(57)【要約】【課題】電気泳動分離のために有用な毛細管を含む物品の内面のような固体面であって、表面に沿って流れる溶質との相互作用を著しく減少させる固体面を提供すること。【解決手段】たとえば電気泳動分離中のような場合において、溶質との区別を行うために有用な物品を提供する。物品の一実施例は毛細管チューブであり、毛細管チューブの内壁に沿ってポリマーを担持する。ポリマーは、望ましくない相互作用を減少させるために有効であり、好ましくは、表面が溶質にさらされる前に表面に吸着されるポリラクタムを含む。好ましいポリラクタムは、約１，０００，０００ダルトン（重量平均）より大である分子量を有するポリビニルピロリドンである。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
明細書に記載の発明。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（発明の属する技術分野）
本発明は、一般に、流れる溶質に有効にさらされる固体面に関し、特に、物品が電気泳動分離に用いられるとき電気浸透流を減少させるために有効な、表面に吸着されるポリマーを有する毛細管又はマイクロチップのような物品に関する。
【背景技術】
【０００２】
（従来の技術）
電気泳動は、電界の影響下での移動速度の違いを用いることによって荷電種を分離するためのよく知られた方法である。毛細管電気泳動に関係づけられた利点は多くある。定量的な情報が非常に小さな試料の大きさで達成され、消費されたゲル又は緩衝液の総量が非常に小さい。毛細管電気泳動は、伝統的なスラブゲル電気泳動においては生じないある現象に関係づけられている。その１つの現象は、現在よく知られた、一方の電極への緩衝液の総体流によって特徴づけられた電気浸透流現象である。
【０００３】
多くの電気泳動の適用において、電気浸透流は望ましくなく、総体流を除去する又は実質的に減少させることが好ましい。一般に、電気浸透流を最小にまで減少させたとき、電気泳動の試料成分は電気泳動の移動によってのみ移動し、分析の再現性及び試料成分の大量回収を向上させる。
【０００４】
ジョーゼンソン（Ｊｏｒｇｅｎｓｏｎ）及びルカス（Ｌｕｋａｃｓ）は、チトクローム，リゾチーム及びリボヌクレアーゼＡのようなモデル蛋白質の分離はｐＨ７のリン酸緩衝液を有する未処理の融解シリカの毛細管において強いテーリング（ｔａｉｌｉｎｇ）を伴うことを言及し、これは正荷電の蛋白質と負荷電の毛細管とのクーロン相互作用によって引き起こされると提案している（ジョーゼンソン他、「科学」（Ｓｃｉｅｎｃｅ）、第２２２号、１９８３年、第２６６頁から第２７２頁）。著者は、テフロン（登録商標）製の毛細管について調査したと報告し、この毛細管が蛋白質への著しい吸着性を示すことを発見した。彼らは、トリメチルシアン、オクタデシルシラン、アミノプロピルシラン及び架橋メチルセルロースのような明白には働かない基で、融解シリカの表面を失活させようと試みた。彼らはその後グリコール含有基を表面に結合させることに取り組んだ。
【０００５】
ラウエ（Ｌａｕｅｒ）及びマクマニジル（ＭｃＭａｎｉｇｉｌｌ）は、「分析化学」（Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）、第５８号、１９８６年、第１６６頁において、蛋白質とシリカ毛細管の毛細管壁との間のクーロン反発作用は、蛋白質の毛細管壁との吸着傾向に勝ると報告している。彼らは、それらの実効電荷を変えるために蛋白質の等電点（ｐＩ）に対する溶液のｐＨを変化させることによってモデル蛋白質（分子量が１３，０００から７７，０００まで変動する）の分離を論証した。しかし、この方法の欠点は、シリカはｐＨ７を越えると分解し始め、カラムの寿命を短くしかつ性能を低下させること、及び緩衝液のｐＨより小さいｐＩを有する蛋白質のみが分析されることである。
【０００６】
さらに、蛋白質の毛細管壁との望ましくない相互作用の問題に対する他の解決法は、イェルテン（Ｈｊｅｒｔｅｎ）を発明者とする１９８７年７月１４日発行の特許文献１に記載されており、電気泳動分離のための薄壁及び細穴の毛細管を準備する方法について、１つの基はガラス壁に明確に反応しかつ他の基は重合過程において貢献するモノマーに反応する二官能化合物の使用によって説明している。この遊離基の手順は、ポリアクリルアミド被覆のようなポリマー性被覆に帰着するものであり、ポリビニルアルコール及びポリビニルピロリドンのような他のポリマーを被覆することにおいて使用するために提案されている。
【０００７】
他の共有結合種は、その後において述べられている。シエー（Ｓｈｉｅｈ）を発明者とする１９９７年２月２５日発行の特許文献２において、内壁の表面に中性の架橋性の親水性被覆を有する毛細管カラムが開示され、検体の内面との相互作用を減少させると述べられている。被覆されたカラムは、内面に共有結合されたポリマーを含む。
【０００８】
カーガー（Ｋａｒｇｅｒ）他を発明者とする１９９８年１１月２４日発行の特許文献３において、高性能の電気泳動のための被覆されたマイクロ毛細管カラムが開示され、ポリマー性被覆層は、ポリビニルアルコールのような有機化合物をカラム面に重合させることによって形成されることが述べられている。スリニバサン（Ｓｒｉｎｉｖａｓａｎ）他を発明者とする１９９８年８月１１日発行の特許文献４において、ポリビニルピロリドン（「ＰＶＰ」）のようなポリマーを毛細管壁に共有結合させることによって毛細管を被覆する又はクロマトグラフィー充填する方法が開示されている。
【０００９】
電気浸透流を減少させるために化学結合（すなわち共有結合）を含む毛細管処理が機能を果たすが、処理過程は、相対的に時間を消費しかつ高価であり、毛細管カラムの内部に相対的に厚い被覆を創成する傾向を有する。毛細管電気泳動に用いられる毛細管カラムは、一般に、約２５μｍないし約２００μｍの範囲の内径を有するある長さのシリカ管で製造され、共有結合による被覆は、電気泳動分離を達成するための時間を著しく増加させる可能性がある。
マダブシ（Ｍａｄａｂｈｕｓｈｉ）他を発明者とする１９９６年９月３日発行の米国特許第５，５５２，０２８号において、分離媒体の１つの成分がシリカ吸着ポリマーを含むポリヌクレオチドの分離のための組成物が開示されている。また、マダブシ（Ｍａｄａｂｈｕｓｈｉ）他を発明者とする１９９６年１０月２２日発行の特許文献５において、約０．００１％と約１０％ｗｔ．／ｖ．（重量対容量百分率）との間の範囲における分離媒体の濃度においてシリカ吸着ポリマーを含む分離媒体が供給される電気浸透流を抑圧する方法が開示されている。これらの２つのマダブシ他の特許において、表面電荷を覆うように分離中に被覆するために溶離剤又は分離媒体それ自体が添加物を含む直接被覆タイプの方法が開示されている。しかし、これらの添加物はある予期しないかつ望ましくない結果に導く検体と相互作用し、最適化は、ある特定の分離マトリックスの使用に限定される傾向を有する。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１０】
【特許文献１】米国特許第４，６８０，２０１号明細書
【特許文献２】米国特許第５，６０５，６１３号明細書
【特許文献３】米国特許第５，８４０，３８８号明細書
【特許文献４】米国特許第５，７９２，３３１号明細書
【特許文献５】米国特許第５，５６７，２９２号明細書
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
本発明の目的は、電気泳動分離のために有用な毛細管を含む物品の内面のような固体面であって、表面に沿って流れる溶質との相互作用を著しく減少させる固体面を提供することであり、一方、本発明に係る表面の準備を、簡単で速く、さらに結果として長期安定性を呈して相対的に安価なものとさせることである。
【００１２】
さらに、本発明の目的及び利点は、本発明の属する技術の分野における通常の知識を有する者にとって、発明の詳細な説明及び特許請求の範囲ならびに添付図面からさらに明らかになろう。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明の一面において、電気泳動分離中において、たとえば蛋白質及びオリゴヌクレオチドのような荷電種を含む溶質の流れに物品がさらされるような場合において、溶質との区別を行うために有用な物品が提供される。本発明の特に好ましい物品は、毛細管として形成され、ＤＮＡ塩基配列決定分析、ＤＮＡ断片分析及びサイジング、蛋白質分離及び分析において有用である。本発明に係る物品は、ポリマーを担持する固体面を有する。ポリマーは、表面に吸着され、表面との相互作用を減少させるために機能を果たす。吸着されるポリマーは、好ましくはポリラクタム、さらに好ましくはポリビニルピロリドン又はＰＶＰであり、好ましくは分離媒体の導入前に毛細管の内壁に吸着させることによって簡単にかつすばやく被覆される、約１，０００，０００ダルトン（重量平均）より大である分子量を有することである。
本発明は、例えば以下の項目を提供する。
（項目１）  区別又は分離のために溶質の流れに有効にさらされる物品であって、
ポリマーを担持する固体面を含み、前記ポリマーは前記溶質が前記固体面を流れるとき前記固体面と前記溶質との間の相互作用を減少させるために有効であり、前記ポリマーは前記固体面が前記溶質にさらされる前に前記固体面に吸着される、物品。
（項目２）  前記物品は毛細管チューブとして形成され、前記固体面は前記毛細管チューブの内壁である、項目１に記載の物品。
（項目３）  前記減じられた相互作用が溶質の毛細管分離の間に電気浸透流を減少させる、項目２に記載の物品。
（項目４）  前記ポリマーは実質的にポリビニルピロリドンからなる、請求項２に記載の物品。
（項目５）  前記物品は毛細管であり、前記固体面は前記毛細管の内部の穴を規定する、項目１に記載の物品。
（項目６）  前記物品はマイクロチップとして形成され、複数のマイクロチャンネルが前記マイクロチップに担持され又は前記マイクロチップによって形成され、前記ポリマーは前記マイクロチップに吸着される、項目１に記載の物品。
（項目７）  試料成分の電気泳動分離のために有用な毛細管カラムであって、
内面を有するある長さの管を含み、前記内面は吸着されたポリマー性被覆を有しかつ前記試料成分の毛細管分離の間に試料中の電気浸透流を減少させ、前記ポリマー性被覆は重量平均分子量が約１，０００，０００ダルトンより大であるポリラクタムを含む、毛細管カラム。
（項目８）  前記ポリラクタムはポリビニルピロリドンを含む、項目７に記載のカラム。
（項目９）  貯蔵ゲルを含む、項目８に記載のカラム。
（項目１０）  溶質の毛細管分離の間に電気浸透を減少させる方法であって、
ポリラクタムを前記毛細管の内壁に吸着させるステップと、
前記溶質を前記毛細管を経て流すステップとを含む、方法。
（項目１１）  前記ポリラクタムはポリビニルピロリドンを含み、前記吸着させるステップは、前記毛細管の内壁を少なくとも約１２％ｗ／ｖのポリビニルピロリドンを有する組成物にさらすことを含む、項目１０に記載の方法。
（項目１２）  前記ポリビニルピロリドンは約１２％ないし約２０％ｗ／ｖの範囲にある、項目１１に記載の方法。
（項目１３）  前記ポリビニルピロリドンは少なくとも約１，０００，０００ダルトンの重量平均分子量を有する、項目１１に記載の方法。
（項目１４）  前記組成物は、２５℃で約３０００ｃＰより大である粘度を有する約２０％ｗ／ｖの濃度を有する、項目１１に記載の方法。
（項目１５）  前記溶質は生体分子を含む、項目１０に記載の方法。
（項目１６）  前記溶質はポリヌクレオチドを含む、項目１０に記載の方法。
（項目１７）  前記さらすステップは約２時間より長い、項目１１に記載の方法。
（項目１８）  貫通して伸びる内部の穴を有する毛細管を供給するステップと、
前記穴を、少なくとも約１２％ｗ／ｖのポリビニルピロリドンを含むポリビニルピロリドン組成物で満たすステップと、
電気浸透流を減少させるために十分な時間において前記組成物からのポリビニルピロリドンを前記穴に吸着させるステップと、
吸着されたポリビニルピロリドンを放置する間に前記ポリビニルピロリドン組成物を除去するステップとを含む、電気泳動において毛細管カラムを有用にする方法。
（項目１９）  前記ポリビニルピロリドンは少なくとも約１，０００，０００ダルトンの重量平均分子量を有する、項目１８に記載の方法。
（項目２０）  前記吸着するステップは、少なくとも約２時間において前記穴を前記ポリビニルピロリドン組成物にさらすことによって行う、項目１８に記載の方法。
（項目２１）  前記ポリビニルピロリドン組成物を除去するステップは、線状ポリアクリルアミドを押し出し、線状ポリアクリルアミドと交換することを含む、項目１８に記載の方法。
（項目２２）  前記ポリビニルピロリドンは置換されたポリビニルピロリドンである、項目１８に記載の方法。
（項目２３）  前記毛細管の穴はシリカで規定されている、項目１８に記載の方法。
（項目２４）  前記ポリビニルピロリドン組成物は、２５℃で約３０００ｃＰより大である粘度で約２０％ｗ／ｖの濃度を有する、項目１８に記載の方法。
（項目２５）  基板に担持され又は基板に形成された複数のマイクロチャンネルを有する基板を供給するステップと、
前記マイクロチャンネルを、重量平均分子量が約１，０００，０００ダルトンより大であるポリラクタムを含むポリマー組成物で満たすステップと、
前記基板の使用の間において電気浸透流を減少させるためにポリマー性のポリラクタムを前記マイクロチャンネルに吸着させるステップとを含む、電気泳動分離のために有用な小型化装置を製作する方法。
【００１４】
本発明によって処理された表面は、減じられた電気浸透流を有しており、電気浸透流を最小又は除去することが望ましい実質的にすべての毛細管電気泳動分離に用いられる。本発明の表面は、ＤＮＡ塩基配列決定分析、ＤＮＡ断片分析及びサイジング、蛋白質分離及び分析のような応用のための、米国カリフォルニア州フラトン（Ｆｕｌｌｅｒｔｏｎ）のベックマン・コールター社（Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ，  Ｉｎｃ．）によって製造及び販売されているＣＥＱ２０００、Ｐ／ＡＣＥ・ＭＤＱ、パラゴン（Ｐａｒａｇｏｎ）ＣＺＥ１０００という装置のような電気泳動分離装置における被覆された毛細管カラムとして特に有用である。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】未被覆（従来技術）の毛細管のための電気浸透流と本発明の実施例とを、ｐＨを電気浸透流に対してプロットして比較した図。
【図２】（Ａ）は、ＤＮＡ分離に用いられたときの未被覆（従来技術）の毛細管を示す図。（Ｂ）は、本発明の実施例によるＤＮＡシーケンサ分離のエレクトロフェログラムを示す図。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
（発明の実施の形態）
本発明の好ましい一実施例において、融解シリカで作られた毛細管は、ポリマー、好ましくはポリラクタムを内穴に吸着することによって処理される。個々の分析の適用に応じて、処理される管は長さ及び直径を変化させることができる。シリカとは別の材料で作られた物品は本発明によって適切に扱われる。
本発明の好ましい他の実施例において、マイクロチップのような小型化装置によって形成された又は小型化装置に担持されたマイクロチャンネルは、ポリマーをチャンネルに吸着させることによって処理される。マイクロチップは、マイクロ分析装置において有用である。たとえば、１９９９年２月２２日の「化学と工学の情報」（Ｃｈｅｍｉｃａｌ  ＆  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  Ｎｅｗｓ）の論説において、小型化化学装置のために用いられる一般的なマイクロチップは、２又は３ｃｍの方形のシリコン、ガラス、石英又はプラスチックが５０μｍ程度に小さい断面を有するチャンバ又はチャンネルでエッチング又は成形されると記載されている。小型化されたコンポーネントは、クロマトグラフィー及び電気泳動分離カラム、ポリマー化された連鎖反応槽、ポンプ及び弁その他同種のもので、すべてｃｍのサイズの大きさのマイクロチップで使用するためである。
【００１７】
管又は小型化チャンネルのようなカラムは、約５ｃｍから約２０００ｃｍの長さ及び約５μｍ約２００μｍの内径（チャンネルを用いるときには幅となる）を有し、小型化装置において記載したが、チップはより典型的には約２又は３ｃｍ２である。
【００１８】
毛細管カラム及びマイクロチップのマイクロチャンネルは、試料成分の電気泳動分離のために有用であるが、生体分子（たとえば蛋白質及びオリゴヌクレオチド）のような特定の成分は特定の好ましい実施例であり、使用において区別のために溶質の流れにさらされる、たとえばビーズ及び他のクロマトグラフィー充填材料のような他の物品は、本発明によって被覆される。
【００１９】
毛細管電気泳動を行うための装置はよく知られており、本発明により被覆された毛細管カラムの特に熟考された使用は、ＤＮＡ塩基配列決定分析、ＤＮＡ断片分析及びサイジング、蛋白質分離及び分析のような応用のための、米国カリフォルニア州フラトンのベックマン・コールター社によって製造及び販売されているＣＥＱ２０００、Ｐ／ＡＣＥ・ＭＤＱ及びパラゴンＣＺＥ１０００という装置のような電気泳動分離装置においてなされる。
【００２０】
本発明によれば、表面又は毛細管のような物品の内面との相互作用を減少させるために有効であるポリマーが、表面に吸着される。本発明によるポリマーは、好ましくは、試料中における成分の電気泳動分離を達成するように、表面を通り過ぎて（たとえばカラムを経て）流されようとする試料に表面がさらされる前に表面に吸着されるポリラクタムである。適切なポリラクタムは、ＰＶＰ及び置換されたＰＶＰ（環上に置換基を有するような）を含む。特に、物品に吸着されるポリマーは、好ましくは約１，０００，０００ダルトン、さらに好ましくは約１，３００，０００ダルトンより大である分子量（重量平均）を有するポリビニルピロリドン又は「ＰＶＰ」から実質的になる。上方の範囲は、著しく変化することが可能である。実際問題として、通常、１，３００，０００と４，０００，０００との間の範囲の分子を有するポリマーを用いる。
【００２１】
ポリマーのシリカ吸着の品質は、エリプソメトリ、吸着性試験粒子の流体力学的性質における変化を決定すること、吸着等温式の決定又は類似の方法のような多くのよく知られた方法において測定することができる。そのような方法は、マルムステン（Ｍａｌｍｓｔｅｎ）他による「高分子」第２５号の第２４７４頁から第２４８１頁（１９９２年）、ロッド（Ｒｏｂ）及びスミス（Ｓｍｉｔｈ）による「欧州ポリマージャーナル」（Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｐｏｌｙｍｅｒ  Ｊ．）第１０号の第１００５頁から第１０１０頁（１９７４年）、ビンセント（Ｖｉｎｃｅｎｔ）他による「表面コロイド科学」（Ｓｕｒｆ．  Ｃｏｌｌｏｉｄ  Ｓｃｉ．）第１２号の第１頁から第１１７頁（１９８２年）、高橋他による「ポリマー科学における進歩」（Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｐｏｌｙｍｅｒｓ  Ｓｃｉｅｎｃｅ）第４６号の第１頁から第６５頁（１９８２年）及び同様の文献に記載されている。吸着の程度は、１組の標準値のもとで電気浸透流の減少を観察することによって間接的に測定することもできる。
【００２２】
ポリヌクレオチドの分離のために、吸着されたポリラクタムは、好ましくは、標準の組の条件のもとで、分解能とポリヌクレオチドの所定の「梯子」（ｌａｄｄｅｒ）のためのポリヌクレオチドの長さとの間の相関によって特徴づけられる。分解能は、試験装置の理論段数Ｎによって便宜的に表現される。Ｎ＝（Ｌ／Δ）２と表され、ここで、Ｌは、噴射ノズルから検出器までのピーク（通常ピーク最大の位置）のもとでの試験検体の平均経路長であり、矢印Δはピークの分散を示す。
【００２３】
前記した大きさの範囲内における異なる大きさのポリヌクレオチドの典型的な梯子は、たとえば、ＢＲＬ−ＧＩＢＣＯからの１００の塩基対の二本鎖ＤＮＡ梯子、応用生物装置社（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，  Ｉｎｃ．）からのＴａｑ・ＤＮＡ塩基配列決定標準、ベックマン・コールター社からのＣＥＱ・ＤＮＡ試験試料又は同様のような商業上入手可能な一式において利用できる。
【００２４】
吸着されたポリラクタムを有する本発明の物品が貯蔵ゲルにおける使用のために準備されるまで好ましく保管されることを発見した。特に好ましい貯蔵ゲルは、ゲル化成分として線状ポリアクリルアミドを用い（貯蔵ゲルとして用いられる他のゲルは確かに実行可能であるが）、特に、１００ｍＭタプス（Ｔａｐｓ）、２０ｍＭトリス（Ｔｒｉｓ）及び１ｍＭエディタ（ＥＤＴＡ）からなる緩衝液において、２，０００，０００から１０，０００，０００までの重量平均分子量を有するポリアクリルアミドの３％ｗ／ｖ（重量対容量百分率）を分解することによって準備されることができる。使用の前に、貯蔵ゲルは、特定用途の理由として、取り除く又は取り除かれない。ゲルのｐＨは、約７．８である。好適なＰＶＰのようなポリラクタムは、緩衝液において好ましく分解される（これを「再構成緩衝液」と呼ぶ）。この好ましい再構成緩衝液は、１００ｍＭタプス（Ｔａｐｓ）、２０ｍＭトリス（Ｔｒｉｓ）及び１ｍＭエディタ（ＥＤＴＡ）から準備される。緩衝液のｐＨは、約８．２である。
【００２５】
概括的に、溶液を処理するポリラクタムは、適切なゲル緩衝液において所定のポリマー（好ましくは１２ないし２０％ｗ／ｖの範囲において）を分解することによって準備される。結果として生じるポリマー溶液は、処理される毛細管にその後注入され、十分な時間、典型的には少なくとも約２時間、さらに好ましくは１２時間又は一夜の間毛細管内にとどまるようにさせられ、適切な貯蔵ゲル又は毛細管電気泳動装置に用いられる特定のゲルに置き換えられる。処理するポリマー溶液の粘度の値は、好ましい有用なポリマーの分子量が約１，０００，０００又はそれより大であるので、相対的に高い傾向にある。
【００２６】
毛細管の実施例のような本発明の物品を作ることにおいて、さらすステップ後の未吸着ＰＶＰを、貯蔵ゲルとして記載した線状ポリアクリルアミドのような顕著に高い粘度を有するゲルで押し出すことは好ましいと考える。押し出す処理は、未吸着ＰＶＰをポリアクリルアミド・ゲルと機械的に置き換えることによって行われる。この「押し出すこと」は、本発明を実施する好ましい方法であり、よりよい被覆を提供すると考えられる。
【００２７】
例１は、特に好ましい実施例の準備について示す。
【００２８】
例１
前切断の未被覆の融解シリカの毛細管は、機械式ポンプを用いて約５分間溶液を毛細管より押し出すことによって、ＰＶＰ被覆溶液で満たされた。ＰＶＰ被覆溶液は以下のように準備された。
【００２９】
２０％（ｗ／ｖ）の濃度における１，３００，０００の分子量を有し、２５℃で３，２４０ｃＰの粘度を有するＰＶＰポリマーは、緩衝液が５分間毛細管を経て注入される再構成において分解させることによって準備され、その後、室温（２０ないし２５℃の範囲である。）で約１６時間毛細管内にとどまるようにした。被覆溶液は透明となり、全分解を示した。
【００３０】
前記した特に好ましい貯蔵ゲルは、その後、ＰＶＰ被覆溶液を置き換える（押し出す）ために用いられた。この代わりの貯蔵ゲルは、押し出され、使用の前に分離マトリックスによって置き換えられた（分離マトリックスは、ＤＮＡ断片を分離するために用いられた溶液である）。
【００３１】
例２
本発明により処理された毛細管の流れから流れへの（ｒｕｎ−ｔｏ−ｒｕｎ）安定性試験は、ＣＥＱ２０００のＤＮＡシーケンサを用いて行った。分離条件は、分離長５０ｃｍ（全長５２．８ｃｍ）で、４０℃で８．２ｋＶで１０５分間とした。試料は、ｐＵＣ−１８テンプレート（ｐＵＣ−１８  ｔｅｍｐｌａｔｅ）及びシアニン・ダイラベルド・ジデオキシ・ヌクレオチド・ターミネータ（ｃｙａｎｉｎｅ  ｄｙｅ−ｌａｂｅｌｅｄ  ｄｉｄｅｏｘｙ  ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  ｔｅｒｍｉｎａｔｏｒｓ）を用いて生成されたＤＮＡ塩基配列決定断片とした
。
【００３２】
表１
【表１】
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【００３３】
毛細管の実施例１、２は両方とも、例１に類似する方法で準備された。データに示されるように、両方の毛細管は優れた被覆安定性及び分離速度を示した。
【００３４】
例３
図１のデータは、未被覆の毛細管における電気浸透流に対するｐＨをプロットしたものであり、本発明の実施例のために、例１と類似する方法で準備された。電気浸透流の測定は、異なったｐＨを有する水溶液で毛細管を満たすことによって行った。図１に示すように、本発明により処理された毛細管は、電気浸透流を著しく減少させた。
【００３５】
実験は、ｐ／ＡＣＥ２２００の毛細管電気泳動装置（カリフォルニア州フラトンのベックマン・コールター社）を用いて行った。毛細管の大きさは、全長が２６ｃｍ、分離長が２０ｃｍ、内径が１００μｍ、外径が２００μｍとした。電気浸透流（以下「ＥＯＦ」という。）の印、水における１％（ｖ／ｖ）ＤＭＳＯは２ｋＶで１０秒間、電気運動現象として毛細管に注入され、８．１ｋＶでＥＯＦ測定のためにさらされた。印は、オンラインＵＶ検出器を用いて２１４ｎｍで検出された。
【００３６】
例４
図２（Ａ）に示すように、ベックマン・コールター社のＣＥＱ２０００ＤＮＡシーケンサを用いて、未被覆の毛細管がＤＮＡ分離に用いられたとき、未被覆の毛細管における強い電気浸透流はＤＮＡ分子が毛細管に入ることを妨げるので、ＤＮＡピークが観察されない。しかし、図２（Ｂ）において、本発明により処理された実施例（例１に類似する方法で準備された）が用いられたとき、ＤＮＡ塩基配列決定断片を用いて著しい検出信号が観察された。分離条件は、分離長５３．５ｃｍ（全長５６．３ｃｍ）を有し、４０℃で８．２ｋＶで１０５分間とした。試料は、ｐＵＣ１８テンプレート及びシアニン・ダイラベルド・ジジオキシヌクレオチド・ターミネータを用いて生成されたＤＮＡ塩基配列決定断片とした。
【００３７】
例５
本発明の本発明により被覆された毛細管は、各流れのために２時間の分離時間を有して２００の流れに至るためのＤＮＡ塩基配列決定の分離における使用による例示として、ｐＨ８．２で少なくとも４００時間に至るまでの長期安定性を証明した。表２は、安定性のデータを与える。
【００３８】
表２
ＣＥＱ２０００１でのダイラベルドｐＵＣ断片のＤＮＡ塩基配列決定分離のためのＰＶＰ被覆された毛細管アレイの長期安定性研究
【表２】
2010160162.tif 000004
注１  分離時間は１０４分であった。データ分析、ゲル充填及び光学的調整を含んで１流れの全周期時間は２時間であった。
注２  毛細管安定性の詳細は、５００個の塩基での塩基呼出精度の基準を経る流れの９５％以下である。
注３  ５００個の塩基での塩基呼出精度のための基準は９８％以下である。
【００３９】
例６
本発明による実施例の製造の間において、望むのであれば、物品は、以下の実験によって例示されるように再構成することができる。被覆された毛細管は、最初にＤＭＳＯで２時間すすがれ、次に被覆を剥ぐために１時間ＤＩ水ですすがれた。剥がされた毛細管の電気浸透流が試験され、結果は、毛細管が未被覆の毛細管のようにふるまうことを示した。毛細管は、その後、前記したＰＶＰ溶液で再被覆された。再被覆された毛細管は、電気浸透流の測定及びＤＮＡ分離が試験された。両方の結果は、再被覆された毛細管は新たに被覆された毛細管と同様にふるまうことを示した。
【００４０】
本発明による物品を再被覆又は再構成するこの能力は、物品を交換するのに相対的に高価であるとき、特に利点である。たとえば、前記した文献の小型化装置において、マイクロチップは、集積回路及び同様のような付加的機能を含むことができる。望んだときは、それらのマイクロチャンネル（すなわち被覆）は、全装置の交換に関して費用の著しい節約で本発明により構成し直すことができる。
【００４１】
上記のことから、本発明の具体的な実施例を図示の目的のために記載したが、本発明の精神及び範囲を逸脱することなく種々の変更が可能であることが理解される。
【図１】
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【図２】
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