(57)【要約】【課題】認知・記憶機能の低下を軽減するための軽減剤を提供する。【解決手段】冬虫夏草、ベニバナ、カノコソウ、セイヨウハッカ、ローズマリー、ウコン、及びイチョウからなる群より選択される１種又は２種以上を有効成分として含有する、認知・記憶機能低下軽減剤である。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
冬虫夏草、ベニバナ、カノコソウ、セイヨウハッカ、ローズマリー、ウコン、及びイチョウからなる群より選択される１種又は２種以上を有効成分として含有する、認知・記憶機能低下軽減剤。
【請求項２】
冬虫夏草を有効成分として含有する、請求項１に記載された認知・記憶機能低下軽減剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、認知・記憶機能低下軽減剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
高齢化社会が進むなか、主な症状に認知機能の低下がある認知症は、深刻な社会問題となっている。また、認知症に伴う記憶機能低下も問題である。認知症の発症機序は複数あると考えられるがその解明はされておらず根本的な予防素材は発見されていない。また、認知症の患者数は高齢化に伴い増加傾向にありその予防薬のニーズは高い。
【０００３】
神経伝達物質であるアセチルコリン（ＡＣｈ）は認知症発症に深く関連があり、脳内におけるアセチルコリンの量が低下することで認知症が誘発されることが知られている（特許文献１）。カルバコールはコリン作動薬として神経刺激作用を有することも知られており（特許文献２）、コリン作動薬の一つであるカルバコールの神経刺激作用により、細胞内因子の細胞外シグナル制御キナーゼ（ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  ｓｉｇｎａｌ−ｒｅｇｕｌａｔｅｄ  ｋｉｎａｓｅ：ＥＲＫ）が活性化すると考えられる。そのため、ＥＲＫの活性化を指標にし、アセチルコリン系神経刺激作用を高める作用を有する材料の評価方法が構築されることで、有益な材料が見出されることが期待される。
【０００４】
そのほかにも多くの研究が進められてはいるが、現在に至るまで、認知・記憶機能低下の絶対的な軽減方法は見いだされておらず、開発成果が待たれている。
【０００５】
一方、さまざまな素材又はその抽出物の有効性、例えば抗菌作用、血行促進作用、抗アレルギー作用、保湿作用等について、食品、皮膚外用剤、化粧品、医薬品等、多方面から検討されている。
【特許文献１】特開平１１−５７４１号公報
【特許文献２】特表２００３−５０６６９５号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、認知・記憶機能の低下を軽減するための軽減剤を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明の一構成としては、冬虫夏草、ベニバナ、カノコソウ、セイヨウハッカ、ローズマリー、ウコン、及びイチョウからなる群より選択される１種又は２種以上を有効成分として含有する、認知・記憶機能低下軽減剤である。
【発明の効果】
【０００８】
本発明の認知・記憶機能低下軽減剤によれば、ＥＲＫ活性化が確認されたことで、アセチルコリン系神経刺激作用を高めることが示唆され、認知・記憶機能の低下を軽減することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００９】
以下、本発明に係る実施の形態について説明するが、本実施の形態における例示が本発明を限定することはない。
【００１０】
本発明の認知・記憶機能低下軽減剤は、冬虫夏草、ベニバナ、カノコソウ、セイヨウハッカ、ローズマリー、ウコン、及びイチョウからなる群より選択される１種又は２種以上を有効成分として含有する。特に、冬虫夏草を有効成分として含有することが好ましい。これらの素材又はその抽出物には、分析しきれないほどの非常に多くの種類の成分が含まれており、これらが総合的に作用して本発明の効果が得られるものと推測される。
【００１１】
本発明者らは、認知症の評価方法としてＥＲＫの活性化の重要性を明らかにし、各種素材又はその抽出物の投与によるＥＲＫの活性化を評価したところ、特定の素材又はその抽出物を投与することで、従来それぞれに対して知られていた効能とは全く異なる効果として、ＥＲＫの活性化が認められ、認知・記憶機能低下の軽減作用があることを見出した。すなわち、ＥＲＫの活性化が認められると、コリン作動薬であるカルバコールの神経刺激作用が促進されていることがわかり、アセチルコリン系神経刺激作用が高まっていることがわかる。
【００１２】
具体的には、特定の素材又はその抽出物において、細胞レベルでのＥＲＫの活性化を見出した。また、コリン阻害薬であるスコポラミンによる急性認知症モデルに対し認知・記憶機能低下を軽減する傾向を確認することができた。
【００１３】
冬虫夏草は、特に制限はなく、一般に知られている蝶蛾類鱗翅目及び鞘翅目の昆虫又はその幼虫に寄生してその体内の菌核を形成し、夏季に宿主である昆虫又はその幼虫の体表面に形成される子実体であればよい。本発明において、特に好ましく使用可能な冬虫夏草としては、コウモリ蛾科の幼虫（Hepialus armoricanus Ober.）に寄生してその体内に菌核を形成し、夏季に頭部から根棒状の子実体を形成するコルダイセプシネンシス（Cordycepssinensis）が挙げられる。また、コルダイセプシネンシス以外の冬虫夏草で生薬として薬効のあるものとしてはセミタケ（Cordyceps sobolifera B.）やサナギタケ（Cordyceps militaris Link）、ミミカキタケ（Cordyceps nutans Pat.）等が知られており、これらも本発明において好ましく使用することができるものである。使用部位は特に限定されず、子実体又は被子体の区別なく用いることができる。
【００１４】
ベニバナ（Carthamas tinctorius L.）は、キク科に属する２年草で、葉、茎、花、根等の各部位及び全草を用いることができるが、花もしくは地上部位全草を用いることが好ましい。
【００１５】
カノコソウ（Valeriana fauriei Briq.）は、オミナエシ科カノコソウ属に属する多年草で、葉、茎、花、根等の各部位及び全草を用いることができるが、葉を含む地上部位全草を用いることが好ましい。
【００１６】
セイヨウハッカ（Mentha x piperita L.）は、シソ科ハッカ属の多年草で、葉、茎、花、根等の各部位及び全草を用いることができるが、葉を含む地上部位全草を用いることが好ましい。
【００１７】
ローズマリー（Rosmarinus officinalis L.）は、シソ科マンネンロウ属の常緑性低木で、葉、茎、花、根等の各部位及び全草を用いることができるが、葉を含む地上部位全草を用いることが好ましい。
【００１８】
本発明において用いることができるウコンは、ウコン属（Curcuma L.）植物であれば特に限定されない。ウコンは、ショウガ科に属する単子葉植物であり、発達した根茎を有する多年草である。主として、熱帯地方に約５０種類が分布する。具体的には、アキウコン（別名：ウコン、C. longa L.）、ハルウコン（C. aromatica Salisb.）、クルクマ・エルギノサ（C. aeruginosa Roxb.）、クスリウコン（C. xanthorrhiza Roxb.）、クルクマ・マンガ（C. mangga Valet.）、クルクマ・ピエレアナ（C. pierreana Gangnep.）、クルクマ・プルプラセンス（C. purpurascens Bl.）、ガジュツ（C. zeodaris (Berg.)Rosc.）、クルクマ・ヘイネアナ（C. heyneana Val. et v. Zijp.）等が知られている。これらのウコンの中でも、素材の入手の容易性からアキウコン若しくはハルウコンを用いることが好ましく、さらに本発明の効果の点からアキウコンを用いることが一層好ましい。使用部位は特に限定されず、葉、茎、花、根、根茎等の各部位及び全草を用いることができるが、根茎を用いることが好ましい。
【００１９】
イチョウ（Ginkgo bibloba L.）は、イチョウ科（Ginkgoaceae）イチョウ属の植物である。使用部位は特に限定されず、樹皮、樹液、葉、枝、根、実等を用いることができるが、その中でも特に葉が本発明の効果の点から好ましい。
上記素材は、採取した生の素材をそのまま、又は乾燥させて用いることができる。その際、抽出物を用いることもできる。
【００２０】
本発明において、各素材の抽出物は、各種溶媒を用いて抽出した抽出物を用いることが好ましい。抽出の際は、生のまま用いてもよいが、抽出効率を考えると、細切、乾燥、粉砕等の処理を行った後に抽出を行うことが好ましい。抽出は、抽出溶媒に浸漬するか、超臨界流体や亜臨界流体を用いた抽出方法でも行うことができる。抽出効率を上げるため、撹拌や抽出溶媒中でホモジナイズしてもよい。抽出温度としては、５℃程度から抽出溶媒の沸点以下の温度とすることが適切である。抽出時間は抽出溶媒の種類や抽出温度によっても異なるが、１時間〜１４日間程度とすることが適切である。
【００２１】
抽出溶媒としては、水の他、メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール等の低級アルコール、１、３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、ジプロピレングリコール、グリセリン等の多価アルコール、エチルエーテル、プロピルエーテル等のエーテル類、酢酸ブチル、酢酸エチル等のエステル類、アセトン、エチルメチルケトン等のケトン類等の溶媒を用いることができ、これらより１種又は２種以上を選択して用いることもできる。また、生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水等を用いてもよい。さらに、水や二酸化炭素、エチレン、プロピレン、エタノール、メタノール、アンモニア等の１種又は２種以上の超臨界流体や亜臨界流体を用いてもよい。
【００２２】
各素材の上記溶媒による抽出物は、そのままでも使用することができるが、濃縮、乾固した物を水や極性溶媒に再度溶解して使用することもでき、これらの生理作用を損なわない範囲で脱色、脱臭、脱塩等の精製処理やカラムクロマトグラフィー等による分画処理を行った後に用いてもよい。各素材の抽出物やその処理物及び分画物は、各処理及び分画後に凍結乾燥し、用時に溶解して用いることもできる。
【００２３】
本発明の各素材及びその抽出物は、優れた加齢による認知・記憶機能低下の軽減効果を発揮し、加齢による認知・記憶機能低下の軽減剤として利用することができる。加齢による認知・記憶機能低下の軽減剤は、皮膚に外用するだけではなく、毛髪に利用することや経口摂取も可能であり、食品、飲料、あるいは医薬品等の機能性経口組成物にも応用することが可能である。
【００２４】
各素材及びその抽出物を皮膚外用剤や機能性経口組成物に配合する際の配合量は、皮膚外用剤や機能性経口組成物の種類や使用目的等によって調整することができるが、効果や安定性等の点から、全量に対して、０．０００１質量％〜１００．０質量％が好ましく、より好ましくは、０．００１質量％〜２０．０質量％である。
【００２５】
各素材及びその抽出物の抽出物を配合する皮膚外用剤の剤型は任意であり、例えば、ローション等の可溶化系、クリームや乳液等の乳化系、カラミンローション等の分散系として提供することができる。さらに、噴射剤と共に充填したエアゾール、リップスティック、ファンデーション等の種々の剤型で提供することもできる。
【００２６】
なお、各素材及びその抽出物を配合する皮膚外用剤には、これらの素材及びその抽出物の他に必要に応じて、通常医薬品、医薬部外品、皮膚化粧料、毛髪用化粧料及び洗浄料に配合される、油性成分、保湿剤、粉体、色素、乳化剤、可溶化剤、洗浄剤、紫外線吸収剤、増粘剤、薬剤、香料、樹脂、防菌防黴剤、アルコール類等を適宜配合することができる。
【００２７】
また、各素材及びその抽出物を配合する機能性経口組成物の剤型は任意であるが、粉末剤、顆粒剤、カプセル剤、液剤等の種々の剤型で提供することもでき、必要に応じて、医薬品・医薬部外品・食品等に配合される、油性成分、保湿剤、粉体、乳化剤、可溶化剤、増粘剤、薬剤、香料、防菌防黴剤、アルコール類、砂糖、練乳、小麦粉、食塩、ブドウ糖、鶏卵、バター、マーガリン、水飴、カルシウム、鉄分、調味料、香辛料、ビタミンＡ及びそれらの誘導体、カロテノイド類、リボフラビン及びその誘導体、ビタミンＢ類及びそれらの塩若しくは誘導体、アスコルビン酸及びその誘導体、コバラミン類、ビタミンＥ及びそれらの誘導体、ビタミンＫ、アデノシン及びその誘導体、フラボノイド類及びタンニン類を配合することもできる。
【実施例】
【００２８】
以下、本発明を実施例により詳しく説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【００２９】
ＣＳエキス（冬虫夏草抽出物）の調製
実施例としてＣＳエキスを次の手順に従って調製した。
【００３０】
抽出操作１：冬虫夏草（Cordyceps sinensis）１０ｇを細切し、２００ｇの精製水を添加して９５℃〜１００℃の温度を保ちながら、９０分間攪拌抽出を行い、抽出液１を濾別した。
【００３１】
抽出操作２：抽出操作１で濾別した残査にさらに、１７０ｇの精製水を添加して９５℃〜１００℃の温度を保ちながら、６０分間攪拌抽出を行い、抽出液２を濾別した。
【００３２】
上記抽出操作１及び２で得られた抽出液１及び抽出液２の全量を混合し、凍結乾燥を行うことによりＣＳエキスエキス３ｇを得た。収率は３０％であった。
【００３３】
（その他の植物抽出物の調製）
実施例としてベニバナ、カノコソウ、セイヨウハッカ、ローズマリー、アキウコン、及びイチョウの原体を細切し、２０質量倍量の５０容量％エタノール水溶液を添加して、室温にて３時間攪拌抽出を行い、抽出液を濾別した。減圧濃縮後凍結乾燥を行い、各植物の抽出物を得た。各植物の使用部位、原体の乾燥質量、乾燥状態の抽出物収量、収率を表１に示す。
【００３４】
【表１】
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【００３５】
（Ｆ１１細胞を用いたＥＲＫのリン酸化促進作用評価）
上記した各植物の抽出物を使用して、Ｆ１１細胞を用いたＥＲＫのリン酸化促進作用評価を、次の手順に従って行った。
【００３６】
１）Ｆ１１細胞（１．２×１０５個／ウェル）を６−ウェル  プレートに播種した。２４時間培養した。
２）無血清培地に交換した。４時間培養した。
３）被検物で３０分間処理した。
４）無血清培地（５ｍＬ及び２ｍＬ）にてウェルを２回洗浄した。
５）５μＭのカルバコール（コリン作動薬）にて細胞を５分間刺激した。
６）氷冷ＰＢＳにてウェルを１回洗浄した。
７）ホスファターゼ阻害剤入り溶解緩衝液（Ｌｙｓｉｓ  Ｂｕｆｆｅｒ）を８０μＬずつウェルに添加した。
８）プレートを１回凍結融解し、細胞破砕液を回収し、遠心分離（１５０００ｒｐｍ、１５ｍｉｎ）後の上清をタンパクサンプルとして回収した。
【００３７】
上記３）で使用した被検物について、抽出物の種類及び処理量を表２に示す。なお、コントロールとして、３）の処理を行わなかったものを併せて示す。
【００３８】
また、上記８）で回収したタンパクサンプルは、ＳＤＳ−ＰＡＧＥを行った後、免疫ブロット法（ウェスタンブロット法）にてＥＲＫのリン酸化（ｐｈｏｓｐｈｏ−ＥＲＫ、以下ｐ−ＥＲＫと略すことがある）およびＥＲＫ（ｔｏｔａｌ−ＥＲＫ、以下ｔ−ＥＲＫと略すことがある）を検出した。
【００３９】
検出したｐ−ＥＲＫおよびｔ−ＥＲＫレベルは、画像処理ソフトウェアＩｍａｇｅＪにて数値化し、ｔ−ＥＲＫに対するｐ−ＥＲＫの比（ｐ−ＥＲＫ／ｔ−ＥＲＫ、以下ｐ／ｔと略すことがある）を算出し、コントロールの値を１とした相対比較にてＥＲＫのリン酸化レベルを評価した。評価結果を表２に併せて示す。
【００４０】
【表２】
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【００４１】
表２に示すように、実施例のＣＳエキス、ベニバナ、カノコソウ、セイヨウハッカ、ローズマリー、アキウコン、イチョウについて、ＥＲＫのリン酸化レベルが上昇していることがわかった。
【００４２】
上記した免疫ブロット法による免疫ブロット図を図１から図３に示す。
【００４３】
図１は、コントロールと実施例１のブロット図である。図２は、コントロール、実施例２から４のブロット図である。図３は、コントロール、実施例５から７のブロット図である。
【００４４】
図１から図３に示すように、カルバコールで刺激した場合は、カルバコール刺激が無い場合に比べ、ＥＲＫのリン酸化が強く確認された。また、実施例１から７は、コントロールに対して、リン酸化レベルが上昇していることが確認された。
【００４５】
表２、及び図１から図３の結果から、実施例１から７の植物抽出物は、いずれも、アセチルコリン系神経刺激作用を高めることが示唆され、認知・記憶機能の低下を軽減することができるといえる。
【００４６】
（マウスを用いた認知・記憶機能低下軽減作用評価）
上記した実施例１のＣＳエキスを使用して、マウスを用いて認知・記憶機能低下の軽減作用の評価を、次の手順に従って行った。
【００４７】
（Ｙ−ｍａｚｅ試験）
実施例８として、８週齢ＣＤ−１マウス（日本チャールズ・リバー株式会社）を用いて、マウス（前日にオープン・フィールド試験（Ｏｐｅｎ  ｆｉｅｌｄ  ｔｅｓｔ、以下ＯＦと称すことがある）によって被検物質による行動異常がないことを確認したもの）をジエチルエーテル麻酔下で捕定し、ＣＳエキス水溶液（滅菌脱イオン蒸留水中に０．３ｍＬ）をマウス重量に対し１００ｍｇ／ｋｇで経口投与した。コントロールとしては同量の蒸留水０．３ｍＬを経口投与した。
【００４８】
６時間後に、コリン阻害薬であるスコポラミン（無菌食塩水中に０．２ｍＬ）をマウス重量に対し１ｍｇ／ｋｇで皮下投与し、４５分後にＹ−ｍａｚｅ試験（以下、ＹＭと称すことがある）を実施した。
【００４９】
ＯＦは次の手法で実施した。各マウスを、２０ｃｍの壁で囲まれた１００ｃｍ２の灰色のプラスチックのフィールド（２０ｃｍの間隔で黒の格子がある）の中央に置いて、３分間、自由に運動させた。歩行を横断した全格子の線で測定し、定義した。
【００５０】
ＹＭは次の手法で実施した。灰色のプラスチックからなり、４０ｃｍの長さ、１２ｃｍの高さ、３ｃｍの底部幅、１０ｃｍの上部幅のアームを有し、３つのアームが１２０°の角度で接続してあるＹＭ用装置を用いた。アーム端に各マウスを置いて、８分間、自由に迷路を探索させた。アームの全エントリー、及び自発的交替の百分率（Ｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓ  Ａｌｔｅｒｎａｔｉｏｎ  ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ：ＳＡ％）を測定した。ＳＡ％は、前回の２つの選択と異なるアーム選択（成功選択）の、実行中の全選択（「全エントリーから２を引いた数」、最初の２回のエントリーは評価されないからである）に対する比で定義した。例えば、マウスが、１−２−３−２−３−１−２−３−２−１と１０回のエントリーをした場合、８回の全選択（１０回のエントリーから２を引いた数）のうち５回の成功選択があったことになる。したがって、この場合のＳＡ％は６２．５％である。
【００５１】
比較例１として、ＣＳエキスを投与しない以外は、上記した実施例８と同様に試験を行った。また、コントロールとして、スコポラミンを投与しないで生理食塩水を投与し、ＣＳエキスを投与したもの（コントロール１）と、ＣＳエキスを投与しないもの（コントロール２）とを用意し、それ以外は上記した実施例８と同様に試験を行った。
【００５２】
結果を図４に示す。図４は、コントロール１、コントロール２、実施例８、及び比較例１のＹＭの結果を示す。
【００５３】
図４に示すように、スコポラミンを投与することで、ＳＡ％が低くなり、認知・記憶機能の低下が誘導されたことが示唆された。スコポラミンを投与した場合では、予めＣＳエキスを投与した実施例８は、比較例１に比べ、ＳＡ％が高かった。これより、ＣＳエキスを投与することで、認知・記憶機能の低下を軽減することができたことがわかった。
【００５４】
（受動的回避試験）
実施例９として、ＹＭ実施２時間後に受動的回避試験（Ｐａｓｓｉｖｅ  ａｖｏｉｄａｎｃｅ  ｔａｓｋ、以下ＰＡと称すことがある）のトレーニング（１日目）を実施し、さらに２４時間後にＰＡのテスト（２日目）を実施した。
【００５５】
ＰＡは次の手法で実施した。装置はギロチン扉で区分けされた明室（長さ１１ｃｍ、幅５ｃｍで、１３ｃｍの壁を設けた）及び暗室（長さ２５ｃｍ、幅２５ｃｍで、２０ｃｍの壁を設けた）から構成され、暗室床面は全面、電気ショックを与えるための鉄格子で構成した。明室内にマウスを閉じ込め、１５秒後にギロチン扉を開け、暗室に入るまでの時間（エントリー待ち時間）を測定した。１日目のトレーニングでは、マウスが暗室内に入った後、ギロチン扉を閉じて、暗室内に閉じ込めた後、０．３ｍＡ、５秒間の電気ショックを与えた。２日目のテストではエントリー待ち時間を計測するが、暗室での電気ショックは与えなかった。３００秒以上暗室に入らなかった場合にはエントリー待ち時間を３００秒とし、テストを終了した。６匹のマウスを用いて試験を繰り返し平均した。
【００５６】
比較例２として、ＣＳエキスを投与しない以外は、上記した実施例９と同様に試験を行った。また、コントロールとして、スコポラミンを投与しないで生理食塩水を投与し、ＣＳエキスを投与したもの（コントロール１）と、ＣＳエキスを投与しないもの（コントロール２）とを用意し、それ以外は上記した実施例９と同様に試験を行った。
【００５７】
結果を図５に示す。図５は、コントロール１、コントロール２、実施例９、及び比較例２のＰＡの結果を示す。
【００５８】
図５に示すように、スコポラミンを投与することで、２日目のエントリー待ち時間が短くなり、認知・記憶機能の低下が誘導されたことが示唆された。スコポラミンを投与した場合では、予めＣＳエキスを投与した実施例９は、比較例２に比べ、２日目のエントリー待ち時間が長かった。これより、ＣＳエキスを投与することで、認知・記憶機能の低下を軽減することができたことがわかった。
【００５９】
このように、ＥＲＫのリン酸化促進作用を有するＣＳエキスを投与することで、認知・記憶機能の低下を軽減することができたことがわかった。
【図面の簡単な説明】
【００６０】
【図１】図１は、実施例１の免疫ブロット図である。
【図２】図２は、実施例２から４の免疫ブロット図である。
【図３】図３は、実施例５から７の免疫ブロット図である。
【図４】図４は、Ｙ−ｍａｚｅ試験の結果を示すグラフである。
【図５】図５は、受動的回避試験の結果を示すグラフである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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