(57)【要約】【課題】本発明の課題は、改善されたバイオアベイラビリティーを有するアデノシン受容体リガンドを見出し、または製造することである。【解決手段】置換２−チオ−３，５−ジシアノ−４−フェニル−６−アミノピリジン化合物、それらの製造方法、および医薬としてのそれらの使用を提供する。本発明の化合物は、価値ある薬理学的な活性スペクトルを示し、従って、疾患の予防および／または処置に特に適切である。また、先行技術と比較して、本発明の化合物は、優れた薬物動態学的性質を有し、特に経口投与によって優れたバイオアベイラビリティーを有する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
式(Ｉ)：
【化１】
2010138209.tif 000017
[式中、
Ｒ１は、(Ｃ１−Ｃ４)−アルキル、(Ｃ１−Ｃ４)−アルコキシ、モノ−もしくはジ−(Ｃ１−Ｃ４)−アルキルアミノを表し；そして
Ｒ２は、ピリジルを表し、これはハロゲン、アミノ、または(Ｃ１−Ｃ４)−アルキルによって置換され得る]の化合物、およびそれらの塩、水和物、その塩の水和物、および溶媒和物。
【請求項２】
請求項１に記載の式(Ｉ)：
[式中、Ｒ１は、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、イソブチル、またはｔｅｒｔ−ブチルを表し；そして
Ｒ２は、２−ピリジルを表し、これは塩素、アミノ、またはメチルによって置換され得る]の化合物、およびそれらの塩、水和物、その塩の水和物、および溶媒和物。
【請求項３】
下記の構造：
【化２】
2010138209.tif 000018
を有する、請求項１または２に記載の化合物、およびその塩、水和物、その塩の水和物、および溶媒和物。
【請求項４】
請求項１に定義した通りの式(Ｉ)の化合物を製造する方法であって、式(II)：
【化３】
2010138209.tif 000019
[式中、Ｒ１は請求項１に記載の意味を有する]の化合物を、式(III)：
【化４】
2010138209.tif 000020
[式中、Ｒ２は請求項１に記載の意味を有し；そして
Ｘは、適切な脱離基を表す]の化合物と反応させることを特徴とする方法。
【請求項５】
疾患の予防および／または処置のための、請求項１で定義した通りの式(Ｉ)の化合物。
【請求項６】
少なくとも１つの請求項１で定義した通りの式(Ｉ)の化合物と、さらに少なくとも１つの補助剤（auxiliary substance）を含む医薬。
【請求項７】
少なくとも１つの請求項１で定義した通りの式(Ｉ)の化合物と、少なくとも１つのさらなる活性な化合物を含む医薬。
【請求項８】
心血管性疾患の予防および／または処置のための医薬を製造するための、請求項１で定義した通りの式(Ｉ)の化合物の使用。
【請求項９】
泌尿生殖器領域の疾患および癌の予防および／または処置のための医薬を製造するための、請求項１で定義した通りの式(Ｉ)の化合物の使用。
【請求項１０】
炎症性疾患、神経炎症性疾患、神経変性疾患、および痛みの予防および／または処置のための医薬を製造するための、請求項１で定義した通りの式(Ｉ)の化合物の使用。
【請求項１１】
気道の疾患、肝臓線維症、肝硬変、および糖尿病の予防および／または処置のための医薬を製造するための、請求項１で定義した通りの式(Ｉ)の化合物の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、置換２−チオ−３,５−ジシアノ−４−フェニル−６−アミノピリジン、それらの製造方法、および医薬としてのそれらの使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
アデノシン、すなわちアデニンとＤ−リボースからなるヌクレオシドは、特に 例えば虚血に伴う広く様々な器官(例えば心臓や脳)において起こる 酸素や物質の制限された供給を含む、細胞損傷条件下での細胞保護活性を示す内在性因子である。
【０００３】
アデノシンは、アデノシン−５'−モノホスフェート(ＡＭＰ)と、Ｓ−アデノシルホモシステインが分解した際に、中間体として細胞内で形成されるが、細胞から放出され、そしてホルモン様物質または神経伝達物質として、特定の受容体に結合することによって、機能し得る。
【０００４】
正常酸素条件下では、細胞外でのフリーのアデノシンの濃度は、非常に低い。しかし、虚血もしくは低酸素状態で影響を受けた器官では、細胞外のアデノシンの濃度が劇的に増大する。従って、例えばアデノシンが血小板の凝集を阻害し、冠動脈を通る血流を増大させることが知られている。さらに、アデノシンは、心拍数、神経伝達物質の分泌、およびリンパ球の分化に影響を与える。
【０００５】
これらのアデノシンの効果は、当該影響を受けた器官における酸素の供給を増大させ、および／またはこれらの器官の代謝を適切に減速させることで、虚血もしくは低酸素状態下での器官の血流に器官の代謝を適応させることに向けられている。
【０００６】
アデノシンの効果は、特定の受容体によって仲介される。現在知られている受容体は、サブタイプ Ａ１、Ａ２ａ、Ａ２ｂ、およびＡ３である。これらのアデノシン受容体の効果は、伝達化合物ｃＡＭＰによって細胞内で仲介される。アデノシンがＡ２ａもしくはＡ２ｂ受容体に結合すると、膜に位置するアデニル酸シクラーゼが活性化される結果として、細胞内のｃＡＭＰが増大し、他方アデノシンのＡ１もしくはＡ３受容体への結合は、アデニル酸シクラーゼが阻害される結果として、細胞内のｃＡＭＰの量を減少させる。
【０００７】
本発明において、１個もしくはそれ以上のアデノシン受容体のサブタイプに選択的に結合し、そのことによって、アデノシンの効果を模倣する(アデノシン アゴニスト)か、またはアデノシンの効果をブロックする(アデノシン アンタゴニスト)物質は、“アデノシン受容体−選択的リガンド”と呼ばれる。
【０００８】
その受容体の選択性によると、アデノシン受容体−選択的リガンドは、様々なクラスに、例えばＡ１もしくはＡ２アデノシン受容体に選択的に結合するリガンドに、後者の場合はまた、Ａ２ａもしくはＡ２ｂアデノシン受容体に選択的に結合するリガンドに、細分され得る。アデノシン受容体リガンドにおいて、アデノシン受容体のサブタイプの幾つかに選択的に結合するリガンド、例えばＡ１とＡ２アデノシン受容体に選択的に結合するが、Ａ３アデノシン受容体には結合しないリガンドも存在し得る。
【０００９】
上記の受容体選択性は、例えば、関連の受容体のサブタイプを発現した後 適切なｃＤＮＡで安定にトランスフェクトした細胞株(これに関しては、M. E. Olah, H. Ren, J. Ostrowski, K. A. Jacobson, G. L. Stiles, “Cloning, expression, and characterization of the unique bovine A1 adenosine receptor. Studies on the ligand binding site by site-directed mutagenesis.” in J. Biol. Chem. 267 (1992) pages 10764-10770 を参照のこと。これは、言及することによって、全体が 本明細書中に組み込まれている)への、物質の効果によって決定され得る。
【００１０】
該細胞株への物質の効果は、細胞内の伝達物質ｃＡＭＰの生化学的な測定によって決定され得る (これに関しては、K. N. Klotz, J. Hessling, J. Hegler, C. Owman, B. Kull, B. B. Fredholm, M. J. Lohse, “Comparative pharmacology of human adenosine receptor subtypes - characterization of stably transfected receptors in CHO cells” in Naunyn Schmiedebergs Arch. Pharmacol. 357 (1998) pages 1-9 を参照のこと。これは、言及することによって、全体が 本明細書中に組み込まれている)。
【００１１】
先行技術で開示されているアデノシン受容体リガンドは、天然のアデノシンに基づく主要な誘導体である(S. A. Poulsen and R. J. Quinn, “Adenosine receptors: new opportunities for future drugs” in Bioorganic and Medicinal Chemistry 6 (1998) pages 619-641)。しかしながら、これらの先行技術から既知のアデノシン リガンドは、経口投与では、天然のアデノシンより活性が低いか、または非常に弱い活性しかないか、または全く活性がないという欠点がある。この理由から、これらは、主に実験的な目的のためにのみ用いられている。
【００１２】
これに加え、WO 01/25210 は、本発明による化合物に構造的に類似している ２−チオ−３，５−ジシアノ−４−アリール−６−アミノピリジンを開示している。しかし、上記の公報に記載されている化合物は、不利益な薬物動態を有している。特に、それらは、経口投与では低いバイオアベイラビリティーしか有さない。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１３】
本発明の目的は、先行技術の欠点を除く化合物、すなわち、特に改善されたバイオアベイラビリティーを有する化合物を見出し、または製造することである。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
本発明は、式(Ｉ)：
【化１】
2010138209.tif 000002
[式中、
Ｒ１は、(Ｃ１−Ｃ４)−アルキル、(Ｃ１−Ｃ４)−アルコキシ、またはモノ−もしくはジ−(Ｃ１−Ｃ４)−アルキルアミノを表し；そして
Ｒ２は、ピリジルまたはチアゾリルを表し、これらは ハロゲン、アミノ、または(Ｃ１−Ｃ４)−アルキルによって置換され得る]の化合物、およびそれらの塩、水和物、その塩の水和物、および溶媒和物に関する。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
置換パターンに依存して、式(Ｉ)の化合物は、互いに実像と鏡像の関係である立体異性体(エナンチオマー)、または互いに実像と鏡像の関係ではない立体異性体(ジアステレオマー)の形態で存在し得る。本発明は、エナンチオマーもしくはジアステレオマーの両方、およびそれぞれの混合物に関する。ラセミ体の形態は、既知の方法で、ジアステレオマーと同様の方法で、立体異性体で同一の成分に分割し得る。同様に、本発明はまた、式(Ｉ)の化合物の他の互変異体およびその塩にも関する。
【００１６】
式(Ｉ)の化合物の塩は、本発明による化合物と、鉱酸、カルボン酸、スルホン酸との生理学的に害のない塩であり得る。特に好ましいのは、例えば塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、トルエンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ナフタレンスルホン酸、トリフルオロ酢酸、酢酸、プロピオン酸、乳酸、酒石酸、クエン酸、フマル酸、マレイン酸、または安息香酸との塩である。
【００１７】
記載し得る塩は、慣例の塩基との塩、例えばアルカリ金属塩(例えばナトリウム塩もしくはカリウム塩)、アルカリ土類金属塩(例えばカルシウム塩もしくはマグネシウム塩)、またはアンモニアもしくは有機アミン(例えばジエチルアミン、トリエチルアミン、エチルジイソプロピルアミン、プロカイン、ジベンジルアミン、Ｎ−メチルモルホリン、ジヒドロアビエチルアミン、１−エフェナミン(ephenamine)、またはメチルピペリジン)から誘導されるアンモニウム塩である。
【００１８】
本発明によると、固体状態もしくは液体状態において、水との水和もしくは溶媒分子の配位による分子化合物もしくは錯体を形成する、式(Ｉ)の化合物の形態は、それぞれ水和物 および 溶媒和物と呼ばれる。水和物の例は、１．５水和物、一水和物、二水和物、および三水和物である。全く同様に、本発明による化合物の塩の水和物もしくは溶媒和物もまた考慮の対象となる。
【００１９】
さらに、本発明はまた、本発明による化合物のプロドラッグを含む。本発明によって、それ自身生物学的に活性であっても不活性であってもよいが、生理学的な条件下で対応する生物学的に活性な形態に変換(例えば代謝もしくは加溶媒分解で)され得る式(Ｉ)の化合物の形態は、プロドラッグと呼ばれる。
【００２０】
本発明の内容において、置換基は、別記しない限り、以下の意味を有する。
ハロゲンは、一般的に、フッ素、塩素、臭素、またはヨウ素を表す。フッ素、塩素、または臭素が望ましい。フッ素または塩素が、特に非常に望ましい。
(Ｃ１−Ｃ４)−アルキルは、一般的に、１から４個の炭素原子を有する 直鎖もしくは分枝のアルキルを表す。記載し得る例は、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、イソブチル、およびｔｅｒｔ−ブチルである。
【００２１】
(Ｃ１−Ｃ４)−アルコキシは、一般的に、１から４個の炭素原子を有する 直鎖もしくは分枝のアルコキシを表す。記載し得る例は、メトキシ、エトキシ、ｎ−プロポキシ、イソプロポキシ、ｎ−ブトキシ、ｓｅｃ−ブトキシ、イソブトキシ、およびｔｅｒｔ−ブトキシである。
【００２２】
モノ−またはジ−(Ｃ１−Ｃ４)−アルキルアミノは、一般的に、１個もしくは２個の、同一もしくは異なる、それぞれの場合で１から４個の炭素原子を有する 直鎖もしくは分枝のアルキル置換基を有するアミノを表す。記載し得る例は、メチルアミノ、エチルアミノ、ｎ−プロピルアミノ、イソプロピルアミノ、ｔ−ブチルアミノ、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ、Ｎ，Ｎ−ジエチルアミノ、Ｎ−エチル−Ｎ−メチルアミノ、Ｎ−メチル−Ｎ−ｎ−プロピルアミノ、Ｎ−イソプロピル−Ｎ−ｎ−プロピルアミノ、およびＮ−ｔ−ブチル−Ｎ−メチルアミノである。
【００２３】
式(Ｉ)：
[式中、
Ｒ１は、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、イソブチル、またはｔｅｒｔ−ブチルを表し；そして
Ｒ２は、２−ピリジル、チアゾール−４−イル、またはチアゾール−５−イルを表し、これらは塩素、アミノ、またはメチルによって置換され得る]の化合物、およびその塩、水和物、その塩の水和物、および溶媒和物が望ましい。
【００２４】
式(Ｉ)[式中、Ｒ１は(Ｃ１−Ｃ４)−アルキルを表す]の化合物、およびその塩、水和物、その塩の水和物、および溶媒和物が、特に望ましい。
式(Ｉ)[式中、Ｒ２は、非置換ピリジルを表す]の化合物、およびその塩、水和物、塩の水和物、および溶媒和物が、同様に 特に望ましい。
【００２５】
下記の式：
【化２】
2010138209.tif 000003
を有する化合物、およびその塩、水和物、塩の水和物、および溶媒和物が、同様に 特に望ましい。
【００２６】
本発明はまた、式(Ｉ)の化合物を製造する方法であって、式(II)：
【化３】
2010138209.tif 000004
[式中、Ｒ１は上記の意味を有する]の化合物を、式(III)：
【化４】
2010138209.tif 000005
[式中、Ｒ２は上記の意味を有し、Ｘは適切な脱離基、好ましくはハロゲン、特に塩素、臭素、またはヨウ素を表すか、またはメシレート、トシレート、トリフレート、または１−イミダゾリルを表す]の化合物と、適当な場合は塩基の存在下で、反応させることを特徴とする方法に関する。
【００２７】
上記の方法は、下記のスキーム：
【化５】
2010138209.tif 000006
によって、例として説明され得る。
【００２８】
反応条件下で不活性な全ての有機溶媒が、本発明による方法に適切な溶媒である。これらの溶媒は、アルコール、例えばメタノールや、エタノールや、イソプロパノール、ケトン、例えばアセトンや メチル エチル ケトン、非環状および環状エーテル、例えばジエチル エーテルや テトラヒドロフラン、エステル、例えば酢酸エチルもしくは酢酸ブチル、炭化水素、例えばベンゼン、キシレン、トルエン、ヘキサン、もしくはシクロヘキサン、塩素化された炭化水素、例えばジクロロメタン、クロロベンゼン、もしくはジクロロエタン、または他の溶媒、例えば ジメチルホルムアミド、アセトニトリル、ピリジン、もしくはジメチルスルホキシド(ＤＭＳＯ)を含む。水も、同様に溶媒として使用するのに適切である。ジメチルホルムアミドが望ましい。上記の溶媒の混合物の使用も、同様に可能である。
【００２９】
慣例の無機塩基もしくは有機塩基が、塩基として使用するのに適切である。これらの塩基は、好ましくは、アルカリ金属水酸化物、例えば水酸化ナトリウムもしくは水酸化カリウム、またはアルカリ金属炭酸塩、例えば炭酸ナトリウムもしくは炭酸カリウム、またはアルカリ金属炭酸水素塩、例えば炭酸水素ナトリウムもしくは炭酸水素カリウム、またはアルカリ金属アルコキシド、例えばナトリウム メトキシド もしくは カリウム メトキシド、ナトリウム エトキシド もしくは カリウム エトキシド もしくは カリウム ｔｅｒｔ−ブトキシド、またはアミド、例えばナトリウム アミド、リチウム ビス(トリメチルシリル)アミド もしくは リチウム ジイソプロピルアミド、または有機金属化合物、例えば ブチルリチウム もしくは フェニルリチウム、または他のアミン、例えばトリエチルアミンおよびピリジンを含む。アルカリ金属炭酸塩 およびアルカリ金属炭酸水素塩が望ましい。
【００３０】
この関係において、塩基は、式(II)の化合物１molに対して、１から１０mol、好ましくは１から５mol、特に１から４molの量で用いられ得る。
【００３１】
一般的に、該反応は、−７８℃から＋１４０℃までの温度範囲で、好ましくは−７８℃から＋４０℃の範囲で、特に室温で起こる。
該反応は、常圧、加圧、または減圧(例えば０．５から５barの範囲)で、実施され得る。一般的に、該反応は、常圧で実施される。
【００３２】
式(II)の化合物は、当業者に既知であるか、または文献で知られている慣例の方法を用いて製造され得る。
式(II)の化合物はまた、式(IV)の化合物から、それをアルカリ金属硫化物と反応させることによって製造され得る。この製造方法は、下記のスキーム：
【化６】
2010138209.tif 000007
で、例として説明され得る。
【００３３】
用いられるアルカリ金属硫化物は、好ましくは硫化ナトリウムであり、それを式(IV)の化合物 １molに対して、１から１０mol、好ましくは１から５mol、特に１から４molの量で用いられる。
【００３４】
反応条件下で不活性な全ての有機溶媒が、溶媒として使用するのに適切である。これらは、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ−メチルピロリジノン、ピリジン、およびアセトニトリルを含む。Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドが特に望ましい。上記の溶媒の混合物を使用することも、同様に可能である。
【００３５】
一般的に、該反応は、＋２０℃から＋１４０℃の範囲で、好ましくは＋２０℃から＋１２０℃の範囲で、特に＋６０℃から＋１００℃で起こる。
該反応は、常圧、加圧、または減圧(例えば０．５から５barの範囲)で実施され得る。一般的に、該反応は、常圧で実施される。
【００３６】
式(III)の化合物は、市販されているか、または当業者に既知であるか、または慣例の方法を用いて製造され得る。
式(IV)の化合物は、市販されているか、または当業者に既知であるか、または慣例の方法を用いて製造され得る。特に、下記の論文：
・Kambe et al., Synthesis, 531-533 (1981);
・Elnagdi et al., Z. Naturforsch. 47b, 572-578 (1991).
を参考文献とし得る。それぞれの内容は、言及することによって、本明細書に組み込まれる。
【００３７】
驚くべきことに、式(Ｉ)の化合物は、価値ある薬理学的な活性スペクトルを示し(このことは、予測され得なかった)、従って、疾患の予防 および／または 処置に特に適切である。
【００３８】
先行技術と比較して、本発明による式(Ｉ)の化合物は、優れた薬物動態学的性質を有し、特に経口投与によって優れたバイオアベイラビリティーを有する。
【００３９】
式(Ｉ)の化合物は、単独で、または１個もしくはそれ以上の異なる活性な化合物と組み合わせて、様々な疾患、例えば、特に心血管系の疾患の予防 および／または 処置に適切である。組み合わせて使用するのに適切な 活性な化合物は、特に、冠動脈心疾患を処置するための活性な化合物、例えばナイトレート、β−ブロッカー、カルシウム アンタゴニスト、および 特に利尿剤である。
【００４０】
本発明の意味において、心血管疾患は、例えば、以下の疾患、特に冠動脈心疾患、高血圧、再狭窄(例えば末梢血管のバルーン拡張後の再狭窄)、動脈硬化症、頻脈、不整脈、末梢血管および心血管疾患、安定型 および不安定型狭心症、および心房細動であると解されるべきである。
【００４１】
式(Ｉ)の化合物は、さらに、例えば心筋の、特に梗塞波及領域を減少させるのに適切である。
さらに、式(Ｉ)の化合物は、特に、血栓塞栓性疾患および虚血、例えば心筋梗塞や、脳卒中や、一過性の虚血性発作の予防 および／または 処置に適切である。
【００４２】
式(Ｉ)の化合物が適切である他の適応領域の例は、特に、泌尿生殖器領域の疾患、例えば過敏性膀胱、勃起不全、および女性の性的な機能不全の予防 および／または 処置であり、さらにまた、炎症性疾患(例えば喘息や炎症性皮膚疾患)、中枢神経系の神経炎症性疾患(例えば脳梗塞後に起こる状態)、およびアルツハイマー病、さらに神経変性疾患、また痛みおよび癌の予防 および／または処置である。
別の適応領域の例は、特に、気道の疾患、例えば喘息、慢性気管支炎、肺気腫、気管支拡張症、嚢胞性線維症(膵線維症)、および肺高血圧の予防 および／または処置である。
【００４３】
さらに、式(Ｉ)の化合物はまた、例えば、特に肝臓線維症および肝硬変の予防 および／または 処置である。
最後に、式(Ｉ)の化合物はまた、例えば、特に糖尿病、特に真性糖尿病の予防 および／または処置に適切である。
【００４４】
本発明はまた、上記の症候群の予防 および／または処置のための医薬の製造における、式(Ｉ)の化合物の使用に関する。
本発明は、さらに式(Ｉ)の化合物を用いた上記の症候群の予防 および／または 処置の方法に関する。
【００４５】
式(Ｉ)の化合物の薬学的な活性は、アデノシンＡ１受容体 および／または アデノシンＡ２ｂ受容体へのリガンドとしてのそれらの効果によって説明され得る。
本発明は、さらに、少なくとも１つの式(Ｉ)の化合物を含む、好ましくは１個もしくはそれ以上の薬理学的に許容される補助剤 (auxiliary substance)もしくは担体を共に含む医薬、および上記の目的のためのそれらの使用に関する。
【００４６】
全ての慣例の投与形態、すなわち経口、非経腸、吸入、経鼻、舌下、直腸、局所(例えばインプラントやステントの場合)、外部の(例えば経皮)の投与形態は、式(Ｉ)の化合物の投与に適切である。非経腸の投与の場合において、特に、静脈、筋肉内、皮下(例えば皮下デポー製剤)の投与が記載され得る。経口もしくは非経腸の投与が望ましい。経口投与が特に望ましい。
【００４７】
この関係において、活性な化合物は、単独もしくは製剤の形態で投与され得る。経口投与に適切な製剤は、錠剤、カプセル剤、ペレット剤、被覆製剤、丸薬、顆粒剤，固体および液体のエアゾール、シロップ、乳液、懸濁液、および溶液を含む。この関係において、活性な化合物は、治療効果が得られるような量で存在しなければならない。一般的に、活性な化合物は、０．１から１００重量％、特に０．５から９０重量％、好ましくは５から８０重量％の濃度で存在し得る。特に、活性な化合物の濃度は、０．５から９０重量％の濃度であるべきである。すなわち、活性な化合物は、規定の容量の許容範囲を達成するのに十分な量で存在するべきである。
【００４８】
この目的のために、活性な化合物を、それ自身既知の方法で、慣例の製剤に変え得る。これは、不活性で毒性のない薬学的に適切な担体、補助剤、溶媒、ビークル、乳化剤、および／または分散化剤を用いて行われる。
【００４９】
列挙し得る補助剤は、例として、水、毒性のない有機溶媒、例えばパラフィン、野菜油(例えばごま油)、アルコール(例えばエタノール、グリセロール)、グリコール(例えばポリエチレン グリコール)、固体の担体、例えば天然の もしくは合成の鉱物の粉末(例えばタルクまたはケイ酸塩)、糖(例えばラクトース)、乳化剤、分散化剤(例えばポリビニルピロリドン)、および滑剤(glidant)(例えば硫酸マグネシウム)である。
【００５０】
経口投与の場合において、錠剤は、当然に、澱粉やゼラチンなどの混合物質と共に、添加剤、例えばクエン酸ナトリウムも含み得る。さらに、矯味剤または着色料を、経口投与のための水性の製剤に加え得る。
【００５１】
非経腸の投与に関して、一般的に、約０.１から約１０,０００μｇ／ｋｇ体重、好ましくは約１から約１,０００μｇ／ｋｇ体重、特に約１μｇ／ｋｇ体重から約１００μｇ／ｋｇ体重の量で投与することが、効果的な結果を得る目的に有利であることが見出されている。経口投与の場合において、その量は、約０.０１から約１０mg／ｋｇ体重、好ましくは約０.０５から約５mg／ｋｇ体重、特に約０.１から約１mg／ｋｇ体重である。
【００５２】
これにもかかわらず、適切な場合は、体重、投与経路、活性な化合物への個々の応答、製剤の性質、および投与がなされる際の時間もしくは間隔に依存して、上記の量を逸脱する必要があり得る。
【００５３】
本発明は、下記の、非限定的な、望ましい実施例によって説明される。これらは、しかしながら、本発明を全く制限しない。
別記しない限り、下記の実施例におけるパーセンテージの値は、それぞれの場合において、重量に関していい、比は、重量比である。
【実施例】
【００５４】
Ａ． 生理学的活性の評価
Ｉ．心血管効果の検出
胸郭を開いた後、心臓を麻酔されたラットから素早く摘出し、常用の Langendorff apparatus に導入する。冠状動脈を一定の体積(１０ml/分)で灌流し、この連結で生じた灌流圧力を適切な圧力センサーによって記録する。このセットアップにおける灌流圧力の減少が、冠状動脈の弛緩に対応する。同時に、心臓が個々の収縮によって発生させる圧力を、左心室に導入した バルーンと第２の圧力センサーによって測定する。摘出状態での鼓動である心拍数は、単位時間あたりの収縮数に基いて計算する。
【００５５】
II. アデノシンＡ１、Ａ２ａ、Ａ２ｂ、およびＡ３作用性(agonism)の決定
ａ) 遺伝子発現による非直接的なアデノシン作用性の決定
ＣＨＯ(Chinese Hamster Ovary) 永久細胞株の細胞を、アデノシン受容体のサブタイプ Ａ１、Ａ２ａ、およびＡ２ｂにおけるｃＤＮＡで安定にトランスフェクトする。アデノシンＡ１受容体は、Ｇｉタンパク質によってアデニル酸シクラーゼと結合し、一方アデノシンＡ２ａおよびＡ２ｂ受容体は、Ｇｓタンパク質によって結合する。これに応答して、細胞中のｃＡＭＰの形成が、それぞれ阻害される もしくは刺激される。その後、ルシフェラーゼの発現を、ｃＡＭＰ依存性プロモーターによって調整する。ルシフェラーゼ試験を、幾つかの試験パラメーター、例えば細胞密度、成長相と試験インキュベーションの時間、フォルスコリン濃度、および培地の成分を変えることによって、感度および再現性を高め、変動を減らし、そしてロボット・システムでの実行において良い安定性を得る目的で最適化する。下記の試験プロトコルを、薬理学的特性検討用細胞、およびロボット補助基質試験スクリーニングで使用する。
【００５６】
ストック培地を３７℃、５％ ＣＯ２下で、１０％  ＦＣＳ(ウシ胎児血清)を含むＤＭＥＭ／Ｆ１２培地中で成長させ、２−３日後にそれぞれのケースで１：１０に割る。試験培地を３８４−ウェル プレートに、ウェル当たり１,０００から３,０００細胞の割合で接種し、３７℃で約４８時間成長させる。次に培地を生理食塩水(１３０ｍＭ 塩化ナトリウム、５ｍＭ 塩化カリウム、２ｍＭ 塩化カルシウム、２０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、１ｍＭ 塩化マグネシウム・６Ｈ２Ｏ、５ｍＭ  ＮａＨＣＯ３、ｐＨ ７．４)で置き換える。ＤＭＳＯに溶解した物質を、１０倍量のこの生理食塩水で３回処理し、試験培地にピペットで移した(試験混合物中のＤＭＳＯの最大最終濃度：０．５％)。この方法において、最終物質濃度、例えば５μＭから５ｎＭで得られる。１０分後、フォルスコリンをＡ１細胞に加え、続いて全ての培地を３７℃で４時間インキュベートする。その後、５０％のリシス試薬(３０ｍＭ リン酸水素二ナトリウム、１０％ グリセロール、３％ TritonX100、２５ｍＭ  ＴｒｉｓＨＣｌ、２ｍＭ ジチオスレイトール(ＤＴＴ)、ｐＨ ７．８)、および５０％ ルシフェラーゼ基質溶液(２．５ｍＭ  ＡＴＰ、０．５ｍＭ ルシフェリン、０．１ｍＭ コエンザイム Ａ、１０ｍＭ トリシン、１．３５ｍＭ 硫酸マグネシウム、１５ｍＭ  ＤＴＴ、ｐＨ ７．８)を含む３５μｌの溶液を、試験培地に加え、プレートを約１分間振盪し、ルシフェラーゼ活性をカメラ・システムを用いて測定する。全てのアデノシン受容体のサブタイプに高い親和性で結合し、かつアゴニスト効果を有しているアデノシン類似化合物ＮＥＣＡ(５−Ｎ−エチルカルボキサミド−アデノシン)を、対照化合物として３つの試験に用いる(Klotz, K.N., Hessling, J., Hegler, J., Owman, C., Kull, B., Fredholm, B.B., Lohse, M.J., Comparative pharmacology of human adenosine receptor subtypes - characterization of stably transfected receptors in CHO cells, Naunyn Schmiedebergs Arch Pharmacol, 357 (1998), 1-9)。
【００５７】
下記の表１は、異なる濃度の実施例１の化合物による、異なるアデノシン受容体サブタイプの刺激で得られた値を示している。
【表１】
2010138209.tif 000008
【００５８】
表は、対応する対照刺激の％値を示している。Ａ２ａおよびＡ２ｂ受容体において測定された値は、ＮＥＣＡによって為される最大の刺激の百分率の値である。Ａ１受容体において測定された値は、アデニル酸シクラーゼを１μＭ フォルスコリンで直接前もって刺激した後の値の百分率である(１００％の値に対応)。Ａ１アゴニストは、それに対応して、ルシフェラーゼ活性の減少を示す(測定値 １００％未満)。
【００５９】
ｂ) ｃＡＭＰを検出することによる 直接的なアデノシン作用性の決定
ＣＨＯ(Chinese Hamster Ovary)永久細胞株の細胞は、アデノシン受容体のサブタイプＡ１、Ａ２ａ、Ａ２ｂ、およびＡ３におけるｃＤＮＡで安定にトランスフェクトされる。Ａ２ａもしくはＡ２ｂ受容体サブタイプへの物質の結合は、慣例の放射免疫アッセイを用いて、これらの細胞における細胞内のｃＡＭＰ含量を測定することによって決定される(cAMP RIA, IBL GmbH, Hamburg, Germany)。
【００６０】
物質がアゴニストとして作用する場合、物質の結合は、細胞内のｃＡＭＰ含量の増大として表される。全てのアデノシン受容体サブタイプに高い親和性で結合し、かつアゴニスト効果を有するアデノシン類似化合物ＮＥＣＡ(５−Ｎ−エチルカルボキサミド−アデノシン)を、これらの試験において、対照化合物として用いる(Klotz, K.N., Hessling, J., Hegler, J., Owman, C., Kull, B., Fredholm, B.B., Lohse, M.J., Comparative pharmacology of human adenosine receptor subtypes - characterization of stably transfected receptors in CHO cells, Naunyn Schmiedebergs Arch Pharmacol, 357 (1998), 1-9)。
【００６１】
アデノシン受容体Ａ１およびＡ３は、Ｇｉタンパク質に結合し、すなわちこれらの受容体の刺激がアデニル酸シクラーゼの阻害を引き起こし、次に細胞内のｃＡＭＰレベルの低下を引き起こす。Ａ１／Ａ３受容体アゴニストを区別するために、アデニル酸シクラーゼをフォルスコリンで刺激する。しかし、さらなるＡ１／Ａ３受容体の刺激は、アデニル酸シクラーゼが阻害し、このことは、Ａ１／Ａ３受容体アゴニストは、比較的低い細胞中のｃＡＭＰの含量で検出され得ることを意味する。
【００６２】
アデノシン受容体に対するアンタゴニストの効果を検出するために、対応する受容体をトランスフェクトした リコンビナント細胞を、ＮＥＣＡで前もって刺激し、前もっての刺激で引き起こされた細胞内のｃＡＭＰの含量の減少に対する物質の効果を調べる。全てにアデノシン受容体サブタイプに高い親和性で結合し かつアンタゴニスト効果を有しているＸＡＣ(キサンチン アミン コンジナー)を、これらの試験で対照化合物として用いる(Mueller, C.E., Stein, B., Adenosine receptor antagonists: structures and potential therapeutic applications, Current Pharmaceutical Design, 2 (1996) 501-530)。
【００６３】
III. 薬物動態学的試験
薬物動態学的データは、様々な物質を、静脈で もしくは経口で、溶液として、マウス、ラット、およびイヌに投与して決定した。これにおいて、血液試料を、投与後２４時間までに集めた。未代謝物質の濃度を、血液試料から得られる血漿試料で、生物分析的方法(ＨＰＬＣもしくはＨＰＬＣ−ＭＳ)によって決定した。続いて薬物動態学的パラメーターを、この方法で得られた血漿濃度の時間経過から確認した。下記の表２に、異なる種のバイオアベイラビリティーを示す。
【表２】
2010138209.tif 000009
＊ 全ての測定時間点での血漿レベルは、決定限界未満(＜１μｇ/Ｌ)であった。
【００６４】
Ｂ． 製造実施例
実施例１
Ｎ−(４−｛２−アミノ−３，５−ジシアノ−６−［(２−ピリジニルメチル)スルファニル］−４−ピリジニル｝フェニル)アセトアミド
第１段階：
Ｎ−［４−(２，２−ジシアノビニル)フェニル］アセトアミド
【化７】
2010138209.tif 000010
３１１．４ｇ(１．９mol)の４−アセトアミノベンズアルデヒドと、１３１ｇ(１．９９mol)のマロンニトリルを、始めに１,３３０mlのエタノール中に入れ、次に６mlのピペリジンを加える。混合物を３０分間還流しながら攪拌する。室温まで冷却した後、結晶を吸引ろ過し、乾燥する。
収量：３１８ｇ(理論値の７９％)；
質量スペクトル：
求められる相対分子量：２１１；
実測値：［Ｍ＋Ｈ］＋＝２１２．
【００６５】
第２段階：
Ｎ−｛４−［２−アミノ−３，５−ジシアノ−６−(フェニルスルファニル)−４−ピリジニル］フェニル｝アセトアミド
【化８】
2010138209.tif 000011
３１８ｇ(１．５mol)のＮ−［４−(２，２−ジシアノビニル)フェニル］アセトアミドと、９９ｇ(１．５mol)のマロンニトリルと、１６６ｇ(１．５mol)のチオフェノールを、始めに２,０００mlのエタノール中に入れ、次に６．７mlのトリエチルアミンを加える。混合物を２時間還流しながら攪拌し、それに伴って結晶化が起こる。混合物を室温まで冷却した後、生成物を吸引ろ過し、真空下で乾燥する。
収量：１７０．３ｇ(理論値の２９％)；
質量スペクトル：
求められる相対分子量：３８５；
実測値：［Ｍ＋Ｈ］＋＝３８６．
【００６６】
第３段階：
Ｎ−［４−(２−アミノ−３，５−ジシアノ−６−スルファニル−４−ピリジニル)フェニル］アセトアミド
【化９】
2010138209.tif 000012
アルゴン下、３０．８３ｇ(８０mmol)のＮ−｛４−［２−アミノ−３，５−ジシアノ−６−(フェニルスルファニル)−４−ピリジニル］フェニル｝−アセトアミドを、１２０mlのＤＭＦに溶解する。その後、９．３６ｇ(１２０mmol)の硫化ナトリウムを加え、混合物を８０℃で２時間攪拌する。次に、２０mlの１Ｎ  ＨＣｌ水溶液(４４mlの水中)を、４０〜６５℃で滴下した後、この手順の間に形成した結晶を、吸引ろ過し、水で洗浄した。沈殿物を２００mlのメタノールに懸濁し、還流しながら５分間攪拌する。室温まで冷却後、沈殿物を吸引ろ過し、メタノールとジエチル エーテルで洗浄し、真空下で乾燥した。
収量：２４．５ｇ(理論値の８８％)；
質量スペクトル：
求められる相対分子量：３０９；
実測値：［Ｍ＋Ｈ］＋＝３１０．１．
【００６７】
第４段階：
Ｎ−(４−｛２−アミノ−３，５−ジシアノ−６−［(２−ピリジニルメチル)スルファニル］−４−ピリジニル｝フェニル)アセトアミド
【化１０】
2010138209.tif 000013
９．２８ｇ(３０mmol)のＮ−［４−(２−アミノ−３，５−ジシアノ−６−スルファニル−４−ピリジニル)フェニル］アセトアミドと、７．３８ｇ(４５mmol)の塩化 ２−ピコリル塩酸塩と、１０．０８ｇ(１２０mmol)の炭酸水素ナトリウムを、室温で、１００mlのＤＭＦ中で攪拌する。２時間後、１００mlの水を、４０〜５０℃で滴下する。室温まで冷却した後、黄−橙色の結晶を吸引ろ過し、真空下で乾燥する。
収量：１０．４２ｇ(理論値の８６％)；
質量スペクトル：
求められる相対分子量：４００；
実測値：［Ｍ＋Ｈ］＋＝４０１；
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ = 2.1 (s, 3H), 4.6 (s, 2H), 7.4 (dd, 1H), 7.45 (d, 1H), 7.65 (d, 2H), 7.75 (m, 3H), 8.1 (s broad, 2H), 8.5 (d, 1H), 10.25 (s, 1H).
【００６８】
実施例２
メチル ４−(２−アミノ−３，５−ジシアノ−６−｛［(２−メチル−１，３−チアゾール−４−イル)メチル］スルファニル｝−４−ピリジニル)フェニルカルバメート
第１段階：
メチル ４−(２−アミノ−３，５−ジシアノ−６−スルファニル−４−ピリジニル)フェニルカルバメート
【化１１】
2010138209.tif 000014
８．５ｇ(４７．４mmol)のメチル ４−ホルミルフェニルカルバメート(Witek et al, Journal f. Prakt. Chemie 321, 804-812 (1979))と、９．５ｇ(９４．９mmol)のシアノチオアセトアミドと、９．６ｇ(９４．８８mmol)のＮ−メチルモルホリンを、エタノール中で３時間還流する。蒸発後、ジクロロメタン／メタノールを残さに加え、全体をろ過する。ケイソウ土(kieselguhr)に吸着させ、ろ液をシリカゲルのクロマトグラフィーによって精製(溶出：ジクロロメタン／メタノール， １００：２から１００：６)する。生成物のフラクションを合わせて蒸発する。蒸発した残さを２００mlの１Ｎ 水酸化ナトリウム水溶液に溶解し、次に全体をろ過する。３００mlの１Ｎ 塩酸をろ液に加え、得られた沈殿物を吸引ろ過し、真空下で乾燥する。
収量：２．７ｇ(理論値の１７％)；
質量スペクトル：
求められる相対分子量：３２５；
実測値：［Ｍ＋Ｈ］＋＝３２６；
1H NMR (200 MHz, DMSO-d6): δ = 3.7 (s, 3H), 7.4 (d, 2H), 7.6 (d, 2H), 8.1 (s broad, 2H), 10.0 (s, 1H).
【００６９】
第２段階：
メチル ４−(２−アミノ−３，５−ジシアノ−６−｛［(２−メチル−１，３−チアゾール−４−イル)メチル］スルファニル｝−４−ピリジニル)フェニルカルバメート
【化１２】
2010138209.tif 000015
３２．５mg(０．１mmol)のメチル ４−(２−アミノ−３，５−ジシアノ−６−スルファニル−４−ピリジニル)フェニルカルバメートと、２７．６mg(０．１５mmol)の４−(クロロメチル)−２−メチル−１，３−チアゾール塩酸塩を、０．４mlのＤＭＦ中で、３３．６mg(０．４mmol)の炭酸水素ナトリウムと共に、終夜振盪する。反応混合物をろ過し、分取ＨＰＬＣによって精製する。
カラム：Nucleosil 5C18 Nautilus, ５μｍ, ２０×５０mm；
プレカラム：Gromsil ODS 4 HE, １５μｍ, １０×２０mm.
流速：２５ml／分．
【表３】
2010138209.tif 000016
検出：２２０ｎｍ．
注入体積：６００μｌ．
生成物のフラクションを真空下で蒸発する。
収量：１５．８mg(理論値の３６％)；
質量スペクトル：
求められる相対分子量：４３６；
実測値：［Ｍ＋Ｈ］＋＝４３７．
【００７０】
用いた略号：
ＤＭＦ＝ジメチルホルムアミド；
ＤＭＳＯ＝ジメチルスルホキシド；
ＨＥＰＥＳ＝２−［４−(２−ヒドロキシエチル)ピペラジノ］エタンスルホン酸；
ＨＰＬＣ＝高速液体クロマトグラフィー；
ＮＭＲ＝核磁気共鳴分光学；
ＲＴ＝室温；
Ｔｒｉｓ＝２−アミノ−２−(ヒドロキシメチル)−１，３−プロパンジオール．