(57)【要約】      （修正有）【課題】ＴＮＦα（腫瘍壊死因子）抗体などのＴＮＦα阻害剤を用いたＴＮＦα関連疾患の治療法の提供。【解決手段】単離したヒト抗体又はその抗原結合部分を用いる、表面プラズモン共鳴によって測定した場合に１ｘ１０−８Ｍ以下のＫｄと１ｘ１０−３ｓ−１以下のＫｏｆｆ速度定数でヒトＴＮＦαから解離しおよび該ヒト抗体又はその抗原結合部分が標準的なインビトロＬ９２９アッセイにおいて１ｘ１０−７Ｍ以下のＩＣ５０でヒトＴＮＦα細胞毒性を中和する方法。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
脊椎関節症、肺疾患、冠動脈疾患、代謝異常、貧血、疼痛、肝疾患、皮膚疾患、爪疾患、又は血管炎からなる群から選択されるＴＮＦα関連疾患が治療されるように、治療的有効量の高親和性中和ＴＮＦα抗体を患者へ投与することを含む、患者のＴＮＦα関連疾患を治療する方法。
【請求項２】
ベーチェット病、強直性脊椎炎、喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、特発性肺線維症（ＩＰＦ）、再狭窄、糖尿病、貧血、疼痛、クローン病関連疾患、若年性関節リウマチ（ＪＲＡ）、Ｃ型肝炎ウイルス感染症、乾癬、乾癬性関節炎、及び慢性プラーク乾癬からなる群から選択されるＴＮＦα関連疾患が治療されるように、患者のＴＮＦα関連疾患を治療する方法。
【請求項３】
加齢による悪液質、アルツハイマー病、脳浮腫、炎症を伴う脳損傷、慢性疲労症候群、皮膚筋炎、薬物反応、脊髄の中及び／又は周辺の浮腫、家族性の周期熱、フェルティー症候群、線維症、糸球体腎炎（例えば、連鎖球菌感染後糸球体腎炎又はＩｇＡ腎症）、人工関節の緩み、顕微鏡的多発血管炎、混合結合組織病、多発性骨髄腫、癌及び悪液質、多臓器障害、骨髄異形成症候群、睾丸炎、骨溶解、急性膵炎、慢性膵炎及び膵膿瘍を含む膵炎、歯周病、多発性筋炎、進行性腎不全、偽痛風、壊疽性膿皮症、再発性多発性軟骨炎、リウマチ性心疾患、サルコイドーシス、硬化性胆管炎、卒中、胸腹部大動脈瘤（ＴＡＡＡ）修復、ＴＮＦ受容体関連周期性発熱症候群（ＴＲＡＰＳ）、黄熱予防接種に関連する症状、耳の炎症性疾患、慢性耳炎又は小児の耳炎からなる群から選択されるＴＮＦα関連疾患の患者を治療する方法。本発明の更に別の実施形態では、ＴＮＦα関連疾患は、クローン病関連疾患、若年性関節炎／スチル病（ＪＲＡ）、ブドウ膜炎、坐骨神経症、前立腺炎、子宮内膜症、脈絡膜新生血管、狼瘡、シェーグレン症候群及び血管新生加齢性黄斑変性症であって、前記ＴＮＦα関連疾患が治療される。
【請求項４】
前記抗体が、単離したヒト抗体又はその抗原結合部分であり、表面プラズモン共鳴によって測定した場合に１ｘ１０−８Ｍ以下のＫｄと１ｘ１０−３ｓ−１以下のＫｏｆｆ速度定数でヒトＴＮＦαから解離しおよび前記ヒト抗体又はその抗原結合部分が標準的なインビトロＬ９２９アッセイにおいて１ｘ１０−７Ｍ以下のＩＣ５０でヒトＴＮＦα細胞毒性を中和する、請求項１、２又は３の何れか一項に記載の方法。
【請求項５】
前記抗体が、単離したヒト抗体又はその抗原結合部分であり、前記ヒト抗体又はその抗原結合部分は、
ａ）表面プラズモン共鳴によって測定した場合に１ｘ１０−３ｓ−１以下のＫｏｆｆ速度定数でヒトＴＮＦαから解離し、
ｂ）配列番号３のアミノ酸配列を含み、又は１、４、５、７若しくは８位へのアラニンの単一置換によって若しくは１、３、４、６、７、８及び／又は９位への１から５個の保存的なアミノ酸置換によって配列番号３を修飾したアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３ドメインを有し、
ｃ）配列番号４のアミノ酸配列を含み、又は２、３、４、５、６、８、９、１０若しくは１１位へのアラニンの単一置換によって若しくは２、３、４、５、６、８、９、１０、１１及び／又は１２位への１から５個の保存的なアミノ酸置換によって配列番号４を修飾したアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３ドメインを有する、
という特性を有する、請求項１、２又は３の何れか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記抗体が、配列番号１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）と配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）とを有する単離したヒト抗体又はその抗原結合部分である、請求項１、２又は３の何れか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記抗体がＤ２Ｅ７である、請求項１、２又は３の何れか一項に記載の方法。
【請求項８】
ベーチェット病、強直性脊椎炎、喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、特発性肺線維症（ＩＰＦ）、再狭窄、糖尿病、貧血、疼痛、クローン病関連疾患、若年性関節リウマチ（ＪＲＡ）、Ｃ型肝炎ウイルス感染症、乾癬、乾癬性関節炎、及び慢性プラーク乾癬からなる群から選択されるＴＮＦα関連疾患が治療されるように、治療的有効量のＴＮＦα抗体又はその抗原結合フラグメントを患者に投与することを含み、前記抗体は、表面プラズモン共鳴によって測定した場合に１ｘ１０−８Ｍ以下のＫｄ及び１ｘ１０−３ｓ−１以下のＫｏｆｆ速度定数でヒトＴＮＦαから解離しおよび標準的なインビトロＬ９２９アッセイにおいて１ｘ１０−７Ｍ以下のＩＣ５０で前記抗体がヒトＴＮＦα細胞毒性を中和する、ＴＮＦα関連疾患に罹患した患者を治療する方法。
【請求項９】
ベーチェット病、強直性脊椎炎、喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、特発性肺線維症（ＩＰＦ）、再狭窄、糖尿病、貧血、疼痛、クローン病関連疾患、若年性関節リウマチ（ＪＲＡ）、Ｃ型肝炎ウイルス感染症、乾癬、乾癬性関節炎、及び慢性プラーク乾癬からなる群から選択されるＴＮＦα疾患が治療されるように、治療的有効量のＴＮＦα抗体又はその抗原結合フラグメントを投与することを含み、
前記ＴＮＦα抗体又はその抗原結合フラグメントは、
ａ）表面プラズモン共鳴によって測定した場合に１ｘ１０−３ｓ−１以下のＫｏｆｆ速度定数でヒトＴＮＦαから解離し、
ｂ）配列番号３のアミノ酸配列を含み、又は１、４、５、７若しくは８位へのアラニンの単一置換によって若しくは１、３、４、６、７、８及び／又は９位への１から５個の保存的なアミノ酸置換によって配列番号３を修飾したアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３ドメインを有し、
ｃ）配列番号４のアミノ酸配列を含み、又は２、３、４、５、６、８、９、１０若しくは１１位へのアラニンの単一置換によって若しくは２、３、４、５、６、８、９、１０、１１及び／又は１２位への１から５個の保存的なアミノ酸置換によって配列番号４を修飾したアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３ドメインを有する、
という特性を有している、ＴＮＦα関連疾患に罹患した患者を治療する方法。
【請求項１０】
配列番号１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）と配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）とを有する治療的有効量のＴＮＦα抗体又はその抗原結合フラグメントを投与して、ＴＮＦα関連疾患を治療することを含む、ベーチェット病、強直性脊椎炎、喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、特発性肺線維症（ＩＰＦ）、再狭窄、糖尿病、貧血、疼痛、クローン病関連疾患、若年性関節リウマチ（ＪＲＡ）、Ｃ型肝炎ウイルス感染症、乾癬、乾癬性関節炎及び慢性プラーク乾癬から成る群から選択されるＴＮＦα関連疾患に罹患した患者を治療する方法。
【請求項１１】
前記ＴＮＦα抗体又はその抗原結合フラグメントがＤ２Ｅ７である、請求項８、９又は１０の何れか一項に記載の方法。
【請求項１２】
ＴＮＦα抗体が、少なくとも１つの追加治療薬と共に投与される、請求項８、９又は１０の何れか一項に記載の方法。
【請求項１３】
ＴＮＦα疾患が治療されるように、ベーチェット病、強直性脊椎炎、喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、特発性肺線維症（ＩＰＦ）、再狭窄、糖尿病、貧血、疼痛、クローン病関連疾患、若年性関節リウマチ（ＪＲＡ）、Ｃ型肝炎ウイルス感染症、乾癬、乾癬性関節炎、及び慢性プラーク乾癬から成る群から選択されるＴＮＦα関連疾患に罹患した患者を治療する方法。
【請求項１４】
Ｄ２Ｅ７が、少なくとも一つの追加治療薬と共に投与される、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
ａ）ＴＮＦα抗体又はその抗原結合部分と薬剤的に許容される担体とを含む医薬組成物と、
ｂ）ＴＮＦα関連疾患に罹患した患者を治療するためのＴＮＦα抗体医薬組成物を患者に投与するための指示書と、を備えたキット。
【請求項１６】
ＴＮＦα関連疾患が、ベーチェット病、強直性脊椎炎、喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、特発性肺線維症（ＩＰＦ）、再狭窄、糖尿病、貧血、疼痛、クローン病関連疾患、若年性関節リウマチ（ＪＲＡ）、Ｃ型肝炎ウイルス感染症、乾癬、乾癬性関節炎、及び慢性プラーク乾癬からなる群から選択される、請求項１５に記載のキット。
【請求項１７】
ＴＮＦα抗体又はその抗原結合部分がＤ２Ｅ７である、請求項１６に記載のキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、２００２年７月１９日に出願した先の米国仮出願第６０／３９７，２７５号に対する優先権を主張する。また、本出願は、２００２年９月１６日に出願した先の米国仮出願第６０／４１１，０８１号、及び２００２年１０月１０日に出願した米国仮出願第６０／４１７４９０に対する優先権を主張する。また、本出願は２００３年３月１８日に出願した先の米国特許仮出願第６０／４５５７７７号に対する優先権を主張する。さらに、本出願は米国特許第６，０９０，３８２号、６，２５８，５６２号及び６，５０９，０１５号に関連する。また、本出願は２００１年３月７日に出願した米国特許出願第０９／８０１，１８５号、２００２年１１月２２日に出願した米国特許出願第１０／３０２，３５６号、２００２年６月２日に出願した米国特許出願第１０／１６３６５７号、２００２年４月２６日に出願した米国特許出願第１０／１３３７１５号に関連する。
本出願は、表題「ＴＮＦα阻害薬を用いたＴＮＦα関連疾患の治療」（代理人番号ＢＰＩ−１８７）、表題「ＴＮＦα阻害薬を用いた脊椎関節症の治療」（代理人番号ＢＰＩ−１８８）、表題「ＴＮＦα阻害薬を用いた肺疾患の治療（代理人番号ＢＰＩ−１８９）、表題「ＴＮＦα阻害薬を用いた冠動脈疾患の治療（代理人番号ＢＰＩ−１９０）、表題「ＴＮＦα阻害薬を用いた代謝異常の治療」（代理人番号ＢＰＩ−１９１）、表題「ＴＮＦα阻害薬を用いた貧血の治療」（代理人番号ＢＰＩ−１９２）、表題「ＴＮＦα阻害薬を用いた疼痛の治療」（代理人番号ＢＰＩ−１９３）、表題「ＴＮＦα阻害薬を用いた肝疾患の治療」（代理人番号ＢＰＩ−１９４）、表題「ＴＮＦα阻害薬を用いた皮膚及び爪の疾患治療」（代理人番号ＢＰＩ−１９５）、表題「ＴＮＦα阻害薬を用いた血管炎の治療」（代理人番号ＢＰＩ−１９６）及び表題「ＴＮＦα阻害薬を用いたＴＮＦα関連疾患の治療」（代理人番号ＢＰＩ−１９７）の米国実用出願に関連するものであり、これら全ては本出願と共に同日付で出願する。前記特許及び特許出願の各内容全体を参照して本明細書に取込む。
【背景技術】
【０００２】
インターロイキン１（ＩＬ−１）及び腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）等サイトカインは、単球及びマクロファージ等の各種細胞により産生される分子であり、炎症過程のメディエータとして認められている。ＴＮＦ等のサイトカインは、損傷又は炎症の結果として生じる炎症反応の強度及び期間を調節する。ＴＮＦα（ＴＮＦとも呼ばれる）は、敗血症、感染症、自己免疫疾患、移植拒絶反応、及び移植片対宿主病等の各種ヒトの疾病及び疾患の病態生理学と関係がある（例として、Ｍｏｅｌｌｅｒら（１９９０）  Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ２：１６２、Ｍｏｅｌｌｅｒらに付与された米国特許番号５，２３１，０２４号、Ｍｏｅｌｌｅｒ，Ａらによる欧州特許公報第２６０  ６１０  Ｂ１号、Ｖａｓｉｌｌｉ（１９９２）  Ａｎｎｕ．  Ｒｅｖ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １０：４１１、Ｔｒａｃｅｙ  ａｎｄ  Ｃｅｒａｍｉ（１９９４）  Ａｎｎｕ．  Ｒｅｖ．  Ｍｅｄ．  ４５：４９１を参照のこと）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
【特許文献１】米国特許番号５，２３１，０２４号明細書
【特許文献２】欧州特許第２６０  ６１０号明細書
【非特許文献】
【０００４】
【非特許文献１】Ｍｏｅｌｌｅｒら（１９９０）  Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ２：１６２
【非特許文献２】Ｖａｓｉｌｌｉ（１９９２）  Ａｎｎｕ．  Ｒｅｖ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １０：４１１、Ｔｒａｃｅｙ  ａｎｄ  Ｃｅｒａｍｉ（１９９４）  Ａｎｎｕ．  Ｒｅｖ．  Ｍｅｄ．  ４５：４９１
【発明の概要】
【０００５】
ＴＮＦαの活性が有害であるＴＮＦα関連疾患の治療は、安全且つ効率的な方法で行う必要がある。本発明は、ＴＮＦα活性が有害である場合のＴＮＦα関連疾患を安全且つ効率的に治療する方法を含む。
【０００６】
本発明の一つの側面は、ＴＮＦα関連疾患が治療されるように、治療的有効量の高親和性中和ＴＮＦα抗体を患者に投与することを含む、患者のＴＮＦα関連疾患を治療する方法を記載する。一つの実施形態では、前記ＴＮＦα関連疾患は、脊椎関節症、肺疾患、冠動脈疾患、代謝異常、貧血、疼痛、肝疾患、皮膚疾患、爪疾患又は血管炎である。別の実施形態では、前記ＴＮＦα関連疾患は、加齢による悪液質、アルツハイマー病、脳浮腫、炎症性脳損傷、慢性疲労症候群、皮膚筋炎、薬物反応、脊髄中及び／又は周辺の浮腫、家族性の周期熱、フェルティー症候群、線維症、糸球体腎炎（例えば、溶連球菌感染後糸球体腎炎又はＩｇＡ腎症）、人工関節の緩み、顕微鏡的多発血管炎、混合結合組織病、多発性骨髄腫、癌及び悪液質、多臓器障害、骨髄異形成症候群、睾丸炎（ｏｒｃｈｉｔｉｓｍ）、骨溶解、膵炎（急性及び慢性膵炎、膵膿瘍を含む）、歯周病、多発性筋炎、進行性腎不全、偽痛風、壊疽性膿皮症、再発性多発性軟骨炎、リウマチ性心疾患、サルコイドーシス、硬化性胆管炎、卒中（ｓｔｒｏｋｅ）、胸腹部大動脈瘤修復（ＴＡＡＡ）、ＴＮＦ受容体関連周期性発熱症候群（ＴＲＡＰＳ）、黄熱予防接種に関連する症状、耳の炎症性疾患、慢性耳炎又は小児の耳炎である。本発明の更に別の実施形態では、ＴＮＦα関連疾患は、クローン病関連疾患、若年性関節炎／スチル病（ＪＲＡ）、ブドウ膜炎、坐骨神経症、前立腺炎、子宮内膜症、脈絡膜新生血管、狼瘡、シェーグレン症候群及び血管新生加齢性黄斑変性症（ｗｅｔ  ｍａｃｕｌａｒ  ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ）である。
【０００７】
一つの実施形態では、本発明の前記抗体は、表面プラズモン共鳴によって測定した場合に１ｘ１０−８Ｍ以下のＫｄと１ｘ１０−３ｓ−１以下のＫｏｆｆ速度定数でヒトＴＮＦαから解離し、および標準的なインビトロＬ９２９アッセイにおいて１ｘ１０−７Ｍ以下のＩＣ５０でヒトＴＮＦα細胞毒性を中和する単離されたヒト抗体又はその抗原結合部分である。
【０００８】
本発明の別の実施形態では、前記抗体は、表面プラズモン共鳴によって測定した場合に、１ｘ１０−３ｓ−１以下のＫｏｆｆ速度定数でヒトのＴＮＦαから解離し、配列番号３のアミノ酸配列を含み、又は１、４、５、７若しくは８位へのアラニンの単一置換によって若しくは１、３、４、６、７、８及び／又は９位への１から５個の保存的なアミノ酸置換によって配列番号３を修飾したアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３ドメインを有し、および配列番号４のアミノ酸配列を含み、又は２、３、４、５、６、８、９、１０若しくは１１位へのアラニンの単一置換によって若しくは２、３、４、５、６、８、９、１０、１１及び／又は１２位への１から５個の保存的なアミノ酸置換によって配列番号４を修飾したアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３領域を有する、単離されたヒト抗体又はその抗原結合部分である。
【０００９】
本発明の別の実施形態では、前記抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）と配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）とを有する、単離されたヒト抗体又はその抗原結合部分である。
【００１０】
本発明の更に別の実施形態では、前記抗体はＤ２Ｅ７であり、これは、ＨＵＭＩＲＡ（登録商標）又はアダリムマブ（ａｄａｌｉｍｕｍａｂ）とも呼ばれる。
【００１１】
本発明の別の側面には、ＴＮＦα関連疾患が治療されるように、治療的有効量のＴＮＦα抗体又は抗原結合性フラグメントを投与することを含み、前記抗体が、表面プラズモン共鳴によって測定した１ｘ１０−８Ｍ以下のＫｄ及び１ｘ１０−３ｓ−１以下のＫｏｆｆ速度定数でヒトＴＮＦαから解離し、および標準的なインビトロＬ９２９アッセイにおいて１ｘ１０−７Ｍ以下のＩＣ５０でヒトＴＮＦα細胞毒性を中和するものである、ＴＮＦα関連疾患に罹患した患者を治療する方法が含まれる。
【００１２】
本発明の更に別の側面には、ＴＮＦα関連疾患が治療されるように、治療的有効量のＴＮＦα抗体又はその抗原結合性フラグメントを投与することを含み、前記抗体が、表面プラズモン共鳴によって測定した場合に１ｘ１０−３ｓ−１以下のＫｏｆｆ速度定数でヒトＴＮＦαから前記抗体が解離し、配列番号３のアミノ酸配列を含み、又は１、４、５、７若しくは８位へのアラニンの単一置換により若しくは１、３、４、６、７、８及び／又は９位への１から５個の保存的なアミノ酸置換により配列番号３を修飾したアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３ドメインを有し、および配列番号４のアミノ酸配列を含み、又は２、３、４、５、６、８、９、１０若しくは１１位へのアラニンの単一置換により若しくは２、３、４、５、６、８、９、１０、１１及び／又は１２位への１から５個の保存的なアミノ酸置換によりる配列番号４を修飾したアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３ドメインを有する、ＴＮＦα関連疾患に罹患した患者を治療する方法が含まれる。
【００１３】
本発明の更なる側面は、ＴＮＦα関連疾患が治療されるように、配列番号１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）と配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）とを有するＴＮＦα抗体又はその抗原結合断片を投与することを含む、ＴＮＦα関連疾患に罹患した患者を治療する方法である。一つの実施形態では、前記ＴＮＦα抗体又はその抗原結合性断片はＤ２Ｅ７である。別の実施形態では、少なくとも１つの治療薬を追加してＴＮＦα抗体と一緒に投与する。
【００１４】
更に、本発明の別の側面は、治療的有効量のＴＮＦα抗体又はその抗原結合性フラグメントを患者に投与することを含み、前記抗体が、表面プラズモン共鳴によって測定された１ｘ１０−８Ｍ以下のＫｄ及び１ｘ１０−３ｓ−１以下のＫｏｆｆ速度定数でヒトＴＮＦαから解離し、および標準的なインビトロＬ９２９アッセイにおいて１ｘ１０−７Ｍ以下のＩＣ５０で前記抗体がヒトＴＮＦα細胞毒性を中和するものである、ＴＮＦα関連疾患に罹患したヒト患者のヒトＴＮＦα活性を阻害する方法である。一つの実施形態では、前記ＴＮＦα抗体又はその抗原結合性フラグメントはＤ２Ｅ７である。
【００１５】
更に、本発明の別の側面には、ＴＮＦα関連疾患が治療されるように、治療的有効量のＤ２Ｅ７又はその抗原結合性フラグメントを患者に投与することを含む、ＴＮＦα関連疾患に罹患した患者を治療する方法が含まれる。
【００１６】
本発明の更に別の側面は、ＴＮＦα関連疾患が治療されるように、治療的有効量のＤ２Ｅ７又はその抗原結合性フラグメントを患者に投与することを含む、ＴＮＦα関連疾患に罹患した患者を治療する方法が含まれる。
【００１７】
本発明の一つの実施形態では、少なくとも１つの治療薬を追加して、Ｄ２Ｅ７（ＨＵＭＩＲＡ（登録商標）又はアダリムマブとも呼ばれる）と一緒に投与する。
【００１８】
本発明の別の側面は、ＴＮＦα抗体又はその抗原結合性部分及び薬剤的に許容される担体と、ＴＮＦα関連疾患に罹患した患者を治療するために患者にＴＮＦα抗体の医薬組成物を投与するための指示書と、を備えたキットである。一つの実施形態では、前記ＴＮＦα抗体又はその抗原結合部分は、Ｄ２Ｅ７（ＨＵＭＩＲＡ（登録商標））である。
【００１９】
本発明は、ＴＮＦα活性（例、ヒトＴＮＦα活性）が有害であるＴＮＦα関連疾患の治療方法に関するものである。この方法は、前記ＴＮＦα関連疾患を治療するように。治療的有効量のＴＮＦα阻害薬の患者への投与を含む。本発明はまた、ＴＮＦα関連疾患治療のために別の治療薬と組み合わせてＴＮＦα阻害薬を投与する方法にも関する。本発明の様々な側面は、抗体及び抗体フラグメントを用いる治療、ならびにＴＮＦα阻害薬および薬剤的に許容される担体を含むＴＮＦα関連疾患の治療のための医薬組成物に関する。
【００２０】
(定義)
本発明に対する理解を更に深めるために、最初に特定の用語を定義付ける。
【００２１】
本明細書で使用する用語「ヒトＴＮＦα（本明細書ではｈＴＮＦα又は単にｈＴＮＦと略す）」は、１７ｋＤ分泌型及び２６ｋＤ膜結合型として存在し、生物学的活性型は非共有結合的に結合した１７ｋＤの分子の三量体で構成される、ヒトサイトカインをいう。ｈＴＮＦαの構造に関する詳細な説明は、例えば、Ｐｅｎｎｉｃａ，Ｄ．，ら  （１９８４）  Ｎａｔｕｒｅ  ３１２：７２４−７２９、Ｄａｖｉｓ，  Ｊ．Ｍ．，ら  （１９８７）  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｙ  ２６：１３２２−１３２６、Ｊｏｎｅｓ，  Ｅ．Ｙ．，ら（１９８９）  Ｎａｔｕｒｅ  ３３８：２２５−２２８にある。用語「ヒトＴＮＦα」は、組み換えヒトＴＮＦα（ｒｈＴＮＦα）をいい、これは標準の組み換え発現方法又は市販のもので調製できる（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、カタログＮｏ．２１０−ＴＡ、Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ、ＭＮ）。ＴＮＦαはまたＴＮＦともいう。
【００２２】
用語「ＴＮＦα阻害薬」は、ＴＮＦαを抑制する薬剤をいう。ＴＮＦα阻害薬には、例えば、エタネルセプト（エンブレル（登録商標）、Ａｍｇｅｎ）、インフリキシマブ（レミケード（登録商標）、Ｊｏｈｎｓｏｎ  ａｎｄ  Ｊｏｈｎｓｏｎ）、ヒト抗ＴＮＦモノクロナール抗体（Ｄ２Ｅ７／ＨＵＭＩＲＡ（登録商標）、Ａｂｂｏｔｔ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）、ＣＤＰ５７１（Ｃｅｌｌｔｅｃｈ）及びＣＤＰ８７０（Ｃｅｌｌｔｅｃｈ）、ならびにＴＮＦα活性を抑制するその他の化合物があり、ＴＮＦα活性が有害である疾患患者又は罹患のリスクにある患者に投与して前記疾患を治療する。一つの実施形態では、ＴＮＦα阻害薬は、エタネルセプトとインフリキシマブを除き、ＴＮＦα活性を抑制する化合物である。別の実施形態では、本発明のＴＮＦα阻害薬はＴＮＦα関連疾患の治療に使用する。これに関しては第ＩＩ項に更に詳述する。一つの実施形態では、エタネルセプトとインフリキシマブを除くＴＮＦα阻害薬を使用して、ＴＮＦα関連疾患を治療する。別の実施形態では、エタネルセプトとインフリキシマブを除くＴＮＦα阻害薬を使用して強直性脊椎炎を治療する。この用語はまた、米国特許番号６，０９０，３８２号、６，２５８，５６２号、６，５０９，０１５号及び米国特許出願番号０９／８０１１８５号及び１０／３０２３５６号での記述と同様に、本明細書においても抗ＴＮＦαヒト抗体及び抗体部分のそれぞれを含む。
【００２３】
本明細書で使用する用語「抗体」は、ジスルフィド結合によって相互接続された４つのポリペプチド鎖（２つの重鎖（Ｈ）及び２つの軽鎖（Ｌ））を含む免疫グロブリン分子をいう。各重鎖には、重鎖可変領域（本明細書ではＨＣＶＲ又はＶＨと略す）及び重鎖定常領域がある。重鎖定常領域は、ＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３の３つの領域で構成される。各軽鎖には、軽鎖可変領域（本明細書ではＬＣＶＲ又はＶＬと略す）及び軽鎖定常領域がある。軽鎖定常領域には、一つの領域（ＣＬ）がある。ＶＨ及びＶＬ領域は、相補性決定領域（ＣＤＲ）と名付けられた超可変領域に更に細区分され、更に良く保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）と名付けられた領域によって区切られている。各ＶＨ及びＶＬは、３つのＣＤＲと４つのＦＲで構成されており、アミノ末端からカルボキシ末端までＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４の順で配列する。本発明の抗体は、米国特許番号６，０９０、３８２号、６，２５８，５６２号、６，５０９，０１５号及び米国特許出願番号０９／８０１１８５号及び１０／３０２３５６号で更に詳細に説明されており、上記全文を参照により本明細書に組み込む。
【００２４】
本明細書で使用する抗体の「抗原結合部分」（または単純に「抗体部分」）という用語は、抗体の１つ若しくはそれ以上のフラグメントをいい、抗原（例えば、ｈＴＮＦα）に特異的に結合する能力を保持している。抗体の抗原結合機能は、完全長の抗体を持つフラグメントによって成し遂げられる。抗体の「抗原結合部分」に含まれる結合フラグメントの例には、（ｉ）ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ及びＣＨ１領域から成る一価のフラグメントであるＦａｂフラグメント、（ｉｉ）ヒンジ領域でジスルフィド架橋によって連結した２つのＦａｂフラグメントを含む二価のフラグメントであるＦ（ａｂ’）２フラグメント、（ｉｉｉ）ＶＨ及びＣＨ１領域から成るＦｄフラグメント、（ｉｖ）抗体の単一の腕を持つＶＬ及びＶＨ領域から成るＦｖフラグメント、（ｖ）ＶＨ領域から成るｄＡｂフラグメント（Ｗａｒｄら  （１９８９）  Ｎａｔｕｒｅ  ３４１：５４４−５４６）及び（ｖｉ）単一の相補性決定領域（ＣＤＲ）がある。また、Ｆｖフラグメントの２つの領域であるＶＬ及びＶＨは異なる遺伝子によってコードされるが、組み換え方法を用いて合成リンカーによって連結できる。合成リンカーは単一のタンパク鎖を作成でき、ＶＬとＶＨ領域を対にして一価の分子を形成する（単鎖のＦｖ（ｓｃＦｖ）として知られている。Ｅ．Ｇ．，  Ｂｉｒｄら  （１９８８）  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２：４２３−４２６及びＨｕｓｔｏｎら  （１９８８）  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ８５：５８７９−５８８３を参照のこと）。前記単鎖抗体はまた、抗体の「抗原結合部分」という用語も含むことを意図する。二重特異性抗体等の、単鎖抗体の別の形も含まれる。二重特異性抗体は２価の二重特異性を有する抗体であり、ＶＨ及びＶＬの領域は単一のポリペプチド鎖上（しかし、この同一鎖上でこの２領域間を対にするには短すぎるリンカーを用いて、それによって前記領域と別の鎖の相補領域とを強制的に対にして２つの抗原結合部位を作る（例として、Ｈｏｌｌｉｇｅｒ，  Ｐ．，ら  （１９９３）  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ９０：６４４４−６４４８、Ｐｏｌｊａｋ，  Ｒ．Ｊ．，ら  （１９９４）  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ２：１１２１−１１２３を参照のこと））で発現される。本発明の抗体部分の更に詳細な説明は、米国特許番号６，０９０，３８２号、６，２５８，５６２号、６，５０９，０１５号及び米国特許出願番号０９／８０１１８５号及び１０／３０２３５６号にあり、上記全文を参照により本明細書に取込まれる。
【００２５】
結合フラグメントは、組換えＤＮＡ技術によって、又は酵素的若しくは化学的に無傷の免疫グロブリンを開裂することによって調製する。結合フラグメントは、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂｃ、Ｆｖ、単鎖、単鎖抗体などがある。「二重特異性」又は「二機能性」の免疫グロブリン又は抗体以外に、免疫グロブリン又は抗体にはそれぞれ同一の結合部位があると理解される。「二重特異性」又は「二機能性」の抗体は、２つの異なる重鎖／軽鎖の対と２つの異なる結合部位を有する人工的なハイブリッド抗体である。二重特異性抗体は、ハイブリドーマの融合又はＦａｂ’フラグメントの連結を含む様々な方法により生産可能である。例えば、Ｓｏｎｇｓｉｖｉｌａｉ  ＆  Ｌａｃｈｍａｎｎ、Ｃｌｉｎ．  Ｅｘｐ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ７９：３１５−３２１（１９９０）、Ｋｏｓｔｅｌｎｙら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １４８，１５４７−１５５３（１９９２）を参照されたい。
【００２６】
本明細書で使用する「保存的なアミノ酸置換」は、ある一つのアミノ酸残基が類似の側鎖を持つ別のアミノ酸残基により置換されることをいう。類似の即鎖を持つアミノ酸残基のファミリーは、塩基性側鎖（例えば、リシン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、チロシン、システイン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）、β分岐鎖（例えば、セロニン、バリン、イソロイシン）及び芳香族側差（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）等を含むものとして、この技術分野では定義されている。
【００２７】
本明細書で使用する「ヒト抗体」という用語は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列由来の可変領域と定常領域とを有する抗体を含むものとする。本発明のヒト抗体（例えばＣＤＲ、特にＣＤＲ３）は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列によってコードされていないアミノ酸残基（例えば、インビトロにおけるランダム若しくは部位特異的変異誘発又はインビボにおける体細胞変異によって導入された変異）を含み得る。しかし、本明細書で使用する用語「ヒト抗体」は、別の哺乳類（マウス等）の生殖系列に由来するＣＤＲ配列をヒトのフレームワーク配列上に移植した抗体を含まないものとする。
【００２８】
本明細書で使用する用語「組換えヒト抗体」は、組換え法によって調製され、発現され、作製され又は単離された（例えば、宿主細胞にトランスフェクトした組換え発現ベクターを用いて発現した抗体（下記に詳述）、組換え型のヒト抗体のコンビナトリアルライブラリから単離した抗体（下記に詳述）、ヒト免疫グロブリン遺伝子のトランスジェニック動物（例えば、マウス）から単離した抗体（例として、Ｔａｙｌｏｒ，  Ｌ．Ｄ．ら（１９９２）  Ｎｕｃｌ．  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．  ２０：６２８７）、又は、その他のＤＮＡ配列にヒト免疫グロブリン遺伝子配列を挿入するなどの他の方法によって調製され、発現され、作成され又は単離された抗体）すべての抗体を含むことが意図される。このような組換えヒト抗体は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列由来の可変領域及び定常領域を有する。特定の実施形態では、しかし、前記組換えヒト抗体は、インビトロの変異（若しくは、ヒトＩｇ配列がトランスジェニック動物に使用されたときは、インビボの体細胞変異）の対象とされる。したがって、組換え抗体のＶＨ及びＶＬ領域を持つアミノ酸配列は、ヒトの生殖系ＶＨ及びＶＬ配列に由来していて、ヒトの生殖系ＶＨ及びＶＬ配列に関連しているにも拘わらず、インビボでヒト抗体の生殖系レパートリ内には自然に存在しないこともあり得る。
【００２９】
本明細書で使用する「単離した抗体」は、異なる抗原特異性を有する他の抗体を実質的に持たない抗体を意味することを意図している（例えば、ｈＴＮＦαに特異的に結合する単離した抗体は、ｈＴＮＦα以外の抗原に特異的に結合する抗体を実質的に有しない。）。しかし、ｈＴＮＦαに特異的に結合する単離した抗体は、他の種のＴＮＦα分子等、他の抗原に対して交差反応性を有する（下記に詳述）。更に、単離した抗体は、実質的に他の細胞性物質及び／又は化学薬品がないものでもあり得る。
【００３０】
本明細書で使用する「中和抗体」（又は「ｈＴＮＦα活性を中和した抗体」）は、ｈＴＮＦαに結合することによりｈＴＮＦαの生物活性を抑制する抗体をいう。ｈＴＮＦα誘発細胞毒性（インビトロ又はインビボの何れでも）、ｈＴＮＦαの生物活性の抑制は、ｈＴＮＦα誘発細胞活性化及びｈＴＮＦα受容体へのｈＴＮＦαの結合等の、１つ若しくはそれ以上のｈＴＮＦα生物活性のインディケータを測定することによって評価できる。前記ｈＴＮＦα生物活性のインディケータは、当該技術分野で既知の１つ若しくはそれ以上の標準的なインビトロ又はインビボアッセイにより評価できる（米国特許番号６，０９０，３８２号参照）。ｈＴＮＦα活性を中和する抗体の能力は、Ｌ９２９細胞のｈＴＮＦα誘発細胞毒性の抑制によって、好ましくは評価される。ｈＴＮＦα活性の追加又は代替のパラメータとして、ＨＵＶＥＣ上でのＥＬＡＭ−１のｈＴＮＦα誘発発現を抑制する抗体の能力を、ｈＴＮＦα誘発細胞活性の一つの基準として評価できる。
【００３１】
本明細書で使用する用語「表面プラズモン共鳴」は、例えばＢＩＡｃｏｒｅシステム（Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒ  ＡＢ，  Ｕｐｐｓａｌａ，  Ｓｗｅｄｅｎ  ａｎｄ  Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，  ＮＪ）を用いてバイオセンサーマトリックス内のタンパク濃度の変化を検出することによってリアルタイムで生物特異的な相互作用の分析を可能にする、光学的な現象をいう。詳細な説明は、米国特許番号６，２５８，５６２号の例１及びＪｏｎｓｓｏｎら（１９９３）Ａｎｎ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｌｉｎ．  ５１：１９、Ｊｏｎｓｓｏｎら（１９９１）  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  １１：６２０−６２７、Ｊｏｈｎｓｓｏｎら（１９９５）  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｒｅｃｏｇｎｉｔ．  ８：１２５、及びＪｏｈｎｎｓｏｎら（１９９１）  Ａｎａｌ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  １９８：２６８を参照。
【００３２】
本明細書で使用する用語「Ｋｏｆｆ」は、抗体／抗原複合体から抗体が解離する際の離脱（ｏｆｆ）速度定数をいう。
【００３３】
本明細書で使用する用語「Ｋｄ」は、特定の抗体−抗原の相互作用の解離速度定数をいう。
【００３４】
本明細書で使用する用語「ＩＣ５０」は、着目の当該生物学的エンドポイントの抑制に、例えば細胞毒性活性の中和に必要な阻害薬の濃度をいう。
【００３５】
本明細書で使用する用語「核酸分子」は、ＤＮＡ分子及びＲＮＡ分子を含むことを意図する。核酸分子は一本鎖又は二本鎖の何れかであるが、二本鎖ＤＮＡが好ましい。
【００３６】
ｈＴＮＦαに結合する抗体または抗体部分（例えば、ＶＨ、ＶＬ、ＣＤＲ３）をコードする核酸に関連して本明細書で使用する用語、「単離された核酸分子」は、抗体または抗体部分をコードするヌクレオチド配列が、ｈＴＮＦα以外の抗原に結合する抗体または抗体部分をコードする別のヌクレオチド配列を持たない核酸分子をいう。別の配列はＤＮＡヒトゲノムＤＮＡ中の核酸の側面に自然に隣接することがある。故に、例えば、抗ｈＴＮＦα抗体のＶＨ領域をコードする本発明の単離された核酸は、ｈＴＮＦα以外の抗原を結合する他のＶＨ領域をコードする配列を含んでいない。
【００３７】
本明細書で使用する用語「ベクター」は、連結している別の核酸を輸送可能な核酸分子をいう。ベクターの一つの型に、追加のＤＮＡセグメントを結紮することができる環状二本鎖ＤＮＡである、「プラスミド」がある。別の型のベクターは、追加のＤＮＡセグメントをウイルスのゲノムに結紮するウイルスベクターである。ある特定のベクターは、宿主細胞に導入されたとき、宿主細胞中で自律増殖できる（例えば、細菌の複製開始点を有する細菌のベクター及び哺乳類のエピソームベクター）。その他のベクター（例えば、哺乳類の非エピソームベクター）は、宿主細胞に導入して宿主細胞のゲノムに組み込むことができ、それによって宿主細胞と共に複製される。また、ある特定のベクターは、作動可能に連結された遺伝子の発現を指示することができる。このようなベクターは、本明細書では、「組換え発現ベクター」（又は単に「発現ベクター」）という。一般に、組換えＤＮＡ技術で有益な発現ベクターはプラスミドの形式であることが多い。本明細書では、プラスミドが最も一般的に使用される型のベクターであるので、「プラスミド」及び「ベクター」を区別なく使用することがある。しかし、本発明には、ウイルスのベクター（例えば、複製欠損のレトロウイルス、アデノウイルス及びアデノ随伴ウイルス）等のような、同等の機能を果たす他の発現ベクターの形も含むことが意図される。
【００３８】
本明細書で使用する用語「組換え宿主細胞（又は単に「宿主細胞」）は、組換え発現ベクターを導入した細胞をいう。このような用語は特体の対象細胞だけではなく、特定の細胞の子孫も意味することを理解されたい。突然変異又は環境の影響により特定の修飾が次の世代に起こることもあるので、実際は、このような子孫は親細胞とは同一でないこともあり得るが、なお、本明細書で使用される「宿主細胞」という用語の範囲に含まれるものとする。
【００３９】
本明細書で使用する用語「投与」は、治療目的（例えば、ＴＮＦα関連疾患の治療）を達成するために物質（例えば、抗ＴＮＦα抗体）を投与することをいう。
【００４０】
本明細書で使用する用語「隔週投与法」、「隔週投与」及び「隔週投薬」とは、治療目的（例えば、ＴＮＦα関連疾患の治療）達成のために、患者に物質（例えば、抗ＴＮＦα抗体）を投与する時間経過をいう。隔週投与法には、毎週投与法は含まれない。物質は、９〜１９日毎に投与されるのが好ましく、更に好ましくは１１〜１７日毎、それよりも更に好ましくは１３〜１５日毎、最も好ましくは１４日毎に投与されることである。
【００４１】
「第一薬と第二薬の組み合わせ」という句の中の用語「組み合わせ」とは、第一薬と第二薬を共投与することであり、例えば、第一薬と第二薬とを、薬剤的に許容される同一の担体中で溶解又は混ぜてもよいし、または第一薬、第二薬の順若しくは第二薬、第一薬の順で投与してもよい。従って、本発明では、組み合わせ療法及び組み合わせ医薬組成物を含む。
【００４２】
「併用療法」という句の中の用語「併用」は、ある薬を第二薬の存在下に投与することをいう。併用療法は、第一、第二、第三、又は追加薬を共投与する方法を含む。併用療法はまた、第一又は追加薬を第二又は追加薬の存在下に投与する方法も含む（ここにおいて、第二又は追加薬は、例えば前もって投与してもよい。）。併用療法は、異なる行為者により段階的に実行されてもよい。例えば、一人の実行者が患者に第一薬を投与し、第二の実行者が前記患者に第二薬を投与してもよい。また、第二薬（及び追加薬）の存在下第一薬の後投与であるのなら、投与は、同時に又はほぼ同時に、又は時間をおいて実行してよい。行為者及び患者は同一の実体であり得る（例えば、ヒト）。
【００４３】
本明細書で使用する用語「組み合わせ療法」とは、２つ以上の治療用物質（例えば、抗ＴＮＦα抗体及び別の薬（ＤＭＡＲＤ又はＮＳＡＩＤ等））を投与することをいう。他の薬を、抗ＴＮＦα抗体投与と同時に、又は事前に、若しくは投与後に投与してよい。
【００４４】
用語「ＴＮＦα媒介疾患」又は「ＴＮＦα関連疾患」とは、ＴＮＦαが第一の媒介物となり疾患の徴候を生じる局所及び／又は全身の生理学的異常をいう。
【００４５】
本明細書で互換性あるように使用する用語「炎症性疾患」又は「炎症性疾病」とは、免疫媒介の有無に関わらず炎症媒介疾患をいう。炎症性疾患は、過度又は無秩序な炎症反応により、過剰な炎症症状、宿主組織の損傷又は組織の機能喪失を生じる疾患である。例として、関節リウマチや脊椎関節症が挙げられる。一つの実施形態では、本発明の炎症性疾患は、骨関節炎及びリウマチ様脊椎炎を除く炎症媒介疾患をいう。
【００４６】
本明細書で使用する用語「肺疾患」とは、特発性間質性肺炎及び／又は慢性閉塞性気道疾患の全てをいう。本発明の一つの実施形態では、肺疾患という用語には、ショック肺、慢性肺炎症性疾患、肺サルコイドーシス、肺線維症及びケイ肺症を除く全ての肺疾患及び／又は慢性閉塞性気道疾患が含まれる。
【００４７】
本明細書で互換性あるように使用する用語「特発性間質性肺炎」又は「特発性間質性肺疾患」は、肺胞間の間質組織に主としてびまん性の病理的変化を生じる、類似の臨床特徴を示す原因不明の複数の疾患の何れか一つを示す。特発性間質性肺炎の例としては、これらに限定されないが、間質性肺線維症（ＩＰＦ）が挙げられる。一つの実施形態では、特発性間質性肺炎は、ショック肺、慢性肺炎症性疾患、肺サルコイドーシス、肺線維症、及びケイ肺症を除く、肺胞間の間質組織に主としてびまん性の病理的変化を生じる、類似の臨床特徴を示す原因不明の複数の疾患の何れか一つを示す。
【００４８】
本明細書で使用する用語「慢性閉塞性気道疾患」は、病因に関係なく、生理学的に判断された慢性気流閉塞でるが故に、肺疾患のことをいう。慢性閉塞性気道疾患の例としてはこれに限定されないが、喘息及び慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）が挙げられる。一つの実施形態では、慢性閉塞性気道疾患は、ショック肺、慢性肺炎症性疾患、肺サルコイドーシス、肺線維症及びケイ肺症を除く、生理学的に判断された慢性気流閉塞であるが故に肺疾患を含む。
【００４９】
用語「気道閉塞」は、肺活量測定の特徴ある所見により表される、気流に対する増加した抵抗性をいう。
【００５０】
本明細書で互換性あるように使用する用語「循環器疾患」と「冠動脈疾患」は、心血管系（例えば、心臓、血管及び／又は血液）に関係がある如何なる疾病、疾患、又は病状をいう。冠動脈疾患の特徴は、一般に、血液及び酸素を心臓（冠動脈）に供給する血管の狭窄である。冠動脈疾患は通常、脂肪性の多い物質の蓄積及びプラークにより生じる。冠動脈が狭窄するにつれて、心臓への血流が緩慢になるか、又は停止する。本発明の冠動脈疾患は、構造的、組織学的、生化学的、又はその他の異常に関係なく、動脈のすべての異常をいう。冠動脈疾患の一例として再狭窄が挙げられる。一つの実施形態では、冠動脈疾患は心血管系に関する疾病、疾患又は症状全てを指すが、心臓の虚血及び心機能不全は除外する。
【００５１】
本明細書で使用する用語「再狭窄」とは、狭窄の再発をいい、動脈の狭窄又は狭小化のことである。再狭窄は、患部血管の再建処置の後に以前に閉塞した病変が進行したため、起こることが多い。この用語は、以前より存在する狭窄の再発だけではなく、以前は正常な血管であったが血管バイパス手術後に部分的に閉塞した場合にも適用される。別の実施形態では、本発明は、再狭窄患者又はそのリスクにある患者への本発明の抗体又はその抗原結合部分の投与を含む再狭窄治療方法を提供する。
【００５２】
本明細書で使用する用語「ステント」とは、動脈等の解剖学的血管の管腔に挿入する構造物をいい、以前に閉塞した通路の開口を維持するためのものである。ステントは、血管の一部位から別の部位への液（例えば、血液）の流れを維持し、ならびに、通路開口を維持し及び／又は移植片もしくは外被を支える血管内のスカフォールド又はステントを維持するために使用される。ステントは、狭窄治療の直接治療法として使用されることもあるが、バルーン血管形成後に使用されることが多い。
【００５３】
本発明の一つの実施形態では、ステントは薬物溶出性である。「薬剤溶出ステント」とは、緩徐から中等度の徐放性製剤で被覆したステントをいう。ここで用いる「薬剤溶出」、「薬剤放出」、「薬剤コーティング」は互換性がある。ステントは、冠動脈疾患治療のいずれかの薬（例えば、本発明の抗体又はその抗原結合フラグメント）で被覆できる。別の実施形態では、ステントはＤ２Ｅ７を送達する。更に別の実施形態では、ステントは、冠動脈疾患治療に使用する別の薬（デキサメサゾン、アルケラン、サイトキサン、リューケラン、シスプラチン、ＢＩＣＮＵ、アドリアマイシン、ドキソルビシン、セルビジン（ｃｅｒｕｂｉｄｉｎｅ）、イダマイシン、ミスラシン（ｍｉｔｈｒａｃｉｎ）、ムタマイシン（ｍｕｔａｍｙｃｉｎ）、フルオロウラシル、メトトレキセート、ソグアニン（ｔｈｏｇｕａｎｉｎｅ）、タキソテーレ、エトポシド、ビンクリスチン、イリノテカン、ヒカンプチン（ｈｙｃａｍｐｔｉｎ）、マチュレン（ｍａｔｕｌａｎｅ）、ビューモン、ヘキサリン、ヒドロキシ尿素、ジェムザール、オンコビン、エトフォフォス（ｅｔｏｐｈｏｐｈｏｓ）、タクロリムス（ＦＫ５０６）、及び次に挙げるシロリムスの類似物、ＳＤＺ−ＲＡＤ、ＣＣＩ−７７９、７−エピーラパマイシン、７−チオメチル−ラパマイシン、７−エピ−トリメトキシフェニルーラパマイシン、７−エピーチオメチル−ラパマイシン、７−エピーチオメチルーラパマイシン、７−デメトキシ−ラパマイシン、３２−デメトキシ、２−デスメチル及びプロリンなど）と組み合わせてＤ２Ｅ７を送達する。
【００５４】
本明細書で使用する用語「代謝異常」とは、生体が生理的機能を果たすために必要な物質の処理に影響を及ぼす疾病又は疾患をいう。代謝異常の例としては、糖尿病及び肥満が挙げられるが、これらに限定されない。本発明の一つの実施形態では、使用する用語「代謝異常」は、自己免疫糖尿病を除く、生体が生理的機能を果たすために必要な物質の処理に影響を及ぼす疾患をいう。
【００５５】
本明細書で互換性あるように使用する「糖尿病」、「糖尿病性疾患」、「真性糖尿病」は、血糖値（血中グルコース濃度）の上昇が特徴の疾病をいう。糖尿病は、インスリン（血糖を調製するために膵臓によって産生される化学物質）分泌不全、インスリン抵抗性、またはその両方により生じる。
【００５６】
本明細書で使用する句「糖尿病を伴う疾患」とは、糖尿病に一般に付随しまたは関連する病状及びその他の疾患をいう。糖尿病を伴う疾患の例として、例えば、高血糖、高インスリン血症、高脂血症、インスリン抵抗性、グルコース代謝異常、肥満、糖尿病性網膜症、黄斑変性症、白内障、糖尿病性腎症、糸球体硬化症、糖尿病性神経障害、勃起不全、月経前症候群、血管の再狭窄、潰瘍性大腸炎、冠動脈疾患、高血圧、狭心症、心筋梗塞、脳卒中、皮膚及び結合組織異常、足の潰瘍形成、代謝性アシドーシス、関節炎及び骨粗鬆症がある。
【００５７】
本明細書で使用する用語「肥満」とは、除脂肪体重と比較して体脂肪が過剰である患者の状態をいう。一つの実施形態では、肥満は、身長に対する理想体重の最大値より少なくとも約２０％若しくはそれ以上多い体重である疾患をいう。成人で体重が１００ポンド以上である場合、「病的肥満」と見なす。別の実施形態では、肥満は、ＢＭＩ（肥満度指数）が３０ｋｇ／ｍ２以上であると定義する。
【００５８】
本明細書で使用する用語「貧血」とは、循環する赤血球数が異常に少ない状態、又は血中ヘモグロビン濃度の減少をいう。
【００５９】
本明細書で使用する用語「疼痛」は、疼痛の全ての型をいう。この用語は、急性及び慢性の疼痛をいい、例えば、神経障害性の疼痛及び術後疼痛、慢性腰痛、群発性頭痛、ヘルペス神経痛、幻肢痛、中枢痛、歯痛、オピオイドに抵抗する痛み、内臓痛、手術痛、骨損傷の痛み、陣痛、日焼けを含む火傷による疼痛、分娩後痛、片頭痛、狭心痛及び膀胱炎を含む尿生殖路に関連する疼痛をいう。この用語はまた、侵害受容性疼痛又は痛覚を含む。
【００６０】
本明細書で使用する用語「肝疾患」は、肝細胞損傷又は胆道疾患を伴う、哺乳類好ましくはヒトの肝臓病又は状態いう。一つの実施形態では、肝疾患は、肝細胞損傷又は胆道疾患を伴う、肝炎、アルコール性肝炎、ウイルス性肝炎を除くヒトの肝臓病又は状態をいう。
【００６１】
本明細書で互換性あるように使用する用語「皮膚疾患」又は「皮膚病」とは、皮膚の炎症を誘発する外傷創傷以外の皮膚の異常をいう。一つの実施形態では、本発明の皮膚疾患は、皮膚が毛細管拡張、白血球浸潤、発赤、熱、及び／又は疼痛の特徴を示す炎症性皮膚疾患をいう。皮膚疾患の例としては、これらに限定されないが、乾癬、尋常性天疱瘡、強皮症、アトピー性皮膚炎、サルコイドーシス、結節性紅斑、化膿性汗腺炎（ｈｉｄｒａｄｅｎｉｔｉｓ  ｓｕｐｐｕｒａｔｉｖｅ）、扁平苔癬、スイート症候群及び白斑が挙げられる。
【００６２】
本明細書で使用する用語「乾癬」とは、表皮の肥厚を伴う皮膚疾患をいう。乾癬の例としては、これに限定されないが、慢性プラーク乾癬、滴状乾癬、間擦疹型乾癬、膿疱性乾癬、尋常性乾癬及び乾癬性紅皮症が挙げられる。乾癬はまた、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）及び関節リウマチ（ＲＡ）を含むその他の炎症性疾患を併発することもある。
【００６３】
用語「健康な皮膚」又は「正常な膚」とは、すなわち、視覚的に明らかな紅斑、浮腫、色素沈着過剰又は色素脱失又は不均一な色素沈着、瘢痕形成（ｓｃａｌｅ  ｆｏｒｍａｔｉｏｎ）、乾燥症又は水泡形成等の病変のない皮膚をいう。組織学的に健康又は正常な皮膚とは、充分に組織化された基底層、有棘層、顆粒層及び干渉性の多層状の緻密層で構成される形態学的外観を有する皮膚組織をいう。
【００６４】
本明細書で使用する用語「爪疾患」又は「爪の病気」とは、指の爪又は足指の爪の色、形、構造又は厚さに異常がある状態をいう。
【００６５】
本明細書で互換性あるように使用する用語「血管炎」又は「脈管炎」とは、血管の炎症を特徴とする疾患群をいう。いかなるサイズの血管も、身体の中で最も大きな血管（大動脈）から皮膚にある最も小さな血管（毛細血管）まで、影響を受け得る。影響を受ける血管のサイズは、血管炎の特定の種類によって異なる。
【００６６】
本明細書で使用する用語「キット」とは、ＴＮＦα関連疾患治療に投与する本発明のＴＮＦα抗体の構成要素を梱包した製品のことをいう。このキットは、キットの構成要素を保持する箱又はコンテナを備えるのが好ましい。これら箱又はコンテナには、ラベル又は食品医薬品局が承認した記録を添付する。これら箱又はコンテナは、好ましくはプラスチック、ポリエチレン、ポリプロピレン、又はプロピレンの容器に入れた本発明の構成要素を保持する。これら容器は、蓋付きのチューブ又はビンである。このキットはまた、本発明のＴＮＦα抗体投与に関する指示書を備える。
【００６７】
本発明の様々な特徴を、更に詳細に説明する。
【００６８】
Ｉ．本発明のＴＮＦα阻害薬
本発明は、ＴＮＦα阻害薬の投与が有益であるＴＮＦα関連疾患の治療方法を提供する。一つの実施形態では、これらの方法には、高親和性及び低い脱離速度を有するヒトＴＮＦαと結合して高い中和能を有する単離したヒト抗体又はその抗原結合部分の投与がある。本発明のヒト抗体は、組換え型の中和ヒト抗ｈＴＮＦα抗体であることが好ましい。本発明の最も好ましい組換え型の中和抗体は、本明細書ではＤ２Ｅ７と呼ばれ、また、ＨＵＭＥＲＡ（登録商標）及びアダリムマブとも呼ばれる（Ｄ２Ｅ７  ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号１に示す。Ｄ２Ｅ７  ＶＨ領域のアミノ酸配列は配列番号２に示す）。Ｄ２Ｅ７（ＨＵＭＩＲＡ（登録商標））の特性の記述は、Ｓａｌｆｅｌｄらの米国特許番号６，０９０，３８２号にあり、本明細書に参照により取り込む。
【００６９】
一つの実施形態では、本発明の治療は、Ｄ２Ｅ７抗体及び抗体部分、Ｄ２Ｅ７関連抗体及び抗体部分ならびにＤ２Ｅ７と同等の特性（低い解離動態と高い中和能を有しつつ、ｈＴＮＦαとの結合の高親和性等）を有する他のヒト抗体及び抗体部分の投与を含む。一つの実施形態では、本発明は、表面プラズモン共鳴によって何れも測定した１ｘ１０−８Ｍ以下のＫｄ、及び１ｘ１０−３ｓ−１以下のＫｏｆｆ速度定数で単離したヒト抗体又はその抗原結合部分をヒトＴＮＦαから解離し、１ｘ１０−７Ｍ以下のＩＣ５０で標準的なインビトロＬ９２９アッセイにおいてヒトＴＮＦα細胞毒性を中和する、単離したヒト抗体又はその抗原結合部分を用いた治療を提供する。更に好ましくは、単離した抗体又はその抗原結合部分は、５ｘ１０−４ｓ−１以下のＫｏｆｆ、又はその上更に好ましくは１ｘ１０−４ｓ−１以下のＫｏｆｆでヒトＴＮＦαから解離する。更に好ましくは、単離したヒト抗体又はその抗原結合部分は、１ｘ１０−８Ｍ以下のＩＣ５０で、その上更に好ましくは、１ｘ１０−９Ｍ以下、更に好ましくは１ｘ１０−１０Ｍ以下のＩＣ５０で、標準的なインビトロＬ９２９アッセイにおいてヒトＴＮＦα細胞毒性を中和する。好ましい実施形態では、抗体は単離したヒト組換え型抗体又はその抗原結合部分である。
【００７０】
抗原に対する抗体の結合特異性／親和性において、抗体の重鎖及び軽鎖のＣＤＲ３領域が重要な役目を果たすことは当該技術分野で周知である。従って、別の特徴としては、本発明は、ｈＴＮＦαとの結合に対し緩慢な解離動態を示し、Ｄ２Ｅ７の軽鎖及び重鎖ＣＤＲ３と構造的に同一又は関連する軽鎖及び重鎖ＣＤＲ３領域を有するヒト抗体を投与することにより、ＴＮＦαが有害であるＴＮＦα関連疾患の治療方法に関するものである。Ａｌａ又はＴｈｒは、実質的にＫｏｆｆに影響を及ぼすことなく、Ｄ２Ｅ７  ＶＬ  ＣＤＲ３の位置９を占ることができる。従って、Ｄ２Ｅ７  ＶＬ  ＣＤＲ３の共通モチーフはアミノ酸配列Ｑ−Ｒ−Ｙ−Ｎ−Ｒ−Ａ−Ｐ−Ｙ−（Ｔ／Ａ）（配列番号３）を含む。更に、Ｔｙｒ及びＡｓｎは、実質的にＫｏｆｆに影響を及ぼすことなく、Ｄ２Ｅ７  ＶＨ  ＣＤＲ３の１２位を占ることができる。故に、Ｄ２Ｅ７  ＶＬ  ＣＤＲ３の共通モチーフはアミノ酸配列Ｖ−Ｓ−Ｙ−Ｌ−Ｓ−Ｔ−Ａ−Ｓ−Ｓ−Ｌ−Ｄ−（Ｙ／Ｎ）（配列番号４）を含む。更に、米国特許番号６，０９０，３８２号の実施例２で示されているように、Ｄ２Ｅ７重鎖及び軽鎖のＣＤＲ３領域は、単一のアラニン残基による置換（ＶＬ  ＣＤＲ３内の１、４、５、７若しくは８位で、又はＶＨ  ＣＤＲ３の２、３、４、５、６、８、９、１０若しくは１１位で）を、実質的にＫｏｆｆに影響を及ぼすことなく受け入れる。さらにまた、Ｄ２Ｅ７  ＶＬ及びＶＨ  ＣＤＲ３領域がアラニンによる置換を受け入れることから、抗体の低いｏｆｆ速度定数を依然として保ちながら、ＣＤＲ３領域内でその他のアミノ酸に、特に保存的なアミノ酸に置換可能であると当業者は認識するはずである。Ｄ２Ｅ７  ＶＬ及び／又はＶＨ  ＣＤＲ３領域内では、１から５を越す保存的なアミノ酸の置換が行われないのが好ましい。Ｄ２Ｅ７  ＶＬ及び／又はＶＨ  ＣＤＲ３領域内では、１から３を越す保存的なアミノ酸の置換が行われないのがより好ましい。加えて、ｈＴＮＦαとの結合に重要なアミノ酸の位置では保存的なアミノ酸を置換すべきではない。Ｄ２Ｅ７  ＶＬ  ＣＤＲ３の２及び５位とＤ２Ｅ７  ＶＨ  ＣＤＲ３の１及び７位は、ｈＴＮＦαとの相互作用に重要であると思われ、従って保存的なアミノ酸の置換は前記位置では行わない方が良い（上述のように、Ｄ２Ｅ７  ＶＬ  ＣＤＲ３の位置５でのアラニンの置換は許容できる）（米国特許番号６，０９０，３８２号を参照のこと）。
【００７１】
従って、別の実施形態において、本発明は、単離したヒト抗体又はその抗原結合部分の投与によるＴＮＦα関連疾患の治療方法を提供する。前記抗体又はその抗原結合部分は、下記の特徴を備えることが好ましい。ａ）表面プラズモン共鳴によって測定して１ｘ１０−３ｓ−１以下のＫｏｆｆ速度定数でヒトＴＮＦαから解離する、ｂ）配列番号３のアミノ酸配列を含む、又は１、４、５、７又は８位で単一のアラニン置換により配列番号３を修飾したアミノ酸配列を含む、又は１、３、４、５、６、７、８及び／又は９位で１から５の保存的なアミノ酸置換により前記配列番号３を修飾したアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３領域を有する、ｃ）配列番号４のアミノ酸配列を含む、又は２、３、４、５、６、８、９、１０又１１位で単一のアラニン置換により配列番号４を修飾したアミノ酸配列を含む、又は２、３、４、５、６、８、９、１０、１１及び／又は１２位で１から５の保存的なアミノ酸置換により配列番号４を修飾したアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３領域を有する。
【００７２】
更に好ましくは、前記抗体又はその抗原結合部分は、５ｘ１０−４ｓ−１以下のＫｏｆｆでヒトＴＮＦαから解離する。より更に好ましくは、抗体又はその抗原結合部分は、１ｘ１０−４ｓ−１以下でＴＮＦαから解離する。
【００７３】
更に別の実施形態において、本発明は単離したヒト抗体又はその抗原結合部分の投与によるＴＮＦα関連疾患の治療方法を提供する。前記抗体又はその結合部分は、配列番号３のアミノ酸配列を含む、又は１、４、５、７又は８位での単一のアラニン置換により配列番号３を修飾したアミノ酸配列を含むＣＤＲ３領域を有する軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含み、および配列番号４を含む、又は２、３、４、５、６、８、９、１０又は１１位での単一アラニン置換により配列番号４を修飾したアミノ酸配列を含むＣＤＲ３領域を有する重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を備えることが好ましい。ＬＣＶＲは更に、配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２領域（すなわちＤ２Ｅ７  ＶＬ  ＣＤＲ２）を有し、ＨＣＶＲは更に、配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２領域（すなわち、Ｄ２Ｅ７  ＶＨ  ＣＤＲ２）を有することが好ましい。ＬＣＶＲは更に、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１領域（すなわち、Ｄ２Ｅ７  ＶＬ  ＣＤＲ１）を有し、ＨＣＶＲは配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１領域を有することが更に好ましい。ＶＬのフレームワーク領域は、ＶΚＩヒトの生殖系由来であることが好ましく、更に好ましくはＡ２０ヒト生殖系Ｖｋ遺伝子由来であること、最も好ましくは図１Ａ及び１Ｂの米国特許番号６，０９０，３８２号のＤ２Ｅ７  ＶＬフレームワーク配列由来のものである。ＶＨのフレームワーク領域はＶＨ３ヒト生殖系由来であることが好ましく、更に好ましくはＤＰ−３１ヒト生殖系ＶＨ遺伝子由来であること、最も好ましくは図２Ａ及び２Ｂの米国特許番号６，０９０，３８２号のＤ２Ｅ７  ＶＨフレームワーク配列由来のものである。
【００７４】
故に、別の実施形態において、本発明は、単離したヒト抗体又はその抗原結合部分の投与によるＴＮＦα関連疾患の治療方法を提供する。前記抗体又はその抗原結合部分は、配列番号１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）（すなわち、Ｄ２Ｅ７  ＶＬ）及び配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）（すなわち、Ｄ２Ｅ７  ＶＨ）を含むのが好ましい。特定の実施形態では、前記抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＭ又はＩｇＤ定常領域等の重鎖定常領域を備える。重鎖定常領域は、ＩｇＧ１重鎖定常領域又はＩｇＧ４重鎖定常領域であることが好ましい。また、前記抗体は、κ型の軽鎖定常領域又はλ型の軽鎖定常領域の何れかの軽鎖定常領域を備える。前記抗体はκ型の軽鎖定常領域を備えることが好ましい。或いは、前記抗体部分は、例えば、Ｆａｂフラグメント又は単鎖Ｆｖフラグメントでもあり得る。
【００７５】
更に他の実施形態では、本発明は、抗ＴＮＦα抗体の投与が、単離したヒト抗体又はその抗原結合部分の有益な投与であるＴＮＦα関連疾患の治療方法を提供する。前記抗体又は抗原結合部分は、Ｄ２Ｅ７関連ＶＬ及びＶＨ  ＣＤＲ３領域、例えば抗体、又はその抗原結合部分を含み、配列番号３、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５及び配列番号２６から成る群から選択したアミノ酸配列を備えるＣＤＲ３領域を有する軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）又は配列番号４、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４及び配列番号３５から成る群から選択したアミノ酸配列を備えるＣＤＲ３領域を有する重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を備えることが好ましい。
【００７６】
別の実施形態では、本発明の前記ＴＮＦα阻害薬は、エタネルセプト（ＷＯ９１／０３５５３及びＷＯ０９／４０６４７６に記述）、インフリキシマブ（米国特許番号５，６５６，２７２号に記述）、ＣＤＰ５７１（ヒト化モノクロナールＴＮＦαＩｇＧ４抗体）、ＣＤＰ８７０（ヒト化モノクロナール抗ＴＮＦα抗体フラグメント）、Ｄ２Ｅ７（ヒト抗ＴＮＦｍＡｂ）、可溶性ＴＮＦ受容体Ｉ型、又はＰＥＧ化された可溶性ＴＮＦ受容体ＩＩ型（ＰＥＧｓ  ＴＮＦ―Ｒ１）である。
【００７７】
本発明のＴＮＦα抗体は、修飾を施すことができる。幾つかの実施形態では、ＴＮＦα抗体又はその抗原結合フラグメントは、化学的に修飾されているため、所望の効果を提供できる。例えば、次の参考文献に記述の通りに、本分野で公知のＰＥＧ化反応の何れかにより、本発明の抗体及び抗体フラグメントのＰＥＧ化を行うことができる。Ｆｏｃｕｓ  ｏｎ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒｓ  ３：４−１０（１９９２）、ＥＰ  ０  １５４  ３１６、及びＥＰ  ０  ４０１  ３８４（各参考文献を、参考文献としてその全文を本明細書に援用する）。反応性のポリエチレングリコール分子（又は類似の反応性の水溶性ポリマー）とのアシル化反応又はアルキル化反応によってＰＥＧ化を実行することが好ましい。本発明の抗体及び抗体フラグメントのＰＥＧ化に好ましい水溶性ポリマーは、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）である。本明細書において使用する「ポリエチレングリコール」には、モノ（Ｃｌ−ＣｌＯ）アルコキシポリエチレングリコール又はアリールオキシポリエチレングリコール等、他のタンパク質の誘導体化に使用されているあらゆる形態のＰＥＧが包含されるものとする。
【００７８】
本発明のＰＥＧ化抗体及び抗体フラグメントを調製する方法には、一般に、（ａ）抗体又は抗体フラグメントを１つ以上のＰＥＧ基に付着させる条件の下に、ＰＥＧの反応性のエステル又はアルデヒド誘導体等のポリエチレングリコールを抗体又は抗体フラグメントと反応させ工程と、（ｂ）反応生成物を取得する工程と、が含まれるであろう。公知のパラメータ及び所望の結果に基づいて、最適な反応条件又はアシル化反応を選択することは、当業者にとって当然のことであろう。
【００７９】
一般に、本明細書に記載されたＴＮＦα抗体及び抗体フラグメントの投与によって本発明のＴＮＦα関連疾患を治療するために、ＰＥＧ化抗体及び抗体フラグメントを使用することができる。通常、ＰＥＧ化抗体及び抗体フラグメントは、非ＰＥＧ化抗体及び抗体フラグメントと比較して半減期が増加する。ＰＥＧ化抗体及び抗体フラグメントは、単独で、又は他の医薬組成物と併用して、若しくは組み合わせて使用し得る。
【００８０】
本発明の更に別の実施形態では、ＴＮＦα抗体又はそのフラグメントを変化させることができ、該抗体の定常領域を修飾して、非修飾抗体と比較して少なくとも一つの定常領域媒介性生物学的エフェクター機能を減じる。本発明の抗体を修飾した結果、Ｆｃ受容体との結合が減少するように、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）相互作用に必要な特定の領域で抗体の免疫グロブリンの定常領域セグメントを変異させることができる（例として、Ｃａｎｆｉｅｌｄ，Ｓ．Ｍ．  ａｎｄ  Ｓ．Ｌ．Ｍｏｒｒｉｓｏｎ（１９９１）  Ｊ．  Ｅｘｐ．  Ｍｅｄ．  １７３：１４８３−１４９１、Ｌｕｎｄ，Ｊ．ら（１９９１）  Ｊ．  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １４７：２６５７−２６６２を参照のこと）。オプソニン作用及び食作用及び抗原依存性細胞の細胞毒性等、ＦｃＲ相互作用に依存する他のエフェクター機能を、前記抗体のＦｃＲ結合能力の減少が減ずることもある。
【００８１】
本発明の抗体又は抗体部分を別の機能的分子（例えば、別のペプチド又はタンパク質）に誘導体化又は連結することができる。従って、本発明の抗体又は抗体部分は、免疫付着分子等、本明細書に記述のヒト抗ｈＴＮＦα抗体の誘導体化その他の修飾型が含まれるものとする。例えば、本発明の抗体又は抗体部分は、別の抗体（例えば、二重特異性の抗体すなわちｄｉａｂｏｄｙ）、検出可能な薬剤、細胞毒性薬剤、医薬品、及び／又は別の分子（ストレプトアビジン中心領域又はポリヒスチジンタグ等）の前記抗体又は抗体部分への会合を媒介することができるタンパク質又はペプチドなど、一つ若しくはそれ以上の他の分子体と、（化学的共役、遺伝子融合、非共有結合又はその他によって）機能的に連結させることが可能である。
【００８２】
２つ以上の抗体（同一型又は異型の抗体、例えば、二重特異性抗体を作成するため）を架橋結合することによって、誘導体化した抗体の一つの型が生産される。適切な架橋試薬は、適切スペーサー（例えば、ｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル）によって分離された２つの別個の反応基を有するヘテロ二官能型、又はホモ二官能型（例えば、スベリン酸ジサクシンイミジル）であるものが含まれる。かかるリンカーはＰｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ社、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、ＩＬから入手できる。
【００８３】
本発明の抗体又は抗体部分を誘導体化することができる有益な検出可能な物質には、蛍光化合物がある。代表的な検出可能な蛍光物質には、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート，  ローダミン、５−ジメチルアミン−１−ナフタレンスルホン酸クロライド、フィコエリトリン等がある。抗体はまた、アルカリホスファターゼ、西洋ワサビペルオキシダーゼ、グルコースオキシダーゼ等の検出可能な酵素により誘導体化してもよい。抗体を検出可能な酵素で誘導体化する時に、酵素が検出可能な反応生成物を生成するために使用する追加の試薬を添加することによって検出される。例えば、検出可能な物質である西洋ワサビペルオキシダーゼが存在する時には、過酸化水素及びジアミノベンジジンを添加することによって検出可能な有色の反応生成物が生じる。ビオチンを用いて抗体を誘導体化することも可能で、アビジン又はストレプトアビジンの結合を間接的に測定することにより検出可能である。
【００８４】
本発明の抗体又は抗体部分は、宿主細胞中での免疫グロブリンの軽鎖及び重鎖遺伝子の組換え発現によって調製できる。抗体を組換え技術によって発現するために、宿主細胞中で軽鎖及び重鎖が発現され、好ましくは宿主細胞を培養する培地中（この培地から抗体を回収することができる）に分泌されるように、抗体の免疫グロブリン軽鎖及び重鎖をコードするＤＮＡフラグメントを運ぶ１つ若しくはそれ以上の組換え型発現ベクターを用いて宿主細胞をトランスフェクトする。Ｓａｍｂｒｏｏｋ、Ｆｒｉｔｓｃｈ  ａｎｄ  Ｍａｎｉａｔｉｓ（ｅｄｓ），  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ；Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，  Ｓｅｃｏｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，  Ｎ．Ｙ．，（１９８９）、Ａｕｓｕｂｅｌ，  Ｆ．Ｍ．ら（ｅｄｓ．）  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，  Ｇｒｅｅｎｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ（１９８９）及びＢｏｓｓらによる米国特許番号４，８１６，３９７号に記載されているような標準的な組換えＤＮＡ方法を使用して、抗体の重鎖及び軽鎖遺伝子を取得し、これらの遺伝子を組換え型発現ベクターに組み込み、前記ベクターを宿主細胞に導入する。
【００８５】
Ｄ２Ｅ７又はＤ２Ｅ７関連抗体を発現するために、最初に軽鎖及び重鎖可変領域をコードするＤＮＡフラグメントを獲得する。これらのＤＮＡは、ポリメラーゼ連鎖反応法（ＰＣＲ）を用いた生殖系の軽鎖及び重鎖の可変配列の増幅及び修飾によって獲得できる。ヒトの重鎖及び軽鎖可変領域の遺伝子の生殖系ＤＮＡ配列は、本分野において公知である（例として、「Ｖｂａｓｅ」ヒト生殖系配列データベースを参照のこと。また、Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．，ら（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，  Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，  ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．９１−３２４２、Ｔｏｍｌｉｎｓｏｎ，  Ｉ．Ｍ．，ら（１９９２）  “Ｔｈｅ  Ｒｅｐｅｒｔｏｉｒｅ  ｏｆ  Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｒｍｌｉｎｅ  ＶＨ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  Ｒｅｖｅａｌｓ  ａｂｏｕｔ  Ｆｉｆｔｙ  Ｇｒｏｕｐｓ  Ｏｆ  ＶＨ  Ｓｅｇｍｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ  Ｈｙｐｅｒｖａｒｉａｂｌｅ  ＬＯＯＰＳ  ”Ｊ．  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ．  ２２７：７７６−７９８、及びＣｏｘ，Ｊ．Ｐ．Ｌ．ら（１９９４）  “Ａ  Ｄｉｒｅｃｔｏｒｙ  ｏｆ  Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｒｍ−ｌｉｎｅ  Ｖ７８  Ｓｅｇｍｅｎｔｓ  Ｒｅｖｅａｌｓ  ａ  Ｓｔｒｏｎｇ  Ｂｉａｓ  ｉｎ  ｔｈｅｉｒ  Ｕｓａｇｅ”  Ｅｕｒ．  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ２４：８２７−８３６。各内容は参照により本明細書に明示的に取り込まれる。）。Ｄ２Ｅ７又はＤ２Ｅ７関連抗体の重鎖可変領域をコードするＤＮＡフラグメントを獲得するために、ヒト生殖系ＶＨ遺伝子のＶＨ３ファミリーの一要素を標準のＰＣＲによって増幅する。ＤＰ−３１  ＶＨ生殖系の配列を増幅するのが最も好ましい。Ｄ２Ｅ７又はＤ２Ｅ７関連抗体の軽鎖可変領域をコードするＤＮＡフラグメントを獲得するために、ＶΚＩファミリーの一要素を標準のＰＣＲによって増幅する。Ａ２０  ＶＬ生殖系の配列を増幅するのが最も好ましい。標準の方法を用いて、上記の参考文献中に公開されたヌクレオチド配列に基づいて、ＤＰ−３１生殖系ＶＨ及びＡ２０生殖系ＶＬ配列増幅の使用に相応しいＰＣＲプライマーの設計が可能である。
【００８６】
生殖系ＶＨ及びＶＬフラグメントを一旦獲得すると、本明細書に示されたＤ２Ｅ７又はＤ２Ｅ７関連アミノ酸配列をコードするように、これらの配列を変異させることができる。最初に、生殖系ＶＨ及びＶＬ  ＤＮＡ配列によりコードされたアミノ酸配列を、Ｄ２Ｅ７又はＤ２Ｅ７関連ＶＨ及びＶＬアミノ酸配列と比較し、生殖系と異なるアミノ酸残基を、Ｄ２Ｅ７又はＤ２Ｅ７関連配列中において同定する。次に、どのヌクレオチドを変化させるべきかを決定するために遺伝コードを用いて、前記変異させた生殖系配列がＤ２Ｅ７又はＤ２Ｅ７関連アミノ酸配列をコードするように、生殖系ＤＮＡ配列の適宜のヌクレオチドを変異させる。ＰＣＲ媒介変異誘発（前記ＰＣＲ生成物が変異を含むように、変異させたヌクレオチドをＰＣＲプライマーに組み込む）又は部位特異的変異誘発等の標準的な方法により、生殖系配列の変異誘発を実行する。
【００８７】
Ｄ２Ｅ７又はＤ２Ｅ７関連ＶＨ及びＶＬ部分をコードするＤＮＡフラグメントを一旦獲得すると（上記のように、生殖系ＶＨ及びＶＬ遺伝子の増幅と変異誘発により）、例えば、可変領域の遺伝子を完全長抗体鎖遺伝子、Ｆａｂフラグメント遺伝子、又はｓｃＦｖ遺伝子に変換する等の、標準的な組換えＤＮＡ技術によって、これらのＤＮＡフラグメントの工作が更に可能となる。これらの工作では、抗体定常領域又は柔軟性に富むリンカー等の、別のタンパク質をコードする別のＤＮＡフラグメントにＶＬ又はＶＨをコードするＤＮＡフラグメントを作動可能に連結する。本明細書で使用する「作動可能に連結」という用語は、２個のＤＮＡフラグメントによりコードされるアミノ酸配列がインフレームの状態に残存するように、２個のＤＮＡフラグメントを連結することをいう。
【００８８】
ＶＨをコードするＤＮＡを、重鎖定常領域（ＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３）をコードする別のＤＮＡ分子に作動可能に連結することによって、ＶＨ領域をコードする単離したＤＮＡを完全長の重鎖遺伝子へと変換することができる。ヒトの重鎖定常領域遺伝子の配列は、当該技術分野で公知であり（例として、Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．，ら（１９９１）  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，  Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，  Ｕ．Ｓ．  Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，  ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．９１−３２４２を参照のこと）、これらの領域を包含するＤＮＡフラグメントは標準的なＰＣＲ増幅によって取得することが可能である。重鎖定常領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＭ又はＩｇＤ定常領域であり得るが、ＩｇＧ１又はＩｇＧ４定常領域が最も好ましい。Ｆａｂフラグメント重鎖遺伝子に関して、ＶＨをコードするＤＮＡを、重鎖ＣＨ１定常領域のみをコードする別のＤＮＡ分子に作動可能に連結することが可能である。
【００８９】
ＶＬ領域をコードする単離したＤＮＡを、軽鎖定常領域（ＣＬ）をコードする別のＤＮＡ分子に作動可能に連結することにより、完全長の軽鎖遺伝子に変換できる（Ｆａｂ軽鎖遺伝子も同様）。ヒト軽鎖定常領域遺伝子の配列は当該技術分野で公知であり（Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．，ら（１９９１）  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，  Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，  Ｕ．Ｓ．  Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．９１−３２４２を参照のこと）、これらの領域を包含するＤＮＡフラグメントは標準的なＰＣＲ増幅によって取得することが可能である。軽鎖定常領域はκ又はλ定常領域であり得るが、κ定常領域であることが最も好ましい。
【００９０】
ｓｃＦｖ遺伝子を作成するために、ＶＨ−及びＶＬをコードするＤＮＡフラグメントを、柔軟性のあるリンカーをコードする別のフラグメント（例えば、アミノ酸配列（ＧＬＹ４−Ｓｅｒ）３をコードする）に作動可能に連結し、柔軟性のあるリンカーにより連結されたＶＬ及びＶＨ領域を用いて、ＶＨ及びＶＬ配列を連続した単鎖タンパク質として発現することが可能である（例として、Ｂｉｒｄら（１９８８）  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２：４２３−４２６、Ｈｕｓｔｏｎら（１９８８）  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ８５：５８７９−５８８３、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら、Ｎａｔｕｒｅ（１９９０）３４８：５５２−５５４を参照のこと）。
【００９１】
本発明の抗体又は抗体部分を発現するために、上記の通りに獲得した部分長又は完全長の軽鎖及び重鎖をコードするＤＮＡを発現ベクターに挿入し、遺伝子を転写及び翻訳調節配列と作動可能に連結する。本明細書において「作動可能に連結」とは、ベクター内の転写及び翻訳調節配列が抗体遺伝子の転写及び翻訳を制御するという所期の機能を発揮するように、抗体遺伝子をベクターに連結することをいう。発現ベクター及び発現調節配列は、使用した発現宿主細胞と適合するように選択する。抗体軽鎖遺伝子及び抗体重鎖遺伝子は別個のベクターに挿入してもよいが、両遺伝子を同一の発現ベクターに挿入するのがより一般的である。抗体遺伝子は標準的な方法によって発現ベクターに挿入する（例えば、抗体遺伝子フラグメント及びベクター上への相補的な制限酵素切断部位の連結、又は制限酵素切断部位が存在しない場合には平滑断端連結）。Ｄ２Ｅ７又はＤ２Ｅ７関連軽鎖又は重鎖配列の挿入前に、発現ベクターは既に抗体定常領域配列を担持していることがある。例えば、完全長の抗体遺伝子のＤ２Ｅ７又はＤ２Ｅ７関連ＶＨ及びＶＬ配列を変換する方法の一つは、重鎖定常領域及び軽鎖定常領域を既にコードしている発現ベクターにそれらを挿入して、ＶＨセグメントが前記ベクター内でＣＨセグメント（複数の場合も有り）に作動可能に連結され、ＶＬセグメントが前記ベクター内でＣＬセグメントに作動可能に連結するようにすることである。これに加えて又はこれに代えて、前記組換え発現ベクターは、宿主細胞の抗体鎖の分泌を促進するシグナルペプチドをコードすることができる。前記抗体鎖遺伝子は、シグナルペプチドが抗体鎖遺伝子のアミノ末端とインフレームに連結されるように、ベクターにクローン化することができる。前記シグナルペプチドは、免疫グロブリンシグナルペプチド又は異種構造のシグナルペプチド（すなわち、非免疫グロブリンタンパク質からのシグナルペプチド）であり得る。
【００９２】
抗体鎖遺伝子に加えて、本発明の組換え発現ベクターは、宿主細胞中の前記抗体鎖遺伝子の発現を調節する制御配列を担持する。「制御配列」という用語は、プロモーター、エンハンサー及び抗体鎖遺伝子の転写又は翻訳を調節するその他の発現調節要素（例えば、ポリアデニル化シグナル）を含む。前記制御配列は、例えば、Ｇｏｅｄｄｅｌ；Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｏｍｏｌｏｇｙ  １８５，  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，  Ｃａ（１９９０）に記載されている。制御配列の選択を含む発現ベクターの設計は、形質転換される宿主細胞の選択、所望のタンパク質発現のレベル等の要因により異なることを当業者は理解するであろう。哺乳類の宿主細胞発現に好ましい制御配列は、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）（ＣＭＶプロモーター／エンハンサー等）、シミアンウィルス４０（ＳＶ４０）（ＳＶ４０プロモーター／エンハンサー等）、アデノウイルス（例えば、アデノウイルス主要後期プロモーター（ＡｄＭＬＰ））及びポリオーマに由来するプロモーター及び／又はエンハンサーなど、哺乳類の細胞中においてタンパク質を高レベルで発現させるウイルス成分を含む。ウイルスの調節成分及びその配列の詳細な記述は、例えば、Ｓｔｉｎｓｋｉによる米国特許第５，１６８，０６２号、Ｂｅｌｌらによる米国特許第４，５１０，２４５号及びＳｃｈａｆｆｎｅｒらによる米国特許第４，９６８，６１５号を参照されたい。
【００９３】
本発明の組換え発現ベクターは、抗体鎖遺伝子及び制御配列以外に、宿主細胞中においてベクターの複製を制御する配列（例えば、複製起点）や選択可能なマーカー遺伝子等、追加の配列を担持してもよい。選択なマーカー遺伝子はベクターが導入された宿主細胞の選択を容易にする（例えば、Ａｘｅｌらによる米国第４，３９９，２１６号、第４，６３４，６６５号及び第５，１７９，０１７号を参照すること）。例えば、前記選択可能なマーカー遺伝子は、Ｇ４１８、ハイグロマイシン又はメトトレキセート等の薬物耐性を、ベクターを導入した宿主細胞に与えるのが通例である。好ましい選択可能なマーカー遺伝子は、ジヒドロ葉酸還元酵素（ＤＨＦＲ）遺伝子（メトトレキセート選択／増幅によるＤＨＦＲ−宿主細胞使用）及びネオ遺伝子（Ｇ４１８選択用）がある。
【００９４】
軽鎖及び重鎖を発現させるためには、重鎖及び軽鎖をコードする発現ベクターを標準的な技術によって宿主細胞にトランスフェクトする。様々な形態の「トランスフェクト」という用語には、外来ＤＮＡを原核生物又は真核生物の宿主細胞中に導入するために一般的に使用されるエレクトロポーレーション、リン酸カルシウム沈殿及びＤＥＡＥ−デキストラントランスフェクション等の様々な技術がある。原核生物又は真核生物の宿主細胞の何れにおいても、本発明の抗体を発現させることが理論的には可能であるが、原核生物よりも真核生物、特に哺乳類の細胞の方が正確に折り畳まれた免疫学的に活性な抗体を組立て及び分泌する可能性が高いため、真核生物、最も好ましくは哺乳類の宿主細胞中で抗体を発現させるのが最適である。原核生物による抗体遺伝子の発現は、活性な抗体を高収率で産生させるには効果的でないという報告がある（Ｂｏｓｓ，  Ｍ．Ａ．  ａｎｄ  Ｗｏｏｄ，  Ｃ．Ｒ．（１９８５）  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｔｏｄａｙ  ６：１２−１３）。
【００９５】
本発明の組換え抗体を発現させるのに好ましい哺乳類の宿主細胞は、チャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ細胞）（Ｕｒｌａｕｂ  ａｎｄ  Ｃｈａｓｉｎ，（１９８０）  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ７７：４２１６−４２２０に記載され、Ｒ．Ｊ．Ｋａｕｆｍａｎ  ａｎｄ  Ｐ．Ａ．Ｓｈａｒｐ（１９８２）  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  １５９：６０１−６２１に記述のＤＨＦＲ選択マーカーと共に使用されるｄｈｆｒ−ＣＨＯ細胞を含む）、ＮＳ０骨髄腫細胞、ＣＯＳ細胞及びＳＰ２細胞である。抗体遺伝子をコードする組換え発現ベクターが哺乳類の宿主細胞に導入されれば、宿主細胞中で抗体が発現するのに充分な期間、更に好ましくは前記抗体が宿主細胞を増殖する培地中に分泌されるのに充分な期間、宿主細胞を培養することによって前記抗体が産生される。抗体は、標準のタンパク質精製方法を用いて前記培地から回収できる。
【００９６】
宿主細胞はまた、Ｆａｂフラグメント又はｓｃＦｖ分子等の、無傷の抗体部分の生産のために使用することができる。上記操作に対する変法も、本発明の範囲に属するものと理解される。例えば、本発明の抗体の軽鎖又は重鎖の何れか（両方ではない）をコードするＤＮＡを宿主細胞にトランスフェクトすることが望ましい。ｈＴＮＦαへの結合に不要な軽鎖及び重鎖の一方又は両方をコードするＤＮＡの一部又は全部を除去するために、組換えＤＮＡ技術を使用してもよい。前記末端切断したＤＮＡ分子から発現された分子も、本発明の抗体に包含される。更に、標準的な化学的架橋法により本発明の抗体を第二の抗体と架橋することによって、一つの重鎖と一つの軽鎖が本発明の抗体であり、別の重鎖及び軽鎖がｈＴＮＦα以外の抗原に特異的である二機能抗体を生産し得る。
【００９７】
本発明の抗体又はその抗原部分の組換え発現に好ましいシステムにおいて、抗体重鎖及び抗体軽鎖の両方をコードする組換え発現ベクターをリン酸カルシウム媒介トランスフェクションによりｄｈｆｒ−ＣＨＯ細胞に導入する。前記組換え発現ベクター内で、抗体の重鎖及び軽鎖の遺伝子をそれぞれ、高レベルの遺伝子転写を誘導するＣＭＶエンハンサー／ＡｄＭＬＰプロモーター調節要素に作動可能に連結する。前記組換え発現ベクターはまたＤＨＦＲ遺伝子を担持しており、これによってメトトレキセート選択／増幅を用いて、ベクターをトランスフェクトしたＣＨＯ細胞を選択することが可能となる。選択された形質転換体宿主細胞は抗体の重鎖及び軽鎖を発現させるよう培養され、培地から無傷の抗体を回収する。標準的な分子生物学技術を用いて組換え発現ベクターを作製して宿主細胞にトランスフェクトし、形質転換体のために選択し、宿主細胞を培養して培地から抗体を回収する。
【００９８】
本発明の組換えヒト抗体は、本明細書に開示されているＤ２Ｅ７若しくはその抗原結合部分、又はＤ２Ｅ７関連抗体に加え、ヒトリンパ球由来のｍＲＮＡを調製したヒトＶＬ及びＶＨ  ｃＤＮＡを用いて調製した組換えコンビナトリアル抗体ライブラリ（好ましくはｓｃＦｖファージディスプレイライブラリ）をスクリーニングすることにより単離できる。このようなライブラリを調製及びスクリーニングする方法は、当該技術分野で公知である。ファージディスプレイライブラリ作製用の市販キット（例えば、Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  Ｐｈａｇｅ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｓｙｓｔｅｍ、カタログＮｏ．２７−９４００−０１、およびＳｔｒａｔａｇｅｎｅ  ＳｕｒｆＺＡＰＴＭ  ファージディスプレイキット、カタログＮｏ．２４０６１２）に加え、抗体ディスプレイライブラリの作製及びスクリーニングでの使用に特に適している方法及び試薬の例は、Ｌａｄｎｅｒらの米国特許第５，２２３，４０９号、ＫａｎｇらのＰＣＴ公開番号ＷＯ９２／１８６１９、ＤｏｗｅｒらのＰＣＴ公開番号ＷＯ９１／１７２７１、ＷｉｎｔｅｒらのＰＣＴ公開番号ＷＯ９２／２０７９１、ＭａｒｋｌａｎｄらのＰＣＴ公開番号ＷＯ９２／１５６７９、ＢｒｅｉｔｌｉｎｇらのＰＣＴ公開番号ＷＯ９３／０１２８８、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙらのＰＣＴ公開番号ＷＯ９２／０１０４７、ＧａｒｒａｒｄらのＰＣＴ公開番号ＷＯ９２／０９６９０、Ｆｕｃｈｓら（１９９１）Ｂｉｏｌｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ９：１３７０−１３７２、Ｈａｙら（１９９２）  Ｈｕｍ  Ａｎｔｉｂｏｄ  Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ  ３：８１−８５、Ｈｕｓｅら（１９８９）  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４６：１２７５−１２８１、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら、Ｎａｔｕｒｅ（１９９０）３４８：５５２−５５４、Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓら（１９９３）  ＥＭＢ０  Ｊ  １２：７２５−７３４、Ｈａｗｋｉｎｓら（１９９２）Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ２２６：８８９−８９６、Ｃｌａｃｋｓｏｎら（１９９１）  Ｎａｔｕｒｅ  ３５２：６２４−６２８、Ｇｒａｍら（１９９２）  ＰＮＡＳ  ８９：３５７６−３５８０、Ｇａｒｒａｒｄら（１９９１）  Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ９：１３７３−１３７７、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍら（１９９１）  Ｎｕｃ  Ａｃｉｄ  Ｒｅｓ  １９：４１３３−４１３７、及びＢａｒｂａｓら（１９９１）ＰＮＡＳ  ８８：７９７８−７９８２で見られる。ｈＴＮＦαに対する親和性が高く且つ脱離速度定数が小さなヒト抗体を単離する方法は、米国特許番号６，０９０，３８２号、６，２５８，５６２号及び６，５０９，０１５号に記述があり、それぞれを本明細書に参考文献として本明細書に援用する。
【００９９】
ＩＩ．本発明のＴＮＦα阻害薬の使用
一つの実施形態において、本発明は、ＴＮＦα活性が有害であるＴＮＦα関連疾患に罹患した患者においてＴＮＦα活性を阻害する方法を提供する。一つの実施形態において、前記ＴＮＦα阻害薬はＤ２Ｅ７であり、Ｄ２Ｅ７はＨＵＭＥＲＡ（登録商標）（アダリムマブ）とも呼ばれる。
【０１００】
ＴＮＦαは、敗血症、感染症、自己免疫疾患、移植拒絶及び移植片対宿主病を含む多種多様なＴＮＦα関連疾患の病理生理学と関係がある（例えば、Ｍｏｅｌｌｅｒ，  Ａ．，ら（１９９０）Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ２：１６２−１６９、Ｍｏｅｌｌｅｒらによる米国特許番号５，２３１，０２４号、Ｍｏｅｌｌｅｒ，  Ａ．らによる欧州特許公開番号２６０  ６１０  Ｂ１号、Ｖａｓｉｌｌｉ，  Ｐ．（１９９２）Ａｎｎｕ．  Ｒｅｖ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １０：４１１−４５２、ｔｒａｃｅｙ，  Ｋ．Ｊ．  ａｎｄ  Ｃｅｒａｍｉ，  Ａ．（１９９４）  Ａｎｎｕ．  Ｒｅｖ．  Ｍｅｄ．  ４５：４９１−５０３を参照のこと）。本発明は、ＴＮＦα関連疾患に罹患した患者においてＴＮＦα活性が阻害されるように、患者に抗体、抗体部分、又は他のＴＮＦα阻害薬を投与することを含む、ＴＮＦα関連疾患に罹患した患者においてＴＮＦα活性を阻害する方法を提供する。本発明は、血管炎患者のＴＮＦα活性を阻害又は減少させるように本発明の抗体、又は抗体部分、又は他のＴＮＦα阻害薬を前記患者に投与することを含む、血管炎患者のＴＮＦα活性を阻害又は減少させる方法も提供する。ＴＮＦαはヒトＴＮＦαとすることが好ましく、患者はヒトであることが好ましい。或いは、前記患者は、本発明の抗体が交差反応するＴＮＦαを発現する哺乳類でも良い。また更に、前記患者は（例えば、ｈＴＮＦαの投与又はｈＴＮＦα導入遺伝子の発現によって）ｈＴＮＦαが導入された哺乳類とすることができる。本発明の抗体は治療目的でヒト患者に投与できる（下記に詳述）。
【０１０１】
さらに、獣医学的用途のために又はヒトの疾患の動物モデルとして、抗体が交差反応するＴＮＦαを発現するヒト以外の哺乳類（例えば、霊長類、ブタ又はマウス）に本発明の抗体を投与することが可能である。後者に関しては、前記動物モデルは、本発明の抗体の治療的な有効性を評価するのに有益である（例えば、投与量及び投与期間の試験）。脊椎関節症の研究に使用される動物モデルの例には、ａｎｋ／ａｎｋトランスジェニックマウス、ＨＬＡ−Ｂ２７トランスジェニックラットがある（Ｔａｕｒｏｇら（１９９８）Ｔｈｅ  Ｓｐｏｎｄｙｌａｒｔｈｒｉｔｉｄｅｓ．  Ｏｘｆｏｒｄ：Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓを参照のこと）。
【０１０２】
肝疾患治療薬剤の治療的な有効性を評価するために使用される動物モデルの例には、チンパンジーＣ型肝炎ウイルスモデルがある（Ｓｈｉｍｉｚｕら（１９９０）  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ８７：６４４１を参照のこと）。皮膚及び爪疾患の研究に使用される動物モデルの例には、例えば、重症複合免疫不全（ＳＣＩＤ）マウスモデル（乾癬）、Ｓｍｉｔｈ  ｌｉｎｅ（ＳＬ）ニワトリ及び色素脱失マウス（白斑）がある（Ｎｉｃｋｏｌｏｆｆ（２０００）  Ｉｎｖｅｓｔｉｇ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ  Ｓｙｍｐ  Ｐｒｏｃ．  ５：６７、Ａｕｓｔｉｎら（１９９５）Ａｍ  Ｊ  Ｐａｔｈｏｌ．  １４６：１５２９、Ｌｅｒｎｅｒら（１９８６）Ｊ  Ｉｎｖｅｓｔ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ．８７：２９９を参照のこと）。
【０１０３】
代謝異常の治療に対するＴＮＦα抗体の有効性を評価するための動物モデルの例には、ＮＯＤトランスジェニックマウス、アキタマウス、ＮＳＹトランスジェニックマウス及びｏｂ／ｏｂマウスがある（Ｂａｅｄｅｒら（１９９２）  Ｃｌｉｎ  Ｅｘｐ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ８９：１７４、Ｈａｓｅｙａｍａら（２００２）  Ｔｏｈｏｋｕ．  Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ．１９８：２３３、Ｍａｋｉｎｏら（１９８０）Ｅｘｐ．  Ａｎｉｍ．  ２９：１、Ｋｏｌｂ（１９８７）  Ｄｉａｂｅｔｅｓ／Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  ３：７５１、Ｈａｍａｄａら（２００１）  Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ．  ５０：１２８２、Ｃｏｌｅｍａｎ，（１９７８）Ｄｉａｂｅｔｏｌｏｇｉａ，  １４：１４１、Ｂａｉｌｅｙら（１９８２）Ｉｎｔ．  Ｊ．  Ｏｂｅｓｉｔｙ  ６：１１を参照のこと）。血管炎の研究に使用される動物モデルの例には、マウスＨＳＶモデル（ベーチェット病）、Ｌ．ｃａｓｅｉマウスモデル（川崎病）及びＡＮＣＡマウスモデル（川崎病）がある。血管炎の他のモデルには、ＭｃＨ５−ｌｐｒ／ｌｐｒ系（Ｎｏｓｅ，Ｍ．，ら（１９９６）Ａｍ．  Ｊ．  Ｐａｔｈ．  １４９：１７６３）及びＳＣＧ／Ｋｊ系のマウス（Ｋｉｎｊｏｈら（１９９３）  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．，  ＵＳＡ  ９０：３４１３）がある。これらのマウス系は、半月体性糸球体腎炎及び脾臓、胃、心臓、子宮及び卵巣の小動脈及び細動脈の壊死性血管炎を自然発症する。これらの動物は、ミエロペルオキシダーゼ（ＭＰＯ）と反応する高ガンマグロブリン血症及びＡＮＣＡ自己抗体を発症する。さらに、ラットにヒトＭＰＯの免疫処置を行うと、ＡＮＣＡ関連の壊死性半月体性糸球体腎炎を発症する（Ｂｒｏｕｗｅｒ，  Ｅ．，ら（１９９３）Ｊ．  Ｅｘｐ．  Ｍｅｄ．  １７７：９０５）。
【０１０４】
特発性間質性肺炎及び慢性閉塞性気道疾患の研究に使用する動物モデルの例には、卵白アルブミン（ＯＶＡ）誘発アレルギー性喘息マウス及び喫煙により誘発された慢性閉塞性肺疾患マウスがある（Ｈｅｓｓｅｌ，ＥＭ．，ら（１９９５）Ｅｕｒ  Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．  ２９３：４０１、Ｋｅａｓｔ  Ｄ，ら（１９８１）Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．  １３５：２４９を参照のこと）。
【０１０５】
再狭窄を含む冠動脈疾患の研究に一般的に使用される動物モデルには、ラット又はマウスの頚動脈結紮モデル及び頚動脈傷害モデルがある（Ｆｅｒｎｓら（１９９１）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５３：１１２９、Ｃｌｏｗｅｓら（１９８３）Ｌａｂ．  Ｉｎｖｅｓｔ．  ４９：２０８、Ｌｉｎｄｎｅｒら（１９９３）Ｃｉｒｃ  Ｒｅｓ．  ７３：７９２）。頚動脈結紮モデルの場合、頚動脈の遠位の分岐に近接する血管を結紮すると動脈血流が乱される。Ｃｌｏｗｅｓらの記述通りに、頚動脈損傷モデルは、外頚動脈を通して導入したバルーンカテーテルが管腔内を通過することによって総頚動脈の内皮が裸出されるように作製する。平滑筋細胞が収縮するため２週間で頚動脈は著しく狭窄し、２〜１２週間で内膜の厚さが２倍になり、そのため管腔のサイズが狭まる。本発明のＴＮＦα抗体が有する治療作用の可能性を、ヒトの再狭窄の予防及び治療において決定するために、これらのモデルは何れも使用可能である。
【０１０６】
貧血の研究に使用される動物モデルの例には、ペプチドグリカン−多糖体ポリマーを接種したラットがある（Ｃｏｃｃｉａら（２００１）Ｅｘｐ  Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ．  ２９：１２０１−１２０９）。疼痛の研究に使用される動物モデルの例は当該技術分野で周知であり、ラットの坐骨神経結紮モデル及びラットの脊髄神経分節結紮モデルがある（Ｂｅｎｎｅｔｔ  ａｎｄ  Ｚｉｅ（１９８８）Ｐａｉｎ．  ３３：８７−１０７、Ｋｉｍ  ａｎｄ  Ｃｈｕｎｇ（１９９２）Ｐａｉｎ  ５０：３５５−３６３を参照のこと）。
【０１０７】
本明細書において使用される「ＴＮＦα活性が有害であるＴＮＦα関連疾患」という用語は、前記疾患患者においてＴＮＦαの存在が明白である、又は前記疾患の病理生理学に原因がある、若しくは前記疾患の悪化の一因である要因と疑われるＴＮＦα関連疾患及びその他の疾患を含む（例えば、若年性関節リウマチ）。従って、ＴＮＦα活性が有害であるＴＮＦα関連疾患は、ＴＮＦα活性を抑制することにより、前記疾患の症状及び／又は進行の軽減が期待される。例えば、疾患患者の体液中のＴＮＦα濃度が上昇することにより前記疾患を立証し（例えば、患者の血清、血漿、滑液等のＴＮＦα濃度の上昇）、例えば、上述のように抗ＴＮＦα抗体を用いて検出することができる。ＴＮＦα活性が有害であるＴＮＦα関連疾患の治療における本発明の抗体、抗体部分及び他のＴＮＦα阻害薬の使用について、下記に詳述する。一部の実施形態では、第ＩＩＩの部に記載されているように、本発明の抗体、抗体部分又は他のＴＮＦα阻害薬を別の治療薬と組み合わせて患者に投与する。
【０１０８】
Ａ．脊椎関節症
ＴＮＦαは、脊椎関節症等の炎症性疾患を含む様々な疾患の病理生理と関係がある（例えば、Ｍｏｅｌｌｅｒ，  Ａ．，ら（１９９０）Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ２：１６２−１６９、Ｍｏｅｌｌｅｒらによる米国特許第５，２３１，０２４号、Ｍｏｅｌｌｅｒ，Ａによる欧州特許公開番号２６０  ６１０  Ｂ１）。本発明は、脊椎関節症患者のＴＮＦα活性が阻害されるように抗体、抗体の一部又は他のＴＮＦα阻害剤を患者に投与することを含む、脊椎関節症患者のＴＮＦα活性を阻害する方法を提供する。一つの実施形態では、本発明は、脊椎関節症（ｓｐｏｎｄｙｌｏａｒｔｈｏｐａｔｈｙ）を治療する方法を提供する。
【０１０９】
本明細書において使用される「脊椎関節症」という用語は、脊椎関節を冒す幾つかの疾病のうち任意の一つを示すために使用され、本疾病は臨床的、放射線学的、組織学的に共通の特徴を有する。数多くの脊椎関節症は遺伝的な特性が共通であり、ＨＬＡ−Ｂ２７対立遺伝子に関係がある。一つの実施形態では、用語の脊椎関節症は、強直性脊椎炎を除く脊椎関節を冒す幾つかの疾病の何れか一つを示すために使用されており、前記疾病は臨床的、放射線学的及び組織学的に共通の特徴を有する。脊椎関節症の例には、強直性脊椎炎、乾癬性関節炎／脊椎炎、腸疾患に基づく関節炎、反応性関節炎又はライター症候群、及び未分化型脊椎関節症（ｕｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅｄ  ｓｐｏｎｄｙｌｏａｒｔｈｒｏｐａｔｈｙ）がある。
【０１１０】
本発明のＴＮＦα抗体は、脊椎関節症を発症するリスクがある患者の治療に使用できる。脊椎関節症のリスクがある患者の例には、関節炎に罹患するヒトが含まれる。関節リウマチ等、関節炎の他の形と脊椎関節症を関連付けることができる。一つの実施形態では、関節リウマチを併発する脊椎関節症患者の治療に本発明の抗体を使用する。本発明のＴＮＦα抗体で治療できる脊椎関節症の例を下記に示す。
【０１１１】
１．強直性脊椎炎（ＡＳ）
腫瘍壊死因子は、強直性脊椎炎の病理生理学と関係がある（Ｖｅｒｊａｎｓら（１９９１）Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ．  ３４（４）：４８６、Ｖｅｒｊａｎｓら（１９９４）  Ｃｌｉｎ  Ｅｘｐ  ＩＮＡＭＵＮＯＬ．  ９７（１）：４５、Ｋａｉｊｔｚｅｌら（１９９９）Ｈｕｍ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ６０（２）：１４０を参照のこと）。強直性脊椎炎（ＡＳ）は１つ若しくはそれ以上の椎骨の炎症を生じる炎症性疾患である。ＡＳは、脊椎の椎骨と仙腸関節の間の関節及び脊椎骨盤間の関節を含む、軸骨格及び／又は末梢関節を冒す慢性炎症性疾患である。ＡＳにより、最終的に、罹患した椎骨は癒着又は融合する。ＡＳを含む脊椎関節症は、乾癬性関節炎（ＰｓＡ）及び／又は潰瘍性大腸炎及びクローン病を含む炎症性腸疾患（ＩＢＤ）を伴って発症することがある。
【０１１２】
ＡＳの早期徴候は、ＣＴスキャン及びＭＲＩスキャンを含む放射線検査で判断できる。ＡＳの早期徴候には陰嚢炎及び仙骨関節の変化があることが多く、これは、肋軟骨下の骨の皮質境界が不明瞭となり、続いてびらん及び硬化が起こることによって証明される。疲労もまた、ＡＳの一般的な症状として認められている（Ｄｕｆｆｙら（２００２）ＡＣＲ  ６６ｔｈ  Ａｎｎｕａｌ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｍｅｅｔｉｎｇ  Ａｂｓｔｒａｃｔ）。従って、本発明の抗体又はその抗原結合フラグメントをＡＳの治療に使用できる。一つの実施形態では、本発明のＴＮＦα抗体又はその抗原結合フラグメントを使用して、ＡＳを含むＩＢＤを伴う脊椎関節症を治療する。ＡＳの治療は、アスピリン又はインドメタシン等の非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤｓ）で行うことが多い。従って、本発明のＴＮＦα抗体は、強直性脊椎炎を通常伴う炎症及び疼痛を軽減するため、一般的に使用される薬と組み合わせて投与されることもある。
【０１１３】
２．乾癬性関節炎
腫瘍壊死因子は、乾癬性関節炎の病理生理学に関係がある（Ｐａｒｔｓｃｈら（１９９８）Ａｎｎ  Ｒｈｅｕｍ  Ｄｉｓ．  ５７：６９１、Ｒｉｔｃｈｌｉｎら（１９９８）Ｊ  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．  ２５：１５４４）。本明細書に言及した通りに、乾癬性関節炎（ＰｓＡ）又は皮膚に発症した乾癬とは、乾癬を伴う慢性炎症性関節炎をいう。乾癬は一般的な慢性の皮膚疾患で、身体に赤斑を生じる。乾癬に罹患した２０人に約１人は、皮膚症状と同時に関節炎を発症し、乾癬は約７５％において関節炎に移行する。ＰｓＡは、軽度から重度の関節炎まで様々な形で現れ、関節炎は通常、指及び脊椎を冒す。脊椎が冒される場合には、その症状は上記の強直性脊椎炎の症状と類似する。本発明のＴＮＦα抗体及びその抗原結合フラグメントを使用してＰｓＡを治療できる。
【０１１４】
ＰｓＡは破壊性関節炎を併発することがある。破壊性関節炎とは、骨に過度のびらんが生じ、その結果、びらんによる変形が全体的に起こり関節を破壊する特徴を持つ疾患である。一つの実施形態では、本発明のＴＮＦα抗体又はその抗原結合フラグメントを使用して破壊性関節炎を治療できる。
【０１１５】
３．反応性関節炎／ライター症候群
腫瘍壊死因子は反応性関節炎の病理生理学と関係があり、ライター症候群とも呼ばれる（Ｂｒａｕｎら（１９９９）  Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ．  ４２（１０）：２０３９）。反応性関節炎（ＲｅＡ）は、身体のいずれかに感染を併発する関節炎で、続いて腸感染又は泌尿生殖器の感染を発症することが多い。ＲｅＡの特徴は、関節の炎症（関節炎）、尿道炎、結膜炎、皮膚及び粘膜の損傷等、特定の臨床症状であることが多い。また、ＲｅＡは、クラミジア、カンピロバクター、サルモネラ、又はエルシニアを含む性行為感染症又は赤痢感染を伴う感染症の後に発症することがある。従って、本発明のＴＮＦα抗体又はその抗原結合フラグメントを使用してＲｅＡを治療することができる。
【０１１６】
４．未分化型脊椎関節症
一つの実施形態では、本発明のＴＮＦα抗体は、未分化型脊椎関節症（Ｚｅｉｄｌｅｒら（１９９２）Ｒｈｅｕｍ  Ｄｉｓ  Ｃｌｉｎ  Ｎｏｒｔｈ  Ａｍ．  １８：１８７を参照のこと）患者を治療するために使用される。未分化型脊椎関節症の説明に使用される他の用語には、血清陰性の少関節型若年性関節リウマチ及び未分化の少関節型若年性関節リウマチがある。本明細書で使用する未分化型脊椎関節症とは、脊椎関節症に伴う症状の幾つかのみが患者に現れる疾患をいう。この疾患は、通常、ＩＢＤ、乾癬、又は典型的なＡＳ若しくはライター症候群の症状のない若年成人で観察される。未分化型脊椎関節症はＡＳの初期徴候であると考えられる場合もある。一つの実施形態では、本発明のＴＮＦα抗体又はその抗原結合フラグメントは、未分化型脊椎関節症脊椎関節症を治療するために用いることができる。
【０１１７】
Ｂ．肺疾患
ＴＮＦαは、特発性間質性肺炎及び慢性閉塞性気道疾患等の様々な肺疾患の病理生理学と関係がある（例として、Ｐｉｑｕｅｔ  ＰＦら（１９８９）  Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ．  １７０：６５５−６３、Ｗｈｙｔｅ  Ｍ，ら（２０００）Ａｍ  Ｊ  Ｒｅｓｐｉｒ  Ｃｒｉｔ  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ．  １６２：７５５−８、Ａｎｔｉｃｅｖｉｃｈ  ＳＺら（１９９５）Ｅｕｒ  Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．  ２８４：２２１−５を参照のこと）。本発明は、抗体、抗体部分、又は他のＴＮＦα阻害薬を、特発性間質性肺炎又は慢性閉塞性気道疾患患者のＴＮＦα活性を抑制するように、患者へ投与することを含む、肺疾患等に罹患する患者におけるＴＮＦα活性のための方法を提供する。ＴＮＦα活性が有害である特発性間質性肺炎及び慢性閉塞性気道疾患の例は、下記に詳述する。
【０１１８】
１．特発性間質性肺炎
一つの実施形態では、本発明のＴＮＦα抗体は、特発性間質性肺炎患者を治療するために用いられる。特発性間質性肺炎は３つの方法で肺を冒す。第一に、ある既知又は不明の方法で肺組織を損傷する。第二に、肺胞嚢の壁に炎症を起こす。最後に、瘢痕（又は線維症）が間質（又は肺胞嚢間の組織）で始まり、肺が硬化する。特発性間質性肺炎の例を下記に詳述する。
【０１１９】
ａ．特発性肺線維症（ＩＰＦ）
腫瘍壊死因子は特発性肺線維症（ＩＰＦ）の病理生理学と関係がある（Ｐｉｑｕｅｔ  ＰＦ，ら（１９８９）  Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ．  １７０：６５５−６３、Ｗｈｙｔｅ  Ｍ，ら（２０００）  Ａｍ  Ｊ  Ｒｅｓｐｉｒ  Ｃｒｉｔ  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ  １６２：７５５−８、Ｃｏｒｂｅｔｔ  ＥＬ，ら（２００２）Ａｍ  Ｊ  Ｒｅｓｐｉｒ  Ｃｒｉｔ  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ．  １６５：６９０−３を参照のこと）。例えば、ＩＰＦ患者では、マクロファージ及びタイプＩＩ上皮細胞のＴＮＦ発現レベルが上昇することがわかっている（Ｐｉｑｕｅｔら（１９９３）  Ａｍ  Ｊ  Ｐａｔｈｏｌ  １４３：６５１、Ｎａｓｈら（１９９３）Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ  ２２：３４３、Ｚｈａｎｇら（１９９３）  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １５０：４１８８を参照のこと）。特定の遺伝子多型もまた、ＴＮＦ発現増加に関連があり、ＩＰＦ及びケイ肺症において役割を果たすと考えられる（Ｗｈｙｔｅら上述、Ｃｏｒｂｅｔｔら上述）。
【０１２０】
用語「特発性肺線維症」又は「ＩＰＦ」は、炎症を起こし、最終的に深部肺組織に瘢痕を残して、息切れを生じる特徴を有する１群の疾患をいう。ＩＰＦにおける肺胞（肺胞嚢）及びその支持構造（間質）の瘢痕は最終的に、機能を果たしている肺胞を喪失し、空気から血液への酸素運搬を減少させる原因となる。ＩＰＦはまた、びまん性実質性肺疾患、肺胞炎、特発性線維化肺胞炎（ＣＦＡ）、特発性間質性肺炎（ＩＰＰ）、及び通常型間質性肺炎（ＵＩＰ）とも呼ばれる。ＵＩＰの細胞パターンはＩＰＦの病理診断において最もよく見られるパターンであるため、ＩＰＦは、ＵＩＰ（「ＩＰＦ／ＵＩＰ」）と同意語として使用されることが多い。
【０１２１】
ＩＰＦ患者は、乾咳、胸痛、及び／又は息切れを含む特定の症状を示すことが多い。ＩＰＦの治療に一般的に使用する薬は、プレドニゾン及びサイトキサンであるが、これらの薬の使用を継続して改善が見られるのは一部の患者のみである（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｈｏｒａｃｉｃ  Ｓｏｃｉｅｔｙ（２０００）Ａｍ．  Ｊ．  Ｒｅｓｐｉｒ．  Ｃｒｉｔ．  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ．１６１：６４６）。酸素投与及び肺の移植は、別の治療選択である。一つの実施形態では、特発性肺線維症治療のために、本発明のＴＮＦα抗体を、別の治療薬、例えば酸素と組み合わせて患者に投与する。
【０１２２】
２．慢性閉塞性気道疾患
一つの実施形態では、本発明のＴＮＦαは、慢性閉塞性気道疾患患者を治療するために用いられる。これらの疾患では、気流閉塞が慢性的及び持続的、又は偶発性及び再発性であることがある。気流閉塞の測定は通常、最大呼気中の時間に対する呼気量を記録する努力呼気肺活量測定によって行う。気流閉塞のない患者の場合は肺活量測定を行うが、これは３〜４秒間かかる。慢性閉塞性気道疾患患者の場合、気流が閉塞されているため、通常、１５〜２０秒までかかり、息こらえ時間により制限される場合もある。正常な場合の１秒量（ＦＥＶ１）の測定は簡単で、年齢、性別及び身長に基づき正確に予想される。努力肺活量に対するＦＥＶ１の比（ＦＥＶ１／ＦＶＣ）は、通常０．７５を超える。努力呼気中及びそれに続く努力吸気中の量に対する気流の記録（フロウボリュームループ検査）も有益であり、主に、上部気道狭窄と下部気道狭窄を区別する。慢性閉塞性気道疾患の例は下記に詳述する。
【０１２３】
ａ．喘息
腫瘍壊死因子は、喘息の病理生理学と関係がある（Ａｎｔｉｃｅｖｉｃｈ  ＳＺら（１９９５）Ｅｕｒ  Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２８４：２２１−５、Ｔｈｏｍａｓ  ＰＳ，ら１９９５．Ａｍ  Ｊ  Ｒｅｓｐｉｒ  Ｃｒｉｔ  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ．  １５２：７６−８０、Ｔｈｏｍａｓ  ＰＳ，  Ｈｅｙｗｏｏｄ  Ｇ．（２００２）  Ｔｈｏｒａｘ．５７：７７４−８）。例えば、急性喘息発作は、肺の好中球増多及びＢＡＬ  ＴＮＦレベルの上昇を伴うことが分かっている（Ｏｒｄｏｎｅｚ  ＣＬら（２０００）Ａｍ  Ｊ  Ｒｅｓｐｉｒ  Ｃｒｉｔ  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ  １６１：１１８５）。喘息症状の重症度はハウスダスト中の内毒素と関連することがわかっている。ラットでは、抗ＴＮＦα抗体が内毒素誘発気道変化を減少させた（Ｋｉｐｓら（１９９２）Ａｍ  Ｒｅｖ  Ｒｅｓｐｉｒ  Ｄｉｓ  １４５：３３２）。
【０１２４】
本明細書で使用する用語「喘息」とは、気道の炎症により、肺への気流の出入りが制限される疾患をいう。また、喘息は、気管支喘息、運動誘発性喘息−気管支の反応性気道障害（ＲＡＤ）とも呼ばれる。喘息はアレルギー及び／又は家族性と関連する場合もある。喘息の症状は、短期間の間に、気管支の気道の直径又は内径に広範な波動が現れ、肺の機能が変化する特徴がある。結果的に気流に対する抵抗性が増加し、息切れ（呼吸困難）、胸の狭窄感又は「締め付け感」及び喘鳴を含む症状が罹患患者に現れる。
【０１２５】
ＮＩＨガイドラインによると喘息患者の特徴は、軽度間欠型、軽度持続型、中等度持続型、重度持続型とされる（ＮＡＥＰＰ  Ｅｘｐｅｒｔ  Ｐａｎｅｌ  Ｒｅｐｏｒｔ  Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ  ｆｏｒ  Ｔｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ  ａｎｄ  Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ  ｏｆ  Ａｓｔｈｍａ−Ｕｐｄａｔｅ  ｏｎ  Ｓｅｌｅｃｔｅｄ  Ｔｏｐｉｃｓ  ２００２．ＪＡＣＩ  ２００２；１１０：Ｓ１４１−Ｓ２０９、Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ  ｆｏｒ  Ｔｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ  ａｎｄ  Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ  ｏｆ  Ａｓｔｈｍａ．ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  ９７−４０５１，Ｊｕｌｙ  １９９７を参照のこと）。中等度持続型喘息と診断された患者の治療は、吸入副腎皮質ステロイドで行うことが多い。重度持続型喘息と診断された患者は、高用量の吸入副腎皮質ステロイド及びＰ．Ｏ．副腎皮質ステロイドで治療することが多い。
【０１２６】
ｂ．慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）
腫瘍壊死因子は慢性閉塞性肺疾患の病理生理学と関係がある（Ｋｅａｔｉｎｇｓ  ＶＭ．  （２０００）Ｃｈｅｓｔ．  １１８：９７１−５、Ｓａｋａｏ  Ｓ，ら（２００１）Ａｍ  Ｊ  Ｒｅｓｐｉｒ  Ｃｒｉｔ  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ．１６３：４２０−２２、Ｓａｋａｏ  Ｓ，ら（２００２）Ｃｈｅｓｔ．１２２：４１６−２０）。本明細書で互換性あるように使用する用語「慢性閉塞性肺疾患」又は「ＣＯＰＤ」は、様々な程度の肺胞拡張及び肺組織破壊を伴う気流の制限により特徴付けられる肺疾患の１群である。用語ＣＯＰＤは、慢性気管支炎（杯状細胞及び粘膜下腺の過形成を伴う粘膜の分泌過多）、慢性閉塞性気管支炎又は肺気腫（気道及び肺実質の破壊）、又はこれらの症状の組み合わせを含む。肺気腫及び慢性気管支炎は慢性閉塞性肺疾患の最もよく知られた形である。ＣＯＰＤは、不可逆性の気流閉塞があることにより判定される。
【０１２７】
ＣＯＰＤでは、炎症の慢性化により、小さな気道及び肺実質及び肺胞壁（肺気腫）の狭窄が固定されることになる。これは、肺胞のマクロファージ、好中球及び細胞障害性Ｔリンパ球の数が増加し、複数の炎症伝達物質（脂質、ケモカイン、サイトカイン、成長因子）を放出する特徴がある。この炎症が原因で、小さな気道の狭窄及び肺実質の破壊を伴う線維症を発症する。また、高レベルの酸化的ストレスがあり、この炎症を増幅することがある。
【０１２８】
Ｃ．冠動脈疾患
ＴＮＦαは再狭窄を含む様々な冠動脈疾患の病理生理学と関係がある（例として、Ｃｌａｕｓｅｌｌら（１９９４）上述、Ｍｅｄａｌｌら（１９９７）Ｈｅａｒｔ  ７８（３）：２７３を参照のこと）。本明細書で使用する通りに、「ＴＮＦα活性が有害である冠動脈疾患」という用語は、前記疾患患者においてＴＮＦαの存在が、明白であるか、又は前記疾患の病理生理学に原因があるか若しくは再狭窄等の循環器疾患を含む疾患の悪化の一因である要因のいずれかが疑われる、冠動脈疾患及び循環器病を含む。ＴＮＦα活性が有害である冠動脈疾患は、動脈の閉塞が原因であることが多い。このような閉塞は、一般的にアテローム性動脈硬化症に伴う変化により、以前に狭窄したことがある冠動脈で通常、形成される血餅が原因であることがある。例えば、動脈壁の中にあるアテロームが破裂すると、血栓又は血餅の形成を誘発することになる。このような疾患は、例えば疾患患者の体液中のＴＮＦα濃度の上昇（例えば、患者の血清、血漿、滑液等のＴＮＦα濃度の上昇）により示すことができる（ＴＮＦα濃度は、例えば、上述のように抗ＴＮＦα抗体を用いて検出することが可能である。）。冠動脈疾患もまた、動脈圧の不均衡、心臓の機能不全、又は例えば血栓による血管の閉塞が原因で発症することもある。冠動脈疾患には、冠動脈疾患及び末梢血管疾患の何れもが含まれる。
【０１２９】
ＴＮＦα活性が有害である冠動脈疾患の例は、再狭窄を含めて多数ある。特定の冠動脈疾患治療における本発明の抗体、抗体部分、及び他のＴＮＦα阻害薬の使用については下記に詳述する。特定の実施形態では、本発明の抗体、抗体部分又は他のＴＮＦα阻害薬は、下記のように、別の治療薬と組み合わせて患者に投与される。
【０１３０】
本発明は、冠動脈疾患患者のＴＮＦα活性を抑制する方法を提供する。本発明は冠動脈疾患患者のＴＮＦα活性を抑制又は緩和する方法を提供する。この方法は、本発明の抗体、抗体部分、又は他のＴＮＦα阻害薬を患者に投与し、その結果、患者のＴＮＦα活性が抑制又は緩和される方法を含む。ＴＮＦαはヒトＴＮＦαであり、患者はヒト患者であることが好ましい。或いは、患者は、本発明の抗体が交差反応するＴＮＦαを発現する哺乳類でもあり得る。また更に、患者はｈＴＮＦαを導入する哺乳類（例えば、ｈＴＮＦαの投与により又はｈＴＮＦα導入遺伝子の発現により）でもあり得る。本発明の抗体を治療目的でヒト患者に投与することができる（下記に詳述）。また、本発明の抗体は、獣医学の目的又はヒトの疾患の動物モデルとしての、抗体が交差反応するＴＮＦαを発現する非ヒト哺乳類（例えば、霊長類、ブタ又はマウス）へ投与することができる。後者に関しては、前記動物モデルは、本発明の抗体の治療有効性の評価に有益である（例えば、投与量及び投与期間の試験）。
【０１３１】
再狭窄を含む冠動脈疾患の研究に一般に使用されている動物モデルは、ラット又はマウスの頚動脈結紮モデル及び頚動脈損傷モデルを含む（Ｆｅｒｎｓら（１９９１）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５３：１１２９、Ｃｌｏｗｅｓら（１９８３）  Ｌａｂ．  Ｉｎｖｅｓｔ．  ４９：２０８、Ｌｉｎｄｎｅｒら（１９９３）  Ｃｉｒｃ  Ｒｅｓ．  ７３：７９２）。頚動脈結紮モデルの場合、頚動脈の遠位の分岐に近接する血管を結紮すると動脈血流が乱される。Ｃｌｏｗｅｓらの記述通りに、頚動脈損傷モデルは、外頚動脈を通して導入したバルーンカテーテルが管腔内を通過することによって総頚動脈の内皮が裸出されるように作製する。２週間で頚動脈は平滑筋細胞の収縮のために著しく狭窄するが、２〜１２週間で内膜の厚さは２倍になり、そのため管腔のサイズが狭まる。本発明のＴＮＦα抗体が有する治療作用の可能性を、ヒトの再狭窄の予防及び治療において決定するために、これらのモデルは何れも使用することができる。
【０１３２】
本発明の抗体は、ＴＮＦα活性が有害である循環器疾患を治療するために使用することができる。ＴＮＦα活性を抑制することにより、冠動脈疾患の症状及び／又は進行の軽減、又は冠動脈疾患の予防が期待される。冠動脈疾患罹患患者又は発症のリスクにある患者は、臨床症状により識別できる。冠動脈疾患の臨床症状には、多くの場合、胸痛、息切れ、衰弱、失神の発作、意識の喪失、激痛、発作性夜間呼吸困難、一過性脳虚血発作及びその他患者が経験した症状が含まれる。冠動脈疾患の臨床徴候にはまた、ＥＫＧ異常、末梢脈拍の変化、動脈の雑音、異常な心音、心拍数及び喘鳴、頚静脈の拡張、神経学的な変化及び医師が識別した他の所見も含まれる。冠動脈疾患はまた、例えば、前記疾患患者の体液中のＴＮＦα濃度上昇により証明されることもある（例えば、患者の血清、血漿、滑液等のＴＮＦα濃度の上昇）。
【０１３３】
循環器疾患の例としてはこれらに限定されないが、冠動脈疾患、狭心症、心筋梗塞、心停止が原因の心血管組織損傷、心原性ショック、及び高血圧、アテローム性動脈硬化症、冠動脈攣縮、冠動脈疾患、弁膜症、不整脈、及び心筋症が挙げられる。特定の循環器治療における本発明の抗体、抗体部分及び他のＴＮＦα阻害薬の使用については下記に詳述する。特定の実施形態では、本発明の抗体、抗体部分又は他のＴＮＦα阻害薬は別の治療薬と組み合わせて患者に投与される。これは第ＩＩＩ項に記述する
１．再狭窄
ＴＮＦαは再狭窄の病理生理学と関係がある（Ｚｈｏｕら（２００２）  Ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ  １６１：１５３、Ｊａｖｅｄら（２００２）Ｅｘｐ  ａｎｄ  Ｍｏｌ  Ｐａｔｈｏｌ  ７３：１４を参照のこと）。例えば、頚動脈にワイヤーステントを挿入したマウスモデルの場合、ＴＮＦ−／−マウスは、野生型マウスと比較して初期の過形成が７倍減少した（Ｚｉｍｍｅｒｍａｎら（２００２）  Ａｍ  Ｊ  Ｐｈｓｉｏｌ  Ｒｅｇｕｌ  Ｌｉｚｔｅｇｒ  Ｃｏｍｐ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  ２８３：Ｒ５０５）。再狭窄は、冠状動脈の脈管構造又は末梢に拘わらず、いかなる種類の血管の再建を行った場合にも起こる（Ｃｏｌｂｕｒｎ  ａｎｄ  Ｍｏｏｒｅ（１９９８）  Ｍｙｏｉｎｔｉｍａｌ  Ｈｙｐｅｒｐｌａｓｉａ  ｐｐ．６９０−７０９  ｉｎ  Ｖａｓｃｕｌａｒ  Ｓｕｒｇｅｒｙ：Ａ  Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｒｅｖｉｅｗ  Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ：Ｓａｕｎｄｅｒｓ）。例えば、研究により、冠動脈再建術後の症候性再狭窄率は３０〜５０％と報告されている（Ｂｅｒｋ  ａｎｄ  Ｈａｒｒｉｓ（１９９５）  Ａｄｖ．  Ｉｎｔｅｒｎ．  Ｍｅｄ．  ４０：４５５−５０１を参照のこと）。更に例としてあげると、頚動脈内膜切除後、調査した患者の２０％において管腔狭窄は５０％以上であった（Ｃｌａｇｅｔｔら（１９８６）  Ｊ．  Ｖａｓｃ．  Ｓｕｒｇ．  ３：１０−２３）。再狭窄は、当該血管の性質等の要因、残存する疾患の程度、及び局所血行動態の組み合わせによる、解剖学的に異なる部位における、以前の閉塞性の病変を伴う様々な程度の総体症状の再狭窄により示される。
【０１３４】
本明細書で使用する「狭窄」は、閉塞性疾患又は再狭窄で見られる動脈の狭窄をいう。狭窄は、動脈部分が狭窄した後の血流減少症状を伴う。この場合、狭窄を生じる前記疾患を病気とする（すなわち、閉塞性疾患又は再狭窄症）。狭窄は血管中に無症候で存在し、血管造影法又は血管の検査等の診断介入によってのみ検出可能である。
【０１３５】
本発明の抗体は、再狭窄患者又は再狭窄を発症するリスクを有する患者を治療するために使用できる。再狭窄発症のリスクにある患者には、ＰＴＣＡを受ける患者も含まれる。再狭窄の予防のために患者にステントを挿入しておくこともある。循環器病患者において狭窄の再発を予防するために、本発明のＴＮＦα抗体を単独で使用、又はステントと組み合わせて使用することができる。
【０１３６】
２．うっ血性心不全
ＴＮＦαは、うっ血性心不全の病理生理学と関係がある（Ｚｈｏｕら（２００２）Ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ  １６１：１５３を参照のこと）。うっ血性心不全患者のＴＮＦαの血清レベルは、前記疾患の重症度に直接比例して上昇する（Ｌｅｖｉｎｅら（１９９０）Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ  ３２３：２３６、Ｔｏｒｒｅ−Ａｍｉｏｎｅら（１９９６）Ｊ  Ａｍ  Ｃｏｌｌ  Ｃａｒｄｉｏｌ  ２７：１２０１）。また、ＴＮＦα阻害薬も、うっ血性心不全の症状を改善することがわかっている（Ｃｈｕｎｇら（２００３）  Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  １０７：３１３３）。
【０１３７】
本明細書で使用する用語「うっ血性心不全」は、身体の酸素量要求を満たす心臓の能力を減少させる症状が含まれる。うっ血性心不全の症状及び徴候には、身体の様々な組織への血流が減少、様々な臓器中の血液が過剰に蓄積（例えば、大静脈によって心臓に戻った血液を心臓が送り出すことができない場合）、労作性呼吸困難、疲労、及び／又は末梢浮腫（例えば、末梢浮腫は心室機能障害により起こる）がある。うっ血性心不全には急性又は慢性がある。うっ血性心不全の徴候は、通常、心臓の機能の一時的又は永久的な損失が共通である様々な心臓疾患又は全身疾患の二次的なものとして起こる。
【０１３８】
前記疾患の例は、高血圧，  冠動脈疾患、弁膜症、心筋症（例えば、肥大性、拡張型、又は拘束型心筋症）がある。
【０１３９】
「うっ血性心不全のある患者又は罹患している患者」とは、心臓が代謝組織の必要条件と釣合った血液を送り出すことができない、又は、充満圧の上昇による場合のみ送り出すことができるという心臓ポンプ作用の障害が共通因子となって、多種多様な病因の臨床症状を含む疾患を有する患者のことである。「うっ血性心不全発症のリスクにある患者」とは、患者の心血管系を冒す特定の要因のため、うっ血性心不全を発症する傾向にある患者をいう。このような患者の場合、うっ血性心不全発症のリスクを減らす、又は予防することが望ましい。「うっ血性心不全患者」には、未だ罹患していないとしてもリスク要因を示すため、一般集団と比較してこの疾患に罹患するリスクが高い患者も含まれる。例えば、未治療高血圧患者はうっ血性心不全に罹患していないかもしれないが、高血圧の病状のため前記患者はリスクを有する。本発明の一つの実施形態では、抗体Ｄ２Ｅ７は、うっ血性心不全発症のリスクにある患者を治療するために使用される。
【０１４０】
３．急性冠症候群
ＴＮＦαは急性冠症候群の病理生理学と関係がある（Ｌｉｂｂｙ（１９９５）  Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  ９１：２８４４を参照のこと）。急性冠症候群とは、血流が制限され、充分な酸素が心臓に送り込まれないことにより、患者が疼痛を感じる疾患である。ＴＮＦαは、急性冠症候群に影響を及ぼすことが研究で明らかになっている。例えば、下流の血行力学的効果のない心筋梗塞を誘発する能力がある新しいラットの異所性心臓移植−冠状動脈結紮モデルにおいて、可溶性のキメラＴＮＦ受容体（ｓＴＮＦＲ）の投与により、一過性のＬＶのリモデリング及び機能障害が消滅した（Ｎａｋａｍｕｒａら（２００３）  Ｊ．  Ｃａｒｄｉｏｌ．  ４１：４１）。また、ｓＴＮＦＲ発現プラスミドを心筋に直接注入したところ、急逝心筋梗塞（ＡＭＩ）実験ラットにおいて梗塞のサイズが減少したことも明らかになっている（Ｓｕｇａｎｏら（２００２）ＦＡＳＥＢ  Ｊ  １６：１４２１）。
【０１４１】
一つの実施形態では、本発明のＴＮＦα抗体は、患者の急性冠症候群を治療又は予防するために使用される。本明細書では急性冠症候群とは、心筋梗塞又はアンギナをいう。
【０１４２】
本明細書で使用する用語「心筋梗塞」又は「ＭＩ」は、心発作をいう。心筋梗塞は、心臓のある部分に壊死又は永久的な損傷があり、その部位に酸素が充分に供給されないために起こる。この壊死の原因は、一般的にアテローム性動脈硬化症又は塞栓症の何れかによる冠動脈の閉塞である。発明のＴＮＦα抗体によって治療するＭＩは、Ｑ波梗塞及び非Ｑ波梗塞の両方を含む。心発作の大多数の原因は、冠動脈（心筋に血液及び酸素を運ぶ血管）の一つをブロックする血餅である。例えば、冠動脈中の血餅は、心筋への血液及び酸素の流れを妨げ、結果として、患部の心臓細胞が死ぬ。損傷を受けた心筋は永久的に収縮能力を喪失し、残りの心筋はその埋め合わせを必要とする。ＭＩはまた、個人にかかる異常なストレスが原因でも発症する。
【０１４３】
用語「アンギナ」は、痙攣性の疼痛、窒息感又は呼吸困難をいい、殆んどの場合、心筋の無酸素による発作性の胸痛である狭心症を特にいう。アンギナは異型狭心症及び労作狭心症の両方を含む。アンギナ患者は虚血性心疾患に罹患するが、これは重度の圧痛が突然、肋骨下に現れ、左肩及び左腕に拡がることが多い。ＭＩ及び軽度のアンギナの両方に罹患する患者のＴＮＦαレベルは上方制御されるため、ＴＮＦαはアンギナと関係がある（Ｂａｌｂａｙら（２００１）Ａｎｇｉｏｌｏｇｙ  ５２０９）。
【０１４４】
４．アテローム性動脈硬化症
本明細書で使用する「アテローム性動脈硬化症」は、動脈壁に沿って脂肪が蓄積する症状をいう。この脂肪は厚さを増し、硬化し、最終的に動脈をブロックする。アテローム性動脈硬化症はまた、動脈硬化症、動脈硬化及び動脈プラーク蓄積とも呼ばれる。ＴＮＦαに直接作用するポリクロナール抗体は、ウサギのアテローム硬化型モデル（ｚｈｏｕら、上述）において炎症及び再狭窄が起こるＴＮＦα活性を中和する効果があることが分かった。従って、本発明のＴＮＦα抗体は、アテローム性動脈硬化症患者又はそのリスクにある患者を治療及び予防するために使用することができる。
【０１４５】
５．心筋症
本明細書で使用する用語「心筋症」は、心臓の筋肉又は心筋が衰弱し、通常その結果、心臓のポンプ機能が不十分となる心筋の疾患として定義する。心筋症の原因は、ウイルス感染、心発作、アルコール症、長期の重度高血圧（高血圧症）、又は自己免疫である。
【０１４６】
心不全患者の約７５〜８０％において、冠動脈疾患は心筋症の潜在的な原因となっているため、「虚血性心筋症」と名付けられている。虚血性心筋症の原因は心発作で、これは、心臓の筋肉又は心筋に瘢痕を残す。患部の心筋は、心臓のポンプ機能に貢献することができず、瘢痕が大きければ大きいほど、又は心発作の回数が多ければ多いほど、虚血性心筋症の発症の確率は高くなる。
【０１４７】
潜在する冠動脈疾患が原因ではない心筋症は、「非虚血性心筋症」と名付けられている。「非虚血性心筋症」には、特発性心筋症、肥大型心筋症、アルコール性心筋症、拡張型心筋症、産褥性心筋症及び収縮性心筋症などがあるが、これらに限定されるものではない。
【０１４８】
Ｄ．代謝異常
ＴＮＦαは、糖尿病及び肥満等の代謝異常を含む様々な疾患の病理生理学と関係がある（Ｓｐｉｅｇｅｌｍａｎ  ａｎｄ  Ｈｏｔａｎｉｓｌｉｇｉｌ（１９９３）Ｃｅｌｌ  ７３：６２５、Ｃｈｕら（２０００）Ｉｎｔ  Ｊ  Ｏｂｅｓ  Ｒｅｌａｔ  Ｍｅｔａｂ  ｄｉｓｏｒｄ．  ２４：１０８５、Ｉｓｈｉｉら（２０００）Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ．  ４９：１６１６）。本発明は、代謝異常患者のＴＮＦα活性を抑制するように、患者へ抗体、抗体部分又は他のＴＮＦα阻害薬を投与することを含む、このような代謝異常患者におけるＴＮＦα活性のための方法を提供する。本発明のＴＮＦα抗体はまた、代謝異常を発症するリスクにある患者の治療に使用できる。代謝異常は、関節リウマチを含む関節炎を併発することが多い。一つの実施形態では、本発明の抗体は、関節リウマチを併発する代謝異常患者を治療するために使用される。別の実施形態では、本発明のＴＮＦα抗体は、糖尿病又は肥満を併発する疾患を治療するために使用される。
【０１４９】
代謝異常は、身体の病理生理学的機能の実行に必要な物質の処理に影響を及ぼす。本発明の多数の代謝異常には共通の特定の特徴がある。すなわち、これらは、インスリン抵抗性、血糖調節機能の欠如、体重増加及び肥満度指数の増加を伴う。代謝異常の例には、糖尿病及び肥満が挙げられる。糖尿病の例には、１型糖尿病、２型糖尿病、糖尿病性神経障害、末梢神経障害、糖尿病性網膜症、糖尿病性潰瘍、網膜潰瘍、糖尿病性大血管障害及び肥満が挙げられる。本発明のＴＮＦσ抗体で治療できる治療可能な代謝異常の例については、下記に詳述する。
【０１５０】
１．糖尿病
腫瘍壊死因子は、糖尿病の病理生理学と関係がある（例として、Ｎａｖａｒｒｏ  Ｊ．Ｆ．，  Ｍｏｒａ  Ｃ．，  Ｍａｃａ，  Ａｍ  Ｊ  Ｋｉｄｎｅｙ  Ｄｉｓ．  ２００３  Ｊｕ１；４２（１）：５３−６１、Ｄａｉｍｏｎ  Ｍら  Ｄａｉｂｅｔｅｓ  Ｃａｒｅ．２００３  Ｊｕ１；２６（７）：２０１５−２０、Ｚｈａｎｇ  ＭらＪ  Ｔｏｎｇｊｉ  Ｍｅｄ  Ｕｎｉｖ．  １９９９；１９（３）：２０３−５、Ｂａｒｂｉｅｒｉ  Ｍら、Ａｍ  Ｊ  Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓ．  ２００３  Ｊｕｌ；１６（７）：５３７−４３を参照のこと）。例えば、ＴＮＦαはインスリン抵抗性の病理生理学と関係がある。胃腸の癌患者の血清ＴＮＦレベルがインスリン抵抗性と関連があることがわかっている（例として、ＭｃＣａｌｌ，  Ｊ．ら  Ｂｒ．  Ｊ．  Ｓｕｒｇ．  １９９２；７９：１３６１−３を参照のこと）。
【０１５１】
糖尿病は、２つの最も一般的な型である１型糖尿病及び２型糖尿病があり、何れも、身体がインスリンを調節できなったことに起因している。インスリンは，血中の血糖（グルコース）値の上昇に応じて膵臓から放出されるホルモンである。
【０１５２】
本明細書で使用する用語「１型糖尿病」は、膵臓がインスリンをほとんど産生しなくなったため、適切な血糖値調製ができなくなる場合に発症する慢性疾患である。１型糖尿病はまた、インスリン依存性糖尿病、ＩＤＭＭ、若年発症糖尿病および糖尿病Ｉ型とも呼ばれる。１型糖尿病は、膵臓β細胞の自己免疫破壊が進行し、続いてインスリンが欠乏した結果、発症する。
【０１５３】
用語「２型糖尿病」は、殆どの場合、身体がインスリンに正しく反応しないため、膵臓が血中グルコースレベルを正常に保つのに充分なインスリンを産生しないときに発症する慢性疾患をいう。２型糖尿病はまた、非インスリン依存性糖尿病、ＮＤＤＭおよび糖尿病ＩＩ型とも呼ばれる。
【０１５４】
糖尿病は、グルコース負荷試験の投与により診断できる。糖尿病は、臨床的に、幾つかの基本的なカテゴリに分類されることが多い。これらカテゴリの第一の例には、自己免疫糖尿病、非インスリン依存性糖尿病（１型ＮＩＤＤＭ）、インスリン依存型糖尿病（２型ＩＤＤＭ）、非自己免疫型糖尿病、非インスリン依存型糖尿病（２型ＮＩＤＤＭ）、及び若年者に発症する成人型糖尿病（ＭＯＤＹ）がある。別のカテゴリは、第２カテゴリと呼ばれることが多いが、糖尿病症候群の発症の原因となる糖尿病、又は発症させる同定可能な疾患によりもたらされる糖尿病をいう。第２カテゴリの例として、膵臓病が原因である糖尿病、ホルモン異常、薬剤又は化学物質誘発糖尿病、インスリン受容体異常が原因である糖尿病、遺伝的症候群に伴う糖尿病、及びその他の原因による糖尿病がある（例として、Ｈａｒｒｉｓｏｎ‘ｓ（１９９６）  １４ＴＨ  ＥＤ．，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌを参照のこと）。
【０１５５】
糖尿病は、前述のカテゴリにおいて、それ自身であり、および下記の項に記述する様々な合併症の原因となり得る。従って、本発明の抗体又はその抗原結合フラグメントは、糖尿病を治療するために使用することができる。一つの実施形態では、本発明のＴＮＦα抗体又はその抗原結合フラグメントは、上記の特定済みカテゴリの疾患を併発する糖尿病を治療するために使用することができる。
【０１５６】
糖尿病の治療は、食事制限、インスリン投与、及び本明細書に記述した様々な薬物療法で行うことが多い。従って、糖尿病に通常付随する代謝異常及び疼痛の治療に一般的に使用される薬剤と組み合わせて、本発明のＴＮＦα抗体を投与し得る。
【０１５７】
一つの実施形態では、本発明のＴＮＦα抗体はまた、糖尿病を併発する疾患も治療するために使用することができる。糖尿病は、下記のカテゴリを含む、糖尿病を伴う多数の合併症及び疾患に現れる。
【０１５８】
ａ．糖尿病性神経障害及び末梢神経障害
腫瘍壊死因子は、糖尿病性神経障害及び末梢神経障害の病理生理学と関係がある（Ｂｅｎｊａｆｉｅｌｄら（２００１）  Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｃａｒｅ．  ２４：７５３、Ｑｉａｎｇ，  Ｘ．ら（１９９８）  Ｄｉａｂｅｔｏｌｏｇｉａ．  ４１：１３２１−６、Ｐｆｅｆｆｅｒら（１９９７）  Ｈｏｒｍ  Ｍｅｔａｂ  Ｒｅｓ．  ２９：１１１を参照のこと）。
【０１５９】
本明細書で使用する、神経障害性糖尿病とも呼ばれる用語「神経障害」は、高血糖（高血糖値）の結果として神経が損傷を受ける糖尿病の一般的な合併症である。遠位感覚運動性の多発性神経障害、局所運動の神経障害及び自律性神経症外等の様々な糖尿病性神経障害が知られている。
【０１６０】
本明細書で使用する、末梢神経炎及び糖尿病性神経障害としても知られる用語「末梢神経障害」は、脳および脊髄と情報のやり取りをする神経の不全をいう。末梢神経障害の症状には、疼痛、感覚喪失及び筋肉のコントロール不能がある。血管、腸機能及び他の臓器をコントロールする神経の不全により、血圧の異常、消化、及び他の基本的な不随意の作用の喪失が起こる。末梢神経障害は、単一の神経又は神経群を損傷（単神経障害）、又は複数の神経（多発神経障害）を冒すことがある。
【０１６１】
交感神経及び副交感神経の小さな有髄線維及び無随繊維を冒す神経障害は「末梢神経障害」として知られる。また、末梢神経炎及び糖尿病性神経障害としても知られる末梢神経障害の関連疾患は、脳および脊髄と情報のやり取りをする神経の不全をいう。この症状には、疼痛、感覚喪失、筋肉コントロール不能等の症状がある。血管、腸機能及び他の臓器をコントロールする神経の不全により、血圧の異常、消化、及び他の基本的な不随意の作用の喪失が起こる。末梢神経障害は、単一の神経又は神経群を損傷（単神経障害）、又は複数の神経（多発神経障害）を冒すことがある。
【０１６２】
用語「糖尿病性神経障害」は、高血糖（高血糖値）の結果として神経が損傷を受ける糖尿病の一般的な合併症をいう。糖尿病性神経障害は、神経障害及び糖尿病における神経障害とも呼ばれる。遠位感覚運動性の多発性神経障害、局所運動の神経障害及び自律性神経症外等の様々な糖尿病性神経障害が知られている。
【０１６３】
ｂ．糖尿病性網膜症
腫瘍壊死因子は、糖尿病性網膜症の病理生理学と関係がある（Ｓｃｈｏｌｚら（２００３）Ｔｒｅｎｄｓ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．  １１：１７１）。本明細書で使用する用語「糖尿病性網膜症」は、長期の糖尿病が原因の進行性の網膜損傷をいう。糖尿病性網膜症には、増殖性網膜症がある。増殖性網膜症はまた、血管新生、網膜の出血及び網膜剥離も含む。
【０１６４】
進行性網膜症の場合、小血管が網膜の表面上で増殖する。これらの血管は脆弱で、出血し易く、網膜出血の原因となり得る。前記出血により視覚が低下する。出血が再吸収される時に、繊維組織により網膜剥離及び視覚喪失の素因が形成される。また、糖尿病性網膜症には、新血管新生、網膜の出血及び網膜剥離を含む増殖性網膜症がある。糖尿病性網膜症にはまた、網膜の層で生じる変化を伴う「底辺網膜症」も含まれる。
【０１６５】
ｃ．糖尿病性潰瘍及び網膜潰瘍
腫瘍壊死因子は糖尿病性潰瘍の病理生理学と関係がある（Ｌｅｅら（２００３）Ｈｕｍ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ６４：６１４、Ｎａｖａｒｒｏら（２００３）Ａｍ  Ｊ  Ｋｉｄｎｅｙ  Ｄｉｓ．  ４２：５３、Ｄａｉｍｏｎら（２００３）  Ｄｉａｂｅｔｉｃ  Ｃａｒｅ．  ２６：２０１５、Ｚｈａｎｇら（１９９９）  Ｊ  Ｔｏｎｇｉｍｅｄ  Ｕｎｉｖ．１９：２０３、Ｂａｒｂｉｅｒｉら（２００３）Ａｍ  Ｊ  Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓ．  １６：５３７、Ｖｅｎｎら（１９９３）  Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ．  ３６：８１９、Ｗｅｓｔａｃｏｔｔｅｔａｌ．（１９９４）  Ｊ  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．  ２１：１７１０）。
【０１６６】
本明細書で使用する用語「糖尿病性潰瘍」は、糖尿病の合併症として生じる潰瘍をいう。潰瘍は、炎症、感染、悪性疾患又は代謝異常が原因で生じる皮膚又は粘膜上のクレーター様の病変である。一般的に、糖尿病性潰瘍は、四肢で見つかり、特に足に見られる。神経障害及び血管不全等の糖尿病の症状が原因で生じる潰瘍は、虚血及び創傷治癒の遅れの原因となり得る。更に潰瘍が拡大すると骨髄炎に進行することがある。一度、骨髄炎を発症すると、抗生物質のみで根治するのは難しく、切断術を要することもある。
【０１６７】
本明細書で使用する用語「網膜潰瘍」は、眼及び網膜の損傷の原因となる、又は眼及び網膜を損傷する潰瘍をいう。網膜潰瘍には、網膜出血を有するような疾患を含む。
【０１６８】
ｄ．糖尿病性大血管障害
腫瘍壊死因子は、糖尿病性大血管障害の病理生理学と関係がある（Ｄｅｖａｒａｊら（２０００）  Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ．  １２：１９１、Ｈａｔｔｏｒｉ  Ｙら（２０００）    Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ  Ｒｅｓ．  ４６：１８８、Ｃｌａｕｓｅｌｌ  Ｎら（１９９９）  Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ  Ｐａｔｈｏｌ．  ８：１４５）。本明細書で使用する「大血管疾患」とも呼ばれる用語「糖尿病性大血管障害」は、糖尿病が原因の血管疾患である。糖尿病性大血管障害合併症は、例えば、脂肪及び血餅が大血管に蓄積し、血管壁に固着して発症する。糖尿病性大血管障害には、冠動脈疾患、脳血管疾患及び末梢血管疾患、高血糖及び循環器病、及び脳卒中等の疾患がある。
【０１６９】
２．肥満
腫瘍壊死因子は肥満の病理生理学と関係がある（例として、Ｐｉｈｌａｊａｍａｋｉ  Ｊら（２００３）Ｏｂｅｓ  Ｒｅｓ．  １１：９１２、Ｂａｒｂｉｅｒｉら（２００３）ＡＭ  Ｊ  Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓ．  １６：５３７、Ｔｓｕｄａら（２００３）Ｊ  Ｎｕｔｒ．  １３３：２１２５を参照のこと）。肥満は、糖尿病、脳卒中、冠動脈疾患、高血圧、高コレステロール、腎臓及び胆嚢の疾患により、個人の疾患リスク及び脂肪リスクを増加させる。肥満はまた、幾つかのタイプの癌発症リスクも増加させ、骨関節炎及び睡眠時無呼吸発症のリスクファクターとなり得る。肥満は、本発明の抗体を、単独で、又は糖尿病を含む他の代謝異常と組み合わせて、治療することができる。
【０１７０】
Ｅ．貧血
ＴＮＦαは様々な貧血の病理生理学と関係がある（例として、Ｊｏｎｇｅｎ−Ｌａｖｒｅｎｃｉｃ  Ｍ．，ら（１９９７）  Ｊ．  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ  ２４（８）：１５０４−９、Ｄｅｍｅｔｅｒ  Ｊ．，ら（２００２）  Ａｎｎ  Ｈｅｍａｔｏｌ．８１（１０）：５６６−９、ＤｉＣａｔｏ  Ｍ．，（２００３）  Ｔｈｅ  Ｏｎｃｏｌｏｇｉｓｔ  ８（ｓｕｐｐｌ  １）：１９−２１を参照のこと）。本発明は、貧血患者におけるＴＮＦα活性が抑制されるように、本発明の抗体、抗体部分又は他のＴＮＦα阻害薬を貧血患者に投与することを含む、前記疾患患者のＴＮＦα活性を抑制する方法を提供する。一つの実施形態では、貧血は関節リウマチを伴う。
【０１７１】
本明細書で使用する用語「貧血」は、循環する赤血球数の異常な減少、又は血中ヘモグロビン濃度の低下をいう。関節リウマチに関連する貧血の例として、例えば、慢性貧血、鉄欠乏性貧血及び自己免疫溶血性貧血が挙げられる。一つの実施形態では、本発明は、例えば、関節リウマチに関連する貧血、感染症及び慢性炎症疾患による貧血、鉄欠乏性貧血、自己免疫溶解性貧血、骨髄障害性貧血、無形成貧血、再生不良性貧血、赤芽球癆及び腎不全又は内分泌障害に付随する貧血、巨赤芽球性貧血、ヘム又はグロビン合成の欠陥、赤血球細胞の構造上の欠陥による貧血（例えば、鎌状赤血球性貧血）、鉄芽球性貧血等の原因不明の貧血、マラリア、トリパノソーマ症、ＨＩＶ、肝炎ウイルス又はその他のウイルス等の慢性感染症に併発する貧血及び骨髄の欠損が原因で生じる骨髄癆性貧血等に関連する貧血の治療方法を提供する。
【０１７２】
Ｆ．疼痛
ＴＮＦαは様々な疼痛症候群の病理生理学と関係がある（例として、Ｓｏｒｋｉｎ，  ＬＳ．ら（１９９７）  Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ．  ８１（１）：２５５−６２、Ｈｕｙｇｅｎ  ＦＪ．，ら（２００２）  Ｍｅｄｉａｔｏｒｓ  Ｉｎｆｌａｍｍ．  １１（１）：４７−５１、Ｐａｒａｄａ  Ｃａ．，ら（２００３）  Ｅｕｒ  Ｊ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．  １７（９）：１８４７−５２を参照のこと）。本発明は、疼痛を患う患者のＴＮＦα活性が抑制されるように、本発明の抗体、抗体部分又は他のＴＮＦα阻害薬を患者に投与することを含む、前記疼痛疾患患者のＴＮＦα活性を抑制する方法を提供する。侵害受容性疼痛及び神経障害性疼痛を含めて、疼痛は様々に定義付けられている。最も一般的な疼痛の型は、インパルスを大脳への伝達をもたらす刺激が神経終末に及ぼす効果として定義される。疼痛はまた一般に、例えば関節リウマチ等の炎症性疾患に伴う。一つの実施形態では、本発明の抗体は、関節リウマチを伴う疼痛に苦しむ患者を治療するために使用される。ＴＮＦα活性が有害である疼痛疾患の例については、下記に詳述する。
【０１７３】
１．神経障害性疼痛
腫瘍壊死因子は神経障害性疼痛の病理生理学と関係がある（Ｓｏｍｍｅｒ  Ｃ．，（１９９９）  Ｓｃｈｍｅｒｚ．  １３（５）：３１５−２３、Ｅｍｐｌ  Ｍら（２００１）Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ．  ５６（１０）：１３７１−７、Ｓｃｈａｆｅｒｓ  Ｍら（２００３）Ｊ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．  ２３（７）：３０２８−３８を参照のこと）。本明細書で使用する用語「神経障害性疼痛」は、神経、脊髄又は脳の損傷が原因でおこる疼痛をいい、神経過敏を伴うことが多い。神経障害性疼痛の例として、慢性の腰痛、関節炎を伴う疼痛、癌に伴う疼痛、ヘルペス神経痛、幻肢痛、中枢痛、オピオイドに抵抗する痛み、骨損傷の痛み及び陣痛が挙げられる。神経障害性疼痛の他の例として、術後疼痛、群発性頭痛、歯痛、手術痛、重度の火傷（例えば、第三度）による疼痛、分娩後痛、狭心症痛、膀胱炎を含む尿生殖器関連の疼痛が挙げられる。
【０１７４】
神経障害性疼痛は侵害受容性疼痛と区別される。侵害受容性のメカニズムに関連する疼痛は通常、組織修復の期間における持続期間が限られており、一般に市販の鎮痛薬又はオピオイドで緩和が図られている（Ｍｙｅｒｓ，  Ｒｅｇｉｏｎａｌ  Ａｎｅｓｔｈｅｓｉａ  ２０：１７３−１８４（１９９５））。神経障害性疼痛は一般的に、持続性又は慢性で、最初の急性組織損傷から発症までに何ヶ月もかかることが多い。神経障害性疼痛は、自発痛が持続し、通常は有痛性ではない刺激に対して有痛性となる異痛症である。神経障害性疼痛は、ピンで刺すなど通常は些細な有痛性の刺激に対する反応も顕著で、痛覚過敏が特徴である。侵害受容性疼痛とは異なり、神経障害性疼痛は通常、オピオイド療法に対して耐性がある（Ｍｙｅｒｓ，上述、１９９５）。従って、本発明の抗体又はその抗原結合フラグメントは、神経障害性疼痛を治療するために使用することができる。
【０１７５】
２．侵害受容性疼痛
本明細書で使用する用語「侵害受容性疼痛」は、無傷のニューロン経路により伝達される疼痛、すなわち、傷害により体に起こる疼痛をいう。侵害受容性疼痛は、疼痛に関する体性感覚及び通常機能が働き、患者に差し迫る組織損傷を伝える。侵害受容性の経路は、患者を保護するために存在する（例えば、火傷に反応して生じる疼痛）。侵害受容性疼痛には、骨痛、内臓痛及び軟組織に関連する疼痛がある。
【０１７６】
腫瘍壊死因子は、内臓痛の病理生理学と関係がある（Ｃｏｅｌｈｏ  Ａ．ら（２０００）Ａｍ  Ｊ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  Ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔ  Ｌｉｖｅｒ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．  ２７９：Ｇ７８１−Ｇ７９０、Ｃｏｅｌｈｏ  Ａ，ら（２０００）Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓ  Ｂｕｌｌ．  ５２（３）：２２３−８を参照のこと）。内臓痛は、Ａδ線維及びＣ神経線維上の受容体が媒介する侵害受容性疼痛を示すために使用される。Ａδ線維及びＣ神経線維は、皮膚、骨、結合組織、筋肉及び内臓にある。内臓痛は分布が曖昧であり、現実には散発的で、深部で疼くような締め付ける疝痛と通常はいわれる。内臓痛の例として、心発作を伴う疼痛が挙げられるが、この場合は、内臓痛は腕、首及び／又は背中で感じる。肝臓の被膜に疼痛がある場合は、内臓痛は背中及び／又は右肩で感じる。従って、本発明のＴＮＦα抗体又はその抗原結合フラグメントは、内蔵痛を治療するために使用することができる。
【０１７７】
Ｇ．肝疾患
ＴＮＦαは様々な肝疾患の病理生理学と関係がある（例として、Ｃｏｌｌｅｔｔｉ  ＬＭ．，ら（１９９０）Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ．  ８５（６）：１９３６−４３、Ｔｉｅｇｓ  Ｇ．（１９９７）Ａｃｔａ  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ  Ｂｅｌｇ．  ６０（２）：１７６−９、Ｆｅｒｎａｎｄｅｚ  ＥＤ．，ら（２０００）Ｊ  Ｅｎｄｏｔｏｘｉｎ  Ｒｅｓ．  ６（４）：３２１−８を参照のこと）。本発明は、肝疾患患者におけるＴＮＦα活性が抑制されるように、本発明の抗体、抗体部分又は他のＴＮＦα阻害薬を患者に投与することを含む、前記肝疾患患者のＴＮＦα活性のための方法を提供する。
【０１７８】
本明細書で使用する用語「ＴＮＦαが有害である肝疾患」は、前記疾患患者にＴＮＦαの存在が明白である、又は前記疾患の病理生理学に原因がある、若しくは前記疾患の悪化の一因である要因の何れかの存在が疑われる他の肝臓の疾病及び疾患を含む。従って、ＴＮＦαが有害である場合の肝疾患は、ＴＮＦα活性を抑制することにより、肝疾患の症状及び／又は進行を緩和することが期待される疾患である。
【０１７９】
肝疾患は、肝機能が低下又は停止する多数の疾病及び疾患をいう。肝細胞損傷には、アルコール性肝硬変、α１アンチトリプシン欠乏症、原発性胆汁性肝硬変、特発性肝硬変、劇症Ｂ型肝炎型及びＣ型肝炎、及び脂肪性肝炎がある。胆管疾患の例には、嚢胞性線維症、原発性胆汁性肝硬変、硬化性胆管炎及び胆道閉塞が挙げられる（Ｗｉｅｓｎｅｒ，  Ｒ．  Ｈ，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｉｎｄｉｃａｔｉｏｎｓ，  Ｃｏｎｔｒａ  Ｉｎｄｉｃａｔｉｏｎｓ  ａｎｄ  Ｔｉｍｉｎｇ  ｆｏｒ  Ｌｉｖｅｒ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ（１９９６），  ｉｎ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｌｉｖｅｒ，  Ｓａｕｎｄｅｒｓ（ｐｕｂｌ．）、  Ｂｕｓｕｔｔｉｌ，  Ｒ．  Ｗ．  ａｎｄ  Ｋｌｉｎｔｍａｌｍ，  Ｇ．Ｂ．（ｅｄｓ．）  Ｃｈａｐｔｅｒ  ６，  ｅ．ｇ．，Ｔａｂｌｅｓ  ６−３  ａｎｄ  ６−５  ａｓ  ｗｅｌｌ  ａｓ  ＦＩＧＳ．６−１１、Ｋｌｅｉｎ，  Ａ．Ｗ．，（１９９８）Ｐａｒｔｉａｌ  Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ：ｔｈｅ  Ｒｏｌｅ  ｏｆ  Ｌｉｖｅｒ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ，  Ｍｕｓｂｙ（ｐｕｂｌ．）  ｉｎ  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｓｕｒｇｉｃａｌ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ６．ｓｕｐ．  ｔｈ  Ｅｄ．  Ｃａｍｅｒｏｎ，  Ｊ．（ｅｄ））。
【０１８０】
用語「肝炎」は、肝臓の炎症をいう。肝炎は、細菌、ウイルス（Ａ型、Ｂ型、Ｃ型、その他の肝炎）又は寄生虫等の様々な生物体による感染が原因で起こる。アルコール、薬、毒キノコ等の化学的毒素もまた肝臓を損傷し、炎症を引き起こす。稀ではあるが、肝炎の極めて危険な原因はアセトアミノフェン（タイレノール）の過剰摂取であり、死に至ることもある。また、体の免疫細胞が肝臓を攻撃し、自己免疫性肝炎を起こすこともある。肝炎には、迅速に回復するもの（急性肝炎）と長期疾患の原因となるもの（慢性肝炎）がある。進行性の肝障害又は肝不全に移行する場合もある。肝炎の発症率及び重症度は、肝障害の原因及び患者の潜在疾患等、多数の要因により異なる。
【０１８１】
一つの実施形態では、本発明は、ＴＮＦα活性が有害である肝疾患が治療されるように、有効量のＴＮＦα阻害薬を患者に投与することを含む、前記肝疾患の治療方法を特徴とする。一つの実施形態では、Ｃ型肝炎ウイルス、自己免疫性肝炎、脂肪肝疾患、Ｂ型肝炎ウイルス、肝毒性、及び、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）を含む非アルコール性肝炎から成る群から肝疾患を選択する。肝疾患の例については下記に詳述する。
【０１８２】
１．Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）
腫瘍壊死因子は、Ｃ型肝炎ウイルスの病理生理学と関係がある（Ｇｏｎｚａｌｅｚ−Ａｍａｒｏ．（１９９４）  Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ．  １７９：８４１−８、Ｎｅｌｓｏｎ  ＤＲ，ら（１９９７）  Ｄｉｇ  Ｄｉｓ  Ｓｃｉ  ４２：２４８７−９４、Ｋａｌｌｉｎｏｗｓｋｉ  Ｂ，ら（１９９８）  Ｃｌｉｎ  Ｅｘｐ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １１１：２６９−７７を参照のこと）。
【０１８３】
用語「Ｃ型肝炎ウイルス」又は「ＨＣＶ」は、非Ａ肝炎、非Ｂ肝炎の原因因子である肝炎を表すために使用する。Ｃ型肝炎ウイルスは肝臓の炎症を引き起こす。ＨＣＶ感染は、Ｃ型肝炎の原因となる。急性期のＣ型肝炎は、一般的にＢ型肝炎よりも軽度であるが、Ｃ型肝炎のほうが高い確率で慢性化する。ＨＣＶは、急性肝炎、肝硬変及び肝癌を含む慢性肝疾患の主な原因である。ＨＣＶはウイルス（Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、及びＥ）の一つで、これらのウイルスがウイルス性肝炎の症例の大多数を占める。エンベロープを有するＲＮＡウイルスで、フラビウイルス科に属し、宿主範囲は狭いと思われる。このウイルスの重要な特徴は、そのゲノムが比較的変異性であり、このことは、翻って、恐らく慢性感染を誘発する高い傾向（８０％）と関係がある。ＨＣＶは幾つかの特徴的な遺伝子形質に分類されるが、これは、前記疾患の重症度及び治療反応の決定に重要と考えられる。一つの実施形態では、本発明のＴＮＦα抗体又はその抗原結合フラグメントは、ＨＣＶを治療するために使用することができる。
【０１８４】
一つの実施形態では、本発明のＴＮＦα抗体を用いてＨＣＶ感染患者を治療する。ＨＣＶ感染（Ｃ型肝炎）の症状には、少なくとも次に上げる症状が含まれる。黄疸、腹痛（特に右上腹部）、疲労、食欲喪失、嘔気及び嘔吐、微熱、蒼白又は土色の便、暗色尿、全身そう痒。しかし、Ｃ型肝炎に感染している患者の多くには症状は発現せず、通常の身体検査又は検診の血液検査でＣ型肝炎が検出されることが多いことに注目されたい。
【０１８５】
２．自己免疫性肝炎（ＡＩＨ）
腫瘍壊死因子は、自己免疫性肝炎の病理生理学と関係がある（Ｃｏｏｋｓｏｎ  Ｓ．ら（１９９９）  Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ  ３０（４）：８５１−６、Ｊａｚｒａｗｉ  Ｓ．ら（２００３）  Ｌｉｖｅｒ  Ｔｒａｎｓｐｌ．  ９（４）：３７７−８２を参照のこと）。本明細書で使用する「自己免疫性肝炎」は、劣等な免疫細胞が、外来組織又は病原体（病原菌）と肝臓の正常細胞を間違えることにより起こる肝臓の炎症を特徴とする肝疾患をいう。自己免疫性肝炎は、肝実質の進行性の破壊が原因で、未治療のまま放置すると高い確率で死亡する（Ｊｏｈｎｓｏｎ  Ｐ．Ｊ．ら（１９９３）  Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ，  １８：９９８−１００５）。自己免疫性肝炎の特徴の一つは、患者の血清のほぼ９０％に循環自己抗体が存在することである。このような抗体は、自己免疫性肝炎患者を特定するために使用することができる。
【０１８６】
患者の臨床的及び血清学的な違いにより、ＡＩＨを２つの型に分類できる。１型の特徴は、抗平滑筋抗体（ＳＭＡ）及び／又は抗核抗体（ＡＮＡ）が患者の血清中に存在することであり、一方、ＩＩ型患者の血清は、抗肝腎マイクロゾーム抗体１型（ＬＫＭ１）を示す（Ｈｏｍｂｅｒｇｊ．  Ｃ．ら（１９８７）  Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ，  ７：１３３３−１３３９、Ｍａｇｇｉｏｒｅ  Ｇ．ら（１９９３）  Ｒ  Ｐｅｄｉａｔｒ．  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ  Ｎｕｔｒ．，  １７：３７６−３８１）。ＩＩ型ＡＩＨ患者の３０％に、血清マーカー（抗肝サイトゾルＩ型抗体（ＬＣ１））が確認されている。また、検査した患者の１０％では、ＬＣ１が唯一の血清マーカーであることを証明された（Ｍａｒｔｉｎｉ  Ｅ．ら（１９８８）  Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ，  ８：１６６２−１６６６）。一つの実施形態では、本発明のＴＮＦα抗体又はその抗原結合フラグメントは、ＡＩＨを治療するために使用できる。
【０１８７】
３．脂肪肝疾患
腫瘍壊死因子は、脂肪肝疾患の病理生理学と関係がある（Ｖａｌｅｎｔｉ  Ｌ．ら（２００２）  Ｇａｓｔｒｏｅｎｅｒｏｌｏｇｙ  １２２（２）：２７４−８０、Ｌｉ  Ｚ．ら（２００３）  Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ  ３７（２）：３４３−５０を参照のこと）。脂肪肝疾患とは、脂肪（肝細胞）が肝臓に過剰に蓄積される疾患をいう。脂肪肝疾患は、栄養過多、アルコールの過剰摂取、糖尿病及び医薬品投与による副作用が原因と考えられている。脂肪肝疾患は慢性肝炎及び肝硬変等の重度疾患の原因となり得る。脂肪肝疾患患者では、生理的許容範囲を超える量の脂質、特に中性脂肪が肝細胞に蓄積する。生化学の観点から見ると、脂肪肝の判断基準とは、中性脂肪の重量が肝組織の湿重量の約１０％若しくはそれ以上（１００ｍｇ／ｇ湿重量）である。一つの実施形態では、本発明のＴＮＦα抗体又はその抗原結合フラグメントは、脂肪肝疾患を治療するために使用できる。
【０１８８】
４．Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）
腫瘍壊死因子は、Ｂ型肝炎ウイルスの病理生理学と関係がある（Ｋａｓａｈａｒａ  Ｓ．ら（２００３）  Ｊ  Ｖｉｒｏｌ．  ７７（４）：２４６９−７６、Ｗａｎｇ  Ｆ．Ｓ．，（２００３）  Ｗｏｒｌｄ  Ｊ  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．  ９（４）：６４１−４、Ｂｉｅｒｍｅｒ  Ｍ．ら（２００３）  Ｊ  Ｖｉｒｏｌ．  ７７（７）：４０３３−４２を参照のこと）。用語「Ｂ型肝炎ウイルス」（ＨＢＶ）は、ヒトのＢ型肝炎を生じるウイルス（血清肝炎ウイルス）を表すのに使用する。これは、潜伏期間の短いＡ型肝炎ウイルス（感染性肝炎ウイルス）とは対照的に、長い潜伏期間（約５０〜１６０日）を有するウイルス性疾患である。Ｂ型肝炎ウイルスは通常、感染血又は血液製剤の注入、若しくは稀ではあるが汚染した注射針、ランセット又はその他の器具の使用により伝染する。臨床的及び病理学的に、この疾患はＡ型肝炎と類似しているが、相互の交差免疫はない。ウイルス抗原（ＨＢＡＧ）が感染後血清中に見出される。
【０１８９】
Ｂ型肝炎は極めて高い確率でヒトに感染する。Ｂ型肝炎に感染したヒトのほとんどにおいて、６ヶ月以内にウイルスは体外へ排除される。短期間の感染は、「急性」Ｂ型肝炎として知られている。少なくとも３億人がＨＢＶの慢性保菌者であると推測される。Ｂ型ウイルス感染の臨床症状は様々で、軽いインフルエンザ様症状から死亡まである。一つの実施形態では、本発明のＴＮＦα抗体又はその抗原結合フラグメントは、ＨＢＶ感染を治療するために使用できる。
【０１９０】
５．肝毒性
腫瘍壊死因子は、肝毒性の病理生理学と関係がある（Ｂｒｕｃｃｏｌｅｒｉ  Ａ．ら（１９９７）  Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ  ２５（１）：１３３−４１、Ｌｕｓｔｅｒ  Ｍ．Ｉ．ら（２０００）Ａｎｎ  ＮＹ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ．  ９１９：２１４−２０、Ｓｉｍｅｏｎｏｖａ  Ｐ．ら（２００１）Ｔｏｘｉｃｏｌ  Ａｐｐｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．  １７７（２）：１１２−２０を参照のこと）。肝毒性という用語は、薬物及びその他の化学薬品又は薬が原因で生じる肝障害を指す。患者の肝毒性を確認する最良の指標は、ＡＳＴ（アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ）、ＡＬＴ（アラニンアミノトランスフェラーゼ）及びＧＯＴ（グルタミン酸オキザロ酢酸トランスアミナーゼ）等、特定の血中酵素測定値の上昇である。
【０１９１】
肝毒性は、永久的な障害及び死亡の原因となり得る。肝毒性の初期症状には、重症の下痢等、急性胃腸疾患がある。肝毒性の第二相の特徴は、症状の寛解である。この明白な鎮静の間に、肝障害の生化学的証拠が現れる。乏尿（排尿量の減少）は、通常第二相で生じる。明白な肝損傷を示す第三相は、化学薬品の摂取後３〜５日で臨床的に識別できるようになり、黄疸が発現する。腎不全を発症することもある。化学薬品誘発型（薬剤誘発型）肝炎の症状は、感染性肝炎と類似している。一つの実施形態では、本発明のＴＮＦα抗体又はその抗原結合フラグメントは、肝毒性を治療するために使用できる。
【０１９２】
６．肝不全（例えば、慢性肝不全）
腫瘍壊死因子は、肝不全（例えば、慢性肝不全）の病理生理学と関係がある（Ｔａｋｅｎａｋａ  Ｋ．ら（１９９８）  Ｄｉｇ  Ｄｉｓ  Ｓｃｉ．  ４３（４）：８８７−９２、Ｎａｇａｋｉ  Ｍ．ら（１９９９）  Ｊ  Ｈｅｐａｔｏｌ．  ３１（６）：９９７−１００５、Ｓｔｒｅｅｔｚ  Ｋ．ら（２０００）  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ．  １１９（２）：４４６−６０を参照すること）。慢性肝不全を含む肝不全は通常、長期間をかけて発症するが、肝臓を繰り返し侵襲し（アルコール乱用又は肝炎ウイルスに感染等により）、ゆっくりと肝臓を損傷する。頻度は低いものの、数日又は数週間で発生する急性肝不全もある。急性肝不全の原因には、肝炎ウイルス感染、薬、妊娠、自己免疫性疾患、及び肝臓への血流の急減等がある。一つの実施形態では、本発明のＴＮＦα抗体又はその抗原結合フラグメントは、肝不全を治療するために使用できる。
【０１９３】
７．ＮＡＳＨを含む非アルコール性肝炎
腫瘍壊死因子は、非アルコール性脂肪肝炎を含む非アルコール性肝炎の病理生理学と関係がある（Ｃｒｅｓｐｏ  Ｊ．ら（２００１）  Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ．  ３４（６）：１１５８−６３、Ｐｅｓｓａｙｒｅ  Ｄ．ら（２００２）  ２８２（２）：Ｇ１９３−９を参照のこと）。用語「非アルコール性脂肪肝炎」又は「ＮＡＳＨ」とは、アルコール乱用がないにもかかわらず肝臓に生じる組織学的変化の発生をいい、アルコールの過剰摂取により誘発される肝臓の組織学的変化と比較可能である。ＮＡＳＨの特徴は、大滴性及び／又は小滴性の脂肪変性、小葉および門脈の炎症、及び時折の線維症及び硬変を伴うマロリー小体である。ＮＡＳＨはまた、高脂血症、肥満、及びＩＩ型真性糖尿病を併発することが多い。
【０１９４】
肝臓脂肪症及び炎症の特徴である臨床症状は他にも、異常な飢餓、空腸回腸バイパス、完全静脈栄養法、慢性Ｃ型肝炎、ウィルソン病、及び副腎皮質ステロイド、カルシウムチャネル遮断薬、高用量の合成エストロゲン、メトトレキセート及びアミオダロン等の副作用がある。従って、（ａ）多量のアルコール消費、（ｂ）以前に減量手術を施術、（ｃ）脂肪肝炎に関連する薬歴、（ｄ）肝臓の遺伝病の証拠、又は（ｅ）慢性Ｃ型肝炎に感染、がないにもかかわらず、これらの生検の所見を示す患者を用語「非アルコール性脂肪肝炎」と記述できる（Ｌｕｄｗｉｇ，  Ｊ．Ｒ．ら（１９８０）  Ｍａｙｏ  Ｃｌｉｎ．  Ｐｒｏｃ．，  ５５：４３４、Ｐｏｗｅｌｌ  Ｅ．ら（１９９０）  Ｈｅｐａｔｏｌ．，  １１：７４を参照のこと）。一つの実施形態では、本発明のＴＮＦα抗体又はその抗原結合フラグメントは、ＮＡＳＨを治療するために使用できる。
【０１９５】
Ｈ．皮膚疾患及び爪疾患
一つの実施形態では、本発明のＴＮＦα抗体は、皮膚疾患及び爪疾患を治療するために使用される。本明細書で使用する用語「ＴＮＦα活性が有害の皮膚疾患及び爪疾患」は、前記疾患患者にＴＮＦαの存在が明白である、又は前記疾患の病理生理学に原因がある、若しくは前記疾患の悪化（例えば、乾癬）の一因である要因の何れかの存在が疑われる皮膚及び／又は爪の疾患及び他の疾患を含む。従って、ＴＮＦαが有害である皮膚疾患及び爪疾患は、ＴＮＦα活性を抑制することにより、前記疾患の症状及び／又は進行を緩和することが期待される疾患である。皮膚及び爪の疾患の治療における本発明の抗体、抗体部分及び他のＴＮＦα阻害薬の具体的な使用に関しては、下記に詳述する。特定の実施形態では、第ＩＩＩ項に記述した通りに別の治療薬と組み合わせて、本発明の抗体、抗体部分又は他のＴＮＦα阻害薬を投与する。一つの実施形態では、乾癬の治療及び関節炎を伴う乾癬の治療に別の治療薬と組み合わせて患者に本発明のＴＮＦα抗体を投与する。
【０１９６】
１．乾癬
腫瘍壊死因子は、乾癬の病理生理学と関係がある（Ｔａｋｅｍａｔｓｕら（１９８９）Ａｒｃｈ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ  Ｒｅｓ．  ２８１：３９８、Ｖｉｃｔｏｒ  ａｎｄ  Ｇｏｔｔｌｉｅｂ（２００２）  Ｊ  Ｄｒｕｇｓ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ．  １（３）：２６４）。乾癬は、頻繁に発症する発赤、そう痒、及び皮膚上の乾燥した厚い銀色の板状鱗屑を特徴とする皮膚の炎症（過敏及び発赤）である。特に、病変の形成は、リンホカイン及び炎症性要因等の、表皮増殖、皮膚の炎症反応、及び調節分子の発現の第一次及び第二次の変化を伴う。
【０１９７】
乾癬の皮膚の形態学的な特徴は、表皮細胞の代謝回転の増加、表皮の肥厚、異常な角化、表皮に浸潤する炎症細胞及び表皮層への多形核白血球及びリンパ球の浸潤があり，この結果、基底細胞のサイクルが増加する。乾癬は爪に発症することが多く、点状凹窩、爪の剥離、肥厚及び変色が高頻度で現れる。乾癬は、関節リウマチを含む関節炎、炎症性腸疾患（ＬＢＤ）及びクローン病等の他の炎症性疾患を伴うことが多い。
【０１９８】
乾癬の証拠は、体幹、肘、膝、頭皮、皮膚のひだ状の部分、指の爪に最も一般的に見られるが、皮膚の何れの部分も冒され得る。通常は、深層から表層へ新しい皮膚細胞が移動するのに約１ヶ月かかるが、乾癬の場合では、このプロセスはほんの数日のみであるため、死んだ皮膚細胞及び厚い板状鱗屑が蓄積する。乾癬の症状には、乾燥又は発赤しており、銀色の板状鱗屑で覆われた境界が赤く隆起した皮膚斑、ひび割れが原因で疼痛がある皮膚斑、及び通常は肘、膝、体幹、頭皮及び手にある皮膚斑、膿疱、皮膚のひび割れ、皮膚の発赤を含む皮膚の病変、関節痛又は関節炎（例えば、乾癬性関節炎）に付随する疼痛がある。
【０１９９】
乾癬の治療には、局所的用副腎皮質ステロイド、ビタミンＤ類似体、局所用又は経口レチノイド、又はこれらの組み合わせを使用することが多い。一つの実施形態では、本発明のＴＮＦα阻害薬を、上記の一般的治療の一つと組み合わせるか、又は投与後に投与する。上記以外で乾癬治療のために本発明のＴＮＦα阻害薬と組み合わせることも可能な治療薬については、第ＩＩＩ．Ｂ項に更に詳細に記述する。
【０２００】
乾癬の診断は通常、皮膚の外観を基に行う。他の皮膚疾患を除外するためには、更に、皮膚の生検又は掻爬及び皮膚斑の培養が必要とされ得る。関節痛があり、持続する場合には、乾癬性関節炎確認のためにＸ線を用いることもある。
【０２０１】
一つの実施形態では、本発明のＴＮＦα阻害薬を使用して、慢性プラーク乾癬、滴状乾癬、間擦疹型乾癬、膿疱性乾癬、尋常性天疱瘡、乾癬性紅皮症、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）を伴う乾癬、及び関節リウマチ（ＲＡ）を伴う乾癬を含む感染を治療する。本発明の治療方法に含めた乾癬の具体的な種類を下記に詳述する。
【０２０２】
ａ．慢性プラーク乾癬
腫瘍壊死因子は、慢性プラーク乾癬の病理生理学と関係する（Ａｓａｄｕｌｌａｈら（１９９９）  Ｂｒ  Ｊ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ．  １４１：９４）。慢性プラーク乾癬（尋常性乾癬とも呼ぶ）は、乾癬の最も一般的な型である。慢性プラーク乾癬の特徴は、皮膚斑が発赤して隆起することで、サイズは硬貨ほどからそれよりも大きいものまである。慢性プラーク乾癬では、プラークの数は１個又は複数で、大きさは２，３ｍｍから数ｃｍまでと様々である。プラークは通常赤く、表面は鱗状で、静かに掻爬すると「銀のような」効果を出して光を反射する。慢性プラーク乾癬の病変（対称的であることが多い）は、体全体に現れるが、膝、肘、腰仙部、頭皮及び爪を含む伸筋の表面に現れる傾向がある。時折、慢性プラーク乾癬は陰茎、外陰部及び彎曲部に生じることがあるが、通常は、剥離は見られない。慢性プラーク乾癬患者の診断は一般的に、上記の臨床特徴を基に行う。特に、慢性プラーク乾癬の特徴は、前記病変の分布、色、典型的な銀の板状鱗屑である。
【０２０３】
ｂ．滴状乾癬
滴状乾癬とは、水滴形の鱗状プラークを特徴とする乾癬をいう。滴状乾癬の発赤は、通常、感染後に現れ、連鎖球菌性咽頭炎が最も顕著である。滴状乾癬の診断は通常、皮膚の外観及び最近の咽頭炎罹患回数を基にして下す。
【０２０４】
ｃ．間擦疹型乾癬
間擦疹型乾癬は、患部の皮膚が滑らかで、通常湿っており、赤く炎症を起こしているが、プラーク乾癬に伴う板状鱗屑とは異なる型の乾癬である。間擦疹型乾癬はまた、間擦部の乾癬又は屈側部の乾癬とも呼ばれる。間擦疹型乾癬は、主として、腋窩、鼠径部、乳房の下、及び性器及び臀部周辺の他の皮膚のひだ状部分に生じ、症状が現れる位置により、摩擦及び発汗によって患部を刺激する。
【０２０５】
ｄ．膿疱性乾癬
膿疱性乾癬は、大きさ及び位置が異なる膿疱を生じる型の乾癬で、手及び足に生じることが多い。前記膿疱は局在するか、又は体の大きな部分全体に広がることがある。膿疱性乾癬には圧痛、疼痛があり、発熱する。
【０２０６】
ｅ．その他の乾癬疾患
本発明のＴＮＦα抗体を用いて治療可能なその他の感染疾患の例には、乾癬性紅皮症、尋常性乾癬、ＩＢＤを併発する乾癬、及び関節リウマチを含む関節炎を併発する乾癬がある。
【０２０７】
２．尋常性天疱瘡
尋常性天疱瘡は、口腔粘膜及び皮膚に好発する重篤な自己免疫性の全身皮膚疾患である。尋常性天疱瘡の病原は、皮膚及び口腔粘膜の接着斑に対する自己免疫プロセスであると考えられており、細胞が互いに接着しなくなる。前記疾患は、液の充満した、破裂傾向にある大きな水泡として発現し、その外観は組織学的に特徴がある。高死亡率であるこの疾患の唯一の有効な治療は抗炎症剤である。尋常性天疱瘡患者に起こる合併症は難治性疼痛、栄養障害及び体液喪失、感染症である。
【０２０８】
３．アトピー性皮膚炎／湿疹
アトピー性皮膚炎（湿疹とも呼ばれる）は、そう痒を伴う鱗状のプラークにより分類される慢性皮膚疾患である。湿疹患者は、喘息、花粉症又は湿疹等のアレルギー症状の家族歴を有することが多い。アトピー性皮膚炎は皮膚に生じる超過敏反応（アレルギーに類似）で、慢性炎症となる。前記炎症によって、皮膚にそう痒と鱗屑が生じる。慢性の刺激及び引っかき行動が長期化すると、皮膚が肥厚し、革のような肌になることがある。皮膚乾燥、水への曝露、気温変化及びストレスと同様に、環境刺激への曝露により症状は悪化する。
【０２０９】
アトピー性皮膚炎患者の識別は特定の症状により可能である。前記症状には、激しいそう痒、毛細血管出血及びかさぶた形成を伴う水疱、水疱周囲の皮膚の発赤又は炎症、発疹、乾燥、革のようになった皮膚の部分、引っかき行動による生傷、及び耳漏／出血がある。
【０２１０】
４．サルコイドーシス
サルコイドーシスは、肉芽腫性炎がリンパ腺、肺、肝臓、眼、皮膚、及び／又はその他の組織に生じる疾病である。サルコイドーシスには、皮膚サルコイドーシス（皮膚のサルコイドーシス）及び結節型サルコイドーシス（リンパ節のサルコイドーシス）がある。サルコイドーシス患者は、全身の不快感、不安、又は不信感、発熱、皮膚病変等の症状で識別できる。
【０２１１】
５．結節性紅斑
結節性紅斑は、圧痛、皮下の小結節の発赤（通常、下腿伸側に好発する）を特徴とする炎症性疾患をいう。結節性紅斑を伴う病変は、初めは、扁平であるが硬く、熱を有して赤くなった疼痛を伴う瘤（直径約１インチ）であることが多い。数日以内に、前記病変は紫色になり、数週間後には退色して褐色の扁平な斑となる。
【０２１２】
結節性紅斑は、時には、連鎖球菌、コクシジウム症、結核、Ｂ型肝炎、梅毒、ねこひっかき病、野兎病、エルシニア、レプトスピラ症、オウム病、ヒストプラスマ症、単核球症（ＥＢＶ）等の感染症を伴い得る。また、結節性紅斑は、経口避妊薬、ペニシリン、スルホンアミド、スルホン、バルビツール酸塩、ヒダントイン、フェナセチン、サリチル酸塩、ヨウ化物、及びプロゲスチン等の特定薬剤に対して過敏である場合もある。結節性紅斑は、白血病、サルコイドーシス、リウマチ熱及び潰瘍性大腸炎等の他の疾患を伴うことが多い。
【０２１３】
結節性紅斑の症状は通常、脛に好発するが、病変は臀部、脹脛、足首、大腿部及び上肢等、体の他の部分にも生じることもある。結節性紅斑患者の他の症状には、熱及び倦怠感がある。
【０２１４】
６．化膿性汗腺炎
化膿性汗腺炎とは、疼痛を有する腫大した炎症性病変が、鼠径部、時折腕又は胸の下に発生する皮膚疾患をいう。化膿性汗腺炎は、アポクリン腺の開口が発汗によりブロックされる、又は腺の発達が不完全なため正常に排出しない時に発症する。腺に閉じ込められた分泌物が発汗及び細菌を周辺組織に押し込めるため、皮下の硬結、炎症及び乾癬を発症する原因となる。化膿性汗腺炎は、アポクリン腺がある体の部分に限局される。この部分は、腋窩、乳頭輪、鼠径部、会陰、肛門周囲、及び臍部である。
【０２１５】
７．扁平苔癬
腫瘍壊死因子は扁平苔癬の病理生理学と関係がある（Ｓｋｌａｖｏｕｎｏｕら（２０００）  Ｊ  Ｏｒａｌ  Ｐａｔｈｏｌ  Ｍｅｄ．  ２９：３７０）。扁平苔癬とは、炎症、そう痒及び顕著な皮膚病変を生じる皮膚及び粘膜の疾患である。扁平苔癬は、Ｃ型肝炎又は特定の薬剤療法で併発することもある。
【０２１６】
８．スイート症候群
腫瘍壊死因子を含む炎症性サイトカインは、スイート症候群の病理生理学と関係がある（Ｒｅｕｓｓ−Ｂｏｒｓｔら（１９９３）  Ｂｒ  Ｊ  Ｈａｅｍａｔｏｌ．  ８４：３５６）。１９６４年にＲ．Ｄ．  Ｓｗｅｅｔが論文発表したスイート症候群の特徴は、突然の発熱、白血球増多症及び皮疹である。皮疹は、境界が明白な柔らかい紅斑性の丘疹及び斑で、顕微鏡で高密度の好中球浸潤が見える。病変は何処にでもできるが、顔を含む上半身に好発する。個々の病変は、偽小胞又は偽膿包と言われることが多いが、単純に、膿包性、水疱性、又は潰瘍性とすることもある。また、口腔及び眼（結膜炎又は上強膜炎）の症状もスイート症候群患者では報告されることが多い。スイート症候群は白血病を伴う。
【０２１７】
９．白斑
白斑は、皮膚の色素が部分的になくなり、正常な肌に規則性の無い白い斑点が生じる皮膚の症状をいう。白斑の病変の特徴は、脱色した扁平部分として現れる。病変の境界は明瞭であるが不規則である。白斑の好発部位は、顔、肘及び膝、手及び足、生殖器である。
【０２１８】
１０．強皮症
腫瘍壊死因子は、強皮症の病理生理学と関係がある（Ｔｕｔｕｎｃｕ  Ｚら（２００２）Ｃｌｉｎ  Ｅｘｐ  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．  ２０（６  Ｓｕｐｐｌ  ２８）：Ｓ１４６−５１、Ｍａｃｋｉｅｗｉｃｚ  Ｚら（２００３）  Ｃｌｉｎ  Ｅｘｐ  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ  ２１（１）：４１−８、Ｍｕｒｏｔａ  Ｈら（２００３）  Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ．  ４８（４）：１１１７−２５）。強皮症とは、びまん性の結合組織疾患で、皮膚、血管、骨格筋及び内臓の変化が特徴である。強皮症はまた、クレスト症候群又は汎発性強皮症とも呼ばれ、通常は３０〜５０歳に好発し、男性よりも女性に好発する。
【０２１９】
強皮症の原因は不明である。局所的又は全身的な症状を生じる。前記疾患の経過及び重症度は患部により異なる。皮膚及び他の臓器に過剰なコラーゲンが蓄積したために、症状を生じる。皮膚及び患部臓器内の小血管も損傷する。潰瘍、石灰化及び色素沈着の変化が皮膚に起こることもある。全身的な症状の特徴は、線維症及び心臓、肺、腎臓、胃腸管の変性である。
【０２２０】
強皮症患者は、寒暑に反応して指及び足指の白化、青色化、又は発赤（指虚血現象）、疼痛、硬直、及び指及び関節の腫脹、皮膚の肥厚、及び手及び前腕のてかり、食道逆流又は胸やけ、嚥下困難及び息切れ等、特定の臨床特徴を示す。強皮症診断に用いる他の臨床症状には、赤血球沈降速度（ＥＳＲ）上昇、リウマチ因子（ＲＦ）上昇、抗核抗体テスト陽性、尿検査におけるタンパク質及び微量の血液観察、胸部Ｘ線検査による線維症観察、及び肺機能検査により拘束性肺疾患観察がある。
【０２２１】
１１．爪疾患
爪疾患は、すべての爪の異常を含む。具体的な爪疾患には、これらに限定されるものではないが、くぼみ、匙形爪甲、ボー線、スプーン状爪、爪離床症、黄色爪、翼状爪膜（扁平苔癬で見られる）、及び爪白斑がある。くぼみの特徴は、爪甲上にある小さな陥凹である。隆線又は直線の挙上が爪の「縦方向」又は「対角線上」の方向に発生する。ボー線は線状のくぼみで、指の爪の「対角線」（横）に発生する。爪白斑は、爪に白い線条又は斑点を描く。匙形爪甲は、指の爪に稜線ができ、薄く凹面になる指の爪の異常である。匙形爪甲は鉄欠乏に伴って生じることが多い。
【０２２２】
本発明のＴＮＦα抗体を用いて治療できる爪疾患にはまた、爪乾癬がある。爪乾癬とは、乾癬に起因する爪の変化をいう。乾癬が爪にのみ発生し、体には発生しない場合がある。爪の乾癬変化は軽度から重度まであり、一般的に、爪体、爪母基（すなわち、爪の成長を司る組織）、爪床（すなわち、爪の下の組織）及び爪を支える皮膚への状態の程度を反映する。爪床が膿疱性乾癬により損傷を受けると、爪を喪失することもある。乾癬による爪の変化は、一般的な部類に属し、単独又は同時に発生する。爪乾癬の部類の一つでは、深いくぼみができるが、これは、恐らく乾癬による爪の成長不良が原因である。別の部類では、爪は黄色から黄色味を帯びたピンクへと変色するが、これは、恐らく爪床に乾癬が生じたためである。爪乾癬の第三部類の特徴は、爪体の下に現れる白い部位である。前記白い部位は、実際には気泡で、爪体が爪床から剥離する場所を示す爪周辺の皮膚が発赤することもある。第４部類は、爪体が崩れて黄色味を帯びた斑点が現れること（すなわち、爪ジストロフィ）によって立証される。これは、恐らく、爪母基に乾癬が生じたために生じる。第５部類の特徴は、爪の完全な喪失である。乾癬が爪母基及び爪床に生じたために起こる。
【０２２３】
本発明のＴＮＦα抗体は、また、扁平苔癬を伴うことが多い爪疾患の治療に使用することができる。扁平苔癬患者の爪は薄く、爪体の表面が粗く、縦の隆線又は翼状片がある。
【０２２４】
本発明のＴＮＦα抗体は、本明細書に記述の爪疾患を治療するために使用することができる。爪疾患は皮膚疾患を伴うことが多い。一つの実施形態では、本発明はＴＮＦα抗体を用いた爪疾患治療法を含む。別の実施形態では、爪疾患は、乾癬等の皮膚疾患を含む別の疾患を伴う。別の実施形態では、爪疾患を伴う疾患は、乾癬性関節炎を含む関節炎である。
【０２２５】
１２．その他の皮膚及び爪疾患
本発明のＴＮＦα抗体は、慢性光線性皮膚炎、類天疱瘡、及び円形脱毛症等の他の皮膚及び爪疾患を治療するために使用することができる。慢性光線性皮膚炎（ＣＡＤ）はまた、光過敏性皮膚炎／光線性類細網症（ＰＤ／ＡＲ）とも呼ばれる。ＣＡＤは、特に日光又は人工光に曝露した部分の皮膚が炎症を起こす疾患である。一般的に、ＣＡＤ患者は、その皮膚に接触する特定の物質に対してアレルギーがあり、特に、各種花、木、香水、日焼け止め及び化合物である。類天疱瘡は、体幹及び四肢に大きな水疱を形成する特徴のある皮膚疾患をいう。円形脱毛症は、頭皮又髭に丸く完全に禿げた部分があるのが特徴である。
【０２２６】
Ｉ．脈管炎
ＴＮＦαは多種多様な脈管炎の病理生理学と関係がある（例として、Ｄｅｇｕｃｈｉら（１９８９）  Ｌａｎｃｅｔ．  ２：７４５を参照のこと）。一つの実施形態では、本発明はＴＮＦα活性が有害である血管患者のＴＮＦα活性を抑制する方法を提供する。
【０２２７】
本明細書で使用する用語「ＴＮＦα活性が有害である血管炎」は、前記疾患患者にＴＮＦαの存在が明白である、又は前記疾患の病理生理学に原因がある、若しくは前記疾患の悪化の一因である要因の何れかの存在が疑われる血管炎を含む。前記疾患の証明は、例えば、疾患患者の体液中のＴＮＦα濃度が上昇することにより可能で（例えば、患者の血清、血漿、滑液等のＴＮＦα濃度の上昇）、例えば、上述のように抗ＴＮＦα抗体を用いて検出することができる。
【０２２８】
ＴＮＦα活性が有害である脈管炎の例はベーチェット病等多数ある。具体的な脈管炎の治療における本発明の抗体、抗体部分及び他のＴＮＦα阻害薬の使用については、下記に詳述する。特定の実施形態では、本発明の抗体、抗体部分又は他のＴＮＦα阻害薬は、別の治療薬と、下記の通りに組み合わせて患者に投与する。本発明の抗体は、ＴＮＦαが有害である血管炎を治療するために使用することができる。ＴＮＦα活性の抑制により、血管炎の症状及び／又は進行の緩和、又は血管炎の予防が期待される。血管炎患者又は血管炎発症のリスクを有する患者は、臨床症状及び検査によって識別することができる。例えば、脈管炎患者は好中球の細胞質、抗好中球細胞質抗体（ＡＮＣＡ）の特定のタンパク質に対する抗体を生じることが多い。従って、脈管炎は、ＡＮＣＡの存在を測定する検査（例えば、ＥＬＩＳＡ）によって証明される場合がある。
【０２２９】
血管炎及びその予後は、疾患の単独発現であることもあり、又は、別の原疾患の第二要素であることもある。血管炎は、単一の臓器に限局することもあるが、同時に数個の臓器を冒すこともあり、症状、罹患した動脈及び静脈の全サイズにより異なる。血管炎は体の臓器全てに発症する。
【０２３０】
血管炎の場合、通常、血管内腔が損なわれ、同時に当該血管が供給する組織が虚血となる。このプロセスにより起こる疾患が広範囲であるのは、血管の種類、サイズ及び部位（例えば、動脈、静脈、細動脈、細静脈、毛細血管）に関係がある。脈管炎は一般的に、下記のように、罹患した血管のサイズに基づき分類される。大血管及び小血管の脈管炎の中には、中サイズの動脈を冒すことがあるが、大及び中サイズの血管の脈管炎は動脈より小さい血管を冒さないことに注目されたい。大血管の血管疾患には、これに限定されるものではないが、側頭動脈炎又は頭蓋動脈炎としても知られる巨細胞性動脈炎、リウマチ性多発筋痛症、及び大動脈炎症候群、若年女性に発症する動脈炎及び脈なし病としても知られる高安病又は動脈炎がある。中サイズの血管疾患には、これに限定されるものではないが、古典的結節性多発動脈炎、及び粘膜皮膚リンパ節症候群としても知られる川崎病がある。小血管疾患の例は限定されておらず、ベーチェット症候群、ウェーグナー肉芽腫症、顕微鏡的多発血管炎、皮膚血管炎としても知られる過敏性血管炎、小血管炎、ヘノッホシェーンライン紫斑病、チャーグ・ストラウス症候群としても知られるアレルギー性肉芽腫性血管炎がある。他の脈管炎には、これに限定されるものではないが、続発性中枢神経系血管炎及びバージャー病としても知られる閉塞性血栓性血管炎がある。古典的結節性多発性動脈炎（ＰＡＮ）、顕微鏡的ＰＡＮ、及びアレルギー性肉芽腫症は一まとめにされ、全身性壊死性脈管炎と呼ばれる。血管炎の更に詳細な説明は下記に記す。
【０２３１】
大血管炎
一つの実施形態では、本発明のＴＮＦα抗体を使用して大血管炎患者を治療する。本明細書で使用する用語「大血管（ｌａｒｇｅ  ｖｅｓｓｅｌ）」とは、大動脈及び体の主な部分に向かう最も大きな血管分枝をいう。大血管には、例えば、大動脈、その分枝及び対応する静脈（例えば、鎖骨下動脈）、腕頭動脈、総頚動脈、無名静脈、内及び外頚静脈、肺動脈及び肺静脈、大静脈孔、腎動脈及び腎静脈、大腿動脈及び大腿静脈、頚動脈がある。大血管の脈管炎の例は下記に記す。
【０２３２】
ａ．巨細胞性動脈炎（ＧＣＡ）
腫瘍壊死因子は、巨細胞性動脈炎の病理生理学と関係がある（Ｓｎｅｌｌｅｒ，  Ｍ．Ｃ．（２００２）  Ｃｌｅｖｅ．  Ｃｌｉｎ．  Ｊ．  Ｍｅｄ．  ６９：ＳＩＩ４０−３、Ｓｃｈｅｔｔ，  Ｇ．，ら（２００２）  Ａｎｎ．  Ｒｈｅｕｍ．  Ｄｉｓ．  ６１：４６３）。巨細胞性動脈炎（ＧＣＡ）とは、血管、特に首の外頚動脈から分枝する大動脈又は中動脈に炎症及び損傷を起こす血管炎をいう。ＧＣＡはまた、側頭動脈炎又は頭蓋動脈炎とも呼ばれ、高齢者では最も一般的な原発性血管炎である。通常は、５０歳以上に発生するが、４０歳及びそれ以下の患者の症例も論文で充分に立証されている。ＧＣＡは通常、頭蓋外動脈を冒す。ＧＣＡは、側頭動脈を含む頚動脈の分枝を冒すことがある。ＧＣＡはまた、全身性疾患で、複数の部位の動脈に発生する。
【０２３３】
組織病理学的に、ＧＣＡは、ラングハンス型巨細胞を頻繁に形成する血管壁内に炎症単各細胞浸潤を伴う汎動脈炎である。内膜の増殖、肉芽性炎及び内弾性板の断片化がある。臓器の病理学所見は、関連血管に関する虚血を示す。
【０２３４】
ＧＣＡ患者は、熱、頭痛、貧血、及び速い赤血球沈降速度（ＥＳＲ）等、特定の症状を示す。ＧＣＡの他の典型的な徴候には、顎又は舌の跛行、頭皮の圧痛、全身症状、蒼白な視神経乳頭浮腫（特に「白墨のように白い」乳頭浮腫）及び視覚障害がある。診断は、側頭動脈の生検によって確認する。
【０２３５】
ｂ．リウマチ性多発筋痛症
腫瘍壊死因子は、リウマチ性多発筋痛症の病理生理学と関係がある（Ｓｔｒａｕｂ，  Ｒ．  Ｈ．，ら（２００２）  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ（Ｏｘｆｏｒｄ）４１：４２３、Ｕｄｄｈａｍｍａｒ，  Ａ．，ら（１９９８）  Ｂｒ．  Ｊ  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．  ３７：７６６）。リウマチ性多発筋痛症とは、中等度から重度の筋痛、及び最も朝に多い首、肩、臀部にこわばりを伴うリウマチ疾患をいう。リウマチ性多発筋痛症患者では、循環単球の大多数の中にＩＬ−６及びＩＬ−１β発現も検出される。リウマチ性多発筋痛症は、単独で発生、又は血管の炎症であるＧＣＡと共存、若しくはＧＣＡを先行することもある。
【０２３６】
Ｃ．高安動脈炎
腫瘍壊死因子は、高安動脈炎の病理生理学と関係がある（Ｋｏｂａｙａｓｈｉ，  Ｙ．  ａｎｄ  Ｎｕｍａｎｏ，  Ｆ．（２００２）  Ｉｎｔｅｒｎ．  Ｍｅｄ．  ４１：４４、Ｆｒａｇａ，  Ａ．  ａｎｄ  Ｍｅｄｉｎａ  Ｆ．（２００２）  Ｃｕｒｒ．  Ｒｈｅｕｎｚａｔｏｌ．  Ｒｅｐ．  ４：３０）。高安動脈炎とは、大動脈及びその主な分枝の炎症が特徴である血管炎をいう。高安動脈炎（大動脈炎症候群、若年女性に発症する動脈炎及び脈なし病としても知られる）は、胸大動脈及び腹大動脈及びその主な分枝、又は肺動脈を冒す。大動脈壁及びその分枝の線維性肥厚（例えば、頚動脈、無名動脈及び鎖骨下動脈）により、大動脈弓から伸びる血管の内腔サイズが減少することがある。この疾患は、通常、腎動脈も冒す。
【０２３７】
高安動脈炎は、２０〜４０歳の若年女性、特にアジア人女性に好発し、倦怠感、関節痛及び重度の跛行の漸進的発症により明らかになる。大多数の患者は、左右非対称の脈拍の限弱及び腕で測定する血圧左右差を通常伴う。冠動脈及び／又は腎動脈の狭窄が起こることがある。
【０２３８】
高安動脈炎の臨床特徴は、初期の炎症性疾患と後期の炎症性疾患で異なる。高安病の初期炎症段階の臨床特徴は、倦怠感、微熱、体重減少、筋肉痛、関節痛、及び多形紅斑である。高安病の後期の特徴は、動脈の線維性狭窄及び血栓症である。発症の主な臨床特徴は、左右非対称の弱い脈拍、両腕で異なる血圧、視覚障害（例えば、暗点及び半盲、眩暈及び失神、半身麻痺又は脳卒中を含む他の神経学的特徴）等の虚血性現象である。虚血に起因する臨床特徴は動脈狭窄及び血栓症が原因である。
【０２３９】
２．中血管の血管疾患
一つの実施形態では、本発明のＴＮＦα抗体は、中血管の血管炎患者を治療するために使用することができる。用語「中血管」は、主要内臓動脈である血管を示すのに使用される。中血管の例には、腸間膜動脈及び静脈、腸骨動脈及び静脈、並びに顎動脈及び静脈がある。中血管の脈管炎の例を下記に記す。
【０２４０】
ａ．結節性多発性動脈炎
腫瘍壊死因子は、結節性多発性動脈炎の病理生理学と関係がある（ＤｉＧｉｒｏｌａｍｏ，  Ｎ．，ら（１９９７）  Ｊ．  Ｌｅｕｋｏｃ．  Ｂｉｏｌ．  ６１：６６７）。結節性多発性動脈炎又は結節性動脈周囲炎とは、小及び中サイズの動脈が、劣等免疫細胞から攻撃を受けて腫脹し損傷を受ける重篤な血管疾患である血管炎をいう。結節性多発性動脈炎は、通常、小児よりも成人に好発する。適切な血液供給なしでは充分な酸素及び栄養を受けられないため、患部血管より供給を受ける組織が損傷される。
【０２４１】
結節性多発性動脈炎患者の症状は、一般的に、冒された内臓、多くは皮膚、心臓、腎臓、神経系の損傷に由来する。結節性多発性動脈炎の全身症状には、熱、疲労、衰弱、食欲不振及び体重減少である。筋肉痛（筋痛）及び関節痛（関節痛）が一般的である。結節性多発性動脈炎患者の皮膚には、発疹、腫脹、潰瘍及び塊（結節病変）も現れる。
【０２４２】
古典的ＰＡＮ（結節性多発性動脈炎）は、中小筋型動脈の全身性の動脈炎で、一般的に腎動脈及び内臓動脈に生じる。ＰＡＮ患者の５０％に、腹部の血管には奇形又は閉塞がある。古典的ＰＡＮは、気管支の血管に生じることがあるが、肺動脈には発生しない。肉芽腫、著しい好酸球増加症及びアレルギー素質は、この疾患にはない。如何なる内臓系にも発症するが、最も一般的な徴候は、末梢神経障害、多発単神経炎、腸虚血、腎虚血、精巣痛及び網状皮斑がある。
【０２４３】
ｂ．川崎病
腫瘍壊死因子は、川崎病の病理生理学と関係がある（Ｓｕｎｄｅｌ，  Ｒ．Ｐ．（２００２）  Ｃｕｒｒ．  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．  Ｒｅｐ．  ４：４７４、Ｇｅｄａｌｉａ，Ａ．（２００２）  Ｃｕｒｒ．  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．  Ｒｅｐ．  ４：２５）。川崎病の病因は不明であるが、冠動脈の炎症を伴うことから、この疾患に伴う組織損傷はＴＮＦα等の炎症誘発性薬剤によって緩和されることが示唆される。川崎病とは、粘膜、リンパ節、血管内層、及び心臓を冒す血管炎をいう。川崎病はまた、皮膚粘膜リンパ節症候群及び乳児結節性多発性動脈炎とも呼ばれる。川崎病患者は、多くの場合、心筋炎及び心外膜炎を生じる冠動脈の血管炎を発症する。急性炎症が減弱すると大抵は、冠動脈が動脈瘤、血栓症を発症し、心筋梗塞へと移行する。
【０２４４】
川崎病は、手掌及び足底の浮腫を伴い、頚部リンパ節の腫脹、口唇のひび割れ及び「いちご舌」を伴う熱性の全身性血管炎である。炎症反応が全身の血管に見られるが、最も一般的な末端期の損傷部位は冠動脈である。川崎病は、主に５歳未満の小児に発症する。日本の発症率は高いが西洋でも徐々に認められるようになり、現在では米国小児の後天性心疾患の主要原因である。川崎病の最も重篤な合併症は冠動脈炎及び動脈瘤の形成で、未治療患者の三分の１に生じる。
【０２４５】
３．小血管の血管疾患
一つの実施形態では、本発明のＴＮＦα抗体は、小血管の血管炎患者を治療するために使用される。用語「小血管（ｓｍａｌｌ  ｖｅｓｓｅｌ）」は、細動脈、細静脈及び毛細血管をいう。細動脈は１又は２層のみの平滑筋細胞から成り、毛細血管網に至り、及び毛細血管網と連続する。
【０２４６】
細静脈は毛細血管網から静脈及び毛細血管接続細動脈及び細静脈まで血液を運ぶ。小血管の脈管炎の例を下記に記す。
【０２４７】
ａ．ベーチェット病
腫瘍壊死因子はベーチェット病の病理生理学と関係がある（Ｓｆｉｋａｋｉｓ，Ｐ．Ｐ．（２００２）  Ａｎｎ．  Ｒｈｅｕｍ．  Ｄｉｓ．  ６１：ｉｉ５１−３、Ｄｏｇａｎ，Ｄ．  ａｎｄ  Ｆａｒａｈ，Ｃ．（２００２）  Ｏｆｔａｌｍｏｌｏｇｉａ．  ５２：２３）。ベーチェット病は慢性疾患で、体中の血管に炎症を起こす。ベーチェット病はまた、様々な種類の皮膚病変、関節炎、腸炎症、及び髄膜炎（膿及び脊髄の粘膜の炎症）の原因となることもある。ベーチェット病発症により、患者は、消化管、中枢神経系、脈管系、肺、及び腎臓を含む体中の組織及び内臓に炎症を発症する。男性は女性の３倍でベーチェット病を発症し、東地中海及び日本に多い。
【０２４８】
ベーチェット病患者の臨床症状には、再発性口腔潰瘍（アフタ性口内炎に類似）、再発性の性器潰瘍及び眼の炎症がある。ベーチェット病患者のＴＮＦα、ＩＬ−８、ＩＬ−１、ＩＬ−６、ＩＮＦ−γおよびＩＬー−１２の血清レベルは上昇し、ベーチェット病患者の単球において前記因子の産生が増加するのが見られる（例として、Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  Ｄｉｓｅａｓｅ  ｏｆ  Ｂｌｏｏｄ  Ｖｅｓｓｅｌｓ（２００１）  Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，  Ｉｎｃ．，  ｅｄｓ．Ｇ．Ｓ．  Ｈｏｆｆｍａｎ  ａｎｄ  Ｃ．Ｍ．  Ｗｅｙａｎｄ，  Ｐ．４７３を参照のこと）。
【０２４９】
ｂ．ウェジナー肉芽腫
腫瘍壊死因子は、ウェジナー肉芽腫の病理生理学と関係がある（Ｍａｒｑｕｅｚ，  Ｊ．，ら（２００３）  Ｃｕｒｒ．  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．  Ｒｅｐ．  ５：１２８、Ｈａｒｍａｎ，  Ｌ．Ｅ．  ａｎｄ  Ｍａｒｇｏ，  Ｃ．Ｅ．（１９９８）  Ｓｕｒｖ．  Ｏｐｈｔｈａｌｒｒａｏｌ．  ４２：４５８）。ウェジナー肉芽腫とは、上気道（鼻、上顎洞、耳）、肺及び腎臓の血管の炎症を起こす血管炎をいう。ウェジナー肉芽腫はまた、正中肉芽腫とも呼ばれる。ウェジナー肉芽腫には、気道の肉芽性炎及び中小血管を冒す壊死性血管炎がある。ウェジナー肉芽腫患者は、多くの場合は、関節炎（関節の炎症）にも罹る。患者の中には糸球体腎炎に罹患するものもいるが、実際には、何れの臓器も冒される。
【０２５０】
ウェジナー肉芽腫患者は、一般的に、再発性副鼻腔炎又は鼻出血、粘膜潰瘍、中耳炎、咳、喀血及び呼吸困難等の臨床症状を示す。ウェジナー肉芽腫の初期症状は、上気道の症状、関節痛、衰弱及び疲労であることが多い。
【０２５１】
ｃ．チャーグ・ストラウス症候群
腫瘍壊死因子は、チャーグ・ストラウス症候群の病理生理学と関係がある（Ｇｒｏｓｓ，  Ｗ．Ｌ（２００２）  Ｃｕｒｒ．  Ｏｐｉｎ．  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．  １４：１１、Ｃｈｕｒｇ，  Ｗ．Ａ．（２００１）  Ｍｏｄ．  Ｐａｔｈｏｌ．  １４：１２８４）。チャーグ・ストラウス症候群とは全身性の血管炎で、初期兆候には喘息及び好酸球増加症がある。チャーグ・ストラウス症候群はまた、アレルギー性肉芽腫症及び脈管炎とも呼ばれ、アレルギー性鼻炎、喘息及び好酸球増加症の場合に起こる。副鼻腔炎及び肺浸潤もチャーグ・ストラウス症候群で生じ、最初に肺及び心臓を冒す。末梢神経障害、冠動脈炎及び胃腸疾患が一般的である。
【０２５２】
チャーグ・ストラウス症候群患者の診断は、アメリカリウマチ学会（ＡＣＲ）が確立した判定基準に基づき行われる。前記判定基準の目的は、ＣＳＳと他の型の血管炎を識別することであった。全患者が全ての判定基準に該当するわけではない。事実、２又は３の判定基準を有するのみの者もいるが、それでもなお、チャーグ・ストラウス症候群として分類される。ＡＣＲは、チャーグ・ストラウス症候群と他の脈管炎との識別に最良であるとした６の疾病特徴（判定基準）を指定した。前記判定基準とは、１）喘息、２）好酸球増加症［白血球百分率で１０％未満］、３）単神経障害、４）胸部Ｘ線上で一過性の肺浸潤、５）副鼻腔の異常、及び６）血管外の好酸球を有する血管を含む生検である。
【０２５３】
Ｊ．他のＴＮＦα関連疾患
一つの実施形態では、本発明は、ＴＮＦα関連疾患を治療するように、有効量のＴＮＦα阻害薬を患者へ投与することを含む、ＴＮＦα活性が有害であるＴＮＦα関連疾患の治療法を特徴とする。ＴＮＦα活性が有害であるＴＮＦα関連疾患の例を下記に詳述する。
【０２５４】
１．クローン病関連疾患
腫瘍壊死因子は、クローン病を含む炎症性腸疾患（ＩＢＤ）の病理生理学と関係がある（例として、Ｔｒａｃｙ，  Ｋ．Ｊ．，ら（１９８６）  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３４：４７０−４７４、Ｓｕｎ，  Ｘ−Ｍ．，ら（１９８８）  Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｉｎｖｅｓｔ．  ８１：１３２８−１３３１、Ｍａｃｄｏｎａｌｄ，  Ｔ．Ｔ．，ら（１９９０）  Ｃｌｉｎ．  Ｅｘｐ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ８１：３０１−３０５を参照のこと）。
【０２５５】
一つの実施形態では、本発明のＴＮＦα阻害薬は、ＩＢＤ及びクローン病を伴うことが多い疾患を治療するために使用される。本明細書で互換性あるように使用する用語「炎症性腸疾患（ＩＢＤ）関連疾患」又は「クローン病関連疾患」は、ＩＢＤ及びクローン病に一般的に併発する症状及び合併症を説明するために用いられる。クローン病関連疾患の例としては、膀胱、膣、及び皮膚にできる瘻孔、腸閉塞、膿瘍、栄養不足、副腎皮質ステロイド使用による合併症、関節の炎症、結節性紅斑、壊疽性膿皮症、及び眼の病変が挙げられる。クローン病に伴う他の一般的な疾患には、クローン病関連関節痛、瘻孔のあるクローン病、原因不明大腸炎、及び嚢炎がある。
【０２５６】
２．若年性関節炎
腫瘍壊死因子は、若年性関節リウマチを含む若年性関節炎の病理生理学と関係がある（Ｇｒｏｍら（１９９６）  Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ．  ３９：１７０３、Ｍａｎｇｇｅら（１９９５）  Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ．  ８：２１１）。一つの実施形態では、本発明のＴＮＦα抗体は、若年性関節リウマチを治療するために使用される。
【０２５７】
本明細書で使用する用語「若年性関節リウマチ」又は「ＪＲＡ」とは、関節又は結合組織の損傷の原因となり、１６歳までに発症する慢性炎症性疾患をいう。ＪＲＡはまた、若年性慢性多発関節炎及びスチル病とも呼ばれる。
【０２５８】
ＪＲＡは、１６歳以下の子供において、６週間以上の関節炎症及びこわばりを生じる。炎症により、関節に発赤、腫脹、熱気、ひりひりする痛みが起こる。全ての関節に発生し、炎症により患部の関節の可動性が制限される。あるタイプのＪＲＡはまた、内臓器を冒すこともある。
【０２５９】
ＪＲＡは、発症関節数、症状、及び血液検査で発見される特定の抗体の有無により、３つの種類に分類されることが多い。前記分類は、疾患の進行程度、及び内臓器又は皮膚における発症の有無に関する医師の判断に有益である。ＪＲＡの分類は、下記の通り。
【０２６０】
ａ．少関節型ＪＲＡでは、患者の４つ以下の関節が冒されている。少関節型はＪＲＡの中で最も一般的であり、通常、膝等の大きな関節に発症する。
【０２６１】
ｂ．多関節型ＪＲＡでは、５つ若しくはそれ以上の関節が冒されている。手及び足の関節等小さな関節のほうが発症しやすいが、大きな関節にも発症することもある。
【０２６２】
ｃ．全身型ＪＲＡの特徴は、関節腫脹、熱、軽い皮疹であり、心臓、肝臓、脾臓及びリンパ節等の内臓器にも発症することがある。全身型ＪＲＡは、スチル病とも呼ばれる。小さなパーセンテージであるが、小児は多数の関節に関節炎を発症し、重度の関節炎に移行して成人まで続くことがある。
【０２６３】
３．子宮内膜症
子宮内膜症に罹患している女性の腹膜のＴＮＦレベルは上昇するため、腫瘍壊死因子は子宮内膜症の病理生理学と関係がある（Ｅｉｓｅｒｍａｎｎ  Ｊ，ら（１９８８）  Ｆｅｒｔｉｌ  Ｓｔｅｒｉｌ  ５０：５７３、Ｈａｌｍｅ  Ｊ．（１９８９）  Ａｍ  Ｊ  Ｏｂｓｔｅｔ  Ｇｙｎｅｃｏｌ  １６１：１７１８、Ｍｏｒｉ  Ｈ，ら（１９９１）  Ａｍ  Ｊ  Ｒｅｐｒｏｄ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２６：６２、Ｔａｋｅｔａｎｉ  Ｙ，ら（１９９２）  Ａｍ  Ｊ  Ｏｂｓｔｅｔ  Ｇｙｎｅｃｏｌ  １６７：２６５、Ｏｖｅｒｔｏｎ  Ｃ，ら（１９９６）  Ｈｕｍ  Ｒｅｐｒｏｄ  １９９６；１１：３８０）。一つの実施形態では、本発明のＴＮＦα抗体を使用して子宮内膜症を治療する。本明細書で使用する用語「子宮内膜症」とは、通常、子宮（子宮内膜）を裏打ちする組織が体の他の部位で成長したために、疼痛、不正出血を生じ、不妊が多くなる症状をいう。
【０２６４】
４．前立腺炎
慢性前立腺炎及び慢性骨盤痛に罹患している男性の精液中のＴＮＦ及びＩＬ−１レベルは、対照群と比較して有意に高いため、腫瘍壊死因子は前立腺炎の病理生理学と関係がある（Ａｌｅｘａｎｄｅｒ  ＲＢ，ら（１９９８）  Ｕｒｏｌｏｇｙ  ５２：７４４、Ｎａｄｌｅｒ  ＲＢ，ら（２０００）  Ｊ  Ｕｒｏｌ  １６４：２１４、Ｏｒｈａｎら（２００１）  Ｉｎｔ  Ｊ  Ｕｒｏｌ  ８：４９５）。また、前立腺炎のラットモデルでは、ＴＮＦレベルも対照群と比較して上昇した（Ａｓａｋａｗａ  Ｋ，ら（２００１）  Ｈｉｎｙｏｋｉｋａ  Ｋｉｙｏ  ４７：４５９、Ｈａｒｒｉｓら（２０００）  Ｐｒｏｓｔａｔｅ  ４４：２５）。一つの実施形態では、本発明のＴＮＦα抗体は前立腺炎を治療するために使用される。
【０２６５】
本明細書で使用する用語「前立腺炎」とは、前立腺の炎症をいう。前立腺炎はまた、骨盤疼痛症候群とも呼ばれる。前立腺炎は、非細菌性前立腺炎、急性前立腺炎、細菌性前立腺炎、及び急性前立腺炎を含む様々な形式で現れる。急性前立腺炎とは、突然発症する前立腺の炎症をいう。急性前立腺炎は、通常、前立腺の細菌感染により発症する。慢性前立腺炎は、徐々に発症し、長期にわたり継続する前立腺の炎症で、通常は、症状は潜在的である。慢性前立腺炎はまた、細菌感染が原因でも起こる。
【０２６６】
５．自己免疫疾患
腫瘍壊死因子は、狼瘡を含む多数の自己免疫疾患の病理生理学と関係がある（Ｓｈｖｉｄｅｌら（２００２）  Ｈｅｍａｔｏｌ  Ｊ．  ３：３２、Ｓｔｕｄｎｉｃｋａ−Ｂｅｎｋｅら（１９９６）  Ｂｒ  Ｊ  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．  ３５：１０６７）。一つの実施形態では、本発明のＴＮＦα抗体は、狼瘡、多臓器の自己免疫疾患、及び自己免疫による聴覚損失等、自己免疫疾患を治療するために使用される。
【０２６７】
本明細書で使用する用語「狼瘡」は、エリテマトーデスと呼ばれる慢性の炎症性自己免疫疾患で、皮膚、関節及び内臓器等の多数の臓器を冒す。狼瘡は、全身性エリテマトーデス、ループス腎炎及びループス脳炎を含む多数の特異的なタイプの狼瘡を含む一般用語である。全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）の場合、体の防衛機能が体を攻撃し、劣等な免疫細胞が体の組織を攻撃する。体の血液細胞、内蔵及び組織に反抗する抗体が産生される。この反抗により、免疫細胞が罹患した内臓を攻撃し、慢性疾患となる。ループス糸球体疾患とも呼ばれるループス腎炎は、通常はＳＬＥの合併症で、糸球体の損傷及び急速な腎機能の喪失が特徴の腎疾患である。ループス脳炎とは、ＳＬＥの別の合併症をいい、脳及び／又は中枢神経系の炎症である。
【０２６８】
６．脈絡膜新生血管
腫瘍壊死因子は脈絡膜新生血管の病理生理学と関係する。例えば、脈絡膜新生血管を外科的切除する際に、ＴＮＦ及びＩＬ−１の両方に関しては、新生血管の染色は陽性であった（Ｏｈ  Ｈら（１９９９）  Ｉｎｖｅｓｔ  Ｏｐｈｔｈａｌｎａｏｌ  Ｖｉｓ  Ｓｃｉ  ４０：１８９１）。一つの実施形態では、本発明のＴＮＦα抗体は、脈絡膜新生血管を治療するために使用される。本明細書で使用する用語「脈絡膜新生血管」は、網膜下の色素上皮（ｓｕｂ−ＲＰＥ）又は網膜下の空隙にあるブルッフ膜の裂け目を通り成長する脈絡膜由来の新しい血管をいう。脈絡膜新生血管（ＣＮＶ）は、前記疾患患者の視力喪失の主な原因である。
【０２６９】
７．坐骨神経症
腫瘍壊死因子は、坐骨神経症の病理生理学と関係がある（Ｏｚａｋｔａｙら（２００２）Ｅｕｒ  Ｓｐｉｎｅ  Ｊ．  １１：４６７、Ｂｒｉｓｂｙら（２００２）  Ｅｕｒ  Ｓｐｉｎｅ  Ｊ．  １１：６２）。一つの実施形態では、本発明のＴＮＦα抗体を使用して、坐骨神経症を治療する。本明細書で使用する用語「坐骨神経症」は、足の運動及び／又は感覚障害を伴い、それが原因で坐骨神経を損傷する疾患をいう。坐骨神経症はまた、一般的に、坐骨神経の神経障害及び坐骨神経の機能障害とも呼ばれる。坐骨神経症は、末梢神経障害の一つの形である。脚の後ろにある坐骨神経に損傷がある場合に生じる。坐骨神経は、膝及び下肢の後ろの筋肉を支配し、大腿の後ろ、下肢の部分及び足底に感覚を供給する。坐骨神経症は、腰椎の椎間板ヘルニア、脊髄狭窄、椎間板の変性疾患、峡部の脊椎すべり症及び梨状筋症候群等の他の疾患の存在を示すことがある。
【０２７０】
８．シェーグレン症候群
腫瘍壊死因子はシェーグレン症候群の病理生理学と関係がある（Ｋｏｓｋｉら（２００１）  Ｃｌｉｎ  Ｅｘｐ  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．  １９：１３１）。一つの実施形態では、本発明のＴＮＦα抗体は、シェーグレン症候群を治療するために使用される。本明細書で使用する用語「シェーグレン症候群」は、口渇、流涙現象、及びその他粘膜乾燥を特徴とする全身性炎症疾患をいい、関節リウマチ等の自己免疫リウマチ疾患を伴うことが多い。眼及び口の乾燥が、この疾患の最も一般的な症状である。前記疾患は単独で発症することも、また、関節リウマチ若しくは他の結合組織疾患を伴うこともある。唾液腺の腫大を伴うこともある。他の臓器も冒されることがある。前記疾患は、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、強皮症、多発性筋炎及びその他の疾患を伴うことがある。
【０２７１】
９．ブドウ膜炎
腫瘍壊死因子は、ブドウ膜炎の病理生理学と関係がある（Ｗａｋｅｆｉｅｌｄ  ａｎｄ  Ｌｌｏｙｄ（１９９２）  Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ４：１、Ｗｏｏｎら（１９９８）  Ｃｕｒｒｅｙｅｒｅｓ．１７：９５５）。一つの実施形態では、本発明のＴＮＦα抗体は、ブドウ膜炎を治療するために使用される。本明細書で使用する用語「ブドウ膜炎」は、強膜と網膜の間の層であるブドウ膜の炎症のことをいい、虹彩、毛様体及び脈絡膜を含む。ブドウ膜炎はまた、虹彩炎、扁平部炎、脈絡膜炎、脈絡網膜炎、前部ブドウ膜炎及び後部ブドウ膜炎とも呼ばれる。ブドウ膜炎の最も一般的な形は前部ブドウ膜炎で、通常は虹彩を除く眼の前部に炎症が起こる。この疾患は一般的に虹彩炎と呼ばれる。一つの実施形態では、ブドウ膜炎という用語は、自己免疫疾患を伴う炎症（すなわち、自己免疫性ブドウ膜炎）を除く、ブドウ膜の炎症をいう。
【０２７２】
１０．血管新生加齢性黄斑変性症
腫瘍壊死因子は、血管新生加齢性黄斑変性症の病理生理学と関係する。一つの実施形態では、本発明のＴＮＦα抗体は、血管新生加齢性黄斑変性症を治療するために使用される。本明細書で使用する用語「血管新生加齢性黄斑変性症」は、黄斑（眼の網膜の中心部分）を冒す疾患をいい、視力を衰えさせ、中心視を損失する可能性がある。血管新生加齢性黄斑変性症患者は網膜の下に新血管ができ、これによって出血、腫脹、瘢痕組織が起こる。
【０２７３】
１１．骨粗鬆症
腫瘍壊死因子は、骨粗鬆症の病理生理学と関係する（Ｔｓｕｔｓｕｍｉｍｏｔｏら（１９９９）  Ｊ  Ｂｏｎｅ  Ｍｉｎｅｒ  Ｒｅｓ．  １４：１７５１）。骨粗鬆症は、骨密度が徐々に減少し、骨組織が薄くなる特徴をもつ疾患をいう。体が新しい骨を充分に形成することができない場合、又は古い骨が大量に体に再吸収される場合、又は両方の場合に、骨粗鬆症が発症する。本発明のＴＮＦα抗体又はその抗原結合フラグメントは、骨粗鬆症を治療するために使用することができる。
【０２７４】
１２．骨関節炎
腫瘍壊死因子は、関節炎の病理生理学と関係がある（Ｖｅｎｎら（１９９３）  Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ．  ３６：８１９、Ｗｅｓｔａｃｏｔｔら（１９９４）  Ｊ  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．  ２１：１７１０）。骨関節炎（ＯＡ）はまた、肥厚性骨関節炎、骨関節症及び変形性関節症とも呼ばれる。ＯＡは、骨格の関節に生じる慢性変性疾患で、年齢に関わらず全成人の特定の関節、特に膝、臀部、手の関節及び脊椎を冒す。ＯＡの特徴には、「潰瘍」又はくぼみを伴う関節軟骨の変性及び薄化、骨増殖体形成、骨縁部の肥厚、及び滑膜の変化及び患部関節の腫大等、多数の徴候がある。また、骨関節炎は、疼痛及びこわばりを併発し、特に持続的な活動後に起こる。本発明の抗体又はその抗原結合フラグメントを使用して、骨関節炎を治療できる。Ｘ線撮影で判明する骨関節炎の特徴には、関節空隙の狭窄、肋軟骨下の硬化、骨増殖症、肋軟骨下の嚢胞形成、関節遊離体（又は「関節ねずみ」）がある。
【０２７５】
骨関節炎の治療に使用する薬剤は、各種非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤＳ）である。また、セレブレックス、ビオックス、ベクストラ、及びエトリコキシブ等のＣＯＸ２阻害薬も、ＯＡの治療に使用する。ステロイド剤は、関節に直接注入するが、これも炎症及び疼痛の鎮静に使用できる。本発明の一つの実施形態では、本発明のＴＮＦα抗体は、ＮＳＡＩＤｓ、ＣＯＸ２阻害薬及び／又はステロイド剤と組み合わせて投与される。
【０２７６】
１３．その他
本発明の抗体及び抗体部分は、また、ＴＮＦα活性が有害である様々な他の疾患を治療するために使用することができる。ＴＮＦαが病理生理学と関係があり、故に本発明の抗体又は抗体部分を使用して治療できる他の疾病及び疾患の例には、加齢による悪液質、アルツハイマー病、脳浮腫、炎症性脳損傷、癌、癌及び悪液質、慢性疲労症候群、皮膚筋炎、スチーブンス・ジョンソン症候及びヤーリッシュ・ヘルクスハイマー反応等の薬物反応、脊髄中及び／又は周辺の浮腫、家族性の周期熱、フェルティー症候、線維症、糸球体腎炎（例えば、溶連菌感染後糸球体腎炎又はＩｇＡ腎症）、人工関節の緩み、顕微鏡的多発血管炎、混合結合組織病、多発性骨髄腫、癌及び悪液質、多臓器障害、骨髄異形成症候群、睾丸炎、骨溶解、急性、慢性及び膵膿瘍を含む膵炎、歯周病、多発性筋炎、進行性腎不全、偽痛風、壊疽性膿皮症、再発性多発性軟骨炎、リウマチ性心疾患、サルコイドーシス、硬化性胆管炎、脳卒中、胸腹部大動脈瘤（ＴＡＡＡ）修復、ＴＮＦ受容体関連周期性発熱症候群（ＴＲＡＰＳ）、黄熱予防接種による症状、耳の炎症性疾患、慢性耳炎、胆脂腫を伴う又は伴わない慢性中耳炎、小児の耳炎、筋炎、卵巣癌、結腸直腸癌、移植に伴う疾患、炎症性疾患を誘発する治療（例えば、ＩＬ−９投与後の症候群）、及び再潅流傷害を伴う疾患がある。
【０２７７】
必要に応じて、上記ＴＮＦα関連疾患全てに、成人型及び若年型の両方があることを理解する。また、上記ＴＮＦα関連疾患全てに、慢性及び急性の両方があることを理解する。更に、本発明のＴＮＦα抗体を使用して、ブドウ膜炎及び狼瘡に罹患する患者等、各上記ＴＮＦα関連疾患を単独又は他と組み合わせて治療することができる。
【０２７８】
ＩＩＩ．医薬組成物及び医薬品の投与
Ａ．組成物及び投与
本発明の抗体、抗体部分及び他のＴＮＦα阻害薬は、患者への投与に適した医薬組成物に組み入れることが可能である。一般に、医薬組成物には、本発明の抗体、抗体部分又は他のＴＮＦα阻害薬、及び薬剤的に許容される担体が含まれる。本明細書で使用する「薬剤的に許容される担体」には、溶媒、分散媒、被覆剤、抗菌及び抗真菌剤、等張剤及び吸収遅延剤、生理学的に適合する剤等の何れか及び全てが含まれる。薬剤的に許容される担体の例には、水、生理食塩水、リン酸緩衝食塩水、ブドウ糖、グリセリン、エタノール等、及びその組み合わせが１つ若しくはそれ以上含まれる。多くの場合、組成物中に等張剤、例えば、砂糖、マンニトール、ソルビトール又は塩化ナトリウム等の多価アルコールが含まれている方が好ましい。薬剤的に許容される担体は更に、抗体、抗体部分又はＴＮＦα阻害薬の有効期間又は有効性を高める湿潤剤又は乳化剤、防腐剤又は緩衝剤等の補助剤を少量含むこともある。
【０２７９】
本発明の組成物の型は様々である。例えば、溶液（例えば、注射液及び注入液）、分散剤又は懸濁液、錠剤、丸剤、散剤、リポソーム及び坐剤等、液体、半流動体及び固体の剤形がある。好ましい型は、投与及び治療適用目的の方法により異なる。一般的には、他の抗体又は他のＴＮＦα阻害薬と共にヒトの受動免疫に使用する組成物と類似の組成物等、注射又は注入液の形であることが好ましい。好ましい投与様式は、非経口である（例えば、静脈内、皮下、腹腔内、筋肉内）。好ましい実施形態では、静脈内注入又は注射によって抗体又は他のＴＮＦα阻害薬を投与する。別の好ましい実施形態では、筋内注射又は皮下注射によって、抗体又は他のＴＮＦα阻害薬を投与する。
【０２８０】
一般に治療用組成物は、製造及び保管の条件下では無菌及び安定していなければならない。溶液、マイクロエマルション、分散剤、リポソーム又は薬剤濃度に適した他の規則構造として、前記組成物を調剤する。上述の成分の１つ又は組み合わせたものと必要量の活性剤（すなわち、抗体、抗体部分又はＴＮＦα阻害薬）を共に適切な溶媒に組み入れることによって、無菌の注射溶液を調製して、その後ろ過滅菌を行う。通常、基本的な分散媒及び上述の必要な他の成分を含む無菌媒体に活性剤を組み入れることにより、分散剤を調製する。無菌注射液の調製用無菌散剤の場合、好ましい調製方法は真空乾燥及び凍結乾燥で、これにより、以前に滅菌ろ過した溶液由来であれば如何なるものでも所望の成分を追加した活性成分を有する散剤ができる。溶液固有の流動性は、例えば、レシチン等の被覆剤を使用することにより、分散剤の場合は必要な粒子のサイズを維持することにより、及び界面活性剤を使用することによって維持する。吸収を遅らせる薬剤の組成に、例えばモノステアレート、塩及びゼラチン等の組成物を添加することにより、注射可能な組成物の吸収を延長させることが可能となる。
【０２８１】
補助活性剤も、組成物に添加できる。特定の実施形態では、本発明の抗体又は抗体部分を、１つ以上の追加治療薬と共に同時処方及び／又は同時投与する。例えば、１つ若しくはそれ以上のＤＭＡＲＤ、又は１つ若しくはそれ以上のＮＳＡＩＤ、又は他の標的を結合する１つ若しくはそれ以上の追加抗体（例えば、他のサイトカインに結合する抗体又は細胞表面分子に結合する抗体）、１つ若しくはそれ以上のサイトカイン、可溶性ＴＮＦα受容体（例として、ＰＣＴ公開番号ＷＯ９４／０６４７６を参照のこと）及び／又はｈＴＮＦα産生又は活性を抑制する１つ若しくはそれ以上の化学薬品（ＰＣＴ公開番号ＷＯ９３／１９７５１記載のシクロヘキサン・イリデン誘導体等）、又は前記何れかの組み合わせと共に、本発明の抗ｈＴＮＦα抗体又は抗体部分を同時処方及び／又は同時投与する。また、本発明の１つ若しくはそれ以上の抗体を、２つ若しくはそれ以上の上記治療薬と組み合わせて使用することも可能である。前記併用療法を有意に利用して、投与型治療薬の投与量をさらに減量することができる。結果、様々な単剤療法による副作用の可能性、合併症、又は患者の反応の悪さを回避できる。
【０２８２】
一つの実施形態では、本発明は、有効量のＴＮＦα阻害薬及び薬剤的に許容される担体を含む医薬組成物を含む。ここで、有効量のＴＮＦα阻害薬は、例えば、坐骨神経症、子宮内膜症、及び前立腺炎を含むＴＮＦα関連疾患の治療に有効であり得る。
【０２８３】
本発明の抗体、抗体部分及び他のＴＮＦα阻害薬は、この技術分野で既知の様々な方法による投与が可能であるが、多くの治療適用において投与経路／方法について、静脈内注射又は注入が好ましい。この分野の技術者によって認められる投与の経路及び／又は方法は、所望の結果により異なる。特定の実施形態では、移植、経皮貼布、及びマイクロカプセル化デリバリーシステムを含む徐放製剤等の、急激な放出に対して薬剤を保護する担体と一緒に活性剤を調製する。エチレン酢酸ビニル、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、及びポリ乳酸等の生分解性、生体適合性ポリマーを用いることができる。前記製剤の多数の調製方法は、特許されているか、又はこの技術分野で周知である。例として、Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ  ａｎｄ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｚｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，  Ｊ．Ｒ．  Ｒｏｂｉｎｓｏｎ，  ｅｄ．，  Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，  Ｉｎｃ．，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  １９７８を参照のこと。
【０２８４】
本発明のＴＮＦα抗体は、タンパク結晶を重合体の担体内にカプセル化して被覆した粒子を形成した組み合わせを含む、タンパク質結晶の製剤形態で投与することも可能である。前記タンパク質結晶製剤の被覆した粒子の形態は球状で、マイクロスフェアは直径５００マイクロメーター未満、若しくは他の形態を有した微粒子である。タンパク質結晶の濃度を増加させると、本発明の抗体を皮下投与できるようになる。一つの実施形態では、本発明のＴＮＦα抗体をタンパク質デリバリーシステムにより送達し、１つ若しくはそれ以上のタンパク質結晶製剤又は組成をＴＮＦα関連疾患患者に投与する。抗体全体の結晶又は抗体フラグメントの結晶の安定製剤調製の組成及び方法については、ＷＯ０２／０７２６３６に記述があり、参照により本明細書に組み込む。一つの実施形態では、実施例３７及び３８に記述した結晶化抗体フラグメントを含む製剤を使用して、ＴＮＦα関連疾患を治療する。
【０２８５】
特定の実施形態では、本発明の抗体、抗体部分又は他のＴＮＦα阻害薬は、例えば不活性希釈液又は同化可能な可食担体と共に、経口投与し得る。この化合物（及び、必要に応じてその他の成分）は、ゼラチン硬カプセル又は軟カプセルに封入し、錠剤中に圧縮し、又は患者の食事に直接入れてもよい。経口投与治療に関して、この化合物は、賦形剤と混ぜて、経口摂取可能な錠剤、バッカル錠、トローチ、カプセル、エリキシル剤、懸濁液、シロップ、オブラート等の形で使用することがある。非経口投与以外で本発明の化合物を投与するためには、前記化合物の不活性化を防ぐための材料で前記化合物を被覆するか、又は前記化合物と共に同時投与する必要がある。
【０２８６】
本発明の医薬組成物には、「治療的有効量」又は「予防的有効量」の本発明の抗体又は抗体部分を含み得る。「治療的有効量」とは、所望の治療効果の達成に必要な調剤及び期間で、有効な量をいう。治療的有効量の抗体、抗体部分又は他のＴＮＦα阻害薬は、患者の疾患の状態、年齢、性別及び体重、並びに抗体、抗体部分、他のＴＮＦα阻害薬が誘発する患者の所望の反応を誘発する能力等の因子により異なり得る。治療的有効量はまた、抗体、抗体部分又は他のＴＮＦα阻害薬の治療上有益な効果の方が、毒性又は有害な効果の何れの効果よりも勝る時の量でもある。「予防的有効量」は、所望の予防効果達成に必要な投与量及び期間で有効な量をいう。一般的に、事前に又は疾患早期に患者に予防投与するため、予防的有効量は、治療的有効量よりも少ない。
【０２８７】
調剤の投与計画は、所望の最適の応答（例えば治療または予防の応答）が得られるように調節しうる。例えば、単一のボーラスを投与してもよいし、数個に分割した用量を長い期間投与してもよいし、または、容量を、治療状況の危急に応じて、比例的に減量しまたは増量してもよい。非経口組成物は、容易な投与と均一な調剤の故に、単位剤形とするのが特に有利である。本明細書で使用する単位剤形は、治療されるべき哺乳類の対象のために単一の用量とされた物理的に分割された単位をいう。各単位は、必要な医薬品の担体と共同で所望の治療効果を得られるよう予め計算された量の活性剤を含む。本発明の剤形単位の特定は、（ａ）前記活性剤固有の特徴及び達成すべき特定の治療上又は予防上の効果、及び（ｂ）個人の治療に対する感受性のためにこのような活性剤を配合する技術特有の限界、により決まり、また、直接影響を受ける。
【０２８８】
本発明の抗体又は抗体部分の治療的又は予防的有効量の代表的な範囲（これに制限されない）は、１０〜１５０ｍｇであり、更に好ましくは２０〜８０ｍｇであり、もっとも好ましくは約４０ｍｇである。用量値は軽減されるべき疾患の種類及び重症度により変化することに注目すべきである。特別な患者の場合、個人のニーズ及び前記組成物の投与又は投与を監視する専門家の判断に従って、具体的な用法を経時的に調製すべきであり、本明細書に記載の用量範囲は単に代表的なものに過ぎず、前記請求組成物の範囲又は実践を制限する目的はないことを更に理解すべきである。中等度から上記の濃度までの範囲（例えば、約６〜１４４ｍｇ／ｍｌ）もまた、本発明の一部とする。すなわち、上記の上限値及び／又は下限値として、上記の数値の何れかを組み合わせた数値の範囲を含めるものとする。
【０２８９】
本発明はまた、上記のとおりの本発明のＴＮＦα阻害薬、及びＴＮＦα関連疾患治療用阻害薬使用指示書を含む包装された医薬組成物に関する。
【０２９０】
本発明の別の特徴は、医薬組成物を含むキットに関し、この医薬組成物は、抗ＴＮＦα抗体及び薬剤的に許容される担体並びにそれぞれがＴＮＦα関連疾患の治療に有益な薬及び薬剤的に許容される担体を含む１つ若しくはそれ以上の医薬組成物を含む。或いは、前記キットは、抗ＴＮＦα抗体、ＴＮＦα関連疾患治療に有益な１つ若しくはそれ以上の薬、及び薬剤的に許容される担体を含む単一の医薬組成物を含む。前記キットは、抗ＴＮＦα抗体の投与が有益である狼瘡等のＴＮＦα関連疾患の治療に必要な前記医薬組成物の投与指示書を備える。
【０２９１】
本発明はまた、上記のとおりの発明のＴＮＦα阻害薬、及びＴＮＦα活性が有害である特定の疾患治療用の阻害薬使用指示書を含む、包装された医薬組成物又は医薬キットに関する。或いは、上記包装又はキットは、ＴＮＦα阻害薬を含み、本明細書に記述の使用又は前記疾患治療用に、情報を同封又は添付して使用に役立てる。前記包装された医薬品又はキットは更に、又は第１薬（本明細書に記述の）と共に第２薬を使用するための指示書を第２の薬（本明細書に記述の）と共に梱包するか、又は共に促進される。
【０２９２】
Ｂ．追加の治療薬
本発明は、ＴＮＦα関連疾患の治療のための医薬組成物及びその使用方法に関する。前記医薬組成物には、ＴＮＦα関連疾患を予防又は抑制する第１薬が含まれる。前記医薬組成物はまた、医薬品活性成分である第２薬も含むことがある。すなわち、第２薬は治療用であり、その機能は、医薬品の担体、防腐剤、希釈液、又は緩衝液等の不活性成分の機能より優れている。第２薬は、ＴＮＦα関連疾患の治療又は予防に有益であり得る。第２薬は、標的疾患と関連のある少なくとも一つの疾患を減弱又は治療することができる。第１及び第２薬は、類似の、又は無関係の作用機序によってその生物学的作用を発揮でき、又は多数の作用機序によって、第１及び第２薬の何れか一つ、又は何れもがその生物学的作用を発揮でき得る。この医薬組成物はまた、第３の化合物又はそれ以上の化合物を含むこともあり、ここでは、第３化合物（及び第４の化合物等）も第２の薬と同一の特性を有する。
【０２９３】
本明細書に記述の医薬組成物は、同一の薬剤的に許容される担体中に又はここに記述の実施態様ごとに別の薬剤的に許容される担体中に、第１及び第２、第３、又は追加薬を有し得ることを理解されたい。ここに記述の各実施態様内において、第１、第２、第３及び追加の薬を同時又は順に投与し得ることを更に理解されたい。或いは、第１及び第２薬を同時に投与し、第３又は追加薬を先の２つの薬の投与前若しくは後に投与することもあり得る。
【０２９４】
ここに記載の方法および医薬組成物の範囲内で使用される薬の組合せは、治療の対象である状態または疾患に対する追加的または相乗的医療効果を有し得る。ここに記載の方法および医薬組成物の範囲内で使用される薬の組合せはまた、薬が単独でまたは特定の医薬組成物の他の薬なしに投与されたときの、少なくとも一つの薬が伴う有害作用を軽減し得る。例えば、ある薬の副作用の毒性は、組成物の他の薬により弱められ、それにより、より多い用量が可能になり、患者の服薬遵守が向上し、および治療結果を改善でき得る。この組成物の前記付加的または相乗的効果、利点および利益は、種々の治療薬種類、構造的または機能的種類または個々の化合物自身に当てはまる。
【０２９５】
補助活性剤を、前記組成物に組み込むこともできる。特定の実施形態では、本発明の抗体又は抗体部分は、ＴＮＦα活性が有害であるＴＮＦα関連疾患治療に有益な追加の治療薬と共に、同時に処方及び／又は投与する。例えば、本発明の抗ｈＴＮＦα抗体、抗体部分又はＴＮＦα阻害薬は、他の標的と結合する、追加の一つ若しくはそれ以上の抗体（例えば、サイトカインと結合する抗体又は細胞表面分子と結合する抗体）、一つ若しくはそれ以上のサイトカイン、可溶性ＴＮＦα受容体（例としてＰＣＴ公開番号ＷＯ  ９４／０６４７６）及び／又はｈＴＮＦαの産生又は活性を抑制する一つ若しくはそれ以上の化学薬品（ＰＣＴ公開番号ＷＯ  ９３／１９７５１に記述のシクロヘキサン・イリデン等）と共に、同時に処方及び／又は投与できる。また、本発明の一つ若しくはそれ以上の抗体又は他のＴＮＦα阻害薬は、２つ若しくはそれ以上の前述の治療薬と組み合わせて、使用することもできる。このような併用療法は、用量を減量した治療薬を有利に活用できるため、様々な単独療法に付随する毒性又は合併症の可能性を回避できる。下記の通りに、通常は、治療対象の特定のＴＮＦα関連疾患に基づき、具体的に治療薬を選択する。
【０２９６】
本発明の抗体、抗体部分又は他のＴＮＦα阻害薬と組み合わせることが可能な治療薬の例には制限がなく、下記の薬を含む。非ステロイド性抗炎症剤（ＮＳＡＩＤ）、サイトカイン抑制抗炎症薬（ＣＳＡＩＤ）、ＣＤＰ−５７１／ＢＡＹ−１０−３３５６（ヒト化抗ＴＮＦα抗体、ＣＥＬＬＴＥＣＨ／ＢＡＹＥＲ）、ｃＡ２／インフリキシマブ（キメラ抗ＴＮＦα抗体、Ｃｅｎｔｏｃｏｒ）、７５  ｋｄＴＮＦＲ−ＩｇＧ／エタネルセプト（７５  ｋＤ  ＴＮＦ受容体−ＩｇＧ融合タンパク、Ｉｍｍｕｎｅｘ、例としてＡｒｔｈｒｉｔｉｓ  ＆  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ  （１９９４）  Ｖｏｌ．３７，Ｓ２９５、Ｊ  Ｉｎｖｅｓｔ．  Ｍｅｄ．  （１９９６）  Ｖｏｌ．４４，  ２３５Ａを参照）、５５  ｋｄＴＮＦ−ＩｇＧ（５５  ｋｄ  ＴＮＦ受容体−ＩｇＧ融合タンパク、Ｈｏｆｆｍａｎｎ−ＬａＲｏｃｈｅ）、ＩＤＥＣ−ＣＥ９．１／ＳＢ  ２１０３９６（非枯渇型の霊長類化抗ＣＤ４抗体、ＩＤＥＣ／ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ、例としてＡｒｔｈｒｉｔｉｓ  ＆  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ  （１９９５）  Ｖｏｌ．３８，  Ｓ１８５）、ＤＡＢ  ４８６−ＩＬ−２及び／又はＤＡＢ  ３８９−ＩＬ−２（ＩＬ−２融合タンパク、Ｓｅｒａｇｅｎ、例としてＡｒｔｈｉｒｉｔｉｓ  ＆  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９３）  Ｖｏｌ．３６，１２２３を参照）、抗−Ｔａｃ（ヒト化抗ＩＬ−２Ｒα、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄｅｓｉｇｎ  Ｌａｂｓ／Ｒｏｃｈｅ）、ＩＬ−４（抗炎症サイトカイン、ＤＮＡＸ／Ｓｃｈｅｒｉｎｇ）、ＩＬ−１０（ＳＣＨ  ５２０００、組換え型ＩＬ−１０、抗炎症サイトカイン、ＤＮＡＸ／ｓｃｈｅｒｉｎｇ）、ＩＬ−４、ＩＬ−１０及び／又はＩＬ−４アゴニスト（例えば、アゴニスト抗体）、ＩＬ−１ＲＡ（ＩＬ−１レセプターアンタゴニスト、Ｓｙｎｅｒｇｅｎ／Ａｍｇｅｎ）、ＴＮＦ−ｂｐ／ｓ−ＴＮＦ（ＴＮＦ結合タンパク、例としてＡｒｔｈｒｉｔｉｓ  ＆  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ  （１９９６）  Ｖｏｌ．３９，  Ｎｏ．９（補遺）、Ｓ２８４、Ａｍｅｒ．  Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．−Ｈｅａｒｔ  ａｎｄ  Ｃｉｒｃｕｌａｔｏｒｙ  Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ  （１９９５）  Ｖｏｌ．２６８，  ｐｐ．３７−４２を参照）、Ｒ９７３４０１（ホスホジエステラーゼ  ＩＶ型阻害剤、例として、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ＆  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ  （１９９６）  Ｖｏｌ．３９，  Ｎｏ．９（補遺、Ｓ２８２を参照）、ＭＫ−９６６（ＣＯＸ−２阻害薬、例としてＡｒｔｈｒｉｔｉｓ  ＆  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ  （１９９６）  Ｖｏｌ．３９，  Ｎｏ．９（補遺），  Ｓ８１を参照）、イロプロスト（例として、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ＆  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ  （１９９６）  Ｖｏｌ．３９，  Ｎｏ．９（補遺），Ｓ８２を参照）、メトトレキセート、サリドマイド（例としてＡｒｔｈｒｉｔｉｓ  ＆  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ  （１９９６）  Ｖｏｌ．３９，  Ｎｏ．９（補遺），Ｓ２８２を参照）及びサリドマイド関連薬（例えば、Ｃｅｌｇｅｎ）、レフルノミド（抗炎症及びサイトカイン阻害薬、例としてＡｒｔｈｒｉｔｉｓ  ＆  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ  （１９９６）  Ｖｏｌ．３９，  Ｎｏ．９（補遺），  Ｓ１３１、Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  （１９９６）  Ｖｏｌ．４５，  ｐｐ．１３−１０７を参照のこと）、��ラネキサム酸（プラスミノーゲン活性の阻害薬、例としてＡｒｔｈｒｉｔｉｓ  ＆  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ  （１９９６）  Ｖｏｌ．３９，  Ｎｏ．９（補遺），  Ｓ２８４）、Ｔ−６１４（サイトカイン阻害薬、例としてＡｒｔｈｒｉｔｉｓ  ＆  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ  （１９９６）  Ｖｏｌ．３９，  Ｓ２８２）、プロスタグランジンＥｌ（例として、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ＆  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ  （１９９６）  Ｖｏｌ．３９，  Ｎｏ．９（補遺），  Ｓ２８２を参照）、テニダップ（非ステロイド性抗炎症剤、例としてＡｒｔｈｒｉｔｉｓ  ＆  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ  （１９９６）  Ｖｏｌ．３９，  Ｎｏ．９（補遺），  Ｓ２８０）、ナプロキセン（非ステロイド性抗炎症剤、例としてＮｅｕｒｏ  Ｒｅｐｏｒｔ  （１９９６）  Ｖｏｌ．７，  ｐｐ．１２０９−１２１３を参照）、メロキシカム（非ステロイド性抗炎症剤）、イブプロフェン（非ステロイド性抗炎症剤）、ピロキシカム（非ステロイド性抗炎症剤）、ジクロフェナク（非ステロイド性抗炎症剤）、インドメタシン（非ステロイド性抗炎症剤）スルファサラジン（例として、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ＆  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ  （１９９６）  Ｖｏｌ．３９，  Ｎｏ．９（補遺），  Ｓ２８１を参照のこと）、アザチオプリン（例として、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ＆  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ  （１９９６）  Ｖｏｌ．３９，  Ｎｏ．９（補遺），  Ｓ２８１を参照のこと）、ＩＣＥ阻害剤（酵素インターロイキン−１β変換酵素の阻害薬）、ｚａｐ−７０及び／又はｌｃｋ阻害薬（チロシンキナーゼｚａｐ−７０又はｌｃｋの阻害薬）、ＶＥＧＦ阻害薬及び／又はＶＥＧＦ−Ｒ阻害薬（血管内皮細胞成長因子又は血管内皮細胞成長因子受容体の阻害薬、血管形成阻害薬）、副腎皮質ステロイド抗炎症薬（例えば、ＳＢ２０３５８０）、ＴＮＦ−転換酵素阻害薬コンバターゼ阻害薬、抗ＩＬ−１２抗体、抗ＩＬ−１８抗体、インターロイキン−１１（例として、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ＆  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ  （１９９６）  Ｖｏｌ．３９，  Ｎｏ．９（補遺），  Ｓ２９６を参照）、インターロイキン−１３（例として、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ＆  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ  （１９９６）  Ｖｏｌ．３９，  Ｎｏ．９（補遺），  Ｓ３０８を参照）、インターロイキン−１７阻害薬（例として、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ＆  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ  （１９９６）  Ｖｏｌ．３９，  Ｎｏ．９（補遺），  Ｓ１２０を参照）、金、ペニシラミン、クロロキン、ヒドロキシクロロキン、クロランブシル、シクロホスファミド、シクロスポリン、全身リンパ組織放射線照射、抗胸腺細胞グロブリン、抗ＣＤ４抗体、ＣＤ５の毒素、経口投与ペプチド及びコラーゲン、ロベンザリット二ナトリウム、サイトカイン調節薬（ＣＲＡｓ）ＨＰ２２８及びＨＰ４６６（Ｈｏｕｇｈｔｅｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，  ＩＮＣ．）、ＩＣＡＭ−１アンチセンス・ホスホロチオネート・オリゴデオキシヌクレオチド（ＩＳＩＳ２３０２、Ｉｓｉｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，  Ｉｎｃ．）、可溶性補体受容体１（ＴＰ１０、Ｔ  Ｃｅｌｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，  Ｉｎｃ．）、プレドニゾン、オルゴテイン、多硫酸グリコサミノグリカン、ミノサイクリン、抗ＩＬ２Ｒ抗体、海洋性及び植物性脂質（魚及び���物の種の脂肪酸、例としてＤｅＬｕｃａら  （１９９５）  Ｒｈｅｕｍ．  Ｄｉｓ．  Ｃｌｉｎ．  Ｎｏｒｔｈ  Ａｍ．  ２１：７５９−７７７）、オーラノフィン、フェニルブタゾン、メクロフェナム酸、フルフェナム酸、静脈投与用免疫グロブリン、ジロートン、ミコフェノール酸（ＲＳ−６１４４３）、タクロリムス（ＦＫ−５０６）、シロリムス（ラパマイシン）、アミプリロース（ａｍｉｐｒｉｌｏｓｅ）（セラフェクチン（ｔｈｅｒａｆｅｃｔｉｎ））、クラドリビン（２−クロロデオキシアデノシン）、アザリビン、メトトレキセート、抗ウイルス薬、及び免疫調節薬。上記の何れの薬も、ＴＮＦα関連疾患治療のために、本発明のＴＮＦα抗体と組み合わせて投与できる。
【０２９７】
一つの実施形態では、本発明のＴＮＦα抗体は、関節リウマチ治療のために、下記の薬と組み合わせて投与される。小分子阻害薬のＫＤＲ（ＡＢＴ−１２３）、小分子阻害薬のＴｉｅ−２、メトトレキセート、プレドニゾン、セレコキシブ、葉酸、硫酸ヒドロキシクロロキン、ロフェコキシブ、エタネルセプト、インフリキシマブ、レフルノミド、ナプロキセン、ヴァルデコキシブ、スルファサラジン、メチルプレドニゾロン、イブプロフェン、メロキシカム、酢酸メチルプレドニゾロン、金チオリンゴ酸ナトリウム、アスピリン、アザチオプリン、トリアムシノロンアセトニド、プロポキシフェンナフシレート／アセトアミノフェン、葉酸、ナブメトン、ジクロフェナク、ピロキシカム  、エトドラク、ジクロフェナクナトリウム、オキサプロジン、塩酸オキシコドン、ヒドロコドン重酒石酸／アセトアミノフェン、ジクロフェナクナトリウム／ミソプロストール、フェンタニル、アナキンラ、ヒト組換え体、塩酸トラマドール、サルサラート、スリンダク、シアノコバラミン／葉酸／ピリドキシン、アセトアミノフェン、アレンドロン酸ナトリウム、プレドニゾロン、硫酸モルヒネ、塩酸リドカイン、インドメタシン、グルコサミン硫酸塩／コンドロイチン、シクロスポリン、塩酸アミトリプチリン、スルファジアジン、塩酸オキシコドン／アセトアミノフェン、塩酸オロパタジン、ミソプロストール、ナプロキセンナトリウム、オメプラゾール、ミコフェノール酸モフェチル、シクロホスファミド、リタキシマブ、ＩＬ−１  ＴＲＡＰ、ＭＲＡ、ＣＴＬＡ４−ＩＧ、ＩＬ−１８  ＢＰ、ＡＢＴ−８７４、ＡＢＴ−３２５（抗ＩＬ１８）、抗ＩＬ１５、ＢＩＲＢ−７９６、ＳＣＩＯ−４６９、ＶＸ−７０２、ＡＭＧ−５４８、ＶＸ−７４０、ロフルミラスト、ＩＣ−４８５、ＣＤＣ−８０１、及びメゾプラム。別の実施形態では、本発明のＴＮＦα抗体は、ＴＮＦα関連疾患を治療するために、関節リウマチ治療用の上記の薬の一つと組み合わせて投与する。
【０２９８】
一つの実施形態では、本発明のＴＮＦα抗体は、ＴＮＦα活性が有害であるＴＮＦα関連疾患を治療するために、下記の薬と組み合わせて投与される。抗ＩＬ１２抗体（ＡＢＴ８７４）、抗ＩＬ１８抗体（ＡＢＴ３２５）、小分子阻害薬のＬＣＫ、小分子阻害薬のＣＯＴ、抗ＩＬｌ抗体、小分子阻害薬のＭＫ２、抗ＣＤ１９抗体、小分子阻害薬のＣＸＣＲ３、小分子阻害薬のＣＣＲ５、小分子阻害薬のＣＣＲ１１抗Ｅ／Ｌセレクチン抗体、小分子阻害薬のＰ２Ｘ７、小分子阻害薬のＩＲＡＫ−４、小分子作用薬の糖質コルチコイド受容体、抗Ｃ５ａ受容体抗体、小分子阻害薬のＣ５ａ受容体、抗ＣＤ３２抗体、及び治療タンパク質としてＣＤ３２。
【０２９９】
更に別の実施形態では、本発明のＴＮＦα抗体は、抗生物質又は抗感染薬と組み合わせて投与される。抗感染薬には、ウイルス、真菌、寄生虫又は細菌の感染治療用に、当該技術分野で既知の薬がある。本明細書で使用する用語「抗生物質」は、微生物の成長を抑制又は殺す化学物質をいう。微生物が産生する抗生物質だけではなく、当該技術分野で既知の合成抗生物質（例えば、類似体）もこの用語に含まれる。抗生物質はこれらに限定されるものではないが、クラリスロマイシン（バイアキシン（登録商標））、シプロフロキサシン（シプロ（登録商標））及びメトロニダゾール（フラジール）がある。
【０３００】
別の実施形態では、本発明のＴＮＦα抗体は、坐骨神経症又は疼痛を治療するために、追加治療薬と組み合わせて投与される。坐骨神経症又は疼痛の症状を軽減又は抑制するために使用できる薬には、例えば、ヒドロコドン重酒石酸／アセトアミノフェン、ロフェコキシブ、塩酸シクロベンザプリン、メチルプレドニゾロン、ナプロキセン、イブプロフェン、塩酸オキシコドン／アセトアミノフェン、セレコキシブ、ヴァルデコキシブ、酢酸メチルプレドニゾロン、プレドニゾン、リン酸コデイン／アセトアミノフェン、塩酸トラマドール／アセトアミノフェン、メタキサロン、メロキシカム、メトカルバモール、塩酸リドカイン、ジクロフェナクナトリウム、ガバペンチン、デキサメサゾン、カリソプロドール、ケトロラク、トロメタミン、インドメタシン、アセトアミノフェン、ジアゼパム、ナブメトン、塩酸オキシコドン、塩酸チザニジン、ジクロフェナクナトリウム／ミソプロストール、プロポキシフェンナフシレート／アセトアミノフェン、アセチルサリチル酸／オキシコド／オキシコドンｔｅｒ、イブプロフェン／ヒドロコドン重酒石酸、塩酸トラマドール、エトドラク、塩酸プロポキシフェン、塩酸アミトリプチリン、カリソプロドール／リン酸コデイン／アセチルサリチル酸、硫酸モルヒネ、マルチビタミン、ナプロキセンナトリウム、クエン酸オルフェナドリン、及びテマゼパムがある。
【０３０１】
更に別の実施形態では、本発明のＴＮＦα抗体を血液透析と組み合わせてＴＮＦα関連疾患を治療する。
【０３０２】
別の実施形態では、本発明のＴＮＦα抗体は、クローン病又はクローン病関連疾患の治療に使用する薬と組み合わせて使用される。クローン病の治療に使用可能な治療薬には、例えば、メサラミン、プレドニゾン、アザチオプリン、メルカプトプリン、インフリキシマブ、ブデソニド、スルファサラジン、コハク酸メチルプレドニゾロンナトリウム、ジフェノキシレート／硫酸アトロピン、塩酸ロペラミド、メトトレキセート、オメプラゾール、葉酸、シプロフロキサシン／ブドウ糖液、ヒドロコドン重酒石酸／アセトアミノフェン、塩酸テトラサイクリン、フルオシノニド、メトロニダゾール、チメロサール／ホウ酸、コレスチラミン／ショ糖、塩酸シプロフロキサシン、硫酸ヒヨスチアミン、塩酸メペリジン、塩酸ミダゾラム、塩酸オキシコドン／アセトアミノフェン、塩酸プロメタジン、リン酸ナトリウム、スルファメトキサゾール／トリメトプリム、セレコキシブ、ポリカルボフィル、プロポキシフェンナフシレート、ヒドロコルチゾン、マルチビタミン、バルサラジド二ナトリウム（ｂａｌｓａｌａｚｉｄｅ  ｄｉｓｏｄｉｕｍ）、リン酸コデイン／アセトアミノフェン、塩酸コレセベラム（ｃｏｌｅｓｅｖｅｌａｍ）、シアノコバラミン、葉酸、レボフロキサシン、メチルプレドニゾロン、ナタリズマブ、及びガンマインターフェロンがある。
【０３０３】
別の実施形態では、本発明のＴＮＦα抗体は、喘息治療のための追加治療薬と組み合わせて投与される。喘息症状の軽減又は抑制に使用可能な薬の例は下記の通り。アルブテロール、サルメテロール／フルチカゾン、ナトリウム、プロピオン酸フルチカゾン、ブデソニド、プレドニゾン、キシナホ酸サルメテロール、塩酸レバルブテロール、硫酸塩／イプラトロピウム、プレドニゾロンリン酸ナトリウム、トリアムシノロンアセトニド、ジプロピオン酸ベクロメタゾン、臭化イプラトロピウム、アジスロマイシン、酢酸ピルブテロール、プレドニゾロン、無水テオフィリン、コハク酸メチルプレドニゾロンナトリウム、クラリスロマイシン、ザフィルルーカスト、フマル酸フォルモテロール、インフルエンザウイルスワクチン、メチルプレドニゾロン、三水塩、フルニソリド、アレルギー注射、クロモリンナトリウム、塩酸フェキソフェナジン、フルニソリド／メントール、アモキシシリン／クラブラン酸、レボフロキサシン、吸入補助器、グアイフェネシン、デキサメサゾンリン酸ナトリウム、塩酸モキシフロキサシン、ハイクレート、グアイフェネシン／デキストロメトルファン、エフェドリン／コデイン（ｃｏｄ）／クロロフェニール、ガチフロキサシン、塩酸セチリジン、フランカルボン酸モメタゾン、キシナホ酸サルメテロール、ベンゾナテート、セファレキシン、ｐｅ／ヒドロコドン／クロルフェニール、塩酸セチリジン／プソイドエフェドリン（ｐｓｅｕｄｏｐｈｅｄ）、フェニレフリン／コデイン（ｃｏｄ）／プロメタジン、コデイン／プロメタジン、セフェプロジル、デキサメサゾン、グアイフェネシン／プソイドエフェドリン、クロルフェニラミン／ヒドロコドン、ネドクロミルナトリウム、硫酸テルブタリン、エピネフリン及びメチルプレドニゾロン、硫酸メタプロテレノール。
【０３０４】
別の実施形態では、本発明のＴＮＦα抗体は、ＣＯＰＤ治療のための追加治療薬と組み合わせて投与される。ＣＯＰＤの症状の軽減又は抑制に使用可能な薬には、例えば、硫酸アルブテロール／イプラトロピウム、臭化イプラトロピウム、サルメテロール／フルチカゾン、アルブテロール、サルメテロール、キシナホ酸、プロピオン酸フルチカゾン、プレドニゾン、無水テオフィリン、コハク酸メチルプレドニゾロンナトリウム、モンテルカストナトリウム、ブデソニド、フマル酸フォルモテロール、トリアムシノロンアセトニド、レボフロキサシン、グアイフェネシン、アジスロマイシン、ジプロピオン酸ベクロメタゾン、塩酸レバルブテロール、フルニソリド、ナトリウム、三水塩、ガチフロキサシン、ザフィルルーカスト、アモキシシリン／クラブラン酸、フルニソリド／メントール、クロルフェニラミン／ヒドロコドン、硫酸メタプロテレノール、メチルプレドニゾロン、フロン酸、−エフェドリン／コデイン（ｃｏｄ）／クロルフェニール、酢酸ピルブテロール、−エフェドリン／ロラタジン、硫酸テルブタリン、臭化チオトロピウム、（Ｒ，Ｒ）−フォルモテロール、ＴｇＡＡＴ、シロミラスト及びロフルミラストがある。
【０３０５】
別の実施形態では、本発明のＴＮＦα抗体は、ＩＰＦの治療のために追加治療薬と組み合わせて投与される。ＩＰＦの症状の軽減又は抑制に使用可能な薬には、例えば、プレドニゾン、アザチオプリン、アルブテロール、コルヒチン、硫酸、ジゴキシン、ガンマインターフェロン、コハク酸メチルプレドニゾロンナトリウム、フロセミド、リシノプリル、ニトログリセリン、スピロノラクトン、シクロホスファミド、臭化イプラトロピウム、アクチノマイシンＤ、アルテプラーゼ、プロピオン酸フルチカゾン、レボフロキサシン、硫酸メタプロテレノール、硫酸モルヒネ、塩酸オキシコドン、塩化カリウム、トリアムシノロンアセトニド、タクロリムス水和物、カルシウム、αインターフェロン、メトトレキセート、ミコフェノール酸モフェチルがある。
【０３０６】
本発明の一つの実施形態では、ＴＮＦα抗体は、脊椎関節症の治療に一般的に使用される薬と組み合わせて投与される。このような薬の例は、非ステロイド性抗炎症剤（ＮＳＡＩＤ）すなわちＣＯＸ―２阻害剤（セレブレックス（登録商標）、バイオックス（登録商標）、及びベクストラ（登録商標）及びエトリコキシブなど）を含む。脊椎関節症の治療は、通常非ステロイド性抗炎症剤と併せて、理学療法も一般に使用されている。
【０３０７】
別の実施形態では、本発明のＴＮＦα抗体は、強直性脊椎炎の治療のために、追加の治療薬と組み合わせて投与される。強直性脊椎炎の症状の軽減又は抑制に使用可能な薬には、例えば、イブプロフェン、ジクロフェナク及びミソプロストール、ナプロキセン、メロキシカム、インドメタシン、ジクロフェナク、セレコキシブ、ロフェコキシブ、スルファサラジン、プレドニゾン、メトトレキセート、アザチオプリン、ミノサイクリン、プレドニゾン、エタネルセプト、及びインフリキシマブがある。
【０３０８】
別の実施形態では、本発明のＴＮＦα抗体は、乾癬性関節炎の治療のために、追加の治療薬と組み合わせて投与される。乾癬性関節炎の症状の軽減又は抑制に使用可能な薬には、例えば、メトトレキセート、エタネルセプト、ロフェコキシブ、セレコキシブ、葉酸、スルファサラジン、ナプロキセン、レフルノミド、酢酸メチルプレドニゾロン、インドメタシン、硫酸ヒドロキシクロロキン、スリンダク、プレドニゾン、増強したジプロピオン酸（ｄｉｐｒｏｐ）ベタメタゾン、インフリキシマブ、メトトレキセート、葉酸、トリアムシノロンアセトニド、ジクロフェナク、ジメチルスルホキシド、ピロキシカム、ジクロフェナクナトリウム、ケトプロフェン、メロキシカム、プレドニゾン、メチルプレドニゾロン、ナブメトン、トルメチンナトリウム、カルシポトリエン、シクロスポリン、ジクロフェナク、ナトリウム／ミソプロストール、フルオシノニド、硫酸グルコサミン、金チオリンゴ酸ナトリウム、ヒドロコドン重酒石酸／アセトアミノフェン、イブプロフェン、リセドロン酸ナトリウム、スルファジアジン、チオグアニン、ヴァルデコキシブ、アレファセプト及びエファリズマブがある。
【０３０９】
一つの実施形態では、冠動脈疾患治療の初期処置後にＴＮＦα阻害薬を投与する。前記処置の例には、これらに限定されるものではないが、冠動脈バイパス移植術（ＣＡＢＧ）及びバルーンを用いた経皮的冠動脈形成術（ＰＴＣＡ）又は血管形成術がある。一つの実施形態では、狭窄の再発を予防するためにＴＮＦα阻害薬を投与する。本発明別の実施形態では、再狭窄の予防又は治療のためにＴＮＦα阻害薬を投与する。本発明はまた、冠動脈疾患治療処置を受ける患者の動脈にステントを挿入する前、挿入と同時、又は挿入後に、ＴＮＦα阻害薬を投与する治療方法を提供する。一つの実施形態では、ＣＡＢＧ又はＰＴＣＡの後に前記ステントを投与する。本発明と関連して、所望の治療の部位及び性質に応じて、多種多様なステント植え込みを活用することができる。ステントグラフトは、例えば、二分岐型又はチューブ型、円筒型又はテーパー型、自己拡張型又はバルーン拡張型、単体構造又はモジュール構造がある。また、ステントグラフトの遠端のみから、又はステントグラフト全体を伝って薬を放出するよう、ステントグラフトを適合させる。本発明のＴＮＦα阻害薬もステント上を伝って投与できる。一つの実施形態では、薬剤溶出ステントによって、本発明のＴＮＦα抗体、例えば、Ｄ２Ｅ７／ＨＵＭＩＲＡ（登録商標）等を投与する。
【０３１０】
本発明のＴＮＦα抗体は、再狭窄治療のために、追加の治療薬と組み合わせて投与され得る。再狭窄の治療又は予防に使用可能な薬剤には、例えば、シロリムス、パクリタキセル、エベロリムス、タクロリムス、ＡＢＴ−５７８及びアセトアミノフェンがある。
【０３１１】
本発明のＴＮＦα抗体は、心筋梗塞治療のために、追加の治療薬と組み合わせて投与され得る。心筋梗塞の治療又は予防に使用可能な薬には、例えば、アスピリン、ニトログリセリン、酒石酸メトプロロール、エノキサパリンナトリウム、ヘパリンナトリウム、硫酸クロピドグレル、カルベディロール、アテノロール、硫酸モルヒネ、コハク酸メトプロロール、ワルファリンナトリウム、リシノプリル、一硝酸イソソルビド、ジゴキシン、フロセミド、シンバスタチン、ラミプリル、ＴＮＫａｓｅ、マレイン酸エナラプリル、トルセミド、レテプラーゼ（Ｒｅｔａｖａｓｅ）、ロサルタンカリウム、塩酸キナプリル／マグカーブ、ブメタニド、アルテプラーゼ、エナラプリラート、塩酸アミオダロン、チロフィバン塩酸ｍ−ハイドレート、塩酸ジルチアゼム、カプトプリル、イルベサルタン、バルサルタン、塩酸プロプラノロール、フォシノプリルナトリウム、塩酸リドカイン、エプティフィバタイド、セファゾリンナトリウム、硫酸アトロピン、アミノカプロン酸、スピロノラクトン、インターフェロン、塩酸ソタロール、塩化カリウム、ドキュセートナトリウム、塩酸ドブタミン、アルプラゾラム、プラバスタチンナトリウム、アトルバスタチンカルシウム、塩酸ミダゾラム、塩酸メペリジン、イソソルビドジニトレート、エプネフリン、塩酸ドーパミン、ビバリルジン、ロスバスタチン、エゼチミブ／シンバスタチン、アバシマイベ、アブシキシマブ、及びカリポリドがある。
【０３１２】
本発明のＴＮＦα抗体は、アンギナ治療のために、追加の治療薬と組み合わせて投与され得る。アンギナの治療又は予防に使用可能な薬には、例えば、アスピリン、ニトログリセリン、一硝酸イソソルビド、コハク酸メトプロロール、アテノロール、酒石酸メトプロロール、ベシル酸アムロジピン、ジルチアゼム塩酸塩、イソソルビドジニトレート、硫酸クロピドグレル、ニフェジピン、アトルバスタチンカルシウム、塩化カリウム、フロセミド、シンバスタチン、塩酸ベラパミル、ジゴキシン、塩酸プロプラノロール、カルベディロール、リシノプリル、スピロノラクトン、ヒドロクロロチアジド、マレイン酸エナラプリル、マドロール（ｍａｄｏｌｏｌ）、ラミプリル、エノキサパリンナトリウム、ヘパリンナトリウム、バルサルタン、塩酸ソタロール、フェノフィブラート、エゼチミブ、ブメタニド、ロサルタンカリウム、リシノプリルヒドロクロロチアジド、フェロジピン、カプトプリル、及びフマル酸ビソプロロールがある。
【０３１３】
本発明の一つの実施形態では、ＴＮＦα抗体は、Ｃ型肝炎ウイルスの治療のために、一般的に使用されている薬と組み合わせて投与される。前記薬の例には、インターフェロンα２ａ、インターフェロン−α２ｂ、インターフェロン−αｃｏｎｌ、インターフェロンα−ｎｌ、ＰＥＧ化インターフェロンα２ａ、ペグインターフェロンα２ｂ、リバビリン、ＰＥＧ化インターフェロンα２ｂ及びリバビリン、ウルソデオキシコール酸、グリチルリジン酸、サイマルファシン、マキサミン（Ｍａｘａｍｉｎｅ）、及びＶＸ−４９７がある。
【０３１４】
本発明のＴＮＦα抗体は、乾癬の治療のために、局所コルチコステロイド、ビタミンＤ類似体、及び局所若しくは経口レチノイド、又はそれらの組み合わせと組み合わせて投与される。また、本発明のＴＮＦα抗体は、乾癬の治療のために、下記の薬の一つと組み合わせて投与される。小分子阻害薬のＫＤＲ（ＡＢＴ−１２３）、小分子阻害薬のＴｉｅ−２、カルシポトリエン、プロピオン酸クロベタゾール、トリアムシノロンアセトニド、プロピオン酸ハロベタゾール、タザロテン、メトトレキセート、フルオシノニド、増強したジプロピオン酸ベタメタゾン、  フルオシノロン、アセトニド、アチトレチン、タールシャンプー、吉草酸ベタメタゾン、フランカルボン酸モメタゾン、ケトコナゾール、プラモキシン／フルオシノロン、吉草酸ヒドロコルチゾン、フルランドレノリド、尿素、ベタメタゾン、プロピオン酸クロベタゾール／皮膚軟化薬、プロピオン酸フルチカゾン、アジスロマイシン、ヒドロコルチゾン、保湿剤、葉酸、デソニド、コールタール、酢酸ジフロラゾン、エタネルセプト、葉酸、乳酸、メトキサレン、ＨＣ／次没食子酸ビスマス／ＺＮＯＸ／ＲＥＳＯＲ、酢酸メチルプレドニゾロン、プレドニゾン、日焼け止め、サリチル酸、ハルシノニド、アントラリン、ピバリン酸クロコルトロン（ｃｌｏｃｏｒｔｏｌｏｎｅ  ｐｉｖａｌａｔｅ）、石炭抽出物、コールタール／サリチル酸、コールタール／サリチル酸／硫黄、デスオキシメタゾン、ジアゼパム、皮膚軟化薬、ピメクロリムス入り皮膚軟化薬、フルオシノニド／皮膚軟化薬、鉱油／ひまし油／乳酸ナトリウム、鉱油／ピーナッツオイル、石油／イソプロピルミリステート、ソラレン、サリチル酸、石鹸／トリブロンサラン、チメロサール／ホウ酸、セレコキシブ、インフリキシマブ、アレファセプト、エファリズマブ、タクロリムス、ピメクロリムス、ＰＵＶＡ、ＵＶＢ、及びスルファサラジン。
【０３１５】
本発明の抗体、抗体部分又は他のＴＮＦα阻害薬は、皮膚疾患の治療のために他の薬と組み合わせて使用され得る。例えば、本発明の抗体、抗体部分又は他のＴＮＦα阻害薬をＰＵＶＡ療法と組み合わせる。ＰＵＶＡはソラレン（Ｐ）及び長波長紫外線（ＵＶＡ）を組み合わせた療法で、多数の様々な皮膚疾患治療に使用される。本発明の抗体、抗体部分又は他のＴＮＦα阻害薬はまた、ピメクロリムスと組み合わせることもできる。別の実施形態では、本発明の抗体は、タクロリムスと組み合わせて投与され、乾癬を治療するために使用される。更なる実施形態では、タクロリムス及びＴＮＦα阻害薬を、メトトレキセート及び／又はシクロスポリンと組み合わせて投与する。更に別の実施形態では、乾癬治療のために、エキシマレーザー治療と組み合わせて、本発明のＴＮＦα阻害薬を投与する。
【０３１６】
皮膚又は爪疾患の治療のために、ＴＮＦα阻害薬と組み合わせ可能な他の治療薬の例には制限がなく、ＵＶＡ及びＵＶＢ光線療法を含む。ＴＮＦα阻害薬と組み合わせて使用可能な他に制限の無い例として、抗体を含む抗ＩＬ−１２及び抗ＩＬ−１８治療薬が挙げられる。
【０３１７】
一つの実施形態では、本発明のＴＮＦα抗体は、ベーチェット病の治療において、追加の治療薬と組み合わせて投与される。ベーチェット病の治療に使用可能な追加の治療薬には、これらに限定されるものではないが、プレドニゾン、シクロホスファミド（サイトキサン）、アザチオプリン（イムランとも呼ぶ）、メトトレキセート、トリメトプラム（ｔｉｍｅｔｈｏｐｒｉｍ）／スルファメトキサゾール（バクトリム又はセプトラとも呼ぶ）及び葉酸がある。
【０３１８】
上記の治療薬の何れか一つを単独で、又は組み合わせて、ＴＮＦαが有害であるＴＮＦα関連疾患患者に本発明のＴＮＦα抗体と組み合わせて投与することができる。一つの実施形態では、ＴＮＦα関連疾患治療のために、上記の治療薬の何れか一つを単独で、又は組み合わせてＴＮＦα抗体に追加して、関節リウマチ患者に投与できる。
【０３１９】
以下の実施例によって、本発明をさらに説明するが、これらの実施例は本発明を限定することを意図したものではない。本出願を通じて引用されている全ての参考文献、特許及び公開された特許出願を参照により本明細書に組込まれる。
【実施例１】
【０３２０】
強直性脊椎炎のラットモデルにおけるＴＮＦα阻害薬
進行性強直症の抑制を調べるためにヒト白血球抗原Ｂ−２７（ＨＬＡ−Ｂ２７）ラットにＴＮＦ抗体を投与
ハイコピー数のヒトの主要組織適合遺伝子複合体クラスＩ分子対立遺伝子Ｂ２７及びβ２ミクログロブリン遺伝子を運ぶよう遺伝子改変されたＦｉｓｈｅｒ３４４ラットは、ヒトの脊椎関節症、特に強直性脊椎炎（ＡＳ）と類似の症状を示す（Ｚｈａｎｇら、Ｃｕｒｒ  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ  Ｒｅｐ．  ２００２：４：５０７）。１０週齢の雄のヒト白血球抗原Ｂ−２７（ＨＬＡ−Ｂ２７）トランスジェニックラットを入手し、４０週齢になるまで動物施設に収容する。Ｆｉｓｈｅｒ３４４ラットの一群を入手し、非トランスジェニック対照群とする。前記対照群ラットは３６週齢で購入し、更に３〜４週間、動物施設に同一条件下で収容する。
【０３２１】
実験的治療に先立ち、ＨＬＡ−Ｂ２７トランスジェニックラット及び対照群ラットの両方の体重を測定し、両群に有意差が無いことを確認する。次に、プラセボ又はラットＴＮＦαに結合して及び中和することが知られている抗体ＴＮ３（ＴＮ３−１９．１２）等のモノクロナール抗ＴＮＦα抗体の何れかをラットに腹腔内（ｉ．ｐ．）投与する（Ｍａｒｚｉら（１９９５）  Ｓｈｏｃｋ  ３：２７、Ｗｉｌｌｉａｍｓら  （１９９２）  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ．  ８９：９７８４、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）。ラットのＡＳの徴候を評価するため、約３６週齢から下記の検査を開始して、研究期間中継続して調べる。体重、ワイヤーグリッドの前肢把握、倒置させたワイヤーグリッドにしがみつく能力、胸郭可動性、脊髄可動性、眼及び皮膚、爪、生殖器、末梢及び体軸の骨格関節の発赤及び腫脹に関する外観、関節の変形及び可動性。また、関節炎の証拠、特に治療ラットのＡＳ症状の減少に関してもラットを調べ、皮膚及び爪の成長の特徴及び変化について詳細に観察する。Ｘ線撮影及び顕微鏡分析のために、４、６、８、１０、１２、１６、及び２０週でラットを屠殺する。
【実施例２】
【０３２２】
ＡＳの徴候に及ぼすＴＮＦα阻害薬の効果
強直性脊椎炎−臨床的考察
一般的にＡＳに伴われた徴候を示す患者が、ＡＳに罹患しており、研究に適しているか否かを決定するために、前記患者を診察及び検査する。ＡＳの一般的な徴候には、不活動後に悪化する低位背部痛、低位背部のこわばり及び可動域制限、臀部の疼痛及び硬直、胸郭拡張の限界、運動範囲の限界（特に、脊椎及び臀部）、肩、膝及び足首の関節痛及び関節の腫脹、首の疼痛、踵の疼痛、症状軽減のために体を屈めた状態を持続、疲労、微熱（ｆｅｖｅｒ，  ｌｏｗ  ｇｒａｄｅ）、食欲不振、体重減少、及び／又は眼の炎症がある。ＡＳに伴う脊椎可動域制限又は胸郭拡張を示唆する特徴的な徴候の何れかが患者に現れているか否かを判断するため、理学的検査を実行する。ＡＳの存在を明らかにする検査には、例えば、仙腸関節及び椎骨のＸ線があり、ＡＳに伴う特徴的な所見を示す。
【０３２３】
強直性脊椎炎の診断には、ニューヨーク診断基準の改訂版を用いる（Ｍｏｌｌら  （１９７３）  Ａｎｎ  Ｒｈｅｕｍ  Ｄｉｓ  ３２：３５４、Ｖａｎ  ｄｅｒ  Ｌｉｎｄｅｎら  （１９８４）  Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ  ２７：３６１）。強直性脊椎炎のニューヨーク診断基準は、ローマ基準の改訂版で、１９６６年度にニューヨークで開催されたＣＩＯＭＳシンポジウムで発議された。仙腸関節の臨床基準及びＸ線所見の両方を組み合わせたものである。
【０３２４】
ニューヨーク診断基準の臨床基準。
【０３２５】
（ａ）３平面全て（前方屈曲側方屈曲伸展）における腰椎の可動域制限。Ｍｏｌｌ（上述）では検査時の補助のために皮膚に印をつけて示している。
【０３２６】
（ｂ）腰背の接合部又は腰椎に、疼痛歴又は疼痛がある、及び
（ｃ）第４肋間腔の位置で測定した胸郭拡張の限界が１インチ（２．５ｃｍ）。
【０３２７】
【表１】
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【０３２８】
ＡＳの様々な徴候を評価するために多数の器具を使用して、ＡＳの臨床経過を評価する。一般的に使用される尺度には、Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ  ｉｎ  Ａｎｋｙｌｏｓｉｎｇ  Ｓｐｏｎｄｙｌｉｔｉｓ（ＡＳＡＳ）、Ｂａｔｈ  Ａｎｋｙｌｏｓｉｎｇ  Ｓｐｏｎｄｙｌｉｔｉｓ  Ｄｉｓｅａｓｅ  Ａｃｔｉｖｉｔｙ  Ｉｎｄｅｘ  （ＢＡＳＤＡＩ）  （Ｇａｒｒｅｔｔら  （１９９４）  Ｊ  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ  ２１：２２８６）、Ｂａｔｈ  Ａｎｋｙｌｏｓｉｎｇ  Ｓｐｏｎｄｙｌｉｔｉｓ  Ｍｅｔｒｏｌｏｇｙ  Ｉｎｄｅｘ（ＢＡＳＭＩ）（Ｊｅｎｋｉｎｓｏｎら  （１９９４）  Ｊ  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ  ２１：１６９４）、及びＢａｔｈ  Ａｎｋｙｌｏｓｉｎｇ  Ｓｐｏｎｄｙｌｉｔｉｓ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｄｅｘ（ＢＡＳＦＩ）（Ｃａｌｉｎら  （１９９４）  Ｊ  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ  ２１：２２８１）がある。これらの指標を使用して、経時的に患者をモニターし、改善度を判断できる。これらの各尺度を下記に詳述する。
【０３２９】
ＡＳの臨床経過測定判断基準
１．Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ  ｉｎ  Ａｎｋｙｌｏｓｉｎｇ  Ｓｐｏｎｄｙｌｉｔｉｓ  （ＡＳＡＳ２０）は、ＡＳの重要な第三相臨床試験の主要評価項目である。４領域のうち３領域若しくはそれ以上における２０％以上の改善及び１０単位以上の絶対改善、疼痛、機能及び炎症に関する主観的包括的評価、残りの潜在的な領域において悪化がないこと（悪化の定義は、悪化が２０％以上及び正味の悪化が１０単位以上の変化をいう（０〜１００の尺度））。
【０３３０】
２．Ｂａｔｈ  Ａｎｋｙｌｏｓｉｎｇ  Ｓｐｏｎｄｙｌｉｔｉｓ  Ｄｉｓｅａｓｅ  Ａｃｔｉｖｉｔｙ  Ｉｎｄｅｘ（ＢＡＳＤＡＩ）を使用すると、ＡＳ患者の疾患活動性のレベルを評価できる。ＢＡＳＤＡＩは、ＡＳの炎症症状及び徴候、夜間及び総合的な背部痛、患者の包括的評価及びショーバー試験等の実際の脊椎可動度物理的測定、胸郭拡張スコア及び後頭部から壁までの距離の測定に焦点を当てる。ＢＡＳＤＡＩは、疲労、脊椎痛、末梢関節炎、付着部炎（腱／靭帯／関節嚢が骨の付着する部位での炎症）及び朝のこわばりに関する６つの質問に基づき疾患活動性を測定する。疲労、脊椎及び末梢関節の疼痛、限局性の圧痛、及び朝のこわばりの重症度を測定する１０ｃｍ水平視覚的アナログ尺度に基づき、これらの質問に答える（質的及び量的の両方）。最終的なＢＡＳＤＡＩスコアの範囲は０〜１０である。
【０３３１】
３．Ｂａｔｈ  Ａｎｋｙｌｏｓｉｎｇ  Ｓｐｏｎｄｙｌｉｔｉｓ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｄｅｘ（ＢＡＳＦＩ）は、ＡＳが原因で生じる身体機能障害を測定し、ＡＳに関する８つの具体的な質問及び患者の日常生活処理能力に関する２つの質問から成る自己評価様式である。ＢＡＳＦＩスコア（０〜１０）の１０ｃｍ水平視覚的アナログ尺度に基づき各質問に答える。
【０３３２】
４．Ｂａｔｈ  Ａｎｋｙｌｏｓｉｎｇ  Ｓｐｏｎｄｙｌｉｔｉｓ  Ｍｅｔｒｏｌｏｇｙ  Ｉｎｄｅｘ（ＢＡＳＭＩ）は、５つの簡単な臨床測定値で構成されており、総合指数を求めてＡＳの疾患状態を確定する。計量学的分析（２０測定値）により、最も正確に体軸の状態を反映する５つの測定値（頚部の回転、耳珠から壁までの距離、側方への屈曲、ショーバー試験の改正版、及び果間の距離）を割り出す。ＢＡＳＭＩは短時間（７分）で、再現可能であり感受性が良く、全体的な疾患スペクトラムを改める。ＢＡＳＭＩ指標はＡＳに罹患している臀部及び脊椎可動度の５つの測定値を含む。前記５つのＢＡＳＭＩ測定値は、０（軽度）から１０（重度）まであり、耳珠から壁までの距離、頚部の回転、腰部の屈曲、腰部の側方への屈曲及び果間（ｉｎｔｅｒｍｏｌｌｅｏｌａｒ）の距離を含む。
【０３３３】
上記の判断基準を組み合わせて、患者を評価する。また、Ｘ線、ＭＲＩ、及び骨及び軟骨の退化マーカーを使用して、ＡＳ患者の疾患活動性が可能となる。
【０３３４】
ＡＳが活動期にあるヒト患者においてＤ２Ｅ７を調べる臨床研究
プラセボ比較臨床試験において、数週間かけて患者にＤ２Ｅ７を皮下投与する。ＡＳ徴候の軽減又は完治の有無を判定するため、翌年に２〜６週間毎に再検査を行う。関節リウマチの治療において有効且つ安全である隔週毎の用量４０ｍｇを研究に使用する。ＡＳ活動期は、ＢＡＳＤＡＩ指標、疼痛のための視覚的アナログ尺度（ＶＡＳ）及び朝のこわばりの存在の３つの判断基準のうち２つを有すると定義付けられているが、これによりＡＳ活動期と診断が確定された患者のみを研究用に選択する。ＢＡＳＤＡＩ指標については上記に詳述している。本研究に登録する患者は、スクリーニング時とベースライン時に、疼痛スコアがＶＡＳで＞４、ＢＡＳＤＡＩスコアが４の激しい疼痛を有することが条件である。
【０３３５】
研究期間中、疾患修飾抗リウマチ薬（ＤＭＡＲＤＳ）又は他の免疫抑制剤の使用を許可する。１日１０ｍｇ未満のプレドニゾンと同等量である場合、患者は登録を許可される。
【０３３６】
各患者の病歴及び現在の所見を文書として記録するために、研究登録前にスクリーニング検査を行う。各患者から次の情報を入手する。朝のこわばり（期間及び重症度）、前部ブドウ膜炎の発症（発症の回数及び期間）、及び炎症を起こした末梢関節の数。各患者の脊柱及び仙腸関節のＸ線を撮る。磁気共鳴映像法も使用して、登録患者の脊柱の記録を取ることもできる。
【０３３７】
患者を無作為に実験群とプラセボ群に振り分け、第１２週又は第２４週まで隔週に１度、Ｄ２Ｅ７又はプラセボの何れかを盲検法で投与する。関節リウマチの治療に有効である２０〜８０ｍｇの用量で、Ｄ２Ｅ７を投与したところ、４０ｍｇ用量が有効であることが確認された。脊髄の炎症の治療にはそれよりも高用量が必要な場合もあるため、本研究ではそれよりも高用量を使用する（非応答者ではなく、及びメトトレキセートを服用中ではない患者に毎週４０ｍｇを投与）。ＡＳＡＳ２０を達成する患者のパーセンテージを算出する。
【実施例３】
【０３３８】
乾癬性関節炎の臨床研究におけるＴＮＦα阻害薬
乾癬性関節炎ヒト患者におけるＤ２Ｅ７
中等度から重度の乾癬性関節炎の全亜類型患者（遠位指節間関節の関節炎、破壊性関節炎、対称性多発性関節炎、非対称性少数関節炎及び／又は脊椎関節症を研究のため選択する。患者は、非ステロイド性抗炎症剤（ＮＳＡＩＤｓ）又は疾患修飾抗リウマチ薬（ＤＭＡＲＤｓ）に対して不耐性がない又は不耐性を示すかの何れかである。単独及び／又はＮＳＡＩＤｓ及びＤＭＡＲＤｓと組み合わせて治療を行う。
【０３３９】
評価の対象となるＤ２Ｅ７用量範囲は隔週毎に４０ｍｇで、これは、関節リウマチ患者の治療に最も有効と判明している。それよりも高用量（毎週４０ｍｇ）についても調べる。研究は１２〜２４週間のプラセボ比較試験を行った後、長期の安全性及び有効性の判定のため非盲検法を実行する。
【０３４０】
スクリーニング時、ベースライン時、及び治療期間中において、患者の臨床検査を頻繁に行う。アメリカリウマチ学会の改善に関する予備診断基準（ＡＣＲ２０）によって、１２週で症状及び徴候の主要有効性評価を判定する。追加の主要評価項目には、構造損傷の変化を検査するための６〜１２ヶ月間のＸ線変化の評価が含まれる。治療期間中に、乾癬性関節炎反応基準（ＰｓＡＲＣ）、ＱＯＬ測定、及び乾癬病変に対する有効性を決定するための皮膚評価（ｐｓｏｒｉａｓｉｓ  ａｒｅａ  ｓｅｖｅｒｉｔｙ  ｉｎｄｅｘ  （ＰＡＳＩ）及び標的病変評価）等、他の複数の評価を行う。
【実施例４】
【０３４１】
喘息のマウスモデルにおけるＴＮＦα阻害薬
卵白アルブミン（ＯＶＡ）誘導性アレルギー喘息マウスを用いたＴＮＦ抗体研究
アレルギー喘息のＯＶＡマウスモデル（Ｈｅｓｓｅｌ，  Ｅ．Ｍ．，ら  （１９９５）  Ｅｕｒ．  Ｊ．  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．  ２９３：４０１、Ｄａｐｈｎｅ，  ＴＮＦα．，ら  （２００１）  Ａｍ．  Ｊ．  Ｒｅｓｐｉｒ．  Ｃｅｌｌ  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ２５：７５１）を次のアレルギー喘息治療に関する研究に使用する。
【０３４２】
全マウスをＯＶＡに感作させる（ニワトリの卵白アルブミン、未精製グレードＶ；Ｓｉｇｍａ，  Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，  ＭＯ）。７回の腹腔内注射投与によって、ＯＶＡ１０μｇを含有する発熱物質を含まない生理食塩水０．５ｍｌをアジュバント無しで能動感作する。最後の感作後３週間後に連日５分間、１６回のＯＶＡ曝露（発熱物質を含まない生理食塩水２ｍｇ／ｍｌ）又は１６回の生理食塩水エアゾール曝露の何れかにマウスを曝露させる（１日１回のエアゾール）。マウスの追加群は、最初に８回のＯＶＡエアゾール、続いて８回の生理食塩水エアゾールの曝露を受ける（ＯＶＡ／生理食塩水、自然消散群）。
【０３４３】
アレルギー性喘息が更に重症進行中のモデルの実験では、２．２５ｍｇミョウバン上に１０μｇのＯＶＡを吸収させた０．１ｍｌのミョウバン沈降抗原を２度腹腔内注入して（７日間空ける）、能動感作によって全マウスをＯＶＡに感作させる（Ａｌｕｍｉｍｊｅｃｔ；Ｐｉｅｒｃｅ、  Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，  ＩＬ）。２度目の感作後２週間で３日毎に、６回のＯＶＡ曝露（１０ｍｇ／ｍｌの発熱物質を含まない生理食塩水）又は６回の生理食塩水エアゾール曝露何れかにマウスを２０分間曝露する（３日毎に１回のエアゾール）。マウスの追加群は、最初に３回のＯＶＡエアゾール、続いて３回の生理食塩水エアゾールの曝露を受ける（ＯＶＡ／生理食塩水、自然消散群）。
【０３４４】
流速６リットル／分で空気を圧縮することによって作動するＰａｒｉ  ＬＣ  Ｓｔａｒ  ｎｅｂｕｌｉｚｅｒ（ＰＡＲＩ  Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ  Ｅｑｕｉｐｍｅｎｔ，  Ｒｉｃｈｍｏｎｄ，  ＶＡ；粒径２．５−３．１μｍ）と連結させたプレキシガラスの曝露用容器（５リットル）で、エアゾール処置を行う。エアゾールの投与は、マウスの数が８匹以下の群で行う。
【０３４５】
第二の感作後、当該技術分野で既知の標準プロトコルに従って、マウスのＴＮＦαを結合及び中和するとして知られる抗体ＴＮ３（ＴＮ３−１９．１２）等のモノクロナール抗ＴＮＦα抗体（Ｍａｒｚｉら  （１９９５）  Ｓｈｏｃｋ  ３：２７、Ｗｉｌｌｉａｍｓら  （１９９２）  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ．  ８９：９７８４、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎを参照）を様々な用量でＯＶＡ感作マウスに投与する。該当するプラセボ対照群にも投与する。
【０３４６】
気圧の体プレチスモグラフィーを用いて、メタコリン吸入に反応する呼吸圧曲線を記録して、意識下の無拘束マウスの気道過敏性を測定する（アセチルβメチルコリン・クロライド、Ｓｉｇｍａ）。手早くマウスを全身用容器に入れ、基部となる目盛りを取得し、３分間平均する。生理食塩水をエアロゾル化し、次にメタコリンの濃度を２倍にして（１．６〜５０ｍｇ／ｍｌまでの生理食塩水）、３分間噴霧投与する。各噴霧投与後の目盛りを読み、３分間の平均をする。メタコリンに対する用量反応曲線（ＤＲＣｓ）を一般線形モデルによって統計分析し、その後、群間の事後比較を行う。データをログ変換して全群の分散を等化するために分析を行う。
【０３４７】
インビボ気道過敏性を測定後、１ｍｌの１０％ウレタンを含有する発熱物質を含まない生理食塩水（Ｓｉｇｍａ）を腹腔内注入してマウスを屠殺する。次に、マウスの心臓を穿刺して出血させ、ＥＬＩＳＡによってＯＶＡ特異的ＩｇＥを測定する。簡潔に説明すると、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）で希釈した２μｇ／ｍｌのラット抗マウスＩｇＥ（クローンＥＭ９５）を用いて、４℃で、マイクロタイタープレート（Ｎｕｎｃ  Ａ／Ｓ、  Ｒｏｓｋｉｌｄｅ、  Ｄｅｎｍａｒｋ）を一晩中覆う。翌日、室温でＥＬＩＳＡを実行する。ＥＬＩＳＡ緩衝液（０．５％ウシ血清アルブミン［Ｓｉｇｍａ］、２ｍＭ  ＥＤＴＡ、１３６．９ｍＭ  ＮａＣｌ、５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ、０．０５％  Ｔｗｅｅｎ−２０［Ｍｅｒｃｋ、  Ｗｈｉｔｅｈｏｕｓｅ  Ｓｔａｔｉｏｎ、  ＮＪ］  ｐＨ７．２を含有するＰＢＳ）を用いて１時間遮断した後に、血清サンプル及び複製の標準曲線（開始１：１０）をＥＬＩＳＡ緩衝駅で希釈し、２時間添加する。ＯＶＡ特異的ＩｇＥ参照標準を、ＯＶＡで腹腔内免疫して入手し、１０，０００実験単位／ｍｌ（ＥＵ／ｍｌ）の値を任意に割り当てる。インキュベーション後に、ジゴキシゲニン（ＤＩＧ）と組合せた１μｇ／ｍｌのＯＶＡ（ＥＬＩＳＡ緩衝液中で、ＤＩＧ−３−ο−メチルカルボニル−ε−アミノカプロン酸−Ｎ−ヒドロキシ−スクシニミド−エステル（Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ，  Ｂａｓｅｌ，  Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）を含むキットから調製）を１．５時間添加する。その後、ＥＬＩＳＡ緩衝液で１：５００に希釈した西洋わさびペルオキシダーゼ（Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）と共役させた抗−ＤＩＧ−Ｆａｂフラグメントと共にインキュベーションする。ο−フェニレンジアミン−二塩化基質（０．４ｍｇ／ｍｌ、Ｓｉｇｍａ）及び４ｍＭのＨ２Ｏ２含有ＰＢＳで発色現像を行い、４ＭのＨ２ＳＯ４を添加して止める。Ｂｅｎｃｈｍａｒｋのマイクロプレートリーダーを用いて測定した光学濃度は、４９２ｎｍである（Ｂｉｏ−ＲＡＤ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，  Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，  Ｃａ）。ＥＬＩＳＡの検出限界は０．５ＥＵ／ｍｌ  ＩｇＥである。
【０３４８】
マウスが出血させた後直ちに気管支肺胞洗浄（ＢＡＬ）を行う。簡潔に説明すると、発熱物質を含まない生理食塩水１ｍｌアリコートを３７℃に暖めて用いて、気管カニューレを通して気道を５回洗浄する。回収した洗浄液を貯蔵し、細胞を小球にし（３２  Ｘ  ｇ、４℃、５分）、１５０μｌの冷ＰＢＳ中で再懸濁する。Ｂｕｒｋｅｒ−Ｔｕｒｋ計算盤（Ｋａｒｌ  Ｈｅｃｈｔ  Ａｓｓｉｓｔｅｎｔ  ＫＧ，  Ｓｏｎｄｈｅｉｍ／Ｒｏｈｍ，  Ｇｅｒｍａｎｙ）を用いて、ＢＡＬＦ中の細胞の総数を測定する。ＢＡＬＦ細胞の細胞数を識別して測定するために、サイトスピンで処理しＤｉｆｆ−Ｑｕｉｃｋ（Ｄａｄｅ  ＡＧ，  ＤＵＤＩＮＧＥＮ，  Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）で染色する。１回のサイトスピンにつき、４００細胞を計測し、標準の形態学により単核細胞（単球、マクロファージ、及びリンパ球）、好酸球、及び好中球に分別する。ノンパラメトリックなマン・ホイットニーの検定、Ｕテストを使用して統計分析を行う。
【０３４９】
肺組織中の抗原再刺激Ｔ細胞によるサイトカイン産生を、前述通りに測定する（Ｈｏｆｓｔｒａ，  Ｃ．Ｌ．，ら  （１９９９）  Ｉｎｆｌａｍｍ．  Ｒｅｓ．  ４８：６０２）。簡潔に説明すると、上述通りに肺を洗浄し、１００Ｕ／ｍｌへパリンを含有する４ｍｌの生理食塩水を用いて右心室経由で灌流して血液及び血管内の白血球を全て除去する。完全に肺組織を除去し、無菌の冷ＰＢＳに移す。次に、肺を切り刻み、２．４ｍｇ／ｍｌのコラゲナーゼＡ及びデオキシリボヌクレアーゼＩ（ＩＩ級）（何れもＲｏｃｈｅＤｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）を含有する３ｍｌのＲＰＭＩ  １６４０中で、３７℃で３０分間、消化する。ウシ胎仔血清（ＦＣＳ）を添加してコラゲナーゼ活性を中止する。１０ｍｌのＲＰＭＩ  １６４０を用いて７０μｍのナイロン細胞ストレーナ（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ  Ｌａｂｗａｒｅ，  Ｆｒａｎｋｌｉｎ  Ｌａｋｅｓ，  ＮＪ）で前記肺組織消化物をろ過して、単細胞懸濁液を得る。肺細胞懸濁液を洗浄し、培地（１０％  ＦＣＳ、１％  Ｇｌｕｔａｍａｘ  Ｉ、及びゲンタマイシン［全てＬｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，  Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，  ＭＤ］を含有するＲＰＭＩ  １６４０）及び５０ｍＭ  Ｘ  メルカプトエタノール（Ｓｉｇｍａ）中で再懸濁する。Ｂｕｒｋｅｒ−Ｔｕｒｋ計算盤を用いて肺細胞の総数を測定する。丸底９６ウェルプレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ  Ｂｉｏ−Ｏｎｅ  ＧｍｂＨ，  Ｋｒｅｍｓｍｕｅｎｓｔｅｒ，  Ａｕｓｔｒｉａ）中で、肺細胞（８  Ｘ  １０５肺細胞／ウェル）をＯＶＡ（１０μＧ／ｍｌ）と共に、又は培地のみで培養する。陽性対照群として、プレートに結合させたラット抗マウスＣＤ３（クローン１７Ａ２、５０μｇ／ｍｌ、４℃で一晩中覆う）の存在下で細胞を培養する。各インビトロ刺激を３回行う。３７℃で培養後５日後に、上清を採集して刺激別に貯蔵し、ＥＬＩＳＡによるサイトカイン濃度測定を行うまで２０℃で保管する。
【０３５０】
製造業者の指導書に準じて、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−１０、及びＩＬ−１３ＥＬＩＳＡを実行する（ＰｈａｒＭｉｎｇｅｎ，  Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，  Ｃａ）。ＥＬＩＳＡの検出限界は、ＩＦＮ−γで１６０ｐｇ／ｍｌ、ＩＬ−４で１６ｐｇ／ｍｌ、ＩＬ−５で３２ｐｇ／ｍｌ、及びＩＬ−１３で１００ｐｇ／ｍｌである。
【０３５１】
全実験において、各マウスのメタコリンに対する気道過敏性、血清中のＯＶＡ特異的ＩｇＥレベル、ＢＡＬＦ中の細胞浸潤、及び肺組織中のＴ細胞の応答を、最後の曝露後２４時間後に測定する。
【０３５２】
単核細胞（単球、マクロファージ及びリンパ球を含む）、好酸球、及びＢＡＬＦ中の好中球の数の減少、気道過敏性の減少、及び肺組織中の抗原再刺激Ｔ細胞によるサイトカイン産生の減少によって、実験マウスの喘息改善度を示す。
【実施例５】
【０３５３】
慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）のマウスモデルにおけるＴＮＦα阻害薬  
肺胞の拡張及び炎症の治療研究
喫煙誘発性ＣＯＰＤマウスモデルを使用して次の研究を行う（Ｋｅａｓｔ，  Ｄ．ら  （１９８１）  Ｊ．  Ｐａｔｈｏｌ．  １３５：２４９、Ｈａｕｔｍａｋｉ，  Ｒ．Ｄ．，ら  （１９９７）  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２７７：２００２）。喫煙に反応して肺に炎症細胞が増加した後、肺気腫の病理学的変化の特徴が観察された。喫煙開始１ヶ月以内に炎症細胞が漸進的に増加し、喫煙開始３〜４ヵ月後には気腔が拡大することが、以前の研究で明らかになっている（Ｈａｕｔｍａｋｉら  （１９９７）  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２７７：２００２）。
【０３５４】
マウス用に調節した室備え付け喫煙装置を使用して、週６日、６ヶ月間、１日２本のフィルター無しタバコにマウスを曝露させる。対照群として、非喫煙の同一齢のマウスを使用する。上記の通りに喫煙に６ヶ月間曝露した後、当該技術分野で既知の標準プロトコルに従って、マウスＴＮＦαを結合及び中和するとして知られる抗体ＴＮ３（ＴＮ３−１９．１２）等のモノクロナール抗ＴＮＦα抗体（Ｍａｒｚｉら  （１９９５）  Ｓｈｏｃｋ  ３：２７、Ｗｉｌｌｉａｍｓら  （１９９２）  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ．  ８９：９７８４、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）を様々な用量で投与する。該当するプラセボ対照群にも投与する。２１日間でマウスに前記抗体を投与する。マウスを屠殺し、その後、下記の通りに、肺気量及びコンプライアンス、サイトカイン測定、組織学的粘液指数測定、肺胞管拡大、気腔測定、肺胞及び間質のマクロファージ数計測及び肺胞のサイズの検査を行う。
【０３５５】
抗体治療後に、安楽死させたマウスの細気管支の洗浄を行う。これは、気管をブラントジセクションによって切り離し、小さな内径の管類を挿入し気道を確保して行う。０．１％ＢＳＡを含有する１．０ｍｌのＰＢＳを２本滴下注入し、静かに吸引して、貯蔵する。各ＢＡＬ液のサンプルを遠心分離した上清を、使用まで−７０℃で保管する。サイトカイン測定は実施例５に記述の通りに行う。
【０３５６】
肺気量及びコンプライアンスを測定するために、動物に麻酔をかけ、気管にカニューレ挿入して、「Ｔ型」ピースアタッチメントによって１００％Ｏ２で肺を換気する。次に、前記気管を固定し、肺灌流を進行させながら酸素を吸収させる。この脱気の最後に、肺及び心臓を一塊として除去し、圧力を０〜３０ｃｍに徐々に増加させながらＰＢＳで膨らませる。容積置換によって、各５ｃｍ間隔で肺のサイズを測定する。プラセボ治療対照群の動物と比較して治療群動物の肺気量が増加すると、ＣＯＰＤは改善されたことになる。
【０３５７】
組織学的分析のために、動物を屠殺して胸骨正中切開を行い、カルシウム及びマグネシウムを含まないＰＢＳで右の心灌流を達成して肺の血管内の隙を一掃する。次に肺を、圧（２５ｃｍ）をかけて中性緩衡１０％ホルマリンで固定する。１０％ホルマリン中で一晩固定し、パラフィン包埋して５μｍで切断し、ヘマトキシリン・エオシン（Ｈ＆Ｅ）及びジアスターゼを用いた過ヨウ素酸シッフ（Ｄ−ＰＡＳ）で染色する。
【０３５８】
組織学的粘液指標（ＨＭＩ）により、気道の基底粘膜１単位につきＤ−ＰＡＳ＋である上皮細胞のパーセンテージを測定する。Ｄ−ＰＡＳで染色した切片から算出する（Ｃｏｈｎ，  Ｌ．，ら  （１９９７）  Ｊ．  Ｅｘｐ．  Ｍｅｄ．  １８６：１７３７）。プラセボ治療対照群の動物と比較して治療群動物のＨＭＩが減少すると、ＣＯＰＤが改善されたことになる。
【０３５９】
５０行の計算格子（全長１０ｍｍ）を用い、２００倍でフィールドを無作為に１５個選択して各マウスの気腔のサイズの指標であるＬｍを算出する。結果は、２名の検査官がそれぞれ測定した値を平均したものである。プラセボ治療対照群の動物と比較して治療群動物の気腔サイズが増加すると、ＣＯＰＤが改善されたことになる。
【０３６０】
肺胞管拡大を測定するために、Ｏｐｔｉｍｕｓ５．２画像解析ソフトウェア（Ｏｐｔｉｍｕｓ，  Ｂｏｔｈｅｌｌ，  ＷＡ）を用いて、終末細気管支−肺胞管移行から前記肺胞管まで近位の表面部分を２５０μｍ延長する。プラセボ治療対照群の動物と比較して治療群動物の肺胞管サイズが増加すると、ＣＯＰＤが改善されたことになる。
【０３６１】
アルカリ性のアビジン−ビオチンを用いて免疫染色したマウスのＭａｃ−３（ラット抗体をマウスへ（０．５ｍｇ／ｍｌ）、１：４０００希釈で使用、ＰｈａｒＭｉｎｇｅｎ，  Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，  ＣＡ）により同定したマクロファージを数えることによって、肺胞及び間質のマクロファージを定量化する。プラセボ治療対照群の動物と比較して治療群動物の肺胞及び間質のマクロファージ数が減少すると、ＣＯＰＤが改善されたことになる。
【０３６２】
気腔の索の平均長から肺胞のサイズを推測する（Ｒａｙ，  Ｐ．，ら  （１９９７）  Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｉｎｖｅｓｔ．  １００：２５０１）。この測定値は、平均直線切片（気腔サイズの標準的な指標）と類似しているが、肺胞の中隔の厚さとは無関係であることが利点である。上記の通りに切片を作成する。分析のために無作為に画像を得るため、印刷した長方形の格子の上に各スライドグラスを置き、格子線の交点、すなわち、約１ｍｍの間隔で、一連の点をカバーガラス上に記す。２ｍｍの間隔で系統的にスキャンすることにより、可能な限り各点に緊密なフィールドを獲得する。識別可能なアーチファクトを含むフィールド又は気管支血管周囲束若しくは胸膜等の非胞状構造を廃棄する。
【０３６３】
各マウスの肺から最低１０フィールドを獲得して、フレームグラッバーボードによってマッキントッシュＧ３コンピュータ（Ａｐｐｌｅ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｉｎｃ．，  Ｃｕｐｅｒｔｉｎｏ，  Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ，  ＵＳＡ）に取り込む。１ミクロンにつき１．５ピクセルの最終拡大率で、８ビットグレースケールで画像を得る。ＮＩＨのＷａｙｎｅ  Ｒａｓｂａｎｄが作成したパブリックドメインのＮＩＨ画像プログラムを使用して、ウェブサイト（ｈｔｔｐ：／／ｒｓｂ．ｉｎｆｏ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｎｉｈ−ｉｍａｇｅ）の特注のマクロを用いてマッキントッシュコンピュータ上で前記画像を分析する。手動で画像に閾値を設定し、次に均等化して反転させる。次に、前記画像を論理的な画像一致「及び」水平及び垂直格子を用いた操作を行う。少なくとも１フィールドにつき３００測定を各動物で行う。重層する気腔の空気を平均の索長で平均する。索の長さは肺胞の拡大に伴い増加する。プラセボ治療対照群の動物と比較して治療群動物の肺胞のサイズが増加すると、ＣＯＰＤが改善されたことになる。
【実施例６】
【０３６４】
特発性肺線維症（ＩＰＦ）マウスモデルにおけるＴＮＦα阻害薬
ブレオマイシン誘発性肺線維症マウスモデルを用いたＩＰＦ治療に関する研究
次の研究は、ブレオマイシン誘発性肺線維症マウスモデルを用いて実行する（Ｂｏｗｄｅｎ，  Ｄ．Ｈ．  （１９８４）  Ｌａｂ．  Ｉｎｖｅｓｔ．  ５０：４８７において検討、Ｔｏｋｕｄａ，  Ａ．，ら  （２０００）  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １６４：２７４５）。
【０３６５】
８〜１０週齢の雌のＣ５７ＢＫ／６Ｊマウスに硫酸ブレオマイシンを投与する。簡潔に説明すると、２００μｌの５ｍｇ／ｍｌペントバルビタールを腹腔内注入し、３ｍｇ／ｋｇ硫酸ブレオマイシン含有の５０μｌの無菌生理食塩水を気管内に滴下注入して、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスに麻酔をかける。
【０３６６】
上記の通りにブレオマイシンの気管支内滴下注入後に、マウスのＴＮＦαを結合及び中和するとして知られる抗体ＴＮ３（ＴＮ３−１９．１２）等のモノクロナール抗ＴＮＦα抗体（Ｍａｒｚｉら  （１９９５）  Ｓｈｏｃｋ  ３：２７、Ｗｉｌｌｉａｍｓら  （１９９２）  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ．  ８９：９７８４、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎを参照）を様々な用量でブレオマイシン誘発性肺線維症マウスに投与する。該当するプラセボ対照群にも投与する。マウスは１４日間の間１日２回治療受ける。
【０３６７】
ブレオマイシン治療後２０及び６０日でマウスを屠殺する。組織を１０％緩衝ホルマリンで固定し、パラフィン包埋する。切片をヘマトキシリン・エオシン染色し、光学顕微鏡で調べる。肺浸潤白血球数、サイトカイン測定、全体的な肺コラーゲンの内容を下記の通りに測定する。
【０３６８】
Ｓｍｉｔｈら（１９９４）  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １５３：４７０４に記述どおりに、ＢＡＬ細胞及び肺浸潤白血球を作成する。簡潔に説明すると、麻酔後に、気管内カニューレを経由して、１ｍｌのＰＢＳの滴下注入と肺からの除去を５回繰り返す。前記ＢＡＬ液を採集し、赤血球溶解後に総白血球数を測定する。サイトスピン遠心分離後に細胞分画を測定する。標本をＤｉｆｆ−Ｑｕｉｋ  製品で染色する（Ｂａｘｔｅｒ，  Ｍｉａｍｉ，  ＦＬ）。
【０３６９】
肺浸潤白血球を単離するために、肺を生理食塩水で灌流し、胸腔から切除してはさみで切り刻む。各標本を１５ｍｌ消化緩衝液（１０％ＦＣＳを含有する、１％コラゲナーゼ入りＲＰＭＩ  １６４０、Ｗａｋｏ  Ｐｕｒｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ，  Ｏｓａｋａ，  Ｊａｐａｎ）に入れ、ロッカー上で３７℃、３０分間インキュベートする。次に、ナイロンメッシュを介して前記標本を圧し、すすいだ後に１０％ＦＣＳ−ＲＰＭＩ  １６４０中で懸濁する。細胞懸濁液をＨｉｓｔｏｐａｑｕｅ−１１１９  （Ｓｉｇｍａ，  Ｓｔ．  Ｌｏｕｉｓ，  ＭＯ）で処理し、肺の実質細胞及び赤血球を除去するため、２０００ｒｐｍで２０分間遠心分離する。すすいだ後に、ペレットを２．５％  ＦＣＳ−ＰＢＳ中で再懸濁する。細胞数を数えた後に、フロー・サイトメトリー免疫蛍光分析を行う。
【０３７０】
前述どおりに（Ｙｏｎｅｙａｍａら  （１９９８）  Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｉｎｖｅｓｔ．  １０２：１９３３、Ｍｕｒａｉら  （１９９９）  Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｉｎｖｅｓｔ．  １０４：４９）、Ｅｐｉｃｓ  Ｅｌｉｔｅセルソーター（Ｃｏｕｌｔｅｒ  Ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃｓ，  Ｈｉａｌｅａｈ，  ＦＬ）を用いて末梢血の白血球及び肺浸潤白血球の免疫蛍光分析を行う。赤血球溶解バッファーを用いて正常なマウスから末梢血白血球を準備する。Ｆｃ  Ｂｌｏｃｋ（抗ＣＤ１６／３２、ＰｈａｒＭｉｎｇｅｎ，  Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，  Ｃａ）を用いた１０分間のインキュベーション後に、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤｌｌｂ、ＣＤｌｌｃ、及びＧＲ−１（ＰｈａｒＭｉｎｇｅｎ）に対するＰＥ結合ＭＡＢで細胞を染色し、また２０μｇ／ｍｌのウサギ抗ＣＣＲ１ポリクロナール抗体でも染色し、その後、ＦＩＴＣ結合ヤギ抗ウサギＩｇＧ（Ｌｅｉｎｃｏ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，  Ｓｔ．  Ｌｏｕｉｓ，  ＭＯ）で染色する。分析前に、プロピジウムアイオダイド（Ｓｉｇｍａ）染色を行って、死亡細胞を除去する。プラセボ治療対照群の動物と比較して治療群動物の肺浸潤白血球数が減少すると、ＩＰＦが改善されたことになる。
【０３７１】
肺標本の免疫組織化学を下記の通りに実行する。前述の通りに肺標本を作成する（Ｙｏｎｅｙａｍａら  （１９９８）  Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｉｎｖｅｓｔ．  １０２：１９３３、Ｍｕｒａｉら  （１９９９）  Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｉｎｖｅｓｔ．  １０４：４９）。簡潔に説明すると、肺標本を過ヨウ素酸−リジン−パラホルムアルデヒド中で固定し、ショ糖を含有するＰＢＳで洗浄、Ｔｉｓｓｕｅ−Ｔｅｋ  ＯＣＴ  化合物（Ｍｉｌｅｓ，  Ｅｌｋｈａｒｔ，  ＩＮ）に包埋、液体窒素中で凍結させ、クリオスタット中で７μｍの厚さの切片に切断する。内在性ペルオキシダーゼ活性を抑制後に、前記切片を第１抗体でインキュベートする。使用した前記抗体は、ウサギ抗ＣＣＲＬ抗体、ラット抗Ｆ４／８０（ＢＭＡ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ，Ｇｅｎｅｖａ，  Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）、ラット抗ＣＤ４、ラット抗ＣＤ８、ラット抗Ｇｒ−１（ＰｈａｒＭｉｎｇｅｎ）、ラット抗非リンパ系樹枝状細胞（ＮＬＤＣ）−１４５、及びラット抗ＭＨＣクラスＩＩ（ＢＭＡ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ）である。負の対照群として、ウサギＩｇＧ又はラットＩｇＧの何れかをそれぞれ使用する。前記を、ＨＲＰ結合ヤギ抗ウサギＩｇＧ（Ｃｅｄａｒｌａｎｅ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，  Ｈｏｒｎｂｙ，  Ｏｎｔａｒｉｏ，  Ｃａｎａｄａ）又はＨＲＰ結合ヤギ抗ラットＩｇＧ（ＢｉｏＳｏｕｒｃｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，  Ｃａｍａｒｉｌｌｏ，  Ｃａ）の何れかで、経時的に処理する。３，３‘−ジアミノベンジジン（Ｗａｋｏ  Ｐｕｒｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ）又は３−アミノ−９−エチルカルバゾール基質キット（Ｖｅｃｔｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，  Ｂｕｒｌｉｎｇａｍｅ，  Ｃａ）で染色後、標本をＭａｙｅｒのヘマトキシリンで対比染色する。プラセボ治療対照群の動物と比較して、治療群動物におけるＣＣＲ１の減少、及び、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、非リンパ系樹枝状細胞（ＮＬＤＣ）、及びＭＨＣクラスＩＩ結合細胞の数の減少によって、ＩＰＦが改善されたことになる。
【０３７２】
Ｓｉｒｃｏｌ  Ｃｏｌｌａｇｅｎ  Ａｓｓａｙキット（Ｂｉｏｃｏｌｏｒ，  Ｎｏｒｔｈｅｒｎ  Ｉｒｅｌａｎｄ）を製造業者の指示書に従って使用して全可溶性コラーゲンを分析し、肺コラーゲンの総量を測定する。簡潔に説明すると、ブレオマイシン投与後１４日目に肺を採集し、約１ｍｇのペプシン／１０ｍｇ組織残留物を含む０．５Ｍ酢酸１０ｍｌでホモジナイズする。各標本を４℃で２４時間、攪拌しながらインキュベートする。遠心分離後、各上清２００μｌを分析する。１ｍｌのＳｉｒｃｏｌ色素試薬をコラーゲンと結合して各標本に添加し、その後３０分間混合する。遠心分離後、キットにあるアルカリ性試薬１ｍｌ中でペレットを懸濁し、分光光度計５４０ｎｍで読む。  コラーゲン標準液を利用して、検量線を作成する。コラーゲンには重量で約１４％のヒドロキシプロリンが含まれており、この方法で入手したコラーゲン内容量は、製造業者のデータによると、ヒドロキシプロリン含有量と関連がある。プラセボ治療対照群の動物と比較して、治療群動物の肺コラーゲンが減少すると、ＩＰＦが改善されたことになる。
【０３７３】
ブレオマイシン誘発性肺線維症マウスモデルを使用して、マウスのＢＡＬ細胞数、末梢血白血球及び肺浸潤白血球の減少を調べた。また、プラセボ治療マウスと比較して、Ｄ２Ｅ７治療マウスの肺コラーゲン総量の減少に関してもマウスを調べる。
【実施例７】
【０３７４】
喘息の治療におけるＴＮＦα阻害薬
喘息ヒト患者におけるＤ２Ｅ７の臨床研究
喘息と診断されて少なくとも２年間の記録があり、過去６ヶ月間以内にアルブテロール投与後にＦＥＶ１が１５％若しくはそれ以上増加する可逆性気管支痙攣も実証できる１２歳から６５歳までの患者を研究対象とする。また、ベースライン時のＦＥＶ１が予測正常値の５０％〜８０％、喘息以外の臨床的に顕著な疾患の欠如、吸入副腎皮質コステロイドの日常使用及び研究開始３０日前の全β２アゴニストの使用休止の歴史も更に判断基準に追加する。
【０３７５】
スクリーニング診察後７日以内にベースライン診察を行う。全患者はＦＥＶ１の検査を受け、理学的検査を完了する。肺の聴診及び口咽頭の検査を行い、喘息の兆候を評価する。無作為にプラセボ群を含む治療群に、適格な患者を割り当てる。
【０３７６】
ベースライン測定後に、患者の治療を開始する。患者を無作為化し、盲検法でＤ２Ｅ７又はプラセボの何れかの治療を行う。第１５日及び第２９日に、ベースライン診察で行った全検査を繰り返す。１２誘導心電図も行う。他の薬の使用及び、ある場合は有害事象に関して、患者のカルテを検討する。
【０３７７】
改善度は、診察毎に測定する肺活量測定で判定する。肺活量測定には、ＦＥＶ１、最大呼気流量（ＰＥＦＲ）、努力肺活量（ＦＣＶ）、及びＦＶＣの２５％〜７５％の努力呼気流量がある。最終診察時のＦＥＶ１を有効性の第一の尺度とする。患者により１日２回のＰＥＦＲ試験を行って比較し、レスキュー薬吸入数を計算する。喘息兆候（喘鳴、胸部締め付け感、息切れ及び咳）に対する患者／医師の評価の特徴は重症度である。患者のカルテの検討及び使用しなかった試験薬を回収することによって服薬遵守を評価する。
【実施例８】
【０３７８】
ＣＯＰＤ治療におけるＴＮＦα阻害薬
ＣＯＰＤヒト患者におけるＤ２Ｅ７を調べる臨床研究
研究対象集団は、ＣＯＰＤと診断された４０〜８０歳の男性及び女性の患者である。患者の条件は、最高ＦＥＶ１／ＦＶＣの比が０．７０リットル以下で、気道閉塞が定着しており、アルブテロール投与後のＦＥＶ１の増加が１５％以下又は２００ｍｌ以下（あるいは両方）に限定、アルブテロール投与後のＦＥＶ１が予測値の３０〜７０％の間とする。また、患者は１０パック年以上の喫煙歴のある、現喫煙者又は元喫煙者でなければならない。
【０３７９】
ベースライン測定後に、患者の治療を開始する。患者を無作為化し、盲検法でＤ２Ｅ７又はプラセボの何れかの治療を行う。
【０３８０】
投与前のベースラインと比較した試験薬投与後の気管支拡張薬前のＦＥＶ１の増加及びＳｔ．  Ｇｅｏｒｇｅ‘ｓ  Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ  Ｑｕｅｓｔｉｏｎｎａｉｒｅ  （Ｊｏｎｅｓ，  Ｐ．Ｗ．，ら  （１９９１）  Ｒｅｓｐ．  Ｍｅｄ．  ８５  （ｓｕｐｐｌ）：２５）の総スコアのベースラインからの変化により改善度を示す。これは、すなわち、患者のＱＯＬの改善を示す。また、改善は、ベースラインのトラフＦＶＣの増加、最初のＣＯＰＤ悪化が起こるまでの時間の延長、及びベースライン時と比較して運動後の息切れの減少によって明らかになる（ｍｏｄｉｆｉｅｄ  Ｂｏｒｇ  Ｓｃａｌｅ；Ｓｔｕｌｂａｒｇ，  Ｍ．，  Ａｄａｍｓ，  Ｌ．  Ｄｙｓｐｎｅａ．  Ｉｎ：Ｍｕｒｒａｙ  Ｊ，  Ｎａｄｅｌ  Ｊ，  ｅｄｓ．  Ｔｅｘｔｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ．  Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，  ＰＡ：ＷＢ  Ｓａｕｎｄｅｒｓ，  ２０００；５４１−５５２）。安全性の尺度は、、有害事象、バイタルサイン、全ての二重盲検診察及び臨床検査における心電図である。
【実施例９】
【０３８１】
ＩＰＦの治療におけるＴＮＦα阻害薬
ＩＰＦヒト患者におけるＤ２Ｅ７の臨床研究
ＩＰＦ患者のＤ２Ｅ７治療とプラセボ治療を比較する多施設二重盲検プラセボ対照比較試験を行う。糖質コルチコイド又は他の免疫抑制剤若しくはその両方を少なくとも６ヶ月間投与して治療を継続又は繰り返したにもかかわらず、ＩＰＦが組織学的に立証され、研究開始前１２ヶ月間、少なくとも１０％の肺機能減退がある患者を対象とする。ＩＰＦの判定に使用した主な組織学的特徴は、微量の細胞浸潤のみを伴う胸膜下及び腺房周囲に存在する線維性の病変である。この疾患の判定の放射線学的判断基準は、断片的な両側性の浸潤が高分解能ＣＴ上に無いこと、及び病巣の支配的な末梢分布の立証である。肺線維症の原因として知られる有機又は無機の粉塵又は薬に対する曝露歴のある患者、及び結合組織疾患又は他の慢性肺疾患患者は除外する。全肺気量の予測正常値の４５％未満を基準にして判定した末期ＩＰＦ患者も除外する。肺機能の繰り返し試験、ＦＶＣ、全肺気量（ＴＬＣ）及び酸素飽和度のベースライン値を測定する。
【０３８２】
ベースライン測定後に、患者の治療を開始する。患者を無作為化し、盲検法でＤ２Ｅ７又はプラセボの何れかの治療を行う。
【０３８３】
ＩＰＦ患者の改善には、研究参加患者の全体的な生存率の増加及びＦＶＣ、全肺気量（ＴＬＣ）及び酸素飽和量の改善が含まれる。ＦＶＣ又はＴＬＣの予測値の１０％若しくはそれ以上の増加、又は、静止又は労作時の呼気と同一の割合の３％若しくはそれ以上の酸素飽和度の増加を肺機能の改善と定義する。各測定値が類似の様式で減少する場合は、悪化と判断する。改善または悪化が立証されない患者は、安定していると判定する。
【実施例１０】
【０３８４】
炎症及び再狭窄の軽減におけるＴＮＦα阻害薬
マウス頚動脈モデルを使用した再狭窄の研究
再狭窄に関する次の研究をマウス頚動脈モデルを使用して行う（Ｋｕｍａｒ  ａｎｄ  Ｌｉｎｄｎｅｒ  （１９９７）  Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ．  Ｔｈｒｏｍｂ．  Ｖａｓｃ．  Ｂｉｏｌ．  １７：２２３８、ｄｅ  Ｗａａｒｄら  （２００２）  Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ．  Ｔｈｒｏｍｂ．  Ｖａｓｃ．  Ｂｉｏｌ．  ２２：１９７８）。２〜４ヶ月齢の範囲のマウスに、キシラジン溶液を腹腔内注入して麻酔をかける。左の総頚動脈を切除して頚動脈の分岐部近くで結紮する。次に、マウスを回復させる。
【０３８５】
マウスのＴＮＦαを結合及び中和するとして知られる抗体ＴＮ３（ＴＮ３−１９．１２）等のモノクロナール抗ＴＮＦα抗体（Ｍａｒｚｉら  （１９９５）  Ｓｈｏｃｋ  ３：２７、Ｗｉｌｌｉａｍｓら  （１９９２）  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ．  ８９：９７８４、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎを参照）を実験群に投与する。１週に付き１日１回の皮下注射により、抗ＴＮＦα抗体又はプラセボの何れかをマウスに投与する。頚動脈の結紮後２．５又は４週でマウスを屠殺後、４％パラホルムアルデヒド含有ＰＢＳを用いて灌流固定する。前記頚動脈を切除し、７０％（Ｖ／Ｖ）エタノール中に浸漬してパラフィンに包埋する。Ｄ２Ｅ７注射マウス及びプラセボマウスの両方において、結紮しなかった右頚動脈を内部対照群として使用する。ｄｅ  Ｗａａｒｄらの記述どおりに（上述）、形態計測分析のために連続切片を作る。
【０３８６】
形態計測分析により、一般的な絶対基準点から特定の指定距離の点で、治療及び非治療の結紮頚動脈の血管部分全体を測定する。結紮が頚動脈の狭窄の原因となることが、以前に明らかにされている（構造のリモデリング）（Ｋｕｍａｒ  ａｎｄ  Ｌｉｎｄｎｅｒ，上述、Ｋｕｍａｒら  （１９９７）  Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  ９６：４３３３）。前記頚動脈の断面を顕微鏡のスライド上に載せ、ヘマトキシリン・エオシンで染色する。顕微鏡デジタル写真を使用して前記頚動脈の画像を入手し、内膜及び培地の断面部分を測定して、動脈狭窄の減少（すなわち、大きい方の血管直径）をプラセボ注射マウスと比較する。
【実施例１１】
【０３８７】
アテローム性動脈硬化症サルモデルにおけるＴＮＦα阻害薬
アテローム性動脈硬化症サルモデルにおけるＤ２Ｅ７の効果
食事誘発性アテローム性動脈硬化症サルモデルを用いて次の研究を行う（Ｌｅｎｔｚ  ＳＲら  （２００２）  Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  １０６（７）：８４２−６、Ｓｕｎｄｅｌｌ  ＣＬら（２００３）３０５（３）：１１１６−２３）。
【０３８８】
コレステロール０．７％及び総カロリーの４３％の脂肪分を含むアテローム生成用食事を成熟カニクイザル（Ｍａｃａｃａ  Ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）に与える。アテローム生成用食事を開始して４４±１ヶ月後に、塩酸ケタミン（２０ｍｇ／ｋｂ  １Ｍ）で動物を鎮静させ、ペントバルビタールナトリウム（２０ｍｇ／ｋｇ  ＩＶ）で麻酔する。血液採取のため腋窩動脈に非閉塞型のカテーテルを挿入し、Ｄ２Ｅ７又はプラセボの何れかの投与及び麻酔補給（ペントバルビタールナトリウム５ｍｇ／ｋｇ／時）のために腋窩静脈をカニューレ処置する。Ｄ２Ｅ７は、カニクイザルを含む様々な種においてＴＮＦα活性を効率良く抑制することが分かっている（米国特許第６，２５８，５６２号を参照）。
【０３８９】
Ｄ２Ｅ７又はプラセボ注入に先立って、止血を評価するために血液を腋窩動脈カテーテルから採取し、１／１０本の３．８％クエン酸ナトリウムの中に直接入れる。採取後、血液標本を直ちに氷上に置き、４℃で３０分間、２５００ｇの遠心分離により血漿を単離する。追加で血液標本を採取し、コレステロール測定のために血清分離管に入れるか、又は総血漿ホモシステイン（ｔＨＣＹ）の測定のために３．４ｍｍｏｌ／Ｌ  ＥＤＴＡで作成した血清分離管に入れる。
【０３９０】
腋窩静脈カテーテルを通して１０分間かけて、Ｄ２Ｅ７又はプラセボを１０ｍｌの生理食塩水に注入する。注入後に、血液標本を定期的に採取する。
【０３９１】
処置後に動物がアテローム性動脈硬化症に罹患する程度を、様々な方法で評価する。血清標本を定期的に前記サルから採取し、総コレステロール、ＨＤＬコレステロール、ＬＤＬコレステロール、ｔＨＣＹ及び中性脂肪を調べる。治療群のサルを検査して、プラセボ治療群のサルと比較して、総コレステロール、及びＬＤＬコレステロール、及びｔＨＣＹレベルの高低、及びＨＤＬコレステロールの高低を判定する。
【実施例１２】
【０３９２】
患者の再狭窄治療に関するＴＮＦα阻害薬
再狭窄ヒト患者におけるＤ２Ｅ７の研究
血管形成術後、最初の６ヶ月以内に再狭窄が生じる確率が増加するので、バルーン形成術を受ける患者を研究のために選択する。
【０３９３】
治療前に、ガイドカテーテルを基準として血管及び病変のパラメータを推定する。推定値には、対象血管径（ＲＶＤ）、治療前の最小管腔直径（ＭＬＤ、（ＲＶＤ  Ｘ  ［１−術前狭窄直径パーセントにより判定］）、術後ＭＬＤ（（ＲＶＤ  Ｘ  ［１−術後狭窄直径パーセントにより判定］））、急性の増加（ａｃｕｔｅ  ｇａｉｎ）（術後ＭＬＤ−術前ＭＬＤ）、罹患した血管の数及び交換した血管の数が含まれる。
【０３９４】
実験群の患者に、各週及び毎週の用量４０ｍｇのＤ２Ｅ７又はプラセボの何れかを投与する。投与量は、再狭窄に精通している当業者が調節することがある。患者を追跡して血管形成術後６ヶ月で検査し、再狭窄の発生の有無を判定する。また、患者を９ヶ月及び長期で検査し、治療によって再狭窄を予防又は軽減した患者群の再狭窄遅延の効果を判定する。Ｄ２Ｅ７治療後に血管及び病変のパラメータの推定値を記録する。患者の再狭窄の程度を比較するため統計分析を行う（Ｊａｃｋｓｏｎら  （２００３）  Ａｍ  Ｈｅａｒｔ  Ｊ  １４５：８７５）。
【実施例１３】
【０３９５】
心不全治療に対するＴＮＦα阻害薬
心不全ヒト患者におけるＤ２Ｅ７の臨床研究
研究のために、安定したニューヨーク心臓協会（ＮＹＨＡ）心機能分類クラスＩＩ又はＩＶ及び３５％未満の左心室駆出率の心不全患者を選択する。ＮＹＨＡ基準の下に、活動が著しく制限される患者をクラスＩＩＩと定義する。すなわち、クラスＩＩＩの患者は安静時に限り問題が無い。クラスＩＶの患者の定義は、ベッド又は椅子に拘束される完全な安静を必要とする患者とし、又は如何なる肉体的活動によっても不快となり、安静時に徴候が現れる患者をいう。Ｂｕｒｎｓらの記述どおりに、左心室駆出は６ヶ月死亡率と関連がある（Ｂｕｒｎｓら  （２００２）  Ｊ  Ａｍ  Ｃｏｌｌ  Ｃａｒｄｉｏ．  ３９：３０）。
【０３９６】
隔週に４０ｍｇ、又は心不全に精通する当業者が調節した用量のＤ２Ｅ７を患者に投与する。対照群にはプラセボを投与する。患者は、１、２、６、１０、１４、２０、及び１８週で検査を受ける。各診察時に、各患者を検査して、研究開始時の患者の状態と比較して患者の全体的な心不全の状態を評価、すなわち、患者のＮＹＨＡクラスを評価する。心不全研究の最後に、患者の最終ＮＹＨＡクラスを最初のＮＹＨＡクラスと比較する。
【実施例１４】
【０３９７】
糖尿病マウスモデルにおけるＴＮＦα阻害薬
ＮＯＤマウスモデルにおけるＴＮＦ抗体の研究
１型糖尿病の非肥満性糖尿病（ＮＯＤ）マウスモデルを用いて次の研究を行う。研究の開始時に、ＮＯＤマウスの血糖値を検査してインスリンレベルを確立する。  ベースラインのインスリンレベルは、一晩中（１７時間）マウスを絶食させることによって確立する。血糖値を確認し、グルコース投与後４分後に再び確認する。血糖は反射率計を用いて測定する。グルコース（０．８５％塩化ナトリウム２００ｍｇ／ｍｌ）を１ｍｌシリンジに入れ、４０℃で予熱してマウスに３ｇ／ｋｇ体重で腹腔内注入する。前記グルコース投与後４分後に第２回目の血糖測定値を測定する。第２回目の血液測定標本を使用して、Ｇｌｕｃｏｍｅｔｅｒ  Ｅｌｉｔｅによって血糖値を測定する。血液の残りの標本をミクロチューブに採集し、インスリン又はＣ−ペプタイド測定用に血清を分離する。製造業者の指示書に従ってげっ歯類のラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）キットを使用、又は酵素結合免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）を用いてインスリンレベルを測定する。
【０３９８】
血糖値が３００ｍｇ／ｄＬ以上の基準に基づき糖尿病マウスを選択する。非糖尿病マウスは、血糖メーターで測定したグルコース値が２００ｍｇ／ｄＬ未満であるマウスを選択する。ＮＯＤマウス（上記の血糖値を示すマウス）に糖尿病を発症させ、プラセボ又はマウスのＴＮＦαを結合及び中和するとして知られる抗体ＴＮ３（ＴＮ３−１９．１２）等のモノクロナール抗ＴＮＦα抗体の何れかの用量を投与する（Ｍａｒｚｉら  （１９９５）  Ｓｈｏｃｋ  ３：２７、Ｗｉｌｌｉａｍｓら  （１９９２）  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ．  ８９：９７８４、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎを参照）。前記マウスは、毎日、ＴＮＦ抗体又はプラセボの皮下投与を受ける。インスリン及びグルコース値を毎週測定し、血糖値の低下の有無を判定する。
【実施例１５】
【０３９９】
糖尿病マウスモデルにおけるＴＮＦα阻害薬
２型糖尿病マウスモデルにおけるＴＮＦ抗体の研究
ＮＳＹマウスモデル（２型糖尿病）を用いて次の研究を行う（Ｕｅｄａら、Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｖｏｌ．  ４８，  Ｍａｙ  １９９９，  １１６８：１１７４）。発病が年齢依存性であり、マウスは重度の肥満ではなく、インスリン抵抗性及びグルコースに対するインスリン反応障害が疾患発症の一因となるよう、ヒト２型糖尿病を忠実に再現してＮＳＹマウスを作成する。本研究は、グルコース値、インスリンレベル、マウスの身長及び体重等、多数の表現型データを評価する。
【０４００】
静脈内ブドウ糖負荷試験等の標準技術に基づきＮＳＹマウスのグルコースを測定する。研究開始１２週間前に予め、ベースラインのグルコース耐性を測定し、グルコース、インスリン、身長及び体重をそれに応じて表にする。
【０４０１】
プラセボ又はマウスのＴＮＦαを結合及び中和するとして知られる抗体ＴＮ３（ＴＮ３−１９．１２）等のモノクロナール抗ＴＮＦα抗体の何れかの用量をＮＳＹマウスに投与する（Ｍａｒｚｉら  （１９９５）  Ｓｈｏｃｋ  ３：２７、Ｗｉｌｌｉａｍｓら  （１９９２）  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ．  ８９：９７８４、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎを参照）。前記マウスは、毎日、抗ＴＮＦ抗体又はプラセボの皮下投与を受ける。本研究開始後０、１２、２４、３６、及び４８週での腹腔内グルコース投与１２０分後にグルコース値の測定を行い、グルコース不耐性の減少の有無を調べる。
【実施例１６】
【０４０２】
肥満マウスモデルにおけるＴＮＦα阻害薬
肥満マウスモデルにおけるＴＮＦ抗体の研究
肥満マウス（ｏｂ／ｏｂ）モデルを用いて次の研究を行う。マウスの体重減少及び肥満度指数の減少を評価する。肥満マウスの特徴は、著しい肥満、過食症、一過性高血糖症、ランゲルハンス島のβ細胞の数及びサイズの増加を伴う血漿インスリン濃度の顕著な上昇がある（Ｃｏｌｅｍａｎ、上述）。約２６日齢で体重に基づいて、肥満マウス（ｏｂ／ｏｂ）をその痩せた同腹仔と表現型的に識別する。肥満マウスは急速に体重を増加させ、５週齢で肥満が顕著になる。肥満マウスの最大体重は７〜８ヶ月齢で６０〜７０ｇに達し、一方、痩せた同腹仔の最大体重は３〜４ヶ月齢で３０〜４０ｇである（Ｃｏｌｅｍａｎ、上述、Ｗｅｓｔｍａｎ  （１９６８）  Ｄｉａｂｅｔｏｌｏｇｉａ  ４：１４１、Ｂｒａｙ  ＆  Ｙｏｒｋ  （１９７１）  Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｒｅｖｉｅｗｓ．  ５１：５９８）。
【０４０３】
１３週齢のｏｂ／ｏｂマウス及びそれに対応する野生型対照マウスの体重を測定し、ベースライン体重を確立する。プラセボ又はマウスのＴＮＦαを結合及び中和するとして知られる抗体ＴＮ３（ＴＮ３−１９．１２）等のモノクロナール抗ＴＮＦα抗体の何れかの用量を前記マウスに投与する（Ｍａｒｚｉら  （１９９５）  Ｓｈｏｃｋ  ３：２７、Ｗｉｌｌｉａｍｓら  （１９９２）  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ．  ８９：９７８４、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎを参照）。マウスは、毎日、抗ＴＮＦ抗体又はプラセボの皮下投与を受ける。全マウスに高脂肪食（５８％脂肪、Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｄｉｅｔｓ  Ｄ１２３３０）を１２週間与える。体重を毎週記録する。１２週間後にマウスを安楽死させ、マウスの最終体重及び切除した脂肪パッドの重量を測定して、最終的な肥満度指数（ＢＭＩ）及び肥満の出現率を測定する。
【０４０４】
或いは、ｏｂ／ｏｂマウスを誕生時からＤ２Ｅ７で治療し、通常食（すなわち、低脂肪食でもなく、高脂肪食でもない）を与える。治療群及び対照群のマウス（ｏｂ／ｏｂ同腹仔）の体重を毎週測定する。通常、５週間でｏｂ／ｏｂマウスは、肥満であることを証明するＢＭＩを示す。５週でマウスを調べ、対照群と比較してＢＭＩ測定値の高低を判定する。
【実施例１７】
【０４０５】
ヒトの２型糖尿病治療におけるＴＮＦα阻害薬
２型糖尿病ヒト患者におけるＤ２Ｅ７の研究
研究のために２型糖尿病と診断される患者を選択する。次の組み入れ基準を使用する。年齢４０〜６５歳、糖尿病を認知している期間が１２ヶ月を超える、３５ｋｇ／ｍ２未満の安定したＢＭＩ、１４０／９０ｍｍ／ＨＧ未満の仰臥位血圧、血清クレアチニンが１０６μｍｏｌ／ｌ未満、最初の検査前に３ヶ月間及び１５日間のプラセボ馴らし期間で毎週検査した標本でｍ２４−ｈ  ＵＡＥが２０〜２００ｇ／分、及び本研究開始前に心血管疾患、肝臓疾患、又は全身的な疾患が無いこと。患者は、糖尿病治療薬以外の薬を服用しない。本研究の開始前３日間及び本研究の全期間中、ナトリウム摂取に制限を設けない等、カロリーの食事法を患者は遵守する（〜０．１３ｍＪ  ×  ｋｇ−１  Ｘ  ｄａｙ−１、５０％炭水化物、３５％脂質、１５％タンパク質）。各診察時に食事に関する勧告の遵守を確認する。
【０４０６】
患者は、隔週に４０ｍｇのＤ２Ｅ７の投与を受ける。但し、この用量及び投与回数は、ＨＣＶ治療に精通する当業者が調節することがある。Ｄ２Ｅ７治療の開始前に行った検査と同様の検査を繰り返し、下記の通りに、１２週間の間、少なくとも毎週患者をモニターする。
【０４０７】
本研究期間中の各患者の評価のために、次のベースライン評価を行う。仰臥位血圧測定、ＢＭＩ、２４時間尿の３つの標本の平均、血糖値、２４時間尿のグルコース、血清クレアチンレベル、クレアチニンクリアランス及び心電図測定値。また、各患者は日誌をつけて、疲労、過度の口渇、頻尿、かすみ目、高い感染率、緩慢な創傷治癒、気分の変容、性機能障害等の典型的な２型糖尿病の症状をモニターする。患者を検査して、Ｄ２Ｅ７の血糖値の低下の測定だけではなく、疲労、過度の口渇、頻尿、かすみ目、高い感染率、緩慢な創傷治癒、及び気分の変容等の２型糖尿病に典型的な症状の減少の有無も判定する。
【実施例１８】
【０４０８】
鉄欠乏性貧血におけるＴＮＦα阻害薬
鉄欠乏症ラットモデルにおけるＴＮＦ抗体の研究
鉄欠乏性貧血ラットモデルを用いて次の研究を行う（Ｃａｔａｎｉら  （２００３）  Ｂｒａｚ．  Ｊ．  Ｍｅｄ．  Ｂｉｏｌ．  Ｒｅｓ．  ３６；６９３）。鉄欠乏性貧血を誘発させるため、ＡＩＮ−９３Ｇ（米国栄養研究所げっ歯類の食餌）の鉄を含有しない食餌を２週間にわたりＷｉｓｔａｒ−ＥＰＭ雄ラット（約３週齢）に与える。プラセボ又はラットのＴＮＦαを結合及び中和するとして知られる抗体ＴＮ３（ＴＮ３−１９．１２）等のモノクロナール抗ＴＮＦα抗体の何れかの用量をラットに投与する（Ｍａｒｚｉら  （１９９５）  Ｓｈｏｃｋ  ３：２７、Ｗｉｌｌｉａｍｓら  （１９９２）  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ．  ８９：９７８４、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎを参照）。血液標本を処置前後に採取して、ヘモグロビン及びヘマトクリット値を測定する。ヘマトクリット及びヘモグロビン濃度の分析のために、血液を採取して５ｍｌの０．５Ｍ  ＥＤＴＡと混合する。ヘマトクリットは、ヘパリン毛細血管に入れた血液を遠心分離して測定する。ヘモグロビン濃度は、５４６ｎｍシアンメトヘモグロビンの吸収度から算出する。ラットを検査して、ヘマトクリット測定値の改善の有無を判定する。
【実施例１９】
【０４０９】
慢性疾患に伴う貧血に関するＴＮＦα阻害薬研究
慢性炎症性疾患に伴う貧血に関するＴＮＦ抗体の研究
慢性疾患に伴う貧血ラットモデルを用いて次の研究を行う（Ｃｏｃｃｉａら  （２００１）  Ｅｘｐ．  Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ  ２９；１２０１）。１５μｇ  ラムノース／ｋｇの用量と釣合うよう０．８５％生理食塩水で懸濁したペプチドグリカン・多糖ポリマー（ＰＧ−ＡＰＳ）を、第０日に８〜１０週齢の雌Ｌｅｗｉｓラットに腹腔内（ｉ．ｐ．）に接種する。尾静脈を介して血液を採集して、ＥＤＴＡでコーティングしたＭｉｃｒｏｔａｉｎｅｒ管に入れ、ラット血用に較正したＡＤＶＡ  １２０  Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ  Ｓｙｓｔｅｍ上で全血球算定（ＣＢＣ）を行う。更に血液標本を採集して、Ｍｉｃｒｏｔａｉｎｅｒ  血清分離遠心管上で分離して血清を分析し、鉄、ビリルビン、及び内因性ＥＰＯ濃度を割り出す。プラセボ又はマウスのＴＮＦαを結合及び中和するとして知られる抗体ＴＮ３（ＴＮ３−１９．１２）等のモノクロナール抗ＴＮＦα抗体の何れかの用量をラットに投与し（Ｍａｒｚｉら  （１９９５）  Ｓｈｏｃｋ  ３：２７、Ｗｉｌｌｉａｍｓら  （１９９２）  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ．  ８９：９７８４、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎを参照）、鉄、ビリルビン、ＥＰＯ濃度の改善を調べる。
【実施例２０】
【０４１０】
貧血に関するＴＮＦα阻害薬
貧血ヒト患者におけるＤ２Ｅ７の研究
貧血を伴う一般的な徴候を示す患者を調べて検査を行い、貧血の有無を判定する。貧血を伴う一般的な徴候には、疲労、胸痛、息切れ、顔面蒼白、心拍数増加がある。貧血を指摘する検査には、例えば、全血球計算（ＣＢＣ）、網赤血球数、及び血清鉄、総鉄結合能、及び血清フェリチン等の鉄供給測定がある。重度の貧血及び赤血球細胞の形態異常がある患者の場合、骨髄穿刺液及び生検が重要な診断ツールである。貧血患者を研究のために選択する。
【０４１１】
ＣＢＣ検査では、ＣＢＣの一部として、ヘモグロビン、赤血球数、赤血球容積分布、血小板数、及び白血球数等の多数のパラメータを自動細胞カウンタが測定する。前記カウンタはまた、ヘマトクリット（赤血球数及び容積に基づく）、平均細胞容積（ＭＣＶ）（容積分布に基づく）、平均細胞ヘモグロビン濃度（ＭＣＨ）（ヘマトクリットにより分けられたヘモグロビン）、及び赤血球分布幅（ＲＤＷ）を算出する。Ｗｒｉｇｈｔ染色血液塗抹標本の直接検査と共に赤血球指数及びＲＤＷを使用して、赤血球の形態を評価する。
【０４１２】
ＣＢＣ検査同様、網赤血球数を正確に測定することは、何れの貧血の初期分類においても重要である。網赤血球は、超生体色素で染色可能で、循環赤血球量のパーセントとして計算可能な残存ＲＮＡを充分に含む新生赤血球である。基本の状態で、通常の網赤血球数の範囲は、前記計算方法によると１〜２パーセントである。これは、通常毎日交換される循環赤血球量の約１パーセントと関連する。網赤血球数が増加すると、貧血に反応して産生される赤血球の測定が信頼できるものになる。
【０４１３】
網赤血球数を産生の指標として使用するためには、患者のヘマトクリットの変化及び骨髄網赤血の循環への初期放出に及ぼすエリスロポエチンの影響を最初に補正しなければならない。ヘマトクリット（ＨＣＴ）補正によって網赤血球の割合は絶対数に変換される。
【０４１４】
％網赤血球  Ｘ  患者ＨＣＴ／４５％＝絶対％網赤血球
骨髄網赤血球の（「シフト」）補正には、末梢血液塗抹標本の多染症が顕著である場合は常に、前記絶対率を１．５〜２．５の係数で割る必要がある。貧血で非常に多数の網赤血球数を有する患者であれば誰にでも前記シフト補正を常に適用し、赤血球細胞産生に有効な真の指標を提供しなければならない。通常の貧血患者は、網赤血球産生指標の２〜３倍の増加につれて３０パーセント未満のヘマトクリットに応答する。故に、この指数のみで、患者が適切にエリスロポエチンに反応し、正常な赤血球骨髄、及び対処に充分な鉄補給を有する事実を確認する。網赤血球指数が２以下に低下する場合には、骨髄増殖又は前駆体の成熟化に欠陥があるに違いない。
【０４１５】
鉄供給に関する標準指標には、血清鉄、総鉄結合能（ＴＩＢＣ）、及び血清フェリチンレベルがある。正常な血清鉄の範囲は９〜２７μｍｏｌ／Ｌ（５０〜１５０μｇ／ｄＬ）で、正常なＴＩＢＣは５４〜６４μｍｏｌ／Ｌ（３００〜３６０μｇ／ｄＬ）である。従って、通常では、循環血液中でトランスフェリン（ｔｒａｎｓｆｅｒｒｉｎｇ）の３０〜５０％のみを鉄で飽和する。各測定により重要な情報が得られると同時に、飽和量を算出できる。血清フェリチンを使用して、体内鉄貯蔵を評価する。成人男子の血清フェリチンレベルは５０〜１５０ｍｇ／Ｌで、鉄貯蔵は６００〜１０００ｍｇである。成人女性の血清フェリチンレベルはそれよりも低く（１５〜５０ｍｇ／Ｌ）で、鉄貯蔵も少ない（０〜３００ｍｇ）。鉄貯蔵が枯渇すると血清フェリチンレベルが低くなるのが観察される。すなわち、前記レベルが１５ｍｇ／Ｌ未満の場合、貯蔵の枯渇及び鉄欠乏を意味する。
【０４１６】
骨髄標本は、針吸引又は針生検により簡単に入手できる。前駆体の増殖及び成熟化に加えて骨髄の構造及び細胞性に関する価値ある情報を提供するため、低増殖性貧血又は赤血球細胞の成熟障害を有する患者にとって最高の価値がある。赤血球と顆粒球の前駆体の比率（Ｅ／Ｇ比（ｒａｔｉｏｎ））を使用して、赤血球（ｅｒｙｔｈｏｒｉｄ）の前駆体の増殖能を評価する。低増殖性貧血で網赤血球指数が２未満の患者のＥ／Ｇ比は、１：３乃至１：２を示す。一方、産生指数が３〜５の溶血性貧血患者のＥ／Ｇ比は１：１より大きい。Ｅ／Ｇ比及び網赤血球産生指数間のミスマッチにより、赤血球細胞の前駆体成熟化の欠陥を識別する。上記それぞれが、Ｅ／Ｇ比が１：１よりも大きく、低い網赤血球指数を有し、無能な成熟障害に赤血球新生が無効であるという特色を示す。
【０４１７】
ベースラインの測定後、患者の治療を開始する。患者を無作為に振り分け、盲検法でＤ２Ｅ７又はプラセボの何れかを用いて治療する。患者の全血球計算値（ＣＢＣ）、網赤血球数及び鉄供給の測定値を、少なくとも隔週にモニターする。
【実施例２１】
【０４１８】
神経障害性の疼痛の動物モデルにおけるＴＮＦα阻害薬
坐骨神経結紮ラットモデルにおけるＴＮＦ抗体
神経障害性疼痛の坐骨神経結紮ラットモデルを使用して次の研究を行う（Ｂｅｎｎｅｔｔ  ａｎｄ  Ｚｉｅ  （１９８８）  Ｐａｉｎ  ３３：８７）。手術前にベースラインの行動測定をする（機械刺激によるアロディニア及び熱痛覚過敏に対する反応、手順は下述）。熱痛覚過敏とはラットの熱痛の閾値をいい、機械刺激によるアロディニアとは、軽い触覚刺激に対する反応閾値をいう。体重が１２０〜１５０ｇのＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ雄ラットに麻酔をかけ、坐骨神経結紮処置をそれぞれに施す。前記坐骨神経結紮処置は、坐骨神経を露出し、次に約１ｍｍの間隔を空けて４本の結紮糸を用いてゆるく縛る。ラットを回復させて、プラセボ又はマウスのＴＮＦαを結合及び中和するとして知られる抗体ＴＮ３（ＴＮ３−１９．１２）等のモノクロナール抗ＴＮＦα抗体の何れかの用量を投与する（Ｍａｒｚｉら  （１９９５）  Ｓｈｏｃｋ  ３：２７、Ｗｉｌｌｉａｍｓら  （１９９２）  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ．  ８９：９７８４、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎを参照）。実験群には、ＴＮＦ抗体またはプラセボを１週につき、毎日皮下投与する。
【０４１９】
手術後に、機械刺激によるアロディニア及び熱痛覚過敏を週１回、１０週間行う。異通検査により、有害な熱に対する反応を調べる。床が透明ガラスの室にラットを入れ、罹患した足の足底面に放射熱源を床の下から当てることによって測定する。逃避反射の潜伏及び期間を記録する。治療後の後肢の逃避反射の増加は、鎮痛活性を明確に示す。
【０４２０】
通常は無害である機械的刺激に対する反応（機械的なアロディニア測定）を測定する。床がスクリーンの室にラットを入れ、後肢を曲げるようグラムで較正する目盛りつきのｖｏｎ  Ｆｒｅｙ  ｈａｉｒを用いて、後肢の足底面を刺激して測定する。坐骨神経結紮ラットは、非手術ラットよりも、足の逃避反射による機械刺激が小さくとも反応する。通常無害である刺激に対するこの反応をアロディニアと名付ける。治療後に、足の逃避反射に必要な機械的力が増加すると、抗アロディニア活性及び神経障害性の疼痛が減少したことになる。
【実施例２２】
【０４２１】
神経障害性の疼痛の動物モデルにおけるＴＮＦα阻害薬
脊髄神経部分結紮ラットモデルにおけるＴＮＦ抗体の研究
神経障害性疼痛の脊髄神経部分結紮ラットモデルを使用して次の研究を行う（Ｋｉｍ  ａｎｄ  Ｃｈｕｎｇ，  Ｐａｉｎ  ５０  （１９９２）  ３５５−３６３．）。体重が１２０〜１５０ｇのＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ雄ラットに麻酔をかけ、腹臥位にする。Ｌ４−Ｓ２で棘状突起から左側傍脊椎筋を剥離する。左のＬ５及びＬ６神経根を露出して、６−０手術用絹縫合糸で後根神経節の遠位を固く結紮する。ラットを回復させ、プラセボ又はラットのＴＮＦαを結合及び中和するとして知られる抗体ＴＮ３（ＴＮ３−１９．１２）等のモノクロナール抗ＴＮＦα抗体の何れかの用量を投与する（Ｍａｒｚｉら  （１９９５）  Ｓｈｏｃｋ  ３：２７、Ｗｉｌｌｉａｍｓら  （１９９２）  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ．  ８９：９７８４、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎを参照）。実験群には、ＴＮＦ抗体またはプラセボを１週につき、毎日皮下投与する。手術前にベースラインの行動測定（機械刺激によるアロディニア及び熱痛覚過敏検査に反応、上記の通り）  を行う。手術後に、神経障害性の疼痛に関する機械刺激によるアロディニア及び熱痛覚過敏検査を週１回、１０週間行う。
【実施例２３】
【０４２２】
神経障害性の疼痛治療におけるＴＮＦα阻害薬
神経障害性の疼痛ヒト患者におけるＤ２Ｅ７を調べる研究
神経障害性の疼痛と診断された患者を本研究のために選択する。病歴、理学的検査及び患者が説明する徴候及び症状の適切な調査等、治療的背景に基づき臨床性の神経障害性疼痛を測定する。世界疼痛学会（ＩＡＳＰ）の慢性疼痛の分類で定義された診断基準の定義を用いて、神経障害性疼痛の臨床診断を立証する。神経障害性疼痛の評価を損なう可能性のある同等又はそれ以上の重症度の別の疼痛問題、すなわち、これらに限定されるものではないが、神経障害性の疼痛の原因とは無関係の顕著な神経又は精神障害、現在薬物又はアルコール中毒、及び臨床上顕著な肝臓疾患、腎臓疾患、又は肺疾患を含む基準に基づいて、患者を除外する。
【０４２３】
Ｓｈｏｒｔ  Ｆｏｒｍ−ＭｃＧｉｌｌ  Ｐａｉｎ  Ｑｕｅｓｔｉｏｎｎａｉｒｅ  （ＳＦ−ＭＰＱ）、１００−ｍｍの線上に垂直に表す視覚的アナログ尺度（ＶＡＳ）（０＝無痛、１００＝耐えられない疼痛）、及びＣｌｉｎｉｃｉａｎ  Ｇｌｏｂａｌ  Ｉｍｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  Ｃｈａｎｇｅ  （ＣＧＩＣ）等、標準の疼痛評価ツールを使用して患者の神経障害性の疼痛を評価する。患者はまた、日記を利用して、神経障害性疼痛のスコアをつけることもある。毎夜、過去２４時間に経験した疼痛の平均強度を評価する。
【０４２４】
１週間のベースライン測定後に、患者の治療を開始する。患者を無作為に振り分け、盲検法でＤ２Ｅ７又はプラセボの何れかを用いて治療する。隔週に患者をモニターし、患者の日誌に表にした通りに、患者の神経障害性疼痛評価及び疼痛の平均強度の減少について調べる。
【実施例２４】
【０４２５】
Ｃ型肝炎感染動物モデルにおけるＴＮＦα阻害薬
ＨＣＶチンパンジーモデルにおけるＤ２Ｅ７の研究
Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）チンパンジーモデルを使用して次の研究を行う（Ｓｈｉｍｉｚｕら  （１９９０）  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ８７：６４４１）。
【０４２６】
輸血後急性非Ａ非Ｂ肝炎患者から得た希釈していない血漿０．５ｍｌをチンパンジーに静脈内接種（ｉ．ｖ．）する。種菌は、例えば、１ｍｌ当たり１０６．５チンパンジー５０％感染価のＨＣＶを含有する。接種前及び毎週治療後に血清標本及び肝臓生検標本を採取する。接種後、チンパンジーにＤ２Ｅ７又はプラセボの用量を投与する。Ｄ２Ｅ７は、生物種間の高親和性のＴＮＦ結合に効果がある（米国特許第６，２５８，５６２号参照）。
【０４２７】
接種後のＨＣＶレベルを様々な方法でモニターする。血清標本をチンパンジーから定期的に採取して、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）に関する検査を行う。ＡＬＴ検査は肝機能検査（又はＬＦＴ）として知られる１群の検査の一つであり、肝臓損傷のモニターに使用する。ＢＣＶ抗体ＥＬＩＳＡ法によってＨＣＶへ循環する抗体（抗−Ｃ１００−３抗体）を検出する。また、血清標本中でＨＣＶを検出し、Ｗｅｉｎｅｒら  （１９９０）  Ｌａｎｃｅｔ  ３３５；１に記述通りに、ｃＤＮＡ／ＰＣＲアッセイを行う。Ｓｈｉｍｉｚｕら  （１９８５）  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ８２；２１３８２記述の方法に従って、モノクロナール抗体４８−１を用いた免疫蛍光染色によって、細胞抗原のために凍結肝臓から得た生検標本の検査も行う。治療したチンパンジーを調べて、プラセボ治療チンパンジーと比較したＡＬＴレベル及びＨＣＶ血清レベルの高低を判定する。
【実施例２５】
【０４２８】
ヒトＨＣＶ感染におけるＴＮＦα阻害薬
ヒトＨＣＶ治療におけるＤ２Ｅ７の研究
代償性慢性（ｃｏｍｐｅｎｓａｔｅｄ）Ｃ型肝炎に感染する１８〜７０歳の男女を選択する。研究参加の資格として、逆転写ポリメラーゼ連鎖反応法（ＲＴ−ＰＣＲ）によって抗ＨＣＶ（第二世代酵素免疫測定法）の陽性化及びＨＣＶ  ＲＮＡ定量の検査を患者に行わなければならない。また、患者は、慢性肝炎を示して研究登録してから１年以内に肝臓生検を受け、治療開始の少なくとも６ヶ月前には血清アラニントランスアミラーゼ（ＡＬＴ）レベルの上昇がある。登録時の白血球数の条件は、最低２，５００／μＬであり、血小板数は７０，０００／μＬ以上でなければならない。除外基準はこれに限定されるものではないが、ヒト免疫不全症又はＢ型肝炎ウイルス同時感染、臨床上顕著な心臓又は心血管の異常、臓器移植、全身性の細菌又は真菌感染、臨床上顕著な出血性疾患、前年にアルコール又は薬物中毒であったこと等、肝疾患又は他の同等の障害の全ての原因を含む。
【０４２９】
標準化ＲＴ−ＰＣＲ定性検査法によって、治療前後の血清ＨＣＶ  ＲＮＡを定量化する。ＲＴ−  ＰＣＲによって治療後に得た血清標本中でＨＣＶ  ＲＮＡの定性検出を行う。ＨＣＶの遺伝子型を調べるために逆ハイブリダイゼーション法を行う。安定した健康関連ＱＯＬ尺度を使用して情動及び心理学的な状態を判定する。
【０４３０】
ベースライン測定後に、患者の治療を開始する。患者を無作為化し、盲検法でＤ２Ｅ７又はプラセボの何れかの治療を行う。患者に隔週用法で４０ｍｇのＤ２Ｅ７を投与する。但し、この用量及び投与回数は、ＨＣＶ治療に精通する当業者が調節することがある。少なくとも４週毎に患者をモニターし、Ｄ２Ｅ７治療開始前に行ったように検査を繰り返す。プラセボのみの投与を受けている患者と比較してＨＣＶレベルの減少によって、ＲＴ−ＰＣＲシグナルが弱いことを証明する。
【実施例２６】
【０４３１】
乾癬マウスモデルにおけるＴＮＦα阻害薬
乾癬ＳＣＩＤマウスモデルにおけるＴＮＦ抗体の研究
ヒトの乾癬プラークの移植を受けた重症複合免疫不全（ＳＣＩＤ）マウスを乾癬の研究の動物モデルとして選択する。前記マウスは長期間、乾癬の典型的な臨床及び組織学的特徴を保持するのが理由である（Ｎｉｃｋｏｌｏｆｆら  （１９９５）  Ａｍ  Ｊ  Ｐａｔｈｏｌ  １４６：５８０−８）。
【０４３２】
病原体の無い動物飼育施設から、２〜３月齢の雌非近交系Ｃ．Ｂ１７  ＳＣＩＤマウスを入手する。ヒトの皮膚標本を慢性プラーク乾癬に罹患する白人男性患者から採取する。臨床に使用する紡錘状の皮膚標本１Ｘ３ｃｍを局所麻酔下で採取し、皮下の脂肪を除去して移植準備を行って、冷却リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）中で保管する。皮膚標本は１〜２時間以内に移植する。
【０４３３】
全層皮膚標本を直径８〜１０ｍｍに切除し、次にマウスの背中に移植する。マウス１匹につき一移植である。手術手順に関しては、ミダゾラム及びクエン酸フェンタニルを１：１で混合して腹腔内（ｉ．ｐ．）に投与し、マウスに麻酔をかける。中央背側を剃毛して切除を施した全層皮膚欠損の対応部分に、紡錘型の全層皮膚片を移植し、６−０非外傷モノフィラメント縫合糸によって固定する。ワセリン含浸処理した滅菌ガーゼを貼付後、隣接する外側の皮膚を用いて前記移植部分の上に皮膚のたるみを縫合することによって移植片（ｇｒａｎｔ）を外傷から保護する。縫合糸と上から縫合した皮膚のたるみは、２〜３週間後に自然に分解するまで所定の位置に残す。
【０４３４】
ＳＣＩＤの皮膚のヒトキメラは、ヒトの乾癬と類似の症状を示す。ＳＣＩＤマウスに移植したプラークは、鱗屑、紅斑、及び肥厚等の乾癬特有の臨床特徴を示す。また、このモデルは、不全角化、表皮肥厚、乳頭間突起の過長、乳頭上部の菲薄化、乳頭真皮におけるリンパ単核球の浸潤等の乾癬特有の組織学的特徴も示す。プラセボ又はマウスのＴＮＦαを結合及び中和するとして知られる抗体ＴＮ３（ＴＮ３−１９．１２）等のモノクロナール抗ＴＮＦα抗体の何れかの用量を前記マウスに投与する（Ｍａｒｚｉら  （１９９５）  Ｓｈｏｃｋ  ３：２７、Ｗｉｌｌｉａｍｓら  （１９９２）  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ．  ８９：９７８４、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎを参照）を移植ＳＣＩＤマウスの病変部位に皮下投与する。実験群には、ＴＮＦ抗体またはプラセボを１週につき、毎日皮下投与する。乾癬プラークを伴う徴候の減少によって、ＴＮＦ抗体治療ＳＣＩＤマウスの改善を証明する。
【実施例２７】
【０４３５】
乾癬の臨床研究におけるＴＮＦα阻害薬
乾癬ヒト患者におけるＤ２Ｅ７
中等度から重度の慢性プラーク乾癬患者を研究のために選択する。研究登録前に、少なくとも４週間は如何なる乾癬治療も、又は少なくとも２週間は如何なる局所治療も患者は受けていない。毎週４０ｍｇ又は隔週４０ｍｇの用量でＤ２Ｅ７の皮下投与を開始する。
【０４３６】
患者は２〜４週毎に臨床検査を受ける。確実に評価を一定させるために、乾癬面積と重症度指数（ＰＡＳＩ）（Ｆｒｅｄｒｉｋｓｓｏｎ  ａｎｄ  Ｐｅｔｔｅｒｓｓｏｎ  （１９７８）  Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｉｃａ  １５７：２３８−４４）及び同一の研究者による医師の包括的評価を用いて、乾癬皮膚病変の臨床活性を評価する。１２週目に、ベースラインと比較してＰＡＳＩスコアを少なくとも７５％減少させる患者の割合の主要評価項目を判定する。有効なスコアを使用して、そう痒症を評価する。有効な方法は、これらに限定されるものではないが、ＤＬＱＩ、ＳＦ−３６、及びＥＱ−５Ｄ用いてＱＯＬ評価を測定する。研究中は、顔を除く全身の写真を定期診察時に撮る。
【０４３７】
研究期間中、指定の間隔を空けて皮膚の生検標本を得て、皮膚の組織学及び生物マーカーと治療との相関関係を証明する。乾癬性皮膚との比較のために、正常な皮膚の生検をベースライン時に行う。
【実施例２８】
【０４３８】
ベーチェット病の動物モデルにおけるＴＮＦα阻害薬
ベーチェット症候群マウスモデルにおけるＴＮＦ抗体の研究
ベーチェット病のＨＳＶマウスモデルを用いて次の研究を行う（Ｈｉｒａｔａ，  Ｙ．，ら  （１９９３）  Ａｃｔａ．  Ｏｔｏｌａｒｙｎｇｏｌ．  Ｓｕｐｐｌ．  ５０３：７９）。ヒトＴＮＦαを発現するマウスの耳垂（詳細な説明はＥＭＢＯ  Ｊ  （１９９１）  １０：４０２５−４０３１を参照）を針で引っかき、次に１型単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ１）（ＫＯＳ株）溶液１．０  Ｘ  １０６プラーク形成単位（ｐｆｕ）／ｍＬを接種する。これによって炎症細胞が生じ、血管の中及び周辺に蓄積される。結果として、内臓、口腔、耳垂、及び生殖器に上皮型病変が生じる。ヒトのベーチェット病で見られる典型的な形態変化に類似する２つ若しくはそれ以上の徴候を有するマウスを、ベーチェット病様疾患に罹患したマウスと定義する。
【０４３９】
マウスのＴＮＦαを結合及び中和するとして知られる抗体ＴＮ３（ＴＮ３−１９．１２）等のモノクロナール抗ＴＮＦα抗体（Ｍａｒｚｉら  （１９９５）  Ｓｈｏｃｋ  ３：２７、Ｗｉｌｌｉａｍｓら  （１９９２）  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ．  ８９：９７８４、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎを参照）を、接種前及び後の両方、又は病変発生の日から、様々な用量でＨＳＶ誘発性ベーチェット症候群マウスに投与する。該当するプラセボ対照群にも投与する。脱毛、口腔及び陰部皮膚の潰瘍、眼の症状をモニターし、組織標本を病変から採集する。断面を分析するために、組織標本をホルマリン固定し、パラフィン包埋する。病変の切片をヘマトキシリン・エオシンで染色し、炎症細胞の外観を調べる。対照群として、３０匹のマウスの同一部位に培養液を接種する。４週間後に、同一方法を用いて第二の接種を行い、１６週まで観察する。
【０４４０】
プラセボ治療群のマウスと比較して、治療群のマウス発毛及び潰瘍の減少を調べる。視診及び組織学的分析により判定した治療群のマウスの病変改善、潰瘍部位の炎症の減少及び潰瘍部位の炎症細胞（例、Ｔ細胞）数の減少も改善の指標となることに注目する。
【実施例２９】
【０４４１】
川崎病治療におけるＴＮＦα阻害薬
Ｌ．ｃａｓｅｉマウスモデルを用いた川崎病におけるＴＮＦ抗体の効果
川崎病のＬ．ｃａｓｅｉマウスモデルを用いて（Ｌｅｈｍａｎ，  Ｔ．Ｊ．，ら  （１９８５）  Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ  ２８：６５２、Ｄｕｏｎｇ，  Ｔ．Ｔ．  （２００２）  Ｉｎｔｉｍｍｕｎｏｌ  １５：７９、Ｂｒａｈｎ，  Ｅ．，ら  （１９９９）  Ｃｌｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ９０：１４７）、次の研究を行う。カセイ菌細胞フラグメントの単回腹腔内投与（ｉｐ）でヒトＴＮＦα（上記参照）を発現するマウスに、冠動脈炎を誘発させる。Ｌ．ｃａｓｅｉで処理したマウスの心臓の組織切片は、川崎病の小児の中型冠動脈で観察される血管炎及び動脈瘤に類似していることが分かっている（Ｌｅｈｍａｎら（１９８５）  Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ  ２８：６５２、Ｄｕｏｎｇ  （２００２）  Ｉｎｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １５：７９、Ｂｒａｈｎら  （１９９９）  Ｃｌｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ９０：１４７）。
【０４４２】
プラセボ又はマウスのＴＮＦαを結合及び中和するとして知られる抗体ＴＮ３（ＴＮ３−１９．１２）等のモノクロナール抗ＴＮＦα抗体の何れかを（Ｍａｒｚｉら  （１９９５）  Ｓｈｏｃｋ  ３：２７、Ｗｉｌｌｉａｍｓら  （１９９２）  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ．  ８９：９７８４、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎを参照）、標準の手順でＬ．ｃａｓｅｉ注入マウスに腹腔内投与する。注入マウスの心臓を第１４日目（疾患初期）又は研究の最後（疾患確立期）に摘出する。血管炎のために盲目的に組織学切片のスコアをつける。
【０４４３】
ＴＮＦ抗体処理マウスの冠血管の炎症病変が、プラセボ処理マウスと比較して縮小したことを判定することによって、冠動脈炎の減少を評価する。プラセボ処理マウスと比較して、内膜増殖の減少及び血管腔狭窄の緩和を伴う冠血管壁の炎症単核細胞浸潤の減少として、冠動脈炎の減少を評価する。
【実施例３０】
【０４４４】
川崎病の動物モデルにおけるＴＮＦα阻害薬
ＡＮＣＡマウスモデルを用いた川崎病におけるＴＮＦ抗体
川崎病の抗内皮細胞抗体（ＡＮＣＡ）マウスモデルを用いて次の研究を行う（Ｇｒｕｎｅｂａｕｍら  （２００２）  Ｃｌｉｎ．  Ｅｘｐ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １３０：２３３、Ｂｌａｎｋら  （１９９５）  Ｃｌｉｎ．  Ｅｘｐ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １０２：１２０、Ｔｏｍｅｒら  （１９９５）  Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ．  ３８：１３７５、Ｄａｍｉａｎｏｖｉｃｈら  （１９９６）  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １５６：４９４６）。ウェゲナー肉芽腫症患者の血漿由来のプロテイナーゼ３特異抗体を含む抗内皮細胞抗体（ＡＮＣＡ）で動物を免疫化する。マウスを精製ＡＮＣＡで免疫化し、対照群のマウスには正常ＩｇＧを注入する。プラセボ又はマウスのＴＮＦαを結合及び中和するとして知られる抗体ＴＮ３（ＴＮ３−１９．１２）等のモノクロナール抗ＴＮＦα抗体の何れかを週用量で、４ヶ月までの間マウスに投与する（Ｍａｒｚｉら  （１９９５）  Ｓｈｏｃｋ  ３：２７、Ｗｉｌｌｉａｍｓら  （１９９２）  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ．  ８９：９７８４、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎを参照）。ヒトＡＮＣＡを与えると、免疫化を行ってから３ヶ月後に、マウスは、ＡＮＣＡに対する内因性抗体を作る。マウスを安楽死させて、川崎病患者で観察されるのと同一の血管壁外部のＩｇ沈着及び細動脈及び細静脈周囲のリンパ球浸潤に関して、肺、腎臓及び心臓を組織学的に調べる（Ｇｒｕｎｅｂａｕｍら  （２００２）  Ｃｌｉｎ．  Ｅｘｐ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １３０：２３３、Ｂｌａｎｋら  （１９９５）  Ｃｌｉｎ．  Ｅｘｐ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １０２：１２０、Ｔｏｍｅｒら  （１９９５）  Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ．  ３８：１３７５、Ｄａｍｉａｎｏｖｉｃｈら  （１９９６）  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １５６：４９４６）。血管壁でのリンパ球浸潤の減少及びＩｇＧ沈着、及びＡＮＣＡ抗体価の低下により、川崎病が改善されたことがわかる。
【実施例３１】
【０４４５】
川崎病の治療におけるＴＮＦα阻害薬
川崎病ヒト患者におけるＤ２Ｅ７の臨床研究
川崎病（ＫＤ）患者を研究のために登録する。全患者は発熱しており、ＫＤに関して発表された５つの臨床判定基準のうち少なくとも４つを満たす（Ｂａｒｒｏｎ，  Ｋ．Ｓ．，ら  （１９９９）  Ｊ．  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．  ２６：１７０）。患者群及び対照群も確認する。冠動脈の直径を心エコー図法によって測定し、体表面積を訂正する。ＰＲ又はＱＴ間隔の延長、異常なＱ波、ＳＴ−Ｔ波の変化、低電位又は不整脈等のＫＤに存在する可能性のある典型的な変化を心電図はスクリーニングする。４０ｍｇのＤ２Ｅ７又はプラセボの何れかを隔週又は毎週、ＫＤ患者に投与する。用量は、ＫＤに精通している当業者が調節することがある。患者の解熱をモニターする。アジュバント療法（例、副腎皮質ステロイド）を必要に応じて行う。患者をモニターし、追跡調査に心エコーを使用して、冠動脈損傷の有無又は冠動脈病変の改善の有無を判定し、改善された心エコーの結果によって証明する。
【実施例３２】
【０４４６】
ベーチェット病の治療におけるＴＮＦα阻害薬
ベーチェット病ヒト患者におけるＤ２Ｅ７の臨床研究
ベーチェット病国際診断基準を満たす患者を研究のために選択する。条件は、平均６年間は、口腔内潰瘍に加え、陰部潰瘍、典型的な定義の眼病変、典型的な定義の皮膚病変又は皮膚針反応陽性の何れか２つを前記患者が有していることである（Ｌａｎｃｅｔ．  （１９９０）  ３３５：１０７８、Ｋａｋｌａｍａｎｉ，  Ｖ．Ｇ．ら  （２００１）  Ｓｅｍｉｎ．  Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ．  ３０：２９９）。４０ｍｇのＤ２Ｅ７又はプラセボを隔週又は毎週、ベーチェット病の患者に投与する。投与量は、ベーチェット病に精通している当業者が調節することがある。治療の前及び後の両方において、全身検査及び視力、眼内圧測定、細隙灯顕微鏡検査、及び眼底撮影後に、後区の倒像鏡検査等の詳細な眼科検査を治療群患者及びプラセボ群患者に行う。眼の炎症の減少及び口腔内潰瘍の数の減少又は重症度の軽減等、ベーチェット病に関して文書化された徴候における改善に関する検査を患者に行う。
【実施例３３】
【０４４７】
狼瘡動物モデルにおけるＴＮＦα阻害薬
狼瘡マウスモデルにおけるＴＮＦ抗体の研究
狼瘡を研究するためにＭＲＬ／ＬＰＲマウスモデルを選択する（Ｒｅｉｌｌｙ  ａｎｄ  Ｇｉｌｋｅｓｏｎ  （２００２）  Ｉｒｎｔａｕｎｏｌｏｇｉｃ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ．  ２５（２）：１４３−１５３、Ｍｉｓｈｒａら  （２００３）  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ．  １１１（４）：５３９−。５５２）。多クローン性Ｂ細胞活性化を有する進行性の自己免疫疾患及び高ガンマグロブリン血症を、ＭＲＬ／ＬＰＲマウスは約８週齢から発症する。１２〜１６週齢までに抗二本鎖ＤＮＡ（抗ｄｓＤＮＡ）自己抗体及び低補体血等の多数の自己抗体の血清学的証拠が、ＭＲＬ／ＬＰＲマウスにはある。ＭＲＬ／ＬＰＲマウスは１６〜２４週齢までに、関節炎、広範囲にわたるリンパ節腫脹、脾腫大、血管炎、及び糸球体腎炎（ＧＮ）の臨床徴候を示す。ＭＲＬ／ＬＰＲマウスの約５０％が、主に腎不全のために２４週齢までに死亡する。
【０４４８】
８週齢のＭＲＬ／ＬＰＲ雌マウスを本研究に使用する。１４週でＭＲＬ／ＬＰＲマウスに様々な濃度のプラセボを腹腔内（ｉ．ｐ．）に投与するか、又はラットを回復させて、プラセボ又はマウスのＴＮＦαを結合及び中和するとして知られる抗体ＴＮ３（ＴＮ３−１９．１２）等のモノクロナール抗ＴＮＦα抗体の何れかの用量を投与する（Ｍａｒｚｉら  （１９９５）  Ｓｈｏｃｋ  ３：２７、Ｗｉｌｌｉａｍｓら  （１９９２）  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ．  ８９：９７８４、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎを参照）。実験群には、ＴＮＦ抗体またはプラセボを１週につき、毎日皮下投与する。
【０４４９】
狼瘡患者の中には、腎臓の持続性の炎症（過敏及び腫脹）によって定義されるループス腎炎を発症する者もいる。前記患者は最終的には腎不全を発症し、透析又は腎移植を必要とすることがある。腎疾患の進行を調べるために、ＭＲＬ／ＬＰＲマウスにＤ２Ｅ７を注入後、２４時間尿採集のために代謝ケージに入れる。既知のマウスのアルブミン濃度標準曲線を用いるＥＬＩＳＡによって、Ｄ２Ｅ７治療の前後に尿アルブミン排泄を測定する（Ｗｅｉｎｂｅｒｇら  （１９９４）  Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ．  １７９：６５１に記述のＣａｐｐｅｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ｐｒｏｄｕｃｔｓ，  Ｄｕｒｈａｍ，  Ｎｏｒｔｈ  Ｃａｒｏｌｉｎａ，  ＵＳＡ）。疾患初期におけるタンパク尿の出現及びタンパク尿悪化が改善されたことは、治療後の平均アルブミン排泄の減少によって証明される。
【０４５０】
第１９週に、イソフルラン麻酔後に頚椎を脱臼させてマウスを屠殺し、腎臓を摘出する。腎臓一つを緩衝ホルマリン液で固定し、パラフィン包埋して切断し、Ｈ＆Ｅで染色する。腎臓の病態を調べ、糸球体の炎症、増殖、半月体形成性糸球体腎炎及び壊死を標準の方法によって等級付ける。間質の変化及び血管炎も認められる。Ｗａｔｓｏｎら  （１９９２）  Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ．  １７６：１６４５−１６５６による記述通りに、０〜３のスコアは各特徴に関して割り当て、次に共に加算して最終的な腎スコアを出す。壊死及び半月体形成性糸球体腎炎のスコアは、加算する前に二倍にする。例えば、糸球体の炎症の等級は、０：正常、１：炎症細胞がわずかに存在、２：中等度の炎症、及び３：重度の炎症となる。プラセボ治療マウスと比較して、Ｄ２Ｅ７治療マウスの腎切片の炎症又は細胞増殖の徴候が最小になることによって、改善が証明される。
【０４５１】
マウスの狼瘡活性悪化の遅延又は予防を明らかにするために、脾臓の重量も測定する。脾臓のサイズは、狼瘡活性の指標であり、前記疾患の潜在的な免疫病理を反映する。ＭＲＬ／ＬＰＲマウスは、疾患悪化につれて広範囲にわたる脾腫大及びリンパ節腫脹を発症する。脾臓のサイズを測定するために、各群（治療及びプラセボ）のマウスを１９週齢で屠殺し、平均脾臓重量を求める。脾臓重量の平均がより小さくなれば、狼瘡が改善されたことになる。
【実施例３４】
【０４５２】
狼瘡治療におけるＴＮＦα阻害薬
狼瘡のヒト患者におけるＤ２Ｅ７を調べる研究
ベースとなる研究のために狼瘡と診断された患者を選択する。熱、疲労、全身不快感、不安又は嫌悪（倦怠感）、体重減少、皮疹、蝶形紅斑、日光で悪化する皮疹、日光過敏、関節の疼痛及び腫脹、関節炎、腺の腫脹、筋肉痛、嘔気及び嘔吐、胸膜炎による胸痛、発作、及び精神病等、一般的に狼瘡に関連する徴候の発現に基づき患者を選択する。徴候には、更に、血尿、喀血、鼻血、嚥下困難、まだらな皮膚の色、皮膚に赤斑、圧により指が変色又は冷気中で指が変色（レイノー現象）、しびれ感及び刺痛、口腔内潰瘍、脱毛、腹痛及び視力障害がある。患者に理学的検査を行い、狼瘡を示す特徴的な徴候の何れかの有無を明らかにする。本疾患の１１の典型的な特徴のうち少なくとも４つの特徴があれば狼瘡の診断を下す。
【０４５３】
前記疾患徴候の存在を確認する検査には様々なものがあるが、次の幾つかも含まれる。抗ＤＮＡ及び抗Ｓｍ抗体を含む抗核抗体（ＡＮＡ）パネル（前記２つの検査は一般的に、狼瘡のみの場合陽性である）、特徴的な皮疹または皮膚の病変、胸膜炎又は心外膜炎を示す胸部Ｘ線、聴診器で胸の音を聞いて心摩擦音又は胸膜摩擦音を明らかにする検査、尿中の血液、円柱、又はタンパクを示す尿分析、ある細胞種類の現象を示す全血球計算、腎臓生検、及び神経学的検査。この疾患はまた、次の検査結果を変えることがある。白血球数、血清グロブリン電気泳動、リウマチ因子、タンパク尿、タンパク質電気泳動−血清、単核球症の斑点分析、赤血球沈降速度（ＥＳＲ）、クリオグロブリン、直接クームス試験、補体成分３（Ｃ３）、補体、抗甲状腺ミクロソーム抗体、抗サイログロブリン抗体、抗抗ミトコンドリア抗体、及び抗平滑筋抗体。
【０４５４】
患者を無作為に実験群及びプラセボ群に分け、Ｄ２Ｅ７又はプラセボを投与する。用量設定試験を本研究に使用して、狼瘡治療に最も有効である用量を決定する。用量は４０ｍｇで開始することとする。これはＤ２Ｅ７の用量であり、関節リウマチ患者の治療に最も有効であることが分かっている。４〜７回の注入でＤ２Ｅ７又はプラセボの何れかを患者に投与する。隔週に患者を検査して狼瘡の徴候の軽減又は完治の有無を判定し、ＥＳＲ及びＣ反応性タンパク質（ＣＲＰ）レベルの減少によって決定する。
【実施例３５】
【０４５５】
シェーグレン症候群に作用するＴＮＦα阻害薬
シェーグレン症候群ヒト患者におけるＤ２Ｅ７を調べる研究
欧州リウマチ学会及びアメリカリウマチ学会の原発性シェーグレン病分類に該当する患者を研究のために選択する（Ｖｉｔａｌｉら  （１９９３）  Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ  ３６：３４０−７、Ｆｏｘら  （１９８６）  Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ．  ２９：５７７−８５）。患者の最低年齢を１８歳とする。登録時には、患者は、スクリーニング時に少なくとも赤血球沈降速度の上昇（ＥＳＲ；＞２５／ｍｍ／時間）又は高ガンマグロブリン血症（＞１．４ｇｍ／リットル）があると定義される原発性シェーグレン病が活動期にある。疾患修飾抗リウマチ薬（ＤＭＡＲＤｓ）及び副腎皮質ステロイドの使用は研究期間中には許可しておらず、ベースラインの少なくとも４週間前には中止する。除外基準としては、過去３ヶ月の重度感染症、潜伏期間にある肺結核、実証済みのヒト免疫不全症ウイルス感染又はＣ型肝炎、重篤な血管炎、既知の悪性で重度の合併症又は管理されていない病気、及び他の結合組織疾患の存在がある。
【０４５６】
本研究には、第０週、２週、６週にＤ２Ｅ７（用量約４０ｍｇ）の３回の注入、及び第１０週及び第１４週の２回の追跡診査が組み込まれている。研究期間を通して用量及び投与計画が安定している場合には、患者は人工涙液の使用継続が許可される。
【０４５７】
ベースライン時及び第２週、４週、６週、１０週、及び１４週に臨床的、眼科学的及び生物学的評価を行う。同一医師が臨床検査を行う。前記検査には、一般的な理学的検査、口渇検査（使用する尺度は０〜２まで、０＝無、１＝軽度から中等度の口渇、及び２＝重度口渇）、及びスピーチテスト（２分間に単語「ｐｕｔｔｉｃａ」を繰り返すことができる回数、Ｎｅｗ  Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｂａｓｉｃ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，  Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ  ａｎｄ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｓｊｏｇｒｅｎ‘ｓ  Ｓｙｎｄｒｏｍｅ，  Ｌｏｎｄｏｎ，  Ｊａｎｕａｒｙ  １９９７の会議でＰ．  Ｊ．  Ｓｈｉｒｌａｗが発表した技術）。また、確立済みの方法に従い唾液喀出技術を用いて、未刺激全唾液を５分間採集し、化学天秤で標本の重量を測定して得た唾液の量を測定する（１ｇｍ＝１ｍｌ）（Ｎａｖａｚｅｓｈ  （１９９３）  Ａｎｎ  ＮＹ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ６９４：７２−７）。眼球乾燥検査も行い、（スコアは０〜２の尺度を使用、０＝症状無し、１＝人工涙液（ＡＴｓ）により軽減される軽度から中等度の症状、及び２＝ＡＴｓでは軽減されない重度の症状）ＡＴｓの使用回数を測定する。
【０４５８】
また、患者は疲労検査（０〜１００ｍｍ視覚的アナログ尺度（ＶＡＳ））も受け、疲労に関するアンケート（０＝疲労無し、１＝日常活動を干渉しない軽度の疲労、２＝日常活動を干渉する中等度の疲労、及び３＝極度に活動を減らす必要がある疲労）に答える。臨床検査にはまた、圧痛関節数（最大６４）、圧痛点（最大１８）、及び患者の疼痛評価（０〜１００ｍｍＶＡＳ）も含まれる。患者及び医師の包括的評価は、０〜１００ｍｍＶＡＳを使用して作成した。
【０４５９】
全眼科検査は、同一医師が行い、これにはフルオレセインで着色する涙液層破壊時間（ＴＢＵＴ）検査、シルマーＩ試験、及びリサミングリーン染色で行う角膜検査（ｖａｎ  Ｂｉｊｓｔｅｒｖｅｌｄのスコア０〜９）がある。研究期間を通して生物学的パラメータを測定し、このパラメータにはＥＳＲ、Ｃ反応タンパクレベル（ＣＲＰ）、全血球計算、腎及び肝機能検査、クレアチン（ｃｒｅａｔｉｎｇ）ホスフォキナーゼレベル、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＧ、抗核抗体（ＡＮＡ）及びリウマチ因子（ＲＦ及び前感作リンパ球型試験（ＣＤ４＝及びＣＤ８＝細胞の数）の血清レベルがある。シェーグレン症候群の徴候を伴う症状が減少するためには、末端関節の圧痛点及び疼痛が減少しなければならない。
【実施例３６】
【０４６０】
若年性関節リウマチに作用するＴＮＦα阻害薬
若年性関節リウマチ罹患小児におけるＤ２Ｅ７を調べる研究
若年性関節リウマチ（ＪＲＡ）と診断された患者を本研究のために選択する。患者は１６週間Ｄ２Ｅ７の投与を受け、次に無作為に実験群及びプラセボ群に分けられる。その後、患者はＤ２Ｅ７又はプラセボの何れかの投与を受ける。患者は、約２０ｍｇ／ｍ２／ＢＳＡ（体表面積）から最大４０ｍｇまでの用量範囲で隔週に投与を受ける。患者は治療期間中、Ｄ２Ｅ７又はプラセボのいずれかを隔週に皮下投与される。各週ごとに患者を再検査し、ＪＲＡの徴候の軽減又は完治の有無を判定する。前記疾患の臨床徴候の減少によるＪＲＡの改善を判定するＪＲＡの改善の定義付けには、Ｇｉａｎｎｉｎｉ（Ｇｉａｎｎｉｎｉら（１９９７）  Ａｒｔｈｉｒｉｔｓ  ＆  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ  ４０：１２０２）により定義された判定基準を使用する。この判定基準を使用して、ベースライン時から、基本セットの６変数のうち３つにおいて少なくとも３０％の改善があり、その残りの変数の１つに３０％若しくはそれ以上の悪化が見られないことを改善の定義とする。基本となるセットの変数には、疾患活動性に関する医師の包括的評価、患者／全体的な健康に関する患者の評価（各スコアを１０ｃｍ視覚的アナログ尺度で各スコアをつける）、機能的能力、活動期にある関節炎の関節数、可動域に制限がある関節数、及び赤血球沈降速度がある。
【実施例３７】
【０４６１】
Ｄ２Ｅ７  Ｆ（ａｂ）’２フラグメントの結晶化
Ｄ２Ｅ７  Ｆ（ａｂ）’２フラグメントの生成及び精製
次の手順に従って、Ｄ２Ｅ７  Ｆ（ａｂ）’２フラグメントを産生及び精製した。２ｍｌのＤ２Ｅ７  ＩｇＧ（約６３ｍｇ／ｍｌ）を、１リットルのバッファーＡ（２０ｍＭ  ＮａＯＡｃ，  ｐＨ４）に対して一晩中透析した。透析後、タンパク質を２０ｍｇ／ｍｌの濃度まで希釈した。固定化ペプシン（Ｐｉｅｒｃｅ、スラリーの６．７ｍｌ）を２７ｍｌのバッファーＡと混合し、遠心分離した（Ｂｅｃｋｍａｎ  ｆｌｏｏｒ  ｃｅｎｔｒｉｆｕｇｅ，  ５０００ｒｐｍ、１０分）。上清を除去し、この洗浄手順を２回以上繰り返した。洗浄した固定化ペプシンを１３．３ｍｌのバッファーＡ中で再懸濁した。Ｄ２Ｅ７（７．２７５ｍｌ、２０ｍｇ／ｍｌ、１４５．５ｍｇ）を７．７２５ｍｌのバッファーＡ及び７．５ｍｌの洗浄した固定化ペプシンのスラリーと混合した。Ｄ２Ｅ７／ペプシンの混合物を振盪させながら（３００ｒｐｍ）、３７℃で４．５時間インキュベートした。前記固定化ペプシンを次に、遠心分離機で分離した。ＳＤＳ−ＰＡＧＥによって前記上清を分析したところ、Ｄ２Ｅ７の消化が原則的に完了したことを示した（〜１１５ｋのＤａバンドは減少せず、〜３０及び〜３２ｋＤａのバンドは減少）。
【０４６２】
プロテインＡクロマトグラフィーを用いて、無傷のＤ２Ｅ７及びＦｃフラグメントからＤ２Ｅ７  Ｆ（ａｂ）’２フラグメントを分離した。上記の反応上清の二分の１（１０ｍｌ）を１０ｍｌのバッファーＢ（２０ｍＭリン酸ナトリウム、ｐＨ７）で希釈し、０．４５μｍ  Ａｃｒｏｄｉｓｋフィルターでろ過し、５ｍｌのプロテインＡセファロースカラム（Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｈｉ−Ｔｒａｐ、以前に５０ｍｌのバッファーＢで洗浄済み）に添加した。画分を採集した。前記タンパク質混合物を添加した後に、２８０ｎｍの吸光度がベースラインを回復するまでバッファーＢで前記カラムを洗浄した。結合したタンパク質を５ｍｌのバッファーＣ（１００ｍＭクエン酸、ｐＨ３）で溶出した。０．２ｍｌの２Ｍ  Ｔｒｉｓ  ＨＣｌ、ｐＨ８．９を加えることによってこれらの画分を中和した。ＳＤＳ−ＰＡＧＥによって画分を分析した。Ｄ２Ｅ７  Ｆ（ａｂ）’２フラグメントを含有した前記画分を貯蔵した（〜４２ｍｌ）。６Ｍ塩酸グアジニン、ｐＨ７中のタンパク質濃度を２８０ｎｍの吸光度で測定した（吸光係数を計算：Ｄ２Ｅ７、１．３９（ＡＵ−ｍｌ）／ｍｇ、Ｆ（ａｂ）’２、１．３６（ＡＵ−ｍｌ）／ｍｇ）。フロースループールに３８．２ｍｇまでのタンパク質（濃度、０．９１ｍｇ／ｍｌ）を入れたが、これはＦ（ａｂ）’２の７９％収率を表す（理論収量は出発原料の２／３までで２つに分ける［半量のみを精製した］、すなわち〜４８．５ｍｇ）。
【０４６３】
Ｄ２Ｅ７  Ｆ（ａｂ）’２フラグメントをゲルろ過クロマトグラフィーによって更に精製した。貯蔵したプロテインＡフロースルーを〜４２から〜２０ｍｌまで濃縮し、次に、バッファーＤ（２０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、０．１ｍＭ  ＥＤＴＡ）で以前に平衡（及び溶出）したＳｕｐｅｒｄｅｘ  ２００カラム（２６／６０、Ｐｈａｒｍａｃｉａ）上で一部分（５ｍｌ、〜７．５ｍｇ）のクロマトグラフィーを行った。吸光度２８０ｎｍによって２つのピークが認められた。１７２〜２００ｍｌで溶出するピーク１はＦ（ａｂ）’２から成る（ＳＤＳ−ＰＡＧＥによる分析、〜１１５ｋＤａのバンドは減少せず、〜３０及び〜３２ｋＤａのバンドは減少）。２３６〜２４８ｍｌで溶出するピーク２は、低分子重量のフラグメントから成る（〜１５ｋＤａ、減少又は減少せず）。結晶化試験用にピーク１を５．３ｍｇ／ｍｌまで濃縮する。
【０４６４】
Ｄ２Ｅ７  Ｆ（ａｂ）’２フラグメントの結晶化
ｓｉｔｔｉｎｇ  ｄｒｏｐ蒸気拡散法を用いて、同量のＦ（ａｂ）’２及び結晶化用緩衝液（各約１μｌ）を混合し、前記混合物を結晶化用緩衝液に対して４又は１８℃で平衡化して、Ｄ２Ｅ７  Ｆ（ａｂ）’２フラグメント（２０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ中５．３ｍｇ／ｍｌ、ｐＨ７、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、０．１ｍＭ  ＥＤＴＡ）を結晶化した。使用した結晶化用緩衝液は、Ｈａｍｐｔｏｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｒｙｓｔａｌ  Ｓｃｒｅｅｎｓ  Ｉ（溶液１〜４８）及びＩＩ（溶液１〜４８）、Ｅｍｅｒａｌｄ  Ｂｉｏｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ  Ｗｉｚａｒｄ  Ｓｃｒｅｅｎｓ  Ｉ及びＩＩ（各溶液１〜４８）、及びＪｅｎａ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  ｓｃｒｅｅｎｓ  １〜１０（各溶液１〜２４）から成る。表１に要約したように、多数の様々な条件下で結晶を得た。
【０４６５】
【表２】
2010209070.tif 000003
2010209070.tif 000004
2010209070.tif 000005
【０４６６】
次の条件（表１に記述）で、結晶品質の回折のために使用した結晶を生成した。ＷｉｚａｒｄＩＩ、１１、１８、１０％  ２プロパノール、０．１Ｍカコジル酸塩  ｐＨ６．５、０．２Ｍ  Ｚｎ（Ｏａｃ）２、小さな六方晶系又は菱形結晶。ＷｉｚａｒｄＩＩ、１０％  ＰＥＧ  ８Ｋ、０．１Ｍ  Ｎａ／Ｋリン酸  ｐＨ６．２、０．２Ｍ  Ｎａｃｌ、クラスターで成長した大きな板状結晶。ＪＢ３、Ｃ６、１８、２５％ＰＥＧ  ４Ｋ、０．１Ｍ  クエン酸ナトリウム  ｐＨ５．６、０．２Ｍ酢酸アンモニウム、長く薄い針状。Ｈａｍｐｔｏｎ２、１５、１８、０．５Ｍ  ＡＳ、０．１Ｍ  酢酸ナトリウム三水和物  ｐＨ５．６、１．０Ｍ  硫酸リチウム一水和物、小さな針状クラスター。
【実施例３８】
【０４６７】
Ｄ２Ｅ７  Ｆａｂフラグメントの結晶化
Ｄ２Ｅ７  Ｆａｂフラグメントの生成及び精製
次の手順に従ってＤ２Ｅ７  Ｆａｂフラグメントを作製し、精製した。４ｍｌのＤ２Ｅ７  ＩｇＧ（約２０ｍｇ／ｍｌまで希釈）を４ｍｌのバッファーＥ（２０ｍＭ  リン酸ナトリウム、５ｍＭ  塩酸システイン、１０ｍＭ  ＥＤＴＡ、ｐＨ７）で希釈し、固定化したパパインのスラリー６．５ｍｌ（Ｐｉｅｒｃｅ、１％、２６ｍｌのバッファーＥで以前に２回洗浄済み）と混合した。Ｄ２Ｅ７とパパインの混合物を３７℃で一晩中振盪しながら（３００ｒｐｍ）インキュベートした。遠心分離によって、固定化したパパイン及び沈殿させたタンパク質を分離した。Ｄ２Ｅ７の消化が部分的に完了したことが、ＳＤＳ−ＰＡＧＥによる上清の分析によって判明した（〜５５、５０、３４、及び３０ｋＤａバンドは減少せず。〜１１５ｋＤａと約１５０ｋＤａに無傷のＤ２Ｅ７と部分的に消化されたＤ２Ｅ７が若干存在した。〜５０ｋＤａバンドだけではなく〜３０及び〜３２ｋＤａも減少した）。しかしながら、前記消化を一時停止して精製を行った。
【０４６８】
プロテインＡクロマトグラフィー及びＳｕｐｅｒｄｅｘ２００ゲルろ過クロマトグラフィーによって、Ｆ（ａｂ）’２フラグメントについて上述したように、Ｄ２Ｅ７  Ｆａｂフラグメントを実質的に精製した。プロテインＡカラムフロースループール（２１ｍｌ）は〜９．２ｍｇ（０．４４ｍｇ／ｍｌ）を含有したが、本明細書では、プロテインＡ溶出（４ｍｌ）は〜１９．５ｍｇ（４．９ｍｇ／ｍｌ）を含有した。ＳＤＳ−ＰＡＧＥによる分析によると、フロースルーは実質的に純粋なＦａｂフラグメントであったことが判明し（〜４８及び〜３０ｋＤａは減少せず、〜３０ｋＤａの幅広いバンドは減少した）、本明細書では溶出は、無傷で部分的に消化されたＤ２Ｅ７であった。ＦａｂフラグメントをＳｕｐｅｒｄｅｘ  ２００カラム上で更に精製して、２１６〜２３２ｍｌで溶出した。すなわち、予想通りに、Ｆ（ａｂ）’２フラグメント後ではあるが、小さなＦｃフラグメントの前に溶出した。下記の通りに、結晶化試験のためにＤ２Ｅ７  Ｆａｂフラグメントを１２．７  ｍｇ／ｍｌまで濃縮した。
【０４６９】
Ｄ２Ｅ７  Ｆａｂフラグメントの結晶化
Ｆ（ａｂ）‘２フラグメントに関して上述したように、ｓｉｔｔｉｎｇ  ｄｒｏｐ蒸気拡散法を用いてＤ２Ｅ７  Ｆａｂフラグメント（２０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ中の１２．７ｍｇ／ｍｌ、ｐＨ７、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、０．１ｍＭ  ＥＤＴＡ）を実質的に結晶化した。表２に要約したように、多数の様々な条件下で結晶を得た。
【０４７０】
【表３】
2010209070.tif 000006
2010209070.tif 000007
2010209070.tif 000008
2010209070.tif 000009
【０４７１】
次の条件（表２に記述）で、結晶品質の回折のために使用可能な結晶を生成した。Ｈａｍｐｔｏｎ  ２、１、４Ｃ、２Ｍ  ＮａＣｌ、１０％  ＰＥＧ  ６Ｋ、小さな板状のクラスター、Ｈａｍｐｔｏｎ  １  ４６、４Ｃ、０．２Ｍ  Ｃａ  アセテート、０．１Ｍ  Ｎａ  カコジル酸ナトリウム、ｐＨ６．５、１８％ＰＥＧ  ８Ｋ、大きな板状のクラスター、Ｗｉｚａｒｄ  Ｉ、２８、４Ｃ、２０％  ＰＥＧ  ３Ｋ、Ｏ．１Ｍ  Ｈｅｐｅｓ  ｐＨ７．５、０．２Ｍ  ＮａＣｌ、大きな斜方晶の板状のクラスター、Ｗｉｚａｒｄ  ＩＩ  ３、４Ｃ、２０％  ＰＥＧ  ８Ｋ、Ｏ．１Ｍ  Ｔｒｉｓ  ｐＨ８．５、０．２Ｍ  塩化マグネシウム、相分離で大きな６角形又はオルトの板状クラスター。
【０４７２】
均等物
当業者であれば、過度の実験を行わずに、本明細書に記載されている本発明の具体的な実施形態の均等物を認識し、又は想到し得るであろう。かかる均等物も、特許請求の範囲に包含されるものとする。
【外国語明細書】
2010209070000001.pdf