(57)【要約】【課題】豚のウイルス性疾患、特にＰＲＲＳの病因であるＰＲＲＳウイルスを抑制し得る抗ＰＲＲＳウイルス剤、及びＰＲＲＳウイルスを抑制するための豚用飼料を提供すること。【解決手段】少なくとも１種の炭素数６〜１２の中鎖脂肪酸及び／又はその塩を有効成分として含む、抗ＰＲＲＳウイルス（豚繁殖・呼吸障害症候群ウイルス）剤。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくとも１種の炭素数６〜１２の中鎖脂肪酸及び／又はその塩を有効成分として含む、抗ＰＲＲＳウイルス（豚繁殖・呼吸障害症候群ウイルス）剤。
【請求項２】
中鎖脂肪酸として、炭素数８の中鎖脂肪酸、及び炭素数１０の中鎖脂肪酸を含む、請求項１に記載の抗ＰＲＲＳウイルス剤。
【請求項３】
中鎖脂肪酸として、炭素数６の中鎖脂肪酸、炭素数８の中鎖脂肪酸、及び炭素数１０の中鎖脂肪酸を含む、請求項１に記載の抗ＰＲＲＳウイルス剤。
【請求項４】
産まれてくる子豚の死亡率を改善するために使用される、請求項１から３の何れかに記載の抗ＰＲＲＳウイルス剤。
【請求項５】
産まれてくる子豚の体重減少を抑制するために使用される、請求項１から３の何れかに記載の抗ＰＲＲＳウイルス剤。
【請求項６】
少なくとも１種の炭素数６〜１２の中鎖脂肪酸及び／又はその塩を有効成分として含む、ＰＲＲＳウイルスを抑制するための豚用飼料。
【請求項７】
飼料の全質量に対して、０．０２５〜０．２５質量％の炭素数６〜１２の中鎖脂肪酸を含む、請求項６に記載の豚用飼料。
【請求項８】
中鎖脂肪酸として、炭素数８の中鎖脂肪酸、及び炭素数１０の中鎖脂肪酸を含む、請求項６又は７に記載の豚用飼料。
【請求項９】
中鎖脂肪酸として、炭素数６の中鎖脂肪酸、炭素数８の中鎖脂肪酸、及び炭素数１０の中鎖脂肪酸を含む、請求項６又は７に記載の豚用飼料。
【請求項１０】
産まれてくる子豚の死亡率を改善するために使用される、請求項６から９の何れかに記載の豚用飼料。
【請求項１１】
産まれてくる子豚の体重減少を抑制するために使用される、請求項６から９の何れかに記載の豚用飼料。
【請求項１２】
豚に、少なくとも１種の炭素数６〜１２の中鎖脂肪酸及び／又はその塩を給与することを含む、ＰＲＲＳウイルスを抑制する方法。
【請求項１３】
中鎖脂肪酸として、炭素数８の中鎖脂肪酸、及び炭素数１０の中鎖脂肪酸を給与する、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
中鎖脂肪酸として、炭素数６の中鎖脂肪酸、炭素数８の中鎖脂肪酸、及び炭素数１０の中鎖脂肪酸を給与する、請求項１２に記載の方法。
【請求項１５】
ＰＲＲＳウイルスを抑制することにより産まれてくる子豚の死亡率が改善される、請求項１２から１４の何れかに記載の方法。
【請求項１６】
ＰＲＲＳウイルスを抑制することにより産まれてくる子豚の体重減少が抑制される、請求項１２から１４の何れかに記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、炭素数６〜１２の中鎖脂肪酸及び／又はその塩を有効成分とする、抗ＰＲＲＳウイルス（豚繁殖・呼吸障害症候群ウイルス）剤並びにＰＲＲＳウイルスを抑制するための豚用飼料に関する。さらに、本発明は、炭素数６〜１２の中鎖脂肪酸及び／又はその塩を有効成分とする、ＰＲＲＳウイルスを抑制する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
豚繁殖・呼吸障害症候群は、1987年に米国で初めて報告されたウイルス性伝染病であり、 その名が示す如く繁殖障害と呼吸障害を特徴とする豚の疾患である。後年になって、該症候群は世界の多くの国々でも発生し、養豚業に甚大な被害を与えている。本症候群の病因については種々研究されているが、ウイルスの起源と変異、病態発生、免疫、疫学など該症候群について不明な問題が多く残されており、防疫対策が著しく困難な疾患として知られている。なお、該症候群は、発生当初原因が不明であったことから、欧米では豚のミステリー病、豚繁殖障害・呼吸器病、豚繁殖障害症候群、青耳病、青い流産、豚流行性流産・呼吸器障害症候群など、またわが国では一部の地域でヘコヘコ病などの如く多くの異なる名称で呼ばれていた。しかし、現在では、一般的にPorcine Reproductive and Respiratory Syndrome （PRRS）の名称が用いられている。
【０００３】
ＰＲＲＳは、ＰＲＲＳウイルスを病因とする（非特許文献１及び２）。そこで、ＰＲＲＳの予防及び治療策として、ＰＲＲＳウイルスに対するワクチンの使用がある（非特許文献３）。しかし、ＰＲＲＳに対するワクチンについては、ＰＲＲＳウイルスの抗原性状に多様性が認められることや免疫における抗体の役割が不明なことなどから、有効なワクチン、特に呼吸障害の予防を目的としたワクチンの開発には困難が多い。さらに、効力に優れたワクチンが開発されたとしても、多くの地域でＰＲＲＳが常在化していることや不顕性感染が多いことから、ワクチン接種プログラムの策定などの面でも多くの問題を抱えている。米国においては、ワクチンの効かないＰＲＲＳウイルスの流行も問題となっている。
【０００４】
一方、家畜の疾患を予防及び治療するための、飼料に添加する抗菌剤などの添加物がこれまでに知られている（特許文献１）。例えば、特許文献１において、炭素数６〜12の中鎖脂肪酸のトリグリセライド、炭素数６〜12の中鎖脂肪酸、該脂肪酸のモノグリセライド及び該脂肪酸のジグリセライドの少なくとも１種を混合した添加物が家畜のコクシジウム症を予防及び治療できることが記載されている（特許文献１）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特許第３０３４６７８号公報
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Kuwahara, H. et al., (1994), J. Vet. Med. Sci., 56: 901-909
【非特許文献２】Terpstra, C., et al., (1991), Vet. Q., 13: 131-136
【非特許文献３】柏崎守ら、(1999), 豚病学−生理・疾病・飼養−＜第四版＞, pp. 237-244
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
しかし、抗菌剤については、ワクチンと同様の問題がある。すなわち、ＰＲＲＳウイルスの性状が一定でないことなどの理由によって、ＰＲＲＳウイルスに有効な抗菌剤はこれまでに知られていない。さらに、特許文献１に記載の添加物は、原虫性疾患であるコクシジウム症の予防及び治療に対して効果があるが、豚のウイルス性疾患、特にＰＲＲＳの予防及び治療に対して効果のある豚用飼料に資する添加物についてはこれまでに知られていない。
【０００８】
そこで本発明の目的は、豚のウイルス性疾患、特にＰＲＲＳの病因であるＰＲＲＳウイルスを抑制し得る抗ＰＲＲＳウイルス剤、及びＰＲＲＳウイルスを抑制するための豚用飼料を提供することにある。さらに本発明の目的は、上記抗ＰＲＲＳウイルス剤に含まれている有効成分によってＰＲＲＳウイルスを抑制する方法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者らは上記課題を解決すべく鋭意研究を行なった結果、豚用飼料に炭素数８の中鎖脂肪酸及び炭素数１０の中鎖脂肪酸を混合して、又は炭素数６の中鎖脂肪酸、炭素数８の中鎖脂肪酸、及び炭素数１０の中鎖脂肪酸を混合して添加することにより、豚の疾患性ウイルス、特にＰＲＲＳウイルスの抑制に対して優れた効果を奏することを見出し、本発明を完成するに至った。
【００１０】
すなわち、本発明によれば、少なくとも１種の炭素数６〜１２の中鎖脂肪酸及び／又はその塩を有効成分として含む、抗ＰＲＲＳウイルス（豚繁殖・呼吸障害症候群ウイルス）剤が提供される。
本発明の好ましい態様によれば、中鎖脂肪酸として、炭素数８の中鎖脂肪酸、及び炭素数１０の中鎖脂肪酸を含む。
本発明の好ましい態様によれば、中鎖脂肪酸として、炭素数６の中鎖脂肪酸、炭素数８の中鎖脂肪酸、及び炭素数１０の中鎖脂肪酸を含む。
【００１１】
好ましい態様によれば、本発明の抗ＰＲＲＳウイルス剤は、産まれてくる子豚の死亡率を改善するために使用される。
好ましい態様によれば、本発明の抗ＰＲＲＳウイルス剤は、産まれてくる子豚の体重減少を抑制するために使用される。
【００１２】
本発明の別の側面によれば、少なくとも１種の炭素数６〜１２の中鎖脂肪酸及び／又はその塩を有効成分として含む、ＰＲＲＳウイルスを抑制するための豚用飼料が提供される。
本発明の好ましい態様によれば、飼料の全質量に対して、０．０２５〜０．２５質量％の炭素数６〜１２の中鎖脂肪酸を含む。
本発明の好ましい態様によれば、中鎖脂肪酸として、炭素数８の中鎖脂肪酸、及び炭素数１０の中鎖脂肪酸を含む。
本発明の好ましい態様によれば、中鎖脂肪酸として、炭素数６の中鎖脂肪酸、炭素数８の中鎖脂肪酸、及び炭素数１０の中鎖脂肪酸を含む。
【００１３】
好ましい態様によれば、本発明の豚用飼料は、産まれてくる子豚の死亡率を改善するために使用される。
好ましい態様によれば、本発明の豚用飼料は、産まれてくる子豚の体重減少を抑制するために使用される。
【００１４】
本発明の別の側面によれば、豚に、少なくとも１種の炭素数６〜１２の中鎖脂肪酸及び／又はその塩を給与することを含む、ＰＲＲＳウイルスを抑制する方法が提供される。
本発明の好ましい態様によれば、中鎖脂肪酸として、炭素数８の中鎖脂肪酸、及び炭素数１０の中鎖脂肪酸を給与する。
本発明の好ましい態様によれば、中鎖脂肪酸として、炭素数６の中鎖脂肪酸、炭素数８の中鎖脂肪酸、及び炭素数１０の中鎖脂肪酸を給与する。
【００１５】
本発明の好ましい態様によれば、ＰＲＲＳウイルスを抑制することにより産まれてくる子豚の死亡率が改善される。
本発明の好ましい態様によれば、ＰＲＲＳウイルスを抑制することにより産まれてくる子豚の体重減少が抑制される。
【発明の効果】
【００１６】
本発明の抗ＰＲＲＳウイルス剤を飼料に添加して豚に給与すれば、又は本発明の豚用飼料を豚に給与すれば、副作用を引き起こすことなく、ＰＲＲＳウイルスを抑制しつつ、豚を飼養することができる。本発明の抗ＰＲＲＳウイルス剤の有効成分である炭素数６、８及び１０の中鎖脂肪酸は豚にとって発育を促進する栄養素である。したがって、本発明によれば、ＰＲＲＳウイルスを抑制しつつ発育を促進することにより、豚の飼養成績や生産性を向上させることも期待できる。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
本発明は、少なくとも１種の炭素数６〜１２の中鎖脂肪酸及び／又はその塩を有効成分として含む、抗ＰＲＲＳウイルス（豚繁殖・呼吸障害症候群ウイルス）剤に関する。
【００１８】
ＰＰＲＳウイルスは、馬動脈炎ウイルス（ＥＡＶ）、マウスの乳酸脱水素酵素上昇ウイルス（ＬＤＶ）、サルの出血熱ウイルスと類似した性状を示し、同ウイルスとともにトガウイルス科のアルテリウイルス層に分類される。しかし、ゲノム構造や複製機構がトガウイルスと異なりコロナウイルスやトロウイルスと類似することから、アルテリウイルスを独立した科にすることが提案されている。アルテリウイルスはマクロファージで増殖すること、持続感染をおこすこと、不顕性感染の多いことなど類似した性状を示す。しかし、同属のウイルスを含めＰＲＲＳウイルスと血清学的に交差するウイルスは知られていない。膜蛋白とヌクレオカプシド蛋白をコードする読み取り枠（ＯＲＦ）６と７の分子系統樹解析では、本ウイルスはＥＡＶよりもＬＤＶに近縁である。
【００１９】
ＰＲＲＳウイルスは、エンベロープを有する直径４５〜６５ｎｍの球形ウイルスで、内部に２０〜３５ｎｍのコアが存在する。エーテルなどの有機溶媒及び酸に感受性を示し、熱に対する抵抗性も比較的弱い。３７℃４８時間あるいは５６℃４５分間の加熱でほとんど不活化され、３７℃１２時間の処理で感染性は半減する。ウイルス粒子は赤血球を凝集しないが核蛋白に赤血球凝集性が認められる。
【００２０】
本発明の抗ＰＲＲＳウイルス剤を給与する対象としては、ＰＲＲＳウイルスに感染する動物種である豚が好ましい。ＰＲＲＳウイルスに感染した豚は、繁殖障害や呼吸障害を引き起こす。特に、ＰＲＲＳにおける呼吸障害は子豚〜肥育豚においてよく見られる。したがって、本発明の組成物及び飼料を給与する対象としては、例えば、子豚〜肥育豚、妊娠前及び妊娠中の母豚がより好ましい。
【００２１】
本発明の抗ＰＲＲＳウイルス剤は、有効成分として、１種又は２種以上の炭素数６〜１２の中鎖脂肪酸（Medium Chain Fatty Acid；ＭＣＦＡ）及び／又はその塩、好ましくは中鎖脂肪酸として炭素数８の中鎖脂肪酸、及び炭素数１０の中鎖脂肪酸、より好ましくは中鎖脂肪酸として炭素数６の中鎖脂肪酸、炭素数８の中鎖脂肪酸、及び炭素数１０の中鎖脂肪酸を混合して含む。したがって、本発明の抗ＰＲＲＳウイルス剤は、これらの中鎖脂肪酸及び／又はその塩を含むことにより、ＰＲＲＳウイルスを抑制、例えば、ＰＲＲＳウイルスの感染やＰＲＲＳウイルスの増殖などを抑制することができる。なお、本発明の抗ＰＲＲＳウイルス剤は、ＰＲＲＳウイルスのエンベロープに作用して、ＰＲＲＳウイルスを不活化させるものと推測される。
【００２２】
本発明の抗ＰＲＲＳウイルス剤の好ましい態様において、炭素数６の中鎖脂肪酸及び／又はその塩（ａ）、炭素数８の中鎖脂肪酸及び／又はその塩（ｂ）、並びに炭素数１０の中鎖脂肪酸及び／又はその塩（ｃ）の比率は任意に選べるが、例えば、（ａ）〜（ｃ）の合計１００質量％に対して、０〜２０：５０〜７０：２０〜５０（質量％）であることが好ましい。ただし、上記比率において、炭素数１０の中鎖脂肪酸の割合が低くなると、ＰＲＲＳウイルスの抑制効果が減少する可能性がある。
【００２３】
炭素数６の中鎖脂肪酸としては、例えば、炭素数６の分岐型及び直鎖型の飽和並びに不飽和脂肪酸を挙げることができるが、好ましくは炭素数６の直鎖型の飽和及び不飽和脂肪酸であり、より好ましくはカプロン酸などの炭素数６の直鎖型の飽和脂肪酸である。炭素数８の中鎖脂肪酸としては、例えば、炭素数８の分岐型及び直鎖型の飽和並びに不飽和脂肪酸を挙げることができるが、好ましくは炭素数８の直鎖型の飽和及び不飽和脂肪酸であり、より好ましくはカプリル酸などの直鎖型の飽和脂肪酸である。炭素数１０の中鎖脂肪酸としては、例えば、炭素数１０の分岐型及び直鎖型の飽和並びに不飽和脂肪酸を挙げることができるが、好ましくは炭素数１０の直鎖型の飽和及び不飽和脂肪酸であり、より好ましくはカプリン酸などの直鎖型の飽和脂肪酸である。その他の炭素数６〜１２の中鎖脂肪酸としては、例えば、エナント酸、ペラルゴン酸、ラウリン酸などの直鎖型の炭素数６〜１２の飽和脂肪酸を挙げることができる。
【００２４】
中鎖脂肪酸の塩としては、例えば、リチウム塩、ナトリウム塩、カリウム塩などのアルカリ金属塩；マグネシウム塩、カルシウム塩などのアルカリ土類金属塩などを挙げることができる。これらの中鎖脂肪酸は、アルキル基や糖鎖などにより修飾されていてもよい。
【００２５】
炭素数６、８及び１０の中鎖脂肪酸並びにそれらの塩は、それぞれ従来知られている方法により化学合成したものでも、従来知られている方法で抽出された天然物由来のものでもいずれでもよいが、好ましくは天然物由来であり、より好ましくは植物油由来であり、さらに好ましくはヤシ油由来である。
【００２６】
天然物から炭素数６〜１２の中鎖脂肪酸を抽出する方法としては、従来知られている方法を制限なく用いることができるが、例えば、連続抽出、浸漬抽出、向流抽出等の溶媒抽出や、超臨界抽出などを挙げることができる。溶媒抽出を行うための溶媒としては、ｎ−ヘキサン、エーテル、酢酸エチル、メタノール、エタノール、イソプロピルアルコール、ブタノール、１，３−ブチレングリコール、エチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン、及び水等を使用することができる。なお、これらの溶媒は１種のみを用いても良いし、２種以上混合して用いても良い。抽出用の水の種類は、特に限定されず、水道水、蒸留水、ミネラル水、アルカリイオン水、深層水等を使用することができる。抽出された中鎖脂肪酸の中から炭素数６〜１２の中鎖脂肪酸を分離するためには、例えば、各脂肪酸の沸点の違いによって分留する方法などを用いることが好ましい。
【００２７】
本発明の抗ＰＲＲＳウイルス剤は、例えば、手動又は従来知られている機器を用いて混合することにより液体物として得ることができる。この液体物には、中鎖脂肪酸のエステル体、例えば、中鎖脂肪酸のモノグリセリド、ジグリセリド、トリグリセリドなどが含まれる場合もある。上記液体物において、炭素数６、８及び１０の中鎖脂肪酸を含む場合、これらの中鎖脂肪酸及び／又はそれらの塩（分母）に対する中鎖脂肪酸のエステル体（分子）の存在比は、例えば、２０／８０が好ましく、１０／９０がより好ましく、５／９５がさらに好ましく、実質的に０／１００であることがなおさらに好ましい。本発明の抗ＰＲＲＳウイルス剤において、中鎖脂肪酸のエステル体の存在比が増すと、ＰＲＲＳウイルスの抑制効果が低下する可能性がある。
【００２８】
本発明の抗ＰＲＲＳウイルス剤を固体物として得たい場合には、例えば、炭素数６〜１２の中鎖脂肪酸を混合する前・中・後の任意の時期に、二酸化ケイ素などの吸着基材；小麦粉などの賦形剤；着香料などの基材を適宜加えることが好ましい。本発明の抗ＰＲＲＳウイルス剤において、液体成分と固体成分とのおおよその質量比は、添加先の飼料の種類や含水率によって適宜変更され得るが、好ましくは７０：３０、より好ましくは６０：４０、さらに好ましくは５０：５０である。
【００２９】
本発明の別の側面によれば、１種又は２種以上の炭素数６〜１２の中鎖脂肪酸及び／又はその塩を有効成分として含む、ＰＲＲＳウイルスを抑制するための豚用飼料が提供される。
【００３０】
本発明の豚用飼料において、炭素数６〜１２の中鎖脂肪酸及び／又はそれらの塩の混合物は、例えば、飼料の全質量（１００質量％）に対して、０．０２５〜０．２５質量％、好ましくは０．０３〜０．１質量％で配合される。上記混合物の配合量は、給与対象の状態、例えば、子豚・肥育豚の場合は離乳期、子豚期、肥育前期、肥育後期；母豚の場合は妊娠期、授乳期などによって適宜変更され得る。
【００３１】
本発明の豚用飼料は、炭素数６〜１２の中鎖脂肪酸及び／又はそれらの塩を従来知られている豚用飼料組成、例えば、とうもろこし、小麦、大麦、ライ麦、マイロ等の穀類、米ぬか、ふすま、麦ぬか等のぬか類、大豆油粕、コーングルテンミール、糖蜜等の製造粕類、魚粉、脱脂粉乳、ホエー、イエローグリース、タロー等の動物性飼料類、ビタミン類、無機質等の栄養素材などに添加して構成されるが、豚用飼料組成としてはこれらに限定されない。さらに、本発明の豚用飼料は、本発明の抗ＰＲＲＳウイルス剤を上記豚用飼料組成に添加して製造することもできる。この場合において、本発明の抗ＰＲＲＳウイルス剤の添加量は、本発明の抗ＰＲＲＳウイルス剤に含まれる中鎖脂肪酸及び／又はそれらの塩の含有量（質量％）に応じて、適宜調整される。
【００３２】
本発明の豚用飼料の組成の具体例としては、とうもろこし  ２０〜８０質量％、マイロ  ０〜４０質量％、大麦  ０〜３０質量％、ふすま  ０〜２０質量％、大豆油粕  ０〜１０質量％、魚粉  ０〜１０質量％、脱脂米ぬか  ０〜１５質量％、アルファルファミール  ０〜１０質量％、糖みつ  ０〜１０質量％、ミネラル  ０〜３質量％、ビタミン  ０〜３質量％、炭素数６の中鎖脂肪酸  ０〜０．０３質量％、炭素数８の中鎖脂肪酸  ０．０７５〜０．１０５質量％、及び炭素数１０の中鎖脂肪酸  ０．０３〜０．０７５質量％を挙げることができるが、これに限定されるものではない。
【００３３】
本発明の別の側面によれば、豚に、１種又は２種以上の炭素数６〜１２の中鎖脂肪酸及び／又はその塩を給与することを含む、ＰＲＲＳウイルスを抑制する方法が提供される。
【００３４】
本発明の方法において、給与の方法は、経口でも非経口でもどちらも制限なく用いることができるが、例えば、経口給与を行う場合に、１種又は２種以上の炭素数６〜１２の中鎖脂肪酸及び／又はその塩として、本発明の抗ＰＲＲＳウイルス剤又は豚用飼料を用いることもできる。
【実施例】
【００３５】
以下に実施例を挙げて本発明を具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。
【００３６】
実施例１：
１．被験物質
名称：アロマビオティック
種類：炭素数６から１０の遊離中鎖脂肪酸を含む混合飼料
製造業者：ベルギー  ビタメックス社
輸入販売業者：物産バイオテック株式会社
含有する飼料添加物：着香料
原材料名：ヤシ油中鎖脂肪酸、二酸化ケイ素、小麦粉
【００３７】
なお、上記のアロマビオティック（以下、組成物Ａとも称する）は、以下の方法で得られたものである。
（１）ヤシ油からの炭素数６、８及び１０の中鎖脂肪酸の分離方法
中鎖脂肪酸トリグリセリドを高圧水蒸気で加水分解し、炭素数６の中鎖脂肪酸（沸点：約２０５℃）、炭素数８の中鎖脂肪酸（沸点：約２３５℃）、及び炭素数１０の中鎖脂肪酸（約１５０℃）を沸点の違いによって分留した。
（２）ＰＲＲＳの予防又は治療用組成物（組成物Ａ）の製造方法
アブラヤシを圧搾してヤシ油を得て、上記１の方法によってヤシ油中の中鎖脂肪酸を分留した。分留して得た炭素数６、８及び１０の中鎖脂肪酸を混合し、さらにこの中鎖脂肪酸混合物と二酸化珪素、小麦粉及び着香料とを混合した。この混合物を篩別して、組成物Ａを得た。
【００３８】
３．離乳子豚におけるＰＲＲＳに対する効果確認試験
（１）試験材料及び方法
被験物質としては、上記２で作製した組成物Ａを用いた。組成物Ａの中鎖脂肪酸の組成は、中鎖脂肪酸１００質量％当たり、炭素数６の中鎖脂肪酸が０〜１０質量％、炭素数８の中鎖脂肪酸が５０〜６０質量％、炭素数１０の中鎖脂肪酸が２０〜４０質量％であった。組成物Ａは、５０質量％の中鎖脂肪酸と５０質量％のその他の基材からなる固形物である。
【００３９】
供試動物には、ＰＲＲＳ汚染農場の離乳直後（２１日齢）の豚を供試して、体重に偏りのないように群毎に３０頭、合計６０頭を試験区分に従い割り付けた。
【００４０】
試験区分は表１の通りである。飼育管理は、農場の慣行に従い飼育管理した。
【００４１】
【表１】
2010138162.tif 000002
【００４２】
被験物質を飼料中に０．３％添加して自由摂餌させることにより経口給与した。観察期間は給与開始後６０  日間とし、検査項目は試験期間中の臨床観察、体重測定及び血清中のリアルタイムＰＣＲによるＰＲＲＳウイルス量及びＰＲＲＳ  ＥＬＩＳＡ抗体価の測定とした。また、無給与の対照群を設け比較検討した。
【００４３】
リアルタイムＰＣＲは以下の通りに実施した。
Inoueらの文献（Ryo Inoue et. al., (2007), Journal of Virological Methods, 141(1), pp.102-106）に記載の方法を一部改変して実施した。ＲＮＡの抽出は、QIAamp MinElute Virus Spin kit (Qiagen)を使用し、マニュアルに従い実施した。逆転写は、抽出ＲＮＡ液８μＬを使用し、PrimeScript (TaKaRa)を用いて逆転写反応を実施した。逆転写には配列表の配列番号２に記載のプライマーを使用した。プライマー濃度、反応条件等はすべてマニュアルに準拠した。リアルタイムＰＣＲについて、プライマーは配列表の配列番号１及び２に記載のプライマーを使用し、ＰＣＲの条件はSYBR_Premix Ex Taq(Perfect Real Time; TAKARA)を使用し、以下の表２の条件で実施した。
【００４４】
【表２】
2010138162.tif 000003
【００４５】
ＰＲＲＳ  ＥＬＩＳＡはＰＲＲＳエリーザキット（アイデックス  ラボラトリーズ株式会社）を用いて、キットに添付されていた使用説明書に従い実施した。
【００４６】
試験日程は表３の通りに実施した。
【００４７】
【表３】
2010138162.tif 000004
【００４８】
観察項目は以下の通りである。
１）リアルタイムＰＣ  Ｒ  測定
試験開始時（給与開始時）、給与開始３０日後及び６０日後に各群３０頭のうち無作為（乱数表使用）に選出した２０頭から採血し、血清中のＰＲＲＳウイルス量を測定した。さらに、ＰＲＲＳ  ＥＬＩＳＡ抗体価の測定も併せて実施した。
２）体重測定
試験開始時（給与開始時）、給与開始３０  日後及び６０  日後に全頭の体重を測定した。
【００４９】
統計学的解析は以下の通りに実施した。
体重及び増体量については乱塊法による分散分析により解析を行い、有意差（ｐ＜０．０５）が認められた場合には、Ｔｕｋｅｙ−Ｋｒａｍｅｒの方法により試験群問の差の検定を、ＰＲＲＳ陽性率、及びＰＲＲＳ  ＥＬＩＳＡ抗体価についてはχ2検定を行った。
【００５０】
（２）リアルタイムＰＣＲ及びＥＬＩＳＡの測定結果
組成物Ａ  ０．３％給与群（以下、１群）及び無給与対照群（以下、２群）のＰＲＲＳリアルタイムＰＣＲ及びＰＲＲＳ  ＥＬＩＳＡ抗体価を測定した結果を表４〜９に示した。
【００５１】
【表４】
2010138162.tif 000005
【００５２】
【表５】
2010138162.tif 000006
【００５３】
【表６】
2010138162.tif 000007
【００５４】
【表７】
2010138162.tif 000008
【００５５】
【表８】
2010138162.tif 000009
【００５６】
【表９】
2010138162.tif 000010
【００５７】
ＰＲＲＳの結果は以下の通りである。
ＰＣＲ陽性率では試験開始時（以下、０ｄａｙ）では１群及び２群ともに０．０％であった。試験開始後３０  日（以下３０  ｄａｙ）では１群で０．０％、２群で２６．３％、試験開始後６０日（以下６０  ｄａｙ）では１群で０．０％、２群で３６．８％であった。統計学的解析の結果では、試験開始後３０日及び６０日では１群で陽性率が低く、２群との間に有意な差が認められた。ＥＬＩＳＡ抗体価陽性率は、０  ｄａｙでは全ての試験群で０．０％、３０  ｄａｙ及び６０  ｄａｙでは１群で０．０％、２群で２６．３％及び３６．８％であった。統計学的解析の結果では、試験開始後３０日及び６０日では１群で陽転せず、２群との間に有意な差が認められた。
【００５８】
（３）体重測定、飼料摂取量及び飼料要求率
平均体重、平均増体量及び平均増体量指数を表１０、総飼料摂取量、飼料要求率及び飼料要求率指数を表１１に示した。
【００５９】
【表１０】
2010138162.tif 000011
【００６０】
【表１１】
2010138162.tif 000012
【００６１】
平均増体量は、０−３０ｄａｙの期間では１群で６．６ｋｇ、２群で５．１ｋｇ、３０−６０ｄａｙの期間では１群で９．７ｋｇ、２群で９．４ｋｇ、全期間（０−６０ｄａｙ）では１群で１６．３ｋｇ、２群で１４．９ｋｇであり、すべての期間で群間に統計学的な差は認められなかった。２群を１００とした場合の平均増体量指数は、０−３０ｄａｙの期間では１群で１２９、３０−６０ｄａｙの期間では１群で１０３、全期間（０‐６０ｄａｙ）では１群で１０９であり、１群は２群と比べて高い数値を示した。飼料要求率は０‐３０ｄａｙの期間では１群で１．６４、２群で１．７４、３０‐６０ｄａｙの期間では１群で２．４９、２群で２．７９、全期間（０‐６０ｄａｙ）では１群で２．１５、２群で２．４０であった。２群を１００とした場合の飼料要求率指数は、０‐３０ｄａｙの期間では１群は９４、３０‐６０ｄａｙの期間では１群は８９、全期間（０‐６０ｄａｙ）では１群は８９であり、１群は２群に比べ低い数値を示した。
【００６２】
（４）まとめ
子豚にＰＲＲＳの予防又は治療用組成物である組成物Ａを飼料添加給与し、離乳期におけるＰＲＲＳ及び群編成等によるストレス（体重減少等）に対する臨床効果を検討するために、２００８年４月から７月にかけて京都府下の養豚場で試験を実施した。試験群は組成物Ａを離乳直後の子豚に６０日間０．３％飼料添加給与する群、及び無給与で観察する群の２群を設定し、各群に体重及び日齢が均一になるように３０頭ずつの離乳豚を割り付けた。観察項目は、リアルタイムＰＣＲ測定（ＰＲＲＳ：各群２０頭）、ＰＲＲＳ  ＥＬＩＳＡ抗体価測定（各群２０頭）、体重測定（全頭）、飼料摂取量測定（全頭）とした。その結果、ＰＲＲＳにおけるリアルタイムＰＣＲ陽性率は試験開始時には２群間に差は認められなかったものの、試験開始３０日後及び６０日後では組成物Ａ給与群は有意に低値を示し、ＰＲＲＳウイルスの排泄量を抑制したものと推察された。平均増体量は、組成物Ａ給与群において高値を示したものの、全ての期間において統計学的な差は認められなかった。以上の結果から、組成物Ａを離乳直後の子豚に６０日間０．３％飼料添加給与することで、ＰＲＲＳウイルス排泄を抑制する効果が明らかとなり、離乳期の群編成等によるストレスの軽減効果が望めるものと示唆された。
【００６３】
実施例２：
（１）試験材料及び方法
１．被験物質
名称：アロマビオティック：Ｌｏｔ  Ｎｏ．０８０５９５９４１
種類：炭素数６から１０の遊離中鎖脂肪酸を含む混合飼料
製造業者：ベルギー  ビタメックス社
輸入販売業者：物産バイオテック株式会社
含有する飼料添加物：着香料
原材料名：ヤシ油中鎖脂肪酸、二酸化ケイ素、小麦粉
【００６４】
２．試験の概要
アロマビオティックを分娩予定３０日前の母豚の飼料中に添加（妊娠期0.1%、授乳期0.2%）して自由摂餌させることにより経口投与した。観察期間は母豚は投与開始時から離乳時まで、母豚の産子（離乳時に各群３０頭選抜）は離乳後３０日までとし、検査項目は血清のＰＰＲＳウイルス量の測定（リアルタイムＰＣＲ）、試験期間中の臨床観察及び体重測定とした。また、無投与の対照群を設け、比較検討した。
【００６５】
３．供試動物
ＰＲＲＳ汚染農場の妊娠後期（分娩予定３０日前）の母豚１０頭を、下記試験群に各５頭ずつ割り付け、これら母豚の産子を離乳までは産子全頭、離乳から離乳後３０日までは無作為に各群３０頭を選抜し、両群合わせて６０頭について観察を行った。
【００６６】
４．試験区分
（１）母豚
【００６７】
【表１２】
2010138162.tif 000013
【００６８】
（２）子豚
【００６９】
【表１３】
2010138162.tif 000014
【００７０】
５．飼育管理
農場の慣行に従い飼育管理した。
【００７１】
６．試験日程
【００７２】
【表１４】
2010138162.tif 000015
【００７３】
７．観察項目
１）母豚
分娩予定の３０日前、分娩時、及び離乳時の３回、全頭について採血し、血清中のＰＲＲＳウイルス量をリアルタイムＰＣＲ測定により測定した。リアルタイムＰＣＲは、実施例１と同様に行った。
【００７４】
２）子豚
離乳時（２５日齢）及び離乳後３０日（５５日齢）に各群３０頭のうち無作為に選出した２０頭から採血し、血清中のＰＲＲＳウイルス量をリアルタイムＰＣＲ測定により測定した。リアルタイムＰＣＲは、実施例１と同様に行った。
子豚について、分娩時及び採血時に全頭の体重を測定し、増体重を算出した。
また、子豚の一般状態（死亡その他の特記事項）も観察した。
【００７５】
８．統計学的解析
体重及び増体重についてはｔ検定により試験群間の差の検定を行った。死亡率、ＰＲＲＳ陽性率、及び離乳時から離乳後３０日の期間で体重減少を示した個体の割合についてはχ2検定を行った。
【００７６】
（２）試験結果
（２−１）ＰＲＲＳリアルタイムＰＣＲ測定
母豚の個体別のＰＲＲＳリアルタイムＰＣＲ測定結果を表１５に示す。産子子豚の個体別のＰＲＲＳリアルタイムＰＣＲ測定結果を表１６に示す。
【００７７】
【表１５】
2010138162.tif 000016
【００７８】
【表１６】
2010138162.tif 000017
【００７９】
母豚のＰＲＲＳリアルタイムＰＣＲ検出陽性率は試験開始時及び分娩時では両群とも０％であったものの、離乳時では１群で０％であったのに対し、２群では４０％（２／５）であった。統計学的解析の結果では、全時点で試験群間に差は認められなかった。またリアルタイムＰＣＲの平均検出量（copies/mL）は試験開始時及び分娩時では両群とも0.E+00（copies/mL）であったが、離乳時は１群で0.E+00（copies/mL）であったのに対し、２群では1.E+09（copies/mL）と高値を示した。
【００８０】
子豚のＰＲＲＳリアルタイムＰＣＲ検出陽性率は離乳時では両群とも０％であったが、離乳後３０日では１群子豚で０％であったのに対し、２群子豚では７５％（１５／２０）が陽性となり、試験群間に有意な差が認められた（ｐ＜０．０１）。またリアルタイムＰＣＲの平均検出量（copies/mL）は、離乳時では両群とも0.E+00（copies/mL）であったが、離乳後３０日では１群で0.E+00（copies/mL）であったのに対し、２群では6.E+08（copies/mL）となり、２群で高値を示した。
【００８１】
（２−２）体重測定及び増体重（子豚）
産子子豚の平均体重、平均増体重、及び平均増体重指数を表１７に示し、個体別の体重測定結果を表１８及び表１９に示す。
【００８２】
【表１７】
2010138162.tif 000018
【００８３】
【表１８】
2010138162.tif 000019
【００８４】
【表１９】
2010138162.tif 000020
【００８５】
平均体重は分娩時が１群で１．５ｋｇ、２群で１．６ｋｇ、離乳時では１群で５．６ｋｇ、２群で６．４ｋｇ、離乳後３０日では１群で１１．２ｋｇ、２群で１０．８ｋｇであり、全時点で試験群間に有意な差は認められなかった。平均増体重は分娩時−離乳時の期間で１群で４．１ｋｇ、２群で４．７ｋｇ、離乳後３０日間では１群で５．４ｋｇ、２群で４．５ｋｇ、全期間では１群で９．６ｋｇ、２群では９．１ｋｇとなり、離乳後３０日間では１群が高値を示したものの、試験群間に有意な差は認められなかった。２群を１００とした場合の１群の平均増体重指数は、哺乳期間では８７．２、離乳後３０日間では１２０．０、全期間では１０５．５であった。なお、離乳時〜離乳後３０日の期間で体重減少を示した個体の割合は１群で０頭、２群で４頭と２群で多く、統計学的に有意な差が認められた。
【００８６】
（２−３）死亡率
子豚の死亡率を表２０に示す。死亡率は１群で３．３％、２群で１６．７％であり、１群で低い値を示した。
【００８７】
【表２０】
2010138162.tif 000021
【００８８】
（２−４）死亡豚の剖検、菌分離及びリアルタイムＰＣＲ測定
死亡豚の菌分離結果、及び採血可能であった死亡豚のＰＲＲＳリアルタイムＰＣＲ測定結果を表２１に示す。
【００８９】
【表２１】
2010138162.tif 000022
【００９０】
死亡豚の剖検では何れの個体も腸管で出血病変が確認され、菌分離の結果、Clostridium perfringensが分離された。さらに死亡時に採血が可能であった３頭（動物番号１１２、１６４、１７３）のリアルタイムＰＣＲ測定結果では、１群の１頭では陰性、２群の２頭は陽性（3.E+07, 2.E+08 copies/mL）であり、ＰＲＲＳの感染が確認された。
【００９１】
（３）まとめ
離乳時の母豚のリアルタイムＰＣＲ検査における検出率がアロマビオティック投与群では０％であるのに対し、無投与対照群では４０％であり、その検出量は平均で1.E+09(copies/mL)と高い値を示しており、ＰＲＲＳの感染が確認された。また子豚でのリアルタイムＰＣＲ検査における検出率についても、離乳後３０日でアロマビオティック投与群が０％であるのに対し、無投与対照群では７５％で、その検出量の平均は6.E+08(copies/mL)と高い値を示し、母豚同様にＰＲＲＳＶの感染が確認された。さらに、対照群では離乳時にＰＲＲＳウイルスが検出された母豚（No.245,196）の子豚は検出率１００％を示し、当該疾病の母豚から子豚への垂直感染の可能性が示唆され、またウイルス感染が確認されなかった母豚（No.193, 199）の子豚においてもＰＲＲＳＶ検出率が高かったことから、子豚から子豚への水平感染が明らかであった。一方、アロマビオティック投与群では母豚及びその産子とも全頭ＰＲＲＳＶの排泄は認められなかった。これらのことからアロマビオティック投与がＰＲＲＳウイルスの排出を抑制し、当該疾病の病勢を軽減させることが判明した。
【００９２】
平均増体重では、アロマビオティック投与母豚産子群で、無投与対照群に比べて高い値を示し、さらに離乳後30日の時点で離乳時の体重を下回っていた個体はアロマビオティック投与群母豚産子群では認められず、体重減少を示した個体の割合では有意な差が得られた。死亡率では、アロマビオティック投与母豚産子群が無投与対照母豚産子群に比べ、低値を示した。また、死亡豚の剖検結果では何れもClostridium perfringensが分離され、ＰＲＲＳの罹患により、免疫機能が低下して重篤な細菌感染を引き起こしたものと考えられた。
【００９３】
以上のことから、分娩予定３０日前から妊娠母豚にアロマビオティックを飼料添加投与することで、母豚のＰＲＲＳウイルスの排泄を抑制することにより子豚における他の疾病による被害を軽減し、ヒネ豚の発生抑制及び増体重効果や死亡率の軽減が期待できる。
【産業上の利用可能性】
【００９４】
本発明の抗ＰＲＲＳウイルス剤はＰＲＲＳウイルスを抑制することができ、市販の豚用飼料に添加して利用できる。本発明の抗ＰＲＲＳウイルス剤の有効成分及び該抗ＰＲＲＳウイルス剤自体を含む豚用飼料は本発明に包含され、特に子豚、育成・肥育豚、母豚用の飼料に資する。
【配列表】
2010138162000001.app