(57)【要約】      （修正有）【課題】治療用ペプチドを改変して、これらをペプチダーゼ活性から保護し、そしてインビボでの作用のより長い持続時間を提供し、一方で低い毒性を維持し、なお改変されたペプチドの治療方法の提供。【解決手段】改変された治療用ペプチドであって、その治療用ペプチドは、ペプチダーゼ安定化治療用ペプチド結合体を形成し得、そのペプチドは、カルボキシ末端アミノ酸、アミノ末端アミノ酸、構造活性関係分析によって同定される治療的活性な領域およびより低い治療的活性な領域を含む。そのペプチドは、それが、アミノ酸のそのより低い治療的活性な領域に位置するアミノ酸に結合される反応性基を有する、特定のアミノ酸配列を含む。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
明細書に記載の発明。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（発明の分野）
本発明は、改変された治療用ペプチドに関する。特に、本発明は、ペプチドが選択的に
血液成分に結合体化することを可能にする改変による、内因性治療用ペプチドの、ペプチ
ダーゼ活性からの保護に関し、従って、ペプチダーゼ活性からのペプチドの保護、および
種々の障害を処置するための治療用ペプチドの作用の持続時間の増加に関する。
【背景技術】
【０００２】
（発明の背景）
多くの内因性ペプチドは、生物学的プロセスの主要な成分であると記載されてきた。こ
れらのペプチドのいくつかは、種々の障害の管理のための主要な治療薬剤として、同定さ
れてきた。一般に、内因性ペプチドは、非天然の配列を有する合成ペプチドよりも、治療
薬剤としてより所望される。なぜなら、内因性ペプチドは、その内因性特性に起因して、
免疫応答を生成しないからである。さらに、内因性ペプチドは、その標的レセプターに対
して非常に特異的であり、そして合成および製造が容易である。しかし、このような治療
用ペプチドの送達の主要な困難は、これらの短い血清中半減期であり、これは主として、
迅速な血清クリアランス、およびペプチダーゼの作用を介するタンパク質分解性分解に起
因する。
【０００３】
ペプチダーゼは、結合を横切って水分子を挿入することによって、ペプチドにおけるペ
プチド結合を破壊する。一般に、大部分のペプチドは、数分以下の様式で、身体内におい
てペプチダーゼにより破壊される。さらに、いくつかのペプチダーゼは、特定の型のペプ
チドに対して特異的であり、これらの分解をさらにより迅速にする。従って、ペプチドを
治療薬剤として使用する場合には、その活性は一般に減少される。なぜなら、このペプチ
ドが、ペプチダーゼの作用に起因して、身体内で迅速に分解するからである。
【０００４】
この欠点を克服するための１つの方法は、大きな投薬量の目的の治療用ペプチドを患者
に投与し、これによって、ペプチドのいくらかが分解する場合でさえも、治療的に効果的
であるために十分に残るようにすることである。しかし、この方法は、患者に対して非常
に不快である。大部分の治療用ペプチドは経口投与され得ないので、治療用ペプチドが絶
えず注入されなければならないか、静脈内注射により頻繁に投与されなければならないか
、または皮下注射という不都合な経路によって頻繁に投与されなければならないかのいず
れかである。頻繁な投与に関する必要性はまた、多くの潜在的なペプチド治療剤が、処置
の経過あたり受容不可能に高い計画費用を有する結果となる。多量の分解したペプチドの
存在はまた、所望でない副作用を生じさせ得る。
【０００５】
投与の際の不快および高い費用は、魅力的な生物活性プロフィールを有する大部分の治
療用ペプチドが薬物候補物として開発されない２つの理由である。その代わりに、これら
の治療用ペプチドは、治療用ペプチドの代わりとなるペプチド模倣物化合物の開発のため
のテンプレートとして使用される。生体工学および大きな製薬会社は、頻繁に、長く高価
な最適化プログラムに着手して、受容不可能な副作用プロフィールを招くことなく、治療
用ペプチドにおいて見られる活性を模倣する非ペプチドの有機化合物を開発することを試
みる。例えば、環状ペプチド、ペプチド模倣物ならびに高価なＳＡＲ（構造活性関係）お
よび分子モデル化試験から生じる小分子は、非常に多くのペプチド模倣物の開発をもたら
した。しかし、これらのペプチド模倣物は、いかなる様式においても、治療用ペプチドの
正確な最初の生物学的性質を反映せず、従って、治療薬剤として内因性治療用ペプチドに
劣る。
【０００６】
ペプチド模倣物を作製することの代替は、ペプチダーゼの活性をブロックして、治療用
ペプチドの分解を防止すること、または治療用ペプチドの分解が減速されながらもなお生
物学的活性を維持する様式で治療用ペプチドを改変することである。このような方法とし
ては、ポリマー材料（例えば、デキストラン、ポリビニルピロリドン、糖ペプチド、ポリ
エチレングリコールおよびポリアミノ酸）との結合体化、アドロイチン（ａｄｒｏｉｔｉ
ｎ）サルフェートとの結合体化、ならびに多糖類、低分子量化合物（例えば、アミノレシ
チン（ａｍｉｎｏｌｅｔｈｉｃｉｎ）、脂肪酸、ビタミンＢ12、およびグリコシド）との
結合体化が挙げられる。しかし、これらの結合体は、依然として、しばしばプロテアーゼ
活性に対して感受性である。さらに、これらのペプチドの治療的活性は、しばしば、ポリ
マー材料の付加により減少する。最後に、この材料がインビボで注射される場合に、これ
らの結合体が免疫応答を生じる危険性が存在する。いくつかの方法は、キャリアタンパク
質とエキソビボで結合体化し、ランダムな結合体の生成を生じることを含む。結合体は製
造が困難であるので、これらの興味は、キャリアが市販で入手可能であること、およびこ
れらの乏しい薬経済学により制限される。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
従って、治療用ペプチドを改変して、これらをペプチダーゼ活性から保護し、そしてイ
ンビボでの作用のより長い持続時間を提供し、一方で低い毒性を維持し、なお改変された
ペプチドの治療の利点を保持するための、新規方法に関する必要性が存在する。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
（発明の要旨）
項目１．改変された治療用ペプチドであって、その治療用ペプチドは、ぺプチダーゼ安定
化治療用ペプチドを形成し得、その治療用ペプチドは、３個と５０個との間のアミノ酸か
らなり、そのペプチドは、カルボキシ末端アミノ酸、アミノ末端アミノ酸、アミノ酸の治
療的に活性な領域およびアミノ酸の治療的により低い活性の領域を有しアミノ酸の治療的
により低い活性の領域を有し、そのペプチドは、以下：
血液成分上のアミノ酸、ヒドロキシル基、またはチオール基と反応して、安定な共有結
合を形成し、それによってそのぺプチダーゼ安定化治療用ペプチドを形成する反応性基で
あって、ここで、その反応性基は、スクシンイミジル基およびマレイミド基からなる群よ
り選択され、そしてその反応性基は、そのアミノ酸の治療的により低い活性の領域に位置
するアミノ酸に結合される、反応性基、
を含む、改変された治療用ペプチド。
項目２．項目１に記載のペプチドであって、上記アミノ酸の治療的に活性な領域が、上記
カルボキシ末端アミノ酸、および上記アミノ末端アミノ酸に結合される上記反応性基を含
む、ペプチド。
項目３．項目１に記載のペプチドであって、上記アミノ酸の治療的に活性な領域が、上記
アミノ末端アミノ酸、および上記カルボキシ末端アミノ酸に結合される上記反応性基を含
む、ペプチド。
項目４．項目１に記載のペプチドであって、上記アミノ酸の治療的に活性な領域が、上記
カルボキシ末端アミノ酸、および上記アミノ末端アミノ酸とそのカルボキシ末端アミノ酸
との間に位置するアミノ酸に結合される上記反応性基を含む、ペプチド。
項目５．項目１に記載のペプチドであって、上記アミノ酸の治療的に活性な領域が、上記
アミノ末端アミノ酸、およびおよびそのアミノ末端アミノ酸と上記カルボキシ末端アミノ
酸との間に配置されたアミノ酸に結合される上記反応性基を含む、ペプチド。
項目６．項目１に記載の改変された治療用ペプチドを合成する方法であって、その方法は
、以下：
ａ）その治療用ペプチドが、システインを含まない場合、上記カルボキシ末端アミノ酸
からそのペプチドを合成し、そして上記反応性基をそのカルボキシ末端アミノ酸に付加す
るか、または末端リジンをそのカルボキシ末端アミノ酸に付加しかつその反応性基をその
末端リジンに付加する工程；
ｂ）その治療用ペプチドが、たった１つのシステインを含む場合、その反応性基を上記
治療的により低い活性の領域のアミノ酸に付加する前に、そのシステインを保護基と反応
させる工程；
ｃ）その治療用ペプチドが、ジスルフィド架橋として２つのシステインを含む場合、そ
の２つのシステインを酸化し、そしてその反応性基を上記アミノ末端アミノ酸、またはそ
のカルボキシ末端アミノ酸、またはそのカルボキシ末端アミノ酸とそのアミノ末端アミノ
酸との間に位置するアミノ酸に付加する工程；ならびに
ｄ）その治療用ペプチドが、ジスルフィド架橋として２より多くのシステインを含む場
合、そのジスルフィド架橋におけるそのシステインを連続的に酸化し、そしてその反応性
基のそのカルボキシ末端アミノ酸への付加の前に、そのペプチドを精製する工程、
を包含する、方法。
項目７．インビボでペプチダーゼ活性から治療用ペプチドを保護するための方法であって
、そのペプチドは、３個と５０個との間のアミノ酸からなり、かつカルボキシ末端および
アミノ末端、ならびにカルボキシ末端アミノ酸およびアミノ末端アミノ酸を有し、その方
法は、以下：
（ａ）反応性基をそのカルボキシ末端アミノ酸、そのアミノ末端アミノ酸、またはその
アミノ末端アミノ酸とそのカルボキシ末端アミノ酸との間に位置するアミノ酸に結合させ
ることによってそのペプチドを改変する工程であって、その結果、その改変されたペプチ
ドが、血液成分上の反応性官能基とインビボで共有結合を形成し得る、工程；
（ｂ）その反応性基と血液成分上の反応性官能基との間に共有結合を形成してペプチド
−血液成分結合体を形成し、それによってペプチダーゼ活性からそのペプチドを保護する
工程；ならびに
（ｃ）そのペプチド−血液成分結合体の安定性を分析して、そのペプチドのペプチダー
ゼ活性からの保護を評価する工程、
を包含する、方法。
項目８．工程（ｂ）より前にインビボで上記改変されたペプチドを投与し、その結果、上
記ペプチド−血液成分結合体がインビボで形成される工程をさらに包含する、項目７に記
載の方法。
項目９．工程（ｂ）は、エキソビボで起こる、項目７に記載の方法。
項目１０．工程（ｃ）は、インビボで行われる、項目７に記載の方法。
項目１１．上記反応性基は、マレイミド基である、項目７に記載の方法。
項目１２．上記反応性基は、連結基を介して上記ペプチドに結合される、項目７に記載の
方法。
項目１３．上記血液成分はアルブミンである、項目７に記載の方法。
項目１４．１以上の上記アミノ酸は、合成的である、項目７に記載の方法。
項目１５．インビボでペプチダーゼ活性から治療用ペプチドを保護する方法であって、そ
のペプチドは、３個と５０個との間のアミノ酸からなり、かつアミノ酸の治療的に活性な
領域およびアミノ酸の治療的により低い活性の領域を有し、その方法は、以下：
（ａ）そのアミノ酸の治療的に活性な領域を決定する工程；
（ｂ）そのアミノ酸の治療的により低い活性の領域に含まれるアミノ酸において、反応
性基をそのアミノ酸に結合させて改変されたペプチドを形成することによってそのペプチ
ドを改変し、その結果、その改変されたペプチドが治療的活性を有し、かつ血液成分上の
反応性官能基とインビボで共有結合を形成し得る、工程；
（ｃ）反応性実体と血液成分上の反応性官能基との間に共有結合を形成してペプチド−
血液成分結合体を形成し、それによって、そのペプチドをペプチダーゼ活性から保護する
工程；ならびに
（ｄ）そのペプチド−血液成分結合体の安定性を分析してそのペプチドのペプチダーゼ
活性からの保護を評価する工程、
を包含する、ペプチド。
項目１６．工程（ｃ）の前に上記改変されたペプチドをインビボで投与し、その結果、上
記ペプチド−血液成分結合体が、インビボで形成される、工程をさらに包含する、項目１
５に記載の方法。
項目１７．工程（ｃ）は、エキソビボで起こる、項目１５に記載の方法。
項目１８．工程（ｄ）は、インビボで行われる、項目１５に記載の方法。
項目１９．工程（ｃ）は、インビボで行われる、項目１７に記載の方法。
項目２０．工程（ｄ）は、エキソビボで行われる、項目１９に記載の方法。
項目２１．項目１５に記載の方法であって、ここで、上記ペプチドは。カルボキシ末端、
アミノ末端、カルボキシ末端アミノ酸およびアミノ末端アミノ酸を有し、そして工程（ｂ
）は、さらに、以下：
（ａ）上記治療的により低い活性の領域が、そのペプチドのカルボキシ末端に位置する
場合、そのペプチドのカルボキシ末端アミノ酸においてそのペプチドを改変する工程；
（ｂ）上記より低い活性部分が、そのペプチドのそのアミノ末端に位置する場合、その
ペプチドのアミノ末端アミノ酸においてそのペプチドを改変する工程；ならびに
（ｃ）そのより低い活性部分が、そのペプチドのアミノ末端にもカルボキシ末端にも位
置しない場合、そのカルボキシ末端とそのアミノ末端との間に位置するアミノ酸において
そのペプチドを改変する工程、
を包含する、方法。
項目２２．上記反応性基は、マレイミド基である、項目１５に記載の方法。
項目２３．上記反応性基は、連結基を介して上記ペプチドに結合される、項目２に記載の
方法。
項目２４．上記血液成分は、アルブミンである、項目１５に記載の方法。
項目２５．１以上の上記アミノ酸は、合成的である、項目１５に記載の方法。
本発明は、目的の治療用ペプチドを改変し、そしてこのペプチドをタンパク質キャリア
に付着させ、その結果、ペプチダーゼの作用が防止されるか、または減速されることによ
り、身体内でのペプチドの分解の問題を克服することに関する。より特定すると、本発明
は、血液タンパク質の利用可能な官能基と反応して共有結合を形成し得る、治療用ペプチ
ドの化学的に反応性の新規誘導体（特に、治療用ペプチド−マレイミド誘導体）に関する
。本発明はまた、このような治療用ペプチドの化学的に反応性の新規な誘導体またはアナ
ログに関する。本発明は、さらに、このような化合物の治療的使用に関する。
【０００９】
本発明は、切断される最初の残基への合成的改変を利用して、治療用ペプチドを改変し
、そしてタンパク質キャリア（好ましくは、アルブミン）に、インビボまたはエキソビボ
の技術を介して付着させて、ペプチダーゼの作用を防止または減少させることに関する。
治療用ペプチドは、通常、Ｎ末端部分、Ｃ末端部分、またはペプチド鎖の内部の部分にお
いて、活性である。本発明の技術を使用して、治療用ペプチドの活性部分以外の部位を、
特定の反応性基により改変する。これらの反応性基は、血液成分に存在する官能基と共有
結合を形成し得る。この反応性基は、治療用ペプチドが血液成分と結合する場合に、この
ペプチドが親化合物の活性のかなりの割合を保持するような部位に位置する。
【００１０】
本発明において使用される化学的改変による、治療用ペプチドの改変は、全てまたは大
部分のペプチド特異性が、血液成分への付着にもかかわらず保存されるような様式で、な
される。この治療用ペプチド−血液成分複合体は、ここで、ペプチダーゼにより分解され
ることなく、そしてこのペプチドがその治療的活性を依然として維持しながら、種々の身
体領域に移動し得る。本発明は、全ての公知の治療用ペプチドに適用可能であり、そして
遊離ペプチドと改変した治療用ペプチドとについての薬物動力学的パラメータを直接比較
することにより、生理学的条件下で容易に試験される。
【００１１】
本発明は、３と５０との間のアミノ酸からなる、ペプチダーゼに対して安定化された治
療用ペプチドを形成し得る、改変された治療用ペプチドに関する。このペプチドは、カル
ボキシ末端アミノ酸、アミノ末端アミノ酸、アミノ酸の治療的に活性な領域およびアミノ
酸の治療的活性の低い領域を有する。このペプチドは、血液成分上のアミノ基、ヒドロキ
シル基、またはチオール基と反応して、安定な共有結合を形成し、これによって、ペプチ
ダーゼに対して安定化された治療用ペプチドを形成する、反応性基を含む。本発明のペプ
チドにおいて、反応性基は、スクシンイミジル基およびマレイミド基からなる群から選択
され、そしてこの反応性基は、アミノ酸の治療的により低い活性の領域に位置するアミノ
酸に付着される。
【００１２】
１つの実施形態において、ペプチドの治療的に活性な領域は、カルボキシ末端アミノ酸
を含み、そして反応性基は、上記アミノ末端アミノ酸に付着される。
【００１３】
別の実施形態において、ペプチドの治療的に活性な領域は、アミノ末端アミノ酸を含み
、そして反応性基は、カルボキシ末端アミノ酸に付着される。
【００１４】
別の実施形態において、ペプチドの治療的に活性な領域は、カルボキシ末端アミノ酸を
含み、そして反応性基は、アミノ末端アミノ酸とカルボキシ末端アミノ酸との間に位置す
るアミノ酸に付着される。
【００１５】
なお別の実施形態において、治療的に活性な領域は、アミノ末端アミノ酸を含み、そし
て反応性基は、アミノ末端アミノ酸とカルボキシ末端アミノ酸との間に位置するアミノ酸
に付着される。
【００１６】
本発明はまた、改変された治療用ペプチドを合成する方法に関する。この方法は、以下
の工程を包含する。第一工程において、治療用ペプチドがシステインを含まない場合には
、このペプチドをカルボキシ末端アミノ酸から合成し、そして反応性基をこのカルボキシ
末端アミノ酸に付加する。あるいは、末端リジンをカルボキシ末端アミノ酸に付加させ、
そして反応性基をこの末端リジンに付加する。第二工程において、治療用ペプチドが１つ
のみのシステインを含む場合には、このシステインを保護基と反応させ、その後、このペ
プチドの治療的により低い活性の領域のアミノ酸に反応性基を付加する。第三工程におい
て、治療用ペプチドが２つのシステインをジスルフィド架橋として含む場合には、これら
２つのシステインを酸化して、反応性基を、この治療用ペプチドのアミノ末端アミノ酸、
もしくはカルボキシ末端アミノ酸、またはカルボキシ末端アミノ酸とアミノ末端アミノ酸
との間に位置するアミノ酸に付加させる。第四工程において、治療用ペプチドが２つより
多いシステインをジスルフィド架橋として含む場合には、これらのシステインを、ジスル
フィド架橋において連続的に酸化し、そしてこのペプチドを精製し、その後、反応性基を
カルボキシ末端アミノ酸に付加する。
【００１７】
本発明はまた、治療用ペプチドをインビボでペプチダーゼ活性から保護するための方法
に関し、このペプチドは、３と５０との間のアミノ酸からなり、そしてカルボキシ末端お
よびアミノ末端、ならびにカルボキシ末端アミノ酸およびアミノ末端アミノ酸を有する。
この方法は、以下の工程を包含する：
（ａ）反応性基を、カルボキシ末端アミノ酸、アミノ末端アミノ酸、またはアミノ酸末
端アミノ酸とカルボキシ末端アミノ酸との間に位置するアミノ酸に付着させることにより
、ペプチドを改変する工程であって、その結果、この改変されたペプチドが、血液成分の
反応性官能基とインビボで共有結合を形成し得る、工程；
（ｂ）反応性基と血液成分の反応性官能基との間に共有結合を形成して、ペプチド−血
液成分結合体を形成する工程であって、これによって、このペプチドをペプチダーゼ活性
から保護する、工程；ならびに
（ｃ）このペプチド−血液成分結合体の安定性を分析して、このペプチドのペプチダー
ゼ活性からの保護を評価する工程。
これらの工程は、インビボで実施してもエキソビボで実施してもいずれでもよい。
【００１８】
本発明はまた、治療用ペプチドをペプチダーゼ活性からインビボで保護するための方法
に関し、このペプチドは、３と５０との間のアミノ酸からなり、そしてアミノ酸の治療的
に活性な領域およびアミノ酸の治療的により低い活性の領域を有する。この方法は、以下
の工程を包含する：
（ａ）アミノ酸の治療的に活性な領域を決定する工程；
（ｂ）反応性基をアミノ酸に付着させて改変されたペプチドを形成することによって、
アミノ酸の治療的により低い活性の領域に含まれるアミノ酸においてペプチドを改変する
工程であって、その結果、この改変されたペプチドが治療的活性を有し、そして血液成分
の反応性官能基とインビボで共有結合を形成し得る、工程；
（ｃ）反応性実体と血液成分の反応性官能基との間に共有結合を形成して、ペプチド−
血液成分結合体を形成する工程であって、これによって、このペプチドをペプチダーゼ活
性から保護する、工程；ならびに
（ｄ）このペプチド−血液成分結合体の安定性を分析して、このペプチドのペプチダー
ゼ活性からの保護を評価する、工程。
これらの工程は、インビボで実施してもエキソビボで実施してもいずれでもよい。
【００１９】
本発明の組成物および方法において有用なペプチドとしては、配列番号１〜配列番号１
６１７に提示されるペプチドが挙げられるが、これらに限定されない。
【発明を実施するための形態】
【００２０】
（発明の詳細な説明）
（定義）
本発明の完全な理解を確実にするために、以下の定義を提供する：
反応性基：  反応性基とは、共有結合を形成し得る実体である。このような反応性基は
、目的の治療用ペプチドに連結または結合される。反応性基は、一般に、水性環境内で安
定であり、そして通常、カルボキシ基、ホスホリル基、または従来のアシル基であり、エ
ステルまたは混合無水物のいずれか、あるいはイミデートとして存在し、これによって、
移動性の血液成分の標的部位の、アミノ基、ヒドロキシまたはチオールのような官能基と
共有結合を形成し得る。大部分において、これらのエステルは、フェノール性化合物を含
むか、またはチオールエステル、アルキルエステル、リン酸エステルなどである。反応性
基としては、スクシンイミジル（ｓｕｃｃｉｍｉｄｙｌ）基およびマレイミド基が挙げら
れる。
【００２１】
官能基：  官能基とは、改変された治療用ペプチドの反応性基が反応して共有結合を形
成する、血液成分上の基であり、可動性タンパク質および固定タンパク質を含む。官能基
は、通常、エステル反応性基との結合のためのヒドロキシル基、マレイミド、イミデート
およびチオールエステル基との結合のためのチオール基；活性化カルボキシル基、ホスホ
リル基または反応性基上の他の任意のアシル基との結合のためのアミノ基を含む。
【００２２】
血液成分：  血液成分は、固定されていても可動であってもいずれでもよい。固定され
た血液成分は、非可動性の血液成分であり、そして組織、膜レセプター、介在タンパク質
、フィブリンタンパク質、コラーゲン、血小板、内皮細胞、上皮細胞およびこれらが結合
する膜および膜レセプター、身体の細胞（ｓｏｍａｔｉｃ  ｂｏｄｙ  ｃｅｌｌ）、骨格
細胞および平滑筋細胞、神経成分、骨細胞および破骨細胞ならびに全ての身体組織（特に
、循環系およびリンパ系に関連するもの）を含む。可動性血液成分とは、いかなる延長し
た期間にわたっても（一般的には５分を超えず、より通常には１分）固定された位置を有
さない、血液成分である。これらの血液成分は、膜結合しておらず、そして延長した期間
にわたって血液中に存在し、そして少なくとも０．１μｇ／ｍｌの最小濃度で存在する。
可動性血液成分としては、血清アルブミン、トランスフェリン、フェリチン、ならびにＩ
ｇＭおよびＩｇＧのような免疫グロブリンが挙げられる。可動性血液成分の半減期は、少
なくとも約１２時間である。
【００２３】
保護基：  保護基とは、ペプチド誘導体をそれ自体と反応しないよう保護するために利
用される、化学部分である。種々の保護基が、米国特許第５，４９３，００７号（これは
、本明細書中に参考として援用される）に開示される。このような保護基としては、アセ
チル、フルオレニルメチルオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）、ｔ−ブチルオキシカルボニル
（Ｂｏｃ）、ベンジルオキシカルボニル（Ｃｂｚ）などが挙げられる。特定の保護された
アミノ酸を、表１に示す。
【００２４】
連結基：  連結基とは、反応性基を治療用ペプチドに連結または接続する、化学部分で
ある。連結基は、１つ以上のアルキル基、アルコキシ基、アルケニル基、アルキル基で置
換されたアルキニル基またはアミノ基、シクロアルキル基、多環式基、アリール基、ポリ
アリール基、置換アリール基、複素環式基、および置換複素環式基を含み得る。連結基は
また、ＡＥＡ（（２−アミノ）エトキシ酢酸）または好ましい連結基であるＡＥＥＡ（［
２−（２−アミノ）エトキシ）］エトキシ酢酸）のような、ポリエトキシアミノ酸を含み
得る。好ましい連結基は、アミノエトキシエトキシ酢酸（ＡＥＥＡ）である。
【００２５】
感受性官能基：  感受性官能基とは、治療用ペプチドに潜在的な反応部位を提供する、
原子の群である。存在する場合には、感受性官能基は、リンカー−反応性基改変のための
付着点として、選択され得る。感受性官能基としては、カルボキシル基、アミノ基、チオ
ール基、およびヒドロキシル基が挙げられるが、これらに限定されない。
【００２６】
改変された治療用ペプチド：  改変された治療用ペプチドとは、反応性基の付着により
改変された治療用ペプチドであり、そして血液成分との結合体化により、ペプチダーゼに
対して安定化されたペプチドを形成し得る。反応性基は、連結基を介してか、または必要
に応じて連結基を使用せずにかのいずれかで、治療用ペプチドに付着され得る。１つ以上
のさらなるアミノ酸が治療用ペプチドに付加されて、反応性基の付着を容易にし得ること
もまた、考慮される。改変されたペプチドは、血液成分との結合体化がインビボで起こる
ように、インビボで投与され得るか、またはこれらは、最初に血液成分とインビトロで結
合体化され、そして得られるペプチダーゼに対して安定化されたペプチド（以下に定義さ
れるような）が、インビボで投与され得る。用語「改変された治療用ペプチド」および「
改変されたペプチド」は、本願において交換可能に使用され得る。
【００２７】
ペプチダーゼに対して安定化された治療用ペプチド：  ペプチダーゼに対して安定化さ
れた治療用ペプチドとは、連結基のありまたはなしで、改変されたペプチドの反応性基と
血液成分の官能基との間に形成される共有結合を介して、血液成分に結合体化された、改
変されたペプチドである。ペプチダーゼに対して安定化されたペプチドは、インビボでペ
プチダーゼの存在下で、安定化されていないペプチドより安定である。ペプチダーゼに対
して安定化された治療用ペプチドは、一般に、同じ配列の安定化されていないペプチドと
比較して、少なくとも１０〜５０％増加した半減期を有する。ペプチダーゼ安定性は、血
清または血液中の改変されていない治療用ペプチドの半減期と、血清または血液中の改変
された対応する治療用ペプチドの半減期とを比較することにより、決定される。半減期は
、改変されたペプチドおよび改変されていないペプチドの投与後の血清または血液をサン
プリングし、そしてそのペプチドの活性を決定することにより、決定される。活性を決定
することに加えて、治療用ペプチドの長さもまた、測定され得る。
【００２８】
（治療用ペプチド）−本発明にて使用される場合、治療用ペプチドとは、以下に規定さ
れるような治療的活性を有する、２アミノ酸と５０アミノ酸との間のアミノ酸鎖である。
各治療用ペプチドは、アミノ末端（Ｎ末端またはアミノ末端アミノ酸とも呼ばれる）、カ
ルボキシル末端（Ｃ末端またはカルボキシル末端アミノ酸とも呼ばれる）、そしてこのア
ミノ末端とカルボキシル末端との間に位置する内部アミノ酸を有する。このアミノ末端は
、遊離α−アミノ基を有するその治療用ペプチド中で唯一のアミノ酸により規定される。
このカルボキシル末端は、遊離α−カルボキシル基を有するその治療用ペプチド中で唯一
のアミノ酸により規定される。
【００２９】
本発明にて使用される治療用ペプチドは、一般にそのアミノ末端か、カルボキシル末端
か、または内部アミノ酸に位置する、治療的に活性な領域を含む。この治療的に活性な領
域は、本願にてより詳細に規定されるような、盲目的（ｂｌｉｎｄ）置換または構造活性
相関（ＳＡＲ）駆動置換を使用して同定され得る。ＳＡＲは、一連の化合物について、分
子の構造とその薬理学的活性との間の関係を規定する分析である。あるいは、その治療的
に活性な領域が以前に規定されておりそしてその文献にて利用可能である場合、科学雑誌
のような参考文献を参照することにより、その治療的に活性な領域が入手され得る。その
ペプチドの治療的に活性な領域の位置の知識は、下記により詳細に規定されるように、そ
の治療用ペプチドを改変するために重要である。
【００３０】
本発明にて使用される治療用ペプチドは、そのアミノ末端か、カルボキシル末端もしく
はカルボキシル末端付近か、または内部アミノ酸もしくは内部アミノ酸付近に一般的に位
置する、治療的により低い活性の領域も含む。この治療的により低い活性な領域は、その
治療用ペプチドの治療的に活性な領域と一致しないアミノ酸の領域である。この治療的に
より低い活性な領域は、一般的には治療的に活性な領域から離れて位置し、その結果、そ
の治療的により低い活性な領域での改変は、その治療用ペプチドの治療的活性に実質的に
は影響しない。例えば、その治療的に活性な領域がアミノ末端に位置する場合、その治療
用ペプチドは、カルボキシル末端または内部アミノ酸のいずれかにて改変される。あるい
は、その治療的に活性な領域がカルボキシル末端に位置する場合、その治療用ペプチドは
、アミノ末端または内部アミノ酸のいずれかにて改変される。最後に、その治療的に活性
な領域が内部領域に位置する場合、その治療用ペプチドは、アミノ末端またはカルボキシ
ル末端のいずれかにて改変される。
【００３１】
「治療的活性」は、患者における生物学的障害を治癒することまたは治療することに関
する、任意の活性である。上記治療用ペプチドの例としては、以下が挙げられる：下垂体
ホルモン（例えば、バソプレシン、オキシトシン、メラニン細胞刺激ホルモン、副腎皮質
刺激ホルモン、成長ホルモン）；視床下部ホルモン（例えば、成長ホルモン放出因子、副
腎皮質刺激ホルモン放出因子、プロラクチン放出ペプチド、性腺刺激ホルモン放出ホルモ
ンおよびその関連ペプチド、黄体化ホルモン放出ホルモン、甲状腺刺激ホルモン放出ホル
モン、オレキシン、およびソマトスタチン）；甲状腺ホルモン（例えば、カルシトニン、
カルシトニン前駆体、およびカルシトニン遺伝子関連ペプチド）；副甲状腺ホルモンおよ
びその関連タンパク質；膵ホルモン（例えば、インスリンおよびインスリン様ペプチド、
グルカゴン、ソマトスタチン、膵ポリペプチド、アミリン、ペプチドＹＹ、および神経ペ
プチドＹ）；消化ホルモン（例えば、ガストリン、ガストリン放出ペプチド、ガストリン
阻害ペプチド、コレシストキニン、セクレチン、モチリン、および血管作用性腸ペプチド
）；ナトリウム排泄増加性ペプチド（例えば、心房性ナトリウム利尿ペプチド、脳ナトリ
ウム利尿ペプチド、およびＣ型ナトリウム利尿ペプチド）；ニューロキニン（ニューロキ
ニンＡ、ニューロキニンＢおよびＰ物質）；レニン関連ペプチド（例えば、レニン物質お
よびインヒビターおよびアンギオテンシン）；エンドセリン（ビッグエンドセリン、エン
ドセリンＡレセプターアンタゴニスト、およびサラフォトキシン（ｓａｒａｆｏｔｏｘｉ
ｎ）ペプチドを含む）；ならびに他のペプチド（例えば、アドレノメデュリンペプチド、
アラトスタチン（ａｌｌａｔｏｓｔａｔｉｎ）ペプチド、アミロイドβタンパク質フラグ
メント、抗生物質ペプチドおよび抗真菌ペプチド、アポトーシス関連ペプチド、ｂａｇ細
胞ペプチド、ボンベシン、骨Ｇｌａタンパク質ペプチド、ＣＡＲＴペプチド、走化性ペプ
チド、コルチコスタチン（ｃｏｒｔｉｓｔａｔｉｎ）ペプチド、フィブロネクチンフラグ
メントおよびフィブリン関連ペプチド、ＦＭＲＦおよびアナログペプチド、ガラニンおよ
び関連ペプチド、成長因子および関連ペプチド、Ｇ治療用ペプチド結合タンパク質フラグ
メント、グアニリンおよびウログアニリン、インヒビンペプチド、インターロイキンおよ
びインターロイキンレセプタータンパク質、ラミニンフラグメント、レプチンフラグメン
トペプチド、ロイコキニン（ｌｅｕｃｏｋｉｎｉｎ）、マスト細胞脱顆粒ペプチド、下垂
体アデニル酸シクラーゼ活性化ポリペプチド、パンクレアスタチン、ペプチドT、ポリペ
プチド、ウイルス関連ペプチド、シグナル伝達試薬、毒素、および以下のような種々のペ
プチド：アジュバントペプチドアナログ、α接合因子、抗不整脈ペプチド、凍結防止ポリ
ペプチド、食欲不振誘発性ペプチド、ウシ松果体抗生殖ペプチド、ブルシン、Ｃ３ペプチ
ドＰ１６、腫瘍壊死因子、カドヘリンペプチド、クロモグラニンＡフラグメント、避妊テ
トラペプチド、コナントキン（ｃｏｎａｎｔｏｋｉｎ）Ｇ、コナントキン（ｃｏｎａｎｔ
ｏｋｉｎ）Ｔ、甲殻類心臓作用性ペプチド、Ｃ−テロペプチド、シトクロムｂ５８８ペプ
チド、デコルシン、デリシャス（ｄｅｌｉｃｉｏｕｓ）ペプチド、Δ−睡眠誘導ペプチド
、ジアゼムパム（ｄｉａｚｅｍｐａｍ）結合インヒビターフラグメント、一酸化窒素シン
ターゼブロッキングペプチド、ＯＶＡペプチド、血小板カルパインインヒビター（Ｐ１）
、プラスミノゲンアクチベーターインヒビター１、リジン（ｒｉｇｉｎ）、精神分裂病関
連ペプチド、血清胸腺因子、ナトリウムカリウムＡ治療ペプチダーゼインヒビター１、ス
ペラクト（ｓｐｅｒａｃｔ）、精子活性化ペプチド、システミン、トロンビンレセプター
アゴニスト、胸腺液性γ２因子、チモペンチン、サイモシンα１、胸腺因子、ツフシン、
アジポキニンホルモン、尿毒症性ペンタペプチド、および他の治療用ペプチド）。
【００３２】
これらの定義を考慮すると、本発明の焦点は、治療用ペプチドをインビボにてペプチダ
ーゼ活性から保護するように改変し、それによって患者にこのペプチド自体を投与するこ
とと比較して、当該治療用ペプチドの有効治療寿命を伸長することである。
【００３３】
（１．本発明において用いられる治療用ペプチド）
添付の配列表（ＳＥＱＵＥＮＣＥ  ＬＩＳＴＩＮＧ）に提供されるような治療用ペプチ
ドの決定されたアミノ酸配列から選択したペプチドフラグメントは、本発明を含む開発に
おける開始点を構成する。このペプチドは、２〜５０アミノ酸長の範囲にわたる。互換可
能な用語である「ペプチドフラグメント」および「ペプチド部分」は、天然に存在するア
ミノ酸配列から誘導可能な合成のアミノ酸配列および天然に存在するアミノ酸配列の両方
を含むことが意図される。
【００３４】
１つの実施形態において、ペプチドおよびペプチドフラグメントは、以下において詳細
に考察されるような、ベンチトップ（ｂｅｎｃｈ−ｔｏｐ）法、または自動ペプチド合成
機のいずれかによって、従来の手段により合成される。しかし、例えば、タンパク質分解
酵素を用いて、天然に存在するアミノ酸配列を断片化することにより、ペプチドのフラグ
メントを獲得することもまた可能である。さらに、Ｍａｎｉａｔｉｓ、Ｔ．ら、Ｍｏｌｅ
ｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓ
ｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９８２）（本明細書中にて参考として
援用される）により開示されるように、組換えＤＮＡ技術の使用により、治療用ペプチド
の所望のフラグメントを得ることが可能である。既存の方法論に対して他の新しい改変の
使用もまた意図される。
【００３５】
本発明は、治療用ペプチドの天然に存在する配列から誘導可能なペプチドを包含する。
ペプチドが天然に存在する配列を断片化することにより獲得され得る場合、またはペプチ
ドが、天然に存在するアミノ酸配列の配列の知識もしくはこの配列をコードする遺伝物質
（ＤＮＡまたはＲＮＡ）の知識に基いて合成され得る場合、そのペプチドは「天然に存在
するアミノ酸配列から誘導可能である」と言われる。ペプチドの「誘導体」であると言わ
れる分子は、本発明の範囲内に含まれる。このような「誘導体」は、以下の特徴を有する
：（１）治療用ペプチドまたはこのペプチドの同様のサイズのフラグメントと実質的な相
同性を共有する、そして（２）このペプチドと同じ治療活性を伴って機能し得る。
【００３６】
ペプチドの誘導体のアミノ酸配列が、その誘導体と同じアミノ酸残基を有するペプチド
またはペプチドのフラグメントのいずれかの配列と、少なくとも８０％、そしてより好ま
しくは少なくとも９０％、そして最も好ましくは少なくとも９５％同じである場合、その
ペプチドの誘導体は、このペプチドと「実質的な相同性」を共有していると言われる。
【００３７】
本発明の誘導体は、以下に詳細に考察するように、天然に存在する治療用ペプチドの配
列に実質的に相同な配列を含むことに加えて、そのアミノ末端および／またはカルボキシ
末端で、１つ以上のさらなるアミノ酸を含み得る、フラグメントを包含する。従って、本
発明は、天然に存在する治療用ペプチド配列に存在しないかもしれない１つ以上のアミノ
酸を含み得る、治療用ペプチドのポリペプチドフラグメントに関する（ただし、このよう
なフラグメントが、その治療用ペプチドの活性を超える治療活性を有する場合である）。
【００３８】
同様に、本発明は、天然に存在する治療用ペプチドの配列と実質的に相同である配列を
含むが、その治療用ペプチドに天然に見出されるアミノ末端および／またはカルボキシ末
端の１つ以上のさらなるアミノ酸を欠失し得る、ポリペプチドフラグメントを包含する。
従って、本発明は、その天然に存在するペプチド配列に通常存在する１つ以上のアミノ酸
を欠失し得る治療用ペプチドのポリペプチドフラグメントに関する（ただし、このような
ポリペプチドがその治療用ペプチドの活性を超える治療活性を有する場合である）。
【００３９】
本発明はまた、重要ではないアミノ酸置換を有する（従って、その天然の配列のアミノ
酸配列とは異なるアミノ酸を有する）、上記フラグメントの明白または瑣末な改変体を包
含する（ただし、このような改変体が、上記誘導体の活性と実質的に同一である活性を有
する場合である）。明白な置換または瑣末な置換の例としては、塩基性残基同士の置換（
すなわち、ＬｙｓをＡｒｇに）、疎水性残基同士の置換（すなわち、ＩｌｅをＬｅｕに）
、または芳香族残基同士の置換（すなわち、ＴｙｒをＰｈｅに）、などが挙げられる。
【００４０】
当該分野で公知のとおり、アミノ酸残基は、以下に詳細に考察するように、適切なアミ
ノ保護基またはカルボキシル保護基を用いて、その保護形態または非保護形態であり得る
。可変性の長さのペプチドは、遊離アミン（Ｎ末端へ）、またはその酸付加塩の形態であ
り得る。通常の酸付加塩は、ハロゲン化水素酸（ｈｙｄｒｏｈａｌｉｃ  ａｃｉｄ）塩（
すなわち、ＨＢｒ、ＨＩまたはより好ましくはＨＣｌ）である。有用なカチオンは、アル
カリ金属またはアルカリ土類金属のカチオン（すなわち、Ｎａ、Ｋ、Ｌｉ、Ｃａ、Ｂａな
ど）またはアミンカチオン（すなわち、テトラアルキルアンモニウム、トリアルキルアン
モニウム（ここでアルキルは、Ｃ1〜Ｃ12であり得る））である。
【００４１】
治療活性を有する任意のペプチドが、本発明において用いられ得る。以下のペプチドの
リストにより、本発明において用いられ得るペプチドの例が提供される。しかし、この例
は、排他的ではなく、本発明に用いられ得るペプチドの数または型を決して限定しない。
これらの治療用ペプチドおよびこれらのペプチドから生成されるフラグメントは、本発明
に従って改変され得、そして身体中で治療的に用いられ得る。
【００４２】
（Ａ．下垂体ホルモン（配列番号１〜７２））
（副腎皮質刺激ホルモン（ＡＣＴＨ、またはコルチコトロピンともいう）（配列番号１
〜２２）−副腎皮質の内分泌機能は、下垂体前葉ホルモンＡＣＴＨにより調節される。Ａ
ＣＴＨ（３９アミノ酸のペプチド）は、コルチコトロピン放出因子の制御下で、下垂体前
葉のコルチコトロフにおいて生成される。ＡＣＴＨは、プロ−オピオメラノコルチン（Ｐ
ＯＭＣ）として公知の２４１アミノ酸前駆体から翻訳後修飾により誘導される。
【００４３】
ＡＣＴＨの生物学的役割は、副腎皮質の嵩および生存度を維持すること、および副腎皮
質ステロイド（主に、コルチソルおよびコルチコステロン）の産生を刺激することである
。ＡＣＴＨの作用の機構は、ＡＣＴＨレセプターへの結合、その後のアデニレートサイク
ラーゼの活性化、サイクリックＡＭＰ（ｃＡＭＰ）の上昇、および副腎皮質組織のプロテ
インキナーゼＡ（ＰＫＡ）活性の増大を含む。これらの事象の主要な効果は、側鎖切断酵
素（コレステロールをプレグネノロンに転換する）の活性を増大することである。種々の
副腎皮質の区画における酵素の分布が原因で、ＡＣＴＨの主な生理学的効果は、グルココ
ルチコステロイドの産生である。
【００４４】
副腎皮質活性を制御する機能だけでなく、ＡＣＴＨは、内分泌腺および内分泌腺の調節
、温度制御、ならびに神経再生および発達への影響を含む、多様な生物学的役割を有する
ようである。さらに、ＡＣＴＨおよびそのフラグメントは、意欲、学習および行動に影響
する。従って、治療用因子としてのＡＣＴＨの使用は、これらの機能の制御を助け得る。
下垂体前葉からのＡＣＴＨの放出は、コルチコトロピン放出因子（ＣＲＦ）により媒介さ
れる。
【００４５】
（成長ホルモンペプチド（配列番号２３〜２４、４５）−ヒト胎盤性ラクトゲン（ｈＰ
Ｌ）、成長ホルモン、およびプロラクチン（ＰｒＩ）は、成長ホルモンファミリーを構成
する。全てが約２００アミノ酸、２つのジスルフィド結合を有し、そしてグルコシル化を
有さない。それぞれがその活性に対して特定のレセプターおよび特有の特徴を有するが、
その全てが、成長促進活性および乳腺刺激性活性を保有する。成熟ＧＨ（２２，０００ダ
ルトン）は、一本のポリペプチド鎖として好酸性下垂体ソマトトロピン産生細胞において
合成される。選択的ＲＮＡスプライシングが原因で、少量の多少小さい分子形態もまた分
泌される。
【００４６】
ＧＨに関する多数の遺伝的欠損が存在する。ＧＨ欠損性小人は、ＧＨを合成または分泌
する能力を欠き、そしてこれらの低身長の個体は、ＧＨ療法によく応答する。ピグミーは
、ＧＨに対するＩＧＦ−１応答を欠くが、その代謝効果を欠くのではない；従って、ピグ
ミーでは、欠損は、本質的にはレセプター後（ｐｏｓｔ−ｒｅｃｅｐｔｏｒ））である。
結局、ラロン型小人は、正常または過剰の血漿ＧＨを有するが、肝臓ＧＨレセプターを欠
き、そして循環のＩＧＦ−１のレベルが低いのである。これらの個体における欠損は、Ｉ
ＧＦ−１の産生による、ＧＨに対する応答不能に密接に関連している。長骨の骨端閉鎖前
の過剰な量ＧＨの産生は、巨人症をもたらし、そして骨端閉鎖の後にＧＨが過剰になる場
合は、末端の骨の成長が末端肥大症の特徴的特徴をもたらす。治療用因子としてＧＨを用
いれば、これらの障害の処置を助け、そしてＧＨレベルが低いかまたは正常な他の種類の
低身長において、もしかすると成長を刺激するかもしれない。
【００４７】
（メラニン細胞刺激ホルモン（ＭＳＨ）（配列番号２５〜３９））−メラニン細胞刺激
ホルモン（ＭＳＨ）は、ドーパミンの制御下で、下垂体中間部において生成される。ＭＳ
Ｈは、脊椎動物の色素細胞メラニン産生の制御、学習および行動に関する神経機能、なら
びに胎児発達において重要な生理学的役割を有し得る。Ｓａｗｙｅｒ、Ｔ．Ｋ．ら、Ｐｒ
ｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，７９，１７５１（１９８２）を参照のこと。
【００４８】
（オキシトシン（配列番号４０〜４４））−オキシトシンは、乳汁分泌の増強、子宮の
収縮、および出産前の骨盤の弛緩に関与する。授乳中の女性におけるオキシトシンの分泌
は、哺乳中の乳首の刺激により得られる直接の神経的フィードバックにより刺激される。
オキシトシンの生理学的効果としては、乳腺筋上皮細胞の収縮（乳腺からの乳汁の駆出を
誘導する）、および出産をうながす子宮平滑筋収縮の刺激が挙げられる。オキシトシンは
、乳腺の分泌腺房の周囲の筋上皮細胞を収縮させ、管を通って乳汁を押し出す。さらに、
オキシトシンはプロラクチンの放出を刺激する。そしてプロラクチンは、乳房の栄養であ
り（ｔｒｏｐｈｉｃ）、そして乳汁の腺房形成を刺激する。従って、結合体化されたオキ
シトシンは、乳汁分泌を補助するために、そして出産前に骨盤を弛緩するのを補助するた
めに用いられ得る。このオキシトシンはまた、産後（ｐｏｓｔ  ｐａｒｔｕｍ）子宮出血
を防ぐために用いられる。
【００４９】
バソプレシン（ＡＤＨ）（配列番号４６〜７２）−バソプレシンはまた、抗利尿ホルモ
ン（ＡＤＨ）としても公知である。なぜなら、バソプレシンは、体液浸透圧の主要な調節
因子であり、抗利尿をもたらし、そして血圧を上昇させるからである。バソプレシンは、
形質膜レセプターに結合し、そしてＧタンパク質を通じて作用し、サイクリックＡＭＰ／
プロテインキナーゼＡ（ｃＡＭＰ／ＰＫＡ）調節系を活性化する。バソプレシンの分泌は
、浸透圧受容体（ｏｓｍｏｒｅｃｅｐｔｏｒ）により、視床下部において調節される。浸
透圧受容体は、水濃度を検知し、そして血漿浸透圧が上昇すれば、バソプレシン分泌の上
昇を刺激する。分泌されたバソプレシンは、尿細管細胞において水の再吸収速度を上昇さ
せ、Ｎａ+が濃縮されている尿の排泄を引き起こし、従って、体液の浸透圧の正味の低下
を引き起こす。バソプレシンの欠損は、尿崩症として知られた状態である、水っぽい尿（
ｗａｔｅｒｙ  ｕｒｉｎｅ）および多渇症をもたらす。従って、結合体化したバソプレシ
ンまたはバソプレシンフラグメントの使用は、これらの障害を防止し、そして身体の浸透
圧の規則正しい維持を可能にする。
【００５０】
（Ｂ．視床下部ホルモン（放出因子））
（コルチコトロピン放出因子（ＣＲＦ）および関連ペプチド（配列番号７３〜１０２）
）−４１アミノ酸のペプチドである、コルチコトロピン放出ホルモン（ＣＲＦ）は、脳お
よび末梢の両方における作用を通じてストレスに対する全般的応答を協調させるのに重要
な役割を果たす。脳においては、ＣＲＦは、視床下部室傍核の小細胞性ニューロンから主
に産生されそして分泌される。そこから、ＣＲＦ含有ニューロンは、正中隆起の門脈毛細
血管に投射し、そして副腎皮質刺激ホルモン（ＡＣＴＨ）、βエンドルフィン、および下
垂体由来の他のプロオピオメラノコルチン（ＰＯＭＣ）由来ペプチドの分泌を刺激するよ
うに働く。引き続く、副腎糖質コルチコイドのＡＣＴＨ誘導性放出は、ストレスに対する
内分泌応答を媒介する、視床下部−下垂体−副腎系（ＨＰＡ）における最終段階を示す。
ＣＲＦの神経内分泌的な役割に加えて、ＣＲＦはまた、神経伝達物質および神経変調物質
として機能し、生理学的、薬理学的および病理学的刺激に対して、広範なスペクトルの自
律神経効果、行動効果、および免疫効果を惹起する。
【００５１】
臨床試験により、ＣＲＦ過剰分泌が種々の疾患（例えば、大うつ病、不安関連疾患、摂
食障害、および炎症性障害）に関連していることが示された。アルツハイマー病、痴呆、
肥満および多くの内分泌疾患において、低レベルのＣＲＦが見出されている。従って、高
レベルまたは低レベルのＣＲＦに関連する効果に対抗する治療薬としてのＣＲＦの使用は
、異常なＣＲＦレベルに関連する疾患の処置のための基礎を提供する。いくつかのペプチ
ドアンタゴニストおよび非ペプチドアンタゴニストが開発されており、広範に研究されて
いる。これには、αらせんＣＲＦ（９〜４１），アストレシン（Ａｓｔｒｅｓｓｉｎ）、
Ｄ−ＰｈｅＣＲＦ（１２〜４１）（ペプチドアンタゴニスト）およびＣＰ−１５４５２６
（非ペプチドアンタゴニスト）が挙げられる。これらのＣＲＦアンタゴニストは、抑うつ
、不安および他のＣＲＨ関連疾病の処置のための新規な薬剤を提供し得る。従って、結合
体化されたＣＲＦペプチドは、長期ステロイド使用の間の副腎の状態および生存度を維持
するため、または抗炎症性薬剤として用いられ得る。
【００５２】
（性腺刺激ホルモン（ゴナドトロピン）放出ホルモン関連ペプチド（ＧＡＰ）（配列番
号１０３〜１１０）−ＧＡＰは、性腺刺激ホルモン放出ホルモン（ＧｎＲＨ）への前駆体
分子に含まれる。ＧＡＰは、プロラクチン阻害特性を有する。Ｇｎ−ＲＨは、視床下部に
より分泌されるホルモンである。これは、性腺刺激ホルモン、卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ
）および黄体形成ホルモン（ＬＨ）の放出を刺激する。低レベルの循環する性ホルモンは
、ＧｎＲＨ合成のフィードバック阻害を軽減し、ＦＳＨおよびＬＨのレベルの上昇を導く
。後者のペプチドホルモンは、性腺組織に結合し、サイクリックＡＭＰ（ｃＡＭＰ）およ
びプロテインキナーゼＡ（ＰＫＡ）媒介径路を介した性ホルモン産生を生じる。結合体化
されたＧｎＲＨは、受胎能を補助するため、または雄性もしくは雌性のいずれかにおける
避妊薬として用いられ得る。この因子は、動物およびヒトにおける用途を有する。
【００５３】
（成長ホルモン放出因子（ＧＲＦ）（配列番号１１１〜１３４））  ＧＲＦは、下垂体
前葉における成長ホルモンの合成および分泌を制御する際に重要な役割を果たす視床下部
ペプチドである。いくつかの構造的に関連しない短いペプチドはまた、異なる機構により
成長ホルモン分泌を誘発するすることが報告された。
【００５４】
ＧＲＦの影響下で、成長ホルモンは、全身循環に放出され、標的組織にＩＧＦ−１を分
泌させる。成長ホルモンはまた、他のより直接的な代謝効果を有する；これは、血糖上昇
効果および脂質分解効果の両方である。全身的なＩＧＦ−１の主な供給源は肝臓であるが
、大部分の他の組織も分泌し、そして全身的ＩＧＦ−１に寄与する。肝臓ＩＧＦ−１は、
組織成長の主なレギュレーターであると見なされている。特に、肝臓により分泌されるＩ
ＧＦ−１は、全身を通した成長を同期化させ、組織サイズおよび質量の恒常的平衡（ｈｏ
ｍｅｏｓｔａｔｉｃ  ｂａｌａｎｃｅ）を生じると考えられる。周辺組織により分泌され
るＩＧＦ−１は、一般に、生物学的作用におけるオートクラインまたはパラクリンである
と見なされている。次いで、ＧＨ放出を増加させる治療剤として結合体化したＧＲＦを使
用することは、ＧＲＦにより調節される成長機能を含む障害の処置を補助する。
【００５５】
（黄体形成ホルモン放出ホルモン（ＬＨ−ＲＨ）（配列番号１３５−１６１））  黄体
形成ホルモン放出ホルモンは、性腺刺激ホルモン、黄体形成ホルモン（ＬＨ）および卵胞
刺激ホルモン（ＦＳＨ）の分泌の神経調節において重要なメディエーターである。ＬＨ−
ＲＨは、血漿性腺刺激ホルモンおよび性ステロイドレベルを調節することによって、性行
動を変化させ得る。Ｖａｌｅ，Ｗ．Ｗ．ら、Ｐｅｐｔｉｄｅｓ，Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ａ
ｎｄ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎ，Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈ
ｅ  Ｓｉｘｔｈ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ，Ｇｒｏｓｓ
，ＥおよびＭｅｉｅｎｈｏｆｅｒ，Ｍ．編，７８１（１９７９）を参照のこと。結合体化
したＬＨ−ＲＨ薬剤を使用して、受精能（ｆｅｒｔｉｌｉｔｙ）の補助としてヒトまたは
動物における排卵を刺激し得る。
【００５６】
（オレキシン（配列番号１６２〜１６４））  オレキシンは、最近発見され、特徴づけ
られた視床下部由来の神経ペプチドのファミリーである。オレキシンは、食欲および食物
消費を刺激する。それらの遺伝子は、視床下部外側部において両側にかつ対称に発現され
る。視床下部外側部は、視床下部の「摂食中枢」であることが早くに決定された。対照的
に、いわゆる満腹中枢は腹内側視床下部（ｖｅｎｔｒｏｍｅｄｉａｌ  ｈｙｐｏｔｈａｌ
ａｍｕｓ）において発現され、そしてレプチン調節性神経ペプチドネットワークにより支
配される。
【００５７】
（プロラクチン放出ペプチド（配列番号６５〜１７０））  プロラクチンは、好酸性下
垂体ラクトトロープ（ｌａｃｔｏｔｒｏｐｅ）により生成される。プロラクチン放出ペプ
チドは、ラクトトロープに対して作用して、プロラクチンを放出させる。ＲＰＬは、哺乳
動物において（しかし通常はエストロゲン様性ホルモンでプライムされた乳腺組織におい
てのみ）乳汁分泌を開始し、そして維持する。結合体化したＰＲＰは、ヒトまたは動物に
おける乳汁分泌を増大させるために使用され得る。
【００５８】
（ソマトスタチン（配列番号１７１〜２０１））  成長ホルモン放出阻害因子（ＧＩＦ
）としても公知のソマトスタチンは、１４アミノ酸のペプチドであり、そして視床下部お
よび膵臓のｄ細胞の両方により分泌される（その膵臓バージョンは、以下で議論される）
。ソマトスタチンは、種々の部位（下垂体、膵臓、腸および脳を含む）の生理学的機能を
調節することが報告された。これは成長ホルモン、インスリン、およびグルカゴンの放出
を阻害する。これは、多くの生物学的役割を有し、これらの役割としては、以下が挙げら
れる：内分泌および外分泌細胞からの基本的および刺激されたホルモン分泌の阻害、歩行
運動（ｌｏｃｏｍｏｔｏｒ  ａｃｔｉｖｉｔｙ）および認識機能に対する効果、ならびに
小細胞肺癌におけるあり得る治療価値。Ｒｅｕｂｉ，Ｊ．Ｃ．ら，Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ
ｏｇｙ，１１０，１０４９（１９８２）を参照のこと。結合体化したソマトスタチンを使
用して、小児における巨人症または成人における先端巨大症を処置し得る。
【００５９】
（サイロトロピン放出ホルモン（ＴＨＲ）およびアナログ（配列番号２０２〜２１４）
）  ＴＨＲは、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ，サイロトロピンとしても公知）の生成およ
びプロラクチン分泌を刺激する。成体において、ＴＳＨは、一般的なタンパク質合成のア
ップレギュレート、および正の窒素平衡の状態の誘導を担う。胚においては、正常な発生
に必要である。胚における甲状腺機能低下は、クレチン病の原因である。クレチン病は、
複数の先天的欠損（ｃｏｎｇｅｎｉｔａｌ  ｄｅｆｅｃｔ）および精神遅滞により特徴づ
けられる。次いで、結合体化したＴＨＲは、これらの障害の処置における治療剤として使
用され得る。これはまた、下垂体が原因の甲状腺機能不全を処置するためにまたはヒトの
甲状腺腫瘍の診断において使用され得る。
【００６０】
（Ｃ．甲状腺ホルモン）
（カルシトニン（ＣＴ）およびカルチトニン前駆体ペプチド（配列番号２１５〜２２４
））  カルシトニン（ＣＴ）は、甲状腺のＣ細胞により分泌される３２アミノ酸のペプチ
ドである。カルシトニンは、骨粗鬆症の症状を軽減するために治療的に用いられるが、そ
の作用機構の詳細は不明なままである。しかし、これは、ＣＴが単離された細胞で上皮小
体ホルモン（ＰＴＨ）の合成を誘導し、このことは血漿ＣＡ2+レベルの増加をインビボで
導くことが観察された。さらに、ＣＴはオステオポリン（Ｏｐｎ）、すなわち、破骨細胞
により生成されたタンパク質の合成を減少し、そして骨に対する破骨細胞の付着の原因で
あることが示された。従って、治療用ペプチドとして結合体化したＣＴを用いることは、
ＰＴＨ誘導を介して血漿Ｃａ2+を上昇させ、そして骨への破骨細胞結合を減少させること
により骨の再吸収が低減される。
【００６１】
（カルシトニン遺伝子関連ペプチド（ＣＧＲＰ）（配列番号２２５〜２５３））  ＣＧ
ＲＰは、３７アミノ酸のペプチドであり。このペプチドは、カルシトニン遺伝子転写物の
選択的スプライシングから生じる。これは、少なくとも２つの形態で存在する：α−ＣＧ
ＲＰ（またはＣＧＲＰ−Ｉ）およびβ−ＣＧＲＰ（またはＣＧＲＰ−ＩＩ）。ＣＧＲＰは
、アミリンおよびアドレノメデュリンとかなりの相同性を有し、そして中枢または末梢の
両方で器官に広範に分布する。これらの器官としては、以下が挙げられる：皮膚、心臓、
膵臓、肺および腎臓。ＣＧＲＰは、神経系および心臓血管系、炎症および代謝に影響を及
ぼす、多くの生物学的役割を有する。
【００６２】
（Ｄ．上皮小体ホルモンおよび関連ペプチド）
（上皮小体ホルモン（ＰＴＨ）（配列番号２５４〜２９３））  上皮小体ホルモン（Ｐ
ＴＨ）は、全身のＣａ2+レベルに応答して上皮小体主細胞により合成され、そして分泌さ
れる。これは、血清カルシウム濃度の調節に主な役割を果たし、それによって鉱質および
骨代謝の生理に影響を及ぼす。上皮小体のＣａ2+レセプターは、ＰＫＣ、Ｃａ2+およびＩ
Ｐ3の細胞内レベルを増加させることによりＣａ2+に応答する；この段階の後、ＰＴＨ分
泌がタンパク質合成期間の後に続く。主細胞におけるＰＴＨの合成および分泌は構成的で
あるが、Ｃａ2+は、血漿Ｃａ2+レベルが上昇した場合にＰＴＨのタンパク質分解の速度を
増大させ、そしてＣａ2+レベルが低下した場合にＰＴＨのタンパク質分解を減少させるこ
とにより、主細胞におけるＰＴＨのレベル（従って、その分泌）を調節する。ＰＴＨの役
割は、細胞外液体におけるＣａ2+濃度を調節することである。従って、ＰＴＨ分泌を調節
するフィードバックループは、上皮小体、Ｃａ2+、および以下に記載の標的組織に関与す
る。
【００６３】
ＰＴＨは、ｃＡＭＰ共役型原形質膜レセプターに結合することにより作用し、生物学的
応答において最高点に達する反応のカスケードを開始する。身体のＰＴＨに対する応答は
複雑であるが、全ての組織において細胞外液体におけるＣａ2+レベルを増大させることに
向けられる。ＰＴＨは、破骨細胞活性を刺激することにより骨の溶解を誘導し、このこと
は、血漿Ｃａ2+およびホスフェートの上昇を導く。腎臓において、ＰＴＨは、その再吸収
を刺激することにより腎臓Ｃａ2+クリアランスを減少させ；同時に、ＰＴＨは、ホスフェ
ートの再吸収を減少させ、そしてそれによってそのクリアランスを増大させる。最後に、
ＰＴＨは、肝臓、腎臓および腸に対して作用して、ステロイドホルモン１，２５−ジヒド
ロキシコレカルシフェロール（カルシトリオール）の生成を刺激する。このステロイドホ
ルモンは、腸におけるＣａ2+吸収を担う。結合体化したＰＴＨを使用して、上皮小体ホル
モン欠損状態を有する患者におけるカルシウムホメオスタシスを調節し得る。インヒビタ
ーアナログを使用して、過剰なＰＴＨレベルを有する腎不全患者または他の患者における
ＰＴＨ作用をブロックし得る。
【００６４】
（上皮小体ホルモン関連タンパク質（ＰＴＨｒＰ）（配列番号２９４〜３０９））  上
皮小体ホルモン関連タンパク質（ＰＴＨｒＰ）は、軟骨細胞分化を低減させ、そしてアポ
トーシス性細胞死を妨げる生理学的レギュレーターとして注意が向けられた。ＰＴＨｒＰ
は、上皮小体ホルモン（ＰＴＨ）（カルシウムホメオスタシスの主要レギュレーター）に
対する構造的類似性を有する腫瘍由来の分泌タンパク質として最初に同定された。ＰＴＨ
およびＰＴＨｒＰは、共通のＧタンパク質共役細胞表面レセプター（ＰＴＨ／ＰＴＨｒＰ
またはＰＴＨ−１レセプター）に結合する。このレセプターは、これらのペプチドのＮ末
端領域（１〜３４）を認識する。従って、腫瘍由来のＰＴＨｒＰが循環中に入る場合、こ
れは、古典的なＰＴＨ標的器官（例えば、骨および腎臓）におけるレセプターを活性化し
、そしてＰＴＨ様生物活性を誘発する。骨の再吸収を促進し、そしてカルシウム排出を阻
害することにより、循環ＰＴＨｒＰは、悪性に関連する体液性高カルシウム血症の通常の
新生物随伴症候群を生じる。
【００６５】
腫瘍において最初に発見されたが、ＰＴＨｒＰは、その後、胎児および成体骨格を含む
著しい種々の正常組織において発現されることが示された。そのアミノ末端ＰＴＨ−１レ
セプターと協同して作用する場合、ＰＴＨｒＰは、細胞増殖および分化を調節するように
作用する。骨に対する断続的ＰＴＨ投与の同化効果および骨粗鬆症におけるその治療的潜
在性は、広範に調査された。ＰＴＨｒＰが、破骨細胞におけるＰＴＨ／ＰＴＨｒＰレセプ
ターについての内因性リガンドであるという認識に対して、同化薬剤としてのその使用も
また調査された。改変ＰＴＨｒＰペプチドは、ＰＴＨと同様な指示のために使用され得る
。
【００６６】
（Ｅ．膵臓ホルモン）  膵臓ホルモンの主要な役割は、主に、主細胞エネルギー供給の
異化および同化に関与する多くの酵素の濃度および活性を調節することによる、体全体の
エネルギー代謝の調節である。
【００６７】
（アミリン（配列番号３１０〜３３５））  膵臓β細胞ホルモンであるアミリンは、Ｃ
ＧＲＰおよびカルシトニンに関連する３７アミノ酸のペプチドである。これは、膵臓β細
胞からインスリンと共に同時分泌される。アミリンは、１型糖尿病で欠損している。アミ
リンは、インスリンと共に働いて、血流における血漿グルコース濃度を調節するようであ
る。このことは、グルカゴンの治療後ペプチドランジアル（ｐｅｐｔｉｄｅｒａｎｄｉａ
ｌ）分泌を停止させ、そして胃が空になる速度を抑制する。糖尿病を有する人々は、イン
スリン分泌における欠損と並行してアミリンの分泌の欠損を有し、このことにより、治療
後ペプチドランジアル期間の間に血流へのグルカゴンの過剰な流入が生じている。
【００６８】
インスリン置換治療は糖尿病処置の基礎であるが、アミリンおよびインスリン両方の機
能の置換により、グルコース制御の正常の生理をより完全に回復させることが可能になり
得る。２型糖尿病は、島アミロイド沈着により特徴づけられる。この島アミロイド沈着は
、島アミロイドポリペプチドのアミロイド生成ヒト形態からおもに構成される。結合体化
したアミリンを糖尿病の管理において用いて、食事後の高血糖症を制限し得る。
【００６９】
（グルカゴン（配列番号３３６〜３７６））  グルカゴンは、非常に大きなプログルカ
ゴン分子として、ランゲルハンス島のα細胞により合成される２９アミノ酸のホルモンで
ある。インスリンのように、グルカゴンは血漿キャリアタンパク質を欠き、そしてインス
リンのように、その循環半減期はまた、約５分である。後者の形質の結果として、グルカ
ゴンの主要な効果は、膵臓分泌物を含む血液がそそぎ込まれる最初の組織である肝臓に対
してである。グルカゴンは、原形質膜レセプターに結合し、そしてＧタンパク質を介して
アデニレートシクラーゼに共役される。ｃＡＭＰおよびＰＫＡの、結果として生じた増加
は、インスリンが肝臓に対して有する上記の効果の全てを逆転させる。この増加はまた、
循環グルコースの顕著な上昇を導き、グルコースは、肝臓糖新生および肝臓グリコーゲン
分解から誘導される。結合体化したグルカゴン構築物は、再発した高血糖症を有する不安
定型糖尿病を管理するか、医原性高血糖症を予防もしくは処置するために使用され得る。
【００７０】
（インスリンおよびインスリン様ペプチド（配列番号３７７〜３８２））  これらの認
識されたホルモンの最初は、膵臓により生成される２１アミノ酸および３０アミノ酸のジ
スルフィド結合ジペプチドであるインスリンであった。インスリンの主要な機能は、多く
の高血糖症生成ホルモンの協調した作用を阻止することであり、そして低い血糖レベルを
維持することである。インスリンは、ＩＧＦ−１、ＩＧＦ−２およびリラキシンを含む、
構造的かつ機能的に類似した分子のファミリーのメンバーである。４分子全ての三次元構
造が類似しており、そして増殖促進活性を全てが有するが、インスリンの優勢な役割は代
謝であり、その一方、ＩＧＦおよびリラキシンの優勢な役割は、細胞増殖および分化の調
節にある。
【００７１】
インスリンは、ランゲルハンス島ｂ細胞におけるプレプロホルモンとして合成される。
そのシグナルペプチドは、小胞体の槽において除去され、そしてこれはゴルジにおける分
泌小胞にパッケージされ、そのネイティブな構造に折り畳みされ、そして２つのジスルフ
ィド結合の形成によりそのコンホメーションをロックする。特異的プロテアーゼ活性はそ
の分子の中心三分の一を切断し、Ｃペプチドとして解離させ、カルボキシ末端Ａペプチド
に結合したアミノ末端Ｂペプチドジスルフィドを残す。
【００７２】
インスリンは、全ての細胞で同じである原形質膜レセプターに結合することにより、そ
の細胞内効果を生じる。このレセプターは、ジスルフィド結合した糖タンパク質である。
インスリンの１つの機能（シグナル伝達におけるその役割は別として）は、肝外組織にお
けるグルコース輸送を増加することであり、原形質膜におけるグルコース輸送体分子の数
を増加させることによる。グルコース輸送体は、ターンオーバーの連続した状態にある。
輸送体の原形質膜含有量における増加は、原形質膜への新たな輸送体の漸増速度の増加に
由来する。これは、細胞質に局在した予備形成した輸送体の特別なプールから誘導される
。
【００７３】
グルコース代謝を調節することにおけるその役割（および糖尿病を処置することにおけ
るその治療的用途）に加えて、インスリンは、脂質生合成を刺激し、脂質分解を減少させ
、そして細胞へのアミノ酸輸送を増大させる。インスリンはまた、転写を調節し、多くの
ｍＲＮＡの細胞含有量を改変する。このことは、増殖、ＤＮＡ合成および細胞複製を刺激
し、インスリンがＩＧＦおよびリラキシンと共通して保持している効果である。従って、
結合体化したインスリンを使用して、糖尿病を管理し得る。
【００７４】
（神経ペプチドＹ（配列番号３８３〜３８９））  ３６アミノ酸残基を有するペプチド
である神経ペプチドＹ（ＮＰＹ）は、末梢神経系および中枢神経系の両方において最も豊
富な神経ペプチドの１つである。神経ペプチドは、膵臓ポリペプチドファミリーのペプチ
ドに属する。その関連分子であるペプチドＹＹ（ＰＹＹ）および膵臓ポリペプチド（ＰＰ
）と同様に、ＮＰＹは、レセプターに結合するために、分子のフリーな末端を合わせる際
に重要なヘアピン構成に曲げられる。
【００７５】
ＮＰＹは、中枢神経系（ＣＮＳ）および末梢において広範な役割を発揮する。そのＣＮ
Ｓ作用は、摂食およびエネルギー支出、ならびに心拍数、血圧、覚醒および気分における
変化に対する主要な効果を含む。末梢において、ＮＰＹは、血管収縮および高血圧を引き
起こし；これはまた、胃腸経路および尿生殖路において見いだされ、胃腸および腎臓標的
に対する作用によりその機能に影響を与える。最近の研究において、視床下部ＮＰＹは、
肥満の特徴を発生させることにおいて基本的役割を果たすことが見出され、視床下部へ体
脂肪をシグナル伝達する経路および体脂肪含有量を調節することにおける主要なトランス
デューサーである。肥満遺伝子産物であるレプチンは、肥満（ｏｂ／ｏｂ）マウスにおい
てＮＰＹ遺伝子発現を減少させることが見いだされた。インスリンおよびコルチコステロ
イドはまた、インスリンがＮＰＹ発現を減少し、そしてコルチコステロイドがＮＰＹ発現
を増加して、視床下部ＮＰＹ合成の調節に関与する。結合体化したＮＰＹを使用して、肥
満および肥満患者におけるＭＯＤＭ（ＩＩ型糖尿病）を処置し得る。
【００７６】
（膵臓ポリペプチド（ＰＰ）（配列３９０〜３９６））  膵臓ポリペプチド（ＰＰ）は
、膵臓島および外分泌膵臓内のＦ細胞により生成された３６アミノ酸のホルモンである。
これは、調節ペプチドのＰＰ折り畳み（ＰＰ  ｆｏｌｄ）ファミリーのメンバーであり、
糖原分解を増加させ、そして胃腸活動を調節する。従って、結合体化した膵臓ポリペプチ
ドを用いて、食物の吸収および代謝を改変し得る。
【００７７】
（ペプチドＹＹ（配列番号３９７〜４００））  ＰＹＹは、３６アミノ酸長のペプチド
であり、ブタ腸組織から最初に単離され、そして主に腸内分泌細胞に局在する。これは、
多くの生物学的活性を有し、これらの活性としては、以下が挙げられる：消化系内の広範
な活性ならびに腸電解質および液体分泌の強力な阻害。
【００７８】
（ソマトスタチン（配列番号１７１〜２０１））  膵臓のｄ細胞により分泌されるソマ
トスタチンは、視床下部により分泌されるソマトスタチンと同一の１４アミノ酸のペプチ
ドである。神経組織においては、ソマトスタチンは、ＧＨ分泌を阻害し、従って、全身的
な効果を有する。膵臓においては、ソマトスタチンは、他の膵臓ホルモンのパラクリンイ
ンヒビターとして作用し、従って、全身的な効果もまた有する。ソマトスタチン分泌は、
血糖レベルに主に応答し、血糖レベルが上昇するにつれて増加し、従って、グルカゴン分
泌のダウンレギュレートを導くと推測される。次いで、結合体化したソマトスタチンを使
用して、糖尿病の管理を補助し得る。
【００７９】
（Ｆ．消化ホルモン）
（コレシストキニン（ＣＣＫ）および関連ペプチド（配列番号４０１〜４１６））  Ｃ
ＣＫは、もともとはブタ小腸から単離された３３アミノ酸のポリペプチドである。これは
、胆嚢収縮および胆汁流を刺激し、そして膵臓からの消化酵素の分泌を増加させる。これ
は複数の形態で存在し、この形態としては、ＣＣＫ−４およびＣＣＫ−８が挙げられ、オ
クタペプチドが、最も大きな活性を示す優勢な分子種を示す。これは、ＣＣＫ／ガストリ
ンペプチドファミリーに属し、そして中枢的には神経系、および末梢的には胃腸系に分布
する。これは多くの生物学的役割を有し、この役割としては、以下が挙げられる：膵臓分
泌の刺激、胆嚢収縮、およびＧＩ経路の腸流動性（ｍｏｂｉｌｉｔｙ）、ならびに満腹お
よび疼痛刺激のあり得る媒介。結合体化したＣＣＫは、胆嚢の診断的研究または慢性胆嚢
炎において使用され得る。
【００８０】
（ガストリン放出ペプチド（ＧＲＰ）（配列番号４１７〜４２９））  ＧＲＰは、もと
もとはブタ非洞胃組織から単離された２７アミノ酸のペプチドであり、そしてボンベシン
増殖と名付けられたカエル皮膚ペプチドのホモログである。これは、脳、肺および胃腸管
を含む組織において、中枢または末梢の両方に広範囲分布している。これは、種々の細胞
の生理学的プロセスを調節する。これらのプロセスとしては、分泌、平滑筋収縮、神経伝
達および細胞増殖が挙げられる。結合体化したＧＲＰは、麻痺性イレウスまたは年配の者
における便秘の処置において使用され得る。
【００８１】
ガストリンおよび関連するペプチド（配列番号４１７〜４２９）−ガストリンは、胃の
幽門洞によって産生される、酸およびペプシンの分泌を刺激する、１７アミノ酸のポリペ
プチドである。ガストリンはまた、膵臓分泌を刺激する。複数の活性な産物はガストリン
前駆体から生成され、そしてガストリン生合成には複数の制御点が存在する。生合成前駆
体および中間体（プロガストリンおよびＧｌｙ−ガストリン）は、推定の増殖因子である
；それらの産物であるアミド化ガストリンは、上皮細胞増殖、酸産生性壁細胞およびヒス
タミン分泌腸クロム親和様（ＥＣＬ）細胞の分化、ならびにＥＣＬ細胞におけるヒスタミ
ンの合成および貯蔵に関連する遺伝子の発現、ならびに急性刺激酸分泌を調節する。ガス
トリンはまた、上皮増殖因子（ＥＧＦ）ファミリーのメンバーの産生を刺激し、このこと
は次いで、壁細胞機能を阻害するが表面上皮細胞の増殖を刺激する。血漿ガストリン濃度
は、Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉを有する被験体において上昇し、この被験
体は、十二指腸潰瘍疾患および胃癌の上昇した危険性を有することが公知である。それゆ
え、治療薬剤としてのガストリンまたはガストリンアンタゴニストの使用は、主な上部胃
腸管疾患を処置するために寄与し得る。
【００８２】
ガストリン阻害ペプチド（配列番号４１７〜４２９）−ガストリン阻害ペプチドは、ガ
ストリンの分泌を阻害する４３アミノ酸のポリペプチドである。結合体化されたＧＩＰを
用いて、重篤な消化性潰瘍疾患を処置し得る。
【００８３】
モチリン（配列番号４３０〜４３３）−モチリンは、胃腸の筋肉を制御する、２２アミ
ノ酸のポリペプチドである。モチリン産生細胞は、十二指腸、上部空腸および結腸直腸腺
癌（ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ  ａｄｅｎｏｃａｒｉｎｏｍａ）ならびに中腸類癌腫に分布す
る。モチリンは、腸の運動性を刺激する。
【００８４】
セクレチン（配列番号４３４〜４４１）−セクレチンは、４．５未満のｐＨ値で十二指
腸から分泌され、膵臓腺房細胞を刺激してバイカーボネートおよびＨ2Ｏを放出させる、
２７アミノ酸のポリペプチドである。セクレチンは、神経ペプチド群における神経伝達物
質（化学メッセンジャー）である。セレクチンは、消化を制御するホルモンのうちの１つ
である（ガストリンおよびコレシストキニンは他方のホルモンである）。セレクチンは、
２７アミノ酸から構成されるポリペプチドであり、そして胃が空な場合に消化器系におけ
る細胞によって分泌される。セクレチンは、腸の酸性度を中和するバイカーボネートが豊
富である消化液を膵臓が出すこと、ペプシン（タンパク質の消化を助ける酵素）を胃が産
生すること、および胆汁を肝臓が産生することを刺激する。
【００８５】
セクレチンは、自閉を処置する際に有用であり得る。１つの研究では、自閉の範囲の障
害を有する小児は、上部胃腸の内視鏡検査およびセクレチンの静脈内投与を受けて、膵臓
胆汁分泌が刺激された。３人全員が、非自閉患者と比較した場合、膵臓胆汁分泌応答の増
加を有した（１〜２ｍＬ／分に対して７．５〜１０ｍＬ／分）。セクレチン注入の５週間
以内に、改善されたアイコンタクト、警戒および表現的言語の拡大によって現れるその挙
動における劇的な改善が観察されたように、小児の胃腸の症状の有意な改善が観察された
。これらの臨床的観察は、自閉挙動を有する患者における胃腸機能と脳機能との間の関連
を示唆する。
【００８６】
血管作用性腸ポリペプチド（ＶＩＰ）および関連するペプチド（配列番号４４２〜４６
４）−ＶＩＰは、視床下部およびＧＩ管によって産生される、２８残基のポリペプチドで
ある。ＶＩＰは、ＧＩを弛緩させ、酸およびペプシンの分泌を阻害し、末梢自律神経系に
おいて神経伝達物質として作用し、そして膵臓および腸からのＨ2Ｏおよび電解質の分泌
を増加させる。ＶＩＰは、肺および腸において元々発見された。そしてＶＩＰはまた、脳
、肝臓、膵臓、平滑筋およびリンパ球を含む組織において見出されている。ＶＩＰは、Ｐ
ＡＣＡＰ、ＰＨＩ、セクレチンおよびグルカゴンを含む、ペプチドのファミリーに構造的
に関連している。ＶＩＰは、血管拡張、電解質分泌、免疫機能の調節および神経伝達を含
む、多岐にわたる範囲の生物学的作用を有する。結合体化されたＶＩＰは、塩酸欠乏、虚
血性大腸炎および過敏性腸症候群（ＩＢＳ）の処置において有用であり得る。
【００８７】
Ｇ．ナトリウム利尿ペプチド−ナトリウム利尿ペプチドホルモンファミリーには、血圧
および流体のホメオスタシスの調節に関与する、３つのメンバー（心房性ナトリウム利尿
ペプチド（ＡＮＰ）、Ｂ型ナトリウム利尿ペプチド（ＢＮＰ、脳ナトリウム利尿ペプチド
）およびＣ型ナトリウム利尿ペプチド（ＣＮＰ））が存在する。
【００８８】
心房性ナトリウム利尿ペプチド（ＡＮＰ）（配列番号４６５〜５０７）−ＡＮＰは、ジ
スルフィド結合を含む、２８アミノ酸ペプチドのホルモンである。ＡＮＰは、ナトリウム
利尿効果、利尿効果および血管緊張低下効果を発揮し、そして身体の血液容量および血圧
のホメオスタシスにおいて重要な役割を果たす。Ｓｍｉｔｈ，Ｆ．Ｇ．ら、Ｊ．Ｄｅｖ．
Ｐｈｙｓｉｏｌ．１２，５５（１９８９）を参照のこと。ＡＮＰ放出を制御する機構は、
猛烈な調査の対象であり、そして現在かなり良く理解されている。ＡＮＰ分泌の主な決定
要因は、筋細胞の伸長である。心臓からのＢＮＰ放出を調節する因子についてはずっとわ
ずかにしか公知でないが、筋細胞伸長もまた、心房および心室の両方からのＢＮＰ放出を
刺激することが報告されている。しかし、壁の伸長が直接作用するのか、またはエンドセ
リン−１、一酸化窒素もしくはアンギオテンシンＩＩのような、拡張に応じて遊離された
因子を介して作用するかは、証明されていない。近年の研究は、エンドセリンのＡ型レセ
プターを刺激することによって、エンドセリンが、理性ある動物における心房性筋細胞か
らの急性容量負荷誘導性ＡＮＰ分泌のメディエーターとして重要な生理学的役割を果たす
ことを示す。実際、直接伸長ではなく、心房性壁の伸長に応じて遊離された内因性パラ分
泌因子／自己分泌因子は、エンドセリンＡ／Ｂ型およびアンギオテンシンＩＩレセプター
の組み合わされた阻害の間のＡＮＰ分泌のほぼ完全な遮断によって証明されるように、容
量負荷に応じたＡＮＰ分泌の活性化を担うようである。さらに、特定の実験条件下では、
アンギオテンシンＩＩおよび一酸化窒素はまた、伸長活性化ＡＮＰ分泌に対して有意な調
節効果を発揮し得る。エンドセリン−１、アンギオテンシンＩＩおよび一酸化窒素が伸長
活性化ＡＮＰ放出を相乗的に調節する分子機構は、未だに不明である。１９９７年１１月
１２日に発行された要約第７５巻８７６−８８５頁、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｏｌｅｃ
ｕｌａｒ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ。結合体化ＡＮＰは、悪性高血圧または重篤な高血圧および
腎不全の管理において有用である。
【００８９】
脳ナトリウム利尿ペプチド（ＢＮＰ）（配列番号５０７〜５１６）−脳ナトリウム利尿
ペプチド（ＢＮＰ）は、ナトリウム利尿ペプチドファミリーの１メンバーであり、心室か
ら産生および放出される。ＢＮＰは、Ａ型グアニル酸シクラーゼ共役レセプターを通して
、体液容量、血圧および血管の緊張を調節する。心房性ナトリウム利尿ペプチド（ＡＮＰ
）のようなＢＮＰは、電解質−流体ホメオスタシスにおいて役割を果たす。結合体化され
たＢＮＰは、心不全の管理において有用であり得る。
【００９０】
Ｃ型ナトリウム利尿ペプチド（ＣＮＰ）（配列番号５１７〜５２４）−Ｃ型ナトリウム
利尿ペプチド（ＣＮＰ）は、ナトリウム利尿ペプチドファミリーの第３のメンバーであり
、血管内皮細胞（ＥＣ）において産生され、そして内皮由来弛緩ペプチドとして作用する
。心房性ナトリウム利尿ペプチドおよび脳ナトリウム利尿ペプチドは、循環性ホルモンと
して心血管機能および内分泌機能の調節に関与することが周知であるが、Ｃ型ナトリウム
利尿ペプチド（ＣＮＰ）の役割は未知のままである。
【００９１】
ＣＮＰは、中枢神経系および血管内皮細胞に主に見出され、一方、ＡＮＰおよびＢＮＰ
は心臓ホルモンである。ＡＮＰは正常な成体心臓の心房において主に合成され、一方、Ｂ
ＮＰは心房および心室の両方によって産生される。
【００９２】
Ｈ．タキキニン（配列番号５２５〜６２７）−ニューロキニンＡ、Ｂおよびサブスタン
スＰを含む、完全な生物学的活性に必要とされる共通のＣ末端配列（Ｆ−Ｘ−ＧＬＭ−Ｎ
Ｈ2）を共有する、ニューロキニンＡおよびサブスタンスＰを含むファミリーのペプチド
。
【００９３】
ニューロキニンＡ−ニューロキニンＡは、サブスタンスＫとして以前に公知のデカペプ
チドである。ニューロキニンＡは、サブスタンスＰおよびニューロキニンＢを含む、タキ
キニンファミリーの神経ペプチドのメンバーである。ニューロキニンＡは、平滑筋の収縮
、痛みの伝達、気管支収縮、血管拡張および免疫系の調節に関連する種々の活性を示す。
【００９４】
ニューロメジン−ニューロメジンは、平滑筋刺激ペプチドであり、通常４つの群に分け
られる：ボンベシン様、カシニン様、ニューロテンシン様およびニューロメジンＵ。これ
らの神経ペプチドおよびそれらのレセプターは、ＨＰＡ下垂体軸（ｈｙｐｏｐｈｙｓｅａ
ｌ  ｐｉｔｕｉｔａｒｙ  ａｘｉｓ）の全構成要素に局在し、唯一の例外はニューロキニ
ンＢであるようであり、ニューロキニンＢは、腺下垂体に検出されない。ニューロメジン
は、多種多様の効果をＨＰＡ軸に対して発揮し、そして副腎に対するそれらの作用は、副
腎皮質の増殖、構造および機能の調節におけるそれらの関与を示唆する。ニューロメジン
は、直接的効果および間接的効果の両方を副腎皮質に対して発揮し得る。直接的効果は、
単離または培養された副腎皮質細胞によるミネラルコルチコイド治療用ペプチドおよびグ
ルココルチコイド治療用ペプチドの刺激、ならびに細胞内［Ｃａ２＋］の動員によって証
明される。一方、間接的効果は、ＡＣＴＨ、アルギニン−バソプレッシン、アンギオテン
シンＩＩ、カテコールアミンによって、または髄質起源の他の調節物質によって媒介され
得る。
【００９５】
サブスタンスＰおよび関連するペプチド−サブスタンスＰは、脳および腸から最初に単
離された１１アミノ酸ペプチドである。サブスタンスＰは、脊髄における痛みの伝達に関
与する神経調節物質として提唱されている。サブスタンスＰはまた、平滑筋の収縮、血圧
の低下、分泌組織の刺激および肥満細胞からのヒスタミンの放出に影響を与える。
【００９６】
（Ｉ．レニン関連ペプチド）
アンギオテンシン（配列番号６２８〜６７７）−アンギオテンシンは、腎臓酵素レニン
によるａ２−グロビンの酵素的切断に由来する１０アミノ酸ペプチドである。次いで、Ｃ
末端の２アミノ酸は遊離されて、アンギオテンシンＩを生じ、これは、副腎細胞からのア
ルドステロンの刺激された合成および放出を通して本態性高血圧を担う。これは、血圧、
血漿容量、ニューロンの機能的口渇、および水取り込みを調節する、多機能性ホルモンで
ある。
【００９７】
アンギオテンシンＩＩは、アンギオテンシン変換酵素によるアンギオテンシンＩに由来
するオクタペプチドであり、そして心臓、腎臓および肝臓のような器官において中心およ
び周縁部の両方に広範囲に分布する。アンギオテンシンＩＶは、アンギオテンシンＩまた
はアンギオテンシンＩＩのいずれかからタンパク質分解性切断によって代謝的に形成され
る、アンギオテンシンＩＩの末端のヘキサペプチドフラグメントである。アンギオテンシ
ンＩＶは、血管の制御、心臓生長、腎臓血流および記憶機能において役割を果たす。
【００９８】
アンギオテンシンＩＩは、血管平滑筋緊張、血圧、自由水取り込みおよびナトリウム貯
留を調節する重要なペプチドホルモンである。アンギオテンシンＩＩは、血管痙攣性緊張
の増加、ナトリウム貯留の増加および自由水取り込みの増加を刺激することによって、血
管内容量の損失を保証する血管ホメオスタシスを制御する。
【００９９】
レニンの基質およびインヒビター（配列番号６７８〜６８４）−レニンは、非常に特異
的なアスパラギン酸プロテアーゼであり、これは、顆粒状上皮細胞と呼ばれる、腎臓の脈
管構造における分化した平滑筋細胞によって合成および放出される。レニンは、その基質
であるアンギオテンシノーゲンに特異的であり、レニンは、アンギオテンシノーゲンをＬ
ｅｕ10−Ｖａｌ11結合で特異的に切断して、デカペプチドであるアンギオテンシンＩ（Ａ
Ｉ）を形成する。レニン−アンギオテンシン系は、脊椎動物全体の流体および無機質のバ
ランスの制御に関与する。レニンは、哺乳動物、トリ、爬虫類、両生類、硬骨魚、軟骨魚
および無顎類（ａｇｎａｔｈａｎ）に見出され得る。特異的レニンインヒビターはまた、
例えば、高血圧および鬱血性心不全の処置のための治療適用について設計され得る（Ｂｌ
ｕｎｄｅｌｌら、１９８７）。
【０１００】
Ｊ．エンドセリンおよび関連するペプチド（配列番号６８５〜７４４）−エンドセリン
ペプチドファミリーは、２１アミノ酸のアイソフォームであるエンドセリン−１、エンド
セリン−２、エンドセリン−３、サラホトキシン（蛇毒）およびサソリ毒素からなる。
【０１０１】
エンドセリン（ＥＴ）および大きなエンドセリン−エンドセリンは、広範な種々の器官
系における内皮細胞に見出される。エンドセリンのレベルおよび合成の変化に関連した病
理および生理学的プロセスの例としては、以下が挙げられる：アテローム性動脈硬化症お
よび高血圧、冠状動脈血管痙攣、急性腎不全、細胞内Ｃａ２+レベルの変化、ならびにレ
ニン−アンギオテンシン系に対する効果。エンドセリンは、アンギオテンシンＩＩ、バソ
プレッシンおよびサイトカイン（例えば、ＴＧＦ−βｍ、ＴＮＦ−α、ＩＬ−β−）レベ
ルのバリエーション、ならびに血流の増加を含む他の生理学的事象に応じて放出される。
【０１０２】
エンドセリンファミリーのペプチドは、内皮細胞上清から最初に単離された非常に強力
な内因性血管収縮剤からなる。これらは、血管収縮効果を動脈に対して運ぶことによって
器官に対する血流を調節する。エンドセリンは、大きなエンドセリンに由来し、大きなエ
ンドセリンは、独特の膜結合型メタロプロテアーゼであるエンドセリン変換酵素によって
、２１アミノ酸の生物活性形態（ＥＴ−１、ＥＴ−２およびＥＴ−３）へと切断される。
【０１０３】
３つのアイソフォーム（ＥＴ−１、ＥＴ−２、ＥＴ−３）のうち、エンドセリン−１は
、主なアイソフォームであり、そして血管機能の調節に重要な役割を果たす。内因性エン
ドセリンペプチドおよびそれらのレセプターは、血管、子宮、膀胱および腸を含む、多く
の平滑筋組織全体に異なって分布する。この広範な分布および局在を通して、これらは、
血管緊張を調節する際および有糸分裂誘発を引き起こす際に生物学的機能を発揮する。Ｅ
Ｔおよびそれらのレセプターサブタイプはまた、種々の内分泌器官に存在する。これは、
プロラクチン、ゴナドトロピンＧＨおよびＴＳＨの分泌のモジュレーターとして作用する
ようである。エンドセリンはまた、虚血性心疾患、アテローム性動脈硬化症、鬱血性心不
全、腎不全、全身性高血圧、肺性高血圧、大脳の血管痙攣における疾患マーカーまたは病
因因子であり得る。
【０１０４】
外から投与されたエンドセリン−１は、末梢抵抗および血圧を用量依存性様式で上昇さ
せることが実証されている。しかし、静脈内投与の最初の数分間の間に、エンドセリンは
また、血管拡張化合物（例えば、一酸化窒素、プロスタサイクリンおよび心房性ナトリウ
ム利尿ペプチド）の放出におそらく起因して、末梢抵抗および血圧を低下させる。
【０１０５】
ＥＴ（Ａ）レセプターアンタゴニスト−エンドセリンレセプターは、２つの型として存
在する：Ａ（ＥＴ−Ａ）およびＢ（ＥＴ−Ｂ１およびＥＴ−Ｂ２）。ＥＴ−Ａレセプター
は担い、一方、ＥＴ−Ｂ１およびＥＴ−Ｂ２はそれぞれ血管緊張低下および血管収縮を媒
介する。
【０１０６】
サラホトキシンペプチド−既に記載したように、エンドセリン（ＥＴ）ペプチドは、Ｇ
タンパク質共役レセプターに結合する強力な増殖因子である。Ａｔｒａｃｔａｓｐｉｓ  
ｅｎｇａｄｄｅｎｓｉｓから単離されたサラホトキシン（Ｓ６）は、エンドセリンに対し
て非常に相同である。サラホトキシンペプチドは、顕著な血管収縮活性を有し、そして蛇
またはサソリに咬まれた後の虚血性四肢の損失を担う。これらは、ショックおよび敗血症
における血管収縮（ｖａｓｏｐｒｅｓｓｉｖｅ）剤としてのペプチダーゼ安定化ペプチド
として治療的に用いられ得る。
【０１０７】
Ｋ．オピオイドペプチド（配列番号７４５−９２７）−オピオイドは、鎮痛剤として臨
床的に用いられる大きなクラスの薬物であり、これは、植物由来および合成のアルカロイ
ドならびに哺乳動物の脳において内因的に見出されるペプチドの両方を含む。植物由来ア
ルカロイドは数千年にわたって公知であり、そして用いられているが、内因性オピオイド
ペプチドは、１９７０年代半ばにようやく発見された。
【０１０８】
オピオイドとしては、カソモルフィン（ｃａｓｏｍｏｒｐｈｉｎ）ペプチド、デモルフ
ィン（ｄｅｍｏｒｐｈｉｎ）、エンドルフィン、エンケファリン、デルトロフィン、ジノ
ルフィン、ならびにこれらのアナログおよび誘導体が挙げられる。
【０１０９】
カソモルフィンペプチド−カソモルフィンペプチドは、カゼイン（β−カソモルフィン
）に由来する新規なオピオイドペプチドである。βカソモルフィンは、食物タンパク質（
β−カゼイン）から生じた、さらに詳細にわたって研究されたオピオイドペプチドである
。これらは、ウシβ−カゼインから元々単離された。この同じ配列は、ヒツジおよびバッ
ファローのβ−カゼインにおいて生じる。
【０１１０】
デモルフィン（ｄｅｒｍｏｒｐｈｉｎ）−デモルフィンは、Ｐｈｙｌｏｍｅｄｕｓａ  
ｓａｕｖａｇｅｉのカエル皮膚から元々単離された、７アミノ酸ペプチドである。デモル
フィンは、μオピオイドレセプターに対して高親和性で結合するリガンドであり、そして
痛覚脱失、内分泌調節、免疫調節、Ｋ+コンダクタンスの増加および活動電位の阻害を含
む、多くの生物学的役割を有する。
【０１１１】
ジノルフィン／新たなエンドルフィン前駆体関連ペプチド−ジノルフィンは、中枢神経
系において複数の形態で存在する内因性オピオイドのクラスである。ジノルフィンは、前
駆体プロジノルフィン（プロエンケファリンＢ）に由来する。ジノルフィンＡ１−１７と
しても公知のジノルフィンは、配列Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ5−Ａｒｇ
−Ａｒｇ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ10−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ｔｒｐ−Ａｓｐ15−Ａ
ｓｎ−Ｇｌｎ（配列番号１）を有する周知のオピオイドである。Ｄｙｎ  Ａ１−１３（配
列番号２）、Ｄｙｎ  Ａ２−１３（配列番号３）、Ｄｙｎ  Ａ１−１２、Ｄｙｎ  Ａ２−
１２およびＤｙｎ
Ａ２−１７、ならびにアミドアナログ（例えば、Ｌｅｅらの米国特許第４，４６２，９
４１号に言及されるアミドアナログ）、Ｎ末端短縮化ジノルフィンアナログ（例えば、Ｌ
ｅｅらの国際特許出願ＷＯ  ９６／０６６２６に記載されるＮ末端短縮化ジノルフィンア
ナログ）ならびにｄｅｓ−Ｔｙｒまたはｄｅｓ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙのアナログ（例えば、ま
たＬｅｅらの国際特許出願ＷＯ  ９３／２５２１７に開示されるアナログ）を含めて、ジ
ノルフィンの多数の誘導体およびアナログが公知である。ジノルフィン（ｄｙｎｏｒｐｈ
ｉ）は、非常に強力なオピオイドであり、そしてκレセプターに対する選択的親和性を示
す。Ｇｏｌｄｓｔｅｉｎ，Ａ．、Ｐｅｐｔｉｄｅｓ、Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ａｎｄ  Ｆｕ
ｎｃｔｉｏｎ、Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ８ｔｈ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐ
ｅｐｔｉｄｅｓ  Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ、Ｈｒｕｂｙ、Ｖ．Ｊ．およびＲｉｃｈ、Ｄ．Ｈ．
編、４０９（１９８３）を参照のこと。
【０１１２】
エンドルフィン−エンドルフィン（ｅｎｄｏｒｐｈｉ）は、前駆体タンパク質リポトロ
ピンに由来する。エンドルフィンは、いくつかの生物学的反応（例えば、痛覚脱失、行動
変化および成長ホルモン放出）を惹起することが見出されている。Ａｋｉｌ，Ｈ．ら、Ａ
ｎｎ．Ｒｅｖ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．、７，２２３（１９８４）を参照のこと。
【０１１３】
エンケファリン（ｅｎｋｅｐａｌｉｎ）および関連ペプチド−エンケファリンおよびエ
ンドルフィンは、痛みのインパルスの伝達を阻害する神経ホルモンである。中枢神経系お
よび末梢神経系の両方におけるニューロンの活性は、それらの放出部位から極めて離れた
細胞に作用する多数の神経ホルモンによって影響を受ける。神経ホルモンは、神経細胞が
シナプスの神経伝達物質に応答する能力を改変し得る。神経系に対して絶大な効果を有す
るいくつかの低分子ペプチド（例えば、エンケファリン（例えば、Ｍｅｔ−エンケファリ
ンおよびＬｅｕ−エンケファリン）ならびにエンドルフィン（例えば、βエンドルフィン
））が近年発見されている。これらの３つのものは、それらの機能に必須である共通のテ
トラペプチド配列（Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ）を含む。エンケファリンおよびエ
ンドルフィンは、天然の鎮痛剤またはアヘン剤として機能し、そして中枢神経系における
疼痛応答を減少させる。Ａｋｉｌ，Ｈ．ら、Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．、７、
２２３（１９８４）もまた参照のこと。
【０１１４】
Ｌ．胸腺ペプチド（配列番号９２８〜９３４）−胸腺は、乳児および成体の両方におい
てＴ細胞免疫の発達および調節を担うと考えられている。胸腺は、その上皮細胞を通した
、胸腺ペプチドと呼ばれる種々の非細胞性ホルモン様産物の分泌を介してその調節機能を
発揮するようである。
【０１１５】
胸腺ペプチドは、Ｔ細胞に対して多くの効果を有することが報告されている。いくつか
の研究は、胸腺ペプチドが未成熟な前駆体細胞の、その充分に能力のあるＴ細胞への発達
を補助し得ることを報告した。胸腺ペプチドは、Ｔ細胞上での種々のサイトカインおよび
モノカインレセプターの発現を調節するようであり、そして免疫系が抗原投与された場合
にＩＬ−２、インターフェロンαおよびインターフェロンγ（疾患と闘う物質）の分泌を
誘導する。化学療法によって引き起こされた免疫不全を有する小児における胸腺ホルモン
の使用が、循環するＴ細胞の増加、Ｔ細胞サブセットの正常化、および遅延型過敏反応の
修復をもたらしたことについての報告が存在する。
【０１１６】
チモポエチン−チモポエチンは、公知の胸腺ホルモンのうちで最大であり、そして４９
アミノ酸からなる。
【０１１７】
サイミュリン−胸腺血清因子として以前に公知のサイミュリンは、化学的に特徴付けら
れた胸腺ホルモンのうちの最小のものであり、そして９アミノ酸からなる。サイミュリン
は、免疫系Ｔ細胞の産生の刺激を担うホルモンである。
【０１１８】
サイモペンティン−サイモペンティンは、治療用ペプチド５またはＴｉｍｕｎｏｘとし
ても公知の、小さな、合成された胸腺ペプチド薬物である。米国では、サイモペンティン
は、Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ＩｎｓｔｉｔｕｔｅによってＡＩ
ＤＳ治療として開発されている。サイモペンティンは、大部分の他の胸腺ペプチド薬物よ
りも詳細にわたって研究されている。少なくとも１つの研究は、未処置のコントロール関
係者と比較して、サイモペンティンを１週間に３回受けた患者における、Ｔ細胞の有意な
上昇およびわずかな臨床的改善を主張した。１４の未処置のコントロール関係者と比較し
て、薬物を摂った患者は、より大きな「免疫学的安定性」およびいくらかの臨床的改善を
示した。
【０１１９】
チモシン−チモシンは、１５以上のタンパク質の混合物である。これらのタンパク質の
うちの１つは、２８アミノ酸からなるチモシンα−１である。チモシンは、一次免疫欠損
の処置のために、そしてインフルエンザワクチンについてのブースターとして腎臓透析患
者において治療用途を有する。チモシンはまた、進行中の臨床試験において慢性Ｂ型肝炎
およびＣ型肝炎、ＨＩＶ感染ならびに特定の形態の癌に対する活性について試験されてい
る。
【０１２０】
胸腺体液因子（ＴＨＦ）−ＴＨＦは、抗ＨＩＶ処置として現在試験されている胸腺ペプ
チドである。ＣＭＶ関連免疫抑制を有するラットにおける前臨床研究では、ＴＨＦは、Ｔ
細胞の調節を通して免疫能力を回復した。さらに、ＴＨＦは、ヘルペスの処置において治
療用途を有し得、（少なくとも１つの研究において）ウイルス感染の迅速な後退およびＴ
細胞集団の増加を引き起こす。
【０１２１】
（Ｌ．他のペプチド）
（アドレノメデュリンペプチド（ＡＭ）（配列番号９３５〜９４５））
アドレノメデュリンは、心臓血管機能に対して主要な効果を発揮する強力な血管拡張ペ
プチドである。その全身投与は、迅速かつ深刻な血圧の低下および肺の血流の増加を引き
起こす。他のその作用は気管支拡張であり、飲酒行動（ｄｒｉｎｋｉｎｇ  ｂｅｈａｖｉ
ｏｒ）のインヒビター、およびアンギオテンシン誘導アルドステロン分泌のインヒビター
である。Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、
第２７０巻、４３号、２５３４４−２５３４７頁、１９９５およびそこに引用されている
参考文献を参照のこと。
【０１２２】
（アラトスタチンペプチド（配列番号９４６〜９４９））
アラトスタチンは、幼若ホルモンの産生を制御するために昆虫によって合成される６〜
１８アミノ酸のペプチドである。幼若ホルモンは、次には、変態および卵生成を含む機能
を調節する。アラトスタチンファミリーの神経ペプチドは、幼若ホルモン（これは、ゴキ
ブリＤｉｐｌｏｐｔｅｒａ  ｐｕｎｃｔａｔａにおいて発生および生殖の局面を調節する
）のインビトロ産生を阻害するが、これらは、血液リンパ、腸におけるペプチダーゼによ
る不活化に感受性であり、そして内部組織に結合する。
【０１２３】
（アミロイドβタンパク質フラグメント（Ａβフラグメント）（配列番号９５０〜１０
１０））
これらは、アルツハイマー病の脳における神経炎性斑中に細胞内的および細胞外的に蓄
積するアミロイド斑の主要な成分である。Ａβは、４．５ｋＤのタンパク質であり、約４
０〜４２アミノ酸長であり、これは、アミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）のＣ末端に
由来する。ＡＰＰは、膜貫通糖タンパク質であり、これは、正常なプロセシング経路にお
いて、Ａβタンパク質内部で切断されて、ＡＰＰの分泌型であるα−ｓＡＰＰを産生する
。α−ａＡＰＰの形成は、Ａβの形成を妨げる。Ａβは、ＡＰＰの異常なプロセシングに
よって蓄積し、その結果、Ａβ産生の原因である酵素の活性を阻害する化合物が探索され
ることが提案されてきた。例えば、Ｗａｇｎｅｒら、Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｒｅｐｏｒｔ（１
９９４／１９９５）、１０６−１０７頁；およびＳｅｌｋｏｅ（１９９３）ＴＩＮＳ  １
６：４０３−４０９を参照のこと。特定の条件下で、Ａβペプチドは最初に凝集し、次い
で、アミロイド原線維に特徴的な折り畳まれたβシート構造として沈着する。β−アミロ
イド（１−４２）型は、β−アミロイド（１−４０）よりも有意に早い速度でかつ大きな
程度で凝集する。
【０１２４】
（抗菌ペプチド（配列番号１０１１〜１０４７））
抗菌ペプチドは、大部分の多細胞生物の先天性免疫系の鍵となる成分であり、これは、
１以上の微生物（例えば、細菌、真菌、原生動物、酵母、およびマイコバクテリア）に対
して活性である。このようなペプチドの例としては、ディフェンシン、セクロピン（ｃｅ
ｃｒｏｐｉｎ）、ブフォリン（ｂｕｆｏｒｉｎ）、およびマガイニン（ｍａｇａｉｎｉｎ
）が挙げられる。配列および分類の広い分岐にも関わらず、大部分の抗菌ペプチドは、共
通の作用メカニズム（すなわち、病原体の膜透過化）を共有する。抗菌ペプチドは、２つ
の広いグループ：直鎖状および環状に分類される。直鎖状抗菌ペプチドにおいて、２つの
サブグループが存在する：αヘリックス両親媒性コンホメーションを取る傾向のある直鎖
状ペプチド、および、Ｐｒｏ、Ａｒｇ、またはＴｒｐのようなアミノ酸に富む異常な組成
の直鎖状ペプチド。環状グループは、すべてのシステイン含有ペプチドを含み、そしてさ
らに、単一または複数のジスルフィド構造に対応する２つのサブグループに分割され得る
。
【０１２５】
大部分の抗菌ペプチドは、原形質膜の透過の増加を引き起こす。特定の膜タンパク質の
阻害、ストレスタンパク質の合成、ＤＮＡ合成の停止、ディフェンシンによる一本鎖ＤＮ
Ａの切断、ブフォリンによるＤＮＡとの相互作用（合成の停止を伴わない）、または過酸
化水素の産生のような、他の機構の証拠もまた存在する。抗菌ペプチドはまた、真核生物
細胞におけるアポトーシスまたは細菌標的における自己分解のような、自己破壊的な機構
を誘発することによって作用し得る。抗菌ペプチドはまた、偽基質として働くことによっ
てか、または基質の接近を妨害する活性部位に強固に結合することによってのいずれかで
、病原性生物によって産生される酵素のインヒビターとして作用することが知られている
。
【０１２６】
抗菌ペプチドのレベルの増加は、いくつかの動物およびヒトの感染について（例えば、
Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ、またはＣｒｙｐｔｏｐｏｒｉｄ
ｉｕｍ感染におけるα−ディフェンシン）、そして水疱および創傷液中において種々のペ
プチドが報告されている。炎症性状況または刺激はまた、抗生物質ペプチドの誘導と関連
する。
【０１２７】
枯渇したレベルの抗菌ペプチドは、いくつかの病理と関連する。従って、特異的顆粒欠
損症候群の患者は、α−ディフェンシンを完全に欠き、頻繁かつ重篤な細菌感染に苦しむ
。ＨＩＶ患者の唾液からの低レベルのヒスタチン（ｈｉｓｔａｔｉｎ）は、口のカンジダ
症および真菌感染の高い発生率と相関していた。おそらく、ヒトの病理における抗菌ペプ
チドの関連性の最も説得力のある例証は、気道の再発性の細菌感染と関連する遺伝病であ
る、嚢胞性線維症に由来する。この疾患を引き起こす欠損した塩素チャネルは、肺胞液の
塩分を増大させ、従って、塩分に感受性であるβ−ディフェンシンの抗菌活性を損なう。
Ａｎｄｒｅｕ  Ｄ．（編）（１９９８）「Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ  ｐｅｐｔｉｄｅ
ｓ」Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ（Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ）第４７巻、第６号、４
１３−４９１頁。Ａ．Ａｎｄｒｅｕ、Ｌ．Ｒｉｖａｓ（１９９８）Ａｎｉｍａｌ
Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ：Ａｎ  Ｏｖｅｒｖｉｅｗ，Ｂｉｏｐ
ｏｌｙｍｅｒｓ（Ｐｅｐ．Ｓｃｉ．）４７：４１５−４３３。
【０１２８】
（抗酸化ペプチド（配列番号１０４８〜１０５０））
抗酸化剤は、組織に対する酸化的損傷を防ぐ薬剤である。哺乳動物細胞は、連続して活
性酸素種（例えば、スーパーオキシド、過酸化水素、ヒドロキシルラジカル、および一重
項酸素）に曝される。これらの反応性酸素中間体は、好気性代謝、薬物および他の生体異
物の異化、紫外線およびＸ線照射、ならびに食細胞（例えば、白血球）の呼吸性バースト
に応答して、インビボで細胞によって生成されて、侵入する細菌（例えば、創傷を通じて
導入されたもの）を殺傷する。例えば、過酸化水素は、特に、ストレスを受けた細胞およ
び損傷した細胞によって、大部分の生きている生物の呼吸の間に産生される。
【０１２９】
抗酸化ペプチドの１つの例は、ナチュラルキラー増強因子Ｂ（ＮＫＥＦ−Ｂ）であり、
これは、最近発見された抗酸化剤の高度に保存されたファミリーに属する。ナチュラルキ
ラー増強因子（ＮＫＥＦ）は、ＮＫ細胞傷害性を増加させるその能力に基づいて、同定お
よびクローニングされた。２つの遺伝子（ＮＫＥＦ−ＡおよびＮＫＥＦ−Ｂ）は、ＮＫＥ
Ｆタンパク質をコードし、そして示された配列分析は、各々が高度に保存された抗酸化剤
のファミリーに属することを示唆する。ＮＫＥＦ−Ｂの抗酸化剤としての役割は、過酸化
水素による酸化的損傷に対する、トランスフェクトされた細胞のその防御によって実証さ
れた。ＮＫＥＦ−Ｂは、酸化促進剤（例えば、アルキルヒドロペルオキシドおよびＭｅＨ
ｇ）に対する抗酸化活性を有する。その抗酸化活性とともに、ＨＰによるＮＫＥＦ−Ｂの
誘導は、ＮＫＥＦ−Ｂが、種々の生体異物毒性薬剤に対する防御を提供する、重要な酸化
的ストレスタンパク質であることを示す。
【０１３０】
（アポトーシス関連ペプチド（配列番号１０５１〜１０７５）
動物細胞は、固有の細胞死のプログラムを介して自己破壊し得る（Ｓｔｅｌｌｅｒ、１
９９５）。アポトーシスは、特定の形態学的および生化学的特性によって特徴付けられる
、プログラムされた細胞死の一形態である（Ｗｙｌｌｉｅら、１９８０）。形態学的に、
アポトーシスは、死滅しつつある細胞の一連の構造変化（原形質膜の小疱形成（すなわち
、水膨れ）、細胞質および核の凝縮、ならびに膜アポトーシス小体への細胞の断片化）に
よって特徴付けられる（Ｓｔｅｌｌｅｒ、１９９５；Ｗｙｌｌｉｅら、１９８０）。
【０１３１】
生化学的には、アポトーシスは、クロマチンの分解によって特徴付けられ、これは、最
初には５０〜３００キロ塩基の大きなフラグメント、引き続いて２００塩基のモノマーお
よびマルチマーである、より小さなフラグメントになる（Ｏｂｅｒｈａｍｍｅｒら、１９
９３；Ｗｙｌｌｉｅ、１９８０）。アポトーシスの他の生化学的な指標は、タンパク質ク
ラステリン（ＴＲＰＭ−２またはＳＧＰ−２としてもまた公知）（Ｐｅａｒｓｅら、１９
９２）の誘導レベルまたは増加レベル、および酵素ＩＩ型トランスグルタミナーゼ（この
酵素は、アポトーシス小体の外被にタンパク質を架橋させる）の活性化である（Ｆｅｓｕ
ｓら、１９９１）。アポトーシスは、組織および細胞型によって変化し得る、関連する形
態学的プロセスおよび生化学的プロセスの複雑な現象である（Ｚａｋｅｒｉら、１９９５
）。
【０１３２】
アポトーシスの遂行は、死滅しつつある細胞からの細胞成分の漏出を最小化する（アポ
トーシスは、細胞を退縮させる）。例えば、プロテアーゼは、隣接する細胞を損傷させ得
るか、または炎症性応答を刺激し得る。アポトーシスのこの基本的な特徴は、アポトーシ
スをネクローシスから区別する。ネクローシスは、通常、外傷から生じ、損傷した細胞を
膨張および溶解させ、炎症性応答を刺激する細胞質性の物質を放出する（Ｓｔｅｌｌｅｒ
、１９９５；Ｗｙｌｌｉｅら、１９８０）。
【０１３３】
（嚢細胞ペプチド（ＢＣＰ）（配列番号１０７６〜１０８０））
海洋軟体動物Ａｐｌｙｓｉａ  ｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａの神経ペプチド作動性嚢細胞は
、動物の産卵行動に関与する。これらの神経分泌性細胞は、産卵ホルモン（ＥＬＨ）前駆
体タンパク質を合成し、複数の生物活性ペプチド（ＥＬＨを含む）、いくつかの嚢細胞ペ
プチド（ＢＣＰ）、および酸性ペプチド（ＡＰ）を産生する。海洋軟体動物Ａｐｌｙｓｉ
ａ  ｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａの嚢細胞は、産卵を開始する、十分に特徴付けられた神経内
分泌細胞である。性的成熟の間、これらの細胞（嚢細胞ニューロン）は、神経系刺激の期
間の間に放出されるホルモンを貯蔵する能力を発達させる。このホルモンは、産卵のプロ
セスに重要であり、それゆえその動物が性的に成熟する前に放出されてはならない。α−
嚢細胞ペプチドは、インビトロで嚢細胞活性を誘発し得る、構造的に関連するペプチドの
小さなファミリーに属する。
【０１３４】
（ボンベシン（配列番号１０８１〜１０９０））
ボンベシンは、共通のＣ末端配列Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｘ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｍｅｔ−ＮＨ
２およびＮ末端領域を共有するペプチドのファミリーに属する、生物活性テトラデカペプ
チド神経ペプチドである。これは、内因性のガストリンの放出による胃の傷害を予防する
、脳の神経および腸において見出される調節的な役割を有する。ボンベシンの哺乳動物ホ
モログは、ガストリン放出ペプチド（ＧＲＰ）である。
【０１３５】
（骨Ｇｌａタンパク質ペプチド（配列番号１０９１〜１０９７））
オステオカルシン（骨Ｇｌａタンパク質またはＢＧＰ）は、骨形成のプロセスにおいて
、骨芽細胞によって産生および分泌される。コラーゲンと同様に、このタンパク質は、骨
マトリックスの成分である。血清オステオカルシンは、骨形成速度が上昇した場合に上昇
する。レベルは、骨成長が最も速い思春期の間において高い。レベルは、しばしば、高い
骨の代謝回転を有する疾患（例えば、上皮小体機能亢進症および甲状腺機能亢進症）にお
いてもまた高い。閉経後の骨粗しょう症において、オステオカルシンレベルは、ときおり
増加し、このことは、二次的な骨の迅速な骨吸収への代謝回転の増加を反映する。より高
齢の被験体において発症する、老人性の骨粗しょう症においては、オステオカルシンレベ
ルが低いようであり、このことは、骨の代謝回転および骨形成の両方の速度が減少してい
ることを反映する。骨形成を増加させる処置レジメンはまた、血清オステオカルシンレベ
ルを上昇させる。
【０１３６】
（ＣＡＲＴペプチド（配列番号１０９８〜１１００））
コカインおよびアンフェタミン調節転写物ペプチド（ＣＡＲＴ）は、強力な食欲抑制活
性を有する、最近発見された視床下部性ペプチドである。ラットにおいて、ＣＡＲＴ遺伝
子は、１２９アミノ酸残基または１１６アミノ酸残基のいずれかのペプチドをコードする
のに対して、ヒトにおいては短い型のみが存在する。推定シグナル配列は、１０２残基ま
たは８９残基のプロホルモン中に生じる２７アミノ酸残基である。ＣＡＲＴのＣ末端は、
４８アミノ酸残基および３つのジスルフィド結合からなり、この分子の生物学的に活性な
部分を構成すると考えられている。
【０１３７】
中枢神経系において、ＣＡＲＴは、多くの視床下部の核において高度に発現され、それ
らのいくつかは、摂食行動の調節に関与する。ＣＡＲＴ  ｍＲＮＡは、レプチンによって
調節されており、そして発現されたＣＡＲＴは、神経ペプチドＹによって誘導される摂食
応答を無効にさえする、摂食の強力なインヒビターである。従って、推定ＣＡＲＴレセプ
ターは、抗肥満薬物についての強力な治療標的である。ＣＡＲＴ，ａ  ｎｅｗ  ａｎｏｒ
ｅｃｔｉｃ  ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｔｈｉｍ  Ｌ；Ｋｒｉｓｔｅｎｓｅｎ  Ｐ；Ｌａｒｓｅｎ
ＰＪ；Ｗｕｌｆｆ  ＢＳ，Ｉｎｔ  Ｊ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ、３０（
１２）：１２８１−４  １９９８  Ｄｅｃを参照のこと。
【０１３８】
（細胞接着ペプチド（配列番号１１０１））
細胞接着ペプチドは、外部刺激に対する細胞応答に直接的に関与する。例えば、炎症性
応答の間に、白血球は、原形質区画から離れて、抗原性の傷害の点に移動しなくてはなら
ない。この移動事象の機構は、可溶性メディエーターと膜結合細胞接着分子との間の複雑
な相互作用である。可溶性細胞走化因子は、種々の常在性の細胞によって損傷された組織
中で産生され、原形質区画の外に化学的濃度勾配を生じさせる。これらの因子の、白血球
上のそれらのレセプターとの相互作用は、走化因子の増加する濃度に向かっての白血球の
方向付けられた移動をもたらす。同時に、種々の接着ペプチドは、内皮組織上で最初の転
がり（ｒｏｌｌｉｎｇ）を媒介する白血球上でアップレギュレートされ、活性化された内
皮組織上の特定のリガンドに結合し、そして最終的に、内皮細胞間でのその組織への移動
をもたらす。事象のカスケードにおけるこの段階は、「細胞接着分子」と名付けられた特
定の細胞表面タンパク質の相互作用によって媒介される。この分子は、例えば、Ｅ−セレ
クチン（ＥＬＡＭ−１、内皮白血球接着分子−１）、ＩＣＡＭ−１（細胞間接着分子−１
）、およびＶＣＡＭ−１（血管細胞接着分子−１）である。
【０１３９】
（走化性ペプチド（配列番号１１０２〜１１１３））
走化性ペプチドは、白血球（ｗｈｉｔｅ  ｃｅｌｌ）、白血球（ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ）
、およびマクロファージの、感染もしくは傷害の部位の組織への移動を刺激するか、また
は代替的に、これらの同じ細胞の、これらの部位から離れる移動を妨害するペプチドであ
る。
【０１４０】
（補体インヒビター（配列番号１１１４〜１１２０））
異種移植片（ｘｅｎｏｔｒａｎｓｐｌａｎｔ）に対する補体攻撃の阻害は、補体インヒ
ビターの使用によって達成され得る。移植された器官の拒絶は、極度に迅速な超急性拒絶
（ＨＡＲ）期およびより遅い細胞拒絶期の両方を含み得る。異種移植片のＨＡＲは、あら
かじめ形成された、ドナーの器官の内皮に結合する「天然の」抗体により開始され、そし
て、この抗体は、ドナーの組織内皮に結合して、レシピエントの免疫系による補体攻撃を
活性化する。補体の活性化は、走化性、凝血促進性、炎症誘発性、接着性、および細胞溶
解性の特性を有する、液相タンパク質（Ｃ３ａ、Ｃ５ａ）および膜結合タンパク質（Ｃ３
ｂおよびＣ５ｂ−９、すなわち、Ｃ５ｂ、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８、およびＣ９）の生成をもた
らす。補体インヒビターは、このプロセスを阻害する。
【０１４１】
（コルチスタチンペプチド（配列番号１１２１〜１１２４））
コルチスタチン（ｃｏｒｔｉｓｔａｔｉｎ）は、そのｍＲＮＡが睡眠遮断の間に蓄積し
、明らかに、皮質興奮性に対するアセチルコリンの効果に拮抗することによって作用し、
それによって、脳の徐波の同期化をもたらす。コルチスタチン−１４（ＣＳＴ−１４）は
、ソマトスタチン−１４（ＳＲＩＦ−１４）とその１４残基のうちの１１を共有し、なお
その睡眠の生理、歩行運動の行動、および海馬の機能に対する効果は、ソマトスタチンの
効果とは全く異なっている。
【０１４２】
（フィブロネクチンフラグメントおよびフィブリン関連ペプチド（配列番号１１２５〜
１１７４））
フィブロネクチンは、反復する相同なペプチド配列の３つの型のブロックから構成され
る、大きな糖タンパク質である。相同なブロックのうちのいくつかは、２つのほぼ同一の
サブユニットアーム上に直鎖状のアレイに組織化される機能的ドメインを形成する。各ア
ームは、機能的ドメインに分けられ得、これらは、しばしば、その領域に結合する物質の
１つによって呼ばれる（例えば、ヘパリン結合フラグメント、フィブリン結合フラグメン
ト、および細胞結合フラグメント）。いくつかの細胞型において、フィブロネクチンの細
胞結合ドメインのＡｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ（ＲＧＤ）配列は、ｌｉｂ／ＩＩＩａと呼ばれ
る細胞表面糖タンパク質と相互作用する。フィブロネクチンはまた、細胞外および基底膜
の成分、ウイルスのエンベロープ糖タンパク質、種々の細菌（ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃ
ｉおよびｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｉを含む）、ならびに寄生生物（例えば、Ｔｒｙｐａｎ
ｏｓｏｍａ  ｃｒｕｚｉおよびＬｅｉｓｈｍａｎｉａ種）に結合する。
【０１４３】
フィブロネクチンは、いくつかの接着機能（例えば、細胞−細胞接着、細胞−基底膜接
着、および凝塊安定化）を有する。さらに、フィブロネクチンは、胚形成、神経再生、線
維芽細胞移動、マクロファージ機能、ならびに、哺乳動物細胞および細胞外マトリックス
への病原体（ウイルス、真菌、細菌、および原生動物）の結合を促進する。従って、フィ
ブロネクチンは、創傷治癒の最終段階を通しての感染の開始からの感染の病因に関与する
。Ｐｒｏｃｔｏｒ，Ｒ．Ａ．、Ｒｅｖ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．、９、３１７（１９８７
）を参照のこと。
【０１４４】
（ＦＭＲＦおよび類似のペプチド（配列番号１１７５〜１１８７））
ＦＭＲＦは、ＦＭＲＦアミド遺伝子にコードされた神経ペプチドであり、共通のＣ末端
ＦＭＲＦアミドを有するが、異なるＮ末端伸長を有する。ＦＭＲＦアミド関連ペプチド（
ＦａＲＰ）は、動物界の至るところに存在し、そして神経機能および胃腸機能の両方に影
響を与える。生物は、共通のＣ末端構造を有するが異なるＮ末端アミノ酸伸長を有する、
多数のＦａＲＰをコードするいくつかの遺伝子を有する。
【０１４５】
（ガラニンおよび関連するペプチド（配列番号１１８８〜１２０８））
ガラニンは、もともとブタの小腸から単離された２９〜３０アミノ酸のペプチドである
。これは、２つの生物学的に活性な形態で見出されている：ＧＡＬ（１〜１９）および非
アミド化形態のＧＡＬ（１〜３０）である。ガラニンは、多くの生物学的役割を有し、そ
れらとしては以下が挙げられる：視床下部における生体アミンの放出の阻害、コリン作用
性機能のシナプス前部およびシナプス後部の阻害、胃腸のホメオスタシスの維持、ならび
にインスリンおよびグルカゴンの分泌の調節。
【０１４６】
（増殖因子および関連するペプチド（配列番号１２０９〜１２４０））
増殖因子は、細胞分裂を調節するタンパク質のファミリーである。いくつかの増殖因子
は細胞型特異的であり、適切なレセプターを有する細胞のみの分裂を刺激する。他の増殖
因子は、その効果においてより一般的である。増殖因子の効果と拮抗して、分裂を遅延ま
たは妨害する細胞外因子もまた、存在する（例えば、トランスフォーミング増殖因子βお
よび腫瘍壊死因子）。これらの細胞外シグナルは、ホルモンのレセプターと非常に類似し
ている細胞表面レセプターを通して、そして類似の機構（細胞内第２メッセンジャーの産
生、タンパク質リン酸化、および究極的には、遺伝子発現の変更）によって作用する。
【０１４７】
（Ｇ治療用ペプチド結合タンパク質フラグメント（配列番号１２４１〜１２４６））
Ｇ治療用ペプチド（Ｇｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｐｅｐｔｉｄｅ）結合調節タンパク質
（Ｇタンパク質）のファミリーのメンバーは、膜結合レセプターから細胞内エフェクター
にシグナルを伝達する。このファミリーには、ＧsおよびＧiが含まれ、これらは、それぞ
れ、アデニル酸シクラーゼの刺激および阻害の原因である。トランスデューシン（Ｔ）は
、網膜杆状体外部セグメントの円板膜に局在し、光によるロドプシンの活性化を、サイク
リックＧＭＰホスホジエステラーゼ活性の増加に連関させる。もともとウシ脳において見
出されたＧoは、このファミリーの第４のメンバーである。
【０１４８】
精製されたＧタンパク質は、類似の物理学的特性を有する。これらは、αサブユニット
、βサブユニット、およびγサブユニットから構成されるヘテロダイマーである。αサブ
ユニットはＧ治療用ペプチドに結合し、そしてこれを加水分解する。Ｓ．Ｍ．Ｍｕｍｂｙ
ら、ＰＮＡＳ  ８３，２６５（１９８６）およびＬｅｈｎｉｎｇｅｒ  ７６４頁を参照の
こと。
【０１４９】
（グアニリンおよびウログアニリン（配列番号１２４７〜１２４９））
グアニリンおよびウログアニリンは、腸粘膜および尿から単離されたペプチドであり、
これらは、腸細胞中のサイクリックＧＭＰ産生を調節し、グアニル酸シクラーゼＣに結合
してそれを活性化し、そして脊椎動物の多くの上皮中での塩および水の輸送を制御し、い
くつかの熱安定性細菌のエンテロトキシンの作用を模倣する。腎臓においては、これらの
両方が、十分に実証されているナトリウム排泄増加性効果およびカリウム排泄増加性効果
を有する。
【０１５０】
腸における塩素分泌は、グアニル酸シクラーゼＣ（ＧＣ−Ｃ）の活性化を介して、これ
らのホルモンによって調節される。両方のペプチドは、種々の組織および器官（腎臓を含
む）において発現される。単離された、灌流した腎臓およびインビボのこれらのホルモン
は、ナトリウム排泄増加および利尿を誘導するが、しかし、腎臓中のそれらの作用の局在
および細胞機構は、なお未知である。
【０１５１】
（インヒビンペプチド（配列番号１２５０〜１２５５）
インヒビンは、２つのサブユニット（αは１３４アミノ酸；βは、１１５〜１１６アミ
ノ酸）から構成される。その役割は、ＦＳＨ分泌の阻害である。２つのインヒビンアイソ
フォーム（インヒビンＡおよびインヒビンＢ）は、配偶子成熟の過程で性腺によって産生
され、そして月経周期の間、異なる分泌パターンを有する。インヒビンはまた、胎盤およ
び胚膜によって産生され、そして妊娠の生理学的適応に関与し得る。臨床的には、インヒ
ビンは、閉経後の女性における感度の高い腫瘍マーカーとして、または不妊の女性におけ
る卵巣の抑制（ｏｖａｒｉａｎ  ｒｅｓｅｒｖｅ）を評価するための有用なツールとして
働き得；これらはまた、母性（ｍａｔｅｒｎｏ）胎児障害の診断において使用され、そし
て卵の成熟を妨害し得るか、または排卵を阻害し得る。
【０１５２】
（インターロイキン（ＩＬ）およびインターロイキンレセプタータンパク質（配列番号
１２５６〜１２６３））
インターロイキンは、造血起源の細胞を標的とする増殖因子である。免疫応答および炎
症応答と関連する種々の生物学的活性は、インターロイキンに起因している。これらの応
答には、発熱、軟骨破壊、骨吸収、胸腺細胞増殖、Ｔリンパ球およびＢリンパ球の活性化
、肝実細胞からの急性期タンパク質合成の誘導、線維芽細胞増殖、ならびに骨髄細胞の分
化および増殖が挙げられる。
【０１５３】
（ラミニンフラグメント（配列番号１２６４〜１２８４））
ラミニン（基底膜の主要非コラーゲン糖タンパク質）は、インビトロで種々の腫瘍細胞
型の接着、拡散、および移動を促進することが示された。特に、実験室において現在主要
な研究は、インタクトなラミニン、ラミニンの精製されたタンパク質分解フラグメント、
およびラミニンの合成ペプチドを、この大きなタンパク質における機能的に活性な部位を
同定するために利用する。このような基底膜の成分は、種々の細胞型についての増殖、発
生および分化の重要なモジュレーターである。結合体化ラミニンは、組織の炎症または線
維症を予防するのに使用され得る。
【０１５４】
このカテゴリーはまた、ペプチドクリングル−５（すなわちＫ−５）を含む。本明細書
中で使用されるように、用語「クリングル５」とは、哺乳動物プラスミノーゲン分子の５
番目のクリングル領域によって規定される特定の三次元コンフォメーションに寄与する３
つのジスルフィド結合を有する哺乳動物のプラスミノーゲンの領域をいう。１つのこのよ
うなジスルフィド結合は、アミノ酸４６２位および５４１位に位置するシステイン残基と
連結し、第２の結合は、アミノ酸４８３位および５２４位に位置するシステイン残基に連
結し、そして第３の結合は、アミノ酸５１２位および５３６位に位置するシステイン残基
に連結する。用語「クリングル５ペプチドペプチド」とは、哺乳動物プラスミノーゲンの
対応するペプチドフラグメントに相同な実質的配列を有する、４アミノ酸と１０４アミノ
酸の間（両端を含む）の抗脈管形成活性を有するペプチドをいう。
【０１５５】
（レプチン（ｌｅｐｔｉｎ）フラグメントペプチド（配列番号１２８５〜１２８８））
レプチン（肥満遺伝子のタンパク質産物）は、脂肪細胞によって分泌される。レプチン
は、ヒトにおける体重および代謝の調節に関与し、また、インシュリン耐性症候群の病態
生理学に関与し得、このインシュリン耐性症候群は、心臓血管疾患の発生と関連する。
【０１５６】
（ロイコキニン（ｌｅｕｃｏｋｉｎｉｎ）（配列番号１２８９〜９８））
ロイコキニンは、腸運動性および細管流体分泌速度を刺激する、広範な昆虫ホルモンの
グループである。細管において、それらの主要な作用は、基底外側の膜上のレセプターに
結合することによって塩化物透過性を上昇させることである。
【０１５７】
（下垂体アデニレートシクラーゼ活性化ポリペプチド（ＰＡＣＡＰ）（配列番号１２９
９〜１３１１）
これは、３８アミノ酸ペプチドであり、これは最初にヒツジ視床下部から単離され、こ
れはまた、ＰＡＣＡＰ−２７と呼ばれる２７アミノ酸形態において生じる。ＰＡＣＡＰは
、視床下部に局在化しており、他には、脳、気道および胃腸系において局在化している。
これは、神経伝達およびホルモン機能、エネルギー代謝の調節の関与、およびニューロン
保護作用活性を含む多くの生物学的作用を有する。
【０１５８】
（パンクレアスタチン（配列番号１３１２〜１３２４））
パンクレアスタチンは、４９アミノ酸ペプチドであり、最初にブタ膵臓から単離、精製
および特徴付けされた。異なる組織におけるその生物学的活性は、分子のＣ末端部分に割
り当てられ得る。パンクレアスタチンは、プロホルモン前駆体、クロモグラニンＡを有し
、このクロモグラニンＡは、内分泌膵臓を含む神経内分泌に存在する糖タンパク質である
。
【０１５９】
（ポリペプチド（配列番号１３２５〜１３２６））
これらは、反復性の鎖である。２つの例を提供する：（ｐｒｏ−Ｈｙｐ−Ｇｌｙ）１０
*２０Ｈ２０およびポリＬ−リジン塩酸塩。
【０１６０】
（シグナル伝達試薬（配列番号１３２７〜１３６７））
シグナル伝達は、細胞外シグナル（例えば、化学的、力学的、または電気的）が増幅さ
れ、細胞性応答に変換されるプロセスである。多くの試薬が、このプロセスに含まれ、例
えば、アチャチン−１（ａｃｈａｔｉｎ−１）、グリコーゲンシンターゼ、オートカムチ
ド２（ａｕｔｏｃａｍｔｉｄｅ２）、カルシニューリン自己阻害ペプチド、カルモジュリ
ン依存性プロテインキナーゼＩＩ、カルモジュリン依存性プロテインキナーゼ基質、カル
モジュリン依存性プロテインキナーゼ基質アナログ。ＣＳＫ−１７、Ｃｙｓ−Ｋｅｍｐｔ
ｉｄｅ、オートカムチド２、マランチド（ｍａｌａｎｔｉｄｅ）、メリチン、リン酸アク
セプターペプチド、プロテインキナーゼＣフラグメント、Ｐ３４ｃｄ２キナーゼフラグメ
ント、Ｐ６０ｃ−ｓｒｃ基質ＩＩ、プロテインキナーゼＡフラグメント、チロシンプロテ
インキナーゼ基質、シンチド２（ｓｙｎｔｉｄｅ２）、Ｓ６キナーゼ基質ペプチド３２、
チロシン特異性プロテインキナーゼインヒビター、およびそれらの誘導体およびフラグメ
ントが挙げられる。
【０１６１】
（トロンビンインヒビター（配列番号１３６８〜１３７７））
トロンビンは、凝固カスケードにおいて重要な調節酵素である；トロンビンは、正のフ
ィードバック調節因子と負のフィードバック調節因子との両方として多元的な役割に役立
つ。止血に対するその直接的な効果に加えて、トロンビンは、動脈血栓症の病原を支持お
よび増幅する様々な細胞型に対する直接的な効果を及ぼす。この酵素は、血小板の強力な
活性化因子であり、血小板を凝集させ、物質（例えば、ＡＤＰ  ＴＸＡ．ｓｕｂ．２ＮＥ
）を放出し、これは、さらに、血栓サイクルを増加させる。フィブリンメッシュ内の血小
板は、白色血栓の主要なフレームワークを含む。トロンビンはまた、内皮細胞に直接的な
効果を及ぼし、これは、血管収縮物質の放出および接着分子のトランスロケーションを引
き起こし、これは、免疫細胞の接着の部位となる。さらに、この酵素は、平滑筋細胞の有
糸分裂誘発および線維芽細胞の増殖を引き起こす。この分析から、トロンビンインヒビタ
ーによるトロンビン活性の阻害が、血栓症と関連する増殖事象の減少に向かった実行可能
な治療アプローチを構成することが明らかである。
【０１６２】
（毒素（配列番号１３８７〜１４１５））
毒素は、本発明を用いて、標的癌細胞、レセプター、ウイルス、または血液細胞に結合
体化され得る。一旦毒素が標的細胞に結合すると、その毒素は内部移行し、細胞毒性を引
き起こし、そして結果的に細胞死を引き起こす。毒素は、癌治療剤として広く使用されて
いる。
【０１６３】
毒素の分類の一つの例は、肥満細胞脱顆粒ペプチド、ハチ毒から単離された２つのジス
ルフィド架橋を有するカチオン性２２−アミノ酸残基ペプチドであり、これは、肥満細胞
脱顆粒を引き起こし、低濃度でヒスタミン放出を引き起こし、高濃度で抗炎症活性を有す
る。この肥満細胞脱顆粒ペプチドは、強力な抗炎症性があり、炎症を減少する際、ヒドロ
コルチゾンより１００倍より高く効果的である。これらの独特の免疫学的性質のため、Ｍ
ＣＤペプチドは、肥満細胞、好塩基性細胞、および白血球のような炎症性細胞の分泌メカ
ニズムを研究する際有用なツールとして役立ち得、治療的可能性を有する化合物の設計に
導く。肥満細胞顆粒化ペプチドの例は、マストパランであり、これはスズメバチの毒液か
ら生じる。マストパランは、肥満細胞を０．５μｇ／ｍｌの濃度で脱顆粒し、同じ濃度で
細胞からヒスタミンを放出させる。ＩＹ．Ｈｉｒａｉら、Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌ
ｌ．２７，１９４２（１９７９）を参照のこと。
【０１６４】
このような毒素の他の例は、オメガ−アガトキシンＴＫ、アゲレニン（ａｇｅｌｅｎｉ
ｎ）、アパミン、カルシクジン（ｃａｌｃｉｃｕｄｉｎｅ）、カルシセプチン（ｃａｌｃ
ｉｓｅｐｔｉｎｅ）、チャーブドトキシン（ｃｈａｒｂｄｏｔｏｘｉｎｅ）、クロロトキ
シン（ｃｈｏｒｏｔｏｘｉｎｅ）、コノトキシン、内毒素インヒビター、ゲグラフィート
キシン（ｇｅｇｒａｐｈｕｔｏｘｉｎｅ）、イベリオトキシン（ｉｂｅｒｉｏｔｏｘｉｎ
）、カリオトキシン（ｋａｌｉｏｔｏｘｉｎ）、肥満細胞顆粒化ペプチド、マーガトキシ
ン（ｍａｒｇａｔｏｘｉｎ）、神経毒ＮＳＴＸ−３、ＰＬＴＸ−ＩＩ、サイラトキシン（
ｓｃｙｌｌａｔｏｘｉｎｅ）、スチコダクチラトキシン（ｓｔｉｃｈｏｄａｃｔｙｌａ  
ｔｏｘｉｎ）、ならびにこれらの誘導体およびフラグメントが挙げられる。
【０１６５】
（トリプシンインヒビター（配列番号１４１６〜１４１８））
トリプシンインヒビターは、トリプシン、ならびに他のセリンプロテアーゼのインヒビ
ターとして機能する。肺炎症、膵炎、心筋梗塞、脳血管虚血の処置に有用である。
【０１６６】
（ウイルス関連ペプチド（配列番号１４１９〜１５２９））
ウイルス関連ペプチドは、ウイルス関連タンパク質、例えば、ウイルスレセプイター、
ウイルスインヒビター、およびエンベロープタンパク質である。例としては、以下が挙げ
られるが、これらには限定されない：ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、ＲＳウイルス（
ＲＳＶ）、ヒトパラインフルエンザウイルス（ＨＰＶ）、麻疹ウイルス（ＭｅＶ）、およ
びシミアン免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）のペプチドインヒビター、蛍光発生的ヒトＣＭＶ
プロテアーゼ基質、ＨＣＶコアタンパク質、ＨＣＶ  ＮＳ４Ａタンパク質、Ｂ型肝炎ウイ
ルスレセプター結合フラグメント、Ｂ型肝炎ウイルスＰｒｅ−Ｓ領域、ヘルペスウイルス
インヒビター２、ＨＩＶエンベロープタンパク質フラグメント、ＨＩＶｇａｇフラグメン
ト、ＨＩＶ基質、ＨＩＶ−１阻害ペプチド、ペプチドＴ、Ｔ２１、Ｖ３デカペプチド、ウ
イルス複製インヒビターペプチド、ならびにそれらのフラグメントおよび誘導体。
【０１６７】
これらのペプチドは、治療的に投与され得る。例えば、ペプチドＴは、ＨＩＶ−１ｇｐ
１２０のＶ２領域からの８アミノ酸の鎖である。これらのアミノ酸は、ＨＩＶの外側エン
ベロープの部分と類似している。これらのアミノ酸は、ＨＩＶ関連の神経学的症状および
全身症状の治療法として研究されており、ペプチドＴは、発熱、寝汗、体重減少、および
疲労のような症状を軽減し得る。これはまた、乾癬損傷を散らすことが示されている。
【０１６８】
（種々雑多なペプチド（配列番号１５２９〜１６１７））
アジュバントペプチドアナログ、α接合因子、抗不整脈ペプチド、食欲不振誘発性ペプ
チド、α−１抗トリプシン、ウシ松果体抗生殖ペプチド、バルシン（ｂｕｒｓｉｎ）、Ｃ
３ペプチドＰ１６、カドヘリンペプチド、クロモグラニンＡフラグメント、避妊テトラペ
プチド、コナントキンＧ（ｃｏｎａｎｔｏｋｉｎ  Ｇ）、コナントキンＴ、甲殻類心臓作
用ペプチド、Ｃ−テロペプチド、チトクロムｂ５８８ペプチド、デコルシン（ｄｅｃｏｒ
ｃｉｎ）、デリシャスペプチド、δ睡眠誘導ペプチド、ジアゼパム結合インヒビターフラ
グメント、一酸化窒素シンターゼ遮断ペプチド、ＯＶＡペプチド、血小板カルパインイン
ヒビター（Ｐ１）、プラスミノーゲン活性化因子インヒビター１、リギン（ｒｉｇｉｎ）
、精神分裂病関連ペプチド、ナトリウムカリウムＡ治療ペプチダーゼインヒビター−１（
ｓｏｄｉｕｍ  ｐｏｔａｓｓｉｕｍ  Ａｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｐｅｐｔｉｄｅａｓｅ
ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ−１）、スペラクト、精子活性化ペプチド、システミン（ｓｙｓｔ
ｅｍｉｎ）、トロンビンレセプターアゴニスト（３つのペプチド）、ツフシン、アジポキ
ニンホルモン、尿毒症ペンタペプチド、凍結防止ペプチド、腫瘍壊死因子、ヒル［Ｄｅｓ
Ａｓｐ１０］Ｄｅｃｏｒｓｉｎ、Ｌ−オルニチルタウリン（Ｏｒｎｉｔｈｙｌｔａｕｒ
ｉｎｅ）塩酸塩、ｐ−アミノフェニルアセチルツフシン、
【０１６９】
【化１】
2010168384.tif 000002
ウニ精子活性化ペプチド、ＳＨＵ−９１１９  ＭＣ３−ＲおよびＭＣ４Ｒアンタゴニスト
、グラスピモド（ｇｌａｓｐｉｍｏｄ）（免疫刺激剤、細菌感染、真菌感染、免疫不全、
免疫障害、白血球減少症に対して有用）、ＨＰ−２２８（メラノコルチン、化学療法誘導
嘔吐、毒性、疼痛、真性糖尿病、炎症、慢性関節リウマチ、肥満に対して有用）、α−２
−プラスミンインヒビター（プラスミンインヒビター）、ＡＰＣ腫瘍抑制因子（腫瘍抑制
因子、新生物に対して有用）、初期妊娠因子（免疫抑制因子）、エンドゼピン（ｅｎｄｏ
ｚｅｐｉｎｅ）ジアゼパム結合インヒビター（レセプターペプチド）、γインターフェロ
ン(白血病に対して有用）、腺カリクレインｎ−１（免疫刺激剤）、胎盤リボヌクレアー
ゼインヒビター、サルコレシン（ｓａｒｃｏｌｅｃｉｎ）結合タンパク質、界面活性タン
パク質Ｄ、ウィルムス腫瘍抑制因子、ウィルムス腫瘍抑制因子、ＧＡＢＡＢ  １ｂレセプ
ターペプチド、プリオン関連ペプチド（ｉＰｒＰ１３）、コリン結合タンパク質フラグメ
ント（細菌関連ペプチド）、テロメラーゼインヒビター、カルジオスタチン（ｃａｒｄｉ
ｏｓｔａｔｉｎ）ペプチド、エンドスタチン（ｅｎｄｏｓｔａｔｉｎ）誘導ペプチド（新
脈管形成インヒビター）、プリオン阻害ペプチド、Ｎ−メチルＤ−アスパラギン酸レセプ
ターアンタゴニスト、Ｃ−ペプチドアナログ（糖尿病合併症に対して有用）が挙げられる
。
【０１７０】
（２．修飾治療用ペプチド）
本発明は、修飾治療用ペプチドおよびそれらの誘導体に関する。本発明の修飾治療用ペ
プチドは、共有結合を形成するために、血液成分の利用可能な反応性官能基と反応し得る
反応性基を含む。本発明はまた、このような修飾物、血液成分とのこのような組み合わせ
およびそれらの使用方法に関する。これらの方法は、修飾治療用ペプチドの効果的な治療
インビボ半減期を延ばす工程を含む。
【０１７１】
タンパク質上の官能性と共有結合を形成するために、反応性基として広範な種々の活性
なカルボキシル基、特にエステルを使用し得、ここで、ヒドロキシル部分は、治療用ペプ
チドを修飾するために必要とされるレベルで生理学的に受容可能である。多くの異なるヒ
ドロキシル基がこれらの連結剤において使用され得るが、最も通常のものは、Ｎ−ヒドロ
キシスクシンイミド（ＮＨＳ）、およびＮ−ヒドロキシ−スルホスクシンイミド（ｓｕｌ
ｆｏ−ＮＨＳ）である。
【０１７２】
第一級アミンは、以下のスキーム１Ａに図示されるようにＮＨＳエステルに対する重要
な標的である。タンパク質のＮ末端に存在するアクセス可能なα−アミンが、ＮＨＳエス
テルと反応する。しかし、タンパク質のα−アミノ基は、ＮＨＳカップリングについて望
ましくないかまたは利用可能でないかもしれない。５個のアミノ酸がその側鎖に窒素を有
するが、リジンのε−アミンのみが、有意にＮＨＳエステルと反応する。アミド結合は、
ＮＨＳエステルが、結合反応において、以下のスキーム１Ａに示されるように、第一級ア
ミンと反応し、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドを放出する場合に形成される。
【０１７３】
【化２】
2010168384.tif 000003
本発明の好ましい実施形態において、タンパク質の官能基はチオール基であり、反応性
基は、γ−マレイミド−ブチルアミド（ＧＭＢＡ）またはＭＰＡのようなマレイミド含有
基である。マレイミド基は、反応混合物のｐＨが以下のスキーム１Ｂに示されるように６
．５と７．４の間で維持される場合、ペプチドのスルフヒドリル基について最も選択的で
ある。ｐＨ７．０において、マレイミド基とスルフヒドリルとの反応速度は、アミンとの
反応より１０００倍速い。マレイミド基とスルフヒドリルとの間の安定なチオエーテル結
合が形成され、これは、生理学的な条件下では切断され得ない。
【０１７４】
【化３】
2010168384.tif 000004
本発明の治療用ペプチドおよびペプチド誘導体は、血液成分の特異的標識化および非特
異的標識化のために修飾され得る。
【０１７５】
（Ａ．特異的標識化）
好ましくは、本発明の治療用ペプチドは、移動性血液タンパク質のチオール基と特異的
に反応するように設計される。このような反応は、好ましくは、血清アルブミンまたはＩ
ｇＧのような移動性血液タンパク質のチオール基へのマレイミド連結（例えば、ＧＭＢＳ
、ＭＰＡまたは他のマレイミドから調製される）を用いて修飾される治療用ペプチドの共
有結合によって確立される。
【０１７６】
特定の条件下において、マレイミドとの特異的な標識化は、ＮＨＳおよびｓｕｌｆｏ−
ＮＨＳのような基を用いる移動性タンパク質の非特異的な標識化に比べていくつかの利点
を提供する。チオール基は、インビボにおいてアミノ基よりもあまり豊富ではない。従っ
て、本発明のマレイミド誘導体は、より少ないタンパク質に共有結合する。例えば、アル
ブミン（最も豊富な血液タンパク質）において、一つのチオール基のみが存在する。従っ
て、治療用ペプチドマレイミド−アルブミン結合体は、治療用ペプチド対アルブミンを約
１：１のモル比で含む傾向がある。アルブミンに加えて、ＩｇＧ分子（クラスＩＩ）もま
た、遊離チオールを有する。ＩｇＧ分子および血清アルブミンが血液において可溶なタン
パク質の大部分を構成するので、これらはまた、マレイミド修飾治療用ペプチドに共有結
合するのに利用可能な血液中の遊離チオール基の大部分を構成する。
【０１７７】
さらに、遊離チオール含有血液タンパク質の間でさえ、マレイミドを用いた特異的標識
化は、アルブミン自体の独特の特徴付けに起因して、治療用ペプチドマレイミド−アルブ
ミン結合体の優先的な形成に導く。アルブミンの単一の遊離チオール基は、種間において
高度に保存され、アミノ酸残基３４（Ｃｙｓ34）に位置する。最近、アルブミンのＣｙｓ
34が他の遊離チオール含有タンパク質の遊離チオールと比べて高い反応性を有することが
示されている。これは、アルブミンのＣｙｓ34に対する非常に低いｐＫ値（５．５）に一
部起因する。これは、一般的にシステイン残基の典型的なｐＫ値（典型的には約８）より
もずっと低い。この低いｐＫに起因して、正常な生理学的条件下でアルブミンのＣｙｓ34
は、主にイオン化された形態であり、これは、その反応性を劇的に増加させる。Ｃｙｓ34
の低いｐＫ値に加えて、Ｃｙｓ34の反応性を高める別の因子はその位置であり、その位置
は、アルブミンのＶ領域の一つのループの表面に近接した間隙である。この位置は、Ｃｙ
ｓ34を全ての種類のリガンドに対してまさしく利用可能にし、遊離ラジカルトラップおよ
び遊離チオール捕捉剤としてＣｙｓ34の生物学的役割において重要な因子である。これら
の性質は、Ｃｙｓ34を治療用ペプチドマレイミドに非常に反応性にし、反応速度の加速は
、他の遊離チオール含有タンパク質と治療用ペプチドマレイミドの反応の反応速度に比べ
て、１０００倍であり得る。
【０１７８】
治療用ペプチドマレイミド−アルブミン結合体の別の利点は、Ｃｙｓ34に特異的にペプ
チド対アルブミンを１：１で含むことに関連する再現性である。グルタルアルデヒド、Ｄ
ＣＣ、ＥＤＣおよび例えば、遊離アミンについての他の化学活性化のような他の技術は、
この選択性を欠いている。例えば、アルブミンは、５２個のリジン残基を含み、このうち
の２５〜３０個は、アルブミンの表面に位置し、そして結合のためにアクセス可能である
。これらのリジン残基の活性化、あるいはこれらのリジン残基を通して結合するペプチド
の修飾は、結合体の不均一な集団を生じる。ペプチド対アルブミンの１：１のモル比が使
用される場合でさえ、生成物は、複数の結合体酸物からなり、そのいくつかは、アルブミ
ン当たり０、１、２以上のペプチドを含み、それぞれは、２５〜３０個の利用可能なリジ
ン部位のいずれか１つにランダムに結合されるペプチドを有する。多くの組み合わせが可
能である場合、抽出成分およびそれぞれのバッチの性質の特徴付けは困難になり、バッチ
間の再現性はほとんど不可能であり、このような結合体を治療剤としてあまり望ましくな
くする。さらに、アルブミンのリジン残基を介する結合体化が、アルブミン分子当たりの
治療剤のより多くを送達する利点を少なくとも有するようであるが、研究によって、治療
剤対アルブミンの１：１の比が好ましいことが示された。Ｓｔｅｈｌｅら、「Ｔｈｅ  Ｌ
ｏａｄｉｎｇ  Ｒａｔｅ  Ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｓ  Ｔｕｍｏｒ  Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  Ｐ
ｒｏｐｅｒｔｉｅｓ  ｏｆ  Ｍｅｔｈｏｔｒｅｘａｔｅ−Ａｌｂｕｍｉｎ  Ｃｏｎｊｕｇ
ａｔｅｓ
ｉｎ  Ｒａｔｓ」、Ａｎｔｉ−Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇｓ，第８巻，６７７−６８５頁
（１９９７）による論文（その全体において本明細書中で援用される）において、著者ら
は、抗癌剤メトトレキサート対グルタルアルデヒドを介して結合されるアルブミンの１：
１の比が最も有望な結果を与えたことを報告した。これらの結合体は腫瘍細胞によって取
り込まれたが、５：１〜２０：１のメトトレキサート分子を有する結合体は、変化したＨ
ＰＬＣプロフィールを有し、そしてインビボで肝臓に迅速に取り込まれた。これらの高い
比において、アルブミンに対するコンフォメーションの変化は、治療キャリアとしてのそ
の有効性を減少することが推論された。
【０１７９】
マレイミド−治療用ペプチドのインビボでの制御された投与を通して、アルブミンおよ
びＩｇＧのインビボでの特異的な標識化を制御し得る。典型的な投与において、８０〜９
０％の投与されたマレイミド−治療用ペプチドが、アルブミンを標識し、５％未満がＩｇ
Ｇを標識する。グルタチオンのような遊離チオールの微量標識がまた、生じる。このよう
な特異的な標識化は、インビボ用途に好ましい。なぜなら、これは、投与された薬剤の見
積もられた半減期の正確な計算を可能にするからである。
【０１８０】
制御された特異的なインビボ標識化を提供することに加えて、マレイミド−治療用ペプ
チドは、血清アルブミンおよびＩｇＧのエキソビボでの特異的標識化を提供し得る。この
ようなエキソビボの標識化は、血清アルブミンおよび／またはＩｇＧを含む血液、血清ま
たは生理食塩水へのマレイミド−治療用ペプチドの添加を包含する。一旦、マレイミド−
治療用ペプチドを用いてエキソビボで修飾すると、血液、血清または生理食塩溶液は、イ
ンビボ処置のために血液に再投与され得る。
【０１８１】
ＮＨＳ−ペプチドと対照的に、マレイミド−治療用ペプチドは、一般的に、水性溶液の
存在下および遊離アミンの存在下において、非常に安定である。マレイミド−治療用ペプ
チドが遊離チオールとのみ反応するので、マレイミド−治療用ペプチドがそれ自体と反応
することを防ぐために、保護基は、一般的に必要ではない。さらにペプチドの増加した安
定性によって、インビボ用途に適切な非常に精製された産物を調製するためのＨＰＬＣの
ようなさらなる精製工程の使用を可能になる。最後に、増加した化学的安定性は、より長
い有効期限を有する製品を提供する。
（Ｂ．非特異的標識）
本発明の治療用ペプチドはまた、血液成分の非特異的標識のために改変され得る。アミ
ノ基との結合が一般的に使用され得、特に非特異的標識のためのアミド結合の形成を伴う
。そのような結合を形成するために、治療用ペプチドと結合した化学反応性基として、広
範に種々の活性カルボキシル基、特にエステルを使用し得、ここでそのヒドロキシル部分
は、必要とされるレベルにおいて生理学的に受容可能である。多数の異なるヒドロキシル
基がこれらの結合剤において使用され得るが、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）
およびＮ−ヒドロキシ−スルホスクシンイミド（スルホ−ＮＨＳ）が最も都合が良い。
【０１８２】
利用され得る他の結合剤は、米国特許第５，６１２，０３４号（これは、本明細書中に
参考として援用される）において記載される。
【０１８３】
非特異的治療用ペプチドの化学反応性基がインビボで反応し得る種々の部位としては、
細胞、特に赤血球（成熟赤血球）および血小板、ならびにタンパク質（例えば、免疫グロ
ブリン（ＩｇＧおよびＩｇＭを含む）、血清アルブミン、フェリチン、ステロイド結合タ
ンパク質、トランスフェリン、サイロキシン結合蛋白、α−２−マクログロブリンなど）
が挙げられる。誘導体化された治療用ペプチドが反応するそれらのレセプター（これは、
長命ではない）は、一般的に、およそ３日以内にヒト宿主から除去される。上記に示され
るタンパク質（細胞のタンパク質を含む）は、血中濃度に基づいて、特に半減期に関して
は、少なくとも３日間血流中に残存し、そして５日間以上残存し得る（一般的に、６０日
間を超えず、より一般的には３０日間を超えない）。
【０１８４】
ほとんどの部分について、反応は、血液中の移動性成分、詳細には血液タンパク質およ
び細胞、より詳細には血液タンパク質および成熟赤血球を伴う。「移動性」とは、その成
分が、任意の長期間（一般的には５分間を超えず、より一般的には１分間である）一定の
場所にいないことを意図するが、いくつかの血液成分は、長期間、比較的停止し得る。最
初は、標識されたタンパク質および細胞の比較的不均一な集団が存在する。しかし、ほと
んどの部分について、投与後数日以内でその集団は、血流中の標識されたタンパク質の半
減期に依存して、最初の集団とは実質的に異なってくる。従って、通常、およそ３日以内
もしくはそれ以上の期間内に、ＩｇＧは、血流において優勢な標識タンパク質となる。
【０１８５】
通常、投与後５日までに、ＩｇＧ、血清アルブミンおよび成熟赤血球は、血液中の結合
成分の少なくとも約６０ｍｏｌ％、通常は少なくとも約７５ｍｏｌ％となり、ＩｇＧ、Ｉ
ｇＭ（実質的により少ない程度まで）および血清アルブミンは、非細胞性結合成分の少な
くとも約５０ｍｏｌ％、通常は少なくとも約７５ｍｏｌ％、より一般には約８０ｍｏｌ％
となる。
【０１８６】
血液成分に対する非特異的治療用ペプチドの所望の結合体は、患者に直接その治療用ペ
プチドを投与することによって、インビボにて調製され得る。この患者は、ヒトまたは他
の哺乳動物であり得る。その投与は、ボーラス形態でなされるか、または流れを計器で調
節して注入することなどによって、ゆっくりと長期間で導入され得る。
【０１８７】
所望される場合、対象結合体はまた、血液と本発明の改変治療用ペプチドとを組み合わ
せることによって、エキソビボで調製され得、血液成分上の反応性官能基と改変治療用ペ
プチドとの共有結合を可能にし、次いで、宿主にその結合体化血液を戻すか、または投与
する。さらに、上記のことは、初めに、個々の血液成分または限られた数の成分（例えば
、赤血球細胞、免疫グロブリン、血清アルブミンなど）を精製し、そしてその成分または
複数の成分をエキソビボにて化学的に反応性の治療（ｌｔｈｅｒｐｅｕｔｉｃ）ペプチド
と組み合わせることによって達成され得る。次いで、標識された血液または血液成分は、
治療的に有効な結合体をインビボで被験体に提供するために宿主に戻され得る。その血液
はまた、エキソビボで操作する間の凝固を予防するために処理され得る。
【０１８８】
（３．本発明において使用される治療用ペプチドの合成）
ペプチドフラグメントは、当業者に公知の固相ペプチド化学の標準的な方法によって、
合成され得る。例えば、ペプチドフラグメントは、アプライドバイオシステムシンセサイ
ザー（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒ）を使用する、Ｓ
ｔｅｗａｒｄおよびＹｏｕｎｇ（Ｓｔｅｗａｒｄ，Ｊ．  Ｍ．およびＹｏｕｎｇ，Ｊ．Ｄ
．，Ｓｏｌｉｄ  Ｐｈａｓｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，第２版．，Ｐｉｅ
ｒｃｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＩＩ．，（１９８４
））により記載される手順に従がう固相化学技術によって合成され得る。次いで、同様に
、複数のフラグメントが共に結合して合成されて、より大きなフラグメントを形成する。
これらの合成ペプチドフラグメントはまた、特定の位置におけるアミノ酸置換を伴って作
製され得る。
【０１８９】
固相ペプチド合成について、多くの技術の概要が、Ｊ．Ｍ．ＳｔｅｗａｒｔおよびＪ．
Ｄ．Ｙｏｕｎｇ，Ｓｏｌｉｄ  Ｐｈａｓｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｗ．
Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ  Ｃｏ．（Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ），１９６３およびＪ．Ｍｅ
ｉｅｎｈｏｆｅｒ，Ｈｏｒｍｏｎａｌ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ａｎｄ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ，
第２巻  ４６頁、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ（Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ），１９７３におい
て見出され得る。伝統的な溶液合成については、Ｇ．ＳｃｈｒｏｄｅｒおよびＫ．Ｌｕｐ
ｋｅ，Ｔｈｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ，第１巻、Ａｃａｃｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ（Ｎｅｗ  Ｙ
ｏｒｋ）を参照のこと。一般的にこれらの方法は、１つ以上のアミノ酸または適切に保護
されたアミノ酸を連続的に付加してペプチド鎖に成長させることを含む。通常、第１のア
ミノ酸のアミノ基またはカルボキシル基のいずれかが、適切な保護基によって保護される
。次いで、その保護されたアミノ酸または誘導体化されたアミノ酸は、不活性固体支持体
に付着されるか、あるいは、アミド結合を形成するために適切な条件下において、適切に
保護されたコンプリメンタリー（ｃｏｍｐｌｉｍｅｎｔａｒｙ）（アミノもしくはカルボ
キシル）基を有する配列中に次のアミノ酸を付加することによって溶液中で利用される。
次いで、保護基をこの新たに付加されたアミノ酸残基から除去し、そして次のアミノ酸（
適切に保護された）が付加などされる。
【０１９０】
全ての所望のアミノ酸が、適切な配列内に結合された後、全ての残りの保護基（および
任意の固体支持体）が連続的にか、または同時に除去されて、最終的なポリヌクレオチド
ができる。この一般的手順の単純な改変によって、１つよりも多くのアミノ酸を一度に付
加させて、鎖を成長させることが可能となる（例えば、保護されたトリペプチドを適切に
保護されたジペプチドに（キラル中心をラセミ化しない条件下で）結合させることによっ
て脱保護の後、ペンタペプチドを形成させることによる）。
【０１９１】
本発明の化合物を調製する特に好ましい方法は、固相ペプチド合成を含み、ここでアミ
ノ酸α−Ｎ−末端は、酸感受性基または塩基感受性基によって保護される。そのような保
護基は、ペプチド結合形成の条件に対して安定であるという特性を有するべき一方で、成
長するペプチド鎖の破壊またはその中に含まれる任意のキラル中心のラセミ化を伴わずに
容易に除去可能であるという特性も有すべきである。適切な保護基は、９−フルオレニル
メチルオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）、ｔ−ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）、ベンジ
ルオキシカルボニル（Ｃｂｚ）、ビフェニルイソプロピルオキシカルボニル、ｔ−アミル
オキシカルボニル、イソボルニルオキシカルボニル、α，α−ジメチル−３，５−ジメト
キシベンジルオキシカルボニル、ｏ−ニトロフェニルスルフェニル、２−シアノ−ｔ−ブ
チルオキシカルボニルなどである。９−フルオレニル−メチルオキシカルボニル（Ｆｍｏ
ｃ）保護基は、治療用ペプチドフラグメントの合成のために特に好ましい。他の好ましい
側鎖保護基は、リジンおよびアルギニンのような側鎖アミノ基に関しては、２，２，５，
７，８−ペンタメチルクロマン−６−スルホニル（ｐｍｃ）、ニトロ基、ｐ−トルエンス
ルホニル基、４−メトキシベンゼン−スルホニル基、Ｃｂｚ基、Ｂｏｃ基、およびアダマ
ンチルオキシカルボニル基；チロシンに関しては、ベンジル基、ｏ−ブロモベンジルオキ
シカルボニル基、２，６−ジクロロベンジル基、イソプロピル基、ｔ−ブチル（ｔ−Ｂｕ
）基、シクロヘキシル基、シクロペニル基およびアセチル（Ａｃ）基であり；セリンに関
しては、ｔ−ブチル基、ベンジル基およびテトラヒドロピラニル基であり；ヒスチジンに
関しては、トリチル基、ベンジル基、Ｃｂｚ基、ｐ−トルエンスルホニル基および２，４
−ジニトロフェニル基であり；トリプトファンに関しては、ホルミル基であり；アスパラ
ギン酸およびグルタミン酸に関しては、ベンジル基およびｔ−ブチル基ならびにシステイ
ンに関しては、トリフェニルメチル（トリチル）基である。
【０１９２】
固相ペプチド合成方法において、α−Ｃ−末端アミノ酸は、適切な固体支持体または樹
脂に付着される。上記合成のために有用な適切な固体支持体は、段階的な縮合−脱保護反
応の試薬および反応条件に対して不活性であり、ならびに使用される媒体に不溶性である
材料である。α−Ｃ−末端カルボキシペプチドの合成のための好ましい固体支持体は、４
−ヒドロキシメチルフェノキシメチル−コポリ（スチレン−１％ジビニルベンゼン）であ
る。α−Ｃ−末端アミドペプチドのための好ましい固相支持体は、４−（２’，４’−ジ
メトキシフェニル−Ｆｍｏｃ−アミノメチル）フェノキシアセトアミドエチル樹脂である
（Ａｐｐｌｉｅｄ
Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ（Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ，Ｃａｌｉｆ．）から入手可能）。こ
のα−Ｃ−末端アミノ酸は、４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）、１−ヒドロキシ
ベンゾトリアゾール（ＨＯＢＴ）、ベンゾトリアゾール−１−イルオキシ−トリス（ジメ
チルアミノ）ホスホニウム−ヘキサフルオロホスフェート（ＢＯＰ）またはビス（２−オ
キソ−３−オキサゾリジニル）ホスフィンクロリド（ＢＯＰＣｌ）を伴うか、または伴わ
ずに、Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピ
ルカルボジイミド（ＤＩＣ）またはＯ−ベンゾトリアゾル−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ
’，−テトラメチルウロニウム−ヘキサフロオロホスフェート（ＨＢＴＵ）によって樹脂
に結合され、結合は、ジクロロメタンまたはＤＭＦのような溶媒中で１０℃と５０℃との
間の温度にて約１時間〜２４時間の間媒介される。
【０１９３】
固体支持体が、４−（２’，４’−ジメトキシフェニル−Ｆｍｏｃ−アミノメチル）フ
ェノキシ−アセトアミドエチル樹脂である場合、Ｆｍｏｃ基は、上記のα−Ｃ−末端アミ
ノ酸とのカップリングの前に、第二級アミン、好ましくはピペリジンで切断される。脱保
護された４−（２’，４’−ジメトキシフェニル−Ｆｍｏｃ−アミノメチル）フェノキシ
−アセトアミドエチル樹脂へのカップリングのための好ましい方法は、ＤＭＦ中Ｏ−ベン
ゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’，−テトラメチルウロニウム−ヘキサフ
ロオロホスフェート（ＨＢＴＵ、１当量）および１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（Ｈ
ＯＢＴ、１当量）である。保護されたアミノ酸の連続的なカップリングは、当該分野にお
いて周知の自動ポリペプチドシンセサイザーにおいて実行され得る。好ましい実施形態に
おいて、成長するペプチド鎖のα−Ｎ−末端アミノ酸は、Ｆｍｏｃで保護される。成長す
るペプチドのα−Ｎ−末端側からのＦｍｏｃ保護基の除去は、第二級アミン、好ましくは
ピペリジンを用いて処理することによって達成される。次いで、各々の保護アミノ酸は、
およそ３倍の過剰なモル濃度で導入され、そして好ましくは、カップリングはＤＭＦ中で
実行される。カップリング剤は、通常、Ｏ−ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ
’，Ｎ’，−テトラメチルウロニウム−ヘキサフロオロホスフェート（ＨＢＴＵ、１当量
）および１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢＴ、１当量）である。
【０１９４】
固相合成の終点において、このポリペプチドは、連続的にか、または１回の操作でのい
ずれかで、樹脂から取り出されて、そして脱保護される。ポリペプチドの取り出しおよび
脱保護は、チオアニソール、水、エタンジチオールおよびトリフルオロ酢酸を含む切断試
薬（ｃｌｅａｖａｇｅ  ｒｅａｇｅｎｔ）を用いて、樹脂結合ポリペプチドを処理するこ
とにより１回の操作で達成され得る。ポリペプチドのα−Ｃ−末端がアルキルアミドであ
る場合、樹脂は、アルキルアミンを用いるアミノ分解によって切断される。あるいは、ペ
プチドは、例えば、メタノールを用いるエステル交換反応、続いてアミノ分解または直接
的アミド基交換によって取り出され得る。保護ペプチドは、この時点で精製され得るか、
または次の工程に直接使用され得る。側鎖保護基の除去は、上記の切断カクテル（ｃｏｃ
ｋｔａｉｌ）を使用して達成される。完全に脱保護されたペプチドは、任意または全ての
以下の型：弱塩基樹脂上のイオン交換（アセテート形態）；非誘導体化ポリスチレン−ジ
ビニルベンゼン上の疎水性吸着クロマトグラフィー（例えば、Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ  ＸＡ
Ｄ）；シリカゲル吸着クロマトグラフィー；カルボキシメチルセルロース上のイオン交換
クロマトグラフィー；分配クロマトグラフィー（例えば、Ｓｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ−２５、
ＬＨ−２０）または向流分配；高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）（特に、オクチ
ル−もしくはオクタデシルシリル−シリカ結合相充填剤上の逆相ＨＰＬＣ）を利用する一
連のクロマトグラフィー工程により精製される。
【０１９５】
これらの治療用ペプチドの分子量は、Ｆａｓｔ  Ａｔｏｍ  Ｂｏｍｂａｒｄｍｅｎｔ（
ＦＡＢ）Ｍａｓｓ  Ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙを使用して決定される。
【０１９６】
本発明の治療用ペプチドは、プロドラッグとしての使用のために、Ｎ末端保護基および
Ｃ末端保護基を用いて合成され得る。
【０１９７】
（（１）Ｎ−末端保護基）
上記に議論されるように、用語「Ｎ−保護基」とは、アミノ酸もしくはペプチドのα−
Ｎ−末端を保護すること、さもなくばアミノ酸もしくはペプチドのアミノ基を、合成手順
の間の望ましくない反応物に対して保護することが意図されるそれらの基をいう。一般的
に、使用されるＮ−保護基は、Ｇｒｅｅｎｅ、「Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  
Ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ、Ｎｅ
ｗ  Ｙｏｒｋ（１９８１））（これは、本明細書中に参考として援用される）に開示され
る。さらに、保護基を、例えば、酵素的加水分解によって容易にインビボで切断されるプ
ロドラッグとして使用して、生物学的に活性なペアレント（ｐａｒｅｎｔ）を放出し得る
。α−Ｎ−保護基は、低級アルカノイル基（例えば、ホルミル基、アセチル基（「Ａｃ」
）、プロピオニル基、ピバロイル基、ｔ−ブチルアセチル基など；２−クロロアセチル基
、２−ブロモアセチル基、トリフルオロアセチル基、トリクロロアセチル基、フタリル基
、ｏ−ニトロフェノキシアセチル基、クロロブチリル基、ベンゾイル基、４−クロロベン
ゾイル基、４−ブロモベンゾイル基、４−ニトロベンゾイル基などを含む他のアシル基；
例えば、ベンゼンスルホニル基、ｐ−トルエンスルホニル基などのようなスルホニル基；
例えば、ベンジルオキシカルボニル基、ｐ−クロロベンジルオキシカルボニル基、ｐ−メ
トキシベンジルオキシカルボニル基、ｐ−ニトロベンジルオキシカルボニル基、２−ニト
ロベンジルオキシカルボニル基、ｐ−ブロモベンジルオキシカルボニル基、３，４−ジメ
トキシベンジルオキシカルボニル基、３，５−ジメトキシベンジルオキシカルボニル基、
２，４−ジメトキシベンジルオキシカルボニル基、４−エトキシベンジルオキシカルボニ
ル基、２−ニトロ−４，５−ジメトキシベンジルオキシカルボニル基、３，４，５−トリ
メトキシベンジルオキシカルボニル基、１−（ｐ−ビフェニルイル）−１−メチルエトキ
シカルボニル基、α，α−ジメチル−３，５−ジメトキシベンジルオキシカルボニル基、
ベンズヒドリルオキシカルボニル基、ｔ−ブチルオキシカルボニル基、ジイソプロピルメ
トキシオキシカルボニル基、イソプロピルオキシカルボニル基、エトキシカルボニル基、
メトキシカルボニル基、アリルオキシカルボニル基、２，２，２−トリクロロエトキシカ
ルボニル基、フェノキシカルボニル基、４−ニトロフェノキシカルボニル基、フルオレニ
ル−９−メトキシカルボニル基、シクロペンチルオキシカルボニル基、アダマンチルオキ
シカルボニル基、シクロヘキシルオキシカルボニル基、フェニルチオカルボニル基などの
カルバメート形成基；例えば、ベンジル基、トリフェニルメチル基、ベンジルオキシメチ
ル基、９−フルオレニルメチルオキシカルボニル基（Ｆｍｏｃ）などのようなアリールア
ルキル基ならびに例えば、トリメチルシリルなどのようなシリル基を含む。
【０１９８】
（（２）カルボキシ保護基）
上記で議論されるように、用語「カルボキシ保護基」とは、化合物の他の官能基部位に
関与する反応が実施されながらカルボン酸官能基をブロックもしくは保護するために使用
されるカルボン酸保護エステル基またはアミド基のことをいうが、る。カルボキシ保護基
は、Ｇｒｅｅｎｅ、「Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓ
ｙｎｔｈｅｓｉｓ」１５２〜１８６頁（１９８１）（これは、本明細書中に参考として援
用される）に開示される。さらに、カルボキシ保護基は、例えば、酵素的加水分解によっ
て容易にインビボで切断され、生物学的に活性なペアレントを放出し得る。そのようなカ
ルボキシ保護基は、当業者に周知であり、米国特許第３，８４０，５５６号および同第３
，７１９，６６７号にて記載されるように、ペニシリンおよびセファロスポリンの分野に
おけるカルボキシル基の保護において広範囲に使用されている。これらの開示は、本明細
書中に参考として援用される。代表的なカルボキシ保護基は、Ｃ1−Ｃ8低級アルキル基（
例えば、メチル基、エチル基またはｔ−ブチル基など）；例えば、フェネチル基またはベ
ンジル基のようなアリールアルキル基ならびに例えば、アルコキシベンジル基またはニト
ロベンジル基などのようなそれらの置換誘導体；例えば、フェニルエテニル基などのアリ
ールアルケニル；アリールおよび例えば、５−インダニル基などのようなその置換誘導体
で；例えば、ジメチルアミノエチル基などのようなジアルキルアミノアルキル基；例えば
、アセトキシメチル基、ブチリルオキシメチル基、バレリルオキシメチル基、イソブチリ
ルオキシメチル基、イソバレリルオキシメチル基、１−（プロピオニルオキシ）−１−エ
チル基、１−（ピバロイルオキシ）−１−エチル基、１−メチル−１−（プロピオニルオ
キシ）−１−エチル基、ピバロイルオキシメチル基、プロピオニルオキシメチル基などの
ようなアルカノイルオキシアルキル基；例えば、シクロプロピルカルボニルオキシメチル
基、シクロブチルカルボニルオキシメチル基、シクロペンチルカルボニルオキシメチル基
、シクロヘキシルカルボニルオキシメチル基などのようなシクロアルカノイルオキシアル
キル基；例えば、ベンゾイルオキシメチル基、ベンゾイルオキシエチル基などのようなア
ロイルオキシアルキル基；例えば、ベンジルカルボニルオキシメチル基、２−ベンジルカ
ルボニルオキシエチル基などのようなアリールアルキルカルボニルオキシアルキル基；例
えば、メトキシカルボニルメチル基、シクロヘキシルオキシカルボニルメチル基、１−メ
トキシカルボニル−１−エチル基などのようなアルコキシカルボニルアルキル基またはシ
クロアルキルオキシカルボニルアルキル基；例えば、メトキシカルボニルオキシメチル基
、ｔ−ブチルオキシカルボニルオキシメチル基、１−エトキシカルボニルオキシ−１−エ
チル基、１−シクロへキシルオキシカルボニルオキシ−１−エチル基などのようなアルコ
キシカルボニルオキシアルキル基またはシクロアルキルオキシカルボニルアルキル基；例
えば、２−（フェノキシカルボニルオキシ）エチル基、２−（５−インダニルオキシカル
ボニルオキシ）エチル基などのようなアリールオキシカルボニルオキシアルキル基；例え
ば、２−（１−メトキシ−２−メチルプロパン−２−オイルオキシ）エチル基などのよう
なアルコキシアルキルカルボニルオキシアルキル基；例えば、２−（ベンジルオキシカル
ボニルオキシ）エチル基などのようなアリールアルキルオキシカルボニルオキシアルキル
基；例えば、２−（３−フェニルプロペン−２−イルオキシカルボニルオキシ）エチル基
などのようなアリールアルケニルオキシカルボニルオキシアルキル基；例えば、ｔ−ブチ
ルオキシカルボニルアミノメチル基などのようなアルコキシカルボニルアミノアルキル基
；例えば、メチルアミノカルボニルアミノメチル基などのようなアルキルアミノカルボニ
ルアミノアルキル基；例えば、アセチルアミノメチル基などのようなアルカノイルアミノ
アルキル基；例えば、４−メチルピペラジニルカルボニルオキシメチル基などのような複
素環式カルボニルオキシアルキル基；例えば、ジメチルアミノカルボニルメチル基、ジエ
チルアミノカルボニルメチル基などのようなジアルキルアミノカルボニルアルキル基；例
えば、（５−ｔ−ブチル−２−オキソ−１，３−ジオキソレン−４−イル）メチル基など
のような（５−（低級アルキル）−２−オキソ−１，３−ジオキソレン−４−イル）アル
キル基；ならびに、例えば、（５−フェニル−２−オキソ−１，３−ジオキソレン−４−
イル）メチル基などのような（５−フェニル−２−オキソ−１，３−ジオキソレン−４−
イル）アルキル基である。
【０１９９】
代表的なアミドカルボキシ保護基は、アミノカルボニル基および低級アルキルアミノカ
ルボニル基である。
【０２００】
本発明の好ましいカルボキシ保護化合物には複数の化合物があり、ここでその保護カル
ボキシ基は、低級アルキルエステル、シクロアルキルエステルもしくはアリールアルキル
エステル（例えば、メチルエステル、エチルエステル、プロピルエステル、イソプロピル
エステル、ブチルエステル、ｓｅｃ−ブチルエステル、イソブチルエステル、アミルエス
テル、イソアミルエステル、オクチルエステル、シクロヘキシルエステル、フェニルエチ
ルエステルなど）またはアルカノイルオキシアルキルエステル、シクロアルカノイルオキ
シアルキルエステル、アロイルオキシアルキルエステルもしくはアリールアルキルカルボ
ニルオキシアルキルエステルである。好ましいアミドカルボキシ保護基は、低級アルキル
アミノカルボニル基である。例えば、アスパラギン酸は、酸不安定基（例えば、ｔ−ブチ
ル基）によりα−Ｃ−末端にて保護され得、そして水素化不安定基（例えば、ベンジル基
）によりβ−Ｃ−末端にて保護され得、次いで、合成中に選択的に脱保護され得る。
【０２０１】
あるいは、例えば、当該分野において周知の方法に従がうタンパク質分解酵素を使用し
て、天然に存在するアミノ酸配列を断片化することによりペプチドのフラグメントを得る
こともまた可能である。さらに、この治療用ペプチドの所望のフラグメントを、当該分野
において周知の方法を使用する組換えＤＮＡ技術の使用を介して得ることが可能である。
【０２０２】
（治療用ペプチドの改変）
本発明の改変された治療用ペプチドを生成する様式は、その分子を含む種々の要素の性
質に依存して、広範に変動する。合成手順は、単純であるように、高収率を提供するよう
に、そして高度に精製された安定な生成物を可能とするように、選択される。通常、反応
性基は、最終段階として、例えば、カルボキシル基を用いて作製され、活性エステルを形
成するためのエステル化が、合成の最終工程である。本発明の改変された治療用ペプチド
の生成のための特定の方法を、以下に記載する。
【０２０３】
一般的に、本発明の改変された治療用ペプチドは、ブラインド（ｂｌｉｎｄ）または構
造活性相関（ＳＡＲ）駆動置換を使用して、作製され得る。ＳＡＲは、分子の構造と、一
連の化合物に対するその薬理学的活性との間の関係を規定する分析である。個々の治療用
ペプチドに関連した種々の研究により、如何にしてペプチドの活性が、化学的構造または
化学的特性のバリエーションに従って変動するかが示される。より詳細には、最初に遊離
ペプチドの治療的活性をアッセイする。次いで、本発明に従い、そのペプチドのＮ末端、
Ｃ末端または内部のいずれかで連結基のみによって、そのペプチドを改変する。連結基と
しては、上記で考察したような反応性基が挙げられる。この改変されたペプチド連結基の
治療的活性を、次いでアッセイし、そして検出された活性に基づいて、改変部位に関して
決定を下す。次いで、ペプチド結合体を調製し、そしてその治療的活性を決定する。結合
体化後のペプチドの治療的活性が実質的に低減されていない場合（すなわち、治療的活性
が、１／１０未満低減されている場合）、ペプチドの安定性を、そのインビボ寿命によっ
て示されるように測定する。安定性が所望されるレベルまで改善されない場合、ペプチド
を、代替的な部位で改変する。そして、所望されるレベルの治療的活性および所望される
安定性が達成されるまで、この手順を繰り返す。
【０２０４】
より詳細には、リンカーおよび反応性基での誘導体化を受けさせるために選択された各
治療用ペプチドを、以下の基準に従って改変する：末端のカルボン酸基が、治療用ペプチ
ドにおいて利用可能であり、そしてこの末端のカルボン酸基が薬理学的活性の保持に重要
ではなく、そして他の感受性官能基が治療用ペプチドに存在しない場合、このカルボン酸
を、リンカー反応性基改変のための結合部位として選択する。末端のカルボン酸基が薬理
学的活性に関与している場合、またはカルボン酸が利用可能ではない場合、薬理学的活性
の保持に重要ではない任意の他の感受性反応性基を、リンカー反応性基改変のための結合
部位として選択する。いくつかの感受性官能基が治療用ペプチドにおいて利用可能である
場合、リンカー／反応性基の付加および保護されたすべての感受性官能基の脱保護後に、
薬理学的活性の保持がなお得られるような様式で、保護基の組み合わせが使用される。感
受性官能基が治療用ペプチドにおいて利用可能ではない、またはより単純な改変経路が所
望される場合、合成的な試みが、生物学的活性の保持およびレセプター特異性または標的
特異性の保持が得られるような様式での本来のペプチドの改変を可能にする。この場合、
改変は、ペプチドの反対の末端において生じる。
【０２０５】
ＮＨＳ誘導体は、治療用ペプチドにおいて、他の感受性官能基の不在下でカルボン酸か
ら合成され得る。特に、このような治療用ペプチドは、無水ＣＨ2Ｃｌ2およびＥＤＣ中で
Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドと反応し、そしてこの生成物は、クロマトグラフィーによ
って精製されるか、またはＮＨＳ誘導体を与えるに適切な溶媒系から再結晶化される。
【０２０６】
あるいは、ＮＨＳ誘導体は、アミノ基および／またはチオール基、ならびにカルボン酸
を含む治療用ペプチドから合成され得る。分子中に遊離のアミノ基またはチオール基が存
在する場合、ＮＨＳ誘導体の付加を実施する前に、これらの感受性官能基を保護すること
が好ましい。例えば、分子が遊離アミノ基を含む場合、Ｆｍｏｃまたは好ましくはｔＢｏ
ｃ保護アミンへのアミンの転換が、上記化学を実施する前に必要とされる。アミン官能基
（ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｔｙ）は、ＮＨＳ誘導体の調製後に脱保護されない。従って、
この方法は、所望される薬理学的効果を誘導するために、アミン基が遊離状態であること
が必要とされない化合物のみに対して適用される。アミノ基が、分子の本来の生物学的特
性を保持するために遊離状態であることが必要とされる場合、実施例３〜６に記載された
別の型の化学が実施されなければならない。
【０２０７】
さらに、ＮＨＳ誘導体は、アミノ基またはチオール基を含み、そしてカルボン酸を含ま
ない治療用ペプチドから合成され得る。選択された分子が、カルボン酸を含まない場合、
一連の二官能性リンカーを使用して、その分子を反応性ＮＨＳ誘導体へと変換し得る。例
えば、ＤＭＦ中に溶解され、そして遊離アミノ含有分子に付加されたエチレングリコール
ビス（スクシンイミジルスクシネート）（ＥＧＳ）およびトリエチルアミン（ＥＧＳの方
が有利なように、１０：１の比率で）は、モノＮＨＳ誘導体を生成する。チオール誘導体
化分子からＮＨＳ誘導体を生成するためには、ＤＭＦ中のＮ−［−マレイミドブチリルオ
キシ］スクシンイミドエステル（ＧＭＢＳ）およびトリエチルアミンが使用され得る。マ
レイミド基は、遊離チオールと反応し、そしてＮＨＳ誘導体は、シリカでのクロマトグラ
フィーによってか、またはＨＰＬＣによって反応混合物から精製される。
【０２０８】
ＮＨＳ誘導体はまた、複数の感受性官能基を含む治療用ペプチドから合成され得る。各
々の場合に、異なる様式で分析および解明がなされなければならない。しかし、市販され
ている多量の保護基および二官能性リンカーのお陰により、本発明は、治療用ペプチドを
誘導体化するために、好ましくはわずか１つの化学的工程で（実施例１または３に記載さ
れるように）、または２工程（実施例２に記載され、感受性基の予めの保護を含む）もし
くは３工程（保護、活性化、および脱保護）で、任意の治療用ペプチドに適用可能である
。例外的な状況下でのみ、治療用ペプチドを活性ＮＨＳまたはマレイミド誘導体に転換す
るために、複数の（３工程を超える）合成工程を使用することが必要とされる。
【０２０９】
マレイミド誘導体はまた、遊離アミノ基および遊離カルボン酸を含む治療用ペプチドか
ら合成され得る。アミノ誘導体化分子からマレイミド誘導体を生成するためには、ＤＭＦ
中のＮ−［γ−マレイミドブチリルオキシ］スクシンイミドエステル（ＧＭＢＳ）および
トリエチルアミンが使用され得る。スクシンイミドエステル基は遊離アミノと反応し、そ
してマレイミド誘導体は、結晶化によってか、またはシリカでのクロマトグラフィーによ
ってか、またはＨＰＬＣによって、反応混合物から精製される。
【０２１０】
最後に、マレイミド誘導体は、複数の他の感受性官能基を含み、そして遊離カルボン酸
を含まない治療用ペプチドから合成され得る。選択された分子が、カルボン酸を含まない
場合、一連の二官能性架橋試薬を使用して、分子を反応性ＮＨＳ誘導体に変換し得る。例
えば、ＤＭＦ中でのＨＢＴＵ／ＨＯＢｔ／ＤＩＥＡ活性化を使用して、マレイミドプロピ
オン酸（ＭＰＡ）を、遊離アミンにカップリングし、遊離アミンとＭＰＡのカルボン酸基
との反応を通してマレイミド誘導体を生成し得る。あるいは、リシン残基をペプチドのＣ
末端に付加して、以下の実施例に記載されるように、リシンのアミノ基での結合体化を可
能にし得る。この付加されたリシンは、樹脂の最初の選択によって設計されたように、ア
ミド官能基によってキャッピングされた末端を維持しつつ、ペプチドのＣ末端での単純か
つ効率的な改変を可能にする。
【０２１１】
多くの他の市販されるヘテロ二官能性架橋試薬が、必要とされる場合に代替的に使用さ
れ得る。多数の二官能性化合物が、実体への架橋のために利用可能である。例示的な試薬
としては、以下が挙げられる：アジドベンゾイルヒドラジド、Ｎ−［４−（ｐ−アジドサ
リチルアミノ）ブチル］−３’−［２’−ピリジルジチオ）プロピオンアミド）、ビス−
スルホスクシンイミジルスベレート（ｓｕｂｅｒａｔｅ）、ジメチルアジピイミデート（
ａｄｉｐｉｍｉｄａｔｅ）、ジスクシンイミジル酒石酸塩、Ｎ−ｙ−マレイミドブチリル
オキシスクシンイミドエステル、Ｎ−ヒドロキシスルホスクシンイミジル−４−アジドベ
ンゾエート、Ｎ−スクシンイミジル［４−アジドフェニル］−１，３’−ジチオプロピオ
ネート、Ｎ−スクシンイミジル［４−ヨードアセチル］アミノベンゾエート、グルタルア
ルデヒド、およびスクシンイミジル４−［Ｎ−マレイミドメチル］シクロヘキサン−１−
カルボキシレート。
【０２１２】
さらにより詳細には、ペプチドは、好ましくは、その置換基の性質、および遊離システ
インの存在または不在に従って、改変される。大半のペプチドは、３つの異なる分類に集
められ得る：（１）システインを含まないペプチド；（２）１つのシステインを含むペプ
チド、（３）ジスルフィド架橋（システイン）として、２つのシステインを含むペプチド
；および（４）複数のシステインを含むペプチド。
【０２１３】
（Ａ．システインを含まないペプチド）
ペプチドがシステインを含まない場合、支持体樹脂から切断され、そして完全に保護さ
れたすべての残基で、Ｃ末端からの付加を実施する。ＥＤＣおよびＮＨＳとのＣ末端の液
相活性化を、ワンポット（ｏｎｅ  ｐｏｔ）において、アミノ−アルキル−マレイミドと
反応させ得る。次いで、ペプチドを、完全に脱保護する。あるいは、リシン残基をペプチ
ドのＣ末端に付加して、アミド基でキャッピングされたカルボキシ末端を維持しつつ、リ
シンのεアミノ基での改変を可能にし得る。このようなリシン残基の付加は、好ましくは
、付加がペプチドの治療的活性に実質的に影響しない場合にのみ実施される。システイン
を含まないペプチドのＣ末端改変についての一般化反応スキームを、以下の模式図に例示
する。
【０２１４】
【化４】
2010168384.tif 000005
Ｎ末端改変が有利であり、そして再度、システインを含まないペプチドについての場合
は、Ｎ末端における付加が、支持体樹脂上に存在するすべての残基で実施され、そして完
全に保護される。活性化ＮＨＳ−Ｍａｌ二官能性リンカーの付加は、樹脂上に存在するペ
プチドと脱保護されたＮ−末端において実施され得る。次いで、ペプチドは完全に脱保護
される。システインを含まず、そしてＣ末端改変を受ける治療用ペプチドの例を、実施例
７〜２６に記載する。システインを含まず、そしてＮ末端改変を受ける治療用ペプチドの
例を、実施例２７〜３８に記載する。システインを含まないペプチドのＮ末端改変につい
ての一般化反応スキームを、それぞれ、ヘテロＮＨＳマレイミド（ＧＭＢＳ様）および３
−ＭＰＡを用いて、以下の模式図において例示する。
【０２１５】
【化５】
2010168384.tif 000006
【０２１６】
【化６】
2010168384.tif 000007
あるいは、ペプチドは、内部アミノ酸（すなわち、Ｃ末端でもＮ末端でもない）で改変
され得る。遊離システインを含まないペプチドの内部アミノ酸での改変についての一般化
反応スキームを、ホモビスＮＨＳおよびヘテロＮＨＳマレイミドを用いて、以下の模式図
において例示する。
【０２１７】
【化７】
2010168384.tif 000008
【０２１８】
【化８】
2010168384.tif 000009
システインを含まず、そして上記のように改変され得るペプチドとしては、以下が挙げ
られる：Ｋｒｉｎｇｌｅ５ペプチドのフラグメント、ＧＬＰ−１ペプチドのフラグメント
、ダイノルフィンＡのフラグメント、ヒト成長ホルモン放出因子、ヒトニューロペプチド
Ｙの１−２４フラグメント、およびヒトセクレチン。これらの各ペプチドについての化学
の完全な説明を、実施例の節において報告する。
【０２１９】
（Ｂ．１つのシステインを含むペプチド）
１つのシステインを含むペプチドの場合、システインは、マレイミドの付加後に、キャ
ッピングされたままでなければならない。システインが、結合部位に含まれる場合、シス
テインが保護基によってキャッピングされて、どの程度の効力が損失したかに関する評価
がなされなければならない。システインが、キャッピングされたままであり得る場合、合
成経路は、Ｃ末端改変またはＮ末端改変のいずれかについて上記のＡ欄に記載された経路
と類似する。
【０２２０】
あるいは、ペプチドは、内部アミノ酸（すなわち、Ｃ末端でもＮ末端でもない）で改変
され得る。システインを含まないペプチドの内部アミノ酸での改変についての一般化反応
スキームを、ホモビスマレイミドおよびヘテロＮＨＳマレイミド（ＧＭＢＳ様）を用いて
、以下の模式図において例示する。
【０２２１】
【化９】
2010168384.tif 000010
【０２２２】
【化１０】
2010168384.tif 000011
１つのシステインを含む治療用ペプチドの例としては、以下が挙げられる：Ｇα（Ｇｔ
ｈｅｒａｐｅｕｔｉｃペプチド結合タンパク質のαサブユニット）、ラット脳一酸化窒素
シンターゼブロッキングペプチドの７２４−７３９フラグメント、ヒト［Ｔｙｒ０］イン
ヒビンのαサブユニット１−３２フラグメント、ＨＩＶエンベロープタンパク質の２５４
−２７４フラグメント、およびＰ３４ｃｄｃ２キナーゼフラグメント。
【０２２３】
（Ｃ．ジスルフィド架橋（システイン）として、２つのシステインを含むペプチド）
ペプチドが、ジスルフィド架橋として２つのシステインを含む場合、ペプチドを、マレ
イミドの付加前に支持体樹脂から切断する。Ｃ末端からのペプチドの改変については、ペ
プチドが樹脂から切断される場合に脱保護されることが必要な、カルボキシ末端（これは
、支持体樹脂からの切断に起因して、保護されないままである）および２つのシステイン
を除いて、すべての保護基が存在する。温和な空気中酸化がジスルフィド架橋を生じ、そ
してペプチドは、その段階で精製され得る。次いで、ジスルフィド架橋の存在下でＣ末端
を活性化するために、そしてＣ末端にマレイミドを付加する（アミノ−アルキル−マレイ
ミドを通して）ために、液相化学が必要とされる。次いで、ペプチドは完全に脱保護され
る。
【０２２４】
Ｎ末端でのペプチドの改変については、ペプチドは、支持体樹脂に残存し得る。２つの
システインは、マレイミドの付加前に、選択的に脱保護される。潜在的に触媒によって補
助される（不均一な）空気中酸化は、樹脂上に存在するペプチドとのジスルフィドを生じ
得る。次いで、マレイミドがＮ末端に付加され、そしてペプチドが、樹脂から切断され、
そして完全に脱保護される。ジスルフィド架橋において２つのシステインを含むペプチド
の内部アミノ酸での改変についての一般化反応スキームを、以下の模式図において例示す
る。
【０２２５】
【化１１】
2010168384.tif 000012
あるいは、ペプチドは、内部アミノ酸（すなわち、Ｃ末端またはＮ末端のいずれでもな
い）において修飾され得る。ジスルフィド架橋いおいて２つのシステインを含むペプチド
の内部アミノ酸における修飾のための一般化された反応スキームは、以下の説明図で例示
される。
【０２２６】
【化１２】
2010168384.tif 000013
ジスルフィド架橋として２つのシステインを含む治療用ペプチドの例としては、ヒトオ
ステオカルシン１−４９、ヒト糖尿病関連ペプチド、ヒト／イヌ心房性ナトリウム利尿ペ
プチドの５−２８フラグメント、ウシバクテネシン（ｂａｃｔｅｎｅｃｉｎ）、およびヒ
ト［Ｔｙｒ０］−コルチスタチン（ｃｏｒｔｉｓｔａｔｉｎ）２９が挙げられる。
【０２２７】
（Ｄ．複数のシステインを含むペプチド）
ペプチドが、ジスルフィド架橋として複数のシステインを含む場合、ペプチドは、マレ
イミドの付加前に支持体樹脂から切断される。Ｃ末端からのペプチドの修飾に関して、全
ての保護基が、カルボキシ末端（カルボキシ末端は、支持体樹脂からの切断に起因して保
護されないままにある）およびジスルフィド架橋を構築するとされる２つのシステインを
除いて存在する。他のジスルフィド架橋に関与するシステインは、保護基の選択を用いて
、対において順に脱保護される。次の架橋に移動する前に１つずつ各架橋を構築し、そし
て精製することが推奨される。おだやかな空気中酸化が、ジスルフィド架橋を産生し、そ
してペプチドが、各段階で精製されるべきである。次いで、溶液相化学が、ジスルフィド
架橋の存在下でＣ末端を活性化し、そしてＣ末端に（アミノ−アルキル−マレイミドを介
して）マレイミドを付加するのに必要とされる。次いで、ペプチドは完全に脱保護される
。
【０２２８】
Ｎ末端からのペプチドの修飾に関しては、支持体樹脂上でペプチドを切断し得、そして
選択的に最初の２つのシステインを脱保護して穏やかな空気中酸化のもと、ジスルフィド
を構築し得る。引き続く脱保護は、マレイミドの付加の前に、他のジスルフィドを提供す
る。触媒（不均一）により潜在的に促進される空気中酸化は、なお樹脂上にあるペプチド
とジスルフィドを産生し得る。次いで、マレイミドは、Ｎ末端上で付加され、そしてペプ
チドは、樹脂から切断され、そして完全に脱保護される。
【０２２９】
あるいは、ペプチドは、内部アミノ酸（すなわち、Ｃ末端またはＮ末端のどちらでもな
い）において修飾され得る。
【０２３０】
複数のシステインを含むペプチドとしては、ヒトエンドセリンおよび［Ｌｙｓ４］サラ
ホトキシンＳ６ｃが挙げられる。
【０２３１】
（５．修飾された治療用ペプチドの投与）
修飾された治療用ペプチドは、生理学的に受容可能な媒体（例えば、脱イオン水、リン
酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）、生理食塩水、水性エタノールまたは他のアルコール、血
漿、蛋白様溶液、マンニトール、水性グルコース、アルコール、植物油など）中で投与さ
れる。含まれ得る他の添加物としては、緩衝液（この媒体は、約５〜１０の範囲のｐＨで
一般的に緩衝化され、緩衝液は一般に約５０〜２５０ｍＭの濃度の範囲である）、塩（塩
の濃度は、一般に約５〜５００ｍＭの範囲である）、生理的に受容可能な安定剤などが挙
げられる。組成物は、都合の良い保存および輸送のために凍結乾燥され得る。
【０２３２】
修飾された治療（ｌｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ）ペプチドは、大部分について、経口的に
、非経口的に（例えば、脈管内に（ＩＶ）、動脈内に（ＩＡ）、筋肉内に（ＩＭ）、皮下
に（ＳＣ）など）投与される。投与は、適切な場合には、輸注により得る。いくつかの場
合において（ここで、官能基の反応は比較的緩慢である）、投与は、経口的、経鼻的、直
腸的、経皮的またはエーロゾルであり得、ここで結合体の性質は、脈管系への移動を可能
にする。通常、一回の注入が使用されるが、所望の場合、１回より多い注入が用いられ得
る。修飾された治療用ペプチドは、任意の都合のよい手段（注射器、トロカール、カテー
テルなどを含む）により投与され得る。投与の特定の様式は、投与されるべき量、１回の
ボーラスであるかまたは継続的な投与であるかなどに依存して変化する。好ましくは、投
与は、脈管内であり（この導入の部位は、本発明に対して重要なものではない）、好まし
くは急速な血流が存在する部位（例えば、静脈内、末梢静脈または中心静脈）である。他
の経路は、投与が、遅延性放出技術または保護マトリックスと結びつけられる使用を見出
し得る。この意図は、治療（ｌｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ）ペプチドが血液中で効率的に分
布されることであり、その結果、血液成分と反応し得る。結合体の濃度は、一般的に約１
ｐｇ／ｍｌ〜５０ｍｇ／ｍｌで、広範に変化する。脈管内に投与される総量は、一般に約
０．１ｍｇ／ｍｌ〜約１０ｍｇ／ｍｌ、より通常では、約１ｍｇ／ｍｌ〜約５ｍｇ／ｍｌ
の範囲である。
【０２３３】
血液の永続成分（例えば、免疫グロブリン、血清アルブミン、赤血球および血小板）を
結合することにより、多数の利点が結果として生じる。修飾された治療用ペプチド成分の
活性は、数日〜数週間延長される。１回の投与のみ、この期間に与えられる必要がある。
活性化合物は、大きい分子に主に結合されることから（ここでは、他の生理学的プロセス
を妨げるように細胞内に取り込まれる可能性が低い）、より優れた特異性が達成され得る
。
【０２３４】
血液成分間の共有結合の形成は、インビボまたはエキソビボで生じ得る。エキソビボの
共有結合形成に関して、修飾された治療（ｌｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ）ペプチドが、血液
、血清あるいはヒト血清アルブミンまたはＩｇＧを含む生理食塩水溶液に添加され、修飾
された治療用ペプチドと血液成分との間の共有結合形成を可能にする。好ましい様式にお
いて、治療用ペプチドは、マレイミドを用いて修飾され、そして生理食塩水溶液中でヒト
血清アルブミンと反応される。一旦、修飾された治療用ペプチドが血液成分と反応して、
治療用ペプチドタンパク質結合体を形成すると、この結合体は、患者に投与され得る。
【０２３５】
あるいは、修飾された治療用ペプチドは、直接患者に投与され得、その結果、共有結合
が、インビボにおいて、修飾された治療用ペプチドと結合成分との間で形成する。
【０２３６】
さらに、治療用ペプチドの局在化した送達が所望される場合、いくつかの送達方法が使
用され得る。
【０２３７】
（Ａ．切開手術領域の洗浄）
切開（ｏｐｅｎ）手術への補助としての治療的化合物の投与を内含する、局所的な治療
的化合物についての多数の適用が存在する。これらの場合において、治療的化合物は、閉
合の前に手術部位（すなわち、その部位の部分）において洗浄されるか、または治療的化
合物が、限られた空間（例えば、動脈内膜切除手順後の動脈切片の内部または切除の間の
ＧＩ管の一部分）において短期間インキュベートされ、そして過剰の液体が引き続いて排
除される。
【０２３８】
（Ｂ．組織移植片のインキュベーション）
組織移植片（例えば、自己および生体異物性の静脈／動脈移植片ならびに弁の移植片な
らびに器官移植片）が、修飾されている治療的化合物を用いて予め処理され、治療用溶液
中でその移植片をインキュベートするかおよび／またはこのような溶液を用いてその移植
片を灌流するかのいずれかにより、共有結合を形成することを可能にし得る。
【０２３９】
（Ｃ．カテーテル送達）
カテーテルは、器官（例えば、膀胱、ＧＩ管、膣／子宮）内部への内視鏡手順の一部と
してか、または心臓血管系カテーテル手順（例えば、バルーン血管形成術）の補助として
のいずれかで、治療的化合物を送達するために使用される。標準的カテーテルならびによ
り新しい薬物送達およびイオン導入カテーテルが利用され得る。
【０２４０】
（Ｄ．直接的注射）
特定の血管化の乏しい空間（例えば、関節内関節空間）に関して、治療的化合物の直接
注射により、表面組織に生体結合体化し（ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ）得、そして薬物効
果の所望される持続期間を達成し得る。他の適用は以下が挙げられ得る：骨髄内注射、腫
瘍内注射、腟内注射、子宮内注射、腸管内注射、エウスターキオ管内注射、鞘内注射、皮
下注射、関節内注射、腹腔内注射または眼内注射ならびに気管支鏡を介して、経鼻胃管を
介しておよび腎造瘻術を介する。
【０２４１】
（６．修飾された治療用ペプチド誘導体の存在のモニタリング）
本発明の別の局面は、生物学的サンプル（例えば、血液）における治療用ペプチドおよ
び／またはアナログ、あるいはそれらの誘導体および結合体の濃度を決定する方法、なら
びに修飾されたペプチドのペプチダーゼ安定性を決定する方法に関する。哺乳動物宿主の
血液は、１回以上、修飾された治療用ペプチド化合物の存在についてモニターされ得る。
宿主の血液の一部分またはサンプルを採取することにより、治療用ペプチドが治療的活性
であるのに十分な量で永続血液成分に結合されているか否かを決定し得、そしてその後、
血液中の治療用ペプチド成分のレベルを決定し得る。所望される場合、治療用ペプチド誘
導体分子がどの血液成分に結合されるかもまた決定され得る。これは、非特異的治療用ペ
プチドを使用する場合に特に重要である。特定のマレイミド治療用ペプチドに関して、血
清アルブミンおよびＩｇＧの半減期を算出することは、はるかに簡単である。
【０２４２】
治療用ペプチド、アナログ、誘導体および結合体の濃度を決定する１つの方法は、治療
用ペプチドまたは治療用ペプチドアナログあるいはそれらの誘導体および結合体に特異的
な抗体を使用すること、ならびにこのような治療用ペプチド、アナログ、および／または
それらの誘導体または結合体と潜在的に関連する毒性に対する処置としての抗体を使用す
ることである。これは、患者において、インビボで、治療用ペプチドの安定性および寿命
の増加が、処置の間の新規の問題（毒性に関する可能性の増加を含む）を導き得るので有
利である。しかし、いくつかの場合、従来の抗体アッセイが、切断される治療用ペプチド
と切断されない治療用ペプチドとの間の相違を認識し得ないことが言及されるべきである
。このような場合、他のアッセイ技術が使用され得る（例えば、ＬＣ／ＭＳ）（液体クロ
マトグラフィー／質量分析法）。
【０２４３】
特定の治療用ペプチド、そのアナログまたは誘導体に特異性を有する抗体（モノクロー
ナル抗体またはポリクローナル抗体のいずれか）の使用は、任意のこのような問題を仲裁
する際に補助し得る。抗体は、特定の治療用ペプチド、そのアナログもしくは誘導体を用
いて、またはその因子の免疫原性フラグメント、あるいはこの因子の抗原決定基に対応す
る合成された免疫原を用いて免疫された宿主から生成され得るか、またはそれらに由来し
得る。好ましい抗体は、治療用ペプチドまたは治療用ペプチドアナログのネイティブな形
態、誘導体化形態、および結合体化形態に対して、高い特異性および親和性を有する。こ
のような抗体はまた、酵素、蛍光色素、または放射性標識を用いて標識され得る。
【０２４４】
誘導体化された治療用ペプチドに特異的な抗体は、誘導体化された治療用ペプチド特異
的抗体の誘導のために精製された治療用ペプチドを使用するすることにより、産生され得
る。抗体の誘導により、動物中への注射による免疫応答の刺激のみならず、合成抗体また
は他の特異的結合分子の産生における類似の工程（例えば、組換え免疫グロブリンライブ
ラリーのスクリーニング）も意図される。モノクローナル抗体およびポリクローナル抗体
の両方が、当該分野で周知の手順により産生され得る。いくつかの場合、モノクローナル
抗体の使用は、ポリクローナル抗体よりも好適であり得る（例えば、分解がエピトープ／
抗体認識の及ばない領域にわたって起こる場合）。
【０２４５】
抗体が、治療用ペプチド、そのアナログまたは誘導体の投与により誘導された毒性を処
置するために使用され得、そしてエキソビボまたはインビボで使用され得る。エキソビボ
の方法は、固体支持体に固定された抗体を使用する、毒性に対する免疫透析処置を含む。
インビボの方法は、抗体−薬剤複合体のクリアランスを誘導するのに有効な量の抗体の投
与を含む。
【０２４６】
抗体は、無菌条件下で抗体と血液を接触させることにより、エキソビボで患者の血液か
ら、治療用ペプチド、そのアナログまたは誘導体、およびその結合体を除去するために使
用され得る。例えば、抗体は、カラムマトリックス上に固着（ｆｉｘ）され得るかまたは
さもなくば固定化（ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅ）され得、そして患者の血液が、その患者から
取り出され得、そしてそのマトリックスに通過され得る。治療用ペプチドアナログ、誘導
体または結合体が、抗体に結合しそして低濃度の治療用ペプチド、アナログ、誘導体また
は結合体を含む血液が、次いで、患者の循環系に戻され得る。除去される治療用ペプチド
化合物の量は、圧力および流速を調整することにより、制御され得る。患者の血液の血漿
成分由来の治療用ペプチド、アナログ、誘導体および結合体の優先的な除去は、例えば、
半透膜の使用により、またはさもなくば、抗治療抗体を含むマトリックスを血漿成分が通
過する前に、当該分野で公知の方法により細胞成分から血漿成分をまず分離することによ
り、もたらされ得る。あるいは、治療用ペプチド結合体化血球（赤血球細胞を含む）の優
先的な除去は、患者の血液中の血球を回収し、そして濃縮し、ならびに患者の血液の血清
成分の排除に対してそれらの細胞を、固着された抗治療抗体と接触させることによりもた
らされ得る。
【０２４７】
抗体は、処置のために、治療用ペプチド、アナログ、誘導体または結合体を受容してい
る患者に、インビボで非経口的に投与され得る。抗体は、治療用ペプチド化合物および結
合体に結合する。一旦治療用ペプチドに結合されると、活性は、完全にはブロックされな
いとしても、妨げられ、それにより患者の血流中の治療用ペプチド化合物の生物学的有効
濃度を低減し、そして有害な副作用を最少にする。さらに、結合された抗体−治療用ペプ
チド複合体は、患者の血流からの治療用ペプチド化合物および結合体のクリアランスを容
易にする。
【０２４８】
十分に記載されている本発明を、ここで以下の限定されない実施例により例示する。
【実施例】
【０２４９】
（実施例）
（Ａ．改変された治療用ペプチドの合成の一般方法）
１００μｍｏｌの規模での、改変されたペプチドの固相ペプチド合成を、Ｆｍｏｃ保護
Ｒｉｎｋ  Ａｍｉｄｅ  ＭＢＨＡ樹脂、Ｆｍｏｃ保護アミノ酸、Ｏ−ベンゾトリアゾール
−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート
（ＨＢＴＵ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）溶液およびＮ−メチルモルホリ
ン（ＮＭＭ）での活性化用いてＳｙｍｐｈｏｎｙ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｚ
ｅｒ上で実行し、そしてＦｍｏｃ基のピペリジン脱保護を行った（工程１）。末端Ｆｍｏ
ｃ基の脱保護を、２０％のピペリジンを用いて達成し（工程２）、続いて、３−マレイミ
ドプロピオン酸（３−ＭＰＡ）のカップリング、酢酸のカップリングまたは１つまたは複
数のＦｍｏｃ−ＡＥＥＡのカップリングのいずれかを行い、続いて３−ＭＰＡのカップリ
ングを行う（工程３）。樹脂の切断および生成物の単離を、８６％  ＴＦＡ／５％  ＴＩ
Ｓ／５％  Ｈ2Ｏ／２％  チオアニソールおよび２％のフェノールを用いて実行し、続い
て、ドライアイス冷却Ｅｔ2Ｏにより沈殿させる（工程４）。生成物を、Ｄｙｎａｍａｘ
Ｃ18、６０Å、８μｍのガードモジュール、２１ｍｍ×２５ｃｍカラムおよびＵＶ検出
器（Ｖａｒｉａｎ  Ｄｙｎａｍａｘ  ＵＶＤ
ＩＩ）（λ２１４および２５４ｎｍ）を備えたＤｙｎａｍａｘ  Ｃ18、６０Å、８μｍ
、２１ｍｍ×２５ｃｍカラムを用いるＶａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）調製用バイナリーＨ
ＰＬＣシステムを用いて調製用逆相ＨＰＬＣにより精製する。生成物は、ダイオードアレ
イ検出器を備えるＨｅｗｌｅｔｔ  Ｐａｃｋａｒｄ  ＬＣＭＳ−１１００シリーズ分光計
を用いるＲＰ−ＨＰＬＣ質量分光計によりそしてエレクトロスプレーイオン化を用いて決
定される場合、＞９５％の純度を有するべきである。
【０２５０】
（Ｂ．ネイティブペプチド鎖の変更）
ペプチドの改変を容易にするために、１以上のアミノ酸残基を、実施例１〜５に記載さ
れるようにペプチドに付加し得、そして／または１以上のアミノ酸残基を、他のアミノ酸
残基で置換し得る。この変更は、反応性基の結合を援助する。
【０２５１】
（実施例１  クリングル−５のＣ末端でのＬｙｓの付加。ＮＡｃ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｌ
ｙｓ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−ＮＨ2．３ＴＦＡの調製）
自動ペプチド合成を用いて、以下の保護アミノ酸を、Ｒｉｎｋ  Ａｍｉｄｅ  ＭＢＨＡ
樹脂に連続的に付加させた：Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔ
Ｂｕ）ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）ＯＨ、
Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂ
ｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ。樹脂に結合したアミノ酸のＮ末端でのＦｍｏｃ基
の逆ブロック化を、ＤＭＦ中の２０％のピペリジンを用いて約１５〜２０分間実行した。
酢酸のカップリングを、アミノ酸カップリングに類似の条件下で実行した。樹脂からの最
終切断を、上記の通りに切断混合物を用いて実行した。生成物を、沈殿により単離し、そ
して調製用ＨＰＬＣにより精製し、凍結乾燥の際に所望の生成物を白色固体として得た。
【０２５２】
（実施例２  クリングル−５のＣ末端でのＬｙｓの付加。ＮＡｃ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌ
ｅｕ−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−ＮＨ2．２ＴＦＡ．３ＴＦＡの調製）
自動ペプチド合成を用いて、以下の保護アミノ酸を、Ｒｉｎｋ  Ａｍｉｄｅ  ＭＢＨＡ
樹脂に連続的に付加させた：Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔ
Ｂｕ）ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）ＯＨ、
Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂ
ｆ）−ＯＨ。樹脂に結合したアミノ酸のＮ末端でのＦｍｏｃ基の逆ブロックを、ＤＭＦ中
の２０％のピペリジンを用いて約１５〜２０分間実行した。酢酸のカップリングを、アミ
ノ酸カップリングと類似の条件下で実行した。樹脂からの最終切断を、上記の通りに切断
混合物を用いて実行した。生成物を、沈殿により単離し、そして調製用ＨＰＬＣにより精
製し、凍結乾燥の際に所望の生成物を白色固体として得た。
【０２５３】
（実施例３  クリングル−５のＮ末端でのＬｙｓの付加。ＮＡｃ−Ｔｙｒ−Ｔｈｒ−Ｔ
ｈｒ−Ａｓｎ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ｎ
Ｈ２．３ＴＦＡの調製）
自動ペプチド合成を用いて、以下の保護アミノ酸を、Ｒｉｎｋ  Ａｍｉｄｅ  ＭＢＨＡ
樹脂に連続的に付加させた：Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔ
Ｂｕ）ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）ＯＨ、
Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂ
ｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−
Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢ
ｕ）ＯＨ。樹脂に結合したアミノ酸のＮ末端でのＦｍｏｃ基の逆ブロックを、ＤＭＦ中の
２０％のピペリジンを用いて約１５〜２０分間実行した。酢酸のカップリングを、アミノ
酸カップリングと類似の条件下で実行した。樹脂からの最終切断を、上記の通りに切断混
合物を用いて実行した。生成物を、沈殿により単離し、そして調製用ＨＰＬＣにより精製
し、凍結乾燥の際に所望の生成物を白色固体として得た。
【０２５４】
（実施例４  クリングル−５のＮ末端におけるＬｙｓの付加。Ｃｙｓの位置５２４にお
けるＡｌａでの置換。ＮＡｃ−Ａｒｇ−Ａｓｎ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｖａ
ｌ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｔｒｐ−Ａｌａ524−Ｔｙｒ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ−
Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−ＮＨ2．４ＴＦＡ
の調製）
自動ペプチド合成を用いて、以下の保護アミノ酸を、Ｒｉｎｋ  Ａｍｉｄｅ  ＭＢＨＡ
樹脂に連続的に付加させた：Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔ
Ｂｕ）ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）ＯＨ、
Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂ
ｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−
Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢ
ｕ）ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ
、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏ
ｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒ
ｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ。樹
脂に結合したアミノ酸のＮ末端でのＦｍｏｃ基の逆ブロックを、ＤＭＦ中の２０％のピペ
リジンを用いて約１５〜２０分間実行した。酢酸のカップリングを、アミノ酸カップリン
グと類似の条件下で実行した。樹脂からの最終切断を、上記の通りに切断混合物を用いて
実行した。生成物を、沈殿により単離し、そして調製用ＨＰＬＣにより精製し、凍結乾燥
の際に所望の生成物を白色固体として得た。
【０２５５】
（実施例５  クリングル−５のＮ末端におけるＬｙｓの付加。ＮＡｃ−Ａｒｇ−Ａｓ
ｎ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｔｒｐ−Ｌｙ
ｓ−ＮＨ2．２ＴＦＡの調製）
自動ペプチド合成を用いて、以下の保護アミノ酸を、Ｒｉｎｋ  Ａｍｉｄｅ  ＭＢＨＡ
樹脂に連続的に付加させた：Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ−Ｏ
Ｈ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍ
ｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、
Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔ
ｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ。樹脂に結合したアミノ酸のＮ末端で
のＦｍｏｃ基の逆ブロックを、ＤＭＦ中の２０％のピペリジンを用いて１５〜２０分間実
行した。酢酸のカップリングを、アミノ酸カップリングと類似の条件下で実行した。樹脂
からの最終切断を、上記の通りに切断混合物を用いて実行した。生成物を、沈殿により単
離し、そして調製用ＨＰＬＣにより精製し、凍結乾燥の際に所望の生成物を白色固体とし
て得た。
【０２５６】
（実施例６  Ｄ−Ａｌａ２  ＧＬＰ−１（７−３６）アミドの調製）
１００μｍｏｌの規模での、ＧＬＰ−１アナログの固相ペプチド合成を、手動固相合成
ならびに、Ｆｍｏｃ保護Ｒｉｎｋ  Ａｍｉｄｅ  ＭＢＨＡ樹脂、Ｆｍｏｃ保護アミノ酸、
Ｏ−ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−ウロニウムヘ
キサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）溶液
およびＮ−メチルモルホリン（ＮＭＭ）での活性化を用いるＳｙｍｐｈｏｎｙ  Ｐｅｐｔ
ｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒを用いて実行し、そしてＦｍｏｃ基のピペリジン脱保護
を行った（工程１）。樹脂の切断および生成物の単離を、８５％  ＴＦＡ／５％  ＴＩＳ
／５％のチオアニソールおよび５％のフェノールを用いて実行し、続いて、ドライアイス
冷却Ｅｔ2Ｏにより沈殿させる（工程２）。生成物をＶａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）調製
用バイナリーＨＰＬＣシステム（：３０〜５５％Ｂ（Ｈ2Ｏ中の０．０４５％  ＴＦＡ（
Ａ）およびＣＨ3ＣＮ中の０．０４５％  ＴＦＡ（Ｂ））の勾配溶出）を用いて、Ｐｈｅ
ｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  １０μのフェニル−ヘキシル、２１ｍｍ×２５ｃｍカラムお
よびＵＶ検出器（Ｖａｒｉａｎ  Ｄｙｎａｍａｘ  ＵＶＤ  ＩＩ）（λ２１４および２５
４ｎｍ）を用いて、調製用逆相ＨＰＬＣにより９．５ｍＬ／分にて１８０分にわたって精
製し、所望のペプチドをＲＰ−ＨＰＬＣによって決定された通りに＞９５％純度で得る。
これらの工程を、以下の概略ダイヤグラム中に図示する。
【０２５７】
【化１３】
2010168384.tif 000014
（Ｃ．システインを含まないペプチドからの改変されたペプチドの調製）
複数の保護官能基を含有しかつシステインを含有しない治療用ペプチドからのマレイミ
ドペプチドの調製を、以下に記載の通りのペプチドの合成により例示する。このペプチド
を、Ｎ末端、Ｃ末端またはＮ末端とＣ末端との間に位置するアミノ酸にて改変し得る。こ
の改変されたペプチドを、天然のペプチド配列のＮ末端を切断（ｌｉｎｋｉｎｇ  ｏｆｆ
）するか、または天然のペプチド配列の改変されたＣ末端を切断することにより合成する
。１以上のさらなるアミノ酸を、治療用ペプチドに付加し、反応性基の結合を容易にし得
る。
【０２５８】
（１．Ｃ末端での治療用ペプチドの改変）
（実施例７  付加されたＣ末端リジン残基のεアミノ基におけるＲＳＶペプチドの改変
。Ｖａｌ−ｌｌｅ−Ｔｈｒ−ｌｌｅ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ａｓｎ−ｌｌｅ−Ｌｙｓ
−Ｇｌｕ−Ａｓｎ−Ｌｙｓ−Ｍｅｔ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ
−Ｌｅｕ−ｌｌｅ−Ｌｙｓ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ
−Ａｓｎ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−（Ｎε−ＭＰＡ）の調製。）
１００μｍｏｌ規模での、ＤＡＣアナログの固相ペプチド合成を、手動の固相合成、Ｓ
ｙｍｐｈｏｎｙ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  ＳｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒおよびＦｍｏｃ保護Ｒｉｎｋ
Ａｍｉｄｅ  ＭＢＨＡを用いて実行する。以下の保護アミノ酸を、連続的に樹脂に付加
する：Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌ
ａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆ
ｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓ
ｐ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆ
ｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−ｌｌ
ｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖ
ａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−
Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｍｅｔ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ
−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ｔ
Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−ｌｌｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ
−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−Ｏ
Ｈ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−ｌｌｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（
ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−ｌｌｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ。それらを、Ｎ，Ｎ
−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中に溶解し、そして配列に従って、Ｏ−ベンゾトリア
ゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−ウロニウムヘキサフルオロホス
フェート（ＨＢＴＵ）およびジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）を用いて活性化す
る。Ｆｍｏｃ保護基の除去を、２０％（Ｖ／Ｖ）ピペリジンのＮ，Ｎ−ジメチルホルムア
ミド（ＤＭＦ）溶液を用いて２０分間活性化する（工程１）。Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）基の選
択的脱保護を、手動で実行し、そして５ｍＬのＣＨＣｌ３：ＮＭＭ：ＨＯＡｃ（１８：１
：０．５）中に溶解した３当量のＰｄ（ＰＰｈ３）４の溶液で２時間樹脂を処理すること
によって達成する（工程２）。次いで、この樹脂を、ＣＨＣｌ３（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ
中の２０％  ＨＯＡｃ（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ（６×５ｍＬ）、およびＤＭＦ（６×５ｍ
Ｌ）で洗浄する。次いで、この合成を、３−マレイミドプリピオン酸の添加のために再自
動化する（工程３）。すべてのカップリングの間に、樹脂をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミ
ド（ＤＭＦ）で３回洗浄し、そしてイソプロパノールで３回洗浄する。このペプチドを、
８５％  ＴＦＡ／５％  ＴＩＳ／５％  チオアニソールおよび５％のフェノールを用いて
樹脂から切断し、続いて、ドライアイスで冷却されたＥｔ２Ｏにより沈殿させる（工程４
）。生成物を、Ｖａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）調製用バイナリーＨＰＬＣシステム（：３
０〜５５％Ｂ（Ｈ2Ｏ中の０．０４５％  ＴＦＡ（Ａ）およびＣＨ3ＣＮ中の０．０４５％
ＴＦＡ（Ｂ））の勾配溶出）を用いて、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  １０μのフ
ェニル−ヘキシル、２１ｍｍ×２５ｃｍカラムおよびＵＶ検出器（Ｖａｒｉａｎ  Ｄｙｎ
ａｍａｘ  ＵＶＤ  ＩＩ）（λ２１４および２５４ｎｍ）を用いて、調製用逆相ＨＰＬＣ
により９．５ｍＬ／分にて１８０分にわたって精製し、ＲＰ−ＨＰＬＣによって決定する
ように、＞９５％純度で所望のＤＡＣを得る。
【０２５９】
（実施例８  付加されたＣ末端リジン残基のεアミノ基におけるＤｙｎ  Ａ  １−１３
の改変−Ｄｙｎ  Ａ  １−１３（Ｎε−ＭＰＡ）−ＮＨ2  Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐ
ｈｅ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−ｌｌｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−（
Ｎε−ＭＰＡ）−ＮＨ2の合成）
１００μｍｏｌ規模での、Ｄｙｎ  Ａ  １−１３の固相ペプチド合成を、手動の固相合
成、Ｓｙｍｐｈｏｎｙ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  ＳｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒおよびＦｍｏｃ保護Ｒ
ｉｎｋ  Ａｍｉｄｅ  ＭＢＨＡを用いて実行する。以下の保護アミノ酸を、連続的に樹脂
に付加する：Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ
−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−Ｏ
Ｈ、Ｆｍｏｃ−ｌｌｅ−Ｈ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐ
ｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−
ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ。それらを、Ｎ，Ｎ
−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中に溶解し、そして配列に従って、Ｏ−ベンゾトリア
ゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−ウロニウムヘキサフルオロホス
フェート（ＨＢＴＵ）およびジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）を用いて活性化す
る。Ｆｍｏｃ保護基の除去を、２０％（Ｖ／Ｖ）ピペリジンのＮ，Ｎ−ジメチルホルムア
ミド（ＤＭＦ）溶液を用いて２０分間で達成する（工程１）。Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）基の選
択的脱保護を、手動で実行し、そして５ｍＬのＣＨＣｌ3：ＮＭＭ：ＨＯＡｃ（１８：１
：０．５）中に溶解した３当量のＰｄ（ＰＰｈ3）4の溶液で２時間樹脂を処理することに
よって達成する（工程２）。次いで、この樹脂を、ＣＨＣｌ3（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ中
の２０％  ＨＯＡｃ（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ（６×５ｍＬ）、およびＤＭＦ（６×５ｍＬ
）で洗浄した。次いで、この合成を、３−マレイミドプリピオン酸の添加のために再自動
化する（工程３）。すべてのカップリングの間に、樹脂をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
（ＤＭＦ）で３回洗浄し、そしてイソプロパノールで３回洗浄する。このペプチドを、８
５％  ＴＦＡ／５％  ＴＩＳ／５％  チオアニソールおよび５％のフェノールを用いて樹
脂から切断し、続いて、ドライアイスで冷却されたＥｔ2Ｏにより沈殿させる（工程４）
。生成物を、Ｖａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）調製用バイナリーＨＰＬＣシステム（：３０
〜５５％Ｂ（Ｈ2Ｏ中の０．０４５％  ＴＦＡ（Ａ）およびＣＨ3ＣＮ中の０．０４５％  
ＴＦＡ（Ｂ））の勾配溶出）を用いて、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  １０μのフェ
ニル−ヘキシル、２１ｍｍ×２５ｃｍカラムおよびＵＶ検出器（Ｖａｒｉａｎ  Ｄｙｎａ
ｍａｘ
ＵＶＤ  ＩＩ）（λ２１４および２５４ｎｍ）を用いて、調製用逆相ＨＰＬＣにより９
．５ｍＬ／分にて１８０分にわたって精製し、ＲＰ−ＨＰＬＣによって決定するように、
＞９５％純度で所望のＤＡＣを得る。
【０２６０】
この生成物の構造は、以下：
【０２６１】
【化１４】
2010168384.tif 000015
である。
【０２６２】
（実施例９  付加されたＣ末端リジン残基のεアミノ基におけるＤｙｎ  Ａ  ２−１３
の改変−Ｄｙｎ  Ａ  ２−１３（Ｎε−ＭＰＡ）−ＮＨ2  Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌ
ｅｕ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−ｌｌｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−（Ｎε−Ｍ
ＰＡ）−ＮＨ2の合成）
自動ペプチド合成を用いて、以下の保護アミノ酸を、連続的にＲｉｎｋ  Ａｍｉｄｅ  
ＭＢＨＡ樹脂に付加した：Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｍｔｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ
、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐ
ｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−ｌｌｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ
−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、Ｆｍｏ
ｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、およびＢｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ。手動合成を、残りの工程について使用
した：ＤＭＦ中のＨＢＴＵ／ＨＯＢｔ／ＤＩＥＡ活性化を用いるＭｔｔ基の選択的除去お
よびＭＰＡのカップリング。標的ダイノルフィンアナログを、樹脂から除去した；生成物
を、沈殿により単離し、そして調製的ＨＰＬＣにより精製して、凍結乾燥の際に３５％収
率で白色固体として所望の生成物を得た。分析的ＨＰＬＣは、生成物がＲt＝３０．４２
分で＞９５％純度であると示した。ＥＳＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ：Ｃ73Ｈ123Ｎ25Ｏ15（ＭＨ+）
、計算値１５９０．０、実測値  ＭＨ3+  ５３１．３。
【０２６３】
（実施例１０  付加されたＣ末端リジン残基のε−アミノ基におけるＤｙｎ  Ａ  １−
１３の改変−Ｄｙｎ  Ａ  １−１３（ＡＥＡ3−ＭＰＡ）−ＮＨ2  Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌ
ｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−ｌｌｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｌｙ
ｓ−（ＡＥＡ3−ＭＰＡ）−ＮＨ2の合成）
自動ペプチド合成を用いて、以下の保護アミノ酸を、連続的にＲｉｎｋ  Ａｍｉｄｅ  
ＭＢＨＡ樹脂に付加した：Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｍｔｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ
、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐ
ｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−ｌｌｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ
−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、Ｆｍｏ
ｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨおよびＢｏｃ−Ｔｙｒ（Ｂｏｃ）−ＯＨ。手
動合成を、残りの工程について使用した：Ｍｔｔ基の選択的除去、各カップリング間にお
ける３つのＦｍｏｃ−ＡＥＡ−ＯＨ基（ＡＥＡ＝アミノエトキシ酢酸）のＦｍｏｃ除去を
用いるカップリング、およびＤＭＦ中のＨＢＴＵ／ＨＯＢｔ／ＤＩＥＡ活性を用いるＭＰ
Ａ酸。標的ダイノルフィンアナログを、樹脂から除去した；生成物を、沈殿により単離し
、そして調製的ＨＰＬＣにより精製して、凍結乾燥の際に２９％収率で白色固体として所
望の生成物を得た。分析的ＨＰＬＣは、生成物がＲt＝３３．０６分で＞９５％純度であ
ると示した。ＥＳＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ：Ｃ94Ｈ154Ｎ29Ｏ23（ＭＨ+）、計算値２０５７．２
、実測値  ＭＨ4+  ５１５．４、ＭＨ3+  ６８６．９、ＭＨ2+  １０２９．７。
【０２６４】
【化１５】
2010168384.tif 000016
（実施例１１  付加されたＣ末端リジン残基のε−アミノ基におけるＤｙｎ  Ａ  ２−
１３の改変−Ｄｙｎ  Ａ  ２−１３（ＡＥＡ3−ＭＰＡ）−ＮＨ2  ＧＩｙ−Ｇｌｙ−Ｐｈ
ｅ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−ｌｌｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−（Ａ
ＥＡ3−ＭＰＡ）−ＮＨ2の合成）
自動ペプチド合成を用いて、以下の保護アミノ酸を、連続的にＲｉｎｋ  Ａｍｉｄｅ  
ＭＢＨＡ樹脂に付加した：Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｍｔｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ
、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐ
ｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−ｌｌｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ
−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、Ｆｍｏ
ｃ−Ｇｌｙ−ＯＨおよびＦｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ。手動合成を、残りの工程について使用
した：Ｍｔｔ基の選択的除去、各カップリング間における３つのＦｍｏｃ−ＡＥＡ−ＯＨ
基とＦｍｏｃ除去を用いるカップリング、およびＤＭＦ中のＨＢＴＵ／ＨＯＢｔ／ＤＩＥ
Ａ活性を用いるＭＰＡ。標的ダイノルフィンアナログを、樹脂から除去した；生成物を、
沈殿により単離し、そして調製的ＨＰＬＣにより精製して、凍結乾燥の際に２９％収率で
白色固体として所望の生成物を得た。分析的ＨＰＬＣは、生成物がＲt＝３１．８８分で
＞９５％純度であると示した。ＥＳＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ：Ｃ85Ｈ145Ｎ25Ｏ21（ＭＨ+）、計
算値１８９４．３、実測値  ＭＨ4+  ４７４．６、ＭＨ3+  ６３２．４、ＭＨ2+  ９４８
．１０。
【０２６５】
【化１６】
2010168384.tif 000017
（実施例１２  付加されたＣ末端リジン残基のε−アミノ基におけるニューロペプチド
Ｙの改変−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−Ａｓｎ−Ｐｒｏ−Ｇｌ
ｙ−Ｇｌｕ−Ａｓｐ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ａｓｐ−Ｍｅｔ−Ａｌａ−Ａｒ
ｇ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−（Ｎ−εＭＰＡ）−ＮＨ2の調
製）
１００μｍｏｌ規模での、改変されたニューロペプチド  Ｙアナログの固相ペプチド合
成を、手動の固相合成、Ｓｙｍｐｈｏｎｙ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒお
よびＦｍｏｃ保護Ｒｉｎｋ  Ａｍｉｄｅ  ＭＢＨＡを用いて実行する。以下の保護アミノ
酸を、連続的に樹脂に付加する：Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅ
ｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔ
ｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ
）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｍｅｔ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ｔＢ
ｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−
Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ
−Ｇｌｕ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏ
ｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−
ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏ
ｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ。それらを、Ｎ，Ｎ−ジメチルホ
ルムアミド（ＤＭＦ）中に溶解し、そして配列に従って、Ｏ−ベンゾトリアゾール−１−
イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−ウロニウムヘキサフルオロホスフェート（Ｈ
ＢＴＵ）およびジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）を用いて活性化する。Ｆｍｏｃ
保護基の除去を、２０％（Ｖ／Ｖ）ピペリジンのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ
）溶液を用いて２０分間活性化する（工程１）。Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）基の選択的脱保護を
、手動で実行し、そして５ｍＬのＣＨＣｌ3：ＮＭＭ：ＨＯＡｃ（１８：１：０．５）中
に溶解した３当量のＰｄ（ＰＰｈ3）4の溶液で２時間樹脂を処理することによって達成す
る（工程２）。次いで、この樹脂を、ＣＨＣｌ3（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ中の２０％  Ｈ
ＯＡｃ（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ（６×５ｍＬ）、およびＤＭＦ（６×５ｍＬ）で洗浄した
。次いで、この合成を、３−マレイミドプリピオン酸の添加のために再自動化する（工程
３）。すべてのカップリングの間に、樹脂をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）で
３回洗浄し、そしてイソプロパノールで３回洗浄する。このペプチドを、８５％  ＴＦＡ
／５％  ＴＩＳ／５％  チオアニソールおよび５％のフェノールを用いて樹脂から切断し
、続いて、ドライアイスで冷却されたＥｔ2Ｏにより沈殿させる（工程４）。生成物を、
Ｖａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）調製用バイナリーＨＰＬＣシステム（：３０〜５５％Ｂ（
Ｈ2Ｏ中の０．０４５％  ＴＦＡ（Ａ）およびＣＨ3ＣＮ中の０．０４５％  ＴＦＡ（Ｂ）
）の勾配溶出）を用いて、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  １０μのフェニル−ヘキシ
ル、２１ｍｍ×２５ｃｍカラムおよびＵＶ検出器（Ｖａｒｉａｎ  Ｄｙｎａｍａｘ  ＵＶ
Ｄ  ＩＩ）（λ２１４および２５４ｎｍ）を用いて、調製用逆相ＨＰＬＣにより９．５ｍ
Ｌ／分にて１８０分にわたって精製し、ＲＰ−ＨＰＬＣによって決定するように、＞９５
％純度で所望のＤＡＣを得る。
【０２６６】
（実施例１３  Ｃ末端アルギニンにおけるＧＬＰ−１（７−３６）の改変−ＧＬＰ−１
（７−３６）−ＥＤＡ−ＭＰＡの調製）
１００μｍｏｌ規模での、改変されたＧＬＰ−１アナログの固相ペプチド合成を、手動
でかつＳｙｍｐｈｏｎｙ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒ  ＳＡＳＲＩＮ（超
酸感応性樹脂）上で実行する。以下の保護アミノ酸を、連続的に樹脂に付加する：Ｆｍｏ
ｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−
ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）
−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−ｌｌｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、
Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−
Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ
−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｃｏ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍ
ｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ
（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍ
ｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ
−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌ
ｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｂｏｃ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ。そ
れらを、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中に溶解し、そして配列に従って、Ｏ
−ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−ウロニウムヘキ
サフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）およびジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）を
用いて活性化する。Ｆｍｏｃ保護基の除去を、２０％（Ｖ／Ｖ）ピペリジンのＮ，Ｎ−ジ
メチルホルムアミド（ＤＭＦ）溶液を用いて２０分間活性化する（工程１）。完全に保護
されたペプチドを、１％  ＴＦＡ／ＤＣＭを用いる処置によって樹脂から切断する（工程
２）。次いで、エチレンジアミンおよび３−マレイミドプロピオン酸を、遊離のＣ末端に
連続的に付加する（工程３）。次いで、保護基を、切断し、そして生成物を、８６％  Ｔ
ＦＡ／５％  ＴＩＳ／５％  Ｈ2Ｏ／２％のチオアニソールおよび２％のフェノールを用
いて単離し、続いて、ドライアイスで冷却されたＥｔ2Ｏにより沈殿させる（工程４）。
生成物を、Ｄｙｎａｍａｘ
Ｃ18、６０Å、８μｍのガードモジュール、２１ｍｍ×２５ｃｍカラムおよびＵＶ検出
器（Ｖａｒｉａｎ  Ｄｙｎａｍａｘ  ＵＶＤ  ＩＩ）（λ２１４および２５４ｎｍ）を備
えたＤｙｎａｍａｘ  Ｃ18、６０Å、８μｍ、２１ｍｍ×２５ｃｍカラムを用いるＶａｒ
ｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）調製用バイナリーＨＰＬＣシステムを用いて、調製用逆相ＨＰＬ
Ｃにより精製し、ＲＰ−ＨＰＬＣによって決定するように、＞９５％純度で所望のＤＡＣ
を得る。これらの工程を、以下の概略ダイアグラム中に例示する。
【０２６７】
【化１７】
2010168384.tif 000018
（実施例１４  Ｃ末端セリンにおけるエキセンディン−４の改変。エキセンディン−４
（１−３９）−ＥＤＡ−ＭＰＡの調製）
１００μｍｏｌ規模での、改変されたエキセンディン−４アナログの固相ペプチド合成
を、手動でかつＳｙｍｐｈｏｎｙ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒ  ＳＡＳＲ
ＩＮ（超酸感応性樹脂）上で実行する。以下の保護アミノ酸を、連続的に樹脂に付加する
：Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−Ｏ
Ｈ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍ
ｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ
−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ
）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔ
ｒｐ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−ｌｌｅ−ＯＨ
、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−Ｏ
Ｈ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）
−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、
Ｆｍｏｃ−Ｍｅｔ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏ
ｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−
Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔ
Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ
−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｂｏ
ｃ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ。それらを、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中に
溶解し、そして配列に従って、Ｏ−ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’
−テトラメチル−ウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）およびジイソプロ
ピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）を用いて活性化する。Ｆｍｏｃ保護基の除去を、２０％（
Ｖ／Ｖ）ピペリジンのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）溶液を用いて２０分間活
性化する（工程１）。完全に保護されたペプチドを、１％  ＴＦＡ／ＤＣＭを用いる処理
によって樹脂から切断する（工程２）。次いで、エチレンジアミンおよび３−マレイミド
プロピオン酸を、遊離のＣ末端に連続的に付加する（工程３）。次いで、保護基を、切断
し、そして生成物を、８６％  ＴＦＡ／５％  ＴＩＳ／５％  Ｈ2Ｏ／２％のチオアニソ
ールおよび２％のフェノールを用いて単離し、続いて、ドライアイスで冷却されたＥｔ2
Ｏにより沈殿させる（工程４）。生成物を、Ｄｙｎａｍａｘ  Ｃ18、６０Å、８μｍのガ
ードモジュール、２１ｍｍ×２５ｃｍカラムおよびＵＶ検出器（Ｖａｒｉａｎ  Ｄｙｎａ
ｍａｘ  ＵＶＤ  ＩＩ）（λ２１４および２５４ｎｍ）を備えたＤｙｎａｍａｘ  Ｃ18、
６０Å、８μｍ、２１ｍｍ×２５ｃｍカラムを用いるＶａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）調製
用バイナリーＨＰＬＣシステムを用いて、調製用逆相ＨＰＬＣにより精製し、ＲＰ−ＨＰ
ＬＣによって決定するように、＞９５％純度で所望のＤＡＣを得る。
【０２６８】
【化１８】
2010168384.tif 000019
（実施例１５  付加されたＣ末端リジン残基のεアミノ基におけるセクレチンペプチド
の改変。Ｈｉｓ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｕ−
Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−
Ｇｌｕ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−（Ｎε−
ＭＰＡ）−ＮＨ2の調製）
１００μｍｏｌ規模での、改変されたセクレチンペプチドアナログの固相ペプチド合成
を、手動の固相合成、Ｓｙｍｐｈｏｎｙ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒおよ
びＦｍｏｃ保護Ｒｉｎｋ  Ａｍｉｄｅ  ＭＢＨＡを用いて実行する。以下の保護アミノ酸
を、連続的に樹脂に付加する：Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ
−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ
）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂ
ｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−
Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ
−Ｇｌｕ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−Ｏ
Ｈ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ
−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−Ｏ
Ｈ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（
ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏ
ｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｈｉｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ。それらを、Ｎ，Ｎ−
ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中に溶解し、そして配列に従って、Ｏ−ベンゾトリアゾ
ール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−ウロニウムヘキサフルオロホスフ
ェート（ＨＢＴＵ）およびジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）を用いて活性化する
。Ｆｍｏｃ保護基の除去を、２０％（Ｖ／Ｖ）ピペリジンのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミ
ド（ＤＭＦ）溶液を用いて２０分間活性化する（工程１）。Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）基の選択
的脱保護を、手動で実行し、そして５ｍＬのＣＨＣｌ3：ＮＭＭ：ＨＯＡｃ（１８：１：
０．５）中に溶解した３当量のＰｄ（ＰＰｈ3）4の溶液で２時間樹脂を処理することによ
って達成する（工程２）。次いで、この樹脂を、ＣＨＣｌ3（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ中の
２０％  ＨＯＡｃ（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ（６×５ｍＬ）、およびＤＭＦ（６×５ｍＬ）
で洗浄した。次いで、この合成を、３−マレイミドプリピオン酸の添加のために再自動化
する（工程３）。すべてのカップリングの間に、樹脂をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（
ＤＭＦ）で３回洗浄し、そしてイソプロパノールで３回洗浄する。このペプチドを、８５
％  ＴＦＡ／５％  ＴＩＳ／５％  チオアニソールおよび５％のフェノールを用いて樹脂
から切断し、続いて、ドライアイスで冷却されたＥｔ2Ｏにより沈殿させる（工程４）。
生成物を、Ｖａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）調製用バイナリーＨＰＬＣシステム（：３０〜
５５％Ｂ（Ｈ2Ｏ中の０．０４５％  ＴＦＡ（Ａ）およびＣＨ3ＣＮ中の０．０４５％  Ｔ
ＦＡ（Ｂ））の勾配溶出）を用いて、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  １０μのフェニ
ル−ヘキシル、２１ｍｍ×２５ｃｍカラムおよびＵＶ検出器（Ｖａｒｉａｎ  Ｄｙｎａｍ
ａｘ  ＵＶＤ  ＩＩ）（λ２１４および２５４ｎｍ）を用いて、調製用逆相ＨＰＬＣによ
り９．５ｍＬ／分にて１８０分にわたって精製し、ＲＰ−ＨＰＬＣによって決定するよう
に、＞９５％純度で所望のＤＡＣを得る。
【０２６９】
（実施例１６  付加されたＣ末端リジン残基のε−アミノ基におけるクリングル−５の
改変。ＮＡｃ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−（
Ｎε−ＭＰＡ）−ＮＨ2．２ＴＦＡの調製）
１００μｍｏｌ規模での、改変されたクリングル−５ペプチドの固相ペプチド合成を、
手動の固相合成、Ｓｙｍｐｈｏｎｙ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  ＳｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒおよびＦ
ｍｏｃ保護Ｒｉｎｋ  Ａｍｉｄｅ  ＭＢＨＡを用いて実行した。以下の保護アミノ酸を、
連続的に樹脂に付加する：Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔ
Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ
、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐ
ｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ。それらを、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（Ｄ
ＭＦ）中に溶解し、そして配列に従って、Ｏ−ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，
Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−ウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）および
ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）を用いて活性化する。Ｆｍｏｃ保護基の除去を
、２０％（Ｖ／Ｖ）ピペリジンのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）溶液を用いて
２０分間活性化する（工程１）。合成の終りに、無水酢酸を、Ｎ末端をアセチル化するた
めに添加した。Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）基の選択的脱保護を、手動で実行し、そして５ｍＬの
ＣＨＣｌ3：ＮＭＭ：ＨＯＡｃ（１８：１：０．５）中に溶解した３当量のＰｄ（ＰＰｈ3
）4の溶液で２時間樹脂を処理することによって達成する（工程２）。次いで、この樹脂
を、ＣＨＣｌ3（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ中の２０％  ＨＯＡｃ（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ（
６×５ｍＬ）、およびＤＭＦ（６×５ｍＬ）で洗浄した。次いで、この合成を、３−マレ
イミドプリピオン酸の添加のために再自動化する（工程３）。すべてのカップリングの間
に、樹脂をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）で３回洗浄し、そしてイソプロパノ
ールで３回洗浄する。このペプチドを、８５％  ＴＦＡ／５％  ＴＩＳ／５％  チオアニ
ソールおよび５％のフェノールを用いて樹脂から切断し、続いて、ドライアイスで冷却さ
れたＥｔ2Ｏにより沈殿させる（工程４）。生成物を、Ｖａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）調
製用バイナリーＨＰＬＣシステム（：３０〜５５％Ｂ（Ｈ2Ｏ中の０．０４５％  ＴＦＡ
（Ａ）およびＣＨ3ＣＮ中の０．０４５％  ＴＦＡ（Ｂ））の勾配溶出）を用いて、Ｐｈ
ｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ
１０μのフェニル−ヘキシル、２１ｍｍ×２５ｃｍカラムおよびＵＶ検出器（Ｖａｒｉ
ａｎ  Ｄｙｎａｍａｘ  ＵＶＤ  ＩＩ）（λ２１４および２５４ｎｍ）を用いて、調製用
逆相ＨＰＬＣにより９．５ｍＬ／分にて１８０分にわたって精製し、ＲＰ−ＨＰＬＣによ
って決定するように、＞９５％純度で所望のＤＡＣを得る。
【０２７０】
（実施例１７  付加されたＣ末端リジン残基のεアミノ基におけるクリングル−５の改
変。ＮＡｃ−Ｔｙｒ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｔｙ
ｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−（Ｎε−ＭＰＡ）−ＮＨ2．２ＴＦＡの調製）
自動ペプチド合成を使用して、以下の保護アミノ酸を、Ｒｉｎｋ  Ａｍｉｄｅ
ＭＢＨＡ樹脂に連続的に付加した：Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−
Ｔｙｒ（ｔＢｕ）ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢ
ｕ）ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａ
ｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、
Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔ
ｙｒ（ｔＢｕ）ＯＨ（工程１）。樹脂結合アミノ酸のＮ末端におけるＦｍｏｃ基の逆ブロ
ックを、ＤＭＦ中の２０％のピペリジンを用いて約１５〜２０分間実行した。樹脂からの
最終切断を、上記の通りに切断混合物を用いて実行した。生成物を、沈殿により単離し、
そしてＨＰＬＣにより精製し、凍結乾燥の際に白色固体として所望の生成物を得た。Ｌｙ
ｓ（Ａｌｏｃ）基の選択的脱保護を、手動で実行し、そして５ｍＬのＣＨＣｌ3：ＮＭＭ
：ＨＯＡｃ（１８：１：０．５）中に溶解した３当量のＰｄ（ＰＰｈ3）4の溶液で２時間
樹脂を処理することによって達成する（工程２）。次いで、この樹脂を、ＣＨＣｌ3（６
×５ｍＬ）、ＤＣＭ中の２０％  ＨＯＡｃ（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ（６×５ｍＬ）、およ
びＤＭＦ（６×５ｍＬ）で洗浄した。次いで、この合成を、３−マレイミドプリピオン酸
の添加のために再自動化する（工程３）。樹脂切断および生成物の単離を、８５％  ＴＦ
Ａ／５％  ＴＩＳ／５％
チオアニソールおよび５％のフェノールを用いて実行し、続いて、ドライアイスで冷却
されたＥｔ2Ｏにより沈殿させる（工程４）。生成物を、Ｖａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）
調製用バイナリーＨＰＬＣシステム（：３０〜５５％Ｂ（Ｈ2Ｏ中の０．０４５％  ＴＦ
Ａ（Ａ）およびＣＨ3ＣＮ中の０．０４５％  ＴＦＡ（Ｂ））の勾配溶出）を用いて、Ｐ
ｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  １０μのフェニル−ヘキシル、２１ｍｍ×２５ｃｍカラ
ムおよびＵＶ検出器（Ｖａｒｉａｎ
Ｄｙｎａｍａｘ  ＵＶＤ  ＩＩ）（λ２１４および２５４ｎｍ）を用いて、調製用逆相
ＨＰＬＣにより９．５ｍＬ／分にて１８０分にわたって精製した。
【０２７１】
（実施例１８  付加されたＣ末端リジン残基のεアミノ基におけるクリングルの改変。
ＮＡｃ−Ａｒｇ−Ａｓｎ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−
Ｐｒｏ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｔｙｒ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−
Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−（Ｎε−ＭＰＡ）−ＮＨ2．３ＴＦＡの調製
）
自動ペプチド合成を使用して、以下の保護アミノ酸を、Ｒｉｎｋ  Ａｍｉｄｅ
ＭＢＨＡ樹脂に連続的に付加した：Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−
Ｔｙｒ（ｔＢｕ）ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢ
ｕ）ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａ
ｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、
Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔ
ｙｒ（ｔＢｕ）ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐ
ｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−Ｏ
Ｈ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ
（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆ
ｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ（工程１）。樹脂結合アミノ酸のＮ末端のＦｍｏｃ基の
逆ブロックを、ＤＭＦ中の２０％のピペリジンを用いて約１５〜２０分間実行した。酢酸
のカップリングを、アミノ酸のカップリングと類似の条件下で実行した。樹脂からの最終
切断を、上記の通りに切断混合物を用いて実行した。生成物を、沈殿により単離し、そし
て調製用ＨＰＬＣにより精製し、凍結乾燥の際に白色固体として所望の生成物を得た。
【０２７２】
Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）基の選択的脱保護を、手動で実行し、そして５ｍＬのＣＨＣｌ3：
ＮＭＭ：ＨＯＡｃ（１８：１：０．５）中に溶解した３当量のＰｄ（ＰＰｈ3）4の溶液で
２時間樹脂を処理することによって達成した（工程２）。次いで、この樹脂を、ＣＨＣｌ
3（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ中の２０％  ＨＯＡｃ（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ（６×５ｍＬ）
、およびＤＭＦ（６×５ｍＬ）で洗浄した。次いで、この合成を、３−マレイミドプリピ
オン酸の添加のために再自動化した（工程３）。樹脂切断および生成物の単離を、８５％
ＴＦＡ／５％  ＴＩＳ／５％  チオアニソールおよび５％のフェノールを用いて実行し
、続いて、ドライアイスで冷却されたＥｔ2Ｏにより沈殿させる（工程４）。生成物を、
Ｖａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）調製用バイナリーＨＰＬＣシステム（：３０〜５５％Ｂ（
Ｈ2Ｏ中の０．０４５％  ＴＦＡ（Ａ）およびＣＨ3ＣＮ中の０．０４５％  ＴＦＡ（Ｂ）
）の勾配溶出）を用いて、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  １０μのフェニル−ヘキシ
ル、２１ｍｍ×２５ｃｍカラムおよびＵＶ検出器（Ｖａｒｉａｎ  Ｄｙｎａｍａｘ  ＵＶ
Ｄ  ＩＩ）（λ２１４および２５４ｎｍ）を用いて、調製用逆相ＨＰＬＣにより９．５ｍ
Ｌ／分にて１８０分にわたって精製した。
【０２７３】
（実施例１９  付加されたＣ末端リジン残基のεアミノ基におけるクリングル−５の改
変。ＮＡｃ−Ａｒｇ−Ａｓｎ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｇｌ
ｙ−Ｐｒｏ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−  （Ｎε−ＭＰＡ）−ＮＨ2．ＴＦＡの調製）
自動ペプチド合成を使用して、以下の保護アミノ酸を、Ｒｉｎｋ  Ａｍｉｄｅ
ＭＢＨＡ樹脂に連続的に付加した：Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−
Ｔｒｐ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−
ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌ
ｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−
Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ（工程１）。Ｌｙｓ（Ａｌ
ｏｃ）基の選択的脱保護を、手動で実行し、そして５ｍＬのＣＨＣｌ3：ＮＭＭ：ＨＯＡ
ｃ（１８：１：０．５）中に溶解した３当量のＰｄ（ＰＰｈ3）4の溶液で２時間樹脂を処
理することによって達成した（工程２）。次いで、この樹脂を、ＣＨＣｌ3（６×５ｍＬ
）、ＤＣＭ中の２０％  ＨＯＡｃ（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ（６×５ｍＬ）、およびＤＭＦ
（６×５ｍＬ）で洗浄した。次いで、この合成を、３−マレイミドプリピオン酸の添加の
ために再自動化した（工程３）。樹脂切断および生成物の単離を、８５％  ＴＦＡ／５％
ＴＩＳ／５％  チオアニソールおよび５％のフェノールを用いて実行し、続いて、ドラ
イアイスで冷却されたＥｔ2Ｏにより沈殿させる（工程４）。生成物を、Ｖａｒｉａｎ（
Ｒａｉｎｉｎ）調製用バイナリーＨＰＬＣシステム（：３０〜５５％Ｂ（Ｈ2Ｏ中の０．
０４５％  ＴＦＡ（Ａ）およびＣＨ3ＣＮ中の０．０４５％  ＴＦＡ（Ｂ））の勾配溶出
）を用いて、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  １０μのフェニル−ヘキシル、２１ｍｍ
×２５ｃｍカラムおよびＵＶ検出器（Ｖａｒｉａｎ  Ｄｙｎａｍａｘ  ＵＶＤ  ＩＩ）（
λ２１４および２５４ｎｍ）を用いて、調製用逆相ＨＰＬＣにより９．５ｍＬ／分にて１
８０分にわたって精製した。
【０２７４】
（実施例２０  付加されたＣ末端リジン残基のεアミノ基におけるクリングル−５の改
変。ＮＡｃ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−（Ｎε−ＭＰ
Ａ）−ＮＨ2．２ＴＦＡの調製）
自動ペプチド合成を使用して、以下の保護アミノ酸を、Ｒｉｎｋ  Ａｍｉｄｅ
ＭＢＨＡ樹脂に連続的に付加した：Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−
Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔ
Ｂｕ）ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−
Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ（工程１）。樹脂結合アミノ酸のＮ末端におけるＦｍｏｃ基の逆
ブロックを、ＤＭＦ中の２０％のピペリジンを用いて約１５〜２０分間実行した。酢酸の
カップリングを、アミノ酸のカップリングと類似の条件下で実行した。樹脂からの最終切
断を、上記の通りに切断混合物を用いて実行した。生成物を、沈殿により単離し、そして
調製用ＨＰＬＣにより精製し、凍結乾燥の際に白色固体として所望の生成物を得た。Ｌｙ
ｓ（Ａｌｏｃ）基の選択的脱保護を、手動で実行し、そして５ｍＬのＣＨＣｌ3：ＮＭＭ
：ＨＯＡｃ（１８：１：０．５）中に溶解した３当量のＰｄ（ＰＰｈ3）4の溶液で２時間
樹脂を処理することによって達成した（工程２）。次いで、この樹脂を、ＣＨＣｌ3（６
×５ｍＬ）、ＤＣＭ中の２０％  ＨＯＡｃ（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ（６×５ｍＬ）、およ
びＤＭＦ（６×５ｍＬ）で洗浄した。次いで、この合成を、３−マレイミドプリピオン酸
の添加のために再自動化した（工程３）。樹脂切断および生成物の単離を、８５％  ＴＦ
Ａ／５％  ＴＩＳ／５％  チオアニソールおよび５％のフェノールを用いて実行し、続い
て、ドライアイスで冷却されたＥｔ2Ｏにより沈殿させる（工程４）。生成物を、Ｖａｒ
ｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）調製用バイナリーＨＰＬＣシステム（：３０〜５５％Ｂ（Ｈ2Ｏ
中の０．０４５％  ＴＦＡ（Ａ）およびＣＨ3ＣＮ中の０．０４５％  ＴＦＡ（Ｂ））の
勾配溶出）を用いて、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  １０μのフェニル−ヘキシル、
２１ｍｍ×２５ｃｍカラムおよびＵＶ検出器（Ｖａｒｉａｎ  Ｄｙｎａｍａｘ  ＵＶＤ  
ＩＩ）（λ２１４および２５４ｎｍ）を用いて、調製用逆相ＨＰＬＣにより９．５ｍＬ／
分にて１８０分にわたって精製した。
【０２７５】
（実施例２１  付加されたＣ末端リジン残基のεアミノ基におけるクリングル−５の改
変。ＮＡｃ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−（Ｎε−ＭＰ
Ａ）−ＮＨ2．２ＴＦＡの調製）
自動ペプチド合成を使用して、以下の保護アミノ酸を、Ｒｉｎｋ  Ａｍｉｄｅ
ＭＢＨＡ樹脂に連続的に付加した：Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−
Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−Ｏ
Ｈ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ
−Ｐｒｏ−ＯＨ（工程１）。樹脂結合アミノ酸のＮ末端のＦｍｏｃ基における逆ブロック
を、ＤＭＦ中の２０％のピペリジンを用いて約１５〜２０分間実行した。酢酸のカップリ
ングを、アミノ酸のカップリングと類似の条件下で実行した。樹脂からの最終切断を、上
記の通りに切断混合物を用いて実行した。生成物を、沈殿により単離し、そしてＨＰＬＣ
により精製し、凍結乾燥の際に白色固体として所望の生成物を得た。
【０２７６】
Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）基の選択的脱保護を、手動で実行し、そして５ｍＬのＣＨＣｌ3：
ＮＭＭ：ＨＯＡｃ（１８：１：０．５）中に溶解した３当量のＰｄ（ＰＰｈ3）4の溶液で
２時間樹脂を処理することによって達成した（工程２）。次いで、この樹脂を、ＣＨＣｌ
3（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ中の２０％  ＨＯＡｃ（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ（６×５ｍＬ）
、およびＤＭＦ（６×５ｍＬ）で洗浄した。次いで、この合成を、３−マレイミドプリピ
オン酸の添加のために再自動化した（工程３）。樹脂切断および生成物の単離を、８５％
ＴＦＡ／５％  ＴＩＳ／５％  チオアニソールおよび５％のフェノールを用いて実行し
、続いて、ドライアイスで冷却されたＥｔ2Ｏにより沈殿させる（工程４）。生成物を、
Ｖａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）調製用バイナリーＨＰＬＣシステム（：３０〜５５％Ｂ（
Ｈ2Ｏ中の０．０４５％  ＴＦＡ（Ａ）およびＣＨ3ＣＮ中の０．０４５％  ＴＦＡ（Ｂ）
）の勾配溶出）を用いて、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  １０μのフェニル−ヘキシ
ル、２１ｍｍ×２５ｃｍカラムおよびＵＶ検出器（Ｖａｒｉａｎ  Ｄｙｎａｍａｘ  ＵＶ
Ｄ  ＩＩ）（λ２１４および２５４ｎｍ）を用いて、調製用逆相ＨＰＬＣにより９．５ｍ
Ｌ／分にて１８０分にわたって精製した。
【０２７７】
（実施例２２  付加されたＣ末端リジン残基のε−アミノ酸基におけるクリングル−５
の改変。ＮＡｃ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−
（Ｎε−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＮＨ2．２ＴＦＡの調製）
自動ペプチド合成を使用して、以下の保護アミノ酸を、Ｒｉｎｋ  Ａｍｉｄｅ
ＭＢＨＡ樹脂に連続的に付加した：Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−
Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔ
Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ
−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ（工程１）。樹脂結合アミノ酸のＮ
末端におけるＦｍｏｃ基の逆ブロックを、ＤＭＦ中の２０％のピペリジンを用いて約１５
〜２０分間実行した。酢酸のカップリングを、アミノ酸のカップリングと類似の条件下で
実行した。Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）基の選択的脱保護を、手動で実行し、そして５ｍＬのＣＨ
Ｃｌ3：ＮＭＭ：ＨＯＡｃ（１８：１：０．５）中に溶解した３当量のＰｄ（ＰＰｈ3）4
の溶液で２時間樹脂を処理することによって達成した（工程２）。次いで、この樹脂を、
ＣＨＣｌ3（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ中の２０％  ＨＯＡｃ（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ（６×
５ｍＬ）、およびＤＭＦ（６×５ｍＬ）で洗浄した。次いで、この合成を、添加のために
再自動化した（工程３）。次いで、この合成を、ＡＥＥＡ（アミノエトキシエトキシ酢酸
）基および３−マレイミドプロピオン酸（ＭＰＡ）の添加のために再自動化した（工程３
）。樹脂切断および生成物の単離を、８５％
ＴＦＡ／５％  ＴＩＳ／５％  チオアニソールおよび５％のフェノールを用いて実行し
、続いて、ドライアイスで冷却されたＥｔ2Ｏにより沈殿させた（工程４）。生成物を、
Ｖａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）調製用バイナリーＨＰＬＣシステム（：３０〜５５％Ｂ（
Ｈ2Ｏ中の０．０４５％  ＴＦＡ（Ａ）およびＣＨ3ＣＮ中の０．０４５％  ＴＦＡ（Ｂ）
）の勾配溶出）を用いて、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  １０μのフェニル−ヘキシ
ル、２１ｍｍ×２５ｃｍカラムおよびＵＶ検出器（Ｖａｒｉａｎ  Ｄｙｎａｍａｘ  ＵＶ
Ｄ  ＩＩ）（λ２１４および２５４ｎｍ）を用いて、調製用逆相ＨＰＬＣにより９．５ｍ
Ｌ／分にて１８０分にわたって精製した。
【０２７８】
（実施例２３  付加されたＣ末端リジン残基のεアミノ基におけるクリングル−５の改
変。ＮＡｃ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−（Ｎ
ε−ＡＥＥＡn−ＭＰＡ）−ＮＨ2．２ＴＦＡの調製）
自動ペプチド合成を使用して、以下の保護アミノ酸を、Ｒｉｎｋ  Ａｍｉｄｅ
ＭＢＨＡ樹脂に連続的に付加した：Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−
Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔ
Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ
−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ（工程１）。樹脂結合アミノ酸のＮ
末端におけるＦｍｏｃ基の逆ブロックを、ＤＭＦ中の２０％のピペリジンを用いて約１５
〜２０分間実行した。酢酸のカップリングを、アミノ酸のカップリングと類似の条件下で
実行した。
【０２７９】
Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）基の選択的脱保護を、手動で実行し、そして５ｍＬのＣＨＣｌ3：
ＮＭＭ：ＨＯＡｃ（１８：１：０．５）中に溶解した３当量のＰｄ（ＰＰｈ3）4の溶液で
２時間樹脂を処理することによって達成した（工程２）。次いで、この樹脂を、ＣＨＣｌ
3（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ中の２０％  ＨＯＡｃ（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ（６×５ｍＬ）
、およびＤＭＦ（６×５ｍＬ）で洗浄した。この合成を、添加のために再自動化した。次
いで、この合成を、３−マレイミドプリピオン酸（ＭＰＡ）およびＡＥＥＡ（アミノエト
キシエトキシ酢酸）基の添加のために再自動化した（工程３）。樹脂切断および生成物の
単離を、８５％  ＴＦＡ／５％  ＴＩＳ／５％  チオアニソールおよび５％のフェノール
を用いて実行し、続いて、ドライアイスで冷却されたＥｔ2Ｏにより沈殿させる（工程４
）。生成物を、Ｖａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）調製用バイナリーＨＰＬＣシステム（：３
０〜５５％Ｂ（Ｈ2Ｏ中の０．０４５％  ＴＦＡ（Ａ）およびＣＨ3ＣＮ中の０．０４５％
ＴＦＡ（Ｂ））の勾配溶出）を用いて、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  １０μのフ
ェニル−ヘキシル、２１ｍｍ×２５ｃｍカラムおよびＵＶ検出器（Ｖａｒｉａｎ  Ｄｙｎ
ａｍａｘ  ＵＶＤ  ＩＩ）（λ２１４および２５４ｎｍ）を用いて、調製用逆相ＨＰＬＣ
により９．５ｍＬ／分にて１８０分にわたって精製した。
【０２８０】
（実施例２４  付加されたＣ末端リジン残基のεアミノ基におけるＧＬＰ−１の改変。
ＧＬＰ−１（１−３６）−Ｌｙｓ37（Ｎε−ＭＰＡ）−ＮＨ2．５ＴＦＡ；Ｈｉｓ−Ａｓ
ｐ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈ
ｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｖａｌ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌ
ｙ−Ｇｌｎ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−ｌｌｅ−Ａｌａ−Ｔｒｐ−Ｌｅ
ｕ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ（Ｎε−ＭＰＡ）−ＮＨ2．５ＴＦＡの調
製）
自動ペプチド合成を使用して、以下の保護アミノ酸を、Ｒｉｎｋ  Ａｍｉｄｅ
ＭＢＨＡ樹脂に連続的に付加した：Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−
Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（ｔＢｏｃ）−Ｏ
Ｈ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ−ＯＨ、Ｆｍ
ｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−ｌｌｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇ
ｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（ｔＢｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−Ｏ
Ｈ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−
ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙ
ｒ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）
−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓ
ｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、
Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（Ｏｔ
Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｂｏｃ−Ｈｉｓ（Ｎ−Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏ
ｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ
−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯＢｕ）−ＯＨ、Ｂ
ｏｃ−Ｈｉｓ（Ｎ−Ｔｒｔ）−ＯＨ（工程１）。
【０２８１】
Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）基の選択的脱保護を、手動で実行し、そして５ｍＬのＣＨＣｌ3：
ＮＭＭ：ＨＯＡｃ（１８：１：０．５）中に溶解した３当量のＰｄ（ＰＰｈ3）4の溶液で
２時間樹脂を処理することによって達成した（工程２）。次いで、この樹脂を、ＣＨＣｌ
3（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ中の２０％  ＨＯＡｃ（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ（６×５ｍＬ）
、およびＤＭＦ（６×５ｍＬ）で洗浄した。次いで、この合成を、３−マレイミドプリピ
オン酸（ＭＰＡ）の添加のために再自動化した（工程３）。樹脂切断および生成物の単離
を、８５％  ＴＦＡ／５％
ＴＩＳ／５％  チオアニソールおよび５％のフェノールを用いて実行し、続いて、ドラ
イアイスで冷却されたＥｔ2Ｏにより沈殿させる（工程４）。生成物を、Ｖａｒｉａｎ（
Ｒａｉｎｉｎ）調製用バイナリーＨＰＬＣシステム（：３０〜５５％Ｂ（Ｈ2Ｏ中の０．
０４５％  ＴＦＡ（Ａ）およびＣＨ3ＣＮ中の０．０４５％  ＴＦＡ（Ｂ））の勾配溶出
）を用いて、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ
１０μのフェニル−ヘキシル、２１ｍｍ×２５ｃｍカラムおよびＵＶ検出器（Ｖａｒｉ
ａｎ  Ｄｙｎａｍａｘ  ＵＶＤ  ＩＩ）（λ２１４および２５４ｎｍ）を用いて、調製用
逆相ＨＰＬＣにより９．５ｍＬ／分にて１８０分にわたって精製した。生成物は、ジオー
ドアレイ検出器を備えたＨｅｗｌｅｔｔ  Ｐａｃｋａｒｄ  ＬＣＭＳ−１１００シリーズ
分光計を用いかつエレクトロスプレーイオン化を用いるＲＰ−ＨＰＬＣ質量分光計によっ
て決定する場合＞９５％純度を有した。これらの工程は、以下の概略ダイアグラムに図示
される。
【０２８２】
【化１９】
2010168384.tif 000020
（実施例２５  付加されたＣ末端リジン残基のε−アミノ基におけるＧＬＰ−１の改変
。ＧＬＰ−１（１−３６）−Ｌｙｓ37（Ｎε−ＡＥＥＡ−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＮＨ2．
５ＴＦＡ；Ｈｉｓ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ａｌａ−Ｇｌｕ
−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｖａｌ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ
−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−ｌｌｅ
−Ａｌａ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ（Ｎε−ＡＥＥＡ
−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＮＨ2．５ＴＦＡの調製）
自動ペプチド合成を使用して、以下の保護アミノ酸を、Ｒｉｎｋ  Ａｍｉｄｅ
ＭＢＨＡ樹脂に連続的に付加した：Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−
Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（ｔＢｏｃ）−Ｏ
Ｈ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ−ＯＨ、Ｆｍ
ｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−ｌｌｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇ
ｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（ｔＢｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−Ｏ
Ｈ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−
ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙ
ｒ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）
−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓ
ｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、
Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（Ｏｔ
Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｂｏｃ−Ｈｉｓ（Ｎ−Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏ
ｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ
−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、
Ｂｏｃ−Ｈｉｓ（Ｎ−Ｔｒｔ）−ＯＨ（工程１）。
【０２８３】
Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）基の選択的脱保護を、手動で実行し、そして５ｍＬのＣＨＣｌ3：
ＮＭＭ：ＨＯＡｃ（１８：１：０．５）中に溶解した３当量のＰｄ（ＰＰｈ3）4の溶液で
２時間樹脂を処理することによって達成した（工程２）。次いで、この樹脂を、ＣＨＣｌ
3（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ中の２０％  ＨＯＡｃ（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ（６×５ｍＬ）
、およびＤＭＦ（６×５ｍＬ）で洗浄した。次いで、この合成を、２つのＡＥＥＡ（アミ
ノエトキシエトキシ酢酸）基および３−マレイミドプリピオン酸（ＭＰＡ）の添加のため
に再自動化した（工程３）。樹脂切断および生成物の単離を、８５％  ＴＦＡ／５％  Ｔ
ＩＳ／５％  チオアニソールおよび５％のフェノールを用いて実行し、続いて、ドライア
イスで冷却されたＥｔ2Ｏにより沈殿させる（工程４）。生成物を、Ｖａｒｉａｎ（Ｒａ
ｉｎｉｎ）調製用バイナリーＨＰＬＣシステム（：３０〜５５％Ｂ（Ｈ2Ｏ中の０．０４
５％  ＴＦＡ（Ａ）およびＣＨ3ＣＮ中の０．０４５％  ＴＦＡ（Ｂ））の勾配溶出）を
用いて、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  １０μのフェニル−ヘキシル、２１ｍｍ×２
５ｃｍカラムおよびＵＶ検出器（Ｖａｒｉａｎ  Ｄｙｎａｍａｘ  ＵＶＤ  ＩＩ）（λ２
１４および２５４ｎｍ）を用いて、調製用逆相ＨＰＬＣにより９．５ｍＬ／分にて１８０
分にわたって精製した。生成物は、ジオードアレイ検出器を備えたＨｅｗｌｅｔｔ  Ｐａ
ｃｋａｒｄ  ＬＣＭＳ−１１００シリーズ分光計を用いかつエレクトロスプレーイオン化
を用いるＲＰ−ＨＰＬＣ質量分光計によって決定する場合＞９５％純度を有し、ＥＳＩ−
ＭＳ  ｍ／ｚ：Ｃ174Ｈ265Ｎ44Ｏ56（ＭＨ+）、計算値３８６８、実測値［Ｍ＋Ｈ2］2+１
９３４、［Ｍ＋Ｈ3］3+１２９０、［Ｍ＋Ｈ4］4+９６７であった。これらの工程を、以下
の概略ダイアグラムに図示する。
【０２８４】
【化２０】
2010168384.tif 000021
（実施例２６  付加されたＣ末端リジン残基のε−アミノ基におけるＧＬＰ−１の改変
。ＧＬＰ−１（７−３６）−Ｌｙｓ37（Ｎε−ＭＰＡ）−ＮＨ2．４ＴＦＡ；Ｈｉｓ−Ａ
ｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｖａｌ−Ｓｅｒ−Ｓ
ｅｒ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ｐ
ｈｅ−ｌｌｅ−Ａｌａ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ（Ｎ
ε−ＭＰＡ）−ＮＨ2．４ＴＦＡの調製）
自動ペプチド合成を使用して、以下の保護アミノ酸を、Ｒｉｎｋ  Ａｍｉｄｅ
ＭＢＨＡ樹脂に連続的に付加した：Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−
Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（ｔＢｏｃ）−Ｏ
Ｈ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ−ＯＨ、Ｆｍ
ｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−ｌｌｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇ
ｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（ｔＢｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−Ｏ
Ｈ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−
ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙ
ｒ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）
−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓ
ｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、
Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（Ｏｔ
Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｂｏｃ−Ｈｉｓ（Ｎ−Ｔｒｔ）−ＯＨ（工程１
）。
【０２８５】
Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）基の選択的脱保護を、手動で実行し、そして５ｍＬのＣＨＣｌ3：
ＮＭＭ：ＨＯＡｃ（１８：１：０．５）中に溶解した３当量のＰｄ（ＰＰｈ3）4の溶液で
２時間樹脂を処理することによって達成した（工程２）。次いで、この樹脂を、ＣＨＣｌ
3（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ中の２０％  ＨＯＡｃ（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ（６×５ｍＬ）
、およびＤＭＦ（６×５ｍＬ）で洗浄した。次いで、この合成を、３−マレイミドプリピ
オン酸（ＭＰＡ）の添加のために再自動化した（工程３）。樹脂切断および生成物の単離
を、８５％  ＴＦＡ／５％
ＴＩＳ／５％  チオアニソールおよび５％のフェノールを用いて実行し、続いて、ドラ
イアイスで冷却されたＥｔ2Ｏにより沈殿させた（工程４）。生成物を、Ｖａｒｉａｎ（
Ｒａｉｎｉｎ）調製用バイナリーＨＰＬＣシステム（：３０〜５５％Ｂ（Ｈ2Ｏ中の０．
０４５％  ＴＦＡ（Ａ）およびＣＨ3ＣＮ中の０．０４５％  ＴＦＡ（Ｂ））の勾配溶出
）を用いて、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ
１０μのフェニル−ヘキシル、２１ｍｍ×２５ｃｍカラムおよびＵＶ検出器（Ｖａｒｉ
ａｎ  Ｄｙｎａｍａｘ  ＵＶＤ  ＩＩ）（λ２１４および２５４ｎｍ）を用いて、調製用
逆相ＨＰＬＣにより９．５ｍＬ／分にて１８０分にわたって精製した。生成物は、ジオー
ドアレイ検出器を備えたＨｅｗｌｅｔｔ  Ｐａｃｋａｒｄ  ＬＣＭＳ−１１００シリーズ
分光計を用いかつエレクトロスプレーイオン化を用いるＲＰ−ＨＰＬＣ質量分光計によっ
て決定する場合＞９５％純度を有した。
【０２８６】
（実施例２７  付加されたＣ末端リジン残基のε−アミノ酸基におけるＧＬＰ−１の改
変。ＧＬＰ−１（７−３６）−Ｌｙｓ37（Ｎε−ＡＥＥＡ−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＮＨ2
．４ＴＦＡ  Ｈｉｓ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓ
ｐ−Ｖａｌ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−Ａｌａ−Ａｌ
ａ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−ｌｌｅ−Ａｌａ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｇｌ
ｙ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ（Ｎε−ＡＥＥＡ−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＮＨ2．４ＴＦＡの調製）
自動ペプチド合成を使用して、以下の保護アミノ酸を、Ｒｉｎｋ  Ａｍｉｄｅ
ＭＢＨＡ樹脂に連続的に付加した：Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−
Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（ｔＢｏｃ）−Ｏ
Ｈ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ−ＯＨ、Ｆｍ
ｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−ｌｌｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇ
ｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（ｔＢｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−Ｏ
Ｈ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−
ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙ
ｒ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）
−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓ
ｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、
Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（Ｏｔ
Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｂｏｃ−Ｈｉｓ（Ｎ−Ｔｒｔ）−ＯＨ（工程１
）。
【０２８７】
Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）基の選択的脱保護を、手動で実行し、そして５ｍＬのＣＨＣｌ3：
ＮＭＭ：ＨＯＡｃ（１８：１：０．５）中に溶解した３当量のＰｄ（ＰＰｈ3）4の溶液で
２時間樹脂を処理することによって達成した（工程２）。次いで、この樹脂を、ＣＨＣｌ
3（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ中の２０％  ＨＯＡｃ（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ（６×５ｍＬ）
、およびＤＭＦ（６×５ｍＬ）で洗浄した。次いで、この合成を、２つのＡＥＥＡ（アミ
ノエトキシエトキシ酢酸）基および３−マレイミドプリピオン酸（ＭＰＡ）の添加のため
に再自動化した（工程３）。樹脂切断および生成物の単離を、８５％  ＴＦＡ／５％  Ｔ
ＩＳ／５％  チオアニソールおよび５％のフェノールを用いて実行し、続いて、ドライア
イスで冷却されたＥｔ2Ｏにより沈殿させる（工程４）。生成物を、Ｖａｒｉａｎ（Ｒａ
ｉｎｉｎ）調製用バイナリーＨＰＬＣシステム（：３０〜５５％Ｂ（Ｈ2Ｏ中の０．０４
５％  ＴＦＡ（Ａ）およびＣＨ3ＣＮ中の０．０４５％  ＴＦＡ（Ｂ））の勾配溶出）を
用いて、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  １０μのフェニル−ヘキシル、２１ｍｍ×２
５ｃｍカラムおよびＵＶ検出器（Ｖａｒｉａｎ  Ｄｙｎａｍａｘ  ＵＶＤ  ＩＩ）（λ２
１４および２５４ｎｍ）を用いて、調製用逆相ＨＰＬＣにより９．５ｍＬ／分にて１８０
分にわたって精製した。生成物は、ジオードアレイ検出器を備えたＨｅｗｌｅｔｔ  Ｐａ
ｃｋａｒｄ  ＬＣＭＳ−１１００シリーズ分光計を用いかつエレクトロスプレーイオン化
を用いるＲＰ−ＨＰＬＣ質量分光計によって決定する場合＞９５％純度を有した。
【０２８８】
（実施例２８  付加されたＣ末端リジン残基のε−アミノ基におけるＤ−Ａｌａ2ＧＬ
Ｐ−１の改変。Ｄ−Ａｌａ2ＧＬＰ−１（７−３６）−Ｌｙｓ37（Ｎε−ＭＰＡ）−ＮＨ2
．４ＴＦＡ  Ｈｉｓ−ｄ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−
Ａｓｐ−Ｖａｌ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−Ａｌａ−
Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−ｌｌｅ−Ａｌａ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−
Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ（Ｎε−ＭＰＡ）−ＮＨｈ2．４ＴＦＡの調製）
自動ペプチド合成を使用して、以下の保護アミノ酸を、Ｒｉｎｋ  Ａｍｉｄｅ
ＭＢＨＡ樹脂に連続的に付加した：Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−
Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（ｔＢｏｃ）−Ｏ
Ｈ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ−ＯＨ、Ｆｍ
ｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−ｌｌｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇ
ｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（ｔＢｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−Ｏ
Ｈ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−
ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙ
ｒ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）
−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓ
ｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、
Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（Ｏｔ
Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−ｄ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｂｏｃ−Ｈｉｓ（Ｎ−Ｔｒｔ）−ＯＨ（工
程１）。
【０２８９】
Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）基の選択的脱保護を、手動で実行し、そして５ｍＬのＣＨＣｌ3：
ＮＭＭ：ＨＯＡｃ（１８：１：０．５）中に溶解した３当量のＰｄ（ＰＰｈ3）4の溶液で
２時間樹脂を処理することによって達成した（工程２）。次いで、この樹脂を、ＣＨＣｌ
3（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ中の２０％  ＨＯＡｃ（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ（６×５ｍＬ）
、およびＤＭＦ（６×５ｍＬ）で洗浄した。次いで、この合成を、３−マレイミドプリピ
オン酸（ＭＰＡ）の添加のために再自動化した（工程３）。樹脂切断および生成物の単離
を、８５％  ＴＦＡ／５％
ＴＩＳ／５％  チオアニソールおよび５％のフェノールを用いて実行し、続いて、ドラ
イアイスで冷却されたＥｔ2Ｏにより沈殿させる（工程４）。生成物を、Ｖａｒｉａｎ（
Ｒａｉｎｉｎ）調製用バイナリーＨＰＬＣシステム（：３０〜５５％Ｂ（Ｈ2Ｏ中の０．
０４５％  ＴＦＡ（Ａ）およびＣＨ3ＣＮ中の０．０４５％  ＴＦＡ（Ｂ））の勾配溶出
）を用いて、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ
１０μのフェニル−ヘキシル、２１ｍｍ×２５ｃｍカラムおよびＵＶ検出器（Ｖａｒｉ
ａｎ  Ｄｙｎａｍａｘ  ＵＶＤ  ＩＩ）（λ２１４および２５４ｎｍ）を用いて、調製用
逆相ＨＰＬＣにより９．５ｍＬ／分にて１８０分にわたって精製した。生成物は、ジオー
ドアレイ検出器を備えたＨｅｗｌｅｔｔ  Ｐａｃｋａｒｄ  ＬＣＭＳ−１１００シリーズ
分光計を用いかつエレクトロスプレーイオン化を用いるＲＰ−ＨＰＬＣ質量分光計によっ
て決定する場合＞９５％純度を有した。これらの工程を、以下の概略ダイアグラムに図示
する。
【０２９０】
【化２１】
2010168384.tif 000022
（実施例２９  付加されたＣ末端リジン残基のε−アミノ基におけるＤ−Ａｌａ2ＧＬ
Ｐ−１の改変。Ｄ−Ａｌａ2ＧＬＰ−１（７−３６）−Ｌｙｓ37（Ｎε−ＡＥＥＡ−ＡＥ
ＥＡ−ＭＰＡ）−ＮＨ2．４ＴＦＡ  Ｈｉｓ−Ｄ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐ
ｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｖａｌ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｇ
ｌｙ−Ｇｌｎ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−ｌｌｅ−Ａｌａ−Ｔｒｐ−Ｌ
ｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ（Ｎε−ＡＥＥＡ−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）
−ＮＨ2．４ＴＦＡの調製）
自動ペプチド合成を使用して、以下の保護アミノ酸を、Ｒｉｎｋ  Ａｍｉｄｅ
ＭＢＨＡ樹脂に連続的に付加した：Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−
Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（ｔＢｏｃ）−Ｏ
Ｈ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ−ＯＨ、Ｆｍ
ｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−ｌｌｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇ
ｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（ｔＢｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−Ｏ
Ｈ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−
ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙ
ｒ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）
−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓ
ｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、
Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（Ｏｔ
Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−ｄ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｂｏｃ−Ｈｉｓ（Ｎ−Ｔｒｔ）−ＯＨ（工
程１）。
【０２９１】
Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）基の選択的脱保護を、手動で実行し、そして５ｍＬのＣＨＣｌ3：
ＮＭＭ：ＨＯＡｃ（１８：１：０．５）中に溶解した３当量のＰｄ（ＰＰｈ3）4の溶液で
２時間樹脂を処理することによって達成した（工程２）。次いで、この樹脂を、ＣＨＣｌ
3（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ中の２０％  ＨＯＡｃ（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ（６×５ｍＬ）
、およびＤＭＦ（６×５ｍＬ）で洗浄した。次いで、この合成を、２つのＡＥＥＡ（アミ
ノエトキシエトキシ酢酸）基および３−マレイミドプリピオン酸（ＭＰＡ）の添加のため
に再自動化した（工程３）。樹脂切断および生成物の単離を、８５％  ＴＦＡ／５％  Ｔ
ＩＳ／５％  チオアニソールおよび５％のフェノールを用いて実行し、続いて、ドライア
イスで冷却されたＥｔ2Ｏにより沈殿させる（工程４）。生成物を、Ｖａｒｉａｎ（Ｒａ
ｉｎｉｎ）調製用バイナリーＨＰＬＣシステム（：３０〜５５％Ｂ（Ｈ2Ｏ中の０．０４
５％  ＴＦＡ（Ａ）およびＣＨ3ＣＮ中の０．０４５％  ＴＦＡ（Ｂ））の勾配溶出）を
用いて、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  １０μのフェニル−ヘキシル、２１ｍｍ×２
５ｃｍカラムおよびＵＶ検出器（Ｖａｒｉａｎ  Ｄｙｎａｍａｘ  ＵＶＤ  ＩＩ）（λ２
１４および２５４ｎｍ）を用いて、調製用逆相ＨＰＬＣにより９．５ｍＬ／分にて１８０
分にわたって精製した。生成物は、ジオードアレイ検出器を備えたＨｅｗｌｅｔｔ  Ｐａ
ｃｋａｒｄ  ＬＣＭＳ−１１００シリーズ分光計を用いかつエレクトロスプレーイオン化
を用いるＲＰ−ＨＰＬＣ質量分光計によって決定する場合＞９５％純度を有した。これら
の工程を、以下の概略ダイアグラムに図示する。
【０２９２】
【化２２】
2010168384.tif 000023
（実施例３０  付加されたＣ末端リジン残基のε−アミノ基におけるエキセジン−４（
１−３９）の改変。エキセンジン−４（１−３９）−Ｌｙｓ40（Ｎε−ＭＰＡ）−ＮＨ2
；Ｈｉｓ−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ
−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｇｌｎ−Ｍｅｔ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ａｒｇ
−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−ｌｌｅ−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ
−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ
（Ｎε−ＭＰＡ）−ＮＨ2．５ＴＦＡの調製）
自動ペプチド合成を使用して、以下の保護アミノ酸を、Ｒｉｎｋ  Ａｍｉｄｅ
ＭＢＨＡ樹脂に連続的に付加した：Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−
Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ
−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ
−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌ
ｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌ
ｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−
Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−ｌｌｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、Ｆｍｏ
ｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｂｐｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍ
ｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢ
ｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｍｅｔ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ
−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔ
Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏ
ｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−
ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ
（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｂｏｃ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ（工程
１）。
【０２９３】
Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）基の選択的脱保護を、手動で実行し、そして５ｍＬのＣＨＣｌ3：
ＮＭＭ：ＨＯＡｃ（１８：１：０．５）中に溶解した３当量のＰｄ（ＰＰｈ3）4の溶液で
２時間樹脂を処理することによって達成した（工程２）。次いで、この樹脂を、ＣＨＣｌ
3（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ中の２０％  ＨＯＡｃ（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ（６×５ｍＬ）
、およびＤＭＦ（６×５ｍＬ）で洗浄した。次いで、この合成を、３−マレイミドプリピ
オン酸（ＭＰＡ）の添加のために再自動化した（工程３）。樹脂切断および生成物の単離
を、８５％  ＴＦＡ／５％
ＴＩＳ／５％  チオアニソールおよび５％のフェノールを用いて実行し、続いて、ドラ
イアイスで冷却されたＥｔ2Ｏにより沈殿させる（工程４）。生成物を、Ｖａｒｉａｎ（
Ｒａｉｎｉｎ）調製用バイナリーＨＰＬＣシステム（：３０〜５５％Ｂ（Ｈ2Ｏ中の０．
０４５％  ＴＦＡ（Ａ）およびＣＨ3ＣＮ中の０．０４５％  ＴＦＡ（Ｂ））の勾配溶出
）を用いて、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ
１０μのフェニル−ヘキシル、２１ｍｍ×２５ｃｍカラムおよびＵＶ検出器（Ｖａｒｉ
ａｎ  Ｄｙｎａｍａｘ  ＵＶＤ  ＩＩ）（λ２１４および２５４ｎｍ）を用いて、調製用
逆相ＨＰＬＣにより９．５ｍＬ／分にて１８０分にわたって精製した。生成物は、ジオー
ドアレイ検出器を備えたＨｅｗｌｅｔｔ  Ｐａｃｋａｒｄ  ＬＣＭＳ−１１００シリーズ
分光計を用いかつエレクトロスプレーイオン化を用いるＲＰ−ＨＰＬＣ質量分光計によっ
て決定する場合＞９５％純度を有した。これらの工程を、以下の概略ダイアグラムに図示
する。
【０２９４】
【化２３】
2010168384.tif 000024
（実施例３１  付加されたＣ末端リジン残基のε−アミノ基におけるエキセンジン−４
（１−３９）の改変。エキセジン４（１−３９）−Ｌｙｓ40（Ｎε−ＡＥＥＡ−ＡＥＥＡ
−ＭＰＡ）−ＮＨ2．５ＴＦＡ；Ｈｉｓ−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔ
ｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｇｌｎ−Ｍｅｔ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｇ
ｌｕ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−ｌｌｅ−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｌ
ｙｓ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐ
ｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ（Ｎε−ＡＥＥＡ−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＮＨ2．５ＴＦ
Ａ
自動ペプチド合成を使用して、以下の保護アミノ酸を、Ｒｉｎｋ  Ａｍｉｄｅ
ＭＢＨＡ樹脂に連続的に付加した：Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−
Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ
−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ
−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒ
ｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒ
ｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−
Ｔｒｐ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−ｌｌｅ−ＯＨ、Ｆｍｏ
ｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｂｐｆ）−ＯＨ、Ｆｍ
ｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、
Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ
−Ｍｅｔ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｏ
Ｈ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（
ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−
ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ
−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｂｏｃ−Ｈｉ
ｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ（工程１）。
【０２９５】
Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）基の選択的脱保護を、手動で実行し、そして５ｍＬのＣＨＣｌ3：
ＮＭＭ：ＨＯＡｃ（１８：１：０．５）中に溶解した３当量のＰｄ（ＰＰｈ3）4の溶液で
２時間樹脂を処理することによって達成した（工程２）。次いで、この樹脂を、ＣＨＣｌ
3（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ中の２０％  ＨＯＡｃ（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ（６×５ｍＬ）
、およびＤＭＦ（６×５ｍＬ）で洗浄した。次いで、この合成を、２つのＡＥＥＡ（アミ
ノエトキシエトキシ酢酸）基および３−マレイミドプリピオン酸（ＭＰＡ）の添加のため
に再自動化した（工程３）。樹脂切断および生成物の単離を、８５％  ＴＦＡ／５％  Ｔ
ＩＳ／５％  チオアニソールおよび５％のフェノールを用いて実行し、続いて、ドライア
イスで冷却されたＥｔ2Ｏにより沈殿させる（工程４）。生成物を、Ｖａｒｉａｎ（Ｒａ
ｉｎｉｎ）調製用バイナリーＨＰＬＣシステム（：３０〜５５％Ｂ（Ｈ2Ｏ中の０．０４
５％  ＴＦＡ（Ａ）およびＣＨ3ＣＮ中の０．０４５％  ＴＦＡ（Ｂ））の勾配溶出）を
用いて、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  １０μのフェニル−ヘキシル、２１ｍｍ×２
５ｃｍカラムおよびＵＶ検出器（Ｖａｒｉａｎ  Ｄｙｎａｍａｘ  ＵＶＤ  ＩＩ）（λ２
１４および２５４ｎｍ）を用いて、調製用逆相ＨＰＬＣにより９．５ｍＬ／分にて１８０
分にわたって精製した。生成物は、ジオードアレイ検出器を備えたＨｅｗｌｅｔｔ  Ｐａ
ｃｋａｒｄ  ＬＣＭＳ−１１００シリーズ分光計を用いかつエレクトロスプレーイオン化
を用いるＲＰ−ＨＰＬＣ質量分光計によって決定する場合＞９５％純度を有した。これら
の工程を、以下の概略ダイアグラムに図示する。
【０２９６】
【化２４】
2010168384.tif 000025
（実施例３２  付加されたＣ末端リジン残基のε−アミノ基におけるエキセンジン−３
（１−３９）の改変。エキセンジン−３（１−３９）−Ｌｙｓ40（Ｎε−ＭＰＡ）−ＮＨ
2．５ＴＦＡ；Ｈｉｓ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａ
ｓｐ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｇｌｎ−Ｍｅｔ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｖ
ａｌ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−ｌｌｅ−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ｇ
ｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓ
ｅｒ−Ｌｙｓ（Ｎε−ＭＰＡ）−ＮＨ2．５ＴＦＡの調製）
自動ペプチド合成を使用して、以下の保護アミノ酸を、Ｒｉｎｋ  Ａｍｉｄｅ
ＭＢＨＡ樹脂に連続的に付加した：Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−
Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ
−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ
−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌ
ｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌ
ｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−
Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−ｌｌｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、Ｆｍｏ
ｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｂｐｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍ
ｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢ
ｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｍｅｔ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ
−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔ
Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏ
ｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−
ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ
（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｂｏｃ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）
−ＯＨ（工程１）。
【０２９７】
Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）基の選択的脱保護を、手動で実行し、そして５ｍＬのＣＨＣｌ3：
ＮＭＭ：ＨＯＡｃ（１８：１：０．５）中に溶解した３当量のＰｄ（ＰＰｈ3）4の溶液で
２時間樹脂を処理することによって達成した（工程２）。次いで、この樹脂を、ＣＨＣｌ
3（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ中の２０％  ＨＯＡｃ（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ（６×５ｍＬ）
、およびＤＭＦ（６×５ｍＬ）で洗浄した。次いで、この合成を、３−マレイミドプリピ
オン酸（ＭＰＡ）の添加のために再自動化した（工程３）。樹脂切断および生成物の単離
を、８５％  ＴＦＡ／５％
ＴＩＳ／５％  チオアニソールおよび５％のフェノールを用いて実行し、続いて、ドラ
イアイスで冷却されたＥｔ2Ｏにより沈殿させる（工程４）。生成物を、Ｖａｒｉａｎ（
Ｒａｉｎｉｎ）調製用バイナリーＨＰＬＣシステム（：３０〜５５％Ｂ（Ｈ2Ｏ中の０．
０４５％  ＴＦＡ（Ａ）およびＣＨ3ＣＮ中の０．０４５％  ＴＦＡ（Ｂ））の勾配溶出
）を用いて、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ
１０μのフェニル−ヘキシル、２１ｍｍ×２５ｃｍカラムおよびＵＶ検出器（Ｖａｒｉ
ａｎ  Ｄｙｎａｍａｘ  ＵＶＤ  ＩＩ）（λ２１４および２５４ｎｍ）を用いて、調製用
逆相ＨＰＬＣにより９．５ｍＬ／分にて１８０分にわたって精製した。生成物は、ジオー
ドアレイ検出器を備えたＨｅｗｌｅｔｔ  Ｐａｃｋａｒｄ  ＬＣＭＳ−１１００シリーズ
分光計を用いかつエレクトロスプレーイオン化を用いるＲＰ−ＨＰＬＣ質量分光計によっ
て決定する場合＞９５％純度を有した。これらの工程を、以下の概略ダイアグラムに図示
する。
【０２９８】
【化２５】
2010168384.tif 000026
（実施例３３  付加されたＣ末端リジン残基のε−アミノ基におけるエキセンジン−３
（１−３９）の改変。エキセンジン−３（１−３９）−Ｌｙｓ40（Ｎε−ＡＥＥＡ−ＡＥ
ＥＡ−ＭＰＡ）−ＮＨ2．５ＴＦＡ；Ｈｉｓ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ
−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｇｌｎ−Ｍｅｔ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ
−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−ｌｌｅ−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ
−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ
−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ（Ｎε−ＡＥＥＡ−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）ＮＨ2．５Ｔ
ＦＡの調製）
自動ペプチド合成を使用して、以下の保護アミノ酸を、Ｒｉｎｋ  Ａｍｉｄｅ
ＭＢＨＡ樹脂に連続的に付加した：Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−
Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ
−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ
−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌ
ｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌ
ｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−
Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−ｌｌｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、Ｆｍｏ
ｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｂｐｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍ
ｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢ
ｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｍｅｔ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ
−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔ
Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏ
ｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−
ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（
ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｂｏｃ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−
ＯＨ（工程１）。
【０２９９】
Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）基の選択的脱保護を、手動で実行し、そして５ｍＬのＣＨＣｌ3：
ＮＭＭ：ＨＯＡｃ（１８：１：０．５）中に溶解した３当量のＰｄ（ＰＰｈ3）4の溶液で
２時間樹脂を処理することによって達成した（工程２）。次いで、この樹脂を、ＣＨＣｌ
3（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ中の２０％  ＨＯＡｃ（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ（６×５ｍＬ）
、およびＤＭＦ（６×５ｍＬ）で洗浄した。次いで、この合成を、２つのＡＥＥＡ（アミ
ノエトキシエトキシ酢酸）基および３−マレイミドプリピオン酸（ＭＰＡ）の添加のため
に再自動化した（工程３）。樹脂切断および生成物の単離を、８５％  ＴＦＡ／５％  Ｔ
ＩＳ／５％  チオアニソールおよび５％のフェノールを用いて実行し、続いて、ドライア
イスで冷却されたＥｔ2Ｏにより沈殿させる（工程４）。生成物を、Ｖａｒｉａｎ（Ｒａ
ｉｎｉｎ）調製用バイナリーＨＰＬＣシステム（：３０〜５５％Ｂ（Ｈ2Ｏ中の０．０４
５％  ＴＦＡ（Ａ）およびＣＨ3ＣＮ中の０．０４５％  ＴＦＡ（Ｂ））の勾配溶出）を
用いて、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  １０μのフェニル−ヘキシル、２１ｍｍ×２
５ｃｍカラムおよびＵＶ検出器（Ｖａｒｉａｎ  Ｄｙｎａｍａｘ  ＵＶＤ  ＩＩ）（λ２
１４および２５４ｎｍ）を用いて、調製用逆相ＨＰＬＣにより９．５ｍＬ／分にて１８０
分にわたって精製した。生成物は、ジオードアレイ検出器を備えたＨｅｗｌｅｔｔ  Ｐａ
ｃｋａｒｄ  ＬＣＭＳ−１１００シリーズ分光計を用いかつエレクトロスプレーイオン化
を用いるＲＰ−ＨＰＬＣ質量分光計によって決定する場合＞９５％純度を有した。
【０３００】
（実施例３４  Ｃ末端におけるＨＩＶ−１  ＤＰ  １７８の改変。改変されたＨＩＶ−
１  ＤＰ  １７８抗融合誘導ペプチド  Ｔｙｒ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−ｌｌｅ−Ｈｉ
ｓ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−ｌｌｅ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｓｅｒ−Ｇｌｎ−Ａｓｎ−Ｇｌｕ−Ｇｌ
ｕ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｌｅ
ｕ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｔｒｐ−Ａｓｎ−Ｔｒｐ−Ｐｈ
ｅ−Ｌｙｓ−（Ｎε−ＭＰＡ）−ＮＨ2の調製）
自動ペプチド合成を用いて、以下の保護アミノ酸を、Ｒｉｎｋ  Ａｍｉｄｅ  ＭＢＨＡ
樹脂に連続的に付加した：Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｍｔｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ
、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−
Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ
、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂ
ｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ
−Ｇｌｕ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏ
ｃ−Ｇｌｕ（Ｔｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（
ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｏ
Ｈ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ
−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔ
ｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ｔＢｕ）−ＯＨ
、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−ｌｌｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−Ｏ
Ｈ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ
−ｌｌｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏ
ｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨおよびＢｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ。手動合成を、残り
の工程について使用する：Ｍｔｔ基の選択的除去およびＤＭＦ中のＨＢＴＵ／ＨＯＢｔ／
ＤＩＥＡ活性を用いるマレイミドプロピオン酸（ＭＰＡ）のカップリング。標的分子を、
樹脂から除去する；生成物を沈殿により単離し、そして調製用ＨＰＬＣにより精製して、
所望の生成物を凍結乾燥の際に白色固体として得る。
【０３０１】
（実施例３５  Ｃ末端におけるＨＩＶ−１  ＤＰ  １０７の改変。改変されたＨＩＶ−
１  ＤＰ  １０７抗融合誘導ペプチド  Ａｓｎ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ａｌ
ａ−ｌｌｅ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｌｅ
ｕ−Ｔｈｒ−Ｖａｌ−Ｔｒｐ−Ｇｌｕ−ｌｌｅ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ａｌ
ａ−Ａｒｇ−ｌｌｅ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ｌｙ
ｓ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−（Ｎε−ＭＰＡ）−ＮＨ2の調製）
自動ペプチド合成を用いて、以下の保護アミノ酸を、Ｒｉｎｋ  Ａｍｉｄｅ  ＭＢＨＡ
樹脂に連続的に付加した：Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｍｔｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒ
ｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、
Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂ
ｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−
Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−ｌｌｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（
Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏ
ｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−
ＯＨ、Ｆｍｏｃ−ｌｌｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ
（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍ
ｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆ
ｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ
）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇ
ｌｕ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−ｌｌｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−
Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ
−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ。手動合成を、残りの工
程について使用する：Ｍｔｔ基の選択的除去およびＤＭＦ中のＨＢＴＵ／ＨＯＢｔ／ＤＩ
ＥＡ活性を用いるマレイミドプロピオン酸（ＭＰＡ）のカップリング。標的アナログを、
樹脂から除去する；生成物を沈殿により単離し、そして調製用ＨＰＬＣにより精製して、
所望の生成物を凍結乾燥の際に白色固体として得る。
【０３０２】
（２．Ｎ末端における治療用ペプチドの改変）
（実施例３６  付加されたＮ末端リジン残基のε−アミノ基におけるＲＳＶペプチドの
改変。（Ｎε−ＭＰＡ）−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−ｌｌｅ−Ｔｈｒ−ｌｌｅ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−
Ｓｅｒ−Ａｓｎ−ｌｌｅ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ａｓｎ−Ｌｙｓ−Ｍｅｔ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ−
Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−ｌｌｅ−Ｌｙｓ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−
Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ａｌａ−Ｖａｌの調製）
１００μｍｏｌの規模での、改変されたＲＳＶペプチドの固相ペプチド合成を、手動固
相合成、Ｓｙｍｐｈｏｎｙ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  ＳｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒおよびＦｍｏｃ保
護Ｒｉｎｋ  Ａｍｉｄｅ  ＭＢＨＡを用いて実行する。以下の保護アミノ酸を、樹脂に連
続的に付加する：Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ
（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−
ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏ
ｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−
ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−ｌｌｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ
−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙ
ｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａ
ｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｍｅｔ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、
Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌ
ｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−ｌｌｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、
Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ｔＢ
ｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−ｌｌｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−
ｌｌｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）−ＯＨ。それら
を、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中に溶解させ、そして配列に従って、Ｏ−
ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフ
ルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）およびジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）を用い
て活性化する。Ｆｍｏｃ保護基の除去を、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中の
２０％（Ｖ／Ｖ）ピペリジンの溶液を用いて２０分間で達成する（工程１）。Ｌｙｓ（Ａ
ｌｏｃ）基の選択的脱保護を、手動で実行し、そして５ｍＬのＣＨＣｌ３：ＮＭＭ：ＨＯ
Ａｃ（１８：１：０．５）中に溶解した３当量のＰｄ（ＰＰｈ３）４の溶液で２時間樹脂
を処理することによって達成する（工程２）。次いで、この樹脂を、ＣＨＣｌ3（６×５
ｍＬ）、ＤＣＭ中の２０％
ＨＯＡｃ（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ（６×５ｍＬ）、およびＤＭＦ（６×５ｍＬ）で洗浄
する。次いで、この合成を、３−マレイミドプリピオン酸の添加のために再自動化する（
工程３）。すべてのカップリングの間に、樹脂をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ
）で３回洗浄し、そしてイソプロパノールで３回洗浄する。このペプチドを、８５％  Ｔ
ＦＡ／５％  ＴＩＳ／５％  チオアニソールおよび５％のフェノールを用いて樹脂から切
断し、続いて、ドライアイスで冷却されたＥｔ２Ｏにより沈殿させる（工程４）。生成物
を、Ｖａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）調製用バイナリーＨＰＬＣシステム（：３０〜５５％
Ｂ（Ｈ2Ｏ中の０．０４５％  ＴＦＡ（Ａ）およびＣＨ3ＣＮ中の０．０４５％  ＴＦＡ（
Ｂ））の勾配溶出）を用いて、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  １０μのフェニル−ヘ
キシル、２１ｍｍ×２５ｃｍカラムおよびＵＶ検出器（Ｖａｒｉａｎ  Ｄｙｎａｍａｘ  
ＵＶＤ  ＩＩ）（λ２１４および２５４ｎｍ）を用いて、調製用逆相ＨＰＬＣにより９．
５ｍＬ／分にて１８０分にわたって精製し、ＲＰ−ＨＰＬＣによって決定するように、＞
９５％純度で所望のＤＡＣを得る。
【０３０３】
（実施例３７  付加されたＮ末端リジン残基のε−アミノ基におけるニューロペプチド
Ｙの改変。（Ｎ−εＭＰＡ）−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｇ
ｌｕ−Ａｓｎ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ａｓｐ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ａ
ｓｐ−Ｍｅｔ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ａｌａ−Ｌｅｕの調製）
１００μｍｏｌの規模での、改変されたニューロペプチド  Ｙの固相ペプチド合成を、
手動固相合成、Ｓｙｍｐｈｏｎｙ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  ＳｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒおよびＦｍ
ｏｃ保護Ｒｉｎｋ  Ａｍｉｄｅ  ＭＢＨＡを用いて実行した。以下の保護アミノ酸を、樹
脂に連続的に付加する：Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−
Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢ
ｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−
Ｍｅｔ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ｔＢｕ）−ＯＨ
、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏ
ｃ−Ａｓｐ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−
ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ
（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍ
ｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）
−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）−ＯＨ。それらを、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミ
ド（ＤＭＦ）中に溶解させ、そして配列に従って、Ｏ−ベンゾトリアゾール−１−イル−
Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）
およびジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）を用いて活性化する。Ｆｍｏｃ保護基の
除去を、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中の２０％（Ｖ／Ｖ）ピペリジンの溶
液を用いて２０分間で達成する（工程１）。Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）基の選択的脱保護を、手
動で実行し、そして５ｍＬのＣＨＣｌ３：ＮＭＭ：ＨＯＡｃ（１８：１：０．５）中に溶
解した３当量のＰｄ（ＰＰｈ３）４の溶液で２時間樹脂を処理することによって達成する
（工程２）。次いで、この樹脂を、ＣＨＣｌ3（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ中の２０％  ＨＯ
Ａｃ（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ（６×５ｍＬ）、およびＤＭＦ（６×５ｍＬ）で洗浄する。
次いで、この合成を、３−マレイミドプリピオン酸の添加のために再自動化する（工程３
）。すべてのカップリングの間に、樹脂をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）で３
回洗浄し、そしてイソプロパノールで３回洗浄する。このペプチドを、８５％  ＴＦＡ／
５％  ＴＩＳ／５％  チオアニソールおよび５％のフェノールを用いて樹脂から切断し、
続いて、ドライアイスで冷却されたＥｔ２Ｏにより沈殿させる（工程４）。生成物を、Ｖ
ａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）調製用バイナリーＨＰＬＣシステム（：３０〜５５％Ｂ（Ｈ
2Ｏ中の０．０４５％  ＴＦＡ（Ａ）およびＣＨ3ＣＮ中の０．０４５％
ＴＦＡ（Ｂ））の勾配溶出）を用いて、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  １０μのフ
ェニル−ヘキシル、２１ｍｍ×２５ｃｍカラムおよびＵＶ検出器（Ｖａｒｉａｎ  Ｄｙｎ
ａｍａｘ  ＵＶＤ  ＩＩ）（λ２１４および２５４ｎｍ）を用いて、調製用逆相ＨＰＬＣ
により９．５ｍＬ／分にて１８０分にわたって精製し、ＲＰ−ＨＰＬＣによって決定する
ように、＞９５％純度で所望のＤＡＣを得る。
【０３０４】
（実施例３８  付加されたＮ末端リジン残基のε−アミノ基におけるニューロペプチド
Ｙの改変。（Ｎ−εＭＰＡ）−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ａ
ｓｐ−Ａｓｎ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ａｓｐ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ａ
ｓｐ−Ｍｅｔ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ａｌａ−Ｌｅｕの調製）
１００μｍｏｌの規模での、改変されたニューロペプチド  Ｙの固相ペプチド合成を、
手動固相合成、Ｓｙｍｐｈｏｎｙ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  ＳｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒおよびＦｍ
ｏｃ保護Ｒｉｎｋ  Ａｍｉｄｅ  ＭＢＨＡを用いて実行する。以下の保護アミノ酸を、樹
脂に連続的に付加する：Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−
Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢ
ｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−
Ｍｅｔ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ｔＢｕ）−ＯＨ
、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏ
ｃ−Ａｓｐ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−
ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ
（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍ
ｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）
−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）−ＯＨ。それらを、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミ
ド（ＤＭＦ）中に溶解させ、そして配列に従って、Ｏ−ベンゾトリアゾール−１−イル−
Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）
およびジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）を用いて活性化する。Ｆｍｏｃ保護基の
除去を、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中の２０％（Ｖ／Ｖ）ピペリジンの溶
液を用いて２０分間で達成する（工程１）。Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）基の選択的脱保護を、手
動で実行し、そして５ｍＬのＣＨＣｌ３：ＮＭＭ：ＨＯＡｃ（１８：１：０．５）中に溶
解した３当量のＰｄ（ＰＰｈ３）４の溶液で２時間樹脂を処理することによって達成する
（工程２）。次いで、この樹脂を、ＣＨＣｌ3（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ中の２０％  ＨＯ
Ａｃ（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ（６×５ｍＬ）、およびＤＭＦ（６×５ｍＬ）で洗浄する。
次いで、この合成を、３−マレイミドプリピオン酸の添加のために再自動化する（工程３
）。すべてのカップリングの間に、樹脂をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）で３
回洗浄し、そしてイソプロパノールで３回洗浄する。このペプチドを、８５％  ＴＦＡ／
５％  ＴＩＳ／５％  チオアニソールおよび５％のフェノールを用いて樹脂から切断し、
続いて、ドライアイスで冷却されたＥｔ２Ｏにより沈殿させる（工程４）。生成物を、Ｖ
ａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）調製用バイナリーＨＰＬＣシステム（：３０〜５５％Ｂ（Ｈ
2Ｏ中の０．０４５％  ＴＦＡ（Ａ）およびＣＨ3ＣＮ中の０．０４５％
ＴＦＡ（Ｂ））の勾配溶出）を用いて、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  １０μのフ
ェニル−ヘキシル、２１ｍｍ×２５ｃｍカラムおよびＵＶ検出器（Ｖａｒｉａｎ  Ｄｙｎ
ａｍａｘ  ＵＶＤ  ＩＩ）（λ２１４および２５４ｎｍ）を用いて、調製用逆相ＨＰＬＣ
により９．５ｍＬ／分にて１８０分にわたって精製し、ＲＰ−ＨＰＬＣによって決定する
ように、＞９５％純度で所望のＤＡＣを得る。
【０３０５】
（実施例３９  付加されたＮ末端リジン残基のεアミノ基におけるＤｙｎ  Ａ１−１３
の改変−（Ｎε−ＭＰＡ）−Ｄｙｎ  Ａ  １−１３−ＮＨ2  （Ｎε−ＭＰＡ）−Ｌｙｓ
−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−ｌｌｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ
−Ｌｙｓ−Ｌｅｕの合成）
１００μｍｏｌの規模での、改変されたＤｙｎ  Ａ  １−１３アナログの固相ペプチド
合成を、手動固相合成、Ｓｙｍｐｈｏｎｙ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒお
よびＦｍｏｃ保護Ｒｉｎｋ  Ａｍｉｄｅ  ＭＢＨＡを用いて実行する。以下の保護アミノ
酸を、樹脂に連続的に付加する：Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ
−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒ
ｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−ｌｌｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆ
ｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、
Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ
、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）−ＯＨ。それらを、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（Ｄ
ＭＦ）中に溶解させ、そして配列に従って、Ｏ−ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ
，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）および
ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）を用いて活性化する。Ｆｍｏｃ保護基の除去を
、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中の２０％（Ｖ／Ｖ）ピペリジンの溶液を用
いて２０分間で達成する。Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）基の選択的脱保護を、手動で実行し、そし
て５ｍＬのＣＨＣｌ３：ＮＭＭ：ＨＯＡｃ（１８：１：０．５）中に溶解した３当量のＰ
ｄ（ＰＰｈ３）４の溶液で２時間樹脂を処理することによって達成する（工程２）。次い
で、この樹脂を、ＣＨＣｌ3（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ中の２０％  ＨＯＡｃ（６×５ｍＬ
）、ＤＣＭ（６×５ｍＬ）、およびＤＭＦ（６×５ｍＬ）で洗浄する。次いで、この合成
を、３−マレイミドプリピオン酸の添加のために再自動化する（工程３）。すべてのカッ
プリングの間に、樹脂をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）で３回洗浄し、そして
イソプロパノールで３回洗浄する。このペプチドを、８５％  ＴＦＡ／５％  ＴＩＳ／５
％  チオアニソールおよび５％のフェノールを用いて樹脂から切断し、続いて、ドライア
イスで冷却されたＥｔ２Ｏにより沈殿させる（工程４）。生成物を、Ｖａｒｉａｎ（Ｒａ
ｉｎｉｎ）調製用バイナリーＨＰＬＣシステム（：３０〜５５％Ｂ（Ｈ2Ｏ中の０．０４
５％  ＴＦＡ（Ａ）およびＣＨ3ＣＮ中の０．０４５％  ＴＦＡ（Ｂ））の勾配溶出）を
用いて、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  １０μのフェニル−ヘキシル、２１ｍｍ×２
５ｃｍカラムおよびＵＶ検出器（Ｖａｒｉａｎ  Ｄｙｎａｍａｘ  ＵＶＤ  ＩＩ）（λ２
１４および２５４ｎｍ）を用いて、調製用逆相ＨＰＬＣにより９．５ｍＬ／分にて１８０
分にわたって精製し、ＲＰ−ＨＰＬＣによって決定するように、＞９５％純度で所望のＤ
ＡＣを得る。
【０３０６】
（実施例４０  Ｎ末端グリシンにおけるＤｙｎ  Ａ  ２−１７−ＮＨ2の改変−ＭＰＡ
−ＡＥＡ3−Ｄｙｎ  Ａ  ２−１７−ＮＨ2  （ＭＰＡ−ＡＥＡ−ＡＥＡ−ＡＥＡ）−Ｇｌ
ｙ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−ｌｌｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ−Ｌｅ
ｕ−Ｌｙｓ−Ｔｒｐ−Ａｓｐ−Ａｓｎ−Ｇｌｕの合成）
自動ペプチド合成を用いて、以下の保護アミノ酸およびマレイミドを、Ｒｉｎｋ  Ａｍ
ｉｄｅ  ＭＢＨＡ樹脂に連続的に付加させた：Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍ
ｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｒ
ｐ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆ
ｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ
）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−ｌｌｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａ
ｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−
Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−ＡＥＡ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−ＡＥＡ−
ＯＨ、Ｆｍｏｃ−ＡＥＡ−ＯＨおよびＭＰＡ。次いで、標的ダイノルフィンアナログを、
樹脂から除去した；生成物を、沈殿によって単離し、そして調製用ＨＰＬＣにより精製し
、所望の生成物を凍結乾燥の際に３２％の収率で淡黄色固体として得た。分析的ＨＰＬＣ
は、生成物が、Ｒｔ＝３３．４４分で＞９５％純度であることを示した。ＥＳＩ−ＭＳ  
ｍ／ｚ：Ｃ109Ｈ172Ｎ35Ｏ29（ＭＨ+）、計算値２４３６．８、実測値ＭＨ3+８１３．６
。
【０３０７】
【化２６】
2010168384.tif 000027
（実施例４２  付加されたＮ末端リジン残基のε−アミノ基におけるクリングル−５の
改変。（Ｎε−ＭＰＡ）−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−
Ｔｙｒ−ＮＨ2．２ＴＦＡの調製）
１００μｍｏｌの規模での、改変されたクリングル−５アナログの固相ペプチド合成を
、手動固相合成、Ｓｙｍｐｈｏｎｙ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  ＳｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒおよびＦ
ｍｏｃ保護Ｒｉｎｋ  Ａｍｉｄｅ  ＭＢＨＡを用いて実行する。以下の保護アミノ酸を、
樹脂に連続的に付加する：Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ｔＢ
ｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−
Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ
、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）−ＯＨ。それらを、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（Ｄ
ＭＦ）中に溶解させ、そして配列に従って、Ｏ−ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ
，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）および
ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）を用いて活性化する。Ｆｍｏｃ保護基の除去を
、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中の２０％（Ｖ／Ｖ）ピペリジンの溶液を用
いて２０分間で達成する（工程１）。Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）基の選択的脱保護を、手動で実
行し、そして５ｍＬのＣＨＣｌ３：ＮＭＭ：ＨＯＡｃ（１８：１：０．５）中に溶解した
３当量のＰｄ（ＰＰｈ３）４の溶液で２時間樹脂を処理することによって達成する（工程
２）。次いで、この樹脂を、ＣＨＣｌ3（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ中の２０％  ＨＯＡｃ（
６×５ｍＬ）、ＤＣＭ（６×５ｍＬ）、およびＤＭＦ（６×５ｍＬ）で洗浄する。次いで
、この合成を、３−マレイミドプリピオン酸の添加のために再自動化する（工程３）。す
べてのカップリングの間に、樹脂をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）で３回洗浄
し、そしてイソプロパノールで３回洗浄する。このペプチドを、８５％  ＴＦＡ／５％  
ＴＩＳ／５％  チオアニソールおよび５％のフェノールを用いて樹脂から切断し、続いて
、ドライアイスで冷却されたＥｔ２Ｏにより沈殿させる（工程４）。生成物を、Ｖａｒｉ
ａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）調製用バイナリーＨＰＬＣシステム（：３０〜５５％Ｂ（Ｈ2Ｏ中
の０．０４５％  ＴＦＡ（Ａ）およびＣＨ3ＣＮ中の０．０４５％  ＴＦＡ（Ｂ））の勾
配溶出）を用いて、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  １０μのフェニル−ヘキシル、２
１ｍｍ×２５ｃｍカラムおよびＵＶ検出器（Ｖａｒｉａｎ  Ｄｙｎａｍａｘ  ＵＶＤ  Ｉ
Ｉ）（λ２１４および２５４ｎｍ）を用いて、調製用逆相ＨＰＬＣにより９．５ｍＬ／分
にて１８０分にわたって精製し、ＲＰ−ＨＰＬＣによって決定するように、＞９５％純度
で所望のＤＡＣを得る。
【０３０８】
（実施例４３  Ｎ末端プロリンにおけるクリングル−５の改変。（ＭＰＡ−ＡＥＥＡ）
−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−ＮＨ2．２ＴＦ
Ａの調製）
自動ペプチド合成を用いて、以下の保護アミノ酸を、Ｒｉｎｋ  Ａｍｉｄｅ  ＭＢＨＡ
樹脂に連続的に付加させる：Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔ
Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｏ
Ｈ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（
Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ（工程１）。末端Ｆｍｏｃ基の脱保護を、２０
％のピペリジンを用いて達成し（工程２）、続いて、３−ＭＰＡのカップリングをする。
生じたＦｍｏｃ−ＡＥＥＡ−ペプチドのＤＭＦ中の２０％のピペリジンを用いる脱保護は
、その後の３−ＭＰＡの付加を可能にする（工程３）。樹脂切断および生成物単離を、８
６％  ＴＦＡ／５％  ＴＩＳ／５％  Ｈ2Ｏ／２％  チオアニソールおよび２％のフェノ
ールを用いて実行し、続いて、ドライアイス冷却Ｅｔ2Ｏにより沈殿させる（工程４）。
生成物を、Ｄｙｎａｍａｘ  Ｃ18、６０Å、８μｍのガードモジュール、２１ｍｍ×２５
ｃｍカラムおよびＵＶ検出器（Ｖａｒｉａｎ  Ｄｙｎａｍａｘ
ＵＶＤ  ＩＩ）（λ２１４および２５４ｎｍ）を備えたＤｙｎａｍａｘ  Ｃ18、６０Å
、８μｍ、２１ｍｍ×２５ｃｍカラムを用いるＶａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）調製用バイ
ナリーＨＰＬＣシステムを用いて調製用逆相ＨＰＬＣにより精製する。生成物は、ジオー
ドアレイ検出器を備えたＨｅｗｌｅｔｔ  Ｐａｃｋａｒｄ  ＬＣＭＳ−１１００シリーズ
分光計を用いかつエレクトロスプレーイオン化を用いるＲＰ−ＨＰＬＣ質量分光計によっ
て決定する場合＞９５％純度を有した。
【０３０９】
（実施例４４  Ｎ末端プロリンにおけるクリングル−５の改変。（ＭＰＡ）−Ｐｒｏ−
Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−ＮＨ2．２ＴＦＡの調製）
自動ペプチド合成を用いて、以下の保護アミノ酸を、Ｒｉｎｋ  Ａｍｉｄｅ  ＭＢＨＡ
樹脂に連続的に付加させる：Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔ
Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｏ
Ｈ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（
Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ（工程１）。末端Ｆｍｏｃ基の脱保護を、２０
％のピペリジンを用いて達成し（工程２）、続いて、３−ＭＰＡのカップリングをする（
工程３）。樹脂切断および生成物単離を、８６％  ＴＦＡ／５％  ＴＩＳ／５％  Ｈ2Ｏ
／２％  チオアニソールおよび２％のフェノールを用いて実行し、続いて、ドライアイス
冷却Ｅｔ2Ｏにより沈殿させる（工程４）。生成物を、Ｄｙｎａｍａｘ  Ｃ18、６０Å、
８μｍのガードモジュール、２１ｍｍ×２５ｃｍカラムおよびＵＶ検出器（Ｖａｒｉａｎ
Ｄｙｎａｍａｘ  ＵＶＤ  ＩＩ）（λ２１４および２５４ｎｍ）を備えたＤｙｎａｍａ
ｘ  Ｃ18、６０Å、８μｍ、２１ｍｍ×２５ｃｍカラムを用いるＶａｒｉａｎ（Ｒａｉｎ
ｉｎ）調製用バイナリーＨＰＬＣシステムを用いて調製用逆相ＨＰＬＣにより精製する。
生成物は、ジオードアレイ検出器を備えたＨｅｗｌｅｔｔ  Ｐａｃｋａｒｄ  ＬＣＭＳ−
１１００シリーズ分光計を用いかつエレクトロスプレーイオン化を用いるＲＰ−ＨＰＬＣ
質量分光計によって決定する場合＞９５％純度を有した。
【０３１０】
（実施例４５  Ｎ末端チロシンにおけるクリングル−５の改変。（ＭＰＡ−ＡＥＥＡ）
−Ｔｙｒ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ａｓｐ
−Ｔｙｒ−ＮＨ2．２ＴＦＡの調製）
自動ペプチド合成を用いて、以下の保護アミノ酸を、Ｒｉｎｋ  Ａｍｉｄｅ  ＭＢＨＡ
樹脂に連続的に付加させる：Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔ
Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｏ
Ｈ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（
Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏ
ｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（
ｔＢｕ）ＯＨ（工程１）。末端Ｆｍｏｃ基の脱保護を、２０％のピペリジンを用いて達成
し（工程２）、続いて、Ｆｍｏｃ−ＡＥＥＡのカップリングをする。生じたＦｍｏｃ−Ａ
ＥＥＡ−ペプチドのＤＭＦ中の２０％のピペリジンを用いる脱保護は、その後の３−ＭＰ
Ａの付加を可能にする（工程３）。樹脂切断および生成物単離を、８６％  ＴＦＡ／５％
ＴＩＳ／５％  Ｈ2Ｏ／２％  チオアニソールおよび２％のフェノールを用いて実行し
、続いて、ドライアイス冷却Ｅｔ2Ｏにより沈殿させる（工程４）。生成物を、Ｄｙｎａ
ｍａｘ  Ｃ18、６０Å、８μｍのガードモジュール、２１ｍｍ×２５ｃｍカラムおよびＵ
Ｖ検出器（Ｖａｒｉａｎ  Ｄｙｎａｍａｘ  ＵＶＤ  ＩＩ）（λ２１４および２５４ｎｍ
）を備えたＤｙｎａｍａｘ  Ｃ18、６０Å、８μｍ、２１ｍｍ×２５ｃｍカラムを用いる
Ｖａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）調製用バイナリーＨＰＬＣシステムを用いて調製用逆相Ｈ
ＰＬＣにより精製する。生成物は、ジオードアレイ検出器を備えたＨｅｗｌｅｔｔ  Ｐａ
ｃｋａｒｄ  ＬＣＭＳ−１１００シリーズ分光計を用いかつエレクトロスプレーイオン化
を用いるＲＰ−ＨＰＬＣ質量分光計によって決定する場合＞９５％純度を有した。
【０３１１】
（実施例４６  Ｎ末端チロシンにおけるクリングル−５の改変。（ＭＰＡ）−Ｔｙｒ−
Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−
ＮＨ2．２ＴＦＡの調製）
自動ペプチド合成を用いて、以下の保護アミノ酸を、Ｒｉｎｋ  Ａｍｉｄｅ  ＭＢＨＡ
樹脂に連続的に付加させる：Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔ
Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｏ
Ｈ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（
Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏ
ｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（
ｔＢｕ）−ＯＨ（工程１）。末端Ｆｍｏｃ基の脱保護を、２０％のピペリジンを用いて達
成し（工程２）、続いて、Ｆｍｏｃ−ＡＥＥＡのカップリングをする（工程３）。樹脂切
断および生成物単離を、８６％  ＴＦＡ／５％  ＴＩＳ／５％  Ｈ2Ｏ／２％  チオアニ
ソールおよび２％のフェノールを用いて実行し、続いて、ドライアイス冷却Ｅｔ2Ｏによ
り沈殿させる（工程４）。生成物を、Ｄｙｎａｍａｘ  Ｃ18、６０Å、８μｍのガードモ
ジュール、２１ｍｍ×２５ｃｍカラムおよびＵＶ検出器（Ｖａｒｉａｎ  Ｄｙｎａｍａｘ
ＵＶＤ  ＩＩ）（λ２１４および２５４ｎｍ）を備えたＤｙｎａｍａｘ  Ｃ18、６０Å
、８μｍ、２１ｍｍ×２５ｃｍカラムを用いるＶａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）調製用バイ
ナリーＨＰＬＣシステムを用いて調製用逆相ＨＰＬＣにより精製する。生成物は、ジオー
ドアレイ検出器を備えたＨｅｗｌｅｔｔ  Ｐａｃｋａｒｄ  ＬＣＭＳ−１１００シリーズ
分光計を用いかつエレクトロスプレーイオン化を用いるＲＰ−ＨＰＬＣ質量分光計によっ
て決定する場合＞９５％純度を有した。
【０３１２】
（実施例４７  Ｎ末端アルギニンにおけるクリングル−５の改変。（ＭＰＡ−ＡＥＥＡ
）−Ａｒｇ−Ａｓｎ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｔｒｐ−Ａｌ
ａ−Ｔｙｒ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ａｓ
ｐ−Ｔｙｒ−ＮＨ2．３ＴＦＡの調製）
自動ペプチド合成を用いて、以下の保護アミノ酸を、Ｒｉｎｋ  Ａｍｉｄｅ  ＭＢＨＡ
樹脂に連続的に付加させる：Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔ
Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｏ
Ｈ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（
Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏ
ｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（
ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ
−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、
Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（Ｏ
ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏ
ｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ（工程１）。末端Ｆｍｏｃ基の脱保護を、２０％のピペリジ
ンを用いて達成し（工程２）、続いて、３−ＭＰＡのカップリングをする。生じたＦｍｏ
ｃ−ＡＥＥＡ−ペプチドのＤＭＦ中の２０％のピペリジンを用いる脱保護は、その後の３
−ＭＰＡの付加を可能にする（工程３）。樹脂切断および生成物単離を、８６％  ＴＦＡ
／５％  ＴＩＳ／５％  Ｈ2Ｏ／２％  チオアニソールおよび２％のフェノールを用いて
実行し、続いて、ドライアイス冷却Ｅｔ2Ｏにより沈殿させる（工程４）。生成物を、Ｄ
ｙｎａｍａｘ  Ｃ18、６０Å、８μｍのガードモジュール、２１ｍｍ×２５ｃｍカラムお
よびＵＶ検出器（Ｖａｒｉａｎ  Ｄｙｎａｍａｘ  ＵＶＤ  ＩＩ）（λ２１４および２５
４ｎｍ）を備えたＤｙｎａｍａｘ  Ｃ18、６０Å、８μｍ、２１ｍｍ×２５ｃｍカラムを
用いるＶａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）調製用バイナリーＨＰＬＣシステムを用いて調製用
逆相ＨＰＬＣにより精製する。生成物は、ジオードアレイ検出器を備えたＨｅｗｌｅｔｔ
Ｐａｃｋａｒｄ  ＬＣＭＳ−１１００シリーズ分光計を用いかつエレクトロスプレーイ
オン化を用いるＲＰ−ＨＰＬＣ質量分光計によって決定する場合＞９５％純度を有した。
【０３１３】
（実施例４８  Ｎ末端アルギニンにおけるクリングル−５の改変。（ＭＰＡ）−Ａｒｇ
−Ａｓｎ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｔｒｐ
−Ａｌａ−Ｔｙｒ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ
−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−ＮＨ2．３ＴＦＡの調製）
自動ペプチド合成を用いて、以下の保護アミノ酸を、Ｒｉｎｋ  Ａｍｉｄｅ  ＭＢＨＡ
樹脂に連続的に付加させる：Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔ
Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｏ
Ｈ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（
Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏ
ｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（
ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ
−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、
Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（Ｏ
ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏ
ｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ（工程１）。末端Ｆｍｏｃ基の脱保護を、２０％のピペリジ
ンを用いて達成し（工程２）、続いて、Ｆｍｏｃ−ＡＥＥＡのカップリングをする（工程
３）。樹脂切断および生成物単離を、８６％  ＴＦＡ／５％  ＴＩＳ／５％  Ｈ2Ｏ／２
％  チオアニソールおよび２％のフェノールを用いて実行し、続いて、ドライアイス冷却
Ｅｔ2Ｏにより沈殿させる（工程４）。生成物を、Ｄｙｎａｍａｘ  Ｃ18、６０Å、８μ
ｍのガードモジュール、２１ｍｍ×２５ｃｍカラムおよびＵＶ検出器（Ｖａｒｉａｎ  Ｄ
ｙｎａｍａｘ  ＵＶＤ  ＩＩ）（λ２１４および２５４ｎｍ）を備えたＤｙｎａｍａｘ  
Ｃ18、６０Å、８μｍ、２１ｍｍ×２５ｃｍカラムを用いるＶａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ
）調製用バイナリーＨＰＬＣシステムを用いて調製用逆相ＨＰＬＣにより精製する。生成
物は、ジオードアレイ検出器を備えたＨｅｗｌｅｔｔ  Ｐａｃｋａｒｄ
ＬＣＭＳ−１１００シリーズ分光計を用いかつエレクトロスプレーイオン化を用いるＲ
Ｐ−ＨＰＬＣ質量分光計によって決定する場合＞９５％純度を有した。
【０３１４】
（実施例４９  Ｎ末端アルギニンにおけるクリングル−５の改変。（ＭＰＡ−ＡＥＥＡ
）−Ａｒｇ−Ａｓｎ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒ
ｏ−Ｔｒｐ−ＮＨ2．ＴＦＡの調製）
自動ペプチド合成を用いて、以下の保護アミノ酸を、Ｒｉｎｋ  Ａｍｉｄｅ  ＭＢＨＡ
樹脂に連続的に付加させる：Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ−Ｏ
Ｈ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍ
ｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、
Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔ
ｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ（工程１）。末端Ｆｍｏｃ基の脱保護
を、２０％のピペリジンを用いて達成し（工程２）、続いて、Ｆｍｏｃ−ＡＥＥＡのカッ
プリングをする。生じたＦｍｏｃ−ＡＥＥＡ−ペプチドのＤＭＦ中の２０％のピペリジン
を用いる脱保護は、その後の３−ＭＰＡの付加を可能にする（工程３）。樹脂切断および
生成物単離を、８６％  ＴＦＡ／５％  ＴＩＳ／５％  Ｈ2Ｏ／２％  チオアニソールお
よび２％のフェノールを用いて実行し、続いて、ドライアイス冷却Ｅｔ2Ｏにより沈殿さ
せる（工程４）。生成物を、Ｄｙｎａｍａｘ  Ｃ18、６０Å、８μｍのガードモジュール
、２１ｍｍ×２５ｃｍカラムおよびＵＶ検出器（Ｖａｒｉａｎ  Ｄｙｎａｍａｘ  ＵＶＤ
ＩＩ）（λ２１４および２５４ｎｍ）を備えたＤｙｎａｍａｘ  Ｃ18、６０Å、８μｍ
、２１ｍｍ×２５ｃｍカラムを用いるＶａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）調製用バイナリーＨ
ＰＬＣシステムを用いて調製用逆相ＨＰＬＣにより精製する。生成物は、ジオードアレイ
検出器を備えたＨｅｗｌｅｔｔ  Ｐａｃｋａｒｄ  ＬＣＭＳ−１１００シリーズ分光計を
用いかつエレクトロスプレーイオン化を用いるＲＰ−ＨＰＬＣ質量分光計によって決定す
る場合＞９５％純度を有した。
【０３１５】
（実施例５０  Ｎ末端アルギニンにおけるクリングル−５の改変。（ＭＰＡ）−Ａｒｇ
−Ａｓｎ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｔｒｐ
−ＮＨ2．ＴＦＡの調製）
自動ペプチド合成を用いて、以下の保護アミノ酸を、Ｒｉｎｋ  Ａｍｉｄｅ  ＭＢＨＡ
樹脂に連続的に付加させる：Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ−Ｏ
Ｈ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍ
ｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、
Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔ
ｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ（工程１）。末端Ｆｍｏｃ基の脱保護
を、２０％のピペリジンを用いて達成し（工程２）、続いて、３−ＭＰＡのカップリング
をする（工程３）。樹脂切断および生成物単離を、８６％  ＴＦＡ／５％  ＴＩＳ／５％
Ｈ2Ｏ／２％  チオアニソールおよび２％のフェノールを用いて実行し、続いて、ドラ
イアイス冷却Ｅｔ2Ｏにより沈殿させる（工程４）。生成物を、Ｄｙｎａｍａｘ
Ｃ18、６０Å、８μｍのガードモジュール、２１ｍｍ×２５ｃｍカラムおよびＵＶ検出
器（Ｖａｒｉａｎ  Ｄｙｎａｍａｘ  ＵＶＤ  ＩＩ）（λ２１４および２５４ｎｍ）を備
えたＤｙｎａｍａｘ  Ｃ18、６０Å、８μｍ、２１ｍｍ×２５ｃｍカラムを用いるＶａｒ
ｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）調製用バイナリーＨＰＬＣシステムを用いて調製用逆相ＨＰＬＣ
により精製する。生成物は、ジオードアレイ検出器を備えたＨｅｗｌｅｔｔ  Ｐａｃｋａ
ｒｄ  ＬＣＭＳ−１１００シリーズ分光計を用いかつエレクトロスプレーイオン化を用い
るＲＰ−ＨＰＬＣ質量分光計によって決定する場合＞９５％純度を有した。
【０３１６】
（実施例５１  Ｎ末端アルギニンにおけるクリングル−５の改変。（ＭＰＡ−ＡＥＥＡ
）−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−ＮＨ2．２ＴＦＡの調製）
自動ペプチド合成を用いて、以下の保護アミノ酸を、Ｒｉｎｋ  Ａｍｉｄｅ  ＭＢＨＡ
樹脂に連続的に付加させる：Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔ
Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｏ
Ｈ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（
Ｐｂｆ）−ＯＨ（工程１）。末端Ｆｍｏｃ基の脱保護を、２０％のピペリジンを用いて達
成し（工程２）、続いて、Ｆｍｏｃ−ＡＥＥＡのカップリングをする。生じたＦｍｏｃ−
ＡＥＥＡ−ペプチドのＤＭＦ中の２０％のピペリジンを用いる脱保護は、その後の３−Ｍ
ＰＡの付加を可能にする（工程３）。樹脂切断および生成物単離を、８６％  ＴＦＡ／５
％  ＴＩＳ／５％  Ｈ2Ｏ／２％  チオアニソールおよび２％のフェノールを用いて実行
し、続いて、ドライアイス冷却Ｅｔ2Ｏにより沈殿させる（工程４）。生成物を、Ｄｙｎ
ａｍａｘ  Ｃ18、６０Å、８μｍのガードモジュール、２１ｍｍ×２５ｃｍカラムおよび
ＵＶ検出器（Ｖａｒｉａｎ  Ｄｙｎａｍａｘ  ＵＶＤ  ＩＩ）（λ２１４および２５４ｎ
ｍ）を備えたＤｙｎａｍａｘ  Ｃ18、６０Å、８μｍ、２１ｍｍ×２５ｃｍカラムを用い
るＶａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）調製用バイナリーＨＰＬＣシステムを用いて調製用逆相
ＨＰＬＣにより精製する。生成物は、ジオードアレイ検出器を備えたＨｅｗｌｅｔｔ  Ｐ
ａｃｋａｒｄ  ＬＣＭＳ−１１００シリーズ分光計を用いかつエレクトロスプレーイオン
化を用いるＲＰ−ＨＰＬＣ質量分光計によって決定する場合＞９５％純度を有した。
【０３１７】
（実施例５２  Ｎ末端アルギニンにおけるクリングル−５の改変。（ＭＰＡ）−Ａｒｇ
−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−ＮＨ2．２ＴＦＡの調製）
自動ペプチド合成を用いて、以下の保護アミノ酸を、Ｒｉｎｋ  Ａｍｉｄｅ  ＭＢＨＡ
樹脂に連続的に付加させる：Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔ
Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｏ
Ｈ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（
Ｐｂｆ）−ＯＨ（工程１）。末端Ｆｍｏｃ基の脱保護を、２０％のピペリジンを用いて達
成し（工程２）、続いて、３−ＭＰＡのカップリングをする（工程３）。樹脂切断および
生成物単離を、８６％  ＴＦＡ／５％  ＴＩＳ／５％  Ｈ2Ｏ／２％  チオアニソールお
よび２％のフェノールを用いて実行し、続いて、ドライアイス冷却Ｅｔ2Ｏにより沈殿さ
せる（工程４）。生成物を、Ｄｙｎａｍａｘ  Ｃ18、６０Å、８μｍのガードモジュール
、２１ｍｍ×２５ｃｍカラムおよびＵＶ検出器（Ｖａｒｉａｎ  Ｄｙｎａｍａｘ
ＵＶＤ  ＩＩ）（λ２１４および２５４ｎｍ）を備えたＤｙｎａｍａｘ  Ｃ18、６０Å
、８μｍ、２１ｍｍ×２５ｃｍカラムを用いるＶａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）調製用バイ
ナリーＨＰＬＣシステムを用いて調製用逆相ＨＰＬＣにより精製する。生成物は、ジオー
ドアレイ検出器を備えたＨｅｗｌｅｔｔ  Ｐａｃｋａｒｄ  ＬＣＭＳ−１１００シリーズ
分光計を用いかつエレクトロスプレーイオン化を用いるＲＰ−ＨＰＬＣ質量分光計によっ
て決定する場合＞９５％純度を有した。
【０３１８】
（実施例５３  Ｎ末端プロリンにおけるクリングル−５の改変。（ＭＰＡ−ＡＥＥＡ）
−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−ＮＨ2．２ＴＦＡの調製）
自動ペプチド合成を用いて、以下の保護アミノ酸を、Ｒｉｎｋ  Ａｍｉｄｅ  ＭＢＨＡ
樹脂に連続的に付加させた：Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（Ｏ
ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏ
ｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−
ＯＨ（工程１）。末端Ｆｍｏｃ基の脱保護を、２０％のピペリジンを用いて達成し（工程
２）、続いて、Ｆｍｏｃ−ＡＥＥＡのカップリングをする。生じたＦｍｏｃ−ＡＥＥＡ−
ペプチドのＤＭＦ中の２０％のピペリジンを用いる脱保護は、その後の３−ＭＰＡの付加
を可能にする（工程３）。樹脂切断および生成物単離を、８６％  ＴＦＡ／５％  ＴＩＳ
／５％  Ｈ2Ｏ／２％  チオアニソールおよび２％のフェノールを用いて実行し、続いて
、ドライアイス冷却Ｅｔ2Ｏにより沈殿させる（工程４）。生成物を、Ｄｙｎａｍａｘ  
Ｃ18、６０Å、８μｍのガードモジュール、２１ｍｍ×２５ｃｍカラムおよびＵＶ検出器
（Ｖａｒｉａｎ  Ｄｙｎａｍａｘ  ＵＶＤ  ＩＩ）（λ２１４および２５４ｎｍ）を備え
たＤｙｎａｍａｘ  Ｃ18、６０Å、８μｍ、２１ｍｍ×２５ｃｍカラムを用いるＶａｒｉ
ａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）調製用バイナリーＨＰＬＣシステムを用いて調製用逆相ＨＰＬＣに
より精製する。生成物は、ジオードアレイ検出器を備えたＨｅｗｌｅｔｔ  Ｐａｃｋａｒ
ｄ  ＬＣＭＳ−１１００シリーズ分光計を用いかつエレクトロスプレーイオン化を用いる
ＲＰ−ＨＰＬＣ質量分光計によって決定する場合＞９５％純度を有した。
【０３１９】
（実施例５４  Ｎ末端プロリンにおけるクリングル−５の改変。（ＭＰＡ）−Ｐｒｏ−
Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−ＮＨ2．２ＴＦＡの調製）
自動ペプチド合成を用いて、以下の保護アミノ酸を、Ｒｉｎｋ  Ａｍｉｄｅ  ＭＢＨＡ
樹脂に連続的に付加させる：Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（Ｏ
ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏ
ｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−
ＯＨ（工程１）。末端Ｆｍｏｃ基の脱保護を、２０％のピペリジンを用いて達成し（工程
２）、続いて、３−ＭＰＡのカップリングをする（工程３）。樹脂切断および生成物単離
を、８６％  ＴＦＡ／５％
ＴＩＳ／５％  Ｈ2Ｏ／２％  チオアニソールおよび２％のフェノールを用いて実行し
、続いて、ドライアイス冷却Ｅｔ2Ｏにより沈殿させる（工程４）。生成物を、Ｄｙｎａ
ｍａｘ  Ｃ18、６０Å、８μｍのガードモジュール、２１ｍｍ×２５ｃｍカラムおよびＵ
Ｖ検出器（Ｖａｒｉａｎ  Ｄｙｎａｍａｘ  ＵＶＤ  ＩＩ）（λ２１４および２５４ｎｍ
）を備えたＤｙｎａｍａｘ  Ｃ18、６０Å、８μｍ、２１ｍｍ×２５ｃｍカラムを用いる
Ｖａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）調製用バイナリーＨＰＬＣシステムを用いて調製用逆相Ｈ
ＰＬＣにより精製する。生成物は、ジオードアレイ検出器を備えたＨｅｗｌｅｔｔ  Ｐａ
ｃｋａｒｄ  ＬＣＭＳ−１１００シリーズ分光計を用いかつエレクトロスプレーイオン化
を用いるＲＰ−ＨＰＬＣ質量分光計によって決定する場合＞９５％純度を有した。
【０３２０】
（３．内部アミノ酸における改変）
（実施例５５  Ｌｙｓ26（ε−ＭＰＡ）ＧＬＰ−１（７−３６）−ＮＨ2の合成）
１００μｍｏｌの規模での、改変されたＧＬＰ−１アナログの固相ペプチド合成を、手
動でかつＦｍｏｃ保護Ｒｉｎｋ  Ａｍｉｄｅ  ＭＢＨＡ樹脂を用いるＳｙｍｐｈｏｎｙ  
Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒ上で実行した。以下の保護アミノ酸を、連続的
に樹脂に付加させた：Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆ
ｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、
Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−ｌｌｅ−ＯＨ
、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（
Ａｌｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌ
ｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、
Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢ
ｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−
Ａｓｐ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢ
ｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−
Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｂｏｃ
−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ。それらを、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中に溶
解し、そして配列に従って、Ｏ−ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−
テトラメチル−ウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）およびジイソプロピ
ルエチルアミン（ＤＩＥＡ）を用いて活性化する。Ｆｍｏｃ保護基の除去を、２０％（Ｖ
／Ｖ）ピペリジンのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）溶液を用いて２０分間活性
化する（工程１）。Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）基の選択的脱保護を、手動で実行し、そして５ｍ
ＬのＣＨＣｌ3：ＮＭＭ：ＨＯＡｃ（１８：１：０．５）中に溶解した３当量のＰｄ（Ｐ
Ｐｈ3）4の溶液で２時間樹脂を処理することによって達成する（工程２）。次いで、この
樹脂を、ＣＨＣｌ3（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ中の２０％  ＨＯＡｃ（６×５ｍＬ）、ＤＣ
Ｍ（６×５ｍＬ）、およびＤＭＦ（６×５ｍＬ）で洗浄した。次いで、この合成を、３−
マレイミドプリピオン酸の添加のために再自動化する（工程３）。樹脂切断および生成物
単離を、８６％  ＴＦＡ／５％  ＴＩＳ／５％  Ｈ2Ｏ／２％のチオアニソールおよび２
％フェノールを用いて実行し、続いて、ドライアイスで冷却されたＥｔ2Ｏにより沈殿さ
せる（工程４）。生成物を、Ｄｙｎａｍａｘ  Ｃ18、６０Å、８μｍのガードモジュール
、２１ｍｍ×２５ｃｍカラムおよびＵＶ検出器（Ｖａｒｉａｎ  Ｄｙｎａｍａｘ  ＵＶＤ
ＩＩ）（λ２１４および２５４ｎｍ）を備えたＤｙｎａｍａｘ  Ｃ18、６０Å、８μｍ
、２１ｍｍ×２５ｃｍカラムを用いるＶａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）調製用バイナリーＨ
ＰＬＣシステムを用いて調製用逆相ＨＰＬＣにより精製し、ＲＰ−ＨＰＬＣによって決定
するように、＞９５％純度で所望のＤＡＣを得る。これらの工程を、以下の概略ダイアグ
ラムに図示する。
【０３２１】
【化２７】
2010168384.tif 000028
（Ｄ．１つの遊離システインを含有するペプチドからの改変されたペプチドの調製）
１つの遊離システインを含有する治療用ペプチドからのマレイミドペプチドの調製を、
以下に記載の通りのペプチドの合成によって例示する。このペプチドを、Ｎ末端、Ｃ末端
またはＮ末端とＣ末端との間に位置するアミノ酸にて改変し得る。
【０３２２】
複数の保護官能基および１つの遊離システイン残基を有する複数のシステイン残基すべ
て（すなわち、１つのシステイン残基を除くすべてのシステイン残基は、ジスルフィドと
して拘束される）を含有するペプチドからのマレイミドペプチドの調製。実施例５のよう
な天然配列における内部アミノ酸からの連結。遊離システイン残基は、キャップされるか
または別のアミノ酸（例えば、アラニン、メチオニンなど）で置換されなければならない
。
【０３２３】
ペプチドが、１つのシステインを含む場合、このシステインは、マレイミドの付加の後
キャップされたままでいなければならない。システインが、結合部位に含まれる場合、潜
在性が度の程度失われ、システインが、どの程度保護基にキャップされているかという評
価をしなければならない。システインが、キャップされ得るままである場合、合成経路は
、上記の実施例（ｉ）と同様である。１つのシステインを含む治療用ペプチドの例として
は、Ｇα（Ｇ治療用ペプチド結合タンパク質のαサブユニット）、ラット脳一酸化炭素シ
ンセターゼブロックペプチドの７２４−７３９フラグメント、ヒト［Ｔｙｒ０］インヒビ
ンのαサブユニット１−３２、ＨＩＶエンベロープタンパク質の２５４−２７４フラグメ
ントおよびＰ３４ｃｄｃ２キナーゼフラグメントが挙げられる。
【０３２４】
（１．Ｎ末端における改変）
（実施例５６  付加されたＮ末端リジンにおけるインヒビンペプチドの改変。（Ｎε−
ＭＰＡ）−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｔｈｒ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−Ｓｅｒ−Ｔｒｐ
−Ｐｒｏ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ
−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｐｒｏ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｌａ
−Ｈｉｓ−Ａｌａ−Ａｓｎ−Ｃｙｓ−Ｈｉｓ−Ａｒｇの調製）
１００μｍｏｌの規模での、改変されたインヒビンペプチドアナログの固相ペプチド合
成を、手動の固相合成、Ｓｙｍｐｈｏｎｙ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒお
よびＦｍｏｃ保護Ｒｉｎｋ  Ａｍｉｄｅ  ＭＢＨＡを用いて実行する。以下の保護アミノ
酸を、連続的に樹脂に付加させる：Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｈｉ
ｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）
−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｈｉｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌ
ａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ｔＢ
ｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−
Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ
、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−Ｏ
Ｈ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−
ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ
（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍ
ｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｍｅｔ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆ
ｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ
）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）−ＯＨ。
それらを、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中に溶解し、そして配列に従って、
Ｏ−ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−ウロニウムヘ
キサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）およびジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）
を用いて活性化する。Ｆｍｏｃ保護基の除去を、２０％（Ｖ／Ｖ）ピペリジンのＮ，Ｎ−
ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）溶液を用いて２０分間活性化する（工程１）。Ｌｙｓ（
Ａｌｏｃ）基の選択的脱保護を、手動で実行し、そして５ｍＬのＣＨＣｌ3：ＮＭＭ：Ｈ
ＯＡｃ（１８：１：０．５）中に溶解した３当量のＰｄ（ＰＰｈ3）4の溶液で２時間樹脂
を処理することによって達成する（工程２）。次いで、この樹脂を、ＣＨＣｌ3（６×５
ｍＬ）、ＤＣＭ中の２０％
ＨＯＡｃ（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ（６×５ｍＬ）、およびＤＭＦ（６×５ｍＬ）で洗浄
した。次いで、この合成を、３−マレイミドプロピオン酸の添加のために再自動化する（
工程３）。すべてのカップリングの間に、樹脂をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ
）で３回洗浄し、そしてイソプロパノールで３回洗浄する。このペプチドを、８５％  Ｔ
ＦＡ／５％  ＴＩＳ／５％  チオアニソールおよび５％のフェノールを用いて樹脂から切
断し、続いて、ドライアイスで冷却されたＥｔ2Ｏにより沈殿させる（工程４）。生成物
を、Ｖａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）調製用バイナリーＨＰＬＣシステム（：３０〜５５％
Ｂ（Ｈ2Ｏ中の０．０４５％  ＴＦＡ（Ａ）およびＣＨ3ＣＮ中の０．０４５％  ＴＦＡ（
Ｂ））の勾配溶出）を用いて、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  １０μのフェニル−ヘ
キシル、２１ｍｍ×２５ｃｍカラムおよびＵＶ検出器（Ｖａｒｉａｎ  Ｄｙｎａｍａｘ  
ＵＶＤ  ＩＩ）（λ２１４および２５４ｎｍ）を用いて、調製用逆相ＨＰＬＣにより９．
５ｍＬ／分にて１８０分にわたって精製し、ＲＰ−ＨＰＬＣによって決定するように、＞
９５％純度で所望のＤＡＣを得る。
【０３２５】
（実施例５７  Ｎ末端におけるＲＳＶ抗融合誘導ペプチドの改変。３−（ＭＰＡ）−Ｖ
ａｌ−ｌｌｅ−Ｔｈｒ−ｌｌｅ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ａｓｎ−ｌｌｅ−Ｌｙｓ−Ｇ
ｌｕ−Ａｓｎ−Ｌｙｓ−Ｃｙｓ−Ａｓｎ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｌ
ｅｕ−ｌｌｅ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ａ
ｓｎ−Ａｌａ−Ｖａｌの調製）
最初に、システイン（Ｃｙｓ）を、ネイティブ配列内のメチオニン（Ｍｅｔ）と置換し
た。１００μｍｏｌの規模での、改変された抗ＲＳＶアナログの固相ペプチド合成を、Ｓ
ｙｍｐｈｏｎｙ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒ上で、Ｆｍｏｃ保護Ｒｉｎｋ
Ａｍｉｄｅ  ＭＢＨＡ樹脂、Ｆｍｏｃ保護アミノ酸、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（
ＤＭＦ）中のＯ−ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−
ウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）およびＮ−メチルモルホリン（ＮＭ
Ｍ）を用いる活性化を用いて実行し、そしてＦｍｏｃ基のピペリジン脱保護をする（工程
１）。末端Ｆｍｏｃ基の脱保護を、２０％のピペリジンを用いて達成し（工程２）、続い
て、３−ＭＰＡのカップリングをする（工程３）。樹脂切断および生成物単離を、８５％
ＴＦＡ／５％  ＴＩＳ／５％  チオアニソールおよび５％のフェノールを用いて実行し
、、続いて、ドライアイスで冷却されたＥｔ2Ｏにより沈殿させる（工程４）。生成物を
、Ｖａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）調製用バイナリーＨＰＬＣシステム（：３０〜５５％Ｂ
（Ｈ2Ｏ中の０．０４５％  ＴＦＡ（Ａ）およびＣＨ3ＣＮ中の０．０４５％  ＴＦＡ（Ｂ
））の勾配溶出）を用いて、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  １０μのフェニル−ヘキ
シル、２１ｍｍ×２５ｃｍカラムおよびＵＶ検出器（Ｖａｒｉａｎ  Ｄｙｎａｍａｘ  Ｕ
ＶＤ  ＩＩ）（λ２１４および２５４ｎｍ）を用いて、調製用逆相ＨＰＬＣにより９．５
ｍＬ／分にて１８０分にわたって精製し、ＲＰ−ＨＰＬＣによって決定するように、＞９
５％純度で所望のＤＡＣを得る。これらの工程を、以下の概略ダイアグラムに図示する。
【０３２６】
【化２８】
2010168384.tif 000029
（２．Ｃ末端における改変）
（実施例５８  付加されたＣ末端リジンにおけるインヒビンペプチドの改変。（Ｎε−
ＭＰＡ）−Ｌｙｓ−Ｃｙｓ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−ｌｌｅ
−Ｓｅｒ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｖａｌ−Ｌｙｓの調製）
１００μｍｏｌの規模での、改変されたインヒビンペプチドアナログの固相ペプチド合
成を、手動の固相合成、Ｓｙｍｐｈｏｎｙ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒお
よびＦｍｏｃ保護Ｒｉｎｋ  Ａｍｉｄｅ  ＭＢＨＡを用いて実行する。以下の保護アミノ
酸を、連続的に樹脂に付加させる：Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａ
ｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆ
ｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、
Ｆｍｏｃ−ｌｌｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ｔＢｕ）−ＯＨ
、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−
Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ
、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）−ＯＨ。それらを、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（Ｄ
ＭＦ）中に溶解し、そして配列に従って、Ｏ−ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，
Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−ウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）および
ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）を用いて活性化する。Ｆｍｏｃ保護基の除去を
、２０％（Ｖ／Ｖ）ピペリジンのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）溶液を用いて
２０分間活性化する（工程１）。Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）基の選択的脱保護を、手動で実行し
、そして５ｍＬのＣＨＣｌ3：ＮＭＭ：ＨＯＡｃ（１８：１：０．５）中に溶解した３当
量のＰｄ（ＰＰｈ3）4の溶液で２時間樹脂を処理することによって達成する（工程２）。
次いで、この樹脂を、ＣＨＣｌ3（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ中の２０％  ＨＯＡｃ（６×５
ｍＬ）、ＤＣＭ（６×５ｍＬ）、およびＤＭＦ（６×５ｍＬ）で洗浄した。次いで、この
合成を、３−マレイミドプロピオン酸の付加のために自動化する（工程３）。すべてのカ
ップリングの間に、樹脂をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）で３回洗浄し、そし
てイソプロパノールで３回洗浄する。このペプチドを、８５％  ＴＦＡ／５％  ＴＩＳ／
５％  チオアニソールおよび５％のフェノールを用いて樹脂から切断し、続いて、ドライ
アイスで冷却されたＥｔ2Ｏにより沈殿させる（工程４）。生成物を、Ｖａｒｉａｎ（Ｒ
ａｉｎｉｎ）調製用バイナリーＨＰＬＣシステム（：３０〜５５％Ｂ（Ｈ2Ｏ中の０．０
４５％  ＴＦＡ（Ａ）およびＣＨ3ＣＮ中の０．０４５％  ＴＦＡ（Ｂ））の勾配溶出）
を用いて、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  １０μのフェニル−ヘキシル、２１ｍｍ×
２５ｃｍカラムおよびＵＶ検出器（Ｖａｒｉａｎ  Ｄｙｎａｍａｘ  ＵＶＤ  ＩＩ）（λ
２１４および２５４ｎｍ）を用いて、調製用逆相ＨＰＬＣにより９．５ｍＬ／分にて１８
０分にわたって精製し、ＲＰ−ＨＰＬＣによって決定するように、＞９５％純度で所望の
ＤＡＣを得る。
【０３２７】
（実施例５９  Ｃ末端におけるＲＳＶ融合誘導ペプチドの改変。Ｖａｌ−ｌｌｅ−Ｔｈ
ｒ−ｌｌｅ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ａｓｎ−ｌｌｅ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ａｓｎ−Ｌｙ
ｓ−Ｃｙｓ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−ｌｌｅ−Ｌｙ
ｓ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ａｓｎ−Ａｌａ−Ｖａｌ−（Ａ
ＥＥＡ．ＭＰＡ））
複数の保護官能基および１個のシステインを含有するペプチドからのマレイミドペプチ
ドの調製を、改変されたＲＳＶ融合誘導ペプチドの合成によって例示する。改変されたＲ
ＳＶ融合誘導ペプチドを、以下の概略ダイアグラムによって例示されるように、ナチュラ
ルペプチド配列にリジン残基を付加させることによるＣ末端の切断によって合成した。シ
ステイン残基が、ペプチド配列内に含まれ、そしてペプチドの生物学的活性が本質的にな
い場合、この残基は、別のアミノ酸（例えば、アラニン、メチオニンなど）と置換されな
ければならない。以下の合成において、システイン（Ｃｙｓ）を、ネイティブＲＳＶ配列
内のメチオニン（Ｍｅｔ）と置換した。
【０３２８】
１００μｍｏｌの規模での、マレイミドＲＳＶ融合誘導ペプチドの固相ペプチド合成を
、手動の固相合成およびＦｍｏｃ保護Ｒｉｎｋ  Ａｍｉｄｅ  ＭＢＨＡを用いるＳｙｍｐ
ｈｏｎｙ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒ、Ｆｍｏｃ保護アミノ酸、Ｎ，Ｎ−
ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中のＯ−ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’
，Ｎ’−テトラメチル−ウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）を用いて実
行し、ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）を用いて活性化し、Ｆｍｏｃ基のピペリ
ジン脱保護をする（工程１）。Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）基の選択的脱保護を、手動で実行し、
そして５ｍＬのＣＨＣｌ3：ＮＭＭ：ＨＯＡｃ（１８：１：０．５）中に溶解した３当量
のＰｄ（ＰＰｈ3）4の溶液で２時間樹脂を処理することによって達成する（工程２）。次
いで、この樹脂を、ＣＨＣｌ3（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ中の２０％  ＨＯＡｃ（６×５ｍ
Ｌ）、ＤＣＭ（６×５ｍＬ）、およびＤＭＦ（６×５ｍＬ）で洗浄した。次いで、この合
成を、３−マレイミドプロピオン酸の付加のために自動化する（工程３）。樹脂切断およ
び生成物単離を、８５％  ＴＦＡ／５％  ＴＩＳ／５％  チオアニソールおよび５％のフ
ェノールを用いて実行し、続いて、ドライアイスで冷却されたＥｔ2Ｏにより沈殿させる
（工程４）。生成物を、Ｖａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）調製用バイナリーＨＰＬＣシステ
ム（：３０〜５５％Ｂ（Ｈ2Ｏ中の０．０４５％  ＴＦＡ（Ａ）およびＣＨ3ＣＮ中の０．
０４５％  ＴＦＡ（Ｂ））の勾配溶出）を用いて、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  １
０μのフェニル−ヘキシル、２１ｍｍ×２５ｃｍカラムおよびＵＶ検出器（Ｖａｒｉａｎ
Ｄｙｎａｍａｘ  ＵＶＤ  ＩＩ）（λ２１４および２５４ｎｍ）を用いて、調製用逆相
ＨＰＬＣにより９．５ｍＬ／分にて１８０分にわたって精製し、ＲＰ−ＨＰＬＣによって
決定するように、＞９５％純度で所望のＤＡＣを得る。これらの工程を、以下の概略ダイ
アグラムに図示する。
【０３２９】
【化２９】
2010168384.tif 000030
（３．内部アミノ酸における改変）
（実施例６０  Ｃｙｓ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−ｌｌｅ−
Ｓｅｒ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−ＶａｌにおけるＧαペプチドの改変）
複数の保護官能基および１つのシステインを含有するペプチドからのマレイミドペプチ
ドの調製を、改変されたＧαペプチドの合成によって例示する。改変されたＧαペプチド
を、以下に記載のように内部アミノ酸における結合によって合成する。
【０３３０】
システイン残基が、ペプチド配列内に含まれ、かつ本質的にペプチドの生物学的活性が
ない場合において、この残基は、キャップされるかまたは別のアミノ酸（例えば、アラニ
ン、メチオニンなど）で置換される。１００μｍｏｌの規模での、改変されたＧαペプチ
ドの固相ペプチド合成を、手動の固相合成およびＦｍｏｃ保護Ｒｉｎｋ  Ａｍｉｄｅ  Ｍ
ＢＨＡを用いるＳｙｍｐｈｏｎｙ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒ、Ｆｍｏｃ
保護アミノ酸、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中Ｏ−ベンゾトリアゾール−１
−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−ウロニウムヘキサフルオロホスフェート（
ＨＢＴＵ）を用いて実行し、Ｎ−メチルモルホリン（ＮＭＭ）を用いて活性化し、Ｆｍｏ
ｃ基のピペリジン脱保護をする（工程１）。Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）基の選択的脱保護を、手
動で実行し、そして５ｍＬのＣＨＣｌ3：ＮＭＭ：ＨＯＡｃ（１８：１：０．５）中に溶
解した３当量のＰｄ（ＰＰｈ3）4の溶液で２時間樹脂を処理することによって達成する（
工程２）。次いで、この樹脂を、ＣＨＣｌ3（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ中の２０％  ＨＯＡ
ｃ（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ（６×５ｍＬ）、およびＤＭＦ（６×５ｍＬ）で洗浄した。次
いで、この合成を、３−マレイミドプロピオン酸の付加のために再自動化する（工程３）
。樹脂切断および生成物単離を、８５％  ＴＦＡ／５％  ＴＩＳ／５％  チオアニソール
および５％のフェノールを用いて実行し、続いて、ドライアイスで冷却されたＥｔ2Ｏに
より沈殿させる（工程４）。生成物を、Ｖａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）調製用バイナリー
ＨＰＬＣシステム（：３０〜５５％Ｂ（Ｈ2Ｏ中の０．０４５％  ＴＦＡ（Ａ）およびＣ
Ｈ3ＣＮ中の０．０４５％  ＴＦＡ（Ｂ））の勾配溶出）を用いて、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅ
ｘ  Ｌｕｎａ  １０μのフェニル−ヘキシル、２１ｍｍ×２５ｃｍカラムおよびＵＶ検出
器（Ｖａｒｉａｎ  Ｄｙｎａｍａｘ  ＵＶＤ  ＩＩ）（λ２１４および２５４ｎｍ）を用
いて、調製用逆相ＨＰＬＣにより９．５ｍＬ／分にて１８０分にわたって精製し、ＲＰ−
ＨＰＬＣによって決定するように、＞９５％純度で所望のＤＡＣを得る。
【０３３１】
（Ｅ．ジスルフィド架橋で２つのシステインを含有するペプチドからの改変されたペプ
チドの調製）
ペプチドが、ジスルフィド結合として２つのシステインを含有する場合、ペプチドを、
マレイミドの付加の前に支持体樹脂から切断する。本発明者らは、他のｔ−Ｂｏｃ保護リ
ジンの存在下でリジンを選択的に脱保護するために、Ｍｔｔ基で保護されたＬｙｓを付加
させることを必要とする。すべての保護基は、カルボキシ末端（これは、支持体樹脂から
の切断に起因して保護されないままでいる）および２つのシステインを除いて存在し、こ
れらは、ペプチドが樹脂から切断される場合に、脱保護される必要がある。穏やかな空気
酸化は、ジスルフィド架橋を与え、そしてこのペプチドは、この段階で精製され得る。次
いで、液相化学は、ジスルフィド架橋の存在下でＣ末端を活性化する必要があり、そして
マレイミド（アミノ−アルキル−マレイミドを介する）をＣ末端に付加させる必要がある
。次いで、このペプチドを、脱保護する。ジスルフィド架橋として２つのシステインを含
有する治療用ペプチドの例としては、ヒトオステオカルシン１−４９、ヒト糖尿病関連ペ
プチド、ヒト／イヌ心房性ナトリウム利尿ペプチド、ウシバクテネシン（ｂａｃｔｅｎｅ
ｃｉｎ）、およびヒト［Ｔｙｒ０］−コルチスタチン２９が挙げれる。
【０３３２】
ジスルフィド架橋で２つのシステインを含有する治療用ペプチドからのマレイミドペプ
チドの調製は、以下に記載のようなペプチドの合成によって例示される。このペプチドを
、Ｎ末端、Ｃ末端、またはＮ末端とＣ末端との間に位置するアミノ酸において改変し得る
。
【０３３３】
（１．Ｎ末端における改変）
（実施例６１  Ｎ末端におけるＴＨ−１ペプチドの改変。（Ｎε−ＭＰＡ）ＮＨ2−Ｌ
ｙｓ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ａｌａ−Ｃｙｓ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｇ
ｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓの調製）
複数の保護官能基を含有しかつ全く遊離システイン残基を含有しない（すなわち、すべ
てのシステイン残基は、ジスルフィド架橋として拘束される）ペプチドからのチオール環
化マレイミドペプチドの調製を、改変されたＴＨ−１ペプチドの合成によって例示する。
【０３３４】
１００μｍｏｌの規模での、改変されたＴＨ−１ペプチドの固相ペプチド合成を、手動
で実行し、そしてＦｍｏｃ保護Ｒｉｎｋ  Ａｍｉｄｅ  ＭＢＨＡ樹脂を用いるＳｙｍｐｈ
ｏｎｙ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒ、Ｆｍｏｃ保護アミノ酸、Ｎ，Ｎ−ジ
メチルホルムアミド（ＤＭＦ）中Ｏ−ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ
’−テトラメチル−ウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）を用いて実行し
、Ｎ−メチルモルホリン（ＮＭＭ）を用いて活性化し、Ｆｍｏｃ基のピペリジン脱保護を
する（工程１）。Ａｃｍ基の除去および樹脂ＤＡＣ上で環化を形成する２つのＣｙｓ残基
の生じる酸化を、ＴＩ（ＣＦ3ＣＯ）2を用いて達成した（工程２）。末端Ｆｍｏｃ基の脱
保護を、２０％のピペリジンを用いて達成し、続いて、３−ＭＰＡのカップリングをする
（工程３）。樹脂切断および生成物単離を、８６％  ＴＦＡ／５％  ＴＩＳ／５％  Ｈ2
Ｏ／２％のチオアニソールおよび２％のフェノールを用いて実行し、続いて、ドライアイ
スで冷却されたＥｔ2Ｏにより沈殿させる（工程４）。生成物を、Ｄｙｎａｍａｘ  Ｃ18
、６０Å、８μｍのガードモジュール、２１ｍｍ×２５ｃｍカラムおよびＵＶ検出器（Ｖ
ａｒｉａｎ  Ｄｙｎａｍａｘ  ＵＶＤ  ＩＩ）（λ２１４および２５４ｎｍ）を備えたＤ
ｙｎａｍａｘ  Ｃ18、６０Å、８μｍ、２１ｍｍ×２５ｃｍカラムを用いるＶａｒｉａｎ
（Ｒａｉｎｉｎ）調製用バイナリーＨＰＬＣシステムを用いて、調製用逆相ＨＰＬＣによ
り精製した。生成物は、ジオードアレイ検出器を備えたＨｅｗｌｅｔｔ  Ｐａｃｋａｒｄ
ＬＣＭＳ−１１００シリーズ分光計を用いかつエレクトロスプレーイオン化を用いるＲ
Ｐ−ＨＰＬＣ質量分光計によって決定する場合＞９５％純度を有した。ＥＳＩ−ＭＳ  ｍ
／ｚ：Ｃ66Ｈ95Ｎ20Ｏ26Ｓ2（ＭＨ+）、１６４６．８、実測値：１６４６．７。これらの
工程を、以下の概略的ダイアグラムに図示する。
【０３３５】
【化３０】
2010168384.tif 000031
（実施例６２  Ｎ−ＭＰＡ−Ｓｅｒ1−ソマトスタチン−２８の合成）
１００μｍｏｌの規模での、ＤＡＣ：ソマトスタチン−２８アナログの固相ペプチド合
成を、手動でかつ、Ｆｍｏｃ保護Ｒｉｎｋ  Ａｍｉｄｅ  ＭＢＨＡ樹脂を用いるＳｙｍｐ
ｈｏｎｙ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒを用いて実行する。以下の保護アミ
ノ酸を、連続的に樹脂に付加させる：Ｆｍｏｃ−Ｃｙｓ（Ａｃｍ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓ
ｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、
Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔ
ｒｐ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−
Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｃｙｓ（Ａｃ
ｍ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂ
ｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｏ
Ｈ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−
ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｍｅｔ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆ
ｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓ
ｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ。そ
れらを、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中に溶解し、そして配列に従って、Ｏ
−ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−ウロニウムヘキ
サフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）およびジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）を
用いて活性化する。Ｆｍｏｃ保護基の除去を、２０％（Ｖ／Ｖ）ピペリジンのＮ，Ｎ−ジ
メチルホルムアミド（ＤＭＦ）溶液を用いて２０分間活性化する（工程１）。Ａｃｍ基の
除去およびジスルフィド架橋を形成する２つのＣｙｓ残基の生じる酸化を、ヨウ素を用い
て達成する（工程２）。末端Ｆｍｏｃ基の脱保護を、２０％のピペリジンを用いて達成し
、続いて３−ＭＰＡのカップリングをする（工程３）。樹脂切断および生成物単離を、８
６％  ＴＦＡ／５％  ＴＩＳ／５％  Ｈ2Ｏ／２％のチオアニソールおよび２％のフェノ
ールを用いて実行し、続いて、ドライアイスで冷却されたＥｔ2Ｏにより沈殿させる（工
程４）。生成物を、Ｄｙｎａｍａｘ  Ｃ18、６０Å、８μｍのガードモジュール、２１ｍ
ｍ×２５ｃｍカラムおよびＵＶ検出器（Ｖａｒｉａｎ  Ｄｙｎａｍａｘ  ＵＶＤ  ＩＩ）
（λ２１４および２５４ｎｍ）を備えたＤｙｎａｍａｘ  Ｃ18、６０Å、８μｍ、２１ｍ
ｍ×２５ｃｍカラムを用いるＶａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）調製用バイナリーＨＰＬＣシ
ステムを用いて調製用逆相ＨＰＬＣにより精製し、ＲＰ−ＨＰＬＣによって決定するよう
に、＞９５％純度で所望のＤＡＣを得る。これらの工程を、以下の概略的ダイアグラムに
例示する。
【０３３６】
【化３１】
2010168384.tif 000032
（２．Ｃ末端における改変）
（実施例６３  ソマトスタチン−２８−ＥＤＡ−ＭＰＡの合成）
１００μｍｏｌの規模での、ＤＡＣ：ソマトスタチン−２８アナログの固相ペプチド合
成を、手動でかつ、ＳＡＳＲＩＮ（超酸感応性樹脂）を用いるＳｙｍｐｈｏｎｙ  Ｐｅｐ
ｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒ上で実行する。以下の保護アミノ酸を、連続的に樹脂
に付加させる：Ｆｍｏｃ−Ｃｙｓ（Ａｃｍ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ
、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔ
Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−ＯＨ
、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−Ｏ
Ｈ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｃｙｓ（Ａｃｍ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ
−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏ
ｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ
（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｍｅ
ｔ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒ
ｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、
Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｂｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ。それらを、Ｎ，Ｎ−ジメチ
ルホルムアミド（ＤＭＦ）中に溶解し、そして配列に従って、Ｏ−ベンゾトリアゾール−
１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−ウロニウムヘキサフルオロホスフェート
（ＨＢＴＵ）およびジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）を用いて活性化する。Ｆｍ
ｏｃ保護基の除去を、２０％（Ｖ／Ｖ）ピペリジンのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（Ｄ
ＭＦ）溶液を用いて２０分間活性化する（工程１）。完全に保護されたペプチドを、１％
ＴＦＡ／ＤＣＭを用いて樹脂から切断する（工程２）。Ａｃｍ基の除去およびジスルフ
ィド架橋を形成する２つのＣｙｓ残基の生じる酸化を、ヨウ素を用いて達成する（工程３
）。次いで、エチレンジアミンおよび３−マレイミドプロピオン酸を、連続的に遊離のＣ
末端に付加する（工程４）。次いで、保護基を切断し、そして生成物を、８６％  ＴＦＡ
／５％  ＴＩＳ／５％  Ｈ2Ｏ／２％のチオアニソールおよび２％のフェノールを用いて
実行し、続いて、ドライアイスで冷却されたＥｔ2Ｏにより沈殿させる（工程５）。生成
物を、Ｄｙｎａｍａｘ  Ｃ18、６０Å、８μｍのガードモジュール、２１ｍｍ×２５ｃｍ
カラムおよびＵＶ検出器（Ｖａｒｉａｎ  Ｄｙｎａｍａｘ  ＵＶＤ  ＩＩ）（λ２１４お
よび２５４ｎｍ）を備えたＤｙｎａｍａｘ  Ｃ18、６０Å、８μｍ、２１ｍｍ×２５ｃｍ
カラムを用いるＶａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）調製用バイナリーＨＰＬＣシステムを用い
て調製用逆相ＨＰＬＣにより精製し、ＲＰ−ＨＰＬＣによって決定するように、＞９５％
純度で所望のＤＡＣを得る。これらの工程を、以下の概略的ダイアグラムに例示する。
【０３３７】
【化３２】
2010168384.tif 000033
（３．内部アミノ酸における改変）
（実施例６４  Ｌｙｓ14（ε−ＭＰＡ）−ソマトスタチン−２８の合成）
１００μｍｏｌの規模での、ＤＡＣ：ソマトスタチン−２８アナログの固相ペプチド合
成を、手動でかつ、Ｆｍｏｃ保護Ｒｉｎｋ  Ａｍｉｄｅ  ＭＢＨＡ樹脂を用いるＳｙｍｐ
ｈｏｎｙ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒ上で実行する。以下の保護アミノ酸
を、連続的に樹脂に付加させる：Ｆｍｏｃ−Ｃｙｓ（Ａｃｍ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ
（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、Ｆｍ
ｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ
（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓ
ｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｃｙｓ（Ａｃｍ）
−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ａｌｏ
ｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ
、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−Ｏ
Ｈ、Ｆｍｏｃ−Ｍｅｔ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍ
ｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ
（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ。それ
らを、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中に溶解し、そして配列に従って、Ｏ−
ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−ウロニウムヘキサ
フルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）およびジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）を用
いて活性化する。Ｆｍｏｃ保護基の除去を、２０％（Ｖ／Ｖ）ピペリジンのＮ，Ｎ−ジメ
チルホルムアミド（ＤＭＦ）溶液を用いて２０分間活性化する（工程１）。Ａｃｍ基の除
去およびジスルフィド架橋を形成する２つのＣｙｓ残基の生じる酸化を、ヨウ素を用いて
達成する（工程２）。Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）基の選択的脱保護を、手動で実行し、そして５
ｍＬのＣＨＣｌ3：ＮＭＭ：ＨＯＡｃ（１８：１：０．５）中に溶解した３当量のＰｄ（
ＰＰｈ３）４の溶液で２時間樹脂を処理することによって達成する（工程３）。次いで、
この樹脂を、ＣＨＣｌ3（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ中の２０％  ＨＯＡｃ（６×５ｍＬ）、
ＤＣＭ（６×５ｍＬ）、およびＤＭＦ（６×５ｍＬ）で洗浄した。次いで、この合成を、
３−マレイミドプリピオン酸の添加のために再自動化する（工程４）。樹脂切断および生
成物単離を、８６％  ＴＦＡ／５％  ＴＩＳ／５％  Ｈ2Ｏ／２％のチオアニソールおよ
び２％のフェノールを用いて実行し、続いて、ドライアイスで冷却されたＥｔ2Ｏにより
沈殿させる（工程５）。生成物を、Ｄｙｎａｍａｘ  Ｃ18、６０Å、８μｍのガードモジ
ュール、２１ｍｍ×２５ｃｍカラムおよびＵＶ検出器（Ｖａｒｉａｎ  Ｄｙｎａｍａｘ  
ＵＶＤ  ＩＩ）（λ２１４および２５４ｎｍ）を備えたＤｙｎａｍａｘ  Ｃ18、６０Å、
８μｍ、２１ｍｍ×２５ｃｍカラムを用いるＶａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）調製用バイナ
リーＨＰＬＣシステムを用いて調製用逆相ＨＰＬＣにより精製し、ＲＰ−ＨＰＬＣによっ
て決定するように、＞９５％純度で所望のＤＡＣを得る。これらの工程を、以下の概略的
ダイアグラムに例示する。
【０３３８】
【化３３】
2010168384.tif 000034
（Ｆ．複数のシステインを含有するペプチドからの改変されたペプチドの調製）
（１．Ｎ末端における改変）
（実施例６５  Ｎ−ＭＰＡ−Ｃｙｓ1−エンドセリン−１（１−２１）−ＯＨの合成）
１００μｍｏｌの規模での、改変されたエンドセリン−１アナログの固相ペプチド合成
を、手動でかつ、Ｆｍｏｃ保護Ｒｉｎｋ  Ａｍｉｄｅ  ＭＢＨＡ樹脂を用いるＳｙｍｐｈ
ｏｎｙ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒ上で実行する。以下の保護アミノ酸を
、連続的に樹脂に付加させる：Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−ｌｌｅ−
ＯＨ、Ｆｍｏｃ−ｌｌｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅ
ｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｃｙｓ（Ａｃｍ）−ＯＨ、Ｆ
ｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、
Ｆｍｏｃ−Ｃｙｓ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−
Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｍｅｔ−Ｏ
Ｈ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（
ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｃｙｓ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−Ｏ
Ｈ、Ｆｍｏｃ−Ｃｙｓ（Ａｃｍ）−ＯＨ。それらを、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（Ｄ
ＭＦ）中に溶解し、そして配列に従って、Ｏ−ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，
Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−ウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）および
ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）を用いて活性化する。Ｆｍｏｃ保護基の除去を
、２０％（Ｖ／Ｖ）ピペリジンのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）溶液を用いて
２０分間活性化する（工程１）。Ａｃｍ基の除去およびジスルフィド架橋を形成する２つ
のＣｙｓ残基の生じる酸化を、ヨウ素を用いて達成する（工程２）。ｔＢｕ基の除去およ
び樹脂上に第２のジスルフィド架橋を形成するその他の２つのＣｙｓの生じる酸化を、タ
リウム（ＩＩＩ）トリフルオロアセテートを用いて達成する（工程３）。末端Ｆｍｏｃ基
の脱保護を、２０％のピペリジンを用い、続いて、３−ＭＰＡのカップリングによって達
成する（工程４）。樹脂切断および生成物単離を、８６％  ＴＦＡ／５％  ＴＩＳ／５％
Ｈ2Ｏ／２％のチオアニソールおよび２％のフェノールを用いて実行し、続いて、ドラ
イアイスで冷却されたＥｔ2Ｏにより沈殿させる（工程５）。生成物を、Ｄｙｎａｍａｘ
Ｃ18、６０Å、８μｍのガードモジュール、２１ｍｍ×２５ｃｍカラムおよびＵＶ検出
器（Ｖａｒｉａｎ
Ｄｙｎａｍａｘ  ＵＶＤ  ＩＩ）（λ２１４および２５４ｎｍ）を備えたＤｙｎａｍａ
ｘ  Ｃ18、６０Å、８μｍ、２１ｍｍ×２５ｃｍカラムを用いるＶａｒｉａｎ（Ｒａｉｎ
ｉｎ）調製用バイナリーＨＰＬＣシステムを用いて調製用逆相ＨＰＬＣにより精製し、Ｒ
Ｐ−ＨＰＬＣによって決定するように、＞９５％純度で所望のＤＡＣを得る。
【０３３９】
【化３４】
2010168384.tif 000035
これらの工程を、上記の概略的ダイアグラムに例示する。
【０３４０】
（２．Ｃ末端における改変）
（実施例６６  エンドセリン−１（１−２１）Ｌｙｓ22−（Ｎε−ＭＰＡ）−ＯＨの合
成）
１００μｍｏｌの規模での、改変されたエンドセリン−１アナログの固相ペプチド合成
を、手動でかつＦｍｏｃ保護Ｒｉｎｋ  Ａｍｉｄｅ  ＭＢＨＡ樹脂を用いるＳｙｍｐｈｏ
ｎｙ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒ上で実行する。以下の保護アミノ酸を、
連続的に樹脂に付加させる：Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（
Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−ｌｌｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−ｌｌｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ
（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆ
ｍｏｃ−Ｃｙｓ（Ａｃｍ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ
）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｃｙｓ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇ
ｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（Ｏｔ
Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｍｅｔ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（
ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｃｙｓ（ｔＢｕ）−Ｏ
Ｈ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｂｏｃ−Ｃｙｓ（Ａｃｍ）−ＯＨ。それらを、
Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中に溶解し、そして配列に従って、Ｏ−ベンゾ
トリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−ウロニウムヘキサフルオ
ロホスフェート（ＨＢＴＵ）およびジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）を用いて活
性化する。Ｆｍｏｃ保護基の除去を、２０％（Ｖ／Ｖ）ピペリジンのＮ，Ｎ−ジメチルホ
ルムアミド（ＤＭＦ）溶液を用いて２０分間活性化する（工程１）。Ａｃｍ基の除去およ
び樹脂上に第１ジスルフィド架橋を形成する第１の２つのＣｙｓ残基の生じる酸化を、ヨ
ウ素を用いて達成する（工程２）。ｔＢｕ基の除去および樹脂上に第２のジスルフィド架
橋を形成するその他の２つのＣｙｓの生じる酸化を、タリウム（ＩＩＩ）トリフルオロア
セテートを用いて達成する（工程３）。Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）基の選択的脱保護を、手動で
実行し、そして５ｍＬのＣＨＣｌ3：ＮＭＭ：ＨＯＡｃ（１８：１：０．５）中に溶解し
た３当量のＰｄ（ＰＰｈ3）4の溶液で２時間樹脂を処理することによって達成する（工程
４）。次いで、この樹脂を、ＣＨＣｌ3（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ中の２０％  ＨＯＡｃ（
６×５ｍＬ）、ＤＣＭ（６×５ｍＬ）、およびＤＭＦ（６×５ｍＬ）で洗浄する。次いで
、この合成を、３−マレイミドプリピオン酸の添加のために再自動化する（工程５）。樹
脂切断および生成物単離を、８６％  ＴＦＡ／５％  ＴＩＳ／５％  Ｈ2Ｏ／２％のチオ
アニソールおよび２％のフェノールを用いて実行し、続いて、ドライアイスで冷却された
Ｅｔ2Ｏにより沈殿させる（工程６）。生成物を、Ｄｙｎａｍａｘ  Ｃ18、６０Å、８μ
ｍのガードモジュール、２１ｍｍ×２５ｃｍカラムおよびＵＶ検出器（Ｖａｒｉａｎ  Ｄ
ｙｎａｍａｘ  ＵＶＤ  ＩＩ）（λ２１４および２５４ｎｍ）を備えたＤｙｎａｍａｘ  
Ｃ18、６０Å、８μｍ、２１ｍｍ×２５ｃｍカラムを用いるＶａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ
）調製用バイナリーＨＰＬＣシステムを用いて調製用逆相ＨＰＬＣにより精製し、ＲＰ−
ＨＰＬＣによって決定するように、＞９５％純度で所望のＤＡＣを得る。これらの工程を
、以下の概略的ダイアグラム中に図示する。
【０３４１】
【化３５】
2010168384.tif 000036
（３．内部アミノ酸における改変）
（実施例６７  Ｌｙｓ4（Ｎε−ＭＰＡ）サラフォトキシンＢ（１−２１）−ＯＨの合
成）
１００μｍｏｌの規模での、改変されたサラフォトキシン−Ｂアナログの固相ペプチド
合成を、手動でかつＦｍｏｃ保護Ｒｉｎｋ  Ａｍｉｄｅ  ＭＢＨＡ樹脂を用いるＳｙｍｐ
ｈｏｎｙ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒ上で実行する。以下の保護アミノ酸
を、連続的に樹脂に付加させる：Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−ｌｌｅ
−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇ
ｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｃｙｓ（Ａｃｍ
）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌ
ｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｃｙｓ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ
、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ
−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｍｅｔ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−
ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｃｙｓ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍ
ｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｂｏｃ−Ｃｙｓ（Ａｃｍ）−ＯＨ。それらを、Ｎ，Ｎ−
ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中に溶解し、そして配列に従って、Ｏ−ベンゾトリアゾ
ール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−ウロニウムヘキサフルオロホスフ
ェート（ＨＢＴＵ）およびジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）を用いて活性化する
。Ｆｍｏｃ保護基の除去を、２０％（Ｖ／Ｖ）ピペリジンのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミ
ド（ＤＭＦ）溶液を用いて２０分間活性化する（工程１）。Ａｃｍ基の除去および樹脂上
に第１ジスルフィド架橋を形成する第１の２つのＣｙｓ残基の生じる酸化を、ヨウ素を用
いて達成する（工程２）。ｔＢｕ基の除去および樹脂上に第２のジスルフィド架橋を形成
するその他の２つのＣｙｓの生じる酸化を、タリウム（ＩＩＩ）トリフルオロアセテート
を用いて達成する（工程３）。Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）基の選択的脱保護を、手動で実行し、
そして５ｍＬのＣＨＣｌ3：ＮＭＭ：ＨＯＡｃ（１８：１：０．５）中に溶解した３当量
のＰｄ（ＰＰｈ3）4の溶液で２時間樹脂を処理することによって達成する（工程４）。次
いで、この樹脂を、ＣＨＣｌ3（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ中の２０％  ＨＯＡｃ（６×５ｍ
Ｌ）、ＤＣＭ（６×５ｍＬ）、およびＤＭＦ（６×５ｍＬ）で洗浄する。次いで、この合
成を、３−マレイミドプリピオン酸の添加のために再自動化する（工程５）。樹脂切断お
よび生成物単離を、８６％  ＴＦＡ／５％  ＴＩＳ／５％  Ｈ2Ｏ／２％のチオアニソー
ルおよび２％のフェノールを用いて実行し、続いて、ドライアイスで冷却されたＥｔ2Ｏ
により沈殿させる（工程６）。生成物を、Ｄｙｎａｍａｘ  Ｃ18、６０Å、８μｍのガー
ドモジュール、２１ｍｍ×２５ｃｍカラムおよびＵＶ検出器（Ｖａｒｉａｎ  Ｄｙｎａｍ
ａｘ  ＵＶＤ  ＩＩ）（λ２１４および２５４ｎｍ）を備えたＤｙｎａｍａｘ  Ｃ18、６
０Å、８μｍ、２１ｍｍ×２５ｃｍカラムを用いるＶａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）調製用
バイナリーＨＰＬＣシステムを用いて調製用逆相ＨＰＬＣにより精製し、ＲＰ−ＨＰＬＣ
によって決定するように、＞９５％純度で所望のＤＡＣを得る。これらの工程を、以下の
概略的ダイアグラム中に図示する。
【０３４２】
【化３６】
2010168384.tif 000037
（Ｆ．ペプチド安定性アッセイ）
（実施例６８  Ｋ５のペプチド安定性アッセイ）
ペプチド安定性アッセイを実行した。（ＭＰＡ）−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−
Ｔｙｒ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−ＮＨ2。２ＴＦＡを、上記の通りに合成し、そしてＭＰＡ−Ｋ
５を同定した。非改変の対応ペプチドＰｒｏ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ａｓｐ
−Ｌｙｓもまた、３−ＭＰＡの付加なしで実施例２０に記載の通りに合成し、そしてＫ５
として同定した。
【０３４３】
Ｋ５（ＭＷ１２６０．１８、９１８．１２遊離塩基）を、水中の１００ｍＭの貯蔵溶液
として調製した。ＭＰＡ−Ｋ５（ＭＷ＝１４１１．１７、１０６９．１１遊離塩基）を、
水中の１００ｍＭの貯蔵溶液として調製した。ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）を、Ａｌｐ
ｈａ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃから入手可能なＡｌｂｕｔｅｉｎ（登録商標）として２５
％溶液（計算値２５０ｍｇ／ｍｌ、３．７５ｍＭ）として得た。ヒト血漿を、Ｇｏｌｄｅ
ｎ  Ｗｅｓｔ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓから得た。
【０３４４】
（１）ヒト血漿におけるＫ５の安定性
Ｋ５を１μＭの溶液として調製し、そして２５％のヒト血清アルブミン中に溶解させた
。次いで、この混合物を、ヒト血漿の存在下で最終濃度１６０ｍＭのＫ５まで３７℃にて
インキュベートした。１００μｌのアリコートを、０、４および２４時間において血漿か
ら回収した。１００μｌのアリコートをすべてのタンパク質を沈殿させるために、１００
μｌのブロッキング溶液（５容量の５％のＺｎＳＯ4／３容量のアセトニトリル／２容量
のメタノール）で混合した。サンプルを１０，０００ｇにて５分間遠心分離し、そしてペ
プチドを含有する上清を、再転換し、そして０．２２μｍフィルターを通して濾過した。
遊離インタクトなＫ５ペプチドの存在を、ＨＰＬＣ／ＭＳによりアッセイした。結果を以
下に示す。血清におけるＫ５ペプチドの検出についてのＨＰＬＣパラメータは、以下の通
りであった。
【０３４５】
ＨＰＬＣ方法は、以下の通りであった：Ａ  Ｖｙｄａｃ  Ｃ１８  ２５０×４．６ｍｍ
、５μ粒子サイズカラムを利用した。カラム温度は、３０℃であり、流速は、０．５ｍｌ
／分であった。流動性相Ａは、０．１％のＴＦＡ／水であった。流動性相Ｂは、０．１％
ＴＦＡ／アセトニトリルであった。注入容量は、１０μｌであった。
【０３４６】
勾配は、以下の通りであった：
時間（分）          ％Ａ      ％Ｂ
０                ９５        ５
２０                ７０      ３０
２５                １０      ９０
３０                １０      ９０
３５                ９５        ５
４５                ９５        ５
タンパク質を２１４、２１５および３３４ｎｍにて検出した。質量分光分析のために、
イオン化様式は、３００〜２０００のＭ／Ｚ範囲におけるＡＰＩ−エレクトロスプレー（
陽性様式）であった。ゲインは、３．０であり、フラグメンターは、１２０ｖであり、闘
値は、２０であり、ステップサイズは、０．１であった。ガス温度は、３５０℃であり、
そして乾燥ガス容量は、１０．０ｌ／分であった。Ｎｅｂ圧力は、２４ｐｓｉであり、そ
してＶｃａｐは、３５００Ｖであった。ＨＰＬＣ方法は以下の通りであった：Ａ  Ｖｙｄ
ａｃ  Ｃ１８  ２５０×４．６分、５μ  粒子サイズカラムを利用した。カラム温度は、
３０℃であり、流速は、０．５ｍｌ／分であった。流動性相Ａは、０．１％のＴＦＡ／水
であった。流動性相Ｂは、０．１％のＴＦＡ／アセトニトリルであった。注入容量は、１
０μｌであった。
【０３４７】
勾配は、以下のとおりであった：
時間（分）            ％Ａ      ％Ｂ
０                  ９５        ５
２０                  ７０      ３０
２５                  １０      ９０
３０                  １０      ９０
３５                  ９５        ５
４５                  ９５        ５
タンパク質を、２１４、２５４および３３４ｎｍにて検出した。質量分光分析のために
、イオン化様式は、３００〜２０００のＭ／Ｚ範囲におけるＡＰＩ−エレクトロスプレー
（陽性様式）であった。ゲインは、３．０であり、フラグメンターは、１２０ｖであり、
闘値は、２０であり、ステップサイズは、０．１であった。ガス温度は、３５０℃であり
、そして乾燥ガス容量は、１０．０ｌ／分であった。Ｎｅｂ圧力は、２４ｐｓｉであり、
そしてＶｃａｐは、３５００Ｖであった。
【０３４８】
時間          血漿中の％Ｋ５ペプチド
０時間                １００％
４時間                    ９％
２４時間                    ０％
結果は、非改変のＫ５ペプチドが、プロテアーゼ活性の結果と同様に血漿中で不安定で
あることを実証する。
【０３４９】
（２）血漿中のＭＰＡ−Ｋ５−ＨＳＡ結合体の安定性
ＭＰＡ−Ｋ５（改変Ｋ５ペプチド）を、室温にて２５％  ＨＳＡを用いて２時間インキ
ュベートした。次いで、ＭＰＡ−Ｋ５−結合体を、最終濃度１６０μｍでヒト血漿の存在
下３７℃にてインキュベートした。特定のインキュベーション期間（０、４および２４時
間）の後、１００μｌのアリコートを、取り上げ、そして０．２２μフィルターを通して
濾過した。インタクトな結合体の存在を、ＨＰＬＣ−ＭＳによりアッセイした。
【０３５０】
カラムは、Ａｑｕａｐｏｒｅ  ＲＰ−３００、２５０×４．６ｍｍ、７μ粒子サイズで
あった。カラム温度は、５０℃であった。流動性相Ａは、０．１％  ＴＦＡ／水であった
。流動性相Ｂは、０．１％  ＴＦＡ／アセトニトリルであった。注入容量は、１μｌであ
った。勾配は、以下の通りであった：
時間（分）      ％Ａ        ％Ｂ        流速（ｍｌ／分）
０            ６６        ３４        ０．７００
１            ６６        ３４        ０．７００
２５        ５８．８    ４１．２        ０．７００
３０            ５０        ５０          ０．７０
３５              ５        ９５          １．００
４１              ５        ９５          １．００
４５            ６６        ３４          １．００
４６            ６６        ３４          ０．７０。
【０３５１】
ペプチドを、定量化のために２１４ｎｍにて検出した。ペプチドの質量分光分析のため
に、イオン化様式は、１２８０〜１５００ｍ／ｚの範囲のＡＰＩ−エレクトロスプレーで
あり、ゲイン１．０、フラグメンター１２５Ｖ、闘値１００、ステップサイズ０．４０で
あった。ガス温度は、３５０℃であり、乾燥ガスは、１３．０ｌ／分であった。圧力は、
６０ｐｓｉであり、そしてＶｃａｐは、６０００Ｖであった。結果を、以下に示す。
【０３５２】
血流における循環するアルブミンのおよそ３３％は、メルカプトアルブミン（ＳＨ−ア
ルブミン）であり、これは、内因性スルフヒドリル化合物（例えば、システインまたはグ
ルタチオン）によってブロックされ、従って、マレイミド基との反応に利用可能である。
循環するアルブミンの残余の６６％は、キャップされるかまたはスルフヒドリル化合物に
よってブロックされる。ＨＰＬＣ  ＭＳアッセイは、キャップされたＨＳＡ、ＳＨ−アル
ブミン、およびＫ５−ＭＰＡ−アルブミンの同定を可能にする。ＭＰＡは、アルブミン上
で遊離のチオールに共有結合する。血漿中のアルブミンの３つの形態の安定性は、以下に
示される。
【０３５３】
【表１】
2010168384.tif 000038
Ｋ５−ＭＰＡ−ＨＳＡの百分率は、非改変のＫ５と対称的に、２４時間の血漿アッセイ
を通して相対的に一定のままであり、血漿中で４時間のみでＫ５の元のの量の９％まで減
少させた。結果は、血漿中でかなり不安定なＫ５と対照的に、Ｋ５−ＭＰＡ−ＨＳＡは、
血漿中でペプチターゼ活性からかなり安定であることを実証する。
【０３５４】
（実施例７０  ダイノルフィンのペプチド安定性アッセイ）
血清ペプチターゼの存在下でペプチド結合体の安定性を決定するために、Ｄｙｎ  Ａ−
（１−１３）−ＯＨ、Ｄｙｎ  Ａ−（１−１３）−ＮＨ2およびＤｙｎ
Ａ  １−１３（ＭＰＡ）−ＮＨ2の血清安定性を、比較した。Ｄｙｎ  Ａ−（１−１３
）−ＯＨ、Ｄｙｎ  Ａ−（１−１３）−ＮＨ2およびＤｙｎ  Ａ−１−１３（ＭＰＡ）−
ＮＨ2を上記の通りに合成した。ダイノルフィンペプチドを、ヒトヘパリン処理化血漿を
用いて最終濃度４ｍｇ／ｍＬまで混合した。３７℃での必要なインキュベーション時間（
０，２０、２０、６０、１２０、１８０、３６０および４８０分）の後、１００μＬのア
リコートを、すべてのタンパク質を沈殿させる１００μＬのブロック溶液（５％ＺｎＳＯ
4水溶液の５容量、アセトニトリルの３容量、メタノールの２容量）に添加した。遠心分
離（１０，０００ｇ、２．５分間）の後、透明な上清を回収し、０．４５μｍフィルター
を通して濾過し、そしてＬＣ／ＭＳ分析まで氷上で貯蔵した。
【０３５５】
サンプルを２１４ｎｍにおいてＬＣを用いて分析し、検出された化合物の同一性を決定
するために、異なる化合物およびＭＳの存在を検出した。次いで、ＬＣクロマトグラムか
らの各ピークについての積分面積％を、時間およびヒト血漿中で決定された相対安定性に
対してプロットした。
【０３５６】
Ｄｙｎ  Ａ−（１−１３）−ＯＨおよびＤｙｎ  Ａ−（１−１３）−ＮＨ2についての
安定性データは、文献に報告されたデータと一致した：ダイノルフィンペプチドのタンパ
ク分解性崩壊は、かなり迅速である。Ｄｙｎ  Ａ−（１−１３）−ＯＨは、約１０分の半
減期を有した。Ｄｙｎ  Ａ−（１−１３）−ＮＨ2は、約３０分の半減期を有した。対照
的に、Ｄｙｎ  Ａ−（１−１３）−ＮＨ2は、血清ペプチターゼ活性の存在下で顕著な安
定性を示した。非改変ダイノルフィンペプチドを、６０分以内に分解する。対照的に、改
変ダイノルフィンペプチド（Ｄｙｎ  Ａ−（１−１３）−ＮＨ2）は、４８０分まで血清
ペプチターゼ活性に安定である。
【０３５７】
ダイノルフィン結合体の安定性決定を、ＥＬＩＳＡによって決定する。観測されたシグ
ナルが、ダイノルフィン結合体に起因するか否かおよびこの結合体が、何かを決定するた
めに、８時間後の反応混合物のＬＣ質量分光分析を実行した。質量分光法の使用は、結合
体の分子量の決定を可能にし、そしてダイノルフィン結合体の任意の切断された形態であ
るか否かの決定を可能にする。ヒト血漿の質量分析は、アルブミンの２つの形態、６６４
３６Ｄａでの遊離のチオールおよび６６５５７Ｄａにおける酸化形態を示す。質量分光法
はまた、均等な混合物での、Ｄｙｎ  ２−１３切断化結合体（６８０４６Ｄａ）とインタ
クトなＤｙｎ  １−１３結合体（６８２０７Ｄａ）との間で区別し得る。
【０３５８】
４８０分の曝露の後、血清から得たダイノルフィンサンプルの血清ペプチターゼに対す
る質量分光分析は、インタクトな結合体（６８１９２Ｄａ）の存在のみを同定し、崩壊産
物の存在を同定しなく、それによって、血清ペプチターゼ活性からのダイノルフィン結合
体の安定性を実証する。
【０３５９】
【表２】
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【配列表】
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