(57)【要約】【課題】生体材料がむき出しのままノズルから噴射されてしまう。そのため、生体材料が損傷したり、生体材料に細菌が付着してしまったりする場合があるという課題がある。【解決手段】第１の導管４１と第１の流出口４３とを有し、第１の生体材料としてのコラーゲンＫ１を収容する第１の収容部４２と、第１の収容部４２内に設けられ、第２の導管５１と第２の流出口５３とを有し、第２の生体材料としての幹細胞Ｃ１と、培養液Ｂ１を収容する第２の収容部５２と、第１の流出口４３に連結され、コラーゲンＫ１と幹細胞Ｃ１とを噴射する生体材料噴射ヘッドと、第１の導管４１に連結され、第１の圧力を発生させる第１の圧力発生部１３２と、第２の導管５１に連結され、第２の圧力を発生させる第２の圧力発生部１３３と、を備え、第２の圧力は、第１の圧力より高く、第１の流出口４３は、第２の流出口５３と対向する位置に設けられる。【選択図】図５
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
第１の導管と第１の流出口とを有し、第１の生体材料を収容する第１の収容部と、
前記第１の収容部内に設けられ、第２の導管と第２の流出口とを有し、第２の生体材料を収容する第２の収容部と、
前記第１の流出口に連結され、前記第１の生体材料と前記第２の生体材料とを噴射する生体材料噴射ヘッドと、
前記第１の導管に連結され、第１の圧力を発生させる第１の圧力発生部と、
前記第２の導管に連結され、第２の圧力を発生させる第２の圧力発生部と、
を備え、
前記第２の圧力は、前記第１の圧力より高く、前記第１の流出口は、前記第２の流出口と対向する位置に設けられることを特徴とする生体材料噴射装置。
【請求項２】
請求項１に記載の生体材料噴射装置であって、
前記第１の流出口及び前記第２の流出口の形状は、それぞれ円形状であることを特徴とする生体材料噴射装置。
【請求項３】
請求項２に記載の生体材料噴射装置であって、
前記第１の流出口の直径は、前記第２の流出口の直径より長いことを特徴とする生体材料噴射装置。
【請求項４】
請求項１から請求項３のいずれか一項に記載の生体材料噴射装置であって、
前記第１の圧力発生部及び前記第２の圧力発生部は、空気によって前記第１の圧力と前記第２の圧力をそれぞれ発生させることを特徴とする生体材料噴射装置。
【請求項５】
請求項１から請求項４のいずれか一項に記載の生体材料噴射装置であって、
前記第２の流出口に、さらに導管を備えたことを特徴とする生体材料噴射装置。
【請求項６】
請求項１から請求項５のいずれか一項に記載の生体材料噴射装置であって、
前記第２の収容部は、紡糸されたコラーゲン繊維から構成されていることを特徴とする生体材料噴射装置。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、生体材料噴射装置に関する。
【背景技術】
【０００２】
人間の臓器や組織が病気やけがにより損傷し、外科もしくは内科的に治療が出来ない場合にはそれらの臓器や組織を移植する以外に機能を回復させるための選択肢がない場合が多い。しかし、必要な臓器や組織が必要な時に入手できることは稀である。この問題を解決するために、再生医学や組織工学などの分野では移植が必要な本人から細胞を採取し、体外で培養して組織化し、これを移植することを目的とした研究が行われている。例えば皮膚を培養して移植する治療などがすでに行われている。しかし、この方法では、細胞を平面的に幡種するため、皮膚の様々な内部構造は再生され難い。例えば光ピンセットを用いて細胞の位置を制御する方法により内部構造を再現できる可能性もあるが、移植に使用可能な大きさの組織を作るので、制御を必要とする細胞の数が膨大となり、皮膚の再生は困難と考えられる。
そこで、例えば特許文献１では、インクジェットプリンタに備えられたようなノズルから生体材料を噴射して、生体組織を構築する方法が提案されている。
【０００３】
【特許文献１】特開２００８−１７７９８号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
しかし、細胞がむき出しのままノズルから噴射されてしまう。そのため、噴射された細胞が着弾したときに細胞が損傷したり、細胞が噴射されて飛行中に乾燥したり、あるいは細胞に細菌が付着したりする場合があるという課題がある。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明は、上述の課題の少なくとも一部を解決するためになされたものであり、以下の形態または適用例として実現することが可能である。
【０００６】
［適用例１］第１の導管と第１の流出口とを有し、第１の生体材料を収容する第１の収容部と、前記第１の収容部内に設けられ、第２の導管と第２の流出口とを有し、第２の生体材料を収容する第２の収容部と、前記第１の流出口に連結され、前記第１の生体材料と前記第２の生体材料とを噴射する生体材料噴射ヘッドと、前記第１の導管に連結され、第１の圧力を発生させる第１の圧力発生部と、前記第２の導管に連結され、第２の圧力を発生させる第２の圧力発生部と、を備え、前記第２の圧力は、前記第１の圧力より高く、前記第１の流出口は、前記第２の流出口と対向する位置に設けられることを特徴とする生体材料噴射装置。
【０００７】
この構成によれば、第２の圧力発生部が発生する第２の圧力は、第１の圧力発生部が発生する第１の圧力より高い。これにより、第２の圧力によって第２の生体材料を押し出そうとする力は、第１の圧力によって第１の生体材料を押し出そうとする力より大きい。また、第１の流出口は、第２の流出口と対向する位置に設けられる。そのため、第２の流出口から流出する第２の生体材料は、対向する位置に設けられた第１の流出口と第２の流出口との間にある第１の生体材料の領域に入り込もうとする。そのため、第２の生体材料を第１の生体材料で覆う可能性が高くなる。
【０００８】
そして、第２の生体材料は、第１の生体材料で覆われた状態で、第１の流出口に連結された生体材料噴射ヘッドに供給され、生体材料噴射ヘッドから噴射される。従って、第２の生体材料は、むき出しのまま噴射されることがないので、噴射された第２の生体材料が着弾したときに第２の生体材料が損傷したり、第２の生体材料が噴射されて飛行中に乾燥したり、あるいは第２の生体材料に細菌が付着したりすることを抑制できる。
【０００９】
［適用例２］前記第１の流出口及び前記第２の流出口の形状は、それぞれ円形状であることを特徴とする上記生体材料噴射装置。
これによれば、第２の圧力によって第２の流出口から流出した第２の生体材料を、第１の圧力によって第１の流出口から流出した第１の生体材料によって全体を覆うことができる。
【００１０】
［適用例３］前記第１の流出口の直径は、前記第２の流出口の直径より長いことを特徴とする上記生体材料噴射装置。
これによれば、第２の生体材料の全体を第１の生体材料で覆う可能性が高くなる。
【００１１】
［適用例４］前記第１の圧力発生部及び前記第２の圧力発生部は、空気によって前記第１の圧力と前記第２の圧力をそれぞれ発生させることを特徴とする上記生体材料噴射装置。
これによれば、第１の収容部内に第１の圧力を発生させ、第２の収容部内に第２の圧力を発生させることができる。
【００１２】
［適用例５］前記第２の流出口に、さらに導管を備えたことを特徴とする上記生体材料噴射装置。
これによれば、第２の流出口から流出する第２の生体材料が拡散することを抑制できる。このため、第２の生体材料の全体を第１の生体材料で覆う可能性が高くなる。
【００１３】
［適用例６］前記第２の収容部は、紡糸されたコラーゲン繊維から構成されていることを特徴とする上記生体材料噴射装置。
これによれば、第２の収容部に収容された第２の生体材料に、コラーゲン繊維から酸素や栄養などが供給される。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１４】
以下、本発明を具体化した実施例について図面に従って説明する。
（第１実施例）
本実施例では、火傷やけがなどによって損傷した指、手などの皮膚を、損傷した部位に向かって生体材料を噴射することによって再生する生体材料噴射装置について説明する。
【００１５】
図１は、本実施例における生体材料噴射装置１００の外観斜視図である。ベース１０３には２本のレール１０６，１１２が備えられる。スライドベース１０５は、レール１０６，１１２をＤ１に示す方向にスライドすることができる。スライドベース１０５には、キャリッジ移動用モータ１１５、従動ローラ１０７が備えられる。
【００１６】
キャリッジ移動用モータ１１５によって駆動される駆動ローラ１１４と従動ローラ１０７には、ベルト１０８が備えられる。ベルト１０８にはキャリッジ１１１が固定される。
キャリッジ１１１を貫通するガイド軸１２０は、レール１０６の図面右側でベース１０３に備えられた支持部１２１と、レール１１２の図面左側でベース１０３に備えられた支持部１２２によって固定される。
【００１７】
キャリッジ移動用モータ１１５が回転することによって、ベルト１０８が回転し、キャリッジ１１１は、ガイド軸１２０に沿ってＤ２に示す方向に移動することができる。
【００１８】
キャリッジ１１１には、生体材料が収容された生体材料カートリッジ１１３が搭載される。生体材料カートリッジ１１３は、キャリッジ１１１に搭載されたり、キャリッジ１１１から取り外されたりすることができる。
【００１９】
スライドベース１０５には、ボールナット支持部１１６が固定される。ボールナット支持部１１６には、ボールナット１１７が備えられる。
【００２０】
ボールナット１１７とボールネジ軸１１８とは噛み合って備えられる。スライドベース移動用モータ１０１によってボールネジ軸１１８が時計周りまたは反時計周りに回転されると、スライドベース１０５は、レール１０６，１１２に沿ってＤ１に示す方向に移動する。
【００２１】
キャリッジ１１１の図面下方向には、生体材料噴射ヘッド（不図示）が備えられる。生体材料噴射ヘッドからは、生体材料カートリッジ１１３から供給された生体材料が図面下方向に噴射される。
【００２２】
ベース１０３に備えられた制御ボックス１０４内には、スライドベース移動用モータ１０１、キャリッジ移動用モータ１１５を制御するためのモータ駆動回路（不図示）と、制御ケーブル１０２を介して、生体材料噴射ヘッドから生体材料を噴射するための制御を行うヘッド駆動回路（不図示）とが備えられる。
【００２３】
制御ボックス１０４には、ボタン操作などによる操作部１１９、液晶パネルなどからなる表示部１２３が備えられる。操作部１１９から入力された数値に基づいて、モータ駆動回路の制御によって、キャリッジ１１１は方向Ｄ１の位置と方向Ｄ２の位置を指定することができる。
【００２４】
ヘッド駆動回路によって、キャリッジ１１１に備えられた生体材料噴射ヘッドから生体材料が、テーブル１０９に置かれた指１１０の損傷した部位に向かって噴射される。キャリッジ１１１が方向Ｄ１と方向Ｄ２に移動しながら、生体材料噴射ヘッドから生体材料を噴射することができる。
【００２５】
次に、キャリッジ１１１に備えられた生体材料噴射ヘッドについて説明する。図２は、生体材料噴射ヘッド１２の斜視図であり、一部断面で示してある。図３は、組み立てられた生体材料噴射ヘッド１２の断面側面図、図４は図３のＡ−Ａ線における矢印方向から見た図である。
【００２６】
これらの図に示すように、生体材料噴射ヘッド１２は、下記に詳述する構造を持つ上側基板１、中間基板２、下側基板３を重ねて接合した積層構造となっている。中間基板２は、例えばシリコン基板であり、複数のノズル孔４を構成するように基板２の表面に一端より平行に等間隔で形成された複数のノズル溝２１と、各々のノズル溝２１に連通し底壁を振動板５とする吐出室６を構成することになる凹部２２と、凹部２２の後部に設けられオリフィス７を構成して流入口となるための細溝２３と、及び各々の吐出室６に生体材料を供給するための共通のキャビティ８を構成することになる凹部２４を有する。
【００２７】
また、振動板５の下部には後述する電極を装着するため振動室９を構成することになる凹部２５が設けられている。ノズル溝２１のピッチは２ｍｍ程度であり、その幅は４０μｍ程度にされる。
【００２８】
中間基板２の上面に接合される上側基板１は、例えばガラスまたはプラスチックからなり、この上側基板１の接合によって、ノズル孔４、吐出室６、オリフィス７及びキャビティ８が構成される。そして、上側基板１にはキャビティ８に連通する供給口１４を穿設する。
【００２９】
供給口１４は接続パイプ１６及びチューブ１７を介して図５の生体材料カートリッジ１１３に設けられた第１の流出口４３に接続される。
【００３０】
中間基板２の下面に接合される下側基板３は、例えばガラスまたはプラスチックからなり、この下側基板３の接合によって振動室９を構成するとともに、下側基板３の表面に振動板５に対応する各々の位置にて電極３１を形成する。
【００３１】
電極３１はリード部３２及び端子部３３を持つ。さらに端子部３３を除き電極３１及びリード部３２の全体を絶縁膜３４で被覆している。各端子部３３にはリード線３５がボンディングされる。
【００３２】
上側基板１、中間基板２、下側基板３は図２のように組み立てられて生体材料噴射ヘッド１２が構成される。さらに、中間基板２と電極３１の端子部３３間にそれぞれ発振回路２６が接続される。図１の生体材料カートリッジ１１３から供給された生体材料１１は、供給口１４を通じて中間基板２の内部に供給され、キャビティ８、吐出室６等を満たしている。
【００３３】
次に、生体材料噴射ヘッド１２の動作を説明する。電極３１に発振回路２６により、例えば０Ｖ〜＋電圧のパルス電圧を印加し、電極３１の表面が＋電位に帯電すると、対応する振動板５の下面は−電位に帯電する。したがって、振動板５は静電気の吸引作用により下方へ撓む。
【００３４】
次に、電極３１をＯＦＦにすると、該振動板５は復元する。したがって、吐出室６内の圧力が急激に上昇し、ノズル孔４より生体材料１１を液滴１３として噴射する。そして、振動板５が下方へ撓むことにより、生体材料１１がキャビティ８よりオリフィス７を通じて吐出室６内に補給される。
【００３５】
発振回路２６には、上記のように０Ｖ〜＋電圧間をＯＮ・ＯＦＦさせるものや交流電源等が用いられる。
【００３６】
次に、図１の生体材料カートリッジ１１３について説明する。図５は、生体材料カートリッジ１１３を説明するための断面図である。生体材料カートリッジ１１３は、第１の収容部４２と、第１の収容部４２内に設けられた第２の収容部５２とから構成される。すなわち、生体材料カートリッジ１１３は、第１の収容部４２と第２の収容部５２とからなる二重構造を形成している。
【００３７】
第１の収容部４２内には、第１の生体材料としてのゲル状のコラーゲンＫ１が収容されている。第２の収容部５２内には、第２の生体材料としての幹細胞Ｃ１と、たんぱく質や糖質を含む培養液Ｂ１とが収容されている。
【００３８】
第１の収容部４２は、細菌が繁殖しない材質が用いられ、例えば、ステンレス、ガラスなどから構成される。第２の収容部５２は、紡糸されたコラーゲン繊維で構成される。コラーゲン繊維は、長繊維でも短繊維でもよい。幹細胞Ｃ１は、コラーゲン繊維から酸素や栄養の補給を受けることができる。
【００３９】
第１の収容部４２には、第１の導管４１が備えられる。第１の導管４１は、第１の収容部４２にコラーゲンＫ１を注入するときの流入口となる。
【００４０】
第２の収容部５２には、第２の導管５１が備えられ、図５に示すように、第２の導管５１は、第１の収容部４２内を通り第２の収容部５２に連結される。第２の導管５１は、第２の収容部５２に幹細胞Ｃ１と培養液Ｂ１とを注入するときの流入口となる。
【００４１】
第１の収容部４２には、第１の流出口４３が設けられ、第２の収容部５２には、第２の流出口５３が設けられる。第１の流出口４３と第２の流出口５３とは図に示すように対向する位置に設けられる。第１の流出口４３、第２の流出口５３の形状は円形状である。
【００４２】
次に、図１の第１の圧力発生部１３２と第２の圧力発生部１３３について説明する。図１の生体材料カートリッジ１１３には、チューブ１３０，１３１を介して第１の圧力発生部１３２、第２の圧力発生部１３３から空気圧がそれぞれ供給される。
【００４３】
図６は、第１の圧力発生部１３２、第２の圧力発生部１３３を説明するための模式図である。ポンプ６１は例えばダイヤフラムなどによって空気圧を発生させる機構を備え、モータ６０によって駆動される。
【００４４】
ポンプ６１によって発生した空気圧は、チューブ６２を介して空気室６３の圧力を発生させる。空気室６３には、空気弁６４が備えられる。空気弁６４によって、空気室６３内の圧力は一定に保持される。
【００４５】
一定に保持された空気圧は、図１のチューブ１３０、１３１を介して生体材料カートリッジ１１３に供給される。本実施例の第２の圧力発生部１３３によって一定に保持される空気圧は、第１の圧力発生部１３２によって一定に保持される空気圧より高い。
【００４６】
第１の収容部４２に備えられた第１の導管４１には、図１のチューブ１３０を介して、第１の圧力発生部１３２から発生した空気圧が供給される。図５の第１の導管４１から供給される空気Ａ３によって、第１の収容部４２内のコラーゲンＫ１に圧力が生じる。
【００４７】
第２の収容部５２には、第２の導管５１が備えられ、図５に示すように、第２の導管５１は、第１の収容部４２内を通り第２の収容部５２に連結される。第２の導管５１には、図１のチューブ１３１を介して、第２の圧力発生部１３３から発生した空気圧が供給される。第２の導管５１から供給される空気Ａ４によって、第２の収容部５２内の幹細胞Ｃ１と培養液Ｂ１とに圧力が生じる。
【００４８】
第１の収容部４２内に生じた圧力によって、コラーゲンＫ１は、矢印Ｄ４、Ｄ５の方向に流れる。第２の収容部５２内に生じた圧力によって、幹細胞Ｃ１と培養液Ｂ１は、矢印Ｄ３の方向に流れる。
【００４９】
以上、説明した本実施例の生体材料噴射装置１００は、第１の導管４１と第１の流出口４３とを有し、第１の生体材料としてのコラーゲンＫ１を収容する第１の収容部４２と、第１の収容部４２内に設けられ、第２の導管５１と第２の流出口５３とを有し、第２の生体材料としての幹細胞Ｃ１と培養液Ｂ１を収容する第２の収容部５２と、第１の流出口４３に連結され、コラーゲンＫ１と幹細胞Ｃ１とを噴射する生体材料噴射ヘッド１２と、第１の導管４１に連結され、第１の圧力を発生させる第１の圧力発生部１３２と、第２の導管５１に連結され、第２の圧力を発生させる第２の圧力発生部１３３と、を備え、第２の圧力は、第１の圧力より高く、第１の流出口４３は、第２の流出口５３と対向する位置に設けられる。
【００５０】
この構成によれば、第２の圧力発生部１３３が発生する第２の圧力は、第１の圧力発生部１３２が発生する第１の圧力より高い。これにより、第２の圧力によって幹細胞Ｃ１を押し出そうとする力は、第１の圧力によってコラーゲンＫ１を押し出そうとする力より大きい。また、第１の流出口４３は、第２の流出口５３と対向する位置に設けられる。そのため、第２の流出口５３から流出する幹細胞Ｃ１は、対向する第１の流出口４３と第２の流出口５３の間にあるコラーゲンＫ１の領域に入り込もうとする。そのため、幹細胞Ｃ１をコラーゲンＫ１で覆う可能性が高くなる。
【００５１】
そして、幹細胞Ｃ１は、コラーゲンＫ１で覆われた状態で、第１の流出口４３に連結された生体材料噴射ヘッド１２に供給され、生体材料噴射ヘッド１２から噴射される。従って、幹細胞Ｃ１は、むき出しのまま噴射されることがないので、噴射された幹細胞Ｃ１が着弾したときに幹細胞Ｃ１が損傷したり、幹細胞Ｃ１が噴射されて飛行中に乾燥したり、あるいは幹細胞Ｃ１に細菌が付着したりすることを抑制できる。
【００５２】
また、第１の流出口４３、第２の流出口５３は円形状である。これにより、第２の流出口５３から流出する幹細胞Ｃ１の全体を第１の流出口４３から流出するコラーゲンＫ１によって覆うことができる。
【００５３】
また、第１の圧力発生部１３２と第２の圧力発生部１３３は、空気による第１の圧力、第２の圧力をそれぞれ発生する。これにより、第１の圧力と第２の圧力をそれぞれ一定に保持することができる。
【００５４】
（第２実施例）
第２実施例では、第２の流出口に導管を備えた生体材料カートリッジについて説明する。図７は、第２実施例における生体材料カートリッジ１１３ａを説明するための断面図である。第２実施例における生体材料噴射装置（不図示）は、第１実施例で説明した図１の生体材料噴射装置１００の生体材料カートリッジ１１３を生体材料カートリッジ１１３ａに置き換えたものである。
【００５５】
生体材料カートリッジ１１３ａは、第１実施例で説明した生体材料カートリッジ１１３の第２の流出口５３に導管５４を備えたものである。導管５４は、第１の収容部４２の図面下方向の壁面に接することがない。そのため、第１の収容部４２内のコラーゲンＫ１は、導管５４と第１の収容部４２の図面下方向の壁面との間を流れることができる。
【００５６】
このように、第２の流出口５３に導管５４を設けることによって、第２の流出口５３から流出される幹細胞Ｃ１を、矢印Ｄ４、Ｄ５の方向に流れる、導管５４と第１の収容部４２の図面下方向の壁面との間から流出されるコラーゲンＫ１で覆った状態で第１の流出口４３から流出する可能性を高くすることができる。
【００５７】
（第３実施例）
第３実施例では、第１の流出口の直径は、第２の流出口の直径より長い生体材料カートリッジについて説明する。図８は、第３実施例における生体材料カートリッジ１１３ｂを説明するための断面図である。
【００５８】
第３実施例における生体材料噴射装置（不図示）は、第１実施例で説明した図１の生体材料噴射装置１００の生体材料カートリッジ１１３を生体材料カートリッジ１１３ｂに置き換えたものである。第１の収容部４２ｂにおける第１の流出口４３ｂの直径Ｌ１は、第２の収容部５２ｂにおける第２の流出口５３ｂの直径Ｌ２より長い。
【００５９】
このようにすれば、第２の収容部５２ｂから流出する幹細胞Ｃ１をコラーゲンＫ１で覆った状態で第１の収容部４２ｂから流出させる可能性が高くなる。
【００６０】
以上、第１実施例から第３実施例で説明した生体材料噴射ヘッド１２に形成され生体材料の流路となる、供給口１４、キャビティ８、オリフィス７を構成して流入口となるための細溝２３、吐出室６、ノズル孔４などは、ガラス、シリコン、プラスチックから構成されている。そのため、金属イオンによって幹細胞Ｃ１が損傷することを抑制できる。
【００６１】
また、幹細胞Ｃ１がゲル状のコラーゲンＫ１に包まれることによって、生体材料噴射ヘッド１２のノズル孔４から噴射される液滴としての重量が増す。これにより、コラーゲンＫ１に包まれた幹細胞Ｃ１がノズル孔４から噴射されるときの飛行経路の直進性を保持しやすくなる。
【００６２】
また、幹細胞Ｃ１がゲル状のコラーゲンＫ１で包まれることにより、噴射される液滴の形状が変化することを抑制できる。さらに、噴射される液滴によって立体形状を形成しやすい。
【００６３】
第１実施例から第３実施例で説明した生体材料噴射ヘッド１２は、静電気を用いて吐出室６に形成された振動板５を振動させる方式であったが、ピエゾの振動を用いて振動板を振動させる方式であってもよい。
【図面の簡単な説明】
【００６４】
【図１】第１実施例における生体材料噴射装置の外観斜視図。
【図２】生体材料噴射ヘッドの斜視図と断面図。
【図３】生体材料噴射ヘッドの断面側面図。
【図４】図３のＡ−Ａ線における矢印方向から見た図。
【図５】第１実施例における生体材料カートリッジを説明するための断面図。
【図６】第１の圧力発生部、第２の圧力発生部を説明するための模式図。
【図７】第２実施例における生体材料カートリッジを説明するための断面図。
【図８】第３実施例における生体材料カートリッジを説明するための断面図。
【符号の説明】
【００６５】
１２…生体材料噴射ヘッド、４１…第１の導管、４２，４２ｂ…第１の収容部、４３，４３ｂ…第１の流出口、５１…第２の導管、５２，５２ｂ…第２の収容部、５３…第２の流出口、５４…導管、Ｃ１…幹細胞、１００…生体材料噴射装置、１３２…第１の圧力発生部、１３３…第２の圧力発生部、Ｌ１…第１の流出口の直径、Ｌ２…第２の流出口の直径。
【図１】
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【図２】
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【図３】
2010094106.tif 000005
【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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