(57)【要約】【課題】本発明は、玉造黒門越瓜（たまつくりくろもんしろうり）からの抽出物を有効成分とするアルコール性肝障害予防・改善組成物を提供する。【解決手段】アルコール性肝疾患として、アルコール性肝炎およびアルコール性肝線維化・肝硬変について細胞を用いたモデルを作製した。アルコール性肝炎では肝細胞の細胞傷害について着目し、アルコール性肝線維化・肝硬変については、肝星細胞によるコラーゲン産生に着目し、それぞれ、その機序解明の研究を鋭意進めてきた。その結果、玉造黒門越瓜からの抽出物が、エタノールによって低下した肝細胞の細胞生存率を有意に回復させること、さらに、エタノールによって亢進した肝星細胞のコラーゲン産生量を顕著に低下させることが明らかとなった。以上のことから、玉造黒門越瓜からの抽出物は、アルコール性肝障害の予防・改善に有効であることを見出した。【選択図】図９
2010275217.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
玉造黒門越瓜（たまつくりくろもんしろうり）からの抽出物を有効成分とするアルコール性肝障害予防・改善組成物。
【請求項２】
請求項１に記載の組成物を含有する、食品、サプリメント、医薬部外品、及び医薬品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アルコール摂取に起因する肝障害の予防または改善に有効な組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、肝疾患が増加しつつあり、特に、アルコール性肝障害は、古くから肝疾患を代表するものとして扱われてきたが、最近のアルコール飲料の消費量の増大に伴い、アルコール性肝疾患の罹患者数は年々増加傾向にあり、その重症化が問題になっている。
【０００３】
一般に、アルコール性肝障害は、アルコールを過大な量な摂取することに起因する疾患で、長期間にわたる過大量のアルコール摂取により、脂肪肝、肝線維症、アルコール性肝炎、アルコール性肝硬変の転帰をとる。アルコール性肝炎では、黄疸などの急性症状と臨床検査における異常所見を示し、肝生検組織像でも肝細胞の変性・壊死と好中球の浸潤を伴う疾患として知られている。また、急性の肝細胞壊死に始まり、慢性的に肝細胞壊死が進行していくことと平行し、肝星細胞からコラーゲン産生が亢進され、肝線維化の誘発に伴いグリソン鞘の周辺結合組織が肥大化することによりグリソン鞘を圧迫し、肝硬変、ひいては肝癌となり、致死的な状態に至る。
【０００４】
通常のアルコール性肝障害では、禁酒とともに安静ならびにビタミン剤を含めた十分な栄養を補給することで、治癒に向かう場合が多い。しかし、重症アルコール性肝炎では、このような治療のみでは十分な治療効果を得ることができないことから、実際的には、日々の生活習慣を改善し、かつ肝保護機能を有する食材等を摂取し、発症予防、重症化予防を心がけることが、有効性が高く、確実な療法となっているのが現状である。
【０００５】
天然物由来の成分が、アルコール性肝障害の予防又は治療効果を有するものとして多数の報告があり、例えば、ジャンボリーキ中のカテキン誘導体（特許文献１）、グロビン蛋白分解物（特許文献２）、米糠に含有するフィチン酸及びその類縁体（特許文献３）などがある。また、リジン含有の組成物がアルコール性肝障害予防に有効であることも報告されている（特許文献４参照）が、十分かつ確実な効果を有するものとは言い難い。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特開２００８−１９５６２２号公報
【特許文献２】特開２００８−１０５９５９号公報
【特許文献３】特開２００６−３４２１２８号公報
【特許文献４】特開２００４−２４５２号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
かかる現況の中で、アルコール摂取に起因する肝疾患の予防及び治療に有効な機能性食品・医薬品等の開発が望まれている。
【０００８】
一方、江戸時代以前の大阪の地は、商業や海運が盛んであり、さまざまな食材が集積されていたことから、野菜も多種類のものが栽培・供給されていた。その後、農業・食文化の変化から、徐々に大阪の伝統野菜の栽培が少なくなり、市場に出回ることすらなくなった伝統野菜も少なくない。近年、「なにわ伝統野菜」として保存・普及をめざす活動が活発化しており、その「なにわ伝統野菜」のひとつとして、玉造黒門越瓜（たまつくりくろもんしろうり）がある。名物名産略記（１８３６年）には、玉造黒門越瓜が、大阪城の東側を流れている猫間川にかかっていた玉造橋付近が発祥地であるとされ、果実の色は濃緑色で８〜９条の白色の縦縞があり、果肉が厚く、引き締っているため漬け物に適すると記載されている。
【０００９】
安土桃山時代から江戸時代にかけて武士や町人たちが愛好して食したとされる玉造黒門越瓜とその粕漬であり、最近になり、美味で有用な食材であることから、有志者によって玉造黒門越瓜の普及がはじまっている。その玉造黒門越瓜が現代人の健康な食生活にも寄与しつつある。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明者らは、アルコール性肝障害または肝線維化について、肝星細胞によるコラーゲン産生に着目し、その機序解明の研究を鋭意進めてきた。その結果、玉造黒門越瓜からの抽出物が、肝星細胞におけるコラーゲンの産生に影響を及ぼし、アルコール性肝障害の予防・改善に有効な効果を有することを見出し、本発明を完成するに至った。
【発明の効果】
【００１１】
本発明は、玉造黒門越瓜からの抽出物を有効成分とするアルコール性肝障害予防・改善組成物である。
【００１２】
本発明者らは、ラットの肝星細胞の培養系を用い、これにエタノールを添加することによりコラーゲンの産生が誘起されることを見出し、これをアルコール性肝線維化・肝硬変モデルとして用いる評価方法を確立した。一方、ラットの肝細胞の培養系を用い、これにエタノールを添加することにより、肝細胞傷害が誘導され、細胞生存率が有意に低下することから、これをアルコール性肝炎モデルとして用いる評価方法を確立した。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】実施例において得られたエタノールによって亢進した肝星細胞のI型コラーゲン産生量におよぼす玉造黒門越瓜抽出物（可食部）の効果の測定結果を示す図面である。
【図２】実施例において得られたエタノールによって亢進した肝星細胞のI型コラーゲン産生量におよぼす玉造黒門越瓜抽出物（可食部）の効果のI型コラーゲンの染色強度を定量化した図面である。
【図３】実施例において得られたエタノールによって亢進した肝星細胞のI型コラーゲン産生量におよぼす玉造黒門越瓜抽出物（皮部）の効果の測定結果を示す図面である。
【図４】実施例において得られたエタノールによって亢進した肝星細胞のI型コラーゲン産生量におよぼす玉造黒門越瓜抽出物（皮部）の効果のI型コラーゲンの染色強度を定量化した図面である。
【図５】実施例において得られたエタノールによって亢進した肝星細胞のI型コラーゲン産生量におよぼす玉造黒門越瓜抽出物（種子部）の効果の測定結果を示す図面である。
【図６】実施例において得られたエタノールによって亢進した肝星細胞のI型コラーゲン産生量におよぼす玉造黒門越瓜抽出物（種子部）の効果のI型コラーゲンの染色強度を定量化した図面である。
【図７】実施例において得られたエタノールによって亢進した肝星細胞のI型コラーゲン産生量におよぼす玉造黒門越瓜抽出物（葉部）の効果の測定結果を示す図面である。
【図８】実施例において得られたエタノールによって亢進した肝星細胞のI型コラーゲン産生量におよぼす玉造黒門越瓜抽出物（葉部）の効果のI型コラーゲンの染色強度を定量化した図面である。
【図９】実施例において得られたエタノールによって低下した肝細胞の細胞生存率におよぼす玉造黒門越瓜抽出物（可食部、皮部および種子部）の効果の測定結果を示す図面である。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
以下に係るモデルを用いて玉造黒門越瓜のアルコール性肝障害予防効果を立証する実験を詳細に示す。肝星細胞の培養系及び産生されるコラーゲンの検出、肝細胞の培養系及び細胞生存率の測定は、以下のように実施した。
【００１５】
分離肝星細胞は13週齢のＷｉｓｔａｒ系雄性ラットの肝臓をプロナーゼ、コラゲナーゼ液で灌流した後、Ｎｙｃｏｄｅｎｚ溶液を用いた密度勾配遠心法によって得た。
【００１６】
肝星細胞は直径３５ ｍｍのプラスチックシャーレ上で１０％ＦＢＳを含むDMEM培地で２日間前培養した後、ＦＢＳ−ｆｒｅｅのDMEM培地で１日間培養することによって細胞周期をあわせた。
【００１７】
次に、本培養として、１００ ｍＭエタノールを添加して24時間培養することによって、アルコール性肝線維化・肝硬変モデルを作製した。
【００１８】
保護効果評価には、上記とともに玉造黒門越瓜抽出物（２５μｇ／ｍｌから１００μｇ／ｍｌまたは１２．５μｇ／ｍlから５０μｇ／ｍｌ)を添加して実験に供した。玉造黒門越瓜抽出物は、各部位ごとに５０％エタノールで抽出した後、凍結乾燥したものを用いた。
【００１９】
コラーゲンの検出法は表１の通りである。
【００２０】
【表１】
2010275217.tif 000003
【００２１】
上述の実験の結果、図１乃至図８に示されるような顕著な効果が認められた。
【００２２】
すなわち玉造黒門越瓜抽出物は、可食部、皮部、種子部、葉部とも肝線維化に関し、アルコール性肝線維化・肝硬変モデル（図１、３、５、７）において顕著なコラーゲン産生抑制が認められた(黒く染色されたコラーゲンの染色強度が著しく減少している)。さらに１型コラーゲンの染色強度を画像解析によって定量化したところ、コントロールを100とした時の各サンプルの染色強度（１標本につき細胞20個について測定して平均した値）の割合として表すと、玉造黒門越瓜抽出物は添加濃度に依存して、コラーゲン産生量を顕著に抑制した（図２、４、６、８）。これらのことから、玉造黒門越瓜抽出物は、アルコール性肝線維化・肝硬変の予防及び改善に有効な組成物であることが認められた。
【００２３】
分離肝細胞は１３週齢のＷｉｓｔａｒ系雄性ラットの肝臓をコラゲナーゼ液で灌流した後、低速遠心法によって得た。
【００２４】
肝細胞は直径３５ｍｍのプラスチックシャーレ上で１０％ ＦＢＳを含むＷｉｌｌｉａｍｓ‘Ｅ培地で２４時間前培養した。
【００２５】
次に、本培養として、１００ ｍＭエタノールを添加して24時間培養することによって、アルコール性肝炎モデルを作製した。
【００２６】
保護効果評価には、上記とともに玉造黒門越瓜抽出物（２５μｇ／ｍｌから１００μｇ／ｍｌまたは１２．５μｇ／ｍｌから５０μｇ／ｍｌ）を添加して実験に供した。玉造黒門越瓜抽出物は、各部位ごとに５０％エタノールで抽出した後、凍結乾燥したものを用いた。
【００２７】
細胞生存率の測定法は表２の通りである。
【００２８】
【表２】
2010275217.tif 000004
【００２９】
本発明の有効成分の具体例を示して、詳細に説明する。
【００３０】
上述の実験の結果、図９に示されるような顕著な効果が認められた。
【００３１】
すなわち玉造黒門越瓜抽出物は、可食部、皮部、種子部とも、添加濃度に依存してエタノールよって有意に低下した肝細胞の細胞生存率を回復させた（図９）。これらのことから、玉造黒門越瓜抽出物は、アルコール性肝炎の予防及び改善に有効な組成物であることが認められた。
【００３２】
本発明にかかる玉造黒門越瓜抽出物を含有する組成物としては、例えば、医薬部外品、医薬品、飲食物、サプリメント等が挙げられる。
【００３３】
本発明の有効成分の投与形態としては、特に限定がなく、必要に応じ適宜選択して使用され、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、細粒剤、散剤等の経口剤、注射剤、坐剤等の非経口剤が挙げられる。
【００３４】
所期の効果を発揮するためには、患者の年令、体重、疾患の程度により異なるが、通常成人で本発明の有効組成物の重量として２〜５０ｇを、１日数回に分けての服用が適当と思われる。
【００３５】
本発明の有効組成物は、錠剤、カプセル剤、顆粒剤等の経口剤は、例えばデンプン、乳糖、白糖、マンニット、カルボキシメチルセルロース、コーンスターチ、無機塩類等を用いて常法に従って製造される。
【００３６】
この種の製剤には、適宜前記賦形剤の他に、結合剤、崩壊剤、界面活性剤、滑沢剤、流動性促進剤、矯味剤、着色剤、香料等を使用することができる。それぞれの具体例は以下に示すごとくである。
【００３７】
［結合剤］デンプン、デキストリン、アラビアゴム末、ゼラチン、ヒドロキシプロピルスターチ、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ヒドロキシプロピルセルロース、結晶セルロース、エチルセルロース、ポリビニルピロリドン、マクロゴール。
［崩壊剤］デンプン、ヒドロキシプロピルスターチ、カルボキシメチルセルロースナトリウム、カルボキシメチルセルロースカルシウム、カルボキシメチルセルロース、低置換ヒドロキシプロピルセルロース。
［界面活性剤］ラウリル硫酸ナトリウム、大豆レシチン、ショ糖脂肪酸エステル、ポリソルベート８０。
［滑沢剤］タルク、ロウ類、水素添加植物油、ショ糖脂肪酸エステル、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸アルミニウム、ポリエチレングリコール。
［流動性促進剤］軽質無水ケイ酸、乾燥水酸化アルミニウムゲル、合成ケイ酸アルミニウム、ケイ酸マグネシウム。
【００３８】
また、本発明の有効組成物は、懸濁剤、エマルジョン剤、シロップ剤、エリキシル剤としても投与することができ、これらの各種剤形には、矯味矯臭剤、着色剤を含有してもよい。
【図２】
2010275217.tif 000005
【図４】
2010275217.tif 000006
【図６】
2010275217.tif 000007
【図８】
2010275217.tif 000008
【図９】
2010275217.tif 000009
【図１】
2010275217.tif 000010
【図３】
2010275217.tif 000011
【図５】
2010275217.tif 000012
【図７】
2010275217.tif 000013