(57)【要約】【課題】食品等に含まれるＡＧＥの吸収を特異的に阻害し、かつ生体に有害な作用をもたらさないＡＧＥ結合剤並びにそれを含むＡＧＥ関連疾患予防組成物、食品及び皮膚外用剤を提供する。【解決手段】米糠及び米糠の水抽出物のいずれか一方又は双方を含み、終末糖化産物（ＡＧＥ）に対する特異的な結合活性を有することを特徴とするＡＧＥ結合剤、及びそれを含むＡＧＥ関連疾患予防組成物、食品及び皮膚外用剤。ＡＧＥ結合剤は、ＡＧＥに対する高い結合能を示し、血液中の血管障害マーカーや炎症マーカーの濃度を低下させることができる。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
米糠及び米糠の水抽出物のいずれか一方又は双方を含み、終末糖化産物（ＡＧＥ）に対する特異的な結合活性を有することを特徴とするＡＧＥ結合剤。
【請求項２】
ＡＧＥによる血液中の血管障害マーカー濃度の上昇を抑制することを特徴とする請求項１記載のＡＧＥ結合剤。
【請求項３】
前記血管障害マーカーがＭＣＰ−１であることを特徴とする請求項２記載のＡＧＥ結合剤。
【請求項４】
ＡＧＥによる血液中の炎症マーカー濃度の上昇を抑制することを特徴とする請求項１から３のいずれか１項記載のＡＧＥ結合剤。
【請求項５】
前記炎症マーカーがＣＲＰであることを特徴とする請求項４記載のＡＧＥ結合剤。
【請求項６】
請求項１から５のいずれか１項記載のＡＧＥ結合剤の１又は複数種を含み、ＡＧＥに関連する疾患に対する治療効果及び予防効果の一方又は双方を有することを特徴とする医薬組成物。
【請求項７】
請求項１から５のいずれか１項記載のＡＧＥ結合剤の１又は複数種を含むことを特徴とする食品。
【請求項８】
請求項１から５のいずれか１項記載のＡＧＥ結合剤の１又は複数種を含み、ＡＧＥに起因する皮膚の老化を抑制するための皮膚外用剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、終末糖化産物（ＡＧＥ）結合剤並びにそれを含むＡＧＥ関連疾患予防組成物、食品及び皮膚外用剤に関し、より具体的には米糠及びその水抽出物のいずれか一方又は双方を含む終末糖化産物（ＡＧＥ）結合剤並びにそれを含むＡＧＥ関連疾患予防組成物、食品及び皮膚外用剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
終末糖化産物（Advanced Glycation Endproduct、ＡＧＥ）は、糖化タンパク質、メイラード反応産物等とも呼ばれ、グルコース等の還元糖とタンパク質のアミノ基との非酵素的な反応により生成する種々の構造を有するタンパク質誘導体である。ＡＧＥは、細胞外マトリックスタンパク質、膜タンパク質及び細胞内タンパク質の糖化修飾に起因するこれらのタンパク質の機能及びそれに依存する細胞機能の破綻、或いはＡＧＥをリガンドとするレセプターが引き起こす細胞応答の結果として、種々の病変の発症及び増悪に関与している。
【０００３】
例えば、ＡＧＥレセプターの１つであるＲＡＧＥによってＡＧＥが認識されると、細胞内ＮＡＤＰＨオキシダーゼによる細胞内酸化ストレス物質の産生が亢進し、これが上皮細胞における遺伝子発現を変化させることにより、種々の糖尿病性血管障害が発症すると考えられている（非特許文献１参照）。
【０００４】
また、近年、ＡＧＥは、糖尿病性血管障害に加え、心筋梗塞、動脈硬化症等の心血管障害（非特許文献２参照）、アルツハイマー病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症等の神経変性疾患（非特許文献３参照）、アルコール依存症による脳障害及び肝障害（非特許文献４参照）、糖尿病性腎症、糖尿病性網膜症、糖尿病性神経症等の糖尿病合併症（非特許文献５参照）、骨粗鬆症等の骨代謝異常（非特許文献６参照）、老化現象（非特許文献７参照）、インスリン抵抗性（非特許文献８参照）、腫瘍の増殖及び転移（非特許文献９参照）等にも関与していることが示唆されている。
【０００５】
生体内におけるＡＧＥの形成を阻害することにより、ＡＧＥに関連する疾患を治療又は予防するための薬剤として、例えば、特許文献１では、ムラサキ属植物の培養細胞抽出エキス若しくはその処理物、又はコーヒー酸重合体を有効成分として含有するメイラード反応阻害剤が開示されている。特許文献２では、メイラード反応阻害剤と、ビタミンＢ6又はその医薬的に許容される塩とを含有したＡＧＥ生成阻害組成物が開示されている。また、特許文献３では、カルボニル化合物トラップ剤を有効成分とする、腹膜透析における腹腔内のカルボニルストレス状態改善剤が開示されている。
【０００６】
また、ＡＧＥに関連する疾患の治療及び予防のためには、キレート能、抗酸化作用等の複数の作用を併せ持つ物質が有望であると考えられている（非特許文献１０参照）。
【０００７】
近年、食品に含まれるクレメジン、キチン、キトサン等の高分子が、食品中のＡＧＥを吸着することが報告されているが（例えば、特許文献１１及び１２参照）、これらが食品中に含まれるＡＧＥを吸着し、排泄を促進することにより血中ＡＧＥ濃度を低下させると考えられる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】特開２００８−２１４２５０号公報
【特許文献２】特開平１０−３２４６２９号公報
【特許文献３】特開２００６−３０５３４５号公報
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】Marie-Paule Wautier他著、「Activation of NADPH oxidase by AGE links oxidant stress to alteredgene expression via RAGE」、Amarican Journal ofPhysiology -Endocrinology and Metabolism、（米国）、アメリカ生理学会（AmericanPhysiological Society）、２００１年５月、第２８０巻、Ｅ６８５−Ｅ６９４
【非特許文献２】YoshihideJinnouchi他著、「Glycolaldehyde-modified low densitylipoprotein leads macrophages to foam cells via the macrophage scavengerreceptor」、The Journal of Biochemistry、日本生化学会、１９９８年、１２３巻、第６号、ｐ．１２０８−１２１７
【非特許文献３】Nobuyuki Sasaki他著、「Advanced Glycation EndProducts in Alzheimer's Disease and Other Neurodegenerative Diseases」、The American Journal of Pathology、（米国）、アメリカ研究病理学会（American Society for Investigative Pathology）、１９９８年１０月、第１５３巻、第４号、ｐ．１１４９−１１５５
【非特許文献４】Keiko Iwamoto他著、「Advancedglycation end products enhance the proliferation and activation of hepaticstellate cells」、Journal of Gastroenterology、シュプリンガー・ジャパン、２００８年４月、第４３巻、第４号、ｐ．２９８−３０４
【非特許文献５】C W Yang他著、「Advancedglycation end products up-regulate gene expression found in diabetic glomerulardisease」、Proceedings of the National Academy ofSciences of the United States of America、（米国）、アメリカ国立科学協会（National Academy of Sciences of the United States of America）、１９９４年９月２７日、第９１巻、第２０号、ｐ．９４３６−９４４０
【非特許文献６】James J. Tomasek他著、「Diabetic and age-related enhancement of collagen-linked fluorescencein cortical bones of rats」、Life Sciences、（オランダ）、エルゼビア（Elsevier B.V.）、１９９４年、第５５巻、ｐ．８５５−８６１
【非特許文献７】Melpomeni Peppa他著、「Aging andglycoxidant stress」、Hormones、（ギリシア）、ギリシア内分泌学協会（Hellenic Endocrine Society）、２００８年、第７巻、第３号、ｐ．１２３−１３２
【非特許文献８】水田雅也、「インスリン作用不足と酸化ストレス」、日本薬理学雑誌、日本薬理学会、第１２５巻、第３号、ｐ．１２５−１２８
【非特許文献９】Riichiro Abe他著、「Regulationof Human Melanoma Growth and Metastasis by AGE-AGE Receptor Interactions」、Journal of Investigative Dermatology、（英国）、ネイチャー・パブリッシング・グループ（Nature Publishing Group）、２００４年２月、第１２２巻、第２号、ｐ．４６１−４６７
【非特許文献１０】Sean M. Culbertson他著、「Paradoxical Impact of Antioxidants on Post-Amadori Glycoxidation:COUNTERINTUITIVE INCREASE IN THE YIELDS OF PENTOSIDINE AND Nε-CARBOXYMETHYLLYSINE USING A NOVELMULTIFUNCTIONAL PYRIDOXAMINE DERIVATIVE」、Journal ofBiological Chemistry、（米国）、米国生化学・分子生物学会（American Societyfor Biochemistry and Molecular Biology）、２００３年１０月、第２７３巻、ｐ．３８３８４−３８３９４
【非特許文献１１】S. Yamagishi他著、「Oraladministration of AST-120 (Kremezin) is a promising therapeutic strategy foradvanced glycation end product (AGE)-related disorders」、Medical Hypotheses、（オランダ）、エルゼビア（ElsevierB.V.）、２００７年、第６９巻、第３号、ｐ．６６６−６６８
【非特許文献１２】S. Ueda他著、「OralAdsorbent AST-120 Decreases Serum Levels of AGEs in Patients with Chronic RenalFailure」、Molecular Medicine、（米国）、ファインスタイン医学研究所（Feinstein Institute for Medical Research）、２００６年、第１２巻、ｐ．１８０−１８４
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
ＡＧＥは、食品にも多く含まれていることは古くから知られており、ＡＧＥ又はその分解物を摂取することも、病態の発症及び進展の一因であると考えられる。特許文献１〜３に記載のＡＧＥ形成阻害剤は生体内でのＡＧＥの形成を阻害するものであり、食品に由来するＡＧＥの体内への吸収及びＡＧＥレセプターとの結合を阻害することができない。したがって、これらを体内に摂取することは、食品に由来するＡＧＥによる疾患の予防又は治療のためには有効でなく、食品に含まれるＡＧＥの腸管吸収を阻害する物質又は素材を用いて、体内に摂取されるＡＧＥの量を低減させる方法がＡＧＥによる疾患の治療又は予防法として有効であると考えられる。非特許文献１１及び１２において高分子が用いられているが、一般に高分子は、分子量によっては水溶性が低く、剤形が制限されるおそれがある。更に、高分子をＡＧＥ結合剤として用いる場合、非特異的な吸着により、他の有用栄養素の摂取を阻害することも懸念される。
【００１１】
本発明はかかる事情に鑑みてなされたもので、食品等に含まれるＡＧＥの吸収を特異的に阻害し、かつ生体に有害な作用をもたらさないＡＧＥ結合剤並びにそれを含むＡＧＥ関連疾患予防組成物、食品及び皮膚外用剤を提供することを目的とする。本発明者らは、ＡＧＥに特異的な結合活性を有する物質及び素材について探索を行い、米糠及びその水抽出物がＡＧＥに対する特異的な結合能を示すことを見いだし、本発明を完成するに至った。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
前記目的に沿う本発明の第１の態様は、米糠及び米糠の水抽出物のいずれか一方又は双方を含み、終末糖化産物（ＡＧＥ）に対する特異的な結合活性を有することを特徴とするＡＧＥ結合剤を提供することにより上記課題を解決するものである。なお、「水抽出物」という語句は、冷水による抽出物及び熱水による抽出物の両者を意味する。また、「特異的な結合能」という語句は、あるタンパク質とそのタンパク質より生成したＡＧＥのうち、後者にのみ結合能を示すことを意味する。
【００１３】
第１の態様に係るＡＧＥ結合剤は、ＡＧＥによる血液中の血管障害マーカー濃度の上昇を抑制するものであってもよく、この場合において、前記血管障害マーカーはＭＣＰ−１（単球走化活性化因子）であってもよい。
【００１４】
また、第１の態様に係るＡＧＥ結合剤は、ＡＧＥによる血液中の炎症マーカー濃度の上昇を抑制するものであってもよく、この場合において、前記炎症マーカーはＣＲＰ（Ｃ反応性タンパク質）であってもよい。
【００１５】
本発明の第２の態様は、本発明の第１の態様に係るＡＧＥ結合剤の１又は複数種を含み、ＡＧＥに関連する疾患に対する治療効果及び予防効果の一方又は双方を有することを特徴とする医薬組成物を提供することにより上記課題を解決するものである。
【００１６】
本発明の第３の態様は、本発明の第１の態様に係るＡＧＥ結合剤の１又は複数種を含むことを特徴とする食品を提供することにより上記課題を解決するものである。
【００１７】
本発明の第４の態様は、本発明の第１の態様に係るＡＧＥ結合剤の１又は複数種を含み、ＡＧＥに起因する皮膚の老化を抑制するための皮膚外用剤を提供することにより上記課題を解決するものである。
【発明の効果】
【００１８】
本発明によると、食品に含まれるＡＧＥの吸収を特異的に阻害することにより、ＡＧＥに関連する疾患の治療及び予防に利用可能なＡＧＥ結合剤並びにそれを含むＡＧＥ関連疾患予防組成物、食品及び皮膚外用剤が提供される。本発明に係るＡＧＥ結合剤は、食経験のある米糠を原料とするものであるため、生体に対し高い安全性を有する。そのため、医薬組成物、食品、皮膚外用剤等の用途に安全に使用できる。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
続いて、本発明を具体化した実施の形態につき説明し、本発明の理解に供する。
本発明の一実施の形態に係るＡＧＥ結合剤は、米糠及び米糠の水抽出物のいずれか一方又は双方を含んでいる。米糠とは玄米から精白米を作る過程で生成する果皮、種皮、糊粉層、及び胚芽からなる部分のことである。米糠としては、搗精等の精米、研米、無洗米の製造工程等において得られる生糠の他に、生糠を炒った炒り糠、生糠から米油を製造する過程で得られる残渣である脱脂糠を利用することができる。
【００２０】
これらの米糠は、そのまま用いてもよいが、水による抽出で得られる水抽出物を用いてもよい。抽出に用いる水は純水でもよいが、食品添加物として認められているエタノールなどの有機溶媒を水と混合したものを用いてもよい。或いは、抽出効率を向上させるために、必要に応じて、酸、塩基、塩等を適宜含んでいてもよい。抽出に用いる水の温度及びｐＨについては特に制限はないが、ｐＨについては、生体への使用を考慮して中性付近、より具体的にはｐＨ４〜９であることが好ましく、６〜８であることがより好ましい。水による抽出は任意の公知の方法により行うことができ、例えば、米糠を水中で所定時間混合後、ろ過、遠心分離、デカンテーション等により固形分と分離する方法、ソックスレー抽出法等の連続抽出法等の方法を用いることができる。
【００２１】
なお、米糠及び米糠の水抽出物に含まれる物質は、いずれもＡＧＥ様の構造を有しておらず、これらを摂取したことに起因してＡＧＥに関連する疾患を発症するおそれはない。
【００２２】
米糠の水抽出物は、抽出液のままの状態で用いてもよいが、凍結乾燥法又はスプレードライ法によって粉末化したものを用いてもよい。いずれの場合においても、必要に応じて、高分子量成分や不溶分等を除去するために、透析、限外ろ過、ろ過、カラムクロマトグラフィー等による前処理を行ってもよい。ろ過による除去の場合には、必要に応じて、不純物を除去するために活性炭、ベントナイト、セライト等の吸着剤やろ過助剤を添加してもよい。特に抽出液の状態で用いる場合には、メンブレンフィルター等による除菌ろ過を併せて行うことが好ましい。
【００２３】
以上のようにして得られるＡＧＥ結合剤は、ＡＧＥに対し特異的な結合能を有しており、ＡＧＥに対する解離定数（Ｋｄ）は、５×１０−４Ｍ以下、好ましくは３×１０−４Ｍ以下、より好ましくは２×１０−４Ｍ以下である。「解離定数（Ｋｄ）」とは、ＡＧＥと結合剤との結合速度定数ｋ１に対する解離速度定数ｋ２の比（すなわち、Ｋｄ＝ｋ２／ｋ１）であると定義され、結合定数の逆数である。したがって、ＡＧＥに対する結合能が高いほど、Ｋｄの値は小さくなる。
【００２４】
解離定数は、任意の公知の方法を用いて決定できる。用いることができる方法の具体例としては、ＥＬＩＳＡ法、分光法、水晶発振子マイクロバランス（ＱＣＭ）法、クロマトグラフィーを用いる方法、平行透析法、蛍光消光法、原子間力顕微鏡（ＡＦＭ）法、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）法等が挙げられるが、操作の簡便性及び測定精度の観点から、ＥＬＩＳＡ法、ＱＣＭ法及びＳＰＲ法等が好ましく用いられる。
【００２５】
本実施の形態に係るＡＧＥ結合剤が結合活性を示すＡＧＥは、任意のタンパク質より誘導されるＡＧＥであり、具体例としては、アルブミン、グロブリン等の血清タンパク質、コラーゲン、エラスチン等の細胞外マトリックスタンパク質、Ｇタンパク質等の膜タンパク質及び細胞内タンパク質の糖化により形成されるＡＧＥ等が挙げられる。
【００２６】
ＡＧＥ結合剤は、ＡＧＥと特異的に結合し、ＲＡＧＥ等のＡＧＥレセプターによるＡＧＥの認識を阻害することができる。そのため、ＡＧＥレセプターによるＡＧＥの認識に伴う細胞応答に起因する種々の疾患を治療又は予防する効果を有している。疾患の具体例としては、糖尿病性血管障害、心筋梗塞、動脈硬化症等の心血管障害、アルツハイマー病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症等の神経変性疾患、アルコール依存症による脳障害及び肝障害、糖尿病性腎症、糖尿病性網膜症、糖尿病性神経症等の糖尿病合併症、骨粗鬆症等の骨代謝異常、老化現象、インスリン抵抗性、腫瘍の増殖及び転移等が挙げられる。
【００２７】
また、ＡＧＥ結合剤は、心血管障害や炎症性疾患に対する予防又は治療効果を有するため、これらの疾患の指標となる血管障害マーカーや炎症マーカーの血液又は血清中の濃度を低下させることができる。血管障害マーカーの具体例としては、単球走化活性化因子（ＭＣＰ）、ＩＬ−６、高感度腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ−α）等が挙げられ、炎症マーカーの具体例としては、Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）、血清アミロイドＡタンパク質（ＳＡＡ）、ＩＬ−６等が挙げられる。
【００２８】
ＡＧＥ結合剤は、米糠及び米糠の水抽出物のいずれか一方を単独で用いてもよいが、米糠そのものと米糠の水抽出物とを任意の割合で混合して用いてもよい。或いは、原料及び抽出条件（溶媒、温度等）のいずれか一方又は双方が異なる複数種の抽出物を任意の割合で混合して用いてもよく、更に米糠を混合して用いてもよい。
【００２９】
ＡＧＥ結合剤を担体等と混合することにより、ＡＧＥに関連する疾患に対する治療効果及び予防効果の一方又は双方を有する医薬組成物として用いることができる。医薬組成物のヒト或いは動物に対する投与形態としては、経口、経直腸、非経口（例えば、静脈内投与、筋肉内投与、皮下投与など）等が挙げられ、投与量は、医薬組成物の製剤形態、投与方法、使用目的及びこれに適用される投与対象の年齢、体重、症状によって適宜設定され一義的に決定することは困難であるが、ヒトの場合、一般には製剤中に含有される有効成分の量で、好ましくは成人１日当り０．１〜２０００ｍｇ／ｋｇである。もちろん投与量は、種々の条件によって変動するので、上記投与量より少ない量で十分な場合もあるし、或いは範囲を超えて必要な場合もある。
【００３０】
経口投与製剤として調製する場合は、錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤、コーティング剤、液剤、懸濁剤等の形態に調製でき、非経口投与製剤にする場合には、注射剤、点滴剤、座薬等の形態に調製することができる。製剤化には、任意の公知の方法を用いることができる。例えば、ＡＧＥ結合剤と、製薬学的に許容し得る担体又は希釈剤、安定剤、及びその他の所望の添加剤を配合して、上記の所望の剤形とすることができる。なお、非経口投与製剤の場合には、米糠をそのまま用いることは好ましくなく、ＡＧＥ結合剤としてその水抽出物が用いられる。
【００３１】
ＡＧＥ結合剤を含む皮膚外用剤としては、軟膏、ローション、スプレー剤、クリーム剤、パウダー、リップスティック、化粧水等の種々の公知の形態をとることができる。
皮膚外用剤に配合して投与するには、適宜液状、固体状、半固形状、ゲル状、クリーム状等の基剤中に混合して調製することができる。その場合、皮膚外用剤の調製に際して任意の公知の添加剤（可溶化剤、安定剤、乳化剤等）を用いることができる。
【００３２】
ＡＧＥ結合剤を含む食品としては、ＡＧＥ結合剤をそのまま食品として調製したもの、他の食品に添加したもの、或いは、カプセル、錠剤等、食品又は健康食品に通常用いられる任意の形態をとることができる。配合される食品の種類に特に制限はなく、用途に応じて、粉末、顆粒、錠剤等の形に成形してもよい。また、必要に応じて、賦形剤、増量剤、結合剤、増粘剤、乳化剤、着色料、香料、食品添加物、調味料等と適宜混合してもよい。
【００３３】
また、ヒトの消費に供する食品以外にも、ＡＧＥ結合剤を飼料中に混合して、家畜、ペット等の動物に投与する場合には、予め飼料の原料中に混合して、機能性を付与した飼料として調製することができる。また、ＡＧＥ結合剤を飼料に添加して投与することもできる。すなわち、ＡＧＥ結合剤を有効成分として含む食品は、ブタ、ニワトリ、ウシ、ウマ、ヒツジ等の家畜や、魚類、ペット（イヌ、ネコ、鳥類）等の飼料に添加することにより、安全で、ＡＧＥに関連する疾患の治療効果及び予防効果の一方又は双方を有する機能性飼料として用いることができる。
【実施例】
【００３４】
次に、本発明の作用効果を確認するために行った実施例について説明する。
実施例１：米糠の冷水抽出物及び熱水抽出物のＡＧＥに対する結合試験
（１）米糠の冷水抽出物の調製
米糠凍結乾燥粉末１重量部に純水２０重量部を加え、５分間超音波処理を行った。その後４℃で１８時間抽出を行った。遠心分離により上清を回収後、不溶分に更に純水１０重量部を加え再度遠心分離により上清を回収した。ひとまとめにした上清を凍結乾燥し、米糠の冷水抽出物の凍結乾燥粉末を得た。
【００３５】
（２）米糠の熱水抽出物の調製
米糠凍結乾燥粉末１重量部に純水２０重量部を加え、５分間超音波処理を行った。その後９５℃で１時間抽出を行った。遠心分離により上清を回収後、不溶分に更に純水１０重量部を加え再度遠心分離により上清を回収した。ひとまとめにした上清を凍結乾燥し、米糠の熱水抽出物の凍結乾燥粉末を得た。
【００３６】
（３）ヒト血清アルブミンの終末糖化産物（ＡＧＥ）の合成
ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ、Ｓｉｇｍａ社製、０．３７ｍＭ）、ＤＬ−グリセルアルデヒド（Ｓｉｇｍａ社製、５ｍＭ）及びジエチレントリアミン五酢酸（Ｓｉｇｍａ社製、５ｍＭ）を含む溶液を３７℃で振とう（６０スイング／分）しながら１週間インキュベートした。未反応のＤＬ−グリセルアルデヒドを除去するために、ＰＤ−１０カラム（ＧＥヘルスケアバイオサイエンス社製）を用いて精製した。
【００３７】
（４）水晶発振子マイクロバランス（ＱＣＭ）法によるＡＧＥ結合剤の結合能の測定
分子間相互作用定量水晶天秤（ＱＣＭ）装置「ＡＦＦＩＮＩＸＱ」（Ｉｎｉｔｉｕｍ社製ＱＣＭ２０００）の専用センサーチップに、ＡＧＥ溶液及びヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）溶液（１００μｇ／ｍＬ）１μＬをそれぞれ滴下し、十分に風乾後、超純水でチップを洗浄した。ＡＧＥ及びＨＳＡを固定したチップを上記装置に装着し、８ｍＬの超純水を入れた試験容器に挿入した。ＡＧＥ結合剤（上記（１）及び（２）で調製した米糠の冷水抽出物及び熱水抽出物）の超純水溶液（１ｍｇ／ｍＬ）を調製し、それぞれ８μＬずつを計り取り、試験容器に添加した。発振周波数が安定になったことを装置のディスプレイの表示で確認後、ＡＧＥ結合剤の超純水溶液８μＬを更に添加した。この操作を２〜４回繰り返し、ＡＧＥ結合剤及びＨＳＡのいずれかとＡＧＥ結合剤との相互作用を示す平衡曲線（吸着曲線）を作成した。装置に内蔵した専用測定解析ソフトウェアで結果を解析し（ＡＧＥ結合剤分子量を５０００と仮定した）、見かけの解離定数（Ｋｄ）を算出した。
【００３８】
得られた結果は、下記の表１に示すとおりである。表１において、「冷水抽出物」及び「熱水抽出物」は、それぞれ、上記の（１）及び（２）で調製した米糠の冷水抽出物及び熱水抽出物を示し、「ＡＧＥ」は上記の（３）で合成したヒト血清アルブミンのＡＧＥを示す。
【００３９】
【表１】
2010209003.tif 000002
【００４０】
表１の結果から明らかなように、冷水抽出物及び熱水抽出物のいずれについても、ヒト血清アルブミンのＡＧＥに対しては、１０−４Ｍ程度の低い解離定数を示したのに対し、ヒト血清アルブミンに対しては結合能を示さなかった。
【００４１】
実施例２：ラットにおける血管障害マーカー及び炎症マーカーの血清濃度に及ぼすＡＧＥ結合剤の影響の検討
（１）ヒト血清アルブミンの終末糖化産物（ＡＧＥ）の合成
ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ、Ｓｉｇｍａ社製、０．３７ｍＭ）、ＤＬ−グルコース（ナカライテスク社製、１００ｍＭ）及びジエチレントリアミン五酢酸（Ｓｉｇｍａ社製、５ｍＭ）を含む溶液を３７℃で振とう（６０スイング／分）しながら１週間インキュベートした。未反応のグルコースを除去するために、粗生成物を純水で３日間透析した。透析により精製したＡＧＥを凍結乾燥し、以下の投与試験に使用した。
【００４２】
（２）ラットを使用した投与試験
５週齢のＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ系雄性ラット（九動株式会社）を１週間馴致飼育後、無作為抽出法により、ＡＧＥ（上記の（１）で合成：１０ｍｇ／ｋｇ）投与群、ＡＧＥ（１０ｍｇ／ｋｇ）＋ＡＧＥ結合剤（実施例１の（２）で調製した米糠の熱水抽出物：１００ｍｇ）投与群、及びプラセボ投与群にそれぞれ５匹ずつ振り分けた。各群に振り分けたラットの飼育は、温度２３±２℃、湿度５５±１０％に制御した飼育装置中の繁殖用ケージ内で行った。ただし、飼育室の清掃等による温度及び湿度の一過性の変動は許容されるものとした。餌は、ラット飼育用餌（ＣＥ−２；日本クレア株式会社）、水は福岡県久留米市水道局給水を用いた。
【００４３】
ＡＧＥ投与群、及びＡＧＥ＋ＡＧＥ結合剤投与群に対しては、最も近い時点における体重の測定値に基づき算出された量のＡＧＥを、１日１回、１４日間にわたり、ラット用ゾンデを用いて胃内に強制投与した。ＡＧＥ（１０ｍｇ／ｋｇ）＋ＡＧＥ結合剤（１００ｍｇ）投与群に対しては、併せてＡＧＥ結合剤を投与した。プラセボ投与群に対しては、最も近い時点における体重の測定値に基づき１０ｍｇ／ｋｇとなるように算出された量の純水を、１日１回、１４日間にわたり胃内に強制投与した。
【００４４】
投与開始から１４日後に、各群における血清中の単球走化活性化因子（ＭＣＰ−１）及び高感度Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）の濃度を、コスモ・バイオ株式会社より市販のラット用ＥＬＩＳＡキットを用いて定量した。ＭＣＰ−１及びＣＲＰに対する測定結果は、それぞれ、表２及び３に示すとおりである。
【００４５】
【表２】
2010209003.tif 000003
【００４６】
【表３】
2010209003.tif 000004
【００４７】
ＡＧＥ投与群における血清中のＭＣＰ−１濃度は、プラセボ投与群に対して統計的に有意に（Ｐ＜０．０１）増大している。このことは、ＡＧＥの投与が血管の障害を誘発していることを示唆している。また、ＡＧＥ＋ＡＧＥ結合剤投与群における血清中のＭＣＰ−１濃度は、ＡＧＥ投与群に対して統計的に有意に減少していることがわかる。このことは、ＡＧＥ結合剤の同時投与により、血管の障害の発生が抑制されることを示唆している。
【００４８】
また、ＡＧＥ投与群における血清中の高感度ＣＲＰ濃度は、プラセボ投与群に対して統計的に有意に（Ｐ＜０．０１）増大している。このことは、ＡＧＥの投与が炎症の発生を誘発していることを示唆している。また、ＡＧＥ＋ＡＧＥ結合剤投与群における血清中の高感度ＣＲＰ濃度は、ＡＧＥ投与群及びプラセボ投与群の両者に対して統計的に有意に減少していることがわかる。このことは、ＡＧＥ結合剤の（同時）投与により、炎症の発生が抑制されることを示唆している。
【産業上の利用可能性】
【００４９】
本発明のＡＧＥ結合剤は、ＡＧＥに関連する疾患の治療及び予防効果を有する医薬品、食品、化粧品を含む皮膚外用剤等の幅広い用途に利用することができる。