(57)【要約】      （修正有）【課題】MTHFR遺伝子に含まれる多型を簡便且つ高精度に判定する。【解決手段】特定の塩基配列からなるポリヌクレオチド及び特定の塩基配列からなるポリヌクレオチドのセットを含むMTHFR遺伝子における多型判定用プローブセット。特定の塩基配列からなるポリヌクレオチドは、MTHFR遺伝子における677番目の塩基を含むDNA断片であって当該677番目の塩基が野生型のシトシンであるDNA断片に対してハイブリダイズでき、特定の塩基配列からなるポリヌクレオチドは、MTHFR遺伝子における677番目の塩基を含むDNA断片であって当該677番目の塩基が変異型のチミンであるDNA断片に対してハイブリダイズできることを特徴とする多型判定用プローブセット。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号１に記載の塩基配列からなるポリヌクレオチド及び配列番号２に記載の塩基配列からなるポリヌクレオチドのセット、又は配列番号３に記載の塩基配列からなるポリヌクレオチド及び配列番号４に記載の塩基配列からなるポリヌクレオチドのセット、を含むMTHFR遺伝子における多型判定用プローブセット。
【請求項２】
上記配列番号１又は３に記載の塩基配列からなるポリヌクレオチドは、MTHFR遺伝子における677番目の塩基を含むDNA断片であって当該677番目の塩基が野生型のシトシンであるDNA断片に対してハイブリダイズでき、上記配列番号２又は４に記載の塩基配列からなるポリヌクレオチドは、MTHFR遺伝子における677番目の塩基を含むDNA断片であって当該677番目の塩基が変異型のチミンであるDNA断片に対してハイブリダイズできることを特徴とする請求項１記載の多型判定用プローブセット。
【請求項３】
上記ポリヌクレオチドは、支持体上に固定されていることを特徴とする請求項１記載の多型判定用プローブセット。
【請求項４】
上記ポリヌクレオチドは、末端にアミノ基が導入されており、支持体上のカルボキシル基と当該アミノ基とのアミド結合を介して支持体上に固定されていることを特徴とする請求項１記載の多型判定用プローブセット。
【請求項５】
上記支持体はビーズ状であることを特徴とする請求項３又は４記載の多型判定用プローブセット。
【請求項６】
MTHFR遺伝子における677番目の塩基を含むDNA断片を増幅できる一対のプライマーと、
請求項１乃至５いずれか一項記載の多型判定用プローブセットと
を含むMTHFR遺伝子における多型判定キット。
【請求項７】
上記一対のプライマーは、配列番号５に記載の塩基配列からなるポリヌクレオチド及び配列番号６に記載の塩基配列からなるポリヌクレオチドであることを特徴とする請求項６記載の多型判定キット。
【請求項８】
上記一対のプライマーを用いて増幅したDNA断片と、上記多型判定用プローブとのハイブリダイズの有無を検出する検出試薬をさらに含むことを特徴とする請求項６記載の多型判定キット。
【請求項９】
上記一対のプライマーはビオチンが結合していることを特徴とする請求項６記載の多型判定キット。
【請求項１０】
アビジン標識蛍光色素をさらに含むことを特徴とする請求項９記載の多型判定キット。
【請求項１１】
検査対象者から採取した生体サンプル由来のMTHFR遺伝子における677番目の塩基を含むDNA断片を増幅する工程と、
上記工程によって増幅したDNA断片と、請求項１乃至５いずれか一項記載の多型判定用プローブセットに含まれるポリヌクレオチドとのハイブリダイズを検出する工程と、
上記ハイブリダイズの結果からMTHFR遺伝子における677番目の塩基を判別する工程と、
を含むMTHFR遺伝子における多型判定方法。
【請求項１２】
上記DNA断片を増幅する工程では、配列番号５に記載の塩基配列からなるポリヌクレオチド及び配列番号６に記載の塩基配列からなるポリヌクレオチドからなる一対のプライマーを使用することを特徴とする請求項１１記載の多型判定方法。
【請求項１３】
上記DNA断片はビオチンが標識されており、上記多型判定用プローブセットに含まれるポリヌクレオチドとハイブリダイズしたDNA断片に対してアビジン標識蛍光色素を作用させる工程を更に含むことを特徴とする請求項１１記載の多型判定方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、メチレンテトラヒドロ葉酸還元酵素（MTHFR）遺伝子における一塩基多型を判定するためのプローブ及び方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
メチレンテトラヒドロ葉酸還元酵素（MTHFR）は、葉酸代謝に関与し、ホモシステイン代謝経路の律速酵素の一つとして知られている。MTHRF遺伝子については、共通遺伝子多型として677番塩基部位でシトシン塩基がチミン塩基によって置き換えられるミスセンス（MTHFR 677Ｃ→Ｔ）が知られている。MTHRF遺伝子におけるC677T多型をホモで有する人（TT型）は、MTHRF酵素活性が低下し、血中（血漿）ホモシステイン濃度が上昇することが知られている。
【０００３】
一般に、血漿中ホモシステイン濃度が高い群では、冠動脈疾患や脳血管障害の発症率が高いことが指摘されている。したがって、MTHRF遺伝子におけるC677T多型を判別することで、冠動脈疾患や脳血管障害のリスク判定の一助となることが期待される（非特許文献１参照）。
【０００４】
一方、多型を判定する技術のひとつとして、耐熱性酵素を使用するポリメラーゼ連鎖反応法（PCR：Polymerase Chain Reaction）を用いて、解析対象の多型を含むDNA断片を増幅して配列を決定する方法が挙げられる。このPCR法は、DNAポリメラーゼがDNAの合成に際してプライマーを必要とし、このプライマーから5'から3'の方向にDNAを合成していくということを利用して、DNA鎖の単一鎖への変性、プライマーの結合、耐熱性DNAポリメラーゼによる相補鎖の合成というサイクルを繰り返すことにより、目的とする遺伝子領域だけを増幅させる方法である。この方法を用いて、特定のDNA鎖を迅速にかつ解析可能な量まで増幅することが可能となる。
【０００５】
次に、PCR法等により増幅されたDNA断片の5'末端のみを蛍光（ラジオアイソトープ）、又は蛍光試薬で標識して電気泳動を行い、シーケンサーで塩基配列を検出することが可能となる。このようなシーケンス処理により、遺伝子を構成するアデニン（Ａ）、シトシン（Ｃ）、グアニン（Ｇ）、チミン（Ｔ）の４つの塩基がどのように配列されているかを特定することができる。シーケンス技術を用いて個体集団のゲノムを解析することによって、一塩基遺伝子多型（SNPs：Single Nucleotide Polymorphism）を検出することができる。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】BMJ 2005; 331 (7524): 1053, doi:10. 1136/bmj.38611.658947.55, (published 10 October 2005)
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
ところが、これまでのシーケンス反応は、増幅反応、精製反応、標識反応、電気泳動といった４つの工程が必要であり、全体で4時間以上の時間を要していた。また、検出したいSNPによっては、ヘテロ型の判断が困難なものがあった。特に、MTHFR遺伝子に含まれる多型について、簡便且つ高精度に判定する方法については知られていない。そこで、本発明は、上述した実情に鑑み、MTHFR遺伝子に含まれる多型を簡便且つ高精度に判定することを目的としている。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
上述した目的を達成した本発明は以下を包含する。
（１）配列番号１に記載の塩基配列からなるポリヌクレオチド及び配列番号２に記載の塩基配列からなるポリヌクレオチドのセット、又は配列番号３に記載の塩基配列からなるポリヌクレオチド及び配列番号４に記載の塩基配列からなるポリヌクレオチドのセット、を含むMTHFR遺伝子における多型判定用プローブセット。
【０００９】
（２）上記配列番号１又は３に記載の塩基配列からなるポリヌクレオチドは、MTHFR遺伝子における677番目の塩基を含むDNA断片であって当該677番目の塩基が野生型のシトシンであるDNA断片に対してハイブリダイズでき、上記配列番号２又は４に記載の塩基配列からなるポリヌクレオチドは、MTHFR遺伝子における677番目の塩基を含むDNA断片であって当該677番目の塩基が変異型のチミンであるDNA断片に対してハイブリダイズできることを特徴とする（１）記載の多型判定用プローブセット。
【００１０】
（３）上記ポリヌクレオチドは、支持体上に固定されていることを特徴とする（１）記載の多型判定用プローブセット。
【００１１】
（４）上記ポリヌクレオチドは、末端にアミノ基が導入されており、支持体上のカルボキシル基と当該アミノ基とのアミド結合を介して支持体上に固定されていることを特徴とする（１）記載の多型判定用プローブセット。
【００１２】
（５）上記支持体はビーズ状であることを特徴とする（３）又は（４）記載の多型判定用プローブセット。
【００１３】
（６）MTHFR遺伝子における677番目の塩基を含むDNA断片を増幅できる一対のプライマーと、（１）乃至（５）いずれか記載の多型判定用プローブセットとを含むMTHFR遺伝子における多型判定キット。
【００１４】
（７）上記一対のプライマーは、配列番号５に記載の塩基配列からなるポリヌクレオチド及び配列番号６に記載の塩基配列からなるポリヌクレオチドであることを特徴とする（６）記載の多型判定キット。
【００１５】
（８）上記一対のプライマーを用いて増幅したDNA断片と、上記多型判定用プローブとのハイブリダイズの有無を検出する検出試薬をさらに含むことを特徴とする（６）記載の多型判定キット。
【００１６】
（９）上記一対のプライマーはビオチンが結合していることを特徴とする（６）記載の多型判定キット。
【００１７】
（１０）アビジン標識蛍光色素をさらに含むことを特徴とする（９）記載の多型判定キット。
【００１８】
（１１）検査対象者から採取した生体サンプル由来のMTHFR遺伝子における677番目の塩基を含むDNA断片を増幅する工程と、上記工程によって増幅したDNA断片と、（１）乃至（５）いずれか記載の多型判定用プローブセットに含まれるポリヌクレオチドとのハイブリダイズを検出する工程と、上記ハイブリダイズの結果からMTHFR遺伝子における677番目の塩基を判別する工程とを含むMTHFR遺伝子における多型判定方法。
【００１９】
（１２）上記DNA断片を増幅する工程では、配列番号５に記載の塩基配列からなるポリヌクレオチド及び配列番号６に記載の塩基配列からなるポリヌクレオチドからなる一対のプライマーを使用することを特徴とする（１１）記載の多型判定方法。
【００２０】
（１３）上記DNA断片はビオチンが標識されており、上記多型判定用プローブセットに含まれるポリヌクレオチドとハイブリダイズしたDNA断片に対してアビジン標識蛍光色素を作用させる工程を更に含むことを特徴とする（１１）記載の多型判定方法。
【発明の効果】
【００２１】
本発明によれば、MTHFR遺伝子に含まれる多型を簡便且つ高精度に判別することができる。特に、本発明に係る多型判定用プローブによれば、MTHFR遺伝子に含まれる多型について遺伝子型のホモ/ヘテロを検出することができる。本発明を適用することによって、MTHFR遺伝子に含まれる多型に起因する疾患や、当該多型がマーカーとなる疾患に関するリスクを判定する際の有効な知見を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００２２】
【図１】表３に示した多型判定用プローブセットを用いてMTHFR遺伝子における677番目の塩基を判定した結果を示す散布図である。
【図２】表４に示した多型判定用プローブセットを用いてMTHFR遺伝子における677番目の塩基を判定した結果を示す散布図である。
【図３】表５に示した多型判定用プローブセットを用いてMTHFR遺伝子における677番目の塩基を判定した結果を示す散布図である。
【図４】表６に示した多型判定用プローブセットを用いてMTHFR遺伝子における677番目の塩基を判定した結果を示す散布図である。
【図５】表７に示した多型判定用プローブセットを用いてMTHFR遺伝子における677番目の塩基を判定した結果を示す散布図である。
【図６】表８に示した多型判定用プローブセットを用いてMTHFR遺伝子における677番目の塩基を判定した結果を示す散布図である。
【発明を実施するための形態】
【００２３】
本発明に係るMTHFR遺伝子における多型判定用プローブセットは、MTHFR遺伝子における677番塩基部位でシトシン塩基がチミン塩基へ置換するといった変異を検出するものである。すなわち、多型判定用プローブセットは、一対の多型判定用プローブから構成され、一方の多型判定用プローブで677番塩基が野生型のシトシンであるMTHFR遺伝子を検出し、他方の多型判定用プローブで677番塩基が変異型のチミンであるMTHFR遺伝子を検出する。
【００２４】
本発明に係る多型判定用プローブセットは、表１に示す一対の多型判定用プローブを挙げることができる。
【００２５】
【表１】
2010166820.tif 000002
【００２６】
なお、表１に示した一対の多型判定用プローブのうち上段の多型判定用プローブは、MTHFR遺伝子のセンス鎖において677番塩基が野生型のシトシンである場合に、当該MTHFR遺伝子のアンチセンス鎖にハイブリダイズするポリヌクレオチドである。また、表１に示した一対の多型判定用プローブのうち下段の多型判定用プローブは、MTHFR遺伝子のセンス鎖において677番塩基が変異型のチミンである場合に、当該MTHFR遺伝子のアンチセンス鎖にハイブリダイズするポリヌクレオチドである。
【００２７】
また、本発明に係る多型判定用プローブセットは、表２に示す一対の多型判定用プローブを挙げることができる。
【００２８】
【表２】
2010166820.tif 000003
【００２９】
なお、表２に示した一対の多型判定用プローブのうち上段の多型判定用プローブは、MTHFR遺伝子のアンチセンス鎖において677番塩基が野生型のグアニンである場合に、当該MTHFR遺伝子のセンス鎖にハイブリダイズするポリヌクレオチドである。また、表２に示した一対の多型判定用プローブのうち下段の多型判定用プローブは、MTHFR遺伝子のアンチセンス鎖において677番塩基が変異型のアデニンである場合に、当該MTHFR遺伝子のセンス鎖にハイブリダイズするポリヌクレオチドである。
【００３０】
以上のように構成された多型判定用プローブセットは、検査対象者から採取した生体サンプル由来のMTHFR遺伝子における677番目の塩基を判定するシステムであれば特に限定されず、公知の多型タイピング系に使用することができる。すなわち、まず、検査対象者から採取した生体サンプルからゲノムDNAを抽出し、ゲノムDNAを鋳型としてMTHFR遺伝子における677番目の塩基を含むDNA断片をPCR等の核酸増幅反応によって取得する。次に、取得したDNA断片と上述した多型判定用プローブとをハイブリダイズさせる。そして、取得したDNA断片と上述した多型判定用プローブとのハイブリダイズを検出することによって、検査対象者から採取した生体サンプル由来のMTHFR遺伝子における677番目の塩基をタイピングすることができる。
【００３１】
上述した多型判定用プローブセットは、各多型判定用プローブを支持体上に固定して使用することができる。支持体としては、特に限定されないが、平板状の支持体、ウェル上の支持体及びビーズ状の支持体を挙げることができる。多型判定用プローブを支持体上に固定する方法は、特に限定されないが、例えば、多型判定用プローブの5'末端にアミノ基を導入しておき、支持体表面のカルボキシル基との間でアミド結合を介して固定することができる。多型判定用プローブセットを構成する一方の多型判定用プローブと、他方の多型判定用プローブとを異なる支持体上、或いは支持体における異なる領域に固定することで、PCR等により増幅したDNA断片がいずれのプローブにハイブリダイズしたかを検出することができる。
【００３２】
また、多型判定用プローブとDNA断片とのハイブリダイズは、PCR等により増幅したDNA断片を例えば蛍光ラベルしておき、この蛍光を測定することによって定量的に測定することができる。なお、ハイブリダイゼーションに使う試薬は、例えばSSC、TMACなどを含む緩衝溶液、若しくは市販のハイブリダイゼーション用キット内の試薬を用いることができる。ハイブリダイゼーション用緩衝液の組成としては、例えば、3 M tetra-methyl ammonium choride(TMAC)、50 mM Tris-HCl (pH 8.0)、2 mM EDTA, 0.1 % SDS及び 5×Denhardt's溶液を例示することができる。なお、使用する蛍光試薬は、例えばローダミン、Cy3、Cy5、フィコエリスリン等が挙げられる。また、蛍光検出器のレーザに合わせて、これ以外の蛍光色素を使うこともできる。標識方法はアビジン-ビオチン反応を用いることが好ましい。すなわち、ビオチン標識プライマーを用いてMTHFR遺伝子における677番目の塩基を含むDNA断片を増幅しておき、多型判定用プローブにハイブリダイズしたDNA断片に対してアビジン標識蛍光色素を反応させることで、多型判定用プローブに対するDNA断片のハイブリダイズを定量的に検出することができる。
【００３３】
以上で説明した本発明に係る多型判定用プローブセットは、MTHFR遺伝子における677番目の塩基の遺伝子型を簡便且つ高精度に判定することができる。すなわち、検査対象者から採取した生体サンプル由来のMTHFR遺伝子における677番目の塩基が、C/C型（野生型のホモ）であるか、C/T型（ヘテロ型）であるか、T/T型（変異型のホモ）であるかを高精度に判定することができる。
【実施例】
【００３４】
以下、実施例により本発明をより詳細に説明するが、本発明の技術的範囲は以下の実施例に限定されるものではない。
【００３５】
１．DNA抽出
人の口腔粘膜を綿棒で採取し、Qiagen社のQIAamp DNA Mini Kitを用いてDNA抽出を行った。
【００３６】
２．PCR法
１のDNA抽出物を鋳型とし、ビオチン標識したプライマーを使用して反応計25μｌでMTHFR遺伝子におけるrs1801133として登録されているSNPを含むDNA断片の増幅を行なった。その際、反応装置はGene Amp(R)PCR System9700(アプライドバイオシステムズ社製)を用いた。なお、反応試薬としては、TaKaRa Ex Taq(R) Hot Start Versionのキットを使用した。反応条件は、94℃で2分間の後、95℃で15秒、60℃で15秒及び72℃で20秒を1サイクルとして40サイクル行い、その後、4℃に維持する条件とした。
（ビオチン標識プライマーの配列）
(フォワードプライマー)  MTHFR_F1    GCTTTGAGGCTGACCTGAAG（配列番号５）
(リバースプライマー)  MTHFR_R1    TCACAAAGCGGAAGAATGTG（配列番号６）
【００３７】
３．ハイブリダイゼーション反応
あらかじめ蛍光色素で染色したマイクロビーズを支持体とし、ビーズ1個に対して1種の多型判定用プローブを結合させた。本実施例では、後述のように６種類の多型判定用プローブセット準備した。各セットは、677番目の塩基が野生型（シトシン）であるMTHFR遺伝子にハイブリダイズする多型判定用プローブと、677番目の塩基が変異型（チミン）であるMTHFR遺伝子にハイブリダイズする多型判定用プローブとが含まれている。ハイブリダイゼーション反応組成を以下に記述する。
【００３８】
（反応組成）
1.5xTMAC（テトラメチルアンモニウムクロライド）
1xTE
PCR産物  5μｌ              Total        50μｌ
【００３９】
（反応条件）
95℃  2min
45℃  30min
45℃  ∞
【００４０】
４．ビーズ蛍光検出反応
３で説明したハイブリダイゼーションの後、反応物に以下の操作を行なった。
１）1xPBS溶液でペッティングしてビーズを洗浄
２）SA-PE（streptavidin-R-phycoerythrin）反応 45℃ 2min
３）遠心し、上清を捨てて余分なSA-PE 溶液を除去
４)1xTMACで懸濁し、ビーズ蛍光検出機にて各ビーズの蛍光強度を読み取った
【００４１】
（検出原理）
ビーズ上にはカルボキシル基（-COOH）がコーティングしてある。このビーズにビオチン標識したプローブ及びビオチン標識プライマーで増幅したPCR産物を結合させると、カルボキシル基COOHのOH基とDNA産物から出ているNH-(アミノ基)が結合する。このハイブリした反応物を検出機にかけると、４.の検出反応でSA-PEを加えた時、ビオチンに特異的結合したPCR産物とビーズ上のプローブがハイブリした反応物にのみ蛍光標識される。サンプルの測定には、635nm、564nmのレーザを用いた。635nmでビーズの番号識別測定、564nmでフィコエリスリンの蛍光量を測定した。このビーズはオレンジ〜赤の色素を含み、各ビーズは赤とオレンジ色の比率を変えることで識別できる。このビーズにレーザを当てると635nmで励起し、励起蛍光するとそれぞれ657nm、720nmのバンドパスフィルタに通る。このバンドパスフィルタが光センサーにより電流に変換される。各ビーズは2色蛍光の比率が異なる為、出てくる蛍光光量でビーズが識別できる。
【００４２】
また、ここで用いたフィコエリスリンは564nmで励起され、575nmのバンドパスフィルタを通って蛍光強度が計測される。上記ビーズの識別と、これを組み合わせることで、ビーズに結合したプローブにPCR産物がハイブリしているか、していないかが分かる。
【００４３】
＜方法および結果＞
MTHFR遺伝子における677番目の塩基を判定するための多型判定用プローブセットを、設計方針I、II、IIIに従って設計した。設計方針Iは、MTHFR遺伝子における677番目の塩基に相当する塩基が末端に位置し、比較的に短い（16mer）設計である。設計方針IIは、MTHFR遺伝子における677番目の塩基に相当する塩基が略中央に位置し、比較的に長い（45mer）設計である。設計方針IIIは、MTHFR遺伝子における677番目の塩基に相当する塩基が略中央に位置し、比較的に短い（16mer）設計である。また設計方針I〜IIIについて、MTHFR遺伝子のセンス鎖及びアンチセンス鎖を設計することで、本実施例では６種類の多型判定用プローブセットを設計した。
【００４４】
また、各セットに含まれる多型判定用プローブを1ビーズに対し１分子結合させた。このビーズを用いて約30検体を上記実験方法で検出した。
【００４５】
設計方針Iでセンス鎖の多型判定用プローブセットは表３に示す塩基配列から構成されている。なお、以下に示すプローブは全て５‘末端側にアミノ基が修飾されている。
【００４６】
【表３】
2010166820.tif 000004
【００４７】
設計方針Iでアンチセンス鎖の多型判定用プローブセットは表４に示す塩基配列から構成されている。
【００４８】
【表４】
2010166820.tif 000005
【００４９】
設計方針IIでセンス鎖の多型判定用プローブセットは表５に示す塩基配列から構成されている。
【００５０】
【表５】
2010166820.tif 000006
【００５１】
設計方針IIでアンチセンス鎖の多型判定用プローブセットは表６に示す塩基配列から構成されている。
【００５２】
【表６】
2010166820.tif 000007
【００５３】
設計方針IIIでセンス鎖の多型判定用プローブセットは表７に示す塩基配列から構成されている。
【００５４】
【表７】
2010166820.tif 000008
【００５５】
設計方針IIIでアンチセンス鎖の多型判定用プローブセットは表８に示す塩基配列から構成されている。
【００５６】
【表８】
2010166820.tif 000009
【００５７】
表３〜８に示した６種類の多型判定用プローブセットを用いて被験者由来のMTHFR遺伝子における677番目の塩基を判定した結果を散布図として図１〜６に示した。図１〜６の散布図は、縦軸がワイルドタイプの多型判定用プローブとのハイブリダイズに基づく値、横軸がミュータントタイプの多型判定用プローブとのハイブリダイズに基づく値を示す。単位は％である。すなわち、ワイルドタイプとミュータントタイプの蛍光強度を足し、それを100%としてワイルドタイプとミュータントタイプが占める割合を％で算出したものを表している。なお、表３〜８において、上段がワイルドタイプの多型判定用プローブであり、下段がミュータントタイプの多型判定用プローブである。
【００５８】
縦軸が100%に近く、横軸が０%に近いとワイルドタイプの遺伝子型（C/C型）、その逆の場合はミュータントタイプの遺伝子型（T/T型）、中間の場合はヘテロタイプの遺伝子型（C/T型）と判定される。図１〜６に示したように、表３〜６に示した多型判定用プローブセットでは、蛍光強度が極端に低く、ハイブリしづらいことが判明した。これらと比較して表７及び８に示した多型判定用プローブセットを用いた場合には、ワイルドタイプの遺伝子型、ヘテロタイプの遺伝子型及びミュータントタイプの遺伝子型を高精度に判別できることが明らかとなった。なお、表３〜６に示した多型判定用プローブセットを使用した場合の蛍光強度は、表７及び８に示した多型判定用プローブセットを用いた場合と比較して、約1/100であった。
【００５９】
また、それぞれのサンプルについてシーケンサーによる塩基配列解析を行ったところ、上述した結果と同じ判定結果であることを確認した。
【配列表フリーテキスト】
【００６０】
配列番号１〜１４は合成DNAの塩基配列である。
【図１】
2010166820.tif 000010
【図２】
2010166820.tif 000011
【図３】
2010166820.tif 000012
【図４】
2010166820.tif 000013
【図５】
2010166820.tif 000014
【図６】
2010166820.tif 000015
【配列表】
2010166820000001.app