(57)【要約】【課題】高血圧発症に関する一塩基多型（ＳＮＰ）マーカー及びその使用方法の提供【解決手段】高血圧発症に関するＳＮＰマーカーが、ＲＧＳ２遺伝子におけるＡ／Ｇ多型ＳＮＰ（ｒｓ番号：ｒｓ３７６７４８９）、ＡＤＤ１遺伝子におけるＣ／Ａ多型ＳＮＰ（ｒｓ番号：ｒｓ４９６１）、ＣＡＣＮＡ２Ｄ２遺伝子におけるＡ／Ｇ多型ＳＮＰ（ｒｓ番号：ｒｓ２２３６９５７）、及び、ＣＡＴ遺伝子におけるＣ／Ｔ多型ＳＮＰ（ｒｓ番号：ｒｓ７６９２１４）のうちの少なくとも２つのＳＮＰｓからなり、前記高血圧発症に関するＳＮＰマーカーの使用方法が、被検試料を準備する準備工程と、前記被検試料について前記少なくとも２つのＳＮＰｓをタイピングするタイピング工程と、前記タイピング工程の結果に基づき高血圧発症のリスクを判定する判定工程とを含む。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
高血圧発症に関する一塩基多型（ＳＮＰ）マーカーの使用方法であって、
前記高血圧発症に関するＳＮＰマーカーは、ＲＧＳ２遺伝子におけるＡ／Ｇ多型ＳＮＰ（ｒｓ番号：ｒｓ３７６７４８９）、ＡＤＤ１遺伝子におけるＣ／Ａ多型ＳＮＰ（ｒｓ番号：ｒｓ４９６１）、ＣＡＣＮＡ２Ｄ２遺伝子におけるＡ／Ｇ多型ＳＮＰ（ｒｓ番号：ｒｓ２２３６９５７）、及び、ＣＡＴ遺伝子におけるＣ／Ｔ多型ＳＮＰ（ｒｓ番号：ｒｓ７６９２１４）からなる群から選択される少なくとも２つのＳＮＰｓからなり、
被検試料を準備する準備工程と、前記被検試料について前記少なくとも２つのＳＮＰｓをタイピングするタイピング工程と、前記タイピング工程の結果に基づき高血圧発症のリスクを判定する判定工程とを含む、高血圧発症に関するＳＮＰマーカーの使用方法。
【請求項２】
前記判定工程における判定が、前記ＲＧＳ２遺伝子のＳＮＰ（ｒｓ番号：ｒｓ３７６７４８９）のリスク多型をＡＡ型、前記ＡＤＤ１遺伝子のＳＮＰ（ｒｓ番号：ｒｓ４９６１）のリスク多型をＡＡ型、前記ＣＡＣＮＡ２Ｄ２遺伝子のＳＮＰ（ｒｓ番号：ｒｓ２２３６９５７）のリスク多型をＡＡ型、及び、前記ＣＡＴ遺伝子のＳＮＰ（ｒｓ番号：ｒｓ７６９２１４）のリスク多型をＴＴ型及びＴＣ型とすることを含む、請求項１記載の高血圧発症に関するＳＮＰマーカーの使用方法。
【請求項３】
前記判定工程における判定が、前記リスク多型の数が増加するほど、高血圧発症のリスクが増加すると判定することを含む、請求項２記載の高血圧発症に関するＳＮＰマーカーの使用方法。
【請求項４】
請求項１から３のいずれかに記載の高血圧発症に関するＳＮＰマーカーの使用方法に使用するＳＮＰマーカーであって、ＲＧＳ２遺伝子におけるＡ／Ｇ多型ＳＮＰ（ｒｓ番号：ｒｓ３７６７４８９）、ＡＤＤ１遺伝子におけるＣ／Ａ多型ＳＮＰ（ｒｓ番号：ｒｓ４９６１）、ＣＡＣＮＡ２Ｄ２遺伝子におけるＡ／Ｇ多型ＳＮＰ（ｒｓ番号：ｒｓ２２３６９５７）、及び、ＣＡＴ遺伝子におけるＣ／Ｔ多型ＳＮＰ（ｒｓ番号：ｒｓ７６９２１４）からなる群から選択される少なくとも２つからなるＳＮＰマーカー。
【請求項５】
高血圧の発症リスクを検査するキットであって、ＲＧＳ２遺伝子におけるＡ／Ｇ多型ＳＮＰ（ｒｓ番号：ｒｓ３７６７４８９）、ＡＤＤ１遺伝子におけるＣ／Ａ多型ＳＮＰ（ｒｓ番号：ｒｓ４９６１）、ＣＡＣＮＡ２Ｄ２遺伝子におけるＡ／Ｇ多型ＳＮＰ（ｒｓ番号：ｒｓ２２３６９５７）、及び、ＣＡＴ遺伝子におけるＣ／Ｔ多型ＳＮＰ（ｒｓ番号：ｒｓ７６９２１４）からなる群から選択される少なくとも２つからなる高血圧発症に関するＳＮＰマーカーのＳＮＰｓをタイピングするためのポリヌクレオチド、プライマー、プローブ、及びＤＮＡマイクロアレイの少なくとも１つを含む、高血圧発症リスク検査キット。
【請求項６】
さらに、説明書を含み、前記説明書には、前記ＲＧＳ２遺伝子のＳＮＰ（ｒｓ番号：ｒｓ３７６７４８９）のリスク多型をＡＡ型、前記ＡＤＤ１遺伝子のＳＮＰ（ｒｓ番号：ｒｓ４９６１）のリスク多型をＡＡ型、前記ＣＡＣＮＡ２Ｄ２遺伝子のＳＮＰ（ｒｓ番号：ｒｓ２２３６９５７）のリスク多型をＡＡ型、及び、前記ＣＡＴ遺伝子のＳＮＰ（ｒｓ番号：ｒｓ７６９２１４）のリスク多型をＴＴ型及びＴＣ型とし、リスク多型の保有数の増加にともない高血圧発症のリスクが高まることが記載される、請求項５記載の高血圧発症リスク検査キット。
【請求項７】
高血圧発症に関する一塩基多型（ＳＮＰ）マーカーの使用方法であって、
前記高血圧発症に関するＳＮＰマーカーは、ＲＧＳ２遺伝子におけるＡ／Ｇ多型ＳＮＰ（ｒｓ番号：ｒｓ３７６７４８９）と連鎖不均衡を示すＳＮＰ、ＡＤＤ１遺伝子におけるＣ／Ａ多型ＳＮＰ（ｒｓ番号：ｒｓ４９６１）と連鎖不均衡を示すＳＮＰ、ＣＡＣＮＡ２Ｄ２遺伝子におけるＡ／Ｇ多型ＳＮＰ（ｒｓ番号：ｒｓ２２３６９５７）と連鎖不均衡を示すＳＮＰ、及び、ＣＡＴ遺伝子におけるＣ／Ｔ多型ＳＮＰ（ｒｓ番号：ｒｓ７６９２１４）と連鎖不均衡を示すＳＮＰからなる群から選択される少なくとも２つのＳＮＰｓからなり、
被検試料を準備する準備工程と、前記被検試料について前記少なくとも２つのＳＮＰｓをタイピングするタイピング工程と、前記タイピング工程の結果に基づき高血圧発症のリスクを判定する判定工程とを含む、高血圧発症に関するＳＮＰマーカーの使用方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、高血圧発症に関する一塩基多型（ＳＮＰ）マーカー及びその使用方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
高血圧は、脳心血管疾患（冠動脈疾患、脳卒中など）や慢性腎疾患等の主要な危険因子であるため、高血圧の予防は、社会的・公衆衛生的に重要な課題である。また、近年、メタボリックシンドロームなどといった生活習慣病が注目され、その予防や早期発見の重要性が叫ばれている。高血圧は多因子疾患であり、その発症には環境因子と遺伝因子との相
互作用が重要な役割を果たすと考えられている。高血圧の環境因子としては、例えば、加齢、肥満、ストレス、塩分過摂取等が挙げられる。一方、高血圧の遺伝因子（ＳＮＰｓ）としては、古典的高血圧感受性遺伝子の１５ＳＮＰｓ（特許文献１〜４）及び高血圧の遺伝子マーカーの３８ＳＮＰｓ（特許文献５及び非特許文献１）が知られている。
【０００３】
前記高血圧感受性遺伝子は、ＡＣＥ、ＡＤＤ１、ＡＤＲＢ２、ＡＤＲＢ３、ＡＧＴ、ＡＬＡＰ、ＡＬＤＨ２、ＢＤＫＲＢ２、ＣＡＴ、ＣＭＡ１、ＥＤＮ１、ＧＮＢ３、ＬＥＰＲ、及びＳＣＮＮ１Ａの各遺伝子を含む。また、前記高血圧の遺伝子マーカーのＳＮＰｓは、ＣＹＰ１７、ＥＸＯＳＣ３、ＡＣＣＮ１、ＫＣＮＭＢ４、ＫＣＮＩＰ２、ＡＴＰ２Ａ３、ＲＡＣ２、ＣＤ３ＥＡＰ、ＣＡＬＣＲ、ＡＴＰ１０Ｄ、ＧＮＡ１４、ＰＴＨＲ１、ＡＴＰ２Ｂ１、ＨＬＡ−ＤＭＢ、ＳＬＣ１３Ａ１、ＳＬＣ２Ａ１１、ＧＮＡＩ２、ＣＡＣＮＡ２Ｄ２、ＰＲＫＷＮＫ１、ＳＬＣ２２Ａ７、ＫＣＮＮ１、ＳＬＣ２１Ａ６、ＣＡＣＮＡ１Ｅ、ＳＬＣ２６Ａ８、ＥＲＣＣ１、ＤＬＧＡＰ２、ＣＯＬ４Ａ１、ＧＵＣＡ１Ｃ、ＡＴＰ１０Ｃ、ＨＣＮ４、ＰＴＰＲＴ、ＦＧＦ２、ＣＨＧＡ、ＰＰＰ１Ｒ１Ｂ、ＡＤＯＲＡ１、ＲＧＳ１９ＩＰ１、ＲＧＳ２０、及び、ＲＧＳ２の各遺伝子に存在することが知られている。
【特許文献１】特開２００４−２２２５０３号公報
【特許文献２】特開２００４−１１３０９４号公報
【特許文献３】特開２００４−３３０５１号公報
【特許文献４】特開２００４−２４１２５号公報
【特許文献５】特開２００７−１４３５０４号公報
【非特許文献１】Kohara K, Tabara Y, Nakura J, et al. Identification of hypertension-susceptibility genes and pathways by a systemic multiple candidate gene approach: The Millennium Genome Project for Hypertension. Hypertens Res 2008; 31: 203-212.
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
上述した従来の高血圧の遺伝因子は、主に、白衣効果などのバイアスを含む随時血圧を用いた横断研究に基づくものであった。例えば、前述の高血圧の遺伝子マーカー（特許文献５及び非特許文献１）は、随時血圧を用いた横断研究により高血圧の有病（罹患）の有無を検討した結果見出された有意差のある３８ＳＮＰｓに基づく。すなわち、前記３８ＳＮＰｓは、高血圧罹患者（ケース）群と正常血圧対照者（コントロール）群とで比較した場合に、対立遺伝子頻度、優性モデル、劣性モデル、および、遺伝子型頻度の少なくとも１つにおいて有意差があるものとして見出されたものである。
【０００５】
しかしながら、高血圧の発症予測という観点から予測性の高い高血圧発症に関するマーカーを得るためには、随時血圧よりも、白衣効果などのバイアスがなく再現性が良好な家庭血圧に基づくことが好ましい。また、高血圧の発症予測するためのマーカーという観点からは、正常血圧又は正常高値の人を対象とした縦断的な前向き研究に基づくことが好ましい。
【０００６】
そこで、本発明は、家庭血圧を用いた前向き研究に基づく高血圧発症に関するＳＮＰマーカー及びその使用方法を提供する。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明は一つの態様において、高血圧発症に関する一塩基多型（ＳＮＰ）マーカーの使用方法であって、前記高血圧発症に関するＳＮＰマーカーが、ＲＧＳ２遺伝子におけるＡ／Ｇ多型ＳＮＰ（ｒｓ番号：ｒｓ３７６７４８９）、ＡＤＤ１遺伝子におけるＣ／Ａ多型ＳＮＰ（ｒｓ番号：ｒｓ４９６１）、ＣＡＣＮＡ２Ｄ２遺伝子におけるＡ／Ｇ多型ＳＮＰ（ｒｓ番号：ｒｓ２２３６９５７）、及び、ＣＡＴ遺伝子におけるＣ／Ｔ多型ＳＮＰ（ｒｓ番号：ｒｓ７６９２１４）からなる群から選択される少なくとも２つのＳＮＰｓからなり、被検試料を準備する準備工程と、前記被検試料について前記少なくとも２つのＳＮＰｓをタイピングするタイピング工程と、前記タイピング工程の結果に基づき高血圧発症のリスクを判定する判定工程とを含む、高血圧発症に関するＳＮＰマーカーの使用方法である。ここで、「ｒｓ番号」とは、米国バイオテクノロジー情報センター（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ；ＮＣＢＩ）ＳＮＰデータベースのｒｓ番号をいう。
【０００８】
本発明はその他の態様において、「本発明の高血圧発症ＳＮＰマーカーの使用方法」に使用するためのＳＮＰマーカーであって、ＲＧＳ２遺伝子におけるＡ／Ｇ多型ＳＮＰ（ｒｓ番号：ｒｓ３７６７４８９）、ＡＤＤ１遺伝子におけるＣ／Ａ多型ＳＮＰ（ｒｓ番号：ｒｓ４９６１）、ＣＡＣＮＡ２Ｄ２遺伝子におけるＡ／Ｇ多型ＳＮＰ（ｒｓ番号：ｒｓ２２３６９５７）、及び、ＣＡＴ遺伝子におけるＣ／Ｔ多型ＳＮＰ（ｒｓ番号：ｒｓ７６９２１４）からなる群から選択される少なくとも２つからなる。
【０００９】
本発明はさらにその他の態様において、本発明の高血圧の発症リスクを検査するキットであって、ＲＧＳ２遺伝子におけるＡ／Ｇ多型ＳＮＰ（ｒｓ番号：ｒｓ３７６７４８９）、ＡＤＤ１遺伝子におけるＣ／Ａ多型ＳＮＰ（ｒｓ番号：ｒｓ４９６１）、ＣＡＣＮＡ２Ｄ２遺伝子におけるＡ／Ｇ多型ＳＮＰ（ｒｓ番号：ｒｓ２２３６９５７）、及び、ＣＡＴ遺伝子におけるＣ／Ｔ多型ＳＮＰ（ｒｓ番号：ｒｓ７６９２１４）からなる群から選択される少なくとも２つからなる高血圧発症に関するＳＮＰマーカーのＳＮＰｓをタイピングするためのポリヌクレオチド、プローブ、及びＤＮＡマイクロアレイの少なくとも１つを含む高血圧発症リスク検査キットである。
【発明の効果】
【００１０】
本発明によれば、例えば、高血圧発症のリスクをリスク多型の数に応じて予測することが可能となり、高血圧の発症予防や早期発見に貢献できる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１１】
［高血圧発症に関するＳＮＰマーカー］
本発明において、高血圧発症に関するＳＮＰマーカーとは、高血圧の発症に関する遺伝因子の目印（マーカー）となるＳＮＰ又はその組合せをいう。
【００１２】
本発明において、「高血圧」とは、循環系障害やその他の障害結果を誘発する恐れのあるレベルにまで全身の動脈圧が一過性に又は持続的に高まった状態をいい、その定義は特に限定されないが、例えば、家庭血圧において、収縮期血圧（ＳＢＰ）が１３５ｍｍＨｇ以上、拡張期血圧（ＤＢＰ）が８５ｍｍＨｇ以上の状態（降圧薬服用含む）をいう。また、本発明において、「高血圧」とは、好ましくは、本態性高血圧である。
【００１３】
一塩基多型（ＳＮＰ）とは、一般的には、遺伝子の塩基配列が一ヶ所だけ異なる状態及びその部位をいう。また、多型とは、一般的には、母集団中１％以上の頻度で存在する２以上の対立遺伝子（アレル）をいう。本発明において、「ＳＮＰ」は、好ましくは、公共データベースに登録されたＳＮＰであって、そのリファレンス番号から特定できるＳＮＰである。前記公共データベースとしては、例えば、ＮＣＢＩ（ＮＬＭ、ＮＩＨ）のＳＮＰデータベースや、ＩＭＳ−ＪＳＴ（東京大学、科学技術振興財団）のＪＳＮＰ（商標）データベース等が挙げられる。本発明におけるＳＮＰは、前記公共データベースのリファレンス番号であるｒｓ番号（ＮＣＢＩ  ＳＮＰデータベース）及びＩＭＳ−ＪＳＴ番号（ＪＳＮＰ（商標）データベース）により特定できる。
【００１４】
本発明の高血圧発症に関するＳＮＰマーカーは、下記の平均１２年に渡る長期前向きコホート研究に基づく。以下に、前記研究の概要を示す。
／対象／
ベースライン時では、現在の岩手県花巻市大迫町の一般地域住民（４０歳〜７９歳）の高血圧症でない（正常血圧・降圧薬非服用である）５７７名を対象とした。家庭血圧測定・遺伝子解析への同意を得た。平均測定間隔１２年後の追跡調査では、前記５７７名のうち、４０３名（平均年齢５６歳、男性割合２９％）が家庭血圧を再測定した。追跡調査時には、１５０名（３７％）が高血圧を発症していた。
／家庭血圧／
測定条件（朝）：起床後１時間以内、朝食前、排尿後、降圧薬服用前、２分間の安静後、座位にて測定。４週間に測定した各個人の平均値を家庭血圧とした。なお、ベースライン家庭血圧及び追跡調査家庭血圧における測定回数は、２２．７（８．４）及び２４．２（５．０）［平均（標準偏差）］であった。
家庭血圧装置：商品名：ＨＥＭ４０１Ｃ又はＨＥＭ７４７１Ｃ（Ｏｍｒｏｎ社製）
／高血圧の定義／
家庭血圧において、収縮期血圧（ＳＢＰ）が１３５ｍｍＨｇ以上、拡張期血圧（ＤＢＰ）が８５ｍｍＨｇ以上の状態（降圧薬服用含む）。
／遺伝子解析／
上述した古典的高血圧感受性遺伝子の１５ＳＮＰｓ及び高血圧の遺伝子マーカーの３８ＳＮＰｓの計５３ＳＮＰｓのうち５１ＳＮＰｓについてタイピングを行い解析した。タイピングは、ＴａｑＭａｎ（商標）プローブアッセイにて行った。
／データ収集と解析／
家庭血圧と同時に、喫煙状況、糖尿病・高脂血症・脳心血管疾患の既往歴、及び、降圧薬服用についての情報を得た。遺伝子型と高血圧との関連性は、ベースライン家庭血圧、年齢、性別、肥満（ＢＭＩ≧２５）、喫煙状況（現在喫煙、以前喫煙、又は、一切なし）、及び、糖尿病・高脂血症・脳心血管疾患の既往歴により補正した多重ロジスティック回帰分析により行った。
ＳＮＰと高血圧発症との関連性は、４つのモデル（マイナーアレル優性、マイナーアレル劣性、マイナーアレル付加、及び、マイナーアレル頻度モデル）を用いて検討し、各ＳＮＰについて、ロジスティック回帰モデルにおいて最も高血圧発症の尤度が高かったモデルを選択した。
変数は、適宜、分散分析（ＡＮＯＶＡ）、共分散分析（ＡＮＣＯＶＡ）及びカイ二乗検定を用いて行った。統計分析は、ＳＡＳソフトウエア、Ｖｅｒ．９．１（SAS Institute社製）を用いた。パラメトリックデータは、平均（標準偏差）で示した。Ｐ値が０．０５未満（Ｐ＜０．０５）を統計的に有意とした。
【００１５】
／ベースライン特性／
上記長期前向きコホート研究で得られたベースライン特性を下記表１に示す。下記表１において、最終的な正常血圧維持者と高血圧発症者との間の統計的有意性は、連続変数についてはｔ検定を用い、分類変数についてはカイ二乗検定を用いて比較した。下記表１からは、年齢、ＢＭＩ、ＳＢＰ、及びＤＢＰにおいて、高血圧発症者が有意に高かったことが示される。
【００１６】
【表１】
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【００１７】
／高血圧の発症と関連する４つのＳＮＰｓ／
上記長期前向きコホート研究の結果、交絡因子で補正した後においても有意かつ独立して高血圧の発症と関連する４つのＳＮＰｓが同定された。具体的には、ＲＧＳ２（regulator of G-protein signaling 2）遺伝子（ＮＭ＿００２９２３）近傍のＳＮＰ（ｒｓ番号：ｒｓ３７６７４８９、ＩＭＳ−ＪＳＴ番号：ＩＭＳ−ＪＳＴ１２２００１）、ＡＤＤ１（α-adducin 1）遺伝子（ＮＭ＿１７６８０１）のＳＮＰ（ｒｓ番号：ｒｓ４９６１、ＩＭＳ−ＪＳＴ番号：ＩＭＳ−ＪＳＴ０１０９６９）、ＣＡＣＮＡ２Ｄ２（calcium channel voltage-dependent, alpha2/delta subunit2）遺伝子（ＮＭ＿００６０３０）のＳＮＰ（ｒｓ番号：ｒｓ２２３６９５７、ＩＭＳ−ＪＳＴ番号：ＩＭＳ−ＪＳＴ０１７４４０）、及び、ＣＡＴ（catalase）遺伝子（ＮＭ＿００１７５２）のＳＮＰ（ｒｓ番号：ｒｓ７６９２１４、ＩＭＳ−ＪＳＴ番号：ＩＭＳ−ＪＳＴ０８１６７０）の４つである。なお、本発明において、「ｒｓ番号」及び「ＩＭＳ−ＪＳＴ番号」は、それぞれ、ＮＣＢＩ  ＳＮＰデータベース（ｄｂＳＮＰ  ＢＵＩＬＤ１２９）及びＪＳＮＰ（商標）データベースにおけるＳＮＰのリファレンス番号のことをいう。また、各遺伝子におけるＮＭ番号（ＮＭ＿○○○○○○）は、各遺伝子のｍＲＮＡ配列を特定するＮＣＢＩのヌクレオチドデータベースのアクセッション番号である。高血圧の発症と有意かつ独立に関連する４つのＳＮＰｓについての結果の詳細を下記２に示す。
【００１８】
【表２】
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【００１９】
上記表２は、ベースライン家庭血圧、年齢、性別、肥満（ＢＭＩ≧２５）、喫煙状況（現在喫煙、以前喫煙、又は、一切なし）、及び、糖尿病・高脂血症・脳心血管疾患の既往歴により補正した多重ロジスティック回帰分析の結果、独立して有意であった４つのＳＮＰｓを示す。また、上記表２において、Ｍａｊｏｒ及びｍｉｎｏｒはアレルの頻度を示し、ＮはＳＮＰのタイピングに成功した対象者の数を示し、「ＳｅｑＩＤ」は配列表の配列番号示す。前記配列表には、前記ＮＣＢＩ  ＳＮＰデータベースに登録されている前記ＳＮＰの多型部位及びその周辺の塩基配列（ＦＡＳＴＡ形式）が記載される。
【００２０】
上記表２に示すとおり、ＲＧＳ２のＡＡ型はＧＡ型及びＧＧ型と比較して１．８倍（Ｐ＝０．０１）、ＡＤＤ１のＡＡ型はＡＣ型及びＣＣ型と比較して１．９倍（Ｐ＝０．０２）、ＣＡＣＮＡ２Ｄ２のＡＡ型はそれ以外と比較して１．７倍（Ｐ＝０．０２）、ＣＡＴのＴＴ型及びＴＣ型はＣＣ型と比較して１．６倍（Ｐ＝０．０４）、高血圧発症リスクが高値だった。
【００２１】
ＲＧＳ２、ＡＤＤ１、ＣＡＣＮＡ２Ｄ２、ＣＡＴにおける遺伝子型の頻度を下記表３−１〜表３−４に示す。
【００２２】
【表３−１】
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【表３−２】
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【表３−３】
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【表３−４】
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【００２３】
上記表３−１〜３−４において、データは平均（標準偏差）又は対象者の割合（％）で示され、統計的有意は、ｔ検定、ＡＮＯＶＡ又はカイ二乗検定で判定した。ΔＢＰは、（追跡時家庭血圧−ベースライン家庭血圧）の値であり、「追跡時に治療中」は、追跡調査時に降圧薬治療をしていることを示し、「高血圧発症」の基準は上述した家庭血圧に基づくものである。Ｐ*は、３つのグループにおけるＡＮＯＶＡ又はカイ二乗検定のＰ値を示し、Ｐ†は、２つのグループ；ＧＧ＋ＧＡｖｓＡＡ（ＲＧＳ２、ＣＡＣＮＡ２Ｄ２）、ＣＣ＋ＣＡｖｓＡＡ（ＡＤＤ１）、ＴＴ＋ＴＣｖｓＣＣ（ＣＡＴ）におけるｔ検定又はカイ二乗検定のＰ値を示す。
【００２４】
上記表３−１〜３−４に示す各遺伝子型におけるアレルの遺伝子頻度は、ハーディー・ワインベルグの法則を満たしていた。また、それぞれのアレル頻度は（報告のないＣＡＴのＳＮＰを除き）、ＪＳＮＰ（商標）のータベースに報告されるアレル頻度と似ていた。また、ベースライン家庭血圧では遺伝子型で差異はなかったが、追跡調査では、ＲＧＳ２のＡＡ型、ＡＤＤ１のＡＡ型、ＣＡＣＮＡ２Ｄ２のＡＡ型、及び、ＣＡＴのＴＴ＋ＴＣ型において、家庭血圧が高くなっていた。同様に、高血圧の発症率も、これらの遺伝子型では他の遺伝子型よりも多かった。
【００２５】
／リスク多型の集積と高血圧発症リスク／
それぞれのＳＮＰにおいて高血圧発症リスクの高かったＲＧＳ２のＡＡ型、ＡＤＤ１のＡＡ型、ＣＡＣＮＡ２Ｄ２のＡＡ型、ＣＡＴのＴＴ及びＴＣ型をリスク多型とし、リスク多型の集積と高血圧発症との関連を検討したところ、これらのリスク多型の数が集積するほど血圧上昇度が有意に大きく（Ｐ＝０．０２／０．００９）、リスク多型の数が増加するごとに１．６倍、２．６倍、４．６倍、１６．２倍（Ｐ＝０．２、０．０１、０．００１、０．００６）と高血圧発症リスクが増大した。その結果を下記表４及び図１に示す。
【００２６】
【表４】
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【００２７】
上記表４において、データは平均（標準偏差）又は対象者の割合（％）で示され、統計的有意は、ｔ検定、ＡＮＯＶＡ又はカイ二乗検定で判定した。ΔＢＰは、（追跡時家庭血圧−ベースライン家庭血圧）の値であり、リスク多型の数は、ＲＧＳ２（ＡＡ＝１、ＧＡ ｏｒ ＧＧ＝０）、ＡＤＤ１（ＡＡ＝１、ＡＣ ｏｒ ＣＣ＝０）、ＣＡＣＮＡ２Ｄ２（ＡＡ＝１、ＧＡ ｏｒ ＧＧ＝０）及び、ＣＡＴ（ＴＣ ｏｒ ＴＴ＝１、ＣＣ＝０)の和で計算した。また、上記表４に示すとおり、リスク多型の数とΔＢＰ値との間には有意な関係があり（Ｐ＝０．０２／０．００１）、高血圧の発症率は、リスク多型の数が増加するとともに有意に増加した（Ｐ＝０．０２）。また、図１は、ベースライン家庭血圧、年齢、性別、肥満（ＢＭＩ≧２５）、喫煙状況（現在喫煙、以前喫煙、又は、一切なし）、及び、喫煙状況、糖尿病・高脂血症・脳心血管疾患の既往歴により補正した、リスク多型の数で規定される５つのグループの高血圧発症のリスクについてのオッズ比及び９５％信頼区間を示す。
【００２８】
すなわち、本発明は、一つの態様において、高血圧発症に関するＳＮＰマーカー（以下、「本発明のＳＮＰマーカー」ともいう）であって、ＲＧＳ２遺伝子近傍のＡ／Ｇ多型ＳＮＰ（ｒｓ番号：ｒｓ３７６７４８９、ＩＭＳ−ＪＳＴ番号：ＩＭＳ−ＪＳＴ１２２００１、本発明において「ＲＧＳ２におけるＳＮＰ」ともいう）、ＡＤＤ１遺伝子のＣ／Ａ多型ＳＮＰ（ｒｓ番号：ｒｓ４９６１、ＩＭＳ−ＪＳＴ番号：ＩＭＳ−ＪＳＴ０１０９６９、本発明において「ＡＤＤ１におけるＳＮＰ」ともいう）、ＣＡＣＮＡ２Ｄ２遺伝子のＡ／Ｇ多型ＳＮＰ（ｒｓ番号：ｒｓ２２３６９５７、ＩＭＳ−ＪＳＴ番号：ＩＭＳ−ＪＳＴ０１７４４０、本発明において「ＣＡＣＮＡ２Ｄ２におけるＳＮＰ」ともいう）、及び、ＣＡＴ遺伝子のＣ／Ｔ多型ＳＮＰ（ｒｓ番号：ｒｓ７６９２１４、ＩＭＳ−ＪＳＴ番号：ＩＭＳ−ＪＳＴ０８１６７０、本発明において「ＣＡＴにおけるＳＮＰ」ともいう）の４つのＳＮＰｓのうちの少なくとも２つからなる。
【００２９】
本発明のＳＮＰマーカーは、上述したとおり、家庭血圧を用いた追跡研究に基づくから、例えば、従来の随時血圧を用いた横断研究に基づく遺伝子マーカーに比べて高血圧発症の予測能が向上しているという効果を奏する。また、本発明のＳＮＰマーカーによれば、高血圧発症のリスクをリスク多型の数に応じて予測することが可能となり、高血圧の発症予防や早期発見に貢献できるという効果を奏する。とりわけ、本発明のＳＮＰマーカーは、例えば、現時点で４０歳〜７９歳で、正常血圧や正常高値の人が１２年間以内に高血圧になる可能性を予測する場合に、その予測性に極めて優れるという効果を奏する。
【００３０】
なお、家庭血圧と随時血圧との比較として、下記表５を参照できる。下記表５に示すとおり、家庭血圧には、白衣効果を排除できる点、再現性が高い点、測定頻度が高くなる点などの利点があるため、随時血圧に基づく場合よりも家庭血圧に基づく場合の方が高血圧発症の予測性が向上することとなる。
【００３１】
【表５】
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【００３２】
本発明のＳＮＰマーカーとなる２つのＳＮＰｓの組合せとしては、特に制限されず、ＲＧＳ２とＡＤＤ１とのＳＮＰｓの組合せ、ＲＧＳ２とＣＡＣＮＡ２Ｄ２とのＳＮＰｓの組合せ、ＲＧＳ２とＣＡＴとのＳＮＰｓの組合せ、ＡＤＤ１とＣＡＣＮＡ２Ｄ２とのＳＮＰｓの組合せ、ＡＤＤ１とＣＡＴとのＳＮＰｓの組合せ、ＣＡＣＮＡ２Ｄ２とＣＡＴとのＳＮＰｓの組合せが挙げられる。
【００３３】
本発明のＳＮＰマーカーは、高血圧発症の予測性を高める観点から、前記４つのＳＮＰｓのうち３つからなることが好ましく、前記４つのＳＮＰｓのすべてからなることがより好ましい。本発明のＳＮＰマーカーが３つのＳＮＰｓの組合せからなる場合、その組合せは特に制限されず、ＲＧＳ２とＡＤＤ１とＣＡＣＮＡ２Ｄ２とのＳＮＰｓの組合せ、ＲＧＳ２とＡＤＤ１とＣＡＴとのＳＮＰｓの組合せ、ＡＤＤ１とＣＡＣＮＡ２Ｄ２とＣＡＴとのＳＮＰｓの組合せ、ＲＧＳ２とＣＡＣＮＡ２Ｄ２とＣＡＴとのＳＮＰｓの組合せが挙げられる。
【００３４】
本発明のＳＮＰマーカーに含まれうる４つのＳＮＰｓそれぞれについてのリスク多型は、上記表２及び表３に基づき、高血圧発症の予測性向上の点から、前記ＲＧＳ２のＳＮＰについてはＡＡ型、前記ＡＤＤ１のＳＮＰについてはＡＡ型、前記ＣＡＣＮＡ２Ｄ２のＳＮＰについてはＡＡ型、及び、前記ＣＡＴのＳＮＰについてはＴＴ及びＴＣ型とすることが好ましい。
【００３５】
本発明のＳＮＰマーカーは、一実施形態において、後述する本発明の高血圧発症に関するＳＮＰマーカーの使用方法に使用するためのＳＮＰマーカーである。
【００３６】
なお、本発明は、その他の態様として、前記４つのＳＮＰｓの少なくとも１つからなる本発明の高血圧発症に関するＳＮＰマーカーであってもよい。上述したとおり、前記４つのＳＮＰｓは、家庭血圧に基づくものであり、いずれか１つのＳＮＰであっても従来よりも予測能が高い高血圧の発症の予測に使用できる。
【００３７】
［高血圧発症に関するＳＮＰマーカーの使用方法］
本発明は、その他の態様において、高血圧発症に関するＳＮＰマーカーの使用方法（以下、「本発明のＳＮＰマーカーの使用方法」ともいう）であって、前記高血圧発症に関するＳＮＰマーカーは、ＲＧＳ２遺伝子におけるＡ／Ｇ多型ＳＮＰ（ｒｓ番号：ｒｓ３７６７４８９）、ＡＤＤ１遺伝子におけるＣ／Ａ多型ＳＮＰ（ｒｓ番号：ｒｓ４９６１）、ＣＡＣＮＡ２Ｄ２遺伝子におけるＡ／Ｇ多型ＳＮＰ（ｒｓ番号：ｒｓ２２３６９５７）、及び、ＣＡＴ遺伝子におけるＣ／Ｔ多型ＳＮＰ（ｒｓ番号：ｒｓ７６９２１４）のうちの少なくとも２つのＳＮＰｓからなり、被検試料を準備する準備工程と、前記被検試料について前記少なくとも２つのＳＮＰｓをタイピングするタイピング工程と、前記タイピング工程の結果に基づき高血圧発症のリスクを判定する判定工程とを含む高血圧発症に関するＳＮＰマーカーの使用方法である。
【００３８】
本発明のＳＮＰマーカーの使用方法は、上述したとおり、家庭血圧を用いた追跡研究に基づく本発明のＳＮＰマーカーを使用するから、例えば、従来の随時血圧を用いた横断研究に基づく遺伝子マーカー等を用いた場合よりも、高血圧発症の予測能がより向上した判定が行えるという効果を奏する。また、本発明のＳＮＰマーカーの使用方法によれば、高血圧発症のリスクをリスク多型の数に応じて判定することが可能となり、高血圧の発症予防や早期発見に貢献できるという効果を奏する。とりわけ、本発明のＳＮＰマーカーの使用方法は、例えば、現時点で４０歳〜７９歳で、正常血圧や正常高値の人が１２年間以内に高血圧になる可能性を予測する場合に、その予測性に極めて優れるという効果を奏する。
【００３９】
本発明のＳＮＰマーカーの使用方法における前記高血圧発症に関するＳＮＰマーカーは、上述した本発明のＳＮＰマーカーを使用できる。
【００４０】
本発明のＳＮＰマーカーの使用方法では、まず、前記準備工程において、被検試料を準備する。前記被検試料としては、ヒトの核酸若しくはゲノムＤＮＡを含むもの又は核酸若しくはゲノムＤＮＡであって、例えば、血液や体液等の生体試料や、そこから調製された核酸やゲノムＤＮＡ等が挙げられる。生体試料の採取方法、採取部位等は、特に制限されず、また、核酸やゲノムＤＮＡの調製方法も従来公知の方法を適用でき、特に制限されない。なお、前記被検試料は、ヒトから得られたものであることが好ましい。前記ヒトとしては特に限定されないが、例えば、日本人などが挙げられる。
【００４１】
次に、前記タイピング工程において、本発明のＳＮＰマーカーである少なくとも２つのＳＮＰｓをタイピングする。本発明において「ＳＮＰのタイピング」とは、ゲノム上の位置が明らかとなっている前記ＳＮＰの多型部位がどの塩基であるかを同定することであって、例えば、ＡとＧとから構成されるＳＮＰを対立遺伝子で見た場合、その被検試料の被検者の遺伝子型が、ＡＡ、ＡＧ、ＧＧのいずれであるかを同定することをいう。ＳＮＰのタイピング方法は、特に制限されず、従来公知の方法により行うことができる。ＳＮＰタイピング方法としては、例えば、プライマー伸張法と蛍光法とを組み合わせた方法（ＴＤＩアッセイ、ＤＯＬアッセイ、基板上で行うプライマーアレイ単一塩基伸張法、Ｌｕｍｉｎｅｘアッセイなど）、リアルタイムＰＣＲと蛍光法とを組み合わせた方法（例えば、ＴａｑＭａｎ（商標）ＰＣＲ法など）、ＰＣＲを用いない蛍光法（Ｉｎｖａｄｅｒ（商標）アッセイなど）、プライマー伸張法とマススペクトルとを組み合わせた方法（ＰＩＮＰＯＩＮＴ法、ＰＲＯＢＥ法、ＶＥＳＴ法、Ｓｕｒｖｉｖｏｒアッセイ、ＧＯＯＤ法など）、ＰＣＲとマススペクトルとを組み合わせた方法（ｈＭＣ反応法など）が挙げられる。ＳＮＰタイピングは、当業者であれば、配列表の配列番号１〜４の塩基配列などを参照し、上記の公知の方法により適宜ＳＮＰタイピングできる。
【００４２】
前記タイピング工程において、タイピングするＳＮＰｓの数は、高血圧発症の予測性を高める観点から、前記４つのＳＮＰｓのうち３つからなることが好ましく、前記４つのＳＮＰｓからなることがより好ましい。使用するＳＮＰｓの数が２又は３のときのＳＮＰｓの組合せについては上述のとおりである。
【００４３】
そして、前記判定工程において、前記タイピング工程の結果に基づき高血圧発症のリスクを判定する。前記判定工程における判定は、上記表２及び表３に基づき、高血圧発症の予測性向上の点から、前記ＲＧＳ２のＳＮＰのリスク多型をＡＡ型、前記ＡＤＤ１のＳＮＰのリスク多型をＡＡ型、前記ＣＡＣＮＡ２Ｄ２のＳＮＰのリスク多型をＡＡ型、及び、前記ＣＡＴのＳＮＰのリスク多型をＴＴ及びＴＣ型とすることを含むことが好ましい。そして、前記判定工程における判定は、上記表４に基づき、高血圧発症のさらなる予測性向上の点から、前記リスク多型の数が増加するほど、高血圧発症のリスクが増加すると判定することを含むことが好ましい。また、前記判定は、肥満（ＢＭＩ≧２５）、喫煙状況、及び、糖尿病・高脂血症・脳心血管疾患の既往歴などの情報を考慮して行ってもよい。さらに、前記判定工程は、判定した結果を、紙、磁気記録媒体などに記録する工程を伴ってもよい。
【００４４】
前記判定としては、例えば、リスク多型が１個だった場合には、高血圧の発症リスクが、リスク多型が０個の場合よりも「約１．６倍」高まる、あるいは、「やや高い」と判定してもよい。また、リスク多型が２個だった場合には、高血圧の発症リスクが、リスク多型が０個の場合よりも「約２．６倍」高まる、あるいは、「高い」と判定してもよい。また、リスク多型が３個だった場合には、高血圧の発症リスクが、リスク多型が０個の場合よりも「約４．７倍」高まる、あるいは、「より高い」と判定してもよい。そして、リスク多型が４個だった場合には、高血圧の発症リスクが、リスク多型が０個の場合よりも「約１６．９倍」高まる、あるいは、「非常に高い」と判定してもよい。高血圧発症リスクの高さの指標の段階は、本発明のＳＮＰマーカーに含まれるＳＮＰｓの数に応じて設定でき、例えば、リスク多型が０個の場合を含めて３〜５段階に設定できる。なお、上記の「やや高い」「高い」「より高い」「非常に高い」は、リスクの高さを示す４段階の指標の例示である。高血圧発症リスクの指標は、例えば、リスクの高い順すなわちリスク多型が多い順（又は低い順すなわちリスク多型が少ない順）に「Ａ」「Ｂ」「Ｃ」「Ｄ」「Ｅ」という表示であってもよい。
【００４５】
なお、本発明は、その他の態様として、前記４つのＳＮＰｓのうち少なくとも１つのＳＮＰからなる高血圧発症に関するＳＮＰマーカーの使用方法であってもよい。上述したとおり、前記４つのＳＮＰｓは、家庭血圧に基づくものであり、いずれか１つのＳＮＰであっても従来よりも予測能が高い高血圧の発症の予測に使用できる。
【００４６】
［高血圧発症リスク検査キット］
本発明は、さらにその他の態様として、高血圧の発症リスクを検査するキット（以下、「本発明のキット」ともいう）であって、ＲＧＳ２遺伝子におけるＡ／Ｇ多型ＳＮＰ（ｒｓ番号：ｒｓ３７６７４８９）、ＡＤＤ１遺伝子におけるＣ／Ａ多型ＳＮＰ（ｒｓ番号：ｒｓ４９６１）、ＣＡＣＮＡ２Ｄ２遺伝子におけるＡ／Ｇ多型ＳＮＰ（ｒｓ番号：ｒｓ２２３６９５７）、及び、ＣＡＴ遺伝子におけるＣ／Ｔ多型ＳＮＰ（ｒｓ番号：ｒｓ７６９２１４）のうちの少なくとも２つからなる高血圧発症に関するＳＮＰマーカーのＳＮＰｓをタイピングするためのポリヌクレオチド、プライマー、プローブ、及びＤＮＡマイクロアレイの少なくとも１つを含む、高血圧発症リスク検査キットである。
【００４７】
ＳＮＰｓをタイピングするためのポリヌクレオチド、プライマー、プローブ及びＤＮＡマイクロアレイとしては、上述した従来公知のＳＮＰタイピング方法に適したものが挙げられる。当業者であれば、配列表の配列番号１〜４の塩基配列を参照し、上記の公知の方法により適宜必要なポリヌクレオチド、プライマー、プローブ及びＤＮＡマイクロアレイの少なくとも１つを準備できる。なお、タイピングするＳＮＰｓの数は、高血圧発症の予測性を高める観点から、前記４つのＳＮＰｓのうち３つからなることが好ましく、前記４つのＳＮＰｓからなることがより好ましい。使用するＳＮＰｓの数が２又は３のときのＳＮＰｓの組合せについては上述のとおりである。本発明のキットは、ＳＮＰタイピング方法に応じて、適宜、試薬等を含むことが好ましい。
【００４８】
本発明のキットは、さらに、説明書を含んでもよく、前記説明書には、前記ＲＧＳ２のＳＮＰのリスク多型をＡＡ型、前記ＡＤＤ１のＳＮＰのリスク多型をＡＡ型、前記ＣＡＣＮＡ２Ｄ２のＳＮＰのリスク多型をＡＡ型、及び、前記ＣＡＴのＳＮＰのリスク多型をＴＴ及びＴＣ型とすること、及び又は、リスク多型の保有数の増加にともない高血圧発症のリスクが高まることが記載されることが好ましい。
【００４９】
本発明のキットの好ましい一実施形態は、本発明のＳＮＰマーカーの使用方法に使用するためのキットである。
【００５０】
なお、本発明は、その他の態様として、前記４つのＳＮＰｓの少なくとも１つからなる高血圧発症に関するＳＮＰマーカーをタイピングするためのポリヌクレオチド、プライマー、プローブ、及びＤＮＡマイクロアレイの少なくとも１つを含む高血圧発症リスク検査キットである。上述したとおり、前記４つのＳＮＰｓは、家庭血圧に基づくものであり、いずれか１つのＳＮＰであっても従来よりも予測能が高い高血圧の発症の予測に使用できる。
【００５１】
［連鎖不均衡ＳＮＰ］
本発明は、さらにその他の態様として、本発明のＳＮＰマーカーに含まれうる上記４つのＳＮＰｓとそれぞれ連鎖不均衡を示すＳＮＰｓを、前記４つのＳＮＰｓに換えて使用した、高血圧発症に関するＳＮＰマーカーの使用方法に関する。すなわち、本発明は、高血圧発症に関するＳＮＰマーカーの使用方法であって、前記高血圧発症に関するＳＮＰマーカーが、ＲＧＳ２遺伝子におけるＡ／Ｇ多型ＳＮＰ（ｒｓ番号：ｒｓ３７６７４８９）と連鎖不均衡を示すＳＮＰ、ＡＤＤ１遺伝子におけるＣ／Ａ多型ＳＮＰ（ｒｓ番号：ｒｓ４９６１）と連鎖不均衡を示すＳＮＰ、ＣＡＣＮＡ２Ｄ２遺伝子におけるＡ／Ｇ多型ＳＮＰ（ｒｓ番号：ｒｓ２２３６９５７）と連鎖不均衡を示すＳＮＰ、及び、ＣＡＴ遺伝子におけるＣ／Ｔ多型ＳＮＰ（ｒｓ番号：ｒｓ７６９２１４）と連鎖不均衡を示すＳＮＰのうちの少なくとも２つのＳＮＰｓからなり、被検試料を準備する準備工程と、前記被検試料について前記少なくとも２つのＳＮＰｓをタイピングするタイピング工程と、前記タイピング工程の結果に基づき高血圧発症のリスクを判定する判定工程とを含む、高血圧発症に関するＳＮＰマーカーの使用方法にも関する。当業者であれば、ＲＧＳ２、ＡＤＤ１、ＣＡＣＮＡ２Ｄ２及びＣＡＴのそれぞれのＳＮＰと連鎖不均衡を示すＳＮＰを選択することは適宜可能である。この態様の本発明の詳細は、ＳＮＰが連鎖不均衡ＳＮＰであること以外は、上述した本発明のＳＮＰマーカーの使用方法と同様である。
【００５２】
［予防・診断方法］
本発明は、さらにその他の態様において、高血圧発症リスク診断方法及び高血圧の予防方法であって、本発明のＳＮＰマーカーの使用方法により対象の高血圧発症リスクを判定することを含む診断及び予防方法に関する。本発明によりもたらされる高血圧発症リスク情報により、高血圧の早期発見及び発症予防が可能となる。
【産業上の利用可能性】
【００５３】
以上、説明したとおり、本発明は、例えば、高血圧の予防・診断を含む、医療・公衆衛生・健康管理の分野で有用である。
【図面の簡単な説明】
【００５４】
【図１】図１は、高血圧の発症リスクが、リスク多型の数にしたがって増加することを示すグラフの一例である。
【図１】
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【配列表】
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