(57)【要約】【課題】生きた生物個体の眼内組織を、眼組織の露出や眼組織内又は眼組織と連絡する神経組織に染色剤を注入するという侵襲的な操作を要することなく、眼内組織を特異的に標識する眼内組織用標識組成物を提供することである。又、本発明の別の目的は、生きた個体の眼内組織を非侵襲的に標識する方法を提供することである。また、本発明の別の目的は、これらの眼内組織用標識組成物を使用したスクリーニング方法を提供することにある。【解決手段】生きた生物個体の眼内組織を標識するための標識組成物であって、網膜の視細胞層を少なくとも１つ以上標識可能な化合物を含むことを特徴とする眼内組織用標識組成物。【選択図】図５
2010168369.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
生きた生物個体の眼内組織用標識組成物であって、
少なくとも網膜の視細胞層を標識可能な化合物を含むことを特徴とし、
前記化合物が一般式（Ｉ）または一般式（ＩＩ）で表される構造を部分骨格にもつ色素化合物であることを特徴とする眼内組織用標識組成物：
【化１】
2010168369.tif 000029
［一般式（Ｉ）中、Ｒ1〜Ｒ2は各々独立して水素原子、アルキル基、またはアリール基を表し、Ｒ1とＲ2は互いに結合して環を形成しても良く、
Ａは、下記一般式（ＩＩＩ）〜（ＩＸ）、または（ＶＩＩＩ’）で表わされる骨格構造を表し、；
【化２】
2010168369.tif 000030
［一般式（ＩＩＩ）中、Ｒ6はアリール基を表し、Ｒ7〜Ｒ8及びＲ10〜Ｒ11は各々独立して水素原子、アルキル基、アリール基、またはハロゲン原子を表し、Ｒ9はカウンターアニオンを有するアンモニウム塩基を表し、
一般式（ＩＶ）中、Ｒ12〜Ｒ13は各々独立して水素原子、アルキル基、アリール基、またはヘテロ環基を表し、Ｒ14〜Ｒ16は各々独立して水素原子、アルキル基、アリール基、ヘテロ環基、ハロゲン原子、またはアミノ基を表し、
一般式（Ｖ）中、Ｒ17〜Ｒ18は各々独立して水素原子、アルキル基、またはアルコキシ基を表し、Ｒ19〜Ｒ20は各々独立して水素原子、アルキル基、アルコキシ基、水酸基、またはシアノ基を表し、Ｒ21はヘテロ環基、または−ＣＨ＝Ｃ（Ｒ22）（Ｒ23）を表し、Ｒ22〜Ｒ23は各々独立して水素原子、シアノ基、ヘテロ環基、カルボン酸基、またはカルボン酸エステル基を表し、Ｒ1とＲ17、Ｒ2とＲ18、Ｒ22とＲ23は各々独立して互いに結合して環を形成しても良く、
一般式（ＶＩ）中、Ｒ24は各々独立して水素原子、アルキル基、アリール基、またはヘテロ環基を表し、
一般式（ＶＩＩ）中、Ｒ25は酸素原子、硫黄原子、または−Ｎ（Ｒ27）を表し、Ｒ26は水素原子、アルキル基、アルコキシ基、またはスルホン酸基を表す。Ｒ27は水素原子、アルキル基、またはアリール基を表し、
一般式（ＶＩＩＩ）中、Ｒ28は水素原子、アルキル基、またはアリール基を表し、
一般式（ＶＩＩＩ’）中、Ｒ28’はハロゲン原子、アルコキシ基、アリールオキシ基を表し、
一般式（ＩＸ）中、Ｒ29は水素原子、アルキル基、またはアリール基を表す。］、
Ａはまた、下記一般式（Ｘ）で表される骨格構造で表される骨格構造を示し；
【化３】
2010168369.tif 000031
［一般式（Ｘ）中、Ｒ31〜Ｒ32はスルホン酸基、またはそれらの塩類を表し、Ｒ33〜Ｒ34は水素原子、アルキル基、アルコキシ基、またはハロゲン原子を表し、一般式（Ｉ）においてＲ1とＲ2の２つが合わさり、１つの置換基：＝Ｎ−Ｒ30を表し、Ｒ30はアリール基、またはヘテロ環基を表す。］、
一般式（ＩＩ）中、Ｒ3〜Ｒ4は各々独立して水素原子、アルケニル基、シアノ基、カルボン酸基、カルボン酸エステル基、スルホン酸基、アシル基、またはヘテロ環基を表し、Ｒ3とＲ4は互いに結合して環を形成しても良い。Ｒ5は水素原子、アルキル基、アリール基、ヘテロ環基を表し、
Ｒ3およびＲ4の一方が水素原子、他方が下記一般式（ＸＩ）で表されるヘテロ環基を表し、
【化４】
2010168369.tif 000032
［一般式（ＸＩ）中、Ｒ35はアルキル基、またはアリール基を表し、Ｒ36〜Ｒ39は各々独立して水素原子、アルキル基、アリール基、アルコキシ基、カルボン酸基、スルホン酸基、ヘテロ環基、アミノ基、またはハロゲン原子を表し、また、Ｒ36とＲ37、Ｒ37とＲ38、またはＲ38とＲ39は互いに結合して環を形成しても良く、Ｘ-は陰イオン性基を表し、Ｑ1は硫黄原子、酸素原子、−Ｃ（Ｒ40）（Ｒ41）−、−ＣＨ＝ＣＨ−、または−Ｎ（Ｒ42）−を表し、Ｒ40〜Ｒ42は水素原子、アルキル基、またはアリール基を表し、Ｒ40とＲ41は互いに結合して環を形成しても良い。］、
一般式（ＩＩ）中で表されるＲ3とＲ4が互いに結合して形成される環は、下記一般式（ＸＩＩ）〜（ＸＶ）で表され；
【化５】
2010168369.tif 000033
［一般式（ＸＩＩ）中、Ｒ43は水素原子、アルキル基、アリール基、カルボン酸、またはヘテロ環基を表し、Ｒ44はアルキル基、アリール基、カルボン酸基、カルボン酸エステル基、ヒドロキシル基、またはアミノ基を表し、
一般式（ＸＩＩＩ）中、Ｑ2は酸素原子、硫黄原子、または−Ｎ（Ｒ52）−を表し、Ｒ45は水素原子、アルキル基、アリール基、またはヘテロ環基を表し、Ｒ46は硫黄原子、酸素原子、＝ＮＲ53、ヘテロ環、またはジシアノメチレン基を表し、Ｒ52及びＲ53は水素原子、アルキル基、アリール基、またはヘテロ環基を表し、
一般式（ＸＶ）中、Ｒ49〜Ｒ50は各々独立して水素原子、アルキル基、アリール基を表し、Ｒ51は酸素原子、または硫黄原子を表す。］、
Ｂは、下記一般式（ＸＶＩ）〜（ＸＶＩＶ）、または（ＸＶＩＩ’）で表わされる骨格構造を示し；
【化６】
2010168369.tif 000034
［一般式（ＸＶＩ）中、Ｒ54は水素原子、アルキル基、アラルキル基、アルケニル基、アリール基、ヘテロ環基、またはアシル基を表し、Ｒ55〜Ｒ58は各々独立して水素原子、アルキル基、アリール基、カルボン酸基、カルボン酸エステル基、またはアシル基を表し、Ｒ55とＲ57が互いに結合して環を形成しても良く、Ｒ59は水素原子、アルキル基、アルコキシ基、またはハロゲン原子を表し、
一般式（ＸＶＩＩ）中、Ｒ60は水素原子、アルキル基、またはアリール基を表し、Ｒ61〜Ｒ64は各々独立して水素原子、アルキル基、アリール基、アルコキシ基、カルボン酸基、スルホン酸基、ヘテロ環基、アミノ基、またはハロゲン原子を表し、又、Ｒ61とＲ62、Ｒ62とＲ63、またはＲ63とＲ64は互いに結合して環を形成しても良く、Ｑ3は硫黄原子、酸素原子、−Ｃ（Ｒ65）（Ｒ66）−、または−ＣＨ＝ＣＨ−を表し、Ｒ65とＲ66は互いに結合して環を表し、
一般式（ＸＶＩＩ’）中、Ｒ60’は水素原子、アルキル基、またはアリール基を表し、Ｑ3’は硫黄原子または酸素原子を表し、一般式（ＸＶＩＩ’）中の点線はベンゼン環がある場合とない場合とを表し、
一般式（ＸＶＩＩＩ）中、Ｒ68〜Ｒ69は各々独立して水素原子、アルキル基、アリール基を表し、Ｒ70は酸素原子、または硫黄原子を表し、
一般式（ＸＶＩＶ）中、Ｒ71はアルキル基を表す。］。
【請求項２】
前記眼内組織が網膜組織であることを特徴とする請求項１に記載の眼内組織用標識組成物。
【請求項３】
前記化合物が、桿体細胞、および波長領域に対する感度が異なる複数種の錐体細胞から選ばれる少なくとも一種の細胞、またはこれら細胞の細胞体の一部分を選択的に標識することを特徴とする請求項１または２に記載の眼内組織用標識組成物。
【請求項４】
前記化合物を０．００１ｎｇ／ｍＬ以上、１００μｇ／ｍＬ以下の濃度で含むことを特徴とする、請求項１から３のいずれか一項に記載の眼内組織用標識組成物。
【請求項５】
前記化合物が蛍光性化合物である事を特徴とする、請求項１から４のいずれか一項に記載の眼内組織用標識組成物。
【請求項６】
生きた生物個体の眼内組織を標識するための標識組成物であって、
少なくとも網膜の視細胞層を標識可能な化合物を含むことを特徴とする、眼内組織用標識組成物。
【請求項７】
前記化合物が、眼組織または眼組織に連絡する神経組織を外科的損傷なく投与して眼内組織を標識可能であることを特徴とする、請求項１から６のいずれか一項に記載の眼内組織用標識組成物。
【請求項８】
請求項１から７のいずれか一項に記載の眼内組織用標識組成物を含む眼内組織用標識剤。
【請求項９】
請求項１から８のいずれか一項に記載の眼内組織用標識組成物または眼内組織用標識剤を有効成分として含む診断用組成物。
【請求項１０】
請求項１から８のいずれか一項に記載の眼内組織用標識組成物または眼内組織用標識剤と眼組織とを接触させる工程を有する、眼組織の染色方法。
【請求項１１】
請求項１から８のいずれか一項に記載の眼内組織用標識組成物または眼内組織用標識剤の少なくとも一種を含む、複数種の標識組成物を用いる眼組織の多重標識方法。
【請求項１２】
前記複数種の標識組成物の少なくとも一種が、少なくとも一種の抗体を含む事を特徴とする請求項１１に記載の多重標識方法。
【請求項１３】
眼内組織に励起光を照射し、蛍光を観察する工程を含むことを特徴とする請求項１から１２のいずれか一項に記載の眼組織の染色方法で染色する眼内組織のイメージング方法。
【請求項１４】
請求項１３に記載の眼内組織のイメージング方法を用いた、網膜の状態の評価方法。
【請求項１５】
請求項１から７のいずれか一項に記載の眼内組織用標識組成物を用いて標識したモデル動物を用いたスクリーニング方法。
【請求項１６】
モデル動物に被験物質を投与する工程、該モデル動物に請求項１から７のいずれか一項に記載の眼内組織用標識組成物を投与する工程、及び該モデル動物の眼内組織に対する該眼内組織用標識組成物の標識の状態を調べる工程を含む、眼組織の疾患治療薬または疾患予防薬のスクリーニング方法。
【請求項１７】
前記モデル動物がゼブラフィッシュである請求項１５または１６に記載のスクリーニング方法。
【請求項１８】
前記モデル動物がマウスまたはラットである請求項１５または１６に記載のスクリーニング方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、生物試料の眼内組織を非侵襲的に標識する眼内組織用標識組成物、眼内組織の標識方法、及びスクリーニング方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、高齢化社会が進むにつれ、眼科疾患の患者数も増加傾向にある。眼疾患により弱視化が進むと、最悪の場合失明に至り、患者は生活の質を著しく損なわれる。そのため、早期に疾患を検出して治療または進行を遅らせる手段を施す事が求められている。中途失明の原因となる代表的な疾患としては、糖尿病性網膜症、黄斑変性疾患、及び緑内障等が挙げられ、眼底網膜が関連する疾患が多い。これらの疾患の診断には、視野検査による視機能の評価や、眼底カメラ、光干渉断層計（ＯＣＴ）、及び走査レーザー検眼鏡等を用いた眼底網膜の形態評価による診断が行われている。
【０００３】
網膜性疾患では神経細胞が障害されることにより、視機能の低下が引き起こされる。近年、疾患時に網膜組織の層構造の状態をＯＣＴ技術により可視化する事が可能となり、網膜病変の生体組織に関する新知見が多く得られてきている。しかしながら、現在のＯＣＴ画像は解像度が低く、網膜を構成する細胞の形態まで可視化することは出来なかった。
【０００４】
従来から、眼組織の可視化技術として、色素化合物を利用して眼組織を造影・染色する方法が知られている。例えば、インドシアニングリーンやフルオレセインのような蛍光色素を用いて脈絡膜血管や網膜血管を可視化する方法がある（非特許文献１）。また、角膜の染色方法として、ローズベンガルやフルオレセインを用いる方法も知られている（非特許文献２）。
【０００５】
一方、硝子体、網膜、及び視神経のような眼内組織の可視化技術としては、主に手術時において、硝子体腔へ染色組成物を投与する方法が開示されている。例えば、硝子体網膜手術の際に網膜の膜を染色する組成物（特許文献１）がある。又、硝子体内へ注入した送達物質が網膜に滞留する事が開示されている（特許文献２）。他に、ラットの網膜神経節細胞を造影するために、網膜神経節に連絡する中脳上丘に逆行性軸索輸送トレーサーを注入し、レーザー眼底鏡を用いて観察を行った報告がある（非特許文献３）。このように、眼内組織の可視化のためには直接的に眼内へ染色組成物を投与する必要があった。
【０００６】
ところで、網膜や網膜神経組織に作用させる薬剤は、静脈注射、経口投与等が試みられているが、網膜への薬剤の移行量は極微量である。一方、硝子体内腔への薬剤投与は、静脈注射や経口投与に比べ網膜組織への薬剤移行量は多いが、高度な技術を必要とし、患者への負担も大きいため、手術や治療時以外は用いることは極めて困難であり、眼底網膜の形態や機能評価に用いることは出来なかった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】特許第３４６９１９８号
【特許文献２】特開２００７−２６２０７８号公報
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】眼科写真，２３，３−１０頁（２００７年）
【非特許文献２】ＥＹＥ  ＣＯＮＴＡＣＴ  ＬＥＮＳ，３４：６１−６４頁（２００８年）
【非特許文献３】Ｉｎｖｅｓｔ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  Ｖｉｓ  Ｓｃｉ，４7（１０），４１９８頁（２００６年）
【非特許文献４】Ｐｒｏｇｒｅｓｓ  ｉｎ  Ｒｅｔｉｎａｌ  ａｎｄ  Ｅｙｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２７，８９−１１０頁（２００８年）
【非特許文献５】Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，４，５０４−５１２（２００４年）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明の目的は、生きた生物個体の眼内組織を簡便に標識可能な眼内組織用標識組成物を提供する事である。特に、インビボでの眼内組織を標識できる標識組成物を提供するものである。又、本発明の別の目的は、生きた生物個体の眼内組織を、眼組織の露出や眼組織内または眼組織と連絡する神経組織への針刺し等の侵襲的な操作を要する事なく、非侵襲的に標識する方法を提供する事である。又、本発明の別の目的は、これらの眼内組織用標識組成物を使用したスクリーニング方法を提供する事にある。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明者らは、上記課題を解決するために鋭意検討した結果、生きた生物個体の眼内組織を標識するという新規な用途を提供する化合物群を見出した。すなわち、生きた生物個体の眼内組織を標識可能な化合物群を見出し、眼内組織用標識組成物を得る事に成功した。
【００１１】
又、本発明者らは、眼内組織を非侵襲的に標識する方法を確立した。更には、本発明の眼内組織用標識組成物を用いた眼内組織のイメージング方法及び、眼内組織を標識できる眼内組織用標識組成物を用いたスクリーニング方法、眼内組織の診断薬を開発し、本発明を完成するに至った。
【００１２】
以下の比較例で示すように、従来公知の眼内組織を染色する化合物は、従来方法によって生きた生物個体の眼内組織は染色されない。
【００１３】
すなわち、本発明は以下の通りである
本発明は、生きた生物個体の眼内組織用標識組成物であって、
少なくとも網膜の視細胞層を標識可能な化合物を含む事を特徴とし、
前記化合物が一般式（Ｉ）または一般式（ＩＩ）で表される構造を部分骨格にもつ色素化合物である事を特徴とする眼内組織用標識組成物：
【００１４】
【化１】
2010168369.tif 000003
【００１５】
［一般式（Ｉ）中、Ｒ1〜Ｒ2は各々独立して水素原子、アルキル基、またはアリール基を表し、Ｒ1とＲ2は互いに結合して環を形成しても良く、
Ａは、下記一般式（ＩＩＩ）〜（ＩＸ）、または（ＶＩＩＩ’）で表わされる骨格構造を表し、；
【００１６】
【化２】
2010168369.tif 000004
【００１７】
［一般式（ＩＩＩ）中、Ｒ6はアリール基を表し、Ｒ7〜Ｒ8及びＲ10〜Ｒ11は各々独立して水素原子、アルキル基、アリール基、またはハロゲン原子を表し、Ｒ9はカウンターアニオンを有するアンモニウム塩基を表し、
一般式（ＩＶ）中、Ｒ12〜Ｒ13は各々独立して水素原子、アルキル基、アリール基、またはヘテロ環基を表し、Ｒ14〜Ｒ16は各々独立して水素原子、アルキル基、アリール基、ヘテロ環基、ハロゲン原子、またはアミノ基を表し、
一般式（Ｖ）中、Ｒ17〜Ｒ18は各々独立して水素原子、アルキル基、またはアルコキシ基を表し、Ｒ19〜Ｒ20は各々独立して水素原子、アルキル基、アルコキシ基、水酸基、またはシアノ基を表し、Ｒ21はヘテロ環基、または−ＣＨ＝Ｃ（Ｒ22）（Ｒ23）を表し、Ｒ22〜Ｒ23は各々独立して水素原子、シアノ基、ヘテロ環基、カルボン酸基、またはカルボン酸エステル基を表し、Ｒ1とＲ17、Ｒ2とＲ18、Ｒ22とＲ23は各々独立して互いに結合して環を形成しても良く、
一般式（ＶＩ）中、Ｒ24は各々独立して水素原子、アルキル基、アリール基、またはヘテロ環基を表し、
一般式（ＶＩＩ）中、Ｒ25は酸素原子、硫黄原子、または−Ｎ（Ｒ27）を表し、Ｒ26は水素原子、アルキル基、アルコキシ基、またはスルホン酸基を表す。Ｒ27は水素原子、アルキル基、またはアリール基を表し、
一般式（ＶＩＩＩ）中、Ｒ28は水素原子、アルキル基、またはアリール基を表し、
一般式（ＶＩＩＩ'）中、Ｒ28'はハロゲン原子、アルコキシ基、またはアリールオキシ基を表し、
一般式（ＩＸ）中、Ｒ29は水素原子、アルキル基、またはアリール基を表す。］、
Ａはまた、下記一般式（Ｘ）で表わされる骨格構造で表される骨格構造を示し；
【００１８】
【化３】
2010168369.tif 000005
【００１９】
［一般式（Ｘ）中、Ｒ31〜Ｒ32はスルホン酸基、またはそれらの塩類を表し、Ｒ33〜Ｒ34は水素原子、アルキル基、アルコキシ基、またはハロゲン原子を表し、一般式（Ｉ）においてＲ1とＲ2の２つが合わさり、１つの置換基：＝Ｎ−Ｒ30を表し、Ｒ30はアリール基、またはヘテロ環基を表す。］、
一般式（ＩＩ）中、Ｒ3〜Ｒ4は各々独立して水素原子、アルケニル基、シアノ基、カルボン酸基、カルボン酸エステル基、スルホン酸基、アシル基、またはヘテロ環基を表し、Ｒ3とＲ4は互いに結合して環を形成しても良い。Ｒ5は水素原子、アルキル基、アリール基、またはヘテロ環基を表し、Ｒ3及びＲ4の一方が水素原子、他方が下記一般式（ＸＩ）で表されるヘテロ環基を表し、
【００２０】
【化４】
2010168369.tif 000006
【００２１】
［一般式（ＸＩ）中、Ｒ35はアルキル基、またはアリール基を表し、Ｒ36〜Ｒ39は各々独立して水素原子、アルキル基、アリール基、アルコキシ基、カルボン酸基、スルホン酸基、ヘテロ環基、アミノ基、またはハロゲン原子を表し、また、Ｒ36とＲ37、Ｒ37とＲ38、またはＲ38とＲ39は互いに結合して環を形成しても良く、Ｘ-は陰イオン性基を表し、Ｑ1は硫黄原子、酸素原子、−Ｃ（Ｒ40）（Ｒ41）−、−ＣＨ＝ＣＨ−、または−Ｎ（Ｒ42）−を表し、Ｒ40〜Ｒ42は水素原子、アルキル基、またはアリール基を表し、Ｒ40とＲ41は互いに結合して環を形成しても良い。］、
一般式（ＩＩ）中で表されるＲ3とＲ4が互いに結合して形成される環は、下記一般式（ＸＩＩ）〜（ＸＶ）で表され；
【００２２】
【化５】
2010168369.tif 000007
【００２３】
［一般式（ＸＩＩ）中、Ｒ43は水素原子、アルキル基、アリール基、カルボン酸、またはヘテロ環基を表し、Ｒ44はアルキル基、アリール基、カルボン酸基、カルボン酸エステル基、ヒドロキシル基、またはアミノ基を表し、
一般式（ＸＩＩＩ）中、Ｑ2は酸素原子、硫黄原子、または−Ｎ（Ｒ52）−を表し、Ｒ45は水素原子、アルキル基、アリール基、またはヘテロ環基を表し、Ｒ46は硫黄原子、酸素原子、＝ＮＲ53、ヘテロ環、またはジシアノメチレン基を表し、Ｒ52及びＲ53は水素原子、アルキル基、アリール基、またはヘテロ環基を表し、
一般式（ＸＶ）中、Ｒ49〜Ｒ50は各々独立して水素原子、アルキル基、またはアリール基を表し、Ｒ51は酸素原子、または硫黄原子を表す。］、
Ｂは、下記一般式（ＸＶＩ）〜（ＸＶＩＶ）、または（ＸＶＩＩ’）で表わされる骨格構造を示し；
【００２４】
【化６】
2010168369.tif 000008
【００２５】
［一般式（ＸＶＩ）中、Ｒ54は水素原子、アルキル基、アラルキル基、アルケニル基、アリール基、ヘテロ環基、またはアシル基を表し、Ｒ55〜Ｒ58は各々独立して水素原子、アルキル基、アリール基、カルボン酸基、カルボン酸エステル基、またはアシル基を表し、Ｒ55とＲ57が互いに結合して環を形成しても良く、Ｒ59は水素原子、アルキル基、アルコキシ基、またはハロゲン原子を表し、
一般式（ＸＶＩＩ）中、Ｒ60は水素原子、アルキル基、またはアリール基を表し、Ｒ61〜Ｒ64は各々独立して水素原子、アルキル基、アリール基、アルコキシ基、カルボン酸基、スルホン酸基、ヘテロ環基、アミノ基、またはハロゲン原子を表し、また、Ｒ61とＲ62、Ｒ62とＲ63、またはＲ63とＲ64は互いに結合して環を形成しても良く、Ｑ3は硫黄原子、酸素原子、−Ｃ（Ｒ65）（Ｒ66）−、または−ＣＨ＝ＣＨ−を表し、Ｒ65とＲ66は互いに結合して環を表し、
一般式（ＸＶＩＩ’）中、Ｒ60'は水素原子、アルキル基、またはアリール基を表し、Ｑ3'は硫黄原子、または酸素原子を表す。また、一般式（ＸＶＩＩ'）中の点線はベンゼン環がある場合とない場合を表し、
一般式（ＸＶＩＩＩ）中、Ｒ68〜Ｒ69は各々独立して水素原子、アルキル基、アリール基を表し、Ｒ70は酸素原子、または硫黄原子を表し、
一般式（ＸＶＩＶ）中、Ｒ71はアルキル基を表す。］を特徴とする。
【発明の効果】
【００２６】
本発明の眼内組織用標識組成物の提供により、これまで不可能であった非侵襲的な眼内組織の標識が可能となり、簡便、且つ、高精細に眼内組織の層構造の状態や細胞形態のイメージングが可能になる。これにより眼内組織等の評価や解析を高い精度で行うことが可能となる。更に、本発明の眼内組織用標識組成物を眼内組織の観察・解析装置と組み合わせ、これまで観察する事が困難であった生きた生物個体の眼内組織、特に網膜の状態を正確かつ高感度に把握でき、眼科領域の研究・診断に有効な新規なツールを提供する事が出来る。
【図面の簡単な説明】
【００２７】
【図１】実施例４で観察された網膜組織の染色を示す。
【図２】実施例２で観察された網膜組織の染色を示す。
【図３】比較例１で観察された網膜組織の蛍光観察像を示す。
【図４】実施例１１８で観察された生体内の網膜組織の観察像を示す。
【図５】実施例１２０で観察されたゼブラフィッシュ眼球凍結切片の染色像を示す。
【図６】実施例１２２で観察されたヒト眼球凍結切片の染色像を示す。
【図７】実施例１２３で観察されたマウス眼球凍結切片の染色像を示す。
【発明を実施するための形態】
【００２８】
以下に本発明を詳細に説明する
＜眼内組織を標識することについて＞
（標識の定義）
本発明において、眼内組織を標識するとは、前記組成物中の有効成分である色素化合物が眼内組織中、またはその表面、あるいはその周囲に保持されることによって、眼内組織の形状、位置、または機能の少なくとも一つを検出可能な状態になることを言う。検出には、後に説明する画像取得手段によって蛍光画像や染色画像を取得する方法や、目視で観察する方法などが挙げられる。
【００２９】
標識の代表例は染色であり、いわゆる細胞染色や組織染色が可能な眼内組織用標識組成物が本発明によって提供される。
【００３０】
（染色メカニズム）
本発明の眼内組織用標識組成物が特定の眼内組織を標識する詳細なメカニズムは判明していない。しかし、本発明が提供する化合物群は、安定且つ低分子量の化合物であるため細胞膜等を透過して移動し易く、且つ特定細胞内に保持され易い構造を有していることにより、細胞の特定の組織内に保持されるのではないかと推測している。
【００３１】
また、本発明の眼内組織用標識組成物は、生体への投与後直ちに眼内組織を標識するものが好ましいが、投与の方法によっては眼内組織が標識されるまでにある程度の時間を要する場合もある。この観点においては、投与後数分以内にまたは数時間内に標識することができる色素化合物であることが好ましい。
【００３２】
また、経時的な変化を観察したい場合は、標識化後長期間残留する色素化合物を選択することが好ましいが、生体への影響を減らすためには、投与後に代謝によって排出されやすい色素化合物を選択することが好ましい。
【００３３】
＜生物試料について＞
本発明の眼内組織用標識組成物を用いて眼内組織を標識する事が可能な生物個体としては、特に限定されるものではない。例えば、脊椎動物としては、トラフグ、クサフグ、ミドリフグ、メダカ、ゼブラフィッシュ等の硬骨魚類、アフリカツメガエル等の両生類、ニワトリ、ウズラ等の鳥類、ラット、マウス、ハムスター等の小動物、ヤギ、ブタ、イヌ、ネコ、ウシ、ウマ等の大動物、サル、チンパンジー、ヒト等が挙げられる。特に、これらの生物個体の眼内組織を生きたままの状態で標識することが出来る。また、生物試料として人を除外してもよい。
【００３４】
ゼブラフィッシュは受精後６から７日で主要な臓器が形成され、眼球の組織学的形態もほぼ完成される。そのため、７日胚の使用は個体差の影響をほとんど受けずに試験を行う事が出来る。また、ゼブラフィッシュは１回の産卵で約２００個以上の受精卵が得られるため同じ遺伝的背景を持ったゼブラフィッシュが得られ、スクリーニングには好都合であるという利点がある。
【００３５】
＜眼内組織について＞
本発明の眼内組織用標識組成物が標識できる眼内組織は、眼球において外界と直接接しない眼球内部の構造を形成する眼内組織であり、眼球表面の組織を除く眼内に存在する組織であれば特に限定されるものではない。例えば、網膜色素上皮層、視細胞層、外境界膜、外顆粒層、外網状層、内顆粒層、内網状層、神経節細胞層、内境界膜から構成される網膜組織、虹彩、毛様体、脈絡膜、水晶体、硝子体、涙腺、視神経、視神経乳頭、視索、網膜血管、これら組織の疾患状態組織、または疾患による新生組織及び癌組織等が挙げられる。また、生物種類、発生段階、または発生異常、疾病等によって前記と異なる眼内組織が存在する場合は、それらの組織も含む事が出来る。
【００３６】
本発明の眼内組織用標識組成物は、特に網膜組織の染色に好適に用いられる。網膜組織の染色は、前記網膜組織を構成する複数の層のうち、少なくとも視細胞層を含む１種類以上の前記組織または細胞を染色する事が出来るため、網膜疾患の可視化等の用途において有用性が高い。
【００３７】
前記記載の網膜組織に含まれる細胞としては特に限定されるものではないが、アマクリン細胞、水平細胞、双極細胞、インタープレキシフォルム細胞、錐体細胞、桿体細胞、線維芽細胞、ミューラーグリア細胞、またはこれらの腫瘍細胞、これらの未分化状態の細胞（幹細胞）等が挙げられる。また、本発明の眼内組織用標識組成物は、桿体細胞及び波長領域に対する感度が異なる複数種の錐体細胞をひとつ以上好適に染色することが出来る。
【００３８】
本発明において、網膜の細胞形態を染色するとは、網膜細胞を構成する細胞が少なくとも１種類染色され、１種類毎に細胞形態がはっきりと判別する事が可能な状態になる事である。
【００３９】
＜投与方法について＞
本発明において、眼組織または眼組織に連絡する神経組織を傷つけることなく眼内組織を標識するとは、眼内組織用標識組成物を、眼組織の切開や、眼組織または眼組織に連絡する神経組織への針刺し等の外科的損傷を、眼組織に与えることなく標識することである。
【００４０】
外科的損傷なく標識する方法としては特に限定されるものではないが、例えば、眼内組織用標識組成物を生物個体の一部または全体に暴露する方法、経口接触による方法、経肺接触による方法、経鼻接触による方法、経消化管接触による方法、経粘膜接触による方法、経体液接触による方法、舌下接触による方法、静脈または動脈等の血管内接触による方法、腹腔内接触による方法、腹膣内、皮下、皮内、膀胱内、気管(気管支)内等への注入方法、噴霧または塗布等の手段による生体内への接触による方法等が挙げられる。
【００４１】
本発明において、眼組織に連絡する神経組織とは、眼組織と組織学的につながりのある神経組織を表している。具体的には、特に限定されるものではないが、例えば視神経組織及び脳神経組織等が挙げられる。
【００４２】
動物への投与の場合には、その投与形態、投与経路、投与量は対象となる動物の体重や状態によって適宜選択する。
【００４３】
＜化合物について＞
本発明の眼内組織用標識組成物に含まれる化合物は、少なくとも網膜の視細胞層を標識可能な化合物を含む事を特徴とする。好ましくは、網膜の視細胞層に存在する桿体細胞、および複数種類の錐体細胞から選ばれる細胞種類をひとつ以上、またはこれら細胞の細胞体の一部分を選択的に標識する化合物を含む。本発明で「選択的に標識」とは、少なくとも明記された細胞または部分が標識され、且つ、網膜組織内で標識されない細胞または部分がある状態を指す。
【００４４】
本発明の眼内組織用標識組成物に含まれる化合物は、標識の対象となる眼内組織、特に網膜組織へ移行させることから、低分子化合物であることが好ましく、分子量が２，０００以下であるものが選択される。好ましくは分子量が１，５００以下の化合物、特に分子量が１，０００以下の化合物であることが好ましい。
【００４５】
又、本発明の化合物は蛍光性を有する蛍光性化合物である事が好ましい。蛍光性の化合物であれば感度が高いため、低濃度で標識することができ、必要とする化合物の量を相対的に減らすことができる。また、標識部位が異なり、蛍光スペクトルの異なる化合物等の組み合わせを選択して複数組織の多重標識が可能になるため、一度の観察で複数の情報を得ることが出来るようになる等、有用性が高い。
【００４６】
本発明の眼内組織用標識組成物で用いられる化合物は、一般式（Ｉ）または一般式（ＩＩ）で表される構造を部分骨格にもつ色素化合物である事が好ましい。
【００４７】
【化７】
2010168369.tif 000009
【００４８】
一般式（Ｉ）中、Ｒ1〜Ｒ2は各々独立して水素原子、アルキル基、またはアリール基を表す。Ｒ1とＲ2は互いに結合して環を形成しても良い。
【００４９】
Ｒ1〜Ｒ2におけるアルキル基としては、特に限定されるものではないが、例えば、メチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基、オクチル基、ノニル基、デシル基、ウンデシル基、ドデシル基、トリデシル基、テトラデシル基、ペンタデシル基、ヘキサデシル基、ヘプタデシル基、オクタデシル基、ノナデシル基、シクロプロピル基、シクロブチル基、またはシクロペンチル基等の直鎖、分岐または環状の炭素数１〜２０個のアルキル基等が挙げられる。
【００５０】
Ｒ1〜Ｒ2におけるアリール基としては、特に限定されるものではないが、例えば、フェニル基、ナフチル基、フェナントリル基、またはアントラセニル基等の６〜１４員環の単環式または多環式アリール基が挙げられる。
【００５１】
Ｒ1〜Ｒ2は、更に置換基を有していてもよく、色素化合物の保存安定性を著しく阻害するものでなければ特に特に限定されるものではない。例えば、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、またはｔｅｒｔ−ブチル基等のアルキル基；フェニル基、またはナフチル基等のアリール基；メトキシ基、エトキシ基、またはブトキシ基等のアルコキシ基；フェノキシ基、またはナフチルオキシ基等のアリールオキシ基；チオメチル基、チオエチル基、チオプロピル基、チオブチル基、またはチオフェニル基等のアルキルスルファニル基；メチルアミノ基、またはブチルアミノ基等のモノ置換アミノ基；ジメチルアミノ基、Ｎ−エチル−Ｎ−フェニルアミノ基、またはジフェニルアミノ基等のジ置換アミノ基；アセチル基、ベンゾイル基、カルボン酸基、カルボン酸エステル基、またはカルバモイル基等のアシル基；スルホン酸基、スルホン酸エステル基、またはスルファモイル基等のスルホニル基；ピリジル基、トリアジニル基、またはベンゾチアゾリル基等のヘテロ環基；ニトロ基；フッ素原子、塩素原子、臭素原子、またはヨウ素原子等のハロゲン原子；ポリエチレングリコール基；４級アンモニウム塩、カルボン酸塩、スルホン酸塩等の塩類等が挙げられる。これらの置換基で水溶性を向上させる性質のある置換基を有する事が好ましく、これらに限定されるわけではないが、例えば、カルボン酸基、スルホン酸基、ポリエチレングリコール基、カルボン酸塩、スルホン酸塩が特に好ましい。上記に例示するこれらの置換基は、本明細書において、「更なる置換基として好適な例示」と称して以後の記載を省略する。
【００５２】
Ｒ1とＲ2が互いに結合して形成する環としては、特に限定されるものではないが、例えば、ピペリジン環、ピペラジン環、モルフォリン環、チオモルフォリン環、ピリジニウム環等のヘテロ環、等が挙げられる。
【００５３】
（一般式（Ｉ）中のＡの説明）
Ａは、下記一般式（ＩＩＩ）〜（ＩＸ）、または（ＶＩＩＩ’）で表わされる骨格構造を示す。
【００５４】
【化８】
2010168369.tif 000010
【００５５】
以下に各構造の詳細な説明をする。
【００５６】
（一般式（ＩＩＩ）の説明）
一般式（ＩＩＩ）中、Ｒ6はアリール基を表す。Ｒ7〜Ｒ8及びＲ10〜Ｒ11は各々独立して水素原子、アルキル基、アリール基、またはハロゲン原子を表す。Ｒ9はカウンターアニオンを有するアンモニウム塩基を表す。
【００５７】
Ｒ6におけるアリール基としては、特に限定されるものではないが、例えば、フェニル基、ナフチル基、フェナントリル基、またはアントラセニル基等の６〜１４員環の単環式または多環式アリール基が挙げられる。更に該環には、置換基を有していてもよく、色素化合物の保存安定性を著しく阻害するものでなければ特に限定されるものではない。例えば、上記した「更なる置換基として好適な例示」の置換基が挙げられる。これらの置換基で水溶性を向上させる性質のある置換基を有する事が好ましく、これらに限定されるわけではないが、例えば、カルボン酸基、スルホン酸基、ポリエチレングリコール基、カルボン酸塩、スルホン酸塩が特に好ましい。
【００５８】
Ｒ6としては、フェニル基またはナフチル基が好ましく、特にカルボン酸基やスルホン酸基、ポリエチレングリコール基、カルボン酸塩、またはスルホン酸塩等の水溶性の置換基を有するフェニル基の場合は、水溶性が向上する点からも好ましい。
【００５９】
Ｒ7〜Ｒ8及びＲ10〜Ｒ11におけるアルキル基としては、特に限定されるものではないが、例えば、メチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基、オクチル基、ノニル基、デシル基、ウンデシル基、ドデシル基、トリデシル基、テトラデシル基、ペンタデシル基、ヘキサデシル基、ヘプタデシル基、オクタデシル基、ノナデシル基、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基等の直鎖、または分岐または環状の炭素数１〜２０個のアルキル基等が挙げられる。
【００６０】
Ｒ7〜Ｒ8及びＲ10〜Ｒ11におけるアリール基としては、特に限定されるものではないが、例えば、フェニル基、ナフチル基、フェナントリル基、またはアントラセニル基等の６〜１４員環の単環式または多環式アリール基が挙げられる。
【００６１】
Ｒ7〜Ｒ8及びＲ10〜Ｒ11におけるハロゲン原子としては、例えば、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、またはヨウ素原子等が挙げられる。
【００６２】
Ｒ7〜Ｒ8及びＲ10〜Ｒ11としては、水素原子、アルキル基、またはハロゲン原子が好ましく、化合物の安定性から水素原子が特に好ましい。
【００６３】
Ｒ9におけるカウンターアニオンを有するアンモニウム塩基としては、特に限定されるものではないが、例えば、アミノ基を４級塩化したアミノ基であり、カウンターアニオンとしては、特に限定されるものではない。例えば、フッ化物イオン、塩化物イオン、臭化物イオン、またはヨウ化物イオン等のハロゲンイオン；硫酸イオン、リン酸イオン、硝酸イオン、テトラフルオロホウ酸イオン、またはヘキサフルオロリン酸イオン等の無機酸イオン；テトラクロロアルミニウムイオン等の含ルイス酸イオン；酢酸イオン、乳酸イオン、メタンスルホン酸イオン、ベンゼンスルホン酸イオン、ｐ−トルエンスルホン酸イオン、トリフルオロ酢酸イオン、トリフルオロメタンスルホン酸イオン、またはテトラフェニルホウ酸イオンなどの有機酸イオン等が挙げられる。
【００６４】
前記一般式（ＩＩＩ）で表される分子構造において、Ｒ6がオルト位にスルホン酸基、またはカルボン酸基を有する芳香環の時、下記一般式（ＩＩＩ’）または（ＩＩＩ’’）の互変異性体が存在する。本発明の色素化合物が有する一般式（ＩＩＩ）で表わされる構造は、下記一般式（ＩＩＩ’）または（ＩＩＩ’’）等で表わされる構造も包含する。
【００６５】
【化９】
2010168369.tif 000011
【００６６】
［一般式（ＩＩＩ’）及び（ＩＩＩ’’）中のＲ7〜Ｒ11は、前記一般式（ＩＩＩ）におけるＲ7〜Ｒ11と同意義を有する。］
（一般式（ＩＶ）の説明）
一般式（ＩＶ）中、Ｒ12〜Ｒ13は各々独立して水素原子、アルキル基、アリール基、またはヘテロ環基を表す。Ｒ14〜Ｒ16は各々独立して水素原子、アルキル基、アリール基、ヘテロ環基、ハロゲン原子、またはアミノ基を表す。
【００６７】
Ｒ12〜Ｒ13及びＲ14〜Ｒ16おけるアルキル基としては、特に限定されるものではないが、例えば、メチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基、オクチル基、ノニル基、デシル基、ウンデシル基、ドデシル基、トリデシル基、テトラデシル基、ペンタデシル基、ヘキサデシル基、ヘプタデシル基、オクタデシル基、ノナデシル基、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基等の直鎖、または分岐または環状の炭素数１〜２０個のアルキル基等が挙げられる。
【００６８】
Ｒ12〜Ｒ13及びＲ14〜Ｒ16におけるアリール基としては、特に限定されるものではないが、例えば、フェニル基、ナフチル基、フェナントリル基、またはアントラセニル基等の６〜１４員環の単環式または多環式アリール基が挙げられる。
【００６９】
Ｒ12〜Ｒ13及びＲ14〜Ｒ16におけるヘテロ環基としては、特に限定されるものではない。例えば、４〜１０員環の単環式または二環式の窒素、酸素及び硫黄から選択される１〜４個の原子を含有するヘテロ環基が挙げられ、例えば、ピリジル基、ピラジニル基、ピリミジニル基、ピロリル基、チエニル基、フリル基、ピラニル基、オキサゾリル基、チアゾリル基、トリアゾリル基、テトラゾリル基、イミダゾリル基、ピラゾリル基、モルホリニル基、チオモルホリニル基、ピペリジニル基、ピペラジニル基、キノリル基、イソキノリル基、インドリル基、イソインドリル基、ベンゾフリル基、またはベンゾチエニル基等が挙げられる。
【００７０】
Ｒ12〜Ｒ13は、アルキル基が好ましく、メチル基、エチル基、プロピル基、またはブチル基が特に好ましい。
【００７１】
Ｒ14〜Ｒ16におけるハロゲン原子としては、例えば、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、またはヨウ素原子等が挙げられる。
【００７２】
Ｒ14〜Ｒ16におけるアミノ基としては、特に限定されるものではないが、例えば、無置換アミノ基；Ｎ−メチルアミノ基、Ｎ−ブチルアミノ基、Ｎ−ヘキシルアミノ基、Ｎ−テトラデシルアミノ基、Ｎ−フェニルアミノ基、またはＮ−ナフチルアミノ基等のモノ置換アミノ基；Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ基、Ｎ，Ｎ−ジエチルアミノ基、Ｎ，Ｎ−ジフェニルアミノ基、またはＮ，Ｎ−メチルプロピルアミノ基等のジ置換アミノ基；アセチルアミノ基、エチルカルボニルアミノ基、ｔｅｒｔ−ブチルカルボニルアミノ基、ベンゾイルアミノ基、ナフトイルアミノ基、またはメトキシカルボニルアミノ基等のカルボニルアミノ基；メチルスルホニルアミノ基、エチルスルホニルアミノ基、ｔｅｒｔ−ブチルスルホニルアミノ基、またはｉｓｏ−プロポキシスルホニルアミノ基等のスルホニルアミノ基が挙げられる。
【００７３】
Ｒ14〜Ｒ16は、水素原子、アルキル基、ハロゲン原子、アミノ基が好ましく、水素原子が特に好ましい。
【００７４】
（一般式（Ｖ）中の説明）
一般式（Ｖ）中、Ｒ17〜Ｒ18は各々独立して水素原子、アルキル基またはアルコキシ基を表す。Ｒ19〜Ｒ20は各々独立して水素原子、アルキル基、アルコキシ基、水酸基、シアノ基を表す。Ｒ21はヘテロ環基、または−ＣＨ＝Ｃ（Ｒ22）（Ｒ23）を表す。Ｒ22〜Ｒ23は各々独立して水素原子、シアノ基、ヘテロ環基、カルボン酸基、カルボン酸エステル基を表す。Ｒ1とＲ17、Ｒ2とＲ18、Ｒ22とＲ23は各々独立して互いに結合して環を形成しても良い。
【００７５】
Ｒ17〜Ｒ20におけるアルキル基としては、特に限定されるものではないが、例えば、メチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基、オクチル基、ノニル基、デシル基、ウンデシル基、ドデシル基、トリデシル基、テトラデシル基、ペンタデシル基、ヘキサデシル基、ヘプタデシル基、オクタデシル基、ノナデシル基、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基等の直鎖、または分岐または環状の炭素数１〜２０個のアルキル基等が挙げられる。
【００７６】
Ｒ17〜Ｒ20におけるアルコキシ基としては、特に限定されるものではないが、例えば、メトキシ基、エトキシ基、プロポキシ基、ブトキシ基、ペンチルオキシ基、デシルオキシ基、ヘキシルオキシ基、ヘプチルオキシ基、オクチルオキシ基、ノニルオキシ基、デシルオキシ基、ドデシルオキシ基、またはオクタデシルオキシ基等の炭素数１〜２０個のアルコキシ基が挙げられる。
【００７７】
Ｒ17〜Ｒ20は水素原子、またはアルコキシ基が好ましく、化合物の安定性から水素原子が特に好ましい。
【００７８】
Ｒ21〜Ｒ23におけるヘテロ環基としては、特に限定されるものではないが、例えば、４〜１０員環の単環式または二環式の窒素、酸素及び硫黄から選択される１〜４個の原子を含有するヘテロ環基が挙げられ、例えば、ピリジル基、ピラジニル基、ピリミジニル基、ピロリル基、チエニル基、フリル基、ピラニル基、オキサゾリル基、チアゾリル基、トリアゾリル基、テトラゾリル基、イミダゾリル基、ピラゾリル基、モルホリニル基、チオモルホリニル基、ピペリジニル基、ピペラジニル基、キノリル基、イソキノリル基、インドリル基、イソインドリル基、ベンゾフリル基、またはベンゾチエニル基等が挙げられる。
【００７９】
Ｒ21におけるヘテロ環基としては、オキサゾリル基、チアゾリル基、またはイミダゾリル基が好ましく、染色性の観点からオキサゾリル基が特に好ましい。
【００８０】
Ｒ21〜Ｒ23におけるカルボン酸エステル基としては、特に限定されるものではないが、例えば、カルボン酸メチル基、カルボン酸エチル基、カルボン酸プロピル基、またはカルボン酸ブチル基等が挙げられる。
【００８１】
Ｒ21〜Ｒ23は、ピリジル基、ピラジニル基、ピリミジニル基、オキサゾリル基、チアゾリル基、トリアゾリル基、テトラゾリル基、イミダゾリル基、またはピラゾリル基が好ましく、化合物の安定性から、オキサゾリル基、チアゾリル基、またはイミダゾリル基が特に好ましい。
【００８２】
一般式（Ｖ）中、Ｒ1とＲ17、Ｒ2とＲ18、またはＲ22とＲ23が、各々独立して互いに結合して形成する環としては、特に限定されるものではない。例えば、ベンゼン環、ナフタレン環等の炭素数３〜１０の芳香環、シクロオクタン環、シクロヘプタン環、シクロヘキサン環、シクロペンタン環、シクロブタン環等の飽和環、シクロペンテン環、シクロヘキセン環等の部分飽和環、ピリジン環、テトラヒドロピリジン環、またはピリミジン環等のヘテロ環が挙げられる。更に該環には、置換基を有していてもよく、色素化合物の保存安定性を著しく阻害するものでなければ特に限定されるものではない。例えば、上記した「更なる置換基として好適な例示」の置換基が挙げられる。これらの置換基で水溶性を向上させる性質のある置換基を有する事が好ましく、これらに限定されるわけではないが、例えば、カルボン酸基、スルホン酸基、ポリエチレングリコール基、カルボン酸塩、スルホン酸塩が特に好ましい。
【００８３】
Ｒ1とＲ17、Ｒ2とＲ18、またはＲ22とＲ23が各々独立して互いに結合して形成する環として、ヘテロ環が好ましく、テトラヒドロピリジン環が特に好ましい。
【００８４】
（一般式（ＶＩ）の説明）
一般式（ＶＩ）中、Ｒ24は各々独立して水素原子、アルキル基、アリール基、またはヘテロ環基を表す。
【００８５】
Ｒ24におけるアルキル基としては、特に限定されるものではないが、例えば、メチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基、オクチル基、ノニル基、デシル基、ウンデシル基、ドデシル基、トリデシル基、テトラデシル基、ペンタデシル基、ヘキサデシル基、ヘプタデシル基、オクタデシル基、ノナデシル基、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基等の直鎖、または分岐または環状の炭素数１〜２０個のアルキル基等が挙げられる。更に該環には、置換基を有していてもよく、色素化合物の保存安定性を著しく阻害するものでなければ特に限定されるものではない。例えば、上記した「更なる置換基として好適な例示」の置換基が挙げられる。これらの置換基で水溶性を向上させる性質のある置換基を有する事が好ましく、これらに限定されるわけではないが、例えば、カルボン酸基、スルホン酸基、ポリエチレングリコール基、カルボン酸塩、スルホン酸塩が特に好ましい。
【００８６】
Ｒ24におけるアリール基としては、特に限定されるものではないが、例えば、フェニル基、ナフチル基、フェナントリル基、またはアントラセニル基等の６〜１４員環の単環式または多環式アリール基が挙げられる。
【００８７】
Ｒ24におけるヘテロ環基としては、特に限定されるものではないが、例えば、４〜１０員環の単環式または二環式の窒素、酸素及び硫黄から選択される１〜４個の原子を含有するヘテロ環基が挙げられ、例えば、ピリジル基、ピラジニル基、ピリミジニル基、ピロリル基、チエニル基、フリル基、ピラニル基、オキサゾリル基、チアゾリル基、トリアゾリル基、テトラゾリル基、イミダゾリル基、ピラゾリル基、モルホリニル基、チオモルホリニル基、ピペリジニル基、ピペラジニル基、キノリル基、イソキノリル基、インドリル基、イソインドリル基、ベンゾフリル基、またはベンゾチエニル基等が挙げられる。
【００８８】
Ｒ24は、アルキル基が好ましく、化合物の安定性から、メチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基、ペンチル基、またはヘキシル基が特に好ましい。
【００８９】
（一般式（ＶＩＩ）の説明）
一般式（ＶＩＩ）中、Ｒ25は酸素原子、硫黄原子、または−Ｎ（Ｒ27）を表す。Ｒ26は水素原子、アルキル基、アルコキシ基、またはスルホン酸基を表す。Ｒ27は水素原子、アルキル基、またはアリール基を表す。
【００９０】
Ｒ25としては、酸素原子、−Ｎ（Ｒ27）が好ましく、染色性の観点からＮＨの時が特に好ましい。
【００９１】
Ｒ26およびＲ27におけるアルキル基としては、特に限定されるものではないが、例えば、メチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基、オクチル基、ノニル基、デシル基、ウンデシル基、ドデシル基、トリデシル基、テトラデシル基、ペンタデシル基、ヘキサデシル基、ヘプタデシル基、オクタデシル基、ノナデシル基、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基等の直鎖、または分岐または環状の炭素数１〜２０個のアルキル基等が挙げられる。
【００９２】
Ｒ26におけるアルコキシ基としては、特に限定されるものではないが、例えば、メトキシ基、エトキシ基、プロポキシ基、ブトキシ基、ペンチルオキシ基、デシルオキシ基、ヘキシルオキシ基、ヘプチルオキシ基、オクチルオキシ基、ノニルオキシ基、デシルオキシ基、ドデシルオキシ基、またはオクタデシルオキシ基等の炭素数１〜２０個のアルコキシ基が挙げられる。
【００９３】
Ｒ26は、水素原子またはスルホン酸基が好ましく、水素原子が特に好ましい。
【００９４】
Ｒ27におけるアリール基としては、特に限定されるものではないが、例えば、フェニル基、ナフチル基、フェナントリル基、またはアントラセニル基等の６〜１４員環の単環式または多環式アリール基が挙げられる。
【００９５】
（一般式（ＶＩＩＩ）の説明）
一般式（ＶＩＩＩ）中、Ｒ28は水素原子、アルキル基、またはアリール基を表す。
【００９６】
Ｒ28におけるアルキル基としては、特に限定されるものではないが、例えば、メチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基、オクチル基、ノニル基、デシル基、ウンデシル基、ドデシル基、トリデシル基、テトラデシル基、ペンタデシル基、ヘキサデシル基、ヘプタデシル基、オクタデシル基、ノナデシル基、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基等の直鎖、または分岐または環状の炭素数１〜２０個のアルキル基等が挙げられる。更に該環には、置換基を有していてもよく、色素化合物の保存安定性を著しく阻害するものでなければ特に限定されるものではない。例えば、上記した「更なる置換基として好適な例示」の置換基が挙げられる。これらの置換基で水溶性を向上させる性質のある置換基を有する事が好ましく、これらに限定されるわけではないが、例えば、カルボン酸基、スルホン酸基、ポリエチレングリコール基、カルボン酸塩、スルホン酸塩が特に好ましい。
【００９７】
Ｒ28におけるアリール基としては、特に限定されるものではないが、例えば、フェニル基、ナフチル基、フェナントリル基、またはアントラセニル基等の６〜１４員環の単環式または多環式アリール基が挙げられる。
【００９８】
（一般式（ＶＩＩＩ’）の説明）
一般式（ＶＩＩＩ'）中、Ｒ28'はハロゲン原子、アルコキシ基、アリールオキシ基を表す。
【００９９】
Ｒ28'におけるハロゲン原子としては、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子を表す。
【０１００】
Ｒ28'におけるアルコキシ基としては、特に限定されるものではないが、例えば、メチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基、オクチル基、ノニル基、デシル基、ウンデシル基、ドデシル基、トリデシル基、テトラデシル基、ペンタデシル基、ヘキサデシル基、ヘプタデシル基、オクタデシル基、ノナデシル基、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基等の直鎖、または分岐または環状の炭素数１〜２０個のアルキル基等が挙げられる。更に該環には、置換基を有していてもよく、色素化合物の保存安定性を著しく阻害するものでなければ特に限定されるものではない。例えば、上記した「更なる置換基として好適な例示」の置換基が挙げられる。これらの置換基で水溶性を向上させる性質のある置換基を有する事が好ましく、これらに限定されるわけではないが、例えば、カルボン酸基、スルホン酸基、ポリエチレングリコール基、カルボン酸塩、スルホン酸塩が特に好ましい。
【０１０１】
Ｒ28'におけるアリール基としては、特に限定されるものではないが、例えば、フェニル基、ナフチル基、フェナントリル基、またはアントラセニル基等の６〜１４員環の単環式または多環式アリール基が挙げられる。
【０１０２】
（一般式（ＩＸ）の説明）
一般式（ＩＸ）中、Ｒ29は水素原子、アルキル基、またはアリール基を表す。
【０１０３】
Ｒ29におけるアルキル基としては、特に限定されるものではないが、例えば、メチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基、オクチル基、ノニル基、デシル基、ウンデシル基、ドデシル基、トリデシル基、テトラデシル基、ペンタデシル基、ヘキサデシル基、ヘプタデシル基、オクタデシル基、ノナデシル基、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基等の直鎖、または分岐または環状の炭素数１〜２０個のアルキル基等が挙げられる。更に該環には、置換基を有していてもよく、色素化合物の保存安定性を著しく阻害するものでなければ特に限定されるものではない。例えば、上記した「更なる置換基として好適な例示」の置換基が挙げられる。これらの置換基で水溶性を向上させる性質のある置換基を有する事が好ましく、これらに限定されるわけではないが、例えば、カルボン酸基、スルホン酸基、ポリエチレングリコール基、カルボン酸塩、スルホン酸塩が特に好ましい。
【０１０４】
Ｒ29におけるアリール基としては、特に限定されるものではないが、例えば、フェニル基、ナフチル基、フェナントリル基、またはアントラセニル基等の６〜１４員環の単環式または多環式アリール基が挙げられる。
【０１０５】
（一般式（Ｉ）中のＡの他の態様）
Ａが下記一般式（Ｘ）で表わされる骨格構造の場合、一般式（Ｉ）中、Ｒ1とＲ2の２つが合わさり、１つの置換基、＝Ｎ−Ｒ30を表わす。Ｒ30はアリール基、ヘテロ環基を表す。
【０１０６】
【化１０】
2010168369.tif 000012
【０１０７】
一般式（Ｘ）中、Ｒ31〜Ｒ32はスルホン酸基、またはそれらの塩類を表わす。Ｒ33〜Ｒ34は水素原子、アルキル基、アルコキシ基、またはハロゲン原子を表す。
【０１０８】
Ｒ33〜Ｒ34におけるアルキル基としては、特に限定されるものではないが、例えば、メチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基、オクチル基、ノニル基、デシル基、ウンデシル基、ドデシル基、トリデシル基、テトラデシル基、ペンタデシル基、ヘキサデシル基、ヘプタデシル基、オクタデシル基、ノナデシル基、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基等の直鎖、または分岐または環状の炭素数１〜２０個のアルキル基等が挙げられる。
【０１０９】
Ｒ33〜Ｒ34におけるアルコキシ基としては、特に限定されるものではないが、例えば、メトキシ基、エトキシ基、プロポキシ基、ブトキシ基、ペンチルオキシ基、デシルオキシ基、ヘキシルオキシ基、ヘプチルオキシ基、オクチルオキシ基、ノニルオキシ基、デシルオキシ基、ドデシルオキシ基、またはオクタデシルオキシ基等の炭素数１〜２０個のアルコキシ基が挙げられる。
【０１１０】
Ｒ33〜Ｒ34におけるハロゲン原子としては、例えば、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、またはヨウ素原子等が挙げられる。
【０１１１】
Ｒ33〜Ｒ34は、水素原子、アルコキシ基、またはハロゲン原子が好ましく、水素原子が特に好ましい。
【０１１２】
Ｒ30におけるアリール基としては、特に限定されるものではないが、例えば、フェニル基、ナフチル基、フェナントリル基、またはアントラセニル基等の６〜１４員環の単環式または多環式アリール基が挙げられる。
【０１１３】
Ｒ30はアリール基が好ましく、ナフチル基が特に好ましい。
【０１１４】
（一般式（ＩＩ）の説明）
一般式（ＩＩ）中、Ｒ3〜Ｒ4は各々独立して水素原子、アルケニル基、シアノ基、カルボン酸基、カルボン酸エステル基、スルホン酸基、アシル基、またはヘテロ環基を表す。Ｒ3とＲ4は互いに結合して環を形成しても良い。Ｒ5は水素原子、アルキル基、アリール基、またはヘテロ環基を表す。
【０１１５】
前記一般式（ＩＩ）中のＲ3及びＲ4におけるアルケニル基としては、特に制限されるものではないが、例えば、ビニル基、２，２−ジフェニルビニル基、３−ブテニル基、またはシクロヘキセニル基等の炭素数２〜２０個のアルケニル基が挙げられる。
【０１１６】
Ｒ3及びＲ4におけるカルボン酸エステル基としては、特に限定されるものではないが、例えば、カルボン酸メチル基、カルボン酸エチル基、カルボン酸プロピル基、またはカルボン酸ブチル基等が挙げられる。
【０１１７】
Ｒ3及びＲ4におけるアシル基としては、特に限定されるものではないが、例えば、アセチル基、プロピオニル基、ブチリル基、ペンタノイル基、ベンゾイル基、１−ナフトイル基、または２−ナフトイル基等が挙げられる。
【０１１８】
Ｒ3及びＲ4におけるヘテロ環基としては、特に限定されるものではないが、例えば、４〜１０員環の単環式または二環式の窒素、酸素及び硫黄から選択される１〜４個の原子を含有するヘテロ環基が挙げられる。例えば、ピリジル基、ピラジニル基、ピリミジニル基、ピロリル基、チエニル基、フリル基、ピラニル基、オキサゾリル基、チアゾリル基、トリアゾリル基、テトラゾリル基、イミダゾリル基、ピラゾリル基、モルホリニル基、チオモルホリニル基、ピペリジニル基、ピペラジニル基、キノリル基、イソキノリル基、インドリル基、イソインドリル基、ベンゾフリル基、またはベンゾチエニル基等が挙げられる。
【０１１９】
Ｒ3及びＲ4は、化合物の合成の容易さからＲ3またはＲ4のどちらか一方が、シアノ基、またはカルボン酸基、ヘテロ環基が好ましく、Ｒ3またはＲ4のどちらか一方はシアノ基が特に好ましい。
【０１２０】
（一般式（ＩＩ）中のＲ3及びＲ4は、一方が水素原子であり、他方が一般式（ＸＩ）のヘテロ環基である説明）
Ｒ3及びＲ4は、一方が水素原子であり、他方が一般式（ＸＩ）のヘテロ環基であることもまた好ましい。
【０１２１】
【化１１】
2010168369.tif 000013
【０１２２】
［一般式（ＸＩ）中、Ｒ35はアルキル基、またはアリール基を表す。Ｒ36〜Ｒ39は各々独立して水素原子、アルキル基、アリール基、アルコキシ基、カルボン酸基、スルホン酸基、ヘテロ環基、アミノ基、またはハロゲン原子を表す。Ｒ36とＲ37、Ｒ37とＲ38、またはＲ38とＲ39は互いに結合して環を形成しても良い。Ｘ-は陰イオン性基を表す。Ｑ1は硫黄原子、酸素原子、−Ｃ（Ｒ40）（Ｒ41）−、−ＣＨ＝ＣＨ−、または−Ｎ（Ｒ42）−を表す。Ｒ40〜Ｒ42は水素原子、アルキル基、またはアリール基を表す。また、Ｒ40とＲ41は、互いに結合して環を形成しても良い。
【０１２３】
Ｒ35及びＲ36〜Ｒ39におけるアルキル基としては、特に限定されるものではないが、例えば、メチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基、オクチル基、ノニル基、デシル基、ウンデシル基、ドデシル基、トリデシル基、テトラデシル基、ペンタデシル基、ヘキサデシル基、ヘプタデシル基、オクタデシル基、ノナデシル基、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基等の直鎖、または分岐または環状の炭素数１〜２０個のアルキル基等が挙げられる。
【０１２４】
Ｒ35及びＲ36〜Ｒ39におけるアリール基としては、特に限定されるものではないが、例えば、フェニル基、ナフチル基、フェナントリル基、またはアントラセニル基等の６〜１４員環の単環式または多環式アリール基が挙げられる。
【０１２５】
Ｒ35は、更に置換基を有していてもよく、色素化合物の保存安定性を著しく阻害するものでなければ特に限定されるものではない。例えば、上記した「更なる置換基として好適な例示」の置換基が挙げられる。これらの置換基で水溶性を向上させる性質のある置換基を有する事が好ましく、これらに限定されるわけではないが、例えば、カルボン酸基、スルホン酸基、ポリエチレングリコール基、カルボン酸塩、スルホン酸塩が特に好ましい。
【０１２６】
Ｒ35は、アルキル基が好ましく、更に該アルキル基にカルボン酸基、スルホン酸基、ポリエチレングリコール基、カルボン酸の塩、またはスルホン酸の塩等の置換基を有すると化合物の水溶性が増し、蛍光強度も増すので好ましい。
【０１２７】
Ｒ36〜Ｒ39におけるアルコキシ基としては、特に限定されるものではないが、例えば、メトキシ基、エトキシ基、プロポキシ基、ブトキシ基、ペンチルオキシ基、デシルオキシ基、ヘキシルオキシ基、ヘプチルオキシ基、オクチルオキシ基、ノニルオキシ基、デシルオキシ基、ドデシルオキシ基、またはオクタデシルオキシ基等の炭素数１〜２０個のアルコキシ基が挙げられる。
【０１２８】
Ｒ36〜Ｒ39におけるヘテロ環基としては、特に限定されるものではないが、４〜１０員環の単環式または二環式の窒素、酸素及び硫黄から選択される１〜４個の原子を含有するヘテロ環基が挙げられる。例えば、ピリジル基、ピラジニル基、ピリミジニル基、ピロリル基、チエニル基、フリル基、ピラニル基、オキサゾリル基、チアゾリル基、トリアゾリル基、テトラゾリル基、イミダゾリル基、ピラゾリル基、モルホリニル基、チオモルホリニル基、ピペリジニル基、ピペラジニル基、キノリル基、イソキノリル基、インドリル基、イソインドリル基、ベンゾフリル基、またはベンゾチエニル基等が挙げられる。
【０１２９】
Ｒ36〜Ｒ39におけるアミノ基としては、特に限定されるものではないが、例えば、無置換アミノ基；Ｎ−メチルアミノ基、Ｎ−ブチルアミノ基、Ｎ−ヘキシルアミノ基、Ｎ−テトラデシルアミノ基、Ｎ−フェニルアミノ基、またはＮ−ナフチルアミノ基等のモノ置換アミノ基；Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ基、Ｎ，Ｎ−ジエチルアミノ基、Ｎ，Ｎ−ジフェニルアミノ基、またはＮ，Ｎ−メチルプロピルアミノ基等のジ置換アミノ基；アセチルアミノ基、エチルカルボニルアミノ基、ｔｅｒｔ−ブチルカルボニルアミノ基、ベンゾイルアミノ基、ナフトイルアミノ基、またはメトキシカルボニルアミノ基等のカルボニルアミノ基；メチルスルホニルアミノ基、エチルスルホニルアミノ基、ｔｅｒｔ−ブチルスルホニルアミノ基、またはｉｓｏ−プロポキシスルホニルアミノ基等のスルホニルアミノ基が挙げられる。
【０１３０】
Ｒ36〜Ｒ39におけるハロゲン原子としては、例えば、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、またはヨウ素原子等が挙げられる。
【０１３１】
Ｒ36〜Ｒ39は、水素原子、カルボン酸基、スルホン酸基、アミノ基、ハロゲン原子が好ましく、水素原子、スルホン酸基の場合は化合物の水溶性があがるため特に好ましい。
【０１３２】
Ｒ36とＲ37、Ｒ37とＲ38、またはＲ38とＲ39が互いに結合して形成する環としては、特に限定されるものではないが、例えば、ベンゼン環、ナフタレン環等の炭素数３〜１０の芳香環、シクロオクタン環、シクロヘプタン環、シクロヘキサン環、シクロペンタン環、シクロブタン環等の飽和環、シクロペンテン環、シクロヘキセン環等の部分飽和環、ピリジン環、またはピリミジン環等のヘテロ環が挙げられる。更に該環には、更に置換基を有していてもよく、色素化合物の保存安定性を著しく阻害するものでなければ特に限定されるものではない。例えば、上記した「更なる置換基として好適な例示」の置換基が挙げられる。これらの置換基で水溶性を向上させる性質のある置換基を有する事が好ましく、これらに限定されるわけではないが、例えば、カルボン酸基、スルホン酸基、ポリエチレングリコール基、カルボン酸塩、スルホン酸塩が特に好ましい。
【０１３３】
また、Ｒ36とＲ37、Ｒ37とＲ38、またはＲ38とＲ39が互いに結合して形成する環として、化合物の保存安定性が向上するため、ベンゼン環の場合が好ましい。
【０１３４】
（一般式（ＸＩ）中のＸ−の説明）
一般式（ＸＩ）中、Ｘ-は陰イオン性基を表す。ここで陰イオン性基としては、特に限定されるものではないが、例えば、フッ化物イオン、塩化物イオン、臭化物イオン、またはヨウ化物イオン等のハロゲンイオン；硫酸イオン、リン酸イオン、硝酸イオン、テトラフルオロホウ酸イオン、またはヘキサフルオロリン酸イオン等の無機酸イオン；テトラクロロアルミニウムイオン等の含ルイス酸イオン；酢酸イオン、乳酸イオン、メタンスルホン酸イオン、ベンゼンスルホン酸イオン、ｐ−トルエンスルホン酸イオン、トリフルオロ酢酸イオン、トリフルオロメタンスルホン酸イオン、またはテトラフェニルホウ酸イオンなどの有機酸イオン等を表す。
【０１３５】
Ｘ-の陰イオン性基としては、塩化物イオン、臭化物イオン、ヨウ化物イオン、硫酸イオン、硝酸イオン、メタンスルホン酸イオン等が好ましく、より好ましくは化合物合成の容易さからも臭化物イオン、ヨウ化物イオンの場合である。
【０１３６】
（一般式（ＸＩ）中のＱ1の説明）
一般式（ＸＩ）中、Ｑ1は硫黄原子、酸素原子、−Ｃ（Ｒ40）（Ｒ41）−、−ＣＨ＝ＣＨ−、または−Ｎ（Ｒ42）−を表す。
【０１３７】
Ｑ1中、Ｒ40〜Ｒ42におけるアルキル基としては、特に限定されるものではないが、例えば、メチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基、オクチル基、ノニル基、デシル基、ウンデシル基、ドデシル基、トリデシル基、テトラデシル基、ペンタデシル基、ヘキサデシル基、ヘプタデシル基、オクタデシル基、ノナデシル基、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基等の直鎖、または分岐または環状の炭素数１〜２０個のアルキル基等が挙げられる。
【０１３８】
Ｒ40〜Ｒ42におけるアリール基としては、特に限定されるものではないが、例えば、フェニル基、ナフチル基、フェナントリル基、またはアントラセニル基等の６〜１４員環の単環式または多環式アリール基が挙げられる。
【０１３９】
Ｑ1中、Ｒ40とＲ41は互いに結合して環を表してもよく、シクロヘキサン環、ピペリジン環、又はピペリジニウム環等が挙げられる。
【０１４０】
Ｑ1は酸素原子、硫黄原子、または−Ｃ（ＣＨ3）（ＣＨ3）−が、化合物の保存安定性が良いため特に好ましい。
【０１４１】
また、Ｑ1が−Ｃ（ＣＨ2）5−を表すときは、染色性が著しく優れているので好ましい。
【０１４２】
（一般式（ＩＩ）中のＲ3とＲ4が互いに結合して形成される環の説明）
一般式（ＩＩ）中で表されるＲ3とＲ4が互いに結合して形成される環は、下記一般式（ＸＩＩ）〜（ＸＶ）で表される。
【０１４３】
【化１２】
2010168369.tif 000014
【０１４４】
（一般式（ＸＩＩ）の説明）
一般式（ＸＩＩ）中、Ｒ43は水素原子、アルキル基、アリール基、またはヘテロ環基を表し、Ｒ44はアルキル基、アリール基、カルボン酸基、カルボン酸エステル基、ヒドロキシル基、またはアミノ基を表す。
【０１４５】
Ｒ43及びＲ44におけるアルキル基としては、特に限定されるものではないが、例えば、メチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基、オクチル基、ノニル基、デシル基、ウンデシル基、ドデシル基、トリデシル基、テトラデシル基、ペンタデシル基、ヘキサデシル基、ヘプタデシル基、オクタデシル基、ノナデシル基、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基等の直鎖、または分岐または環状の炭素数１〜２０個のアルキル基等が挙げられる。
【０１４６】
Ｒ43及びＲ44におけるアリール基としては、特に限定されるものではないが、例えば、フェニル基、ナフチル基、フェナントリル基、またはアントラセニル基等の６〜１４員環の単環式または多環式アリール基が挙げられる。更に該環には、置換基を有していてもよく、色素化合物の保存安定性を著しく阻害するものでなければ特に限定されるものではない。例えば、上記した「更なる置換基として好適な例示」の置換基が挙げられる。これらの置換基で水溶性を向上させる性質のある置換基を有する事が好ましく、これらに限定されるわけではないが、例えば、カルボン酸基、スルホン酸基、ポリエチレングリコール基、カルボン酸塩、スルホン酸塩が特に好ましい。
【０１４７】
Ｒ43におけるヘテロ環基としては、特に限定されるものではないが、４〜１０員環の単環式または二環式の窒素、または酸素及び硫黄から選択される１〜４個の原子を含有するヘテロ環基が挙げられる。例えば、ピリジル基、ピラジニル基、ピリミジニル基、ピロリル基、チエニル基、フリル基、ピラニル基、オキサゾリル基、チアゾリル基、トリアゾリル基、テトラゾリル基、イミダゾリル基、ピラゾリル基、モルホリニル基、チオモルホリニル基、ピペリジニル基、ピペラジニル基、キノリル基、イソキノリル基、インドリル基、イソインドリル基、ベンゾフリル基、またはベンゾチエニル基等が挙げられる。
【０１４８】
Ｒ43として好ましくは、化合物の安定性からアリール基の場合である。更に該アリール基にカルボン酸のような水溶性の置換基を有していると水溶性が向上するため好ましい。
【０１４９】
Ｒ44におけるカルボン酸エステル基としては、特に限定されるものではないが、例えば、カルボン酸メチル基、カルボン酸エチル基、カルボン酸プロピル基、またはカルボン酸ブチル基等が挙げられる。
【０１５０】
Ｒ44におけるアミノ基としては、特に限定されるものではないが、例えば、無置換アミノ基；Ｎ−メチルアミノ基、Ｎ−ブチルアミノ基、Ｎ−ヘキシルアミノ基、Ｎ−テトラデシルアミノ基、Ｎ−フェニルアミノ基、Ｎ−ナフチルアミノ基等のモノ置換アミノ基；Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ基、Ｎ，Ｎ−ジエチルアミノ基、Ｎ，Ｎ−ジフェニルアミノ基、またはＮ，Ｎ−メチルプロピルアミノ基等のジ置換アミノ基；アセチルアミノ基、エチルカルボニルアミノ基、ｔｅｒｔ−ブチルカルボニルアミノ基、ベンゾイルアミノ基、ナフトイルアミノ基、またはメトキシカルボニルアミノ基等のカルボニルアミノ基；メチルスルホニルアミノ基、エチルスルホニルアミノ基、ｔｅｒｔ−ブチルスルホニルアミノ基、またはｉｓｏ−プロポキシスルホニルアミノ基等のスルホニルアミノ基が挙げられる。
【０１５１】
Ｒ44は、化合物の合成の容易さからアルキル基、アリール基、カルボン酸基、またはアミノ基が好ましく、アルキル基、またはカルボン酸基が特に好ましい。
【０１５２】
（一般式（ＸＩＩＩ）の説明）
一般式（ＸＩＩＩ）中、Ｑ2は酸素原子、硫黄原子、または−Ｎ（Ｒ52）−を表す。Ｒ45は水素原子、アルキル基、アリール基、またはヘテロ環基であり、Ｒ46は硫黄原子、酸素原子、＝ＮＲ53、ヘテロ環、またはジシアノメチレン基である。Ｒ52及びＲ53は水素原子、アルキル基、アリール基、またはヘテロ環基である。
【０１５３】
Ｒ45及びＲ52〜Ｒ53におけるアルキル基としては、特に限定されるものではないが、例えば、メチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基、オクチル基、ノニル基、デシル基、ウンデシル基、ドデシル基、トリデシル基、テトラデシル基、ペンタデシル基、ヘキサデシル基、ヘプタデシル基、オクタデシル基、ノナデシル基、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基等の直鎖、または分岐または環状の炭素数１〜２０個のアルキル基等が挙げられる。更に置換基を有していてもよく、色素化合物の保存安定性を著しく阻害するものでなければ特に限定されるものではない。例えば、上記した「更なる置換基として好適な例示」の置換基が挙げられる。これらの置換基で水溶性を向上させる性質のある置換基を有する事が好ましく、これらに限定されるわけではないが、例えば、カルボン酸基、スルホン酸基、ポリエチレングリコール基、カルボン酸塩、スルホン酸塩が特に好ましい。
【０１５４】
Ｒ45及びＲ52〜Ｒ53におけるアリール基としては、特に限定されるものではないが、例えば、フェニル基、ナフチル基、フェナントリル基、またはアントラセニル基等の６〜１４員環の単環式または多環式アリール基が挙げられる。
【０１５５】
Ｒ45及びＲ52〜Ｒ53におけるヘテロ環基としては、特に限定されるものではないが、４〜１０員環の単環式または二環式の窒素、または酸素及び硫黄から選択される１〜４個の原子を含有するヘテロ環基が挙げられ、例えば、ピリジル基、ピラジニル基、ピリミジニル基、ピロリル基、チエニル基、フリル基、ピラニル基、オキサゾリル基、チアゾリル基、トリアゾリル基、テトラゾリル基、イミダゾリル基、ピラゾリル基、モルホリニル基、チオモルホリニル基、ピペリジニル基、ピペラジニル基、キノリル基、イソキノリル基、インドリル基、イソインドリル基、ベンゾフリル基、またはベンゾチエニル基等が挙げられる。
【０１５６】
Ｒ45は、アルキル基が好ましく、更に該アルキル基にカルボン酸基、スルホン酸基、ポリエチレングリコール基、カルボン酸の塩、またはスルホン酸の塩等の置換基を有すると化合物の水溶性が増し、蛍光強度も増すので好ましい。
【０１５７】
Ｒ46は、硫黄原子、酸素原子、またはヘテロ環が好ましい。
【０１５８】
Ｒ46が硫黄原子の場合は染色性が良くなる傾向があり、３位に置換基を有する２−チオキソチアゾリジン−４−オンの場合は、最大蛍光波長の検出が近赤外波長の領域に長波長化するものが多いため、近赤外での応用に用いる事が出来るためより好ましい。
【０１５９】
（一般式（ＸＶ）の説明）
一般式（ＸＶ）中、Ｒ49〜Ｒ50は各々独立して水素原子、アルキル基、アリール基を表す。Ｒ51は酸素原子、または硫黄原子を表わす。
【０１６０】
Ｒ49〜Ｒ50におけるアルキル基としては、特に限定されるものではないが、例えば、メチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基、オクチル基、ノニル基、デシル基、ウンデシル基、ドデシル基、トリデシル基、テトラデシル基、ペンタデシル基、ヘキサデシル基、ヘプタデシル基、オクタデシル基、ノナデシル基、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基等の直鎖、または分岐または環状の炭素数１〜２０個のアルキル基等が挙げられる。
【０１６１】
Ｒ49〜Ｒ50におけるアリール基としては、特に限定されるものではないが、例えば、フェニル基、ナフチル基、フェナントリル基、またはアントラセニル基等の６〜１４員環の単環式または多環式アリール基が挙げられる。
【０１６２】
（一般式（ＩＩ）中のＢの説明）
Ｂは、下記一般式（ＸＶＩ）〜（ＸＶＩＶ）、または（ＸＶＩＩ’）で表される骨格構造を示す。
【０１６３】
【化１３】
2010168369.tif 000015
【０１６４】
以下、各構造を詳細に説明する。
【０１６５】
（一般式（ＸＶＩ）の説明）
一般式（ＸＶＩ）中、Ｒ54は水素原子、アルキル基、アラルキル基、アルケニル基、アリール基、ヘテロ環基、またはアシル基を表す。Ｒ55〜Ｒ58は各々独立して水素原子、アルキル基、アリール基、カルボン酸基、カルボン酸エステル基、またはアシル基を表し、Ｒ55とＲ57が互いに結合して環を形成しても良い。Ｒ59は水素原子、アルキル基、アルコキシ基、またはハロゲン原子を表す。
【０１６６】
Ｒ54、Ｒ55〜Ｒ58およびＲ59におけるアルキル基としては、特に限定されるものではないが、例えば、メチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基、オクチル基、ノニル基、デシル基、ウンデシル基、ドデシル基、トリデシル基、テトラデシル基、ペンタデシル基、ヘキサデシル基、ヘプタデシル基、オクタデシル基、ノナデシル基、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基等の直鎖、分岐または環状の炭素数１〜２０個のアルキル基等が挙げられる。
【０１６７】
Ｒ54におけるアラルキル基としては、特に限定されるものではないが、例えば、ベンジル基、またはフェネチル基等が挙げられる。
【０１６８】
Ｒ54におけるアルケニル基としては、特に限定されるものではないが、例えば、ビニル基、２，２−ジフェニルビニル基、３−ブテニル基、またはシクロヘキセニル基等の炭素数２〜２０個のアルケニル基が挙げられる。
【０１６９】
Ｒ54およびＲ55〜Ｒ58におけるアリール基としては、特に限定されるものではないが、例えば、フェニル基、ナフチル基、フェナントリル基、またはアントラセニル基等の６〜１４員環の単環式または多環式アリール基が挙げられる。
【０１７０】
Ｒ54におけるヘテロ環基としては、特に限定されるものではないが、例えば、４〜１０員環の単環式または二環式の窒素、酸素及び硫黄から選択される１〜４個の原子を含有するヘテロ環基が挙げられる。例えば、ピリジル基、ピラジニル基、ピリミジニル基、ピロリル基、チエニル基、フリル基、ピラニル基、オキサゾリル基、チアゾリル基、トリアゾリル基、テトラゾリル基、イミダゾリル基、ピラゾリル基、モルホリニル基、チオモルホリニル基、ピペリジニル基、ピペラジニル基、キノリル基、イソキノリル基、インドリル基、イソインドリル基、ベンゾフリル基、またはベンゾチエニル基等が挙げられる。
【０１７１】
Ｒ54及びＲ55〜Ｒ58におけるアシル基としては、特に限定されるものではないが、例えば、アセチル基、プロピオニル基、ブチリル基、ペンタノイル基、ベンゾイル基、１−ナフトイル基、または２−ナフトイル基等が挙げられる。
【０１７２】
Ｒ54及びＲ55〜Ｒ58は、更に置換基を有していてもよく、色素化合物の保存安定性を著しく阻害するものでなければ特に限定されるものではない。例えば、上記した「更なる置換基として好適な例示」の置換基が挙げられる。これらの置換基で水溶性を向上させる性質のある置換基を有する事が好ましく、これらに限定されるわけではないが、例えば、カルボン酸基、スルホン酸基、ポリエチレングリコール基、カルボン酸塩、スルホン酸塩が特に好ましい。
【０１７３】
Ｒ54及びＲ55〜Ｒ58は、上記に列挙した置換基から、それぞれ独立に且つ任意に選択できるが、好ましい形態としてはアラルキル基、アルケニル基、またはアリール基等の場合が蛍光の強度が強いため好ましい。具体的には、フェニル基、ブロモフェニル基、ベンジル基、ブロモベンジル基、メチルチオフェニル基、メトキシフェニル基、メトキシナフチル基、ベンジルフェニル基、２，２−ジフェニルビニル基、または２，２−ジフェニルビニルフェニル基等が好ましい。更に好ましくは、フェニル基、ブロモフェニル基、ベンジル基、メチルチオフェニル基、メトキシフェニル基、またはメトキシナフチル基が挙げられる。特に、メチルチオフェニル基の場合はストークスシフト（最大励起波長と最大蛍光波長の差）が飛躍的に大きくなる傾向が認められるため好ましい。
【０１７４】
Ｒ55〜Ｒ58におけるカルボン酸エステル基としては、特に限定されるものではないが、例えば、カルボン酸メチル、カルボン酸エチル、カルボン酸プロピル基、又はカルボン酸ブチル基等が挙げられる。
【０１７５】
Ｒ55とＲ57が互いに結合して形成する環としては、特に限定されるものではないが、例えば、シクロオクタン環、シクロヘプタン環、シクロヘキサン環、シクロペンタン環、またはシクロブタン環等の飽和脂肪族環、シクロペンテン環、またはシクロヘキセン環等の部分飽和脂肪族環等が挙げられる。更に該環には、置換基を有していてもよく、色素化合物の保存安定性を著しく阻害するものでなければ特に限定されるものではない。例えば、上記した「更なる置換基として好適な例示」の置換基が挙げられる。これらの置換基で水溶性を向上させる性質のある置換基を有する事が好ましく、これらに限定されるわけではないが、例えば、カルボン酸基、スルホン酸基、ポリエチレングリコール基、カルボン酸塩、スルホン酸塩が特に好ましい。
【０１７６】
Ｒ55〜Ｒ58は、各々独立して水素原子、アルキル基、またはアリール基、Ｒ55とＲ57が互いに結合して環を形成していることが好ましく、Ｒ55とＲ57が互いに結合して環を形成している場合が化学構造上安定であるのでより好ましい。具体的には、シクロオクタン環、シクロヘプタン環、シクロヘキサン環、シクロペンタン環、またはシクロブタン環が挙げられる。より好ましくはシクロペンタン環が保存安定性の上からも好ましい。
【０１７７】
Ｒ59におけるアルコキシ基としては、特に限定されるものではないが、例えば、メトキシ基、エトキシ基、プロポキシ基、ブトキシ基、ペンチルオキシ基、デシルオキシ基、ヘキシルオキシ基、ヘプチルオキシ基、オクチルオキシ基、ノニルオキシ基、デシルオキシ基、ドデシルオキシ基、またはオクタデシルオキシ基等の炭素数１〜２０個のアルコキシ基が挙げられる。
【０１７８】
Ｒ59におけるハロゲン原子としては、例えば、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、またはヨウ素原子等が挙げられる。
【０１７９】
Ｒ59は水素原子、ハロゲン原子、またはアルコキシ基が好ましく、水素原子、またはハロゲン原子がより好ましい。
【０１８０】
（一般式（ＸＶＩＩ）の説明）
一般式（ＸＶＩＩ）中、Ｒ60は水素原子、アルキル基、またはアリール基を表す。Ｒ61〜Ｒ64は各々独立して水素原子、アルキル基、アリール基、アルコキシ基、カルボン酸基、スルホン酸基、ヘテロ環基、アミノ基、またはハロゲン原子を表す。また、Ｒ61とＲ62、Ｒ62とＲ63、またはＲ63とＲ64は互いに結合して環を形成しても良い。
【０１８１】
Ｒ60及びＲ61〜Ｒ64におけるアルキル基としては、特に限定されるものではないが、例えば、メチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基、オクチル基、ノニル基、デシル基、ウンデシル基、ドデシル基、トリデシル基、テトラデシル基、ペンタデシル基、ヘキサデシル基、ヘプタデシル基、オクタデシル基、ノナデシル基、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基等の直鎖、または分岐または環状の炭素数１〜２０個のアルキル基等が挙げられる。
【０１８２】
Ｒ60及びＲ61〜Ｒ64におけるアリール基としては、特に限定されるものではないが、例えば、フェニル基、ナフチル基、フェナントリル基、またはアントラセニル基等の６〜１４員環の単環式または多環式アリール基が挙げられる。
【０１８３】
Ｒ60は、更に置換基を有していてもよく、色素化合物の保存安定性を著しく阻害するものでなければ特に限定されるものではない。例えば、上記した「更なる置換基として好適な例示」の置換基が挙げられる。これらの置換基で水溶性を向上させる性質のある置換基を有する事が好ましく、これらに限定されるわけではないが、例えば、カルボン酸基、スルホン酸基、ポリエチレングリコール基、カルボン酸塩、スルホン酸塩が特に好ましい。
【０１８４】
Ｒ60は、アルキル基が好ましく、更に該アルキル基にカルボン酸基、スルホン酸基、ポリエチレングリコール基、カルボン酸塩、またはスルホン酸の塩等の置換基を有すると化合物の水溶性が増し、蛍光強度も増すので好ましい。
【０１８５】
Ｒ61〜Ｒ64におけるアルコキシ基としては、特に限定されるものではないが、例えば、メトキシ基、エトキシ基、プロポキシ基、ブトキシ基、ペンチルオキシ基、デシルオキシ基、ヘキシルオキシ基、ヘプチルオキシ基、オクチルオキシ基、ノニルオキシ基、デシルオキシ基、ドデシルオキシ基、またはオクタデシルオキシ基等の炭素数１〜２０個のアルコキシ基が挙げられる。
【０１８６】
Ｒ61〜Ｒ64におけるヘテロ環基としては、特に限定されるものではないが、４〜１０員環の単環式または二環式の窒素、酸素及び硫黄から選択される１〜４個の原子を含有するヘテロ環基が挙げられる。例えば、ピリジル基、ピラジニル基、ピリミジニル基、ピロリル基、チエニル基、フリル基、ピラニル基、オキサゾリル基、チアゾリル基、トリアゾリル基、テトラゾリル基、イミダゾリル基、ピラゾリル基、モルホリニル基、チオモルホリニル基、ピペリジニル基、ピペラジニル基、キノリル基、イソキノリル基、インドリル基、イソインドリル基、ベンゾフリル基、またはベンゾチエニル基等が挙げられる。
【０１８７】
Ｒ61〜Ｒ64におけるアミノ基としては、特に限定されるものではないが、例えば、無置換アミノ基；Ｎ−メチルアミノ基、Ｎ−ブチルアミノ基、Ｎ−ヘキシルアミノ基、Ｎ−テトラデシルアミノ基、Ｎ−フェニルアミノ基、またはＮ−ナフチルアミノ基等のモノ置換アミノ基；Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ基、Ｎ，Ｎ−ジエチルアミノ基、Ｎ，Ｎ−ジフェニルアミノ基、またはＮ，Ｎ−メチルプロピルアミノ基等のジ置換アミノ基；アセチルアミノ基、エチルカルボニルアミノ基、ｔｅｒｔ−ブチルカルボニルアミノ基、ベンゾイルアミノ基、ナフトイルアミノ基、またはメトキシカルボニルアミノ基等のカルボニルアミノ基；メチルスルホニルアミノ基、エチルスルホニルアミノ基、ｔｅｒｔ−ブチルスルホニルアミノ基、またはｉｓｏ−プロポキシスルホニルアミノ基等のスルホニルアミノ基が挙げられる。
【０１８８】
Ｒ61〜Ｒ64におけるハロゲン原子としては、例えば、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、またはヨウ素原子等が挙げられる。
【０１８９】
Ｒ61〜Ｒ64は、水素原子、カルボン酸基、スルホン酸基、アミノ基、ハロゲン原子が好ましく、水素原子、スルホン酸基の場合は化合物の水溶性があがるためより好ましい。
【０１９０】
Ｒ61とＲ62、Ｒ62とＲ63、またはＲ63とＲ64が互いに結合して形成する環としては、特に限定されるものではないが、例えば、ベンゼン環、ナフタレン環等の炭素数３〜１０の芳香環、シクロオクタン環、シクロヘプタン環、シクロヘキサン環、シクロペンタン環、シクロブタン環等の飽和環、シクロペンテン環、シクロヘキセン環等の部分飽和環、ピリジン環、またはピリミジン環等のヘテロ環が挙げられる。更に該環には、置換基を有していてもよく、色素化合物の保存安定性を著しく阻害するものでなければ特に限定されるものではない。例えば、上記した「更なる置換基として好適な例示」の置換基が挙げられる。これらの置換基で水溶性を向上させる性質のある置換基を有する事が好ましく、これらに限定されるわけではないが、例えば、カルボン酸基、スルホン酸基、ポリエチレングリコール基、カルボン酸塩、スルホン酸塩が特に好ましい。
【０１９１】
また、Ｒ61とＲ62、Ｒ62とＲ63、またはＲ63とＲ64が互いに結合して形成する環として、化合物の保存安定性が向上するため、ベンゼン環の場合が好ましい。
【０１９２】
（一般式（ＸＶＩＩ）のＱ3の説明）
一般式（ＸＶＩＩ）中、Ｑ3は硫黄原子、酸素原子、−Ｃ（Ｒ65）（Ｒ66）−、または−ＣＨ＝ＣＨ−を表しＲ65とＲ66は互いに結合して環を表す。
【０１９３】
Ｑ3中、Ｒ65とＲ66が互いに結合してなる環としては、シクロヘキサン環、ピペリジン環、又はピペリジニウム環等が上げられる。
【０１９４】
Ｑ3は硫黄原子、酸素原子、または−Ｃ（Ｒ65）（Ｒ66）−が好ましく、酸素原子、硫黄原子が特に好ましい。
【０１９５】
また、Ｑ3が−Ｃ（ＣＨ2）5−を表すときは、染色性が著しく優れているので好ましい。
【０１９６】
（一般式（ＸＶＩＩ’）の説明）
【０１９７】
【化１４】
2010168369.tif 000016
【０１９８】
一般式（ＸＶＩＩ'）中、Ｒ60'は水素原子、アルキル基、またはアリール基を表し、Ｑ３'は硫黄原子、または酸素原子を表す。また、一般式（ＸＶＩＩ'）中の点線はベンゼン環がある場合とない場合を表す。
【０１９９】
Ｒ60'におけるアルキル基としては、特に限定されるものではないが、例えば、メチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基、オクチル基、ノニル基、デシル基、ウンデシル基、ドデシル基、トリデシル基、テトラデシル基、ペンタデシル基、ヘキサデシル基、ヘプタデシル基、オクタデシル基、ノナデシル基、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基等の直鎖、または分岐または環状の炭素数１〜２０個のアルキル基等が挙げられる。
【０２００】
Ｒ60'におけるアリール基としては、特に限定されるものではないが、例えば、フェニル基、ナフチル基、フェナントリル基、またはアントラセニル基等の６〜１４員環の単環式または多環式アリール基が挙げられる。
【０２０１】
Ｒ60'は、更に置換基を有していてもよく、色素化合物の保存安定性を著しく阻害するものでなければ特に限定されるものではない。例えば、上記した「更なる置換基として好適な例示」の置換基が挙げられる。これらの置換基で水溶性を向上させる性質のある置換基を有する事が好ましく、これらに限定されるわけではないが、例えば、カルボン酸基、スルホン酸基、ポリエチレングリコール基、カルボン酸塩、スルホン酸塩が特に好ましい。
【０２０２】
Ｒ60'はアルキル基が好ましく、更に該アルキル基にカルボン酸基、スルホン酸基、ポリエチレングリコール基、カルボン酸塩、またはスルホン酸の塩等の置換基を有すると化合物の水溶性が増し、蛍光強度も増すので好ましい。
【０２０３】
（一般式（ＸＶＩＩＩ）の説明）
一般式（ＸＶＩＩＩ）中、Ｒ68〜Ｒ69は各々独立して水素原子、アルキル基、アリール基を表す。Ｒ70は酸素原子または硫黄原子を表わす。
【０２０４】
Ｒ68〜Ｒ69におけるアルキル基としては、特に限定されるものではないが、例えば、メチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基、オクチル基、ノニル基、デシル基、ウンデシル基、ドデシル基、トリデシル基、テトラデシル基、ペンタデシル基、ヘキサデシル基、ヘプタデシル基、オクタデシル基、ノナデシル基、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基等の直鎖、または分岐または環状の炭素数１〜２０個のアルキル基等が挙げられる。
【０２０５】
Ｒ68〜Ｒ69におけるアリール基としては、特に限定されるものではないが、例えば、フェニル基、ナフチル基、フェナントリル基、またはアントラセニル基等の６〜１４員環の単環式または多環式アリール基が挙げられる。
【０２０６】
Ｒ68〜Ｒ69は、更に置換基を有していてもよく、色素化合物の保存安定性を著しく阻害するものでなければ特に限定されるものではない。例えば、上記した「更なる置換基として好適な例示」の置換基が挙げられる。これらの置換基で水溶性を向上させる性質のある置換基を有する事が好ましく、これらに限定されるわけではないが、例えば、カルボン酸基、スルホン酸基、ポリエチレングリコール基、カルボン酸塩、スルホン酸塩が特に好ましい。
【０２０７】
（一般式（ＸＶＩＶ）の説明）
一般式（ＸＶＩＶ）中、Ｒ71はアルキル基を表す。Ｒ71におけるアルキル基としては、特に限定されるものではないが、例えば、メチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基、オクチル基、ノニル基、デシル基、ウンデシル基、ドデシル基、トリデシル基、テトラデシル基、ペンタデシル基、ヘキサデシル基、ヘプタデシル基、オクタデシル基、ノナデシル基、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基等の直鎖、または分岐または環状の炭素数１〜２０個のアルキル基等が挙げられる。
【０２０８】
（一般式（Ｉ）〜（ＸＶＩＶ），（ＶＩＩＩ’）、（ＸＶＩＩ’）の説明）
前記、一般式（Ｉ）〜（ＸＶＩＶ）、（ＶＩＩＩ’）、または（ＸＶＩＩ’）から構成される化合物中にカルボン酸基、スルホン酸基、またはポリエチレングリコール基を少なくとも１つ以上有すると水溶性が向上するため好ましい。また、カルボン酸基もしくはスルホン酸基の塩類も本発明の範疇である。具体的にカルボン酸基もしくはスルホン酸基の塩としては、特に限定されるものではないが、例えば、ナトリウム塩、またはカリウム塩等のアルカリ金属塩；マグネシウム塩、またはカルシウム塩等のようなアルカリ土類塩；アンモニウム塩、ピリジニウム塩、ピペリジニウム塩、またはトリエチルアンモニウム塩等のアミン塩；トリプトファン塩、リジン塩、ロイシン塩、フェニルアラニン塩、バリン塩、またはアルギニン塩等のアミノ酸塩が挙げられる。好ましくは、ナトリウム塩、カリウム塩、アンモニウム塩、ピリジニウム塩、またはピペリジニウム塩等である。
【０２０９】
＜合成例＞
本発明にかかる一般式（Ｉ）〜（ＸＶＩＶ）、（ＶＩＩＩ’）、または（ＸＶＩＩ’）から構成される色素化合物は、市販品を容易に入手する事が可能である。また、各々公知の方法により容易に合成する事も出来る。例えば、一般式（Ｉ）中、Ａが一般式（ＩＩＩ）で表わされる色素化合物の場合は、例えば、特開２００８−９４８９７号公報等を参考にして容易に合成することが出来る。また、一般式（Ｉ）中、Ａが一般式（Ｖ）及び（ＶＩＩ）で表わされる色素化合物の場合は、例えば、特開２００１−３１５４３７号公報に記載の方法で合成することが出来る。一方、一般式（ＩＩ）中、Ｂが一般式（ＸＶＩ）で表される色素化合物は、例えば、Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍ．，２４巻，３０３６−３０３７頁（２００３）等により容易に合成することができる。
【０２１０】
次に、本発明の一般式（Ｉ）中、Ａが一般式（ＩＩＩ）で表される色素化合物の製造方法についての一態様を示すが、合成方法がこれに限定されるわけではない。以下に合成スキームの一例を示す。
【０２１１】
【化１５】
2010168369.tif 000017
【０２１２】
上記式中のＲ1〜Ｒ2及びＲ6〜Ｒ11は、前記Ｒ1〜Ｒ2及びＲ6〜Ｒ11と同義である。
【０２１３】
先ず、縮合（１）工程では、化合物（Ａ）とアミン誘導体とを、有機溶剤中（または溶剤の非存在下）、縮合剤の存在下（または縮合剤の非存在下）で加熱し縮合させ化合物（Ｂ）を得る。次に、化合物（Ｂ）を、上記に示したアミン誘導体と再び加熱縮合させる。この結果、本発明にかかる色素化合物（ＩＩＩ）が得られる。
【０２１４】
上記に例示した合成スキームの縮合反応において使用することができる好ましい有機溶剤としては、縮合（１）工程では、反応に関与しなければ特に制限はないが、例えば、メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノール及びｎ−ブタノール等を、単独で若しくは混合して使用することができる。縮合（２）工程において使用することができる好ましい有機溶剤としては、反応に関与しなければ特に制限はないが、例えば、エチレングリコール、Ｎ−メチルピロリドン、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、スルホラン、クロロベンゼン、ジクロロベンゼン、トリクロロベンゼン及びニトロベンゼン等が挙げられる。
【０２１５】
縮合（１）工程における反応温度は、０℃〜２００℃の範囲内で行われ、好ましくは１０〜１５０℃、より好ましくは２０℃〜１００℃の範囲内である。また、縮合（２）工程における反応温度は、５０〜２５０℃の範囲内で行われ、好ましくは１００〜２３０℃、より好ましくは１５０℃〜２２０℃である。
【０２１６】
反応させるアミン誘導体の置換基におけるＲ1とＲ2とが同一の置換基であって、且つ、Ｒ1'とＲ2'とが同一の置換基である化合物の場合には、同一のアミン誘導体を使用する事が出来るため、化合物（Ａ）より一段階の縮合工程で一般式（ＩＩＩ）の色素化合物を得ることができる。その際における反応温度は、縮合（２）工程に準ずる。
【０２１７】
縮合工程で用いられる縮合剤としては、反応に関与しなければ特に制限はされないが、例えば、酸化マグネシウム、塩化亜鉛及び塩化アルミニウム等から選択して用いることができる。
【０２１８】
得られた色素化合物（ＩＩＩ）は、通常の有機化合物の単離・精製方法を用いる事ができる。例えば、反応液を塩酸等で酸性にして、酸析する事によって固体をろ別し、水酸化ナトリウム等で中和し、濃縮すれば、粗成物が得られる。更に、粗成物をアセトン、メタノール等を用いた再結晶、シリカゲルを用いたカラム精製等により精製する。これらの方法は、単独または２つ以上組み合わせて精製を行う事により高純度で得る事が可能である。
【０２１９】
以下に、本発明の具体例（１）〜（１２２）を示すが、下記例に限定されるものではない。
【０２２０】
【化１６−１】
2010168369.tif 000018
【０２２１】
【化１６−２】
2010168369.tif 000019
【０２２２】
【化１６−３】
2010168369.tif 000020
【０２２３】
【化１６−４】
2010168369.tif 000021
【０２２４】
【化１６−５】
2010168369.tif 000022
【０２２５】
【化１６−６】
2010168369.tif 000023
【０２２６】
＜放射線標識＞
本発明の網膜組織標識組成物は、放射性核種で標識されたプローブとして用いることも可能である。
【０２２７】
標識に用いる放射性核種の種類は、特に制限されるものではないが、使用の態様によって適宜選択する事が出来る。
【０２２８】
放射性核種で標識した眼内組織用標識組成物は、例えば、オートラジオグラフィー、陽電子（ポジトロン）放出核種を用いる放射断層撮影法（ＰＥＴ）、様々なガンマ線放出核種を用いる単一光子放射断層撮影法（ＳＰＥＣＴ）等によって画像化を行う事が出来る。また、フッ素原子核に由来するＭＲ信号や13Ｃを利用した核磁気共鳴法（ＭＲＩ）で検出してもよい。更に、次世代分子イメージング装置として複数分子同時イメージングが可能なコンプトンカメラ（ＧＲＥＩ）等によって画像化する事も可能である。また、例えば、液体シンチレーションカウンター、Ｘ線フィルム、イメージングプレート等を用いて網膜組織用プローブの定量をする事も可能である。
【０２２９】
14Ｃ等の放射性同位元素で標識した眼内組織用標識組成物は、加速器質量分析法（ＡＭＳ）等によって、血液中（または、尿中もしくは糞中）の濃度を測定して、標識化した物質の未変化体や代謝物の薬物動態学的情報（薬物血中濃度−時間曲線下面積（ＡＵＣ）、血中濃度半減期（Ｔ1/2）、最高血中濃度（Ｃmax）、最高血中濃度到達時間（Ｔmax）、分布容積、初回通過効果、生物学的利用率、糞尿中排泄率等）を得る事が可能である。
【０２３０】
放射性核種は、特に限定されるものではないが、使用の態様によって適宜選択する事が出来る。
【０２３１】
具体的に、ＰＥＴによる測定の場合、例えば11Ｃ、14Ｃ、13Ｎ、15Ｏ、18Ｆ、19Ｆ、62Ｃｕ、68Ｇａ、または78Ｂｒ等の陽電子放出核種を用いる事が出来る。好ましくは11Ｃ、13Ｎ、15Ｏ、または18Ｆ等であり、特に好ましくは11Ｃ、または18Ｆ等である。
【０２３２】
又、ＳＰＥＣＴによる測定の場合は、例えば99mＴｃ、111Ｉｎ、67Ｇａ、201Ｔｌ、123Ｉ、または133Ｘｅ等のγ線放射核種を用いる事が出来る。好ましくは99mＴｃ、または123Ｉ等である。
【０２３３】
更に、ヒト以外の動物を測定する場合には、例えば125Ｉのようなより半減期の長い放射線核種を用いる事が出来る。
【０２３４】
ＧＲＥＩによる測定の場合は、例えば131Ｉ、85Ｓｒ、65Ｚｎ等を用いる事が出来る。
【０２３５】
放射線核種は、一般式（Ｉ）〜（ＸＶＩＶ）、（ＶＩＩＩ’）、または（ＸＶＩＩ’）で表される化合物に含まれる形でも、結合する形でも良い。
【０２３６】
放射線核種の標識の方法は、特に限定されるものではなく、一般に用いられている方法で良い。また、一般式（Ｉ）〜（ＸＶＩＶ）、（ＶＩＩＩ’）、または（ＸＶＩＩ’）で表わされる化合物を構成する元素の少なくとも一部を放射性核種で置換する形でも、結合する形でも良い。
【０２３７】
一般式（Ｉ）〜（ＸＶＩＶ）、（ＶＩＩＩ’）、または（ＸＶＩＩ’）で表わされる化合物を放射性核種で標識した場合、１ｍＭあたり１〜１００μＣｉ程度の放射性を有することが好ましい。
【０２３８】
この時、用いる眼内組織用標識剤の投与量は、影響がなければ特に制限はされず、化合物の種類及び標識に用いた放射性核種の種類により適宜選択される。
【０２３９】
＜眼内組織用標識組成物の調整＞
本発明の眼内組織用標識組成物に含まれる化合物の濃度は眼内組織を検出する事が出来れば特に限定されるものではないが、標的とする部位や使用される化合物によって適宜調節される。通常は０．００１ｎｇ／ｍＬ以上、１００μｇ／ｍＬ以下の濃度で用いられ、より好ましくは０．００１ｎｇ／ｍＬ以上、１０μｇ／ｍＬ以下、より好ましくは０．００１ｎｇ／ｍＬ以上、５μｇ／ｍＬ以下の濃度で用いられる。
【０２４０】
本発明の眼内組織用標識組成物は、前記一般式（Ｉ）〜（ＸＶＩＶ）、（ＶＩＩＩ’）、または（ＸＶＩＩ’）で表される色素化合物の少なくとも１種を適当な溶媒に溶解させて用いる。生体に影響がなければ特に限定されるものではないが、例えば生体との親和性が高い水性の液体が好ましい。具体的には、水；生理食塩水；リン酸緩衝液（ＰＢＳ）、Ｔｒｉｓ等の緩衝液；メタノール、エタノール、イソプロパノール、ブタノール、エチレングリコール、グリセリン等のアルコール系溶媒；Ｎ，Ｎ−ジメチルスルホキシド（以下、ＤＭＳＯと略する）、Ｎ，Ｎ-ジメチルホルムアミド（以下、ＤＭＦと略する）等の有機溶媒；Ｄ−ＭＥＭ、ＨＢＳＳ等の細胞培養用培地、または乳酸リンゲル液等の輸液が挙げられる。特に水が５０％以上含まれている事が好ましい。また、これらの溶媒を２種以上混合して用いる事も出来る。
【０２４１】
本発明の眼内組織用標識組成物の作製方法は、特に限定されるものではないが、例えば、上記のような溶媒に溶解させた化合物の濃厚溶液を希釈して作成しても良い。化合物の水溶性が低い場合には、適当な溶媒に溶解させてから精製水に希釈させて用いる事が出来る。特に好ましくは、メタノール、エタノール、ＤＭＳＯ等である。
【０２４２】
本発明の眼内組織用標識組成物には、生体に適した塩濃度やｐＨ等を制御する事が必要であれば添加剤を１種類またはそれ以上組み合わせて添加する事が出来る。
【０２４３】
本発明に用いられる添加剤としては、眼内組織用標識組成物に影響がなければ特に限定されるものではないが、例えば、保湿剤、表面張力調製剤、増粘剤、塩化ナトリウムのような塩類、各種ｐＨ調製剤、ｐＨ緩衝剤、防腐剤、抗菌剤、甘味剤、または香料等が挙げられる。
【０２４４】
ｐＨ調製剤としては、ｐＨを５〜９に調製する事が好ましく、特に限定されるものではないが、例えば、塩酸、酢酸、リン酸、クエン酸、リンゴ酸、水酸化ナトリウム、または炭酸水素ナトリウム等が挙げられる。
【０２４５】
＜試験方法について＞
本発明における眼内組織用標識組成物に含まれる化合物は、下記に示す試験方法を行って、最大輝度値の比（Ｌａ／Ｌｂ）が３以上の化合物である事が好ましい。本発明に用いられる化合物を選択するための試験方法の詳細を以下に示す。
【０２４６】
試験化合物を１μｇ／ｍＬの水溶液となるように調製し、３個体のゼブラフィッシュ７日胚に１時間暴露する。その後、精製水で２回洗浄し、４％パラホルムアルデヒド溶液で固定した各ゼブラフィッシュの片眼球の固定化切片をａ１〜ａ３とする。又、未処理の３個体のゼブラフィッシュ７日胚を４％パラホルムアルデヒド溶液で固定した各ゼブラフィッシュの片眼球の固定化切片をｂ１〜ｂ３とする。本試験方法では、少なくとも硝子体と網膜の層構造が全て含まれる固定化切片を使用する。
【０２４７】
固定化切片ａ１〜ａ３を用いて、眼球の網膜切片が観察可能な倍率に調製し、網膜組織内の蛍光強度が最大となる励起波長及び蛍光波長を設定する。網膜切片が観察可能な倍率としては、硝子体と網膜の層構造が確認できれば厳密に調整する必要は無いが、好ましくは眼の組織切片の全体が含まれる倍率であること。具体的には、１０倍から４００倍、より好ましくは４０倍から２００倍に設定することで、網膜組織の構造を可視化できる。一方、固定化切片ｂ１〜ｂ３の網膜色素上皮と硝子体に挟まれた任意の大きさの網膜領域における最大輝度値の平均値をＬｂとし、値が２〜６の範囲になるように励起光強度及び撮影感度を設定する。
【０２４８】
各設定した観察条件で固定化切片ａ１〜ａ３の網膜色素上皮と硝子体に挟まれた任意の大きさの網膜領域における最大輝度値の平均値をＬａとし、Ｌａ／Ｌｂ値を計算する。
【０２４９】
本試験方法において用いられるゼブラフィッシュの系統は特に限定されるものではないが、例えば遺伝子変異を持たない野生型や、特に目に関連する遺伝子変異を持たない系統が好ましく用いられる。具体的には、ＲＩＫＥＮ  ＷＴ（ＲＷ）、ＡＢ  ｓｔｒａｉｎ、ＴＵ  ｓｔｒａｉｎ等が好適に用いられる。
【０２５０】
試験化合物の溶液を暴露する方法は、ゼブラフィッシュ７日胚を飼育水毎、例えば、２４ウェルプレートの任意のウェルに入れ、飼育水を抜いて試験化合物の溶液に置換し、接触させる事で行うことが出来る。または、ウェル中に蒸留水と共に入れたゼブラフィッシュに最終濃度が１μｇ／ｍＬとなるように試験化合物の濃厚溶液を適量加える方法を用いても良い。
【０２５１】
通常、試験化合物の溶液中にゼブラフィッシュ７日胚を１時間暴露する事で、眼組織や眼組織に連絡する神経組織を傷つけることなく眼内組織に移行する化合物は眼内組織を標識する事が出来る。眼内組織の観察は、特に制限されるものではないが、例えば、試験化合物の溶液に暴露したゼブラフィッシュの眼組織の固定化切片を観察することで行う事が出来る。
【０２５２】
ゼブラフィッシュの眼球における固定化切片の作製は、特に限定されるものではないが、例えば、低温融解アガロースゲルにゼブラフィッシュを包埋して市販の切片作製装置で切片化する事が出来る。
【０２５３】
市販の切片作製装置としては、切片が作製されるものであれば特に制限されるものではないが、例えば、ビブラトームやリニアスライサー等が挙げられる。特に、リニアスライサーを用いると切片がより良好に作製されるので好ましい。このように切片作製装置で作製した固定化切片をスライドガラスへ乗せ、観察を行う。
【０２５４】
また、凍結組織切片用コンパウンドにゼブラフィッシュを包埋して液体窒素等で急速凍結させてから凍結切片作製装置等で切片化する事も出来る。凍結切片作製装置としては、特に制限されるものではないが、市販のクライオスタットを好適に使用することが出来る。このようにして作製した凍結切片をスライドガラスに乗せ、乾燥させた後、観察を行う。
【０２５５】
切片を作製する際の切片の厚みは、試験時に一定であれば特に限定されるものではないが、例えば５μｍ以上の厚みがあるとスライドへ移す際に形態を保ちやすいので好ましい。
【０２５６】
網膜組織内の蛍光強度が最大となる励起波長及び蛍光波長への調整は、試験化合物を含む水溶液に暴露した切片試料を観察し、任意の波長の励起波長を照射したときに、励起波長よりも少なくとも１０ｎｍ以上、より好ましくは２０ｎｍ以上長波長の蛍光を検出したときに、励起光の映り込みが少なく、最も蛍光強度が高くなるように蛍光フィルターセットを切り替えることで、行うことが出来る。
【０２５７】
網膜組織を含む領域の最大輝度値の測定は、用いる試験化合物に応じて、観察装置の励起波長と蛍光波長を設定する必要がある。
【０２５８】
用いる観察装置としては、蛍光観察が出来る装置であれば特に限定されるものではないが、例えば、実体蛍光顕微鏡、蛍光顕微鏡、または共焦点レーザー蛍光顕微鏡等が挙げられる。
【０２５９】
本試験方法では、固定化切片ｂの網膜領域が含まれる画像を取得し、取得画像の任意の領域が最大輝度値を示す値を測定する。
【０２６０】
最大輝度値の測定は、ソフトウェア等を用いて測定するが、取得した画像をグレースケールに変換して測定することが好ましい。最大輝度値の測定に用いるソフトは任意の領域内の最大輝度値が求められるものであれば特に限定されるものではないが、例えば、ＮＩＨ  Ｉｍａｇｅ、Ｓｃｉｏｎ  Ｉｍａｇｅ、またはＩｍａｇｅ  Ｊ等を挙げる事が出来る。
【０２６１】
これらのソフトウェアを使用して、固定化切片ｂ１〜ｂ３の最大輝度値が２〜６の範囲になるように励起光強度及び撮影感度を調節し、固定化切片ｂ１〜ｂ３の最大輝度値の平均値Ｌｂを得る。
【０２６２】
次に、上記で設定した条件で固定化切片ａ１〜ａ３の網膜領域を含む画像を取得し、上記と同様に固定化切片ａ１〜ａ３の最大輝度値の平均値Ｌａを取得する事が出来る。
【０２６３】
本発明の眼内組織用標識組成物に含まれる化合物は、前記の試験方法で得られたＬａとＬｂの比（Ｌａ／Ｌｂ）が３以上であることが好ましい。Ｌａ／Ｌｂが３以上の化合物は眼内組織を眼組織や眼組織に連絡する神経組織を傷つけることなく明瞭に標識することが出来る。Ｌａ／Ｌｂが５以上、更に、Ｌａ／Ｌｂが１０以上であると、化合物濃度が低くても眼内組織を明瞭に識別可能な状態に染色されるため好ましい。
【０２６４】
＜標識方法＞
本発明の眼内組織の標識方法は、前記一般式（Ｉ）〜（ＸＶＩＶ）、（ＶＩＩＩ’）、または（ＸＶＩＩ’）で表される色素化合物を少なくとも１種類以上含む眼内組織用標識組成物を用いて行うことが出来る。生きた生物個体の眼内組織を標識する方法は、標識組成物が眼組織の切開や、眼組織または眼組織に連絡する神経組織への針刺し等の外科的損傷を与えることなく標識することである。
【０２６５】
外科的損傷なく標識する方法としては特に限定されるものではないが、例えば、眼内組織用標識組成物を生物個体の一部または全体に暴露する方法、経口接触による方法、経肺接触による方法、経鼻接触による方法、経消化管接触による方法、経粘膜接触による方法、経体液接触による方法、舌下接触による方法、静脈または動脈等の血管内接触による方法、腹腔内接触による方法、腹膣内、皮下、皮内、膀胱内、気管（気管支）内等への注入方法、噴霧または塗布等の手段による生体内への接触による方法等が挙げられる。
【０２６６】
また、本発明の眼内組織用標識組成物は、眼内に直接注入して眼内組織を標識してもよい。眼内に直接注入する方法は特に限定されるものではないが、例えば強膜切開術を行うことによって開孔した後、硝子体眼の後方部分を空気で満たし、本発明の眼内組織用標識組成物数滴、一般的には１ｍＬ以下を眼内に注入することで実施される。
【０２６７】
＜観察方法＞
本発明の観察方法は、本発明の眼内組織用標識組成物を用いる事を特徴とする。その測定及び検出方法は当業者には公知の方法を用いて行われる。
【０２６８】
本発明で用いられる観察方法は、眼内組織に影響を与えなければ特に限定されるものではないが、生物試料の状態及び変化を画像とし捉える方法である。例えば、眼組織に可視光、近赤外光、または赤外光を照射してカメラやＣＣＤ等で観察する可視光観察、近赤外光観察、赤外光観察、レーザー顕微鏡観察、または蛍光内視鏡等のように生物試料に対して励起光光源から励起光を照射して、発光している生物試料の蛍光を観察する蛍光観察、蛍光顕微鏡観察、蛍光内視鏡観察、共焦点顕微鏡観察、多光子励起蛍光顕微鏡観察、狭帯域光観察、または共光干渉断層画像観察（ＯＣＴ）、更に、軟エックス線顕微鏡による観察等が挙げられる。
【０２６９】
本発明で用いられる励起するための波長は、特に限定されるものではないが、使用する前記一般式（Ｉ）〜（ＸＶＩＶ）、（ＶＩＩＩ’）、または（ＸＶＩＩ’）で表される色素化合物によって異なる。本発明の前記一般式（Ｉ）〜（ＸＶＩＶ）、（ＶＩＩＩ’）、または（ＸＶＩＩ’）で表される色素化合物が効率よく蛍光を発すれば特に限定されるものではない。通常２００〜１０１０ｎｍ、好ましくは４００〜９００ｎｍ、より好ましくは４８０〜８００ｎｍである。近赤外領域の光を用いる場合は、通常６００〜１０００ｎｍで、好ましくは生体透過性に優れている６８０〜９００ｎｍの波長が用いられる。
【０２７０】
本発明で用いられる蛍光励起光源としては特に限定されるものではないが、各種レーザー光源を用いることが出来る。例えば、色素レーザー、半導体レーザー、イオンレーザー、ファイバーレーザー、ハロゲンランプ、キセノンランプ、またはタングステンランプ等が挙げられる。また、各種光学フィルターを用いて、好ましい励起波長を得たり、蛍光のみを検出したりする事が出来る。
【０２７１】
このように生物個体に励起光を照射する事により、眼組織の内部において発光させた状態で眼内組織を撮像すれば発光部位を容易に検出する事が出来る。又、可視光を照射して得られた明視野画像と励起光を照射して得られた蛍光画像を画像処理手段で組み合わせる事で、より詳細に眼内組織を観察する事も出来る。
【０２７２】
＜スクリーニング方法＞
本発明の眼内組織用標識組成物は、生物個体、例えば小型硬骨魚類であるゼブラフィッシュを用いて、生きたままの状態、所謂ｉｎ  ｖｉｖｏで眼内組織の染色性に対する基質一般性をスクリーニングする事が可能である。更に、生きた生物個体であるゼブラフィッシュを用いているため、眼内組織用標識組成物の安全性についても同時にスクリーニングする事が可能である。
【０２７３】
ゼブラフィッシュは、米国及び英国では、近年、既にマウス及びラットに続く第３のモデル動物として認知されており、人と比較して全ゲノム配列が８０％の相同性、遺伝子数もほぼ同じ、主要臓器・組織の発生・構造も良く似ている事が解明されてきている。各パーツ（心臓、肝臓、腎臓、消化管等の臓器・器官）が受精卵から分化して形成されていく過程が透明な体を通して観察できるのが特徴であるため、ゼブラフィッシュをモデル動物としてスクリーニングに用いる事は特に好ましい。
【０２７４】
具体的に、一例として、眼内組織用標識組成物とゼブラフィッシュを接触させて、眼内組織用標識組成物がゼブラフィッシュに及ぼす影響を観察するスクリーニング法が挙げられる。
【０２７５】
眼内組織用標識組成物を接触させる方法としては、特に限定されるものではないが、眼内組織用標識組成物が水溶性の場合は、飼育水中に眼内組織用標識組成物を投与する方法、非水溶性の場合は、飼育水中に眼内組織用標識組成物を単独で分散させて投与する方法、または微量の界面活性剤やＤＭＳＯと共に投与する方法、ゼブラフィッシュの餌に混ぜて経口投与する方法、または、注射等による非経口投与する方法が挙げられる。好ましくは、容易に出来る飼育水中に眼内組織用標識組成物を投与する方法が挙げられる。そのためにも前記一般式（Ｉ）〜（ＸＶＩＶ）、（ＶＩＩＩ’）、または（ＸＶＩＩ’）で表される色素化合物は、水溶性であることが望ましく、化合物中にカルボン酸基やスルホン酸基を含有している事が望ましい。
【０２７６】
１種類以上の本発明の眼内組織用標識組成物を有効成分として利用し、化学物質の眼内組織における効果、副作用、または安全性を生物個体、例えばゼブラフィッシュを用いてｉｎ  ｖｉｖｏで生物に及ぼす影響のスクリーニングが可能である。標的部位、目的、検査手段等に応じて、眼内組織用標識組成物を随時に選択する事が出来る。更に、眼内組織用標識組成物の染色性から、疾病の高精度な診断や治療法の開発等の応用展開が期待され、診断用組成物として用いることができる。
【０２７７】
前記化学物質とは、化学的に作用のある化合物の総称を意味し、特に限定されるものではないが、例えば、医薬品、有機化合物、治療剤、治験薬、農薬、化粧品、環境汚染物質、または内分泌攪乱物質等が挙げられる。
【０２７８】
ゼブラフィッシュは、スクリーニングの目的に応じ、野生型ゼブラフィッシュに制限されず、各種疾患系モデルのゼブラフィッシュを用いる事が出来る。疾患系のモデルを用いた場合には、観察により新薬候補化合物の効果を見出し、疾患治療薬または疾患予防薬のスクリーニングに応用する事が出来る。
【０２７９】
また、本発明のスクリーニング方法は、小型硬骨魚類を用いる事が出来る。特に制限されるものではないが、例えば、ゼブラフィッシュ、フグ、金魚、メダカ、またはジャイアント・レリオ等が挙げられる。小型硬骨魚類は、マウス及びラット等と比較して、スピード面・コスト面で非常に優れているため好ましい。特に、ゼブラフィッシュはゲノムの解読がほぼ完了しており、また飼育及び繁殖が容易で流通価格も安く、受精後４８〜７２時間で主要臓器・組織の基本構造が出来上がるために好ましい。
【０２８０】
本発明の眼内組織用標識組成物は、例えば、眼科手術中に疾患の細胞組織や腫瘍と思われる被験物質の部位を特異・選択的に標識し、正常な細胞との違いを見極める手段や、疾患による組織の変化を観測する事に用いる事が出来る。
【０２８１】
本発明の眼内組織用標識組成物は、生きた生物個体の眼内組織を、眼組織の露出や眼組織内または眼組織と連絡する神経組織に染色剤を注入するという侵襲的な操作を要する事なく、眼内組織を特異的に標識する事が可能である。従って、これらの識別を利用して診断剤としての応用に用いることが出来る。
【０２８２】
診断剤としては、特に限定されるものではないが、例えば、眼の機能を検査する診断剤や眼疾患の診断剤等に用いる事が出来る。
【０２８３】
＜ヒトへの外挿性について＞
本発明の眼内組織用標識組成物は、ヒトへも適用可能である。ヒトへの外挿性は、ヒトと実験動物の眼内組織の類似性、相違点を認識した上で全体的な近似によって確かめられる。以下に数例を示すが、これらに限定されるのではない。
１．ヒト以外で、ヒトとヒト以外の生きた生物試料の眼内組織を標識し、類似性を確認する。ヒト以外の生きた生物試料としては、マウス、ハムスター、ラット、モルモット、ウサギ、イヌ、豚、猫、サル等の哺乳類動物、ゼブラフィッシュ等の硬骨魚類等が挙げられる。
２．前記ヒト以外の生きた生物試料の固定化組織切片を用いて、眼内組織の染色性を確認し、生きた生物試料と同様の染色性がある事を確認する。
３．ヒトの固定化組織切片を用いて眼内組織の染色性を確認する。
【０２８４】
以上の３点を確認することで、ヒトに対しても本発明の眼内組織用標識組成物が適用できる事を確認することが出来る。
【０２８５】
ヒトへの外挿性確認の別の方法としては、本発明の眼内組織用標識組成物を放射性標識して極微量をヒトの体内へ投与し、眼内組織への局在を確かめることで確認することが出来る。この手法はマイクロドージング試験と呼ばれる。
【０２８６】
また、別の方法としては、以下の４点を同定、確認する方法がある。
１．ヒト以外の生物試料の眼内組織で、本発明の眼内組織用標識組成物の標的生体分子または標識機構を同定する。
２．該標的生体分子または標識分子機構に相同なヒト生体分子またはヒト生体機構を同定する。
３．ヒト以外の実験動物に遺伝子改変によって該ヒト生体分子または染色機構を導入する。
４．得られた実験動物を用いて、導入した生体分子または染色機構を介して染色されることを確認する。
【０２８７】
ヒト以外の生物試料としては、特にゼブラフィッシュを好ましく用いることができる。眼は多くの脊椎動物の間で解剖学的、組織学的、生化学的に非常によく保存されており、発生についても同様である。ゼブラフィッシュの網膜は、現存の脊椎動物の多くと同様に７種類の主要な細胞種から構成され（Ｐｒｏｇｒｅｓｓ  ｉｎ  Ｒｅｔｉｎａｌ  ａｎｄ  Ｅｙｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２７，８９−１１０頁（２００８年））、ヒトとゼブラフィッシュの網膜組織切片像の比較ではスケールは異なるものの、非常に高い共通性を有している（Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，４，５０４−５１２（２００４年））。ゼブラフィッシュを用いることで、マウスなどに較べて飼育コストが低く、用いる化合物の量も少量で済むなどの利点が高い。また、形態だけではなく、視物質のひとつであるロドプシンの塩基配列上の共通性はマウスよりも若干高く、分子レベルでヒトとも高い相同性を持つことが示されている。また、齧歯類が夜行性なのに対して、ゼブラフィッシュは昼行性であり、網膜には桿体細胞に加えて多様な錐体細胞を有していることからもヒトとゼブラフィッシュは組織学的、機能的に相同性が高い。以上のことから、ゼブラフィッシュを用いて本発明の眼内組織標識組成物のヒト外挿性を確認することが好ましい。
【実施例】
【０２８８】
以下に実施例を挙げて本発明をより詳細に説明するが、これらの実施例は本発明のより一層の深い理解のために示される具体例であって、本発明はこれらの具体例に何ら限定されるものではない。なお、特に表示していない限りは「％」は質量基準である。
【０２８９】
眼内組織用標識組成物による眼内組織の染色
＜実施例１＞
１ｍｇ／ｍＬの色素化合物１のＤＭＳＯ溶液に蒸留水を加えて、色素化合物１の濃度が１μｇ／ｍＬである染色液１を得た。２４穴マルチプレート（ＩＷＡＫＩ製）の任意のウェル中に、１ｍＬの染色液１とゼブラフィッシュ７日胚（７ｄｐｆ）の稚魚を入れ、１時間放置した。次に、ウェル中の染色液１を除去し、蒸留水１ｍＬで置換する操作を３回行った。更に、４％パラホルムアルデヒドを含むリン酸緩衝溶液１ｍＬを加えて１時間放置した。次に、ウェルから稚魚を取り出し、５％低温融解アガロースゲルに包埋して、リニアスライサーＰＲＯ７（堂阪イーエム社製）を用いて眼組織の切片を作製した。作製した眼組織の切片をスライドガラスに載せ、共焦点顕微鏡（Ｚｅｉｓｓ社製  Ｐａｓｃａｌ  Ｅｘｃｉｔｅｒ）を用いて眼組織の観察を行った。
【０２９０】
＜実施例２〜１０６＞
実施例１の色素化合物１を表１に記載の色素化合物に変更した以外は、実施例１と同様の操作で切片を作製し、観察を行った。
【０２９１】
＜比較例１〜３＞
実施例１の色素化合物１を表１に記載のように、色素化合物なし、インドシアニングリーン（ＩＣＧ）、またはフルオレセイン（ＦＬＵ）に変更した以外は、実施例１と同様の操作で切片を作製し、観察を行った。
【０２９２】
眼内組織染色性の評価
前記実施例１〜１０６及び比較例１〜３について、染色性（＋＋＋：視細胞層を含む眼内組織が強く染色される、＋＋：視細胞層が染色される、−：染色されない）及び、染色部位（１：網膜組織中、視細胞層を含む層構造が１〜５層可視化されている、２：網膜組織が全体的に可視化されている、Ｌ：硝子体が染色されている）を評価した。
【０２９３】
以上の結果を表１に示す。なお、実施例１〜１０６までの色素化合物の励起波長および蛍光波長は、１０ｍｇ／ｍＬのＤＭＳＯ溶液を精製水に５００倍希釈した水溶液を日立ハイテク社製ＦＬ４５００蛍光分光測定機で測定して求めた。実施例９５〜１０６の色素化合物については、クロロホルム溶液中での値を示す。
【０２９４】
【表１−１】
2010168369.tif 000024
【０２９５】
【表１−２】
2010168369.tif 000025
【０２９６】
【表１−３】
2010168369.tif 000026
【０２９７】
【表１−４】
2010168369.tif 000027
【０２９８】
表１から明らかなように、本発明の眼内組織用標識組成物は、蛍光感度が優れ、生きたまま眼内組織を染色し、その染色性は非常に優れている。また、染色部位は色素によって異なり、視細胞層を強く染色するものと、網膜組織全体的に染色性を示すものがあった。更に、ゼブラフィッシュをモデル動物に用いる事で短期間に安価にスクリーニングを実施する事が出来る。
【０２９９】
Ｉｎ  ｖｉｖｏ眼内観察
＜実施例１０７＞
１ｍｇ／ｍＬの色素化合物５のＤＭＳＯ溶液に、蒸留水を１μｇ／ｍＬになるよう加えて染色液２を得た。２４穴マルチプレートの任意のウェル中に、１ｍＬの染色液２とゼブラフィッシュの稚魚を入れ、１時間放置した。次に、ウェル中の染色液２を除去し、蒸留水１ｍＬで置換する操作を３回行った。
【０３００】
次に、稚魚を０．７％アガロース溶液に入れスライドガラスに乗せ、共焦点顕微鏡を用いて稚魚の眼底観察を行った。
【０３０１】
＜実施例１０８〜１１９＞
実施例１０７で用いた化合物を表２に示す化合物に変えた以外は実施例１０７と同様の操作を行い、稚魚の眼底観察を行った。
【０３０２】
＜比較例４〜６＞
実施例１０７で用いた化合物を表２に示す化合物に変えた以外は実施例１０７と同様の操作を行い、稚魚の眼底観察を行った。
【０３０３】
Ｉｎ  ｖｉｖｏ眼内観察の評価
前記実施例１０７〜１１９について、染色性（＋＋＋：複数の層からなる網膜のうち、視細胞層とその内側の層構造が共に染色される、＋＋：複数の層からなる網膜のうち、主に視細胞層だけが染色される、−：観察できない）を評価した。
以上の結果を表２に示す。
【０３０４】
【表２】
2010168369.tif 000028
【０３０５】
実施例１０７〜１１９において、ゼブラフィッシュの眼底で蛍光が観察された。具体的には、例えば図４に示すように、本発明の眼内組織用標識組成物が非侵襲的に眼内組織へ移行し、眼内組織を明瞭にイメージングしていることが分かる。
【０３０６】
＜実施例１２０＞
ゼブラフィッシュ７日胚（７ｄｐｆ）の稚魚の眼球を４％パラフォルムアルデヒド（ＰＦＡ）の／ＰＢＳ溶液で固定後、３０％スクロースのＰＢＳ溶液で置換し、ティッシュー・テック社製ＯＣＴ  ｃｏｍｐｏｕｎｄで包埋して液体窒素で凍結させた。凍結サンプルをクライオスタット（サクラファインテック社製 ティッシュー・テック  クライオ３）で７μｍに薄切りし、ＭＡＳコートスライドグラス（松浪硝子工業社製）上に伸展させ、ゼブラフィッシュ眼球組織切片スライドを得た。スライドグラスをブロッキング溶液（ナカライ社製 Ｂｌｏｃｋｉｎｇ  ｏｎｅ）で３０分間、室温で処理し、ＰＢＳで希釈した抗Ｚｐｒ−１抗体（赤、緑の錐体細胞を染色する）を一次抗体としてスライドガラスにマウントし、４℃で１２時間処理した。次に、スライドグラスをＰＢＳＴで１０分３回洗浄し、二次抗体（Ａｌｅｘａ４８８−抗マウスＩｇＧ抗体）と１μｇ／ｍＬの化合物５をＰＢＳに希釈してスライドガラスに１時間、室温でマウントした。スライドグラスをＰＢＳＴで１０分３回洗浄し、Ｆｌｕｏｒｏｍｏｕｎｔ  Ｇ（Ｓｏｕｔｈｅｍ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社製）をマウントしてカバーグラスをかけた。得られたゼブラフィッシュ眼球組織切片の染色スライドを共焦点顕微鏡で観察を行った。
【０３０７】
＜実施例１２１＞
実施例１２０で使用した一次抗体を抗Ｚｐｒ−３抗体（桿体細胞を染色する）に変えた以外は実施例１２０と同様の操作を行い、ゼブラフィッシュ眼球組織切片の染色スライドを作製し、共焦点顕微鏡で観察を行った。
【０３０８】
＜実施例１２２＞
実施例１２０のゼブラフィッシュ組織切片スライドを、ヒト正常網膜組織切片スライド（ＵＳ  Ｂｉｏｍａｘ社製）に変え、一次抗体を抗ｍＧｌｕＲ５抗体（錐体細胞を染色する）、二次抗体をＡｌｅｘａ４８８−抗ウサギＩｇＧ抗体に変えた以外は実施例１２０と同様の操作を行い、ヒト正常網膜組織切片の染色スライドを作製し、共焦点顕微鏡で観察を行った。
【０３０９】
染色スライドの評価
実施例１２０では、視細胞層において化合物５とＺｐｒ−１抗体の染色像は重ならなかったが（図５）、実施例１２１では、視細胞層において化合物５とＺｐｒ−３抗体の染色像が一部重なった。このことは、化合物５は視細胞層への染色性を持つが、視細胞層中で赤と緑の錐体細胞は染色しない事を示している。一方、実施例１２１の結果から、化合物５は桿体細胞及び、青または紫外線の錐体細胞の少なくとも一種類以上の細胞種類を染色していることが示されている。このことから、化合物５は視細胞層中の細胞種類を選択的に染色していることが確認された。
【０３１０】
実施例１２２ではヒトの正常網膜の凍結切片で、ゼブラフィッシュの網膜で共通する視細胞層が染色されることが確認された。また、ｍＧｌｕＲ５抗体による染色部位が異なることから、ヒトにおいても視細胞層中で特定の細胞種類だけを選択的に染色していることが確認された。以上の結果から、ヒトとゼブラフィッシュの網膜での染色性が近似しており、本発明の眼内組織用標識組成物はヒトへの外挿性が高いことが確認された。
【０３１１】
マウスの眼内組織の染色
＜実施例１２３＞
色素化合物８１を等モル量のＮａＯＨ溶液に１０ｍｇ／ｍｌになるように加え、１４ｋｒｐｍで５分遠心した上清を得る。この上清を３ヶ月齢のＢ１０マウスの腹腔に０．２ｍｌ単回投与する。１時間後、処置動物をジエチルエーテル麻酔により屠殺し、眼球を採取する。取り出した眼球をＯＣＴコンパウンドに包埋して、液体窒素で冷却したイソペンタン中で凍結する。これを−２０℃に冷却したクリオスタット中で約５μｍの厚さに薄切し、スライドグラスに載せ、乾燥させ、眼組織の切片を作製した。作製した眼組織の切片を共焦点顕微鏡（Ｚｅｉｓｓ社製  Ｐａｓｃａｌ  Ｅｘｃｉｔｅｒ）を用いて眼組織の観察を行った。その結果、色素化合物８１についてマウスの腹腔投与による網膜の染色性を確認することができた。
【０３１２】
眼内組織の染色および有毛細胞染色
上記の実施例１５〜２２、２６、５６〜６１、６８、７０、８５、８６で用いた色素化合物は、眼内組織を染色する効果に加え、インビボで有毛細胞を染色することが確認された。すなわち、化合物番号１５、１７、１９〜２２、３０、６３〜６８、７５、９７、９８で示される化合物は、眼内組織および有毛細胞の両者を同時に染色する効果があることが分かった。
【産業上の利用可能性】
【０３１３】
本発明は、生きた生物試料の眼内組織を染色でき、眼内組織の細胞の形態を高感度にイメージングすることが可能な眼内組織用標識組成物が提供されるため、眼科領域の研究や眼科イメージング技術に必要不可欠な材料となる。また、眼科疾患に関連する創薬開発において経時的な評価が可能になり、ハイスループットで高精度なスクリーニングを低コストで行うことが出来、新しい疾患の診断法や治療法の開発、更には眼科研究を飛躍的に発展させ、産業上及び実用化の上でもきわめて有効な基盤技術となる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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