(57)【要約】【課題】バルク製造において、チゲサイクリンのエピマー化および酸化を制御する製造プロセスを提供する。【解決手段】本明細書において、静脈内注入に適合するチゲサイクリンの調製物のための製造プロセスが開示される。具体的には、本発明の重要な特徴は、上記プロセスの段階の間、温度および酸素レベルを制御することである。チゲサイクリンは、非反応性ガス（例えば、窒素）を含む不活性ガス媒体を注入すること、および温度の制御により、プロセスの間保護される。本発明の実施形態は、バルク水溶液の温度制御と共に、溶存酸素のレベルを制御することにより、０．９％未満の総分解物量でのチゲサイクリンの製造を提供することである。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
明細書に記載の発明。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（発明の分野）
本発明は、チゲサイクリンの調製物のための製造プロセスに関する。
【背景技術】
【０００２】
（発明の背景）
チゲサイクリンは、広範な抗菌活性のスペクトルを有する抗生物質である。重要なことに、チゲサイクリンは、いくつかのバクテリア耐性株に対して効果的である。粉末状態でのチゲサイクリンは、静脈内注入前に、適合する再構成希釈剤の添加により再構成される。抗生物質チゲサイクリンは、ｔ−ブチルグリシル置換ナフタセンカルボキサミド遊離塩基である。
【０００３】
しかし、チゲサイクリンは、大気中の酸素による酸化的分解を含む分解、およびエピマー形成に対して脆弱なため、製造が困難である。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
それゆえ、バルク製造において、チゲサイクリンのエピマー化および酸化を制御する製造プロセスに対するニーズが存在する。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
（発明の要旨）
本発明は、凍結乾燥された粉末状態のバルク製造の間エピマー形成および酸化分解を制御することによる、チゲサイクリンのための製造プロセスに関する。具体的には、本発明の重要な特徴は、上記プロセスの段階の間、温度および酸素レベルを制御することである。チゲサイクリンは、非反応性ガス（例えば、窒素）を含む不活性ガス媒体を注入すること、および温度の制御により、プロセスの間保護される。
【０００６】
本発明の実施形態は、バルク水溶液の温度制御と共に、溶存酸素のレベルを制御することにより、０．９％未満の総分解物量でのチゲサイクリンの製造を提供することである。
【０００７】
本発明のさらなる実施形態は、０．９％未満の総分解産物を有する再構成可能な粉末としてのチゲサイクリンのための製造プロセスを提供することであり、そして少なくとも８０Ｌスケールにおける、注射用水（ＷＦＩ）とチゲサイクリンとの溶液からチゲサイクリンの再構成可能な粉末をさらに提供することである。
【０００８】
本発明の実施形態は、約１０ｍｇ／ｍＬ〜５０ｍｇ／ｍＬ、好ましくは２０ｍｇ／ｍＬの濃度でのＷＦＩ水におけるチゲサイクリンの製造プロセスを提供することである。ここで、上記水中の酸素レベルは、該水に窒素ガスを注入することにより０．５ｐｐｍ未満であり、そして該溶液が、バイアルに添加され得、該バイアル中のその溶液が、再構成可能な粉末に凍結乾燥され得る。
【０００９】
本発明のさらなる実施形態は、チゲサイクリン粉末の上記製造の間、バルク溶液のための約１３時間〜約２４時間の総製造保持時間を有する製造プロセスを提供することである。
【００１０】
本発明のさらなる実施形態は、静脈内投与前の再構成が利用可能な、そして少なくとも
１８ヶ月の貯蔵寿命を有するチゲサイクリン粉末を提供することである。
【００１１】
本発明のさらなる実施形態は、上記ＷＦＩ水が、約２℃〜約８℃の温度である製造プロセスを提供することである。
【００１２】
本発明のさらなる実施形態は、最初のバイアルの充填から凍結乾燥サイクルの開始までの６時間の最大滅菌保持時間を提供することである。
【００１３】
本発明の実施形態は、以下の段階を含む０．９％未満の総分解産物を有する再構成可能な粉末としてのチゲサイクリンの生成のための製造プロセスを提供することである：
ａ．約２℃〜約８℃の温度を維持しながら、ＷＦＩ水中の酸素レベルを０．５ｐｐｍ以下に低下させ、そして維持する段階；
ｂ．上記温度および酸素レベルを維持しながら、約１０ｍｇ／ｍＬ〜５０ｍｇ／ｍＬの濃度にて、段階ａの上記水おいてチゲサイクリンの溶液を形成する段階；
ｃ．段階ｂの上記溶液を、バイアルに充填する段階；
ｄ．段階ｃの上記溶液を凍結乾燥し、バイアル中に２５ｍｇ〜１５０ｍｇの再構成可能な粉末を形成する段階；および
ｅ．窒素下で、上記バイアルをシールする段階。
【００１４】
好ましくは、上述のプロセスの段階ｂにおけるチゲサイクリンの溶液は、約２０ｍｇ／ｍｌの濃度である。
【００１５】
好ましくは、５０ｍｇ〜１５０ｍｇ、さらに好ましくは５０ｍｇの再構成可能な粉末が、上述のプロセスの段階ｄのバイアル中に存在する。
【００１６】
凍結乾燥され、そして再構成されたチゲサイクリンの粉末は、実質的に図１で示されるような逆相ＨＰＬＣ溶出プロフィールを有することが分析された。
【００１７】
本発明は、以下の項目を提供する。
（項目１）
０．９％未満の総分解産物を有する再構成可能な粉末としてのチゲサイクリンの生成のための製造プロセスであって：
ａ．約２℃〜約８℃の温度を維持しながら、ＷＦＩ水中の酸素レベルを０．５ｐｐｍ以下に低下させ、そして維持する段階；
ｂ．該温度および酸素レベルを維持しながら、約１０ｍｇ／ｍＬ〜５０ｍｇ／ｍＬの濃度にて、段階ａの該水においてチゲサイクリンの溶液を形成する段階；
ｃ．段階ｂの該溶液を、バイアルに充填する段階；
ｄ．段階ｃの該溶液を凍結乾燥し、バイアル中に２５ｍｇ〜１５０ｍｇの再構成可能な粉末を形成する段階；
ｅ．窒素下で、該バイアルをシールする段階、
を包含する、製造プロセス。
（項目２）
項目１に記載の製造プロセスであって、前記プロセスの段階ｂにおけるチゲサイクリンの前記溶液が、約２０ｍｇ／ｍＬの濃度である、製造プロセス。
（項目３）
項目１または項目２に記載の製造プロセスであって、前記プロセスの段階ｄにおける５０ｍｇ〜１５０ｍｇの再構成可能な粉末が、前記バイアル中に存在する、製造プロセス。
（項目４）
項目１〜項目３のいずれか１項に記載のプロセスであって、段階ｂにおいて、チゲサイクリンの前記水溶液が、８０Ｌに等しいか、または８０Ｌよりも多い、プロセス。
（項目５）
項目１〜項目４のいずれか１項に記載のプロセスであって、段階ａにおける水中の前記酸素レベルが、窒素を注入することにより、０．５ｐｐｍであるか、または０．５ｐｐｍ未満である、プロセス。
（項目６）
項目１〜項目４のいずれか１項に記載のプロセスであって、段階ａにおける水中の前記酸素レベルが、窒素を注入することにより、約０．４ｐｐｍであるか、または０．４ｐｐｍ未満である、プロセス。
（項目７）
項目１〜項目４のいずれか１項に記載のプロセスであって、段階ａにおける水中の前記酸素レベルが、窒素を注入することにより、約０．１ｐｐｍであるか、または０．１ｐｐｍ未満である、プロセス。
（項目８）
項目１〜項目７のいずれか１項に記載のプロセスであって、静脈内投与の前の、再構成が利用可能なチゲサイクリンの粉末が、少なくとも１８ヶ月の貯蔵寿命を有する、プロセス。
（項目９）
項目１の上記プロセスに記載の製造された凍結乾燥チゲサイクリン粉末であって、該チゲサイクリンの粉末が、実質的に図１で示されるような逆相ＨＰＬＣ溶出プロフィールを有する、凍結乾燥チゲサイクリン粉末。
（項目１０）
項目１〜項目８のいずれか１項に記載のプロセスにより製造された、生成物。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
【図１】図１は、製造プロセスからのチゲサイクリンの逆相ＨＰＬＣ溶出プロファイルの代表的なクロマトグラムを示す。
【図２】図２は、チゲサイクリン製造プロセスの段階を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
（発明の詳細な説明）
本発明は、０．９％未満の総分解物を有する再構成可能な粉末としてのチゲサイクリンのための製造プロセスを提供する。上記チゲサイクリンの再構成可能な粉末を調製するためのプロセスは、８０Ｌの、または８０Ｌよりも大きなスケールにおける、注射用水（ＷＦＩ）とチゲサイクリンとの溶液から提供され得る。
【００２０】
総分解産物により、本発明者らは、チゲサイクリンの分解の結果である化合物または生成物を意味する。これら化合物または生成物としては、チゲサイクリンの酸化によって形成されるもの（例えば、Ｃ−１１位でヒドロキシル基を形成するか、または次いでＣ−６位で脱水して６−エン産物を形成する）、あるいは副反応（例えば、脱カルボキシル化、加水分解、光化学反応、または閉環）（Ｃ−４位での光誘導反応によって、加水分解および脱アミノを通して形成される生成物）によって形成される化合物または生成物が挙げられる。エピマーは、上記定義に含まれる。ミノサイクリン、および９−アミノ  ミノサイクリンは、上記定義から除外される。
【００２１】
「０．９％未満の総分解産物」により、本発明者らは、チゲサイクリンの溶液形成後であるが凍結乾燥前である２４時間における、チゲサイクリンに対する総分解産物量の割合が０．９％未満であることを意味する。
【００２２】
一般的に、上記プロセスは、約１０ｍｇ／ｍｌ〜５０ｍｇ／ｍｌ、好ましくは２０ｍｇ／ｍＬの濃度でのＷＦＩ水におけるチゲサイクリンの溶液を提供する。ここで、上記水中
の酸素レベルは、該水に窒素ガスを注入することにより０．５ｐｐｍ未満であり、そして該溶液が、バイアルに添加され得、該バイアル中のその溶液が、再構成可能な粉末に凍結乾燥され得る。
【００２３】
本発明は、再構成に利用でき、そしてさらに少なくとも１８ヶ月の貯蔵寿命を有するチゲサイクリン粉末の生成のための、約１３時間〜約２４時間のバルク溶液に対する総製造保持時間を有する製造プロセスを提供する。
【００２４】
本発明は、製造プロセスを提供する。ここで、ＷＦＩ水は、約２℃〜約８℃の温度で保持され、そして上記水は、酸素レベルが５ｐｐｍ未満となるように、さらに窒素を注入される。
【００２５】
最初のバイアルのバルク溶液の充填から凍結乾燥サイクルの開始までの６時間の最大滅菌保持時間は、分解の制御を確実にするために開発された。
【００２６】
本発明は、チゲサイクリンを添加する前に、約２℃〜約８℃の温度を維持しながら、０．５ｐｐｍ未満にＷＦＩ水中の酸素レベルを先ず低下させ、そして維持し、そして上記温度および酸素レベルをなお維持しながら、約１０ｍｇ／ｍＬ〜５０ｍｇ／ｍＬの溶液を形成することにより、０．９％未満の総分解産物を有する再構成可能な粉末としてのチゲサイクリンの生成のための製造プロセスを提供する。チゲサイクリンの水溶液は、バイアルに添加され得、さらに再構成可能な粉末に凍結乾燥され得、そしてこのバイアルはさらに、窒素下でシールされ得る。
【００２７】
好ましくは、チゲサイクリンの溶液が、２０ｍｇ／ｍｌであり、そして上記バイアルが、凍結乾燥後約５０ｍｇの再構成可能な粉末を有する。
【実施例】
【００２８】
以下の実施例は、本発明のプロセスを記述し、例示だけの目的のために示される。本発明は、詳細に、そして具体的な実施形態を参照して記載されているが、種々の変更および改良が、本発明の主旨および意図から逸脱することなく、このような実施形態に対して行われ得ることは、当業者にとって明らかである。
【００２９】
以下は、代表的なバッチサイズである８０Ｌでの、注射用チゲサイクリン（Ｔｉｇｅｃｙｃｌｉｎｅ）のための代表的な製造プロセスを記載する。
【００３０】
非滅菌バルク配合段階
１．バルク配合段階を開始する前に、配合ライン、充填ライン、配合物輸送ラインならびに配合タンク、中間タンク、および貯蔵タンクを、濾過された窒素で、パージする。
【００３１】
２．注射用水の要求量の約９５％（７６Ｌ）を配合タンクに添加し、溶存酸素量が０．５ｍｇ／Ｌ（ｐｐｍ）以下となるまで、濾過された窒素を注入しながら２℃〜８℃に水を冷却する。
【００３２】
３．上記水の溶存酸素量を測定する。上記溶存酸素量が、０．５ｍｇ／Ｌより高い場合には、溶存酸素量が０．５ｍｇ／Ｌ（ｐｐｍ）以下となり、そして温度が２℃〜８℃となるまで、上記水に、濾過された窒素を注入し続ける。
【００３３】
４．注入を続け、濾過された窒素で貯蔵タンクを加圧する。薬物物質を添加する前に、配合タンク中の上記水の窒素ガス注入を中止し、濾過された窒素で一面を覆い続ける。
【００３４】
５．全体のプロセスの間中、濾過された窒素のフローを維持することにより、薬物物質が空気に曝されないことを確実にしながら、１６００ｇの薬物物質を上記タンクに添加する。
【００３５】
６．上記バルク溶液を撹拌する。上記溶液の温度は２℃〜８℃でなければならない。
【００３６】
７．最終的な体積／重量（８０Ｌ）に達するまで、注射用水を配合タンクに添加し、溶液を撹拌する。
【００３７】
８．配合タンクにおいて、濾過された窒素で覆うことを維持する。溶存酸素量を測定する。
【００３８】
９．上記溶液の溶存酸素量が０．５ｍｇ／Ｌより高い場合には、安定な溶存酸素量測定値が得られるまで、濾過された窒素を注入し続ける。
【００３９】
無菌濾過および無菌充填
１．滅菌したガラスバイアル中に充填し、定期的に充填重量を検査する。バイアルを部分的に閉める。このプロセスは、６時間（最大許容可能な滅菌溶液の保持時間）で完了すべきである。
【００４０】
２．部分的に閉められたバイアルを、充填機器からトレイに載せる。密閉された輸送カートに、満載されたトレイを置く。
【００４１】
３．この段階までの製造プロセスは、１３時間〜２４時間（最大許容可能なバルク溶液の保持時間）で完了すべきである。
【００４２】
凍結乾燥
１．棚の入口の温度を２℃（±５℃）に設定する。
【００４３】
２．上記バイアルを載せる。
【００４４】
３．上記凍結乾燥器のドアを閉め、サイクルを開始する。
【００４５】
４．棚の入口の温度を−４５℃に下げる。棚の入口での、−４５℃（±５℃）の温度を、４時間保持するか、または−１７℃以下の生成物温度に達するまで、保持する。
【００４６】
５．最初の乾燥段階を開始する前に、チャンバー圧力を１５０ｍトール（ｍＴ）±１５０ｍＴに下げる。
【００４７】
６．上記生成物の崩壊温度（−６．５℃）／共融温度（−０．７４℃）未満の生成物温度に制限するために、棚温度を上げることによって最初の乾燥を開始し、最大２０時間（棚温度：−１０℃〜＋２５℃）続けるか、または生成物温度が０℃より高くなるまで続ける。
【００４８】
７．上記棚の入口の温度を４０℃（±５℃）まで上げることによる最後の乾燥を行い、９時間保持するか、または生成物温度が、少なくとも３時間、３０℃より高く維持されるまで、保持する。
【００４９】
８．濾過された窒素で、１２．５ｐｓｉ（±０．５ｐｓｉ）の部分真空に弱め、上記バイアルを完全に閉める。
【００５０】
９．部分真空を大気圧に弱める。
【００５１】
１０．上記乾燥器からバイアルを取り出し、クリンプでシールする（ｃｒｉｍｐ−ｓｅａｌ）。
【００５２】
ＨＰＬＣ試験
サンプルバイアルの内容物を、希釈剤に溶解する。必要であれば、サンプル溶液を希釈し、そしてグラジエント溶出を使用して、逆相カラムによりクロマトグラフィを行う。不純物を、付随して得られる、サンプル調製物クロマトグラムにおける不純物ピークの面積と、標準調製物クロマトグラムにおけるチゲサイクリンピークの平均面積との比較により決定する。
【００５３】
クロマトグラフィのカラム（長さ約１５ｃｍ、内径約４．６ｍｍ）を、Ｉｎｅｒｔｓｉｌ  ＯＤＳ２（粒径５μｍ）または等価物によりパックする。
【００５４】
検出器―２４８ｎｍで、フルスケール当たり約０．５吸光度単位の感度で操作できる、紫外線分光光度検出器。
【００５５】
試薬および材料
アセトニトリル―ＨＰＬＣグレード。
水―ＨＰＬＣ適合。
リン酸―試薬グレード、約８７％Ｈ３ＰＯ４。
水酸化カリウム溶液（１Ｎ）―試薬グレード。
トリフルオロ酢酸―試薬グレート。
二塩基性リン酸カリウム―Ｋ２ＨＰＯ４、ＨＰＬＣグレード。
ナトリウムＥＤＴＡ―（エチレンジニトリロ）−４酢酸２ナトリウム塩−ＨＰＬＣグレード。
ナトリウム亜硫酸水素塩―ＮａＨＳＯ３、試薬グレード。
移動相Ａ―９５０ｍＬの水に、二塩基性リン酸カリウムの４．３５ｇおよびナトリウムＥＤＴＡの０．９３ｇを溶解する。リン酸により、ｐＨを６．４に調整する。５０ｍＬのアセトニトリルを添加し、よく混合する。必要な場合は、孔径０．４５μｍの膜フィルターで濾過する。必要な場合は、脱気する。
移動相Ｂ―５００ｍＬの水に二塩基性リン酸カリウムの４．３５ｇおよびナトリウムＥＤＴＡの０．９３ｇを溶解する。リン酸により、ｐＨを６．４に調整する。５００ｍＬのアセトニトリルを添加し、よく混合する。必要な場合は、孔径０．４５μｍの膜フィルターで濾過する。必要な場合は、脱気する。
【００５６】
希釈剤―１リッター容量フラスコに、二塩基性リン酸カリウムの４．３５ｇおよびナトリウム亜硫酸水素塩の０．５０ｇを秤量する。水で溶解し、水で容量まで希釈する。１Ｎ水酸化カリウムにより、この溶液のｐＨを８．０に調整する。
【００５７】
ＥＤＴＡ溶液―１リッター容量フラスコに、ナトリウムＥＤＴＡの３．７ｇを秤量する。９５０ｍＬの水で溶解する。５０ｍＬアセトニトリルを添加し、よく混合する。
【００５８】
チゲサイクリン参考標準―既知の濃度。
【００５９】
以下の材料、方法、および手順を使用して、チゲサイクリン溶液の純度プロフィールにおける処理パラメータ（例えば、温度、時間、および溶存酸素量）の効果を調査するための、さらなる研究の結果を、表Ａ〜Ｏにおいて示す。
【００６０】
（材料および方法）
チゲサイクリン薬物物質  ロット番号  ８７１８５８Ｃ
０．１Ｎ  ＮａＯＨ  ロット番号  ９７１２０３１
０．１Ｎ  ＨＣｌ  ロット番号  ２８５３
滅菌注射用水  ロット番号  Ｊ３Ｎ４７２（Ｂ．Ｂｒａｕｎ）
（手順）
実験を、標準的な実験室の明るさの条件下で、プラスチックのグローブバック中で実施した。プラスチックのグローブボックスを、ビーカーのヘッドスペースを制御するために使用する。バッチサイズを、２００ｍＬとした。
【００６１】
１．意図どおりに溶液中の酸素レベルを達成するために、窒素と空気の混合物を含む上記グローブバッグを準備する。
【００６２】
２．マグネットスターラー上に、被覆されたビーカーを置く。ビーカーとクーラーを接続する。上記クーラーを所望される設定値に設定する。
【００６３】
３．２００ｍＬの滅菌注射用水（ＳＷＦＩ）を上記ビーカーに添加する。平衡化させる。温度および酸素量を測定する。所望した条件に達するときに、正確に秤量されたＡＰＩを添加し、溶解するまで混合する。必要であれば、溶解を助けるためにスパチュラーを使用する。ｐＨを調整するために、製造用の、０．１Ｎ  ＮａＯＨと０．１Ｎ  ＨＣｌのいずれかの４ｍＬ、および１９６ｍＬの注射用水（ＷＦＩ）を使用する。
【００６４】
４．完全な溶解後、約５．５ｍＬの溶液をバイアルに移し、それらを閉める。これらバイアルを、適切なヘッドスペース条件で閉める。適切な温度条件中にこのバイアルを置く。
【００６５】
５．１時間、４時間、８時間、１０時間、１２時間、および２４時間で、上記バイアルをサンプリングする。上記サンプルを分析のために送る。翌日の分析のために、−２０℃で、上記１０時間、１２時間、および２４時間のサンプルを冷凍する。
【００６６】
６．ｐＨを測定し、各時点での溶液の色を記録する。
【００６７】
（結果）
（実験条件）
上記１時間のサンプルを、直接ビーカーから取る。ヘッドスペース条件の模擬実験をするために、より遅い時点でのサンプルを、上記バッグのガス体で処理された、閉じたバイアルにおいて収集し、それから個々の温度条件を維持するために、水浴または冷蔵庫に配置した。これは、実験室における安全性を維持するために行った。使い捨てプラスチックグローブバッグは、サンプル中の所望される溶存酸素（ＤＯ）量をもたらすヘッドスペース酸素レベルを維持するために、窒素および空気の混合物の一定のフローを要求する。サンプルのｐＨを、各サンプリング時点で、測定した。
【００６８】
（濃度および分解のプロファイル）
濃度および分解のプロファイルを、上記記載したように、ＨＰＬＣにより分析した。結果は、上記プロセスから酸素を除去し、温度を制御する場合、ほとんど分解が見られないことを、示している。分解は、より高温条件下で、わずかにより高かった。
【００６９】
上記さらなる研究の結果は、上記プロセスから酸素を除去する場合、ほとんど分解が見られないことを、示している（試行Ｈ、Ｉ、及びＫ〜Ｏを参照のこと）。分解は、より高
温条件下で、わずかにより高かった。研究されたｐＨの範囲（７．７〜８．２）は、チゲサイクリンのバルク溶液の分解において、重要な効果を有さなかった。しかし、わずかにより高い分解が、ｐＨ８．２、温度８℃、かつ溶存酸素２ｐｐｍでのサンプルで見られた（ｐＨ７．７、同じ温度、かつ同じ溶存酸素量での溶液と比較した場合）。２４時間後の総分解量は、温度と溶液中の溶存酸素レベルとの間の相互作用を示している。バルク溶液を調整する温度、または保持する温度に関係なく、上記酸素レベルが、０ｐｐｍと約０．４ｐｐｍとの間である場合には、見出される分解要素の総量は最小となる。０．４ｐｐｍの酸素レベル〜１．２ｐｐｍの酸素レベル―上記酸素レベルが増加する場合に、バルク溶液が生成される温度、および保持される温度を、４℃から２℃に低くする限り、分解生成物の総量は、なお最小であり得る。比較の試行Ａ〜ＧおよびＪで示されるように、受け入れることができない分解産物レベルが見出される。
【００７０】
【化１】
2010024252.tif 000002
【００７１】
【化２】
2010024252.tif 000003
【００７２】
【化３】
2010024252.tif 000004
【００７３】
【化４】
2010024252.tif 000005
【００７４】
【化５】
2010024252.tif 000006
【００７５】
【化６】
2010024252.tif 000007
【００７６】
【化７】
2010024252.tif 000008
【００７７】
【化８】
2010024252.tif 000009
【図１】
2010024252.tif 000010
【図２】
2010024252.tif 000011