(57)【要約】【課題】本発明は、肌荒れの修復のための新規の美容方法を提供することを目的とする。【解決手段】ステロール構造を有する化合物を含む皮膚外用剤を皮膚上に適用することにより肌荒れの修復を促進させることを特徴とする美容方法。【選択図】図１Ｃ
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
ステロール構造を有する化合物を含む皮膚外用剤を皮膚上に適用することにより肌荒れの修復を促進させることを特徴とする美容方法。
【請求項２】
前記皮膚外用剤の適用の前又は後、あるいはそれと同時に、炭素数１２〜１８の脂肪酸から選ばれる１種又は２種以上の脂肪酸を含む皮膚外用剤が皮膚に適用される、請求項１に記載の美容方法。
【請求項３】
前記脂肪酸がパルミチン酸であることを特徴とする請求項２に記載の美容方法。
【請求項４】
前記皮膚外用剤が更に、炭素数１２〜１８の脂肪酸から選ばれる１種又は２種以上の脂肪酸を含むことを特徴とする請求項１に記載の美容方法。
【請求項５】
前記脂肪酸がパルミチン酸であることを特徴とする請求項４に記載の美容方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ステロール化合物を用いて肌荒れを修復する新規の美容方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
皮膚の最外層に位置する角層は細菌や有害物質などの異物の接触や浸透から生体を保護すると共に、体内からの水分蒸散を防ぐことによって皮膚を健全な状態に保持するバリア機能を有する。バリア機能が低下すると、皮膚表面からの経表皮水分蒸発量（trans epidermal water loss：ＴＥＷＬ）が増加し、相対的に角層水分量が低下する。角層水分量の低下により皮溝、皮丘から成る皮紋（きめ）が不規則化すると、皮膚はかさかさした肌荒れ状態を呈する（曽根俊郎ら、香粧会誌 Vol.15 No.2. pp. 60-65(1991)）。
【０００３】
このバリア機能において重要な役割を果たす角層の細胞間脂質は、主にセラミド、遊離脂肪酸及びコレステロールを主成分とし、ラメラ構造を形成していることが知られている（Bouwstra JA, et al., Acta Derm Venereol Suppl (Stockh). 2000;208:pp. 23-30.; Bouwstra JA, et al., Int J Cosmet Sci. 2008 Oct;30(5): p. 388）。
【０００４】
スキンケア洗浄料等に含まれる成分として界面活性剤がある。界面活性剤は、角層に浸透し、角質細胞のケラチンに吸収され、そして細胞間脂質と混和する（Friberg, S. E. et al., Colloids Surf. 1988, 30, pp.1-12; Rhein, L. D. Ibid. 1997, 48, pp.253-274）。更に、界面活性剤は、脂肪酸、脂肪酸グリセリド、コレステリルエステル等の皮膚脂質を除去することで、たとえ除去される脂質が少量であったとしても皮膚に損傷を与えることが知られている（Fulmer, A. W. et al., J. Invest. Dermatol. 1986, 86, pp. 598-602; Denda, M. et al., Arch. Dermatol. Res. 1994, 286, pp.41-46; Ronald, R. W. et al., J. Invest. Dermatol. 1999, 113, pp. 960-966; Lopez, O. et al. Bioch. et Biophy Acta 2000, 1508, pp. 196-209及びEbba, B. et al., Inter J. Phama. 2000, 195, pp.189-195）。
【０００５】
化粧品業界において、上記のようなヒトの角層の損傷に対して回復させるための検討が行われてきた。その一例として、添加物として油脂を使用することで、少なくとも部分的に脂質膜を回復させることができることが知られている（Lawson, E. E.; Anigbogu, A. N. C.; Williams, A. C.; Barry, B. W.; Edwards, H. G. M. Spectrochimica Acta Part A 1998, 54, pp. 543-558）。
【０００６】
皮膚表面をアセトン／エーテルで処理すると、角層からセラミドを含む細胞間脂質が溶出する。セラミドの溶出により、角層中の水分含量は著しく低下するものの、セラミドを当該皮膚表面に塗布して補うことで、かかる水分含量は正常レベルに回復することが知られている（Imokawa, G.; Akasaki, S.; Minematsu, Y.; Kawai, M. Arch. Dermatol. Res. 1989, 281, pp. 45-51.）。角層を構成するセラミドが失われた場合、セラミドを補填するのは合理的である。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】曽根俊郎ら、香粧会誌 Vol.15 No.2. pp. 60-65(1991)
【非特許文献２】Bouwstra JA, et al., Acta Derm Venereol Suppl (Stockh). 2000;208:pp. 23-30.
【非特許文献３】Bouwstra JA, et al., Int J Cosmet Sci. 2008 Oct;30(5): p. 388）。
【非特許文献４】Friberg, S. E. et al., Colloids Surf. 1988, 30, pp.1-12
【非特許文献５】Rhein, L. D. Ibid. 1997, 48, pp.253-274
【非特許文献６】Fulmer, A. W. et al., J. Invest. Dermatol. 1986, 86, pp. 598-602
【非特許文献７】Denda, M. et al., Arch. Dermatol. Res. 1994, 286, pp.41-46
【非特許文献８】Ronald, R. W. et al., J. Invest. Dermatol. 1999, 113, pp. 960-966
【非特許文献９】Lopez, O. et al. Bioch. et Biophy Acta 2000, 1508, pp. 196-209
【非特許文献１０】Ebba, B. et al., Inter J. Phama. 2000, 195, pp.189-195
【非特許文献１１】Lawson, E. E.; Anigbogu, A. N. C.; Williams, A. C.; Barry, B. W.; Edwards, H. G. M. Spectrochimica Acta Part A 1998, 54, pp. 543-558
【非特許文献１２】Imokawa, G.; Akasaki, S.; Minematsu, Y.; Kawai, M. Arch. Dermatol. Res. 1989, 281, pp. 45-51.
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明は、従来知られていたセラミドをベースとした保湿機能の回復方法とは異なる、新規なメカニズムによる肌荒れの修復のための美容方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
かかる皮膚へのアセトン／エーテルの適用は、セラミドだけでなく、それ以外の細胞間脂質の流出を生じさせ、皮膚疾患に近い状態をもたらすことが報告されている。このように、細胞間脂質構造が大きく乱れた状態は、化粧品等に含める成分の適否を検討する上で日常発生する肌荒れとは異なると考えられる。
【００１０】
一方、本発明者が適切な濃度のドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）等の界面活性剤を皮膚に適用したところ、上記のアセトン／エーテル処理とは異なり、短時間内（１日以内）ではセラミドはほとんど流出しないことが分かった。また、界面活性剤の適用により損傷が生じた角層に種々の油分を適用したところ、コレステロールやフィトステロール等のステロール構造を有する油分が特にその損傷に対する修復に有効であることも見出された。これらの知見に基づき、本発明者は、セラミドではなくステロール構造を有する化合物が肌荒れの修復に重要な因子であると結論付け、本発明を完成させるに至った。
【００１１】
即ち、本発明は以下の発明を包含する。
【００１２】
[１]ステロール構造を有する化合物を含む皮膚外用剤を皮膚上に適用することにより肌荒れの修復を促進させることを特徴とする美容方法。
[２]前記皮膚外用剤の適用の前又は後、あるいはそれと同時に、炭素数１２〜１８の脂肪酸から選ばれる１種又は２種以上の脂肪酸を含む皮膚外用剤が皮膚に適用される、[１]に記載の美容方法。
[３]前記脂肪酸がパルミチン酸である[２]に記載の美容方法。
[４]前記皮膚外用剤が更に、炭素数１２〜１８の脂肪酸から選ばれる１種又は２種以上の脂肪酸を含む[１]に記載の美容方法。
[５]前記脂肪酸がパルミチン酸である[４]に記載の美容方法。
【発明の効果】
【００１３】
主要な細胞間脂質成分であるコレステロールは、生体膜の流動性を調節している。本発明によれば、コレステロール等のステロール構造を有する化合物を皮膚に適用することで、肌荒れ状態、すなわち、コレステロール、パルミチン酸が溶出して乱れた細胞間脂質構造を即時的に正常な状態に再構築することができる。これは皮膚のバリア機能の回復を意味し、セラミドを用いた保湿機能の回復とは異なるメカニズムと言える。
【００１４】
ステロール化合物による角層中の細胞間脂質構造の修復は、本願出願人により構築された、角層をトータルで育て・維持するという「コルネオ（角層）育成理論」と軌を一にするものでもある。
【００１５】
このようなステロール化合物を用いた新規の肌荒れ修復メカニズムは、従来の保湿剤が発揮する肌荒れ改善効果のメカニズムとは異なる、細胞間脂質をターゲットとした新規な角層ケア成分の開発、延いては新規な肌荒れ改善剤の開発にも資するものである。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１Ａ】図１Ａは、下から、未処理角層脂質擬似基板、ＳＤＳ溶液曝露後の前記基板、ＳＤＳ溶液に代え、エタノール溶液に曝露した後の角層脂質擬似基板、並びにＳＤＳ溶液曝露後にコレステロール及びパルミチン酸の混合物を含有するエタノール溶液を適用した後の前記基板（７秒〜２４時間）の赤外（ＩＲ）吸収スペクトルを示す。
【図１Ｂ】図１Ｂは、下から、ＳＤＳ溶液曝露後の角層脂質擬似基板及びパルミチン酸含有エタノール溶液を適用した後の当該基板（５秒〜２４時間）のＩＲ吸収スペクトルを示す。
【図１Ｃ】図１Ｃは、下から、ＳＤＳ溶液曝露後の角層脂質擬似基板及びコレステロール酸含有エタノール溶液を適用した後の当該基板（６秒〜２４時間）のＩＲ吸収スペクトルを示す。
【図２】図２は、電子スピン共鳴（ＥＳＲ）測定による、ＳＤＳ処理後の角層脂質擬似基板に対するパルミチン酸、コレステロール、フィトステロールの修復効果を示す図である。
【図３】図３は、ＥＳＲ測定による、ＳＤＳ処理後の角層脂質擬似基板に対する化粧品汎用成分の修復効果を示す図である。
【図４】図４は、ＥＳＲ測定による、ＳＤＳ処理後の角層脂質擬似基板に対するステロール油分の修復効果を示す図である。
【図５】図５は、示差走査熱量（ＤＳＣ）測定による、ＳＤＳ処理後の角層脂質擬似基板に対するパルミチン酸、コレステロール、フィトステロールの修復効果を示す図である。
【図６】図６は、ＳＤＳ処理後のヒト角層に対するフィトステロールの修復効果をコルネオメーター測定値の比で表した図である。
【図７】図７は、ＳＤＳ処理後のヒト角層に対するフィトステロールの修復効果をＴＥＷＬ比で表した図である。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
本発明は、ステロール構造を有する化合物を含む溶液を皮膚上に適用することにより肌荒れの修復を促進させることを特徴とする美容方法を提供する。
【００１８】
本明細書で使用する用語「ステロール構造を有する化合物」は、本明細書において「ステロール化合物」と同義に使用される。肌荒れを修復させる観点からは、ステロール構造を有する化合物が好ましい。
【００１９】
ステロール化合物のうち、コレステロール、フィトステロール等室温で固体の結晶性物質に関しては、適当な溶媒に溶解した後皮膚に適用される。後述する皮膚角層細胞間脂質擬似基板を用いた実験によれば、ＳＤＳの添加により細胞間脂質構造が乱れた当該基板に対しステロール化合物を適用した場合、当該基板内のセラミドのコンフォーメーションが短時間（8秒）で修復されることが明らかとなっている。一方、パルミチン酸は、ステロール化合物のように短時間でセラミドのコンフォーメーションを修復することはできないものの、徐々に当該基板内に浸透していき、当該基板を未処理の状態に修復することができる。従って、ステロールの化合物の適用時に、例えば当該適用前又は後、あるいはそれと同時に炭素数１２〜１８の脂肪酸、好ましくはパルミチン酸を含む溶液を皮膚に適用することで、ステロール化合物を単独で適用した場合と比較してより未処理の状態に修復させることができる。
【００２０】
上述したステロール化合物及び炭素数１２〜１８の脂肪酸は、パルミチン酸、ステアリン酸等のように室温で粉末状の場合、エタノール、イソプロパノール等のアルコール類、流動パラフィン、スクワラン、イソドデカン等の炭化水素油、マカデミアナッツ油、ヒマワリ油、オリーブ油等の油脂、ホホバ油、オレイン酸等の炭素数１２〜１８以外の脂肪酸等、あるいはこれらの混合物に溶解した後皮膚外用剤に含められる。これらの溶媒は、列記した具体的なものに限定されず、前記ステロール化合物及び炭素数１２〜１８の脂肪酸を溶解可能なものであればどのようなものでもよい。一方、ステロール化合物及び炭素数１２〜１８の脂肪酸が室温で液状である場合、これらはそのまま皮膚外用剤に含めることができる。このように、別の観点において、本発明は、肌荒れを修復する有効成分としてステロール化合物及び／又は炭素数１２〜１８の脂肪酸を含有する皮膚外用剤を提供する。
【００２１】
前記皮膚外用剤中、ステロール化合物は０．０１〜１００重量％、そして炭素数１２〜１８の脂肪酸は０．０１〜１００重量％の量で含まれてもよい。
【００２２】
前記皮膚外用剤の剤型は溶液に限定されるものでなく、クリーム、軟膏、ゲル、エアゾール等の任意の剤型をとることができる。これらの成分は、他の任意な成分とともに、化粧水、乳液等の任意のスキンケア製品に含めることができる。
【００２３】
「肌荒れ」を評価する指標として、ＴＥＷＬ値（経皮水分蒸散量）の上昇が一般的に知られている。この方法によれば、被検物適用前よりＴＥＷＬ（経皮水分蒸散量）が上昇した状態が肌荒れとみなされ、ＴＥＷＬ上昇の程度が大きいほど皮膚のバリア能が低下している状態とみなされる。本発明では、in vitroで肌荒れを評価するために、本願発明者が開発した皮膚角層細胞間脂質を模した基板（以下、本明細書では「皮膚角層細胞間脂質擬似基板」と称する）（特願２００８−３３５３１９）を用いて、その構造の乱れ等を肌荒れとして評価する。当該基板は、複雑な構造を有する角層を単純化した、３種の脂質（セラミド、パルミチン酸及びコレステロール）から構成されるモデル膜である。本発明では、未処理基板のＩＲ吸収スペクトルと比較した差異（スペクトル強度、配合脂質由来の吸収帯の波数シフトなど）を損傷の程度とみなす。
【００２４】
前記３種の脂質から成る脂質膜を形成させる基礎の基板には、カバーガラス、マイカ、シリコンウエハー等の平面板を用いることができる。これらの脂質混合物は、質量比で、２０〜７０％：１０〜６０％：２０〜４０％（セラミド：パルミチン酸：コレステロール）で溶媒中に溶解される。皮膚中に存在する角層細胞間脂質の組成比を模するという観点からは、混合脂質の比率は２：１：１（セラミド：パルミチン酸：コレステロール）の質量比であることが好ましい。前記溶媒として、メタノール、クロロホルム、ヘキサン、アセトン、酢酸エチル等、あるいはその混合物を使用することができる。前記溶媒は、これらの具体的な溶媒に限定されず、上記脂質を溶解可能なものであればどのようなものでもよい。
【００２５】
上記脂質混合物を溶媒に溶解した後、当該溶液を平面板、例えばカバーグラス上に展開させ、乾燥させる。続いて、平面板を高温（例えば１２０℃）のオーブン中で溶融させ、窒素気流下で所定の時間静置する。室温に冷却後、平面板に水を加えて加湿（例えば、水に長時間浸漬又は加水）浸漬することで、本発明の脂質擬似基板を調製することができる。固体脂質混合物を溶融した後加湿する方法も可能である。
【００２６】
「肌荒れの修復」は、界面活性剤の適用により引き起こされた前記基板における細胞間脂質構造（ラメラ構造）の乱れ及びその流動性・秩序性が、界面活性剤適用前の状態に回復することを意味する。ステロール化合物単独及び／又はステロール化合物とパルミチン酸の混合物を前記基板に適用すると、８秒後にはＩＲスペクトルが未処理の基板と同様のプロファイルを示した（図１Ａ及び１Ｃ）。一方、パルミチン酸を単独で適用した場合、ＩＲスペクトルが元のプロファイルに回復するのに１１分かかった（図１Ｂ）。このような結果から、実際の皮膚に適用した場合でも、ステロール化合物は即時的な肌荒れの修復に寄与するものと考えられる。
【００２７】
しかしながら、前記皮膚外用剤におけるステロール構造を有する化合物及び炭素数１２〜１８の脂肪酸の用量・用法も特に限定されるものではなく、剤型や処置すべき肌荒れの状態により適宜決定される。典型的には、１日当たり数回、例えば１回〜３回、適量、例えば１平方ｃｍ2当たり３質量％溶液２〜３μLを肌に直接すり込むか、又その適量をガーゼなどに染み込ませてから肌に貼付することができる。
【実施例】
【００２８】
皮膚角層細胞間脂質擬似基板の調製
セラミドIII（９５．９％、０．３ｇ）（Evonik Degussa社、ドイツ、エッセン）、パルミチン酸（０．１５ｇ）（ナカライテスク社、日本、京都）及びコレステロール（０．１５ｇ）（ナカライテスク社、日本、京都）をクロロホルム（５０ｃｍ3）及びメタノール（１０ｃｍ3）の混合溶媒に溶解した。続いて、この脂質混合溶液（０．２ｃｍ3）を１８×１８ｍｍのカバーグラス上に広げ、そして乾燥させた。生成した脂質混合膜は、オーブン内において１２０℃で融解した後、同じ温度で１時間窒素雰囲気下に放置した。このサンプルを、室温に冷却した後２４時間水に浸透させた。最後に、飽和塩化ナトリウムを含むデシケーター（相対湿度７５％）内で、使用するまで保存した。
【００２９】
ＳＤＳによる皮膚角層細胞間脂質擬似基板の損傷
調製した複数の基板を各々ＳＤＳ水溶液（５．０ｍｇ／ｃｍ3）に曝露し、そしてそれぞれ異なる時間維持することで、実験的にヒトの肌荒れ状態を当該基板内に作り出した。ＳＤＳの曝露により損傷した基板は、少量の水で洗浄し、乾燥させた後使用した。
【００３０】
ＳＤＳ水溶液に曝露した後の基板内の化学構造及び組成の変化は、ＩＲ吸収スペクトルを用いて分光学的に解析した。ＩＲ吸収スペクトルは、Bio-Rad社製Digilab FTS-60Aスペクトロメーター上で、ＫＢｒペレットを用いた透過モードで測定することにより得た。スペクトルは全て、４０００〜４００ｃｍ-1の間で、平均６４回スキャンしたものである。
【００３１】
また、損傷後の基板をＸ線回折（ＸＲＤ）にかけることで、基板内の脂質の充填状態を確認した。Ｘ線回折（ＸＲＤ）測定は、Ｘ線回折装置（理学社製RAD-RC、日本及びBruker社製D8 Discover、ドイツ）上で、グラファイトモノクロメーターで単色化した高密度ＣｕＫα放射線（λ＝０．１５４ｎｍ）を用い、５０ｍＡ、６０ｋＶ、及び４０ｍＡ、４０ｋＶの条件で実施した。
【００３２】
ＩＲ及びＸＲＤの結果から、ＳＤＳを前記基板に適用した場合、コレステロール及びパルミチン酸が前記基板から溶出することが明らかになった。具体的には、コレステロールは適用から約１分後に溶出し、パルミチン酸は適用から５〜６分で溶出した。一方、セラミド（特にセラミドIII）は、適用から４分後に、そのアミド基の構造が、α−ヘリックスからβ構造へと変化したことが示唆されたものの、適用から２４時間経過した後も前記基板にほとんど残留していた。これらの現象は、ヒトの皮膚でも確認された。
【００３３】
コレステロール及び／又はパルミチン酸の添加による脂質構造の回復
エタノールに１）コレステロールとパルミチン酸とを等量含む混合物、２）パルミチン酸単独、及び３）コレステロール単独をそれぞれ５．０ｍｇ／ｃｍ3となるよう溶解させ、損傷した前記基板を当該溶液に異なる期間曝露し、維持した。洗浄して乾燥させた後、ＩＲ吸収スペクトル測定を行った。
【００３４】
ＩＲスペクトルによるＳＤＳ曝露により損傷した基板の修復評価
脂質曝露後の前記基板と曝露前のＩＲ吸収スペクトルを比較した。結果を図１Ａ〜Ｃに示す。図１Ａに示すとおり、１）コレステロールとパルミチン酸の混合溶液に対して曝露された前記基板は、８秒間の曝露によりアミドI（セラミドIII）の１６１４ｃｍ-1の吸収帯が１６４０ｃｍ-1に回復した。これは、セラミドIIIの構造がβ構造からαヘリックスへと回復したことを示唆している。損傷した基板を３）コレステロール単独の溶液に曝露した場合にも、セラミドIIIは同様にβ構造からαヘリックスへと回復した（図１Ｃ）。しかしながら、２）パルミチン酸単独の溶液に曝露した場合、アミドI（セラミドIII）の構造は回復しなかった（図１Ｂ）。これにより、コレステロールを添加することで、残留していたセラミドIIIの構造にも影響を及ぼすことが分かる。
【００３５】
Ｃ＝Ｏ伸縮モード（パルミチン酸由来）の１７０８ｃｍ-1の吸収帯は、１）パルミチン酸とコレステロールのエタノール溶液に曝露してから３分後に徐々に強度が増大した（図１Ａ）。他方、１３７８ｃｍ-1の吸収帯（コレステロールのＣＯＨの面内変角モード由来）の強度は、１）の溶液を用いた場合、８秒の曝露後に増大した。しかしながら、１７０８ｃｍ-1の吸収帯が、２）パルミチン酸単独のエタノール溶液に対する曝露から１１分後に強度が増大したのに対し（図１Ｂ）、１３７８ｃｍ-1の吸収帯は、３）コレステロール単独のエタノール溶液に対する曝露から８秒後に強度が増大した（図１Ｃ）。これらの結果は、コレステロールの浸透速度がパルミチン酸よりも速いことを示唆している。
【００３６】
ＥＳＲ測定によるＳＤＳ処理角層に対する修復効果の検討
角層のラメラ構造の流動性・秩序性を検討するために、前記脂質曝露前の基板と曝露後の基板のＥＳＲ測定を行った。ＳＤＳ処理角層を被検試料のエタノール溶液に１０秒間浸漬した後、角層に吸着した被検試料を除去するためエタノールに１０秒間浸漬した。対照として、未処理角層、ＳＤＳ処理角層をそれぞれエタノールに１０秒間浸漬したサンプルも調製した。それぞれの処理角層に対して、５−ＤＳＡ水溶液を適用して３７℃で１時間インキュベートした後、角層を十分に水洗してカバーグラス上に広げ、相対湿度９３％のデシケーター中で終夜静置しＥＳＲ測定に供した。測定条件は以下の通りである。装置：JES-RE1X X-band (9 GHz) EPR spectrometer（JEOL）、microwave power：10mW、time constant：1 second、sweep time：8 minutes、modulation：0.2 mT、sweep width：15 mT。角層構造性はオーダーパラメーター（Ｓ値）を算出して評価した。
【００３７】
１．角層細胞間脂質関連物質の添加
角層細胞間脂質関連物質であるパルミチン酸、コレステロール、フィトステロールを０．２５質量％の量で含むエタノール溶液で１０秒間浸漬処理した角層の測定結果を図２に示す。グラフの縦軸はＳ値を示しており、数値が大きい程角層構造性が高いことを示している。未処理角層に対しＳＤＳ処理した角層は角層構造性が低下しており、更に１０秒間エタノール処理をしてもＳ値に変化はみられなかった。これらに対し、パルミチン酸適用角層に関しては中程度の修復効果、ステロール化合物であるコレステロール、フィトステロール適用角層は優れた修復効果がみられた。
【００３８】
２．化粧品汎用油分の添加
化粧品汎用油分として用いられる流動パラフィン、ジイソステアリン酸グリセリル、Ｎ−ラウロイル−Ｌ−グルタミン酸ジ（フィトステリル・２−オクチルドデシル）、オリーブ油、イソステアリン酸、メチルポリシロキサンの３質量％のエタノール溶液で１０秒間浸漬処理した角層の測定結果を図３に示す。グラフの縦軸はＳ値を示しており、数値が大きい程角層構造性が高いことを示している。未処理角層に対しＳＤＳ処理した角層は角層構造性が低下しており、更に１０秒間エタノール処理をしてもＳ値に変化はみられなかった。これらに対し、流動パラフィン、ジイソステアリン酸グリセリル、オリーブ油適用角層に関しては中程度の修復効果、イソステアリン酸、メチルポリシロキサン適用角層に関しては修復効果があまりみられなかったが、ステロール化合物であるＮ−ラウロイル−Ｌ−グルタミン酸ジ（フィトステリル・２−オクチルドデシル）処理角層は優れた修復効果がみられた。
【００３９】
３．ステロール油分の添加
ステロール構造を有する油分であるポリオキシエチレンフィトステロール、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレンフィトステロール、Ｎ−ラウロイル−Ｌ−グルタミン酸ジ（フィトステリル・２−オクチルドデシル）、マカデミアナッツ油脂肪酸フィトステリルの３質量％のエタノール溶液で１０秒間浸漬処理した角層の測定結果を図４に示す。グラフの縦軸はＳ値を示しており、数値が大きい程角層構造性が高いことを示している。未処理角層に対しＳＤＳ処理した角層は角層構造性が低下しており、更に１０秒間エタノール処理をしてもＳ値に変化はみられなかった。これらに対し、検討したステロール油分処理角層すべてに関して優れた修復効果がみられた。
【００４０】
ＤＳＣ測定による角層修復効果の検討
角層細胞間脂質の添加による、ＳＤＳ処理後の前記基板の脂質構造の回復をＤＳＣ測定により検討した。添加する角層細胞間脂質として、１）パルミチン酸、２）コレステロールに加え、３）フィトステロールを使用した。各脂質をそれぞれ０．２５重量％の濃度となるようエタノールに溶解させた。ＳＤＳ処理角層を当該エタノール溶液に各々１０秒間適用した後、角層に吸着した被検試料を除去するためエタノールに１０秒間浸漬した。対照として、未処理角層、ＳＤＳ処理角層をそれぞれエタノールに１０秒間浸漬したサンプルも調製した（ｎ＝１）。測定条件は以下の通りである。装置：DSC120（SII社）、測定セル：銀製15μL容、測定条件：5℃から130℃まで2K/minで昇温。結果を図５に示す。
【００４１】
図５の結果から明らかなように、未処理角層は、６４℃付近に脂質由来のピーク温度を有する。当該ピーク温度は、ＳＤＳ処理角層では６２℃未満に低下し、更にエタノールを１０秒間適用しでも６２℃未満のままであった。しかしながら、ＳＤＳ処理角層をコレステロールのエタノール溶液に１０秒という短時間曝露しただけで、ピーク温度は未処理角層が示す温度に回復した。また、フィトステロールも顕著に脂質由来のピーク温度が回復した。パルミチン酸のエタノール溶液の添加によっては中程度の回復効果を示した。
【００４２】
上記のＥＳＲ及びＤＳＣの結果から、ステロール構造を有する化合物は角層のラメラ構造の乱れ及び流動性・秩序性を即時に本来の状態に回復させることに寄与するものと考えられる。優れた角層修復効果を示したフィトステロールに関して、ヒト角層を用いたin vivo試験において修復効果を検討した。
【００４３】
in vivoヒト角層におけるＳＤＳ処理に対するフィトステロールの修復効果の検討
前腕内側部を石鹸洗浄し、タオルで乾燥させた。３０分経過した後に、フィトステロールを適用する部位に印を付け、コルネオメーターCM825PC（COLOGNE社製、ドイツ）、テバメーターTM210（Courage+Khazaka社製、ドイツ、ケルン）を用いて皮表水分量及びＴＥＷＬ値を測定した。その後、３重量％のＳＤＳ水溶液３００μｌを各適用部位に３０分間パッチ適用した。
【００４４】
次に、ＳＤＳをパッチ適用部位から除去するために、適用部位を石鹸洗浄し、３０分間静置した。その後、前記コルネオメーター及びテバメーターを用いて皮表水分量及びＴＥＷＬ値を測定した。
【００４５】
前記適用部位に０．２５重量％フィトステロール（日清製油（株）、日本、東京）含有エタノール溶液を塗布し、３０分間静置した。その後、前記コルネオメーター及びテバメーターを用いて皮表水分量及びＴＥＷＬ値を測定した。結果を図６及び７に示す。
【００４６】
未処理皮膚に対する皮表水分量比（コルネオメーター測定値比）及びＴＥＷＬ比は、ＳＤＳ適用後に皮表水分量比は低下し（図６）、ＴＥＷＬ比は上昇した（図７）。これは、ＳＤＳの適用により肌荒れの状態が引き起こされたことを意味する。これに対し、フィトステロール添加後の皮膚は、皮表水分量比が上昇し（図６）、ＴＥＷＬ比が低下した（図７）。すなわち、コレステロールだけでなく、植物由来のステロール化合物であるフィトステロールも肌荒れの回復に寄与することが実際の皮膚で証明された。
【産業上の利用可能性】
【００４７】
本発明の美容方法によれば、セラミドを用いることなく、ステロール構造を有する化合物を肌に適用することで肌荒れ状態を回復させることができる。このようなステロール化合物を用いた新規の肌荒れ修復メカニズムを利用することで、細胞間脂質をターゲットとした新規な角層ケア成分、延いては新規な肌荒れ改善剤の開発が可能となる。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図１Ｃ】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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