(57)【要約】      （修正有）【課題】表面を血液適合性にコーティングするための基質、そのコーティング方法、および望まない反応を防止または低減するための表面上でのそれらの使用方法の提供。【解決手段】選択された血液適合性表面を調整するための、糖ユニットであるN−アシルグルコサミンまたはＮ−アシルガラクトサミンを含む、オリゴ糖および多糖類、ならびにそれらオリゴ糖および／または多糖類の使用、ならびに、ヘパリン、ヘパラン硫酸およびキトサンの一般的な生合成前駆体物質を模範とする、前記オリゴ糖および／または多糖類を伴った表面の血液適合性コーティングの方法。さらに、前記オリゴ糖および／または多糖類の生産方法、および、血液適合性コートされた表面の様々な利用に関する。また特に、抗増殖性、抗炎症性および／または抗血栓性の活性物質を含む血液適合性コーティングを付着したステントにおける前記オリゴ糖および／または多糖類の使用方法。【選択図】図１
2010189649.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記の一般式ＩａおよびＩｂで表される化合物
一般式Ｉａ
【化１】
2010189649.tif 000018
一般式Ｉｂ
【化２】
2010189649.tif 000019
ｎは、４から１０５０の間の整数であり、
ＹおよびＺは、互いに独立に、−ＣＨＯ，−ＣＯＣＨ３，−ＣＯＣ２Ｈ５，−ＣＯＣ３Ｈ７，−ＣＯＣ４Ｈ９，−ＣＯＣ５Ｈ１１，−ＣＯＣＨ（ＣＨ３）２，−ＣＯＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２，−ＣＯＣＨ（ＣＨ３）Ｃ２Ｈ５，−ＣＯＣ（ＣＨ３）３，−ＣＨ２ＣＯＯ−，−Ｃ２Ｈ４ＣＯＯ−，−Ｃ３Ｈ６ＣＯＯ−，−Ｃ４Ｈ８ＣＯＯ−，の基（groups）を表す化合物、および当該化合物の塩。
【請求項２】
請求項１の一般式Ｉａの化合物であって、
前記ＹおよびＺは、互いに独立に、−ＣＯＣＨ３，−ＣＯＣ２Ｈ５，−ＣＯＣ３Ｈ７，−ＣＨ２ＣＯＯ−，−Ｃ２Ｈ４ＣＯＯ−，−Ｃ３Ｈ６ＣＯＯ−，の基を表す化合物、および当該化合物の塩。
【請求項３】
請求項１の一般式Ｉｂの化合物であって、
前記Ｙは、−ＣＯＣＨ３，−ＣＯＣ２Ｈ５，−ＣＯＣ３Ｈ７，の基を表す化合物、および当該化合物の塩。
【請求項４】
前記一般式Ｉａの化合物の製造方法であって、
ヘパラン硫酸および／またはヘパラン硫酸ヘパリンが、実質的に完全に脱硫酸化され、続いて酸によってN−アシル化されていることを特徴とする方法。
【請求項５】
前記一般式Ｉｂの化合物の製造方法であって、以下の、
ａ）キトサンは部分的にＮ−カルボキシアルキル化され、続いてＮ−アシル化され、または、
ｂ）キトサンは部分的にＮ−アシル化され、続いてＮ−カルボキシアルキル化され、または、
ｃ）キトサンは部分的に脱アセチル化され、続いてＮ−カルボキシアルキル化されること、
を特徴とする方法。
【請求項６】
請求項５の製造方法において、
実質的に前記キトサンまたはキチンのアミノ基の半分はアシル化され、それらの他の半分はカルボキシアルキル化されること、
を特徴とする方法。
【請求項７】
請求項４〜６のいずれか一つの方法によって得られうる前記一般式Ｉａおよび／またはＩｂの化合物。
【請求項８】
請求項１、２、３または７のいずれか一つの前記一般式Ｉａおよび／またはＩｂの化合物であって、二糖ユニット（disaccharide unit）当たりの硫酸基（sulphate groups）の含有量が０．００５未満であること、
を特徴とする化合物。
【請求項９】
請求項１、２、３、７、または８のいずれか一つの前記一般式Ｉａおよび／またはＩｂの化合物であって、遊離アミノ基の含有量が、前記−ＮＨ−Ｙ基の全てに関して１％未満であること、
を特徴とする化合物。
【請求項１０】
請求項１から３、７から９のいずれか一つの前記一般式Ｉａおよび／またはＩｂの化合物であって、前記糖ユニット（sugar units）の順番が実質的に変換されていること、
を特徴とする化合物。
【請求項１１】
請求項１から３、７から１０のいずれか一つの前記一般式Ｉａの化合物であって、前記全てのアミノ基の４５％から５５％が前記Ｙの基を有しており、残りのアミノ基が前記Ｚの基を有すること、
を特徴とする化合物。
【請求項１２】
医療用機器の血液適合性（hemocompatible）の表面を生成するための、前記一般式Ｉａおよび／またはＩｂの化合物の使用方法。
【請求項１３】
請求項１２の使用方法であって、前記一般式Ｉａおよび／またはＩｂの化合物は、前記表面に共有結合していること、
を特徴とする使用方法。
【請求項１４】
表面の血液適合性コーティングのためのオリゴ糖および／または多糖類の使用方法であって、
前記オリゴ糖および／または多糖類は、糖ユニットであるＮ−アシルグルコサミンまたはＮ−アシルガラクトサミンを４０％から６０％の間で含み、実質的に残りの糖ユニットは、糖ユニット当たり一つのカルボキシル基を有すること、
を特徴とする使用方法。
【請求項１５】
請求項１４の使用方法であって、
前記オリゴ糖および／または多糖類の実質的に各２番目の糖ユニットは、Ｎ−アシルグルコサミンまたはＮ−アシルガラクトサミンであること、
を特徴とする使用方法。
【請求項１６】
請求項１４または１５の使用方法であって、Ｎ−アシルグルコサミン  Ｎ−アセチルグルコサミンの場合、および、Ｎ−アシルガラクトサミン Ｎ−アセチルガラクトサミンの場合が考慮されること、
を特徴とする使用方法。
【請求項１７】
請求項１４、１５、または１６の使用方法であって、前記残りの糖ユニットがウロン酸であること、
を特徴とする使用方法。
【請求項１８】
請求項１７の使用方法において、前記ウロン酸は実質的にＤ−グルクロン酸おおびＬ−イズロン酸であること、
を特徴とする使用方法。
【請求項１９】
請求項１２から１８のいずれか一つの使用方法において、前記糖ユニットの順番が実質的に変更されていること、
を特徴とする使用方法。
【請求項２０】
請求項１４から１９のいずれか一つの使用方法であって、前記オリゴ糖および／または多糖類は、実質的に脱硫酸化および実質的にＮ−アシル化されたヘパラン硫酸、および部分的にＮ−カルボキシアルキル化およびＮ−アシル化されたキトサンであること、
を特徴とする使用方法。
【請求項２１】
医療用機器の生物的および／または人工的な表面の血液適合性コーティングのための方法であって、以下の：
ａ）医療用機器の表面を準備するステップ、
ｂ）前記表面の血液適合性層（layer）として、請求項１から３、７から１１、１４から２０のいずれか一つの、少なくとも一つのオリゴ糖および／または多糖類を付着するステップ、あるいは、
ｂ’）前記医療用機器の表面または前記血液適合性層に生物的安定層を付着するステップ、
を含む方法。
【請求項２２】
請求項２１の方法であって、前記血液適合性層または生物的安定層は、共有および／または接着結合する少なくとも１の活性物質を含む、少なくとも１の生物分解性層、および／または生物的安定層を浸漬（dipping）または吹きつけ法（spraying method）を介してコートされること、
を特徴とする方法。
【請求項２３】
請求項２１の方法であって、さらに、
ｃ）前記血液適合性層または生物的安定層の中、および／または上に少なくとも１の活性物質を付着するステップ、
を含む方法。
【請求項２４】
請求項２３の方法であって、前記少なくとも１の活性物質は、前記血液適合性層または生物的安定層の上および／または中に浸漬または吹きつけ法によって適用および／または付着され、および／または、前記少なくとも１の活性物質は、前記血液適合性層または生物的安定層に共有および／または接着結合によって結合されること、
を特徴とする方法。
【請求項２５】
請求項２１から２４のいずれか一つの方法であって、さらに、
ｄ）少なくとも１の生物分解性層および／または少なくとも１の生物的安定層を、前記血液適合性層または前記活性物質の層のそれぞれに付着するステップ、あるいは、
ｄ’）前記生物的安定層または前記活性物質の層のそれぞれに、血液適合性層として、請求項１から３、７から１１、１４から２０のいずれか一つの少なくとも１のオリゴ糖および／または多糖類を付着するステップ、
を含むことを特徴とする方法。
【請求項２６】
請求項２１から２５のいずれか一つの方法であって、さらに、
ｅ）少なくとも１の生物分解性層、および／または生物的安定層または血液適合性層の中および／または上に少なくとも１の活性物質を付着するステップ、
を含むことを特徴とする方法。
【請求項２７】
請求項２６の方法であって、
前記少なくとも１の活性物質は、少なくとも１の生物分解性、および／または生物的安定層または血液適合性層の上および／または中に浸漬または吹きつけ法を介して付着および／または適用され、および／または、少なくとも１の活性物質は、少なくとも生物分解性、および／または、生物的安定層または血液適合性層に共有および／または接着結合することによって結合されること、
を特徴とする方法。
【請求項２８】
請求項２５から２７のいずれか一つの方法であって、前記生物的安定および／または生物分解性層は、前記医療用機器の表面に共有および／または接着結合しており、前記血液適合性層は、前記生物的安定層に共有結合して、それを完全に（completely）または不完全に（incompletely）覆うこと、
を特徴とする方法。
【請求項２９】
請求項２１から２８のいずれか一つの方法であって、
前記血液適合性層は、購入可能なヘパリンの標準的な分子量１３ｋＤに至るまで抗血栓作用を生じさせるペンタサッカライド(pentasaccharide)の分子量範囲において、異なる硫酸化率（硫酸化度）およびアシル化率（アシル化度）を有する位置選択的（regioselectively）に合成された誘導体の、天然由来のヘパリン、ヘパラン硫酸およびその誘導体、赤血球性の（erythrocytic）グリコカリックス（glycocalix）のオリゴ−および多糖類、脱硫酸化（desulphated）およびＮ−再アセチル化（reac(et)ylated）されたヘパリン、Ｎ−カルボキシメチル化および／または部分的にＮ−アセチル化（N-ac(et)ylated）されたキトサン、またはそれらの物質の混合物、
を含むことを特徴とする方法。
【請求項３０】
請求項２１から２９のいずれか一つの方法において、
前記生物分解性層のための生物分解性物質として、ポリバレロラクトン、ポリ−ε−デカラクトン、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、ポリラクチド、ポリグリコライド、ポリラクチドおよびポリグリコライドのコポリマー、ポリ−ε−カプロラクトン、ポリヒドロキシブタン酸、ポリヒドロキンブチレート、ポリヒドロキシバレレート、ポリヒロドキシブチレート−ｃｏ−バレレート、ポリ（１、４−ジオキサン−２、３−ジオン）、ポリ（１、３−ジオキサン−２−オン）、ポリ−パラ−ジオキサノン、例えばポリ無水マレイン酸のようなポリアンヒドリド、ポリヒドロキシメタクリレート、フィブリン、ポリシアノアクリレート、ポリカプロラクトンジメチルアクリレート、ポリ−ｂ−マレイン酸、ポリカプロラクトンブチル−アクリレーツ、例えばオリゴカプロラクトンジオールおよびオリゴジオキサノンジオールから得られるようなマルチブロックポリマー、例えばＰＥＧおよびポリ（ブチレン  テレフタレート）のようなポリエーテルエステル・マルチブロックポリマー、ポリピボトラクトン、ポリグリコール酸  トリメチレン−カーボネート、ポリカプロラクトン−グリコライド、ポリ（ｇ−エチルグルタミン酸）、ポリ（ＤＴＨ−イミノカーボネート）、ポリ（ＤＴＥ−ｃｏ−ＤＴ−カーボネート）、ポリ（ビスフェノール−Ａ−イミノカーボネート）、ポリオルトエステル、ポリグリコール酸  トリメチレン−カーボネート、ポリトリメチルカルボン酸、ポリイミノカルボン酸、ポリ（Ｎ−ビニル）−ピロリドン、ポリビニルアルコール、ポリエステルアミド、グリコール酸・ポリエステル、ポリホスホエステル、ポリホスファゼン、ポリ［ｐ−カルボキシフェノキシ）プロパン］、ポリヒドロキシペンタン酸、ポリアンヒドリド、ポリエチレンオキシド−プロピレンオキシド、ソフトポリウレタン、主鎖にアミノ酸残基が付加されたポリウレタン、例えばポリエチレンオキシドのようなポリエーテルエステル、ポリアルケンシュウ酸、ポリオルトエステルおよびそれらのコポリマー、脂質、カラギーナン、フィブリノーゲン、デンプン、コラーゲン、プロテインをもとにしたポリマー、ポリアミノ酸、合成されたポリアミノ酸、ゼイン、修飾されたゼイン、ポリヒドロキシアルカン酸、ペクチン酸、化学作用のある酸（actinic acid）、修飾および非修飾のフィブリンおよびカゼイン、カルボキシメチル硫酸、アルブミン、さらに、ヒアルロン酸、キトサン及びその誘導体、ヘパラン硫酸及びその誘導体、ヘパリン、コンドロイチン硫酸、デキストラン、ｂ−シクロデキストリン、ＰＥＧおよびポリプロピレングリコールによるコポリマー、アラビアゴム、グアー、ゼラチン、コラーゲン、コラーゲン−Ｎ−ヒドロキシサクシンイミド、脂質、リン脂質、前述の物質の修飾物、前述の物質のコポリマー、および／または、前述の物質の混合物、が用いられること、
を特徴とする方法。
【請求項３１】
請求項２１から３０のいずれか一つの方法において、
前記生体安定性層のための生体安定性物質として、ポリアクリル酸および、例えばポリメチルメタクリレートのようなポリアクリレート、ポリブチルメタクリレート、ポリアクリルアミド、ポリアクリロニトリル、ポリアミド、ポリエーテルアミド、ポリエチレンアミン、ポリイミド、ポリカーボネート、ポリカルボウレタン、ポリビニルケトン、ポリビニルハロゲン化物、ポリビニリデンハロゲン化物、ポリビニルエーテル、ポリイソブチレン、ポリビニルアロメート、ポリビニルエステル、ポリビニルピロリドン、ポリオキシメチレン、ポリテトラメチレンオキシド、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリテトラフルオロエチレン、ポリウレタン、ポリエーテルウレタン、シリコン−ポリエーテルウレタン、シリコン−ポリウレタン、シリコン−ポリカーボネート−ウレタン、ポリオレフィンエラストマー、ポリイソブチレン、ＥＰＤＭ  ガム、フルオロシリコン、カルボキシメチルキトサン、ポリアリルエーテルエーテル（polyaryletherether）ケトン、ポリエーテルエーテル（polyetherether）ケトン、ポリエチレンテレフタラート、ポリバレレート、カルボキシメチルセルロース、セルロース、レーヨン、レーヨントリアセテート、セルロースニトレート、セルロースアセテート、ヒドロキシエチルセルロース、セルロースブチレート、セルロースアセテートブチレート、エチルビニールアセテート・コポリマー、ポリスルホン、エポキシレジン、ＡＢＳレジン、ＥＰＤＭ  ガム、例えばポリシロキサンのようなシリコン、ポリジメチルシロキサン、ポリビニルハロゲンおよびコポリマー、セルロースエーテル、セルローストリアセテート、キトサン、それらの物質のコポリマー、および／またはそれらの混合物、が用いられること、
を特徴とする方法。
【請求項３２】
請求項２１から３１のいずれか一つの方法において、
前記活性物質は、シロリムス（ラパマイシン）、エベロリムス、ピメクロリムス、ソマトスタチン、タクロリムス、ロキシスロマイシン、ドウナイマイシン、アスコマイシン、バフィロマイシン、エリスロマイシン、ミデカマイシン、ジョサマイシン、コンカナマイシン、クラリスロマイシン、トロレアンドマイシン、フォリマイシン、セリバスタチン、シンバスタチン、ロバスタチン、フルバスタチン、ロスバスタチン、アトルバスタチン、プラバスタチン、ピタバスタチン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、ビノレルビン、エトボシド、テニポシド、ニムスチン、カルムスチン、ロムスチン、シクロホスファミド、４−ヒドロキシシクロフォスファミド、エストラムスチン、メルファラン、イホスファミド、トロフォスファミド、サイモシンα−１、クロランブシル、ベンダムスチン（bendamustine）、ダカルバジン、ブスルファン、プロカルバジン、トレオスルファン（treosulfan）、トレモゾロミド（tremozolomide）、チオテパ、ダウノルビシン、ドキソルビシン、アクラルビシン、エピルビシン、ミトキサントロン、イダルビシン、ブレオマイシン、マイトマイシン、ダクチノマイシン、メトトレキセート、フルダラビン、２−メチルチアゾリジン−２，４−ジカルボン酸、チアリン（tialin）−Ｎａ（チアリンのナトリウム塩）、フルダラビン−５’−リン酸二水素、クラドリビン、メルカプトプリン、チオグアニン、シタラビン、フルオロウラシル、ゲムシタビン、カペシタビン、ドセタキセル、カルボプラチン、シスプラチン、オキサリプラチン、アムサクリン、イリノテカン、トポテカン、ヒドロキシカルバミド、ミルテフォシン、ペントスタチン、アルデスロイキン、トレチノイン、アスパラギナーゼ、ペガスパラーゼ、アナストロゾール、エキセメスタン、レトロゾール、フォルメスタン、アミノグルテサミド、アドリアマイシン、アジスロマイシン、スピラマイシン、セファランチン、ダームシジン（ダームシジン）、ｓｍｃ増殖阻害剤−２ｗ、エポシロンＡおよびＢ、ミトキサントロン、アザチオプリン、マイコフェノールアトモフェチル、ｃ−ｍｙｃ−アンチセンス、ｂ−ｍｙｃ−アンチセンス、ベツリニック酸、カンプトセシン、ＰＩ−８８（硫酸化オリゴ糖）、メラニン細胞刺激ホルモン（α−ＭＳＨ）、活性化プロテインＣ、ＩＬ１−β阻害剤、フマル酸、およびそのエステル、カルシポトリオール、タカルシトール、ラパコール、β−ラパコン、ポドフィロトキシン、ベツリン、ポドフィリック酸  ２−エチルヒドラジド、モルグラモスティム（ｒｈｕＧＭ−ＣＳＦ）、ペグインターフェロン  α−２ｂ、ラノグラスチム（ｒ−ＨｕＧ−ＣＳＦ）、フィルグラスチム、マクロゴール、ダカルバジン、エキセメスタン、レトロゾール、ゴセレリン、セファロマニン、バシリキシマブ、トラスツズマブ、ダシリツマブ、セレクチン（サイトカイン  アンタゴニスト）、ＣＥＴＰ阻害剤、カドヘリン、サイトカイニン阻害剤、ＣＯＸ−２阻害剤、ＮＦｋＢ、アンギオペプチン、シプロフロキサシン、カンプトセシン、フルロブラスチン、筋細胞の増殖を阻害するモノクローナル抗体、ｂＦＧＦアンタゴニスト、プロブコール、プロスタグランジン、１，１１−ジメトキシカンシン−６−オン、１−ヒドロキシ−１１−メトキシカンチン−６−オン、スコポレクチン、コルヒチン、例えば四硝酸ペンタエリスリトールおよびシンドノエイミンのようなＮＯ供与体（一酸化窒素供与体）、Ｓ−ニトロソデリバティブ、タモキシフェン、スタウロスポリン、β−エストラジオール、α−エストラジオール、エストリオール、エストロン、エチニルエストラジオール、ホスフェストロール、メドロキシプロゲステロン、エストラジオールシピオネイト、エストラジオール  ベンゾアート、トラニラスト、カメバコーリン、および、癌の治療に利用されるその他のテルペノイド、ベラパミル、チロシンキナーゼ阻害剤（チルフォスチン）、シクロスポリンＡ、例えば６−α−ヒドロキシ−パクリタキセルのようなパクリタキセルおよびその誘導体、バッカチン、タキソテール、その他合成的に生産および天然源に由来するカーボン・サブオキサイドの大環状オリゴマー（ＭＣＳ）およびその誘導体、モフェブタゾン、アセメタシン、ジクロフェナク、ロナゾラック、ダプソン、ｏ−カルバモイルフェノキシ酢酸、リドカイン、ケトプロフェン、メフェナム酸、ピロキシカム、メロキシカム、クロロキンリン酸、ペニシラミン、ヒドロキシクロロキン、オーラノフィン、金チオリンゴ酸ナトリウム、オクサセプロール、セレコキシブ、β−シトステリン、アデノシル・メチオニン、ミルテカイン、ポリドカノール、ノニヴァミド、レボメントール、ベンゾカイン、アエスシン、エリプチシン、Ｄ−２４８５１  （カルビオケム）、コルセミド、サイトカラシンＡ−Ｅ、インダノシン、ノコダゾール、Ｓ１００プロテイン、バシトラシン、ビトロネクチン受容体アンタゴニスト、アゼラスチン、グアニジル  シクラーゼ刺激薬  組織メタロプロテアーゼインヒビター−１および−２、遊離した核酸、ウイルス伝搬体に組み込まれた核酸、ＤＮＡおよびＲＮＡ断片、プラスミノーゲン活性化因子インヒビター−１、プラスミノーゲン活性化因子インヒビター−２、アンチセンス・オリゴヌクレオチド、ＶＥＧＦ阻害剤、ＩＧＦ−１、例えばセファドロキシル、セファゾリン、セファクロル、セフォタキシン、トブラマイシン、ゲンタマイシン、例えばジクロキサシリンのようなペニシリン、オキサシリン、サルファ剤、メトロニダゾールからなる抗生物質の群より選ばれた活性物質、例えばアルガトロバンのような抗血栓剤、アスピリン、アブシキシマブ、合成されたアンチトロンビン、ビバリルジン、クマジン、エノキソパリン、脱硫酸化およびＮ−再アセチル化されたヘパリン、組織プラスミノーゲン活性化因子、ＧｐＩＩｂ／ＩＩＩａ  血小板層レセプター、ファクターＸａ阻害抗体、ヘパリン、ヒルジン、ｒ−ヒルジン、ＰＰＡＣＫ、プロタミン、チアリン−Ｎａ（thialin-Na）、プロウロキナーゼ、ストレプトキナーゼ、ワルファリン、ウロキナーゼ、例えばジピラミドールのような血管拡張薬、トラピジル、ニトロプルシド、例えばトリアゾロピリミジンおよびセラミンのようなＰＤＧＦアンタゴニスト、例えばカプトプリルのようなＡＣＥ阻害剤、シラザプリル、リシノプリル、エナラプリル、ロサルタン、チオプロテアーゼ阻害剤、プロスタサイクリン、バピプロスト、インターフェロンα、βおよびγ、ヒスタミン  アンタゴニスト、セロトニンブロッカー、アポトーシス阻害剤、例えばｐ６５、ＮＦ−ｋＢまたはＢｃｌ−ｘＬ  アンチセンス・オリゴヌクレオチドのようなアポトーシスレギュレーター、ハロフジノン、ニフェジピン、トコフェロール、ビタミンＢ１、Ｂ２、Ｂ６、Ｂ１２、葉酸、トラニラスト、モルシドミン、茶成分ポリフェノール、エピカテキン・ガレート、エピガロカテキン・ガレート、ボズウェラ酸およびその誘導体、レフルノミド、アナキンラ、エタネルセプト、スルファサラジン、エトポシド、ジクロキサシリン、テトラサイクリン、トリアムシノロン、ムタマイシン、プロカイナミド、レチノイン酸、キニジン、ジソピラミド、フレカイニド、プロパフェノン、ソタロール、アミドロン、例えばブリオフィリンＡのような天然および合成的に得られたステロイド、イノトジオール、マキロシドＡ、ガラキノシド、マンソニン、ストレブロシド、ヒドロコルチゾン、ベタメタゾン、デキサメタゾン、例えばフェノプロフェンのような非ステロイド化合物（ＮＳＡＩＤＳ）、イブプロフェン、インドメタシン、ナプロキセン、フェニルブタゾン、例えばアシクロビル、ガンシクロビルおよびジドブジンのようなその他の抗ウイルス剤、例えばクロトリマゾール、フルシトシン、グリセオフルビン、ケトコナゾール、ミコナゾール、ニスタチン、テルビナフィンのような抗かび剤、例えばクロロキン、メフロキン、キニーネのようなアンチプロゾール作用物質、さらに、例えばヒッポカエスクリンのような天然のテルペノイド、バリントゲノール−Ｃ２１−アンゲレート、１４−デヒロドアグロスチスタチン、アグロスケリン、アガロスチスタチン、１７−ヒドロキシアグロスチスタチン、オヴァトジオライド、４，７−オキシシクロアニソメリック・アシッド、バッカリノイドＢ１、Ｂ２、Ｂ３およびＢ７、トゥベイモシド、ブルセノールＡ、ＢおよびＣ、ブルセアンチノシドＣ、ヤダンジオシドＮおよびＰ、イソデオキシエレファントピン、トメンファントピンＡおよびＢ、コロナリンＡ、Ｂ、ＣおよびＤ、ウルソール酸、ヒプタチック酸Ａ、ゼオリン、イソ−イリドジャーマナル、メイテンフォリオル、エフサンチンＡ、エキシサニンＡおよびＢ、ロンギカウリンＢ、スカルポネアチン  Ｃ、カメバウニン、ロイカメニンＡおよびＢ、１３，１８−デヒドロ−６−α−シネシオイルオキシシャパリン、タクサマイリンＡおよびＢ、レジェニロール、トリプトライド、さらに、シマリン、アポシマリン、アリストロキア酸、アノプテリン、ヒドロキシアノプテリン、アネモニン、プロトアネモニン、ベルベリン、チェリブリン・クロライド、シクトキシン、シノコクリン、ボムブレスタチンＡおよびＢ、クドライソフラボンＡ、クルクミン、ジヒドロニチジン、塩化ニチジン、１２−β−ヒドロキシプレグナジエン−３，２０−ジオン、ビロボール、ギンコール、ギンコール酸、ヘレナリン、インジシン、インジシン−Ｎ−オキシド、ラシオカルピン、イノトジオール、グリコシド  １ａ、ポドフィロトキシン、ジャスチシジンＡおよびＢ、ラレアチン、マロテリン、マロトクロマノール、イソブチリルマロトクロマノール、マキロシドＡ、マーチャンチンＡ、メイタイシン、リコリジシン、マルゲチン、パンクラチスタチン、リリオデニン、ビスパーセ��リジン、オクソウシンスニン、アリストラクタム−ＡＩＩ、ビスパーセノリジン、ペリプロコシドＡ、ガラキノシド、ウルソール酸、デオキシソロスパミン、サイコルビン、リシンＡ、サンギナリン、マンウ  ホウィート・アシッド、メチルソルビフォリン、メラニン細胞刺激ホルモン（α−ＭＳＨ）、スファセリアクロメン、スチゾフィリン、マンソニン、ストレブロシド、アカゲリン、ジヒロドウサムバレンシン、ヒドロキシウサムバリン、ストリクノペンタミン、ストリクノフィリン、ウサムバリン、ウサムバレンシン、ベルベリン、リリオデニン、オクソウシンスニン、ダフノレチン、ラリシレシノール、メトキシラリシレシノール、シリンガレジノール、ウンベリフェロン、アフロモソン、アセチルビスミオン  Ｂ、デスアセチルビスミオンＡ、ビスミオンＡおよびＢ、からなる群より選択されたものであること、
を特徴とする方法。
【請求項３３】
請求項２１から３２のいずれか一つの方法であって、
請求項１から３、７から１１、１４から２０のいずれか一つの前記オリゴ糖および／または多糖類の付着または固定化は、疎水的相互作用、ファン・デル・ワールス力、ファン・デル・ワールス力、静電的相互作用、水素結合、イオン結合、架橋結合、および／または共有結合によって行われること、
を特徴とする方法。
【請求項３４】
請求項２１から３３のいずれか一つの方法によって得られうる医療用機器。
【請求項３５】
医療用機器であって、前記医療用機器の表面は、少なくとも１の介在する（interjacent）生物的安定層および／または生物分解性層によって直接的および／またはそれらを介してコートされ、および／または、血液適合性層を伴う活性物質の層は、請求項１から３、７から１１、１４から２０の少なくとも１のオリゴ糖および／または多糖類を含むこと、
を特徴とする医療用機器。
【請求項３６】
請求項３５の医療用機器であって、前記血液適合性層の下、または２つの血液適合性層の間に、少なくとも１の生物的安定層および／または生物分解性層が存在すること、
を特徴とする医療用機器。
【請求項３７】
請求項３５または３６の医療用機器であって、前記血液適合性層は、少なくとも他の、上にある（suprajacent）生物的安定層および／または生物分解性層によって完全に、および／または不完全にコートされること、
を特徴とする医療用機器。
【請求項３８】
請求項３６または３７の医療用機器であって、前記少なくとも１の活性物質の層は、生物的安定層および／または生物分解性層の間に存在し、前記血液適合性層は、共有および／または接着結合する、少なくとも１の抗増殖性(antiproliferative)、抗炎症性(antiinflammatory)、および／または、抗血栓性(antithrombotic)の活性物質(active agent）を含むこと、
を特徴とする医療用機器。
【請求項３９】
請求項３５から３８のいずれか一つの医療用機器であって、前記少なくとも１の抗増殖性、抗炎症性、および／または、抗血栓性の活性物質(active agent）は、前記血液適合性層、および／または生物的安定層、および／または生物分解性層、の中および／または上に共有および／または接着結合すること、
を特徴とする医療用機器。
【請求項４０】
請求項３５から３９のいずれか一つの医療装置において、
前記用いられる活性物質は、シロリムス（ラパマイシン）、エベロリムス、ピメクロリムス、ソマトスタチン、タクロリムス、ロキシスロマイシン、ドウナイマイシン、アスコマイシン、バフィロマイシン、エリスロマイシン、ミデカマイシン、ジョサマイシン、コンカナマイシン、クラリスロマイシン、トロレアンドマイシン、フォリマイシン、セリバスタチン、シンバスタチン、ロバスタチン、フルバスタチン、ロスバスタチン、アトルバスタチン、プラバスタチン、ピタバスタチン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、ビノレルビン、エトボシド、テニポシド、ニムスチン、カルムスチン、ロムスチン、シクロホスファミド、４−ヒドロキシシクロフォスファミド、エストラムスチン、メルファラン、イホスファミド、トロフォスファミド、クロランブシル、ベンダムスチン、ダカルバジン、ブスルファン、プロカルバジン、トレオスルファン、サイモシンα−１、トレモゾロミド、チオテパ、チアリン（２−メチルチアゾリジン−２，４−ジカルボン酸）、チアリン−Ｎａ（チアリンのナトリウム塩）、アウノルビシン（aunorubicin）、ドキソルビシン、アクラルビシン、エピルビシン、ミトキサントロン、イダルビシン、ブレオマイシン、マイトマイシン、ダクチノマイシン、メトトレキセート、フルダラビン、フルダラビン−５’−リン酸二水素、クラドリビン、メルカプトプリン、チオグアニン、シタラビン、フルオロウラシル、ゲムシタビン、カペシタビン、ドセタキセル、カルボプラチン、シスプラチン、オキサリプラチン、アムサクリン、イリノテカン、トポテカン、ヒドロキシカルバミド、ミルテフォシン、ペントスタチン、アルデスロイキン、トレチノイン、アスパラギナーゼ、ペガスパラーゼ、アナストロゾール、エキセメスタン、レトロゾール、フォルメスタン、アミノグルテサミド、アドリアマイシン、アジスロマイシン、スピラマイシン、セファランチン、ｓｍｃ増殖阻害剤−２ｗ、エポシロンＡおよびＢ、ミトキサントロン、アザチオプリン、マイコフェノールアトモフェチル、ｃ−ｍｙｃ−アンチセンス、ｂ−ｍｙｃ−アンチセンス、ベツリニック酸、カンプトセシン、ＰＩ−８８（硫酸化オリゴ糖）、メラニン細胞刺激ホルモン（α−ＭＳＨ）、活性化プロテインＣ、ＩＬ１−β阻害剤、フマル酸、およびそのエステル、ダームシジン、カルシポトリオール、タカルシトール、ラパコール、β−ラパコン、ポドフィロトキシン、ベツリン、ポドフィリック酸  ２−エチルヒドラジド、モルグラモスティム（ｒｈｕＧＭ−ＣＳＦ）、ペグインターフェロン  α−２ｂ、ラノグラスチム（ｒ−ＨｕＧ−ＣＳＦ）、フィルグラスチム、マクロゴール、ダカルバジン、レトロゾール、ゴセレリン、セファロマニン、トラスツズマブ、エキセメスタン、バシリキシマブ、ダシリツマブ、セレクチン（サイトカイン  アンタゴニスト）、ＣＥＴＰ阻害剤、カドヘリン、サイトカイニン阻害剤、ＣＯＸ−２阻害剤、ＮＦｋＢ、アンギオペプチン、シプロフロキサシン、カンプトセシン、フルロブラスチン、筋細胞の増殖を阻害するモノクローナル抗体、ｂＦＧＦアンタゴニスト、プロブコール、プロスタグランジン、１、１１−ジメトキシカンシン−６−オン、１−ヒドロキシ−１１−メトキシカンチン−６−オン、スコポレクチン、コルヒチン、例えば四硝酸ペンタエリスリトールおよびシンドノエイミンのようなＮＯ供与体（一酸化窒素供与体）、Ｓ−ニトロソデリバティブ、タモキシフェン、スタウロスポリン、β−エストラジオール、α−エストラジオール、エストリオール、エストロン、エチニルエストラジオール、ホスフェストロール、メドロキシプロゲステロン、エストラジオールシピオネイト、エストラジオール  ベンゾアート、トラニラスト、カメバコーリン、および、癌の治療に利用されるその他のテルペノイド、ベラパミル、チロシンキナーゼ阻害剤（チルフォスチン）、シクロスポリンＡ、例えば６−α−ヒドロキシ−パクリタキセルのようなパクリタキセルおよびその誘導体、バッカチン、タキソテール、その他合成的に生産および天然源に由来するカーボン・サブオキサイドの大環状オリゴマー（ＭＣＳ）およびその誘導体、モフェブタゾン、アセメタシン、ジクロフェナク、ロナゾラック、ダプソン、ｏ−カルバモイルフェノキシ酢酸、リドカイン、ケトプロフェン、メフェナム酸、ピロキシカム、メロキシカム、クロロキンリン酸、ペニシラミン、ヒドロキシクロロキン、オーラノフィン、金チオリンゴ酸ナトリウム、オクサセプロール、セレコキシブ、β−シトステリン、アデノシル・メチオニン、ミルテカイン、ポリドカノール、ノニヴァミド、レボメントール、ベンゾカイン、アエスシン、エリプチシン、Ｄ−２４８５１  （カルビオケム）、コルセミド、サイトカラシンＡ−Ｅ、インダノシン、ノコダゾール、Ｓ１００プロテイン、バシトラシン、ビトロネクチン受容体アンタゴニスト、アゼラスチン、グアニジル  シクラーゼ刺激薬  組織メタロプロテアーゼインヒビター−１および−２、遊離した核酸、ウイルス伝搬体に組み込まれた核酸、ＤＮＡおよびＲＮＡ断片、プラスミノーゲン活性化因子インヒビター−１、プラスミノーゲン活性化因子インヒビター−２、アンチセンス・オリゴヌクレオチド、ＶＥＧＦ阻害剤、ＩＧＦ−１、例えばセファドロキシル、セファゾリン、セファクロル、セフォタキシン（cefotaxin）、トブラマイシン、ゲンタマイシン、例えばジクロキサシリンのようなペニシリン、オキサシリン、サルファ剤、メトロニダゾールからなる抗生物質（antibiotics）の群より選ばれた活性物質、例えばアルガトロバンのような抗血栓剤、アスピリン、アブシキシマブ、合成されたアンチトロンビン、ビバリルジン、クマジン、エノキソパリン（enoxoparin）、脱硫酸化（desulphated）およびＮ−再アセチル化（reacetylated）されたヘパリン、組織プラスミノーゲン活性化因子、ＧｐＩＩｂ／ＩＩＩａ  血小板層レセプター、ファクターＸａ阻害抗体、ヘパリン、ヒルジン、ｒ−ヒルジン、ＰＰＡＣＫ、プロタミン、プロウロキナーゼ、ストレプトキナーゼ、ワルファリン、ウロキナーゼ、例えばジピラミドールのような血管拡張薬、トラピジル、ニトロプルシド、例えばトリアゾロピリミジンおよびセラミンのようなＰＤＧＦアンタゴニスト、例えばカプトプリルのようなＡＣＥ阻害剤、シラザプリル、リシノプリル、エナラプリル、ロサルタン、チオプロテアーゼ阻害剤（thioprotease inhibitors）、プロスタサイクリン、バピプロスト、インターフェロンα、βおよびγ、ヒスタミン  アンタゴニスト、セロトニンブロッカー、アポトーシス阻害剤、例えばｐ６５、ＮＦ−ｋＢまたはＢｃｌ−ｘＬ  アンチセンス・オリゴヌクレオチドのようなアポトーシスレギュレーター、ハロフジノン、ニフェジピン、トコフェロール、トラニラスト、モルシドミン、茶成分ポリフェノール、エピカテキン・ガレート、エピガロカテキン・ガレート、ボズウェラ酸およびその誘導体、レフルノミド、アナキンラ、エタネルセプト、スルファサラジン、エトポシド、ジクロキサシリン、テトラサイクリン、トリアムシノロン、ムタマイシン、プロカイナミド、レチノイン酸、キニジン、ジソピラミド、フレカイニド、プロパフェノン、ソタロール、アミドロン、例えばブリオフィリン（bryophyllin）Ａのような天然および合成的に得られたステロイド、イノトジオール（inotodiol）、マキロシド（maquiroside）Ａ、ガラキノシド（ghalakinoside）、マンソニン（mansonine）、ストレブロシド（strebloside）、ヒドロコルチゾン、ベタメタゾン、デキサメタゾン、例えばフェノプロフェン（fenoporfen）のような非ステロイド化合物（ＮＳＡＩＤＳ）、イブプロフェン、インドメタシン、ナプロキセン、フェニルブタゾン、例えばアシクロビル、ガンシクロビルおよびジドブジンのようなその他の抗ウイルス剤、例えばクロトリマゾール、フルシトシン、グリセオフルビン、ケトコナゾール、ミコナゾール、ニスタチン、テルビナフィンのような抗かび剤、例えばクロロキン、メフロキン、キニーネのようなアンチプロゾール作用物質、さらに、例えばヒッポカエスクリンのような天然のテルペノイド、バリントゲノール−Ｃ２１−アンゲレート、１４−デヒロドアグロスチスタチン、アグロスケリン、アガロスチスタチン、１７−ヒドロキシアグロスチスタチン、オヴァトジオライド、４、７−オキシシクロアニソメリック・アシッド、バッカリノイドＢ１、Ｂ２、Ｂ３およびＢ７、トゥベイモシド、ブルセノールＡ、ＢおよびＣ、ブルセアンチノシドＣ、ヤダンジオシドＮおよびＰ、イソデオキシエレファントピン、トメンファントピンＡおよびＢ、コロナリンＡ、Ｂ、ＣおよびＤ、ウルソール酸、ヒプタチック酸Ａ、ゼオリン、イソ−イリドジャーマナル、メイテンフォリオル、エフサンチンＡ、エキシサニンＡおよびＢ、ロンギカウリンＢ、スカルポネアチン  Ｃ、カメバウニン、ロイカメニンＡおよびＢ、１３、１８−デヒドロ−６−α−シネシオイルオキシシャパリン、タクサマイリンＡおよびＢ、レジェニロール、トリプトライド、さらに、シマリン、アポシマリン、アリストロキア酸、アノプテリン、ヒドロキシアノプテリン、アネモニン、プロトアネモニン、ベルベリン、チェリブリン・クロライド、シクトキシン、シノコクリン、ボムブレスタチンＡおよびＢ、クドライソフラボンＡ、クルクミン、ジヒドロニチジン、塩化ニチジン、１２−β−ヒドロキシプレグナジエン−３、２０−ジオン、ビロボール、ギンコール、ギンコール酸、ヘレナリン、インジシン、インジシン−Ｎ−オキシド、ラシオカルピン、イノトジオール、グリコシド  １ａ、ポドフィロトキシン、ジャスチシジンＡおよびＢ、ラレアチン、マロテリン、マロトクロマノール、イソブチリルマロトクロマノール、マキロシドＡ、マーチャンチンＡ、メイタイシン、リコリジシン、マルゲチン、パンクラチスタチン、リリオデニン、ビスパーセノリジン（bisparthenolidine）、オクソウシンスニン、アリストラクタム−ＡＩＩ、ビスパーセノリジン、ペリプロコシドＡ、ガラキノシド、ウルソール酸、デオキシソロスパミン、サイコルビン、リシンＡ、サンギナリン、マンウ  ホウィート・アシッド、メチルソルビフォリン、スファセリアクロメン、スチゾフィリン、マンソニン、ストレブロシド、アカゲリン、ジヒロドウサムバレンシン、ヒドロキシウサムバリン、ストリクノペンタミン、ストリクノフィリン、ウサムバリン、ウサムバレンシン、ベルベリン、リリオデニン、オクソウシンスニン、ダフノレチン、ラリシレシノール、メトキシラリシレシノール、シリンガレジノール、ウンベリフェロン、アフロモソン、アセチルビスミオン  Ｂ、デスアセチルビスミオンＡ、ビスミオンＡおよびＢ、からなる群より選択されたものであること、
を特徴とする医療装置。
【請求項４１】
請求項４０の医療用機器であって、利用される活性物質として、タクロリムス、ピペクロリムス、PI 88、サイモシン a-1、PETN、バッカチン（baccatine）およびその誘導体、ドセタキセル, コルヒチン、パクリタキセルおよびその誘導体、トラピジル、α−およびβ−エストラジオール、ダームシジン, チアリン-ナトリウム（sodium）、シンバスタチン,大環状のサブオキサイト（macrocyclic suboxide） (MCS) およびその誘導体、シロリムス、チルフォスチン、D24851、コルヒチン、フマル酸およびそのエステル、活性化プロテイン (aPC)、インターロイキン１β阻害剤、またはメラニン細胞刺激ホルモン（α−ＭＳＨ）（melanocyte stimulating hormon (a-MSH) ）、またはそれらの活性物質の混合物、が考慮されること、
を特徴とする医療用機器。
【請求項４２】
請求項３４から４１のいずれか一つの医療用機器であって、前記医療用機器は、人工器官、器官、血管、大動脈、心臓弁、管、器官予備部品、インプラント、繊維（fibers）、中空糸、ステント、中空針（hollow needles）、シリンジ、メンブレン（membranes）、缶詰商品（tinned goods）、血液容器（blood containers）、滴定のプレート（titrimetric plates）、ペースメーカー、吸収媒体、クロマトグラフィー媒体、クロマトグラフィーカラム、透析器、連結部品（connexion parts）、センサー（sensors）、バルブ、遠心用のチャンバー（centrifugal chambers）、熱交換器（recuperators）、内視鏡、フィルター、またはポンプのチャンバー（pump chambers）を含むこと、
を特徴とする医療用機器。
【請求項４３】
請求項４２の医療用機器であって、前記医療用機器がステントであることを特徴とする医療用機器。
【請求項４４】
請求項４３のステントであって、前記ポリマーは、０．０１ｍｇから３ｍｇ／層（layer）（層当たり）、好ましくは０．２０ｍｇから１ｍｇ／層、特に好ましくは０．２ｍｇから０．５ｍｇ／層の量で付着されること、
を特徴とするステント。
【請求項４５】
請求項４３または４４のステントであって、前記抗増殖性、抗炎症性、および／または抗血栓性の活性物質は、ステント表面１平方センチ当たり０．００１から１０mgの薬学的活性濃度(pharmaceutically active concentrations)を含むこと、
を特徴とするステント。
【請求項４６】
再狭窄の防止、またはそれを低下させるための、請求項４３から４５のいずれか一つの前記ステントの使用方法。
【請求項４７】
少なくとも、抗増殖性、抗炎症性、および／または、抗血栓性の活性物質を連続的に放出するための、請求項４３から４６のいずれか一つの前記ステントの使用方法。
【請求項４８】
血液に直接接触させるための、請求項３４から４１のいずれか一つの前記医療用機器の使用方法。
【請求項４９】
前記医療用機器のコートされた表面にタンパク質が接着することを防止、またはそれを低下させるための、請求項３４から４１のいずれか一つの前記医療用機器の使用方法。
【請求項５０】
請求項４８または４９の前記使用方法であって、診断上の検出方法に利用するための、マイクロタイター（microtiter）のプレート、または他の支持媒体（carrier media）の血液親和的にコートされた表面が、非特異的なタンパク質の付着を防止またはそれを低下させること、
を特徴とする使用方法。
【請求項５１】
請求項４８または４９の使用方法であって、吸着媒体（adsorber media）またはクロマトグラフィー媒体の前記血液親和的にコートされた表面が、非特異的なタンパク質の付着を防止またはそれを低下させること、
を特徴とする使用方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、血液適合性表面を調製するための、糖ビルディングブロックＮ−アシルグルコサミンおよび／またはＮ−アシルガラクトサミンを含有するオリゴ糖類および／または多糖類の使用、前記オリゴ糖類および／または多糖類を用いて表面を血液適合性にコーティングするための方法、ならびに血液適合性にコーティングされた表面の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
ヒトの身体において、血液は、外傷の場合にのみ、天然の血管の内面以外の表面と接触する。結果として、血液が異質面と接触する場合、出血を抑制し、生命を脅かすほど血液が失われるのを防ぐために、血液凝固システムが常に活性化される。インプラントが異質面を示すという事実により、血液と永久的に接触するインプラントを受け入れる全ての患者は、血液と薬物、いわゆる血液凝固を抑制する抗凝固薬に継続して接触するように処置される。このことは、血液透析患者等の体外循環を適用される患者にもいえる。しかし、この凝固抑制医薬は、毛髪喪失、血小板減少症を超え、嘔気および嘔吐、出血性皮膚壊死に至る範囲の考慮すべき副作用をある程度受け、脳出血等の致命的な結果を有する副作用まで出血性素因が増加する。
【０００３】
従って、血液に接触した際に凝固システムを活性化せず、血液の凝固を引き起こさない、プロテーゼ（prothese）、臓器スペアパーツ、層、カニューレ、管、血液コンテナ、ステント等のような、トロンボゲンを形成しない血液適合性の材料に対する需要が存在する。
【０００４】
ＥＰ−Ｂ−０  ３３３  ７３０（特許文献１）は、トロンボゲンを形成しない内皮細胞表面の多糖類（ＨＳ−Ｉ）の組み込み、接着および／または改変および接続による、血液適合性の基質を調製するための方法を記載している。生物学的表面または人工表面へのこの特定の内皮細胞表面の硫酸プロテオヘパランＨＳＩの固定化により、このようにコーティングされた表面が血液適合性を持ち、永久的な血液接触に対して好ましい。しかし、ＨＳＩを生成するためのプロセスは内皮細胞の培養を必要とし、その結果、このプロセスの経済的な有用性は、内皮細胞の培養に時間がかかり、比較的大量の培養された内皮細胞を手に入れるには、かなり高いコストがかかるため、非常に限定されるので、不利益である。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】欧州特許第ＥＰ−Ｂ−０  ３３３  ７３０
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明の目的は、表面を血液適合性にコーティングするための基質、表面を血液適合性にコーティングするための方法、および望まない反応を防止または低減するための表面上でのそれらの使用、を提供することにある。
【０００７】
特に、本発明の目的は、一方で、選択された活性化剤および活性化剤の組み合わせを用いて移植の初日および数週間の細胞反応を抑制することによって、他方では、活性化剤の影響を減らしつつ、この異質な表面において、長期間にわたって合併症を招く恐れのある反応が起こらないことを保証する、トロンボゲンを形成しない表面、不活性な表面、生体適合性の表面を提供することによって、医療用製品の連続的に制御された内殖を可能にする医療用製品を提供することである。
【０００８】
この目的は、本発明の独立請求項の技術的教示によって解決される。本発明の更に有利な実施の形態は、従属項、説明、図面および実施例から明らかである。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明は一般式Ｉａの多糖類
【００１０】
【化３】
2010189649.tif 000003
【００１１】
および一般式Ｉｂの構造的に非常に類似した多糖類
【００１２】
【化４】
2010189649.tif 000004
【００１３】
を開示する。
【００１４】
式Ｉａの多糖類は、２ｋＤから４００ｋＤ、好ましくは５ｋＤから１５０ｋＤ、更に好ましくは１０ｋＤから１００ｋＤ、特に好ましくは３０ｋＤから８０ｋＤの分子量を有する。式Ｉｂの多糖類は、２ｋＤから１５ｋＤ、好ましくは４ｋＤから１３ｋＤ、更に好ましくは６ｋＤから１２ｋＤ、特に好ましくは８ｋＤから１１ｋＤの分子量を有する。変数ｎは４から１０５０までの範囲の整数である。好ましくは、ｎは９から４００まで、更に好ましくは１４から２６０までの整数であり、特に好ましくは１９から２１０までの整数である。
【００１５】
一般式ＩａおよびＩｂは二糖類を表し、これらは本発明の多糖類の基本単位として表され、この基本単位がｎ回つながることによって多糖類を形成する。２個の糖分子を含む前記基本単位は、一般式ＩａおよびＩｂが偶数の糖分子を有する多糖類に関連する場合のみを示唆することを意図していない。もちろん、一般式Ｉａおよび一般式Ｉｂは、奇数の糖単位を有する多糖類も含んでいる。ヒドロキシ基は、オリゴ糖類および多糖類の末端基としてそれぞれ存在している。
【００１６】
基ＹおよびＺは互いに独立して、以下の化学アシル基またはカルボキシアルキル基を表す：−ＣＨＯ、−ＣＯＣＨ３、−ＣＯＣ２Ｈ５、−ＣＯＣ３Ｈ７、−ＣＯＣ４Ｈ９、−ＣＯＣ５Ｈ１１、−ＣＯＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＯＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＯＣＨ（ＣＨ３）Ｃ２Ｈ５、−ＣＯＣ（ＣＨ３）３、−ＣＨ２ＣＯＯ−、−Ｃ２Ｈ４ＣＯＯ−、−Ｃ３Ｈ６ＣＯＯ−、−Ｃ４Ｈ８ＣＯＯ−。
【００１７】
好ましいのはアシル基−ＣＯＣＨ３、−ＣＯＣ２Ｈ５、−ＣＯＣ３Ｈ７、およびカルボキシアルキル基−ＣＨ２ＣＯＯ−、−Ｃ２Ｈ４ＣＯＯ−、−Ｃ３Ｈ６ＣＯＯ−である。更に好ましいのはアセチル基およびプロパノイル基であり、カルボキシメチル基およびカルボキシエチル基である。特に好ましいのはアセチル基およびカルボキシメチル基である。
【００１８】
加えて、基Ｙがアシル基を表し、基Ｚがカルボキシアルキル基を表すことが好ましい。Ｙが基−ＣＯＣＨ３、−ＣＯＣ２Ｈ５またはＣＯＣ３Ｈ７である場合が更に好ましく、特に−ＣＯＣＨ３である。更に、Ｚがカルボキシエチル基またはカルボキシメチル基の場合が更に好ましく、カルボキシメチル基が特に好ましい。
【００１９】
式Ｉａによって示される二糖類基本単位は、置換基Ｙおよび更なる基Ｚをそれぞれ含む。
【００２０】
本発明の多糖類が２つの異なる基、すなわちＹおよびＺを含むことは明らかである。一般式Ｉａは、二糖類基本単位を共につなげることにより生じる厳格な交互配列で基ＹおよびＺを含む多糖類を含むだけではなく、アミノ基で完全にランダムな順序で基ＹおよびＺを有する多糖類も含むべきであることをここで指摘することは重要である。更に、一般式Ｉａは、基ＹおよびＺを異なる数で含有する多糖類も含むべきである。Ｙ基の数対Ｘ基の数の比は、７０％：３０％、好ましくは６０％：４０％、特に好ましくは４５％：５５％であることができる。特に好ましいのは、単にランダムな分布で、アミノ基の実質的に半分がＹ残基を有し、アミノ基の残りの半分がＺ残基を有する、一般式Ｉａの多糖類である。用語「実質的に半分」は、ほとんどの適切な場合において正確に５０％を意味するが、４５％から５５％まで、特に４８％から５２％までも含むべきである。
【００２１】
好ましいのは、基ＹおよびＺが以下の意味を有する一般式Ｉａの化合物である：
Ｙ      ＝      −ＣＨＯ および Ｚ      ＝      −Ｃ２Ｈ４ＣＯＯ−
Ｙ      ＝      −ＣＨＯ および Ｚ      ＝      −ＣＨ２ＣＯＯ−
Ｙ      ＝      −ＣＯＣＨ３ および Ｚ      ＝      −Ｃ２Ｈ４ＣＯＯ−
Ｙ      ＝      −ＣＯＣＨ３ および Ｚ      ＝      −ＣＨ２ＣＯＯ−
Ｙ      ＝      −ＣＯＣ２Ｈ５ および Ｚ      ＝      −Ｃ２Ｈ４ＣＯＯ−
Ｙ      ＝      −ＣＯＣ２Ｈ５ および Ｚ      ＝      −ＣＨ２ＣＯＯ−
特に好ましいのは、基ＹおよびＺが以下の意味を有する一般式Ｉａの化合物である：
Ｙ      ＝      −ＣＨＯ および Ｚ      ＝      −Ｃ２Ｈ４ＣＯＯ−
Ｙ      ＝      −ＣＯＣＨ３ および Ｚ      ＝      −ＣＨ２ＣＯＯ−
特に好ましいのは、Ｙが以下の基の１つである、一般式Ｉｂの化合物である：−ＣＨＯ、−ＣＯＣＨ３、−ＣＯＣ２Ｈ５またはＣＯＣ３Ｈ７。更に好ましいのは、基−ＣＨＯ、−ＣＯＣＨ３、−ＣＯＣ２Ｈ５であり、特に好ましいのは基−ＣＯＣＨ３である。
【００２２】
一般式Ｉｂの化合物は、ごく少量の遊離アミノ基を含有する。ニンヒドリン試験を用いても遊離アミノ基が検出されない場合、この試験の感受性に起因して、全ての−ＮＨ−Ｙ基のうち、２％未満、好ましくは１％未満、特に好ましくは０．５％未満が遊離アミノ基として存在すること、すなわち、Ｙが水素を表す−ＮＨ−Ｙ基の割合が低いことを結論づけることができる。
【００２３】
一般式ＩａおよびＩｂの多糖類がカルボキシレート基およびアミノ基を含有する場合、一般式ＩａおよびＩｂは、それぞれの多糖類のアルカリ金属塩およびアルカリ土類金属塩も含む。従って、ナトリウム塩、カリウム塩、リチウム塩等のアルカリ金属塩、またはマグネシウム塩またはカルシウム塩等のアルカリ土類金属塩を述べることができる。更に、アンモニア、第1、第２、第３および第４のアミン、ピリジンおよびピリジン誘導体を用いて、アンモニウム塩、好ましくはアルキルアンモニウム塩およびピリジニウム塩を形成することができる。多糖類と塩を形成する塩基としては、ＮａＯＨ、ＫＯＨ、ＬｉＯＨ、ＣａＣＯ３、Ｆｅ（ＯＨ）３、ＮＨ４ＯＨ、テトラアルキルアンモニウム水酸化物等の無機および有機の塩基、および類似の化合物がある。
【００２４】
ヘパラン硫酸は哺乳動物の細胞表面に偏在している。細胞の種類によって、ヘパラン硫酸は、分子量、アセチル化度および硫酸化度について非常に異なる。例えば、肝臓のヘパラン硫酸は、約５０％のアセチル化度を有しているが、一方、内皮細胞の多糖外被（glycocalyx）由来のヘパラン硫酸は９０％以上のアセチル化度を示す場合がある。ヘパリンは、５％までの非常に低いレベルのアセチル化度しか示さない。肝臓のヘパラン硫酸およびヘパリンの硫酸化度は、二糖類単位あたり約２であり、内皮細胞のヘパラン硫酸の硫酸化度はほぼ０であり、他の細胞種由来のヘパラン硫酸は二糖類単位あたり０〜２である。
【００２５】
以下の図は、硫酸基がランダムに分布し、ヘパリンについて典型的な場合、二糖類単位あたり硫酸化度２の、ヘパリンまたはヘパラン硫酸の四糖類単位を示す。
【００２６】
【化５】
2010189649.tif 000005
【００２７】
すべてのヘパラン硫酸は、ヘパリンと共通の生合成プロセスを有する。この場合に、最初に、キシロース含有結合領域を有するコアタンパク質が構築される。このコアタンパク質は、キシロースと、それらに結合する２個のガラクトース残基からなる。２個のガラクトース残基のうち最後の１個に対して、グルクロン酸およびガラクトサミンが、それぞれの鎖長が達成されるまで、互いに交互に結合する。最後に、スルホトランスフェラーゼおよびエピメラーゼによる、全てのヘパラン硫酸およびヘパリンの通常の前駆体多糖類の多段階酵素的改変は、種々のヘパラン硫酸からヘパリンまでの広範囲のスペクトルを生じる変動する完全性（completeness）を有する反応によって行われる。
【００２８】
ヘパリンは、Ｄ−グルコサミンおよびＤ−グルクロン酸またはＬ−イズロン酸から代替的に構築され、ここで、Ｄ−グルコサミンおよびＤ−グルクロン酸は、β−１，４−グリコシド様式（または、α−１，４−グリコシド様式におけるＬ−イズロン酸）で二糖類となるように結合し、ヘパリンサブユニットを形成する。これらのサブユニットは、順に、互いにβ−１，４−グリコシド様式で結合し、ヘパリンへと導かれる。スルホニル基の位置は変わってもよい。四糖類単位は、平均４〜５の硫酸基を含有する。ヘパラン硫酸は、硫酸ヘパリチンとも称され、肝臓のヘパラン硫酸を除き、ヘパリンよりもＮ−結合およびＯ−結合したスルホニル基が少ないが、Ｎ−アセチル基が多い。
【００２９】
図３から明らかなように、一般式Ｉａの化合物（例として図３Ｃを参照）および一般式Ｉｂの化合物（例として図３Ｂを参照）は、内皮細胞の天然のヘパラン硫酸と構造的に非常に類似しているが、内皮細胞のヘパラン硫酸の使用における最初に記載したような不利益を防ぐ。
【００３０】
抗血栓活性について、特定の五糖類単位が、約３番目の分子ごとに市販のヘパリン調整物中に見出すことができるものが原因である。異なる抗血栓活性を持つヘパリン調製物は、特定の分離技術によって製造可能である。高い活性において、例えば、調製物から得られるアンチトロンビン−ＩＩＩ−アフィニティークロマトグラフィー（「高親和性」−ヘパリン）によって、この活性な配列は全てのヘパリン分子中に見出され、一方、「非親和性」−調製物は特徴的ではない五糖類配列であり、凝固の活性阻害は検出することができない。この五糖類との相互作用を介して、アンチトロンビンＩＩＩの活性、凝固鍵因子トロンビンの阻害剤は、本質的に累乗される（結合親和性は因子（factor）２×１０３まで増加する）［Stiekema J.C.J.;Clin Nephrology 26,Suppl.No.1,S3-S8,(1986)］。
【００３１】
ヘパリンのアミノ基はほとんどＮ−硫酸化またはＮ−アセチル化されている。最も重要なＯ−硫酸化位置は、イズロン酸のＣ２およびグルコサミンのＣ６およびＣ３である。血漿の凝固における五糖類の活性のために、基本的にＣ６上の硫酸基が原因であり、それより低い比率で他の官能基も原因である。
【００３２】
ヘパリンまたはヘパラン硫酸でコーティングされた医療用インプラントの表面は、コーティングによって単に状況的に血液適合性になり、その状態を維持する。人工表面上に添加されるヘパリンまたはヘパラン硫酸は、上述の五糖類単位とアンチトロンビンＩＩＩとの立体障害に起因する、制限された相互作用に関する、その抗血栓活性の測定値において部分的に顕著に減少する。
【００３３】
これらのポリアニオン性基質の固定化のために、一方で、ヘパリンの凝固抑制効果または硫酸ヘパリンの凝固抑制効果を排除し、他方では、付着によって特定の凝固プロセスを開始し、それにより血漿タンパク質（例えば、アルブミン、フィブリノーゲン、トロンビン）の三次構造が変化し、その上に血小板が付着する全ての場合において、ヘパリン化表面上への血漿タンパク質の強い吸着が観察される。
【００３４】
従って、一方で、固定化による五糖類単位とアンチトロンビンＩＩＩとの制限された相互作用、他方では、医療用インプラント上でヘパリンまたはヘパラン硫酸層上への血漿タンパク質の付着について、相関関係が存在し、コーティングの抗血栓性の損失を導き、２〜３秒の間に起こる血漿タンパク質の吸着が抗凝固性表面を失わせ、粘着性の血漿タンパク質が三次構造を変化させ、それによってトロンボゲン生成能を有する表面が生じるため、正反対のことも起こり得る。驚くべきことに、一般式ＩａおよびＩｂの化合物が、ヘパリンまたはヘパラン硫酸に対して構造的に異なっているにもかかわらず、ヘパリンの血液適合性を示し、更に、一般式ＩａおよびＩｂの化合物の固定化の間に、凝固カスケードの活性化における初期段階を示す血漿タンパク質の顕著な付着が観察されないことが検出された。本発明の化合物の血液適合性は、人工表面への固定後にも維持されている。
【００３５】
更に、ヘパリンまたはヘパラン硫酸の硫酸基は、アンチトロンビンＩＩＩとの相互作用のために必要であり、ヘパリンまたはヘパラン硫酸に抗血栓効果を付与すると考えられる。式Ｉｂの化合物および式Ｉａの化合物は、ほとんど完全な脱硫酸化に起因して、凝固抑制に活性を持たず、すなわち、抗凝固性を持たず、一般式Ｉｂの化合物の硫酸基は、二糖類単位あたりの硫酸基が０．２未満の少量になるまで除去される。
【００３６】
一般式Ｉｂの化合物は、最初に多糖類を実質的に完全に脱硫酸化し、次いで実質的に完全にＮ−アシル化することによって、ヘパリンまたはヘパラン硫酸から製造可能である。用語「実質的に完全に脱硫酸化」は、９０％を超える、好ましくは９５％を超える、特に好ましくは９８％を超える脱硫酸化度をいう。脱硫酸化度は、遊離アミノ基を検出する、いわゆるニンヒドリン試験によって決定することができる。脱硫酸化は、ＤＭＭＢ（ジメチルメチレンブルー）を用いて得られる着色反応が起こらない程度まで行われる。この着色試験は、硫酸化した多糖類を検出するために適切である。しかし、それらの検出限界は当該技術分野の文献において公知ではない。脱硫酸化は、例えば、溶媒混合物中でピリジニウム塩を加熱することによって実施できる。特に、ＤＭＳＯ、１，４−ジオキサンおよびメタノールの混合物が適していることがわかった。
【００３７】
ヘパラン硫酸およびヘパリンは、全体的な加水分解によって脱硫酸化、次いで再アシル化された。その後、二糖類単位あたりの硫酸基の数（Ｓ／Ｄ）を１３Ｃ−ＮＭＲによって決定した。以下の表１は、ヘパリン、および脱硫酸化され、再アセチル化されたヘパリン（Ａｃ−ヘパリン）の実施例におけるこれらの結果を示す。
【００３８】
表１：１３Ｃ−ＮＭＲによって決定されるような、ヘパリン、およびＡｃ−ヘパリンの実施例における二糖類単位あたりの官能基の分布
【００３９】
【表１】
2010189649.tif 000006
【００４０】
２−Ｓ、３−Ｓ、６−Ｓ それぞれ２位、３位、６位に硫酸基
ＮＳ：アミノ基上に硫酸基
Ｎ−Ａｃ：アミノ基上にアセチル基
ＮＨ２：遊離アミノ基
Ｓ／Ｄ：二糖類単位あたりの硫酸基
ヘパリンの場合には硫酸基含量が約２．５の硫酸基／二糖類単位（Ｓ／Ｄ）であるのと比較して、Ａｃ−ヘパリンの場合には、約０．０３の硫酸基／二糖類単位が再生可能に得られた。
【００４１】
上述のように、ヘパリンまたは硫酸ヘパリンと、前記一般式の化合物とにおける硫酸基含量の違いは、アンチトロンビンＩＩＩに対する活性におよびこれらの化合物の凝固効果にかなりの悪影響を与える。
【００４２】
一般式ＩａおよびＩｂの化合物は、二糖類単位あたりの硫酸基含量が０．２未満であり、好ましくは０．０７未満、更に好ましくは０．０５未満、特に好ましくは二糖類単位あたりの硫酸基含量が０．０３未満である。
【００４３】
活性な凝固抑制作用機構が認められているヘパリンの硫酸基を除去することによって、ヘパリンは、一方で、凝固プロセスにおける活性な役割を持たず、他方で、凝固システムによって異質面として検出されない、血液適合性の、凝固不活性なオリゴ糖類または多糖類の適切な表面改質を受ける。このコーティングは、血液の凝固活性成分に対して最も高い標準的な血液適合性および不動態性を与える天然物を首尾よく模倣する。
【００４４】
実施例５および６は、一般式Ｉａおよび／またはＩｂの本発明の化合物でコーティングされる表面が、特に共有結合的にコーティングされる表面が、不動態性、非トロンボン形成性、血液適合性、非増殖性および／または非炎症性のコーティングを生じることを明らかにする。このことは、Ａｃ−ヘパリンの実施例によって明らかになっている。
【００４５】
用語「実質的に完全にＮ−アシル化された」は、９４％を超える、好ましくは９７％を超える、特に好ましくは９８％を超えるＮ−アシル化度をいう。アシル化は、遊離アミノ基のニンヒドリン検出がいかなる着色反応も示さないほど完全な様式で行われる。アシル化剤として、カルボン酸塩化物、臭化物、または無水物が好ましく使用される。例えば、無水酢酸、無水プロピオン酸、無水ブタン酸、酢酸塩化物、プロピオン酸塩化物またはブタン酸塩化物が、本発明の化合物を調製するために適している。無水カルボン酸は、アシル化剤として特に適している。
【００４６】
溶媒として、特に無水カルボン酸のための溶媒として、脱イオン水が、好ましくは、１０〜３０体積％の量で添加される共溶媒とともに使用される。共溶媒として、メタノール、エタノール、ＤＭＳＯ、ＤＭＦ、アセトン、ジオキサン、ＴＨＦ、酢酸エチルエステルおよび他の極性溶媒が適している。カルボン酸ハロゲン化物を使用する場合、ＤＭＳＯまたはＤＭＦのような水を含まない極性溶媒が使用されるのが好ましい。
【００４７】
溶媒として、脱イオン水が、好ましくは、１０〜３０体積％の量で添加される共溶媒とともに使用される。共溶媒として、メタノール、エタノール、ＤＭＳＯ、ＤＭＦ、アセトン、ジオキサン、ＴＨＦ、酢酸エチルエステルおよび他の極性溶媒が適している。
【００４８】
一般式Ｉａの本発明の化合物は、糖分子の半分にカルボキシレート基を有し、他の半分にＮ−アシル基を有する。
【００４９】
このような化合物は、多糖類ヒアルロン酸、硫酸デルマタン、コンドロイチン硫酸から製造することもできる。ヘパリンおよびヘパラン硫酸に対する違いは、本明細書中では１，４−グリコシド結合ではなく１，３−グリコシド結合に存在する単糖類の結合から生じる。二糖類は再び、互いに１，４−グリコシドに結合する。血液凝固抗血栓活性な硫酸デルマタン［Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ  ２８９，３１３〜３３０（１９９３）］の場合にも、コントロイチン硫酸Ｎ−アセチルグルコサミンがＮ−アセチルガラクトサミンによって置換され、４位のＣ原子でのヒドロキシル基の立体的位置が異なる。
【００５０】
それらの関連する構造に起因して、多糖類は、以下のような違いによって分類される：
タイプ１）ウロン酸−ガラクトサミンタイプ（ＨｅｘＡ−ＧａｌＮ）ｎ：
このタイプに分類されるのは硫酸コンドロイチンおよび硫酸デルマタンである。この基に典型的なのは、ガラクトサミンに対してウロン酸がβ−１，３−グリコシド結合していることである。ガラクトサミンは、次のウロン酸に対して一部分がβ−１，４−グリコシド結合している。硫酸デルマタンは、ウロン酸を生じるヘパリンおよびヘパラン硫酸におけるものとは別の、つまり大量のＬ−イズロン酸によって、硫酸コンドトイチンとは異なる。硫酸コンドロイチンの硫酸化度は、二糖類あたり０．１から１．３の硫酸基である。硫酸デルマタンは、硫酸コンドロイチンよりも平均的に高い硫酸化度で、二糖類あたり１．０から３．０までの硫酸基を有し、ヘパリンと似た値に達している。アミノ基はＮ−アセチル化されている。
【００５１】
脱硫酸化およびＮ−再アセチル化は、ヘパリンおよび硫酸ヘパリンの場合におけるように、トロンボンを形成しないコーティングとして使用するためにも適する化合物を導く。
【００５２】
タイプ２）ウロン酸−グルコサミンタイプ（ＨｅｘＡ−ＧｌｃＮ）ｎ：
このタイプに分類されるのは、ヘパリン、ヘパラン硫酸およびヒアルロナンである。ヘパリンおよびヘパラン硫酸は、β−１，４−結合のみであり、一方、この種類にも分類されるヒアルロナンにおいて、単糖類Ｄ−グルクロン酸およびＤ−グルコサミンはβ−１，３−結合した単糖類である。この多糖類は、硫酸基を有さずＮ−アセチル化されている多糖類のみを含む。分子量は、ヘパリンおよびヘパラン硫酸の最大値と比較して、８０００ｋＤにまで達する。鎖長の減少およびアセチル基の維持またはＮ−再アセチル化によって、単糖類のβ−１，３−グリコシド結合によってのみ式Ｉｂから区別できる構造が導かれる。
【００５３】
更なる化合物は、キチンまたはキトサンからも調製可能である。キチンは、そのモノマー単位がＮ−アセチル−Ｄ−グルコサミンからなり、β−１，４−グリコシド様式で結合する、窒素含有多糖類である。キチンは、約２，０００個の糖単位からなり、約４００，０００ｇ／ｍｏｌの分子量を有する直鎖ポリマーである。キチンは溶解度が非常に低く、水、有機溶媒および希酸または希塩基にほとんど溶けない。強酸と混合すると加水分解し、Ｄ−グルコサミンおよび酢酸が生成する。しかし、強塩基を用いて処理すると、キトサンおよび酢酸塩が生じる。
【００５４】
キトサンは、キチンのケン化によって容易に製造することができる。キトサンは、β−１，４−グリコシド結合したグルコサミン（２−アミノ−２−デオキシ−Ｄ−グルコース）からなる。キトサンは、そのフィルム形成能について知られており、イオン交換器のための基本材料として更に使用され、血清中のコレステロール濃度を下げ、減量のための薬剤として更に使用される。
【００５５】
一般式Ｉａの本発明の基質は、強塩基を用いてキチンを部分的に脱アセチル化し、遊離アミノ基をモノカルボキシアルキル化することによって、キチンから製造可能である（図１を参照）。脱アセチル化度、すなわち、デマスクした第１アミノ基の量は、容積分析によって決定できる。遊離アミノ基の定量的な検出は、ニンヒドリン反応を用いて行われる。実験が行われる様式によって、２０から８０％の脱アセチル化度を得ることができる。４０から６０％の脱アセチル化度が好ましく、４５から５５％が特に好ましい。
【００５６】
この様式の合成によって、多糖類は、単にランダムな分布で、Ｎ−アセチル基またはＮ−カルボキシアルキル基のいずれかを含有する糖単位を得ることができる。
【００５７】
キチンのＮ−アセチル基の塩基性加水分解によって容易に得ることができるキトサン（図１を参照）は、同時に、式Ｉａの多糖類の合成のための出発物質として役立つ。
【００５８】
キトサンはＮ−アセチル基を非常にわずかしか有していない。従って、本発明の化合物は、一方で、第１のステップで遊離アミノ基の実質的に半分をカルボキシアルキル化し、次いで残りの遊離アミノ基をアシル化するか、またはアシル化を最初に行い、次いで残りの遊離アミノ基と適切なカルボキシアルキル化剤とを反応させることによって得ることができる。アミノ基の実質的に半分がアシル化され、残りの半分がカルボキシアルキル化されている場合が好ましい。
【００５９】
「部分的にＮ−アシル化されたキトサン」は、３０〜７０％、好ましくは４０〜６０％、特に好ましくは４５〜５５％のＮ−アシル化度をいう。特に好ましいのは、単にランダムな分布で、アミノ基の実質的に半分がＹ残基を有し、アミノ基の残りの半分がＺ残基を有する、キトサン誘導体である。用語「実質的に半分」は、最も適切な場合には正確に５０％を意味するが、４５％から５５％までの範囲も含むべきである。カルボキシアルキル化度およびアシル化度は、例えば、１３Ｃ−ＮＭＲで決定できる（偏差±３％）。
【００６０】
第１の反応ステップにおいて、特定の数の遊離アミノ基がアシル化されるかまたはカルボキシアルキル化されるという事実に起因して、このことにより、一般式Ｉａの多糖類におけるアシル基またはカルボキシアルキル基の完全にランダムな分布を必然的に生じる。従って、式Ｉａは、本発明の多糖類のうちの二糖類単位を示すことを意図するだけでなく、アシル基およびカルボキシアルキル基の交互配列を決定することも意図する。
【００６１】
以下の図は、Ｎ−カルボキシメチル化され、Ｎ−アセチル化されたキトサンの典型的な四糖類単位を示す。
【００６２】
【化６】
2010189649.tif 000007
【００６３】
本発明は、コーティング、特に天然および／または人工の表面を血液適合性にコーティングするための、一般式Ｉａおよび／またはＩｂの化合物およびそれらの化合物の塩の使用を記載する。「血液適合性」は、血液凝固システムまたは血小板の基質と相互作用せず、血液凝固カスケードの引き金とならないことを意味する、本発明に従う化合物の性質をいう。
【００６４】
加えて、本発明は、表面を血液適合性にコーティングするための、オリゴ糖類および／または多糖類を開示している。好ましいのは、上述の分子量の範囲内の多糖類である。使用されるオリゴ糖類および／または多糖類の顕著な特徴の１つは、大量の糖単位Ｎ−アシルグルコサミンまたはＮ−アシルガラクトサミンを含有することである。このことは、糖単位の４０〜６０％、好ましくは４５〜５５％、特に好ましくは４８〜５２％がＮ−アシルグルコサミンまたはＮ−アシルガラクトサミンであり、実質的に残りの糖単位がそれぞれカルボキシル基を有することを意味する。従って、通常は９５％を超える、好ましくは９８％を超えるオリゴ糖類および／または多糖類が、単に２個の糖単位からなり、１つの糖単位はカルボキシル基を有し、他のものはＮ−アシル基を有する。
【００６５】
オリゴ糖類および／または多糖類の１つの糖単位は、Ｎ−アシルグルコサミンおよびＮ−アシルガラクトサミン、好ましくはＮ−アセチルグルコサミンおよびＮ−アセチルガラクトサミンであり、他方はウロン酸、好ましくはグルクロン酸およびイズロン酸である。
【００６６】
好ましいのは、実質的に糖グルコサミンおよびガラクトサミンからなり、実質的に糖単位の半分がＮ−アシル基、好ましくはＮ−アセチル基を保有し、グルコサミン単位の他の半分が、アミノ基を介して、または１つ以上のメチレニル基を介して直接結合するカルボキシル基を保有するオリゴ糖類および／または多糖類である。アミノ基に結合するこれらのカルボン酸基は、好ましくはカルボキシメチルまたはカルボキシエチル基である。更に、実質的にその半分、すなわち４８〜５２％、好ましくは４９〜５１％、特に好ましくは４９．５〜５０．５％が、Ｎ−アシルグルコサミンおよびＮ−アシルガラクトサミンであり、好ましくはＮ−アセチルグルコサミンまたはＮ−アセチルガラクトサミンからなり、および実質的にそれらの他の半分がウロン酸、好ましくはグルクロン酸およびイズロン酸からなる、オリゴ糖類および／または多糖類が好ましい。特に好ましいのは、２つの糖単位が実質的に交互の配列を示す（すなわち、交互の接続の場合における統計的偏移率にかかわらない）オリゴ糖類および／または多糖類である。偏差結合の比は、１％未満、好ましくは０．１％未満であるべきである。
【００６７】
驚くべきことに、本発明の使用のために、特に、実質的に脱硫酸化され、実質的にＮ−アシル化されたヘパリンおよび部分的にＮ−カルボキシアルキル化され、Ｎ−アシル化されたキトサン並びに脱硫酸化され、実質的にＮ−アシル化された硫酸デルマタン、硫酸コンドロイチン、更に鎖長の減少したヒアルロン酸が特に適していることが示された。特に、Ｎ−アセチル化されたヘパリンおよび部分的にＮ−カルボキシメチル化され、Ｎ−アセチル化されたキトサンは、血液適合性コーティングに適している。
【００６８】
「実質的に」によって定義される脱硫酸化度およびアシル化度は、すでに上記で更に定義された。用語「実質的に」は、統計的偏差を考慮に入れる必要があることを明らかにすることを意図している。糖単位の実質的に交互の配列は、一般的に、２個の等しい糖単位が互いに結合しているわけではないが、このような誤りのある結合を完全に排除するわけではないことを意味する。これに対して、「実質的に半分」は、ほぼ５０％を意味するが、わずかな偏差は許容する。これは、特に生合成で製造される高分子において、最も適切な場合は決して達成されず、酵素は完全に働くわけではなく、触媒は通常特定の誤り率を含んでいるので、特定の偏差は常に考慮に入れなければならないためである。しかし、天然ヘパリンの場合には、Ｎ−アセチルグルコサミンおよびウロン酸単位（グルクロン酸の代わり）の厳密な交互配列が存在する。
【００６９】
更に、直接的な血液接触を意図する、表面を血液適合性にコーティングするためのプロセスが開示される。前記プロセスにおいて、天然および／または人工の表面が提供され、上に記載されるオリゴ糖類および／または多糖類は上記表面上に固定される。
【００７０】
これらの表面上のオリゴ糖類および／または多糖類の固定化は、オリゴ糖類および／または多糖類の疎水性相互作用、ファンデルワールス力、静電相互作用、水素結合、イオン相互作用、架橋を介して、および／または表面上の共有結合によって達成可能である。好ましいのは、オリゴ糖類および／または多糖類の共有結合（横からの結合）、更に好ましくは共有結合性の単一点での結合（横からの結合）、特に好ましくは共有結合性の末端結合（末端からの結合）である。
【００７１】
医療用製品の任意の天然および／または人工の表面は、例えば、プロテーゼ、臓器、血管、大動脈、心臓弁、管、臓器交換パーツ、インプラント、繊維、中空繊維、ステント、皮下針、シリンジ、層、糖剤、血液容器、タイタープレート、ペースメーカー、吸着媒体、クロマトグラフィー媒体、クロマトグラフィーカラム、ダイアライザー、接続パーツ、センサー、ベンタイル、遠心チャンバ、熱交換器、内視鏡、フィルター、ポンプチャンバの表面、および他の表面に使用可能であり、これらは血液適合性を有するべきである。用語「医療用製品」は、広範囲に理解されるべきであり、特に、血液と短時間接触するかかる製品（例えば内視鏡）または永久的に接触する製品（例えばステント）の表面をいう。
【００７２】
以下に、本発明のコーティング方法を記載する。医療用デバイスの生物学的表面および／または人工表面は、以下の方法を用いて血液適合性のコーティングを備えることができる：
【００７３】
ａ）医療用デバイスの表面を提供するステップ、および
ｂ）式Ｉａおよび／またはＩｂの少なくとも１つのオリゴ糖類および／または多糖類の付着ステップ、
および／または
少なくとも１つのオリゴ糖類および／または多糖類は、糖単位Ｎ−アシルグルコサミンまたはＮ−アシルガラクトサミン４０％から６０％を含有し、残りの糖単位は実質的に糖単位あたり１つのカルボキシル基を含有する。
【００７４】
「付着」は、対応する化合物で表面を少なくとも部分的にコーティングすることをいい、ここで、上記化合物は下にある表面上および／または表面中に付着され、および／または導入され、および／または固定化されるか、または何らかの方法で固着される。
【００７５】
「実質的に残りの糖のビルディング単位」とは、カルボキシル基を有する糖ビルディング単位の残りの６０〜４０％のうち、残りの糖ビルディング単位の９３％、好ましくは９６％、特に好ましくは９８％であると理解すべきである。
【００７６】
コーティングされていない表面および／または非血液適合性の表面が、提供されるのが好ましい。「非血液適合性」表面は、血液凝固システムを活性化可能な、多かれ少なかれトロンボゲン形成能を有する表面をいう。
【００７７】
代替の実施の形態は以下のステップを含む：
ａ）医療用デバイスの表面を提供するステップ、および
ｂ’）医療用デバイスの表面上に生体安定性の層（膜）を付着
または
ａ）医療用デバイスの表面を提供するステップ、および
ｂ）式Ｉａおよび／またはＩｂの少なくとも１つのオリゴ糖類および／または多糖類の付着ステップ、
および／または
少なくとも１つのオリゴ糖類および／または多糖類が、糖単位Ｎ−アシルグルコサミンまたはＮ−アシルガラクトサミン４０％から６０％を含有し、残りの糖単位が、糖単位あたり１つのカルボキシル基を実質的に含有する。
【００７８】
ｂ’）医療用デバイスの表面上に生体安定性の層を付着するステップ、および
ｄ’）式Ｉａおよび／またはＩｂの少なくとも１つのオリゴ糖類および／または多糖類の更なる血液適合性の層の付着ステップ、
および／または
少なくとも１つのオリゴ糖類および／または多糖類が、糖単位Ｎ−アシルグルコサミンまたはＮ−アシルガラクトサミン４０％から６０％を含有し、残りの糖単位が、糖単位あたり１つのカルボキシル基を実質的に含有する。
【００７９】
最後に述べた実施の形態は、例えば、移植中の不適切な輸送または複雑な条件に起因して、ポリマー性層およびそれと共に外部の血液適合性層の機械的ダメージの場合でさえ、表面コーティングが血液適合性であるその性質を失わないことを確実にしている。
【００８０】
「生物学的および人工」表面は、人工の医療用デバイスと人工パーツと、例えば、ブタの心臓と人工心臓弁との組み合わせであると理解すべきである。
【００８１】
単一層は、好ましくは浸漬法または噴霧法によって付着され、一方、１つの層が医療用デバイスの表面上で別のまたは更なる活性化剤を付着するのと同時に付着可能であり、次いで、共有結合的におよび／または接着的に結合するそれぞれの層において行われる。この様式において、１つ以上の活性化剤が、医療用デバイス上に血液適合性の層が付着するのと同時に付着可能である。
【００８２】
生体安定性または生分解性の層のために使用可能な活性化剤および基質を、以下で更に項目別に記す。
【００８３】
この第１の生体安定性または血液適合性の層について、追加で任意のステップｃ）において、１つ以上の活性化剤の活性化剤層を付着させることが可能である。好ましい実施の形態では、活性化剤はその下層に共有結合する。また、活性化剤は、好ましくは浸漬法または噴霧法によって付着される。
【００８４】
ステップｂ）またはステップｃ）の後、血液適合性の層または活性化剤層上に少なくとも１つの生分解性層および／または少なくとも１つの生体安定性の層を付着することを含む、更なるステップｄ）を続けることができる。
【００８５】
代替の実施の形態によれば、ステップｂ’）またはステップｃ）の後に、式ＩａまたはＩｂの本発明の少なくとも１つのオリゴ糖類および／または多糖類の付着または固定化、および／または、血液適合性層として、糖単位Ｎ−アシルグルコサミンまたはＮ−アシルガラクトサミンを４０％から６０％含有し、残りの糖単位が実質的に糖単位あたり１つのカルボキシル基を含有する少なくとも１つのオリゴ糖類および／または多糖類の付着または固定化を含む、ステップｄ’）を続けることができる。好ましくはステップｂ’）の後にステップｄ’）が続く。
【００８６】
ステップｄ）またはｄ’）の後に、１つ以上の活性化剤の別の活性化剤層の付着を、その下の生分解性および／または生体安定性の層または血液適合性層の内部または上で行うことができる。
【００８７】
付着した活性化剤層に加えて、生体安定性、生分解性および／または血液適合性の層は、生体安定性および／または生分解性の基質と共に、または医療用デバイス上の血液適合性オリゴ糖類および／または多糖類と共に付着され、それぞれの層に含有される更なる活性化剤を含有することができる。
【００８８】
好ましい実施の形態によれば、生体安定性の層は、医療用デバイスの表面に共有結合および／または接着結合し、生体安定性層に（好ましくは共有結合で）結合する血液適合性層を完全または不完全に覆う。
【００８９】
好ましくは、血液適合性層は、抗血栓活性の原因となる五糖類の分子量範囲（購入可能なヘパリンの標準的な分子量１３ｋＤまで）において、異なる硫酸化係数（硫酸化度）およびアシル化係数（アシル化度）を持つ位置選択的に合成された誘導体の天然起源のヘパリン、ヘパラン硫酸およびその誘導体、赤血球グリコカリックスのオリゴ糖類および多糖類、脱硫酸化され、Ｎ−再アセチル化されたヘパリン、Ｎ−カルボキシメチル化され、および／または部分的にＮ−アセチル化されたキトサン、並びにこれらの基質の混合物を含む。
【００９０】
また、本発明の主題は、上述の方法の１つによって血液適合性を持ってコーティングされる医療用デバイスである。
【００９１】
更に、本発明の主題は、医療用デバイスの表面が、血液適合性層を用いて、直接的に、または少なくとも１つの間にある生体安定性および／または生分解性の層および／または活性化剤層を介して覆われ、血液適合層は、少なくとも１つのオリゴ糖類および／または多糖類からなり、これらは糖単位Ｎ−アシルグルコサミンまたはＮ−アシルガラクトサミンを４０％から６０％含有し、残りの糖単位は実質的に糖単位あたり１つのカルボキシル基を含有する、医療用デバイスである。
【００９２】
好ましい実施の形態によれば、上述のオリゴ糖類および／または多糖類の血液適合性層の下に、少なくとも１つの生体安定性層が存在し、この生体安定性層は、医療用デバイスの表面に好ましくは更に共有結合される。
【００９３】
血液適合性層の上に、血液適合性層を完全または不完全に覆う少なくとも１つの生体安定性および／または少なくとも１つの生分解性層が存在する場合が更に好ましい。特に好ましいのは、血液適合性層を覆う生分解性層である。
【００９４】
更に好ましい実施の形態は、生体安定性の下部層およびその下の血液適合性層との間に、血液適合性層に共有結合および／または接着的に結合する、非増殖性、非炎症性および／または抗血栓性の少なくとも１つの活性剤の活性化剤層を含有する。代替として、活性化剤層に対して、または活性化剤層に加えて、下部の生体安定性および／または上部の血液適合性層は、好ましくはそれぞれの層の付着と共に付着される更なる活性化剤を含有することができる。
【００９５】
基本的に全ての層、すなわち、生体安定性層、生分解性層および血液適合性層は、非増殖性、非炎症性および／または抗血栓性の１つ以上の活性化剤を含有することができ、更に、上述の層の間に、１つ以上の活性化剤の活性化剤層が存在可能である。好ましいのは、２つの層、生体安定性および血液適合性層のコーティング系であり、ここで、血液適合性層は外部層であり、両方の層は、１つ以上の活性化剤を含有することができる。更に、血液適合性層の上または下に、１つ以上の活性化剤の活性化剤層が存在する場合が好ましい。また、好ましいのは、生体安定性層、生分解性層および血液適合性層からなる三層系である。ここで、好ましくは、最も下部の層が生体安定性層である。更なる１つまたは２つの活性化剤層が可能である。２つの活性化剤層が互いに直接的に付着することも可能である。更に好ましい実施の形態において、少なくとも１つの活性化剤が、層の上または中で共有結合する。
【００９６】
活性化剤としてのコーティング方法および医療用デバイスで好ましく使用されるものは、タクロリムス、ピメクロリムス、ＰＩ８８、チモシンα−１、ＰＥＴＮ（ペンタエリスリトール四硝酸塩）、バッカチンおよびその誘導体、ドセタキセル、コルヒチン、パクリタキセルおよびその誘導体、トラピジル、α−およびβ−エストラジオール、デルミシジン（ｄｅｒｍｉｃｉｄｉｎ）、チアリン（ｔｉａｌｉｎ）（２−メチルチアゾリジン−２，４−ジカルボン酸）、チアリンナトリウム（チアリンのナトリウム塩）、シムバスタチン（ｓｉｍｖａｓｔａｔｉｎｅ）、大環状亜酸化物（ＭＣＳ）およびその誘導体、シロリムス、チロホスチン（ｔｙｒｐｈｏｓｔｉｎｅ）、Ｄ２４８５１、コルヒチン、フマル酸およびフマル酸エステル、活性化タンパク質Ｃ（ａＰＣ）、インターロイシン−１βインヒビター、およびメラニン細胞刺激ホルモン（α−ＭＳＨ）、並びにこれらの活性化剤の混合物である。
【００９７】
医療用デバイスの天然および／または人工の表面は、本発明のオリゴ糖類および／または多糖類、または糖単位Ｎ−アシルグルコサミンまたはＮ−アシルガラクトサミンを４０％から６０％含有し、残りの糖単位が糖単位あたり１つのカルボキシル基を実質的に含有するオリゴ糖類および／または多糖類の血液適合性層を用いて本明細書中に記載の方法でコーティングされる、血液循環および血液と直接接触する、インプラントおよび臓器交換パーツとしてそれぞれ特に適している。本発明に従ってコーティングされる医療用デバイスは、直接的および永久的な血液接触のために特に適しているだけでなく、驚くべきことに、このようにコーティングされた表面上にタンパク質が付着するのを減らすかまたは防ぐという特性を示す。
【００９８】
血液と接触する異質面上の血漿タンパク質の付着は本質的であり、血液システムの認識および実行行為に関する更なる事象の開始ステップである。
【００９９】
このことは、例えば、体液からのインビトロ診断において重要である。従って、本発明のコーティングの付着は、一般的に感受性の試験反応を妨害し、分析結果の錯誤をもたらし得る、診断用検出法のために使用されるマイクロタイタープレートまたは他の支持媒体上にタンパク質が非特異的に付着するのを防ぐか、または少なくとも低減する。
【０１００】
吸着媒体またはクロマトグラフィー媒体上に本発明のコーティングを使用することによって、タンパク質の非特異的な付着も防ぐかまたは低減し、より良好な分離を達成可能であり、より高い純度を持つ製品を製造可能である。
【０１０１】
特に、ステントは、本発明の方法を用いてコーティングされる。閉塞した血管のバルーン膨張を用いたステントの移植は、昨年徐々に達成されるようになった。ステントは再生した血管の閉塞リスクを減らすが、かかる再狭窄を完全に防ぐことは現時点ではまだできない。
【０１０２】
再狭窄の実際の概念上の記載は、技術文献中には見出すことができない。最も慣習的に使用される再狭窄の形態学的定義は、血管直径を通常の５０％未満まで小さくするような、首尾よいＰＴＡ（経皮経管形成術）の後の再狭窄を定義するものである。これは、血流力学の関連性および臨床病理学との関係が、大規模な科学的基礎を持たない経験的に定義される値である。実際の実験において、患者の臨床的悪化は、以前に処置した血管セグメントの再狭窄のサインとして、しばしば観察される。
【０１０３】
ステントによって生じる再狭窄について、異なる３つの理由が存在する：
ａ．）移植後の最初の期間中、ステント表面は血液と直接接触し、新しく存在する異質面に起因して血管が再び閉塞し、急性血栓症が起こる場合がある。
【０１０４】
ｂ．）ステントの移植は、最初の７日間の回復プロセスに重要な役割を果たす炎症性反応を誘発する血管の外傷を生じる。本明細書中で、並行したプロセスは、他のものの中で増殖因子の放出と関連し、制御できない増殖のために、血管の再生した閉塞を迅速に生じる平滑筋細胞の増加した増殖を開始する。
【０１０５】
ｃ．）数週間後、ステントは、血管の組織内で増殖を始める。このことは、ステントが全体的に平滑筋細胞に囲まれ、血液と接触しないことを意味する。この瘢痕化は、非常に独特であり（新生内層過形成）、ステント表面を覆うだけでなく、ステントの内部表面全体を閉塞する場合がある。
【０１０６】
ヘパリンを用いたステントのコーティングによって再狭窄の問題を解決することが試みられたがうまくいかなかった（Ｊ．Ｗｈoｅｒｌｅ他、Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｈｅａｒｔ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ２００１，２２，１８０８〜１８１６）。ヘパリンは、最初に述べた原因でのみ抗凝固剤として扱われ、溶液中でのみ全体的な効果を更に表すことが可能である。この第１の問題は、一方では、抗凝固剤の適用によって、医薬的にほぼ全体的に避けることができる。第２および第３の問題は、ステント上で局部的に平滑筋細胞の増殖を阻害することによって現在は解決することが意図されている。このことは、例えば、放射性ステントまたは薬学的な活性化剤を含有するステントによって行われる。
【０１０７】
米国特許ＵＳ−Ａ−５  ８９１  １０８は、例えば、その内部に薬学的な活性化剤を含有することができ、ステントの種々の数の出口を通って放出可能な、中空に成形されたステントを開示する。一方、欧州特許ＥＰ−Ａ−１  １２７  ５８２は、その表面に、活性化剤を実装するために適切な深さ０．１〜１ｍｍおよび長さ７〜１５ｍｍの溝を示す、ステントを記載する。これらの活性化剤を貯めておく部分は、中空ステント中の出口と同様に、含有する薬学的な活性化剤を時間通りに高濃度で、比較的長時間にわたって放出するが、平滑筋細胞がステントを囲まないか、または単に非常に遅れるという事実を生じる。その結果として、ステントはずいぶん長く血液にさらされ、血栓症による血管閉塞を再び増加させる（Liistro F.,Colombo A.,Late acute thrombosis after Paclitaxel eluting stent implantation.Heart 2001,86，２６２〜２６４）。
【０１０８】
この問題に対する１つのアプローチは、生体適合性のホスホリルコリンコーティング（ＷＯ０１０１９５７）によって表される。ここでは、赤血球細胞層の構成成分であるホスホリルコリンは、ステント上にコーティングされた非生分解性ポリマー層の構成成分としてトロンボゲンを生成しない表面を作る。その分子量に依存して、活性化剤は、ホスホリルコリン層を含むポリマーに吸収されるか、または表面上に吸着される。
【０１０９】
本発明のステントは、血液適合性の層でコーティングされ、非増殖性および／または非炎症性および必要な場合、抗血栓性の活性化剤を少なくとも含む、１つ以上の追加の層を特徴とする。
【０１１０】
ステントの血液適合性コーティングは、必要な血液適合性を提供し、ステントの表面全体にわたって均一に分布する活性化剤（または活性化剤の組み合わせ）は、制御された様式で、細胞、特に平滑筋細胞および内皮細胞を用いてステント表面を覆うことを提供する。従って、再狭窄を導き得る細胞を用いた迅速な集合および過剰増殖は、ステント表面で起こらず、一方、ステント表面を細胞で覆うことは、血栓症のリスクに関与する高い医薬濃度によって完全には防ぎきれない。
【０１１１】
従って、その下の層に共有結合および／または接着結合する、および／または層内に共有結合および／または付着結合された活性化剤または活性化剤の組み合わせは、細胞によるステント表面の集合は阻害されないが、過剰増殖は防がれる少ない用量で、連続的に放出されることを保証する。両方の効果の組み合わせは、本発明のステントが血管壁内で迅速に増殖し、再狭窄のリスクおよび血栓症のリスクを両方とも減らす能力を与える。１つ以上の活性化剤の放出は、１から１２ヶ月にわたる期間であり、好ましくは移植後１から３ヶ月である。
【０１１２】
抗増殖性の活性物質、抗炎症性(antiphlogistic)ならびに抗血栓性化合物が活性物質として用いられる。細胞成長抑止物質（cytostatics）、マクロライド抗生物質、および／または、スタチン（statins）は、抗増殖性の活性物質（active agents）として用いられるのが好ましい。適用可能な抗増殖性の活性物質は、シロリムス（ラパマイシン）、エベロリムス、ピメクロリムス、ソマトスタチン、タクロリムス、ロキシスロマイシン、ドウナイマイシン（dunaimycin）、アスコマイシン、バフィロマイシン、エリスロマイシン、ミデカマイシン、ジョサマイシン、コンカナマイシン、クラリスロマイシン、トロレアンドマイシン、フォリマイシン（folimycin）、セリバスタチン、シンバスタチン、ロバスタチン、フルバスタチン、ロスバスタチン、アトルバスタチン、プラバスタチン、ピタバスタチン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、ビノレルビン、エトポシド（etoboside）、テニポシド（teniposide）、ニムスチン、カルムスチン、ロムスチン、シクロホスファミド、４−ヒドロキシシクロホスファミド、エストラムスチン、メルファラン、ベツリニック酸（betulinic acid）、カンプトセシン、ラパコール、β−ラパコン（lapachone）、ポドフィロトキシン、ベツリン（betulin）、トロフォスファミド（trofosfamide）、ポドフィリック酸（podophyllic acid）２−エチルヒドラジド、イホスファミド、クロランブシル、ベンダムスチン（bendamustine）、ダカルバジン、ブスルファン、プロカルバジン、トレオスルファン（treosulfan）、テモゾロマイド、メラニン細胞刺激ホルモン（α−ＭＳＨ）、チオテパ、ダウノルビシン、ドキソルビシン、アクラルビシン、エピルビシン、ミトキサントロン、イダルビシン、ブレオマイシン、マイトマイシン、ダクチノマイシン、メトトレキセート、フルダラビン、フルダラビン−５’−リン酸二水素、モフェブタゾン（mofebutazone）、アセメタシン、ジクロフェナク、ロナゾラック（lonazolac）、ダプソン、ｏ−カルバモイルフェノキシ酢酸（carbamoylphenoxyacetic acid）、リドカイン、ケトプロフェン、メフェナム酸、ピロキシカム、メロキシカム、クロロキンリン酸、ペニシラミン、ヒドロキシクロロキン、オーラノフィン、金チオリンゴ酸ナトリウム、オクサセプロール（oxaceprol）、セレコキシブ、β−シトステリン、アデノシル・メチオニン（ademetionine）、ミルテカイン（myrtecaine）、ポリドカノール、ノニヴァミド（nonivamide）、レボメントール（levomenthol）、ベンゾカイン、アエスシン（aescin）、クラドリビン、メルカプトプリン、チオグアニン、シタラビン、フルオロウラシル、ゲムシタビン、カペシタビン、ドセタキセル、カルボプラチン、シスプラチン、オキサリプラチン、アムサクリン、イリノテカン、トポテカン、ヒドロキシカルバミド、ミルテフォシン、ペントスタチン、アルデスロイキン（aldesleukin）、トレチノイン、アスパラギナーゼ、トラスツズマブ、エキセメスタン、レトロゾール、ゴセレリン、セファロマニン、ペガスパルガーゼ（pegaspargase）、アナストロゾール、エキセメスタン、レトロゾール、フォルメスタン（formestane）、アミノグルテチミド（aminoglutethemide）、アドリアマイシン、アジスロマイシン、スピラマイシン、セファランチン（cepharantin）、ｓｍｃ増殖阻害剤（smc proliferation inhibitor）���２ｗ、エポシロンＡおよびＢ、ミトキサントロン、アザチオプリン、マイコフェノールアトモフェチル（mycophenolatmofetil）、ｃ−ｍｙｃ−アンチセンス、ｂ−ｍｙｃ−アンチセンス、セレクチン（サイトカイン  アンタゴニスト）、ＣＥＴＰ阻害剤、カドヘリン（cadherines）、サイトカイニン阻害剤、ＣＯＸ−２阻害剤、ＮＦｋＢ、アンギオペプチン（angiopeptin）、シプロフロキサシン、カンプトセシン、フルロブラスチン（fluroblastin）、筋細胞の増殖を阻害するモノクローナル抗体、ｂＦＧＦアンタゴニスト、プロブコール、プロスタグランジン、葉酸および誘導体、B類のビタミン、カルシポトリロールのようなビタミンD誘導体、タカルシトール、D２４８５１、フマル酸およびジメチルフマレートのような誘導体、ＩＬ−１β阻害剤、コルヒチン、例えば四硝酸ペンタエリスリトール（pentaerythritol tetranitrate）およびシンドノエイミン（syndnoeimines）のようなＮＯ供与体（一酸化窒素供与体）、Ｓ−ニトロソデリバティブ（nitrosoderivatives）、タモキシフェン、スタウロスポリン、β−エストラジオール、α−エストラジオール、エストロン、エストリオール、エチニルエストラジオール、ホスフェストロール、メドロキシプロゲステロン、エストラジオール  シピオネイト（cypionates）、エストラジオール  ベンゾアート、トラニラスト、カメバコーリン（kamebakaurin）、および、癌の治療に利用されるその他のテルペノイド、ベラパミル、チロシンキナーゼ阻害剤（チルフォスチン（tyrphostines））、シクロスポリンＡ、パクリタキセルおよびその誘導体（６−α−ヒドロキシ−パクリタキセル、バッカチン（baccatin）、およびその他）、合成的に生産および天然源に由来するカーボン・サブオキサイド（carbon suboxide）の大環状オリゴマー（ＭＣＳ）およびその誘導体、モルグラモスティム（molgramostim）（ｒｈｕＧＭ−ＣＳＦ）、ペグインターフェロン  α−２ｂ、ラノグラスチム（lanograstim）  （ｒ−ＨｕＧ−ＣＳＦ）、フィルグラスチム、マクロゴール、ダカルバジン、レトロゾール（letrozol）、ゴセレリン、セファロマニン（chephalomannin）、トラスツズマブ、エキセメスタン、バシリキシマブ、ダシリツマブ（daclizumab）、エリプチシン、Ｄ−２４８５１（カルビオケム）、コルセミド、サイトカラシンＡ−Ｅ、インダノシン（indanocine）、ノコダゾール、Ｓ１００プロテイン、ＰＩ−８８、メラニン細胞刺激ホルモン（α−ＭＳＨ）、バシトラシン、ビトロネクチン受容体アンタゴニスト、アゼラスチン、グアニジル  シクラーゼ刺激薬（stimulator）  組織メタロプロテアーゼインヒビター（tissue inhibitor of metal proteinase）−１および−２、遊離した核酸、ウイルス伝搬体（virus transmitters）に組み込まれた核酸、ＤＮＡおよびＲＮＡ断片、プラスミノーゲン活性化因子インヒビター−１、プラスミノーゲン活性化因子インヒビター−２、インターロイキン−１β阻害剤、アンチセンス・オリゴヌクレオチド、ＶＥＧＦ阻害剤、いわゆるＩＧＦ−１、が好ましい。
【０１１３】
抗生物質（antibiotics）の群から、さらに、セファドロキシル、セファゾリン、セファクロル、セフォタキシム（cefotaxim）、トブラマイシン、ゲンタマイシンを利用することができる。手術後の段階（postoperative phase）に対してよい影響を与えるものとして、例えばジクロキサシリンのようなペニシリン、オキサシリン、サルファ剤、メトロニダゾール、例えばアルガトロバンのような抗血栓剤、アスピリン、アブシキシマブ、合成された（synthetic）アンチトロンビン、ビバリルジン（bivalirudin）、クマジン、ダームシジン、エノキサパリン、ヘモパリン（hemoparin）、組織プラスミノーゲン活性化因子、ＧｐＩＩｂ／ＩＩＩａ  血小板層レセプター、ファクターＸａ阻害剤（factor Xa inhibitor）、活性化プロテインＣ、ダームシジン、抗体、ヘパリン、ヒルジン、ｒ−ヒルジン、ＰＰＡＣＫ、プロタミン、プロウロキナーゼ、ストレプトキナーゼ、ワルファリン、ウロキナーゼ、例えばジピラミドール（dipyramidole）のような血管拡張薬（vasodilators）、トラピジル、ニトロプルシド（nitroprussides）、例えばトリアゾロピリミジン（triazolopyrimidine）およびセラミンのようなＰＤＧＦアンタゴニスト、カプトプリルのようなＡＣＥ阻害剤、シラザプリル、リシノプリル、エナラプリル、ロサルタン、チオールプロテアーゼ阻害剤、カスパーゼ阻害剤、アポトーシス阻害剤、例えばｐ６５  ＮＦ−ｋＢまたはＢｃｌ−ｘＬ  アンチセンス・オリゴヌクレオチドおよびプロスタサイクリンのようなアポトーシスレギュレーター、バピプロスト（vapiprost）、インターフェロンα、βおよびγ、ヒスタミン・アンタゴニスト、セロトニンブロッカー、ハロフジノン、ニフェジピン、トコフェロール、トラニラスト（tranirast）、モルシドミン、茶成分ポリフェノール、エピカテキン・ガレート（epicatechin gallate）、エピガロカテキン・ガレート（epigallocatechin gallate）、ボズウェラ酸（boswellic acids）およびその誘導体（derivatives）、レフルノミド、アナキンラ、エタネルセプト、スルファサラジン、エトポシド、ジクロキサシリン、テトラサイクリン、トリアムシノロン、ムタマイシン（mutamycin）、プロカイナミド（procainimid）、レチノイン酸、キニジン、ジソピラミド（disopyrimide）、フレカイニド、プロパフェノン、ソタロール（sotolol）、アミドロン（amidorone）がある。さらに、活性物質（active agents）は、ステロイド（ヒドロコルチゾン、ベタメタゾン、デキサメタゾン）、例えばフェノプロフェン、イブプロフェン、インドメタシン、ナプロキセン、フェニルブタゾンおよびその他のような非ステロイド化合物（ＮＳＡＩＤＳ）である。例えばアシクロビル、ガンシクロビルおよびジドブジンのような抗ウイルス剤も適用可能である。種々の抗かび剤（antimycotics）も、当分野で用いられる。この例として、クロトリマゾール、フルシトシン、グリセオフルビン、ケトコナゾール、ミコナゾール、ニスタチン、テルビナフィンがある。例えばクロロキン、メフロキン、キニーネのようなアンチプロゾール（antiprozoal）作用物質は、同等の手段として有効な活性物質であり、さらに、例えばヒッポカエスクリン（hippocaesculin）のような天然のテルペノイド、バリントゲノール（barringtogenol）−Ｃ２１−アンゲレート、１４−デヒロドアグロスチスタチン（dehydroagrostistachin）、アグロスケリン（agroskerin）、アガロスチスタチン（agrostistachin）、１７−ヒドロキシアグロスチスタチン（hydroxyagrostistachin）、オヴァトジオライド（ovatodiolids）、４，７−オキシシクロアニソメリック・アシッド（oxycycloanisomelic acid）、バッカリノイド（baccharinoids）Ｂ１、Ｂ２およびＢ３、トゥベイモシド（tubeimoside）、ブルセノール（bruceanol）Ａ、ＢおよびＣ、ブルセアンチノシドＣ、ヤダンジオシド（yadanziosides）ＮおよびＰ、イソデオキシエレファントピン（isodeoxyelephantopin）、トメンファントピン（tomenphantopin）ＡおよびＢ、コロナリン（coronarin）Ａ、Ｂ、ＣおよびＤ、ウルソール酸、ヒプタチック酸（hyptatic acid）Ａ、ゼオリン（zeorin）、イソ−イリドジャーマナル（iridogermanal）、メイテンフォリオル（maytenfoliol）、エフサンチン（effusantin）Ａ、エキシサニン（excisanin）ＡおよびＢ、ロンギカウリン（longikaurin）  Ｂ、スカルポネアチン（sculponeatin）Ｃ、カメバウニン（kamebaunin）、ロイカメニン（leukamenin）ＡおよびＢ、１３，１８−デヒドロ−６−α−シネシオイルオキシシャパリン（senecioyloxychaparrin）、１，１１−ジメトキシカンシン（dimethoxycanthin）−６−オン、１−ヒドロキシ−１１−メトキシカンチン（methoxycanthin）−６−オン、スコポレティン（scopolectin）、タクサマイリン（taxamairin）ＡおよびＢ、レジェニロール（regenilol）、トリプトライド（triptolide）、さらに、シマリン、アポシマリン（apocymarin）、アリストロキア酸、アノプテリン（anopterin）、ヒドロキシアノプテリン（hydroxyanopterin）、アネモニン、プロトアネモニン、ベルベリン、チェリブリン・クロライド（cheliburin chloride）、シクトキシン（cictoxin）、シノコクリン（sinococuline）、ボムブレスタチン（bombrestatin）ＡおよびＢ、クドライソフラボン（cudraisoflavone）Ａ、クルクミン、ジヒドロニチジン（dihydronitidine）、塩化ニチジン（nitidine chloride）、１２−β−ヒドロキシプレグナジエン（hydroxypregnadien）−３，２０−ジオン、ビロボール（bilobol）、ギンコール（ginkgol）、ギンコール酸、ヘレナリン（helenalin）、インジシン（indicine）、インジシン（indicine）−Ｎ−オキシド、ラシオカルピン（lasiocarpine）、イノトジオール（inotodiol）、グリコシド１ａ、ポドフィロトキシン、ジャスチシジン（justicidin）ＡおよびＢ、ラレアチン（larreatin）、マロテリン（malloterin）、マロトクロマノール（mallotochromanol）、イソブチリルマロトクロマノール（isobutyrylmallotochromanol）、マキロシド（maquiroside）Ａ、マーチャンチン（marchantin）Ａ、メイタイシン（maytansine）、リコリジシン（lycoridicin）、マルゲチン（margetine）、パンクラチスタチン（pancratistatin）、リリオデニン（liriodenine）、オクソウシンスニン（oxoushinsunine）、アリストラクタム（aristolactam）−ＡＩＩ、ビスパーセノリジン（bisparthenolidine）、ペリプロコシド（periplocoside）Ａ、ガラキノシド（ghalakinoside）、ウルソール酸、デオキシソロスパミン（deoxypsorospermin）、サイコルビン（psychorubin）、リシンＡ、サンギナリン、マンウ（manwu）ホウィート・アシッド（wheat acid）、メチルソルビフォリン（methylsorbifolin）、スファセリアクロメン（sphatheliachromen）、スチゾフィリン（stizophyllin）、マンソニン（mansonine）、ストレブロシド（strebloside）、アカゲリン（akagerine）、ジヒロドウサムバレンシン（dihydrousambarensine）、ヒ���ロキシウサムバリン（hydroxyusambarine）、ストリクノペンタミン（strychnopentamine）、ストリクノフィリン（strychnophylline）、ウサムバリン（usambarine）、ウサムバレンシン（usambarensine）、ベルベリン、リリオデニン（liriodenine）、オクソウシンスニン（oxoushinsunine）、ダフノレチン（daphnoretin）、ラリシレシノール（lariciresinol）、メトキシラリシレシノール（methoxylariciresinol）、シリンガレジノール（syringaresinol）、ウンベリフェロン（umbelliferon）、アフロモソン（afromoson）、アセチルビスミオン（acetylvismione）  Ｂ、デスアセチルビスミオン（desacetylvismione）Ａ、ビスミオン（vismione）ＡおよびＢ、さらに、例えばヒッポカエスクリンのような天然のテルペノイド、１４−デヒロドアグロスチスタチン、アグロスケリン、アガロスチスタチン、１７−ヒドロキシアグロスチスタチン、オヴァトジオライド、４，７−オキシシクロアニソメリック・アシッド、ヤダンジオシドＮおよびＰ、イソデオキシエレファントピン、トメンファントピンＡおよびＢ、コロナリンＡ、Ｂ、ＣおよびＤ、ウルソール酸、ヒプタチック酸Ａ、ゼオリン、イソ−イリドジャーマナル、メイテンフォリオル、エフサンチンＡ、エキシサニンＡおよびＢ、ロンギカウリン  Ｂ、スカルポネアチンも同等の手段として有効な活性物質である。
【０１１４】
かかる活性物質は、同じ濃度あるいは異なる濃度において、単独あるいは組み合わせて用いられる。その抗増殖性効果とともに免疫抑制性を特徴とする活性物質が特に好ましい。このような活性物質は、エリスロマイシン、ミデカマイシン、タクロリムス、シロリムス、パクリタキセル、およびジョサマイシンである。さらに、好ましいのは、いくつかの、抗増殖性作用物質、あるいは、免疫抑制性活性物質を有した抗増殖性活性物質、の組み合わせである。
【０１１５】
本発明に好適であるのは、タクロリムス、ピペクロリムス、PI88、サイモシン a-1、PETN (四硝酸ペンタエリスリトール）、バッカチンおよびその誘導体、ドセタキセル、コルヒチン、パクリタキセルおよびその誘導体、トラピジル、α-およびβ-エストラジオール、ダームシジン、シンバスタチン、大環状のサブオキサイド（MCS）および誘導体、シロリムス、チルフォスチン、D24851、コルヒチン、フマル酸、およびフマル酸エステル、活性化プロテイン（aPC）、インターロイシン-1s阻害剤、およびメラニン細胞刺激ホルモン（α−ＭＳＨ）、およびチアリン（２−メチルチアゾリジン−２，４−ジカルボン酸）、ならびにチアリン-Na（チアリンのナトリウム塩）である。
【０１１６】
かかる活性物質には、ステント表面の１平方センチ当たり、及び活性物質層当たりまたは層を含む活性物質当たり、０．００１から１０mg濃度の薬学的活性物質が含まれていることが好ましい。追加の活性物質を、同様の濃度で、同じあるいは別の層に含んでもよい。
【０１１７】
本発明によってコートされた医療用製品、特に、本発明によってコートされたステントは、活性物質を放出、または活性物質を連続的および制御可能に放出することが可能であり、再狭窄の防止またはそれを低下させるために適している（図６参照）。
【０１１８】
ステントを直接を覆う血液適合性層は、購入可能なヘパリンの標準的な分子量に至るまで抗血栓作用を生じさせるペンタサッカライド(pentasaccharide)の分子量範囲において、異なる硫酸化率（硫酸化度）およびアシル化率（アシル化度）を有する合成的に得られた誘導体とともに、天然由来のヘパリン、および、ヘパラン硫酸、およびその誘導体、赤血球の非血栓形成的な（athrombogeneous)な表面に整然と並んで模作された、赤血球性の（erythrocytic）グリコカリックス（glycocalix）のオリゴおよび多糖類類を含んでおり、ここで、ホスホリルコリンとは反対側には、血液と赤血球表面との間に実際の接触が生じており、完全に脱硫酸化およびＮ−再アセチル化されたヘパリン、脱硫酸化およびＮ−再アセチル化されたヘパリン、Ｎ−カルボキシメチル化され、および／または、部分的にＮ−アセチル化（N-acetylated）されたキトサン、キトサンおよび／またはこれらの物質の混合物、を含むことが好ましい。血液適合性コーテイングを有するこれらのステントは、従来のコートされていない通常のステントを準備し、活性物質の放出後、すなわち、活性物質の影響が減少し、マトリクスが分解した後、移植物を永久にマスクする血液適合性を有する層を共有付着させること、によって得られる。
【０１１９】
発明にかかる方法によりコートされた従来のステントは、ステンレススチール、ニチロール(nitirol)、又は、他の金属および合金、あるいは、合成ポリマーから構成される。
【０１２０】
本発明にかかるステントの他の好ましい実施形態は、少なくとも２つの層から構成されるコーテイングを示している。また、複数層を有するシステムを用いることもできる。かかる複数層システムにおいては、ステントに直接付着された層が、第１層と呼ばれる。第２層と呼ばれるのは、第１層の上に付着された層等である。
【０１２１】
２つの層を有するデザインによると、前記第１層は、少なくとも、抗増殖性物質、抗消炎物質、および／または、共有および／または接着結合した抗血栓活性物質を含む生物分解性層により、ほぼ完全に覆われる血液適合性層、から構成される。また、互いに促進し、補充しあう、活性物質の組み合わせを適用することもできる。
【０１２２】
外側層用の生物分解性物質には、ポリバレロラクトン（polyvalerolactones）、ポリ−ε−デカラクトン、ポリ乳酸（ポリアクトニック・アシッド（polylactonic acid））、ポリグリコール酸、ポリラクチド、ポリグリコライド、ポリラクチドのコポリマー（copolymers、共重合体）、および、ポリグリコライド、ポリ−ε−カプロラクトン、ポリヒドロキシブタン酸、ポリヒドロキンブチレート、ポリヒドロキシバレレート（polyhydroxyvalerates）、ポリヒロドキシブチレート−ｃｏ−バレレート（valerates）、ポリ（１，４−ジオキサン−２，３−ジオン）、ポリ（１，３−ジオキサン−２−オン（ｏｎｅｓ））、ポリ−ｐ−ジオキサノン、例えばポリ無水マレイン酸（polymaleic anhydrides）のようなポリアンヒドリド（polyanhydrides）、ポリヒドロキシメタクリレート、フィブリン、ポリシアノアクリレート、ポリカプロラクトンジメチルアクリレート、ポリ−ｂ−マレイン酸、ポリカプロラクトンブチル−アクリレーツ（acrylates）、例えばオリゴカプロラクトンジオール（oligocaprolactonedioles）およびオリゴジオキサノンジオール（oligodioxanonedioles）から得られるようなマルチブロックポリマー（multiblock polymers）、例えばＰＥＧおよびポリブチレンテレフタレートのようなポリエーテルエステル・マルチブロックポリマー（multiblock polymers）、ポリピボトラクトン（polypivotolactones）、ポリグリコール酸・トリメチル−カーボネート（carbonates)、ポリカプロラクトン−グリコライド（glycolides）、ポリ−ｇ−エチルグルタミン酸、ポリ（ＤＴＨ−イミノカーボネート（iminocarbonate））、ポリ（ＤＴＥ−ｃｏ−ＤＴ−カーボネート）、ポリ（ビスフェノール−Ａ−イミノカーボネート（iminocarbonate））、ポリオルトエステル、ポリグリコール酸・トリメチル−カーボネート（carbonates）、ポリトリメチルカルボン酸、ポリイミノカルボン酸、ポリ（Ｎ−ビニル）−ピロリドン、ポリビニルアルコール、ポリエステルアミド（polyesteramides）、グリコール酸・ポリエステル（glycolated polyesters）、ポリホスホエステル（polyphosphoesters）、ポリホスファゼン、ポリ［ｐ−カルボキシフェノキシ）プロパン］、ポリヒドロキシペンタン酸、ポリアンヒドリド（polyanhydrides）、ポリエチレンオキシド−プロピレンオキシド、ソフトポリウレタン、主鎖にアミノ酸残基が付加されたポリウレタン、例えばポリエチレンオキシドのようなポリエーテルエステル、ポリアルケンシュウ酸（polyalkeneoxalates）、ポリオルトエステルおよびそれらのコポリマー、脂質（lipides）、カラギーナン（carrageenanes）、フィブリノーゲン、デンプン、コラーゲン、プロテインをもとにしたポリマー（protein based polymers）、ポリアミノ酸、合成された（synthetic）ポリアミノ酸、ゼイン（zein）、修飾されたゼイン、ポリヒドロキシアルカン酸、ペクチン酸、化学作用のある酸（actinic acid）、修飾および非修飾のフィブリンおよびカゼイン、カルボキシメチル硫酸（carboxymethylsulphate）、アルブミン、さらに、ヒアルロン酸、ヘパラン硫酸（heparan sulphate）、ヘパリン、コンドロイチン硫酸（chondroitinesulphate）、デキストラン、ｂ−シクロデキストリン、ＰＥＧおよびポリプロピレングリコールによるコポリマー、アラビアゴム（gummi arabicum）、グアー（guar）、ゼラチン、コラーゲン、コラーゲン−Ｎ−ヒドロキシサクシンイミド、脂質（lipides）、リン脂質（phospholipides）、前述の物質の修飾物、前述の物質のコポリマー、および／または前述の物質の混合物、を用いることが可能である。
【０１２３】
活性物質を含む前記層並びに複数の層は、それぞれ、分解速度にしたがって層外に活性物質を放出し、あるいは、自己の溶出態様に基づきマトリクスから自身を溶かすよう、血液の成分によってゆっくりと分解する。生物分解性層が分解されると、第１の血液適合性層は、必要とされるステントの血液適合性を確保する。外部層のこのような生物分解性、ならびに、対応する活性物質の放出は、一定期間だけ細胞の成長速度(ongrowth)を著しく減少させ、外部層が広く分解された場所に向け、制御された接着を可能にする。かかる外部層の生物分解性は、都合の良いことに１ヶ月から３６ヶ月間、好ましくは１ヶ月から６ヶ月間、更に好ましくは１ヶ月から２ヶ月間にわたる。このようなステントは、再狭窄を予防、あるいは、少なくとその可能性を非常に小さくすることが示される。かかる期間で、重要な治癒がなされる。最後に、血液適合性層は、非血栓形成表面として残存し、生命を危険にさらすような反応が起こらないようにするよう、異物表面をマスクする。
【０１２４】
医療用製品、好ましくはステントの表面に付着するポリマーの量は、層当たり０．０１ｍｇから３ｍｇ、好ましくは層当たり０．２０ｍｇから１ｍｇ、特に好ましくは層当たり０．２ｍｇから０．５ｍｇである。
【０１２５】
このようなステントは、基本的に以下の方式：
ａ）コートしていないステントを準備するステップ、
ｂ）好ましくは、共有結合する血液適合性層を付着するステップ、
ｃ）血液適合性層中に活性物質を拡散するステップ、あるいは、
ｃ’）少なくとも１の活性物質に浸漬あるいは吹きつけを行うことにより、前記血液適合性層をほぼ完全にコートするステップ、あるいは
ｃ’’）少なくとも１の生物分解性層、および／または、少なくとも１の活性物質、および／または、当該活性物質そのものを代表するもの、を含む生物的安定層に浸漬あるいは吹きつけを行うことにより、前記血液適合性層を、ほぼ完全、および／または、部分的に（incomplete）コートするステップ、を備えた、ステントに血液適合性コーテイングを施す方法によって製造することができる。
【０１２６】
かかるコーテイング法は、活性物質の選択に要求される基準に関し、広い範囲の自由度を提供するとともに、それら自身の間で組み合わせ可能な別のコーテイング様式に、分離可能である。
【０１２７】
コーテイング法Ｉ：
a)コートされていないステントを準備するステップ、
b)血液適合性層を付着するステップ、
c)活性物質、あるいは、活性物質の組み合わせをマトリクスなしで前記血液適合性層上に付着するステップ、
d)活性物質あるいは活性物質の組み合わせを、マトリクスなしで前記血液適合性層上に付着するとともに、拡散を制御するため、生物分解性および／または生物的安定材料により、前記層を、ほぼ完全および／または不完全にコートするステップ、を備えた、コーテイング法である。
【０１２８】
コーテイング法ＩＩ：
a)コートされていないステントを準備するステップ、
b)血液適合性層を付着するステップ、
c)前記血液適合性層に共有および／または接着結合する、少なくとも１の活性物質を含む、少なくとも１の生物分解性層、および／または、生物的安定層により、前記血液適合性層を、ほぼ完全、および／または、不完全にコートするステップ、
d)少なくとも１の活性物質であって前記マトリクスに共有および／または接着結合するもの、を含む少なくとも１の生物分解性層および／または生物的安定層、ならびに、拡散バリアとして、下にある層を完全および／または部分的に覆う、活性物質を含まない他の生物分解性層および／または生物的安定層により、前記血液適合性層をほぼ完全にコートするステップ、
を備えた、コーテイング法である。
【０１２９】
コーテイング法ＩＩＩ：
a)コートされていないステントを準備するステップ、
b)血液適合性層を付着するステップ、
c)少なくとも１の活性物質であって共有および／または接着結合するもの、を含む少なくとも１の生物分解性層および／または生物的安定層により前記血液適合性層を、ほぼ完全にコートするステップ、
d)前記下にある層と共有および／または接着結合する活性物質あるいは活性物質の組み合わせを付着するステップ、
e)共有および／または接着結合する少なくとも１の活性物質を含む、少なくとも１の生物分解性層、および／または、生物的安定層により、前記血液適合性層をほぼ完全にコートするとともに、活性物質あるいは活性物質の組み合わせ、ならびに、拡散バリアとして、下にある層を完全または／および部分的に覆う、活性物質を含まない他の生物分解性層、および／または、生物的安定層を付着するステップ、
を備えた、コーテイング法である。
【０１３０】
コーテイング法ＩＶ：
a)コートされていないステントを準備するステップ、
b)血液適合性層を付着するステップ、
c)層ごとに異なる濃度を有し、共有および／または接着結合する少なくとも１の活性物質を含む、少なくとも２の生物分解性層、および／または、生物的安定層により、前記血液適合性層をほぼ完全および／または不完全にコートするステップ、
d)層ごとに異なる濃度を有し、共有および／または接着結合する少なくとも１の活性物質を含む、少なくとも２の生物分解性層、および／または、生物的安定層、ならびに、拡散バリアとして、下にある層を完全および／または部分的に覆う、活性物質を含まない、少なくとも他の生物分解性層、および／または、他の生物的安定層により、前記血液適合性層をほぼ完全および／または不完全にコートするステップ、
e)共有および／または接着結合形式において同じあるいは異なる濃度を有する、少なくとも１の活性物質、および／または、同じ群あるいは他の補足的物質の群からの少なくとも他の活性物質を含む、少なくとも１の生物分解性層および／または生物的安定層により、前記血液適合性層をほぼ完全または／および不完全にコートするステップ、
f)同じあるいは異なる濃度を有し、少なくとも１の活性物質、および／または、同じ群あるいは他の補足的物質の群からの少なくとも他の活性物質を含む、少なくとも２の生物分解性層および／または生物的安定層、ならびに、拡散バリアとして、下にある層を完全および／または部分的に覆う、活性物質ではない少なくとも他の生物分解性層および／または生物的安定層により、前記血液適合性層をほぼ完全および／または不完全にコートするステップ、
g)同じおよび／または異なる濃度を有し、共有および／または接着結合する少なくとも１の活性物質を含む、少なくとも２の生物分解性層および／または生物的安定層、ならびに、拡散バリアとして、下にある層を完全またはその一部のみを覆う、活性物質を含まない他の生物分解性層および／または生物的安定層により、前記血液適合性層をほぼ完全にコートするステップであって、前記層は、下のマトリクスに共有結合、および／または支持材料（support material）なしで接着結合する、少なくとも１の活性物質を含む活性物質の層によりカバーされるステップ、
を備えた、コーテイング法である。
【０１３１】
他の好都合な実施形態は、少なくとも３つの層構造のコーテイングを有するステントにより表され、第１層は、血液適合性層によりステントの表面を覆い、第２層は、活性物質を含むが、生物分解性はなく、第３の血液適合性層により覆われる。かかる外部層は、ここで、ステントに必要とされる血液適合性を提供するとともに、第２層は、活性物質貯め(active agent reservoir)として機能する。必要に応じ、活性物質は、加水分解−弱い結合（hydrolysis-weak bonding）によりマトリクスと共有結合し、および／または、前記コーテイング方法に必要とされる溶液を溶解したマトリクスに加えられ、その活性物質は、第２層から連続的に少しづつ溶出して低い濃度となり、前記外部血液適合性層を介し自由に拡散する。この層アセンブリは、ステント表面上に細胞を生じさせることは妨げないが、理想的な程度の数に抑えるという結果を生じさせる。第１層は、移植中にステント表面が、例えば、存在する血小板による摩擦、あるいは、例えば、配置前の段階（例えば圧接段階など）に、損傷するリスクを最小限にする。第２の安全策は、生物的に安定したポリマーでも、長い期間を経て、体内で分解するという事実から、ステント表面の少なくとも一部を覆わない、という結果を得る。上述のコーテイング方法のように、具体的には、生物分解性素材と組み合わせることもできる。
【０１３２】
このようなステントは、従来のステントを用意し、その表面に血液適合性の第１層を付着し、少なくとも１の活性物質、ならびに、共有および／または接着結合する他の群の他の活性物質との組み合わせを含む、生物分解性のない層を付着し、この層を、他の血液適合性により、ほぼ完全にコートすることにより、準備することができる。
【０１３３】
生物的安定層として問題となる物質は、医学用に一貫して用いられる全ての材料である。それらの材料は、例えばポリアクリル酸および例えばポリメチルメタクリレートのようなポリアクリレート、ポリブチル・メタクリレート（methacrylate）、ポリアクリルアミド、ポリアクリロニトリル、ポリアミド、ポリエーテルアミド（polyetheramides）、ポリエチレンアミン、ポリイミド、ポリカーボネート（polycarbonates）、ポリカルボウレタン（polycarbourethanes）、ポリビニルケトン、ポリビニルハロゲン化物（polyvinylhalogenides）、ポリビニリデンハロゲン化物（polyvinylidenhalogenides）、ポリビニルエーテル、ポリビニルアロメート（polyvinylaromates）、ポリビニルエステル、ポリビニルピロリドン、ポリオキシメチレン、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリテトラフルオロエチレン、ポリウレタン、ポリオレフィンエラストマー、ポリイソブチレン、ＥＰＤＭ  ガム（gums）、フルオロシリコン、カルボキシメチル  キトサン、ポリエチレンテレフタレート、ポリバレレート（polyvalerates）、カルボキシメチルセルロース、セルロース、レーヨン、レーヨントリアセテート、セルロースニトレート、セルロースアセテート、ヒドロキシエチルセルロース、セルロース・ブチレート、セルロース・アセテート・ブチレート、エチルビニールアセテート・コポリマー（copolymers、共重合体）、ポリスルホン、エポキシレジン、ＡＢＳレジン、ＥＰＤＭ  ガム（gums）、例えばポリシロキサンのようなシリコン、ポリビニルハロゲンおよびコポリマー（copolymers、共重合体）、セルロースエーテル、セルロース  トリアセテート、キトサンおよびコポリマー、および／または、これらの物質の混合物、である。
【０１３４】
複数の層を用いるシステムにおいて、新しく付着された層は、下の層をほぼ完全に覆う。「実質的に」という文言は、ここでは、少なくとも、血管壁に接触するステントの表面が完全に覆われており、それぞれ、ステント表面の少なくとも９０％、好ましくは９５％、特に好ましくは９８％が覆われていることを意味する。
【０１３５】
さらに、上述した方法に関して、いかなるプラスチック表面も、オリゴ糖および／または多糖類の血液適合性層によってコートされうる。プラスチックとして、例えば、単量体（モノマー）のエテン、酢酸ビニル、メタクリル酸、ビニルカルバゾール、トリフルオロエチレン、プロペン、ブテン、メチルペンテン、イソブテン、スチレン、クロロスチレン、アミノスチレン、アクリロニトリル、ブタジエン、アクリル酸エステル、ジビニルベンゼン、イソプロペン、塩化ビニル、ビニルアルコール、ビニルピリジン、ビニルピロリドン、テトラフロオロエチレン、トリフルオロエチレン、フッ化ビニル、ヘキサフルオロイソブテン（hexafluoroisobutene）、アクリル酸、アクロレイン、アクリルアミド、メタクリルアミド、マレイン酸、ヒドロキシメチルメタクリル酸、メチルメタクリル酸、無水マレイン酸、無水メタクリル酸、メタクリロニトリル、フルオロスチレン（fluorstyrene）、フルオロアニリド（fluoranilide）、３，４−イソチオシアネイトスチレン（3,4-isothiocyanatostyrene）、アリル・アルコール、スルホン酸、メタリルスルホン酸（methallylsulfonic acid）、ジアリル・フタル酸、シアノアクリル酸、ジメチルアミノエチルメタクリル酸、メタクリル酸ラウリル（lauryl methacrylic acid）、アセトアミノフェニルエトキシメタクリル酸（acetaminophenylethoxymethacrylic acid）、ジメタクリル酸グリコール（glycol dimethacrylic acid）、２−ヒドロキシエチルメタクリル酸（2-hydroxyethyl methacrylic acid）、ホルムアルデヒド、フルオラル（fluoral）、クローラル、エチレンオキシド、テトラヒドロフラン、プロピレンオキシド、アリルグリシジル・エーテル（allyl glycidyl ether）、エピクロルヒドリン、グリセリン、トリメチルプロパン、ペンタエリスライト（pentaerythrite）、ソルバイト、フタル酸、コハク酸、フマル酸、アジピニック酸（adipinic acid）、チオフェン、エチレンイミン、ヘキサメチレン・アジパミド、ヘキサメチレン・セバカミド（hexamethylene sebacamide）、ヘキサメチレン・ドデカンジアミド（hexamethylene dodecane diamide）、アミノベンズアミド、フェニレンジアミン、アミドヒドラジド（amide hydrazides）、ジメチルピペラジン、ベンズイミダゾール、テトラアミノベンゼン、ピロン（pyrones）、ｅ−カプロラクタム、イソフタル酸、グルタミニン酸、ロイシン、フェニルアラニン、バリン、リジン、尿素、ジイソシアネート（diisocyanate）、チオ尿素、およびその他、または、上述のモノマーの混合物を含む、合成されたポリマーおよびバイオポリマー（生物高分子）が適当である。さらに、以下のポリマーも考慮することができる：シリコン、セルロースおよびセルロースの誘導体、油（オイル）、ポリカーボネート、ポリウレタン、アガロース、多糖類、デキストラン、スターチ（でんぷん）、キチン、グリコサミノグリカン、ゼラチン、コラーゲンＩ−ＸＩＩ、およびその他のタンパク質。
【発明の効果】
【０１３６】
本発明にかかるステントは、急性血栓症(acute thrombosis)ならびにステント移植後の新生内層過形成(neointimal hyperplasia )の両方の問題を解決する。さらに、本発明にかかるステントは、単一層あるいは複数層システムのいずれであるかに拘わらず、そのコーテイングにより、１以上の抗増殖性物質および／または免疫抑制活性物質を放出するのに非常に適している。要求される量の活性物質を連続的に放出することを目的とするかかる特徴により、本発明にかかるコートされたステントは、再狭窄の危険性をほぼ完全に予防することができる。
【図面の簡単な説明】
【０１３７】
【図１】図１は、塩の加水分解（basic hydrolysis）によってキトサンに変わりうる、または、部分的な脱アセチル化および続くＮ−カルボキシアルキル化によって一般式Ｉａの化合物に変わりうる、キチンの二糖構造の一部分を示す。
【図２】図２は、部分的なＮ−アシル化および続くＮ−カルボキシアルキル化によって、または、部分的なＮ−カルボキシアルキル化および続くＮ−アシル化によって一般式Ｉａの化合物に変わりうる、キトサンの二糖構造の一部分を示す。
【図３】図３は、硫酸基がランダムに分布しており、ヘパリンの典型例として、二糖ユニット当たり２の硫酸化度である、ヘパリンまたはヘパラン硫酸の四糖類の１ユニット（a tetrasaccharide unit）を示す（図３Ａ）。構造類似性の比較として、図３Ｂは、一般式Ｉｂに関する化合物の例を示し、図３Ｃは、Ｎ−カルボキシメチル化され、部分的にＮ−アセチル化されたキトサンの典型的な構造を伴った部分を示す。
【図４】図４は、拡張されたＰＶＣ−チューブへ入れた場合の、表面が改良されたステンレススチールの冠動脈ステントにおける血小板数の減少（PLT-loss）の影響を示す。非コートのステンレススチールの冠動脈ステントは、基準（非コート）として測定した。血小板数の減少の０値の基準として、ステンレススチール冠動脈ステントがないＰＶＣ−チューブの場合を設定した。
【０１３８】
ＳＨ１は、ヘパリンを共有結合してコートしたステントである。ＳＨ２は、コンドロイチン硫酸でコートされたステントである。ＳＨ３は、赤血球性の（erythrocytic）グリコカリックスから得られた多糖類でコートされたステントである。ＳＨ４は、Ａｃ−ヘパリンを共有結合してコートしたステンレススチール冠動脈ステントである。
【図５】図５は、豚への移植４週間後の、非コートのステントおよびポリアクリル酸（PAS）でコートされたステントとの比較における、完全な脱硫酸化およびＮ−再アセチル化されたヘパリン（Ac-heparin）を共有結合してコートしたステント、および赤血球性のグリコカリックスのオリゴ−および多糖類でコートしたステントの再狭窄率の概略的な提示を示す。
【図６】図６は、定量的冠動脈造影を示す。図６は、非コートのステント（unco.）（図６B）との比較としての、Ac-ヘパリンでコートしたステントの管部分（vessel-segment）を含んだステント（図６Ａ）の断面画像である。動物実験（豚）での４週間後において、形成された新生内層の厚さに明らかな相違が観察されうる。
【図７】図７は、ステント（支持媒体なし）からのパクリタキセルの溶出のグラフである。
【図８】図８は、PLGA-マトリクス内に埋め込まれたパクリタキセルの溶出の図表である。
【図９】図９は、PLGA-マトリクス内に埋め込まれたパクリタキセルの溶出の図表、および、ベースコーテイング（basis coating）を完全に覆う、パクリタキセル原液（undiluted）の層の溶出に関する図表である。
【図１０】図１０は、マトリクス内に埋め込まれた親水性の活性物質の溶出の図表、および、拡散を制御するためにベースコーティングを完全に覆う、上にある、活性物質のないポリマー（トップコート）の溶出に関する図表である。
【図１１】図１１は、PLGA-マトリクスからのコルヒチンの溶出に関する図表である。
【図１２】図１２は、PLGA-マトリクスからのシンバスタチン(simvastatin)の溶出に関する図表である。
【図１３】図１３は、拡散を制御する層としての、ベースコーテイングを完全に覆う、ポリスチレンによるマトリクスからのスタチンの溶出に関する図表である。
【図１４】図１４は、チャンドラーループ（Chandler loop）後の、空のチューブ（コントロール）、新たに抽出した血液の血小板の数（ドナー）、および、注射器中に６０分置いた血液の血小板の数（シリンジ６０）ついての、コート済み（coat.）のステントと非コート（unco.）のステントとの間の血液中の血小板数の比較である。
【図１５】図１５は、新たに抽出した血液中の血小板（ドナー）、空のチューブに入れて６０分経過後（コントロール）、および、コートされていないステント、ならびに、コート済みステント、の血小板因子４の濃度の比較である。
【図１６】図１６は、新たに抽出した血液(ドナー）、空のチューブに入れて６０分経過後（コントロール）、および、コートされていないステント、ならびに、コート済みステント、の活性化された補体因子Ｃ５aの比較を表した図である。
【図１７】図１７は、非コートのステントとの比較による、（豚体内への移植１２週間経過後の）完全に脱硫酸しＮ−再アセチル化されたヘパリン（Ａｃ−ヘパリン）により共有コートされたステントであって、ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−ＣＯ−グリコライド（D,L-lactide-co-glycolide）の２番目の層を伴うものの再狭窄率  直径％を表した図である。PLGAの場合の狭窄の形成の時系列経過を示すものであり、「％−直径  再狭窄率」は、ステントの移植直後（post）の初期状態に対する、血管（vessel）の直径の百分率を表す。実験のために、６から９ヶ月の年齢の家畜の豚を用い、血管の直径を、移植前（pre）およびステントの移植後（Post）に血管内超音波法（IVUS）によって測定した。一週間後（1WoFUP）、１ヶ月後（4WoFUP）、６週間後（6WoFUP）、および３ヶ月後（12WoFUP）のそれぞれについて、ステントが用いられた領域を冠動脈造影法、および血管内超音波法（IVUS）によって検査した。得られたデータは、予期できないほどの驚くべきの明白な効果を示しており、これは、疑う余地なくコーティングによるものである。３ヶ月後の狭窄の値は、非コートのステントとコート済みのステントとはほとんど違いがないが、PLGA−コート済みステントに向かう血管壁の手ごたえ（reaction）は、実質的により滑らかである（smoother）。１週間後の狭窄の値は、非コートのインプラントの値である１０．４％よりも著しく低い６％である。４週間後の金属表面のマスキング（masking）の結果は、この期間後に最高値２２．６％（５４％の増加）に達する非コートのステントよりも、２倍以上低い狭窄率である１０％（３３％の増加）にすぎない。コート済みのステントは、最高値として、６週間後に１２．３３％を示したのみである。１２週間後の両方の系統の値は、約１１％で互いに等しい。
【図１８】図１８は、図１７における、豚（pig.）内の、血液適合性が与えられたPLGA-コート済みのステントの１週間後、４週間後、６週間後、および３ヶ月後のそれぞれの動物実験の定量的冠動脈造影の画像である。
【発明を実施するための最良の形態】
【０１３９】
実施例１
脱硫酸化され、再アセチル化されたヘパリンの調製：
アンバーライトＩＲ−１２２カチオン交換樹脂１００ｍＬを、直径２ｃｍを有するカラムに充填し、３Ｍ  ＨＣｌ  ４００ｍＬを用いてＨ＋形態に変換し、溶出液が塩素を含まずｐＨが中性になるまで蒸留水で洗浄した。ナトリウムヘパリン１ｇを水１０ｍＬに溶解し、カチオン交換カラム上に置き、水４００ｍＬで溶出させた。溶出液をピリジン０．７ｇを用いて受け器に落とし、続けて、ピリジンを用いてｐＨ６になるまで滴定し、凍結乾燥させた。
【０１４０】
ヘパリンピリジニウム塩０．９ｇを、還流冷却器を取り付けた丸底フラスコ中のＤＭＳＯ／１，４−ジオキサン／メタノールの６／３／１混合物（ｖ／ｖ／ｖ）９０ｍＬに添加し、９０℃で２４時間加熱した。次いで、塩化ピリジニウム８２３ｍｇを添加し、９０℃までの加熱を更に７０時間続けた。次いで、水１００ｍＬを用いて希釈し、希苛性ソーダを用いてｐＨ９まで滴定した。脱硫酸化されたヘパリンを水に対して透析し、凍結乾燥させた。
【０１４１】
脱硫酸化されたヘパリン１００ｍｇを水１０ｍＬに溶解し、０℃まで冷却し、攪拌しながらメタノール１．５ｍＬとともに混合した。この溶液に、ＯＨ−−形態のＤｏｗｅｘ  １×４アニオン交換樹脂４ｍＬ、次いで無水酢酸１５０μＬを添加し、４℃で２時間攪拌した。その後、樹脂をろ過し、溶液を水に対して透析し、凍結乾燥させた。
【０１４２】
実施例２
Ｎ−カルボキシメチル化され、部分的にＮ−アセチル化されたキトサン：
０．１Ｎ  ＨＣｌ  １５０ｍＬに、キトサン２ｇを溶解し、窒素下、還流下で２４時間沸騰させた。室温まで冷却した後、２Ｎ  ＮａＯＨを用いて溶液のｐＨを５．８に調整した。溶液を脱塩水に対して透析し、凍結乾燥させた。
【０１４３】
この様式で部分的に加水分解されたキトサン１ｇを１％酢酸１００ｍＬに溶解した。メタノール１００ｍＬを添加した後、メタノール３０ｍＬに溶解した無水酢酸６０５μＬを添加し、室温で４０分攪拌した。メタノール１４０ｍＬおよび２５％ＮＨ３溶液６０ｍＬの混合物に注ぐことによって、生成物を沈殿させた。これをろ過し、メタノールおよびジエチルエーテルで洗浄し、減圧下で一晩乾燥させた。
【０１４４】
部分的に加水分解され、部分的にＮ−アセチル化されたキトサン１ｇを水５０ｍＬに懸濁させた。グリオキシル酸一水和物０．５７ｇを添加した後、キトサン誘導体を続く４５分以内に溶解した。この溶液のｐＨ値を２Ｎ  ＮａＯＨを用いて１２に調整した。できる限り少ない水にシアノ水素化ホウ素ナトリウム０．４ｇを溶かした溶液を添加し、４５分攪拌した。生成物をエタノール４００ｍＬ中で沈殿させ、ろ過し、エタノールで洗浄し、減圧下で一晩乾燥させた。
【０１４５】
実施例３
脱硫酸化され、Ｎ−プロピオニル化されたヘパリンの合成：
アンバーライトＩＲ−１２２カチオン交換樹脂１００ｍＬを、直径２ｃｍを有するカラムに充填し、３Ｍ  ＨＣｌ  ４００ｍＬを用いてＨ＋形態に変換し、溶出液が塩素を含まずｐＨが中性になるまで蒸留水ですすいだ。ナトリウムヘパリン１ｇを水１０ｍＬに溶解し、カチオン交換カラム上に置き、水４００ｍＬで溶出させた。溶出液をピリジン０．７ｇを用いて受器に落とし、その後、ピリジンを用いてｐＨ６になるまで滴定し、凍結乾燥させた。
【０１４６】
ヘパリンピリジニウム塩０．９ｇを、還流冷却器を取り付けた丸底フラスコ中に、ＤＭＳＯ／１，４−ジオキサン／メタノールの６／３／１混合物（ｖ／ｖ／ｖ）９０ｍＬとともに添加し、９０℃で２４時間加熱した。次いで、塩化ピリジニウム８２３ｍｇを添加し、９０℃で更に７０時間加熱した。その後、水１００ｍＬで希釈し、希水酸化ナトリウムでｐＨ９になるまで滴定した。脱硫酸化されたヘパリンを水に対して透析し、凍結乾燥させた。
【０１４７】
脱硫酸化されたヘパリン１００ｍｇを水１０ｍＬに溶解し、０℃まで冷却し、攪拌しながらメタノール１．５ｍＬを添加した。この溶液に、ＯＨ−形態のｄｏｗｅｘ  １×４アニオン交換樹脂４ｍＬ、次いで無水プロピオン酸１９２μＬを添加し、４℃で２時間攪拌した。次いで、樹脂をろ過により除去し、溶液を水に対して透析し、凍結乾燥させた。
【０１４８】
実施例４
Ｎ−カルボキシメチル化され、部分的にＮ−プロピオニル化されたキトサン：
１５０ｍＬの０．１Ｎ  ＨＣｌに、キトサン２ｇを溶解し、窒素下、還流下で２４時間沸騰させた。室温まで冷却した後、２Ｎ  ＮａＯＨを用いて溶液のｐＨを５．８に調整した。溶液を脱塩水に対して透析し、凍結乾燥させた。
【０１４９】
この様式で部分的に加水分解されたキトサン１ｇを１％酢酸１００ｍＬに溶解した。メタノール１００ｍＬを添加した後、メタノール３０ｍＬに溶解した無水プロピオン酸７７２μＬを添加し、室温で４０分攪拌した。メタノール１４０ｍＬおよび２５％ＮＨ３溶液６０ｍＬの混合物に注ぐことによって、生成物を沈殿させた。これをろ過し、メタノールおよびジエチルエーテルで洗浄し、減圧下で一晩乾燥させた。
【０１５０】
部分的に加水分解され、部分的にＮ−アセチル化されたキトサン１ｇを水５０ｍＬに懸濁させた。グリオキシル酸一水和物０．５７ｇを添加した後、キトサン誘導体はその後４５分以内に溶解した。この溶液のｐＨ値を２Ｎ  ＮａＯＨを用いて１２に調整した。できる限り少量の水にシアノ水素化ホウ素ナトリウム０．４ｇを溶かした溶液を添加し、４５分間攪拌した。生成物をエタノール４００ｍＬ中に沈殿させ、ろ過し、エタノールで洗浄し、減圧下で一晩乾燥させた。
【０１５１】
実施例５
ＩＳＯ１０９３３−４（インビトロ測定）による、一般式ＩａおよびＩｂの化合物の血液適合性の測定：
式ＩａおよびＩｂの化合物の血液適合性を測定するために、セルロース膜、シリコン管およびステンレス鋼ステントを、式ＩａおよびＩｂの化合物を用いて共有結合的にコーティングし、コーティングされていない材料表面を使用する単一試験において、ヘパリンおよび対応物に対して試験した。
【０１５２】
５．１．脱硫酸化され、再アセチル化されたヘパリン（Ａｃ−ヘパリン）でコーティングされたセルロース膜（キュプロファン）
クエン酸添加された全血液とＡｃ−ヘパリンまたはヘパリンでコーティングされたキュプロファン膜との間の凝固性の生理学的相互作用を試験するために、Ｓａｋａｒｉａｓｓｅｎ改良のＢａｕｍｇａｒｔｎｅｒ−チャンバの開かん流システムが使用される［Ｓａｋａｒｉａｓｓｅｎ  Ｋ．Ｓ．他；Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｌｉｎ．Ｍｅｄ．１０２：５２２〜５３５（１９８３）］。チャンバは、４つのビルディングパーツに加えてコニカルニップルおよびねじ込み継手で構成され、ポリメチルメタクリレートで製造され、２個の改質された膜の並行観察が可能となり、その結果、全ての実験において、すでに統計的有効範囲が含まれる。このチャンバ構成は、準層状のかん流条件を可能にする。
【０１５３】
３７℃で５分間かん流した後、膜を抽出し、粘着性の血小板を固定した後、血小板占有率を測定する。それぞれの結果は、１００％血小板占有率を有するネガティブ標準として、高度にトロンボゲンを形成するサブ内皮細胞マトリックスに関連して設定される。血小板の付着は、異物に血漿タンパク質層が形成する前に、二次的に起こる。血漿タンパク質のフィブリノーゲンは、血小板凝集の共因子として作用する。血小板のこのような誘発された活性によって、例えば、ビトロネクチン、フィブロネクチンおよび血小板表面のｖｏｎ  Ｗｉｌｌｅｂｒａｎｄ因子のような、いくつかの凝固に関連する血漿タンパク質の結合が生じる。それらの影響によって、最終的に血小板の不可逆的な凝集が起こる。血小板占有率は、血液が異物表面と接触する場合の、上述の相互作用に因る、表面のトロンボゲン形成性に対して受容される量を示す。この因子から、以下の結果が生じる：血小板占有率が与えられた表面上で小さくなるにつれて、判断される試験表面の血液適合性が高くなる。
【０１５４】
ヘパリンでコーティングされた膜およびＡｃ−ヘパリンでコーティングされた膜による試験結果では、Ａｃ−ヘパリンを用いたコーティングを介して異質面の血液適合性が改善されたこと明確に示している。ヘパリンでコーティングされた膜は、４５乃至６５％の血小板占有率を示す。一方、Ａｃ−ヘパリンでコーティングされた表面は、０乃至５％の値を示す（参照：１００％の血小板占有率を有するサブ内皮細胞マトリックス）。
【０１５５】
Ａｃ−ヘパリン化された表面上の血小板の付着は、血小板の活性化に不可欠な血漿タンパク質が存在しないことに起因して、顕著に悪化する。これとは異なり、迅速に初期の血漿タンパク質の吸着を伴うヘパリンでコーティングされた表面は、血小板の活性化、付着および凝集のための最適な前提条件を与え、最終的に、凝固カスケードの活性化によって、対応する防衛機構で、血液と挿入された異質面とが反応する。Ａｃ−ヘパリンは、ヘパリンよりもはるかに優れており、異質面の血液適合性に対する要件を満たす。
【０１５６】
表面のトロンボン形成性のための直接的な量としての血漿タンパク質吸着および血小板占有率の相互作用は、血液に提供されたコーティングに依存して、特にこのインビトロ試験によってさらに十分に明らかにされる。従って、共有結合ヘパリンを抗血栓性のオペラント表面として使用することは、非常に限定されるか、または完全に不可能である。固定化されたヘパリンと血液との相互作用は、所望でない逆の方へと戻っていく。つまり、ヘパリンでコーティングされた表面がトロンボン形成能を獲得する。
【０１５７】
明らかに、抗血栓剤としてのヘパリンの突出した重要性は、共有結合的に固定化されたヘパリンにはあてはまらない。溶解した形態における全身適用においては、その特性を十分に発揮することができる。しかし、ヘパリンが共有結合的に固定化されない場合、その抗血栓性の特性は、仮にあったとしても、寿命が非常に短い。Ａｃ−ヘパリン（「非親和性」−ヘパリン）は、脱硫酸化およびＮ−再アセチル化に起因して、初期分子の活性な抗血栓性特性を完全に失っているが、不動態性対アンチトロンビンＩＩＩにおいて顕著に見出され、凝固を開始するプロセスに対する親和性を失っており、共有結合後にも維持する、区別可能な非トロンボン形成性を獲得しているという事実において異なる。
【０１５８】
ここで、Ａｃ−ヘパリンおよび一般式ＩａおよびＩｂの化合物は全体として、凝固システムと接触する異質面のカモフラージュのために最適である。
【０１５９】
５．２．シリコン上の固定化
内径３ｍｍを有する長いシリコン管１ｍを通して、エタノール／水１／１（ｖ／ｖ）混合物１００ｍＬを４０℃で３０分、円運動で圧送した。次いで、３−（トリエトキシシリル）−プロピルアミン２ｍＬを添加し、４０℃で更に１５時間、円運動で圧送した。その後、それぞれの場合においてエタノール／水１００ｍＬおよび水１００ｍＬで２時間すすいだ。
【０１６０】
脱アセチル化され再アセチル化されたヘパリン（Ａｃ−ヘパリン）３ｍｇを３０ｍＬの０．１Ｍ  ＭＥＳ−バッファーｐＨ４．７５  中に４℃で溶解し、ＣＭＥ−ＣＤＩ（Ｎ−シクロヘキシル−Ｎ’−（２−モルホリノエチル）カルボジイミドメチル−ｐ−トルエンスルホネート）３０ｍｇと混合した。この溶液を管を通して、４℃で１５時間、円運動で圧送した。水ですすいだ後に、それぞれの場合に４Ｍ  ＮａＣｌ溶液および水で２時間すすいだ。
【０１６１】
５．３  血小板数の決定（ＥＮ３０９９３−４）
内径３ｍｍを有する１ｍ長のシリコン管に、２つの２ｃｍ長の形状の合ったガラス管を配置した。次いで、管を収縮可能な管で円状に密閉し、０．１５４Ｍ  ＮａＣｌ溶液を用いてシリンジを介して空気を排除しつつ充填した。そのようにしながら、１つのシリンジを使用して溶液中に充填し、他のシリンジを用いて空気を除去した。空気を排除しながら（気泡が存在しない）、健康な被検体のクエン酸塩を添加した全血液に対して、２つのシリンジを用いて溶液を交換した。次いで、シリンジの凹状の穴を、その上からガラス管を押すことによって閉じ、透析ポンプ内で管をトートではさんだ。血液を１５０ｍＬ／分の流速で１０分間圧送した。Ｃｏｕｌｔｅｒカウンターを用いてかん流する前および後に、血液の血小板成分を測定した。コーティングされていないシリコン管について、血小板損失は１０％であった。それに対して、実施例５．２でコーティングされたシリコン管中の血小板損失は、平均で０％であった（実験数：ｎ＝３）。
【０１６２】
また、この動的試験システムにおいて、Ａｃ−ヘパリンでコーティングされた表面上の血小板の活性が減少することが示されている。同時に、ヘパリンの固定化が、使用した表面の血液適合性に悪影響をもたらすと記録できる。それに対し、Ａｃ−ヘパリンは、その受身の性質に従って、血小板と接触しても何の影響も与えないことを示す。
【０１６３】
５．４  ３１６ＬＶＭステンレス鋼冠状ステント上での全血液実験
生体適合性を有するラインの試験において、３１ｍｍ長の３１６ＬＶＭステンレス鋼ステントを、Ａｃ−ヘパリンで共有結合的にコーティングした。全表面２ｃｍ２および占有率係数約２０ｐｍ／ｃｍ２のステント表面の場合、このようなステントへの充填は、約０．３５μｇのＡｃ−ヘパリンである。比較として、一方、血栓症予防の場合には、ヘパリンの通常の１日の適用は、２０〜３０ｍｇであり、これは上記の値の少なくとも６０，０００倍に対応する。
【０１６４】
これらの実験は、確立された血流力学のＣｈａｎｄｌｅｒループシステム［A.Henseler,B.Oedekoven,C.Andersson,K.Mottaghy;KARDIOTECHNIK 3（１９９９）］を用いたRWTH Aachenの生理学研究所で行われた。コーティングされたステントおよびコーティングされていないステントを広げ、６００ｍｍ長および４ｍｍ内径を有するＰＶＣ管（医療用グレードＰＶＣ）中で試験した。これらの実験の結果は、シリコン管によって議論された実験を立証する。５０％のかん流液におけるステントに起因する初期の血小板損失は、Ａｃ−ヘパリンを用いてステント表面を改質することによって、８０％を越えて減少する。
【０１６５】
広げた管において、血小板損失に対する表面改質した冠状ステントの影響を、４５分間の全血液のかん流中に、更なるＣｈａｎｄｌｅｒ試験において評価する。最初にステントが存在しないＰＶＣ管を分析すると、この結果はゼロ値である。空の管は、ドナー血液に関して平均２７．４％の血小板損失を示し、標準偏差はわずかに３．６％である。この基本値に基づき、異なる表面改質されたステントがＰＶＣ管中で広げられ、それらによって生じる血小板損失について、類似の条件下で分析する。また、この場合において、単に全試験表面の約０．８４％を占めるステントを被覆する表面が、血小板含量に対して顕著で再生可能な効果を生じる。空の管（基本値）に基づいて、研磨された、化学的に表面被覆されていないステントの分析によって、２２．７％の更なる平均血小板損失を生む。ＰＶＣの空の管と比較して、１％未満の測定可能な異質面がほぼ同程度の血小板損失を有する。直接的な結果として、ステント材料として使用される医療用ステンレス鋼３１６ＬＶＭは、この試験表面は全表面の０．８４％を占めるのみであるが、医療用グレードのＰＶＣ表面と比較して、約１００倍の強度の血小板損傷を誘発する。
【０１６６】
ステンレス鋼冠状ステント上の分析された表面コーティングは、ステントにより誘発される血小板損傷の度合いを明らかに低減できることを示す（図４を参照）。最も効果的なのはＡｃ−ヘパリンを８１．５％用いた場合であることがわかった（ＳＨ４）。
【０１６７】
血小板損失に対するＡｃ−ヘパリンでコーティングされたステントの効果が考慮される場合、良好な一致する値が生じる。かん流液中の血小板損失と、提示された表面に対する血小板の付着との相関関係は、測定結果の信頼性を示す。
【０１６８】
５．４．１  ステントに対する共有血液適合性コーテイング
医療用ステンレススチールＬＶＭ３１６製の非伸張ステントは、アセトンおよびエタノールを貯めた超音波漕内で１５分間脱脂され、乾燥棚内において１００℃で乾燥された。次に、これらのステントは、 エタノール／水の混合液(５０対５０の体積比）と３−アミノプロピルトリエトキシシラン（3-aminopropyltriethoxysilane)の２％溶液中に５分間浸漬され、その後、１００℃で５分間乾燥された。その後、ステントは、脱塩水を用いて一晩洗浄された。
【０１６９】
３mgの脱硫酸され、再アセチル化されたヘパリンを、４℃において３０mlの０．１Ｍ  ＭＥＳ−バッファ（２−（Ｎ−モルホリノ）エタンスルホン酸）（ｐＨ４．７５）に溶解し、Ｎ−シクロヘキシル−Ｎ´−（２−モルホリノエチル）カルボジイミド−メチル−ｐ−トレンスルフォネート（ｔｏｌｕｅｎｅｓｕｌｐｈｏｎａｔｅ）３０mgと共に混合した。１０本のステントが、この溶液中において、４℃で１５時間攪拌された。次に、かかるステントは、水で洗浄され、２時間毎に４ＭのＮａＣｌ溶液および水で洗浄された。
【０１７０】
５．４．２  高速液体クロマトグラフィー（HPLC)によるコート済みステントのグルコサミンの含有量の測定：
【０１７１】
加水分解：コート済みステントが、細い加水分解チューブ内に置かれ、３mlの３ＭHCIとともに、室温でちょうど１分間放置された。金属プローブが、取り除かれ、前記チューブは、密閉後、乾燥棚内において１００℃で１６時間インキュベート（保温）された。次に、ステントは、冷却され、乾燥状態になるまで３回乾燥され、１mlの脱気および濾過された水の中に入れられ、加水分解された標準試料との比較によって高速液体クロマトグラフィーによる測定が行われた（measured contra an also hydrolysed standard in HPLC)。
【０１７２】
【表２】
2010189649.tif 000008
【０１７３】
実施例６
コーティングされた冠状ステントのインビボ実験（図５）
６．１．Ａｃ−ヘパリンでコーティングされた冠状ステントのインビボ実験
血液適合性についてのデータに起因して、Ａｃ−ヘパリンをインビトロ実験において得て、金属ステントの非トロンボン形成性コーティングとしてのＡｃ−ヘパリン表面の適性をインビボで検討した（動物実験）。実験の標的は、主として、血管反応を誘発するステントに対するＡｃ−ヘパリンコーティングの影響を評価することである。可能な血栓事象の位置合わせ以外に、新生内層領域、血管内腔および狭窄症の程度のような狭窄プロセスについての関連パラメータを記録した。
【０１７４】
認定された心臓病専門医であるＨｅｓｓ教授の指導の下で、動物実験をInselspital Bern（スイス）で行った。実験のために、６〜９月齢の家畜のブタを使用し、ステントの妥当性確認のために、１匹を長期間定住させ、動物モデルとして良好であると判断した。
【０１７５】
これらの実験において予想されるように、急性、亜急性でもなく後期急性でもない血栓事象を位置合わせし、Ａｃ−ヘパリンの非トロンボン形成性についての証明として評価してもよい。
【０１７６】
４週間後、動物を選び（安楽死させ）、ステントの冠状動脈セグメントを抽出し、組織形態学的に分析した。Ａｃ−ヘパリンでコーティングされたステントを移植した結果として、可能な急性または亜慢性の毒性、アレルギー反応または潜在性の刺激に対する指標は、実験段階全体で、特に組織学的実験において、観察されない。ステント移植およびフォローアップの冠状の血管造影データセットを解明する間に、ステント移植に対する血管反応に関して解釈した。
【０１７７】
コーティングされていないコントロールステントとＡｃ−ヘパリンでコーティングされたステントとの違いは、明確である。はっきりと区別できる新生内層層の生成は、コーティングされていないコントロールステントの場合は、非常に良好に観察可能である。すでに４週間後に、周りの組織に対するコーティングされていない表面の増殖促進効果は、ステント領域における血管閉塞の危険性が最終的に与えられる程度まで生じている。Ａｃ−ヘパリンでコーティングされたステントの場合では対照的に、明確に薄い新生内層層が観察され、広い、自由な血管内腔を維持した状態で、ステントの十分に調整された内殖がある。
【０１７８】
詳細な組織形態学的および冠状の血管造影データはこの結果を立証し、一致して観察可能な場合、Ａｃ−ヘパリンコーティング（ＳＨ４）を介して、新生内層過形成（「再狭窄」）は、コーティングされていないコントロールステントと比較して、約１７から２０％抑制された。この結果は予期されないものであり、同時に顕著なものである。確実に、血液適合性を事前に備えておくことに加えて、新生内層過形成を導くプロセスにおいても影響を有し、すなわち、再狭窄を防ぐ、トロンボゲンを生成しない表面は要求されていない。
【０１７９】
一方、Ａｃ−ヘパリンを用いたステント表面の密集した、永久的な占有は、金属表面に対する直接的な細胞接触を防ぐ。技術文献におけるように、インプラント付近の組織内への特定の金属イオンの放出は、再狭窄の１つの可能な理由として議論されており、抗再狭窄能は、直接的な金属接触を防止するコーティングの１つによって見出された。
【０１８０】
他方では、このような肯定的な副作用はもっともらしい。というのは、血小板凝集が起こらない消極的で非トロンボン形成性のステント表面においては、増殖効果、それによる増側因子の放出が起こらないからである。従って、内腔側から開始する、重要な新生内層増殖は起こらない。
【０１８１】
実施例７
共有結合したＡｃ−ヘパリンおよびＰＬＧＡ５０／５０の第２のその上に隣接する層でコーティングされた冠状ステントのインビボ実験
７．１  インビトロで使用されるマトリックスの血液適合性
ＰＬＧＡ５０／５０の血液適合性の評価のために、ステンレス鋼ステントをポリマーでコーティングし、インビトロで全血液試験を用いて、RWTH Aachenの生理学研究所で試験した。使用され、確立され、標準化されたＣｈａｎｄｌｅｒループシステムは、動的に密閉された管システムであり、ポンプを使用することなく作動する。血液適合性実験の全血液の範囲内で、血小板因子４（ＰＦ４）および相補因子５ａ（Ｃ５ａ）を決定した（図１４〜１６を参照）。比較の理由のために、コーティングされていないステントが含まれていた。
【０１８２】
実験の実施：
ドナー血液をヘパリン１．５Ｕ／ｍＬに入れる。ステントをＰＶＣ管（内径３．５ｍｍ、長さ（Ｌ）＝９５ｃｍ）に導入し、バルーンカテーテルを介して固定する。４つの管（Ｋ３〜Ｋ６）および２つの空の管（Ｌ１、Ｌ２）をそれぞれの場合において等張性の塩化ナトリウム溶液７．５ｍＬで満たし、Ｃｈａｎｄｌｅｒループ中で、３７℃で５ｒ／分で１５分間回転させた。完全に空にした管をヘパリン化されたドナー血液（７．５ｍＬ）で注意深く満たし、５ｒ／分で６０分間回転させた。抗凝固剤サンプルをｍｏｎｏｖｅｔｔｅｓおよびサンプルジャーにそれぞれ入れ（ＰＦ４−ＣＴＡＤ、Ｃ５ａ−ＥＤＴＡ、ＢＢ−ＥＤＴＡ）、処理する。
【０１８３】
血小板数の決定は、空のコントロール管、コーティングされたステントおよびコーティングされていないステント間で、顕著な違いを示す。放出されたＰＦ４は、コーティングされた管およびコーティングされていない管の場合では、同じレベルである。活性化された相補因子５（Ｃ５ａ）の決定は、コーティングされたステントの場合には、コーティングされていないステントの場合より活性化度が低い。
【０１８４】
７．２  インビトロで使用されるマトリックスの血液適合性
この実験の標的は、主として、血管反応を誘発するステントに関するＰＬＧＡ−コーティングの影響を評価することである。実験のために、２８匹の６月齢から９月齢の家畜のブタを使用した。ステント領域を１週間後（１ＷｏＦＵＰ）、１ヶ月後（４ＷｏＦＵＰ）、６週間後（６ＷｏＦＵＰ）、および３ヶ月後（１２ＷｏＦＵＰ）に試験した。得られたデータは、予想されない顕著に肯定的な効果を示し、これは疑いようもなくＰＬＧＡ５０／５０の存在に起因する。３ヶ月後の狭窄症の値はコーティングされていないステントおよびコーティングされたステントについてはほとんど異ならないが、ＰＬＧＡでコーティングされたステントに対する血管壁の反応は実質的に横ばい（smoother）である。１週間後、狭窄症値は、コーティングされていないインプラントが１０．４％なのを顕著に下回って６％である。金属表面の保護効果は、４週間後ですら１０％であり（３３％の増加）、この期間経過後その最大値が２２．６％まで到達する（５４％の増加）コーティングされていないステントよりも、２つを超える因子において、狭窄症の速度が遅い。コーティングされたステントは、６週間後にも、最大で１２．３３％しか示さない。１２週間後、両システムの値は互いに約１１％で等しい（図１６）。
【０１８５】
再狭窄プロセスについてのデータは、定量冠状血管造影（ＱＣＡ）および脈管内超音波実験（ＩＶＵＳ）を介して決定した。
【０１８６】
実施例８
タクロリムス(tacrolimus)を表面にコーテイングすることに関する実験：
【０１８７】
トルイジンブルー液による前実験：
タクロリムスを化学的に検出するのは非常に困難なことから、最初に、トルイジンブルー(アルドリッチ社）による前実験が行われる。
【０１８８】
化学物質：
ステンレススチールチューブＬＶＭ３１６：長さ２．５センチ、直径２ミリ
ポリラクチド ：Fluka社 ロット番号３９８５５５／１２３５００、ＨNo.０４０９
トルイジンブルー ：アルドリッチ社  ロット番号１９，８１６−１、  ＨNo.０４３０
ＰＢＳーバッファ  pH7.4 ：１４．２４ｇのNa2HPO4, 2.72ｇのNaH2PO4および９ｇのNaCl
実行：
かかるステントは、化学天秤で量られ、質量（ｗｅｉｇｈｔ）が記録される。０．５ｇのポリラクチドは、細い加水分解チューブにおいて、２mlのCHCl3に溶解される。この結果、それは、水槽内で６５℃まで加熱される。かかる溶液は、冷凍室において冷却される。２００マイクログラムのトルイジンブルーが、２００マイクロリットルのCHCl3に加えられる。この溶液中に、ステントが浸漬される。数分後、ステントは、ピンセットにより溶液から取り出され、溶液が乾燥するまでヒュームフード(fume hood)内に置かれる。ステントは、２回目の浸漬がなされる。空気乾燥した後、ステントは約１０分間フリーズドライされる。乾燥後、ステントは、再び秤量される。質量の差から、トルイジンブルーにより固定化されたポリラクチドの量が、測定される（サンプル１）。
【０１８９】
この実験は、同じ溶液（サンプル２）を用いて再度繰り返される。
【０１９０】
実験３のため、実験１（サンプル１）および実験２（サンプル２）によって生じた浸漬溶液（１．９３ml)  は、０．８２５mlのCHCl3ならびに２５０mgのポリラクチド中の０．８２５mgのトルイジンブルーと混合される。かかるポリラクチドは、加熱中に溶解される。次に、上述のように、ステントはそれに２回浸漬される。
【０１９１】
結果：
処理していないステントは、それぞれ１７６．０mgおよび１８０．９mgの質量があった。ポリラクチド溶液に浸漬後、ステントの質量は、２００．９および２０５．２mgとなった。
【０１９２】
浸漬溶液は、ポリラクチドを５００mgおよびトルイジンブルーを２００マイクログラム含んでいる。サンプル１ならびにサンプル２についてのトルイジンブルーの結合量は、この比率により測定することが可能である。サンプル３の場合、２．７５５mlの溶液が１mgのトルイジンブルー、ならびに、６３８．６mgのポリラクチドを含んでいる（初期質量−サンプル１＋２の消費量；約５０mg）。ここでは、吸収を高めるために、２本のステントが１回の製造に供される。厚いコーテイングを作り出す浸漬溶液は、非常に粘度が高いので、クロロホルムを用い、２．６２５mlから４mlに希釈される。
【０１９３】
浸漬溶液中の濃度：
【０１９４】
【表３】
2010189649.tif 000009
【０１９５】
チューブならびに測定されたコーテイングの質量：
【０１９６】
【表４】
2010189649.tif 000010
【０１９７】
実施例９
異なる濃度におけるコーテイングの溶出態様：
【０１９８】
前実験のように、エタノール中のトルイジンブルー溶液の可視分光分析値(UV-Vis)が取られ（ｃ＝０．１mg/ml)、吸収極大(absrption maximum)が決定される。溶液中のトルイジンブルーの濃度は、６２７nmの吸収極大において測定される。それに対する検量線が生成される。
【０１９９】
ステントは、ｐＨ７．４のリン酸緩衝液(phosphate buffer)(14.24g のNaH2PO4、2.72gの K2HPO4および9gのNaCl)中の２５mlの生理食塩水を有するビーカー内に、置かれ、室温でゆっくりと撹拌される。０．５、１、２、３、６、２４、４８ならびに１２０時間経過後、毎回３mlのサンプルが取られて、分光的に測定され、製造に反映される。
【０２００】
【表５】
2010189649.tif 000011
【０２０１】
異なる時間経過後のサンプルの吸収。濃度を測定するため、キュベットの差(cuvette difference)(abs. at T=0)が、測定値から差し引かれる。
【０２０２】
１２日および１３日後、それぞれの実験が、終了する。実験終了後、全てのステントの上にコーテイングが残存している。溶解しているトルイジンブルーおよびポリラクチドの量をそれぞれ決定するため、ステントは、水およびエタノールにより洗浄され、次に、それらをその後に秤量するため、１時間フリーズドライされる。
【０２０３】
【表６】
2010189649.tif 000012
【０２０４】
トルイジンブルーの濃度が、浸漬溶液１ml当たり９０マイクログラムである場合、トルイジンブルー溶出量は、 吸収値が分光計の測定限界に存する程度に非常に低い。濃度が、１ml当たり２００マイクログラムである場合、吸収値は数時間後に測定可能領域に達する。測定の際、より高い吸収値を得るため、ビーカー（溶出ジャー）内に２つのサンプルを収納することが推奨される。ポリラクチド／トルイジンブルーの濃度が最も高い場合、濃度の薄いサンプルの場合に、溶出比がほぼ直線状の軌道を有する間、飽和効果(saturation effect)が現れる。数日経った後でも、全てのステント上でコーテイングを検出することができる。
【０２０５】
約２週間後、結合したトルイジンブルーは、平均して約１／４から１／５溶解する。このように、かかるサンプルは、約８週から１０週間、トルイジンブルーを溶出する。
【０２０６】
浸漬溶液は、濃すぎてはならず、そうしなければコーテイング材料が厚すぎて不均一になってしまうので、抽出中にクロロホルムがすぐに蒸発しないよう、冷却しなければならない。ここで、サンプル４におけるポリラクチドの濃度（１３４mg/ml)は、十分であるように思えるが、とりわけ濃度が高い場合、溶液の粘度が非常に高くなり、ポリラクチドを溶解するだけでも大変である。
【０２０７】
実施例１０
スプレー法を用いてのステントのコーテイング：
実験例１ならびに実験例２によると、前もって準備した非伸張ステントは、秤量され、回転兼フィード器具(rotation and feed equipemnt)の回転軸に付けられた（stuck on）細い金属棒（d=0.2mm)に水平に引っ掛けられ、毎分２８回転する。かかるステントは、ステントの内部が前記金属棒に触れないよう固定される。フィーデイング幅(feeding amplitude)が２．２ｃｍ、フィーデイング速度が秒速４ｃｍであり、ステントとスプレーノズル間の距離が６ｃｍである時、それぞれのスプレー液が当該ステントに吹き付けられる。室温での乾燥後（約１５分）、ヒュームフード内に約一晩入れ、再度秤量される。
【０２０８】
実施例１１
マトリクスのみによるステントのコーテイング：
スプレー液の準備：
ポリラクチド１７６mgを秤量し、クロロホルムを注いで２０ｇとする。
【０２０９】
かかるステントには、毎回、３mlのスプレー液が吹き付けられ、スプレーの前後に秤量され、生成された層の厚みは、倍率が１００倍の顕微鏡によって測定することにより決定される。
【０２１０】
【表７】
2010189649.tif 000013
【０２１１】
実施例１２
活性物質のみによるステントのコーテイング：
スプレー液の準備：
タクソール ４４mgを、クロロホルム６gに溶解する。
【０２１２】
スプレーの前後にステントを秤量する。
【０２１３】
【表８】
2010189649.tif 000014
【０２１４】
実施例１３
ＰＢＳ−バッファにおける溶出態様の決定：
十分小さいフラスコ内に置かれた各ステントに、2mlのＰＢＳ−バッファが加えられ、パラフィルムにより密閉され、乾燥棚において３７℃でインキュベートされる。所定時間の終了後に、毎回、ピペットによって上澄み液が除去され、３０６nmにおける自身の赤外線吸収が測定される。
【０２１５】
実施例１４
活性物質を載せたマトリクスにより血液適合性を具備するステントをコーテイングする（図７）：
スプレー液：
ポリラクチド１４５．２mgならびにタクソール４８．４mgに、クロロホルムを注いで、２２ｇのポリラクチド  ＲＧ５０２／タクソール−溶液とする。
【０２１６】
【表９】
2010189649.tif 000015
【０２１７】
実施例１５
活性物質を載せたマトリクスによりステントをコーテイングするとともに、活性物質をトップコートとして用いる（図８）：
【０２１８】
ベースコート：ポリラクチド１９．８mgならびにタクソール６．６mgにクロロホルムを注いで、３ｇとする。
【０２１９】
トップコート：タクソール８．８mgにクロロホルムを注いで、２ｇとする。
【０２２０】
【表１０】
2010189649.tif 000016
【０２２１】
実施例１６
親水性の活性物質を含むポリラクチド、ならびに、トップコートとして、活性物質を含まないマトリクス、によりステントをコーテイングする（図９）：
スプレー液：
ベースコーテイング：ポリラクチド２２mgならびに親水性の活性物質２２mgを秤量し、それにクロロホルムを注いで、５ｇとする。
【０２２２】
トップコート： ポリラクチド２２mgならびにポリスチレン２２mgを秤量し、それにクロロホルムを注いで、５ｇとする。
【０２２３】
【表１１】
2010189649.tif 000017
【図１】
2010189649.tif 000020
【図２】
2010189649.tif 000021
【図３】
2010189649.tif 000022
【図４】
2010189649.tif 000023
【図５】
2010189649.tif 000024
【図６】
2010189649.tif 000025
【図７】
2010189649.tif 000026
【図８】
2010189649.tif 000027
【図９】
2010189649.tif 000028
【図１０】
2010189649.tif 000029
【図１１】
2010189649.tif 000030
【図１２】
2010189649.tif 000031
【図１３】
2010189649.tif 000032
【図１４】
2010189649.tif 000033
【図１５】
2010189649.tif 000034
【図１６】
2010189649.tif 000035
【図１７】
2010189649.tif 000036
【図１８】
2010189649.tif 000037
【手続補正書】
【提出日】平成22年3月30日(2010.3.30)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記の一般式Ｉｂで表される化合物
一般式Ｉｂ
【化２】
2010189649.tif 000038
ｎは、４から１０５０の間の整数であり、
Ｙは、−ＣＨＯ，−ＣＯＣＨ３，−ＣＯＣ２Ｈ５，−ＣＯＣ３Ｈ７，−ＣＯＣ４Ｈ９，−ＣＯＣ５Ｈ１１，−ＣＯＣＨ（ＣＨ３）２，−ＣＯＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２，−ＣＯＣＨ（ＣＨ３）Ｃ２Ｈ５の基を表す化合物、および当該化合物の塩。
【請求項２】
請求項１の一般式Ｉｂの化合物であって、
前記Ｙは、−ＣＯＣＨ３，−ＣＯＣ２Ｈ５，−ＣＯＣ３Ｈ７，の基を表す化合物、および当該化合物の塩。
【請求項３】
前記一般式Ｉｂの化合物の製造方法であって、
ヘパラン硫酸および／またはヘパリンが、実質的に完全に脱硫酸化され、続いて酸によってN−アシル化されていることを特徴とする方法。
【請求項４】
請求項３の方法によって得られる前記一般式Ｉｂの化合物。
【請求項５】
請求項１、２または４のいずれか一つの前記一般式Ｉｂの化合物であって、二糖ユニット当たりの硫酸基の含有量が０．００５未満であること、
を特徴とする化合物。
【請求項６】
請求項１、２、４または５のいずれか一つの前記一般式Ｉｂの化合物であって、遊離アミノ基の含有量が、前記−ＮＨ−Ｙ基の全てに関して１％未満であること、
を特徴とする化合物。
【請求項７】
請求項１、２、４から６のいずれか一つの前記一般式Ｉｂの化合物であって、糖ユニットの順番が実質的に変換されていること、
を特徴とする化合物。
【請求項８】
医療用機器の血液適合性の表面を生成するための、前記一般式Ｉｂの化合物の使用方法。
【請求項９】
請求項８の使用方法であって、前記一般式Ｉｂの化合物は、前記表面に共有結合していること、
を特徴とする使用方法。
【請求項１０】
表面の血液適合性コーティングのためのオリゴ糖および／または多糖類の使用方法であって、
前記オリゴ糖および／または多糖類は、糖ユニットであるＮ−アシルグルコサミンまたはＮ−アシルガラクトサミンを４０％から６０％の間で含み、実質的に残りの糖ユニットは、糖ユニット当たり一つのカルボキシル基を有すること、
を特徴とする使用方法。
【請求項１１】
請求項１０の使用方法であって、
前記オリゴ糖および／または多糖類の実質的に各２番目の糖ユニットは、Ｎ−アシルグルコサミンまたはＮ−アシルガラクトサミンであること、
を特徴とする使用方法。
【請求項１２】
請求項１０または１１の使用方法であって、Ｎ−アシルグルコサミン  Ｎ−アセチルグルコサミンの場合、および、Ｎ−アシルガラクトサミン Ｎ−アセチルガラクトサミンの場合が考慮されること、
を特徴とする使用方法。
【請求項１３】
請求項１０、１１、または１２の使用方法であって、前記残りの糖ユニットがウロン酸であること、
を特徴とする使用方法。
【請求項１４】
請求項１３の使用方法において、前記ウロン酸は実質的にＤ−グルクロン酸およびＬ−イズロン酸であること、
を特徴とする使用方法。
【請求項１５】
請求項８から１４のいずれか一つの使用方法において、前記糖ユニットの順番が実質的に変更されていること、
を特徴とする使用方法。
【請求項１６】
請求項１０から１５のいずれか一つの使用方法であって、前記オリゴ糖および／または多糖類は、実質的に脱硫酸化および実質的にＮ−アシル化されたヘパラン硫酸、および部分的にＮ−カルボキシアルキル化およびＮ−アシル化されたキトサンであること、
を特徴とする使用方法。
【請求項１７】
医療用機器の生物的および／または人工的な表面の血液適合性コーティングのための方法であって、以下の：
ａ）医療用機器の表面を準備するステップ、
ｂ）前記表面の血液適合性層として、請求項１から２、４から７、１０から１６のいずれか一つの、少なくとも一つのオリゴ糖および／または多糖類を付着するステップ、あるいは、
ｂ’）前記医療用機器の表面または前記血液適合性層に生物的安定層を付着するステップを含み、
前記一般式Ｉｂによる化合物が血液適合性層として用いられる場合には、活性化剤はパクリタキセルでない方法。
【請求項１８】
請求項１７の方法であって、前記血液適合性層または生物的安定層は、共有および／または接着結合する少なくとも１の活性物質を含む、少なくとも１の生物分解性層、および／または生物的安定層を浸漬または吹きつけ法を介してコートされること、
を特徴とする方法。
【請求項１９】
請求項１７の方法であって、さらに、
ｃ）前記血液適合性層または生物的安定層の中、および／または上に少なくとも１の活性物質を付着するステップ、
を含む方法。
【請求項２０】
請求項１９の方法であって、前記少なくとも１の活性物質は、前記血液適合性層または生物的安定層の上および／または中に浸漬または吹きつけ法によって適用および／または付着され、および／または、前記少なくとも１の活性物質は、前記血液適合性層または生物的安定層に共有および／または接着結合によって結合されること、
を特徴とする方法。
【請求項２１】
請求項１７から２０のいずれか一つの方法であって、さらに、
ｄ）少なくとも１の生物分解性層および／または少なくとも１の生物的安定層を、前記血液適合性層または前記活性物質の層のそれぞれに付着するステップ、あるいは、
ｄ’）前記生物的安定層または前記活性物質の層のそれぞれに、血液適合性層として、請求項１から２、４から７、１０から１６のいずれか一つの少なくとも１のオリゴ糖および／または多糖類を付着するステップ、
を含むことを特徴とする方法。
【請求項２２】
請求項１７から２１のいずれか一つの方法であって、さらに、
ｅ）少なくとも１の生物分解性層、および／または生物的安定層または血液適合性層の中および／または上に少なくとも１の活性物質を付着するステップ、
を含むことを特徴とする方法。
【請求項２３】
請求項２２の方法であって、
前記少なくとも１の活性物質は、少なくとも１の生物分解性、および／または生物的安定層または血液適合性層の上および／または中に浸漬または吹きつけ法を介して付着および／または適用され、および／または、少なくとも１の活性物質は、少なくとも生物分解性、および／または、生物的安定層または血液適合性層に共有および／または接着結合することによって結合されること、
を特徴とする方法。
【請求項２４】
請求項２１から２３のいずれか一つの方法であって、前記生物的安定および／または生物分解性層は、前記医療用機器の表面に共有および／または接着結合しており、前記血液適合性層は、前記生物的安定層に共有結合して、それを完全にまたは不完全に覆うこと、
を特徴とする方法。
【請求項２５】
請求項１７から２４のいずれか一つの方法であって、
前記血液適合性層は、購入可能なヘパリンの標準的な分子量１３ｋＤに至るまで抗血栓作用を生じさせるペンタサッカライドの分子量範囲において、異なる硫酸化率（硫酸化度）およびアシル化率（アシル化度）を有する位置選択的に合成されたヘパリン誘導体、ヘパラン硫酸誘導体、赤血球性のグリコカリックスのオリゴ−および多糖類、脱硫酸化およびＮ−再アセチル化されたヘパリン、Ｎ−カルボキシメチル化および／または部分的にＮ−アセチル化されたキトサン、またはそれらの物質の混合物、
を含むことを特徴とする方法。
【請求項２６】
請求項１７から２５のいずれか一つの方法において、
前記生物分解性層のための生物分解性物質として、ポリバレロラクトン、ポリ−ε−デカラクトン、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、ポリラクチド、ポリグリコライド、ポリラクチドおよびポリグリコライドのコポリマー、ポリ−ε−カプロラクトン、ポリヒドロキシブタン酸、ポリヒドロキンブチレート、ポリヒドロキシバレレート、ポリヒロドキシブチレート−ｃｏ−バレレート、ポリ（１、４−ジオキサン−２、３−ジオン）、ポリ（１、３−ジオキサン−２−オン）、ポリ−パラ−ジオキサノン、ポリアンヒドリド、ポリ無水マレイン酸、ポリヒドロキシメタクリレート、フィブリン、ポリシアノアクリレート、ポリカプロラクトンジメチルアクリレート、ポリ−ｂ−マレイン酸、ポリカプロラクトンブチル−アクリレーツ、マルチブロックポリマー、オリゴカプロラクトンジオールおよびオリゴジオキサノンジオールから得られるマルチブロックポリマー、ポリエーテルエステル・マルチブロックポリマー、ＰＥＧ、ポリ（ブチレン  テレフタレート）、ポリピボトラクトン、ポリグリコール酸  トリメチレン−カーボネート、ポリカプロラクトン−グリコライド、ポリ（ｇ−エチルグルタミン酸）、ポリ（ＤＴＨ−イミノカーボネート）、ポリ（ＤＴＥ−ｃｏ−ＤＴ−カーボネート）、ポリ（ビスフェノール−Ａ−イミノカーボネート）、ポリオルトエステル、ポリグリコール酸  トリメチレン−カーボネート、ポリトリメチルカルボン酸、ポリイミノカルボン酸、ポリ（Ｎ−ビニル）−ピロリドン、ポリビニルアルコール、ポリエステルアミド、グリコール酸・ポリエステル、ポリホスホエステル、ポリホスファゼン、ポリ［ｐ−カルボキシフェノキシ）プロパン］、ポリヒドロキシペンタン酸、ポリアンヒドリド、ポリエチレンオキシド−プロピレンオキシド、ソフトポリウレタン、主鎖にアミノ酸残基が付加されたポリウレタン、ポリエーテルエステル、ポリエチレンオキシド、ポリアルケンシュウ酸、ポリオルトエステルおよびそれらのコポリマー、脂質、カラギーナン、フィブリノーゲン、デンプン、コラーゲン、プロテインをもとにしたポリマー、ポリアミノ酸、合成されたポリアミノ酸、ゼイン、修飾されたゼイン、ポリヒドロキシアルカン酸、ペクチン酸、化学作用のある酸、修飾および非修飾のフィブリンおよびカゼイン、カルボキシメチル硫酸、アルブミン、さらに、ヒアルロン酸、キトサン及びその誘導体、ヘパラン硫酸及びその誘導体、ヘパリン、コンドロイチン硫酸、デキストラン、ｂ−シクロデキストリン、ＰＥＧおよびポリプロピレングリコールによるコポリマー、アラビアゴム、グアー、ゼラチン、コラーゲン、コラーゲン−Ｎ−ヒドロキシサクシンイミド、脂質、リン脂質、前述の物質の修飾物、前述の物質のコポリマー、および／または、前述の物質の混合物、が用いられること、
を特徴とする方法。
【請求項２７】
請求項１７から２６のいずれか一つの方法において、
前記生体安定性層のための生体安定性物質として、ポリアクリル酸およびポリアクリレート、ポリメチルメタクリレート、ポリブチルメタクリレート、ポリアクリルアミド、ポリアクリロニトリル、ポリアミド、ポリエーテルアミド、ポリエチレンアミン、ポリイミド、ポリカーボネート、ポリカルボウレタン、ポリビニルケトン、ポリビニルハロゲン化物、ポリビニリデンハロゲン化物、ポリビニルエーテル、ポリイソブチレン、ポリビニルアロメート、ポリビニルエステル、ポリビニルピロリドン、ポリオキシメチレン、ポリテトラメチレンオキシド、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリテトラフルオロエチレン、ポリウレタン、ポリエーテルウレタン、シリコン−ポリエーテルウレタン、シリコン−ポリウレタン、シリコン−ポリカーボネート−ウレタン、ポリオレフィンエラストマー、ポリイソブチレン、ＥＰＤＭ  ガム、フルオロシリコン、カルボキシメチルキトサン、ポリアリルエーテルエーテルケトン、ポリエーテルエーテルケトン、ポリエチレンテレフタラート、ポリバレレート、カルボキシメチルセルロース、セルロース、レーヨン、レーヨントリアセテート、セルロースニトレート、セルロースアセテート、ヒドロキシエチルセルロース、セルロースブチレート、セルロースアセテートブチレート、エチルビニールアセテート・コポリマー、ポリスルホン、エポキシレジン、ＡＢＳレジン、ＥＰＤＭ  ガム、例えばポリシロキサンのようなシリコン、ポリジメチルシロキサン、ポリビニルハロゲンおよびコポリマー、セルロースエーテル、セルローストリアセテート、キトサン、それらの物質のコポリマー、および／またはそれらの混合物、が用いられること、
を特徴とする方法。
【請求項２８】
請求項１７から２７のいずれか一つの方法において、
前記活性物質は、シロリムス（ラパマイシン）、エベロリムス、ピメクロリムス、ソマトスタチン、タクロリムス、ロキシスロマイシン、ドウナイマイシン、アスコマイシン、バフィロマイシン、エリスロマイシン、ミデカマイシン、ジョサマイシン、コンカナマイシン、クラリスロマイシン、トロレアンドマイシン、フォリマイシン、セリバスタチン、シンバスタチン、ロバスタチン、フルバスタチン、ロスバスタチン、アトルバスタチン、プラバスタチン、ピタバスタチン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、ビノレルビン、エトボシド、テニポシド、ニムスチン、カルムスチン、ロムスチン、シクロホスファミド、４−ヒドロキシシクロフォスファミド、エストラムスチン、メルファラン、イホスファミド、トロフォスファミド、サイモシンα−１、クロランブシル、ベンダムスチン、ダカルバジン、ブスルファン、プロカルバジン、トレオスルファン、トレモゾロミド、チオテパ、ダウノルビシン、ドキソルビシン、アクラルビシン、エピルビシン、ミトキサントロン、イダルビシン、ブレオマイシン、マイトマイシン、ダクチノマイシン、メトトレキセート、フルダラビン、２−メチルチアゾリジン−２，４−ジカルボン酸、チアリン−Ｎａ（チアリンのナトリウム塩）、フルダラビン−５’−リン酸二水素、クラドリビン、メルカプトプリン、チオグアニン、シタラビン、フルオロウラシル、ゲムシタビン、カペシタビン、ドセタキセル、カルボプラチン、シスプラチン、オキサリプラチン、アムサクリン、イリノテカン、トポテカン、ヒドロキシカルバミド、ミルテフォシン、ペントスタチン、アルデスロイキン、トレチノイン、アスパラギナーゼ、ペガスパラーゼ、アナストロゾール、エキセメスタン、レトロゾール、フォルメスタン、アミノグルテサミド、アドリアマイシン、アジスロマイシン、スピラマイシン、セファランチン、ダームシジン（ダームシジン）、ｓｍｃ増殖阻害剤−２ｗ、エポシロンＡおよびＢ、ミトキサントロン、アザチオプリン、マイコフェノールアトモフェチル、ｃ−ｍｙｃ−アンチセンス、ｂ−ｍｙｃ−アンチセンス、ベツリニック酸、カンプトセシン、ＰＩ−８８（硫酸化オリゴ糖）、メラニン細胞刺激ホルモン（α−ＭＳＨ）、活性化プロテインＣ、ＩＬ１−β阻害剤、フマル酸、およびそのエステル、カルシポトリオール、タカルシトール、ラパコール、β−ラパコン、ポドフィロトキシン、ベツリン、ポドフィリック酸  ２−エチルヒドラジド、モルグラモスティム（ｒｈｕＧＭ−ＣＳＦ）、ペグインターフェロン  α−２ｂ、ラノグラスチム（ｒ−ＨｕＧ−ＣＳＦ）、フィルグラスチム、マクロゴール、ダカルバジン、エキセメスタン、レトロゾール、ゴセレリン、セファロマニン、バシリキシマブ、トラスツズマブ、ダシリツマブ、セレクチン（サイトカイン  アンタゴニスト）、ＣＥＴＰ阻害剤、カドヘリン、サイトカイニン阻害剤、ＣＯＸ−２阻害剤、ＮＦｋＢ、アンギオペプチン、シプロフロキサシン、カンプトセシン、フルロブラスチン、筋細胞の増殖を阻害するモノクローナル抗体、ｂＦＧＦアンタゴニスト、プロブコール、プロスタグランジン、１，１１−ジメトキシカンシン−６−オン、１−ヒドロキシ−１１−メトキシカンチン−６−オン、スコ��レクチン、コルヒチン、ＮＯ供与体（一酸化窒素供与体）、四硝酸ペンタエリスリトール、シンドノエイミン、Ｓ−ニトロソデリバティブ、タモキシフェン、スタウロスポリン、β−エストラジオール、α−エストラジオール、エストリオール、エストロン、エチニルエストラジオール、ホスフェストロール、メドロキシプロゲステロン、エストラジオールシピオネイト、エストラジオール  ベンゾアート、トラニラスト、カメバコーリン、癌の治療に利用されるテルペノイド、ベラパミル、チロシンキナーゼ阻害剤（チルフォスチン）、シクロスポリンＡ、パクリタキセルおよびその誘導体、６−α−ヒドロキシパクリタキセル、バッカチン、タキソテール、その他合成的に生産および天然源に由来するカーボン・サブオキサイドの大環状オリゴマー（ＭＣＳ）およびその誘導体、モフェブタゾン、アセメタシン、ジクロフェナク、ロナゾラック、ダプソン、ｏ−カルバモイルフェノキシ酢酸、リドカイン、ケトプロフェン、メフェナム酸、ピロキシカム、メロキシカム、クロロキンリン酸、ペニシラミン、ヒドロキシクロロキン、オーラノフィン、金チオリンゴ酸ナトリウム、オクサセプロール、セレコキシブ、β−シトステリン、アデノシル・メチオニン、ミルテカイン、ポリドカノール、ノニヴァミド、レボメントール、ベンゾカイン、アエスシン、エリプチシン、Ｄ−２４８５１  （カルビオケム）、コルセミド、サイトカラシンＡ−Ｅ、インダノシン、ノコダゾール、Ｓ１００プロテイン、バシトラシン、ビトロネクチン受容体アンタゴニスト、アゼラスチン、グアニジル  シクラーゼ刺激薬  組織メタロプロテアーゼインヒビター−１および−２、遊離した核酸、ウイルス伝搬体に組み込まれた核酸、ＤＮＡおよびＲＮＡ断片、プラスミノーゲン活性化因子インヒビター−１、プラスミノーゲン活性化因子インヒビター−２、アンチセンス・オリゴヌクレオチド、ＶＥＧＦ阻害剤、ＩＧＦ−１、例えばセファドロキシル、セファゾリン、セファクロル、セフォタキシン、トブラマイシン、ゲンタマイシン、例えばジクロキサシリンのようなペニシリン、オキサシリン、サルファ剤、メトロニダゾールからなる抗生物質の群より選ばれた活性物質、例えばアルガトロバンのような抗血栓剤、アスピリン、アブシキシマブ、合成されたアンチトロンビン、ビバリルジン、クマジン、エノキソパリン、組織プラスミノーゲン活性化因子、ＧｐＩＩｂ／ＩＩＩａ  血小板層レセプター、ファクターＸａ阻害抗体、ヘパリン、ヒルジン、ｒ−ヒルジン、ＰＰＡＣＫ、プロタミン、チアリン−Ｎａ、プロウロキナーゼ、ストレプトキナーゼ、ワルファリン、ウロキナーゼ、血管拡張薬、ジピラミドール、トラピジル、ニトロプルシド、ＰＤＧＦアンタゴニスト、トリアゾロピリミジン、セラミン、ＡＣＥ阻害剤、カプトプリル、シラザプリル、リシノプリル、エナラプリル、ロサルタン、チオプロテアーゼ阻害剤、プロスタサイクリン、バピプロスト、インターフェロンα、βおよびγ、ヒスタミン  アンタゴニスト、セロトニンブロッカー、アポトーシス阻害剤、アポトーシスレギュレーター、ｐ６５、ＮＦ−ｋＢまたはＢｃｌ−ｘＬ  アンチセンス・オリゴヌクレオチド、ハロフジノン、ニフェジピン、トコフェロール、ビタミンＢ１、���２、Ｂ６、Ｂ１２、葉酸、トラニラスト、モルシドミン、茶成分ポリフェノール、エピカテキン・ガレート、エピガロカテキン・ガレート、ボズウェラ酸およびその誘導体、レフルノミド、アナキンラ、エタネルセプト、スルファサラジン、エトポシド、ジクロキサシリン、テトラサイクリン、トリアムシノロン、ムタマイシン、プロカイナミド、レチノイン酸、キニジン、ジソピラミド、フレカイニド、プロパフェノン、ソタロール、アミドロン、天然および合成的に得られたステロイド、ブリオフィリンＡ、イノトジオール、マキロシドＡ、ガラキノシド、マンソニン、ストレブロシド、ヒドロコルチゾン、ベタメタゾン、デキサメタゾン、非ステロイド化合物（ＮＳＡＩＤＳ）、フェノプロフェン、イブプロフェン、インドメタシン、ナプロキセン、フェニルブタゾン、抗ウイルス剤、アシクロビル、ガンシクロビル、ドブジン、抗かび剤、クロトリマゾール、フルシトシン、グリセオフルビン、ケトコナゾール、ミコナゾール、ニスタチン、テルビナフィン、アンチプロゾール作用物質、クロロキン、メフロキン、キニーネ、さらに天然のテルペノイド、ヒッポカエスクリン、バリントゲノール−Ｃ２１−アンゲレート、１４−デヒロドアグロスチスタチン、アグロスケリン、アガロスチスタチン、１７−ヒドロキシアグロスチスタチン、オヴァトジオライド、４，７−オキシシクロアニソメリック・アシッド、バッカリノイドＢ１、Ｂ２、Ｂ３およびＢ７、トゥベイモシド、ブルセノールＡ、ＢおよびＣ、ブルセアンチノシドＣ、ヤダンジオシドＮおよびＰ、イソデオキシエレファントピン、トメンファントピンＡおよびＢ、コロナリンＡ、Ｂ、ＣおよびＤ、ウルソール酸、ヒプタチック酸Ａ、ゼオリン、イソ−イリドジャーマナル、メイテンフォリオル、エフサンチンＡ、エキシサニンＡおよびＢ、ロンギカウリンＢ、スカルポネアチン  Ｃ、カメバウニン、ロイカメニンＡおよびＢ、１３，１８−デヒドロ−６−α−シネシオイルオキシシャパリン、タクサマイリンＡおよびＢ、レジェニロール、トリプトライド、さらに、シマリン、アポシマリン、アリストロキア酸、アノプテリン、ヒドロキシアノプテリン、アネモニン、プロトアネモニン、ベルベリン、チェリブリン・クロライド、シクトキシン、シノコクリン、ボムブレスタチンＡおよびＢ、クドライソフラボンＡ、クルクミン、ジヒドロニチジン、塩化ニチジン、１２−β−ヒドロキシプレグナジエン−３，２０−ジオン、ビロボール、ギンコール、ギンコール酸、ヘレナリン、インジシン、インジシン−Ｎ−オキシド、ラシオカルピン、イノトジオール、グリコシド  １ａ、ポドフィロトキシン、ジャスチシジンＡおよびＢ、ラレアチン、マロテリン、マロトクロマノール、イソブチリルマロトクロマノール、マキロシドＡ、マーチャンチンＡ、メイタイシン、リコリジシン、マルゲチン、パンクラチスタチン、リリオデニン、ビスパーセノリジン、オクソウシンスニン、アリストラクタム−ＡＩＩ、ビスパーセノリジン、ペリプロコシドＡ、ガラキノシド、ウルソール酸、デオキシソロスパミン、サイコルビン、リシンＡ、サンギナリン、マンウ  ホウィート・アシッド、メチルソルビフォリン、メラニン細胞刺激ホルモン（α−ＭＳＨ）、スファセリアク���メン、スチゾフィリン、マンソニン、ストレブロシド、アカゲリン、ジヒロドウサムバレンシン、ヒドロキシウサムバリン、ストリクノペンタミン、ストリクノフィリン、ウサムバリン、ウサムバレンシン、ベルベリン、リリオデニン、オクソウシンスニン、ダフノレチン、ラリシレシノール、メトキシラリシレシノール、シリンガレジノール、ウンベリフェロン、アフロモソン、アセチルビスミオン  Ｂ、デスアセチルビスミオンＡ、ビスミオンＡおよびＢ、からなる群より選択されたものであること、
を特徴とする方法。
【請求項２９】
請求項１７から２８のいずれか一つの方法であって、
請求項１から２、４から７、１０から１６のいずれか一つの前記オリゴ糖および／または多糖類の付着または固定化は、疎水的相互作用、ファン・デル・ワールス力、ファン・デル・ワールス力、静電的相互作用、水素結合、イオン結合、架橋結合、および／または共有結合によって行われること、
を特徴とする方法。
【請求項３０】
請求項１７から２９のいずれか一つの方法によって得られる医療用機器。
【請求項３１】
医療用機器であって、前記医療用機器の表面は、少なくとも１の介在する生物的安定層および／または生物分解性層によって直接的および／またはそれらを介してコートされ、および／または、血液適合性層を伴う活性物質の層は、請求項１から２、５から８、１０から１６の少なくとも１のオリゴ糖および／または多糖類を含み、
前記一般式Ｉｂによる化合物が血液適合性層として用いられる場合には、活性化剤はパクリタキセルでないことを特徴とする医療用機器。
【請求項３２】
請求項３１の医療用機器であって、前記血液適合性層の下、または２つの血液適合性層の間に、少なくとも１の生物的安定層および／または生物分解性層が存在すること、
を特徴とする医療用機器。
【請求項３３】
請求項３１または３２の医療用機器であって、前記血液適合性層は、少なくとも他の、上にある生物的安定層および／または生物分解性層によって完全に、および／または不完全にコートされること、
を特徴とする医療用機器。
【請求項３４】
請求項３１から３３のいずれか一つの医療用機器であって、前記少なくとも１の活性物質の層は、生物的安定層および／または生物分解性層の間に存在し、前記血液適合性層は、共有および／または接着結合する、少なくとも１の抗増殖性、抗炎症性、および／または、抗血栓性の活性物質を含むこと、
を特徴とする医療用機器。
【請求項３５】
請求項３１から３４のいずれか一つの医療用機器であって、前記少なくとも１の抗増殖性、抗炎症性、および／または、抗血栓性の活性物質は、前記血液適合性層、および／または生物的安定層、および／または生物分解性層、の中および／または上に共有および／または接着結合すること、
を特徴とする医療用機器。
【請求項３６】
請求項３１から３５のいずれか一つの医療装置において、
前記用いられる活性物質は、シロリムス（ラパマイシン）、エベロリムス、ピメクロリムス、ソマトスタチン、タクロリムス、ロキシスロマイシン、ドウナイマイシン、アスコマイシン、バフィロマイシン、エリスロマイシン、ミデカマイシン、ジョサマイシン、コンカナマイシン、クラリスロマイシン、トロレアンドマイシン、フォリマイシン、セリバスタチン、シンバスタチン、ロバスタチン、フルバスタチン、ロスバスタチン、アトルバスタチン、プラバスタチン、ピタバスタチン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、ビノレルビン、エトボシド、テニポシド、ニムスチン、カルムスチン、ロムスチン、シクロホスファミド、４−ヒドロキシシクロフォスファミド、エストラムスチン、メルファラン、イホスファミド、トロフォスファミド、クロランブシル、ベンダムスチン、ダカルバジン、ブスルファン、プロカルバジン、トレオスルファン、サイモシンα−１、トレモゾロミド、チオテパ、チアリン（２−メチルチアゾリジン−２，４−ジカルボン酸）、チアリン−Ｎａ（チアリンのナトリウム塩）、アウノルビシン、ドキソルビシン、アクラルビシン、エピルビシン、ミトキサントロン、イダルビシン、ブレオマイシン、マイトマイシン、ダクチノマイシン、メトトレキセート、フルダラビン、フルダラビン−５’−リン酸二水素、クラドリビン、メルカプトプリン、チオグアニン、シタラビン、フルオロウラシル、ゲムシタビン、カペシタビン、ドセタキセル、カルボプラチン、シスプラチン、オキサリプラチン、アムサクリン、イリノテカン、トポテカン、ヒドロキシカルバミド、ミルテフォシン、ペントスタチン、アルデスロイキン、トレチノイン、アスパラギナーゼ、ペガスパラーゼ、アナストロゾール、エキセメスタン、レトロゾール、フォルメスタン、アミノグルテサミド、アドリアマイシン、アジスロマイシン、スピラマイシン、セファランチン、ｓｍｃ増殖阻害剤−２ｗ、エポシロンＡおよびＢ、ミトキサントロン、アザチオプリン、マイコフェノールアトモフェチル、ｃ−ｍｙｃ−アンチセンス、ｂ−ｍｙｃ−アンチセンス、ベツリニック酸、カンプトセシン、ＰＩ−８８（硫酸化オリゴ糖）、メラニン細胞刺激ホルモン（α−ＭＳＨ）、活性化プロテインＣ、ＩＬ１−β阻害剤、フマル酸、およびそのエステル、ダームシジン、カルシポトリオール、タカルシトール、ラパコール、β−ラパコン、ポドフィロトキシン、ベツリン、ポドフィリック酸  ２−エチルヒドラジド、モルグラモスティム（ｒｈｕＧＭ−ＣＳＦ）、ペグインターフェロン  α−２ｂ、ラノグラスチム（ｒ−ＨｕＧ−ＣＳＦ）、フィルグラスチム、マクロゴール、ダカルバジン、レトロゾール、ゴセレリン、セファロマニン、トラスツズマブ、エキセメスタン、バシリキシマブ、ダシリツマブ、セレクチン（サイトカイン  アンタゴニスト）、ＣＥＴＰ阻害剤、カドヘリン、サイトカイニン阻害剤、ＣＯＸ−２阻害剤、ＮＦｋＢ、アンギオペプチン、シプロフロキサシン、カンプトセシン、フルロブラスチン、筋細胞の増殖を阻害するモノクローナル抗体、ｂＦＧＦアンタゴニスト、プロブコール、プロスタグランジン、１、１１−ジメトキシカンシン−６−オン、１−ヒドロキシ−１１−メトキシカンチン−６−オン��スコポレクチン、コルヒチン、ＮＯ供与体（一酸化窒素供与体）、四硝酸ペンタエリスリトール、シンドノエイミン、Ｓ−ニトロソデリバティブ、タモキシフェン、スタウロスポリン、β−エストラジオール、α−エストラジオール、エストリオール、エストロン、エチニルエストラジオール、ホスフェストロール、メドロキシプロゲステロン、エストラジオールシピオネイト、エストラジオール  ベンゾアート、トラニラスト、カメバコーリン、癌の治療に利用されるテルペノイド、ベラパミル、チロシンキナーゼ阻害剤（チルフォスチン）、シクロスポリンＡ、パクリタキセルおよびその誘導体、６−α−ヒドロキシ−パクリタキセル、バッカチン、タキソテール、合成的に生産および天然源に由来するカーボン・サブオキサイドの大環状オリゴマー（ＭＣＳ）およびその誘導体、モフェブタゾン、アセメタシン、ジクロフェナク、ロナゾラック、ダプソン、ｏ−カルバモイルフェノキシ酢酸、リドカイン、ケトプロフェン、メフェナム酸、ピロキシカム、メロキシカム、クロロキンリン酸、ペニシラミン、ヒドロキシクロロキン、オーラノフィン、金チオリンゴ酸ナトリウム、オクサセプロール、セレコキシブ、β−シトステリン、アデノシル・メチオニン、ミルテカイン、ポリドカノール、ノニヴァミド、レボメントール、ベンゾカイン、アエスシン、エリプチシン、Ｄ−２４８５１  （カルビオケム）、コルセミド、サイトカラシンＡ−Ｅ、インダノシン、ノコダゾール、Ｓ１００プロテイン、バシトラシン、ビトロネクチン受容体アンタゴニスト、アゼラスチン、グアニジル  シクラーゼ刺激薬  組織メタロプロテアーゼインヒビター−１および−２、遊離した核酸、ウイルス伝搬体に組み込まれた核酸、ＤＮＡおよびＲＮＡ断片、プラスミノーゲン活性化因子インヒビター−１、プラスミノーゲン活性化因子インヒビター−２、アンチセンス・オリゴヌクレオチド、ＶＥＧＦ阻害剤、ＩＧＦ−１、〔セファドロキシル、セファゾリン、セファクロル、セフォタキシン、トブラマイシン、ゲンタマイシン、ペニシリン、ジクロキサシリン、オキサシリン、サルファ剤、メトロニダゾール〕からなる抗生物質の群より選ばれた活性物質、抗血栓剤、アルガトロバン、アスピリン、アブシキシマブ、合成されたアンチトロンビン、ビバリルジン、クマジン、エノキソパリン、組織プラスミノーゲン活性化因子、ＧｐＩＩｂ／ＩＩＩａ  血小板層レセプター、ファクターＸａ阻害抗体、ヘパリン、ヒルジン、ｒ−ヒルジン、ＰＰＡＣＫ、プロタミン、プロウロキナーゼ、ストレプトキナーゼ、ワルファリン、ウロキナーゼ、血管拡張薬、ジピラミドール、トラピジル、ニトロプルシド、例えばトリアゾロピリミジンおよびセラミンのようなＰＤＧＦアンタゴニスト、ＡＣＥ阻害剤、カプトプリル、シラザプリル、リシノプリル、エナラプリル、ロサルタン、チオプロテアーゼ阻害剤、プロスタサイクリン、バピプロスト、インターフェロンα、βおよびγ、ヒスタミン  アンタゴニスト、セロトニンブロッカー、アポトーシス阻害剤、アポトーシスレギュレーター、ｐ６５、ＮＦ−ｋＢまたはＢｃｌ−ｘＬ  アンチセンス・オリゴヌクレオチド、ハロフジノン、ニフェジピン、トコフェロール、トラニラスト、モルシドミン、茶成分ポリ���ェノール、エピカテキン・ガレート、エピガロカテキン・ガレート、ボズウェラ酸およびその誘導体、レフルノミド、アナキンラ、エタネルセプト、スルファサラジン、エトポシド、ジクロキサシリン、テトラサイクリン、トリアムシノロン、ムタマイシン、プロカイナミド、レチノイン酸、キニジン、ジソピラミド、フレカイニド、プロパフェノン、ソタロール、アミドロン、天然および合成的に得られたステロイド、ブリオフィリンＡ、イノトジオール、マキロシドＡ、ガラキノシド、マンソニン、ストレブロシド、ヒドロコルチゾン、ベタメタゾン、デキサメタゾン、非ステロイド化合物（ＮＳＡＩＤＳ）、フェノプロフェン、イブプロフェン、インドメタシン、ナプロキセン、フェニルブタゾン、抗ウイルス剤、アシクロビル、ガンシクロビル、ジドブジン、抗かび剤、クロトリマゾール、フルシトシン、グリセオフルビン、ケトコナゾール、ミコナゾール、ニスタチン、テルビナフィン、アンチプロゾール作用物質、クロロキン、メフロキン、キニーネ、さらに天然のテルペノイド、ヒッポカエスクリン、バリントゲノール−Ｃ２１−アンゲレート、１４−デヒロドアグロスチスタチン、アグロスケリン、アガロスチスタチン、１７−ヒドロキシアグロスチスタチン、オヴァトジオライド、４、７−オキシシクロアニソメリック・アシッド、バッカリノイドＢ１、Ｂ２、Ｂ３およびＢ７、トゥベイモシド、ブルセノールＡ、ＢおよびＣ、ブルセアンチノシドＣ、ヤダンジオシドＮおよびＰ、イソデオキシエレファントピン、トメンファントピンＡおよびＢ、コロナリンＡ、Ｂ、ＣおよびＤ、ウルソール酸、ヒプタチック酸Ａ、ゼオリン、イソ−イリドジャーマナル、メイテンフォリオル、エフサンチンＡ、エキシサニンＡおよびＢ、ロンギカウリンＢ、スカルポネアチン  Ｃ、カメバウニン、ロイカメニンＡおよびＢ、１３、１８−デヒドロ−６−α−シネシオイルオキシシャパリン、タクサマイリンＡおよびＢ、レジェニロール、トリプトライド、さらに、シマリン、アポシマリン、アリストロキア酸、アノプテリン、ヒドロキシアノプテリン、アネモニン、プロトアネモニン、ベルベリン、チェリブリン・クロライド、シクトキシン、シノコクリン、ボムブレスタチンＡおよびＢ、クドライソフラボンＡ、クルクミン、ジヒドロニチジン、塩化ニチジン、１２−β−ヒドロキシプレグナジエン−３、２０−ジオン、ビロボール、ギンコール、ギンコール酸、ヘレナリン、インジシン、インジシン−Ｎ−オキシド、ラシオカルピン、イノトジオール、グリコシド  １ａ、ポドフィロトキシン、ジャスチシジンＡおよびＢ、ラレアチン、マロテリン、マロトクロマノール、イソブチリルマロトクロマノール、マキロシドＡ、マーチャンチンＡ、メイタイシン、リコリジシン、マルゲチン、パンクラチスタチン、リリオデニン、ビスパーセノリジン、オクソウシンスニン、アリストラクタム−ＡＩＩ、ビスパーセノリジン、ペリプロコシドＡ、ガラキノシド、ウルソール酸、デオキシソロスパミン、サイコルビン、リシンＡ、サンギナリン、マンウ  ホウィート・アシッド、メチルソルビフォリン、スファセリアクロメン、スチゾフィリン、マンソニン、ストレブロシド、アカゲリン、ジヒロドウサムバレンシン、ヒドロキシウサムバリン、ストリクノペンタミン、ストリクノフィリン、ウサムバリン、ウサムバレンシン、ベルベリン、リリオデニン、オクソウシンスニン、ダフノレチン、ラリシレシノール、メトキシラリシレシノール、シリンガレジノール、ウンベリフェロン、アフロモソン、アセチルビスミオン  Ｂ、デスアセチルビスミオンＡ、ビスミオンＡおよびＢ、からなる群より選択されたものであること、
を特徴とする医療装置。
【請求項３７】
請求項３６の医療用機器であって、利用される活性物質として、タクロリムス、ピペクロリムス、PI 88、サイモシン a-1、PETN、バッカチンおよびその誘導体、ドセタキセル, コルヒチン、パクリタキセルおよびその誘導体、トラピジル、α−およびβ−エストラジオール、ダームシジン, チアリン-ナトリウム、シンバスタチン,大環状のサブオキサイト (MCS) およびその誘導体、シロリムス、チルフォスチン、D24851、コルヒチン、フマル酸およびそのエステル、活性化プロテイン (aPC)、インターロイキン１β阻害剤、またはメラニン細胞刺激ホルモン（α−ＭＳＨ）、またはそれらの活性物質の混合物、が考慮されること、
を特徴とする医療用機器。
【請求項３８】
請求項３０から３７のいずれか一つの医療用機器であって、前記医療用機器は、人工器官、器官、血管、大動脈、心臓弁、管、器官予備部品、インプラント、繊維、中空糸、ステント、中空針、シリンジ、メンブレン、缶詰商品、血液容器、滴定のプレート、ペースメーカー、吸収媒体、クロマトグラフィー媒体、クロマトグラフィーカラム、透析器、連結部品、センサー、バルブ、遠心用のチャンバー、熱交換器、内視鏡、フィルター、またはポンプのチャンバーを含むこと、
を特徴とする医療用機器。
【請求項３９】
請求項３８の医療用機器であって、前記医療用機器がステントであることを特徴とする医療用機器。
【請求項４０】
請求項３９のステントであって、前記ポリマーは、０．０１ｍｇから３ｍｇ／層（層当たり）の量で付着されること、
を特徴とするステント。
【請求項４１】
請求項３９または４０のステントであって、前記抗増殖性、抗炎症性、および／または抗血栓性の活性物質は、ステント表面１平方センチ当たり０．００１から１０mgの薬学的活性濃度を含むこと、
を特徴とするステント。