(57)【要約】【課題】ＡＤＭ特有の抗体に対して特異的な結合性を有するペプチドを用いてＡＤＭの羅患の有無を簡便に検出する検査方法を提供する。【解決手段】本発明によって提供されるＡＤＭ検査方法は、被験者由来の被験試料に配列番号１若しくは配列番号２に示すアミノ酸配列または該いずれかのアミノ酸配列中の部分アミノ酸配列を含み、ＡＤＭ罹患者に特異的に存在する抗体と抗原抗体反応により特異的に結合し得る人為的に合成されたペプチドを接触させること、前記ペプチドと前記試料中の抗体との間で抗原抗体反応が生じ得る条件で該ペプチドと接触した状態の試料をインキュベートすること、前記インキュベート後に前記ペプチドに結合した前記試料由来の抗体量を測定すること、及び、前記抗体量に関する測定値に基づいて前記被験者のＡＤＭ罹患の有無を判定すること、を包含する。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＡＤＭ（Ａｍｙｏｐａｔｈｉｃ Ｄｅｒｍａｔｏｍｙｏｓｉｔｉｓ）の検査に用いられるペプチドであって、
配列番号１若しくは配列番号２に示すアミノ酸配列を含み、ＡＤＭ罹患者に特異的に存在する抗体と抗原抗体反応により特異的に結合し得る人為的に合成されたペプチド。
【請求項２】
配列番号１若しくは配列番号２に示すアミノ酸配列から構成されている、請求項１に記載のペプチド。
【請求項３】
ＡＤＭ（Ａｍｙｏｐａｔｈｉｃ Ｄｅｒｍａｔｏｍｙｏｓｉｔｉｓ）の検査のための試薬であって、
配列番号１若しくは配列番号２に示すアミノ酸配列または該いずれかのアミノ酸配列中の部分アミノ酸配列を含み、ＡＤＭ罹患者に特異的に存在する抗体と抗原抗体反応により特異的に結合し得る人為的に合成されたペプチド、
を備える、ＡＤＭ検査試薬。
【請求項４】
前記ペプチドは、配列番号１若しくは配列番号２に示すアミノ酸配列または該いずれかのアミノ酸配列中の部分アミノ酸配列から構成されている合成ペプチドである、請求項３に記載のＡＤＭ検査試薬。
【請求項５】
ＡＤＭ（Ａｍｙｏｐａｔｈｉｃ Ｄｅｒｍａｔｏｍｙｏｓｉｔｉｓ）の検査のためのキットであって、
配列番号１若しくは配列番号２に示すアミノ酸配列または該いずれかのアミノ酸配列中の部分アミノ酸配列を含み、ＡＤＭ罹患者に特異的に存在する抗体と抗原抗体反応により特異的に結合し得る人為的に合成されたペプチドと、
該ペプチドを担持した基材と、
を備える、ＡＤＭ検査キット。
【請求項６】
前記ペプチドは、配列番号１若しくは配列番号２に示すアミノ酸配列または該いずれかのアミノ酸配列中の部分アミノ酸配列から構成されている合成ペプチドである、請求項５に記載のＡＤＭ検査キット。
【請求項７】
ＡＤＭ（Ａｍｙｏｐａｔｈｉｃ Ｄｅｒｍａｔｏｍｙｏｓｉｔｉｓ）の検査方法であって、
被験者由来の被験試料に、配列番号１若しくは配列番号２に示すアミノ酸配列または該いずれかのアミノ酸配列中の部分アミノ酸配列を含み、ＡＤＭ罹患者に特異的に存在する抗体と抗原抗体反応により特異的に結合し得る人為的に合成されたペプチドを接触させること、
前記ペプチドと前記試料中の抗体との間で抗原抗体反応が生じ得る条件で該ペプチドと接触した状態の試料をインキュベートすること、
前記インキュベート後に前記ペプチドに結合した前記試料由来の抗体量を測定すること、及び、
前記抗体量に関する測定値に基づいて前記被験者のＡＤＭ罹患の有無を判定すること、
を包含する、ＡＤＭ検査方法。
【請求項８】
前記ペプチドとして、配列番号１若しくは配列番号２に示すアミノ酸配列または該いずれかのアミノ酸配列中の部分アミノ酸配列から構成されている合成ペプチドを使用する、請求項７に記載の検査方法。
【請求項９】
検査対象の前記ペプチドと特異的に結合する抗体がヒトＩｇＧであり、抗ヒトＩｇＧ抗体を使用して該抗ヒトＩｇＧ抗体と前記ペプチドに特異的に結合する抗体との間で抗原抗体反応を生じさせ、該抗体に結合した抗ヒトＩｇＧ抗体量を測定することによって前記抗体量に関する測定値を決定する、請求項７又は８に記載の検査方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、皮膚筋炎の一種であって筋症状の乏しい皮膚筋炎として知られるＡＤＭ（Ａｍｙｏｐａｔｈｉｃ Ｄｅｒｍａｔｏｍｙｏｓｉｔｉｓ）の診断に有効なペプチド及びそれを有効成分とする検査試薬とキットに関する。また、該ペプチド及び該ペプチドを有効成分とするＡＤＭ検査試薬を用いて行うＡＤＭの検査方法（診断方法）に関する。
【背景技術】
【０００２】
皮膚筋炎（Ｄｅｒｍａｔｏｍｙｏｓｉｔｉｓ；ＤＭ）は１８６３年にＷａｇｅｎｅｒが多発性筋炎（Ｐｏｌｙｍｙｏｓｉｔｉｓ；ＰＭ）として最初に記載した疾患で、国内における患者数は約８，５００人(１０万あたり５〜８人、人口約１億３０００万人から平均を算出)である。
ところで、皮膚筋炎の一種として筋痛やＣＰＫ（クレアチンホスホキナーゼ）上昇といったような筋症状があまり見られないタイプが存在し、一般にＡｍｙｏｐａｔｈｉｃ
Ｄｅｒｍａｔｏｍｙｏｓｉｔｉｓ、略してＡＤＭと呼ばれている。かかる筋症状の乏しいタイプの皮膚筋炎を当該医学分野と同様に本願明細書ならびに特許請求の範囲においても「ＡＤＭ」と呼称することとする。
ＡＤＭ患者はＤＭ患者全体の約１割を占めると言われているが、統計調査は行われておらず、正確な患者数は不明である。ＡＤＭは、呼吸器症状が表れた後、数週間〜数箇月で死亡する急速進行性間質性肺炎（特許文献１）を合併することが多い。特に日本や他のアジア諸国の患者でこの傾向は顕著である（非特許文献１）。従って、ＡＤＭの早期検査・早期診断は重要である。
【０００３】
ＡＤＭの発症原因は解明されていないが、筋炎特異的な自己抗体の存在が知られていることから、自己免疫が重要な役割を果たすと考えられている（特許文献２、非特許文献２参照）。このことに関連し、２００５年には佐藤らがＡＤＭと急速進行性間質性肺炎に関連する抗ＣＡＤＭ−１４０抗体の存在を報告している（非特許文献３）。しかしながら、これに関しては臨床例が少なく診断マーカーとしての有用性は厳密に示されていない。従って、ＡＤＭ罹患者に特異的に認められる抗体（例えば自己抗体）に特異的に結合するエピトープを構成するペプチドを用いて、ＡＤＭ罹患の有無を判定（診断）できる臨床検査方法を開発する事は、極めて有意義である。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開２００５−３０８５２号公報
【特許文献２】特開２００７−１０１４８８号公報
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】リウマチ(Ryumachi)、３０巻、１９９０年、ｐｐ．２０４−２１１
【非特許文献２】ジャーナル・オブ・インベスティゲイティブ・ダーマトロジー(Journalof Investigative Dermatology)、１００巻、１９９３年、ｐｐ．１１６−１２３
【非特許文献３】アースライティス・アンド・リウマチ(ARTHRITIS &RHEUMATISM)、５２巻（５号）、２００５年、ｐｐ．１５７１−１５７６
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
そこで本発明は、ＡＤＭに関する上記従来の課題を解決すべく創出されたものであり、ＡＤＭの罹患者に特異的に認められるＡＤＭ特有の抗体に対して特異的な結合性を有するペプチド、ならびに該ペプチドを用いてＡＤＭの罹患の有無を簡便に検出する検査方法と検査試薬とキットを提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、上記課題を解決すべく免疫学的、分子生物学的研究を重ねた結果、特定のアミノ酸配列を有するペプチドが、ＡＤＭ罹患者の血清中において特異的に存在（産生）するある種の抗体（以下、かかるＡＤＭ罹患者に特異的な抗体を「ＡＤＭ抗体」と略称する。）に特異的に認識されて抗原抗体反応により該抗体と結合することを見出した。そして、該ペプチドを用いることによって、ＡＤＭの罹患の有無を簡便且つ精度良く判別できる診断法を構築するに至った。
【０００８】
本発明によってＡＤＭの検査のための試薬が提供される。ここで開示される一つの態様のＡＤＭ検査試薬は、以下のアミノ酸配列、即ち、
ＶＭＬＧＤＰＤＴＰＰＧＲＲＲ（配列番号１）；
若しくは
ＱＥＲＧＨＱＧＨＤＥＨＧＷＤＶＤＤＲＧＤＬＧＥＧＩＱ（配列番号２）；
に示すアミノ酸配列、または、該いずれかのアミノ酸配列中の部分アミノ酸配列（即ち該いずれかのアミノ酸配列の一部であってＡＤＭ抗体に認識されるエピトープを形成し得る数の連続するアミノ酸残基からなる部分アミノ酸配列）、
を含み、ＡＤＭ罹患者に特異的に存在する抗体（ＡＤＭ抗体）と抗原抗体反応により特異的に結合し得る人為的に合成されたペプチドを備える。
【０００９】
また、本発明によってＡＤＭの検査のためのキットが提供される。ここで開示される一つの態様のＡＤＭ検査キットは、上記の配列番号１若しくは配列番号２に示すアミノ酸配列または該いずれかのアミノ酸配列中の部分アミノ酸配列（即ち該いずれかのアミノ酸配列の一部であってＡＤＭ抗体に認識されるエピトープを形成し得る数の連続するアミノ酸残基からなる部分アミノ酸配列）を含み、ＡＤＭ罹患者に特異的に存在する抗体と抗原抗体反応により特異的に結合し得る人為的に合成されたペプチドと、該ペプチドを担持（固定）した基材とを備える。
【００１０】
また、本発明によって、ＡＤＭの検査方法が提供される。かかるＡＤＭ検査方法は、ここで開示されるいずれかのＡＤＭ検査試薬及び／又は試薬キットを使用することを一つの特徴とする。
即ち、ここで開示される一つの態様のＡＤＭ検査方法は、
被験者由来の被験試料に、配列番号１若しくは配列番号２に示すアミノ酸配列または該いずれかのアミノ酸配列中の部分アミノ酸配列（即ち該いずれかのアミノ酸配列の一部であってＡＤＭ抗体に認識されるエピトープを形成し得る数（例えば４〜１２個）の連続するアミノ酸残基からなる部分アミノ酸配列）を含み、ＡＤＭ罹患者に特異的に存在する抗体（ＡＤＭ抗体）と抗原抗体反応により特異的に結合し得る人為的に合成されたペプチドを接触させること、
上記ペプチドと上記試料中の抗体との間で抗原抗体反応が生じ得る条件で該ペプチドと接触した状態の試料をインキュベートすること、
上記インキュベート後に上記ペプチドに結合した上記試料由来の抗体量を測定すること、及び、
上記抗体量に関する測定値に基づいて上記被験者のＡＤＭ罹患の有無を判定すること、
を包含する。
【００１１】
かかる構成のＡＤＭ検査試薬及び検査キットならびにＡＤＭ検査方法では、本発明者によって創出された所定のアミノ酸配列を有し且つＡＤＭ罹患者に特異的に存在するＡＤＭ抗体と抗原抗体反応により特異的に結合し得る人為的に合成されたペプチド（以下、本発明に係るペプチドを「ＡＤＭ抗体エピトープペプチド」という。）が使用されている。このことによって、ＡＤＭが疑われる被験者由来の生体試料（典型的には被験者から予め採取しておいた血液等の生体成分を含む試料、若しくは被験者の体液等から分離した少なくとも被験者由来の抗体を含む試料をいう。）中にＡＤＭ罹患者に特異的に存在する（産生される）ＡＤＭ抗体が存在するか否かの判定及び存在するＡＤＭ抗体の量を従来の免疫化学的手法により容易に求めることができる。
従って、本発明によると、当該被験者がＡＤＭを罹患しているか否かをインビトロの検査にて容易に且つ簡易に判定（診断）することができる。
【００１２】
好ましい一つの態様のＡＤＭ検査試薬及び検査キットならびにＡＤＭ検査方法では、使用するＡＤＭ抗体エピトープペプチドが配列番号１若しくは配列番号２に示すアミノ酸配列または該いずれかのアミノ酸配列中の部分アミノ酸配列（即ち該いずれかのアミノ酸配列の一部であってＡＤＭ抗体に認識されるエピトープを形成し得る数（例えば４〜１２個の連続するアミノ酸残基からなる部分アミノ酸配列）から構成されている合成ペプチドである。
かかる比較的少ないアミノ酸残基数の鎖長の短い合成ペプチド（典型的には直鎖状のペプチド）を用いることによって、より容易にインビトロの検査にてＡＤＭ罹患の有無の判定（診断）を行うことができる。また、短い合成ペプチドを使用することにより、ペプチド製造コストを低く抑えることができる。
【００１３】
また、本発明によって提供されるＡＤＭ抗体エピトープペプチドとして、好ましい一態様に、配列番号１若しくは配列番号２に示すアミノ酸配列を含みＡＤＭ罹患者に特異的に存在するＡＤＭ抗体と抗原抗体反応により特異的に結合し得る人為的に合成されたペプチドが挙げられる。特に好ましい一態様は、配列番号１若しくは配列番号２に示すアミノ酸配列から構成されているペプチドである。このようなペプチドは、ここで開示されるＡＤＭ検査試薬の構成成分として適する。また、このようなペプチドを使用してここで開示されるＡＤＭ検査方法を好適に実施することができる。
【００１４】
また、ここで開示されるＡＤＭ検査方法では、従来からよく用いられている種々の免疫化学的手法によってＡＤＭ抗体エピトープペプチドに特異的に結合したＡＤＭ抗体を検出し、その結合した抗体量を測定することが可能であるが、好ましくは、二次抗体を使用する方法である。即ち、ここで開示されるＡＤＭ検査方法の好ましい一態様では、検査対象のＡＤＭ抗体エピトープペプチドと抗原抗体反応により特異的に結合する抗体がヒトＩｇＧであり、抗ヒトＩｇＧ抗体を使用して該抗ヒトＩｇＧ抗体と上記ペプチドに結合した抗体との間で抗原抗体反応を生じさせ、該抗体に結合した抗ヒトＩｇＧ抗体量を測定することによって上記抗体量に関する測定値を決定することを特徴とする。
かかる構成の二次抗体を使用する免疫化学的手法（例えばＥｎｚｙｍｅ Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ(ＥＩＡ)法、特にＥｎｚｙｍｅ−Ｌｉｎｋｅｄ  Ｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔ  Ａｓｓａｙ(ＥＬＩＳＡ)法を行うことにより、高精度にＡＤＭ抗体量を検出し測定することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】一実施例に係る配列番号１に示すペプチドを使用して実施したＡＤＭ検査方法の結果を示す散布図であり、被験者をＡＤＭ患者群、その他の幾つかの自己免疫疾患の患者群、及び健常人群に分類し、各被験者から得られた生体試料（２００倍希釈の血清試料）についてＥＬＩＳＡ法に基づいてＡＤＭ抗体量を酵素活性の程度として測定した結果を示す図である。なお、図中の＊、＊＊、＊＊＊＊は、ｔ検定（Student's t-test）を用いてＡＤＭ患者群の測定値と他の被験者群との比較を行った際の統計学的有意差（即ち、＊：ｐ＜０.０５、＊＊：ｐ＜０.０１、＊＊＊＊：ｐ＜０.０００１）を示す。また、図中の点線は本結果から得られた特異度９９％において陽性率が最も高い値(カットオフ値)を表す。
【図２】他の一実施例に係る配列番号２に示すペプチドを使用して実施したＡＤＭ検査方法の結果を示す散布図であり、被験者をＡＤＭ患者群、その他の幾つかの自己免疫疾患の患者群、及び健常人群に分類し、各被験者から得られた生体試料（１０００倍希釈の血清試料）についてＥＬＩＳＡ法に基づいてＡＤＭ抗体量を酵素活性の程度として測定した結果を示す図である。なお、図中の＊、＊＊＊＊は、ｔ検定（Student's t-test）を用いてＡＤＭ患者群の測定値と他の被験者群との比較を行った際の統計学的有意差（即ち、＊：ｐ＜０.０５、＊＊＊＊：ｐ＜０.０００１）を示す。また、図中の点線は本結果から得られた特異度９９％において陽性率が最も高い値(カットオフ値)を表す。
【図３】一実施例に係る配列番号１に示すペプチドを使用して実施したＡＤＭ検査方法（ＥＬＩＳＡ）におけるＡＤＭ患者群の測定データと他の自己免疫疾患患者群の測定データを用いて感度（縦軸）と特異性（横軸）をプロットしたＲＯＣ（Receiver Operating Characteristic）カーブを示すグラフである。図中矢印はカットオフ値を表す。
【図４】他の一実施例に係る配列番号２に示すペプチドを使用して実施したＡＤＭ検査方法（ＥＬＩＳＡ）におけるＡＤＭ患者群の測定データと他の自己免疫疾患患者群の測定データを用いて感度（縦軸）と特異性（横軸）をプロットしたＲＯＣカーブを示すグラフである。図中矢印はカットオフ値を表す。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
以下、本発明の好適な実施形態を説明する。なお、本明細書において特に言及している事項（例えばＡＤＭ抗体エピトープペプチドの一次構造や鎖長）以外の事柄であって本発明の実施に必要な事柄（例えば、抗原抗体反応を生じさせるためのインキュベート条件設定を包含するＥＬＩＳＡ等の免疫化学的手法、ペプチドの化学合成法、ペプチドを成分とする検査試薬の調製法と保存法に関するような一般的事項）は、医学、薬学、有機化学、生化学、遺伝子工学、タンパク質工学、分子生物学、衛生学等の分野における従来技術に基づく当業者の設計事項として把握され得る。本発明は、本明細書に開示されている内容と当該分野における技術常識とに基づいて実施することができる。
なお、本明細書においては、アミノ酸をIUPAC-IUBガイドラインで示されたアミノ酸に関する命名法に準拠した１文字表記（但し配列表では３文字表記）で表す。また、本明細書中で引用されている全ての参考文献の全ての内容は本明細書中に参照として組み入れられている。
【００１７】
本願において「人為的に合成されたペプチド」とは、そのペプチド鎖がそれのみで独立して自然界に安定的に存在するものではなく、人為的な化学合成或いは生合成（即ち遺伝子工学に基づく生産）によって製造され、所定の系（例えばＡＤＭ検査試薬を構成する液状若しくは固形状の組成物）の中で安定して存在し得るペプチドをいう。
本願において「ペプチド」とは、複数のペプチド結合を有するアミノ酸ポリマーを指す用語であり、構成アミノ酸残基数に応じてポリペプチド、オリゴペプチドと呼ばれるものを包含する用語である。本発明に係るＡＤＭ抗体エピトープペプチドは、ＡＤＭ罹患者に特異的に存在する抗体と抗原抗体反応により特異的に結合し得る（即ちエピトープを構成し得る）限りにおいてペプチド鎖に含まれるアミノ酸残基の数は限定されない。典型的には全アミノ酸残基数が２００以下であり、特に１００以下であることが好ましい。７０以下程度（例えば１０〜５５程度）のアミノ酸残基からなるペプチド鎖はＡＤＭ抗体エピトープペプチドとして好適である。
【００１８】
また、本願における「ペプチド」には、単純な直鎖構造、螺旋構造、環状構造、等のアミノ酸ポリマー（ペプチド鎖）のみからなるペプチドのほか、各種の修飾ペプチドが包含される。例えばアミノ酸配列のＣ末端やペプチド鎖中のアミノ酸残基の側鎖のカルボキシル基（−ＣＯＯＨ）がアミド化（−ＣＯＮＨ２）したものやエステル化（−ＣＯＯＲ）したものが修飾されたペプチドの典型例として挙げられる。ここでエステル基におけるＲとしては、例えば、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル等の炭素数１〜６のアルキル基や、シクロペンチル、シクロヘキシル等の炭素数３〜８のシクロアルキル基や、フェニル、α−ナフチル等の炭素数６〜１２のアリール基等が好ましい。また、アミノ酸配列のＮ末端やペプチド鎖中のアミノ酸残基の側鎖のアミノ基がアセチル化されたものも修飾されたペプチドの典型例である。このほかにも、Ｎ末端のアミノ基が保護基（例えば、ホルミル基、アセチル基等の炭素数１〜６のアシル基など）で保護されているもの、生体内で切断されて生成するＮ末端のグルタミン残基がピログルタミン酸化したもの、ペプチド鎖中のアミノ酸残基の側鎖の置換基（水酸基、メルカプト基、アミノ基、イミダゾール基、インドール基、グアニジノ基、等）が適当な保護基で保護されているものも本願における「ペプチド」に包含され得る。
また、糖鎖を有するもの（糖鎖ペプチド）も、ここで開示される所定のアミノ酸配列を有しＡＤＭ罹患者に特異的に存在する抗体と抗原抗体反応により特異的に結合し得る人為的に合成されたペプチドである限り、本願に係るＡＤＭ抗体エピトープペプチドに包含されるペプチドである。
【００１９】
また、種々の塩の形態（ペプチド塩）も、ここで開示される所定のアミノ酸配列を有しＡＤＭ罹患者に特異的に存在する抗体と抗原抗体反応により特異的に結合し得る人為的に合成されたペプチドとして機能し得る限り、本願に係るＡＤＭ抗体エピトープペプチドに包含されるペプチドである。例えば、薬学的に好ましい酸付加塩の形態であり得る。この種のペプチド塩として、種々の無機酸塩（リン酸塩、塩酸塩、硫酸塩、臭化水素酸塩、等）、或いは種々の有機酸塩（酢酸塩、酒石酸塩、ギ酸塩、シュウ酸塩、プロピオン酸塩、フマル酸塩、クエン酸塩、マレイン酸塩、コハク酸塩、リンゴ酸塩、安息香酸塩、メタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩）の塩等が挙げられる。或いは、ナトリウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属塩、マグネシウム塩、カルシウム塩等のアルカリ土類金属塩、モノメチルアミン塩やトリエチルアミン塩等のアミン塩、トリメチルエチルアンモニウム塩、テトラメチルアンモニウム塩等の第４級アンモニウム塩であってもよい。
【００２０】
本発明者は、多種多様な微生物を含む土壌から得た微生物由来のゲノムライブラリーを構築し、ＡＤＭ患者血清を用いての幾多のスクリーニングを鋭意検討しつつ行うことによって、配列番号１及び配列番号２にそれぞれ示すアミノ酸配列のペプチドがＡＤＭ罹患者に特異的に存在するとみられる抗体に特異的に認識され得るエピトープを構成し、該抗体と特異的に結合し得ることを見出し、かかる特性をＡＤＭ検査方法に適用することにより本発明を完成するに至った。
【００２１】
即ち、ここで開示されるＡＤＭ抗体エピトープペプチドの典型例は、以下のいずれかのアミノ酸配列：
ＶＭＬＧＤＰＤＴＰＰＧＲＲＲ（配列番号１）；
若しくは
ＱＥＲＧＨＱＧＨＤＥＨＧＷＤＶＤＤＲＧＤＬＧＥＧＩＱ（配列番号２）；
により構成される人為的に合成されたペプチドである。
以下、便宜上、本発明に係る配列番号１に示すアミノ酸配列からなるペプチドを「第１エピトープペプチド」といい、本発明に係る配列番号２に示すアミノ酸配列からなるペプチドを「第２エピトープペプチド」という。
【００２２】
上記第１エピトープペプチドならびに第２エピトープペプチドは、それ自体でＡＤＭ抗体エピトープペプチドとして好ましく使用することができるが、ここで開示されるＡＤＭ検査方法に使用されるＡＤＭ抗体エピトープペプチドを、かかる２種に厳格に限定する必要はない。ＡＤＭ罹患者に特異的に存在する抗体（ＡＤＭ抗体）と特異的に結合し得る限りにおいて第１エピトープペプチド或いは第２エピトープペプチドのアミノ酸配列に基づく種々の改変ペプチドを採用することができる。
例えば、第１エピトープペプチドや第２エピトープペプチドをそのまま使用する代わりに、配列番号１又は２に示すアミノ酸配列の一部であってＡＤＭ抗体に認識されるエピトープ（典型的にはシークエンシャルエピトープ）を形成し得る数（例えば４〜１２個程度、特に５〜１０個程度）の連続するアミノ酸残基からなる部分アミノ酸配列で構成される改変ペプチドを使用することができる。このようなエピトープ部位（即ち、使用する部分アミノ酸配列）の決定は、従来公知の種々のエピトープ解析を行うまでもなく、例えば、配列番号１又は２に示すアミノ酸配列中から適宜選択する５〜８個程度の連続するアミノ酸残基からなるペプチドを合成し、実際にＡＤＭ抗体を含むＡＤＭ患者の生体試料（典型的には血清等の血液試料）とインキュベートし、抗原抗体反応の有無を確認することによって容易に行うことができる。
そうして得られた部分アミノ酸配列からなるペプチド、或いは該部分アミノ酸配列を含み、ＡＤＭ罹患者に特異的に存在する抗体（ＡＤＭ抗体）と特異的に結合し得る合成ペプチドもまた、ここで開示されるＡＤＭ検査方法に好適に使用することができる。
【００２３】
或いは、エピトープとしてＡＤＭ抗体に認識され得る限りにおいて、第１エピトープペプチドや第２エピトープペプチド、若しくは上記のような部分アミノ酸配列（エピトープを構成する配列）を含むペプチドであってもよい。例えば、配列番号１に示すアミノ酸配列（第１エピトープペプチド）及び／又は配列番号２に示すアミノ酸配列（第２エピトープペプチド）が２若しくは３単位以上相互に近接して配置されたペプチド鎖からなるペプチドもまたＡＤＭ罹患者に特異的に存在する抗体（ＡＤＭ抗体）と抗原抗体反応により特異的に結合し得る合成ペプチドである限り、ここで開示されるＡＤＭ検査方法に好適に使用し得るペプチドであり得る。なお、使用するＡＤＭ抗体エピトープペプチドを効率よく合成するという観点からは、ペプチド鎖を構成するアミノ酸残基数は、２００以下が適当であり、１００以下が好ましく、７０以下（好ましくは１０〜５５程度、例えば５０以下）が特に好ましい。
【００２４】
ここで開示されるＡＤＭ抗体エピトープペプチドのうち、比較的短いもの（例えば第１エピトープペプチドや第２エピトープペプチドのようなペプチド鎖を構成するアミノ酸残基数が５０以下の比較的短いものは、一般的な化学合成法に準じて容易に製造することができる。例えば、従来公知の固相合成法又は液相合成法のいずれを採用してもよい。アミノ基の保護基としてＢｏｃ（t-butyloxycarbonyl）或いはＦｍｏｃ（9-fluorenylmethoxycarbonyl）を適用した固相合成法が好適である。即ち、市販のペプチド合成機を用いた固相合成法により、所望するアミノ酸配列や修飾（Ｃ末端アミド化等）部分を有するペプチド鎖を容易に合成することができる。なお、詳しい合成プロセスや原理を知らなくても市販の全自動ペプチド合成装置を用いることにより、目的のペプチドを容易に製造することができる。
【００２５】
或いは、遺伝子工学的手法に基づいてＡＤＭ抗体エピトープペプチドを生合成してもよい。このアプローチは、ペプチド鎖の比較的長いＡＤＭ抗体エピトープペプチドを製造する場合に好適である。すなわち、所望するＡＤＭ抗体エピトープペプチドのアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列（ＡＴＧ開始コドンを含む。）のＤＮＡを合成する。そして、このＤＮＡと該アミノ酸配列を宿主細胞内で発現させるための種々の調節エレメント（プロモーター、リボゾーム結合部位、ターミネーター、エンハンサー、発現レベルを制御する種々のシスエレメントを包含する。）とから成る発現用遺伝子構築物を有する組換えベクターを、宿主細胞に応じて構築する。
一般的な技法によって、この組換えベクターを所定の宿主細胞（例えばイースト、昆虫細胞、植物細胞、動物（哺乳類）細胞）に導入し、所定の条件で当該宿主細胞又は該細胞を含む組織や個体を培養する。このことにより、目的とするＡＤＭ抗体エピトープペプチドを細胞内で発現、生産させることができる。そして、宿主細胞（分泌された場合は培地中）からポリペプチドを単離し、精製することによって、目的のアミノ酸配列から成るペプチドを得ることができる。一般的な技法によって、この組換えベクターを所定の宿主細胞（例えばイースト、昆虫細胞、植物細胞、哺乳類細胞）に導入し、所定の条件で当該宿主細胞又は該細胞を含む組織や個体を培養する。このことにより、目的とするポリペプチドを細胞内で発現、生産させることができる。そして、宿主細胞（分泌された場合は培地中）からＡＤＭ抗体エピトープペプチドを単離し、精製することによって、目的のペプチドを得ることができる。
なお、組換えベクターの構築方法及び構築した組換えベクターの宿主細胞への導入方法等は、当該分野で従来から行われている方法をそのまま採用すればよく、かかる方法自体は特に本発明を特徴付けるものではないため、詳細な説明は省略する。
【００２６】
本発明によって提供されるＡＤＭ検査試薬は、上述したような構成の本発明に係るＡＤＭ抗体エピトープペプチドを少なくとも１種備える試薬である。かかる検査試薬は、従来の免疫化学的診断法に用いられる検査試薬と同様、主成分たるペプチドの他に、種々の成分を含み得る。通常、ペプチドの他、ペプチドを変性させない少なくとも１種の副成分を含み得る。例えば、液状の試薬であれば、生理食塩水や薬学的に許容できる各種の緩衝液を溶媒、即ちキャリア（担体）として含ませることができる。その他、従来の診断薬剤やペプチド製剤と同様、防腐剤、安定化剤、ｐＨ調整剤等の薬剤を添加してもよい。また、固体状（典型的には粉末形態）のペプチドを備える形態の試薬でもよい。この場合、各種糖質（デキストリン、乳糖等）のような賦形剤を含ませることができる。
【００２７】
また、検査試薬を構成するＡＤＭ抗体エピトープペプチドは、予め種々の標識物質で標識されたものであってもよい。
例えば、上記ペプチドの標識物質として、ＥＬＩＳＡ等の免疫化学的手法による診断分野において当業者が通常用いる標識化合物を使用することができる。例えば、３Ｈ、１４Ｃ、１３１Ｉ、９９ｍＴｃ等の放射性同位元素；β−ガラクトシダーゼ、β−グルコシダーゼ、アルカリフォスファターゼ、パーオキシダーゼ、リンゴ酸脱水素酵素等の酵素；フルオレスカミン、フルオレセインイソチオシアネート等の蛍光物質；ルシフェリン、ルミノール誘導体、イソルミノール誘導体等の発光物質；等が挙げられる。
これらの標識物質を使用してのペプチド標識化は、従来公知の方法で行えばよく、本発明を特徴付ける手法でもないため、詳細な説明は省略する。
【００２８】
ここで開示されるＡＤＭ検査方法は、ＡＤＭ抗体エピトープペプチドを用いての免疫化学的手法によって、被験者から得た生体試料（典型的には被験者から採取した血液由来の試料）中のＡＤＭ抗体を検出する方法であり、該ＡＤＭ抗体の検出が行い得る限りにおいて、種々の態様の方法を採用することができる。例えば、ＥＩＡ、放射免疫測定法（ＲＩＡ）、蛍光免疫測定法（ＦＩＡ）、化学発光免疫測定法（ＣＬＩＡ）、ゲル内沈降反応、免疫比濁法、粒子凝集反応法、等が挙げられる。
例えば、一般的に用いられる免疫化学的手法は、入江 寛編「ラジオイムノアッセイ」（講談社、昭和４９年発行）、入江 寛編「続ラジオイムノアッセイ」（講談社、昭和５４年発行）、石川栄治ら編「酵素免疫測定法」（医学書院、昭和５３年発行）、石川栄治ら編「酵素免疫測定法」（第２版）（医学書院、昭和５７年発行）、石川栄治ら編「酵素免疫測定法」（第３版）（医学書院、昭和６２年発行）などを参照することができる。
【００２９】
また、検査法の内容に応じてキットに含まれる試薬や器具を適宜選択すればよい。例えば、免疫化学的手法の種類や適用される検出・測定装置（通常は市販の装置を用い、その使用マニュアルに応じて適する薬品類や器具（基材等）が選択される。）に応じて、上記検査試薬を構成するペプチドや各種担体（生理食塩水のような溶媒を包含する。）の他に、溶解液（各種の緩衝液等）、洗浄液、酵素、酵素基質液、酵素反応検出試薬、色素、反応停止液、緩衝液、等が試薬キットに備えられ得る。これらは溶液の形態で備えられてもよく、或いは固体（粉末等）の形状で備えられており、使用時に溶液を調製する形態でもよい。
なお、ＡＤＭ抗体エピトープペプチド以外のキット構成成分や器具類は、従来のこの種の診断分野で通常用いられているものであればよく、本発明を何ら特徴付けるものではないため、詳細な説明は省略する。
【００３０】
本発明に係るＡＤＭ検査方法の実施において、好ましくは、標識化された若しくは標識化されていないＡＤＭ抗体エピトープペプチドを予め基材に担持させたものを含むキットを使用する。或いは、キットに基材（プレート等）とＡＤＭ抗体エピトープペプチドとを別個に装備しておき、使用時にＡＤＭ抗体エピトープペプチドを当該基材に担持（固定化）させてもよい。
なお、かかる基材としては、典型的には種々の高分子化合物（例えばアガロース、セルロース）や合成樹脂（例えばポリスチレン、ポリプロピレン、ポリカーボネート）製若しくはガラス等のセラミック製であるものが挙げられる。基材の形状は、使用目的に応じてプレート、ビーズ、メンブレン、スティック、試験管等の形状が挙げられ、特に制限はない。ペプチドの基材への担持（固定）方法は、従来と同様でよく特に制限はない。例えば、従来公知の物理的吸着法、共有結合法、イオン結合法、架橋法等を採用すればよい。
【００３１】
好ましい一態様のＡＤＭ検査方法として、いわゆる二次抗体を使用する方法が挙げられる。その場合、使用するＡＤＭ検査キットには、適当な二次抗体と該二次抗体を検出し且つその量を免疫化学的手法により測定し得る試薬類とが含まれる。
ＡＤＭ抗体を検出可能な二次抗体であれば特に制限なく使用することができるが、ＡＤＭ抗体の典型例はＩｇＧであると考えられることから、好ましい二次抗体は抗ヒトＩｇＧである。抗ヒトＩｇＧマウス抗体、抗ヒトＩｇＧラット抗体、抗ヒトＩｇＧヤギ抗体、抗ヒトＩｇＧウサギ抗体、等の一般に市販されている二次抗体を特に制限なく用いることができる。
このような二次抗体（典型的には抗ヒトＩｇＧ抗体）を使用して免疫化学的手法（例えばＥＩＡ法、特にＥＬＩＳＡ法）を行うことによって、該二次抗体と上記ペプチドに結合したＡＤＭ抗体との間の抗原抗体反応に基づき該抗体に結合した二次抗体（典型的には抗ヒトＩｇＧ抗体）の量に関する測定値を、より高精度及び／又は高感度に決定することができる。
【００３２】
また、二次抗体を使用するＡＤＭ検査方法の好ましい一態様では、標識化された若しくは標識化されていない二次抗体（典型的には抗ヒトＩｇＧ抗体）を予め基材に担持させたものを含むキットを使用する。或いは、キットには基材（プレート等）とＡＤＭ抗体エピトープペプチドと二次抗体とをそれぞれ別個に装備しておき、使用時に二次抗体（典型的には抗ヒトＩｇＧ抗体）を当該基材に担持（固定化）させてもよい。
【００３３】
ここで開示されるＡＤＭ検査方法の好ましい実施形態についてさらに詳細に説明する。
本発明に係るＡＤＭ検査方法は、少なくとも１種のＡＤＭ抗体エピトープペプチドをＡＤＭ抗体のエピトープを構成する人為的な抗原物質として利用する方法である。即ち、ＡＤＭ抗体エピトープペプチドに対して被験者の生体試料中にＡＤＭ抗体が存在すると、抗原抗体反応による抗原抗体複合体が生成され、この複合体を検出及び測定することによりＡＤＭの罹患の有無などを診断する方法である。
検査対象物である被験試料は、上述したような免疫化学的手法に用いられ得るものであれば特に制限はなく、予め被験者から採取した被験者由来の生体試料、例えば、血液、血漿、血清、リンパ液、腹水、唾液、滑液、髄液、精液、涙液、汗、尿、等をそのまま若しくは適宜希釈等して調製したものを使用することができる。特に血液、血清、血漿の使用が好ましい。或いはまた、被験者から採取した血液等の試料から予め抗体成分を単離した抗体試料を用いてもよい。
【００３４】
例えば被験者の血清試料を被験試料とし、免疫化学的手法としてＥＬＩＳＡを例示するならば、測定対象のＡＤＭ抗体を例えば以下の方法で検出及び測定することができる。
先ず、ＡＤＭ抗体エピトープペプチドをプレート等の基材に担持（固定化）し、これに被験試料としての血清試料を加え、４〜４０℃程度（例えば３０〜３７℃）の温度条件下で所定時間（例えば０．５時間〜２４時間）インキュベートする。試料中にＡＤＭ抗体が存在すると、インキュベートの間に抗原抗体反応によって基材に担持されているＡＤＭ抗体エピトープペプチドとＡＤＭ抗体とが結合する。即ち、ＡＤＭ抗体が基材に固定される。
次いで、ＡＤＭ抗体エピトープペプチドを介して基材に捕捉（固定）されているＡＤＭ抗体（主としてＩｇＧ）の検出およびその量の測定を、二次抗体を使用して行う。例えば所定の標識物質（典型的には酵素分子や酵素の基質となり得る物質）で標識した二次抗体として抗ヒトＩｇＧ抗体（例えば抗ヒトＩｇＧマウスＩｇＧ）を添加して再度インキュベートを行い、抗原抗体反応によりＡＤＭ抗体に二次抗体を特異的に結合させる。次いで、上記標識物質に対応した適当な酵素反応を生じさせ、該反応に基づいてＡＤＭ抗体量を測定（算出）する。そして、得られた測定値に基づいて被験者のＡＤＭ罹患の有無を判定する。典型的には、所定のカットオフ値と比較することによって被験者のＡＤＭ罹患の有無を判定することができる。
或いはまた、抗ヒトＩｇＧ抗体等の検出用試薬を、予め基材に固定化し、これに血清を添加して該血清中のＡＤＭ抗体を捕捉させ、次いで、ＡＤＭ抗体エピトープペプチドを加えることで、被験試料中に存在するＡＤＭ抗体を検出し、測定することも可能である。これらの測定手法における各種手段の選択やそれらの改変などはいずれも当業者に公知である（「臨床検査法提要」金原出版、１９９５年等参照）。
【００３５】
なお、上述したＥＬＩＳＡにおいては、基材上に固相化されたＡＤＭ抗体エピトープペプチドに被験試料（血清）を添加して反応（１次反応）させ、さらに標識した抗ヒトＩｇＧ抗体を反応（２次反応）させた後、基材上の標識物質の活性を測定することによりＡＤＭ抗体を検出ならびにその量の測定をするものであるが、かかる１次反応と２次反応は、同時に行なってもよいし時間をずらして行なってもよい。なお、二次抗体は必ずしも１種類である必要はなく、測定感度を向上させる等の目的で２種類以上の抗体の混合物を用いてもよい。
【００３６】
上記の測定系（ＥＬＩＳＡ）において使用する溶媒としては、反応に悪影響を与えないものであれば一般的に使用されているものであればよく、例えばリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）等のリン酸緩衝液、トリス塩酸緩衝生理食塩水（ＴＢＳ）等のトリス塩酸緩衝液、ホウ酸緩衝液、クエン酸緩衝液、酢酸緩衝液等のｐＨが６〜９程度の緩衝液及び、Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０、Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）Ｘ−１００等の界面活性剤及びウシ血清アルブミン（以下「ＢＳＡ」という。）やミルクタンパク質等の安定化剤、ＮａＮ３等の防腐剤を含んだ上記緩衝液等が挙げられる。
【００３７】
上記の工程で、抗原抗体反応の複合体（標識化合物による標識体が含まれる）の測定は、使用する標識化合物の種類に応じた方法で行うことができる。例えば、標識化合物に酵素を使用した場合、標識体の酵素活性を測定するが、酵素活性の測定は、使用する酵素の種類に応じて公知の方法に従って行うことができる。これらの酵素活性を測定する為には、酵素に応じた基質、例えばパーオキシダーゼでは３,３’,５’,５−テトラメチルベンジジン（ＴＭＢと略記）やｏ−フェニレンジアミン（ＯＰＤと略記）を、アルカリフォスファターゼにはｐ−ニトロフェニルフォスフェート（ｐＮＰＰと略記）を添加して一定時間反応させた後、分光光度計などで発色を測定する方法が広く用いられている。
【００３８】
ここで開示されるＡＤＭ検査方法の好ましい具体的な一態様を以下に要約する。
＜１＞ＡＤＭ抗体エピトープペプチドをマイクロプレート（基材）の各ウェル内に担持（固定）する。通常、ウェル内の非特異的な結合部位をふさぐため、ＢＳＡやカゼイン等の蛋白質、Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０等の界面活性剤でブロッキング操作を行う。
＜２＞被験試料（血清或いは血漿）を、必要であればＢＳＡやカゼイン等の蛋白質、Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０等の界面活性剤を含む緩衝液（試料希釈液）で希釈し、上記マイクロプレートに添加し、所定時間インキュベートして抗原抗体反応を行う（１次反応）。
＜３＞マイクロプレートを、できればＴｗｅｅｎ（登録商標）２０等の界面活性剤を含む緩衝液（洗浄液）で洗浄後、標識された抗ヒトＩｇＧ抗体を、ＢＳＡやカゼイン等の蛋白質、Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０等の界面活性剤を含む緩衝液（希釈液）で希釈して添加し、所定時間インキュベートして抗原抗体反応を行う（２次反応）。
＜４＞マイクロプレートを、上記洗浄液で洗浄後、標識に応じた方法（酵素標識であれば酵素活性、放射性標識であれば放射活性）を測定する。
【００３９】
以下、本発明に関するいくつかの実施例を説明するが、本発明をかかる実施例に示すものに限定することを意図したものではない。
【００４０】
＜実施例１：合成ペプチド＞
サンプル１及び２の計２種類のＡＤＭ抗体エピトープペプチドを市販のペプチド合成機を用いて製造した。即ち、サンプル１は上述した配列番号１に示すアミノ酸配列からなる第１エピトープペプチドであり、サンプル２は上述した配列番号２に示すアミノ酸配列からなる第２エピトープペプチドである。なお、表１には、各サンプルペプチドの総アミノ酸残基数、分子量（ｋＤａ）、等電点、疎水性度を示している。なお、表１中の疎水性度は全構成アミノ酸残基に占める疎水性アミノ酸残基数の百分率（％）である。
【００４１】
【表１】
2010285416.tif 000003
【００４２】
＜実施例２：ＡＤＭ検査＞
実施例１で得られた２種のサンプルペプチド（ＡＤＭ抗体エピトープペプチド）を用いてＥＬＩＳＡを実施し、ＡＤＭ患者群、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）患者群、全身性強皮症（ＳＳｃ）患者群、間質性肺炎患者群、関節リウマチ（ＲＡ）患者群、皮膚筋炎（ＤＭ）／多発性筋炎（ＰＭ）患者群、ならびに健常人群からそれぞれ得た血清試料に対する反応性を調べた。
【００４３】
市販の合成樹脂製マイクロタイタープレート（９６ウェル）の各ウェルにサンプル１又はサンプル２のペプチドを担持させた。
具体的には、０．１％ＮａＮ３を含むＰＢＳでサンプル１のペプチド濃度が０．５μｇ／ｍＬとなる担持用ペプチド溶液を調製した。一方、サンプル２については０．１％ＮａＮ３を含むＰＢＳでペプチド濃度が２．０μg／ｍＬとなる担持用ペプチド溶液を調製した。
これらをマイクロタイタープレートの各ウェルに添加し、４℃で一晩インキュベートした。次いで、０．１％Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０を含むＰＢＳで各ウェルを洗浄した後、ブロッキングバッファー（２％ＢＳＡ、５％シュクロース、０.１％ＮａＮ３を含むＰＢＳ）でブロッキングした。これにより、サンプル１のペプチド担持（固定化）プレートと、サンプル２のペプチド担持（固定化）プレートをそれぞれ作製した。
【００４４】
上記の各疾患の患者群ならびに健常人群の生体試料を用いて本実施例に係るＡＤＭ検査方法を行った。
具体的には、各被験者から得た血清試料（即ち、ＡＤＭ患者１４例、ＳＬＥ患者３３例、ＳＳｃ患者２０例、間質性肺炎患者１４例、ＲＡ患者５０例、ＤＭ／ＰＭ患者５０例、健常人由来８３例）を、試料希釈液（１％ＢＳＡ、０.１％Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０を含むＴＢＳ）を用いて希釈した。サンプル１を使用する試験区では１／２００に希釈した。一方、サンプル２を使用する試験区では１／１０００に希釈した。
次いで、希釈した試料を各ウェルに１００μＬずつ添加した。そして、２２℃で１時間静置した状態でインキュベートし、その後、ＰＢＳＴ（０.１％Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０を含むＰＢＳ）で６回洗浄した。
【００４５】
そして、同バッファーで１／４０００に希釈したＨＲＰ（Horseradish Peroxidase）標識した抗ヒトＩｇＧ抗体（ＤＡＫＯ社製）溶液を添加し、２２℃で１時間静置した状態でインキュベートした後、同バッファーで８回洗浄した。
次に発色基質としてＴＭＢ溶液（ＤＡＫＯ社製）を添加し、２２℃で３０分間反応させた後、停止液（２ＮのＨ２ＳＯ４）を添加して反応を停止した。次いで、市販のプレートリーダーにて吸光度（４５０ｎｍ−６００ｎｍ）を測定した。データの解析は、吸光度値をユニット（Ｕ／ｍＬ）に換算して行なった。吸光度（Ａ）４５０ｎｍ−吸光度（Ａ）６００ｎｍの値が１．５前後となるような標準液をあらかじめ希釈し、更に３倍希釈を２段階行い、各々１０００Ｕ／ｍＬ、３３３Ｕ／ｍＬ、１１１Ｕ／ｍＬと値付けた。これらとブランクの４点を用いて作成したｓｔａｎｄａｒｄ ｃｕｒｖｅにより測定値をユニットに換算した。各試料の測定は２点測定とし、その平均値を解析に用いた。
２点の測定値のｃｖ値が１０％以上の場合は、再度、測定を実施した。測定結果を散布図として図１（サンプル１を使用した試験区）及び図２（サンプル２を使用した試験区）に示す。
【００４６】
そして、ＡＤＭ患者群の測定値と他の疾患の患者群における測定値（吸光度値）との間でそれぞれ有意差検定（ｔ検定（Student's t-test））を行った。その結果、サンプル１（第１エピトープペプチド）を使用した試験区では、健常人群を含め他の全ての疾患の患者群とＡＤＭ患者群との間で有意差が認められた（但し、間質性肺炎患者群においては、換算不能な高値の１例が見られたため、有意差検定は未実施）。
また、サンプル２（第２エピトープペプチド）を使用した試験区においても、ＤＭ／ＰＭ患者群及び健常人群とＡＤＭ患者群との間で有意差が認められた。
【００４７】
図３に、サンプル１（第１エピトープペプチド）を使用した試験区に関してのＡＤＭと他疾患におけるＲＯＣカーブを示す。また、図４に、サンプル２（第２エピトープペプチド）を使用した試験区に関してのＡＤＭと他疾患におけるＲＯＣカーブを示す。
これらＲＯＣカーブに基づき、各試験区において特異度９９％において陽性率が最も高い値をカットオフ値として求めた。具体的には、サンプル１（第１エピトープペプチド）を使用した試験区のカットオフ値は３０８．８Ｕ／ｍＬ、サンプル２（第２エピトープペプチド）を使用した試験区のカットオフ値は５２８．０Ｕ／ｍＬである。
これらカットオフ値を用いて、各疾患患者血清の測定値について陽性判定を行い、陽性率を求めた。結果を表２に示す。
【００４８】
【表２】
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【００４９】
表２に示すように、ＡＤＭ患者群の血清に対する陽性率は、サンプル１を使用した試験区で２８.６％、サンプル２を使用した試験区で１４．３％であったのに対し、ＳＬＥ等その他の自己免疫疾患または健常人血清に対する偽陽性率は０〜７．１％であった。
この結果より、本実施例に係るＡＤＭ検査方法がＡＤＭの罹患の有無およびその他の自己免疫疾患との鑑別に利用できる事が示された。
【産業上の利用可能性】
【００５０】
以上に説明したように、ここで開示されるＡＤＭ抗体エピトープペプチドを使用することにより、ＡＤＭの診断における検査試薬ならびに検査キットを提供し、免疫化学的手法によってＡＤＭ罹患の有無を簡便に或いは迅速に検出することが可能となる。
【配列表フリーテキスト】
【００５１】
配列番号１  合成ペプチド
配列番号２  合成ペプチド
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【配列表】
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