(57)【要約】【課題】担体に付着された細胞などの生物試料の酸素消費量などの信頼性が高い評価が可能となる酸素測定装置を提供する。【解決手段】担体に付着された生物試料を収容する生物試料収容容器と、生物試料収容容器へ培地を灌流する培地灌流システムと、生物試料収容容器の培地出口に設置された、酸素電極が組み込まれたフローセルと、を備える酸素測定装置である。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
担体に付着された生物試料を収容する生物試料収容容器と、
前記生物試料収容容器へ培地を灌流する培地灌流システムと、
前記生物試料収容容器の培地出口に設置された、酸素電極が組み込まれたフローセルと、
を備えることを特徴とする酸素測定装置。
【請求項２】
請求項１に記載の酸素測定装置であって、
前記生物試料収容容器の培地入口側の配管と培地出口側の配管とを接続するバイパス経路を備えることを特徴とする酸素測定装置。
【請求項３】
担体に付着された生物試料を収容する生物試料収容容器へ培地を灌流し、前記生物試料収容容器からの流出後の培地の溶存酸素濃度を測定することを特徴とする酸素測定方法。
【請求項４】
請求項３に記載の酸素測定方法であって、
前記生物試料収容容器を経由しない培地の溶存酸素濃度を測定して基準溶存酸素濃度を求め、前記基準溶存酸素濃度に対する、前記生物試料収容容器からの流出後の培地の溶存酸素濃度の変化量を求めることにより、前記生物試料による酸素消費量を測定することを特徴とする酸素測定方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、担体に付着された細胞などの生物試料の酸素消費量などを測定する酸素測定装置および酸素測定方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、細胞などの生物試料の活性を示す指標の一つと考えられている呼吸活性を溶液中の溶存酸素濃度などから測定する研究が盛んに行われている。例えば、溶液中において生物試料が消費する酸素量などを溶液中の溶存酸素濃度などから測定する研究である。
【０００３】
現在、一般的に用いられる溶液中の酸素濃度測定方法には、酸素分圧に比例する電流を発生する酸素電極を用いる酸素電極法、酸素分圧に逆相関する蛍光を発する酸素感受性蛍光物質を利用する蛍光法などがある。
【０００４】
また、特許文献１には、溶液を収容する容器と、容器内に設けられる一対の電極と、容器内に配置された一対の電極のうちの一方の電極の付近に生物試料を導く試料ガイドと、を有し、試料ガイドには、一方の電極を取り囲む微小領域とその微小領域内へ生物試料を導く導入領域とが形成され、一対の電極を介して流れる微小電流に基づいて、試料ガイドの微小領域内に導入された生物試料の近傍の溶存酸素に関する測定量が測定される酸素測定装置が記載されている。
【０００５】
これらの方法を利用して、担体に付着された定着性細胞の酸素消費量を測定する場合、例えば、次のような手順で細胞の試料液を調製する。
（１）培養容器中の古い培地を吸引除去
（２）容器の壁着細胞をバッファ（Ｈａｎｋｓ液など）で洗浄した後、バッファを吸引除去
（３）トリプシン溶液などの酵素溶液を培養容器に入れ、細胞を充分に濡らし、インキュベータに入れて、５分から１０分程度放置
（４）新しい培地を加え、ピペッティングし、細胞を培地に分散させた後、細胞液を遠心分離にかけ、上澄み液を吸引除去
（５）新しい培地を入れ、撹拌して、細胞の塊をばらして、充分に分散
（６）液の細胞濃度を調べ、必要な濃度に調整希釈
【０００６】
このようにして作製した細胞試料溶液を測定容器に分注し、容器に設置した酸素センサ（酸素電極法または蛍光法）により、液中の溶存酸素濃度の経時変化を測定し、細胞の酸素消費量を得る。
【０００７】
血液系細胞など、体液中に漂う細胞を除き、多くの細胞は適当な担体に付着された状態で増殖、分化など本来の細胞活動を営み、その機能を発現する。上記の測定方法では、細胞を担体から剥離することで細胞の活性が低下するだけでなく、増殖など本来の細胞機能が損なわれた状態で細胞の酸素消費量が評価されることになる。また、細胞はその活動により、酸素や培地中の栄養成分を消費し、アンモニアや乳酸のような有害な老廃物を産生する。酸素については、測定容器を密閉構造としなければ、気液境界面からの拡散、対流などにより、ある程度補給されるが、栄養成分の消費と老廃物の産生などにより、細胞の環境が経時的に悪化することが避けられない。
【０００８】
したがって、従来の測定方法は、定着性細胞の増殖に関わる物質の影響を評価したり、効果や害が現れるまでに長い期間を必要とする物質の細胞への影響を調べるような場合には、必ずしも適したものではない。
【０００９】
例えば、特許文献２には、対象物質を固定化してなる固定化層に対して検体を供給し、対象物質と検体との反応を電極で検出することにより検体の測定を達成する検体測定方法であって、濃度を経時的に変化させながら検体を供給し、電極からの出力信号の変化量に基づいて検体の測定を行う検体測定方法が記載されている。しかし、特許文献２の装置では、対象物質を固定化してなる固定化層と電極がともに測定容器の同じ部屋（第２室）に収容されているため、信頼性が高い評価が得られない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１０】
【特許文献１】特開２００８−６４６６１号公報
【特許文献２】特開２０００−２７０８３８号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
本発明は、担体に付着された細胞などの生物試料の酸素消費量などの信頼性が高い評価が可能となる酸素測定装置および酸素測定方法である。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明は、担体に付着された生物試料を収容する生物試料収容容器と、前記生物試料収容容器へ培地を灌流する培地灌流システムと、前記生物試料収容容器の培地出口に設置された、酸素電極が組み込まれたフローセルと、を備える酸素測定装置である。
【００１３】
また、前記酸素測定装置において、前記生物試料収容容器の培地入口側の配管と培地出口側の配管とを接続するバイパス経路を備えることが好ましい。
【００１４】
また、本発明は、担体に付着された生物試料を収容する生物試料収容容器へ培地を灌流し、前記生物試料収容容器からの流出後の培地の溶存酸素濃度を測定する酸素測定方法である。
【００１５】
また、前記酸素測定方法において、前記生物試料収容容器を経由しない培地の溶存酸素濃度を測定して基準溶存酸素濃度を求め、前記基準溶存酸素濃度に対する、前記生物試料収容容器からの流出後の培地の溶存酸素濃度の変化量を求めることにより、前記生物試料による酸素消費量を測定することが好ましい。
【発明の効果】
【００１６】
本発明では、担体に付着された生物試料を収容する生物試料収容容器と、生物試料収容容器へ培地を灌流する培地灌流システムと、生物試料収容容器の培地出口に設置された、酸素電極が組み込まれたフローセルと、を備えることにより、細胞などの生物試料の酸素消費量などの信頼性が高い評価が可能となる酸素測定装置を提供することができる。
【００１７】
また、本発明では、担体に付着された生物試料を収容する生物試料収容容器へ培地を灌流し、生物試料収容容器からの流出後の培地の溶存酸素濃度を測定することにより、細胞などの生物試料の酸素消費量などの信頼性が高い評価が可能となる酸素測定方法を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
【図１】本発明の実施形態に係る酸素測定装置の一例を示す概略構成図である。
【図２】本発明の実施例における、酸素電極による細胞（ＳＤＲ−Ｍ）の酸素消費量の測定結果を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
本発明の実施の形態について以下説明する。本実施形態は本発明を実施する一例であって、本発明は本実施形態に限定されるものではない。
【００２０】
本発明の実施形態に係る酸素測定装置１は、培地を灌流しながら、細胞などの生物試料の呼吸（酸素消費）などによる培地中の溶存酸素濃度を測定することにより、信頼性の高い生物試料による酸素消費量の測定を実現するものである。本実施形態に係る酸素測定装置の一例の概略を図１に示し、その構成について説明する。酸素測定装置１は、担体に付着された細胞などの生物試料を収容する生物試料収容容器１０と、生物試料収容容器１０へ培地を灌流する培地灌流システム１２と、酸素電極１４が組み込まれたフローセル１６と、酸素電極１４による出力される応答電流値を経時的に測定、記録可能な微小電流計３２および記録・表示装置３４とを備える。培地灌流システム１２は、培地容器１８と、送液ポンプ２０とを備える。
【００２１】
酸素測定装置１において、培地容器１８は、送液ポンプ２０の流入側に配管などにより接続され、送液ポンプ２０の吐出側に配管などにより生物試料収容容器１０の入口が接続されている。生物試料収容容器１０の出口は、配管などによりフローセル１６の入口に接続され、フローセル１６の出口には配管などにより、フローセル１６から排出された培地を貯留するための容器２２が接続されている。フローセル１６には、酸素電極１４が組み込まれている。生物試料収容容器１０の入口側の配管と出口側の配管とは、流路が切り替え可能な三方バルブ２４ａ，２４ｂを介して、バイパス配管２６により接続されている。培地容器１８には、スターラ２８などの撹拌装置が設置され、撹拌装置には撹拌装置を制御する制御部３０が電気的接続などにより接続されている。酸素電極１４には、微小電流計３２が電気的接続などにより接続され、微小電流計３２には、記録・表示装置３４が電気的接続などにより接続されている。
【００２２】
液体中の溶存酸素濃度や酸素電極の応答電流には温度依存性があるので、温度補正（校正）を避けるために、微小電流計３２や記録・表示装置３４などの測定装置類を除いた、培地容器１８、生物試料収容容器１０、フローセル１６、酸素電極１４などは、一定の温度条件に保つことができる環境に設置することが好ましい。図１では、培地容器１８、スターラ２８、生物試料収容容器１０、フローセル１６、酸素電極１４、容器２２が、恒温槽３６の中に収容されている。培地容器１８の内部、恒温槽３６の内部、フローセル１６の内部には、温度センサ３８ａ，３８ｂ，３８ｃがそれぞれ設置されている。
【００２３】
生物試料収容容器１０としては、担体に付着された細胞などの生物試料を収容する収容部と、収容部に通じる入口部および出口部とを有し、液体である培地を収容部に流すことができるものであればよい。生物試料収容容器１０の液容量が大きいと、細胞などの呼吸代謝などによる溶存酸素濃度の変化速度が遅くなるので、溶存酸素濃度の変化に対する応答性を高めるために生物試料収容容器１０の液容量はできるだけ小さい方が好ましい。生物試料収容容器１０は、収容部に、ガラスまたは樹脂などの透明材料を用いた観察窓を有していてもよい。
【００２４】
フローセル１６は、流路と、流路に通じる入口部および出口部とを有し、液体である培地を流路に流すことができて、酸素電極１４を流路で検出可能なように組み込むことができるものであればよい。溶存酸素濃度の変化に対する酸素電極１４の応答性を高めるためにフローセル１６の液容量はできるだけ小さい方が好ましい。
【００２５】
生物試料収容容器１０とフローセル１６は、図１に示すようにそれぞれ独立した構造のものを配管などにより接続してもよいが、生物試料収容容器１０と、生物試料収容容器１０からの培地が流入し、酸素電極１４が組み込まれたフローセル１６とが一体化した構造（図１の一点鎖線部分）のものであってもよい。生物試料収容容器１０とフローセル１６とが一体化した構造であると、応答速度が高く、配管や接続部品などからの酸素などの漏れを避けることができるため、好ましい。
【００２６】
溶存酸素濃度の変化に対する酸素電極１４の応答速度を上げるためには、生物試料収容容器１０とフローセル１６との間の配管の容量はできるだけ小さくして、培地がスムースに流れるようにすることが好ましい。
【００２７】
酸素電極１４としては、酸素分圧に比例する電流を発生するものであればよく、特に制限はないが、接液面積が小さく、少ない流量（例えば、２ｍＬ／ｈｒ程度）の培地灌流システムにおいても安定した応答電流値が得られるものが好ましい。このような電極として、例えば、酸素を検出する電極部分（カソード）が極めて小さな面積を持つように構成され、自己酸素消費量が極めて少ないマイクロカソード酸素電極などが挙げられる。
【００２８】
送液ポンプ２０としては、少ない流量（例えば、２ｍＬ／ｈｒ程度）で、流量精度、再現性がよいものであることが好ましい。
【００２９】
本実施形態に係る酸素測定装置１を用いた、細胞などの生物試料による酸素消費量の測定方法について説明する。
【００３０】
＜測定対象の生物試料の準備＞
測定対象となる細胞などの生物試料を、ガラス板などの担体に付着などしたものを、担体ごと生物試料収容容器１０に収容する。
【００３１】
測定対象となる生物試料としては、細胞などが挙げられる。生物試料を付着する担体としては、ガラス、樹脂などが挙げられる。例えば、細胞をガラス板により単層培養したものを用いればよいが、灌流系に組み込める形態であれば、どのような培養形態であってもよい。担体として、表面積が既知であるものを用いることで、後述するように、細胞数当たりの酸素消費量を求めることができる。
【００３２】
＜培地の加温・脱ガス＞
培地容器１８内には培地を収容する。培地は、生物試料の生存に適した成分を含む液体である。低温では液体へのガス飽和濃度が高く、冷蔵保存された培地には培養に用いる３７℃前後の培地に比べて、２倍近いガス（酸素、窒素など）が溶解していることがある。十分に脱ガスせずに培地の送液を行うと、送液途中の温度上昇などにより気泡が発生し、送液や溶存酸素濃度の測定に障害となる可能性がある。そのため、培地容器１８内の培地は、必要に応じてスターラ２８などの撹拌装置により撹拌しながら、恒温槽３６により所定の温度（例えば、３７℃前後）に加温、制御することが好ましい。培地容器１８内に収容する前に恒温水槽など用いて、別途、培地を加温しておいてもよい。また、気液界面で十分なガス交換が可能なように、培地容器１８は密封せずに開放状態にしておくほうがよい。スターラ２８などの撹拌装置は、制御部３０により制御する。また、培地容器１８内の培地の温度、恒温槽３６内部の温度は、温度センサ３８ａ，３８ｂによりそれぞれモニタリングし、必要に応じて記録・表示装置３４により、データとして記録し、グラフなどによって表示する。
【００３３】
＜基準溶存酸素濃度電流値の測定＞
まず、基準溶存酸素濃度電流値（Ａ）の測定を行う。バイパス配管２６を経由する経路に三方バルブ２４ａ，２４ｂを切り替えた状態で、培地容器１８内の培地を、送液ポンプ２０によりフローセル１６へ送液する。送液流量は、例えば、後述する実施例１では１〜３ｍＬ／ｈｒであるが、細胞などの酸素消費速度は種により大きく異なり、細胞数に比例するので、生物試料収容容器１０に収容する細胞などの生物試料の種類、数などにより適宜設定すればよい。必要に応じて、送液流量を高くして、配管系のパージを行ってもよい。フローセル１６の流路を流れる培地に含まれる溶存酸素濃度に相応（比例）して生じる酸素電極１４の応答電流値を微小電流計３２により測定し、必要に応じて記録・表示装置３４により、記録、表示する。また、フローセル１６内の温度は、温度センサ３８ｃによりモニタリングし、必要に応じて記録・表示装置３４により、記録、表示する。培地の温度が所定の温度（例えば、３７℃前後）に達していても、溶存酸素濃度がその温度の飽和濃度まで低下しているとは限らないため、酸素電極１４による電流値、温度センサ３８ａ，３８ｂ，３８ｃによる温度が十分に安定するまで、測定を行う。測定が完了したら、次工程に進む。なお、基準溶存酸素濃度電流値の測定は、次工程の溶存酸素濃度電流値の測定の後に行ってもよい。
【００３４】
＜溶存酸素濃度電流値の測定＞
次に、細胞などの生物試料による培地の酸素消費を反映する溶存酸素濃度電流値（Ｂ）の測定を行う。生物試料収容容器１０を経由する経路に三方バルブ２４ａ，２４ｂを切り替えた状態で、培地容器１８内の培地を、送液ポンプ２０によりフローセル１６へ送液する。フローセル１６の流路を流れる培地に含まれる溶存酸素濃度に相応（比例）して生じる酸素電極１４の応答電流値を微小電流計３２により測定し、必要に応じて記録・表示装置３４により、記録、表示する。酸素電極１４による電流値、温度センサ３８ａ，３８ｂ，３８ｃによる温度が十分に安定するまで、測定を行う。測定が完了したら、次工程に進む。
【００３５】
＜基準溶存酸素濃度電流値の測定（確認）＞
確認などのため、再び、基準溶存酸素濃度電流値（Ｃ）の測定を行う。バイパス配管２６を経由する経路に三方バルブ２４ａ，２４ｂを切り替えた状態で、培地容器１８内の培地を、送液ポンプ２０によりフローセル１６へ送液する。必要に応じて、送液流量を高くして、生物試料収容容器１０を経由した培地を追い出すために配管系のパージを行ってもよい。フローセル１６の流路を流れる培地に含まれる溶存酸素濃度に相応（比例）して生じる酸素電極１４の応答電流値を微小電流計３２により測定し、必要に応じて記録・表示装置３４により、記録、表示する。酸素電極１４による電流値、温度センサ３８ａ，３８ｂ，３８ｃによる温度が十分に安定するまで、測定を行う。
【００３６】
基準溶存酸素濃度電流値（Ａ）と、基準溶存酸素濃度電流値（Ｃ）との値が一致しない場合は、流路などの汚染や、基準溶存酸素濃度電流値（Ａ）の測定時に温度に対する飽和酸素濃度に達していなかったことなどが考えられる。また、溶存酸素濃度電流値（Ｂ）の測定では、測定の初期段階において、室温程度の温度で酸素飽和していた溶存酸素濃度が高い培地が流れることがあるため、一時的に基準溶存酸素濃度電流値（Ａ）や、基準溶存酸素濃度電流値（Ｃ）よりも電流値が高くなることがある。
【００３７】
基準溶存酸素濃度電流値（Ａ），（Ｃ）、溶存酸素濃度電流値（Ｂ）の測定は、バイパス配管２６を設けずに、生物試料収容容器１０の上流側、下流側のそれぞれに酸素電極が組み込まれたフローセルを設けて、測定してもよい。１つの酸素電極で共通して測定することにより、電極間のばらつきによる測定ばらつきをなくすこと、充分に滅菌されていない酸素電極やフローセルなどに起因する雑菌混入や、電極やフローセルなどからの溶出物質などの影響を受ける可能性を低減して生物試料収容容器１０へ培地を流すことができることなどから、バイパス配管２６を設け、経路を切り替えて測定することが好ましい。
【００３８】
＜酸素消費量の算出＞
培地内の溶存酸素濃度は、生物試料の呼吸に応じて、つまり生物試料による酸素消費量に応じて変化する。そのため、溶存酸素濃度から、例えば生物試料の呼吸活性を評価することができる。
【００３９】
生物試料収容容器１０中の生物試料を経由したことによる酸素電極応答電流値の変化量（基準溶存酸素濃度電流値（Ａ）に対する溶存酸素濃度電流値（Ｂ）の変化量、すなわち、生物試料（ここでは、生物試料収容容器１０）に供給される酸素量に対する、生物試料経由後（ここでは、生物試料収容容器１０経由後）の酸素量の変化量）を求める。変化量とは、例えば、変化率、差分などである。例えば、基準溶存酸素濃度電流値（Ａ）に対する溶存酸素濃度電流値（Ｂ）の変化率、すなわち、生物試料に供給される酸素量に対する、生物試料経由後の酸素量の変化率に、酸素供給量を乗じて生物試料の酸素消費量を求める。供給酸素量は、培地に接する気体の酸素分圧や、測定時の温度、塩分濃度などにより定まる培地の飽和酸素濃度と、送液流量とから、（飽和酸素濃度）×（送液流量）により算出される。また、酸素消費量を生物試料収容容器１０中の細胞数で除して、細胞１個当たりの細胞酸素消費量を算出することができる。
【００４０】
得られる酸素消費量には、酸素電極１４自身による酸素消費も含まれる。電極の酸素消費は、ファラデイの法則により算出することができる。上記の通り、酸素電極１４として、自己酸素消費量が極めて少ないマイクロカソード酸素電極などを用いることにより、酸素電極１４自身による酸素消費はほとんど無視することができる。
【００４１】
本実施形態に係る酸素測定装置および酸素測定方法により、定着性細胞などの生物試料を担体から剥離する必要がないため、生物試料の活性や機能を本来のものに近い状態に保ちながら、細胞などの活性を示す指標の１つである呼吸酸素消費量の測定ができる。担体ごと生物試料を取り扱うことができるため、測定のための準備作業が簡略化される。また、生物試料の損傷や損失が少なく、繰り返し利用しやすい。
【００４２】
また、灌流により培地が新鮮な状態で生物試料に供給されるため、細胞などの活性を長期間維持することができ、長期間の酸素消費動態の測定が可能であるため、効果や毒性が比較的弱い物質による細胞への影響を評価することができる。灌流により、培地中の試薬、添加物などの濃度および時間的制御を容易に行うことができる。
【００４３】
また、細胞の担体としてガラス板などの表面積が既知である担体を利用することで、細胞数当たりの酸素消費量を評価することができる。
【００４４】
さらに、生物試料収容容器１０に、観察窓としてガラスまたは樹脂などの透明材料を用いることにより、酸素消費量の測定とともに光学顕微鏡などによる細胞の観察などを行うことができる。
【００４５】
以上のことから、本実施形態に係る酸素測定装置および酸素測定方法により、担体に付着された生物試料の酸素消費量の信頼性が高い評価が可能となる。もちろん、生物試料による酸素消費量以外の酸素に関する測定量（例えば、補液や輸血、透析などにおける液中の酸素量など）を測定してもよい。
【実施例】
【００４６】
以下、実施例および比較例を挙げ、本発明をより具体的に詳細に説明するが、本発明は、以下の実施例に限定されるものではない。
【００４７】
＜実施例１＞
以下の構成の酸素測定装置を用いて、細胞の酸素消費量を測定した。
［酸素濃度測定フローセル］
フローセル：液容量０．６ｍＬ
酸素電極：１３０２型マイクロカソード電極（ｓｔｒａｔｈｋｅｌｖｉｎ社製、酸素自己消費量：９３ｆｍｏｌ／ｍｉｎ（ｔｙｐｉｃａｌ、応答電流０．６ｎＡ時））
内蔵温度センサ：白金測温抵抗体  Ｐｔ１００ｃｌａｓｓＡ（±０．１５＋０．００２ｔ℃）
［酸素電極電源］
酸化銀電池（抵抗により電極への印加電圧を０．６５Ｖに調整した）
［生物試料収容容器］
内径：２５ｍｍ（φ２２ガラス板対応）
ガラス板収容時の液容量：０．４ｍＬ
［送液ポンプ］
ポンプ：チュービングポンプ（ＡＣ−２１２０、ａｔｔｏ製）
流量：０．１〜１０００ｍＬ／ｈｒ
［送液配管］
送液チューブ：Ｔｙｇｏｎ  Ｒ３６０３
［温度センサ］
恒温槽：白金測温抵抗体  Ｐｔ１００ｃｌａｓｓＡ（±０．１５＋０．００２ｔ℃）
培地容器：Ｔ型熱電対
［微小電流計］
微小電流計ＴＲ８６５２（ａｄｖａｎｔｅｓｔ製、電流測定精度：１ｐＡ）
［記録装置］
データロガーＮＲ−５００（ｋｅｙｅｎｃｅ製）
【００４８】
生物試料、培地は以下のものを用いた。
［生物試料］
歯根膜由来上皮細胞（ＳＤＲ−Ｍ）、φ２２ガラス板単層培養（培養日数：７日〜９０日、細胞数：２Ｅ＋５個（コンフレント（増殖飽和状態）時、推定値）
［培地］
ＤＭＥＭ／Ｆ１２培地  血清１５％
培地流量：２ｍＬ／ｈｒ
【００４９】
φ２２ガラス板上で培養した歯根膜由来上皮細胞（ＳＤＲ−Ｍ、培養日数：７日，８日，１５日，２２日，３ヶ月）について、酸素電極の応答電流を細胞測定時の電流最大値（本実施例で基準溶存酸素濃度電流値として用いた）でノーマライズした結果を図２に示す。酸素電極電流値の変化率、すなわち溶存酸素濃度の変化は、−３％〜−６％程度であった。３７℃培地の飽和酸素濃度は、約６．７％であり、培地流量２ｍＬ／ｈｒ（０．０３３ｍＬ／ｍｉｎ）では、細胞（生物試料収容容器）への酸素供給量は、約０．７ｎｍｏｌ／ｍｉｎである。よって、各測定結果の酸素消費量は、０．２１〜０．４２ｎｍｏｌ／ｍｉｎとなり、φ２２ガラス板でコンフレント（増殖飽和状態）時の細胞数は２００，０００個と推定されるため、ＳＤＲ−Ｍ細胞の酸素消費速度は、１〜２ｆｍｏｌ／ｍｉｎ／ｃｅｌｌと算出される。
【００５０】
このように、細胞の本来の活性、機能を妨げることなく、酸素消費量の測定が可能であった。
【符号の説明】
【００５１】
１  酸素測定装置、１０  生物試料収容容器、１２  培地灌流システム、１４  酸素電極、１６  フローセル、１８  培地容器、２０  送液ポンプ、２２  容器、２４ａ，２４ｂ  三方バルブ、２６  バイパス配管、２８  スターラ、３０  制御部、３２  微小電流計、３４  記録・表示装置、３６  恒温槽、３８ａ，３８ｂ，３８ｃ  温度センサ。
【図１】
2010266261.tif 000003
【図２】
2010266261.tif 000004