(57)【要約】【課題】食後の血中トリグリセリド濃度上昇抑制剤を提供すること。【解決手段】カメリアシネンシス由来のフラボノールアグリコン及びフラボノール配糖体を含有するポリフェノール組成物であって、  次の（Ａ）及び（Ｂ）：  （Ａ）高速液体クロマトグラフィーにより測定される、加水分解後の当該ポリフェノール組成物の固形分中のフラボノールアグリコンの総量  （Ｂ）酒石酸鉄法により測定される、当該ポリフェノール組成物の固形分中のポリフェノールの総量の質量比［（Ｂ）／（Ａ）］が０．０１〜１８であるポリフェノール組成物を有効成分とする食後の血中トリグリセリド濃度上昇抑制剤。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
カメリアシネンシス由来のフラボノールアグリコン及びフラボノール配糖体を含有するポリフェノール組成物であって、次の（Ａ）及び（Ｂ）：
（Ａ）高速液体クロマトグラフィーにより測定される、加水分解後の当該ポリフェノール組成物の固形分中のフラボノールアグリコンの総量
（Ｂ）酒石酸鉄法により測定される、当該ポリフェノール組成物の固形分中のポリフェノールの総量
の質量比［（Ｂ）／（Ａ）］が０．０１〜１８であるポリフェノール組成物を有効成分とする食後の血中トリグリセリド濃度上昇抑制剤。
【請求項２】
カメリアシネンシス由来のフラボノールアグリコン及びフラボノール配糖体を含有するポリフェノール組成物であって、次の（Ａ）及び（Ｂ）：
（Ａ）高速液体クロマトグラフィーにより測定される、加水分解後の当該ポリフェノール組成物の固形分中のフラボノールアグリコンの総量
（Ｂ）酒石酸鉄法により測定される、当該ポリフェノール組成物の固形分中のポリフェノールの総量
の質量比［（Ｂ）／（Ａ）］が０．０１〜１８であるポリフェノール組成物を有効成分とするリパーゼ活性阻害剤。
【請求項３】
前記（Ａ）フラボノールアグリコンの総量が０．７〜５０質量％である、請求項１又は２記載の剤。
【請求項４】
前記（Ｂ）ポリフェノールの総量が５〜９５質量％である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の剤。
【請求項５】
前記ポリフェノール組成物がルチンを含有し、（Ｃ）当該ポリフェノール組成物の固形分中のルチンの含有量が０．４〜３０質量％である、請求項１〜４のいずれか１項に記載の剤。
【請求項６】
前記カメリアシネンシスが緑茶である、請求項１〜５のいずれか１項に記載の剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、食後の血中トリグリセリド濃度上昇抑制剤、リパーゼ活性阻害剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
血清コレステロール値の高値は、脳梗塞や心筋梗塞、動脈硬化等の原因となりうることから、現代人が最も注意する健康指標の一つとなっている。
食品に含まれるコレステロールは、腸内に分泌された胆汁酸の働きにより胆汁酸ミセルという非常に小さな親水性分子に取り込まれて腸管から吸収されることが知られている。したがって、食品が摂取されてから胆汁酸ミセルに取り込まれるまでのいずれかの過程でコレステロールの吸収を阻害することができれば、コレステロール値の上昇を抑制することができる。このような抑制作用を有する物質について様々な報告があるが、中でも天然物である茶抽出成分が数多く報告されている。
【０００３】
例えば、特許文献１には茶葉中に含まれる（−）エピカテキン（ＥＣ）が血中コレステロール量の低下作用を有することが報告されており、また特許文献２には茶カテキン類、特に（−）エピガロカテキンガレート（ＥＧＣｇ）を有効成分とするコレステロール低下剤が提案されている。更に、特許文献３には（−）エピガロカテキンガレート（ＥＧＣｇ）又は（−）エピカテキンガレート（ＥＣｇ）を有効成分とする抗高コレステロール血症剤が報告されており、また特許文献４にはエピカテキンガレート（ＥＣｇ）を有効成分とするコレステロール排泄促進剤が報告されている。
【０００４】
一方、高脂肪・高コレステロール食又はコレステロール無添加食をラットに投与した実験において、（−）ＥＧＣｇ及び茶カテキン混合物［純度９１．２％、相対カテキン含量（％）；（−）ＥＧＣｇ：（−）ＥＧＣ：（−）ＥＣｇ：（−）ＥＣ＝５８：１７：１５：１０］に、血漿総コレステロール濃度及びＬＤＬ−コレステロール濃度の低下効果が認められるが、血漿ＨＤＬ−コレステロールやＬＤＬ−コレステロールを正常レベル以下に低下させる作用はないとの報告がある（非特許文献１）。
また、茶、赤ワイン等に含まれるポリフェノール類によって腸肝循環における胆汁酸のミセル形成が阻害されてコレステロールの再吸収が抑制され、その結果、高コレステロール血症予防作用が発現されるとの報告がある（非特許文献２）。
更に、茶カテキン（ＥＧＣｇ）の共存により、コレステロールの小腸粘膜への吸収が濃度依存的に抑制されるとの報告（非特許文献３）や、ＥＧＣｇやＥＣｇが混合ミセル中のコレステロールの溶解性を低下させ、これが腸管からのコレステロール吸収を抑制するとの報告（非特許文献４）もある。更には、ＥＧＣｇやＥＣｇがコレステロール生合成の律速酵素の１つであるスクアレンエポキシダーゼを極めて低濃度で選択的に阻害するとの報告もある（非特許文献５）。
また更に、茶カテキンによるコレステロールの吸収低下効果はＥＧＣｇ及びＥＣｇの方がＥＧＣ及びＥＣよりもはるかに高く、ガロイル基の存在によってできた疎水領域がコレステロールと相互作用して優れたコレステロール吸収低下作用を発揮すると考えられている（非特許文献６）。
【０００５】
また、カテキンによるリパーゼ活性阻害（非特許文献７）や、烏龍茶の主カテキン成分であるepigallocatechin-3-O-gallateを茶葉酵素（ポリフェノールオキシダーゼ）で酸化重合させて得られる化合物によるリパーゼ活性阻害（特許文献５）についても報告されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特開昭５２−１１６４７３号公報
【特許文献２】特開昭６０−１５６６１４号公報
【特許文献３】特開昭６２−３０７１１号公報
【特許文献４】特開平０１−２９９２２４号公報
【特許文献５】特開２００６−１９０９号公報
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】茶の機能，村松敬一郎，学会出版センター，２００２，ｐ．１２４−１２６
【非特許文献２】日本栄養・食料学会誌，ｖｏｌ．３９，Ｎｏ．６、４９５−５００，１９８６
【非特許文献３】T.Chisaka,H.Matsuda, Y.Kubomura et al.，Chem.Pharm.Bull.，36，227(1988)
【非特許文献４】I.Ikeda, Y.Imasato, E.Sasaki et al.，Biochem.Biophys.Acta，1127，141(1992)
【非特許文献５】I.Abe, T.Seki, K.Umehara et al，Biochem.Biophys.Res.Commun.，268，767(2000)
【非特許文献６】月刊「茶」，２００１年４月号，静岡県立大学 食品栄養科学部 中山 勉著
【非特許文献７】I.Ikeda, K.Tsuda, Y.Suzuki et al，J Nutr., 135(2)，155-9(2005)
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
しかしながら、カメリアシネンシス由来のポリフェノール組成物が食後の血中トリグリセリド濃度上昇抑制作用やリパーゼ活性阻害作用を有するとの報告はない。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者らは、カメリアシネンシス由来の抽出物について種々検討したところ、フラボノールアグリコン及びその配糖体の含有比率の高いポリフェノール組成物が存在するとの知見を得た。本発明者らは、更に詳細に検討したところ、このポリフェノール組成物が食後の血中トリグリセリド濃度上昇抑制作用とともに、リパーゼ活性阻害作用をも有することを見出した。
【００１０】
すなわち、本発明は、カメリアシネンシス由来のフラボノールアグリコン及びフラボノール配糖体を含有するポリフェノール組成物であって、次の（Ａ）及び（Ｂ）：
（Ａ）高速液体クロマトグラフィーにより測定される、加水分解後の当該ポリフェノール組成物の固形分中のフラボノールアグリコンの総量
（Ｂ）酒石酸鉄法により測定される、当該ポリフェノール組成物の固形分中のポリフェノールの総量
の質量比［（Ｂ）／（Ａ）］が０．０１〜１８であるポリフェノール組成物を有効成分とする食後の血中トリグリセリド濃度上昇抑制剤を提供するものである。
【００１１】
本発明はまた、カメリアシネンシス由来のフラボノールアグリコン及びフラボノール配糖体を含有するポリフェノール組成物であって、次の（Ａ）及び（Ｂ）：
（Ａ）高速液体クロマトグラフィーにより測定される、加水分解後の当該ポリフェノール組成物の固形分中のフラボノールアグリコンの総量
（Ｂ）酒石酸鉄法により測定される、当該ポリフェノール組成物の固形分中のポリフェノールの総量
の質量比［（Ｂ）／（Ａ）］が０．０１〜１８であるポリフェノール組成物を有効成分とするリパーゼ活性阻害剤を提供するものである。
【発明の効果】
【００１２】
本発明によれば、食後の血中トリグリセリド濃度上昇抑制剤、リパーゼ活性阻害剤が提供される。本発明においては、膵臓リパーゼの活性を抑制して腸管における食物中のトリグリセライドの分解を阻害し、小腸よりの脂肪吸収量を下げることで血中トリグリセリド濃度の上昇を抑制することができる。
本発明の食後の血中トリグリセリド濃度上昇抑制剤、リパーゼ活性阻害剤（以下、「本発明の剤」という）は、カメリアシネンシス由来の抽出物から得られる画分を有効成分とするため、長期間に亘って摂取しても安全性が高く、日常的に摂取することが可能である。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】試験例１における食後の血漿ＴＧ（トリグリセリド）濃度の推移を示す図である。
【図２】試験例２におけるリパーゼ活性阻害作用を示す図である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１４】
先ず、本明細書で使用する用語について説明する。
本明細書において「ポリフェノール」とは、酒石酸鉄法により測定されるものをいい、具体的にはカメリアシネンシスに含まれるカテキン単量体、該カテキン単量体の重合体、フラボノールアグリコン及びフラボノール配糖体等を含有する。ポリフェノールとして、具体的には、フラボノール類、フラバン−３−オール類、プロアントシアニジン類及びそれらの重合体が例示される。また、フラボノール類には、ケルセチン、ミリセチン、ケンフェロール等が包含され、更にフラバン−３−オール類の重合体にはテアフラビン類、ウーロンホモビスフラバン類等が包含される。
「カメリアシネンシス（Camellia sinensis）」とは、ツバキ科ツバキ属のチャノキのことであるが、加工方法により、不発酵茶、半発酵茶、発酵茶に大別することができる。中でも、不発酵茶が好ましい。不発酵茶としては、Camellia属、例えば、C.var.sinensis（やぶきた種を含む）、C.var.assamica及びそれらの雑種から選択される茶から製茶された、茎茶、棒茶、芽茶、番茶、碾茶、釜入り茶等の緑茶が例示される。半発酵茶としては、総称して烏龍茶と呼ばれる鉄観音、色種、黄金桂、武夷岩茶等が例示される。発酵茶としては、紅茶と呼ばれるダージリン、ウバ、キーマン等が例示される。ここで、本明細書において「不発酵茶、半発酵茶、発酵茶、緑茶、烏龍茶、紅茶」とは、飲用に供される茶抽出物ではなく、該茶抽出物を得るための茶原料をいう。
本明細書において「フラボノールアグリコン」とは、ミリセチン、ケルセチン及びケンフェロールからなる混合物の総称であり、「フラボノールアグリコンの総量」は上記３種の合計量に基づいて定義される。
本明細書において「フラボノール配糖体」とは、ミリセチン、ケルセチン又はケンフェロールをアグリコン骨格として有する配糖体をいい、これら配糖体に更に糖が結合したものも包含される。
【００１５】
次に、本発明の剤について説明する。
本発明の剤は、カメリアシネンシス由来のフラボノールアグリコン及びその配糖体を含有するポリフェノール組成物を有効成分として含有するが、このポリフェノール組成物は、次の（Ａ）及び（Ｂ）を特定の比率で含有することを特徴とするものである。
ここで、（Ａ）は、高速液体クロマトグラフィーにより測定される、加水分解後の当該ポリフェノール組成物の固形分中のフラボノールアグリコンの総量（以下、「（Ａ）フラボノールアグリコンの総量」という）である。（Ａ）フラボノールアグリコンの総量は０．７〜５０質量％であることが好ましく、風味や水への溶解性の観点から、１．５〜４５質量％、更に５〜４０質量％、更に７〜３５質量％、特に７〜２５質量％であることが好ましい。
また、（Ｂ）は、酒石酸鉄法により測定される、当該ポリフェノール組成物の固形分中のポリフェノールの総量（以下、「（Ｂ）ポリフェノールの総量」という）であるが、（Ｂ）ポリフェノールの総量は５〜９５質量％であることが好ましく、風味や水への溶解性の観点から、１０〜９０質量％、更に１５〜８０質量％、特に２０〜７０質量％であることが好ましい。ここで、「固形分」とは、ポリフェノール組成物を１０５℃の電気恒温乾燥機で３時間乾燥して水などの揮発物質を除いた残分をいう。
そして、上記（Ａ）及び（Ｂ）の質量比［（Ｂ）／（Ａ）］は０．０１〜１８であるが、エグ味低減の観点から、０．０１〜１６、更に０．１〜１１、更に０．５〜７、特に１〜５であることが好ましい。
なお、「（Ａ）フラボノールアグリコンの総量」及び「（Ｂ）ポリフェノールの総量」は、後掲の実施例に記載の方法により定量されたものである。
【００１６】
また、本発明に係るポリフェノール組成物はルチンを含有することができるが、薬理効果の観点から、緑茶抽出物、紅茶抽出物及び烏龍茶抽出物等の従来のカメリアシネンシス由来の抽出物（以下、「カメリアシネンシス抽出物」という）に比べてルチン含有量が高いことが好ましい。具体的には、（Ｃ）当該ポリフェノール組成物の固形分中のルチンの含有量は０．４〜３０質量％であることが好ましく、より一層の薬理効果向上の観点から、０．８〜２５質量％、更に２〜２０質量％、特に４〜１５質量％であることが好ましい。ここで、「ルチン」とは、フラボノール配糖体の一種であり、ケルセチンの３位の酸素原子にβ−ルチノース（６−Ｏ−α−Ｌ−ラムノシル−Ｄ−β−グルコース）が結合したものである。
【００１７】
上記質量比［（Ｂ）／（Ａ）］及び（Ｃ）ルチン含有量が上記範囲内にあるポリフェノール組成物は、例えば、下記の工程（１）〜（３）によりカメリアシネンシス抽出物を分画して得ることができる。
（１）カメリアシネンシス抽出物を合成吸着剤に吸着させる工程、
（２）上記合成吸着剤に第１の有機溶媒水溶液を接触させて、第１の画分を溶出させる工程、
（３）上記第１の画分を溶出した後の合成吸着剤に、上記第１の有機溶媒水溶液よりも疎水性の高い第２の有機溶媒水溶液を接触させて、ポリフェノール組成物を含む第２の画分を溶出させる工程。
【００１８】
上記工程（１）及び（２）においては、例えば、特開２００６−１６０６５６号公報、特開２００８−０７９６０９号公報等に記載の方法を採用することができる。
工程（３）に使用する第２の有機溶媒水溶液としては、第１の有機溶媒水溶液と同様にエタノール、メタノール等のアルコール類、アセトン等のケトン類、酢酸エチル等のエステル類等の有機溶媒の水溶液が例示される。第２の有機溶媒水溶液としては、第１の有機溶媒水溶液よりも疎水性の高いものであれば特に限定されるものではなく、例えば、第１の有機溶媒水溶液よりも有機溶媒濃度の高い水溶液を使用するか、あるいは第１の有機溶媒よりも炭素数の多い有機溶媒を含む水溶液を使用することができる。
また、有機溶媒水溶液の通液条件は適宜設定することが可能であり、第２の有機溶媒水溶液の通液条件は第１の有機溶媒水溶液と同一でも異なっていてもよい。第１及び第２の有機溶媒水溶液の通液条件は、例えば、通液速度（ＳＶ）が０．５〜１０［ｈ-1］であり、かつ通液倍数（ＢＶ）が合成吸着剤の容量に対して０．５〜１０［ｖ／ｖ］である。
工程（３）後においては、第２の画分を濃縮することでポリフェノール組成物を得ることができるが、濃縮は蒸留、減圧蒸留、精留、薄膜蒸留、膜濃縮等により行うことが可能である。また、濃縮前又は濃縮後において、必要によりろ過及び／又は遠心分離処理により夾雑物を分離してもよい。ポリフェノール組成物の形態としては、固体、半固体、液体、スラリー等の種々のものが例示される。
【００１９】
また、本発明においては、上記ポリフェノール画分に、カメリアシネンシス抽出物、その濃縮物及びそれらの精製物、並びに他のポリフェノール組成物から選ばれる少なくとも１種を配合して所望の質量比［（Ｂ）／（Ａ）］及び（Ｃ）ルチン含有量に調整してもよい。「他のポリフェノール組成物」としては、例えば、上記ポリフェノール画分とは異なる分画条件で得られたポリフェノール画分や、上記ポリフェノール画分とは異種のカメリアシネンシス抽出物から得られたポリフェノール画分が例示される。また、「カメリアシネンシス抽出物、その濃縮物及びそれらの精製物」は、上記ポリフェノール画分と同種及び異種の何れのカメリアシネンシスから得られたものであってもよい。
【００２０】
カメリアシネンシス抽出物としては、例えば、カメリアシネンシスから熱水又は水溶性有機溶媒により抽出した抽出物が例示される。抽出方法としては、攪拌抽出、カラム抽出、ドリップ抽出等の公知の方法を採用することができる。上記濃縮物とは、カメリアシネンシス抽出物から溶媒を一部除去したものであり、例えば、特開昭５９−２１９３８４号公報、特開平４−２０５８９号公報、特開平５−２６０９０７号公報、特開平５−３０６２７９号公報等に記載の方法により調製することができる。カメリアシネンシス抽出物としては、緑茶抽出物が好適に用いられる。緑茶抽出物の濃縮物として、三井農林（株）の「ポリフェノン」、伊藤園（株）の「テアフラン」、太陽化学（株）の「サンフェノン」等の緑茶抽出物の濃縮物の市販品を使用してもよい。また、上記精製物とは、溶剤やカラムを用いてカメリアシネンシス抽出物又はその濃縮物から沈殿物等を除去したものをいい、必要によりタンナーゼ処理しても（例えば、特開２００４−３２１１０５号公報）、当該タンナーゼ処理後に更に活性炭、酸性白土及び活性白土から選ばれる少なくとも１種で処理してもよい（例えば、特公開２００７−２８２５６８号公報）。
カメリアシネンシス抽出物、その濃縮物及びそれらの精製物の形態としては、固体、水溶液、スラリー状等の種々のものが例示される。
【００２１】
本発明の剤の剤型は特に限定されず、経口投与用の剤型の中から治療や予防の目的に最も適したものを適宜選択することができる。経口投与に適した剤型としては、例えば、錠剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤、細粒剤、シロップ剤、溶液剤、乳剤、懸濁剤、チュアブル剤等が挙げられる。
経口投与剤は、例えば、賦形剤、崩壊剤、結合剤、滑沢剤、界面活性剤、アルコール類、水、水溶性高分子、甘味料、矯味剤、酸味料等を添加して製造することが可能である。
【００２２】
本発明の剤の投与量及び投与回数は、疾患の種類や重篤度、投与形態、患者の年齢や体重等の条件、合併症の有無等の種々の要因により適宜設定することができるが、一般的には、本発明の剤の有効成分（固形分）の投与量として一日当り１ｍｇ／ｋｇ体重以上、更に３ｍｇ／ｋｇ体重以上、特に５ｍｇ／ｋｇ体重以上が好ましい。そして、このような投与量を、一日１回又は数回程度に分けて投与することができる。なお、本発明の抑制剤は、カメリアシネンシス由来の抽出物を原料とするため安全性が高く、実質的な投与量の上限はないが、３５ｍｇ／ｋｇ体重、特に３０ｍｇ／ｋｇ体重とすることが好ましい。
本発明の剤は、ヒトを含む任意の哺乳動物に投与することができるが、好ましくはヒトに投与される。
【００２３】
また、本発明においては、上記カメリアシネンシス由来のポリフェノール組成物を有効成分（固形分）とする、保健機能食品、特定保健用食品 、栄養機能食品又は栄養補助食品として提供することができる。これにより、実質的に副作用のない安全な食品として日常的に摂取することが可能になる。なお、当該食品中の有効成分（固形分）の含有量は適宜選択することが可能であるが、一般的には０．１〜２０質量％、特に０．１〜１０質量％が好ましい。
【実施例】
【００２４】
１．非重合体カテキン類及びカフェインの測定
試料溶液をフィルター（０．４５μｍ）で濾過し、高速液体クロマトグラフ（型式ＳＣＬ−１０ＡＶＰ、島津製作所製）を用い、オクタデシル基導入液体クロマトグラフ用パックドカラム（Ｌ−カラムＴＭ  ＯＤＳ、４．６ｍｍφ×２５０ｍｍ：財団法人  化学物質評価研究機構製）を装着し、カラム温度３５℃でグラディエント法により分析した。移動相Ａ液は酢酸を０．１ｍｏｌ／Ｌ含有する蒸留水溶液、Ｂ液は酢酸を０．１ｍｏｌ／Ｌ含有するアセトニトリル溶液とし、試料注入量は２０μＬ、ＵＶ検出器波長は２８０ｎｍの条件で行った。なお、グラディエントの条件は、以下のとおりである。
【００２５】
時間（分）      Ａ液濃度（体積％）      Ｂ液濃度（体積％）
０．０                ９７                      ３
５．０                ９７                      ３
３７．０                ８０                    ２０
４３．０                ８０                    ２０
４３．５                  ０                  １００
４８．５                  ０                  １００
４９．０                ９７                      ３
６０．０                ９７                      ３
【００２６】
２．ルチンの測定
試料溶液をフィルター（０．４５μｍ）で濾過し、高速液体クロマトグラフ（型式Ｗａｔｅｒｓ２６９５、ＷＡＴＥＲＳ製）を用い、カラム（Ｓｈｉｍｐａｃｈ  ＶＰ  ＯＤＳ、１５０×４．６ｍｍＩ．Ｄ．）を装着し、カラム温度４０℃でグラディエント法により行った。移動相Ａ液はリン酸を０．０５質量％含有する蒸留水溶液、Ｂ液はメタノール溶液とし、流速は１ｍＬ／分、試料注入量は１０μＬ、ＵＶ検出器波長は３６８ｎｍの条件で行った。なお、グラディエントの条件は、以下のとおりである。
【００２７】
時間（分）      Ａ液濃度（体積％）      Ｂ液濃度（体積％）
０．０                ９５                      ５
２０．０                ８０                    ２０
４０．０                ３０                    ７０
４１．０                  ０                  １００
４６．０                  ０                  １００
４７．０                ９５                      ５
６０．０                ９５                      ５
【００２８】
３．フラボノールアグリコン（ミリセチン、ケルセチン及びケンフェロール）の測定
（１）試料の加水分解
試料溶液５ｍＬにメルカプトエタノール２００μＬ、２Ｎ塩酸５００μＬを添加した。その後、ドライブロックバス（アズワン株式会社製）にて１２０℃で４０分間加熱し、冷却した。
【００２９】
（２）分析
加水分解後の試料溶液中に存在しているミリセチン、ケルセチン及びケンフェロールを、高速液体クロマトグラフィーにより定量した。なお、定量はグラディエント法により行ったが、その条件は上記「ルチンの測定」と同じである。
【００３０】
（３）フラボノールアグリコンの総量
上記分析により定量されたミリセチン量、ケルセチン量及びケンフェロール量の総和として求めた。
【００３１】
４．ポリフェノールの測定
（１）試薬の調製
１）酒石酸鉄試薬の調製
５００ｍＬメスフラスコに硫酸第一鉄七水塩０．５０ｇと（＋）酒石酸ナトリウム・カリウム四水和物２．５０ｇを採取し、イオン交換水でメスアップした。
【００３２】
２）リン酸バッファーの調製
２０００ｍＬメスフラスコにリン酸水素二ナトリウム・二水和物２０．００ｇとリン酸二水素カリウム２．９０ｇを採取し、イオン交換水でメスアップした。この溶液のｐＨが７．５〜７．６になるように調整した。ｐＨ７．６を超える場合、リン酸二水素カリウム・二水和物０．９ｇ／１００ｍＬ水溶液を添加し、ｐＨ７．５未満の場合、リン酸二水素カリウム１．２ｇ／１００ｍＬ水溶液を添加し調整した。
【００３３】
（２）装置及び器具
１）分光光度計（Ｕ−２０１０；日立製作所製）
２）石英製セル（１０ｍｍ×１０ｍｍ）
３）２５ｍＬ、１００ｍＬ、２００ｍＬ、５００ｍＬ、２０００ｍＬのメスフラスコ
４）１ｍＬ、５ｍＬ、１０ｍＬ、２０ｍＬ、３０ｍＬのホールピペット
５）１ｍＬ、３ｍＬ、５ｍＬのマイクロピペット
【００３４】
（３）分析条件
１）測定波長：５４０ｎｍ
２）温度    ：２０℃±２℃
【００３５】
（４）操作：
１）検量線作成
ｉ）没食子酸エチル約０．５ｇを使用前に２〜３時間乾燥させた。
ii）２００ｍＬメスフラスコに乾燥した没食子酸エチル０．２ｇを採取し、イオン交換水でメスアップした（１００ｍｇ／１００ｍＬ標準液）。
iii）１００ｍＬメスフラスコに、ii）の標準液を用い、５ｍｇ／１００ｍＬ、１０ｍｇ／１００ｍＬ、２０ｍｇ／１００ｍＬ、３０ｍｇ／１００ｍＬの標準液を作製した。
iv）２５ｍＬメスフラスコに、iii）の標準液をそれぞれ５ｍＬ採取し、酒石酸鉄試薬５ｍＬを加えリン酸バッファーでメスアップした。また、ブランクとして標準液を加えないものを調製した。
ｖ）分光光度計にて吸光度を測定し検量線を作成した。
なお、検量線については下記を目安にし、逸脱した時は再調整した。
Ｒ２      ：０．９９９５〜１．００００
検量線傾き：３４．５±０．４
切片      ：０．３以下
【００３６】
２）試料測定
ｉ）イオン交換水にて分光光度計をゼロ補正した。
ii）２５ｍＬメスフラスコに試料を所定量採取し、酒石酸鉄試薬５ｍＬを加えリン酸バッファーでメスアップした後、吸光度を測定した。なお、吸光度の測定は、発色後４０分以内とした。
【００３７】
実施例１
ポリフェノール組成物Ａ
緑茶葉（大葉種）を熱水で抽出した後、噴霧乾燥により緑茶抽出物Ａを得た。『緑茶抽出物Ａ』は、非重合体カテキン類濃度３０．８質量％、非重合体カテキン類中のガレート率３６．０質量％、カフェイン濃度５．５質量％であった。
次いで、『緑茶抽出物Ａ』の非重合体カテキン類濃度が１質量％になるようにイオン交換水で希釈した。次いで、『緑茶抽出物Ａ』の希釈液８００ｇをカラム（内径５０ｍｍ×高さ１８０ｍｍ、容積３５３．３ｍＬ）に充填した合成吸着剤（ＳＰ−７０、三菱化学（株）製）２００ｍＬに吸着させた。次いで、イオン交換水３００ｍＬ、３０質量％エタノール水溶液４００ｍＬを順次合成吸着剤に通液して非重合体カテキン類を溶出させた。次いで、合成吸着剤に５０質量％エタノール水溶液を４００ｍＬ通液してポリフェノール組成物を溶出させた。なお、本分画操作はすべて、通液速度ＳＶ＝０．８〜１．２［ｈ-1］になるように流量調整して行った。次いで、得られた溶出液を減圧濃縮によりエタノールを留去した後、凍結乾燥により水分を除去して『ポリフェノール組成物Ａ』を得た。得られた『ポリフェノール組成物Ａ』の組成を表１に示す。
【００３８】
比較例１
緑茶抽出物の濃縮物（ポリフェノンＨＧ、三井農林（株）製）１００ｇを、２５℃、２５０ｒｐｍ攪拌条件下の９５質量％エタノール水溶液４９０．９ｇ中に懸濁させ、活性炭（クラレコールＧＬＣ、クラレケミカル社製）２０ｇと酸性白土（ミズカエース＃６００、水澤化学社製）１００ｇを投入後、約１０分間攪拌を続けた。次いで、４０質量％エタノール水溶液４０９．１ｇを１０分間かけて滴下したのち、室温のまま約３０分間の攪拌処理を続けた。その後、２号濾紙で活性炭及び沈殿物を濾過したのち、０．２μｍメンブランフィルターによって再濾過を行った。そして、イオン交換水２００ｇを濾過液に添加し、４０℃、３３３３Ｐａ（２５Torr）でエタノールを留去し、その後凍結乾燥により茶抽出物の乾燥物を有効成分（固形分）とする製剤を得た。得られた製剤の組成を表１に示す。
【００３９】
【表１】
2010222276.tif 000002
【００４０】
試験例１  食後の血中トリグリセリド濃度上昇抑制効果
雄性マウスＣ５７ＢＬ/６Ｊ（７週齢）を６日間予備飼育し、試験開始前に１６時間絶食させてから３群（実施例１群、比較例１群、対照群（水）、各群ｎ＝５）に分け、血液を採取した。そして、実施例１群には実施例１で得られた製剤を２０質量％エタノール水溶液に溶解し、これを５７０ｍｇ／ｋｇ体重として経口投与した。また、比較例１群には比較例１で得られた製剤を２０質量％エタノール水溶液に溶解し、これを０．３９ｍｇ／ｇ体重として経口投与した。更に、対照群には水のみを経口投与した。そして、各試料を投与直後のマウスに、表２に示す組成の脂肪乳剤を４０ｍｇ／ｇ体重となるように経口投与した。
【００４１】
【表２】
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【００４２】
乳剤投与から１０分、３０分、６０分、１２０分及び１８０分経過ごとに各マウスから血液を採取し、トリグリセライドＥ‐テストワコー（和光純薬社製）により血漿トリグリセリド濃度を分析した。食後の血漿トリグリセリド濃度の推移を図１に示す。
【００４３】
図１から、次のことが確認された。すなわち、対照群では脂肪乳剤の投与により食後の血漿トリグリセリド濃度が上昇するのに対し、実施例１群及び比較例１群はともに食後の血糖値上昇が抑制されるが、実施例１群の方が比較例１群よりも食後の血漿トリグリセリド濃度上昇が極めて抑制されることが確認された。
【００４４】
試験例２  リパーゼ活性阻害効果
リパーゼ活性の測定は、下記の方法により行った。
酵素  ：50U/mL ブタ膵臓由来リパーゼ(Sigma type II dissolved in buffer)
基質  ：0.1M 4-Methylumbelliferyl oleate(dissolved in DMSO)
緩衝液：150 mM NaCl、1.36mM CaCl2を含む 13 mM Tris-HCl (pH 8.0)
阻害剤：実施例１で得た製剤又は比較例１で得た製剤(dissolved in 20%EtOH)
手順  ：
（１）25℃でマイクロプレートに、緩衝液60μL、基質20μLを添加し混合
（２）阻害剤10μLを添加
（３）酵素10μLを添加
（４）25℃で30分間インキュベート
（５）停止液（クエン酸緩衝液pH4.2）100μLを添加
（６）励起波長355nmで波長460nmの蛍光を測定
【００４５】
蛍光測定の結果を図２に示したが、図２から、実施例１群は比較例１群に比較してリパーゼ活性を強く阻害することが確認された。
【図１】
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【図２】
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