(57)【要約】【課題】生体物質検出装置を小型に構成できるようにする。【解決手段】生体物質検出装置１０は、本体部２内を貫通する流路２Ｎに対象物質ＴＢを捕捉・抽出する捕捉部３を設けた捕捉チップ１を用い、当該流路２Ｎ内に試料液ＱＳを通液して捕捉部３により対象物質ＴＢを捕捉し、光源１１から出射された測定光Ｌ１を捕捉部３に照射し、これに応じて捕捉部３から得られる検出光Ｌ２の光強度を検出部１４により検出することにより、捕捉チップ１の捕捉部３に捕捉した対象物質ＴＢをそのまま用いて検出作業を行うことができる。【選択図】図２
2010185705.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
所定材料でなる本体部と、
上記本体部の一側面でなり略平面状に形成された第１側面と、
上記本体部内を上記第１側面と略平行に貫通する流路と、
上記流路中に設けられ、所定の溶媒中に含まれる所定の生体物質を捕捉する捕捉部と
を有する生体物質捕捉器。
【請求項２】
上記第１側面は、
上記捕捉部の上記生体物質から得られる検出光を集光し、当該第１側面に対し略垂直な方向へ進行させる第１レンズ部が形成されている
請求項１に記載の生体物質捕捉器。
【請求項３】
上記本体部は、
上記捕捉部を挟んで上記第１側面の反対側に、上記第１側面と略平行な略平面状の第２側面が形成されている
請求項１に記載の生体物質捕捉器。
【請求項４】
上記第２側面は、
当該第２側面に入射される所定の測定光を上記捕捉部に集光する第２レンズ部が形成され、
上記第１側面は、
上記測定光の照射に応じて上記捕捉部の生体物質から得られる検出光を集光し、当該第１側面に対し略垂直な方向へ進行させる第１レンズ部が形成されている
請求項３に記載の生体物質捕捉器。
【請求項５】
上記本体部は、
透明な材料でなる
請求項１に記載の生体物質捕捉器。
【請求項６】
上記本体部は、
上記所定材料が一体成形されることにより上記流路が形成されている
請求項１に記載の生体物質捕捉器。
【請求項７】
上記流路は
長さが１［ｍｍ］以上１００［ｍｍ］以下である
請求項１に記載の生体物質捕捉器。
【請求項８】
所定材料でなる本体部と、
上記本体部の一側面でなり略平面状に形成された第１側面と、
上記本体部内を上記第１側面と略平行に貫通する流路と、
上記流路中に設けられ、所定の溶媒中に含まれる所定の生体物質を捕捉する捕捉部と
を有する生体物質捕捉器と、
上記生体物質を捕捉した上記捕捉部から上記第１側面を介して得られる検出光の強度を検出し、その検出結果に応じた検出信号を生成する検出部と
を有する生体物質検出装置。
【請求項９】
測定光を出射する光源部
をさらに有し、
上記生体物質捕捉器の上記第１側面は、
上記測定光を上記捕捉部に集光すると共に、上記捕捉部の生体物質から得られる検出光を集光し、当該第１側面に対し略垂直な方向へ進行させる第１レンズ部が形成されている
請求項８に記載の生体物質検出装置。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は生体物質捕捉器及び生体物質検出装置に関し、例えば特定の生体物質を検出する生体物質検出装置に適用して好適なものである。
【背景技術】
【０００２】
近年、バイオテクノロジー分野における研究・開発が盛んに行われており、これに伴って生体サンプルに含まれる特定の生体物質、例えばＤＮＡ(Deoxyribonucleic Acid)、ＲＮＡ(Ribonucleic Acid)或いは蛋白質等を検出する生体物質検出装置が提案されている。
【０００３】
かかる生体物質検出装置の一つとして、所定の検体に反応するプローブが固相化されてなる微粒子を捕捉する捕捉部材を設け、当該捕捉部材が当該微粒子を捕捉した状態を撮像して、画像解析により所望の検体を測定するものが提案されている（例えば、特許文献１参照）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開２００４−３５４１６４公報（第１図）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
しかしながら、かかる構成の生体物質検出装置では、捕捉部材が当該微粒子を捕捉した状態を撮像して画像解析するため、どうしても装置構成が複雑となり、これに伴い装置全体が大型化してしまうという問題があった。
【０００６】
本発明は以上の点を考慮してなされたもので、検出装置を小型に構成できる生体物質捕捉器及び小型に構成できる生体物質検出装置を提案しようとするものである。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
かかる課題を解決するため本発明の生体物質捕捉器においては、所定材料でなる本体部と、本体部の一側面でなり略平面状に形成された第１側面と、本体部内を第１側面と略平行に貫通する流路と、流路中に設けられ、所定の溶媒中に含まれる所定の生体物質を捕捉する捕捉部とを設けるようにした。
【０００８】
これにより本発明の生体物質捕捉器は、捕捉部により所望の生体物質を捕捉でき、且つ当該生体物質を捕捉した捕捉部から得られる検出光を、本体部の第１側面を介して所定の生体物質検出装置により検出させることができる。
【０００９】
また本発明の生体物質検出装置においては、所定材料でなる本体部と、本体部の一側面でなり略平面状に形成された第１側面と、本体部内を第１側面と略平行に貫通する流路と、流路中に設けられ、所定の溶媒中に含まれる所定の生体物質を捕捉する捕捉部とを有する生体物質捕捉器と、生体物質を捕捉した捕捉部から第１側面を介して得られる検出光の強度を検出し、その検出結果に応じた検出信号を生成する検出部とを設けるようにした。
【００１０】
これにより本発明の生体物質検出装置は、生体物質捕捉器の捕捉部により所望の生体物質を捕捉させることができ、且つ当該生体物質を捕捉した捕捉部に捕捉したから得られる検出光を、第１側面を介して出射させることができ、検出部によりその光強度を検出することができる。
【発明の効果】
【００１１】
本発明によれば、捕捉部により所望の生体物質を捕捉でき、且つ当該捕捉部に捕捉した生体物質から得られる検出光を、本体部の第１側面を介して所定の生体物質検出装置により検出させることができ、かくして検出装置を小型に構成できる生体物質捕捉器を実現できる。
【００１２】
また本発明によれば、生体物質捕捉器の捕捉部により所望の生体物質を捕捉させることができ、且つ当該捕捉部に捕捉した生体物質から得られる検出光を、第１側面を介して出射させることができ、検出部によりその光強度を検出することができる。かくして本発明は、小型に構成できる生体物質検出装置を実現できる。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】第１の実施の形態による捕捉チップの構成を示す略線的斜視図である。
【図２】第１の実施の形態による生体物質検出装置の全体構成を示す略線図である。
【図３】特定のｍＲＮＡの検出結果を示す略線図である。
【図４】第２の実施の形態による捕捉チップの構成を示す略線図である。
【図５】第２の実施の形態による生体物質検出装置の全体構成を示す略線図である。
【図６】第３の実施の形態による捕捉チップの構成を示す略線図である。
【図７】第３の実施の形態による生体物質検出装置の全体構成を示す略線図である。
【図８】他の実施の形態による捕捉チップの構成を示す略線図である。
【図９】他の実施の形態による捕捉チップ及び生体物質検出装置の全体構成を示す略線図である。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
以下、発明を実施するための形態（以下実施の形態とする）について、図面を用いて説明する。なお、説明は以下の順序で行う。
１．第１の実施の形態（捕捉チップの側面を平面状に構成した例）
２．第２の実施の形態（捕捉チップの１側面にレンズを形成した例）
３．第３の実施の形態（捕捉チップの２側面にレンズを形成した例）
４．他の実施の形態
【００１５】
＜１．第１の実施の形態＞
［１−１．捕捉チップの構成］
第１の実施の形態において、捕捉チップ１は、図１に示すように、全体として略直方体状に形成された本体部２を中心に構成されている。
【００１６】
本体部２の側面２Ａ及び２Ｂは、当該本体部２における長手方向の両端面となっており、それぞれ略平面状に形成されている。また本体部２の側面２Ｃ及び２Ｄは、それぞれほぼ平面状に形成されると共に、互いにほぼ平行となっている。
【００１７】
以下、説明の都合上、側面２Ａ及び２Ｂを結ぶ方向（すなわち長手方向）をｘ方向、側面２Ｃ及び側面２Ｄを結ぶ方向（図１における上下方向）をｙ方向、ｘ方向及びｙ方向のいずれにも直交する方向をｚ方向とそれぞれ定義する。
【００１８】
捕捉チップ１は、比較的小型に形成されており、例えば本体部２におけるｙ方向及びｚ方向の長さが５００［μｍ］、ｘ方向の長さが６０［ｍｍ］となっている。
【００１９】
また本体部２には、ｘ方向に沿って、当該本体部２内を内部を貫通するように孔状の流路２Ｎが形成されている。流路２Ｎは、側面２Ａから２Ｂに渡るように、側面２Ｃ及び２Ｄとほぼ平行に形成されており、またその断面が、ｙ方向を短径としｚ方向を長径とする楕円状に構成されている。
【００２０】
この流路２Ｎは、側面２Ａの孔部２ＡＨ及び側面２Ｂの孔部２ＢＨにそれぞれ所定の流入管及び排出管が接続された上で、捕捉対象となる特定の生体物質（以下これを対象物質ＴＢと呼ぶ）を含む試料液ＱＳ等が流されるようになされている。
【００２１】
また本体部２は、透明な樹脂材料でなり、流路２Ｎと共に一体成形されるようになされている。これにより本体部２は、側面２Ｃ及び２Ｄを通る光を効率よく流路２Ｎ内に到達させることができる。
【００２２】
さらに捕捉チップ１は、流路２Ｎにおけるｙ方向のほぼ中央部分に、特定のＤＮＡ、ＲＮＡ或いは蛋白質等を捕捉する（すなわち抽出する）担体でなる捕捉部３が設けられている。
【００２３】
捕捉部３は、例えばポリスチレン等でなり微小な球状に形成されたプラスチックビーズ３Ｂが所定量充填され、流路２Ｎ内に固定されている。このプラスチックビーズ３Ｂは、対象物質ＴＢを捕捉する所定の物質が表面に結合されている。
【００２４】
このため捕捉部３は、流路２Ｎに対象物質ＴＢを含む試料液ＱＳ等が通液された場合、プラスチックビーズ３Ｂの表面に結合された物質の作用により、当該試料液ＱＳに含まれる対象物質ＴＢを捕捉することができる。また捕捉チップ１は、捕捉部３に対象物質ＴＢを捕捉した状態を維持できる。
【００２５】
このように捕捉チップ１は、流路２Ｎに試料液ＱＳ等が流されると、対象物質ＴＢに応じた物質を有する捕捉部３により、当該試料液ＱＳ中に含まれる対象物質ＴＢを捕捉するようになされている。
【００２６】
［１−２．生体物質検出装置の構成］
図２に示すように、第１の実施の形態における生体物質検出装置１０は、捕捉チップ１（図１）を用いて対象物質ＴＢを捕捉した上で、当該対象物質ＴＢを検出するようになされている。
【００２７】
すなわち捕捉チップ１は、図示しない固定部材等により所定の取付位置に固定されると共に、供給管１７及び排出管１８がそれぞれ孔部２ＡＨ及び２ＢＨに接続される。
【００２８】
この状態で試料液ＱＳが供給管１７から供給され排出管１８から排出される、いわゆる通液が行われると、捕捉チップ１は、捕捉部３により対象物質ＴＢを捕捉し、その状態を保持する。
【００２９】
また捕捉チップ１の捕捉部３は、対象物質ＴＢと作用して標識となる物質（いわゆるプローブ）を含むプローブ液ＱＰが通液されると、捕捉した対象物質ＴＢにプローブが作用し、当該プローブを間接的に捕捉する。すなわち捕捉部３には、捕捉した対象物質ＴＢの量に応じた量のプローブが間接的に捕捉される。
【００３０】
一方、光源１１は、所定波長でなる測定光Ｌ１を出射し、ビームスプリッタ１２へ入射させる。ビームスプリッタ１２は、反射面１２Ｓにおいて測定光Ｌ１を所定の透過率で透過させ、対物レンズ１３へ入射させる。
【００３１】
対物レンズ１３は、測定光Ｌ１を捕捉部３に集光し、当該捕捉部３内に焦点を形成する。これに応じて捕捉部３の対象物質ＴＢ又は当該対象物質ＴＢに作用したプローブは、測定光Ｌ１を反射し、或いは当該測定光Ｌ１に応じて検出光Ｌ２を発生等させる（詳しくは後述する）。
【００３２】
この検出光Ｌ２は、測定光Ｌ１の光強度や捕捉部３に捕捉されている対象物質ＴＢ（又はプローブ）の量に応じた光強度となる。検出光Ｌ２は、発散光として対物レンズ１３へ入射し、当該対物レンズ１３により平行光に変換され、ビームスプリッタ１２へ入射する。
【００３３】
ビームスプリッタ１２は、検出光Ｌ２を反射面１２Ｓにおいて所定の反射率で反射させ、検出部１４へ照射する。
【００３４】
検出部１４は、例えばフォトディテクタ等でなり、検出光Ｌ２を受光すると共にその光強度に応じた検出信号Ｓを生成し、これを図示しない信号処理部へ送出する。このとき生成された検出信号Ｓは、測定光Ｌ１の光強度が一定であれば、捕捉部３に捕捉されている対象物質ＴＢ（又は当該対象物質ＴＢに作用したプローブ）の量に応じた信号レベルとなる。
【００３５】
これに応じて信号処理部は、当該検出信号Ｓを検出値に変換するなどした上で、当該検出値を所定の表示部に数値、グラフや波形等として表示し、或いは所定の外部機器（図示せず）へ送信する。
【００３６】
このように生体物質検出装置１０は、捕捉チップ１の流路２Ｎに試料液ＱＳを通液した後、捕捉部３に測定光Ｌ１を照射し、これに応じて発生する検出光Ｌ２の光強度に応じた検出信号Ｓを生成することにより、対象物質ＴＢの量を検出するようになされている。
【００３７】
［１−３．生体物質検出装置による対象物質の検出例］
以下では、特定のｍＲＮＡ（messenger RNA）を対象物質ＴＢとし、培養細胞より抽出した全てのＲＮＡから生体物質検出装置１０を用いて対象物質ＴＢを検出した場合について説明する。
【００３８】
まず捕捉チップ１について説明する。捕捉部３を構成するプラスチックビーズ３Ｂとしては、その表面に、ビオチン−ストレプトアビジン結合によりポリ（ｄＴ）配列を結合したものを用いることができる。
【００３９】
具体的には、まず粒径６［μｍ］のプラスチックビーズ３Ｂと、ポリデオキシヌクレオチドとして５’末端をビオチン修飾した５０塩基のポリ（ｄＴ）配列の一本鎖ＤＮＡ（ｓｓＤＮＡ）を用意した。次に、プラスチックビーズ３Ｂとポリ（ｄＴ）配列を持つ一本鎖ＤＮＡとを純水中で懸濁し、当該プラスチックビーズ３Ｂの表面にポリ（ｄＴ）配列を結合させた。これにより対象物質ＴＢを捕捉し得るプラスチックビーズ３Ｂが生成された。
【００４０】
次に、流路２Ｎに未だ捕捉部３が設けられていない、いわば「空の」本体部２に対し、供給管１７からプラスチックビーズ３Ｂを充填することにより、捕捉部３（すなわちハイブリッド形成のための担体充填部、いわゆるベッド）が形成された。
【００４１】
因みに、捕捉部３のｘ方向における長さは約４０［ｍｍ］であった。また、流路２Ｎに純水を通液することにより、捕捉部３内の結合していないポリ（ｄＴ）配列は洗い流した。
【００４２】
続いて、コンディショニング液として、２［ｍｌ］の０．２％ＳＤＳ（ドデシル硫酸ナトリウム）含有０．３Ｍ塩化ナトリウム水溶液を用意し、これを流路２Ｎに流した。この水溶液はハイブリッド形成条件となっており、捕捉部３を調整するコンディショニング液や非特異的に吸着したＤＮＡやＲＮＡ等を洗浄するための洗浄液としても用いた。
【００４３】
このようにして、対象物質ＴＢである特定のｍＲＮＡを捕捉し得る捕捉チップ１を作成した。
【００４４】
次に、この捕捉チップ１を用いて、培養細胞より抽出した全ＲＮＡからｍＲＮＡを検出することを試みた。具体的には、培養したＨｅＬａ細胞から全ＲＮＡ抽出キット（RNeasy protect mini kit、Qiagen）を用いて抽出した５［μｇ］の全ＲＮＡを、３５０［μｌ］の０．２％ＳＤＳ含有０．３Ｍ塩化ナトリウム水溶液に溶解し、試料液ＱＳとして調製した。
【００４５】
また対象物質ＴＢとしてのｍＲＮＡは、β−アクチン（ＡＣＴＢ）及びグリセロアルデヒド−３−リン酸脱水素酵素（ＧＡＰＤ）の各々のｍＲＮＡとした。
【００４６】
ＡＣＴＢとＧＡＰＤのｍＲＮＡの検出用のプローブとしては、各ｍＲＮＡのポリ（Ａ）テールの近傍の配列から２１塩基の長さの配列を選択し、その配列に相補的で５’末端をＣｙ３標識したｓｓＤＮＡ（塩基数２１）を用意した。各々のｓｓＤＮＡを濃度５μＭになる様に０．２［％］ＳＤＳ含有０．３Ｍ塩化ナトリウム水溶液に溶解することにより、ＡＣＴＢとＧＡＰＤのｍＲＮＡ用のプローブ液ＱＰとした。
【００４７】
このように調製した試料液ＱＳを捕捉チップ１の流路２Ｎに通液し、その後７００［μｌ］の０．２％ＳＤＳ含有０．３Ｍ塩化ナトリウム水溶液で洗浄した。次に、ＡＣＴＢ又はＧＡＰＤのプローブ液ＱＰを捕捉チップ１の流路２Ｎに通液し、２［ｍｌ］の０．２％ＳＤＳ含有０．３Ｍ塩化ナトリウム水溶液で洗浄した。
【００４８】
このとき、捕捉チップ１への試料液ＱＳの通液・洗浄後及びプローブ液ＱＰの通液・洗浄後における、生体物質検出装置１０による検出信号Ｓの値、すなわち捕捉部３の蛍光による光強度（蛍光強度）をそれぞれ測定した。
【００４９】
この結果、図３に示すように、ＡＣＴＢ又はＧＡＰＤのいずれのｍＲＮＡプローブを用いた場合でも、蛍光強度は増加した。
【００５０】
これは、プラスチックビーズ３Ｂのポリ（ｄＴ）配列と全ＲＮＡ中のｍＲＮＡのポリ（Ａ）テールがハイブリッドを形成することにより、ｍＲＮＡがプラスチックビーズ３Ｂ上に捕獲されたことを示している。さらに、ＡＣＴＢ又はＧＡＰＤにおけるｍＲＮＡ検出用の特異プローブが、捕捉された様々なｍＲＮＡの中に存在するＡＣＴＢまたはＧＡＰＤのｍＲＮＡと、２段目のハイブリッドを形成したことも示された。
【００５１】
このことは、一連の処理により各々のｍＲＮＡを検出できたことを表している。すなわち、生体物質検出装置１０において、表面にポリ（ｄＴ）配列を結合させたプラスチックビーズ３Ｂを捕捉チップ１の捕捉部３とすることにより、対象物質ＴＢとしたｍＲＮＡをいわゆるサンドイッチ・ハイブリッド形成法によって検出することができた。
【００５２】
ここで、ハイブリッド形成反応は、水素結合による物理化学的な結合反応である。そのため、ハイブリッド形成における他の条件が一致しているならば、ハイブリッド形成量は、結合する２本の核酸鎖の濃度により決まる。すなわち、ハイブリッドは定量的に形成される。
【００５３】
従って、プローブ濃度等のハイブリッド形成条件を一定に保つことができれば、全ＲＮＡ中における対象物質ＴＢとしたｍＲＮＡの濃度に応じてハイブリッドの形成量も決まる。このため、測定されたハイブリッド形成量から、元のｍＲＮＡの濃度（試料溶液量が既知の場合は元のｍＲＮＡ量）を逆算して求めることができる。すなわち、検出光Ｌ２の光強度に応じた検出信号Ｓを基に、このような計算を行うことにより、対象物質ＴＢ（すなわち特定のｍＲＮＡ）を定量することが可能となる。
【００５４】
［１−４．動作及び効果］
以上の構成において、捕捉チップ１は、本体部２内をｘ方向に貫通する流路２Ｎ内に、表面に対象物質ＴＢを捕捉・抽出する所定の物質が結合されたプラスチックビーズ３Ｂが充填されることにより、捕捉部３が形成される。
【００５５】
生体物質検出装置１０は、捕捉チップ１の流路２Ｎに試料液ＱＳを通液することにより、捕捉部３のプラスチックビーズ３Ｂによって対象物質ＴＢを捕捉し、その状態を保持する。さらに生体物質検出装置１０は、流路２Ｎにプローブ液ＱＰを通液する。
【００５６】
一方生体物質検出装置１０は、光源１１から出射された測定光Ｌ１を捕捉部３に照射し、これに応じて捕捉部３から得られる検出光Ｌ２の光強度を検出部１４により検出する。
【００５７】
従って生体物質検出装置１０は、捕捉チップ１の捕捉部３に捕捉した対象物質ＴＢの量を、当該捕捉部３に捕捉した状態で検出することができるため、分離・抽出といった他の操作を行う必要が無く、短時間で且つ容易に検出作業を行うことができる。
【００５８】
このため生体物質検出装置１０は、対象物質ＴＢの抽出処理と検出処理とを別々に行うような検出手法と比較して、装置構成を簡略化することができ、全体構成を小型化することができる。
【００５９】
例えば、従来の一般的な検出手法として、対象物質ＴＢと相互作用するプローブを反応プレート、反応容器又は反応ウェル等に固定したＤＮＡチップ等に試料液ＱＳを流し、当該プローブと反応した生体物質を評価するものがあった。
【００６０】
しかしながらかかる手法は、一般に、網羅解析或いは多数物質の同時解析に適したものといえる。すなわち、特定の生体物質のみを検出する場合であっても、その準備及び操作は網羅解析等と同様に大がかりなものとなってしまい、手間を要するほか、検出装置あたりのコストも高くなってしまう。
【００６１】
また、特定のＤＮＡ、ＲＮＡ或いは蛋白質等の生体物質を抽出した後に、これを検出する手法としてＨＰＬＣ（High performance liquid chromatography、高速液体クロマトグラフィー）がある。
【００６２】
しかしながらＨＰＬＣでは、対象物質ＴＢを分離した後、液送を用い、別の箇所に設けた検出部により当該生体物質を検出する。このため、一般に操作性が悪く長時間を要してしまう。
【００６３】
さらにＨＰＬＣでは、対象物質ＴＢを含む液体を担体に順次流し、このとき分子の大きさや吸着担体との親和性の違いによる当該担体との吸脱着時間の差を利用して遅延時間を作り出し、時間分離することにより対象物質ＴＢを検出する。
【００６４】
このためＨＰＬＣでは、分離した対象物質ＴＢが１回の操作で失われてしまい、検出操作ミス等があってもやり直すことができなかった。
【００６５】
これに対し本発明の生体物質検出装置１０は、捕捉チップ１の流路２Ｎ内に対象物質ＴＢを捕捉し得る捕捉部３を形成し、当該流路２Ｎ内に試料液ＱＳ及びプローブ液ＱＰを通液するだけで、検出光Ｌ２を検出し得る状態となる。このため、生体物質検出装置１０は、装置構成を極めて簡素化できると共に、操作手順も簡略化することができる。
【００６６】
また生体物質検出装置１０は、検出部１４をフォトディテクタ等により構成し、当該検出部１４により検出光Ｌ２の光強度を検出すれば良い。このため生体物質検出装置１０は、撮像素子を用いて画像を検出し、当該画像に対し画像解析処理を施すような場合と比較して、検出部１４の構成を簡素化でき、また信号処理等における演算処理量も大幅に低減できるので、装置全体を簡略化・小型化することができる。
【００６７】
さらに生体物質検出装置１０では、対象物質ＴＢが捕捉部３に捕捉され、そのまま保持されるため、検出光Ｌ２を検出する操作において作業ミス等があったとしても、保持されている対象物質ＴＢを再度利用して、検出操作のみをやり直すことができる。
【００６８】
一方、捕捉チップ１は、側面２Ｃ及び２Ｄが略平面状に形成されている。このため生体物質検出装置１０は、当該側面２Ｃ及び２Ｄが曲面状に（すなわち本体部２が略円筒状に）形成された場合と比較して、側面２Ｄの境界面に対する測定光Ｌ１及び検出光Ｌ２の入射角度を深くすることができ、その反射率を低減させることができる。このため生体物質検出装置１０は、検出光Ｌ２の光強度を高い感度で検出することができる。
【００６９】
さらに捕捉チップ１は、本体部２が一体成形されているため、複数材料の貼り合わせ等を行う場合よりも小型に構成することができる。
【００７０】
また捕捉チップ１の捕捉部３は、対象物質ＴＢの種類等に応じてプラスチックビーズ３Ｂの表面に結合する物質を定めることにより、当該対象物質ＴＢを適切に捕捉・抽出することができる。
【００７１】
以上の構成によれば、生体物質検出装置１０は、本体部２内を貫通する流路２Ｎに対象物質ＴＢを捕捉・抽出する捕捉部３を設けた捕捉チップ１を用い、当該流路２Ｎ内に試料液ＱＳを通液して捕捉部３により対象物質ＴＢを捕捉する。また生体物質検出装置１０は、光源１１から出射された測定光Ｌ１を捕捉部３に照射し、これに応じて捕捉部３から得られる検出光Ｌ２の光強度を検出部１４により検出する。これにより生体物質検出装置１０は、捕捉チップ１の捕捉部３に捕捉した対象物質ＴＢをそのまま用いて検出作業を行うことができる。
【００７２】
＜２．第２の実施の形態＞
［２−１．捕捉チップの構成］
第２の実施の形態では、第１の実施の形態における捕捉チップ１（図１）に代えて、図４（Ａ）及び（Ｂ）に示す捕捉チップ２１が用いられるようになされている。
【００７３】
捕捉チップ２１は、捕捉チップ１の本体部２と対応する本体部２２を中心に構成されている。本体部２２は、本体部２の側面２Ａ、２Ｂ、２Ｃ及び２Ｄ並びに孔部２ＡＨ及び２ＢＨとそれぞれ同様の側面２２Ａ、２２Ｂ、２２Ｃ及び２２Ｄ並びに孔部２２ＡＨ及び２２ＢＨが設けられている。
【００７４】
また本体部２２は、本体部２における流路２Ｎと同様、当該本体部２２内をｘ方向に貫通する流路２２Ｎが形成されている。この流路２２Ｎは、捕捉チップ１の場合と同様に、ｘ方向のほぼ中央部分にプラスチックビーズ３Ｂが所定量充填されることにより、捕捉部３が形成されるようになされている。
【００７５】
このため捕捉チップ２１は、捕捉チップ１と同様、流路２２Ｎに試料液ＱＳ等が通液されると、対象物質ＴＢに応じた物質を有する捕捉部３により、当該試料液ＱＳ中に含まれる対象物質ＴＢを捕捉することができる。
【００７６】
さらに本体部２２は、側面２２Ｄのほぼ中央部分、すなわち捕捉部３と対応する部分にレンズ部２２ＤＬが形成されている。このレンズ部２２ＤＬは、生体物質検出装置１０（図２）における対物レンズ１３と同様の光学的機能を有している。
【００７７】
［２−２．生体物質検出装置の構成］
図２と対応する図５に示すように、生体物質検出装置３０は、生体物質検出装置１０と比較して捕捉チップ１に代えて捕捉チップ２１が設けられ、また対物レンズ１３が省略されている点が相違するものの、他は同様に構成されている。
【００７８】
すなわち捕捉チップ２１は、所定の取付位置に固定され供給管１７及び排出管１８が接続された状態で流路２２Ｎに試料液ＱＳ等が通液されると、捕捉部３により対象物質ＴＢを捕捉し、その状態を保持する。また捕捉チップ２１は、対象物質ＴＢに応じたプローブ液ＱＰが流路２２Ｎに通液される。
【００７９】
一方、光源１１から出射された測定光Ｌ１は、その一部がビームスプリッタ１２の反射面１２Ｓを透過し、レンズ部２２ＤＬに入射される。レンズ部２２ＤＬは、対物レンズ１３と同様、測定光Ｌ１を捕捉部３に集光する。これに応じて捕捉部３では、検出光Ｌ２が発生する。
【００８０】
検出光Ｌ２は、レンズ部２２ＤＬの集光作用により発散光から平行光に変換され、ビームスプリッタ１２の反射面１２Ｓにおいてその一部が反射され、検出部１４に照射される。検出部１４は、検出光Ｌ２の光強度に応じた検出信号Ｓを生成する。
【００８１】
このように生体物質検出装置３０は、捕捉チップ２１の流路２２Ｎに試料液ＱＳを通液した後、捕捉部３に測定光Ｌ１を照射し、これに応じて発生する検出光Ｌ２の光強度に応じた検出信号Ｓを生成することにより、対象物質ＴＢを検出するようになされている。
【００８２】
［２−３．動作及び効果］
以上の構成において、第２の実施の形態における捕捉チップ２１は、捕捉チップ１と同様、流路２２Ｎ内にプラスチックビーズ３Ｂが充填されることにより、捕捉部３が形成される。
【００８３】
生体物質検出装置３０は、捕捉チップ２１の流路２２Ｎに試料液ＱＳを通液することにより、捕捉部３のプラスチックビーズ３Ｂによって対象物質ＴＢを捕捉し、さらに当該対象物質ＴＢに応じたプローブ液ＱＰが通液された上で、その状態を保持する。
【００８４】
また生体物質検出装置３０は、光源１１から出射された測定光Ｌ１をレンズ部２２ＤＬにより集光して捕捉部３に照射し、これに応じて捕捉部３から得られる検出光Ｌ２の光強度を検出部１４により検出する。
【００８５】
従って生体物質検出装置３０は、第１の実施の形態と同様、捕捉チップ２１の捕捉部３に対象物質ＴＢを捕捉した状態で当該対象物質ＴＢの量を検出することができるため、他の操作を行う必要が無く、短時間で且つ容易に検出作業を行うことができる。
【００８６】
これにより生体物質検出装置３０は、第１の実施の形態と同様、装置構成を簡略化することができる。
【００８７】
特に生体物質検出装置３０は、捕捉チップ２１の本体部２２における側面２２Ｄにレンズ部２２ＤＬが形成されているため、対物レンズ１３（図２）を用いることなく測定光Ｌ１等を集光することができる。
【００８８】
このため生体物質検出装置３０は、生体物質検出装置１０と比較して、対物レンズ１３を設ける必要がないため、全体構成をさらに小型化することができる。
【００８９】
また生体物質検出装置３０は、例えば捕捉部３により捕捉する対象物質ＴＢがそれぞれ相違する複数の捕捉チップ２１を用い、且つ測定光Ｌ１の焦点位置や集光の度合い等をそれぞれ相違させたい場合に、捕捉チップ２１ごとにレンズ部２２ＤＬの設計を相違させることもできる。
【００９０】
これにより生体物質検出装置３０では、例えば対物レンズ１３を有する生体物質検出装置１０において、捕捉チップ１を交換する度に対物レンズ１３の位置調整を行い測定光Ｌ１の焦点を調整するといった煩わしい作業が不要となる。
【００９１】
すなわち生体物質検出装置３０は、捕捉チップ２１を交換し平行光でなる測定光Ｌ１を照射するだけで、焦点調整のような作業を要すること無く、当該測定光Ｌ１を対象物質ＴＢに応じた所望の状態で照射することができる。
【００９２】
その他、生体物質検出装置３０は、第１の実施の形態における生体物質検出装置１０と同様の作用効果を奏し得る。
【００９３】
以上の構成によれば、第２の実施の形態による生体物質検出装置３０は、流路２２Ｎに対象物質ＴＢを捕捉・抽出する捕捉部３を形成した捕捉チップ２１を用い、当該流路２２Ｎ内に試料液ＱＳを通液して捕捉部３により対象物質ＴＢを捕捉する。また生体物質検出装置３０は、光源１１から出射された測定光Ｌ１をレンズ部２２ＤＬにより集光して捕捉部３に照射し、これに応じて捕捉部３から得られる検出光Ｌ２の光強度を検出部１４により検出する。これにより生体物質検出装置３０は、捕捉チップ２１の捕捉部３に捕捉した対象物質ＴＢをそのまま用いて検出作業を行うことができる。
【００９４】
＜３．第３の実施の形態＞
［３−１．捕捉チップの構成］
第３の実施の形態では、第２の実施の形態における捕捉チップ２１（図４）に代えて、図６（Ａ）及び（Ｂ）に示す捕捉チップ４１が用いられるようになされている。
【００９５】
捕捉チップ４１は、捕捉チップ２１の本体部２２と対応する本体部４２を中心に構成されている。本体部４２は、本体部２２の側面２２Ａ、２２Ｂ、２２Ｃ及び２２Ｄ並びに孔部２２ＡＨ及び２２ＢＨとそれぞれ同様の側面４２Ａ、４２Ｂ、４２Ｃ及び４２Ｄ並びに孔部４２ＡＨ及び４２ＢＨが設けられている。
【００９６】
また本体部４２は、流路２Ｎ及び２２Ｎと同様、当該本体部４２内をｘ方向に貫通する流路４２Ｎが形成されている。この流路４２Ｎは、捕捉チップ１及び２１の場合と同様に、ｘ方向のほぼ中央部分にプラスチックビーズ３Ｂが所定量充填されることにより、捕捉部３が形成されるようになされている。
【００９７】
このため捕捉チップ４１は、捕捉チップ１及び２１と同様、流路４２Ｎに試料液ＱＳ等が通液されると、対象物質ＴＢに応じた物質を有する捕捉部３により、当該試料液ＱＳ中に含まれる対象物質ＴＢを捕捉することができる。
【００９８】
さらに本体部４２は、側面４２Ｃ及び４２Ｄのほぼ中央部分、すなわち捕捉部３と対応する部分にそれぞれレンズ部４２ＣＬ及び４２ＤＬが形成されている。このレンズ部４２ＣＬ及び４２ＤＬは、第２の実施の形態における本体部２２のレンズ部２２ＤＬと同様の光学的機能を有している。
【００９９】
［３−２．生体物質検出装置の構成］
図２及び図５と対応する図７に示すように、生体物質検出装置５０は、生体物質検出装置３０における捕捉チップ２１に代えて捕捉チップ４１が用いられている。また生体物質検出装置５０は、生体物質検出装置３０と比較して、ビームスプリッタ１２が省略され、検出部１４が捕捉チップ４１を挟んで光源１１の反対側に設けられている点において相違するものの、他は同様に構成されている。
【０１００】
すなわち捕捉チップ４１は、所定の取付位置に固定され供給管１７及び排出管１８が接続された状態で流路４２Ｎに試料液ＱＳ等が通液されると、捕捉部３により対象物質ＴＢを捕捉し、その状態を保持する。また捕捉チップ４１は、対象物質ＴＢに応じたプローブ液ＱＰが流路４２Ｎに通液される。
【０１０１】
一方、光源１１から出射された測定光Ｌ１は、レンズ部２２ＤＬに入射される。レンズ部２２ＤＬは、測定光Ｌ１を捕捉部３に集光する。これに応じて捕捉部３は、検出光Ｌ２を発生させる。
【０１０２】
このとき生体物質検出装置５０は、生体物質検出装置１０及び３０の場合と異なり、測定光Ｌ１のうち捕捉部３を透過した部分が検出光Ｌ２となる。
【０１０３】
検出光Ｌ２は、レンズ部２２ＣＬにより発散光から平行光に変換され、検出部１４に照射される。検出部１４は、検出光Ｌ２の光強度に応じた検出信号Ｓを生成する。
【０１０４】
このように生体物質検出装置５０は、捕捉チップ４１の流路４２Ｎに試料液ＱＳを通液した後、捕捉部３に測定光Ｌ１を照射し、これに応じて発生する検出光Ｌ２の光強度に応じた検出信号Ｓを生成することにより、対象物質ＴＢを検出するようになされている。
【０１０５】
［３−３．動作及び効果］
以上の構成において、第３の実施の形態における捕捉チップ２１は、捕捉チップ１及び２１と同様、流路４２Ｎ内にプラスチックビーズ３Ｂが充填されることにより、捕捉部３が形成される。
【０１０６】
生体物質検出装置５０は、捕捉チップ４１の流路４２Ｎに試料液ＱＳを通液することにより、捕捉部３のプラスチックビーズ３Ｂによって対象物質ＴＢを捕捉し、さらに当該対象物質ＴＢに応じたプローブ液ＱＰが通液された上で、その状態を保持する。
【０１０７】
また生体物質検出装置５０は、光源１１から出射された測定光Ｌ１をレンズ部２２ＤＬにより集光して捕捉部３に照射し、これに応じて捕捉部３から得られる検出光Ｌ２の光強度を検出部１４により検出する。
【０１０８】
従って生体物質検出装置５０は、第１及び第２の実施の形態と同様、捕捉チップ４１の捕捉部３に対象物質ＴＢを捕捉した状態で当該対象物質ＴＢの量を検出することができるため、他の操作を行う必要が無く、短時間で且つ容易に検出作業を行うことができる。
【０１０９】
このため生体物質検出装置５０は、やはり第１及び第２の実施の形態と同様、装置構成を簡略化することができ、全体構成を小型化することができる。
【０１１０】
特に生体物質検出装置５０は、捕捉チップ４１の本体部４２における側面４２Ｃ及び４２Ｄにレンズ部４２ＣＬ及び４２ＤＬが形成されているため、対物レンズ１３（図２）を用いることなく測定光Ｌ１及び検出光Ｌ２等を集光することができる。
【０１１１】
その他、生体物質検出装置５０は、第１の実施の形態における生体物質検出装置１０及び第２の実施の形態における生体物質検出装置３０と同様の作用効果を奏し得る。
【０１１２】
以上の構成によれば、第３の実施の形態による生体物質検出装置５０は、流路４２Ｎに対象物質ＴＢを捕捉・抽出する捕捉部３を形成した捕捉チップ４１を用い、当該流路４２Ｎ内に試料液ＱＳを通液して捕捉部３により対象物質ＴＢを捕捉・抽出する。また生体物質検出装置５０は、光源１１から出射された測定光Ｌ１をレンズ部４２ＤＬにより集光して捕捉部３に照射し、これに応じて捕捉部３から得られる検出光Ｌ２をレンズ部４２ＣＬにより集光してその光強度を検出部１４により検出する。これにより生体物質検出装置５０は、捕捉チップ４１の捕捉部３に捕捉した対象物質ＴＢをそのまま用いて検出作業を行うことができる。
【０１１３】
＜４．他の実施の形態＞
なお上述した第１の実施の形態においては、対象物質ＴＢを捕捉・抽出する所定の物質が表面に結合されたプラスチックビーズ３Ｂを流路２Ｎに充填することにより担体としての捕捉部３を構成した場合について述べた。
【０１１４】
本発明はこれに限らず、例えば微小なガラスビーズ、プラスチックファイバー・メンブレンやガラスファイバー・メンブレン、プラスチック多孔質体やガラス多孔質体を用いて捕捉部３を構成しても良い。また、微小プラスチックビーズを固化又は一体化したもの、或いは微小ガラスビーズを固化・一体化したものや、上述した部材の表面を化学修飾したものを用いて捕捉部３を構成しても良い。
【０１１５】
さらに本発明では、いわゆる担体ではなく、例えば流路２Ｎの内壁に微細構造でなる捕捉部３を形成するようにしても良い。本発明における捕捉部３としては、要は流路２Ｎに試料液ＱＳが通液されたときに対象物質ＴＢを捕捉・抽出し得る構造や材料であれば良い。第２及び第３の実施の形態についても同様である。
【０１１６】
また上述した第１の実施の形態においては、流路２Ｎ内に捕捉部３のみを設ける場合について述べた。本発明はこれに限らず、例えば図８（Ａ）に示すように、捕捉部３の下流側に当該捕捉部３を固定するプレフィルタ４を設けても良い。或いは、図８（Ｂ）に示すように当該捕捉部３の下流側及び上流側に当該捕捉部３を固定するプレフィルタ４及び５をそれぞれ設けるようにしても良い。
【０１１７】
このプレフィルタ４及び５は、流路２内において捕捉部３を固定・安定化することに加えて、不純物や大きなごみ等をトラップさせることもできる。これによりプレフィルタ４及び５は、設置場所や材質によってこれらを捕捉部３内や当該捕捉部３の下流に流さないようにすることができる。
【０１１８】
プレフィルタ４及び５の材質としては、多孔質ポリプロピレン、多孔質ポリエチレン、ＳＵＳ（Stainless Used Steel）等を原料とした焼結金属、発泡金属、多孔質ガラスなどを用途に応じて適宜選ぶことができる。
【０１１９】
またプレフィルタ４及び５については、細孔径も適宜選ぶことができる。例えばプラスチックビーズ３Ｂ（すなわち担体）として粒径６［μｍ］のポリスチレンビーズを用いる場合、その欠落を防ぐ為に、プレフィルタ４及び５の細孔径は、６［μｍ］未満であることが望ましい。この場合、例えば細孔径２［μｍ］のＳＵＳ製の焼結金属をプレフィルタ４として捕捉部３の下流に設置するとともに、プレフィルタ５として当該捕捉部３の上流にも設置することにより、担体の安定化と不純物のトラップとを行うことができる。
【０１２０】
さらに上述した第１の実施の形態においては、Ｃｙ３標識したｓｓＤＮＡを含むプローブ液ＱＰを用い、測定光Ｌ１を捕捉部３に照射することにより、当該Ｃｙ３標識の蛍光反応により発生する検出光Ｌ２の光強度を基に、対象物質ＴＢを検出する場合について述べた。
【０１２１】
本発明はこれに限らず、所定のプローブ液ＱＰを用いることにより、例えば捕捉部３において発光作用により発生する検出光Ｌ２の光強度や、捕捉部３において測定光Ｌ１が反射されることにより発生する検出光Ｌ２の光強度を基に対象物質ＴＢを検出しても良い。特に発光作用を利用する場合には、生体物質検出装置１０から光源１１及びビームスプリッタ１２を省略することができる。第２の実施の形態についても同様である。
【０１２２】
さらに上述した第１の実施の形態においては、流路２Ｎの断面形状を略楕円状とする場合について述べた。本発明はこれに限らず、流路２Ｎの断面形状を例えば円形状や矩形状等の様々な形状とするようにしても良い。第２及び第３の実施の形態についても同様である。
【０１２３】
さらに上述した第１の実施の形態においては、捕捉チップ１における本体部２のｘ方向の長さを６０［ｍｍ］とし、ｙ方向及びｚ方向の長さをいずれも５００［μｍ］とする場合について述べた。本発明はこれに限らず、それぞれを任意の長さとしても良い。この場合、生体物質検出装置１０を小型化する観点から、ｘ方向の長さが１〜１００［ｍｍ］程度であることが好ましい。第２及び第３の実施の形態についても同様である。
【０１２４】
さらに上述した第１の実施の形態においては、捕捉チップ１における本体部２のｙ方向及びｚ方向の長さを同等とし、ｘ方向に関する断面形状を略正方形状とする場合について述べた。本発明はこれに限らず、当該断面を略長方形状や略台形状、略平行四辺形状、さらには略六角形状としても良い。
【０１２５】
さらに上述した第１の実施の形態では、捕捉チップ１における本体部２を略直方体状とし、ｘ方向に関する断面形状を略正方形状とする場合について述べた。本発明はこれに限らず、当該断面を略長方形状、略台形状又は略平行四辺形状等の種々の形状とするように本体部２を形成しても良い。特に本体部２は、ｚ方向の側面については、必ずしも平面状である必要はなく、任意の形状としても良く、さらには生体物質検出装置１０に固定するための任意の凹凸部等を設けても良い。第２及び第３の実施の形態についても同様である。
【０１２６】
また第１の実施の形態においては、本体部２の側面２Ｃについても平面状である必要はなく、任意の形状であっても良い。第２の実施の形態についても同様である。
【０１２７】
さらに上述した第１の実施の形態においては、生体物質検出装置１０の対物レンズ１３により測定光Ｌ１を捕捉部３内に集光し焦点を形成する場合について述べた。
【０１２８】
本発明はこれに限らず、例えば対物レンズ１３により測定光Ｌ１を捕捉部３の表面付近に集光し、或いは当該測定光Ｌ１の焦点を結ぶことなく、当該捕捉部３内である程度広い範囲に照射する等、様々に集光するようにしても良い。要は、測定光Ｌ１が対物レンズ１３を介して捕捉部３に照射されることに応じて、検出光Ｌ２が発生されれば良い。また検出光Ｌ２については、対物レンズ１３により必ずしも平行光に変換される必要はなく、ある程度集光されることにより、検出部１４において光強度を検出し得れば良い。第２及び第３の実施の形態におけるレンズ部２２ＤＬ、４２ＣＬ及び４２ＤＬについても同様である。
【０１２９】
さらに上述した実施の形態においては、捕捉チップ１の本体部２を樹脂材料により構成する場合について述べた。本発明はこれに限らず、本体部２を例えばガラス材料等の光をある程度透過する種々の材料により構成しても良い。また本体部２は、一体成形に限らず、複数の部品の組み合わせにより構成されても良い。第２及び第３の実施の形態についても同様である。
【０１３０】
さらに上述した実施の形態においては、検出部１４において検出光Ｌ２の光強度を基に検出信号Ｓを生成するようにした場合について述べた。本発明はこれに限らず、例えば放射性検出を行うようにしても良い。この場合、本体部２を構成する材料は可視光を透過する必要は良く、放射線を透過すれば良い。
【０１３１】
さらに上述した第１の実施の形態においては、捕捉チップ１の本体部２内に１本の流路２Ｎを形成する場合について述べた。
【０１３２】
本発明はこれに限らず、本体部２内に複数の流路を形成するようにしても良い。例えば図９に示すように、捕捉チップ８１は、本体部８２内に流路２Ｎと同様の流路８２ＮＰ、８２ＮＱ、８２ＮＲ及び８２ＮＳが形成され、それぞれに捕捉部３Ｐ、３Ｑ、３Ｒ及び３Ｓが設けられることにより、４個分の捕捉チップ１と同様の機能を有する。
【０１３３】
さらに第１の実施の形態においては、光源１１が平行光でなる測定光Ｌ１を出射する場合について述べた。本発明はこれに限らず、発散光や収束光など他の種類の光を光源１１から出射するようにしても良い。第２及び第３の実施の形態についても同様である。
【０１３４】
この場合、生体物質検出装置９０は、生体物質検出装置１０における光源１１、ビームスプリッタ１２、対物レンズ１３及び検出部１４でなる光学部９１を一体としてｚ方向又はその反対方向へ移動させれば良い。また捕捉チップ８１は、本体部８２のｙ方向一側面又は両側面に、捕捉チップ２１及び４１と同様のレンズ部を設けても良い。この場合、生体物質検出装置３０及び５０と同様に、生体物質検出装置９０の光学部９１から対物レンズ１３を省略することができる。
【０１３５】
さらに上述した実施の形態においては、本体部としての本体部２と、第１側面としての側面２Ｄと、流路としての流路２Ｎと、捕捉部としての捕捉部３とによって生体物質捕捉器としての捕捉チップ１を構成する場合について述べた。
【０１３６】
本発明はこれに限らず、その他種々の構成でなる本体部と、第１側面と、流路と、捕捉部とによって生体物質捕捉器を構成するようにしても良い。
【０１３７】
さらに上述した実施の形態においては、本体部としての本体部２と、第１側面としての側面２Ｄと、流路としての流路２Ｎと、捕捉部としての捕捉部３とを有する生体物質捕捉器としての捕捉チップ１と、検出部としての検出部１４とによって生体物質検出装置としての生体物質検出装置１０を構成する場合について述べた。
【０１３８】
しかしながら本発明はこれに限らず、その他種々の構成でなる本体部と、第１側面と、流路と、捕捉部とを有する生体物質捕捉器と、検出部とによって生体物質検出装置を構成するようにしても良い。
【産業上の利用可能性】
【０１３９】
本発明は、特定の生体物質を検出する検出装置でも利用できる。
【符号の説明】
【０１４０】
１、２１、４１……捕捉チップ、２、２２、４２……本体部、２Ｃ、２Ｄ、２２Ｃ、２２Ｄ、４２Ｃ、４２Ｄ……側面、２２ＤＬ、４２ＣＬ、４２ＤＬ……レンズ部、２Ｎ、２２Ｎ、４２Ｎ……流路、３……捕捉部、３Ｂ……プラスチックビーズ、１０、３０、５０……生体物質検出装置、１１……光源、１２……ビームスプリッタ、１３……対物レンズ、１４……検出部、Ｌ１……測定光、Ｌ２……検出光。
【図１】
2010185705.tif 000003
【図２】
2010185705.tif 000004
【図３】
2010185705.tif 000005
【図４】
2010185705.tif 000006
【図５】
2010185705.tif 000007
【図６】
2010185705.tif 000008
【図７】
2010185705.tif 000009
【図８】
2010185705.tif 000010
【図９】
2010185705.tif 000011