(57)【要約】【課題】医薬品、化粧品等の様々な用途に利用することが可能である花粉荷を有効成分として含有する抗ヒスタミン剤を提供する。【解決手段】花粉荷、又は花粉荷の溶媒抽出物を有効成分として含有することを特徴とする抗ヒスタミン剤であって、例えばＩ型アレルギー疾患の治療又は予防剤として用いられる。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
花粉荷、又は花粉荷の溶媒抽出物を有効成分として含有することを特徴とする抗ヒスタミン剤。
【請求項２】
前記抗ヒスタミン剤は、Ｉ型アレルギー疾患の治療又は予防剤として用いられることを特徴とする請求項１に記載の抗ヒスタミン剤。
【請求項３】
前記溶媒は、水、親水性有機溶媒、及び水／親水性有機溶媒の混合液から選ばれる少なくとも一種であることを特徴とする請求項１又は請求項２に記載の抗ヒスタミン剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、花粉荷、又は花粉荷の溶媒抽出物を有効成分として含有することを特徴とする抗ヒスタミン剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
一般に、花粉荷は、蜜蜂が植物の雄しべから花粉を得て、蜂蜜や唾液で丸めて団子状に固めたもので、良質なタンパク質、ビタミン及びミネラル等の多種多様な栄養素を含んでいる事から「パーフェクトフード」とも呼ばれている。花粉荷は、採集器等により蜜蜂から容易に回収され、主に栄養補助食品等として摂取されている。
【０００３】
従来より、花粉荷は、いくつかの薬理効果を有することが知られている。花粉荷の薬理効果を利用した発明として、例えば特許文献１，２に開示される組成物が知られている。特許文献１は、花粉荷を有効成分として含有する骨量増進組成物について開示する。特許文献２は、花粉荷を有効成分として含有する糖尿病性疾患の予防・治療用組成物について開示する。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開２００７−０１６０１４号公報
【特許文献２】特開２００８−１０５９８２号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
ところで、免疫反応が特定の抗原に対して過剰に起こる疾患としてアレルギー疾患が知られている。この中でも、生理活性物質としてヒスタミンを介するアレルギー疾患としてＩ型アレルギーが知られている。Ｉ型アレルギーは、即時型過敏症とも呼ばれ、代表的な疾患として、例えば気管支喘息、蕁麻疹、アトピー性皮膚炎、並びに蜂毒、食物及び薬物等が原因で生ずるアナフィラキシーショックが知られている。Ｉ型アレルギーは、まず免疫グロブリンであるＩｇＥがマスト細胞（肥満細胞）や好塩基球に結合し、そこに抗原が結合すると細胞内に顆粒として貯蔵されるヒスタミンが細胞外に放出されることによって生ずる。従来よりＩ型アレルギーの治療薬として種々の第一世代及び第二世代抗ヒスタミン薬が知られている。しかしながら、それらのいずれも副作用の問題があり、投与に慎重を要する場合があった。
【０００６】
本発明者らは、上述した花粉荷の新たな生理作用を模索した結果、花粉荷にマスト細胞や好塩基球からのヒスタミンの遊離を抑制する作用を有することを発見するに至った。
本発明の目的とするところは、医薬品、化粧品等の様々な用途に利用することが可能である花粉荷を有効成分として含有する抗ヒスタミン剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
上記目的を達成するために、請求項１に記載の抗ヒスタミン剤は、花粉荷、又は花粉荷の溶媒抽出物を有効成分として含有することを特徴とする。
請求項２に記載の発明は、請求項１に記載の抗ヒスタミン剤において、Ｉ型アレルギー疾患の治療又は予防剤として用いられることを特徴とする。
【０００８】
請求項３に記載の発明は、請求項１又は請求項２に記載の抗ヒスタミン剤において、前記溶媒は、水、親水性有機溶媒、及び水／親水性有機溶媒の混合液から選ばれる少なくとも一種であることを特徴とする。
【発明の効果】
【０００９】
本発明によれば、医薬品、化粧品等の様々な用途に利用することが可能である花粉荷を有効成分として含有する抗ヒスタミン剤を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】ラット腹腔内マスト細胞からのヒスタミン遊離抑制効果を示す図。（ａ）花粉荷エタノール抽出エキス（花粉荷エタノール抽出物）を各量（図中において固形分濃度％を示す。以下同じ）添加した場合のヒスタミン遊離量を示す図。（ｂ）花粉荷エタノール抽出エキスを各量添加した場合のヒスタミン遊離抑制率を示す図。（ｃ）花粉荷水抽出エキス（花粉荷水抽出物）を各量添加した場合のヒスタミン遊離量を示す図。（ｄ）花粉荷水抽出エキスを各量添加した場合のヒスタミン遊離抑制率を示す図。（ｅ）甜茶水抽出エキスを各量添加した場合のヒスタミン遊離量を示す図。（ｆ）甜茶水抽出エキスを各量添加した場合のヒスタミン遊離抑制率を示す図。
【図２】ラット好塩基球性白血病細胞からのカルシウムイオノホアによるヒスタミン遊離の抑制効果を示す図。（ａ）花粉荷エタノール抽出エキスを各量添加した場合のヒスタミン遊離量を示す図。（ｂ）花粉荷水抽出エキスを各量添加した場合のヒスタミン遊離量を示す図。（ｃ）花粉荷水抽出エキスを各量添加した場合のヒスタミン遊離抑制率を示す図。（ｄ）甜茶水抽出エキスを各量添加した場合のヒスタミン遊離量を示す図。（ｅ）甜茶水抽出エキスを各量添加した場合のヒスタミン遊離抑制率を示す図。
【図３】ラット好塩基球性白血病細胞からのコンカナバリンＡ（ＣｏｎＡ）及びホスファチジルセリン（ＰＳ）によるヒスタミン遊離の抑制効果を示す図。（ａ）花粉荷エタノール抽出エキスを各量添加した場合のヒスタミン遊離量を示す図。（ｂ）花粉荷エタノール抽出エキスを各量添加した場合のヒスタミン遊離抑制率を示す図。（ｃ）花粉荷水抽出エキスを各量添加した場合のヒスタミン遊離量を示す図。（ｄ）花粉荷水抽出エキスを各量添加した場合のヒスタミン遊離抑制率を示す図。（ｅ）甜茶水抽出エキスを各量添加した場合のヒスタミン遊離量を示す図。（ｆ）甜茶水抽出エキスを各量添加した場合のヒスタミン遊離抑制率を示す図。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
以下、本発明の抗ヒスタミン剤を具体化した一実施形態を説明する。
本実施形態の抗ヒスタミン剤は、花粉荷又は花粉荷から溶媒により抽出処理することにより得られる溶媒抽出物を有効成分として含有する。花粉荷は、上述したように蜜蜂が植物の雄しべから花粉を得て、蜂蜜や唾液で丸めて団子状に固めたもので、ビタミン及びミネラル等の多種多様な栄養素を含んでいる。花粉荷の原産地は、特に限定されず、例えば日本、中国、ブラジル、ヨーロッパ諸国、オセアニア諸国、及びアメリカ等のいずれであってもよい。また、花粉荷の原料となる花粉の起源植物としては、特に限定されず、蜜蜂が採取したものであればいずれも使用することができる。花粉の起源植物としては、例えば、ハンニチバナ科、ツツジ科、シソ科、ムラサキ科、ブナ科、キク科、モクセイ科、アブラナ科、マメ科、バラ科、及びヤナギ科が挙げられる。これらの中で、ハンニチバナ科、及びアブラナ科が入手容易性の観点から好ましい。ハンニチバナ科としては、例えばシスタス属ジャラが挙げられる。アブラナ科としては、例えばアブラナ属ナタネ、及びダイコン属ダイコンが挙げられる。花粉荷の採集方法としては、特に限定されず公知の方法を適宜採用することができる。例えば、巣箱の出入り口に取り付けられ、格子状の剥取多孔板を備えてなる花粉採集器を用いる方法、巣板又は蜜蜂に付着した花粉荷を直接採集する方法等が挙げられる。
【００１２】
本実施形態において、有効成分として花粉荷自体の他、花粉荷から溶媒により抽出処理することにより得られる溶媒抽出物を有効成分として使用してもよい。抽出処理に使用される溶媒としては、例えば水、親水性有機溶媒、及び水／親水性有機溶媒の混合液が挙げられる。親水性有機溶媒としては、水に溶解する性質を有するエタノール、メタノール、イソプロパノール等の低級アルコールのほか、アセトンやメチルエチルケトン等のケトン類を適宜選択して使用することができる。これらの親水性有機溶媒を単独で使用してもよく、２種以上を組み合わせて使用してもよい。これら溶媒の中でも、抽出物の抗ヒスタミン遊離作用がより優れる水又はエタノールを好ましく適用することができる。
【００１３】
抽出溶媒として例えば水が使用される場合、溶媒の花粉荷に対する添加量は、抽出効率の点から、花粉荷１質量部に対して１〜１０質量部が好ましく、４〜８質量部がより好ましく、５〜６質量部が最も好ましい。これらの抽出溶媒は、花粉荷とともに混合及び撹拌される。抽出温度は溶媒の種類等により適宜設定されるが、有効成分の抽出効率の観点から３０〜６０℃であることが好ましい。抽出温度が３０℃未満の場合には、溶解成分と不溶性成分の分離効率が低下するため好ましくない。逆に抽出温度が６０℃を超える場合には、抽出成分の変性を招くおそれがある。抽出の時間は、抽出温度等により適宜設定されるが、例えば４〜４８時間程度が好ましく、５〜２０時間程度がより好ましい。得られた抽出物は、水に可溶性の画分と沈殿物からなる不溶性の画分から構成される。これらの可溶性画分と不溶性画分は、公知の方法、例えば濾過処理、及び遠心分離を用いることにより、容易に分離することができる。このうち可溶性画分を溶媒抽出物として使用することができる。
【００１４】
抽出溶媒として例えばエタノールが使用される場合、溶媒の花粉荷に対する添加量は、抽出効率の点から、花粉荷１質量部に対して１〜１０質量部が好ましく、４〜８質量部がより好ましく、５〜６質量部が最も好ましい。これらの抽出溶媒は、花粉荷とともに混合及び撹拌される。抽出温度は溶媒の種類等により適宜設定されるが、有効成分の抽出効率の観点から１０〜４０℃であることが好ましい。抽出温度が１０℃未満の場合には、溶解成分と不溶性成分の分離効率が低下するため好ましくない。逆に抽出温度が４０℃を超える場合には、抽出溶媒が蒸発するため抽出効率の低下を招くおそれがある。抽出の時間は、抽出温度等により適宜設定されるが、例えば４〜４８時間程度が好ましく、５〜２０時間程度がより好ましい。得られた抽出物は、エタノール溶媒に可溶性の画分と沈殿物からなる不溶性の画分から構成される。これらの可溶性画分と不溶性画分は、公知の方法、例えば濾過処理、及び遠心分離を用いることにより、容易に分離することができる。このうち可溶性画分を溶媒抽出物として使用することができる。
【００１５】
本実施形態の抗ヒスタミン剤は、マスト細胞（肥満細胞）や好塩基球からのヒスタミンの遊離を阻害する作用を有する。したがって、マスト細胞や好塩基球からのヒスタミンの遊離により生じる各種疾患の治療剤又は予防剤として適用することができる。ヒスタミンは、生体に対し、例えば血圧降下、血管透過性亢進、平滑筋収縮、血管拡張、及び腺分泌促進等の薬理作用を有する。ヒスタミンは通常マスト細胞や好塩基球等の細胞内に顆粒として貯蔵されるが、免疫グロブリンであるＩｇＥがマスト細胞や好塩基球に結合し、そこに抗原が結合すると細胞内に顆粒として貯蔵されるヒスタミンが細胞外に放出される。マスト細胞や好塩基球からのヒスタミンの遊離が関連（介在）する疾患として例えばＩ型アレルギーや炎症反応が挙げられる。Ｉ型アレルギーは、即時型過敏症とも呼ばれ、ヒスタミンが過剰に分泌された場合、平滑筋、血管内皮細胞及び中枢神経等の組織において発現するヒスタミン１型受容体に結合し、その後血圧降下や平滑筋収縮等の生理作用を介した喘息発作や浮腫発赤等の症状を生じさせる。Ｉ型アレルギーの代表的な疾患として、気管支喘息、蕁麻疹、ＰＩＥ症候群、アトピー性皮膚炎、アレルギー性鼻炎、花粉症、並びに蜂毒、食物及び薬物等が原因で生ずるアナフィラキシーショック（薬物過敏症）が知られている。本実施形態の抗ヒスタミン剤により、これらの症状の緩和が期待される。したがって、本実施形態の抗ヒスタミン剤は、Ｉ型アレルギーの治療、症状の軽減又は発症抑制を得ることを目的とした治療剤又は予防剤として好ましく適用することができる。
【００１６】
本実施形態の抗ヒスタミン剤の具体的な配合形態としては、上記の作用効果を得ることを目的とした医薬品、研究用試薬、化粧品及び飲食品等として適用することができる。
本実施形態の抗ヒスタミン剤を医薬品として使用する場合は、目的等に応じ公知の投与方法を適宜採用することができる。例えば、患部への塗布、服用（経口摂取）により投与する場合の他、血管内投与、経皮投与等のあらゆる投与方法を採用することが可能である。剤形としては、抗ヒスタミン剤の目的等に応じ公知の剤形を適宜採用することができる。例えば、軟膏、液剤、スプレー剤、シート剤、散剤、粉剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、丸剤、坐剤、注射剤等が挙げられる。また、添加剤として賦形剤、基剤、乳化剤、溶剤、安定剤等を配合してもよい。
【００１７】
本実施形態の抗ヒスタミン剤をマスト細胞や好塩基球からのヒスタミン遊離抑制試薬の形態で実験用・研究用試薬として適用してもよい。上記ヒスタミンの遊離が関係する生理作用のメカニズムの解明又は各種症状の治療法等の研究・開発等の分野において好適に用いられる。
【００１８】
本実施形態の抗ヒスタミン剤を化粧品に適用する場合、化粧品基材に配合することにより製造することができる。化粧品の形態は、乳液状、クリーム状、粉末状等のいずれであってもよい。このような化粧品を肌に適用することにより、ヒスタミンを介する炎症の抑制作用等の効果を得ることができる。化粧品基剤は、一般に化粧品に共通して配合されるものであって、例えば、油分、精製水及びアルコールを主要成分として、界面活性剤、保湿剤、酸化防止剤、増粘剤、抗脂漏剤、血行促進剤、美白剤、ｐＨ調整剤、色素顔料、防腐剤及び香料から選択される少なくとも一種が適宜配合される。
【００１９】
本実施形態の抗ヒスタミン剤を飲食品に適用する場合、種々の食品素材又は飲料品素材に添加することによって使用することができる。飲食品の形態としては、特に限定されず、液状、粉末状、ゲル状、固形状等のいずれであってもよく、また剤形としては、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、ドリンク剤等のいずれであってもよい。その中でも、吸湿性が抑えられることから、カプセル剤であることが好ましい。前記飲食品としては、その他の成分としてゲル化剤含有食品、糖類、香料、甘味料、油脂、基材、賦形剤、食品添加剤、副素材、増量剤等を適宜配合してもよい。
【００２０】
本実施形態によって発揮される効果について、以下に記載する。
（１）本実施形態において、花粉荷、又は花粉荷の溶媒抽出物は、高い抗ヒスタミン作用を有している。したがって、抗ヒスタミン剤として抗ヒスタミン作用を目的とした医薬品、研究用試薬、化粧品、及び飲食品に好ましく適用することができる。
【００２１】
（２）本実施形態の抗ヒスタミン剤は、好ましくはＩ型アレルギー疾患の治療又は予防剤として用いられる。Ｉ型アレルギーは、マスト細胞や抗塩基球からのヒスタミンの遊離を介するアレルギーである。したがって、本実施形態の抗ヒスタミン剤は、Ｉ型アレルギーの代表的な症状である気管支喘息、蕁麻疹、アトピー性皮膚炎、並びに蜂毒、食物及び薬物等が原因で生ずるアナフィラキシーショック等に対し、治療剤又は予防剤として好ましく適用することができる。
【００２２】
（３）本実施形態の抗ヒスタミン剤において、花粉荷の溶媒抽出物を得るために用いられる溶媒は、好ましくは水、親水性有機溶媒、又は水／親水性有機溶媒の混合液である。したがって、有効成分として花粉荷自体を用いるよりも不純物の含有量が少ないため、より効果の高い抗ヒスタミン作用を発揮することができる。
【００２３】
（４）本実施形態では、抗ヒスタミン剤の有効成分として、天然素材である花粉荷又はその溶媒抽出物が用いられる。したがって、副作用を生ずるおそれがなく、安全に各種用途に適用することができる。
【００２４】
（５）本実施形態の抗ヒスタミン剤は、有効成分として花粉荷が含有される場合、花粉荷には、ビタミン及びミネラル等の多種多様な栄養素を含んでいる事から、摂取により各種栄養成分の補給も行うことができる。
【００２５】
なお、上記実施形態は以下のように変更してもよい。
・上記実施形態の抗ヒスタミン剤は、ヒトに適用される医薬品、化粧品及び飲食品のみならず、家畜等の飼養動物に対する医薬品等に適用してもよい。
【００２６】
・上記実施形態の抗ヒスタミン剤は、マスト細胞や抗塩基球からのヒスタミンの遊離が関係する疾患の症状の治療又は症状の軽減の為の用途のみならず、その疾患の症状の発症予防のために適用してもよい。
【実施例】
【００２７】
以下に試験例を挙げ、前記実施形態をさらに具体的に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
（製造例１）
半径数キロ以内の周辺植物としてシスタス属ジャラ等が存在するセイヨウミツバチの巣箱から花粉荷を得た。その花粉荷１００ｇに、抽出溶媒としてのエタノール６００ｇを加えて室温で４時間攪拌して抽出した。そして、前記花粉荷の攪拌抽出液を濾紙（アドバンテック東洋株式会社製のＮｏ．２）で濾過して、エタノールに不溶性の残渣と上澄み（抽出液）を分離することによって、抽出液３０ｇ（固形分４質量％）を得た。これを製造例１における花粉荷エタノール抽出エキス（花粉荷エタノール抽出物）とした。
【００２８】
（製造例２）
半径数キロ以内の周辺植物としてシスタス属ジャラ等が存在するセイヨウミツバチの巣箱から花粉荷を得た。その花粉荷１００ｇに、抽出溶媒としての水６００ｇを加えて６０℃で６時間攪拌して抽出した。そして、前記花粉荷の攪拌抽出液を濾紙（アドバンテック東洋株式会社製のＮｏ．２）で濾過して、水に不溶性の残渣と上澄み（抽出液）を分離することによって、抽出液５０ｇ（固形分７．５質量％）を得た。これを製造例２の花粉荷水抽出エキス（花粉荷水抽出物）とした。
【００２９】
（試験例１：マスト細胞からのヒスタミン遊離抑制試験）
花粉荷の生理活性作用の一つである抗ヒスタミン作用について、ラット腹腔内マスト細胞を用い、ヒスタミン遊離抑制作用を測定した。試料として上記製造例１，２の各花粉荷溶媒抽出エキスを使用した。陽性対象として甜茶水抽出エキス（松浦薬業社製、固形分１００％）を使用した。各試料は、固形分濃度が図１に記載の各量になるようリン酸緩衝生理食塩液で希釈した。
【００３０】
被験動物として、Ｗｉｓｔａｒ系雄ラットを用いた。ラットをエーテル過麻酔致死させた後、腹腔内にリン酸緩衝生理食塩液（Dulbecco's Phosphate Buffered Saline：Ｄ−ＰＢＳ（＋）、ナカライテスク社製）２０ｍＬを注入し、腹腔内液を回収した。回収液を、１２００ｒｐｍ、４℃、５分間遠心分離し、上清を除去した。さらに、リン酸緩衝生理食塩液（Ｄ−ＰＢＳ（−）、カルシウム及びマグネシウム不含、ナカライテスク社製）５ｍＬを加えた細胞浮遊液を、１２００ｒｐｍ、４℃、５分間遠心分離して上清を除去することを２回繰り返して、均一な細胞浮遊液を作成した。血球計算盤で細胞数を測定し、４×１０５ｃｅｌｌ／ｍＬに調整したものをマスト細胞浮遊液とした。
【００３１】
まず、１５ｍＬ容のプラスチック製チューブにマスト細胞浮遊液を２．５ｍＬ分注し、固形分濃度が上記所定量となるように調製した各試料を０．５ｍＬを加えた後、３７℃のウォーターバスで５分間前培養した。脱顆粒誘発剤として、Ｃｏｍｐｏｕｎｄ４８／８０（シグマアルドリッチジャパン社製）０．５ｍＬ（１０μｇ／ｍＬ）を添加した後、３７℃のウォーターバスで１０分間培養した。５分間、氷水中で反応を停止した。１２００ｒｐｍ、４℃、５分間遠心分離してマスト細胞を除去し、上清を回収して、遊離ヒスタミン量を測定した。ヒスタミンの分析は、市販のヒスタミン測定キット（チェックカラーヒスタミン、キッコーマン社製）を用いて行った。ヒスタミン遊離抑制率は、下記の計算式から算出した。
【００３２】
ヒスタミン遊離抑制率（％）＝[（ａ−ｃ）−（ｂ−ｃ）]／（ａ−ｃ）×１００
ａは脱顆粒誘発剤を加えたマスト細胞浮遊液上清中のヒスタミン量を示す（エキス０％）。ｂは脱顆粒誘発剤、及び花粉荷溶媒抽出エキス又は甜茶水抽出エキスを加えたマスト細胞浮遊液上清中のヒスタミン量を示す。ｃはマスト細胞浮遊液上清中のヒスタミン量を示す（ベースライン）。遊離したヒスタミン量及びヒスタミン遊離抑制率の結果を図１に示す。また、検量線を作成し、ヒスタミン遊離の８０％阻害濃度（抽出エキスの固形分濃度）を算出した。この結果を表１に示す。
【００３３】
【表１】
2010235524.tif 000002
図１に示されるように、花粉荷のエタノール抽出エキス及び水抽出エキス共に、ラット腹腔内マスト細胞からのヒスタミン遊離を濃度依存的に抑制することが確認された。表１に示されるように、マスト細胞からのヒスタミン遊離を抑制する作用は、花粉荷の水抽出エキスよりエタノール抽出エキスの方が高いことが確認される。
【００３４】
（試験例２：ラット好塩基球性白血病細胞からのヒスタミン遊離抑制試験）
花粉荷の生理活性作用の一つである抗ヒスタミン作用について、ラット好塩基球性白血病細胞を用い、ヒスタミン遊離抑制作用を測定した。試料として上記製造例１，２の各花粉荷溶媒抽出エキスを使用した。陽性対象として甜茶水抽出エキス（松浦薬業社製、固形分１００％）を使用した。各試料は、固形分濃度が図１に記載の各量になるようリン酸緩衝生理食塩液で希釈した。
【００３５】
ラット好塩基球性白血病細胞として、ＲＢＬ−２Ｈ３細胞を、１０％非動化牛胎児血清（シグマアルドリッチジャパン社製）、ペニシリン（１００Ｕ／ｍＬ、ナカライテスク社製）及びストレプトマイシン（０．１ｍｇ／ｍＬ、ナカライテスク社製）含有のダルベッコ改変イーグル培地（Dulbecco's modified Eagle’s medium：Ｄ−ＭＥＭ、シグマアルドリッチジャパン社製）にて５％ＣＯ２、３７℃の条件下で前培養を行った。前培養終了後、０．２５％トリプシン−１ｍＭのＥＤＴＡ溶液（ナカライテスク社製）を用いて細胞を剥がした。１０００ｒｐｍ、４℃、５分間遠心分離して細胞を集めた。血球計算盤で細胞数を測定し、４×１０５ｃｅｌｌ／ｍＬに調整したものをＲＢＬ−２Ｈ３細胞浮遊液とした。
【００３６】
まず、２４ウェルの培養プレートに、ＲＢＬ−２Ｈ３細胞浮遊液を５００μＬ（２×１０５ｃｅｌｌ／ウェル）播種し、５％ＣＯ２、３７℃の条件下で１２時間培養した。培養終了後、培地を除去し、ＰＢＳ（−）で各ウェルを洗浄した。Ｌ−ｇｌｕｔａｍｉｎｅ及びＰｈｅｎｏｌ  Ｒｅｄ不含のＤ−ＭＥＭ培地（シグマアルドリッチジャパン社製）を各ウェルに４００μＬ添加後、固形分濃度が上記所定量となるように調製した各試料を５０μＬを添加して、５％ＣＯ２、３７℃の条件下で３０分間培養した。異なる作用機序を想定して脱顆粒誘発剤として、カルシウムイオノホア（Ａ２３１８７、和光純薬社製）と、ＩｇＥ受容体のアゴニストであるコンカナバリンＡ（ＣｏｎＡ、和光純薬社製）及びホスファチジルセリン（ＰＳ、フナコシ社製）の組み合わせの２種類を用いた。Ａ２３１８７では、各ウェルに５０μＬ（１０μｇ／ｍＬ）添加した後、５％ＣＯ２、３７℃の条件下で３０分間培養した。ＣｏｎＡ（２ｍｇ／ｍＬ）及びＰＳ（０．５ｍｇ／ｍＬ）では、各ウェルに２５μＬずつ添加した後、５％ＣＯ２、３７℃の条件下で６０分間培養した。各ウェルの培養上清を回収し、１０００ｒｐｍ、４℃、５分間遠心分離してＲＢＬ−２Ｈ３細胞を除去した後、遊離ヒスタミン量を測定した。
【００３７】
ヒスタミンの分析は、市販のヒスタミン測定キット（チェックカラーヒスタミン、キッコーマン社製）を用いて行った。ヒスタミン遊離抑制率は、下記計算式から算出した。
ヒスタミン遊離抑制率（％）＝（ａ−ｂ）／ａ×１００
ａは脱顆粒誘発剤を加えた培養上清中のヒスタミン量を示す（エキス０％）。ｂは脱顆粒誘発剤、及び花粉荷溶媒抽出エキス又は甜茶水抽出エキスを加えた培養上清中のヒスタミン量を示す。遊離したヒスタミン量及びヒスタミン遊離抑制率の結果を図２，３に示す。ラット好塩基球性白血病細胞からのカルシウムイオノホアによるヒスタミン遊離の抑制効果の結果を図２に示す。ラット好塩基球性白血病細胞からのコンカナバリンＡ（ＣｏｎＡ）及びホスファチジルセリン（ＰＳ）によるヒスタミン遊離の抑制効果の結果を図３に示す。また、検量線を作成し、ヒスタミン遊離の８０％阻害濃度（抽出エキスの固形分濃度）を算出した。この結果を表２に示す。
【００３８】
【表２】
2010235524.tif 000003
脱顆粒誘発剤としてＡ２３１８７を用いた場合、花粉荷水抽出エキスにＲＢＬ−２Ｈ３細胞からのヒスタミン遊離を濃度依存的に抑制する効果が確認された。一方、花粉荷エタノール抽出エキスには、ヒスタミン遊離の抑制効果は確認されなかった。脱顆粒誘発剤としてＣｏｎＡ及びＰＳの組み合わせを用いた場合、花粉荷のエタノール抽出エキス及び水抽出エキス共に、ＲＢＬ−２Ｈ３細胞からのヒスタミン遊離の抑制効果が確認された。以上の結果より、花粉荷のエタノール抽出エキスは、細胞膜を安定化させることによりヒスタミン遊離を阻害している可能性が示唆される。一方、花粉荷の水抽出エキスは、カルシウム流入工程以降のシグナル伝達系を阻害している可能性が示唆される。
【００３９】
次に、上記実施形態及び別例から把握できる技術的思想について、それらの効果とともに以下に追記する。
（ａ）前記抗ヒスタミン剤を含有する医薬品、研究用試薬、化粧品、及び飲食品。
【００４０】
（ｂ）前記親水性有機溶媒は、エタノールである前記抗ヒスタミン剤。
（ｃ）花粉荷、又は花粉荷の溶媒抽出物を有効成分として含有することを特徴とするマスト細胞又は好塩基球における脱顆粒抑制剤又はヒスタミン遊離抑制剤。
【図１】
2010235524.tif 000004
【図２】
2010235524.tif 000005
【図３】
2010235524.tif 000006