(57)【要約】【課題】  微粒子を効率よく容器中に保存する方法を提供すること。【解決手段】（ａ）微粒子を高分子体により容器中に包括固定する工程、（ｂ）前記高分子体を溶解させることで前記微粒子を回収する工程、を含むことを特徴とする微粒子保存方法であって、好ましくは高分子体が水溶性ポリマー溶液と水溶性化合物溶液とを混合して形成させた三次元架橋体で、水溶性ポリマー及び水溶性化合物が水酸基を有し、水酸基同士の可逆的共有結合の生成により三次元架橋体を形成するものである微粒子保存方法。【選択図】 図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）微粒子を高分子体により容器内に包括固定する工程、
（ｂ）前記高分子体を溶解させることで前記微粒子を回収する工程、
を含むことを特徴とする微粒子の保存方法。
【請求項２】
前記高分子体が三次元架橋体である請求項１記載の微粒子保存方法。
【請求項３】
前記三次元架橋体が、コラーゲン、ゼラチン、アルギン酸、又は合成ポリマーである請求項１又は２記載の微粒子保存方法。
【請求項４】
前記三次元架橋体が多価水酸基を有する化合物である請求項２又は３記載の微粒子保存方法。
【請求項５】
前記三次元架橋体が水溶性ポリマー溶液と水溶性化合物溶液とを混合して形成させたものである請求項２〜４いずれか記載の微粒子保存方法。
【請求項６】
前記水溶性ポリマー及び前記水溶性化合物が水酸基を有し、水酸基同士の可逆的共有結合の生成により三次元架橋体を形成するものである請求項５記載の微粒子保存方法。
【請求項７】
前記水溶性ポリマーがホスホリルコリン基及びフェニルボロン酸基を含有するポリマーであり、前記水溶性化合物が多価水酸基を有する化合物である請求項６記載の微粒子保存方法。
【請求項８】
前記多価水酸基を有する化合物が単糖類、二糖類、多糖類、低分子多価アルコール、及びポリビニルアルコールから選ばれる少なくとも一つである請求項７記載の微粒子保存方法。
【請求項９】
前記（ｂ）の工程において、高分子体の溶解が高分子体を加熱することによりなされる請求項１〜８いずれか記載の微粒子保存方法。
【請求項１０】
前記（ｂ）の工程において、高分子体の溶解が高分子体に溶液を加えることによりなされる請求項１〜８いずれか記載の微粒子保存方法。
【請求項１１】
前記高分子体に加える溶液が、複数の水酸基を有する化合物の溶液である請求項１０記載の微粒子保存方法。
【請求項１２】
前記複数の水酸基を有する化合物が、糖または糖アルコールである請求項１１記載の微粒子保存方法。
【請求項１３】
前記（ｂ）の工程において、高分子体の溶解が有機溶媒を加えることによりなされる請求項１〜８いずれか記載の微粒子保存方法。
【請求項１４】
前記有機溶媒が、アルコールである請求項１３記載の微粒子保存方法。
【請求項１５】
前記微粒子が、シリカ微粒子、高分子微粒子、金微粒子、セファロース微粒子、アガロース微粒子、及びセルロース微粒子から選ばれる少なくとも一つである請求項１〜１４いずれか記載の微粒子保存方法。
【請求項１６】
前記微粒子が、活性基を有するものである請求項１〜１５いずれか記載の微粒子保存方法。
【請求項１７】
前記活性基が、アビジン、ビオチン、抗体、レクチン、カルボニル基、アミノ基、アミノオキシル基、ヒドラジド基、エステル基、マレイミド基、及びチオール基から選ばれる少なくとも一つである請求項１６記載の微粒子保存方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、微粒子を効率良く容器中に保存させる方法に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
抗体ビーズ、レクチンビーズ、アビジンビーズ、ビオチンビーズ、ヒドラジドビーズなど表面を活性化させた微粒子が多数市販されている。しかし、それらの大半は水溶液あるいは有機溶媒の分散液として保存し、使用時に必要量分取するという使用方法である。しかし、微粒子のような固体を液体中に均一に分散させるのは困難であり、使用毎に分取量が変化してしまう。また、処理する検体数が多い場合、分散液を反応容器に移すのに手間がかかるという欠点があった。
【０００３】
この様な背景から、あらかじめ一定量の微粒子が反応容器に保存された状態での提供が求められる。カラムにあらかじめ微粒子が充填された状態で販売されている例もあるが、分散液での保存、乾燥状態での保存ともに容器の表面等に付着してしまうことで一部の微粒子を失ってしまう。特に、少量の微粒子を反応に用いるような系の場合、そのことが原因で結果にばらつきが生じやすくなってしまう。
【０００４】
そこで、微粒子を失わず、且つ、表面の活性基を失活させることなく保存させる方法が必要とされる。また、保存した微粒子を容易に反応に持ち込む状態にできる方法が必要である。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】国際公開第２００６／０４６７１６号公報
【特許文献２】特表２００８−５３６８２１号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、従来の小分けにした微粒子の容器内での保存の場合の問題点を解決するためになされたもので、その目的とするところは微粒子を失ったり表面の活性基を失活したりすることなく、微粒子を効率よく容器中に保存する方法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明は以下の通りである。
（１）（ａ）微粒子を高分子体により容器内に包括固定する工程、
（ｂ）前記高分子体を溶解させることで前記微粒子を回収する工程、
を含むことを特徴とする微粒子の保存方法。
（２）前記高分子体が三次元架橋体である（１）記載の微粒子保存方法。
（３）前記三次元架橋体が、コラーゲン、ゼラチン、アルギン酸、又は合成ポリマーである（１）又は（２）記載の微粒子保存方法。
（４）前記三次元架橋体が多価水酸基を有する化合物である（２）又は（３）記載の微粒子保存方法。
（５）前記三次元架橋体が水溶性ポリマー溶液と水溶性化合物溶液とを混合して形成させたものである（２）〜（４）いずれか記載の微粒子保存方法。
（６）前記水溶性ポリマー及び前記水溶性化合物が水酸基を有し、水酸基同士の可逆的共有結合の生成により三次元架橋体を形成するものである（５）記載の微粒子保存方法。
（７）前記水溶性ポリマーがホスホリルコリン基及びフェニルボロン酸基を含有するポリマーであり、前記水溶性化合物が多価水酸基を有する化合物である（６）記載の微粒子保存方法。
（８）前記多価水酸基を有する化合物が単糖類、二糖類、多糖類、低分子多価アルコール、及びポリビニルアルコールから選ばれる少なくとも一つである（７）記載の微粒子保存方法。
（９）前記（ｂ）の工程において、高分子体の溶解が高分子体を加熱することによりなされる（１）〜（８）いずれか記載の微粒子保存方法。
（１０）前記（ｂ）の工程において、高分子体の溶解が高分子体に溶液を加えることによりなされる（１）〜（８）いずれか記載の微粒子保存方法。
（１１）前記高分子体に加える溶液が、複数の水酸基を有する化合物の溶液である（１０）記載の微粒子保存方法。
（１２）前記複数の水酸基を有する化合物が、糖または糖アルコールである（１１）記載の微粒子保存方法。
（１３）前記（ｂ）の工程において、高分子体の溶解が有機溶媒を加えることによりなされる（１）〜（８）いずれか記載の微粒子保存方法。
（１４）前記有機溶媒が、アルコールである（１３）記載の微粒子保存方法。
（１５）前記微粒子が、シリカ微粒子、高分子微粒子、金微粒子、セファロース微粒子、アガロース微粒子、及びセルロース微粒子から選ばれる少なくとも一つである（１）〜（１４）いずれか記載の微粒子保存方法。
（１６）前記微粒子が、活性基を有するものである（１）〜（１５）いずれか記載の微粒子保存方法。
（１７）前記活性基が、アビジン、ビオチン、抗体、レクチン、カルボニル基、アミノ基、アミノオキシル基、ヒドラジド基、エステル基、マレイミド基、及びチオール基から選ばれる少なくとも一つである（１６）記載の微粒子保存方法。
【発明の効果】
【０００８】
本発明の微粒子保存方法によれば、微粒子を失うことなく容器内に微粒子を保持することが可能となる。また、熱をかけるあるいは溶液を加えることで、もとの微粒子の状態に戻すことができるため、容易に微粒子を反応に持ち込むことが可能となる。
【図面の簡単な説明】
【０００９】
【図１】実施例１の三次元架橋体により保存をしたビーズを用いて作製した、２−ＡＢ標識ウシ由来ＩｇＧ糖鎖を高速液体クロマトグラフィにより測定した結果を示すチャート図である。
【図２】比較例１の三次元架橋体による保存を行っていないビーズを用いて作製した、２−ＡＢ標識ウシ由来ＩｇＧ糖鎖を高速液体クロマトグラフィにより測定した結果を示すチャート図である。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
以下、本発明について詳細に説明するが、本発明の範囲はこれらの説明に拘束されることはなく、以下の例示以外についても、本発明の趣旨を損なわない範囲で適宜変更し実施し得る。
【００１１】
本発明は、（ａ）微粒子を高分子体により容器内に包括固定する工程、（ｂ）前記高分子体を溶解させることで前記微粒子を回収する工程、を含むことを特徴とする微粒子の保存方法である。
（ａ）の工程において、微粒子は溶液に分散した状態でも、乾燥した状態でも良い。前者の場合、水、アルコール、その他有機溶媒どの溶媒に分散した状態でも良いが、水あるいはアルコールに分散しているのが好ましく、さらに好ましくは水に分散していることである。
【００１２】
本発明に使用する微粒子としては、シリカ微粒子、高分子微粒子、金微粒子、セファロース微粒子、アガロース微粒子、セルロース微粒子等が挙げられる。微粒子は、表面に活性基として、アビジン、ビオチン、抗体、レクチン、カルボニル基、アミノ基、アミノオキシル基、ヒドラジド基、エステル基、マレイミド基、チオール基等を有するものが好ましい。
【００１３】
本発明に使用する高分子体は三次元架橋体であることが好ましく、コラーゲン、ゼラチン、合成ポリマー等が挙げられる。より好ましくは、水溶性ポリマー溶液と水溶性化合物溶液とを混合して形成させた三次元架橋体である。水溶性ポリマー溶液として好ましいのは、フェニルボロン酸基を含有するポリマーであり、より好ましくはホスホリルコリン基及びフェニルボロン酸基の両方を含有するポリマーである。
このポリマーは、ホスホリルコリン基を含有するモノマー、フェニルボロン酸基を有するモノマー及び必要に応じて他のモノマーを共重合させて得られる。
【００１４】
ホスホリルコリン基を含有するモノマーとしては、ビニル基やアリル基などの炭素−炭素二重結合を重合性基として有し、かつホスホリルコリン基を同一分子中に有する化合物であることが好ましい。
例えば、２−メタクリロイルオキシエチルホスホリルコリン、（２−メタクリロイルオキシルエチル−２’−（トリメリチルアンモニア）エチルホスフェート、２−（メタ）アクリロイルオキシエチル−２’−（トリメチルアンモニオ）エチルホスフェート等が挙げられるが、特に２−メタクリロイルオキシエチルホスホリルコリン（ＭＰＣ）が好ましい。
【００１５】
フェニルボロン酸基を有するモノマーとしては、ビニル基やアリル基などの炭素−炭素二重結合を重合性基として有し、かつホフェニルボロン酸基を同一分子中に有する化合物であることが好ましい。
例えば、ｐ−ビニルフェニルボロン酸、ｍ−ビニルフェニルボロン酸、ｐ−（メタ）アクリロイルオキシルフェニルボロン酸、ｍ−（メタ）アクリロイルオキシフェニルボロン酸、ｐ−（メタ）アクリルアミドフェニルボロン酸、ｐ−ビニルオキシフェニルボロン酸、ｍ−ビニルオキシフェニルボロン酸、ビニルウレタンフェニルボロン酸などが挙げられるが、ｐ−ビニルフェニルボロン酸又はｍ−ビニルフェニルボロン酸が好ましい。
【００１６】
他のモノマーとしては、例えば、（メタ）アクリル酸、（メタ）アクリル酸ナトリウム、２−ヒドロキシエチル（メタ）アクリレート、グリセロール（メタ）アクリレート、Ｎ−ビニルピロリドン、アクリロニトリル、（メタ）アクリルアミド、ビニルベンゼンスルホン酸ナトリウム等の親水性モノマー、メチル（メタ）アクリレート、エチル（メタ）アクリレート、ブチル（メタ）アクリレート、ラウリル（メタ）アクリレート、ドデシル（メタ）アクリレート、スチレン、酢酸ビニル等の疎水性モノマー、（３−メタクリロイルオキシプロピル）トリメトキシシラン等のアルキルオキシシラン基を有するモノマー、シロキサン基を有するモノマー、グリシジルメタクリレート等のグリシジル基を含むモノマー、アリルアミン、アミノエチル（メタ）アクリレート等のアミノ基を有するモノマー、カルボキシル基、水酸基、アルデヒド基、チオール基、ハロゲン基、メトキシ基、エポキシ基、スクシンイミド基、マレイミド基を有するモノマーを挙げることができる。
【００１７】
前記の内、特に好ましいモノマーの組み合わせは、２−メタクリロイルオキシエチルホスホリルコリン（以下ＭＰＣと略す）、ｐ−ビニルフェニルボロン酸、及びブチル（メタ）アクリレートによる３元共重合体である。重合はラジカル重合が好ましい。
ラジカル発生剤としては、アゾビスイソブチロニトリル、４，４’−アゾビス（４−シアノペンタン酸）等の脂肪族アゾ化合物、過酸化ベンゾイルやこはく酸パーオキシド等の過酸化物が好ましい。
【００１８】
ポリマー中の組成モル分率は、モノマー混合溶液の組成で制御することができる。ホスホリルコリン基を有するモノマー単位のモル分率の範囲は０．０１〜０．９９であり、好ましくは０．３０〜０．７０の範囲であり、さらに好ましくは０．４５〜０．６０の範囲である。ポリマー中のフェニルボロン基を有するモノマー単位のモル分率の範囲は０．０１〜０．９９であり、好ましくは０．０３〜０．５０の範囲であり、さらに好ましくは０．３０〜０．４０の範囲である。
【００１９】
また、該ポリマーの分子量はゲル浸透クロマトグラフィーで測定し、ポリエチレンオキシドを標準物質として換算し、その範囲は、１，０００〜１０，０００，０００であり、好ましくは１０，０００〜１，０００，０００、さらに好ましくは、２０，０００〜３００，０００である。分子量が上限値を超えると、水媒体への溶解性が低下する可能性がある。
【００２０】
水溶性化合物としては、多価水酸基を有する化合物であることが好ましい。多価水酸基を有する化合物は水系溶媒に対して溶解し、均一な溶液となることが必要である。例としては、単糖類、二糖類、多糖類、低分子多価アルコール、ポリビニルアルコール等が挙げられるが、多糖類又はポリビニルアルコール（ＰＶＡ）を選択することが構造の安定した三次元架橋体を構成するために好ましい。
【００２１】
ホスホリルコリン基とフェニルボロン酸基を含有するポリマーを含む溶液と、多価水酸基化合物を含む溶液を混合することで、三次元架橋体が製造できる。
三次元架橋体中に生体成分を捕捉し安定に保存するためには、溶媒は水系が好ましく、有機溶媒の使用は避けるべきである。
ホスホリルコリン基とフェニルボロン酸基を含有するポリマー、及び多価水酸基化合物は水系溶媒に溶ける範囲の濃度で使用可能であるが、０．５〜２０重量％が好ましく、２．５〜１０重量％がさらに好ましい。
【００２２】
三次元架橋体を形成するための温度は、−１００℃〜１００℃であることが好ましく、より好ましくは０℃〜５０℃、さらに好ましくは０℃〜４０℃である。
【００２３】
本発明の工程（ａ）において、予め微粒子と水溶性ポリマー溶液を混合しておき、この分散液に多価水酸基化合物を含む水溶液を混合し、三次元架橋体を形成することによって、微粒子を三次元架橋体内に封入することができる。
逆に微粒子と多価水酸基化合物を含む水溶液を予め混合し、この分散液に対して水溶性ポリマー溶液を混合し、三次元架橋体を形成することもできる。
【００２４】
微粒子に対する三次元架橋体の体積比は、微粒子の０．０１倍〜１００倍であるのが好ましく、より好ましくは０．１倍〜５０倍であり、さらに好ましくは０．５倍〜２０倍である。体積比が大きくなるにつれて、（ｂ）の工程の高分子体の除去が困難になるので注意が必要である。
【００２５】
（ｂ）の工程において、上記のように形成された三次元架橋体を溶解させるための方法として、加熱あるいは溶解用溶液と接触させるのいずれかまたは両方を行う方法がある。
【００２６】
加熱する場合は、その温度は３０℃〜１５０℃であることが好ましく、より好ましくは３０℃〜１００℃であり、さらに好ましくは４０℃から９０℃である。
【００２７】
加える溶解用溶液としては、三次元架橋体が溶解する溶液であり、且つ、微粒子に悪影響を及ぼさない溶液であれば特に限定されない。
【００２８】
三次元架橋体がホスホリルコリン基とフェニルボロン酸基を含有するポリマーを含む溶液と、多価水酸基化合物を含む溶液から得られるものである場合、溶解のために加える溶液の溶媒としては、水あるいはアルコールであることが好ましい。
【００２９】
また、溶解用の溶液には複数の水酸基を含有する化合物を含有することが好ましい。複数の水酸基を含有する化合物としては、糖あるいは糖アルコールが好ましい。
糖としてはグルコース、ガラクトース、スクロース、ラクトース、マルトース、キシロース、マンノースなどが挙げられるが、グルコースが好ましい。
糖アルコールは糖を還元した構造を有するものであり、グリセリン、エリトリトール、キシリトール、マンニトール、ラクチトール、ソルビトール、マルチトール等が挙げられるが、キシリトール、マンニトール、又はマルチトールが好ましい。
【００３０】
溶解用溶液中の複数の水酸基を含有する化合物の濃度は、高濃度であることが短時間で三次元架橋体を溶解させるために好ましい。例えば、キシリトール、マルチトールでは４０〜８５ｗ／ｖ％の濃度が好ましく、更に好ましくは６０〜８０ｗ／ｖ％の濃度である。又、マンニトールでは４０〜６５ｗ／ｖ％の濃度が好ましく、更に好ましくは５０〜６０ｗ／ｖ％の濃度である。他の種類の糖アルコールあるいは糖を用いる場合も、その化合物が溶解できる最大濃度に近いところでの使用が最も好ましい。
【００３１】
溶解用溶液の添加量に関しては、条件にもよるので特に定めるものではないが、三次元架橋体の容量の当倍量から２０倍量を用いることが好ましく、より好ましく３〜１０倍量である。この分量を用いた場合、５〜３０分で三次元架橋体を完全に溶解することが可能である。
【００３２】
より、短時間に溶解させたい場合は、溶解用溶液の添加後加熱するのが良い。３〜１０倍量の溶解用溶液を添加し、８０℃に加熱した場合、１〜５分で三次元架橋体を完全に溶解することが可能である。
【００３３】
三次元架橋体を溶解させるためには、三次元架橋体に溶解用溶液を添加して接触させ、ピペッティング等の操作により短時間攪拌することが好ましい。
【実施例】
【００３４】
《実施例１》
（１）ポリマーの作製
ホスホリルコリン基とフェニルボロン酸を含有するポリマーの合成を以下の方法で行った。
フラスコに２−メタクリロイルオキシエチルホスホリルコリン（ＭＰＣ）５．３ｇを秤量し、エタノール３０ｇを仕込み、攪拌しながら容器内をアルゴンガス置換した。ｐ−ビニルフェニルボロン酸（ＶＰＢＡ）０．４４ｇ、ブチル（メタ）アクリレート（ＢＭＡ）１．３ｇおよび２,２’−アゾビスイソブチロニトリル０．０５ｇを添加し、均一なるように攪拌、密栓した後、６０℃に加温、４８時間反応させた。得られた反応溶液をジエチルエーテル／クロロホルム（８／２）溶液に滴下し固体ポリマーを得た。ポリマーのＮＭＲ分析の結果、ＭＰＣ／ＶＰＢＡ／ＢＭＡ＝５３／１１／３６（モル比）であった。また分子量は、２７，０００であった。本共重合体をＰＭＢＶと略す。
多価水酸基化合物は、市販のポリビニルアルコール（ＰＶＡ）平均重合度５００（和光純薬製、１６０−０３０５５）を用いた。ＰＶＡを加温した超純水に溶かして９ｗｔ％溶液を作製した。
ＰＭＢＶを超純水に溶解し、９ｗｔ％溶液を作製した。
【００３５】
（２）微粒子の保存
９６ウェルフィルタープレート（Ｗａｔｅｒｓ社、１８６００２７８０）にヒドラジドビーズ分散液（ポリマー粒子、球状、０．５ｍｇ／ｕＬ、ヒドラジド基保有、住友ベークライト社製、ＢＳ−４５６０３）５０ｕＬを分注し、Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ  ｐｌａｔｅ  ｍａｎｉｆｌｏｄ  ｆｏｒ  Ｏａｓｉｓ  ９６−ｗｅｌｌ  ｐｌａｔｅｓ  （Ｗａｔｅｒｓ社、  １８６００１８３１）を用いてバキュームにより溶媒を排出させた。９ｗｔ％のＰＭＶＢ溶液をビーズの上に１０ｕＬ分注し、続いて９ｗｔ％のＰＶＡ溶液を１０ｕＬ分注した。プレートを振とうさせて、溶液を良く攪拌しゲル化させた。
ゲル化は数分で起こり、逆さにしても溶液が落ちてこないことを確認した。
【００３６】
（３）タンパク質の前処理
ウシ免疫グロブリンＧ（ウシＩｇＧ）１ｍｇを１００ｍＭ重炭酸アンモニウム５０μLに溶解させた後、１２０ｍＭ  ＤＴＴ（ジチオスレイトール）を５μＬ加え、６０℃で３０分間反応させた。反応終了後、１２３ｍＭ  ＩＡＡ（ヨードアセトアミド）１０μＬを加えて遮光下、室温で１時間反応させた。続いて４００Ｕのトリプシンによってプロテアーゼ処理をし、タンパク質部分をペプチド断片化した。反応溶液を９０℃で５分処理した後、５ＵのグリコシダーゼＦによる処理を行って糖鎖をペプチドから遊離させ、予備処理済の生体試料を得た。
【００３７】
（４）微粒子の回収
キシリトール（東京化成製、Ｘ００１８）を純水で５０ｗ／ｖ％に調整した。（２）の固定化した微粒子にキシリトール溶液を１００ｕＬ加えて、８０℃で５分間静置した。溶液をバキュームにより排出した後、２００ｕＬメタノールおよび２００ｕＬ純水でビーズを洗浄した。
【００３８】
（５）微粒子と生体試料の反応
予備処理済の生体試料の懸濁物２０μＬおよび１８０μＬの２％酢酸／アセトニトリル溶液を加え、８０℃で１時間反応させビーズ上のヒドラジド基に糖を固定させた。反応は開放系で行い、溶媒が完全に蒸発しビーズが乾固した状態であることを目視で確認した。続いて、グアニジン溶液、水、メタノール、トリエチルアミン溶液にてビーズを洗浄後、１０％無水酢酸／メタノールを添加し、室温で３０分間反応させ、未反応のヒドラジド基をキャッピングした。キャッピング後、メタノール、塩酸水溶液、水にてビーズを洗浄した。
ビーズの入ったディスポカラムに超純水２０μLおよび２％酢酸／アセトニトリル溶液１８０μＬを加え、７０℃で１時間反応させビーズ上の糖鎖を切り出した。反応は開放系で行い、溶媒が完全に蒸発しビーズが乾固した状態であることを目視で確認した。
【００３９】
（６）標識化工程
ビーズの入ったディスポカラムに、２−ａｍｉｎｏｂｅｎｚａｍｉｄｅ（２−ＡＢ）およびシアノ水素化ホウ素ナトリウムの終濃度がそれぞれ０．３５Ｍ、１Ｍになるように３０％酢酸／ＤＭＳＯ混合溶媒に溶解させて調整した溶液５０μLを添加し、６０℃で２時間反応させた。
【００４０】
（７）余剰試薬除去工程
反応溶液５０μＬを回収し、アセトニトリルで１０倍に希釈した後、付属のクリーンアップカラムに吸着させた。アセトニトリル、アセトニトリル／水混合溶液（９５：５）にてカラムを洗浄後、超純水５０μＬにて標識糖鎖を回収した。
【００４１】
（８）標識化糖鎖の検出
得られた標識糖鎖をＨＰＬＣにて測定した。アミドカラム（ＴＳＫ−ＧＥＬ  Ａｍｉｄｅ−８０  ４．６＊２５０）を用いて励起波長３３０ ｎｍ、蛍光波長４２０ ｎｍにて測定した。溶媒Ａは５０ｍＭギ酸、２５％アンモニア水にてｐＨ４．４に調整したものを使用し、溶媒Ｂとしてアセトニトリルを使用し、溶媒Ａ液２０％  （０ｍｉｎ）→Ａ液５８％（１５８ｍｉｎ）で送液した。カラム温度は３０℃で流速は０．４ｍＬ／ｍｉｎとした。図１に測定結果を示す。実線はウシＩｇＧ糖鎖由来ピークである。
【００４２】
《比較例１》
実施例１と同様のヒドラジドビーズを用いて、３次元架橋体で保存する操作を行わない以外は実施例１と同様して標識化糖鎖の検出を行なった。図２に測定結果を図２に示す。実線はウシＩｇＧ糖鎖由来ピークである。
【００４３】
実施例１及び比較例１により、本手法により保存したヒドラジドビーズを用いても、通常と同様の結果が得られることを確認した。
【産業上の利用可能性】
【００４４】
本発明の保存方法は、抗体ビーズ、レクチンビーズ、アビジンビーズ、ビオチンビーズ、ヒドラジドビーズ等の微粒子を一定量任意の容器に保存するのに使用できる。三次元架橋体により保存するため、保存中に微粒子が分散したり、容器壁面に付着したりすることも回避できる。微粒子を使用する際は、有機溶媒や水溶液を加える、あるいは、加熱することにより三次元架橋体を融解させ、容易に微粒子と分離することができる。また一連の操作により微粒子の有する活性基等を破壊することもない。使用毎に量り取る手間や、ロスを心配することなく微粒子保存するのに適している。
【図１】
2010249566.tif 000003
【図２】
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