。加えて、ＬＨ類似体は、天然哺乳類ＬＨ受容体の機能的アゴニストであってもよい。
【００５６】
ヒト絨毛性ゴナドトロピンまたはｈＣＧは、天然哺乳類（例えば、ヒト）ｈＣＧまた天然哺乳類ｈＣＧと同等なポリペプチド配列を含むタンパク質である。本明細書で用いるｈＣＧ類似体、同変異体、または同断片は、（１）天然ｈＣＧと実質的な配列類似性を共有するポリペプチドを含み（２）天然哺乳類ｈＣＧの生物活性を有する。天然ｈＣＧは、非共有的に結合するアルファおよびベータサブユニットからなるヘテロダイマーである。アルファサブユニットは、ＬＨ、ＦＳＨおよびｈＣＧの間で共通であり、ベータサブユニットは、各ホルモンに特殊である。ただし、ｈＣＧおよびＬＨのベータサブユニットは、８５％の配列類似性を共有する。本方法およびキットにおいて有用なｈＣＧは、天然ｈＣＧと実質的な配列類似性を共有するベータサブユニットとともに、天然のアルファサブユニットを有してよい。あるいは、ｈＣＧは、天然ｈＣＧと実質的な配列類似性を共有するアルファサブユニットとともに、天然のベータサブユニットを有してよい。ｈＣＧ類似体、同変異体、または同断片は、対応する天然のサブユニットと実質的な配列類似性を共有するアルファおよびベータのいずれのサブユニットを有してもよい。こうして、ｈＣＧ類似体、同変異体または同断片という用語は、天然ｈＣＧサブユニットの欠失的、挿入的、または置換的突然変異体を含む。さらに、ｈＣＧという用語は、他の種からのｈＣＧ対応物およびその天然の変異体を包含する。加えて、ｈＣＧ類似体は、天然哺乳類ｈＣＧ／ＬＨ受容体の機能的アゴニストであってもよい。
【００５７】
プロラクチンは、天然哺乳類（例えば、ヒト）プロラクチンまたは天然哺乳類プロラクチンと同等なポリペプチド配列を含むポリペプチドである。本明細書で用いるプロラクチン類似体、同変異体、または同断片は、（１）天然哺乳類プロラクチン、好ましくは、天然ヒトプロラクチンと実質的な配列類似性を共有し、（２）天然哺乳類プロラクチンの生物活性を有する。天然哺乳類プロラクチンは、おもに下垂体で合成される１９９アミノ酸のポリペプチドである。こうして、プロラクチンという用語は、天然プロラクチンの欠失的、挿入的、または置換的突然変異体である、プロラクチン類似体、同変異体、または同断片を包含する。さらに、プロラクチンという用語は、他の種からのプロラクチンおよびその天然の変異体を包含する。
【００５８】
加えて、プロラクチン類似体、同変異体、または同断片は、天然哺乳類プロラクチン受容体の機能的アゴニストであってもよい。例えば、その機能的アゴニストは、プロラクチン受容体に関する米国特許第６，３３３，０３１号に開示の活性化アミノ酸配列；プロラクチン受容体に対するアゴニスト活性を有する、金属錯体を含む受容体リガンド（米国特許第６，４１３，９５２号）；ヒト成長ホルモンの類似体であるが、プロラクチンアゴニストとして作用するＧ１２０ＲｈＧＨ（Ｍｏｄｅら、１９９６年）；米国特許第５，５０６，１０７号および同第５，８３７，４６０号に記載のプロラクチン受容体のリガンドであってよい。
【００５９】
上皮細胞成長因子またはＥＧＦは、天然哺乳類ＥＧＦまたは天然哺乳類ＥＧＦと同等なポリペプチド配列を含むタンパク質である。本明細書で用いるＥＧＦ類似体、同変異体、または同断片は、天然ＥＧＦとの実質的なアミノ酸配列類似性のほか、ＥＧＦ受容体への結合など、天然ＥＧＦと少なくとも１つの生物活性を共有する。任意の種の天然ＥＧＦ、ＴＧＦα、または組換え修飾ＥＧＦを、とくにＥＧＦとして含める。特殊例は、２つのＣ末端側アミノ酸の欠失、および位置５１における中性アミノ酸置換を有する組換え修飾ＥＧＦ（とくに、ＥＧＦ５１  ｇｌｎ５１；米国特許出願公開第２００２００９８１７８Ａ１号）、位置１６におけるＨｉｓ残基が、中性または酸性のアミノ酸で置換された、ＥＧＦ突然変異タンパク質（ＥＧＦ−Ｘ１６）（米国特許第６，１９１，１０６号）、天然ＥＧＦのアミノ末端側残基を欠くＥＧＦの５２アミノ酸欠失突然変異体（ＥＧＦ−Ｄ）、Ｎ末端側残基のほか２つのＣ末端側残基（Ａｒｇ−−Ｌｅｕ）が欠失するＥＧＦ欠失突然変異体（ＥＧＦ−Ｂ）、位置２１におけるＭｅｔ残基が酸化されるＥＧＦ−Ｄ（ＥＧＦ−Ｃ）、位置２１におけるＭｅｔ残基が酸化されるＥＧＦ−Ｂ（ＥＧＦ−Ａ）、へパリン結合ＥＧＦ様成長因子（ＨＢ−ＥＧＦ）、ベータセルリン、アンフィレグリン、ニューレグリン、または上記のいずれかを含む融合タンパク質を含むが、以上に限定されない。他の有用なＥＧＦ類似体、同変異体、または同断片は、米国特許出願公開第２００２００９８１７８Ａ１号、ならびに米国特許第６，１９１，１０６号および同第５，５４７，９３５号に記載されている。
【００６０】
加えて、ＥＧＦ類似体、同変異体、または同断片は、天然哺乳類ＥＧＦ受容体の機能的アゴニストであってもよい。例えば、その機能的アゴニストは、ＥＧＦ受容体に関する米国特許第６，３３３，０３１号に開示の活性化アミノ酸配列、またはＥＧＦ受容体に対するアゴニスト活性を有する抗体（Ｆｅｒｎａｎｄｅｚ−Ｐｏｌ、１９８５年および米国特許第５，７２３，１１５号）であってよい。
【００６１】
下垂体アデニル酸シクラーゼ活性化ポリペプチドまたはＰＡＣＡＰは、天然哺乳類（例えば、ヒト）ＰＡＣＡＰ、または天然哺乳類ＰＡＣＡＰと同等なポリペプチド配列、を含むポリペプチドである。本明細書で用いるＰＡＣＡＰ類似体、同変異体、または同断片は、天然ＰＡＣＡＰとの実質的なアミノ酸配列類似性のほか、ＰＡＣＡＰ受容体への結合など、天然ＰＡＣＡＰと少なくとも１つの生物活性を共有する天然ＰＡＣＡＰまたは任意のＰＡＣＡＰ類似体、同変異体もしくは同断片である。有用なＰＡＣＡＰ類似体、同変異体、または同断片は、ＰＡＣＡＰの３８アミノ酸変異体および２７アミノ酸変異体（それぞれ、ＰＡＣＡＰ３８およびＰＡＣＡＰ２７）、ならびに、例えば、米国特許第５，１２８，２４２号、同第５，１９８，５４２号、同第５，２０８，３２０号、同第５，３２６，８６０号、同第５，６２３，０５０号、同第５，８０１，１４７号、および同第６，２４２，５６３号に開示の類似体および変異体を含むが、以上に限定されない。
【００６２】
加えて、ＰＡＣＡＰ類似体、同変異体、または同断片は、天然哺乳類ＰＡＣＡＰ受容体の機能的アゴニストであってもよい。例えば、その機能的アゴニストは、ＰＡＣＡＰ１型受容体の特殊アゴニストとして作用するポリペプチドである、マキサジラン（Ｍｏｒｏら、１９９７年）であってよい。
【００６３】
エリスロポエチンまたはＥＰＯは、天然哺乳類（例えば、ヒト）ＥＰＯまたは天然哺乳類ＥＰＯと同等なポリペプチド配列を含むタンパク質である。本明細書で用いるＥＰＯ類似体、同変異体、または同断片は、天然ＥＰＯとの実質的なアミノ酸配列類似性のほか、ＥＰＯ受容体への結合など、天然ＥＰＯと少なくとも１つの生物活性を共有する。ＥＰＯ類似体、同変異体、または同断片の例は、例えば、米国特許第６，０４８，９７１号および同第５，６１４，１８４号に開示されている。
【００６４】
加えて、ＥＰＯ類似体、同変異体、または同断片は、天然哺乳類ＥＰＯ受容体の機能的アゴニストであってもよい。例えば、その機能的アゴニストは、ＥＰＯ模倣ペプチド１（ＥＭＰ１；Ｊｏｈｎｓｏｎら、２０００年）；Ｗｒｉｇｈｔｏｎら、１９９６年および米国特許第５，７７３，５６９号に記載されるＥＰＯの短ペプチド模倣体の１つ；Ｋａｕｓｈａｎｓｋｙ、２００１年に開示される任意の小分子ＥＰＯ模倣体；米国特許第５，８８５，５７４号および国際公開第９６／４０２３１号、同第９７／４８７２９号、Ｆｅｒｎａｎｄｅｚ−Ｐｏｌ、１９８５年または米国特許第５，７２３，１１５号に記載の、ＥＰＯ受容体を活性化する抗体；ＥＰＯ受容体に関する米国特許第６，３３３，０３１号に開示の活性化アミノ酸配列；ＥＰＯ受容体に対するアゴニスト活性を有する、金属錯体を含む受容体リガンド（米国特許第６，４１３，９５２号）、または米国特許第５，５０６，１０７号および同第５，８３７，４６０号に記載のＥＰＯ受容体のリガンドであってよい。
【００６５】
ＬＨ／ｈＣＧ誘発剤は、動物に投与すると、動物におけるＬＨまたはｈＣＧ量を増加させることができる物質である。例えば、ＬＨ放出ホルモン（ＬＨＲＨ）は、ＬＨの分泌を刺激する。
【００６６】
哺乳類フェロモンは、天然哺乳類（例えば、ヒト）フェロモンまたは天然哺乳類フェロモンと同等なポリペプチド配列もしくは類似の小分子を含むタンパク質または小分子でありうる。本明細書で用いるフェロモン類似体、同変異体、または同断片は、同一種の別の動物、通常は異性の動物に対するシグナルとして役立つ物質である。フェロモンは、２−ｓｅｃ−ブチル−４，５−ジヒドロチアゾール（ＳＢＴ）、２，３−デヒドロ−ｅｘｏ−ブレビコミン（ＤＨＢ）、アルファおよびベータファルネセン、６−ヒドロキシ−６−メチル−３−ヘプタノン、２−ヘプタノン、ｔｒａｎｓ−５−ヘプテン−２−オン、ｔｒａｎｓ−４−ヘプテン−２−オン、ｎ−ペンチルアセテート、ｃｉｓ−２−ペンテン−１−イル−アセテート、２，５−ジメチルピラジン、ドデシルプロピオネート、および（Ｚ）−７−ドデセン−１−イルアセテート（例えば、Ｄｕｌａｃら、２００３年を参照のこと）からなる群から選択することが好ましい。
【００６７】
有効量とは、意図する目的を達成するのに十分な治療用薬剤の量である。例えば、神経幹細胞数を増加させるためのＬＨまたはｈＣＧの有効量は、適用例に応じｉｎ  ｖｉｖｏまたはｉｎ  ｖｉｔｒｏにおいて、神経幹細胞数を増加させるために十分な量である。神経変性疾患または病態を治療または改善するためのＬＨまたはｈＣＧの有効量は、神経変性疾患または病態の１つまたは複数の症状を抑制または除去するために十分なＬＨ／ｈＣＧ量である。所与の治療用薬剤の有効量は、その薬剤の性質、投与経路、治療用薬剤を投与される動物のサイズおよび種、ならびに投与目的などの因子により変化する。各個の適用例における有効量は、当技術分野において確立した方法により、当業者が経験的に決定してよい。
【００６８】
神経幹細胞増殖剤の等効力量とは、別の神経幹細胞増殖剤と同一または同等の効果を得るために必要な神経幹細胞増殖剤の量である。等効力量は、等効力量の相対的レベルまたは結果により指定することができる。こうして、等効力量または等効力用量は、血清または脳脊髄液中において、別の特殊な神経幹細胞増殖剤と同一のレベルを得るために必要な神経幹細胞増殖剤の量または用量でありうる。
【００６９】
薬剤送達機器とは、有効量の神経幹細胞増殖剤または分化剤の投与に好適なものである。薬剤送達機器は、例えば、非経口、静脈内、動脈内、結腸内、気管内、腹腔内、鼻腔内、血管内、髄腔内、頭蓋内、骨髄内、胸膜内、皮内、経皮、皮下、筋肉内、腹腔内、経口、直腸内、膣内、外用投与、肺内投与、またはその任意の組合せを含む、当技術分野で確立された任意の方法により、神経幹細胞増殖剤または分化剤を投与することができる。全身送達は、例えば、非経口、静脈内、動脈内、結腸内、気管内、腹腔内、鼻腔内、血管内、髄腔内、頭蓋内、骨髄内、胸膜内、皮内、経皮、皮下、筋肉内、腹腔内、経口、直腸内、膣内、外用投与、肺内投与、またはその任意の組合せを含む技術により実現することができる。薬剤送達機器は、例えば、植え込み式機器またはポンプ（例えば、浸透圧ポンプ）、持続性薬剤（徐放）による製剤の送達、または（注射針を有するまたは有さない）注射ペンでありうる。場合によって、薬剤送達機器は、注入器またはその構成成分、あるいは、注入以外の手段のための機器である。
【００７０】
以下の実施例は、本発明のある種の実施形態をさらに例示することを意図するものであり、請求項の適用範囲を制限することを意図するものではない。
【実施例】
【００７１】
以下の実施例において、以下の略記は以下の意味を有する。定義のない略記は、一般的に許容されている意味を有する。
℃  ＝  摂氏度
ｈｒ  ＝  時間
ｍｉｎ  ＝  分
μＭ  ＝  マイクロモル濃度
ｍＭ  ＝  ミリモル濃度
Ｍ  ＝  モル濃度
ｍｌ  ＝  ミリリットル
μｌ  ＝  マイクロリットル
ｍｇ  ＝  ミリグラム
μｇ  ＝  マイクログラム
ＦＢＳ  ＝  ウシ胎仔血清
ＰＢＳ  ＝  リン酸緩衝生理食塩水
ＤＭＥＭ  ＝  ダルベッコ改変イーグル培地
ＭＥＭ  ＝  改変イーグル培地
ＥＧＦ  ＝  上皮細胞成長因子
ＮＳＣ  ＝  神経幹細胞
ＳＶＺ  ＝  脳室下帯
ＰＡＣＡＰ  ＝  下垂体アデニル酸シクラーゼ活性化ポリペプチド
ＢＭＰ  ＝  骨形成タンパク質
ＲＳＡ  ＝  ラット血清アルブミン
（実施例１）
ｒｈＣＧ＋ＥＰＯを用いる脳卒中後の機能改善
右中大脳動脈（ＭＣＡ）の一時的閉塞により雄ラットに損傷を与えた後、組換えヒト絨毛性ゴナドトロピン（ｒｈＣＧ）を用量を漸増させて投与し、次いで、３日間、エリスロポエチン（ＥＰＯ、Ｅｐｏｇｅｎ  １４４０ＩＵ／日）を投与した。
【００７２】
雄のロングエバンスラット（２８０〜３３０ｇ）を、一晩絶食させたが、水は自由に与えた。硫酸アトロピン（０．５ｍｇ／ｋｇ、腹腔内）を、麻酔の１０分前に注射した。７０％亜酸化窒素と３０％酸素との混合気体中の３．５％のイソフルランにより、麻酔を誘発した。ラット全例に経口挿管し、人工呼吸した。人工呼吸中、臭化パンクロニウム（０．６ｍｇ／ｋｇ、腹腔内）により、ラットを麻痺させた。
【００７３】
Ｚｅａ  Ｌｏｎｇａら（Ｓｔｒｏｋｅ、第２０号、８４頁、１９８９年）が述べ、（Ｂｅｌａｙｅｖら、Ｓｔｒｏｋｅ、第２７号、１６１６頁、１９９６年）が改変した通りに、９０分間にわたりＭＣＡを一時的に閉塞させた。結紮後、頸部切開を閉じ、ラットを麻酔から覚醒させた。ＭＣＡｏの６０分後に、標準化された神経行動バッテリー上でラットを調べ、神経学的欠損の存在を確認した（Ｂｅｌａｙｅｖら、１９９６年）。左上肢の不全麻痺を示さなかったラット（総神経学的スコアが９未満；下記および図１の行動学的試験を参照のこと）を、さらなる試験から除外した。ＭＣＡｏの９０分後に、ラットに再麻酔し、体温プローブを再挿入し、管腔内の結紮を注意深く除去した。
【００７４】
ＭＣＡｏ前および閉塞中（６０分後）のラット全例において、行動学的試験を実施し、ＭＣＡｏの成功を確認した。そのバッテリーは、神経学的機能の各態様を評価するために以前に用いた以下の２つの試験からなった。（１）尾で吊下げられる間の上半身の姿勢を検査するためにＢｅｄｅｒｓｏｎら（Ｓｔｒｏｋｅ、第１７号、４７２頁、１９８６年）が開発した、姿勢反射試験；および（２）視覚的、触覚的、および固有覚的刺激に対して応答する前肢における感覚運動的統合を検査するためにＤｅ  Ｒｙｃｋら（Ｓｔｒｏｋｅ、第２０号、１３８３頁、１９８９年）が開発した、前肢置き直し試験。神経学的機能は、０〜１２のスケール（正常時のスコア＝０、最大スコア＝１２）で評価した。
【００７５】
投与および実験群は、以下の通りであった。
【００７６】
第１群：ｎ＝８；手術後第１、第３、第５日に生理食塩溶液（筋肉内投与するｈＣＧと等量）を筋肉内投与した後で、第７、第８、第９日から、ＡＬＺＥＴ（登録商標）ポンプ（カリフォルニア州、クパチーノ；Ａｌｚｅｔ浸透圧ポンプ）により、生理食塩水を静脈内投与した。初回注射は、脳卒中手術の２４時間後に投与した。
【００７７】
第２群：ｎ＝８；ＭＣＡ閉塞後第１、第３、第５日に生理食塩溶液（筋肉内投与するｈＣＧと等量）を筋肉内投与した後で、第７、第８、第９日から、ＡＬＺＥＴ（登録商標）ポンプにより、ＥＰＯ（１４４０ＩＵ／日）を静脈内投与した。初回注射は、脳卒中手術の２４時間後に投与した。
【００７８】
第３群：ｎ＝８；ＭＣＡ閉塞後第１、第３、第５日にｈＣＧ（３３ＩＵ／日）を筋肉内送達した後で、第７、第８、第９日から、ＡＬＺＥＴ（登録商標）ポンプにより、ＥＰＯ（１４４０ＩＵ／日）を静脈内投与した。初回注射は、脳卒中手術の２４時間後に投与した。
【００７９】
第４群：ｎ＝８；ＭＣＡ閉塞後第１、第３、第５日にｈＣＧ（１００ＩＵ／日）を筋肉内送達した後で、第７、第８、第９日から、ＡＬＺＥＴ（登録商標）ポンプにより、ＥＰＯ（１４４０ＩＵ／日）を静脈内投与した。初回注射は、脳卒中手術の２４時間後に投与した。
【００８０】
第５群：ｎ＝８；ＭＣＡ閉塞後第１、第３、第５日にｈＣＧ（３００ＩＵ／日）を筋肉内送達した後で、第７、第８、第９日から、ＡＬＺＥＴ（登録商標）ポンプにより、ＥＰＯ（１４４０ＩＵ／日）を静脈内投与した。初回注射は、脳卒中手術の２４時間後に投与した。
【００８１】
第６群：ｎ＝８；ＭＣＡ閉塞後第１、第３、第５日にｈＣＧ（１０００ＩＵ／日）を筋肉内送達した後で、第７、第８、第９日から、ＡＬＺＥＴ（登録商標）ポンプにより、ＥＰＯ（１４４０ＩＵ／日）を静脈内投与した。初回注射は、脳卒中手術の２４時間後に投与した。
【００８２】
第７群：ｎ＝８；ＭＣＡ閉塞後第１、第３、第５日にｈＣＧ（３０００ＩＵ／日）を筋肉内送達した後で、第７、第８、第９日から、ＡＬＺＥＴ（登録商標）ポンプにより、ＥＰＯ（１４４０ＩＵ／日）を静脈内投与した。初回注射は、脳卒中手術の２４時間後に投与した。
【００８３】
第８群：ｎ＝８；ＭＣＡ閉塞後第１、第３、第５日にｈＣＧ（１０，０００ＩＵ／日）を筋肉内送達した後で、第７、第８、第９日から、ＡＬＺＥＴ（登録商標）ポンプにより、ＥＰＯ（１４４０ＩＵ／日）を静脈内投与した。初回注射は、脳卒中手術の２４時間後に投与した。
【００８４】
第９群：ｎ＝８；ＭＣＡ閉塞後第１、第３、第５日にｈＣＧ（３０，０００ＩＵ／日）を筋肉内送達した後で、第７、第８、第９日から、ＡＬＺＥＴ（登録商標）ポンプにより、ＥＰＯ（１４４０ＩＵ／日）を静脈内投与した。初回注射は、脳卒中手術の２４時間後に投与した。
【００８５】
図１に見られるように、ｈＣＧの後にＥＰＯを投与されるこれらのラットの機能改善は、ＥＰＯ単剤を投与されるラットの場合よりも良好であった。
【００８６】
ヒトにおける投与への変換は、相対成長係数８に従い、ラットに投与するｍｇ／ｋｇを、ヒトにおける投与のためのｍｇ／ｍ２に変換する。この変換のために確立されたガイドライン（「Ｇｕｉｄａｎｃｅ  ｆｏｒ  Ｉｎｄｕｓｔｒｙ：  Ｅｓｔｉｍａｔｉｎｇ  ｔｈｅ  Ｍａｘｉｍｕｍ  Ｓａｆｅ  Ｓｔａｒｔｉｎｇ  Ｄｏｓｅ  ｉｎ  Ｉｎｉｔｉａｌ
Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｔｒｉａｌｓ  ｆｏｒ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  ｉｎ  Ａｄｕｌｔ  Ｈｅａｌｔｈｙ  Ｖｏｌｕｎｔｅｅｒｓ」、Ｕ．Ｓ．  Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、ＦＤＡ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｄｒｕｇ  Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、２００５年７月）に従い、ラットについて観察された３００ＩＵ／日の最適用量を、以下に変換する。
ＨＤ＝［ＡＤ×ＡＫｍ］／ＨＫｍ
ここで、
ＨＤ＝ヒトにおける用量
ＡＤ＝ラットにおける用量
ＡＫｍ＝ラットにおけるｋｍ係数
ＨＫｍ＝ヒトにおけるｋｍ係数
したがって、体重３０５ｇの平均的なラットに対する３００ＩＵ／日（１日あたり３０μｇのｈＣＧに相当、すなわち、本試験では、１μｇ  ｈＣＧ＝１０ＩＵ  ｈＣＧ）は、ラットにおける９８．４μｇ／ｋｇの用量に相当する。したがって、ラットにおけるｋｍ係数を８、ヒトにおけるｋｍ係数を３７とすると、ヒトにおける投与のためのｈＣＧの最適用量は、以下のように計算される。
ＨＤ＝９８．４μｇ／ｋｇ×８／３７＝２１．２８μｇ／ｋｇまたは２１２．８ＩＵ／ｋｇ／日
ヒトにおけるＥＰＯ用量は、体重３０５ｇの平均的なラットに対するＥＰＯ用量を１４４０ＩＵ／日とする本実施例における活量により、ラットにおける４，７２１．３ＩＵ／ｋｇの用量に相当する。したがって、ラットにおけるｋｍ係数を８、ヒトにおけるｋｍ係数を３７とすると、ヒトにおける投与のためのＥＰＯの最適用量は、以下のように計算される。
ＨＤ＝４，７２１．３ＩＵ／ｋｇ×８／３７＝１０２０．８２ＩＵ／ｋｇ
（実施例２）
ｈＣＧ＋ＥＰＯを用いる脳卒中後の機能改善
実施例１に述べた通り、右中大脳動脈（ＭＣＡ）の一時的閉塞により雄ラットの別の群に損傷を与えた後、ヒト由来のヒト絨毛性ゴナドトロピン（ｈＣＧ）を投与し、次いで、実施例１に述べた通り、３日間、エリスロポエチン（ＥＰＯ、Ｅｐｏｇｅｎ  １４４０ＩＵ／日）を投与した。
【００８７】
雄のロングエバンスラット（２８０〜３３０ｇ）を一晩絶食させたが、水は自由に与えた。硫酸アトロピン（０．５ｍｇ／ｋｇ、腹腔内）を、麻酔の１０分前に注射した。７０％亜酸化窒素と３０％酸素との混合気体中の３．５％のイソフルランにより、麻酔を誘発した。ラット全例に経口挿管し、人工呼吸した。人工呼吸中、臭化パンクロニウム（０．６ｍｇ／ｋｇ、腹腔内）により、ラットを麻痺させた。
【００８８】
実施例１に述べた通り、ＭＣＡｏ前および閉塞中（６０分後）のラット全例において、行動学的試験を実施し、ＭＣＡｏの成功を確認した。
【００８９】
投与および実験群は、以下の通りであった。
【００９０】
第１群：ｎ＝１０；手術後第１、第３、第５日に生理食塩溶液（筋肉内投与するｈＣＧと等量）を筋肉内投与した後で、第７、第８、第９日から、ＡＬＺＥＴ（登録商標）ポンプにより、生理食塩水を静脈内投与した。
【００９１】
第２群：ｎ＝１０；ＭＣＡ閉塞後第１、第３、第５日にｈＣＧ（４４０ＩＵ／日）を筋肉内送達した後で、第７、第８、第９日から、ＡＬＺＥＴ（登録商標）ポンプにより、ＥＰＯ（１４４０ＩＵ／日）を静脈内投与した。
【００９２】
第３群：ｎ＝１０；ＭＣＡ閉塞後第１、第３、第５日にｈＣＧ（４４０ＩＵ／日）を筋肉内送達した後で、第７、第８、第９日から、ＡＬＺＥＴ（登録商標）ポンプにより、生理食塩水を等量で静脈内投与した。
【００９３】
第４群：ｎ＝１０；ＭＣＡ閉塞後第１、第３、第５日に生理食塩水を筋肉内送達した後で、第７、第８、第９日から、ＡＬＺＥＴ（登録商標）ポンプにより、ＥＰＯ（１４４０ＩＵ／日）を静脈内投与した。
【００９４】
第５群：ｎ＝５、ＭＣＡｏなし、投与なし；第−１、第１、第２、第３、第４、および第６週に、４つの行動学的タスクによりラットを訓練し調べた。
【００９５】
図２は、０〜１２のスケールで評価した、脳卒中後の同時点における試験群間の神経学的機能の差を示す。見られる通り、本明細書に述べるやり方でｈＣＧの投与後にＥＰＯを投与すると、著明な機能的改善が認められる。さらに、図３は、これらの試験群の百分率による組織喪失（非脳卒中の脳半球と比較）を表すグラフを示し、図４は、各群の組織喪失の代表的な画像を示す。
【００９６】
加えて、血清ｈＣＧレベルは、第３回のｈＣＧ腹腔内投与後に測定した。図５に示す通り、循環ｈＣＧレベルは、投与を受けたラットにおいて著明に高値であった。
【００９７】
（実施例３）
ヒトにおける急性脳卒中の治療におけるｈＣＧ＋ＥＰＯの使用
ヒト脳卒中患者各例に、試験参加の第１、第３、および第５日における毎日１回ずつ３回の筋肉内ｈＣＧ投与（１０，０００ＩＵ／回）の後、１日の休薬期間（第６日）を置いて、試験参加の第７、第８、および第９日における毎日１回ずつ３回の静脈内エリスロポエチン投与（３０，０００ＩＵ／回）を行う試験を始めた。初回の筋肉内ｈＣＧ投与は、中等度〜高度の脳卒中事象の２４〜４８時間後に送達することを目標とする。患者は、脳卒中の発症後６週間および３カ月など、治療期間の複数の時点において検査を受ける。ベースライン時の評価は、臨床／安全性状態、神経学的状態、血液学的状態、および血管状態のほか、脳ＭＲＩを含む。臨床／安全性状態、神経学的状態、血液学的状態、および血管状態の評価は、治療終了の１日後、１５日後、および８０日後に繰り返す。脳ＭＲＩは、比較のために、治療終了の８０日後（脳卒中発症の約９０日後）に繰り返す。
【００９８】
（実施例４）
プロラクチンの投与
雄ラット（２５０〜３００ｇ）を、２つのプロラクチン投与実験に用いた。プロラクチンは、ミニ浸透圧ポンプによる皮下注入（ＡＬＺＥＴ（登録商標）ミニポンプ）−毎日１回注射−により投与した。原料のプロラクチンは、重炭酸緩衝液中で希釈し、さらに、生理食塩水中１ｍｇ／ｍｌのラット血清アルブミン（ＲＳＡ）で希釈して注射した。ラットは、虚血性損傷を受けなかった。第６日に、ラットに１０時間で６回のＢｒｄＵ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社製）注射（６０ｍｇ／ｋｇ、腹腔内）を行い、最終回ＢｒｄＵ注射の３０分後にラットを屠殺した。脳の凍結切片を作製し、１匹あたり８切片を用いて、ＳＶＺにおけるＢｒｄＵ＋細胞を測定した。結果は、ＳＶＺにおけるＢｒｄＵ＋細胞総数、または図の説明に記した通り、切片あたりの平均として示した。
実験＃１
ラットには６日間投与し、ＲＳＡ（対照）またはラットプロラクチン（カリフォルニア州、トーランス、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｈｏｒｍｏｎｅ  ａｎｄ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｐｒｏｇｒａｍ）の皮下注入を、以下の用量で行った（各群にラット３例ずつ）。
＊１０×＝９９ｕｌ／ポンプ（２ｍｇ／０．２５ｍｌ  ＰＲＬ）−１１３μｇ／日
＊＊１５×＝１４８．５ｕｌ／ポンプ（２ｍｇ／０．２５ｍｌ  ＰＲＬ）−１７０μｇ／日
＊＊＊２０×＝１９８ｕｌ／ポンプ（２ｍｇ／０．２５ｍｌ  ＰＲＬ）−２２６μｇ／日ここで、
＊１０×＝脳室内注入のために投与した用量（約１１μｇ／日）の１０倍
＊＊１５×＝脳室内注入のために投与した用量の１５倍
＊＊＊２０×＝脳室内注入のために投与した用量の２０倍
結果
図６に示す通り、１７０μｇ／日が、前脳ＳＶＺ内の増殖（ＢｒｄＵ＋細胞数）で最大の増加をもたらした。
実験＃２
ラットには３または６日間投与し、ＲＳＡまたはラットプロラクチン（カリフォルニア州、トーランス、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｈｏｒｍｏｎｅ  ａｎｄ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｐｒｏｇｒａｍ）の毎日の単回腹腔内注射を、以下の用量で行った（各群にラット３例ずつ）。３日間にわたり１７０μｇ／日
３日間にわたり３９６μｇ／日
６日間にわたり１７０μｇ／日
結果
図７に示す通り、６日間にわたり送達した１７０μｇ／日が、前脳ＳＶＺ内の増殖（ＢｒｄＵ＋細胞数）で最大の増加をもたらした。
【００９９】
（実施例５）
ｈＣＧの投与
本試験の目的は、運動皮質に軟膜剥離による血管遮断性の虚血性損傷を与えた、成体雄ラットの前脳胚帯における細胞増殖および組織再生を最大化するｈＣＧ用量を決定することである。
方法
動物と手術
すでに記された（ＧｏｎｚａｌｅｚおよびＫｏｌｂ、「Ａ  ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ  ｏｆ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ  ｍｏｄｅｌｓ  ｏｆ  ｓｔｒｏｋｅ  ｏｎ  ｂｅｈａｖｉｏｒ  ａｎｄ  ｂｒａｉｎ  ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ」、Ｅｕｒ  Ｊ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ、２００３年、第１８巻、第７号、１９５０〜１９６２頁）通りに、２５０〜３００ｇの雄ラットの運動皮質に、軟膜剥離による血管遮断性の虚血性損傷を与えた。ラットをペントバルビタールナトリウム麻酔下に置き（６０ｍｇ／ｋｇ）、ブレグマから前／後方向に＋４〜−２ｍｍおよび正中線から横方向に１．５〜４．５ｍｍの直角の穴を、ドリルで前頭骨および頭頂骨に開けた。硬膜を除去し、無菌の生理食塩水に漬けた綿棒を用いて、皮質表面から軟膜および付随の血管を除去した。
投与
脳卒中の１日後（２４時間後）から、ラットにｈＣＧ（カリフォルニア州、トーランス、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  ａｎｄ  Ｈｏｒｍｏｎｅ  Ｐｒｏｇｒａｍ）の単回筋肉内（ｉ．ｍ．）注射を行った。投与は表１に記した通りに行い、５日間に３回の注射（第１、第３、および第５日に投与）または１週間毎日の注射のいずれかにより送達し、注射は各日午前９時に行った。対照ラットには、食塩水中のラット血清アルブミン（ＲＳＡ；Ｓｉｇｍａ社製、１ｍｇ／ｍｌ）の注射を行った。最終投与日において、ｈＣＧ注射の３０分後から、１０時間に６回のＢｒｄＵ注射をラットに行った。ＢｒｄＵ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社製）は、６０ｍｇ／ｋｇの用量で腹腔内投与した。４％パラホルムアルデヒドにより、心臓経由でラットを灌流した。脳を解剖し、スクロースで凍結保護し、凍結切片を作製した。スライドあたり８切片とする８スライドずつの２シリーズにより、１４ミクロン厚で脳の凍結切片を作製した。ウサギ抗ホスホヒストンＨ３（抗ｐＨＨ３、１：１００、Ｕｐｓｔａｔｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社製）、ラット抗ＢｒｄＵ（１：１００、Ｓｅｒａｌａｂ社製）、ヤギ抗ダブルコルチン（ＤＣＸ、１：１００、Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社製）を用いて、免疫染色を行った。各ラットの側脳室周囲の前脳脳室下帯（ＳＶＺ）における、ホスホヒストンＨ３（ｐＨＨ３：分裂活性細胞のマーカー）、ＢｒｄＵ、およびダブルコルチン（ＤＣＸ：未成熟ニューロンのマーカー）に陽性の細胞数を、８切片において測定し、側脳室あたりの平均陽性細胞数として提示した。
統計学的分析
値は、平均＋平均の標準誤差（ＳＥＭ）である。有意性は、一元配置ＡＮＯＶＡを用いた後、テューキーＨＳＤポストホック検定により判定した（＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１）。各群にラット３例とした。
結果
本試験では、ｈＣＧの筋肉内注射が、脳卒中後における成体の前脳脳室下帯（ＳＶＺ）に存在する神経幹細胞および前駆体細胞の増殖を促進する能力を検討した。ラットには、軟膜剥離による血管遮断術を行い、運動皮質に限局性の虚血性損傷を誘発し、２４時間後に投与を開始した。高用量ボーラス投与法では、表１にまとめた通り、５日間にわたり第１（脳卒中の２４時間後）、第３、および第５日に３回のｈＣＧ投与を行った。前脳ＳＶ
Ｚにおける増殖レベルを分析するため、第５日にラットを屠殺した。表２および図８に示す通り、本投与計画は、ＲＳＡ対照注射を投与した脳卒中ラットと比べ、増殖の増大に有効であった。図９に示す通り、１０００μｇ投与時に、増殖はほぼ２．５倍増大し、これらのラットのＳＶＺ中で新たに産生されたダブルコルチン陽性（ＤＣＸ＋）ニューロン数も、同様に著明に増大した。
【０１００】
別の試験では、表１にまとめた通り、脳卒中の２４時間後から７日間、ラットにｈＣＧを毎日投与し、第７日に１０時間にわたりＢｒｄＵを投与し、次いでラットを屠殺した。図１０Ａに示す通り、ｐＨＨ３免疫反応性が示すＳＶＺ中の分裂細胞数は、３３０μｇ／回群において、他のすべての群と比べ著明に増大した。この増大は、これらのラットのＳＶＺにおけるＢｒｄＵ＋細胞数を、ＲＳＡ対照と比べて測定することにより確認した（図１１）。１００μｇ投与群においては、軟膜を剥離したＲＳＡ対照と比べ、レベル増大の傾向が見られた（図１０Ａおよび１１）。図１０の非投与ラットには注射を行わず、軟膜剥離による脳卒中も誘発しなかったことに注意のこと。内部対照として、１群に３３０μｇ／回群と同じ総用量を投与した（表１を参照のこと）が、第１、第３、および第５日に７７０μｇ／回のｈＣＧを３回投与し、第５日にラットを屠殺した。本試験によれば、３３０μｇ／回で毎日行う低用量の定期的なｈＣＧ投与が、脳における虚血性損傷後の前脳ＳＶＺにおける増殖の増大にはもっとも有効であった。
【０１０１】
どの投与計画が、新たな皮質組織の成長をもたらしうるかを判定するため、発明者らは、ｈＣＧ治療動物の皮質における病変部位を分析した。組織の再成長は、３３０μｇ／注射を投与する群のラットのための、低用量で定期的な毎日の投与計画において、とくに著明であった（図１０Ｂ）。
【０１０２】
本明細書で言及する任意の特許または刊行物は、本発明が関連する当業者の水準を示す。個々の刊行物をそれぞれ参照により組み込むため具体的かつ個々に示す場合と同程度に、これらの特許および刊行物を、その全体において参照により本明細書に組み込む。
【０１０３】
本発明は、そのいくつかの態様の例示であることを意図する実施例において開示される実施形態により範囲を制限されず、機能的に等価であるいずれの実施形態も、本発明の範囲内にある。方法およびキットの、本明細書で示し記載したものに加えての各種の変更は、当業者には明らかとなり、添付した特許請求の範囲内にあるものとする。さらに、上述の実施形態では、本明細書に開示する組成物のある種の代表的な組合せのみを具体的に述べたが、その組成物の他の組合せも、当業者には明らかとなり、添付した特許請求の範囲内にあるものとする。したがって、本明細書では、ステップまたは組成物の組合せについて明示的に言及する場合がある。ただし、明示的に述べない場合であっても、ステップまたは組成物の他の組合せを含む。
表１  ｈＣＧ投与法を示す表である。脳卒中後２４時間から５日間に３回、または７日間毎日、ラットにｈＣＧの筋肉内（Ｉ．Ｍ．）注射を行った。対照ラットには、ＲＳＡ注射のみを行った。
【０１０４】
【表１】
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表２  軟膜剥離による血管遮断性の脳卒中後２４時間にｈＣＧを投与したラットにおけるｐＨＨ３＋、ＢｒｄＵ＋、およびＤＣＸ＋細胞を対照と比べて測定するために、側脳室あたりの平均陽性細胞数として提示する、実測値±ＳＥＭ。
【０１０５】
【表２】
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０Ａ】
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【図１０Ｂ】
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【図１１】
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