(57)【要約】【課題】  本発明は、食中毒原因菌として重要なビブリオを簡易かつ正確に検出することができるビブリオ検出用培地を提供する。【解決手段】  本発明は、培地中にポリペプチド系抗生物質を含有させることにより、ビブリオ・アルギノリティカスの生育のみを選択的に抑制し、かつ腸炎ビブリオ、ビブリオ・コレラ、ビブリオ・バルニフィカスの３種を同時に検出することができるビブリオ検出用培地。【選択図】 無し【特許請求の範囲】
【請求項１】
ビブリオ・アルギノリティカスの生育のみを選択的に抑制し、かつ他のビブリオの生育を抑制しない、ポリペプチド系抗生物質を含有することを特徴とするビブリオ検出用培地。
【請求項２】
ポリペプチド系抗生物質がポリミキシンＢ、コリスチン、およびバシトラシンから成る群から選択される少なくとも１種である請求項１記載のビブリオ検出用培地。
【請求項３】
ポリペプチド系抗生物質がポリミキシンＢである請求項１又は２記載のビブリオ検出用培地。
【請求項４】
ポリミキシンＢの濃度が１００〜１３００unitである請求項１〜３記載のビブリオ検出用培地。
【請求項５】
他のビブリオが腸炎ビブリオ、ビブリオ・コレラ、ビブリオ・バルニフィカスである請求項１記載のビブリオ検出用培地。
【請求項６】
培地１Ｌあたり、ポリミキシンＢ１００〜１３００unit、ペプトン１〜３０ｇ、酵母エキス１〜１０ｇ、白糖３５〜５０ｇ、胆汁末１〜２０ｇ、塩化ナトリウム５〜４０ｇ、クエン酸ナトリウム５〜２０ｇ、チオ硫酸ナトリウム５〜２０ｇ、クエン酸鉄０．１〜５ｇ、ブロムチモールブルー０.００５〜０．１ｇ、寒天５〜２０ｇを含有する請求項１記載のビブリオ検出用培地。
【請求項７】
請求項１〜６記載のいずれか１項記載の培地に、検体を接種して培養後、ビブリオ・アルギノリティカスの生育のみを選択的に抑制し、抑制されない他のビブリオを検出することを特徴とするビブリオの検出方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ビブリオ検出用培地に関し、特に食中毒原因菌として重要なビブリオを簡易かつ正確に検出することができるビブリオ検出用培地に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
ビブリオ属細菌は、細菌性食中毒菌の原因菌として高い頻度で検出される病原細菌の一種である。本菌は、広く海洋中に分布し、海産物を多量に接種する我が国では、重要な病原菌の一つであり、特に夏期に本菌が原因の食中毒が多発している。この食中毒は、急性胃腸炎であり、発熱、嘔吐、腹痛、下痢を伴うことを特徴としている（例えば、非特許文献１参照）。
【０００３】
従来、このような食中毒原因菌であるビブリオの検出培地として、ＴＣＢＳ（Thiosulfate citrate bile salts sucrose）寒天培地が広く用いられている。このＴＣＢＳ寒天培地は、白糖とｐＨ指示薬を含むものである。
この培地は、腸炎ビブリオが白糖を利用しないのに対し、ビブリオ属に属し、かつ食中毒の原因であるビブリオ・アルギノリティカスやビブリオ・コレラが白糖を利用して酸を生成するという性質を利用したものである（例えば、非特許文献２参照）。
【０００４】
一方、ＴＣＢＳ寒天培地においては、白糖の分解性をブロムチモールブルー（以下、ＢＴＢ（ｐＨ指示薬）と略す）で検出するため、ビブリオ・アルギノリティカスが多量に発育すると、白糖が分解されて酸が産生され、培地全体が黄色に呈色する。
これに対して、本来、白糖非分解である腸炎ビブリオは、酸を出さないので、緑色に呈色する。
しかしながら、アルギノリティカスが多量に発育すると、産生された酸の影響で腸炎ビブリオのコロニーが緑色から黄色に変色し、腸炎ビブリオを正確に検出できないという問題があった。
【０００５】
このため、腸炎ビブリオと同じビブリオ属に属するビブリオ・アルギノリティカスが共存しても色の変化を生じずに、正確かつ簡便に腸炎ビブリオを検出できる培地が提案されている（例えば、特許文献１参照）。
【０００６】
しかしながら、上記公報に係る発明では、腸炎ビブリオのみを検出することができるに止まり、腸炎ビブリオ、ビブリオ・コレラ、ビブリオ・バルニフィカスの３種を同時に検出するには至っていない。
【０００７】
【特許文献１】特開２００２−３５５０９１号公報
【０００８】
【非特許文献１】島田俊夫  食品衛生研究  ２００１年、５１巻  ｐ．７-１８
【非特許文献２】小林俊一  他.  日細誌  １９６３年、１８巻  ｐ.３８７
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明は、培地中にポリペプチド系抗生物質を含有させることにより、ビブリオ・アルギノリティカスの生育のみを選択的に抑制し、かつ腸炎ビブリオ、ビブリオ・コレラ、ビブリオ・バルニフィカスの３種を同時に検出することができるビブリオ検出用培地を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明は、下記のような構成からなるものである。
（１）ビブリオ・アルギノリティカスの生育のみを選択的に抑制し、かつ他のビブリオの生育を抑制しない、ポリペプチド系抗生物質を含有することを特徴とするビブリオ検出用培地。
（２）ポリペプチド系抗生物質がポリミキシンＢ、コリスチン、およびバシトラシンから成る群から選択される少なくとも１種である（１）記載のビブリオ検出用培地。
（３）ポリペプチド系抗生物質がポリミキシンＢである（１）又は（２）記載のビブリオ検出用培地。
（４）ポリミキシンＢの濃度が１００〜１３００unitである（１）〜（３）記載のビブリオ検出用培地。
（５）他のビブリオが腸炎ビブリオ、ビブリオ・コレラ、ビブリオ・バルニフィカスである（１）記載のビブリオ検出用培地。
（６）培地１Ｌあたり、ポリミキシンＢ１００〜１３００unit、ペプトン１〜３０ｇ、酵母エキス１〜１０ｇ、白糖３５〜５０ｇ、胆汁末１〜２０ｇ、塩化ナトリウム５〜４０ｇ、クエン酸ナトリウム５〜２０ｇ、チオ硫酸ナトリウム５〜２０ｇ、クエン酸鉄０．１〜５ｇ、ＢＴＢ０.００５〜０．１ｇ、寒天５〜２０ｇを含有する請求項１記載のビブリオ検出用培地。
（７）（１）〜（６）記載のいずれか１記載の培地に、検体を接種して培養後、ビブリオ・アルギノリティカスの生育のみを選択的に抑制し、かつ抑制されないビブリオを検出することを特徴とするビブリオ検出方法。
【発明の効果】
【００１１】
本発明のビブリオ検出用培地によれば、ビブリオ・アルギノリティカスの生育のみを選択的に抑制し、かつ腸炎ビブリオ、ビブリオ・コレラ、ビブリオ・バルニフィカスの生育を抑制しないため、これらのビブリオを同時に検出することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１２】
以下、本発明を更に詳細に説明する。
本発明のビブリオ検出用培地の特徴は、培地中にビブリオ・アルギノリティカスの生育のみを選択的に抑制し、かつ腸炎ビブリオ、ビブリオ・コレラ、ビブリオ・バルニフィカスの生育を抑制しない、ポリペプチド系抗生物質を含有させることにある。
このポリペプチド系抗生物質としては、ポリミキシンＢ、コリスチン、およびバシトラシンから成る群から選択される少なくとも１種が挙げられる。中でも、ポリミキシンＢが最も好ましい。
これら以外に同様の効果を有する抗生物質としてグラミシジン、ミカマイシンおよびバイオマイシンなどが挙げられる。
【００１３】
このポリミキシンＢの濃度は１００〜１３００unitの範囲であることが好ましく、より好ましくは２００〜１０００unitの範囲であり、最も好ましくは４００unitである。
ポリミキシンＢの濃度が１００unit未満になると、ビブリオ・アルギノリティカスの生育を選択的に抑制することができなくなる。逆に、１３００unitを超えると、腸炎ビブリオの生育を抑制する。
【００１４】
本発明のビブリオ検出用培地は、培地１Ｌあたり、ポリミキシンＢ１００〜１３００unit、ペプトン１〜３０ｇ、酵母エキス１〜１０ｇ、白糖３５〜５０ｇ、胆汁末１〜２０ｇ、塩化ナトリウム５〜４０ｇ、クエン酸ナトリウム５〜２０ｇ、チオ硫酸ナトリウム５〜２０ｇ、クエン酸鉄０．１〜５ｇ、ブロムチモールブルー０.００５〜０．１ｇ、寒天５〜２０ｇを含有することが好ましい。
【００１５】
これらの他に、ビブリオの発育を促進する栄養源として、硫酸アンモニウムなどの窒素源、マルトースやスクロースなどの糖類、更に必要に応じてミネラルやビタミンなどの任意のものを含めることができる。
【００１６】
本発明では、特に必要とされないが、雑菌の繁殖を抑制するための抗菌剤として、ゲンタマイシン、ストレプトマイシン、カナマイシン、ネオマイシンなどのアミノグリコキシド系抗生物質、広範囲の抗菌スペクトルを有するペニシリン、セファロスポリンを含有させることができる。
【００１７】
本発明の培地は、液体、半流動、固形のいずれの形態も取りうるが、検出のし易さ等の観点から、固形培地が好ましく、より好ましくは平板固形培地の形態である。
固形培地の固化剤としては、寒天、カラギーナン、アガロースなど通常使用されているものが挙げられる。
【実施例】
【００１８】
以下、実施例によって本発明を更に詳細に説明するが、本発明はこれによって限定されるものではない。
【００１９】
実施例
表１に示した培地成分１２１．５ｇを秤量し、更にポリミキシンＢを５０〜１５００unitになるように添加して、１０００ｍＬの精製水に溶解した。振盪した後、ｐＨを８．８±０．２に調整し、１００℃で２０分間加熱滅菌した。５０℃に冷却後、１８ｍＬずつシャーレに分注して固化した。固化後、３０分間乾燥した。
各菌について１０株を一晩培養し、その菌株をマクファーランド＃１に調整後、（１０6cfu/mL)になるように滅菌生理食塩水で希釈した。この菌株をエーゼで培地に画線し、３７℃で１８時間培養した。
表２および表３の結果に示すように、ポリミキシンＢの濃度が１００unit未満になると、ビブリオ・アルギノリティカスの生育を抑制できなくなることが判る。一方、１３００unitを超えると、腸炎ビブリオの生育が抑制されることが判る。
従って、ビブリオ・アルギノリティカスの生育のみを選択的に抑制し、かつ腸炎ビブリオ、ビブリオ・コレラ、ビブリオ・バルニフィカスの３種を同時に検出できるポリミキシンの濃度は１００〜１３００unitの範囲であることが判る。
【００２０】
表１  培地の組成
──────────────────────
ペプトン                    １０．０ｇ
酵母エキス末                  ４．０ｇ
白糖                        ４０．０ｇ
チオ硫酸ナトリウム          １２．０ｇ
クエン酸ナトリウム          １０．０ｇ
塩化ナトリウム              ２５．０ｇ
胆汁末                        ６．０ｇ
クエン酸鉄                     ０.５ｇ
ＢＴＢ                       ０.０３ｇ
寒天                        １４．０ｇ
──────────────────────
ｐＨ８．８±０．２
【００２１】
表２  １０6をエーゼ画線培養（ＴＣＢＳ）
───────────────────────────────────────
ポリミキシン濃度(unit)  50  100  200  300  400  1100  1200  1300  1400  1500  
───────────────────────────────────────
ビブリオ・アルギノリティカス
8    2    1    1    0    0     0     0     0     0
腸炎ビブリオ            10   10   10   10   10    9     8     8     4     0
ビブリオ・コレラ        10   10   10   10   10   10    10    10    10    10
ビブリオ・バルニフィカス10   10   10   10   10   10    10    10    10    10
───────────────────────────────────────
【００２２】
表３  １０6をエーゼ画線培養（ビブリオ検出培地）
───────────────────────────────────────
ポリミキシン濃度(unit)  50  100  200  300  400  1100  1200  1300  1400  1500  
───────────────────────────────────────
ビブリオ・アルギノリティカス 
9    1    1    1    0    0     0     0     0     0
腸炎ビブリオ            10   10   10   10   10    9     9     8     3     0
ビブリオ・コレラ        10   10   10   10   10   10    10    10    10    10
ビブリオ・バルニフィカス10   10   10   10   10   10    10    10    10    10
───────────────────────────────────────
【産業上の利用可能性】
【００２３】
本発明によれば、食中毒原因菌として重要なビブリオを簡易かつ正確に検出することができるビブリオ検出用培地を提供することができる。