(57)【要約】      （修正有）【課題】種々の病原性生物およびウイルスに関連する感染能、罹患率および死亡率を減少させるための組成物および方法の提供。【解決手段】抗微生物水中油型ナノエマルジョンが溶媒および界面活性剤を含み、該抗微生物水中油型ナノエマルジョンが微生物と接触すると微生物を死滅させるまたは無力とする組成物および、病原性生物およびウイルスがコロニー形成した、またはそうでなければ感染した領域を除染するための方法および組成物。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ざ瘡治療剤を含む組成物であって、ざ瘡治療剤が抗微生物水中油型ナノエマルジョンを含み、抗微生物水中油型ナノエマルジョンが溶媒および界面活性剤を含み、該抗微生物水中油型ナノエマルジョンが微生物と接触すると微生物を死滅させるまたは無力とする、組成物。
【請求項２】
ざ瘡治療剤が、アダパレン、アゼライン酸、過酸化ベンゾイル、クリンダマイシン、エリスロマイシン、イソテトリノイン、メクロサイクリン、ニコチンアミド、レゾルシノール、サリチル酸、硫黄、硫化石灰、およびテトラサイクリン塩酸からなる群より選択される成分をさらに含む請求項1の組成物。
【請求項３】
練り歯磨きを含む組成物であって、練り歯磨きが抗微生物水中油型ナノエマルジョンを含み、抗微生物水中油型ナノエマルジョンが溶媒および界面活性剤を含み、該抗微生物水中油型ナノエマルジョンが微生物と接触すると微生物を死滅させるまたは無力とする、組成物。
【請求項４】
練り歯磨きが、フッ化ナトリウム、モノフルオロリン酸ナトリウム、フッ化アミン、フッ化第一スズ、過酸化水素、カルボポル956、水酸化ナトリウム、酸性リン酸ナトリウム、スズ酸ナトリウム、ポリピロフォスフェート、ピロリン酸四ナトリウム、ベンゾカイン、重曹、および硝酸カリウムからなる群より選択される成分をさらに含む請求項3の組成物。
【請求項５】
皮膚消毒剤を含む組成物であって、皮膚消毒剤が抗微生物水中油型ナノエマルジョンを含み、抗微生物水中油型ナノエマルジョンが溶媒および界面活性剤を含み、該抗微生物水中油型ナノエマルジョンが微生物と接触すると微生物を死滅させるまたは無力とする、組成物。
【請求項６】
マウスウォッシュを含む組成物であって、マウスウォッシュが抗微生物水中油型ナノエマルジョンを含み、抗微生物水中油型ナノエマルジョンが溶媒および界面活性剤を含み、該抗微生物水中油型ナノエマルジョンが微生物と接触すると微生物を死滅させるまたは無力とする、組成物。
【請求項７】
マウスウォッシュが、リゾチウム、ラクトフェリン、グルコースオキシダーゼ、およびラクトペルオキシダーゼからなる群より選択される成分をさらに含む請求項6の組成物。
【請求項８】
抗真菌治療剤を含む組成物であって、抗真菌治療剤が抗微生物水中油型ナノエマルジョンを含み、抗微生物水中油型ナノエマルジョンが溶媒および界面活性剤を含み、該抗微生物水中油型ナノエマルジョンが微生物と接触すると微生物を死滅させるまたは無力とする、組成物。
【請求項９】
抗真菌治療剤が、クリオキノール、ハロプロギン、ナフチフィン、トルナフテート、テルビナフィン、オキシコナゾール、およびケトコナゾールからなる群より選択される成分をさらに含む請求項8の組成物。
【請求項１０】
局所防腐剤を含む組成物であって、局所防腐剤が抗微生物水中油型ナノエマルジョンを含み、抗微生物水中油型ナノエマルジョンが溶媒および界面活性剤を含み、該抗微生物水中油型ナノエマルジョンが微生物と接触すると微生物を死滅させるまたは無力とする、組成物。
【請求項１１】
局所防腐剤が無傷皮膚局所防腐剤を含む請求項10の組成物。
【請求項１２】
局所防腐剤が非無傷皮膚局所防腐剤を含む請求項10の組成物。
【請求項１３】
局所防腐剤が閉塞創局所防腐剤を含む請求項10の組成物。
【請求項１４】
単純疱疹I型治療剤を含む組成物であって、単純疱疹I型治療剤が抗微生物水中油型ナノエマルジョンを含み、抗微生物水中油型ナノエマルジョンが溶媒および界面活性剤を含み、抗微生物水中油型ナノエマルジョンが微生物に接触すると微生物を死滅させるまたは無力とする、組成物。
【請求項１５】
帯状疱疹治療剤を含む組成物であって、帯状疱疹治療剤が抗微生物水中油型ナノエマルジョンを含み、抗微生物水中油型ナノエマルジョンが溶媒および界面活性剤を含み、該抗微生物水中油型ナノエマルジョンが微生物と接触すると微生物を死滅させるまたは無力とする、組成物。
【請求項１６】
歯科防腐剤を含む組成物であって、歯科防腐剤が抗微生物水中油型ナノエマルジョンを含み、抗微生物水中油型ナノエマルジョンが溶媒および界面活性剤を含み、該抗微生物水中油型ナノエマルジョンが微生物と接触すると微生物を死滅させるまたは無力とする、組成物。
【請求項１７】
経口粘膜炎治療剤を含む組成物であって、経口粘膜炎治療剤が抗微生物水中油型ナノエマルジョンを含み、抗微生物水中油型ナノエマルジョンが溶媒および界面活性剤を含み、該抗微生物水中油型ナノエマルジョンが微生物と接触すると微生物を死滅させるまたは無力とする、組成物。
【請求項１８】
鼻洗浄剤を含む組成物であって、鼻洗浄剤が抗微生物水中油型ナノエマルジョンを含み、抗微生物水中油型ナノエマルジョンが溶媒および界面活性剤を含み、該抗微生物水中油型ナノエマルジョンが微生物と接触すると微生物を死滅させるまたは無力とする、組成物。
【請求項１９】
ナノエマルジョンが、ハロゲン含有化合物をさらに含む請求項1、3、5、6、8、10、14、15、16、17または18の組成物。
【請求項２０】
ハロゲン含有化合物が塩化ベンゼトニウム、塩化メチルベンゼトニウム、塩化N−アルキルジメチルベンジルアンモニウム、塩化アルキルジメチル−3，4−ジクロロベンジルアンモニウム、および塩化セチルピリジニウムからなる群より選択される請求項19の組成物。
【請求項２１】
溶媒がアルコールである請求項1、3、5、6、8、10、14、15、16、17または18の組成物。
【請求項２２】
アルコールがエタノールである請求項21の組成物。
【請求項２３】
溶媒がグリセロールである請求項1、3、5、6、8、10、14、15、16、17または18の組成物。
【請求項２４】
溶媒がポリエチレングリコールである請求項1、3、5、6、8、10、14、15、16、17または18の組成物。
【請求項２５】
ナノエマルジョンが第四級アンモニウム化合物を含む請求項1、3、5、6、8、10、14、15、16、17または18の組成物。
【請求項２６】
第四級アンモニウム化合物が塩化n−ドデシルジメチルエチルベンジルアンモニウム、塩化n−ヘキサデシルジメチルベンジルアンモニウム、塩化n−テトラデシルジメチルベンジルアンモニウム、塩化n−テトラデシルジメチルエチルベンジルアンモニウム、塩化n−オクタデシルジメチルベンジルアンモニウム、1，3，5−トリアジン−1，3，5（2H，4H，6H）−トリエタノール；塩化1−デカンアミニウム，N−デシル−N，N−ジメチル−（または）塩化ジデシルジメチルアンモニウム；塩化2−（2−（p−（ジイソブチル）クレゾスキシ）エトキシ）エチルジメチルベンジルアンモニウム；塩化2−（2−（p−（ジイソブチル）フェノキシ）エトキシ）エチルジメチルベンジルアンモニウム；塩化アルキル1または3ベンジル−1−（2−ヒドロキシエチル）−2−イミダゾリニウム；塩化アルキルビス（2−ヒドロキシエチル）ベンジルアンモニウム；塩化アルキルジメチルベンジルアンモニウム；塩化アルキルジメチル3，4−ジクロロベンジルアンモニウム（100％C12）；塩化アルキルジメチル3，4−ジクロロベンジルアンモニウム（50％C14，40％C12，10％C16）；塩化アルキルジメチル3，4−ジクロロベンジルアンモニウム（55％C14，23％C12，20％C16）；塩化アルキルジメチルベンジルアンモニウム；塩化アルキルジメチルベンジルアンモニウム（100％C14）；塩化アルキルジメチルベンジルアンモニウム（100％C16）；塩化アルキルジメチルベンジルアンモニウム（41％C14，28％C12）；塩化アルキルジメチルベンジルアンモニウム（47％C12，18％C14）；塩化アルキルジメチルベンジルアンモニウム（55％C16，20％C14）；塩化アルキルジメチルベンジルアンモニウム（58％C14，28％C16）；塩化アルキルジメチルベンジルアンモニウム（60％C14，25％C12）；塩化アルキルジメチルベンジルアンモニウム（61％C11，23％C14）；塩化アルキルジメチルベンジルアンモニウム（61％C12，23％C14）；塩化アルキルジメチルベンジルアンモニウム（65％C12，25％C14）；塩化アルキルジメチルベンジルアンモニウム（67％C12，24％C14）；塩化アルキルジメチルベンジルアンモニウム（67％C12，25％C14）；塩化アルキルジメチルベンジルアンモニウム（90％C14，5％C12）；塩化アルキルジメチルベンジルアンモニウム（93％C14，4％C12）；塩化アルキルジメチルベンジルアンモニウム（95％C16，5％C18）；塩化アルキルジメチルベンジルアンモニウム（および）塩化ジデシルジメチルアンモニウム；（脂肪酸におけるような）塩化アルキルジメチルベンジルアンモニウム；塩化アルキルジメチルベンジルアンモニウム（C12−C16）；塩化アルキルジメチルベンジルアンモニウム（C12−C18）；塩化アルキルジメチルベンジルおよび塩化ジアルキルジメチルアンモニウム；塩化アルキルジメチルジメチルベンジルアンモニウム；臭化アルキルジメチルエチルアンモニウム（90％C14，5％C16，5％C12）；臭化アルキルジメチルエチルアンモニウム（大豆油の脂肪酸におけるような混合アルキルおよびアルケニル基）；塩化アルキルジメチルエチルベンジルアンモニウム；塩化アルキルジメチルエチルベンジルアンモニウム（60％C14）；塩化アルキルジメチルイソプロピルベンジルアンモニウム（50％C12，30％C14，17％C16，3％C18）；塩化アルキルトリメチルアンモニウム（58％C18，40％C16，1％C14，1％C12）；塩化アルキルト���メチルアンモニウム（90％C18，10％C16）；塩化アルキルジメチル（エチルベンジル）アンモニウム（C12−18）；塩化ジ−（C8−10）−アルキルジメチルアンモニウム；塩化ジアルキルジメチルアンモニウム；塩化ジアルキルジメチルアンモニウム；塩化ジアルキルジメチルアンモニウム；塩化ジアルキルメチルベンジルアンモニウム；塩化ジデシルジメチルアンモニウム；塩化ジイソデシルジメチルアンモニウム；塩化ジオクチルジメチルアンモニウム；塩化ドデシルビス（2−ヒドロキシエチル）オクチル水素アンモニウム；塩化ドデシルジメチルベンジルアンモニウム；塩化ドデシルカルバモイルメチルジメチルベンジルアンモニウム；塩化ヘプタデシルヒドロキシエチルイミダゾリニウム；ヘキサヒドロ−1，3，5−トリス（2−ヒドロキシエチル）−s−トリアジン；塩化ミリスタルコニウム（および）カントリニウム  14；塩化N，N−ジメチル−2−ヒドロキシプロピルアンモニウムポリマー；塩化n−アルキルジメチルベンジルアンモニウム；塩化n−アルキルジメチルエチルベンジルアンモニウム；塩化n−テトラデシルジメチルベンジルアンモニウム一水和物；塩化オクチルデシルジメチルアンモニウム；塩化オクチルドデシルジメチルアンモニウム；塩化オクチルフェノキシエトキシエチルジメチルベンジルアンモニウム；オキシジエチレンビス（アルキルジメチルアンモニウムクロライド）；塩化ジココアルキルジメチル；塩化トリメトキシシリルプロピルジメチルオクタデシルアンモニウム；トリメトキシシリルカンツ、および塩化トリメチルドデシルベンジルアンモニウムからなる群より選択される請求項25の組成物。
【請求項２７】
ナノエマルジョンがグラム陰性菌、グラム陽性菌、ウイルス、胞子、および真菌と接触させた場合にグラム陰性菌、グラム陽性菌、ウイルス、胞子、および真菌を死滅させるまたは無力とする請求項1、3、5、6、8、10、14、15、16、17または18の組成物。
【請求項２８】
ナノエマルジョンが、第2の界面活性剤、第2の溶媒、発芽増強剤、相互作用増強剤、塩化ナトリウム、クエン酸、香味剤、着色剤、および水酸化ナトリウムからなる群より選択される成分をさらに含む請求項1、3、5、6、8、10、14、15、16、17または18の組成物。
【請求項２９】
ざ瘡治療剤が、アダパレン、アゼライン酸、過酸化ベンゾイル、クリンダマイシン、エリスロマイシン、イソテトリノイン、メクロサイクリン、ニコチンアミド、レゾルシノール、サリチル酸、硫黄、硫化石灰、およびテトラサイクリン塩酸からなる群より選択される成分をさらに含む請求項1、3、5、6、8、10、14、15、16、17または18の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
以下の出願は、その各々が1999年4月28日に出願された米国特許仮出願第60／131，638号に対する優先権を主張する、1999年12月30日に出願された第09／474，866号の一部継続出願である、2000年4月28日に出願された第09／561，111号の一部継続出願である、2000年12月29日に出願された米国特許出願第09／751，059号の一部継続出願である、2001年6月25日に出願された米国特許出願第09／891，086号の一部継続出願である、2001年9月27日に出願された米国特許出願第09／965，447号の一部継続出願である。これらの出願の各々を、本明細書に参照としてその全体を本明細書に組み入れられる。本発明はDARPA補助金番号MDA972−97−1−0007の下で米国政府によって一部補助された仕事の間に一部がなされた。政府は本発明においてある種の権利を有する。
【０００２】
発明の分野
本発明は種々の病原体に関連する感染能、罹患率、および死亡率を減少させるための組成物および方法に関する。また、本発明は病原体および微生物がコロニー形成した、またはそうでなければ感染した領域、試料、溶液、および食品を除染するための方法および組成物に関する。
【背景技術】
【０００３】
発明の背景
細菌、真菌、ウイルス、および細菌胞子のような病原体は過度のヒトおよび動物の病気、ならびに食品および生物学的および環境的試料の汚染の原因である。動物の微生物感染の最初の段階は、一般に、皮膚または粘膜の付着またはコロニー形成、引き続いての感染性微生物の侵入および伝播である。病原体細菌の侵入口は圧倒的に皮膚および粘膜である。
【０００４】
特に、バチルス属（Bacillus）の細菌は、厳しい条件および極端な温度に抵抗する安定な胞子を形成する。農場の炭疽菌（B．anthracis）での汚染は家畜、農業および野生動物において致命的な病気に至る（例えば、DragonおよびRennie，Can．Vet．J．36：295［1995］(非特許文献１)参照）。この生物でのヒトの感染は、通常、感染した動物または感染した動物の産物との接触の結果である（例えば、Welkosら、Infect．Immun．51：795［1986］(非特許文献２)参照）。ヒトの臨床的症候群は、迅速な開始を有し、頻繁には致命的である肺形態を含む。迅速ではないが、炭疽の胃腸および皮膚形態の結果、攻撃的に治療するのでなければ死を招く状態をもたらしうる（例えば、Franzら、JAMA  278：399［1997］(非特許文献３)；およびPileら、Arch．Intem．Med．158：429［1998］(非特許文献４)参照）。ヒトにおける炭疽菌（Bacillus anthracis）感染は、もはや、ワクチン、抗生物質および感染した家畜の適切な廃棄を含む効果的な動物制御により普通ではない。しかし、動物の炭疽感染は、土壌および農場の除染の困難性のため依然として重大な問題の代表例である。加えて、戦争および／またはテロリストの活動によって引き起こされるヒト感染について関心がある。
【０００５】
炭疽菌ワクチンは入手可能であり（例えば、Ivinsら、Vaccine  13：1779［1995］(非特許文献５)参照）、古典的炭疽の予防で用いることができるが、前記生物の異なる株の遺伝的混合はワクチンを無効としうる（例えば、Mobley，Military  Med．160：547［1995］(非特許文献６)参照）。炭疽菌胞子の生物兵器としての使用の潜在的結果は、以前のソビエト連邦における軍事微生物学研究所からの炭疽菌の事故による放出によって示された。66の死亡を含めたヒト炭疽の77の症例は事故に帰属された。前記研究所から4キロメートルと遠くで幾つかの炭疽感染が起こった（例えば、Meselsonら、Science266：1202［1994］(非特許文献７)参照）。感染した犠牲者の遺伝子分析により、複数株または遺伝的に改変された炭疽菌いずれかの存在が明らかにされた（例えば、Jacksonら、Proc．Nat．Acad．of  Sci．U．S．A．95：1224［1998］(非特許文献８)参照）。
【０００６】
加えて、前記バチルス属の他のメンバーも多くのヒトの病気での病因学的な病原体であると報告されている。バチルス・セレウス（Bacillus  cereus）は通常の病原体である。それは、調理過程で生き残る胞子の能力のため食品で発生する病気に関与する。また、それは局所的敗血症および創傷および全身感染に関係する（例えば、Drobniewski，Clin．Micro．Rev．6：324［1993］(非特許文献９)参照）。多くの細菌は容易に抗生物質に対する抵抗性を生じる。細菌の抗生物質−抵抗性株に感染した生物は重症かつ潜在的に生命を脅かす結果に直面する。
【０００７】
抵抗性を生じる細菌の例は、しばしば、致命的感染を引き起こすブドウ球菌属（Staphylococcus）、肺炎および髄膜炎を引き起こす肺炎球菌属（Pneumococci）；下痢を引き起こすサルモネラ属（Salmonella）および大腸菌（E．coli）；および血流、外科創傷および尿管感染を引き起こす腸球菌属（Enterococci）を含む（例えば、Berkelmanら、J．Infcet．Dis．170（2）：272［1994］(非特許文献１０)参照）。
【０００８】
貴重な進歩があったが、特に、抗生物質に対して抵抗性の種々の細菌の株が出現する場合、抗生物質および抗微生物療法は幾つかの問題を抱えている。加えて、バチルス胞子に対してかなり効果的な消毒剤／殺生物剤（例えば、次亜鉛素酸ナトリウム、ホルムアルデヒドおよびフェノール）は環境、装備または犠牲者の除染に充分適するのではない。これは、揮発性発煙の吸入に続く組織壊死およびひどい肺損傷に導く毒性による。また、これらの化合物の腐食性はそれらを感受性装備の除染に対して不適当とする（例えば、Alasriら、Can．J．Micro．39：52［1993］(非特許文献１１)；Beauchampら、Crit．Rev．Tox．22：143［1992］(非特許文献１２)；Hessら、Amer．J．dent．4：51［1991］(非特許文献１３)；Lineaweaverら、Arch．Surg．120：267［1985］(非特許文献１４)；Morgan，Tox．Path．25：291［1997］(非特許文献１５)；およびRussell，Clin．Micro．3：99「1990」(非特許文献１６)参照）。
【０００９】
インフルエンザA型ウイルスは、インビトロで（例えば、KaraivanovaおよびSpiro，Biochem．J．329：511［1998］(非特許文献１７)；Mammenら、J．Med．Chem．38：4179［1995］(非特許文献１８)；およびHuangら、FEBS  Letters  291：199［1991］(非特許文献１９)参照）、およびインビボで（例えば、WaghornおよびGoa，Drugs  55：721［1998］(非特許文献２０)；Mendelら、Antimicrob．Agents  Chemother．42：640［1998］(非特許文献２１)；およびSmithら、J．Med．Chem．41：787［1998］(非特許文献２２)参照）抗ウイルス剤を試験するためのモデル系として広く用いられる通常の人工呼吸器病原体である。ウイルスのサブタイプの抗原性特異性を決定するエンベロープ糖タンパク質、ヘマグルチニン（HA）およびノイラミニダーゼ（NA）は容易に突然変異でき、ウイルスが中和抗体を回避するのを可能とする。現行の抗ウイルス化合物およびノイラミニダーゼ阻害剤は効果が最小であり、ウイルス抵抗性は普通である。
【００１０】
明らかに、病原体曝露に関連する感染能、罹患率および死亡率を低下させる抗病原体組成物および方法が必要とされる。そのような組成物および方法は、好ましくは、微生物抵抗性を促進する、または受容者に対して毒性である望ましくない特性を有するべきでない。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００１１】
【非特許文献１】DragonおよびRennie，Can．Vet．J．36：295［1995］
【非特許文献２】Welkosら、Infect．Immun．51：795［1986］
【非特許文献３】Franzら、JAMA  278：399［1997］
【非特許文献４】Pileら、Arch．Intem．Med．158：429［1998］
【非特許文献５】Ivinsら、Vaccine  13：1779［1995］
【非特許文献６】Mobley，Military  Med．160：547［1995］
【非特許文献７】Meselsonら、Science266：1202［1994］
【非特許文献８】Jacksonら、Proc．Nat．Acad．of  Sci．U．S．A．95：1224［1998］
【非特許文献９】Drobniewski，Clin．Micro．Rev．6：324［1993］
【非特許文献１０】Berkelmanら、J．Infcet．Dis．170（2）：272［1994］
【非特許文献１１】Alasriら、Can．J．Micro．39：52［1993］
【非特許文献１２】Beauchampら、Crit．Rev．Tox．22：143［1992］
【非特許文献１３】Hessら、Amer．J．dent．4：51［1991］
【非特許文献１４】Lineaweaverら、Arch．Surg．120：267［1985］
【非特許文献１５】Morgan，Tox．Path．25：291［1997］
【非特許文献１６】Russell，Clin．Micro．3：99「1990」
【非特許文献１７】KaraivanovaおよびSpiro，Biochem．J．329：511［1998］
【非特許文献１８】Mammenら、J．Med．Chem．38：4179［1995］
【非特許文献１９】Huangら、FEBS  Letters  291：199［1991］
【非特許文献２０】WaghornおよびGoa，Drugs  55：721［1998］
【非特許文献２１】Mendelら、Antimicrob．Agents  Chemother．42：640［1998］
【非特許文献２２】Smithら、J．Med．Chem．41：787［1998］
【発明の概要】
【００１２】
本発明は種々の病原体に関連する感染能、罹患率および死亡率を減少させるための組成物および方法に関する。また、本発明は、病原体および微生物がコロニー形成するまたはそうでなければ感染する領域、試料、溶液および食品を除染するための方法および組成物に関する。本発明の組成物のある種の態様は非毒性であって、ヒトおよび他の動物が安全に摂取することができる。加えて、本発明のある種の態様は化学的に安定であって、非染色性である。
【００１３】
いくつかの態様において、本発明は、病原体または病原体の脅威に曝露されたヒトを含めた動物を治療するのに適した組成物および方法を提供する。いくつかの態様において、病原性生物への曝露に先立って動物を有効量の組成物と接触させる。他の態様において、病原性生物への曝露の後に動物を有効量の組成物と接触させる。従って、本発明では、微生物学的感染の予防および治療双方が考えられる。
【００１４】
他の態様において、本発明が、病原体に曝露された、または病原体を含むことが疑われる有機および無機試料を含めた溶液および表面を除染するのに適した組成物および方法を提供する。本発明のさらに他の態様において、組成物は、生物学的および環境的試料における有害なまたは望まない微生物の増殖を妨げるため添加剤として用いられる。
【００１５】
好ましい態様において、減少した病原性生物の感染能、罹患率および死亡率は、病原性生物を、油相、水相および少なくとも1つの他の成分を含む水中油型ナノエマルジョンと接触させることによって達成される。いくつかの好ましい態様において、エマルジョンはさらに溶媒を含む。いくつかの好ましい態様において、溶媒は有機リン酸溶媒を含む。さらに他の態様において、有機リン酸ベースの溶媒はリン酸ジアルキルまたはリン酸トリアルキル（例えば、リン酸トリブチル）を含む。さらに他の好ましい態様において、エマルジョンはさらにアルコールを含む。溶媒を使用する好ましい態様において、溶媒は組成物の油相中に提供する。
【００１６】
いくつかの態様において、本発明の組成物はさらに一つまたは複数の界面活性剤または洗剤を含む。いくつかの態様において、界面活性剤は非アニオン性洗剤であると考えられる。好ましい態様において、前記非アニオン性洗剤はポリソルベート界面活性剤である。他の態様において、前記非アニオン性洗剤はポリオキシエチレンエーテルである。本発明で用いられる界面活性剤は限定されるものではないが、化合物のツィーン（TWEEN）、トライトン（TRITON）およびチロキサポール（TYLOXAPOL）ファミリーのような界面活性剤を含む。
【００１７】
ある他の態様において、本発明の組成物は、さらに、限定されるものではないが、塩化セチルピリジニウムを含めた一つまたは複数のカチオン性ハロゲン含有化合物を含む。さらに他の態様において、本発明の組成物は、さらに、ある種の微生物、特にある種の細菌の胞子形態の発芽を促進または増強する一つまたは複数の化合物（「発芽増強剤」）を含む。本発明の組成物と製剤化で考えられる発芽増強剤は、限定されるものではないが、L−アラニン、イノシン、CaCl2およびNH4Clなどを含む。なおさらなる態様において、本発明の組成物は、さらに、組成物と微生物との相互作用を増大させる一つまたは複数の化合物（「相互作用増強剤」）（例えば、緩衝液中のエチレンジアミンテトラ酢酸またはエチレンビス（オキシエチレンニトリロ）テトラ酢酸のようなキレート化剤）を含む。加えて、本発明のさらに他の態様において、製剤は、さらに、着色剤または香味剤（例えば、色素およびペパーミント油）を含む。
【００１８】
いくつかの態様において、組成物は、さらに、エマルジョンの製剤を助けるための乳化剤を含む。乳化剤は、油／水界面で凝集して、2つの隣接する液滴の間の直接的接触を妨げるある種の連続膜を形成する化合物を含む。本発明のある態様は、その抗病原性特性を損なうことなく所望の濃度まで水で容易に希釈することができる水中油型エマルジョン組成物を特徴とする。
【００１９】
水相に分散した区別される油液滴に加えて、水中油型エマルジョンは小さな脂肪小胞（例えば、水相の層によって相互に分離されるいくつかの実質的に多くの場合同心の脂質二層よりなる脂質の球）、ミセル（例えば、極性ヘッド基が水相に向けて外方向に向き、かつ非極性テイルが水相から内向きに隔離されるように配列した50〜200分子の小さなクラスター中の両親媒性分子）、またはラメラ相（各粒子が水の薄いフィルムによって分離された平行な両親媒性二層よりなる脂質分散液）のような他の脂質構造体を含むこともできる。
【００２０】
これらの脂質構造体は、非極性残基（例えば、長い炭化水素鎖）を水から離れさせるような疎水力の結果として形成される。前記脂質調製物は、一般に、界面活性剤脂質調製物（SLP）として記載することができる。SLPは粘膜に対して毒性が最小であり、小腸内で代謝されると考えられる。（例えば、Hamoudaら、J．Infect．Desease  180：1939［1998］参照）。SLPは漂白剤のような消毒剤とは対照的にプラスチックおよび金属に対して非腐食性である。それ自体、SLPに基づく本発明の製剤は、細菌、真菌、ウイルスおよび他の病原体に対して特に有用であると考えられる。
【００２１】
本発明のある態様では、病原体を水中油型エマルジョンを含む組成物と接触させることを含む微生物（例えば、病原因子）の感染能を減少させる方法が考えられる。いくつかの好ましい態様において、エマルジョンは界面活性剤と共に水相に分配された油相の形態であり、油相は有機リン酸ベースの溶媒および担体油を含む。いくつかの態様において、2またはそれ以上の区別されるエマルジョンが病原体に曝露される。好ましい態様において、エマルジョンは融原性および／または溶原性である。好ましい態様において、前記方法で用いる油相は非ホスフェートベースの溶媒（例えばアルコール）を含む。
【００２２】
特別な態様において、前記接触は、病原因子を死滅させる、または前記因子の増殖を阻害するのに充分な時間行なう。他の態様において、本発明は有害なまたは望まない病原体を保有する環境表面を除染する方法を提供する。1つのそのような態様において、病原因子は環境表面と会合しており、前記方法は環境表面を、前記表面を除染するのに充分な量の組成物と接触させることを含む。そのように望まれる一方で、除染の結果、病原体の全排除は必ずしももたらされない。いくつかの態様において、組成物および方法は、さらに、処理された表面が本発明の組成物で充分に処理されてしまっていることを確実とするために、色素、塗料および他の標識および同定化合物を含む。
【００２３】
ある態様において、本発明の組成物で動物を内部処理する。いくつかの好ましい態様において、前記接触は皮内、皮下、筋肉内または腹腔内注射を介する。他の態様において、前記接触は経口、鼻、頬、直腸、膣または局所投与を介するものである。本発明の組成物を医薬として投与する場合、組成物は、さらに、薬学的に許容されるアジュバント、賦形剤、安定化剤、希釈剤などを含むと考えられる。なおさらなる態様において、本発明では、さらに、追加の薬学的に許容される生活性分子（例えば、抗体、抗生物質、核酸トランスフェクション用の手段、ビタミン、ミネラル、補因子等）を含む組成物が考えられる。
【００２４】
いくつかの好ましい態様において、本発明は水中油型エマルジョンを含む組成物を提供し、前記水中油型エマルジョンは水相に分配した不連続油相、アルコールまたはグリセロールを含む第1の成分、および界面活性剤またはハロゲン含有化合物を含む第2の成分を含む。水相は、限定されるものではないが、水（例えば、diH2O、蒸留水、水道水）および溶液（例えばリン酸緩衝化生理食塩水）を含めたいずれのタイプの水相を含むこともできる。油相は、限定されるものではないが、植物油（例えば、大豆油、アボカド油、亜麻仁油、ヤシ油、綿実油、スクワレン油、オリーブ油、アブラナ油、トウモロコシ油、菜種油、サフラワー油およびヒマワリ油）、動物油（例えば、魚油）、フレーバー油、水不溶性ビタミン、鉱油、モーター油を含めたいずれのタイプの油を含むこともできる。いくつかの好ましい態様において、油相は30〜90容量％の水中油型エマルジョンを含み（すなわち、最終エマルジョンの合計容量の30〜90％を構成する）、より好ましくは50〜80％である。本発明はアルコール成分の性質によって限定されないが、いくつかの好ましい態様において、アルコールはエタノールまたはメタノールである。さらに、本発明は界面活性剤の性質によって限定されないが、いくつかの好ましい態様においては、界面活性剤はポリソルベート界面活性剤（例えば、ツィーン  20、ツィーン  40、ツィーン60およびツィーン  80）、フェノキシポリエトキシエタノール（例えば、トライトン  X−100、X−301、X−165、X−102、X−200、およびチロキサポール）またはドデシル硫酸ナトリウムである。同様に、本発明はハロゲン含有化合物の性質によって限定されないが、いくつかの態様においては、ハロゲン含有化合物はハロゲン化セチルピリジニウム、ハロゲン化セチルトリメチルアンモニウム、ハロゲン化セチルジメチルエチルアンモニウム、ハロゲン化セチルジメチルベンジルアンモニウム、ハロゲン化セチルトリブチルホスホニウム、ハロゲン化ドデシルトリチメルアンモニウム、ハロゲン化テトラデシルトリメチルアンモニウム、塩化セチルピリジニウム、塩化セチルトリメチルアンモニウム、塩化セチルベンジルジメチルアンモニウム、臭化セチルピリジニウム、臭化セチルトリメチルアンモニウム、臭化セチルジメチルエチルアンモニウム、臭化セチルトリブチルホスホニウム、臭化ドデシルトリメチルアンモニウム、または臭化テトラデシルトリメチルアンモニウムを含む。
【００２５】
前記エマルジョンは、さらに、第3、第4、第5等の成分を含むことができる。いくつかの好ましい態様においては、追加の成分は界面活性剤（例えば、第2の界面活性剤）、発芽増強剤、ホスフェートベースの溶媒（例えば、リン酸トリブチル）、ニュートラミンゲン、L−アラニン、塩化アンモニウム、トリプティカーゼ大豆ブロス、酵母エキス、L−アスコルビン酸、レシチン、p−ヒドロキシ安息香酸メチルエステル、チオ硫酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、イノシン、水酸化ナトリウム、デキストロース、およびポリエチレングリコール（例えば、PEG  200、PEG  2000等）である。
【００２６】
また、本発明は水中油型エマルジョンを含む非毒性で、非刺激性の組成物を提供し、前記水中油型エマルジョンは第四級アンモニウム化合物を含み、前記水中油型エマルジョンは細菌、ウイルス、真菌および胞子に対して抗微生物性である。いくつかの好ましい態様において、水中油型エマルジョンは植物または動物に対して（例えば、ヒトに対して）検出可能な毒性を有しない。他の好ましい態様において、水中油型エマルジョンは植物または動物に対して（例えば、ヒトに対して）検出可能な刺激を引き起こさない。いくつかの態様において、水中油型エマルジョンは、さらに、前記したいずれかの成分を含む。第四級アンモニウム化合物は、限定されるものではないが、サッカリン酸N−アルキルジメチルベンジルアンモニウム、1，3，5−トリアジン−1，3，5（2H，4H，6H）−トリエタノール；塩化1−デカンアミニウム、N−デシル−N，N−ジメチル−（または）塩化ジデシルジメチルアンモニウム；塩化2−（2−（p−（ジイソブチル）クレゾスキシ）エトキシ）エチルジメチルベンジルアンモニウム；塩化2−（2−（p−（ジイソブチル）フェノキシ）エトキシ）エチルジメチルベンジルアンモニウム；塩化アルキル1または3ベンジル−1−（2−ヒドロキシエチル）−2−イミダゾリニウム；塩化アルキルビス（2−ヒドロキシエチル）ベンジルアンモニウム；塩化アルキルジメチルベンジルアンモニウム；塩化アルキルジメチル3，4−ジクロロベンジルアンモニウム（100％C12）；塩化アルキルジメチル3，4−ジクロロベンジルアンモニウム（50％C14，40％C12，10％C16）；塩化アルキルジメチル3，4−ジクロロベンジルアンモニウム（55％C14，23％C12，20％C16）；塩化アルキルジメチルベンジルアンモニウム；塩化アルキルジメチルベンジルアンモニウム（100％C14）；塩化アルキルジメチルベンジルアンモニウム（100％C16）；塩化アルキルジメチルベンジルアンモニウム（41％C14，28％C12）；塩化アルキルジメチルベンジルアンモニウム（47％C12，18％C14）；塩化アルキルジメチルベンジルアンモニウム（55％C16，20％C14）；塩化アルキルジメチルベンジルアンモニウム（58％C14，28％C16）；塩化アルキルジメチルベンジルアンモニウム（60％C14，25％C12）；塩化アルキルジメチルベンジルアンモニウム（61％C11，23％C14）；塩化アルキルジメチルベンジルアンモニウム（61％C12，23％C14）；塩化アルキルジメチルベンジルアンモニウム（65％C12，25％C14）；塩化アルキルジメチルベンジルアンモニウム（67％C12，24％C14）；塩化アルキルジメチルベンジルアンモニウム（67％C12，25％C14）；塩化アルキルジメチルベンジルアンモニウム（90％C14，5％C12）；塩化アルキルジメチルベンジルアンモニウム（93％C14，4％C12）；塩化アルキルジメチルベンジルアンモニウム（95％C16，5％C18）；塩化アルキルジメチルベンジルアンモニウム（および）塩化ジデシルジメチルアンモニウム；（脂肪酸におけるような）塩化アルキルジメチルベンジルアンモニウム；塩化アルキルジメチルベンジルアンモニウム（C12−C16）；塩化アルキルジメチルベンジルアンモニウム（C12−C18）；塩化アルキルジメチルベンジルおよび塩化ジアルキルジメチルアンモニウム；塩化アルキルジメチルジメチルベンジルアンモニウム；臭化アルキルジメチルエチルアンモニウム（90％C14，5％C16，5％C12）；臭化アルキルジメチルエチルアンモニウム（大豆油の脂肪酸におけるような混合アルキルおよびアルケニル基）；塩化アルキルジメチルエチルベンジルアンモニウム；塩化アルキルジメチルエチルベンジルアンモニウム（60％C14）；塩化アルキルジメチルイソプロピルベンジルアンモニウム（50％C12，30％C14，17％C16，3％C18）；塩化アルキルトリメチルアンモニウム（58％C18，40％C16，1％C14，1％C12）；塩化アルキルトリメチルアンモニウム（90％C18，10％C16）；塩化アルキルジメチル（エチルベンジル）アンモニウム（C12−18）；塩化ジ−（C8−10）−アルキルジメチルアンモニウム；塩化ジアルキルジメチルアンモニウム；塩化ジアルキルジメチルアンモニウム；塩化ジアルキルジメチルアンモニウム；塩化ジアルキルメチルベンジルアンモニウム；塩化ジデシルジメチルアンモニウム；塩化ジイソデシルジメチルアンモニウム；塩化ジオクチルジメチルアンモニウム；塩化ドデシルビス（2−ヒドロキシエチル）オクチル水素アンモニウム；塩化ドデシルジメチルベンジルアンモニウム；塩化ドデシルカルバモイルメチルジメチルベンジルアンモニウム；塩化ヘプタデシルヒドロキシエチルイミダゾリニウム；ヘキサヒドロ−1，3，5−トリス（2−ヒドロキシエチル）−s−トリアジン；塩化ミリスタルコニウム（および）カントリニウム（Quat  RNIUM)  14；塩化N，N−ジメチル−2−ヒドロキシプロピルアンモニウムポリマー；塩化n−アルキルジメチルベンジルアンモニウム；塩化n−アルキルジメチルエチルベンジルアンモニウム；塩化n−テトラデシルジメチルベンジルアンモニウム一水和物；塩化オクチルデシルジメチルアンモニウム；塩化オクチルドデシルジメチルアンモニウム；塩化オクチルフェノキシエトキシエチルジメチルベンジルアンモニウム；オキシジエチレンビス（アルキルジメチルアンモニウムクロライド）；第四級アンモニウム化合物、ジココアルキルジメチル、クロライド；塩化トリメトキシシリルプロピルジメチルオクタデシルアンモニウム；トリメトキシシリルカンツ（quats）、塩化トリメチルドデシルベンジルアンモニウム；塩化n−ドデシルジメチルエチルベンジルアンモニウム；塩化n−ヘキサデシルジメチルベンジルアンモニウム；塩化n−テトラデシルジメチルベンジルアンモニウム；塩化n−テトラデシルジメチルエチルベンジルアンモニウム；および塩化n−オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムを含む。
【００２７】
また、本発明は本明細書中に開示するエマルジョンの各々の製法を提供する。例えば、本発明は混合物を乳化することを含む水中油型エマルジョンの製法を提供し、前記混合物は油、水性溶液、アルコールまたはグリセロールを含む第1の成分、および界面活性剤またはハロゲン含有化合物を含む第2の成分を含む。
【００２８】
本発明は、さらに、水中油型エマルジョン（例えば、本明細書中に記載した水中油型エマルジョンのいずれか）を含む組成物に領域を曝露することを含む領域を保護し、（例えば、微生物の汚染から保護し）または除染する（例えば、領域における微生物を除去し、またはその数を減少させることによって前記領域を除染する）方法を提供する。前記方法はいずれのタイプの領域にも適用することができる。例えば、いくつかの態様においては、前記領域は固体表面（例えば、医療機器）、溶液、生物の表面（例えば、ヒトの外部または内部部分）、または食品を含む。
【００２９】
また、本発明は、本明細書中に記載するエマルジョンのいずれかを修飾する方法であって、エマルジョンを提供し、エマルジョンに成分を添加し、またはそれから成分を除去して修飾されたエマルジョンを得ることを含む前記エマルジョンを修飾する方法を提供する。いくつかの態様においては、前記方法は、さらに、生物学的アッセイ法において前記修飾されたエマルジョンを試験する工程を含む（例えば、処理した領域に関連する微生物の量を減少させることにおいてエマルジョンの有効性を決定するための抗微生物アッセイ法）。また、本発明では、商業においてそのような修飾されたエマルジョンを用いる方法が考えられる。例えば、いくつかの態様において、前記方法は、さらに、修飾されたエマルジョンの販売を広告しおよび／または修飾されたエマルジョンを販売する工程を含む。
【００３０】
また、本発明は、本明細書中に記載した水中油型エマルジョンのいずれかを含有する送達系（例えば、容器、ディスペンサー、パッケージング等）を含むシステムを提供する。本発明は、さらに、本明細書中に記載した水中油型エマルジョンのいずれかと接触した物質を含むシステムを含む。本発明はエマルジョンと接触した物質の性質によって限定されない。例えば、物質は限定されるものではないが、医療機器、溶液、食品、洗浄製品、モーター油、クリーム、および生物学的物質（例えば、ヒト組織）を含む。
【００３１】
定義
本発明の理解を容易とするために、多数の用語およびフレーズを以下に定義する。
【００３２】
本明細書中で用いるように、「微生物」という用語とは、微視的生物および藻、細菌、真菌（地衣類を含む）、原生動物、ウイルスおよびウイルス成分剤のカテゴリー内の分類学的に関連する微視的生物をいう。微生物という用語は、それ自体がもう1つの生物（例えば、ヒトを含めた動物、および植物）に対して病原性である生物、および当該生物それ自体は他の生物に対して直接的に病原性または感染性ではないが、もう1つの生物に対して病原性である物質を生じる生物を共に含む。本明細書中で用いるように、「病原体」という用語および文法的同等物は、他の生物に直接的に感染することによって、またはもう1つの生物に病気を引き起こす剤を生じさせることによって（例えば、病原性毒素などを生じる細菌）、もう1つの生物（例えば、動物および植物）に病気を引き起こす微生物を含めた生物をいう。
【００３３】
本明細書中で用いるように、「病気」という用語とは、種または群のメンバーに普通または平均とみなされる状態からの逸脱をいい、これは、その種または群の個体の大部分にとって有害ではない条件下で罹患した個体に有害である（例えば、下痢、嘔吐、発熱、疼痛、および炎症等）。病気は微生物および／または病原体による接触から引き起こされるか、またはそれに由来し得る。
【００３４】
本明細書中で用いるように、「宿主」または「対象」という用語とは、本発明の組成物によって処置されるべき生物をいう。そのような生物は、一つまたは複数の病原体に曝露した、または曝露したことが疑われる生物を含む。そのような生物は、病原体への望まない曝露を防止するように処置される生物も含む。生物は、限定されるものではないが、動物（例えば、ヒト、家畜動物種、野生動物）および植物を含む。
【００３５】
本明細書中で用いるように、「不活化する」という用語および文法的同等体は、感染しおよび／または宿主において病理学的応答を引き起こす病原体を死滅させ、排除し、またはその能力を低下させる能力を有することを意味する。
【００３６】
本明細書中で用いるように、「融合性」という用語とは、微生物剤（例えば、細菌または細菌の胞子）の膜と融合することができるエマルジョンをいう。融合性エマルジョンの具体的な例は限定されるものではないが、その各々を参照として本明細書にその全体を組み入れられる、米国特許第5，618，840号；第5，547，677号；および第5，549，901号に記載されたW808Pおよび米国特許第5，700，679号に記載されたNP9を含む。NP9は分岐したポリ（オキシ−1，2エタネオリル），α−（4−ノニルフェニル）−ω−ヒドロキシ−界面活性剤である。以下のものに限定されないが、本発明で有用であり得るNP9および他の界面活性剤は、本明細書に、参照としてその全体を組み入れられる米国特許第5，662，957号の表1に記載されている。
【００３７】
本明細書中で用いるように、「溶解性」という用語とは、微生物剤（例えば、細菌または細菌の胞子）の膜を破壊することができるエマルジョンをいう。例示的な溶解性組成物は、BCTPである。本発明の好ましい態様において、同一組成物中における溶解性剤および融合性剤双方の存在は、いずれかの剤単独よりも増強された不活化効果を生じる。この改良された抗微生物組成物を用いる方法および組成物を本明細書に詳細に記載する。
【００３８】
本明細書中で用いる「エマルジョン」という用語は、古典的な水中油型分散液または液滴、ならびに水非混和性油性相を水相と混合する場合に、非極性残基（すなわち、長い炭化水素鎖）を水から排除し、極性頭部基を水に向ける疎水力の結果として形成できる他の脂質構造を含む。これらの他の脂質構造は、限定されるものではないが、一層、小層、および多層脂質小胞、ミセル、およびラメラ相を含む。同様に、本明細書中で用いる「ナノエマルジョン」という用語とは、小さな脂質構造を含む水中油型分散液をいう。例えば、好ましい態様においては、ナノエマルジョンはほぼ0．1ミクロンまたはそれ以下〜5ミクロン（例えば0.1〜10ミクロン）の平均粒子サイズを持つ液滴を有する油相を含む。「エマルジョン」および「ナノエマルジョン」という用語は、本明細書中においては、本発明のナノエマルジョンをいうのに相互交換的にしばしば用いられる。
【００３９】
本明細書中で用いるように、「接触した」および「曝露した」という用語とは、本発明の組成物が、存在する場合には、微生物または病原性剤を不活化できるように、本発明の一つまたは複数の組成物を病原体または病原体に対して保護すべき試料と接触させることをいう。本発明では、開示された組成物を充分な容量および／または濃度にて病原体または微生物剤と接触させて病原体または微生物剤を不活化することが考えられる。
【００４０】
「界面活性剤」という用語とは、水による溶媒和をエネルギー的に好む極性頭部基、および水によって充分には溶媒和されない疎水性尾部の双方を有するいずれの分子もいう。「カチオン性界面活性剤」という用語とは、カチオン性頭部基を持つ界面活性剤をいう。「陰イオン性界面活性剤」という用語とはアニオン性頭部基を持つ界面活性剤をいう。
【００４１】
「親水性−親油性バランス指標数」および「HLB指標数」という用語とは、界面活性剤分子の化学的構造をその表面活性と相関させるための指標をいう。前記HLB指標数は、参照として本明細書に組み入れられるMeyers（Meyers，Surfactant  Science  and  Technology，VCH  Publishers  Inc．，New  York，pp．231−245［1992］）によって記載されているように種々の経験的な式によって計算することができる。本明細書中で用いるように、界面活性剤のHLB指標数は、McCutcheonの第1巻：Emulsifiers  and  Detergents  North  American版，1996（参照として本明細書に組み入れられる）においてその界面活性剤に帰属されたHLB指標数である。HLB指標数は市販の界面活性剤では0から約70の範囲である。水に対する高い溶解度および可溶化特性を持つ親水性界面活性剤は等級の高い方の端部にあり、他方、油への水の良好な可溶化剤である水に対して低い溶解度を持つ界面活性剤は等級の低い方の端部にある。
【００４２】
本明細書中で用いるように、「発芽エンハンサー」という用語は、細菌のある種の系統の発芽を増強するように作用する化合物（例えば、L−アミノ酸［L−アラニン］、CaCl2、イノシン等）を記載する。
【００４３】
本明細書中で用いるように、「相互作用エンハンサー」という用語とは、細菌（例えば、グラム陰性菌）の細胞壁とエマルジョンとの相互作用を増強するように作用する化合物をいう。意図される相互作用エンハンサーは、限定されるものではないが、キレート化剤（例えば、エチレンジアミンテトラ酢酸［EDPA］、エチレンビス（オキシエチレンニトリロ）テトラ酢酸［EGTA］等）およびある種の生物学的物質（例えば、ウシ血清アルブミン［BSA］等）を含む。
【００４４】
「緩衝液」または「緩衝剤」という用語とは、溶液に添加された場合に、前記溶液がpHの変化に抵抗するようにする物質をいう。
【００４５】
「還元剤」および「電子供与体」という用語とは、電子を第2の物質に供給して、第2の物質の原子の一つまたは複数の酸化状態を低下させる材料をいう。
【００４６】
「一価塩」という用語とは、金属（例えば、Na、KまたはLi）が溶液中で正味1＋電荷を有する（すなわち、電子よりも1多いプロトン）いずれの塩もいう。
【００４７】
「二価塩」という用語とは、金属（例えば、Mg、CaまたはSr）が溶液中で正味2＋電荷を有するいずれの塩もいう。
【００４８】
「キレーター」または「キレート化剤」という用語とは、金属イオンに結合できる電子の孤立対を持つ2つ以上の原子を有するいずれの物質もいう。
【００４９】
「溶液」という用語とは、水性または非水性混合物をいう。
【００５０】
本明細書中で用いるように、「治療剤」という用語とは、病原性微生物と接触した宿主において感染率、罹患率または死亡率の開始を減少させるか、または病原性微生物と接触した宿主において感染率、罹患率または死亡率の開始を防止する組成物をいう。そのような剤は、加えて、薬学的に許容される化合物（例えば、アジュバント、賦形剤、安定化剤、希釈剤等）を含むことができる。いくつかの態様においては、本発明の治療剤は、局所エマルジョン、注射組成物、摂取可能溶液などの形態で投与される。経路が局所である場合、前記形態は例えばクリーム、外用薬、軟膏、スプレーであり得る。
【００５１】
本明細書中で用いるように、「薬学的に許容される」または「薬理学的に許容される」という用語とは、宿主（例えば、動物またはヒト）に投与した場合、有害なアレルギーまたは免疫学的反応を実質的に生じない組成物をいう。さらに、ある態様では本発明の組成物が園芸での使用または農業での使用のために製剤化されてもよい。このような製剤には、ディップ剤、スプレー剤、シードドレッシング（seed dressing）剤、茎注入剤、スプレー剤、および噴霧剤が含まれる。本明細書中で用いるように、「薬学的に許容される担体」は、いずれかのおよび全ての溶剤、分散媒体、コーティング、湿潤剤（例えば、ラウリル硫酸ナトリウム）、等張化剤および吸収遅延剤、崩壊剤（例えば、ジャガイモ澱粉または澱粉グリコール酸ナトリウム）等を含む。
【００５２】
本明細書中で用いるように、「局所的に」という用語とは、皮膚および粘膜細胞および組織の表面に本発明の組成物を適用することをいう（例えば、歯槽、頬、舌、蘇軾、または鼻粘膜、および中空器官または体腔を整列化する他の組織および細胞）。
【００５３】
本明細書中で用いるように、「局所的活性剤」という用語とは、適用（接触）の部位における薬理学的応答を宿主に対して誘導する本発明の組成物をいう。
【００５４】
本明細書中で用いるように、「全身的活性薬物」という用語は、適用点または対象への進入、から離れた部位において薬理学的応答を生じさせる物質または組成物を示すために広く用いられる。
【００５５】
本明細書中で用いるように、「医療機器」という用語は（例えば、病気または負傷のための）医療処置のクールにおいて患者の身体上で、中で、またそれを通じて用いるいずれの物質または機器も含む。医療機器は、限定されるものではないが、医療インプラント、創傷ケア機器、薬物送達機器、および体腔および個人的保護機器のような品目を含む。医療インプラントは、限定されるものではないが、尿カテーテル、血管内カテーテル、透析シャント、創傷排液管、皮膚縫合、血管移植片、移植可能なメッシュ、眼内機器、心臓弁等を含む。創傷ケア機器は、限定されるものではないが、一般的な創傷包帯、生物学的移植片材料、テープ閉鎖および包帯および外科切開布を含む。薬物送達機器は、限定されるものではないが、針、薬物送達皮膚パッチ、薬物送達粘膜パッチおよび医療スポンジを含む。体腔および個人的保護機器は、限定されるものではないが、タンポン、スポンジ、外科および調査手袋、および歯ブラシを含む。出産制御機器は、限定されるものではないが、子宮内機器（IUD）、避妊ペッサリーおよびコンドームを含む。
【００５６】
本明細書中で用いるように、「精製された」または「精製する」という用語とは、試料または組成物から汚染物または望まない化合物を除去することをいう。本明細書中で用いるように、「実質的に精製された」という用語とは、試料または組成物から汚染物または望まない化合物の約70〜90％、100％まで除去することをいう。
【００５７】
本明細書中で用いるように、「表面」という用語は、その最も広い意味で用いられる。1つの意味においては、前記用語は、本発明の組成物が接触することができる（例えば、動物では、皮膚、頭髪および毛など、および植物では、葉、幹、花の部分、および結実体など）生物または無生物物体（例えば小胞、ビルディング、および食品加工器具等）の最も外側の境界をいう。もう1つの意味においては、前記用語は、多数の経皮送達経路（例えば、注射、摂取、経皮送達、吸入等）のうちのいずれかによって組成物が接触することができる動物および植物の内膜および表面（例えば、動物では、消化管、血管組織等、および植物では、維管束組織等）もいう。
【００５８】
本明細書中で用いるように、「試料」という用語はその最も広い意味で用いられる。1つの意味においては、それは動物細胞または組織をいうことができる。もう1つの意味においては、それは、生物学的および環境的試料のような任意の供給源から得られた検体または培養物を含めることを意図する。生物学的試料は植物または動物（ヒトを含む）から得ることができ、流体、固体、組織および気体を含む。環境的試料は、表面物質、土壌、水および産業試料のような環境物質を含む。これらの例は、本発明に適用することができる試料タイプを限定するものと解釈されるべきではない。
【図面の簡単な説明】
【００５９】
以下の図面は本明細書の一部を形成し、本発明のある局面および態様をさらに示すために含める。本発明は、本明細書に示した特別の態様の記載と組み合わせて一つまたは複数のこれらの図面を参照することによって良好に理解することができる。
（図１）バチルス・セレウス胞子に対する本発明のエマルジョンの殺菌効果を示す。
（図２）バチルス・セレウス胞子に対する本発明のエマルジョンの殺菌効果を示す細菌スミアを示す。
（図３）異なる炭疽菌胞子に対する本発明のエマルジョンの異なる希釈の殺胞子活性を示す。
（図４）本発明のエマルジョンおよび漂白剤の殺胞子活性の経時的比較を示す。
（図５）本発明のエマルジョンおよび漂白剤の殺胞子活性の経時的比較を示す。
（図６）異なる炭疽菌胞子に対する培地中の本発明のエマルジョンの異なる希釈の殺胞子活性を示す。
（図７）デルリオ、テキサス（TX）からの炭疽菌に対する本発明のエマルジョンの殺胞子活性についての時間経過を示す。
（図８）大腸菌の電子顕微鏡写真を示す（10，000×）。
（図９）BCTPで処理した大腸菌の電子顕微鏡写真を示す（10，000×）。
（図１０）W808Pで処理した大腸菌の電子顕微鏡写真を示す（10，000×）。
（図１１）コレラ菌の電子顕微鏡写真を示す（25，000×）。
（図１２）W808Pで処理したコレラ菌の電子顕微鏡写真を示す（25，000×）。
（図１３）BCTPで処理したコレラ菌の電子顕微鏡写真を示す（25，000×）。
（図１４）X8W60PCで処理したコレラ菌の電子顕微鏡写真を示す（25，000×）。
（図１５）インフルエンザA型の活性に対するBCTP、W808PおよびX8W60PCの効果を示す。
（図１６）2つのバチルス種に対するX8W60PCのそれと比較した4つの異なるバチルス種に対するBCTPの殺胞子活性を示す。BCTPは、枯草菌胞子に対してではなく、バチルス・セレウス、バチルス・シルクランス、および巨大菌胞子に対する処理の4時間後における有意な殺胞子活性を示した。4時間で、X8W60PCはバチルス・セレウスに対するより効果的な死滅を示したが、BCTPに対して抵抗性であった枯草菌に対する殺胞子活性も有した。
（図１７）バチルス・セレウスに対するナノエマルジョンの殺胞子活性の時間経過を示す。1：100希釈したBCTPとのインキュベーションの結果、4時間以内に95％死滅をもたらした。1：1000希釈したX8W60PCとのインキュベーションの結果、ほんの30分以内に95％死滅をもたらした。
（図１８）BCTPでのバチルス・セレウス胞子の処理前および処理後の電子顕微鏡写真を示す。BCTPでの処理前における皮質における均一な密度およびよく規定された胞子外皮に注意のこと。BCTP処理の4時間後における胞子は、胞子の外皮および皮質双方において破壊を示し、中核成分は喪失した。
（図１９）1：100希釈したBCTPの殺胞子活性に対する発芽の阻害および刺激の効果を示す。BCTP殺胞子効果は10mMのD−アラニンの存在下で遅れ（発芽阻害）、50μMのL−アラニンおよび50μMのイノシンの存在下で加速された（発芽刺激）。
（図２０）BCTPおよびバチルス・セレウス胞子の異なる組合せを皮下注射した動物の肉眼および組織学的写真を示す。図20Aおよび図20Bは、1：10の希釈においてBCTP単独を注射した動物を示す。重篤な組織損傷はなく、組織学は炎症を示さなかった。図20Cおよび図20Dは、4×107のバチルス・セレウル胞子単独を皮下注射した動物を示す。大きな壊死領域は1．68cm2の平均面積であった。この領域の組織学は、皮下脂肪および筋肉を含めた表皮および真皮の実質的に完全な組織壊死を示した。図20Eおよび図20Fは、最終希釈1：10のBCTPナノエマルジョンと直ちに予備混合した4×107バチルス胞子を注射したマウスを示す。これらの動物は平均面積0．02cm2を持つ最小皮膚病巣を示した（胞子で未処理感染から得られた病巣からほぼ98％減少）。図20Fにおける組織学はいくらか炎症を示したが、表皮および真皮における細胞構造のほとんどは無傷であった。全ての組織病理学を4×倍率で示す。
（図２１）バチルス・セレウス胞子を感染させた実験創傷を持つ動物の肉眼および組織学的写真を示す。図21Aおよび図21Bは、2．5×107バチルス・セレウス胞子を感染させたが、処理しなかった実験創傷を持つマウスを示す。これらの創傷の組織学的調査は、かなりの壊死および顕著な炎症応答を示した。図21Cおよび図21Dは、2．5×107バチルス・セレウス胞子で感染させ、後に生理食塩水で1時間洗浄した創傷を持つマウスを示す。48時間まで、4．86cm2の平均面積を持つ創傷の周りに大きな壊死領域があった。加えて、この群における動物の80％は感染の結果として死亡した。これらの病巣の組織学は、真皮および真皮下の全壊死および多数の栄養型バチルス生物を示した。図21Eおよび図21Fは、2．5×107バチルス・セレウス胞子で感染させ、後にBCTPの1：10希釈で1時間洗浄した創傷を持つマウスを示す。胞子および生理食塩水洗浄を受けた動物と比較して98％減少した創傷（0．06cm2）に隣接して小さな面積の壊死があった。加えて、動物の20％がこれらの創傷で死亡したに過ぎなかった。これらの病巣の組織学は栄養型バチルスの証拠を示さず、本発明の種々のエマルジョンのいくつかの特定の態様を示す。
（図２２Ａ）界面活性剤脂質調製物によるインフルエンザA型感染の阻害を示す。図22AはBCTP、W808P、SS、およびNNを示す。ウイルスをSLPと共に30分間インキュベートし、引き続いて希釈し、細胞の上に置いた。細胞ELISAを用い、インフルエンザA型感染の阻害を測定した。各データ点は三通りの平均＋／−1標準誤差を表す。
（図２２Ｂ）界面活性剤脂質調製物によるインフルエンザA型感染の阻害を示す。図22BはBCTPおよびSSを示す。ウイルスをSLPと共に30分間インキュベートし、引き続いて希釈し、細胞の上に置いた。細胞ELISAを用い、インフルエンザA型感染の阻害を測定した。各データ点は三通りの平均＋／−1標準誤差を表す。
（図２３）トライトン  X−100と比較した抗インフルエンザ剤としてのBCTPの効率を示す。インフルエンザA型ウイルスをBCTP、リン酸トリ（n−ブチル）／トライトン  X−100／大豆油（TTO）、トライトン  X−100／大豆油（TO）、およびトライトン  X−100（T）単独で30分間処理した。トライトン  X−100の濃度は、処理で用いた全ての調製物において同一であった。細胞ELISAを用い、インフルエンザA型感染の阻害を測定した。各データ点は三通りの平均＋／−1標準誤差を表す。
（図２４）アデノウイルスの感染能にBCTPが影響しないことを示す。アデノウイルスベクター（AD．RSV  ntlacZ）をBCTPの3つの希釈物で30分間処理し、引き続いて、293細胞のトランスフェクションで用いた。5日後、6−ガラクトシダーゼアッセイ法を行なった。各データ点は八通りの平均＋／−1標準誤差を表す。
（図２５）電子顕微鏡で観察したインフルエンザA型およびアデノウイルスの構造を示す。ウイルスを室温にて15分間および60分間、1：100希釈のBCTPで処理しかなったか、またはそれと共にインキュベートし、実施例に記載した電子顕微鏡固定手法に付した。図25Aは未処理のインフルエンザA型ウイルスを示し；図25BはBCTPと共に15分間インキュベートしたインフルエンザA型ウイルスを示す；図25Cは未処理のアデノウイルスを示す；および図25DはBCTPと共に60分間インキュベートしたアデノウイルスを示す。全ての画像につき、倍率は200，000×である。棒線は200nmを表す。
(図２６)1％および10％BCTPの抗菌特性を示す。殺菌効果（％死滅）は以下のように計算した。
2010209109.tif 000002
（図２７）プラーク減少アッセイ法によって評価した10％および1％BCTPの抗ウイルス特性を示す。
（図２８）本発明のエマルジョンについての標的である例示的生物を示す。
（図２９−１）本発明の種々のエマルジョン組成物のいくつかの特定の態様および前記エマルジョンについてのある種の使用を示す。
（図２９−２）本発明の種々のエマルジョン組成物のいくつかの特定の態様および前記エマルジョンについてのある種の使用を示す。
（図２９−３）本発明の種々のエマルジョン組成物のいくつかの特定の態様および前記エマルジョンについてのある種の使用を示す。
（図２９−４）本発明の種々のエマルジョン組成物のいくつかの特定の態様および前記エマルジョンについてのある種の使用を示す。
（図２９−５）本発明の種々のエマルジョン組成物のいくつかの特定の態様および前記エマルジョンについてのある種の使用を示す。
（図３０）本発明の種々のエマルジョン組成物のいくつかの特定の態様および前記エマルジョンについてのある種の使用を示す。
（図３１Ａ）種々の一般化された製剤および本発明のある態様の使用を模式的に示す。図31Aは、ナノエマルジョンの10％、1％および0．10％希釈についての本発明の種々のナノエマルジョンによる大腸菌のlog減少を示す。
（図３１Ｂ）種々の一般化された製剤および本発明のある態様の使用を模式的に示す。図31Bは、ナノエマルジョンの10％、1％および0．10％希釈についての本発明の種々のナノエマルジョンによるB. グロビギー胞子のlog減少を示す。
（図３１Ｃ）種々の一般化された製剤および本発明のある態様の使用を模式的に示す。図31Cは、ナノエマルジョンの10％、1％および0．10％希釈についての本発明の種々のナノエマルジョンによるインフルエンザA型のlog減少（pfu／ml）を示す。
（図３２）40℃にてEDTAの存在下で本発明のエマルジョンで処理したネズミチフス菌のlog減少のグラフを示す。
（図３３）50℃にてEDTAの存在下で本発明のエマルジョンで処理したネズミチフス菌のlog減少のグラフを示す。
（図３４）その非乳化成分の溶解効果と比較した本発明のエマルジョンの溶解効果を示す。
（図３５）室温および37℃における本発明のエマルジョンによるマイコバクテリア・フォーツイタムのlog減少を示す。
（図３６）本発明のエマルジョンを用いる表面の除染についてのデータを示す。
【発明を実施するための形態】
【００６０】
発明の詳細な説明
本発明は、種々の微生物および病原性生物に関連する感染能、罹患率および死亡率を減少させるための組成物および方法を含む。また、本発明は、病原性生物がコロニー形成した、またはそうでなければそれに感染した領域を除染するための方法および組成物に関する。さらに、本発明は、食品における病原性生物の感染能を減少させるための方法および組成物に関する。好ましい態様において、病原性生物の感染能、罹患率および死亡率の減少は、病原性生物を、水相、油相および少なくとも1つの他の化合物を含む水中油型組成物と接触させることによって達成される。いくつかの好ましい態様において、本発明の組成物は、細菌、真菌、ウイルスおよび胞子を含めた広いスペクトルの微生物に対する抗力を保有しつつ、非毒性で、非刺激性で、かつ非腐食性である。本発明のある特別な態様を以下に記載する。本発明はこれらの特別な態様に限定されない。前記記載は以下のセクション、I）例示的組成物；II）例示的製剤化技術；III）特性および活性；IV）使用；およびV）特別な実施例に掲げる。
【００６１】
I．例示的組成物
好ましい態様において、本発明のエマルジョンは（i）水相；（ii）油相；および少なくとも1つのさらなる化合物を含む。本発明のいくつかの態様において、これらのさらなる化合物は組成物の水相または油相のいずれかに混合される。他の態様において、これらのさらなる化合物は先に乳化させた油相および水相の組成物に混合される。これらの態様のあるものにおいて、その使用の直前に、一つまたは複数のさらなる化合物を存在するエマルジョン組成物に混合する。他の態様において、組成物を直ちに使用する前に、一つまたは複数のさらなる化合物を存在するエマルジョン組成物に混合する。
【００６２】
本発明の組成物で用いるのに適したさらなる化合物は、限定されるものではないが、一つまたは複数の有機、およびより特別には、有機リン酸ベースの溶媒、界面活性剤および洗剤、カチオン性ハロゲン含有化合物、発芽増強剤、相互作用増強剤、食品添加物（例えば、香味剤、甘味剤、増量剤等）および薬学的に許容される化合物を含む。本発明の組成物で用いることが考えられる種々の化合物のある例示的態様を以下に掲げる。
【００６３】
A．水相
ある好ましい態様において、エマルジョンは、より多いおよびより少ない量が考えられるが、エマルジョンの合計容量に基づき、約5〜60、好ましくは10〜40、より好ましくは15〜30容量％の水相を含む。好ましい態様において、水相は約4〜10、好ましくは約6〜8のpHの水を含む。本発明のエマルジョンが発芽増強剤を含む場合、pHは好ましくは6〜8である。水は好ましくは脱イオン化されているか（以後、「DiH2O」）、または蒸留されている。いくつかの態様において、水相はリン酸緩衝化生理食塩水（PBS）を含む。宿主による消費、またはそれに対する接触を意図した本発明の態様において、水相、および水相に提供せられたいずれかのさらなる化合物はさらに滅菌し、発熱物質なしとすることができる。
【００６４】
B．油相と溶媒
いくつかの態様において、エマルジョンは油相を含む。ある好ましい態様において、（より多い量とより少ない量も考えられるが）本発明のエマルジョンの油相（例えば、担体油）は、前記エマルジョンの合計容量に基づき、30〜90容量％、好ましくは60〜80容量％、より好ましくは60〜70容量％の油を含む。適当な油は、限定されるものではないが、大豆油、アボカド油、亜麻仁油、ヤシ油、綿実油、スクワレン油、スクワレン油、オリーブ油、アブラナ油、トウモロコシ油、菜種油、サフラワー油、ヒマワリ油、マツ油（例えば15％）、オレストラ（Olestra）油、魚油、フレーバー油、水不溶性ビタミンおよびその混合物を含む。特に好ましい態様において、大豆油を用いる。さらに考えられる油には、モーターオイル、鉱油、およびバターが含まれる。本発明の好ましい態様において、油相は、好ましくは、約1〜2ミクロン、より好ましくは0．2〜0．8ミクロン、最も好ましくは約0．8ミクロンの範囲の平均粒子サイズを有する液滴としての水相の全体に分配される。他の態様において、水相は油相中に分配することができる。いくつかの好ましい態様では、非常に小さい液滴サイズ（例えば0.5ミクロン未満）を用いて、安定な名のエマルジョン組成物を生成する。小さい液滴組成物がある製品タイプにおいて所望の使用を見出されうる透明な溶液も提供することが考えられる。
【００６５】
いくつかの態様において、より多い量とより少ない量が考えられるが、油相は、エマルジョンの合計容量に基づき、3〜15容量％、および好ましくは5〜10容量％の有機溶媒を含む。本発明はいずれかの特定の機序に限定されないが、エマルジョンで使用される有機リン酸ベースの溶媒が、病原体の膜中の脂質を除去または破壊するように働くと考えられる。従って、微生物膜中のステロールまたはリン脂質を除去するいずれの溶媒も本発明のエマルジョンで用いられる。適当な有機溶媒は、限定されるものではないが、有機リン酸ベースの溶媒またはアルコールを含む。好ましい態様において、有機リン酸ベースの溶媒は、限定されるものではないが、いずれかの組合せのリン酸ジアルキルおよびリン酸トリアルキル（例えば、リン酸トリ−n−ブチル［TBP］）を含む。ある態様における特に好ましいリン酸トリアルキルは、可塑剤であるリン酸トリ−n−ブチルを含む。さらに、好ましい態様において、リン酸ジトリアルキルまたはリン酸トリアルキルの各アルキル基は1〜10またはそれ以上の炭素原子、より好ましくは2〜8の炭素原子を有する。また、本発明では、リン酸ジトリアルキルまたはリン酸トリアルキルの各アルキル基は相互に同一であってもなくてもよいと考えられる。ある態様においては、異なるリン酸ジアルキルおよびリン酸トリアルキルの混合物を使用することができる。溶媒として一つまたは複数のアルコールを含む態様においては、そのような溶媒は、限定されるものではないが、メタノール、エタノール、プロパノールおよびオクタノールを含む。特に好ましい態様において、アルコールはエタノールである。宿主による消費、またはそれに対する接触を意図した本発明の態様においては、油相、および油相に提供した任意のさらなる化合物はさらに滅菌し、発熱物質なしとすることができる。
【００６６】
C．界面活性剤および洗剤
いくつかの態様において、本発明の組成物は、さらに、一つまたは複数の界面活性剤または洗剤を含む（例えば、より多いおよびより少ない量が考えられるが、約3〜15％、および好ましくは約10％）。本発明はいずれかの特定の機序に限定されず、本発明を行うために機序の理解が必要とされないが、組成物中に存在すると、界面活性剤は組成物を安定化させるように助けると考えられる。非イオン性（非アニオン）およびイオン性界面活性剤双方が考えられる。加えて、界面活性剤のBRIJファミリーからの界面活性剤は本発明の組成物の使用が見出されている。界面活性剤は水相または油相いずれか中に提供することができる。エマルジョンで用いるのに適した界面活性剤は種々のアニオン性およびノニオン性界面活性剤ならびに水中油型エマルジョンの形成を促進することができる他の乳化化合物を含む。一般に、乳化化合物は比較的親水性であり、乳化化合物の混和を用いて必要な品質を達成することができる。いくつかの製剤において、ノニオン性界面活性剤は、それらが広いpH範囲に実質的により適合し、しばしば、イオン性（例えば、石鹸型）乳化剤よりも安定なエマルジョンを形成する点でイオン性乳化剤よりも優れた利点を有する。従って、ある好ましい態様において、本発明の組成物はポリソルベート界面活性剤（例えば、ポリオキシエチレンエーテル）、ポリソルベート洗剤、フェノキシポリエトキシエタノールなどのような一つまたは複数の非イオン性界面活性剤を含む。本発明で有用なポリソルベート洗剤の例は、限定されるものではないが、ツィーン  20、ツィーン  40、ツィーン  60、ツィーン  80等を含む。
【００６７】
ツィーン  20、ツィーン  40およびツィーン  80と共にツィーン  60（ポリオキシエチレンソルビタンモノステアリン酸）は、多数の薬学的組成物中で乳化剤として用いられるポリソルベートを含む。本発明のいくつかの態様において、これらの化合物はアジュバントと共に共成分としても用いられる。また、ツィーン界面活性剤は脂質−エンベロープウイルスに対して殺ウイルス効果を有するようである（例えば、Erikssonら、Blood  Coagulation  and  Fibtinolysis  5（Suppl．3）：S37−S44［1994］参照）。
【００６８】
本発明で有用なフェノキシポリエトキシエタノールおよびそのポリマーの例は、限定されるものではないが、トライトン（例えば、X−100、X−301、X−165、X−102、X−200）およびチロキサポールを含む。トライトンX−100は、生物学的構造から脂質およびタンパク質を抽出するのに広く用いられる強力な非イオン性洗剤および分散剤である。また、それはエンベロープウイルスの幅広いスペクトルに対して殺ウイルス効果を有する（例えば、MahaおよびIgarashi，Southeast  Asia  J．Trop．Med．Pub．Health  28：718［1997］；およびPortocalaら、Virologie  27：261［1976］参照）。この抗ウイルス活性のため、それは、新鮮な凍結ヒト血漿中のウイルス病原体を不活化させるのに使用される（例えば、Horowitzら、Blood  79：826［1992］）。
【００６９】
特に好ましい態様において、界面活性剤トライトン  X−100（t−オクチルフェノキシポリエトキシエタノール）および／またはチロキサポールを使用する。いくつかの他の態様は殺精薬（例えば、ノノキシノール−9）を使用する。本発明の組成物で有用なさらなる界面活性剤および洗剤は参照文献から確認することができる（例えば、McCutheonの第1巻：Emulsions  and  Detergents−North  American編，2000）。
【００７０】
いくつかの態様において、図28に示すように、界面活性剤および有機溶媒を含む組成物は、エンベロープウイルスおよびグラム陽性菌を不活化するのに有用である。
【００７１】
D．カチオン性ハロゲン含有化合物
いくつかの態様において、本発明の組成物は、さらに、カチオン性ハロゲン含有化合物を含む（例えば、より多いおよびより少ない量が考えられるが、エマルジョンの合計重量に基づき、約0．5〜1．0重量％またはそれ以上）。好ましい態様において、カチオン性ハロゲン含有化合物は好ましくは油相と予め混合され；しかし、カチオン性ハロゲン含有化合物は別個の製剤においてエマルジョン組成物と組み合わせて提供することができると理解されるべきである。適当なハロゲン含有化合物は、例えば、塩化物、フッ化物、臭化物およびヨウ化物イオンを含む化合物より選択することができる。好ましい態様において、適当なカチオン性ハロゲン含有化合物は、限定されるものではないが、ハロゲン化セチルピリジニウム、ハロゲン化セチルトリメチルアンモニウム、ハロゲン化セチルジメチルエチルアンモニウム、ハロゲン化セチルジメチルベンジルアンモニウム、ハロゲン化セチルトリブチルホスフォニウム、ハロゲン化ドデシルトリメチルアンモニウム、またはハロゲン化テトラデシルトリメチルアンモニウムを含む。いくつかの特別な態様において、適当なカチオン性ハロゲン含有化合物は、限定されるものではないが、塩化セチルピリジニウム（CPC）、塩化セチルトリメチルアンモニウム、塩化セチルベンジルジメチルアンモニウム、臭化セチルピリジニウム（CPB）、および臭化セチルトリメチルアンモニウム（CTAB）、臭化セチルジメチルエチルアンモニウム、臭化セチルトリブチルホスフォニウム、臭化ドデシルトリメチルアンモニウム、および臭化テトラデシルトリメチルアンモニウムを含む。特に好ましい態様において、本発明の組成物はいずれかの特定なカチオン含有化合物での製剤化に制限されないが、カチオン性ハロゲン含有化合物はCPCである。
【００７２】
ある態様において、本発明のエマルジョン組成物への1．0重量％またはそれ以上のカチオン含有化合物の添加は、エンベロープウイルス、グラム陽性菌、グラム陰性菌および真菌を不活化するのに有用な組成物を供する。
【００７３】
E．発芽増強剤
本発明の他の態様において、組成物は、さらに、一つまたは複数の発芽増強化合物を含む（例えば、より多いおよびより少ない量が考えられるが、約1mM〜15mM、およびより好ましくは約5mM〜10mM）。好ましい態様において、発芽増強化合物はエマルジョンの形成に先立って水相に提供される。本発明では、発芽エンハンサーが開示の組成物に添加されると、組成物の殺胞子特性が増強されると考えられる。本発明では、さらに、そのような発芽エンハンサーは中性pH（pH6〜8の間、好ましくは7）の近くで殺胞子活性を開始すると考えられる。そのような中性pHエマルジョンは、例えば、リン酸緩衝生理食塩水（PBS）で希釈することによって、または中性エマルジョンの調製によって得ることができる。組成物の殺胞子活性は、胞子が発芽を開始した場合に優先的に起こる。
【００７４】
特別な態様において、本発明のエマルジョンは殺胞子活性を有することが証明された。本発明はいずれかの特定の機序に限定されないが、エマルジョンの融合性成分が発芽を開始するように作用し、栄養型形態の復帰が完了する前に、エマルジョンの溶原性成分が新たに発芽する胞子を溶解させるように作用すると考えられる。従って、エマルジョンのこれらの成分は共同して作用して、エマルジョンによる破壊に対して胞子が感受性であるようにする。発芽エンハンサーの添加は、さらに、例えば、殺胞子活性が起こる速度を早めることによって本発明のエマルジョンの抗殺胞子活性を促進する。
【００７５】
細菌内生胞子および真菌胞子の発芽は増大した代謝および熱および化学反応体に対する減少した抵抗性に関連する。発芽が起こるには、胞子は、環境が成長および再生を支持するのに適したことを感知しなければならない。アミノ酸L−アラニンは細菌胞子発芽を刺激する（例えば、Hills，J．Gen．Micro．4：38［1950］；およびHalvorsonおよびChurch，Bacteriol  Rev．21：112［1957］参照。また、L−アラニンおよびL−プロリンは真菌胞子発芽を開始させると報告されている（Yanagita，Arch  Mikrobiol  26：329［1957］）。グリシンおよびL−アラニンのような単純なα−アミノ酸は代謝において中枢的な位置を占める。α−アミノ酸のトランスアミノ化または脱アミノ化は代謝および成長に必要な糖原性またはケト原性炭水化物および窒素を生じる。例えば、L−アラニンのトランスアミノ化または脱アミノ化は解糖代謝の最終生成物であるピルビン酸を生じる（エムデン−マイヤーホフ−パルナス経路）。ピルビン酸デヒドロゲナーゼ複合体によるピルビン酸の酸化はアセチル−CoA、NADH、H＋およびCO2を生じる。アセチル−CoAは、ミトコンドリア電子輸送鎖を供給するトリカルボン酸回路（クレブス回路）についての開始伝達基質である。また、アセチル−CoAは脂肪酸合成並びにステロール合成についての究極的な炭素源である。単純α−アミノ酸は続く発芽および代謝活性に必要な窒素、CO2、糖原性および／またはケト原性同等体を提供することができる。
【００７６】
ある態様において、本発明の適当な発芽増強剤は、限定されるものではないが、グリシンならびにアラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、セリン、スレオニン、リジン、フェニルアラニン、チロシンおよびそのアルキルエステルのL−エナンチオマーを含むα−アミノ酸を含む。発芽に対するアミノ酸の効果に対するさらなる情報は、その全体を参照として本明細書に組み入れられる米国特許第5，510，104号に見出すことができる。いくつかの態様において、グルコース、フルクトース、アスパラギン、塩化ナトリウム（NaCl）、塩化アンモニウム（NH4Cl）、塩化カルシウム（CaCl2）および塩化カリウム（KCl）の混合物を用いることもできる。本発明の特に好ましい態様において、製剤は発芽エンハンサーL−アラニン、CaCl2、イノシンおよびNH4Clを含む。いくつかの態様において、組成物は、さらに、加えて、それ自体が発芽エンハンサーおよび緩衝液を含んでも含まなくてもよい一つまたは複数の共通形態の成長培地（例えば、トリプティカーゼ大豆ブロス等）を含む。
【００７７】
前記化合物は単に例示的な発芽エンハンサーであり、他の公知の発芽エンハンサーは本発明の組成物で用いられると理解される。候補発芽エンハンサーは本発明の組成物に含めるための2つの基準を満足すべきである。それは本発明のエマルジョンに関連できるべきであり、それは、本発明のエマルジョンに配合すると標的胞子の発芽の速度を増加させるべきである。当業者であれば、本明発明の組成物と組み合わせてそのような剤を標的に適用し、前記剤なくして本発明の組成物によって標的の不活化と混合によって接触した場合の標的の不活化を比較することによって、特定の剤が発芽エンハンサーとして作用する所望の機能を有するか否かを判断することができる。発芽を増加させ、それにより、生物の増殖を減少または阻害するいずれの剤も、本発明で用いる適当なエンハンサーと考えられる。
【００７８】
さらに他の態様において、中性エマルジョン組成物への発芽増強剤（または増殖培地）の添加により、エンベロープウイルス、グラム陰性菌、およびグラム陽性菌に加えて細菌胞子を処理するのに有用な組成物が製造される。
【００７９】
いくつかの態様において、本発明は、発芽増強剤を含む、エマルジョンまたはナノエマルジョンを含まない組成物を含めた抗微生物組成物を提供する。例えば、発芽増強剤をいずれかの他の物質（例えば、市販の消毒剤、溶液等）に加えて、発芽増強剤（類）の非存在下における組成物の活性と比較して発芽を促進し、胞子を死滅させるまたは中和する組成物の能力を増加させることができる。
【００８０】
F．相互作用エンハンサー
なお他の態様において、本発明の組成物は、組成物（すなわち、「相互作用エンハンサー」）と標的病原体（例えば、ビブリオ（Vibrio）、サルモネラ（Salmonella）、シゲラ（Shigella）およびシュードモナス（Pseudomonas）のようなグラム陰性菌の細胞壁）との相互作用を増加させることができる一つまたは複数の化合物を含む。好ましい態様において、相互作用エンハンサーは、好ましくは、油相と混合するが、他の態様においては、相互作用エンハンサーは、乳化後、組成物と組み合わせて提供する。ある好ましい態様において、相互作用エンハンサーはキレート化剤（例えば、緩衝液［例えば、トリス緩衝液］中のエチレンジアミンテトラ酢酸［EDTA］またはエチレンビス（オキシエチレンニトリロ）テトラ酢酸［EGTA］）。キレート化剤は単に例示的な相互作用増強化合物であると理解される。事実、微生物剤および／または病原体と本発明の組成物の相互作用を増加させる他の剤が考えられる。特に好ましい態様では、より多い量およびより少ない量が考えられるが、相互作用エンハンサーは約50〜約250μMの濃度におけるものである。当業者であれば、本発明の組成物と組み合わせたそのような剤を標的に適用し、前記剤なくして本発明の組成物による標的の不活化と、混合により接触した場合の標的の不活化を比較することによって、特定の剤が相互作用エンハンサーとして作用する所望の機能を有するか否かを決定することができると考えられる。相互作用を増加させ、それにより、その非存在下におけるそのパラメーターと比較して細菌の増殖を減少または阻害するいずれの剤も相互作用エンハンサーと考えられる。
【００８１】
いくつかの態様において、相互作用エンハンサーの本発明の組成物への添加は、エンベロープウィルス、いくつかのグラム陽性菌およびいくつかのグラム陰性菌を処理するのに有用な組成物を生じる。
【００８２】
G．他の成分
本発明のいくつかの態様において、ナノエマルジョン組成物は、ナノエマルジョンに対して所望の特性または機能を提供するために一つまたは複数のさらなる成分を含む。これらの成分はナノエマルジョンの水相または油相に配合することができ、乳化に先立って、または乳化に続いて加えることができる。例えば、いくつかの態様において、ナノエマルジョンは、さらに、フェノール（例えば、トリクロサン、フェニルフェノール）、酸性化剤（例えば、クエン酸［例えば、1．5〜6％］、酢酸、レモンジュース）、アルキル化剤（例えば、水酸化ナトリウム［例えば、0．3％］）、緩衝液（例えば、クエン酸緩衝液、酢酸緩衝液、その他特異的pHを維持するのに有用な緩衝液）、およびハロゲン（例えば、ポリビニルピロリドン、次亜塩素酸ナトリウム、過酸化水素）を含む。
【００８３】
II．例示的製剤
以下に記載するセクションA）において、本発明は、開示した組成物の汎用の製剤を製造するための例示的技術を記載する。加えて、本発明は、多数の特別な、例示的ではあるが、後記するセクションB）における製剤化レシピを引用する。
【００８４】
A．製剤化技術
本発明の病原体不活化水中油型エマルジョンは、古典的なエマルジョン形成技術を用いて形成することができる。簡単に述べれば、（例えば、高い水圧力および機械力を用いて）比較的高い剪断力下で、油相を水相と混合して、水中油型ナノエマルジョンを得る。前記エマルジョンは、約1：9〜5：1、好ましくは約5：1〜3：1、最も好ましくは4：1の水相に対する油相の範囲の容量対容量ベースで油相を水相と混合することによって形成される。油相および水相は、フレンチ・プレスまたは高剪断ミキサー（例えば、FDAが認可した高剪断ミキサーは、例えば、Admix，Inc．，Manchester，NHから入手可能である）のようなエマルジョンを形成するのに充分な剪断力を生じさせることができるいずれかの装置を用いて混合することができる。そのようなエマルジョンを製造する方法は、参照としてその全体を本明細書に組み入れられる米国特許第5，103，497号および第4，895，452号に記載されている。
【００８５】
好ましい態様において、本発明の方法で用いる組成物は、水のような水性連続相に分散させた油性不連続相の液滴を含む。好ましい態様において、本発明の組成物は安定であって、長い貯蔵期間（例えば、1年またはそれ以上）の後においてさえ分解しない。本発明のある組成物は、嚥下し、吸入し、または宿主の皮膚に接触させる場合に、非毒性かつ安全である。これは、公知の刺激物である多くの化学殺微生物剤とは対照的である。加えて、いくつかの態様において、組成物は植物に対しても非毒性である。
【００８６】
本発明の組成物は大量に製造することができ、広い範囲の温度にて何ヶ月間も安定である。希釈しなければ、それは半固体クリームのきめを有する傾向にあり、手によって局所適用するか、または水と混合することができる。希釈すれば、それは脱脂粉乳と同様なコンシステンシーおよび外観を有する傾向にあり、噴霧して表面を除染することができるかまたは、吸入前にエアロゾル化胞子と潜在的に相互作用させることができる。これらの特性は、広い範囲の抗微生物適用で有用な柔軟性を供する。加えて、これらの特性は本発明の組成物を除染適用に特に適したものとする。
【００８７】
前記したように、エマルジョンの少なくとも一部は、限定されるものではないが、単層、多層、およびパウクリアメラー（paucliamellar）脂質小胞、ミセルおよび、ラメラ相を含めた脂質構造の形態とすることができる。
【００８８】
本発明のいくつかの態様は、エタノールを含有する油相を使用する。例えば、いくつかの態様において、本発明のエマルジョンは（i）水相および（ii）有機溶媒としてのエタノールおよび、選択的に、発芽増強剤を含有する油相、ならびに（iii）界面活性剤としてのチロキサポール（好ましくは2〜5％、より好ましくは3％）を含有する。この製剤は微生物に対してかなり効果的であり、また、哺乳動物使用者に対して非刺激性かつ非毒性（であり、従って、粘膜と接触させることができる）。
【００８９】
いくつかの他の態様において、本発明のエマルジョンは第2のエマルジョン内に乳化された第1のエマルジョンを含み、（a）前記第1のエマルジョンは（i）水相；および（ii）油および有機溶媒を含む油相；ならびに（iii）界面活性剤を含み；および（b）前記第2のエマルジョンは（i）水相；および（ii）油およびカチオン含有化合物を含む油相；ならびに（iii）界面活性剤を含む。
【００９０】
B．例示的製剤
以下の記載は組成物BCTPおよびX8W60PC用の製剤を含めた多数の例示的エマルジョンを提供する。BCTPは油中水型ナノエマルジョンを含み、油相は80％水中の大豆油、リン酸トリ−n−ブチル、およびトライトン  X−100から作成された。X8W60PCは等容量のBCTPとW808Pとの混合物を含む。W808Pはモノステアリン酸グリセロール、精製大豆ステロール（例えば、ジェネロール（GENEROL）ステロール）、ツィーン  60、大豆油、カチオンハロゲン含有CPCおよびペパーミント油から作成されたリポソーム様化合物である。前記ジェネロールファミリーはポリエトキシル化大豆ステロールの群である（Henkel  Corporation，Ambler，Pennsylvania）。本発明のある態様について、エマルジョン製剤を表1に掲げる。これらの特別な製剤は、参照としてその全体を本明細書に組み入れられる米国特許第5，700，679号（NN）；米国特許第5，618，840号；米国特許第5，549，901号（W808P）；および第5，547，677号で見出すことができる。ある他のエマルジョン製剤は図29に示される。さらに、図30は本発明のある態様の一般化された製剤および使用を模式的に示す。
【００９１】
X8W60PCエマルジョンは、まず、W808PエマルジョンおよびBCTPエマルジョンを別々に作成することによって製造される。次いで、これらの2つのエマルジョンの混合物を再度乳化させて、X8W60PCと呼ばれる新鮮なエマルジョン組成物を得る。そのようなエマルジョンを製造する方法は（参照としてその全体を本明細書に組み入れられる）米国特許第5，103，497号および米国特許第4，895，452号に記載されている。これらの化合物は広いスペクトルの抗微生物活性を有し、膜の破壊を通じて増殖性細菌を不活化することができる。
【００９２】
（表１）
2010209109.tif 000003
【００９３】
前記リストの組成物は単に例示的なものであって、当業者であれば、成分の量を変化させて本発明の目的に適したナノエマルジョン組成物に到達することができると思われる。当業者であれば、水に対する油相の比率ならびに個々の油担体、界面活性剤CPCおよび有機リン酸緩衝液（各組成物の成分）を変化させることができるのを理解すると思われる。
【００９４】
BCTPを含むある組成物は4：1の油に対する水の比率を有するが、前記BCTPはより多いまたはより少ない水相を有するように製剤化できることが理解される。例えば、いくつかの態様において、油相の各部に対して3、4、5、6、7、8、9、10またはそれ以上の部の水相がある。これはW808P製剤で当てはまる。同様に、リン酸トリ（N−ブチル）：トライトン  X−100：大豆油の比率も変化させることができる。
【００９５】
表1はW808Pについてのモノオレイン酸グリセロール、ポリソルベート60、ジェネロール  122、塩化セチルピリジニウム、および担体油の具体的量をリストするが、これらは例示的なものに過ぎない。同一機能を満たすと思われる異なる濃度のこれらの成分または事実異なる成分の各々を有するW808Pの特性を有するエマルジョンを製剤化することができる。例えば、エマルジョンは最初の油相中に約80〜約100gの間のモノオレイン酸グリセロールを有することができる。他の態様において、エマルジョンは最初の油相中に約15〜約30gのポリソルベート60を有することができる。さらにもう一つの態様において、組成物は最初の油相に約20〜約30gの間のジェネロールステロールを含むことができる。
【００９６】
本発明のエマルジョンのある態様のナノエマルジョン構造はその殺生物活性において役割を果たすことができ、ならびにこれらのエマルジョンの非毒性に寄与する。例えば、BCTPにおける活性成分であるトライトン  X−100は11％BCTPと同等な濃度においてウイルスに対してより低い殺生物活性を示す。洗剤および溶媒への油相の添加は、同一濃度において組織培養中のこれらの病原因子の毒性を顕著に低下させる。いずれかの理論に拘束されるものではないが（機序の理解は本発明を実施するのに必要ではなく、また、本発明はいずれかの特定の機序に限定されない）、ナノエマルジョンはその成分と病原体との相互作用を増強させ、それにより、病原体の不活化を容易にし、個々の成分の毒性を低下させると示される。BCTPの全ての成分をナノエマルジョン構造体中ではなく1つの組成物中で合わせると、混合物は、成分がナノエマルジョン構造体中にある場合程は抗微生物剤として効果的ではないことに注意すべきである。
【００９７】
このような組成物での製剤のクラスにおいて示した多数のさらなる態様を以下に示す。抗病原性物質としての多数のこれらの組成物の効果は図31に示す。以下の組成物は活性な成分の種々の比率および混合物を引用する。当業者であれば、以下に引用した製剤は例示的なものであって、引用した成分の同様なパーセント範囲を含むさらなる製剤は本発明の範囲内にあることを認識すると思われる。
【００９８】
本発明のある態様において、本発明の製剤は約3〜8容量％のチロキサポール、約8容量％のエタノール、約1容量％の塩化セチルピリジニウム（CPC）、約60〜70容量％の油（例えば、大豆油）、約15〜25容量％の水相（例えば、DiH2OまたはPBS）および、ある製剤では、約1容量％未満の1N  NaOHを含む。これらの態様のあるものはPBSを含む。これらの態様のあるものにおける1N  NaOHおよび／またはPBSの添加は、約7．0〜約9．0、およびより好ましくは約7．1〜8．5のpH範囲が達成されるように、使用者が有利には製剤のpHを制御できるようにすると考えられる。例えば、本発明の1つの態様は約3容量％のチロキサポール、約8容量％のエタノール、約1容量％のCPC、約64容量％の大豆油、および約24容量％のDiH2Oを含む（本明細書ではY3ECと命名する）。もう1つの同様な態様は約3．5容量％のチロキサポール、約8容量％のエタノール、および約1容量％のCPC、約64容量％の大豆油、および約23．5容量％のDiH2Oを含む（本明細書ではY3．5ECと命名する）。さらにもう1つの態様は約3容量％のチロキサポール、約8容量％のエタノール、約1容量％のCPC、製剤のpHが約7．1となるような約0．067容量％の1N  NaOH、約64容量％の大豆油、および約23．93容量％のDiH2Oを含む（本明細書ではY3EC  pH7．1と命名する）。なおもう1つの態様は約3容量％のチロキサポール、約8容量％のエタノール、約1容量％のCPC、製剤のpHが約8．5となるような約0．67容量％の1N  NaOH、64容量％の大豆油、および約23．33容量％のDiH2Oを含む（本明細書ではY3EC  pH8．5と命名する）。もう1つの同様な態様は約4％のチロキサポール、約8容量％のエタノール、約1％のCPC、および64容量％の大豆油、および約23容量％のDiH2Oを含む（本明細書ではY4ECと命名する）。さらにもう1つの態様において、製剤は約8％のチロキサポール、約8％のエタノール、約1容量％のCPC、および約64容量％の大豆油、および約19容量％のDiH2Oを含む（本明細書ではY8ECと命名する）。さらなる態様は約8容量％のチロキサポール、約8容量％のエタノール、約1容量％のCPC、約64容量％の大豆油、および約19容量％の1×PBSを含む（本明細書ではY8EC  PBSと命名する）。
【００９９】
本発明のいくつかの態様において、本発明の製剤は約8容量％のエタノール、約1容量％のCPC、および約64容量％の油（例えば、大豆油）、および約27容量％の水相（例えば、DiH2OまたはPBS）を含む（本明細書ではECと命名する）。
【０１００】
本発明において、いくつかの態様は約8容量％のドデシル硫酸ナトリウム（SDS）、約8容量％のリン酸トリブチル（TBP）、および約64容量％の油（例えば、大豆油）、および約20容量％の水相（例えばDiH2OまたはPBS）を含む（本明細書ではS8Pと命名する）。
【０１０１】
本発明のある態様において、本発明の製剤は約1〜2容量％のトライトン  X−100、約1〜2容量％のチロキサポール、約7〜8容量％のエタノール、約1容量％の塩化セチルピリジニウム（CPC）、約64〜57．6容量％の油（例えば、大豆油）、および約23容量％の水相（例えば、DiH2OまたはPBS）を含む。加えて、これらの製剤のあるものは、さらに、約5mMのL−アラニン／イノシン、および約10mMの塩化アンモニウムを含む。これらの製剤のあるものはPBSを含む。これらの態様のあるものにおけるPBSの添加は、使用者が有利には製剤のpHを制御できるようにすると考えられる。例えば、本発明の1つの態様は約2容量％のトライトン  X−100、約2容量％のチロキサポール、約8容量％のエタノール、約1容量％のCPC、約64容量％の大豆油、および約23容量％の水相DiH2Oを含む。もう1つの態様において、製剤は約1．8容量％のトライトン  X−100、約1．8容量％のチロキサポール、約7．2容量％のエタノール、約0．9容量％のCPC、約5mMのL−アラニン／イノシン、および約10mMの塩化アンモニウム、約57．6容量％の大豆油、および残りの1×PBSを含む（本明細書では90％  X2Y2EC／GEと命名する）。
【０１０２】
本発明の別の態様において、製剤は約5容量％のツィーン  80、約8容量％のエタノール、約1容量％のCPC、約64容量％の油（例えば、大豆油）、および約22容量％のDiH2Oを含む（本明細書ではW805ECと命名する）。
【０１０３】
本発明のさらに他の態様において、製剤は約5容量％のツィーン  20、約8容量％のエタノール、約1容量％のCPC、約64容量％の油（例えば、大豆油）、および約22容量％のDiH2Oを含む（本明細書ではW205ECと命名する）。
【０１０４】
本発明のさらに他の態様において、製剤は約2〜8容量％のトライトン  X−100、約8容量％のエタノール、約1容量％のCPC、約60〜70容量％の油（例えば、大豆油またはオリーブ油）、および約15〜25容量％の水相（例えば、DiH2OまたはPBS）を含む。例えば、本発明では、約2容量％のトライトン  X−100、約8容量％のエタノール、約64容量％の大豆油、および約26容量％のDiH2Oを含む製剤が考えられる（本明細書ではX2Eと命名する）。他の同様な態様において、製剤は約3容量％のトライトン  X−100、約8容量％のエタノール、約64容量％の大豆油、および約25容量％のDiH2Oを含む（本明細書ではX3Eと命名する）。なおさらなる態様において、製剤は約4容量％のトライトン  X−100、約8容量％のエタノール、約64容量％の大豆油、および約24容量％のDiH2Oを含む（本明細書ではX4Eと命名する）。さらに他の態様において、製剤は約5容量％のトライトン  X−100、約8容量％のエタノール、約64容量％の大豆油、および約23容量％DiH2Oを含む（本明細書ではX5Eと命名する）。本発明のもう1つの態様は約6容量％のトライトン  X−100、約8容量％のエタノール、約64容量％の大豆油、および約22容量％のDiH2Oを含む（本明細書ではX6Eと命名する）。本発明のなおさらなる態様において、製剤は約8容量％のトライトン  X−100、約8容量％のエタノール、約64容量％の大豆油、および約20容量％のDiH2Oを含む（本明細書ではX8Eと命名する）。本発明のなおさらなる態様において、製剤は約8容量％のトライトン  X−100、約8容量％のエタノール、約64容量％のオリーブ油、および約20容量％のDiH2Oを含む（本明細書ではX8E  Oと命名する）。さらにもう1つの態様は8容量％のトライトン  X−100、約8容量％のエタノール、約1容量％のCPC、約64容量％の大豆油、および約19容量％のDiH2Oを含む（本明細書ではX8ECと命名する）。
【０１０５】
本発明の別の態様において、製剤は約1〜2容量％のトライトン  X−100、約1〜2容量％のチロキサポール、約6〜8容量％のTBP、約0．5〜1．0容量％のCPC、約60〜70容量％の油（例えば、大豆）、および約1〜35容量％の水相（例えば、DiH2OまたはPBS）を含む。加えて、これらの製剤のあるものは約1〜5容量％のトリプティカーゼ大豆ブロス、約0．5〜1．5容量％の酵母エキス、約5mMのL−アラニン／イノシン、約10mMの塩化アンモニウム、および約20〜40容量％の液状ベビー製剤を含む。液状ベビー製剤を含む態様のいくつかにおいて、製剤はカゼイン加水分解物（例えば、ニュートラミゲンまたはプロゲスチミル等）を含む。これらの態様のいくつかにおいて、本発明の製剤は、さらに、約0．1〜1．0容量％のチオ硫酸ナトリウム、および約0．1〜1．0容量％のクエン酸ナトリウムを含む。これらの基本的成分を含む他の同様な態様は水相としてリン酸緩衝化生理食塩水（PBS）を使用する。例えば、1つの態様は約2容量％のトライトン  X−100、約2容量％のチロキサポール、約8容量％のTBP、約1容量％のCPC、約64容量％の大豆油、および約23容量％のDiH2Oを含む（本明細書ではX2Y2ECと命名する）。さらに他の態様において、本発明の製剤は約2容量％のトライトン  X−100、約2容量％のチロキサポール、約8容量％のTBP、約1容量％のCPC、約0．9容量％のチオ硫酸ナトリウム、約0．1容量％のクエン酸ナトリウム、約64容量％の大豆油、および約22容量％のDiH2Oを含む（本明細書ではX2Y2PC  STS1と命名する）。もう1つの同様な態様において、製剤は約1．7容量％のトライトン  X−100、約1．7容量％のチロキサポール、約6．8容量％のTBP、約0．85％のCPC、約29．2％のNEUTRAMIGEN、約54．4容量％の大豆油、および約4．9容量％のDiH2Oを含む（本明細書では85％  X2Y2PC／ベイビーと命名する）。本発明のさらにもう1つの態様において、製剤は約1．8容量％のトライトン  X−100、約1．8容量％のチロキサポール、約7．2容量％のTBP、約0．9容量％のCPC、約5mMのL−アラニン／イノシン、約10mMの塩化アンモニウム、約57．6容量％の大豆油、および残りの容量％の0．1×PBSを含む（本明細書では90％  X2Y2  PC／GEと命名する）。さらにもう1つの態様において、製剤は約1．8容量％のトライトン  X−100、約1．8容量％のチロキサポール、約7．2容量％のTBP、約0．9容量％のCPC、および約3容量％のトリプティカーゼ大豆ブロス、約57．6容量％の大豆油、および約27．7容量％のDiH2Oを含む（本明細書では90％  X2Y2PC／TSBと命名する）。本発明のもう1つの態様において、製剤は約1．8容量％のトライトン  X−100、約1．8容量％のチロキサポール、約7．2容量％のTBP、約0．9容量％のCPC、約1容量％の酵母エキス、約57．6容量％の大豆油、および約29．7容量％のDiH2Oを含む（本明細書では90％  X2Y2PC／YEと命名する）。
【０１０６】
本発明のいくつかの態様において、本発明の製剤は約3容量％のチロキサポール、約8容量％のTBP、および約1容量％のCPC、約60〜70容量％の油（例えば、大豆油またはオリーブ油）、および約15〜30容量％の水相（例えば、DiH2OまたはPBS）を含む。本発明の特別な態様において、本発明の製剤は約3容量％のチロキサポール、約8容量％のTBP、および約1容量％のCPC、約64容量％の大豆、および約24容量％のDiH2Oを含む（本明細書ではY3PCと命名する）。
【０１０７】
本発明のいくつかの態様において、本発明の製剤は約4〜8容量％のトライトン  X−100、約5〜8容量％のTBP、約30〜70容量％の油（例えば、大豆油またはオリーブ油）、および約0〜30容量％の水相（例えば、DiH2OまたはPBS）を含む。加えて、これらの態様のあるものは、さらに、約1容量％のCPC、約1容量％の塩化ベンザルコニウム、約1容量％の臭化セチルピリジニウム、約1容量％の臭化セチルジメチルエチルアンモニウム、500μMのEDTA、約10mMの塩化アンモニウム、約5mMのイノシン、および約5mMのL−アラニンを含む。例えば、これらの態様のあるものにおいて、本発明の製剤は約8容量％のトライトン  X−100、約8容量％のTBP、約64容量％の大豆油、および約20容量％のDiH2Oを含む（本明細書ではX8Pと命名する）。本発明のもう1つの態様において、本発明の製剤は約8容量％のトライトン  X−100、約8容量％のTBP、約1％のCPC、約64容量％の大豆油、および19容量％のDiH2Oを含む（本明細書ではX8PCと命名する）。さらにもう1つの態様において、製剤は約8容量％のトライトン  X−100、約8容量％のTBP、約1容量％のCPC、約50容量％の大豆油、および約33容量％のDiH2Oを含む（本明細書ではATB−X1001と命名する）。なおもう1つの態様において、製剤は約8容量％のトライトン  X−100、約8容量％のTBP、約2容量％のCPC、約50容量％の大豆油、および約32容量％のDiH2Oを含む（本明細書ではATB−X002と命名する）。本発明のもう1つの態様は約4容量％のトライトン  X−100、約4容量％のTBP、約0．5容量％のCPC、約32容量％の大豆油、および約59．5容量％のDiH2Oを含む（本明細書では50％  X8PCと命名する）。なおもう1つの関連する態様は約8容量％のトライトン  X−100、約8容量％のTBP、約0．5容量％のCPC、約64容量％の大豆油、および約19．5容量％のDiH2Oを含む（本明細書ではX8PC1／2と命名する）。本発明のいくつかの態様において、本発明の製剤は約8容量％のトライトン  X−100、約8容量％のTBP、約2容量％のCPC、約64容量％の大豆油、および約18容量％のDiH2Oを含む（本明細書ではX8PC2と命名する）。他の態様において、本発明の製剤は約8容量％のトライトン  X−100、約8％のTBP、約1％の塩化ベンザルコニウム、約50容量％の大豆油、および約33容量％のDiH2Oを含む（本明細書ではX8P  BCと命名する）。本発明の別の態様において、製剤は約8容量％のトライトン  X−100、約8容量％のTBP、約1容量％の臭化セチルピリジニウム、約50容量％の大豆油、および約33容量％のDiH2Oを含む（本明細書ではX8P  CPBと命名する）。本発明のもう1つの例示的態様において、製剤は約8容量％のトライトン  X−100、約8容量％のTBP、約1容量％の臭化セチルジメチルエチルアンモニウム、約50容量％の大豆油、および約33容量％のDiH2Oを含む（本明細書ではX8P  CTABと命名する）。なおさらなる態様において、本発明は約8容量％のトライトン  X−100、約8容量％のTBP、約1容量％のCPC、約500μMのEDTA、約64容量％の大豆油、および約15．8容量％のDiH2Oを含む（本明細書ではX8PC  EDTAと命名する）。さらなる同様な態様は8容量％のトライトン  X−100、約8容量％のTBP、約1容量％のCPC、約10mMの塩化アンモニウム、約5mMのイノシン、約5mMのL−アラニン、約64容量％の大豆油、および約19容量％のDiH2OまたはPBSを含む（本明細書ではX8PC  GE1×と命名する）。本発明のもう1つの態様において、本発明の製剤は、さらに、約5容量％の��ライトン  X−100、約5％のTBP、約1容量％のCPC、約40容量％の大豆油、および約49容量％のDiH2Oを含む（本明細書ではX5P5Cと命名する）。
【０１０８】
本発明のいくつかの態様において、本発明の製剤は約2容量％のトライトン  X−100、約6容量％のチロキサポール、約8容量％のエタノール、約64容量％の大豆油、および約20容量％のDiH2Oを含む（本明細書ではX2Y6Eと命名する）。
【０１０９】
本発明のさらなる態様において、製剤は約8容量％のトライトン  X−100、約8容量％のグリセロール、約60〜70容量％の油（例えば、大豆油またはオリーブ油）、および約15〜25容量％の水相（例えば、DiH2OまたはPBS）を含む。ある関連する態様は、さらに、約1容量％のL−アスコルビン酸を含む。例えば、1つの特別な態様は約8容量％のトライトン  X−100、約8容量％のグリセロール、約64容量％の大豆油、および約20容量％のDiH2Oを含む（本明細書ではX8Gと命名する）。さらにもう1つの態様において、本発明の製剤は約8容量％のトライトン  X−100、約8容量％のグリセロール、約1容量％のL−アスコルビン酸、約64容量％の大豆油、および約19容量％のDiH2Oを含む（本明細書ではX8GVCと命名する）。
【０１１０】
なおさらなる態様において、本発明の製剤は約8容量％のトライトン  X−100、約0．5〜0．8容量％のツィーン  60、約0．5〜2．0容量％のCPC、約8容量％のTBP、約60〜70容量％の油（例えば、大豆油またはオリーブ油）、および約15〜25容量％の水相（例えば、DiH2OまたはPBS）を含む。例えば、1つの特別な態様において、製剤は約8容量％のトライトン  X−100、約0．70容量％のツィーン  60、約1容量％のCPC、約8容量％のTBP、約64容量％の大豆油、および約18．3容量％のDiH2Oを含む（本明細書ではX8W60PC1と命名する）。もう1つの関連する態様は約8容量％のトライトン  X−100、約0．71容量％のツィーン  60、約1容量％のCPC、約8容量％のTBP、約64容量％の大豆油、および約18．29容量％のDiH2Oを含む（本明細書ではW600．7X8PCと命名する）。さらに他の態様において、本発明の製剤は約8容量％のトライトン  X−100、約0．7容量％のツィーン  60、約0．5容量％のCPC、約8容量％のTBP、約64〜70容量％の大豆油、および約18．8容量％のDiH2Oを含む（本明細書ではX8W60PC2と命名する）。さらに他の態様において、本発明は約8容量％のトライトン  X−100、約0．71容量％のツィーン  60、約2容量％のCPC、約8容量％のTBP、約64容量％の大豆油、および約17．3容量％のDiH2Oを含む。本発明のもう1つの態様において、製剤は約0．71容量％のツィーン  60、約1容量％のCPC、約8容量％のTBP、約64容量％の大豆油、および約25．29容量％のDiH2Oを含む（本明細書ではW600．7PCと命名する）。
【０１１１】
本発明のもう1つの態様において、本発明の製剤は、約60〜70容量％の油（例えば、大豆油またはオリーブ油）、および約20〜30容量％の水相（例えば、DiH2OまたはPBS）に加えて、約2容量％のスルホコハク酸ジオクチル、約8容量％のグリセロールもしくは約8容量％のTBPを含む。例えば、本発明の1つの態様は約2容量％のスルホコハク酸ジオクチル、約8容量％のグリセロール、約64容量％の大豆油、および約26容量％のDiH2Oを含む（本明細書ではD2Gと命名する）。もう1つの関連する態様において、本発明の製剤は約2容量％のスルホコハク酸ジオクチル、および約8容量％のTBP、約64容量％の大豆油、および約26容量％のDiH2Oを含む（本明細書ではD2Pと命名する）。
【０１１２】
本発明のさらに他の態様において、本発明の製剤は約8〜10容量％のグリセロール、約1〜10容量％のCPC、約50〜70容量％の油（例えば、大豆油またはオリーブ油）、および約15〜30容量％の水相（例えば、DiH2OまたはPBS）を含む。加えて、これらの態様のあるものにおいて、組成物はさらに約1容量％のL−アスコルビン酸を含む。例えば、1つの特別な態様は約8容量％のグリセロール、約1容量％のCPC、約64容量％の大豆油、および約27容量％のDiH2Oを含む（本明細書ではGCと命名する）。さらなる関連する態様は約10容量％のグリセロール、約10容量％のCPC、約60容量％の大豆油、および約20容量％のDiH2Oを含む（本明細書ではGC10と命名する）。本発明のさらにもう1つの態様において、本発明の製剤は約10容量％のグリセロール、約1容量％のCPC、約1容量％のL−アスコルビン酸、約64容量％の大豆油、および約24容量％のDiH2Oを含む（本明細書ではGCVCと命名する）。
【０１１３】
本発明のいくつかの態様において、本発明の製剤は約8〜10容量％のグリセロール、約8〜10容量％のSDS、約50〜70容量％の油（例えば、大豆油またはオリーブ油）、および約15〜30容量％の水相（例えば、DiH2OまたはPBS）を含む。加えて、これらの態様のあるものにおいて、組成物はさらに約1容量％のレシチン、および約1容量％のp−ヒドロキシ安息香酸メチルエステルを含む。そのような製剤の例示的態様は約8容量％のSDS、8容量％のグリセロール、約64容量％の大豆油、および約20容量％のDiH2Oを含む（本明細書ではS8Gと命名する）。関連する製剤は約8容量％のグリセロール、約8容量％のSDS、約1容量％のレシチン、約1容量％のp−ヒドロキシ安息香酸メチルエステル、約64容量％の大豆油、および約18容量％のDiH2Oを含む（本明細書ではS8GL1B1と命名する）。
【０１１４】
本発明のなおもう1つの態様において、本発明の製剤は約4容量％のツィーン  80、約4容量％のチロキサポール、約1容量％のCPC、約8容量％のエタノール、約64容量％の大豆油、および約19容量％のDiH2Oを含む（本明細書ではW804Y4ECと命名する）。
【０１１５】
本発明のいくつかの態様において、本発明の製剤は約0．01容量％のCPC、約0．08容量％のチロキサポール、約10容量％のエタノール、約70容量％の大豆油、および約19．91容量％のDiH2Oを含む（本明細書ではY．08EC．01と命名する）。
【０１１６】
本発明のなおもう1つの態様において、本発明の製剤は約8容量％のラウリル硫酸ナトリウム、約8容量％のグリセロール、約64容量％の大豆油、および約20容量％のDiH2Oを含む（本明細書ではSLS8Gと命名する）。
【０１１７】
C．さらなる製剤
前記した特別な製剤は、本発明で用いられる種々の組成物を説明するための単なる例である。本発明では、前記製剤の多くの変形、ならびにさらなるナノエマルジョンが本発明の方法で用いられると考えられる。候補エマルジョンが本発明で用いるのに適するかを判断するために、3つの基準を分析することができる。本明細書中に記載した方法および標準を用い、候補エマルジョンを容易に試験して、それが適するかを判断することができる。まず、所望の成分を本明細書中に記載した方法を用いて調製して、エマルジョンが形成できるかを判断する。もしエマルジョンが形成できなければ、前記候補は拒絶される。例えば、4．5％のチオ硫酸ナトリウム、0．5％のクエン酸ナトリウム、10％のn−ブタノール、64％の大豆油、および21％のDiH2Oから作成された候補組成物はエマルジョンを形成しなかった。
【０１１８】
第2に、候補エマルジョンは安定なエマルジョンを形成すべきである。もしエマルジョンがその意図した使用を可能とするのに充分な時間エマルジョンの形態で留まるならば、そのエマルジョンは安定である。例えば、貯蔵し、出荷等すべきエマルジョンでは、組成物が数ヶ月〜数年間エマルジョン形態で留まるのが望ましい場合がある。比較的不安定な典型的なエマルジョンは1日以内にその形態を失うと思われる。8％の1−ブタノール、5％のツィーン  10、1％のCPC、64％の大豆油、および22％のDiH2Oから作成された候補組成物は安定なエマルジョンを形成しなかった。以下の候補エマルジョンは本明細書に記載する方法を用いて安定であることが示された。0．08％のトライトン  X−100、0．08％のグリセロール、0．01％の塩化セチルピリジニウム、99％のバター、および0．83％のdiH2O（本明細書では1％  X8GCバターと命名する）；0．8％  トライトン  X−100、0．8％のグリセロール、0．1％の塩化セチルピリジニウム、6．4％の大豆油、1．9％のdiH2O、および90％のバター（本明細書では10％  X8GCバターと命名する）；2％のW205EC、1％のナトロゾル（Natrosol）250L  NF、および97％のdiH2O（本明細書では2％  W205EC  L  ゲル（GEL）と命名する）；1％の塩化セチルピリジニウム、5％のツィーン  20、8％のエタノール、64％の70粘度鉱油、および22％のdiH2O（本明細書ではW205EC  70鉱油と命名する）；1％の塩化セチルピリジニウム、5％のツィーン  20、8％のエタノール、64％の350粘度鉱油および22％のdiH2O（本明細書ではW205EC  350鉱油と命名する）。いくつかの態様において、本発明のナノエマルジョンは1週間にわたって、1ヶ月にわたって、または1年にわたって安定である。
【０１１９】
第3に、候補エマルジョンはその意図した使用に対して有効性を有するべきである。例えば、抗菌性エマルジョンは細菌を検出できるレベルまで、または好ましい死滅レベルまで（例えば、1  log、2  log、3  log、4  log、・・・減少）死滅させるまたは無力とすべきである。本明細書に示すように、本発明のある種のエマルジョンは他のものに対するのではなく、特異的な微生物に対して抗力を有する。本明細書に記載する方法を用い、所望の微生物に対する特定の候補エマルジョンの適当性を決定することができる。一般に、これは、適当な対照試料（例えば、水のような陰性対照）を用いる一対一実験において微生物を1回またはそれ以上エマルジョンに曝露し、エマルジョンが微生物を死滅させるまたは無力とするか、およびどの程度そうするかを測定することを含む。例えば、1％の塩化アンモニウム、5％のツィーン  20、8％のエタノール、64％の大豆油、および22％のDiH2Oから作成された候補組成物は効果的なエマルジョンではないことが示された。以下の候補エマルジョンは本明細書中に記載した方法を用いて効果的であると示された。5％のツィーン  20、5％の塩化セチルピリジニウム、10％のグリセロール、60％の大豆油、および20％のdiH2O（本明細書ではW205GC5と命名される）；1％の塩化セチルピリジニウム、5％のツィーン  20、10％のグリセロール、64％の大豆油、および20％のdiH2O（本明細書ではW205GCと命名される）；1％の塩化セチルピリジニウム、5％のツィーン  20、8％のエタノール、64％のオリーブ油、および22％のdiH2O（本明細書ではW205ECオリーブ油と命名される）；1％の塩化セチルピリジニウム、5％のツィーン  20、8％のエタノール、64％の亜麻仁油、および22％のdiH2O（本明細書ではW205EC亜麻仁油と命名される）；1％の塩化セチルピリジニウム、5％のツィーン  20、8％のエタノール、64％のトウモロコシ油、および22％のdiH2O（本明細書ではW205EC  トウモロコシ油と命名される）；1％塩化セチルピリジニウム、5％のツィーン  20、8％のエタノール、64％のヤシ油、および22％のdiH2O（本明細書ではW205ECヤシ油と命名される）；1％の塩化セチルピリジニウム、5％のツィーン  20、8％のエタノール、64％の綿実油、および22％のdiH2O（本明細書ではW205EC綿実油と命名される）；8％のデキストロース、5％のツィーン  10、1％の塩化セチルピリジニウム、64％の大豆油、および22％のdiH2O（本明細書ではW205Cデキストロースと命名される）；8％のPEG  200、5％のツィーン  10、1％の塩化セチルピリジニウム、64％の大豆油、および22％のdiH2O（本明細書ではW205C  PEG  200と命名される）；8％のメタノール、5％のツィーン  10、1％の塩化セチルピリジニウム、64％の大豆油、および22％のdiH2O（本明細書ではW205Cメタノールと命名される）；8％のPEG  1000、5％のツィーン  10、1％の塩化セチルピリジニウム、64％の大豆油、および22％のdiH2O（本明細書ではW205C  PEG  1000と命名される）；2％のW205EC、2％のナトロゾル（Natrosol）250H  NF、および96％のdiH2O（本明細書では2％  W205ECナトロゾル2と命名され、また、2％  W205EC  ゲルと呼ばれる）；2％のW205EC、1％のナトロゾル250H  NF、および97％のdiH2O（2％  W205ECナトロゾル1と命名される）；2％のW205EC、3％のナトロゾル250H  NF、および95％のdiH2O（本明細書では2％  W205ECナトロゾル3と命名される）；2％のW205EC、0．5％のナトロゾル250H  NF、および97．5％のdiH2O（本明細書では2％W205ECナトロゾル0．5と命名される）；2％のW205EC、2％のメトセルA、および96％のdiH2O（本明細書では2％  W205ECメトセルAと命名される）；2％のW205EC、2％のメトセルK、および96％のdiH2O（2％のW205ECメトセルKと命名される）；2％のナトロゾル、0．1％のX8PC、0．1×PBS、5mMのL−アラニン、5mMのイノシン、10mMの塩化アンモニウム、およびdiH2O（本明細書では0．1％  X8PC／GE＋2％ナトロゾルと命名される）；2％のナトロゾル、0．8％のトライトン  X−100、0．8％のリン酸トリブチル、6．4％の大豆油、0．1％の塩化セチルピリジニウム、0．1×PBS、5mMのL−アラニン、5mMのイノシン、10mMの塩化アンモニウム、およびdiH2O（本明細書では10％  X8PC／GE＋2％ナトロゾルと命名される）；1％の塩化セチルピリジニウム、5％のツィーン  20、8％のエタノール、64％のラード、および22％のdiH2O（本明細書ではW205ECラードと命名される）；1％の塩化セチルピリジニウム、5％のツィーン  20、8％のエタノール、64％の鉱油、および22％のdiH2O（本明細書ではW205EC鉱油と命名される）；0．1％の塩化セチルピリジニウム、2％のネロリドール（Nerolidol）、5％のツィーン  20、10％のエタノール、64％の大豆油、および18．9％のdiH2O（本明細書ではW205EC0．1Nと命名される）；0．1％の塩化セチルピリジニウム、2％のファルネゾル、5％のツィーン  20、10％のエタノール、64％の大豆油、および18．9％のdiH2O（本明細書ではW205EC0．1Fと命名される）；0．1％の塩化セチルピリジニウム、5％のツィーン  20、10％のエタノール、64％の大豆油、および20．9％のdiH2O（本明細書ではW205EC0．1と命名される）；10％の塩化セチルピリジニウム、8％のリン酸トリブチル、8％のトライトン  X−100、54％の大豆油、および20％のdiH2O（本明細書ではX8PC10と命名される）；5％の塩化セチルピリジニウム、8％のトライトン  X−100、8％のリン酸トリブチル、59％の大豆油、および20％のdiH2O  （本明細書ではX8PC5と命名される）；0．02％の塩化セチルピリジニウム、0．1％のツィーン  20、10％のエタノール、70％の大豆油、および19．88％のdiH2O（本明細書ではW200．1EC0．02と命名される）；1％の塩化セチルピリジニウム、5％のツィーン  20、8％のグリセロール、64％のモービル（Mobil）1、および22％のdiH2O（本明細書ではW205GCモービル1と命名される）；7．2％のトライトン  X−100、7．2％のリン酸トリブチル、0．9％の塩化セチルピリジニウム、57．6％の大豆油、0．1×PBS、5mMのL−アラニン、5mMのイノシン、10mMの塩化アンモニウム、および25．87％のdiH2O（本明細書では90％  X8PC／GEと命名される）；7．2％のトライトン  X−100、7．2％のリン酸トリブチル、0．9％の塩化セチルピリジニウム、57．6％の大豆油、1％のEDTA、5mMのL−アラニン、5mMのイノシン、10mMの塩化アンモニウム、0．1×PBS、およびdiH2O（本明細書では90％  X8PC／GE  EDTAと命名される）；および7．2％のトライトン  X−100、7．2％のリン酸トリブチル、0．9％の塩化セチルピリジニウム、57．6％の大豆油、1％のチオ硫酸ナトリウム、5mMのL−アラニン、5mMのイノシン、10mMの塩化アンモニウム、0．1％PBS、およびdiH2O（本明細書では90％  X8PC／GE  STSと命名される）。
【０１２０】
D．非毒性で、非刺激性で、非腐食性の製剤
本発明の好ましい態様において、ナノエマルジョンは、細菌、真菌、ウイルスおよび胞子を含めた広い範囲の微生物に対する抗力を保有するが、（例えば、ヒト、植物または動物に対して）非毒性であり、（例えば、ヒト、植物または動物に対して）非刺激性であって、（例えば、ヒト、植物、または動物または環境に対して）非腐食性である。多数の前記したナノエマルジョンはこれらの適格性を満たすが、以下の記載は本発明の多数の好ましい非毒性で、非刺激性で、非腐食性の抗微生物ナノエマルジョンを提供する（以後、このセクションでは、「非毒性ナノエマルジョン」という）。
【０１２１】
いくつかの態様において、非毒性ナノエマルジョンは、細菌およびその胞子、エンベロープウイルスおよび真菌に対して効果的な広いスペクトルの抗微生物剤として用いられる界面活性剤脂質調製物（SLP）を含む。好ましい態様において、これらのSLPは、その殺生物活性を増強させる数個のイオンに加えて油、洗剤、溶媒およびカチオン性ハロゲン含有化合物の混合物を含む。これらのSLPは、高度に刺激性および／または毒性である商業的に入手可能な殺菌および殺胞子剤と比較して安定で、非刺激性で、かつ非毒性の化合物として特徴付けられる。
【０１２２】
非毒性ナノエマルジョンで用いられる成分は、限定されるものではないが、洗剤（例えば、TRIXON  X−100［5〜15％］またはトライトンファミリーの他のメンバー、ツィーン  60［0．5〜2％］またはツィーンファミリーの他のメンバー、またはチロキサポール［1〜10％］）；溶媒（例えば、リン酸トリブチル［5〜15％］）；アルコール（例えば、エタノール［5〜15％］またはグリセロール［5〜15％］）；油（例えば、大豆油［40〜70％］）；カチオン性ハロゲン含有化合物（例えば、塩化セチルピリジニウム［0．5〜2％］、臭化セチルピリジニウム［0．5〜2％］）、または臭化セチルジメチルエチルアンモニウム［0．5〜2％］）；第四級アンモニウム化合物（例えば、塩化ベンザルコニウム［0．5〜2％］、塩化N−アルキルジメチルベンジルアンモニウム［0．5〜2％］）；イオン（塩化カルシウム［1mM〜40mM］、塩化アンモニウム［1mM〜20mM］、塩化ナトリウム［5mM〜200mM］、リン酸ナトリウム［1mM〜20mM］）；ヌクレオシド（例えば、イノシン［50μM〜20mM］）；およびアミノ酸（例えば、L−アラニン［50μM〜20mM］）を含む。エマルジョンは、例えば、高剪断ミキサー中で3〜10分間混合することによって調製される。エマルジョンは、82℃にて1時間混合する前に加熱してもしなくてもよい。
【０１２３】
本発明で用いられる第四級アンモニウム化合物は、限定されるものではないが、サッカリン酸N−アルキルジメチルベンジルアンモニウム；1，3，5−トリアジン−1，3，5（2H，4H，6H）−トリエタノール；塩化1−デカンアミニウム、N−デシル−N,N−ジメチル−（または）塩化ジデシルジメチルアンモニウム；塩化2−（2−（p−（ジイソブチル）クレゾスキシ）エトキシ）エチルジメチルベンジルアンモニウム；塩化2−（2−（p−（ジイソブチル）フェノキシ）エトキシ）エチルジメチルベンジルアンモニウム；塩化アルキル1または3ベンジル−1−（2−ヒドロキシエチル）−2−イミダゾリニウム；塩化アルキルビス（2−ヒドロキシエチル）ベンジルアンモニウム；塩化アルキルジメチルベンジルアンモニウム；塩化アルキルジメチル3，4−ジクロロベンジルアンモニウム（100％C12）；塩化アルキルジメチル3，4−ジクロロベンジルアンモニウム（50％C14，40％C12，10％C16）；塩化アルキルジメチル3，4−ジクロロベンジルアンモニウム（55％C14，23％C12，20％C16）；塩化アルキルジメチルベンジルアンモニウム；塩化アルキルジメチルベンジルアンモニウム（100％C14）；塩化アルキルジメチルベンジルアンモニウム（100％C16）；塩化アルキルジメチルベンジルアンモニウム（41％C14，28％C12）；塩化アルキルジメチルベンジルアンモニウム（47％C12，18％C14）；塩化アルキルジメチルベンジルアンモニウム（55％C16，20％C14）；塩化アルキルジメチルベンジルアンモニウム（58％C14，28％C16）；塩化アルキルジメチルベンジルアンモニウム（60％C14，25％C12）；塩化アルキルジメチルベンジルアンモニウム（61％C11，23％C14）；塩化アルキルジメチルベンジルアンモニウム（61％C12，23％C14）；塩化アルキルジメチルベンジルアンモニウム（65％C12，25％C14）；塩化アルキルジメチルベンジルアンモニウム（67％C12，24％C14）；塩化アルキルジメチルベンジルアンモニウム（67％C12，25％C14）；塩化アルキルジメチルベンジルアンモニウム（90％C14，5％C12）；塩化アルキルジメチルベンジルアンモニウム（93％C14，4％C12）；塩化アルキルジメチルベンジルアンモニウム（95％C16，5％C18）；塩化アルキルジメチルベンジルアンモニウム（および）塩化ジデシルジメチルアンモニウム；（脂肪酸におけるような）塩化アルキルジメチルベンジルアンモニウム；塩化アルキルジメチルベンジルアンモニウム（C12−C16）；塩化アルキルジメチルベンジルアンモニウム（C12−C18）；塩化アルキルジメチルベンジルおよび塩化ジアルキルジメチルアンモニウム；塩化アルキルジメチルジメチルベンジルアンモニウム；臭化アルキルジメチルエチルアンモニウム（90％C14，5％C16，5％C12）；臭化アルキルジメチルエチルアンモニウム（大豆油の脂肪酸におけるような混合アルキルおよびアルケニル基）；塩化アルキルジメチルエチルベンジルアンモニウム；塩化アルキルジメチルエチルベンジルアンモニウム（60％C14）；塩化アルキルジメチルイソプロピルベンジルアンモニウム（50％C12，30％C14，17％C16，3％C18）；塩化アルキルトリメチルアンモニウム（58％C18，40％C16，1％C14，1％C12）；塩化アルキルトリメチルアンモニウム（90％C18，10％C16）；塩化アルキルジメチル（エチルベンジル）アンモニウム（C12−18）；塩化ジ−（C8−10）−アルキルジメチルアンモニウム；塩化ジアルキルジメチルアンモニウム；塩化ジアルキルジメチルアンモニウム；塩化ジアルキルジメチルアンモニウム；塩化ジアルキルメチルベンジルアンモニウム；塩化ジデシルジメチルアンモニウム；塩化ジイソデシルジメチルアンモニウム；塩化ジオクチルジメチルアンモニウム；塩化ドデシルビス（2−ヒドロキシエチル）オクチル水素アンモニウム；塩化ドデシルジメチルベンジルアンモニウム；塩化ドデシルカルバモイルメチルジメチルベンジルアンモニウム；塩化ヘプタデシルヒドロキシエチルイミダゾリニウム；ヘキサヒドロ−1，3，5−トリス（2−ヒドロキシエチル）−s−トリアジン；塩化ミリスタルコニウム（および）カントリニウム  14；塩化N，N−ジメチル−2−ヒドロキシプロピルアンモニウムポリマー；塩化n−アルキルジメチルベンジルアンモニウム；塩化n−アルキルジメチルエチルベンジルアンモニウム；塩化n−テトラデシルジメチルベンジルアンモニウム一水和物；塩化オクチルデシルジメチルアンモニウム；塩化オクチルドデシルジメチルアンモニウム；塩化オクチルフェノキシエトキシエチルジメチルベンジルアンモニウム；オキシジエチレンビス（アルキルジメチルアンモニウムクロライド）；第四級アンモニウム化合物、ジココアルキルジメチル、クロライド；塩化トリメトキシシリルプロピルジメチルオクタデシルアンモニウム；トリメトキシシリルカンツ、塩化トリメチルドデシルベンジルアンモニウム；塩化n−ドデシルジメチルエチルベンジルアンモニウム；塩化n−ヘキサデシルジメチルベンジルアンモニウム；塩化n−テトラデシルジメチルベンジルアンモニウム；塩化n−テトラデシルジメチルエチルベンジルアンモニウム；および塩化n−オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムを含む。
【０１２４】
一般に、好ましい非毒性ナノエマルジョンは以下によって特徴付けられる。より大きなおよびより小さな直径のナノエマルジョン双方が考えられるが、それは直径がほぼ200〜800nmであり；電荷は成分に依存し；それは比較的長期間（例えば、2年まで）安定であり、その殺生物活性が維持されり；それは、少なくとも部分的には、洗剤および溶媒の毒性を顕著に低下させるその油含有量のため、その個々の成分と比較して非刺激性であって非毒性であり；それは0．1％と低い濃度において効果的であり；それはほとんどの栄養型細菌（グラム陽性およびグラム陰性生物を含む）、真菌、およびエンベロープおよび非エンベロープウイルスに対して15分以内抗微生物活性を有し（例えば、99．99％死滅）；および、それは発芽増強剤を用いて製造すると1〜4時間以内殺胞子活性を有する（例えば、99．99％死滅）。
【０１２５】
III．特性および活性
本発明の特別な組成物はある範囲の便宜な活性および特性を保有する。多数の例示的便宜な特性および活性を以下に記載する。A）殺微生物および静微生物活性；B）殺胞子および静胞子活性；C）殺ウイルスおよび静ウイルス活性；D）殺真菌および静真菌活性；およびE）インビボ効果。加えて、図31A〜Cは本発明のある例示的製剤の特性を供する。いくつかの好ましい態様において、本発明のナノエマルジョンは広いスペクトルの死滅活性を有し、それにより、それらは1）細菌（グラム陽性およびグラム陰性）、2）ウイルス、3）真菌、および4）胞子のうちの2またはそれ以上を死滅させるまたは抗力をなくする（例えば、1  log、2  log、3  log、4  log・・・低下）。
【０１２６】
A．殺微生物および静微生物活性
本発明の方法を用いて、細菌を迅速に不活化することができる。ある態様において、組成物はグラム陽性菌を不活化するにおいて特に効果的である。好ましい態様において、細菌の不活化は約5〜10分後に起こる。従って、細菌を本発明によるエマルジョンと接触させることができ、迅速かつ効果的に不活化されると思われる。接触と不活化との間の時間は、細菌が直接的にエマルジョンに曝露された場合には、5〜10分またはそれ以下と短い可能性があることが予測される。しかし、本発明のエマルジョンを治療的意味で使用し、全身投与する場合、不活化は、限定されるものではないが、適用後5分、10分、15分、20分、25分、30分、60分の長い時間にわたって起こり得ることが理解される。さらに、さらなる態様において、不活化は起こるのに2時間、3時間、4時間、5時間または6時間要すると思われる。
【０１２７】
他の態様において、本発明の組成物および方法はある種のグラム陰性菌を迅速に不活化できる。いくつかの態様において、細菌不活化エマルジョンを、細胞壁によるエマルジョンの相互作用を増大させる化合物と予め混合する。本発明の組成物におけるこれらの増強剤の使用は、本明細書中において後に議論する。ある種のエマルジョン、特に、増強剤を含むエマルジョンはある種のグラム陽性菌および陰性菌に対して効果的であり、経口投与することができ、そこで、それは必要な腸細菌と接触する可能性があることに注意すべきである。
【０１２８】
特別な態様において、本発明は、本発明のエマルジョンが栄養型細菌に対して最小の毒性でもって優れた選択的殺生物活性を有することを示した。BCTPはバチルス・セレウス、バチルス・シルクランス（B. circulans）および巨大菌（B.megaterium）、ウェルシュ菌（C. perfrigens）、インフルエンザ菌（H.influrnzae）、淋菌（N. gonorrhoeae）、ステレプトコッカス・アガラクティエ（S. agalactiae）、肺炎球菌（S. pneumonia）、化膿連鎖球菌（S. pyogenes）およびコレラ菌（V. cholerae）古典型およびエルトール型に対して非常に効果的であった（図26）。この不活化は接触直後に開始し、感受性微生物のほとんどで15〜30分以内に完了する。
【０１２９】
図31Aは、大腸菌に対する本発明の多数の例示的ナノエマルジョンの有効性を示す。
【０１３０】
B．殺胞子および静胞子活性
ある特別な態様において、本発明は、本発明のエマルジョンが殺胞子活性を有することを示した。いずれかの理論に拘束されないが（機序の理解は本発明を実施するのに必要ではなく、本発明はいずれかの特定の機序に限定されない）、これらのエマルジョンの殺胞子活性は、エマルジョンによる破壊に感受性の胞子を放出する栄養型形態への完全な復帰なくして発芽の開始を通じて起こると示唆される。発芽の開始は、エマルジョンまたはその成分の作用によって媒介され得る。
【０１３１】
電子顕微鏡実験の結果は、BCTP処理に続く中核内容物の崩壊に伴う胞子外皮および皮質の破壊を示す。殺胞子活性はトライトン  X−100およびリン酸トリ−n−ブチル成分双方によって媒介されるようである。というのは、いずれかの成分を欠くナノエマルジョンはインビボで不活性であるからである。1％漂白剤と効率が同様であるエマルジョンのこの独特な作用は興味深い。なぜならば、バチルス属胞子は、多くの通常に用いられる洗剤を含めたほとんどの消毒剤に対して一般的には抵抗性だからである（Russell，Clin．Micro．3：99［1990］）。
【０１３２】
本発明は、マウスに注射する前のBCTPとバチルス・セレウス胞子との混合がバチルス・セレウスの病原性効果を妨げたことを示す。さらに、本発明は、バチルス・セレウス胞子で汚染した刺激された創傷のBCTP処理が、マウスにおける感染の危険および死亡率を顕著に低下させたことを示す。1：10に希釈されたBCTP単独を注射した対照動物はいずれの炎症効果も示さず、これは、BCTPがマウスにおいて皮膚毒性を有しないことを証明する。これらの結果は、曝露前または後に直ちに胞子を処理すると、実験的皮膚感染の組織損傷の重症度を効果的に低下できることを示唆する。
【０１３３】
本発明の開発の間に行なった他の実験は、異なるバチルス属胞子を不活化するBCTPおよびBCTP由来の他のエマルジョンの効果を比較した。1：1000（v／v）まで希釈したBCTPは4時間以内に炭疽菌胞子の90％を超えて不活化し、それは、胞子外皮の明らかな破裂を通じて3つの他のバチルス属胞子に対しても殺胞子性であった。1：1000希釈したX8W60PCは炭疽菌、バチルス・セレウスおよび枯草菌（B. subtilis）に対してより大きな殺胞子活性を有し、30分未満に作用の開始を有した。マウスにおいては、皮下注射前のBCTPとバチルス・セレウスとの混合または胞子接種から1時間後におけるBCTPでの創傷洗浄の結果、皮膚病巣のサイズは98％を超えて低下した。死亡率は後者の実験において4倍低下した。本発明の組成物は、他の入手可能な殺胞子剤と比較して、安定で、容易に分散され、非刺激性であって、非毒性である。
【０１３４】
本発明の方法で用いられる細菌不活化水中油型エマルジョンを用いて、接触に際して種々の細菌および細菌胞子を不活化することができる。例えば、現在開示するエマルジョンを用いて、バチルス・セレウス、バチルス・シルクランスおよび巨大菌を含めたバチルス属、またクロストリジウム（例えば、ボツリヌス菌（C. botulinum）および破傷風菌（C. tetani））を含めて不活化することができる。本発明の方法は、ある種の生物兵器（例えば、炭疽菌）を不活化するのに特に有用であり得る。加えて、本発明の製剤はウェルシュ菌、インフルエンザ菌、淋菌、ステレプトコッカス・アガラクティエ、肺炎球菌、化膿連鎖球菌およびコレラ菌古典型およびエルトール型と戦うのにも用いられる（図26）。
【０１３５】
BCTPはトライトン  X−100を含有し、他方、SSおよびW808Pはツィーン  60を含有し、NNはノノキシノール−9界面活性剤を含有した。各々は非イオン性界面活性剤であるが、その化学的および生物学的特徴は異なる。ノノキシノール−9は強力な殺精子活性を有し、それは、膣に送達される避妊製品の成分として広く用いられる（Lee，1996）。それは、エンベロープウイルスに対して殺ウイルス効果を有すると主張されている（Hermonatら、1992；Zeitlinら、1997）。しかし、ノノキシノール−9は非エンベロープウイルスに対して効果的であることが示されたことはない（Hermonatら、1992）。
【０１３６】
図31Bは、B. グロビギー（B. globigii）胞子に対する本発明の多数の例示的ナノエマルジョンの有効性を示す。
【０１３７】
C．殺ウイルスおよび静ウイルス活性
さらなる態様において、本発明のナノエマルジョン組成物は抗ウイルス特性を有することが示された。ウイルス因子に対するこれらのエマルジョンの効果は、プラーク減少アッセイ法（PRA）、細胞酵素結合免疫吸着検定（ELISA）、P−ガラクトシダーゼアッセイ法、および電子顕微鏡観察（EM）を用いてモニターし、脂質調製物の細胞毒性は、（4，5−ジメチルチアゾール−2−イル）−2，5−ジフェニルテトラゾリウム（MTT）染色アッセイ法を用いて評価した（Mosmann  1983）。
【０１３８】
細胞ELISAによって測定し、続いてPRAによる確認して、MDCK細胞のインフルエンザA型感染能の顕著な低下があった。希釈1：10におけるBCTPおよびSSはウイルス感染能を95％を超えて低下させた。二つの他のエマルジョンは、希釈1：10においてほぼ40％だけ、ウイルス低下感染能に対して中程度の効果を示したに過ぎない。BCTPは最も優れた調製物であり、希釈1：100においてさえ減少しない殺ウイルス効果を示した。動的研究は、ウイルスと1：10希釈のBCTPとの5分間のインキュベーションがその感染能を完全になくしたことを示した。希釈1：5000におけるBCTPの活性な成分であるトライトン  X−100はBCTPと比較してウイルスの感染能を部分的に阻害したに過ぎず、これは、ナノエマルジョンそれ自体が抗ウイルス効率に寄与することを示す。BCTPの抗ウイルス特性をさらに調べるため、非エンベロープウイルスに対するその作用を調べた。BCTP処理は、β−ガラクトシダーゼアッセイ法を用いて測定して、293細胞におけるlacZアデノウイルス構築体の複製に影響しなかった。EMで調べると、インフルエンザA型ウイルスはBCTPとのインキュベーションの後に完全に破壊され、他方、アデノウイルスは無傷のままであった。
【０１３９】
加えて、PBS中でのウイルスと10％および1％BCTPとのプレインキュベーションは、プラーク減少アッセイ法によって評価してヘルペスウイルス、センダイウイルス、シンドビスウイルスおよびワクシニアウイルスを完全に排除する（図27）。経時的分析は、不活化の開始が迅速であって、10％BCTPとのインキュベーションの5分以内に、および1％BCTPとのインキュベーションの30分以内に完了することを示した。BCTPの異なる希釈で処理したアデノウイルスは、感染性の低下を示さなかった。
【０１４０】
種々のウイルスの猛攻撃に対するある種のBCTPベースの組成物の効果および粘膜に対するそれらの最小毒性は、効果的な消毒剤、およびエンベロープウイルスでの感染に由来する病気の予防のための剤としてのそれらの能力を示す。
【０１４１】
いくつかの態様において、本発明のナノエマルジョンは低pH緩衝液と組み合わせて用いられる。そのようなナノエマルジョンはウイルス（例えば、リノウイルスまたは他のピコルナウイルス）の迅速な死滅剤として用いられる。
【０１４２】
図31Cは、インフルエンザA型に対する本発明の多数の例示的ナノエマルジョンの有効性を示す。
【０１４３】
D．殺真菌および静真菌活性
本発明のナノエマルジョンのなおもう1つの特性は、それらが抗真菌活性を保有することである。真菌感染の通常の剤は属カンジダおよびアスペルギルスの種々の種、およびそのタイプ、その他を含む。外部真菌感染は比較的重要でないが、全身真菌感染は重篤な医学的結果を生起させ得る。損なわれた免疫系を有する増大する数の患者に部分的に帰せられる、ヒトにおける真菌感染の増加する症例がある。真菌病は、特に全身である場合、損なわれた免疫系を有する患者では生命を脅かしうる。
【０１４４】
本発明の開発の間に行なわれた実験は、鵞口瘡カンジダ（Candida  albicans）に適用した場合に1％BCTPが92％を超える静真菌活性を有することを示した。カンジダは37℃にて一晩増殖させた。次いで、細胞を洗浄し、血球計を用いてカウントした。既知の数の細胞を異なる濃度のBCTPと混合し、24時間インキュベートした。次いで、カンジダをデキストロース寒天上で増殖させ、一晩インキュベートし、コロニーをカウントした。BCTPの静真菌効果は以下の通り決定した。
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【０１４５】
当業者であれば、本発明の製剤を採用し、それらを、真菌病の治療のために適切な製剤とすることができると思われる。本発明のナノエマルジョンは、競技者の足、カンジダ症および他の急性または全身真菌感染のような感染と戦うのに用いられる。
【０１４６】
E．インビボ効果
動物実験は、本発明の組成物および方法の保護および治療効果を示した。実験動物におけるバチルス・セレウス感染は、炭疽の研究用のモデル系として以前に使用されてきた（例えば、BurdonおよびWende，J  Infect．Diseas．170（2）：272［1960］；LamannaおよびJones，J．Bact．85：532［1963］；およびBurdonら、J  Infect．Diseas．117：307［1967］参照）。実験的にバチルス・セレウスで感染させた動物において誘導された病気症候群は炭疽と同様である（Drobniewski，Clin．Microbio．Rev．6：324［1993］；およびFritzら、Lab．Invest．73：691［1995］）。本発明の開発の間に行なった実験は、マウスに注射する前にBCTPとビイ・セレウル胞子とを混合すると、バチルス・セレウスの病理学的効果を妨げたことを示した。さらに、バチルス・セレウス胞子で汚染された刺激された創傷のBCTP処理は、マウスにおける感染の危険性および死亡率を顕著に低下させたことが示された。1：10に希釈したBCTP単独を注射した対照動物はいずれの炎症効果も示さず、これは、BCTPがマウスにおいて皮膚毒性を有しないことを証明する。これらの結果は、曝露の前または後に胞子を直ちに処理すると、実験的皮膚感染の組織損傷の重症度を効果的に低下させることができることを示唆する。
【０１４７】
特別な例において、ウェルシュ菌感染の実験用の実験動物としてモルモットを使用した。1．5cmの皮膚創傷を作成し、下層筋肉を破砕し、いずれのさらなる処理もなくして、5×107cfuのウェルシュ菌で感染させた。もう1つの群を同数の細菌で感染させ、次いで1時間後に、それを生理食塩水またはBCTPで洗浄して、曝露後除染を刺激した。実験的に感染させた創傷の生理食塩水での洗浄の結果、いずれの明らかな利点ももたらされなかった。しかし、ウェルシュ菌で感染させた創傷のBCTP洗浄は浮腫、炎症反応および壊死の顕著な低下を示した。それ自体、本発明のある種の製剤は細菌感染と戦うのに用いることができるのが示された。
【０１４８】
さらに、10％BCTPの皮下注射は実験動物において苦痛を引き起こさず、たいした組織学的組織損傷をもたらさなかった。経口毒性実験における全てのラットは実験期間にわたり体重増加を示した。悪い臨床的兆候は認められず、全ての組織は肉眼観察で正常な限界内に見えた。処理動物の糞からの細菌培養は、未処理動物のそれと有意には異ならなかった。
【０１４９】
IV．例示的使用
本明細書中に開示した組成物についての多数の例示的使用を以下に記載する。A）医薬および治療剤：B）除染および滅菌：C）食品の調製；およびD）キット、ならびにE）本発明の組成物の修飾、調製および送達のための方法および系の記載。
【０１５０】
A．医薬および治療剤
本発明では、微生物感染と戦うおよび／または治療するのに適した薬学的および治療組成物ならびに適用で使用することができる製剤が考えられる。そのような組成物を使用して、感染を低下させ、微生物を死滅させ、微生物の増殖を阻害し、またはそうでなければ微生物感染の有害効果を無くすることができる。
【０１５１】
インビボ適用では、組成物を、いずれかの効果的な薬学的に許容される形態で、ヒトおよび動物対象を含めた温血動物に投与することができる。一般に、これは、発熱因子、ならびにヒトまたは動物に有害であり得る他の不純物を実質的に含まない組成物を調製することを含む。
【０１５２】
薬学的に許容される形態の特別な例は、限定されるものではないが、経口、鼻、頬、直腸、膣、局所または鼻腔内スプレー、または微生物感染の部位に本発明の活性な組成物を送達するのに効果的ないずれかの他の形態を含む。好ましい態様において、投与経路は、組成物と感染性微生物との直接的な接触を得るように設計される。他の態様において、投与は正常位、皮膚内、皮下、筋肉内または腹腔内注射によることができる。また、組成物は対象に非経口または腹腔内投与することもできる。そのような組成物は、通常、薬学的に許容される組成物として投与される場合がある。いずれかの慣用的薬学的に許容される媒体または剤が本発明のエマルジョンに適合しない限り、これらの特定の態様における公知の薬学的に許容される媒体および剤の使用が考えられる。さらなる態様において、補助的有効生物を組成物に配合することもできる。
【０１５３】
局所適用では、薬学的に許容される担体は液体、クリーム、泡、ローションまたはゲルの形態をとることができ、加えて、有機溶媒、乳化剤、ゲル化剤、モイスチャークリーム、安定化剤、界面活性剤、湿潤剤、保存剤、適時放出剤、および少量の保湿剤、金属イオン封鎖剤、色素、香料、および局所投与のために薬学的組成物で通常使用される他の成分を含むことができる。
【０１５４】
エマルジョンを経口または局所投与のために製剤化される組成物の錠剤および投与形態は、液体カプセルおよび坐薬を含む。経口投与のための固体投与形態では、組成物は一つまたは複数の実質的に不活性な希釈剤（例えば、スクロース、ラクトース、澱粉等）と混合することができ、加えて、潤滑剤、緩衝化剤、腸溶コーティング、および当業者に周知の他の成分を含むことができる。
【０１５５】
本発明のもう1つの態様において、本発明の組成物は、特に、機器またはレンズが患者または着用者と接触させて用いるのを意図する場合、医療器具および機器、コンタクトレンズ等の消毒または滅菌のようなインビトロ適用のために特に設計することができる。例えば、組成物を用いて、対象への接触に先立って医療用および外科用器具ならびに用品を洗浄し、除染することができる。加えて、組成物を用いて、手術後に、またはいずれかの侵入手法の後に、手術後感染が起こるのを最小とするのを助けることができる。特に好ましい態様において、組成物は、易感染性または効果的でない免疫学的防御を持つ対象（例えば、老人および非常に若い者、火傷および外傷の犠牲者、およびHIV等に感染した者）に投与される。このタイプの投与では、組成物は、便宜には、液体、泡、ペーストまたはゲルの形態で提供することができ、乳化剤、界面活性剤、緩衝化剤、湿潤剤、保存剤、金属イオン、抗生物質およびこのタイプの組成物で通常見出される他の成分を用いて提供することができる。
【０１５６】
いくつかの態様において、組成物は器官または人工組織の移植または維持と組み合わせて用いられる。例えば、組成物は器官を滅菌するために移植するための器官の表面で用いることができる。組成物は器官の保存または貯蔵溶液（例えば、ビアスパン（VIASPAN）、Barr  Laboratories）と組み合わせて用いることもできる。
【０１５７】
他の態様において、組成物は縫合、包帯およびガーゼのような吸収性材料に含浸させることができるか、または微生物感染の予防のために部位に組成物を送達するための外科ステープル、ジッパーおよびカテーテルのような固相材料表面に被覆することができる。このタイプの他の送達系は当業者に容易に明らかであると思われる。
【０１５８】
尚もう1つの態様において、組成物は、消臭剤、石鹸における個人の健康のケア産業、ざ瘡／皮膚糸状菌治療剤、口臭の治療、膣酵母感染の治療等で用いることができる。また、組成物は、他の内部および外部微生物感染を治療するのに用いることもできる（例えば、インフルエンザ、単純疱疹、足指爪真菌等）。これらの適用において、エマルジョンは前記した治療担体とで製剤化することができる。いくつかの態様において、本発明のナノエマルジョンはゲルに製剤化され、ここに、ゲルは局所投与される。
【０１５９】
ある態様において、本発明の抗微生物組成物および方法は種々の組合せ療法も含む。例えば、しばしば、単一の抗微生物剤は、相互に組み合わせて使用する数個の剤よりも微生物を阻害するにおいてかなり効果は低い。このアプローチは、しばしば、多薬剤抵抗性の結果として遭遇する問題を回避するにおいて有利である。これは、薬物の生物からの流出を媒介する輸送体を有する細菌において特に行き渡っている。本発明では、さらに、そのような組合せ療法における本発明の方法および組成物の使用が考えられる。
【０１６０】
いくつかの態様において、本発明のナノエマルジョン組成物はもう1つの剤（例えば、医薬剤）のための送達系として用いられる。いくつかの態様において、前記剤は抗微生物特性を有する。そのような態様において、本発明のナノエマルジョンは、本発明のナノエマルジョンの非存在下における剤の送達と比較して、抗微生物効果を増大させる。しかし、いくつかの態様において、ナノエマルジョンは、もう1つの抗微生物剤なくして用いられる（すなわち、ナノエマルジョンそれ自体は組成物の抗微生物部分に過ぎない）。
【０１６１】
細菌、真菌およびウイルス感染を治療するのに用いられる現在入手可能な膨大な数の抗微生物剤がある。そのような薬物の一般的クラスに対する包括的な論説およびそれらの作用の機序については、当業者は（参照としてその全体を本明細書に組み入れられる）Goodman  ＆  Gilmanの「The  Pharmacological  Basis  of  Therapeutics」Hardmanら編、第9版、Pub．McGraw  Hill、43〜50章、1996を参照のこと。一般に、これらの剤は、細胞壁の合成を阻害する剤（例えば、ペニシリン、セファロスポリン、シクロセリン、バンコマイシン、バシトラシン）；およびイミダゾール抗真菌剤（例えば、ミコナゾール、ケトコナゾールおよびクロトリマゾール）；微生物の細胞膜を破壊するように直接的に作用する剤（例えば、ポルミキシンおよびコリスチメテートのような洗剤ならびに抗真菌ナイスタチンおよびアンフォテリシンB）；タンパク質の合成を阻害するようにリボソームサブユニットに影響を及ぼす剤（例えば、クロラムフェニコール、テトラサイクリン、エリスロマイシンおよびクリンダマイシン）；タンパク質合成を変化させ、細胞の死滅に至らせる剤（例えば、アミノグリコシド）；核酸代謝に影響する剤（例えば、リファマイシンおよびキノロン）；抗代謝剤（例えば、トリメトプリムおよびスロホンアミド）；およびDNA合成に必須のウイルス酵素を阻害するように作用するジドブジン、ガンシクロビール、ビダラビンおよびアシクロビールのような核酸アナログを含む。抗微生物剤の種々の組合せを用いることができる。
【０１６２】
組成物の実際の量および組成物中のいずれかの増強剤は、栄養型ならびに胞子型微生物を死滅させ、それらの毒生産物を中和するのに効果的な治療部位におけるエマルジョンおよび増強剤の量が得られるように変化させることができる。従って、選択された量は性質および治療のための部位、所望の応答、殺生物作用の所望の持続および他の因子に依存すると思われる。一般に、本発明のエマルジョン組成物は液体組成物1ml当たり少なくとも0．001％〜100％、好ましくは0．01〜90％のエマルジョンを含むと思われる。ウイルス感染は、液体組成物の1ml当たり約0．01％〜100％の間のエマルジョンを用いて治療することができると考えられる。細菌感染は、液体組成物の1ml当たり約0．001％〜約100％の間のエマルジョンを含む組成物で攻撃することができる。胞子は、液体組成物の1ml当たり約0．001％〜約100％のエマルジョンを含むエマルジョンによって死滅させることができる。これらは単に例示的な範囲である。製剤は液体組成物の1ml当たり約0．001％、約0．0025％、約0．005％、約0．0075％、約0．01％、約0．025％、約0．05％、約0．075％、約0．1％、約0．25％、約0．5％、約1．0％、約2．5％、約5％、約7．5％、約10％、約12．5％、約15％、約20％、約25％、約30％、約35％、約40％、約50％、約55％、約60％、約65％、約70％、約75％、約80％、約85％、約90％、約95％または約100％のエマルジョンを含むことができると考えられる。前記リストのいずれの2つの数字の間の範囲も、本発明の境界内に含まれると特に考えられると理解すべきである。投与量のいくらかの変形は、治療すべき対象の状態に応じて必然的に起こると思われる。
【０１６３】
投与に責任のある人は、いずれにせよ、個々の対象のための適切な容量を決定すると考えられる。さらに、人への投与では、調製物はFDA  Office  of  Biologics基準によって要求される滅菌性、発熱因子原性、一般的安全性および純度の基準を満たすべきである。
【０１６４】
B．除染および滅菌
一般に、本発明では、環境除染剤として用いられる、および軍隊およびテロリスト双方の攻撃における犠牲の治療用の組成物および方法が考えられる。実験動物における低毒性と組み合わせた、栄養型細菌およびエンベロープウイルス（例えば、Chatlyyneら、「A  lipid  emulsion  with  effective  virucidal  activity  against  HIV−1  and  other  common  viruses」、Foundation  for  Retrovirology  and  Humna  Health、3rd  Conference  on  retroviruses  and  Opportunistic  Infections、Washington  DC，U．S．A．［1996］参照）および細菌胞子を含めた広い範囲の病原体の不活化は、本発明のエマルジョンを、特定の病原体が同定される前に一般的な除染剤として用いるのに適したものとする。本発明の好ましい組成物は大量に迅速に生産することができ、広い範囲の温度において何ヶ月間も安定である。これらの特性は、広い範囲の除染適用で有用な柔軟性を提供する。
【０１６５】
例えば、本発明のある製剤は、生物兵器で用いられる細菌胞子および病原因子の多くを破壊するにおいて特に効果的である。この点に関し、本発明の組成物および方法は生物兵器因子によって汚染された人および物質を除染するのに有用である。本発明の組成物の溶液は、接地ベースの、または空気噴霧系から汚染された物質または人に直接スプレーすることができる。これらの適用のあるものにおいては、本発明では、除染が起こるように汚染された物質または人に有効量の組成物を接触させることが考えられる。または、人の除染キットを、生物剤で汚染したと思われる軍人または市民に供することができる。
【０１６６】
低毒性と組み合わせた、栄養型細菌およびエンベロープウイルス（例えば、Chatlyyneら、「A  lipid  emulsion  with  effective  virucidal  activity  against  HIV−1  and  other  common  viruses」，Foundation  for  Retrovirology  and  Humna  Health，3rd  Conference  on  retroviruses  and  Opportunistic  Infections，Washington  DC，U．S．A．［1996］参照）、および細菌胞子（例えば、Hamoudaら、J．Infect．Disease  180：1939［1999］参照）を含めた広い範囲の病原体の不活化は、本発明の組成物を、特定の病原体が同定される前に一般的な除染剤として用いるのに特に適したものとする。
【０１６７】
従って、本発明のある態様では、望まない病原体に付された可能性のある土壌、機械、搬送体および他の器具、および水路を除染するための本発明の組成物の消毒剤および洗剤における使用が特に考えられる。そのような除染手法は液体スプレーの形態の製剤の単純な適用を含むことができるか、またはより厳しいレジメンを必要とし得る。また、本発明のエマルジョンを用いて、（慣用的抗生物質の代わりに、それと共に用いるために）、種々の植物ウイルスにつき作物を処理することができる。また、ナノエマルジョンを用いて、農場動物、動物小屋、周囲の表面、および動物の死骸を除染し、例えば、ひずめおよび口の病気の非エンベロープウイルスを排除することもできる。
【０１６８】
土地および器具の除染におけるそれらの使用に加えて、製剤は、一般的な消毒剤目的で家事洗剤で用いることもできる。さらに、本発明のいくつかの態様を用いて、細菌または真菌での食品の汚染を防止することもできる（例えば、非毒性組成物）。これは、食品製造プロセスにおいて、または添加剤、消毒剤または保存剤としての食品への添加によってなすことができる。
【０１６９】
本発明のエマルジョンは、好ましくは、液体形態で堅い表面で用いられる。従って、これまでの成分を一つまたは複数の水性担体液体と混合する。水性担体の選択は重要ではない。しかし、それは安全であるべきであり、かつそれは本発明のエマルジョンと化学的に適合すべきである。いくつかの態様において、水性担体液体は、堅い表面を洗浄する組成物で通常用いられる溶媒を含む。そのような溶媒は本発明のエマルジョンと混和すべきであり、エマルジョンのpHにおいて化学的に安定であるべきである。また、それらは良好なフィルム形成／残存特性を有すべきである。堅い表面洗浄剤で用いるための溶媒は、参照としてその全体を本明細書に組み入れられる米国特許第5，108，660号に記載されている。
【０１７０】
好ましい態様において、水性担体は水またはアルコールおよび水の混和性混合物である。前記アルコールを用いて組成物の粘度を調整することができる。いくつかの態様において、アルコールは好ましくはC2−C4アルコールである。特に好ましい態様において、エタノールが使用される。例えば、1つの好ましい態様において、水性担体液体は水または約0〜約50％エタノールを含有する水−エタノール混合物である。また本発明では、非液体組成物を具体化する。これらの非液体組成物は顆粒、粉末またはゲルの形態、好ましくは顆粒形態とすることができる。
【０１７１】
選択的に、いくつかの組成物は、それが本発明のエマルジョンの活性に干渉しない限り、洗浄および審美性を増加させる補助的物質を含む。組成物は、選択的に、非干渉性補助的界面活性剤を含むことができる。広く種々の有機性の水溶性界面活性剤を選択的に使用することができる。補助的界面活性剤の選択は、組成物の意図した目的および界面活性剤の商業的入手可能性に関する使用者の希望に依存する。香料、増白剤、酵素、着色剤等のような他の任意の添加剤を組成物で使用して、審美性および／または洗浄効率を増強させることができる。また、洗剤ビルダーを組成物で使用することもできる。洗剤ビルダーは補助的界面活性剤または補助界面活性剤と結合し、それを効果が低いようにする可能性のあるカルシウムおよびマグネシウム硬度イオンを隔離する。洗剤ビルダーは、補助的界面活性剤または補助界面活性剤を使用する場合に特に有用であり、例外的に硬い水道水で使用するに先立って組成物を、約12グレイン／ガロンを超えて希釈する場合になおより有用である。
【０１７２】
他の態様において、組成物はさらに石鹸泡立ち抑制剤を含む。これらの態様において、組成物は、好ましくは、組成物を硬い表面に接触させた場合に過剰の石鹸泡立ちを防止するのに充分な量の石鹸泡立ち抑制剤を含む。石鹸泡立ち抑制剤は組成物の非リンス適用のための製剤で特に有用である。石鹸泡立ち抑制剤は公知の慣用的手段によって提供することができる。石鹸泡立ち抑制剤の選択は組成物において製剤化するその能力、および組成物の残渣および洗浄プロフィールに依存する。石鹸泡立ち抑制剤は組成物中の成分に化学的に適合しなければならず、それは本明細書に記載するpH範囲で機能的でなければならず、かつそれは洗浄した表面に目に見える残渣を残すべきではない。低発泡性補助界面活性剤を石鹸泡立ち抑制剤として用いて、組成物における石鹸泡立ちプロフィールを媒介することができる。約1部および約3％の間の補助界面活性剤の濃度が通常は充分である。
【０１７３】
本明細書に用いられる適当な共−界面活性剤の例はブロックコポリマー（例えば、プルロニック（PLURONIC）およびテトロニック（TETRONIC）ゲル［ポリ（エチレンオキシド）−b−ポリ（プロピレンオキシド）−b−ポリ（エチレンオキシド）ポリマーゲル、BASF  Company，Parispany，NJ］）およびアルキル化（例えば、エトキシル化／プロポキシル化）第1級および第2級アルコール（例えば、テリグトール（TERIGTOL）［Union  Carbide，Danbury，CT］；ポリ−テルゲント（POLY−TERGENTO）［Olin  Corporation，Norwalk，CT］）を含む。選択的な石鹸泡立ち抑制剤は、好ましくは、シリコーンベースの物質を含む。これらの物質は非常に低い濃度にて石鹸泡立ち抑制剤として効果的である。低い濃度において、シリコーンベースの泡立ち抑制剤は、組成物の洗浄性能に余り干渉しないようである。組成物で用いられる適当なシリコーンベースの石鹸泡立ち抑制剤の例はDow  CorningのDSEである。これらの選択的であるが好ましいシリコーンベースの石鹸泡立ち抑制剤は、公知の慣用的手段によって組成物に配合することができる。
【０１７４】
さらに他の態様において、組成物は、それらの個人的健康安全性および除染の必要性のために、健康ケア労働者、または人または領域を微生物感染と接触させるいずれかの人によって用いられ得る。加えて、本発明のエマルジョンは、洗浄および消毒医療機器および患者の部屋、家電製品、台所および浴室表面などのような病院および家庭用途のためにスプレーに製剤化することができる。同様な態様において、組成物は衛生および環境サービス労働者、食品加工および農業労働者および研究所所員によって、これらの個人が感染性生物学的剤と接触する可能性がある場合に使用され得る。加えて、組成物は、感染性および病理学的因子を保有する可能性がある旅行者および人が接触する領域によって使用され得る。
【０１７５】
C．食品製造
また、本発明では、本明細書中に記載したある組成物を、食品で生じる細菌、真菌およびトキシンで汚染した食品を予防し処理する際において食品加工および製造産業で使用することができる。従って、そのような組成物を使用して、微生物の増殖を低下させまたは阻害し、またはそうでなければ食品の微生物汚染の有害効果をなくすることができる。これらの適用では、エマルジョン組成物は、添加剤、保存剤または調味料のような食品産業で許容される形態で適用する。
【０１７６】
フレーズ「食品産業で許容される」とは、ヒトまたは動物が口から摂取した場合に有害またはアレルギー反応を実質的に生じさせない組成物をいう。本明細書中で用いるように「食品産業媒体中で許容される」とは、いずれかのおよび全ての溶媒、分散物質、いずれかのおよび全ての香辛料および薬草ならびにそれらの抽出物を含む。いずれかの慣用的添加剤、保存剤および調味料が本発明のエマルジョンと適合しない限り、食品で生じる微生物およびそれらの毒生産物を予防または処理するにおけるそれらの使用が考えられる。また、補助的有効成分を組成物に配合することもできる。そのような適用では、許容される担体は液体、クリーム、泡、ゲルの形態をとることができ、加えて、溶媒、乳化剤、ゲル化剤、モイスチャークリーム、安定化剤、湿潤剤、保存剤、金属イオン封鎖剤、色素、香料および食品加工産業で通常使用される他の成分を含むことができる。
【０１７７】
本発明のもう1つの態様において、組成物は、食品が加工され、包装され、および貯蔵される消毒または滅菌食品産業機器、器具および領域のような適用のために特に設計することができる。このタイプの適用では、組成物は便宜には液体または泡の形態で提供することができ、乳化剤、界面活性剤、緩衝化剤、湿潤剤、保存剤、およびこのタイプの組成物で通常見出される他の成分と共に提供することができる。いくつかの態様において、組成物を適用して、製品の輸送の前にまたはその間に農業製品を製造する。本発明の組成物は、輸送および貯蔵の間に食品汚染の予防用の包装材料（たとえば、ダンボールまたは紙包装）で通常用いられる吸収性物質に含浸させることができる。このタイプの他の送達系は当業者に明らかであると思われる。
【０１７８】
本発明の組成物におけるエマルジョンおよび増強剤の実際の量は、エマルジョンおよび増強剤の適切な濃度を得て、食品で生じる微生物およびそれらの毒生産物によって引き起こされる食品汚染を効果的に防止し、または阻害するように変化させることができる。従って、選択された濃度は食品の性質、包装、貯蔵手法および他の因子に依存すると思われる。一般に、本発明のエマルジョン組成物は液体組成物中に少なくとも0．001％〜約90％のエマルジョンを含むと思われる。製剤は液体組成物の1ml当たり約0．001％、約0．0025％、約0．005％、約0．0075％、約0．01％、約0．025％、約0．05％、約0．075％、約0．1％、約0．25％、約0．5％、約1．0％、約2．5％、約5％、約7．5％、約10％、約12．5％、約15％、約20％、約25％、約30％、約35％、約40％、約50％、約55％、約60％、約65％、約70％、約75％、約80％、約85％、約90％、約95％または約100％のエマルジョンを含むことができると考えられる。前記リストのいずれかの2つの数字の間の範囲は、本発明の境界内に含まれると特に考えられると理解されるべきである。
【０１７９】
特別な態様において、エマルジョンは、食品、土壌および水、機械および他の器具、および動物の微生物感染を除染し、予防するための消毒剤および洗剤として用いることができる。
【０１８０】
本発明のエマルジョンは、汚染を予防するために食品産業で用いることができる。例えば、食品それ自体内にエマルジョンを含めるのは、肉または家禽を偶発的に汚染した可能性のある細菌を死滅させるのに効果的であると思われる。これはまた、食品業界が、潜在的により広いスペクトルの食品を用い、コストを低減させるのを可能とする。
【０１８１】
本発明のある態様は飲料産業で用いることもできる。例えば、本発明のエマルジョンは、汚染を引き起こし、消費者にとって有害なマイコトキシンの生産に至るある種の真菌の増殖を予防するためにジュース製品に含めることができる。少量の本発明のエマルジョンの添加を通じて、フルーツジュース中のほとんどの通常の真菌汚染体は防止された。この効果は、エマルジョンの10，000において1部と少ない量（ジュース製品のフレーバーまたは組成物を変化させない量）で達成された。例えば、いくつかの態様において、ビソクラミス・フルバ（Byssochlamys  fulva）のような生物によるゲートレイド（GATORADE）のような製品の汚染は、本発明のナノエマルジョンの使用で予防される。
【０１８２】
本発明のエマルジョンを用いて、機械および他の器具上の感染性因子を実質的に除去することができる。例えば、エマルジョンを用いて、屠殺場または食品包装施設をエマルジョンで連続的に洗浄することによって、特に、リステリア菌（Listeria  monocytogenes）およびサルモネラ属微生物のような生物の肉加工プラントにおける汚染を排除することができる。
【０１８３】
投与に責任のある人は、いずれにせよ、個々の適用のために適当な投与量を決定すると考えられる。さらに、前記の適用は、FDA庁によって要求される一般的な安全性および純度の基準を満たすべきである。
【０１８４】
D．キット
本発明の他の態様において、方法および組成物、または方法および組成物の成分は単一の製剤に製剤化する場合か、または特定の適用で望まれる場合があるので、使用の間に後の混合のために別々の製剤に分離することができる。そのような成分は、有利には、微生物感染に対して用いるキット、除染器具などに入れることができる。いくつかの態様において、そのようなキットは、本発明の製剤、その意図した作用の部位に送達するのに必要な全ての必須の物質および試薬を含有する。
【０１８５】
インビボで用いることを意図したいくつかの態様において、本発明の方法および組成物を、単一または別々の薬学的に許容される注入可能な組成物に製剤化することができる。この場合、容器手段は、それ自体が、吸入器、シリンジ、ピペット、点眼器、または他の同様な装置とすることができ、それから、製剤を肺のような身体の患部に適用し、動物に注射し、または適用し、およびキットの他の成分と混合することができる。
【０１８６】
また、本発明のキットは、典型的には、商業的販売のために密封されるバイアルを含有するための手段（例えば、所望のバイアルをそこに保持する射出またはブロー成型プラスチック容器）を含む。容器の数またはタイプに拘わらず、本発明のキットは動物の身体内への最終的複合組成物を注入／投与または設置するのを助けるための器具を含むことができるか、またはそれで包装することもできる。そのような器具は吸入器、シリンジおよび防腐ワイパー、ピペット、ピンセット、計量スプーン、点眼器またはいずれかのそのような医療的に認可された送達ビヒクルであり得る。
【０１８７】
E．修飾、調製および送達
本発明は、さらに、本発明のナノエマルジョンの修飾、ナノエマルジョンの他の製品への配合、本発明の組成物の包装および送達のための種々の方法およびシステム、および微生物で汚染した可能性のある物質または試料の使用もしくは取扱いに関連するコストを低減する方法を提供する。以下の記載は、本発明の組成物の修飾、調製および送達のいくつかの例を単に提供することを意図する。当業者であればそのような方法の変形を認識すると思われる。
【０１８８】
いくつかの態様において、本発明は、本明細書中に記載するナノエマルジョンを改良または改変する方法を提供する。そのような方法は、例えば、本明細書中に記載するナノエマルジョンを採用すること、およびナノエマルジョンの一つまたは複数の成分を変化させることを含む。そのような変化は、限定されるものではないが、一つまたは複数の成分の添加または除去を含む。次いで、改変されたナノエマルジョンを試験して、それが所望のまたは有用な特性を有するかを判断することができる。本発明のいくつかの態様において、本発明のナノエマルジョン、または本発明のナノエマルジョンから誘導されたものを希釈する。次いで、希釈された試料を試験して、それらが所望の機能を維持しているかを判断することができる。本発明のさらに他の態様において、本発明のナノエマルジョン、または本発明のナノエマルジョンから誘導されたものを品質管理（QC）および／または品質保証（QA）工程を通じて、使用者または小売業者に対する販売または送達についてのナノエマルジョンの適当性を確認する。
【０１８９】
本発明のいくつかの態様において、本発明のナノエマルジョンをもう1つの製品に添加して、前記製品の抗微生物能力を加えるかまたは改良し、または疑われるものを試験し、または前記製品に対する認識される改良抗―微生物能力を提供する（すなわち、本発明のナノエマルジョンの製品への添加は、それが検出可能な、またはいずれかの抗微生物能力を有するか否かにかかわらず、本発明の範囲内にあると考えられる）。例えば、いくつかの態様において、本発明のナノエマルジョンを洗浄または消毒物質（例えば、家庭洗浄剤）に加える。他の態様において、ナノエマルジョンを医療または第1の援助物質に加える。例えば、ナノエマルジョンを滅菌剤および創傷ケア製品に加えることができるか（または、それらとして直接的に使用することができる）。さらに他の態様において、ナノエマルジョンを産業製品に加える。例えば、いくつかの態様において、ナノエマルジョンをモーター油に加えて、例えば、真菌汚染を予防し、または低下させる。前記したように、効果的で安定なエマルジョンは、油成分としてモーター油を用いて合成することさえもできる（例えば、W205GC  モービル1）。さらに他の態様において、ナノエマルジョンを食品に加える。例えば、ナノエマルジョンを飲料に加えて、飲料中の望まない生物の増殖を予防することができる。
【０１９０】
本発明のナノエマルジョンは、単独または他の物質と組み合わせるかを問わず、多くの異なるタイプの容器および送達系において提供することができる。例えば、本発明のいくつかの態様において、ナノエマルジョンはクリームまたは他の固体もしくは半固体形態で供される。本発明の開発の間に、本発明のエマルジョンは、抗微生物能力を維持しつつ、ヒドロゲル製剤に配合することができると判断された。ヒドロゲルにおけるエマルジョンの使用は多数の有用な特徴を提供する。例えば、ヒドロゲルは所望のサイズおよび形状の半固体構造で調製することができる。これは、例えば、ヒドロゲル物質の管または他の通路への挿入が抗微生物フィルターを作り出すことを可能とする（すなわち、ヒドロゲルを通過する物質は本発明のエマルジョンによって除染される）。
【０１９１】
ナノエマルジョンはいずれかの適当な容器中にて（例えば、使用者または消費者に）送達される。所望の適用のためのナノエマルジョンの一つまたは複数の単一使用または複数使用投与量を提供する容器を用いることができる。本発明のいくつかの態様において、ナノエマルジョンは懸濁液または液体形態で供される。そのようなナノエマルジョンはスプレー瓶（例えば、加圧スプレー瓶）を含めたいずれかの適当な容器中にてデリバーすることができる。産業または他の大規模な使用では、大容量の（例えば、数十〜数千リットルの）ナノエマルジョンを、ナノエマルジョンの分配または使用を可能とするのに適切な配置の単一容器中にて提供することができる。そのような容器は大規模な製造施設と組み合わせて用いることができる。
【０１９２】
本発明のいくつかの好ましい態様において、本発明のナノエマルジョンを現存商慣行と組み合わせて用いて、商慣行と関連したコストを低減化し、または商慣行の操作の安全性を改良する。例えば、本発明のナノエマルジョンの使用は、微生物で汚染した可能性のある物質または試料の使用もしくは取扱いに関連するコストを低減化することができる。いくつかの態様において、本発明のナノエマルジョンを用いて、安全性を改善し、または医療産業に関連するコストを低減する。例えば、ナノエマルジョンは、医療物質（例えば、動物、人々または生物学的試料と接触する表面）または患者（例えば、外部または内部）で用いるための安価で効果的な滅菌剤として用いられる。また、ナノエマルジョンは、食品加工および取扱いならびに産業適用のために安価で効果的な滅菌剤としても用いられる。いくつかのそのような態様において、本発明は非毒性ナノエマルジョンを提供する。例えば、医療、農業および食品適用で用いられる適当な規制機関（例えば、FDA、USDAなど）によって現在認可されている成分を含むナノエマルジョンが本明細書に提供される。さらに、非毒性で認可された物質より全体がなることができる所望の機能を持つさらなるナノエマルジョンを創製する方法が本明細書に提供される。それ自体、本発明のナノエマルジョンは、規制認可を得るのに時間がかかり出費のかさむ手続きを受けることを経験することなく適用で用いることができる。事実、エマルジョンは、それらの個々の成分の総量よりも少ない毒性を有し得る。例えば、X8PCを試験して、非乳化剤成分の混合物の溶解効果と比較して、血液寒天プレート上で試験したヒツジ赤血球細胞に対するエマルジョンの溶解効果を比較した。データを図34に掲げる。図34中の2つの黒色棒線は、全ての成分の非乳化混合物の溶解効果と比較したX8PCナノエマルジョンの溶解効果を示す。
【０１９３】
F．さらなる例
本発明のナノエマルジョンは単独または他の物質および製品と組み合わせて用いて、特異的所望の機能を行って産生することができる。例えば、ナノエマルジョンを健康ケア製品、衛生製品および家庭製品に加えて、またはそれらと共に製剤化して、製品の汚染を予防しおよび／または製品の抗微生物特性を加え、または改良することができる。いくつかの態様において、製品の機能的成分はナノエマルジョンの（例えば、前記したナノエマルジョン組成物のいずれか）の水相または油相に含める。成分は乳化前に、間にまたは後に加えることができる。
【０１９４】
製剤および使用の例は以下のものを含む（成分および濃度は例示的なものであり；修飾は適切にまたは所望によりなすことができる）：ざ瘡治療（例えば、0．10％アダパレン、20％アゼライン酸、2．5〜20％過酸化ベンゾイル、1％クリンダマイシン、1．5〜2％エリスロマイシン、0．05％イソテトリノイン、1％メクロサイクリン、4％ニコチンアミド、1〜3％レゾルシノール、0．5〜5％サリチル酸、0．5〜5％硫黄、6％硫化石灰［1：10希釈］、2．2mg／mlテトラサイクリン塩酸および0．025〜0．1％トレチノイン）；深ポア精製アストリンジェント（Witch  Hazel）；酸中和（例えば、＜600mg／5mlのアルミナ［水酸化アルミニウム］、炭酸アルミニウム、リン酸アルミニウム、＜850mg／5mlの炭酸カルシウム、540mg／5mlのマガルドレート、＜500mg／5mlのマグネシア（水酸化マグネシウム）、炭酸マグネシウム、酸化マグネシウム、三ケイ酸マグネシウム、炭酸水素ナトリウム、＜40mg／5mlのシメチコン）；アフタ性口内炎治療（例えば、コルチコステロイド、0．12％クロルヘキシジン）；コルチコステロイド（例えば、0．05％アルクロメタゾンジプロピオネート、0．10％アムシノナイド、0．025％ベクロメタゾンジプロピオネート、0．01〜0．1％のベタメタゾンおよび誘導体、0．05％クロべタゾールプロピオネートおよび誘導体、0．05％デゾナイド、0．25％デソキメタゾン、0．10％デキサメタゾンおよび誘導体、0．05％ジフォラゾンジアセテート、0．10％ジフルコルトロンバレレート、0．03％フルメタゾンピバレート、0．01〜0．025％フルオシノロンアセトニド、0．01〜0．05％フルオシノナイド、0．025〜0．05％フルランドレノリド、0．005％フルチカゾンプロピオネート、0．10％ハルシノナイド、0．05％ハロベタゾールプロピオネート、0．2〜2．5％ヒドロコルチゾン誘導体、0．10％モメタゾンフロネート、0．025〜0．5％トリアミシノロンアセトニド）；昆虫刺され治療／風邪びらん／局所麻酔剤（例えば、5〜20％ベンゾカイン、1％ブタムベン、0．50％ジブカイン、0．5〜5％リドカイン、1％プラモキシン、1％テトラシン、＋／−0．50％メントール）；火傷創傷感染（例えば、85mg／gmのマフェニド、1％銀スルファジアジン、0．5〜1．5％フラミセチン、0．01％グラミシジン［フラミセチンと混合］、2％フシジン酸）；ベンチ治療（例えば、2〜20％レゾルシノール、レゾルシノール＋硫黄2％＋5〜8％）；カンジダ症（例えば、2％ブトコナゾール、1％シクロピロックス、1〜10％クロトリマゾール、クロトリマゾールおよびベタメタゾン1％および0．05％、150mg／容量エコナゾール、2％ケトコノゾール、500mgおよび100，000単位メトロニダゾールおよびナイスタチン、2〜5％ミコナゾール、100，000単位／グラムナイスタチン、100，000単位および1mg／グラムナイスタチンおよびトリアムシノロン、1％スルコナゾール、0．4〜0．8％テルコナゾール、6．50％チオコナゾール）；抗真菌製品（例えば、3％クリオキノール、1％ハロプロジン、1％ナフチフィン、1％トルナフテート、1％テルビナフィン、1％オキシコナゾール）；癜風（例えば、1％ハロプロジン、2％ケトコナゾール）；ODOR  GUARD  靴消臭剤（例えば、5．0％塩化ナトリウム）；ふけ（例えば、2％クロロキシン、1〜25％コールタール、2％ケトコナゾール、1〜2％ピリチオン、1〜10％サルチル酸、1〜2．5％硫化セレン）；��膚炎／乾癬（例えば、コロチコステロイド）；毛包炎症（例えば、3％クリオキノール）；ヘルペス（例えば、5％アシクロビール）；インペチゴ（2％ムピロシン）；昆虫忌避剤（例えば、7．5〜100％ジエチルトルアミド）；モイスチャーローション（例えば、ジメチコン、アラントイン、ショウノウ、メントール、ユーカリ）；口感染（例えば、0．12％クロルヘキシジン）；アタマシラミ寄生症（例えば、1％リンダン［安息香酸ベンジル］）；疥癬（例えば、0．50％マラチオン、1〜5％ペルメトリン、0．18〜0．33％および2．2〜4％ピレスリンおよびピペロニルブトキサイド）；疥癬（例えば、10％クロタミトン、0．5〜10％硫黄、6％硫化石灰）；乾癬（例えば、0．1〜1％アントラリン、0．01％カルシポトリエン、1〜25％クールタール、1％メトキサレン、1〜3％レゾルシノール）；酒さ（例えば、0．75％メトロニダゾール、2〜10％硫黄）；皮膚感染（細菌）／潰瘍（例えば、1．0％クロラムフェニコール、3．0％クロロテトラサイクリン、1．0％クリンダマイシン、3．0％クリオキノール、1．5〜2％エリスロマイシン、0．1％ゲンタマイシン、2〜7％ヨウ素、2．0％ムピロシン、0．5％ネオマイシン、10，000単位／gmポリミキシンB、500単位／gmバシトラシン、1．0％銀スルファジアジン、3％テトタサイクリン）；殺精子（例えば、ノノキシノール9、ナノキシノール9＋／−コンドーム）；日焼け止め剤（例えば、5〜15％アミノ酸安息香酸、3％アボベンゾン、3％ジオキシベンゾン、4〜15％ホモサラーテ、2〜3％リサジメート、3．5〜5％メチルアントラニレート、7〜10％オクトクリーレン、2〜7．5％オクチルメトキシシンナメート、3〜5％サリチル酸オクチル、2〜6％オキシベンゾン、1．4〜8％パジメートO、1〜4％ファニルベンズイミダゾールスルフォン酸、1〜5％ロキサジメート、5〜10％スリゾベンゾン、2〜25％二酸化チタン、5〜12％サリチル酸トロラミン、酸化亜鉛）；練り歯磨き（例えば、フッ化ナトリウム、モノフルオロリン酸ナトリウム、フッ化アミン、フッ化スズ）；歯美白剤（例えば、過酸化水素、カルボポル956、水酸化ナトリウム、酸性リン酸ナトリウム、スズ酸ナトリウム）；タルテールファイティング（例えば、ポリピロフォスフェート、ピロリン酸四ナトリウム）；歯痛（例えば、10〜20％ベンゾカイン）；歯感受性保護（例えば、重曹、5．0％硝酸カリウム）；マウスウォッシュ（例えば、0．006％リゾチウム、0．006％ラクトフェリン、4000単位／100mlグルコースオキシダーゼ、4000単位／100mlラクトペロシダーゼ）；膣癬（例えば、2％クリンダマイシン、0．75〜10％メトロニダゾール）；尋常性イボ（例えば、2〜20％レゾルシノール、13％または40％サリチル酸）；扁平イボ（例えば0．025〜0．1％トレチノイン）；点眼剤（例えば、70．0％デキストラン、0．3％ヒドロキシプロピルメチルセルロース2910、1．4％ポリビニルアルコール、0．6％ポビドン）；コンタクトレンズ洗浄剤（例えば、3．0％過酸化水素、シトレート、テトロニック1304、AMP−95）；コンタクトレンズ（例えば、塩化ナトリウム、ホウ酸、ソルビトール、エデト酸二ナトリウム）；コンタクトレンズ消毒剤（例えば、0．0010％ポリクワッド［ポリクワテルニウム−1］、0．0005％アルドックス［ミリスタミドプロピルジメチルアミン］）；消臭剤（例えば、19．0％アル���ニウムジルコニウム）；抗菌性消臭石鹸（例えば、トリクロカーボン）；おむつ発疹（例えば、40．0％酸化亜鉛、ジメチコン）；ペット用の抗菌性ワイパー（例えば、リドカインHCl）；ネコ寝藁（例えば、重曹）；皿洗い器洗剤（例えば、2．7％リン、1．19gフォスフェート）；浴槽およびシャワー洗浄剤（例えば、モノカルバミド塩酸）；ガラスおよび表面洗浄剤（例えば、3．5％プイソロパノール、0．3％プロピレングリコール）；便器洗浄剤（例えば、51．0％1−ブロモ−3−クロロ−5，5−ジメチルヒダントニン、23．3％1，3−ジクロロ−5，5−ジメチルヒダントニン、9．0％1，3−ジクロロ−5−エチル−5−メチルヒダントニン）；ランドリー洗浄剤（例えば、5．3％硫酸ノナノキシロキシベンゼンナトリウム、5．3％過ホウ酸、ナトリウム塩）；ペットの新鮮なカーペットの洗浄剤（例えば、0．3％ゲラニオール、ローズマリー油、杉油、ゲラニウム油、コースイガヤ油、レモングラス油、シナモン油、ミント油）。
【０１９５】
従って、いくつかの態様において、本発明は、溶媒（例えば、エタノール、グリセロール、ポリエチレングリコール、イソプロパノール）を含む第1の成分、ハロゲン含有化合物（例えば、塩化ベンゼトニウム、塩化メチルベンゼトニウム、塩化N−アルキルジメチルベンジルアンモニウム、塩化アルキルジメチル−3，4−ジクロロベンジルアンモニウム、塩化セチルピリジニウム）を含む第2の成分、界面活性剤（例えば、ツィーン−20、トライトン  X−100、SDS、ポロキサマー、ラウリル乳酸ナトリウム）を含む第3の成分、および第4の成分（例えば、さらなる界面活性剤、メタノール、EDTA、リン酸トリブチル、チロキサポール、2−フェニルフェノール、塩化ナトリウム、クエン酸三ナトリウム一水和物、クエン酸、フッ化ナトリウム、ペパーミントエキス、NaOH、L−アラニン、イノシン、塩化アンモニウム、PBS、メントール、チモール、ユーカリ、サリチル酸メチル、トリクロサン、ジセリン、ナトロゾール、過酸化ベンゾイル、サリチル酸、クエン酸緩衝液、サッカリンナトリウム、テルギトール、モノエタノールアミン、高張生理食塩水、塩化カルシウム、過酸化水素、ポリマー407）の一つまたは複数を有する抗微生物水中油型ナノエマルジョンを提供する。
【実施例】
【０１９６】
V. 実施例
以下の実施例は、本発明のある好ましい態様および局面を説明するものであり、本発明の範囲を限定するものと解釈されるべきではない。
【０１９７】
以下の実験開示において、以下の省略を適用する。eq（当量）；μ（ミクロン）；M（モル濃度）；μM（マイクロモル濃度）；mM（ミリモル濃度）；N（規定）；mol（モル）；mmol（ミリモル）；μmol（マイクロモル）；nmol（ナノモル）；g（グラム）；mg（ミリグラム）；μg（マイクログラム）；ng（ナノグラム）；L（リットル）；ml（ミリリットル）；μl（マイクロリットル）；cm（センチメートル）；mm（ミリメートル）；μm（マイクロメーター）；nM（ナノモル濃度）；℃（度摂氏）；およびPBS（リン酸緩衝化生理食塩水）。
【０１９８】
実施例1
エマルジョンを製剤化する方法
エマルジョンは以下の通り製造される。有機溶媒、油および界面活性剤を混和し、得られた混合物を37〜90℃にて一時間まで加熱することによって油相が作成される。エマルジョンは往復シリンジ器具またはシルバーソン（Silverson）高剪断ミキサーいずれかで形成される。水相を油相に添加し、1〜30分間、好ましくは5分間混合する。揮発性成分を含有するエマルジョンでは、揮発性成分を水相と共に添加する。
【０１９９】
特定の態様において、エマルジョンは以下の通り形成された。リン酸トリブチル、大豆油および界面活性剤（例えば、トライトン  X−100）を混和し、次いで、得られた混合物を86℃にて一時間加熱することによって油相を作成した。次いで、4部の水に対する1部の油相の容量／容量比率にて水を油相に注入することによってエマルジョンを製造した。エマルジョンは往復シリンジ器具、またはバッチもしくは連続流動器具を用いて手動で製造することができる。これらのエマルジョンを製造する方法は当業者によく知られており、例えば、（その全体を参照として本明細書に組み入れられる）米国特許第5，103，497号および第4，895，452号に記載されている。表2は、各成分の割合、pH、および循環水浴を備えたコールター（Coulter）LS  130レーザーサイジング装置で測定したエマルジョンのサイズを示す。
【０２００】
（表２）
2010209109.tif 000005
※このエマルジョンは、1：9の比率でBCTPエマルジョンを水で希釈することによって得られた。
【０２０１】
本発明のエマルジョンはかなり安定である。事実、エマルジョンは前記したように製造し、密閉した50〜1000mlのポリプロピレンチューブ中に室温で一晩放置した。次いで、エマルジョンを分離の兆候につきモニターした。分離の兆候を示さなかったエマルジョンを「安定」と考えた。次いで、安定なエマルジョンを一年間にわたってモニターし、安定性を維持することが判明した。
【０２０２】
エマルジョンを前記したように再度製造し、密閉した50mLのポリプロピレンチューブ中にて−20℃で一晩放置した。次いで、エマルジョンを分離の兆候につきモニターした。分離の兆候を示さなかったエマルジョンを「安定」と考えた。前記BCTPおよびBCTP0．1エマルジョンは、室温における少なくとも24ヶ月の保存後に実質的に不変であることが判明した。
【０２０３】
実施例2
脂質液滴中に形成された乳化リポソームとしての本発明の例示的細菌不活化エマルジョンの特徴付け
脂質含有水中油型エマルジョンをBCTPと混合することによってX8W60PCと命名した本発明の細菌不活化エマルジョンを形成した。特に、一次脂質としてのモノオレイン酸グリセロール（GMO）および陽性電荷生成剤としての塩化セチルピリジニウム（CPC）を有する脂質含有水中油型エマルジョン（本明細書ではGMO／CPC脂質エマルジョンまたは「W808P」という）およびBCTPを1：1（容量vs容量）比で混合した。（その全体を参照として本明細書に組み入れられる）米国特許第5，547，677号は、GMO／CPC脂質エマルジョン、およびBCTPと組み合わせて本発明の細菌不活化水中油型エマルジョンを提供することができる他の関連脂質エマルジョンを記載する。
【０２０４】
実施例3
インビトロ殺菌効果の研究I−グラム陽性菌
本発明のエマルジョンの殺菌効果を研究するために、エマルジョンを種々の細菌と10分間混合し、次いで、種々の希釈にて標準微生物学的培地上で平板培養した。次いで、コロニーのカウントを未処理培養と比較して、処理によって死滅された細菌のパーセントを決定した。表3は実験の結果をまとめる。
【０２０５】
（表３）
2010209109.tif 000006
【０２０６】
バチルス種の種々の栄養形態に対する本発明のエマルジョンの殺菌効果を研究するために、3つの希釈のエマルジョンを4つのバチルス種と10分間で混合し、次いで、微生物学的培地上で平板培養した。次いで、コロニーのカウントを未処理培養物と比較して、処理によって死滅された細菌のパーセントを決定した。表4は、括弧に入れた平均パーセンテージ死滅と共に、いくつかの実験からの殺菌結果のまとめを含む。
【０２０７】
（表４）
2010209109.tif 000007
【０２０８】
実施例4
インビトロ殺菌効果の研究II−グラム陰性菌
グラム陰性菌の細胞壁による細菌不活化エマルジョンの取り込みを増加させ、それにより、抵抗性グラム陰性菌に対するエマルジョンの殺微生物効果を増強させるため、EDTA（エチレンジアミンテトラ酢酸）をエマルジョンと予め混合した。前記EDTAは低濃度（50〜25μM）で用い、前記混合物を種々のグラム陰性菌と共に15分間インキュベートした。次いで、前記混合物の殺微生物効果をトリプティカーゼ大豆ブロス上で測定した。結果を以下の表5に記載する。1／100希釈中のBCTPを用い、細菌カウントの99％を超える減少があった。カウントのこの減少は、250μMのEDTA単独が15分以内に細菌カウントを減少させることができなかった対照群から示されたように、EDTA単独の死滅効果によるものではなかった。
【０２０９】
（表５）
2010209109.tif 000008
【０２１０】
実施例5
インビトロ殺菌効果の研究III−栄養および胞子形態
バチルス・セレウス（B. cereus ATCC＃14579）を炭疽菌についてのモデル系として使用した。バチルス・セレウスの（活発に増殖しつつある）栄養形態に対する本発明の化合物の殺菌効果を研究するためのBCTP希釈調製物での実験を行なった。37℃における10分間の培地中での処理を評価した。表6にまとめるように、BCTPエマルジョンはバチルス・セレウスの栄養形態に対して効果的である。この調製物での10分間の曝露は、1：100と高い希釈を含めた試験した全ての濃度においてバチルス・セレウスの栄養形態の実際に完全な死滅に効果的である。
【０２１１】
（表６）
2010209109.tif 000009
実験数＝4
【０２１２】
炭疽菌の胞子形態は、生物兵器として用いられるべき最も可能性の高い生物のうちの1つである。胞子はほとんどの消毒剤に対してかなり抵抗性であることが知られている。前記したように、胞子の効果的な死滅は、通常、ホルムアルデヒドまたは次亜塩素酸ナトリウム（すなわち、漂白）のような毒性かつ刺激性化学物質の使用を必要とする。従って、同実験をバチルス・セレウスの胞子形態で行なった。表7に示すように、37℃における10分間の双方の培地における処理はバチルス・セレウスの胞子を死滅させるのに充分ではなかった。
【０２１３】
（表７）
2010209109.tif 000010
実験数＝2
【０２１４】
バチルス・セレウスの胞子形態に対する本発明の化合物のある期間にわたる効果を評価するために、BCTPを1：100の希釈にて固体寒天培地に組み込み、胞子を表面に均一に広げ、37℃にて96時間インキュベートした。BCTPを組み込んだ固体寒天培地では増殖が96時間まで起こらなかった（すなわち、＞99％死滅、平均＞99％死滅、3実験）。
【０２１５】
BCTPによる胞子の死滅が起こる時点をより綿密に否定する試みにおいて、以下の実験を行なった。簡単に述べれば、胞子調製物を1：100の希釈にてBCTPで処理し、未処理対照と比較した。ミリリットル当たりのコロニー形成単位（CFU／ml）を0．5時間、1時間、2時間、4時間、6時間および8時間後に定量した。図1に示すように、未処理対照におけるCFU／mlは最初の4時間のインキュベーションにわたって増加し、次いで、プラトーに到達した。時刻0時間、1時間、2時間、4時間および6時間において調製し、胞子構造につき染色した細菌スミアにより、2時間まで、胞子構造は残らないことが明らかとなった（図2A〜2C）。従って、2時間の時点までに、胞子の100％発芽が未処理対照で起こった。BCTPで処理した胞子調製物において、CFU／mlは最初の2時間にわたった増加を示さず、次いで、2〜4時間にわたって迅速に低下した。2〜4時間にわたるベースラインCFU／mlからの減少はほぼ1000倍であった。同時点で調製し、胞子構造につき染色した細菌スミアにより、胞子構造は8時間における実験の最後まで残ることが明らかとなった。よって、発芽プロセスの阻害、または胞子が損傷され、発芽できないゆえのいずれかにより、胞子の発芽はBCTP処理培養では起こらなかった。バチルス・セレウスに加えて他のバチルス種を死滅させるにおいてエマルジョンが効果的であるか否かを判断するために、前記したのと同様な実験を行ない、ここに、胞子調製物をエマルジョンで処理し、4時間のインキュベーション後に未処理対照と比較した。以下の表8は、数字がいくつかの実験からの平均殺胞子活性を表す結果を示す。
【０２１６】
（表８）
2010209109.tif 000011
【０２１７】
実施例6
インビボ殺菌効果の研究
動物研究を行なって、インビボでのエマルジョンの保護および治療効果を証明した。実験動物におけるバチルス・セレウス感染は、以前、炭疽の研究用のモデル系として用いられた（BurdonおよびWende，1960；Burdonら、1967；LamannaおよびJones，1963）。炭疽と同様ないくつかの点において、バチルス・セレウスで実験的に感染させた動物で誘導した病気兆候（Drobniewski，1993；Fritzら、1995）。マウスへの注射前に、本発明のエマルジョンをバチルス・セレウス胞子と混合した。
【０２１８】
皮膚創傷への灌注
1cmの皮膚創傷を2．5×107バチルス・セレウス胞子で感染させ、次いで、いずれのさらなる処理もなく閉じた。他の群を同一数の胞子で感染させた。1時間後、創傷を本発明のエマルジョンまたは生理食塩水のいずれかで灌注して、曝露後、脱汚染を刺激した。48時間までに、創傷を囲む大きな壊死領域があり、平均面積は4．86cm2であった。加えて、この群における動物の60％は感染の結果として死亡した。これらの病巣の組織学は、皮膚および皮膚下ならびに多数の栄養型バチルス生物の全壊死を示した。生理食塩水での実験的に感染させた創傷の灌注の結果、いずれの明らかな利点もなかった。
【０２１９】
バチルス・セレウス胞子で感染させた創傷の本発明のエマルジョンでの灌注は実質的な利点を示し、4．86cm2から0．06cm2への病巣サイズの継続的な98％減少をもたらした。処理または生理食塩水灌注を受けなかった実験動物と比較すると、病巣サイズのこの減少は死亡率の3倍の低下が伴った（60％から20％）。これらの創傷の組織学が、栄養型バチルス生物の証拠は示さず、表皮の最小破壊を示した（Hamoudaら、1999）。
【０２２０】
皮下注射
CD−1マウスに対照としての生理食塩水中に1：10希釈したエマルジョンを注射し、肉眼または組織学的分析いずれかにおいて、苦痛または炎症反応の兆候を示さなかった。インビボでのバチルス・セレウス胞子の病原効果および本発明のエマルジョンの殺胞子効果を試験するために、4×107バチルス・セレウス胞子の懸濁液を生理食塩水または1：10の最終希釈の本発明のエマルジョンと混合し、次いで、直ちに、CD−1マウスの背中に皮下注射をした。
【０２２１】
本発明のエマルジョンなくしてバチルス・セレウス胞子を皮下注射したマウスは6〜8時間においてひどい浮腫を発生した。これに続いて18〜24時間において注射部位を囲う灰色の壊死が出現し、48時間までに存在する皮膚がひどいかさぶたとなり、乾燥した赤色病巣が残った。
【０２２２】
胞子およびエマルジョンの同時注射の結果、胞子を本発明のエマルジョンと予め混合すると、1．68cm2から0．02cm2へと壊死病巣のサイズは98％を超えて減少した。これは最小浮腫または炎症と関連した（Hamoudaら、1999）。
【０２２３】
ウサギ角膜
ウサギの角膜を種々の濃度の本発明のエマルジョンで灌注し、24時間および48時間にモニターした。組成物を治療量で用いた場合、刺激または異常は観察されなかった。
【０２２４】
粘膜
鼻腔当たり4％のナノエマルジョンの25μLの注入によって、鼻腔内毒性をマウスにおいて行なった。これらのマウスにおいて臨床的または組織病理学的変化は観察されなかった。
【０２２５】
ラットにおける経口毒性試験は、25％ナノエマルジョン1kg当たり8mLまで胃管処理することによって行なった。ラットは体重が減少しないか、または臨床的または組織病理学的に毒性の兆候を示さなかった。エマルジョンの経口投与の結果として腸細菌フローラの変化は観察されなかった。
【０２２６】
特別な態様において、バチルス・セレウスを血液寒天（5％ヒツジ血液を含むTSA、REMEL）上で三回継代した。バチルス・セレウスを第3継代プレートから掻き取り、（BBLから入手可能な）トリプティカーゼ大豆ブロス（TSB）に再懸濁した。バチルス・セレウス懸濁液を2つの試験管に分けた。等容量の滅菌生理食塩水を1つの試験管に加え、バチルス・セレウス懸濁液／生理食塩水の混合した0．1mlを5匹のCD−1マウスに皮下注射した。等容量の（滅菌生理食塩水中に1：5希釈した）BCTPを1つの試験管に添加し、混合し、1：10のBCTPの最終希釈を得た。バチルス・セレウス懸濁液／BCTPの混合された0．1mlを5匹のCD−1マウスに皮下注射しつつ、バチルス・セレウス懸濁液／BCTPを37℃にて10分間インキュベートした。等容量の（滅菌生理食塩水中に1：5希釈した）BCTPおよびTSBを混合し、1：10のBCTPの最終希釈を得た。BCTP／TSBの0．1mlを5匹のCD−1マウスに皮下注射した。
【０２２７】
接種物中のバチルス・セレウスのコロニー形成単位（cfu）の数は以下の通りに定量した。バチルス・セレウスの10倍段階希釈およびバチルス・セレウス／BCTP懸濁液を蒸留水で作成した。TSAの二枚のプレートを各希釈（プレート当たり10μl）から接種した。TSAプレートを37℃にて一晩インキュベートした。コロニーをカウントし、cfu／mlの数を計算した。BCTPで予め処理したバチルス・セレウスで接種したマウスにおいて、壊死病巣はより小さく見えた。以下の表9は実験の結果を示す。
【０２２８】
（表９）
2010209109.tif 000012
【０２２９】
胞子形成の誘導用の0．1％酵母エキス（Difco）および50μg／mlのMnSO4を含む栄養寒天（Difco）上でバチルス・セレウスを増殖させた。プレートを掻き取り、滅菌50％エタノールに懸濁させ、攪拌しつつ室温で2時間インキュベートして、残りの栄養型細菌を溶解させた。懸濁液を2，500×gにて20分間遠心分離し、上澄みを捨てた。ペレットをdiH2Oに再懸濁し、2，500×gで20分間遠心分離し、上澄みを捨てた。胞子懸濁液を分けた。ペレットをTSBに再懸濁させた。生理食塩水で1：2希釈した0．1mlのビー・セレウス胞子懸濁液を3匹のCD−1マウスに皮下注射した。等容量の（滅菌生理食塩水中に1：5希釈した）BCTPおよびバチルス・セレウス胞子懸濁液を混合し、1：10のBCTPの最終希釈を得た（プレインキュベーション時間）。0．1mlのBCTP／バチルス・セレウス胞子懸濁液を3匹のCD−1マウスに皮下注射した。接種物中のバチルス・セレウスのコロニー形成単位（cfu）の数を以下の通りに定量した。バチルス・セレウスの10倍段階希釈およびバチルス・セレウス／H8P懸濁液を蒸留水中で作成した。TSAの二枚のプレートを各希釈から接種した（プレート当たり10μl）。前記TSAプレートを37℃にて一晩インキュベートした。コロニーのカウントをなし、cfu／mlの数を計算した。BCTPで予め処理したバチルス・セレウス胞子を接種したマウスでは、壊死病巣はより小さく見えた。これらの実験からの観察を表10に示す。
【０２３０】
（表１０）
2010209109.tif 000013
【０２３１】
胞子形成の誘導用の0．1％酵母エキス（Difco）および50g／ml  MnSO4を含む栄養寒天（Difco）上でバチルス・セレウスを増殖させた。プレートを掻き取り、滅菌50％エタノールに懸濁し、攪拌しつつ室温にて2時間インキュベートして、残りの栄養型細菌を溶解させた。懸濁液を2，500×gにて20分間遠心分離し、上澄みを捨てた。ペレットを蒸留水に再懸濁し、2，500×gにて20分間遠心分離し、上澄みを捨てた。ペレットをTSBに再懸濁させた。バチルス・セレウス胞子懸濁液を3つの試験管に分けた。等容量の滅菌生理食塩水を1つの試験管に加え、混合した。0．1mlのバチルス・セレウス懸濁液／生理食塩水を10匹のCD−1マウスに皮下注射した。等容量の（滅菌生理食塩水中に1：5希釈した）BCTPを第2の試験管に加え、混合し、1：10のBCTPの最終希釈を得た。バチルス・セレウス胞子懸濁液／BCTP（1：10）を混合しつつ37℃にて4時間インキュベートした。0．1mlのバチルス・セレウス胞子懸濁液／BCTP（1：10）を10匹のCD−1マウスに皮下注射した。等容量の（滅菌生理食塩水中に1：50希釈した）BCTPを第3の試験管に加え、混合し、1：100のBCTPの最終希釈を得た。バチルス・セレウス胞子懸濁液／BCTP（1：100）を混合しつつ37℃にて4時間インキュベートした。0．1mlのバチルス・セレウス胞子懸濁液／BCTP（1：100）を10匹のCD−1マウスに皮下注射した。等容量の（滅菌生理食塩水中に1：5希釈した）BCTPおよびTSBを混合し、1：10のBCTPの最終希釈を得た。0．1mlのBCTPFTSBを10匹のCD−1マウスに皮下注射した。等容量の（滅菌生理食塩水中に1：50希釈した）BCTPおよびTSBを混合し、1：100のBCTPの最終希釈を得た。0．1mlのBCTP／TSBを10匹のCD−1マウスに皮下注射した。これらの研究からの観察を表11および表12に示す。
【０２３２】
（表１１）
2010209109.tif 000014
注：浮腫を伴う灰色の皮膚病巣、浮腫、壊死領域赤色／乾燥
【０２３３】
（表１２）
2010209109.tif 000015
【０２３４】
バチルス・セレウスの再単離を皮膚病巣、血液、肝臓および脾臓から試みた（表13）。皮膚病巣をベタジン、続いて70％滅菌イソプロピルアルコールで洗浄した。病巣の縁部で切り出しを行い、綿棒で拭った。胸をベタジン、続いて70％滅菌イソプロピルアルコールで洗浄した。血液を心臓穿刺で吸った。腹部をベタジン、続いて70％滅菌イソプロピルアルコールで洗浄した。皮膚および腹部筋肉を別々の滅菌器具で開いた。別々の滅菌器具を用いて肝臓および脾臓の試料を摘出した。肝臓および脾臓試料を火炎に軽く通し、滅菌器具を用いて切断した。新たに曝露した表面を培養のために用いた。BHI寒天（Difco）を接種し、37℃にて好気的に一晩インキュベートした。
【０２３５】
（表１３）
2010209109.tif 000016
※これらのマウスにおいて病巣は存在しなかったが、注射部位から生物が摘出された。
【０２３６】
栄養型バチルス・セレウスおよびバチルス・セレウス胞子の予備処理は、実験動物に導入した場合に病気兆候を引き起こすそれらの能力を減じる。これは、皮膚病巣のより小さなサイズおよび前記病巣から取り出したバチルス・セレウスの一般的により少ない数に反映される。加えて、血液、肝臓および脾臓からのバチルス・セレウスの頻度の低い再単離が起こり、これは、敗血症が予防可能であることを示唆する。
【０２３７】
実施例7
インビボ毒性実験I
CD−1マウスに0．1mlの本発明の化合物を皮下注射し、炎症および／または壊死の兆候につき4日間観察した。化合物の希釈は滅菌生理食塩水中で行なった。マウスからの組織試料は組織病理学検査のために10％中性緩衝化ホルマリン中に保存した。組織学的再検査のために送付された（未希釈化合物を注射したマウスからの）皮膚および筋肉からの試料は、組織壊死の兆候を示すと報告された。希釈化合物を注射したマウスからの組織試料は組織学的には調べなかった。表14および15は2つの個々の実験の結果を示す。
【０２３８】
（表１４）
2010209109.tif 000017
【０２３９】
（表１５）
2010209109.tif 000018
【０２４０】
モルモットに部位当たり本発明の化合物の1．0mlを（後脚双方に）筋肉内注射し、炎症および／または壊死の兆候につき4日間観察した。化合物の希釈は滅菌生理食塩水中で行なった。
【０２４１】
モルモットからの組織試料を組織学的検査のために10％中性緩衝化ホルマリン中に保存した。組織試料は組織学的には調べなかった。
【０２４２】
（表１６）
2010209109.tif 000019
【０２４３】
インビボ毒性実験Iの結果は、試験した化合物の皮下および筋肉内注射の結果、肉眼で観察できる組織損傷は起こらず、実験動物では苦痛を引き起こすように見えなかったことを示す（表16）。
【０２４４】
実施例8
インビボ毒性実験II
各々5匹のオスおよび5匹のメスよりなるSD（Sprague−Dawley）ラットの1つの群を個々のケージに入れ、投与前に5日間前馴化させた。ラットに14日間毎日投与した。0〜13日には、14日間続けて、グループ1における各ラットは、各々、3ミリリットルのBCTP、1：100濃縮の胃管処理を受けた。3ミリリットルの容量は、ラットについての最大許容経口容量であると判断された。投与に先立ち、0日および7日に、各々のラットの体重を測った。その後、ラットは研究の継続中に毎週体重を測った。動物は病気または死亡率につき毎日観察した。動物を14日間休息させた。28日に、ラットの体重を測り、安楽死させた。経口毒性実験の平均体重結果を表17に示す。0日、7日、および14日、21日および28日におけるオスおよびメスについての平均体重ならびに0日〜28日の平均体重増加も表17に示す。1匹のラットが、14日の投与の間に胃管挿入の操作から機械的外傷のため死亡した。全ての生存するラットは28日にわたる研究の間体重を増加し、病気の報告はなかった。従って、リン酸トリブチル単独は毒性であって粘膜に刺激性であることが知られているが、本発明のエマルジョンに配合すると、これらの特徴は明らかではない。BCTPエマルジョン、1：100濃縮を、米国連邦規則集16（16CFR）§1500．3に規定されたプロトコルに従ってウサギにおける皮膚毒性についても試験した。エマルジョンは試験した動物において皮膚に対して刺激性でなかった。
【０２４５】
（表１７）
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【０２４６】
毒性試験のための一般的技術は皮膚刺激試験、目刺激試験、皮下試験、筋肉内試験、開放創傷洗浄、鼻腔内試験、経口試験を含む。皮膚試験はウサギで行なうことができ、ここに、0．5mlの10％エマルジョンを4時間皮膚またはウサギに適用する。皮膚の反応を72時間まで記録する。ドライゼ（Draize）スケールを用いて、刺激をスコア取りする。目の刺激試験では、0．1mlの10％エマルジョンをウサギの目に適用し、目の反応を72時間まで記録する。ドライゼスケールを用いて刺激をスコア取りする。皮下および筋肉内試験では、0．1mlの10％エマルジョンをマウスに注射する。マウスを用い、2mlの10％エマルジョンを開放創傷洗浄試験で適用する。鼻腔内試験では、0．25m／鼻腔の2〜4％エマルジョンをマウスに適用する。経口試験では、4ml／kg／日の10％エマルジョンを1週間経口的に与え、8ml／kgの100％エマルジョンを単一容量で与える。
【０２４７】
実施例9
炭疽菌でのインビトロ実験
炭疽菌の胞子形態に対する本発明の化合物の殺菌効果を研究するためのX8W60PC調製物での実験を行なった。炭疽菌の6つの異なる系統に対するX8W60PC（水中）の異なる希釈の殺胞子活性を図3に示した。図4および5に示すように、X8W60PCは4時間以内に炭疽の7つの異なる系統（図3についてのこれらとエイムス（Ames）、ウサムリッド（USAMRID））の98％を超えて死滅させ、1〜10％漂白として効果的である。同様な殺胞子活性が培地中のX8W60PCの異なる希釈で見出される（図6）。図7は、室温におけるゼロ時間と比較した炭疽菌のデルリオ（Del  Rio）株、テキサス（Tx）株に対するX8W60PCの殺胞子活性の経時的変化を示す。示されるようにX8W60PCは30分と短い時間で炭疽胞子を死滅させることができる。
【０２４８】
実施例10
作用機序
以下の実施例は、本発明のナノエマルジョンの提案された作用機序に対する洞察を提供し、それらの殺胞子活性を示すために提供する。この機序は本発明の範囲を限定することを意図せず、機序の理解は本発明を実施するのに必要でなく、かつ、本発明はいずれかの特定の機序に限定されるものではない。大腸菌に対するGMO／CPC脂質エマルジョン（「W808P」）およびBCTPの効果を調べた。W808Pは（脱イオン水中で）大腸菌を死滅させたが、BCTPはこの生物に対して効果的でなかった。図8に対照を、図9にBCTP処理大腸菌を示す。図9に示すように、BCTP処理大腸菌は正常に見え、規定された構造および無傷脂質膜を備えている。図10により、P10処理大腸菌が示され、この細菌は内部に空砲を有し、生物の規定された構造が失われるように内容物が膨潤している。特定の理論に拘束されないが（機序の理解は本発明を実施するのに必要ではなく、本発明はいずれかの特定の機序に限定されない）、この観察は、W808Pはそれらを溶解することなく細菌を死滅させ、その代わり、内部構造の変化を引き起こすことを示唆し、空胞化および膨潤によって明らかである。第2の研究はコレラ菌で行なった。コレラ菌は大腸菌に密接に関連するにもかかわらず、BCTP、W808PおよびX8W60PC双方はこの生物を死滅させた。対照電子顕微鏡写真（図11）と比較し、W808P処理コレラ菌（図12）は、再度、生物の内部の膨潤および変化を示すが、細胞は無傷のままである。対照的に、BCTP処理コレラ菌（図13）は残りの細胞片のみで完全に溶解される。X8W60PC（図14）は効果の組合せを示し、ここに、生物のいくつかは膨潤するが、無傷であり、あるものは溶解する。これは、明らかに、BCTP、W808PおよびX8W60PCが異なる機序によって働くことを示唆する。
【０２４９】
第3の比較実験を行なって、種々の濃度におけるエマルジョンの効率を評価した。表18に示すように、X8W60PCは、W808PまたはBCTPいずれかに対して感受性の細菌においてより低い濃度（より高い希釈）で殺生物剤としてより効果的である。加えて、W808PおよびBCTPに対して抵抗性の6つの他の細菌は全てX8W60PCに対して罹患性である。この活性の差は、インフルエンザ感染性アッセイ法においてW808PおよびBCTPおよびX8W60PCを比較する場合にも観察される。図15に示すように、BCTPおよびX8W60PC双方は1：10および1：100希釈において効果的であり、加えて、X8W60PCは最低濃度、1：1，000希釈において効果的である。対照的に、W808Pは1：10希釈においてさえほとんど活性を有さず、それはこのエンベロープ生物に対する効果的な処理ではないことを示唆する。加えて、X8W60PCは、W808PまたはBCTPのいずれかによって殺されない酵母種を死滅させる。
【０２５０】
（表１８）選択された微生物の90％を超えて死滅させるのに必要な最低ナノエマルジョン濃度
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※低濃度のデータ入手できず
＃脱イオン水中を除き死滅なし
10  ND＝測定せず
【０２５１】
実施例11
バチルス種に対するナノエマルジョンの殺胞子活性のさらなる証拠
本実施例は、異なるバチルス胞を不活化する本発明のエマルジョンの特別な態様能力のさらなる検査の結果を提供する。これらの実験の方法および結果を下に概略を示す。
【０２５２】
界面活性剤脂質調製物：
油相が大豆油、リン酸トリ−n−ブチル、および80％水中のトライトン  X−100から作成されたBCTP、油中水型ナノエマルジョン。X8W60PCは、グリセロールモノステアリン酸、精製大豆ステロール、ツィーン  60、大豆油、カチオンハロゲン含有CPCおよびペパーミント油から作成されたリポソーム様化合物であるW808Pと等しい容量のBCTPを混合することによって調製した。
【０２５３】
胞子調製物：
胞子形成の誘導のために、バチルス・セレウス（ATTC  14579）、バチルス・シルクランス（ATCC  4513）、巨大菌（ATCC  14581）、および枯草菌（ATCC  11774）をNAYEMn寒天（0．1％酵母エキスおよび5mg／l  MnSO4を含む栄養寒天）上で37℃にて一週間増殖させた。プレートを掻き取り、細菌／胞子を滅菌50％エタノールに懸濁させ、攪拌しつつ室温（27℃）にて2時間インキュベートして、残りの栄養型細菌を溶解させた。懸濁液を2，500×gにて20分間遠心分離し、ペレットを冷diH2O中で2回洗浄した。胞子ペレットをトリプティカーゼ大豆ブロス（TSB）に再懸濁させ、直ちに、実験で用いた。炭疽菌胞子、エイムスおよびボラム（Vollum)  1B系統はBruce  Ivins博士（USAMRIID，Fort  Detrick，Frederick，MD）の好意により提供され、以前に記載されているように調製した（Ivinsら、1995）。炭疽の4つの他の系統はMartin  Hugh−Jones博士（LSU，Baton  Rouge，LA）の好意により提供された。これらの系統は、サウスアフリカ；モザンビーク；バイソン、カナダ；およびデルリオ、テキサスからの高い対立遺伝子非類似性を持つ単離体を表す。
【０２５４】
インビトロ殺胞子アッセイ法：
固体培地の殺胞子活性の評価のために、トリプティカーゼ大豆寒天（TSA）をオートクレーブ処理し、55℃まで冷却した。BCTPを1：100最終希釈にてTSAに加え、プレートを注ぐ間に連続的に攪拌した。胞子調製物を段階的に希釈し（10倍）、10μlのアリコットを二通りで平板培養した（最高接種はプレート当たり105胞子であった）。プレートを37℃にて好気的に48時間インキュベートし、増殖につき評価した。
【０２５５】
液体培地中での殺胞子活性の評価のため、胞子をTSBに再懸濁させた。2×106胞子（最終濃度106胞子／ml）を含有する1ml胞子懸濁液を、試験管中で、1mlのBCTPまたはX8W60PC（diH2O中2×最終濃度）と混合した。試験管を37℃の試験管ローテータ中で4時間インキュベートした。処理の後、懸濁液をdiH2O中で10倍希釈した。各希釈からの二つのアリコット（25μl）をTSA上に画線培養し、37℃にて一晩インキュベートし、次いで、コロニーをカウントした。パーセンテージ死滅として表した殺胞子活性を計算した。
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【０２５６】
実験は少なくとも3回反復し、パーセンテージ死滅の平均を計算した。
【０２５７】
電子顕微鏡観察：
37℃振とう培養機中のエルレンマイヤーフラスコを用い、バチルス・セレウス胞子をTSB中1：100最終希釈のBCTPで処理した。50ml試料を間隔をおいて採取し、2，500×gにて20分間遠心分離し、上澄みを捨てた。ペレットを0．1Mカコジレート（pH7．3）中の4％グルタルアルデヒドで固定した。胞子ペレットを透過型電子顕微鏡のために処理し、酢酸ウラニルおよび酢酸鉛での染色の後に薄い切片を調べた。
【０２５８】
発芽阻害剤／刺激剤：
（最終濃度106胞子／mlの）バチルス・セレウス胞子を、発芽阻害剤D−アラニン（最終濃度1μm）または発芽刺激剤L−アラニン＋イノシン（各々、最終濃度50μM）（TitballおよびManchee，［1987］；FosterおよびJohnston [1990]；Shibataら、［1976］）いずれかを含むTSBに懸濁させ、次いで、直ちに（1：100の最終希釈にて）BCTPと混合し、種々の間隔でインキュベートした。次いで、混合物を段階的に希釈し、平板培養し、一晩インキュベートした。翌日、プレートをカウントし、パーセンテージ殺胞子活性を計算した。
【０２５９】
インビボ殺胞子活性：
2つの動物モデルを開発した。最初のものにおいて、（滅菌生理食塩水に懸濁させた）ビー・セレウス胞子を1：10の最終希釈にて等容量のBCTPと混合した。対照として、同一ビー・セレウス胞子懸濁液を等容量の滅菌生理食塩水と混合した。次いで、4×107胞子を含有する100μlの懸濁液を直ちにCD−1マウスに皮下注射した。
【０２６０】
第2のモデルにおいて、マウスの背中の皮膚中に切開を作成することによって、シミュレートした創傷を作成した。平滑切開によって皮膚を下の筋肉から分離した。「ポケット」を（生理食塩水中の）2．5×107胞子を含有する200μlで接種し、創傷クリップを用いて閉じた。1時間後、クリップを取り外し、創傷を2mlの滅菌生理食塩水または2mlのBCTP（滅菌生理食塩水中1：10）いずれかで灌注した。次いで、創傷クリップを用いて創傷を閉じた。動物を臨床的兆候につき観察した。動物を5日後に安楽死させた時に、肉眼観察および組織病理学的観察を行なった。以下の式によって創傷サイズを計算した。
2010209109.tif 000023
（式中、aおよびbは創傷の2つの垂直方向直径である）
【０２６１】
インビトロ殺胞子活性：
BCTPの殺胞子活性を評価するために、バチルス属の4つの種、バチルス・セレウス、バチルス・シルクランス、巨大菌および枯草菌からの胞子を試験した。1：100希釈におけるBCTPは、4時間で、バチルス・セレウスおよび巨大菌に対して91％を超える殺胞子活性を示した。（図16）バチルス・シルクランスはBCTPに対して感受性は低く、胞子カウントの80％減少を示し、他方、枯草菌は4時間でBCTPに対して抵抗性のように見えた。バチルス・セレウス胞子に対する（1：10および1：100の希釈における）BCTPの殺胞子効果の比較を、漂白剤の1：100希釈（すなわち、0．0525％次亜塩素酸ナトリウム）で行い、殺胞子効果の率または程度いずれかにおいて有意な差は明らかでなかった。他のナノエマルジョンX8W60PCはバチルス胞子を死滅させるのにより効果的であった。1：1000希釈においては、それは（BCTPの1：1000希釈での47％と比較して）4時間以内のバチルス・セレウス胞子の98％死滅を示した。1：1000希釈におけるX8W60PCの結果、BCTPに対するその抵抗性とは対照的に、4時間以内の枯草菌胞子の97．6％死滅をもたらした（図17）。
【０２６２】
バチルス・セレウス殺胞子経時的観察：
バチルス・セレウス殺胞子経時的観察を行なって、8時間にわたるバチルス・セレウスに対する1：100希釈BCTPおよび1：1000希釈X8W60PCの殺胞子活性を分析した。バチルス・セレウス胞子と一緒にした1：100希釈BCTPのインキュベーションの結果、1時間以内に生きた胞子の数が77％減少し、4時間後に95％減少した。再度、1：1000希釈X8W60PCは1：100希釈BCTPよりも効果的であり、30分後にはカウントが約95％減少した。
【０２６３】
BCTPの炭疽菌殺胞子活性：
初期インビトロ実験に続き、BCTP殺胞子活性を炭疽菌の2つのビルレント系統（エイムスおよびボラム  1B）に対して試験した。増殖培地に配合された1：100最終希釈のBCTPは1×105炭疽菌胞子の増殖を完全に阻害することが判明した。また、エイムスまたはボラム  1B胞子いずれかと一緒にした1：1000までの希釈のBCTPでの4時間のインキュベーションの結果、混合物を室温でインキュベートした場合には91％を超える殺胞子活性となり、混合物を37℃でインキュベートした場合には96％を超える殺胞子活性となった（表19）。
【０２６４】
表19：コロニー減少アッセイ法によって決定された炭疽菌胞子の2つの異なる系統に対するBCTPの殺胞子活性（％死滅）
1：1000までの希釈のBCTPは、27または37℃（胞子発芽の程度が顕著に異なる条件）いずれかにおいて、4時間以内に双方の胞子系統の＞91％を効果的に死滅させた。殺胞子活性は1×106／mlまでの胞子濃度において合致した。
【０２６５】
（表１９）
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【０２６６】
X8W60PCの炭疽菌殺胞子活性：
X8W60PCはより高い希釈にてBCTPよりもバチルス胞子のより多くの種に対して効果的であるので、それを室温にて1：10，000までの希釈にて炭疽菌の4つの異なる系統に対して試験して、発芽を妨げた。X8W60PCは1：1000希釈において86％および99．9％の間の最大死滅を示した（表20）。
【０２６７】
表20：異なる臨床的単離体を代表する炭疽菌の4つの異なる系統に対するX8W60PC殺胞子活性
胞子を室温において異なる希釈にてX8W60PCで処理して、発芽を妨げた。低い希釈では有意な死滅はなかった。最大殺胞子効果は1：1000希釈で観察された。
【０２６８】
（表２０）
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【０２６９】
胞子の電子顕微鏡検査：
バチルス・セレウスは炭疽菌に最も密接に関連するので、それを用いて検査を行なった。TSB中に1：100希釈したBCTPで処理したバチルス・セレウス胞子の4時間の透過型電子顕微鏡検査により、中心の歪みおよび密度の喪失を伴う胞子外皮および皮質の広範な破壊を含めたバチルス・セレウス胞子に対する物理的損傷が明らかとなった（図18）。
【０２７０】
発芽の刺激および阻害：
バチルス胞子に対するBCTPの殺胞子効果に与える発芽の阻害の効果を調査するために、発芽阻害剤D−アラニン（TitballおよびManchee，1987；FosterおよびJohnston，1990）、および発芽刺激剤L−アラニンおよびイノシン（Shibataら、1976，前記）を胞子およびBCTPと共に1時間インキュベートした。BCTPの殺胞子効果は10mMのD−アラニンの存在下では遅延し、50μMのL−アラニンおよび50μMのイノシンの存在下では加速された（図19）。
【０２７１】
インビボ殺胞子活性：
実験動物におけるバチルス・セレウス感染は、以前、炭疽の実験用のモデル系として用いられており、実験的炭疽感染と類似の病気を引き起こす（Welkosら、［1986］；Drobniewski，［1993］；BurdonおよびWende [1960]；Burdonら、［1967］；Fritzら、［1995］；WelkosおよびFriedlander，［1988］）。皮膚バチルス・セレウス病の2つの動物モデルを開発して、BCTPのインビボ効果を評価した。これらのモデルはナノエマルジョンの皮下投与を含むので、BCTPのインビボ毒性試験をこの適用に先立って行なった。対照としての生理食塩水中に1：10希釈したBCTPを注射したCD−1マウスは、肉眼または組織学的観察において苦痛または炎症反応の兆候を呈しなかった（図20A、図20B）。インビボでのバチルス・セレウス胞子の病原効果およびBCTPの殺胞子効果を試験するために、4×107バチルス・セレウス胞子の懸濁液を生理食塩水または1：10の最終希釈のBCTPと混合し、次いで、CD−1マウスの背中に直ちに皮下注射した。BCTPなくしてバチルス・セレウス胞子を皮下注射したマウスは6〜8時間において重篤な浮腫を生じた。これに続き、18〜24時間において注射部位を囲う灰色の壊死領域が現れ、48時間までには存在する皮膚はひどいかさぶたとなり、乾燥した赤色病巣が残った（図20C、図20D）。胞子およびBCTPの同時注入の結果、胞子をBCTPと予め混合すると、1．68cm2から0．02cm2への壊死病巣のサイズの98％を超える減少があった。これは最小浮腫または炎症に関連した（図20E、図20F）。
【０２７２】
さらなる実験において、1cmの皮膚創傷を2．5×107バチルス・セレウス胞子で感染させ、次いで、いずれのさらなる処理もなくして閉じた（図21A、図21B）。他の群を同一数の胞子で感染させ、次いで、1時間後に、創傷をBCTPまたは生理食塩水で灌注して、曝露後脱汚染を刺激した。生理食塩水での実験的に感染させた創傷の灌注の結果、いずれの明らかな利点ももたらされなかった（図21C、図21D）。バチルス・セレウス胞子で感染させた創傷のBCTP灌注は実質的利点を示し、4．86cm2から0．06cm2への病巣サイズの合致した98％減少がもたらされた（図21E、図21F）。処理または生理食塩水灌注いずれも受けなかった実験動物と比較すると、病巣サイズのこの減少には死亡率の4倍低下が伴っていた（80％から20％）。
【０２７３】
実施例12
インビトロでのインフルエンザA型ウイルス感染性に対する界面活性剤脂質調製物（SLPS）の効果
エンベロープウイルスは病原体として非常に関心がある。それは迅速に広がり、長期間宿主で生存できる。インフルエンザA型ウイルスはそれが抗ウイルス剤を試験するためのよく受け入れられたモデルであるので選択した（KaraivanovaおよびSpiro，［1998］；Mammenら、［1995］；Huangら、[1991]）。インフルエンザは、高度に伝染性であって、重篤な流行性病気の原因である臨床的に重要な呼吸器系病原体である。
【０２７４】
エンベロープ糖タンパク質であるヘマグルチニン（HA）およびノイラミニダーゼ（NA）はインフルエンザサブタイプの抗原特異性を決定するのみならず（Shulze、[1997]）、それらは容易に突然変異し、その結果、ウイルスが宿主防御系を侵すようにしかねない。この結果、密接な近縁系統に対して免疫性である個体における病気の開始をもたらす可能性がある。以下に、インフルエンザA型感染性を防ぐ際のSLPの効果を測定するのに用いる方法および組成物を記載する。
【０２７５】
界面活性剤脂質調製物（SLA）：
SLPを2工程手法で作成した。油相は、大豆油を表1に列挙した試薬と混和し、86℃にて1時間加熱することによって調製した（Florence，1993）。次いで、水または水中の1％ビスマス（SS）を、往復シリンジポンプを用いて一定容量／容量比率にて油相に注入することによってSLPを形成した。
【０２７６】
ウイルス：
インフルエンザウイルスA／AA／6／60（Hedochere，1996）はHunein  F．Maassab博士（School  of  Public  Health，University  of  Michigan）によってご好意により提供された。インフルエンザA型ウイルスは、標準的な方法（BarrettおよびInglis，1985）を用い、受精した病原体不含めんどり卵（SPAFAS，Norwich，CT）の尿膜腔中で増殖させた。ウイルスストックを−80℃にて感染性尿膜流体のアリコット（108pfu／ml）中で維持した。アデノウイルスベクター（AD.RSV  ntlacZ）はVector  Core  Facility（University  of  Michigan  Medical  Center，Ann  Arbor，MI）によって提供され、アリコット中で維持した（−80℃にて1012pfu／ml）。前記ベクターは、E1AおよびE1Bにわたるヌクレオチド配列およびE3領域の一部を欠失したヒトアデノウイルス（セロタイプ5）ゲノム骨格に基づくものである。これは、非許容性細胞を複製または形質転換させるウイルスの能力を与える。それは、ラウス肉腫ウイルスロング末端リピート（RSV−LTR）からのプロモーターの制御下にあるβ−ガラクトシダーゼをコードする大腸菌LacZ遺伝子を運ぶ。また、それはタンパク質発現の検出を容易とするためにLacZ遺伝子の5’末端に連結された核標的化（ntと命名）エピトープを含む（Baragiら、1995）。
【０２７７】
細胞：
Madin  Darby  Canine  Kidney（MDCK）細胞はAmerican  Type  Culture  Collection（ATCC；Rockville，MD）から購入し、273細胞（CRL  1573；形質転換された初代胚ヒト腎臓）はVector  Core  Facility（University  of  Michigan  Medical  Center，Ann  Arbor、MI）から入手した。前記293細胞はアデノウイルス5の形質転換性遺伝子を発現し、従って、宿主細胞において複製するAd．RSV  ntlacZベクターの能力を回復する（Grahamら, 1997）。
【０２７８】
細胞維持培地：
MDCK細胞は10％胎児ウシ血清（FBS；Hyclone  Laboratories，Logan，UT）を含有するアール（Earle）塩、2mMのL−グルタミンおよび1．5g／lの炭酸水素ナトリウム（Mediatech，Lnc．，Hemdon，VA）を含むイーグルの最小必須培地中で維持した。前記培地には0．1mMの非必須アミノ酸、1．0mMのピルビン酸ナトリウム、100Uペニシリン／mlおよびストレプトマイシン100μg／mlを補足してあった（Life  Technologies，Gaithersburg，MD）。293細胞を、2mMのL−グルタミン、0．1mMの非必須アミノ酸、および1．0mMのピルビン酸ナトリウムを含有するダルベッコ改変イーグル培地（Mediatech，Inc．，Herndon，VA）中に維持した。また、それは100Uペニシリン／mlおよびストレプトマイシン100μg／mlを含有し（Life  Technologies，Gaithersburg，MD）を含有し、10％FBSを補足してあった（Hyclone  Laboratories，Logan，UT）。
【０２７９】
ウイルス感染培地：
インフルエンザA型感染培地は3．0μg／mlのトリルスルホニルフェニルアラニルクロロメチルケトン（TPCK）処理トリプシン（Worthington  Biochemical  Corporation，Lakewood，NJ）を補足したMDCK細胞維持培地であった（FBSを含まず）。アデノウイルス感染培地は血清の濃度を減少させた（2％FBS）293細胞維持培地であった。
【０２８０】
インフルエンザA型重層培地：
重層培地は等量の2×感染培地および1．6％シーケム（SEAKEM）MEアガロースよりなるものであった（FMC  Bio  Products，Rockland，MD）。染色アガロース重層培地は、TPCK処理トリプシンを含まない、アガロース重層培地＋0．01％ニュートラルレッド溶液（Life  Technologies，Gaithersburg，MD）よりなるものであった。
【０２８１】
プラーク減少アッセイ法（PRA）：
プラーク減少アッセイ法はその他の所で記載された方法（Haydenら、1980）を改変して行なった。MDCK細胞を12ウェルファルコン（FALCON）プレート中1×105細胞／ウェルにて接種し、37℃／5％CO2にて3日間インキュベートした。ほぼ1×108pfuのインフルエンザA型ウイルスを後記するように界面活性剤脂質調製物と共にインキュベートした。インフルエンザA型ウイルス−SLP処理物および対照を感染培地中に希釈して、30〜100pfu／250μlを含むようにした。密集細胞単層を3つのプレート上で三連で接種し、37℃／5％CO2にて1時間インキュベートした。接種物／培地を吸引し、1mlのアガロース重層培地／ウェルを加え、プラークが出現するまでプレートを37℃／5％CO2でインキュベートした。単層をアガロース重層培地で染色し、インキュベーションを37℃／5％CO2で継続した。プラークを染色から6〜12時間後にカウントした。脂質調製物濃度と共に9ウェルからの平均プラークカウントを未処理ウイルスウェルの平均プラークカウントと比較した。
【０２８２】
インサイチュー細胞酵素結合免疫吸着検定法（ELISA）：
インフルエザAウイルスで感染したMDCK細胞におけるウイルスタンパク質を検出し、定量するために、前記インサイチュー細胞ELISAを最適化した。簡単に述べれば、100μlの完全培地中の2×104MDCK細胞を平底96ウェルマイクロタイタープレートに加え、1晩インキュベートした。翌日、培地を取り出し、細胞を無血清維持培地で洗浄した。100μlのウイルス接種物をウェルに加え、1時間インキュベートした。ウイルス接種物を除去し、100μlのMDCK細胞維持培地＋2％FBSで置き換えた。感染したMDCK細胞をさらに24時間インキュベートした。次いで、細胞をPBSで1回洗浄し、氷冷エタノール：アセトン混合物（1：1）で固定し、−20℃で保存した。アッセイの日に、固定した細胞のウェルをPBSで洗浄し、37℃にてPBS中の1％乾燥ミルクで30分間ブロックした。（Hunein  F．Maassab博士（Scool  of  Public  Health，University  of  Michigan）の好意によって提供された）100μlの1：1000希釈のフェレット抗インフルエンザA型ウイルスポリクローナル抗体を37℃にて1時間でウェルに添加した。細胞を洗浄乾燥液（PBSおよび0．05％ツィーン−20）で4回洗浄し、37℃にて、100μlの1：1000希釈のヤギ抗フェレットペルオキシダーゼ標識抗体（Kirkegaard  ＆  Perry  Laboratories  Gaithersburg，MA）と共に30分間インキュベートした。細胞を4回洗浄し、発色するまで100μlの1工程ターボTMB-ELISA（1−STEP  TURBO  TMB−ELISA）基質（Pierce，Rockford，IL）と共にインキュベートした。反応を1N硫酸で停止させ、ELISAマクロタイターリーダーにて450nmの波長でプレートを読んだ。
【０２８３】
β−ガラクトシダーゼアッセイ法：
β−ガラクトシダーゼアッセイ法はその他の所で記載されているように（Lim，1989）細胞抽出物で行なった。簡単に述べれば、ほぼ4×104細胞／ウェルにて、293細胞を96ウェルの「U」底組織培養プレート上に接種し、37℃／5％CO2にて維持培地中で1晩インキュベートした。翌日、培地を除去し、細胞を100μlのダルベッコウのリン酸緩衝化生理食塩水（DPBS）で洗浄した。アデノウイルスストックを感染培地中で5×107pfu／mlの濃度まで希釈し、後記するように異なる濃度のBCTPと混合した。BCTPでの処理の後、ウイルスを1×104pfu／mlの濃度まで感染培地で希釈し、293細胞に重ねた。細胞を37℃／5％CO2にて5日間インキュベートし、その後、プレートを遠心分離し、培地を取り出し、細胞をCa＋＋およびMg＋＋を含まないPBSで3回洗浄した。3回目の洗浄の後、PBSを吸引し、100μlの1×レポーター溶解緩衝液（Promega，Madison，WI）を各ウェルに入れた。細胞溶解を増強するため、プレートを凍結させ、3回解凍し、若干改変した、β−ガラクトシダーゼの販売者（Promega，Madison，WI）によって提供された指示書に従ってβ−ガラクトシダーゼアッセイ法を行なった。5マイクロリットルの細胞抽出物を96ウェルの平底プレートに移し、45μlの1×レポーター溶解緩衝液と混合した（1：10）。引き続いて、50μlの2×アッセイ緩衝液（120mM  Na2HPO4，80mM  NaH2PO4，2mM  NgCl2，100mM  β−メルカプトエタノール、1．33mg／ml  ONPG（Sigma，St．Louis，MO））を加え、細胞抽出物と混合した。弱い黄色が発色するまで、プレートを室温でインキュベートした。その時点で、100μlの1M炭酸水素ナトリウムを添加することによって反応を停止させた。ELISAマイクロプレートリーダにて420nmの波長でプレートを読んだ。50mMバイシン（bicine）緩衝液（Sigma, St. Louse, Mo）、pH7.5と1X レポーター溶解緩衝液で希釈した100（g/ml BSA）を添加した(u-μl β-ガラクトシダーゼ（Sigma，St．Louis, MO）からなる標準を全てのアッセイで用いた。標準におけるレベルと参照することによる回帰分析によって各細胞抽出物のβ−ガラクトシダーゼの単位を計算し、細胞抽出物試料中のタンパク質のミリグラムで割った。
【０２８４】
細胞の毒性および脂質調製物でのウイルス処理：
ウイルス罹患性試験に先立ち、MDCKおよび293細胞に対するSLPの細胞傷害性を、顕微鏡観察およびMTTアッセイ法によって評価した。罹患性試験において適用したウイルスおよびSLPの混合物の希釈は、アッセイしたSLPの安全な濃度よりも少なくとも1桁大きくなるようにした。ほぼ1×108pfuのインフルエンザA型またはアデノウイルスいずれかを、振とう機上の結果に示したように異なる時点に1：10、1：100、および1：1000の最終濃度で脂質調製物と共にインキュベートした。インキュベーションの後、SLP／ウイルス混合物の段階希釈を適当な感染培地中で行い、前記したようにMDCK（インフルエンザA型）または293（アデノウイルス）細胞に重ねて、PRA、細胞ELISAまたはβ−ガラクトシダーゼアッセイ法を行なった。
【０２８５】
電子顕微鏡観察：
超遠心分離機（20，000rpmでの16時間のBeckmanローターSW  28  Ti）を用いてGTNE（グリシン200mL，トリス−HCl  10mM（pH8．8），NaCl  100mM，およびEDTA  1mM）で調製した30％ショ糖クッションを通すことによって、インフルエンザA型ウイルスを尿膜流体から半精製した。ペレット化されたウイルスをGTNE中で再構築した。10マイクロリットルの各試料（アデノウイルス、インフルエンザウイルス、アデノウイルス＋BCTP、インフルエンザウイルス＋BCTP）を15および60分間インキュベートし、次いで、パロジアン被覆200メッシュ銅グリッド上に2分間置いた。5μlの2％カコジル化緩衝グルタルアルデヒドを次いで加えた。3分後、流体を濾紙で除去した。10マイクロリットルの7％酢酸ウラニルをグリッドに加え、30秒後に、濾紙で吸い取った。グリッドを10分間乾燥させ、フィリップス（Philips）  EM400t透過型電子顕微鏡で調べた。顕微鏡写真を200，000×の倍率でフジ（Fuji）FGフィルムに記録した。
【０２８６】
SLPSに対するインフルエンザA型の罹患性試験：
MDCK細胞のインフルエンザA型感染に対する4つの界面活性剤脂質調製物（BCTP，NN，W808PおよびSS）の効果を調べた。図22に示すように、全ての試験した調製物は、種々の程度インフルエンザA型ウイルス感染を阻害した。BCTPおよびSSは、1：10希釈にてインフルエンザA型感染の95％を超える阻害を呈した。NNおよびW808PはインフルエンザA型ウイルスに対して中程度の効果を示したに過ぎず、ほぼ40％だけ感染を低下させた。BCTPの殺ウイルス効果は1：100希釈においてさえ減少しなかった。SSは55％だけインフルエンザA型感染を阻害する1：100希釈にあまり効果的でなかった。1：1000希釈におけるこれらの2つの脂質調製物は、22〜29％の範囲のウイルス感染性に対する弱い阻害効果を示したにすぎなかった（図23B）。
【０２８７】
BCTPおよびSSは共にウイルス感染性に対して強力な阻害効果を示したので、PRAを用いて、細胞ELISAから得られたデータを確認した。PRAによりBCTPおよびSSの効果が確認された。BCTPは1：10希釈において平均50．88から0までプラークの数を減少させた（表21）。希釈1：100において、BCTPは殺ウイルス効率を維持した。希釈1：100において、未処理ウイルスと比較し、SSはほぼ7％だけプラークの数を減少させた。
【０２８８】
（表２１）
2010209109.tif 000026
aウイルスはSLPと共に30分間インキュベートした。
bプラークの数
【０２８９】
インフルエンザA型ウイルスに対するBCTP作用の速度論：
BCTPがインフルエンザA型感染性に作用する時間条件を調べるために、2つの希釈（1：10、1：100）および4つの異なる時間間隔（5分、10分、15分、30分）においてウイルスをBCTPと共にインキュベートした。引き続いて、プラーク減少アッセイ法を行なった。表22に示すように、いずれかの希釈におけるBCTPとのインキュベーションから5分後、MDCK細胞のインフルエンザA型ウイルス感染性は完全になくなった。濃度または時間に拘わらず、BCTPとインフルエザAウイルスの相互作用の間に有意な差はなかった。
【０２９０】
（表２２）
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【０２９１】
BCTPの抗インフルエンザA型効率：
トライトン  X−100界面活性剤は抗ウイルス活性を有するので（MahaおよびIgarashi，［1997］；Portocalaら, [1976]）、トライトン  X−100単独または個々のBCTP成分と組み合わせたトライトン  X−100がBCTPと同程度だけインフルエンザA型感染性を阻害するかを調べた。インフルエンザA型ウイルスを：1）BCTP、2）リン酸トリ（n−ブチル）、トライトン  X−100、および大豆油（TTO）の組合せ、3）トライトン  X−100および大豆油（TO）、または4）トライトン  X−100（T）単独で処理した。BCTPは、トライトン  X−100単独または試験した他の成分と混合したトライトン  X−100よりも1：10および1：100希釈（1：500および1：5000のトライトン  X−100希釈）においてインフルエンザA型ウイルスに対して有意により効果的であった（図23）。希釈1：1000において、BCTP（1：50，000のトライトン  X−100希釈）はほぼ50％だけMDCK細胞のインフルエンザA型感染を低下させることができ、他方、同一濃度におけるトライトン  X−100単独は完全に効果的でなかった。
【０２９２】
BCTPは非エンベロープウイルスの感染性に影響しない：
BCTPが非エンベロープウイルスの感染性に影響し得るか調べるために、β−ガラクトシダーゼをコードするLacZ遺伝子を含有する遺伝子工学により作成したアデノウイルスを用いた。このアデノウイルス構築物は形質転換する遺伝子を欠き、従って、複製でき、アデノウイルス5の形質転換するウイルスを含有する許容性細胞のみを形質転換させることができる。構成的に形質転換性遺伝子を発現する293細胞を使用して、アデノウイルス複製およびβ−ガラクトシダーゼ酵素の生産を促進させた。図24に示すようにBCTP処理は293細胞においてβ−ガラクトシダーゼ活性を複製し、それを発現するアデノウイルスの能力に影響しなかった。BCTP処理および未処理アデノウイルスは共にほぼ0．11単位のβ−ガラクトシダーゼ酵素を生産した。
【０２９３】
エンベロープウイルスに対するBCTPの作用：
BCTPはエンベロープウイルスの感染性を改変したのみだったので、エンベロープウイルス完全性に対するこのエマルジョンの作用を電子顕微鏡を用いてさらに調べた。図25Dに示すように、BCTPの1：100希釈での60分のインキュベーションの後、アデノウイルスの構造は不変であった。BCTPとの15分のインキュベーションの後に少数の認識可能なインフルエンザA型ビリオンが位置したが（図25B）、1時間のインキュベーションの後に認識可能なインフルエンザA型ビリオンは見出されなかった。インフルエンザA型ウイルスに対するBCTPの効率および粘膜に対するその最小毒性は、エンベロープウイルスでの感染に由来する病気を予防するための効果的な消毒剤および剤としてのその可能性を示す。
【０２９４】
実施例13
ネズミチフス菌（S. typhimurium）のW205EC処理に対する温度およびEDTAの効果
図31および32は、0．1％EDTAを添加した本発明の異なるエマルジョンでのサルモネラの処理を示す。40℃（図32）および50℃（図33）双方において、EDTAはエマルジョンの抗菌活性を改良した。エマルジョンを10．0％、1．0％および0．1％希釈において試験した。
【０２９５】
実施例14
X8PCおよびW205ECの抗微生物特性
前記したように、エマルジョンX8PCは約8容量％のトライトン  X−100、約8容量％のTBP、約1％のCPC、約64容量％の大豆油、および約19％容量％のDiH2Oよりなり、エマルジョンW205ECは約5容量％のツィーン  20、約8容量％のエタノール、約1容量％のCPC，約64容量％の油（例えば、大豆油）、および約22容量％のDiH2Oよりなる。X8PCおよびW205ECを、種々の条件下にて、多数の微生物の増殖を低減させるそれらの能力につき試験した。図35は、室温および37℃における10％、1％および0．1％希釈でのX8PCによるマイコバクテリア・フォーツイタム（Mycobacteria  fortuitum）のlog減少を示す。
【０２９６】
（1％、2％および3％ナトロゾールを含むおよび含まない）W205ECの2％エマルジョンは、各々、室温での15分間のインキュベーションの後に、乾式および湿式細菌の双方につき大腸菌においてほぼ2log減少を示した。（1％、2％および3％ナトロゾルを含むおよび含まない）W205ECの2％エマルジョンは、各々、室温における15分間のインキュベーションの後において乾式および湿式細菌の双方につき黄色ブドウ球菌（S. aureus）においてほぼ4log減少を示した。（1％、2％および3％ナトロゾルを含むおよび含まない）W205ECの2％エマルジョンは、各々、室温における15分間のインキュベーションの後に湿式細菌につき淋菌においてほぼ3log減少を示した。
【０２９７】
ゴム表面実験を行なって、複数の温度における、異なるタイプの水に希釈した1％W205ECの細菌活性を試験した。1フィートの表面を20gのベルトくずを塗りつけた。ネズミチフス菌を手で表面にスプレーし、20分間で乾燥させた。前記処理を1分間隔で3回適用し、各間隔の間に1分間休止した。室温において10分間のインキュベーションを行なった。結果を図36に示す。データは、W205ECが、試験した各温度においてdiH2O，蒸留水および水道水を用いて効果的であることを示す。
【０２９８】
前記明細書で述べたすべての刊行物および特許を参照として本明細書に組み入れられる。本発明の記載した方法およびシステムの種々の修飾および変形は、本発明の範囲および精神を逸脱することなく当業者に明らかであると思われる。特別な好ましい態様に関連して本発明を記載してきたが、特許請求する発明はそのような特定の態様に限定されるべきではないことは理解されるべきである。事実、関連分野における当業者に明白な発明を実施するための記載した形態の種々の修飾は、以下の請求の範囲内にあることを意図する。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２Ａ】
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【図２２Ｂ】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９−１】
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【図２９−２】
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【図２９−３】
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【図２９−４】
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【図２９−５】
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【図３０】
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【図３１Ａ】
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【図３１Ｂ】
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【図３１Ｃ】
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【図３２】
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【図３３】
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【図３４】
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【図３５】
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【図３６】
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