(57)【要約】【課題】優れた抗炎症作用を有し、かつ安全性の高い抗炎症剤、優れた抗老化作用を有し、かつ安全性の高い抗老化剤、優れた抗肥満作用を有し、かつ安全性の高い抗肥満剤、及び優れた育毛作用を有し、かつ安全性の高い育毛剤、並びに、前記抗炎症剤、抗老化剤、抗肥満剤、及び育毛剤の少なくともいずれかを利用した化粧料、及び美容用飲食品の提供。【解決手段】オタネニンジン（Ｐａｎａｘ ｇｉｎｓｅｎｇ）の花抽出物を含有する抗炎症剤、抗老化剤、抗肥満剤、及び育毛剤、並びに、前記抗炎症剤、抗老化剤、抗肥満剤、及び育毛剤の少なくともいずれかを含有する化粧料、及び美容用飲食品である。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
オタネニンジン（Ｐａｎａｘ ｇｉｎｓｅｎｇ）の花抽出物を含有することを特徴とする抗炎症剤。
【請求項２】
ヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用、シクロオキシゲナーゼ−２（ＣＯＸ−２）活性阻害作用、一酸化窒素（ＮＯ）産生抑制作用、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ−α）産生抑制作用、及び血小板凝集抑制作用の少なくともいずれかを有する請求項１に記載の抗炎症剤。
【請求項３】
オタネニンジン（Ｐａｎａｘ ｇｉｎｓｅｎｇ）の花抽出物を含有することを特徴とする抗老化剤。
【請求項４】
エストロゲン様作用、ラミニン−５産生促進作用、ヒアルロン酸合成促進作用、及び皮膚線維芽細胞増殖促進作用の少なくともいずれかを有する請求項３に記載の抗老化剤。
【請求項５】
オタネニンジン（Ｐａｎａｘ ｇｉｎｓｅｎｇ）の花抽出物を含有することを特徴とする抗肥満剤。
【請求項６】
サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ活性阻害作用を有する請求項５に記載の抗肥満剤。
【請求項７】
オタネニンジン（Ｐａｎａｘ ｇｉｎｓｅｎｇ）の花抽出物を含有することを特徴とする育毛剤。
【請求項８】
テストステロン５α−リダクターゼ活性阻害作用、アンドロゲン受容体結合阻害作用、及び毛乳頭細胞増殖促進作用の少なくともいずれかを有する請求項７に記載の育毛剤。
【請求項９】
請求項１から２のいずれかに記載の抗炎症剤、請求項３から４のいずれかに記載の抗老化剤、請求項５から６のいずれかに記載の抗肥満剤、及び請求項７から８のいずれかに記載の育毛剤の少なくともいずれかを含有することを特徴とする化粧料。
【請求項１０】
請求項１から２のいずれかに記載の抗炎症剤、請求項３から４のいずれかに記載の抗老化剤、請求項５から６のいずれかに記載の抗肥満剤、及び請求項７から８のいずれかに記載の育毛剤の少なくともいずれかを含有することを特徴とする美容用飲食品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、オタネニンジン（Ｐａｎａｘ ｇｉｎｓｅｎｇ）の花抽出物を含有する抗炎症剤、抗老化剤、抗肥満剤、及び育毛剤、並びに、前記抗炎症剤、抗老化剤、抗肥満剤、及び育毛剤の少なくともいずれかを利用した化粧料、及び美容用飲食品に関する。
【背景技術】
【０００２】
炎症性の疾患、例えば接触性皮膚炎（かぶれ）、乾癬、尋常性天疱瘡、その他肌荒れを伴う各種皮膚疾患等の原因及び発症機構は多種多様である。その原因として、例えば、ヘキソサミニダーゼ（ヒスタミン）遊離、一酸化窒素（ＮＯ）産生、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ−α）産生、血小板凝集、シクロオキシゲナーゼ−２（ＣＯＸ−２）活性によるものなどが知られている。
【０００３】
前記ヒスタミン遊離は、肥満細胞内のヒスタミンが細胞外に遊離する現象であり、遊離されたヒスタミンが炎症反応を引き起こす。このため、ヒスタミン遊離を阻害乃至抑制する物質によりアレルギー性疾患、炎症性疾患を予防乃至治療する試みがなされている。
このようなヒスタミン遊離抑制剤として、例えばトラニラスト、クロモグリク酸ナトリウム、バイカリン、バイカレイン、塩酸プロメタジンなどが用いられてきた。
しかし、これらの物質はいずれも副作用があり、安全性の点で問題があった。
【０００４】
前記一酸化窒素（ＮＯ）は、大気汚染、酸性雨等の要因となる窒素酸化物である。また、近年、一酸化窒素（ＮＯ）は、血管内皮由来弛緩因子（ＥＤＲＦ）、神経伝達物質、生体防御における微生物、腫瘍細胞の障害因子等、生体内で多彩な機能を示す生理活性物質であることが報告されている。生理活性物質としては、マクロファージから産生される一酸化窒素が細菌及びウイルスの感染を防御することが知られている。しかし、前記マクロファージから産生される一酸化窒素が大量に生合成されると、生体にとって無毒ではなく、自己組織の破壊を引き起こし、炎症の悪化、リューマチ、糖尿病等の病態の原因となることがある。また、大量に生合成された一酸化窒素が血管平滑筋の弛緩と過剰な透過性の増大をもたらし、著しい血圧の低下によってエンドトキシン・ショックを引き起こすこともある。したがって、このような炎症性疾患においては、一酸化窒素（ＮＯ）の過剰な産生を抑制することが重要となる。
このような一酸化窒素の産生抑制作用を有するものとしては、例えば、ローズマリー抽出液、カルノソール、カルノシン酸、コーヒー豆の抽出液、サクラダソウ抽出液、オウレン抽出液、オウバク抽出液、カンゾウ抽出液、イヌノイバラの抽出液、センキュウ抽出液、トウニン抽出液、シャクヤク抽出液、ヨクイニン抽出液、アカブドウ抽出液（特許文献１参照）などが報告されている。
【０００５】
前記ＴＮＦ−αは、腫瘍を壊死させる因子として見出されたが、最近では腫瘍に対してだけでなく、正常細胞の機能を調節するメディエーター的な役割を担うサイトカインであると考えられている。ＴＮＦ−αは炎症の初発から終息までの過程において重要な役割を担っているが、その持続的かつ過剰な産生は、皮膚を含めた組織の障害を引き起こし、全身的には発熱やカケクシアの原因となり、炎症の悪化を引き起こす。そのような炎症としては、例えば、関節リューマチ、変形性関節症などの慢性炎症性疾患が代表的である。したがって、病的な炎症においては、ＴＮＦ−αの過剰な産生を抑制することが重要となる。
このようなＴＮＦ−α産生抑制剤としては、例えば、シソ抽出液（非特許文献１参照）などが報告されている。
【０００６】
前記血小板凝集は、アラキドン酸カスケードのホスホリパーゼＡ２の活性化を招き、それによりロイコトリエンＢ及びプロスタグランジンＥ２等が放出されて起炎物質となる。このため、血小板の凝集を阻害乃至抑制する物質によりアレルギー疾患性疾患、炎症性疾患を予防乃至治療する試みがなされている。
このような血小板凝集抑制作用を有するものとしては、例えば、カナリウム属に属する植物の抽出物（特許文献２参照）などが報告されている。
【０００７】
また、炎症は、発赤、浮腫、発熱、痛み、機能障害などの症状を示す複雑な反応である。微視的に見ると、血漿漏出を起こす血管反応、白血球の浸潤、炎症性細胞による組織破壊などの共通する反応からなり、発熱反応や痛覚過敏など中枢神経系が関与する全身の反応も引き起こす場合がある。このような炎症の個々の反応にはプロスタグランジンが重要な役割を果たしており、この炎症時におけるプロスタグランジンの産生には、主として誘導型のシクロオキシゲナーゼであるシクロオキシゲナーゼ−２の関与が明らかとなっている。
このため、炎症反応の防止及び予防を図る目的で、アスピリンに代表される多くのシクロオキシゲナーゼ活性阻害剤が用いられている（非特許文献２参照）。また、植物由来のシクロオキシゲナーゼ活性阻害剤としては、例えば、マンゴスチン果皮抽出物中のα−マンゴスチン及びγ−マンゴスチンなどが報告されている（特許文献３参照）。また、前記シクロオキシゲナーゼ−２活性阻害作用を有する化合物としては、２−フェニル−１，２−ベンズイソセレナゾール−３（２Ｈ）−オン、その塩、又はその水和物（特許文献４参照）が報告されている。
【０００８】
また、皮膚は角層、表皮、基底膜及び真皮から構成されており、基底膜は表皮と真皮との境界部にあって、表皮と真皮とを繋ぎ止めるだけでなく、皮膚機能の維持に重要な役割を果たしていることが知られている。また、基底膜と表皮の境界に存在し、基底膜と表皮とを繋ぎ止めているのがラミニン−５を主成分とする各種糖蛋白質である。前記表皮、及び真皮は、表皮細胞、線維芽細胞、及びこれらの細胞の外にあって皮膚構造を支持するエラスチン、コラーゲン等の細胞外マトリックスによって構成されている。若い皮膚においては、これらの皮膚組織の相互作用が恒常性を保つことによって、水分保持、柔軟性、弾力性等が確保され、肌は外見的にも張りや艶があってみずみずしい状態に維持される。
ところが、紫外線の照射、空気の著しい乾燥、過度の皮膚洗浄等のある種の外的因子の影響を受けたり、加齢が進んだりすると、ラミニン−５は分解や変質を起こし、基底膜構造が破壊されてしまう。その結果、皮膚の保湿機能や弾力性が低下し、角質は異常剥離を始め、肌は張りや艶を失い、荒れ、シワ等の老化症状を呈するようになる。更に、外的因子の影響や加齢に伴い、線維芽細胞の増殖率が低下すると、天然保湿因子であるヒアルロン酸の合成量が低下する。
【０００９】
したがって、ラミニン−５の産生を亢進することによって基底膜構造の再構築を誘導し、皮膚機能を改善する物質、線維芽細胞の増殖を促進することによって、ヒアルロン酸の合成を促進し、皮膚機能を改善する物質、及びヒアルロン酸の合成を促進することによって、皮膚機能を改善する物質の提供が望まれている。
このようなラミニン−５産生促進作用を有するものとしては、例えば、カッコン抽出物、カンゾウ抽出物又はそのフラボノイド画分、ヒオウギ抽出物、ジタノキ抽出物、イボツヅラフジ抽出物、コロハ抽出物、又は乳清抽出物（特許文献５参照）などが報告されている。
また、線維芽細胞増殖促進作用を有するものとしては、例えば、テンニンカ抽出物（特許文献６参照）などが報告されている。
また、ヒアルロン酸合成促進作用を有するものとしては、例えば、アメリカニガキ抽出物（特許文献７参照）などが報告されている。
【００１０】
また、加齢を伴う皮膚老化の一因は、女性ホルモンの一種であるエストロゲンの分泌が減退することにある。即ち、エストロゲンは成人女性の健康維持に深く関っていて、その分泌不足は種々の内科的疾患を招くほか、肌の過敏症、弾力性低下、潤いの減少等、好ましくない肌の変化の原因となることが知られている。このため、エストロゲンの分泌が衰える更年期以降の女性に対して、エストロゲンと同様の作用をする物質（エストロゲン様作用剤）を経皮的又は経口的に投与することが行われている。
このようなエストロゲン様作用剤としては、例えば、ステロイド系エストロゲン、非ステロイド系エストロゲン、フラボン系化合物（特許文献８〜１０参照）などが報告されている。
【００１１】
また、肥満の防止には、脂肪の代謝促進に関与しているサイクリックＡＭＰを分解する酵素であるサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼの作用を抑制するのが有効であると考えられる。実際、サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼの作用を抑えると、細胞内サイクリックＡＭＰの濃度が上昇して脂質代謝が活発になり、肥満が解消されることが知られている。
このようなサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ活性阻害作用を有するものとしては、例えば、藤茶抽出物（特許文献１１参照）などが報告されている。
【００１２】
また、毛髪は、成長期、退行期及び休止期からなる周期的なヘアサイクル（毛周期）に従って成長及び脱落を繰り返している。このヘアサイクルのうち、休止期から成長期にかけての新たな毛包が形成されるステージが、発毛に最も重要であると考えられており、このステージにおける毛包上皮系細胞の増殖乃至分化に重要な役割を果たしているのが、毛乳頭細胞であると考えられている。毛乳頭細胞は、毛根近傍にある外毛根鞘細胞とマトリックス細胞とからなる毛包上皮系細胞の内側にあって、基底膜に包まれている毛根の根幹部分に位置する細胞であり、毛包上皮系細胞に働きかけてその増殖を促進する等の、毛髪への分化に重要な役割を担っている（非特許文献３参照）。
このように、毛乳頭細胞は、毛包上皮系細胞の増殖乃至分化及び毛髪の形成において最も重要な役割を果たしており、例えば、毛乳頭細胞に対象物質を接触させて、その細胞の増殖活性の有無、あるいは強弱を特定することで、その対象物質の育毛効果を検定する方法が提案されている（特許文献１２参照）。また、毛乳頭細胞増殖促進作用を有するものとしては、例えば、ハトムギ抽出物、ワイルドタイム抽出物、スギナ抽出物、ショウブ抽出物、ローズマリー抽出物、ウコン抽出物、シラカバ抽出物、コウチャ抽出物（特許文献１３参照）などが報告されている。
【００１３】
また多くのステロイドホルモンは産生臓器から分泌された分子型で受容体と結合してその作用を発現するが、アンドロゲンと総称される男性ホルモンの場合、例えば、テストステロンは標的臓器の細胞内に入ってテストステロン５α−リダクターゼにより、ジヒドロテストステロンに還元されてから受容体と結合し、アンドロゲンとしての作用を発現する。
前記アンドロゲンは重要なホルモンであるが、それが過度に作用すると、男性型脱毛症、多毛症、脂漏症、座瘡（ニキビなど）、前立腺肥大症、前立腺腫瘍、男児性早熟等のさまざまな好ましくない症状を誘発する。
【００１４】
そこで、従来、これらの各種症状を改善するために過剰のアンドロゲンの作用を抑制する方法、具体的には、テストステロンをジヒドロテストステロンに還元するテストステロン５α−リダクターゼの作用を阻害することにより、ジヒドロテストステロンが生じるのを抑制する方法や、テストステロンから生じたジヒドロテストステロンが受容体と結合するのを阻害することによりアンドロゲン活性を発現させない方法が提案されている。
このようなテストステロン５α−リダクターゼの作用を阻害する作用（テストステロン５α−リダクターゼ活性阻害作用）を有するものとしては、例えば、ウルシ科Ｃｈｏｅｒｏｓｐｏｎｄｉａｓ属植物の抽出物（特許文献１４参照）などが報告されている。
また、ジヒドロテストステロンが受容体と結合するのを阻害する作用（アンドロゲン受容体結合阻害作用）を有するものとしては、例えば、マジト及びカチュアの少なくともいずれかの抽出物（特許文献１５参照）などが報告されている。
【００１５】
しかしながら、現在までのところ、入手が容易で安価であり、安全性の高い天然物系のものであって、味、匂い、使用感等の点で添加対象物の品質に悪影響を及ぼさず、化粧料、及び美容用飲食品に広く使用可能な抗炎症剤、抗老化剤、抗肥満剤、及び育毛剤は未だ提供されておらず、その速やかな提供が強く求められているのが現状である。
【００１６】
【特許文献１】特開２００２−８７９７５号公報
【特許文献２】特開２００２−５３４７８号公報
【特許文献３】特開２００２−４７１８０号公報
【特許文献４】特開２０００−１６９３５号公報
【特許文献５】特開２００３−１３７７６７号公報
【特許文献６】特開２００６−１９９６７８号公報
【特許文献７】特開２００３−０８１８５０号公報
【特許文献８】特開２００２−２２６３２３号公報
【特許文献９】特開２００１−３１６２４０号公報
【特許文献１０】特開２００３−５５２４５号公報
【特許文献１１】特開２００３−１２５３２号公報
【特許文献１２】特開平１０−２２９９７８号公報
【特許文献１３】特開２００６−２１９４０７号公報
【特許文献１４】特開２００３−５５１６２号公報
【特許文献１５】特開２００２−２４１２９７号公報
【非特許文献１】「炎症」１９９３年，Ｖｏｌ.１３，Ｎｏ．４，ｐ.３３７〜３４０
【非特許文献２】薬理学アトラス（Ｐ１８４）、福原武彦監訳、文光堂
【非特許文献３】「Ｔｒｅｎｄｓ  Ｇｅｎｅｔ」，１９９２年，第８巻，ｐ.５６−６１
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１７】
本発明は、前記従来における諸問題を解決し、以下の目的を達成することを課題とする。即ち、本発明は、優れた抗炎症作用を有し、かつ安全性の高い抗炎症剤、優れた抗老化作用を有し、かつ安全性の高い抗老化剤、優れた抗肥満作用を有し、かつ安全性の高い抗肥満剤、及び、優れた育毛作用を有し、かつ安全性の高い育毛剤、並びに、前記抗炎症剤、抗老化剤、抗肥満剤、及び育毛剤の少なくともいずれかを利用した化粧料、及び美容用飲食品を提供することを目的とする。
【００１８】
本発明者は、前記課題を解決するために鋭意検討を行ったところ、オタネニンジン（Ｐａｎａｘ ｇｉｎｓｅｎｇ）の花抽出物が、優れた抗炎症作用、抗老化作用、抗肥満作用、及び育毛作用を有することを見出し、本発明を完成するに至った。
【課題を解決するための手段】
【００１９】
本発明は、本発明者らの前記知見に基づくものであり、前記課題を解決するための手段
としては、以下の通りである。即ち、
＜１＞  オタネニンジン（Ｐａｎａｘ ｇｉｎｓｅｎｇ）の花抽出物を含有することを特徴とする抗炎症剤である。
＜２＞  ヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用、シクロオキシゲナーゼ−２（ＣＯＸ−２）活性阻害作用、一酸化窒素（ＮＯ）産生抑制作用、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ−α）産生抑制作用、及び血小板凝集抑制作用の少なくともいずれかを有する前記＜１＞に記載の抗炎症剤である。
＜３＞  オタネニンジン（Ｐａｎａｘ ｇｉｎｓｅｎｇ）の花抽出物を含有することを特徴とする抗老化剤である。
＜４＞  エストロゲン様作用、ラミニン−５産生促進作用、ヒアルロン酸合成促進作用、及び皮膚線維芽細胞増殖促進作用の少なくともいずれかを有する前記＜３＞に記載の抗老化剤である。
＜５＞  オタネニンジン（Ｐａｎａｘ ｇｉｎｓｅｎｇ）の花抽出物を含有することを特徴とする抗肥満剤である。
＜６＞  サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ活性阻害作用を有する前記＜５＞に記載の抗肥満剤である。
＜７＞  オタネニンジン（Ｐａｎａｘ ｇｉｎｓｅｎｇ）の花抽出物を含有することを特徴とする育毛剤である。
＜８＞  テストステロン５α−リダクターゼ活性阻害作用、アンドロゲン受容体結合阻害作用、及び毛乳頭細胞増殖促進作用の少なくともいずれかを有する前記＜７＞に記載の育毛剤である。
＜９＞  前記＜１＞から＜２＞のいずれかに記載の抗炎症剤、前記＜３＞から＜４＞のいずれかに記載の抗老化剤、前記＜５＞から＜６＞のいずれかに記載の抗肥満剤、及び前記＜７＞から＜８＞のいずれかに記載の育毛剤の少なくともいずれかを含有することを特徴とする化粧料である。
＜１０＞  前記＜１＞から＜２＞のいずれかに記載の抗炎症剤、前記＜３＞から＜４＞のいずれかに記載の抗老化剤、前記＜５＞から＜６＞のいずれかに記載の抗肥満剤、及び前記＜７＞から＜８＞のいずれかに記載の育毛剤の少なくともいずれかを含有することを特徴とする美容用飲食品である。
【発明の効果】
【００２０】
本発明によると、従来における諸問題を解決し、前記目的を達成することができ、優れた抗炎症作用を有し、かつ安全性の高い抗炎症剤、優れた抗老化作用を有し、かつ安全性の高い抗老化剤、優れた抗肥満作用を有し、かつ安全性の高い抗肥満剤、及び、優れた育毛作用を有し、かつ安全性の高い育毛剤、並びに、前記抗炎症剤、抗老化剤、抗肥満剤、及び育毛剤の少なくともいずれかを利用した化粧料、及び美容用飲食品を提供することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２１】
（抗炎症剤、抗老化剤、抗肥満剤、及び育毛剤）
本発明の抗炎症剤、抗老化剤、抗肥満剤、及び育毛剤は、オタネニンジン（Ｐａｎａｘ ｇｉｎｓｅｎｇ）の花抽出物を含有してなり、更に必要に応じてその他の成分を含有してなる。
【００２２】
前記抗炎症剤は、ヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用、シクロオキシゲナーゼ−２（ＣＯＸ−２）活性阻害作用、一酸化窒素（ＮＯ）産生抑制作用、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ−α）産生抑制作用、及び血小板凝集抑制作用の少なくともいずれかに基づく抗炎症作用を有するものである。
前記抗老化剤は、エストロゲン様作用、ラミニン−５産生促進作用、ヒアルロン酸合成促進作用、及び皮膚線維芽細胞増殖促進作用の少なくともいずれかに基づく抗老化作用を有するものである。
前記抗肥満剤は、サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ活性阻害作用に基づく抗肥満作用を有するものである。
前記育毛剤は、テストステロン５α−リダクターゼ活性阻害作用、アンドロゲン受容体結合阻害作用、及び毛乳頭細胞増殖促進作用の少なくともいずれかに基づく育毛作用を有するものである。
前記オタネニンジン（Ｐａｎａｘ ｇｉｎｓｅｎｇ）の花抽出物が含有する、抗炎症作用、抗老化作用、抗肥満作用、及び育毛作用を発揮する物質の詳細については不明であるが、前記オタネニンジン（Ｐａｎａｘ ｇｉｎｓｅｎｇ）の花抽出物がこのような優れた作用を有し、抗炎症剤、抗老化剤、抗肥満剤、及び育毛剤として有用であることは、従来には全く知られておらず、本発明者による新たな知見である。
【００２３】
前記オタネニンジン（Ｐａｎａｘ ｇｉｎｓｅｎｇ）は、ウコギ科の植物であり、中国、韓国等に分布しており、これらの地域から容易に入手可能である。
本発明の抽出原料として使用する前記オタネニンジンの部位は、花である。
本発明では、前記抽出原料として花を用いているため、抽出原料として根を用いた場合のように１回しか採取できないものではなく、同一個体から複数回採取することができる点で、有利である。
【００２４】
抽出原料である前記オタネニンジンの花は、例えば、乾燥した後に、そのままの状態で又は粗砕機等を用いて粉砕した状態で、溶媒抽出に供することができる。中でも、前記抽出原料としては、採取後ただちに乾燥し、粉砕したものが好ましい。前記乾燥は、例えば、天日で行ってもよいし、通常使用される乾燥機を用いて行ってもよい。なお、前記オタネニンジンの花は、ヘキサン、ベンゼン等の非極性溶媒によって脱脂等の前処理を施してから抽出原料として使用してもよい。脱脂等の前処理を行うことにより、前記オタネニンジンの花の極性溶媒による抽出処理を、効率よく行うことができる。
【００２５】
前記オタネニンジンの花抽出物は、植物の抽出に一般に用いられる方法を利用することによって、容易に得ることができる。また、前記オタネニンジンの花抽出物としては、市販品を使用してもよい。なお、前記オタネニンジンの花抽出物には、前記オタネニンジンの花の抽出液、該抽出液の希釈液若しくは濃縮液、該抽出液の乾燥物、又は、これらの粗精製物若しくは精製物のいずれもが含まれる。
【００２６】
前記抽出に用いる溶媒としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、水、親水性有機溶媒、又は、これらの混合溶媒を、室温又は溶媒の沸点以下の温度で用いることが好ましい。前記オタネニンジンの花に含まれる抗炎症作用、抗老化作用、抗肥満作用、及び育毛作用を示す成分は、極性溶媒を抽出溶媒とする抽出処理によって、容易に抽出することができる。
【００２７】
前記抽出溶媒として使用し得る水としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、純水、水道水、井戸水、鉱泉水、鉱水、温泉水、湧水、淡水等の他、これらに各種処理を施したものが含まれる。水に施す処理としては、例えば、精製、加熱、殺菌、ろ過、イオン交換、浸透圧の調整、緩衝化等が含まれる。したがって、前記抽出溶媒として使用し得る水には、精製水、熱水、イオン交換水、生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水等も含まれる。
【００２８】
前記抽出溶媒として使用し得る親水性有機溶媒としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、メタノール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコール等の炭素数１〜５の低級アルコール；アセトン、メチルエチルケトン等の低級脂肪族ケトン；１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等の炭素数２〜５の多価アルコールなどが挙げられ、該親水性有機溶媒と水との混合溶媒なども用いることができる。なお、前記水と前記親水性有機溶媒との混合溶媒を使用する際には、低級アルコールの場合は水１０質量部に対して１質量部〜９０質量部、低級脂肪族ケトンの場合は水１０質量部に対して１質量部〜４０質量部を混合したものを使用することが好ましい。また、多価アルコールの場合は水１０質量部に対して１質量部〜９０質量部を混合したものを使用することが好ましい。
【００２９】
抽出原料である前記オタネニンジンの花から、抗炎症作用、抗老化作用、抗肥満作用、及び育毛作用を有する抽出物を抽出するにあたって、特殊な抽出方法を採用する必要はなく、室温又は還流加熱下で、任意の抽出装置を用いて抽出することができる。
具体的には、抽出溶媒を満たした処理槽内に、前記各抽出原料を投入し、更に必要に応じて時々攪拌しながら、３０分〜４時間静置して可溶性成分を溶出した後、ろ過して固形物を除去し、得られた抽出液から抽出溶媒を留去し、乾燥することにより抽出物を得ることができる。抽出溶媒量は通常、抽出原料の５倍量〜１５倍量（質量比）である。抽出条件は、抽出溶媒として水を用いた場合には、通常５０℃〜９５℃にて１時間〜４時間程度である。また、抽出溶媒として水とエタノールとの混合溶媒を用いた場合には、通常４０℃〜８０℃にて３０分間〜４時間程度である。なお、溶媒で抽出することにより得られる抽出液は、抽出溶媒が安全性の高いものであれば、そのまま本発明の抗炎症剤、抗老化剤、抗肥満剤、及び育毛剤の有効成分として用いることができる。
【００３０】
抽出により得られる前記オタネニンジンの花の抽出液は、該抽出液の希釈液若しくは濃縮液、該抽出液の乾燥物、又はこれらの粗精製物若しくは精製物を得るため、常法に従って希釈、濃縮、乾燥、精製等の処理を施してもよい。なお、得られる前記オタネニンジンの花の抽出液は、そのままでも抗炎症剤、抗老化剤、抗肥満剤、及び育毛剤の有効成分として使用することができるが、濃縮液又はその乾燥物としたものの方が利用しやすい。抽出液の乾燥物を得るにあたっては、常法を利用することができ、また、吸湿性を改善するためにデキストリン、シクロデキストリン等のキャリアーを添加してもよい。また、抽出原料である前記オタネニンジンの花は特有の匂いと味を有している場合があり、そのため、前記オタネニンジンの花抽出物に対しては、生理活性の低下を招かない範囲で、脱色、脱臭等を目的とする精製を行うことも可能であるが、例えば化粧料に添加する場合などには大量に使用するものではないから、未精製のままでも実用上支障はない。なお、精製は、具体的には、活性炭処理、吸着樹脂処理、イオン交換樹脂処理等によって行うことができる。
【００３１】
以上のようにして得られる前記オタネニンジンの花抽出物は、ヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用、シクロオキシゲナーゼ−２（ＣＯＸ−２）活性阻害作用、一酸化窒素（ＮＯ）産生抑制作用、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ−α）産生抑制作用、及び血小板凝集抑制作用、並びに、エストロゲン様作用、ラミニン−５産生促進作用、ヒアルロン酸合成促進作用、及び皮膚線維芽細胞増殖促進作用、並びに、サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ活性阻害作用、並びに、テストステロン５α−リダクターゼ活性阻害作用、アンドロゲン受容体結合阻害作用、及び毛乳頭細胞増殖促進作用の少なくともいずれかを有し、これらの作用に基づき、本発明の抗炎症剤、抗老化剤、抗肥満剤、及び育毛剤の有効成分として好適に利用可能なものである。
なお、前記オタネニンジンの花抽出物は、前記した各作用に基づき、ヘキソサミニダーゼ遊離抑制剤、シクロオキシゲナーゼ−２（ＣＯＸ−２）活性阻害剤、一酸化窒素（ＮＯ）産生抑制剤、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ−α）産生抑制剤、及び血小板凝集抑制剤、並びに、エストロゲン様作用剤、ラミニン−５産生促進剤、ヒアルロン酸合成促進剤、及び皮膚線維芽細胞増殖促進剤、並びに、サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ活性阻害剤、並びに、テストステロン５α−リダクターゼ活性阻害剤、アンドロゲン受容体結合阻害剤、及び毛乳頭細胞増殖促進剤としても、それぞれ好適に利用可能である。
【００３２】
本発明の抗炎症剤における抗炎症作用は、ヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用、シクロオキシゲナーゼ−２（ＣＯＸ−２）活性阻害作用、一酸化窒素（ＮＯ）産生抑制作用、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ−α）産生抑制作用、及び血小板凝集抑制作用の少なくともいずれかに基づいて発揮される。
本発明の抗老化剤における抗老化作用は、エストロゲン様作用、ラミニン−５産生促進作用、ヒアルロン酸合成促進作用、及び皮膚線維芽細胞増殖促進作用の少なくともいずれかに基づいて発揮される。
本発明の抗肥満剤における抗肥満作用は、サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ活性阻害作用に基づいて発揮される。
本発明の育毛剤における育毛作用は、テストステロン５α−リダクターゼ活性阻害作用、アンドロゲン受容体結合阻害作用、及び毛乳頭細胞増殖促進作用の少なくともいずれかに基づいて発揮される。
【００３３】
前記抗炎症剤、抗老化剤、抗肥満剤、及び育毛剤中の前記オタネニンジンの花抽出物の含有量としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、また、前記抗炎症剤、抗老化剤、抗肥満剤、及び育毛剤は、前記オタネニンジンの花抽出物そのものであってもよい。
【００３４】
また、前記抗炎症剤、抗老化剤、抗肥満剤、及び育毛剤中に含まれ得る、前記オタネニンジンの花抽出物以外のその他の成分としても、本発明の効果を損なわない範囲内であれば、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、前記オタネニンジンの花抽出物を所望の濃度に希釈等するための、生理食塩液などが挙げられる。また、前記抗炎症剤、抗老化剤、抗肥満剤、及び育毛剤中の前記その他の成分の含有量にも、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。
また、前記抗炎症剤、抗老化剤、抗肥満剤、及び育毛剤は、必要に応じて製剤化することにより、粉末状、顆粒状、錠剤状等、任意の剤形とすることができる。
【００３５】
本発明の抗炎症剤、抗老化剤、抗肥満剤、及び育毛剤は、優れた抗炎症作用、抗老化作用、抗肥満作用、及び育毛作用を有すると共に、安全性に優れるため、例えば、後述する本発明の化粧料、及び美容用飲食品などへの利用に好適である。
【００３６】
（化粧料）
本発明の化粧料は、前記した本発明の抗炎症剤、抗老化剤、抗肥満剤、及び育毛剤の少なくともいずれかを含有してなり、更に必要に応じてその他の成分を含有してなる。
前記化粧料は、前記オタネニンジンの花抽出物を、その活性を妨げないように任意の化粧料に配合したものであってもよいし、前記オタネニンジンの花抽出物を主成分とした化粧料であってもよい。また、前記化粧料は、前記オタネニンジンの花抽出物そのものであってもよい。
【００３７】
本発明の化粧料は、高い安全性を有し、優れたヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用、シクロオキシゲナーゼ−２（ＣＯＸ−２）活性阻害作用、一酸化窒素（ＮＯ）産生抑制作用、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ−α）産生抑制作用、及び血小板凝集抑制作用、並びに、エストロゲン様作用、ラミニン−５産生促進作用、ヒアルロン酸合成促進作用、及び皮膚線維芽細胞増殖促進作用、並びに、サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ活性阻害作用、並びに、テストステロン５α−リダクターゼ活性阻害作用、アンドロゲン受容体結合阻害作用、及び毛乳頭細胞増殖促進作用の少なくともいずれかを発揮するものである。
【００３８】
ここで、前記化粧料としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、軟膏、クリーム、乳液、化粧水、ローション、パック、ゼリー、リップクリーム、口紅、入浴剤、アストリンゼント、ヘアトニック、シャンプー、リンスなどが挙げられる。
【００３９】
前記化粧料は、更に必要に応じて本発明の目的及び作用効果を損なわない範囲で、その化粧料の製造に通常使用される各種主剤、助剤、その他の成分を添加することができる。
前記その他の成分としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、収斂剤、殺菌剤、抗菌剤、美白剤、紫外線吸収剤、保湿剤、細胞賦活剤、油脂類、ロウ類、炭化水素類、脂肪酸類、アルコール類、エステル類、界面活性剤、香料、などが挙げられる。
【００４０】
前記化粧料中の、前記抗炎症剤、抗老化剤、抗肥満剤、及び育毛剤の含有量としては、特に制限はなく、化粧料の種類や抽出物の生理活性等によって適宜選択することができるが、０．０００１質量％〜１０質量％が好ましく、０．００１質量％〜５質量％がより好ましい。
【００４１】
（美容用飲食品）
本発明の美容用飲食品は、前記した本発明の抗炎症剤、抗老化剤、抗肥満剤、及び育毛剤の少なくともいずれかを含有してなり、更に必要に応じてその他の成分を含有してなる。
ここで、前記美容用飲食品とは、人の健康に危害を加えるおそれが少なく、通常の社会生活において、経口又は消化管投与により摂取されるものをいい、行政区分上の食品、医薬品、医薬部外品などの区分に制限されるものではなく、例えば、経口的に摂取される一般食品、健康食品、保健機能食品、医薬部外品、医薬品などを幅広く含むものを意味する。
前記美容用飲食品は、前記オタネニンジンの花抽出物を、その活性を妨げないように任意の飲食物に配合したものであってもよいし、前記オタネニンジンの花抽出物を主成分とする栄養補助食品であってもよい。また、前記美容用飲食品は、前記オタネニンジンの花抽出物そのものであってもよい。
【００４２】
本発明の美容用飲食品は、高い安全性を有し、優れたヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用、シクロオキシゲナーゼ−２（ＣＯＸ−２）活性阻害作用、一酸化窒素（ＮＯ）産生抑制作用、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ−α）産生抑制作用、及び血小板凝集抑制作用、並びに、エストロゲン様作用、ラミニン−５産生促進作用、ヒアルロン酸合成促進作用、及び皮膚線維芽細胞増殖促進作用、並びに、サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ活性阻害作用、並びに、テストステロン５α−リダクターゼ活性阻害作用、アンドロゲン受容体結合阻害作用、及び毛乳頭細胞増殖促進作用の少なくともいずれかを発揮するものである。
【００４３】
前記美容用飲食品としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、清涼飲料、炭酸飲料、栄養飲料、果実飲料、乳酸飲料等の飲料；アイスクリーム、アイスシャーベット、かき氷等の冷菓；そば、うどん、はるさめ、ぎょうざの皮、しゅうまいの皮、中華麺、即席麺等の麺類；飴、キャンディー、ガム、チョコレート、錠菓、スナック菓子、ビスケット、ゼリー、ジャム、クリーム、焼き菓子、パン等の菓子類；カニ、サケ、アサリ、マグロ、イワシ、エビ、カツオ、サバ、クジラ、カキ、サンマ、イカ、アカガイ、ホタテ、アワビ、ウニ、イクラ、トコブシ等の水産物；かまぼこ、ハム、ソーセージ等の水産・畜産加工食品；加工乳、発酵乳等の乳製品；サラダ油、てんぷら油、マーガリン、マヨネーズ、ショートニング、ホイップクリーム、ドレッシング等の油脂及び油脂加工食品；ソース、たれ等の調味料；カレー、シチュー、親子丼、お粥、雑炊、中華丼、かつ丼、天丼、うな丼、ハヤシライス、おでん、マーボドーフ、牛丼、ミートソース、玉子スープ、オムライス、餃子、シューマイ、ハンバーグ、ミートボール等のレトルトパウチ食品；種々の形態の健康食品や栄養補助食品；錠剤、カプセル剤、ドリンク剤、トローチ等の医薬品、医薬部外品などが挙げられる。
【００４４】
前記その他の成分としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、美容用飲食品を製造するにあたって通常用いられる、補助的原料又は添加物などが挙げられる。
前記補助的原料又は添加物としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、ブドウ糖、果糖、ショ糖、マルトース、ソルビトール、ステビオサイド、ルブソサイド、コーンシロップ、乳糖、クエン酸、酒石酸、リンゴ酸、コハク酸、乳酸、Ｌ−アスコルビン酸、ｄｌ−α−トコフェロール、エリソルビン酸ナトリウム、グリセリン、プロピレングリコール、グリセリン脂肪酸エステル、ポリグリセリン脂肪酸エステル、ショ糖脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、アラビアガム、カラギーナン、カゼイン、ゼラチン、ペクチン、寒天、ビタミンＢ類、ニコチン酸アミド、パントテン酸カルシウム、アミノ酸類、カルシウム塩類、色素、香料、保存剤などが挙げられる。
【００４５】
前記飲食品中の、前記抗炎症剤、抗老化剤、抗肥満剤、及び育毛剤の含有量としては、対象となる飲食品の種類に応じて異なり、一概には規定することができないが、例えば、飲食品本来の味を損なわない範囲で任意の飲食物に配合することを目的とする場合には、有効成分である前記オタネニンジンの花抽出物の量として、０．００１質量％〜５０質量％が好ましく、０．０１質量％〜２０質量％がより好ましい。また、例えば、前記オタネニンジンの花抽出物を主成分とする顆粒、錠剤、カプセル形態等の栄養補助飲食品を製造することを目的とする場合には、有効成分である前記オタネニンジンの花抽出物の量として、０．０１質量％〜１００質量％が好ましく、５質量％〜１００質量％がより好ましい。
【００４６】
（効果）
本発明の抗炎症剤、抗老化剤、抗肥満剤、及び育毛剤、並びに、化粧料、及び美容用飲食品は、日常的に使用することが可能であり、有効成分である前記オタネニンジンの花抽出物の働きによって、抗炎症作用、抗老化作用、抗肥満作用、及び育毛作用を、極めて効果的に発揮させることができるものである。
【００４７】
なお、本発明の抗炎症剤、抗老化剤、抗肥満剤、及び育毛剤、並びに、化粧料、及び美容用飲食品は、ヒトに対して好適に適用されるものであるが、その作用効果が奏される限り、ヒト以外の動物（例えば、マウス、ラット、ハムスター、イヌ、ネコ、ウシ、ブタ、サルなど）に対して適用することも可能である。また、本発明の抗炎症剤、抗老化剤、抗肥満剤、及び育毛剤、並びに、化粧料、及び美容用飲食品は、天然由来の前記オタネニンジンの花抽出物を有効成分としたものであり、安全性に優れる点でも、有利である。
【実施例】
【００４８】
以下、本発明の実施例を説明するが、本発明は、これらの実施例に何ら限定されるものではない。
【００４９】
（製造例１）
−オタネニンジン（Ｐａｎａｘ ｇｉｎｓｅｎｇ）の花の５０質量％エタノール抽出物の製造−
オタネニンジンの花の粉砕物に、質量比で１０倍量の５０質量％エタノールを加え、８０℃で２時間加熱し、ろ過した。残渣に同量の５０質量％エタノールを加え、８０℃で２時間加熱し、ろ過した。ろ液を濃縮、凍結乾燥して、オタネニンジンの花の５０質量％エタノール抽出物（凍結乾燥品）を得た。なお、得られたオタネニンジンの花の５０質量％エタノール抽出物の抽出率は、２０．９％であった。
【００５０】
（製造例２）
−オタネニンジン（Ｐａｎａｘ ｇｉｎｓｅｎｇ）の花の水抽出物の製造−
オタネニンジンの花の粉砕物に、質量比で１０倍量の水を加え、８０℃で２時間加熱し、ろ過した。残渣に同量の水を加え、８０℃で２時間加熱し、ろ過した。ろ液を濃縮、凍結乾燥して、オタネニンジンの花の水抽出物（凍結乾燥品）を得た。なお、得られたオタネニンジンの花の水抽出物の抽出率は、２２．４％であった。
【００５１】
（製造例３）
−オタネニンジン（Ｐａｎａｘ ｇｉｎｓｅｎｇ）の花の８０質量％エタノール抽出物の製造−
オタネニンジンの花の粉砕物に、質量比で１０倍量（質量比）の８０質量％エタノールを加え、８０℃で２時間加熱し、ろ過した。残渣に同量の８０質量％エタノールを加え、８０℃で２時間加熱し、ろ過した。ろ液を濃縮、凍結乾燥して、オタネニンジンの花の８０質量％エタノール抽出物（凍結乾燥品）を得た。なお、得られたオタネニンジンの花の８０質量％エタノール抽出物の抽出率は、１５．１％であった。
【００５２】
（実施例１：ヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用試験）
前記製造例１〜３のオタネニンジンの花抽出物を被験試料として用い、下記の試験方法によりヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用を試験した。
【００５３】
ラット好塩基球白血病細胞（ＲＢＬ−２Ｈ３）を１５％ＦＢＳ添加Ｓ−ＭＥＭを用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を４．０×１０５ｃｅｌｌｓ／ｍＬの濃度に培地で希釈し、ＤＮＰ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ＩｇＥ（ＳＩＧＭＡ製）が終濃度０．５μｇ／ｍＬとなるよう添加した後、９６穴プレートに１穴当たり１００μＬずつ播種し、一晩培養した。培養終了後、培地を抜き、Ｓｉｒａｇａｎｉａｎ緩衝液１００μＬにて洗浄を２回行った。次に、同緩衝液３０μＬ及び同緩衝液にて調製した被験試料１０μＬを加え、３７℃にて１０分静置した。その後１００ｎｇ／ｍＬ  ＤＮＰ−ＢＳＡ（ＬＳＬ  ＣＯ．，ＬＴＤ製）溶液１０μＬを加え、３７℃にて１５分静置し、ヘキソサミニダーゼを遊離させた。その後、９６穴プレートを氷上に静置することにより遊離を停止した。各穴の細胞上清１０μＬ及び１ｍｍｏｌ／Ｌ  ｐ−ＮＡＧ（ｐ−ｎｉｔｒｏｐｈｅｎｙｌ  Ｎ−ａｃｅｔｙｌ  β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｓａｍｉｎｉｄｅ（ＳＩＧＭＡ製））溶液１０μＬを、新たな９６穴プレートに添加し、３７℃、１時間反応させた。反応終了後、各穴に０．１ｍｏｌ／Ｌ  Ｎａ２ＣＯ３／ＮａＨＣＯ３  ２５０μＬを加え、波長４１５ｎｍにおける吸光度を測定した。同時に濁度として波長６５０ｎｍにおける吸光度を測定し補正した。また、空試験として、細胞上清１０μＬおよび０．１ｍｏｌ／Ｌ  Ｎａ２ＣＯ３／ＮａＨＣＯ3  ２５０μＬ混合液の吸光度を同様に測定した。
下記式１からヘキソサミニダーゼ遊離抑制率を算出した。
ヘキソサミニダーゼ遊離抑制率（％）＝｛１−（Ｂ−Ｃ）／Ａ｝×１００・・・（式１）
Ａ：被験試料無添加での吸光度
Ｂ：被験試料添加での吸光度
Ｃ：被験試料添加、ｐ−ＮＡＧ無添加での吸光度
【００５４】
結果を表１に示す。なお、被験試料は、試料濃度４００μｇ／ｍＬで使用した。
【００５５】
【表１】
2010155787.tif 000002
【００５６】
（実施例２：シクロオキシゲナーゼ−２（ＣＯＸ−２）活性阻害作用試験）
前記製造例１〜３のオタネニンジンの花抽出物を被験試料として用い、下記の試験方法によりシクロオキシゲナーゼ−２（ＣＯＸ−２）活性阻害作用を試験した。
【００５７】
マウスマクロファージ細胞（ＲＡＷ２６４．７、大日本製薬株式会社製）を１０％ＦＢＳ含有ダルベッコＭＥＭ（日水製薬株式会社製）を用いて培養した後、セルスクレーパーにより細胞を回収した。回収した細胞を２．０×１０５ｃｅｌｌｓ／ｍＬの濃度になるように１０％ＦＢＳ含有ダルベッコＭＥＭで希釈した後、９６穴プレートに１穴当たり１００μＬずつ播種し、３７℃、５％ＣＯ２下で１８時間培養した。培養終了後、既に存在するＣＯＸ−１及び少量発現しているＣＯＸ−２をアセチル化し失活させるため、培地を５００μｍｏｌ／Ｌ  アスピリン含有培地に交換し、３７℃、５％ＣＯ２下で４時間培養した。細胞をＰＢＳ（−）で３回洗浄し、終濃度０．５％ＤＭＳＯを含む１０％ＦＢＳ含有ダルベッコＭＥＭで溶解した被験試料を各穴に１００μＬ添加した後、終濃度１μｇ／ｍＬで１０％ＦＢＳ含有ダルベッコＭＥＭに溶解したリポポリサッカライド（ＬＰＳ、Ｅ．ｃｏｌｉ  ０１１１；Ｂ４、ＤＩＦＣＯ社製）を１００μＬ添加し、３７℃、５％ＣＯ２下で１６時間培養した。培養終了後、各穴の培養上清中のプロスタグランジンＥ２量をＰＧＥ２  ＥＩＡ  Ｋｉｔ（Ｃａｙｍａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ社製）を用いて定量した。
ＣＯＸ−２活性阻害作用は、下記式２により算出した。
ＣＯＸ−２活性阻害率（％）＝｛１−（Ａ−Ｃ）／（Ｂ−Ｃ）｝×１００・・・（式２）
Ａ：被験試料添加、ＬＰＳ刺激時のプロスタグランジンＥ２量
Ｂ：被験試料無添加、ＬＰＳ刺激時のプロスタグランジンＥ２量
Ｃ：被験試料無添加、ＬＰＳ無刺激時のプロスタグランジンＥ２量
【００５８】
結果を表２に示す。なお、被験試料は、試料濃度２５μｇ／ｍＬで使用した。
【００５９】
【表２】
2010155787.tif 000003
【００６０】
（実施例３：一酸化窒素（ＮＯ）産生抑制作用試験）
前記製造例１〜３のオタネニンジンの花抽出物を被験試料として用い、下記の試験方法により一酸化窒素（ＮＯ）産生抑制作用を試験した。
【００６１】
マウスマクロファージ細胞（ＲＡＷ２６４．７、大日本製薬株式会社製）を、１０％ＦＢＳ含有ダルベッコＭＥＭ（日水製薬株式会社製）を用いて培養した後、セルスクレーパーにより細胞を回収した。回収した細胞を３．０×１０６ｃｅｌｌｓ／ｍＬの濃度になるように１０％ＦＢＳ含有フェノールレッド不含ダルベッコＭＥＭで希釈した後、９６穴マイクロプレートに１穴当たり１００μＬずつ播種し、３７℃、５％ＣＯ２下で４時間培養した。培養終了後、培地を抜き、終濃度２％のＤＭＳＯを含む１０％ＦＢＳ含有フェノールレッド不含ダルベッコＭＥＭで溶解した被験試料溶液を各穴に１００μＬ添加し、終濃度１μｇ／ｍＬで１０％ＦＢＳ含有フェノールレッド不含ダルベッコＭＥＭに溶解したリポポリサッカライド（ＬＰＳ、Ｅ．ｃｏｌｉ  ０１１１；Ｂ４、ＤＩＦＣＯ社製）を１００μＬ加え、３７℃、５％ＣＯ２下で４８時間培養した。ＮＯ産生量は亜硝酸イオン（ＮＯ２−）量を指標に測定した。培養終了後、各穴の培養液に、同量のグリス試薬（１質量％のスルファニルアミド、０．１質量％のＮ−１−ｎａｐｈｔｈｙｌ  ｅｔｈｙｌｅｎｄｉａｍｉｎｅ  ｄｉｈｙｄｒｏｃｈｌｐｒｉｄｅ  ｉｎ  ５質量％のリン酸溶液）を添加し、１０分間室温にて反応した。反応後、波長５４０ｎｍにおける吸光度を測定した。
ＮＯ産生抑制作用は、下記式３により算出した。
ＮＯ産生抑制率（％）＝{１−（Ａ−Ｂ）／（Ｃ−Ｄ）}×１００・・・（式３）
Ａ：被験試料添加、ＬＰＳ刺激時の波長５４０ｎｍにおける吸光度
Ｂ：被験試料添加、ＬＰＳ無刺激時の波長５４０ｎｍにおける吸光度
Ｃ：被験試料無添加、ＬＰＳ刺激時の波長５４０ｎｍにおける吸光度
Ｄ：被験試料無添加、ＬＰＳ無刺激時の波長５４０ｎｍにおける吸光度
【００６２】
結果を表３に示す。なお、被験試料は、試料濃度２００μｇ／ｍＬで使用した。
【００６３】
【表３】
2010155787.tif 000004
【００６４】
（実施例４：腫瘍壊死因子（ＴＮＦ−α）産生抑制作用試験）
前記製造例１〜３のオタネニンジンの花抽出物を被験試料として用い、下記の試験方法により腫瘍壊死因子（ＴＮＦ−α）産生抑制作用を試験した。
【００６５】
マウスマクロファージ細胞（ＲＡＷ２６４．７、大日本製薬株式会社製）を１０％ＦＢＳ含有ダルベッコＭＥＭ（日水製薬株式会社製）を用いて培養した後、セルスクレーパーにより細胞を回収した。回収した細胞を１．０×１０６ｃｅｌｌｓ／ｍＬの濃度になるように１０％ＦＢＳ含有ダルベッコＭＥＭで希釈した後、９６穴プレートに１穴当たり１００μＬずつ播種し、３７℃、５％ＣＯ２下で４時間培養した。培養終了後、培地を抜き、終濃度２％ＤＭＳＯを含む１０％ＦＢＳ含有ダルベッコＭＥＭで溶解した被験試料を各穴に１００μＬ添加し、終濃度１μｇ／ｍＬで１０％ＦＢＳ含有ダルベッコＭＥＭに溶解したリポポリサッカライド（ＬＰＳ、Ｅ．ｃｏｌｉ  ０１１１；Ｂ４、ＤＩＦＣＯ社製）を１００μＬ加え、３７℃、５％ＣＯ２下で２４時間培養した。培養終了後、各穴の培養上清中のＴＮＦ−α量を下記のサンドイッチＥＬＩＳＡ法を用いて測定した。
一次抗体であるラット抗マウスＴＮＦ−αモノクローナル抗体（Ｅｎｄｏｇｅｎ  Ｉｎｃ．製）を５０ｍＭ炭酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ９.６）で２．５μｇ／ｍＬとなるように溶解し、その溶液１００μＬを９６穴マイクロプレートに加え、一晩、４℃でコーティングした。次いで、洗浄液（０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０を含むリン酸緩衝液）で各穴を洗浄後、１％ＢＳＡを含むリン酸緩衝液でブロッキングを行った。
洗浄液によって各穴を洗浄後、試験培地で培養上清を希釈し、その１００μＬを各穴に加え、３７℃で１２０分間インキュベートした。各穴を洗浄した後、二次抗体として、０．３％ＢＳＡを含むリン酸緩衝液に２．５μｇ／ｍＬの濃度で溶解させたウサギ抗マウスＴＮＦ−αポリクローナル抗体（Ｅｎｄｏｇｅｎ  Ｉｎｃ．製）１００μＬを加え、３７℃で６０分間インキュベートしてから洗浄した。
次いで、１，０００倍に希釈したアルカリフォスファターゼ標識抗ウサギＩｇＧ抗体（ＣＨＥＭＩＣＯＮ  Ｉｎｃ．製）を１００μＬ加え、３７℃で６０分間インキュベートした。各穴を洗浄した後、発色用緩衝液（２０ｍＭ硫酸マグネシウム含有トリス塩酸緩衝液、ｐＨ８．０）１００ｍＬにｐ−ニトロフェニルリン酸５０ｍｇを溶解してなる基質溶液１５０μＬを穴に添加し、３７℃で２０分間〜３０分間酵素反応を行って発色させ、４０５ｎｍの吸光度を測定し、リコビナントマウスＴＮＦ−α（Ｅｎｄｏｇｅｎ  Ｉｎｃ．製）標準液より作成した標準曲線から、培養上清中のＴＮＦ−α量（ｐｇ／ｍＬ）を求めた。
ＴＮＦ−α産生抑制作用は、下記式４により算出した。
ＴＮＦ−α産生抑制率（％）＝｛（Ｂ−Ａ）／Ｂ｝×１００・・・（式４）
Ａ：被験試料添加時のＴＮＦ−α量
Ｂ：被験試料無添加時のＴＮＦ−α量
【００６６】
次に、試料濃度を段階的に減少させて、上記、ＴＮＦ−α産生抑制率の測定を行い、ＴＮＦ−α産生抑制率が５０％になる試料濃度（μｇ／ｍＬ）を内挿法により求めた。結果を表４に示す。
【００６７】
【表４】
2010155787.tif 000005
【００６８】
（実施例５：血小板凝集抑制作用試験）
前記製造例１〜３のオタネニンジンの花抽出物を被験試料として用い、下記の試験方法により血小板凝集抑制作用を試験した。
【００６９】
まず、ヘパリンナトリウム注射液（日本薬局方）を１／１０量加えて採血したウサギの血液を遠心分離（１８０×ｇ、１０分、室温）して、血小板浮遊液（Ｐｌａｔｅｌｅｔ  Ｒｉｃｈ  Ｐｌａｓｍａ；Ｐ．Ｒ．Ｐ．）を得た。
次に、血小板浮遊液（Ｐ．Ｒ．Ｐ．）２２３μＬに２００ｍｍｏｌ／Ｌの塩化カルシウム溶液１μＬを加え、３７℃で１分間反応した。これに被験試料溶液１μＬを加え、更に２分間反応し、撹拌子を入れて１分間撹拌した後、コラーゲン溶液を２５μＬ添加して、３７℃で１０分間の血小板凝集率を測定した。別に、コントロールとして被験試料溶液の代わりに被験試料溶液の溶媒を添加した以外は、上記と同様に操作して血小板凝集率を測定した。
血小板凝集抑制作用は、下記式５により算出した。
血小板凝集抑制率（％）＝｛（Ａ−Ｂ）／Ａ｝×１００・・・（式５）
Ａ：コントロールの血小板凝集率
Ｂ：被験試料溶液添加時の血小板凝集率
【００７０】
結果を表５に示す。なお、被験試料は、試料濃度４００μｇ／ｍＬで使用した。
【００７１】
【表５】
2010155787.tif 000006
【００７２】
実施例１〜５の結果から、オタネニンジン（Ｐａｎａｘ ｇｉｎｓｅｎｇ）の花抽出物は、ヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用、シクロオキシゲナーゼ−２（ＣＯＸ−２）活性阻害作用、一酸化窒素（ＮＯ）産生抑制作用、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ−α）産生抑制作用、及び血小板凝集抑制作用を有することが確認され、オタネニンジン（Ｐａｎａｘ ｇｉｎｓｅｎｇ）の花抽出物が、抗炎症剤の有効成分として、好適に利用可能であることが示唆された。
【００７３】
（実施例６：エストロゲン様作用試験）
前記製造例１〜３のオタネニンジンの花抽出物を被験試料として用い、下記の試験方法によりエストロゲン様作用を試験した。
【００７４】
エストロゲン依存性細胞の増殖に対する影響を調べるＴｈｏｍａｓらの方法（Ｉｎ  Ｖｉｔｒｏ  Ｃｅｌｌ．Ｄｅｖ．Ｂｉｏｌ．２８Ａ，５９５−６０２，１９９２）に準拠して試験を行った。
ヒト乳ガン由来のＭＣＦ−７細胞（ＤＳファーマバイオメディカル社製）を７５ｃｍ２フラスコでコンフルエント様になるまで培養し、トリプシン処理により、このＭＣＦ−７細胞を集め、１０％ＦＢＳ（活性炭処理済み）、１％ＮＥＡＡ及び１ｍＭピルビン酸ナトリウムを含みフェノールレッドを含まないＭＥＭ培地（以下、「ＭＥＭ培地」と称することがある。）を用いて、３．３×１０４ｃｅｌｌｓ／ｍＬに調製した。
調製したＭＣＦ−７細胞を４８穴プレートに０．４５ｍＬずつ播種し、これを定着させるために３７℃、５％ＣＯ２下で培養した。６時間後（０日日）、ＭＥＭ培地で溶解した被験試料を各穴に５０μＬを添加し、培養を続けた。
培養開始から６日目に、培地を０．９７ｍｍｏｌ／ＬのＭＴＴを含むＭＥＭ培地に交換し、２時間培養後、培地をイソプロパノールに交換して細胞内に生成したブルーホルマザンを抽出した。溶出したブルーホルマザンを含有するイソプロパノールについて、ブルーホルマザンの吸収極大点がある５７０ｎｍの吸光度を測定した。
なお、付着細胞の影響を補正するため、同時に６５０ｎｍの吸光度も測定し、両吸光度の差をもってブルーホルマザンの生成量に比例する値とした（下記式における吸光度はこの補正済み吸光度である）。陽性対照としては、１０−９Ｍのβ−エストラジオールを使用した。
エストロゲン様作用（エストロゲン依存性増殖作用）は、下記式６により算出した。なお、エストロゲン様作用の強さは、被験試料無添加時の吸光度を１００％として算出した。
エストロゲン様作用率（％）＝（Ａ／Ｂ）×１００・・・（式６）
Ａ：被験試料添加時の吸光度
Ｂ：被験試料無添加時の吸光度
【００７５】
結果を表６に示す。なお、被験試料は、試料濃度５０μｇ／ｍＬで使用した。
【００７６】
【表６】
2010155787.tif 000007
【００７７】
（実施例７：ラミニン−５産生促進作用試験）
前記製造例１〜３のオタネニンジンの花抽出物を被験試料として用い、下記の試験方法によりラミニン−５産生促進作用を試験した。
【００７８】
正常ヒト皮膚表皮角化細胞（倉敷紡績社製）を２４穴プレートに播種し、３７℃、５％ＣＯ２下で、被験試料を添加した正常ヒト表皮角化細胞培地（ＫＧＭ）より牛脳下垂体抽出物（ＢＰＥ）を除いた培地（ＫＧＭ−ＢＰＥ）で４８時間培養した後、上清１００μＬをＥＬＩＳＡプレートに移し換え一晩４℃でプレートに吸着させたのち、溶液を捨て、０．０５％トゥイーン−２０を含むリン酸生理緩衝液（ＰＢＳ−Ｔ）にて、洗浄を行った。その後、１％ウシ血清アルブミンを含むリン酸生理緩衝液で、ブロッキング操作を行った。溶液を捨て、０．０５％トゥイーン−２０を含むリン酸生理緩衝液（ＰＢＳ−Ｔ）にて、洗浄を行い、抗ヒトラミニン−５抗体（マウスＩｇＧ、ケミコン社製）を反応させた。溶液を捨て、０．０５％トゥイーン−２０を含むリン酸生理緩衝液（ＰＢＳ−Ｔ）にて、洗浄を行い、ビオチン標識抗体マウスＩｇＧ（アマシャムバイオサイエンス社製）を反応させた。溶液を捨て、０．０５％トゥイーン−２０を含むリン酸生理緩衝液（ＰＢＳ−Ｔ）にて、洗浄を行い、アビジン−ビオチン化ペルオキシダーゼ複合体と反応させたのち、同様の洗浄操作を行い、発色させ、４０５ｎｍの吸光度を測定した。
ラミニン−５産生促進作用は、下記式７により算出した。
ラミニン−５産生促進率（％）＝（Ａ／Ｂ）×１００・・・（式７）
Ａ：被験試料添加時の吸光度
Ｂ：被験試料無添加時の吸光度
【００７９】
結果を表７に示す。なお、被験試料は、試料濃度５０μｇ／ｍＬで使用した。
【００８０】
【表７】
2010155787.tif 000008
【００８１】
（実施例８：ヒアルロン酸合成促進作用試験）
前記製造例１〜３のオタネニンジンの花抽出物を被験試料として用い、下記の試験方法によりヒアルロン酸合成促進作用を試験した。
【００８２】
ヒト正常皮膚線維芽細胞（ＮＢ１ＲＧＢ、理化学研究所製）を１０％ＦＢＳ含有α−ＭＥＭ（ｍｉｎｉｍｕｍ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌ  ｍｅｄｉｕｍ）を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を２．２×１０５ｃｅｌｌｓ／ｍＬの濃度に５％ＦＢＳ含有α−ＭＥＭで希釈した後、９６穴プレートに１穴当たり１００μＬずつ播種し、３７℃、５％ＣＯ２下で一晩培養した。培養終了後、０．５％ＦＢＳ含有α−ＭＥＭに溶解した被験試料を各穴に１００μＬ添加し、３７℃、５％ＣＯ２下で３日間培養した。培養後、各穴の培地中のヒアルロン酸量を間接的ＥＬＩＳＡ法により測定した。
ヒアルロン酸合成促進作用は、下記式８により算出した。
ヒアルロン酸合成促進率（％）＝（Ａ／Ｂ）×１００・・・（式８）
Ａ：被験試料添加時のヒアルロン酸量
Ｂ：被験試料無添加時のヒアルロン酸量
【００８３】
結果を表８に示す。なお、被験試料は、試料濃度１００μｇ／ｍＬで使用した。
【００８４】
【表８】
2010155787.tif 000009
【００８５】
（実施例９：皮膚線維芽細胞増殖促進作用試験）
前記製造例１〜３のオタネニンジンの花抽出物を被験試料として用い、下記の試験方法により皮膚線維芽細胞増殖促進作用を試験した。
【００８６】
ヒト正常皮膚線維芽細胞（ＮＢ１ＲＧＢ、理化学研究所製）を１０％ＦＢＳ含有α−ＭＥＭを用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を７．０×１０４ｃｅｌｌｓ／ｍＬの濃度に５％ＦＢＳ含有α−ＭＥＭで希釈した後、９６穴プレートに１穴当たり１００μＬずつ播種し、３７℃、５％ＣＯ２下で一晩培養した。培養終了後、５％ＦＢＳ含有α−ＭＥＭで溶解した被験試料を各穴に１００μＬ添加し、３日間培養した。皮膚線維芽細胞増殖促進作用は、ＭＴＴアッセイ法を用いて測定した。培養終了後、各穴から１００μＬずつ培地を抜き、終濃度５ｍｇ／ｍＬでＰＢＳ（−）に溶解したＭＴＴを各穴に２０μＬずつ添加した。３７℃、５％ＣＯ２下で４．５時間培養した後に、１０％ＳＤＳを溶解した０．０１ｍｏｌ／Ｌ  塩酸溶液を各穴に１００μＬずつ添加し、３７℃、５％ＣＯ２下で一晩培養した後、波長５７０ｎｍにおける吸光度を測定した。同時に濁度として波長６５０ｎｍにおける吸光度を測定し、両者の差をもってブルーホルマザン生成量とした。また、同様の方法で空試験を行い補正した。
皮膚線維芽細胞増殖促進作用は、下記式９により算出した。
皮膚線維芽細胞増殖促進率（％）＝（Ｓｔ−Ｓｂ）／（Ｃｔ−Ｃｂ）×１００・・・（式９）
Ｓｔ：被験試料を添加した細胞での吸光度
Ｓｂ：被験試料を添加した空試験の吸光度
Ｃｔ：被験試料を添加しない細胞での吸光度
Ｃｂ：被験試料を添加しない空試験の吸光度
【００８７】
結果を表９に示す。なお、被験試料は、試料濃度２００μｇ／ｍＬで使用した。
【００８８】
【表９】
2010155787.tif 000010
【００８９】
実施例６〜９の結果から、オタネニンジン（Ｐａｎａｘ ｇｉｎｓｅｎｇ）の花抽出物は、エストロゲン様作用、ラミニン−５産生促進作用、ヒアルロン酸合成促進作用、及び皮膚線維芽細胞増殖促進作用を有することが確認され、オタネニンジン（Ｐａｎａｘ ｇｉｎｓｅｎｇ）の花抽出物が、抗老化剤の有効成分として、好適に利用可能であることが示唆された。
【００９０】
（実施例１０：サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ活性阻害作用試験）
前記製造例１〜３のオタネニンジンの花抽出物を被験試料として用い、下記の試験方法によりサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ活性阻害作用を試験した。
【００９１】
５ｍｍｏｌ／Ｌ  塩化マグネシウム含有５０ｍｍｏｌ／Ｌ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ７．５）０．２ｍＬに、２．５ｍｇ／ｍＬ  ウシ血清アルブミン溶液０．１ｍＬ及び０．１ｍｇ／ｍＬ  ホスホジエステラーゼ溶液０．１ｍＬ、さらに被験試料溶液０．０５ｍＬを加え、３７℃で５分間予備反応した。これに０．５ｍｇ／ｍＬ  サイクリックＡＭＰ（ｃＡＭＰ）溶液０．０５ｍＬを加え、３７℃で６０分間反応した。沸騰水浴上で３分間煮沸することにより反応を停止し、これを遠心（２，２６０×ｇ、１０分、４℃）し、上清中の反応基質であるサイクリックＡＭＰを下記の条件でＨＰＬＣ分析した。同様の方法で空試験を行い補正した。
［ＨＰＬＣの条件］
Ｃｏｌｕｍｎ：Ｗａｋｏｓｉｌ  Ｃ１８−ＯＤＳ  ５μｍ
Ｍｏｂｉｌ  ｐｈａｓｅ：１ｍＭ  ＴＢＡＰ  ｉｎ  ２５ｍＭ  ＫＨ２ＰＯ４：ＣＨ３ＣＮ＝９０：１０
Ｆｌｏｗ  ｒａｔｅ：１．０ｍＬ／ｍｉｎ
Ｄｅｔｅｃｔｏｒ：２６０ｎｍ
Ａｔｔｅｎ：１２８
次に、サイクリックＡＭＰ標準品のピーク面積（Ａ）、被験試料無添加時におけるサイクリックＡＭＰ標準品とサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼとの反応溶液の上清のピーク面積（Ｂ１）及び被験試料添加時におけるサイクリックＡＭＰ標準品とサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼとの反応溶液の上清のピーク面積（Ｂ２）を求めた。得られた結果から、下記式より試料無添加時のサイクリックＡＭＰ標準品分解率（Ｃ）及び試料添加時のサイクリックＡＭＰ標準品の分解率（Ｄ）を算出した。
試料無添加時の標準品の分解率（Ｃ）（％）＝（１−Ｂ１／Ａ）×１００・・・（式１０）
試料添加時の標準品の分解率（Ｄ）（％）＝（１−Ｂ２／Ａ）×１００・・・（式１１）
サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ活性阻害作用は、上記式１０、及び式１１により算出した各分解率（Ｃ、Ｄ）に基づいて、下記式１２により算出した。
サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ活性阻害率（％）＝（１−Ｄ／Ｃ）×１００・・・（式１２）
【００９２】
結果を表１０に示す。なお、被験試料は、試料濃度２００μｇ／ｍＬで使用した。
【００９３】
【表１０】
2010155787.tif 000011
【００９４】
実施例１０の結果から、オタネニンジン（Ｐａｎａｘ ｇｉｎｓｅｎｇ）の花抽出物は、サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ活性阻害作用を有することが確認され、オタネニンジン（Ｐａｎａｘ ｇｉｎｓｅｎｇ）の花抽出物が、抗肥満剤の有効成分として、好適に利用可能であることが示唆された。
【００９５】
（実施例１１：テストステロン５α−リダクターゼ活性阻害作用試験）
前記製造例１〜３のオタネニンジンの花抽出物を被験試料として用い、下記の試験方法によりテストステロン５α−リダクターゼ活性阻害作用を試験した。
【００９６】
蓋付Ｖ底試験管にて、プロピレングリコールで調製した４．２ｍｇ／ｍＬ  テストステロン２０μＬ、１ｍｇ／ｍＬ  ＮＡＤＰＨ含有５ｍｍｏｌ／Ｌ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ７．１３）８２５μＬを混合した。これに、エタノール、５０％エタノール、若しくは精製水で調製した被験試料８０μＬ、及び、粗酵素液（Ｓ−９）（オリエンタル酵母社製）７５μＬを加え再び混合し、３７℃にて３０分反応させた後、塩化メチレン１ｍＬを加え反応を停止した。これを遠心（１，６００×ｇ、１０分）し、塩化メチレン層を下記の条件でガスクロマトグラフィー分析した。同様の方法で空試験を行った。
予め、３α−アンドロスタンジオール、ジヒドロテストステロン（ＤＨＴ）、及び、テストステロンの標準品の塩化メチレン溶液を同様にガスクロマトグラフィー分析し、これら３化合物の精秤量とピーク面積よりピーク面積あたりの化合物量を算出しておき、Ｓ−９による反応後の３α−アンドロスタンジオール、ジヒドロテストステロン（ＤＨＴ）、及び、テストステロンそれぞれのピーク面積あたりの濃度を求めた（式１３）。その後、式１４に従い、被験試料の変換率を求めた。
濃度（％）＝被験試料のピーク面積×標準品濃度／標準品のピーク面積・・・（式１３）
変換率（％）＝（Ａ＋Ｂ）／（Ａ＋Ｂ＋Ｃ）・・・（式１４）
Ａ：３α−アンドロスタンジオールの濃度
Ｂ：ジヒドロテストステロン（ＤＨＴ）の濃度
Ｃ：テストステロンの濃度
テストステロン５α−リダクターゼ活性阻害作用は、上記変換率に基づいて、下記式１５により算出した。
テストステロン５α−リダクターゼ活性阻害率（％）＝（１−Ｅ／Ｄ）×１００・・・（式１５）
Ｄ：空試験での変換率
Ｅ：被験試料添加での変換率
なお、ガスクロマトグラフィーの条件は、以下のとおりである。
［ガスクロマトグラフィーの条件］
・使用機器：Ｓｈｉｍａｄｚｕ  ＧＣ−７Ａ（株式会社島津製作所製）
・カラム：ＤＢ−１７０１（直径０．５３ｍｍ×３０ｍ、膜厚：１．０μｍ）
・カラム温度／注入温度：２４０℃／３００℃
・検出器：ＦＩＤ
・キャリアガス：窒素ガス
【００９７】
次に、試料濃度を段階的に減少させて、上記、テストステロン５α−リダクターゼ活性阻害率の測定を行い、テストステロン５α−リダクターゼ活性阻害率が５０％になる試料濃度（μｇ／ｍＬ）を内挿法により求めた。結果を表１１に示す。
【００９８】
【表１１】
2010155787.tif 000012
【００９９】
（実施例１２：アンドロゲン受容体結合阻害作用試験）
前記製造例１〜３のオタネニンジンの花抽出物を被験試料として用い、下記の試験方法によりアンドロゲン受容体結合阻害作用を試験した。
【０１００】
アンドロゲン依存性マウス乳癌細胞ＳＣ−３細胞を、２％ＦＢＳ（活性炭処理）含有ＭＥＭ培地（以下ＭＥＭ−２と略す）を用いて、９６穴プレートに１穴当たり１００μＬ（１．０×１０４ｃｅｌｌｓ）ずつ播種し、３７℃、５％ＣＯ２下で培養した。２４時間後、試料および１０−９ｍｏｌ／Ｌのジヒドロテストステロン（ＤＨＴ）を添加した０．５％ＢＳＡ含有ＨａｍＦ１２＋ＭＥＭ培地(以下ＨＭＢ培地と略す)に培地を交換して４８時間培養した。その後、培地を０．９７ｍｍｏｌ／Ｌ  ＭＴＴを含むＭＥＭ−２培地に交換し、２時間培養後、培地をイソプロパノールに交換して細胞内に生成したブルーホルマザンを抽出した。溶出したブルーホルマザンを含有するイソプロパノールについて、ブルーホルマザンの吸収極大点がある５７０ｎｍの吸光度を測定した。
なお、付着細胞の影響を補正するため、同時に６５０ｎｍの吸光度も測定し、両吸光度の差をもってブルーホルマザンの生成量に比例する値とした（下記結合阻害率の計算式における吸光度はこの補正済み吸光度である）。上記と並行して、試料単独でＳＣ−３細胞に及ぼす影響をみるため、ＨＭＢ培地にＤＨＴを添加せず試料のみを添加して、同様の培養と測定を行った。さらに、コントロールとして、試料およびＤＨＴを添加しないＨＭＢ培地で培養した場合、および試料を添加せずＤＨＴのみを添加したＨＭＢ培地で培養した場合についても同様の測定を行った。
測定結果より、アンドロゲン受容体結合阻害作用を示す結合阻害率（％）を下記式１６により算出した。
結合阻害率（％）＝{１−（Ａ−Ｂ）／（Ｃ−Ｄ）}×１００・・・（式１６）
Ａ：ＤＨＴ添加、試料添加の場合の吸光度
Ｂ：ＤＨＴ無添加、試料添加の場合の吸光度
Ｃ：ＤＨＴ添加、試料無添加の場合の吸光度
Ｄ：ＤＨＴ無添加、試料無添加の場合の吸光度
【０１０１】
結果を表１２に示す。なお、被験試料は、試料濃度５０μｇ／ｍＬで使用した。
【０１０２】
【表１２】
2010155787.tif 000013
【０１０３】
（実施例１３：毛乳頭細胞増殖促進作用試験）
前記製造例１〜３のオタネニンジンの花抽出物を被験試料として用い、下記の試験方法により毛乳頭細胞増殖促進作用を試験した。
【０１０４】
正常ヒト毛乳頭細胞（ＴＯＹＯＢＯ社製、ＣＡ６０２０５）を含有した毛乳頭細胞増殖培地（ＴＯＹＯＢＯ社製、ＴＰＧＭ−２５０）を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を１０％のＦＢＳ含有ダルベッコＭＥＭ（ＤＭＥＭ）を用いて１．０×１０４ｃｅｌｌｓ／ｍＬの濃度に希釈した後、コラーゲンコートした９６穴マイクロプレートに１穴当り２００μＬ播種し、３７℃、５％ＣＯ２下で３日間培養した。培養後、培地を抜き、無血清ダルベッコＭＥＭ（ＤＭＥＭ）に溶解した被験試料溶液を各穴に２００μＬ添加し、更に３７℃、５％ＣＯ２下で４日間培養した。毛乳頭細胞増殖促進作用はＭＴＴアッセイを用いて測定した。具体的には、培養終了後、培地を抜き、終濃度０．４ｍｇ／ｍＬで無血清のＤＭＥＭに溶解したＭＴＴ〔３−（４，５−Ｄｉｍｅｔｈｙｌ−２−ｔｈｉａｚｏｌｙｌ）−２，５−ｄｉｐｈｅｎｙｌ−２Ｈ−ｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍ  Ｂｒｏｍｉｄｅ〕を各穴に１００μＬ添加した。３７℃、５％ＣＯ２下で２時間培養した後に、細胞内に生成したブルーホルマザンを２−プロパノール１００μＬで抽出した。抽出後、波長５７０ｎｍにおける吸光度を測定した。同時に濁度として波長６５０ｎｍにおける吸光度を測定し、両者の差をもってブルーホルマザン生成量とした。また、同様の方法で空試験を行い補正した。
毛乳頭細胞増殖促進作用は、下記式１７により算出した。
毛乳頭細胞増殖促進率（％）＝Ａ／Ｂ×１００・・・（式１７）
Ａ：被験試料溶液添加時の吸光度
Ｂ：被験試料溶液無添加時の吸光度
【０１０５】
結果を表１３に示す。なお、被験試料は、試料濃度５０μｇ／ｍＬで使用した。
【０１０６】
【表１３】
2010155787.tif 000014
【０１０７】
実施例１１〜１３の結果から、オタネニンジン（Ｐａｎａｘ ｇｉｎｓｅｎｇ）の花抽出物は、テストステロン５α−リダクターゼ活性阻害作用、アンドロゲン受容体結合阻害作用、及び毛乳頭細胞増殖促進作用を有することが確認され、オタネニンジン（Ｐａｎａｘ ｇｉｎｓｅｎｇ）の花抽出物が、育毛剤の有効成分として、好適に利用可能であることが示唆された。
【０１０８】
（配合例１）
−乳液−
下記組成に従い、乳液を常法により製造した。
・オタネニンジン（Ｐａｎａｘ ｇｉｎｓｅｎｇ）の花の５０質量％エタノール抽出物（製造例１）・・・０．１０ｇ
・ホホバオイル・・・４．００ｇ
・１，３−ブチレングリコール・・・３．００ｇ
・アルブチン・・・３．００ｇ
・ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ．）・・・２．５０ｇ
・オリーブオイル・・・２．００ｇ
・スクワラン・・・２．００ｇ
・セタノール・・・２．００ｇ
・モノステアリン酸グリセリル・・・２．００ｇ
・オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（２０Ｅ．Ｏ．）・・・２．００ｇ
・パラオキシ安息香酸メチル・・・０．１５ｇ
・グリチルリチン酸ステアリル・・・０．１０ｇ
・黄杞エキス・・・０．１０ｇ
・グリチルリチン酸ジカリウム・・・０．１０ｇ
・イチョウ葉エキス・・・０．１０ｇ
・コンキオリン・・・０．１０ｇ
・オウバクエキス・・・０．１０ｇ
・カミツレエキス・・・０．１０ｇ
・香料・・・０．０５ｇ
・精製水・・・残部（合計１００．００ｇ）
【０１０９】
（配合例２）
−化粧水−
下記組成に従い、化粧水を常法により製造した。
・オタネニンジン（Ｐａｎａｘ ｇｉｎｓｅｎｇ）の花の水抽出物（製造例２）・・・０．１０ｇ
・グリセリン・・・３．００ｇ
・１，３−ブチレングリコール・・・３．００ｇ
・アスコルビン酸グルコシド・・・２．００ｇ
・オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（２０Ｅ．Ｏ．）・・・２．００ｇ
・パラオキシ安息香酸メチル・・・０．１５ｇ
・グリチルリチン酸二カリウム・・・０．１０ｇ
・クエン酸・・・０．１０ｇ
・クエン酸ソーダ・・・０．１０ｇ
・油溶性甘草エキス・・・０．１０ｇ
・海藻エキス・・・０．１０ｇ
・クジンエキス・・・０．１０ｇ
・キシロビオースミクスチャー・・・０．０５ｇ
・香料・・・０．０５ｇ
・精製水・・・残部（合計：１００．００ｇ）
【０１１０】
（配合例３）
−クリーム−
下記組成に従い、クリームを常法により製造した。
・オタネニンジン（Ｐａｎａｘ ｇｉｎｓｅｎｇ）の花の８０質量％エタノール抽出物（製造例３）・・・０．１０ｇ
・スクワラン・・・１０．００ｇ
・１，３−ブチレングリコール・・・６．００ｇ
・流動パラフィン・・・５．００ｇ
・サラシミツロウ・・・４．００ｇ
・セタノール・・・３．００ｇ
・モノステアリン酸グリセリル・・・３．００ｇ
・ラノリン・・・２．００ｇ
・オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（２０Ｅ．Ｏ．）・・・１．５０ｇ
・パラオキシ安息香酸メチル・・・１．５０ｇ
・ステアリン酸・・・１．００ｇ
・アルコルビン酸リン酸マグネシウム・・・０．１０ｇ
・グリチルレチン酸・・・０．１０ｇ
・酵母抽出液・・・０．１０ｇ
・シソ抽出液・・・０．１０ｇ
・シナノキ抽出液・・・０．１０ｇ
・ジユ抽出液・・・０．１０ｇ
・香料・・・０．１０ｇ
・精製水・・・残部（合計：１００．００ｇ）
【０１１１】
（配合例４）
−パック−
下記組成に従い、パックを常法により製造した。
・オタネニンジン（Ｐａｎａｘ ｇｉｎｓｅｎｇ）の花の５０質量％エタノール抽出物（製造例１）・・・０．２０ｇ
・ポリビニルアルコール・・・１５．００ｇ
・エタノール・・・１０．００ｇ
・プロピレングリコール・・・７．００ｇ
・ポリエチレングリコール・・・３．００ｇ
・セージ抽出液・・・０．１０ｇ
・トウキ抽出液・・・０．１０ｇ
・ニンジン抽出液・・・０．１０ｇ
・パラオキシ安息香酸エチル・・・０．０５ｇ
・香料・・・０．０５ｇ
・精製水・・・残部（合計：１００．００ｇ）
【０１１２】
（配合例５）
−ヘアトニック−
下記組成の育毛作用を有するヘアトニックを、常法により製造した。
・塩酸ピリドキシン・・・０．１ｇ
・レゾルシン・・・０．０１ｇ
・Ｄ−パントテニルアルコール・・・０．１ｇ
・グリチルリチン酸ジカリウム・・・０．１ｇ
・ｌ−メントール・・・０．０５ｇ
・１，３−ブチレングリコール・・・４．０ｇ
・センブリエキス・・・０．１ｇ
・ニンジンエキス・・・０．１ｇ
・クジンエキス・・・０．１ｇ
・オタネニンジン（Ｐａｎａｘ ｇｉｎｓｅｎｇ）の花の５０質量％エタノール抽出物（製造例１）・・・０．２ｇ
・香料・・・適量
・精製水・・・残部（合計：１００．００ｇ）
【０１１３】
（配合例６）
−シャンプー−
下記組成に従い、シャンプーを常法により製造した。
・ポリオキシエチレンアルキルエーテル硫酸ナトリウム・・・３０．０ｇ
・ポリオキシエチレンアルキルエーテル硫酸アンモニウム・・・２０．０ｇ
・ヤシ油脂肪酸アミドプロピルベタイン・・・６．０ｇ
・ヤシ油脂肪酸モジエタノールアミド・・・４．０ｇ
・ジステアリン酸エチレングリコール・・・２．０ｇ
・防腐剤（パラオキシ安息香酸メチル）・・・０．１５ｇ
・オタネニンジン（Ｐａｎａｘ ｇｉｎｓｅｎｇ）の花の８０質量％エタノール抽出物（製造例３）・・・０．２ｇ
・ムクロジエキス・・・０．２ｇ
・黄杞エキス・・・０．５ｇ
・オウバクエキス・・・０．３ｇ
・ローズマリーエキス・・・０．５ｇ
・香料・・・０．０１ｇ
・１，３−ブチレングリコール・・・３．０ｇ
・精製水・・・残部（合計：１００．００ｇ）
【０１１４】
（配合例７）
−リンス−
下記組成に従い、リンスを常法により製造した。
・塩化ステアリルトリメチルアンモニウム・・・１．５ｇ
・ポリオキシエチレンセチルエーテル・・・１．０ｇ
・セチルアルコール・・・２．０ｇ
・オクチルドデカノール・・・１．０ｇ
・カチオン化セルロース・・・０．５ｇ
・プロピレングリコール・・・５．０ｇ
・オタネニンジン（Ｐａｎａｘ ｇｉｎｓｅｎｇ）の花の５０質量％エタノール抽出物（製造例１）・・・０．２ｇ
・ムクロジエキス・・・０．２ｇ
・黄杞エキス・・・０．５ｇ
・オウバクエキス・・・０．３ｇ
・ローズマリーエキス・・・０．５ｇ
・香料・・・３．０ｇ
・精製水・・・残部（合計：１００．００ｇ）
【０１１５】
（配合例８）
−錠剤状栄養補助食品−
下記の混合物を打錠して、錠剤状栄養補助食品を製造した。
・オタネニンジン（Ｐａｎａｘ ｇｉｎｓｅｎｇ）の花の５０質量％エタノール抽出物（製造例１）・・・３０ｇ
・粉糖（ショ糖）・・・１７８ｇ
・ソルビット・・・１０ｇ
・グリセリン脂肪酸エステル・・・１２ｇ
【０１１６】
（配合例９）
−顆粒状栄養補助食品−
下記の混合物を顆粒状に形成して、顆粒状栄養補助食品を製造した。
・オタネニンジン（Ｐａｎａｘ ｇｉｎｓｅｎｇ）の花の水抽出物（製造例２）・・・２０ｇ
・ビートオリゴ糖・・・１，０００ｇ
・ビタミンＣ・・・１６７ｇ
・ステビア抽出物・・・１０ｇ
【０１１７】
（配合例１０）
−顆粒状栄養補助食品−
下記の混合物を顆粒状に形成して、顆粒状栄養補助食品を製造した。
・オタネニンジン（Ｐａｎａｘ ｇｉｎｓｅｎｇ）の花の８０質量％エタノール抽出物（製造例３）・・・２０ｇ
・ビートオリゴ糖・・・１，０００ｇ
・ビタミンＣ・・・１６７ｇ
・ステビア抽出物・・・１０ｇ
【産業上の利用可能性】
【０１１８】
本発明の抗炎症剤、抗老化剤、抗肥満剤、及び育毛剤の少なくともいずれかを配合した化粧料は、優れた抗炎症作用、抗老化作用、抗肥満作用、及び育毛作用の少なくともいずれかを有し、かつ安全性にも優れているので、例えば、軟膏、クリーム、乳液、化粧水、ローション、パック、ゼリー、リップクリーム、口紅、入浴剤、アストリンゼント、ヘアトニック、シャンプー、リンスなどに好適に利用可能である。
また、本発明の抗炎症剤、抗老化剤、抗肥満剤、及び育毛剤の少なくともいずれかを配合した美容用飲食品は、経口摂取によっても優れた抗炎症作用、抗老化作用、抗肥満作用、及び育毛作用の少なくともいずれかを有し、かつ安全性にも優れているので、例えば、健康食品、栄養補助食品などに好適に利用可能である。