(57)【要約】【課題】ＡＩ−２の活性を阻害し、感染症を予防、治療若しくは改善するための医薬品、医薬部外品、又は飲食品として有用なＡＩ−２阻害剤の提供。【解決手段】カテキン類を０．００１〜０．１ｍＭの濃度で含有するＡＩ−２阻害剤。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
カテキン類を０．００１〜０．１ｍＭの濃度で含有するＡＩ−２阻害剤。
【請求項２】
カテキン類が、カテキン、カテキンガレート、ガロカテキン、ガロカテキンガレート、エピカテキン、エピガロカテキン、エピカテキンガレート及びエピガロカテキンガレートから選ばれる１種以上である請求項１記載のＡＩ−２阻害剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、感染症の予防又は治療に有用なオートインデューサー２（以下、「ＡＩ−２」と称する）阻害剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
自然界において、微生物は様々な環境下で生存しなければならない。貧栄養、低温度、高温、ｐＨ変化はもちろんのこと、生体内においては貪食細胞または抗菌性液性因子（補体、抗体、リゾチーム等）が存在する環境での生存を余儀なくされる。このような状況下で、細菌は自らの存在環境の変化を敏感に感知する機構を獲得してきた。そのような機構の１つとして、微生物は特異的な情報伝達物質を介して環境における自らの濃度を感知し、その濃度に応じて自らの様々な生物活性を巧妙に制御していることが明らかとなっている。このような細胞間の情報伝達機構は、クオラムセンシングシステムと称される。
【０００３】
クオラムセンシングは、発光性海洋細菌であるビブリオ・フィシェリおよびビブリオ・ハーベイにおいて最初に報告された。しかし、最近では、多くの細菌における一般的な遺伝子調節機構であると認識されている。この現象により、細菌は、生物発光、スウォーミング、バイオフィルム形成、タンパク質分解酵素の産生、抗生物質の合成、遺伝子受容能の発達、プラスミド接合伝達、病原因子産生および胞子形成等といった活動を一斉に行うことができる。
【０００４】
クオラムセンシングシステムを有する細菌は、オートインデューサーと呼ばれるシグナル伝達分子を合成し、放出し、細胞密度の増減によりシグナル伝達分子の応答性が変化することで、そのシグナル伝達分子に応答して遺伝子発現を制御する。これまで、アシルホモセリンラクトンがオートインデューサー−１（以下、「ＡＩ−１」と称する）として、４，５−ジヒドロキシ−２，３−ペンタンジオンがＡＩ−２として同定されている。
【０００５】
ビブリオ属細菌、緑膿菌、セラチア、エンテロバクター等臨床上重要な細菌がクオラムセンシングにＡＩ−１を利用することが報告されている。また、ビブリオ・ハーベイが、種内情報伝達には種特異性の高いＡＩ−１を利用し、種間情報伝達には種特異性の低いＡＩ−２を利用することが報告されている（非特許文献１）。さらに最近の研究では、ＡＩ−２による病原性細菌の種間でのクオラムセンシングが、病原因子の産生を調節していることも示されている。
【０００６】
例えば、胃潰瘍および胃ガンを惹起すると言われているヘリコバクター・ピロリのＬｕｘＳ（ＡＩ−２合成酵素）欠損株では、細菌運動性が低下し、マウス胃粘膜への感染率が低下すること（非特許文献２）が報告されている。また、食中毒、ガス壊疽、出血性腸炎等の原因菌であるウェルシュ菌のＬｕｘＳ欠損株において、α−、κ−、θ−毒素の産生が低下すること（非特許文献３）が報告されている。
【０００７】
従って、ＡＩ−２の活性を阻害する物質は、各種感染症の予防又は治療に有用であると考えられ、これまでに、ＡＩ−２の活性を阻害する物質として、４−ヒドロキシ−２，５−ジメチル−３（２Ｈ）−フラノン（特許文献１）、２−メトキシ−２，４−ジフェニル−３（２Ｈ）−フラノン（特許文献１）、２−ペンチル−２−シクロペンテン−１−オン（特許文献２）等が報告されている。
【０００８】
一方、カテキン類は、緑茶、紅茶、カカオ豆等に含まれるポリフェノールの１種であり、カテキン類には、歯周病の病原菌として知られるバクテロイデス・ジンジバリスの育成を特異的に阻害する作用があること（特許文献３）、歯垢除去作用及び歯石沈着防止作用があることが知られている（特許文献４）。
また、カテキン類の１種であるエピガロカテキンガレートが、そのバイオフィルムの形成にＡＩ−２が関与することが知られている歯周病細菌Eikenella corrodens（非特許文献４）のバイオフィルム形成を阻害することが知られている（特許文献５）。
しかしながら、カテキン類にＡＩ−２阻害作用があることはこれまで知られていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００９】
【特許文献１】特表２００３−５３２６９８号公報
【特許文献２】特表２００５−５０６９５３号公報
【特許文献３】特開平４−７７４２４号公報
【特許文献４】特開平６−５６６８７号公報
【特許文献５】特開２００８−１３４５８号公報
【非特許文献】
【００１０】
【非特許文献１】Bassler et al., Bacteriol.179:4043-4045,1997
【非特許文献２】Osaki T. et al., J. Med. Microbiol., 55(Pt11), 1477-1485, 2006
【非特許文献３】Ohtani K. et al., Mol. Microbiol., 44(1), 171-179, 2002
【非特許文献４】J. Biosci. Bioeng 102, 110-117 (2006)
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
本発明は、ＡＩ−２の活性を阻害し、感染症を予防、治療若しくは改善するための医薬品、医薬部外品、又は飲食品として有用なＡＩ−２阻害剤を提供することに関する。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明者らは、上記課題に鑑み、抗菌作用を有することが知られているカテキン類が、意外にも、ＡＩ−２を認識する細菌に対して抗菌活性を有さない濃度で、当該細菌に対するＡＩ−２阻害活性を有することを見出した。
【００１３】
すなわち、本発明は、カテキン類を０．００１〜０．１ｍＭの濃度で含有するＡＩ−２阻害剤に係るものである。
【発明の効果】
【００１４】
本発明のＡＩ−２阻害剤は、ＡＩ−２を認識する病原細菌による各種感染症、例えば、ヘリコバクター・ピロリが原因となる胃炎や、ウェルシュ菌が原因となる食中毒、ガス壊疽、出血性腸炎等の感染症等の予防、治療若しくは改善するための医薬品、医薬部外品、又は飲食品として有用である。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】カテキン類のＡＩ−２相対活性を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
ＡＩ−２活性
本発明において、ＡＩ−２を阻害することは、ＡＩ−２が細菌に及ぼす影響を阻害することをいい、ＡＩ−２活性を阻害すること、ＡＩ−２を分解すること、ＡＩ−２のＡＩ−２受容体への結合を阻害すること等が包含される。
また、ＡＩ−２活性とは、ＡＩ−２がクオラムセンシングシステムを有する細菌に影響を及ぼす活性、すなわち、ＡＩ−２よりもたらされる細菌の機能を促進する活性をいう。細菌は、ＡＩ−２により、発光、スウォーミング、バイオフィルム形成、タンパク質分解酵素の産生、抗生物質の合成、遺伝子受容能の発達、プラスミド接合伝達、病原因子産生および胞子形成を行うことが知られている。従って、ＡＩ−２活性は、換言すれば、ＡＩ−２を認識する細菌、すなわちＡＩ−２受容体を有する細菌による生物発光、スウォーミング、バイオフィルム形成、タンパク質分解酵素の産生、抗生物質の合成、遺伝子受容能の発達、プラスミド接合伝達、病原因子産生および胞子形成の活性ということができ、本発明においては、ＡＩ−２活性は、特に、細菌の病原因子産生活性をさす。
【００１７】
細菌の病原因子としては、例えば、エンテロトキシン、アデニル酸シクラーゼ毒素、アドヘシン、アルカリプロテアーゼ、溶血毒、炭疽毒素、ＡＰＸ毒素、α毒素、β毒素、δ毒素、Ｃ２毒素、Ｃ３毒素、ボツリヌス毒素、束状線毛構造サブユニット、Ｃ５Ａペプチダーゼ、心臓毒、コレラ毒素、毛様体毒素、クロストリジウム細胞毒、クロストリジウム神経毒、コラーゲン接着遺伝子、細胞溶解素、嘔吐毒素、内毒素、表皮剥脱毒素、外毒素、細胞外エラスターゼ、フィブリノゲン、フィブロネクチン結合タンパク質、線維状赤血球凝集素、フィンブリア、ゼラチナーゼ、赤血球凝集素、ロイコトキシン、リポタンパク質シグナルペプチダーゼ、リステリオリシンＯ、Ｍタンパク質、神経毒、非フィンブリアアドヘシン類、浮腫因子、透過酵素、百日咳毒素、ホスホリパーゼ、線毛、孔形成毒素、プロリンパーミアーゼ、セリンプロテアーゼ、志賀毒素、破傷風毒素、チオール活性化細胞溶解素、気管細胞溶解素、ウレアーゼ等が挙げられるがこれに制限されない。
【００１８】
本発明のＡＩ−２阻害剤で影響を及ぼすことができる細菌、換言すれば、本発明のＡＩ−２阻害剤で病原性を抑制できる細菌は、ＡＩ−２によりその機能が促進される細菌である。例えば、ＡＩ−２受容体を有する細菌が挙げられ、ＡＩ−２受容体を有し、ＡＩ−２を産生する細菌が好ましい。斯かる細菌としては、例えば、ビブリオ（Vibrio）属細菌、シュードモナス（Pseudomonas）属細菌、ポルフィロモナス（Porphyromonas）属細菌、エルシニア（Yersinia）属細菌、エシェリキア（Escherichia）属細菌、サルモネラ（Salmonella）属細菌、ヘモフィルス（Haemophilus）属細菌、ヘリコバクター（Helicobacter）属細菌、バシルス（Bacillus）属細菌、ボレリア（Borrelia）属細菌、ナイセリア（Neisseria）属細菌、カンピロバクター（Campylobacter）属細菌、デイノコックス（Deinococcus）属細菌、ミコバクテリウム（Mycobacterium）属細菌、エンテロコッカス（Enterococcus）属細菌、ストレプトコッカス（Streptococcus）属細菌、シゲラ（Shigella）属細菌、エロモナス（Aeromonas）属細菌、エイケネラ（Eikenella）属細菌、クロストリジウム（Clostridium）属細菌、スタフィロコッカス（Staphylococcus）属細菌、ラクトバチルス（Lactobacillus）属細菌、アクチノバチルス（Actinobacillus）属細菌、アクチノマイセス（Actinomyces）属細菌、バクテロイデス（Bacteroides）属細菌、カプノサイトファガ（Capnocytophaga）属細菌、クレブシエラ（Klebsiella）属細菌、ハロバチルス（Halobacillus）属細菌、フゾバクテリウム（Fusobacterium）属細菌、エルウィニア（Erwinia）属細菌、エルベネラ（Elbenella）属細菌、ラクトバチルス（Lactobacillus）属細菌、リステリア（Listeria）属細菌、マンヘイミア（Mannheimia）属細菌、ペプトコッカス（Peptococcus）属細菌、プレボテラ（Prevotella）属細菌、プロテウス（Proteus）属細菌、セラチア（Serratia）属細菌およびベイロネラ（Veillonella）属細菌等が挙げられる。
【００１９】
より具体的には、ビブリオ・ハーベイ（Vibrio harveyi）、ビブリオ・フィシェリ（Vibrio fischeri）、コレラ菌（Vibrio cholerae）、腸炎ビブリオ（Vibrio parahaemolyticus）、ビブリオ・アルギノリチカス（Vibrio alginolyticus）、シュードモナス・ホスホレウム（Pseudomonas phosphoreum）、ポリフィロモナス・ジンジバリス（Porphyromonas gingivalis）、エルシニア・エンテロコリチカ（Yersinia enterocolitica）、大腸菌（Escherichia coli）、ネズミチフス菌（Salmonella typhimurium）、インフルエンザ菌（Haemophilus influenzae）、ヘリコバクター・ピロリ（Helicobacter pylori）、枯草菌（Bacillus subtilis）、ボレリア・ブルグドルフェリ（Borrelia burgfdorferi）、髄膜炎菌（Neisseria meningitidis）、淋菌（Neisseria gonorrhoeae）、ペスト菌（Yersinia pestis）、カンピロバクター・ジェジュニ（Campylobacter jejuni）、デイノコックス・ラジオデュランス（Deinococcus radiodurans）、結核菌（Mycobacterium tuberculosis）、エンテロコッカス・フェカリス（Enterococcus faecalis）、肺炎レンサ球菌（Streptococcus pneumoniae）、化膿レンサ球菌（Streptococcus pyogenes）、ストレプトコッカス・ミュータンス（Streptococcus mutans）、黄色ブドウ球菌（Staphylococcus aureus）、箕田赤痢菌（Shigella flexneri）、シゲラ・ボイデイ（Shigella boydii）、セレウス菌（Bacillus cereus）、バチルス・クブチリス（Bacillus cubtilis）、エロモナス・ハイドロフィラ（Aeromonas hydrophila）、チフス菌（Salmonella enterica）、エイケネラ・コロデンス（Eikenella corrodens）、ヘリコバクター・ヘパティカス（Helicobacter hepaticus）、ウェルシュ菌（Clostridium perfringens）、スタフィロコッカス・ハエモリティカス（Staphylococcus haemolyticus）、ラクトバチルス・ガセリ（Lactobacillus gasseri）、ラクトバチルス アシドフィラス（Lactobacillus acidophilus）、ラクトバチルス・ロイテリ（Lactobacillus reuteri）、ラクトバチルス・サリバリウス（Lactobacillus salivarius）、ラクトバチルス・カゼイ（Lactobacillus casei）、ストレプトコッカス・サンギニス（Streptococcus sanguinis）、ストレプトコッカス・アンギノーサス（Streptococcus anginosus）、ストレプトコッカス・オラリス（Streptococcus oralis）、ストレプトコッカス・ボビス（Streptococcus bovis）、ストレプトコッカス・ゴルドニ（Streptococcus gordonii）、ストレプトコッカス・ミティス（Streptococcus mitis）、アクチノバチルス・アクチノマイセテムコミタンス（Actinobacillus actinomycetemcomitans）、ビブリオ・ブルニフィカス（Vivrio vulnificus）、ビブリオ・ミミクス（Vibrio  mimicus）、ビブリオ・アングイラルム（Vibrio anguillarum）、ラクトバチルス・ラムノサス（Lactobacillus rhamnosus）、エルウィニア・アミロボラ（Erwinia amylovora）、エルウィニア・カロトバラ（Erwinia carotovara）、ハロバチルス・ハロフィラス（Halabacilus halophilus）、セラチア・ピムチカ（Serratia pymuthica）、セラチア・マルセセンス（Serratia marcescens）、バクテロイデス・フラジリス（Bacteroides fragilis）、バクテロイデス・ブルガタス（Bacteroides vulgatus）、バクテロイデス・ディスタソニス（Bacteroides distasonis）、リステリア・モノサイトジェネス（Listeria monocytogenes）、スタフィロコッカス・エピデルミディス（Staphylococcus epidermidis）、クロストリジウム・ディフィシル（Clostridium difficile）、アエロモナス・ハイドロフィリア（Aeromonas hydrophilia）、マンヘイミア・ハエモライティカ（Mannhemia haemolytica）、クレブシエラ・ニューモニアエ���Klebsiella pneumoniae）、バチルス・アンスラシス（Bacillus anthracis）、カンピロバクター・コリ（Campylobacter coli）、カンピロバクター・レクタス（Campylobacter rectus）、プロテウス・ミラビリス（Proteus mirabilis）、アクチノマイセス・ナエスランディ（Actinomyces naeslundii）、ペプトコッカス・アナエロビウス（Peptococcus anaerobius）、フゾバクテリウム・ヌクレアタム（Fusobacterium nucleatum）、ベイロネラ・パルラ（Veillonella parvula）、カプノサイトファガ・スプティゲナ（Capnocytophaga sputigena）およびプレボテラ・インタメディア（Prevotella intermedia）等が挙げられる。
【００２０】
ＡＩ−２活性は、ＡＩ−２を認識することにより発光するレポーター細菌、好ましくはＡＩ−２受容体およびルシフェラーゼを有する細菌を用いるバイオアッセイにより測定することができる（Keersmaecker S.C.J. et al., J. Biol. Chem., 280(20), 19563-19568, 2005）。具体的には、ビブリオ・ハーベイＢＢ１７０株をレポーター細菌とし、被検化合物の存在下で培養し、培養後の発光強度をケミルミネッセンス計等で測定することにより、ＡＩ−２活性を測定することができる。
【００２１】
カテキン類
本発明において、カテキン類としては、非重合体カテキン類、重合体カテキン類が挙げられ、ＡＩ−２阻害活性の点で、非重合体カテキン類が好ましい。
ここで、非重合体カテキン類としては、カテキン、ガロカテキン、カテキンガレート、ガロカテキンガレート等の非エピ体カテキン類；エピカテキン、エピガロカテキン、エピカテキンガレート、エピガロカテキンガレート等のエピ体カテキン類が挙げられ、これらを単独又は２種以上を混合して用いてもよい。このうち、ＡＩ−２阻害活性の点で、ガロカテキン、カテキンガレート、ガロカテキンガレート、エピガロカテキン、エピカテキンガレート、エピガロカテキンガレートが好ましく、ガロカテキンガレート、エピガロカテキンガレートがより好ましい。
上記カテキン類としては、茶葉又は他の原料由来のもの、カラム精製品、化学合成品のいずれを用いてもよいが、茶葉由来のもの、すなわち、茶葉からの抽出物、それらの濃縮・精製物を用いるのが好ましい。
【００２２】
当該茶抽出は、Camellia属、例えばC. sinensis、C. assamica、又はそれらの雑種から得られる茶葉から製茶された茶葉に、水又は熱水やこれらに抽出助剤を添加し、攪拌抽出等をすることにより行うことができる。また、煮沸脱気や窒素ガス等の不活性ガスを通気して溶存酸素を除去しつつ、いわゆる非酸化的雰囲気下で抽出する方法を併用してもよい。抽出助剤としては、アスコルビン酸ナトリウム等の有機酸、又はこれら有機酸塩類が挙げられる。
当該製茶された茶葉には、（１）煎茶、番茶、玉露、てん茶、釜煎り茶等の緑茶類；（２）総称して烏龍茶と呼ばれる鉄観音、色種、黄金桂、武夷岩茶等の半発酵茶；（３）紅茶と呼ばれるダージリン、ウバ、キーマン等の発酵茶が含まれる。
【００２３】
当該茶抽出物の濃縮は、上記抽出物を濃縮することにより行うことができ、当該茶抽出物の精製は、溶剤やカラムを用いて精製することにより行うことができる。茶抽出物の濃縮物や精製物の形態としては、固体、水溶液、スラリー状等種々のものが挙げられる。
例えば、当該茶抽出物は、特開昭５９−２１９３８４号、特開平４−２０５８９号、特開平５−２６０９０７号、特開平５−３０６２７９号等に詳細に例示されている方法で調製することができる。また、市販品を用いることもでき、斯かる市販品としては、（株）伊藤園「テアフラン」、三井農林（株）「ポリフェノン」、太陽化学（株）「サンフェノン」、サントリー（株）「サンウーロン」等が挙げられる。
【００２４】
当該茶抽出物中のカテキン類は、主に非重合体で存在し、かつ液に溶解しているもの又は茶の微細粉末の懸濁物に吸着若しくは包含された固形状のものとして存在する。
また、当該抽出物中のカテキン類の含有量は、30〜98質量％が好ましく、40〜90質量％がより好ましい。また、これらの総ポリフェノール中のカテキン類の含有量は、製造直後でカテキン量が10質量％以上であることが好ましく、20質量％以上がより好ましい。
【００２５】
また、茶葉中のカテキン類の大部分はエピ体カテキン類として存在しており、このエピ体カテキン類を用いて熱や酸やアルカリ等の処理により立体異性体である非エピ体に変化させることができる。従って、非エピ体カテキン類を使用する場合には、緑茶類、半発酵茶類又は発酵茶類からの抽出液や茶抽出液の濃縮物を水溶液にして、例えば４０〜１４０℃、０．１分〜１２０時間加熱処理して得ることができる。また非エピカテキン類含有量の高い茶抽出液の濃縮物を使用してもよい。それらは単独で用いても又は併用してもよい。
【００２６】
本発明において、カテキン類は、斯くして得られる抽出液や画分をそのまま用いてもよく、適宜な溶媒で希釈した希釈液としたものを用いてもよく、濃縮エキスや乾燥粉末としたり、ペースト状に調製したものを用いてもよい。
【００２７】
ＡＩ−２阻害剤
カテキン類は、下記実施例に示すように、ビブリオ・ハーベイにおけるＡＩ−２活性を抑制する。従って、カテキン類は、ＡＩ−２を利用するクオラムセンシングシステムを有する細菌に関連する感染症の予防又は治療のために使用でき、またＡＩ−２阻害剤を製造するために使用できる。
また、下記実施例に記載のとおり、ＡＩ−２阻害剤は、ＡＩ−２阻害剤中のカテキン類の濃度が０．００１〜０．１ｍＭの範囲の場合、カテキン類が本来有するビブリオ・ハーベイに対する抗菌活性をほとんど示さない。従って、本願発明のＡＩ−２阻害剤は、抗菌作用によらず、ＡＩ−２を認識する病原細菌による各種感染症の予防、治療若しくは改善に有効なものである。
当該ＡＩ−２阻害剤は、感染症を予防又は治療するための医薬品、医薬部外品、飲食品等として使用できる。また、飲食品として使用する場合は、ＡＩ−２阻害或いは感染症の予防又は治療をコンセプトとし、必要に応じてその旨を表示した飲食品、機能性食品、病者用食品、特定保健用食品として使用することもできる。
【００２８】
ここで、感染症とは、例えば、日和見生物により引き起こされる日和見感染症、肺炎レンサ球菌およびインフルエンザ菌等により引き起こされる急性中耳炎（ＡＯＭ）および滲出性中耳炎（ＯＭＥ）、インフルエンザ菌により引き起こされるインフルエンザ、ヘリコバクター・ピロリにより引き起こされる十二指腸潰瘍および胃潰瘍、コレラ菌により引き起こされるコレラ、ペスト菌により引き起こされるペスト、髄膜炎菌により引き起こされる髄膜炎、ネズミチフス菌等のサルモネラ属細菌により引き起こされるサルモネラ中毒、ウェルシュ菌が原因となる食中毒、ガス壊疽、出血性腸炎等の感染症、および大腸菌等により引き起こされる下痢症等が挙げられる。
【００２９】
本発明のＡＩ−２阻害剤を医薬品、医薬部外品として用いる場合の投与形態としては、例えば錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、シロップ剤等による経口投与又は注射剤、坐剤、吸入薬、経皮吸収剤、外用剤等による非経口投与が挙げられる。
また、このような種々の剤型の製剤を調製するには、本発明のカテキン類を他の薬学的に許容される賦形剤、結合剤、増量剤、崩壊剤、界面活性剤、滑沢剤、分散剤、緩衝剤、保存剤、嬌味剤、香料、被膜剤、担体、希釈剤等を適宜組み合わせて用いることができる。
また、これらの投与形態のうち、好ましい形態は経口投与であり、経口用液体製剤を調製する場合は、嬌味剤、緩衝剤、安定化剤等を加えて常法により製造することができる。
【００３０】
本発明のＡＩ−２阻害剤を飲食品として用いる場合の形態としては、パン類、ケーキ類、麺類、菓子類、ゼリー類、冷凍食品、アイスクリーム類、乳製品、飲料、スープ類等の各種飲食品の他、上述した経口投与製剤と同様の形態（錠剤、カプセル剤、シロップ等）が挙げられる。飲料は、例えば、果汁飲料、炭酸飲料、茶系飲料、ニアウオーター、スポーツ飲料、乳飲料、アルコール飲料、清涼飲料等が挙げられる。食用油として用いる場合の形態としては、調理用油、調味料、マヨネーズ、ドレッシング、マーガリン等の油脂加工品類、パスタソース類等が挙げられる。
種々の形態の飲食品を調製するには、本発明のカテキン類を他の食品材料や、溶剤、軟化剤、油、乳化剤、防腐剤、香科、安定剤、着色剤、酸化防止剤、保湿剤、増粘剤等を適宜組み合わせて各種感染症予防用飲食品、ペットフード等として用いることが可能である。
【００３１】
ＡＩ−２阻害剤中のカテキン類の濃度は、０．００１〜０．１ｍＭであるが、ＡＩ−２阻害活性の点から、０．０１〜０．１ｍＭが好ましい。
また、食品の形態では、本発明のカテキン類は、食品中に通常0.00001〜5質量％、さらに0.0001〜1質量％、特に0.001〜0.5質量％含有するのが好ましい。
上記以外の医薬品、例えば錠剤、顆粒剤、カプセル剤等の経口用固形製剤、内服液剤、シロップ剤等の経口用液体製剤の場合には、本発明のカテキン類は、製剤中に通常0.00001〜5質量％、さらに0.0001〜1質量％、特に0.001〜0.5質量％含有するのが好ましい。
【００３２】
本発明のＡＩ−２阻害剤の投与量（有効摂取量）は、本発明のカテキン類として、一日あたり1〜3000ｍｇ／６０ｋｇ体重とするのが好ましく、特に5〜2000ｍｇ／６０ｋｇ体重、さらに10〜1500ｍｇ／６０ｋｇ体重とするのが好ましく20〜1000ｍｇ／６０ｋｇ体重とするのが最も好ましい。
【実施例】
【００３３】
本試験では、カテキン、EC（エピカテキン）、GC（ガロカテキン）、EGC（エピガロカテキン）、CG（カテキンガーレート）、ECG（エピカテキンガーレート）、GCG（ガロカテキンガーレート）、EGCG（エピガロカテキンガーレート）を用いて評価をおこなった。カテキン類はSIGMAまたは和光純薬製のものを用いた。
【００３４】
試験例１
（１）ＡＩ−２測定用菌株・培地作成
ＡＩ−２バイオアッセイ系のためのレポーター菌株はビブリオ・ハーベイＢＢ１７０株（ＡＴＣＣ  ＢＡＡ−１１１７）を用いた。ビブリオ・ハーベイＢＢ１７０株培養のための培地はＭａｒｉｎｅ培地（Ｄｉｆｃｏ社製）及びＡＢ（Autoinducer Bioassay）培地を用いた。ＡＢ培地はBasslerらの方法を参照し調製した（Bassler BLら,Mol Microbiol,9(4),773-786,1993）。0.2% Vitamin-free casamino acids（Difco、和光）、0.3M NaCl（和光）、0.05M MgSO4・7H2O（和光）の溶液を任意の濃度のKOH溶液（和光）でpH7.5に調整し、オートクレーブ後室温で保存した。上記溶液1Lに対し、1M リン酸カリウムバッファー（1M KH2PO4 21.1ml+1M K2HPO4 28.9ml）10ml、0.1M L-arginine(free-base、和光) 10ml、1mg/ml thiamine HCl（和光） 1ml、10μg/ml riboflavin（和光）1ml、glycerol（和光）20mlを添加しよく混和後、ポアサイズ0.22μmフィルター（ミリポア）にて濾過滅菌した。
【００３５】
（２）レポーター菌の調製及びＡＩ−２活性の測定
Ｍａｒｉｎｅ平板培地（Marine Agar2216、Ｄｉｆｃｏ社製）にて培養したビブリオ・ハーベイBB170株をＭａｒｉｎｅ培地（Marine Broth2216、Ｄｉｆｃｏ社製）に一白金耳植菌し、振盪培養（30℃、160rpm、8時間、好気条件下）後、AB培地 に植え継ぎ、同条件下にて一晩培養した。濁度をマイクロプレートリーダーにて測定し、AB培地にてOD600=1.0に調製し、さらにこれをAB培地で4500倍に希釈したものをレポーター菌液として用いた。このレポーター菌液に、調製したカテキン類溶液（終濃度０．００１〜０．１mM）を添加し、室温で１０分プレインキュベートした後、４，５−ジヒドロキシ−２，３−ペンタンジオン（ＤＰＤ、終濃度１０μＭ、OMM  Scientificに合成検討を依頼し、同社で合成したものを購入）を添加し、３０℃にて好気振盪培養し、４時間後の発光強度をケミルミネッセンス計（ベルトールド、Mitharas  LB940（商品名）、化学発光を検出）で測定した。ＤＰＤのみ添加したものをコントロール１００％とし、それに対する相対値として表した（図１）。尚、陽性対照としては、ＡＩ−２阻害化合物として既知である４−ブロモ−５−（４−メトキシフェニル）−２（５Ｈ）−フラノン（最終濃度10μＭ、Sigma社製、comp（１）と表示）を用いた。
本発明のカテキン類は、既知のＡＩ−２阻害化合物に比して、同等もしくはそれ以上のＡＩ−２阻害活性を有することが示された。
尚、上記カテキン類について、以下の方法により、ビブリオ・ハーベイＢＢ１７０株への殺菌能の有無の確認を行ったところ、何れも、殺菌作用は確認されなかった。
【００３６】
＜殺菌試験＞
Ｍａｒｉｎｅ平板培地（Marine Agar2216、Ｄｉｆｃｏ社製）にて培養したビブリオ・ハーベイBB170株をＭａｒｉｎｅ培地（Marine Broth2216、Ｄｉｆｃｏ社製）に一白金耳植菌し、振盪培養（30℃、160rpm、8時間、好気条件下）後、AB培地 に植え継ぎ、同条件下にて一晩培養した。濁度をマイクロプレートリーダーにて測定し、AB培地にてOD600=1.0に調製し、さらにこれをAB培地で４５００倍に希釈調製したビブリオ・ハーベイＢＢ１７０株菌液と各サンプルを１０分間プレインキュベート（３０℃）し、さらにＡＢ培地で１０００倍に希釈したサンプルをＭａｒｉｎｅ平板培地（Ｄｉｆｃｏ）に播種し、３０℃・１日培養後、コロニーをカウントし生菌数を算出した。
【図１】
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