(57)【要約】【課題】本発明は、細胞増殖障害（例えば、良性および悪性の癌細胞に関連する障害）を処置するために使用され得る化合物を提供し、さらに、この化合物を含む薬学的組成物を提供することを課題とする。【解決手段】上記課題は、ヒト細胞を含む哺乳動物細胞中の細胞周期Ｇ２チェックポイント、特にＤＮＡ損傷誘発性Ｇ２チェックポイントを阻害する組成物および方法を提供することによって解決された。特に、本発明は、細胞周期Ｇ２チェックポイントを排除することにより細胞をＤＮＡ損傷剤に感作する組成物および方法を提供する。本発明の化合物は、癌のような増殖障害を処置するのに使用される。本発明は、Ｇ１チェックポイントで弱められた癌細胞をＤＮＡ損傷剤および処置に対して選択的に感作するための組成物および方法を提供する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
明細書に記載の発明。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願）
本願は、２００２年６月６日に出願された米国出願６０／３８６，９３０の優先権を主張する。
【０００２】
（発明の分野）
本発明は、抗細胞増殖活性を有する化合物、およびその生成、ならびにこの化合物を含む薬学的組成物、およびこれらの化合物および組成物を使用して増殖障害を処置する方法に関する。従って、本発明の化合物は、細胞増殖の阻害のため、従って、癌を含む細胞増殖障害を処置するために有用である。特に、本発明は、細胞周期Ｇ２チェックポイント（ＤＮＡ損傷誘発性Ｇ２チェックポイント）を排除する化合物に関し、これは、増殖障害（例えば、癌）の処置（転移性および非転移性の固形または液体の腫瘍の処置を含む）のために有用である。
【背景技術】
【０００３】
（背景）
細胞周期は、Ｓ期（ＤＮＡ複製）、Ｍ期（有糸分裂）、およびＳ期とＭ期との間の２つのギャップ期（Ｇ１期およびＧ２期）を含む。細胞周期中のチェックポイントは、細胞周期段階を通る正確な進行を保証し、そしてＤＮＡ完全性の状態、ＤＮＡ複製、細胞サイズおよび周辺環境状態のモニタリングを包含する（非特許文献１）。多細胞生物にとって、ゲノムの完全性を維持することが本質的に重要であり、そしてゲノムの状態をモニタリングする複数のチェックポイントが存在する。これらの中に、Ｇ１チェックポイントおよびＧ２チェックポイントが、それぞれ、ＤＮＡ複製およびＤＮＡ有糸分裂の前に存在する。Ｓ期に入る前にＤＮＡ損傷を修復または修正することが重要である。なぜなら、一旦、損傷したＤＮＡが複製されると、これはしばしば変異を生じるからである（非特許文献２）。広範なＤＮＡ損傷を修復することのないＧ１チェックポイントおよびＧ２チェックポイントを通る進行は、有糸分裂の結末および／またはアポトーシスを誘導する。
【０００４】
ほとんどの癌細胞が、Ｇ１チェックポイント関連タンパク質（例えば、ｐ５３、Ｒｂ、ＭＤＭ−２、ｐ１６ＩＮＫ４およびｐ１９ＡＲＦ）に異常を有する（非特許文献３）。あるいは、変異は、癌遺伝子産物（例えば、Ｒａｓ、ＭＤＭ−２およびサイクリンＤ）の過剰発現および／または過剰活性化を生じ得、このことはＧ１チェックポイントのストリンジェンシーを減少させる。これらの変異に加えて、過剰な増殖因子のシグナル伝達が、増殖因子の過剰発現によって生じ得、そしてＧ１チェックポイントのストリンジェンシーを減少させ得る。機能の喪失および機能変異の取得と共に、増殖因子レセプターまたは下流シグナル伝達分子による連続した活性化は、Ｇ１チェックポイントを無効にすることによって、細胞形質転換を生じ得る。崩壊または排除されたＧ１チェックポイントは、癌細胞において観察されるより高い変異率および多くの変異に寄与する。結果として、ほとんどの癌細胞は、過剰なＤＮＡ損傷に対する生存について、Ｇ２チェックポイントに依存する（非特許文献４）。
【０００５】
Ｇ２細胞周期チェックポイントは、ＤＮＡの複製および修復が完了するまで、有糸分裂の開始を制限する。Ｇ２チェックポイントの機能不全は、ＤＮＡの複製および修復の完了前に有糸分裂を時期尚早に開始させ、ゲノムＤＮＡのかなりの部分を欠くか、または変異を有する娘細胞を生成する。Ｇ２チェックポイントの機能としては、ＤＮＡ損傷の検出、およびＤＮＡ損傷が検出された場合に細胞周期を停止させ得るシグナルの生成が挙げられる。ＤＮＡ損傷の後の細胞周期Ｇ２の停止を促進するメカニズムは、酵母からヒトまでの種において保存されていると考えられている。損傷ＤＮＡの存在下で、Ｃｄｃ２／サイクリンＢキナーゼは、Ｃｄｃ２キナーゼ上のスレオニン−１４残基およびチロシン−１５残基のリン酸化によって不活性に保たれる；あるいは、サイクリンＢタンパク質のレベルが減少され得る。有糸分裂の開始時に、ＣＤＣ２５ホスファターゼは、Ｃｄｃ２／サイクリンＢキナーゼから阻害性ホスファターゼを除去し、それによりＣｄｃ２／サイクリンＢキナーゼを活性化する。Ｃｄｃ２／サイクリンＢキナーゼの活性化は、Ｂ期の開始と等価である。
【０００６】
分裂酵母において、プロテインキナーゼＣｈｋ１は、損傷ＤＮＡに応答する細胞周期の停止のために必要である。Ｃｈｋ１キナーゼは、いくつかのラット遺伝子産物の下流で作用し、ＤＮＡが損傷した際に、リン酸化によって改変される。発芽酵母のキナーゼＲａｄ５３および分裂酵母のＣｄｓ１は、未複製のＤＮＡからシグナルを伝達することが知られている。ＣＨＫ１とＣｄｓ１との間にいくつかの縮退が存在するようである。なぜなら、Ｃｈｋ１およびＣｄｓ１の両方の排除は、損傷ＤＮＡによって誘導されるＧ２停止の崩壊で終了したからである。興味深いことに、Ｃｈｋ１およびＣｄｓ１の両方は、Ｃｄｃ２５をリン酸化し、そしてＣｄｃ２５へのＲａｄ２４の結合を促進し、このＣｄｃ２５はＣｄｃ２５を細胞質に隔離し、Ｃｄｃ２／サイクリンＢの活性化を妨げる。従って、Ｃｄｃ２５は、これらのキナーゼの共通の標的であるようであり、このことはこの分子がＧ２チェックポイントにおける不可欠の因子であることを示唆している。
【０００７】
ヒトにおいて、分裂酵母Ｃｈｋ１のヒトホモログログであるｈＣｈｋ１、ならびに発芽酵母Ｒａｄ５３および分裂酵母Ｃｄｓ１のヒトホモログログであるＣｈｋ２／ＨｕＣｄｓ１の両方は、ＤＮＡ損傷に応答して、重要な調節部位であるセリン−２１６におけるＣｄｃ２５Ｃをリン酸化する。このリン酸化は、分裂酵母のＲａｄ２４およびＲａｄ２５のヒトホモログログである小さな酸性タンパク質１４−３−３ｓに対する結合部位を生成する。このリン酸化の調節的役割は、Ｃｄｃ２５Ｃのセリン−２１６のアラニンへの置換がヒト細胞における細胞周期Ｇ２停止を混乱させたという事実によって明確に示された。しかし、Ｇ２チェックポイントの機構は、完全には理解されていない。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】Ｍａｌｌｅｒ（１９９１）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．，３：２６
【非特許文献２】Ｈａｒｔｗｅｌｌ（１９９２）Ｃｅｌｌ，７１：５４３
【非特許文献３】Ｌｅｖｉｎｅ（１９９７）Ｃｅｌｌ，８８：３２３
【非特許文献４】Ｏ’ＣｏｎｎｏｒおよびＦａｎ（１９９６）Ｐｒｏｇ．Ｃｅｌ  Ｃｙｃｌｅ  Ｒｅｓ．，２：１６５
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００９】
（要旨）
本発明は、細胞増殖障害（例えば、良性および悪性の癌細胞に関連する障害）を処置するために使用され得る化合物を提供し、さらに、この化合物を含む薬学的組成物を提供する。本発明な任意の特定の機構に限定されないが、本発明の化合物は、Ｇ２チェックポイントを阻害、破壊または排除することによって、特に、ＤＮＡ損傷誘発性Ｇ２チェックポイントを排除することによって、機能し得ると考えられる。本発明の化合物は、ＤＮＡ損傷を有する細胞（例えば、癌細胞）を、ＤＮＡ損傷の影響に対して選択的に感作することによって、抗癌剤として作用し得る。本発明の化合物は、細胞、特に、癌細胞を、ＤＮＡ損傷剤または処置剤の影響に対して感作し得る。本発明の化合物は、いずれのさらなるＤＮＡ損傷処置なしで、かつ正常細胞に対する細胞傷害性がほとんどか全くなしで、細胞増殖を抑制し得る。従って、本発明の化合物は、抗癌剤として、および抗癌薬として使用される薬学的組成物中の活性成分として、任意のさらなるＤＮＡ損傷処理を伴ってかまたは伴わずに使用され得る。
【００１０】
本発明は、増殖性障害を有する細胞を処置するための方法を提供する。本発明は、細胞のＧ２チェックポイントを排除するための方法、特に、細胞を、本発明の化合物または本発明の薬学的組成物と、Ｇ２チェックポイントを排除するのに十分な量で接触させることによって、ＤＮＡ損傷誘発性Ｇ２チェックポイントを排除するための方法を提供する。本発明はさらに、細胞を、ＤＮＡ損傷剤に対して、損傷したＧ１チェックポイントで選択的に感作するための方法を提供し、この方法は、この細胞を、本発明の化合物または本発明の組成物と、Ｇ２チェックポイントを排除するのに十分な量で接触させ、それによりこの細胞をこのＤＮＡ損傷剤に対して感作する工程を包含する。この細胞は、哺乳動物細胞、特に、ヒト細胞、より詳細には、ヒト癌細胞であり得る。
【００１１】
本発明は、本発明の化合物または本発明の薬学的組成物を、細胞におけるＧ２チェックポイントを排除するのに十分な量で投与し、それによりこの細胞をＤＮＡ損傷剤に対して感作し、そしてＤＮＡ損傷剤を投与することによって、個体における細胞の有糸分裂の崩壊および／またはアポトーシスを誘導するための方法を提供する。この細胞は、哺乳動物細胞、特に、ヒト細胞、詳細には、ヒト癌細胞であり得る。この癌細胞は、損傷したＧ１細胞周期停止チェックポイントを有し得る。ＤＮＡ損傷剤は、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、レベカマイシン（ｒｅｂｅｃｃａｍｙｃｉｎ）、アドリアマイシン、ブレオマイシン、シスプラチン、温熱療法、ＵＶ照射またはγ線照射、またはＤＮＡ損傷を引き起こすことが知られており、そして／またはスクリーニング方法によって同定される任意の適切な化合物であり得る（米国特許出願番号第０９／６６７，３６５号に記載）。
【００１２】
本発明は、例えば以下を提供する。
（項目１）
細胞に投与される場合、細胞周期Ｇ２チェックポイントを排除する化合物であって、以下の構造：
【化１】
2010168398.tif 000002
を有し、ベンゼンのいずれかまたは両方が、ピラジン、ピリミジン、ピペラジン、モルホリン、シクロヘキサン、ピペリジンまたはピリジンで置換され得；Ｒ１は、ハロゲン、臭素（Ｂｒ）、塩素（Ｃｌ）、フッ素（Ｆ）、ヨウ素（Ｉ）、アミノ（ＮＨ２）、ニトロ（ＮＯ２）、ヒドロキシ（ＯＨ）Ｏ−メチル（ＯＣＨ３）メチル（ＣＨ３）または水素であり；Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６は、臭素（Ｂｒ）、塩素（Ｃｌ）、フッ素（Ｆ）、ヨウ素（Ｉ）、アミノ（ＮＨ２）、ニトロ（ＮＯ２）、メチル（ＣＨ３）、Ｏ−メチル（ＯＣＨ３）、ヒドロキシ（ＯＨ）、ＣＨ（ＣＨ３）２、ＣＨＯ、ＣＨＯＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）ｎＣＨ３、ＯＣＯ（Ｃ６Ｈ１２）Ｃｌ、ＣＯＯＣＨ３または水素であり；Ｘ１は、窒素（ＮＨ）、酸素（Ｏ）、または硫黄（Ｓ）であり；そしてＸ２は、酸素（Ｏ）または硫黄（Ｓ）である、化合物。
（項目２）
細胞に投与される場合、ＤＮＡ損傷誘発性チェックポイントを排除する、項目１に記載の化合物。
（項目３）
正常細胞およびＤＮＡ損傷細胞を含む細胞の集団に投与される場合、ＤＮＡ損傷細胞を抑制または殺傷する、項目２に記載の化合物。
（項目４）
細胞に投与される場合、細胞をＤＮＡ損傷剤または処置に感作する、項目２に記載の化合物。
（項目５）
４−クロロ−安息香酸４−メトキシ−フェニルエステル（ＣＤＢＣ００４）；４−クロロ−安息香酸ｐ−トリルエステル（ＣＢＤＣ４０１）；４−ブロモ−安息香酸ｐ−トリルエステル（ＣＢＤＣ４０２）；３，４，５−トリフルオロ−安息香酸ｐ−トリル１エステル（ＣＢＤＣ４０３）；４−フルオロ−安息香酸４−ブロモフェニル１エステル（ＣＢＤＣ４０４）；３，４−ジクロロ−安息香酸ｐ−トリルエステル（ＣＢＤＣ４０５）；２，４−ジクロロ−安息香酸ｐ−トリルエステル（ＣＢＤＣ４０６）；４−フルオロ−安息香酸ｐ−トリルエステル（ＣＢＤＣ４０７）；２，３，４，５，６−ペンタフルオロ−安息香酸ｐ−トリルエステル（ＣＢＤＣ４０８）；４−クロロ−安息香酸３，４−ジメチルフェニルエステル（ＣＢＤＣ４０９）；４−クロロ−安息香酸４−ヒドロキシフェニルエステル（ＣＢＤＣ４１０）；４−フルオロ−安息香酸４−ヒドロキシフェニルエステル（ＣＢＤＣ４１１）；４−ブロモ−安息香酸４−フルオロフェニルエステル（ＣＢＤＣ４１２）；４−ブロモ−安息香酸４−トリフルオロメチルフェニルエステル（ＣＢＤＣ４１３）；４−ブロモ−安息香酸４−ヒドロキシフェニルエステル（ＣＢＤＣ４１４）；４−ブロモ−安息香酸４−トリフルオロメトキシフェニルエステル（ＣＢＤＣ４１５）；４−ブロモ−安息香酸６−メチル−ピリジン−３−イルエステル（ＣＢＤＣ４１８）；４−ブロモ−チオ安息香酸０−ｐ−トリルエステル（ＣＢＤＣ４４０）；４−ブロモ−ジチオ安息香酸ｐ−トリルエステル（ＣＢＤＣ４４１）；４−ブロモ−チオ安息香酸Ｓ−ｐ−トリルエステル（ＣＢＤＣ４４２）から選択される少なくとも１つの化合物を含む、項目１に記載の化合物。
（項目６）
以下の構造：
【化２】
2010168398.tif 000003
を有する、４−クロロ−安息香酸４−メトキシ−フェニルエステル（ＣＢＤＣ００４）を含む、項目１に記載の組成物。
（項目７）
以下の構造：
【化３】
2010168398.tif 000004
を有する、４−クロロ−安息香酸ｐ−トリルエステル（ＣＢＤＣ４０１）を含む、項目１に記載の組成物。
（項目８）
以下の構造：
【化４】
2010168398.tif 000005
を有する、４−ブロモ−安息香酸ｐ−トリルエステル（ＣＢＤＣ４０２）を含む、項目１に記載の組成物。
（項目９）
以下の構造：
【化５】
2010168398.tif 000006
を有する、３，４，５−トリフルオロ−安息香酸ｐ−トリルエステル（ＣＢＤＣ４０２）を含む、項目１に記載の組成物。
（項目１０）
以下の構造：
【化６】
2010168398.tif 000007
を有する、４−フルオロ−安息香酸４−ブロモ−フェニルエステル（ＣＢＤＣ４０４）を含む、項目１に記載の組成物。
（項目１１）
以下の構造：
【化７】
2010168398.tif 000008
を有する、３，４−ジクロロ−安息香酸ｐ−トリルエステル（ＣＢＤＣ４０５）を含む、項目１に記載の組成物。
（項目１２）
以下の構造：
【化８】
2010168398.tif 000009
を有する、２，４−ジクロロ−安息香酸ｐ−トリルエステル（ＣＢＤＣ４０６）を含む、項目１に記載の組成物。
（項目１３）
以下の構造：
【化９】
2010168398.tif 000010
を有する、４−フルオロ−安息香酸ｐ−トリルエステル（ＣＢＤＣ４０７）を含む、項目１に記載の組成物。
（項目１４）
以下の構造：
【化１０】
2010168398.tif 000011
を有する、２，３，４，５，６−ペンタフルオロ−安息香酸ｐ−トリルエステル（ＣＢＤＣ４０８）を含む、項目１に記載の組成物。
（項目１５）
以下の構造：
【化１１】
2010168398.tif 000012
を有する、４−クロロ−安息香酸３，４−ジメチル−フェニルエステル（ＣＢＤＣ４０９）を含む、項目１に記載の組成物。
（項目１６）
以下の構造：
【化１２】
2010168398.tif 000013
を有する、４−クロロ−安息香酸４−ヒドロキシ−フェニルエステル（ＣＢＤＣ４１０）を含む、項目１に記載の組成物。
（項目１７）
以下の構造：
【化１３】
2010168398.tif 000014
を有する、４−フルオロ−安息香酸４−ヒドロキシ−フェニルエステル（ＣＢＤＣ４１１）を含む、項目１に記載の組成物。
（項目１８）
以下の構造：
【化１４】
2010168398.tif 000015
を有する、４−ブロモ−安息香酸４−フルオロ−フェニルエステル（ＣＢＤＣ４１２）を含む、項目１に記載の組成物。
（項目１９）
以下の構造：
【化１５】
2010168398.tif 000016
を有する、４−ブロモ−安息香酸４−トリフルオロメチル−フェニルエステル（ＣＢＤＣ４１３）を含む、項目１に記載の組成物。
（項目２０）
以下の構造：
【化１６】
2010168398.tif 000017
を有する、４−ブロモ−安息香酸４−ヒドロキシ−フェニルエステル（ＣＢＤＣ４１４）を含む、項目１に記載の組成物。
（項目２１）
以下の構造：
【化１７】
2010168398.tif 000018
を有する、４−ブロモ−安息香酸４−トリフルオロメトキシ−フェニルエステル（ＣＢＤＣ４１５）を含む、項目１に記載の組成物。
（項目２２）
以下の構造：
【化１８】
2010168398.tif 000019
を有する、４−ブロモ−安息香酸６−メチルピリジン−３−イルエステル（ＣＢＤＣ４１８）を含む、項目１に記載の組成物。
（項目２３）
以下の構造：
【化１９】
2010168398.tif 000020
を有する、４−ブロモ−チオ安息香酸０−ｐ−トリルエステル（ＣＢＤＣ４４０）を含む、項目１に記載の組成物。
（項目２４）
以下の構造：
【化２０】
2010168398.tif 000021
を有する、４−ブロモ−ジチオ安息香酸ｐ−トリルエステル（ＣＢＤＣ４４１）を含む、項目１に記載の組成物。
（項目２５）
以下の構造：
【化２１】
2010168398.tif 000022
を有する、４−ブロモ−チオ安息香酸Ｓ−ｐ−トリルエステル（ＣＢＤＣ４４２）を含む、項目１に記載の組成物。
（項目２６）
薬学的に受容可能なキャリアおよび項目１に記載の組成物を含む、薬学的組成物。
（項目２７）
薬学的に受容可能なキャリアおよび項目２に記載の組成物を含む、薬学的組成物。
（項目２８）
細胞中の前記Ｇ２チェックポイントを排除する方法であって、細胞に該Ｇ２チェックポイントを阻害するのに有効な量の項目１に記載の少なくとも１つの化合物を投与する工程を包含する、方法。
（項目２９）
増殖障害を有する細胞を殺傷し、または抑制するための方法であって、増殖障害を有する少なくとも１つの細胞に、前記Ｇ２チェックポイントを阻害するのに有効な量の項目１に記載の化合物を投与する工程を包含する、方法。
（項目３０）
増殖障害または分化障害により特徴付けられる症状を処置する方法であって、該障害を処置するのに有効な量の項目１に記載の少なくとも１つの化合物を投与する工程を包含する、方法。
（項目３１）
ＤＮＡ損傷細胞を選択的に抑制または殺傷する方法であって、前記ＤＮＡ損傷誘発性Ｇ２チェックポイントを阻害するのに有効な量の項目２に記載の化合物を、正常細胞およびＤＮＡ損傷細胞を含む細胞の集団に投与する工程を包含する、方法。
（項目３２）
前記ＤＮＡ損傷細胞が、癌細胞である、項目３１に記載の方法。
（項目３３）
前記ＤＮＡ損傷細胞が、異種移植片腫瘍細胞である、項目３１に記載の方法。
（項目３４）
項目２に記載の化合物を投与する工程が、ＤＮＡ損傷細胞をＤＮＡ損傷剤または処置に感作する、項目３１に記載の方法。
（項目３５）
前記ＤＮＡ損傷細胞が癌細胞であり、さらに項目２に記載の化合物を投与する工程が、該癌細胞をＤＮＡ損傷剤または処置に感作する、項目３４に記載の方法。
（項目３６）
ＤＮＡ損傷誘発性Ｇ２チェックポイントを排除する非ペプチド化合物をスクリーニングする方法であって、以下：
（ａ）試験化合物を提供する工程；
（ｂ）細胞の集団を提供する工程；
（ｃ）該細胞の集団にＧ２／Ｍ期細胞の蓄積を引き起こすＤＮＡ損傷剤を投与する工程；
（ｄ）該試験化合物を該ＤＮＡ損傷剤で処置された集団の第１の処置された部分に投与する工程；
（ｅ）該集団の該第１の処置された部分のＧ２／Ｍ期の細胞数を測定し、該集団の該Ｇ２／Ｍ期の細胞数が、Ｇ２細胞周期停止における細胞数を示す工程；
（ｆ）該ＤＮＡ損傷剤で処置された該集団の第２の処置されない部分の該Ｇ２／Ｍ期の細胞数を測定する工程であって、該集団の該Ｇ２／Ｍ期の細胞数を測定する工程が、該Ｇ２細胞周期停止における細胞数を示す工程；ならびに
（ｇ）該（ｅ）の数と該（ｆ）の数を比較し、工程（ｅ）のＧ２／Ｍ期のより低い細胞数が、該試験化合物が、第１に処置された部分における該ＤＮＡ損傷細胞誘発性Ｇ２細胞周期チェックポイントを排除することを示す工程
を包含する、方法。
（項目３７）
前記化合物が、項目１に記載の化合物である、項目４０に記載の方法。
（項目３８）
前記化合物が、項目２に記載の化合物である、項目４２に記載の方法。
（項目３９）
細胞に投与される場合、細胞周期Ｇ２チェックポイントを排除する化合物であって、以下の構造：
【化２２】
2010168398.tif 000023
を有し、ベンゼンのいずれかまたは両方が、ピラジン、ピリミジン、ピペラジン、モルホリン、シクロヘキサン、ピペリジン、またはピリジンで置換され得；Ｒ１は、ハロゲン、臭素（Ｂｒ）、塩素（Ｃｌ）、フッ素（Ｆ）、ヨウ素（Ｉ）、アミノ（ＮＨ２）、ニトロ（ＮＯ２）、ヒドロキシ（ＯＨ）Ｏ−メチル（ＯＣＨ３）メチル（ＣＨ３）または水素であり；Ｒ２は、臭素（Ｂｒ）、塩素（Ｃｌ）、フッ素（Ｆ）、ヨウ素（Ｉ）、アミノ（ＮＨ２）、ニトロ（ＮＯ２）、メチル（ＣＨ３）、Ｏ−メチル（ＯＣＨ３）、ヒドロキシ（ＯＨ）、ＣＨ（ＣＨ３）２、ＣＨＯ、ＣＨＯＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）ｎＣＨ３、ＯＣＯ（Ｃ６Ｈ１２）Ｃｌ、ＣＯＯＣＨ３、または水素であり；Ｘ１は、窒素（ＮＨ）、酸素（Ｏ）または硫黄（Ｓ）であり；そしてＸ２は、酸素（Ｏ）または硫黄（Ｓ）である、化合物。
（項目４０）
細胞に投与される場合、ＤＮＡ損傷誘発性チェックポイントを排除する、項目３９に記載の化合物。
（項目４１）
正常細胞およびＤＮＡ損傷細胞を含む細胞の集団に投与される場合、ＤＮＡ損傷細胞を抑制または殺傷する、項目４０に記載の化合物。
（項目４２）
細胞に投与される場合、細胞をＤＮＡ損傷剤または処置に感作する、項目４０に記載の化合物。
（項目４３）
細胞中の前記Ｇ２チェックポイントを排除する方法であって、細胞に該Ｇ２チェックポイントを阻害するのに有効な量の項目３９に記載の少なくとも１つの化合物を投与する工程を包含する、方法。
（項目４４）
増殖障害を有する細胞を殺傷し、または抑制するための方法であって、増殖障害を有する少なくとも１つの細胞に、前記Ｇ２チェックポイントを阻害するのに有効な量の項目３９に記載の化合物を投与する工程を包含する、方法。
（項目４５）
増殖障害または分化障害により特徴付けられる症状を処置する方法であって、該障害を処置するのに有効な量の項目３９に記載の少なくとも１つの化合物を投与する工程を包含する、方法。
（項目４６）
ＤＮＡ損傷細胞を選択的に抑制または殺傷する方法であって、前記ＤＮＡ損傷誘発性Ｇ２チェックポイントを阻害するのに有効な量の項目４０に記載の化合物を、正常細胞およびＤＮＡ損傷細胞を含む細胞の集団に投与する工程を包含する、方法。
（項目４７）
前記ＤＮＡ損傷細胞が、癌細胞である、項目４６に記載の方法。
（項目４８）
前記ＤＮＡ損傷細胞が、異種移植片腫瘍細胞である、項目４６に記載の方法。
（項目４９）
項目４０に記載の化合物を投与する工程が、ＤＮＡ損傷細胞をＤＮＡ損傷剤または処置に感作する、項目４６に記載の方法。
（項目５０）
前記ＤＮＡ損傷細胞が癌細胞であり、さらに項目４０に記載の化合物を投与する工程が、該癌細胞をＤＮＡ損傷剤または処置に感作する、項目４９に記載の方法。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】図１は、２４時間、ブレオマイシン（４０μｇ／ｍｌ）、または種々の濃度（０．２、０．３９、０．７８、１．５６、３．１２５、６．２５、１２．５，２５および５０μｇ／ｍｌ）のブレオマイシン＋ＣＢＤＣ４０２で処置した後の、Ｊｕｒｋａｔ細胞のＤＮＡ含量のフローサイトメトリー分析の結果を示す。
【図２】図２は、２４時間、コルヒチン（５μｇ／ｍｌ）、または種々の濃度（０．２、０．３９、０．７８、１．５６、３．１２５、６．２５、１２．５，２５および５０μｇ／ｍｌ）のコルヒチン＋ＣＢＤＣ４０２で処置した後の、Ｊｕｒｋａｔ細胞のＤＮＡ含量のフローサイトメトリー分析の結果を示す。
【図３】図３ａ〜ｂは、種々のＣＢＤＣ化合物の活性を示す：図３ａは、種々のＣＢＤＣ化合物によるＧ２チェックポイントの排除についての用量応答曲線を示し、図３ｂは、ＣＢＤＣ化合物の構造−活性の関係を示す。
【図４−１】図４−１は、特定のＣＢＤＣ化合物の構造、化学名、およびＣＢＤＣコードを示す。
【図４−２】図４−２は、特定のＣＢＤＣ化合物の構造、化学名、およびＣＢＤＣコードを示す。
【図４−３】図４−３は、特定のＣＢＤＣ化合物の構造、化学名、およびＣＢＤＣコードを示す。
【図５】図５は、特定のＣＢＤＣ化合物の構造および相対活性を示す。
【図６】図６は、特定のＣＢＤＣ化合物によるＧ２チェックポイントの排除についてのＩＣ５０値を示す。
【図７】図７は、２４時間、アドリアマイシン（ＡＤＲ）、ブレオマイシン（Ｂｌｅｏ）、カンプトセシン（ｃｏｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ）（Ｃａｍｐｔｏ）およびシスプラチン（ＣＤＤＰ）で処置し、その後この細胞をＣＢＤＣ００４で処置しないか、または２μＭ、１０μＭもしくは５０μＭのＣＢＤＣ００４で処置した後の、ＨＣＴ１１６細胞のＤＮＡ含量のフローサイトメトリー分析の結果を示す。
【図８】図８は、ブレオマイシン（１０μｇ／ｍｌ）、アドリアマイシン（１μｇ／ｍｌ）、カンプトセシン（１μｇ／ｍｌ）またはシスプラチン（ＣＤＤＰ，１０μｇ／ｍｌ）で処置したＨＣＴ１１６細胞の細胞傷害性結果（％サブＧ１集団）のフローサイトメトリー分析の結果を示し、各処置レジメンにおいて、細胞は、ＣＢＤＣ００４で処置されていないか、または２μＭ、１０μＭまたは５０μＭのＣＢＤＣ００４で処置され；そしてサブＧ１集団は、Ｋｒｉｓｈａｎ溶液で細胞を染色することによって決定された。
【図９】図９は、ＣＰＴ−１１、ＣＢＤＣ４０２、またはＣＰＴ−１１とＣＢＤＣ４０２との組み合わせの腫瘍増殖に対する効果を示し、ここで、ヒト結腸癌細胞株ＨＣＴ１１６細胞は、ＳＣＩＤマウスに皮下移植され；各処置群の平均腫瘍サイズが、処置後の日数に対してプロットされた（ｎ＝４）。
【図１０】図１０ａ〜ｃは、ＣＢＤＣ４０２がＤＮＡ損傷誘発性細胞周期Ｇ２チェックポイントを特異的に排除することを示すフローサイトメトリー分析の結果を示す；図１０ａは、ＣＢＤＣ４０２がＧ２期の活性化された正常Ｔ細胞のブレオマイシン誘発性の増加を排除することを示し；図１０ｂは、ＣＢＤＣ４０２が、Ｇ２期の白血病性Ｔ細胞（Ｊｕｒｋａｔ細胞）の大きなブレオマイシン誘発性の増加を排除することを示し；図１０ｃは、ＣＢＤＣ４０２が、Ｍ期の活性化正常Ｔ細胞のコルヒチン誘発性の増加に影響を与えないことを示す。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
（発明の詳細な説明）
本発明は、細胞増殖性障害を処置するための組成物および方法を提供する。詳細には、本発明は、細胞周期Ｇ２チェックポイントを排除する化合物を提供し、この化合物は、細胞増殖性障害（例えば、癌に関連するもの）を処置するために使用され得る。本発明は、本発明の１つ以上の化合物を、適切なキャリアまたは賦形剤中に含む薬学的組成物を提供し、ここでこれらの組成物は、ＤＮＡ損傷剤のようなさらなる活性成分を含み得る。本発明は、本発明の化合物および本発明の化合物を含む薬学的組成物を使用するための方法を提供し、増殖中の細胞、特に、増殖性障害を有する細胞を抑制または殺傷する。本発明はさらに、ＤＮＡ損傷剤を含む他の薬剤または処置剤の影響に対して細胞を選択的に感作するために、本発明の化合物を使用するための方法を提供する。
【００１５】
（定義）
他に記載されない限り、本明細書中で使用される全ての技術用語および科学用語は、本発明が属する（登録商標）業者によって一般的に理解されている意味を有する。本明細書中で使用される場合、以下の用語は、特に明記されない限り、この用語に与えられた意味を有する。
【００１６】
用語「細胞周期Ｇ２チェックポイントを排除する」または「細胞周期Ｇ２チェックポイントを阻害する」または「細胞周期Ｇ２チェックポイントを崩壊する」または「Ｇ２チェックポイントの排除」、およびこの用語の任意の文法的等価物は、本発明の化合物が、Ｇ２チェックポイントにおける細胞周期を低下させる細胞の能力を排除する能力をいう。細胞周期Ｇ２チェックポイントの排除は、そうでなければＧ２細胞周期停止を引き起こす細胞における条件下、例えば、特定の抗腫瘍剤、Ｘ線照射、γ線照射、ＵＶ照射または温熱療法によるＤＮＡの損傷の蓄積の排除を含む。このような条件下におけるＧ２チェックポイントの排除は、「Ｇ２チェックポイントの排除」と考えられるが、より詳細には、「ＤＮＡ損傷誘発性Ｇ２チェックポイント」の排除と考えられ、ここで、このＤＮＡ損傷誘発性Ｇ２チェックポイントは、ＤＮＡ損傷の認識、および通常はＧ２細胞周期停止を生じるシグナルの生成を含むことが理解される。細胞周期Ｇ２チェックポイントが排除される細胞は、細胞がＧ２チェックポイントに留まる時間の減少を示し、この時間は、Ｇ２チェックポイント全ての非存在（Ｇ２チェックポイント停止）から、適切な条件下で、数分、数時間、数週間またはそれより長い持続時間の減少を有するＧ２チェックポイントまでの範囲であり得る。従って、本発明の化合物と接触される細胞は、この化合物の非存在下においてこの細胞が通常有する時間よりも短いＧ２チェックポイント時間を有する。例えば、Ｇ２チェックポイント時間の長さの減少は、特定の時間（例えば、４時間）Ｇ２にある細胞が、本発明の化合物と接触された場合、４時間未満（例えば、３．５、３、２．５、２、１またはそれより短い時間）Ｇ２にあることを意味する。用語「Ｇ２の排除」または「Ｇ２チェックポイントの排除」または「Ｇ２チェックポイント阻害活性」または任意の文法的等価物は、Ｇ２チェックポイントの任意の量の排除または阻害を意味する。
【００１７】
本明細書中で使用される場合、用語「アポトーシス」とは、当該分野で理解されているように、プログラム細胞死、および細胞生理学における関連の変化（核酸フラグメント化、カスパーゼ活性化、染色体凝縮などを含む）をいう。用語「有糸分裂の破壊」とは、有糸分裂プロセスにおける誤りから生じる細胞死を意味する。
【００１８】
本明細書中で使用される場合、用語「ＤＮＡ損傷処置」およぼい「ＤＮＡ損傷剤」とは、直接的または間接的にＤＮＡを損傷する任意の処置レジメンを意味する。ＤＮＡ損傷剤の特定の例としては、アルキル化剤、ニトロソウレア、抗代謝物質、植物アルカロイド、植物抽出物および放射性同位体が挙げられる。薬剤の特定の例としてはまた、ＤＮＡ損傷薬、例えば、５-フルオロウラシル（５−ＦＵ）、カペシタビン（ｃａｐｅｃｉｔａｂｉ
ｎｅ）、Ｓ−１（Ｔｅｇａｆｕｒ，５−クロロ−２，４−ジヒドロキシピリジンおよびオキソ酸（ｏｘｏｎｉｃ  ａｃｉｄ））、５−エチニルウラシル、アラビノシルシトシン（ａｒａ−Ｃ）、５−アザシチジン（５−ＡＣ）、２’，２’−ジフルオロ−２’−デオキシシチジン（ｄＦｄＣ）、プリン抗代謝物質（メルカプトプリン、アザチオプリン、チオグアニン）、ゲムシタビン塩酸塩（Ｇｅｍｚａｒ）、ペントスタチン、アロプリノール、２−フルオロ−アラビノシル−アデニン（２Ｆ−ａｒａ−Ａ）、ヒドロキシウレア、イオウマスタード（ビスクロロエチルスルフィド）、メクロレタミン（ｍｅｃｈｌｏｒｅｔｈａｍｉｎｅ）、メルファラン、クロラムブシル、シクロホスファミド、イフォスファミドチオテパ、ＡＺＱ、マイトマイシンＣ、ジアンヒドロガラクチトール（ｄｉａｎｈｙｄｒｏｇａｌａｃｔｉｔｏｌ）、ジブロモドシトール（ｄｉｂｒｏｍｏｄｕｃｉｔｏｌ）、アルキルスルホネート（ブスルファン）、ニトロソウレア（ＢＣＮＵ、ＣＣＮＵ、４−メチルＣＣＮＵまたはＡＣＮＵ）、プロカルバジン、デカルバジン、レベカマイシン、アントラサイクリン（例えば、ドキソルビシン（アドリアマイシン；ＡＤＲ）、ダウノルビシン（Ｃｅｒｕｂｉｃｉｎｅ）、イダルビシン（Ｉｄａｍｙｃｉｎ）、およびエピルビシン（Ｅｌｌｅｎｃｅ））、アントラサイクリンアナログ（例えば、ミトキサトロン）、アクチニマイシンＤ、非介在トポイソメラーゼインヒビター（例えば、エピポドフィロトキシン（エトポシド＝ＶＰ１６、テニポシド＝ＶＭ−２６））、ポドフィロトキシン、ブレオマイシン（Ｂｌｅｏ）、ペプレオマイシン（ｐｅｐｌｅｏｍｙｃｉｎ）、核酸含有白金誘導体との付加物を形成する化合物（例えば、シスプラチン（ＣＤＤＰ）、シスプラチンのトランスアナログ、カルボプラチン、イプロプラチン（ｉｐｒｏｐｌａｔｉｎ）、テトラプラチンおよびオキサリプラチン（ｏｘａｌｉｐｌａｔｉｎ））、ならびにカンプトテシン、トポテカン、イリノテカン（ＣＰＴ−１１）、およびＳＮ−３８が挙げられる。核酸損傷処置の特定の例としては、放射線（例えば、紫外線（ＵＶ）、赤外線（ＩＲ）、またはα線、β線もしくはγ線）、ならびに環境的ショック（例えば、温熱療法）が挙げられる。当業者は、他のＤＮＡ損傷剤および処置を同定し使用し得る。
【００１９】
用語「本発明の化合物」とは、本明細書中に開示される構造および活性を有する分子を意味することを意図する。本発明の化合物は、単離され得るか、純粋であり得るか、実質的に純粋であり得、あるいは他の化合物の混合物を含む組成物中に存在し得る。本発明の化合物を含む組成物の純度は、例えば、分析化学技術（例えば、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を使用して決定され得る。本明細書中で提供される組成物は、１つ以上の本発明の化合物を、適切なキャリア、賦形剤、さらなる活性成分（ＤＮＡ損傷剤を含む）などと混合して含み得る。
【００２０】
用語「薬学的組成物」とは、被験体における薬学的使用（例えば、抗癌剤として）に適切な組成物をいう。被験体は、細胞増殖性障害の処置を必要とするヒトであり得る。本発明の薬学的組成物は、薬理学的有効量の少なくとも１つの本発明の化合物および薬学的に受容可能なキャリアを含む処方物である。
【００２１】
本明細書中で使用される場合、用語「増殖性障害」および「増殖性状態」とは、少なくとも１つの細胞の異常または望まない増殖によって特徴付けられる任意の病理学的または非病理学的な生理学的状態を意味し、これには望まないかまたは不要な細胞増殖によって特徴付けられる状態、または不完全または異常または不完全なアポトーシスによって特徴付けられる細胞生存状態、ならびに異常または望まないまたは不要な細胞生存によって特徴付けられる状態が挙げられる。用語「分化障害］とは、異常または不完全な分化によって特徴付けられる任意の病理学的または非病理学的な生理学的状態を意味する。
【００２２】
用語「被験体」とは、動物、代表的には、哺乳動物、例えば、霊長類（ヒト、サル、テナガザル、チンパンジー、オランウータン、マカクザル）、ペット（イヌおよびネコ）、家畜（ウマ、ウシ、ヤギ、ヒツジ、ブタ）、および実験用動物（マウス、ラット、ウサギ、モルモット）をいう。被験体は、動物疾患モデル（例えば、腫瘍保有マウス）を含む。
【００２３】
本明細書で使用される場合、単数形態「ａ」、「ａｎｄ］、「ｔｈｅ」および「ｉｓ」は、特に言及しない限り、その複数形の概念をも含む。従って、例えば、「化合物」という言及は、複数の化合物を含み、そして「残基」または「アミノ酸」という言及は、１つ以上の残基およびアミノ酸を含む。
【００２４】
本明細書に引用される全ての刊行物、特許、および特許出願は、全て目的のために、参考として明確に援用される。
【００２５】
（Ｇ２チェックポイントの排除（ａｂｒｏｇａｔｉｏｎ））
本発明は、特定の作用機構に限定されないが、本発明の化合物が増殖細胞のＧ２チェックポイントを排除し得ることを観察している。Ｇ２細胞周期チェックポイントは、ＤＮＡ複製および修復が完了するまで有糸分裂の開始を制限し、Ｇ２チェックポイントの破壊は、ＤＮＡ複製および修復の完了前に、早まった有糸分裂を開始させる。この理論に束縛されることを望まないが、蓄積したＤＮＡ損傷を有する細胞において、本発明の化合物によるＧ２チェックポイントの排除は、Ｇ２チェックポイントでＤＮＡ損傷を正し、修復する機会を持たない細胞は、そのかわり、ＤＮＡ修復せずにＧ２を進み、それにより、有糸分裂の破壊、アポトーシスまたは細胞の抑制もしくは細胞死を生じる他の状態を誘導すると考えられる。
【００２６】
１つの局面に従って、本発明は、ＤＮＡ損傷により誘導されるＧ２細胞周期停止を排除するための方法を提供する。特に、Ｇ２チェックポイント、正常細胞、およびＤＮＡ損傷細胞において、細胞周期応答の有意な差異が存在する。損傷誘発性Ｇ２チェックポイント（ｄａｍａｇｅ−ｉｎｄｕｃｅｄ  Ｇ２  ｃｈｅｃｋｐｏｉｎｔ）は、ＤＮＡ損傷の認識および細胞周期停止を生じるシグナルの生成を含む。本発明は、ＤＮＡ損傷誘発性Ｇ２チェックポイントを選択的に排除する化合物を提供する。
【００２７】
別の局面において、本発明は、ＤＮＡ損傷剤および処置に対して細胞を感受性にする化合物ならびに薬学的組成物を提供する。本発明は、ＤＮＡ損傷剤および処置に対して細胞を感受性にするための方法を提供する。
【００２８】
別の局面に従って、本発明は、ＤＮＡ損傷を有する細胞を選択的に標的化する化合物および薬学的組成物を提供する。本発明は、さらに、細胞と、ＤＮＡ損傷誘発性Ｇ２チェックポイントを排除するのに十分な量の、本発明の少なくとも１つの化合物とを接触させることによって、ＤＮＡ損傷を有する細胞を選択的に標的化するための方法を提供する。１つの実施形態において、ＤＮＡ損傷が元から存在する細胞は、Ｇ２チェックポイントを排除する本発明の化合物で処置され、そしてＧ２期を通過したＤＮＡ損傷細胞は、細胞死または細胞の抑制（通常、有糸分裂の破壊またはアポトーシス）を生じる。別の実施形態において、細胞は、少なくとも１つのＤＮＡ損傷剤および少なくとも１つの本発明の化合物の組み合わせで処理され、ＤＮＡ損傷剤単独を用いて得られるよりも高い割合で細胞死または細胞の抑制を生じる。
【００２９】
別の局面において、本発明は、損傷したＧ１細胞周期チェックポイントを有する細胞を選択的に標的化する化合物および薬学的組成物を提供する。本発明は、損傷したＧ１細胞周期チェックポイントを有する細胞（特に癌細胞）を、これらの細胞と、Ｇ２細胞周期チェックポイントを排除するのに十分な量の本発明の少なくとも１つの化合物とを接触させることによって、選択的に標的化するための方法を提供する。この理論に限定されることを望まないが、損傷したＧ１細胞周期チェックポイント（ｉｍｐａｉｒｅｄ  Ｇ１  ｃｅｌｌ  ｃｙｃｌｅ  ｃｈｅｃｋｐｏｉｎｔ）を有する細胞は、Ｇ１前にＤＮＡ損傷を修復せず、本発明の化合物によるＧ２チェックポイントの排除は、これらの細胞が蓄積されたＤＮＡ損傷を修復することなしに有糸分裂を通過することを意味する。ＤＮＡ損傷後の有効なＧ２チェックポイントの欠如は、Ｇ１チェックポイントの欠陥を有する細胞を致命的にする。細胞がＤＮＡ損傷を十分に修復せずにＧ２を通過した場合、損傷は、有糸分裂の破壊またはアポトーシスを誘導する。
【００３０】
１つの局面に従って、本発明は、癌細胞を選択的に標的化し、癌細胞の殺傷または増殖を抑制する化合物を提供する。本発明はさらに、癌細胞（特に癌細胞）と、Ｇ２チェックポイントを排除するために十分な量の少なくとも１つの化合物とを接触させることによって、癌細胞を選択的に標的化し、癌細胞を殺傷または細胞の増殖を抑制するための方法を提供する。多くの癌細胞は、Ｇ１細胞周期停止チェックポイント（ｃｅｌｌ  ｃｙｃｌｅ
ａｒｒｅｓｔ  ｃｈｅｃｋｐｏｉｎｔ）に関連する遺伝子の変異（障害された腫瘍抑制遺伝子（例えば、ｐ５３、Ｒｂ、ｐ１６ＩＮＫ４、およびｐ１９ＡＲＦが挙げられる）、ならびに／または癌遺伝子（ｏｎｃｏｇｅｎｅ）（例えば、ＭＤＭ−２およびサイクリンＤ）の発現を引き起こす変異を有する。さらに、Ｇ１チェックポイントを無効にすること（ｏｖｅｒｒｉｄｅ）は、正常細胞の癌細胞への形質転換（増殖因子の過剰発現によって引き起こされる増殖因子の過剰なシグナル伝達のような）は、増殖因子レセプターまたは下流シグナル伝達分子がＧ１チェックポイントを無効にすることによって細胞の形質転換を引き起こす状態を導き得る。対照的に、いくつかの癌は、混乱したＧ２細胞周期停止チェックポイントを有する。従って、Ｇ２チェックポイントは、通常、損傷したＧ１チェックポイントを有する癌細胞において保持される。Ｇ２チェックポイントの選択的な混乱は、インタクトなＧ１チェックポイントを有する正常細胞に比べて、よＤＮＡ損傷剤に対してより感受性の、損傷したＧ１チェックポイントを有する癌細胞をつくる。なぜなら、このような損傷を修復することなくＧ１およびＧ２を進行させることは、アポトーシスまたは有糸分裂の破壊を誘導するからである。この理論に限定されることを望まないが、本発明の化合物は、癌細胞のＧ２チェックポイントを選択的に混乱（排除）し、それによって、損傷したＧ１チェックポイントを有する癌細胞を、ＤＮＡ損傷処置に対してより感受性にさせる。従って、本発明は、Ｇ１チェックポイントを障害した癌細胞を、ＤＮＡ損傷剤および処置に対して感受性にする化合物を提供する。
【００３１】
本発明の別の局面に従って、本発明の化合物は、正常細胞に対して細胞毒性効果を全く有さないか、またはほとんど有さずに、選択的に癌細胞を標的化し得る。この理論に限定されることを望まないが、本発明の化合物によってＧ２チェックポイントが排除される正常細胞は、Ｇ２チェックポイントを機能化することなくＧ２期に入り有糸分裂を行うという有害な結果を全く被らないか、またはほとんど被らず；対照的に、本発明の化合物によるＤＮＡ損傷細胞のＤＮＡ損傷Ｇ２チェックポイントの排除は、アポトーシスまたは有糸分裂の破壊を引き起こす重大な細胞毒性効果を有することが予測されることが提案される。従って、本発明は、ＤＮＡ損傷細胞（例えば、癌細胞）を、これらの細胞と、Ｇ２チェックポイントを排除するのに十分な量の本発明の少なくとも１つの化合物とを接触させることによって、正常（損傷していない）細胞に対して細胞毒性効果を全く有さないか、またはほとんど有さずに選択的に標的化するための方法を提供する。ＤＮＡ損傷細胞（例えば、癌細胞）を選択的に標的化するための方法における使用にとって適切な、正常（損傷していない）細胞に対して細胞毒性効果を全く有さないか、またはほとんど有さない、本発明の少なくとも１つの化合物を含む薬学的組成物が提供される。
【００３２】
本発明のなお別の局面に従って、本発明の化合物は、正常細胞に対して細胞毒性効果を全く有さないか、またはほとんど有さないＤＮＡ損傷剤の細胞殺傷効果に対して、細胞（特に癌細胞）を選択的に感受性にし得る。最も習慣的な抗癌剤は、細胞が癌細胞であるか、または正常細胞であるか否かとは関係なく、増殖細胞を標的にし、その結果、最も習慣的な抗癌薬剤は、悪心、下痢、または脱毛のような副作用を生じる。対照的に、本発明の化合物は、損傷したＧ１チェックポイントまたはＤＮＡ損傷の他の型を有する細胞を選択的に標的化し、それによって、正常細胞に対して細胞毒性効果を全く有さないか、またはほとんど有さない。
【００３３】
本発明は、細胞と、Ｇ２チェックポイントを排除するのに十分な量の本発明の少なくとも１つの化合物とを接触させることによって、アポトーシスと有糸分裂の破壊を誘導するための方法を提供する。本発明は、細胞と、Ｇ２チェックポイントを排除するのに十分な量の本発明の少なくとも１つの薬学的組成物とを接触させることによって、細胞のアポトーシスまたは有糸分裂の破壊を誘導するための方法を提供する。これらの細胞は、ＤＮＡ損傷を有する細胞（特に、癌細胞）であり得る。
【００３４】
本発明は、細胞と、ＤＮＡ損傷剤または処置剤およびＧ２チェックポイントを排除するのに十分な量の本発明の少なくとも１つの化合物とを接触させ、それにより、細胞をＤＮＡ損傷剤または処置に対して感受性にすることによって、細胞のアポトーシスまたは有糸分裂の破壊を誘導するための方法を提供する。これらの細胞は癌細胞であり得る。癌細胞は、損傷したＧ１細胞周期チェックポイントを有し得る。ＤＮＡ損傷剤または処置剤は、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、レベカマイシン（ｒｅｂｅｃｃａｍｙｃｉｎ）、アドリアマイシン、ブレイマイシン（ｂｌｅｏｍｃｉｎ）、シスプラチン、温熱療法、ＵＶ照射、γ線照射、または損傷を引き起こすのに十分な他のＤＮＡ損傷剤もしくは処置剤であり得る。
【００３５】
１つの局面に従って、本発明は、以下の工程によってＧ２チェックポイントを排除し得る化合物についてスクリーニングする方法を提供する：（ａ）試験化合物を提供する工程；（ｂ）細胞の集団を提供する工程；（ｃ）処理後、Ｇ２／Ｍ期細胞の蓄積を引き起こす因子を細胞の集団に投与する工程；（ｄ）Ｇ２／Ｍ期細胞の蓄積を引き起こす因子で処理した集団の一部分に、この試験化合物を投与する工程；（ｅ）この試験化合物で処理された集団におけるＧ２／Ｍ期の細胞数を測定する工程；（ｆ）Ｇ２／Ｍ期細胞の蓄積を引き起こす因子のみで処理された集団におけるＧ２／Ｍ期の細胞数を測定する工程；（ｆ）の数と（ｅ）の数とを比較して、この試験化合物がＧ２細胞周期チェックポイントを排除したか否かを決定する工程。この方法によると、Ｇ２／Ｍ期の細胞の蓄積は、Ｇ２細胞周期停止の指標して使用される。１つの実施形態において、この因子は、ＤＮＡ損傷を誘導し、この方法は、ＤＮＡ損傷誘発性Ｇ２チェックポイントを排除し得る化合物をスクリーニングのに有用である。別の実施形態において、ＤＮＡの量は、フローサイトメトリー（例えば、ヨウ化プロピジウムを用いてＤＮＡを染色して）、およびＦＡＣＳＴＭ分析、または等価物を使用して各細胞のＤＮＡ含有量を測定することによって、細胞周期の段階を決定する。１つの実施形態において、ＤＮＡの量は、接触工程の約１０〜約７２時間後に測定される。
【００３６】
本発明は、細胞に投与した場合、Ｇ２チェックポイント（特にＤＮＡ損傷誘発性Ｇ２チェックポイント）を排除し、そしてＤＮＡ損傷処置を伴ってか、または伴わずに、細胞を殺傷または抑制する化合物を提供し、この化合物は、以下の一般構造：
【００３７】
【化２３】
2010168398.tif 000024
【００３８】
を有し、ここで、いずれかまたは両方のベンゼンは、ピラジン、ピラミジン、ピペラジン、モルホリン、シクロヘキサン、ピペリジンもしくはピリジンで置換され得；Ｒ１は、ハロゲン（例えば、臭素（Ｂｒ）、塩素（Ｃｌ）、フッ素（Ｆ）、ヨウ素（Ｉ）、アミノ（ＮＨ２）、ニトロ（ＮＯ２）、ヒドロキシ（ＯＨ）Ｏ−メチル（ＯＣＨ３）メチル（ＣＨ３）もしくは水素（Ｈ）であり、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５および／またはＲ６は、臭素（Ｂｒ）、塩素（Ｃｌ）、フッ素（Ｆ）、ヨウ素（Ｉ）、アミノ（ＮＨ２）、ニトロ（ＮＯ２）、メチル（ＣＨ３）、Ｏ−メチル（ＯＣＨ３）、ヒドロキシ（ＯＨ）、ＣＨ（ＣＨ３）２、ＣＨＯ、ＣＨＯＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）ｎＣＨ３、ＯＣＯ（Ｃ６Ｈ１２）Ｃｌ、ＣＯＯＣＨ３もしくは水素であり；Ｘ１は、窒素（ＮＨ）、酸素（Ｏ）もしくは硫黄（Ｓ）であり；Ｘ２は、酸素（Ｏ）もしくは硫黄（Ｓ）である。例示的な実施形態は、図面、特に図３、４、５および６に見出されるが、本発明の化合物は、これらの実施形態に限定されない。
【００３９】
本発明は、細胞に投与された場合、Ｇ２チェックポイント（特に、ＤＮＡ損傷誘発性Ｇ２チェックポイント）を排除し、ＤＮＡ損傷処置伴うか、または伴わずに細胞を殺傷または抑制する化合物を提供し、この化合物は、以下の一般構造：
【００４０】
【化２４】
2010168398.tif 000025
【００４１】
を有し、ここで、いずれかまたは両方のベンゼンは、ピラジン、ピラミジン、ピペラジン、モルホリン、シクロヘキサン、ピペリジンもしくはピリジンで置換され得；Ｒ１は、臭素（Ｂｒ）、塩素（Ｃｌ）、フッ素（Ｆ）、ヨウ素（Ｉ）、アミノ（ＮＨ２）、ニトロ（ＮＯ２）、ヒドロキシ（ＯＨ）Ｏ−メチル（ＯＣＨ３）メチル（ＣＨ３）もしくは水素（Ｈ）であり、Ｒ２は、臭素（Ｂｒ）、塩素（Ｃｌ）、フッ素（Ｆ）、ヨウ素（Ｉ）、アミノ（ＮＨ２）、ニトロ（ＮＯ２）、メチル（ＣＨ３）、Ｏ−メチル（ＯＣＨ３）、ヒドロキシ（ＯＨ）、ＣＨ（ＣＨ３）２、ＣＨＯ、ＣＨＯＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）ｎＣＨ３、ＯＣＯ（Ｃ６Ｈ１２）Ｃｌ、ＣＯＯＣＨ３もしくは水素であり；Ｘ１は、窒素（ＮＨ）、酸素（Ｏ）もしくは硫黄（Ｓ）であり；Ｘ２は、酸素（Ｏ）もしくは硫黄（Ｓ）である。例示的な実施形態は、図面、特に図３、４、５および６に見出される。
【００４２】
本発明は、Ｇ２チェックポイントを排除し、そして／あるいは、ＤＮＡ損傷処置伴うか、または伴わずに細胞を抑制または殺傷する化合物を提供し、この化合物は、以下の一般構造：
【００４３】
【化２５】
2010168398.tif 000026
【００４４】
を有し、Ｒ１〜Ｒ６位での異なる分子の置換は、得られる化合物のＧ２チェックポイント排除活性に影響を与える。以下の構造−活性関係は決定されている。
【００４５】
Ｒ１において、臭素（Ｂｒ）は、塩素（Ｃｌ）、フッ素（Ｆ）またはメチル（ＣＨ３）よりも高い活性を提供する。
【００４６】
Ｒ２において、メチル（ＣＨ３）またはＯ−メチル（ＯＣＨ３）は、水酸化物（ＯＨ）、臭素（Ｂｒ）、塩素（ＣＩ）、ＣＨ（ＣＨ３）２、ＣＨＯ、ＣＨＯＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）ｎＣＨ３、ＯＣＯ（Ｃ６Ｈ１２）ＣまたはＣＯＯＣＨ３またはＨよりも高い活性を提供する。
【００４７】
Ｒ３において、メチル（ＣＨ３）は、ＨまたはＯ−メチル（ＯＣＨ３）よりも高い活性を提供する。
【００４８】
Ｒ４において、臭素（Ｂｒ）、フッ素（Ｆ）、塩素（Ｃｌ）、またはＨが使用され得る。
【００４９】
Ｒ５において、臭素（Ｂｒ）、フッ素（Ｆ）、塩素（Ｃｌ）、またはＨが使用され得る。
【００５０】
Ｒ６において、臭素（Ｂｒ）、フッ素（Ｆ）、塩素（Ｃｌ）、またはＨが使用され得る。
【００５１】
以下の列挙は、単に例示であり、網羅ではない。例示的な実施形態は、図３、４、５および６において見出される。当業者は、本開示の教示に従って、さらなる置換および活性の決定をなし得、本発明のさらなる化合物を得る。ＤＮＡ損傷誘発性Ｇ２チェックポイントの排除に関して、特定の置換基が他の置換基よりも高い活性を有する構造をつくることが観察されるものの、本発明は、全ての置換基および全レベルの活性を有する化合物を提供することは、当業者によって理解される。特定の実施形態について、当業者は、特定の標的に対する化合物の活性に加えて、実施形態において使用されるための本発明の化合物を選択する複数の要因を考慮する。当業者は、化合物の活性、アベイラビリティー、安定性、容易さ、または合成効率、薬学的組成物の処方についての適合性、薬物適合性（ｄｒｕｇａｂｉｌｉｔｙ）、インビボ、エキソビボ、もしくはインビトロでの他の化合物との相互作用、細胞殺傷能力、細胞の増殖抑制能力、正常細胞に対する影響、および他の活性を考慮する。
【００５２】
本発明は、Ｇ２チェックポイントを排除する化合物、特に、ＤＮＡ損傷誘発性細胞周期Ｇ２チェックポイントを選択的に排除する化合物を提供する。Ｇ１チェックポイント欠損細胞（例えば、癌細胞）において、ＤＮＡ損傷誘発性細胞周期Ｇ２チェックポイントを選択的に排除し、そしてＤＮＡ損傷薬剤で処理された細胞において、ＤＮＡ損傷誘発性Ｇ２チェックポイントを選択的に排除する化合物が提供される。本発明は、ＤＮＡ損傷処理に対して癌細胞を感作する化合物を提供する。異種移植片腫瘍増殖を、単独でかまたは抗癌剤との組み合わせで阻害する化合物が、さらに提供される。本発明は、癌細胞におけるインビトロでのコロニー形成を、単独でかまたは抗癌剤との組み合わせで抑制する化合物を提供する。特に、本発明は、ＤＮＡ損傷処理ありまたはなしで、Ｇ２チェックポイントを排除し、そして／または癌細胞を抑制もしくは殺傷する化合物を提供し、これらの化合物としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：
ＣＤＢＣ００４：  ４−クロロ−安息香酸４−メトキシ−フェニルエステル
ＣＢＤＣ４０１：  ４−クロロ−安息香酸ｐ−トリルエステル
ＣＢＤＣ４０２：  ４−ブロモ−安息香酸ｐ−トリルエステル
ＣＢＤＣ４０３：  ３，４，５−トリフルオロ−安息香酸ｐ−トリル１エステル
ＣＢＤＣ４０４：  ４−フルオロ−安息香酸４−ブロモ−フェニル１エステル；エタンとの配合物
ＣＢＤＣ４０５：  ３，４−ジクロロ−安息香酸ｐ−トリルエステル；エタンとの配合物ＣＢＤＣ４０６：  ２，４−ジクロロ−安息香酸ｐ−トリルエステル；エタンとの配合物ＣＢＤＣ４０７：  ４−フルオロ−安息香酸ｐ−トリルエステル；エタンとの配合物
ＣＢＤＣ４０８：  ２，３，４，５，６−ペンタフルオロ−安息香酸ｐ−トリルエステル；エタンとの配合物
ＣＢＤＣ４０９：  ４−クロロ−安息香酸３，４−ジメチル−フェニルエステル；エタンとの配合物
ＣＢＤＣ４１０：  ４−クロロ−安息香酸４−ヒドロキシ−フェニルエステル；エタンとの配合物
ＣＢＤＣ４１１：  ４−フルオロ−安息香酸４−ヒドロキシ−フェニルエステル；エタンとの配合物
ＣＢＤＣ４１２：  ４−ブロモ−安息香酸４−フルオロ−フェニルエステル
ＣＢＤＣ４１３：  ４−ブロモ−安息香酸４−トリフルオロメチル−フェニルエステル
ＣＢＤＣ４１４：  ４−ブロモ−安息香酸４−ヒドロキシ−フェニルエステル
ＣＢＤＣ４１５：  ４−ブロモ−安息香酸４−トリフルオロメトキシ−フェニルエステルＣＢＤＣ４１８：  ４−ブロモ−安息香酸６−メチル−ピリジン−３−イルエステル
ＣＢＤＣ４４０：  ４−ブロモ−チオ安息香酸Ｏ−ｐ−トリルエステル
ＣＢＤＣ４４１：  ４−ブロモ−ジチオ安息香酸ｐ−トリルエステル
ＣＢＤＣ４４２：  ４−ブロモ−チオ安息香酸Ｓ−ｐ−トリルエステル。
【００５３】
これらの化合物の構造は、本明細書中で、図３、４、５、および６、ならびに特許請求の範囲に提供されている。
【００５４】
本発明は、ＤＮＡ損傷誘発性細胞周期チェックポイントを選択的に排除する組成物を提供する。１つの実施形態において、化合物ＣＢＤＣ４０２は、以下で実施例１に記載されるように、Ｇ１チェックポイント欠損癌細胞において、ＤＮＡ損傷誘発性細胞周期Ｇ２チェックポイントを選択的に排除した。Ｊｕｒｋａｔ細胞（ヒトＴ細胞白血病由来の細胞株）の、ブレオマイシン（抗癌剤として使用されるＤＮＡ損傷薬剤）での処理は、Ｇ２／Ｍ期における細胞の蓄積を生じた。このことは、ブレオマイシン誘発性ＤＮＡ損傷に起因するＧ２細胞周期停止を示す。ＣＢＤＣ４０２は、用量依存性の様式で、Ｇ２／Ｍ期の細胞のブレオマイシン誘発性蓄積を排除した（図１）。コルヒチンは、Ｇ２細胞周期停止を誘発せず、そして別の実施形態において、ＣＢＤＣ４０２は、いずれのＣＢＤＣ４０２濃度においても、Ｇ２／Ｍ期の細胞におけるコルヒチン誘発性細胞蓄積を阻害しなかった（図２）。従って、ＣＢＤＣ４０２は、ＤＮＡ損傷誘発性細胞周期チェックポイントを、選択的に排除した。
【００５５】
本発明は、細胞に投与される場合にＤＮＡ損傷誘発性Ｇ２チェックポイントを排除する組成物を提供する。種々の実施形態において、化合物ＣＢＤＣ００４、ＣＢＤＣ４０２、ＣＢＤＣ４０３、ＣＢＤＣ４０４、ＣＢＤＣ４０５、ＣＢＤＣ４０６、ＣＢＤＣ４０７、ＣＢＤＣ４０８、ＣＢＤＣ４０９、ＣＢＤＣ４１０およびＣＢＤＣ４１１は、ブレオマイシン処理されたＪｕｒｋａｔ細胞におけるＧ２細胞周期チェックポイントを、用量依存性の様式で排除した（図３ａ）。種々のＣＢＤＣ化合物によるＧ２チェックポイントの排除についての用量−応答曲線は、ＣＢＤＣ４０２が、この実施形態において最も高い活性を示し、そして試験された全てのＣＢＤＣ化合物は、最も高い濃度（５０μｇ／ｍｌ）において、Ｇ２細胞周期チェックポイントを排除し得ることを示した。異なるレベルの活性に対応する構造が、図３ｂに示される；図３ｂに開示される構造に対応するＣＢＤＣの指定は、図４を参照することによって見出され得る。
【００５６】
この方法は、異なるＧ２チェックポイント排除活性を有する組成物を提供し、そしてさらに、これらの活性を決定するための方法を提供する。さらなる実施形態において、ＣＢＤＣ化合物は、それらのＧ２チェックポイント排除活性について試験された。ＣＢＤＣ化合物は、図５に示されるように、非常に活性；中程度に活性；活性；弱く活性；および不活性と順位付けられた。Ｊｕｒｋａｔ細胞におけるＧ２チェックポイント排除のＩＣ５０は、上記活性として実施される用量応答性の研究によって決定され、そして図６に示されるように、それらの活性に従って順位付けされた。図５および６において、ＣＢＤＣ化合物は、それらの化学構造の開示によって完全に開示されており、そしていくつかのエントリーにおいて、ＣＢＤＣ化合物は、ＣＢＤＣ指定番号によってさらに同定される。
【００５７】
本発明は、種々のＤＮＡ損傷薬剤によって誘発される、ＤＮＡ損傷誘発性Ｇ２チェックポイントを排除する組成物を提供する。１つの実施形態において、化合物ＣＢＤＣ００４は、種々の抗癌剤によって活性化されたＤＮＡ損傷誘発性Ｇ２チェックポイントを排除した。ヒト癌細胞（ＨＣＴ１１６ヒト結腸癌腫細胞）が、化合物ＣＢＤＣ００４ありまたはなしで、ブレオマイシン、アドリアマイシン、カンプトテシン、またはシスプラチン（ＣＤＤＰ）で処理された。これらの抗癌剤の各々が、細胞周期Ｇ２／Ｍにおける細胞の蓄積を誘発し、そしてＣＢＤＣ００４との同時インキュベーションは、Ｇ２／Ｍにおける細胞の数を減少させ、このことは、ＣＢＤＣ００４が、ブレオマイシン、アドリアマイシン、カンプトテシン、またはシスプラチンによって活性化された、ＤＮＡ損傷誘発性Ｇ２チェックポイントを排除したことを示した。
【００５８】
本発明は、ＤＮＡ損傷処理に対して細胞を感作させるための組成物および方法を提供する。なお別の実施形態において、ＣＢＤＣ００４は、ヒト細胞を、抗癌剤として使用される種々のＤＮＡ損傷処理の細胞傷害性効果に対して感作した。ヒト癌細胞（ＨＣＴ１１６細胞）が、ＣＢＤＣ００４ありまたはなしで、ブレオマイシン、アドリアマイシン、カンプトテシンまたはシスプラチンで処理され、そして死滅した細胞の数が、処理後に測定された。ＣＢＤＣ００４は、細胞を、各ＤＮＡ損傷処理の細胞傷害性効果に対して感作した（図８）。本発明の化合物を細胞に投与することにより、この細胞がＤＮＡ損傷処理に対して感作され、ＤＮＡ損傷処理をより効果的にする。
【００５９】
本発明は、異種移植片腫瘍の増殖を阻害するための組成物および方法を提供する。別の実施形態において、ＣＢＤＣ４０２は、異種移植片腫瘍の増殖を阻害した。ＨＣＴ−１１６ヒト結腸癌腫細胞が重症複合型免疫不全（ＳＣＩＤ）マウスに皮下移植された後に、種々の化合物が投与され、そして腫瘍増殖がモニタリングされた。ＣＢＤＣ４０２は、単独では、腫瘍増殖のわずかな減少を与え、そしてＣＢＤＣ４０２とＣＰＴ−１１（ＣＳＭＰＴＯＳＡＲ（登録商標）、イリノテカン（Ｉｒｉｎｏｔｅｃａｎ），トポイソメラーゼインヒビター）との組み合わせは、腫瘍増殖をわずかに減少させたか、または阻害した。
【００６０】
本発明は、増殖障害を有する細胞を処理するための組成物および方法を提供する。特に、本発明は、増殖障害を有する細胞の種々の局面を阻害するため（癌細胞によるインビトロでのコロニー形成の阻害を包含する）の化合物および方法を提供する。本発明の化合物は、癌細胞によるコロニー形成を、インビトロで、単独でかまたは抗癌剤との組み合わせで阻害した。１つの実施形態において、ヒト胃癌由来の細胞株由来のＭＫ−４５細胞（マルチウェルプレートに播種された）を、ＣＢＤＣ４０２、ＣＢＤＣ４１２、ＣＢＤＣ４１３、およびＣＢＤＣ４１８で処理した。ＣＢＤＣ４０２単独での処理は、ＭＫ−４５細胞によるコロニー形成の有意な抑制を引き起こし、そしてＣＢＤＣ４１２での処理は、コロニー形成のわずかな抑制を引き起こした。ＣＰＴ−１１もまた含む実施形態において、ＣＢＤＣ４０２の添加は、ＣＰＴ−１１の効果を増大させるようであり、コロニー形成のほとんど完全な抑制を生じた。
【００６１】
本発明は、Ｍチェックポイントに影響を与えずに、ＤＮＡ損傷誘発性Ｇ２チェックポイントを選択的に排除する組成物および方法を提供する。１つの実施形態において、ＣＢＤＣ４０２は、ＤＮＡ損傷誘発性Ｇ２チェックポイントを選択的に排除する。ブレオマイシンは、Ｇ２期にある活性化正常Ｔ細胞の蓄積の、中程度の増加を誘発し（図１０ａ）、そしてＪｕｒｋａｔ細胞（白血病Ｔ細胞）におけるＧ２期にある細胞の大きい蓄積を誘発した（図１０ｂ）。ＣＢＤＣは、両方の細胞株において、Ｇ２期にある細胞のバイオマイシン誘発性増加を廃止した（図１０ａ、ｂ）。受容された活性化正常Ｔ細胞が、コルヒチンで処理される場合、これは、Ｍ期の細胞の蓄積を引き起こし、そしてＣＢＤＣ４０２は、Ｍ期の活性化正常Ｔ細胞のコルヒチン誘発性増加に影響を与えなかった。この実施形態は、ＣＢＤＣ４０２が、Ｇ２細胞周期チェックポイントを選択的に排除し、そしてＭ期でないチェックポイントを排除しないことを実証する。
【００６２】
本発明は、本発明の化合物を合成するための方法を提供する。１つの実施形態において、ＣＢＤＣ４１２（４−ブロモ−安息香酸４−フルオロ−フェニルエステル）が、以下に記載されるように合成される。１つの実施形態において、１０ｍｌのジオキサン、５ｍｍｏｌ（１．１ｇ）の４−ブロモ−安息香酸塩素（４−ｂｒｏｍｏ−ｂｅｎｚｏｉｃ  ａｃｉｄ  ｃｈｌｏｒｉｎｅ）、および５ｍｍｏｌ（０．５６ｇ）の４−フルオロ−フェノールが、５０ｍｌの４つ口フラスコに連続的に添加され、そして室温で溶解された。ジオキサンに溶解したトリエチルアミンが、この溶液にゆっくりと滴下され、そしてこの溶液が、室温で３時間撹拌された。沈澱した結晶が濾過され、そしてベンゼンで抽出された。抽出された溶液が、炭酸水素ナトリウムで数回洗浄され、無水マグネシウムが添加され、そして得られた溶液が乾燥され、そして濾過された。この溶液が、低圧下で蒸留され、そして結晶化された。この原料結晶は、黄色がかった白色であり、１．３７ｇの重量であった。この結晶の一部（０．５ｇ）がベンゼンに溶解され、そして１００ｇのシリカゲルで精製された。この精製された生成物は白色であり、そしてその純度は、液体クロマトグラフィー（ＬＣ）によって、９９．９３％であると確認された。その構造は、ＮＭＲによって確認された（実施例６を参照のこと）。
【００６３】
（スクリーニング）
本発明は、Ｇ２チェックポイントを阻害または排除するための潜在的な治療化合物（「試験化合物」または「候補化合物」）をスクリーニングするための組成物および方法を提供する。スクリーニングのために使用され得るアッセイ形式は、周知である。結合アッセイについての異なる形式の一般的な記載については、例えば、ＢＡＳＩＣ  ＡＮＤ  ＣＬＩＮＩＣＡＬ  ＩＭＭＵＮＯＬＯＧＹ，第７版、ＳｔｉｌｅｓおよびＴｅｒｒ編（１９９１）；ＥＮＺＹＭＥ  ＩＭＭＵＮＯＡＳＳＡＹ，Ｍａｇｇｉｏ編，ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ，Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ，Ｆｌｏｒｉｄａ（１９８０）；ならびに「Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ａｎｄ  Ｔｈｅｏｒｙ  ｏｆ  Ｅｎｚｙｍｅ  Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙｓ」，Ｔｉｊｓｓｅｎ，ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ  ＴＥＣＨＮＩＱＵＥＳ  ＩＮ  ＢＩＯＣＨＥＭＩＳＴＲＹ  ＡＮＤ  ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ  ＢＩＯＬＯＧＹ，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｂ．Ｖ．Ａｍｓｔｅｒｄａｍ（１９８５）を参照のこと。
【００６４】
（標的）
処置のために適切な被験体としては、増殖障害または分化障害または（例えば、抗腫瘍治療）のための処置を現在受けている被験体、あるいはこの処置の候補である被験体が挙げられる。さらなる候補被験体としては、例えば、細胞増殖障害を発症する危険のある被験体が挙げられる。従って、本発明の方法は、細胞増殖障害を発症する危険にあるが、この障害の明白な症状をまだ示していない被験体を処置するために適用可能である。危険のある被験体は、細胞増殖障害を発症する遺伝的素因または家族歴を有するとして同定され得る。例えば、活性化癌遺伝子を有するかまたは腫瘍サプレッサ遺伝子の変異もしくは欠失を有する被験体は、候補被験体である。従って、危険のある被験体は、遺伝的病変の存在についての慣用的な遺伝的スクリーニング、または被験体がこの障害の危険にあることを確立する被験体の家族歴の調査を使用して、同定され得る。危険のある被験体の特定の例は、腫瘍性細胞または薬物耐性の腫瘍性細胞がＣＤ４０を発現する癌に対する素因を示す家族歴または他の遺伝的特徴を有する被験体である。遺伝的疾患の特定の例は、網膜芽細胞腫であり、これは、Ｒｂ腫瘍サプレッサ遺伝子の欠損によって引き起こされる。
【００６５】
代表的に、「有効量」または「十分な量」の本発明の化合物が投与され、ここで、この量は、所望の効果を生じるために十分な量である。従って、有効量は、増殖している細胞（例えば、標的細胞の少なくともいくらか）を含む細胞の少なくとも一部の、細胞増殖の減少、細胞の数の減少、増加した増殖の阻害、細胞の増加した数の阻害、アポトーシスの増加、または生存の減少のうちの１つ以上を測定することによって、決定される。従って、例えば、細胞増殖を阻害することが望ましい場合、有効量は、細胞増殖、または増殖する細胞の数を検出可能に減少させる量、あるいは細胞アポトーシスを増加させるかまたは細胞の生存を減少させる量である。従って、この量は、標的細胞の数を減少させるため、標的細胞の数を安定化させるため、または標的細胞の数の増加を阻害するために十分であり得る。例えば、障害が固形腫瘍を含む場合、腫瘍の少なくとも一部の腫瘍の大きさを減少させること、腫瘍の大きさを安定化させること、または腫瘍のさらなる増殖を予防すること（例えば、腫瘍塊を構成する細胞の５〜１０％、またはこれらの細胞の１０〜２０％以上の増殖を阻害すること）は、満足な臨床エンドポイントである。障害が液体腫瘍を含む場合、腫瘍細胞の少なくとも部分集団の腫瘍細胞の数を減少させること、腫瘍細胞の数を安定化させること、または腫瘍細胞の数のさらなる増加を阻害すること（例えば、細胞の５〜１０％、またはこれらの細胞の１０〜２０％以上の増殖を阻害すること）は、満足な臨床エンドポイントである。
【００６６】
さらに、有効であるとみなされる量は、状態または障害の進行を防止または阻害し得る。例えば、特定の腫瘍は、進行するにつれて、次第に攻撃的になり、転移性形態に進行することを包含する。従って、同様に有効であるとみなされる量は、腫瘍が次第に攻撃的になること、または転移することの、減少または防止を生じる。従って、障害または状態の悪化を阻害または予防すること、すなわち、状態を安定化することは、さらなる満足な臨床エンドポイントである。
【００６７】
液体腫瘍を含有する生物学的サンプル（例えば、血液または組織サンプル）の試験は、腫瘍細胞の質量または数が減少したか否か、あるいは腫瘍細胞増殖の阻害が起こったか否かを確立し得る。固形腫瘍については、侵襲性画像化方法および非侵襲性画像化方法が、腫瘍の大きさの減少、または腫瘍の大きさの増加の阻害を確認し得る。レセプター陽性腫瘍のレセプターの計数の減少を使用して、腫瘍細胞増殖の減少または阻害を評価し得る。ホルモン産生腫瘍（例えば、乳癌、精巣癌、または卵巣癌）のホルモンの量を使用して、腫瘍の増殖の減少または阻害を評価し得る。
【００６８】
有効量はまた、障害または状態に付随する症状の重篤度または頻度を、客観的にかまたは主観的に減少させ得る。例えば、疼痛、悪心または他の不快を減少させるか、あるいは欲求または主観的幸福を増加させる、本発明の化合物の量は、満足な臨床エンドポイントである。
【００６９】
有効量はまた、満足な臨床エンドポイントとみなされる別のプロトコルでの処置の量（例えば、投薬量）または頻度の減少を包含する。例えば、本発明の化合物で処置される癌患者は、癌細胞増殖を阻害するために、より少ない核酸損傷処置を必要とし得る。この例において、有効量は、この被験体が投与される核酸損傷薬剤の投薬頻度または投薬量を、本発明の化合物での処置なしで投与される投薬頻度または投薬量と比較して減少させる投薬量を含む。
【００７０】
被験体の状態の改善または治療的利点を導く、本発明の方法は、持続時間が比較的短くあり得、例えば、改善は、数時間、数日間、または数週間続き得るか、あるいはより長い期間（例えば、数ヶ月または数年間）にわたって延長され得る。有効量は、状態または障害の任意の症状または全ての症状の完全な切除である必要はない。従って、有効量についての満足な臨床エンドポイントは、上記基準のいずれか、または障害もしくは状態の状態を短期間または長期間にわたって決定するために適切な、当該分野において公知の他の基準を使用して決定されるような、被験体の状態の主観的改善または客観的改善が存在する場合に、達成される。本明細書中に記載されるような、または当業者に公知であるような、１つ以上の有利な効果を提供するために有効な量は、被検体の状態の「改善」または被験体に対する「治療的利点」と称される。
【００７１】
本発明の化合物の有効量は、動物研究に基づいて、または必要に応じて、ヒト臨床治験において、決定され得る。当業者は、特定の被験体を処置するために必要とされる用量およびタイミングに影響を与え得る、種々の要因を理解し、これらの要因としては、例えば、被験体の一般的健康状態、年齢、もしくは性別、障害または状態の重篤度または段階、以前の処置、所望でない副作用の受けやすさ、所望される臨床結果、および他の障害または状態の存在が挙げられる。このような要因は、治療的利点のために有効な量を提供するために必要とされる投薬量およびタイミングに影響を与え得る。投薬レジメンはまた、薬物速度論（すなわち、薬学的組成物の吸収速度、バイオアベイラビリティ、代謝、およびクリアランス）を考慮する。さらに、用量または処置プロトコルは、被験体に対して特にあつらえられ得るか、または薬物ゲノム学データに基づいて改変され得る。
【００７２】
本発明の化合物で処理され得る細胞としては、その増殖がインビトロ、エキソビボ、またはインビボで阻害または予防されることが望ましい、任意の細胞が挙げられる。特定の標的細胞は、正常な細胞周期Ｇ１チェックポイント時間より短い時間を示すか、または欠損した細胞周期Ｇ１チェックポイントを有し、その結果、この細胞は、核酸修復を完了するために十分な時間が経過する前に、Ｇ１チェックポイントを出る。候補細胞はまた、試験細胞を本発明の化合物に単独で、またはＤＮＡ損傷処理と組み合わせて接触させ、そして接触された細胞が、減少した増殖または増加した細胞死、特に、アポトーシスまたは有糸分裂カタストロフを示すか否かを決定することによって、同定され得る。
【００７３】
従って、本発明の化合物は、細胞増殖を、インビトロ、エキソビボおよびインビボで阻害するために有用である。従って、異常かもしくは望ましくないかもしくは所望でない細胞増殖もしくは細胞生存、または異常かもしくは欠損した細胞分化によって特徴付けられる、障害または生理学的状態を有するか、あるいはこれらの障害または生理学的状態を有する危険のある被験体が、本発明の化合物で、単独でかあるいはＤＮＡ損傷を直接的にかもしくは間接的に引き起こす処理と組み合わせて、または抗増殖処理と組み合わせて、処置され得る。
【００７４】
従って、本発明に従って、細胞増殖を阻害するための方法、ＤＮＡ損傷薬剤または処理に対する細胞の感受性を増加させるための方法、ならびに細胞に対する核酸損傷をインビトロ、エキソビボおよびインビボで増加させるための方法が、提供される。１つの実施形態において、方法は、細胞（例えば、培養された細胞または被験体中に存在する細胞）を、Ｇ２チェックポイントを排除するために十分な量の本発明の化合物と接触させる工程を包含する。別の実施形態において、方法は、細胞を、ＤＮＡ損傷薬剤または処理に対する細胞の感受性を増加させるために十分な量の本発明の化合物と接触させる工程を包含する。なお別の実施形態において、方法は、細胞を、この細胞の核酸損傷を増加させるために十分な量の本発明の化合物と接触させる工程を包含する。種々の局面において、方法は、細胞を、ＤＮＡ損傷薬剤と接触させる工程、または細胞を、ＤＮＡ損傷処理に曝露する工程をさらに包含する。
【００７５】
被験体における細胞増殖性障害または細胞分化性障害（所望でないもしくは不要な細胞増殖または細胞生存によって特徴付けられる状態、欠乏性アポトーシスまたは異常性アポトーシスによって特徴付けられる状態、異常性細胞生存または欠乏性細胞生存によって特徴付けられる状態、ならびに異常性細胞分化または欠乏性細胞分化によって特徴付けられる状態を含む）を処置する方法が、さらに提供される。１つの実施形態において、方法は、細胞増殖性障害を有するか、または細胞増殖性障害を有する危険性がある被験体に、その細胞増殖性障害を処置するのに有効な量の本発明の化合物を投与する工程を包含する。１つの局面において、この量は、被験体の状態を改善するのに十分である。特定の局面において、この改善は、標的細胞（例えば、異常に増殖している細胞）のうちの少なくとも一部分において、減少された細胞増殖、減少された細胞数、細胞数の増加の阻害、増加されたアポトーシス、または減少された生存を含む。なお別の局面において、本発明の化合物は、細胞増殖を阻害する処置を行う前に、同時に、または後に、被験体に投与される。さらなる特定の局面において、細胞増殖性障害の細胞のうちの少なくとも一部分は、血液、乳房、肺、甲状腺、頭部または頚部、脳、リンパ球、胃腸管、尿生殖路、腎臓、膵臓、肝臓、骨、筋肉、または皮膚に位置付けられる。
【００７６】
別の実施形態において、方法は、一定量の本発明の化合物を被験体に投与して、固形腫瘍を処置する工程を包含する。なお別の実施形態において、方法は、一定量の本発明の化合物を投与して、液状腫瘍を処置する工程を包含する。種々の局面において、腫瘍を有する被験体は、別の抗腫瘍治療の前に、同時に、または後に、本発明の化合物を投与される。
【００７７】
（増殖性障害または分化性障害を処置するための本発明の化合物の使用）
本明細書中で提供される組成物および方法を使用する処置に従う増殖性障害または分化性障害としては、異常であるかもしくは所望されない細胞数、細胞増殖または細胞生存によって特徴付けられる、良性および腫瘍性の両方の疾患および非病理学的な生理的状態が挙げられる。従って、このような障害または状態は、疾患状態を構成し得、かつすべての型の癌性増殖または発癌性プロセス、転移性組織または悪性転換細胞、悪性転換組織、または悪性転換器官を含み得るか、あるいは非病理学的（すなわち、正常からの逸脱であるが、代表的には疾患と関連付けられない）であり得る。本発明に従って処置され得る非病理学的な状態の特定の例は、瘢痕を生じる創傷修復からの組織再生である。
【００７８】
増殖性障害または分化性障害を含む細胞は、細胞塊中に凝集され得るか、または分散され得る。用語「固形腫瘍」は、代表的には一緒になって凝集して集団を形成する、新形成または転移を指す。特定の例としては、内臓腫瘍（例えば、胃癌または結腸癌、肝臓癌、静脈癌、肺および脳の腫瘍／癌）が挙げられる。「液状腫瘍」は、造血系の新形成（例えば、リンパ腫、骨髄腫および白血病）、または代表的には固体塊を形成しないような、自然に拡散する新形成を指す。白血病の特定の例としては、急性および慢性のリンパ芽球性白血病、骨髄芽球白血病および多発性骨髄腫が挙げられる。
【００７９】
このような障害としては、実質的に任意の細胞型または組織型（例えば、癌腫、肉腫、黒色腫、転移性障害または造血性新生物障害）に影響を及ぼし得る、新生物または癌が挙げられる。転移性腫瘍は、多数の原発性腫瘍型（乳房、肺、甲状腺、頭部および頚部、脳、リンパ球、胃腸（口、食道、胃、小腸、結腸、直腸）、尿生殖器路（子宮、卵巣、子宮頚部、精巣、陰茎、前立腺）、腎臓、膵臓、肝臓、骨、筋肉、皮膚などを含むが、これらに限定されない）から生じ得る。
【００８０】
癌腫とは、上皮組織または内分泌組織の悪性腫瘍を指し、そして呼吸器系癌腫、胃腸系癌腫、尿生殖器系癌腫、精巣癌腫、乳房癌腫、前立腺癌腫、内分泌系癌腫、および黒色腫が挙げられる。例示的な癌腫としては、子宮頚部、肺、前立腺、乳房、頭部および頚部、結腸、肝臓および卵巣から形成する癌腫が挙げられる。この用語はまた、癌肉腫（例えば、癌組織および肉腫組織から構成される悪性腫瘍を含む）を含む。腺癌としては、腺組織の癌腫、または癌腫中で腫瘍が腺様構造を形成する癌腫が挙げられる。
【００８１】
肉腫とは、間葉細胞起源の悪性腫瘍を指す。例示的な肉腫としては、例えば、リンパ肉腫、脂肪肉腫、骨肉種、および線維肉腫が挙げられる。
【００８２】
本明細書中で使用される場合、用語「造血性増殖性障害」とは、造血性起源（例えば、骨髄系統、リンパ系統または赤血球系統、あるいはそれらの前駆細胞から生じる）の増殖性／新生物性細胞に関わる疾患を意味する。代表的には、この疾患は、未分化型急性白血病（例えば、赤芽球性白血病および急性巨核芽球性白血病）から生じる。さらなる例示的な骨髄性疾患としては、急性前骨髄球性白血病（ＡＰＭＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、および慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）が挙げられるが、これらに限定されない；リンパ悪性腫瘍としては、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）（Ｂ系統ＡＬＬおよびＴ系統ＡＬＬが挙げられる）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、前リンパ球性白血病（ＰＬＬ）、毛様細胞性白血病（ＨＬＬ）およびヴァルデンストレームマクログロブリン血症（ＷＭ）が挙げられるが、これらに限定されない。さらなる悪性のリンパ腫としては、非ホジキンリンパ腫およびその変種、末梢Ｔ細胞リンパ腫、成体Ｔ細胞白血病／リンパ腫（ＡＴＬ）、皮膚Ｔ細胞リンパ腫（ＣＴＣＬ）、大顆粒リンパ性白血病（ＬＧＦ）、ホジキン病およびリード−スターンバーグ疾患が挙げられるが、これらに限定されない。
【００８３】
本発明の化合物と組み合わせての使用のための処置としては、本明細書中で開示されるかまたは当該分野で公知のような任意の抗増殖性処置、ＤＮＡ損傷処置、または抗腫瘍処置が挙げられる。例えば、抗細胞増殖性処置または抗腫瘍処置は、必要に応じて薬物処置と組み合わせる放射線処置または外科的切除を含み得る。この処置は、化学物質（例えば、放射性同位元素、薬物（例えば、化学療法剤）、または遺伝子治療（例えば、抗癌遺伝子（例えば、Ｒｂ、ＤＣＣ、ｐ５３など）、ドミナントネガティブな癌遺伝子または癌遺伝子のアンチセンス）の投与を含み得る。この化合物は、他の処置プロトコルの前に、同時にまたは後に、投与され得る。例えば、抗細胞増殖性治療（例えば、放射線治療、化学療法、遺伝子治療、外科的切除など）についての候補被験体は、抗細胞増殖性治療を開始する前に本発明の化合物を投与され得る。従って、予防的処置法が提供される。
【００８４】
（コンビナトリアル化学ライブラリー）
コンビナトリアル化学ライブラリーは、新しい化合物リード（すなわち、Ｇ２細胞周期停止チェックポイントを阻害または抑止する化合物）の産生を補助するための１つの手段である。コンビナトリアル化学ライブラリーは、試薬のような多数の化学的「基礎単位」を組み合わせることによる化学合成または生合成のいずれかによって生成される、多様な化合物の収集物である。例えば、直鎖状のコンビナトリアル化学ライブラリー（例えば、ポリペプチドライブラリー）は、所定の化合物の長さ（すなわち、ポリペプチド化合物中のアミノ酸の数）のために可能なあらゆる方法で、アミノ酸と称される化学的基礎単位のセットを組み合わせることによって形成される。何百万もの化合物が、このような化学的基礎単位の組み合わせ混合を介して合成され得る。例えば、１００個の互換性のある化学的基礎単位の系統的な組み合わせ混合は、結果として１億個の四量体化合物または１００億個の五量体化合物の理論的合成物をもたらす。コンビナトリアル化学ライブラリーの調製およびスクリーニングは、当業者に周知である（例えば、米国特許第６，００４，６１７号、同第５，９８５，３５６号を参照のこと）。このようなコンビナトリアル化学ライブラリーとしては、ペプチドライブラリー（例えば、米国特許第５，０１０，１７５号；Ｆｕｒｋａ（１９９１）Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｅｐｔ．Ｐｒｏｔ．Ｒｅｓ．、３７：４８７−４９３、Ｈｏｕｇｈｔｏｎら（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ、３５４：８４−８８、を参照のこと）が挙げられるが、これらに限定されない。化学的多様性ライブラリーを生成するための他の化学としては、ペプトイド（例えば、ＷＯ  ９１／１９７３５を参照のこと）、コード化ペプチド（例えば、ＷＯ  ９３／２０２４２を参照のこと）、ランダムバイオオリゴマー（例えば、ＷＯ  ９２／０００９１を参照のこと）、ベンゾジアゼピン（例えば、米国特許第５，２８８，５１４号を参照のこと）、ダイバーソマー（ｄｉｖｅｒｓｏｍｅｒ）（例えば、ヒダントイン、ベンゾジアゼピンおよびジペプチド）（例えば、Ｈｏｂｂｓ（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：６９０９  ６９１３、を参照のこと）、ビニル性（ｖｉｎｙｌｏｇｏｕｓ）ポリペプチド（例えば、Ｈａｇｉｈａｒａ（１９９２）Ｊ．Ａｍｅｒ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１１４：６５６８、を参照のこと）、β  Ｄグルコース骨格を有する非ペプチド性ペプチド模倣物（例えば、Ｈｉｒｓｃｈｍａｎｎ（１９９２）Ｊ．Ａｍｅｒ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１１４：９２１７  ９２１８、を参照のこと）、小化合物ライブラリーの類似の有機合成（例えば、Ｃｈｅｎ（１９９４）Ｊ．Ａｍｅｒ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１１６：２６６１、を参照のこと）、オリゴカルバメート（例えば、Ｃｈｏ（１９９３）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２６１：１３０３、を参照のこと）、および／またはペプチジルホスホネート（例えば、Ｃａｍｐｂｅｌｌ（１９９４）Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．５９：６５８、を参照のこと）が挙げられるが、これらに限定されない。また、Ｇｏｒｄｏｎ（１９９４）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３７：１３８５、を参照のこと；核酸ライブラリー、ペプチド核酸ライブラリーについて、例えば、米国特許第５，５３９，０８３号を参照のこと；抗体ライブラリーについて、例えば、Ｖａｕｇｈｎ（１９９６）Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １４：３０９−３１４、を参照のこと；糖質ライブラリーについて、例えば、Ｌｉａｎｇら（１９９６）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２７４：１５２０−１５２２、米国特許第５，５９３，８５３号を参照のこと；有機低分子ライブラリーについて、例えば、イソプレノイドについて米国特許第５，５６９，５８８号を；チアゾリジノン（ｔｈｉａｚｏｌｉｄｉｎｏｎｅ）およびメタチアザノン（ｍｅｔａｔｈｉａｚａｎｏｎｅ）について米国特許第５，５４９，９７４号を；ピロリジンについて米国特許第５，５２５，７３５号および同第５，５１９，１３４号を；モルホリン化合物について米国特許第５，５０６，３３７号を；ベンゾジアゼピンについて米国特許第５，２８８，５１４号を参照のこと。
【００８５】
コンビナトリアルライブラリーの調製のためのデバイスは、市販される（例えば、米国特許第６，０４５，７５５号；同第５，７９２，４３１号；３５７  ＭＰＳ，３９０  ＭＰＳ，Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｃｈｅｍ  Ｔｅｃｈ，Ｌｏｕｉｓｖｉｌｌｅ  ＫＹ，Ｓｙｍｐｈｏｎｙ，Ｒａｉｎｉｎ，Ｗｏｂｕｒｎ，ＭＡ，４３３Ａ  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ，ＣＡ，９０５０  Ｐｌｕｓ，Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ，Ｂｅｄｆｏｒｄ，ＭＡを参照のこと）。多数のロボットシステムがまた、液相化学について開発されている。これらのシステムは、自動化ワークステーション（例えば、Ｔａｋｅｄａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ，ＬＴＤ．（Ｏｓａｋａ，Ｊａｐａｎ）によって開発された同様の自動化合成装置および科学者によって実施されるマニュアル合成オペレーションを模倣する、ロボットアームを利用する多くのロボットシステム（Ｚｙｍａｔｅ  ＩＩ，Ｚｙｍａｒｋ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｈｏｐｋｉｎｔｏｎ，Ｍａｓｓ．；Ｏｒｃａ，Ｈｅｗｌｅｔｔ  Ｐａｃｋａｒｄ，Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ，Ｃａｌｉｆ．）が挙げられる。上記のデバイスのうちのいずれもが、本発明での使用に適切である。本明細書中に議論される通りにこれらが作動し得るこれらのデバイスへの改変（ある場合）の性質および実行は、関連分野の当業者に明らかである。さらに、多数のコンビナトリアルライブラリーは、それ自体が市販される（例えばＣｏｍＧｅｎｅｘ，Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ，Ｎ．Ｊ．，Ａｓｉｎｅｘ，Ｍｏｓｃｏｗ，Ｒｕ，Ｔｒｉｐｏｓ，Ｉｎｃ．，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ，ＣｈｅｍＳｔａｒ，Ｌｔｄ，Ｍｏｓｃｏｗ，ＲＵ，３Ｄ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｅｘｔｏｎ，ＰＡ，Ｍａｒｔｅｋ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｃｏｌｕｍｂｉａ，ＭＤなどを参照のこと）。
【００８６】
（薬学的組成物の処方および投与）
１つの実施形態では、本発明の化合物は、薬学的に受容可能なキャリア（賦形剤）と合わされて、薬理学的組成物が形成される。薬学的に受容可能なキャリアは、例えば、本発明の薬学的組成物を安定化するか、または本発明の薬学的組成物の吸収速度もしくはクリアランス速度を増加もしくは減少させるように作用する、生理学的に受容可能な化合物を含み得る。生理学的に受容可能な化合物としては、例えば、糖質（例えば、グルコース、スクロース、またはデキストラン）、抗酸化剤（例えば、アスコルビン酸またはグルタチオン）、キレート剤、低分子量タンパク質、この化合物のクリアランスまたは加水分解を減少させる組成物、あるいは賦形剤または他の安定剤および／もしくは緩衝剤が挙げられ得る。界面活性剤をまた用いて、この薬学的組成物（リポソームキャリアが挙げられる）を安定化し得るか、またはこの薬学的組成物の吸収を増加もしくは減少させ得る。本明細書中に開示される通りの化合物についての薬学的に受容可能なキャリアおよび処方物は、当業者に公知であり、そして科学文献および特許文献（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ
Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ（「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ」）の最新版を参照のこと）に詳細に記載されている。
【００８７】
他の生理学的に受容可能な化合物としては、湿潤剤、乳化剤、分散剤または保存剤（これは、微生物の増殖または作用を防止するために特に有用である）が挙げられる。種々の保存剤は周知であり、そして例えば、フェノールおよびアスコルビン酸が挙げられる。当業者は、薬学的に受容可能なキャリア（生理学的に受容可能な化合物が挙げられる）の選択が、例えば、本発明の化合物の投与経路およびその特定の物理化学的特徴に依存することを認識する。
【００８８】
１つの実施形態では、本発明の少なくとも１つの化合物の溶液は、薬学的に受容可能なキャリア（例えば、この組成物が水溶性である場合、水性キャリア）中に溶解される。腸での薬物送達、非経口薬物送達または経粘膜薬物送達のための処方物中で用いられ得る水溶液の例としては、例えば、水、生理食塩水、リン酸緩衝化生理食塩水、ハンクス溶液、リンゲル溶液、デキストロース／生理食塩水、グルコース溶液などが挙げられる。これらの処方物は、生理学的条件に近似させるために必要とされる場合、薬学的に受容可能な補助物質（例えば、緩衝化剤、張度調整剤（ｔｏｎｉｃｉｔｙ  ａｄｊｕｓｔｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）、湿潤剤、界面活性剤など）を含み得る。添加物はまた、さらなる活性成分（例えば、殺細菌剤または安定剤）を含み得る。例えば、この溶液は、酢酸ナトリウム、乳酸ナトリウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、ソルビタンモノラウレートまたはトリエタノールアミンオレエートを含み得る。これらの組成物は、従来の周知の滅菌技術によって滅菌されてもよく、または濾過滅菌されてもよい。得られる水溶液は、そのままでの使用のために包装されてもよく、または凍結乾燥されてもよく、凍結乾燥調製物は、投与前に無菌水溶液と合わされる。これらの処方物中のペプチド濃度は、広範囲に変動し得、そして流体の体積、粘度、体重など主に基づいて、選択された特定の投与形態および患者の要求に従って、選択される。
【００８９】
固体処方物は、腸（経口）投与のために用いられ得る。これらは、例えば、丸剤、錠剤、散剤またはカプセル剤として処方され得る。固体組成物に関しては、従来の無毒性固体キャリア（例えば、薬学的グレードのマンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、タルカム、セルロース、グルコース、スクロース、炭酸マグネシウムなどが挙げられる）が用いられ得る。経口投与について、薬学的に受容可能な無毒性組成物は、通常用いられる賦形剤（例えば、上記に列挙されたキャリア）のいずれかおよび一般に１０％〜９５％の活性成分（例えば、ペプチド）を取り込むことにより、形成される。非固体処方物はまた、腸投与のために用いられ得る。このキャリアは、石油起源、動物起源、植物起源もしくは合成起源の油（例えば、落花生油、大豆油、鉱油、ゴマ油など）を含む種々の油から選択され得る。適切な薬学的賦形剤としては、例えば、デンプン、セルロース、滑石、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、麦芽、イネ、粉、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸ナトリウム、モノステアリン酸グリセロール、塩化ナトリウム、脱脂粉乳、グリセロール、プロピレングリコール、水、エタノールが挙げられる。
【００９０】
本発明の化合物は、経口投与される場合、消化から保護され得る。これは、この化合物を酸加水分解および酵素的加水分解に対して耐性にする構成物（ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ）を、この化合物と化合させること、または適切に耐性なキャリア（例えば、リポソーム）中でペプチドもしくは複合体でパッケージングすることのいずれかによって達成され得る。化合物を消化から保護する手段は、当該分野で周知である（例えば、治療剤の経口送達用の脂質組成物を記載するＦｉｘ（１９９６）Ｐｈａｒｍ  Ｒｅｓ．１３：１７６０  １７６４；Ｓａｍａｎｅｎ（１９９６）Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．４８：１１９  １３５；米国特許５，３９１，３７７を参照のこと（リポソーム送達は、以下でさらに詳細に考察される）。
【００９１】
全身投与はまた、経粘膜手段または経皮手段によってであり得る。経粘膜投与または経皮投与については、透過障害に対して適切な透過剤がその組成物中で用いられ得る。このような透過剤は、当該分野で一般に知られており、そして例えば、経粘膜投与については、胆汁酸塩およびフシジン酸誘導体が挙げられる。さらに、界面活性剤はまた、透過を促進するために用いられ得る。経粘膜投与は、鼻腔スプレーによって、または坐剤を用いてであり得る。例えば、Ｓａｙａｎｉ（１９９６）「Ｓｙｓｔｅｍｉｃ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ
ｏｆ  ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ａｃｒｏｓｓ  ａｂｓｏｒｐｔｉｖｅ  ｍｕｃｏｓａｅ」、Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｔｈｅｒ．Ｄｒｕｇ  Ｃａｒｒｉｅｒ  Ｓｙｓｔ．１３：８５  １８４を参照のこと。局所の経皮投与については、これらの薬剤は、軟膏剤（ｏｉｎｔｍｅｎｔ）、クリーム剤、軟膏（ｓａｌｖｅ）、散剤およびゲル剤に処方される。経皮送達システムとしてはまた、例えば、パッチが挙げられる。
【００９２】
本発明の化合物はまた、処方物を内部に送達し得る、持続送達または徐放機構において投与され得る。例えば、本明細書中に開示された通りの化合物の持続送達が可能な、生分解性マイクロスフェアもしくは生分解性カプセルまたは他の生分解性ポリマー構成物は、本発明の処方物に含まれ得る（例えば、Ｐｕｔｎｅｙ（１９９８）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１６：１５３  １５７を参照のこと）。
【００９３】
吸入については、本発明の化合物は、乾燥粉末エアロゾル、液体送達システム、エアジェットネブライザ、プロペラントシステムなどを含め、当該分野で公知の任意のシステムを用いて送達され得る。例えば、この薬学的処方物は、エアロゾルまたはミストの形態で投与され得る。エアロゾル投与については、この処方物は、細かく分割された形態で、界面活性剤およびプロペラントとともに供給され得る。別の実施形態では、この処方物を呼吸器組織へと送達するためのデバイスは、その中で処方物が気化される吸入器である。他の液体送達システムとしては、例えば、エアジェットネブライザが挙げられる。
【００９４】
本発明の薬剤を調製する際に、種々の処方改変が、薬物動態および生体分布を改変するために用いられ得、そして操作され得る。薬物動態および生体分布を改変するための多数の方法は、当業者に公知である。このような方法の例としては、物質（例えば、タンパク質、脂質（例えば、リポソーム、以下を参照のこと）、糖質または合成ポリマー（以下で考察される））から構成されるビヒクル中での複合体の保護が挙げられる。薬物動態の一般的な考察については、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓの第３７章〜第３９章を参照のこと。
【００９５】
本発明の方法において用いられる化合物および組成物は、単独で、または薬学的組成物として、当該分野で公知の任意の手段によって（例えば、全身的に、局部的に（ｒｅｇｉｏｎａｌ）または局所的に（ｌｏｃａｌ）（例えば、腫瘍に対して直接的にまたは向けられて）；動脈内投与、髄腔内（ＩＴ）投与、静脈内（ＩＶ）投与、非経口投与、胸膜腔内投与、表面（ｔｏｐｉｃａｌ）投与、経口投与または局所投与によって、皮下、気管内（例えば、エアロゾルによる）または経粘膜（例えば、頬粘膜、膀胱粘膜、膣粘膜、子宮粘膜、直腸粘膜、鼻腔粘膜）として）送達され得る。投与可能な組成物を調製するための実際の方法は、当業者に公知または明らかであり、そして科学文献および特許文献に詳細に記載されている。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓを参照のこと。例えば、特定の器官に焦点を合わせるための、「局部的効果」について、１つの投与形態としては、例えば、特定の器官（例えば、脳および中枢神経系）に焦点を合わせるための動脈内注射または髄腔内（ＩＴ）注射が挙げられる（例えば、Ｇｕｒｕｎ（１９９７）Ａｎｅｓｔｈ  Ａｎａｌｇ．８５：３１７  ３２３を参照のこと）。例えば、本発明のペプチド複合体またはポリペプチド複合体を脳に直接的に送達することが所望される場合、頸静脈内注射が好ましい。高い全身投薬量が必要とされる場合、非経口投与が好ましい送達経路である。非経口的に投与可能な組成物を調製するための実際の方法は、当業者に公知であるかまたは明らかであり、そして例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓに詳細に記載される。Ｂａｉ（１９９７）Ｊ．Ｎｅｕｒｏｉｍｍｕｎｏｌ．８０：６５  ７５；Ｗａｒｒｅｎ（１９９７）Ｊ．Ｎｅｕｒｏｌ．Ｓｃｉ．１５２：３１  ３８；Ｔｏｎｅｇａｗａ（１９９７）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８６  ：５０７  ５１５もまた参照のこと。
【００９６】
１つの実施形態において、本発明の化合物を含む薬学的処方物は、脂質単層または脂質二重層（例えば、リポソーム）中に組み込まれる。例えば、米国特許第６，１１０，４９０号；同第６，０９６，７１６号；同第５，２８３，１８５号；同第５，２７９，８３３号を参照のこと。リポソーム処方物は、任意の手段（静脈内投与、経皮投与（例えば、Ｖｕｔｌａ（１９９６）Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．８５：５  ８を参照のこと）、経粘膜投与、または経口投与が挙げられる）によってであり得る。本発明はまた、本発明のペプチドおよび／または複合体がミセルおよび／またはリポソーム内に組み込まれた、薬学的調製物を提供する（例えば、Ｓｕｎｔｒｅｓ（１９９４）Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．４６：２３  ２８；Ｗｏｏｄｌｅ（１９９２）Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．９：２６０  ２６５を参照のこと）。リポソームおよびリポソーム処方物は、標準的方法に従って調製され得、そしてそれらはまた、当該分野で周知である。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ；Ａｋｉｍａｒｕ（１９９５）Ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ  Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．１：１９７  ２１０；Ａｌｖｉｎｇ（１９９５）Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．１４５：５  ３１；Ｓｚｏｋａ（１９８０）Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｂｉｏｅｎｇ．９：４６７、米国特許第４，２３５，８７１号、同第４，５０１，７２８号および同第４，８３７，０２８号を参照のこと。
【００９７】
薬学的に受容可能な処方物は、約１％〜９９．９％の活性成分（例えば、本発明の化合物）を組込み得る。この薬学的組成物は、従来の周知の滅菌技術によって滅菌されても、または滅菌濾過されてもよい。さらなる薬学的処方物および送達系が、当該分野で公知であり、そして本発明の方法および組成物において適用可能である（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（１９９０）第１８版、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  ＣＯ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ；Ｔｈｅ  Ｍｅｒｃｋ  Ｉｎｄｅｘ（１９９６）第１２版、Ｍｅｒｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｇｒｏｕｐ，Ｗｈｉｔｅｈｏｕｓｅ，ＮＪ；Ｐｈａｒｍａｃｅｔｕｔｉｃａｌ  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｓｏｌｉｄ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ，Ｔｅｃｈｎｏｎｉｃ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，Ｉｎｃ．，Ｌａｎｃａｓｔｅｒ，ＰＡ，（１９９３）；およびＰｏｚｎａｎｓｋｙら、Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｒ．Ｌ．Ｊｕｌｉａｎｏ編、Ｏｘｆｏｒｄ，Ｎ．Ｙ．（１９８０），ｐｐ．２５３〜３１５を参照のこと）。
【００９８】
この薬学的処方物は、投与の容易さおよび投薬量の均一性のために、単位投与形態でパッケージされ得る。「単位投与形態」とは、本明細書中で使用される場合、処置されるべき被験体に投与するための、物理的に別個の単位投与量を指し、各単位は、薬学的キャリアもしくは賦形剤と組み合わせて望ましい効果を生成する所定量の化合物を含む。
【００９９】
本発明はさらに、本発明の化合物およびその薬学的処方物を、必要に応じて適切なパッケージング材料中にパッケージして含む、キットを提供する。キットは、代表的には、そのキット中の成分のインビトロ、インビボもしくはエキソビボでの使用のためのその成分の説明または指示を含む、標識またはパッケージ挿入物を含む。キットは、そのような成分（例えば、２つ以上の本発明の化合物、または核酸損傷剤もしくは抗増殖剤と組み合わせた本発明の化合物）の集合物を含み得る。
【０１００】
用語「パッケージ材料」とは、そのキットの成分を収容する物理的構造をさす。このパッケージ材料は、その成分を滅菌して維持し得、そしてそれは、そのような目的のために一般的に使用される材料（例えば、紙、ダンボール、ガラス、プラスチック、ホイル、アンプルなど）から製造され得る。その標識またはパッケージ挿入物は、適切な文書の指示を含み得る。従って、本発明のキットは、さらに、本発明の任意の方法においてキット成分を使用するための標識または指示を含み得る。指示は、本明細書中に記載された本発明の方法（処置方法、検出方法、モニタリング方法、または診断法を含む）のいずれかを実施するための指示を包含し得る。従って、例えば、キットは、本発明の処置方法において本発明の化合物を投与するための指示とともに、パック中または供給器中に本発明の化合物を含み得る。指示は、満足すべき臨床指標もしくは生じ得るあらゆる有害な症状の表示、または監督官庁（例えば、食品医薬品局）によりヒト被験体における使用のために必要とされるさらなる情報を、さらに含み得る。
【０１０１】
この指示は、「印刷物」上（例えば、そのキット中にあるかもしくは添付された紙もしくは厚紙上、またはそのキットもしくはパッケージ材料に添付された標識上、またはそのキットの成分を含むバイアルもしくはチューブに取り付けられた標識上）であり得る。指示は、コンピュータ読出し可能媒体（例えば、ディスク（フレキシブルディスクもしくはハードディスク）、光学ＣＤ（例えば、ＣＤ−ＲＯＭ／ＲＡＭもしくはＤＶＤ−ＲＯＭ／ＲＡＭ）、磁気テープ、電子記憶媒体（例えば、ＲＡＭおよびＲＯＭ）、ＩＣチップ、ならびにこれらの混合物（例えば、磁気／光学記憶媒体））上にさらに含まれ得る。
【０１０２】
本発明のキットは、緩衝剤または保存剤または安定化剤を、薬学的処方物中にさらに含み得る。このキットの各成分は、個々の容器内に収納され得、それらの種々の容器すべては、単一パッケージ中に存在し得る。本発明のキットは、低温保存のために設計され得る。
【０１０３】
（処置レジメン：薬物速度論）
この薬学的組成物は、投与方法に依存して、種々の単位投与形態で投与され得る。代表的な薬学的組成物についての投与量は、当業者にとって周知である。そのような投与量は、代表的には、本質的に助言的であり、特定の治療状況、患者の許容度などに依存して、調整される。これを達成するために十分である本発明の化合物の量が、「治療上有効な用量」として規定される。この使用のために有効な投与スケジュールおよび量（すなわち、「投与レジメン」）は、種々の要因（疾患もしくは状態の段階、その疾患もしくは状態の重篤度、患者の健康の一般的状態、患者の身体的状態、年齢、薬学的処方物および活性剤濃度などが挙げられる）に依存する。患者についての投与レジメンを計算する際に、投与様式もまた、考慮に入れられる。その投与レジメンはまた、薬物速度論（すなわち、薬学的組成物の吸収速度、バイオアベイラビリティ、代謝、クリアランスなど）を考慮にいれなければならない。例えば、最新のＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ；Ｅｇｌｅｔｏｎ（１９９７）「Ｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ  ａｎｄ  ｔｒａｎｓｐｏｒｔ  ｏｆ  ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  ｐｅｐｔｉｄｅ  ｄｒｕｇｓ  ｉｎｔｏ  ｔｈｅ  ｂｒａｉｎ」Ｐｅｐｔｉｄｅｓ  １８：１４３１〜１４３９；Ｌａｎｇｅｒ（１９９０）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４９：１５２７〜１５３３を参照のこと。
【０１０４】
治療適用において、組成物は、癌に罹患している患者に、その疾患および／またはその合併症を少なくとも部分的に停止するに十分な量で投与される。例えば、１つの実施形態において、静脈内（ＩＶ）投与のための可溶性薬学的組成物投与量は、数時間（代表的には、１時間、３時間、または６時間）にわたって投与される約０．０１ｍｇ／時間〜約１．０ｍｇ／時間であり、これは、断続的周期で数週間にわたって反復され得る。かなり高投与量（例えば、約１０ｍｇ／ｍｌまでの範囲）が、特にその薬物が離れた部位に投与されて血流中（例えば、体腔もしくは器官管腔（例えば、脳脊髄液（ＣＳＦ））中）に投与されない場合には、使用され得る。
【０１０５】
他のように規定されない限り、本明細書中で使用されるすべての技術用語および科学用語は、本発明が属する分野の当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。本明細書中に記載された方法および材料と類似するかまたは等価である方法および材料が、本発明の実施または試験において使用され得るが、適切な方法および材料は、本明細書中に記載される。
【０１０６】
本明細書中にて引用されるすべての刊行物、特許および他の参考文献は、その全体が参考として援用される。矛盾する場合、本明細書（定義を含む）が支配する。
【実施例】
【０１０７】
以下の実施例は、本願発明を例示するために提供されるが、本願発明を限定するためには提供されない。
【０１０８】
（実施例１：Ｇ１チェックポイント欠損細胞（癌細胞）におけるＤＮＡ損傷誘発性細胞周期Ｇ２チェックポイントの選択的排除）
（化学物質および試薬）  ブレオマイシン、アドリアマイシン、およびコルヒシンを、Ｗａｋｏ  Ｐｕｒｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．（Ｏｓａｋａ，Ｊａｐａｎ）から購入した。これらの化学物質を、蒸留Ｈ２Ｏ中に１０ｍｇ／ｍｌで溶解し、４℃で保存した。シスプラチンを、Ｎｉｈｏｎ  Ｋａｙａｋｕ  Ｃｏ．（Ｔｏｋｙｏ，Ｊａｐａｎ）から購入し、蒸留Ｈ２Ｏ中に５ｍｇ／ｍｌで溶解し、そして４℃で保存した。カンプトテシン（Ｃａｍｐｔｏ）を、Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）から購入した。ヨウ化プロピジウム（ＰＩ）を、Ｓｉｇｍａから購入した。フィトヘマグルチニンを、Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．（Ｇｒａｎｄ  Ｉｓｌａｎｄ，ＮＹ）から購入した。インターロイキン２（ＩＬ−２）を、Ｈｅｍａｇｅｎ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ  Ｉｎｃ．から購入した。
【０１０９】
（細胞培養）  ヒトＴ細胞白血病由来細胞株であるＪｕｒｋａｔを、１０％ウシ胎仔血清（ＩＢＬ：Ｉｍｍｕｎｏ−Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｓ，Ｇｕｎｍａ，Ｊａｐａｎ）を補充したＲＰＭＩ  １６４０培地（Ｓｉｇｍａ）中で３７℃／５％ＣＯ２にて培養した。ヒト結腸癌由来細胞株であるＨＣＴ１１６を、１０％ウシ胎仔血清を補充したＭｃＣｏｙ’ｓ  ５Ａ  Ｍｅｄｉｕｍ  Ｍｏｄｉｆｉｅｄ（Ｇｉｂｃｏ  ＢＲＬ）中で３７℃／５％ＣＯ２にて培養した。正常ヒト末梢血白血球を、Ｆｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕｅ（登録商標）（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）により分離し、そして０．１μｇ／ｍｌ  ＰＨＡおよび１μｇ／ｍｌ  ＩＬ−２の存在下で培養した。
【０１１０】
（細胞周期分析）  本発明の化合物および／またはブレオマイシン、アドリアマイシン、コルヒシン、もしくはシスプラチンで処理した細胞の細胞周期状態を、Ｋａｗａｂｅ（１９９７）Ｎａｔｕｒｅ  ３８５：４５４〜４５８により本質的には記載されるように、フローサイトメトリーによって分析した。簡単に述べると、２百万個の細胞を、３００μｌのＫｒｉｓｈａｎ’ｓ溶液（０．１％  クエン酸ナトリウム、５０μｇ／ｍｌ  ＰＩ、２０μｇ／ｍｌ  ＲＮアーゼＡおよび０．５％  ＮＰ−４０）中に再懸濁し、そして４℃にて１時間インキュベートし、そしてＦＡＣＳｃａｎＴＭフローサイトメーター（Ｂｅｃｋｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，Ｍｏｕｎｔａｉｎ  Ｖｉｅｗ，ＣＡ）をＣＥＬＬＱｕｅｓｔＴＭプログラム（Ｂｅｃｋｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）とともに使用するフローサイトメトリーによって分析した。
【０１１１】
（ＣＢＤＣ４０２は、Ｊｕｒｋａｔ細胞のブレオマイシン誘発性細胞周期Ｇ２蓄積を無効にした）
Ｊｕｒｋａｔ細胞（ヒトＴ細胞白血病由来細胞株）を、ブレオマイシン（４０μｇ／ｍｌ）またはブレオマイシン＋化合物ＣＢＤＣ４０２（４−ブロモ−安息香酸ｐ−トリルエステル）を種々の濃度（０．２μｇ／ｍｌ、０．３９μｇ／ｍｌ、０．７８μｇ／ｍｌ、１．５６μｇ／ｍｌ、３．１２５μｇ／ｍｌ、６．２５μｇ／ｍｌ、１２．５μｇ／ｍｌ、２５μｇ／ｍｌおよび５０μｇ／ｍｌ）で用いて２４時間処理した。処理したＪｕｒｋａｔ細胞のＤＮＡを、ヨウ化プロピジウムで染色し、各細胞の細胞周期状態を、フローサイトメトリーによって評価した。図１に示されるように、ブレオマイシン処理は、細胞周期Ｇ２／Ｍ期における細胞の蓄積を誘発した。ＣＢＤＣ４０２処理は、用量依存性様式で、Ｇ２／Ｍ細胞のブレオマイシン誘発性蓄積を無効にした。
【０１１２】
（Ｊｕｒｋａｔ細胞におけるＭ期チェックポイントは、ＣＢＤＣ４０２処理によって排除されなかった）
Ｊｕｒｋａｔ細胞を、コルヒシン（５μｇ／ｍｌ）およびコルヒシン＋化合物ＣＢＤＣ４０２を種々の濃度（０．２μｇ／ｍｌ、０．３９μｇ／ｍｌ、０．７８μｇ／ｍｌ、１．５６μｇ／ｍｌ、３．１２５μｇ／ｍｌ、６．２５μｇ／ｍｌ、１２．５μｇ／ｍｌ、２５μｇ／ｍｌおよび５０μｇ／ｍｌ）で用いて２４時間処理した。処理したＪｕｒｋａｔ細胞のＤＮＡを、ヨウ化プロピジウムで染色し、各細胞の細胞周期状態を、フローサイトメトリーによって評価した。図２に示されるように、コルヒシン処理は、Ｇ２／Ｍ期の細胞における細胞の蓄積を誘発した。ＣＢＤＣ４０２は、いかなるＣＢＤＣ４０２濃度でも、このＧ２／Ｍ蓄積を排除しなかった。
【０１１３】
（種々のＣＢＤＣ化合物は、細胞周期Ｇ２チェックポイントを排除した）
Ｊｕｒｋａｔ細胞を、ブレオマイシン（４０μｇ／ｍｌ）および種々のＣＢＤＣ化合物を０．２μｇ／ｍｌ、０．３９μｇ／ｍｌ、０．７８μｇ／ｍｌ、１．５６μｇ／ｍｌ、３．１２５μｇ／ｍｌ、６．２５μｇ／ｍｌ、１２．５μｇ／ｍｌ、２５μｇ／ｍｌおよび５０μｇ／ｍｌで用いて処理し、そして２４時間培養した。ＣＢＤＣ化合物００４、４０２、４０３、４０４、４０５、４０６、４０７、４０８、４０９、４１０、および４１１を試験した。細胞を採集し、ＤＮＡを、ヨウ化プロピジウムで染色し、Ｇ２／Ｍ期の細胞の割合（Ｇ２／Ｍ％）を、フローサイトメトリーによって評価した。図３は、各濃度の各ＣＢＤＣ化合物について検出されたＧ２／Ｍ細胞％を示し、これは、種々のＣＢＤＣ化合物によるＧ２チェックポイント排除についての用量応答曲線を提供する。ＣＢＤＣ４０２は、最高の活性を示した。試験したすべてのＣＢＤＣ化合物は、最高濃度（５０μｇ／ｍｌ）にてＧ２細胞周期チェックポイントを排除した。この実験において試験したＣＢＤＣ化合物の構造が、図４に示される。
【０１１４】
さらなるＣＢＤＣ化合物を、上記ようにそのＧ２チェックポイント排除活性について試験した。図５に示されるように、化合物を、非常に活性；中程度に活性；活性；弱く活性；および不活性として順位付けた。図６に示されるように、Ｊｕｒｋａｔ細胞におけるＧ２チェックポイント排除のＩＣ５０を、上記のように実行した用量応答研究によって決定した。
【０１１５】
（ＣＢＤＣ００４は、種々の抗癌剤により誘発された細胞周期Ｇ２チェックポイントを排除した）
ＨＣＴ１１６ヒト結腸癌細胞を、１０μｇ／ｍｌのブレオマイシン（Ｂｌｅｏ）または１μｇ／ｍｌのアドリアマイシン（ＡＤＲ）または１０μｇ／ｍｌのカンプトテシン（Ｃａｍｐｔｏ）または２μｇ／ｍｌのシスプラチン（ＣＤＤＰ）、および０μＭ、２μＭ、１０μＭ、もしくは５０μＭのＣＢＤＣ００４で、２４時間処理した。ＤＮＡをヨウ化プロピジウムで染色し、各細胞の細胞周期状態を、フローサイトメトリーによって評価した。図７に示されるように、これらの抗癌剤の各々が、細胞周期Ｇ２／Ｍにおいて細胞の蓄積を誘発し、ＣＢＤＣ００４との同時インキュベーションは、Ｇ２／Ｍの細胞数を減少した。このことは、ＣＢＤＣ００４は、ブレオマイシン、アドリアマイシン、カンプトテシン、またはシスプラチンにより活性化されたＧ２チェックポイントを排除したことを示す。
【０１１６】
（実施例２：ＤＮＡ損傷処理に対する癌細胞の感作）
組み合わせ処置の細胞傷害活性を、ブレオマイシン、アドリアマイシン、カンプトテシン、またはシスプラチンを、２μＭ、１０μＭ、もしくは５０μＭのＣＢＤＣ００４とともに処理したかまたはＣＢＤＣ００４を伴わずに用いて処理したＨＣＴ１１６細胞のｓｕｂＧ１集団を分析することによって、決定した。このｓｕｂＧ１集団を、Ｋｒｉｓｈａｎ’ｓ溶液を用いてＨＣＴ１１６を染色することによって決定し、そしてフローサイトメトリーにより分析した。死細胞を、ＤＮＡ含量に基づいて同定し、ｓｕｂＧ１中の細胞の割合（ｓｕｂＧ１％）を、計算した。図８において示されるように、ブレオマイシン、アドリアマイシン、カンプトテシン、またはシスプラチンは、ＨＣＴ１１６細胞に対して細胞傷害効果を有した。ＣＢＤＣ００４は、これらの抗癌剤の細胞傷害活性を、用量依存性様式で増加した。
【０１１７】
（実施例３；ＣＢＤＣ４０２は、ＳＣＩＤマウスにおける異種移植片腫瘍増殖を抑制した）
ＨＣＴ−１１６ヒト結腸癌細胞を、重症複合型免疫不全（ＳＣＩＤ）マウスにおいて皮下移植した。原発性腫瘍が０．１ｃｍ３の大きさ（７ｍｍまたは８ｍｍ）に達した時（１日目と呼ばれる）、処理を開始した。
【０１１８】
抗癌剤ＣＰＴ−１１（ＣＡＭＰＴＯＳＡＲ（登録商標）、イリノテカン、トポイソメラーゼインヒビター）およびＣＢＤＣ４０２を、以下の処理レジメンにおいて静脈内注射によって投与した。２０ｍｇ／ｋｇのＣＰＴ−１１を１週間に１回；２０ｍｇ／ｋｇのＣＢＤＣ４０２を１週間に２回；４０ｍｇ／ｋｇのＣＢＤＣ４０２を１週間に２回；２０ｍｇ／ｋｇのＣＢＤＣ４０２を１週間に２回＋２０ｍｇ／ｋｇのＣＰＴ−１１を１週間に１回；ならびに４０ｍｇ／ｋｇのＣＢＤＣ４０２を１週間に２回＋２０ｍｇ／ｋｇのＣＰＴ−１１を１週間に１回。ＤＭＳＯを、コントロール処理として投与した。腫瘍サイズを、１週間に３回カリパスを使用して測定し、その体積を、式：重量（ｍｇ）＝［幅（ｍｍ）２×長さ（ｍｍ）]／２を使用して計算した。各処理群（ｎ＝４）についての平均腫瘍サイ
ズを、処理日に対してプロットした。図９に示されるように、ＤＭＳＯ処理したコントロールマウスは、成長し続けた。ＣＢＤＣ４０２単独（両方の濃度）は、腫瘍増殖のわずかな減少を生じた。ＣＰＴ−１１単独は、腫瘍増殖を減少した。ＣＢＤＣ４０２＋ＣＰＴ−１１の組み合わせは、腫瘍増殖を有意に減少するかまたは阻害した。
【０１１９】
（実施例４：ヒト胃癌由来細胞株ＭＫ−４５のコロニー形成分析）
ヒト胃癌由来細胞株由来のＭＫ−４５細胞を、６ウェルプレート中に１０００細胞／ウェルで播種した。一晩培養した後、その細胞を、１０μＭの種々のＣＢＤＣ化合物、１０μｇ／ｍｌのＣＰＴ−１１、またはＣＢＤＣ化合物とＣＰＴ−１１との組み合わせを用いて３時間処理した。試験したＣＢＤＣ化合物は、ＣＢＤＣ４０２、ＣＢＤＣ４１２、ＣＢＤＣ４１３、およびＣＢＤＣ４１８であった。培養培地を交感し、そして細胞を１４日間培養した。その後、コロニーをメタノールで固定し、０．１％クリスタルバイオレットで染色した。１０μＭのＣＢＤＣ４０２を用いる３時間の処理によって、ＭＫ−４５細胞によるコロニー形成の有意な抑制が引き起こされたが、１０μＭ  ＣＢＤＣ４１２を用いる処理は、コロニー形成のわずかな抑制を引き起こし、そして１０μＭ  ＣＢＤＣ４１３もＣＢＤＣ４１８も、コロニー形成に対して感知できる影響は有さなかった。１０μｇ／ｍｌ  ＣＰＴ−１１を用いる処理は、コロニー形成の有意な抑制を引き起こしたが、１０μＭ  ＣＢＤＣ４０２の添加は、１０μｇ／ｍｌ  ＣＰＴ−１１の影響を増強するようであり、コロニー形成のほぼ完全な抑制を生じた。１０μｇ／ｍｌ  ＣＰＴ−１１と１０μＭ
ＣＢＤＣ４１２との組み合わせは、ＣＰＴ−１１単独を用いて観察される上記のコロニー形成のわずかな抑制を引き起こしたが、１０μｇ／ｍｌ  ＣＰＴ−１１と１０μＭ  ＣＢＤＣ４１３、ＣＢＤＣ４１８との組み合わせ。
【０１２０】
（実施例５：ＣＢＤＣ４０２は、細胞周期Ｇ２チェックポイントを特異的に排除した）
活性化正常Ｔ細胞および白血病Ｔ細胞（Ｊｕｒｋａｔ細胞）を、薬剤で処理して、Ｇ２期またはＭ期の細胞の蓄積を誘発し、細胞周期チェックポイントを通る細胞の進行に対するＣＢＤＣ４０２の影響を、測定した。処理後に、細胞を採取し、ＤＮＡを染色し、各細胞の細胞周期段階を、上記のようにフローサイトメトリーによって決定した。１つの実験において、活性化正常Ｔ細胞に、何も処理を与えない（コントロール）か、またはそれを、ブレオマイシン、ＣＢＤＣ４０２、もしくはブレオマイシンとＣＢＤＣ４０２との組み合わせで処理した。図１０ａに示されるように、ブレオマイシン処理は、Ｇ２期の少数の細胞集団の蓄積を引き起こし、ＣＢＤＣ４０２は、Ｇ２期の活性化正常Ｔ細胞のブレオマイシン誘発性増加を排除した。別の実験において、白血病Ｔ細胞（Ｊｕｒｋａｔ細胞）に、何も処理を与えない（コントロール）か、またはそれを、ブレオマイシン、ＣＢＤＣ４０２、もしくはブレオマイシンとＣＢＤＣ４０２との組み合わせで処理した。図１０ｂに示されるように、ブレオマイシンは、Ｇ２期の多数の細胞集団の蓄積を引き起こし、ＣＢＤＣ４０２は、Ｇ２期の白血病Ｔ細胞（Ｊｕｒｋａｔ細胞）の大きなブレオマイシン誘発性増加を排除した。別の実験において、活性化正常Ｔ細胞に、何も処理を与えない（コントロール）か、またはそれを、コルヒシン、ＣＢＤＣ４０２、もしくはコルヒシンとＣＢＤＣ４０２との組み合わせで処理した。図１０ｃに示されるように、コルヒシンは、Ｍ期の細胞の蓄積を引き起こした。ＣＢＤＣ４０２は、Ｍ期の活性化正常Ｔ細胞のコルヒシン誘発性増加に影響を与えなかった。これらの結果は、Ｇ２蓄積（Ｍ期チェックポイントではなく）に対するＣＢＤＣ４０２の特異性を示し、癌細胞に対するＣＢＤＣ４０２の特異性を示した。
【０１２１】
（実施例６：４−ブロモ−安息香酸４−フルオロ−フェニルエステルの合成）
１０ｍｌのジオキサン、５ｍｍｏｌ（１．１ｇ）の塩化４−ブロモ−安息香酸および５ｍｍｏｌ（０．５６ｇ）の４−フルオロ−フェノールを、５０ｍｌの４口フラスコに連続して添加し、室温で溶解させた。ジオキサン中に溶解したトリエチルアミンを、この溶液中にゆっくり滴下し、この溶液を、室温で３時間攪拌した。沈殿した結晶を濾過し、ベンゼンで抽出した。抽出した溶液を、炭酸水素ナトリウムで数回洗浄し、無水マグネシウムを添加し、生じた溶液を乾燥させて濾過した。この溶液を、低圧下で蒸留して結晶化させた。未精製結晶は、黄白色であり、１．３７ｇであった。この結晶の一部（０．５ｇ）を、ベンゼン中に溶解し、１００ｇのシリカゲル（ＷａｋｏゲルＣ−３００、Ｊａｐａｎ）を用いて精製した。この精製生成物は白色であった。その純度が９９．９３％であることを、液体クロマトグラフィー（ＬＣ）によって確認した。その構造が以下の通りであることをＮＭＲによって確認した。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ８．０５（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ），７．８３（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ），７．３８〜７．２９（４Ｈ，ｍ）  １３Ｃ  ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１５９．７２（Ｃ−Ｆ，ｄ，Ｊ＝２４０Ｈｚ）１６３．９５（Ｃ＝Ｏ）。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４−１】
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【図４−２】
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【図４−３】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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