(57)【要約】【課題】安全性の高い天然物由来の物質を有効成分とする多用途抗炎症剤、および、それを用いて抗炎症性皮膚化粧料を提供する。【解決手段】モウボクジュの樹皮又はコウザレンキの樹皮より抽出され、ホスホリパーゼＡ２阻害剤、ヒアルロニダーゼ阻害剤、およびヒスタミン遊離抑制剤のいずれか２種以上を有効成分として含有する抗炎症剤である。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
モウボクジュの樹皮又はコウザレンキの樹皮より抽出され、ホスホリパーゼＡ２阻害剤、ヒアルロニダーゼ阻害剤、およびヒスタミン遊離抑制剤のいずれか２種以上を有効成分として含有することを特徴とする抗炎症剤。
【請求項２】
請求項１に記載の抗炎症剤を含有することを特徴とする皮膚化粧料。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、種々の原因による皮膚の炎症の防止に有用な、皮膚化粧料等に配合して使用する抗炎症剤、および皮膚化粧料に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
接触性皮膚炎（かぶれ）、乾癬、尋常性天疱瘡、先天性水疱瘡、その他肌荒れを伴う各種皮膚疾患等の原因や発症機構は多種多様であるが、その主なものと対策には次のようなものがあった。
【０００３】
（１）ホスホリパーゼＡ２によるもの
ホスホリパーゼＡ２はアラキドン酸の代謝経路であるアラキドン酸カスケードの重要酵素であって、この酵素の作用が活発化するとアラキドン酸代謝に異常が起こり、炎症、アレルギー、喘息、虚血、心筋梗塞などを引き起こす。したがって、この酵素を阻害する物質により上記障害に対処する試みがなされ、メパクリン、パラブロモフェナシルブロミド、デキサメタゾンなどが使われてきた。しかし、これらは合成品であり、副作用が問題となっていた。
【０００４】
（２）ヒアルロニダーゼによるもの
ヒアルロニダーゼはヒアルロン酸を加水分解する酵素であるが、ヒアルロン酸は間充組織に見られるムコ多糖であって微生物や毒物の侵入および伝播の防止に役立っているものであるから、ヒアルロニダーゼの作用が活発化するとヒアルロン酸による防御作用が減退することによる障害が起こりやすくなる。また、Ｉ型アレルギー反応にも関係し、マストセルからの脱顆粒反応を支配する酵素であると考えられている。そこで、このヒアルロニダーゼの作用を阻害する物質を用いた抗炎症剤や抗アレルギー剤、たとえばトラニラスト、ＤＳＣＧ、バイカレイン等が提供されたが、やはり副作用が問題になっていた。
【０００５】
（３）ヒスタミン遊離によるもの
ヒスタミンはマスト細胞内に存在し、脱顆粒反応により放出されたものが起炎物質として作用する。このヒスタミンの遊離を抑制することによりアレルギー症状を抑制するのに有効な物質としては、トラニラスト、クロモグリク酸ナトリウム、バイカリン、バイカレイン、塩酸プロメタジン等がある。しかしながら、これらの物質も副作用があり、一般的な皮膚化粧料に配合するには安全性の点で問題があった。
【０００６】
さらに、抗炎症剤として有効な上記従来の薬剤はいずれもホスホリパーゼＡ２阻害、ヒアルロニダーゼ阻害、ヒスタミン遊離抑制等のいずれか一つにしか効果がなかったので、発症原因が不特定の炎症に有効な抗炎症剤や皮膚化粧料を得ようとすると複数の薬剤を併用する必要があった。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明の目的は、安全性の高い天然物由来の物質の中から多種類の炎症に対して有効な物質を見いだし、多目的な抗炎症剤として提供することにある。
【０００８】
本発明の他の目的は、複数の炎症発症原因に対して有効な物質を配合してなる抗炎症性皮膚化粧料を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明による抗炎症剤は、モウボクジュの樹皮又はコウザレンキの樹皮より抽出され、ホスホリパーゼＡ２阻害剤、ヒアルロニダーゼ阻害剤、およびヒスタミン遊離抑制剤のいずれか２種以上を有効成分として含有することを特徴とする。
【００１０】
本発明による皮膚化粧料は、上記本発明による抗炎症剤を配合してなるものである。
【発明の効果】
【００１１】
以上説明したように、本発明によればホスホリパーゼＡ２、ヒアルロニダーゼ等、炎症性の酵素が関与する種々の皮膚疾患、肌荒れ等の予防と改善に有効で安全性にも優れた抗炎症剤を提供することができる。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
最初に、本発明による抗炎症剤の有効成分として使われた抗炎症性物質の取得法について述べる。抗炎症性物質の抽出原料となる植物は次のようなものである。
【００１３】
（１）ヒャクジツセイ（学名：Ｐｏｄｏｃａｒｐｕｓ ｒｉｉｆｏｌｉｕｓ）
マキ科の常緑高木である。木材として、家具や船の製作に利用されているものである。抗炎症性物質の抽出原料とするのはその茎柄および葉の部分である。
【００１４】
（２）コウカツツジ（学名：Ｒｈｏｄｏｄｅｎｄｒｏｎ ａｒｂｏｒｅｕｍ）
ツツジ科の低木である。抗炎症性物質の抽出原料とするのはその花および樹皮である。陰干しした花が気管支炎、月経不順、消化道出血の治療に有効であるとされている。樹皮はランプの芯に利用されることがある程度である。
【００１５】
（３）モウボクジュ（学名：Ｓｃｈｉｍａ ｗａｌｌｉｃｈｉｉ）
ツバキ科の常緑小高木である。抗炎症性物質の抽出原料とするのはその樹皮部分であるが、この樹皮については、魚毒として利用可能であることが知られている。
【００１６】
（４）サラソウジュ（学名：Ｓｈｏｒｅａ ｒｏｂｕｓｔａ）
フタバガキ科の落葉高木である。花はお茶にして飲まれ、木材は建築用材や鉄道枕木として利用される。抗炎症性物質の抽出原料とするのはその樹皮部分である。
【００１７】
（５）コウザンレキ（学名：Ｑｕｅｒｃｕｓ ｓｅｍｉｃａｒｐｉｆｏｌｉａ）
ブナ科の常緑または半常緑の高木である。葉や種子が、解毒作用を有し腸炎等の治療に有効であるとされているが、樹皮が抗炎症性物質を含有することは知られていなかった。
【００１８】
上述の抽出原料が含有する抗炎症性物質は、有機溶媒、例えばメタノール、エタノール等の低級脂肪族アルコール（含水アルコールでもよい）、アセトン、１，３−ブチレングリコール、ブロピレングリコール等の極性溶媒のほか、クロロホルム、酢酸エチル等の中間極性溶媒を用いて、常温または加熱下に抽出することができる。
【００１９】
各抽出原料から得られる抽出物は、いずれも、下記のとおり抗炎症に有効な複数の作用を有することが確認されている（後記実施例参照）。
ヒャクジツセイ抽出物：ホスホリパーゼＡ２阻害，ヒスタミン遊離抑制コウカツツジ抽出物：ホスホリパーゼＡ２阻害，ヒアルロニダーゼ阻害，ヒスタミン遊離抑制モウボクジュ抽出物：ホスホリパーゼＡ２阻害，ヒアルロニダーゼ阻害サラソウジュ抽出物：ヒアルロニダーゼ阻害，ヒスタミン遊離抑制コウザンレキ抽出物：ホスホリパーゼＡ２阻害，ヒアルロニダーゼ阻害，ヒスタミン遊離抑制
【００２０】
これらの活性成分は経皮的に吸収されやすい物質であるから、皮膚化粧料等に適量を配合して皮膚表面から炎症部位に到達させ、炎症を沈静化させるのに利用することができる。
【００２１】
本発明による抗炎症剤を配合するのに適した皮膚化粧料の具体例としては、軟膏、パップ、クリーム、乳液、ローション、パック、ゼリー等がある。
【００２２】
本発明の抗炎症剤を配合して皮膚化粧料を製造する場合は、抗炎症作用を発揮させるのに妨げとならない限り、該抗炎症剤と共にその皮膚化粧料の製造に通常使用される化粧料構成成分その他任意の物質を併用することができる。併用可能な皮膚化粧料構成成分の例としては次のようなものがある。
【００２３】
収斂剤：クエン酸またはその塩、酒石酸またはその塩、乳酸またはその塩、硫酸亜鉛、オトギリソウエキス、ダイオウエキス、ヤグルマソウエキス、マロニエエキス、サルビアエキス、メリッサエキス等。
【００２４】
殺菌・抗菌剤：安息香酸またはその塩、パラオキシ安息香酸エステル、サリチル酸、サリチル酸ナトリウム、ソルビン酸、レゾルシン、フェノキシエタノール、ビサボロール、ヒノキチオール、メントール、キトサン、キトサン分解物、ユッカエキス、アロエエキス、ケイヒエキス等。
【００２５】
美白剤：アスコルビン酸およびその誘導体、イオウ、胎盤抽出物、コウジ酸およびその誘導体、アルビチンおよびその誘導体、グルタチオン、油溶性甘草エキス、オウゴンエキス、センキュウエキス、ソウハクヒエキス、マンネンタケ菌糸体培養物またはその抽出物、ギムネマエキス、シナノキエキス、モモ葉エキス、ボタンピエキス、ハマメリスエキス、オトギリソウエキス等。
【００２６】
保湿剤：セリン、グリシン、コラーゲン、加水分解コラーゲン、フィブロネクチン、ケラチン、ローヤルゼリー、グリセロリン脂質、グリセロ糖脂質、スフィンゴリン脂質、リノール酸またはそのエステル、ペクチン、ビフィズス菌発酵物、乳酸菌発酵物、酵母抽出物、ダイズリン脂質、γ−オリザノール、ヨクイニンエキス、ジオウエキス、カイソウエキス、キダチアロエエキス、ゴボウエキス、マンネンロウエキス、小麦フスマ、コメヌカエキス等。
【００２７】
細胞賦活剤：リボフラビンまたはその誘導体、パントテン酸またはその誘導体、ニンジンエキス、オタネニンジンエキス、ヘチマエキス、ボタンピエキス、シャクヤクエキス、ムクロジエキス、ベニバナエキス、ビワ葉エキス、ユキノシタエキス、黄杞エキス、マンネンロウエキス等。
【００２８】
消炎・抗アレルギー剤：アズレン、アラントイン、インドメタシン、塩化リゾチーム、オキシベンゾン、グリチルリチン酸またはその誘導体、グリチルレチン酸またはその誘導体、塩酸ジフェンヒドラミン、トラネキサム酸またはその誘導体、エストラジオール、コルチゾン、ヒドロコルチゾン、プレドニゾロン、コルチコステロン、アルニカエキス、サンシシエキス、ヨモギエキス、センキュウエキス、ボウフウエキス等。
【００２９】
抗酸化・活性酸素消去剤：没食子酸プロピル、バイカリン、バイカレイン、スーパーオキサイドディスムターゼ、カタラーゼ、オウゴンエキス、エイジツエキス、キナエキス、シソエキス、タイムエキス、キャラウェイエキス、ナツメグエキス、メースエキス、ローレルエキス、クローブエキス、ヤナギタデエキス等。
【実施例】
【００３０】
以下、実施例を示して本発明を説明する。
製造実施例１
粗砕した原料植物体１００ｇに抽出溶媒２０００ｍｌを加え、ゆるく撹拌しながら３時間、７０℃に保って可溶性成分を溶出させる。その後、濾過して得られた抽出液を４０℃で減圧下に濃縮し、減圧乾燥機で乾燥する。
【００３１】
ヒャクジツセイ（茎柄および葉）、コウカツツジ（花）、モウボクジュ（樹皮）、サラソウジュ（樹皮）、およびコウザンレキ（樹皮）を原料とし、８０％含水エタノールまたはエタノールを溶媒にして上記抽出処理を行なった。抽出物の収率は表１のとおりであった。
【００３２】
【表１−１】
2010168400.tif 000002
【表１−２】
2010168400.tif 000003
【００３３】
試験例１
製造実施例１で得られた５種類の８０％エタノール抽出物について、下記の方法でホスホリパーゼＡ２阻害作用を試験した。
【００３４】
試験法：ラット白血病細胞のＲＢＬ−２Ｈ３細胞を７５ｃｍ２のフラスコで１５％ＦＢＳ含有ＭＥＭ培地にて３７℃、５％ＣＯ２下で培養し、常法により細胞を集める。得られた細胞を１５％ＦＢＳ含有ＭＥＭ培地にて５×１０５個／ｍｌになるよう調整し、さらに〔３Ｈ〕アラキドン酸（５０μＣｉ／５００μｌ）を、３μｌ／１０ｍｌの割合で加える。得られた調整液を２４ｗｅｌｌ  ｐｌａｔｅに１ｍｌ播種し、５％ＣＯ２下、３７℃で一夜培養する。各ｗｅｌｌ中の培地を捨て、ＰＢＳ（−）で洗浄後、無血清ＭＥＭ培地を加え、３７℃で３０分間、ｐｒｅｉｎｃｕｂａｔｉｏｎする。次いで、無血清ＭＥＭ培地に製造実施例１で得られた試料をそれぞれ溶解した溶液を加え、同様に１０分間ｐｒｅｉｎｃｕｂａｔｉｏｎする。さらに、１ｍＭ  Ａ２３１８７  １０μｌを加え、３７℃で５分間ｉｎｃｕｂａｔｉｏｎする。反応後、氷冷下に上清４００μｌを取り、シンチレーションカクテル６μｌを加えて液体シンチレーションカウンターで放射活性を測定する。同様にして、空試験（Ａ２３１８７刺激なし）およびコントロール（試料溶液の溶媒）について測定し、次式によりホスホリパーゼＡ２活性阻害率を求める。
【００３５】
阻害率（％）＝〔１−（Ａ−Ｃ）／（Ｂ−Ｃ）〕×１００
但し、
Ａ：試料添加時の放射活性
Ｂ：コントロールの放射活性
Ｃ：空試験の放射活性試料濃度を段階的に変更して上記測定を行い、阻害率が５０％になる試料濃度を内挿法により求める。試験結果は表２のとおりであった。
【００３６】
【表２】
2010168400.tif 000004
【００３７】
試験例２
製造実施例１で得られた５種類の８０％エタノール抽出物について、下記の方法でヒアルロニダーゼ阻害作用を試験した。
【００３８】
試験法：ヒアルロニダーゼ溶液（４００ユニット／ｍｌ，ｐＨ９．１ホウ酸緩衝液）０．１ｍｌと試料溶液０．２ｍｌを混合し、３７℃に２０分間加温したのち、活性化剤溶液（０．０１％Ｃｏｍｐｏｕｎｄ４８／８０，２．５ｍＭ−ＣａＣｌ２，０．１５Ｍ−ＮａＣｌ）０．２ｍｌを加え、３７℃に２０分間加温して酵素を活性化する。ヒアルロン酸カリウム緩衝液０．５ｍｌを加え、３７℃で４０分間反応させた後、０．４Ｎ水酸化ナトリウム０．２ｍｌを加えると共に氷冷して反応を停止させる。次いで０．８Ｍホウ酸溶液（ｐＨ９．１）０．２ｍｌを加え、沸騰湯浴中で３分間加熱後、直ちに１０分間氷冷する。ＤＭＡＢ試薬（ｐ−ジメチルアミノベンズアルデヒド１０ｇを１０Ｎ塩酸１２．５ｍｌと酢酸８７．５ｍｌの混合液に溶解し、酢酸で１０倍に希釈したもの）６．０ｍｌを加えて３７℃に２０分間保つことにより上記酵素反応で遊離したＮ−アセチルグルコサミンを発色させ、波長５８５ｎｍの吸光度を測定する。コントロールとして、試料溶液の代わりに水を加えた場合について、同様の操作と吸光度測定を行う。
【００３９】
以上の測定結果から、下記の計算式によりヒアルロニダーゼ活性の阻害率を算出する。
阻害率（％）＝〔１−（Ａ１−Ａ０）／（Ａ３−Ａ２）〕×１００
但し、
Ａ０：試料溶液を添加した場合の吸光度；酵素反応開始前
Ａ１：試料溶液を添加した場合の吸光度；酵素反応終了後
Ａ２：コントロール；酵素反応開始前
Ａ３：コントロール；酵素反応終了後試料溶液の濃度を段階的に変更して上記阻害率を測定し、阻害率が５０％になる試料濃度を内挿法により求める。試験結果は表３のとおりであった。
【００４０】
【表３】
2010168400.tif 000005
【００４１】
試験例３
製造実施例１で得られた５種類の８０％エタノール抽出物について、下記の方法でヒスタミン遊離抑制作用を試験した（細胞内のヒスタミンが遊離されると同時にヘキソサミニダーゼも遊離されることから、ヘキソサミニダーゼ遊離を指標にヒスタミン遊離抑制作用を評価する方法である。）。
【００４２】
試験法：２５ｍｌのフラスコに入れた１５％ＦＢＳ添加ＭＥＭ培地にＲＢＬ−２Ｈ３細胞１．０×１０６個を播種し、５％ＣＯ２下、３７℃で４日間培養する。その後トリプシン処理および遠心処理（１０００ｒｐｍ，２分間）を行なって細胞を沈殿物として得る。これを上記培地と同じ培地に４．０×１０５ｃｅｌｌ／ｍｌ懸濁させ、そこにマウスモノクロナール抗ジニトロフェニル基ＩｇＥ（ＤＮＰ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ ＩｇＥ）を５μｌ添加し、濃度を０．５μｇ／ｍｌとする。得られた細胞浮遊液を９６穴プレートに８０μｌ播種し、５％ＣＯ２下３７℃で２４時間培養する。培養終了後、各穴中の培地を除去し、シリガリアン緩衝液で洗浄する。次に上記緩衝液３０μｌおよび試料溶液１０μｌを加え、３７℃で１０分間インキュベートする。次にジニトロフェニル化ウシ血清アルブミン（ＤＮＰ−ＢＳＡ）１０μｌを加え、さらに３７℃で１５分間インキュベートする。その後、氷冷下で上清液１０μｌを新たな９６穴プレートに移し替え、これに１ｍＭ  ｐ−ニトロフェニル−Ｎ−アセチル−β−Ｄ−グルコサミド溶液１０μｌを加え、３７℃で１時間インキュベートする。反応終了後、０．１Ｍ  Ｎａ２ＣＯ３・ＮａＨＣＯ３溶液２５０μｌを加え、マイクロプレートリーダーにて４１５ｎｍにおける吸光度Ａを測定する。試料溶液を添加しない細胞浮遊液についても同様の処理と吸光度測定を行う（このとき測定される吸光度をＢとする）。また、細胞浮遊液のかわりに上記緩衝液を用いて同様の処理と吸光度測定を行う（このとき測定される吸光度をＣとする）。そして、次式によりヘキソサミニダーゼ遊離抑制率を算出する。
【００４３】
ヘキソサミニダーゼ遊離抑制率（％）＝〔１−（Ａ−Ｃ）／（Ｂ−Ｃ）〕×１００
試料溶液の濃度を段階的に変更して上記方法により抑制率を測定し、抑制率が５０％になる試料溶液の濃度を内挿法により求める。試験結果は表４のとおりであった。
【００４４】
【表４】
2010168400.tif 000006
【００４５】
製造実施例２
粗砕した原料植物体１００ｇに抽出溶媒１０００ｍｌを加え、ゆるく撹拌しながら３時間、５０℃に保つ。その後、濾過して、抽出液を得る。ヒャクジツセイ（茎柄および葉）、コウカツツジ（樹皮）、モウボクジュ（樹皮）、サラソウジュ（樹皮）、およびコウザンレキ（樹皮）を原料とし、５０％含水１，３−ブチレングリコールを溶媒にして上記抽出処理を行なった。得られた抽出液の固形分濃度から計算された固形分収量は表５のとおりであった。
【００４６】
【表５】
2010168400.tif 000007
【００４７】
試験例４
製造実施例２による５種類の５０％１，３−ブチレングリコール抽出液について、試験例１〜３と同様にしてホスホリパーゼＡ２阻害作用、ヒアルロニダーゼ阻害作用およびヒスタミン遊離抑制作用の試験を行なった。その結果を表６〜表８に示す。
【００４８】
【表６】
2010168400.tif 000008
【００４９】
【表７】
2010168400.tif 000009
【００５０】
【表８】
2010168400.tif 000010
【００５１】
試験例５
製造実施例１による５種類の８０％エタノール抽出物の１種または２種を含有するローション状塗布液、および、８０％エタノール抽出物を含有しないほかは同じ組成の対照液を調製し、それらについて、カミソリ負け防止効果を試験した。各塗布液の組成およびカミソリ負け防止効果の評価は表９のとおりである。
【００５２】
【表９】
2010168400.tif 000011
【００５３】
（注１）塗布液組成：数値はｇ；精製水を用いて全量を１００ｍｌとした。
（注２）カミソリ負け防止効果試験法：カミソリ負けする男性被験者５０名を８名ずつ５群に分け、各群ごとに異なる塗布液を、ひげ剃り直後の剃りあとに塗布させて塗布効果を次の判定基準で申告させる。
カミソリ負け改善効果の判定基準：
著効あり        カミソリ負けが消失
有効            カミソリ負けが弱くなった
やや有効        カミソリ負けがやや弱くなった
無効            カミソリ負けに変化が認められない
上記判定基準で“無効”と判定した被験者が２０％未満のものをＡ、２０％以上５０％未満のものをＢ、５０％以上８０％未満のものをＣ、８０％以上のものをＤと評価した。
【００５４】
なお、上記カミソリ負け防止についての判定と同時に、肌に対する刺激（ヒリヒリ感）の程度について感想を述べさせたが、すべての塗布液について、全被験者が刺激を感じないと答えた。
【００５５】
実施例１
製造実施例１によるヒャクジツセイ８０％エタノール抽出物を加えて抗炎症作用を付与した下記組成のクリームを、クリーム製造の常法により製造した。
ヒャクジツセイ抽出物                                            １．０重量％
ステアリン酸                                                    ２．０
ステアリルアルコール                                            ７．０
ラノリン                                                        ２．０
スクワラン                                                      ５．０
グリセリンモノステアリン酸エステル                              ２．０
ポリオキシエチレン（２５ＥＯ）セチルアルコルエーテル            ３．０
２−オクチルドデシルアルコール                                  ６．０
プロピレングリコール                                            ５．０
エチルパラベン                                                  ０．３
香料                                                            適量
精製水                                                          残部
【００５６】
実施例２
製造実施例１によるコウカツツジ８０％エタノール抽出物を加えて抗炎症作用を付与した下記組成の乳液を乳液製造の常法に従い製造した。
コウカツツジ抽出物                                              １．０重量％
ステアリン酸                                                    ２．０
セチルアルコール                                                １．５
ワセリン                                                        ５．０
流動パラフィン                                                １０．０
ポリオキシエチレン（１０ＥＯ）オレイン酸エステル                ２．０
ポリエチレングリコール１５００                                  ３．０
トリエタノールアミン                                            １．０
エチルパラベン                                                  ０．３
香料                                                            適量
精製水                                                          残部
【００５７】
実施例３
製造実施例１による３種類の８０％エタノール抽出物を加えて抗炎症作用を付与した下記組成のパックを製造した。
モウボクジュ抽出物                                              １．０重量％
サラソウジュ抽出物                                              １．０
コウザンレキ抽出物                                              ２．０
ポリビニルアルコール                                          １３．０
エチルアルコール                                                ７．０
ジプロピレングリコール                                          ５．０
ポリオキシエチレン（６０ＥＯ）硬化ヒマシ油                      ５．０
オリーブ油                                                      ５．０
酢酸トコフェロール                                              ０．２
エチルパラベン                                                  ０．２
香料                                                            適量
【００５８】
実施例４
製造実施例１によるサラソウジュ８０％エタノール抽出物を加えて抗炎症作用を付与した下記組成のゼリー状化粧料を製造した。
サラソウジュ抽出物                                              ３．０重量％
９５％エチルアルコール                                        １０．０
ジプロピレングリコール                                        １５．０
ポリオキシエチレン（５０ＥＯ）オレイルアルコールエーテル        ２．０
カルボキシビニルポリマー                                        ０．０５
Ｌ−アルギニン                                                  ０．１
エチルパラベン                                                  ０．３
香料                                                            適量
精製水                                                          残部