(57)【要約】【課題】優れた効果を有する育毛養毛剤と、この育毛養毛剤の有効成分に適したＮＴ−４発現阻害剤を提供する。【解決手段】本発明のＮＴ−４発現阻害剤は、下記一般式（１）  【化１】2010241728.tif 000015で示されるダフネファクターＦ３を有効成分として含むことを特徴とする。前記ダフネファクターＦ３はアサクー抽出物から分画されたＮＴ−４発現阻害作用に優れたアサクー抽出分画物を分画精製することにより得られる。本発明の育毛養毛剤は本発明のＮＴ−４発現阻害剤を有効成分として含むことを特徴とする。【選択図】        図２
2010241728.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
［１］  下記一般式（１）
【化１】
2010241728.tif 000013
（式中、Ｍｅはメチル基を示す。）
で示されるダフネファクターＦ３を有効成分として含むＮＴ−４発現阻害剤。
【請求項２】
前記ダフネファクターＦ３がアサクー水性有機溶媒抽出物から分画されたＮＴ−４発現阻害作用に優れたアサクー抽出分画物を分画精製することにより得られたものであることを特徴とする請求項１に記載のＮＴ−４発現阻害剤。
【請求項３】
前記ダフネファクターＦ３が前記アサクー抽出分画物を逆相高速液体クロマトグラフィーにより分画精製して得られた画分のうちの着色の低い画分から得られたものであることを特徴とする請求項２に記載のＮＴ−４発現阻害剤。
【請求項４】
前記アサクー抽出分画物が、アサクー水性有機溶媒抽出物から水溶性分画物が除去されてなるアサクー有機溶媒分画物を更に液体クロマトグラフィーにより溶媒強度を変化させて分取した液体クロマトグラフィー分画物であることを特徴とする請求項２または３に記載のＮＴ−４発現阻害剤。
【請求項５】
請求項１〜４のいずれか１項に記載のＮＴ−４発現阻害剤を有効成分として含有することを特徴とする育毛養毛剤。
【請求項６】
ＮＴ−４発現阻害剤の有効成分として用いられる、下記一般式（１）
【化１】
2010241728.tif 000014
（式中、Ｍｅはメチル基を示す。）
で示されるダフネファクターＦ３の製造方法であって、アサクー材の破砕物を水性有機溶媒により抽出した水性有機溶媒抽出物を用意する第１の工程と、前記水性有機溶媒抽出物を水と有機溶媒とを用いて液液分離して、水溶性分画物を除去したＮＴ−４発現阻害作用を有するアサクー有機溶媒分画物を得る第２の工程と、前記アサクー有機溶媒分画物を液体クロマトグラムを用いて溶媒強度を変化させて分画することによりＮＴ−４発現阻害作用に優れた液体クロマトグラフィー分画物を分取する第３の工程と、前記液体クロマトグラフィー分画物を逆相高速液体クロマトグラフィーにより分画精製し、得られた画分のうちの最もＮＴ−４発現阻害作用が高くかつ着色の低い画分を分取することにより前記ダフネファクターＦ３を得る第４の工程を有することを特徴とするダフネファクターＦ３の製造方法。
【請求項７】
前記液体クロマトグラムがシリカゲルカラム液体クロマトグラムまたはアルミナカラム液体クロマトグラムであることを特徴とする請求項６に記載のダフネファクターＦ３の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、Ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｎ−４（本明細書では、ＮＴ−４と略記する場合もある）の発現阻害作用を有するダフネファクターＦ３を有効成分として含むＮＴ−４発現阻害剤、該阻害剤を有する育毛養毛剤、並びにダフネファクターＦ３の製造方法に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
ＮＴ−４は、アポトーシス誘導を促進する蛋白質としても知られている。
アポトーシス誘導蛋白質としてのＮＴ−４は、最近の研究により動物の脱毛症に寄与していることが報告されている（非特許文献１）。脱毛症の発症原因、発症機序については多くの研究がなされており、いまだ不明な点が多いが、毛母細胞または／および周辺細胞におけるＮＴ−４の発現によりアポトーシスが促進され、脱毛症が生じることが確認されている。
【０００３】
本願発明者らは、本願に先立って、「アポトーシス誘導促進蛋白質の阻害物質を有効成分として含むことを特徴とする育毛養毛剤」を提案している（特許文献１）。前記阻害物質としては、椿皮、九節菖蒲、レンゲソウ、アサクー、エクロニアなどの植物抽出物を特定している。この育毛養毛剤は、優れた育毛養毛効果を有し、かつ長期に亘る使用に十分耐え得る安全性を備えている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開２００６−２３２８２８号公報
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】ＦＡＳＥＢ  Ｊ．（１９９９），１３（２）：３９５−４１０
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
上記育毛養毛剤の製品としての性能をさらに向上させるために、本発明者らが検討したところ、以下のような改良すべき点があることを知るに到った。
有効成分として用いる植物抽出物は、既知および未知の複数種の有機化合物から構成されていると推定される。それら構成成分の組成比および成分量が、各植物の産地や採集時期などの違いによって、変動することがある。そのため、植物の粗抽出物を有効成分として含有する育毛養毛剤では、その効果が採取時期や原料産地の違いによって、差が生じる場合がある。したがって、上記育毛養毛剤をより実用的なものとするためには、原料植物の種類やそれらの採取時期、産地の違いによって、育毛養毛効果に変動を生じないように改良することが望まれる。また、植物抽出物には、着色性があり、製剤化する場合、有効成分としての植物抽出物の濃度の増加に伴って着色の程度も上昇するため、植物抽出物の配合量を一定量以上に増加させることができず、ＮＴ−４発現阻害効果を高めることができない場合があった。
【０００７】
上記ＮＴ−４発現阻害作用を有する植物抽出物から採取時期や原料産地の違いによって影響を受けない安定した作用を示す成分が精製分離することができれば、その成分は上述の育毛養毛剤として安定した効果が期待できる。
【０００８】
したがって、本発明の課題は、安定したＮＴ−４発現阻害作用を有し、着色の低いＮＴ−４発現阻害剤、該阻害剤を有する育毛養毛剤、並びにＮＴ−４発現阻害剤の有効成分の製造方法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
前記課題を解決するために、本願発明者らが鋭意実験、検討を重ねたところ、顕著なＮＴ−４発現阻害作用を有するアサクー抽出物をクロマトグラフィーとＮＴ−４発現阻害率測定法を用いて分画精製したところ、最もＮＴ−４発現阻害率が高く、かつ着色の少ない画分を特定することができた。さらにこの画分を化学的に同定したところ、ダフネファクターＦ３であることを知見するに至った。
【００１０】
上記ダフネファクターＦ３（Daphne factor F3）とは、ジンチョウゲ科やトウダイグサ科の植物に含まれる成分として化学的に同定された化合物であり、下記一般式（１）で示される構造を有する（例えば、ＰＨＹＴＯＴＨＥＲＡＰＹ  ＲＥＳＥＡＲＣＨ（１９９１），５：１６３−１６８参照）。
【００１１】
【化１】
2010241728.tif 000003
（式中、Ｍｅはメチル基を示す。）
【００１２】
本発明は、上記知見に基づいてなされたもので、下記構成を採用したＮＴ−４発現阻害剤、該阻害剤を有する育毛養毛剤、並びにダフネファクターＦ３の製造方法を提供する。
【００１３】
［１］  下記一般式（１）
【００１４】
【化１】
2010241728.tif 000004
（式中、Ｍｅはメチル基を示す。）
で示されるダフネファクターＦ３を有効成分として含むＮＴ−４発現阻害剤。
【００１５】
［２］  前記ダフネファクターＦ３がアサクー水性有機溶媒抽出物から分画されたＮＴ−４発現阻害作用に優れたアサクー抽出分画物を分画精製することにより得られたものであることを特徴とする、上記［１］に記載のＮＴ−４発現阻害剤。
【００１６】
［３］  前記ダフネファクターＦ３が前記アサクー抽出分画物を逆相高速液体クロマトグラフィーにより分画精製して得られた画分のうち着色の低い画分から得られたものであることを特徴とする、上記［２］に記載のＮＴ−４発現阻害剤。
【００１７】
［４］  前記アサクー抽出分画物が、アサクー水性有機溶媒抽出物から水溶性分画物が除去されてなるアサクー有機溶媒分画物を更に液体クロマトグラフィーにより溶媒強度を変化させて分取した液体クロマトグラフィー分画物であることを特徴とする、上記［２］または［３］に記載のＮＴ−４発現阻害剤。
【００１８】
［５］  上記［１］〜［４］のいずれか一つに記載のＮＴ−４発現阻害剤を有効成分として含有することを特徴とする育毛養毛剤。
【００１９】
［６］  ＮＴ−４発現阻害剤の有効成分として用いられる、下記一般式（１）
【００２０】
【化１】
2010241728.tif 000005
（式中、Ｍｅはメチル基を示す。）
で示されるダフネファクターＦ３の製造方法であって、アサクー材の破砕物を水性有機溶媒により抽出した水性有機溶媒抽出物を用意する第１の工程と、前記水性有機溶媒抽出物を水と有機溶媒とを用いて液液分離して、水溶性分画物を除去したＮＴ−４発現阻害作用を有するアサクー有機溶媒分画物を得る第２の工程と、前記アサクー有機溶媒分画物を液体クロマトグラムを用いて溶媒強度を変化させて分画することによりＮＴ−４発現阻害作用に優れた液体クロマトグラフィー分画物を分取する第３の工程と、前記液体クロマトグラフィー分画物を逆相高速液体クロマトグラフィーにより分画精製し、得られた画分のうちの最もＮＴ−４発現阻害作用が高くかつ着色の低い画分を分取することにより前記ダフネファクターＦ３を得る第４の工程を有することを特徴とするダフネファクターＦ３の製造方法。
【００２１】
［７］  前記液体クロマトグラムがシリカゲルカラム液体クロマトグラムまたはアルミナカラム液体クロマトグラムであることを特徴とする、上記［６］に記載のダフネファクターＦ３の製造方法。
【００２２】
なお、本発明で言う「育毛養毛剤」とは、育毛および養毛を促進する作用を有し、ヘアートニック、ヘアークリームなどの具体的組成物に添加することにより、育毛養毛を促進する効果を付与した育毛養毛用組成物を調製するための薬剤を意味する。本発明の育毛養毛剤を含む育毛養毛用組成物を、哺乳類の主に頭皮に適用することにより、育毛養毛を促進する効果が得られる。
【発明の効果】
【００２３】
本発明にかかるＮＴ−４発現阻害剤は、高いＮＴ−４発現阻害効果を安定的に有する化合物であるダフネファクターＦ３を有効成分として含み、ＮＴ−４の発現そのものを阻害する作用を発揮する。
【００２４】
また、本発明にかかるＮＴ−４発現阻害剤は、上述のように高いＮＴ−４発現阻害効果を安定的に有する化合物であるダフネファクターＦ３を有効成分として含み、ＮＴ−４の発現そのものを阻害する作用を発揮するので、ＮＴ−４に起因するアポトーシスの誘導を防止することができる。したがって、本発明に係るＮＴ−４発現阻害剤は、ＮＴ−４によるアポトーシスに起因して生体に生じる悪影響の予防、治療及び改善のために有用である。特に、毛包におけるＮＴ−４によるアポトーシスの誘導を防止することにより、哺乳類に対する育毛養毛効果を発揮することができる。その他にアポトーシスが関与していると考えられているアルツハイマー病や脳梗塞の予防および治療薬として、本発明に係るＮＴ−４発現阻害剤は有用であると考えられる。また、本発明にかかるＮＴ−４発現阻害剤が発揮するＮＴ−４発現阻害効果は、使用単位当たり、アサクー粗抽出物（水性有機溶媒抽出物）の約５００倍にも達するほどに増強される。そのため、所定の育毛養毛効果を得るための使用量を大幅に低減することができる。即ち、効果に対する使用量が植物抽出物に比べて少量で済むので、アサクー粗抽出物が有する色素を起因とする育毛養毛剤の着色を容易に防止することができるという効果も得られる。
【００２５】
また、ＮＴ−４発現阻害効果に優れた化合物として特定されたダフネファクターＦ３は、現在のところ化学合成によって安定的に製造することが困難である。これに対して、本発明のダフネファクターＦ３の製造方法は、アサクー抽出物から安定的かつ効率的にダフネファクターＦ３を製造することができるので、大変有用である。
【００２６】
上述のように、本発明にかかるＮＴ−４発現阻害剤は、ＮＴ−４によるアポトーシスに起因して生体に生じる悪影響の予防、治療及び改善に有用であり、例えば、哺乳類の脱毛症、特に男性型脱毛症を改善すると共に、長期に亘る使用に十分耐え得る安全性を備えているので、使用感の良好な育毛養毛剤の有効成分として産業的価値を有し、医療組成物や毛髪化粧料などの育毛養毛用組成物として利用することができる。さらに、本発明にかかるＮＴ−４発現阻害剤は、育毛養毛剤としての利用の他に、アポトーシスに起因して生体に生じると推測されるアルツハイマー病や脳梗塞の予防および治療薬として有用であると考えられる。
【図面の簡単な説明】
【００２７】
【図１】図１は、実施例における逆相高速液体クロマトグラフィー（以下、逆相ＨＰＬＣと略記する場合もある）を用いた１回目の分画操作で得たＨＰＬＣクロマトグラムを示した図である。
【図２】図２は、実施例における逆相高速液体クロマトグラフィー（以下、逆相ＨＰＬＣと略記する場合もある）を用いた２回目の分画操作で得たＨＰＬＣクロマトグラムを示した図である。
【発明を実施するための形態】
【００２８】
以下に、本発明の実施形態について説明する。
上述のように、本発明にかかるＮＴ−４発現阻害剤は、下記一般式（１）
【００２９】
【化１】
2010241728.tif 000006
（式中、Ｍｅはメチル基を示す。）
で示されるダフネファクターＦ３を有効成分として含むことを特徴とする。
前記ダフネファクターＦ３はアサクー水性有機溶媒抽出物から分画されたＮＴ−４発現阻害作用に優れたアサクー抽出分画物を分画精製することにより得られたものが好ましくは用いられるが、他の植物源から分画精製されたものや、化学合成品を入手できれば、それらを用いてもよい。
【００３０】
また、本発明にかかるダフネファクターＦ３の製造方法は、上述のように、アサクー材の破砕物を水性有機溶媒により抽出した水性有機溶媒抽出物を用意する第１の工程と、前記水性有機溶媒抽出物を水と有機溶媒とを用いて液液分離して、水溶性分画物を除去したＮＴ−４発現阻害作用を有するアサクー有機溶媒分画物を得る第２の工程と、前記アサクー有機溶媒分画物を液体クロマトグラムを用いて溶媒強度を変化させて分画することによりＮＴ−４発現阻害作用に優れた液体クロマトグラフィー分画物を分取する第３の工程と、前記液体クロマトグラフィー分画物を逆相高速液体クロマトグラフィーにより分画精製し、得られた画分のうちの最もＮＴ−４発現阻害作用が高くかつ着色の低い画分を分取することにより前記ダフネファクターＦ３を得る第４の工程を有することを特徴とする。
以下、本発明の実施形態について詳しく説明する。
【００３１】
（ＮＴ−４発現阻害剤）
本発明のＮＴ−４発現阻害剤は、有効成分としてダフネファクターＦ３を含むことを特徴とする。本発明の実施形態では、ダフネファクターＦ３はアサクーの粗抽出物からクロマトグラフィーおよびＮＴ−４発現阻害率測定法とを組み合わせてＮＴ−４発現阻害率の高い成分を分画精製することにより得る。以下、本発明のＮＴ−４発現阻害剤の調製方法（ダフネファクターＦ３の製造方法）の各工程を説明する。
【００３２】
（第１の工程：アサクー粗抽出物（水性有機溶媒抽出物）の調製）
アサクー（学名：Ｈｕｒａ  ｃｒｅｐｉｔａｎｓ  Ｌ．）は、熱帯アメリカ等の熱帯地域に自生する木本植物であり、その用部に特に限定はないが、有効性を発揮させる点から、材、すなわち茎の木質の部分が好適である。アサクー粗抽出物は、市販品あるいは公知の抽出方法よって得られたものを使用に供する。
前記抽出方法に用いる溶媒（以下、「抽出溶媒」という場合もある。）としては、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール等のアルコール類；プロピレングリコール、ブチレングリコール等の多価アルコール類およびその水溶液などの水性有機溶媒が挙げられ、これらを単独で又は２種以上の混合溶媒として用いることができる。
【００３３】
前記抽出方法における各種条件は、特に制限されるものではないが、通常、抽出原料と前記抽出溶媒との比率は、質量比で抽出原料：抽出溶媒＝１：２〜１：５０程度の範囲が好ましい。また、抽出温度は、５〜８０℃の範囲が好ましく、１時間〜１週間、抽出溶媒に浸漬したり、攪拌したりすることによって行うことが好ましい。なお、抽出ｐＨは、極端な酸性又はアルカリ性でなければ、特に制限はない。
このアサクー粗抽出物のＮＴ−４発現阻害率は、後述の実施例に示すように、アサクー材の入手先によってある程度の変動があるが、平均すると１ｐｐｍで１２％程度である。
【００３４】
なお、ここで言う「ＮＴ−４発現阻害率」とは、培養細胞系において活性型男性ホルモン（ＤＨＴ）によって誘導されるＮＴ−４の発現量を基準に、アサクー分画物を添加した場合の発現阻害量の割合として定義される値である。
【００３５】
（第２の工程：アサクー有機溶媒分画物の調製）
上記アサクー粗抽出物を水と有機溶媒を用いた液液分画に供し、ＮＴ−４発現阻害率の低い水層溶出成分（水溶性成分）を除去することによりＮＴ−４発現阻害率の高いアサクー有機溶媒分画物（有機溶媒層溶出成分）が得られる。
前記有機溶媒としては、酢酸エチル、アセトン、酢酸メチルなどを用いることができ、酢酸エチルが好適であり、水との配合比（重量）は、通常１：１の配合比にて実施するが、それに限定されるものではない。
このアサクー有機溶媒分画物のＮＴ−４発現阻害率は、後述の実施例に示すように、原材料の入手先によってある程度の変動があるが、平均すると、１ｐｐｍで６０％〜７０％である。
【００３６】
（第３の工程：液体クロマトグラフィー分画物（アサクー抽出分画物）の調製）
前記アサクー有機溶媒分画物を、液体クロマトグラムの固定相カラムに吸着させて、この固定カラムに溶媒強度が順次に増加するように調製した複数種の有機溶媒を順次通過させ、溶離してくる成分（液体クロマトグラフィー分画物）を順次に分取する。すなわち、溶媒強度に対応した分画物を分取する。そして、分取した分画物の内のＮＴ−４発現阻害率が高い（好ましくは２０％以上）ものを選択採取する。
固定相カラムとしては、シリカゲルカラムとアルミナカラムを用いる。溶離溶媒として用いる有機溶媒としては、ヘキサン、イソオクタン、ジエチルエーテル、アセトン、エタノール、メタノールなどを使用し、単独あるいは組み合わせることによって、溶媒強度を調整する。
【００３７】
前述のように溶媒強度にしたがって分取された分画物のＮＴ−４発現阻害率には、差異がある。後述の実施例に示すように、シリカゲルカラムを用いた場合では、溶媒強度が０．２８〜０．４８の範囲で分取された分画物が高いＮＴ−４発現阻害率（２０％以上）を示し、溶媒強度が０．３３〜０．４３の範囲で分取された分画物では、更に高いＮＴ−４発現阻害率（５０％以上）を示す。また、アルミナカラムを用いた場合では、溶媒強度が０．４８〜０．９５の範囲で分取された分画物が高いＮＴ−４発現阻害率（２０％以上）を示し、溶媒強度が０．５６〜０．９５の範囲で分取された分画物では、更に高いＮＴ−４発現阻害率（５０％以上）を示す。
【００３８】
（第４の工程：ダフネファクターＦ３の調製）
前記液体クロマトグラフィー分画物を逆相高速液体クロマトグラフィーにより分画精製し、得られた画分のうちの最もＮＴ−４発現阻害作用が高くかつ着色の低い画分を分取することにより前記ダフネファクターＦ３を得ることができる。
この第４の工程は、以下の３つの下位工程１〜３から構成される。
【００３９】
（下位工程１）
前記液体クロマトグラフィー分画物を逆相高速液体クロマトグラフィーにより主要なピーク毎に分画して複数の分画物を得る。得られた複数の分画物の内のＮＴ−４発現阻害率が高い分画物を選択採取する。
【００４０】
（下位工程２）
上記下位工程１で選別された画分をさらに逆相高速液体クロマトグラフィーにより主要ピーク毎に分画して複数の分画物を得る。得られた複数の分画物の内のＮＴ−４発現阻害率が高い分画物を選択採取する。この時点でＮＴ−４発現阻害率の高い分画が少数（通常２つ）に絞られる。
【００４１】
（下位工程３）
上記下位工程２で選別された画分の内から着色の低い画分を選別する。この画分をＮＭＲ分析にかけると、ダフネファクターＦ３であることが確認される。
【００４２】
本発明のＮＴ−４発現阻害剤は、上記ダフネファクターＦ３を有効成分として含むことを特徴とする剤であり、通常、ダフネファクターＦ３と溶媒とを成分として含むが、必要に応じて、その他の成分を含んでもよいし、ダフネファクターＦ３のみから構成してもよい。
【００４３】
（育毛養毛剤）
本発明にかかる育毛養毛剤は、上記ダフネファクターＦ３を有効成分として含むＮＴ−４発現阻害剤を有効成分として有することを特徴とする。
上記有効成分であるダフネファクターＦ３の最終溶離溶媒が、エタノール、水／エタノール（含水エタノール）等の非毒性の溶媒である場合は、溶出物を育毛養毛剤の有効成分としてそのまま用いても良く、あるいは上記抽出溶媒をさらに希釈液として用いて希釈してもよい。なお、ダフネファクターＦ３の最終溶離溶媒として上記以外の溶媒を用いた場合は、溶媒を留去後、乾燥分を非毒性の溶媒で希釈して用いることが望ましい。
【００４４】
本発明の育毛養毛剤を、ヘアートニック、ヘアクリームなどの具体的組成物に添加することにより、その具体的組成物に養毛育毛効果を付与した育毛養毛組成物を得ることができる。
【００４５】
本発明の育毛養毛剤を具体的組成物に添加する場合、各組成物中における育毛養毛剤の配合量は、その製品形態、使用頻度により異なり一概に規定することはできないが、通常製剤全体に対してダフネファクターＦ３換算で１０−６〜１．０質量％（以下、％と略称する）、より好ましくは０．０１〜１．０％である。１０−６％より少ないと十分な効果が期待できず、また１．０％を超えると効果が頭打ちになったり、製剤の安定性および使用感の面で不具合が発生したりする可能性があるためである。
【００４６】
本発明の育毛養毛組成物は、さらに炭素鎖長が１１、１３、１５、および１７の奇数鎖脂肪酸からなる群より選ばれる少なくとも１種の脂肪酸を含むことが好ましい。前記脂肪酸を含むことにより、相乗的な育毛養毛効果を得ることができるためである。これら脂肪酸の濃度としては０．０００５〜５０％、特に０．２５〜２５％が好ましい。０．０００５％より少ないと十分な効果が期待できず、また５０％を超えると効果が頭打ちになったり、製剤の安定性の面で不具合が発生したりする可能性があるためである。
【００４７】
本発明の育毛養毛用組成物は、更に、既存の育毛養毛成分を含有してもよい。既存の養育毛成分としては、ＰＤＧ（ペンタデカン酸グリセリド）、特開平０９−１５７１３６号公報記載のコレウスエキス、特開平１０−４５５３９号公報記載のゲンチアナエキス、マツカサエキス、ローヤルゼリーエキス、クマザサエキスなどの化学物質及びエキス類を挙げることができる。中でも、育毛養毛効果の点から、ＰＤＧ、コレウスエキスが好ましい。
【００４８】
前記既存の育毛養毛成分として例示した化学物質及びエキス類は、市販品あるいは公知の方法によって得られたものを使用することができる。特に、前記エキス類は植物成分の抽出により得ることができる。この場合、抽出に用いる溶媒としては、水；メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール等のアルコール類；プロピレングリコール、ブチレングリコール等の多価アルコール類などが挙げられ、これらは一種を単独で又は２種以上の混合物として用いることができる。抽出方法は、通常の植物エキスの抽出法などの方法に準じて行えばよく、必要により公知の方法で脱臭、脱色等の処理を施してから用いてもよい。また、市販の抽出物も用いることができる。
【００４９】
また、本発明の育毛養毛剤には、使用目的に応じて、上記有効成分であるＮＴ−４発現阻害剤以外の任意の成分を配合することができる。そのような成分としては、例えば、精製水、エタノール、非イオン性界面活性剤、糖質系界面活性剤およびその他の界面活性剤、セルロース類、油脂類、エステル油、高分子樹脂、色剤、香料、紫外線吸収剤やビタミン類、ホルモン類、血管拡張剤、アミノ酸類、抗炎症剤、皮膚機能亢進剤、角質溶解剤等の薬効成分などを挙げることができる。
【００５０】
前記セルロース類としては、例えば、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース及びヒドロキシプロピルメチルセルロース等が挙げられる。
【００５１】
前記界面活性剤としては、例えば、ソルビタン脂肪酸エステル類（ソルビタンモノラウレート、ソルビタンモノオレート等）、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油モノまたはイソステアレート、グリセリン脂肪酸エステル、ポリグリセリン脂肪酸エステル（モノミリスチン酸デカグリセリン、モノミリスチン酸ペンタグリセリン）等が挙げられる。
【００５２】
前記油脂類としては、例えば、多価アルコール脂肪酸エステル（トリ−２エチルヘキサン酸グリセリン、トリイソステアリン酸トリメチロールプロパン酸等）、サフラワー油、月見草油、ホホバ油等が挙げられる。
【００５３】
前記エステル油としては、例えば、不飽和脂肪酸アルキルエステル（オレイン酸エチル、リノール酸イソプロピル等）、ミリスチン酸メチル、ミリスチン酸イソプロピル等が挙げられる。
【００５４】
前記アミノ酸類としては、例えば、メチオニン、セリン、グリシン、シスチン等が挙げられる。
【００５５】
前記角質溶解剤としては、例えば、サリチル酸、レゾルシン等が挙げられる。
【００５６】
前記高分子樹脂としては、例えば、両性、カチオン性、アニオン性及びノニオン性ポリマー等が挙げられる。
【００５７】
前記紫外線吸収剤としては、例えば、メトキシケイ皮酸オクチル（ネオヘリオパンＡＶ）、オキシベンゾン、ウロカニン酸等が挙げられる。
【００５８】
本発明の育毛養毛剤に、その他蛋白質を配合する場合は、任意の量で配合できる。
【００５９】
本発明の育毛養毛剤の適用分野（具体的組成物）としては、各種の外用製剤類（動物用に使用する製剤も含む）全般が挙げられる。具体的には、カプセル状、粉末状、顆粒状、固形状、液状、ゲル状、軟膏状、或いは気泡性の（１）医薬品類、（２）医薬部外品類、（３）局所又は全身用の皮膚化粧品類、（４）頭皮・頭髪に適用する薬用及び／又は化粧用の製剤類（例えば、シャンプー剤、リンス剤、トリートメント剤、パーマネント液、染毛料、整髪料、ヘアートニック剤、育毛・養毛料など）が挙げられる。
【００６０】
本発明の育毛養毛剤を有効成分として含む育毛養毛組成物としては、上述のように育毛養毛用毛髪化粧料及び育毛養毛用医薬品が挙げられるが、これら前記育毛養毛用毛髪化粧料及び育毛養毛用医薬品には、本発明の効果を損なわない範囲において、既知の薬効成分を必要に応じて適宜配合することができる。既知の薬効成分としては、例えば、抗菌剤、抗炎症剤、保湿剤等を配合することができる。
【００６１】
本発明の育毛養毛剤を有効成分として含む育毛養毛用毛髪化粧料及び育毛養毛用医薬品は、常法に従って均一溶液、ローション、ジェルなどの形態で外用により使用することができる。また、本発明の養育毛用毛髪化粧料は、エアゾールの形態をとることができ、その場合には、前記成分以外に、ｎ−プロピルアルコールまたはイソプロピルアルコールなどの低級アルコール：ブタン、プロパン、イソブタン、液化石油ガス、ジメチルエーテル等の可燃性ガス：窒素ガス、酸素ガス、炭酸ガス、亜酸化窒素ガス等の圧縮ガスを含有することができる。 
【実施例】
【００６２】
以下、実施例に基づき、本発明についてさらに詳細に説明する。なお、本発明は下記実施例に限定されるものではない。
【００６３】
以下に示す実施例及び比較例においては、各例で得られたサンプルのＮＴ−４発現阻害率を測定しているが、それらは以下の方法により測定したものである。
【００６４】
（ＮＴ−４阻害率の測定方法）
まず、ＮＴ−４上流配列約２０００ｂｐ（配列番号１）を、ｐＧＬ３−ｂａｓｉｃ (Ｐｒｏｍｅｇａ社製)にサブクローニングを行う。得られたプラスミドを、内部標準としてのｐＲＬ−ＳＶ４０（Ｐｒｏｍｅｇａ社製）とともに、ＨｅＬａ細胞に導入する。これを所定の培地中で１日培養後、その培地を、測定用の各サンプルの各１ｐｐｍと１０−７Ｍ ｄｉｈｙｄｒｏｔｅｓｔｏｓｔｅｒｏｎｅ（ＤＨＴ）とを含む培地に交換する。
コントロール群としてはＤＨＴを含まない培地を用いる。また、ＤＨＴ添加群を基準対照群として用いる。このＤＨＴ添加群としては、各サンプルを含まない代わりに０．１体積％エタノールと１０−７Ｍ  ＤＨＴとを含む培地を用いる。
【００６５】
次に、上記各培地を２４時間培養した後、各サンプル群、ＤＨＴ添加群およびコントロール群に対して、デュアル−ルシフェラーゼ  レポーター  アッセイ  システム（Dual-Luciferase Reporter Assay System：Ｐｒｏｍｅｇａ社製）を用いてルシフェラーゼアッセイ（Luciferase assay）を行う。このルシフェラーゼアッセイは、１０％チャコール処理済ＦＢＳを添加したＤＭＥＭ（Dulbecco's modified Eagle's Medium、フェノールレッド不含）培地で行う。
【００６６】
上記ルシフェラーゼアッセイにより各サンプルのルシフェラーゼ相対活性（Ｒｅｌａｔｉｖｅ  Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ  Ａｃｔｉｖｉｔｙ）が算出される。このルシフェラーゼ相対活性は、ＮＴ−４上流配列とpGL3-basicのサブクローニングにより得られたベクターにより発現するホタルルシフェラーゼの活性値を、内部標準として導入したpRL-SV40により発現するウミシイタケルシフェラーゼの活性値で除することにより求められる。このルシフェラーゼ相対活性（ＮＴ−４発現率）から下記の式を用いてＮＴ−４発現阻害率（％）を算出する。
NT-4発現阻害率(%)＝[１−(RLASamp−RLACont)/(RLADHT−RLACont)]×１００
・・・・・・（１）
式（１）中、RLACont:コントロール群のNT-4発現率
RLADHT:DHT添加群のNT-4発現率
RLASamp:各サンプル添加群のNT-4発現率
【００６７】
（アサクー粗抽出物の調製（第１の工程））
アサクー樹皮（１Ｋｇ）を破砕し、この破砕物に破砕物質量の２０倍量の７０％エチルアルコールを加え、一昼夜撹拌後、減圧乾固して固形のアサクー粗抽出物を得た。
上記乾固前の７０％エチルアルコール抽出物（アサクー粗抽出物）を比較例１として、上述の測定法によりＮＴ−４発現阻害率（サンプル濃度：１ｐｐｍ）を求めたところ、１１．８５％であった。
【００６８】
（アサクー有機溶媒分画物の調製（第２の工程））
次に、上記アサクー粗抽出物を、酢酸エチル／水(１／１)で液液分画し、水層、酢酸エチル層のそれぞれを採取して真空乾燥した。
一方の水層分画物（アサクー水溶性分画物）は、比較例２として、上述の測定法によりＮＴ−４発現阻害率（サンプル濃度：１ｐｐｍ）を求めたところ、−０．５７％であった。
【００６９】
他方の酢酸エチル層から、減圧乾固により内部に含有するアサクー有機溶媒分画物を回収した。この分画物のＮＴ−４発現阻害率（サンプル濃度：１ｐｐｍ）を上述の測定法により求めたところ、７１．８９％であった。
【００７０】
（液体クロマトグラフィー分画物の調製（第３の工程））
次に、上記酢酸エチル層を原料として、以下のようにして液体クロマトグラフィー分画物を調製した。まず、カラムとしてシリカゲルカラムを用いた場合の調製例を示し、次にカラムとしてアルミナカラムを用いた場合の調製例を示す。
【００７１】
（シリカゲルカラムを用いた調製例）
上記酢酸エチル層をさらに液体クロマトグラフィー（シリカゲルカラム）を用いて極性分画した。
具体的には、まずシリカゲルカラム（内径２．５ｃｍ、長さ３５ｃｍ）に水分が付着していないことを確認し、このカラムをイソオクタンで洗浄した。カラムのメッシュ部に親指先大の脱脂綿を固く詰め、カラムクロマト用シリカゲル（関東科学社製、商品名「６３−２００」）約１０ｇを充填した。
【００７２】
一方、アサクー酢酸エチル層分画物２５０ｍｇを少量のメタノールに溶解し、そこにカラムクロマトグラム用シリカゲルを２ｇ加えた。ウォーターバス上で加温し、メタノールを揮発させ、シリカゲルの表面に均一にアサクー酢酸エチル層分画物を吸着させた。シリカゲルが完全に乾いたことを確認し、先に準備したシリカゲルカラムに移した。
【００７３】
分液漏斗を上記カラム上部に装着し、下記（表１）にある組成比の溶離液を順次通過させ、溶離してくる成分を順に、Ｆｒ１、Ｆｒ２、・・・・・とサンプリングした。得られた各分画物を真空乾燥し、重量を測定した後、先述の測定法によりＮＴ−４発現阻害率（サンプル濃度：１ｐｐｍ）を求めた。その結果を（表１）に併記した。
【００７４】
使用した溶離液における溶媒強度は、使用した各溶媒単独の溶媒強度が既知であるので、それらに基づいて決定した。すなわち、溶媒が２成分系の場合の溶媒強度（εab）は、以下の計算式（２）により算出した。
εab=εa+Log[Nb×10^(nb×(εb-εa))+1-Nb]/nb          （２）
ただし、εa：低極性溶媒(a)の溶媒強度
εb：高極性溶媒(b)の溶媒強度
nb：高極性溶媒(b)の分子吸着占有面積
Nb：高極性溶媒(b)のモル分率
【００７５】
【表１】
2010241728.tif 000007
【００７６】
（アルミナカラムを用いた調製例）
上記（シリカゲルカラムを用いた調製例）と同様にしてアサクーの７０％エチルアルコール抽出物（比較例１）から得た酢酸エチル画分を、アルミナカラムを用いて極性分画した。極性分画の方法は（シリカゲルカラムを用いた調製例）と同様だが、カラムに充填した吸着剤としてはシリカゲルの代わりにカラムクロマト用アルミナ（メルク社製、商品名「Ａｌｕｍｉｎｉｕｍｏｘｉｄｅ  ９０  ａｃｔｉｖｅ  ａｃｉｄｉｃ（０．０６３−０．２００ｍｍ）」を用いた点が異なる。下記（表２）に示す溶媒を順次通過させ、溶離してくる成分を順に、Ａｌ−Ｆｒ１、Ａｌ−Ｆｒ２、・・・・・と付番して分取した。得られた各分画物を真空乾燥し、重量を測定した後、先述の測定法によりＮＴ−４発現阻害率（サンプル濃度：１ｐｐｍ）を求めた。その結果を（表２）に併記した。
【００７７】
【表２】
2010241728.tif 000008
【００７８】
以下のダフネファクターＦ３を調製する第４の工程に用いる材料としては、上記液体クロマトグラフィー分画物の内のＮＴ−４発現阻害率が最も高い分画を選択採取して用いる。したがって、シリカゲルを用いた調製例では分画Ｆｒ６が用いられ、アルミナカラムを用いた調製例では分画Ａｌ−Ｆｒ４が用いられる。以下の第４工程の実施例では、上述のシリカゲルカラムを用いた調製例により得た液体クロマトグラフィー分画物の内のＮＴ−４阻害率が最も高いＦｒ６を材料として用いた。
【００７９】
（ダフネファクターＦ３の調製（第４の工程））
前記液体クロマトグラフィー分画物の内の分画Ｆｒ６（ジエチルエーテル溶出画分）を以下の下位工程１〜３により分画精製して、ダフネファクターＦ３を得た。
【００８０】
（下位工程１）
上記分画Ｆｒ６を逆相ＨＰＬＣに供した。この逆相ＨＰＬＣの条件を以下に示す。
【００８１】
（装置）：Agilent Technologies 1200 Series（アジレント社製）
（カラム）：Wakosil-II5C18（和光純薬工業社製）
（移動相）：75％メタノール（0→8分）、100％メタノール（8→30分）
（流速）：２ｍＬ／分
（カラムオーブン温度）：４０℃
（注入量）：３０００ｐｐｍ、５００μＬ
（検出波長）：２８２ｎｍ
【００８２】
得られたＨＰＬＣクロマトグラムを図１に示した。図１に示すピーク毎に画分を分取した。具体的には、時間軸（横軸）の０分から１２分までの画分（Ｆｒ６−１）と、１２分から２０分までの画分（Ｆｒ６−２）と、２０分から３０分までの画分（Ｆｒ６−３）に分けて採取した。
得られた各分画物を減圧乾固し、固形の分画物Ｆ６−１、Ｆｒ６−２、Ｆｒ６−３を得た。各分画物の収率は、Ｆｒ６−１が７８％、Ｆｒ６−２が１４％、Ｆｒ６−３が８％であった。
これらの分画物のＮＴ−４発現阻害率（サンプル濃度：１ｐｐｍ）を上述の測定法により測定したところ、Ｆｒ６−１が−５．７７％、Ｆｒ６−２が８４．１３％、Ｆｒ６−３が１２．８９％であった。
【００８３】
（下位工程２）
上記分画物Ｆ６−１、Ｆｒ６−２、Ｆｒ６−３の内の最もＮＴ−４発現阻害率が高いＦｒ６−２を分取し、逆相ＨＰＬＣに供した、この逆相ＨＰＬＣの条件を以下に示す。
【００８４】
（装置）：Agilent Technologies 1200 Series（アジレント社製）
（カラム）：Wakosil-II5C8HG（和光純薬工業社製）
（移動相）：77.5％メタノール（0→20分）、100％メタノール（20→50分）
（流速）：２ｍＬ／分
（カラムオーブン温度）：４０℃
（注入量）：10,000ｐｐｍ、２０μＬ
（検出波長）：２８２ｎｍ
【００８５】
得られたＨＰＬＣクロマトグラムを図２に示した。図２に示すピーク毎に画分を分取した。具体的には、時間軸（横軸）２０分付近に得られたピークを単離する目的で、その前後をサンプリングした。すなわち２０分付近に見られるピークの前の画分（Ｆｒ６−２−１）と、２０分付近に見られるピークの画分（Ｆｒ６−２−２）と、２０分付近に見られるピークの後の画分（Ｆｒ６−２−３）とに分けて採取した。
【００８６】
得られた各分画物を減圧乾固し、固形の分画物Ｆｒ６−２−１と、Ｆｒ６−２−２、Ｆｒ６−２−３を得た。各分画物の収率は、Ｆｒ６−２−１が８６％、Ｆｒ６−２−２が４％、Ｆｒ６−２−３が１０％であった。
【００８７】
これらの分画物のＮＴ−４発現阻害率（サンプル濃度：０．１ｐｐｍ）を上述の測定法により測定したところ、Ｆｒ６−２−１が４７．８１％、Ｆｒ６−２−２が８４．９８％、Ｆｒ６−２−３が８５．６３％であった。これらの分画物のＮＴ−４発現阻害率は、サンプル濃度が１ｐｐｍではなく、その１／１０量の０．１ｐｐｍでの値であり、各分画物とも高い値を示しているが、中でもＦｒ６−２−２とＦｒ６−２−３とが非常に高いＮＴ−４発現阻害率を示している。これらの分画物Ｆｒ６−２−２とＦｒ６−２−３と分取して、以下の下記工程３に供した。各分画の採取量は、Ｆｒ６−２−２が１５ｍｇ、Ｆｒ６−２−３が４２ｍｇであった。
【００８８】
（下位工程３）
上記分画物Ｆｒ６−２−２とＦｒ６−２−３との着色度の程度を以下の方法により評価した。
【００８９】
（着色度の測定方法）
各画分を０．１質量／体積％となるようにエタノールに溶解した。これについて４５０ｎｍでの分光測定を行った。さらに５０℃、１ヶ月間の保存試験の後にも同様に測定を行うことで、着色の度合いと経時的変化を調べた。
【００９０】
上記方法により分画物Ｆｒ６−２−２の着色度は０．０４９、Ｆｒ６−２−３の着色度は０．０９３であった。また１ヶ月間の保存期間を経た場合のＦｒ６−２−２の着色度は０．０５１であり、同様の条件でのＦｒ６−２−３の着色度は０．１０２であった。即ち、Ｆｒ６−２−２の着色度はＦｒ６−２−３と比較して低い値を示した。
この分画物Ｆｒ６−２−２を最終分画物としてＮＭＲ分析を実施し、下記に示すＮＭＲスペクトルから、分画物を構成する化合物の同定を行った。
【００９１】
（1H-NMRスペクトル（δppm, in CD3OD, 500 MHz））
δ:7.66(1H, br-s), 7.40(1H, dd, 10.3 and 5.2 Hz), 6.37-6.23(2H, m), 6.02(1H, d, 15.0 Hz), 5.75(1H, br-s), 5.17(1H, s), 5.10(1H, br-s), 4.11(1H, br-s), 3.97(1H, d, 12.3 Hz), 3.69(1H, br-s), 3.60(1H, d, 12.3 Hz), 3.22(1H, s), 2.27-2.19(3H, m), 2.09-2.01(1H, m), 1.90(3H, s), 1.78(4H, br-s), 1.52-1.47(2H, m), 1.33(12H, br-s), 1.06(3H, d, 6.3 Hz), 0.94(3H, t, 6.5 Hz)
（13C-NMRスペクトル（appm, in CD3OD, 125 MHz））
a: 209.88, 168.85, 162.12, 147.50, 147.25, 146.58, 135.79, 129.79, 120.00, 114.35, 78.60, 78.19, 74.66, 74.56, 70.38, 64.80, 64.27, 63.73, 51.38, 40.48, 39.03, 38.65, 34.01, 33.03, 30.66, 30.54, 30.41, 30.27, 29.88, 23.70, 19.25, 18.50, 14.40, 9.91
【００９２】
上記ＮＭＲ分析の結果、最終分画物Ｆｒ６−２−２は、下記一般式（１）で示されるダフネファクターＦ３であることが確認された。
【００９３】
【化１】
2010241728.tif 000009
（式中、Ｍｅはメチル基を示す。）
【００９４】
上記ダフネファクターＦ３（最終分画物Ｆｒ６−２−２）と、このＦｒ６−２−２と同時に分画されたＦｒ６−２−３とは、ＮＴ−４発現阻害率に関しては、ほぼ同等の高い値を示している。これら最終分画物Ｆｒ６−２−２とＦｒ６−２−３のＮＴ−４発現阻害率の高さを確認するために、最終分画物Ｆｒ６−２−２およびＦｒ６−２−３と、アサクー粗抽出物から最終分画物Ｆｒ６−２−２およびＦｒ６−２−３に至るまでの中間分画精製物とに関して、各サンプル濃度を変化させた場合のＮＴ−４発現阻害率を測定した。その結果を下記（表３）に示す。
【００９５】
【表３】
2010241728.tif 000010
【００９６】
上記（表３）に示すように、最終分画物Ｆｒ６−２−２およびＦｒ６−２−３は、サンプル濃度が０．０１ｐｐｍという少量濃度においてさえ、ＮＴ−４発現阻害率が５８．７６％および５７．９５％という高い値を示している。そして、最終分画物Ｆｒ６−２−２はダフネファクターＦ３と呼称される化合物であり、その着色度はＦｒ６−２−３と比較して小さいことが分かっている。
【００９７】
（育毛養毛効果の評価）
（育毛養毛効果の評価方法）
雄のＣ５７ＢＬ／６マウス（７週齢）を用い、小川らの方法（フレグランスジャーナル，Ｖｏｌ．１７，Ｎｏ．５，ｐ２０−２９，１９８９．参照）を参考にして実験を行った。マウスの背部体毛を約２〜４ｃｍの大きさに電気バリカン及び電気シェーバーにて除毛し、毛髪成長期を誘導した。除毛後、ＤＨＴ３０ｍｇを皮下に投与した。翌日より１日１回１００μＬずつ週５回、３０日間サンプル塗布を行い、除毛部分に対し毛再生が始まった部分の面積比の変化を求め、下記１０段階評価にて、毛再生の早さの比較を行った。
サンプルとしては、前記実施例１、２、３で得られたＮＴ−４発現阻害剤を用いた。サンプル量は０．０１質量％とした。また、コントロール群には、溶媒であるエタノールの５０％水溶液を塗布した。各群ともに１群６匹として実験に供した。除毛、皮下投与後から、下記発毛スコアが５点に至るまでに要した日数を（表４）に示す。
【００９８】
（育毛養毛効果の評価基準）
除毛された部分の全体面積に対する毛再生が始まった部分の面積の割合（％）に下記点数を付して、点数（発毛スコア）の大きさによって、育毛養毛効果を評価した。
（点数）：（毛再生面積率（％））
０点：０〜４％
１点：５〜１４％
２点：１５〜２４％
３点：２５〜３４％
４点：３５〜４４％
５点：４５〜５４％
６点：５５〜６４％
７点：６５〜７４％
８点：７５〜８４％
９点：８５〜９４％
１０点：９５〜１００％
【００９９】
【表４】
2010241728.tif 000011
【０１００】
（表４）に見るように、最終分画物Ｆｒ６−２−２とＦｒ６−２−３の育毛養毛効果が格段に優れていることが分かる。そして、最終分画物Ｆｒ６−２−２はダフネファクターＦ３と呼称される化合物であり、その着色度はＦｒ６−２−３と比較して小さいことが分かっている。
【０１０１】
（育毛養毛組成物への着色度の影響評価）
アサクー７０％エタノール粗抽出物およびダフネファクターＦ３をそれぞれ有効成分とする下記（表５）に示す組成の育毛養毛剤サンプルＳ１〜Ｓ５を調剤した。育毛養毛剤サンプルＳ１およびＳ２はダフネファクターＦ３を有効成分として含む製剤であり、育毛養毛剤サンプルＳ３およびＳ４はアサクー粗抽出物を有効成分として含む製剤であり、育毛養毛製剤サンプルＳ５はコントロール製剤である。これらの育毛養毛剤サンプルＳ１〜Ｓ５について、有効成分の色が育毛養毛組成物に与える影響を確認した。これら育毛養毛組成物の育毛作用を（表５）併記した。
【０１０２】
各育毛養毛剤サンプルＳ１〜Ｓ５について、まず調整時に４５０ｎｍで分光測定を行い、さらに５０℃、１ヶ月間の保存試験の後にも同様に測定を行うことで、着色の度合いと経時的変化を調べた。
【０１０３】
【表５】
2010241728.tif 000012
【０１０４】
（表５）に示すように、測定の結果、ダフネファクターＦ３を有効成分として含む製剤サンプルＳ１およびＳ２の着色および着色変化は小さかったことに対し、アサクー７０％エタノール粗抽出物を有効成分とする製剤サンプルＳ３およびＳ４の着色および着色変化は大きいことが分かった。
【産業上の利用可能性】
【０１０５】
以上のように、本発明にかかるＮＴ−４発現阻害剤は、高いＮＴ−４発現阻害効果を安定的に有する化合物であるダフネファクターＦ３を有効成分として含み、ＮＴ−４の発現そのものを阻害する作用を発揮する。
また、本発明にかかるＮＴ−４発現阻害剤は、ＮＴ−４に起因するアポトーシスの誘導を防止することができるので、ＮＴ−４によるアポトーシスに起因して生体に生じる悪影響の予防、治療及び改善のために有用である。特に、毛包におけるＮＴ−４によるアポトーシスの誘導を防止することにより、哺乳類に対する育毛養毛効果を発揮することができる。
また、本発明にかかる育毛養毛剤は、前記本発明にかかるＮＴ−４発現阻害剤を有効成分として有しているので、哺乳類の脱毛症、特に男性型脱毛症を改善すると共に、長期に亘る使用に十分耐え得る安全性を備え、使用感の良好な育毛養毛剤である。
【図１】
2010241728.tif 000016
【図２】
2010241728.tif 000017
【配列表】
2010241728000001.app