(57)【要約】【課題】  抗炎症活性を示す食物又は食物由来物質により、各種免疫炎症性障害やメタボリック・シンドロームの予防や治療を行う。【解決手段】  （１）食用キノコからの熱水抽出物を含有することを特徴とする抗炎症活性を示す組成物又は（２）エルゴチオネイン、その薬理学的に許容される塩、又は加水分解によってエルゴチオネインとなる化合物を抗免疫炎症活性成分として含有することを特徴とする抗炎症活性を示す組成物を使用する。また、食用キノコの乾燥粉末から、熱水にて抽出する工程（１）、工程（１）で得られた混合物から上澄液を分離する工程（２）、及び前記上澄液を濃縮する工程（３）を経て、抗炎症活性を示す組成物を調製する。【選択図】  図４
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
食用キノコからの熱水抽出物を含有することを特徴とする抗炎症活性を示す組成物。
【請求項２】
キノコが、アンニンコウ（Ｇｒｉｆｏｌａ  ｇａｒｇａｌ）、マイタケ（Ｇｒｉｆｏｌａ  ｆｒｏｎｄｏｓａ）、ヒラタケ（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ  ｏｓｔｒｅａｔｕｓ）、エリンギ（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ  ｅｒｉｎｇｉｉ）、シイタケ（Ｌｅｎｔｉｎｕｌａ  ｅｄｏｄｅｓ）、ナメコ（Ｐｈｏｌｉｏｔａ  ｎａｍｅｋｏ）、ヤナギマツタケ（Ａｇｒｏｃｙｂｅ  ｃｙｌｉｎｄｒａｃｅａ）、オオイチョウタケ（Ｌｅｕｃｏｐａｘｉｌｌｕｓ  ｇｉｇａｎｔｅｕｓ）、ヒメマツタケ（Ａｇａｒｉｃｕｓ  ｂｌａｚｅｉ）、サウーバ（Ｔｒｉｃｈｏｌｏｍａ  ｓｐ．）及びキッタリア（Ｃｙｔｔａｒｉａ  ｅｓｐｉｎｏｓａｅ）からなる群から選択される少なくとも一種である、請求項２に記載の組成物。
【請求項３】
キノコがアンニンコウ（Ｇｒｉｆｏｌａ  ｇａｒｇａｌ）である、請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
キノコがアンニンコウ（Ｇｒｉｆｏｌａ  ｇａｒｇａｌ）の菌糸体である、請求項３に記載の組成物。
【請求項５】
抗炎症活性が、抗免疫炎症活性である、請求項１乃至４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項６】
抗免疫炎症活性が、炎症性腸又は胃腸障害（ＩＢＤ）を治療又は緩解させる活性である、請求項５に記載の組成物。
【請求項７】
抗炎症活性が、炎症性アディポサイトカインを抑制する活性である、請求項１乃至４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項８】
エルゴチオネイン、その薬理学的に許容される塩、又は加水分解によってエルゴチオネインとなる化合物を抗免疫炎症活性成分として含有することを特徴とする抗炎症活性を示す組成物。
【請求項９】
前記組成物が、食用キノコからの熱水抽出物である、請求項８に記載の組成物。
【請求項１０】
食用キノコの乾燥粉末から、熱水にて抽出する工程（１）、工程（１）で得られた混合物から上澄液を分離する工程（２）、及び前記上澄液を濃縮する工程（３）を含む、抗炎症活性を示す組成物の調製方法。
【請求項１１】
さらに、工程（３）で得られた濃縮物を、凍結又は噴霧乾燥する工程（４）を含む、請求項１０に記載の抗炎症活性を示す組成物の調製方法。
【請求項１２】
さらに、工程（３）で得られた濃縮物を、逆相ＨＰＬＣで分画する工程（５）を含む、請求項１０に記載の抗炎症活性を示す組成物の調製方法。
【請求項１３】
さらに、工程（５）で得られた活性画分を、濃縮する工程（６）、及び／又は、凍結又は噴霧乾燥する工程（７）を含む、請求項１２に記載の抗炎症活性を示す組成物の調製方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、各種免疫炎症性障害やメタボリック・シンドロームの予防や治療に有用な、食用キノコからの熱水抽出物を主成分とする抗炎症活性を示す組成物、そのような組成物の調製方法、及びエルゴチオネインを抗炎症活性成分として含有する組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
炎症の一種である免疫炎症性障害は、免疫系の不適切な活性化により生じる。即ち、免疫系は、本来はヒト等の身体にとって有害な侵入体に対してそれを排除するように働くべきところ、ヒト等それ自体の組織を攻撃し、損傷させて炎症を生起させてしまうのが、免疫炎症性障害である。免疫炎症性障害には、アトピー性皮膚炎、喘息、アレルギー性結膜炎、炎症性腸又は胃腸障害（ＩＢＤ）、多発性硬化症、リウマチ又はリウマチ様関節炎、全身性エリテマトーデス等が包含される。
【０００３】
免疫炎症性障害患者は、特に先進国において増加の一途をたどっている。また、免疫炎症性障害の治療法について、研究が進んできてはいるものの、ステロイド剤の使用が中心である。ステロイド剤には種々の副作用があるため、その使用は、医師が患者一人一人の状態を慎重に見極めながら、ステロイド剤の種類を変更し、また使用量をコントロールしなければならない。さらに、十分な治療効果が得られない患者がいることも事実である。新たなステロイド剤やステロイド剤に代わる新薬の開発も行われてきている。しかし、治療の選択肢を増やす意味でも、免疫炎症性障害の治療に有用なさらなる化合物や組成物の探索が求められている。
【０００４】
そのような状況下、特許文献１には、（ａ）グルココルチコイド受容体シグナル伝達活性を増加させる薬剤と、（ｂ）ＮＦ−κＢ経路等のシグナル伝達経路のシグナル伝達活性を調節する非ステロイド剤とを含む、免疫炎症性障害の治療に有用な組成物に関する発明が開示されている。特許文献１には、薬剤（ａ）の例として、プレドニゾロン及びデキサメタゾンのようなグルココルチコイド受容体アゴニストが記載されており（段落番号０００６）、また、非ステロイド剤（ｂ）の例には、エルゴチオネインも記載されている（段落番号００４８）。しかし、特許文献１の実施例にはエルゴチオネインを使用した例はなく、このような組成物の一成分としてエルゴチオネインを使用した場合に、その組成物が免疫炎症性障害に有効であるか否かは、特許文献１の記載のみからでは、かならずしも明らかであるとはいえない。
【０００５】
また、現代社会においては、メタボリック・シンドローム患者も増加の一途をたどっている。従って、メタボリック・シンドローム対策も、医療費抑制等の観点から、重要である。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特表２００７−５３８０８３
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
キノコ類は、種々の有用成分を含有することが知られている。そこで、本発明者等は、食用キノコからの抽出物が、抗炎症活性を示すか否かについて、研究を行った。その結果、１１種の食用キノコの熱水抽出物には、抗炎症活性成分が含有されていることが明らかとなった。
【０００８】
本発明の目的は、食用キノコの熱水抽出物を主成分とする、抗炎症活性を示す組成物を提供することにある。また、本発明のさらなる目的は、食用キノコに含有されている抗炎症活性成分を明らかにし、その抗炎症活性成分を含有する、各種炎症性障害の予防や治療に有用な組成物を提供することにある。加えて、本発明の目的は、食用キノコを原料とする、抗炎症活性を示す組成物の調製方法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者等は、食用キノコに抗炎症活性を示す成分が含有されているか否かについて研究行い、その活性成分がどのような化合物であるかを特定するためにさらに研究を重ね、本発明を完成させた。
【００１０】
即ち、本発明は、食用キノコからの熱水抽出物を含有することを特徴とする抗炎症活性を示す組成物に関する。
【００１１】
また、本発明は、エルゴチオネイン、その薬理学的に許容される塩、又は加水分解によってエルゴチオネインとなる化合物を抗炎症活性成分として含有することを特徴とする抗炎症活性を示す組成物に関する。
【００１２】
さらに、本発明は、食用キノコの乾燥粉末から、熱水にて抽出する工程（１）、工程（１）で得られた混合物から上澄液を分離する工程（２）、及び前記上澄み液を濃縮する工程（３）を含む、抗炎症活性を示す組成物の調製方法に関する。
【発明の効果】
【００１３】
本発明により、免疫炎症性障害を初めとする各種炎症性障害やメタボリック・シンドロームの予防や治療に有用な組成物が提供される。本発明の組成物の一種は、食用キノコから有用成分を熱水抽出することによって調製することができるので、安全性が非常に高い組成物であるということができる。
【００１４】
また、本発明の組成物は、その原材料又は由来が食品であるので、本発明の組成物を例えば免疫炎症性障害の治療に用いた場合に、ステロイド剤のような副作用は生起されないことが期待される。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】生体内における、炎症作用に関与する成分の生成とその生成の抑制について説明する図である。
【図２】肥満と炎症性アディポサイトカイン、メタボリック・シンドロームとの関係を説明する図である。
【図３】１１種の食用キノコからの熱水抽出物の抗酸化活性（ＯＲＡＣ）を測定した結果を示すグラフである。
【図４】１１種の食用キノコからの熱水抽出物の抗炎症活性を測定した結果を示すグラフである。
【図５】アンニンコウからの熱水抽出物のＨＰＬＣによる分画のチャートと、その分画によって得られた画分Ｆ１乃至Ｆ８の抗酸化活性（ＯＲＡＣ）及び抗炎症活性を測定した結果を示すグラフとを示す。
【図６】画分Ｆ３単独と画分Ｆ３にエルゴチオネインを添加した試料のＨＰＬＣのチャートと、画分Ｆ３の１Ｈ−ＮＭＲのチャートを示す。
【図７】１１種の食用キノコのエルゴチオネイン含量を測定した結果を示すグラフである。
【図８】アンニンコウの子実体と菌糸体のエルゴチオネイン含量を測定した結果を示すグラフである。
【図９】アンニンコウの子実体からの熱水抽出物の添加により、ＴＮＦ−αの刺激によって細胞から分泌されるインターロイキン６の量が変化することを示すグラフである。
【図１０】エルゴチオネインの添加により、ＴＮＦ−αの刺激によって細胞から分泌されるインターロイキン６の量が変化することを示すグラフである。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１６】
本発明に係る第一の組成物は、食用キノコからの熱水抽出物を含有し、抗炎症活性を示すもの、すなわち抗炎症性組成物である。
【００１７】
食用キノコは、当該キノコからの熱水抽出物が抗炎症活性を示す成分を含有するものである限り、特に限定されない。その熱水抽出物が抗炎症活性を示す成分を含有する食用キノコの例を挙げると、アンニンコウ（学名：Ｇｒｉｆｏｌａ  ｇａｒｇａｌ）、マイタケ（学名：Ｇｒｉｆｏｌａ  ｆｒｏｎｄｏｓａ）、ヒラタケ（学名：Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ  ｏｓｔｒｅａｔｕｓ）、エリンギ（学名：Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ  ｅｒｉｎｇｉｉ）、シイタケ（学名：Ｌｅｎｔｉｎｕｌａ  ｅｄｏｄｅｓ）、ナメコ（学名：Ｐｈｏｌｉｏｔａ  ｎａｍｅｋｏ）、ヤナギマツタケ（学名：Ａｇｒｏｃｙｂｅ  ｃｙｌｉｎｄｒａｃｅａ）、オオイチョウタケ（学名：Ｌｅｕｃｏｐａｘｉｌｌｕｓ  ｇｉｇａｎｔｅｕｓ）、ヒメマツタケ（学名：Ａｇａｒｉｃｕｓ  ｂｌａｚｅｉ）、サウーバ（学名：Ｔｒｉｃｈｏｌｏｍａ  ｓｐ．）及びキッタリア（学名：Ｃｙｔｔａｒｉａ  ｅｓｐｉｎｏｓａｅ）がある。
【００１８】
上記の食用キノコ中、マイタケ、ヒラタケ、エリンギ、シイタケ、ナメコ、オオイチョウタケ及びヤナギマツタケの７種は、日本において食用として栽培されているキノコであり、アンニンコウ、ヒメマツタケ、サウーバ及びキッタリアの４種は、南アメリカに生息している食用キノコである。
【００１９】
食用キノコとして、特に、アンニンコウが好ましい。また、アンニンコウは、菌糸体でも子実体でもよいが、より強い抗炎症活性を示すのは菌糸体であるので、菌糸体の方が好ましい。なお、アンニンコウは、南アメリカのパタゴニア地方のＮｏｔｏｆａｇｕｓ  ｓｐ．の枯れ木や倒木に発生する、担子菌類、ヒダナシタケ目、サルノコシカケ科、マイタケ属に属する木材腐食菌であり、近年、菌床栽培も可能となったものである。アンニンコウの菌床栽培方法は、例えば特開２００７−２０５６０に開示されている。
【００２０】
「食用キノコからの熱水抽出物」とは、熱水抽出物そのものに限定されない。例えば、熱水抽出物の濃縮液、熱水抽出物の凍結乾燥品といった、食用キノコからの熱水抽出物に、抗炎症活性が大きく損なわれることがないように処理を加えたもの、即ち、「食用キノコからの熱水抽出物に由来するもの」も、「食用キノコからの熱水抽出物」の概念に包含される。
【００２１】
「食用キノコからの熱水抽出物」を調製する方法は、その第一段階が熱水抽出であること以外は特に限定されない。好ましい方法は、抗炎症活性を示す組成物の調製方法として後記する。
【００２２】
本発明に係る第二の組成物は、エルゴチオネイン、その薬理学的に許容される塩、又は加水分解によってエルゴチオネインとなる化合物を抗炎症活性成分として含有する。ここで、エルゴチオネインは、式（１）によって表される。
【００２３】
【化１】
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【００２４】
「薬理学的に許容される塩」とは、例えば、前記式（１）において、水酸基の水素が、ナトリウム、カリウム、カルシウム等で置換されてアルカリ又はアルカリ土類金属塩となっているものやアンモニウム基で置換されてアンモニウム塩となっているもの、水酸基の水素やイミノ基の水素に、塩酸、硫酸等の無機酸、ｐ−トルエンスルホン酸等の有機酸、グリシン等のアミノ酸が付加した付加塩をいう。しかし、これらに限定されず、薬理学的に許容されるものであれば、いずれであってもよい。
【００２５】
「加水分解によってエルゴチオネインとなるとなる化合物」とは、例えば、前記式（１）中の水酸基が、保護基で保護されている、換言すれば、当該水酸基中の水素原子が、何らかの基によって置換されており、加水分解されると水酸基となる化合物をいう。このような「保護基で保護されている水酸基」の例としては、メトキシメチルエーテル基、テトラヒドロピラニルエーテル基、ターシャリーブチルエーテル基、アリルエーテル基、安息香酸エステル基、アセテート基（アセチルオキシ基）、ホルメート基、クロトネート基、ｐ−フェニル安息香酸エステル基、トリメチルアセチルオキシ基、ターシャリーブチルジメチルシリルオキシ基、ターシャリーブチルジフェニルシリルオキシ基、トリチルオキシ基、ベンジルオキシ基等が挙げられる。
【００２６】
本発明において、「エルゴチオネイン、その薬理学的に許容される塩、又は加水分解によってエルゴチオネインとなる化合物を抗炎症活性成分として含有する」とは、本発明の第二の組成物が示す抗炎症活性が、少なくともエルゴチオネインによって示され、好ましくは主としてエルゴチオネインによって示されるような量で、エルゴチオネイン、その薬理学的に許容される塩、又は加水分解によってエルゴチオネインとなる化合物が、組成物中に含有されていることをいう。
【００２７】
エルゴチオネインは、例えば、ヒスチジンをヘルシニン（ｈｅｒｃｙｎｉｎｅ）に変換し、これにシステインを反応させることで合成することができる。エルゴチオネイン等は、天然物から抽出することもできる。エルゴチオネイン等の抽出に使用する天然物は、エルゴチオネインを含有し、エルゴチオネインの抽出の際に同時に毒物が抽出されないものであれば、特に限定されない。エルゴチオネイン等の抽出に適する天然物の例として、食用キノコが挙げられる。また、食用キノコの具体例としては、先に本発明の第一の組成物に関する説明において記載した１１種のキノコが挙げられる。
【００２８】
本発明の第一の組成物は、食用キノコからの熱水抽出物を必須成分として含有し、その他の成分は含有してもしなくてもよい。また、本発明の第二の組成物は、エルゴチオネイン、その薬理学的に許容される塩、又は加水分解によってエルゴチオネインとなる化合物（以下、「エルゴチオネイン等」ということがある）を必須成分として含有し、さらにその他の成分とを含有するものである。その他の成分は、食用キノコからの熱水抽出物やエルゴチオネイン等の示す抗炎症活性を阻害しないものである限り、特に限定されない。本発明に係る第一又は第二の組成物は、経口投与を目的として、例えば錠剤、カプセル剤、顆粒剤、細粒剤、散剤等の剤型で、また、非経口投与を目的として、例えば注射剤、吸入剤、座剤、経皮吸収剤等の剤型で提供され得る。従って、このような分野で前記剤型とするために一般的に使用されている添加剤、賦形剤、結合剤、崩壊剤、溶剤等が、その他の成分として使用され得る。また、食用キノコからの熱水抽出物やエルゴチオネインと相乗又は相加効果を示す他の化合物も、その他の成分として使用され得る。
【００２９】
本発明の第一の組成物は、食用キノコからの熱水抽出物を、少なくともその組成物が抗炎症活性を示す量で含有するものである。この組成物は、食用キノコからの熱水抽出物を
主成分とするものであることが好ましい。ここで、「主成分とする」とは、当該組成物が示す抗炎症活性の３０％以上、好ましくは５０％以上、さらに好ましくは７０％以上が、食用キノコからの熱水抽出物によって発現されることをいう。また、本発明の第二の組成物は、エルゴチオネイン等を、少なくともその組成物が抗炎症活性を示す量で含有するものである。第二の組成物に複数の抗炎症活性成分が含有されている場合には、複数の抗炎症活性成分の中で、エルゴチオネインが主成分であることが好ましい。ここで、「主成分である」とは、当該組成物が示す抗炎症活性の３０％以上、好ましくは５０％以上、さらに好ましくは７０％以上が、エルゴチオネインによって発現されることをいう。
【００３０】
抗炎症活性とは、様々な炎症性障害を予防、治療又は緩解させる活性である。抗炎症活性の一例として、抗免疫炎症活性が挙げられる。免疫炎症は、免疫系が本来は攻撃すべきでない生物体自身の組織を標的として攻撃し、損傷を与えてしまうために生じる。このような免疫炎症を生じる免疫炎症性障害には、免疫系が攻撃する組織の相違等に基づき、様々な病名が与えられている。その限定されない例を挙げると、以下の通りである。
【００３１】
尋常性アクネ、急性呼吸逼迫症候群、アジソン病、アレルギー性鼻炎、アレルギー性眼内炎症病、ＡＮＣＡ関連小血管の血管炎、強直性脊椎炎、関節炎、喘息、アテローム性硬化症、アトピー性皮膚炎、自己免疫肝炎、自己免疫溶血性貧血、自己免疫肝炎、ベーチェット病、ベル麻痺、水泡性類天疱瘡、大脳虚血症、慢性閉塞性肺病、硬変、コーガン症候群、接触皮膚炎、ＣＯＰＤ、クローン病、クッシング症候群、皮膚筋炎、真性糖尿病、円板状エリテマトーデス、好酸球性筋膜炎、結節性紅斑、剥奪性皮膚炎、線維筋痛、巣状糸球体硬化症、巣状分節状糸球体硬化症、巨細胞動脈炎、痛風、痛風性関節炎、移植片対宿主病、手湿疹、ヘーノホ・シェーンライン紫斑病、妊娠性疱疹、多毛症、特発性角膜強膜炎、特発性肺線維症、特発性血小板減少性紫斑病、免疫性血小板減少性紫斑病、炎症性腸又は胃腸障害（ＩＢＤ）、炎症性皮膚病、扁平苔癬、ループス腎炎、リンパ腫気管気管支炎、斑状浮腫、多発性硬化症、重症筋無力症、筋炎、非特異的線維形成性肺病、骨関節炎、膵臓炎、妊娠性類天疱瘡、尋常性天疱瘡、歯周炎、結節性多発性動脈炎、リウマチ性多発性筋炎、掻痒、掻痒・炎症陰嚢、乾癬、乾癬性関節炎、肺ヒストプラズマ症、リウマチ様関節炎、再発性多発性軟骨炎、サルコイドーシスによって引き起こされた酒さ、強皮症によって引き起こされた酒さ、スイート症候群によって引き起こされた酒さ、全身エリテマトーデスによって引き起こされた酒さ、蕁麻疹によって引き起こされた酒さ、帯状疱疹関連疼痛によって引き起こされた酒さ、サルコイドーシス、強皮症、分節状糸球体硬化症、肺血病ショック症候群、肩腱炎又は滑液包炎、シェーグレン症候群、スティル病、発作誘導脳細胞死滅、水痘病、全身エリテマトーデス、全身性硬化症、高安動脈炎、側頭動脈炎、毒性表皮壊死病、移植片拒絶及び移植片拒絶関連症候群、結核、Ｉ型糖尿病、潰瘍性結腸炎、ブドウ膜炎、血管炎及びヴェーゲナー肉芽腫症。
【００３２】
上記のような免疫炎症性障害の中、本発明の組成物は、特に、炎症性腸又は胃腸障害（ＩＢＤ）、さらには炎症性腸障害に有用である。
【００３３】
図１に示すように、生体内では、好中球によって生成された次亜塩素酸が、アミン（例えばリジン）と反応してアミン塩化物（例えばクロラミン）を生成させ、これがチロシンと反応して炎症作用に関与する３−クロロチロシンを生成させるという反応が起こっている。本発明に係る第一及び第二の組成物は、次亜塩素酸によるリジンの塩化を抑制し、これによって抗炎症活性を示すと考えられている。
【００３４】
本発明の組成物は、メタボリック・シンドロームの予防や治療にも有用である。図２に示すように、肥満の脂肪組織からは、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ−α）等の炎症性アディポサイトカインが分泌される。その結果、マクロファージが活性化され、インターロイキン６（ＩＬ−６）等のケモカインが分泌されるようになる。即ち、脂肪組織の肥大によるアディポサイトカイン等のサイトカインの分泌異常がマクロファージの活性化を誘発して、相互刺激状態となる。その結果、体内全体が慢性の炎症刺激状態となる。このような病態に対し、本発明に係る第一及び第二の組成物は、細胞からのＩＬ−６の分泌を抑制し、その結果として炎症性アディポサイトカインの量を低減させるので、メタボリック・シンドロームの予防や治療に有用なのである。
【００３５】
本発明の第一の組成物及び第二の組成物の摂取量は、特に限定されないが、成人１日当たり、エルゴチオネインの量に換算して、１２乃至４８ｍｇであることが好ましい。
【００３６】
本発明は、抗炎症活性を示す組成物の調製方法にも関する。この方法で使用する原料は、食用キノコの乾燥粉末である。この方法で使用される食用キノコの例は、先に、本発明第一の組成物に関する説明において、好適に使用されるキノコの例として挙げられたものと同様である。食用キノコの乾燥方法は、例えば、キノコに、４５℃の温風を一昼夜、その後７０℃の温風を１時間あてるというものである。粉末化は、例えば、乾燥後のキノコをミキサーで粉砕することによって行う。
【００３７】
本発明の方法では、抽出溶媒として熱水を使用する。熱水とは、約９０乃至１００℃の水である。熱水抽出は、食用キノコの乾燥粉末を熱水に入れ、温度を保ちながら、キノコと熱水との混合物を攪拌することによって行う（工程（１））。
【００３８】
抽出、即ち工程（１）が終了したら、工程（１）で得られた混合物から上澄液を分離（工程（２））。この工程は、好ましくは遠心分離によってキノコの乾燥粉末を沈澱させた後に行う。また、この工程は、工程（１）で得られた混合物を篩を通過させることによって、キノコの乾燥粉末を分離・除去することによって行ってもよい。
【００３９】
工程（１）及び（２）は、１回でもよいが、通常は工程（２）の後に残留したキノコに新たな熱水を加え、さらに、攪拌抽出（工程（１））及び上澄液の分離（工程（２））を行う。工程（１）及び（２）は、例えば工程（１）における攪拌時間が３０分間程度であれば、好ましくは２乃至５回程度、特に好ましくは３又は４回行う。
【００４０】
工程（２）で得られた上澄液中の有効成分濃度は低いので、工程（３）にて、上澄液を濃縮する。濃縮は、有効成分、例えばエルゴチオネインが分解されない条件で行う限り、その方法は限定されない。
【００４１】
濃縮工程（３）の後に、凍結又は噴霧乾燥工程（工程（４））も実施することが好ましい。なお、凍結又は噴霧乾燥は、この分野で通常行われている条件及び方法で行えばよい。
【００４２】
工程（３）で得られた濃縮物を、例えば逆相高速液体クロマトグラフィ（逆相ＨＰＬＣ）で分画する工程（５）を実施することも好ましい。これにより、有効成分濃度が高められ得る。さらに、工程（５）で得られた抗炎症活性を示す画分を、工程（３）と同様に濃縮する工程（６）、及び／又は、工程（４）と同様に凍結又は噴霧乾燥する工程（７）を実施することも好ましい。
【実施例】
【００４３】
以下に、実施例により、本発明を具体的に説明する。
【００４４】
（実施例１）食用キノコからの有効成分の熱水抽出
表１に示す１１種の食用キノコ（それぞれ子実体）からの有効成分の熱水抽出を行った。
【００４５】
【表１】
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【００４６】
（１）キノコの乾燥粉末の調製
１１種の食用キノコそれぞれに、４５℃の温風を一昼夜あて、その後７０℃の温風を１時間あてた。得られた乾燥キノコをミキサーに入れ、約１分間粉砕した。
【００４７】
（２）熱水抽出方法
キノコの乾燥粉末１０ｇを、２００ｍｌの熱水（約９０℃）に入れ、得られたキノコ／熱水混合物を、３０分間、緩やかに攪拌した。キノコ／熱水混合物を遠心分離に掛け（１０，０００ｒｐｍ、１０分間）、上澄みと沈澱とに分けた。
【００４８】
沈澱を２００ｍｌの熱水（約９０℃）に入れ、得られたキノコ／熱水混合物を、３０分間、緩やかに攪拌した。キノコ／熱水混合物を遠心分離に掛け（１０，０００ｒｐｍ、１０分間）、上澄みと沈澱とに分けた。この工程をさらに２回行った。
【００４９】
全ての上澄液を合わせ、減圧条件下で約１００ｍｌ以下となるまで濃縮し、次いで、凍結乾燥を行った。
【００５０】
原料として使用したキノコの乾燥粉末重量に対する、凍結乾燥後の熱水抽出物重量の割合を、抽出物収率として表１に示した。
【００５１】
（実施例２）食用キノコからの熱水抽出物の抗酸化活性の測定
実施例１で調製された熱水抽出物を用い、それらの抗酸化活性を、活性酸素吸収能力（Ｏｘｙｇｅｎ  Ｒａｄｉｃａｌ  Ａｂｓｏｒｂａｎｃｅ  Ｃａｐａｃｉｔｙ、ＯＲＡＣ）法で測定した。具体的には、次のようにして測定した。
【００５２】
先ず、１６７ｎＭ濃度で蛍光色素（ｄｉｓｏｄｉｕｍ  ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ）を含有する蛍光色素溶液（溶媒：７５ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．４））を調製した。また、各キノコからの熱水抽出物（凍結乾燥したもの）は、水に溶解させ、熱水抽出物濃度が１ｍｇ／ｍｌの溶液とし、次いでこれを１０倍希釈した。さらに、１５０ｍＭ濃度でＡＡＰＨ（２，２&#884;−アゾビス（２−アミジノプロパン）ジヒドロクロリド）を含有する溶液（溶媒：７５ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．４））を調製した。
【００５３】
蛍光色素溶液１５０μｌに、熱水抽出物溶液２５μｌを加え、３７℃にて１０分間反応させた。ブランクについては、熱水抽出物溶液の代わりに水を使用した。標準試料としては、Ｔｒｏｌｏｘ（６−ｈｙｄｒｏｘｙ−２，５，７，８−ｔｅｔｒａｍｅｔｈｙｌｃｈｒｏｍａｎ−２−ｃａｒｂｏｘｙｌｉｃ  ａｃｉｄ；ビタミンＥのアナログ）を使用した。次いで、ＡＡＰＨ溶液２５μｌを加えた。励起波長４８５ｎｍ、蛍光波長５３８ｎｍにて、蛍光強度を測定した。
【００５４】
蛍光強度の測定は、５分毎に６０分まで測定した。検体、標準物質及びブランクのそれぞれについて、測定時間（横軸）と蛍光強度（縦軸）をプロットし、検体又は標準物質の蛍光強度の曲線下面積（Ａｒｅａ  Ｕｎｄｅｒ  ｔｈｅ  Ｃｕｒｖｅ；ＡＵＣ）とブランクのＡＵＣとの差（ｎｅｔ  ＡＵＣ）を求めた。標準物質のｎｅｔ  ＡＵＣより検体のｎｅｔ  ＡＵＣに相当するＴｒｏｌｏｘ濃度を求め、検体１ｇ当たりのＴｒｏｌｏｘのマイクロモル数（μｍｏｌｅ  ＴＥ／ｇ）をもってＯＲＡＣ値とした。なお、計算式は、次の通りである。
【００５５】
【数１】
2010189284.tif 000005
【００５６】
結果を図３に示す。図３から明らかなように、アンニンコウ、マイタケ、ヤナギマツタケ、オオイチョウタケ、ヒメマツタケ及びサウーバからの熱水抽出物が、強い抗酸化活性を示した。他のキノコも、抗酸化活性を示した。
【００５７】
（実施例３）食用キノコからの熱水抽出物の抗炎症活性の測定
実施例１で調製した熱水抽出物を用い、それらの抗炎症活性を、クロロ化抑制評価法で測定した。この方法は、ミエロペルオキシダーゼにより生成される次亜塩素酸（ＨＯＣｌ）とリジン残基のモデル化合物であるベンゾイル・グリシル・リジン（Ｂｅｎｚｏｙｌ  Ｇｌｙｃｙｌ  Ｌｙｓｉｎｅ；ＢＧＬ）との反応により生成するＮ−クロロベンゾイル・グリシル・リジン（Ｎ−Ｃｈｌｏｒｏｂｅｎｚｏｙｌ  Ｇｌｙｃｙｌ  Ｌｙｓｉｎｅ；Ｎ−ＣｌＢＧＬ）の量を指標として、クロロ化の抑制率を求めるものである。具体的には、次のようにして測定した。
【００５８】
固形分（キノコの熱水抽出物の凍結乾燥品）を０．２ｍｇ／ｍｌ濃度で含有する水溶液に、ＢＧＬは１ｍＭ濃度となるように、また、ＨＯＣｌは２ｍＭ濃度となるように添加した。得られた溶液を、３７℃にて６０分間インキュベートした。次いで、ＨＰＬＣにて生成したＮ−ＣｌＢＧＬの量を測定した。  
【００５９】
ＨＰＬＣの条件は、次の通りであった。
（ＨＰＬＣ条件）
カラム：  ＯＤＳ−ＨＧ−５  Ｃ１８（４．６ｍｍφ×２５０ｍｍ）（野村化学製）
Ａ液：  Ｈ２Ｏ／０．０５％ＣＨ３ＣＯＯＨ  
Ｂ液：  ＭｅＯＨ／０．０５％ＣＨ３ＣＯＯＨ  
流速：  ０．８ｍｌ／分
検出：  ２４５ｎｍ
【００６０】
得られたピーク面積から、次のようにして抑制率を算出した。
【００６１】
【数２】
2010189284.tif 000006
【００６２】
結果を図４に示す。図４から明らかなように、アンニンコウ、シイタケ、ヤナギマツタケ及びオオイチョウタケからの熱水抽出物が、強い抗炎症活性を示した。他のキノコも、抗炎症活性を示した。
【００６３】
（実施例４）アンニンコウからの熱水抽出物中の有効成分の特定
（１）アンニンコウからの熱水抽出物のＨＰＬＣによる分画
アンニンコウからの熱水抽出物（凍結乾燥品）をＨＰＬＣにかけ、分画した。ＨＰＬＣの条件は、次の通りであった。  
【００６４】
（ＨＰＬＣ条件）
カラム：  ＯＤＳ−ＨＧ−５  Ｃ１８（８ｍｍφ×２５０ｍｍ）（野村化学製）
Ａ液：  Ｈ２Ｏ／０．０１％トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）  
Ｂ液：  ＭｅＯＨ／０．０１ＴＦＡ  
流速：  ２．０ｍｌ／分
分画の指標：  ２６０ｎｍにおける吸光度
【００６５】
図５に示すように、２６０ｎｍにおける吸光度を指標として、流出液を八つの画分（Ｆ１乃至Ｆ８）に分けた。  
【００６６】
（２）各画分の抗酸化活性の測定
キノコからの熱水抽出物（凍結乾燥したもの）の代わりに、Ｆ１乃至Ｆ８のそれぞれについての乾燥物を用いたこと以外は実施例２と同様の方法で、ＯＲＡＣ値を求めた。結果を図５に示す。図５から明らかなように、Ｆ３が、強い抗酸化活性を示した。
【００６７】
（３）各画分の抗炎症活性の測定
キノコからの熱水抽出物（凍結乾燥したもの）の代わりに、Ｆ１乃至Ｆ８のそれぞれについての乾燥物を用いたこと以外は実施例３と同様の方法で、Ｎ−ＣｌＢＧＬの量を測定し、クロロ化抑制率を求めた。結果を図５に示す。図５から明らかなように、Ｆ３が、強い抗炎症活性を示した。
【００６８】
（４）Ｆ３画分に含有されている有効成分の特定
（４−１）ＨＰＬＣによる同定
画分Ｆ３と、画分Ｆ３にエルゴチオネインを添加した試料とを、ＨＰＬＣにかけ、流出液の２６０ｎｍにおける吸光度を測定した。ＨＰＬＣの条件は、次の通りであった。
【００６９】
（ＨＰＬＣ条件）
カラム：  Ｄｅｖｅｌｏｓｉｌ  ＯＤＳ−ＨＧ−５（４．６ｍｍφ×２５０ｍｍ）（野村化学製）２本をタンデムに接続した。
溶離液：  Ｈ２Ｏ／０．１％トリエチルアミン（ＴＥＡ）
流速：  ０．８ｍｌ／分
【００７０】
図６に示すように、画分Ｆ３単独と画分Ｆ３にエルゴチオネインを添加した試料のいずれにおいても、保持時間約９分のところに吸光度のピークがあった。従って、画分Ｆ３中の有効成分は、エルゴチオネインであると同定された。
【００７１】
（４−２）１Ｈ−ＮＭＲによる特定
画分Ｆ３の乾燥物をＤ２Ｏ（重水）に溶解させ、それを１Ｈ−ＮＭＲ（Ｂｒｕｋｅｒ  ＡＲＸ４００（４００ＭＨｚ；Ｂｒｕｋｅｒ，Ｋａｒｌｓｒｕｈｅ，Ｇｅｒｍａｎｙ））によって分析した。
【００７２】
１Ｈ−ＮＭＲのチャートを図６に示す。このチャートにおける各シグナルが、標品（エルゴチオネイン）の各シグナルと一致することから、画分Ｆ３中の有効成分は、エルゴチオネインであると同定された。
【００７３】
（実施例５）食用キノコのエルゴチオネイン含有量の測定
実施例１で使用した食用キノコ１１種（それぞれ子実体）から熱水抽出を行い、各キノコのエルゴチオネイン含有量を測定した。
【００７４】
（１）熱水抽出方法
キノコの乾燥粉末１０ｇを、２００ｍｌの熱水（約９０℃）に入れ、得られたキノコ／熱水混合物を、３０分間、緩やかに攪拌した。キノコ／熱水混合物を遠心分離に掛け（１０，０００ｒｐｍ、１０分間）、上澄みと沈澱とに分けた。
【００７５】
沈澱を２００ｍｌの熱水（約９０℃）に入れ、得られたキノコ／熱水混合物を、３０分間、緩やかに攪拌した。キノコ／熱水混合物を遠心分離に掛け（１０，０００ｒｐｍ、１０分間）、上澄みと沈澱とに分けた。この工程をさらに２回行った。
【００７６】
全ての上澄液を合わせ、濃縮後、１００ｍｌにメス・アップした。これを、Ｓｅｐ  Ｐａｋ（Ｃ１８）（ウォーターズ社製）にて前処理した後、ＨＰＬＣにかけた。ＨＰＬＣの条件は、次の通りであった。
【００７７】
（ＨＰＬＣ条件）
カラム：    ＯＤＳ−ＨＧ−５  Ｃ１８（４．６ｍｍφ×２５０ｍｍ）（野村化学製）２本をタンデムに接続した。
溶離液：  Ｈ２Ｏ／０．１％トリエチルアミン（ＴＥＡ）
流速：  ０．８ｍｌ／分
有効成分含有画分の特定のための指標：  ２６０ｎｍにおける吸光度
【００７８】
有効成分が含まれている画分を集め、エルゴチオネイン量を測定し、食用キノコ１ｇ当たりのエルゴチオネイン量に換算した。結果を図７に示す。図７から明らかなように、エルゴチオネイン含量が多いのは、アンニンコウ、ヒラタケ及びオオイチョウタケであった。
【００７９】
（実施例６）アンニンコウの菌糸体と子実体との、エルゴチオネイン含有量の比較
キノコの乾燥粉末として、アンニンコウの子実体の乾燥粉末と菌糸体の乾燥粉末とをそれぞれ使用したこと以外は、実施例５と同様の方法により、エルゴチオネイン含量を求めた。結果を図８に示す。図８から明らかなように、エルゴチオネイン含量が多いのは、菌糸体であった。
【００８０】
（実施例７）脂肪細胞のＴＮＦ−αによる酸化障害に対する、アンニンコウからの熱水抽出物の防御作用の測定
マウス脂肪前駆細胞を用い、ＴＮＦ−αによる酸化障害に対するアンニンコウからの熱水抽出物の抑制効果を、培養上清中のインターロイキン６の量を指標として測定した。具体的には、次のようにして測定した。
【００８１】
２４ウェル・プレートを用い、マウス脂肪前駆細胞（３Ｔ３−Ｌ１）を、ＤＭＥＭ培地で培養（３７℃；５％ＣＯ２；細胞数：１〜２×１０５個／ウェル）した。細胞がコンフルエントになった後に、３−イソブチル−１−メチルキサンチン（ＭＩＸ）を０．２５μＭ、デキサメタゾン（ＤＥＸ）を１μＭ、そしてインスリンを２μＭ濃度で含有する培地に交換し、分化誘導を行った。３日間培養を行った後、インスリンを２μＭ濃度で含有する培地に交換し、分化促進を行った。以降、２日おきに、この分化促進用培地を交換した。
【００８２】
分化誘導から９日後に、アンニンコウの子実体からの熱水抽出物の凍結乾燥品（実施例１で調製したもの）を、０．０ｍｇ／ｍｌ（２検体）、０．５ｍｇ／ｍｌ、１．０ｍｇ／ｍｌ又は２．０ｍｇ／ｍｌとなる量で、培地に添加し、培養（３７℃；５％ＣＯ２）を続けた。
【００８３】
熱水抽出物の凍結乾燥品の添加から２４時間後に、当該凍結乾燥品を添加しなかった２検体中の１検体を除く４検体に、ＴＮＦ−αを１０ｎｇ／ｍｌとなる量で培地に添加し、培養（３７℃；５％ＣＯ２）を続けた。
【００８４】
ＴＮＦ−αの添加から２０時間後に、各検体から培養上清を回収し、抗体チップ（名古屋大学での試作品）を用い、インターロイキン６（ＩＬ−６）の量を測定した。ＩＬ−６６の測定方法は、次の通りであった。
【００８５】
（ＩＬ−６の測定方法）
（１）アゾポリマーフィルムを形成したスライドグラスにマウスＩＬ−６抗体を光固定化した抗体チップに、１％ＢＳＡ（牛血清アルブミン）含有ＰＢＳを７５μｌ滴下し、次いでその液滴上にＧＡＰガラスを被せた。ＧＡＰガラスの上から、１５．０Ｖの光線を３０分間照射し、ブロッキングを行った。ＧＡＰガラスをはずし、抗体チップを０．０１％Ｔｗｅｅｎ２０含有ＰＢＳ（ＴＰＢＳ）で２回洗浄し、次いでＰＢＳにとおして濯ぎ、遠心分離に供して乾燥させた。
（２）ＩＬ−６標準品を０．５％ＢＳＡ含有ＴＰＢＳで希釈し、ＩＬ−６含有量が０乃至１ｎｇ／ｍｌの希釈液を調製した。
（３）培養上清は、０．５％ＢＳＡ含有ＴＰＢＳで１乃至１０倍に希釈して使用した。
（４）（１）に記載した抗体チップのマウスＩＬ−６抗体をコーティングした個所に、ＩＬ−６標準品又は培養上清を、１μｌ滴下した。その後、室温の湿潤箱内で６０分間インキュベートした。
（５）抗体チップを０．０１％Ｔｗｅｅｎ２０含有ＰＢＳ（ＴＰＢＳ）で２回洗浄し、次いでＰＢＳにとおして濯ぎ、遠心分離に供して乾燥させた。
（６）ビオチン化マウスＩＬ−６抗体を０．５μｇ／ｍｌの濃度で含有する０．５％ＢＳＡ含有ＴＰＢＳを調製した。これを、（５）が終了した抗体チップのマウスＩＬ−６抗体をコーティングした個所に、７５μｌ滴下した。その後、その液滴上にＧＡＰガラスを被せ、室温の湿潤箱内で６０分間インキュベートした。
（７）抗体チップを０．０１％Ｔｗｅｅｎ２０含有ＰＢＳ（ＴＰＢＳ）で２回洗浄し、遠心分離に供して乾燥させた。
（８）ストレプトアビジンＡＰを、ゼラチンを０．０３％濃度で含有するＴＰＢＳで１０，０００倍希釈した。これを６ｍｌ取って反応Ｂｏｘに入れ、その中に、（７）が終了した抗体チップを浸した。５０ｒｐｍで振とうしながら、室温にて６０分間インキュベートした。
（９）抗体チップを０．０１％Ｔｗｅｅｎ２０含有ＰＢＳ（ＴＰＢＳ）で２回洗浄し、次いでＰＢＳにとおして濯ぎ、遠心分離に供して乾燥させた。
（１０）化学発光溶液ＣＤＰ−Ｓｔａｒ（ＴＲＯＰＩＸ製）３２０μｌを抗体チップに滴下し、カバー・シールを貼った。
（１１）Ｌｕｍｉ  Ｖｉｗｅｒ（アイシン精機製）にて、ストレプトアビジンを検出した。ＩＬ−６標準品を用いた場合のデータにより検量線を作成し、培養上清中のＩＬ−６量を算出した。
【００８６】
結果を図９に示す。
【００８７】
図９から明らかなように、アンニンコウの子実体からの熱水抽出物を添加することにより、培養上清中に分泌されるインターロイキン６の量が減少した。即ち、当該熱水抽出物は、ＴＮＦ−αによる酸化障害を抑制した。
【００８８】
（実施例８）脂肪細胞のＴＮＦ−αによる酸化障害に対するエルゴチオネインの防御作用の測定
アンニンコウの子実体からの熱水抽出物の代わりに、エルゴチオネインを、０．１ｍＭとなるよう、２．５ｍＭとなる量又は５．０ｍＭとなる量で使用したこと以外は、実施例７と同様の実験を行った。結果を図１０に示す。
【００８９】
図１０から明らかなように、エルゴチオネインを添加することにより、培養上清中に分泌されるインターロイキン６の量が減少した。即ち、エルゴチオネインは、ＴＮＦ−αによる酸化障害を抑制した。
【産業上の利用可能性】
【００９０】
本発明に係る組成物は、免疫炎症性障害を初めとする各種炎症性障害やメタボリック・シンドロームの予防や治療に使用することができる。
【図９】
2010189284.tif 000007
【図１】
2010189284.tif 000008
【図２】
2010189284.tif 000009
【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図１０】
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