(57)【要約】      （修正有）【課題】新規肺炎球菌ワクチン、また、前記新規肺炎球菌ワクチンを使用する、肺炎球菌感染症に対する対象、特に免疫無防備状態の対象のワクチン接種を提供する。【解決手段】少なくとも１種のコンジュゲート莢膜糖類肺炎球菌抗原と、アジュバントとして少なくとも１種のＴＬＲ−９アゴニストとを含む、肺炎球菌ワクチンである。さらに、１種のＴＬＲ−９アゴニストが、ＣｐＧオリゴヌクレオチド、好ましくはＣｐＧオリゴヌクレオチドのいずれかを含む肺炎球菌ワクチン。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくとも１種のコンジュゲート莢膜糖類肺炎球菌抗原と、アジュバントとして少なくとも１種のＴＬＲ−９アゴニストとを含む、肺炎球菌ワクチン。
【請求項２】
前記少なくとも１種のＴＬＲ−９アゴニストが、ＣｐＧオリゴヌクレオチド、好ましくは本明細書に開示されるＣｐＧオリゴヌクレオチドのいずれかを含む、またはそれからなる、請求項１に記載の肺炎球菌ワクチン。
【請求項３】
前記ＣｐＧオリゴヌクレオチドが、Ａ、Ｂ、ＣまたはＰクラスＣｐＧ免疫刺激性オリゴヌクレオチドである、請求項２に記載の肺炎球菌ワクチン。
【請求項４】
前記ＣｐＧオリゴヌクレオチドが、ＢクラスＣｐＧ免疫刺激性オリゴヌクレオチド、好ましくは本明細書に開示されるＢクラスＣｐＧオリゴヌクレオチドのいずれかである、請求項３に記載の肺炎球菌ワクチン。
【請求項５】
Ａ、Ｂ、ＣまたはＰクラスの前記ＣｐＧオリゴヌクレオチドが、５’末端にＥ修飾を含む、請求項３に記載の肺炎球菌ワクチン。
【請求項６】
前記ＣｐＧオリゴヌクレオチドが、5' TCGTCGTTTTTCGGTGCTTTT 3' (配列番号3)、5' TCGTCGTTTTTCGGTCGTTTT 3' (配列番号4)、5' TCGTCGTTTTGTCGTTTTGTCGTT 3' (配列番号5)、5' TCGTCGTTTCGTCGTTTTGTCGTT 3'  (配列番号6)および5' TCGTCGTTTTGTCGTTTTTTTCGA 3' (配列番号7)からなる群から選択される核酸配列を有する、請求項４に記載の肺炎球菌ワクチン。
【請求項７】
前記ＣｐＧオリゴヌクレオチドが、5' T*C*G*T*C*G*T*T*T*T*T*C*G*G*T*G*C*T*T*T*T 3' (配列番号8)、または
5'
T*C*G*T*C*G*T*T*T*T*T*C*G*G*T*C*G*T*T*T*T 3' (配列番号9)、または
5'
T*C*G*T*C*G*T*T*T*T*G*T*C*G*T*T*T*T*G*T*C*G*T*T 3' (配列番号10)、または
5'
T*C*G*T*C*G*T*T*T*C*G*T*C*G*T*T*T*T*G*T*C*G*T*T 3' (配列番号11)、または
5'
T*C*G*T*C*G*T*T*T*T*G*T*C*G*T*T*T*T*T*T*T*C*G*A 3' (配列番号12)'
［式中、＊は、ホスホロチオエート結合を指す］からなる群から選択される、請求項４に記載の肺炎球菌ワクチン。
【請求項８】
前記ＣｐＧオリゴヌクレオチドが、ＣクラスＣｐＧ免疫刺激性オリゴヌクレオチド、好ましくは本明細書に開示されるＣクラスＣｐＧオリゴヌクレオチドのいずれかである、請求項３または５のいずれか一項に記載の肺炎球菌ワクチン。
【請求項９】
前記ＣｐＧオリゴヌクレオチドが、5' TCGCGTCGTTCGGCGCGCGCCG 3'  (配列番号13)、5' TCGTCGACGTTCGGCGCGCGCCG 3'  (配列番号14)、5' TCGGACGTTCGGCGCGCGCCG 3'  (配列番号15)、5' TCGGACGTTCGGCGCGCCG 3'  (配列番号16)、5'TCGCGTCGTTCGGCGCGCCG 3'  (配列番号17)、5' TCGACGTTCGGCGCGCGCCG 3'  (配列番号18)、5' TCGACGTTCGGCGCGCCG 3'  (配列番号19)、5' TCGCGTCGTTCGGCGCCG 3'  (配列番号20)、5' TCGCGACGTTCGGCGCGCGCCG 3'  (配列番号21)、5'TCGTCGTTTTCGGCGCGCGCCG 3'  (配列番号22)、5' TCGTCGTTTTCGGCGGCCGCCG 3'  (配列番号23)、5' TCGTCGTTTTACGGCGCCGTGCCG 3'  (配列番号24)および5'TCGTCGTTTTCGGCGCGCGCCGT 3'  (配列番号25)からなる群から選択される核酸配列を有する、請求項８に記載の肺炎球菌ワクチン。
【請求項１０】
前記ＣｐＧオリゴヌクレオチドが、5' T*C_G*C_G*T*C_G*T*T*C_G*G*C*G*C_G*C*G*C*C*G 3' (配列番号26)、
5'
T*C_G*T*C_G*A*C_G*T*T*C_G*G*C*G*C_G*C*G*C*C*G 3' (配列番号27)、
5'
T*C_G*G*A*C_G*T*T*C_G*G*C*G*C_G*C*G*C*C*G 3' (配列番号28)、
5'
T*C_G*G*A*C_G*T*T*C_G*G*C*G*C*G*C*C*G 3' (配列番号29)、
5' T*C_G*C_G*T*C_G*T*T*C_G*G*C*G*C*G*C*C*G
3' (配列番号30)、
5'
T*C_G*A*C_G*T*T*C_G*G*C*G*C_G*C*G*C*C*G 3' (配列番号31)、
5'
T*C_G*A*C_G*T*T*C_G*G*C*G*C*G*C*C*G 3' (配列番号32)、
5'
T*C_G*C_G*T*C_G*T*T*C_G*G*C*G*C*C*G 3' (配列番号33)、
5'
T*C_G*C_G*A*C_G*T*T*C_G*G*C*G*C_G*C*G*C*C*G 3' (配列番号34)、
5'
T*C*G*T*C*G*T*T*T*T*C*G*G*C*G*C*G*C*G*C*C*G 3' (配列番号35)、
5'
T*C*G*T*C*G*T*T*T*T*C*G*G*C*G*G*C*C*G*C*C*G 3' (配列番号36)、
5'
T*C*G*T*C_G*T*T*T*T*A*C_G*G*C*G*C*C_G*T*G*C*C*G 3' (配列番号37)および
5'
T*C_G*T*C*G*T*T*T*T*C*G*G*C*G*C*G*C*G*C*C*G*T 3' (配列番号38)
［式中、＊は、ホスホロチオエート結合を指し、＿は、ホスホジエステル結合を指す］からなる群から選択される、請求項８に記載の肺炎球菌ワクチン。
【請求項１１】
前記ＣｐＧオリゴヌクレオチドが、ＰクラスＣｐＧ免疫刺激性オリゴヌクレオチド、好ましくは本明細書に開示されるＰクラスＣｐＧオリゴヌクレオチドのいずれかである、請求項３または５のいずれか一項に記載の肺炎球菌ワクチン。
【請求項１２】
前記ＣｐＧオリゴヌクレオチドが、核酸配列：5' TCGTCGACGATCGGCGCGCGCCG 3' (配列番号39)を有する、請求項１１に記載の肺炎球菌ワクチン。
【請求項１３】
前記ＣｐＧオリゴヌクレオチドが、5' T*C_G*T*C_G*A*C_G*A*T*C_G*G*C*G*C_G*C*G*C*C*G 3' (配列番号40)［式中、＊は、ホスホロチオエート結合を指し、＿は、ホスホジエステル結合を指す］である、請求項１１に記載の肺炎球菌ワクチン。
【請求項１４】
ＣｐＧオリゴヌクレオチドのヌクレオチド間結合が、ホスホジエステル、ホスホロチオエート、メチルホスホネート、メチルホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ｐ−エトキシまたはそれらの組合せである、請求項１から１３のいずれか一項に記載の肺炎球菌ワクチン。
【請求項１５】
少なくとも１種のＣｐＧオリゴヌクレオチドが、６〜１００ヌクレオチド長、または優先的には８〜３０ヌクレオチド長である、請求項１から１４のいずれか一項に記載の肺炎球菌ワクチン。
【請求項１６】
０．２ｍｇ〜１０ｍｇのＣｐＧオリゴヌクレオチド、好ましくは約１ｍｇのＣｐＧオリゴヌクレオチドを含む、請求項１から１５のいずれか一項に記載の肺炎球菌ワクチン。
【請求項１７】
コンジュゲート莢膜糖類肺炎球菌抗原が、少なくとも７種の血清型の肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）に由来する、請求項１から１６のいずれか一項に記載の肺炎球菌ワクチン。
【請求項１８】
７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２または２３種の異なる血清型の肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）に由来する莢膜糖類抗原を含む、請求項１から１７のいずれか一項に記載の肺炎球菌ワクチン。
【請求項１９】
１１、７または１３種の異なる血清型の肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）に由来する莢膜糖類抗原を含む、請求項１から１８のいずれか一項に記載の肺炎球菌ワクチン。
【請求項２０】
前記莢膜糖類抗原が、本明細書に記載される担体タンパク質のいずれか１種と個々にコンジュゲートしている、請求項１から１９のいずれか一項に記載の肺炎球菌ワクチン。
【請求項２１】
血清型４、６Ｂ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆおよび２３Ｆに由来する、コンジュゲートしている肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）糖類を含む、請求項１から２０のいずれか一項に記載の肺炎球菌ワクチン。
【請求項２２】
血清型１に由来する、コンジュゲートしている肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）糖類をさらに含む、請求項２０に記載の肺炎球菌ワクチン。
【請求項２３】
血清型５に由来する、コンジュゲートしている肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）糖類をさらに含む、請求項２１から２２のいずれか一項に記載の肺炎球菌ワクチン。
【請求項２４】
血清型７Ｆに由来する、コンジュゲートしている肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）糖類をさらに含む、請求項２１から２３のいずれか一項に記載の肺炎球菌ワクチン。
【請求項２５】
血清型３に由来する、コンジュゲートしている肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）糖類をさらに含む、請求項２１から２４のいずれか一項に記載の肺炎球菌ワクチン。
【請求項２６】
血清型６Ａに由来する、コンジュゲートしている肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）糖類をさらに含む、請求項２１から２５のいずれか一項に記載の肺炎球菌ワクチン。
【請求項２７】
血清型１９Ａに由来する、コンジュゲートしている肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）糖類をさらに含む、請求項２１から２６のいずれか一項に記載の肺炎球菌ワクチン。
【請求項２８】
血清型２２Ｆに由来する、コンジュゲートしている肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）糖類をさらに含む、請求項２１から２７のいずれか一項に記載の肺炎球菌ワクチン。
【請求項２９】
血清型１５に由来する、コンジュゲートしている肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）糖類をさらに含む、請求項２１から２８のいずれか一項に記載の肺炎球菌ワクチン。
【請求項３０】
血清型８に由来する、コンジュゲートしている肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）糖類をさらに含む、請求項２１から２９のいずれか一項に記載の肺炎球菌ワクチン。
【請求項３１】
血清型１２Ｆに由来する、コンジュゲートしている肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）糖類をさらに含む、請求項２１から３０のいずれか一項に記載の肺炎球菌ワクチン。
【請求項３２】
血清型２に由来する、コンジュゲートしている肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）糖類をさらに含む、請求項２１から３１のいずれか一項に記載の肺炎球菌ワクチン。
【請求項３３】
血清型９Ｎに由来する、コンジュゲートしている肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）糖類をさらに含む、請求項２１から３２のいずれか一項に記載の肺炎球菌ワクチン。
【請求項３４】
血清型１０Ａに由来する、コンジュゲートしている肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）糖類をさらに含む、請求項２１から３３のいずれか一項に記載の肺炎球菌ワクチン。
【請求項３５】
血清型１１Ａに由来する、コンジュゲートしている肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）糖類をさらに含む、請求項２１から３４のいずれか一項に記載の肺炎球菌ワクチン。
【請求項３６】
血清型１７Ｆに由来する、コンジュゲートしている肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）糖類をさらに含む、請求項２１から３５のいずれか一項に記載の肺炎球菌ワクチン。
【請求項３７】
血清型２０に由来する、コンジュゲートしている肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）糖類をさらに含む、請求項２１から３６のいずれか一項に記載の肺炎球菌ワクチン。
【請求項３８】
血清型３３Ｆに由来する、コンジュゲートしている肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）糖類をさらに含む、請求項２１から３７のいずれか一項に記載の肺炎球菌ワクチン。
【請求項３９】
血清型４、６Ｂ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆおよび２３Ｆに由来する、コンジュゲートしている肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）糖類を含む、請求項１から２０のいずれか一項に記載の肺炎球菌ワクチン。
【請求項４０】
血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆおよび２３Ｆに由来する、コンジュゲートしている肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）糖類を含む、請求項１から２０のいずれか一項に記載の肺炎球菌ワクチン。
【請求項４１】
血清型１、４、５、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆおよび２３Ｆに由来する、コンジュゲートしている肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）糖類を含む、請求項１から２０のいずれか一項に記載の肺炎球菌ワクチン。
【請求項４２】
血清型１、３、４、５、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆおよび２３Ｆに由来する、コンジュゲートしている肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）糖類を含む、請求項１から２０のいずれか一項に記載の肺炎球菌ワクチン。
【請求項４３】
莢膜糖類抗原が、ＴＴ、ＤＴ、ＣＲＭ１９７、ＴＴの断片Ｃ、ＰｈｔＤ、ＰｈｔＤＥ融合物、解毒されたニューモリシンおよびタンパク質Ｄからなる群から独立に選択される担体タンパク質とコンジュゲートしている、請求項１から４２のいずれか一項に記載の肺炎球菌ワクチン。
【請求項４４】
莢膜糖類抗原が、同一の担体タンパク質と、すべて個々にコンジュゲートしている、請求項１から４３のいずれか一項に記載の肺炎球菌ワクチン。
【請求項４５】
莢膜糖類抗原が、ＤＴ（ジフテリアトキソイド）とコンジュゲートしている、請求項１から４４のいずれか一項に記載の肺炎球菌ワクチン。
【請求項４６】
莢膜糖類抗原が、ＴＴ（破傷風トキソイド（ｔｏｘｉｄ））とコンジュゲートしている、請求項１から４４のいずれか一項に記載の肺炎球菌ワクチン。
【請求項４７】
莢膜糖類抗原が、ＴＴの断片Ｃとコンジュゲートしている、請求項１から４４のいずれか一項に記載の肺炎球菌ワクチン。
【請求項４８】
莢膜糖類抗原が、タンパク質Ｄとコンジュゲートしている、請求項１から４４のいずれか一項に記載の肺炎球菌ワクチン。
【請求項４９】
莢膜糖類抗原が、ＣＲＭ１９７タンパク質とコンジュゲートしている、請求項１から４４のいずれか一項に記載の肺炎球菌ワクチン。
【請求項５０】
血清型１、２、３、４、５、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｎ、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１７Ｆ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２０、２２Ｆ、２３Ｆまたは３３Ｆに由来する糖類が、タンパク質Ｄとコンジュゲートしている、請求項１から４９のいずれか一項に記載の肺炎球菌ワクチン。
【請求項５１】
血清型１、２、３、４、５、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｎ、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１７Ｆ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２０、２２Ｆ、２３Ｆまたは３３Ｆに由来する糖類が、ＣＲＭ１９７とコンジュゲートしている、請求項１から５０のいずれか一項に記載の肺炎球菌ワクチン。
【請求項５２】
少なくとも血清型１および３、１および４、１および５、１および６Ａ、１および６Ｂ、１および７、１および９Ｖ、１および１４、１および２２Ｆ、１および２３Ｆ、３および４、３および５、３および６Ａ、３および６Ｂ、３および７Ｆ、３および９Ｖ、３および１４、３および２２Ｆ、３および２３Ｆ、４および５、４および６Ａ、４および６Ｂ、４および７Ｆ、４および９Ｖ、４および１４、４および２２Ｆ、４および２３Ｆ、５および６Ａ、５および６Ｂ、５および７Ｆ、５および９Ｖ、５および１４、５および２２Ｆ、５および２３Ｆ、６Ａおよび６Ｂ、６Ａおよび７Ｆ、６Ａおよび９Ｖ、６Ａおよび１４、６Ａおよび２２Ｆ、６Ａおよび２３Ｆ、６Ｂおよび７Ｆ、６Ｂおよび９Ｖ、６Ｂおよび１４、６Ｂおよび２２Ｆ、６Ｂおよび２３Ｆ、７Ｆおよび９Ｖ、７Ｆおよび１４、７Ｆおよび２２Ｆ、７Ｆおよび２３Ｆ、９Ｖおよび１４、９Ｖおよび２２Ｆ、９Ｖおよび２３Ｆ、１４および２２Ｆ、１４および２３Ｆまたは２２Ｆおよび２３Ｆに由来する糖類が、ＣＲＭ１９７とコンジュゲートしている、請求項１から５１のいずれか一項に記載の肺炎球菌ワクチン。
【請求項５３】
少なくとも血清型１、３および４、１、３および５、１、３および６Ａ、１、３および６Ｂ、１、３および７Ｆ、１、３および９Ｖ、１、３および１４、３、４および７Ｆ、３、４および５、３、４および７Ｆ、３、４および９Ｖ、３、４および１４、４、５および７Ｆ、４、５および９Ｖ、４、５および１４、５、７Ｆおよび９Ｖ、５、７Ｆおよび１４、７Ｆ、９Ｖおよび１４、１、３、４および５、３、４、５および７Ｆ、４、５、７Ｆおよび９Ｖ、４、５、７Ｆおよび１４、４、５、９Ｖおよび１４、４、７Ｆ、９Ｖおよび１４、５、７Ｆ、９Ｖおよび１４または４、５、７Ｆ、９Ｖおよび１４に由来する糖類が、ＣＲＭ１９７とコンジュゲートしている、請求項１から５２のいずれか一項に記載の肺炎球菌ワクチン。
【請求項５４】
少なくとも血清型１および３、１および４、１および５、１および６Ａ、１および６Ｂ、１および７、１および９Ｖ、１および１４、１および２２Ｆ、１および２３Ｆ、３および４、３および５、３および６Ａ、３および６Ｂ、３および７Ｆ、３および９Ｖ、３および１４、３および２２Ｆ、３および２３Ｆ、４および５、４および６Ａ、４および６Ｂ、４および７Ｆ、４および９Ｖ、４および１４、４および２２Ｆ、４および２３Ｆ、５および６Ａ、５および６Ｂ、５および７Ｆ、５および９Ｖ、５および１４、５および２２Ｆ、５および２３Ｆ、６Ａおよび６Ｂ、６Ａおよび７Ｆ、６Ａおよび９Ｖ、６Ａおよび１４、６Ａおよび２２Ｆ、６Ａおよび２３Ｆ、６Ｂおよび７Ｆ、６Ｂおよび９Ｖ、６Ｂおよび１４、６Ｂおよび２２Ｆ、６Ｂおよび２３Ｆ、７Ｆおよび９Ｖ、７Ｆおよび１４、７Ｆおよび２２Ｆ、７Ｆおよび２３Ｆ、９Ｖおよび１４、９Ｖおよび２２Ｆ、９Ｖおよび２３Ｆ、１４および２２Ｆ、１４および２３Ｆまたは２２Ｆおよび２３Ｆに由来する糖類が、タンパク質Ｄとコンジュゲートしている、請求項１から５３のいずれか一項に記載の肺炎球菌ワクチン。
【請求項５５】
少なくとも血清型１、３および４、１、３および５、１、３および６Ａ、１、３および６Ｂ、１、３および７Ｆ、１、３および９Ｖ、１、３および１４、３、４および７Ｆ、３、４および５、３、４および７Ｆ、３、４および９Ｖ、３、４および１４、４、５および７Ｆ、４、５および９Ｖ、４、５および１４、５、７Ｆおよび９Ｖ、５、７Ｆおよび１４、７Ｆ、９Ｖおよび１４、１、３、４および５、３、４、５および７Ｆ、４、５、７Ｆおよび９Ｖ、４、５、７Ｆおよび１４、４、５、９Ｖおよび１４、４、７Ｆ、９Ｖおよび１４、５、７Ｆ、９Ｖおよび１４または４、５、７Ｆ、９Ｖおよび１４に由来する糖類が、タンパク質Ｄとコンジュゲートしている、請求項１から５４のいずれか一項に記載の肺炎球菌ワクチン。
【請求項５６】
タンパク質Ｄと個々にコンジュゲートしている、血清型４、６Ｂ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆおよび２３Ｆに由来する糖類を含む、請求項１から５５のいずれか一項に記載の肺炎球菌ワクチン。
【請求項５７】
ＣＲＭ１９７と個々にコンジュゲートしている、血清型４、６Ｂ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆおよび２３Ｆに由来する糖類を含む、請求項１から５６のいずれか一項に記載の肺炎球菌ワクチン。
【請求項５８】
タンパク質Ｄと個々にコンジュゲートしている、血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆおよび２３Ｆに由来する糖類を含む、請求項１から５７のいずれか一項に記載の肺炎球菌ワクチン。
【請求項５９】
ＣＲＭ１９７と個々にコンジュゲートしている、血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆおよび２３Ｆに由来する糖類を含む、請求項１から５８のいずれか一項に記載の肺炎球菌ワクチン。
【請求項６０】
タンパク質Ｄと個々にコンジュゲートしている、血清型１、４、５、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆおよび２３Ｆに由来する糖類を含む、請求項１から５９のいずれか一項に記載の肺炎球菌ワクチン。
【請求項６１】
ＣＲＭ１９７と個々にコンジュゲートしている、血清型１、４、５、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆおよび２３Ｆに由来する糖類を含む、請求項１から６０のいずれか一項に記載の肺炎球菌ワクチン。
【請求項６２】
タンパク質Ｄと個々にコンジュゲートしている、血清型１、３、４、５、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆおよび２３Ｆに由来する糖類を含む、請求項１から６１のいずれか一項に記載の肺炎球菌ワクチン。
【請求項６３】
ＣＲＭ１９７と個々にコンジュゲートしている、血清型１、３、４、５、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆおよび２３Ｆに由来する糖類を含む、請求項１から６２のいずれか一項に記載の肺炎球菌ワクチン。
【請求項６４】
タンパク質Ｄと個々にコンジュゲートしている、血清型１、２、３、４、５、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｎ、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１７Ｆ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２０、２２Ｆ、２３Ｆおよび３３Ｆに由来する糖類を含む、請求項１から６３のいずれか一項に記載の肺炎球菌ワクチン。
【請求項６５】
ＣＲＭ１９７と個々にコンジュゲートしている、血清型１、２、３、４、５、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｎ、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１７Ｆ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２０、２２Ｆ、２３Ｆおよび３３Ｆに由来する糖類を含む、請求項１から６４のいずれか一項に記載の肺炎球菌ワクチン。
【請求項６６】
タンパク質Ｄと個々にコンジュゲートしている、血清型１、４、５、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４および２３Ｆに由来する糖類と、破傷風トキソイド（ＴＴ）とコンジュゲートしている、血清型１８Ｃに由来する糖類と、ジフテリアトキソイド（ＤＴ）とコンジュゲートしている、血清型１９Ｆに由来する糖類とを含む、請求項１から６５のいずれか一項に記載の肺炎球菌ワクチン。
【請求項６７】
破傷風トキソイド（ＴＴ）と個々にコンジュゲートしている、血清型１、４、５、７Ｆ、９Ｖ、１９Ｆおよび２３Ｆに由来する糖類と、ジフテリアトキソイド（ＤＴ）と個々にコンジュゲートしている、血清型３、１４  １８Ｃおよび６Ｂに由来する糖類とを含む、請求項１から６６のいずれか一項に記載の肺炎球菌ワクチン。
【請求項６８】
各ワクチン用量中のコンジュゲートの量が、０．１〜１０００μｇの各糖類−タンパク質コンジュゲート、好ましくは２〜１００μｇ、最も好ましくは４〜４０μｇである、請求項１から６７のいずれか一項に記載の肺炎球菌ワクチン。
【請求項６９】
各用量が、０．１から２０μｇ、１から１０μｇまたは１から５μｇの間の糖類を含む、請求項１から６８のいずれか一項に記載の肺炎球菌ワクチン。
【請求項７０】
０．１〜２０μｇ、０．５〜１０μｇ、０．５〜５μｇまたは１〜５μｇの間の糖類の用量で、各肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）莢膜糖類を含む、請求項１から６９のいずれか一項に記載の肺炎球菌ワクチン。
【請求項７１】
ＣＲＭ１９７と個々にコンジュゲートしている、血清型４、６Ｂ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆおよび２３Ｆに由来する糖類を含有し、各肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）莢膜糖類が、４μｇの用量である６Ｂを除いて、２μｇの用量である、請求項１から７０のいずれか一項に記載の肺炎球菌ワクチン。
【請求項７２】
ＣＲＭ１９７と個々にコンジュゲートしている、血清型４、６Ｂ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆおよび２３Ｆに由来する糖類を含有し、各肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）莢膜糖類が、８μｇの用量である６Ｂを除いて、４μｇの用量である、請求項１から７０のいずれか一項に記載の肺炎球菌ワクチン。
【請求項７３】
ＣＲＭ１９７と個々にコンジュゲートしている、血清型４、６Ｂ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆおよび２３Ｆに由来する糖類を含有し、各肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）莢膜糖類が、１２μｇの用量である６Ｂを除いて、６μｇの用量である、請求項１から７０のいずれか一項に記載の肺炎球菌ワクチン。
【請求項７４】
ＣＲＭ１９７と個々にコンジュゲートしている、血清型４、６Ｂ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆおよび２３Ｆに由来する糖類を含有し、各肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）莢膜糖類が、１６μｇの用量である６Ｂを除いて、８μｇの用量である、請求項１から７０のいずれか一項に記載の肺炎球菌ワクチン。
【請求項７５】
ＣＲＭ１９７と個々にコンジュゲートしている、血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆおよび２３Ｆに由来する糖類を含有し、各肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）莢膜糖類が、４μｇの用量である６Ｂを除いて、２μｇの用量である、請求項１から７０のいずれか一項に記載の肺炎球菌ワクチン。
【請求項７６】
ＣＲＭ１９７と個々にコンジュゲートしている、血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆおよび２３Ｆに由来する糖類を含有し、各肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）莢膜糖類が、８μｇの用量である６Ｂを除いて、４μｇの用量である、請求項１から７０のいずれか一項に記載の肺炎球菌ワクチン。
【請求項７７】
ＣＲＭ１９７と個々にコンジュゲートしている、血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆおよび２３Ｆに由来する糖類を含有し、各肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）莢膜糖類が、１２μｇの用量である６Ｂを除いて、６μｇの用量である、請求項１から７０のいずれか一項に記載の肺炎球菌ワクチン。
【請求項７８】
ＣＲＭ１９７と個々にコンジュゲートしている、血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆおよび２３Ｆに由来する糖類を含有し、各肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）莢膜糖類が、１６μｇの用量である６Ｂを除いて、８μｇの用量である、請求項１から７０のいずれか一項に記載の肺炎球菌ワクチン。
【請求項７９】
５〜５００μｇ、好ましくは１０〜２００μｇ、さらにより好ましくは２０〜１００μｇのＣＲＭ１９７担体タンパク質を含む、請求項１から７８のいずれか一項に記載の肺炎球菌ワクチン。
【請求項８０】
２０〜５０μｇ、好ましくは２０〜４０μｇ、さらにより好ましくは２５〜３０μｇ、さらにより好ましくは約２８または２９μｇのＣＲＭ１９７担体タンパク質を含む、請求項１から７９のいずれか一項に記載の肺炎球菌ワクチン。
【請求項８１】
４０〜１００μｇ、好ましくは４０〜８０μｇ、さらにより好ましくは５０〜６０μｇ、さらにより好ましくは約５７または５８μｇのＣＲＭ１９７担体タンパク質を含む、請求項１から７９のいずれか一項に記載の肺炎球菌ワクチン。
【請求項８２】
賦形剤として、塩化ナトリウムおよび／またはコハク酸ナトリウムバッファーを含む、請求項１から８１のいずれか一項に記載の肺炎球菌ワクチン。
【請求項８３】
本明細書に開示される少なくとも１種のＴＬＲ−９アゴニストアジュバントに加えて、少なくとも１種、２種または３種のアジュバントを含む、請求項１から８２のいずれか一項に記載の肺炎球菌ワクチン。
【請求項８４】
本明細書に開示される「さらなるアジュバント」のいずれかをさらに含む、請求項１から８３のいずれか一項に記載の肺炎球菌ワクチン。
【請求項８５】
少なくとも１種のＴＬＲ−９アゴニストアジュバントのさらなるアジュバントとして、ミョウバン、水酸化アルミニウム、リン酸アルミニウムまたは硫酸アルミニウムを含む、請求項１から８４のいずれか一項に記載の肺炎球菌ワクチン。
【請求項８６】
ＣＲＭ１９７と個々にコンジュゲートしている、血清型４、６Ｂ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆおよび２３Ｆに由来する糖類を含有し、各肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）莢膜糖類が、４μｇの用量である６Ｂを除いて、２μｇの用量であり、賦形剤として、０．５ｍｇのリン酸アルミニウム、場合により、塩化ナトリウムおよびコハク酸ナトリウムバッファーをさらに含む、請求項１から８５のいずれか一項に記載の肺炎球菌ワクチン。
【請求項８７】
ＣＲＭ１９７と個々にコンジュゲートしている、血清型４、６Ｂ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆおよび２３Ｆに由来する糖類を含有し、各肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）莢膜糖類が、８μｇの用量である６Ｂを除いて、４μｇの用量であり、賦形剤として、１ｍｇのリン酸アルミニウム、場合により、塩化ナトリウムおよびコハク酸ナトリウムバッファーをさらに含む、請求項１から８５のいずれか一項に記載の肺炎球菌ワクチン。
【請求項８８】
ＣＲＭ１９７と個々にコンジュゲートしている、血清型４、６Ｂ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆおよび２３Ｆに由来する糖類を含有し、各肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）莢膜糖類が、１２μｇの用量である６Ｂを除いて、６μｇの用量であり、賦形剤として、１．５ｍｇのリン酸アルミニウム、場合により、塩化ナトリウムおよびコハク酸ナトリウムバッファーをさらに含む、請求項１から８５のいずれか一項に記載の肺炎球菌ワクチン。
【請求項８９】
ＣＲＭ１９７と個々にコンジュゲートしている、血清型４、６Ｂ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆおよび２３Ｆに由来する糖類を含有し、各肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）莢膜糖類が、１６μｇの用量である６Ｂを除いて、８μｇの用量であり、賦形剤として、２ｍｇのリン酸アルミニウム、場合により、塩化ナトリウムおよびコハク酸ナトリウムバッファーをさらに含む、請求項１から８５のいずれか一項に記載の肺炎球菌ワクチン。
【請求項９０】
ＣＲＭ１９７と個々にコンジュゲートしている、血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆおよび２３Ｆに由来する糖類を含有し、各肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）莢膜糖類が、４μｇの用量である６Ｂを除いて、２μｇの用量であり、賦形剤として、０．５ｍｇのリン酸アルミニウム、場合により、塩化ナトリウムおよびコハク酸ナトリウムバッファーをさらに含む、請求項１から８５のいずれか一項に記載の肺炎球菌ワクチン。
【請求項９１】
ＣＲＭ１９７と個々にコンジュゲートしている、血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆおよび２３Ｆに由来する糖類を含有し、各肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）莢膜糖類が、８μｇの用量である６Ｂを除いて、４μｇの用量であり、賦形剤として、１ｍｇのリン酸アルミニウム、場合により、塩化ナトリウムおよびコハク酸ナトリウムバッファーをさらに含む、請求項１から８５のいずれか一項に記載の肺炎球菌ワクチン。
【請求項９２】
ＣＲＭ１９７と個々にコンジュゲートしている、血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆおよび２３Ｆに由来する糖類を含有し、各肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）莢膜糖類が、１２μｇの用量である６Ｂを除いて、６μｇの用量であり、賦形剤として、１．５ｍｇのリン酸アルミニウム、場合により、塩化ナトリウムおよびコハク酸ナトリウムバッファーをさらに含む、請求項１から８５のいずれか一項に記載の肺炎球菌ワクチン。
【請求項９３】
ＣＲＭ１９７と個々にコンジュゲートしている、血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆおよび２３Ｆに由来する糖類を含有し、各肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）莢膜糖類が、１６μｇの用量である６Ｂを除いて、８μｇの用量であり、賦形剤として、２ｍｇのリン酸アルミニウム、場合により、塩化ナトリウムおよびコハク酸ナトリウムバッファーをさらに含む、請求項１から８５のいずれか一項に記載の肺炎球菌ワクチン。
【請求項９４】
肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）感染によって引き起こされる疾患の予防または治療のための、請求項１から９３のいずれか一項に記載の肺炎球菌ワクチン。
【請求項９５】
免疫無防備状態の対象における、肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）感染によって引き起こされる疾患の予防または治療のための、請求項１から９３のいずれか一項に記載の肺炎球菌ワクチン。
【請求項９６】
肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）感染によって引き起こされる疾患の予防または治療のための医薬の製造のための、請求項１から９３のいずれか一項に記載の肺炎球菌ワクチンの使用。
【請求項９７】
免疫無防備状態の対象における、肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）感染によって引き起こされる疾患の予防または治療のための医薬の製造のための、請求項１から９３のいずれか一項に記載の肺炎球菌ワクチンの使用。
【請求項９８】
免疫無防備状態の対象にワクチン接種するための、請求項１から９３のいずれか一項に記載の肺炎球菌ワクチンの使用。
【請求項９９】
肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）感染によって引き起こされる疾患に対して対象を免疫化する方法であって、前記対象に、免疫防御用量の、請求項１から９３のいずれか一項に記載のワクチンを投与するステップを含む方法。
【請求項１００】
肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）感染によって引き起こされる疾患に対して免疫無防備状態の対象を免疫化する方法であって、前記対象に、免疫防御用量の、請求項１から９３のいずれか一項に記載のワクチンを投与するステップを含む方法。
【請求項１０１】
前記免疫無防備状態の対象が、本明細書に記載される免疫無防備状態の対象のいずれかである、請求項９５に記載の肺炎球菌ワクチン、または請求項９７もしくは９８に記載の使用、または請求項１００に記載の方法。
【請求項１０２】
前記免疫無防備状態の対象が、ネコ、ヒツジ、ブタ、ウマ、ウシ、イヌ、ラット、マウスまたはヒトなどの哺乳類である、請求項９５に記載の肺炎球菌ワクチン、または請求項９７もしくは９８に記載の使用、または請求項１００に記載の方法。
【請求項１０３】
前記免疫無防備状態の対象がヒトである、請求項９５に記載の肺炎球菌ワクチン、または請求項９７もしくは９８に記載の使用、または請求項１００に記載の方法。
【請求項１０４】
前記免疫無防備状態の対象が、免疫系に影響を及ぼす疾患を患っている、請求項９５もしくは１０３に記載の肺炎球菌ワクチン、または請求項９７、９８もしくは１０３に記載の使用、または請求項１００もしくは１０３に記載の方法。
【請求項１０５】
前記疾患が、本明細書に開示される原発性免疫不全障害のいずれかである、請求項１０４に記載の肺炎球菌ワクチン、または請求項１０４に記載の使用、または請求項１０４に記載の方法。
【請求項１０６】
前記疾患が、後天性免疫不全障害、好ましくは本明細書に開示される後天性免疫不全障害のいずれかである、請求項１０４に記載の肺炎球菌ワクチン、または請求項１０４に記載の使用、または請求項１０４に記載の方法。
【請求項１０７】
前記疾患が、細菌またはウイルス感染症（ＨＩＶなど）、癌（白血病または骨髄腫など）、その他の慢性障害、ほかにも、加齢、栄養失調または種々の化学療法薬治療（グルココルチコイドなど）からなる群から選択される、請求項１０４もしくは１０６に記載の肺炎球菌ワクチン、または請求項１０４もしくは１０６に記載の使用、または請求項１０４もしくは１０６に記載の方法。
【請求項１０８】
前記疾患が、ＨＩＶ感染、後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）、癌、慢性心または肺障害、鬱血性心不全、真性糖尿病、慢性肝臓疾患、アルコール依存症、硬変、脊髄液漏出、心筋症、慢性気管支炎、肺気腫、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、脾臓機能不全（鎌状赤血球症など）、脾臓機能の欠如（無脾臓）、血液悪性腫瘍、白血病、多発性骨髄腫、ホジキン病、リンパ腫、腎不全、ネフローゼ症候群および喘息からなる群から選択される、請求項１０４もしくは１０６に記載の肺炎球菌ワクチン、または請求項１０４もしくは１０６に記載の使用、または請求項１０４もしくは１０６に記載の方法。
【請求項１０９】
前記疾患が、脾臓機能不全（鎌状赤血球症など）、脾臓機能の欠如（無脾臓）、白血病、多発性骨髄腫、ホジキン病およびリンパ腫からなる群から選択される、請求項１０４もしくは１０６に記載の肺炎球菌ワクチン、または請求項１０４もしくは１０６に記載の使用、または請求項１０４もしくは１０６に記載の方法。
【請求項１１０】
前記疾患が、ＨＩＶ感染または後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）である、請求項１０４もしくは１０６に記載の肺炎球菌ワクチン、または請求項１０４もしくは１０６に記載の使用、または請求項１０４もしくは１０６に記載の方法。
【請求項１１１】
ワクチン接種される予定の免疫無防備状態の対象が、ＨＩＶ感染または後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）を患っており、治療下にあり、前記治療が、非ヌクレオシド（ｎｏｎ−ｎｕｃｌｅｏｓｉｅｄ）逆転写酵素阻害剤、プロテアーゼ阻害剤およびヌクレオシド類似体逆転写酵素阻害剤（例えば、アバカビル）からなる群から選択される少なくとも１種の抗レトロウイルス薬の投与からなる、請求項１０４もしくは１０６に記載の肺炎球菌ワクチン、または請求項１０４もしくは１０６に記載の使用、または請求項１０４もしくは１０６に記載の方法。
【請求項１１２】
ワクチン接種される予定の免疫無防備状態の対象が、ＨＩＶ感染または後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）を患っており、治療下にあり、前記治療が、非ヌクレオシド逆転写酵素阻害剤、プロテアーゼ阻害剤およびヌクレオシド類似体逆転写酵素阻害剤（例えば、アバカビル）からなる群から選択される、少なくとも２クラスの抗レトロウイルス薬に属する少なくとも３種の薬物の投与からなる、請求項１０４もしくは１０６に記載の肺炎球菌ワクチン、または請求項１０４もしくは１０６に記載の使用、または請求項１０４もしくは１０６に記載の方法。
【請求項１１３】
ワクチン接種される予定の免疫無防備状態の対象が、ＨＩＶ感染または後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）を患っており、治療下にあり、前記治療が、少なくとも２種のヌクレオシド類似体逆転写酵素阻害剤、およびプロテアーゼ阻害剤または非ヌクレオシド逆転写酵素阻害剤のいずれかの投与からなる、請求項１０４もしくは１０６に記載の肺炎球菌ワクチン、または請求項１０４もしくは１０６に記載の使用、または請求項１０４もしくは１０６に記載の方法。
【請求項１１４】
ワクチン接種される予定の免疫無防備状態の対象が、ＨＩＶ感染または後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）を患っており、好ましくは非ヌクレオシド逆転写酵素阻害剤、プロテアーゼ阻害剤および／もしくはヌクレオシド類似体逆転写酵素阻害剤（例えば、アバカビル）を含む３種薬物療法、または非ヌクレオシド逆転写酵素阻害剤およびプロテアーゼ阻害剤の組合せを含む２種薬物療法からなる高活性抗レトロウイルス剤療法（ＨＡＡＲＴ）下にある、請求項１０４もしくは１０６に記載の肺炎球菌ワクチン、または請求項１０４もしくは１０６に記載の使用、または請求項１０４もしくは１０６に記載の方法。
【請求項１１５】
ワクチン接種される予定の免疫無防備状態の対象が、ＨＩＶ感染または後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）を患っており、高活性抗レトロウイルス剤療法（ＨＡＡＲＴ）下になく、または抗レトロウイルス剤療法下になく、または前記対象が抗レトロウイルス薬にさらされたことがない、請求項１０４もしくは１０６に記載の肺炎球菌ワクチン、または請求項１０４もしくは１０６に記載の使用、または請求項１０４もしくは１０６に記載の方法。
【請求項１１６】
ワクチン接種される予定の免疫無防備状態の対象が、非ウイルス血症ＨＩＶ感染患者である、請求項１０４もしくは１０６に記載の肺炎球菌ワクチン、または請求項１０４もしくは１０６に記載の使用、または請求項１０４もしくは１０６に記載の方法。
【請求項１１７】
ワクチン接種される予定の免疫無防備状態の対象が、ウイルス血症ＨＩＶ感染患者である、請求項１０４もしくは１０６に記載の肺炎球菌ワクチン、または請求項１０４もしくは１０６に記載の使用、または請求項１０４もしくは１０６に記載の方法。
【請求項１１８】
前記疾患が、結核または性行為感染症、例えば、梅毒または肝炎である、請求項１０４もしくは１０６に記載の肺炎球菌ワクチン、または請求項１０４もしくは１０６に記載の使用、または請求項１０４もしくは１０６に記載の方法。
【請求項１１９】
ワクチン接種される予定の免疫無防備状態の対象が、栄養失調を患っている、請求項９５、１０１から１１８のいずれか一項に記載の肺炎球菌ワクチン、または請求項９７、９８、１０１から１１８のいずれか一項に記載の使用、または請求項１００から１１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２０】
ワクチン接種される予定の免疫無防備状態の対象が、５５歳以上のヒト成人、より好ましくは６５歳以上のヒト成人である、請求項９５、１０１から１１９のいずれか一項に記載の肺炎球菌ワクチン、または請求項９７、９８、１０１から１１９のいずれか一項に記載の使用、または請求項１００から１１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２１】
ワクチン接種される予定の免疫無防備状態の対象が、７０歳以上、７５歳以上または８０歳以上のヒト成人である、請求項９５、１０１から１２０のいずれか一項に記載の肺炎球菌ワクチン、または請求項９７、９８、１０１から１２０のいずれか一項に記載の使用、または請求項１００から１２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２２】
ワクチン接種される予定の免疫無防備状態の対象が、感染に対する身体の抵抗性を低下させる薬物または治療、特に、化学療法（例えば、抗癌剤）、疾患修飾性抗リウマチ薬、臓器移植後の免疫抑制薬およびグルココルチコイドからなる群から選択される薬物を受けている、請求項９５、１０１から１２１のいずれか一項に記載の肺炎球菌ワクチン、または請求項９７、９８、１０１から１２１のいずれか一項に記載の使用、または請求項１００から１２１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２３】
ワクチン接種される予定の免疫無防備状態の対象が、タクロリムス（Ｐｒｏｇｒａｆ）、ミコフェノール酸モフェチル（ＣｅｌｌＣｅｐｔ）、シロリムス（Ｒａｐａｍｕｎｅ）、プレドニゾン、シクロスポリン（ｃｙｃｌｏｓｏｐｏｒｉｎｅ）（Ｎｅｏｒａｌ、Ｓａｎｄｉｍｍｕｎｅ、Ｇｅｎｇｒａｆ）およびアザチオプリン（Ｉｍｕｒａｎ）からなる群から選択される経口免疫抑制剤を受けている、請求項９５、１０１から１２２のいずれか一項に記載の肺炎球菌ワクチン、または請求項９７、９８、１０１から１２２のいずれか一項に記載の使用、または請求項１００から１２２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２４】
ワクチン接種される予定の免疫無防備状態の対象が、エベロリムス、ミコフェノール酸、コルチコステロイド（例えば、プレドニゾロンまたはヒドロコルチゾン）、モノクローナル抗ＩＬ−２Ｒα受容体抗体（例えば、バシリキシマブまたはダクリツマブ）、抗胸腺細胞グロブリン（ＡＴＧ）および抗リンパ球グロブリン（ＡＬＧ）からなる群から選択される免疫抑制剤を受けている、請求項９５、１０１から１２３のいずれか一項に記載の肺炎球菌ワクチン、または請求項９７、９８、１０１から１２３のいずれか一項に記載の使用、または請求項１００から１２３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２５】
免疫無防備状態の対象が、臓器移植または骨髄移植または蝸牛移植を受けている、請求項９５、１０１から１２４のいずれか一項に記載の肺炎球菌ワクチン、または請求項９７、９８、１０１から１２４のいずれか一項に記載の使用、または請求項１００から１２４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２６】
免疫無防備状態の対象が、放射線療法を受けている、請求項９５、１０１から１２５のいずれか一項に記載の肺炎球菌ワクチン、または請求項９７、９８、１０１から１２５のいずれか一項に記載の使用、または請求項１００から１２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２７】
ワクチン接種される予定の免疫無防備状態の対象が喫煙者である、請求項９５、１０１から１２６のいずれか一項に記載の肺炎球菌ワクチン、または請求項９７、９８、１０１から１２６のいずれか一項に記載の使用、または請求項１００から１２６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２８】
ワクチン接種される予定の免疫無防備状態の対象が、喘息を患っており、経口コルチコステロイド療法で治療されている、請求項９５、１０１から１２７のいずれか一項に記載の肺炎球菌ワクチン、または請求項９７、９８、１０１から１２７のいずれか一項に記載の使用、または請求項１００から１２７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２９】
ワクチン接種される予定の免疫無防備状態の対象が、アラスカ先住民またはアメリカンインディアンである、請求項９５、１０１から１２８のいずれか一項に記載の肺炎球菌ワクチン、または請求項９７、９８、１０１から１２８のいずれか一項に記載の使用、または請求項１００から１２８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３０】
ワクチン接種される予定の免疫無防備状態の対象が、１リットルあたり細胞５×１０９個未満または１リットルあたり細胞４×１０９個未満または１リットルあたり細胞３×１０９個未満または１リットルあたり細胞２×１０９個未満または１リットルあたり細胞１×１０９個未満または１リットルあたり細胞０．５×１０９個未満または１リットルあたり細胞０．３×１０９個未満または１リットルあたり細胞０．１×１０９個未満の白血球数（ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ  ｃｏｕｎｔ）を有する、請求項９５、１０１から１２９のいずれか一項に記載の肺炎球菌ワクチン、または請求項９７、９８、１０１から１２９のいずれか一項に記載の使用、または請求項１００から１２９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３１】
ワクチン接種される予定の免疫無防備状態の対象が、好中球減少症を患っている、請求項９５、１０１から１３０のいずれか一項に記載の肺炎球菌ワクチン、または請求項９７、９８、１０１から１３０のいずれか一項に記載の使用、または請求項１００から１３０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３２】
ワクチン接種される予定の免疫無防備状態の対象が、１リットルあたり細胞２×１０９個未満の、または１リットルあたり細胞１×１０９個未満の、または１リットルあたり細胞０．５×１０９個未満の、または１リットルあたり細胞０．１×１０９個未満の、または１リットルあたり細胞０．０５×１０９個未満の好中球数を有する、請求項９５、１０１から１３１のいずれか一項に記載の肺炎球菌ワクチン、または請求項９７、９８、１０１から１３１のいずれか一項に記載の使用、または請求項１００から１３１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３３】
ワクチン接種される予定の免疫無防備状態の対象が、５００／ｍｍ３未満のＣＤ４＋細胞数または３００／ｍｍ３未満のＣＤ４＋細胞数または２００／ｍｍ３未満のＣＤ４＋細胞数または１００／ｍｍ３未満のＣＤ４＋細胞数または７５／ｍｍ３未満のＣＤ４＋細胞数または５０／ｍｍ３未満のＣＤ４＋細胞数を有する、請求項９５、１０１から１３２のいずれか一項に記載の肺炎球菌ワクチン、または請求項９７、９８、１０１から１３２のいずれか一項に記載の使用、または請求項１００から１３２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３４】
本明細書に開示される免疫無防備状態の対象が、ヒト男性またはヒト女性である、請求項９５、１０１から１３３のいずれか一項に記載の肺炎球菌ワクチン、または請求項９７、９８、１０１から１３３のいずれか一項に記載の使用、または請求項１００から１３３のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規肺炎球菌ワクチンに関する。本発明はまた、前記新規肺炎球菌ワクチンを使用する、肺炎球菌感染症に対する対象、特に免疫無防備状態の対象のワクチン接種にも関する。
【背景技術】
【０００２】
肺炎球菌疾患は、世界中にわたる公衆衛生上の大きな問題である。肺炎球菌によって引き起こされる感染は、世界中にわたる罹病率および死亡率の主な原因である。肺炎、発熱性菌血症および髄膜炎は、侵襲性肺炎球菌疾患の最も一般的な徴候であるが、気道内への細菌の広がりは、中耳感染、副鼻腔炎または再発性気管支炎をもたらし得る。侵襲性疾患と比較して、非侵襲性の徴候は、通常あまり重篤ではないが、かなり一般的である。
【０００３】
肺炎球菌疾患の重要性にもかかわらず、特に、発展途上国からの疾病負担に関する情報が不足している。これは、幾分かは、肺炎の場合には病因の診断を得るという特有の問題による。しかし、入手可能なデータに基づくと、毎年、推定２６０万人の５歳未満の子どもが急性呼吸器感染によって死亡している。肺炎球菌は、１００万人を超えるこれらの死亡を引き起こし、そのほとんどは発展途上国で生じ、発展途上国では、肺炎球菌はおそらく、乳児期早期の最も重要な病原体である。欧州および米国では、肺炎球菌肺炎は、最も一般的な地域感染型の細菌性肺炎であり、毎年、成人１０００００人あたりおよそ１００人が発症すると推定される。発熱性菌血症および髄膜炎の対応する数字は、それぞれ、１０００００人あたり１５〜１９人および１０００００人あたり１〜２人である。１種または複数のこれらの徴候の危険性は、乳児および高齢者、ならびに任意の年齢の免疫力が低下した人ではかなり高い。経済的に発展した地域においてさえも、侵襲性肺炎球菌疾患は、高い死亡率をもたらし、肺炎球菌肺炎を患う成人の死亡率は平均１０％〜２０％であり、さらに、ハイリスク群では５０％を超える場合もある。肺炎は、間違いなく、世界中で肺炎球菌による死亡の最も一般的な原因である。
【０００４】
肺炎球菌疾患の病原因子、肺炎球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）（肺炎球菌）ポリサッカライド莢膜によって囲まれているグラム陽性被包性球菌。この莢膜の組成の相違によって、約９０種の莢膜種類間の血清学的鑑別が可能となり、そのいくつかは、肺炎球菌疾患と関連していることが多く、その他のものは稀である。侵襲性肺炎球菌感染として、肺炎、髄膜炎および発熱性菌血症が挙げられ、一般的な非侵襲性の徴候の中には、中耳炎、副鼻腔炎および気管支炎がある。
【０００５】
ペニシリン、セファロスポリンおよびマクロライドなどの基本的な抗菌剤に対する肺炎球菌耐性は、世界中の、深刻な、急増している問題である。
【０００６】
重篤な肺炎球菌疾患の危険性の増大と関連している状態として、極度の年齢（乳児、高齢者）および任意の理由、例えば、それだけには限らないが、ＨＩＶ感染、その他の慢性ウイルス感染、鎌状赤血球貧血、糖尿病、癌および癌治療、喫煙、慢性臓器不全、臓器移植および免疫抑制療法のために免疫無防備状態であることが挙げられる。
【０００７】
基本的な抗生物質に対する広まった微生物抵抗性の最近の進展および免疫無防備状態の人の数の増大は、より効果的な肺炎球菌ワクチンの緊急の必要性を明確に示す。
【０００８】
現在のワクチン接種のいくつかの欠点として、防御を達成するために数回の追加免疫が必要であること、防御抗体の発生の遅れ、ワクチンノンレスポンダーの蔓延（これは、免疫力が低下している個体にとって特に問題である）、新規コンジュゲート肺炎球菌ワクチンの開発においては極めて重大な制限である、抗原およびワクチン製造の費用、親和性の低い防御抗体が不十分であること、経時的な抗体力価の低下が挙げられる。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明の新規肺炎球菌ワクチンの目的は、これらの欠点のうちいくつかを少なくとも部分的に克服することである。特に、肺炎球菌感染症に対して免疫無防備状態の対象にワクチン接種することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
第１の態様では、本発明は、抗原として担体タンパク質とコンジュゲートしている１種または複数の肺炎球菌（ｐｎｅｕｍｏｃｃａｌ）ポリサッカライド抗原と、アジュバントとしてＴｏｌｌ様受容体９（ＴＬＲ９）のアゴニストとを含む新規肺炎球菌ワクチンを対象とする。
【００１１】
さらなる態様では、本発明は、免疫無防備状態の対象にワクチン接種するための、抗原として担体タンパク質とコンジュゲートしている１種または複数の肺炎球菌（ｐｎｅｕｍｏｃｃａｌ）ポリサッカライド抗原と、アジュバントとしてＴＬＲ−９アゴニストとを含む肺炎球菌ワクチンの使用を対象とする。
【００１２】
一態様では、本発明は、免疫無防備状態の対象の、好ましくは本明細書に開示されるいずれかの免疫無防備状態の対象のワクチン接種において使用するための、本明細書に開示されるいずれかの肺炎球菌ワクチンを対象とする。
【００１３】
さらなる態様では、本発明は、免疫無防備状態の対象、好ましくは本明細書に開示されるいずれかの免疫無防備状態の対象にワクチン接種するための、本明細書に開示されるいずれかの肺炎球菌ワクチンの使用を対象とする。
【００１４】
さらなる態様では、本発明は、好ましくは免疫無防備状態の対象において、肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）感染によって引き起こされる疾患を予防または治療するための、本明細書に開示されるいずれかのワクチンを対象とする。
【００１５】
さらなる態様では、本発明は、対象、好ましくは本明細書に開示されるいずれかの免疫無防備状態の対象を、肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）感染によって引き起こされる疾患に対して免疫化する方法であって、前記対象に、免疫防御用量の、本明細書に開示されるいずれかのワクチンを投与するステップを含む方法を対象とする。
【００１６】
さらなる態様では、本発明は、好ましくは免疫無防備状態の対象における、肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）感染によって引き起こされる疾患の予防または治療のための医薬の製造のための、本明細書に開示されるいずれかのワクチンの使用を対象とする。
【００１７】
さらなる態様では、本発明は、本明細書に開示されるいずれかの肺炎球菌ワクチンおよび本明細書に開示される少なくとも１種のＴＬＲ−９アゴニストを対象とする。
【００１８】
さらなる態様では、本発明は、本明細書に開示されるいずれかの免疫無防備状態の対象のワクチン接種において使用するための、本明細書に開示されるいずれかの肺炎球菌ワクチンおよび本明細書に開示される少なくとも１種のＴＬＲ−９アゴニストを対象とする。
【図面の簡単な説明】
【００１９】
【発明を実施するための形態】
【００２０】
本発明のＴｏｌｌ様受容体９アゴニスト（ＴＬＲ−９アゴニスト）
本発明の一実施形態では、本発明において使用するためのＴＬＲ−９アゴニストは、ＣｐＧオリゴヌクレオチドである。本明細書において使用する場合、ＣｐＧオリゴヌクレオチドとは、免疫刺激性ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド（ＣｐＧ  ＯＤＮ）を指し、したがって、これらの用語は、特に断りのない限り、同義的に使用される。免疫刺激性ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチドは、場合により、特定の好ましい塩基状況内に、１種または複数の、非メチル化シトシン−グアニンジヌクレオチドである免疫刺激性ＣｐＧモチーフを含有する。ＣｐＧ免疫刺激性モチーフのメチル化状態とは、通常、ジヌクレオチド中のシトシン残基を指す。少なくとも１つの非メチル化ＣｐＧジヌクレオチドを含有する免疫刺激性オリゴヌクレオチドは、３’グアニンとのリン酸結合によって連結された５’非メチル化シトシンを含有するオリゴヌクレオチドであり、Ｔｏｌｌ様受容体９（ＴＬＲ−９）との結合によって免疫系を活性化する。別の実施形態では、免疫刺激性オリゴヌクレオチドは、１種または複数のメチル化ＣｐＧジヌクレオチドを含有し得、ＴＬＲ９を介して免疫系を活性化するが、ＣｐＧモチーフ（複数可）が非メチル化である場合ほど強力ではない。ＣｐＧ  ＣｐＧ免疫刺激性オリゴヌクレオチドは、１種または複数の回文構造を含み得、次いで、これはＣｐＧジヌクレオチドを包含し得る。ＣｐＧオリゴヌクレオチドは、いくつかの発行済み特許、公開特許出願およびその他の刊行物、例えば、米国特許第６，１９４，３８８号、同６，２０７，６４６号、同６，２１４，８０６号、同６，２１８，３７１号、同６，２３９，１１６号および同６，３３９，０６８号に記載されている。
【００２１】
種々のクラスのＣｐＧ免疫刺激性オリゴヌクレオチドが同定されている。これらは、Ａ、Ｂ、ＣおよびＰクラスと呼ばれ、以下でより詳細に記載する。本発明の方法は、これらの種々のクラスのＣｐＧ免疫刺激性オリゴヌクレオチドの使用を包含する。
【００２２】
いずれかのクラスを、その能力を増強するＥ修飾に付してもよい。Ｅ修飾は、５’末端ヌクレオチドのハロゲン置換であり得、このような置換の例として、それだけには限らないが、ブロモ−ウリジンまたはヨード−ウリジン置換が挙げられる。Ｅ修飾はまた、５’末端ヌクレオチドのエチル−ウリジン置換を含み得る。
【００２３】
「Ａクラス」ＣｐＧ免疫刺激性オリゴヌクレオチドは、形質細胞様樹状細胞（ｐＤＣ）からの高レベルのインターフェロン−α（ＩＦＮ−α）を誘導する能力によって機能的に特徴付けられ、またＮＫ細胞活性化を誘導するが、Ｂ細胞活性化に対しては最小の効果しか有さない。構造的に、このクラスは、通常、５’および３’末端のポリ−Ｇ配列を安定化している。また、少なくとも６ヌクレオチドの、回文構造のホスホジエステルＣｐＧジヌクレオチド含有配列も有し、例えば、必ずしもそうではないが、以下の六量体の回文構造：Ｙａｍａｍｏｔｏおよび共同研究者によって記載されたＧＡＣＧＴＣ、ＡＧＣＧＣＴまたはＡＡＣＧＴＴのうち１種を含む。Ｙａｍａｍｏｔｏ  Ｓら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ  １４８：４０７２〜６頁（１９９２年）。ＡクラスＣｐＧ免疫刺激性オリゴヌクレオチドおよびこのクラスの例示的配列は、両方とも２０００年９月２７日に出願された、米国非仮特許出願第０９／６７２，１２６号および公開ＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＵＳ００／２６５２７（ＷＯ０１／２２９９０）に記載されている。
【００２４】
一実施形態では、本発明の「Ａクラス」ＣｐＧオリゴヌクレオチドは、以下の核酸配列：5' GGGGACGACGTCGTGGGGGGG 3' (配列番号1)を有する。
【００２５】
Ａクラスオリゴヌクレオチドのいくつかの限定されない例として以下が挙げられる：
5'
G*G*G_G_A_C_G_A_C_G_T_C_G_T_G_G*G*G*G*G*G 3' (配列番号2)［式中、＊は、ホスホロチオエート結合を指し、＿は、ホスホジエステル結合を指す］。
【００２６】
「Ｂクラス」ＣｐＧ免疫刺激性オリゴヌクレオチドは、Ｂ細胞およびｐＤＣを活性化する能力によって機能的に特徴付けられるが、ただし、ＩＦＮ−αおよびＮＫ細胞活性化の誘導において比較的弱い。構造的に、このクラスは、通常、ホスホロチオエート結合を用いて十分に安定化され得るが、好ましくはＣｐＧモチーフ（複数可）のシトシンおよびグアニン間に１つまたは複数のホスホジエステル結合も有し得、この場合、分子はセミソフトと呼ばれる。一実施形態では、本発明において使用するためのＴＬＲ−９アゴニストは、少なくとも次式によって表されるＢクラスＣｐＧオリゴヌクレオチドである：
５’Ｘ１Ｘ２ＣＧＸ３Ｘ４３’［式中、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３およびＸ４は、ヌクレオチドである］。一実施形態では、Ｘ２は、アデニン、グアニンまたはチミンである。別の実施形態では、Ｘ３は、シトシン、アデニンまたはチミンである。
【００２７】
別の実施形態では、本発明において使用するためのＴＬＲ−９アゴニストは、少なくとも次式によって表されるＢクラスＣｐＧオリゴヌクレオチドである：
５’Ｎ１Ｘ１Ｘ２ＣＧＸ３Ｘ４Ｎ２３’［式中、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３およびＸ４は、ヌクレオチドであり、Ｎは、任意のヌクレオチドであり、Ｎ１およびＮ２は、各々約０〜２５個のＮからなる核酸配列である］。一実施形態では、Ｘ１Ｘ２は、ＧｐＴ、ＧｐＧ、ＧｐＡ、ＡｐＡ、ＡｐＴ、ＡｐＧ、ＣｐＴ、ＣｐＡ、ＣｐＧ、ＴｐＡ、ＴｐＴおよびＴｐＧからなる群から選択されるジヌクレオチドであり、Ｘ３Ｘ４は、ＴｐＴ、ＡｐＴ、ＴｐＧ、ＡｐＧ、ＣｐＧ、ＴｐＣ、ＡｐＣ、ＣｐＣ、ＴｐＡ、ＡｐＡおよびＣｐＡからなる群から選択されるジヌクレオチドである。好ましくはＸ１Ｘ２は、ＧｐＡまたはＧｐＴであり、Ｘ３Ｘ４は、ＴｐＴである。その他の実施形態では、Ｘ１またはＸ２または両方がプリンであり、Ｘ３またはＸ４または両方がピリミジンであるか、あるいは、Ｘ１Ｘ２がＧｐＡであり、Ｘ３またはＸ４または両方がピリミジンである。１つの好ましい実施形態では、Ｘ１Ｘ２は、ＴｐＡ、ＡｐＡ、ＡｐＣ、ＡｐＧおよびＧｐＧからなる群から選択されるジヌクレオチドである。さらに別の実施形態では、Ｘ３Ｘ４は、ＴｐＴ、ＴｐＡ、ＴｐＧ、ＡｐＡ、ＡｐＧ、ＧｐＡおよびＣｐＡからなる群から選択されるジヌクレオチドである。別の実施形態では、Ｘ１Ｘ２は、ＴｐＴ、ＴｐＧ、ＡｐＴ、ＧｐＣ、ＣｐＣ、ＣｐＴ、ＴｐＣ、ＧｐＴおよびＣｐＧからなる群から選択されるジヌクレオチドであり、Ｘ３は、ＡおよびＴからなる群から選択されるヌクレオチドであり、Ｘ４は、ヌクレオチドであるが、Ｘ１Ｘ２が、ＴｐＣ、ＧｐＴまたはＣｐＧである場合には、Ｘ３Ｘ４は、ＴｐＣ、ＡｐＴまたはＡｐＣではない。
【００２８】
別の好ましい実施形態では、ＣｐＧオリゴヌクレオチドは、配列５’ＴＣＮ１ＴＸ１Ｘ２ＣＧＸ３Ｘ４３’を有する。本発明のＣｐＧオリゴヌクレオチドは、いくつかの実施形態では、ＧｐＴ、ＧｐＧ、ＧｐＡおよびＡｐＡからなる群から選択されるＸ１Ｘ２と、ＴｐＴ、ＣｐＴおよびＴｐＣからなる群から選択されるＸ３Ｘ４とを含む。
【００２９】
本発明のＢクラスＣｐＧオリゴヌクレオチド配列としては、上記で大まかに記載されるものならびに公開ＰＣＴ特許出願ＰＣＴ／ＵＳ９５／０１５７０およびＰＣＴ／ＵＳ９７／１９７９１に、ならびにＵＳＰ第６，１９４，３８８号、同６，２０７，６４６号、同６，２１４，８０６号、同６，２１８，３７１号、同６，２３９，１１６号および同６，３３９，０６８号に開示されるものがある。例示的配列として、それだけには限らないが、これら後者の出願および特許に開示されるものが挙げられる。
【００３０】
一実施形態では、本発明の「Ｂクラス」ＣｐＧオリゴヌクレオチドは、以下の核酸配列を有する：
5'
TCGTCGTTTTTCGGTGCTTTT 3'  (配列番号3)、または
5'
TCGTCGTTTTTCGGTCGTTTT 3' (配列番号4)、または
5'
TCGTCGTTTTGTCGTTTTGTCGTT 3' (配列番号5)、または
5' TCGTCGTTTCGTCGTTTTGTCGTT
3' (配列番号6)、または
5'
TCGTCGTTTTGTCGTTTTTTTCGA 3'  (配列番号7)。
【００３１】
これらの配列のいずれにおいても、すべての結合が、すべてホスホロチオエート結合であり得る。別の実施形態では、これらの配列のいずれにおいても、結合のうち１種または複数、好ましくはセミソフトＣｐＧオリゴヌクレオチドを作製するＣｐＧモチーフの「Ｃ」および「Ｇ」間が、ホスホジエステルであり得る。これらの配列のいずれにおいても、エチル−ウリジンまたはハロゲンは、５’Ｔと置換されてもよく、ハロゲン置換の例として、それだけには限らないが、ブロモ−ウリジンまたはヨード−ウリジン置換が挙げられる。
【００３２】
Ｂクラスオリゴヌクレオチドのいくつかの限定されない例として、以下が挙げられる：
5'
T*C*G*T*C*G*T*T*T*T*T*C*G*G*T*G*C*T*T*T*T 3' (配列番号8)、または
5'
T*C*G*T*C*G*T*T*T*T*T*C*G*G*T*C*G*T*T*T*T 3' (配列番号9)、または
5' T*C*G*T*C*G*T*T*T*T*G*T*C*G*T*T*T*T*G*T*C*G*T*T
3' (配列番号10)、または
5'
T*C*G*T*C*G*T*T*T*C*G*T*C*G*T*T*T*T*G*T*C*G*T*T 3' (配列番号11)、または
5'
T*C*G*T*C*G*T*T*T*T*G*T*C*G*T*T*T*T*T*T*T*C*G*A 3' (配列番号12)。
［式中、＊は、ホスホロチオエート結合を指す］。
【００３３】
「Ｃクラス」のＣｐＧ免疫刺激性オリゴヌクレオチドは、Ｂ細胞およびＮＫ細胞を活性化し、ＩＦＮ−αを誘導する能力によって機能的に特徴付けられる。構造的に、このクラスは、通常、１つまたは複数のＢクラス型免疫刺激性ＣｐＧモチーフを含む領域と、分子が二次（例えば、ステム−ループ）または三次（例えば、二量体）型構造を形成するのを可能にする、ＧＣリッチの回文構造またはほぼ回文構造の領域とを含む。これらのオリゴヌクレオチドのうちいくつかは、従来の「刺激性」ＣｐＧ配列と、「ＧＣリッチ」または「Ｂ細胞中和」モチーフの両方を有する。これらの組合せモチーフオリゴヌクレオチドは、従来のＢクラスＣｐＧオリゴヌクレオチド（すなわち、Ｂ細胞活性化および樹状細胞（ＤＣ）活性化の強力な誘導）と関連する効果と、ＡクラスＣｐＧ  ＯＤＮと関連する効果（すなわち、ＩＦＮ−αおよびＮＫ細胞活性化の強力な誘導、ただし、Ｂ細胞およびＤＣ活性化の比較的弱い誘導）の中間に位置する免疫刺激効果を有する。Ｋｒｉｅｇ  ＡＭら（１９９５年）Ｎａｔｕｒｅ  ３７４：５４６〜９頁；Ｂａｌｌａｓ  ＺＫら（１９９６年）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １５７：１８４０〜５頁；Ｙａｍａｍｏｔｏ  Ｓら（１９９２年）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １４８：４０７２〜６頁。
【００３４】
Ｃクラスの組合せモチーフ免疫刺激性オリゴヌクレオチドは、完全に安定化された、（例えば、すべてホスホロチオエート）、キメラ（ホスホジエステル中心領域）またはセミソフト（例えば、ＣｐＧモチーフ内のホスホジエステル）骨格のいずれかを有し得る。このクラスは、２００２年８月１９日に出願された米国特許出願ＵＳ１０／２２４，５２３に記載されている。
【００３５】
ＣクラスＣｐＧオリゴヌクレオチドの１つの刺激性ドメインまたはモチーフは、式：５’Ｘ１ＤＣＧＨＸ２３’によって規定される。Ｄは、Ｃ以外のヌクレオチドである。Ｃは、シトシンである。Ｇは、グアニンである。Ｈは、Ｇ以外のヌクレオチドである。Ｘ１およびＸ２は、０〜１０のヌクレオチド長の任意の核酸配列である。Ｘ１は、ＣＧを含んでもよく、この場合には、このＣＧの直前にＴがあることが好ましい。いくつかの実施形態では、ＤＣＧはＴＣＧである。Ｘ１は、０〜６のヌクレオチド長であることが好ましい。いくつかの実施形態では、Ｘ２は、ポリＧまたはポリＡモチーフを全く含まない。その他の実施形態では、免疫刺激性オリゴヌクレオチドは、５’末端に、または３’末端にポリＴ配列を有する。本明細書において使用する場合、「ポリＡ」または「ポリＴ」とは、それぞれ、４個以上の連続するＡまたはＴのストレッチ、例えば、５’ＡＡＡＡ３’または５’ＴＴＴＴ３’を指すものとする。本明細書において使用する場合、「ポリＧ末端」とは、４個以上の連続するＧのストレッチ、例えば、核酸の５’末端または３’末端に存在する５’ＧＧＧＧ３’を指すものとする。本明細書において使用する場合、「ポリＧオリゴヌクレオチド」とは、式５’Ｘ１Ｘ２ＧＧＧＸ３Ｘ４３’を有するオリゴヌクレオチド（式中、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３およびＸ４は、ヌクレオチドであり、Ｘ３およびＸ４のうち少なくとも一方は、Ｇであることが好ましい）を指すものとする。この式下のＢ細胞刺激性ドメインのいくつかの好ましい設計は、ＴＴＴＴＴＣＧ、ＴＣＧ、ＴＴＣＧ、ＴＴＴＣＧ、ＴＴＴＴＣＧ、ＴＣＧＴ、ＴＴＣＧＴ、ＴＴＴＣＧＴ、ＴＣＧＴＣＧＴを含む。
【００３６】
ＣクラスＣｐＧオリゴヌクレオチドの第２のモチーフは、ＰまたはＮのいずれかと呼ばれ、Ｘ１のすぐ５’側またはＸ２のすぐ３’側に位置する。
【００３７】
Ｎは、ＣＧＧトリヌクレオチドで始まり、少なくとも１０ヌクレオチド長であるＢ細胞中和配列である。Ｂ細胞中和モチーフは、ＣＧがＣの後ろにあるか、Ｇが後ろに続く、少なくとも１つのＣｐＧ配列（Ｋｒｉｅｇ  ＡＭら、（１９９８年）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｄ  ＵＳＡ  ９５：１２６３１〜１２６３６頁）を含むまたはＣＧのＣがメチル化されているＣＧ含有ＤＮＡ配列である。中和モチーフまたは配列は、他の非刺激性モチーフ中に存在する場合には、ある程度の免疫刺激能を有するが、その他の免疫刺激性モチーフとの関連で存在する場合には、その他のモチーフの免疫刺激力を低減するよう働く。
【００３８】
Ｐは、少なくとも１０のヌクレオチド長の配列を含有するＧＣリッチ回文構造である。
【００３９】
本明細書において使用する場合、「回文構造」および同等に「回文構造の配列」とは、反転した反復、すなわち、ＡＢＣＤＥＥ’Ｄ’Ｃ’Ｂ’Ａ’（ここで、ＡおよびＡ’、ＢおよびＢ’などは、通常のワトソン−クリック塩基対を形成できる塩基である）などの配列を指すものとする。
【００４０】
本明細書において、「ＧＣリッチ回文構造」とは、少なくとも２／３のＧおよびＣ塩基組成を有する回文構造を指すものとする。いくつかの実施形態では、ＧＣリッチドメインは、好ましくは「Ｂ細胞刺激性ドメイン」の３’側にある。１０塩基長のＧＣリッチ回文構造の場合には、したがって、回文構造は、少なくとも８個のＧおよびＣを含む。１２塩基長のＧＣリッチ回文構造の場合には、回文構造はまた、少なくとも８個のＧおよびＣを含む。１４マーのＧＣリッチ回文構造の場合には、回文構造のうちの少なくとも１０塩基が、ＧおよびＣである。いくつかの実施形態では、ＧＣリッチ回文構造は、もっぱらＧおよびＣで構成されている。
【００４１】
いくつかの実施形態では、ＧＣリッチ回文構造は、少なくとも８１％のＧおよびＣという塩基組成を有する。このような１０塩基長ＧＣリッチ回文構造の場合には、したがって、回文構造は、もっぱらＧおよびＣからなる。このような１２塩基長のＧＣリッチ回文構造の場合には、回文構造のうちの少なくとも１０塩基（８３％）が、ＧおよびＣであることが好ましい。いくつかの好ましい実施形態では、１２塩基長のＧＣリッチ回文構造は、もっぱらＧおよびＣからなる。１４マーのＧＣリッチ回文構造の場合には、回文構造のうち少なくとも１２塩基（８６％）が、ＧおよびＣである。いくつかの好ましい実施形態では、１４塩基長のＧＣリッチ回文構造は、もっぱらＧおよびＣからなる。ＧＣリッチ回文構造のＣは、メチル化されていない場合もあり、またはそれらは、メチル化されている場合もある。
【００４２】
一般に、このドメインは、少なくとも３個のＣおよびＧを有し、より好ましくは各々４個、最も好ましくは各々５個以上を有する。このドメイン中のＣおよびＧの数は、同一である必要はない。ＣおよびＧは、ＣＣＧＣＧＣＧＧなど、自己相補的二本鎖または回文構造を形成できるように配置されることが好ましい。これは、ＡまたはＴによって中断され得るが、自己相補性が、例えば、モチーフＣＧＡＣＧＴＴＣＧＴＣＧまたはＣＧＧＣＧＣＣＧＴＧＣＣＧにおけるように、少なくとも部分的に保存されることが好ましい。相補性が保存されない場合には、非相補的塩基対は、ＴＧであることが好ましい。好ましい実施形態では、回文構造の一部ではない連続する塩基は３個以下、好ましくは２個以下しかなく、最も好ましくは１個だけである。いくつかの実施形態では、ＧＣリッチ回文構造は、少なくとも１つのＣＧＧ三量体、少なくとも１つのＣＣＧ三量体または少なくとも１つのＣＧＣＧ四量体を含む。その他の実施形態では、ＧＣリッチ回文構造は、ＣＣＣＣＣＣＧＧＧＧＧＧまたはＧＧＧＧＧＧＣＣＣＣＣＣ、ＣＣＣＣＣＧＧＧＧＧまたはＧＧＧＧＧＣＣＣＣＣではない。
【００４３】
ＧＣリッチ領域のＧの少なくとも１個は、イノシン（Ｉ）で置換されていてもよい。いくつかの実施形態では、Ｐは、２個以上のＩを含む。
【００４４】
特定の実施形態では、免疫刺激性オリゴヌクレオチドは、以下の式５’ＮＸ１ＤＣＧＨＸ２３’、５’Ｘ１ＤＣＧＨＸ２Ｎ３’、５’ＰＸ１ＤＣＧＨＸ２３’、５’Ｘ１ＤＣＧＨＸ２Ｐ３’、５’Ｘ１ＤＣＧＨＸ２ＰＸ３３’、５’Ｘ１ＤＣＧＨＰＸ３３’、５’ＤＣＧＨＸ２ＰＸ３３’、５’ＴＣＧＨＸ２ＰＸ３３’、５’ＤＣＧＨＰＸ３３’または５’ＤＣＧＨＰ３’のうち１種を有する。
【００４５】
本発明は、式５’Ｎ１ＰｙＧＮ２Ｐ３’によって規定されるその他の免疫刺激性オリゴヌクレオチドを提供する。Ｎ１は、１〜６ヌクレオチド長の任意の配列である。Ｐｙはピリミジンである。Ｇはグアニンである。Ｎ２は、０〜３０ヌクレオチド長の任意の配列である。Ｐは、少なくとも１０ヌクレオチド長の配列を含有するＧＣリッチ回文構造である。
【００４６】
Ｎ１およびＮ２は、５０％を超えるピリミジン、より好ましくは５０％を超えるＴを含有し得る。Ｎ１は、ＣＧを含んでもよく、その場合には、このＣＧの直前にＴがあることが好ましい。いくつかの実施形態では、Ｎ１ＰｙＧはＴＣＧ、最も好ましくはＴＣＧＮ２（式中、Ｎ２はＧではない）である。
【００４７】
Ｎ１ＰｙＧＮ２Ｐは、１個または複数のイノシン（Ｉ）ヌクレオチドを含み得る。Ｎ１中のＣまたはＧのいずれかは、イノシンによって置換されていてもよいが、ＩｐＧよりもＣｐＩが好ましい。ＩｐＧなどのイノシン置換については、「セミソフト」またはキメラ骨格の使用で最適活性が達成され得、これでは、ＩＧまたはＣＩ間の結合がホスホジエステルである。Ｎ１は、少なくとも１つのＣＩ、ＴＣＩ、ＩＧまたはＴＩＧモチーフを含み得る。
【００４８】
特定の実施形態では、Ｎ１ＰｙＧＮ２は、ＴＴＴＴＴＣＧ、ＴＣＧ、ＴＴＣＧ、ＴＴＴＣＧ、ＴＴＴＴＣＧ、ＴＣＧＴ、ＴＴＣＧＴ、ＴＴＴＣＧＴおよびＴＣＧＴＣＧＴからなる群から選択される配列である。
【００４９】
一実施形態では、本発明の「Ｃクラス」ＣｐＧオリゴヌクレオチドは、以下の核酸配列を有する：
5' TCGCGTCGTTCGGCGCGCGCCG
3'  (配列番号13)、または
5'
TCGTCGACGTTCGGCGCGCGCCG 3'  (配列番号14)、または
5'
TCGGACGTTCGGCGCGCGCCG 3'  (配列番号15)、または
5'
TCGGACGTTCGGCGCGCCG 3'  (配列番号16)、または
5'
TCGCGTCGTTCGGCGCGCCG 3'  (配列番号17)、または
5'
TCGACGTTCGGCGCGCGCCG 3'  (配列番号18)、または
5' TCGACGTTCGGCGCGCCG
3'  (配列番号19)、または
5'
TCGCGTCGTTCGGCGCCG 3'  (配列番号20)、または
5'
TCGCGACGTTCGGCGCGCGCCG 3'  (配列番号21)、または
5'
TCGTCGTTTTCGGCGCGCGCCG 3'  (配列番号22)、または
5'
TCGTCGTTTTCGGCGGCCGCCG 3'  (配列番号23)、または
5'
TCGTCGTTTTACGGCGCCGTGCCG 3'  (配列番号24)、または
5'
TCGTCGTTTTCGGCGCGCGCCGT 3'  (配列番号25)。
【００５０】
これらの配列のいずれにおいても、すべての結合がすべてホスホロチオエート結合であり得る。別の実施形態では、これらの配列のいずれにおいても、１種または複数の結合、好ましくはＣｐＧモチーフの「Ｃ」と「Ｇ」の間が、ホスホジエステルであり得、これがセミソフトＣｐＧオリゴヌクレオチドを作製する。
【００５１】
Ｃクラスオリゴヌクレオチドのいくつかの限定されない例として以下が挙げられる：
5'
T*C_G*C_G*T*C_G*T*T*C_G*G*C*G*C_G*C*G*C*C*G 3' (配列番号26)、または
5'
T*C_G*T*C_G*A*C_G*T*T*C_G*G*C*G*C_G*C*G*C*C*G 3' (配列番号27)、または
5'
T*C_G*G*A*C_G*T*T*C_G*G*C*G*C_G*C*G*C*C*G 3' (配列番号28)、または
5'
T*C_G*G*A*C_G*T*T*C_G*G*C*G*C*G*C*C*G 3' (配列番号29)、または
5'
T*C_G*C_G*T*C_G*T*T*C_G*G*C*G*C*G*C*C*G 3' (配列番号30)、または
5'
T*C_G*A*C_G*T*T*C_G*G*C*G*C_G*C*G*C*C*G 3' (配列番号31)、または
5'
T*C_G*A*C_G*T*T*C_G*G*C*G*C*G*C*C*G 3' (配列番号32)、または
5'
T*C_G*C_G*T*C_G*T*T*C_G*G*C*G*C*C*G 3' (配列番号33)、または
5'
T*C_G*C_G*A*C_G*T*T*C_G*G*C*G*C_G*C*G*C*C*G 3' (配列番号34)、または
5' T*C*G*T*C*G*T*T*T*T*C*G*G*C*G*C*G*C*G*C*C*G
3' (配列番号35)、または
5'
T*C*G*T*C*G*T*T*T*T*C*G*G*C*G*G*C*C*G*C*C*G 3' (配列番号36)、または
5'
T*C*G*T*C_G*T*T*T*T*A*C_G*G*C*G*C*C_G*T*G*C*C*G 3' (配列番号37)、または
5'
T*C_G*T*C*G*T*T*T*T*C*G*G*C*G*C*G*C*G*C*C*G*T 3' (配列番号38)
［式中、＊は、ホスホロチオエート結合を指し、＿は、ホスホジエステル結合を指す］。
【００５２】
これらの配列のいずれにおいても、エチル−ウリジンまたはハロゲンは、５’Ｔと置換されていてもよく、ハロゲン置換の例として、それだけには限らないが、ブロモ−ウリジンまたはヨード−ウリジン置換が挙げられる。
【００５３】
「Ｐクラス」ＣｐＧ免疫刺激性オリゴヌクレオチドは、ＷＯ２００７／０９５３１６に記載されており、それらは、例えば、５’および３’両末端にまたはその付近に、完全または不完全な回文構造などの二本鎖を形成する領域を含み、コンカテマーなどの高次構造を形成する能力をそれらに与えるという事実を特徴とする。Ｐクラスオリゴヌクレオチドと呼ばれるこれらのオリゴヌクレオチドは、いくつかの例では、Ｃクラスよりもかなり高レベルのＩＦＮ−α分泌を誘導する能力を有する。Ｐクラスオリゴヌクレオチドは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏおよび／またはｉｎ  ｖｉｖｏのいずれかで、コンカテマーへ自発的に自己組織化する能力を有する。これらの分子の作用方法について、いずれか特定の理論に拘束されるものではないが、１つの可能性ある仮説は、この特性は、Ｐクラスオリゴヌクレオチドに、特定の免疫細胞内にＴＬＲ９をより高度に架橋し、これまでに記載されたクラスのＣｐＧオリゴヌクレオチドと比較して、別個のパターンの免疫活性化を誘導する能力を与えるということである。
【００５４】
一実施形態では、本発明において使用するためのＴＬＲ−９アゴニストは、５’ＴＬＲ活性化ドメインおよび少なくとも２つの回文構造領域を含有するＰクラスＣｐＧオリゴヌクレオチドであり、１つの回文構造領域は、少なくとも６ヌクレオチド長の５’回文構造領域であり、直接またはスペーサーを介してのいずれかで少なくとも８ヌクレオチド長の３’回文構造領域と接続しており、オリゴヌクレオチドは、少なくとも１つのＹｐＲジヌクレオチドを含む。一実施形態では、前記オリゴヌクレオチドは、T*C_G*T*C_G*A*C_G*T*T*C_G*G*C*G*C_G*C*G*C*C*G
(配列番号27)ではない。一実施形態では、ＰクラスＣｐＧオリゴヌクレオチドは、少なくとも１つの非メチル化ＣｐＧジヌクレオチドを含む。別の実施形態では、ＴＬＲ活性化ドメインは、ＴＣＧ、ＴＴＣＧ、ＴＴＴＣＧ、ＴＹｐＲ、ＴＴＹｐＲ、ＴＴＴＹｐＲ、ＵＣＧ、ＵＵＣＧ、ＵＵＵＣＧ、ＴＴＴまたはＴＴＴＴである。さらに別の実施形態では、ＴＬＲ活性化ドメインは、５’回文構造領域内にある。別の実施形態では、ＴＬＲ活性化ドメインは、５’回文構造領域のすぐ５’側にある。さらに別の実施形態では、５’回文構造領域は、少なくとも８ヌクレオチド長である。別の実施形態では、３’回文構造領域は、少なくとも１０ヌクレオチド長である。別の実施形態では、５’回文構造領域は、少なくとも１０ヌクレオチド長である。さらに別の実施形態では、３’回文構造領域は、非メチル化ＣｐＧジヌクレオチドを含む。別の実施形態では、３’回文構造領域は、２つの非メチル化ＣｐＧジヌクレオチドを含む。別の実施形態では、５’回文構造領域は、非メチル化ＣｐＧジヌクレオチドを含む。さらに別の実施形態では、５’回文構造領域は、２つの非メチル化ＣｐＧジヌクレオチドを含む。別の実施形態では、５’および３’回文構造領域は、少なくとも２５の二本鎖安定性値を有する。別の実施形態では、５’および３’回文構造領域は、少なくとも３０の二本鎖安定性値を有する。別の実施形態では、５’および３’回文構造領域は、少なくとも３５の二本鎖安定性値を有する。別の実施形態では、５’および３’回文構造領域は、少なくとも４０の二本鎖安定性値を有する。別の実施形態では、５’および３’回文構造領域は、少なくとも４５の二本鎖安定性値を有する。別の実施形態では、５’および３’回文構造領域は、少なくとも５０の二本鎖安定性値を有する。別の実施形態では、５’および３’回文構造領域は、少なくとも５５の二本鎖安定性値を有する。別の実施形態では、５’および３’回文構造領域は、少なくとも６０の二本鎖安定性値を有する。別の実施形態では、５’および３’回文構造領域は、少なくとも６５の二本鎖安定性値を有する。
【００５５】
一実施形態では、２つの回文構造領域は、直接連結している。別の実施形態では、２つの回文構造領域は、３’−３’結合によって連結している。別の実施形態では、２つの回文構造領域は、１つのヌクレオチドによって重複している。さらに別の実施形態では、２つの回文構造領域は、２つのヌクレオチドによって重複している。別の実施形態では、２つの回文構造領域は、重複していない。別の実施形態では、２つの回文構造領域は、スペーサーによって連結している。一実施形態では、スペーサーは、１〜５０ヌクレオチド長を有する核酸である。別の実施形態では、スペーサーは、１ヌクレオチド長を有する核酸である。別の実施形態では、スペーサーは、非ヌクレオチドスペーサーである。一実施形態では、非ヌクレオチドスペーサーは、Ｄ−スペーサーである。別の実施形態では、非ヌクレオチドスペーサーはリンカーである。一実施形態では、オリゴヌクレオチドは、式５’ＸＰ１ＳＰ２Ｔ３’（式中、ＸはＴＬＲ活性化ドメインであり、Ｐ１は回文構造であり、Ｓはスペーサーであり、Ｐ２は回文構造であり、Ｔは０〜１００ヌクレオチド長の３’テールである）を有する。一実施形態では、Ｘは、ＴＣＧ、ＴＴＣＧまたはＴＴＴＣＧである。別の実施形態では、Ｔは、５〜５０ヌクレオチド長である。さらに別の実施形態では、Ｔは５〜１０ヌクレオチド長である。一実施形態では、Ｓは、１〜５０ヌクレオチド長を有する核酸である。別の実施形態では、Ｓは、１ヌクレオチド長を有する核酸である。別の実施形態では、Ｓは、非ヌクレオチドスペーサーである。一実施形態では、非ヌクレオチドスペーサーは、Ｄ−スペーサーである。別の実施形態では、非ヌクレオチドスペーサーはリンカーである。別の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはリボザイムではない。一実施形態では、Ｐ１は、ＡおよびＴリッチである。別の実施形態では、Ｐ１は、少なくとも４個のＴを含む。別の実施形態では、Ｐ２は、完全回文構造である。別の実施形態では、Ｐ２は、Ｇ−Ｃリッチである。さらに別の実施形態では、Ｐ２は、ＣＧＧＣＧＣＸ１ＧＣＧＣＣＧ（式中、Ｘ１はＴであるか、または存在しない）である。
【００５６】
一実施形態では、オリゴヌクレオチドは、少なくとも１つのホスホロチオエート結合を含む。別の実施形態では、オリゴヌクレオチドのすべてのヌクレオチド間結合は、ホスホロチオエート結合である。別の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、少なくとも１つのホスホジエステル様結合を含む。別の実施形態では、ホスホジエステル様結合は、ホスホジエステル結合である。別の実施形態では、親油性基が、オリゴヌクレオチドとコンジュゲートしている。一実施形態では、親油性基はコレステロールである。
【００５７】
一実施形態では、本発明において使用するためのＴＬＲ−９アゴニストは、５’ＴＬＲ活性化ドメインおよび少なくとも２つの相補性含有領域、５’および３’相補性含有領域を含むＰクラスＣｐＧオリゴヌクレオチドであり、各相補性含有領域は、少なくとも８ヌクレオチド長であり、互いに直接またはスペーサーを介してのいずれかで連結しており、オリゴヌクレオチドは、少なくとも１つのピリミジン−プリン（ＹｐＲ）ジヌクレオチドを含み、少なくとも１つの相補性含有領域は、完全回文構造ではない。一実施形態では、オリゴヌクレオチドは、少なくとも１つの非メチル化ＣｐＧジヌクレオチドを含む。別の実施形態では、ＴＬＲ活性化ドメインは、ＴＣＧ、ＴＴＣＧ、ＴＴＴＣＧ、ＴＹｐＲ、ＴＴＹｐＲ、ＴＴＴＹｐＲ、ＵＣＧ、ＵＵＣＧ、ＵＵＵＣＧ、ＴＴＴまたはＴＴＴＴである。別の実施形態では、ＴＬＲ活性化ドメインは、５’相補性含有領域内にある。別の実施形態では、ＴＬＲ活性化ドメインは、５’相補性含有領域のすぐ５’側にある。別の実施形態では、３’相補性含有領域は、少なくとも１０ヌクレオチド長である。さらに別の実施形態では、５’相補性含有領域は、少なくとも１０ヌクレオチド長である。一実施形態では、３’相補性含有領域は、非メチル化ＣｐＧジヌクレオチドを含む。別の実施形態では、３’相補性含有領域は、２つの非メチル化ＣｐＧジヌクレオチドを含む。さらに別の実施形態では、５’相補性含有領域は、非メチル化ＣｐＧジヌクレオチドを含む。別の実施形態では、５’相補性含有領域は、２つの非メチル化ＣｐＧジヌクレオチドを含む。別の実施形態では、相補性含有領域は、少なくとも１つのヌクレオチド類似体を含む。別の実施形態では、相補性含有領域は、分子内二本鎖を形成する。一実施形態では、分子内二本鎖は、少なくとも１つの非ワトソンクリック塩基対を含む。別の実施形態では、非ワトソンクリック塩基対は、Ｇ−Ｔ、Ｇ−Ａ、Ｇ−ＧまたはＣ−Ａである。一実施形態では、相補性含有領域は、分子間二本鎖を形成する。別の実施形態では、少なくとも１つの分子間二本鎖は、少なくとも１つの非ワトソンクリック塩基対を含む。別の実施形態では、非ワトソンクリック塩基対は、Ｇ−Ｔ、Ｇ−Ａ、Ｇ−ＧまたはＣ−Ａである。さらに別の実施形態では、相補性含有領域は、ミスマッチを含む。さらに別の実施形態では、相補性含有領域は、２つのミスマッチを含む。別の実施形態では、相補性含有領域は、介在ヌクレオチドを含む。別の実施形態では、相補性含有領域は、２つの介在ヌクレオチドを含む。
【００５８】
一実施形態では、５’および３’相補性含有領域は、少なくとも２５の二本鎖安定性値を有する。別の実施形態では、５’および３’相補性含有領域は、少なくとも３０の二本鎖安定性値を有する。別の実施形態では、５’および３’相補性含有領域は、少なくとも３５の二本鎖安定性値を有する。別の実施形態では、相補性含有領域は、少なくとも４０の二本鎖安定性値を有する。別の実施形態では、相補性含有領域は、少なくとも４５の二本鎖安定性値を有する。別の実施形態では、相補性含有領域は、少なくとも５０の二本鎖安定性値を有する。別の実施形態では、相補性含有領域は、少なくとも５５の二本鎖安定性値を有する。別の実施形態では、相補性含有領域は、少なくとも６０の二本鎖安定性値を有する。別の実施形態では、相補性含有領域は、少なくとも６５の二本鎖安定性値を有する。
【００５９】
別の実施形態では、２つの相補性含有領域は、直接連結している。別の実施形態では、２つの回文構造領域は、３’−３’結合によって連結している。さらに別の実施形態では、２つの相補性含有領域は、１つのヌクレオチドによって重複している。別の実施形態では、２つの相補性含有領域は、２つのヌクレオチドによって重複している。別の実施形態では、２つの相補性含有領域は、重複していない。別の実施形態では、２つの相補性含有領域は、スペーサーによって連結している。別の実施形態では、スペーサーは、１〜５０ヌクレオチド長を有する核酸である。別の実施形態では、スペーサーは、１ヌクレオチド長を有する核酸である。一実施形態では、スペーサーは、非ヌクレオチドスペーサーである。別の実施形態では、非ヌクレオチドスペーサーは、Ｄ−スペーサーである。さらに別の実施形態では、非ヌクレオチドスペーサーはリンカーである。
【００６０】
一実施形態では、Ｐクラスオリゴヌクレオチドは、式５’ＸＮＳＰＴ３’（式中、ＸはＴＬＲ活性化ドメインであり、Ｎは非完全回文構造であり、Ｐは回文構造であり、Ｓはスペーサーであり、Ｔは０〜１００ヌクレオチド長の３’テールである）を有する。別の実施形態では、Ｘは、ＴＣＧ、ＴＴＣＧまたはＴＴＴＣＧである。別の実施形態では、Ｔは、５〜５０ヌクレオチド長である。別の実施形態では、Ｔは、５〜１０ヌクレオチド長である。別の実施形態では、Ｓは、１〜５０ヌクレオチド長を有する核酸である。別の実施形態では、Ｓは、１ヌクレオチド長を有する核酸である。別の実施形態では、Ｓは、非ヌクレオチドスペーサーである。別の実施形態では、非ヌクレオチドスペーサーは、Ｄ−スペーサーである。別の実施形態では、非ヌクレオチドスペーサーはリンカーである。別の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはリボザイムではない。別の実施形態では、Ｎは、ＡおよびＴリッチである。別の実施形態では、Ｎは、少なくとも４個のＴを含む。別の実施形態では、Ｐは、完全回文構造である。別の実施形態では、ＰはＧ−Ｃリッチである。別の実施形態では、Ｐは、ＣＧＧＣＧＣＸ１ＧＣＧＣＣＧ（式中、Ｘ１はＴであるか、または存在しない）である。別の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、少なくとも１つのホスホロチオエート結合を含む。別の実施形態では、オリゴヌクレオチドのすべてのヌクレオチド内ヌクレオチド間結合は、ホスホロチオエート結合である。別の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、少なくとも１つのホスホジエステル様結合を含む。別の実施形態では、ホスホジエステル様結合は、ホスホジエステル結合である。別の実施形態では、親油性基が、オリゴヌクレオチドとコンジュゲートしている。一実施形態では、親油性基はコレステロールである。
【００６１】
一実施形態では、本発明の「Ｐクラス」ＣｐＧオリゴヌクレオチドは、以下の核酸配列を有する：5' TCGTCGACGATCGGCGCGCGCCG 3' (配列番号39)。
【００６２】
前記配列において、すべての結合が、すべてホスホロチオエート結合であり得る。別の実施形態では、結合のうち１種または複数、好ましくはＣｐＧモチーフの「Ｃ」および「Ｇ」間が、ホスホジエステルであり得、セミソフトＣｐＧオリゴヌクレオチドを作製する。これらの配列のいずれにおいても、エチル−ウリジンまたはハロゲンは、５’Ｔと置換されていてもよく、ハロゲン置換の例として、それだけには限らないが、ブロモ−ウリジンまたはヨード−ウリジン置換が挙げられる。
【００６３】
Ｐクラスオリゴヌクレオチドの限定されない例として、以下が挙げられる：
5'
T*C_G*T*C_G*A*C_G*A*T*C_G*G*C*G*C_G*C*G*C*C*G 3' (配列番号40)
［式中、＊は、ホスホロチオエート結合を指し、＿は、ホスホジエステル結合を指す］。
【００６４】
一実施形態では、本明細書に開示されるＣｐＧオリゴヌクレオチドのすべてのヌクレオチド間結合は、ホスホジエステル結合（ＰＣＴ出願ＷＯ２００７／０２６１９０に記載されるような「ソフト」オリゴヌクレオチド）である。別の実施形態では、本発明のＣｐＧオリゴヌクレオチドは、分解に対して耐性にされている（例えば、安定化されている）。「安定化オリゴヌクレオチド」とは、ｉｎ  ｖｉｖｏ分解（例えば、エキソヌクレアーゼまたはエンドヌクレアーゼによる）に対して比較的耐性であるオリゴヌクレオチドを指す。核酸安定化は、骨格修飾によって達成できる。ホスホロチオエート結合を有するオリゴヌクレオチドは、最大の活性を提供し、オリゴヌクレオチドを細胞内エキソヌクレアーゼおよびエンドヌクレアーゼによる分解から保護する。
【００６５】
免疫刺激性オリゴヌクレオチドは、ホスホジエステルおよびホスホロチオエート結合の組合せを有するキメラ骨格を有し得る。本発明の目的上、キメラ骨格とは、少なくとも１つのヌクレオチド間結合がホスホジエステルまたはホスホジエステル様であり、少なくとも１つのその他のヌクレオチド間結合が、安定化ヌクレオチド間結合であり、少なくとも１つのホスホジエステルまたはホスホジエステル様結合および少なくとも１つの安定化結合が異なっている、部分的に安定化された骨格を指す。ホスホジエステル結合が、ＣｐＧモチーフ内に優先的に配置される場合は、このような分子は、ＰＣＴ出願ＷＯ２００７／０２６１９０に記載されるように「セミソフト」と呼ばれる。
【００６６】
その他の修飾オリゴヌクレオチドとして、ホスホジエステル、ホスホロチオエート、メチルホスホネート、メチルホスホロチオエート、ホスホロジチオエートおよび／またはｐ−エトキシ結合の組合せが挙げられる。
【００６７】
ボラノホスホネート結合は、ホスホジエステル結合と比較して安定化されると報告されているので、骨格のキメラ性を目的として、ボラノホスホネート結合は、状況に応じて、ホスホジエステル様または安定化のいずれかとして分類され得る。例えば、本発明のキメラ骨格は、いくつかの実施形態では、少なくとも１つのホスホジエステル（ホスホジエステルまたはホスホジエステル様）結合および少なくとも１つのボラノホスホネート（安定化）結合を含み得る。その他の実施形態では、本発明のキメラ骨格は、ボラノホスホネート（ホスホジエステルまたはホスホジエステル様）およびホスホロチオエート（安定化）結合を含み得る。「安定化ヌクレオチド間結合」とは、ｉｎ  ｖｉｖｏ分解（例えば、エキソヌクレアーゼまたはエンドヌクレアーゼによる）に対し、ホスホジエステルヌクレオチド間結合と比較して相対的に耐性であるヌクレオチド間結合を意味するものとする。好ましい安定化ヌクレオチド間結合として、限定されるものではないが、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、メチルホスホネートおよびメチルホスホロチオエートが挙げられる。その他の安定化ヌクレオチド間結合として、限定されるものではないが、ペプチド、アルキル、デホスホおよび上記のようなその他のものが挙げられる。
【００６８】
ホスホロチオエートなどの修飾骨格は、ホスホルアミデートまたはＨ−ホスホネート化学のいずれかを使用する自動化技術を用いて合成してもよい。アリール−およびアルキル−ホスホネートは、例えば、米国特許第４，４６９，８６３号に記載のとおり製造してもよく、アルキルホスホトリエステル（米国特許第５，０２３，２４３号および欧州特許第０９２，５７４号に記載のとおり、帯電酸素部分が、アルキル化されている）は、市販の試薬を使用して自動化固相合成によって調製してもよい。その他のＤＮＡ骨格修飾および置換を行う方法は記載されている。Ｕｈｌｍａｎｎ  Ｅら（１９９０年）Ｃｈｅｍ  Ｒｅｖ  ９０：５４４；Ｇｏｏｄｃｈｉｌｄ  Ｊ（１９９０年）Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ  １：１６５参照のこと。キメラオリゴヌクレオチドを調製する方法も公知である。例えば、Ｕｈｌｍａｎｎらに発行された特許には、このような技術が記載されている。
【００６９】
混合骨格修飾ＯＤＮは、ＰＣＴ出願ＷＯ２００７／０２６１９０に記載のとおり合成してもよい。
【００７０】
本発明のオリゴヌクレオチドはまた、その他の修飾を含み得る。これらは、非イオン性ＤＮＡ類似体、例えば、アルキル−およびアリール−ホスフェート（帯電ホスホネート酸素が、アルキルまたはアリール基によって置換されている）、ホスホジエステルおよび帯電酸素部分がアルキル化されているアルキルホスホトリエステルを含む。いずれかまたは両末端にジオール、例えば、テトラエチレングリコールまたはヘキサエチレングリコールを含む核酸も、ヌクレアーゼ分解に対して実質的に耐性であるとわかっている。
【００７１】
ＣｐＧオリゴヌクレオチドの大きさ（すなわち、オリゴヌクレオチドの長さに沿ったヌクレオチド残基の数）も、オリゴヌクレオチドの刺激活性の一因となり得る。細胞への取り込みを促進するために、本発明のＣｐＧオリゴヌクレオチドは、６ヌクレオチド残基の最小の長さを有することが好ましい。大きなオリゴヌクレオチドは細胞内で分解されるので、６ヌクレオチドより大きい任意の大きさのオリゴヌクレオチド（数ｋｂ長であっても）も、十分な免疫刺激性モチーフが存在すれば免疫応答を誘導できる。特定の実施形態では、ＣｐＧオリゴヌクレオチドは、６〜１００ヌクレオチド長、優先的には８〜３０ヌクレオチド長である。重要な実施形態では、本発明の核酸およびオリゴヌクレオチドは、プラスミドまたは発現ベクターではない。
【００７２】
一実施形態では、本明細書に開示されるＣｐＧオリゴヌクレオチドは、ＷＯ２００７／０２６１９０の段落１３４〜１４７に記載されるように、例えば、塩基および／または糖における置換または修飾を含む。
【００７３】
一実施形態では、本発明のＣｐＧオリゴヌクレオチドは、化学修飾される。化学修飾の例は、当業者に公知であり、例えば、Ｕｈｌｍａｎｎ  Ｅ．ら（１９９０年）、Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．９０：５４３、Ｓ．Ａｇｒａｗａｌ編Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ、Ｔｏｔｏｗａ、ＵＳＡ  １９９３年；Ｃｒｏｏｋｅ，Ｓ．Ｔ．ら（１９９６年）Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．３６：１０７〜１２９頁；およびＨｕｎｚｉｋｅｒ  Ｊ．ら、（１９９５年）、Ｍｏｄ．Ｓｙｎｔｈ．Ｍｅｔｈｏｄｓ７：３３１〜４１７頁に記載されている。本発明のオリゴヌクレオチドは、１つまたは複数の修飾を有してもよく、各修飾は、天然ＤＮＡまたはＲＮＡからなる同一配列のオリゴヌクレオチドと比較して、特定のホスホジエステルヌクレオシド内架橋に、および／または、特定のβ−Ｄ−リボース単位に、および／または、特定の天然ヌクレオシド塩基位置に位置する。
【００７４】
本発明のいくつかの実施形態では、ＣｐＧ含有核酸は、当業者に公知の方法に従って、免疫原性担体と単に混合してもよい（例えば、ＷＯ０３／０２４４８０参照のこと）。
【００７５】
本発明の特定の実施形態では、本明細書に開示されるワクチンはいずれも、２μｇ〜１００ｍｇのＣｐＧオリゴヌクレオチド、好ましくは０．１ｍｇ〜５０ｍｇのＣｐＧオリゴヌクレオチド、好ましくは０．２ｍｇ〜１０ｍｇのＣｐＧオリゴヌクレオチド、好ましくは０．３ｍｇ〜５ｍｇのＣｐＧオリゴヌクレオチド、好ましくは０．３ｍｇ〜５ｍｇのＣｐＧオリゴヌクレオチド、いっそう好ましくは０．５〜２ｍｇのＣｐＧオリゴヌクレオチド、いっそう好ましくは０．７５〜１．５ｍｇのＣｐＧオリゴヌクレオチドを含む。好ましい一実施形態では、本明細書に開示されるワクチンはいずれも、約１ｍｇのＣｐＧオリゴヌクレオチドを含む。
【００７６】
肺炎球菌ワクチン
本発明の肺炎球菌ワクチンは、通常、コンジュゲートしている莢膜糖類抗原を含み、糖類は、少なくとも７種の血清型の肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）に由来する。肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）莢膜糖類の数は、７種の異なる血清型（すなわち「ｖ」、価）〜２３種の異なる血清型（２３ｖ）の範囲であり得る。一実施形態では、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２または２３種の異なる血清型がある。一実施形態では、１０または１１種の異なる血清型がある。一実施形態では、７種または１３種の異なる血清型がある。莢膜糖類抗原は、本明細書において以下に記載されるように担体タンパク質とコンジュゲートしている。
【００７７】
本発明の別の実施形態では、ワクチンは、コンジュゲートしている肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）糖類およびコンジュゲートしていない肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）糖類を含み得る。好ましくは糖類血清型の総数は、２３以下である。例えば、ワクチンは、７種のコンジュゲートしている血清型および１６種のコンジュゲートしていない糖類を含み得る。別の実施形態では、ワクチンは、１３種のコンジュゲートしている血清型および１０種のコンジュゲートしていない糖類を含み得る。同様に、ワクチンは、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５または１６種のコンジュゲートしている糖類および１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８または７種のコンジュゲートしていない糖類をそれぞれ含み得る。
【００７８】
１．一実施形態では、本発明のワクチンは、血清型４、６Ｂ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆおよび２３Ｆに由来する、コンジュゲートしている肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）糖類を含む。
２．別の実施形態では、本発明のワクチンは、上記のポイント１に加え、血清型１に由来する、コンジュゲートしている肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）糖類を含む。
３．別の実施形態では、本発明のワクチンは、上記のポイント１または２に加え、血清型５に由来する、コンジュゲートしている肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）糖類を含む。
４．別の実施形態では、本発明のワクチンは、上記のポイント１、２または３に加え、血清型７Ｆに由来する、コンジュゲートしている肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）糖類を含む。
５．別の実施形態では、本発明のワクチンは、上記のポイント１、２、３または４に加え、血清型３に由来する、コンジュゲートしている肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）糖類を含む。
６．別の実施形態では、本発明のワクチンは、上記のポイント１、２、３、４または５に加え、血清型６Ａに由来する、コンジュゲートしている肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）糖類を含む。
７．別の実施形態では、本発明のワクチンは、上記のポイント１、２、３、４、５または６に加え、血清型１９Ａに由来する、コンジュゲートしている肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）糖類を含む。
８．別の実施形態では、本発明のワクチンは、上記のポイント１、２、３、４、５、６または７に加え、血清型２２Ｆに由来する、コンジュゲートしている肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）糖類を含む。
９．別の実施形態では、本発明のワクチンは、上記のポイント１、２、３、４、５、６、７または８に加え、血清型１５に由来する、コンジュゲートしている肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）糖類を含む。
１０．別の実施形態では、本発明のワクチンは、上記のポイント１、２、３、４、５、６、７、８または９に加え、血清型８に由来する、コンジュゲートしている肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）糖類を含む。
１１．別の実施形態では、本発明のワクチンは、上記のポイント１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０に加え、血清型１２Ｆに由来する、コンジュゲートしている肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）糖類を含む。
１２．別の実施形態では、本発明のワクチンは、上記のポイント１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または１１に加え、血清型２に由来する、コンジュゲートしている肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）糖類を含む。
１３．別の実施形態では、本発明のワクチンは、上記のポイント１、２、３、４、５、６、７、８、９、１１または１２に加え、血清型９Ｎに由来する、コンジュゲートしている肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）糖類を含む。
１４．別の実施形態では、本発明のワクチンは、上記のポイント１、２、３、４、５、６、７、８、９、１１、１２または１３に加え、血清型１０Ａに由来する、コンジュゲートしている肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）糖類を含む。
１５．別の実施形態では、本発明のワクチンは、上記のポイント１、２、３、４、５、６、７、８、９、１１、１２、１３または１４に加え、血清型１１Ａに由来する、コンジュゲートしている肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）糖類を含む。
１６．別の実施形態では、本発明のワクチンは、上記のポイント１、２、３、４、５、６、７、８、９、１１、１２、１３、１４または１５に加え、血清型１１Ａに由来する、コンジュゲートしている肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）糖類を含む。
１７．別の実施形態では、本発明のワクチンは、上記のポイント１、２、３、４、５、６、７、８、９、１１、１２、１３、１４、１５または１６に加え、血清型１７Ｆに由来する、コンジュゲートしている肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）糖類を含む。
１８．別の実施形態では、本発明のワクチンは、上記のポイント１、２、３、４、５、６、７、８、９、１１、１２、１３、１４、１５、１６または１７に加え、血清型２０に由来する、コンジュゲートしている肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）糖類を含む。
１９．別の実施形態では、本発明のワクチンは、上記のポイント１、２、３、４、５、６、７、８、９、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７または１８に加え、血清型３３Ｆに由来する、コンジュゲートしている肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）糖類を含む。
【００７９】
一実施形態では、本発明のワクチンは、血清型４、６Ｂ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆおよび２３Ｆに由来する、コンジュゲートしている肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）糖類を含む。
【００８０】
一実施形態では、本発明のワクチンは、血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆおよび２３Ｆに由来する、コンジュゲートしている肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）糖類を含む。
【００８１】
一実施形態では、本発明のワクチンは、血清型１、４、５、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆおよび２３Ｆに由来する、コンジュゲートしている肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）糖類を含む。
【００８２】
一実施形態では、本発明のワクチンは、血清型１、３、４、５、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆおよび２３Ｆに由来する、コンジュゲートしている肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）糖類を含む。
【００８３】
好ましい実施形態では、莢膜糖類抗原は、ＴＴ、ＤＴ、ＣＲＭ１９７、ＴＴの断片Ｃ、ＰｈｔＤ、ＰｈｔＤＥ融合物（特に、ＷＯ０１／９８３３４およびＷＯ０３／５４００７に記載されるもの）、解毒されたニューモリシンおよびプロテインＤからなる群から独立に選択される担体タンパク質とコンジュゲートしている。
【００８４】
好ましい実施形態では、莢膜糖類抗原は、ＤＴ（ジフテリア毒素）、ＴＴ（破傷風トキソイド（ｔｏｘｏｉｄ））またはＴＴの断片Ｃ、ＣＲＭ１９７（ジフテリア毒素の非毒性であるが、抗原性的には同一である変異体）その他のＤＴ点突然変異体、例えば、ＣＲＭ１７６、ＣＲＭ２２８、ＣＲＭ４５（ＵｃｈｉｄａらＪ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２１８；３８３８〜３８４４頁、１９７３年）、ＣＲＭ９、ＣＲＭ４５、ＣＲＭ１０２、ＣＲＭ１０３およびＣＲＭ１０７ならびにＧｅｎｅｔｉｃａｌｌｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ  Ｔｏｘｉｎｓ、Ｅｄ：Ｆｒａｎｋｅｌ、Ｍａｅｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ  Ｉｎｃ、１９９２中、ＮｉｃｈｏｌｌｓおよびＹｏｕｌｅによって記載されるその他の突然変異体、Ｇｌｕ−１４８の欠失またはＡｓｐ、ＧｌｎもしくはＳｅｒへの突然変異および／またはＡｌａ１５８の欠失またはＧｌｙへの突然変異およびＵＳ４７０９０１７またはＵＳ４９５０７４０に開示されるその他の突然変異、少なくとも１個以上の残基Ｌｙｓ５１６、Ｌｙｓ５２６、Ｐｈｅ５３０および／またはＬｙｓ５３４の突然変異ならびにＵＳ５９１７０１７またはＵＳ６４５５６７３に開示されるその他の突然変異またはＵＳ５８４３７１１に開示される断片、肺炎球菌ニューモリシン（Ｋｕｏら（１９９５年）Ｉｎｆｅｃｔ  ｌｍｍｕｎ６３；２７０６〜１３頁）、例えば、何らかの方法で解毒されたｐｌｙ、例えば、ｄＰＬＹ−ＧＭＢＳ（ＷＯ０４０８１５１５、ＰＣＴ／ＥＰ２００５／０１０２５８）またはｄＰＬＹ−ｆｏｒｍｏｌ、ＰｈｔＸ、例えば、ＰｈｔＡ、ＰｈｔＢ、ＰｈｔＤ、ＰｈｔＥ（ＰｈｔＡ、ＰｈｔＢ、ＰｈｔＤまたはＰｈｔＥの配列は、ＷＯ００／３７１０５またはＷＯ００／３９２９９に開示されている）ならびにＰｈｔタンパク質の融合物、例えば、ＰｈｔＤＥ融合物、ＰｈｔＢＥ融合物、Ｐｈｔ  Ａ−Ｅ（ＷＯ０１／９８３３４、ＷＯ０３／５４００７、ＷＯ２００９／０００８２６）、ＯＭＰＣ（髄膜炎菌性外膜タンパク質−通常、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂから抽出される−ＥＰ０３７２５０１）、ＰｏｒＢ（髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）由来）、ＰＤ（インフルエンザ菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）タンパク質Ｄ−例えば、ＥＰ０５９４６１０Ｂ参照のこと）またはその免疫学的機能的同等物、合成ペプチド（ＥＰ０３７８８８１、ＥＰ０４２７３４７）、熱ショックタンパク質（ＷＯ９３／１７７１２、ＷＯ９４／０３２０８）、百日咳タンパク質（ＷＯ９８／５８６６８、ＥＰ０４７１１７７）、サイトカイン、リンホカイン、増殖因子またはホルモン（ＷＯ９１／０１１４６）、種々の病原体由来抗原に由来する複数のヒトＣＤ４＋Ｔ細胞エピトープを含む人工タンパク質（Ｆａｌｕｇｉら（２００１年）Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ３１；３８１６〜３８２４頁）例えば、Ｎ１９タンパク質（Ｂａｒａｌｄｏｉら（２００４年）Ｉｎｆｅｃｔ  Ｉｍｍｕｎ７２；４８８４〜７頁）肺炎球菌表面タンパク質ＰｓｐＡ（ＷＯ０２／０９１９９８）、鉄取り込みタンパク質（ＷＯ０１／７２３３７）、Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）の毒素ＡまたはＢ（ＷＯ００／６１７６１）からなる群において選択される担��タンパク質とコンジュゲートしている。
【００８５】
一実施形態では、莢膜糖類抗原は、ＤＴ（ジフテリアトキソイド）とコンジュゲートしている。別の実施形態では、莢膜糖類抗原は、ＴＴ（破傷風トキソイド（ｔｏｘｏｉｄ））とコンジュゲートしている。
【００８６】
別の実施形態では、莢膜糖類抗原は、ＴＴの断片Ｃとコンジュゲートしている。
【００８７】
別の実施形態では、莢膜糖類抗原は、ＰＤ（インフルエンザ菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）タンパク質Ｄ−例えば、ＥＰ０５９４６１０Ｂ参照のこと）とコンジュゲートしている。
【００８８】
好ましい実施形態では、本発明の莢膜糖類抗原は、ＣＲＭ１９７タンパク質とコンジュゲートしている。ＣＲＭ１９７タンパク質は、ジフテリア毒素の非毒性の形態であるが、ジフテリア毒素と免疫学的に区別できない。ＣＲＭ１９７は、毒素産生性コリネファージβのニトロソグアニジン突然変異誘発によって作製した無毒のファージβ１９７ｔｏｘ−によって感染したジフテリア菌（Ｃ．ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ）によって産生される（Ｕｃｈｉｄａ，Ｔ．ら１９７１年、Ｎａｔｕｒｅ  Ｎｅｗ  Ｂｉｏｌｏｇｙ２３３：８〜１１頁）。ＣＲＭ１９７タンパク質は、ジフテリア毒素と同一の分子量を有するが、構造遺伝子中の一塩基変化（グアニンからアデニンへ）によって異なる。この一塩基変化が、成熟タンパク質では、グルタミン酸のグリシンとの）アミノ酸置換を引き起こし、ジフテリア毒素の毒性を消去する。ＣＲＭ１９７タンパク質は、糖類の、安全で有効なＴ細胞依存性担体である。ＣＭＲ１９７およびその製造についてのさらなる詳細は、例えば、ＵＳ５，６１４，３８２に見ることができる。
【００８９】
一実施形態（ｅｍｂｏｄｉｍｅｎｅｔ）では、タンパク質担体が、組成物中で２種以上の糖類にとって同一である場合は、糖類は、タンパク質担体の同一分子とコンジュゲートしてもよい（コンジュゲートしている２種のさらなる異なる糖類を有する担体分子）［例えば、ＷＯ０４／０８３２５１参照のこと］。
【００９０】
あるいは、糖類は、タンパク質担体の異なる分子と各々個々にコンジュゲートしていてもよい（コンジュゲートしている１種の糖類のみを有するタンパク質担体の各分子）。前記実施形態では、莢膜糖類は、担体タンパク質と個々にコンジュゲートしているといわれる。
【００９１】
一実施形態では、本発明の莢膜糖類抗原は、種々の肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型に由来するものであり、１種または複数の担体タンパク質（ｐｒｏｔｉｅｉｎ）とコンジュゲートしている。一実施形態では、本発明のワクチンは、ＣＲＭ１９７が担体タンパク質である、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２または２３種の異なる血清型莢膜糖類コンジュゲートを含む。
【００９２】
一実施形態では、本発明のワクチンは、タンパク質Ｄが担体タンパク質である、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２または２３種の異なる血清型の莢膜糖類コンジュゲートを含む。
【００９３】
一実施形態では、血清型１、２、３、４、５、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｎ、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１７Ｆ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２０、２２Ｆ、２３Ｆまたは３３Ｆに由来する糖類が、タンパク質Ｄとコンジュゲートしている。
【００９４】
一実施形態では、血清型１、２、３、４、５、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｎ、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１７Ｆ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２０、２２Ｆ、２３Ｆまたは３３Ｆに由来する糖類が、ＣＲＭ１９７とコンジュゲートしている。
【００９５】
一実施形態では、少なくとも血清型１および３、１および４、１および５、１および６Ａ、１および６Ｂ、１および７、１および９Ｖ、１および１４、１および２２Ｆ、１および２３Ｆ、３および４、３および５、３および６Ａ、３および６Ｂ、３および７Ｆ、３および９Ｖ、３および１４、３および２２Ｆ、３および２３Ｆ、４および５、４および６Ａ、４および６Ｂ、４および７Ｆ、４および９Ｖ、４および１４、４および２２Ｆ、４および２３Ｆ、５および６Ａ、５および６Ｂ、５および７Ｆ、５および９Ｖ、５および１４、５および２２Ｆ、５および２３Ｆ、６Ａおよび６Ｂ、６Ａおよび７Ｆ、６Ａおよび９Ｖ、６Ａおよび１４、６Ａおよび２２Ｆ、６Ａおよび２３Ｆ、６Ｂおよび７Ｆ、６Ｂおよび９Ｖ、６Ｂおよび１４、６Ｂおよび２２Ｆ、６Ｂおよび２３Ｆ、７Ｆおよび９Ｖ、７Ｆおよび１４、７Ｆおよび２２Ｆ、７Ｆおよび２３Ｆ、９Ｖおよび１４、９Ｖおよび２２Ｆ、９Ｖおよび２３Ｆ、１４および２２Ｆ、１４および２３Ｆまたは２２Ｆおよび２３Ｆに由来する糖類が、ＣＲＭ１９７とコンジュゲートしている。
【００９６】
一実施形態では、少なくとも血清型１、３および４、１、３および５、１、３および６Ａ、１、３および６Ｂ、１、３および７Ｆ、１、３および９Ｖ、１、３および１４、３、４および７Ｆ、３、４および５、３、４および７Ｆ、３、４および９Ｖ、３、４および１４、４、５および７Ｆ、４、５および９Ｖ、４、５および１４、５、７Ｆおよび９Ｖ、５、７Ｆおよび１４、７Ｆ、９Ｖおよび１４、１、３、４および５、３、４、５および７Ｆ、４、５、７Ｆおよび９Ｖ、４、５、７Ｆおよび１４、４、５、９Ｖおよび１４、４、７Ｆ、９Ｖおよび１４、５、７Ｆ、９Ｖおよび１４または４、５、７Ｆ、９Ｖおよび１４に由来する糖類が、ＣＲＭ１９７とコンジュゲートしている。
【００９７】
一実施形態では、少なくとも血清型１および３、１および４、１および５、１および６Ａ、１および６Ｂ、１および７、１および９Ｖ、１および１４、１および２２Ｆ、１および２３Ｆ、３および４、３および５、３および６Ａ、３および６Ｂ、３および７Ｆ、３および９Ｖ、３および１４、３および２２Ｆ、３および２３Ｆ、４および５、４および６Ａ、４および６Ｂ、４および７Ｆ、４および９Ｖ、４および１４、４および２２Ｆ、４および２３Ｆ、５および６Ａ、５および６Ｂ、５および７Ｆ、５および９Ｖ、５および１４、５および２２Ｆ、５および２３Ｆ、６Ａおよび６Ｂ、６Ａおよび７Ｆ、６Ａおよび９Ｖ、６Ａおよび１４、６Ａおよび２２Ｆ、６Ａおよび２３Ｆ、６Ｂおよび７Ｆ、６Ｂおよび９Ｖ、６Ｂおよび１４、６Ｂおよび２２Ｆ、６Ｂおよび２３Ｆ、７Ｆおよび９Ｖ、７Ｆおよび１４、７Ｆおよび２２Ｆ、７Ｆおよび２３Ｆ、９Ｖおよび１４、９Ｖおよび２２Ｆ、９Ｖおよび２３Ｆ、１４および２２Ｆ、１４および２３Ｆまたは２２Ｆおよび２３Ｆに由来する糖類が、タンパク質Ｄとコンジュゲートしている。
【００９８】
一実施形態では、少なくとも血清型１、３および４、１、３および５、１、３および６Ａ、１、３および６Ｂ、１、３および７Ｆ、１、３および９Ｖ、１、３および１４、３、４および７Ｆ、３、４および５、３、４および７Ｆ、３、４および９Ｖ、３、４および１４、４、５および７Ｆ、４、５および９Ｖ、４、５および１４、５、７Ｆおよび９Ｖ、５、７Ｆおよび１４、７Ｆ、９Ｖおよび１４、１、３、４および５、３、４、５および７Ｆ、４、５、７Ｆおよび９Ｖ、４、５、７Ｆおよび１４、４、５、９Ｖおよび１４、４、７Ｆ、９Ｖおよび１４、５、７Ｆ、９Ｖおよび１４または４、５、７Ｆ、９Ｖおよび１４に由来する糖類が、タンパク質Ｄとコンジュゲートしている。
【００９９】
一実施形態では、本発明のワクチンは、ＣＲＭ１９７が担体タンパク質である、７種の異なる血清型の莢膜糖類コンジュゲートを含む。
【０１００】
一実施形態では、本発明のワクチンは、タンパク質Ｄが担体タンパク質である、７種の異なる血清型の莢膜糖類コンジュゲートを含む。
【０１０１】
一実施形態では、本発明のワクチンは、ＣＲＭ１９７が担体タンパク質である、１０種の異なる血清型の莢膜糖類コンジュゲートを含む。
【０１０２】
一実施形態では、本発明のワクチンは、タンパク質Ｄが担体タンパク質である、１０種の異なる血清型の莢膜糖類コンジュゲートを含む。
【０１０３】
一実施形態では、本発明のワクチンは、ＣＲＭ１９７が担体タンパク質である、１１種の異なる血清型の莢膜糖類コンジュゲートを含む。
【０１０４】
一実施形態では、本発明のワクチンは、タンパク質Ｄが担体タンパク質である、１１種の異なる血清型の莢膜糖類コンジュゲートを含む。
【０１０５】
一実施形態では、本発明のワクチンは、ＣＲＭ１９７が担体タンパク質である、１３種の異なる血清型の莢膜糖類コンジュゲートを含む。
【０１０６】
一実施形態では、本発明のワクチンは、タンパク質Ｄが担体タンパク質である、１３種の異なる血清型の莢膜糖類コンジュゲートを含む。
【０１０７】
一実施形態では、本発明のワクチンは、ＣＲＭ１９７が担体タンパク質である、２３種の異なる血清型の莢膜糖類コンジュゲートを含む。
【０１０８】
一実施形態では、本発明のワクチンは、タンパク質Ｄが担体タンパク質である、２３種の異なる血清型の莢膜糖類コンジュゲートを含む。
【０１０９】
一実施形態では、本発明のワクチンは、タンパク質Ｄとコンジュゲートしている、血清型４、６Ｂ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆおよび２３Ｆに由来する糖類を含む。
【０１１０】
一実施形態では、本発明のワクチンは、ＣＲＭ１９７とコンジュゲートしている、血清型４、６Ｂ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆおよび２３Ｆに由来する糖類を含む。
【０１１１】
一実施形態では、本発明のワクチンは、タンパク質Ｄとコンジュゲートしている、血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆおよび２３Ｆに由来する糖類を含む。
【０１１２】
一実施形態では、本発明のワクチンは、ＣＲＭ１９７とコンジュゲートしている、血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆおよび２３Ｆに由来する糖類を含む。
【０１１３】
一実施形態では、本発明のワクチンは、タンパク質Ｄとコンジュゲートしている、血清型１、４、５、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆおよび２３Ｆに由来する糖類を含む。
【０１１４】
一実施形態では、本発明のワクチンは、ＣＲＭ１９７とコンジュゲートしている、血清型１、４、５、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆおよび２３Ｆに由来する糖類を含む。
【０１１５】
一実施形態では、本発明のワクチンは、タンパク質Ｄとコンジュゲートしている、血清型１、３、４、５、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆおよび２３Ｆに由来する糖類を含む。
【０１１６】
一実施形態では、本発明のワクチンは、ＣＲＭ１９７とコンジュゲートしている、血清型１、３、４、５、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆおよび２３Ｆに由来する糖類を含む。
【０１１７】
一実施形態では、本発明のワクチンは、タンパク質Ｄとコンジュゲートしている、血清型１、２、３、４、５、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｎ、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１７Ｆ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２０、２２Ｆ、２３Ｆおよび３３Ｆに由来する糖類を含む。
【０１１８】
一実施形態では、本発明のワクチンは、ＣＲＭ１９７とコンジュゲートしている、血清型１、２、３、４、５、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｎ、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１７Ｆ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２０、２２Ｆ、２３Ｆおよび３３Ｆに由来する糖類を含む。
【０１１９】
一実施形態では、本発明のワクチンは、タンパク質Ｄとコンジュゲートしている、血清型１、４、５、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４および２３Ｆに由来する糖類、破傷風トキソイド（ＴＴ）とコンジュゲートしている、血清型１８Ｃに由来する糖類、ならびにジフテリアトキソイド（ＤＴ）とコンジュゲートしている、血清型１９Ｆに由来する糖類を含む。
【０１２０】
一実施形態では、本発明のワクチンは、破傷風トキソイド（ＴＴ）とコンジュゲートしている、血清型１、４、５、７Ｆ、９Ｖ、１９Ｆおよび２３Ｆに由来する糖類、ならびにジフテリアトキソイド（ＤＴ）とコンジュゲートしている、血清型３、１４  １８Ｃおよび６Ｂに由来する糖類を含む。
【０１２１】
一実施形態では、本発明のワクチンは、タンパク質Ｄと個々にコンジュゲートしている、血清型１、４、５、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４および２３Ｆに由来する糖類、破傷風トキソイド（ＴＴ）とコンジュゲートしている、血清型１８Ｃに由来する糖類、ならびにジフテリアトキソイド（ＤＴ）とコンジュゲートしている、血清型１９Ｆに由来する糖類を含む。
【０１２２】
一実施形態では、本発明のワクチンは、破傷風トキソイド（ＴＴ）と個々にコンジュゲートしている血清型１、４、５、７Ｆ、９Ｖ、１９Ｆおよび２３Ｆに由来する糖類、ならびにジフテリアトキソイド（ＤＴ）とコンジュゲートしている、血清型３、１４  １８Ｃおよび６Ｂに由来する糖類を含む。
【０１２３】
本明細書を通じて、用語「糖類」とは、ポリサッカライドまたはオリゴ糖を示す場合があり、その両方を含む。肺炎球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の莢膜ポリサッカライドは、最大８の糖残基を含み得る反復オリゴ糖単位を含む。重要な肺炎球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型のオリゴ糖単位の概説については、ＪＯＮＥＳ，Ｃｈｒｉｓｔｏｐｈｅｒ．Ｖａｃｃｉｎｅｓ  ｂａｓｅｄ  ｏｎ  ｔｈｅ  ｃｅｌｌ  ｓｕｒｆａｃｅ  ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅｓ  ｏｆ  ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ  ｂａｃｔｅｒｉａ．Ａｎ．Ａｃａｄ．Ｂｒａｓ．Ｃｉｅｎｃ、２００５年６月、第７７巻、第２号、２９３〜３２４頁、表ＩＩ  ＩＳＳＮ  ０００１−３７６５参照のこと。
【０１２４】
本発明の莢膜糖類抗原は、当業者に公知の標準技術によって調製する。通常、ポリサッカライドコンジュゲートは、分離工程によって調製し、単回投与量製剤に製剤する。例えば、一実施形態では、各肺炎球菌ポリサッカライド血清型を、ダイズベースの培地で増殖させる。次いで、個々のポリサッカライドを、遠心分離、沈殿、限外濾過およびカラムクロマトグラフィーによって精製する。精製したポリサッカライドを、化学的に活性化して、担体タンパク質と反応できる糖類を作製する。各莢膜ポリサッカライドは、活性化されると、担体タンパク質に別個にコンジュゲートされて、複合糖質を形成する。一実施形態では、各莢膜ポリサッカライドは、同一の担体タンパク質とコンジュゲートしている。この実施形態では、コンジュゲーションは、還元的アミノ化によって達成する。ポリサッカライドの化学的活性化およびその後の担体タンパク質へのコンジュゲーションは、従来法によって達成する。例えば、米国特許第４，６７３，５７４号および同４，９０２，５０６号参照のこと。
【０１２５】
莢膜ポリサッカライドを、担体タンパク質にコンジュゲートした後、ポリサッカライド−タンパク質コンジュゲートを、種々の技術によって精製する（ポリサッカライド−タンパク質コンジュゲートの量に関して濃縮する）。これらの技術として、濃縮／ダイアフィルトレーション操作、沈殿／溶出、カラムクロマトグラフィーおよびデプス濾過が挙げられる。例えば、ＵＳ２００７／０１８４０７２またはＷＯ２００８／０７９６５３参照のこと。個々の複合糖質を精製した後、それらを配合して本発明のワクチンを製剤する。本発明の免疫原性組成物の製剤は、当技術分野で承認されている方法を使用して達成できる。例えば、個々の肺炎球菌コンジュゲートは、生理学的に許容できるビヒクルを用いて製剤し、組成物を調製できる。このようなビヒクルの例として、それだけには限らないが、水、緩衝溶液、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、液体ポリエチレングリコール）およびデキストロース溶液が挙げられる。
【０１２６】
各ワクチン用量中のコンジュゲートの量は、通常のワクチンにおいて重大な副作用を伴わずに免疫防御反応を誘導する量として選択される。このような量は、どの特定の免疫原が使用されるか、どのように提示されるかに応じて変わる。一実施形態では、各用量は、０．１〜１０００μｇの各糖類または糖類−タンパク質コンジュゲート、好ましくは２〜１００μｇ、最も好ましくは４〜４０μｇを含む。
【０１２７】
一実施形態では、各用量は、０．１から２０μｇ、１から１０μｇまたは１から５μｇの間の糖類を含む。
【０１２８】
一実施形態では、本発明のワクチンは、各肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）莢膜糖類を、０．１〜２０μｇ、０．５〜１０μｇ、０．５〜５μｇまたは１〜５μｇの間の糖類という用量で含有する。一実施形態では、莢膜糖類は、種々の投与量で存在し得、例えば、いくつかの莢膜糖類は、約または正確に２μｇの用量で存在し得、または、いくつかの莢膜糖類は、約または正確に４μｇの用量で存在し得る。
【０１２９】
本発明の特定の実施形態では、ワクチンは、ＣＲＭ１９７と個々にコンジュゲートしている、血清型４、６Ｂ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆおよび２３Ｆに由来する糖類を含有し、各肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）莢膜糖類は、４μｇの用量である６Ｂを除いて、２μｇの用量である。
【０１３０】
本発明の特定の実施形態では、ワクチンは、ＣＲＭ１９７と個々にコンジュゲートしている、血清型４、６Ｂ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆおよび２３Ｆに由来する糖類を含有し、各肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）莢膜糖類は、８μｇの用量である６Ｂを除いて、４μｇの用量である。
【０１３１】
本発明の特定の実施形態では、ワクチンは、ＣＲＭ１９７と個々にコンジュゲートしている、血清型４、６Ｂ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆおよび２３Ｆに由来する糖類を含有し、各肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）莢膜糖類は、１２μｇの用量である６Ｂを除いて、６μｇの用量である。
【０１３２】
本発明の特定の実施形態では、ワクチンは、ＣＲＭ１９７と個々にコンジュゲートしている、血清型４、６Ｂ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆおよび２３Ｆに由来する糖類を含有し、各肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）莢膜糖類は、１６μｇの用量である６Ｂを除いて、８μｇの用量である。
【０１３３】
本発明の特定の実施形態では、ワクチンは、ＣＲＭ１９７と個々にコンジュゲートしている、血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆおよび２３Ｆに由来する糖類を含有し、各肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）莢膜糖類は、４μｇの用量である６Ｂを除いて、２μｇの用量である。
【０１３４】
本発明の特定の実施形態では、ワクチンは、ＣＲＭ１９７と個々にコンジュゲートしている、血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆおよび２３Ｆに由来する糖類を含有し、各肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）莢膜糖類は、８μｇの用量である６Ｂを除いて、４μｇの用量である。
【０１３５】
本発明の特定の実施形態では、ワクチンは、ＣＲＭ１９７と個々にコンジュゲートしている、血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆおよび２３Ｆに由来する糖類を含有し、ここで、各肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）莢膜糖類は、１２μｇの用量である６Ｂを除いて、６μｇの用量である。
【０１３６】
本発明の特定の実施形態では、ワクチンは、ＣＲＭ１９７と個々にコンジュゲートしている、血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆおよび２３Ｆに由来する糖類を含有し、ここで、各肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）莢膜糖類は、１６μｇの用量である６Ｂを除いて、８μｇの用量である。
【０１３７】
本発明の特定の実施形態では、本明細書に開示されるワクチンは、５〜５００μｇ、好ましくは１０〜２００μｇ、さらにより好ましくは２０〜１００μｇのＣＲＭ１９７担体タンパク質を含有する。
【０１３８】
本発明の一実施形態では、本明細書に開示されるワクチンは、２０〜５０μｇ、好ましくは２０〜４０μｇ、さらにより好ましくは２５〜３０μｇ、さらにより好ましくは約２８または２９μｇのＣＲＭ１９７担体タンパク質を含有する。
【０１３９】
本発明の一実施形態では、本明細書に開示されるワクチンは、４０〜１００μｇ、好ましくは４０〜８０μｇ、さらにより好ましくは５０〜６０μｇ、さらにより好ましくは約５７または５８μｇのＣＲＭ１９７担体タンパク質を含有する。
【０１４０】
本発明の特定の実施形態では、本明細書に開示されるワクチンは、賦形剤として塩化ナトリウムおよび／またはコハク酸ナトリウムバッファーを含有する。
【０１４１】
一実施形態では、本明細書において使用される予定の肺炎球菌ワクチンは、７価のコンジュゲート肺炎球菌ワクチン（Ｐｒｅｖｅｎａｒ）またはＵＳ２００７／０１８４０７２に開示される１３価のコンジュゲート肺炎球菌ワクチン−Ｐｒｅｖｅｎａｒ１３）である。７価Ｐｒｅｖｅｎａｒは、ＣＲＭ１９７と個々にコンジュゲートしている、血清型４、６Ｂ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆおよび２３Ｆに由来する糖類を含有する。１３価Ｐｒｅｖｅｎａｒは、ＣＲＭ１９７と個々にコンジュゲートしている、血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆおよび２３Ｆに由来する糖類を含有する。
【０１４２】
一実施形態では、本発明のワクチンは、タンパク質Ｄと個々にコンジュゲートしている、血清型１、４、５、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４および２３Ｆに由来する糖類、破傷風トキソイド（ＴＴ）とコンジュゲートしている、血清型１８Ｃに由来する糖類、ならびにジフテリアトキソイド（ＤＴ）とコンジュゲートしている、血清型１９Ｆに由来する糖類を含み、ここで、各肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）莢膜糖類は、３μｇの用量である４、１８Ｃおよび１９Ｆについてを除いて、１μｇの用量である。本発明の特定の実施形態では、前記ワクチンは、５〜５００μｇ、好ましくは７〜１００μｇのタンパク質Ｄ担体タンパク質と、２〜２００μｇ、好ましくは４〜５０μｇの破傷風トキソイド（ＴＴ）担体タンパク質と、１〜１００μｇ、好ましくは２〜２５μｇのジフテリアトキソイド（ＤＴ）担体タンパク質とを含有する。本発明の特定の実施形態では、前記ワクチンは、９〜１６μｇのタンパク質Ｄ担体タンパク質と、５〜１０μｇの破傷風トキソイド（ＴＴ）担体タンパク質と、３〜６μｇのジフテリアトキソイド（ＤＴ）担体タンパク質とを含有する。
【０１４３】
一実施形態では、本発明のワクチンは、タンパク質Ｄと個々にコンジュゲートしている、血清型１、４、５、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４および２３Ｆに由来する糖類、破傷風トキソイド（ＴＴ）とコンジュゲートしている、血清型１８Ｃに由来する糖類、ならびにジフテリアトキソイド（ＤＴ）とコンジュゲートしている、血清型１９Ｆに由来する糖類を含み、ここで、各肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）莢膜糖類は、６μｇの用量である４、１８Ｃおよび１９Ｆについてを除いて、２μｇの用量である。本発明の特定の実施形態では、前記ワクチンは、１０〜１０００μｇ、好ましくは１４〜２００μｇのタンパク質Ｄ担体タンパク質と、４〜４００μｇ、好ましくは８〜１００μｇの破傷風トキソイド（ＴＴ）担体タンパク質と、２〜２００μｇ、好ましくは４〜５０μｇのジフテリアトキソイド（ＤＴ）担体タンパク質とを含有する。本発明の特定の実施形態では、前記ワクチンは、１８〜３２μｇのタンパク質Ｄ担体タンパク質と、１０〜２０μｇの破傷風トキソイド（ＴＴ）担体タンパク質と、６〜１２μｇのジフテリアトキソイド（ＤＴ）担体タンパク質とを含有する。
【０１４４】
一実施形態では、本発明のワクチンは、タンパク質Ｄと個々にコンジュゲートしている、血清型１、４、５、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４および２３Ｆに由来する糖類と、破傷風トキソイド（ＴＴ）とコンジュゲートしている、血清型１８Ｃに由来する糖類と、ジフテリアトキソイド（ＤＴ）とコンジュゲートしている、血清型１９Ｆに由来する糖類とを含み、ここで、各肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）莢膜糖類は、９μｇの用量である４、１８Ｃおよび１９Ｆについてを除いて３μｇの用量である。本発明の特定の実施形態では、前記ワクチンは、１５〜１５００μｇ、好ましくは２１〜３００μｇのタンパク質Ｄ担体タンパク質と、６〜６００μｇ、好ましくは１２〜１５０μｇの破傷風トキソイド（ＴＴ）担体タンパク質と、３〜３００μｇ、好ましくは６〜７５μｇのジフテリアトキソイド（ＤＴ）担体タンパク質とを含有する。本発明の特定の実施形態では、前記ワクチンは、２７〜４８μｇのタンパク質Ｄ担体タンパク質と、１５〜３０μｇの破傷風トキソイド（ＴＴ）担体タンパク質と、９〜１８μｇのジフテリアトキソイド（ＤＴ）担体タンパク質とを含有する。
【０１４５】
一実施形態では、本発明のワクチンは、タンパク質Ｄと個々にコンジュゲートしている、血清型１、４、５、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４および２３Ｆに由来する糖類と、破傷風トキソイド（ＴＴ）とコンジュゲートしている、血清型１８Ｃに由来する糖類と、ジフテリアトキソイド（ＤＴ）とコンジュゲートしている、血清型１９Ｆに由来する糖類とを含み、ここで、各肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）莢膜糖類は、１２μｇの用量である４、１８Ｃおよび１９Ｆについてを除いて、４μｇの用量である。本発明の特定の実施形態では、前記ワクチンは、２０〜２０００μｇ、好ましくは２８〜４００μｇのタンパク質Ｄ担体タンパク質と、８〜８００μｇ、好ましくは１６〜２００μｇの破傷風トキソイド（ＴＴ）担体タンパク質と、４〜４００μｇ、好ましくは８〜１００μｇのジフテリアトキソイド（ＤＴ）担体タンパク質とを含有する。本発明の特定の実施形態では、前記ワクチンは、３６〜６４μｇのタンパク質Ｄ担体タンパク質と、２０〜４０μｇの破傷風トキソイド（ＴＴ）担体タンパク質と、１２〜２４μｇのジフテリアトキソイド（ＤＴ）担体タンパク質とを含有する。
【０１４６】
本発明の特定の実施形態では、本明細書に開示されるワクチンは、賦形剤として塩化ナトリウムバッファーを含有する。
【０１４７】
一実施形態では、本明細書において使用される予定の肺炎球菌ワクチンは、商品名Ｓｙｎｆｌｏｒｉｘ（商標）の下で販売される１０価コンジュゲート肺炎球菌ワクチンである。
【０１４８】
さらなるアジュバント（複数可）
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される肺炎球菌ワクチンは、本明細書に開示される少なくとも１種のＴＬＲ−９アゴニストアジュバントに加えて、少なくとも１、２または３種のアジュバントを含む。用語「アジュバント」とは、抗原に対する免疫応答を増強する化合物または混合物を指す。抗原は、主して送達系として、主に免疫モジュレーターとして作用するか、または両方の強力な特徴を有し得る。適したアジュバントとして、ヒトを含めた哺乳類において使用するのに適したものが挙げられる。
【０１４９】
ヒトにおいて使用してよい、公知の適した送達系タイプのアジュバントの例として、それだけには限らないが、ミョウバン（例えば、リン酸アルミニウム、硫酸アルミニウムまたは水酸化アルミニウム）、リン酸カルシウム、リポソーム、ＭＦ５９（４．３％  ｗ／ｖスクアレン、０．５％  ｗ／ｖポリソルベート８０（Ｔｗｅｅｎ  ８０）、０．５％  ｗ／ｖトリオレイン酸ソルビタン（Ｓｐａｎ  ８５））などの水中油型エマルション、モンタニドなどの油中水型エマルションおよびポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−コ−グリコリド）（ＰＬＧ）微粒子またはナノ粒子が挙げられる。
【０１５０】
ヒトにおいて使用してよい、公知の適した免疫調節タイプのアジュバントの例として、それだけには限らないが、アクイラツリー（Ａｑｕｉｌｌａ  ｔｒｅｅ）（ＱＳ２１、Ｑｕｉｌ  Ａ）の樹皮から得られるサポニン抽出物、ＭＰＬ（モノホスホリル脂質Ａ）、３ＤＭＰＬ（３−Ｏ−脱アシル化ＭＰＬ）またはＧＬＡ−ＡＱ、ＬＴ／ＣＴ突然変異体などのＴＬＲ４アゴニスト、種々のインターロイキン（例えば、ＩＬ−２、ＩＬ−１２）などのサイトカインまたはＧＭ−ＣＳＦなどが挙げられる。
【０１５１】
ヒトにおいて使用してよい、送達および免疫調節特徴の両方を有する公知の適した免疫調節タイプアジュバントの例として、それだけには限らないが、ＩＳＣＯＭＳ（例えば、Ｓｊｏｌａｎｄｅｒら（１９９８年）  Ｊ．Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ  Ｂｉｏｌ．６４：７１３；ＷＯ９０／０３１８４、ＷＯ９６／１１７１１、ＷＯ００／４８６３０、ＷＯ９８／３６７７２、ＷＯ００／４１７２０、ＷＯ０６／１３４４２３およびＷＯ０７／０２６１９０参照のこと）またはＴＬＲ４アゴニストおよび水中油型エマルションの組合せであるＧＬＡ−ＥＭが挙げられる。
【０１５２】
それだけには限らないが、動物実験をはじめとする獣医学適用には、完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）、フロイントの不完全アジュバント（ＩＦＡ）、エマルシゲン（Ｅｍｕｌｓｉｇｅｎ）、Ｎ−アセチル−ムラミル−Ｌ−トレオニル−Ｄ−イソグルタミン（ｔｈｒ−ＭＤＰ）、Ｎ−アセチル−ノル−ムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミン（ノル−ＭＤＰと呼ばれるＣＧＰ１１６３７）、Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミニル−Ｌ−アラニン−２−（１’−２’−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ヒドロキシホスホリルオキシ）−エチルアミン（ＭＴＰ−ＰＥと呼ばれるＣＧＰ１９８３５Ａ）および細菌から抽出した３種の成分を含有するＲＩＢＩ、モノホスホリル脂質Ａ、２％スクアレン／Ｔｗｅｅｎ  ８０エマルション中トレハロースジミコレートおよび細胞壁骨格（ＭＰＬ＋ＴＤＭ＋ＣＷＳ）を使用してよい。
【０１５３】
本明細書に開示される肺炎球菌ワクチンの有効性を増強するさらなる例示的アジュバントとして、それだけには限らないが、（１）水中油型エマルション製剤（ムラミルペプチド（以下参照のこと）または細菌細胞壁成分などのその他の特定の免疫刺激剤を含むか含まない）、例えば、（ａ）サブミクロンエマルションに顕微溶液化された、または大きな粒径のエマルションを作製するようボルテックス処理された、１０％スクアラン、０．４％  Ｔｗｅｅｎ  ８０、５％プルロニックブロックポリマーＬ１２１およびｔｈｒ−ＭＤＰを含有するＳＡＦおよび（ｂ）２％スクアレン、０．２％  Ｔｗｅｅｎ  ８０および１種または複数の細菌細胞壁成分、例えば、モノホスホリルリピド（ｍｏｎｏｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌ  ｌｉｐｉｄ）Ａ（ＭＰＬ）、トレハロースジミコレート（ＴＤＭ）および細胞壁骨格（ＣＷＳ）、好ましくはＭＰＬ＋ＣＷＳ（ＤＥＴＯＸ（商標））を含有する、ＲＩＢＩ（商標）アジュバントシステム（ＲＡＳ）、（Ｒｉｂｉ  Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍ、Ｈａｍｉｌｔｏｎ、ＭＴ）など、（２）などのサポニンアジュバント、使用することができるＱＳ２１、ＳＴＩＭＵＬＯＮ（商標）（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、Ｗｏｒｃｅｓｔｅｒ、ＭＡ）、Ａｂｉｓｃｏ（登録商標）（Ｉｓｃｏｎｏｖａ、Ｓｗｅｄｅｎ）やＩｓｃｏｍａｔｒｉｘ（登録商標）（Ｃｏｍｍｏｎｗｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｕｍ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ａｕｓｔｒａｌｉａ）またはさらなる界面活性剤を含まなくてもよいＩＳＣＯＭ（免疫刺激複合体）など、それらから作製した粒子、例えば、ＷＯ００／０７６２１、（３）完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）および不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ）、（４）サイトカイン、例えば、インターロイキン（例えば、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−１２（ＷＯ９９／４４６３６）など）、インターフェロン（例えば、γインターフェロン）、マクロファージコロニー刺激因子（Ｍ−ＣＳＦ）、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）など、（５）肺炎球菌糖類とともに使用する場合に、場合により、ミョウバンの実質的に不在下での（例えば、ＷＯ００／５６３５８参照のこと）、モノホスホリル脂質Ａ（ＭＰＬ）または３−Ｏ−脱アシル化ＭＰＬ（３ｄＭＰＬ）（例えば、ＧＢ−２２２０２２１、ＥＰ−Ａ−０６８９４５４参照のこと）、（６）３ｄＭＰＬの、例えば、ＱＳ２１および／または水中油型エマルション（例えば、ＥＰ−Ａ−０８３５３１８、ＥＰ−Ａ−０７３５８９８、ＥＰ−Ａ−０７６１２３１参照のこと）との組合せ、（７）ポリオキシエチレンエーテルまたはポリオキシエチレンエステル（例えば、ＷＯ９９／５２５４９参照のこと）、（８）オクトキシノール（ＷＯ０１／２１２０７）との組合せ中のポリオキシエチレンソルビタンエステル界面活性剤または少なくとも１種のさらなる非イオン性界面活性剤、例えば、オクトキシノール（ＷＯ０１／２１１５２）と組み合わせたポリオキシエチレンアルキルエーテルもしくはエステル界面活性剤、（９）サポニンおよび免疫刺激性オリゴヌクレオチド（例えば、ＣｐＧオリゴヌクレオチド）（ＷＯ００／６２８００）、（１０）免疫賦活薬および金属塩の粒子（例えば���ＷＯ００／２３１０５参照のこと）、（１１）サポニンおよび水中油型エマルション、例えば、ＷＯ９９／１１２４１、（１２）サポニン（例えば、ＱＳ２１）＋３ｄＭＰＬ＋ＩＭ２（場合により＋ステロール）例えば、ＷＯ９８／５７６５９、（１３）免疫刺激剤として作用し、組成物の有効性を増強するその他の物質が挙げられる。ムラミルペプチドとして、Ｎ−アセチル−ムラミル−Ｌ−トレオニル−Ｄ−イソグルタミン（ｔｈｒ−ＭＤＰ）、Ｎ−２５アセチル−ノルムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミン（ノル−ＭＤＰ）、Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタルニニル−Ｌ−アラニン−２−（１’−２’−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ヒドロキシホスホリルオキシ）−エチルアミンＭＴＰ−ＰＥ）などが挙げられる。
【０１５４】
好ましい一実施形態では、本明細書に開示される肺炎球菌ワクチンは、本明細書に開示される少なくとも１種のＴＬＲ−９アゴニストアジュバントに対してさらなるアジュバントとして、ミョウバン、水酸化アルミニウム、リン酸アルミニウムまたは硫酸アルミニウムを含む。
【０１５５】
本発明の特定の実施形態では、ワクチンは、ＣＲＭ１９７と個々にコンジュゲートしている、血清型４、６Ｂ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆおよび２３Ｆに由来する糖類を含有し、各肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）莢膜糖類は、４μｇの用量である６Ｂを除いて２μｇの用量であり、賦形剤として０．５ｍｇのリン酸アルミニウム、場合により、塩化ナトリウムおよびコハク酸ナトリウムバッファーをさらに含む。
【０１５６】
本発明の特定の実施形態では、ワクチンは、ＣＲＭ１９７と個々にコンジュゲートしている、血清型４、６Ｂ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆおよび２３Ｆに由来する糖類を含有し、各肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）莢膜糖類は、８μｇの用量である６Ｂを除いて４μｇの用量であり、賦形剤として、１ｍｇのリン酸アルミニウム、場合により、塩化ナトリウムおよびコハク酸ナトリウムバッファーをさらに含む。
【０１５７】
本発明の特定の実施形態では、ワクチンは、ＣＲＭ１９７と個々にコンジュゲートしている、血清型４、６Ｂ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆおよび２３Ｆに由来する糖類を含有し、各肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）莢膜糖類は、１２μｇの用量である６Ｂを除いて６μｇの用量であり、賦形剤として、１．５ｍｇのリン酸アルミニウム、場合により、塩化ナトリウムおよびコハク酸ナトリウムバッファーをさらに含む。
【０１５８】
本発明の特定の実施形態では、ワクチンは、ＣＲＭ１９７と個々にコンジュゲートしている、血清型４、６Ｂ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆおよび２３Ｆに由来する糖類を含有し、各肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）莢膜糖類は、１６μｇの用量である６Ｂを除いて８μｇの用量であり、賦形剤として、２ｍｇのリン酸アルミニウム、場合により、塩化ナトリウムおよびコハク酸ナトリウムバッファーをさらに含む。
【０１５９】
本発明の特定の実施形態では、ワクチンは、ＣＲＭ１９７と個々にコンジュゲートしている、血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆおよび２３Ｆに由来する糖類を含有し、各肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）莢膜糖類は、４μｇの用量である６Ｂを除いて２μｇの用量であり、賦形剤として、０．５ｍｇのリン酸アルミニウム、場合により、塩化ナトリウムおよびコハク酸ナトリウムバッファーをさらに含む。
【０１６０】
本発明の特定の実施形態では、ワクチンは、ＣＲＭ１９７と個々にコンジュゲートしている、血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆおよび２３Ｆに由来する糖類を含有し、各肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）莢膜糖類は、８μｇの用量である６Ｂを除いて４μｇの用量であり、賦形剤として、１ｍｇのリン酸アルミニウム、場合により、塩化ナトリウムおよびコハク酸ナトリウムバッファーをさらに含む。
【０１６１】
本発明の特定の実施形態では、ワクチンは、ＣＲＭ１９７と個々にコンジュゲートしている、血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆおよび２３Ｆに由来する糖類を含有し、各肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）莢膜糖類は、１２μｇの用量である６Ｂを除いて６μｇの用量であり、賦形剤として、１．５ｍｇのリン酸アルミニウム、場合により、塩化ナトリウムおよびコハク酸ナトリウムバッファーをさらに含む。
【０１６２】
本発明の特定の実施形態では、ワクチンは、ＣＲＭ１９７と個々にコンジュゲートしている、血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆおよび２３Ｆに由来する糖類を含有し、各肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）莢膜糖類は、１６μｇの用量である６Ｂを除いて８μｇの用量であり、賦形剤として、１．５ｍｇのリン酸アルミニウム、場合により、塩化ナトリウムおよびコハク酸ナトリウムバッファーをさらに含む。
【０１６３】
一実施形態では、肺炎球菌ワクチンは、７価のコンジュゲート肺炎球菌ワクチン（Ｐｒｅｖｅｎａｒ）またはＵＳ２００７／０１８４０７２（１３ｖＰｎＣ）に開示される１３価のコンジュゲート肺炎球菌ワクチンである。
【０１６４】
免疫無防備状態の対象
本発明の好ましい実施形態では、本発明のワクチンを用いてワクチン接種される予定の対象は、免疫無防備状態対象である。好ましくは前記免疫無防備状態（ｉｍｍｕｎｏｃｏｍｐｒｉｍｉｓｅｄ）対象は、ネコ、ヒツジ、ブタ、ウマ、ウシ、イヌまたはヒトなどの哺乳類である。最も好ましい実施形態では、前記対象は、ヒトである。
【０１６５】
免疫無防備状態の個体は、通常、感染作用物質による攻撃に対して、正常な体液性または細胞性防御を開始するための減弱または低減した能力を示す人と定義される。
【０１６６】
本発明の一実施形態では、肺炎球菌ワクチンを用いてワクチン接種される予定の免疫無防備状態対象は、免疫系を損ない、肺炎球菌疾患から保護するまたはこれを治療するには不十分である抗体応答しかもたらさない疾患または状態を患っている。
【０１６７】
一実施形態では、前記疾患は、主に、免疫不全障害である。前記主な免疫不全障害は、複合Ｔ−およびＢ−細胞免疫不全症、抗体欠損症、十分に明らかにされた症候群、免疫調節異常疾患、食細胞障害、自然免疫不全、自己炎症性障害および補体欠損症からなる群から選択されることが好ましい。
【０１６８】
一実施形態では、前記複合Ｔ−およびＢ−細胞免疫不全とは、γｃ欠損症、ＪＡＫ３欠損症、インターロイキン７受容体鎖α欠損症、ＣＤ４５欠損症またはＣＤ３δ／ＣＤ３ε欠損症、ＲＡＧ１／２欠損症、ＤＣＬＲＥ１Ｃ欠損症、アデノシンデアミナーゼ（ＡＤＡ）欠損症、細網異形成症、オーメン症候群、ＤＮＡリガーゼＩＶ型欠損症、ＣＤ４０リガンド欠損症、ＣＤ４０欠損症、プリンヌクレオシドホスホリラーゼ（ＰＮＰ）欠損症、ＭＨＣクラスＩＩ欠損症、ＣＤ３γ欠損症、ＣＤ８欠損症、ＺＡＰ−７０欠損症、ＴＡＰ−１／２欠損症およびウィングドヘリックス欠損症からなる群から選択される。
【０１６９】
一実施形態では、前記抗体欠損症は、Ｘ連鎖無ガンマグロブリン血症、ｂｔｋ欠損症、ブルトン型無ガンマグロブリン血症、μ−重鎖欠損症、Ｉ５欠損症、Ｉｇα欠損症、ＢＬＮＫ欠損症、免疫不全を伴う胸腺腫、分類不能型免疫不全（ＣＶＩＤ）、ＩＣＯＳ欠損症、ＣＤ１９欠損症、ＴＡＣＩ（ＴＮＦＲＳＦ１３Ｂ）欠損症、ＢＡＦＦ受容体欠損症、ＡＩＤ欠損症、ＵＮＧ欠損症、重鎖欠失、κ鎖欠損症、単離ＩｇＧサブクラス欠損症、ＩｇＧサブクラス欠損症を伴うＩｇＡ、選択的免疫グロブリンＡ欠損症、正常Ｂ細胞および正常Ｉｇ濃度を有する特異的抗原に対する特異的抗体欠損症、乳児期の一過性低ガンマグロブリン血症（ＴＨＩ）からなる群から選択される。
【０１７０】
一実施形態では、前記十分に明らかにされた症候群は、ウィスコット−アルドリッチ症候群、運動失調毛細血管拡張症、運動失調様症候群、ナイミーヘン症候群、ブルーム症候群、ディジョージ症候群（胸腺の異常と関連する場合）、軟骨−毛髪低形成症、シムケ症候群、ヘルマンスキー−プドラック症候群２型、高ＩｇＥ症候群、慢性粘膜皮膚カンジダ症からなる群から選択される。
【０１７１】
一実施形態では、前記免疫調節異常疾患は、チェディアック−東症候群、グリセリ症候群２型、パーフォリン欠損症、ＭＵＮＣ１３Ｄ欠損症、シンタキシン１１欠損症、Ｘ連鎖リンパ球増殖性症候群、自己免疫リンパ球増殖性症候群、例えば、１ａ型（ＣＤ９５欠損）、１ｂ型（Ｆａｓリガンド欠損）、２ａ型（ＣＡＳＰ１０欠損）、２ｂ型（ＣＡＳＰ８欠損）、ＡＰＥＣＥＤ（カンジダ症および外胚葉異形成症を伴う自己免疫多腺性内分泌障害）およびＩＰＥＸ（Ｘ連鎖型免疫調節異常多発性内分泌障害腸症）からなる群から選択される。
【０１７２】
一実施形態では、前記食細胞障害は、ＥＬＡ２欠損症（脊髄形成異常症を伴う）、ＧＦＩ１欠損症（Ｔ／Ｂリンパ球減少症を伴う）、Ｇ−ＣＳＦＲ欠損症（Ｇ−ＣＳＦ−非応答性）、コストマン症候群、サイクリック好中球減少症、Ｘ連鎖好中球減少症／脊髄形成異常症、白血球接着不全症１、２および３型、ＲＡＣ２欠損症、β−アクチン欠損症、限局型若年性歯周炎、パピヨン−ルフェーブル症候群、二次顆粒欠損症、シュバッハマン−ダイアモンド症候群、慢性肉芽腫症：Ｘ連鎖および常染色体型、好中球グルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼ欠損症、ＩＬ−１２およびＩＬ−２３  β１鎖欠損症、ＩＬ−１２ｐ４０欠損症、インターフェロンγ受容体１欠損症、インターフェロンγ受容体２欠損症およびＳＴＡＴ１欠損症（２型）からなる群から選択される。
【０１７３】
一実施形態では、前記自然免疫不全は、無汗性外胚葉形成不全、ＮＥＭＯ欠損症、ＩＫＢＡ欠損症、ＩＲＡＫ−４欠損症、ＷＨＩＭ症候群（いぼ、低ガンマグロブリン血症、感染症、ミエロカテキシス（ｍｙｌｅｏｋａｔｈｅｘｉｓ））および疣贅状表皮発育異常症からなる群から選択される。
【０１７４】
一実施形態では、前記自己炎症性障害は、家族性地中海熱、ＴＮＦ受容体関連周期性症候群（ＴＲＡＰＳ）、高ＩｇＤ症候群（ＨＩＤＳ）、ＣＩＡＳ１関連疾患、マックル・ウェルズ症候群、家族性感冒自己炎症性症候群、新生児期発症多臓器性炎症性疾患、ＰＡＰＡ症候群（化膿性無菌性関節炎、壊疽性膿皮症、ざ瘡）およびブラウ症候群からなる群から選択される。
【０１７５】
一実施形態では、前記補体欠損症は、Ｃ１ｑ欠損症（ループス様症候群、リウマチ性疾患、感染症）、Ｃ１ｒ欠損症（同上）、Ｃ４欠損症（同上）、Ｃ２欠損症（ループス様症候群、脈管炎、多発性筋炎、化膿性感染症）、Ｃ３欠損症（再発性化膿性感染症）、Ｃ５欠損症（ナイセリア感染症、ＳＬＥ）、Ｃ６欠損症（同上）、Ｃ７欠損症（同上、脈管炎）、Ｃ８ａおよびＣ８ｂ欠損症（同上）、Ｃ９欠損症（ナイセリア感染症）、Ｃ１−阻害剤欠損症（遺伝性血管性浮腫）、因子Ｉ欠損症（化膿性感染症）、因子Ｈ欠損症（溶血尿毒症症候群、膜性増殖性糸球体腎炎）、因子Ｄ欠損症（ナイセリア感染症）、プロパージン欠損症（ナイセリア感染症）、ＭＢＰ欠損症（化膿性感染症）およびＭＡＳＰ２欠損症からなる群から選択される。一実施形態では、前記自己炎症性障害は、Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３およびＣ４欠損症からなる群から選択される。
【０１７６】
本発明の一実施形態では、ワクチン接種される予定の免疫無防備状態対象は、免疫系に影響を及ぼす疾患を患っており、ここで、前記疾患は、後天性免疫不全障害である。後天性免疫不全は、細菌またはウイルス感染症（ＨＩＶなど）、癌（白血病または骨髄腫など）、その他の慢性障害、ほかにも、加齢、栄養失調または種々の化学療法薬治療（グルココルチコイドなど）をはじめとするいくつかの因子によって引き起こされ得る。
【０１７７】
本発明の特定の実施形態では、ワクチン接種される予定の免疫無防備状態の対象は、ＨＩＶ感染、後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）、癌、慢性心または肺障害、鬱血性心不全、真性糖尿病、慢性肝臓疾患、アルコール依存症、硬変、脊髄液漏出、心筋症、慢性気管支炎、肺気腫、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、脾臓機能不全（鎌状赤血球症など）、脾臓機能の欠如（無脾臓）、血液悪性腫瘍、白血病、多発性骨髄腫、ホジキン病、リンパ腫、腎不全、ネフローゼ症候群および喘息からなる群から選択される疾患を患っている。
【０１７８】
特定の実施形態では、ワクチン接種される予定の免疫無防備状態の対象は、脾臓機能不全（鎌状赤血球症など）、脾臓機能の欠如（無脾臓）、白血病、多発性骨髄腫、ホジキン病およびリンパ腫からなる群から選択される疾患を患っている。
【０１７９】
好ましい実施形態では、ワクチン接種される予定の免疫無防備状態の対象は、ＨＩＶ感染または後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）を患っている。
【０１８０】
特定の実施形態では、ワクチン接種される予定の免疫無防備状態の対象は、ＨＩＶ感染または後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）を患っており、治療下にあり、前記治療は、非ヌクレオシド（ｎｏｎ−ｎｕｃｌｅｏｓｉｅｄ）逆転写酵素阻害剤、プロテアーゼ阻害剤およびヌクレオシド類似体逆転写酵素阻害剤（例えば、アバカビル）からなる群から選択される少なくとも１種の抗レトロウイルス薬の投与からなる。特定の実施形態では、前記治療は、非ヌクレオシド逆転写酵素阻害剤、プロテアーゼ阻害剤およびヌクレオシド類似体逆転写酵素阻害剤（例えば、アバカビル）からなる群から選択される、少なくとも２クラスの抗レトロウイルス薬に属する少なくとも３種の薬物の投与からなる。特定の実施形態では、前記治療は、少なくとも２種のヌクレオシド類似体逆転写酵素阻害剤、およびプロテアーゼ阻害剤または非ヌクレオシド逆転写酵素阻害剤のいずれかの投与からなる。
【０１８１】
特定の実施形態では、ワクチン接種される予定の免疫無防備状態の対象は、ＨＩＶ感染または後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）を患っており、高活性抗レトロウイルス剤療法（ＨＡＡＲＴ）下にある。一実施形態では、前記ＨＡＡＲＴは、非ヌクレオシド逆転写酵素阻害剤、プロテアーゼ阻害剤および／もしくはヌクレオシド類似体逆転写酵素阻害剤（例えば、アバカビル）を含む３種薬物療法または非ヌクレオシド逆転写酵素阻害剤およびプロテアーゼ阻害剤の組合せを含む２種薬物療法からなる。
【０１８２】
特定の実施形態では、ワクチン接種される予定の免疫無防備状態の対象は、ＨＩＶ感染または後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）を患っており、高活性抗レトロウイルス剤療法（ＨＡＡＲＴ）下になく、または抗レトロウイルス剤療法下になく、または前記対象が抗レトロウイルス薬にさらされたことがない。
【０１８３】
特定の実施形態では、ワクチン接種される予定の免疫無防備状態の対象は、非ウイルス血症ＨＩＶ感染患者である。別の実施形態では、ワクチン接種される予定の免疫無防備状態の対象は、ウイルス血症ＨＩＶ感染患者である。
【０１８４】
本発明の特定の実施形態では、ワクチン接種される予定の免疫無防備状態の対象は、結核または性行為感染症、例えば、梅毒もしくは肝炎を患っている。
【０１８５】
本発明の一実施形態では、ワクチン接種される予定の免疫無防備状態の対象は、栄養失調を患っている。
【０１８６】
本発明の一実施形態では、ワクチン接種される予定の免疫無防備状態の対象は、加齢に苦しんでいる。本発明の特定の実施形態では、ワクチン接種される予定の免疫無防備状態の対象は、５５歳以上のヒト成人、より好ましくは６５歳以上のヒト成人である。一実施形態では、ワクチン接種される免疫無防備状態の対象は、７０歳以上、７５歳以上または８０歳以上のヒト成人である。
【０１８７】
本発明の特定の実施形態では、ワクチン接種される予定の免疫無防備状態の対象は、感染に対する身体の抵抗性を低下させる薬物または治療を受けている。
【０１８８】
本発明の特定の実施形態では、ワクチン接種される予定の免疫無防備状態の対象は、化学療法（例えば、抗癌剤）、疾患修飾性抗リウマチ薬、臓器移植後の免疫抑制薬およびグルココルチコイドからなる群から選択される薬物を受けている。
【０１８９】
本発明の一実施形態では、ワクチン接種される予定の免疫無防備状態の対象は、タクロリムス（Ｐｒｏｇｒａｆ）、ミコフェノール酸モフェチル（ＣｅｌｌＣｅｐｔ）、シロリムス（Ｒａｐａｍｕｎｅ）、プレドニゾン、シクロスポリン（ｃｙｃｌｏｓｏｐｏｒｉｎｅ）（Ｎｅｏｒａｌ、Ｓａｎｄｉｍｍｕｎｅ、Ｇｅｎｇｒａｆ）およびアザチオプリン（Ｉｍｕｒａｎ）からなる群から選択される経口免疫抑制剤を受けている。一実施形態では、免疫無防備状態の対象は、前記経口免疫抑制剤のうち少なくとも２種または３種を受けている。
【０１９０】
本発明の一実施形態では、ワクチン接種される予定の免疫無防備状態の対象は、エベロリムス、ミコフェノール酸、コルチコステロイド（例えば、プレドニゾロンまたはヒドロコルチゾン）、モノクローナル抗−ＩＬ−２Ｒα受容体抗体（例えば、バシリキシマブまたはダクリツマブ）、抗胸腺細胞グロブリン（ＡＴＧ）および抗リンパ球グロブリン（ＡＬＧ）からなる群から選択される免疫抑制剤を受けている。一実施形態では、免疫無防備状態の対象は、前記免疫抑制剤のうち少なくとも２種または３種を受けている。
【０１９１】
本発明の特定の実施形態では、ワクチン接種される予定の免疫無防備状態の対象は、臓器移植または骨髄移植または蝸牛移植を受けている。
【０１９２】
本発明の特定の実施形態では、ワクチン接種される予定の免疫無防備状態の対象は、放射線療法を受けている。
【０１９３】
本発明の特定の実施形態では、ワクチン接種される予定の免疫無防備状態の対象は、喫煙者である。
【０１９４】
本発明の特定の実施形態では、ワクチン接種される予定の免疫無防備状態の対象は、喘息を患っており、経口コルチコステロイド療法で治療されている。
【０１９５】
本発明の特定の実施形態では、ワクチン接種される予定の免疫無防備状態の対象は、アラスカ先住民またはアメリカンインディアンである。
【０１９６】
本発明の特定の実施形態では、ワクチン接種される予定の免疫無防備状態の対象は、１リットルあたり細胞５×１０９個未満または１リットルあたり細胞４×１０９個未満または１リットルあたり細胞３×１０９個未満または１リットルあたり細胞２×１０９個未満または１リットルあたり細胞１×１０９個未満または１リットルあたり細胞０．５×１０９個未満または１リットルあたり細胞０．３×１０９個未満または１リットルあたり細胞０．１×１０９個未満の白血球数（ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ  ｃｏｕｎｔ）を有する。
【０１９７】
白血球数（ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ  ｃｏｕｎｔ）：血液中の白血球（ＷＢＣ）の数。ＷＢＣは、通常、ＣＢＣ（全血球数）の一部として測定される。白血球は、血液において感染と戦う細胞であり、赤血球として知られる赤色（酸素保持）血液細胞とは異なっている。好中球（多形核白血球；ＰＭＮ）、桿状球（わずかに未熟な好中球）、Ｔ型リンパ球（Ｔ細胞）、Ｂ型リンパ球（Ｂ細胞）、単球、好酸球および好塩基球をはじめ、種々の種類の白血球がある。すべての種類の白血球が、白血球数に反映される。白血球数の正常範囲は、通常、血液１立法ミリメートルあたり細胞４，３００から１０，８００個である。これもまた、白血球数と呼ばれることがあり、１リットルあたり細胞４．３〜１０．８×１０９個として国際単位で表されることもある。
【０１９８】
本発明の特定の実施形態では、ワクチン接種される予定の免疫無防備状態の対象は、好中球減少症を患っている。本発明の特定の実施形態では、ワクチン接種される予定の免疫無防備状態の対象は、１リットルあたり細胞２×１０９個未満の、または１リットルあたり細胞１×１０９個未満の、または１リットルあたり細胞０．５×１０９個未満の、または１リットルあたり細胞０．１×１０９個未満の、または１リットルあたり細胞０．０５×１０９個未満の好中球数を有する。
【０１９９】
低白血球数または「好中球減少症」は、循環血液中の異常に低いレベルの好中球を特徴とする状態である。好中球は、感染症の予防および感染症と戦うのに役立つ、特定の種類の白血球である。癌患者が好中球減少症を経験する最も一般的な理由は、化学療法の副作用としてのものである。化学療法誘導性好中球減少症は、患者の感染の危険性を高め、癌治療に支障を来す。
【０２００】
血液中に好中球が少ないほど、より長く患者が十分な好中球がないままであるほど、患者が、細菌または真菌感染をより発症しやすくなる。好中球は、抗菌防御機構の主要な構成要素である。好中球数が、１．０、０．５および０．１×１０９個／Ｌ未満に低下する時、命にかかわる感染の頻度が、それぞれ、１０％から１９％および２８％に急上昇する。
【０２０１】
本発明の特定の実施形態では、ワクチン接種される予定の免疫無防備状態の対象は、５００／ｍｍ３未満のＣＤ４＋細胞数または３００／ｍｍ３未満のＣＤ４＋細胞数または２００／ｍｍ３未満のＣＤ４＋細胞数または１００／ｍｍ３未満のＣＤ４＋細胞数または７５／ｍｍ３未満のＣＤ４＋細胞数または５０／ｍｍ３未満のＣＤ４＋細胞数を有する。
【０２０２】
ＣＤ４細胞試験は、通常、１ｍｍ３中の細胞数として報告される。正常ＣＤ４数は、５００から１６００であり、ＣＤ８数は、３７５から１１００である。ＣＤ４数は、ＨＩＶの人では、著しく低下する。
【０２０３】
本発明の一実施形態では、本明細書に開示される免疫無防備状態の対象はいずれも、ヒト男性またはヒト女性である。
【０２０４】
投与計画
いくつかの場合には、本発明のワクチンのわずか１用量しか必要でないが、いくつかの状況、例えば、より重大な免疫不全の状態下では、第２、第３または第４の用量が投与され得る。
【０２０５】
一実施形態では、０日目に初回刺激用量を与え、約２〜約２４週の範囲の間隔で１回または複数回の追加免疫を与え、４〜８週の投薬間隔が好ましい。
【０２０６】
一実施形態では、０日目に初回刺激用量を与え、約３ヶ月後に追加免疫を与える。
【０２０７】
実施例の部分に示されるように、本発明のワクチンを使用して、現在のワクチン接種の欠点のいくつかを克服することができる。特に、本発明のワクチンは、血清防御を達成するのに必要とされるワクチン接種の数を低減し、血清転換を加速し、おそらくは曝露後ワクチン接種を可能にし、ノンレスポンダーの割合を低減し、必要な抗原の量を低減し、抗体結合活性および防御活性を高め、かつ／または、より持続する抗体レベルにつながり得る。
【０２０８】
これらの利点は、免疫無防備状態の患者を治療する場合には、特に興味深いものである。
【実施例１】
【０２０９】
ＨＩＶ感染成人におけるＴｏｌｌ様受容体９−アゴニストをアジュバントとして用いた肺炎球菌ワクチン接種に対する免疫応答
９６人のＨＩＶ感染患者の第ＩＩ相試験を行った。
【０２１０】
目的：
主目的：
・７種の肺炎球菌血清型のうち少なくとも５種に対してＣｐＧ７９０９群対対照群において、２倍の増大およびＩｇＧレベル≧１μｇ／ｍＬとして定義される（定量的ＩｇＧ測定によって）、ワクチンハイレスポンダーの数を比較するため。
【０２１１】
副次的目的：
・ＣｐＧ７９０９を含むか含まない肺炎球菌ワクチン接種に対する定性的（機能的）抗体応答を比較するため
・肺炎球菌ワクチンアジュバントとしてのＣｐＧ７９０９の安全性および忍容性を評価するため
・肺炎球菌ワクチン接種後の肺炎球菌担体状態の変化を分析するため
【０２１２】
主な評価パラメータ：
有効性：
主要：特定の抗莢膜抗体（７種の血清型）の定量的測定
副次的：特定の抗莢膜抗体（肺炎球菌血清型６Ｂ、１４、１９Ｆおよび２３Ｆ）の機能活性、有害事象および重篤有害事象の数および強度、肺炎球菌の咽頭定着における微生物学的変化、ベースラインＣＤ４数およびｓＣＤ１６３の測定
【０２１３】
安全性／忍容性：
有害事象（ＡＥ）、重篤有害事象（ＳＡＥ）、臨床検査（血液学的、臨床化学、すなわち、ウイルス量（ＨＩＶ  ＲＮＡ）およびＣＤ４数）、理学的検査。
【０２１４】
試験デザイン：プラセボ対照無作為化二重盲検試験。総サンプルサイズ：９６人の参加者（群あたり４８人）。
【０２１５】
試験薬物および製剤：ＰＢＳバッファー中で製剤したＣｐＧ７９０９（合成Ｔｏｌｌ様受容体９−アゴニスト）。ＣＰＧ７９０９は、配列5'-TCGTCGTTTTGTCGTTTTGTCGTT-3' (配列番号5)のＢクラスＣｐＧ  ＯＤＮであり、全ホスホロチオエート骨格を用いて合成してある。
【０２１６】
試験薬物投与量：各肺炎球菌ワクチン接種と混合した１ｍｇのＣｐＧ７９０９（１００μｌ）。
【０２１７】
対照：各肺炎球菌ワクチンを含む１００μｌの中性ＰＢＳバッファー（試験薬物と色および粘度は同一）。
【０２１８】
投与経路：筋肉注射。盲検：二重盲検試験。
【０２１９】
登録（ＥＮＲＯＬＭＥＮＴ）：無作為化；
適格患者を、ＣｐＧ７９０９を含むか含まない肺炎球菌ワクチン接種を受けるよう１：１の割合で無作為化した。
【０２２０】
免疫化：
ワクチンは、製造業者の説明に従って、その元の容器中で維持し、免疫化の直前にアジュバント（ＣｐＧ７９０９またはプラセボ）と混合した。免疫化は、対象の好みで左または右上三角筋に実施した。
【０２２１】
各参加者の試験期間：１回目のワクチン接種から最後のフォローアップまで１０ヶ月。
【０２２２】
試験からの対象離脱：
分析見込みから、試験からの「離脱」は、治験実施計画書において予測される最終来診に戻ってこなかった任意の対象である。
【０２２３】
対象は、試験の手順が全く行われなかった場合、フォローアップが全く実施されなかった場合および離脱／最終接触日から、この対象についてさらなる情報が全く集められなかった場合に、試験からの「離脱」と見なされる。
【０２２４】
離脱は差し換えなかった。
【０２２５】
治験薬からの対象離脱
治験薬からの離脱は、完全な治療を受けなかった、すなわち、離脱日から、さらなる計画された用量が投与されなかった場合の任意の対象である。治験薬からの対象離脱は、治験実施計画書において計画されている場合には、さらなる試験の手順またはフォローアップが実施される場合があるので（安全性または免疫原性）、必ずしも試験からの離脱ではない場合がある。
【０２２６】
症例報告書に含まれるべきデータ：
・誕生日、性別、人種、身長、体重、試験番号
・開始点および期間（解消までの時間）を含めた対象によって報告される有害事象
・理学的検査の際の陽性結果
・病歴
・試験期間の間に試験以外で受けたその他のワクチン接種
・試験時間の間の常用医薬の任意の変化
・試験の開始／最初のワクチン接種に先立って、対象に存在する、以前から存在している状態または徴候および／または症状
・試験時間の間のすべての検査所見
【０２２７】
参加者組み入れ基準：
１）参加者情報シートおよび責任ある倫理委員会によって承認されたインフォームドコンセント書式を使用した、地方規制および倫理綱領に従って提供された、書面によるインフォームドコンセントおよび当局声明
２）＞＝１８歳の男性または女性参加者
３）ＨＩＶ血清陽性個体
【０２２８】
参加者除外基準：
１）陽性尿β−ｈＣＧ（女性の場合）によって決定される妊娠
２）治験の期間の間、信頼性の高い避妊法を使用することに気が進まない参加者。バースコントロールの信頼性の高い方法として、薬理学的避妊薬、例えば、経口、非経口および経皮的送達、殺精子薬を含むコンドーム、殺精子薬を含むペッサリー、外科的避妊手術、膣リング、子宮内器具、禁欲および閉経後（女性の場合）が挙げられる。
３）現在母乳を与えていること（女性の場合）。
４）最新のＣＤ４数＜細胞２００×１０６個／μＬ
５）ＨＡＡＲＴ（プロテアーゼ阻害剤またはＮＮＲＴＩのいずれかを含む、少なくとも３種の抗レトロウイルス薬として定義される）中の場合には、ウイルス量（ＨＩＶ  ＲＮＡ）＞５０コピー／ｍＬ（すなわち、最低６ヶ月間で、コンビビル３００／１５０ｍｇ×２＋ストックリン６００ｍｇ×１）
６）この試験における事前登録
７）治験責任医師（ＰＩ）の判断において、試験目的の評価と干渉する任意の医学的、精神医学的、社会的または職業的状態またはその他の責任能力（例えば、重度のアルコール中毒、重度の薬物中毒、痴呆）。
８）治験実施計画書治療計画をたどることができない
９）組み入れ前５年以内に肺炎球菌ワクチン接種
１０）試験時間の間の、その他のワクチン接種治験における参加の計画
【０２２９】
手順：
組み入れ／除外基準を通った同意している参加者を、本試験に登録した。ベースラインパラメータ測定のために血液サンプルを採取し、その後、免疫化を開始した。無作為化時に、参加者を、２種の試験治療計画のうち一方に１：１に割り当てた：
・実験群：２用量の７価コンジュゲート肺炎球菌ワクチン接種（Ｐｒｅｖｅｎａｒ（登録商標）、Ｗｙｅｔｈ）＋１ｍｇ  ＣｐＧ７９０９（０日目）、２用量の７価コンジュゲート肺炎球菌ワクチン接種（Ｐｒｅｖｅｎａｒ（登録商標）、Ｗｙｅｔｈ）＋１ｍｇ  ＣｐＧ７９０９（９０日目）および１用量の２３価ポリサッカライドワクチン（Ｐｎｅｕｍｏ  Ｎｏｖｕｍ（登録商標）、サノフィパスツールＭＳＤ）＋１ｍｇ  ＣｐＧ７９０９（２７０日目）
・対照群：２用量の７価コンジュゲート肺炎球菌ワクチン接種（Ｐｒｅｖｅｎａｒ（登録商標）、Ｗｙｅｔｈ）＋１００μｌのプラセボ（０日目）、２用量の７価コンジュゲート肺炎球菌ワクチン接種（Ｐｒｅｖｅｎａｒ（登録商標）、Ｗｙｅｔｈ）＋１００μｌのプラセボ（９０日目）および１用量の２３価ポリサッカライドワクチン（Ｐｎｅｕｍｏ  Ｎｏｖｕｍ（登録商標）、サノフィパスツールＭＳＤ）＋１００μｌのプラセボ（２７０日目）。
【０２３０】
血液サンプルを採取し、医師によるフォローアップには、理学的検査および病歴、ＡＥ（有害事象）／ＳＡＥ（重篤有害事象）の登録、試験以外のワクチン接種歴およびＣＲＦにおける文書と関連する可能性がある任意のその他の情報を含めた。最終来診は、３００日目に実施した。
【０２３１】
最終来診のために戻った対象、またはこの治験実施計画書において予測される最終接触に応じることができる対象を、試験を完了したと考えた。
【０２３２】
ワクチンおよび治験薬品／プラセボ注射：
すべての対象に、０、９０および２７０日目に投薬した。すべての免疫化は、右または左腕の三角筋において（参加者の好みに応じて）実施した。
・０日目および９０日目に、試験参加者に、二重用量Ｐｒｅｖｅｎａｒ１．０ｍｌ＋０．１ｍｌ治験薬（ＣｐＧ７９０９）／プラセボの１回の筋肉内注射を施した。両方の場合において、腕に注射される容量は、１．１ｍｌである。
・２７０日目に、試験参加者に、０．５ｍｌのＰｎｅｕｍｏ  Ｎｏｖｕｍ＋０．１ｍｌ治験薬品（ＣｐＧ７９０９）／プラセボの１回の筋肉内注射を与える。すべての場合において、腕に注射される容量は、１．１ｍｌである。
【０２３３】
治験責任医師および参加者は、実験注射が投与されたのか、対照注射が投与されたのかは承知していなかった。各注射製剤の容量および外観は同一であった。
【０２３４】
主要有効性パラメータおよび抗体応答の分析
この試験には、７種の肺炎球菌血清型のうち少なくとも５種に対して２倍の増大およびＩｇＧレベル≧１μｇ／ｍＬとして定義される（定量的ＩｇＧ測定によって）肺炎球菌ワクチンハイレスポンダーにおいて、実験群と対照群間の相違を検出するよう検出力を与えた。この試験には、肺炎または侵襲性／非侵襲性の確定された肺炎球菌疾患の罹患率の相違を検出するようには検出力を与えなかった。これには、相当な数の参加者および長期のフォローアップ期間が必要であろう。肺炎球菌ワクチン接種に対する免疫応答の最も広く用いられる測定値は、血清型特異的抗莢膜抗体の定量的検出である。最近のデータは、この方法の特異性は、２２Ｆ吸収ステップを組み込み、それによって低結合活性の交差反応抗体を回収することによって改善することができるということを示す。定量的血清型特異的ＩｇＧ測定は、ＥＬＩＳＡを使用し、２２Ｆ吸収ステップを組み込み、Ｓｔａｔｅｎｓ  Ｓｅｒｕｍ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔ（ＳＳＩ）、Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ、Ｄｅｎｍａｒｋによって実施した。ＳＳＩは、治療割付に関して盲検されていた。
【０２３５】
副次的有効性パラメータおよび抗体応答の分析
血清型特異的抗莢膜抗体の定量的量を測定することは、抗体の機能の情報を全く与えない。これは、フローサイトメトリーオプソニン作用アッセイによって測定することができ、侵入する肺炎球菌をオプソニン化し、死滅を促進する抗体能力に関して間接情報を与える。
【０２３６】
定性分析は、血清型特異的抗体の機能的（オプソニン作用）活性（ＯＰＡ）を測定するフローサイトメトリーオプソニン作用アッセイを使用して実施した。手短には、１０μｌの試験血清からＯＰＡバッファーで８つの２倍希釈物を作製する。標的肺炎球菌血清型または肺炎球菌ポリサッカライドがコンジュゲートしているビーズの各々を１×１０５個含有するマルチプレックス細菌またはマルチプレックスビーズ懸濁液のいずれかの２０μｌのアリコートを、各ウェルに加え、プレートを、水平に振盪しながら（２００ｒｐｍ）３７℃で１時間インキュベートする。この後、各ウェルに３〜４週齢のベビーウサギ血清から得た２０μｌの滅菌血清（Ｐｅｌ−Ｆｒｅｅｚ、Ｂｒｏｗｎ  Ｄｅｅｒ、Ｗｉｓ．）を、ＨＬ６０細胞対照ウェルを除いて加え、ＨＬ６０細胞対照ウェルには、２０μｌのＯＰＡバッファーを与える。振盪しながら（オービタルシェーカーで２００ｒｐｍ）３７℃で２０分間インキュベーションした後、各ウェルに３０μｌの洗浄したＨＬ６０多形核白血球（ＰＭＮ）（２．５μ  １０４／ｍｌ）を加えた結果、１：４のエフェクター対標的比（各標的種に対して）となる。この最終ウェル容量は、８０μｌであり、希釈系列の最初のウェルは１：８最終希釈を含有する。次いで、プレートを３７℃で振盪しながら６０分間インキュベートする。どのウェルにも、さらなる８０μｌのＯＰＡバッファーを加え、フローサイトメトリー分析に十分な容量を提供し、ウェル内容物をマイクロタイターチューブ（Ｂｉｏ−Ｒａｄ、Ｈｅｒｃｕｌｅｓ、Ｃａｌｉｆ．）に移す。１プレートにつき、品質管理サンプルを含めて最大１２種の血清サンプルをアッセイすることができる。フロー分析は、Ｆｌｏｗ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｉｎｃ、Ｉｌｌ、ＵＳＡ５１によって実施した。
【０２３７】
肺炎球菌保菌
肺炎球菌ワクチン接種は、肺炎球菌の咽頭保菌に影響を及ぼし得る。肺炎球菌咽頭定着はまた、肺炎球菌ワクチン接種に対する免疫応答に影響を及ぼし得る。したがって、肺炎球菌ワクチン接種前後の保菌者状態をはっきりさせることが重要である。口腔咽頭定着は、口腔を通るＢＢＬ培養物交換（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｓｏｎ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｃｏｃｋｅｙｓｖｉｌｌｅ、ＭＤ、ＵＳＡ）を使用して咽頭後側で調べた。サンプルは個体試験ＩＤ番号でラベルし、数時間内に−２０℃で凍結し、後に、Ｓｔａｔｅｎｓ  Ｓｅｒｕｍ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔに発送し、そこで、単離、培養および血清型決定を行った。これは、０日目およびフォローアップ期間に再度、２７０日目に行った。
【０２３８】
有害事象（ＡＥ）：
ＡＥは、医薬品と関連していると考えられるものであろうとなかろうと、医薬品の使用と時間的に関連している臨床試験対象における任意の有害な医学的出来事である。
【０２３９】
したがって、ＡＥは、医薬品の使用と時間的に関連している任意の好ましくないおよび意図されない徴候（異常な検査所見を含む）、症状または疾患（新規または増悪した）であり得る。
【０２４０】
この試験では、ＡＥは、共通毒性基準、第２．０版に従って類別した。
【０２４１】
重篤有害事象（ＳＡＥ）の定義：
臨床試験の間に生じる有害事象とは、患者における医薬品の使用と関連する任意の望ましくない経験である。この事象は、重篤であり、患者の予後が以下である場合に規制当局に報告される：
１．死亡
２．命にかかわる
３．入院（最初または長期）
４．身体障害
５．恒久的障害または損傷を避けるための介入が必要である
６．先天性障害／異常（妊婦に対する）
【０２４２】
疑わしい予測できない重篤有害事象反応（ＳＵＳＡＲ）の定義：
試験の間に生じ、報告すべきである疑わしい予測できない重篤有害反応（ＳＵＳＡＲ）：
・この事象はＳＡＥでなければならない。
・事象が、投与された薬物に対する有害反応である特定の程度の可能性がなくてはならない。
有害反応が、予測できない、すなわち、治験薬概要書（未承認医薬品のための）において予見されないものでなくてはならない。
【０２４３】
データ評価：目的の評価のための基準
すべてのエンドポイントは、実験ワクチン群（＋ＣｐＧ７９０９）と対照ワクチン群（＋プラセボ）間で比較してある。
【０２４４】
サブスタディは、２種の（非無作為化）治療群（ＨＡＡＲＴ中対ＨＡＡＲＴなし）においてエンドポイントを比較した。
【０２４５】
主要エンドポイント：
Ｐｒｅｖｅｎａｒを用いた２回目のワクチン接種の６ヶ月後に。
・７種の肺炎球菌血清型のうち少なくとも５種について、２倍の増大およびＩｇＧレベル≧１μｇ／ｍＬとして定義される肺炎球菌ワクチンハイレスポンダー（定量ＩｇＧ測定によって）
【０２４６】
副次的エンドポイント：
免疫原性
Ｐｒｅｖｅｎａｒを用いた１回目のワクチン接種の３ヶ月後に。
・７種の肺炎球菌血清型のうち少なくとも５種について、２倍の増大およびＩｇＧレベル≧１μｇ／ｍＬとして定義される肺炎球菌ワクチンハイレスポンダー（定量ＩｇＧ測定によって）
・力価として表される血清型６Ｂ、１４、１９Ｆおよび２３Ｆのオプソニン作用活性
・２倍の増大およびＩｇＧレベル≧１μｇ／ｍＬとして定義される血清型特異的抗体反応
・ＩｇＧレベルの変化として定義される血清型特異的抗体反応
Ｐｒｅｖｅｎａｒを用いた２回目のワクチン接種の６ヶ月後に。
・力価として表される血清型６Ｂ、１４、１９Ｆおよび２３Ｆのオプソニン作用活性
・２倍の増大およびＩｇＧレベル≧１μｇ／ｍＬとして定義される血清型特異的抗体反応
・ＩｇＧレベルの変化として定義される血清型特異的抗体反応
Ｐｎｅｕｍｏ  Ｎｏｖｕｍを用いたワクチン接種の１ヶ月後に。
・７種の肺炎球菌血清型のうち少なくとも５種について、２倍の増大およびＩｇＧレベル≧１μｇ／ｍＬとして定義される肺炎球菌ワクチンハイレスポンダー（定量ＩｇＧ測定によって）
・力価として表される血清型６Ｂ、１４、１９Ｆおよび２３Ｆのオプソニン作用活性
・２倍の増大およびＩｇＧレベル≧１μｇ／ｍＬとして定義される血清型特異的抗体反応
・ＩｇＧレベルの変化として定義される血清型特異的抗体反応
・血清型１、４、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃおよび１９Ｆの、標準酵素免疫測定法を用いる幾何平均抗体濃度
【０２４７】
咽頭定着
Ｐｒｅｖｅｎａｒを用いた２回目のワクチン接種の６ヶ月後に。
・肺炎球菌が定着した個体の数
【０２４８】
抗体反応を予知するもの
ベースラインで。
・Ｐｒｅｖｅｎａｒを用いた２回目のワクチン接種の６ヶ月後のワクチン応答の危険因子
【０２４９】
副次的エンドポイント：
すべての対象における反応原性および安全性
【０２５０】
分析集団：
安全性集団：少なくとも１回のワクチン接種を受けたすべての患者
・各ワクチン接種用量後の４日間（０日目から３日目）の応答型および全身の症状の出現
・各ワクチン接種の最大１ヶ月後までの非応答型の症状の出現
・試験の間のＣＤ４数およびウイルス量の変化
安全性は、理学的検査、有害事象（共通毒性基準第２．０版に従う）、臨床検査およびＨＩＶ対照パラメータ（ＨＩＶ  ＲＮＡおよびＣＤ４数）によって評価する。
【０２５１】
統計分析
ベースライン特性決定
０日目の試験群間の相違は、マンホイットニー順位和検定（連続型変数）およびカイ二乗検定（二値およびカテゴリー変数）によって評価する。
【０２５２】
主要エンドポイント
２種のワクチン接種スキーム群（ＣｐＧ７９０９を含む／含まない）を比較する、Ｐｒｅｖｅｎａｒを用いる２回目のワクチン接種の６ヶ月後のハイレスポンダーの罹患率を、カイ二乗検定によって推定した。年齢、ベースラインでのＣＤ４細胞数およびベースラインでのＨＡＡＲＴ（ＨＡＡＲＴ中対ＨＡＡＲＴなし）によって調整したポアソン回帰モデルを計画する。
【０２５３】
副次的エンドポイント
試験群間のエンドポイントの比較を、カイ二乗検定によって行った。適当な可能性のある交絡要因について調整された、ポアソン回帰（二値エンドポイント）または線形回帰（連続エンドポイント）を計画する。
【０２５４】
Ｐｒｅｖｅｎａｒを用いた２回目のワクチン接種の６ヶ月後に高いワクチン接種反応を達成する（ハイレスポンダーとして分類される）ための危険因子は、多変量ポアソン回帰によって推定する。
【０２５５】
安全性データ
安全性データを列挙し、カイ二乗検定によって比較した。
【０２５６】
推定されるサンプルサイズ
治療企図（ＩＴＴ）集団：すべての無作為化された参加者
サンプルサイズは、主要エンドポイント（２種のワクチン接種スキーム群を比較する、Ｐｒｅｖｅｎａｒを用いた２回目のワクチン接種の６ヶ月後のハイレスポンダーの罹患率）について算出される。タイプＩおよびタイプＩＩエラーの確率の設定：
・タイプＩエラー確率（ａ）＝０．０５（両側）。
・タイプＩＩエラー確率（β）＝０．２０（検出力＝１−β＝０．８０）。
・主要エンドポイント：ワクチンハイレスポンダーの割合（７種の肺炎球菌血清型のうち少なくとも５種に対して２倍の増大およびＩｇＧレベル≧１μｇ／ｍＬとして定義される）。
・Ｎは、各群において必要とされる参加者の数である。
【０２５７】
対照／ＣｐＧ    ０．５０    ０．５５    ０．６０    ０．６５    ０．７０
０．２０            ３９        ２９        ２３        １８        １５
０．２５            ５８        ４１        ３１        ２４        １９
０．３０            ９３        ６１        ４２        ３１        ２４
０．３５          １７０        ９６        ６２        ４３        ３１
０．４０          ３８８      １７３        ９７        ６２        ４２
【０２５８】
対照ワクチン群において３０％の罹患率および実験ワクチン群において６０％の罹患率を仮定すれば、ポアソン回帰によって推定される罹患率の相違を検出するためには、群あたり４２人の患者というサンプルサイズが必要とされる。予想される脱落パーセンテージは、１０％に設定される。したがって、本試験において合計９４人の対象が必要であった。
【０２５９】
規制当局によって推奨されるアプローチに従って、両側９５％の信頼区間（ＣＩ）の免疫応答の相違を算出した。
【実施例２】
【０２６０】
ＨＩＶ感染成人における、ＴＬＲ９をアジュバントとして用いた肺炎球菌ワクチンの免疫原性および安全性。無作為化二重盲検プラセボ対照試験の結果
実施例１に記載される臨床試験を実施した。
【０２６１】
この試験は、ＨＩＶを患う者を、０および３ヶ月目にＰＣＶ（肺炎球菌コンジュゲートワクチン）（Ｐｒｅｖｎａｒ）±１ｍｇ  ＣｐＧ７９０９の二重用量を用いて、および９ヶ月目にＰＰＶ（肺炎球菌ポリサッカライドワクチン）±１ｍｇ  ＣｐＧ７９０９の１回の単回用量を用いてワクチン接種されるよう無作為化するプラセボ対照第ＩＩ相試験であった。免疫原性および安全性は、０、３、４、９および１０ヶ月目に評価した。主要エンドポイントは、９ヶ月目に７種のＰＣＶ血清型のうち少なくとも５種に対して２倍の増大およびＩｇＧレベル≧１μｇ／ｍＬとして定義されるワクチンハイレスポンダーの割合とした（ＥＬＩＳＡによる定量的ＩｇＧ、Ｓｔａｔｅｎｓ  Ｓｅｒｕｍ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ、Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ、Ｄｅｎｍａｒｋ）。
【０２６２】
結果：表１に示されるように、９６人の参加者が組み入れられた。４８人の参加者の各群において、３８人がＡＲＴ中であった。
【０２６３】
【表１】
2010260849.tif 000003
【０２６４】
表３および図１に示されるように、ＰＣＶ免疫化後に、ワクチンハイレスポンダーの割合は、プラセボアジュバント群においてよりもＣｐＧにおいて有意に高かった（４８．８％対２５．０％、ｐ＝０．０１８）。応答の増大は、３（５１．１％対３９．６％、ｐ＝０．２６）、４（７７．３％対５６．３％、ｐ＝０．０３３）および１０（８７．８％対５１．１％、ｐ＜０．００１）ヶ月でも観察された。
【０２６５】
【表２】
2010260849.tif 000004
【０２６６】
図２および３は、ＣＰＧおよびプラセボ群間の、２種のＰＣＶ血清型（９ｖおよび１４）についての相対的ＩｇＧ反応の相違を示す。
【０２６７】
図４および５は、ＣＰＧおよびプラセボ群における２種の非ＰＣＶ血清型（１および７ｆ）についての相対的ＩｇＧ反応を示す（予想されたように、ＰＣＶ免疫化に関してＩｇＧの増大が観察されなかった）。
【０２６８】
ＰＰＶ免疫化後、両群（＋／−ＣｐＧ）が相当な反応を示す。しかし、ＣｐＧは、ＰＰＶ免疫化後に、非ＰＣＶ血清型（１および７ｆ）に対する抗体反応を増大しなかった。
【０２６９】
表４（３７〜３８頁）に示されるように、ＩｇＧ抗体の幾何平均濃度（ＧＭＣ）に関するデータは、対照群と比較した実験群の、ほぼすべてのＰＣＶ−７−血清型についての、ベースラインから、３、４、９および１０ヶ月に向けて増大するＧＭＣ比を示した。予想されたように、３種の非ＰＣＶ血清型（１、７Ｆおよび１９Ａ）のＧＭＣは、ＰＣＶ−７免疫化後に大幅には変化しなかった。ＰＰＶ−２３後には、両群は、非ＰＣＶ−７血清型についてＧＭＣの２〜５倍の増大を経験した（血清型１９Ａについてが最低）が、ＧＭＣ比における有意な群の相違はなかった。
【０２７０】
【表３−１】
2010260849.tif 000005
【０２７１】
【表３−２】
2010260849.tif 000006
【０２７２】
表２に示されるように、ＰＣＶに対する軽度の全身および注射部位反応は、ＣｐＧ群においてより多く見られた（１００％対８１．３％、ｐ＝０．００２）。ＰＰＶ後にＣｐＧ群において中程度から重篤なインフルエンザ様症状が観察された。
【０２７３】
いずれかの群において、ＣＤ４＋細胞数（図６参照）または臓器機能に対する有害作用は生じなかった。
【０２７４】
【表４】
2010260849.tif 000007
【０２７５】
結論：免疫化に対して低反応性であるとわかっている集団では、コンジュゲート肺炎球菌ワクチンへのＣＰＧ７９０９の付加は、ワクチンハイレスポンダーの割合を大幅に高めた。
【０２７６】
ＣＰＧ７９０９およびコンジュゲート肺炎球菌ワクチン（Ｐｒｅｖｎａｒ）の安全性は、良好であり、試験の間に臓器機能またはＨＩＶ疾患進行に対する有害作用は、観察されなかった。ＣＰＧ７９０９およびコンジュゲート肺炎球菌ワクチン（Ｐｒｅｖｎａｒ）の組合せは、良好に忍容され、有害事象は、軽度の注射部位反応およびインフルエンザ様症状であった。この試験では、ＣＰＧ７９０９は、肺炎球菌ポリサッカライドワクチン接種後に非Ｐｒｅｖｎａｒ血清型に対する反応を増大するとは思われなかった。
【実施例３】
【０２７７】
ＴＬＲ９−アゴニストアジュバントは、ＨＩＶ感染成人において、肺炎球菌コンジュゲートワクチンに応じた細胞記憶を誘導する。
本発明者らは、ＣＰＧ７９０９が、肺炎球菌コンジュゲートワクチンに応じた細胞記憶の誘導にどのように影響を及ぼすかを調べた。
【０２７８】
方法：実施例１の二重盲検プラセボ対照第Ｉｂ／ＩＩａ相試験からの４０人のＨＩＶ感染個体から得た末梢（Ｐｅｒｉｆｅｒａｌ）血単核細胞（ＰＢＭＣ）（各群において２０人の対象）を、０および４ヶ月目に回収し、保存した（凍結した）。
【０２７９】
凍結したＰＢＭＣを解凍し、生存力について調べ、９６ウェル平底組織培養プレートに移した。細胞を、３７℃で一晩インキュベートし、精製肺炎球菌ポリサッカライド（血清型（ＳＴ）６Ｂおよび１４）を用いて翌日刺激した。４８時間インキュベーションした後、上清を回収し、Ｌｕｍｉｎｅｘによってサイトカイン濃度を測定した。肺炎球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）に対する既存の免疫性を考慮し、ならびに、生得的認識に由来する偏りを排除して、免疫化前後のサイトカイン濃度間の比として相対反応を算出した。
【０２８０】
結果：図７、８および９で示されるように、２回目の肺炎球菌コンジュゲートワクチンの１ヶ月後、ＩＦＮ−γ（ＳＴ６Ｂ）：１．２２対０．８２、ｐ＝０．００４；（ＳＴ１４）：１．２１対０．８９、ｐ＝０．０４；ＴＮＦ−α（ＳＴ６Ｂ）：１．４９対０．８２、ｐ＝０．０３；（ＳＴ１４）：１．７６対０．８５、ｐ＝０．０１）；ＩＬ−６（ＳＴ６Ｂ）：２．１１対０．８３、ｐ＝０．００８４；（ＳＴ１４）：１．６４対０．８１、ｐ＝０．０３５７）、ＩＦＮ−α（ＳＴ６Ｂ）：１．５５対０．８４、ｐ＝０．００１４；（ＳＴ１４）：１．４３対０．９０、ｐ＝０．０４６６）について、ＣＰＧ７９０９群は、プラセボ−アジュバント群よりも有意に高い相対サイトカイン反応を有していた。対照群と比較したＣＰＧ７９０９群におけるサイトカイン反応も、ＩＬ−１Ｂ、ＩＬ−２Ｒ、ＭＩＰ−１α、ＭＩＰ−β、ＭＣＰ−１およびＩＰ−１０について、有意に増大して観察された。
【０２８１】
結論：本発明者らの結果は、ＨＩＶを患う者の間では、肺炎球菌コンジュゲートワクチンと同時に投与されるＴＬＲ９アゴニスト−アジュバントは、ワクチンが単独で投与された場合には観察されなかった肺炎球菌ポリサッカライドに対する細胞記憶を誘導したことを示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
2010260849.tif 000012
【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【配列表】
2010260849000001.app
【手続補正書】
【提出日】平成22年8月12日(2010.8.12)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１９】
【図１】肺炎球菌ワクチンハイレスポンダーの割合を示す図である。
【図２】血清型９vについての相対反応を示す図である。
【図３】血清型１４についての相対反応を示す図である。
【図４】血清型１についての相対反応を示す図である。
【図５】血清型７ｆについての相対反応を示す図である。
【図６】試験の間のベースラインからのＣＤ４＋細胞数変化を示す図である。
【図７】免疫化前後のサイトカイン濃度間の比として相対反応を示す図である。
【図８】免疫化前後のサイトカイン濃度間の比として相対反応を示す図である。
【図９】免疫化前後のサイトカイン濃度間の比として相対反応を示す図である。
【外国語明細書】
2010260849000001.pdf