(57)【要約】      （修正有）【課題】医薬製剤に使用するため、カンナビス植物からの抽出によって得られるカンナビノイドを含む所与の純度の植物性原薬調製法の提供。【解決手段】脱炭酸ステップ、液体二酸化炭素（ＣＯ２）による抽出ステップ、および抽出物中の非標的材料の比率を減らすステップを含み、液体ＣＯ２による抽出が、５〜１５℃の範囲の温度および５０〜７０バールの範囲の圧力の亜臨界条件下で行われる、植物材料からカンナビノイドを抽出する方法。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
脱炭酸ステップ、液体二酸化炭素（ＣＯ２）による抽出、および抽出物中の非標的材料の比率を減らすステップを含む、植物材料からカンナビノイドを抽出する方法であって、液体ＣＯ２による抽出が、５〜１５℃の範囲の温度および５０〜７０バールの範囲の圧力の亜臨界条件下で行われることを特徴とする方法。
【請求項２】
脱炭酸ステップが液体ＣＯ２による抽出後に行われる、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
脱炭酸ステップが液体ＣＯ２による抽出前に行われる、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
温度が８〜１２℃の範囲である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
温度が実質的に１０℃である、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
圧力が５５〜６５バールの範囲である、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
圧力が実質的に６０バールである、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
ＣＯ２が１０００〜１５００Ｋｇ／ｈの範囲のマスフローを有する、請求項１〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
ＣＯ２が実質的に１２５０Ｋｇ／ｈのマスフローを有する、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
抽出が最長１０時間実行される、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
抽出が約８時間実行される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
ＣＯ２が減圧によって除去され、回収された抽出物が−１５℃〜−２０℃の範囲の温度に保持される、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
抽出物中の非標的材料の比率を減らすステップは、Ｃ１〜Ｃ５アルコールにより沈殿させることであり、処理される材料がＣ１〜Ｃ５アルコールの添加前に室温を超えて温められる、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
Ｃ１〜Ｃ５アルコールがエタノールである、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
抽出物が３６℃〜４４℃の範囲の温度まで温められる、請求項１３または１４に記載の方法。
【請求項１６】
抽出物が約４０℃まで温められる、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
Ｃ１〜Ｃ５アルコールが処理される材料の重量に対して３：１〜１：１のＣ１〜Ｃ５アルコール容積の量で添加される、請求項１４〜１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
Ｃ１〜Ｃ５アルコールが処理される材料の重量に対して約２：１のＣ１〜Ｃ５アルコール容積の量で添加される、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
処理される材料にＣ１〜Ｃ５アルコールを添加して得られる溶液を冷却し、不溶物を沈殿させる、請求項１３〜１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
処理される材料にＣ１〜Ｃ５アルコールを添加して得られる溶液が−１５℃〜−２５℃の範囲の温度まで冷却される、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
処理される材料にＣ１〜Ｃ５アルコールを添加して得られる溶液が最長５２時間冷却される、請求項１９または２０に記載の方法。
【請求項２２】
不溶物の沈殿が濾過によって除去される、請求項１９〜２１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
濾過が２０μｍの膜による、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
減圧下の多段階蒸発をさらに含む、請求項１３〜２３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２５】
最初にＣ１〜Ｃ５アルコールが除去され、次いで水が除去される、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
１６８〜１７２ミリバールの範囲の真空下で３８〜４２℃の範囲の蒸気温度を生じるように、Ｃ１〜Ｃ５アルコールを５８〜６２℃の範囲の温度に加熱して除去し、目に見える凝縮物がほとんどまたは全く認められなくなるまで行う、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
水が約５０ミリバールまで段階的に真空を下げることによりさらに除去される、請求項２５または２６に記載の方法。
【請求項２８】
脱炭酸ステップが液体ＣＯ２による抽出に先立って行われ、ＴＨＣのＣＢＮへの熱分解が１０％未満であることを確保しながら、酸性カンナビノイドの中性型への少なくとも９５％の変換を確保する温度および時間、植物材料を加熱することによって行われる、請求項３から２７のいずれかに記載の方法。
【請求項２９】
植物材料が
ｉ）保有水を蒸発させ、植物材料の均一な加熱を可能にするため、第１の時間、第１の温度まで加熱し、
ｉｉ）酸性カンナビノイドの中性型への少なくとも９５％の変換が起きるまで、第２の時間、第２の温度まで温度を上昇させる、
多段階加熱プロセスを行う、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
第１ステップが１０〜２０分間、１００℃〜１１０℃の範囲の温度で行われる、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
第１の温度が約１０５℃であり、第１の時間が約１５分である、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
植物材料が高いＣＢＤ含量を有し、第２の温度が１１５℃〜１２５℃の範囲、好ましくは１２０℃であり、第２の時間が４５分〜７５分の範囲、好ましくは約６０分である、請求項２８〜３１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３３】
植物材料が高いＣＢＤ含量を有し、第２の温度が１３５℃〜１４５℃の範囲、好ましくは１４０℃であり、第２の時間が１５分〜４５分の範囲、好ましくは約３０分である、請求項２８〜３１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３４】
植物材料が高いＣＢＤ含量を有し、第２の温度が１４０℃〜１５０℃の範囲、好ましくは約１４５℃であり、第２の時間が５５分〜９０分の範囲である、請求項２８〜３１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３５】
植物材料が高いＴＨＣ含量を有し、第２の温度が１１５℃〜１２５℃の範囲、好ましくは約１２０℃であり、第２の時間が４５分〜７５分の範囲、好ましくは約６０分である、請求項２８〜３１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３６】
植物材料が高いＴＨＣ含量を有し、第２の温度が１００℃〜１１０℃の範囲、好ましくは約１０５℃であり、第２の時間が６０分〜１２０分の範囲である、請求項２８から３１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３７】
植物材料が高いＴＨＣ含量を有し、第２の温度が１４０℃〜１５０℃の範囲、好ましくは約１４５℃であり、第２の時間が４５〜５５分の範囲である、請求項２８から３１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３８】
脱炭酸ステップが、ＴＨＣのＣＢＮへの熱分解が５％未満であることを確保しながら、酸性カンナビノイドの中性型への少なくとも９７％の変換を確保する温度および時間、行われる、請求項２８〜３７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３９】
植物材料が磨砕、粉砕、または他の処理で２ｍｍ未満とされる、請求項１〜３８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４０】
粒径が１ｍｍを超える、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
植物材料に由来する抽出物を活性炭で処理するステップをさらに含む、請求項１〜４０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４２】
植物材料に由来する抽出物をアルコール溶液に溶かす、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
アルコール溶液がエタノール溶液である、請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】
活性炭による処理がエタノール沈殿ステップの後に続く、請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
液体ＣＯ２による抽出を含む植物材料からカンナビノイドを抽出する方法であって、有機調整剤または極性溶媒を二酸化炭素に添加することを特徴とする方法。
【請求項４６】
調整剤または極性溶媒が最大１０重量％の量で添加される、請求項４５に記載の方法。
【請求項４７】
調整剤または極性溶媒がエタノールである、請求項４５または４６に記載の方法。
【請求項４８】
植物材料が撹拌される、請求項３〜２７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４９】
植物材料が８〜１２％の含水量を有する、請求項３〜２７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５０】
あるＴＨＣ含量を有する高ＴＨＣ含有カンナビス植物由来の植物性原材料から得られる植物性原薬であって、前記植物性原薬が、抽出物の少なくとも５０％ｗ／ｗのＴＨＣ、ＴＨＣ含量の％ｗ／ｗとしてＣＢＤを５％以下、およびＴＨＣ含量の％ｗ／ｗとしてＴＨＣおよびＣＢＤ以外のカンナビノイドを５％以下含む、高ＴＨＣカンナビス植物由来の抽出物である、植物性原薬。
【請求項５１】
あるＣＢＤ含量を有する高ＣＢＤ含有カンナビス植物由来の植物性原材料から得られる植物性原薬であって、前記植物性原薬が、抽出物の５０％ｗ／ｗのＣＢＤ、ＣＢＤ含量の％ｗ／ｗとしてＴＨＣを７．５％以下、およびＣＢＤ含量の％ｗ／ｗとしてＣＢＤおよびＴＨＣ以外のカンナビノイドを５％以下含む、高ＣＢＤカンナビス植物由来の抽出物である、植物性原薬。
【請求項５２】
アフラトキシンを４ｐｐｂ以下含む、請求項５０または５１に記載の植物性原薬。
【請求項５３】
全重金属を２０ｐｐｍ以下含む、請求項５０または５１に記載の植物性原薬。
【請求項５４】
残留溶媒を１５％ｗ／ｗ以下含む、請求項５０または５１に記載の植物性原薬。
【請求項５５】
残留溶媒がエタノールである、請求項５４に記載の植物性原薬。
【請求項５６】
１０５ｃｆｕ／ｇ以下のＴＶＣ、１０４ｃｆｕ／ｇ以下の真菌、１０３ｃｆｕ／ｇ以下の腸内細菌および他の非グラム陰性微生物を含み、大腸菌、サルモネラ菌および黄色ブドウ球菌は検出されない、請求項５０または５１に記載の植物性原薬。
【請求項５７】
少なくとも６０％のカンナビノイドを含み、その少なくとも９０％はＴＨＣであり、約１．５％はＣＢＤであり、残りは他の微量カンナビノイドを含む、カンナビスから得られる植物性原薬。
【請求項５８】
少なくとも６０％のカンナビノイドを含み、その少なくとも８５％はＣＢＤであり、約３％はＴＨＣであり、残りは他の微量カンナビノイドを含む、カンナビスから得られる植物性原薬。
【請求項５９】
請求項５７および５８に記載の植物性原薬を混ぜることによって得られる植物性原薬。
【請求項６０】
少なくとも１種のカンナビス植物由来の抽出物である植物性原薬を活性物質として含む医薬組成物を製造する方法であって、請求項１〜４８のいずれか一項に記載の抽出方法を用いて少なくとも１種のカンナビス植物からカンナビノイドを含有する植物性原薬を調製すること、および医薬組成物を製造するための１種または複数の薬学的に許容できる希釈剤、担体または賦形剤と一緒に植物性原薬を製剤化することを含む方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は植物材料からの薬学的に活性な成分の抽出に関するものであり、より具体的には、薬物に組み入れるための植物性原薬（ＢＤＳ）の調製に関するものである。また、本発明は医薬製剤に使用するための所与の純度のＢＤＳに関するものである。特に、本発明はカンナビスからの抽出によって得られるカンナビノイドを含むＢＤＳに関するものである。
【背景技術】
【０００２】
ＰＣＴ／ＧＢ０２／００６２０（ＷＯ／２００２／０６４１０９）において、出願人は、薬用カンナビス（大麻）由来の生薬抽出物（植物性原薬）を調製する方法を開示している。プロセスは、
１．酸型のカンナビノイドを脱炭酸して中性型にするための加熱ステップ、
２．６〜８時間の、規定容積の液体二酸化炭素による第１の抽出、および
３．ｗｉｎｔｅｒｉｓａｔｉｏｎと呼ばれるろうを沈殿させるステップである、非標的材料の割合を下げるためのステップを含む。
【０００３】
より具体的に、ＰＣＴ／ＧＢ０２／００６２０は、
ステップ１が、脱炭酸を可能にするのに十分な時間、１００〜１５０℃において刻んだカンナビス（２〜３ｍｍ）を加熱することを含み、
ステップ２が、
ａ）粗い粉末（粒子を３ｍｍのメッシュに通す）、
ｂ）充填密度０．３、および
ｃ）４時間、３５℃、６００バールの超臨界条件（１０〜３５℃および６０〜６００バールの範囲の温度と圧力の他の組合せ（超臨界条件と亜臨界条件双方）が使用できることが知られているが）を用いるＣＯ２抽出、および
ステップ３が、２４時間、−２０℃においてエタノール沈殿を行い、濾過によってろう状物質を除去することを含むプロセスについて記載している。
【０００４】
ＰＣＴ／ＧＢ０２／００６２０に開示されている超臨界法は、
ａ）テトラヒドロカンナビノール（ＴＨＣ）６０％
カンナビジオール（ＣＢＤ）１〜２％
ＣＢＮを含む他の微量カンナビノイド４〜５％
（量的収率は、薬用大麻の乾燥重量に基づいて９％ｗｔ／ｗｔであった）
を含有する高ＴＨＣ抽出物、および
ｂ）ＣＢＤ６０％
ＴＨＣ４％
他のカンナビノイド２％
（量的収率は、薬用大麻の乾燥重量に基づいて９％ｗｔ／ｗｔであった）
を含有する高ＣＢＤ抽出物を生じた。
【０００５】
得られるＢＤＳを医薬品において使用する場合、このプロセスが安全で、ＧＭＰに拡張でき、高度な製品の一貫性と、好ましくは好収率も与えることが不可欠であることは明らかである。
【０００６】
超臨界流体抽出（ＳＦＥ）の原理は、ある種の物質を密閉ガラス容器中で加熱することによりその物質の温度を上昇させた場合、気液境界が消失することが指摘された１８２２年のカニャール・ド・ラ・トゥール男爵の研究以来知られてきた。この初期の仕事から、物質の臨界点というものが初めて発見された。臨界点は、それを超えると、物質が気相、液相および固相で共存することができるようになる温度である。後に、物質をその臨界温度および臨界圧以上に上げることにより、複雑な混合物を抽出および分画するための高性能な溶媒として使用できることが判明した。
【０００７】
この技法は、燃料油加工業において広く用いられ、例えば、植物油および魚油の精製および分離に応用されてきた。
【０００８】
従来の溶媒の使用法を上回るＳＦＥの魅力的特徴は、臨界点を超える温度および圧力の操作によって、溶解力（Ｅ°）を変えられることである。
【０００９】
物質の典型的な圧力−温度図には、相のうちの２相間の平衡を規定する３本の線が存在する。これらの線は、三重点において交わる。線は、気体、液体および固体状態間の境界を規定し、線に沿った点は、一組の相間の平衡を規定する。例えば、蒸気圧（沸点）曲線は、三重点から始まり、臨界点で終わる。臨界領域は、この点から始まり、超臨界流体は、その臨界温度（Ｔｃ）および臨界圧（Ｐｃ）を超える任意の物質である。したがって、臨界温度は、圧力の増加によって気体を液体に変換することができる最高温度であり、臨界圧は、温度を上げることによって液体を伝統的な気体に変換することができる最高圧力である。いわゆる臨界領域では、１つの相のみが存在し、気体と液体双方の特性のいくつかを有する。
【００１０】
植物材料から活性物質を抽出するために使用することができる多くの溶媒が存在し、表１には、それらの溶媒の一部について臨界温度および臨界圧を示している。
【００１１】
【表１】
2010248227.tif 000002
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１２】
【特許文献１】国際公開第２００２／０６４１０９号
【発明の概要】
【００１３】
出願人は、臨界温度３１．１℃および臨界圧７３．８バールを有する二酸化炭素を好ましい溶媒として選択した。
【００１４】
二酸化炭素は、豊富な供給量で利用でき、低コストであり、必要ならばリサイクルすることができるため、特に有利である。ＣＯ２の喪失も生態学的に中性である。さらに、ＣＯ２抽出は、保存的な調製方法であり、極めて壊れやすい分子を的確に抽出することができる。
【００１５】
カンナビス薬草の強力な規格化された抽出物を製造するための溶媒として液体ＣＯ２を最初に選択する際に考慮した重要な事柄は、高度な選択性が得られることであった。ＣＯ２系において、溶媒和力は、主に密度および温度の関数であると見なされ、溶媒密度がより重要な要素であると判断されている。
【００１６】
予想とは逆に、出願人は、カンナビノイドが超臨界条件下より、むしろ亜臨界条件下で最も良く得られると判断した。
【００１７】
超臨界の温度および圧力未満に温度および圧力を注意深く制御することにより、出願人は、比較的容易に分離することができる他の成分と共にカンナビノイドに富んだ特定の親油性または親水性分画を分離し、薬学的に許容できる形態で望ましい成分を含有する植物性原薬（ＢＤＳ）を得ることができた。したがって、活性物質であることが知られている化合物を、植物性原材料中に存在する複雑な混合物から分離することができる。
【００１８】
さらに、極めて良好なバッチ間再現性がバッチ間で得られ、植物性原材料中に様々な程度で存在する可能性のある重金属などの望ましくない成分を廃棄物質中に残すことができる。
【００１９】
抽出条件を変更し、原材料中に存在する可能性のある残留農薬を排除することもできる。
【００２０】
亜臨界条件を用いる利点には、抽出の選択性が含まれる。対照的に、出願人は、ＳＦＥについて、溶媒ならびに望ましいカンナビノイドの可溶化は、その後の精製ステップにおいて分離することが困難であることが分かっている他の非標的材料を不都合なほどに可溶化することを見いだした。
【００２１】
説明すると、亜臨界ＣＯ２の密度は低く、系の臨界点に達するまで圧力を上げてもなお低い。したがって、亜臨界ＣＯ２の溶媒和力は低下するものの、最も可溶性の成分（この場合にはカンナビノイド分画）のみがＣＯ２によって効率的に溶かされるため、高度な選択性を得ることができる。その結果は、カンナビノイドはもちろんのこと、多くを簡単なステップにおいて比較的容易に除去することができる限られた数に過ぎない非標的化合物を含有する比較的単純な抽出物の生成である。さらに、比較的低い圧力および温度で操作することによって行われる費用節減はさらなる利点である。
【００２２】
対照的に、３１℃の臨界温度を超えると、超臨界流体状態で存在するため、ＣＯ２の密度が有意に増加する。このことは、溶媒の溶媒和力を大きく増加させる効果を有し、より多くのカンナビノイドが可溶化されて高収率を与える点で一般には有利であるものの、より強力な溶媒の選択性の低下は、得られる抽出物の精製を困難にする一連の非標的化合物の溶解性を増す結果になるという理由で実際には不都合であると分かっている。言い換えれば、標的化合物の濃度が著しく希釈されている（すなわち、抽出物の効力が低下する）可能性のあるより複雑な抽出物の生成をもたらす。
【図面の簡単な説明】
【００２３】
【図１】標準ＴＨＣ植物性原薬（ＢＤＳ）および活性炭処理ＴＨＣ  ＢＤＳ（精製ＢＤＳ）の４０℃における経時的なＴＨＣの消失を示す図である。Ｙ軸：ＴＨＣの量（ｔ０値に対する割合として表される）、Ｘ軸：時間（月）。
【図２】標準ＣＢＤ植物性原薬（ＢＤＳ）および活性炭処理ＣＢＤ  ＢＤＳ（精製ＢＤＳ）の４０℃における経時的なＣＢＤの消失を示す図である。Ｙ軸：ＣＢＤの量（ｔ０値に対する割合として表される）、Ｘ軸：時間（月）。
【図３】標準ＴＨＣ植物性原薬（ＢＤＳ）および活性炭処理ＴＨＣ  ＢＤＳ（精製ＢＤＳ）の４０℃における経時的なカンナビノール（ＣＢＮ）の生成を示す図である。Ｙ軸：ＣＢＮの量（ｔ０値に対する割合として表される）、Ｘ軸：時間（月）。
【発明を実施するための形態】
【００２４】
第１の態様において、本発明は、脱炭酸ステップ、液体二酸化炭素（ＣＯ２）による抽出、および抽出物中の非標的材料の割合を減らすステップを含む、植物材料からカンナビノイドを抽出する方法であって、液体ＣＯ２による抽出が５〜１５℃の温度および５０〜７０バールの圧力下の亜臨界条件下で行われることを特徴とする方法を提供する。
【００２５】
本発明の方法を用い、カンナビス植物材料からカンナビノイドに富んだ抽出物を調製することができる。好ましい実施形態では、この方法を用い、植物性原薬であるカンナビス抽出物を製造することができる。
【００２６】
本出願との関連において、「植物性原薬」は、カンナビス植物材料に由来する抽出物であり、Ｇｕｉｄａｎｃｅ  ｆｏｒ  Ｉｎｄｕｓｔｒｙ  Ｂｏｔａｎｉｃａｌ  Ｄｒｕｇ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ  Ｄｒａｆｔ  Ｇｕｉｄａｎｃｅ、Ａｕｇｕｓｔ  ２０００、米国保健省食品医薬品局医薬品評価研究センターに示されている「植物性原薬」の定義「１種または複数の植物、藻類、または肉眼で見える真菌に由来する原薬。微粉化、煮沸、発現、水抽出、エタノール抽出、または他の類似したプロセスのうち１種または複数のプロセスにより植物性原材料から調製される」を満たす抽出物である。
【００２７】
「植物材料」は、植物または植物部分（例えば、樹皮、木、葉、茎、根、花、果実、種子、液果またはそれらの部分）ならびに浸出物として定義され、Ｇｕｉｄａｎｃｅ  ｆｏｒ  Ｉｎｄｕｓｔｒｙ  Ｂｏｔａｎｉｃａｌ  Ｄｒｕｇ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ  Ｄｒａｆｔ  Ｇｕｉｄａｎｃｅ、Ａｕｇｕｓｔ  ２０００、米国保健省食品医薬品局医薬品評価研究センターにおける「植物性原材料」の定義の範囲に入る材料が含まれる。
【００２８】
本発明の方法を用い、このようなカンナビノイドを含有することが知られている任意の植物材料からカンナビノイドを抽出することができる。最も典型的には、しかし必ずではないが、「植物材料」は、１種または複数のカンナビス植物に由来する「植物材料」または「植物性原材料」であろう。
【００２９】
用語「カンナビス植物」は、野性型カンナビス・サティバ（Ｃａｎｎａｂｉｓ  ｓａｔｉｖａ）およびその変異体も包含し、様々な量の個々のカンナビノイドを自然に含有するカンナビス化学型、変異体の変種インディカ（ｉｎｄｉｃａ）および変種カフィリスタニカ（ｋａｆｉｒｉｓｔａｎｉｃａ）を含むカンナビス・サティバ、亜種インディカ、カンナビス・インディカおよびそれらの遺伝的交雑、自家交雑またはハイブリッドの結果である植物も含まれる。したがって、用語「カンナビス植物材料」は、１種または複数のカンナビス植物に由来する植物材料を包含すると解釈するべきである。疑いを回避するため、本明細書では、「カンナビス植物材料」には乾燥カンナビスバイオマスが含まれることを明記する。
【００３０】
液体ＣＯ２による抽出は８〜１２℃の温度で行うことが好ましく、約１０℃の温度で行うことが最も好ましい。
【００３１】
液体ＣＯ２による抽出は５５〜６５バールの圧力で行うことが好ましく、実質的に６０バールの圧力で行うことが最も好ましい。
【００３２】
ＣＯ２は、１０００〜１５００Ｋｇ／ｈのマスフローを有することが最も好ましく、実質的に１２５０Ｋｇ／ｈのマスフローを有することがより好ましい。
【００３３】
液体ＣＯ２抽出は最長１０時間実行することが好ましく、約８時間実行することが最も好ましい。
【００３４】
好ましい実施形態において、液体ＣＯ２は減圧によって除去され、回収された抽出物は−１５℃〜−２０℃の範囲の温度に保たれる。
【００３５】
植物性原薬中の非標的材料の割合を減らすステップは、基本的に、最終の植物性原薬生成物中に存在する望ましくない成分の量が減少するように、望ましくない成分（カンナビノイドとは反対に）の選択的除去をもたらす任意の処理であってよい。「非標的」材料は、最終植物性原薬中に存在することが望ましくない出発植物材料に由来する任意の材料である。好ましい実施形態において、このステップは、Ｃ１〜Ｃ５アルコールによる沈殿を含み、アルコール沈殿ステップにおいて処理される材料は、Ｃ１〜Ｃ５アルコールが添加される前に室温より高温に温められる。通常、植物性原薬中の非標的材料の比率を減らすステップは、液体ＣＯ２による抽出後に行われ、その場合、アルコール沈殿中の「処理される材料」は、液体ＣＯ２抽出の生成物である。この抽出物は、それ自体が上記で示した定義内の「植物性原薬」である。
【００３６】
Ｃ１〜Ｃ５アルコールは、エタノールであることが好ましい。抽出物は、３６℃〜４４℃の範囲の温度まで温められることが好ましく、約４０℃まで温められることが最も好ましい。Ｃ１〜Ｃ５アルコールの添加に先立って処理される材料を温めることは、この材料とＣ１〜Ｃ５アルコールの混合を改善する効果を有するため、アルコール沈殿ステップの成果を改善する。
【００３７】
Ｃ１〜Ｃ５アルコールは、処理される材料の重量に対して３：１〜１：１のＣ１〜Ｃ５アルコール容積の量で添加されることが好ましく、処理される材料の重量に対して約２：１のＣ１〜Ｃ５アルコール容積の量で添加されることがより好ましい。
【００３８】
処理される材料にＣ１〜Ｃ５アルコールを添加して得られる溶液を冷却し、不溶物を沈殿させる。溶液を−１５℃〜−２５℃の範囲の温度まで冷却することが好ましく、溶液を５２時間までの間冷却することが好ましい。
【００３９】
次いで、不溶物の沈殿を、通常は濾過によって除去する。濾過は、２０μｍの膜により行うことが好ましい。
【００４０】
他の好ましい実施形態において、方法は、減圧下の多段階蒸発をさらに含むことができる。これは、回転蒸発または他の知られている技法によることができる。
【００４１】
通常、多段階蒸発は、すべてのＣ１〜Ｃ５アルコールおよび水を実質的に除去するため、Ｃ１〜Ｃ５アルコール沈殿ステップの生成物に対して行う。Ｃ１〜Ｃ５アルコールを初めに除去し、次いで水を除去することが好ましい。
【００４２】
好ましくは、Ｃ１〜Ｃ５アルコールの除去は、５８〜６２℃の範囲の温度まで加熱し、１６８〜１７２ミリバールの範囲の真空下で３８〜４２℃の範囲の蒸気温度とし、目に見える凝縮物がほとんどあるいは全く認められなくなるまで行う。
【００４３】
次いで、水を、好ましくは約５０ミリバールまで段階的に真空を段階的に引き下げることによりさらに除去する。
【００４４】
脱炭酸ステップは、液体ＣＯ２による抽出に先立って、またはその後に行うことができる。
【００４５】
好ましい実施形態において、脱炭酸ステップは、液体ＣＯ２による抽出に先立って行い、ＴＨＣのＣＢＮへの熱分解が１０％未満であることを確保しながら、酸性カンナビノイドの酸型から中性型への少なくとも９５％の変換を確保する温度および時間、植物材料を加熱することによって行う。
【００４６】
カンナビノイド酸の脱炭酸は、時間および温度の関数であることから、より高温では、所与の量のカンナビノイド酸を完全に脱炭酸するのに要する時間はより短くなる。しかしながら、脱炭酸の適切な条件を選択する際には、望ましい薬理学的カンナビノイドの望ましくない分解生成物への熱分解、特にＴＨＣのカンナビノール（ＣＢＮ）への熱分解を最小限に抑えることを考慮しなければならない。
【００４７】
脱炭酸は、植物材料を、
ｉ）第１の（比較的短い）時間、第１の温度まで加熱することにより、保有水を蒸発させ、植物材料の均一な加熱を可能にし、
ｉｉ）酸性カンナビノイドの中性型への少なくとも９５％の変換が起きるまで、第２の時間（通常は、第１の時間よりも長い）、温度を第２の温度まで上昇させる
多段階加熱プロセスで行われることが好ましい。
【００４８】
第１ステップは、１０〜２０分間、１００℃〜１１０℃の範囲の温度で行われることが好ましい。第１の温度は約１０５℃であり、第１の時間は約１５分であることがより好ましい。
【００４９】
植物材料が、高いＣＢＤ含量を有する（全カンナビノイド含量の中の割合として＞９０％ＣＢＤとして定義される）カンナビス植物由来である場合、第２の温度は１１５℃〜１２５℃の範囲であることが好ましく、約１２０℃であることが好ましく、第２の時間は４５〜７５分の範囲であり、約６０分であることが好ましい。第２の温度は１３５℃〜１４５℃の範囲であることがより好ましく、約１４０℃であることが好ましく、第２の時間は１５〜４５分の範囲であり、約３０分であることが好ましい。別の実施形態において、４ｋｇを超える植物材料の質量に対し、第２の温度は１４０℃〜１５０℃の範囲、好ましくは１４５℃であり、第２の時間は５５〜９０分の範囲であることが最も好ましい。後者の条件は、例えば、４〜６ｋｇの出発植物材料の量を処理するのに好ましく、正確な数字、特に時間は、質量の増加によってわずかに変化することがある。
【００５０】
植物材料が、高いＴＨＣ含量を有する（全カンナビノイド含量の中の割合として＞９０％ＴＨＣとして定義される）カンナビス植物由来である場合、第２の温度は１１５℃〜１２５℃の範囲であることが好ましく、通常は１２０℃であり、第２の時間は４５分〜７５分の範囲であることが好ましく、通常は約６０分である。第２の温度は１００℃〜１１０℃の範囲であることがより好ましく、通常は１０５℃であり、第２の時間は６０〜１２０分の範囲である。別の実施形態において、４ｋｇを超える植物材料の質量に対し、第２の温度は１４０℃〜１５０℃の範囲、好ましくは１４５℃であり、第２の時間は４５〜５５分の範囲であることが最も好ましい。
【００５１】
脱炭酸ステップは、ＴＨＣのＣＢＮへの熱分解が５％未満であることを確保しながら、酸性カンナビノイドの中性型への少なくとも９７％の変換を確保する温度および時間、行うことが最も好ましい。
【００５２】
カンナビノイドアッセイの標準条件、およびカンナビノイド含量（％として）を算出する方法は、添付の実施例に示す。
【００５３】
抽出プロセスの出発材料として使用する植物材料は、好ましくは磨砕、粉砕、または他の処理で、２ｍｍ未満の粒径とするが、好ましくは１ｍｍを超える。一般に、このような処理は、充填密度が改善されるため、植物材料からのカンナビノイドの抽出の改善をもたらす。
【００５４】
好ましい実施形態において、本発明の方法は、植物材料に由来する抽出物（すなわち、植物性原薬材料）を活性炭で処理するステップをさらに含む。
【００５５】
通常、このステップは、Ｃ１〜Ｃ５アルコールによる沈殿の生成物に対し、通常は沈殿を除去するための濾過直後に行うものとする。アルコール沈殿の液体生成物は、上記に示す定義に従い、「植物性原薬」として分類される。好都合には、処理される液体材料を活性炭カラム中に流下させることによって、活性炭による処理を行うことができる。
【００５６】
添付の実施例に示すように、活性炭による処理は、カンナビス植物材料に由来する植物性原薬の安定性を有意に改善し、活性カンナビノイドの熱分解に対する抵抗性を有意に改善する。
【００５７】
好ましい実施形態において、本発明の方法は、以下のステップを含み、カンナビス植物材料から出発し、
ｉ）脱炭酸、
ｉｉ）粗製の植物性原薬を製造するための液体ＣＯ２による抽出、
ｉｉｉ）非標的材料の比率を減らすためのＣ１〜Ｃ５アルコールによる沈殿、
ｉｖ）沈殿を除去するための濾過、
ｖ）Ｃ１〜Ｃ５アルコールおよび水を除去し、最終の植物性原薬（ＢＤＳ）を製造するための蒸発という定められた順序で行われることが好ましい。
【００５８】
活性炭による処理のステップは、ステップｉｖ）とステップｖ）の間に入れることができ、最終ＢＤＳの安定性の改善をもたらす。
【００５９】
さらに、出願人は、ある比率の調整剤または極性溶媒、例えば、エタノールなどのＣ１〜Ｃ５アルコールを液体二酸化炭素溶媒に添加することが、抽出プロセスの選択性をさらに高めると判断した。
【００６０】
したがって、本発明は、液体ＣＯ２による抽出を含む植物材料からカンナビノイドを抽出する方法であって、二酸化炭素に有機調整剤または極性溶媒を添加することを特徴とする方法をさらに提供する。
【００６１】
調整剤または極性溶媒を１０重量％までの量で添加することが好ましい。
【００６２】
調整剤は、Ｃ１〜Ｃ５アルコールであることが好ましく、エタノールであることが最も好ましい。
【００６３】
他の態様において、さらに、本発明は、カンナビス植物材料に由来する植物性原薬に関する。したがって、本発明は、全カンナビノイド含量の少なくとも９０％ｗ／ｗのＴＨＣ含量を有する高ＴＨＣ含有カンナビス植物由来の植物性原材料から得られる植物性原薬であって、前記植物性原薬は、抽出物の少なくとも５０％ｗ／ｗのＴＨＣ、ＴＨＣ含量の５％ｗ／ｗ以下のＣＢＤ、およびＴＨＣ含量の５％ｗ／ｗ以下のＴＨＣおよびＣＢＤ以外のカンナビノイドを含む高ＴＨＣカンナビス植物由来の抽出物である、植物性原薬を提供する。
【００６４】
抽出物のＴＨＣの％ｗｔ／ｗｔは、少なくとも５５％であることが好ましく、少なくとも６０％であることがより好ましい。他のカンナビノイドおよび量を測定するためのアッセイ方法は後で示す。
【００６５】
また、本発明は、全カンナビノイド含量の少なくとも９０％ｗ／ｗのＣＢＤ含量を有する高ＣＢＤ含有カンナビス植物由来の植物性原材料から得られる植物性原薬であって、前記植物性原薬は、抽出物の少なくとも５０％ｗ／ｗのＣＢＤ、ＣＢＤ含量の７．５％ｗ／ｗ以下のＴＨＣ、およびＣＢＤ含量の％ｗ／ｗで表してＣＢＤおよびＴＨＣ以外のカンナビノイド５％以下を含む高ＣＢＤカンナビス植物由来の抽出物である、植物性原薬を提供する。
【００６６】
自然選択により、あるいはカンナビジオレート合成酵素およびＴＨＣ合成酵素の遺伝子が同定された（ＪＰ２００１０２９０８２およびＪＰ２００００７８９７９を参照）ので遺伝子操作により、他のカンナビノイド、例えばＣＢＤに富んだ植物を開発するために、同様に使用できる従来の各育種技法を用いて、娯楽のためではあるが、例えば「Ｓｋｕｎｋ」などの高ＴＨＣ植物が育種されてきたことを、当業者であれば理解されよう。ＣＰＲＯ９２１０１８Ｌａｎｄ系統であるＴｕｒｋｅｙは、高ＣＢＤ植物の例である。
【００６７】
本発明による抽出方法を用い、カンナビス植物材料（植物性原材料）から出発して植物性原薬を得ることができる。
【００６８】
好ましい実施形態において、植物性原薬は、４ｐｐｂ以下のアフラトキシンを含む。
【００６９】
他の好ましい実施形態において、植物性原薬は、２０ｐｐｍ以下の全重金属を含む。
【００７０】
他の好ましい実施形態において、植物性原薬は、１５％ｗ／ｗ以下の残留溶媒、より具体的には１５％ｗ／ｗ以下のエタノールを含む。
【００７１】
他の好ましい実施形態において、植物性原薬は、１０５ｃｆｕ／ｇ以下のＴＶＣ（全生菌数；Ｔｏｔａｌ  Ｖｉａｂｌｅ  Ｃｏｕｎｔ）、１０４ｃｆｕ／ｇ以下の真菌、１０３ｃｆｕ／ｇ以下の腸内細菌および他の非グラム陰性菌を含み、大腸菌、サルモネラ菌および黄色ブドウ球菌は検出されなかった。
【００７２】
上に列挙したパラメータは、植物性原薬の純度に関し、植物性原薬を医薬品に組み入れる場合に好ましい純度のレベルを規定している。必要な純度のレベルを有する植物性原薬は、本発明による抽出プロセス、特に添付の実施例に記載の操作条件および品質管理手順を用いて得ることができる。植物性原薬中のアフラトキシン、重金属、残留溶媒および汚染菌のレベルを測定する際に使用するための標準的アッセイ技法は、当技術分野において知られており（例えば、欧州薬局方（Ｐｈ．Ｅｕｒ．）標準手順）、さらなる詳細を添付の実施例に示す。
【００７３】
本発明の方法に従ってカンナビス植物材料から調製される植物性原薬は、薬学的に活性な物質としてカンナビノイドを含有する医薬製剤を製造するため、１種または複数の薬学的に許容できる担体、希釈剤または賦形剤と一緒に製剤化するか、蒸発のために薬学的に許容できる表面上に沈着させることができる。
【００７４】
したがって、他の態様において、本発明は、少なくとも１種のカンナビス植物変種由来の抽出物である植物性原薬を活性物質として含む医薬組成物を製造する方法であって、本発明による抽出方法を用いて少なくとも１種のカンナビス植物変種由来のカンナビノイドを含有する植物性原薬を調製すること、および医薬品組成物を製造するために１種または複数の薬学的に許容できる希釈剤、担体または賦形剤と一緒に植物性原薬を製剤化するか、薬学的に許容できる蒸発用表面上に植物性原薬を沈着させることを含む方法を提供する。
【００７５】
個々の植物性原薬を、異なるカンナビノイド含量を有する単一のカンナビス植物変種（例えば、高ＴＨＣおよび高ＣＢＤ植物）から調製し、次いで、製剤化に先立って混合または混和し、最終医薬組成物を製造することができる。この手法は、例えば、最終製剤中に個々のカンナビノイドについて所定の重量比を得ることが望ましい場合には好ましい。あるいは、所定のカンナビノイド含量の１種または複数のカンナビス植物変種由来の植物性原材料を、望ましいカンナビノイド含量を有する単一の植物性原薬の抽出に先立って一緒に混ぜ、次いで、最終医薬組成物に製剤化することができる。
【００７６】
植物性原薬を、任意の好都合な薬学的に許容できる希釈剤、担体または賦形剤と一緒に製剤化し、医薬組成物を製造することができる。希釈剤、担体または賦形剤の選択は、望ましい剤形に左右され、望ましい剤形は、患者への意図した投与経路に左右される。好ましい剤形には、とりわけ、ポンプ式またはエアロゾルのスプレーを介する投与のための液体剤形、錠剤、トローチ剤、ゲル剤、カプセル剤、坐剤、散剤など、および気化器が含まれる。このような剤形は、当業者に知られている医薬製剤化の標準原理に従って調製することができる。好ましい剤形、およびそのような剤形を調製する方法は、出願人による同時に係属している国際出願ＰＣＴ／ＧＢ０２／００６２０（ＷＯ０２／０６４１０３）に記載されている。
【００７７】
液体製剤が特に好ましい。本発明を限定することを意図してはいないが、カンナビノイドの投与に特に好ましい製剤は、植物性原薬、エタノールおよびプロピレングリコール、ならびに場合によりハッカ油などの香料を含む液体製剤である。この製剤は、ポンプ式スプレーを介して頬側または舌下粘膜へ好都合に投与することができ、活性カンナビノイドの効率的吸収をもたらす。
【実施例】
【００７８】
添付の図と一緒に以下の実施例により、例示だけのために、本発明の様々な態様をさらに説明する。
【００７９】
略語
主なカンナビノイドについて一般に受け入れられている略語は以下の通りである：
テトラヒドロカンナビノール（ＴＨＣ）、Δ９−テトラヒドロカンナビノール（ＴＨＣまたはΔ９−ＴＨＣ）、Δ８−テトラヒドロカンナビノール（Δ８−ＴＨＣ）、Δ９−テトラヒドロカンナビノール  プロピル類似体（ＴＨＣＶ）、カンナビジオール（ＣＢＤ）、カンナビジオール  プロピル類似体（ＣＢＤＶ）、カンナビノール（ＣＢＮ）、カンナビクロメン（ＣＢＣ）、カンナビクロメン  プロピル類似体（ＣＢＣＶ）およびカンナビゲロール（ＣＢＧ）。
【００８０】
（実施例１）カンナビス植物からカンナビノイドを抽出するためのプロセスの開発
大麻化学型の選択
ＧＷ  Ｐｈａｒｍａ社は、特定の化学成分であるカンナビノイドの生産量を最大限に高めるため、カンナビス属植物雑種の異なる変種を開発した。２つのタイプの植物を用い、１つの化学型はＴＨＣを主に産生し、別の化学型はＣＢＤを主に産生する。しかしながら、代わりの変種を入手し（例えば、Ｃｏｍｍｏｎ  ｃａｎｎａｂｉｎｏｉｄｓ  ｐｈｅｎｏｔｙｐｅｓ  ｉｎ  ３５０  ｓｔｏｃｋｓ  ｏｆ  ｃａｎｎａｂｉｓ、ＳｍａｌｌおよびＢｅｃｋｓｔｅａｄ、ＬＬｏｙｄｉａ  ｖｏｌ  ３６ｂ、１９７３  ｐ１４４−１５６を参照）、当業者に知られている技法を用いて栽培し、カンナビノイド含量を最大限に高めることができる。
【００８１】
ＴＨＣとＣＢＤの間には、化学的および構造的類似性が存在する。出発材料の植物起源に加えてこれらの類似性のため、カンナビノイドを抽出するためのプロセスの開発に関しては、各々が互換的であると見なすことができる。
【００８２】
各カンナビス属化学型は、２つの異なるＢＤＳを得るため別々に処理され制御されることが好ましい。しかしながら、２種以上の化学型由来の植物材料を混ぜるか、抽出に先立って望ましい比の所与のカンナビノイドを産生する変種を用い、単一ＢＤＳを調製することが可能である。
【００８３】
植物性原材料の製造
ＢＤＳは、カンナビス・サティバ・エル（Ｃａｎｎａｂｉｓ  ｓａｔｉｖａ  Ｌ．）（Ｃａｎｎａｂｉｄａｃｅａｅ科）の抽出物から調製する。カンナビス・サティバは、１９３４年の英国薬局方に記載された。カンナビスは、イギリスのＧＷ  Ｐｈａｒｍａ社の管理下、イギリス内務省の許可を受けて栽培されている。栽培施設は、ほぼ同一の育成条件で１年に何回かの作物を生産し、供給の連続性を確保することができるように、日よけおよび完全な環境制御（温度、湿度、および高輝度照明）を備えている。
【００８４】
栽培：
カンナビス植物は、単一の種子源に由来する母木から採取した挿木から繁殖させる。したがって、作物は、植物がすべて雌である無性繁殖により生産される。挿木を用いる繁殖は、遺伝子型の一貫性を制御する。
【００８５】
農薬非含有として供給される堆肥中で挿木を根付かせる。植物に水をやり、育成サイクル中に徐放性肥料を施す。制御された育成条件により、植物が成熟に達するのに約１２週間を要する。
【００８６】
育成サイクルを通じ、植物に飲料水を注ぐ。
【００８７】
カンナビス植物の栽培には合成除草剤と農薬は一切使用しない。
【００８８】
堆肥：
カンナビスの効率的栽培には、確実に均一な育成培地の供給が必要である。
【００８９】
堆肥は、軟らかい感触、高い空隙率、早い湿潤性、低伝導率およびバランスのとれた栄養供給を提供する。堆肥は、ピートおよびカンナビス植物の育成サイクル中に堆肥のｐＨ制御を提供するための石灰（炭酸マグネシウムおよび炭酸カルシウム）を含む添加天然ミネラルからなる。
【００９０】
堆肥は、十分な供給の必須ミネラルおよび植物に対して知られている有害作用のある最低限のミネラルを含有する。マンガンを含むいくつかのミネラルは、堆肥中に不溶形で存在し、時間とともに易溶形で放出することができる。堆肥のｐＨを制御し、水浸しを避けるために注水をモニターすることは、可溶性マンガンレベルを制御することになる。堆肥のｐＨは、５．５より高く維持される。
【００９１】
堆肥は、農薬および除草剤は一切添加されていないため、農薬非含有と宣言される。
【００９２】
肥料：
堆肥は、２つの別個の形、基肥と徐放性肥料とに識別可能な肥料を含有する。徐放性肥料は、育成中の植物に追加して施す。
【００９３】
病害対策および害虫駆除：
栽培中は人工除草剤と農薬を一切使用しない。厳密な衛生状態は、害虫および病害の進入を減らす。
【００９４】
育成条件を制御することにより、乾燥、不十分な光および好ましくない温度などの環境ストレスは、病害の危険を軽減する。
【００９５】
育成サイクル中に植物を定期的に検査すると、任意の変異植物および害虫を検出することができる。変異雄株が生じることがあるが、制御された育成条件および培地により、雑草は存在しないはずである。頻繁な検査および生物学的制御方法を用い、生じる可能性のある任意の害虫および病害を管理する。
【００９６】
植物採集：
育成条件の厳重な管理により、カンナビス植物は、約１２週で成熟に達する。育成の最後の数週に、密集した樹脂性の花が開く。約１１週目の末までに、カンナビノイドの生合成は著しく遅くなり、植物は収穫の準備ができている。
【００９７】
植物全体を切り、温度と湿度が制御された環境で乾燥する。
・約２１℃。
・約３８〜４５％ＲＨ。
乾燥植物の終点を物理的に確かめる。
【００９８】
ＴＨＣおよびＣＢＤは、ＢＤＳにおける主要な生理活性成分である。しかしながら、これらの成分は、ＢＲＭ中で生物学的に不活性なカルボン酸として存在する。
・ＴＨＣＡ
・ＣＢＤＡ
酸型は、乾燥中、時間とともにゆっくりと脱炭酸する。大きな茎から葉および花を取り、植物性原材料（ＢＲＭ）を得る。
【００９９】
ＢＲＭの貯蔵：
貯蔵条件下で、乾燥減量は、約１０％の平衡に達する。乾燥ＢＲＭの貯蔵条件は、ＢＲＭの物理的状態に左右される。
【０１００】
ＢＲＭの一般的貯蔵条件：
・遮光。
・約１５〜２５℃または−２０℃
・約３８〜４２％ＲＨ。
【０１０１】
概要−ＢＲＭの製造：
植物の収穫
↓
乾燥
（光排除）
↓
ＢＲＭ
（ＴＨＣＡ＋ＣＢＤＡを含有）
↓
２０００μｍ未満に粉砕し粒径を小さくする
↓
中性カンナビノイド（ＴＨＣ＋ＣＢＤ）を製造するための酸型カンナビノイド（ＴＨＣＡ＋ＣＢＤＡ）の脱炭酸
【０１０２】
高ＣＢＤ変種に由来する典型的なＢＲＭの規格を表２に示す：
【０１０３】
【表２】
2010248227.tif 000003
【０１０４】
分析方法：
視覚による同定：
巨視的特性は、カンナビス植物の特徴を潜在的な混和物および代用物と区別することを可能にする。それは、写真による標準品に対する視覚的同定である。
【０１０５】
ＴＬＣによる同定：
ＴＬＣは、カンナビスの変種を効率的に同定するための保持時間と特徴的なスポット発色の双方を使用する。乾燥した薬草を抽出することにより、ＴＬＣ分析のために試験サンプルを調製する。ＴＨＣおよびＣＢＤの基準サンプルと並べて、一定分量をＴＬＣプレート上にスポットする。Ｆａｓｔ  Ｂｌｕｅ  Ｂ試薬に曝露すると、ＴＨＣおよびＴＨＣＡはピンク色のスポットとして現れ、ＣＢＤおよびＣＢＤＡはオレンジ色である。中性成分は、Ｒｆ値を標準品について得られたＲｆ値と比較することにより酸と区別することができる。サンプルスポットのＲｆおよび色を適切な標準品について得られたＲｆおよび色と比較することにより同一性を確認する。
【０１０６】
ＨＰＬＣによる同定：
ＨＰＬＣは、カンナビスの変種を効率的に同定するためのカンナビノイドの保持時間比較を使用する。逆相ＨＰＬＣ法は、ＣＢＤおよびＣＢＤＡに特異的であることから、同一性テストとして使用することができる。バイオマスのサンプルを抽出し、遠心分離する。全分析物の検出は、２２０ｎｍにおいて行い、酸性分析物は３１０ｎｍにおいてさらに確認する。
【０１０７】
アッセイ（ＣＢＤ＋ＣＢＤＡ）：
このアッセイを用い、植物中のＣＢＤおよびＣＢＤＡ含量をモニターする。ＣＢＤおよびＣＢＤＡアッセイは、ＨＰＬＣ法を用いて測定する。
【０１０８】
脱炭酸プロセスの効率は、ＣＢＤのｗ／ｗ換算の含量％を全ＣＢＤ＋ＣＢＤＡ含量で除することにより決定する。
【０１０９】
乾燥減量：
乾燥減量は、欧州薬局方の試験法を用いて評価する。
【０１１０】
アフラトキシン：
アフラトキシンは、英国認定機関（ＵＫＡＳ）の認定方法を用いて分析する。
【０１１１】
微生物：
微生物学的品質は、欧州薬局方の方法を用いて判定する。
【０１１２】
異物：
異物は、欧州薬局方の試験法を用いて評価する。花、葉および側茎を、きれいな実験室表面上に薄い層に広げる。できる限り完全に、手によって異物を分離し、秤量する。結果は、薬草バイオマスサンプル中の異物の％ｗ／ｗとして表す。異物は、バイオマスの２％以下を構成することがある。
【０１１３】
残留除草剤および農薬：
カンナビス植物は、十分に制御された環境で育成される。栽培中は、人工的な除草剤や農薬を使用せず必要ともしない。
【０１１４】
ＢＲＭ相当規格（表２と比較）が高ＴＨＣ変種について得られ、ＴＨＣ／ＴＨＣＡをＣＢＤ／ＣＢＤＡに置き換える以外は同一の分析方法を用いた。
【０１１５】
脱炭酸
ＴＨＣおよびＣＢＤは、カンナビスにおける主要な生理活性成分である。しかしながら、これらの成分は、カンナビス属植物中で生物学的に不活性なカルボン酸として存在する。カンナビス植物材料からＴＨＣおよびＣＢＤを抽出するためには、貯蔵前駆体化合物のＴＨＣＡおよびＣＢＤＡを、より容易に抽出できて薬学的に活性な形に変換する必要がある。ＴＨＣ酸およびＣＢＤ酸は、時間とともに自然にゆっくりと脱炭酸する。脱炭酸速度を高めるための伝統的方法は、熱をかけるものである。しかしながら、ＴＨＣＡは、ＴＨＣばかりでなく、別のカンナビノイドであるカンナビノール（ＣＢＮ）にも変換される。
【０１１６】
【化１】
2010248227.tif 000004
【０１１７】
一般に、脱炭酸手順は、抽出プロセスの開始に先立って、出発材料すなわち植物性原材料（ＢＲＭ）を調製する間に行われる。
【０１１８】
実験室での研究−脱炭酸
粉砕した乾燥植物材料の一部を加熱した（粒径１〜２ｍｍ、約０．２５ｇ）。ＴＨＣＡまたはＣＢＤＡをそれぞれＴＨＣおよびＣＢＤへ最適に変換するためのパラメータを決定する目的で、得られるそのような化合物の熱分解生成物への変換、ＴＨＣの場合はＣＢＮの生成を、同時に最小限に抑えながら、パイロットスケールの実験系を設定した。
【０１１９】
材料および方法の簡単な説明：
粉砕した（粒径約１〜２ｍｍ）ＴＨＣＡとＣＢＤＡ双方の薬草材料の一部（０．２５ｇ）を２０ｍｌのガラス製ヘッドスペースバイアルに入れ、バイアルを、クリンプキャップ付きのテフロン表面処理ブチルゴムシールでしっかりと密閉した。密封したバイアルを、以下の通り４時間まで、３温度のうち一つで加熱した。
１０５℃、１２０℃、１４０℃で０．５、１．０、２．０および４．０時間。
【０１２０】
加熱は、強制的に空気を循環させるオーブン内で行った。オーブン条件は、使用した３温度において０．５〜１．０度以内で正確であることが分かった。
【０１２１】
加熱プロセスが完了した後、脱炭酸された薬草の代表的サンプルをＨＰＬＣ、ＧＣおよびＴＬＣ技法を用いてアッセイした。ＴＨＣ、ＣＢＤおよびＣＢＮの標準品を、ＨＰＬＣおよびＧＣの分析手順に含めた。
【０１２２】
結果および考察：
溶媒抽出物のＨＰＬＣ分析は、２つの低い方の温度における時間の関数としてのＣＢＤＡあるいはＴＨＣＡの消失を立証することができた。１４０℃では、０．５時間における最も早い時点のサンプルが、ＣＢＤＡまたはＴＨＣＡの保持時間において溶出する極めて少ないレベルのピークのみを含んでいた。
【０１２３】
表３および４は、ＣＢＤＡまたはＴＨＣＡの遊離化合物への変換を定量化するＨＰＬＣデータを示しており、ＣＢＤまたはＴＨＣの含量およびＣＢＤ／ＣＢＤＡ＋ＣＢＤまたはＴＨＣ／ＴＨＣＡ＋ＴＨＣの比を示すデータも示している。カルボン酸体の対応する脱炭酸体への変換は、脱炭酸／脱炭酸＋非脱炭酸の比を脱炭酸化合物の絶対含量と比較することによりモニターすることができる。したがって、その比が最大値（＞０．９５）に達した場合、ＴＨＣまたはＣＢＤの含量も最大となる最も早い時間／温度の点が、変換プロセスにとって最適のはずである。
【０１２４】
したがって、ＣＢＤ含有薬草の場合、１２０℃で１時間または１４０℃で０．５時間が適切であった。
【０１２５】
このことは、溶媒抽出物のＴＬＣクロマトグラムの検討によって裏付けられ、１２０℃で１時間後に、または１４０℃ではいかなる時点でもＣＢＤＡは存在しない。
【０１２６】
ＴＨＣについては３番目の基準、ＣＢＮの生成が存在し、熱的脱炭酸プロセス中のこの化合物の生成を最小限に抑えることが望ましい。表５は、ＣＢＮ／ＴＨＣ比を導き出すことができるガスクロマトグラフィー（ＧＣ）データを提供している。ＴＨＣ／ＴＨＣＡ＋ＴＨＣの比および最高ＴＨＣ含量を考慮すると、最小のＣＢＮ生成は、１２０℃で０．５または１時間後に起きる。１４０℃では、０．５時間でさえ、２つのより低い時間／温度のどちらよりも高いＣＢＮの含量を与える。
【０１２７】
したがって、実験室での研究は、脱炭酸の最適条件が以下の通りであることを示している。
・主にＣＢＤを生産する化学型では、１２０℃で１時間または１４０℃で０．５時間である。
・主にＴＨＣを生産する化学型では、ＣＢＮ生成を最小限に抑えるため、１０５℃で１〜２時間または１２０℃で１時間であることを示している。
【０１２８】
薄層クロマトグラフィーは、事実上すべてのＴＨＣＡが１０５℃で４時間後、および１２０℃で１時間後には消失したことを示している。薬草を１４０℃で加熱した場合、いかなる時点においてもＴＨＣＡは見られない。ＴＬＣ上のこの保持値における少量の残留染色およびＨＰＬＣ分析におけるＴＨＣＡに一致する低レベルのピークの存在は、残留ＴＨＣＡよりむしろ微量カンナビノイドの存在を示している可能性がある。
【０１２９】
【表３】
2010248227.tif 000005
【０１３０】
【表４】
2010248227.tif 000006
【０１３１】
【表５】
2010248227.tif 000007
【０１３２】
植物性原材料（ＢＲＭ）約４ｋｇのバッチスケールに関する脱炭酸条件は以下の通りである：
粉砕した脱炭酸されるＢＲＭ（ＴＨＣＡあるいはＣＢＤＡ）約４ｋｇを、初めは１０５℃まで加熱し、この温度で約１５分間保って保有水を蒸発させ、ＢＲＭの均一な加熱を可能にした。次いで、バッチをさらに１４５℃まで加熱し、その温度に４５分間保って、９５％の効率を超えるまで脱炭酸を完了させる。
【０１３３】
ＣＢＤＡは、ＴＨＣＡよりも脱炭酸に対して抵抗性がやや高いことが結果から明らかになったため、ＣＢＤＡ  ＢＲＭの加熱時間は１４５℃で５５分まで延ばした。ＣＢＤとＴＨＣ間のこの差異は、商業的規模のバッチではさらに顕著となろう。ＴＨＣ  ＢＲＭの加熱時間は１４５℃で４５分間に保った。
【０１３４】
パイロットスケールで使用する条件は、実験室研究から最適と判断された条件を忠実に反映している。その差異は、パイロットスケールのバッチサイズが大きいために、容器を介し、ＢＲＭを通る熱伝導の速さと効率が低下することによって説明することができる。
【０１３５】
表６および７は、生物学的に活性なカンナビノイド、ＴＨＣまたはＣＢＤの含量について測定した脱炭酸の効率を示すデータを提供している。
【０１３６】
【表６】
2010248227.tif 000008
【０１３７】
約４ｋｇから６ｋｇまでＣＢＤ  ＢＲＭのバッチサイズを増加させた結果、脱炭酸時間を増やすことが必要になった。１４５℃における脱炭酸時間を５５分から９０分まで増やした。
【０１３８】
【表７】
2010248227.tif 000009
【０１３９】
抽出プロセスの概要：
ＢＤＳは、液体二酸化炭素法を用いて脱炭酸ＢＲＭから抽出される。これは、高圧力容器に入っている刻んだバイオマスに液化二酸化炭素を連続的に通すものである。粗製抽出物をエタノールに溶かし、低温まで冷却して濾過し、ろうなどの沈殿成分を除去する。真空中でエタノールおよび水を除去することは、使用するバイオマスにもよるが、高濃度のＣＢＤあるいはＴＨＣを含有するＢＤＳを生じる。
【０１４０】
典型的な抽出プロセスの流れ図：
約１０５℃まで１５分間と、続いて約１４５℃までＴＨＣＡの場合は最低５５分間、ＣＢＤＡの場合は最低９０分間加熱することによってＢＲＭを脱炭酸する。
↓
最長１０時間の液体二酸化炭素（ＣＯ２）［食品グレード］による抽出
条件：約６０バール±１０バールの圧力および１０℃±５℃
↓
粗製抽出物を回収するための減圧によるＣＯ２の除去
↓
「ｗｉｎｔｅｒｉｓａｔｉｏｎ」−粗製抽出物をエタノールに溶解後、不要のろうを沈殿させるために溶液を冷却すること（−２０℃±５℃／５２時間まで）
↓
冷間濾過による不要のろう状材料の除去
（２０μｍフィルター）
↓
減圧下の薄膜蒸発による濾液からのエタノールおよび水の除去
（６０℃±２℃、４０℃±２℃の蒸気／１７２ミリバールおよび７２ミリバール±４ミリバール）
↓
ＢＤＳ
（−２０℃±５℃で貯蔵）
【０１４１】
抽出番号１
製造プロセスにおける第１段階は、亜臨界条件下で液体ＣＯ２を用いる抽出である。
【０１４２】
実験は、ＴＨＣとＣＢＤの双方が、約６０バール±１０バールの圧力を用い、約１０℃±５℃の低温において亜臨界ＣＯ２を用いて高い効率でカンナビス植物材料から抽出できることを示した。
【０１４３】
以下の表８は、ＴＨＣに富むＢＤＳについて作成された比較データを示している。
【０１４４】
【表８】
2010248227.tif 000010
【０１４５】
この結果から、超臨界条件下での高含量のろうによって示されるように、選択性が失われることが見て取れる。ｗｉｎｔｅｒｉｓａｔｉｏｎは、ろうの除去量を増やすことができるとはいえ、例えばフィルターが詰まるので処理は困難である。
【０１４６】
ＣＢＤについても同様の結果が得られた。
【０１４７】
液体ＣＯ２抽出の好ましい条件は以下の通りである：
脱炭酸した植物性原材料を１本のカラムに詰め込み、加圧下で液体ＣＯ２に曝露する。
・バッチサイズ：約６０ｋｇ
・圧力：６０バール±１０バール
・温度：１０℃±５℃
・時間：約８時間
・ＣＯ２マスフロー  １２５０ｋｇ／ｈｒ±２０％。
【０１４８】
ＢＤＳの製造に好ましい製法パラメータは、抽出時間＞１０時間、ＣＯ２圧力５０〜７０バール、抽出温度５〜１５℃、ＣＯ２マス１６７ｋｇ／ｋｇ  ＢＲＭである。
【０１４９】
減圧およびＣＯ２の放出後、粗製ＢＤＳ抽出物を密封容器中に集める。元のＢＲＭは、粗製ＢＤＳ抽出物の約１０％ｗ／ｗまで減少する。粗製ＢＤＳ抽出物は、−２０℃±５℃に保つ。
【０１５０】
粗製ＢＤＳ抽出物は、ろうおよび長鎖分子を含有する。除去は「ｗｉｎｔｅｒｉｓａｔｉｏｎ」手順（抽出２）により、粗製ＢＤＳ抽出物を、例えば４０℃±４℃まで暖めて材料を液化する。粗製ＢＤＳ抽出物の重量に対して２：１の比のエタノール容積でエタノールを加える。次いで、エタノール溶液を−２０℃±５℃まで冷却し、この温度で約４８時間保つ。
【０１５１】
ｗｉｎｔｅｒｉｓａｔｉｏｎが完了したら、２０μｍフィルターによる冷間濾過により沈殿を除去する。
【０１５２】
抽出番号２
製造プロセスにおける第２段階は、エタノールを用いる「ｗｉｎｔｅｒｉｓａｔｉｏｎ」と呼ばれる抽出番号２である。粗製ＢＤＳ抽出物は、ろうなどの成分を含有する抽出番号１から製造される。エタノールは、粗製抽出物から長鎖分子を効率的に抽出する。
【０１５３】
研究：
粗製ＢＤＳ抽出物を約４０℃まで温めることにより、粗製抽出物を溶媒と混ぜる能力が改善されることが判明した。
【０１５４】
「ｗｉｎｔｅｒｉｓａｔｉｏｎ」溶液を−２０℃まで約４８時間冷却することが好ましかった。
【０１５５】
ＢＤＳの製造に好ましい製法パラメータは、抽出温度３６〜４４℃、エタノール：生成物比約２：１、フリーザー温度−２５℃〜−１５℃、時間４８〜５４時間である。
【０１５６】
濾過
第２抽出段階において製造されるエタノール溶液は、得られる沈殿を除去するための濾過を必要とする。フィルタサイズは、２０μｍであることが好ましい。
【０１５７】
ＢＤＳの製造に好ましい製法パラメータは、総濾過時間＞６時間である。
【０１５８】
蒸発
製造プロセスの最終段階は、エタノールおよび存在する可能性のある水の除去である。これは、１７２ミリバール±４ミリバールの真空中で４０℃±２℃の蒸気温度を得るために６０℃±２℃に加熱することによって行われることが好ましい。これらの条件下の蒸留は、目に見える凝縮物がほとんどあるいは全く認められなくなるまで続く。約５０ミリバールまで段階的にさらに真空を下げると、水除去が完了する。完了したら、密封したステンレス容器にＢＤＳを移し、−２０℃±５℃でフリーザーに貯蔵する。
【０１５９】
ＢＤＳの製造に好ましい製法パラメータは、蒸発蒸気温度３８〜４２℃、エタノールの除去真空圧力１６７〜１７７ミリバール、水の除去真空圧力７０〜７５ミリバール、６２〜５８ミリバール、５２〜４８ミリバール、時間＜８時間である。
【０１６０】
ＢＤＳの特性決定
ＴＨＣ  ＢＤＳは、少なくとも６０％のカンナビノイド成分からなる褐色で粘稠な半固体抽出物である。カンナビノイド成分には、少なくとも９０％のＴＨＣ、約１．５％のＣＢＤが含まれ、残りは、他の微量カンナビノイドで構成されている。
【０１６１】
カンナビスの化学組成は、同定されている４００種を超える化合物について徹底的に研究されている（Ｈｅｎｄｒｉｃｋｓ他、１９７５；Ｔｕｒｎｅｒ他、１９８０）。６０種を超えるカンナビノイドが同定されており、ＣＢＤＡおよびＴＨＣＡ（ＣＢＤおよびＴＨＣ前駆体）が最も豊富に含まれている。一般に、非カンナビノイド成分は、抽出プロセスにもよるが、抽出物の５０％までを構成する。同定されている化学種には、アルカン（２５〜３０個の炭素鎖）、窒素化合物、アミノ酸、糖、アルデヒド、アルコールおよびケトン、フラバノイド、グリコシド、ビタミン、色素およびテルペンが含まれる。カンナビスでは約９５種のモノテルペンおよびセスキテルペンが同定されており、特徴的な臭いの原因である。
【０１６２】
ＣＢＤとＴＨＣ双方の構造を完全に解明するためにかなりの仕事が行われ（上記論文に要約されている）、双方とも合成的に調製されている。純粋なＴＨＣは、同定および定量用の基準材料として使用できるほど十分な量でＢＤＳから単離することに成功している。
【０１６３】
不純物：
ＢＤＳ物質は、カンナビス・サティバのうち特定の化学型の、乾燥され脱炭酸された葉および花頭からの選択的抽出物である。６０種を超えるカンナビノイドを含む４００種を超える様々な化合物がカンナビス植物に見いだされている（Ｔｕｒｎｅｒ  １９８０）。これらが天然に存在することから、これらの成分のいずれも不純物と見なす必要はないと考えられる。したがって、主要な不純物は、４つの領域、すなわち育成プロセス中に導入される農薬、アフラトキシン、脱炭酸によって生成する新たな生成物およびＢＤＳを構成するカンナビノイド以外の材料で生じる。
【０１６４】
育成プロセスは、ＧＡＰガイドラインを用いて厳密に制御され、気候の制御された屋内育成環境で行われる。育成中は作物に一切農薬を使用せず、すべての害虫駆除は、生物学的手段によって行う。育成培地には一切農薬を組み入れない。生成物中に農薬残留物が導入されないことを保証するため、育成培地供給業者によって使用されることが知られている農薬について育成培地を定期的に検査する。
【０１６５】
植物材料を収穫および乾燥したら、作物の汚染が起きていないことを保証するための一般的な農薬スクリーンを用い、他のサンプルを定期的に検査する。可能性のある不純物は、ＢＲＭ段階において十分に制御される。
【０１６６】
これを防ぐために育成条件が注意深く制御されているにもかかわらず、原材料は、微生物で汚染され、生成物中にアフラトキシンをもたらす可能性がある。したがって、ＢＲＭおよびＢＤＳは、アフラトキシン含量について定期的に検査される。
【０１６７】
新しく育成された植物中で天然に存在するＴＨＣの形態は酸ＴＨＣＡであるが、少量の中性ＴＨＣが存在する。抽出前に加熱によってＴＨＣＡを脱炭酸すると、中性ＴＨＣが得られる。このプロセスは効率的であるが、少量のＴＨＣＡが残り、ＢＤＳの最終試験中にそれをモニターする。脱炭酸プロセス中のＴＨＣＡおよびＴＨＣの熱分解により、ＣＢＮＡおよびＣＢＮが生成する可能性がある。これらをＢＤＳでモニターする。
【０１６８】
ＢＤＳのバラスト部分を構成する非カンナビノイド成分には、炭化水素およびトリグリセリドろう、植物色素およびテルペンが含まれる。これらは、薬用植物の多くの他の抽出物の共通成分であり、毒性上も薬理上もほとんど意味がないと考えられている。存在する他の成分の範囲は広いが、通常は少量存在するに過ぎない。
【０１６９】
バラストの量は、ろうを沈殿させるｗｉｎｔｅｒｉｓａｔｉｏｎプロセスによって減少する。バラスト材料は、活性成分の希釈剤と見なされ、アッセイも制御もしない。
【０１７０】
【表９】
2010248227.tif 000011
【０１７１】
分析手順
同定、アッセイおよび関連カンナビノイド：
ＢＲＭおよびＢＤＳ中のＴＨＣ、ＣＢＤおよびカンナビノール（ＣＢＮ）の含量は、メタノールまたはメタノール／クロロホルム（９：１）による抽出によって定量する。２２０ｎｍにおけるＵＶ検出による逆相高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）が定量の方法である。すべての分析は、当該化合物が光に敏感であるため、暗室灯下で行わなければならない。
【０１７２】
クロマトグラフィー機器および条件：
機器  可変波長ＵＶ検出器またはダイオードアレイ検出器付きＡｇｉｌｅｎｔ（ＨＰ）１１００ＨＰＬＣシステム
ＨＰＬＣカラム  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  Ｃ８  ５μｍ  １５ｃｍ×０．４６ｃｍ
プレカラム  Ｋｉｎｇｓｏｒｂ  Ｃ１８  ５μｍ  ３ｃｍ×０．４６ｃｍ
移動相  アセトニトリル：メタノール：０．２５％ｗ／ｖ酢酸（容積で１６：７：６）
カラム温度  ２５℃
流速  １．０ｍｌ  ｍｉｎ−１
検出  ２２０ｎｍ  ６００ｍＡ  ｆ．ｓ．ｄ．  第２波長３１０ｎｍ
注入量  １０μｌ
実行時間  ２０〜２５分（遅れて溶出するピークを少量含むサンプルの場合に延長してもよい）
溶出順序  ＣＢＤ、ＣＢＤＡ、Δ９ＴＨＣＶ、ＣＢＮ、Δ９ＴＨＣ、ＣＢＣ、Δ９ＴＨＣＡ
【０１７３】
標準品調製：
約１ｍｇ  ｍｌ−１のＣＢＤ、ＣＢＮおよびΔ９ＴＨＣの保存メタノール標準溶液は、−２０℃で保存する。
【０１７４】
希釈使用標準品（Δ９ＴＨＣおよびＣＢＤについては０．１ｍｇ／ｍｌであり、ＣＢＮについては０．０１ｍｇ／ｍｌ）を保存標準品からメタノール中で調製し、−２０℃で保存する（初期調製後最大１２カ月）。調製後、標準溶液をバイアルに等分し、室温に曝される標準品の量を軽減する。ＨＰＬＣサンプルアッセイで使用するのに先立って、必要数の標準バイアルを取り出し、室温まで平衡化する。
【０１７５】
サンプル調製：
すべての調製において、重量あるいは容積を用い、同一の最終希釈液を得る。
【０１７６】
植物性原材料
・刻んで乾燥した均一な材料約１００ｍｇを１０ｍｌのメスフラスコに正確に秤量する。
・材料をメタノール：クロロホルム（９：１  ｖ／ｖ）に分散させ、同一溶媒で定容量にする。
・超音波浴で１５分間、サンプルを抽出する。
・一定量を３０００ｒｐｍで約２分間、遠心分離する。
・適当なＨＰＬＣサンプルバイアル中でメタノールにより上清１００μｌを１ｍｌまで希釈する。（主要なカンナビノイド濃度が線形使用範囲の外側にある場合には、さらなる希釈が必要なことがある）。
【０１７７】
脱炭酸植物性原材料：
植物性原材料に関して。
【０１７８】
植物性原薬
・ＢＤＳ約８０ｍｇを５０ｍｌのメスフラスコに正確に秤量する。
・ＢＤＳをメタノールで溶かして定容量にする。
・適当なＨＰＬＣオートサンプラーバイアル中でメタノールにより調製された上清１００μｌを１ｍｌまで希釈する。
【０１７９】
クロマトグラフィー手順：
Ａｇｉｌｅｎｔケムステーション上の配列リストに入れられた順序で、オートサンプラーラックにサンプルを入れる。標準溶液を用い、定量および保持時間データを得る。通常、これらを任意のサンプル溶液の注入に先立って２回または３回、次いで実行中に適切な間隔で１回注入することができ、標準品間では最大１０個の試験サンプルとする。
【０１８０】
クロマトグラフィー合否基準：
【０１８１】
【表１０】
2010248227.tif 000012
【０１８２】
【表１１】
2010248227.tif 000013
【０１８３】
計算：
植物性原材料：
下記の式を用い、バッチ中の現在のところアッセイ可能なカンナビノイド（ＣＢＤ、ＣＢＤＡ、ＣＢＮ、Δ９ＴＨＣおよびΔ９ＴＨＣＡ）の％として主要なカンナビノイドの純度に関する結果を得る：
【０１８４】
高Δ９ＴＨＣ材料の場合：
【０１８５】
【数１】
2010248227.tif 000014
【０１８６】
高ＣＢＤ材料の場合、ＣＢＤおよびＣＢＤＡが、式のトップラインにおけるＴＨＣおよびＴＨＣＡと置き換わる。
【０１８７】
脱炭酸植物性原材料：
下記の式を用い、脱炭酸プロセスの効率を算出する：
【０１８８】
高Δ９ＴＨＣ材料の場合：
【０１８９】
【数２】
2010248227.tif 000015
【０１９０】
高ＣＢＤ材料の場合、ＣＢＤおよびＣＢＤＡが、式中のＴＨＣおよびＴＨＣＡと置き換わる。
【０１９１】
植物性原薬：
下記の式を用い、原薬サンプルの濃度、個々のサンプルカンナビノイド濃度、原薬中のアッセイ可能なカンナビノイドの含量％、現在のところアッセイ可能なカンナビノイドの％としての主要なカンナビノイドの量および抽出原薬の全重量における主要なカンナビノイドの量を算出する。
【０１９２】
高Δ９ＴＨＣ材料の場合：
【０１９３】
【数３】
2010248227.tif 000016
ここで、希釈係数＝５０×１０＝５００
【０１９４】
【数４】
2010248227.tif 000017
【０１９５】
【数５】
2010248227.tif 000018
【０１９６】
Δ９ＴＨＣに代えてこれらの式のすべてにＣＢＤおよびＣＢＮを代入し、両方の量的結果を得ることができる。また、Δ９ＴＨＣＡおよびＣＢＤＡも、それら自体の具体的な基準標準品なしにΔ９ＴＨＣまたはＣＢＤの標準品濃度を用いて算出することができる。
【０１９７】
関連物質は、ＣＢＮ、Δ９ＴＨＣＡおよびＣＢＤＡの平均％ｗ／ｗ値の和として定義される。
【０１９８】
【数６】
2010248227.tif 000019
【０１９９】
全原薬抽出物中に存在するΔ９ＴＨＣの全量が得られる。
【０２００】
（実施例２）活性炭を用いる部分的精製による植物性原薬（ＢＤＳ）の安定性の検討
ＴＨＣ製剤に関する安定性試験の結果は、ＢＤＳの形態では、５℃という低い貯蔵温度でさえＴＨＣが不安定であることを示している。これは、冷たい周囲温度で２年の貯蔵期間が認められているＭａｒｉｎｏｌソフトゲルカプセル剤中の精製ＴＨＣ（Ｄｒｏｎａｂｉｎｏｌ  ＵＳＰ）の挙動とは対照的である。また、注目すべきことに、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈにより供給されるＴＨＣのメタノール標準溶液の貯蔵期間は、冷蔵保存され、遮光された場合に４年であると言われている。
【０２０１】
このＢＤＳ（ＴＨＣ）と精製ＴＨＣ間の安定性の明らかな差異は、ＢＤＳのある成分が主要なカンナビノイドを不安定化しているという推測を促した。
【０２０２】
この問題の解決法は、ＢＤＳ（ＴＨＣ）を精製し、高純度、好ましくは結晶性のカンナビノイドを得ることであろう。しかしながら、ＢＤＳの純粋なカンナビノイドへの変換に掛かる余分な処理コストのために、カンナビノイドを組み入れる最終医薬品のコストが実質的に増大しよう。
【０２０３】
したがって、出願人は、安定性を増したＢＤＳを生成するが、処理コストを法外に増大させない簡単な精製ステップを開発しようとした。
【０２０４】
出願人は、活性炭精製ステップを、「ｗｉｎｔｅｒｉｓａｔｉｏｎ」プロセスと密接に結び付けて、エタノール性ｗｉｎｔｅｒｉｓａｔｉｏｎ溶液をフィルタベッドに通し、沈殿したろうを除去し、次いで活性炭カラムに直接通すことにより単一ステップで行うことができ、活性炭の使用で貯蔵期間を有意に改善すると判断した。
【０２０５】
実験の詳細
濃度１００ｍｇ／ｍｌのＢＤＳ（ＴＨＣ）あるいはＢＤＳ（ＣＢＤ）の無水エタノールＢＰ溶液を、活性炭を詰めたカラムに通し、溶出液を集めた。次いで、それらを無水エタノールでさらに希釈し、約２５ｍｇ／ｍｌのカンナビノイド濃度を得た。次いで、１０ｍｌのＡＸ１型（すなわち、琥珀色ガラス）バイアルに溶液を移し、クリンプシールをした。これらのサンプルを活性炭精製ＢＤＳと名付けた。
【０２０６】
活性炭カラムに通さなかったＢＤＳ（ＴＨＣ）およびＢＤＳ（ＣＢＤ）溶液のサンプルを同様に希釈して２５ｍｇ／ｍｌのカンナビノイド濃度とし、同型の琥珀色ガラスバイアル中に密封した。これらのサンプルは、「標準ＢＤＳ」と名付け、安定性試験の対照として用いた。
【０２０７】
各タイプの標準ＢＤＳおよび活性炭精製ＢＤＳを含むバイアルを４０℃において安定性インキュベータ中に保存し、次いで、カンナビノイド含量ＨＰＬＣの分析およびＴＬＣプロファイリングのために１〜１２カ月間にわたって定期的にサンプルを採取した。
【０２０８】
順相ＴＬＣ分析は、以下の条件を用いた：
固定相：Ｓｉｌｉｃａ  Ｇｅｌ  Ｇ
移動相：８０：２０  ヘキサン／アセトン
展開：２×８ｃｍすなわち二重展開
可視化：０．１％ｗ／ｖＦａｓｔ  Ｂｌｕｅ  Ｂ（水溶液）に浸漬する
【０２０９】
逆相ＴＬＣ分析は、以下の条件を用いた：
固定相：Ｃ１８被覆Ｓｉｌｉｃａ  Ｇｅｌ
移動相：６：７：１６  ０．２５％ｖ／ｖ酢酸（水溶液）／メタノール／アセトニトリル
展開：２×８ｃｍすなわち二重展開
可視化：０．１％ｗ／ｖＦａｓｔ  Ｂｌｕｅ  Ｂ（水溶液）に浸漬する
【０２１０】
各サンプルについて、約５μｇの全カンナビノイドを含有する容積の溶液をＴＬＣプレートにアプライした。
【０２１１】
結果および考察
標準ＢＤＳ（ＴＨＣ）および標準ＢＤＳ（ＣＢＤ）のエタノール溶液は、かなり濃い黄色である。ＢＤＳ溶液を活性炭に通すと、おそらく液体ＣＯ２抽出による大麻薬草からのＢＤＳの調製中にカンナビノイドと同時に抽出される植物色素が吸着されることにより、効果的に溶液が脱色された。
【０２１２】
様々なＢＤＳ溶液のＨＰＬＣ分析結果を表１２として以下に示し、グラフとしても示す（図１〜３）。全データをｔ０アッセイの％として報告する。ＣＢＮの値は、以前の安定性試験においてＴＨＣの熱分解の目印としてこの化合物が同定されているため、ＢＤＳ（ＴＨＣ）溶液に含まれる。
【０２１３】
【表１２】
2010248227.tif 000020
【０２１４】
上記のデータから、活性炭により除去することができ、カンナビノイドを不安定化しているバラストのある成分がＢＤＳ（ＴＨＣ）とＢＤＳ（ＣＢＤ）の双方に存在することは極めて明白である。
【０２１５】
標準ＢＤＳおよび対応する活性炭精製ＢＤＳについて４０℃において１２カ月後に到達する分解のレベルを比較すると、ＴＨＣとＣＢＤ抽出物の双方にとって、活性炭精製は、熱分解に対する抵抗性を５０％より大きく増大させることを示している。
【０２１６】
ＢＤＳ（ＴＨＣ）の場合、ＣＢＮのレベルは、失われた主要なカンナビノイドの関数として増加するように見える（図３）。ＴＨＣを含有する他の製剤について観察されるように、ＣＢＮのレベルは、熱分解の目印となることが確認される。
【０２１７】
４０℃において１２カ月後の標準ＢＤＳ（ＣＢＤ）と精製ＢＤＳ（ＣＢＤ）サンプルそれぞれのＨＰＬＣクロマトグラムのカンナビノイド領域の比較（データ省略）は、有意な情報を示さなかった。しかしながら、分解後の標準と精製ＢＤＳ（ＴＨＣ）のＨＰＬＣクロマトグラムの同様の比較は参考になった。
【０２１８】
ＣＢＮは、より高度に分解された未精製標準ＢＤＳではより高いレベルにあったが、第２の有意な分解生成物も観察され、その生成物はこの場合にも両サンプルに存在するがより分解されたサンプルでより多かった。この場合も、この分解生成物のスペクトルは、ＣＢＮのスペクトルと基本的に一致し、このことと保持時間に基づき、ＣＢＮ類似体の一つであるように見えた。
【０２１９】
結論
簡単な活性炭処理により、耐熱分解性の有意な改善が得られる。
【０２２０】
（実施例３）  カンナビス植物材料のＣＯ２抽出に対する有機調整剤の添加の影響
下記の実施例は、液体ＣＯ２抽出を用いてカンナビス植物材料（Ｇ５化学型）から製造される抽出物の特性に対する極性共溶媒の添加の影響に対する検討について記載し、超臨界ＣＯ２抽出と対比して亜臨界ＣＯ２抽出を用いて得られる選択性の差異について説明する。
【０２２１】
実験の詳細
抽出実験は、１リットル容量のＣＯ２抽出装置を用いて行った。食品グレードのＣＯ２およびＢＰグレードの無水エタノールを溶媒として用いた。
【０２２２】
Ｇ５カンナビス（高ＣＢＤ化学型）のバッチを使用した。ＣＢＤ含量は、脱炭酸後に７．３％ｗ／ｗであった。抽出物のカンナビノイド含量の分析は、ＨＰＬＣにより行った。
【０２２３】
結果および考察
特定の条件下で４時間の抽出時間後に得られる最終抽出物の組成に関するデータを以下の表１３に示す：
【０２２４】
【表１３】
2010248227.tif 000021
【０２２５】
回収効率は、各抽出について容器に充填された脱炭酸植物材料において利用可能なＣＢＤに基づいている。
【０２２６】
結果は、亜臨界から超臨界への抽出条件の変更がＣＯ２の溶媒和力を高め、利用可能なＣＢＤの高い回収率をもたらすことを示している。しかしながら、超臨界ＣＯ２は、より広範囲の化合物を可溶化することがあり、これらの付加的化合物の抽出は、亜臨界抽出の場合に得られるよりも低くなるまで抽出物中のＣＢＤの濃度を希釈する効果を有する。その結果、原材料からの利用可能なＣＢＤのわずかな上乗せ回収は、この不利益を上回ることはなく、超臨界条件の使用が望ましくないことを示している。
【０２２７】
超臨界ＣＯ２に調整剤として２％ｗ／ｗの無水エタノールを添加すると、利用可能なＣＢＤの回収率は９０％を超えるまで上昇する。おそらく、比較的極性のカンナビノイドは、抽出物の極性が高いほどその中の溶解量が増す。
【０２２８】
興味深いことに、抽出物中のＣＢＤの濃度は、極性調整剤の添加によりわずかに増加した。このことは、植物材料中に存在する同時抽出可能な非カンナビノイド材料が、標的カンナビノイドより極性が低いため、極性を高めた場合、この材料（「バラスト」）の抽出が選択解除されることを示しているように見える。したがって、超臨界ＣＯ２＋２％ｗ／ｗエタノールによる大麻植物材料の抽出は、選択性を失うという不利益を伴わずに、標的活性の回収量を増加させる。
【０２２９】
要約すれば：
１．亜臨界条件から超臨界条件への変更は、原材料からのカンナビノイドの総回収率という点でほとんど利点を生じないが、抽出物の活性含量を減らすという不利益をもたらす。
【０２３０】
２．超臨界ＣＯ２への２％無水エタノール調整剤の添加は、同時抽出される材料による活性含量の希釈という不利益もなく、原材料からのカンナビノイドの回収率に有意な改善をもたらす。
【図１】
2010248227.tif 000022
【図２】
2010248227.tif 000023
【図３】
2010248227.tif 000024
【手続補正書】
【提出日】平成22年7月1日(2010.7.1)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
全カンナビノイド含量の少なくとも９０％ｗ／ｗのカンナビジオール（ＣＢＤ）含量を有する高ＣＢＤ含有カンナビス植物由来の植物性原材料から得られる植物性原薬であって、前記植物性原薬が、抽出物の少なくとも５０％ｗ／ｗのＣＢＤ、ＣＢＤ含量の％ｗ／ｗとしてテトラヒドロカンナビノール（ＴＨＣ）を７．５％以下、およびＣＢＤ含量の％ｗ／ｗとしてカンナビノール（ＣＢＮ）、カンナビジオール酸（ＣＢＤＡ）およびテトラヒドロカンナビノール酸（ＴＨＣＡ）を含むカンナビノイドを５％以下含む、高ＣＢＤカンナビス植物由来の抽出物である、植物性原薬。
【請求項２】
全カンナビノイド含量の少なくとも９０％ｗ／ｗのカンナビジオール（ＣＢＤ）含量を有する高ＣＢＤ含有カンナビス植物由来の植物性原材料から得られる植物性原薬であって、前記植物性原薬が、抽出物の少なくとも５０％ｗ／ｗのＣＢＤ、ＣＢＤ含量の％ｗ／ｗとしてテトラヒドロカンナビノール（ＴＨＣ）を７．５％以下、およびＣＢＤ含量の％ｗ／ｗとしてカンナビノール（ＣＢＮ）、カンナビジオール酸（ＣＢＤＡ）およびテトラヒドロカンナビノール酸（ＴＨＣＡ）を含むカンナビノイドを５％以下含む、高ＣＢＤカンナビス植物由来の抽出物である、植物性原薬と
全カンナビノイド含量の少なくとも９０％ｗ／ｗのＴＨＣ含量を有する高ＴＨＣ含有カンナビス植物由来の植物性原材料から得られる植物性原薬であって、前記植物性原薬が、抽出物の少なくとも５０％ｗ／ｗのＴＨＣ、ＴＨＣ含量の％ｗ／ｗとしてＣＢＤを５％以下、およびＴＨＣ含量の％ｗ／ｗとしてカンナビノール（ＣＢＮ）、カンナビジオール酸（ＣＢＤＡ）およびテトラヒドロカンナビノール酸（ＴＨＣＡ）を含むカンナビノイドを５％以下含む、高ＴＨＣカンナビス植物由来の抽出物である、植物性原薬とを
混ぜることによって得られる植物性原薬。
【請求項３】
非カンナビノイド成分としてテルペンをさらに含む、請求項１または２に記載の植物性原薬。
【請求項４】
炭化水素およびトリグリセリドろうを含まない、請求項１〜３のいずれか一項に記載の植物性原薬。
【請求項５】
植物色素を含まない、請求項１〜４のいずれか一項に記載の植物性原薬。
【請求項６】
アフラトキシンを４ｐｐｂ以下含む、請求項１〜５のいずれか一項に記載の植物性原薬。
【請求項７】
全重金属を２０ｐｐｍ以下含む、請求項１〜５のいずれか一項に記載の植物性原薬。
【請求項８】
残留溶媒を１５％ｗ／ｗ以下含む、請求項１〜５のいずれか一項に記載の植物性原薬。
【請求項９】
残留溶媒がエタノールである、請求項８に記載の植物性原薬。
【請求項１０】
１０５ｃｆｕ／ｇ以下の全生菌数（ＴＶＣ）、１０４ｃｆｕ／ｇ以下の真菌、１０３ｃｆｕ／ｇ以下の腸内細菌および他の非グラム陰性微生物を含み、大腸菌、サルモネラ菌および黄色ブドウ球菌は検出されない、請求項１〜９のいずれか一項に記載の植物性原薬。