(57)【要約】【課題】本発明はキャッツクローに由来するＰＯＡの六成分中から不活性のミトラフィリンのみを、他のＰＯＡ成分の活性を阻害しない程度まで有効に除去し、ＰＯＡの高活性化を達成でき、又ＰＯＡ成分中、高い活性を示すイソテロポディンの単離が有効に実行できる高活性ＰＯＡの製法を提供する。【解決手段】キャッツクローから抽出したＰＯＡ溶液に溶媒としてトルエン又はベンゼン又はキシレンの一又は二以上を加えてＰＯＡ成分中のミトラフィリンの溶解度を低下させることにより同ミトラフィリンを析出し、該析出したミトラフィリンを除去する高活性ＰＯＡの製法、並びに上記ミトラフィリンを除去した後に、カラムクロマトグラフィーによりＰＯＡ成分中のイソテロポディンを単離する高活性ＰＯＡの製法。【選択図】    なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
キャッツクローから抽出したＰＯＡ溶液に溶媒としてトルエン又はベンゼン又はキシレンの一又は二以上を加えてＰＯＡ成分中のミトラフィリンの溶解度を低下させることにより同ミトラフィリンを析出し、該析出したミトラフィリンを除去することを特徴とする高活性ＰＯＡの製法。
【請求項２】
キャッツクローから抽出したＰＯＡ溶液に溶媒として植物油又は流動パラフィン又は動物油を加えてＰＯＡ成分中のミトラフィリンの溶解度を低下させることにより同ミトラフィリンを析出し、該析出したミトラフィリンを除去することを特徴とする高活性ＰＯＡの製法。
【請求項３】
上記析出ミトラフィリンを除去したＰＯＡ溶液中よりカラムクロマトグラフィーにより残留ミトラフィリンを除去することを特徴とする請求項１又は２記載の高活性ＰＯＡの製法。
【請求項４】
キャッツクローから抽出したＰＯＡ溶液に溶媒としてトルエン又はベンゼン又はキシレンの一又は二以上を加えてＰＯＡ成分中のミトラフィリンの溶解度を低下させることにより同ミトラフィリンを析出し、該析出したミトラフィリンを除去し、更にカラムクロマトグラフィーによりＰＯＡ成分中のイソテロポディンを単離することを特徴とする高活性ＰＯＡの製法。
【請求項５】
キャッツクローから抽出したＰＯＡ溶液に溶媒として植物油又は流動パラフィン又は動物油を加えてＰＯＡ成分中のミトラフィリンの溶解度を低下させることにより同ミトラフィリンを析出し、該析出したミトラフィリンを除去し、更にカラムクロマトグラフィーによりＰＯＡ成分中のイソテロポディンを単離することを特徴とする高活性ＰＯＡの製法。
【請求項６】
上記溶媒を上記ＰＯＡ溶液１に対し重量比で０．２〜１０倍量加えることを特徴とする請求項１又は２又は４又は５記載の高活性ＰＯＡの製法。
【請求項７】
上記溶媒を上記ＰＯＡ溶液１に対し重量比で０．２〜１０倍量加えると共に、重量比で０．２〜２０倍量の水を加えることを特徴とする請求項１又は２又は４又は５記載の高活性ＰＯＡの製法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明はキャッツクローから抽出されるＰＯＡから高活性ＰＯＡを生成する製法に関する。
【背景技術】
【０００２】
既知の通り、キャッツクロー（学術名：Ｕｎｃａｒｉａ  Ｔｏｍｅｎｔｏｓａ（Ｗｉｌｌｄ．）ＤＣ）に特異的に含有される活性成分ＰＯＡはテロポディン、イソテロポディン、スペシオフィリン、ミトラフィリン、イソミトラフィリン、ウンカリンＦの六成分が同定されている。
【０００３】
ＰＯＡはペンタサイクリック・オキシインドール・アルカロイド（Ｐｅｎｔａｃｙｃｌｉｃ  Ｏｘｉｎｄｏｌｅ  Ａｌｋａｌｏｉｄｓ）の略語であり、以下単にＰＯＡと称する。
【０００４】
キャッツクローエキスはキャッツクローから抽出した上記ＰＯＡを含有するパウダー又は液体として存在する。
【０００５】
ケプリンガー氏は特許文献１中において、ミトラフィリンが免疫系刺激剤として不活性であることを指摘している。
【０００６】
上記指摘のように、上記ＰＯＡ成分中、ミトラフィリンは機能性食品又は医薬品等としての効能において不活性である。
【０００７】
他方、テロポディン、イソテロポディン、スペシオフィリン、イソミトラフィリン、ウンカリンＦの個々は後記する順位で高活性であることが出願人の研究と実験から数値的に明らかにされた。
【０００８】
更に、上記キャッツクローエキス中のＰＯＡ六成分の相対含有率について、多数の検体を分析した結果、ミトラフィリンが他のＰＯＡ成分に比較し突出して多く、平均３０％強の含有率に達していることが解った。
【０００９】
機能性食品又は医薬品等として不活性のミトラフィリンを多量に含有していると、該ミトラフィリンが他のＰＯＡ成分による上記効能を著しく減殺せしめ、全体としての活性を低下させる主要な原因となっている。
【００１０】
上記不活性なミトラフィリンの除去法の一つとしてＰＯＡ六成分の個々を単離し、ミトラフィリンを除いた五成分を混合する方法が考えられるが、個々を単離する点において生産性と経済性を阻害する。
【００１１】
他方、ＰＯＡの六成分中からミトラフィリンのみを、他のＰＯＡ成分の活性を阻害しない程度まで除去する工業的に利用し得る有効な技術は確立されていない。
【００１２】
【特許文献１】特公平６−６５８８号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１３】
出願人はキャッツクローと、ＰＯＡの抽出と純化、並びにその癌細胞増殖抑制効果について研究を重ねてきた。該研究の結果、テロポディン、イソテロポディン、スペシオフィリン、イソミトラフィリン、ウンカリンＦの順で癌細胞に対する増殖抑制効果が顕著であり、ミトラフィリンについては全く増殖抑制効果が認められないことを数値的に初めて明らかにした。
【００１４】
本発明に係る高活性ＰＯＡの製法はこの知見に基づき提供されたものであり、これにより上記ミトラフィリンを除去した高活性ＰＯＡの投与、又はイソテロポディン単体の投与による癌細胞増殖抑制効果の著しい向上、例えば抗癌剤と併用して癌の進行を劇的に抑制する等の、癌治療におけるＰＯＡ活用の道を拓くことを可能にしたものである。
【課題を解決するための手段】
【００１５】
本発明は、上記キャッツクローエキスから不活性なミトラフィリンを除去する、第一の除去法として、キャッツクローから抽出したＰＯＡ溶液に溶媒としてトルエン又はベンゼン又はキシレンの一又は二以上を加えてＰＯＡ成分中のミトラフィリンの溶解度を低下させることにより同ミトラフィリンを析出し、該析出したミトラフィリンを除去する高活性ＰＯＡの製法を提供する。
【００１６】
又本発明は、上記キャッツクローエキスから不活性なミトラフィリンを除去する、第二の除去法として、キャッツクローから抽出したＰＯＡ溶液に溶媒として植物油又は流動パラフィン又は動物油を加えてＰＯＡ成分中のミトラフィリンの溶解度を低下させることにより同ミトラフィリンを析出し、該析出したミトラフィリンを除去する高活性ＰＯＡの製法を提供する。
【００１７】
又本発明は、上記キャッツクローエキスから不活性なミトラフィリンを除去する、第三の除去法として、上記析出ミトラフィリンを除去したＰＯＡ溶液中よりカラムクロマトグラフィーにより残留ミトラフィリンを除去する高活性ＰＯＡの製法を提供する。
【００１８】
又本発明は、上記キャッツクローエキスから不活性なミトラフィリンを除去し、更に該ミトラフィリンを除去したＰＯＡからイソテロポディンを単離する、第一の単離法として、キャッツクローから抽出したＰＯＡ溶液に溶媒としてトルエン又はベンゼン又はキシレンの一又は二以上を加えてＰＯＡ成分中のミトラフィリンの溶解度を低下させることにより同ミトラフィリンを析出し、該析出したミトラフィリンを除去し、更にカラムクロマトグラフィーによりＰＯＡ成分中のイソテロポディンを単離する高活性ＰＯＡの製法を提供する。
【００１９】
又本発明は、上記キャッツクローエキスから不活性なミトラフィリンを除去し、更に該ミトラフィリンを除去したＰＯＡからイソテロポディンを単離する、第二の単離法として、キャッツクローから抽出したＰＯＡ溶液に溶媒として植物油又は流動パラフィン又は動物油を加えてＰＯＡ成分中のミトラフィリンの溶解度を低下させることにより同ミトラフィリンを析出し、該析出したミトラフィリンを除去し、更にカラムクロマトグラフィーによりＰＯＡ成分中のイソテロポディンを単離する高活性ＰＯＡの製法を提供する。
【００２０】
好ましい例示として、上記各製法における溶媒は上記ＰＯＡ溶液１に対し重量比で０．２〜１０倍量加える。
【００２１】
又は他の好ましい例示として、上記溶媒を上記ＰＯＡ溶液１に対し重量比で０．２〜１０倍量加えると共に、重量比で０．２〜２０倍量の水を加える。  
【発明の効果】
【００２２】
本発明によれば、キャッツクローに由来するＰＯＡの六成分中から不活性のミトラフィリンのみを、他のＰＯＡ成分の活性を阻害しない程度まで有効に除去することができ、ＰＯＡの高活性化を達成できる。
【００２３】
又本発明によれば、ＰＯＡ成分中、高い活性を示すイソテロポディンの単離が有効に実行できる。
【００２４】
又本発明によれば、上記ミトラフィリンを除去した高活性ＰＯＡの投与、又はイソテロポディン単体の投与により、大きな癌細胞増殖抑制効果を達成でき、癌治療における副作用のない治療法の道を拓く。例えば抗癌剤と併用して癌の進行を劇的に抑制する効果が期待できる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２５】
キャッツクローエキスはキャッツクローから抽出した上記ＰＯＡを含有するパウダー又は液体として存在する。
【００２６】
前記した、ケプリンガー氏が指摘するように、ミトラフィリンが免疫系刺激剤として不活性である。即ち、上記ＰＯＡ成分中、ミトラフィリンは機能性食品又は医薬品等としての効能において不活性である。
【００２７】
他方、テロポディン、イソテロポディン、スペシオフィリン、イソミトラフィリン、ウンカリンＦの個々は該記載の順位で高活性であること、該ミトラフィリンが他のＰＯＡ成分に比較し、平均３０％強の含有率に達していることを数値的に検証した。
【００２８】
従って、上記多量で且つ不活性のミトラフィリンは機能性食品又は医薬品等におけるＰＯＡ成分による上記効能を減殺せしめ、全体としての活性を低下せしめる。
【００２９】
前記のように、上記不活性なミトラフィリンの除去法の一つとしてＰＯＡ六成分の個々を単離し、ミトラフィリンを除いた五成分を混合する方法が考えられるが、個々を単離する点において生産性と経済性を阻害する。
【００３０】
他方、ＰＯＡの六成分中からミトラフィリンのみを、他のＰＯＡ成分の活性を阻害しない程度まで除去する工業的に利用し得る有効な技術は確立されていない。
【００３１】
出願人はキャッツクローと、ＰＯＡの抽出と純化、並びにその癌細胞増殖抑制効果について研究を重ねてきた。該研究の結果、テロポディン、イソテロポディン、スペシオフィリン、イソミトラフィリン、ウンカリンＦの順で癌細胞に対する増殖抑制効果が顕著であり、ミトラフィリンについては全く増殖抑制効果が認められないことを数値的に初めて明らかにした。本発明に係る高活性ＰＯＡの製法は、この知見に基づいている。
【００３２】
以下、高活性ＰＯＡの製法、即ちミトラフィリンの除去に関する方法、並びに上記ミトラフィリン除去法を併用したイソテロポディン単離に関する方法に共通な事項について工程順に説明する。
【００３３】
１．キャッツクローの原木の採取
キャッツクローは主にペルー熱帯雨林に自生し、八年以上、特に一二年以上の原木が最もＰＯＡ含有量が高く、採取時期は雨期を避け、乾期に採取するのが好ましい。
又ウカヤリ県コロネル・ポルティヨ郡  プカルパ市に自生するキャッツクローが最もＰＯＡ含有量が高い。
【００３４】
２．キャッツクロー原木の幹の内樹皮の剥離
キャッツクローの葉は不活性成分であるミトラフィリンの含有率が高く、キャッツクローからこの葉を除去した幹、特に幹の外樹皮を除去し、外樹皮内側の内樹皮（第二層）を剥離し採取する。内樹皮は外樹皮や木部や髄に比べ２〜４倍のＰＯＡ含有率を有する。
【００３５】
３．内樹皮の乾燥
上記採取した内樹皮の水分が重量比で５〜１０％程度になるまで乾燥する。自然乾燥、強制乾燥の何れかの方法を採る。
【００３６】
４．粉砕
上記乾燥した内樹皮を粉砕機にかけ、粉末状又は粒状、例えば２０〜７０メッシュ、好ましくは３０〜５０メッシュの粒度の粉末状に粉砕する。粉砕機として例えばハンマーミルを適用する。
【００３７】
５．キャッツクローエキスの抽出
エタノール、含水エタノールの抽出溶媒中に上記キャッツクロー粉末を浸漬し、キャッツクローエキスを抽出する。
浸漬時間：２４〜１２０時間、好ましくは５０〜９０時間
浸漬温度：１５〜８０℃、好ましくは１５〜４０℃
（溶媒温度をこの温度範囲に保つ）
抽出方法：浸漬液を濾過装置等にかけキャッツクローエキス液を得る。
【００３８】
６．キャッツクローエキス液の濃縮
上記キャッツクローエキス液を濃縮機にかけ、エタノールを除去して濃縮キャッツクローエキス液を得る。
【００３９】
７．濃縮キャッツクローエキス液の粉化
上記濃縮キャッツクローエキス液をスプレードライ機（噴霧乾燥機）にかけ、水分を蒸発させてキャッツクローエキスパウダーを得る。
【００４０】
８．キャッツクローエキスパウダーの整粒
【００４１】
上記キャッツクローエキスパウダーの大部分は粉末状であるが、部分的に塊状を呈する。この塊状物を解消するためハンマーミル等の粉砕機にかけて粉砕する。
【００４２】
次に上記粉砕パウダーを篩過し１００〜３００メッシュの範囲の粒度に整粒したＰＯＡ含有率５〜１０％のキャッツクローエキスパウダーを得る。
【００４３】
上記工程８で得られたキャッツクローエキスパウダーを出発原料として下記の方法により高活性ＰＯＡを製造する。
【００４４】
又は上記５で得られたキャッツクローエキスの液体、上記工程６で得られたキャッツクローエキスの液体をそのまま出発原料として下記の方法により高活性ＰＯＡを製造することができる。
【００４５】
又は上記工程７で得られたキャッツクローエキスパウダーをそのまま出発原料として下記の方法により高活性ＰＯＡを製造することができる。
【００４６】
＜ミトラフィリンの第一の除去法＞
本発明はキャッツクローから抽出したＰＯＡ溶液にトルエン又はベンゼン又はキシレンの一又は二以上を加えてＰＯＡ成分中のミトラフィリンの溶解度を低下させることにより同ミトラフィリンを析出し、該析出したミトラフィリンを除去する高活性ＰＯＡの製法を提供する。
【００４７】
＜ミトラフィリンの第二の除去法＞
又本発明はキャッツクローから抽出したＰＯＡ溶液に溶媒として植物油又は流動パラフィンを加えてＰＯＡ成分中のミトラフィリンの溶解度を低下させることにより同ミトラフィリンを析出し、該析出したミトラフィリンを除去する高活性ＰＯＡの製法を提供する。
【００４８】
上記植物油に代え、動物油を溶媒として用いることができる。
【００４９】
＜ミトラフィリンの第三の除去法＞
上記第一の方法又は第二の方法により得られた高活性ＰＯＡ中には少量のミトラフィリンを残留し、この不活性成分である残留ミトラフィリンを除去するため、本発明は上記析出ミトラフィリンを除去したＰＯＡ溶液中よりカラムクロマトグラフィーにより上記残留ミトラフィリンを除去する高活性ＰＯＡの製法を提供する。
【００５０】
＜イソテロポディンの第一の単離法＞
本発明は上記ミトラフィリンの第一の除去法によって得た高活性ＰＯＡからイソテロポディンを単離する高活性ＰＯＡの製法を提供する。
【００５１】
即ち、キャッツクローから抽出したＰＯＡ溶液にトルエン又はベンゼン又はキシレンの一又は二以上を加えてＰＯＡ成分中のミトラフィリンの溶解度を低下させることにより同ミトラフィリンを析出し、該析出したミトラフィリンを除去し、更にカラムクロマトグラフィーによりＰＯＡ成分中のイソテロポディンを単離する高活性ＰＯＡの製法を提供する。
【００５２】
＜イソテロポディン第二の単離法＞
又本発明は上記ミトラフィリンの第二の除去法によって得た高活性ＰＯＡからイソテロポディンを単離する高活性ＰＯＡの製法を提供する。
【００５３】
又本発明はキャッツクローから抽出したＰＯＡ溶液に溶媒として植物油又は流動パラフィンを加えてＰＯＡ成分中のミトラフィリンの溶解度を低下させることにより同ミトラフィリンを析出し、該析出したミトラフィリンを除去し、更にカラムクロマトグラフィーによりＰＯＡ成分中のイソテロポディンを単離する高活性ＰＯＡの製法を提供する。
【００５４】
上記植物油に代え、動物油を溶媒として用いることができる。
次に上記ミトラフィリン除去法、つまりミトラフィリンを除去した高活性ＰＯＡの製法の具体例について説明する。
【００５５】
＜ミトラフィリンの第一の除去法・・・溶媒としてトルエンを使用＞
原料として使用する５％（重量比）のＰＯＡを含む上記キャッツクローエキスパウダー又はキャッツクローエキス液を、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）で分析したところ、全ＰＯＡ中のミトラフィリン含有率は絶対検量線法で３１．５％であった。次に述べるベンゼン又はキシレンを用いた原料も同様である。
【００５６】
上記キャッツクローエキスパウダー１００ｇ又は該パウダー１００ｇに相当するキャッツクローエキス液にメタノール３００ｍＬを加えた。
このＰＯＡ溶液にトルエン２００ｍＬ及び水４００ｍＬを加え、分液漏斗で１０分間振とうしたのち１０分間静置して有機層と水層に液相分離した。
【００５７】
上記有機層（上層）を採り、溶媒を留去して微黄色固体４．２３ｇを得た。高速液体クロマトグラフィーで分析したところ、全ＰＯＡ中のミトラフィリン含有率は絶対検量線法で４．０％であった。
【００５８】
＜ミトラフィリンの第一の除去法・・・溶媒としてベンゼンを使用＞
上記キャッツクローエキスパウダー１００ｇ又は該パウダー１００ｇに相当するキャッツクローエキス液にメタノール３００ｍＬを加えた。
【００５９】
このＰＯＡ溶液にベンゼン２００ｍＬ及び水４００ｍＬを加え、分液漏斗で１０分間振とうしたのち１０分間静置して有機層と水層に液相分離した。
【００６０】
上記有機層（上層）を採り、溶媒を留去して微黄色固体４．３７ｇを得た。高速液体クロマトグラフィーで分析したところ、全ＰＯＡ中のミトラフィリン含有率は絶対検量線法で４．８％であった。
【００６１】
＜ミトラフィリンの第一の除去法・・・溶媒としてキシレンを使用＞
上記キャッツクローエキスパウダー１００ｇ又は該パウダー１００ｇに相当するキャッツクローエキス液にメタノール３００ｍＬを加えた。
【００６２】
このＰＯＡ溶液にキシレン２００ｍＬ及び水４００ｍＬを加え、分液漏斗で１０分間振とうしたのち１０分間静置して有機層と水層に液相分離した。
【００６３】
上記有機層（上層）を採り、溶媒を留去して微黄色固体３．８０ｇを得た。高速液体クロマトグラフィーで分析したところ、全ＰＯＡ中のミトラフィリン含有率は絶対検量線法で４．５％であった。
【００６４】
＜ミトラフィリンの第二の除去法・・・溶媒として植物油又は動物油を使用＞
原料として使用する５％（重量比）のＰＯＡを含む上記キャッツクローエキスパウダー又はキャッツクローエキス液を、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）で分析したところ、全ＰＯＡ中のミトラフィリンは絶対検量線法で３１．５％であった。次に述べる流動パラフィンを用いた原料も同様である。
【００６５】
上記キャッツクローエキスパウダー１００ｇ又は該パウダー１００ｇに相当するキャッツクローエキス液にメタノール３００ｍＬを加えた。
【００６６】
このＰＯＡ溶液に植物油２００ｍＬ及び水４００ｍＬを加え、分液漏斗で１０分間振とうしたのち遠心分離機を用いて３０００ｒｐｍ、１０分間遠心分離により有機層と水層に液相分離した。
【００６７】
又はこのＰＯＡ溶液に動物油２００ｍＬ及び水４００ｍＬを加え、分液漏斗で１０分間振とうしたのち遠心分離機を用いて３０００ｒｐｍ、１０分間遠心分離により有機層と水層に液相分離した。
【００６８】
上記有機層（上層）を採り、高速液体クロマトグラフィーで分析したところ、全ＰＯＡ中のミトラフィリン含有率は絶対検量線法で２．８％であった。
【００６９】
上記植物油としては、菜種、大豆、トウモロコシ、ひまわりの種子、ごま、サフラワー（紅花）、リノール酸、オレイン酸、綿実、こめ（米糠）、落花生（ピーナッツ）等に由来する植物油の適用が可能である。
【００７０】
上記動物油としては家畜等の動物、魚に由来する油の適用が可能である。
【００７１】
＜ミトラフィリンの第二の除去法・・・溶媒として流動パラフィンを使用＞
上記キャッツクローエキスパウダー１００ｇ又は該パウダー１００ｇに相当するキャッツクローエキス液にメタノール３００ｍＬを加えた。
【００７２】
このＰＯＡ溶液に流動パラフィン２００ｍＬ及び水４００ｍＬを加え、分液漏斗で１０分間振とうしたのち遠心分離機を用いて３０００ｒｐｍ、１０分間遠心分離により有機層と水層に液相分離した。
【００７３】
上記有機層（上層）を採り、高速液体クロマトグラフィーで分析したところ、全ＰＯＡ中のミトラフィリン含有率は絶対検量線法で３．５％であった。
【００７４】
＜ミトラフィリンの第三の除去法・・・溶媒としてトルエン又はベンゼン又はキシレンを使用＞
上記ミトラフィリンの第一の除去法で得られた有機層（上層）を採り、上記溶媒を留去して約２０mＬまで濃縮し、これを溶離液として塩化メチレンを使用した充填材としてシリカゲルを使用したカラムクロマトグラフィーに付し、トルエン溶媒では白色固体２．５８ｇ、ベンゼン溶媒では白色固体２．３５ｇ、キシレン溶媒では白色固体２．００ｇを得た。これを高速液体クロマトグラフィーで分析したところ、全ＰＯＡ中のミトラフィリンは検出されなかった。
【００７５】
上記充填材としてシリカゲルに代え、合成高分子吸着樹脂を使用することができる。
【００７６】
＜ミトラフィリンの第三の除去法・・・溶媒として植物油又は流動パラフィン又は動物油を使用＞
上記ミトラフィリンの第二の除去法で得られた有機層（上層）を採り、これを溶離液として塩化メチレンを使用した充填材としてシリカゲルを使用したカラムクロマトグラフィーに付し、植物油溶媒では白色固体２．８０ｇ、流動パラフィン溶媒では白色固体２．７５ｇ、動物油溶媒では白色固体２．８２ｇを得た。これを高速液体クロマトグラフィーで分析したところ、全ＰＯＡ中のミトラフィリンは検出されなかった。
【００７７】
上記充填材としてシリカゲルに代え、合成高分子吸着樹脂を使用することができる。
【００７８】
上記ミトラフィリンの第一乃至第三の除去法において使用する溶媒の好ましい例示として、上記ＰＯＡ溶液１に対し重量比で０．２〜１０倍量の溶媒、即ちトルエン又はベンゼン又はキシレンの一又は二以上、又は植物油又は流動パラフィン又は動物油を加えたものを使用する。
【００７９】
又は他の例示として、上記ＰＯＡ溶液１に対し重量比で０．２〜１０倍量の溶媒、即ちトルエン又はベンゼン又はキシレンの一又は二以上、又は植物油又は流動パラフィン又は動物油を加えると共に、重量比で０．２〜２０倍量の水を加えたものを使用する。
【００８０】
＜イソテロポディンの第一の単離法・・・溶媒としてトルエン又はベンゼン又はキシレンを使用＞
上記ミトラフィリンの第一の除去法で得られた有機層（上層）を採り、上記溶媒を留去して約２０mＬまで濃縮し、この濃縮液を充填材としてシリカゲルを使用したカラムクロマトグラフィーに付し、酢酸エチル／ｎ−ヘキサン＝１／１３（ｖ／ｖ）を溶離液として使用して白色固体１．０８ｇを得た。これを高速液体クロマトグラフィーで分析したところ、絶対検量線法で９９．２％の高純度のイソテロポディンが単離できた。
【００８１】
＜イソテロポディンの第二の単離法・・・溶媒として植物油又は流動パラフィン又は動物油を使用＞
上記ミトラフィリンの第二の除去法で得られた有機層（上層）を採り、これを充填材としてシリカゲルを使用したカラムクロマトグラフィーに付し、酢酸エチル／ｎ−ヘキサン＝１／１３（ｖ／ｖ）を溶離液として使用して白色固体１．３０ｇを得た。これを高速液体クロマトグラフィーで分析したところ、絶対検量線法で９９．５％の高純度のイソテロポディンが単離できた。
【００８２】
上記イソテロポディンの第一、第二の単離法において使用する溶媒の好ましい例示として、上記ＰＯＡ溶液１に対し重量比で０．２〜１０倍量の溶媒、即ちトルエン又はベンゼン又はキシレンの一又は二以上、又は植物油又は流動パラフィン又は動物油を加えたものを使用する。
【００８３】
又は他の例示として、上記ＰＯＡ溶液１に対し重量比で０．２〜１０倍量の溶媒、即ちトルエン又はベンゼン又はキシレンの一又は二以上、又は植物油又は流動パラフィン又は動物油を加えると共に、重量比で０．２〜２０倍量の水を加えたものを使用する。
【００８４】
＜高活性ＰＯＡの製法の上記各例において出発原料として使用されるキャッツクローエキスにおけるＰＯＡの含有量向上方法＞
前記各例において出発原料として使用されるキャッツクローエキスにおけるＰＯＡの含有量を増加させれば、結果物として得られる高活性ＰＯＡの収量を高めることができる。以下、ＰＯＡ収量を高める方法について説明する。
【００８５】
前記工程１乃至５を経て得られたキャッツクローエキス液に下記の６乃至９の工程を実施する（１乃至５の工程は省約する）。
６．キャッツクローエキスのＰＯＡ高含量化
【００８６】
上記キャッツクローエキス液をカラムクロマトグラフィーに付し、即ちカラム筒に充填した合成高分子吸着樹脂に通液後、更に該合成高分子吸着樹脂を水で洗浄し、該洗浄済み合成高分子吸着樹脂にエタノール又は含水エタノールを通液してＰＯＡ含有率１０〜１２％のキャッツクローエキスの高含量液を得る。
【００８７】
７．キャッツクローエキス液の濃縮
上記キャッツクローエキス液を濃縮機にかけ、エタノールを除去してＰＯＡ含有率１６〜２０％の濃縮キャッツクローエキス液を得る。
【００８８】
８．濃縮キャッツクローエキス液の粉化
上記濃縮キャッツクローエキス液をスプレードライ機（噴霧乾燥機）にかけ、水分を蒸発させてＰＯＡ含有率２５〜３０％のキャッツクローエキスパウダーを得る。
【００８９】
９．キャッツクローエキスパウダーの整粒
上記キャッツクローエキスパウダーの大部分は粉末状であるが、部分的に塊状を呈する。この塊状物を解消するためハンマーミル等の粉砕機にかけて粉砕する。
【００９０】
次に上記粉砕パウダーを篩過し１００〜３００メッシュの範囲の粒度に整粒したＰＯＡ含有率２５〜３０％のキャッツクローエキスパウダーを得る。
【００９１】
本発明によって得られた高活性ＰＯＡは医薬品、医薬部外品、飲食物、香粧品、皮膚外用剤、機能性食品、抗菌剤、消臭剤等の組成材として使用できる。
【００９２】
本発明によって得られた高活性ＰＯＡの使用形態としては、散剤、顆粒、錠剤、糖衣錠、カプセル、液状あるいはシロップ状にして使用できる。