(57)【要約】【課題】    簡易な方法で化粧料中に貴金属ナノコロイドを安定分散させる方法の提供、さらには安定化によりプラズモン吸収効果を維持させることで、光応答性機能を有する薬物運搬体としての利用。【解決手段】    貴金属ナノコロイドをベシクル状脂質ラメラ構造体の表面に担持させることにより、貴金属ナノコロイドが安定分散したリポソーム／貴金属ナノコロイド複合体の製造方法、さらにリポソーム／貴金属ナノコロイド複合体を含有する化粧料。【選択図】      図４
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
貴金属ナノコロイドをベシクル状脂質ラメラ構造体表面に担持することを特徴とするリポソーム／貴金属ナノコロイド複合体。
【請求項２】
請求項１記載のリポソーム／貴金属ナノコロイド複合体を配合することを特徴とする化粧料。
【請求項３】
赤外線を照射することによって、リポソーム／貴金属ナノコロイド複合体に内包された物質を放出することを特徴とする請求項２記載の化粧料。
【請求項４】
脂質二分子膜からなる平均粒子径が５０〜２００ｎｍのベシクル状脂質ラメラ構造体分散液を調製する工程と、貴金属塩水溶液に還元剤を添加して貴金属ナノコロイド分散液を調製する工程と、貴金属ナノコロイド分散液調製直後に、該貴金属ナノコロイド分散液に対し、前記工程により得られたベシクル状脂質ラメラ構造体分散液を１〜１５当量添加し、室温下にて混合攪拌する工程、とを備えることを特徴とするリポソーム／貴金属ナノコロイド複合体の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、貴金属ナノコロイドを安定分散させるため、および光応答性機能を有する薬物運搬体として利用することを目的とするものであり、貴金属ナノコロイドをベシクル状脂質ラメラ構造体の表面に担持させたリポソーム／貴金属ナノコロイド複合体、およびリポソーム／貴金属ナノコロイド複合体を含有する化粧料、並びにリポソーム／貴金属ナノコロイド複合体の製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
従来から脂質二分子膜からなる閉鎖小胞体であるベシクル状脂質ラメラ構造体、いわゆるリポソームは、医薬品分野では薬物運搬体としてその応用研究がなされているが、化粧品分野においては、水分保持機能を利用した皮膚保湿成分や、角層バリヤー機能低下の改善を目的として用いられている。また、ナノサイズのカプセルとしての機能を利用して、成分を内包することで、通常では酸化安定性の悪い成分を保護するなど、成分の安定配合のために利用されている。
【０００３】
また一方、金や白金を代表とする貴金属は、液体中に分散した貴金属の微粒子（貴金属ナノコロイド）が、その生理活性効果から、活性酸素消去能の高い抗酸化剤として応用できること（特許文献１および特許文献２）が報告され、その機能に着目した化粧品への利用が期待されている。しかしながら、貴金属ナノコロイドは、高イオン強度下では電荷が遮蔽されるために分散安定性を失い、凝集するという欠点があり、化粧品その他に応用するには、その安定化が課題となっていた。
【０００４】
ラメラ構造体に貴金属ナノコロイドを内包させて化粧品に配合する方法については、すでにいくつか報告されている。一般には、ラメラ構造体調製時に同時に貴金属ナノコロイドを存在させ内包させる方法がとられる。金ナノコロイドを内包したリポソームに関する技術（非特許文献１）や、化粧品分野では、脂肪酸モノグリセリドを主構成成分とするラメラ構造体分散液を調製後、該分散液に貴金属塩水溶液および還元剤を添加することにより、貴金属塩水溶液とラメラ構造体分散液の共存下で発生した貴金属コロイドが内包される方法（特許文献３）が報告されている。
【０００５】
【特許文献１】特開２００４−２８５１６６
【特許文献２】特開２００５−１７９５００
【特許文献３】特開２００７−２５４３５３
【非特許文献１】K. Hong, D.S. Friend, C.G. Glabe, D. Papahadjopoulos, Biochim. Biophys. Acta 732 (1983) 320.
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
しかしながら、いずれの方法も、容積を持つラメラ構造体内部に貴金属ナノコロイドを存在させるために、貴金属ナノコロイドの凝集が生じ、一定量の貴金属のナノサイズでの安定化は困難である。また、ナノサイズの状態が維持されない場合、貴金属のサイズによる特性は減衰し、たとえば、金や銀のナノコロイドにおいては、ある特定の波長の光を吸収する作用（表面プラズモン吸収）が変化する。このプラズモン吸収はそのサイズに大きく依存することが知られている。また、ナノコロイド粒子表面の変化は化粧品に配合する目的である活性酸素消去効果を低下させることも考えられる。さらに、金属塩の還元による金属ナノコロイドの製法では、本来化粧品等の製剤へ配合する必要がない成分や、悪影響を及ぼす成分までもが含まれることになり、生体への適用を厳密に調査する必要が生じる。また、調製手法も多段階となり煩雑である。
【０００７】
これらの報告は、ラメラ構造体が持つ優れた特性に、貴金属ナノコロイドの生理学的特性を付加した機能を得ることを目的とするものであり、貴金属ナノコロイドの安定化を目的としてリポソームを用いた技術に関する報告はなく、また、その光応答性機能を化粧品に応用した報告もない。
【０００８】
本発明の目的は、簡易な方法で化粧料中に貴金属ナノコロイドを安定分散させることであり、さらには安定化によりプラズモン吸収効果を維持させることで、光応答性機能を有する薬物運搬体として利用することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
前記目的を達成するために本発明者等が鋭意検討を重ねた結果、貴金属ナノコロイド調製直後に、ベシクル状脂質ラメラ構造体分散液を特定の割合にて室温下で攪拌混合するという簡易な方法で、脂質ラメラ構造体表面に貴金属ナノコロイドを担持するリポソーム／貴金属ナノコロイド複合体を得ることができ、さらにこれ配合する化粧料において、赤外線を照射することによって、リポソーム／貴金属ナノコロイド複合体に内包された物質を放出することが可能であることを見出し、本発明を完成するに至った。
【００１０】
すなわち、本発明は、貴金属ナノコロイドをベシクル状脂質ラメラ構造体表面に担持するリポソーム／貴金属ナノコロイド複合体、および該リポソーム／貴金属ナノコロイド複合体を配合する化粧料を提供するものである。
【００１１】
また、赤外線を照射することによって、リポソーム／貴金属ナノコロイド複合体に内包された物質を放出することが可能な化粧料を提供するものである。
【００１２】
さらに、脂質二分子膜からなる平均粒子径が５０〜２００ｎｍのベシクル状脂質ラメラ構造体分散液を調製する工程と、貴金属塩水溶液に還元剤を添加して貴金属ナノコロイド分散液を調製する工程と、貴金属ナノコロイド分散液調製直後に、該貴金属ナノコロイド分散液に対し、前記工程により得られたベシクル状脂質ラメラ構造体分散液を１〜１５当量添加し、室温下にて攪拌混合する工程、とを備えることを特徴とするリポソーム／貴金属ナノコロイド複合体の製造方法を提供するものである。
【００１３】
ところで、脂質ラメラ構造体表面に貴金属ナノコロイドを担持するとは、脂質ラメラ構造体表面に貴金属ナノコロイドの粒子が相互作用により化学結合ないし物理結合し、固定化された状態をいう。またリポソーム／貴金属ナノコロイド複合体に内包されたとは、ベシクル状の脂質ラメラ構造体、いわゆる閉鎖された小胞体の内部に封入された状態をいう。本発明においては、担持と内包とは全く存在部位が異なることから、明確に使い分ける必要がある。
【発明の効果】
【００１４】
本発明のリポソーム／貴金属ナノコロイド複合体は、簡易な方法で製造することが可能であり、これにより貴金属ナノコロイドが安定分散した化粧料を得ることが可能である。さらに、本発明により貴金属ナノコロイドの欠点である凝集しやすいという性質を解消することで、貴金属ナノコロイドのプラズモン吸収効果を維持させることが可能になったことから、光応答性機能を有する薬物運搬体としての利用も容易となった。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１５】
本発明の貴金属ナノコロイドは、化粧料に配合し、皮膚に適用することから、安全性において一次刺激やアレルギー原因となりにくいものであることが好ましい。よって貴金属ナノコロイドとしては、金、プラチナ、銀が好ましく、プラズモン吸収効果により、リポソームの崩壊を生じさせる化粧料を得る上で、特に金が好ましい。
【００１６】
本発明の貴金属ナノコロイドは、貴金属塩水溶液に還元剤を添加して、貴金属ナノコロイド分散液を調製するものであるが、その還元剤としては、特に限定されず、化粧料に配合して全く悪影響がない成分として、クエン酸が好ましい。
【００１７】
本発明のベシクル状脂質ラメラ構造体分散液に用いる脂質成分としては、膜構成成分として一般に使用されるものであれば特に限定されない。通常は、リン脂質および糖脂質のうちで少なくとも１つを必須の主要成分とし、それ以外に任意成分として膜の安定化目的でステロール類やグリコール類など、またカチオン性脂質、あるいはポリエチレングリコール基を有する脂質などを共存させるが、特に限定されない。
【００１８】
リン脂質としては、大豆や卵などから得られるレシチン、リゾレシチンなどの中性リン脂質、および／またはこれらの水素添加物が好ましく使用される。その他のリン脂質としては、天然物に由来、もしくは半合成のフォスファチジルコリン、フォスファチジルセリン、フォスファチジルイノシトール、フォスファチジルエタノールアミン、フォスファチジルグリセロール、スフィンゴミエリン、ならびに合成のジパルミトイルホスファチジルコリン、ジステアロイルフォスファチジルコリン、ジステアロイルフォスファチジルセリンなどを挙げることができる。これらリン脂質は、通常は単独で使用されるが、２種以上を併用してもよい。
【００１９】
糖脂質としては、ジガラクトシルジグリセリド、ガラクトシルジグリセリド硫酸エステルなどのグリセロ脂質、ガラクトシルセラミド、ガラクトシルセラミド硫酸エステルなどのスフィンゴ糖脂質などを挙げることができる。
【００２０】
また、ステロール類はリポソームの膜安定化剤として作用し、例えば、コレステロール、ジヒドロコレステロール、コレステロールエステル、フィトステロール、シトステロール、コレスタノールなどが挙げられる。特にコレステロールが好ましい。
【００２１】
さらにまた、本発明のベシクル状脂質ラメラ構造体分散液は、一般に知られる方法で、そのベシクル内部に特定の成分を内包することが可能である。
【００２２】
次に、本発明のリポソーム／貴金属ナノコロイド複合体の製造方法について説明する。まず、平均粒子径が５０〜２００ｎｍのベシクル状脂質ラメラ構造体分散液を調製する。ラボレベルにて調製する場合、超音波処理やエクストルーダー処理にてサブミクロンサイズの微粒子化を行うが、工業的に生産する場合、高圧ホモジナイザーが好適に用いられる。高圧ホモジナイザーとしては、超高圧ホモジナイザー「マイクロフルイダイザー」（みづほ工業株式会社製）、薄膜旋回型高速ホモミキサー「Ｔ．Ｋフィルミックス」（プライミクス株式会社製）等を用いると、大量のベシクル状脂質ラメラ構造体分散液が製造できる。処理圧力および処理回数を調節することにより、平均粒子径が５０〜２００ｎｍのベシクル状脂質ラメラ構造体分散液を調製する。
【００２３】
次の工程としては、貴金属塩水溶液に還元剤を添加して貴金属ナノコロイド分散液を調製する。前述のように、貴金属ナノコロイド分散液は凝集しやすいことから、先に調製したベシクル状脂質ラメラ構造体分散液と複合化を行う直前に、還元剤を添加して調製する必要がある。この際１〜１２ｎｍのコロイド粒子が形成される。ベシクル状脂質ラメラ構造体表面に貴金属ナノコロイドを担持させるには、リポソーム径／ナノコロイド径は、５以上が好ましい。このとき貴金属ナノコロイドはアニオン性の表面電荷を持つ。
【００２４】
次に、貴金属ナノコロイド分散液にベシクル状脂質ラメラ構造体分散液を貴金属ナノコロイド分散液に対して１〜１５当量になるよう添加し、室温下にて攪拌混合する。これにより、リポソーム／貴金属ナノコロイド複合体を形成させる。驚くことに、特に複雑な操作や製造機械は必要とせず、このような簡易な操作だけで、脂質ラメラ構造体表面に貴金属ナノコロイドを担持させることができる。
【００２５】
本発明のリポソーム／貴金属ナノコロイド複合体を化粧料に配合する場合、その安定性を考慮すると、化粧料は水分散系製剤が好ましいが、一般に化粧料に用いられる乳化系であれば、殆どの場合、水中油型乳化製剤へも配合できる。
【００２６】
本発明のリポソーム／貴金属ナノコロイド複合体は、そのベシクル内部に化粧料に用いられる特定の成分を内包させた場合、赤外線を照射することによって、内包物質を放出することができる。プラズモン吸収効果を維持したリポソーム／貴金属ナノコロイド複合体は、光によってベシクルの崩壊が起こり、皮膚へ光を照射する美容機器（光照射型美顔器、脱毛機器、日焼け機器など）との併用では、必要なときに内包物質のリリースを誘導できる。このことから、本発明のリポソーム／貴金属ナノコロイド複合体を含む化粧料としては、化粧水，乳液，クリームなどの基礎化粧料、脱毛剤、日焼け止め化粧料などを挙げることができる。内包物質としては、内包できるものであれば特に限定されず、化粧料の目的に応じて選択できる。
【実施例】
【００２７】
以下、実施例を挙げて説明する。本発明の技術的範囲はこれによってなんら限定されるものではない。
【００２８】
［実施例１］
＜リポソーム／金ナノコロイド複合体分散液の調製＞
（Ａ）ベシクル状脂質ラメラ構造体分散液の調製
卵黄フォスファチジルコリン5ｍｇを含むクロロホルム溶液からエバポレーションによってクロロホルムを除去して真空乾燥することにより、脂質の薄膜を作製する。リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）0.5ｍｌに加えた後、3分間超音波照射する。凍結融解を４回行った後、エクストルーダーを通した。テストワコーによってリン脂質の定量を行い、１ｍMのベシクル状脂質ラメラ構造体分散液を調製した。
（Ｂ）金ナノコロイド分散液の調製
次に金ナノコロイド分散液の前駆体として、テトラクロロ金酸４水和物を用いる。１ｍMの塩化金酸４水和物水溶液５０ｍｌを作製した。還流下で、これに38.8ｍＭクエン酸ナトリウム５ｍｌを一気に加え、１０分間加熱還流し、金ナノコロイド分散液を調製する。１０分後加熱を停止し冷却した後、さらに15分撹拌した。金コロイドの生成は、還元剤溶液添加後１分程度で溶液の色が金色から鮮赤色に変化することで確認できる。得られた溶液を濾過することによって凝集体を除去し、金ナノコロイド分散液を調製した。
（Ｃ）リポソーム／金ナノコロイド複合体分散液の調製
次に、（Ａ）のベシクル状脂質ラメラ構造体分散液（１ｍM）0.455ｍｌをリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）0.495ｍｌで希釈し、（Ｂ）の金ナノコロイド分散液0.050ｍｌをボルテックス下で添加して複合体を調製する。このとき脂質分子と金原子の比率（脂質分子／金原子）は１０当量に相当する。これを室温下にてインキュベーションすることで、リポソーム／金ナノコロイド複合体分散液を得た。
【００２９】
［実施例２］
＜アスコルビン酸グルコシド内包リポソーム／金ナノコロイド複合体分散液の調製＞
（Ａ）アスコルビン酸グルコシド内包ベシクル状脂質ラメラ構造体分散液の調製
アスコルビン酸グルコシド５ｍｇ、卵黄フォスファチジルコリン5ｍｇを含むクロロホルム溶液からエバポレーションによってクロロホルムを除去して真空乾燥することにより、脂質の薄膜を作製する。リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）0.5ｍｌに加えた後、3分間超音波照射する。凍結融解を４回行った後、エクストルーダーを通した。テストワコーによってリン脂質の定量を行い、１ｍMのアスコルビン酸グルコシド内包ベシクル状脂質ラメラ構造体分散液を調製した。
（Ｂ）金ナノコロイド分散液の調製
次に実施例１と同様の調製方法にて、金ナノコロイド分散液を調製した。
（Ｃ）リポソーム／金ナノコロイド複合体分散液の調製
次に、（Ａ）のアスコルビン酸グルコシド内包ベシクル状脂質ラメラ構造体分散液（１ｍM）0.455ｍｌをリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）0.495ｍｌで希釈し、（Ｂ）の金ナノコロイド分散液0.050ｍｌをボルテックス下で添加して複合体を調製する。このとき脂質分子と金原子の比率（脂質分子／金原子）は１０当量に相当する。これを室温下にてインキュベーションすることで、アスコルビン酸グルコシド内包リポソーム／金ナノコロイド複合体分散液を得た。
【００３０】
（Ａ）の操作は、工業的に大量に調製する場合には、高圧ホモジナイザーを好適に用いることを説明したが、具体的には、まず脂質の薄膜を作製した後、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）を加えて、室温下ホモミキサー等の高速攪拌機にて、１０分間混合攪拌し、プレミックス液を得る。このプレミックス液をマイクロフルイダイザー（みづほ工業株式会社製）で、処理圧力２００ｍＰａ、処理回数３回にて平均粒子径１２０〜１５０ｎｍのベシクル状脂質ラメラ構造体分散液を調製することができる。
【００３１】
［安定性評価］
実施例１のリポソーム／金ナノコロイド複合体分散液において、（Ａ）のベシクル状脂質ラメラ構造体分散液に対する（Ｂ）の金ナノコロイド分散液の量比と、金ナノコロイドの安定性との関係について評価を行った。金原子に対し、脂質分子を０．１当量、１当量、１０当量、１５当量を加えた場合に得られたリポソーム／金ナノコロイド複合体の１時間、４時間、８時間、１２時間後の４００〜８００ｎｍのＵＶ−ＶＩＳスペクトルの変化を紫外可視分光光度計（Ｊａｓｃｏ  Ｍｏｄｅｌ  Ｖ−５６０  ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｅｒ）を用いて測定した。結果を図１〜図１５に示す。
【００３２】
図１〜図５の結果より、ベシクル状脂質ラメラ構造体の割合が少ないと、金ナノコロイドは凝集を生じ、脂質分子／金原子が１当量でやや安定化し、１０〜１５当量ではかなり安定あることが確認できた。１５当量以上では特に差は見られなかった。以下、さらにリポソーム／金ナノコロイド複合体分散液を化粧料に配合した例を示す。
【００３３】
［実施例３］
＜リポソーム／金ナノコロイド複合体配合美容液＞
（１）精製水により１００とする（質量％）
（２）濃グリセリン                                          １５．０
（３）１，３ブチレングリコール                              １０．０
（４）カルボキシビニルポリマー（１質量％溶液）              １５．０
（５）キサンタンガム（１質量％溶液）                        １０．０
（６）ショ糖ラウリン酸エステル                                １．５
（７）モノラウリン酸ポリグリセリル                            １．０
（８）ミリスチン酸オクチルドデシル                            ５．０
（９）流動パラフィン                                          ２．５
（１０）セチルアルコール                                      ０．７５
（１１）ワセリン                                              ３．０
（１２）Ｌ−アルギニン（２０質量％溶液）                      １．０
（１３）実施例１のリポソーム／金ナノコロイド複合体分散液    １０．０
（１４）エチルアルコール                                      ０．５
（１５）パラオキシ安息香酸メチル                              ０．１
（１６）香料                                                  微量
製造方法：工程１／（１）〜（５）の水相成分を混合し、７０〜７５℃の加熱下で溶解する。工程２／（６）〜（１１）の油相成分を混合し、同様に７０〜７５℃の加熱下にて溶解する。工程３／工程１の水相成分に工程２の油相成分を徐々に添加してプレミックスを行った後、高速ホモミキサーにて本乳化処理を行う。工程４／乳化後に冷却を開始し、４５〜５０℃にて（１２）〜（１３）の成分を、次に別に溶解した（１４）〜（１６）の成分を加える。工程５／さらに室温付近まで冷却し、取り出す。
【００３４】
［実施例４］
＜アスコルビン酸グルコシド内包リポソーム／金ナノコロイド複合体配合美容液＞
（１）精製水により１００とする（質量％）
（２）濃グリセリン                                          １５．０
（３）カルボキシビニルポリマー（１質量％溶液）              １５．０
（４）ポリアクリル酸ナトリウム（０．１質量％溶液）            １．０
（５）ショ糖ラウリン酸エステル                                １．５
（６）モノラウリン酸ポリグリセリル                            １．０
（７）ミリスチン酸オクチルドデシル                            ５．０
（８）オリーブ由来スクワラン                                  ２．５
（９）ベヘニルアルコール                                      ０．５
（１０）精製蜜蝋                                              ３．０
（１１）Ｌ−アルギニン（２０質量％溶液）                      １．０
（１２）実施例２のアスコルビン酸グルコシド内包
リポソーム／金ナノコロイド複合体分散液                      １０．０
（１３）エチルアルコール                                      ０．５
（１４）パラオキシ安息香酸メチル                              ０．１
（１５）香料                                                  微量
製造方法：工程１／（１）〜（４）の水相成分を混合し、７０〜７５℃の加熱下で溶解する。工程２／（５）〜（１０）の油相成分を混合し、同様に７０〜７５℃の加熱下にて溶解する。工程３／工程１の水相成分に工程２の油相成分を徐々に添加してプレミックスを行った後、高速ホモミキサーにて本乳化処理を行う。工程４／乳化後に冷却を開始し、４５〜５０℃にて（１１）〜（１２）の成分を、次に別に溶解した（１３）〜（１５）の成分を加える。工程５／さらに室温付近まで冷却し、取り出す。
【図面の簡単な説明】
【００３５】
【図１】金ナノコロイドのみの安定性を評価した結果を示す図である。
【図２】脂質分子／金原子の比率が０．１当量の場合の本発明のリポソーム／貴金属ナノコロイド複合体の安定性を評価した結果を示す図である。
【図３】脂質分子／金原子の比率が１当量の場合の本発明のリポソーム／貴金属ナノコロイド複合体の安定性を評価した結果を示す図である。
【図４】脂質分子／金原子の比率が１０当量の場合の本発明のリポソーム／貴金属ナノコロイド複合体の安定性を評価した結果を示す図である。
【図５】脂質分子／金原子の比率が１５当量の場合の本発明のリポソーム／貴金属ナノコロイド複合体の安定性を評価した結果を示す図である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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