(57)【要約】【課題】工業的に効率的かつ安定的なカプサイシノイド類の分離方法、カプシノイド類の分離方法およびカプサイシノイド類とカプシノイド類との分離方法を提供する。【解決手段】固定相と移動相とを有する液体クロマトグラフィー法により分離する方法において、該固定相として（メタ）アクリル酸エステル系架橋（共）重合体からなる多孔質有機高分子粒子を用いることを特徴とする、カプサイシノイド類を含有する原料からカプサイシノイド類を分離する方法。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
固定相と移動相とを有する液体クロマトグラフィー法により分離する方法において、
該固定相として（メタ）アクリル酸エステル系架橋（共）重合体からなる多孔質有機高分子粒子を用いることを特徴とする、カプサイシノイド類を含有する原料からカプサイシノイド類を分離する方法。
【請求項２】
固定相と移動相とを有する液体クロマトグラフィー法により分離する方法において、
該固定相として（メタ）アクリル酸エステル系架橋（共）重合体からなる多孔質有機高分子粒子を用いることを特徴とする、カプシノイド類を含有する原料からカプシノイド類を分離する方法。
【請求項３】
固定相と移動相とを有する液体クロマトグラフィー法により分離する方法において、
該固定相として（メタ）アクリル酸エステル系架橋（共）重合体からなる多孔質有機高分子粒子を用いることを特徴とする、カプサイシノイド類とカプシノイド類とを含有する原料からカプサイシノイド類とカプシノイド類とを分離する方法。
【請求項４】
前記移動相に水を含まないことを特徴とする、請求項１乃至３のいずれか一項に記載の分離方法。
【請求項５】
前記移動相が、前記多孔質有機高分子粒子に比べて低い比誘電率を有する溶媒、又は、該低い比誘電率を有する溶媒と前記多孔質有機高分子粒子に比べて高い比誘電率を有する溶媒との混合溶媒のいずれか一方であることを特徴とする、請求項１乃至４のいずれか一項に記載の分離方法。
【請求項６】
前記移動相が、比誘電率２．５未満の溶媒、又は、比誘電率が２．５未満である溶媒と比誘電率が２．５以上である溶媒とを、比誘電率が２．５未満の溶媒が、溶媒全体の体積を１００体積部とした時に５０体積部を超えるように混合した溶媒のいずれか一方であることを特徴とする、請求項１乃至５のいずれか一項に記載の分離方法。
【請求項７】
前記移動相が、ヘキサン、ヘキサン／エタノール混合溶媒、ヘキサン／メタノール混合溶媒、およびヘキサン／アセトン混合溶媒からなる群から選ばれる１種であることを特徴とする、請求項１乃至６のいずれか一項に記載の分離方法。
【請求項８】
前記移動相が、ヘキサン、又はヘキサン／エタノール混合溶媒であることを特徴とする、請求項１乃至７のいずれか一項に記載の分離方法。
【請求項９】
前記多孔質有機高分子粒子の窒素吸着法で求められる比表面積が、５０ｍ２／ｇ以上、２０００ｍ２／ｇ以下の範囲であり、かつ、窒素吸着法で求められる細孔容積が０．１ｍｌ／ｇ以上、３．０ｍｌ／ｇ以下であることを特徴とする、請求項１乃至８のいずれか一項に記載の分離方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、液体クロマトグラフィー法により、カプサイシノイド類およびカプシノイド類を分離する方法に関するものである。詳しくは、液体クロマトグラフィー法、特に順相液体クロマトグラフィー法により、カプサイシノイド類又はカプシノイド類を含有する原料から、カプサイシノイド類又はカプシノイド類を分離する方法、更にはカプサイシノイド類とカプシノイド類とを含有する原料からカプサイシノイド類とカプシノイド類とをそれぞれ分離する方法に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
トウガラシは、食品，香辛料および医薬品原料として世界中で広く利用されている植物である。その主要な辛味の成分はカプサイシンおよびジヒドロカプサイシンである。更に、微量成分として、ノルジヒドロカプサイシン、ホモカプサイシンおよびホモジヒドロカプサイシン等があり、これらを総称しカプサイシノイド類という。
【０００３】
また、例えば「ＣＨ−１９甘」等の一部のトウガラシには、カプシエイト、ジヒドロカプシエイト、ノルジヒドロカプシエイト等のカプシノイド類と総称されるカプサイシノイド様物質が存在し、カプサイシノイド類がほとんど含まれないために辛味を呈しないものがある（非特許文献１及び２）。カプシノイド類にもカプサイシノイド類と同様のエネルギー代謝促進作用、肥満抑制作用、免疫賦活作用等の効果があり、カプサイシノイド類と同様に機能性食品、化粧品、又は医薬品としての用途が期待されている。
【０００４】
これらカプサイシノイド類又はカプシノイド類を原料から分離する方法に関しては、これまでにも様々な技術が開示されている。特許文献１は、抽出分離装置を用いて唐辛子からカプシノイド化合物を抽出分離する方法であって、唐辛子粉砕物と、水、アセトン、アルコール類、ヘキサン、エーテル及びジオキサンからなる群より選ばれる１種または２種以上の抽出溶媒とを前記抽出分離装置の内側ミキサー槽内で撹拌混合することによって該抽出溶媒中に唐辛子中のカプシノイド化合物を抽出する工程と、前記抽出分離装置の外側分離槽において、前記内側ミキサー槽の送出口より送出されてきた唐辛子粉砕物及びカプシノイド化合物含有抽出溶媒の混合液から唐辛子粉砕物を沈降分離させて、前記外側分離槽の吐出口より唐辛子粉砕物を吐出する工程とを包含することを特徴とする唐辛子からのカプシノイド化合物の抽出分離方法に関する技術を開示している。
【０００５】
特許文献２は、唐辛子粉砕物と、水及びアセトンを含有してなる混合抽出溶媒とを接触させることによって、該混合抽出溶媒中に唐辛子中のカプシノイド化合物を抽出分離する方法であって、前記混合抽出溶媒として、水とアセトンの混合モル比がある一定の範囲に設定された混合抽出溶媒を用いることを特徴とする唐辛子からカプシノイド化合物を抽出分離する方法に関する技術を開示している。
【０００６】
特許文献３は、特定の化学構造を有するカプサイシノイド様物質に関する技術を開示している。該カプサイシノイド様物質の分離方法については、実施例において、トウガラシ無辛味固定品種「ＣＨ−１９甘」から酢酸エチルを用いてカプシノイドを抽出し、得られた抽出物から酢酸エチルを留去したオレオレジン（樹脂油剤）を、さらにシリカゲルクロマトグラフィー及びシリカゲル上の逆相クロマトグラフィーにより段階的に精製して、目的のカプサイシノイド様物質を得る方法が開示されている。
【０００７】
特許文献４は、トウガラシを超臨界又はその近傍の状態にある二酸化炭素を抽剤として用いて抽出処理することを特徴とするカプサイシノイド様物質の抽出方法に関する技術を開示している。
【０００８】
特許文献５は、カプシノイドを含有するトウガラシから、前記カプシノイドを溶媒で抽出する溶媒抽出工程と、該溶媒抽出工程後の抽出液から、前記溶媒を分離して前記カプシノイドを濃縮する濃縮工程とを少なくとも含むカプシノイド抽出物の製造方法において、前記抽出溶媒としてエタノール又は含水エタノールを用い、前記溶媒抽出工程を酸性条件下で行なうことを特徴とするカプシノイド抽出物の製造方法に関する技術を開示している。
【０００９】
【特許文献１】特開２００４−６６２２７号公報
【特許文献２】特開２００６−１９９６０４号公報
【特許文献３】特開平１１−２４６４７８号公報
【特許文献４】特開２００２−２２６４４５号公報
【特許文献５】特開２００４−１８４２８号公報
【非特許文献１】Ｊ．  Ａｇｒｉｃ．  Ｆｏｏｄ  Ｃｈｅｍ．、４６巻、１６９５〜１６９７頁
【非特許文献２】Ｊ．  Ｎａｔ．  Ｐｒｏｄ．、６２巻、３３５〜３３６頁
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
しかし、特許文献１及び２においては、抽出物の回収方法として多孔性樹脂等の吸着剤を用いる吸着法が例示されているものの、厳密にはカプシノイド類の抽出のみであり、具体的な分離精製例は開示されていないことから、分離精製度が低いこと、及びカプサイシノイド類を有する原料混合物においては、開示された技術を必ずしもそのまま応用することができないことが考えられる。
【００１１】
また、特許文献３に開示されたシリカゲルクロマトグラフィー及びシリカゲル上の逆相クロマトグラフィーにより段階的に精製する技術は、特許文献４においても指摘されているように、精製工程においてカプシノイド類が徐々に分解されるため、カプシノイドを高収率で抽出することができないという問題が考えられる。
【００１２】
さらに、特許文献４に開示された抽出方法は、該方法において用いられる超臨界抽出装置の装置コストが高いという問題がある。
【００１３】
また、特許文献５に開示された技術は、カプシノイド類の分解を抑制するために添加される有機酸または無機酸が抽出物に混在する問題がある。
【００１４】
このように、従来技術においては工業的に効率的かつ安定的な方法で、カプサイシノイド類およびカプシノイド類を分離することは困難であった。
本発明は上記実情に鑑みてなされたものであり、その目的は、工業的に効率的かつ安定的なカプサイシノイド類の分離方法、カプシノイド類の分離方法およびカプサイシノイド類とカプシノイド類との分離方法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１５】
本発明のカプサイシノイド類を含有する原料からカプサイシノイド類を分離する方法は、固定相と移動相とを有する液体クロマトグラフィー法により分離する方法において、該固定相として（メタ）アクリル酸エステル系架橋（共）重合体からなる多孔質有機高分子粒子を用いることを特徴とする。
【００１６】
このような構成の分離方法は、前記固定相として、カプサイシノイド類を保持しやすい、（メタ）アクリル酸エステル系架橋（共）重合体からなる多孔質有機高分子粒子を用いることにより、カプサイシノイド類を含有する原料から、効率よく所望のカプサイシノイド類のみを分離することができる。したがって、本発明の分離方法は、従来技術では困難であったカプサイシノイド類の高効率な分離が、工業的な規模であっても効率的かつ安定的に行なうことができる。
【００１７】
本発明のカプシノイド類を含有する原料からカプシノイド類を分離する方法は、固定相と移動相とを有する液体クロマトグラフィー法により分離する方法において、該固定相として（メタ）アクリル酸エステル系架橋（共）重合体からなる多孔質有機高分子粒子を用いることを特徴とする。
【００１８】
このような構成の分離方法は、前記固定相として、カプシノイド類を保持しやすい、（メタ）アクリル酸エステル系架橋（共）重合体からなる多孔質有機高分子粒子を用いることにより、カプシノイド類を含有する原料から、効率よく所望のカプシノイド類のみを分離することができる。したがって、本発明の分離方法は、従来技術では困難であったカプシノイド類の高効率な分離が、工業的な規模であっても効率的かつ安定的に行なうことができる。
【００１９】
本発明のカプサイシノイド類とカプシノイド類とを含有する原料からカプサイシノイド類とカプシノイド類とを分離する方法は、固定相と移動相とを有する液体クロマトグラフィー法により分離する方法において、該固定相として（メタ）アクリル酸エステル系架橋（共）重合体からなる多孔質有機高分子粒子を用いることを特徴とする。
【００２０】
このような構成の分離方法は、前記固定相として、カプサイシノイド類及びカプシノイド類を保持しやすい、（メタ）アクリル酸エステル系架橋（共）重合体からなる多孔質有機高分子粒子を用いることにより、カプサイシノイド類及びカプシノイド類を含有する原料から、効率よく所望のカプサイシノイド類及びカプシノイド類のみをそれぞれ分離することができる。したがって、本発明の分離方法は、従来技術では困難であった同一原料からのカプサイシノイド類及びカプシノイド類の高効率な分離が、工業的な規模であっても効率的かつ安定的に行なうことができる。
【００２１】
本発明の分離方法は、前記移動相に水を含まないことが好ましい。
【００２２】
このような構成の分離方法は、前記移動相に水を含まないことにより、液体クロマトグラフィー法による分離中において、カプサイシノイド類及び／又はカプシノイド類の加水分解が生じることがなく、効率よく所望のカプサイシノイド類及び／又はカプシノイド類を得ることができる。
【００２３】
本発明の分離方法は、前記移動相が、前記多孔質有機高分子粒子に比べて低い比誘電率を有する溶媒、又は、該低い比誘電率を有する溶媒と前記多孔質有機高分子粒子に比べて高い比誘電率を有する溶媒との混合溶媒のいずれか一方であることが好ましい。
【００２４】
このような構成の分離方法は、前記移動相に、前記固定相よりも低い比誘電率を有する溶媒、又は、前記固定相よりも低い比誘電率を有する溶媒と、前記固定相よりも高い比誘電率を有する溶媒との混合溶媒のいずれか一方を用いることによって、カプサイシノイド類及び／又はカプシノイド類の固定相からの溶出を適度に制御することができ、順相液体クロマトグラフィーの分離の性能を向上させることができる。
【００２５】
本発明の分離方法は、前記移動相が、比誘電率２．５未満の溶媒、又は、比誘電率が２．５未満である溶媒と比誘電率が２．５以上である溶媒とを、比誘電率が２．５未満の溶媒が、溶媒全体の体積を１００体積部とした時に５０体積部を超えるように混合した溶媒のいずれか一方であることが好ましい。
【００２６】
このような構成の分離方法は、前記移動相に、一定値未満の比誘電率を有する溶媒、又は、一定値未満の比誘電率を有する溶媒と、一定値以上の比誘電率を有する溶媒とが適切な割合で混合された混合溶媒のいずれか一方を用いることによって、カプサイシノイド類及び／又はカプシノイド類の固定相からの溶出をより適切に制御することができ、順相液体クロマトグラフィーの分離の性能をさらに向上させることができる。
【００２７】
本発明の分離方法は、前記移動相が、ヘキサン、ヘキサン／エタノール混合溶媒、ヘキサン／メタノール混合溶媒、およびヘキサン／アセトン混合溶媒からなる群から選ばれる１種であることが好ましい。
【００２８】
このような構成の分離方法は、前記移動相に、適切な溶媒又は混合溶媒を用いることによって、カプサイシノイド類及び／又はカプシノイド類の固定相からの溶出をより適切に制御することができ、順相液体クロマトグラフィーの分離の性能をさらに向上させることができる。
【００２９】
本発明の分離方法は、前記移動相が、ヘキサン、又はヘキサン／エタノール混合溶媒であることが好ましい。
【００３０】
このような構成の分離方法は、前記移動相に、最も適切な溶媒又は混合溶媒であり、且つ、人体への影響等が少ないヘキサン、又はヘキサン／エタノール混合溶媒を用いることによって、カプサイシノイド類及び／又はカプシノイド類の固定相からの溶出をより適切に制御することができ、順相液体クロマトグラフィーの分離の性能を最も向上させることが可能であり、さらに、分離したカプサイシノイド類及び／又はカプシノイド類から溶媒を完全に除去するために特別な処置を講ずることなく、該カプサイシノイド類及び／又はカプシノイド類を食品添加物等に用いることができる。
【００３１】
本発明の分離方法は、前記多孔質有機高分子粒子の窒素吸着法で求められる比表面積が、５０ｍ２／ｇ以上、２０００ｍ２／ｇ以下の範囲であり、かつ、窒素吸着法で求められる細孔容積が０．１ｍｌ／ｇ以上、３．０ｍｌ／ｇ以下であることが好ましい。
【００３２】
このような構成の分離方法は、適切な比表面積及び細孔容積を有する多孔質有機高分子粒子を固定相として用いることによって、固定相が適度な保持力を発揮し、効率よく所望のカプサイシノイド類及び／又はカプシノイド類を得ることができる。
【発明の効果】
【００３３】
本発明の分離方法によれば、前記固定相として、カプサイシノイド類及びカプシノイド類を保持しやすい、（メタ）アクリル酸エステル系架橋（共）重合体からなる多孔質有機高分子粒子を用いることにより、カプサイシノイド類及びカプシノイド類を含有する原料から、効率よく所望のカプサイシノイド類及びカプシノイド類のみをそれぞれ分離することができる。したがって、本発明の分離方法によれば、従来技術では困難であったカプサイシノイド類及び／又はカプシノイド類の高効率な分離が、工業的な規模であっても効率的かつ安定的に行なうことができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３４】
本発明のカプサイシノイド類を含有する原料からカプサイシノイド類を分離する方法は、固定相と移動相とを有する液体クロマトグラフィー法により分離する方法において、該固定相として（メタ）アクリル酸エステル系架橋（共）重合体からなる多孔質有機高分子粒子を用いることを特徴とする。
【００３５】
本発明のカプシノイド類を含有する原料からカプシノイド類を分離する方法は、固定相と移動相とを有する液体クロマトグラフィー法により分離する方法において、該固定相として（メタ）アクリル酸エステル系架橋（共）重合体からなる多孔質有機高分子粒子を用いることを特徴とする。
【００３６】
本発明のカプサイシノイド類とカプシノイド類とを含有する原料からカプサイシノイド類とカプシノイド類とを分離する方法は、固定相と移動相とを有する液体クロマトグラフィー法により分離する方法において、該固定相として（メタ）アクリル酸エステル系架橋（共）重合体からなる多孔質有機高分子粒子を用いることを特徴とする。
【００３７】
以下、本発明の実施の形態について詳細に説明するが、本発明は以下の実施の形態に限定されるものではなく、その要旨の範囲内で種々変形して実施することができる。
本発明において、（メタ）アクリル酸とは、アクリル酸、及び、メタアクリル酸のことである。また、（共）重合体とは、１種類のモノマーが重合してなる重合体、及び、複数の種類のモノマーが重合してなる共重合体のことである。
本発明は、液体クロマトグラフィーにより、カプサイシノイド類及び／又はカプシノイド類を分離する方法に関するものであり、該液体クロマトグラフィーの固定相として（メタ）アクリル酸エステル系架橋（共）重合体からなる多孔質有機高分子粒子を用いるものである。
本発明の分離方法は、カプサイシノイド類及びカプシノイド類を含有する原料からカプサイシノイド類及びカプシノイド類を効率的に分離することができることをその特徴とする。本発明の分離方法によれば、特に、工業的な規模であっても、カプサイシノイド類又はカプシノイド類を含有する原料からカプサイシノイド類又はカプシノイド類を効率的に分離することができる。さらに、工業的な規模であっても、カプサイシノイド類及びカプシノイド類を含有する同一原料から、カプサイシノイド類又はカプシノイド類をそれぞれ効率的に分離することができる。
カプサイシノイド類及びカプシノイド類を含有する原料としてはトウガラシ、トウガラシ無辛味固定品種「ＣＨ−１９甘」等からの公知の方法による抽出物が例示される。
【００３８】
本発明において、「カプサイシノイド類」とは、カプサイシンと同様の基本骨格を有し、且つ、カプサイシンと同質の生理活性（上述したエネルギー代謝促進作用、肥満抑制作用、免疫賦活作用等）を有する化合物群の総称である。ここでいう「カプサイシンと同様の基本骨格」とは、下記式（１）の一般式に示すような、ベンゼン環及びアミド基を有し、且つ、該ベンゼン環及び該アミド基の窒素原子がメチレン鎖で結合し、且つ、該アミド基の炭素原子には脂肪族炭化水素基又は芳香族炭化水素基（下記式（１）中のＲ）が付加し、且つ、該ベンゼン上に、１以上のアルコキシ基（下記式（１）中の‐ＯＲａ）及び１以上のヒドロキシ基が置換している構造のことである。
【００３９】
【化１】
2010077086.tif 000003
（上記式（１）中の置換基Ｒは、炭素数５〜１５の脂肪族炭化水素基、又は炭素数６〜１５の芳香族炭化水素基を示す。ｍ、ｎはそれぞれ１〜４の自然数であり、ｍとｎの和が２以上５以下であれば、ヒドロキシ基及びアルコキシ基（‐ＯＲａ）の置換位置は問わない。アルコキシ基上のＲａは、炭素数１〜３の脂肪族炭化水素基である。）
【００４０】
カプサイシノイド類の具体例としては、例えば、下記式（２）に示すような構造を有するものを挙げることができる。
【００４１】
【化２】
2010077086.tif 000004
（上記式（２）中の置換基Ｒは、炭素数５〜１５の脂肪族炭化水素基、又は炭素数６〜１５の芳香族炭化水素基を示す。Ｒ１〜Ｒ５は、置換基Ｒの例であり、Ｒ１：カプサイシン、Ｒ２：ジヒドロカプサイシン、Ｒ３：ノルジヒドロカプサイシン、Ｒ４：ホモカプサイシン、Ｒ５：ホモジヒドロカプサイシンである。）
【００４２】
本発明において、「カプシノイド類」とは、カプシエイトと同様の基本骨格を有し、且つ、カプシエイトと同質の生理活性（上述したエネルギー代謝促進作用、肥満抑制作用、免疫賦活作用等）を有する化合物群の総称である。ここでいう「カプシエイトと同様の基本骨格」とは、下記式（３）の一般式に示すような、ベンゼン環及びエステル基を有し、且つ、該ベンゼン環及び該エステル基の酸素原子がメチレン鎖で結合し、且つ、該エステル基の炭素原子には脂肪族炭化水素基又は芳香族炭化水素基（下記式（３）中のＲ）が付加し、且つ、該ベンゼン上に、１以上のアルコキシ基（下記式（３）中の‐ＯＲａ）及び１以上のヒドロキシ基が置換している構造のことである。
【００４３】
【化３】
2010077086.tif 000005
（上記式（３）中の置換基Ｒは、炭素数５〜１５の脂肪族炭化水素基、又は炭素数６〜１５の芳香族炭化水素基を示す。ｍ、ｎはそれぞれ１〜４の自然数であり、ｍとｎの和が２以上５以下であれば、ヒドロキシ基及びアルコキシ基（‐ＯＲａ）の置換位置は問わない。アルコキシ基上のＲａは、炭素数１〜３の脂肪族炭化水素基である。）
【００４４】
カプシノイド類の具体例としては、例えば、下記式（４）に示すような構造を有するものを挙げることができる。
【００４５】
【化４】
2010077086.tif 000006
（上記式（４）中の置換基Ｒは、炭素数５〜１５の脂肪族炭化水素基、又は炭素数６〜１５の芳香族炭化水素基を示す。Ｒ６〜Ｒ８は、置換基Ｒの例であり、Ｒ６：カプシエイト、Ｒ７：ジヒドロカプシエイト、Ｒ８：ノルジヒドロカプシエイトである。）
【００４６】
本発明において用いられる液体クロマトグラフィーは、順相液体クロマトグラフィーであることが好ましい。順相液体クロマトグラフィーとは、固定相に対して、該固定相よりも極性の低い移動相を通液し、試料を負荷、分離する方法である。
上述した特許文献３に開示されたシリカゲルクロマトグラフィー及びシリカゲル上の逆相クロマトグラフィーにより段階的に精製する技術は、上述した特許文献４においても指摘されているように、精製工程においてカプシノイド類が徐々に分解されるため、カプシノイドを高収率で抽出することができないという問題が考えられる。その理由の１つとしては、特許文献３において行われる逆相クロマトグラフィーに用いられた移動相中には水が含まれていることから、目的生成物であるカプシノイドの一部を加水分解によって失ってしまったと推測される。
順相液体クロマトグラフィーを用いた場合は、逆相クロマトグラフィーと異なり、移動相において水が必須ではないため、移動相に無水溶媒を用いることにより、分離中にカプサイシノイド類およびカプシノイド類が加水分解される問題を抑制することが可能であり、上述した原料の分離に好適である。
【００４７】
（固定相）
本発明においては、液体クロマトグラフィーの固定相として、（メタ）アクリル酸エステル系架橋（共）重合体からなる多孔質有機高分子粒子を用いる。これにより、後述の実施例にあるように、カプサイシノイド類又はカプシノイド類の分離が可能となり、更にはカプサイシノイド類とカプシノイド類との分離も可能となる。なお、この（メタ）アクリル酸エステル系架橋（共）重合体からなる多孔質有機高分子粒子は、固定相として用いた場合に、高度分離に適した数μｍの小粒径から、工業用分離に適した数百μｍの大粒径までの広範囲な粒子径の粒子の製造再現性に優れるという特徴を有するものである。多孔質有機高分子粒子の粒子径の範囲としては、一般的に、１μｍ以上２ｍｍ以下の範囲のものを用いることができる。
【００４８】
また、本発明においては、固定相として（メタ）アクリル酸エステル系架橋（共）重合体からなる多孔質有機高分子粒子を用いることにより、カプサイシノイド類およびカプシノイド類を含有する溶液の分離を行った場合に、カプサイシノイド類およびカプシノイド類の固定相に対する吸着性が従来のシリカゲル担体の場合よりも高いため、仮に、極性有機溶媒（アルコール等）で抽出した原料から所望のカプサイシノイド類及び／又はカプシノイド類を分離する場合であっても、抽出した溶液を直接カラムに注入することができ、カラム注入前に抽出物から抽出溶媒である極性有機溶媒を除去したり、又は、極性有機溶媒以外の他の溶剤を用いて抽出する必要がなく、本発明を工業的に実施する際に極めて有利といえる。
（メタ）アクリル酸エステル系架橋（共）重合体からなる多孔質有機高分子粒子に対する、カプサイシノイド類およびカプシノイド類の吸着性が高い理由としては、該架橋（共）重合体がエステル基を有するため、架橋（共）重合体自体の極性が高く保持力が高いこと、及び、カプシノイド類自体もエステル基を有し、カプサイシノイド類はエステル基とよく似た構造を有するアミド基を有することから、該架橋（共）重合体とカプサイシノイド類又はカプシノイド類との親和性が高いことが挙げられる。また、カプサイシノイド類及びカプシノイド類を同一原料からそれぞれ分離することができる理由としては、該架橋（共）重合体自身の、カプサイシノイド類が有するアミド基に対する親和性と、カプシノイド類が有するエステル基に対する親和性とが異なることが挙げられる。
【００４９】
本発明で用いられる（メタ）アクリル酸エステル系架橋（共）重合体からなる多孔質有機高分子粒子としては、液体クロマトグラフィーに使用可能なものであれば特に制限はない。代表的な（メタ）アクリル酸エステル系架橋（共）重合体としては、例えば、（メタ）アクリル酸エステルおよびその誘導体と（メタ）アクリル酸ポリオールエステルとの共重合体、（メタ）アクリル酸ポリオールエステルの単独重合体、又は（メタ）アクリル酸ポリオールエステルのすくなくとも２種の共重合体が挙げられる。
上記に例示した中でも、（メタ）アクリル酸エステル系架橋（共）重合体の具体例としては、（メタ）アクリル酸ポリオールエステルの単独重合体や（メタ）アクリル酸エステルと（メタ）アクリル酸ポリオールエステルとの架橋共重合体が好ましい。
（メタ）アクリル酸エステルおよびその誘導体としては、具体的には、（メタ）アクリル酸メチル、（メタ）アクリル酸エチル等の（メタ）アクリル酸アルキルエステル類；（メタ）アクリル酸ヒドロキシエチル、（メタ）アクリル酸ヒドロキシプロピル、（メタ）アクリル酸３−クロロ−２−ヒドロキシプロピル、（メタ）アクリル酸２−クロロエチル、（メタ）アクリル酸グリシジル、（メタ）アクリル酸ジメチルアミノエチル、（メタ）アクリル酸ジエチルアミノエチル、（メタ）アクリル酸テトラヒドロフルフリル、（メタ）アクリル酸２，３−ジヒドロキシプロピル等の（メタ）アクリル酸エステル誘導体類が挙げられる。
【００５０】
また、（メタ）アクリル酸ポリオールエステルとしては、（ポリ）エチレングリコールジ（メタ）アクリレート、（ポリ）プロピレングリコールジ（メタ）アクリレート、グリセリンジ（メタ）アクリレート、グリセリントリ（メタ）アクリレート、トリメチロールプロパントリ（メタ）アクリレート、テトラヒドロキシブタンジ（メタ）アクリレート、ブタンジオールジ（メタ）アクリレート，ネオペンチルグリコールジ（メタ）アクリレート、ヘキサンジオールジ（メタ）アクリレート、ペンタエリスリトールジ（メタ）アクリレート、ジペンタエリスリトールテトラ（メタ）アクリレート等が挙げられる。
これらの架橋（共）重合体等はそのままで用いることもできるが、必要に応じて更に官能基を導入して用いてもよい。導入する官能基としては、例えば、水酸基、エステル基、エーテル基、カルボニル基等の含酸素官能基、アミノ基、アミド基、ニトロ基、ニトリル基等の含窒素官能基、チオール基、スルホン基等の含硫黄官能基等が挙げられる。中でも、水酸基、エステル基、アミノ基、アミド基、ニトリル基が好ましく、水酸基、エステル基が更に好ましい。
【００５１】
本発明に用いられる（メタ）アクリル酸エステル系架橋（共）重合体は、（メタ）アクリル酸エステルモノマーを繰り返し単位として５０ｍｏｌ％以上、好ましくは６０ｍｏｌ％以上、最も好ましくは７０ｍｏｌ％以上有し、且つ、多官能アクリルエステルのようなアクリル基又はその他のエチレン性不飽和結合を２以上有するモノマーを架橋成分として有していればよい。なお、本発明に用いられる架橋（共）重合体には、これらのモノマー以外のモノマーが繰り返し単位として含まれていてもよいが、その割合は好ましくは５ｍｏｌ％以下、さらに好ましくは１ｍｏｌ％以下、最も好ましくは０．０１ｍｏｌ％以下である。
【００５２】
架橋（共）重合体の架橋度としては、液体クロマトグラフィーのカラムとして用いることが可能な強度を与えられればよく、通常は０．１重量％以上、好ましくは１０重量％以上、最も好ましくは２０重量％以上である。これは、架橋度が０．１重量％未満であるとすると、架橋（共）重合体の機械的強度を保つことができないからである。ここで、架橋度とは、架橋しているモノマーの重量を、重合体の主骨格を構成するモノマーの重量及び架橋モノマーの重量の和で割った値のことである。
なお、上記に例示した架橋（共）重合体は、公知の方法により製造することができる。
【００５３】
本発明において、（メタ）アクリル酸エステル系架橋（共）重合体からなる有機高分子粒子は、多孔性であることが好ましい。多孔性のものを用いると、順相クロマトグラフィーによる分離時の処理量を高めるために有効であるからである。
（メタ）アクリル酸エステル系架橋（共）重合体からなる有機高分子粒子（以下、単に「有機高分子粒子」と称する場合がある。）の多孔性の程度としては、具体的には、窒素吸着法にて求められる比表面積として、通常１ｍ２／ｇ以上、好ましくは５０ｍ２／ｇ以上、更に好ましくは１００ｍ２／ｇ以上であり、また、通常２０００ｍ２／ｇ以下である。
窒素吸着法にて求められる、有機高分子粒子の細孔容積としては、通常０．０１ｍｌ／ｇ以上、好ましくは０．１ｍｌ／ｇ以上、更に好ましくは０．２ｍｌ／ｇ以上であり、また、通常３．０ｍｌ／ｇ以下である。
なお、前記の比表面積は、例えば、フローソーブ２３００型（マイクロメリティクス社製）を用いて、前記の細孔容積は、例えば、ＡＳＡＰ２４００型（マイクロメリティクス社製）を用いて測定することができる。
有機高分子粒子の平均粒子径としては、通常１μｍ以上２ｍｍ以下の範囲、好ましくは３μｍ以上２ｍｍ以下の範囲、工業的に更に好ましくは４μｍ以上１ｍｍ以下の範囲である。また、有機高分子粒子の粒子形状は真球状であることが好ましく、粒子径分布は狭いことが好ましい。
【００５４】
本発明の（メタ）アクリル酸エステル系架橋（共）重合体からなる多孔質有機高分子粒子としては、上記の特性を満たす限り、市販品から適宜選定することができる。具体的には、ダイヤイオン  ＨＰ１ＭＧ、ＨＰ２ＭＧ（細孔容積：１．２ｍｌ／ｇ、比表面積：４７０ｍ２／ｇ）等、ＭＣＩＧＥＬＣＨＰ２ＭＧＭ、ＣＨＰ２ＭＧ、ＣＨＰ２ＭＧＹ等、セパビーズ  ＳＰ２ＭＧＳ、ＦＰ−ＨＧ等（以上三菱化学社製；商品名）、アンバーライト  ＸＡＤ７、ＸＡＤ７ＨＰ（比表面積：３８０ｍ２／ｇ）、アンバークロム  ＣＧ−７１（比表面積：５００ｍ２／ｇ）等（以上、ローム・アンド・ハース社製；商品名）等が挙げられる。
【００５５】
本発明において用いられる液体クロマトグラフィーとしては、順相液体クロマトグラフィーであることが好ましく、順相液体クロマトグラフィーとするためには、固定相よりも極性の低い移動相を選択する必要がある。極性を表す指標としては、比誘電率が挙げられ、例えばポリマーハンドブック第３版によれば、ポリメタクリル酸メチルの比誘電率は２．５７〜３．６である。
【００５６】
（移動相）
移動相としては、通常、上述した固定相よりも極性の低い有機溶媒を使用することができるが、カプサイシノイド類およびカプシノイド類の加水分解による回収率の低下を抑えるためには移動相に水を含まないことが好ましい。
なお、ここでいう「水を含まない」溶媒とは、水を意図的に含有させていないが、不純物としての水を、本発明の目的を達成することが可能な程度の比較的少量だけ（特に好ましくは極めて微量に）含んでいてもよい溶媒のことであり、一般に液体クロマトグラフィー法に用いられる無水溶媒程度の水分含有率、すなわち１．０重量％以下、好ましくは０．５重量％以下の水分を含んだ溶媒のことをいう。移動相の水分含有率としては、０．１重量％以下であるのがさらに好ましく、０．０５重量％以下であるのが最も好ましい。
【００５７】
より具体的には、カプサイシノイド類及び／又はカプシノイド類の固定相からの溶出を適度に制御することができ、順相液体クロマトグラフィーの分離の性能を向上させることができるという観点から、移動相が、固定相として用いる多孔質有機高分子粒子に比べて低い比誘電率を有する溶媒、又は、該低い比誘電率を有する溶媒と、固定相として用いる多孔質有機高分子粒子に比べて高い比誘電率を有する溶媒との混合溶媒のいずれか一方であることが好ましい。
【００５８】
移動相の極性に関し、比誘電率で規定すると、比誘電率２．５未満の溶媒、あるいは、比誘電率が２．５未満である溶媒と比誘電率が２．５以上である溶媒とを、比誘電率が２．５未満の溶媒が、溶媒全体の体積を１００体積部とした時に５０体積部を超える、好ましくは７０体積部以上、更に好ましくは８０体積部以上の割合となるように混合した溶媒のいずれか一方を、移動相として選択することが好ましい。これは、移動相に、一定値未満の比誘電率を有する溶媒、又は、一定値未満の比誘電率を有する溶媒と、一定値以上の比誘電率を有する溶媒とが適切な割合で混合された混合溶媒のいずれか一方を用いることによって、カプサイシノイド類及び／又はカプシノイド類の固定相からの溶出をより適切に制御することができ、順相液体クロマトグラフィーの分離の性能をさらに向上させることができるからである。
なお、本発明において比誘電率とは、真空の誘電率に対する物質の誘電率の比をいい、測定方法はＪＩＳＣ２１３８に準拠する。
移動相として用いることのできる比誘電率２．５未満の溶媒としては、具体的には、ｎ−ペンタン（比誘電率１．８４４）、ｎ−ヘキサン（比誘電率１．８９０）、ｎ−ヘプタン（比誘電率１．９２４）、ｎ−オクタン（比誘電率１．９４８）、イソオクタン（比誘電率１．９４３）、シクロヘキサン（比誘電率２．０５２）等の飽和脂肪族系炭化水素、およびトルエン（比誘電率２．２４）、キシレン（比誘電率２．２６６）等の芳香族系炭化水素からなる群より選択される一種または二種以上の炭化水素系有機溶媒が挙げられる。
これらの炭化水素系有機溶媒は、必要に応じて、比誘電率が２．５以上である溶媒としての極性有機溶媒を少量含んでいても良い。炭化水素系有機溶媒と極性有機溶媒との混合溶媒を用いると、溶離位置の調整が容易になり好適であるからである。
【００５９】
上記の比誘電率が２．５未満である溶媒としての炭化水素系有機溶媒に対して添加し得る極性有機溶媒としては、比誘電率が２．５以上、好ましくは通常比誘電率が４〜３８の有機溶媒から選ばれる。具体的にはメタノール（比誘電率３３．１）、エタノール（比誘電率２３．８）、ｎ−プロパノール（比誘電率２２．２）、２−プロパノール（比誘電率１８．３）等の炭素数１から６の脂肪族アルコール類；酢酸エチル（比誘電率６．０２）、酢酸プロピル（比誘電率６．００２）等のアルキル鎖の炭素数が１から６の酢酸アルキルエステル類；クロロホルム（比誘電率４．９）、ジクロロメタン（比誘電率９．１）等の塩素系有機化合物類；アセトン（比誘電率２０．７）、メチルエチルケトン（比誘電率１８．５１）等のアルキルケトン類；ジエチルエーテル（比誘電率４．１９７）、ジイソプロピルエーテル（比誘電率４．４９）、テトラヒドロフラン（比誘電率７．５８）等のアルキルエーテル類、およびアセトニトリル（比誘電率３７．５）等からなる群から任意に選択された一種又は二種以上の有機溶媒が挙げられる。
【００６０】
液体クロマトグラフィー法における移動相がヘキサン、ヘキサン／エタノール混合溶媒、ヘキサン／メタノール混合溶媒、およびヘキサン／アセトン混合溶媒からなる群から選ばれる１種であることが好ましい。これは、移動相に、適切な溶媒又は混合溶媒を用いることによって、カプサイシノイド類及び／又はカプシノイド類の固定相からの溶出をより適切に制御することができ、順相液体クロマトグラフィーの分離の性能をさらに向上させることができるからである。
【００６１】
移動相がヘキサン、又はヘキサン／エタノール混合溶媒であることが特に好ましい。これは、移動相に、最も適切な溶媒又は混合溶媒であり、且つ、人体への影響等が少ないヘキサン、又はヘキサン／エタノール混合溶媒を用いることによって、カプサイシノイド類及び／又はカプシノイド類の固定相からの溶出をより適切に制御することができ、順相液体クロマトグラフィーの分離の性能を最も向上させることが可能であり、さらに、分離したカプサイシノイド類及び／又はカプシノイド類から溶媒を完全に除去するために特別な処置を講ずることなく、該カプサイシノイド類及び／又はカプシノイド類を食品添加物等に用いることができるからである。
【００６２】
なお、炭化水素系有機溶媒が含有し得る極性有機溶媒の量は、固定相の極性度、有機溶媒の種類、比誘電率等によっても異なり画一的には決められないが、溶媒全体の体積を１００体積部とした時に、通常５０体積部未満、好ましくは３０体積部以下、更に好ましくは２０体積部以下である。
【００６３】
（クロマトグラフィー装置）
本発明において行われる液体クロマトグラフィー分離を実施する装置については、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）装置、中圧液体クロマトグラフィー装置、低圧液体クロマトグラフィー装置等、公知の装置が使用できる。
また、本発明において行われる順相液体クロマトグラフィー分離においては、単カラム法、多段カラム法、複数のカラムを循環接続させ、移動相通液、試料添加および分離成分抜き出しを各カラム間に設けたバルブを介して行ういわゆる擬似移動床（擬似移動相、Ｓｉｍｕｌａｔｅｄ  Ｍｏｖｉｎｇ  ＢｅｄまたはＳＭＢ）法、改良型擬似移動床（Ｉｍｐｒｏｖｅｄ  Ｓｉｍｕｌａｔｅｄ  Ｍｏｖｉｎｇ  ＢｅｄまたはＩＳＭＢ）法等が可能である。
【００６４】
本発明の分離方法によれば、前記固定相として、カプサイシノイド類及びカプシノイド類を保持しやすい、（メタ）アクリル酸エステル系架橋（共）重合体からなる多孔質有機高分子粒子を用いることにより、カプサイシノイド類及びカプシノイド類を含有する原料から、効率よく所望のカプサイシノイド類及びカプシノイド類のみをそれぞれ分離することができる。したがって、本発明の分離方法によれば、従来技術では困難であったカプサイシノイド類及び／又はカプシノイド類の高効率な分離が、工業的な規模であっても効率的かつ安定的に行なうことができる。
【実施例】
【００６５】
以下に、本発明の具体的態様を実施例により更に詳細に説明するが、本発明はその要旨を超えない限り、これらの実施例によって限定されるものではない。
【００６６】
（実施例１）
送液ポンプ、オートサンプルインジェクタ、紫外吸光度検出器、およびデータ処理装置を備えた高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）装置を用い、固定相としては、（メタ）アクリル酸エステル系架橋（共）重合体からなる多孔質有機高分子粒子である、ＭＣＩＧＥＬ ＣＨＰ２ＭＧ（三菱化学株式会社製、粒子径１０μｍ）を、内径４．６ｍｍ、長さ２５０ｍｍのステンレス製カラムに充填したものを使用した。移動相として、ｎ−ヘキサン／エタノール＝８７．５／１２．５（体積比）を用いた順相液体クロマトグラフィー条件で、送液ポンプにて流速１．００ｍｌ／分で通液した。実験室内の温度は２５℃であった。
【００６７】
試料（分離する原料）として、カプサイシン（和光純薬社製、生化学用）１ｍｇをエタノール（純正化学製、試薬特級）１．００ｇに溶解した溶液を用い、オートサンプルインジェクタにて２０μｌをカラムに注入し、分離を行なった。
紫外吸光度検出器の波長を２８０ｎｍとして得られたクロマトグラムを図１に示す。図１において、横軸は保持体積（保持時間に流速を掛けた値）をカラム体積にて割った値を表し、縦軸は波長２８０ｎｍにおける吸光度を表す。後掲の図２〜図１３においても同様である。カプサイシン単独では（保持体積）／（カラム体積）が約４．１の位置にカプサイシンのピークが鋭く検出された。
【００６８】
（実施例２）
試料として、ジヒドロカプサイシン（シグマ社製、純度９０％以上。）１ｍｇを、エタノール（純正化学製、試薬特級）１．００ｇに溶解したものを用いたこと以外は、実施例１と同一の条件にて順相クロマトグラフィー分離を行った。
得られたクロマトグラムを図２に示す。ジヒドロカプサイシン単独では（保持体積）／（カラム体積）が約３．７の位置にジヒドロカプサイシンのピークが鋭く検出された。図１との比較において、（保持体積）／（カラム体積）の位置が離れており、またピークも鋭いことからカプサイシンとジヒドロカプサイシンとの分離が可能であることがわかる。
【００６９】
（実施例３）
試料として、トウガラシ末（高砂薬業社製）１．００ｇをエタノール（純正化学製、試薬特級）２５ｍｌにて抽出したものを用いたこと以外は、実施例１と同一の条件で順相クロマトグラフィー分離を行った。
得られたクロマトグラムを図３に示す。図３において、図１とほぼ同じ（保持体積）／（カラム体積）に、カプサイシン由来のピークが存在し、図２とほぼ同じ（保持体積）／（カラム体積）に、ジヒドロカプサイシン由来のピークが存在していることがわかる。
従って、本実施例において、トウガラシ末エタノール抽出物よりカプサイシンとジヒドロカプサイシンをそれぞれ分離することが可能であることがわかる。
【００７０】
（実施例４）
試料として、トウガラシ末（高砂薬業社製）１．００ｇをエタノール（純正化学製、試薬特級）２５ｍｌにて抽出したものを用い、注入量を４０μｌとしたこと以外は、実施例１と同一の条件で順相クロマトグラフィー分離を行った。
得られたクロマトグラムを図４に示す。（メタ）アクリル酸エステル系架橋（共）重合体からなる多孔質有機高分子粒子を固定相に用いた場合は、同じ試料について注入量を２０μｌとした実施例３と比較するとわかるように、トウガラシ末エタノール抽出物の注入量を倍に増やした図４の場合でも抽出剤であるエタノールの影響は少なく、図１とほぼ同じ（保持体積）／（カラム体積）に、カプサイシン由来のピークが存在し、図２とほぼ同じ（保持体積）／（カラム体積）に、ジヒドロカプサイシン由来のピークが存在していることがわかる。
【００７１】
（実施例５）
試料として、カプシエイトナチュラ（味の素社製の唐辛子抽出物含有食品。でんぷん、グリセリン、カラギナンおよびｐＨ調整剤からなる被包剤中に内容物として唐辛子抽出物および菜種油を含み、１粒０．３３ｇ中に１．０ｍｇのカプシエイトを含む）１粒中の内容物を、１０．０ｇのヘキサンに溶解したものを用いたこと以外は、実施例１と同一条件にて順相クロマトグラフィー分離を行った。
得られたクロマトグラムを図５に示す。図５において、カプサイシンおよびジヒドロカプサイシンよりも（保持体積）／（カラム体積）の小さい位置に２つのピークが存在することが分かる。これらの２つのピークは、非特許文献１中の記載にある、単離されたカプシエイトとジヒドロカプシエイトの存在比から、（保持体積）／（カラム体積）が約２．７の位置に存在する面積値の小さなピークがジヒドロカプシエイトであり、（保持体積）／（カラム体積）が約３．０の位置に存在する面積値の大きなピークがカプシエイトであると判断できる。
このことから、唐辛子抽出物よりカプシエイトとジヒドロカプシエイトをそれぞれ分離することが可能であることがわかる。さらに、本実施例において得られたカプシエイト、ジヒドロカプシエイトそれぞれの（保持体積）／（カラム体積）の値が、実施例１〜３で示したカプサイシン、ジヒドロカプサイシンの（保持体積）／（カラム体積）の値とそれぞれ異なることから、カプシエイトとジヒドロカプシエイトを、カプサイシンやジヒドロカプサイシンとも分離することが可能であることもわかる。
【００７２】
（実施例６）
送液ポンプ、オートサンプルインジェクタ、紫外吸光度検出器、およびデータ処理装置を備えた高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）装置を用い、固定相としては、（メタ）アクリル酸エステル系架橋（共）重合体からなる多孔質有機高分子粒子である、ＭＣＩＧＥＬ  ＣＨＰ２ＭＧ（三菱化学株式会社製、粒子径１０μｍ）を、内径４．６ｍｍ、長さ２５０ｍｍのステンレス製カラムに充填したものを使用した。移動相として、ｎ−ヘキサン／エタノール＝９０／１０（体積比）を用いた順相液体クロマトグラフィー条件で、送液ポンプにて流速１．００ｍｌ／分で通液した。実験室内の温度は２５℃であった。
【００７３】
試料として、カプシエイトナチュラ（味の素社製の唐辛子抽出物含有食品。でんぷん、グリセリン、カラギナンおよびｐＨ調整剤からなる被包剤中に内容物として唐辛子抽出物および菜種油を含み、１粒０．３３ｇ中に１．０ｍｇのカプシエイトを含む）１粒中の内容物をヘキサンで溶解することなくそのまま用い、オートサンプルインジェクタにて６０μｌをカラムに注入し、分離を行なった。
得られたクロマトグラムを図６に示す。実施例５に比べて負荷量が多くなっても、カプシエイトとジヒドロカプシエイトをそれぞれ分離することが可能であることが分かる。
【００７４】
（実施例７）
送液ポンプ、マニュアルサンプルインジェクタ、紫外吸光度検出器、データ処理装置を備えた高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）装置を用い、固定相としては、（メタ）アクリル酸エステル系架橋（共）重合体からなる多孔質有機高分子粒子であるセパビーズ  ＳＰ２ＭＧＳ（粒子径１４５μｍ、三菱化学社製）を、内径２０ｍｍ、長さ５００ｍｍのステンレス製カラムに充填したものを使用した。移動相として、ｎ−ヘキサン／エタノール＝９０／１０（体積比）を用いた順相液体クロマトグラフィー条件で、送液ポンプにて流速２．３６ｍｌ／分で通液した。実験室内の温度は２５℃であった。
【００７５】
試料として、カプシエイトナチュラ（味の素社製の唐辛子抽出物含有食品。でんぷん、グリセリン、カラギナンおよびｐＨ調整剤からなる被包剤中に内容物として唐辛子抽出物および菜種油を含み、１粒０．３３ｇ中に１．０ｍｇのカプシエイトを含む）８粒中の内容物をそのまま用い、マニュアルサンプルインジェクタにて１．２ｍｌをカラムに注入し、分離を行なった。
紫外吸光度検出器の波長を２８０ｎｍとして得られたクロマトグラムを図７に示す。図７において、図６とほぼ同じ（保持体積）／（カラム体積）に、カプシエイトとジヒドロカプシエイト由来のピークが存在する。
従って、本実施例において、カプシエイトとジヒドロカプシエイトをそれぞれ分離することが可能であることが分かる。
【００７６】
（比較例１）
実施例１で用いたＨＰＬＣ装置と同一のものを用い、固定相としては、ポリスチレン系架橋（共）重合体からなる多孔質有機高分子粒子であるＭＣＩＧＥＬ  ＣＨＰ５Ｃ（三菱化学株式会社製、粒子径１０μｍ）を、内径４．６ｍｍ、長さ１５０ｍｍのステンレス製カラムに充填したものを使用した。移動相として、ｎ−ヘキサン／エタノール＝９８／２（体積比）を用いた順相液体クロマトグラフィー条件で、送液ポンプにて流速１．００ｍｌ／分で通液した。実験室内の温度は２５℃であった。
【００７７】
カプサイシン（和光純薬社製、生化学用）１ｍｇをエタノール（純正化学製、試薬特級）１．００ｇに溶解した溶液を用い、オートサンプルインジェクタにて２０μｌをカラムに注入し、分離を行なった。
紫外吸光度検出器の波長を２８０ｎｍとして得られたクロマトグラムを図８に示す。実施例１とは異なり、カプサイシンの明確なピークが確認できないことがわかる。したがって、ポリスチレン系架橋（共）重合体からなる多孔質有機高分子粒子を固定相として用いた場合には、（メタ）アクリル酸エステル系架橋（共）重合体からなる多孔質有機高分子粒子を用いた場合（実施例１）と異なり、カプサイシンを分離することはできないことがわかる。
【００７８】
（比較例２）
試料として、ジヒドロカプサイシン（シグマ社製、純度９０％以上。）１ｍｇを、エタノール（純正化学製、試薬特級）１．００ｇに溶解したものを用いたこと以外は、比較例１と同一の条件にて順相クロマトグラフィー分離を行った。
得られたクロマトグラムを図９に示す。この場合もジヒドロカプサイシンの明確なピークは確認できず、またカプサイシンとの分離も達成されていないことが分かる。したがって、ポリスチレン系架橋（共）重合体からなる多孔質有機高分子粒子を固定相として用いた場合には、（メタ）アクリル酸エステル系架橋（共）重合体からなる多孔質有機高分子粒子を用いた場合（実施例２）と異なり、ジヒドロカプサイシンを分離することはできないことがわかる。
【００７９】
（参考例１）
実施例１で用いたＨＰＬＣ装置と同一のものを用い、固定相としては、シリカゲル充填カラムであるＹＭＣ  Ｐａｃｋ  ＳＩＬ  ＳＬ１２Ｓ１１−２５４６ＷＴ（粒子径１０μｍ；カラム内径４．６ｍｍ、カラム長さ２５０ｍｍ、ＹＭＣ社製）を用いた。移動相として、ｎ−ヘキサン／エタノール＝９５／５（体積比）を用いた順相液体クロマトグラフィー条件で、送液ポンプにて流速１．００ｍｌ／分で通液した。実験室内の温度は２５℃であった。
【００８０】
カプサイシン（和光純薬社製、生化学用）１ｍｇをエタノール（純正化学製、試薬特級）１．００ｇに溶解した溶液を用い、オートサンプルインジェクタにて２０μｌをカラムに注入し、分離を行なった。
紫外吸光度検出器の波長を２８０ｎｍとして得られたクロマトグラムを図１０に示す。カプサイシン単独では（保持体積）／（カラム体積）が約５．２の位置にカプサイシンのピークがややブロードに検出された。
【００８１】
（参考例２）
試料として、ジヒドロカプサイシン（シグマ社製、純度９０％以上。）１ｍｇを、エタノール（純正化学製、試薬特級）１．００ｇに溶解したものを用いたこと以外は、参考例１と同一の条件にて順相クロマトグラフィー分離を行った。
得られたクロマトグラムを図１１に示す。ジヒドロカプサイシン単独の場合も、（保持体積）／（カラム体積）が約４．９の位置にジヒドロカプサイシンのピークがややブロードに検出された。
【００８２】
（比較例３）
試料として、トウガラシ末（高砂薬業社製）１．００ｇをエタノール（純正化学製、試薬特級）２５ｍｌにて抽出したものを用いたこと以外は、参考例１と同一の条件で順相クロマトグラフィー分離を行った。
得られたクロマトグラムを図１２に示す。（保持体積）／（カラム体積）が約５．０の位置にブロードなピークが存在するが、トウガラシ末エタノール抽出物よりカプサイシンとジヒドロカプサイシンとを分離することは出来ないことがわかる。
シリカゲル充填カラムに多量のアルコールを含有する試料をカラムに注入した本比較例３においては、カプサイシンとジヒドロカプサイシンとを分離する分離能が非常に悪かった。したがって、シリカゲル充填カラムを用いる場合には、アルコールで抽出した試料を直接カラムに注入することは不適切であり、カラム注入前に抽出物からアルコールを除去するか、又は、アルコール以外の他の溶剤を用いて抽出する必要がある。
【００８３】
（比較例４）
試料として、トウガラシ末（高砂薬業社製）１．００ｇをエタノール（純正化学製、試薬特級）２５ｍｌにて抽出したものを用い、注入量を４０μｌとしたこと以外は、参考例１と同一の条件で順相クロマトグラフィー分離を行った。
得られたクロマトグラムを図１３に示す。シリカゲルを固定相に用いた場合は、トウガラシ末エタノール抽出物の注入量を増やすと抽出剤であるエタノールの影響によりカプサイシンとジヒドロカプサイシンとの分離能が低下するのみならず、（保持体積）／（カラム体積）が約４．９の位置になり、カプサイシノイド類の保持が短くなることがわかる。
【産業上の利用可能性】
【００８４】
本発明はカプサイシノイド類およびカプシノイド類を分離する任意の分野において用いることができ、本発明の方法により分離されたカプサイシノイド類およびカプシノイド類は、例えば、食品、医薬品、医薬部外品、化粧品等に有用である。
【図面の簡単な説明】
【００８５】
【図１】本発明の実施例１の結果、得られたクロマトグラムを示す。
【図２】本発明の実施例２の結果、得られたクロマトグラムを示す。
【図３】本発明の実施例３の結果、得られたクロマトグラムを示す。
【図４】本発明の実施例４の結果、得られたクロマトグラムを示す。
【図５】本発明の実施例５の結果、得られたクロマトグラムを示す。
【図６】本発明の実施例６の結果、得られたクロマトグラムを示す。
【図７】本発明の実施例７の結果、得られたクロマトグラムを示す。
【図８】本発明の比較例１の結果、得られたクロマトグラムを示す。
【図９】本発明の比較例２の結果、得られたクロマトグラムを示す。
【図１０】本発明の参考例１の結果、得られたクロマトグラムを示す。
【図１１】本発明の参考例２の結果、得られたクロマトグラムを示す。
【図１２】本発明の比較例３の結果、得られたクロマトグラムを示す。
【図１３】本発明の比較例４の結果、得られたクロマトグラムを示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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