(57)【要約】【課題】リン酸アルミニウムと配合されたＢ型肝炎抗原を含有する新規ワクチン製剤を提供する。【解決手段】本ワクチン製剤は、失活Ａ型肝炎ウィルス、水酸化アルミニウム、及びホルモルをさらに含有することができる。併合Ａ型肝炎及びＢ型肝炎ワクチン製剤は、所望により、２投薬養生法においてヒト患者に投与されることができる。好適な配合処方を説明する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
２投与スケジュールで青年又は子供に投与されるための免疫保護性Ａ型プラスＢ型肝炎製剤の製造のための、Ｂ型肝炎表面抗原；失活Ａ型肝炎ウィルス（ＨＡＶ）；及びホルモルを含み、かつ、Ｂ型肝炎表面抗原１μｇ当り０．０１５〜０．１mgのリン酸アルミニウム、及び１ml当り０．０５〜０．１０mgの水酸化アルミニウムがその中に存在する水性ワクチン組成物の使用。
【請求項２】
前記ホルモル濃度が１０〜２００μｇ／mlである、請求項１に記載の使用。
【請求項３】
ＨＡＶの濃度が７２０〜２，８８０ＥＵ／mlである、請求項２に記載の使用。
【請求項４】
１mlの投与量中、以下の：
２０μｇのＨＢｓＡｇ；
７２０ＥＵのＨＡＶ；
０．４mgのリン酸アルミニウム、及び０．０５mgの水酸化アルミニウムからなる０．４５mgのアルミニウム塩；及び
８０μｇのホルモル；
を含むか又はから成る、青年及び／又は子供への投与のための、請求項３に記載の使用。
【請求項５】
０．５mlの投与量中、以下の：
２０μｇのＨＢｓＡｇ；
７２０ＥＵのＨＡＶ；
０．４mgのリン酸アルミニウム、及び０．０５mgの水酸化アルミニウムからなる０．４５mgのアルミニウム塩；及び
８０μｇのホルモル；
を含むか又はから成る、青年及び／又は子供への投与のための、請求項３に記載の使用。
【請求項６】
前記Ｂ型肝炎表面抗原がＳ−抗原である、請求項１〜５のいずれか１項に記載の使用。
【請求項７】
前記Ａ型肝炎抗原がＨＭ−１７５株に由来する、請求項１〜６のいずれか１項に記載の使用。
【請求項８】
前記２投与が０ヶ月目と６ヶ月目に行われる、請求項１〜７のいずれか１項に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
Ａ型肝炎感染及びＢ型肝炎感染の診断用ワクチンは周知である。例えば、Smithkline Beecham BiologicalsからのワクチンＥｎｇｅｒｉｘ−Ｂ（商標）がＢ型肝炎を予防するために使用されている。このワクチンは、Ｂ型肝炎表面抗原（特に、Harford et al. in Postgraduate Medical Journal, 1987, 63 (Suppl. 2), 65-70中に記載された２２６アミノ酸のＳ−抗原）を含み、そしてアジュバントとして水酸化アルミニウムを使用して配合されている。同じくSmithkline Beecham Biologicalsからの、ワクチンＨａｖｒｉｘ（商標）は、Ａ型肝炎感染を予防するために使用されることができ、そしてまたアジュバントとしての水酸化アルミニウムと配合されている。このワクチンは、ホルモル（ホルムアルデヒド）で失活されたＨＭ−１７５  Ａ型肝炎ウィルスの減弱ウィルスを含む；Andre et al〔Prog Med. Virol. 1990, vol. 37 ; p 72-95 〕を参照のこと。上記Ａ型肝炎抗原とＢ型肝炎抗原の組合せであるワクチンＴｗｉｎｒｉｘ（商標）は、Ａ型肝炎とＢ型肝炎に対して同時に保護するために使用されることができる。
【０００２】
ヨーロッパ特許第０  ３３９  ６６７号（Chemo Sero）は、併合ワクチンを作るためにＡ型肝炎抗原とＢ型肝炎抗原を併合するという一般的概念について記載している。その明細書中には、使用されるアジュバントは決定的なものでなく：それは、その免疫活性を所望の程度まで高めることができ、そしていずれの副作用も引き起こさないということのみが必要とされるということが述べられている。アルミニウム・ゲル、特に水酸化アルミニウム・ゲルとリン酸アルミニウム・ゲルが使用されることができるということが述べられている。
【０００３】
ＰＣＴ出願ＷＯ９３／２４１４８（Smithkline Beecham）は、リン酸アルミニウムがアジュバントとして使用されているところの、Ｂ型肝炎表面抗原を含むワクチンの調製について記載している。場合によりＡ型肝炎抗原を含有することができる多価併合ワクチンが記載されている。ホルモルの使用は開示されていない。
【０００４】
ヨーロッパ特許第０  ６３３  ７８４号（Smithkline Beecham）は、リン酸アルミニウム及び３デ−Ｏ−アシル化モノホスホリル・リピドＡと併合されて、Ｂ型肝炎成分、特にＢ型肝炎表面抗原を含む新規ワクチン製剤について記載している。
【発明の概要】
【０００５】
今般、驚ろくべきことに、そのワクチンが特別のやり方で配合されるとき、Ｂ型肝炎抗原及び／又はＡ型肝炎抗原を含むワクチンが例外的に良好な結果を与えるということが発見された。
【０００６】
本願発明に係るワクチン製剤を使用することにより、３投薬よりもむしろ２投薬の養生法において、ワクチンを投与することができる。
本願発明の第１の態様においては、アジュバントとしてリン酸アルミニウムと配合されたＢ型肝炎表面抗原を含む水性ワクチン製剤であって、そのリン酸アルミニウムの濃度が、Ｂ型肝炎表面抗原１μｇ当り０．０１５〜０．１mgのリン酸アルミニウムの比が存在するように、選択されている、前記ワクチン製剤が提供される。
【０００７】
好ましくは、前記比は、ＨＢｓＡｇ  １μｇ当り、０．０２〜０．０８mgのリン酸アルミニウムの範囲内にある。
本願発明のさらなる側面においては、失活Ａ型肝炎ウィルス（ＨＡＶ）が、場合により、本願発明に係る配合物に添加されることができ、２投薬スケジュールにおいて投与されることができる併合Ａ型肝炎プラスＢ型肝炎ワクチンが提供される。
【０００８】
Ａ型肝炎抗原は、好ましくは、商業的製品Ｈａｖｒｉｘ（Smithkline Beecham Biologicals）中で使用されるＨＭ−１７５株である。
本願発明に係るワクチン製剤中のＡ型肝炎抗原の濃度は、好ましくは、約７２０〜２，８８０ＥＵ単位／mlである。ＥＵ単位の定義については、Andre et al (1990)上記引用文中、を参照のこと。
【０００９】
ＨＡＶを含む本願発明に係る組成物は、水酸化アルミニウムをさらに含み、ここで、水酸化アルミニウムの合計量は一般に０．０５〜０．１０mg／mlである。  ０．５又１ml投与量当りのアルミニウム塩の合計量は、通常、０．４〜１．０mgの範囲内にある。
本願発明に係るワクチン製剤においては、そのホルモル濃度が１０〜２００μｇ／mlであるように、ホルモル（ホルムアルデヒド）を添加することが有利である。
【００１０】
好ましくは、前記ホルモル濃度は約２０〜１６０μｇ／mlである。
通常、Ｂ型肝炎抗原はＢ型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）であろう。Ｂ型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）の調製は、よく文書化されている。例えば、Harford et al in Develop. Biol. Standard, 54, page 125 (1983), Gregg et al in Biotechnology, 5, page 479 (1987), ＥＰ−Ａ−０  ２２６  ８４６，ＥＰ−Ａ−０  ２９９  １０８、及びそれらの中の引用文献を参照のこと。
【００１１】
本願明細書中に使用するとき、“Ｂ型肝炎表面抗原”又は“ＨＢｓＡｇ”は、ＨＢＶ表面抗原の抗原性を示すいずれかのＨＢｓＡｇ抗原又はその断片を含む。ＨＢｓＡｇ  Ｓ抗原の２２６アミノ酸配列（例えば、Tiollais et al, Nature, 317, 489 (1985）及びその中の引用文献を参照のこと）に加えて、本明細書中に記載するＨＢｓＡｇは、所望により、上記文献及びＥＰ−Ａ−０  ２７８  ９４０中に記載されているようなプレ−Ｓ配列の全部又は一部を含むことが理解されるであろう。本明細書中に記載するときＨＢｓＡｇは、変異体（variants）、例えば、ＷＯ９１／１４７０３中に記載される“エスケープ突然変異体（escape mutant)”をいうこともできる。さらなる局面においては、ＨＢｓＡｇは、ヨーロッパ特許出願第０  ４１４  ３７４号中にＳＬ＊ として記載されたタンパク質、すなわち、そのアミノ酸配列が、Ｂ型肝炎ウィルスのラージ（Ｌ）タンパク質（ａｄ又はａｙサブタイプ）のアミノ酸配列の一部から成るタンパク質であって、そのタンパク質のアミノ酸配列が、以下の：
（ａ）上記Ｌタンパク質の、残基１２〜５２、それに続く残基１３３〜１４５、それに続く残基１７５〜４００；又は
（ｂ）上記Ｌタンパク質の、残基１２、それに続く残基１４〜５２、それに続く残基１３３〜１４５、それに続く残基１７５〜４００、
のいずれかから成ることを特徴とする、前記タンパク質を含む。
【００１２】
ＨＢｓＡｇは、ＥＰ  ０  １９８  ４７４又はＥＰ  ０  ３０４  ５７８中に記載されているポリペプチドを指すこともできる。
通常、上記ＨＢｓＡｇは粒子形態であろう。それは、Ｓタンパク質を単独で含むこともできるし、又は複合粒子、例えば、（Ｌ＊ ，Ｓ）｛ここで、Ｌ＊ は先に定義した通りであり、そしてＳはＢ型肝炎表面抗原のＳ−タンパク質を表す。｝として存在することもできる。
【００１３】
好ましくは、前記ＨＢｓＡｇは、ＷＯ９３／２４１４８中に記載されているようにリン酸アルミニウム上に吸着されるであろう。
好ましくは、前記Ｂ型肝炎抗原は、商業的製品Ｅｎｇｅｒｉｘ−Ｂ（Smithkline Beecham Biologicals）中で使用されているようなＨＢｓＡｇ  Ｓ−抗原である。
【００１４】
本願発明に係るワクチン製剤は、免疫保護量の抗原を含有するであろうし、そして慣用技術により調製されることができる。ワクチンの調製は、一般に、New Trends and Developments in Vaccines, edited by Voller et al., University Park Press, Baltimore, Maryland, U.S.A. 1978 中に記載されている。リポソーム内への封入（encapsulation)は、例えば、Fullerton, U.S. Patent 4,235,877により記載されている。巨大分子へのタンパク質の抱合は、例えば、Likhite, U.S. Patent 4,372,945及びArmor et al., U.S. Patent 4,474,757 により、開示されている。
【００１５】
本願発明に係るワクチン製剤は、好ましくは、０，６ヶ月スケジュールにおいて、すなわち、０ヶ月目に第１投薬、そして６ヶ月目に第２投薬において、投与される。
本願発明に係るワクチン製剤は、一般に、成人に適しており、そしてまた、青年及び子供への投与にも適している。
【実施例】
【００１６】
以下の実施例は説明のためのものであり、本願発明を限定するものではない。
実施例
実施例１：特定の配合
本願発明の範囲内の特定の配合は、以下のものを含む：
ａ）０．５mlの投与量中、以下の：
４０μｇのＨＢｓＡｇ
１４４０ＥＵのＨＡＶ
０．８５mgのアルミニウム塩（０．８mgのリン酸アルミニウム＋０．０５mgの  水酸化アルミニウム）
２０μｇのホルモル
を含む、成人への投与のためのワクチン製剤。
【００１７】
ｂ）１．０mlの投与量中、以下の：
４０μｇ  ＨＢｓＡｇ
１４４０ＥＵのＨＡＶ
０．８５mgのアルミニウム塩（０．８mgのリン酸アルミニウム＋０．０５mgの  水酸化アルミニウム）
２０μｇのホルモル
を含む、成人への投与のためのワクチン製剤。
【００１８】
ｃ）１mlの投与量中、以下の：
２０μｇのＨＢｓＡｇ
７２０ＥＵのＨＡＶ
０．４５mgのアルミニウム塩（０．４mgのリン酸アルミニウム＋０．０５mgの  水酸化アルミニウム）
８０μｇのホルモル
を含む、青年及び／又は子供（adolescents and/or children)への投与のためのワクチン製剤。
【００１９】
ｄ）０．５mlの投与量中、以下の：
２０μｇのＨＢｓＡｇ
７２０ＥＵのＨＡＶ
０．４５mgのアルミニウム塩（０．４mgのリン酸アルミニウム＋０．０５mgの  水酸化アルミニウム）
８０μｇのホルモル
を含む、青年及び／又は子供への投与のためのワクチン製剤。
【００２０】
実施例２：試験“ＨＡＢ  ０５４”
２．１  １群の４７人の健康成人を、以下の：
１４４０ＥＵのＨＡＶ抗原
４０μｇのＨＢｓＡｇ（Ｓ−抗原）
０．８mgのＡｌＰＯ４
０．０５mgの水酸化アルミニウム
２０μｇ／mlのホルモル
を含有するワクチン製剤（1ml容積）でワクチン接種した。
【００２１】
これを、以下の表中、“１４４０／ＮＦ４０”と略す。
２．２  １群の４７人の健康成人を以下のようにワクチン接種した：
ａ）片腕中に、１ml投与量中、０．８mgのＡｌＰＯ４ 、２０μｇ／mlのホルモルと配合された４０μｇのＨＢｓＡｇを含有するワクチン製剤（以下、この製剤を“ＮＦ４０”と略す）を；そして
ｂ）他方の腕中に、１ml投与量中、０．５mgの水酸化アルミニウム上の１４４０ＥＵ  ＨＡＶ抗原を含有し、そして２０μｇ／mlホルモルを含有する、ＨＡＶＲＩＸ  １４４０を、接種した。
【００２２】
ＨＡＢ  ０５４のための免疫化スケジュールは、０，６（すなわち、０ヶ月目と６ヶ月目に投薬を行う）であった。
２，６、及び７ヶ月目におけるＢ型肝炎の血清学的結果（抗体陽転（seroconversion (SC))、血清保護（seroprotection (SP))、及び幾何平均力価（geometric mean titre (GMT)))は、同一年齢群のボランティアが含まれるところの他の試験（ＨＢＶ  ＮＦ０２１）において得られた病歴結果に比較して予想外に高いものであった。
【００２３】
試験ＨＢＶ  ＮＦ０２１（表１参照）は、以下の３群を含んでいた：
群１：ホルモルを含有しない０．５ml容量中、０．５μｇ  ＡｌＰＯ４ 上４０μｇのＨＢｓＡｇを含有する製剤による、スケジュール０，６月におけるワクチン接種（これを、表中、ＮＦ４０μｇ、０，６Ｍと略す）。
群２：ホルモルを含有しない、０．５ml容量中、０．５μｇ  ＡｌＰＯ４ 上２０μｇのＨＢｓＡｇを含有する製剤による、スケジュール０，６月におけるワクチン接種（これを、表中、ＮＦ２０μｇ、０，６Ｍと略す）。
【００２４】
群３：０，１，６月の古典的３投薬免疫化スケジュールを使用するＥｎｇｅｒｉｘ  Ｂ製剤（２０μｇ）によるワクチン接種（表１中の第３の行）。
結果
１）試験ＨＢＶ  ＮＦ０２１において、群１と群２における７ヶ月目におけるＢ型肝炎血清学的結果は、群３に比較して満足できるものではなかった（より低い、ＳＣ，ＳＰ、そしてＧＭＰ±Ｅｎｇｅｒｉｘ−Ｂの３投薬後に得られたレベル（１５００）の１／３（５００〜６００））。
【００２５】
２）試験ＨＡＢ  ０５４において、２投薬のワクチン後に得られた力価は、Ｅｎｇｅｒｉｘ−Ｂの３投薬後に得られるであろうものと同一オーダーの大きさをもっていた。
【００２６】
【表１】
2010209118.tif 000002
【００２７】
【表２】
2010209118.tif 000003
【００２８】
【表３】
2010209118.tif 000004
【００２９】
【表４】
2010209118.tif 000005
【００３０】
【表５】
2010209118.tif 000006
【００３１】
【表６】
2010209118.tif 000007
【００３２】
実施例３：試験“ＨＡＢ  ０６３，ＨＡＢ  ０７１、及びＨＡＢ  ０７５”１１〜１８歳の青年におけるＨＡＢ２投薬プログラム
３．１  試験ＨＡＢ  ０６３
ワクチン製剤は、０．５ml投与量中、以下の：
７２０  ＨＡＶ  ＥＵ／２０μｇ  ＨＢｓＡｇ
０．２５mg  Ａｌ塩
４０μｇ  ホルモル
を含有する。
【００３３】
結果を表７に示す
【００３４】
【表７】
2010209118.tif 000008
【００３５】
３．２  試験ＨＡＢ  ０７１
２群を本試験において使用した。
ワクチン製剤  群１：
７２０  ＨＡＶ  ＥＵ／２０μｇ  ＨＢｓＡｇ
０．４２５mg  Ａｌ塩
４０μｇ  ホルモル
０．５ml投与量中、そして第０，６月のスケジュールにおけるもの。
【００３６】
ワクチン製剤  群２（Ｔｗｉｎｒｉｘ（商標）Ｊｕｎｉｏｒ）：
３６０  ＨＡＶ  ＥＵ／１０μｇ  ＨＢｓＡｇ
０．２２５mg  Ａｌ塩
４０μｇ  ホルモル
０．５ml投与量中、そして第０，１，６月のスケジュールにおけるもの。
【００３７】
【表８】
2010209118.tif 000009
【００３８】
３．３  試験ＨＡＢ  ０７５
２群を本試験において使用した。
ワクチン製剤  １群（Ｔｗｉｎｒｉｘ（商標））：
７２０  ＨＡＶ  ＥＵ／２０μｇ  ＨＢｓＡｇ
０．４５mg  Ａｌ塩
８０μｇ  ホルモル
１ml投与量中、そして第０，６月のスケジュールにおけるもの。
【００３９】
Ｎ＝６７
ワクチン製剤  ２群：
１４４０  ＨＡＶ  ＥＵ／４０μｇ  ＨＢｓＡｇ
０．８５mg  Ａｌ塩
８０μｇ  ホルモル
１ml投与量中、そして第０，６月のスケジュールにおけるもの。
【００４０】
Ｎ＝５５
【００４１】
【表９】
2010209118.tif 000010
【００４２】
実施例４：試験“ＨＡＢ  ０８４”
１２〜１５歳の青年におけるＨＡＢ２投薬プログラム２群を本試験において使用した。
ワクチン製剤  １群（Ｔｗｉｎｒｉｘ（商標））：
７２０  ＨＡＶ  ＥＵ／２０μｇ  ＨＢｓＡｇ
０．４５mg  Ａｌ塩
８０μｇのホルモル
１ml投与量中、そして第０，６月のスケジュールにおけるもの。
【００４３】
ワクチン製剤  ２群（Ｔｗｉｎｒｉｘ（商標）Ｊｕｎｉｏｒ）：
３６０  ＨＡＶ  ＥＵ／１０μｇ  ＨＢｓＡｇ
０．２２５mg  Ａｌ塩
４０μｇ  ホルモル
０．５ml投与量中、そして第０，１，６月のスケジュールにおけるもの。
【００４４】
【表１０】
2010209118.tif 000011
【００４５】
実施例５：試験“ＨＡＢ  ０７６”
１〜１１歳の子供におけるＨＡＢ２投薬プログラム
ワクチン製剤は以下の：
７２０  ＨＡＶ  ＥＵ／２０μｇ  ＨＢｓＡｇ
０．４５mg  Ａｌ塩
８０μｇ  ホルモル
を含有する。
【００４６】
１ml投与量中、第０，１月のスケジュールにおけるもの。
結果を表１１に示す。
【００４７】
【表１１】
2010209118.tif 000012
【００４８】
まとめ
上記実施例中に示す臨床結果は、満足いく免疫応答が、子供、青年、及び成人において、全スケジュール後、すなわち、第７月までに、Ａ型肝炎とＢ型肝炎の両者について、得られるということを、はっきりと示している。