(57)【要約】【課題】回収される細胞に脂分が不純物として含まれてしまう不都合を回避して細胞を高収率に回収する。【解決手段】脂肪由来細胞を捕捉する細胞捕捉フィルタ２と、その一側に接続する配管８，１０に、択一的に切替可能な第１の切替弁９を介して接続された、脂肪組織と消化酵素液とを含む細胞懸濁液Ａを収容する細胞ソース容器３および洗浄液Ｂを収容する洗浄液容器４と、配管８に設けられ、細胞ソース容器３から供給されてきた細胞懸濁液Ａに含まれる脂分を捕捉する脂分捕捉フィルタ６と、該脂分捕捉フィルタ６と細胞捕捉フィルタ２との間の配管１０に、択一的に切替可能な第２の切替弁１１を介して接続された回収容器７と、細胞捕捉フィルタ２の他側に、択一的に切替可能な第３の切替弁１４を介して接続された、廃液を収容する廃液容器１２および溶出液Ｃを供給する溶出液供給手段１３とを備える細胞回収装置１を提供する。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
脂肪由来細胞を捕捉する細胞捕捉フィルタと、
該細胞捕捉フィルタの一側に接続する配管に、択一的に切替可能な第１の切替弁を介して接続された、脂肪組織と消化酵素液とを含む細胞懸濁液を収容するための細胞ソース容器および洗浄液を収容するための洗浄液容器と、
前記配管に設けられ、前記細胞ソース容器から供給されてきた細胞懸濁液に含まれる脂分を捕捉する脂分捕捉フィルタと、
該脂分捕捉フィルタと前記細胞捕捉フィルタとの間の前記配管に、択一的に切替可能な第２の切替弁を介して接続された回収容器と、
前記細胞捕捉フィルタの他側に、択一的に切替可能な第３の切替弁を介して前記細胞捕捉フィルタに接続された、記細胞捕捉フィルタを通液した廃液を収容するための廃液容器および細胞回収用の溶出液を供給する溶出液供給手段とを備える細胞回収装置。
【請求項２】
前記脂分捕捉フィルタが、不織布であって、平均繊維径が２０μｍ以上１００μｍ以下である請求項１に記載の細胞回収装置。
【請求項３】
前記脂分捕捉フィルタの平均繊維径が、３０μｍ以上５０μｍ以下である請求項２に記載の細胞回収装置。
【請求項４】
前記脂分捕捉フィルタが、多数の貫通気孔を有する多孔質材料であって、その平均気孔径が２０μｍ以上１００μｍ以下である請求項１に記載の細胞回収装置。
【請求項５】
前記脂分捕捉フィルタの平均気孔径が２５μｍ以上４０μｍ以下である請求項４に記載の細胞回収装置。
【請求項６】
請求項１から請求項５のいずれかに記載の細胞回収装置により回収された脂肪由来細胞含有液。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、細胞回収装置および脂肪由来細胞含有液に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
従来、骨髄、末梢血、あるいは臍帯血などから白血球のような単核球を分離するフィルタが知られている（特許文献１参照。）。またこのようなフィルタを、脂肪組織を消化する酵素を含む脂肪組織消化液に対して用いることで、脂肪由来細胞を高収率で回収する方法が開示されている（例えば、特許文献２参照。）。
【０００３】
【特許文献１】特許第３９３８９７３号公報
【特許文献２】特開２００７−２８９０７６号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
しかしながら、脂肪組織消化液をフィルタにより分離する場合には、脂肪組織消化液内に含まれている脂肪細胞から遊離した脂分が、脂肪由来細胞を捕捉するフィルタに捕捉され、最終的な回収が望まれる脂肪由来細胞とともに回収されてしまうという不都合がある。
【０００５】
本発明は上述した事情に鑑みてなされたものであって、回収される脂肪由来細胞に脂分が不純物として含まれてしまう不都合を回避して脂肪由来細胞を高収率に回収することができる細胞回収装置を提供すること目的としている。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
上記目的を達成するために、本発明は以下の手段等を提供する。
すなわち、本発明は、脂肪由来細胞を捕捉する細胞捕捉フィルタと、該細胞捕捉フィルタの一側に接続する配管に、択一的に切替可能な第１の切替弁を介して接続された、脂肪組織と消化酵素液とを含む細胞懸濁液を収容するための細胞ソース容器および洗浄液を収容するための洗浄液容器と、前記配管に設けられ、前記細胞ソース容器から供給されてきた細胞懸濁液に含まれる脂分を捕捉する脂分捕捉フィルタと、該脂分捕捉フィルタと前記細胞捕捉フィルタとの間の前記配管に、択一的に切替可能な第２の切替弁を介して接続された回収容器と、前記細胞捕捉フィルタの他側に、択一的に切替可能な第３の切替弁を介して前記細胞捕捉フィルタに接続された、記細胞捕捉フィルタを通液する廃液を収容するための廃液容器および細胞回収用の溶出液を供給する溶出液供給手段とを備える細胞回収装置を提供する。
【０００７】
本発明の細胞回収装置においては、細胞捕捉フィルタの上方に細胞ソース容器を配置して、第１の切替弁を操作して細胞捕捉フィルタの入口側（一側）に続く配管に該細胞ソース容器を接続し、第２の切替弁を脂分捕捉フィルタ側に切り替える一方、第３の切替弁を操作して細胞捕捉フィルタの出口側（他側）に廃液容器を接続した状態で、細胞ソース容器内の細胞懸濁液を重力等によって細胞捕捉フィルタに通液させると、まず、細胞懸濁液が脂分捕捉フィルタを通液し、脂分および一部の脂肪由来細胞が捕捉される。大部分の脂肪由来細胞を含む細胞懸濁液は脂分捕捉フィルタを通過して細胞捕捉フィルタに流入する。
【０００８】
細胞懸濁液に含まれる脂肪由来細胞は、細胞捕捉フィルタによって捕捉され、他の液体は細胞捕捉フィルタを通過して第３の切替弁を介して廃液容器に流入する。一部の消化酵素液は細胞捕捉フィルタに付着する。
この状態で、第１の切替弁を洗浄液容器側に切り替えて、洗浄液を脂分捕捉フィルタに流入させる。脂分捕捉フィルタに捕捉されていた脂分はそのまま捕捉された状態に維持され、同じく捕捉されていた一部の脂肪由来細胞は、洗浄液によって押し流されて下流側の細胞捕捉フィルタに流入させられ、細胞捕捉フィルタに捕捉される。
【０００９】
この後に、第２の切替弁を回収容器側に切り替え、第３の切替弁を溶出液供給手段側に切り替え、溶出液供給手段を作動させることで、溶出液を細胞捕捉フィルタに、その出口側から供給する。これにより、脂肪由来細胞が細胞捕捉フィルタから剥離されて回収容器に流入し回収される。そして、このようにして、脂分および消化酵素液が充分に排除された脂肪由来細胞を回収容器に回収することができる。
【００１０】
上記発明においては、前記脂分捕捉フィルタが、不織布であって、平均繊維径が２０μｍ以上１００μｍ以下であることとしてもよい。
また、平均繊維径が、３０μｍ以上５０μｍ以下であることが好ましい。
このようにすることで、平均繊維径が比較的大きな繊維からなる不織布によって、脂分がより効率的に捕捉され、最終的に回収される脂肪由来細胞から脂分や消化酵素液を十分に低減することができる。即ち、平均繊維径を、好ましくは２０μｍ以上、より好ましくは３０μｍ以上とすることにより、脂分がより効率的に前記脂分捕捉フィルタ内に入り込みやすくなり、一方、脂肪由来細胞は、脂分捕捉フィルタを通過しやすくなる。また平均繊維径を、好ましくは１００μｍ以下、より好ましくは５０μｍ以下とすることにより、前記脂分捕捉フィルタに捕捉された脂分がよりフィルタ内で保持されやすくなる。
【００１１】
本発明においては、前記脂分捕捉フィルタが、多数の貫通気孔を有する多孔質材料であって、その平均気孔径が２０μｍ以上１００μｍ以下であることとしてもよい。
また、平均気孔径が、２５μｍ以上４０μｍ以下であることが好ましい。
このようにすることで、脂分を効率的に捕獲し、最終的に回収される脂肪由来細胞から脂分や消化酵素液を十分に低減することができる。即ち、平均気孔径を、好ましくは２０μｍ以上、より好ましくは２５μｍ以上とすることにより、脂分がより効率的に前記脂分捕捉フィルタ内に入り込みやすくなり、一方、脂肪由来細胞は、脂分捕捉フィルタを通過しやすくなる。また平均気孔径を、好ましくは１００μｍ以下、より好ましくは４０μｍ以下とすることにより、前記脂分捕捉フィルタに捕捉された脂分がよりフィルタ内で保持されやすくなる。
【発明の効果】
【００１２】
本発明の細胞回収装置によれば、回収される脂肪由来細胞、これを含む脂肪由来細胞含有液に、脂分が不純物として含まれてしまう不都合が回避され、細胞を高収率に回収することができるという効果を奏する。
また本発明の細胞回収装置により回収される脂肪由来細胞含有液においては、前述したように脂分や消化酵素液量が充分に排除されているため、例えば、生体に移植等する際にも、酵素による生体への悪影響が充分に低減されている。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１３】
本発明の一実施形態に係る細胞回収装置１について、図１〜図４を参照して以下に説明する。
本実施形態に係る細胞回収装置１は、図１に示されるように、脂肪由来細胞を捕捉する細胞捕捉フィルタ２と、該細胞捕捉フィルタ２の入口側に配置される細胞ソース容器３、洗浄液容器４、メッシュチャンバ５、脂分捕捉フィルタ６および回収容器７と、細胞ソース容器３と洗浄液容器４とを択一的にメッシュチャンバ５への流路８に接続するように切り替える第１の切替弁９と、脂分捕捉フィルタ６からの流路１０と回収容器７とを択一的に細胞捕捉フィルタ２の入口２ａ側に接続させる第２の切替弁１１と、細胞捕捉フィルタ２の出口２ｂ側に配置される廃液容器１２および溶出液供給手段１３と、これら廃液容器１２および溶出液供給手段１３を択一的に細胞捕捉フィルタ２の出口２ｂ側に接続させる第３の切替弁１４とを備えている。
【００１４】
細胞捕捉フィルタ２としては、ポリエステルあるいはポリプロピレン等を含む平均繊維径約０．０１〜１０μｍの不織布フィルタを積層したもの等が採用されている。
脂分捕捉フィルタ６も、ポリエステルあるいはポリプロピレン等を含む平均繊維径約２０μｍ以上１００μｍ以下、好ましくは３０μｍ以上５０μｍ以下の不織布フィルタを積層したものが採用されている。
【００１５】
メッシュチャンバ５は、比較的大きな脂肪組織片を捕捉して、細胞捕捉フィルタ２への流入を防止するようになっている。メッシュチャンバ５および脂分捕捉フィルタ６は、第１の切替弁９と細胞捕捉フィルタ２との間の流路１０に直列に並んで配置されている。
また、細胞ソース容器３、洗浄液容器４、回収容器７および廃液容器１２は、いずれも輸血バッグのような柔軟なポリエステル等の材料からなる容器等でもよく、いずれも無菌的に細胞捕捉フィルタ２に接続されるようになっている。
【００１６】
細胞ソース容器３には、細かく切断された脂肪組織と該脂肪組織を消化して脂肪由来細胞を単離させるための消化酵素液とを混合してなる細胞懸濁液Ａが収容されている。
洗浄液容器４には、例えば、生理食塩水、乳酸リンゲル液のような洗浄液Ｂが収容されている。
また、回収容器７および廃液容器１２は最初の状態では何も収容されていない。
【００１７】
第１〜第３の切替弁９，１１，１４は、例えば、三方弁によって構成されている。
溶出液供給手段１３は、溶出液Ｃとして、脂肪由来細胞の変性が少ない、例えば、生理食塩水、ダルベッコリン酸塩緩衝液（Ｄ−ＰＢＳ）、ハンクス液等の緩衝液、ＲＰＭＩ１６４０等の培地等が収容されたシリンジである。
【００１８】
このように構成された本実施形態に係る細胞回収装置１の作用について以下に説明する。
本実施形態に係る細胞回収装置１を用いて脂肪組織と消化酵素液とを含む細胞懸濁液Ａから脂肪由来細胞を分離回収するには、まず、図２に示されるように、細胞捕捉フィルタ２の上方に、細胞ソース容器３が配置されるようにして、第１の切替弁９を細胞ソース容器３側に、第２の切替弁１１を脂分捕捉フィルタからの流路１０側、第３の切替弁１４を廃液容器１２側に切り替える。
【００１９】
このようにすることで、細胞ソース容器３内の細胞懸濁液Ａが、重力によって、第１の切替弁９を介して、メッシュチャンバ５および脂分捕捉フィルタ６を通過させられた後に、第２の切替弁１１を介して細胞捕捉フィルタ２に通液させられる。メッシュチャンバ５を通過させられることにより、細胞懸濁液Ａ内の比較的大きな脂肪組織等はメッシュチャンバ５に捕捉され、脂肪組織から単離した脂肪由来細胞、脂分および消化酵素液が脂分捕捉フィルタ６に通液する。
【００２０】
脂分捕捉フィルタ６においては、主として脂分が捕捉される。細胞懸濁液Ａに含まれる脂肪由来細胞および消化酵素液等の液体成分の大部分は通過するが、その一部は付着して残留する。脂分捕捉フィルタ６を通過した脂肪由来細胞等は、直後に配置されている細胞捕捉フィルタ２に流入する。
【００２１】
細胞捕捉フィルタ２においては、主として、脂肪由来細胞が捕捉される。消化酵素液等の液体成分の大部分は通過するが、その一部も付着して残留する。細胞捕捉フィルタ２を通過した液体は、第３の切替弁１４を介して廃液Ｄとして廃液容器１２に回収される。
【００２２】
細胞ソース容器３内の全ての細胞懸濁液Ａが排出された時点で、図３に示すように、第１の切替弁９を洗浄液容器４側に切り替える。これにより、洗浄液容器４内の洗浄液Ｂがメッシュチャンバ５、脂分捕捉フィルタ６および細胞捕捉フィルタ２に、重力によって流入し、これらを通過させられる。
洗浄液Ｂが流通されることにより、メッシュチャンバ５に付着していた脂肪由来細胞や消化酵素液は下流の脂分捕捉フィルタ６に向けて押し流される。また、脂分捕捉フィルタ６に付着していた脂肪由来細胞および消化酵素液は細胞捕捉フィルタ２に向けて押し流される。さらに、細胞捕捉フィルタ２内に付着していた消化酵素液も押し流されて廃液容器１２に流入させられる。
【００２３】
すなわち、この洗浄液Ｂを流通させる作業により、細胞捕捉フィルタ２には、不要な脂分や消化酵素液が除去された状態で、主として脂肪由来細胞のみが捕捉される。
ほぼ全ての洗浄液Ｂが洗浄液容器４から排出された時点で、図４に示されるように、第２の切替弁１１を回収容器７側に切り替え、第３の切替弁１４を溶出液供給手段１３側に切り替えて、溶出液供給手段１３を作動させることにより、溶出液Ｃを細胞捕捉フィルタ２に、その出口２ｂ側から供給する。これにより、細胞捕捉フィルタ２の入口２ａ側に捕捉されていた脂肪由来細胞が細胞捕捉フィルタ２から剥離される。
そして、このようにして剥離された脂肪由来細胞は溶出液Ｃとともに、第２の切替弁１１を介して回収容器７内に流入し、回収される。
【００２４】
このように本実施形態に係る細胞回収装置１によれば、脂肪組織と消化酵素液とを含む細胞懸濁液Ａをそのまま細胞捕捉フィルタ２に流入させるのではなく、流入に先立って脂分捕捉フィルタ６を通過させるので、不要な脂分が細胞捕捉フィルタ２に捕捉されてしまう不都合の発生を防止することができる。また、細胞捕捉フィルタ２に捕捉された脂肪由来細胞をそのまま回収するのではなく、洗浄液Ｂによって一旦洗浄するので、回収される脂肪由来細胞に混入する消化酵素液の量を低減することができる。その結果、ダメージの少ない脂肪由来細胞を回収でき、健全な状態に維持することができる。
【００２５】
なお、本実施形態においては、第１〜第３の切替弁９，１１，１４として、いずれか位置の経路に選択的に切り替えられる３方弁を例示して説明したが、これに限定されるものではなく、ピンチコックのようなクランプによって択一的に経路を選択することにしてもよい。
また本実施形態においては、脂肪由来細胞を含む細胞懸濁液Ａを、重力の影響により細胞捕捉フィルタに通液させたが、脂肪由来細胞をフィルタに通過させる方法としてはこれに限定されることはなく、例えば、ペリスタポンプ、加圧式装置等を用いて通液させてもよい。
また、脂分捕捉フィルタ６としては、ポリエステルあるいはポリプロピレンからなる平均気孔径約２０μｍ以上１００μｍ以下、好ましくは２５μｍ以上４０μｍ以下のスポンジ状のフィルタを積層したものを採用してもよい。
【００２６】
また本実施形態に係る細胞回収装置１により、高い回収率で回収された本実施形態に係る脂肪由来細胞を含む脂肪由来細胞含有液において、脂肪由来細胞には、血管内皮細胞、線維芽細胞、造血幹細胞、血球系の細胞、脂肪由来幹細胞などが含まれる。ここで、幹細胞は、細胞治療などの目的で、脂肪組織から採取される細胞であり、多分化能、自己再生能を有する細胞を指す。また脂肪組織としては、ヒト由来の皮下脂肪組織、内臓脂肪組織、白色脂肪組織、褐色脂肪組織等でよく、ヒト等の脂肪部位をハサミ等の鋭利な器具で採取されたもの、脂肪吸引等の方法によって採取されたものなどであってよい。
本実施形態に係る脂肪由来細胞含有液においては、前述したように消化酵素が充分排除されているため、生体に移植等する際にも、酵素による生体への悪影響が充分低減されている。
【図面の簡単な説明】
【００２７】
【図１】本発明の一実施形態に係る細胞回収装置を示す全体構成図である。
【図２】図１の細胞回収装置において、細胞捕捉フィルタに脂肪由来細胞を捕捉させる捕捉ステップを示す図である。
【図３】図１の細胞回収装置において、細胞捕捉フィルタに捕捉された脂肪由来細胞を順方向に洗浄する洗浄ステップを示す図である。
【図４】図１の細胞回収装置において、細胞捕捉フィルタに捕捉された脂肪由来細胞を溶出し回収するステップを示す図である。
【符号の説明】
【００２８】
１  細胞回収装置
２  細胞捕捉フィルタ
２ａ  入口
２ｂ  出口
３  細胞ソース容器
４  洗浄液容器
６  脂分捕捉フィルタ
７  回収容器
８，１０  配管
９  第１の切替弁
１１  第２の切替弁
１２  廃液容器
１３  溶出液供給手段
１４  第３の切替弁
Ａ  細胞懸濁液
Ｂ  洗浄液
Ｃ  溶出液
Ｄ  廃液
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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