(57)【要約】      （修正有）【課題】正確な質量較正を簡便に行うことができ、且つ、適応範囲も広い質量較正法および該方法に使用する標準物質を提供する。【解決手段】質量較正のための標準物質として、２種類以上のポルフィリンを組み合わせて用いる。２種類以上のポルフィリンのうち、１種又は２種類以上のポルフィリンが錯塩である。２種類以上のポルフィリンを用意する工程と、前記２種類以上のポルフィリンを質量分析し、前記２種類以上のポルフィリンそれぞれのイオンピークの質量の実測値を得る工程と、前記２種類以上のポルフィリンそれぞれの、質量分析におけるイオンピークの質量の理論値を算出する工程と、前記実測値と前記理論値とを比較することによって質量較正曲線を作成する工程とを含む、質量分析装置の質量較正方法。【選択図】図１
2010117153.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
質量較正のための標準物質として、２種類以上のポルフィリンを組み合わせて用いることを特徴とする質量分析装置の質量較正方法。
【請求項２】
２種類以上のポルフィリンのうち、１種又は２種類以上のポルフィリンが錯塩であることを特徴とする、請求項１に記載の質量分析装置の質量較正方法。
【請求項３】
２種類以上のポルフィリンを用意する工程と、
前記２種類以上のポルフィリンを質量分析し、前記２種類以上のポルフィリンそれぞれのイオンピークの質量の実測値を得る工程と、
前記２種類以上のポルフィリンそれぞれの、質量分析におけるイオンピークの質量の理論値を算出する工程と、
前記実測値と前記理論値とを比較することによって質量較正曲線を作成する工程とを含む、請求項１〜２のいずれか１項に記載の質量分析装置の質量較正方法。
【請求項４】
２種類以上のポルフィリンを組み合わせて質量校正に用いた場合に、
前記2種類以上のポルフィリンを質量分析し、前記２種類以上のポルフィリンそれぞれのイオンピークの質量の実測値を得る工程と、
前記２種類以上のポルフィリンそれぞれの、質量分析におけるイオンピークの質量の理論値を算出する工程と、
前記実測値と前記理論値とを比較することによって質量較正曲線を作成する工程とを実行するプログラムを有する質量分析装置。
【請求項５】
質量較正のための標準物質として、２種類以上のポルフィリンを組み合わせたことを特徴とする質量分析装置用の質量分析用標準物質キット。
【請求項６】
２種類以上のポルフィリンのうち、１種又は２種類以上のポルフィリンが錯塩であることを特徴とする請求項５に記載の質量分析装置用の質量分析用標準物質キット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、質量分析装置で、精密質量測定を行う際に用いる質量分析用標準物質および該標準物質を使用する質量分析装置の質量較正方法に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
質量分析法として、高速原子衝撃イオン化法（Fast Atom Bombardment Ionization:以下、ＦＡＢ）、電子イオン化法（Electron Ionization：以下、ＥＩ）およびマトリックス支援レーザー脱離イオン化法（Matrix-Assisted Laser Desorption/Ionization：以下、ＭＡＬＤＩ）が知られており、それぞれ対応する質量分析装置が用いられる。
【０００３】
質量分析を行なう際、低分解能質量測定では、整数質量電荷比(ｍ／ｚ)を決定することができるが、一般に未知物質の組成を決定することができない。例えば、ｍ／ｚ＝14の場合、ＮまたはＣＨ2の可能性があるが、整数質量電荷比だけではどちらかを決定できない。しかし、小数第４桁まで質量数を表わすと、Ｎは14.0031であるのに対し、ＣＨ2は14.0156と、明らかに判別できる。そこで、組成決定を行うために、精密質量測定が用いられてきた。
【０００４】
図１は、精密質量測定法の概念図である。ここで、精密質量測定では、まず、精密質量測定を行う試料と内部標準物質を混合して質量分析を行なう。内部標準物質としては、試料イオンピークの両側に近接してピークが出現するようなものが選ばれる。図１におけるStandard A及びStandard Bがそれに相当する。そして、質量数が既知であるこれらの内部標準物質の２つのピークに基づいて、その間に存在する試料ピークＭ+の質量数を内挿法により校正し、試料イオンの精密質量を小数第４桁まで求める。
【０００５】
図１に示すように、測定試料の精密質量の実測値Ｍ+（obs）と理論値Ｍ+（calc）との間の差の値をとって、理論値で除し、結果（error）の絶対値が10ppm以内であれば、一般に、試料イオンの組成は理論値に一致すると見なすことができると言われている。
【０００６】
ＦＡＢにおいて、標準物質としてポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ペルフルオロアルキルホスファジン（ウルトラマーク）、ヨウ化セシウム（ＣｓＩ）などが用いられている。
また、エレクトロスプレーイオン化法において、標準物資として、クラウンエーテル類にアルカリ金属塩を付加した錯化合物（特許文献１）、テトラアルキルピペリジン基を分子内に２個以上有する化合物（特許文献２）、単糖・オリゴ糖（特許文献３）、ＭＡＬＤＩおいて、同一分子量の１種又は複数種の単糖を構成糖とし且つ構成糖の数が互いに異なる複数種の糖鎖の組み合わせ（特許文献４）、内部標準物質に異なる質量を持たせるためのタグ（特許文献５）、５，１０，１５，２０−テトラキス（４−ヒドロキシフェニル）ポリフィリンにＯ−保護シクロデキストリンが結合した化合物（特許文献６）が知られている。
また、ＦＡＢにおいて、異なる分子量のＰＥＧの組み合わせ、ＰＥＧ＋ＮＢＡ（m-ニトロベンジルアルコール）などの組み合わせの最適化が試みられている（非特許文献１）
【０００７】
【特許文献１】特開2000-310617
【特許文献２】特開2003-014696
【特許文献３】特開2004-205431
【特許文献４】特開2005-292093
【特許文献５】特開2006-300752
【特許文献６】特開2006-300752
【非特許文献１】分析化学,Vol.53,No6,624-627(2004)
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
標準物質としてＦＡＢで用いられているＰＥＧ（図２）およびウルトラマークでは、質量数６００から１０００付近の範囲ではピーク強度が非常に低いことから、ピーク形状のノイズが大きく精密な質量測定が困難である（図１６）。
【０００９】
標準物質としてＦＡＢで用いられているＣｓＩは測定可能範囲が６０００程度であるが、水溶性無機塩であるため、水溶性に乏しい有機化合物を測定する際は、厳密な意味での内部標準物質として用いることができない。
【００１０】
また、標準物質としてＥＩで用いられているペルフルオロケロセン（ＰＦＫ）は溶媒に溶けにくいためＦＡＢに適用することは困難であり、さらに質量数５００以降はピーク強度が低いことから、同領域で用いることができない（図１５）。
【００１１】
さらにＰＥＧ、ウルトラマーク、ＰＦＫ、ＣｓＩなどの標準物質はポリマーであるため、測定範囲外の成分もイオン化される。そのため、イオン源が汚染されるという問題がある。
【００１２】
また、ＭＡＬＤＩで用いられている標準物質は主にペプチドであるが、ペプチドは生体分子であるため扱いにくく、冷凍保存が必須であり、長期間使用することは難しい。すなわち、質量数６００から１０００付近において十分に使用可能な標準物質はこれまでに存在しなかった。
【００１３】
一方、ＦＡＢの正イオンスペクトルにおいて、ＰＥＧ２００およびＰＥＧ４００は、試料ターゲットにそのまま塗布して測定が可能であるが、ＰＥＧ６００、１０００、１５４０は粘性が増すためそのままターゲットに乗せて測定すると満足なスペクトルを得ることができない。したがってマトリックスとしてＮＢＡを混合して測定を行う。しかしながら分子量が大きくなるとｍ／ｚ＝４５、８９のフラグメントイオンが多くなり分子イオンピークの強度が低下していく。また、ＦＡＢ負イオンスペクトルはＰＥＧ２００およびＰＥＧ４００はピークがあらわれるが、ＰＥＧ６００およびＰＥＧ１０００はＮＢＡを混合しても満足できるスペクトル強度は得られない。
【００１４】
また、ウルトラマークの測定可能質量範囲は１１００から２０００であり、揮発性が高いことから３回ほど測定するとピークが消失するので、長時間測定が不可能である。
本発明は、上述した諸点に鑑みてなされたものであり、ピーク強度の低い質量範囲に対して適用可能な精密質量測定用の内部標準物質を提供することを目的とするものである。
【課題を解決するための手段】
【００１５】
前述の課題を解決するために、第１の本発明は、質量較正のための標準物質として、２種類以上のポルフィリンを組み合わせて用いることを特徴とする質量分析装置の質量較正方法である。
【００１６】
第２の本発明は、前記ポルフィリンが１種又は２種類以上のポルフィリンの錯塩である質量分析装置の質量較正方法である。
【００１７】
第３の本発明は、２種類以上のポルフィリンを用意する工程と、
前記２種類以上のポルフィリンを質量分析し、前記２種類以上のポルフィリンそれぞれのイオンピークの質量の実測値を得る工程と、
前記２種類以上のポルフィリンそれぞれの、質量分析におけるイオンピークの質量の理論値を算出する工程と、
前記実測値と前記理論値とを比較することによって質量較正曲線を作成する工程とを含む、質量分析装置の質量較正方法である。
【００１８】
第４の本発明は、２種類以上のポルフィリンを組み合わせて質量校正に用いた場合に、
前記２種類以上のポルフィリンを質量分析し、前記2種類以上のポルフィリンそれぞれのイオンピークの質量の実測値を得る工程と、
前記２種類以上のポルフィリンそれぞれの、質量分析におけるイオンピークの質量の理論値を算出する工程と、
前記実測値と前記理論値とを比較することによって質量較正曲線を作成する工程とを実行するプログラムを有する質量分析装置を提供することである。
【００１９】
第５の本発明は、質量較正のための標準物質として、２種類以上のポルフィリンを組み合わせたことを特徴とする質量分析装置用の質量分析用標準物質キットである。
【００２０】
第６の本発明は、前記ポルフィリンが１種又は２種類以上のポルフィリンの錯化合物である質量分析装置用の質量分析用標準物質キットである。
【００２１】
以下、本発明の実施の形態を詳説する。
本発明で、ポルフィリンとは、式［１］に示すポルフィン核に直鎖アルキル基、分岐アルキル基、ポリグリセロール、アルキル脂肪酸、アリール基、ピレニル基などの置換基を有する化合物を意味し、さらにポルフィリンに鉄、銅、マグネシウム、ニッケルの導入された錯塩（以下、金属錯体と称す）も含むものである。
【００２２】
【化１】
2010117153.tif 000003
【００２３】
本発明で用いるポルフィリンは、特に限定はされないが、ポルフィン核の５，１０，１５，２０の位置に置換基が導入されたもの（タイプＡ）、２，３，７，８，１２，１３，１７，１８の位置に置換基が導入されたもの（タイプＢ）およびそれらの金属錯体が好ましい。
【００２４】
タイプＡのポルフィリン誘導体（式［２］）
【化２】
2010117153.tif 000004
【００２５】
「式中、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4は、同一または異なって、置換されていてもよいアリール基を示す。」
で表わされるポルフィリン誘導体。
式［２］のポルフィリン誘導体のアリール基としては、フェニル基、ナフチル基が挙げられ、フェニル基が好ましい。
またアリールの置換基としては、例えば、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、tert-ブチルなどの低級アルキル基；ビニル、アリルなどの低級アルケニル基；メチルオキシ、エチルオキシ、プロピルオキシ、イソプロピルオキシなどの低級アルキルオキシ基などが挙げられ、それらの置換基は、さらに、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素などのハロゲン原子；ヒドロキシル基；カルボキシル基：スルホニル基などの基で置換されていてもよい。
【００２６】
タイプＡのポルフィリン誘導体として、具体的な化合物として、例えば、以下のものが挙げられる。
・５，１０，１５，２０‐テトラキス（フェニル）‐２１Ｈ，２３Ｈ‐ポルフィリン
［C44H30N4,精密質量 614.24705ポルフィリン誘導体１（図４のTPP)］
・５，１０，１５，２０‐テトラキス（２，６‐ジメチルフェニル）‐２１Ｈ，２３Ｈ‐ポルフィリン
［C52H46N4,精密質量 726.3722 ポルフィリン誘導体２（図４の26-Me)］
・５，１０，１５，２０‐テトラキス（２，４，６‐トリメチルフェニル）‐２１Ｈ，２３Ｈ‐ポルフィリン
［C56H54N4,精密質量 782.4348 ポルフィリン誘導体３（図４の246-Me)］
・５，１０，１５，２０‐テトラキス（２，４，６‐トリエチルフェニル）‐２１Ｈ，２３Ｈ‐ポルフィリン
［C68H78N4,精密質量 950.6226 ポルフィリン誘導体４（図４の246-Et)］
・５，１０，１５，２０‐テトラキス（２，３，４，５，６‐ペンタメチルフェニル）‐２１Ｈ，２３Ｈ‐ポルフィリン
［C64H70N4,精密質量 894.5600ポルフィリン誘導体５（図４の23456-Me)］
・５，１０，１５，２０‐テトラキス（３，５‐ジ‐ｔｅｒｔ‐ブチルフェニル）‐２１Ｈ，２３Ｈ‐ポルフィリン
［C76H94N4,精密質量 1062.7478ポルフィリン誘導体６（図４の35-tBu)］
・５，１０，１５，２０‐テトラキス（３，５‐ジメトキシフェニル）‐２１Ｈ，２３Ｈ‐ポルフィリン
［C52H46N4O8,精密質量 854.3316ポルフィリン誘導体７（図４の35-OMe)］
・５，１０，１５，２０‐テトラキス［４‐（トリフルオロメチル）フェニル］‐２１Ｈ，２３Ｈ‐ポルフィリン
［C48H26F12N4O8,精密質量 886.1966ポルフィリン誘導体８（図４の4-CF3)］
【００２７】
タイプＢのポルフィリン誘導体（式［３］）
【化３】
2010117153.tif 000005
「式中、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7、Ｒ8、Ｒ9、Ｒ10、Ｒ11、Ｒ12は、同一または異なって、置換されていてもよいアルキルまたはアルケニル基を示す。」
で表わされるポルフィリン誘導体。
式［３］のポルフィリン誘導体のアルキル基としては、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、tert-ブチルなどの低級アルキル基；アルケニル基としては、ビニル、アリルなどの低級アルケニル基が挙げられ、それらの置換基は、さらに、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素などのハロゲン原子；ヒドロキシル基；カルボキシル基：スルホニル基などの基で置換されていてもよい。
【００２８】
タイプＢのポルフィリン誘導体として、具体的な化合物として、例えば、以下のものが挙げられる。
・オクタエチルポルフィリン
［C36H46N4精密質量 534.37225 ポルフィリン誘導体９（図４のOct-Et)］
・ウロポルフィリン［ポルフィリン誘導体１０］
・コプロポルフィリン［ポルフィリン誘導体１１］
・ヘマトポルフィリン［ポルフィリン誘導体１２］
・プロトポルフィリン［ポルフィリン誘導体１３］
【００２９】
本発明に使用するポリフィリン誘導体は、例えば、試薬会社から購入することが可能（ポルフィリン誘導体１、８、９など）であるが、公知文献に開示された方法によって合成することもできる。
【００３０】
上記したポルフィリン誘導体で、カルボキシル基を有する弱酸性化合物は、ポジティブモード測定において好ましく、スルホニル基を有する強酸性化合物はネガティブモード測定において好ましい。
【００３１】
ポルフィリンを合成するには、ピロールとアルデヒドを酸性条件で縮合させるのが一般的である。用いるアルデヒドを変化させることで、ピロール間の炭素上（メソ位）へ、またピロールの誘導体を使うことでピロール環のβ位へ様々な置換基を導入することができる。たとえば、Lindseyらにより開示された合成方法が一般的に用いられている（J. Org.Chem. 1989, 54, 828-836）。
【００３２】
上記のタイプＡおよびタイプＢのポルフィリン誘導体の金属錯体を形成する金属イオンとして、亜鉛イオン（Zn２＋、質量63.92915）、マグネシウムイオン（Mg２＋、質量23.98505）、パラジウムイオン（Pd２＋、質量105.90348）、鉄イオン（Fe２＋、質量55.93494）、銅イオン（Cu２＋、質量62.92960）、ニッケルイオン（Ni＋、質量57.93535）が挙げられる。
これら金属イオンと、ポルフィリンとを組み合わせて使用すれば、質量数の異なる多彩な錯塩を提供することができるが、具体的には、例えば、以下のポルフィリン誘導体の金属錯体が挙げられる。
・５，１０，１５，２０‐テトラキス（２，４，６‐トリメチルフェニル）‐２１Ｈ，２３Ｈ‐ポルフィリン亜鉛
［C56H52N4Zn精密質量 844.3483 (図４のZn 246-Me)］
・５，１０，１５，２０‐テトラキス（２，４，６‐トリメチルフェニル）‐２１Ｈ，２３Ｈ‐ポルフィリン銅
［C56H52N4Cu精密質量 845.3644 (図４のCu 246-Me)］
・５，１０，１５，２０‐テトラキス（３，５‐ジメトキシフェニル）‐２１Ｈ，２３Ｈ‐ポルフィリン亜鉛
［C52H44N4O8Zn精密質量 916.2451（図４のZn 35-OMe)］
・オクタエチルポルフィリンニッケル
［C36H44N4Ni精密質量 590.29195（図４のNi Oct-Et)］
【００３３】
ポルフィリン錯体を合成する方法としては、ポルフィリンを適当な金属塩と共に混合し、室温下１〜３時間攪拌することで容易に得ることが可能である。例えば、ポルフィリン誘導体７（0.05mmol）のクロロホルム溶液（60 mL）に酢酸亜鉛メタノール飽和溶液（12 mL）を加え室温で２時間攪拌後、反応液を水で洗浄し無水硫酸ナトリウムで乾燥させたのち、溶液をエバポレーターで除去後、再結晶することでポルフィリン誘導体７の亜鉛錯体を95%収率で得ることができる（参考文献：J. Phys. Chem. C 2007,111,3528-3537など）。
【００３４】
本発明のキットは、質量較正のための標準物質として、２種類以上のポルフィリンが組み合わされている。
キットに使用されるポリフィリンは、質量が６００から１１００であるものが好ましく、さらに上記したタイプＡおよびタイプＢのポルフィリン誘導体並びにそれらの金属錯体の中から選ばれること好ましい。また、キットには、ポリフィリンの溶媒、マトリックス物質、最適な質量分析結果を得るためのサンプル調製方法などを記載した使用説明書などを含めることができる。
【００３５】
ポルフィリンは有機溶媒およびまたはマトリックスで希釈して用いることが好ましい。ポルフィリンの濃度としては、限定はされないが、ＦＡＢおよびＥＩにおいては、0.001〜10mg/mLの濃度範囲が好ましい。ＭＡＬＤＩにおいては、1pg〜10mg/mLの濃度範囲が好ましい。
【００３６】
ポルフィリンは有機溶媒に対して高い溶解性を示すので広範囲の溶媒を使用可能であるが、限定はされないが、溶媒としてはクロロホルム、ジクロロメタン、酢酸エチル、メタノール、エタノール、ヘキサンなどの溶媒を１種類または２種類以上混合して用いることが好ましく、マトリックスとしては、ＦＡＢにおいては、ＮＢＡ、ニトロフェニルオクチルエーテル（ＮＰＯＥ）、ジチオスレイトール（ＤＴＴ）、チオグリセロール（ＴＧ）、グリセロールなどのマトリックスを１種類または２種類以上混合して用いることが好ましく、ＭＡＬＤＩにおいては、α−シアノ−４−ヒドロキシケイ皮酸（ＣＨＣＡ）、ジスラノールなどのマトリックスを１種類または１種類以上混合して用いることが好ましい。
【発明の効果】
【００３７】
ポルフィリン類は、ＦＡＢ、ＥＩ、ＭＡＬＤＩなどの様々なイオン化法で効率よくイオン化する性質を有し、２種類以上のポルフィリンを組み合わせて、内部標準物質として用いることで、ポジティブモード、ネガティブモードの両モードに対応する質量較正を行うことができる。
【実施例】
【００３８】
以下に本発明を、ポルフィリンがイオン化することを確認した実験で説明する。
＜実施例１＞
ポルフィリンはＦＡＢおよびＥＩにおいては0.1mg/mLのクロロホルム溶液を用い、ＭＡＬＤＩにおいては1μg/mLのクロロホルム溶液を用いた。ＰＥＧは原液をそのまま用いた。また、マトリックスとしてはＦＡＢにおいてはＮＢＡを用い、ＭＡＬＤＩにおいてはＣＨＣＡ溶液（CHCA 50mgをエタノール2.5mL、水2.5mL、およびトリフルオロ酢酸2.5μLから成る混合溶媒に溶解したもの）0.5μLにポルフィリン溶液0.5μL混合して調製して用いた。なお、以下に述べる結果は、日本電子製磁場型質量分析装置ＪＭＳ−ＨＸ１１０ＡおよびＪＭＳ−ＳＸ１０２Ａまたはアプライドバイオシステムズ社製ＴＯＦ型質量分析装置Ｖｏｙａｇｅｒ−Ｅｌｉｔｅを用いた。ＪＭＳ−ＨＸ１１０ＡおよびＪＭＳ−ＳＸ１０２Ａを使用する際には装置の分解能を3000以上に設定した上で、電場スキャン法（加速電圧スキャン法）により測定を行った。
【００３９】
イオン化を確認したポルフィリンを図５に示す。つぎに２種類のポルフィリンを混合した場合においてもイオン化することを確認した。その結果、図５に示すように、混合した２種類のポルフィリンは、ＦＡＢ（正イオン）マススペクトル上ですべてイオンピークとして検出された。また、図６に示すようにＦＡＢ(負イオン)マススペクトル上でもすべてイオンピークとして検出された。さらに図７に示すようにＭＡＬＤＩ（正イオン）マススペクトル上でもすべてイオンピークとして検出された。さらに、図１３に示すようにEI（正イオン）マススペクトル上でもすべてイオンピークとして検出された。
【００４０】
図８はポルフィリンおよびポルフィリン金属錯化合物のＦＡＢ(正イオン)スペクトルである。このように、１種類のポルフィリンでも金属を導入することで質量シフトが可能であるため、精密質量測定を行いたい有機化合物の質量に応じてポルフィリンおよび金属を選択することが可能である。
【００４１】
次に、これらのポルフィリン類を内部標準物質に用いて、有機化合物（C40H37F12N3O10S）の精密質量測定を行なうことができるか否かを確認した実験を説明する。この測定は、日本電子製磁場型質量分析装置ＪＭＳ−HX110Aを用い、装置の分解能を3000以上に設定した上で、電場スキャン法により行なった。
【００４２】
結果を図９および図１０に示す。図９は、質量９７９の有機化合物（C40H37F12N3O10S）の高分解能ＦＡＢマススペクトル（HR FAB-MS spectrum）を示し、図１０は測定された精密質量数を示している。また、図９の横軸は試料の質量電荷比、図９の縦軸はイオン強度を表わしている。また、精密質量測定のための内部標準物質としては、ポルフィリン246Et（質量950.6226）とポルフィリン35-tBu（質量1062.7478）の２種類を用いた。
【００４３】
今、２つの内部標準物質の間に挟まれて観測されたイオンピークの質量電荷比を、２つの内部標準物質のイオンピーク位置からの内挿によって精密に求めると、質量電荷比は979.2029となる。これは当該有機化合物の分子イオンを示しており、測定値979.2029と理論値979.2008の誤差は、わずかに2.1ｍｍｕ（ミリマスユニット）、すなわち2.1ｐｐｍとなり、両者は10ppm以下の誤差で完全に一致する。これは、試料イオンの組成式が理論式と一致していることを示すものである。
【００４４】
比較例として、ポルフィリンのかわりにＰＥＧを用いて精密質量測定をおこなった例を図１１および図１２に示す。整数質量電荷比を測定後、ＰＥＧの原液を１μL加えて測定してもピークは検出されなかったので有機化合物（C40H37F12N3O10S）およびマトリックスを1μL取り除きＰＥＧを1μL加えたところようやくＰＥＧのピークが検出された（図１１）。この手法は、対象とする有機化合物のイオン化効率がポルフィリンのように高い場合のみに適用され得るが、イオン化効率が高くない化合物の場合には適用されないため、精密質量測定は困難である（図１６参照）。
【００４５】
今、２つの内部標準物質の間に挟まれて観測されたイオンピークの質量電荷比を、２つの内部標準物質のイオンピーク位置からの内挿によって精密に求めると、質量電荷比は979.1975となる。これは当該有機化合物の分子イオンを示しており、測定値979.1975と理論値979.2008の誤差は3.3ｍｍｕ（ミリマスユニット）、すなわち3.4ppmとなり、両者は10ppm以下の誤差で一致する。これは、試料イオンの組成式が理論式と一致したことを示すものである。
【００４６】
＜実施例２＞
ポルフィリン類を内部標準物質に用いて、有機化合物（C44H28N4Cu）の精密質量測定を行なうことができるか否かを確認した実験を説明する。この測定は、日本電子製磁場型質量分析装置ＪＭＳ−SX102Aを用い、装置の分解能を3000以上に設定した上で、電場スキャン法により行なった。
【００４７】
結果の一例を図１３および図１４に示す。図１３は、質量675の有機化合物（（C44H28N4Cu）の高分解能ＥＩマススペクトル（HR EI-MS spectrum）を示し、図１４は測定された精密質量を示している。また、図１３の横軸は試料の質量電荷比、図１４の縦軸はイオン強度を表わしている。また、精密質量測定のための内部標準物質としては、ポルフィリンTPP（質量614.2471）とポルフィリン26-Me（質量726.3723）の２種類を用いている。
【００４８】
今、２つの内部標準物質の間に挟まれて観測されたイオンピークの質量電荷比を、２つの内部標準物質のイオンピーク位置からの内挿によって精密に求めると、質量電荷比は675.1597となる。これは当該有機化合物の分子イオンを示しており、測定値675.1597と理論値65.1610の誤差は、わずかに1.3ｍｍｕ（ミリマスユニット）、すなわち1.9ppmとなり、両者は10ppm以下の誤差で完全に一致する。これは、試料イオンの組成式が理論式と一致したことを示すものである。
【００４９】
＜実施例３＞
結果の一例を図１７および図１８に示す。図１７は、質量726の有機化合物（C52H46N4）の高分解能FABマススペクトル（HR FAB-MS spectrum）を示し、図１８は測定された精密質量を示している。また、図１７の横軸は試料の質量電荷比、図１７の縦軸はイオン強度を表わしている。また、精密質量測定のための内部標準物質としては、ポルフィリンOct-Et（質量534.37225）とポルフィリン金属錯化合物Ni Oct-Et（質量782.4348）の２種類を用いている。
【００５０】
今、２つの内部標準物質の間に挟まれて観測されたイオンピークの質量電荷比を、２つの内部標準物質のイオンピーク位置からの内挿によって精密に求めると、質量電荷比は726.3716となる。これは当該有機化合物の分子イオンを示しており、測定値726.3716と理論値726.3722の誤差は、わずかに0.6ｍｍｕ（ミリマスユニット）、すなわち0.8ｐｐｍとなり、両者は10ｐｐｍ以下の誤差で完全に一致する。これは、試料イオンの組成式が理論式と一致していることを示すものである。
【産業上の利用可能性】
【００５１】
本発明は、高質量のポルフィリンを含む、さまざまな質量のポルフィリンのおよびポルフィリン金属錯体を固体の状態で、あるいは溶媒に溶解した状態で、セットにして予め準備することにより、ＦＡＢ、ＥＩおよびＭＡＬＤＩにおける精密質量測定のための標準物質キットとして、きわめて有用である。さらに、本発明の標準物質はケミカルイオン化法（Chemical Ionization: CI）、ＥＳＩなど他のイオン化法についても適用できる。
【図面の簡単な説明】
【００５２】
【図１】質量分析法における精密質量測定の概念図である。
【図２】従来技術であるＰＥＧのＦＡＢスペクトルである。
【図３】従来技術であるＰＥＧを内部標準物質に用いてポルフィリン類の精密質量測定を行なったスペクトルである。
【図４】本発明の内部標準物質に使用されるポルフィリン類の化学構造式を示す図である。
【図５】本発明のポルフィリン類(ポリフィリン誘導体３および６）の整数質量測定を行なったＦＡＢ(正イオン)スペクトルである。
【図６】本発明のポルフィリン類(ポリフィリン誘導体３および６）の整数質量測定を行なったＦＡＢ(負イオン)スペクトルである。
【図７】本発明のポルフィリン類(ポリフィリン誘導体３および６）の整数質量測定を行なったＭＡＬＤＩ(正イオン)スペクトルである。
【図８】本発明のポルフィリン類（ポリフィリン誘導体７）およびポルフィリン金属錯体（ポリフィリン誘導体７の亜鉛錯体）の整数質量測定を行なったＦＡＢ（正イオン)スペクトルである。
【図９】本発明のポルフィリン類（ポリフィリン誘導体４および６）を内部標準物質に用いて有機化合物（C40H37F12N3O10S）の精密質量測定を行なったＦＡＢ（正イオン)スペクトルである。
【図１０】本発明のポルフィリン類（ポリフィリン誘導体４および６）を内部標準物質に用いて有機化合物（C40H37F12N3O10S）の精密質量測定（ＦＡＢ（正イオン））を行なった結果を示す。
【図１１】従来技術であるＰＥＧを内部標準物質に用いて有機化合物（C40H37F12N3O10S）の精密質量測定を行なったＦＡＢ（正イオン）スペクトルである。
【図１２】従来技術であるＰＥＧを内部標準物質に用いて有機化合物（C40H37F12N3O10S）の精密質量測定（ＦＡＢ（正イオン)）を行なった結果を示す。
【図１３】本発明のポルフィリン類（ポリフィリン誘導体１および２）を内部標準物質に用いて有機化合物（C40H37F12N3O10S）の精密質量測定を行なったＥＩ(正イオン)スペクトルである。
【図１４】本発明のポルフィリン類（ポリフィリン誘導体１および２）を内部標準物質に用いて有機化合物（C40H37F12N3O10S）の精密質量測定（ＥＩ（正イオン））を行なった結果を示す。
【図１５】従来技術であるＰＦＫのＥＩスペクトルおよび主ピークの精密質量および相対強度表である。
【図１６】従来技術であるＰＥＧを内部標準物質に用いて有機化合物（C47H43ClN2O2SPRh:質量数８６８）の精密質量測定を行なったＦＡＢ(正イオン)スペクトルである。
【図１７】本発明のポルフィリン類（ポルフィリン誘導体９）およびポルフィリン金属錯体（ポリフィリン誘導体９のニッケル錯体）を内部標準物質に用いて有機化合物（C52H46N4）の精密質量測定を行なったFAB(正イオン)スペクトルを示す。
【図１８】本発明のポルフィリン類（ポルフィリン誘導体９）およびポルフィリン金属錯体（ポリフィリン誘導体９のニッケル錯体）を内部標準物質に用いて有機化合物（C52H46N4）の精密質量測定（FAB(正イオン)）を行なった結果を示す。
【図１】
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【図４】
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【図２】
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【図３】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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