(57)【要約】      （修正有）【課題】生体適合性を有し、毒性がなく、且つ量的制限なく工業生産プロセスにより容易に調製される、再生可能な天然資源を使用する新規痩身剤の提供。【解決手段】少なくとも１つの極性溶媒で抽出することにより得られる穀類抽出物を含む痩身剤。好ましくは、糖化合物を豊富に含有し、キシラン又はアラビノキシラン等の少なくとも１つのキシラン誘導体を含有する穀物が用いられ、更に好ましくは小麦、ライ麦、大麦又はオート麦から選択される穀類が用いられる。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくとも１つの極性溶媒で抽出することにより得られる穀類抽出物を含む痩身剤。
【請求項２】
抽出物は単独の穀類の全体若しくは一部から又は少なくとも１つの他の穀類との混合物として得られる請求項１に記載の痩身剤。
【請求項３】
穀類は、糖化合物を豊富に含有し、特にキシラン又はアラビノキシラン等の少なくとも１つのキシラン誘導体を豊富に含有する請求項１又は２に記載の痩身剤。
【請求項４】
穀類は、小麦、ライ麦、大麦又はオート麦から選択される請求項１又は３に記載の痩身剤。
【請求項５】
抽出物は、線維、特に穀類の茎若しくは葉、種子、殻、又はふすまに含有される線維から選択される少なくとも１つの穀類の断片から、又は前記穀類のフレークから得られる請求項１又は３に記載の痩身剤。
【請求項６】
抽出物は、ライ麦フレークの抽出物である請求項１又は３に記載の痩身剤。
【請求項７】
穀類抽出物は、選択された穀類又は穀類断片を極性溶媒又は極性溶媒混合物に接触させることにより調製される請求項１又は３に記載の痩身剤。
【請求項８】
溶媒又は溶媒混合物は、水、エタノール等のＣ１〜Ｃ４アルコール、Ｃ２〜Ｃ６グリコール、及びそれらの混合物から選択される請求項１又は３に記載の痩身剤。
【請求項９】
グリコール溶媒は、グリセリン、ブチレングリコール、プロピレングリコール、及びそれらの混合物から選択される請求項８に記載の痩身剤。
【請求項１０】
抽出物は、水抽出物、又は少なくとも５０体積％の水を含むアルコール水溶液若しくはグリコール水溶液中での抽出により得られる抽出物である請求項１又は３に記載の痩身剤。
【請求項１１】
穀類抽出物は、一連の以下のステップ：
穀類又は穀類の一部を水に懸濁するステップ、
同時又は連続的な酵素により加水分解（複数回可）するステップ、
濾過、遠心分離、沈降により可溶相と不溶相を分けるステップ、
熱処理するステップ、
濾過により有効画分を精製するステップ、並びに
滅菌ろ過するステップ
を含む方法により調製される請求項１又は３に記載の痩身剤。
【請求項１２】
抽出物は、グルコース、キシロース及びキシラン並びにそれらの誘導体等の糖化合物を豊富に含有する請求項１又は３に記載の痩身剤。
【請求項１３】
抽出物は、抽出物を構成する固形分に対するパーセントで表わして、少なくとも９０質量％の総糖類を含む請求項１又は３に記載の痩身剤。
【請求項１４】
請求項１〜１３のいずれか一項に記載の穀類抽出物を含む痩身剤を痩身剤の１つとして含む痩身活性を有する美容組成物。
【請求項１５】
穀類抽出物の濃度は、０．０００１質量％〜１質量％である請求項１４に記載の美容組成物。
【請求項１６】
穀類抽出物の濃度は、美容組成物の質量に対して、抽出物乾燥質量として、特に０．０１質量％〜０．５質量％である請求項１４に記載の美容組成物。
【請求項１７】
本発明の美容効果に類似する及び／又はこれを補足する美容効果を有し、且つ例えば、細胞内ｃＡＭＰ濃度に対して作用することによる脂質生成、脂質分解、又は脂質貯蔵に対する作用により痩身効果を有する活性剤、組織内への水の浸透等セルライトの出現を引き起こす因子に対して作用する活性剤、及び細胞外マトリックスの保護により再構成効果を有し且つ組織の堅さを保持するよう作用する活性剤である、１つ又は複数の別の美容活性剤を含む請求項１４又は１５に記載の美容組成物。
【請求項１８】
顔料、着色剤、ポリマー、界面活性剤、流動剤、香料、電解質、ｐＨ調整剤、抗酸化剤及び防腐剤並びにそれらの混合物から特に選択されてもよい、化粧料に許容される少なくとも１つの添加剤を更に含む請求項１４又は１５に記載の美容組成物。
【請求項１９】
美容液、ローション、クリーム等のエマルション、又はヒドロゲルの形態である、又はスティック若しくはパッチの形態である請求項１４又は１５に記載の美容組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、痩身美容組成物中の痩身活性剤としての穀類抽出物の新規な使用、及び上記組成物の使用による美容術の方法にも関する。
【背景技術】
【０００２】
脂肪組織は生体のエネルギー均衡の制御において中心的役割を果たす。脂肪組織は、凝集細胞、脂肪細胞、及び豊富な結合性血管性間質から構成される。脂肪細胞（又は脂肪性細胞）は、脂質（本質的にトリグリセリド）としてエネルギーを蓄えるかこのエネルギーを脂肪酸及びグリセリンとして細胞外媒質中に放出する。この目的で、脂肪細胞は細胞全体の約８０％を占める非常に大きな脂肪液胞を含む。
【０００３】
これらの脂質は脂肪酸のエステル化によりトリアシルグリセリンとして貯蓄される（脂質生成）。トリグリセリドリパーゼによりトリアシルグリセリンが加水分解されると、脂肪酸が放出されて血流中に入る（脂肪分解）。
【０００４】
皮下組織内に存在する成熟脂肪細胞は脂肪細胞前駆体又は前駆脂肪細胞から形成され、脂肪細胞前駆体又は前駆脂肪細胞とは脂肪組織内で脂肪細胞に分化可能な線維芽細胞である。成長期の後、前駆脂肪細胞の細胞増殖は停止する。次いで脂肪細胞分化過程に入る。
【０００５】
最終分化の過程で脂肪細胞は著しい脂質生成能力を示す。その結果、細胞質中に脂肪液胞が徐々に蓄積され、その後融解する。このステップは周囲媒質中のホルモン、サイトカイン、生長因子又はビタミン等の因子により上方又は下方制御される。
【０００６】
脂肪細胞の分化過程により「インテグリン」として知られる細胞表面タンパク質の発現特性及び組成が変化する。
【０００７】
これらのインテグリンは、大きな細胞外部分、膜貫通部分、及び概して非常に短く且つ酵素活性のない細胞質部分を各々有する。
【０００８】
インテグリンは結合組織を形成する分子の受容体に例えることができる。インテグリンは細胞表面に存在するヘテロダイマーのファミリーであり、その各々は非共有結合により結合するα−サブユニット及びβ−サブユニットから構成される。α鎖としては１４のアイソフォームが知られ、β鎖としては９のアイソフォームが知られている。これらのα及びβアイソフォームが様々な形で互いに結合することにより２０以上の受容体が生じ、その結果系に多様性がもたらされる。
【０００９】
インテグリンは細胞間接着及び細胞−細胞外マトリックスタンパク質（ラミニン、フィブロネクチン、コラーゲン、ビトロネクチン等）接着に関連する。細胞内では、インテグリンの細胞質部分がタリン又はα−アクチニン等の細胞骨格の多様なタンパク質と結合している。膜貫通部分は接着の制御を促進するだけでなく、細胞の挙動（静止状態、遊走状態、増殖、分泌等）を変更できる細胞内シグナルの伝達も可能にする。
【００１０】
インテグリンはまたシグナル伝達及び遺伝子制御における役割も有する。それぞれフィブロネクチン及びラミニンの受容体であるα５及びα６インテグリンが前駆脂肪細胞の増殖及び脂肪細胞への分化を相互に制御することが示されている（Ｌｉｕ  Ｊ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  Ｍｅｔａｂ．２００５  Ｓｅｐ；２（３）：１６５−７７）。上記著者らはα５インテグリンの発現が増大すると分化する細胞が減少することを示している。α５サブユニットは前駆脂肪細胞中に多く発現するが脂肪細胞中では検出されていない。逆に、α６サブユニットは前駆脂肪細胞中では検出されていないが脂肪細胞中では豊富である。
【００１１】
α５インテグリンを過剰発現する細胞は、線維芽細胞の表現型を維持し脂肪滴をほとんど含まない。細胞中におけるα６インテグリンの過剰発現は、細胞分化誘導の５日後に細胞内トリグリセリドの合成を誘導する。
【００１２】
したがって、細胞を未分化の状態（前駆脂肪細胞）に維持するα５インテグリンと、シグナル伝達過程の「制御」により脂肪細胞への最終分化を導くα６インテグリンとの間のインテグリンタンパク質発現の切り替えが、脂肪細胞分化過程において生じるということである。
【００１３】
ＦＲ２８９３５０４（ＳＩＬＡＢ）は水溶液として得られる穀類及び／又はマメ科植物抽出物を開示している。上記抽出物は抗老化、特に抗しわ効果を目的とした美容組成物中で活性剤として使用される。
【００１４】
しかし、ＦＲ２８９３５０４中には、上記抽出物に関し、皮膚脂肪組織の細胞におけるインテグリン発現に対しての有効性は示唆されず、また上記抽出物の美容組成物の痩身活性剤としての使用についても想定されていない。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１５】
本発明の主要な目的は、生体適合性を有し、毒性がなく、且つ量的制限なく工業生産プロセスにより容易に調製される、再生可能な天然資源の使用する新規痩身剤の提供からなる、新たな技術的課題の解決である。
【００１６】
上記技術的課題は、工業及び化粧品規模で利用可能な容易且つ安価な方法で本発明により初めて解決される。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】未処理対照細胞の培地における４つの異なる部分について得られた４つの画像を示し、これらを、細胞核及び未処理対照細胞表面におけるα５インテグリン網目状構造の発現の検知のための免疫標識に関する本明細書中の実施例２、第４項に記載の方法により分析する。
【図２】培地中で固形分約０．０５質量％となるよう希釈したライ麦水抽出物で処理した細胞の培地における４つの異なる部分について得られた４つの画像を示し、これらを処理細胞表面におけるα５インテグリンの発現について観察する。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
したがって、本発明の主題は、少なくとも１つの極性溶媒で抽出することにより得られる穀類抽出物を含む新規痩身剤、及び上記痩身剤を含む美容組成物である。本発明は、上記痩身剤を含む、身体の必要箇所に対して痩身効果をもたらす美容術の方法にも関する。
【００１９】
特定の一実施形態によれば、抽出物は単独の穀類の全体若しくは一部から又は少なくとも１つの他の穀類との混合物として得られる。
【００２０】
別の特定の実施形態によれば、上記穀類は糖化合物を豊富に含有し、特に少なくとも１つの［α］−Ｌ−アラビノ−フラノース基が［β］−（１−４）結合により結合したＤ−キシロピラノース骨格からなる、キシラン又はアラビノキシラン等の少なくとも１つのキシラン誘導体を特に豊富に含有する穀類である。
【００２１】
別の特定の実施形態によれば、上記穀類は小麦、ライ麦、大麦、又はオート麦から選択される。
【００２２】
更に別の特定の実施形態によれば、上記穀類抽出物は、線維、特に穀類の茎若しくは葉、種子、殻、又はふすまに含有される線維から選択される少なくとも１つの穀類の断片から、又は上記穀類のフレークから得られる。一変形実施形態によれば、上記フレークは抽出前に湿熱処理した穀類の種子から得ることができる。
【００２３】
特に好ましい一実施形態によれば、上記抽出物はライ麦フレークの抽出物である。
【００２４】
上記穀類抽出物は、選択された穀類又は穀類断片を極性溶媒又は極性溶媒混合物に接触させることにより有利に調製される。
【００２５】
抽出ステップに使用可能な極性溶媒として、溶媒又は溶媒混合物は、水、エタノール等のＣ１−Ｃ４アルコール、並びにグリセリン、ブチレングリコール及びプロピレングリコールから好ましく選択されるＣ２〜Ｃ６グリコール、並びにそれらの混合物から有利に選択される。
【００２６】
特定の一実施形態によれば、上記抽出物は水抽出物、又は少なくとも５０体積％の水を含むアルコール水溶液若しくはグリコール水溶液中での抽出により得られる抽出物である。
【００２７】
特に好ましい一変形形態によれば、調製方法は仏国特許出願第２，８９３，５０４号に記載の方法に従い、その内容は本出願に参照により組み込まれる。
【００２８】
したがって、本発明の穀類抽出物は、以下のステップを連続して有利に含み得る方法により有利に調製される：
穀類又は穀類の一部を水に懸濁するステップ、
同時に又は続いて酵素により加水分解（複数回可）するステップ、
濾過、遠心分離、沈降により可溶相と不溶相を分離するステップ、
熱処理するステップ、
濾過により活性画分を精製するステップ、並びに
滅菌ろ過するステップ。
【００２９】
本発明の好ましい一変形形態によれば、上記穀類抽出物はグルコース、キシロース、及びキシラン並びにそれらの誘導体等の糖化合物を特に豊富に含有する。
【００３０】
本発明の更に別の好ましい変形形態によれば、上記抽出物は、抽出物を構成する固形分に対するパーセントで表わして糖少なくとも９０質量％、好ましくは少なくとも９５質量％の総糖類を含む。
【００３１】
第２の態様によれば、本発明は、痩身活性を有する美容組成物において、糖化合物を豊富に含有し、少なくとも１つの極性溶媒により得られる穀類抽出物を痩身剤の１つとして含むことを特徴とする美容組成物をも対象とし、上記抽出物は上記に定義される通り、又は以下の記載全体の結果として得られる。
【００３２】
上記組成物の特定の一実施形態によれば、上記組成物は、穀類抽出物の濃度が、美容組成物の質量に対する抽出物乾燥質量として、０．０００１質量％〜１質量％、特に０．０１質量％〜０．５質量％であることを特徴とする。
【００３３】
本発明の組成物は、本発明の美容効果に類似する及び／又はこれを補足する美容効果を有する１つ又は複数の別の美容活性剤を有利に含んでもよい。
【００３４】
上記有利な活性剤は特に、例えば、環状３’，５’−アデノシン一リン酸（環状ＡＭＰ又はｃＡＭＰ）の細胞内濃度に対して作用することによる脂質生成、脂質分解、又は脂質貯蔵に対する作用により痩身効果を有する活性剤、組織内への水の浸透等セルライトの出現を引き起こす因子に対して作用する活性剤、及び細胞外マトリックスの保護により再構成効果を有し且つ組織の堅さを保持するよう作用する活性剤から選択されてもよい。
【００３５】
したがって、本発明の組成物は、フィトスフィンゴシン、又は化粧料に許容されるその塩、特にその塩酸塩を、好ましくは、組成物総質量に対して０．００１質量％〜１質量％、好ましくは０．０５質量％〜０．５質量％の濃度で含んでもよい。
【００３６】
本発明の組成物は、ｃＡＭＰ及びその誘導体、アデニル酸シクラーゼ酵素を活性化する活性剤、並びにホスホジエステラーゼ酵素を阻害する活性剤からなる群より選択される１つ又は複数の活性剤を含んでもよい。
【００３７】
ｃＡＭＰ誘導体としては、化粧料に許容される任意のｃＡＭＰ誘導体、特に塩又はアシル化誘導体、とりわけモノブチリル又はジブチリル誘導体を選択してもよい。
【００３８】
上記美容組成物において、ｃＡＭＰ又はその誘導体は組成物総質量に対して０．００１質量％〜５質量％の濃度で有利に使用される。
【００３９】
アデニル酸シクラーゼ活性化剤としては、組成物総質量に対して好ましくは０．００１質量％〜１質量％、好ましくは０．０５質量％〜０．２５質量％の濃度の、フォルスコリン又はフォルスコリン含有植物抽出物が有利に選択される。
【００４０】
フォルスコリン含有抽出物としては、コレウス・フォルスコリ（Ｃｏｌｅｕｓ  ｆｏｒｓｋｈｏｌｉｉ）抽出物、特に上記植物の外皮抽出物が好ましく選択される。このような抽出物は欧州特許第４８６５９５号記載の方法等の抽出方法により取得可能である。
【００４１】
植物テフロシア・パープレア（Ｔｅｐｈｒｏｓｉａ  ｐｕｒｐｕｒｅａ）の抽出物、特に上記植物の種子抽出物を組成物総質量に対して０．００１質量％〜５質量％、好ましくは０．０１質量％〜５質量％の濃度でアデニル酸シクラーゼ活性化剤として使用してもよい。上記抽出物は例えば、欧州特許第７１１１４１号記載の抽出方法により取得可能である。
【００４２】
ホスホジエステラーゼ阻害剤としては、３−イソブチル−１−メチルキサンチン若しくはＩＢＭＸ等のキサンチン、カフェイン、又はテオフィリンを、組成物質量に対して好ましくは０．００１質量％〜１０質量％、更に好ましくは０．０１〜１質量％の濃度で使用してよい。
【００４３】
本発明の組成物は、ヒメコラノキ（Ｃｏｌａ  ａｃｕｍｉｎａｔａ）抽出物、リノール酸、ヴィニフェラ種ヨーロッパブドウ（Ｖｉｔｉｓ  ｖｉｎｉｆｅｒａ）抽出物、スフィンゴ糖脂質、ジヒドロミリセチン、ヘキサペプチド−１１、セイヨウウツボグサ（Ｐｒｕｎｅｌｌａ  ｖｕｌｇａｒｉｓ）加水分解抽出物とケイトウ（Ｃｅｌｏｓｉａ  ｃｒｉｓｔａｔａ）加水分解抽出物の混合物、アノゲイスス・レイオカープス（Ａｎｏｇｅｉｓｓｕｓ  ｌｅｉｏｃａｒｐｕｓ）抽出物、特に上記植物の外皮抽出物、キャッサバ（Ｍａｎｉｈｏｔ  ｕｔｉｌｉｓｓｉｍａ）の葉抽出物、マデカッソシド又はマデカッソシド含有植物抽出物、ビタミンＡエステル、特にパルミチン酸レチノール、セリコサイド又はセリコサイド含有植物抽出物、Ｎ−アセチル−ジペプチド−１−ヘキサデシルエステル、及びビスナガベラ抽出物から選択される活性剤を含んでもよい。
【００４４】
本発明の組成物は、顔料、着色剤、ポリマー、界面活性剤、流動剤、香料、電解質、ｐＨ調整剤、抗酸化剤、及び防腐剤、並びにそれらの混合物から特に選択されてもよい、化粧料に許容される少なくとも１つの添加剤を更に含む。
【００４５】
本発明の美容組成物は、例えば、美容液、ローション、クリーム等のエマルション、又はヒドロゲルの形態であってもよく、又はスティック若しくはパッチの形態であってもよい。
【００４６】
第３の態様によれば、本発明は、少なくとも１つの穀類抽出物を含む痩身美容組成物の身体皮膚の対象領域に対する局所塗布を含むことを特徴とする痩身美容術方法にも関し、上記組成物は上記に定義される通り、又は以下の記載全体の結果として得られる。
【００４７】
したがって、本発明は、容易且つ安価であり且つ工業及び化粧品規模で利用可能な方法により、再生可能な天然資源を使用して新規痩身剤を提供することにより上述の新たな技術的課題を確かに解決することが理解される。
【実施例】
【００４８】
実施例１−本発明のライ麦抽出物の調製
植物ライ麦（Ｓｅｃａｌｅ  ｃｅｒｅａｌｅ）の種子から得たフレークの蒸煮処理により抽出物を調製する。
【００４９】
抽出方法は以下のステップを有利に含む：
ライ麦フレークを水に懸濁するステップ、
酵素的加水分解をするステップ、
可溶相と不溶相を分けるステップ、
熱処理するステップ、
精製及び滅菌ろ過するステップ。
【００５０】
抽出プロセス終了後、固形分約５質量％を含有するライ麦抽出物の水溶液が得られる。
【００５１】
乾燥物の割合は、１０５℃のオーブン中に所与の質量の試料を入れて質量が実質上一定に達するまで保持することにより測定される。
【００５２】
総糖類濃度はデュボワ（ＤＵＢＯＩＳ）の方法（Ｄｕｂｏｉｓ  Ｍ．§  ａｌ（１９５６）Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２８，Ｎ°３，Ｐ  ３５０−３５６）により決定される。
【００５３】
この方法は、濃硫酸及びフェノールを糖と反応させて黄味がかったオレンジ色の化合物を得ることを含む。検量線から試料の総糖類濃度を決定できる。
【００５４】
本発明の活性剤を構成する穀類抽出物（本実施例中ではライ麦抽出物）の水溶液中の総糖類濃度は４５〜６５ｇ／ｌである。
【００５５】
単糖（モノサッカライド）濃度は５％程度であり、グルコース約９６％、キシロース約３％、及びアラビノース約１％を含む。
【００５６】
下記表により、本発明の抽出物／活性剤の糖類又は糖分画に含まれるグルコース、キシロース、及びアラビノースが実質的に二糖、五糖、及びオリゴ糖として含まれることが示される。
【００５７】
【表１】
2010285431.tif 000002
【００５８】
実施例２−脂肪細胞におけるα５インテグリン発現に対する活性剤の調節効果
３Ｔ３−Ｆ４４２Ａ前駆脂肪細胞をスライドグラス上で培養し、その上にフィブロネクチンを流すことにより接着及び細胞増殖を促進する（Ｋｕｗａｄａ  ＳＫ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  Ｃｅｌｌ．２０００  Ｊｕｌ；１１（７）：２４８５−９６；Ｓａｓｔｒｙ  ＳＫ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．１９９９  Ｍａｒ  ２２；１４４（６）：１２９５−３０９）。
【００５９】
実施例１により得られたライ麦水抽出物で処理した３Ｔ３−Ｆ４４２Ａ前駆脂肪細胞を免疫蛍光法に供して、α５インテグリン発現を調べる。多様な標識を共焦点顕微鏡により視覚化し、次いで、細胞表面におけるα５インテグリンの存在に対応する蛍光を画像解析により定量する。
【００６０】
材料及び方法
１−試薬
ダルベッコ改変イーグル最小必須培地（ＤＭＥＭ）＋グルコース４．５ｇ／ｌ：ＩＮＶＩＴＲＯＧＥＮ
仔ウシ血清（ＣＳ）：ＢＩＯＷＥＳＴ
ＰＢＳ（ＤＰＢＳ＋ＣａＣｌ２＋ＭｇＣｌ２  ＧＩＢＣＯ１４０４０−０９１）
ＢＳＡ：ウシ血清アルブミンＳＩＧＭＡ
１０％ホルマリン、４％ホルムアルデヒド溶液（ＳＩＧＭＡ）
抗α５インテグリン抗体（ＳＡＮＴＡ  ＣＲＵＺ  ＢＩＯＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ）
アレクサ・フルオル（Ａｌｅｘａ  ｆｌｕｏｒ）５４６結合抗ウサギヤギ抗体（ＩＮ  Ｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ）
シトックスグリーン（ＳＹＴＯＸＧＲＥＥＮ）：（核酸染色、ＤＭＳＯ保存溶液中に５ｍＭ、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ）。最終希釈２００００倍、即ち第１希釈でＰＡＢ中に１００倍希釈し、次に第２抗体調製溶液で２００倍希釈。
フィブロネクチン被覆スライドグラス：バイオコートセルウェア（ＢＩＯＣＯＡＴ  ＣＥＬＬＷＡＲＥ）、ヒトフィブロネクチン４ウェル（ＦＡＬＣＯＮ）。
【００６１】
２−細胞培養
静止状態でトリグリセリドを大量に蓄積するクローンを株化マウス線維芽細胞株３Ｔ３から単離する。このマウス前駆脂肪細胞（３Ｔ３−Ｆ４４２Ａ）（Ｇｒｅｅｎ  Ｈ．ａｎｄ  Ｋｅｈｉｎｄｅ  Ｏ．Ｃｅｌｌ．１９７６；７（１）：１０５−１３）は増殖及び分化可能であり、成熟脂肪細胞の分化した機能に特徴的な形態的及び生化学的表現型を呈する。対数増殖期においては、線維芽細胞の細長い形状を呈し、且つ支持体に非常によく付着する。
【００６２】
３Ｔ３−Ｆ４４２Ａ前駆脂肪細胞をフィブロネクチン被覆４ウェルラボテック（Ｌａｂｔｅｋ）スライドグラス上に培地１ｍｌ中、２×１０３細胞／ウェルの割合で播種し、３７℃のインキューベータ内に空気−ＣＯ２（９５−５％）雰囲気下で静置する。細胞を１０％仔ウシ血清（ＣＳ）添加ＤＭＥＭ培地（グルコース４．５０ｇ／ｌ）培地中で４８時間培養し、次いで、同培地中において活性剤で処理する。
【００６３】
３−処理
細胞をウェル中で２４時間処理する。
実施例１で調製したライ麦抽出物を培地中で固形分０．０５質量％に希釈して試験する。
【００６４】
４−α５インテグリンの免疫標識
処理終了時、細胞をカルシウム及びマグネシウム含有ＰＢＳで洗浄し、次いで、ホルマリンで洗浄し、室温で２０分間ホルマリン固定する。次いで、細胞をＰＢＳ−ＢＳＡ（ＰＡＢ）３％（付属Ｉ参照）で洗浄し、３％ＰＡＢ溶液に１時間接触させる。スライドグラスを乾燥させ、次いで、α５インテグリンに対する抗体を３％ＰＡＢで５０倍希釈したものと共に室温で１時間インキュベートする。ＰＡＢにより各１５分間ずつ２回洗浄し且つ各１５分間ずつ２回浸漬した後、スライドグラスを乾燥させ、次いで、ＰＡＢで２００倍希釈したアレクサ・フルオル（Ａｌｅｘａ  ｆｌｕｏｒ）５４６結合抗ウサギ抗体と共に４５分間インキュベートする。細胞核をシトックスグリーン（上記溶液にて２００倍希釈）で染色する。ＰＡＢにより各１５分間ずつ２回洗浄し且つ各１５分間ずつ２回浸漬した後、スライドグラスを乾燥させ、スライドグラスとカバーグラスの間に配置する。
【００６５】
共焦点顕微鏡（バイオラッド（ＢＩＯＲＡＤ）ＭＲＣ１０２４）により観察し、レーザーシャープ（ＬａｓｅｒＳｈａｒｐ）２０００ソフトウェア（バイオラッド）により対照及び処理試料について培地における１０の異なる部分について１０の画像を取得する。１０の画像からランダムに選択した４つの画像により、図１（未処理対照）及び図２（本発明の抽出物により処理）を参照して本発明が例示される。
【００６６】
蛍光（α５インテグリン網目状構造について赤色、核染色について緑色）を解析し、ライカ（ＬＥＩＣＡ）クウィン（ＱＷＩＮ）Ｖ３ソフトウェアにより以下のステップに従って標識を定量する：
ステップ１：元の写真の組み合わせから得られる画像により、赤色のα５インテグリン標識及び緑色の細胞核標識が示される。
ステップ２：画像解析ソフトウェアによりα５インテグリン標識を示す画素を検出する。検出された赤色画素の数を測定する。この数は各細胞中にあるα５インテグリンの量に対応する。
ステップ３：ソフトウェアにより細胞核に対応する緑色画素を検出する。対象の数を測定する。
ステップ４：測定領域は添付の図１又は２に示す顕微鏡視野全体からなる。
【００６７】
実施例１により取得され且つ固形分０．０５質量％にて試験されたライ麦抽出物について、α５インテグリン標識の強度に対する作用を評価する。前駆脂肪細胞中のα５インテグリン標識の総量を測定し、続いて標識を測定領域内で計数された核の数に対して標定する。
【００６８】
結果：
処理後の結果を下記表に示す。
【００６９】
【表２】
2010285431.tif 000003
Ｓは対照との有意差を示す（ｐ≦０．０５）。
【００７０】
結論：
共焦点顕微鏡で得られた画像から、斑点状の表面標識が細胞のライ麦抽出物処理後に強くなることが明らかになる。外観が変化しており、蛍光の位置が変化しており、処理することによってより多くの線維状構造に置き換わっている。
【００７１】
定量により、未処理対照細胞とライ麦抽出物希釈溶液で処理した細胞とを比較すると、蛍光が約８０％増加することが示される。
【００７２】
ＡＮＯＶＡ統計分析により、未処理対照とライ麦抽出物で処理した細胞とにおいてα５インテグリン標識の強度における有意差が示される。
【００７３】
本発明に従ってライ麦抽出物の存在下で培養し且つ実施例１に従って調製した前駆脂肪細胞はα５インテグリンをより多く発現し、これにより細胞を非脂肪細胞状態に維持する能力が増大する：処理後、細胞は細胞分化に入りにくい状態となる。
【００７４】
実施例３−痩身美容組成物
固形分約０．０５質量％に希釈された水溶液としてライ麦抽出物を含む痩身ボディクリームを調製する。
【００７５】
上記美容組成物は、当業者であれば調製方法を知っているものなどの水中油エマルションである（割合は最終組成物に対する質量％で示す）。
％
ライ麦抽出物                                        ０．１
テフロシア・パープレア種子抽出物                    １
クリーム添加剤                              十分量  １００
【００７６】
組成物を、使用を要する身体個所に２〜３週間、所望の痩身効果が得られるまで毎日塗布する。
【図１】
2010285431.tif 000004
【図２】
2010285431.tif 000005
【外国語明細書】
2010285431000001.pdf