(57)【要約】【課題】現在治療が利用可能でない、心臓抑制、心機能障害、熱傷関連の罹患率および心臓保護のための治療を提供する。【解決手段】本発明の１実施形態は、薬学的組成物であって、治療上有効な量の少なくとも１つの抗ＭＩＦ抗体と；少なくとも１つの薬学的に受容可能なキャリアとを含む、薬学的組成物に関する。本発明の別の実施形態は、薬学的組成物であって、治療上有効な量の少なくとも１つの抗ＣＤ７４抗体と；少なくとも１つの薬学的に受容可能なキャリアとを含む、薬学的組成物に関する。本発明の別の実施形態は、薬学的組成物であって、治療上有効な量の少なくとも１つの抗ＴＮＦＲ抗体と；治療上有効な量の少なくとも１つの抗ＭＩＦ抗体と；少なくとも１つの薬学的に受容可能なキャリアとを含む、薬学的組成物に関する。【選択図】図３１
2010159267.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
心機能障害をその処置または予防が必要な被験体において処置または予防すること、心筋活性における不規則性をその処置または予防が必要な被験体において処置または予防すること、心筋活性における抑制をその処置または予防が必要な被験体において処置または予防すること、熱傷に関連する心機能障害をその処置または予防が必要な被験体において処置または予防すること、急性心筋梗塞後の心機能障害をその処置または予防が必要な被験体において処置または予防すること、心臓抑制をその処置または予防が必要な被験体において処置または予防すること、ならびにそれらの組み合わせからなる群より選択される少なくとも１つのための薬学的組成物であって、低分子ＭＩＦインヒビター、該低分子ＭＩＦインヒビターの塩、該低分子ＭＩＦインヒビターのプロドラッグおよびそれらの組み合わせからなる群より選択される少なくとも１つの有効な量を含み、
該低分子ＭＩＦインヒビターが、以下の式Ｉ：
【化１】
2010159267.tif 000015
を有し、ここで、
Ｒ１−４は独立して、Ｒ、ハロ、Ｎ３、ＣＮ、ＯＨ、ＮＲＲ’、またはＳＨであり；
ＲおよびＲ’は独立してＨまたはＣ１−６アルキルであり；
Ｘは、Ｒ、ハロ、Ｎ３、ＣＮ、ＯＲ、ＮＲＲ’、ＳＨ、＝Ｏ、＝ＣＨ２、またはＡであり；
Ａは、置換または非置換芳香族環であり；
ＹはＲ、ＮＲＲ’、ＮＲＲ’’または（ＣＨ２）ｎ−Ａであり；
Ｚは、Ｒ、ＯＲ、ＯＲ’’、ＮＲＲ’、ＮＲＲ’’またはＡであり；
Ｒ’’は置換もしくは非置換、直鎖もしくは分枝鎖のＣ２−Ｃ１８であり；
そしてｎは０または１である
組成物。
【請求項２】
前記式Ｉの化合物が、ｐ−ヒドロキシフェニル−イソキサゾリン含有化合物であって、ここで各々のＲ、Ｒ１−４、ＸおよびＹはＨまたは−ＣＨ２−Ａであり、そしてＺがＯＲである、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記式Ｉの化合物が、（Ｒ）−３−（４−ヒドロキシフェニル）−４，５−ジヒドロ−５−イソキサゾリン酢酸のエステルである、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
前記式Ｉの化合物が、（Ｒ）−３−（４−ヒドロキシフェニル）−４，５−ジヒドロ−５−イソキサゾリン酢酸のメチルエステルである、請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
前記式Ｉの化合物が、２−｛３−（４−ヒドロキシ−フェニル）−４，５−ジヒドロ−イソキサゾール−５−イル｝−３−フェニル−プロピオン酸のエステルである、請求項１に記載の組成物。
【請求項６】
前記式Ｉの化合物が、２−｛３−（４−ヒドロキシ−フェニル）−４，５−ジヒドロ−イソキサゾール−５−イル｝−３−フェニル−プロピオン酸のメチルエステルである、請求項１に記載の組成物。
【請求項７】
さらに薬学的に受容可能なキャリアを含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項８】
必要のある被験体における心機能障害を処置または予防するための、請求項１に記載の組成物。
【請求項９】
必要のある被験体における心筋活性における不規則性を処置または予防するための、請求項１に記載の組成物。
【請求項１０】
必要のある被験体における心筋活性における抑制を処置または予防するための、請求項１に記載の組成物。
【請求項１１】
必要のある被験体における熱傷に関連する心機能障害を処置または予防するための、請求項１に記載の組成物。
【請求項１２】
必要のある被験体における急性心筋梗塞後の心機能障害を処置または予防するための、請求項１に記載の組成物。
【請求項１３】
必要のある被験体における心臓抑制を処置または予防するための、請求項１に記載の組成物。
【請求項１４】
被験体における心機能障害を処置または予防するためのキットであって、
有効な量の少なくとも１つの化合物と、
使用指示書と
を含み、該化合物が、以下の式Ｉ：
【化１】
2010159267.tif 000016
を有し、ここで、
Ｒ１−４は独立して、Ｒ、ハロ、Ｎ３、ＣＮ、ＯＨ、ＮＲＲ’、またはＳＨであり；
ＲおよびＲ’は独立してＨまたはＣ１−６アルキルであり；
Ｘは、Ｒ、ハロ、Ｎ３、ＣＮ、ＯＲ、ＮＲＲ’、ＳＨ、＝Ｏ、＝ＣＨ２、またはＡであり；
Ａは、置換または非置換芳香族環であり；
ＹはＲ、ＮＲＲ’、ＮＲＲ’’または（ＣＨ２）ｎ−Ａであり；
Ｚは、Ｒ、ＯＲ、ＯＲ’’、ＮＲＲ’、ＮＲＲ’’またはＡであり；
Ｒ’’は置換もしくは非置換、直鎖もしくは分枝鎖のＣ２−Ｃ１８であり；
そしてｎは０または１である
キット。
【請求項１５】
心機能障害をその処置または予防が必要な被験体において処置または予防すること、心筋活性における不規則性をその処置または予防が必要な被験体において処置または予防すること、心筋活性における抑制をその処置または予防が必要な被験体において処置または予防すること、熱傷に関連する心機能障害をその処置または予防が必要な被験体において処置または予防すること、急性心筋梗塞後の心機能障害をその処置または予防が必要な被験体において処置または予防すること、心臓抑制をその処置または予防が必要な被験体において処置または予防すること、ならびにそれらの組み合わせからなる群より選択される少なくとも１つのための組成物であって、低分子ＭＩＦインヒビター、該低分子ＭＩＦインヒビターの塩、該低分子ＭＩＦインヒビターのプロドラッグおよびそれらの組み合わせからなる群より選択される少なくとも１つの有効な量を含み、
該低分子ＭＩＦインヒビターが、以下の式Ｉ：
【化１】
2010159267.tif 000017
を有し、ここで、
Ｒ１−４は独立して、Ｒ、ハロ、Ｎ３、ＣＮ、ＯＨ、ＮＲＲ’、またはＳＨであり；
ＲおよびＲ’は独立してＨまたはＣ１−６アルキルであり；
Ｘは、Ｒ、ハロ、Ｎ３、ＣＮ、ＯＲ、ＮＲＲ’、ＳＨ、＝Ｏ、＝ＣＨ２、またはＡであり；
Ａは、置換または非置換芳香族環であり；
ＹはＲ、ＮＲＲ’、ＮＲＲ’’または（ＣＨ２）ｎ−Ａであり；
Ｚは、Ｒ、ＯＲ、ＯＲ’’、ＮＲＲ’、ＮＲＲ’’またはＡであり；
Ｒ’’は置換もしくは非置換、直鎖もしくは分枝鎖のＣ２−Ｃ１８であり；
そしてｎは０または１である
組成物。
【請求項１６】
前記式Ｉの化合物が、ｐ−ヒドロキシフェニル−イソキサゾリン含有化合物であって、ここで各々のＲ、Ｒ１−４、ＸおよびＹはＨまたは−ＣＨ２−Ａであり、そしてＺがＯＲである、請求項１５に記載の組成物。
【請求項１７】
前記式Ｉの化合物が、（Ｒ）−３−（４−ヒドロキシフェニル）−４，５−ジヒドロ−５−イソキサゾリン酢酸のエステルである、請求項１５に記載の組成物。
【請求項１８】
前記式Ｉの化合物が、（Ｒ）−３−（４−ヒドロキシフェニル）−４，５−ジヒドロ−５−イソキサゾリン酢酸のメチルエステルである、請求項１５に記載の組成物。
【請求項１９】
前記式Ｉの化合物が、２−｛３−（４−ヒドロキシ−フェニル）−４，５−ジヒドロ−イソキサゾール−５−イル｝−３−フェニル−プロピオン酸のエステルである、請求項１５に記載の組成物。
【請求項２０】
前記式Ｉの化合物が、２−｛３−（４−ヒドロキシ−フェニル）−４，５−ジヒドロ−イソキサゾール−５−イル｝−３−フェニル−プロピオン酸のメチルエステルである、請求項１５に記載の組成物。
【請求項２１】
さらに薬学的に受容可能なキャリアを含む、請求項１５に記載の組成物。
【請求項２２】
必要のある被験体における心機能障害を処置または予防するための、請求項１５に記載の組成物。
【請求項２３】
必要のある被験体における心筋活性における不規則性を処置または予防するための、請求項１５に記載の組成物。
【請求項２４】
必要のある被験体における心筋活性における抑制を処置または予防するための、請求項１５に記載の組成物。
【請求項２５】
必要のある被験体における熱傷に関連する心機能障害を処置または予防するための、請求項１５に記載の組成物。
【請求項２６】
必要のある被験体における急性心筋梗塞後の心機能障害を処置または予防するための、請求項１５に記載の組成物。
【請求項２７】
必要のある被験体における心臓抑制を処置または予防するための、請求項１５に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、国立衛星研究所によって授与された助成金番号ＲＯ１ＧＭ５８８６３の下、米国政府の支持で行なわれた。米国政府は、本発明において確かな権利を有する。
【０００２】
本出願は、２００３年８月２９日に出願された米国仮特許出願番号６０／４９８，６５９；２００４年２月２５日に出願された同６０／５４７，０５４；２００４年２月２５に出願された同６０／５４７，０５６；２００４年２月２５日に出願された同６０／５４７，０５７；２００４年２月２５に出願された第６０／５４７，０５９、および２００４年３月２６日に出願された同６０／５５６，４４０に基づいており、それらの各々の全内容が、全ての目的のために本明細書中に参考として援用される。
【０００３】
（発明の背景）
（発明の分野）
本発明は概して、サイトカインおよび他の細胞シグナル伝達機構に関与する、脊椎動物種における病理および生理学に、そしてまた、サイトカインおよび他の細胞シグナル伝達機構に関与する診断アッセイに関する。本発明の他の局面は、心筋抑制因子として、およびインビボにおけるエンドトキシン誘発性心機能障害のメディエーターとしてのマクロファージ遊走阻止因子（ＭＩＦ）に関する。本発明の他の局面は、ＭＩＦの産生または活性を媒介および／または阻害するため、ならびに心機能障害、敗血症、熱傷または熱傷に関連する他の状態を処置および予防するための、化合物、組成物、方法に関する。本発明の他の局面は、ＬＰＳチャレンジ後の心臓、肝臓および脾臓からのＭＩＦ放出、ならびにＴＮＦレセプターＩ／ＩＩシグナル伝達の役割に関する。本発明の他の局面は、ＴＮＦレセプターＩ／ＩＩシグナル伝達とは独立した血清中へのＭＩＦの放出に関する。本発明の他の局面は、心筋細胞上でのＣＤ７４の発現および心機能障害のその媒介に関する。
【背景技術】
【０００４】
（背景技術）
マクロファージ遊走阻止因子（ＭＩＦ）は、多能性の炎症誘発性のサイトカインであって、その作用機序は、過去４０年間にわたって精査されている。ＭＩＦに関する当該分野で現在理解されているものとしては、その生理学的に関連するオリゴマー形成状態である三量体としてのその結晶化に関する研究；その推定の膜レセプター（単数または複数）；ならびにタウトメラーゼ（ｔａｕｔｏｍｅｒａｓｅ）およびオキシドレダクターゼとしてのその細胞内酵素活性の生理学的妥当性が挙げられる。
【０００５】
ＭＩＦが、関節リウマチ（Ｍ．Ｌｅｅｃｈら、「Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  Ｍｉｇｒａｔｉｏｎ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  Ｆａｃｔｏｒ  ｉｎ  Ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ  Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ：Ｅｖｉｄｅｎｃｅ  ｏｆ  Ｐｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｂｙ  Ｇｌｕｃｏｃｏｒｔｉｃｏｉｄｓ」，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ，４２，１６０１−１６０８（１９９９），Ｍ．Ｌｅｅｃｈら、「Ｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  Ｍｉｇｒａｔｉｏｎ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  Ｆａｃｔｏｒ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｒａｔ  Ａｄｊｕｖａｎｔ  Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ」，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ．，４１，９１０−９１７（１９９８），Ａ．Ｍｉｋｕｌｏｗｓｋａら、「Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  Ｍｉｇｒａｔｉｏｎ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  Ｆａｃｔｏｒ  ｉｓ  Ｉｎｖｏｌｖｅｄ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ  ｏｆ  Ｃｏｌｌａｇｅｎ  Ｔｙｐｅ  １１−Ｉｎｄｕｃｅｄ  Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ｉｎ  Ｍｉｃｅ」，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５８，５５１４−５５１７（１９９７））、遅延型過敏症（Ｊ．Ｂｅｒｎｈａｇｅｎら、「Ａｎ  Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ  Ｒｏｌｅ  ｆｏｒ  Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  Ｍｉｇｒａｔｉｏｎ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  Ｆａｃｔｏｒ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｔｕｂｅｒｃｕｌｉｎ  Ｄｅｌａｙｅｄ−Ｔｙｐｅ  Ｈｙｐｅｒｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ  Ｒｅａｃｔｉｏｎ」，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１８３，２７７−２８２（１９９６），Ｈ．Ｙ．Ｌａｎら、「Ｄｅ  Ｎｏｖｏ  Ｒｅｎａｌ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  Ｍｉｇｒａｔｉｏｎ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｄｕｒｉｎｇ  ｔｈｅ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｒａｔ  Ｃｒｅｓｃｅｎｔｉｃ  Ｇｌｏｍｅｒｕｌｏｎｅｐｈｒｉｔｉｓ」，Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．，１４９，１１１９−１１２７（１９９６），Ｈ．Ｙ．Ｌａｎら、「Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  Ｍｉｇｒａｔｉｏｎ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎ  Ｈｕｍａｎ  Ｒｅｎａｌ  Ａｌｌｏｇｒａｆｔ  Ｒｅｊｅｃｔｉｏｎ」，Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ，６６，１４６５−１４７１（１９９８），Ｈ．Ｙ．Ｌａｎら、「ＴＮＦ−Ａｌｐｈａ  Ｕｐ−Ｒｅｇｕｌａｔｅｓ  Ｒｅｎａｌ  ＭＩＦ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎ  Ｒａｔ  Ｃｒｅｓｃｅｎｔｉｃ  Ｇｌｏｍｅｒｕｌｏｎｅｐｈｒｉｔｉｓ」，Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．，３，１３６−１４４（１９９７），Ｔ．Ｓｈｉｍｉｚｕら、「Ｉｎｃｒｅａｓｅｄ  ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  Ｍｉｇｒａｔｉｏｎ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  Ｆａｃｔｏｒ  ｂｙ  ＰＢＭＣｓ  ｏｆ  Ａｔｏｐｉｃ  Ｄｅｒｍａｔｉｔｉｓ」，Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１０４，６５９−６６９（１９９９））、炎症性肺疾患（Ｓ．Ｃ．Ｄｏｎｎｅｌｌｙら、「Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  Ｒｏｌｅ  ｆｏｒ  Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  Ｍｉｇｒａｔｉｏｎ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  Ｆａｃｔｏｒ  ｉｎ  Ａｃｕｔｅ  Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ  Ｄｉｓｔｒｅｓｓ  Ｓｙｎｄｒｏｍｅ」，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．，３，３２０−３２３（１９９７），Ｈ．Ｍａｋｉｔａら、「Ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  Ａｎｔｉ−Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  Ｍｉｇｒａｔｉｏｎ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  Ｆａｃｔｏｒ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｏｎ  Ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ−Ｉｎｄｕｃｅｄ  Ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  Ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ  Ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ」，Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｒｉｔ．Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ．，１５８，５７３−５７９（１９９８），Ａ．Ｇ．Ｒｏｓｓｉら、「Ｈｕｍａｎ  Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ  Ｅｏｓｉｎｏｐｈｉｌｓ  Ｓｅｃｒｅｔｅ  Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  Ｍｉｇｒａｔｉｏｎ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  Ｆａｃｔｏｒ（ＭＩＦ）．Ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  Ｒｏｌｅ  ｉｎ  Ａｓｔｈｍａ」，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，１０１，２８６９−２８７４（１９９８））、ガン（Ｊ．Ｃｈｅｓｎｅｙら、「Ａｎ  Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ  Ｒｏｌｅ  ｆｏｒ  Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  Ｍｉｇｒａｔｉｏｎ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  Ｆａｃｔｏｒ（ＭＩＦ）ｉｎ  Ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ  ａｎｄ  Ｇｒｏｗｔｈ  ｏｆ  ａ  Ｍｕｒｉｎｅ  Ｌｙｍｐｈｏｍａ」，Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．，５，１８１−１９１（１９９９），Ｍ．Ｔ．ｄｅｌ  Ｖｅｃｃｈｉｏら、「Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  Ｍｉｇｒａｔｉｏｎ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  Ｆａｃｔｏｒ  ｉｎ  Ｐｒｏｓｔａｔｉｃ  Ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ：Ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  Ｔｕｍｏｒ  Ｇｒａｄｉｎｇ  ａｎｄ  Ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ−Ｒｅｌａｔｅｄ  Ｃｈａｎｇｅｓ」，Ｐｒｏｓｔａｔｅ，４５，５１−５７（２０００），Ｊ．Ｄ．Ｈｕｄｓｏｎら、「Ａｌ  Ｐｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  Ｉｎｈｉｂｉｔｓ  ｐ５３  Ｔｕｍｏｒ  Ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ  Ａｃｔｉｖｉｔｙ」，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１９０，１３７５−１３８２（１９９０），Ａ．Ｋａｍｉｍｕｒａら、「Ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  Ｍｉｇｒａｔｉｏｎ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｐｒｅｄｉｃｔｓ  ｔｈｅ  Ｐｒｏｇｎｏｓｉｓ  ｏｆ  Ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  Ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｌｕｎｇ」，Ｃａｎｃｅｒ，８９，３３４−３４１（２０００），Ｋ．Ｍｅｙｅｒ−Ｓｉｅｇｌｅｒら、「Ｉｎｃｒｅａｓｅｄ  Ｓｔａｂｉｌｉｔｙ  ｏｆ  Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  Ｍｉｇｒａｔｉｏｎ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  Ｆａｃｔｏｒ（ＭＩＦ）ｉｎ  ＤＵ−１４５  Ｐｒｏｓｔａｔｅ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌｓ」，Ｊ．Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ  Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  Ｒｅｓ．，２０，７６９−７７８（２０００），Ｔ．Ｓｈｉｍｉｚｕら、「Ｈｉｇｈ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  Ｍｉｇｒａｔｉｏｎ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  Ｆａｃｔｏｒ  ｉｎ  Ｈｕｍａｎ  Ｍｅｌａｎｏｍａ  Ｃｅｌｌｓ  ａｎｄ  Ｉｔｓ  Ｒｏｌｅ  ｉｎ  Ｔｕｍｏｒ  Ｃｅｌｌ  Ｇｒｏｗｔｈ  ａｎｄ  Ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ」，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．，２６４，７５１−７５８（１９９９），Ｔａｋａｈａｓｈｉら、「Ｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  Ｍｉｇｒａｔｉｏｎ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  Ｆａｃｔｏｒ（ＭＩＦ）ｉｎ  ｔｈｅ  Ｍｅｃｈａｎｉｓｍ  ｏｆ  Ｔｕｍｏｒ  Ｃｅｌｌ  Ｇｒｏｗｔｈ」，Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．，４，７０７−７１４（１９９８））、心筋梗塞（Ｍ．Ｔａｋａｓｈａｓｈｉら、「Ｅｌｅｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｐｌａｓｍａ  Ｌｅｖｅｌｓ  ｏｆ  Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  Ｍｉｇｒａｔｉｏｎ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  Ｆａｃｔｏｒ  ｉｎ  Ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  Ａｃｕｔｅ  Ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ  Ｉｎｆａｒｃｔｉｏｎ」，Ａｍ．Ｊ．Ｃａｒｄｉｏｌ．，８９，２４８−２４９（２００２），Ｍ．Ｔａｋａｈａｓｈｉら、「Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  Ｍｉｇｒａｔｉｏｎ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  Ｆａｃｔｏｒ  ａｓ  ａ  Ｒｅｄｏｘ−Ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ  Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ｉｎ  Ｃａｒｄｉａｃ  Ｍｙｏｃｙｔｅｓ」，Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ  Ｒｅｓ．，５２，４３８−４４５（２００１），Ｃ．Ｍ．Ｙｕら、「Ｅｌｅｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｐｌａｓｍａ  Ｌｅｖｅｌ  ｏｆ  Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  Ｍｉｇｒａｔｉｏｎ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  Ｆａｃｔｏｒ  ｉｎ  Ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  Ａｃｕｔｅ  Ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ  Ｉｎｆａｒｃｔｉｏｎ」，Ａｍ．Ｊ．Ｃａｒｄｉｏｌ．，８８，７７４−７７７（２００１））、および敗血性ショック（Ｊ．Ｂｅｒｈｎａｇｅｎら、「ＭＩＦ  ｉｓ  ａ  Ｐｉｔｕｉｔａｒｙ−Ｄｅｒｉｖｅｄ  Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ｔｈａｔ  Ｐｏｔｅｎｔｉａｔｅｓ  Ｌｅｔｈａｌ  Ｅｎｄｏｔｏｘａｅｍｉａ」，Ｎａｔｕｒｅ，３６５，７５６−７５９（１９９３），Ｍ．Ｂｏｚｚａら、「Ｔａｒｇｅｔｅｄ  Ｄｉｓｒｕｐｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｍｉｇｒａｔｉｏｎ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｇｅｎｅ  Ｒｅｖｅａｌｓ  Ｉｔｓ  Ｃｒｉｔｉｃａｌ  Ｒｏｌｅ  ｉｎ  Ｓｅｐｓｉｓ」，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８９，３４１−３４６（１９９９），Ｔ．Ｃａｌａｎｄｒａら、「ＭＩＦ  ａｓ  ａ  Ｇｌｕｃｏｃｏｒｔｉｃｏｉｄ−Ｉｎｄｕｃｅｄ  Ｍｏｄｕｌａｔｏｒ  ｏｆ  Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ」，Ｎａｔｕｒｅ，３７７，６８−７１（１９９５），Ｔ．Ｃａｌａｎｄｒａら、「Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ  ｆｒｏｍ  Ｓｅｐｔｉｃ  Ｓｈｏｃｋ  ｂｙ  Ｎｅｕｔｒａｌｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  Ｍｉｇｒａｔｉｏｎ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  Ｆａｃｔｏｒ」，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．，６，１６４−１７０（２０００），Ｔ．Ｃａｌａｎｄｒａら、「Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  Ｍｉｇｒａｔｉｏｎ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  Ｆａｃｔｏｒ  ｉｓ  ａ  Ｃｒｉｔｉｃａｌ  Ｍｅｄｉａｔｏｒ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｅ  Ｃｅｌｌｓ  ｂｙ  Ｅｘｏｔｏｘｉｎｓ  ｏｆ  Ｇｒａｍ−Ｐｏｓｉｔｉｖｅ  Ｂａｃｔｅｒｉａ」，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９５，１１３８３−１１３８８（１９９８））のような多様な疾患において重要な役割を有することは多くの研究で実証されている。モノクローナル抗ＭＩＦ抗体またはポリクローナル抗ＭＩＦ抗体が敗血症の病理に影響し得るといういくつかの証拠があるが、それらの役割は、ヒトでは詳しく特徴付けられてはいない。しかし、敗血性ショックの間に、ＭＩＦは動物およびヒトの血漿で増大されて、モノクローナル抗体またはポリクローナル抗体によるＭＩＦ活性の遮断は、実験的に敗血症を誘発された動物の生存を顕著に改善する（Ｍ．��ｏｚｚａら、「Ｔａｒｇｅｔｅｄ  Ｄｉｓｒｕｐｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｍｉｇｒａｔｉｏｎ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｇｅｎｅ  Ｒｅｖｅａｌｓ  Ｉｔｓ  Ｃｒｉｔｉｃａｌ  Ｒｏｌｅ  ｉｎ  Ｓｅｐｓｉｓ」，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８９，３４１−３４６（１９９９），Ｔ．Ｃａｌａｎｄｒａら、「Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ  ｆｒｏｍ  Ｓｅｐｔｉｃ  Ｓｈｏｃｋ  ｂｙ  Ｎｅｕｔｒａｌｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  Ｍｉｇｒａｔｉｏｎ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  Ｆａｃｔｏｒ」，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．，６，１６４−１７０（２０００））。
【０００６】
ＭＩＦ活性の遮断は、多数のインヒビターで実証されている。ＭＩＦ酵素活性の遮断は、現在係属中の２００２年８月２３日提出の米国特許出願第１０／２２６，２９９号に示されるような多様な化合物で実証されている。例えば、米国特許第６，４９２，４２８号も参照のこと。抗体はまた、米国特許第６，０３０，６１５号に示されるようにＭＩＦ活性を遮断するためにも用いられている。ＭＩＦ発現はまた、現在係属中の１９９６年１０月２４日出願、米国特許出願第０８／７３８，９４７号、または上述のＭＩＦインヒビターの全てとともに利用可能である薬学的処方物をさらに実証する、米国特許第６，２６８，１５１号に開示されるようなアンチセンス技術を用いて阻害され得る。
【０００７】
リポポリサッカライド（ＬＰＳ）は、内因性の心筋収縮力を抑制し、そして敗血症および敗血性ショックを生じる心機能障害において重要であると考えられる（Ａ．Ｍ．Ｌｅｆｅｒ，「Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ｏｆ  ｃａｒｄｉｏｄｅｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎ  ｅｎｄｏｔｏｘｉｎ  ｓｈｏｃｋ」，Ｃｉｒｃ  Ｓｈｏｃｋ  補遺１：１−８（１９７９），Ｊ．Ｅ．Ｐａｒｒｉｌｌｏら、「Ａ  ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ  ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ  ｄｅｐｒｅｓｓａｎｔ  ｓｕｂｓｔａｎｃｅ  ｉｎ  ｈｕｍａｎｓ  ｗｉｔｈ  ｓｅｐｔｉｃ  ｓｈｏｃｋ．Ｓｅｐｔｉｃ  ｓｈｏｃｋ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ａ  ｒｅｄｕｃｅｄ  ｅｊｅｃｔｉｏｎ  ｆｒａｃｔｉｏｎ  ｈａｖｅ  ａ  ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ  ｆａｃｔｏｒ  ｔｈａｔ  ｄｅｐｒｅｓｓｅｓ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ｍｙｏｃａｒｔｄｉａｌ  ｃｅｌｌ  ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ」，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．７６：１５３９−１５５３（１９８５），Ｊ．Ｍ．Ｒｅｉｌｌｙら、「Ａ  ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ  ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ  ｄｅｐｒｅｓｓａｎｔ  ｓｕｂｓｔａｎｃｅ  ｉｓ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ｃａｒｄｉａｃ  ｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ  ｈｙｐｏｐｅｒｆｕｓｉｏｎ（ｌａｃｔｉｃ  ａｃｉｄｅｍｉａ）ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｓｅｐｔｉｃ  ｓｈｏｃｋ」，Ｃｈｅｓｔ．９５：１０７２−１０８０（１９８９））。ＴＮＦ−α、ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＩＬ−１８、およびマクロファージ遊走阻止因子（ＭＩＦ）を含む、多くの炎症誘発性サイトカインが、ＬＰＳチャレンジ後に放出されており、観察された心機能障害を直接媒介することが示されている（Ｏ．Ｃｏｕｒｔら、「Ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｒｅｖｉｅｗ：Ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ  ｄｅｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｓｅｐｓｉｓ  ａｎｄ  ｓｅｐｔｉｃ  ｓｈｏｃｋ」，Ｃｒｉｔ．Ｃａｒｅ  ６：５００−５０８（２００２），Ｌ．Ｂ．Ｇａｒｎｅｒら、「Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  ｍｉｇｒａｔｉｏｎ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  ｆａｃｔｏｒ  ｉｓ  ａ  ｃａｒｉｄａｃ−ｄｅｒｉｖｅｄ  ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ  ｄｅｐｒｅｓｓａｎｔ  ｆａｃｔｏｒ」，Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ  Ｈｅａｒｔ  Ｃｉｒｃ  Ｐｈｙｓｉｏｌ，２８５：Ｈ２５００−２５０９（２００３），Ｓ．Ｋｒｉｓｈｎａｇｏｐａｌａｎら、「Ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ  ｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｐａｔｉｅｎｔ  ｗｉｔｈ  ｓｅｐｓｉｓ」，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｃｒｉｔ．Ｃａｒｅ  ８：３７６−３８８（２００２））。本発明者らは近年、マクロファージ遊走阻止因子（ＭＩＦ）を致死量未満の内毒素チャレンジ（内毒素中毒症）のモデルにおける心臓由来の心筋抑制因子として記載した（Ｌ．Ｂ．Ｇａｒｎｅｒら、「Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  ｍｉｇｒａｔｉｏｎ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  ｆａｃｔｏｒ  ｉｓ  ａ  ｃａｒｄｉａｃ−ｄｅｒｉｖｅｄ  ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ  ｄｅｐｒｅｓｓａｎｔ  ｆａｃｔｏｒ」，Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ  Ｈｅａｒｔ  Ｃｉｒｃ．Ｐｈｙｓｉｏｌ  ２８５：Ｈ２５００−２５０９（２００３））。ＬＰＳチャレンジによって、炎症誘発性サイトカインＭＩＦの恒常的な存在は最大１２時間まで放出が誘発される。このモデルにおけるＭＩＦの放出は、心機能障害���並行であって、ＭＩＦはＬＰＳチャレンジ後に遅れて媒介することが示された。抗ＭＩＦ抗体によるＭＩＦの中和は、８時間で有意な保護の開始を生じ、そして４８時間までに完全に消滅した（（Ｌ．Ｂ．Ｇａｒｎｅｒら、「Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  ｍｉｇｒａｔｉｏｎ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  ｆａｃｔｏｒ  ｉｓ  ａ  ｃａｒｄｉａｃ−ｄｅｒｉｖｅｄ  ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ  ｄｅｐｒｅｓｓａｎｔ  ｆａｃｔｏｒ」，Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ  Ｈｅａｒｔ  Ｃｉｒｃ．Ｐｈｙｓｉｏｌ  ２８５：Ｈ２５００−２５０９（２００３）））。ＭＩＦは、その遅延型の放出およびメディエーターの下流でブロックする能力において前述のサイトカインのなかでも独特である。
【０００８】
研究者らは以前に、内毒素血症の間に生じた心筋におけるＴＮＦαレベルと収縮の機能不全との間の時間的な不一致を報告している（Ｘ．Ｍｅｎｇら、「ＴＮＦ−α  ａｎｄ  ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ  ｄｅｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎ  ｅｎｄｏｘｔｏｘｅｍｉｃ  ｒａｔｓ：ｔｅｍｐｏｒａｌ  ｄｉｓｃｏｒｄａｎｃｅ  ｏｆ  ａｎ  ｏｂｌｉｇａｔｏｒｙ  ｒｅｌａｔｉｏｎｈｓｈｉｐ」，Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ  ２７５：Ｒ５０２−５０８（１９９８））。すなわち、心機能不全は、ＴＮＦαレベルがベースラインに戻るまでおこらず、このことは、ＴＮＦαが、敗血症において機能障害をより直接的に企てる他の心臓抑制については、重要な指標的シグナルであることを示唆する。これらの初期のサイトカインについての重要性は未知であるが、抗ＩＬ−１βおよび抗ＴＮＦαの様式のような敗血性ショックの初期のメディエーターに対する治療上のストラテジーは、ヒトでの臨床試験で試験されており、疾患プロセスにおけるその早期の出現におそらく起因して、利点は観察されていない（Ｃ．Ｊ．Ｆｉｓｈｅｒら、「Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  ｈｕｍａｎ  ｉｎｅｒｌｅｕｋｉｎ  １  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｓｅｐｓｉｓ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ．Ｒｅｓｕｌｔｓ  ｆｒｏｍ  ａ  ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ，ｄｏｕｂｌｅ−ｂｌｉｎｄ，ｐｌａｃｅｂｏ−ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  ｔｒｉａｌ」，Ｐｈａｓｅ  ＩＩＩ  ｒｈＩＬ−Ｉｒａ  Ｓｅｐｓｉｓ  Ｓｙｎｄｒｏｍｖｅ  Ｓｔｕｄｙ  Ｇｒｏｕｐ，Ｊａｍａ，２７１：１８３６−１８４３（１９９４），Ｃ．Ｊ．Ｆｉｓｈｅｒら、「Ｉｎｉｔｉａｌ  ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｓｅｐｓｉｓ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ：ａ  ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ，ｏｐｅｎ−ｌａｂｅｌ，ｐｌａｃｅｂｏ−ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  ｍｕｌｔｉｃｅｎｔｅｒ  ｔｒｉａｌ」，Ｔｈｅ  ＩＬ−ＩＲＡ  Ｓｅｐｓｉｓ  Ｓｙｎｄｒｏｍｅ  Ｓｔｕｄｙ  Ｇｒｏｕｐ，Ｃｒｉｔ．Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ．，２２：１２−２１（１９９４），Ｃ．Ｎａｔａｎｓｏｎら、「Ｓｅｌｅｃｔｅｄ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ  ｆｏｒ  ｓｅｐｔｉｃ  ｓｈｏｃｋ  ｂａｓｅｄ  ｏｎ  ｐｒｏｐｏｓｅｄ  ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ｏｆ  ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ」，Ａｎｎ．Ｉｎｔｅｒｎ．Ｍｅｄ．，１２０：７７１−７８３（１９９４），Ｋ．Ｒｅｉｎｈａｒｔら、「Ａｎｔｉ−ｔｕｍｏｒ
ｎｅｃｒｏｓｉｓ  ｆａｃｔｏｒ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｉｎ  ｓｅｐｓｉｓ：ｕｐｄａｔｅ  ｏｎ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｔｒｉａｌｓ  ａｎｄ  ｌｅｓｓｏｎｓ  ｌｅａｒｎｅｄ」，Ｃｒｉｔ．Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ．，２９：Ｓ１２１−１２５（２００１））。
【０００９】
マクロファージ遊走阻止因子（ＭＩＦ）は、敗血症を含むいくつかの疾患の病理に関与する。ＭＩＦは、グルココルチコイドの抗炎症性効果に対抗し、また組織代謝を有意に変更する。ＭＩＦは偏在性に発現されると思われるが、ＭＩＦがインビボにおいて心筋で発現されるか否か、または敗血症の間の心筋もしくは他の組織からのＭＩＦの放出が心臓の能力に有害に影響し得るか否かを示す刊行物は現在ない。
【００１０】
敗血症の間の心機能障害（Ｏ．Ｃｏｕｒｔら、「Ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｒｅｖｉｅｗ：Ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ  ｄｅｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｓｅｐｓｉｓ  ａｎｄ  ｓｅｐｔｉｃ  ｓｈｏｃｋ」，Ｃｒｉｔ．Ｃａｒｅ，６：５００−５０８（２００２），Ｓ．Ｋｒｉｓｈｎａｇｏｐａｌａｎら、「Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  Ｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｐａｔｉｅｎｔ  ｗｉｔｈ  Ｓｅｐｓｉｓ」，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｃｒｉｔ．Ｃａｒｅ，８，３７６−３８８（２００２））は、ヒト（Ｐ．Ａｍｍａｎｎら、「Ｅｌｅｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｔｒｏｐｏｎｉｎ  Ｉ  ｉｎ  Ｓｅｐｓｉｓ  ａｎｄ  Ｓｅｐｔｉｃ  Ｓｈｏｃｋ」，Ｉｎｔｅｎｓｉｖｅ  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ．，２７，９６５−９６９（２００１），Ｃ．Ｎ．Ｓｅｓｓｌｅｒら、「Ｎｅｗ  Ｃｏｎｃｅｐｔｓ  ｉｎ  Ｓｅｐｓｉｓ」，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｃｒｉｔ．Ｃａｒｅ，８，４６５−４７２（２００２））および動物（Ｍ．Ｂｏｚｚａら、「Ｔａｒｇｅｔｅｄ  Ｄｉｓｒｕｐｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｍｉｇｒａｔｉｏｎ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｇｅｎｅ  Ｒｅｖｅａｌｓ  Ｉｔｓ  Ｃｒｉｔｉｃａｌ  Ｒｏｌｅ  ｉｎ  Ｓｅｐｓｉｓ」，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１８９，３４１−３４６（１９９９），Ｔ．Ｃａｌａｎｄｒａら、「Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ  ｆｒｏｍ  Ｓｅｐｔｉｃ  Ｓｈｏｃｋ  ｂｙ  Ｎｅｕｔｒａｌｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  Ｍｉｇｒａｔｉｏｎ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  Ｆａｃｔｏｒ」，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．，６，１６４−１７０（２０００））の両方のモデルにおいて転帰が劣っている。敗血症または熱傷関連心機能障害は主に、ＴＮＦ−αを含む循環中の心筋抑制因子に起因することが以前に実証されている（Ｂ．Ｐ．Ｇｉｒｏｉｒら、「Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｔｕｍｏｒ  Ｎｅｃｒｏｓｉｓ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｐｒｅｖｅｎｔｓ  Ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ  Ｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ  Ｄｕｒｉｎｇ  Ｂｕｒｎ  Ｓｈｏｃｋ」，Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．，２６７，Ｈ１１８−Ｈ１２４（１９９４），Ｈａｕｄｅｋら、「Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ  Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ  ＮＦ  Ｋａｐｐａ  Ｂ  Ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ  Ａｃｕｔｅ  ｏｒ  Ｃｈｒｏｎｉｃ  ＴＮＦ−α  Ｅｘｐｏｓｕｒｅ」，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ  Ｃａｒｄｉｏｌ．，３３，１２６３−１２７１（２００１），Ａ．Ｋｕｍａｒら、「Ｔｕｍｏｒ  Ｎｅｃｒｏｓｉｓ  Ｆａｃｔｏｒ  Ａｌｐｈａ  ａｎｄ  Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ  １  Ｂｅｔａ  ａｒｅ  Ｒｅｓｐｏｎｓｉｂｌｅ  ｆｏｒ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  Ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｄｅｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｉｎｄｕｃｅｄ  ｂｙ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｐｔｉｃ  Ｓｈｏｃｋ  Ｓｅｒｕｍ」，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１８３，９４９−９５８（１９９６））。しかし、ＴＮＦαは、指標となる急速応答サイトカインであり、心筋機能障害の決定の数日または数週間前に循環中からなくなるので、さらなる心筋抑制タンパク質が存在し得るか否かを見出すための必要性は依然として存在する。
【００１１】
生きた細菌を利用する研究では、Ｅ．ｃｏｌｉの腹腔内投与の直接注射、または盲腸結紮穿刺（ＣＬＰ）のいずれかによって、ＭＩＦの血漿および／または腹水レベルがチャレンジ後数時間増大すること、およびＭＩＦに対する抗体が致死的な細菌性腹膜炎からマウスを保護することが以前に実証されている（Ｔ．Ｃａｌａｎｄｒａら、「Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ  ｆｒｏｍ  ｓｅｐｔｉｃ  ｓｈｏｃｋ  ｂｙ  ｎｅｕｔｒａｌｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  ｍｉｇｒａｔｉｏｎ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  ｆａｃｔｏｒ」，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．，６，１６４−１７０（２０００））。さらに、マウスは、抗体が感染の開始後８時間程度遅れて与えられた場合、保護された（Ｔ．Ｃａｌａｎｄｒａら、「Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ  ｆｒｏｍ  ｓｅｐｔｉｃ  ｓｈｏｃｋ  ｂｙ  ｎｅｕｔｒａｌｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  ｍｉｇｒａｔｉｏｎ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  ｆａｃｔｏｒ」，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．，６，１６４−１７０（２０００））。
【００１２】
ＭＩＦは、多数の特性を有し、それによってサイトカインの中でも独特である。ＭＩＦは、リンパ球、マクロファージおよび下垂体前葉を含む多数の細胞タイプから放出される（Ｊ．Ｂｅｒｎｈａｇｅｎら、「Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｉｍｍｕｎｅ  Ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｂｙ  Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  Ｍｉｇｒａｔｉｏｎ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  Ｆａｃｔｏｒ：Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  Ｆｅａｔｕｒｅｓ」，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．，７６，１５１−１６１（１９９８），Ｔ．Ｃａｌａｎｄｒａら、「Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  Ｍｉｇｒａｔｉｏｎ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  Ｆａｃｔｏｒ（ＭＩＦ）：Ａ  Ｇｌｕｃｏｃｏｒｔｉｃｏｉｄ  Ｃｏｕｎｔｅｒ−Ｒｅｇｕｌａｔｏｒ  Ｗｉｔｈｉｎ  ｔｈｅ  Ｉｍｍｕｎｅ  Ｓｙｓｔｅｍ」，Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１７，７７−８８（１９９７），Ｓ．Ｃ．Ｄｏｎｎｅｌｌｙら、「Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  Ｍｉｇｒａｔｉｏｎ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  Ｆａｃｔｏｒ：Ａ  Ｒｅｇｕｌａｔｏｒ  ｏｆ  Ｇｌｕｃｏｃｏｒｔｉｃｏｉｄ  Ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｗｉｔｈ  ａ  Ｃｒｉｔｉｃａｌ  Ｒｏｌｅ  ｉｎ  Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  Ｄｉｓｅａｓｅ」，Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．Ｔｏｄａｙ，３，５０２−５０７（１９９７），Ｒ．Ａ．Ｍｉｔｃｈｅｌｌら、「Ｔｕｍｏｒ  Ｇｒｏｗｔｈ−Ｐｒｏｍｏｔｉｎｇ  Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ  ｏｆ  Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  Ｍｉｇｒａｔｉｏｎ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  Ｆａｃｔｏｒ（ＭＩＦ）」，Ｓｅｍｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｂｉｏｌ．，１０，３５９−３６６（２０００））。しかし、ＭＩＦの供給源のリストは、増え続けており、これには、肺、肝臓、副腎、脾臓、腎臓、皮膚、筋肉、胸腺、皮膚および精巣のような他の組織が挙げられる（Ｍ．Ｂａｃｈｅｒら、「Ｍｉｇｒａｔｉｏｎ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｌｙ  Ｉｎｄｕｃｅｄ  Ｅｎｄｏｔｏｘｅｍｉａ」，Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．，１５０，２３５−２４６（１９９７），Ｇ．Ｆｉｎｇｅｒｌｅ−Ｒｏｗｓｏｎら、「Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  Ｍｉｇｒａｔｉｏｎ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｂｙ  Ｇｌｕｃｏｃｏｒｔｉｃｏｉｄｓ  ｉｎ  ｖｉｖｏ」，Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ，１６２，４７−５６（２００３））。ＭＩＦは、タウトメラーゼおよびオキシドレダクターゼ活性という別個の少なくとも２つの触媒性活性を有する。このために、ＭＩＦタウトメラーゼ活性の薬理学的なインヒビターが、敗血症、急性呼吸窮迫性症候群（ＡＲＤＳ）、喘息、アトピー性皮膚炎、関節リウマチ、腎症およびガンのようなＭＩＦ関連性疾患の処置のために開発されている（Ａ．Ｄｉｏｓら、「Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ＭＩＦ  Ｂｉｏａｃｔｉｖｉｔｙ  ｂｙ  Ｒａｔｉｏｎａｌ  Ｄｅｓｉｇｎ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｏｆ  ＭＩＦ  Ｔａｕｔｏｍｅｒａｓｅ  Ａｃｔｉｖｉｔｙ」，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，４５，２４１０−２４１６（２００２），Ｍ．Ｏｒｉｔａら、「Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  Ｍｉｇｒａｔｉｏｎ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  Ｆａｃｔｏｒ  ａｎｄ  ｔｈｅ  Ｄｉｓｃｏ���ｅｒｙ  ｏｆ  Ｔａｕｔｏｍｅｒａｓｅ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ」，Ｃｕｒｒ．Ｐｈａｒｍ．Ｄｅｓ．，８，１２９７−１３１７（２００２））。これらの疾患は、抗ＭＩＦ抗体に由来する利点を示している。
【００１３】
いくつかの研究で、ＭＩＦが直接の機構および間接的な機構によって効果を発揮し得ることが示されている。以前の研究では、ＭＩＦが他の炎症促進性サイトカインの放出およびその薬力学的効果を促進するという証拠が得られている。アンチセンスＭＩＦ  ｃＤＮＡを発現するマクロファージ（内因性ＭＩＦを少なくさせる）は、有意に少ないＴＮＦα、ＩＬ−６およびＮＯを分泌／発現するが、ＮＦ−κＢ活性はＬＰＳに応答して低下する（４４）。従って、ＭＩＦは、ＬＰＳシグナル伝達経路と間接的に相互作用し得ると考えられる（Ｈ．Ｌｕｅら、「Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  Ｍｉｇｒａｔｉｏｎ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  Ｆａｃｔｏｒ（ＭＩＦ）：Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ｏｆ  Ａｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｒｏｌｅ  ｉｎ  Ｄｉｓｅａｓｅ」，Ｍｉｃｒｏｂｅｓ  Ｉｎｆｅｃｔ．，４，４４９−４６０（２００２））。さらに、ＬＰＳの致死的な容量に対して耐性であるＭＩＦノックアウト（ＭＩＦＫＯ）マウスは、２００２年１２月１９日出願の米国特許出願番号（代理人番号９５５１−０９５−２７）に実証されているように、野生型マウスのベースラインに比較して低い循環血漿レベルのＴＮＦαを有する。ＬＰＳチャレンジの際、それらは、循環中のＴＮＦα濃度の低下、一酸化窒素（ＮＯ）濃度の増大、および未変化のＩＬ−６およびＩＬ−１２濃度を示す（Ｍ．Ｂｏｚｚａら、「Ｔａｒｇｅｔｅｄ  Ｄｉｓｒｕｐｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｍｉｇｒａｔｉｏｎ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｇｅｎｅ  Ｒｅｖｅａｌｓ  Ｉｔｓ  Ｃｒｉｔｉｃａｌ  Ｒｏｌｅ  ｉｎ  Ｓｅｐｓｉｓ」，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８９，３４１−３４６（１９９９））。ＭＩＦは、炎症促進性サイトカインを促進すると考えられるが、ＭＩＦの効果は、ＴＮＦαと独立した様式で作用することが示されている。ＣＬＰが、ＴＮＦ−αノックアウトマウスで行なわれた場合、野生型のマウスでの０％の生存率に比較して、抗ＭＩＦ抗体を投与されたマウスでは６０％の生存率がみられた（Ｔ．Ｃａｌａｎｄｒａら、「Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ  ｆｒｏｍ  Ｓｅｐｔｉｃ  Ｓｈｏｃｋ  ｂｙ  Ｎｅｕｔｒａｌｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  Ｍｉｇｒａｔｉｏｎ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  Ｆａｃｔｏｒ」，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．，６，１６４−１７０（２０００））。
【００１４】
敗血症に関してではなく心機能障害に関しては、血清ＭＩＦ濃度の上昇はまた、急性の心筋梗塞後に患者で記載されている（Ｍ．Ｔａｋａｈａｓｈｉら、「Ｅｌｅｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｐｌａｓｍａ  Ｌｅｖｅｌｓ  ｏｆ  Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  Ｍｉｇｒａｔｉｏｎ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  Ｆａｃｔｏｒ  ｉｎ  Ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  Ａｃｕｔｅ  Ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ  Ｉｎｆａｒｃｔｉｏｎ」，Ａｍ．Ｊ．Ｃａｒｄｉｏｌ．，８９，２４８−２４９（２００２），Ｍ．Ｔａｋａｈａｓｈｉら、「Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  Ｍｉｇｒａｔｉｏｎ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  Ｆａｃｔｏｒ  ａｓ  ａ  Ｒｅｄｏｘ−Ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ  Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ｉｎ  Ｃａｒｄｉａｃ  Ｍｙｏｃｙｔｅｓ」，Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ  Ｒｅｓ．，５２，４３８−４４５（２００１），Ｃ．Ｍ．Ｙｕら、「Ｅｌｅｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｐｌａｓｍａ  Ｌｅｖｅｌ  ｏｆ  Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  Ｍｉｇｒａｔｉｏｎ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  Ｆａｃｔｏｒ  ｉｎ  Ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  Ａｃｕｔｅ  Ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ  Ｉｎｆａｒｃｔｉｏｎ」，Ａｍ．Ｊ．Ｃａｒｄｉｏｌ．，８８，７７４−７７７（２００１））が、生理学的な妥当性は従来未知であった。同様に、培養された心筋細胞は、低酸素症および過酸化水素（フリー・ラジカル・イニシエーター）に応答してＭＩＦを放出するが、アンジオテンシンＩＩ、エンドセリン−１、ＩＬ−１βまたはＴＮＦ−αではないことが注記されている（Ｊ．Ｆｕｋｕｚａｗａら、「Ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  Ｆａｃｔｏｒ  ｔｏ  Ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｓｉｇｎａｌ−Ｒｅｇｕｌａｔｅｄ  Ｋｉｎａｓｅ  Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｂｙ  Ｏｘｉｄａｔｉｖｅ  Ｓｔｒｅｓｓ  ｉｎ  Ｃａｒｄｉｏｍｙｏｃｙｔｅｓ」，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７７，２４８８９−２４８９５，Ｍ．Ｔａｋａｈａｓｈｉら、「Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  Ｍｉｇｒａｔｉｏｎ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  Ｆａｃｔｏｒ  ａｓ  ａ  Ｒｅｄｏｘ−Ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ  Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ｉｎ  Ｃａｒｄｉａｃ  Ｍｙｏｃｙｔｅｓ」，Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ  Ｒｅｓ．，５２，４３８−４４５（２００１））。心筋のＭＩＦ放出を潜在的に誘発し得、それによって心機能に有害に影響する多くの臨床的なシナリオがある。心機能障害は、心筋細胞および心臓組織における任意の不規則な状態を通じて明らかになり得る。このような機能障害としては、限定はしないが、心筋炎、心内膜炎、心膜炎、リウマチ性心疾患、心筋梗塞、不整脈、細動、心臓性ショック、虚血、肥大、心筋症、狭心症、心雑音または動悸、心発作または心不全、および一般に先天性心疾患に関連する任意の症状または欠陥が挙げられる。
【００１５】
マクロファージ遊走阻止因子は、心臓を含む多くの器官で発現され、そして内毒素中毒症のマウスモデルにおいて遅延心臓機能障害に関連している（Ｇａｒｎｅｒら、「Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  Ｍｉｇｒａｔｉｏｎ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  Ｆａｃｔｏｒ  ｉｓ  Ａ  Ｃａｒｄｉａｃ−Ｄｅｒｉｖｅｄ  Ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ  Ｄｅｐｒｅｓｓａｎｔ  Ｆａｃｔｏｒ」，Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｈｅａｒｔ  Ｃｉｒｃ．Ｐｈｙｓｉｏｌ，２５８，Ｈ２５００−Ｈ２５０９（２００３））。
【００１６】
熱傷は、心拍出量の減少、ショックおよび左室不全に関与する、心臓の損傷および収縮機能障害を生じる（Ｊ．Ｔ．Ｍｕｒｐｈｙら、「Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｔｒｏｐｏｎｉｎ−Ｉ  ａｓ  Ａｎ  Ｉｎｄｉｃａｔｏｒ  ｏｆ  Ｃａｒｄｉａｃ  Ｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ  Ａｆｔｅｒ  Ｔｈｅｒｍａｌ  Ｉｎｊｕｒｙ，４５，７００−７０４，（１９９８），Ｅ．Ｍ．Ｒｅｙｎｏｌｄｓら、「Ｌｅｆｔ  Ｖｅｎｔｒｉｃｕｌａｒ  Ｆａｉｌｕｒｅ  Ｃｏｍｐｌｉｃａｔｉｎｇ  Ｓｅｖｅｒｅ  Ｐｅｄｉａｔｒｉｃ  Ｂｕｒｎ  Ｉｎｊｕｒｉｅｓ」，Ｊ．Ｐｅｄｉａｔｒ．Ｓｕｒｇ．３０，２６４−２６９；  ｄｉｓｃｕｓｓｉｏｎ  ２６９−２７０（１９９５），Ｗ．Ｃ．Ｓｈｏｅｍａｋｅｒら、ｋ「Ｂｕｒｎ  Ｐａｔｈｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ  Ｉｎ  Ｍａｎ．Ｉ．Ｓｅｑｕｅｎｔｉａｌ  Ｈｅｍｏｄｙｎａｍｉｃ  Ａｌｔｅｒａｔｉｏｎｓ，Ｊ．Ｓｕｒｇ．Ｒｅｓ．，１４，６４−７３（１９７３），Ｒ．Ｒ．Ｗｏｌｆｅら、「Ｒｅｖｉｅｗ：Ａｃｕｔｅ  Ｖｅｒｓｕｓ  Ｃｈｒｏｎｉｃ  Ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｔｏ  Ｂｕｒｎ  Ｉｎｊｕｒｙ」，Ｃｉｒｃ．Ｓｈｏｃｋ，８，１０５−１１５（１９８１））。これらの収縮性の欠損は、熱傷の後２時間程度の早期に生じると報告されている（Ｊ．Ｗ．Ｈｏｒｔｏｎら、「Ｐｏｓｔｂｕｒｎ  Ｃａｒｄｉａｃ  Ｃｏｎｔｒａｃｔｉｌｅ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｍａｒｋｅｒｓ  ｏｆ  Ｐｏｓｔｂｕｒｎ  Ｃａｒｄｉａｃ  Ｉｎｊｕｒｙ」，Ｊ．Ａｍ．Ｃｏｌｌ．Ｓｕｒｇ．，１８１，２８９−２９８（１９９５））。いくつかの近年の研究では、腸に由来する因子に応答して、トール様レセプター４（Ｔｌｒ−４）、ＩＲＡＫおよびＮＦ−ｋＢを含む内毒素シグナル伝達経路に関与する早期の分子事象が解明されている（Ｄ．Ｌ．Ｃａｒｌｓｏｎら、「Ｉ  Ｋａｐｐａ  Ｂ  Ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎ  Ｃａｒｄｉｏｍｙｏｃｙｔｅｓ  Ｐｒｅｖｅｎｔｓ  ＮＦ−κ  Ｂ  Ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｐｒｏｖｉｄｅｓ  Ｃａｒｄｉｏｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ  ｉｎ  Ｔｒａｕｍａ」，Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｈｅａｒｔ  Ｃｉｒｃ．Ｐｈｙｓｉｏｌ，２８４，Ｈ８０４−８１４（２００３），Ｊ．Ｔ．Ｓａｍｂｏｌら、「Ｂｕｒｎ−Ｉｎｄｕｃｅｄ  Ｉｍｐａｉｒｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｃａｒｄｉａｃ  Ｃｏｎｔｒａｃｔｉｌｅ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｉｓ  Ｄｕｅ  ｔｏ  Ｇｕｔ−Ｄｅｒｉｖｅｄ  Ｆａｃｔｏｒｓ  Ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｄ  ｉｎ  Ｍｅｓｅｎｔｅｒｉｃ  Ｌｙｍｐｈ」，Ｓｈｏｃｋ，１８，２７２−２７６（２００２），Ｊ．Ａ．Ｔｈｏｍａｓら、「ＩＲＡＫ  Ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅｓ  ｔｏ  Ｂｕｒｎ−Ｔｒｉｇｇｅｒｅｄ  Ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ  Ｃｏｎｔｒａｃｔｉｌｅ  Ｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ」，Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｈｅａｒｔ  Ｃｉｒｃ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．，２８３，Ｈ８２９−８３６（２００２），Ｊ．Ａ．Ｔｈｏｍａｓら、「ＴＬＲ４  Ｉｎａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｒＢＰＩ（２１）Ｂｌｏｃｋ  Ｂｕｒｎ−Ｉｎｄｕｃｅｄ  Ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ  Ｃｏｎｔｒａｃｔｉｌｅ  Ｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ」，Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｈｅａｒｔ  Ｃｉｒｃ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．，２８３，Ｈ１６４５−１６５５（２００２））。
【００１７】
Ｔｌｒ−４レセプターを通じた内毒素シグナル伝達は、心機能障害に関連する熱傷の最初の経路を示すが、他の研究者らは、早期の下流の媒介因子としては、ＴＮＦα、ＩＬ−１βおよびＩＬ−６が挙げられるということを実証している（Ｈ．Ｌｕｅら、「Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  Ｍｉｇｒａｔｉｏｎ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  Ｆａｃｔｏｒ（ＭＩＦ）：Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ｏｆ  Ａｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｒｏｌｅ  ｉｎ  Ｄｉｓｅａｓｅ」，Ｍｉｃｒｏｂｅｓ  Ｉｎｆｅｃｔ．，４，４４９−４６０（２００２））。実験的に、ＴＮＦ−αがブロックされれば、熱傷関連の心機能障害は軽減され、このことは機能障害の重要な調節因子としてのその重要性を強調する（Ｂ．Ｐ．Ｇｉｒｏｉｒら、「Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｔｕｍｏｒ  Ｎｅｃｒｏｓｉｓ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｐｒｅｖｅｎｔｓ  Ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ  Ｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  Ｄｕｒｉｎｇ  Ｂｕｒｎ  Ｓｈｏｃｋ」，Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．，２６７，Ｈ１１８−１２４（１９９４））。抗ＩＬ−１βおよび抗ＴＮＦαの形態のような敗血性ショックの早期のメディエーターに対する治療ストラテジーが、ヒトでの臨床試験で試験されている場合、疾患のプロセスにおけるその早期の出現におそらく起因して利点は観察されていない（Ｃ．Ｊ．Ｆｉｓｈｅｒ  Ｊｒ．ら、「Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  Ｈｕｍａｎ  Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ  １  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  Ｓｅｐｓｉｓ  Ｓｙｎｄｒｏｍｅ，Ｒｅｓｕｌｔｓ  ｆｒｏｍ  ａ  Ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ，Ｄｏｕｂｌｅ−Ｂｌｉｎｄ，Ｐｌａｃｅｂｏ−Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｔｒｉａｌ」，Ｐｈａｓｅ  ＩＩＩ  ｒｈＩＬ−１ｒａ  Ｓｅｐｓｉｓ  Ｓｙｎｄｒｏｍｅ  Ｓｔｕｄｙ  Ｇｒｏｕｐ，Ｊａｍａ．２７１，１８３６−１８４３（１９９４），Ｃ．Ｊ．Ｆｉｓｈｅｒら、「Ｉｎｉｔｉａｌ  Ｅｖａｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｈｕｍａｎ  Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｓｅｐｓｉｓ
Ｓｙｎｄｒｏｍｅ：Ａ  Ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ，Ｏｐｅｎ−Ｌａｂｅｌ，Ｐｌａｃｅｂｏ−Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｍｕｌｔｉｃｅｎｔｅｒ  Ｔｒｉａｌ」，Ｔｈｅ  ＩＬ−ＩＲＡ  Ｓｅｐｓｉｓ  Ｓｙｎｄｒｏｍｅ  Ｓｔｕｄｙ  Ｇｒｏｕｐ，Ｃｒｉｔ．Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ．，２２，１２−２１（１９９４），Ｃ．Ｎａｔａｎｓｏｎら、「Ｓｅｌｅｃｔｅｄ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ  ｆｏｒ  Ｓｅｐｔｉｃ  Ｓｈｏｃｋ
Ｂａｓｅｄ  ｏｎ  Ｐｒｏｐｏｓｅｄ  Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ｏｆ  Ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ」，Ａｎｎ．Ｉｎｔｅｒｎ．Ｍｅｄ．，１２０，７７１−７８３（１９９４），Ｋ．Ｒｅｉｎｈａｒｔら、「Ａｎｔｉ−Ｔｕｍｏｒ  Ｎｅｃｒｏｓｉｓ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｔｈｅｒｅａｐｙ  ｉｎ  Ｓｅｐｓｉｓ：Ｕｐｄａｔｅ  ｏｎ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｔｒａｉｌｓ  ａｎｄ  Ｌｅｓｓｏｎｓ  Ｌｅａｒｎｅｄ」，Ｃｒｉｔ．Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ．，２９，Ｓ１２１−１２５（２００１））。
【００１８】
近年では、マクロファージ遊走阻止因子（ＭＩＦ）として公知のサイトカインは、敗血症の死亡率において重要な役割を果たすことが示されている（Ｈ．Ｌｕｅら、「Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  Ｍｉｇｒａｔｉｏｎ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  Ｆａｃｔｏｒ（ＭＩＦ）：Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ｏｆ  Ａｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｒｏｌｅ  ｉｎ  Ｄｉｓｅａｓｅ」，Ｍｉｃｏｒｂｅｓ  Ｉｎｆｅｃｔ．，４，４４９−４６０（２００２））。実際、抗ＭＩＦ治療は、発作発症後８時間までに与えられた場合でさえ、敗血症の致死的モデル（盲腸結紮穿刺）において生存を有意に改善することが示されている（Ｔ．Ｃａｌａｎｄｒａら、「Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ  Ｆｒｏｍ  Ｓｅｐｔｉｃ  Ｓｈｏｃｋ  Ｂｙｎｅｕｔｒａｌｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  Ｍｉｇｒａｔｉｏｎ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  Ｆａｃｔｏｒ」，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．，６，１６４−１７０（２０００））。さらに、ＭＩＦは、ＡＲＤＳ（Ｋ．Ｎ．Ｌａｉら、「Ｒｏｌｅ  Ｆｏｒ  Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  Ｍｉｇｒａｔｉｏｎ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  Ｆａｃｔｏｒ  ｉｎ  Ａｃｕｔｅ  Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ  Ｄｉｓｔｒｅｓｓ  Ｓｙｎｄｒｏｍｅ」，Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．，１９９，４９６−５０８（２００３））、熱傷の一般的な合併症（Ｍ．Ｂｈａｔｉａら、「Ｒｏｌｅ  ｏｆ  Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  Ｍｅｄｉａｔｏｒｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｐａｔｈｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ａｃｕｔｅ  Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ  Ｄｉｓｔｒｅｓｓ  Ｓｙｎｄｒｏｍｅ」，Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．，２０２，１４５−１５６（２００４））において重要な役割を果たすことが示されている。次いで、本研究の目的は、熱傷の十分規定されたマウスモデルを用いて、熱傷関連の心罹患率の有用な治療標的としてＭＩＦを同定および特徴付けるものであった（Ｇａｒｎｅｒら、「Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  Ｍｉｇｒａｔｉｏｎ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  Ｆａｃｔｏｒ  ｉｓ  ａ  Ｃａｒｄｉａｃ−Ｄｅｒｉｖｅｄ  Ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ  Ｄｅｐｒｅｓｓａｎｔ  Ｆａｃｔｏｒ」，Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｈｅａｒｔ  Ｃｉｒｃ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．，２８５，Ｈ２５００−２５０９（２００３））。
【００１９】
従って、現在治療が利用可能でない、心臓抑制、心機能障害、熱傷関連の罹患率および心臓保護のための治療の必要性が依然として存在する。
【００２０】
米国特許第６，０３０，６１５号は、サイトカイン媒介性の毒性によって生じる疾患を処置するための方法および組成物に関する。
【００２１】
米国特許第６，４２０，１８８号は、ＭＩＦ活性を拮抗する方法および組成物、ならびにこの活性に基づいて種々の疾患を処置する方法に関する。
【００２２】
米国特許第６，５９９，９３８号は、ＭＩＦ活性を拮抗する方法および組成物、ならびにこの活性に基づいて種々の疾患を処置する方法に関する。
【００２３】
米国特許第６，６４５，４９３号は、ＭＩＦの放出および／または生物学的活性を阻害するための組成物および方法に関する。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００２４】
（発明の要旨）
本発明の１実施形態は、心機能障害をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、心筋活性における不規則性をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、心筋活性における抑制をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、熱傷に関連する心機能障害をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、急性心筋梗塞後の心機能障害をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、心臓抑制をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、およびその組み合わせを含む群より選択される少なくとも１つについて有効な薬学的組成物であって、
有効な量の少なくとも１つの抗ＭＩＦ抗体と、
少なくとも１つの薬学的に受容可能なキャリアと、
を含む薬学的組成物に関する。
【００２５】
本発明の別の実施形態は、心機能障害をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、心筋活性における不規則性をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、心筋活性における抑制をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、熱傷に関連する心機能障害をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、急性心筋梗塞後の心機能障害をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、心臓抑制をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、およびその組み合わせを含む群より選択される少なくとも１つについて有効な薬学的組成物であって、
有効な量の少なくとも１つの抗ＣＤ７４抗体と、
有効な量の少なくとも１つの薬学的に受容可能なキャリアと、
を含む薬学的組成物に関する。
【００２６】
本発明の別の実施形態は、心機能障害をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、心筋活性における不規則性をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、心筋活性における抑制をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、熱傷に関連する心機能障害をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、急性心筋梗塞後の心機能障害をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、心臓抑制をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、およびその組み合わせからなる群より選択される少なくとも１つについて有効な薬学的組成物であって、
有効な量の少なくとも１つの抗ＴＮＦＲ抗体と、
有効な量の少なくとも１つの抗ＭＩＦ抗体と、
少なくとも１つの薬学的に受容可能なキャリアと、
を含む薬学的組成物に関する。
【００２７】
本発明の別の実施形態は、被験体における心機能障害を処置および／または予防するための方法であって、
有効量の少なくとも１つの抗ＭＩＦ抗体をこの被験体に投与する工程、
を包含する方法に関する。
【００２８】
本発明の別の実施形態は、被験体における熱傷関連心機能障害を処置および／または予防するための方法であって、
有効量の少なくとも１つの抗ＭＩＦ抗体をこの被験体に投与する工程、
を包含する方法に関する。
【００２９】
本発明の別の実施形態は、被験体における心機能障害を処置および／または予防するための方法であって、
有効量の少なくとも１つの抗ＣＤ７４抗体をこの被験体に投与する工程、
を包含する方法に関する。
【００３０】
本発明の別の実施形態は、急性心筋梗塞後の被験体における心機能を改善するための方法であって、
有効量の少なくとも１つの抗ＭＩＦ抗体をこの被験体に投与する工程、
を包含する方法に関する。
【００３１】
本発明の別の実施形態は、ＭＩＦインヒビターを同定するための方法であって、
少なくとも１つの筋細胞を少なくとも１つのＭＩＦに対して曝露する工程；
少なくとも１つのＭＩＦ関連筋細胞活性を決定する工程；
この筋細胞をこのＭＩＦおよび少なくとも１つの候補因子に対して曝露する工程；
この候補因子の存在下でこのＭＩＦ関連筋細胞活性を決定する工程；
この候補因子がこのＭＩＦ関連筋細胞活性に影響するか否かを決定する工程、
を包含する方法に関する。
【００３２】
本発明の別の実施形態は、急性心筋梗塞後の被験体における心機能障害を処置および／または予防するための方法であって、
この被験体に対して、有効な量の少なくとも１つの抗ＴＮＦＲ抗体と有効な量の少なくとも１つの抗ＭＩＦ抗体とを投与する工程、
を包含する方法に関する。
【００３３】
本発明の別の実施形態は、被験体における心機能障害を処置および／または予防するための方法であって、
この被験体に対して、有効な量の少なくとも１つの抗ＭＩＦ抗体を投与する工程、
を包含する方法に関する。
【００３４】
本発明の別の実施形態は、被験体における熱傷関連の心機能障害を処置および／または予防するための方法であって、
この被験体に対して、少なくとも１つの抗ＭＩＦ抗体と少なくとも１つの薬学的に受容可能なキャリアとを含む組成物の有効な量を投与する工程、
を包含する方法に関する。
【００３５】
本発明の別の実施形態は、被験体における心機能障害を処置および／または予防するための方法であって、
この被験体に対して、少なくとも１つの抗ＣＤ７４抗体と少なくとも１つの薬学的に受容可能なキャリアとを含む組成物の有効な量を投与する工程、
を包含する方法に関する。
【００３６】
本発明の別の実施形態は、急性心筋梗塞後の被験体における心機能を改善するための方法であって、
この被験体に対して、少なくとも１つの抗ＭＩＦ抗体と少なくとも１つの薬学的に受容可能なキャリアとを含む組成物の有効な量を投与する工程、
を包含する方法に関する。
【００３７】
本発明の別の実施形態は、急性心筋梗塞後の被験体における心機能障害を処置または予防するための方法であって、
この被験体に対して、少なくとも１つの抗ＴＮＦＲ抗体と、少なくとも１つの抗ＭＩＦ抗体と、少なくとも１つの薬学的に受容可能なキャリアとを含む組成物の有効な量を投与する工程、
を包含する方法に関する。
【００３８】
本発明の別の実施形態は、心機能障害をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、心筋活性における不規則性をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、心筋活性における抑制をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、熱傷に関連する心機能障害をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、急性心筋梗塞後の心機能障害をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、心臓抑制をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、およびその組み合わせを含む群より選択される少なくとも１つのための方法であって、低分子ＭＩＦインヒビター、その塩、そのプロドラッグおよびそれらの組み合わせを含む群より選択される少なくとも１つの有効な量をこの被験体に投与する工程を包含する方法に関する。
【００３９】
本発明の別の実施形態は、心機能障害をその処置または予防が必要な被験体において処置または予防すること、心筋活性における不規則性をその処置または予防が必要な被験体において処置または予防すること、心筋活性における抑制をその処置または予防が必要な被験体において処置または予防すること、熱傷に関連する心機能障害をその処置または予防が必要な被験体において処置または予防すること、急性心筋梗塞後の心機能障害をその処置または予防が必要な被験体において処置または予防すること、心臓抑制をその処置または予防が必要な被験体において処置または予防すること、およびその組み合わせを含む群より選択される少なくとも１つのための方法であって、少なくとも１つの抗ＴＮＦＲ抗体の有効な量と必要に応じて少なくとも１つの薬学的に受容可能なキャリアとをその必要な被験体に投与する工程を包含する方法に関する。
本発明はさらに、以下の項目を提供する。
（項目１）
心機能障害をその処置または予防が必要な被験体において処置または予防すること、心筋活性における不規則性をその処置または予防が必要な被験体において処置または予防すること、心筋活性における抑制をその処置または予防が必要な被験体において処置または予防すること、熱傷に関連する心機能障害をその処置または予防が必要な被験体において処置または予防すること、急性心筋梗塞後の心機能障害をその処置または予防が必要な被験体において処置または予防すること、心臓抑制をその処置または予防が必要な被験体において処置または予防すること、ならびにそれらの組み合わせからなる群より選択される少なくとも１つのために有効な薬学的組成物であって、
有効な量の少なくとも１つの抗ＭＩＦ抗体と、
少なくとも１つの薬学的に受容可能なキャリアと、
を含む、薬学的組成物。
（項目２）
少なくとも１つのＣＤ７４インヒビターをさらに含む、項目１に記載の薬学的組成物。
（項目３）
上記ＣＤ７４インヒビターが少なくとも１つの抗ＣＤ７４抗体を含む、項目２に記載の薬学的組成物。
（項目４）
心機能障害をその処置または予防が必要な被験体において処置または予防すること、心筋活性における不規則性をその処置または予防が必要な被験体において処置または予防すること、心筋活性における抑制をその処置または予防が必要な被験体において処置または予防すること、熱傷に関連する心機能障害をその処置または予防が必要な被験体において処置または予防すること、急性心筋梗塞後の心機能障害をその処置または予防が必要な被験体において処置または予防すること、心臓抑制をその処置または予防が必要な被験体において処置または予防すること、ならびにそれらの組み合わせからなる群より選択される少なくとも１つのために有効な薬学的組成物であって、
有効な量の少なくとも１つの抗ＣＤ７４抗体と、
少なくとも１つの薬学的に受容可能なキャリアと、
を含む、薬学的組成物。
（項目５）
心機能障害をその処置または予防が必要な被験体において処置または予防すること、心筋活性における不規則性をその処置または予防が必要な被験体において処置または予防すること、心筋活性における抑制をその処置または予防が必要な被験体において処置または予防すること、熱傷に関連する心機能障害をその処置または予防が必要な被験体において処置または予防すること、急性心筋梗塞後の心機能障害をその処置または予防が必要な被験体において処置または予防すること、心臓抑制をその処置または予防が必要な被験体において処置または予防すること、ならびにそれらの組み合わせからなる群より選択される少なくとも１つのために有効な薬学的組成物であって、
有効な量の少なくとも１つの抗ＴＮＦＲ抗体と、
有効な量の少なくとも１つの抗ＭＩＦ抗体と、
少なくとも１つの薬学的に受容可能なキャリアと、
を含む、薬学的組成物。
（項目６）
被験体における心機能障害を処置または予防するための方法であって、
有効量の少なくとも１つの抗ＭＩＦ抗体を該被験体に投与する工程、
を包含する、方法。
（項目７）
上記心機能障害が、心筋活性における不規則性、心筋活性における抑制、およびそれらの組み合わせからなる群より選択される、項目６に記載の方法。
（項目８）
被験体における熱傷関連心機能障害を処置または予防するための方法であって、
有効量の少なくとも１つの抗ＭＩＦ抗体を該被験体に投与する工程、
を包含する、方法。
（項目９）
上記熱傷関連の心機能障害が、心筋活性における不規則性、心筋活性における抑制、およびそれらの組み合わせからなる群より選択される、項目８に記載の方法。
（項目１０）
被験体における心機能障害を処置または予防するための方法であって、
有効量の少なくとも１つの抗ＣＤ７４抗体を該被験体に投与する工程、
を包含する、方法。
（項目１１）
急性心筋梗塞後の被験体における心機能を改善するための方法であって、
有効量の少なくとも１つの抗ＭＩＦ抗体を該被験体に投与する工程、
を包含する、方法。
（項目１２）
心機能障害をその処置または予防が必要な被験体において処置または予防すること、心筋活性における不規則性をその処置または予防が必要な被験体において処置または予防すること、心筋活性における抑制をその処置または予防が必要な被験体において処置または予防すること、熱傷に関連する心機能障害をその処置または予防が必要な被験体において処置または予防すること、急性心筋梗塞後の心機能障害をその処置または予防が必要な被験体において処置または予防すること、心臓抑制をその処置または予防が必要な被験体において処置または予防すること、ならびにそれらの組み合わせからなる群より選択される少なくとも１つのための方法であって、
該必要な被験体に対して、有効な量の少なくとも１つの抗ＴＮＦＲ抗体と、必要に応じて、少なくとも１つの薬学的に受容可能なキャリアとを投与する工程
を包含する、方法。
（項目１３）
ＭＩＦインヒビターを同定するための方法であって、
少なくとも１つの筋細胞を少なくとも１つのＭＩＦに対して曝露する工程；
少なくとも１つのＭＩＦ関連筋細胞活性を決定する工程；
該筋細胞を該ＭＩＦおよび少なくとも１つの候補因子に対して曝露する工程；
該候補因子の存在下で該ＭＩＦ関連筋細胞活性を決定する工程；
該候補因子が該ＭＩＦ関連筋細胞活性に影響するか否かを決定する工程、
を包含する、方法。
（項目１４）
急性心筋梗塞後の被験体における心機能障害を処置または予防するための方法であって、
該被験体に対して、有効な量の少なくとも１つの抗ＴＮＦＲ抗体と有効な量の少なくとも１つの抗ＭＩＦ抗体とを投与する工程、
を包含する、方法。
（項目１５）
被験体における心機能障害を処置または予防するための方法であって、
該被験体に対して、有効な量の少なくとも１つの抗ＭＩＦ抗体を投与する工程、
を包含する、方法。
（項目１６）
被験体における熱傷関連の心機能障害を処置または予防するための方法であって、
該被験体に対して、少なくとも１つの抗ＭＩＦ抗体と少なくとも１つの薬学的に受容可能なキャリアとを含む組成物の有効な量を投与する工程、
を包含する、方法。
（項目１７）
被験体における心機能障害を処置または予防するための方法であって、
該被験体に対して、少なくとも１つの抗ＣＤ７４抗体と少なくとも１つの薬学的に受容可能なキャリアとを含む組成物の有効な量を投与する工程、
を包含する、方法。
（項目１８）
急性心筋梗塞後の被験体における心機能を改善するための方法であって、
該被験体に対して、少なくとも１つの抗ＭＩＦ抗体と少なくとも１つの薬学的に受容可能なキャリアとを含む組成物の有効な量を投与する工程、
を包含する、方法。
（項目１９）
急性心筋梗塞後の被験体における心機能障害を処置または予防するための方法であって、
該被験体に対して、少なくとも１つの抗ＴＮＦＲ抗体と、少なくとも１つの抗ＭＩＦ抗体と、少なくとも１つの薬学的に受容可能なキャリアとを含む組成物の有効な量を投与する工程、
を包含する、方法。
（項目２０）
心機能障害をその処置または予防が必要な被験体において処置または予防すること、心筋活性における不規則性をその処置または予防が必要な被験体において処置または予防すること、心筋活性における抑制をその処置または予防が必要な被験体において処置または予防すること、熱傷に関連する心機能障害をその処置または予防が必要な被験体において処置または予防すること、急性心筋梗塞後の心機能障害をその処置または予防が必要な被験体において処置または予防すること、心臓抑制をその処置または予防が必要な被験体において処置または予防すること、ならびにそれらの組み合わせからなる群より選択される少なくとも１つのための方法であって、低分子ＭＩＦインヒビター、該低分子ＭＩＦインヒビターの塩、該低分子ＭＩＦインヒビターのプロドラッグおよびそれらの組み合わせからなる群より選択される少なくとも１つの有効な量を該被験体に投与する工程を包含する、方法。
【図面の簡単な説明】
【００４０】
前述の説明は、添付の図面と組み合わせて読む場合、さらによく理解される。本発明を例示する目的のためには、現在好ましい実施形態を図面に示しているが、本発明は、示される詳細な配置および手段には限定されないことが理解される。
【図１】図１：ＭＩＦタンパク質放出は、心臓組織におけるＬＰＳチャレンジの１２時間内に検出される。各々のデータポイントは、独立したウエスタンブロット実験の平均（＋／−標準誤差）である。代表的なウエスタンブロットは、グラフの下に示す。＊ｐ＜０．０５。
【図２】図２：ＬＰＳチャレンジは、心臓組織においてＭＩＦ  ｍＲＮＡを上方制御しない。グラフ中の各々のデータポイントは３つの独立したノーザンブロット実験の平均（＋／−標準誤差）である。代表的なノーザンブロットは以下のグラフに示す。時点の間で有意な相違は同定されなかった（ｐ＞０．０５）。
【図３】図３：ＬＰＳチャレンジの前後の心臓、肝臓および脾臓中のＭＩＦの存在。心臓、肝臓および脾臓（Ａ、Ｄ、Ｇ）中で予備形成されたＭＩＦは、ＬＰＳチャレンジ後１２時間低下して（Ｂ、ＥおよびＨ）、免疫組織化学によって実証されるとおり２４時間（Ｃ、Ｆおよび１）後に再補充される（Ｃ、ＦおよびＩ）。倍率：１００×（腎臓、脾臓）、４００×（心臓）。
【図４】図４：Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウス、および内毒素耐性Ｃ３Ｈ／ＨｅＪマウスにおいて、ｒＭＩＦチャレンジ後のＬａｎｇｅｎｄｏｒｆｆ調製によって決定した心機能は、ｒＭＩＦがＬＰＳとは独立した機構で心機能障害を媒介することを実証する。データは、１群あたり平均７（Ｃ３Ｈ／ＨｅＪ）〜１０（Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ）の独立したＬａｎｇｅｎｄｏｒｆｆ実験の平均を示す。＊ｐ＜０．０５。
【図５】図５：心機能に対する、ＬＰＳおよびＬＰＳに加えて抗ＭＩＦ抗体の投与の効果の心エコー評価。野生型マウスでのベースラインおよびＬＰＳ投与後８時間の代表的なＭモード心エコー図がそれぞれＡおよびＢ。ＣおよびＤは、それぞれ、ＬＰＳに加えて抗ＭＩＦ処理したマウスにおける８時間および４８時間の代表的な心エコー図。抗ＭＩＦ抗体を事前処置に与えた場合、心機能の有意な保護（ＦＳ％）がＬＰＳチャレンジマウスで観察されている（Ｅ）。データは、複数の時点モニターした３匹のマウス由来の９つの心周期の平均を示す。＊ｐ＜０．０５。
【図６】図６：ＬＰＳチャレンジ後の抗ＭＩＦ抗体でのＭＩＦの阻害を実証する火傷モデル。この火傷データは、抗ＭＩＦ抗体でのＭＩＦの阻害を実証し、そして火傷後の心機能を修復する。
【図７】図７：熱傷後の心臓からのＭＩＦ放出速度を実証するグラフ表示。マクロファージ遊走阻止因子（ＭＩＦ）は、心臓組織において恒常的に発現され、そして熱傷後最大８時間放出される。各々のデータポイントは、３つの独立したウエスタンブロット実験の平均密度の任意単位（Ａ．Ｕ．）／ｍｍ２±ＳＥを示す。代表的なウエスタンブロットを下のグラフに示す。一元ＡＮＯＶＡおよびＴｕｋｅｙ法を用いる多重比較手順を使用して、コントロール群に比較した統計学的有意性を決定した（＊ｐ＜０．０５）。
【図８】図８：種々の組織サンプル中のＭＩＦの存在を実証する免疫化学染色スライド。心臓、肝臓、脾臓、肺および腎臓に構成的に存在するインサートＧ−ＭＩＦは、熱傷後に減少する。心臓、腎臓および脾臓（Ａ、Ｅ、Ｉ）中で予備形成されたＭＩＦは、免疫組織化学によって実証されるとおり、肝臓（Ｍ、Ｎ）を除いて、火傷の８時間後低下して（Ｂ、Ｆ、Ｊ）、そして心臓および腎臓（Ｃ、Ｇ）では２４時間で増大するが、心臓および肝臓（Ｋ、Ｏ）では増大しない。陰性のコントロール（一次抗ＭＩＦ抗体なしの二次抗体）は、右端の列（Ｄ、Ｈ、Ｌ、Ｐ）で示されるように検討した各々の器官において各々の時点でバックグウンド染色が存在しないことを一貫して実証する。倍率：１００×（腎臓、脾臓、肝臓）、４００×（心臓）。
【図９】図９：熱傷後の３つの異なるサイトカインの濃度変化の経時的なグラフ表示。図９−熱傷後のＭＩＦ（ｎｇ／ｍｌ）、ＩＬ−１２（ｐｇ／ｍｌ）およびＩｌ−６（ｐｇ／ｍｌ）の血清濃度（それぞれＡ〜Ｃ）。データは、ＥＬＩＳＡによって決定される場合、６匹のＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスの平均±ＳＥとして表しており、そしてＢｏｎｆｅｒｒｏｎｉ法を使用して多重比較手順による１元ＡＮＯＶＡを用いて統計学的に分析して、群間の有意差を決定する（＊ｐ＜０．０５、ベースラインに対して比較）。
【図１０】図１０：熱傷後のＭＩＦ  ｍＲＮＡの上方制御を示すグラフ表示および代表的なノーザンブロット。熱傷は心臓組織におけるＭＩＦ  ｍＲＮＡの発現を８時間まで有意に上方制御する。ＭＩＦおよびβアクチンのｍＲＮＡは、ＭＩＦおよびβアクチンのｍＲＮＡに相補的な３２Ｐ放射性標識プローブを用いて検出した。各々のデータポイントは、３つの独立したノーザンブロット実験の平均密度の任意単位（Ａ．Ｕ．）／ｍｍ２±ＳＥを示す。代表的なノーザンブロットを下のグラフに示す。正規化したＭＩＦは、ＭＩＦ密度と存在する相対的なβアクチン密度を掛けることによって決定した。一元ＡＮＯＶＡおよびＴｕｋｅｙ法を用いる多重比較手順を使用して、ベースラインに比較した統計学的有意性を決定した（＊ｐ＜０．０５）。
【図１１】図１１：冠血流速度のグラフ表示であって、流速のコントロール測定と、未処置の熱傷対抗ＭＩＦで処置した熱傷とを比較する３つの異なる方法で算出した。熱傷後１８時間の、冠血流（Ａ）およびＣａ２＋の関数としての、Ｌａｎｇｅｎｄｏｒｆｆ調製による心機能決定。心機能は、２５の独立したＬａｎｇｅｎｄｏｒｆｆ実験の平均±ＳＥとして表す（１１がニセ、９つが熱傷、５つが抗ＭＩＦ処置後の熱傷）。処置群の関数として、各々のＬＶＰ、＋ｄＰ／ｄｔｍａｘおよび−ｄＰ／ｄｔｍａｘ、そして冠血流速度について、反復測定ＡＮＯＶＡおよびＢｏｎｆｅｒｒｏｎｉ法を使用する多重比較手順を用いて、別々の分析を行なって、群間の有意差を決定した（＊ｐ＜０．０５）。
【図１２】図１２：ＭＩＦ遮断の心保護効果を実証する熱傷後の抗ＭＩＦ抗体治療の効果の心エコーおよびグラフの表示。熱傷後の抗ＭＩＦ抗体治療の効果の心エコー評価によって、ＭＩＦ遮断の心保護効果が実証される。野生型マウスにおけるベースラインおよび熱傷８時間後の代表的なＭモードの心エコー、それぞれＡおよびＢ。ＣおよびＤは、熱傷に加えて抗ＭＩＦ処置したマウスでの、それぞれ４時間および４８時間の代表的な心エコー図を示す。心機能（ＦＳ％）の有意な回復が、熱傷前に抗ＭＩＦ抗体を与えた熱傷マウスで観察される（Ｅ）。各々の群由来のデータは、複数の時点でモニターした３匹のマウス由来の９つの心周期の平均±ＳＥに相当する。心エコー図によって決定した心機能は、円周短縮率％（ＬＶＥＤ−ＬＶＥＳ／ＬＶＥＤ×１００）±ＳＥとして表されて、１元反復測定ＡＮＯＶＡおよびＴｕｋｅｙ検定を使用する多重比較手順を用いて分析されて、特定の群の間の有意差が決定された。
【図１３】図１３：Ｅｎｂｒｅｌ（登録商標）で事前に処置した（６０分）、（Ａ）野生型マウス、（Ｂ）ＴＮＦＲ−／−マウス、および（Ｃ）野生型マウスにおける４ｍｇ／ｋｇの内毒素チャレンジ後の血清ＭＩＦ濃度（ベースラインからの倍数）。データは、Ｅｎｂｒｅｌ（登録商標）で事前に処置した、（Ａ）６  Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウス、（Ｂ）６  ＴＮＦＲ−／−マウス、および（Ｃ）３  Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ（Ｃ）のＭＩＦのベースラインレベルの画分（平均＋／−標準誤差）として表される。血清レベルは、ＥＬＩＳＡによって決定して、Ｂｏｎｆｅｒｒｏｎｉ法を使用する多重比較手順とともに１元ＡＮＯＶＡを用いて統計的に分析して、群間の有意差を決定した（＊ｐ＜０．０５、ベースラインに対して比較）。
【図１４】図１４：心組織におけるＬＰＳチャレンジ後、ＭＩＦタンパク質放出は検出されない。各々のデータポイントは３つの異なるウエスタンブロット実験の平均（＋／−標準誤差）である。代表的なウエスタンブロットを下のグラフに示す。＊ｐ＜０．０５。
【図１５】図１５：ＴＮＦＲ−／−マウスにおけるＬＰＳチャレンジ前後の心臓、肝臓および脾臓のＭＩＦの存在。心臓、肝臓および脾臓（Ａ、Ｄ、Ｇ）において事前形成されたＭＩＦは、ＬＰＳチャレンジの１２時間後低下せず（Ｂ、Ｆ、Ｊ）、これは免疫組織化学によって実証されるとおり野生型マウスでみられる。倍率：１００×（腎臓、脾臓）、４００×（心臓）。
【図１６】図１６：ＬＰＳチャレンジは、ＴＮＦＲ−／−マウスの心臓組織におけるＭＩＦ  ｍＲＮＡを上方制御しない。グラフ中の各々のデータポイントは、３つの独立したノーザンブロット実験の平均（＋／−標準誤差）である。代表的なノーザンブロットは、下のグラフに示す。時点の間で有意な相違は確認されなかった（ｐ＞０．０５）。
【図１７】図１７：Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ、Ｂ６／１２９ＳおよびＴＮＦＲ−／−マウスにおいてｒＭＩＦチャレンジ後のＬａｎｇｅｎｄｏｒｆｆ調製によって決定された心機能によって、ｒＭＩＦがエキソビボでＴＮＦαシグナル伝達とは独立して心機能障害を媒介することが実証される。データは、１群あたり６つ（Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ）、４つ（Ｂ６／１２９Ｓ）および４つ（ＴＮＦＲ−／−）の独立したＬａｎｇｅｎｄｏｒｆｆ実験の平均を示す。＊ｐ＜０．０５。
【図１８】図１８：ＴＮＦＲ−／−マウスにおける心機能に対する、ＬＰＳおよびＬＰＳに加えて抗ＭＩＦ抗体の投与の効果の心エコー評価。野生型マウスでのベースラインおよびＬＰＳ投与４時間後の代表的なＭモード心エコー図がそれぞれＡおよびＢ。ＣおよびＤは、それぞれ、ＬＰＳに加えて抗ＭＩＦ処理したマウスにおける４時間および４８時間の代表的な心エコー図。抗ＭＩＦ抗体を事前処置に与えた場合、心機能の有意な保護（ＦＳ％）がＬＰＳチャレンジマウスで観察されている（Ｅ）。データは、複数の時点でモニターした３匹のマウス由来の９つの心周期の平均を示す。＊ｐ＜０．０５。
【図１９】図１９：野生型およびＴＮＦＲ−／−マウスにおけるＬＰＳチャレンジ後の血清サイトカイン。炎症性サイトカインのパネルは、（Ａ）ＴＮＦ−α、（Ｂ）ＩＬ−１β、（Ｃ）ＩＦＮ−γ、（Ｄ）ＩＬ−１２、（Ｅ）ＩＬ−１０、＝（Ｆ）ＩＬ−６、（Ｇ）ＧＭ−ＣＳＦ、およびＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５（データ示さず）についてＬｕｍｉｎｅｘプラットフォームでアッセイした。データは、各々の時点において３つの独立した実験マウス由来の血清サイトカイン濃度の平均＋／−標準誤差として表す。
【図２０】図２０：抗ＭＩＦ事前処置（９０分）の有無におけるＬＰＳチャレンジ後の野生型における血清サイトカインの決定。変調したサイトカインを示している：Ｌｕｍｉｎｅｘプラットフォーム上でアッセイした、（Ａ）ＩＦＮ−γおよび（Ｂ）ＩＬ−１０。データは、３つの独立した実験のマウスの各々の時点でに由来する血清サイトカイン濃度の平均＋／−標準誤差として表される。
【図２１】図２１：ＬＡＤ結紮後の心機能（円周短縮率）をＬＡＤのみと抗ＭＩＦ＋ＬＡＤで比較する。
【図２２】図２２：ＬＡＤ前の抗ＭＩＦ治療の効果をＬＡＤのみと抗ＭＩＦ＋ＬＡＤで示す。
【図２３】図２３：いくつかの処置群についてのＬＡＤ後４８時間の心機能データを示す。
【図２４】図２４：ＬＡＤの４８時間後の血清トロポニン濃度を事前の抗ＭＩＦ処置と遅延した抗ＭＩＦ処置で示す。
【図２５】図２５：結紮後２週間にわたる血清トロポニンＩおよびＭＩＦの濃度を示す。
【図２６】図２６：器官のＣＤ７４の構成的発現および心臓ＣＤ７４のＬＰＳチャレンジ後発現を示す。
【図２７】図２７：ＬＰＳチャレンジ後ｔ＝０〜ｔ＝４８時間のいくつかの群の心エコー／円周短縮率を示す。
【図２８】図２８：ＬＰＳチャレンジ後の血清ｓＣＤ７４放出を示す。
【図２９】図２９：ＣＤ７４シリーズのゲルを示す。表５も参照のこと。
【図３０】図３０：ＣＤ７４ＫＯマウスにおける、冠血流速度対、ＬＶＰ、＋ｄＰ／ｄＴ  ｍａｘおよび−ｄＰ／ｄｔ  ｍａｘを示す。
【図３１】図３１．結紮後の時間対、コントロールの円周短縮率、低分子ＭＩＦインヒビター＋ＤＭＳＯ／ＭＩおよびＤＭＳＯ／ＭＩを示す。
【発明を実施するための形態】
【００４１】
（発明の詳細な説明）
本発明の種々の他の目的、特徴および付随する利点は、他に示さない限り、限定はしないが、本発明の以下の詳細な説明からよりよく理解されるのと同じようにさらに詳細に理解される。
【００４２】
本発明の１つの好ましい実施形態は、心臓由来の心筋抑制因子としてマクロファージ遊走阻止因子（ＭＩＦ）に関与する処置方法およびバイオアッセイに関する。
【００４３】
本発明の１つの好ましい実施形態は、熱傷に関連する心機能障害の処置および／または予防の方法に関する。
【００４４】
本発明の１つの好ましい実施形態は、心筋梗塞のための治療としてのＭＩＦの調節に関する。
【００４５】
本発明の１つの好ましい実施形態は、心機能障害におけるＴＮＦ−αの調節に関する。
【００４６】
本発明の１つの好ましい実施形態は、ＣＤ７４の阻害による心保護の方法に関する。
【００４７】
本発明の１つの好ましい実施形態は、抗ＭＩＦ抗体によるＭＩＦの調節に関する。
【００４８】
本発明の１つの好ましい実施形態は、ＭＩＦ活性を阻害する因子を同定するためのバイオアッセイに関する。
【００４９】
本発明の１つの好ましい実施形態は、抗ＭＩＦ抗体でのＭＩＦの阻害および心機能の付随する回復（火傷後）に関する。
【００５０】
本発明の１つの好ましい実施形態は、抗ＭＩＦ抗体の投与による熱傷関連心臓抑制の改善のための方法に関する。
【００５１】
本発明の１つの好ましい実施形態は、抗ＭＩＦ抗体の投与による急性心筋梗塞後の心臓機能の改善に関する。
【００５２】
本発明の１つの好ましい実施形態は、心臓、肝臓および脾臓からのＭＩＦの放出が、ＴＮＦ−αレセプターＩ／ＩＩシグナル伝達に依存しており、従ってＴＮＦ−αは治療標的であり得るという観察に関する。
【００５３】
本発明の１つの好ましい実施形態は、組み換えヒトＴＮＦＲ：ＦｃでのＴＮＦ−αの中和に関する。
【００５４】
本発明の１つの好ましい実施形態は、１つ以上の抗ＭＩＦ抗体でのＭＩＦ活性の中和に関する。
【００５５】
本発明の１つの好ましい実施形態は、ＭＩＦの上流のメディエーターとしてのＴＮＦ−αの発見に関する。
【００５６】
本発明の１つの好ましい実施形態は、ＣＤ７４（ＭＩＦレセプター）が、心筋細胞で発現され、そして心機能障害の「重要な（ｃｒｉｔｉｃａｌ）」メディエーターであるという観察に関する。
【００５７】
本発明の１つの好ましい実施形態は、ＭＩＦの阻害および１つ以上の抗ＣＤ７４モノクローナル中和抗体でＣＤ７４レセプターを阻害することによる心保護の改善に関する。
【００５８】
本発明の１つの好ましい実施形態は、心筋活性の不規則性または抑制のような心機能障害を処置および／または予防するための方法に関する。この方法は好ましくは、マクロファージ遊走阻止因子（ＭＩＦ）インヒビターを含む組成物の有効量を投与する工程を包含する。このインヒビターは抗体であってもよい。このインヒビターは、タウトメラーゼ活性またはオキシドレダクターゼ活性のような酵素活性を含む、特定のＭＩＦ活性に影響し得る。
【００５９】
本発明の１つの好ましい実施形態は、ＭＩＦ活性を阻害する因子を同定するためのアッセイに関する。このアッセイは好ましくは、筋細胞を、インビトロまたはインビボのいずれかで、そしてＭＩＦを、ＭＩＦ活性を阻害し得る因子の有無において、その両方を包含する。このアッセイは、例えば、ＭＩＦおよび潜在的なインヒビターの存在に基づいて、免疫組織化学または心エコーのようなツールを用いて、筋細胞活性を分析する。
【００６０】
本発明の１つの好ましい実施形態は、ＭＩＦ活性を阻害する因子を同定するためにこのアッセイを用いる方法であって、ＭＩＦ活性を阻害し得る因子の存在下に筋細胞およびＭＩＦを置く工程、筋細胞活性に対するその影響を決定する工程とを包含する方法に関する。筋細胞は、インビトロであってもインビボであってもよく、そしてその効果は、免疫組織化学または心エコー図を利用して測定されてもよい。
【００６１】
本発明者らは、ＭＩＦが心筋の障害の誘発因子であり、ヒトの敗血症の罹患率および死亡率に有意に寄与することが公知であるということを見出している。ヒト患者および動物の両方のモデルにおいて、敗血症関連心機能障害は、両室の拡張、収縮期収縮性の低下、および拡張期弛緩の低下によって特徴付けられる。理論によって束縛されることは望まないが、その病原性は多因子性であって、その発現の誘発に関与する腫瘍壊死因子α（ＴＮＦα）のような全身および心筋に由来するサイトカインによると考えられる。
【００６２】
本発明の１実施形態は、ＭＩＦまたは他の心臓由来タンパク質が、自己分泌または傍分泌機構によって、敗血症および他の心疾患において心機能障害を媒介するか否かを決定する工程に関する。マウスにおける心臓の遺伝子発現のマイクロアレイ分析をスクリーニングすることによって、ＭＩＦが心臓で発現されること、およびリポポリサッカライド（ＬＰＳ）チャレンジ後に示差的に調節されることが示唆される。ＭＩＦ阻害が実験的な敗血症を有する動物において転帰を改善するというデータを考慮し、以下の実施例を構築して、ＭＩＦがインビボで心筋細胞によって発現されるか否か、この発現がエンドトキシンチャレンジによって偏向されるか否か、そしてＭＩＦが心機能に対して生理学的に重要な効果を有することが確認された。本明細書の実施例のいくつかによって、インビボの心臓ＭＩＦ発現が実証され、そしてＭＩＦがインビボで致死量未満の内毒素チャレンジにおいて心機能を抑制することが確認される。
【００６３】
ＭＩＦは、正常な心筋において構成的に発現され、そして、内毒素チャレンジ後に心筋細胞によって放出されて、心臓組織レベルはチャレンジ後１２時間で最低に達する。遅延型放出を支持する証拠は、心臓および脾臓の組織から１２時間の有意な放出を実証している、ウエスタンブロットおよび免疫組織化学によって本出願において示されており、そして８時間で開始してその後継続する心臓保護の遅延型発現によって間接的に支持される。抗ＭＩＦモノクローナル抗体を用いたＬＰＳをチャレンジされたマウスの処置によって、左室の円周短縮率の改善によって証明されるとおりインビボで心機能が有意に改善される。
【００６４】
ＭＩＦの心筋抑制効果をさらに実証するため、切り離された拍動中のマウス心臓（Ｌａｎｇｅｎｄｏｒｆｆ灌流）を、ある濃度の組み換えＭＩＦ（ｒＭＩＦ）を含有する溶液で灌流させた。ｒＭＩＦを用いた灌流によって、収縮および拡張性の能力の両方の有意な抑制が生じる。本発明者らは、ＭＩＦがインビボで心筋細胞によって合成され、ＬＰＳチャレンジ後に放出されるということを実証した。従って、ＭＩＦは心機能障害を直接媒介し、そしてＭＩＦは、敗血症および他の心疾患における心機能の改善の薬理学的標的として実証される。
【００６５】
心臓遺伝子発現に対するマイクロアレイデータによって、ＭＩＦは心臓組織においても発現されるということが強調される。本明細書におけるいくつかの実施例によって、ＭＩＦ灌流はインビトロにおいて心機能を直接抑制すること；そしてさらに、ＭＩＦに対する２つの独立したモノクローナル抗体のいずれかでの処置が後期の心筋抑制を軽減することが示される。
【００６６】
本発明の別の好ましい実施形態は、限定はしないが、心筋活性の不規則性または抑制のような心機能障害を含む、熱傷関連状態を処置および／または予防するための方法に関する。この方法は好ましくは、マクロファージ遊走阻止因子（ＭＩＦ）インヒビターを含む組成物の有効量を投与する工程を包含する。このインヒビターは、ＭＩＦ活性および／またはＭＩＦ産生を阻害し得る。このインヒビターは好ましくは、抗体またはタンパク質である。このインヒビターは、タウトメラーゼ活性またはオキシドレダクターゼ活性のような酵素活性を含む、特定のＭＩＦ活性に影響し得る。このインヒビターは、心筋組織におけるＭＩＦ活性またはＭＩＦ産生を阻害またはブロックし得る。このインヒビターはまた、ＡＢＣ輸送体のインヒビターのように、ＭＩＦ放出を阻害または予防し得る。
【００６７】
本発明の別の好ましい実施形態は、ＭＩＦの活性または産生を阻害する因子を同定するためのアッセイに関する。このアッセイは、心筋細胞を、インビトロまたはインビボのいずれかで、そしておそらくＭＩＦを、ＭＩＦ活性またはＭＩＦ産生を阻害する因子の有無において包含する。このアッセイは、ＭＩＦおよび潜在的なインヒビターの存在に基づいて、免疫組織学または心エコー図のようなツールを用いて、筋細胞活性を分析する。
【００６８】
本発明の１実施形態は、予防／処置の方法および診断のアッセイにおける火傷関連の心機能障害におけるＭＩＦの役割を利用する。マウス熱傷モデルを用いて（４０％ＴＢＳＡ）、本発明者らは、構成的な心臓ＭＩＦは、ウエスタンブロット分析によって決定されるように熱傷の８時間後、有意に低下した（２．１分の一）ことを確認した。血清ＭＩＦは、熱傷の４時間後に最大であった（２．２倍増大）。これらのパターンは、熱傷後の心臓および全身に由来する、事前に成形された細胞質貯蔵からのＭＩＦ放出と一致している。本明細書の実施例に示されるとおり、熱傷後にみられる心機能障害におけるＭＩＦの効果を決定するために、マウスを抗ＭＩＦ中和モノクローナル抗体で事前に処置した。熱傷の４時間後に開始（そして４８時間にわたって継続）して、熱傷のみを有するマウスは、３８．６＋／−１．８％（ニセのＦＳ％５６．０＋／−２．６％）という抑制された左室円周短縮率（ＦＳ％）を示した。抗ＭＩＦ処置マウスは、熱傷後に心機能改善の遅延を示し、機能の完全な回復は２４時間までであった。これによって、サイトカインＭＩＦは、熱傷関連心機能障害の遅延を媒介することが示され、そしてまた、ＭＩＦは熱傷関連心機能障害および他のＭＩＦ媒介性の合併症、例えば熱傷関連ＡＲＤＳの処置のための薬理学的標的であることが示される。
【００６９】
熱傷後、ＭＩＦは、４時間までに血清中に最大放出され（図９）；組織放出は、８時間まで最大になる（心臓および脾臓）（図７および８）。ＭＩＦが抗体によって中和される場合、心機能は１２時間まで有意に、そして２４時間で完全に改善して、これによって、ＭＩＦの調節は、熱傷後のインビボにおける心機能障害のメディエーターとして実証される（図１２）。
【００７０】
熱傷のマウスモデルでは、ＬＰＳがそのＴｌｒ−４（トール様レセプター４）との相互作用、およびそのＩＲＡＫ−１との相互作用を通じて関連の心機能障害を媒介することが実証されている。ＬＰＳの供給源は、熱傷に関連するいくつかの潜在的な損傷（ｉｎｓｕｌｔ）に起因して腸由来であると考えられる。これらとしては、腸の虚血、菌の移行、および腸透過性の増大が挙げられる。理論によって束縛されることは望まないが、炎症性因子の産生および放出は、腸関連リンパ組織を通じて全身性になると考えられる。
【００７１】
マウスでの致死量未満の内毒素中毒症のモデルでは（４ｍｇ／ｋｇ  ＬＰＳ）、ＭＩＦが、インビボにおける遅延型の心臓抑制効果を媒介したことが観察される。組み換えＭＩＦは、ＬＰＳと独立した方式でＬａｎｇｅｎｄｏｒｆｆアッセイによってエキソビボで直接的な心臓抑制を誘発することも確認されている。熱傷に関して、本発明の１実施形態は適切には、内毒素中毒症のモデルにおいて得られた観察と比較していくつかの利点を有する。第一に、ＭＩＦは、ＬＰＳチャレンジ（８時間）に比較して、火傷モデル（４時間、図７）では早期の時点で放出され、そして全身性のＭＩＦ濃度の増大は有意に高い（２．２倍増大（図９）対１．５倍）。第二に、心機能障害の程度は、心エコーによって測定されるとおり、内毒素中毒症モデルに比較して熱傷モデルにおいてそれほど大きくない。熱傷に関して、本発明者らは望ましくは、円周短縮率（心拍出量の評価）を、４時間の内毒素中毒症モデルでの５３．７％に比較して（６７．２ＦＳ％−３１．１ＦＳ％／６７．２ＦＳ％）、４時間までにベースラインから３８％低下（５６．２ＦＳ％−３４．８ＦＳ％／５６．２ＦＳ％）させることが可能である。ＭＩＦ阻害は、本発明の１実施形態によれば、２４時間までに完全な心保護を生じ（図１２）、これは、内毒素中毒症モデルでは４８時間まで生じないが、内毒素中毒症モデルでは８時間までに有意な保護が最初にみられ、そして熱傷モデルでは１２時間までない。これによって、ＭＩＦは熱傷関連心機能障害でさらに大きい役割を果たすことが実証される。最後に、心臓のＭＩＦ  ｍＲＮＡレベルの増大は、熱傷では８時間までに有意に増大して（図１０）、内毒素中毒症モデルでは４８時間まで増大されなかったことが確認された。熱傷の心臓効果は、腸由来ＬＰＳに関連することが示されているが、効力のある損傷（ｉｎｓｕｌｔ）は、それが、皮膚および腸に関与しており、さらに生理学的に関連する疾患プロセスであるという点で、内毒素中毒症モデルよりも複雑である。
【００７２】
ＭＩＦの中和は、１２時間で開始する心保護を生じ、そして顕著な心機能障害は、熱傷を有するマウスでは、４時間程度の早期に確認された（図１２）。ＴＮＦ−α、ＩＬ−１β、ＩＬ−６、およびＩＬ−１０が、心筋細胞によって分泌され、そしてＴＮＦ−αおよびＩＬ−１βが、心筋抑制の主なメディエーターである。本発明は、ＭＩＦ媒介性の心機能障害の前に生じる早期心機能障害においてこれらが役割を果たすことを考慮する。ＭＩＦは、心エコー検査によって示される抗ＭＩＦ処置（１２時間）の保護効果の直前（８時間）に心臓から局所的に放出されるので、本発明は、このモデルでは後期の時点でみられる心機能障害においてＭＩＦが重大な役割を果たすことを考慮する（熱傷後１２〜４８時間）。系統的に検討されたさらなる１０のサイトカインのうち（図９）、全身性のＩＬ−６およびＩＬ−１２のみが熱傷後に調節された。外科手術後の敗血症患者において報告されているように、全身性のＩＬ−１２レベルは最初の１２時間で有意に低下された。このＴＨ１サイトカインにおける低下は、敗血症における生存が、熱傷で同定されている感染に対する生得的な免疫応答の障害によって低下されるという１つの機構として仮説されている。
【００７３】
大きな熱傷は、組織における酸化的ストレスから生じる脂質過酸化の主な産物である、血漿および心臓のマロンジアルデヒド（ＭＤＡ）レベルの有意な増大を生じることが示されている。さらに、抗酸化療法は、酸化的ストレスの増大に対する、熱傷関連炎症性応答において、炎症性サイトカインの放出を減少させることが示されている。以前の研究によって、ＭＩＦは酸化的ストレス後の心筋細胞から分泌され、そして理論によって束縛はされないが、これはＭＩＦが放出される機構であり得るということが実証されている。Ｈ２Ｏ２によって開始される酸化的ストレスは、ＥＲＫ１／２シグナル伝達経路およびプロテインキナーゼＣの活性化を生じ、この後者がＭＩＦの分泌を担うと考えられる。従って、事前に形成されたＭＩＦの心臓放出は、心臓における酸化的ストレスの増大で開始され得、これがＭＩＦの放出をシグナルして（図７および８）、そしてその転写を上方制御（図１０）して、心筋細胞における貯蔵を再補充する。
【００７４】
ほとんどのサイトカインは、刺激後に上方制御される、緊密に制御された発現を有する。しかし、ＭＩＦは、かなりの量で予備形成されて、その発現は、新規なタンパク質合成にのみ依拠するのではなく、ＡＢＣ輸送体に関与する分泌機構によって制御される既存の貯蔵にも依拠する。ＭＩＦ遺伝子は、その役割がそれを小胞体に転位することである、Ｎ末端シグナル配列はコードしない。ＭＩＦは、小胞中のサイトゾルおよび核に主に位置しており、これが摘み取られて細胞の外側に放出される。従って、壊死性の細胞傷害は、事前に貯蔵されたＭＩＦの放出をもたらす。理論によって束縛されることは望まないが、以前の研究では、熱傷は本発明者らのモデルにおける皮膚壊死に関与することが明確に実証されているので、ＭＩＦ放出は、皮膚の壊死細胞から直接放出され得る。なぜならＭＩＦは、皮膚で同定されており、そして上皮の基底層に局在しているからである。
【００７５】
予備成形されたＭＩＦの壊死性の放出に加えて、損傷された上皮および線維芽細胞は、ＭＩＦの発現および分泌を増大することが示されている。例えば、アトピー性皮膚炎では、ＭＩＦは上方制御されて、疾患の病理学で中心的な役割を果たす。インビボでの全身のＵＶ  Ｂ被曝はＭＩＦ産生を増大させることが示されており、これによって、組織損傷におけるその関与が示唆される。損傷された上皮および培養された線維芽細胞はまた、創傷治癒プロセスに対して陽性に寄与するＭＩＦの発現を増大する。ＭＩＦの全身レベルは、火傷損傷の皮膚から放出されたＭＩＦに関与する因子に起因して、内毒素中毒症モデルに比較してこの熱傷モデルにおいては、さらに急速かつ劇的に増大し得る（熱傷モデルにおける４時間までの２．２倍対、内毒素中毒症モデルにおける８時間までの１．５倍の増大）。
【００７６】
ＭＩＦは、ＡＲＤＳおよび敗血症の肺合併症においてある役割を果たすと仮説されていることが示されている。抗ＭＩＦ治療は、敗血症に関連する急性の肺損傷において肺の好中球蓄積を低下させることが示されている。ＭＩＦは、ＡＲＤＳ患者由来の肺胞毛細管内皮および非浸潤性マクロファージにおいて発現される。ＭＩＦ発現は、ＡＲＤＳにおいてこれらの２つのサイトカインに対する重篤な炎症に効率的に関連するＴＮＦ−αとの増幅ループを形成することが示されている。ＡＲＤＳは、熱傷の重要かつ一般的な合併症であるので、本発明は、心臓保護適応以外で有用であり、そして転帰に深く影響する抗ＭＩＦ治療を考慮する。
【００７７】
ＭＩＦは、サイトカインのなかでも固有である。なぜなら、ＭＩＦは、オキシドレダクターゼおよびタウトメラーゼの活性を含む、多数の酵素活性を有するからである。そのタウトメラーゼ活性の阻害は、そのグルココルチコイドの主要な活性のような公知のＭＩＦ活性を相殺することが示されている。ＭＩＦタウトメラーゼ活性の薬理学的インヒビターは、敗血症、喘息、アトピー性皮膚炎および急性呼吸急迫症候群（ＡＲＤＳ）のような抗ＭＩＦ治療が有効である疾患のために開発されている。
【００７８】
サイトカインＭＩＦは、熱傷に関連する遅発性の心機能障害において重要な役割を果たす。ＭＩＦ自体は、直接の心臓抑制因子であり、そして心臓からの遅延型の放出を有する。ＭＩＦの遅延型の放出およびＭＩＦの活性を潜在的に阻害するインヒビターの開発によって、ＭＩＦは、その心肺効果に関連する罹患率および死亡率に関連して、疾患、例えば熱傷について潜在的な標的となる。
【００７９】
本発明の別の実施形態では、本発明者らは、心臓、肝臓および脾臓からのＭＩＦ放出がＬＰＳチャレンジ後のＴＮＦレセプターＩ／ＩＩシグナル伝達に依存することを見出した。さらに、本発明者らは、ＴＮＦレセプターＩ／ＩＩシグナル伝達がＭＩＦの血清への放出とは独立していることを確認する。ＴＮＦレセプターシグナル伝達なしに、ＭＩＦレベルは、わずかに遅延し（野生型での８時間に比較して１２〜２４時間）、そしてわずかに増大する（野生型での１．５倍の増大に比較して、ベースラインの１．７〜２．３倍）ようである。さらに、ＴＮＦレセプターＩ／ＩＩ欠損マウス（ＴＮＦＲ−／−）におけるＴＮＦレセプターと独立したＭＩＦ放出は、野生型マウスで以前に同定されている、組織からのＭＩＦ放出の欠乏にかかわらずＬＰＳチャレンジ後少なくとも２４時間まで心機能障害を媒介するのに十分である。早期の心機能障害がＴＮＦＲ−／−マウスで確認されており、そして理論によって束縛されることは望まないが、他の潜在的なメディエーター（例えば、ＩＬ−１８および他のメディエーター）に加えて、このモデルにおいて高度に発現されることを本発明者らが確認した公知のメディエーター（ＩＬ−１β、ＩＬ−６）におそらく起因すると考えられる。分離された心臓（Ｌａｎｇｅｎｄｏｒｆ調製）では、ＭＩＦは、即時的な（２０分内）の心機能障害（収縮期および拡張期）を、直接、ＴＮＦＲ−／−マウスおよび野生型マウスの両方で同じ程度まで誘発することが確認された。しかし、ＴＮＦＲ−／−マウスにおけるＬＰＳ誘発性心機能障害は、抗体でのＭＩＦ中和によって４８時間まで完全に消失され、これによって、ＴＮＦレセプター媒介性のＭＩＦの独立した放出が、内毒素中毒症のモデルにおいて顕著な後期心機能障害を誘発し得る（２４時間および４８時間）ことが示された。
【００８０】
サイトカインＭＩＦは、リンパ球、マクロファージおよび下垂体前葉を含む多くの細胞タイプで構成的に発現される。心臓、肺、肝臓、副腎、脾臓、腎臓、皮膚、筋肉、胸腺、皮膚および精巣を含む多くの組織がまたＭＩＦを含む。分泌の機構は、ＬＰＳ刺激単球で最近記載されている。モネンシンまたはブレフェルディング（ｂｒｅｆｅｌｄｉｎｇ）Ａのような古典的なタンパク質分泌物のインヒビターは、ＭＩＦの分泌を阻害せず、このことによって、非古典的なタンパク質輸出経路が示唆される。ＡＢＣＡ１（ＡＴＰ結合カセットＡ１）輸送体（グリブリドおよびプロベネシド）のインヒビターが与えられた場合、ＭＩＦ分泌は生じなかった。ＭＩＦは、小胞中のサイトゾルおよび核に主に位置しており、これが摘み取られて細胞の外側に放出される。この非古典的な、小胞媒介性の分泌経路は、炎症性疾患および特に敗血症において重要な役割を果たすことが示されているＨＭＧＢ１のような他の重要な炎症性メディエーターの分泌の機構であることが示されている。本発明では、いくつかの組織におけるＴＮＦ−αシグナル伝達に対するＭＩＦ分泌の依存を最初に記載している。
【００８１】
ＭＩＦは、活性化補助因子ＪＡＢ１／ＣＳＮ５および細胞表面タンパク質ＣＤ７４／Ｉｉ鎖を通じて調節される触媒特性である、糖質コルチコイド拮抗特性を含む多くの生物学的活性を有する。ＭＩＦの特異的な分泌は、内毒素（ＬＰＳ）および腫瘍壊死因子のような炎症性刺激、ならびにＡＣＴＨおよびアンジオテンシンＩＩのようなホルモンの後に生じる。免疫細胞に加えて、内分泌細胞およびいくつかの上皮細胞はＭＩＦを分泌する。分泌は、ＭＩＦ発現の増強および新規の合成、ならびに既存の貯蔵からの放出の誘発に起因する；この両方とも、心臓で前に実証されている。
【００８２】
心臓ＭＩＦは、野生型マウスにおけるＬＰＳチャレンジの１２時間後に最大に放出されることが報告されている。ＬＰＳチャレンジ後の野生型マウスにおける血清ＭＩＦレベルは、心機能障害の早期の保護に対応して、８時間で最大放出する。ＴＮＦ−αシグナル伝達が、Ｅｎｂｒｅｌ（登録商標）前処理またはＴＮＦＲ−／−マウスのいずれかによってＬＰＳチャレンジ後に阻害される場合、ＭＩＦレベルのピークはさらに遅くかつわずかに高く、このことは、ＴＮＦ−αが血清ＭＩＦレベルに対するある程度の制御を有するが、ＭＩＦ放出は阻害しないことを示す。野生型マウスを抗ＭＩＦ中和抗体で前処置して、ＬＰＳチャレンジ（４ｍｇ／ｋｇ）に供した場合、最初の重篤な心機能障害は、４時間で見られ、これはＬＰＳ単独を投与されたマウスと同一であった。しかし、最初の有意な保護は、８時間でみられ、そして４８時間までに改善され、心機能がコントロールの動物と有意に異なることはなかった。ＭＩＦは、単離された野生型の心臓においてほぼ即時的かつ直接的な心臓効果を有したので、ＭＩＦは、その遅延型放出と平行して心機能における役割を果たしたと考えられた。しかし、本発明では、ＭＩＦの非心臓の放出はインビボで同様に（２４時間および４８時間）機能に有意な影響を有し得るということが実証されている。これらの効果は、以前に記載されたよりも遅れて生じ（８時間で最初の保護）、そしてＴＮＦ−αシグナル伝達が野生型マウス（８時間で最大のＭＩＦ放出）に比較してブロックされる（１２〜２４時間）場合、全身的なＭＩＦ放出は平行して遅れる。
【００８３】
早期の心機能障害は、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１β、およびＩＬ−１８のような敗血症（およびＬＰＳ）関連の心機能障害を媒介することが示されているいくつかのサイトカインに起因し得ると考えられる。内毒素血症における心筋ＴＮＦ−αレベルと収縮性の機能障害との間の一時的な不一致が報告されている。ＬＰＳ関連心筋障害のこれらの知見は、ＴＮＦ−αの中和後のＬＰＳ誘発性心機能障害から保護を報告している他の知見と矛盾して、ＴＮＦ−αレベルが、ベースラインに戻るまで生じなかった。これらの知見およびその他の知見によって、まだ同定されていない他の因子のなかでもＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＩＬ−１８のような下流のメディエーターのＬＰＳ誘発性の増大のために、ＴＮＦ−αが必要であるという仮説が導かれた。本発明者らは、内毒素血症のそれらのモデルにおいてＭＩＦの効果のうち全てではないがある程度（心臓、肝臓、脾臓からのＭＩＦ分泌）をＴＮＦシグナル伝達が媒介するということを実証する。
【００８４】
ＴＮＦ−αシグナル伝達の指標的な役割は、他の研究者によって、特に内毒素血症モデルにおけるサイトカインＩＬ−１８との関係において、研究されている。ＴＮＦ−αノックアウト（−／−）マウスにおけるＬＰＳチャレンジ後、心臓でのＩＬ−１８レベルは有意に変化せず、一方野生型マウスは、ＩＬ−１８レベルの有意な増大を実証した。ＩＬ−１８が中和される場合、この研究によって、ＬＰＳ誘発性の心機能障害は、軽減されること、およびＩＬ−１８が組織のＴＮＦ−α、ＩＬ−１β、およびＩＣＡＭ−１／ＶＣＡＭ−１のレベルに対して下流の効果を有すると考えられることが実証された。この研究はＩＬ−１８の心筋産生および心筋でのＩＬ−１８の放出に集中していたが、ＩＬ−１８の心臓以外の供給源は検討されなかった。この研究は、ＩＬ−１８の組織（心臓）産生／放出に対するＴＮＲ−α依存性における本発明者らの研究と同様であると考えられる。
【００８５】
同様に、心筋のサイトカインｍＲＮＡ発現およびＬＰＳチャレンジ後の血漿サイトカインレベルに対するＴＮＦ−α阻害の効果を確認した以前の研究に注目することが重要である。ＴＮＦの阻害は、２時間で、ＩＬ−１β、ＩＬ−６およびＭＣＰ−１の血漿レベルを有意に低下したが、ＭＩＦも、ＴＮＦも、ＩＬ−１０もＩＬ−１２も低下しなかった；対照的に、抗ＴＮＦ事前処置は、この早期の時点で、ＩＬ−１βの心筋発現を有意に低下したが、ＭＩＦを含む他のサイトカインは低下しなかった。本発明者らは、ＭＩＦが２時間より後に放出する（１２時間でピーク）ことが示されるということを示しているので、本発明者らは、この以前の研究において、ＴＮＦ非依存性およびＴＮＦ依存性のＭＩＦ経路を、ＩＬ−１β、ＩＬ−６、およびＭＣＰ−１と平行して初めて記載している。これらは、重要な知見である。なぜならこれらのサイトカインのほとんどが、心機能障害を直接媒介することが示されているからである。
【００８６】
この研究におけるＬＰＳチャレンジ後のＴＮＦＲ−／−マウスの心機能障害（１８．２％（４５．９−２７．７  ＦＳ％）は、本発明者らの以前の研究における野生型マウスで確認された心機能障害、３６．７％（６７．３−３０．６）ほど顕著ではないが、この抑制は、有意である。多数のサイトカインが、ＬＰＳチャレンジ後の早期の心機能障害の結果であると考えられたので、本発明者らは、ＴＮＦＲ−／−モデルにおいて血清サイトカインのレベルを確認した。ＴＮＦ−αのレベルは、野生型マウスに比較して劇的に増大したが、機能的なレセプター（ＴＮＦレセプターまたはＴＮＦレセプターＩＩ）がなければ、早期の心機能障害が媒介されることはなかった。しかし、ＩＬ−１βおよびＩＬ−６の増大は、４時間で明確にみられ（それぞれ、野生型マウスを３１．２倍および８．５倍上回る）、そしておそらく、他のサイトカイン、例えば、近年記載されたＩＬ−１βおよびまだ記載されていない他のメディエーターに加えて、早期の心機能障害に寄与する可能性がある。ＴＮＦ−α分泌の調節におけるＴＮＦ−αシグナル伝達の役割は、以前に記載されている。しかし、本発明者らは、ＴＮＦ−αレセプターシグナル伝達が負のフィードバック機構によって、ＩＬ−１β、ＩＬ−１２およびＩＬ−１０を調節し、そしてＩＦＮ−γを正に調節することを初めて実証した（図１９）。同様に、ＩＬ−６欠損マウスは、ＬＰＳチャレンジ後にＩＬ−１βおよびＴＮＦ−αの発現を増強し、そして本発明者らは、心臓のＩＬ−６、それ自体を含む炎症促進性メディエーターの発現を負のフィードバック機構によって抑制するということを考慮する。
【００８７】
ＴＮＦ−αシグナル伝達は、ＴＮＦ−αレセプター１および２という２つのレセプターを通じて生じる。これらの２つの経路は、多様なシグナル伝達経路を有する。ＴＮＦ−αとレセプター１との相互作用は、ＴＮＦ−αレセプターが活性化しない、ＮＦ−ｋＢを含むいくつかのシグナル伝達経路を活性化する。２つの可能なＴＮＦレセプターのいずれが心臓におけるＭＩＦ放出の阻害を担っているかを検討するために、本発明者らは、心臓においてＩｋＢを過剰発現しているマウスをチャレンジして、ほぼ完全なＮＦ−ｋＢ阻害を得た。ウエスタン分析によって、本発明者らは、放出が試験した全ての時点でＴＮＦＲ−／−マウスと同じ方式で生じなかったことを実証した（データ示さず、図２Ａと同一）。これらのマウスは、野生型に匹敵する循環中のＴＮＦ−αを有する（なぜなら、ＮＦ−ｋＢ阻害は、心臓特異的であるから）。さらに、これらのマウスは、野生型マウスと同様に血清中でＭＩＦを発現する。従って、本発明は、ＴＮＦレセプター１が、心臓から野生型マウスでみられる組織放出を媒介し得ることを考慮する。この心臓の表現型は最初の４８時間の間のエコーによって、ＬＰＳチャレンジ後に完全に保護される（データ示さず）ので、本発明者らは、循環中のＭＩＦは上流のＮＦ−ｋＢ媒介性タンパク質がシグナル伝達することを必要とするということ（ＴＮＦ−α、ＩＬ−１β）または、ＭＩＦがＮＦ−ｋＢ自体によってその効果を媒介することを考慮する。
【００８８】
野生型マウスにおけるＬＰＳチャレンジ後のＩＬ−１０およびＩＦＮ−γの放出は、それらがＭＩＦ中和抗体で事前処置される場合、減弱される（図２０）。ＭＩＦは、遅延型の放出であるので、このサイトカインは、ＭＩＦが放出された後に生じる、ＭＩＦに対するその一時的な関係に起因して影響される可能性が高い（図１３）。これらの知見によって、ＭＩＦ活性は、内毒素チャレンジ後にＩＬ−１０およびＩＦＮ−γ放出において有意な役割を果たすことが示されるが、これは、それらの放出についての唯一のシグナルではないようである。ＴＮＦＲ−／−マウス（図１９Ｃ）では、ＩＦＮ−γ放出は同様に阻害され、その放出に必要なＴＮＦおよびＭＩＦの両方を作製するということに注目することが興味深い。同様に、抗ＭＩＦ抗体による、硫酸デキストラン誘発性大腸炎のモデルでは、ＩＦＮ−γは有意に抑制される。心筋細胞におけるｉＮＯＳの発現によって、ＴＮＦ−αおよびＬＰＳがＩＦＮ−γとともに与えられた場合に発現されるが、ただしＩＦＮ−γなしでは発現されないことが示されている。ｉＮＯＳ自体はＬＰＳ関連性の心機能障害の調節経路においてある役割を果たすので、これらのサイトカイン経路は複雑であり、かつ密接に相互作用するようである。
【００８９】
敗血症および敗血性ショックにおける罹患率および死亡率を軽減するためのＴＮＦ−αを阻害する努力は以前には、内毒素チャレンジに対して保護されたマウスでの前臨床試験でさえ、臨床的には失敗している。本発明者らは、ＬＰＳチャレンジの前のＴＮＦ−αシグナル伝達の阻害は組織からのＭＩＦ分泌の阻害を生じるが、血清ＭＩＦ放出は影響されないことを見出した。さらに、Ｅｎｂｒｅｌが９０分前ではなく、ＬＰＳチャレンジの直前または直後に与えられた場合、ＭＩＦの組織放出は散発的に（データ示さず）生じ、これは、この治療によるさらに下流のＭＩＦ効果を説明し得る。理論によって束縛されることは望まないが、これらの知見によって、抗ＴＮＦ治療がＭＩＦ効果に起因して作用し得ない機構が示される。
【００９０】
肝臓感染なしでのＬＰＳチャレンジのこの研究は、敗血症誘発性心筋障害に対して直接推定できないが、ＭＩＦは肝臓の複数菌による腹膜炎（ＣＬＰ）のモデルにおいて生理学的に関連することが示されていることに注目することが重要である。ＭＩＦ中和抗体がＴＮＦ−α−／−マウス（特にＣＬＰ損傷に感受性）に与えられた場合、ＭＩＦは、１５時間の死亡率（ＣＬＰのみでの０％に比較してＭＩＦ中和マウスでは９日目に６２％生存）に対して保護的であった。同様に、野生型マウスでは、ＭＩＦ中和抗体は、９日間（実験のエンドポイント）保護的であって、ここで、抗体が損傷（ｉｎｓｕｌｔ）の４．５時間後までに与えられた場合でさえ、３１％と比較して８１％で生存していた（５％に比較して６１％生存）。従って、本発明者らは、敗血症誘発性心筋障害に対する抗ＭＩＦ療法を考慮する。
【００９１】
ＭＩＦ放出は、ＴＮＦ−αのような重要な上流のメディエーターのブロッキングによって遅延されて部分的には影響されないので、これは、１つの良好な治療用標的であるかもしれない。このためには、その生物学的機能のいくつかを媒介するＭＩＦのタウトメラーゼ活性の阻害は、薬理学的に介入され得る。さらに、放出の近年の非古典的な分泌機構はまた、治療の潜在的な標的である。しかし、公知であって（ＨＭＧＢ１）そして記載されている標的である、敗血症における他の有意な標的が既に存在することが理解されることが重要である。従って、これらのメディエーターの全てのうちで本発明の治療の効果を理解することが重要である。
【００９２】
本発明者らは、敗血症の間の心筋障害に寄与すると考えられるＬＰＳ誘発性の心機能障害においてＭＩＦが重要な役割を果たすことを実証している。ＴＮＦ−αは、ＬＰＳ誘発性の心機能障害において重要な指標的サイトカインであると考えられるので、ＭＩＦ誘発性の心機能障害に対する、インビボにおけるＴＮＦ−αシグナル伝達経路のブロック効果を検討している。血清濃度およびＭＩＦの時間的分布は、わずかに増大されて、ＴＮＦ−αシグナル伝達の阻害によって遅延された（最大の増大は１２〜２４時間（ＴＮＦ−αシグナル伝達阻害対野生型での８時間のベースラインの１．７〜２．３倍（１．５倍増大）。心臓、肝臓および脾臓からの事前に形成されたＭＩＦの放出は、野生型のマウスで以前にみられた１２時間の遅延した最大放出とは異なり、ＴＮＦ−αシグナル伝達の阻害後ＬＰＳチャレンジ後には生じなかった。心臓ＭＩＦ  ｍＲＮＡのノーザン分析は、ＬＰＳチャレンジ後に転写の有意な変化を示さなかった。組み換えＭＩＦを単離されたＴＮＦＲ−／−心臓（Ｌａｎｇｅｎｄｏｒｆｆ調製）に与えた場合、心機能の有意な低下は、野生型マウスと同等に検出され、このことは、ＭＩＦシグナル伝達がＴＮＦ−αであったことを示した。ＬＰＳチャレンジ後のＴＮＦＲ−／−マウスの心エコー図は、早期の心機能障害（円周短縮率％で１８．２％の低下）を示し、４８時間後には最小に改善された。ＭＩＦがモノクローナル抗体によって中和された場合、心機能は２４時間までに有意に改善され、そして４８時間で完全に回復し、このことは、ＭＩＦが組織放出の欠損にかかわらず遅発性のＬＰＳ関連心機能障害においてある役割を果たしたことを示す。この研究によって、心臓および他の組織からのＭＩＦ放出は、ＴＮＦシグナル伝達に依存し、ＭＩＦの血清放出は、ＬＰＳチャレンジ後のＴＮＦシグナル伝達を欠くことによって影響されず、心機能障害を媒介するに十分であることが初めて示される。
【００９３】
マクロファージ遊走阻止因子（ＭＩＦ）は、敗血症（重篤な感染）の間に心機能に対して直接かつ有意に有害な影響を有する多能性サイトカインである。本発明の１実施形態は、ＭＩＦ活性の阻害が急性の心筋梗塞の後に心機能を顕著に改善し得るということをマウスモデルにおいて実証する（図２１〜２５を参照のこと）。この改善は、数時間内に認められ、そして実験の期間にわたって存続する（１週間）。ＭＩＦの調節は梗塞のサイズおよび他の病理的パラメーターを軽減させる可能性が高いと考えられる。心機能の改善の程度は、顕著であり、そして実質的に、ＴＮＦ−αのような他の免疫標的に比較して少なくとも１０倍過剰である。
【００９４】
本発明の以前には、心機能の障害および急性の心筋組織損傷の化学的／サイトカインのメディエーターを標的する、心筋梗塞のための処置はなかった。ＴＰＡのような治療によって梗塞を最小化することが現在の技術の目的である。一旦ＴＰＡまたは同様の治療を行なえば、標準的な変力性（ドブタミン）の、または機械的なデバイス（動脈内バルーンポンプ）から生じる心原性ショック／不全を予防する薬物療法はない。短期および長期の両
方で心機能をさらに改善するため、そして潜在的には梗塞のサイズを最小化するためにＴＰＡまたはバルーン血管形成術と同時に与えたＭＩＦをブロックする療法を、本明細書では考慮する。
【００９５】
本発明の１実施形態は、急性心筋梗塞後の急性および慢性の心機能障害の問題を解決する。本発明によって、免疫メディエーター、すなわちＭＩＦを調節するという点で、特有の分類の療法を得ることができるようになる。理論によって束縛されることは望まないが、本発明は、梗塞のサイズを直接低下させ得ると考えられる。長期心機能を保存するような等価な療法はない。短期の機能については、本発明によるＭＩＦ活性の調節は、動脈内バルーンポンプおよび他の機械的デバイスの必要性を最小にする。適切なモノクローナル抗ＭＩＦ抗体は、Ｋｉｎｇ  ｏｆ  Ｐｒｕｓｓｉａ，ＰＡのＣｙｔｏｋｉｎｅ  ＰｈａｒｍａＳｃｉｅｎｃｅ，Ｉｎｃ．から入手する。
【００９６】
本発明の別の実施形態は、敗血症、外傷、急性ＭＩおよび慢性心不全のような重篤な疾患に関連する心機能障害を防御するためのＣＤ７４の阻害に関する。ＣＤ７４は、循環中の免疫細胞および抗原提示細胞（ＭＨＣクラスＩＩに従って）上に表現されているが、本発明より前には、心臓（および他の器官）中のＣＤ７４の存在は報告されていない。さらに重要な事には、病理学的または疾患のプロセスにおける心機能に対するＣＤ７４の機能的な役割は、以前には実証されていない。ＣＤ７４は、インビトロでＭＩＦ活性を媒介することが示されているが、これは、独立しては確認されておらず、そして線維芽細胞および白血球に限定される。
【００９７】
適切な抗ヒトＣＤ７４抗体は、例えば、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ（製品のカタログ番号５５５５３８（クローンＭ−Ｂ７４１；精製型；アイソタイプマウスＩｇＧ２ａ，κ；Ｗ．Ｓ．Ｎｏ  Ｖ  ＣＤ７４．４；反応性ヒト）および５５５６１２（クローンＬＮ２；精製型；アイソタイプマウスＩｇＧ１、κ；Ｗ．Ｓ．Ｎｏ  Ｖ  ＣＤ７４．３；反応性ヒト）から入手可能である。
【００９８】
本発明によって、心疾患において抗サイトカイン治療（抗ＭＩＦを含む）を用いることが可能になる。敗血症モデルにおける抗ＴＮＦ治療を用いる予備的実験は機能しなかった。さらに、ＣＤ７４阻害によってブロックされる推定のサイトカインであるＭＩＦは、後期に生じるサイトカインであり、急性のＭＩの本発明者らのモデルでは、損傷（ｉｎｓｕｌｔ）後数週間にわたって増大され、これによってその期間中の介入が可能になる。
【００９９】
急性ＭＩおよび敗血症における早期の心機能障害は、これらの疾患の各々に関連する高い罹患率および死亡率の原因となる。本発明者らは、能力を向上させて、各々に関連する罹患率を潜在的に低下させ得るサイトカイン療法を考慮する。
【０１００】
心疾患におけるほとんどの治療的な介入は、再灌流（ＭＩ）または変力作用（ＭＩおよび敗血症）に集中してきた。本発明の１実施形態によれば、ＭＩＦの推定のレセプターであるＣＤ７４レセプターへ介入すれば、急性および慢性の両方の心原性障害が緩和されて、生存／転帰が改善され得る。
【０１０１】
ＭＩＦは、ＬＰＳチャレンジ後に心筋細胞から分泌され、そして後期発症（＞６時間）の心機能障害を直接媒介する。免疫細胞では、ＣＤ７４は、ＥＲＫ１／２細胞内シグナル伝達経路を介して効果を発揮する、ＭＩＦレセプターであることが確認された。ＣＤ７４が敗血症でＭＩＦ誘発性の心機能障害を媒介するか否かを決定するために、本発明者らは、１）ＬＰＳを用いて野生型マウス（Ｃ５７ＢＬ／６）をチャレンジし；２）抗ＣＤ７４モノクローナル中和抗体で事前処置された野生型マウスをＬＰＳを用いてチャレンジし、そして３）ＬＰＳ（４ｍｇ／ｋｇ）を用いてＣＤ７４ノックアウトマウスをチャレンジした。連続的な心エコー検査を行なって、円周短縮率（ＦＳ％）を決定した。２４時間で、コントロール（ＦＳ％＝５８±１％）に比較して、ＬＰＳを与えたＷＴマウスでは有意な障害が観察された（ＦＳ％＝３１．６％±３．３％）。ＬＰＳを用いてチャレンジされた、抗ＣＤ７４抗体処置されたマウス、そしてＣＤ７４ノックアウトマウスの両方で、心機能はＬＰＳのみを与えられた野生型マウスに比較して有意に改善された（それぞれ、ＦＳ％＝４９±３．６％および５３．３±２．４％、ｐ＜０．０５）。ＣＤ７４発現は、心臓ではいまだかつて実証されていないので、本発明者らは、イムノブロットおよび組織化学を行なって、ＣＤ７４が心臓細胞膜上におよびサイトゾル中に構成的に存在すること；そしてＬＰＳチャレンジ後に実質的に調節された（１２時間でほぼなし、４倍以上低下）ことを確認した。本発明者らは、ＣＤ７４が、心筋細胞上で発現されること、そして心機能障害の重要なメディエーターであることを実証する。
【０１０２】
本発明の別の実施形態は、１つ以上の可溶性ＭＩＦレセプターまたはＭＩＦレセプターアンタゴニストの使用によるＭＩＦ活性の阻害に関する。例えば、抗ＴＮＦα療法では、ＲＥＭＩＣＡＤＥ（商標）またはＩＮＦＬＩＸＩＭＡＢ（商標）（抗体ＴＮＦα）およびＥＮＢＲＥＬ（商標）またはＥＴＡＮＥＲＣＥＰＴ（商標）（可溶性ＴＮＦ−レセプター）が適切である。この方法は、心機能障害をその必要な被験体において処置および／または予防するために、心筋活性の不規則性をその必要な被験体において処置および／または予防するために、心筋活性の抑制をその必要な被験体において処置および／または予防するために、熱傷に関連する心機能障害をその必要な被験体において処置および／または予防するために、急性心筋梗塞後の心機能障害をその必要な被験体において処置および／または予防するために、心臓抑制をその必要な被験体において処置および／または予防するために、あるいはそれらの組み合わせについて、その必要な被験体に対して、１つ以上の可溶性のＭＩＦレセプターおよび／またはＭＩＦレセプターアンタゴニストを有効量で投与する工程を包含する。
【０１０３】
本発明の別の実施形態は、心機能障害をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、心筋活性の不規則性をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、心筋活性の抑制をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、熱傷に関連する心機能障害をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、急性心筋梗塞後の心機能障害をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、心臓抑制をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、あるいはそれらの組み合わせにおける、低分子ＭＩＦインヒビター（時には、「ＭＩＦアンタゴニスト（ＭＩＦ  ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｓ）、または「イソキサゾリン化合物（ｉｓｏｘａｚｏｌｉｎｅ  ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ）」と呼ばれる」の使用に関する。
【０１０４】
以下の化学式では、置換基の上つき文字の使用は、置換基の名称を特定するため（例えば、「Ｒ２」は、Ｒ２と命名された置換基を示すために用いられる）であるが、下付き文字の使用は、ある置換基がその分子部位に存在する回数を数え上げるために用いられる（例えば、「Ｒ２」または「（Ｒ）２」は両方とも、単に「Ｒ」と命名された２つの置換基を示すために用いられる）。
【０１０５】
本明細書の方法における使用のための適切な低分子ＭＩＦインヒビターは、以下の構造式Ｉ：
【０１０６】
【化１】
2010159267.tif 000003
を有し、ここで、
Ｒ１−４は独立して、Ｒ、ハロ、Ｎ３、ＣＮ、ＯＨ、ＮＲＲ’、またはＳＨであり；
ＲおよびＲ’は独立してＨまたはＣ１−６アルキルであり；
Ｘは、Ｒ、ハロ、Ｎ３、ＣＮ、ＯＲ、ＮＲＲ’、ＳＨ、＝Ｏ、＝ＣＨ２、またはＡであり；
Ａは、置換または非置換芳香族環であり；
ＹはＲ、ＮＲＲ’、ＮＲＲ’’または（ＣＨ２）ｎ−Ａであり；
Ｚは、Ｒ、ＯＲ、ＯＲ’’、ＮＲＲ’、ＮＲＲ’’またはＡであり；
Ｒ’’は置換もしくは非置換、直鎖もしくは分枝鎖のＣ２−Ｃ１８であり；
そしてｎは０または１である。
【０１０７】
好ましくは、構造式Ｉの化合物は、ｐ−ヒドロキシフェニル−イソキサゾリン含有化合物であって、ここで各々のＲ、Ｒ１−４、ＸおよびＹはＨまたは−ＣＨ２−Ａであり、そしてＺがＯＲである。さらに好ましくは、構造式Ｉの化合物は、（Ｒ）−３−（４−ヒドロキシフェニル）−４，５−ジヒドロ−５−イソキサゾリン酢酸のエステル、特に、その酸メチルエステル（本明細書において、時には、「ＩＳＯ−１」または「ＣＰＳＩ」または「ＣＰＳＩ−２６」として特定される）であり、これはまた、ｐ−ヒドロキシフェノール−イソキサゾリンメチルエステルとして公知である。さらにより好ましくは、この化合物は、２−｛３−（４−ヒドロキシ−フェニル）−４，５−ジヒドロ−イソキサゾール−５−イル｝−３−フェニル−プロピオン酸のエステル、特にそのメチルエステル（「ＩＳＯ−２」として特定される）である。
【０１０８】
本明細書の方法における使用のための他の適切な低分子ＭＩＦインヒビターは、以下の構造式ＩＩまたはＩＩＩ：
【０１０９】
【化２】
2010159267.tif 000004
を有し、ここでＢが、酸素またはイオウのいずれかであり、そして各々の「Ｒ」は独立して：
【０１１０】
【化３】
2010159267.tif 000005
で規定され、ただし、これは、各々の「Ｒ」が構造式ＩＩまたはＩＩＩのいずれかにおいて水素としてのみ存在することはできず（すなわち、構造式ＩＩまたはＩＩＩのいずれかの上の少なくとも１つのＲが水素以外の「Ｒ」置換基である）、そして任意のＢが独立して酸素またはイオウのいずれかであり；任意のＲ１が独立して水素、（Ｃ１−Ｃ６）アルキルまたはいくつかの他の適切な置換基であり、任意のＲ２がアミン、アルコキシまたはいくつかの他の適切な置換基であり；そして「ｍ」が独立して０または１〜２０の整数のいずれかであるという条件下であり；
各々のＸが独立して、炭素または窒素原子のいずれかであり；そして任意のＸが炭素であれば、Ｙが各々のＸについて、
【０１１１】
【化４】
2010159267.tif 000006
として独立して規定される置換基であり、
各々のＺが独立して水素、ヒドロキシル、ハロゲン、またはいくつかの他の適切な置換基のいずれかであり；そして
「ｎ」が独立して０、１、２、３または４のいずれかである、低分子ＭＩＦインヒビター；
ならびにその薬学的に受容可能な塩およびプロドラッグである。
【０１１２】
本発明はまた、一般式Ｉ、ＩＩまたはＩＩＩの化合物の薬学的に受容可能な酸富化塩に関する。本発明の上述のベース化合物の薬学的に受容可能な酸付加塩を調製するために用いられる酸は、非毒性の酸付加塩、すなわち、薬理学的に受容可能な陰イオンを含む塩、例えば、塩化物、臭化物、ヨウ化物、硝酸塩、硫酸塩、重硫酸塩、リン酸塩、酸性リン酸塩、酢酸塩、乳酸塩、クエン酸塩、酸性クエン酸塩、酒石酸塩、酒石酸水素塩、コハク酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、グルタミン酸塩、Ｌ−乳酸塩、Ｌ−酒石酸塩、トシレート、メシレート、グルコン酸塩、サッカラート、安息香酸塩、メタンスルホナート、エタンスルホナート、ベンゼンスルホナート、ｐ−トルエンスルホナート、およびパモエート（すなわち、１，１’−メチレン−ビス−（２−ヒドロキシ−３−ナフトエート））塩を形成する酸である。
【０１１３】
本発明はまた、低分子ＭＩＦインヒビターの塩基付加塩に関する。天然には酸性である、一般式Ｉ、ＩＩまたはＩＩＩのそれらの化合物の薬学的に受容可能な塩基塩を調製するための試薬として用いられ得る化学塩基は、このような化合物と非毒性の塩基の塩を形成する塩基である。このような非毒性の塩基の塩としては限定はしないが、アルカリ金属陽イオン（例えば、カリウムおよびナトリウム）およびアルカリ土類金属陽イオン（たとえば、カルシウムおよびマグネシウム）のような薬学的に受容可能な陽イオンに由来する塩、Ｎ−メチルグルカミン−（メグルミン）のようなアンモニウムまたは水溶性アミン付加塩、ならびに薬学的に受容可能な有機アミンの低級アルカノールアンモニウムおよび他の塩基の塩が挙げられる。
【０１１４】
低分子ＭＩＦインヒビターの化合物およびプロドラッグは、いくつかの互変異性型、および幾何異性体、ならびにその混合物で存在し得る。このような互変異性型の全てが、本発明の範囲内に包含される。互変異性体は、溶液中に互変異性体の混合物として存在する。固体型では、通常１つの互変異性型が優勢である。１つの互変異性型が記載され得るが、本発明は、低分子ＭＩＦインヒビターの全ての互変異性型を包含する。
【０１１５】
本発明はまた、低分子ＭＩＦインヒビターのアトロプ異性体を包含する。アトロプ異性体とは、回転の制限された異性体に分離され得る低分子ＭＩＦインヒビターの化合物をいう。低分子ＭＩＦインヒビターは、オレフィン様二重結合を含み得る。このような結合が存在する場合、低分子ＭＩＦインヒビターは、シス型立体配置としておよびトランス型立体配置として、そしてその混合物として存在する。
【０１１６】
「適切な置換基（ｓｕｉｔａｂｌｅ  ｓｕｂｓｔｉｔｕｅｎｔ）」とは、化学的および薬学的に受容可能な官能基、すなわち、低分子ＭＩＦインヒビターの阻害活性を打ち消さない部分を意味するものとする。このような適切な置換基は、当業者によって慣用的に選択され得る。適切な置換基の例示的な例としては、限定はしないが、ハロ基、ペルフルオロアルキル基、ペルフルオロアルコキシ基、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、ヒドロキシ基、オキソ基、メルカプト基、アルキルチオ基、アルコキシ基、アリール基またはヘテロアリール基、アリールオキシ基またはヘテロアリールオキシ基、アラルキル基またはヘテロアラルキル基、アラルコキシ基またはヘテロアラルコキシ基、ＨＯ−（Ｃ＝Ｏ）−基、アミノ基、アルキル基およびジアルキルアミノ基、カルバモイル基、アルキルカボニル基、アルコキシカルボニル基、アルキルアミノカルボニル基  ジアルキルアミノカルボニル基、アリールカルボニル基、アリールオキシカルボニル基、アルキルスルホニル基、アリールスルホニル基などが挙げられる。
【０１１７】
好ましい低分子ＭＩＦインヒビターは、全ての目的のためにその各々の内容全体が参照として本明細書に援用される、２００４年３月２６日提出、米国仮出願第６０／５５６，４４０号、２００１年６月８日提出米国仮出願第６０／２９６，４７８号；および２００２年６月１０日出願、米国出願第１０／１６４，６３０号に見出すことができる。
【０１１８】
好ましくは、この実施形態では、有効量の１つ以上の低分子ＭＩＦインヒビターおよび／またはその塩を、その必要な被験体に対して活性な成分として投与する。低分子ＭＩＦインヒビターの組み合わせも可能である。
【０１１９】
低分子ＭＩＦインヒビター化合物はまた、必要に応じて、その薬学的に活性な塩および／またはプロドラッグの形態で投与され得る。塩および／またはプロドラッグの組み合わせは、この低分子ＭＩＦインヒビターの塩型および非塩型の組み合わせと同様に可能である。
【０１２０】
本発明の別の実施形態は、心機能障害をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、心筋活性の不規則性をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、心筋活性の抑制をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、熱傷に関連する心機能障害をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、急性心筋梗塞後の心機能障害をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、心臓抑制をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、あるいはそれらの組み合わせにおいて適切な薬学的組成物であって、１つ以上の低分子ＭＩＦインヒビターおよび／またはその塩を活性成分として、そして少なくとも１つの薬学的に受容可能なキャリア、賦形剤、アジュバントおよび／または希釈剤を含む薬学的組成物に関する。
【０１２１】
本発明の別の実施形態は、少なくとも１つの低分子ＭＩＦインヒビター、その塩および／またはそのプロドラッグおよび少なくとも１つの抗ＭＩＦ抗体を含む有効量の組成物の、その必要な被験体に対する投与であって、心機能障害をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、心筋活性の不規則性をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、心筋活性の抑制をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、熱傷に関連する心機能障害をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、急性心筋梗塞後の心機能障害をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、心臓抑制をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、あるいはそれらの組み合わせにおける投与に関する。
【０１２２】
本発明の別の実施形態は、心機能障害をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、心筋活性の不規則性をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、心筋活性の抑制をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、熱傷に関連する心機能障害をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、急性心筋梗塞後の心機能障害をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、心臓抑制をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、あるいはそれらの組み合わせにおいて適切な薬学的組成物であって、少なくとも１つの低分子ＭＩＦインヒビター、その塩および／またはそのプロドラッグおよび少なくとも１つの抗ＭＩＦ抗体の組み合わせの有効量、ならびに少なくとも１つの薬学的に受容可能なキャリア、賦形剤、アジュバントおよび／または希釈剤を含む薬学的組成物に関する。
【０１２３】
本発明の別の実施形態は、少なくとも１つの低分子ＭＩＦインヒビター、その塩および／またはそのプロドラッグ、少なくとも１つの抗ＴＮＦＲ抗体および少なくとも１つの抗ＭＩＦ抗体の組み合わせを含む組成物の有効量の、その必要な被験体に対する投与であって、心機能障害をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、心筋活性の不規則性をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、心筋活性の抑制をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、熱傷に関連する心機能障害をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、急性心筋梗塞後の心機能障害をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、心臓抑制をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、あるいはそれらの組み合わせにおける投与に関する。
【０１２４】
本発明の別の実施形態は、心機能障害をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、心筋活性の不規則性をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、心筋活性の抑制をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、熱傷に関連する心機能障害をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、急性心筋梗塞後の心機能障害をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、心臓抑制をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、あるいはそれらの組み合わせにおいて適切な薬学的組成物であって、少なくとも１つの低分子ＭＩＦインヒビター、その塩および／またはそのプロドラッグ、少なくとも１つの抗ＴＮＦＲ抗体および少なくとも１つの抗ＭＩＦ抗体の組み合わせの有効量、ならびに少なくとも１つの薬学的に受容可能なキャリア、賦形剤、アジュバントおよび／または希釈剤を含む薬学的組成物に関する。
【０１２５】
本発明の別の実施形態は、少なくとも１つの低分子ＭＩＦインヒビター、その塩および／またはそのプロドラッグ、少なくとも１つの抗ＣＤ７４抗体および少なくとも１つの抗ＭＩＦ抗体の組み合わせを含む有効量の組成物の、その必要な被験体に対する投与であって、心機能障害をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、心筋活性の不規則性をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、心筋活性の抑制をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、熱傷に関連する心機能障害をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、急性心筋梗塞後の心機能障害をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、心臓抑制をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、あるいはそれらの組み合わせにおける投与に関する。
【０１２６】
本発明の別の実施形態は、心機能障害をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、心筋活性の不規則性をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、心筋活性の抑制をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、熱傷に関連する心機能障害をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、急性心筋梗塞後の心機能障害をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、心臓抑制をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、あるいはそれらの組み合わせにおいて適切な薬学的組成物であって、少なくとも１つの低分子ＭＩＦインヒビター、その塩および／またはそのプロドラッグ、少なくとも１つの抗ＣＤ７４抗体および少なくとも１つの抗ＭＩＦ抗体の組み合わせの有効量、ならびに少なくとも１つの薬学的に受容可能なキャリア、賦形剤、アジュバントおよび／または希釈剤を含む薬学的組成物に関する。
【０１２７】
本発明の別の実施形態は、少なくとも１つの低分子ＭＩＦインヒビター、その塩および／またはそのプロドラッグおよび少なくとも１つの抗ＣＤ７４抗体の組み合わせを含む組成物の有効量の、その必要な被験体に対する投与であって、心機能障害をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、心筋活性の不規則性をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、心筋活性の抑制をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、熱傷に関連する心機能障害をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、急性心筋梗塞後の心機能障害をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、心臓抑制をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、あるいはそれらの組み合わせにおける投与に関する。
【０１２８】
本発明の別の実施形態は、心機能障害をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、心筋活性の不規則性をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、心筋活性の抑制をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、熱傷に関連する心機能障害をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、急性心筋梗塞後の心機能障害をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、心臓抑制をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、あるいはそれらの組み合わせにおいて適切な薬学的組成物であって、少なくとも１つの低分子ＭＩＦインヒビター、その塩および／またはそのプロドラッグ、少なくとも１つの抗ＣＤ７４抗体の組み合わせの有効量、ならびに少なくとも１つの薬学的に受容可能なキャリア、賦形剤、アジュバントおよび／または希釈剤を含む薬学的組成物に関する。
【０１２９】
理論によって束縛されることは望まないが、低分子ＭＩＦインヒビターでのタウトメラーゼ活性（サイトカインＭＩＦが有することが示されている）の中和は、心筋梗塞後に生じる心臓抑制の阻害を生じるかまたはそれに寄与すると考えられる。低分子インヒビターでのタウトメラーゼの阻害は、抗ＭＩＦ抗体と同様の心臓保護を生じる。ＭＩＦは、タウトメラーゼ活性を有することが示されており、その活性を媒介することがインビトロ研究で示唆されているので、ＭＩＦの中和は、そのタウトメラーゼ活性が阻害された後に生じ得ると考えられる。
【０１３０】
本発明者らは、ＭＩＦを阻害すること、および／またはＭＩＦタウトメラーゼ活性を中和することによって、心疾患に対する抗サイトカイン／炎症療法が得られることを見出している。ＭＩＦの阻害によって、心筋梗塞後の心機能が改善され、そして心筋梗塞の急性の続発症を助けること、例えば、急性心筋梗塞における早期の心機能障害を軽減すること、および付随する高罹患率および死亡率を軽減することが可能になる。現在の技術を上回る本発明の１つの利点は、変力作用に集中する、心疾患における治療介入とは異なり、本発明は、心機能障害の原因を処置および／または予防することによって、急性および慢性の両方の心原性障害が軽減され得、そして生存／転帰を改善し得るということである。
【０１３１】
本発明の１実施形態は、本発明の少なくとも１つの化合物を活性成分として（および／またはその塩および／またはプロドラッグ）そして少なくとも１つの薬学的に受容可能なキャリア、賦形剤、アジュバントおよび／または希釈剤を含む薬学的組成物に関する。
【０１３２】
この化合物はまた、必要に応じて実質的に非毒性の薬学的に受容可能なキャリア、賦形剤、アジュバントまたは希釈剤を用いて、その薬学的に活性な塩の形態で投与されてもよい。本発明の組成物は、任意の従来の固体または液体のキャリアまたは希釈剤および必要に応じて任意の従来の薬学的に作製されたアジュバントにおいて、適切な投薬レベルで公知の方法で調製され得る。好ましい調製物は、口腔適用のために適切である投与可能形態である。これらの投与可能な形態としては、例えば、丸剤、錠剤、フィルム錠剤、コートされた錠剤、カプセル、粉末およびデポ製剤が挙げられる。
【０１３３】
経口投与可能な形態以外の形態も可能である。本発明の化合物、および／またはその化合物を含む薬学的調製物は、限定はしないが、上皮または粘膜皮膚裏層（口腔粘膜、結腸および膣上皮裏層、鼻咽頭粘膜、腸粘膜）を通じた吸収による注射（静脈内、腹腔内、筋肉内、皮下）を含む任意の適切な方法；経口、直腸、経皮、局所的、皮内、胃内、皮内、膣内、脈管内、鼻腔内、口腔内、経皮的、舌下または製薬業界で利用可能な任意の他の方法によって投与され得る。
【０１３４】
本発明の少なくとも１つの化合物またはその薬学的に受容可能な塩を活性成分として含む本発明の薬学的組成物は代表的には、投与の意図される形態、すなわち、経口錠剤、カプセル（固体充填、半固体充填または液体充填された）、構成用の粉末、経口ゲル、エリキシル、分散性顆粒、シロップ、懸濁液などに関して適切に選択される適切なキャリア物質と混合して、従来の薬学的手段に従って投与される。例えば、錠剤またはカプセルの形
態での経口投与のためには、活性薬物成分は、任意の経口的な非毒性の薬学的に受容可能な不活性キャリア、例えば、ラクトース、デンプン、スクロース、セルロース、ステアリン酸マグネシウム、第二リン酸カルシウム、硫酸カルシウム、滑石、マンニトール、エチルアルコール（液体型）などと組み合わせられてもよい。さらに、所望される場合、または必要に応じて、適切な結合剤、潤滑剤、崩壊剤および着色剤をまたこの混合物中に組み込んでもよい。
【０１３５】
薬学的組成物は、活性成分の重量の約５〜約９５重量％から構成され得るが、この範囲としては、５、５．５、６、６．５、７、７．５、８、８．５、９、９．５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９０．５、９１、９１．５、９２、９２．５、９３、９３．５、９４、９４．５、および９５重量％を含む、その範囲の間の全ての値および部分的範囲が挙げられる。
【０１３６】
適切な結合剤としては、デンプン、ゼラチン、天然の糖、コーン甘味料、天然および合成のガム、例えば、アカシアゴム、アルギン酸ナトリウム、カルボキシメチル−セルロース、ポリエチレングリコールおよびワックス（ロウ状物質）が挙げられる。潤滑剤のなかでも、これらの投薬形態における使用について言及され得るのは、ホウ酸、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウムなどである。崩壊剤としては、デンプン、メチルセルロース、グアールガムなどが挙げられる。甘味料および香味料および防腐剤はまた、必要に応じて包含されてもよい。上記の用語のいくつかは、すなわち錠剤分解物質、希釈剤、潤滑剤、結合剤などは以下にさらに詳細に考察される。
【０１３７】
さらに、本発明の化合物または組成物は、任意の１つ以上の成分または活性成分の徐放性の放出を提供して治療効果、すなわち抗ヒスタミン活性などを最適化するために、徐放性の形態で処方され得る。徐放性のための適切な投薬形態としては、崩壊速度を変化させる層または活性成分を浸透された徐放性ポリマーマトリクスを含み、このように含浸されるかまたはカプセル化された多孔性ポリマーマトリクスを含む錠剤型またはカプセルに成形された層状の錠剤が挙げられる。
【０１３８】
液体型調製物としては、溶液、懸濁液およびエマルジョンが挙げられる。例えば、非経口注射または甘味料の添加のための水、エタノール、水−エタノールまたは水プロピレングリコール溶液、ならびに経口溶液、懸濁液およびエマルジョンのための乳白剤が言及され得る。液体型調製物はまた、経鼻投与のための溶液を包含し得る。
【０１３９】
吸入のために適切なエアロゾル調製物としては、薬学的に受容可能なキャリア、例えば、不活性な圧縮ガス、例えば窒素と組み合わせられ得る、溶液および粉末型の固体を挙げることができる。
【０１４０】
坐剤を調製するためには、ココアバターのような脂肪酸グリセリドの混合物などの低融点ワックスを最初に融解して、その活性成分を、撹拌または同様に混合することによってそこで均一に分散させる。次いでこの溶かされた均一の混合物を従来のサイズの型に注いで、冷却しそれによって固化させる。
【０１４１】
また、経口もしくは非経口投与のいずれかのための液体型調製物に使用直前に変換されるものとする固体型調製物も包含される。このような液体型としては、溶液、懸濁液およびエマルジョンが挙げられる。
【０１４２】
本発明の化合物はまた、経皮的に送達され得る。経皮組成物は、クリーム、ローション、エアロゾルおよび／またはエマルジョンの形態をとってもよく、そしてその目的のために当該分野において従来と同様に、マトリックスまたはリザーバーのタイプの経皮パッチに含まれてもよい。
【０１４３】
カプセルという用語は、活性成分を含む組成物を保持または含有するための、メチルセルロース、ポリビニルアルコールまたは変性されたゼラチンもしくはデンプンからなる、特別な容器または封入物をいう。硬性シェルカプセルは代表的には、比較的高いゲル強度の骨およびブタの皮膚のゼラチンの混合物からなる。このカプセル自体は、少量の色素、不透明な因子、可塑剤および防腐剤を含み得る。
【０１４４】
錠剤とは、適切な希釈剤とともに活性な成分を含む圧縮または成型された固体投薬形態を意味する。この錠剤は、当業者に周知の、湿式造粒法、乾式造粒法によって、または圧縮成型によって得られた混合物または顆粒の圧縮によって調製され得る。
【０１４５】
経口のゲルとは、親水性の半固体マトリックス中に分散または可溶化された活性成分をいう。
【０１４６】
構成のための粉末とは、活性成分および適切な希釈物を含む粉末混合物であって、水またはジュース中に懸濁され得るものを指す。
【０１４７】
適切な希釈物は、組成物または投薬形態の主な部分を通常構成する物質である。
【０１４８】
適切な希釈物としては、ラクトース、スクロース、マンニトールおよびソルビトールのような糖、コムギ、コーン  ライスおよびポテト由来のデンプン、ならびに微結晶性セルロースのようなセルロースが挙げられる。この組成物中の希釈物の量は、総組成物の約５〜約９５重量％、好ましくは約２５〜約７５重量％、さらに好ましくは約３０〜約６０重量％の範囲であってもよい。
【０１４９】
崩壊剤という用語は、組成物に添加される物質であって、それが医薬を壊し（分解）て、放出することを補助する物質を指す。適切な崩壊剤としては、デンプン、「冷水可溶性（ｃｏｌｄ  ｗａｔｅｒ  ｓｏｌｕｂｌｅ）」、修飾デンプン、例えば、カルボキシルメチル・スターチ・ナトリウム、天然および合成のガム、例えば、イナゴマメゴム、カラヤゴム、グアールゴム、トラガカントゴムおよび寒天、セルロース誘導体、例えば、メチルセルロースおよびカルボキシルメチル・セルロース・ナトリウム、微結晶性セルロースおよび架橋微結晶性セルロース、例えば、クロスカルメロースナトリウム、アルギン酸塩、例えば、アルギン酸およびアルギン酸ナトリウム、粘土、例えば、ベントナイトおよび発泡性混合物が挙げられる。この組成物での崩壊剤の量は、この組成物の約２〜約２０重量％、さらに好ましくは約５〜約１０重量％の範囲におよんでもよい。
【０１５０】
結合剤とは、粉末を一緒に結合するかまたは「接着し（ｇｌｕｅ）」て、顆粒を成型することによってそれらを粘着性にさせ、これによって処方物中で「接着剤（ａｄｈｅｓｉｖｅ）」として作用する物質を特徴付ける。結合剤は、希釈物または充填剤において既に利用可能な結合力を加える。適切な結合剤としては、スクロースのような糖、コムギ、コーン  ライスおよびポテト由来のデンプン、；天然ゴム、例えば、アカシアゴム、ゼラチンおよびトラガカントゴム；海草由来物、例えば、アルギン酸、アルギン酸ナトリウムおよびアルギン酸アンモニウムカルシウム；セルロース性物質、例えば、メチルセルロースおよびカルボキシメチルセルロースナトリウムおよびヒドロキシプロピル−メチルセルロース；ポリビニルピロリドン；およびケイ酸マグネシウムアルミニウムのような無機物が挙げられる。組成物中の結合剤の量は、この組成物の約２〜約２０重量％、より好ましくは、約３〜約１０重量％、さらに好ましくは、約３〜約６重量％におよんでもよい。
【０１５１】
潤滑剤とは、圧縮された後に、錠剤、顆粒などを成型できるように投薬形態に添加される物質であって、摩擦または磨耗を軽減することによって、型または金型から遊離させるための物質を指す。適切な潤滑剤としては、ステアリン酸金属、例えば、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウムまたはステアリン酸カリウム；ステアリン酸；高融点ワックス；および水溶性潤滑剤、例えば、塩化ナトリウム、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、オレイン酸ナトリウム、ポリエチレングリコールおよびｄ，１−ロイシンが挙げられる。潤滑剤は通常、圧縮前に最終工程で添加される。なぜなら、それらは、顆粒の表面上に、そして表面と錠剤圧迫部分との間に存在しなければならないからである。組成物中の潤滑剤の量は、その組成物の約０．２〜約５重量％、好ましくは約０．５〜約２重量％、さらに好ましくは約０．３〜約１．５重量％におよんでもよい。
【０１５２】
グライデント（ｇｌｉｄｅｎｔｓ）は、流動が円滑かつ均一になるように、固化を防いで、顆粒化の流動特徴を改善する物質である。適切なグライデントとしては、二酸化ケイ素および滑石が挙げられる。組成物中のグライデントの量は、組成物全体の約０．１％〜約５重量％、好ましくは約０．５〜約２重量％におよび得る。
【０１５３】
着色料は、組成物または投薬形態に色を与える賦形剤である。このような賦形剤は、食品用色素および粘土または酸化アルミニウムのような適切な吸収剤上に吸着された食品用色素を包含し得る。着色料の量は、組成物の約０．１〜約５重量％、好ましくは約０．１〜約１％におよんでもよい。
【０１５４】
本発明の化合物の処方および投与のための技術は、その内容全体が参照によって本明細書に援用される「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ  Ｐａ．，に見出すことができる。本発明の少なくとも１つの化合物を含む適切な組成物は、適切な液体の薬学的キャリア中の化合物の溶液、または任意の他の処方物、例えば、錠剤、丸剤、フィルム錠剤、コーティング錠剤、糖衣錠、カプセル、粉末およびデポ剤、ゲル、シロップ、スラリー、懸濁物、エマルジョンなどであってもよい。
【０１５５】
本明細書において用いる場合「処置および／または予防すること（ｔｒｅａｔｉｎｇ  ａｎｄ／ｏｒ  ｐｒｅｖｅｎｔｉｎｇ）」という用語は、この用語が適用される障害もしくは状態の進行、またはその障害もしくは状態の１つ以上の症状を逆転、緩和、阻害すること、または予防することを指す。本明細書において用いる場合、「処置（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」という用語は、上記の用語のように処置および／または予防する作用を指す。好ましくは、処置されるまたは投与される被験体は、ヒト被験体であり、そしてさらに好ましくは処置の必要なヒト被験体である。
【０１５６】
「有効量（ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ  ａｍｏｕｎｔ）」または「治療上有効な量（ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃａｌｌｙ  ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ  ａｍｏｕｎｔ）」という用語は、任意の観察可能なまたは測定可能な相違を生じ、そして好ましくは被験体の状態または兆候を改善するのに、そして好ましくはその状態または兆候が処置されるのに十分な量を意味する。
【０１５７】
マウス抗ＭＩＦ抗体のアクセッション番号は、以下に示す：
ＩＩＩ．Ｄ．９  ｍＡｂについて：ＨＢ−１２２２０
ＸＩＶ．１５．５  ｍＡｂについて：ＨＢ−１２２２１
好ましくは、「急性（ａｃｕｔｅ）」状態、例えば、急性心筋梗塞は、「慢性（ｃｈｒｏｎｉｃ）」状態、例えば慢性うっ血性心不全から識別される。
【０１５８】
本明細書において用いる場合、「抗体」という用語は適切には、当業者に公知であるとおり、抗体由来のフラグメント（単数または複数）、Ｆａｂ、Ｆａｂフラグメント（単数または複数）、Ｆａｂ２、ＣＤＲ由来領域、抗体由来ペプチド、および／または単鎖抗体を包含する。Ｆａｂが好ましい。
【０１５９】
本明細書において用いる場合、「心機能障害（ｃａｒｄｉａｃ  ｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ）」という用語は、適切には、心機能障害、心筋活性における不規則性、心筋活性における抑制、熱傷に関連する心機能障害、急性心筋梗塞後の心機能障害、心臓抑制およびその組み合わせを含む群から選択される１つ以上の兆候を包含し得る。これらの用語は、当該分野の通常の技術の医師によって理解される。
【０１６０】
本発明の他の実施形態は、以下に示される。
【０１６１】
Ａ．被験体において熱傷関連の心臓抑制および／または心機能障害を処置および／または予防するための方法であって、
この被験体に対して少なくとも１つの抗ＭＩＦ抗体の有効量を投与する工程を包含する、方法。
【０１６２】
Ｂ．被験体において熱傷関連心機能障害を処置および／または予防するための方法であって、
この被験体に対して少なくとも１つの抗ＭＩＦ抗体の有効量を投与する工程を包含し、
ここでこの熱傷関連心機能障害は、心筋活性の不規則性もしくは心筋活性の抑制またはその両方を包含する、方法。
【０１６３】
Ｃ．被験体において熱傷関連心臓抑制を処置および／または予防するための方法であって、
この被験体に対してＭＩＦインヒビターを含む組成物の有効量を投与する工程を包含し、
ここでこのＭＩＦインヒビターが少なくとも１つの抗ＭＩＦ抗体を包含する、方法。
【０１６４】
Ｄ．被験体において熱傷関連心機能障害を処置および／または予防するための方法であって、
この被験体に対して少なくとも１つのＭＩＦインヒビターを含む組成物の有効量を投与する工程を包含し、
ここでこのＭＩＦインヒビターは、少なくとも１つの抗ＭＩＦ抗体を包含し、そしてこの抗体はモノクローナル抗体である、方法。
【０１６５】
Ｅ．被験体において熱傷関連心機能障害を処置および／または予防するための方法であって、
この被験体に対して少なくとも１つのＭＩＦインヒビターを含む組成物の有効量を投与する工程を包含し、
ここでこのＭＩＦインヒビターが少なくとも１つの抗ＭＩＦモノクローナルヒト化抗体を包含する、方法。
【０１６６】
Ｆ．被験体において熱傷関連心機能障害を処置および／または予防するための方法であって、
この被験体に対して少なくとも１つのＭＩＦインヒビターを含む組成物の有効量を投与する工程を包含し、この組成物は、筋肉内注射、腹腔内注射、皮下注射、脈管内注射およびその組み合わせを包含する群より選択される少なくとも１つの経路を介して投与される、方法。
【０１６７】
Ｇ．被験体における熱傷関連心機能障害の処置および予防のための薬学的組成物であって：
少なくとも１つの抗ＭＩＦ抗体と；
少なくとも１つの薬学的に受容可能なキャリアと、
を包含する薬学的組成物。
【０１６８】
Ｈ．被験体における熱傷関連心機能障害の処置および予防のための薬学的組成物であって：
少なくとも１つのＭＩＦインヒビターと；
少なくとも１つの薬学的に受容可能なキャリアとを含み、このＭＩＦインヒビターとしては少なくとも１つの抗ＭＩＦ抗体を含む、薬学的組成物。
【０１６９】
Ｉ．被験体における心臓抑制および／または心機能障害の処置および予防のための方法であって：
この被験体に対して少なくとも１つの抗ＣＤ７４抗体を含む組成物の有効量を投与する工程を包含する、方法。
【０１７０】
Ｊ．被験体における心臓抑制および／または心機能障害の処置および予防のための方法であって：
この被験体に対して少なくとも１つの抗ＣＤ７４抗体を含む組成物の有効量を投与する工程を包含し、ここでこの心機能障害および／または心臓抑制としては、心筋活性の不規則性もしくは心筋活性の抑制またはその両方を包含する、方法。
【０１７１】
Ｋ．被験体における心機能障害の処置および／または予防のための方法であって：
この被験体に対して少なくとも１つの抗ＣＤ７４抗体の有効量を投与する工程を包含し、この心機能障害としては、少なくとも１つの熱傷関連心機能障害が挙げられる、方法。
【０１７２】
Ｌ．被験体における心機能障害の処置および／または予防のための方法であって：
この被験体に対して少なくとも１つの抗ＣＤ７４インヒビターを含む組成物の有効量を投与する工程を包含し、このＣＤ７４インヒビターとしては、少なくとも１つの抗ＣＤ７４抗体が挙げられる、方法。
【０１７３】
Ｍ．被験体における心機能障害および／または心臓抑制の処置および予防のための方法であって：
この被験体に対して少なくとも１つの抗ＣＤ７４インヒビターを含む組成物の有効量を投与する工程を包含し、このＣＤ７４インヒビターとしては、少なくとも１つの抗ＣＤ７４モノクローナル抗体が挙げられる、方法。
【０１７４】
Ｎ．被験体における心機能障害の処置および／または予防のための方法であって：
この被験体に対して少なくとも１つのＣＤ７４インヒビターを含む組成物の有効量を投与する工程を包含し、このＣＤ７４インヒビターとしては、少なくとも１つの抗ＣＤ７４モノクローナルヒト化抗体が挙げられる、方法。
【０１７５】
Ｏ．被験体における心機能障害の処置および／または予防のための方法であって：
この被験体に対して少なくとも１つの抗ＣＤ７４抗体を含む組成物の有効量を投与する工程を包含し、この組成物が、筋肉内注射、腹腔内注射、皮下注射、脈管内注射およびその組み合わせを包含する群より選択される少なくとも１つの経路を介して投与される、方法。
【０１７６】
Ｐ．被験体における心機能障害および／または心臓抑制の処置および予防のための薬学的組成物であって：
少なくとも１つの抗ＣＤ７４抗体と；
少なくとも１つの薬学的に受容可能なキャリアと、
を包含する薬学的組成物。
【０１７７】
Ｑ．被験体における心機能障害の処置および予防のための薬学的組成物であって：
少なくとも１つのＣＤ７４インヒビターと；
少なくとも１つの薬学的に受容可能なキャリアとを含み、このＣＤ７４インヒビターとしては少なくとも１つの抗ＣＤ７４抗体を含む、薬学的組成物。
【０１７８】
Ｒ．急性心筋梗塞後の被験体において心臓機能を改善するための方法であって：
この被験体に対して少なくとも１つの抗ＭＩＦ抗体を含む組成物の有効量を投与する工程を包含する、方法。
【０１７９】
Ｓ．急性心筋梗塞後の被験体における心機能を改善するための方法であって：
この被験体に対して少なくとも１つのＭＩＦインヒビターの有効量を投与する工程を包含し、
このＭＩＦインヒビターとしては、少なくとも１つの抗ＭＩＦ抗体を包含する、方法。
【０１８０】
Ｔ．急性心筋梗塞後の被験体において心機能を改善するための方法であって：
この被験体に対して少なくとも１つのＭＩＦインヒビターの有効量を投与する工程を包含し、
このＭＩＦインヒビターとしては、少なくとも１つの抗ＭＩＦモノクローナル抗体が挙げられる、方法。
【０１８１】
Ｕ．急性心筋梗塞後の被験体における心機能を改善するための方法であって：
この被験体に対して少なくとも１つのＭＩＦインヒビターの有効量を投与する工程を包含し、
このＭＩＦインヒビターとしては、少なくとも１つの抗ＭＩＦモノクローナルヒト化抗体が挙げられる、方法。
【０１８２】
Ｖ．急性心筋梗塞後の被験体における心機能を改善するための方法であって：
この被験体に対して少なくとも１つの抗ＭＩＦ抗体および少なくとも１つの抗ＣＤ７４抗体の有効量を投与する工程を包含する、方法。
【０１８３】
Ｗ．急性心筋梗塞後の被験体における心機能を改善するための方法であって：
この被験体に対して少なくとも１つのＭＩＦインヒビターおよび少なくとも１つのＣＤ７４インヒビターを含む組成物の有効量を投与する工程を包含し、このＣＤ７４インヒビターとしては、少なくとも１つの抗ＣＤ７４抗体が挙げられる、方法。
【０１８４】
Ｘ．急性心筋梗塞後の被験体における心機能を改善するための方法であって：
この被験体に対して少なくとも１つのＭＩＦインヒビターおよび少なくとも１つのＣＤ７４インヒビターを含む組成物の有効量を投与する工程を包含し、このＣＤ７４インヒビターとしては少なくとも１つの抗ＣＤ７４モノクローナル抗体が挙げられる、方法。
【０１８５】
Ｙ．急性心筋梗塞後の被験体における心機能を改善するための方法であって：
この被験体に対して少なくとも１つのＭＩＦインヒビターおよび少なくとも１つのＣＤ７４インヒビターを含む組成物の有効量を投与する工程を包含し、このＣＤ７４インヒビターとしては、少なくとも１つの抗ＣＤ７４モノクローナルヒト化抗体が挙げられる、方法。
【０１８６】
Ｚ．急性心筋梗塞後の被験体における心機能を改善するための方法であって：
この被験体に対して少なくとも１つの抗ＭＩＦ抗体を含む組成物の有効量を投与する工程を包含し、
この組成物が、筋肉内注射、腹腔内注射、皮下注射、脈管内注射およびその組み合わせを包含する群より選択される少なくとも１つの経路を介して投与される、方法。
【０１８７】
ＡＡ．被験体における心機能障害および／または心臓抑制の処置および予防のための薬学的組成物であって：
少なくとも１つの抗ＭＩＦ抗体と；
少なくとも１つの薬学的に受容可能なキャリアと、
を包含する薬学的組成物。
【０１８８】
ＢＢ．被験体における心機能障害および／または心臓抑制の処置および予防のための薬学的組成物であって：
少なくとも１つの抗ＭＩＦ抗体と；
少なくとも１つの抗ＣＤ７４抗体と；
少なくとも１つの薬学的に受容可能なキャリアとを含む、薬学的組成物。
【０１８９】
ＣＣ．急性心筋梗塞後の被験体において心機能障害を処置および／または予防するための方法であって：
この被験体に対して少なくとも１つの抗ＴＮＦＲ抗体および少なくとも１つの抗ＭＩＦ抗体の有効量を投与する工程を包含する、方法。
【０１９０】
ＤＤ．急性心筋梗塞後の被験体における心機能障害を処置および／または予防するための方法であって：
この被験体に対して少なくとも１つのＴＮＦＲインヒビターおよび少なくとも１つのＭＩＦインヒビターを含む組成物の有効量を投与する工程を包含し、
このＴＮＦＲインヒビターとしては、少なくとも１つの抗ＴＮＦＲ抗体が挙げられ、このＭＩＦインヒビターとしては少なくとも１つの抗ＭＩＦ抗体が挙げられる、方法。
【０１９１】
ＥＥ．急性心筋梗塞後の被験体において心機能障害を処置および／または予防するための方法であって：
この被験体に対して少なくとも１つのＴＮＦＲインヒビターおよび少なくとも１つのＭＩＦインヒビターを含む組成物の有効量を投与する工程を包含し、
このＴＮＦＲインヒビターとしては、少なくとも１つの抗ＴＮＦＲ抗体が挙げられ、このＭＩＦインヒビターとしては少なくとも１つの抗ＭＩＦ抗体が挙げられ、この抗ＴＮＦＲ抗体としては、少なくとも１つのモノクローナル抗体が挙げられる、方法。
【０１９２】
ＦＦ．急性心筋梗塞後の被験体における心機能障害を処置および／または予防するための方法であって：
この被験体に対して少なくとも１つのＴＮＦＲインヒビターおよび少なくとも１つのＭＩＦインヒビターを含む組成物の有効量を投与する工程を包含し、
このＴＮＦＲインヒビターとしては、少なくとも１つの抗ＴＮＦＲ抗体が挙げられ、このＭＩＦインヒビターとしては少なくとも１つの抗ＭＩＦ抗体が挙げられ、そしてこの抗ＴＮＦＲ抗体としては、少なくとも１つのモノクローナルヒト化抗体が挙げられる、方法。
【０１９３】
ＧＧ．急性心筋梗塞後の被験体における心機能障害を処置および／または予防するための方法であって：
この被験体に対して少なくとも１つのＴＮＦＲインヒビターおよび少なくとも１つのＭＩＦインヒビターを含む組成物の有効量を投与する工程を包含し、
このＴＮＦＲインヒビターとしては、少なくとも１つの抗ＴＮＦＲ抗体が挙げられ、このＭＩＦインヒビターとしては少なくとも１つの抗ＭＩＦモノクローナル抗体が挙げられる、方法。
【０１９４】
ＨＨ．急性心筋梗塞後の被験体における心機能障害を処置および／または予防するための方法であって：
この被験体に対して少なくとも１つのＴＮＦＲインヒビターおよび少なくとも１つのＭＩＦインヒビターを含む組成物の有効量を投与する工程を包含し、
このＴＮＦＲインヒビターとしては、少なくとも１つの抗ＴＮＦＲ抗体が挙げられ、このＭＩＦインヒビターとしては少なくとも１つの抗ＭＩＦモノクローナルヒト化抗体が挙げられる、方法。
【０１９５】
ＩＩ．急性心筋梗塞後の被験体における心機能障害を処置および／または予防するための方法であって：
この被験体に対して少なくとも１つのＴＮＦＲインヒビターおよび少なくとも１つのＭＩＦインヒビターを含む組成物の有効量を投与する工程を包含し、
このＴＮＦＲインヒビターとしては、少なくとも１つの抗ＴＮＦＲモノクローナルヒト化抗体が挙げられ、このＭＩＦインヒビターとしては少なくとも１つの抗ＭＩＦモノクローナルヒト化抗体が挙げられる、方法。
【０１９６】
ＪＪ．被験体における心機能障害および／または心臓抑制の処置および予防のための薬学的組成物であって、
少なくとも１つの抗ＴＮＦＲ抗体と；
少なくとも１つの抗ＭＩＦ抗体と、を包含する薬学的組成物。
【０１９７】
ＫＫ．被験体における心機能障害の処置および予防のための薬学的組成物であって、
少なくとも１つのＴＮＦＲインヒビターと；
少なくとも１つのＭＩＦインヒビターと；
少なくとも１つの薬学的に受容可能なキャリアと、を包含し；
このＴＮＦＲインヒビターが、少なくとも１つの抗ＴＮＦＲ抗体を包含する、薬学的組成物。
【０１９８】
ＬＬ．被験体における心機能障害の処置および予防のための薬学的組成物であって、
少なくとも１つのＴＮＦＲインヒビターと；
少なくとも１つのＭＩＦインヒビターと；
少なくとも１つの薬学的に受容可能なキャリアと、を包含し；
このＭＩＦインヒビターが、少なくとも１つの抗ＭＩＦ抗体を包含する、薬学的組成物。
【０１９９】
ＭＭ．被験体における心機能障害の処置および予防のための薬学的組成物であって、
少なくとも１つのＴＮＦＲインヒビターと；
少なくとも１つのＭＩＦインヒビターと；
少なくとも１つの薬学的に受容可能なキャリアと、を包含し；
このＴＮＦＲインヒビターとしては、少なくとも１つの抗ＴＮＦＲ抗体が挙げられ、このＭＩＦインヒビターとしては、少なくとも１つの抗ＭＩＦ抗体が挙げられる、薬学的組成物。
【０２００】
ＮＮ．被験体における心機能障害の処置および予防のための薬学的組成物であって、
少なくとも１つのＴＮＦＲインヒビターと；
少なくとも１つのＭＩＦインヒビターと；
少なくとも１つの薬学的に受容可能なキャリアと、を包含し；
このＴＮＦＲインヒビターとしては、少なくとも１つの抗ＴＮＦＲモノクローナル抗体が挙げられ、このＭＩＦインヒビターとしては、少なくとも１つの抗ＭＩＦモノクローナル抗体が挙げられる、薬学的組成物。
【０２０１】
ＯＯ．被験体における心機能障害の処置および予防のための薬学的組成物であって、
少なくとも１つのＴＮＦＲインヒビターと；
少なくとも１つのＭＩＦインヒビターと；
少なくとも１つの薬学的に受容可能なキャリアと、を包含し；
このＴＮＦＲインヒビターとしては、少なくとも１つの抗ＴＮＦＲモノクローナルヒト化抗体が挙げられ、このＭＩＦインヒビターとしては、少なくとも１つの抗ＭＩＦモノクローナルヒト化抗体が挙げられる、薬学的組成物。
【０２０２】
ＰＰ．被験体における心機能障害の処置および／または予防のための方法であって：
この被験体に対して少なくとも１つの抗ＭＩＦ抗体の有効量を投与する工程を包含する、方法。
【０２０３】
ＱＱ．被験体において心機能障害を処置および／または予防するための方法であって、この被験体に対して少なくとも１つの抗ＭＩＦ抗体を含む組成物の有効量を投与する工程を包含し、
ここでこの心機能障害としては、心筋活性の不規則性、心筋活性の抑制およびその組み合わせを含む群から選択される少なくとも１つを包含する、方法。
【０２０４】
ＲＲ．被験体において心機能障害および／または心臓抑制を処置および／または予防するための方法であって、
この被験体に対して少なくとも１つのＭＩＦインヒビターを含む組成物の有効量を投与する工程を包含し、
このＭＩＦインヒビターが少なくとも１つの抗ＭＩＦ抗体を包含する、方法。
【０２０５】
ＳＳ．被験体において心機能障害を処置および／または予防するための方法であって、この被験体に対して少なくとも１つのＭＩＦインヒビターを含む組成物の有効量を投与する工程を包含し、
このＭＩＦインヒビターとしては、少なくとも１つの抗ＭＩＦモノクローナル抗体が挙げられる、方法。
【０２０６】
ＴＴ．被験体において心機能障害を処置および／または予防するための方法であって、この被験体に対して少なくとも１つのＭＩＦインヒビターを含む組成物の有効量を投与する工程を包含し、
このＭＩＦインヒビターが少なくとも１つの抗ＭＩＦヒト化抗体を包含する、方法。
【０２０７】
ＵＵ．薬学的組成物であって、
治療上有効な量の少なくとも１つの抗ＭＩＦ抗体と；
少なくとも１つの薬学的に受容可能なキャリアと
を包含する、薬学的組成物。
【０２０８】
ＶＶ．薬学的組成物であって、
少なくとも１つのＭＩＦインヒビターと；
少なくとも１つの薬学的に受容可能なキャリアと、を包含し、
このＭＩＦインヒビターとしては少なくとも１つの抗ＭＩＦ抗体が挙げられる、薬学的組成物。
【０２０９】
ＷＷ．ＭＩＦインヒビターを同定するための方法であって、
少なくとも１つの筋細胞をＭＩＦに対して曝露する工程；
少なくとも１つのＭＩＦ関連筋細胞活性を決定する工程；
この筋細胞を少なくとも１つのＭＩＦおよび少なくとも１つの候補因子に対して曝露する工程；
この候補因子の存在下で少なくとも１つのＭＩＦ関連筋細胞活性を決定する工程；
この候補因子がこのＭＩＦ関連筋細胞活性に影響するか否かを決定する工程；
を包含する、方法。
【０２１０】
ＸＸ．ＭＩＦインヒビターを同定するための方法であって、
少なくとも１つの筋細胞をＭＩＦに対して曝露する工程；
少なくとも１つのＭＩＦ関連筋細胞活性を決定する工程；
この筋細胞を少なくとも１つのＭＩＦおよび少なくとも１つの候補因子に対して曝露する工程；
この候補因子の存在下で少なくとも１つのＭＩＦ関連筋細胞活性を決定する工程；
この候補因子がこのＭＩＦ関連筋細胞活性に影響するか否かを決定する工程；
を包含し、
このＭＩＦ関連筋細胞活性が免疫化学によって決定される、方法。
【０２１１】
ＹＹ．ＭＩＦインヒビターを同定するための方法であって、
少なくとも１つの筋細胞をＭＩＦに対して曝露する工程；
少なくとも１つのＭＩＦ関連筋細胞活性を決定する工程；
この筋細胞を少なくとも１つのＭＩＦおよび少なくとも１つの候補因子に対して曝露する工程；
この候補因子の存在下で少なくとも１つのＭＩＦ関連筋細胞活性を決定する工程；
この候補因子がこのＭＩＦ関連筋細胞活性に影響するか否かを決定する工程；
を包含し、
このＭＩＦ関連筋細胞活性がＬａｎｇｅｎｄｏｒｆｆアッセイによって決定される、方法。
【０２１２】
ＺＺ．ＭＩＦインヒビターを同定するための方法であって、
少なくとも１つの筋細胞をＭＩＦに対して曝露する工程；
少なくとも１つのＭＩＦ関連筋細胞活性を決定する工程；
この筋細胞を少なくとも１つのＭＩＦおよび少なくとも１つの候補因子に対して曝露する工程；
この候補因子の存在下で少なくとも１つのＭＩＦ関連筋細胞活性を決定する工程；
この候補因子がこのＭＩＦ関連筋細胞活性に影響するか否かを決定する工程；
を包含し、
このＭＩＦ関連筋細胞活性が心エコー法によって決定される、方法。
【０２１３】
ＡＡＡ．心機能障害をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、心筋活性の不規則性をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、心筋活性の抑制をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、熱傷に関連する心機能障害をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、急性心筋梗塞後の心機能障害をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、心臓抑制をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、ならびにそれらの組み合わせからなる群より選択される少なくとも１つのための方法であって、
この被験体に対して、少なくとも１つの低分子ＭＩＦインヒビターおよび／またはその塩の有効量を投与する工程を包含する、方法。
【０２１４】
ＢＢＢ．心機能障害をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、心筋活性の不規則性をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、心筋活性の抑制をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、熱傷に関連する心機能障害をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、急性心筋梗塞後の心機能障害をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、心臓抑制をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、ならびにそれらの組み合わせを包含する群より選択される少なくとも１つのための方法であって、
この被験体に対して、少なくとも１つの低分子ＭＩＦインヒビターおよび／またはその塩と；
少なくとも１つの薬学的に受容可能なキャリアと、
を含む組成物の有効量を投与する工程を包含する、方法。
【０２１５】
ＣＣＣ．被験体において熱傷関連の心臓抑制および／または心機能障害を処置および／または予防するための方法であって、
この被験体に対して少なくとも１つの低分子ＭＩＦインヒビターおよび／またはその塩の有効量を投与する工程、を包含する方法。
【０２１６】
ＤＤＤ．被験体において熱傷関連の心機能障害を処置および／または予防するための方法であって、
この被験体に対して少なくとも１つの低分子ＭＩＦインヒビターおよび／またはその塩の有効量を投与する工程、を包含し、
この熱傷関連心機能障害としては、心筋活性の不規則性もしくは心筋活性の抑制またはその両方が挙げられる、方法。
【０２１７】
ＥＥＥ．被験体において熱傷関連の心機能障害を処置および／または予防するための方法であって、
この被験体に対して少なくとも１つの低分子ＭＩＦインヒビターおよび／またはその塩を含む組成物の有効量を投与する工程、
を包含する、方法。
【０２１８】
ＦＦＦ．被験体において熱傷関連の心機能障害を処置および／または予防するための方法であって、
この被験体に対して少なくとも１つの低分子ＭＩＦインヒビターおよび／またはその塩を含む組成物の有効量を投与する工程を包含し、この組成物が、筋肉内注射、腹腔内注射、皮下注射、脈管内注射およびその組み合わせを包含する群より選択される少なくとも１つの経路を介して投与される、方法。
【０２１９】
ＧＧＧ．被験体における熱傷関連の心機能障害の処置および予防のための薬学的組成物であって：
少なくとも１つの低分子ＭＩＦインヒビターおよび／またはその塩と；
少なくとも１つの薬学的に受容可能なキャリアと、
を包含する薬学的組成物。
【０２２０】
ＨＨＨ．急性心筋梗塞後の被験体における心機能を改善するための方法であって：
この被験体に対して、少なくとも１つの低分子ＭＩＦインヒビターおよび／またはその塩の有効量を投与する工程を包含する、方法。
【０２２１】
ＩＩＩ．急性心筋梗塞後の被験体において心機能を改善するための方法であって：
この被験体に対して少なくとも１つの低分子ＭＩＦインヒビターおよび／またはその塩を含む組成物の有効量を投与する工程を包含し、
この組成物が、筋肉内注射、腹腔内注射、皮下注射、脈管内注射およびその組み合わせを包含する群より選択される少なくとも１つの経路を介して投与される、方法。
【０２２２】
ＪＪＪ．急性心筋梗塞後の被験体における心機能障害を処置および／または予防するための方法であって：
この被験体に対して、少なくとも１つの低分子ＭＩＦインヒビターおよび／またはその塩を含む組成物の有効量を投与する工程を包含する、方法。
【０２２３】
ＫＫＫ．心機能障害をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、心筋活性の不規則性をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、心筋活性の抑制をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、熱傷に関連する心機能障害をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、急性心筋梗塞後の心機能障害をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、心臓抑制をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、ならびにそれらの組み合わせを包含する群より選択される少なくとも１つのために有効な薬学的組成物であって、
少なくとも１つの抗ＴＮＦＲ抗体と；
少なくとも１つの抗ＭＩＦ抗体と；
少なくとも１つの薬学的に受容可能なキャリアと
を包含する組み合わせの有効量を含む、薬学的組成物。
【０２２４】
ＬＬＬ．心機能障害をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、心筋活性の不規則性をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、心筋活性の抑制をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、熱傷に関連する心機能障害をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、急性心筋梗塞後の心機能障害をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、心臓抑制をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、ならびにそれらの組み合わせを包含する群より選択される少なくとも１つのために有効な薬学的組成物であって、
少なくとも１つの抗ＣＤ７３抗体と；
少なくとも１つの抗ＭＩＦ抗体と；
少なくとも１つの薬学的に受容可能なキャリアと
を包含する組み合わせの有効量を含む、薬学的組成物。
【０２２５】
ＭＭＭ．心機能障害をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、心筋活性の不規則性をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、心筋活性の抑制をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、熱傷に関連する心機能障害をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、急性心筋梗塞後の心機能障害をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、心臓抑制をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、ならびにそれらの組み合わせを包含する群より選択される少なくとも１つのための方法であって、この被験体に対して、
少なくとも１つの抗ＴＮＦＲ抗体と；
少なくとも１つの抗ＭＩＦ抗体と；
少なくとも１つの薬学的に受容可能なキャリアと
を包含する組み合わせの有効量を投与する工程を包含する、方法。
【０２２６】
ＮＮＮ．心機能障害をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、心筋活性の不規則性をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、心筋活性の抑制をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、熱傷に関連する心機能障害をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、急性心筋梗塞後の心機能障害をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、心臓抑制をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、ならびにそれらの組み合わせを包含する群より選択される少なくとも１つのための方法であって、この被験体に対して
少なくとも１つの抗ＣＤ７３抗体と；
少なくとも１つの抗ＭＩＦ抗体と；
少なくとも１つの薬学的に受容可能なキャリアと
を包含する組み合わせの有効量を投与する工程を包含する、方法。
【０２２７】
ＯＯＯ．本発明の別の実施形態は、１つ以上の可溶性ＭＩＦレセプターおよび／またはＭＩＦレセプターアンタゴニスト（必要に応じて薬学的に受容可能なキャリアに含まれる）の有効量をその必要な被験体に投与する工程であって、心機能障害をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、心筋活性の不規則性をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、心筋活性の抑制をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、熱傷に関連する心機能障害をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、急性心筋梗塞後の心機能障害をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、心臓抑制をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、ならびにそれらの組み合わせを含む群より選択される少なくとも１つのための投与工程に関する。
【０２２８】
ＰＰＰ．本発明の別の実施形態は、任意の組み合わせで、以下：
低分子ＭＩＦインヒビター；
可溶性ＭＩＦレセプター；
ＭＩＦレセプターアンタゴニスト；
抗ＣＤ７４抗体；
抗ＭＩＦ抗体；
抗ＴＮＦＲ抗体；および
必要に応じて薬学的に受容可能なキャリア
の１つ以上の有効量をその必要な被験体に投与する工程であって、心機能障害をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、心筋活性の不規則性をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、心筋活性の抑制をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、熱傷に関連する心機能障害をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、急性心筋梗塞後の心機能障害をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、心臓抑制をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、ならびにそれらの組み合わせを含む群より選択される少なくとも１つのための投与工程に関する。
【０２２９】
ＱＱＱ．本発明の別の実施形態は、任意の組み合わせで、以下：
低分子ＭＩＦインヒビター；
可溶性ＭＩＦレセプター；
ＭＩＦレセプターアンタゴニスト；
抗ＣＤ７４抗体；
抗ＭＩＦ抗体；
抗ＴＮＦＲ抗体；および
必要に応じて薬学的に受容可能なキャリア
の１つ以上の有効量を含む組成物であって、この組成物が、心機能障害をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、心筋活性の不規則性をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、心筋活性の抑制をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、熱傷に関連する心機能障害をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、急性心筋梗塞後の心機能障害をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、心臓抑制をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、ならびにそれらの組み合わせを含む群より選択される少なくとも１つのために有効である組成物に関する。
【０２３０】
ＲＲＲ．本発明の別の実施形態は、有効量の抗ＴＮＦＲ抗体；および
必要に応じて薬学的に受容可能なキャリア
をその必要な被験体に投与する工程であって、心機能障害をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、心筋活性の不規則性をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、心筋活性の抑制をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、熱傷に関連する心機能障害をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、急性心筋梗塞後の心機能障害をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、心臓抑制をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、ならびにそれらの組み合わせを含む群より選択される少なくとも１つのための投与工程に関する。
【０２３１】
ＳＳＳ．本発明の別の実施形態は、有効量の抗ＴＮＦＲ抗体；および
必要に応じて薬学的に受容可能なキャリア
を含む組成物であって、この組成物が、心機能障害をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、心筋活性の不規則性をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、心筋活性の抑制をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、熱傷に関連する心機能障害をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、急性心筋梗塞後の心機能障害をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、心臓抑制をその処置および／または予防が必要な被験体において処置および／または予防すること、ならびにそれらの組み合わせを含む群より選択される少なくとも１つのために有効である組成物に関する。
【実施例】
【０２３２】
（実施例）
本発明を一般的に記載してきているが、例示のみの目的で本明細書に提供されるが、他に特定しない限り限定は意図していない、特定の実施例によってさらなる理解を深めることができる。
【０２３３】
（実施例１）
（抗体およびサイトカイン）  ヤギ抗ｈＭＩＦ  ＩｇＧおよびｒｈＭＩＦ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＮＩＮ）を、それぞれ、ＰＢＳおよび０．１％
ＢＳＡ含有ＰＢＳ中に再構成して、アリコートして、使用するまで−２０℃で保管した。ウサギ抗−ヤギＩｇＧ−ＨＲＰ（ＢｉｏＲａｄ  Ｃｏｒｐ．，Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ）は、使用するまで４℃で保管した。
【０２３４】
動物および実験デザイン。Ｃ５７ＢＬ／６ＪおよびＣ３Ｈ／ＨｅＪマウスは、６〜１０週齢で得た（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｓ，Ｂａｒ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｍｅ．）。３２５〜３６０ｇの体重の成体のＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット（Ｈａｒｌａｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｈｏｕｓｔｏｎ，ＴＸ）をこの研究に用いた。市販の固形飼料および水道水を自由に利用可能にさせた。全ての動物プロトコールは再審査されて、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｔｅｘａｓ  Ｓｏｕｔｈｗｅｓｔｅｒｎ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ  Ａｄｖｉｓｏｒｙ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅによって承認されて、ＮＩＨによって公開された、動物使用を管理する規則に従った。Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスには、４ｍｇ／ｋｇ  Ｅ．ｃｏｌｉ  ０１１１：Ｂ４
ＬＰＳ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｏｒｐ．，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，Ｍｏ．）を腹腔内（ｉ．ｐ．）に注射して、ＣＯ２窒息および引き続く頚部脱臼によって、注射後、テキストに示された時点で屠殺した。注射していないマウスをコントロールとして用いた。２つの抗ＭＩＦ抗体（ＩＩＩ．Ｄ．９およびＸＩＶ．１５．５，Ｒｏｃｋｌａｎｄ  Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．，Ｇｉｌｂｅｒｔｓｖｉｌｌｅ，ＰＡ）およびそれらのアイソタイプコントロール（ＨＢ−４９，Ｒｏｃｋｌａｎｄ  Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．，Ｇｉｌｂｅｒｔｓｖｉｌｌｅ，ＰＡ）を、心エコー研究におけるＬＰＳチャレンジの９０分前に腹腔内に（ｉ．ｐ．）注射した（１００μｇを２００μｌ  ＰＢＳ中に含有）。心臓全体を取り出して、液体窒素中で急速凍結させ、−８０℃で保管するか、または免疫組織化学のために、１０％天然の緩衝化ホルマリン中で２４時間固定して、７０％エタノールに入れた。
【０２３５】
（実施例２）
（タンパク質抽出およびウエスタンブロッティング）  心臓を解凍して、１％  ＮＰ４０、０．５％デオキシコール酸、０．１％  ＳＤＳ、２ｍＭ  ＥＤＴＡ、および１ｍＭ  ＰＭＳＦを含有するＴｒｉｓ−緩衝化生理食塩水（ＴＢＳ，５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ，１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、ｐＨ７．５）中で氷上でホモジナイズした。溶解物の濃度は、Ｂｉｏ−Ｒａｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａｓｓａｙ（Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ）を用いて定量した。タンパク質（２０μｇ）を、Ｌａｅｍｍｌｉサンプル緩衝液（Ｂｉｏ−Ｒａｄ，Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ）を用いて１：１希釈して、還元条件下で１８％  ＳＤＳポリアクリルアミドゲル上で再溶解した。このゲルを、半乾燥転写装置（ｓｅｍｉ−ｄｒｙ  ｔｒａｎｓｆｅｒ  ａｐｐａｒａｔｕｓ）（Ｂｉｏ−Ｒａｄ，Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ）を１５Ｖで１５分間用いて、ＰＶＤＦメンブレン（ＮＥＮ，Ｂｏｓｔｏｎ，ＭＡ）に転写した。メンブレンを、０．５％脱脂粉乳を含むＴＢＳ／０．１％  Ｔｗｅｅｎ−２０（ＴＢＳ−Ｔ）を用いて３０分間ブロックして、ヤギ抗−ｈＭＩＦ  ＩｇＧ（１：７５０）を含有するＴＢＳ／０．１％  Ｔｗｅｅｎ−２０／５％脱脂乳とともに４℃で一晩インキュベートした。このメンブレンをＴＢＳ−Ｔ中で１０分間３回洗浄して、抗ヤギＩｇＧ−ＨＲＰ（１：１０００）とともに室温で１時間インキュベートして、ＴＢＳ−Ｔを用いて１０分間４回洗浄した。このメンブレンを、アルカリ条件（ＳｕｐｅｒＳｉｇｎａｌ  Ｗｅｓｔ  Ｐｉｃｏ，Ｐｉｅｒｃｅ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ）のもとでルミノールに過酸化水素を加えた５ｍｌの混合物に５分間曝して、得られた化学発光反応を、Ｋｏｄａｋ  Ｘ−ＯＭＡＴ  ＡＲ  Ｆｉｌｍ（Ｅａｓｔｍａｎ  Ｋｏｄａｋ  Ｃｏ．，Ｒｏｃｈｅｓｔｅｒ，Ｎｅｗ．Ｙｏｒｋ）によって検出した。
【０２３６】
（実施例３）
（ＲＮＡ抽出、プローブ調製およびノーザンブロッティング）  全ＲＮＡを、製造業者のプロトコールに従って氷上で解凍した心臓からトリゾール（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）で抽出して、分光測定法によって定量した。ＭＩＦ特異的ノーザンプローブを、ＭＩＦプラスミド（Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，Ｈｕｎｔｓｖｉｌｌｅ，ＡＬ）からＤＮＡ（ＤＮｅａｓｙ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｋｉｔ，Ｑｉａｇｅｎ，Ｖａｌｅｎｃｉａ，ＣＡ）を単離すること、および引き続きＥＣＯＲ１およびＮＯＴ  Ｉ制限酵素（Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇｈ，ＰＡ）を用いてそれを切断することによって調製した。得られたＤＮＡを１．２％アガロースゲル上で分離して、精製し（ＧｅｎＥｌｕｔｅ  Ａｇａｒｏｓｅ  Ｓｐｉｎ  Ｃｏｌｕｍｎｓ，Ｓｕｐｅｌｃｏ，Ｂｅｌｌｅｆｏｎｔｅ，ＰＡ）、Ｒｅａｄｙ−Ｔｏ−Ｇｏ  Ｌａｂｅｌｉｎｇ  Ｂｅａｄｓ（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｐｈａｒｍａｃｉａ，Ｐｉｓｃａｔａｎｙ，ＮＪ）を用いて、５μｌ  ３２Ｐ−ｄＣＴＰ（３０００  Ｃｉ／ｍｍｏｌ）（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ，Ｂｏｓｔｏｎ，ＭＡ）で標識して、製造業者のプロトコールに従って、ＰｒｏｂｅＱｕａｎｔ  Ｍｉｃｒｏｃｏｌｕｍｎｓ（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｐｈａｒｍａｃｉａ，Ｐｉｓｃａｔａｎｙ，ＮＪ）中で精製した。
【０２３７】
ｍＲＮＡ（１０μｇ）を、１．２％アガロースゲル上で、１００Ｖで、１時間分離させて、転写電気泳動ユニット（ＴｒａｎｓＰｈｏｒ  ＰｏｗｅｒＬｉｄ，Ｈｏｅｆｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ）上で、Ｈｙｂｏｎｄ−Ｎ＋メンブレン（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｐｈａｒｍａｃｉａ，Ｂｕｃｋｉｎｇｈａｍ，Ｅｎｇｌａｎｄ）に対して１００Ｖで１時間転写させた。ＧＳ  Ｇｅｎｅ  Ｌｉｎｋｅｒ（Ｂｉｏ−Ｒａｄ，Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ）を用いてこのメンブレンにＲＮＡを２分間結合させた。メンブレンは、Ｐｅｒｆｅｃｔ−Ｈｙｂ  Ｐｌｕｓ（Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，Ｍｏ．）中で４〜５時間４２℃でプレハイブリダイズさせ、次いで、３２Ｐ標識したＭＩＦ  ＤＮＡプローブとともに４２℃で一晩インキュベートさせた。このメンブレンを２×ＳＳＣ／０．１％  ＳＤＳ中で３０分間２回４６℃で洗浄して、０．２×ＳＳＣ／０．１％  ＳＤＳ中で３０分間２回４６℃で洗浄し、Ｋｏｄａｋ  Ｘ−ＯＭＡＴ  ＡＲ  Ｆｉｌｍ（Ｅａｓｔｍａｎ  Ｋｏｄａｋ  Ｃｏ．，Ｒｏｃｈｅｓｔｅｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）によって検出した。次いで、この同じメンブレンを放射性標識したβ−アクチンを用いてプローブして、タンパク質の等しいローディングを確実にした。
【０２３８】
（実施例４）
（免疫組織化学）  組織を天然の緩衝化ホルマリン中で固定して、パラフィンに処理して、引き続き、西洋ワサビペルオキシダーゼおよびジアミノベンジジン（ＤＡＢ）色素原（Ｓｉｇｎｅｔ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｄｅｄｈａｍ，Ｍ  Ａ）を用いる、ウルトラ−ストレプトアビジン・ビオチンシステム（Ｕｌｔｒａ−ｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ  ｂｉｏｔｉｎ  ｓｙｓｔｅｍ）を用いて、ＢｉｏＴｅｋ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ  Ｔｅｃｈｍａｔｅ（商標）１０００自動免疫染色機（ａｕｔｏｍａｔｅｄ  ｉｍｍｕｎｏｓｔａｉｎｅｒ）（Ｖｅｎｔａｎａ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｔｕｃｓｏｎ，ＡＺ）上で室温で免疫染色した。最適の一次抗体希釈は、公知の陽性コントロール組織を用いて事前に決定した（ラットのＬＰＳチャレンジ後）。パラフィン切片を、ロータリーミクロトーム上で３μｍに切断して、正に荷電したガラススライド（ＰＯＰ１００  キャピラリーギャップスライド、Ｖｅｎｔａｎａ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｔｕｃｓｏｎ，ＡＺ）上に装着して、一晩風乾した。次いで切片をキシレンおよびエタノール中で脱パラフィン化して、新鮮な３％過酸化水素を用いて１０分間クエンチして、内因性の組織ペルオキシダーゼ活性を阻害して、脱イオン水を用いてリンスした。二次抗体の非特異的結合をブロックするために１５分間、未標識のブロック血清中で切片をインキュベートし、次いで１％クエン酸緩衝液（ＢｉｏＰａｔｈ，Ｏｋｌａｈｏｍａ  Ｃｉｔｙ，ＯＫ）中で希釈したウサギ抗ＭＩＦ（１：４００，Ｔｏｒｒｅｙ  Ｐｉｎｅｓ  ＢｉｏＬａｂｓ，Ｉｎｃ．，Ｈｏｕｓｔｏｎ，ＴＸ）、または陰性の試薬コントロールとしては緩衝液単独のいずれかとともに２５分間インキュベートした。緩衝液中での洗浄後、切片をビオチン化した多価二次抗体溶液（ヤギ抗ウサギ免疫グロブリン含有）とともに２５分間インキュベートした。次に、切片を緩衝液を用いて洗浄して、西洋ワサビペルオキシダーゼ結合体化ストレプトアビジン−ビオチン複合体中で１５分間インキュベートした、緩衝液中で再度洗浄し、次いでＤＡＢおよびＨ２Ｏ２を含有する緩衝液液の新鮮調製混合物を２回交換して各々５分間インキュベートして、その後に緩衝液中で次いで水中で洗浄した。次いで切片をヘマトキシリンで対比染色し、エタノールおよびキシレンの段階的な系列中で脱水して、カバースリップをかけた。スライドを光学顕微鏡によって検査して、ＤＡＢとの陽性の反応は、濃褐色の反応生成物として特定された。
【０２３９】
（実施例５）
（ｒＭＩＦに対する応答における心機能の決定）  Ｃ５７ＢＬ／６ＪおよびＣ３Ｈ／ＨｅＪマウスをＬａｎｇｅｎｄｏｒｆｆアッセイ中で用いた。要するに、２００Ｕの硫酸ヘパリンを複空内に与えて、２０分後にマウスを屠殺して、直ちに心臓を取り出して、氷上でＫｒｅｂｓ−Ｈａｎｓｅｌｅｉｔ緩衝液（２ｍＭ  ＮａＨＣＯ３、１１８ｍＭ  ＮａＣｌ、４．７ｍＭ  ＫＣＬ、１．２ｍＭ  ＫＨ２ＰＯ４、１．２ｍＭ  ＭｇＳＯ４、２．５ｍＭ  ＣａＣｌ２、１１．１ｍＭ  グルコース、ｐＨ７．４、これは、脱塩された脱イオン水で新鮮に調製され、そして９５％  Ｏ２および５％  ＣＯ２（ＰＯ２  ５９０ｍｍＨｇ、ｐＣＯ２  ３８ｍｍＨｇ）でバブリングした）中に入れた。この大動脈をＰＥ５０チューブングによってカニューレ挿入し、事前に濾過した酸素化Ｋｒｅｂｓ−Ｈａｎｓｅｌｅｉｔ  Ｂｕｆｆｅｒを用いて、１．５ｍｌ／ｍ（Ｔ３７℃）という一定の流速および１００ｍｌの再循環容積で、大動脈起始部を通じて逆行性の方法で心臓を灌流させた。心臓をウォータージャケットチャンバに入れて一定の温度および湿度を維持した。Ｓｔａｔｈａｍ圧力トランスデューサーに接続された、ＰＥ６０ｉｎｔｒａｔｎｅｄｉｃポリエチレン管を左室（ＬＶ）中に挿入して、ＬＶ圧を測定した。ＬＶ筋肉に挿入した２７Ｇサーミスタ・ニードルを用いて温度をモニターした。計測後、心臓を１０分間安定化させて、安定な圧力に達することができないか、またはこの時間中に不整な脈が続いていた心臓は研究から除外した。安定化後、ＬＶ圧力およびその一次導関数（ｄＰ／ｄＴ）、心拍および冠動脈潅流をマルチチャネルＧｒａｓｓ  ７Ｄポリグラフ（Ｇｒａｓｓ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｑｕｉｎｃｙ，ＭＡ）を用いて同時に測定した。全ての心臓についての心機能を、冠動脈潅流速度の変化に対して、ピークの収縮期ＬＶ圧力、および±ｄＰ／ｄｔ，Ｉａ値をプロットすることによって決定した。心臓を、灌流液に添加した２０ｎｇ／ｍｌ  ＲＭＩＦの有無とともに灌流させた。
【０２４０】
（実施例６）
（心エコー法による心機能障害の決定）
収縮期機能を評価するための心エコー図をＭモードの測定を用いて行なった。５％イソフルランを２．５Ｌ／ｍ  Ｏ２で２０秒間（意識消失まで）、続いて２％イソフルランおよびＯ２を平均１２〜１５分間用いて、マウスを麻酔した。Ｎａｉｒ（登録商標）ヘアリムーバーを用い、ガーゼを用いて３分間置いた後、胸郭および上腹部から毛を取り除いた。一過性の心臓抑制を生じさせるための導入の約５〜８分後に、麻酔したマウスで心エコー測定を得た。心エコー図によって検出した心機能におけるこれらの一過性の最小の変化は、吸入イソフルランを用いて報告されているが、ＦＳ（％）は安定であることが報告されている。心臓の心エコー図は、ランダムな方式および盲検的な方式で３００〜５００フレーム／秒のフレーム速度でＨｅｗｌｅｔｔ−Ｐａｃｋａｒｄ  Ｓｏｎｏｓ  ５５００（Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ；  Ｅｄｍｏｎｔｏｎ，Ａｌｂｅｒｔａ，Ｃａｎａｄａ）を用いて行なった。１２ＭＨｚの直線のトランスデューサを、ＵＳ移動ゲル（Ａｑｕａｓｏｎｉｃ  １００，Ｐａｒｋｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ；  Ｆａｉｒｆｉｅｌｄ，Ｎ．Ｊ．）の層と接した左側の胸郭に置いた。２次元の胸骨傍の短軸画像によって、乳頭筋レベルに近いＬＶのＭモードトレーシングが導かれた。深さは、１５０ｍ／ｓの走査速度で最小２ｃｍに設定された。トレーシングは、Ｓｏｎｙのカラープリンター（ＵＰ−５２００，Ｓｏｎｙ）で印刷された。
【０２４１】
（実施例７）
（Ｍモード測定）  データは、その各々が少なくとも３つの選択された拍動の平均にあたる少なくとも２つの別のスキャンの平均に相当する。心臓拡張末期は、最大のＬＶ拡張期径として規定され、そして心臓収縮末期は、後壁運動のピークとして規定された。収縮機能は、以下のようにＬＶ径から円周短縮率（ＦＳ）として算出された：図５Ａに示されるとおり、ＦＳ（％）：ＬＶＥＤ−ＬＶＥＳ／ＬＶＥＤ×１００。
【０２４２】
（実施例８）
（統計学的分析）  ノーザンおよびウエスタンのデータは、平均±標準誤差として表され、そして一元分散分析を用いて統計学的に分析される。実験群とコントロール群との間の有意差の決定は、チューキー法を用いて行なった（ｐ≦０．０５）。Ｌａｎｇｅｎｄｏｒｆｆ調製によって決定した心臓機能は、平均±標準誤差として表し、そして別の分析を各々のＬＶＰ、＋ｄＰ／ｄｔｍａｘ、および−ｄＰ／ｄｔｍａｘについて、処置群の関数として、そして冠血流速度について、反復測定分散分析を用いて行なった。Ｂｏｎｆｅｒｒｏｎｉ法を使用する多重比較手順を用いて、群間の有意差を決定した（ｐ＜０．０５）。心エコー図によって決定した心機能は、円周短縮率％（ＬＶＥＤ−ＬＶＥＳ／ＬＶＥＰ×１００．）±標準偏差によって表され、そして一元の反復測定分散分析を用いて分析される。チューキー検定を用いてさらなる比較を行ない、特定の群の間の有意差を決定した（ｐ＜０．０５）。全ての統計学的分析は、ＳｉｇｍａＳｔａｔ  ２．０３（ＳＰＳＳ  Ｉｎｃ．，Ｃｈｉｃａｇｏ，ＩＬ）およびＭｉｃｒｏｓｏｆｔ  Ｅｘｃｅｌ（Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ  Ｃｏｒｐ．，Ｓｅａｔｔｌｅ，ＷＡ）を用いて行なった。
【０２４３】
（実施例９）
ＭＩＦタンパク質は、インビボにおいて心筋細胞によって構成的に発現されて、ＬＰＳチャレンジに応答して放出される。心臓組織で行なった免疫組織およびウエスタン分析の両方によって、心室および心房の筋細胞を含む心臓細胞におけるＭＩＦの存在が、ベースラインのコントロール条件下で実証された（図１および２）。内毒素チャレンジ後、免疫組織化学およびイムノブロット分析の両方によって、内毒素後の心臓組織のＭＩＦの有意な減少が証明される。この減少は、１２時間で最も顕著（７５％低下）であったが、２４時間までにほぼベースラインのコントロールレベルに戻った。心臓におけるこの発現パターンは、肝臓および脾臓において証明されたパターンと同様であり（図２）、そしてＭＩＦがＬＰＳチャレンジ後に組織内の予め形成された貯蔵から放出されるという仮説と一致している。組織からのＭＩＦの放出は、４時間でイムノブロットで証明され（図１）、内毒素曝露後の血清レベルの増大と相関している（表１）。
【０２４４】
【表１】
2010159267.tif 000007
（実施例１０）
（内毒素チャレンジ後の心筋でのＭＩＦ  ＭＲＮＡ発現）  コントロールのマウスまたはＬＰＳチャレンジマウスのいずれかの心臓から所定の時点で得られたＲＮＡのノーザン分析によって、ＭＩＦ  ｍＲＮＡは、コントロールマウスで構成的に発現されること、およびＬＰＳチャレンジ後に、心臓全体の調製物においてＭＩＦ  ｍＲＮＡの濃度に有意な変化は検出できないことが示される。
【０２４５】
（実施例１１）
ＭＩＦは、収縮期および拡張期の心機能障害を誘発する。ＭＩＦが心機能に直接影響するか否かを決定するために、自発的に拍動している正常なマウス心臓（Ｌａｎｇｅｎｄｏｒｆｆ調製）を、組み換えＭＩＦ（ｒＭＩＦ）を用いて、敗血性ショックを有するヒトの血清で実証された濃度（２０）に近い２０ｎｇ／ｍｌの濃度で灌流させた。ＭＩＦに対する応答は、Ｃ５７ＢＬ／６ＪマウスおよびＣ３Ｈ／ＨｅＪマウスの両方由来の心臓において確認された。Ｃ３Ｈ／ＨｅＪマウスは、内毒素（４１−４３）に対して耐性であり、従って、観察される任意の抑制が灌流液中の微量の内毒素に起因し得る可能性は限定される。表２は、コントロールの灌流液、または２０ｎｇ／ｍｌの組み換えＭＩＦを含有する灌流液での１．５ｍｌ／分の逆行性の心房灌流に対する、両方のマウス系統の応答を図示する。ＭＩＦでの灌流によって、両方のマウス系統でＬＶＰ、＋ｄＰ／ｄｔｍａｘ、および−ｄＰ／ｄｔｍａｘの有意な低下がもたらされた。図４は、ある範囲の冠血流速度を超えるＭＩＦの効果を例示する。実験群の割り当てに関わらず、全ての心臓において収縮能力の段階的な増大が存在する。ＭＩＦに曝された心臓とコントロールの心臓との比較によって、機能曲線の下向きのシフトが明らかになり、これによって、２０ｎｇ／ｍｌ  ｒＭＩＦに応答する有意な収縮期および拡張期の抑制が示された（ｐ＜０．０５）。ＭＩＦの効果は、内毒素感受性系統（Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ）および内毒素耐性系統（Ｃ３Ｈ／ＨｅＪ）の両方で統計学的に同一であった。同様に、ｒＭＩＦで灌流させたＣ５７ＢＬ／６ＪとＣ３Ｈ／ＨｅＪの研究心臓の間でＬＶＰ、＋ｄＰ／ｄｔｍａｘおよび−ｄＰ／ｄｔｍａｘに相違はなかった。
【０２４６】
【表２】
2010159267.tif 000008
（実施例１２）
抗ＭＩＦ抗体は、インビボにおいてＬＰＳ誘発性の心臓抑制を改善する。インビボにおいて心機能障害の病原性におけるＭＩＦの影響を決定するために、連続的な心エコー（Ｍモード）を、抗ＭＩＦモノクローナル抗体、アイソタイプコントロール抗体、または処置なしのいずれかを用いて事前に処置（９０分前）されている、ＬＰＳチャレンジしたマウスで行なった（図５）。ＬＰＳチャレンジ４時間後、全てのＬＰＳチャレンジしたマウスの円周短縮率％（ＦＳ％）は、群の割り当てにかかわらず、同様に抑制された（ＦＳ％において５０％減少）。しかし、ＬＰＳチャレンジの８時間後、いずれかの抗ＭＩＦモノクローナル抗体を注射されたマウスは、処置なしまたはアイソタイプ抗体コントロールのいずれかを受けている、ＬＰＳチャレンジされた群に比較してＦＳ％の統計学的に有意な回復を実証した（図５）。機能のこの増強された回復は、１２時間、２４時間および４８時間継続した。チャレンジ後４８時間で、抗ＭＩＦ処置群は、ＦＳ％のほぼ完全な回復を示したが、ＬＰＳチャレンジした群は、顕著に抑制されたままであった。４８時間にわたって、ニセマウスのＦＳ％は、有意に変化されず、このことは、心機能が麻酔または試験レジメン自体によって影響されなかったことを示している。さらに、全ての時点で、アイソタイプの抗体コントロールを注射されたマウスは、ＬＰＳチャレンジされた動物に同一であって、このことは抗ＭＩＦ抗体効果の特異性を示す。
【０２４７】
（実施例１３）
（材料および方法）
（抗体およびサイトカイン）。ポリクローナルウサギ抗ラットＭＩＦ  ＩｇＧ（Ｔｏｒｒｅｙ  Ｐｉｎｅｓ  ＢｉｏＬａｂｓ，Ｉｎｃ．，Ｈｏｕｓｔｏｎ，ＴＸ）を、ウエスタンイムノブロットおよび免疫組織化学に用いた。この抗体は以前にマウスＭＩＦと交差反応することが示されており、前に記載されたとおり調製された（２３）。ポリクローナルヤギ抗ウサギＩｇＧ−ＨＲＰ（ＢｉｏＲａｄ  Ｃｏｒｐ．，Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ）をウエスタンイムノブロットのための二次抗体として用いて、４℃で保管した。２つのモノクローナルマウス抗マウス（およびヒト）ＭＩＦ  ＩｇＧ１抗体（ＸＩＶ．１５．５およびＩＩＩ．Ｄ．９、Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ＰｈａｒｍａＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｉｎｃ．から贈呈）およびモノクローナルマウスＩｇＧ１アイソタイプコントロール抗体（ＨＢ−４９、Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ＰｈａｒｍａＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｉｎｃ．から贈呈）を、心エコー法研究において用いた。ＸＩＶ．１５．５およびＩＩＩ．Ｄ．９クローンの両方によるＭＩＦ活性のインビボ中和は、以前に実証されている。
【０２４８】
動物、実験デザインおよび熱傷。６〜１０週齢の雄性Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウス（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｓ，Ｂａｒ  Ｈａｒｂｏｒ，ＭＥ）を、特異的な病原体なしの環境で維持した。市販の固形飼料および水道水を自由に利用させた。全ての動物プロトコールは再審査されて、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｔｅｘａｓ  Ｓｏｕｔｈｗｅｓｔｅｒｎ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ  Ａｄｖｉｓｏｒｙ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅによって承認されて、ＮＩＨによって公開された、動物使用を管理する規則に従った。マウスは、４０％  ＴＢＳＡの熱傷に供した。要するにマウスは、効果を発揮するためにソフルラン（１〜２％）を２．５Ｌ／ｍの酸素とともに用いて麻酔した。次いで、外科用調製ブレードおよび７０％エタノールを用いて、そのマウスの背中および横腹から毛を取り除いた。煮沸水中で黄銅プローブを１００℃に加熱して、次いで動物の横腹および背中に５秒間、対であてた（表面に全部で８つのプローブ）。あるいは、ニセのマウスは麻酔して、剃毛したが熱傷は与えなかった。麻酔が除去された（酸素を継続することによって）後、Ｂｕｐｒｅｎｅｘ（２ｃｃ  ＬＲ＋０．２ｃｃ  Ｂｕｐｒｅｎｅｘ（＝０．０５ｍｇ／ｋｇ））を含む乳酸リンゲルの腹腔内注射を、熱傷後に与えた。次いで、マウスを、約１時間加熱ランプ下で、そして研究の期間中加熱パッド上で、個々のケージに入れて、厳密にモニターした。マウスを、ＣＯ２窒息と引き続く頚部脱臼によって、図に示した時点で屠殺した。モノクローナル抗ＭＩＦ抗体（ＩＩＩ．Ｄ．９およびＸＩＶ．１５．５）またはアイソタイプコントロール（ＨＢ−４９）を、心エコー図研究において熱傷の９０分前に腹腔内に注射した（１００μｇを２００μｌ  ＰＢＳに含有）。心臓全体を取り出して、液体窒素中で凍結し、−８０℃で保管した。平行する実験では、心臓を１０％の天然の緩衝化ホルマリン中で２４時間固定し、次いで免疫組織化学のために処理するまで７０％エタノール中に入れた。全血を後眼窩採血によって採集して、血清を収集して保管した。
【０２４９】
タンパク質抽出およびウエスタンブロッティング。−８０℃で保管した心臓を氷上で溶解緩衝液（１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、２ｍＭ  ＥＤＴＡ，０．１％Ｃｈａｐｓ，ｐＨ７．４中で、１０ｍｌの緩衝液あたり１の完全Ｍｉｎｉ−ＥＤＴＡ−Ｆｒｅｅプロテアーゼインヒビターカクテル錠剤、Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ，Ｍａｎｎｈｅｉｍ，Ｇｅｒｍａｎｙ）とともにホモジナイズした。タンパク質濃度をＢｉｏ−Ｒａｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａｓｓａｙ（Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ）を用いて定量した。次いで、５０μｇの総タンパク質（溶解物）であって、Ｌａｅｍｍｅｌｉサンプル緩衝液（Ｂｉｏ−Ｒａｄ）中に１：１の比で最終容積１０μｌに希釈したものを、還元条件下で１２％ＳＤＳポリアクリルアミドゲル上で溶解した。事前に染色したＳＤＳ−ＰＡＧＥ標準（Ｋａｌｅｉｄｏｓｃｏｐｅ  Ｂｒｏａｄ  ｒａｎｇｅ，Ｂｉｏ−Ｒａｄ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ）を各々のゲルで泳動して、検出されたバンドの適切な分子量を決定した。このゲルを、ミニトランスブロットトランスファー装置（Ｂｉｏ−Ｒａｄ，Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ）を１００Ｖで７０分間用いて、ＰＶＤＦメンブレン（ＮＥＮ，Ｂｏｓｔｏｎ，ＭＡ）に転写して、氷嚢で冷却した。このメンブレンをメタノールで再度湿らせて、１００＋ｍｌの水で最低３回洗浄し、そして４℃で一晩ブロックした（５％脱脂粉乳（Ｂｉｏ−Ｒａｄ）／ＴＢＳ／０．１％  Ｔｗｅｅｎ−２０（ＴＢＳ−Ｔ）。次いでこのメンブレンを一次ウサギ抗−ＭＩＦ（１：１２５０希釈）を用いて室温で２時間、５％乳／ＴＢＳ−Ｔ中でインキュベートして、ＴＢＳ−Ｔ中で１回、１５分間洗浄し、続いてＴＢＳ−Ｔ中で５回（各々５分）洗浄した。次いで、これをＴＢＳ−Ｔ中のＨＲＰ結合体化ヤギ抗ウサギ抗体（１：５０００）とともに室温で１時間インキュベートして、１５分間２回洗浄し、続いてさらに５回（各々５分）ＴＢＳ−Ｔ中で洗浄した。発色するために、５ｍｌのＥＣＬ試薬（ＳｕｐｅｒＳｉｇｎａｌ  Ｗｅｓｔ  Ｐｉｃｏ，Ｐｉｅｒｃｅ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ）を、ＰＶＤＦメンブレン上に５分間置いて、得られた化学発光反応をＫｏｄａｋ  Ｘ−ＯＭＡＴ  ＡＲ  Ｆｉｌｍ（Ｅａｓｔｍａｎ  Ｋｏｄａｋ  Ｃｏ．，Ｒｏｃｈｅｓｔｅｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）によって検出した。
【０２５０】
ほぼＭＩＦの分子量（１２．５ｋＤ）を有する単一のバンド密度の定量を、Ｓｃａｎｊｅｔ  ３４００ｃ（Ｈｅｗｌｅｔｔ  Ｐａｃｋａｒｄ，Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ，ＣＡ）を用いるＴＩＦＦファイル（８ビット  グレースケール）への放射線用フィルムの変換後にＱｕａｎｔｉｔｙ  Ｏｎｅ  ソフトウェア（Ｂｉｏ−Ｒａｄ，Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ，Ｖｅｒ．４．４．０，Ｂｕｉｌｄ  ３６）を用いて決定して、任意の単位（Ａ．Ｕ．）／ｍｍ２で報告した。
【０２５１】
（免疫組織化学）  組織を天然の緩衝化ホルマリン中で固定して、パラフィン処理し、引き続いて、西洋ワサビペルオキシダーゼおよびジアミノベンジジン（ＤＡＢ）色素原（Ｓｉｇｎｅｔ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｄｅｄｈａｍ，ＭＡ）を備えるウルトラ−ストレプトアビジン・ビオチンシステム（Ｕｌｔｒａ−ｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ  ｂｉｏｔｉｎ  ｓｙｓｔｅｍ）を用いて、室温でＢｉｏＴｅｋ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ  Ｔｅｃｈｍａｔｅ（商標）１０００自動化免疫染色機（Ｖｅｎｔａｎａ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｔｕｃｓｏｎ，ＡＺ）上で免疫染色した。最適の一次抗体濃度は、公知の陽性コントロール組織（ＬＰＳチャレンジしたラット）を用いて事前に決定した。パラフィン切片は、ロータリー・ミクロトームで３μｍに切断し、正に荷電したガラススライド（ＰＯＰ１００キャピラリーガススライド，Ｖｅｎｔａｎａ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｔｕｃｓｏｎ，ＡＺ）上に装着して、一晩風乾した。次いで切片をキシレンおよびエタノール中で脱パラフィンして、新鮮な３％過酸化水素で１０分間クエンチして内因性の組織ペルオキシダーゼ活性を阻害して、脱イオン水でリンスした。切片を、１５分間未標識のブロッキング血清中でインキュベートして、二次抗体の非特異的結合をブロックし、次いで１％クエン酸緩衝液（ＢｉｏＰａｔｈ，Ｏｋｌａｈｏｍａ  Ｃｉｔｙ，ＯＫ）中で希釈したポリクローナルウサギ抗ラットＭＩＦ  ＩｇＧ（１：４００，Ｔｏｒｒｅｙ  Ｐｉｎｅｓ  ＢｉｏＬａｂｓ，Ｉｎｃ．，Ｈｏｕｓｔｏｎ，ＴＸ）または、陰性の試薬コントロールとして緩衝液単独のいずれかとともに２５分間インキュベートした。陰性の試薬コントロールは、各々の時点についておよび各々の器官について行なった。緩衝液中での洗浄後、切片を、ビオチン化多価二次抗体溶液（ヤギ抗ウサギ免疫グロブリンを含有）とともに２５分間インキュベートした。次に、切片を緩衝液で洗浄し、西洋ワサビペルオキシダーゼ結合体化ストレプトアビジン−ビオチン複合体中で１５分間インキュベートして、緩衝液中で再度洗浄し、次いでＤＡＢおよびＨ２Ｏ２を有する緩衝液の新鮮に調製した混合物を２回交換して各々５分間インキュベートして、続いて緩衝液、次いで水中で洗浄した。次いで切片をヘマトキシリンで対比染色して、段階的な一連のエタノールおよびキシレン中で脱水し、カバースリップをかけた。スライドを蛍光顕微鏡によって観察して、ＤＡＢとの陽性の反応は、濃褐色反応生成物として同定された。
【０２５２】
血清ＭＩＦレベルの決定。６匹のマウス由来の血清を、製造業者の指示に従って、Ｃｈｅｍｉｋｉｎｅ（商標）ラット／マウスマクロファージ阻害因子（ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  ｆａｃｔｏｒ）（ＭＩＦ）ＥＩＡキット（Ｃｈｅｍｉｃｏｎ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．，Ｔｅｍｅｃｕｌａ，ＣＡ）を用いてマウスＭＩＦについてアッセイした。要するに、５μｌの標準、サンプル、または反応緩衝液（ブランク）を、各々のウェルに３連で添加した。次に、１００μｌの希釈ＭＩＦ−ＨＲＰ抗体結合体を各々のウェルに添加して、室温で２時間インキュベートした。次いでウェルを５回洗浄して、１００μｌの３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）基質を添加して、暗野で３０分間室温でインキュベートさせた。停止試薬を各々のウェルに加えて、穏やかに混合し、アッセイの終了３０分内に４５０ｎｍ（バックグラウンド６３０ｎｍ）でＥＬＩＳＡプレートリーダー（ＥＬ  ３１２ｅ  Ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ  Ｒｅａｄｅｒ，Ｂｉｏ−Ｔｅｋ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｗｉｎｏｏｓｋｉ，ＶＴ）でＥＬＩＳＡを読みとった。
【０２５３】
Ｌｕｍｉｎｅｘによる多重サイトカイン検出。血漿の炎症性サイトカイン（ＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＦＮ−γ、ＴＮＦ−α、およびＧＭ−ＣＳＦ）の濃度は、製造業者の指示に従って、Ｌｕｍｉｎｅｘ  ｘＭＡＰ（商標）システム（Ｌｕｍｉｎｅｘ  Ｃｏｒｐ．，Ａｕｓｔｉｎ，ＴＸ）上で、マウスサイトカインＴｅｎ−Ｐｌｅｘ抗体ビーズキット（Ｂｉｏｓｏｕｒｃｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．，Ｃａｍａｒｉｌｌｏ，ＣＡ）を用いて検出した。このプレートをＬｕｍｉｎｅｘ  ＸＹＰ（商標）プラットフォーム上にロードして、この装置を５０μｌを除去するようにセットして、総ての事象をビーズセットあたり１００に等しく設定した。各々のサイトカインについて少なくとも１００の事象（ほとんど＞２００）を各々のサンプル中で収集して、統計学的に有意な結果を確認した。Ｌｕｍｉｎｅｘ（商標）Ｄａｔａ  Ｃｏｌｌｅｃｔｏｒ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ（Ｌｕｍｉｎｅｘ  Ｃｏｒｐ．，Ａｕｓｔｉｎ，ＴＸ）を用いてデータを収集した。各々の試行に用いたロット特異的な再構成した標準の濃度をソフトウェアに入れて、次いで未知のサンプルについての分析濃度をＭａｓｔｅｒＰｌｅｘ（商標）ＱＴソフトウェア（Ｖｅｒｓｉｏｎ  １．２．８．５８，Ｍｉｒａｉ  Ｂｉｏ，Ｉｎｃ．，Ａｌａｍｅｄａ，ＣＡ）を用いてサイトカイン特異的な標準曲線から推定した。最初の希釈係数を考慮するために最終濃度に２を掛けた。いずれかのサイトカインについての標準曲線よりも高いサンプルは検出されなかった。
【０２５４】
総ＲＮＡ単離、ＭＩＦおよびβアクチンプローブ調製およびノーザンブロッティング。−８０℃で保管した心臓を、液体窒素を充填した乳棒に入れて乳鉢で微細な粉末になるまで細かくした。次いで、各々の粉砕された心臓を２ｍｌのＴｒｉｚｏｌ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）に直ちに入れて、総ＲＮＡを製造業者のプロトコールに従って単離し、分光測定によって定量した。ＭＩＦ特異的なノーザンプローブは、Ｇｅｎｅｌｕｔｅ  ＨＰ  Ｐｌａｓｍｉｄ  ＭｉｄｉＰｒｅｐキット（Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）を用いて単離したＭＩＦ含有プラスミド（Ｉｍａｇｅ  Ｃｌｏｎｅ  Ｉ．Ｄ．６３４９１０，Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，Ｈｕｎｔｓｖｉｌｌｅ，ＡＬ）から調製した。ＥｃｏＲ１およびＮｏｔ１消化（Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇｈ，ＰＡ）によってフラグメントを調製して、ゲル精製し、ＧｅｎＥｌｕｔｅ  Ａｇａｒｏｓｅ  Ｓｐｉｎ  Ｃｏｌｕｍｎｓ（Ｓｕｐｅｌｃｏ，Ｂｅｌｌｅｆｏｎｔｅ，ＰＡ）を用いて１．２％アガロースゲル上で単離した。βアクチンプローブＤＮＡフラグメントは、Ａｍｂｉｏｎ（Ａｕｓｔｉｎ，ＴＸ）から購入した。ＭＩＦおよびβ−アクチンプローブの両方を、Ｓｔｒｉｐ−ＥＺ（商標）ＤＮＡプローブ合成キット（Ａｍｂｉｏｎ，Ａｕｓｔｉｎ，ＴＸ）を用いて５μｌ［α−３２Ｐ］ｄＡＴＰ（３０００  Ｃｉ／ｍｍｏｌ，１０ｍＣｉ／ｍｌ）（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ，Ｂｏｓｔｏｎ，ＭＡ）で標識して、製造業者のプロトコールに従ってＰｒｏｂｅＱｕａｎｔ  Ｍｉｃｒｏｃｏｌｕｍｎｓ（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｐｈａｒｍａｃｉａ，Ｐｉｓｃａｔａｎｙ，ＮＪ）中で精製した。
【０２５５】
ＲＮＡ（１０μｇ）を、１．２％アガロースゲル上で１００ボルトで１時間分離して、転写電気泳動ユニット（ＴｒａｎｓＰｈｏｒ  ＰｏｗｅｒＬｉｄ，Ｈｏｅｆｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ）上で、Ｈｙｂｏｎｄ−Ｎ＋メンブレン（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｐｈａｒｍａｃｉａ，Ｂｕｃｋｉｎｇｈａｍ，Ｅｎｇｌａｎｄ）に対して１．５アンペアで７０分間転写した。ＧＳ  Ｇｅｎｅ  Ｌｉｎｋｅｒ（Ｂｉｏ−Ｒａｄ，Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ）を用いて約２分間ＲＮＡをこのメンブレンに結合させた。このメンブレンは、Ｐｅｒｆｅｃｔ−Ｈｙｂ  Ｐｌｕｓ（Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）中で、６８℃で１時間ハイブリダイゼーションオーブン（Ｓｏｒｖａｌｌ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｉｎｃ．，Ｇｒｅｅｎｓｂｏｒｏ，ＮＣ）中でプレハイブリダイズさせた。次いで、剪断された変性された、サケまたはニシンの精巣ＤＮＡ（１００μｇ／ｍｌ）を１時間加え、続いて、＞５×１０８ｃｐｍ／μｇで標識された約０．１μｇのプローブを添加した。次いでこのブロットをハイブリダイゼーションオーブン中で６８℃で１２時間ハイブリダイズさせ、続いて２×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ中で６８℃で洗浄した。このメンブレンを１時間洗浄して、その緩衝液を交換し、次いでメンブレンをさらに１時間６８℃で洗浄した。このメンブレンをサランラップで包み、２４時間後にｍＲＮＡをＫｏｄａｋ  Ｘ−ＯＭＡＴ  ＡＲ  Ｆｉｌｍ（Ｅａｓｔｍａｎ  Ｋｏｄａｋ  Ｃｏ．，Ｒｏｃｈｅｓｔｅｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）によって検出した。次いでサンプルのメンブレンを、同様の方式で、放射性標識されたβアクチン（＞５×１０８ｃｐｍ／μｇで標識した０．１μｇのプローブ）（Ａｍｂｉｏｎ，Ａｕｓｔｉｎ，ＴＸ）を用いて再プローブさせた。濃度測定は、ウエスタンブロットについて上記したとおり行った。βアクチンのｍＲＮＡバンドは、ＭＩＦ  ｍＲＮＡ濃度測定を正規化するコントロールとして役立った。
【０２５６】
Ｌａｎｇｅｎｄｏｒｆｆによるエキソビボ心機能決定。マウス心臓機能を、Ｌａｎｇｅｎｄｏｒｆｆアッセイ手順を用いて決定した。要するに、２００単位の硫酸ヘパリンを腹腔内に注射して、２０分後にマウスを屠殺した。心臓を直ちに取り出して、氷上でＫｒｅｂｓ−Ｈｅｎｓｅｌｅｉｔ緩衝液（脱塩、脱イオンした水で新鮮に調製され、そして９５％Ｏ２および５％ＣＯ２（ＰＯ２  ５９０ｍｍＨｇ，ｐＣＯ２  ３８ｍｍＨｇ）でバブリングされた、２ｍＭ  ＮａＨＣＯ３，１１８ｍＭ  ＮａＣｌ，４．７ｍＭ  ＫＣＬ，１．２ｍＭ  ＫＨ２ＰＯ４，１．２ｍＭ  ＭｇＳＯ４，２．５ｍＭ  ＣａＣｌ２，１１．１ｍＭグルコース，ｐＨ７．４）中に入れた。大動脈にＰＥ５０チューブングをカニューレ挿入し、事前に濾過した酸素化Ｋｒｅｂｓ−Ｈａｎｓｅｌｅｉｔ  Ｂｕｆｆｅｒを用いて、１．５ｍｌ／ｍ（Ｔ３７℃、１００ｍｌの再循環容積）という一定の流速で、大動脈起始部を通じて逆行性の方法で心臓を灌流させた。心臓をウォータージャケットチャンバに入れて一定の温度および湿度を維持した。Ｓｔａｔｈａｍ圧力トランスデューサに接続した、ＰＥ６０ｉｎｔｒａｍｅｄｉｃポリエチレン管を左室（ＬＶ）中に挿入して、ＬＶ圧を測定した。ＬＶ筋肉に挿入した２７ゲージのサーミスタニードルを用いて温度をモニターした。計測後、心臓を１０分間安定化させて、安定な圧力に達することができないか、またはこの時間中に不整な脈が続いていた心臓はこの研究から除外した。安定化後、ＬＶ圧力およびその一次導関数（ｄＰ／ｄＴ）、心拍数および冠動脈潅流をマルチチャネルＧｒａｓｓ  ７Ｄポリグラフ（Ｇｒａｓｓ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｑｕｉｎｃｙ，ＭＡ）を用いて同時に測定した。冠動脈灌流の関数としての心室の能力を、冠血流速度の段階的な増大に対して、ピークの収縮期ＬＶ圧力、および±ｄＰ／ｄｔｍａｘ値をプロットすることによって全ての心臓について決定した。
【０２５７】
（心エコー法による心機能障害の決定）
収縮期機能を評価するための心エコー図をＭモードの測定を用いて行なった。５％イソフルランを２．５Ｌ／ｍ  Ｏ２で２０秒間（意識消失まで）、続いて２％イソフルランおよびＯ２を平均１２〜１５分間用いて、マウスを麻酔した。Ｎａｉｒ（登録商標）ヘアリムーバーおよびガーゼを用いて、３分間置いた後、胸郭および上腹部から毛を取り除いた。導入の約５〜８分後に、麻酔したマウスで心エコー測定を得た。心臓の心エコー図は、ランダムな方式および盲検的な方式で３００〜５００フレーム／秒のフレーム速度でＨｅｗｌｅｔｔ−Ｐａｃｋａｒｄ  Ｓｏｎｏｓ  ５５００（Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ；  Ｅｄｍｏｎｔｏｎ，Ａｌｂｅｒｔａ，Ｃａｎａｄａ）を用いて行なった。１２ＭＨｚの直線のトランスデューサを、ＵＳトランスミッション（ｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎ）ゲル（Ａｑｕａｓｏｎｉｃ  １００，Ｐａｒｋｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ；  Ｆａｉｒｆｉｅｌｄ，ＮＪ）の層と接した左側の胸郭に置いた。２次元の胸骨傍の短軸画像によって、乳頭筋レベルに近いＬＶのＭモードトレーシングが導かれた。深さは、１５０ｍ／ｓの走査速度で最小２ｃｍに設定された。トレーシングは、Ｓｏｎｙのカラープリンター（ＵＰ−５２００，Ｓｏｎｙ）で印刷された。
【０２５８】
（Ｍモード測定）  データは、少なくとも２つの別のスキャン由来の９つの選択された心周期の平均に相当する。心臓拡張末期は、最大のＬＶ拡張期径として規定され、そして心臓収縮末期は、後壁運動のピークとして規定された。収縮機能の代用である円周短縮率％（ＦＳ％）は、以下のようにＬＶ径から算出された：図１２に示されるとおり、ＦＳ（％）：ＬＶＥＤ−ＬＶＥＳ／ＬＶＥＤ×１００。
【０２５９】
（統計学的分析）  ノーザンおよびウエスタンのデータは、平均±標準誤差（ＳＥ）として表され、そして一元分散分析（ＡＮＯＶＡ）を用いて統計学的に分析される。多重比較手順はチューキー法を用いて使用して、群間の統計学的有意差を決定した。Ｌａｎｇｅｎｄｏｒｆｆ調製（安定化データを含む）によって決定した心臓機能は、平均±ＳＥとして表し、そして別の分析を各々のＬＶＰ、＋ｄＰ／ｄｔｍａｘ、および−ｄＰ／ｄｔｍａｘについて、処置群の関数として、そして冠血流速度について、反復測定ＡＮＯＶＡを用いて行なった。Ｂｏｎｆｅｒｒｏｎｉ法を使用する多重比較手順を用いて、群間の有意差を決定した。血清ＭＩＦレベルは、平均±ＳＥとして表されて、Ｂｏｎｆｅｒｒｏｎｉ法を使用する多重比較手順とともに、一元ＡＮＯＶＡを用いて統計学的に分析されて、群間の有意差が決定された。Ｍ−モード心エコー図によって決定した心機能は、円周短縮率％±ＳＥとして表され、一元反復測定ＡＮＯＶＡを用いて分析される。チューキー検定を用いてさらなる比較を実施して、特定の群間の有意差を決定した。全ての分析についての統計学的有意差は、ｐ≦０．０５として規定した。全ての統計学的分析は、ＳｉｇｍａＳｔａｔ  ２．０３（ＳＰＳＳ  Ｉｎｃ．，Ｃｈｉｃａｇｏ，ＩＬ）およびＭｉｃｒｏｓｏｆｔ  Ｅｘｃｅｌ（Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ  Ｃｏｒｐ．，Ｓｅａｔｔｌｅ，ＷＡ）を用いて行なった。
【０２６０】
（結果−実施例１３）
ＭＩＦタンパク質は、インビボにおいて心筋細胞によって構成的に発現されて、熱傷に応答して放出される。このサイトカインであるマクロファージ遊走阻止因子（ＭＩＦ）は、ウエスタンおよび免疫組織化学によって実証されるとおり、心室および心房の両方の筋細胞にベースラインで存在する（図７および８）。熱傷後、有意な減少（２・１倍）がＭＩＦの組織濃度で、８時間で同定され、これは１２時間でベースラインのレベルに戻った（図７）。この発現パターンは、熱傷後の肝臓、脾臓および肺において平行であって（図８）、これは、熱傷の応答メディエーターにおいてＭＩＦが放出されるという仮説と一致している。
【０２６１】
合成ＭＩＦおよびＩＬ−６レベルが熱傷後に増大される。ＭＩＦの最大の全身放出（２．２倍増大）は、血清中において４時間で特定され、そして８時間でベースラインレベルに戻った（図９）。最大血清ＩＬ−６レベルは、１２時間で同定され、これは４８時間までにベースラインレベルに戻った。血清ＩＬ−１２レベルは、熱傷後に低下して、２４時間で最低で、４８時間までにベースラインに戻った。試験した（材料および方法で列挙したように）他のサイトカンで、血清中で検出されたものはなかった。
【０２６２】
心臓におけるＭＩＦ  ｍＲＮＡは熱傷後８時間までに心臓で有意に増大する。ＭＩＦ  ｍＲＮＡのレベルは、ニセのマウスまたは熱傷後４、８、１２、２４および４８時間後のマウスのいずれかの心臓から単離された総ＲＮＡからのノーザン分析によって検出された（図１０）。ＭＩＦ  ｍＲＮＡは、心臓で構成的に発現され、そして転写の有意な増大は最初に８時間で生じ、これは試験の残りの時間経過（４８時間）の間、上方制御される（４８時間）（図１０）。
【０２６３】
抗ＭＩＦ抗体は、ＬＰＳ誘発性心臓抑制をエキソビボで改善する。ニセの操作、熱傷または熱傷とともに抗ＭＩＦ抗体の事前処置を受けているマウスから１．５ｍｌ／分の逆行性の大動脈灌流に対する心臓の応答は、心機能のＬａｎｇｅｎｄｏｒｆｆ分析を用いて決定した。熱傷を受けた１８時間後のマウスにおいて、ＬＶＰ、＋ｄＰ／ｄｔｍａｘ、−ｄＰ／ｄｔｍａｘ、ＤＲ、ｄＰ４０、ＴＰＰ、ＲＴ９０および最大−ｄＰ／ｄｔ時間における有意な低下が確認された。抗ＭＩＦ（クローンＩＩＩ．Ｄ．９）で事前処置された、熱傷を受けているマウスは、１８時間まで完全に保護され（表３）たが、アイソタイプコントロールで処置されたマウスは、熱傷のみと有意に異なることはなかった（データ示さず）。
【０２６４】
図１１は、ニセマウス、熱傷マウス、および抗ＭＩＦ抗体で事前処置した熱傷マウス由来の熱傷またはニセの手順の１８時間後の、ある範囲の冠血流速度にわたる心臓の機能を図示する。冠血流の増大によって、試験した全ての心臓（群）において収縮能力の段階的な増大が生じた。熱傷を受けているマウスは、ＬＶＰ、＋ｄＰ／ｄｔｍａｘおよび−ｄＰ／ｄｔｍａｘ機能曲線において下向きのシフトを生じ、このことは有意な収縮期および拡張期の機能障害を実証した（図１１）。しかし、この機能障害は、抗ＭＩＦ抗体が与えられた場合には存在せず、ニセマウスに対して有意な相違は確認されなかった（図１１）。
【０２６５】
抗ＭＩＦモノクローナル抗体療法は、インビボにおいて熱傷関連心臓抑制を改善する。連続的な心エコー（Ｍモード）を、熱傷を受けているマウス、および２つの抗ＭＩＦ抗体、アイソタイプコントロール、または処置なしのいずれかで熱傷の９０分前に事前に処置されたマウスにおいて行なった（図１２）。４および８時間で、全ての熱傷処置したマウスの円周短縮率％（ＦＳ％）は、抗ＭＩＦ処置にかかわらず、同様に抑制された２１．４ＦＳ（５６．２ＦＳ％−３４．８％）。しかし、熱傷の１２時間後、２つのモノクローナル抗ＭＩＦ抗体のいずれかを注射されたマウスは、アイソタイプ抗体コントロールの処置なしのいずれかを受けている、熱傷マウスに比較してＦＳ％の統計学的に有意な回復を実証した（図１２）。２４時間までに、処置されたマウスのＦＳ％は、コントロールと有意に異なることはなく、このことは、付随する心機能障害の完全な保護を示している。４８時間にわたって、ニセマウスのＦＳ％は有意に変化せず、これによって、この試験レジメンおよび麻酔が心機能に影響しなかったことが示される。最後に、アイソタイプコントロール抗体を投与されているマウスは、熱傷のみを受けている動物と有意な相違を示さず、これによって抗ＭＩＦ抗体の効果の特異性が示された。
【０２６６】
【表３】
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（実施例１４）
ＴＮＦ−αシグナル伝達がＭＩＦ分泌において有する役割、およびその関連する心機能障害を致死量未満の内毒素中毒症のモデルにおいて決定するため、以下の実験を実施例１４において実行した。
【０２６７】
（材料および方法）
（抗体およびサイトカイン）  マウスＭＩＦと交差反応するポリクローナルウサギ抗ラットＭＩＦ  ＩｇＧ（Ｔｏｒｒｅｙ  Ｐｉｎｅｓ  ＢｉｏＬａｂｓ，Ｉｎｃ．，Ｈｏｕｓｔｏｎ，ＴＸ）をウエスタンイムノブロットおよび免疫組織化学のために用いた。ポリクローナルヤギ抗ウサギＩｇＧ−ＨＲＰ（ＢｉｏＲａｄ  Ｃｏｒｐ．，Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ）をウエスタンイムノブロットのための二次抗体として用いた。２つのモノクローナルマウス抗マウス（およびヒト）ＭＩＦ  ＩｇＧ１抗体（ＸＩＶ．１５．５およびＩＩＩ．Ｄ．９、Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ＰｈａｒｍａＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｋｉｎｇ  ｏｆ  Ｐｒｕｓｓｉａ，ＰＡから贈呈）およびモノクローナルマウスＩｇＧ１アイソタイプコントロール抗体（ＨＢ−４９，Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ＰｈａｒｍａＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｉｎｃ．から贈呈）を、心エコー研究において用いた。ＸＩＶ．１５．５およびＩＩＩ．Ｄ．９クローンの両方によるＭＩＦ活性のインビボ中和は以前に実証されている。ＴＮＦ−αを中和するために用いた組み換えヒトＴＮＦＲ：Ｆｃ（Ｅｎｂｒｅｌ（登録商標））は、Ｉｍｍｕｎｅｘ  Ｃｏｒｐ．／Ａｍｇｅｎ，Ｉｎｃ．、（Ｔｈｏｕｓａｎｄ  Ｏａｋｓ，ＣＡ）から贈呈された。組み換えヒトＭＩＦは、Ｂｅｒｎｈａｇｅｎらの方法に従って合成して、Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  Ｐｈａｒｍａｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｉｎｃ．によって提供された。
【０２６８】
動物および実験デザイン。病原体なしの成体雄性Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスを、６〜１０週齢で入手して、約１２週齢で利用した（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｓ，Ｂａｒ  Ｈａｒｂｏｒ，ＭＥ）。Ｂ６：１２９ＰＦ１／ＪおよびＢ６；１２９Ｓ−Ｔｎｆｒｓｆｌａｔｍ１
ＩｍｘＴｎｆｒｓｆｌｂｔｍ１  Ｉｍｘマウス（ＴＮＦＲ−／−）の繁殖するペアをＪａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（Ｂａｒ  Ｈａｒｂｏｒ，ＭＥ）から購入して、雄性の子孫を遺伝子型決定後に２０〜２４週（３０〜４０グラム）で利用した。市販の固形飼料および水道水は自由に利用させた。全ての動物プロトコールは再審査されて、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｔｅｘａｓ  Ｓｏｕｔｈｗｅｓｔｅｒｎ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ  Ａｄｖｉｓｏｒｙ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅによって承認されて、ＮＩＨによって公開された、動物使用を管理する規則に従った。
【０２６９】
マウスに、４ｍｇ／ｋｇ  Ｅ．ｃｏｌｉ  ０１１１：Ｂ４  ＬＰＳ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｏｒｐ．，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，Ｍｏ．）を腹腔内注射して、ＣＯ２窒息および引き続く頚部脱臼によって屠殺した。注射していないマウスをコントロールとして用いた。２つの抗−ＭＩＦ抗体（ＩＩＩ．Ｄ．９およびＸＩＶ．１５．５，Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ＰｈａｒｍａＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｋｉｎｇ  ｏｆ  Ｐｒｕｓｓｉａ，ＰＡから贈呈）およびそのアイソタイプコントロール（ＨＢ−４９，Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ＰｈａｒｍａＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｉｎｃ．から贈呈）を、心エコー研究においてＬＰＳチャレンジの前に複空内に９０分注射した（１００μｇを２００μｇ  ＰＢＳに含有）。Ｅｎｂｒｅｌ（登録商標）（ｒｈＴＮＦＲ：Ｆｃ）を、野生型マウスにおいてＬＰＳチャレンジの７５分前に複空内に注射した（５ｍｇ／ｋｇまたは３００μｇを０．５ｍｌ  ＰＢＳに含有）。
【０２７０】
心臓全体を取り出して、液体窒素中で凍結し、−８０℃で保管するか、または１０％の天然の緩衝化ホルマリン中で２４時間固定して、免疫組織化学のために７０％エタノール中に入れた。全血を後眼窩採血によって採集して、分離試験管を用いて分離した。血清を無菌のスナップ・トップ（ｓｎａｐ−ｔｏｐ）試験管に移して、ＥＬＩＳＡによって分析するまで−８０℃で凍結させた。
【０２７１】
血清ＭＩＦレベルの決定。６匹のマウス由来の血清を製造業者の指示に従って、Ｃｈｅｍｉｋｉｎｅ（商標）ラット／マウスマクロファージ阻害性因子（Ｒａｔ／Ｍｏｕｓｅ  ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  ｆａｃｔｏｒ）（ＭＩＦ）ＥＩＡキット（Ｃｈｅｍｉｃｏｎ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．，Ｔｅｍｅｃｕｌａ，ＣＡ）を用いてマウスＭＩＦについて分析した。要するに、５μｌの標準物、サンプルまたは反応緩衝液（ｂｌａｎｋ）を各々のウェルに２連で添加した。希釈されたＭＩＦ−ＨＲＰ抗体結合体を各々のウェル（１００μｌ）に添加して、室温で２時間インキュベートさせた。次いで、ウェルを５回洗浄し、ＴＭＢ基質（１００μｌ）を、暗野で３０分間室温でインキュベートさせた。停止試薬を各々のウェルに添加して、穏やかに混合し、そしてアッセイの終了３０分内に４５０ｎｍ（バックグラウンド６３０ｎｍ）でＥＬＩＳＡプレートリーダー（ＥＬ  ３１２ｅ  Ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ  Ｒｅａｄｅｒ，Ｂｉｏ−Ｔｅｋ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｗｉｎｏｏｓｋｉ，ＶＴ）でＥＬＩＳＡを読みとった。
【０２７２】
タンパク質抽出およびウエスタンブロッティング。−８０℃で保管した心臓を氷上で溶解緩衝液（１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、２ｍＭ  ＥＤＴＡ，０．１％Ｃｈａｐｓ，ｐＨ７．４）中で、１０ｍｌの緩衝液（Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ，Ｍａｎｎｈｅｉｍ，Ｇｅｒｍａｎｙ）あたり１錠のＣｏｍｐｌｅｔｅ  Ｍｉｎｉ−ＥＤＴＡ−Ｆｒｅｅプロテアーゼインヒビターカクテル錠剤とともにホモジナイズした。タンパク質濃度をＢｉｏ−Ｒａｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａｓｓａｙ（Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ）を用いて定量して、Ｌａｅｍｍｅｌｉサンプル緩衝液（Ｂｉｏ−Ｒａｄ）中に希釈した５０μｇのタンパク質を、１：１の比で最終容積１０μｌまで添加して、還元条件下で１２％ＳＤＳポリアクリルアミドゲル上で溶解した。事前に染色したＳＤＳ−ＰＡＧＥ標準（Ｋａｌｅｉｄｏｓｃｏｐｅ  Ｂｒｏａｄ  ｒａｎｇｅ，Ｂｉｏ−Ｒａｄ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ）を各々のゲルで泳動して（１０μｌ／レーン）、検出されたバンドの適切な分子量を決定した。このゲルを、Ｍｉｎｉ  Ｔｒａｎｓｂｌｏｔ（登録商標）電気泳動転写セル（ｔｒａｎｓｆｅｒ  ｃｅｌｌ）（Ｂｉｏ−Ｒａｄ，Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ）を用いて１００Ｖで７０分間、ＰＶＤＦメンブレン（ＮＥＮ，Ｂｏｓｔｏｎ，ＭＡ）に転写して、氷嚢で冷却した。引き続き、このメンブレンをメタノールで再度湿らせて、１００＋ｍｌの水で最低３回洗浄し、そしてブロック（５％脱脂粉乳（Ｂｉｏ−Ｒａｄ）／ＴＢＳ／０．１％  Ｔｗｅｅｎ−２０（ＴＢＳ−Ｔ）中に４℃で一晩おいた。次いでこのメンブレンを一次ウサギ抗−ＭＩＦ（１：１２５０希釈）を用いて室温で２時間、５％乳／ＴＢＳ−Ｔ中でインキュベートさせた。このメンブレンをＴＢＳ−Ｔ中で１回、１５分間洗浄し、続いて５回（各々５分）洗浄した。次いで、このメンブレンをＴＢＳ−Ｔ中でＨＲＰ結合体化ヤギ抗ウサギ抗体（１：５０００に希釈）とともに室温で１時間インキュベートさせた。次いでこのメンブレンを１５分間２回洗浄し、続いてさらに５回（各々５分）洗浄した。次いで、このメンブレンを、５ｍｌのＥＣＬ試薬（ＳｕｐｅｒＳｉｇｎａｌ  Ｗｅｓｔ  Ｐｉｃｏ，Ｐｉｅｒｃｅ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ）とともに５分間発色させて、得られた化学発光反応をＫｏｄａｋ  Ｘ−ＯＭＡＴ  ＡＲ  Ｆｉｌｍ（Ｅａｓｔｍａｎ  Ｋｏｄａｋ  Ｃｏ．，Ｒｏｃｈｅｓｔｅｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）によって検出した。
【０２７３】
ほぼＭＩＦの分子量（１２．５ｋＤ）を有する単一のバンド密度の定量を、Ｓｃａｎｊｅｔ  ３４００ｃ（Ｈｅｗｌｅｔｔ  Ｐａｃｋａｒｄ，Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ，ＣＡ）を用いるＴＩＦＦファイル（８ビット  グレースケール）への放射線用フィルムの変換後にＱｕａｎｔｉｔｙ  Ｏｎｅ  ソフトウェア（Ｂｉｏ−Ｒａｄ，Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ，Ｖｅｒ．４．４．０，Ｂｕｉｌｄ  ３６）を用いて決定して、任意の単位（Ａ．Ｕ．）／ｍｍ２で報告した。
【０２７４】
（免疫組織化学）  組織を天然の緩衝化ホルマリン中で固定して、パラフィンに処理し、引き続いて、西洋ワサビペルオキシダーゼおよびジアミノベンジジン（ＤＡＢ）色素原（Ｓｉｇｎｅｔ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｄｅｄｈａｍ，ＭＡ）を備えるウルトラ−ストレプトアビジン・ビオチンシステム（Ｕｌｔｒａ−ｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ  ｂｉｏｔｉｎ  ｓｙｓｔｅｍ）を用いて、室温でＢｉｏＴｅｋ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ  Ｔｅｃｈｍａｔｅ（商標）１０００自動化免疫染色機（Ｖｅｎｔａｎａ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｔｕｃｓｏｎ，ＡＺ）上で免疫染色した。パラフィン切片は、ロータリー・ミクロトームで３μｍに切断し、正に荷電したガラススライド（ＰＯＰ１００キャピラリーガススライド，Ｖｅｎｔａｎａ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｔｕｃｓｏｎ，ＡＺ）上に装着して、一晩風乾した。次いで切片をキシレンおよびエタノール中で脱パラフィンして、新鮮な３％過酸化水素で１０分間クエンチして内因性の組織ペルオキシダーゼ活性を阻害して、脱イオン水でリンスした。切片を、１５分間未標識のブロッキング血清中でインキュベートして、二次抗体の非特異的結合をブロックし、次いで１％クエン酸緩衝液（ＢｉｏＰａｔｈ，Ｏｋｌａｈｏｍａ  Ｃｉｔｙ，ＯＫ）中で希釈したウサギ抗ラットＭＩＦ（１：４００，Ｔｏｒｒｅｙ  Ｐｉｎｅｓ  ＢｉｏＬａｂｓ，Ｉｎｃ．，Ｈｏｕｓｔｏｎ，ＴＸ）または、陰性の試薬コントロールとして緩衝液単独のいずれかとともに２５分間インキュベートした。緩衝液中での洗浄後、切片を、ビオチン化多価二次抗体溶液（ヤギ抗ウサギ抗体を含有）とともに２５分間インキュベートした。次に、切片を緩衝液で洗浄し、西洋ワサビペルオキシダーゼ結合体化ストレプトアビジン−ビオチン複合体中で１５分間インキュベートして、緩衝液中で再度洗浄し、次いでＤＡＢおよびＨ２Ｏ２を含有する緩衝液の新鮮に調製した混合物を２回交換して各々５分間インキュベートして、続いて緩衝液、次いで水中で洗浄した。次いで切片をヘマトキシリンで対比染色して、段階的な一連のエタノールおよびキシレン中で脱水し、カバースリップをかけた。スライドを蛍光顕微鏡によって観察して、ＤＡＢとの陽性の反応は、濃褐色反応生成物として同定された。
【０２７５】
総ＲＮＡ単離、ＭＩＦおよびβアクチンプローブ調製およびノーザンブロッティング。−８０℃で保管した心臓を、液体窒素を充填した乳棒に入れて乳鉢で微細な粉末になるまですりつぶした。次いで、各々の粉砕された心臓を２ｍｌのＴｒｉｚｏｌ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）に直ちに入れて、総ＲＮＡを製造業者のプロトコールに従って単離し、分光測定によって定量した。ＭＩＦ特異的なノーザンプローブは、Ｇｅｎｅｌｕｔｅ  ＨＰ  Ｐｌａｓｍｉｄ  ＭｉｄｉＰｒｅｐキット（Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）を用いて単離したＭＩＦ含有プラスミド（Ｉｍａｇｅ  Ｃｌｏｎｅ  Ｉ．Ｄ．６３４９１０，Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，Ｈｕｎｔｓｖｉｌｌｅ，ＡＬ）から調製した。ＥｃｏＲ１およびＮｏｔ１消化（Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇｈ，ＰＡ）によってフラグメントを調製して、ゲル精製し、ＧｅｎＥｌｕｔｅ  Ａｇａｒｏｓｅ  Ｓｐｉｎ  Ｃｏｌｕｍｎｓ（Ｓｕｐｅｌｃｏ，Ｂｅｌｌｅｆｏｎｔｅ，ＰＡ）を用いて１．２％アガロースゲル上で単離した。βアクチンプローブＤＮＡフラグメントは、Ａｍｂｉｏｎ（Ａｕｓｔｉｎ，ＴＸ）から購入した。ＭＩＦおよび（β−アクチンプローブの両方を、Ｓｔｒｉｐ−ＥＺ（商標）ＤＮＡプローブ合成キット（Ａｍｂｉｏｎ，Ａｕｓｔｉｎ，ＴＸ）を用いて５μｌ［α−３２Ｐ］ｄＡＴＰ（３０００  Ｃｉ／ｍｍｏｌ，１０ｍＣｉ／ｍｌ）（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ，Ｂｏｓｔｏｎ，ＭＡ）で標識して、製造業者のプロトコールに従ってＰｒｏｂｅＱｕａｎｔ  Ｍｉｃｒｏｃｏｌｕｍｎｓ（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｐｈａｒｍａｃｉａ，Ｐｉｓｃａｔａｎｙ，ＮＪ）中で精製した。
【０２７６】
単離された総ＲＮＡ（１０μｇ）を、製造業者のプロトコールに従って、１：３のサンプル：ローディング色素の比で、ホルムアルデヒドローディング色素（Ａｍｂｉｏｎ，Ｉｎｃ．）と合わせた。各々のゲルは、サンプル（１０μｇ）と平行して泳動した０．２４〜９．５ｋＢのＲＮＡラダー（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｃｏｒｐ．）を有した。サンプルおよびＲＮＡのラダーは、電気泳動前に１０分間６５℃において、１．２％アガロースゲル上で１×ＴＡＥ緩衝液（Ａｍｂｉｏｎ，Ｉｎｃ．）を用いて１００ボルトで１時間分離して、転写電気泳動ユニット（ＴｒａｎｓＰｈｏｒ  ＰｏｗｅｒＬｉｄ，Ｈｏｅｆｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ）上において０．５×ＴＡＥ中で、Ｈｙｂｏｎｄ−Ｎ＋メンブレン（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｐｈａｒｍａｃｉａ，Ｂｕｃｋｉｎｇｈａｍ，Ｅｎｇｌａｎｄ）に対して、１．５アンペアで７０分間、転写した。ＧＳ  Ｇｅｎｅ  Ｌｉｎｋｅｒ（Ｂｉｏ−Ｒａｄ，Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ）を用いて約２分間ＲＮＡをこのメンブレンに結合させた。このメンブレンを、ハイブリダイゼーションオーブン（Ｓｏｒｖａｌｌ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｉｎｃ．，Ｇｒｅｅｎｓｂｏｒｏ，ＮＣ）中でＰｅｒｆｅｃｔ−Ｈｙｂ  Ｐｌｕｓ（Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）中で、剪断された、変性されたサケ精子ＤＮＡ（１００μｇ／ｍｌ）とともに６８℃で１時間、プレハイブリダイズさせた。９０℃に１０分間加熱することによって（１０μｌのプローブとともに１００μｌ  １０ｍＭ  ＥＤＴＡ）、続いて、ハイブリダイゼーション緩衝液に対して＞５×１０８ｃｐｍ／μｇで標識された約０．１μｇのプローブを添加することによって、プローブを調製した。次いでこのブロットを６８℃で１２時間ハイブリダイズさせ、続いて２×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ中で６８℃で洗浄した。このメンブレンを１時間洗浄して、その緩衝液を交換し、次いでメンブレンをさらに１時間６８℃で洗浄した。このメンブレンをサランラップで包み、２４時間後にｍＲＮＡをＫｏｄａｋ  Ｘ−ＯＭＡＴ  ＡＲ  Ｆｉｌｍ（Ｅａｓｔｍａｎ  Ｋｏｄａｋ  Ｃｏ．，Ｒｏｃｈｅｓｔｅｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）によって検出した。次いでサンプルのメンブレンを、同様の方式で、放射性標識されたβアクチン（＞５×１０８ｃｐｍ／μｇで標識した０．１μｇのプローブ）（Ａｍｂｉｏｎ，Ａｕｓｔｉｎ，ＴＸ）を用いて再プローブさせた。濃度測定は、ウエスタンブロットについて上記したとおり行った。βアクチンのｍＲＮＡバンドは、ＭＩＦ  ｍＲＮＡ濃度測定を正規化するコントロールとして役立った。
【０２７７】
Ｌａｎｇｅｎｄｏｒｆｆによるエキソビボ心機能決定。マウス心臓機能を、Ｌａｎｇｅｎｄｏｒｆｆアッセイ手順を用いて決定した。要するに、２００単位の硫酸ヘパリンを腹腔内に注射して、２０分後にマウスを屠殺した。心臓を直ちに取り出して、氷上でＫｒｅｂｓ−Ｈｅｎｓｅｌｅｉｔ緩衝液（脱塩、脱イオンした水で新鮮に調製され、そして９５％Ｏ２および５％ＣＯ２（ＰＯ２  ５９０ｍｍＨｇ，ｐＣＯ２  ３８ｍｍＨｇ）でバブリングされた、２ｍＭ  ＮａＨＣＯ３，１１８ｍＭ  ＮａＣｌ，４．７ｍＭ  ＫＣＬ，１．２ｍＭ  ＫＨ２ＰＯ４，１．２ｍＭ  ＭｇＳＯ４，２．５ｍＭ  ＣａＣｌ２，１１．１ｍＭグルコース，ｐＨ７．４）中に入れた。大動脈にＰＥ５０チューブングをカニューレ挿入し、事前に濾過した酸素化したＫｒｅｂｓ−Ｈａｎｓｅｌｅｉｔ  Ｂｕｆｆｅｒを用いて、１．５ｍｌ／ｍ（３７℃の定温、１００ｍｌの再循環容積）という一定の流速で、大動脈起始部を通じて逆行性の方法で心臓を灌流させた。心臓をウォータージャケットチャンバに入れて一定の温度および湿度を維持した。Ｓｔａｔｈａｍ圧力トランスデューサに接続した、ｉｎｔｒａｍｅｄｉｃポリエチレン管（ＰＥ６０）を左室（ＬＶ）中に挿入して、ＬＶ圧を測定した。ＬＶ筋肉に挿入した２７ゲージのサーミスタニードルを用いて温度をモニターした。計測後、心臓を１０分間安定化させて、安定な圧力に達することができないか、またはこの時間中に不整な脈が続いていた心臓はこの研究から除外した。安定化後、ＬＶ圧力およびその一次導関数（ｄＰ／ｄＴ）、心拍数および冠動脈潅流をマルチチャネルＧｒａｓｓ  ７Ｄポリグラフ（Ｇｒａｓｓ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｑｕｉｎｃｙ，ＭＡ）を用いて同時に測定した。冠動脈灌流の関数としての心室の能力を、冠動脈潅流速度の段階的な増大に対してピークの収縮期ＬＶ圧力および±ｄＰ／ｄｔｍａｘ値をプロットすることによって全ての心臓について決定した。心臓は、灌流液に対する２０ｎｇ／ｍｌのｒＭＩＦの添加の有無において灌流させた。
【０２７８】
（心エコー法による心機能障害の決定）
収縮期機能を評価するための心エコー図はＭモードの測定を用いて行なった。５％イソフルランを２．５Ｌ／ｍ  Ｏ２とともに２０秒間（意識消失まで）、続いて２％イソフルランおよびＯ２を平均１２〜１５分間用いて、マウスを麻酔した。Ｎａｉｒ（登録商標）ヘアリムーバーおよびガーゼを用いて、３分間置いた後、胸郭および上腹部から毛を取り除いた。導入の約５〜８分後に、麻酔したマウスで心エコー測定を得た。心臓の心エコー図は、ランダムな方式および盲検的な方式で３００〜５００フレーム／秒のフレーム速度でＡｃｕｓｏｎ  Ｓｅｑｕｏｉａ（商標）Ｍｏｄｅｌ  Ｃ２５６（Ｓｉｅｍｅｎｓ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ，ＵＳＡ，Ｉｎｃ．，Ｍｏｕｎｔａｉｎ  Ｖｉｅｗ，ＣＡ）を用いて行なった。１５ＭＨｚの直線のトランスデューサ（１５Ｌ８，Ｓｉｅｍｅｎｓ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ，ＵＳＡ，Ｉｎｃ．）を、超音波伝動ゲル（Ａｑｕａｓｏｎｉｃ  １００，Ｐａｒｋｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ；  Ｆａｉｒｆｉｅｌｄ，ＮＪ）の層と接した左側の胸郭に置いた。２次元の胸骨傍の短軸画像によって、乳頭筋レベルに近いＬＶのＭモードトレーシングが導かれた。深さは、２００ｍ／秒の走査速度で最小２ｃｍに設定された。
【０２７９】
（Ｍモード測定）  データは、少なくとも２つの別のスキャン由来の９つの選択された心周期の平均に相当する。心臓拡張末期は、最大のＬＶ拡張期径として規定され、そして心臓収縮末期は、後壁運動のピークとして規定された。収縮機能の代用である円周短縮率％（ＦＳ％）は、以下のようにＬＶ径から算出された：図１８に示されるとおり、ＦＳ（％）：ＬＶＥＤ−ＬＶＥＳ／ＬＶＥＤ×１００。
【０２８０】
Ｌｕｍｉｎｅｘによる多重サイトカイン検出。血漿の炎症性サイトカイン（ＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＦＮ−γ、ＴＮＦ−α、およびＧＭ−ＣＳＦ）の濃度は、製造業者の指示に従って、Ｌｕｍｉｎｅｘ  ｘＭＡＰ（商標）システム（Ｌｕｍｉｎｅｘ  Ｃｏｒｐ．，Ａｕｓｔｉｎ，ＴＸ）上で、マウスサイトカインＴｅｎ−Ｐｌｅｘ抗体ビーズキット（Ｂｉｏｓｏｕｒｃｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．，Ｃａｍａｒｉｌｌｏ，ＣＡ）を用いて検出した。このプレートをＬｕｍｉｎｅｘ  ＸＹＰ（商標）プラットフォーム上にロードして、この装置を５０μｌを除去するようにセットして、総ての事象をビーズセットあたり１００に等しく設定した（ほとんどについて２００収集）。Ｌｕｍｉｎｅｘ（商標）Ｄａｔａ  Ｃｏｌｌｅｃｔｏｒ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ（Ｌｕｍｉｎｅｘ  Ｃｏｒｐ．，Ａｕｓｔｉｎ，ＴＸ）を用いてデータを収集した。各々の試行に用いたロット特異的な再構成した標準の濃度をソフトウェアに入れて、次いで未知のサンプルについての分析濃度をＭａｓｔｅｒＰｌｅｘ（商標）ＱＴソフトウェア（Ｖｅｒｓｉｏｎ  １．２．８．５８，Ｍｉｒａｉ  Ｂｉｏ，Ｉｎｃ．，Ａｌａｍｅｄａ，ＣＡ）を用いてサイトカイン特異的な標準曲線から推定した。最初の希釈係数を考慮するために最終濃度に２を掛けた。いずれかのサイトカインについての標準曲線よりも高いサンプルは検出されなかった。
【０２８１】
（統計学的分析）  ノーザンおよびウエスタンのデータは、平均±標準誤差（ＳＥ）として表され、そして一元分散分析（ＡＮＯＶＡ）を用いて統計学的に分析される。多重比較手順はチューキー法を用いて使用して、群間の統計学的有意差を決定した。Ｌａｎｇｅｎｄｏｒｆｆ調製（安定化データを含む）によって決定した心臓機能は、平均±ＳＥとして表し、そして別の分析を各々のＬＶＰ、＋ｄＰ／ｄｔｍａｘ、および−ｄＰ／ｄｔｍａｘについて、処置群の関数として、そして冠血流速度について、反復測定ＡＮＯＶＡを用いて行なった。Ｂｏｎｆｅｒｒｏｎｉ法を使用する多重比較手順を用いて、群間の有意差を決定した。血清ＭＩＦレベルは、平均±ＳＥとして表されて、Ｂｏｎｆｅｒｒｏｎｉ法を使用する多重比較手順とともに、一元ＡＮＯＶＡを用いて統計学的に分析されて、群間の有意差をが決定された。Ｍ−モード心エコー図によって決定した心機能は、円周短縮率％±ＳＥとして表され、一元反復測定ＡＮＯＶＡを用いて分析される。チューキー検定を用いてさらなる比較を実施して、特定の群間の有意差を決定した。全ての分析についての統計学的有意差は、ｐ≦０．０５として規定した。全ての統計学的分析は、ＳｉｇｍａＳｔａｔ  ２．０３（ＳＰＳＳ  Ｉｎｃ．，Ｃｈｉｃａｇｏ，ＩＬ）およびＭｉｃｒｏｓｏｆｔ  Ｅｘｃｅｌ（Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ  Ｃｏｒｐ．，Ｓｅａｔｔｌｅ，ＷＡ）を用いて行なった。
【０２８２】
（結果−実施例１４）
ＷＴマウス、Ｅｎｂｒｅｌ（登録商標）で事前処置したＷＴマウスおよびＴＮＦＲ−／−マウスの血清ＭＩＦレベル。ＭＩＦの血清レベルは、ＬＰＳチャレンジ後野生型マウスでは８時間で最大（ベースラインの約１．５倍）に達する（図１３Ａ）。ＴＮＦＲ−／−マウスにＬＰＳをチャレンジするとき、最大の血清ＭＩＦレベルは、１２時間で生じる（ベースラインの１．７倍）（図１３Ｂ）。最大血清ＭＩＦレベル（ベースラインの約２．３倍）は、Ｅｎｂｒｅｌ（登録商標）で事前に処置し（６０分）てＬＰＳをチャレンジした野生型マウスにおいて２４時間で確認された（図１３Ｃ）。
【０２８３】
心臓ＭＩＦは、ＬＰＳチャレンジ後のＴＮＦＲ−／−マウスにおいて、心臓、脾臓または肝臓からは放出されない。心臓、肝臓および脾臓において行なったウエスタンおよび免疫組織化学の両方によって、ＬＰＳチャレンジ後の野生型マウスにおいて以前に証明された放出は、その両方ともＴＮＦ−αシグナル伝達を妨げる、Ｅｎｂｒｅｌ（登録商標）で事前処置されたＴＮＦＲ−／−マウスでも野生型マウスでも、いずれの時点でも生じなか
った（図１４および図１５）。
【０２８４】
心臓のＭＩＦ転写は、ＬＰＳチャレンジ後ＴＮＦＲ−／−マウスでは調節されない。ＬＰＳをチャレンジしたＴＮＦＲ−／−マウス由来の心臓組織から単離した総ＲＮＡからのＭＩＦ  ｍＲＮＡの検出によって、ＭＩＦの転写は、ＬＰＳチャレンジ後に上方制御されないことが実証される（図１６）が、これは野生型マウスでは以前に４８時間で同定されている。
【０２８５】
ＭＩＦは、ＷＴマウスと同じ程度までＴＮＦＲ−／−マウスにおいて直接の心臓抑制効果を有する。ＭＩＦがＴＮＦと独立して心臓機能に直接影響するか否かを決定するために、自発的に拍動している正常なマウス心臓（Ｌａｎｇｅｎｄｏｒｆｆ調製）を、敗血性ショックを有する患者で実証された血清レベルに近い（２５）２０ｎｇ／ｍｌの濃度で組み換えヒトＭＩＦ（ｒＭＩＦ）を用いて灌流させた。Ｌａｎｇｅｎｄｏｒｆｆ灌流試験において用いたヒトＭＩＦは、マウスＭＩＦとほぼ９０％の相同性を有することが示されており、そして種に交差する生物学的機能を有することが示されている。
【０２８６】
表４は、コントロール灌流液または２０ｎｇ／ｍｌのｒＭＩＦを含有する灌流液を１．５ｍｌ／分で用いた逆行性の大動脈灌流に対するＴＮＦＲ−／−マウス、Ｃ５７ＢＬ／６マウスおよびＴＮＦＲ−／−マウスのバックグラウンド系統の応答を実証する。ｒＭＩＦの灌流は、両方のマウス系統におけるＬＶＰ、＋ｄＰ／ｄｔｍａｘ、−ｄＰ／ｄＴｍａｘ、およびｄｐ４０（ｍｍ  Ｈｇ／秒）の有意な減少を生じたが、一方他のパラメーター（最大±ｄＰ／ｄｔ時間、ＣＰＰ、ＣＶＲ、ａおよびＨＲ）は影響されなかった。図１８は、冠血流速度にわたってのｒＭＩＦの効果を例示する。冠血流量の増大によって、実験群の割り当てにかかわらず、収縮の威力の段階的な増大が生じた。ＭＩＦチャレンジした心臓によって、機能曲線における下向きのシフトが実証され、これによって２０ｎｇ／ｍｌに応答して有意な収縮性（＋ｄＰ／ｄｔ）および拡張性（−ｄＰ／ｄｔ）の機能曲線が生じた（ｐ＜０．０５）。
【０２８７】
抗ＭＩＦ抗体によるＭＩＦ中和によって、ＴＮＦＲ−／−マウスにおけるＬＰＳチャレンジの２４〜４８時間後に完全な保護が生じる。インビボにおける心機能障害の病理においてＭＩＦに対するＴＮＦシグナル伝達の影響を決定するために、連続的な心エコー（Ｍモード）を、２つの抗ＭＩＦモノクローナル抗体、アイソタイプコントロール抗体、または処置なしのいずれかで事前に処置（９０分前）されている、ＬＰＳチャレンジしたＴＮＦＲ−／−マウスで行なった（図１７）。ＬＰＳチャレンジの４、８および１２時間後、全てのＬＰＳチャレンジしたマウスの円周短縮率％（ＦＳ％）は、群の割り当てにかかわらず、ベースライン（４５．９＋／−０．００２  ＦＳ％）に比べて、同様に抑制された（２７．７＋／−０．０１  ＦＳ％）（図１７Ｂ、Ｃ、Ｅ）。しかし、ＬＰＳチャレンジの２４時間後、２つのモノクローナル抗ＭＩＦ抗体のいずれかを注射されたマウスは、ＬＰＳもしくはＬＰＳおよびアイソタイプ抗体を受けている、ＬＰＳチャレンジされた群に比較してＦＳ％の統計学的に有意な回復を実証した。機能のこの増強された回復は、４８時間継続し、この４８時間で、機能は完全な回復を示し、アイソタイプコントロールを投与されたＬＰＳチャレンジマウスは、顕著に抑制されたままであった（図１７Ｄ，１７Ｅ）。４８時間にわたって、未処置のコントロールのＴＮＦＲ−／−マウスのＦＳ％は、有意に変化されず、このことは、心機能が試験レジメンによって影響されなかったことを示している。
【０２８８】
野生型マウスおよびＴＮＦＲ−／−マウスにおける血清サイトカイン放出。他の炎症性サイトカインが、ＴＮＦ−αに加えてＬＰＳチャレンジ後早期に心機能障害においてある役割を果たすことが示されているので（すなわち、ＩＬ−１β、ＩＬ−６）、本発明者らは、野生型およびＴＮＦＲ−／−マウスにおける炎症性パネルの血清レベルを決定した（図１９）。この図では野生型マウスにおけるＴＮＦ−α、ＩＬ−１βの放出は明らかではない。この理由は、図１９Ａおよび１９Ｂに示されるような、ＴＮＦＲ−／−マウスでのこれらのサイトカインの有意な増大である（ＬＰＳチャレンジ後４時間で野生型を３１．２倍（４９３４／１５８ｐｇ／ｍｌ）および９４．７倍（７０９９／７５ｐｇ／ｍｌ）上回る）。同様に、ＩＬ−１２は、野生型マウスに比較してＴＮＦＲ−／−マウスでは増大していた（１．７倍（５１２８／２９３７ｐｇ／ｍｌ））（図１９Ｃ）が、ＩＦＮ−γのレベルは、３．６倍（２１０／５８ｐｇ／ｍｌ）低下した（図１９Ｄ）。ＩＬ−１０およびＩＬ−６は、野生型およびＴＮＦＲ−／−マウスで同様に増大したが、これらのサイトカインの各々の遅延はＴＮＦＲ−／−マウスでは小さかった（図１９Ｅおよび１９Ｆ）。ＩＬ−６のレベルは、野生型マウスに比較してＴＮＦＲＫＯマウスでは４時間で８．５倍であった（７０９９／８３５ｐｇ／ｍｌ）。ＧＭ−ＣＳＦの全身性の増大は、野生型およびＴＮＦＲ−／−マウスの両方で確認され、そして時間的な応答はほぼ同一であった（図１９Ｇ）．サイトカインＩＬ−２、ＩＬ−４およびＩＬ−５は、野生型またはＴＮＦＲ−／−マウスのいずれかにおけるＬＰＳチャレンジ後ごくわずかな変化も示さなかった。
【０２８９】
野生型マウスにおけるＭＩＦ中和後の血清サイトカイン放出。本研究においてアッセイした１０のサイトカインのうち、ＭＩＦ中和抗体（ＬＰＳで事前にチャレンジ）のみが野生型マウスでのＬＰＳチャレンジ後に血清のＩＦＮ−γおよびＩＬ−１０のレベルの調節（増大または減少）に影響した（図２０）。詳細には、ＩＦＮ−γの放出は、ＬＰＳチャレンジの８時間後にピークになり（図１９Ｃ）、そして３分の一に減弱された（２１０／６９ｐｇ／ｍｌ）（図２０Ａ）。４８時間でピークに達する、野生型マウスにおけるＩＬ−１０の遅延性の放出は、野生型マウスにおけるＬＰＳチャレンジ後２．９分の一に減弱された（２４４／８４ｐｇ／ｍｌ）（図２０Ｂ）。
【０２９０】
（表４．Ｌａｎｇｅｎｄｏｒｆｆ灌流実験における単離された心臓からのインビトロ安定化データ）  心機能は、平均±ＳＥとして表される。別々の分析を各々のパラメーター（左列）について、処置群および冠血流速度の関数として行なった。Ｂｏｎｆｅｒｒｏｎｉ法を使用する多重比較手順による反復測定ＡＮＯＶＡを用いて、群間の有意差を決定した（コントロールに比較して、＊ｐ＜０．０５）。
【０２９１】
【表４】
2010159267.tif 000010
（実施例１５）
（動物）：Ｃｈａｒｌｅｓ  ＲｉｖｅｒのＣ５７ＢＬ／６マウス（１２〜１５週齢）には、市販の固形飼料および水道水を自由に利用させて飼育した。全ての動物プロトコールは再審査されて、ＮＩＨによって公開された動物使用を管理する規則に従うＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｔｅｘａｓ  Ｓｏｕｔｈｗｅｓｔｅｒｎ  ＩＡＣＡＣによって承認された。
【０２９２】
（冠動脈結紮）：マウスを１〜１．５％のイソフルランで麻酔して、その後に冠動脈結紮を行なった。アトロピン（筋肉内に０．７５ｍｇ／ｋｇ与える）、リドカイン（筋肉内に１ｍｇ／ｋｇ）、および生理食塩水（腹腔内に１ｍｌ）を手技の前に与えた。マウスの鼻面にフィットする特注のマスクおよび小型動物用呼吸器（（Ｈａｒｖａｒｄ  Ａｐｐａｒａｔｕｓ，Ｉｎｃ．，Ｈｏｌｌｉｓｔｏｎ，ＭＡ）を用いて換気を行なった。左胸郭の第四肋間腔に切開（約５ｍｍ）を行い、心膜切開術を行なって左室を露出させた。左の冠動脈を、左心耳の約２ｍｍ下に８−０のプロレン（ｐｒｏｌｅｎｅ）を用いて閉塞した。引き続き、胸部を層を成して閉じて、シリンジ吸引によって胸部の陰圧を戻した。ブプレノルフィン（０．１０ｍｇ／ｋｇ）は手術後１回疼痛のために与えた。ニセの手順は、冠動脈の結紮なしに同じく行なった。
【０２９３】
（抗ＭＩＦ抗体）：モノクローナル抗マウスＭＩＦ  ＩｇＧ１抗体（ＩＩＩ．Ｄ．９，Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ＰｈａｒｍａＳｃｉｅｎｃｅ，Ｉｎｃ．より贈呈）およびモノクローナルＩｇＧ１アイソタイプコントロール抗体（ＨＢ−４９，Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ＰｈａｒｍａＳｃｉｅｎｃｅ，Ｉｎｃ．より贈呈）を、心エコーの研究に用いた。以前の研究は、ＭＩＦのインビボ中和を実証している。図２１〜２５は、本実施例で得られた結果を示す。図２１は、ＬＡＤ結紮後の、ＬＡＤのみ、および抗ＭＩＦ＋ＬＡＤでの心機能（円周短縮率）を比較する。図２２は、ＬＡＤ前の抗ＭＩＦ治療の効果であって、ＬＡＤのみ、および抗ＭＩＦ+ＬＡＤでの効果を示す。図２３は、いくつかの処置群についてのＬＡＤ４
８時間後の心機能データを示す。図２４は、ＬＡＤ４８時間後の血清トロポニン濃度であって、抗ＭＩＦ処置前および遅れた抗ＭＩＦ処置での濃度を示す。図２５は、結紮後２週間にわたる血清トロポニンＩおよびＭＩＦの濃度を示す。
【０２９４】
（実施例１６）
ＭＩＦは、ＬＰＳチャレンジ後の心筋細胞から分泌され、そして遅発性（＞６時間）の心機能障害を直接媒介する。哺乳動物細胞では、ＣＤ７４は近年、ＥＲＫ１／２細胞内シグナル伝達経路を介して効果を発揮する、ＭＩＦレセプターであることが確認された。ＣＤ７４が敗血症においてＭＩＦ誘発性心機能障害を媒介するか否かを決定するために、本発明者らは、１）ＬＰＳを用いて野生型マウス（Ｃ５７ＢＬ／６）をチャレンジし；２）抗ＣＤ７４モノクローナル中和抗体で事前処置された野生型マウスをＬＰＳを用いてチャレンジし、そして３）ＬＰＳ（４ｍｇ／ｋｇ）を用いてＣＤ７４ノックアウトマウスをチャレンジした。連続的な心エコー検査を行なって、円周短縮率（ＦＳ％）を決定した。２４時間で、コントロール（ＦＳ％＝５８±１％）に比較して、ＬＰＳを与えたＷＴマウスでは有意な障害が観察された（ＦＳ％＝３１．６％±３．３％）。ＬＰＳを用いてチャレンジされた、抗ＣＤ７４抗体処置されたマウス、そしてＣＤ７４ノックアウトマウスの両方で、心機能はＬＰＳのみを与えられた野生型マウスに比較して有意に改善された（それぞれ、ＦＳ％＝４９±３．６％および５３．３±２．４％、ｐ＜０．０５）。ＣＤ７４発現は、心臓ではいまだかつて実証されていないので、本発明者らは、イムノブロットおよび組織化学を行なって、これによって、ＣＤ７４が心臓細胞膜上におよびサイトゾル中に構成的に存在すること；そしてＬＰＳチャレンジ後に実質的に調節された（１２時間でほぼなし、４倍以上低下）ことを確認した。図２６〜３０および表５〜７。これらのデータは、ＣＤ７４が心筋細胞上で発現されて、心機能障害の重要なメディエーターであることを初めて実証する。
【０２９５】
（表５）
（ゲルの名称：ＣＤ７４シリーズ１（列１−Ｄイメージ）
【０２９６】
【表５】
2010159267.tif 000011
バックグラウンド差引き法：局所
データ単位：強度（ＩＮＴ）。
【０２９７】
（表６  ＣＤ７４  ＫＯマウス−灌流液にｒｈ／ＭＩＦを添加）
【０２９８】
【表６】
2010159267.tif 000012
（表７）
【０２９９】
【表７】
2010159267.tif 000013
2010159267.tif 000014
（実施例１７）
（冠動脈結紮）  マウスを１〜１．５％のイソフルランで麻酔して、その後に冠動脈結紮を行なった。アトロピン（筋肉内に０．０７５ｍｇ／ｋｇ与えた）、リドカイン（筋肉内に１ｍｇ／ｋｇ）、および生理食塩水（腹腔内に１ｍｌ）を手技の前に与えた。マウスの鼻面にフィットする特注のマスクおよび小型動物用呼吸器（（Ｈａｒｖａｒｄ  Ａｐｐａｒａｔｕｓ，Ｉｎｃ．，Ｈｏｌｌｉｓｔｏｎ，ＭＡ）を用いて換気を行なった。左胸郭の第四肋間腔に切開（約５ｍｍ）を行い、心膜切開術を行なって左室を露出させた。左の冠動脈を、左心耳の約２ｍｍ下に８−０のプロレン（ｐｒｏｌｅｎｅ）を用いて閉塞した。引き続き、胸部を、層を成して閉じて、シリンジ吸引によって胸部の陰圧を戻した。（Ｒ）−３−（４−ヒドロキシフェニル）−４，５−ジヒドロ−５−酢酸イソキサゾリンの酸性メチルエステル（「ＩＳＯ−１」、「ＣＰＳＩ−２６」またはｐ−ヒドロキシフェノール−イソキサゾリンメチルエステル）を、２５μｌのＤＭＳＯ中に含む２００ｍｇ／ｋｇの投薬量で２週間毎日複空内に与えた。ブプレノルフィン（０．１０ｍｇ／ｋｇ）は手術後１回疼痛のために与えた。ニセの手順は、冠動脈の結紮なしに同じく行なった。結果を図３１に示す。
【０３００】
（略語）：ＡＢＣ輸送体、ＡＴＰ結合カセット輸送体；ＦＳ％、円周短縮率％；ＩＬ−１０、インターロイキン−１β；ＩＲＡＫ、ＩＬ−１レセプター会合キナーゼＭ；ＬＰＳ、リポポリサッカライド；ＭＤＡ、マロンジアルデヒド；ＭＩＦ、（マクロファージ）輸送阻止因子；Ｔｌｒ−４、トール様レセプター−４；ＣＬＰ、盲腸結紮穿刺；Ｅｎｂｒｅｌ（登録商標）、組み換えヒトＴＮＦＲ：Ｆｃ（インビボでＴＮＦ活性を中和する可溶性ＴＮＦレセプター）の商品名；ＩＬ−１β、インターロイキン−１β；ＴＮＦ−α、腫瘍壊死因子α；ＴＮＦＲ−／−、ＴＮＦ−αレセプターＩ／レセプターＩＩノックアウトマウス。
【０３０１】
上記および以下の、本明細書に援用される各々の参考文献の内容は、全ての目的のために参照によって本明細書に援用される。
【０３０２】
Ａｂｅ  Ｒ，Ｓｈｉｍｉｚｕ  Ｔ，Ｏｈｋａｗａｒａ  Ａ，ａｎｄ  Ｎｉｓｈｉｈｉｒａ  Ｊ．Ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  ｍｉｇｒａｔｉｏｎ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  ｆａｃｔｏｒ（ＭＩＦ）ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎ  ｉｎｊｕｒｅｄ  ｅｐｉｄｅｒｍｉｓ  ａｎｄ  ｃｕｌｔｕｒｅｄ  ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ．Ｂｉｏｃｈｉｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ａｃｔａ  １５００：１−９，２０００．
Ａｂｒａｈａｍ  Ｅ，Ａｎｚｕｅｔｏ  Ａ，Ｇｕｔｉｅｒｒｅｚ  Ｇ，Ｔｅｓｓｌｅｒ
Ｓ，Ｓａｎ  Ｐｅｄｒｏ  Ｇ，Ｗｕｎｄｅｒｉｎｋ  Ｒ，Ｄａｌ  Ｎｏｇａｒｅ  Ａ，Ｎａｓｒａｗａｙ  Ｓ，Ｂｅｒｍａｎ  Ｓ，Ｃｏｏｎｅｙ  Ｒ，Ｌｅｖｙ  Ｈ，Ｂａｕｇｈｍａｎ  Ｒ，Ｒｕｍｂａｋ  Ｍ，Ｌｉｇｈｔ  Ｒ  Ｂ，Ｐｏｏｌｅ  Ｌ，Ａｌｌｒｅｄ
Ｒ，Ｃｏｎｓｔａｎｔ  Ｊ，Ｐｅｎｎｉｎｇｔｏｎ  Ｊ，ａｎｄ  Ｐｏｒｔｅｒ  Ｓ．Ｄｏｕｂｌｅ−ｂｌｉｎｄ  ｒａｎｄｏｍｉｓｅｄ  ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  ｔｒｉａｌ
ｏｆ  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｔｏ  ｈｕｍａｎ  ｔｕｍｏｕｒ  ｎｅｃｒｏｓｉｓ  ｆａｃｔｏｒ  ｉｎ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｓｅｐｔｉｃ  ｓｈｏｃｋ．ＮＯＲＡＳＥＰＴ  ＩＩ  Ｓｔｕｄｙ  Ｇｒｏｕｐ．Ｌａｎｃｅｔ  ３５１：９２９−９３３，１９９８．
Ａｂｒａｈａｍ  Ｅ，Ｗｕｎｄｅｒｉｎｋ  Ｒ，Ｓｉｌｖｅｒｍａｎ  Ｈ，Ｐｅｒｔ  Ｔ  Ｍ，Ｎａｓｒａｗａｙ  Ｓ，Ｌｅｖｙ  Ｈ，Ｂｏｎｅ  Ｒ，Ｗｅｎｚｅｌ  Ｒ  Ｐ，Ｂａｌｋ  Ｒ，Ａｌｌｒｅｄ  Ｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｆｆｉｃａｃｙ  ａｎｄ  ｓａｆｅｔｙ  ｏｆ  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｔｏ  ｈｕｍａｎ  ｔｕｍｏｒ
ｎｅｃｒｏｓｉｓ  ｆａｃｔｏｒ  α  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｓｅｐｓｉｓ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ．Ａ  ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ，ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ，ｄｏｕｂｌｅ−ｂｌｉｎｄ，ｍｕｌｔｉｃｅｎｔｅｒ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｔｒｉａｌ．ＴＮＦ−α  ＭＡｂ  Ｓｅｐｓｉｓ  Ｓｔｕｄｙ  Ｇｒｏｕｐ．Ｊａｍａ  ２７３：９３４−９４１，１９９５．
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Ｃａｌａｎｄｒａ  Ｔ，Ｂｅｒｎｈａｇｅｎ  Ｊ，Ｍｉｔｃｈｅｌｌ  Ｒ  Ａ，ａｎｄ
Ｂｕｃａｌａ  Ｒ．Ｔｈｅ  ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  ｉｓ  ａｎ  ｉｍｐｏｒｔａｎｔ
ａｎｄ  ｐｒｅｖｉｏｕｓｌｙ  ｕｎｒｅｃｏｇｎｉｚｅｄ  ｓｏｕｒｃｅ  ｏｆ  ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  ｍｉｇｒａｔｉｏｎ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  ｆａｃｔｏｒ．Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  １７９：１８９５−１９０２，１９９４．
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Ｂ  ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｐｒｏｖｉｄｅｓ  ｃａｒｄｉｏｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ｔｒａｕｍａ．Ａｍ  Ｊ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  Ｈｅａｒｔ  Ｃｉｒｃ
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Ｃｈｅｎ  Ｇ，Ｃａｏ  Ｐ，ａｎｄ  Ｇｏｅｄｄｅｌ  Ｄ  Ｖ．ＴＮＦ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｒｅｃｒｕｉｔｍｅｎｔ  ａｎｄ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＩＫＫ  ｃｏｍｐｌｅｘ  ｒｅｑｕｉｒｅ  Ｃｄｃ３７  ａｎｄ  Ｈｓｐ９０．Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ
９：４０１−４１０，２００２．
Ｃｈｅｎ  Ｇ  ａｎｄ  Ｇｏｅｄｄｅｌ  Ｄ  Ｖ．ＴＮＦ−Ｒ１  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ：ａ  ｂｅａｕｔｉｆｕｌ  ｐａｔｈｗａｙ．Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２９６：１６３４−１６３５，２００２．
Ｃｈｅｓｎｅｙ，Ｊ．ら、「Ａｎ  Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ  Ｒｏｌｅ  ｆｏｒ  Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  Ｍｉｇｒａｔｉｏｎ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  Ｆａｃｔｏｒ（ＭＩＦ）ｉｎ  Ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ  ａｎｄ  ｔｈｅ  Ｇｒｏｗｔｈ  ｏｆ  ａ  Ｍｕｒｉｎｅ  Ｌｙｍｐｈｏｍａ」，Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．，５，１８１−１９１（１９９９）．
Ｃｏｕｒｔ，Ｏら、「Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｒｅｖｉｅｗ：Ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ  Ｄｅｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｓｅｐｓｉｓ  ａｎｄ  Ｓｅｐｔｉｃ  Ｓｈｏｃｋ」，Ｃｒｉｔ．Ｃａｒｅ，６，５００−５０８（２００２）．
Ｄａｒｙａｎｉ  Ｒ，ＬａＬｏｎｄｅ  Ｃ，Ｚｈｕ  Ｄ，Ｗｅｉｄｎｅｒ  Ｍ，Ｋｎｏｘ  Ｊ，ａｎｄ  Ｄｅｍｌｉｎｇ  Ｒ  Ｈ．Ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ｅｎｄｏｔｏｘｉｎ  ａｎｄ  ａ  ｂｕｒｎ  ｉｎｊｕｒｙ  ｏｎ  ｌｕｎｇ  ａｎｄ  ｌｉｖｅｒ  ｌｉｐｉｄ  ｐｅｒｏｘｉｄａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｃａｔａｌａｓｅ  ａｃｔｉｖｉｔｙ．Ｊ  Ｔｒａｕｍａ  ３０：１３３０−１３３４，１９９０．
Ｄｅｉｔｃｈ  Ｅ  Ａ．Ｂａｃｔｅｒｉａｌ  ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｇｕｔ  ｆｌｏｒａ．Ｊ  Ｔｒａｕｍａ  ３０：Ｓ１８４−１８９，１９９０．
Ｄｅｉｔｃｈ  Ｅ  Ａ．Ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙ  ｉｓ  ｉｎｃｒｅａｓｅｄ  ｉｎ  ｂｕｒｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｓｈｏｒｔｌｙ  ａｆｔｅｒ  ｉｎｊｕｒｙ．Ｓｕｒｇｅｒｙ  １０７：４１１−４１６，１９９０．
Ｄｅｉｔｃｈ  Ｅ  Ａ，Ｍａｅｊｉｍａ  Ｋ，ａｎｄ  Ｂｅｒｇ  Ｒ．Ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ｏｒａｌ  ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ  ａｎｄ  ｂａｃｔｅｒｉａｌ  ｏｖｅｒｇｒｏｗｔｈ  ｏｎ  ｔｈｅ  ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＧＩ  ｔｒａｃｔ  ｍｉｃｒｏｆｌｏｒａ  ｉｎ  ｂｕｒｎｅｄ  ｒａｔｓ．Ｊ  Ｔｒａｕｍａ  ２５：３８５−３９２，１９８５．
ｄｅ  Ｊｏｎｇ  Ｙ  Ｐ，Ａｂａｄｉａ−Ｍｏｌｉｎａ  Ａ  Ｃ，Ｓａｔｏｓｋａｒ  Ａ  Ｒ，Ｃｌａｒｋｅ  Ｋ，Ｒｉｅｔｄｉｊｋ  Ｓ  Ｔ，Ｆａｕｂｉｏｎ  Ｗ  Ａ，Ｍｉｚｏｇｕｃｈｉ  Ｅ，Ｍｅｔｚ  Ｃ  Ｎ，Ａｌｓａｈｌｉ  Ｍ，ｔｅｎ  Ｈｏｖｅ  Ｔ，Ｋｅａｔｅｓ  Ａ  Ｃ，Ｌｕｂｅｔｓｋｙ  Ｊ  Ｂ，Ｆａｒｒｅｌｌ  Ｒ  Ｊ，Ｍｉｃｈｅｔｔｉ  Ｐ，ｖａｎ  Ｄｅｖｅｎｔｅｒ  Ｓ  Ｊ，Ｌｏｌｉｓ  Ｅ，Ｄａｖｉｄ  Ｊ  Ｒ，Ｂｈａｎ  Ａ  Ｋ，Ｔｅｒｈｏｒｓｔ  Ｃ，ａｎｄ  Ｓａｈｌｉ  Ｍ  Ａ．Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ｃｈｒｏｎｉｃ  ｃｏｌｉｔｉｓ  ｉｓ  ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｏｎ  ｔｈｅ  ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ＭＩＦ．Ｎａｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２：１０６１−１０６６，２００１．
ｄｅｌ  Ｖｅｃｃｈｉｏ，Ｍ．Ｔ．，ｅｔ  ａｌ．「Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  Ｍｉｇｒａｔｉｏｎ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  Ｆａｃｔｏｒ  ｉｎ  Ｐｒｏｓｔａｔｉｃ  Ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ：Ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  Ｔｕｍｏｒ  Ｇｒａｄｉｎｇ  ａｎｄ  Ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ−Ｒｅｌａｔｅｄ  Ｃｈａｎｇｅｓ」，Ｐｒｏｓｔａｔｅ，４５，５１−５７（２０００）．
Ｄｉｏｓ  Ａ．ら、「Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ＭＩＦ  Ｂｉｏａｃｔｉｖｉｔｙ
ｂｙ  Ｒａｔｉｏｎａｌ  Ｄｅｓｉｇｎ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｏｆ  ＭＩＦ  Ｔａｕｔｏｍｅｒａｓｅ  Ａｃｔｉｖｉｔｙ」，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，４５，２４１０−２４１６（２００２）．
Ｄｏｎｎｅｌｌｙ，Ｓ．Ｃ．ら、「Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  Ｍｉｇｒａｔｉｏｎ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  Ｆａｃｔｏｒ：Ａ  Ｒｅｇｕｌａｔｏｒ  ｏｆ  Ｇｌｕｃｏｃｏｒｔｉｃｏｉｄ  Ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｗｉｔｈ  ａ  Ｃｒｉｔｉｃａｌ  Ｒｏｌｅ  ｉｎ  Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  Ｄｉｓｅａｓｅ」，Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．Ｔｏｄａｙ．，３，５０２−５０７（１９９７）．
Ｄｏｎｎｅｌｌｙ，Ｓ．Ｃ．ら、「Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  Ｒｏｌｅ  ｆｏｒ  Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  Ｍｉｇｒａｔｉｏｎ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  Ｆａｃｔｏｒ  ｉｎ  Ａｃｕｔｅ  Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ  Ｄｉｓｔｒｅｓｓ  Ｓｙｎｄｒｏｍｅ」，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．，３，３２０−３２３（１９９７）．
Ｅｉｃｋｈｏｆｆ  Ｒ，Ｗｉｌｈｅｌｍ  Ｂ，Ｒｅｎｎｅｂｅｒｇ  Ｈ，Ｗｅｎｎｅｍｕｔｈ  Ｇ，Ｂａｃｈｅｒ  Ｍ，Ｌｉｎｄｅｒ  Ｄ，Ｂｕｃａｌａ  Ｒ，Ｓｅｉｔｚ  Ｊ，ａｎｄ  Ｍｅｉｎｈａｒｄｔ  Ａ．Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  ｍｉｇｒａｔｉｏｎ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  ｆａｃｔｏｒ  ａｓ  ａ  ｓｅｃｒｅｔｏｒｙ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｆｒｏｍ
ｒａｔ  ｅｐｉｄｉｄｙｍｉｓ：ｅｖｉｄｅｎｃｅｓ  ｆｏｒ  ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ  ｒｅｌｅａｓｅ  ａｎｄ  ｔｒａｎｓｆｅｒ  ｔｏ  ｓｐｅｒｍａｔｏｚｏａ．Ｍｏｌ  Ｍｅｄ  ７：２７−３５，２００１．
Ｅｍｍａｎｕｉｌｉｄｉｓ  Ｋ，Ｗｅｉｇｈａｒｄｔ  Ｈ，Ｍａｔｅｖｏｓｓｉａｎ  Ｅ，Ｈｅｉｄｅｃｋｅ  Ｃ  Ｄ，Ｕｌｍ  Ｋ，Ｂａｒｔｅｌｓ  Ｈ，Ｓｉｅｗｅｒｔ  Ｊ
Ｒ，ａｎｄ  Ｈｏｌｚｍａｎｎ  Ｂ．Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ  ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｓｙｓｔｅｍｉｃ  ＩＬ−１８  ａｎｄ  ＩＬ−１２  ｒｅｌｅａｓｅ  ｄｕｒｉｎｇ  ｐｏｓｔｏｐｅｒａｔｉｖｅ  ｓｅｐｓｉｓ：ｈｉｇｈ  ｓｅｒｕｍ  ＩＬ−１８  ａｓ  ａｎ  ｅａｒｌｙ  ｐｒｅｄｉｃｔｉｖｅ  ｉｎｄｉｃａｔｏｒ  ｏｆ  ｌｅｔｈａｌ  ｏｕｔｃｏｍｅ．Ｓｈｏｃｋ  １８：３０１−３０５，２００２．
Ｅｖａｎｓ  Ｈ  Ｇ，Ｌｅｗｉｓ  Ｍ  Ｊ，ａｎｄ  Ｓｈａｈ  Ａ  Ｍ．Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１β  ｍｏｄｕｌａｔｅｓ  ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ  ｃｏｎｔｒａｃｔｉｏｎ  ｖｉａ  ｄｅｘａｍｅｔｈａｓｏｎｅ  ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ  ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ
ｏｆ  ｎｉｔｒｉｃ  ｏｘｉｄｅ．Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ  Ｒｅｓ  ２７：１４８６−１４９０，１９９３．
Ｆｉｎｇｅｒｌｅ−Ｒｏｗｓｏｎ，Ｇ．ら、「Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  Ｍｉｇｒａｔｉｏｎ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｂｙ  Ｇｌｕｃｏｃｏｒｔｉｃｏｉｄｓ  ｉｎ  ｖｉｖｏ」，Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．，１６２，４７−５６（２００３）．
Ｆｉｓｈｅｒ  Ｃ  Ｊ，Ｊｒ．，Ａｇｏｓｔｉ  Ｊ  Ｍ，Ｏｐａｌ  Ｓ  Ｍ，Ｌｏｗｒｙ  Ｓ  Ｆ，Ｂａｌｋ  Ｒ  Ａ，Ｓａｄｏｆｆ  Ｊ  Ｃ，Ａｂｒａｈａｍ  Ｅ，Ｓｃｈｅｉｎ  Ｒ  Ｍ，ａｎｄ  Ｂｅｎｊａｍｉｎ  Ｅ．Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｓｅｐｔｉｃ  ｓｈｏｃｋ  ｗｉｔｈ  ｔｈｅ  ｔｕｍｏｒｎｅｃｒｏｓｉｓ  ｆａｃｔｏｒ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ：Ｆｃ  ｆｕｓｉｏｎ  ｐｒｏｔｅｉｎ．Ｔｈｅ  Ｓｏｌｕｂｌｅ  ＴＮＦ
Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  Ｓｅｐｓｉｓ  Ｓｔｕｄｙ  Ｇｒｏｕｐ．Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ  ３３４：１６９７−１７０２，１９９６．
Ｆｉｓｈｅｒ  Ｃ  Ｊ，Ｊｒ．，Ｏｐａｌ  Ｓ  Ｍ，Ｄｈａｉｎａｕｔ  Ｊ  Ｆ，Ｓｔｅｐｈｅｎｓ  Ｓ，Ｚｉｍｍｅｒｍａｎ  Ｊ  Ｌ，Ｎｉｇｈｔｉｎｇａｌｅ  Ｐ，Ｈａｒｒｉｓ  Ｓ  Ｊ，Ｓｃｈｅｉｎ  Ｒ  Ｍ，Ｐａｎａｃｅｋ  Ｅ  Ａ，Ｖｉｎｃｅｎｔ  Ｊ
Ｌ，ａｎｄ  ｅｔ  ａｌ．Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ  ｏｆ  ａｎ  ａｎｔｉ−ｔｕｍｏｒ  ｎｅｃｒｏｓｉｓ  ｆａｃｔｏｒ  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｏｎ  ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ｌｅｖｅｌｓ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｓｅｐｓｉｓ．Ｔｈｅ  ＣＢ０００６  Ｓｅｐｓｉｓ  Ｓｙｎｄｒｏｍｅ  Ｓｔｕｄｙ  Ｇｒｏｕｐ．Ｃｒｉｔ  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ  ２１：３１８−３２７，１９９３．
Ｆｉｓｈｅｒ  Ｃ  Ｊ，Ｊｒ．，Ｄｈａｉｎａｕｔ  Ｊ  Ｆ，Ｏｐａｌ  Ｓ  Ｍ，Ｐｒｉｂｂｌｅ  Ｊ  Ｐ，Ｂａｌｋ  Ｒ  Ａ，Ｓｌｏｔｍａｎ  Ｇ  Ｊ，Ｉｂｅｒｔｉ  Ｔ  Ｊ，Ｒａｃｋｏｗ  Ｅ  Ｃ，Ｓｈａｐｉｒｏ  Ｍ  Ｊ，Ｇｒｅｅｎｍａｎ  Ｒ  Ｌ，ａｎｄ  ｅｔ  ａｌ．Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  ｈｕｍａｎ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ  １  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｓｅｐｓｉｓ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ．Ｒｅｓｕｌｔｓ  ｆｒｏｍ  ａ  ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ，ｄｏｕｂｌｅ−ｂｌｉｎｄ，ｐｌａｃｅｂｏ−ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  ｔｒｉａｌ．Ｐｈａｓｅ  ＩＩＩ  ｒｈＩＬ−１ｒａ  Ｓｅｐｓｉｓ  Ｓｙｎｄｒｏｍｅ  Ｓｔｕｄｙ  Ｇｒｏｕｐ．Ｊａｍａ  ２７１：１８３６−１８４３，１９９４．
Ｆｉｓｈｅｒ  Ｃ  Ｊ，Ｊｒ．，Ｓｌｏｔｍａｎ  Ｇ  Ｊ，Ｏｐａｌ  Ｓ  Ｍ，Ｐｒｉｂｂｌｅ  Ｊ  Ｐ，Ｂｏｎｅ  Ｒ  Ｃ，Ｅｍｍａｎｕｅｌ  Ｇ，Ｎｇ  Ｄ，Ｂｌｏｅｄｏｗ  Ｄ  Ｃ，ａｎｄ  Ｃａｔａｌａｎｏ  Ｍ  Ａ．Ｉｎｉｔｉａｌ  ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｓｅｐｓｉｓ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ：ａ  ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ，ｏｐｅｎ−ｌａｂｅｌ，ｐｌａｃｅｂｏ−ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  ｍｕｌｔｉｃｅｎｔｅｒ  ｔｒｉａｌ．Ｔｈｅ  ＩＬ−１ＲＡ  Ｓｅｐｓｉｓ  Ｓｙｎｄｒｏｍｅ  Ｓｔｕｄｙ  Ｇｒｏｕｐ．Ｃｒｉｔ  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ  ２２：１２−２１，１９９４．
Ｆｌｉｅｇｅｒ  Ｏ，Ｅｎｇｌｉｎｇ  Ａ，Ｂｕｃａｌａ  Ｒ，Ｌｕｅ  Ｈ，Ｎｉｃｋｅｌ  Ｗ，ａｎｄ  Ｂｅｒｎｈａｇｅｎ  Ｊ．Ｒｅｇｕｌａｔｅｄ  ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ
ｏｆ  ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  ｍｉｇｒａｔｉｏｎ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  ｆａｃｔｏｒ  ｉｓ  ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｂｙ  ａ  ｎｏｎ−ｃｌａｓｓｉｃａｌ  ｐａｔｈｗａｙ  ｉｎｖｏｌｖｉｎｇ  ａｎ  ＡＢＣ  ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ．ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ
５５１：７８−８６，２００３．
Ｆｕｋｕｚａｗａ  Ｊ．ら、「Ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  Ｍｉｇｒａｔｉｏｎ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  Ｆａｃｔｏｒ  ｔｏ  Ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｓｉｇｎａｌ−Ｒｅｇｕｌａｔｅｄ  Ｋｉｎａｓｅ  Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｂｙ  Ｏｘｉｄａｔｉｖｅ  Ｓｔｒｅｓｓ  ｉｎ  Ｃａｒｄｉｏｍｙｏｃｙｔｅｓ」，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７７，２４８８９−２４８９５（２００２）．
Ｆｕｌｔｏｎ  Ｒ  Ｊ，ＭｃＤａｄｅ  Ｒ  Ｌ，Ｓｍｉｔｈ  Ｐ  Ｌ，Ｋｉｅｎｋｅｒ
Ｌ  Ｊ，ａｎｄ  Ｋｅｔｔｍａｎ  Ｊ  Ｒ，Ｊｒ．Ａｄｖａｎｃｅｄ  ｍｕｌｔｉｐｌｅｘｅｄ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｗｉｔｈ  ｔｈｅ  ＦｌｏｗＭｅｔｒｉｘ  ｓｙｓｔｅｍ．Ｃｌｉｎ  Ｃｈｅｍ  ４３：１７４９−１７５６，１９９７．
Ｇａｎｄｏ，Ｓ．ら、「Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  Ｍｉｇｒａｔｉｏｎ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  Ｆａｃｔｏｒ  ｉｓ  ａ  Ｃｒｉｔｉｃａｌ  Ｍｅｄｉａｔｏｒ  ｏｆ  Ｓｙｓｔｅｍｉｃ  Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  Ｒｅｓｐｏｎｓｅ  Ｓｙｎｄｒｏｍｅ」，Ｉｎｔｅｎｓｉｖｅ  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ．，２７，１１８７−１１９３（２００１）．
Ｇａｒｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  ｍｉｇｒａｔｉｏｎ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  ｆａｃｔｏｒ  ｉｓ  ａ  ｃａｒｄｉａｃ−ｄｅｒｉｖｅｄ  ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ  ｄｅｐｒｅｓｓａｎｔ  ｆａｃｔｏｒ．Ａｍ  Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ  Ｈｅａｒｔ  Ｃｉｒｃ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  ２８５：Ｈ２５００−Ｈ２５０９，２００３．
Ｇａｒｎｅｒ  Ｌ  Ｂ，Ｗｉｌｌｉｓ  Ｍ  Ｓ，Ｃａｒｌｓｏｎ  Ｄ  Ｌ，ＤｉＭａｉｏ  Ｊ  Ｍ，Ｗｈｉｔｅ  Ｍ  Ｄ，Ｗｈｉｔｅ  Ｄ  Ｊ，Ａｄａｍｓ  ＧＡｔ，Ｈｏｒｔｏｎ  Ｊ  Ｗ，ａｎｄ  Ｇｉｒｏｉｒ  Ｂ  Ｐ．Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  ｍｉｇｒａｔｉｏｎ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  ｆａｃｔｏｒ  ｉｓ  ａ  ｃａｒｄｉａｃ−ｄｅｒｉｖｅｄ  ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ  ｄｅｐｒｅｓｓａｎｔ  ｆａｃｔｏｒ．Ａｍ  Ｊ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  Ｈｅａｒｔ  Ｃｉｒｃ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  ２８５：Ｈ２５００−２５０９，２００３．
Ｇａｒｄｅｌｌａ  Ｓ，Ａｎｄｒｅｉ  Ｃ，Ｆｅｒｒｅｒａ  Ｄ，Ｌｏｔｔｉ  Ｌ  Ｖ，Ｔｏｒｒｉｓｉ  Ｍ  Ｒ，Ｂｉａｎｃｈｉ  Ｍ  Ｅ，ａｎｄ  Ｒｕｂａｒｔｅｌｌｉ  Ａ．Ｔｈｅ  ｎｕｃｌｅａｒ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ＨＭＧＢ１  ｉｓ  ｓｅｃｒｅｔｅｄ  ｂｙ  ｍｏｎｏｃｙｔｅｓ  ｖｉａ  ａ  ｎｏｎ−ｃｌａｓｓｉｃａｌ，ｖｅｓｉｃｌｅ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｓｅｃｒｅｔｏｒｙ  ｐａｔｈｗａｙ．ＥＭＢＯ  Ｒｅｐ  ３：９９５−１００１，２００２．
Ｇｉｒｏｉｒ，Ｂ．Ｐ．ら、「Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｔｕｍｏｒ  Ｎｅｃｒｏｓｉｓ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｐｒｅｖｅｎｔｓ  Ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ  Ｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ  Ｄｕｒｉｎｇ  Ｂｕｒｎ  Ｓｈｏｃｋ」，Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．，２６７，Ｈ１１８−Ｈ１２４（１９９４）．
Ｈａｕｄｅｋ  Ｓ  Ｂ，Ｓｐｅｎｃｅｒ  Ｅ，Ｂｒｙａｎｔ  Ｄ  Ｄ，Ｗｈｉｔｅ  Ｄ
Ｊ，Ｍａａｓｓ  Ｄ，Ｈｏｒｔｏｎ  Ｊ  Ｗ，Ｃｈｅｎ  Ｚ  Ｊ，ａｎｄ  Ｇｉｒｏｉｒ  Ｂ  Ｐ．Ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｃａｒｄｉａｃ  Ｉ−κＢα  ｐｒｅｖｅｎｔｓ  ｅｎｄｏｔｏｘｉｎｉｎｄｕｃｅｄ  ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ  ｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ．Ａｍ  Ｊ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  Ｈｅａｒｔ  Ｃｉｒｃ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  ２８０：Ｈ９６２−９６８，２００１．
Ｈａｕｄｅｋら、「Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ  Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ  ＮＦ  Ｋａｐｐａ  Ｂ  Ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ  Ａｃｕｔｅ  ｏｒ  Ｃｈｒｏｎｉｃ  ＴＮＦ−Ａｌｐｈａ  Ｅｘｐｏｓｕｒｅ」，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ  Ｃａｒｄｉｏｌ．，３３，１２６３−１２７１（２００１）．
Ｈｅｓｓｅ  Ｄ  Ｇ，Ｔｒａｃｅｙ  Ｋ  Ｊ，Ｆｏｎｇ  Ｙ，Ｍａｎｏｇｕｅ  Ｋ  Ｒ，Ｐａｌｌａｄｉｎｏ  Ｍ  Ａ，Ｊｒ．，Ｃｅｒａｍｉ  Ａ，Ｓｈｉｒｅｓ  Ｇ  Ｔ，ａｎｄ  Ｌｏｗｒｙ  Ｓ  Ｆ．Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ａｐｐｅａｒａｎｃｅ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｅｎｄｏｔｏｘｅｍｉａ  ａｎｄ  ｐｒｉｍａｔｅ  ｂａｃｔｅｒｅｍｉａ．Ｓｕｒｇ  Ｇｙｎｅｃｏｌ  Ｏｂｓｔｅｔ  １６６：１４７−１５３，１９８８．
Ｈｏｒｔｏｎ  Ｊ  Ｗ，Ｇａｒｃｉａ  Ｎ  Ｍ，Ｗｈｉｔｅ  Ｄ  Ｊ，ａｎｄ  Ｋｅｆｆｅｒ  Ｊ．Ｐｏｓｔｂｕｒｎ  ｃａｒｄｉａｃ  ｃｏｎｔｒａｃｔｉｌｅ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ｍａｒｋｅｒｓ  ｏｆ  ｐｏｓｔｂｕｒｎ  ｃａｒｄｉａｃ  ｉｎｊｕｒｙ．Ｊ  Ａｍ  Ｃｏｌｌ  Ｓｕｒｇ  １８１：２８９−２９８，１９９５．
Ｈｏｒｔｏｎ  Ｊ  Ｗ，Ｗｈｉｔｅ  Ｄ  Ｊ，Ｍａａｓｓ  Ｄ  Ｌ，Ｈｙｂｋｉ  Ｄ  Ｐ，Ｈａｕｄｅｋ  Ｓ，ａｎｄ  Ｇｉｒｏｉｒ  Ｂ．Ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ  ｖｉｔａｍｉｎ  ｔｈｅｒａｐｙ  ａｌｔｅｒｓ  ｂｕｒｎ  ｔｒａｕｍａ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｃａｒｄｉａｃ  ＮＦ−κＢ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｃａｒｄｉｏｍｙｏｃｙｔｅ  ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ．Ｊ  Ｔｒａｕｍａ  ５０：３９７−４０６；  ｄｉｓｃｕｓｓｉｏｎ  ４０７−３９８，２００１．
Ｈｕｄｓｏｎ，Ｊ．Ｄ．ら、「Ａ  Ｐｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  Ｉｎｈｉｂｉｔｓ  ｐ５３  Ｔｕｍｏｒ  Ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ  Ａｃｔｉｖｉｔｙ」，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１９０，１３７５−１３８２（１９９９）．
Ｋａｍｉｍｕｒａ，Ａ．ら、「Ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  Ｍｉｇｒａｔｉｏｎ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｐｒｅｄｉｃｔｓ  ｔｈｅ  Ｐｒｏｇｎｏｓｉｓ  ｏｆ  Ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  Ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｌｕｎｇ」，Ｃａｎｃｅｒ，８９，３３４−３４１（２０００）．
Ｋｅｔｔｍａｎ  Ｊ  Ｒ，Ｄａｖｉｅｓ  Ｔ，Ｃｈａｎｄｌｅｒ  Ｄ，Ｏｌｉｖｅｒ  Ｋ  Ｇ，ａｎｄ  Ｆｕｌｔｏｎ  Ｒ  Ｊ．Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ  ｏｆ  ６４  ｍｕｌｔｉｐｌｅｘｅｄ  ｍｉｃｒｏｓｐｈｅｒｅ  ｓｅｔｓ．Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ  ３３：２３４−２４３，１９９８．
Ｋａｄｏｋａｍｉ  Ｔ，ＭｃＴｉｅｒｎａｎ  Ｃ  Ｆ，Ｋｕｂｏｔａ  Ｔ，Ｆｒｙｅ  Ｃ  Ｓ，Ｂｏｕｎｏｕｔａｓ  Ｇ  Ｓ，Ｒｏｂｂｉｎｓ  Ｐ  Ｄ，Ｗａｔｋｉｎｓ  Ｓ  Ｃ，ａｎｄ  Ｆｅｌｄｍａｎ  Ａ  Ｍ．Ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｓｏｌｕｂｌｅ  ＴＮＦ
ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｎ  ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ  ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ．Ａｍ  Ｊ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  Ｈｅａｒｔ  Ｃｉｒｃ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  ２８０：Ｈ２２８１−２２９１，２００１．
Ｋｌｅｅｍａｎｎ  Ｒ，Ｈａｕｓｓｅｒ  Ａ，Ｇｅｉｇｅｒ  Ｇ，Ｍｉｓｃｈｋｅ  Ｒ，Ｂｕｒｇｅｒ−Ｋｅｎｔｉｓｃｈｅｒ  Ａ，Ｆｌｉｅｇｅｒ  Ｏ，Ｊｏｈａｎｎｅｓ  Ｆ  Ｊ，Ｒｏｇｅｒ  Ｔ，Ｃａｌａｎｄｒａ  Ｔ，Ｋａｐｕｒｎｉｏｔｕ  Ａ，Ｇｒｅｌｌ  Ｍ，Ｆｉｎｋｅｌｍｅｉｅｒ  Ｄ，Ｂｒｕｎｎｅｒ  Ｈ，ａｎｄ  Ｂｅｒｎｈａｇｅｎ  Ｊ．Ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  ａｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｃｙｔｏｋｉｎｅ
ＭＩＦ  ｔｏ  ｍｏｄｕｌａｔｅＡＰ−１  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ａｎｄ  ｔｈｅ  ｃｅｌｌ  ｃｙｃｌｅ  ｔｈｒｏｕｇｈ  Ｊａｂ１．Ｎａｔｕｒｅ  ４０８：２１１−２１６，２０００．
Ｋｌｅｅｍａｎｎ  Ｒ，Ｋａｐｕｒｎｉｏｔｕ  Ａ，Ｆｒａｎｋ  Ｒ  Ｗ，Ｇｅｓｓｎｅｒ  Ａ，Ｍｉｓｃｈｋｅ  Ｒ，Ｆｌｉｅｇｅｒ  Ｏ，Ｊｕｔｔｎｅｒ  Ｓ，Ｂｒｕｎｎｅｒ  Ｈ，ａｎｄ  Ｂｅｒｎｈａｇｅｎ  Ｊ．Ｄｉｓｕｌｆｉｄｅ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｒｅｖｅａｌｓ  ａ  ｒｏｌｅ  ｆｏｒ  ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  ｍｉｇｒａｔｉｏｎ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  ｆａｃｔｏｒ（ＭＩＦ）ａｓ  ｔｈｉｏｌ−ｐｒｏｔｅｉｎ  ｏｘｉｄｏｒｅｄｕｃｔａｓｅ．Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ２８０：８５−１０２，１９９８．
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Ｋｕｍａｒ，Ａら、「Ｔｕｍｏｒ  Ｎｅｃｒｏｓｉｓ  Ｆａｃｔｏｒ  Ａｌｐｈａ  ａｎｄ  Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ  １  Ｂｅｔａ  ａｒｅ  Ｒｅｓｐｏｎｓｉｂｌｅ  ｆｏｒ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  Ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｄｅｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｉｎｄｕｃｅｄ  ｂｙ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｐｔｉｃ  Ｓｈｏｃｋ  Ｓｅｒｕｍ」，Ｊ，Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１８３，９４９−９５８（１９９６）．
Ｌａｉ  Ｋ  Ｎ，Ｌｅｕｎｇ  Ｊ  Ｃ，Ｍｅｔｚ  Ｃ  Ｎ，Ｌａｉ  Ｆ  Ｍ，Ｂｕｃａｌａ  Ｒ，ａｎｄ  Ｌａｎ  Ｈ  Ｙ．Ｒｏｌｅ  ｆｏｒ  ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  ｍｉｇｒａｔｉｏｎ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  ｆａｃｔｏｒ  ｉｎ  ａｃｕｔｅ  ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ  ｄｉｓｔｒｅｓｓ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ．Ｊ  Ｐａｔｈｏｌ  １９９：４９６−５０８，２００３．
Ｌａｎ，Ｈ．Ｙ．ら、「Ｄｅ  Ｎｏｖｏ  Ｒｅｎａｌ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  Ｍｉｇｒａｔｉｏｎ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｄｕｒｉｎｇ  ｔｈｅ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｒａｔ  Ｃｒｅｓｃｅｎｔｉｃ  Ｇｌｏｍｅｒｕｌｏｎｅｐｈｒｉｔｉｓ」，Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．，１４９，１１１９−１１２７（１９９６）．
Ｌａｎ，Ｈ．Ｙ．ら、「Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  Ｍｉｇｒａｔｉｏｎ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎ  Ｈｕｍａｎ  Ｒｅｎａｌ  Ａｌｌｏｇｒａｆｔ  Ｒｅｊｅｃｔｉｏｎ」，Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ，６６，１４６５−１４７１（１９９８）．
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Ｌａｓｔ−Ｂａｒｎｅｙ  Ｋ，Ｈｏｍｏｎ  Ｃ  Ａ，Ｆａａｎｅｓ  Ｒ  Ｂ，ａｎｄ  Ｍｅｒｌｕｚｚｉ  Ｖ  Ｊ．Ｓｙｎｅｒｇｉｓｔｉｃ  ａｎｄ  ｏｖｅｒｌａｐｐｉｎｇ
ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ  ｏｆ  ｔｕｍｏｒ  ｎｅｃｒｏｓｉｓ  ｆａｃｔｏｒ−α  ａｎｄ  ＩＬ−１．Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １４１：５２７−５３０，１９８８．
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Ｌｅｅｃｈ  Ｍ，Ｍｅｔｚ  Ｃ，Ｓａｎｔｏｓ  Ｌ，Ｐｅｎｇ  Ｔ，Ｈｏｌｄｓｗｏｒｔｈ  Ｓ  Ｒ，Ｂｕｃａｌａ  Ｒ，ａｎｄ  Ｍｏｒａｎｄ  Ｅ  Ｆ．Ｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  ｍｉｇｒａｔｉｏｎ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  ｆａｃｔｏｒ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ  ｏｆ  ｒａｔ  ａｄｊｕｖａｎｔ  ａｒｔｈｒｉｔｉｓ．Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ  ４１：９１０−９１７，１９９８．
Ｌｅｆｅｒ  Ａ  Ｍ．Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ｏｆ  ｃａｒｄｉｏｄｅｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎ  ｅｎｄｏｔｏｘｉｎ  ｓｈｏｃｋ．Ｃｉｒｃ  Ｓｈｏｃｋ  Ｓｕｐｐｌ  １：１−８，１９７９．
Ｌｅｈｍａｎｎ，Ｌ．Ｅ．，「Ｐｌａｓｍａ  Ｌｅｖｅｌｓ  ｏｆ  Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  Ｍｉｇｒａｔｉｏｎ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  Ｆａｃｔｏｒ  Ａｒｅ  Ｅｌｅｖａｔｅｄ  ｉｎ  Ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  Ｓｅｖｅｒｅ  Ｓｅｐｓｉｓ」，Ｉｎｔｅｎｓｉｖｅ  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ．，２７，１４１２−１４１５（２００１）．
Ｌｅｎｇ  Ｌ，Ｍｅｔｚ  Ｃ  Ｎ，Ｆａｎｇ  Ｙ，Ｘｕ  Ｊ，Ｄｏｎｎｅｌｌｙ  Ｓ，Ｂａｕｇｈ  Ｊ，Ｄｅｌｏｈｅｒｙ  Ｔ，Ｃｈｅｎ  Ｙ，Ｍｉｔｃｈｅｌｌ  Ｒ  Ａ，ａｎｄ  Ｂｕｃａｌａ  Ｒ．ＭＩＦ  ｓｉｇｎａｌ  ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ  ｉｎｉｔｉａｔｅｄ  ｂｙ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｔｏ  ＣＤ７４．Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  １９７：１４６７−１４７６，２００３．
Ｌｕｂｅｔｓｋｙ  Ｊ  Ｂ，Ｄｉｏｓ  Ａ，Ｈａｎ  Ｊ，Ａｌｊａｂａｒｉ  Ｂ，Ｒｕｚｓｉｃｓｋａ  Ｂ，Ｍｉｔｃｈｅｌｌ  Ｒ，Ｌｏｌｉｓ  Ｅ，ａｎｄ  Ａｌ−Ａｂｅｄ
Ｙ．Ｔｈｅ  ｔａｕｔｏｍｅｒａｓｅ  ａｃｔｉｖｅ  ｓｉｔｅ  ｏｆ  ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  ｍｉｇｒａｔｉｏｎ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  ｆａｃｔｏｒ  ｉｓ  ａ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  ｔａｒｇｅｔ  ｆｏｒ  ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  ｏｆ  ｎｏｖｅｌ  ａｎｔｉ−ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ａｇｅｎｔｓ．Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７７：２４９７６−２４９８２，２００２．
Ｌｕｅ，Ｈ．ら、「Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  Ｍｉｇｒａｔｉｏｎ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  Ｆａｃｔｏｒ（ＭＩＦ）：Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ｏｆ  Ａｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｒｏｌｅ  ｉｎ  Ｄｉｓｅａｓｅ」，Ｍｉｃｒｏｂｅｓ  Ｉｎｆｅｃｔ．，４，４４９−４６０（２００２）．
Ｍａｋｉｔａ，Ｈ．ら、「Ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  Ａｎｔｉ−Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  Ｍｉｇｒａｔｉｏｎ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  Ｆａｃｔｏｒ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｏｎ  Ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ−Ｉｎｄｕｃｅｄ  Ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  Ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ  Ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ」，Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｒｉｔ．Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ．，１５８，５７３−５７９（１９９８）．
Ｍａａｓｓ  Ｄ  Ｌ，Ｗｈｉｔｅ  Ｊ，ａｎｄ  Ｈｏｒｔｏｎ  Ｊ  Ｗ．ＩＬ−１β  ａｎｄ  ＩＬ−６  ａｃｔ  ｓｙｎｅｒｇｉｓｔｉｃａｌｌｙ  ｗｉｔｈ  ＴＮＦ−α  ｔｏ  ａｌｔｅｒ  ｃａｒｄｉａｃ  ｃｏｎｔｒａｃｔｉｌｅ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ａｆｔｅｒ  ｂｕｒｎ  ｔｒａｕｍａ．Ｓｈｏｃｋ  １８：３６０−３６６，２００２．
Ｍｅｎｇ  Ｘ，Ａｏ  Ｌ，Ｍｅｌｄｒｕｍ  Ｄ  Ｒ，Ｃａｉｎ  Ｂ  Ｓ，Ｓｈａｍｅｓ
Ｂ  Ｄ，Ｓｅｌｚｍａｎ  Ｃ  Ｈ，Ｂａｎｅｒｊｅｅ  Ａ，ａｎｄ  Ｈａｒｋｅｎ  Ａ
Ｈ．ＴＮＦ−α  ａｎｄ  ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ  ｄｅｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎ  ｅｎｄｏｔｏｘｅｍｉｃ  ｒａｔｓ：ｔｅｍｐｏｒａｌ  ｄｉｓｃｏｒｄａｎｃｅ  ｏｆ  ａｎ  ｏｂｌｉｇａｔｏｒｙ  ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ．Ａｍ  Ｊ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  ２７５：Ｒ５０２−５０８，１９９８．
Ｍｅｙｅｒ−Ｓｉｅｇｌｅｒ，Ｋ．ら、「Ｉｎｃｒｅａｓｅｄ  Ｓｔａｂｉｌｉｔｙ  ｏｆ  Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  Ｍｉｇｒａｔｉｏｎ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  Ｆａｃｔｏｒ（ＭＩＦ）ｉｎ  ＤＵ−１４５  Ｐｒｏｓｔａｔｅ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌｓ」，Ｊ．Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ  Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  Ｒｅｓ．，２０，７６９−７７８（２０００）．
Ｍｉｋｕｌｏｗｓｋａ，Ａ．ら、「Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  Ｍｉｇｒａｔｉｏｎ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  Ｆａｃｔｏｒ  ｉｓ  Ｉｎｖｏｌｖｅｄ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ  ｏｆ  Ｃｏｌｌａｇｅｎ  Ｔｙｐｅ  １１−Ｉｎｄｕｃｅｄ  Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ｉｎ  Ｍｉｃｅ」，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５８，５５１４−５５１７（１９９７）．
Ｍｉｔｃｈｅｌｌ，Ｒ．Ａ．，ｅｔ  ａｌ．「Ｔｕｍｏｒ  Ｇｒｏｗｔｈ−Ｐｒｏｍｏｔｉｎｇ  Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ  ｏｆ  Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  Ｍｉｇｒａｔｉｏｎ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  Ｆａｃｔｏｒ（ＭＩＦ）」，Ｓｅｍｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｂｉｏｌ．，１０，３５９−３６６（２０００）．
Ｍｉｔｃｈｅｌｌ  Ｒ  Ａ，Ｍｅｔｚ  Ｃ  Ｎ，Ｐｅｎｇ  Ｔ，ａｎｄ  Ｂｕｃａｌａ
Ｒ．Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ  ｍｉｔｏｇｅｎ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｋｉｎａｓｅ（ＭＡＰＫ）ａｎｄ  ｃｙｔｏｐｌａｓｍｉｃ  ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐａｓｅ
Ａ２  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｂｙ  ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  ｍｉｇｒａｔｉｏｎ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  ｆａｃｔｏｒ（ＭＩＦ）．Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  ｒｏｌｅ  ｉｎ
ｃｅｌｌ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｇｌｕｃｏｃｏｒｔｉｃｏｉｄ  ａｃｔｉｏｎ．Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７４：１８１００−１８１０６，１９９９．
Ｍｏｚｅｔｉｃ−Ｆｒａｎｃｋｙ  Ｂ，Ｃｏｔｉｃ  Ｖ，Ｒｉｔｏｎｊａ  Ａ，Ｚｅｒｏｖｎｉｋ  Ｅ，ａｎｄ  Ｆｒａｎｃｋｙ  Ａ．Ｈｉｇｈ−ｙｉｅｌｄ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ａｎｄ  ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  ｈｕｍａｎ  ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  ｍｉｇｒａｔｉｏｎ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  ｆａｃｔｏｒ．Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｘｐｒ  Ｐｕｒｉｆ  ９：１１５−１２４，１９９７．
Ｍｕｒｐｈｙ  Ｊ  Ｔ，Ｈｏｒｔｏｎ  Ｊ  Ｗ，Ｐｕｒｄｕｅ  Ｇ  Ｆ，ａｎｄ  Ｈｕｎｔ  Ｊ  Ｌ．Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｒｏｐｏｎｉｎ−Ｉ  ａｓ  ａｎ  ｉｎｄｉｃａｔｏｒ  ｏｆ  ｃａｒｄｉａｃ  ｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ  ａｆｔｅｒ  ｔｈｅｒｍａｌ  ｉｎｊｕｒｙ．Ｊ  Ｔｒａｕｍａ  ４５：７００−７０４，１９９８．
Ｎａｔａｎｓｏｎ  Ｃ，Ｈｏｆｆｍａｎ  Ｗ  Ｄ，Ｓｕｆｆｒｅｄｉｎｉ  Ａ  Ｆ，Ｅｉｃｈａｃｋｅｒ  Ｐ  Ｑ，ａｎｄ  Ｄａｎｎｅｒ  Ｒ  Ｌ．Ｓｅｌｅｃｔｅｄ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ  ｆｏｒ  ｓｅｐｔｉｃ  ｓｈｏｃｋ  ｂａｓｅｄ
ｏｎ  ｐｒｏｐｏｓｅｄ  ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ｏｆ  ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ．Ａｎｎ  Ｉｎｔｅｒｎ  Ｍｅｄ  １２０：７７１−７８３，１９９４．
Ｎａｔａｎｓｏｎ，Ｃ．ら、「Ｅｎｄｏｔｏｘｉｎ  ａｎｄ  Ｔｕｍｏｒ  Ｎｅｃｒｏｓｉｓ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｃｈａｌｌｅｎｇｅｓ  ｉｎ  Ｄｏｇｓ  Ｓｉｍｕｌａｔｅ  ｔｈｅ  Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｆｉｌｅ  ｏｆ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｐｔｉｃ  Ｓｈｏｃｋ」，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，１６９，８２３−９３２（１９８９）．
Ｎｉｓｈｉｎｏ  Ｔ，Ｂｅｒｎｈａｇｅｎ  Ｊ，Ｓｈｉｉｋｉ  Ｈ，Ｃａｌａｎｄｒａ
Ｔ，Ｄｏｈｉ  Ｋ，ａｎｄ  Ｂｕｃａｌａ  Ｒ．Ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  ｍｉｇｒａｔｉｏｎ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  ｆａｃｔｏｒ（ＭＩＦ）ｔｏ  ｓｅｃｒｅｔｏｒｙ  ｇｒａｎｕｌｅｓ  ｗｉｔｈｉｎ  ｔｈｅ  ｃｏｒｔｉｃｏｔｒｏｐｈｉｃ  ａｎｄ  ｔｈｙｒｏｔｒｏｐｈｉｃ  ｃｅｌｌｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｐｉｔｕｉｔａｒｙ  ｇｌａｎｄ．Ｍｏｌ  Ｍｅｄ  １：７８１−７８８，１９９５．
Ｏｈｋａｗａｒａ  Ｔ，Ｎｉｓｈｉｈｉｒａ  Ｊ，Ｔａｋｅｄａ  Ｈ，Ｈｉｇｅ  Ｓ，Ｋａｔｏ  Ｍ，Ｓｕｇｉｙａｍａ  Ｔ，Ｉｗａｎａｇａ  Ｔ，Ｎａｋａｍｕｒａ  Ｈ，Ｍｉｚｕｅ  Ｙ，ａｎｄ  Ａｓａｋａ  Ｍ．Ａｍｅｌｉｏｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｄｅｘｔｒａｎ  ｓｕｌｆａｔｅ  ｓｏｄｉｕｍ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｃｏｌｉｔｉｓ  ｂｙ  ａｎｔｉ−ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  ｍｉｇｒａｔｉｏｎ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  ｆａｃｔｏｒ
ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｉｎ  ｍｉｃｅ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ  １２３：２５６−２７０，２００２．
Ｏｋｕｓａｗａ  Ｓ，Ｇｅｌｆａｎｄ  Ｊ  Ａ，Ｉｋｅｊｉｍａ  Ｔ，Ｃｏｎｎｏｌｌｙ  Ｒ  Ｊ，ａｎｄ  Ｄｉｎａｒｅｌｌｏ  Ｃ  Ａ．Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ  １  ｉｎｄｕｃｅｓ  ａ  ｓｈｏｃｋ−ｌｉｋｅ  ｓｔａｔｅ  ｉｎ  ｒａｂｂｉｔｓ．Ｓｙｎｅｒｇｉｓｍ  ｗｉｔｈ  ｔｕｍｏｒ  ｎｅｃｒｏｓｉｓ  ｆａｃｔｏｒ  ａｎｄ  ｔｈｅ
ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ｃｙｃｌｏｏｘｙｇｅｎａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ．Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ  ８１：１１６２−１１７２，１９８８．
Ｏｎｏ  Ｓ，Ｕｅｎｏ  Ｃ，Ａｏｓａｓａ  Ｓ，Ｔｓｕｊｉｍｏｔｏ  Ｈ，Ｓｅｋｉ  Ｓ，ａｎｄ  Ｍｏｃｈｉｚｕｋｉ  Ｈ．Ｓｅｖｅｒｅ  ｓｅｐｓｉｓ  ｉｎｄｕｃｅｓ  ｄｅｆｉｃｉｅｎｔ  ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ−ｇａｍｍａ  ａｎｄ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１２  ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ，ｂｕｔ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１２  ｔｈｅｒａｐｙ  ｉｍｐｒｏｖｅｓ  ｓｕｒｖｉｖａｌ  ｉｎ  ｐｅｒｉｔｏｎｉｔｉｓ．Ａｍ  Ｊ  Ｓｕｒｇ  １８２：４９１−４９７，２００１．
Ｏｒｉｔａ，Ｍ．ら、「Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  Ｍｉｇｒａｔｉｏｎ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  Ｆａｃｔｏｒ  ａｎｄ  ｔｈｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  ｏｆ  Ｔａｕｔｏｍｅｒａｓｅ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ」，Ｃｕｒｒ．Ｐｈａｒｍ．Ｄｅｓ．，８，１２９７−１３１７（２００２）．
Ｐａｒｋｅｒ，Ｍ．Ｍ．ら、「Ｒｉｇｈｔ  Ｖｅｎｔｒｉｃｕｌａｒ  Ｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｄｉｌａｔａｔｉｏｎ，Ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  Ｌｅｆｔ  Ｖｅｎｔｒｉｃｕｌａｒ  Ｃｈａｎｇｅｓ，Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚｅ  ｔｈｅ  Ｃａｒｄｉａｃ
Ｄｅｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  Ｓｅｐｔｉｃ  Ｓｈｏｃｋ  ｉｎ  Ｈｕｍａｎｓ」，Ｃｈｅｓｔ，９７，１２６−１３１（１９９０）．
Ｐａｒｒｉｌｌｏ  Ｊ  Ｅ，Ｂｕｒｃｈ  Ｃ，Ｓｈｅｌｈａｍｅｒ  Ｊ  Ｈ，Ｐａｒｋｅｒ  Ｍ  Ｍ，Ｎａｔａｎｓｏｎ  Ｃ，ａｎｄ  Ｓｃｈｕｅｔｔｅ  Ｗ．Ａ  ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ  ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ  ｄｅｐｒｅｓｓａｎｔ  ｓｕｂｓｔａｎｃｅ  ｉｎ  ｈｕｍａｎｓ  ｗｉｔｈ  ｓｅｐｔｉｃ  ｓｈｏｃｋ．Ｓｅｐｔｉｃ  ｓｈｏｃｋ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ａ  ｒｅｄｕｃｅｄ  ｅｊｅｃｔｉｏｎ  ｆｒａｃｔｉｏｎ  ｈａｖｅ  ａ  ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ  ｆａｃｔｏｒ  ｔｈａｔ  ｄｅｐｒｅｓｓｅｓ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ  ｃｅｌｌ  ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ．Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ  ７６：１５３９−１５５３，１９８５．
Ｐｅｓｃｈｏｎ  Ｊ  Ｊ，Ｔｏｒｒａｎｃｅ  Ｄ  Ｓ，Ｓｔｏｃｋｉｎｇ  Ｋ  Ｌ，Ｇｌａｃｃｕｍ  Ｍ  Ｂ，Ｏｔｔｅｎ  Ｃ，Ｗｉｌｌｉｓ  Ｃ  Ｒ，Ｃｈａｒｒｉｅｒ  Ｋ，Ｍｏｒｒｉｓｓｅｙ  Ｐ  Ｊ，Ｗａｒｅ  Ｃ  Ｂ，ａｎｄ  Ｍｏｈｌｅｒ  Ｋ  Ｍ．ＴＮＦ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ−ｄｅｆｉｃｉｅｎｔ  ｍｉｃｅ  ｒｅｖｅａｌ  ｄｉｖｅｒｇｅｎｔ  ｒｏｌｅｓ  ｆｏｒ  ｐ５５  ａｎｄ  ｐ７５  ｉｎ  ｓｅｖｅｒａｌ  ｍｏｄｅｌｓ  ｏｆ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ．Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １６０：９４３−９５２，１９９８．
Ｐｏｌｔｏｒａｋ，Ａ．ら、「Ｄｅｆｅｃｔｉｖｅ  ＬＰＳ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ｉｎ  Ｃ３Ｈ／ＨｅＪ  ａｎｄ  Ｃ５７ＢＬ／１ＯＳｃＣｒ  Ｍｉｃｅ：Ｍｕｔａｔｉｏｎｓ  ｉｎ  Ｔｌｒ４  Ｇｅｎｅ」，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２８２，２０８５−２０８８（１９９８）．
Ｐｏｌｔｏｒａｋ，Ａ．ｅｔ  ａｌ．，「Ｇｅｎｅｔｉｃ  ａｎｄ  Ｐｈｙｓｉｃａｌ
Ｍａｐｐｉｎｇ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｌｐｓ  Ｌｏｃｕｓ：Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ
ｏｆ  ｔｈｅ  Ｔｏｌｌ−４  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｓ  ａ  Ｃａｎｄｉｄａｔｅ  Ｇｅｎｅ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｃｒｉｔｉｃａｌ  Ｒｅｇｉｏｎ」，Ｂｌｏｏｄ  Ｃｅｌｌｓ  Ｍｏｌ．Ｄｉｓ．，２４，３４０−３５５（１９９８）．
Ｐｙｌｅ  Ｍ  Ｅ，Ｋｏｒｂｏｎｉｔｓ  Ｍ，Ｇｕｅｏｒｇｕｉｅｖ  Ｍ，Ｊｏｒｄａｎ  Ｓ，Ｋｏｌａ  Ｂ，Ｍｏｒｒｉｓ  Ｄ  Ｇ，Ｍｅｉｎｈａｒｄｔ  Ａ，Ｐｏｗｅｌｌ
Ｍ  Ｐ，Ｃｌａｒｅｔ  Ｆ  Ｘ，Ｚｈａｎｇ  Ｑ，Ｍｅｔｚ  Ｃ，Ｂｕｃａｌａ  Ｒ，ａｎｄ  Ｇｒｏｓｓｍａｎ  Ａ  Ｂ．Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  ｍｉｇｒａｔｉｏｎ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  ｆａｃｔｏｒ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｓ  ｉｎｃｒｅａｓｅｄ  ｉｎ  ｐｉｔｕｉｔａｒｙ  ａｄｅｎｏｍａ  ｃｅｌｌ  ｎｕｃｌｅｉ．Ｊ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  １７６：１０３−１１０，２００３．
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Ｒａｅｂｕｒｎ  Ｃ  Ｄ，Ｄｉｎａｒｅｌｌｏ  Ｃ  Ａ，Ｚｉｍｍｅｒｍａｎ  Ｍ  Ａ，Ｃａｌｋｉｎｓ  Ｃ  Ｍ，Ｐｏｍｅｒａｎｔｚ  Ｂ  Ｊ，ＭｃＩｎｔｙｒｅ  Ｒ  Ｃ，Ｊｒ．，Ｈａｒｋｅｎ  Ａ  Ｈ，ａｎｄ  Ｍｅｎｇ  Ｘ．Ｎｅｕｔｒａｌｉｚａｔｉｏｎ
ｏｆ  ＩＬ−１８  ａｔｔｅｎｕａｔｅｓ  ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ  ｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ．Ａｍ  Ｊ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  Ｈｅａｒｔ  Ｃｉｒｃ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  ２８３：Ｈ６５０−６５７，２００２．
Ｒｉｃｅ  Ｅ  Ｋ，Ｔｅｓｃｈ  Ｇ  Ｈ，Ｃａｏ  Ｚ，Ｃｏｏｐｅｒ  Ｍ  Ｅ，Ｍｅｔｚ  Ｃ  Ｎ，Ｂｕｃａｌａ  Ｒ，Ａｔｋｉｎｓ  Ｒ  Ｃ，ａｎｄ  Ｎｉｋｏｌｉｃ−Ｐａｔｅｒｓｏｎ  Ｄ  Ｊ．Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ＭＩＦ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ａｎｄ  ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ  ｂｙ  ｔｕｂｕｌａｒ  ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓ：Ａ
ｎｏｖｅｌ  ａｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ  ＩＩ．Ｋｉｄｎｅｙ  Ｉｎｔ  ６３：１２６５−１２７５，２００３．
Ｒｅｉｌｌｙ  Ｊ  Ｍ，Ｃｕｎｎｉｏｎ  Ｒ  Ｅ，Ｂｕｒｃｈ−Ｗｈｉｔｍａｎ  Ｃ，Ｐａｒｋｅｒ  Ｍ  Ｍ，Ｓｈｅｌｈａｍｅｒ  Ｊ  Ｈ，ａｎｄ  Ｐａｒｒｉｌｌｏ  Ｊ  Ｅ．Ａ  ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ  ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ  ｄｅｐｒｅｓｓａｎｔ  ｓｕｂｓｔａｎｃｅ  ｉｓ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ｃａｒｄｉａｃ  ｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ  ｈｙｐｏｐｅｒｆｕｓｉｏｎ（ｌａｃｔｉｃ  ａｃｉｄｅｍｉａ）ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｓｅｐｔｉｃ  ｓｈｏｃｋ．Ｃｈｅｓｔ  ９５：１０７２−１０８０，１９８９．
Ｒｅｉｎｈａｒｔ  Ｋ，Ｗｉｅｇａｎｄ−Ｌｏｈｎｅｒｔ  Ｃ，Ｇｒｉｍｍｉｎｇｅｒ
Ｆ，Ｋａｕｌ  Ｍ，Ｗｉｔｈｉｎｇｔｏｎ  Ｓ，Ｔｒｅａｃｈｅｒ  Ｄ，Ｅｃｋａｒｔ
Ｊ，Ｗｉｌｌａｔｔｓ  Ｓ，Ｂｏｕｚａ  Ｃ，Ｋｒａｕｓｃｈ  Ｄ，Ｓｔｏｃｋｅｎｈｕｂｅｒ  Ｆ，Ｅｉｓｅｌｓｔｅｉｎ  Ｊ，Ｄａｕｍ  Ｌ，ａｎｄ  Ｋｅｍｐｅｎｉ  Ｊ．Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｓａｆｅｔｙ  ａｎｄ  ｅｆｆｉｃａｃｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉ−ｔｕｍｏｒ  ｎｅｃｒｏｓｉｓ  ｆａｃｔｏｒ  ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｆｒａｇｍｅｎｔ，ＭＡＫ  １９５Ｆ，ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｓｅｐｓｉｓ  ａｎｄ  ｓｅｐｔｉｃ  ｓｈｏｃｋ：ａ  ｍｕｌｔｉｃｅｎｔｅｒ，ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ，ｐｌａｃｅｂｏ−ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ，ｄｏｓｅ−ｒａｎｇｉｎｇ  ｓｔｕｄｙ．Ｃｒｉｔ  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ  ２４：７３３−７４２，１９９６．
Ｒｅｉｎｈａｒｔ  Ｋ  ａｎｄ  Ｋａｒｚａｉ  Ｗ．Ａｎｔｉ−ｔｕｍｏｒ  ｎｅｃｒｏｓｉｓ  ｆａｃｔｏｒ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｉｎ  ｓｅｐｓｉｓ：ｕｐｄａｔｅ  ｏｎ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｔｒｉａｌｓ  ａｎｄ  ｌｅｓｓｏｎｓ  ｌｅａｒｎｅｄ．Ｃｒｉｔ
Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ  ２９：Ｓ１２１−１２５，２００１．
Ｒｅｙｎｏｌｄｓ  Ｅ  Ｍ，Ｒｙａｎ  Ｄ  Ｐ，Ｓｈｅｒｉｄａｎ  Ｒ  Ｌ，ａｎｄ  Ｄｏｏｄｙ  Ｄ  Ｐ．Ｌｅｆｔ  ｖｅｎｔｒｉｃｕｌａｒ  ｆａｉｌｕｒｅ  ｃｏｍｐｌｉｃａｔｉｎｇ  ｓｅｖｅｒｅ  ｐｅｄｉａｔｒｉｃ  ｂｕｒｎ  ｉｎｊｕｒｉｅｓ．Ｊ
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Ｒｏｇｅｒ，Ｔ．ら、「ＭＩＦ  Ｒｅｇｕｌａｔｅｓ  Ｉｎｎａｔｅ  Ｉｍｍｕｎｅ  Ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ  Ｔｈｒｏｕｇｈ  Ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｔｏｌｌ−Ｌｉｋｅ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ４」，Ｎａｔｕｒｅ，４１４，９２０−９２４（２００１）．
Ｒｏｓｓｉ，Ａ．Ｇ．ら、「Ｈｕｍａｎ  Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ  Ｅｏｓｉｎｏｐｈｉｌｓ  Ｓｅｃｒｅｔｅ  Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  Ｍｉｇｒａｔｉｏｎ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  Ｆａｃｔｏｒ（ＭＩＦ）．Ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  Ｒｏｌｅ  ｉｎ  Ａｓｔｈｍａ」，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，１０１，２８６９−２８７４（１９９８）．
Ｒｏｓｅｎｇｒｅｎ  Ｅ，Ｂｕｃａｌａ  Ｒ，Ａｍａｎ  Ｐ，Ｊａｃｏｂｓｓｏｎ  Ｌ，Ｏｄｈ  Ｇ，Ｍｅｔｚ  Ｃ  Ｎ，ａｎｄ  Ｒｏｒｓｍａｎ  Ｈ．Ｔｈｅ  ｉｍｍｕｎｏｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  ｍｅｄｉａｔｏｒ  ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  ｍｉｇｒａｔｉｏｎ
ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  ｆａｃｔｏｒ（ＭＩＦ）ｃａｔａｌｙｚｅｓ  ａ  ｔａｕｔｏｍｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｒｅａｃｔｉｏｎ．Ｍｏｌ  Ｍｅｄ  ２：１４３−１４９，１９９６．
Ｒｏｔｈ，Ｄ．Ｍ．ら、「Ｉｍｐａｃｔ  ｏｆ  Ａｎｅｓｔｈｅｓｉａ  ｏｎ  Ｃａｒｄｉａｃ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎ  Ｄｕｒｉｎｇ  Ｅｃｈｏｃａｒｄｉｏｇｒａｐｈｙ  ｉｎ
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Ｓａｉｔｏ  Ｈ，Ｐａｔｔｅｒｓｏｎ  Ｃ，Ｈｕ  Ｚ，Ｒｕｎｇｅ  Ｍ  Ｓ，Ｔｉｐｎｉｓ  Ｕ，Ｓｉｎｈａ  Ｍ，ａｎｄ  Ｐａｐａｃｏｎｓｔａｎｔｉｎｏｕ  Ｊ．Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ａｎｄ  ｓｅｌｆ−ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｃａｒｄｉａｃ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−６  ｄｕｒｉｎｇ  ｅｎｄｏｔｏｘｅｍｉａ．Ａｍ  Ｊ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  Ｈｅａｒｔ  Ｃｉｒｃ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  ２７９：Ｈ２２４１−２２４８，２０００．
Ｓａｎｄｅｒｓ  Ｄ  Ｂ，Ｌａｒｓｏｎ  Ｄ  Ｆ，Ｈｕｎｔｅｒ  Ｋ，Ｇｏｒｍａｎ  Ｍ，ａｎｄ  Ｙａｎｇ  Ｂ．Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ  ｏｆ  ｔｕｍｏｒ  ｎｅｃｒｏｓｉｓ  ｆａｃｔｏｒ−α  ｅｆｆｅｃｔ  ｏｎ  ｔｈｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｉＮＯＳ  ｉｎ  ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  ａｎｄ  ｃａｒｄｉａｃ  ｍｙｏｃｙｔｅｓ．Ｐｅｒｆｕｓｉｏｎ  １６：６７−７４，２００１．
Ｓａｍｂｏｌ  Ｊ  Ｔ，Ｗｈｉｔｅ  Ｊ，Ｈｏｒｔｏｎ  Ｊ  Ｗ，ａｎｄ  Ｄｅｉｔｃｈ  Ｅ  Ａ．Ｂｕｒｎ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｉｍｐａｉｒｍｅｎｔ  ｏｆ  ｃａｒｄｉａｃ
ｃｏｎｔｒａｃｔｉｌｅ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｉｓ  ｄｕｅ  ｔｏ  ｇｕｔ−ｄｅｒｉｖｅｄ  ｆａｃｔｏｒｓ  ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｄ  ｉｎ  ｍｅｓｅｎｔｅｒｉｃ  ｌｙｍｐｈ．Ｓｈｏｃｋ  １８：２７２−２７６，２００２．
Ｓｃｈｗａｃｈａ  Ｍ  Ｇ，Ｓｃｈｎｅｉｄｅｒ  Ｃ  Ｐ，ａｎｄ  Ｃｈａｕｄｒｙ  Ｉ  Ｈ．Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ａｎｄ  ｔｉｓｓｕｅ  ｃｏｍｐａｒｔｍｅｎｔａｌｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ  ｔｈｅｒｍａｌ  ｉｎｊｕｒｙ．Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  １７：２６６−２７４，２００２．
Ｓｅｎｔｅｒ  Ｐ  Ｄ，Ａｌ−Ａｂｅｄ  Ｙ，Ｍｅｔｚ  Ｃ  Ｎ，Ｂｅｎｉｇｎｉ  Ｆ，Ｍｉｔｃｈｅｌｌ  Ｒ  Ａ，Ｃｈｅｓｎｅｙ  Ｊ，Ｈａｎ  Ｊ，Ｇａｒｔｎｅｒ  Ｃ  Ｇ，Ｎｅｌｓｏｎ  Ｓ  Ｄ，Ｔｏｄａｒｏ  Ｇ  Ｊ，ａｎｄ  Ｂｕｃａｌａ  Ｒ．Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  ｍｉｇｒａｔｉｏｎ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  ｆａｃｔｏｒ（ＭＩＦ）ｔａｕｔｏｍｅｒａｓｅ  ａｎｄ  ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ
ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ  ｂｙ  ａｃｅｔａｍｉｎｏｐｈｅｎ  ｍｅｔａｂｏｌｉｔｅｓ．Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９９：１４４−１４９，２００２．
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Ｓｈｉｍｉｚｕ，Ｔら、「Ｈｉｇｈ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  Ｍｉｇｒａｔｉｏｎ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  Ｆａｃｔｏｒ  ｉｎ  Ｈｕｍａｎ  Ｍｅｌａｎｏｍａ  Ｃｅｌｌｓ  ａｎｄ  Ｉｔｓ  Ｒｏｌｅ  ｉｎ  Ｔｕｍｏｒ  Ｃｅｌｌ  Ｇｒｏｗｔｈ  ａｎｄ  Ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ」，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．，２６４，７５１−７５８（１９９９）．
Ｓｈｉｍｉｚｕ  Ｔ，Ａｂｅ  Ｒ，Ｏｈｋａｗａｒａ  Ａ，Ｍｉｚｕｅ  Ｙ，ａｎｄ  Ｎｉｓｈｉｈｉｒａ  Ｊ．Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  ｍｉｇｒａｔｉｏｎ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  ｆａｃｔｏｒ  ｉｓ  ａｎ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌ  ｉｍｍｕｎｏｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ｉｎ  ａｔｏｐｉｃ  ｄｅｒｍａｔｉｔｉｓ．Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓ  Ｃｏｍｍｕｎ  ２４０：１７３−１７８，１９９７．
Ｓｈｉｍｉｚｕ  Ｔ，Ｏｈｋａｗａｒａ  Ａ，Ｎｉｓｈｉｈｉｒａ  Ｊ，ａｎｄ  Ｓａｋａｍｏｔｏ  Ｗ．Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  ｍｉｇｒａｔｉｏｎ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  ｆａｃｔｏｒ（ＭＩＦ）ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｓｋｉｎ  ａｎｄ  ｉｔｓ  ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ．ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ  ３８１：１９９−２０２，１９９６．
Ｓｈｉｍｉｚｕ，Ｔ．ら、「Ｉｎｃｒｅａｓｅｄ  ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  Ｍｉｇｒａｔｉｏｎ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  Ｆａｃｔｏｒ  ｂｙ  ＰＢＭＣｓ  ｏｆ  Ａｔｏｐｉｃ  Ｄｅｒｍａｔｉｔｉｓ」，Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１０４，６５９−６６４（１９９９）．
Ｓｈｉｍｏｍｕｒａ  Ｙ，Ｓｈｉｍｉｚｕ  Ｈ，Ｔａｋａｈａｓｈｉ  Ｍ，Ｓａｔｏ  Ｎ，Ｕｅｈａｒａ  Ｙ，Ｓｕｗａ  Ｋ，Ｋｏｂａｙａｓｈｉ  Ｉ，Ｔａｄｏｋｏｒｏ  Ｓ，ａｎｄ  Ｋｏｂａｙａｓｈｉ  Ｓ．Ｃｈａｎｇｅｓ  ｉｎ  ａｍｂｕｌａｔｏｒｙ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ａｎｄ  ｄｏｐａｍｉｎｅ  ｔｕｒｎｏｖｅｒ  ｉｎ  ｓｔｒｅｐｔｏｚｏｔｏｃｉｎ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｄｉａｂｅｔｉｃ  ｒａｔｓ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ  １２３：２６２１−２６２５，１９８８．
Ｓｈｏｅｍａｋｅｒ  Ｗ  Ｃ，Ｖｌａｄｅｃｋ  Ｂ  Ｃ，Ｂａｓｓｉｎ  Ｒ，Ｐｒｉｎｔｅｎ  Ｋ，Ｂｒｏｗｎ  Ｒ  Ｓ，Ａｍａｔｏ  Ｊ  Ｊ，Ｒｅｉｎｈａｒｄ  Ｊ  Ｍ，ａｎｄ  Ｋａｒｋ  Ａ  Ｅ．Ｂｕｒｎ  ｐａｔｈｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ  ｉｎ  ｍａｎ．Ｉ．Ｓｅｑｕｅｎｔｉａｌ  ｈｅｍｏｄｙｎａｍｉｃ  ａｌｔｅｒａｔｉｏｎｓ．Ｊ  Ｓｕｒｇ  Ｒｅｓ  １４：６４−７３，１９７３．
Ｓｈｕ  Ｈ  Ｂ，Ｔａｋｅｕｃｈｉ  Ｍ，ａｎｄ  Ｇｏｅｄｄｅｌ  Ｄ  Ｖ．Ｔｈｅ  ｔｕｍｏｒ  ｎｅｃｒｏｓｉｓ  ｆａｃｔｏｒ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ２  ｓｉｇｎａｌ  ｔｒａｎｓｄｕｃｅｒｓ  ＴＲＡＦ２  ａｎｄ  ｃ−ＩＡＰ  １  ａｒｅ  ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｔｕｍｏｒ  ｎｅｃｒｏｓｉｓ  ｆａｃｔｏｒ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  １  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ｃｏｍｐｌｅｘ．Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９３：１３９７３−１３９７８，１９９６．
Ｓｕｆｆｒｅｄｉｎｉ，Ａ．Ｆ．ら、「Ｔｈｅ  Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ  Ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｏｆ  Ｎｏｒｍａｌ  Ｈｕｍａｎｓ  ｔｏ  ｔｈｅ  Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｅｎｄｏｔｏｘｉｎ」，Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，３２１，２８０−２８７（１９８９）．
Ｔａｋａｈａｓｈｉ，Ｍ．ら、「Ｅｌｅｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｐｌａｓｍａ  Ｌｅｖｅｌｓ  ｏｆ  Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  Ｍｉｇｒａｔｉｏｎ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  Ｆａｃｔｏｒ  ｉｎ  Ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  Ａｃｕｔｅ  Ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ  Ｉｎｆａｒｃｔｉｏｎ」，Ａｍ．Ｊ．Ｃａｒｄｉｏｌ．，８９，２４８−２４９（２００２）．
Ｔａｋａｈａｓｈｉ，Ｍ．ら、「Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  Ｍｉｇｒａｔｉｏｎ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  Ｆａｃｔｏｒ  ａｓ  ａ  Ｒｅｄｏｘ−Ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ  Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ｉｎ  Ｃａｒｄｉａｃ  Ｍｙｏｃｙｔｅｓ」，Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ  Ｒｅｓ．，５２，４３８−４４５（２００１）．
Ｔａｋａｈａｓｈｉら、「Ｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  Ｍｉｇｒａｔｉｏｎ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  Ｆａｃｔｏｒ（ＭＩＦ）ｉｎ  ｔｈｅ  Ｍｅｃｈａｎｉｓｍ  ｏｆ  Ｔｕｍｏｒ  Ｃｅｌｌ  Ｇｒｏｗｔｈ」，Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．，４，７０７−７１４（１９９８）．
Ｔｈｏｍａｓ  Ｊ  Ａ，Ｔｓｅｎ  Ｍ  Ｆ，Ｗｈｉｔｅ  Ｄ  Ｊ，ａｎｄ  Ｈｏｒｔｏｎ  Ｊ  Ｗ．ＩＲＡＫ  ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅｓ  ｔｏ  ｂｕｒｎ−ｔｒｉｇｇｅｒｅｄ
ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ  ｃｏｎｔｒａｃｔｉｌｅ  ｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ．Ａｍ  Ｊ
Ｐｈｙｓｉｏｌ  Ｈｅａｒｔ  Ｃｉｒｃ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  ２８３：Ｈ８２９−８３６，２００２．
Ｔｈｏｍａｓ  Ｊ  Ａ，Ｔｓｅｎ  Ｍ  Ｆ，Ｗｈｉｔｅ  Ｄ  Ｊ，ａｎｄ  Ｈｏｒｔｏｎ  Ｊ  Ｗ．ＴＬＲ４  ｉｎａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｒＢＰＩ（２１）ｂｌｏｃｋ  ｂｕｒｎ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ  ｃｏｎｔｒａｃｔｉｌｅ  ｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ．Ａｍ  Ｊ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  Ｈｅａｒｔ  Ｃｉｒｃ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  ２８３：Ｈ１６４５−１６５５，２００２．
Ｕｔｓｕｎｏｍｉｙａ  Ｔ，Ｋｏｂａｙａｓｈｉ  Ｍ，Ｈｅｒｎｄｏｎ  Ｄ  Ｎ，Ｐｏｌｌａｒｄ  Ｒ  Ｂ，ａｎｄ  Ｓｕｚｕｋｉ  Ｆ．Ａ  ｍｅｃｈａｎｉｓｍ  ｏｆ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１２  ｕｎｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅｎｅｓｓ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ
ｗｉｔｈ  ｔｈｅｒｍａｌ  ｉｎｊｕｒｙ．Ｊ  Ｓｕｒｇ  Ｒｅｓ  ９６：２１１−２１７，２００１．
Ｖｉｇｎａｌｉ  Ｄ  Ａ．Ｍｕｌｔｉｐｌｅｘｅｄ  ｐａｒｔｉｃｌｅ−ｂａｓｅｄ  ｆｌｏｗ  ｃｙｔｏｍｅｔｒｉｃ  ａｓｓａｙｓ．Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ
２４３：２４３−２５５，２０００
Ｗａｋａｂａｙａｓｈｉ  Ｇ，Ｇｅｌｆａｎｄ  Ｊ  Ａ，Ｂｕｒｋｅ  Ｊ  Ｆ，Ｔｈｏｍｐｓｏｎ  Ｒ  Ｃ，ａｎｄ  Ｄｉｎａｒｅｌｌｏ  Ｃ  Ａ．Ａ  ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ  ｆｏｒ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ  １  ｐｒｅｖｅｎｔｓ  Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｓｈｏｃｋ  ｉｎ  ｒａｂｂｉｔｓ．Ｆａｓｅｂ  Ｊ５：３３８−３４３，１９９１．
Ｗｈｉｔｅ，Ｊ．ら、「Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ａｎ  Ａｃｕｔｅ  Ｂｕｒｎ
Ｍｏｄｅｌ  ｉｎ  Ａｄｕｌｔ  Ｍｉｃｅ  ｆｏｒ  Ｓｔｕｄｉｅｓ  ｏｆ  Ｃａｒｄｉａｃ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｃａｒｄｉｏｍｙｏｃｙｔｅ  Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎ」，Ｓｈｏｃｋ，１６，１２２−１２９（２００１）．
Ｗｈｉｔｅ  Ｊ，Ｃａｒｌｓｏｎ  Ｄ  Ｌ，Ｔｈｏｍｐｓｏｎ  Ｍ，Ｍａａｓｓ  Ｄ  Ｌ，Ｓａｎｄｅｒｓ  Ｂ，Ｇｉｒｏｉｒ  Ｂ，ａｎｄ  Ｈｏｒｔｏｎ  Ｊ  Ｗ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ａｎｄ  ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ  ｔｏ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ  ｎｉｔｒｉｃ  ｏｘｉｄｅ  ａｆｔｅｒ  ｂｕｒｎ  ｔｒａｕｍａ．Ａｍ  Ｊ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  Ｈｅａｒｔ  Ｃｉｒｃ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  ２８５：Ｈ１６１６−１６２５，２００３．
Ｗｈｉｔｅ  Ｊ，Ｍａａｓｓ  Ｄ  Ｌ，Ｇｉｒｏｉｒ  Ｂ，ａｎｄ  Ｈｏｒｔｏｎ  Ｊ
Ｗ．Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ａｎ  ａｃｕｔｅ  ｂｕｒｎ  ｍｏｄｅｌ  ｉｎ
ａｄｕｌｔ  ｍｉｃｅ  ｆｏｒ  ｓｔｕｄｉｅｓ  ｏｆ  ｃａｒｄｉａｃ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｃａｒｄｉｏｍｙｏｃｙｔｅ  ｃｅｌｌｕｌａｒ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ．Ｓｈｏｃｋ  １６：１２２−１２９，２００１．
Ｗｏｌｆｅ  Ｒ  Ｒ．Ｒｅｖｉｅｗ：ａｃｕｔｅ  ｖｅｒｓｕｓ  ｃｈｒｏｎｉｃ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｔｏ  ｂｕｒｎ  ｉｎｊｕｒｙ．Ｃｉｒｃ  Ｓｈｏｃｋ  ８：１０５−１１５，１９８１．
Ｙａｎｇ  Ｈ，ＣＯｃｈａｎｉ  Ｍ，Ｌｉ  Ｊ，Ｑｉａｎｇ  Ｘ，Ｔａｎｏｖｉｃ  Ｍ，Ｈａｒｒｉｓ  Ｈ，Ｓｕｓａｒｌａ  Ｓ，Ｕｌｌｏａ  Ｌ，Ｗａｎｇ  Ｈ，ＤｉＲａｉｍｏ  Ｒ，Ｃｚｕｒａ  Ｃ，Ｗａｎｇ  Ｈ，Ｒｏｔｈ  Ｊ，Ｗａｒｒｅｎ  Ｈ，Ｆｉｎｋ
Ｍ，Ｆｅｎｔｏｎ  Ｍ，Ａｎｄｅｒｓｓｏｎ  Ｕ，ａｎｄ  Ｔｒａｃｅｙ  Ｋ  Ｊ．Ｒｅｖｅｒｓｉｎｇ  ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ  ｓｅｐｓｉｓ  ｗｉｔｈ  ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｓ  ｏｆ  ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ  ｈｉｇｈ−ｍｏｂｉｌｉｔｙ  ｇｒｏｕｐ  ｂｏｘ  １．ＰＮＡＳ  １０１：２９６−３０１，２００４．
Ｙｕ  Ｃ  Ｍ，Ｌａｉ  Ｋ  Ｗ，Ｃｈｅｎ  Ｙ  Ｘ，Ｈｕａｎｇ  Ｘ  Ｒ，ａｎｄ  Ｌａｎ  Ｈ  Ｙ．Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  ｍｉｇｒａｔｉｏｎ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  ｆａｃｔｏｒ  ｉｎ  ａｃｕｔｅ  ｉｓｃｈｅｍｉｃ  ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ  ｉｎｊｕｒｙ．Ｊ．Ｈｉｓｔｏｃｈｅｍ  Ｃｙｔｏｃｈｅｍ  ５１：６２５−６３１，２００３．
Ｙｕ，Ｃ．Ｍ．ら、「Ｅｌｅｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｐｌａｓｍａ  Ｌｅｖｅｌ  ｏｆ  Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  Ｍｉｇｒａｔｉｏｎ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  Ｆａｃｔｏｒ  ｉｎ  Ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  Ａｃｕｔｅ  Ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ  Ｉｎｆａｒｃｔｉｏｎ」，Ａｍ．Ｊ．Ｃａｒｄｉｏｌ．，８８，７７４−７７７（２００１）。
【０３０３】
本発明の多くの改変および変異は明らかに、上記の引用物に照らして可能である。従って、本発明は添付の特許請求の範囲内で、本明細書に詳細に引用される以外に実施可能であり得ることが理解される。
【図３】
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【図４】
2010159267.tif 000019
【図５】
2010159267.tif 000020
【図８】
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【図１０】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図２０】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図１】
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【図２】
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【図６】
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【図７】
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【図９】
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【図１１】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１９】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
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【図３１】
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