(57)【要約】【課題】  胃腸障害の治療のための方法および組成物を提供する。【解決手段】  本発明は、ＩＢＳおよび他の胃腸の障害および状態（例えば、胃腸運動障害、機能性胃腸障害、胃食道逆流性疾患（ＧＥＲＤ）、クローン病、潰瘍性大腸炎、炎症性腸疾患、機能性胸焼け、消化不良（機能性消化不良または非潰瘍性消化不良を含む）、胃不全麻痺、慢性的な腸偽閉塞症（または結腸偽閉塞症））、ならびに便秘に関連する障害および状態（例えば、アヘン鎮痛剤の使用に関連する便秘、術後便秘、およびニューロパシー性障害に関連する便秘）、ならびに他の状態および障害を、グアニル酸シクラーゼＣ（ＧＣ−Ｃ）レセプターを活性化するペプチドおよび他の薬剤を使用して治療するための組成物および関連する方法を特徴とする。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
アミノ酸配列（Ｉ）：Ｘａａ１Ｘａａ２Ｘａａ３Ｘａａ４Ｘａａ５Ｃｙｓ６Ｃｙｓ７Ｘａａ８Ｘａａ９Ｃｙｓ１０Ｃｙｓ１１Ｘａａ１２Ｘａａ１３Ｘａａ１４Ｃｙｓ１５Ｘａａ１６Ｘａａ１７Ｃｙｓ１８Ｘａａ１９Ｘａａ２０Ｘａａ２１を含む精製ペプチドであって、前記配列中、Ｘａａ１Ｘａａ２Ｘａａ３Ｘａａ４Ｘａａ５がＡｓｎＳｅｒＳｅｒＡｓｎＴｙｒもしくは欠失している、またはＸａａ１Ｘａａ２Ｘａａ３Ｘａａ４が欠失しているペプチド。
【請求項２】
Ｘａａ５がＡｓｎ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ａｓｐ、またはＰｈｅである、請求項１に記載の精製ペプチド。
【請求項３】
Ｘａａ５がＴｈｒまたはＩｌｅである、請求項１に記載の精製ペプチド。
【請求項４】
Ｘａａ５がＴｙｒ、Ａｓｐ、またはＴｒｐである、請求項１に記載の精製ペプチド。
【請求項５】
Ｘａａ８がＧｌｕ、Ａｓｐ、Ｇｌｎ、Ｇｌｙ、またはＰｒｏである、請求項１に記載の精製ペプチド。
【請求項６】
Ｘａａ９がＬｅｕ、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、Ａｌａ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、またはＰｈｅである、請求項１に記載の精製ペプチド。
【請求項７】
Ｘａａ９がＬｅｕ、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、またはＰｈｅである、請求項１に記載の精製ペプチド。
【請求項８】
Ｘａａ１２がＡｓｎ、Ｔｙｒ、Ａｓｐ、またはＡｌａである、請求項１に記載の精製ペプチド。
【請求項９】
Ｘａａ１３がＡｌａ、Ｐｒｏ、またはＧｌｙである、請求項１に記載の精製ペプチド。
【請求項１０】
Ｘａａ１４がＡｌａ、Ｌｅｕ、Ｓｅｒ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｇｌｕ、Ｇｌｎ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、またはＡｓｐである、請求項１に記載の精製ペプチド。
【請求項１１】
Ｘａａ１６がＴｈｒ、Ａｌａ、Ａｓｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｔｒｐである、請求項１に記載の精製ペプチド。
【請求項１２】
Ｘａａ１７がＧｌｙ、Ｐｒｏ、またはＡｌａである、請求項１に記載の精製ペプチド。
【請求項１３】
Ｘａａ１９がＴｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ、Ａｓｎ、またはＬｅｕである、請求項１に記載の精製ペプチド。
【請求項１４】
Ｘａａ１９がＬｙｓまたはＡｒｇである、請求項１に記載の精製ペプチド。
【請求項１５】
Ｘａａ２０Ｘａａ２１がＡｓｐＰｈｅであるか、またはＸａａ２０がＡｓｎもしくはＧｌｕであってＸａａ２１が欠失している、請求項１に記載の精製ペプチド。
【請求項１６】
アミノ酸配列：ＡｓｎＳｅｒＳｅｒＡｓｎＴｙｒＣｙｓＣｙｓＧｌｕＴｙｒＣｙｓＣｙｓＡｓｎＰｒｏＡｌａＣｙｓＴｈｒＧｌｙＣｙｓＴｙｒ（配列番号−；ＭＤ−９１５）を含む精製ペプチド。
【請求項１７】
アミノ酸配列：ＣｙｓＣｙｓＧｌｕＴｙｒＣｙｓＣｙｓＡｓｎＰｒｏＡｌａＣｙｓＴｈｒＧｌｙＣｙｓＴｙｒ（配列番号−；ＭＤ−１１００）を含む精製ペプチド。
【請求項１８】
アミノ酸配列が、ＡｓｎＳｅｒＳｅｒＡｓｎＴｙｒＣｙｓＣｙｓＧｌｕＴｙｒＣｙｓＣｙｓＡｓｎＰｒｏＡｌａＣｙｓＴｈｒＧｌｙＣｙｓＴｙｒ（配列番号−；ＭＤ−９１５）である精製ペプチド。
【請求項１９】
アミノ酸配列が、ＣｙｓＣｙｓＧｌｕＴｙｒＣｙｓＣｙｓＡｓｎＰｒｏＡｌａＣｙｓＴｈｒＧｌｙＣｙｓＴｙｒ（配列番号−；ＭＤ−１１００）である精製ペプチド。
【請求項２０】
アミノ酸配列：ＡｓｎＳｅｒＳｅｒＡｓｎＴｙｒＣｙｓＣｙｓＧｌｕＬｅｕＣｙｓＣｙｓＡｓｎＰｒｏＡｌａＣｙｓＴｈｒＧｌｙＣｙｓＴｙｒ（配列番号−；ＭＭ−４１６７７６）を含む精製ペプチドを投与する工程を包含する、患者における胃腸障害を治療するための方法。
【請求項２１】
アミノ酸配列：ＡｓｎＳｅｒＳｅｒＡｓｎＴｙｒＣｙｓＣｙｓＧｌｕＴｙｒＣｙｓＣｙｓＡｓｎＰｒｏＡｌａＣｙｓＴｈｒＧｌｙＣｙｓＴｙｒ（配列番号−；ＭＤ−９１５）を含む精製ペプチドを投与する工程を包含する、患者における胃腸障害を治療するための方法。
【請求項２２】
アミノ酸配列：ＣｙｓＣｙｓＧｌｕＬｅｕＣｙｓＣｙｓＡｓｎＰｒｏＡｌａＣｙｓＴｈｒＧｌｙＣｙｓＴｙｒ（配列番号−；ＭＭ４１６７７４）を含む精製ペプチドを投与する工程を包含する、患者における胃腸障害を治療するための方法。
【請求項２３】
アミノ酸配列：ＣｙｓＣｙｓＧｌｕＴｙｒＣｙｓＣｙｓＡｓｎＰｒｏＡｌａＣｙｓＴｈｒＧｌｙＣｙｓＴｙｒ（配列番号−；ＭＤ−１１００）を含む精製ペプチドを投与する工程を包含する、患者における胃腸障害を治療するための方法。
【請求項２４】
精製ポリペプチドであって、
【化１】
2010222377.tif 000009
2010222377.tif 000010
2010222377.tif 000011
2010222377.tif 000012
2010222377.tif 000013
（ここで、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯは配列番号を意味する）
のいずれかのアミノ酸配列を含む精製ポリペプチド。
【請求項２５】
請求項１に記載のペプチドを投与する工程を包含する、患者における胃腸障害を治療するための方法。
【請求項２６】
請求項２４に記載のペプチドを投与する工程を包含する、患者における胃腸障害を治療するための方法。
【請求項２７】
前記胃腸障害が胃腸運動障害である、請求項２０〜２６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２８】
前記胃腸障害が、胃腸運動障害、過敏性腸症候群、慢性便秘、機能性胃腸障害、胃食道逆流性疾患、機能性胸焼け、消化不良、機能性消化不良、非潰瘍性消化不良、胃不全麻痺、慢性的な腸偽閉塞症、結腸偽閉塞症、クローン病、潰瘍性大腸炎、および炎症性腸疾患からなる群から選択される、請求項２０〜２６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２９】
請求項１、１６〜１９、および２４のいずれか１項に記載のペプチドを投与する工程を包含する、肥満を治療するための方法。
【請求項３０】
請求項１、１６〜１９、および２４のいずれか１項に記載のペプチドを投与する工程を包含する、うっ血性心不全を治療するための方法。
【請求項３１】
請求項１、１６〜１９、および２４のいずれか１項に記載のペプチドを投与する工程を包含する、良性前立腺過形成を治療するための方法。
【請求項３２】
アミノ酸配列ＤＦ；ＱＨＮＰＲ（配列番号  ）；ＶＱＨＮＰＲ（配列番号  ）；ＶＲＱ
ＨＮＰＲ（配列番号  ）；ＶＲＧＱＨＮＰＲ（配列番号  ）；ＶＲＧＰＱＨＮＰＲ（配列番号  ）；ＶＲＧＰＲＱＨＮＰＲ（配列番号  ）；ＶＲＧＰＲＲＱＨＮＰＲ（配列番号  ）；またはＲＱＨＮＰＲ（配列番号  ）がアミノ末端またはカルボキシ末端に融合されている、請求項１、１６、１７、および２４のいずれか１項に記載の精製ペプチド。
【請求項３３】
エンドモルフィン−１、エンドモルフィン−２、ノシスタチン、ダラルギン、ルプロン、およびサブスタンスＰからなる群から選択される鎮痛ペプチドのアミノ酸配列がアミノ末端またはカルボキシ末端に融合されている、請求項１、１６、１７、および２４のいずれか１項に記載の精製ペプチド。
【請求項３４】
アミノ末端またはカルボキシ末端またはその両方に１０アミノ酸以下のさらなるアミノ酸を含み、かつグアニル酸シクラーゼレセプターアゴニストである、請求項１、１６、１７、および２４のいずれか１項に記載の精製ペプチド。
【請求項３５】
Ｘａａ１Ｘａａ２Ｘａａ３Ｘａａ４Ｘａａ５が欠失しており；Ｘａａ８がＧｌｕであり；Ｘａａ９がＬｅｕ、Ｉｌｅ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、またはＰｈｅであり；Ｘａａ１２がＡｓｎであり；Ｘａａ１３がＰｒｏであり；Ｘａａ１４がＡｌａであり；Ｘａａ１６がＴｈｒ、Ａｌａ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｔｒｐであり；Ｘａａ１７がＧｌｙであり；Ｘａａ１９がＴｙｒまたはＬｅｕであり；Ｘａａ２０Ｘａａ２１がＡｓｐＰｈｅであるかまたは欠失している、請求項１に記載の精製ペプチド。
【請求項３６】
請求項１、１６〜２３、および２８のいずれか１項に記載のポリペプチドを投与する工程を包含する、便秘に罹患した患者を治療するための方法。
【請求項３７】
請求項１、１６〜１９、および２４のいずれか１項に記載のポリペプチドを投与する工程を包含する、患者における腸のグアニル酸シクラーゼ（ＧＣ−Ｃ）レセプターの活性を増大させるための方法。
【請求項３８】
ＧＣ−Ｃレセプターアゴニストを投与する工程を包含する、患者における胃腸障害を治療するための方法。
【請求項３９】
前記胃腸障害が胃腸運動障害である、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
前記胃腸障害が、胃腸運動障害、過敏性腸症候群、慢性便秘、機能性胃腸障害、胃食道逆流性疾患、機能性胸焼け、消化不良、機能性消化不良、非潰瘍性消化不良、胃不全麻痺、慢性的な腸偽閉塞症、結腸偽閉塞症、クローン病、潰瘍性大腸炎、および炎症性腸疾患からなる群から選択される、請求項３８に記載の方法。
【請求項４１】
ＧＣ−Ｃレセプターアゴニストを投与する工程を包含する、肥満を治療するための方法。
【請求項４２】
ＧＣ−Ｃレセプターアゴニストを投与する工程を包含する、うっ血性心不全を治療するための方法。
【請求項４３】
ＧＣ−Ｃレセプターアゴニストを投与する工程を包含する、良性前立腺過形成を治療するための方法。
【請求項４４】
ＧＣ−Ｃレセプターアゴニストを投与する工程を包含する、内臓痛を治療するための方法。
【請求項４５】
ＧＣ−Ｃレセプターアゴニストを投与する工程を包含する、炎症を治療するための方法。
【請求項４６】
ＧＣ−Ｃレセプターアゴニストを投与する工程を包含する、便秘を治療するための方法。
【請求項４７】
請求項１、１６〜１９、および２４のいずれか１項に記載のポリペプチドを投与する工程を包含する、内臓痛を治療するための方法。
【請求項４８】
請求項１、１６〜１９、および２４のいずれか１項に記載のポリペプチドを投与する工程を包含する、炎症を治療するための方法。
【請求項４９】
請求項１、１６〜１９、および２４のいずれか１項に記載のポリペプチドを投与する工程を包含する、嚢胞性線維症を治療するための方法。
【請求項５０】
ＧＣ−Ｃレセプターアゴニストを投与する工程を包含する、嚢胞性線維症を治療するための方法。
【請求項５１】
請求項１、１６〜１９、および２４のいずれか１項に記載のペプチドおよび薬学的に許容可能な担体を含む薬学的組成物。
【請求項５２】
腸溶性コーティングで覆われた、請求項１、１６〜１９、および２４のいずれか１項に記載のペプチドを含む薬学的組成物。
【請求項５３】
請求項１、１６〜１９、および２４のいずれか１項に記載のペプチドならびに生分解性のポリマーマトリックスを含む制御放出性薬学的組成物。
【請求項５４】
請求項１、１６〜１９、および２４のいずれか１項に記載のペプチド、鎮痛剤、ならびに薬学的に許容可能な担体を含む薬学的組成物。
【請求項５５】
請求項１、１６〜１９、および２４のいずれか１項に記載のペプチド、ホスホジエステラーゼ阻害剤、ならびに薬学的に許容可能な担体を含む薬学的組成物。
【請求項５６】
請求項１、１６〜１９、および２４のいずれか１項に記載のペプチドを投与する工程を包含する、がん、呼吸器障害、神経障害、水分とナトリウムの保持に関連した障害、炭酸塩の不均衡に関連した障害、勃起障害、インスリン関連障害、または内耳障害を治療するための方法。
【請求項５７】
ＧＣ−Ｃレセプターアゴニストを投与する工程を包含する、がん、呼吸器障害、神経障害、水分とナトリウムの保持に関連した障害、炭酸塩の不均衡に関連した障害、勃起障害、インスリン関連障害、または内耳障害を治療するための方法。
【請求項５８】
請求項１６〜１９および２４のいずれか１項に記載のペプチドを製造する方法であって、該ペプチドをコードする核酸分子を有する細胞を供給する工程、該ペプチドが発現される条件下で細胞を培養する工程、および発現されたペプチドを単離する工程を包含する方法。
【請求項５９】
請求項１６〜１９および２４のいずれか１項に記載のペプチドを製造する方法であって、ペプチドを化学合成する工程、次いで合成されたペプチドを精製する工程を包含する方法。
【請求項６０】
請求項１、１６〜１９、および２４のいずれか１項に記載のペプチド、ならびに、心房性ナトリウム利尿ペプチド、脳ナトリウム利尿ペプチド、Ｃ型ナトリウム利尿ペプチドなどのナトリウム利尿ペプチド、利尿剤、またはアンギオテンシン変換酵素阻害剤を含む薬学的組成物。
【請求項６１】
請求項１、１６〜１９、および２４のいずれか１項に記載のペプチド、ならびに５−αレダクターゼ阻害剤またはαアドレナリン作動遮断剤を含む薬学的組成物。
【請求項６２】
請求項１、１６〜１９、および２４のいずれか１項に記載のペプチド、ならびに腸ホルモンの断片ペプチドＹＹ３−３６、ｇｌｐ−１（グルカゴン様ペプチド−１）、エキセンディン４（ｇｌｐ−１の阻害剤）、シブトラミン、フェンテルミン、フェンジメトラジン、塩酸ベンズフェタミン（Ｄｉｄｒｅｘ（登録商標））、オーリスタット（Ｘｅｎｉｃａｌ（登録商標））、塩酸ジエチルプロピオン（Ｔｅｎｕａｔｅ（登録商標））、フルオキセチン（Ｐｒｏｚａｃ（登録商標））、ブプロピオン、エフェドラ、クロム、ガルシニアカンボジア、ベンゾカイン、ブラダーラック（学名Fucus  vesiculosus  ）、キトサン、ノマメハーバ、ガレガソウ（英名ゴーツルー（Goat's  Rue）、フレンチライラック（French
Lilac））、共役リノール酸、Ｌ−カルニチン、繊維（アメリカオオバコの繊維、シャゼ
ンソウの繊維、グアー豆の繊維）、カフェイン、デヒドロエピアンドロステロン、ジャーマンダー（学名Teucrium  c hamaedrys  ）、Ｂ−ヒドロキシ−β−メチル酪酸、または
ピルビン酸を含む薬学的組成物。
【請求項６３】
ＧＣ−Ｃレセプターアゴニスト、ならびに、心房性ナトリウム利尿ペプチド、脳ナトリウム利尿ペプチド、Ｃ型ナトリウム利尿ペプチドなどのナトリウム利尿ペプチド、利尿剤、またはアンギオテンシン変換酵素阻害剤を含む薬学的組成物。
【請求項６４】
ＧＣ−Ｃレセプターアゴニスト、ならびに５−αレダクターゼ阻害剤またはαアドレナリン作動遮断剤を含む薬学的組成物。
【請求項６５】
ＧＣ−Ｃレセプターアゴニスト、ならびに腸ホルモンの断片ペプチドＹＹ３−３６、ｇｌｐ−１（グルカゴン様ペプチド−１）、エキセンディン４（ｇｌｐ−１の阻害剤）、シブトラミン、フェンテルミン、フェンジメトラジン、塩酸ベンズフェタミン（Ｄｉｄｒｅｘ（登録商標））、オーリスタット（Ｘｅｎｉｃａｌ（登録商標））、塩酸ジエチルプロピオン（Ｔｅｎｕａｔｅ（登録商標））、フルオキセチン（Ｐｒｏｚａｃ（登録商標））、ブプロピオン、エフェドラ、クロム、ガルシニアカンボジア、ベンゾカイン、ブラダーラック（学名Fucus  vesiculosus  ）、キトサン、ノマメハーバ、ガレガソウ（英名ゴーツルー（Goat's  Rue）、フレンチライラック（French  Lilac））、共役リノール酸、Ｌ−カルニチン、繊維（アメリカオオバコの繊維、シャゼンソウの繊維、グアー豆の繊維）、カフェイン、デヒドロエピアンドロステロン、ジャーマンダー（学名Teucrium  chamaedrys  ）、Ｂ−ヒドロキシ−β−メチル酪酸、またはピルビン酸を含む薬学的組成物。
【請求項６６】
請求項１、１６〜１９、および２４のいずれか１項に記載のペプチド、ならびに心房性ナトリウム利尿ペプチド、脳ナトリウム利尿ペプチド、Ｃ型ナトリウム利尿ペプチドなどのナトリウム利尿ペプチド、利尿剤、またはアンギオテンシン変換酵素阻害剤を投与する工程を包含する、うっ血性心不全を治療するための方法。
【請求項６７】
請求項１、１６〜１９、および２４のいずれか１項に記載のペプチド、ならびに５−αレダクターゼ阻害剤またはαアドレナリン作動遮断剤を投与する工程を包含する、良性前立腺過形成を治療するための方法。
【請求項６８】
請求項１、１６〜１９、および２４のいずれか１項に記載のペプチド、ならびに腸ホルモンの断片ペプチドＹＹ３−３６、ｇｌｐ−１（グルカゴン様ペプチド−１）、エキセンディン４（ｇｌｐ−１の阻害剤）、シブトラミン、フェンテルミン、フェンジメトラジン、塩酸ベンズフェタミン（Ｄｉｄｒｅｘ（登録商標））、オーリスタット（Ｘｅｎｉｃａｌ（登録商標））、塩酸ジエチルプロピオン（Ｔｅｎｕａｔｅ（登録商標））、フルオキセチン（Ｐｒｏｚａｃ（登録商標））、ブプロピオン、エフェドラ、クロム、ガルシニアカンボジア、ベンゾカイン、ブラダーラック（学名Fucus  vesiculosus  ）、キトサン、ノマメハーバ、ガレガソウ（英名ゴーツルー（Goat's  Rue）、フレンチライラック（French
Lilac））、共役リノール酸、Ｌ−カルニチン、繊維（アメリカオオバコの繊維、シャゼ
ンソウの繊維、グアー豆の繊維）、カフェイン、デヒドロエピアンドロステロン、ジャーマンダー（学名Teucrium  chamaedrys  ）、Ｂ−ヒドロキシ−β−メチル酪酸、またはピルビン酸を投与する工程を包含する、肥満を治療するための方法。
【請求項６９】
ＧＣ−Ｃレセプターアゴニスト、ならびに心房性ナトリウム利尿ペプチド、脳ナトリウム利尿ペプチド、Ｃ型ナトリウム利尿ペプチドなどのナトリウム利尿ペプチド、利尿剤、またはアンギオテンシン変換酵素阻害剤を投与する工程を包含する、うっ血性心不全を治療するための方法。
【請求項７０】
ＧＣ−Ｃレセプターアゴニスト、ならびに５−αレダクターゼ阻害剤またはαアドレナリン作動遮断剤を含む、良性前立腺過形成を治療するための方法。
【請求項７１】
ＧＣ−Ｃレセプターアゴニスト、ならびに腸ホルモンの断片ペプチドＹＹ３−３６、ｇｌｐ−１（グルカゴン様ペプチド−１）、エキセンディン４（ｇｌｐ−１の阻害剤）、シブトラミン、フェンテルミン、フェンジメトラジン、塩酸ベンズフェタミン（Ｄｉｄｒｅｘ（登録商標））、オーリスタット（Ｘｅｎｉｃａｌ（登録商標））、塩酸ジエチルプロピオン（Ｔｅｎｕａｔｅ（登録商標））、フルオキセチン（Ｐｒｏｚａｃ（登録商標））、ブプロピオン、エフェドラ、クロム、ガルシニアカンボジア、ベンゾカイン、ブラダーラック（学名Fucus  vesiculosus  ）、キトサン、ノマメハーバ、ガレガソウ（英名ゴーツルー（Goat's  Rue）、フレンチライラック（French  Lilac））、共役リノール酸、Ｌ−カルニチン、繊維（アメリカオオバコの繊維、シャゼンソウの繊維、グアー豆の繊維）、カフェイン、デヒドロエピアンドロステロン、ジャーマンダー（学名Teucrium  chamaedrys  ）、Ｂ−ヒドロキシ−β−メチル酪酸、またはピルビン酸を投与する工程を包含する、肥満を治療するための方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、胃腸障害、肥満、うっ血性心不全、および良性前立腺過形成を含む種々の障害を治療するための方法および組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
過敏性腸症候群（ＩＢＳ）は、米国だけでも２０００万〜６０００万人に発症している一般的な腸の慢性障害である（非特許文献１）。ＩＢＳは、胃腸科専門医によって診断される最も一般的な障害であり（検査した患者の２８％）、初診の医師への来診例の１２％を占める（非特許文献２）。米国では、保健医療上の使用という直接的コストおよび仕事の長期欠勤という間接的コストによって、ＩＢＳの経済的影響は年間２５０億ドルと見積もられている（非特許文献３）。ＩＢＳ患者は、仕事の長期欠勤が３倍多く、生活の質の低下を訴えている。患者は、社会的行事に出席すること、雇用を維持すること、または短い距離でさえ移動することが不可能であるか、またはそうすることを欲しない可能性がある（非特許文献４）。ＩＢＳを治療するための処方の選択肢がほとんどないので、この患者集団においては満たされていない多大な医学的必要性が存在する。
【０００３】
ＩＢＳ患者は、腹痛および腸の乱調に苦しむ。腸の主な傾向に基づき、ＩＢＳ患者について３種のサブグループ、すなわち便秘優勢型（ｃ−ＩＢＳ）、下痢優勢型（ｄ−ＩＢＳ）、または前記２つの間の交互型（ａ−ＩＢＳ）、が定義されている。ｃ−ＩＢＳに罹患している人はＩＢＳ患者の２０−５０％の範囲であると見積もられ、しばしば３０％とされている。他の２つのサブグループが類似の性別比を有するのとは対照的に、ｃ−ＩＢＳは女性に多い（３：１の比率）（非特許文献５）。
【０００４】
ＩＢＳについての定義および診断基準は、「ローマ基準（Rome  Criteria  ）」（非特許文献６）において定式化され、これは、臨床的実務において十分に受容されている。しかし、症状の複雑さは、解剖学的な異常または代謝的な変化によっては説明されていなかった。その結果、ローマ基準ならびに器質性疾患を除外するための一定限度の評価に基づいて診断され、機能性胃腸障害としてＩＢＳが分類されるに至った（非特許文献７）。ＩＢＳは、３つの相互作用するメカニズム、すなわち腸の運動性の変化、痛み刺激に対する小腸または結腸の感度（内臓の感度）の増大、および心理社会学的要因、の組み合わせから生じる「生物心理社会的」障害であると見なされている（非特許文献２）。最近、ＩＢＳの病因論において炎症の役割についての証拠が増加してきている。ＩＢＳ患者のサブセットでは、結腸の炎症性細胞およびマスト細胞がわずかであるが有意に増加し、誘導性の一酸化窒素（ＮＯ）および合成酵素（ｉＮＯＳ）が増加し、かつ炎症性サイトカインの発現が変化することを示すことが報告されている（非特許文献８に概説）。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】リーマンブラザース（Lehman  Brothers  ）、「世界の保健医療‐過敏性腸症候群の最新市場（Global  Healthcare-Irritable  bowel  syndrome  industry  update）」、１９９９年９月
【非特許文献２】キャミレリ（Camilleri  ）、２００１年、Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ  第１２０巻、ｐ．６５２−６６８
【非特許文献３】タリー（Talley）、１９９５年、Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ  第１０９巻、ｐ．１７３６−１７４１
【非特許文献４】ドロスマン（Drossman）、１９９３年、Ｄｉｇ  Ｄｉｓ  Ｓｃｉ  第３８巻、ｐ．１５６９−１５８０
【非特許文献５】タリーら（Talley  et  al.  ）、１９９５年、Ａｍ  Ｊ  Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌ  第１４２巻、ｐ．７６−８３
【非特許文献６】ドロスマンら（Drossman  et  al.  ）、１９９９年、Ｇｕｔ  第４５巻、補遺ＩＩ、ｐ．１−８１
【非特許文献７】リンゲルら（Ringel  et  al.)、２００１年、Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｍｅｄ  第５２巻、ｐ．３１９−３３８
【非特許文献８】タリー（Talley）、２０００年、Ｍｅｄｓｃａｐｅ  Ｃｏｖｅｒａｇｅ  ｏｆ  ＤＤＷ  ｗｅｅｋ
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明の目的は、胃腸障害、肥満、うっ血性心不全、および良性前立腺過形成を含む種々の障害を治療するための方法および組成物を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明は、ＩＢＳおよびその他の胃腸の障害および状態（例えば、胃腸運動障害、機能性胃腸障害、胃食道逆流性疾患（ＧＥＲＤ）、クローン病、潰瘍性大腸炎、炎症性腸疾患、機能性胸焼け、消化不良（機能性消化不良または非潰瘍性消化不良を含む）、胃不全麻痺、慢性的な腸偽閉塞症（または結腸偽閉塞症））、ならびに便秘に関連する障害および状態（例えば、アヘン鎮痛剤の使用に関連する便秘、術後の便秘、およびニューロパシー性の障害に関連する便秘）、ならびに他の状態および障害を治療するための組成物および関連する方法を特徴とする。本発明の組成物は、グアニル酸シクラーゼＣ（ＧＣ−Ｃ）レセプターを活性化するペプチドを特徴とする。
【０００８】
本発明はまた、肥満、うっ血性心不全、および良性前立腺過形成（ＢＰＨ）を治療するための組成物および関連する方法を特徴とする。
いかなる特定の理論にも束縛されることはないが、ＩＢＳおよび他の胃腸障害の場合は本発明のペプチドが有用である。本発明のペプチドは胃腸の運動性を増大させ得るからである。
【０００９】
いかなる特定の理論にも束縛されることはないが、ＩＢＳおよび他の胃腸障害の場合は本発明のペプチドが有用である。なぜなら、１つには本発明のペプチドは炎症を減少させ得るからである。
【００１０】
いかなる特定の理論にも束縛されることはないが、ＩＢＳおよび他の胃腸障害の場合は本発明のペプチドがまた有用である。なぜなら、本発明のペプチドは胃腸の痛みまたは内臓痛を減少させ得るからである。
【００１１】
本発明は、グアニル酸シクラーゼＣ（ＧＣ−Ｃ）レセプターの活性化能を有する特定のペプチドを含んでなる薬学的組成物を特徴とする。本発明のペプチドを含む薬学的組成物、ならびに本発明のペプチドと第２の治療剤、例えば、便秘を治療するための薬剤（例えば、ＳＰＩ−０２１１；スカンポファーマシューティカルズ社（Sucampo  Pharmaceuticals,  Inc.  ）；米国メリーランド州ベゼスダ所在）または何らかの他の胃腸障害を治療
するための薬剤とを含む組み合わせ組成物もまた、本発明の範囲内にある。第２の治療剤の例には、胃酸抑制剤（例えばプロトンポンプ阻害剤およびＨ２レセプターブロッカー）、運動促進剤（例えば５ＨＴレセプターアゴニスト（例えばＺｅｌｎｏｒｍ（登録商標）））、抗炎症剤、鎮痙剤、抗うつ剤、中枢性鎮痛剤（例えばオピオイドレセプターアゴニスト、オピオイドレセプターアンタゴニスト）、炎症性腸疾患、クローン病および潰瘍性大腸炎の治療剤（例えば、Ｔｒａｆｉｃｅｔ−ＥＮ（登録商標））（ケモセントリクス社（ChemoCentryx,  Inc.）；米国カリフォルニア州サンカルロス所在）、胃腸の痛みまた
は内臓痛を治療する薬剤、ならびにｃＧＭＰホスホジエステラーゼ阻害剤（モタピゾン（motapizone）、ザプリナスト（zaprinast  ）、およびスルジナクスルホン（suldinac  sulfone））が含まれる。従って、例えば、本発明の薬学的組成物は、Ｃａチャネルブロッカー（例えば、ジコノチド）、５ＨＴレセプターアンタゴニスト（例えば、５ＨＴ３、５ＨＴ４、および５ＨＴ１レセプターアンタゴニスト）、オピオイドレセプターアゴニスト（例えば、ロペラミド、フェドトジン、およびフェンタニル、ナロキソン、ナルトレキソン、メチルナロゾン（methyl  nalozone  ）、ナルメフェン、シプリジム（cypridime  
）、β−フナルトレキサミン、ナロキソナジン、ナルトリンドール、およびノルビナルトルフィミン、モルヒネ、ジフェニルオキシレート、エンケファリンペンタペプチド、およびトリメブチン）、ＮＫ１レセプターアンタゴニスト（例えば、エズロピタントおよびＳＲ−１４０３３）、ＣＣＫレセプターアゴニスト（例えば、ロキシグルミド）、ＮＫ１レセプターアンタゴニスト、ＮＫ３レセプターアンタゴニスト（例えば、タルネタント（talnetant  ）、オサネタント（ＳＲ−１４２８０１））、ノルエピネフリン−セロトニン
再取り込み阻害剤（ＮＳＲＩ；例えば、ミルナシプラン）、バニロイドおよびカンナバノイドレセプターアゴニスト（例えば、アーバニル（arvanil  ））、シアロルフィン（sialorphin）、アミノ酸配列ＱＨＮＰＲ（配列番号  ）を含むシアロルフィン関連ペプチド
（例えば、ＶＱＨＮＰＲ（配列番号  ）；ＶＲＱＨＮＰＲ（配列番号  ）；ＶＲＧＱＨＮＰＲ（配列番号  ）；ＶＲＧＰＱＨＮＰＲ（配列番号  ）；ＶＲＧＰＲＱＨＮＰＲ（配列番号  ）；ＶＲＧＰＲＲＱＨＮＰＲ（配列番号  ）；およびＲＱＨＮＰＲ（配列番号  ））、ネプリリシンの阻害剤である化合物またはペプチド、フラケファミド（frakefamide
）（Ｈ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ａｌａ−Ｐｈｅ（Ｆ）−Ｐｈｅ−ＮＨ２；国際公開公報第０１／０１９８４９  Ａ１号）、ロペラミド、Ｔｙｒ−Ａｒｇ（キョートルフィン）、ＣＣＫレセプターアゴニスト（セルレイン）、コノトキシンペプチド、サイムリンのペプチドアナログ、ロキシグルミド、デキシロキシグルミド（dexloxiglumide）（ロキシグルミドのＲ異性体）（国際公開公報第８８／０５７７４号）からなる群から選択される鎮痛剤を含み得る。そして他の鎮痛剤または化合物は本発明のペプチドとともに使用されてもよいし、または本発明のペプチドに連結されてもよい。
【００１２】
本発明は、ＧＣ−Ｃレセプターの部分的または完全なアゴニストとして作用するペプチドを投与することによって種々の胃腸障害を治療するための方法を含む。このペプチドは、３つのジスルフィド結合を形成する少なくとも６個のシステインを含む。特定の実施形態において、ジスルフィド結合は、他の共有結合による架橋によって置き換えられ、ある場合においては、システインは別の共有結合による架橋を提供するために他の残基によって置換される。該ペプチドはまた、少なくとも１つのトリプシンもしくはキモトリプシンの切断部位と、カルボキシ末端の鎮痛ペプチドもしくは低分子（例えばＡｓｐＰｈｅもしくは何らかの他の鎮痛ペプチド）とのうち少なくともいずれかを含み得る。ペプチド中に存在する場合、鎮痛ペプチドまたは低分子の前に、同鎮痛ペプチドまたは低分子の放出を可能にするキモトリプシンまたはトリプシンの切断部位があってもよい。本発明のペプチドまたは方法は、胃腸障害を含む種々の障害に関連する痛みおよび炎症を治療するためにも有用である。ある種のペプチドは、切断されると同ペプチドが不活性化されうるように配置された機能的なキモトリプシンまたはトリプシンの切断部位を含む。機能的切断部位を有するある種のペプチドは、消化管の中で切断され、かつ漸進的に不活性化されるが、このことはある状況において望ましい。ある種のペプチドにおいては、機能的キモトリプシン部位が改変され、同ペプチドのインビボでの安定性を増加させている。
【００１３】
本発明は、ＧＣ−Ｃレセプターのアゴニストとして作用するペプチドまたは低分子を（非経口的または経口的に）投与することによって、うっ血性心不全および良性前立腺過形成などの他の障害を治療するための方法を包含する。このような薬剤は、ナトリウム利尿ペプチド（例えば、心房性ナトリウム利尿ペプチド、脳ナトリウム利尿ペプチド、Ｃ型ナトリウム利尿ペプチド）、利尿剤、またはアンギオテンシン変換酵素の阻害剤と組み合わ
せて使用され得る。
【００１４】
本発明は、腸の運動性を増大させるための方法および組成物を特徴とする。腸の運動には、消化の過程で胃腸管を通して食物を移動させるための、胃、腸、結腸、および直腸の自発的かつ同調的な拡張および収縮が含まれる。
【００１５】
特定の実施形態において、本発明のペプチドは、１つもしくは２つもしくはそれ以上の連続的な負に荷電したアミノ酸（例えば、ＡｓｐもしくはＧｌｕ）、または１つもしくは２つもしくはそれ以上の連続的な正に荷電した残基（例えば、ＬｙｓもしくはＡｒｇ）、または１つもしくは２つもしくはそれ以上の連続的な正もしくは負に荷電したアミノ酸、のうちいずれかをそのカルボキシ末端に含む。これらの実施形態においては、カルボキシ末端で隣接するアミノ酸のすべては、正に荷電しているかまたは負に荷電しているかのいずれかである。他の実施形態においては、カルボキシ末端の荷電したアミノ酸の前にＬｅｕが先行する。例えば、以下のアミノ酸配列、すなわち、Ａｓｐ；ＡｓｐＬｙｓ；ＬｙｓＬｙｓＬｙｓＬｙｓＬｙｓＬｙｓ；ＡｓｐＬｙｓＬｙｓＬｙｓＬｙｓＬｙｓＬｙｓ；ＬｅｕＬｙｓＬｙｓ；およびＬｅｕＡｓｐ、がペプチドのカルボキシ末端に付加され得る。カルボキシ末端に単にＬｅｕを加えることもまた可能である。
【００１６】
第１の態様において、本発明は、アミノ酸配列（Ｉ）：Ｘａａ１Ｘａａ２Ｘａａ３Ｘａａ４Ｘａａ５Ｃｙｓ６Ｃｙｓ７Ｘａａ８Ｘａａ９Ｃｙｓ１０Ｃｙｓ１１Ｘａａ１２Ｘａａ１３Ｘａａ１４Ｃｙｓ１５Ｘａａ１６Ｘａａ１７Ｃｙｓ１８Ｘａａ１９Ｘａａ２０Ｘａａ２１を含むペプチド、アミノ酸配列が前記配列であるペプチド、または前記配列から本質的に構成されるペプチドを特徴とし、前記配列において、Ｘａａ１Ｘａａ２Ｘａａ３Ｘａａ４Ｘａａ５がＡｓｎＳｅｒＳｅｒＡｓｎＴｙｒもしくは欠失している、またはＸａａ１Ｘａａ２Ｘａａ３Ｘａａ４が欠失していることを特徴とする。特定の実施形態において、Ｘａａ８、Ｘａａ９、Ｘａａ１２、Ｘａａ１３、Ｘａａ１４、Ｘａａ１７、およびＸａａ１９は任意のアミノ酸であり得る。特定の実施形態において、Ｘａａ５はＡｓｎ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ａｓｐ、またはＰｈｅである。他の実施形態において、Ｘａａ５はＴｈｒまたはＩｌｅでもよい。他の実施形態において、Ｘａａ５はＴｙｒ、Ａｓｐ、またはＴｒｐである。ある実施形態において、Ｘａａ８はＧｌｕ、Ａｓｐ、Ｇｌｎ、Ｇｌｙ、またはＰｒｏである。他の実施形態において、Ｘａａ８はＧｌｕであり；ある実施形態において、Ｘａａ９はＬｅｕ、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、Ａｌａ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、またはＰｈｅであり、ある実施形態において、Ｘａａ９はＬｅｕ、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、またはＰｈｅである。
【００１７】
特定の実施形態においては、アミノ酸は、天然に存在しないアミノ酸または天然に存在するアミノ酸類似体もしくは天然に存在しないアミノ酸類似体によって置き換えられ得る。例えば、芳香族アミノ酸は、３，４−ジヒドロキシ−Ｌ−フェニルアラニン、３−ヨード−Ｌ−チロシン、トリヨードチロニン、Ｌ−チロキシン、フェニルグリシン（Ｐｈｇ）、またはノル−チロシン（ｎｏｒＴｙｒ）によって置き換えられ得る。ＰｈｇおよびｎｏｒＴｙｒならびに他のＰｈｅおよびＴｙｒを含むアミノ酸は、例えば、ハロゲン、−ＣＨ３、−ＯＨ、−ＣＨ２ＮＨ３、−Ｃ（Ｏ）Ｈ、−ＣＨ２ＣＨ３、−ＣＮ、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３、−ＳＨ、または別の基によって置換され得る。
【００１８】
一部の実施形態において、Ｘａａ１２はＡｓｎ、Ｔｙｒ、Ａｓｐ、またはＡｌａである。他の実施形態において、Ｘａａ１２はＡｓｎである。ある実施形態において、Ｘａａ１３はＡｌａ、Ｐｒｏ、またはＧｌｙであり、そして他の実施形態においてＸａａ１３はＰｒｏである。ある実施形態において、Ｘａａ１４はＡｌａ、Ｌｅｕ、Ｓｅｒ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｇｌｕ、Ｇｌｎ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、またはＡｓｐであり、他の実施形態においてＸａａ１４はＡｌａまたはＧｌｙであり、そしてさらに他の実施形態にお
いてＸａａ１４はＡｌａである。ある実施形態において、Ｘａａ１６はＴｈｒ、Ａｌａ、Ａｓｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｔｒｐであり；Ｘａａ１７はＧｌｙ、Ｐｒｏ、もしくはＡｌａであり；Ｘａａ１９はＴｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ、Ａｓｎ、およびＬｅｕから選択されるか、またはＸａａ１９はＴｒｐ、Ｔｙｒ、およびＰｈｅから選択されるか、またはＸａａ１９はＬｅｕ、Ｉｌｅ、およびＶａｌから選択されるか；またはＸａａ１９はＨｉｓであるか、またはＸａａ１９はＴｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ、Ａｓｎ、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、Ｈｉｓ、およびＬｅｕから選択され；ならびにＸａａ２０Ｘａａ２１はＡｓｐＰｈｅであるかもしくは欠失しており、またはＸａａ２０がＡｓｎもしくはＧｌｕでありかつＸａａ２１が欠失しているか、またはＸａａ１９Ｘａａ２０Ｘａａ２１が欠失している。本発明はまた、前述のペプチドを含む組成物を投与することによって、胃腸障害（例えば、胃腸運動障害、機能性胃腸障害、胃食道逆流性疾患、機能性胸焼け、消化不良、機能性消化不良、非潰瘍性消化不良、胃不全麻痺、慢性的な腸偽閉塞症、結腸偽閉塞症）、肥満、うっ血性心不全、または良性前立腺過形成を治療するための方法を特徴とする。
【００１９】
Ｘａａ９がＴｒｐ、Ｔｙｒ、もしくはＰｈｅである場合、またはＸａａ１６がＴｒｐである場合、ペプチドは、切断されると同ペプチドによるＧＣ−Ｃレセプターへの結合性が不活性化される部位に位置する潜在的機能性を備えたキモトリプシン切断部位を有する。Ｘａａ９がＬｙｓもしくはＡｒｇである場合、またはＸａａ１６がＬｙｓもしくはＡｒｇである場合、ペプチドは、切断されると同ペプチドによるＧＣ−Ｃレセプター結合性が不活性化される部位に潜在的機能性を備えたトリプシン切断部位が位置している。
【００２０】
Ｘａａ１９がＴｒｐ、Ｔｙｒ、もしくはＰｈｅである場合、ペプチドは、切断によりＸａａ１９に対してカルボキシ末端側のペプチド部分が遊離する部位にキモトリプシン切断部位が位置している。Ｘａａ１９がＬｅｕ、Ｉｌｅ、もしくはＶａｌである場合、ペプチドは、切断によりＸａａ１９に対してアミノ末端側のペプチド部分が遊離する部位にキモトリプシン切断部位が位置していてもよい。比較的高いｐＨでは、Ｘａａ１９がＨｉｓである場合に同じ効果が見られる。Ｘａａ１９がＬｙｓもしくはＡｒｇである場合、ペプチドは、切断によりＸａａ１９に対してカルボキシ末端側のペプチド部分が遊離する部位にトリプシン切断部位が位置している。従って、該ペプチドがＸａａ１９に対してカルボキシ末端側に鎮痛ペプチドを含む場合、鎮痛ペプチドは、適切なプロテアーゼに曝露されると消化管中で遊離される。ペプチドに含まれ得る鎮痛ペプチドの中には、ＡｓｐＰｈｅ（Ｘａａ２０Ｘａａ２１として）、エンドモルフィン−１、エンドモルフィン−２、ノシスタチン、ダラルギン（dalargin）、ルプロン、およびサブスタンスＰ、ならびに本明細書中に記載される他の鎮痛ペプチドがある。これらのペプチドは、例えば、Ｘａａ２０Ｘａａ２１を置き換えるために使用され得る。
【００２１】
本発明のペプチドのＸａａ１またはアミノ末端のアミノ酸（例えば、Ｘａａ２またはＸａａ３）がＴｒｐ、Ｔｙｒ、またはＰｈｅである場合、ペプチドは、切断されるとＸａａ１（またはＸａａ２またはＸａａ３）に対してアミノ末端側のペプチド部分がＸａａ１、Ｘａａ２、またはＸａａ３とともに遊離する部位に位置するキモトリプシン切断部位を有する。本発明のペプチドのＸａａ１またはアミノ末端のアミノ酸（例えば、Ｘａａ２またはＸａａ３）がＬｙｓまたはＡｒｇである場合、ペプチドは、切断されるとＸａａ１に対してアミノ末端側のペプチド部分をＸａａ１、Ｘａａ２、またはＸａａ３とともに遊離する部位に位置するトリプシン切断部位を有する。本発明のペプチドのＸａａ１またはアミノ末端アミノ酸がＬｅｕ、Ｉｌｅ、またはＶａｌである場合、ペプチドは、切断がＸａａ１に対してアミノ末端側のペプチド部分を遊離する部位に位置するキモトリプシン切断部位を有し得る。比較的高いｐＨでは、Ｘａａ１がＨｉｓである場合に同じ効果が見られる。従って、例えば、ペプチドが、Ｘａａ１に対してアミノ末端側に鎮痛ペプチドを含む場合、鎮痛ペプチドは、適切なプロテアーゼに曝露されると消化管中で遊離される。ペプチドに含まれ得る鎮痛ペプチドの中には、ＡｓｐＰｈｅ、エンドモルフィン−１、エンドモ
ルフィン−２、ノシスタチン、ダラルギン、ルプロン、およびサブスタンスＰ、ならびに本明細書中に記載される他の鎮痛ペプチドがある。
【００２２】
完全にフォールディングしたとき、ジスルフィド結合はＣｙｓ６とＣｙｓ１１との間；Ｃｙｓ７とＣｙｓ１５との間；およびＣｙｓ１０とＣｙｓ１８との間に存在する。本発明のペプチドは、ＳＴペプチドに対するある程度の配列類似性を有するが、機能性を改善するアミノ酸の改変および／または付加を含む。これらの改変は、例えば、活性を増加もしくは減少させることができ（例えば、腸の運動を刺激するペプチドの能力を増加もしくは減少させることができ）、ペプチドの正確にフォールディングする能力、ペプチドの安定性、ペプチドのＧＣ−Ｃレセプターに結合する能力を変化させることができ、かつ／または毒性を減少させることができる。ある場合において、本発明のペプチドは野生型ＳＴペプチドよりも望ましく機能し得る。例えば、本発明のペプチドは下痢および脱水などの望ましくない副作用を制限し得る。
【００２３】
ある実施形態においては、通常ジスルフィド結合を形成する１またはそれ以上のＣｙｓ残基対の一方または両方のメンバーが、ホモシステイン、３−メルカプトプロリン（コロジッジら（Kolodziej  et  al.）、１９９６年、Ｉｎｔ  Ｊ  Ｐｅｐｔ  Ｐｒｏｔｅｉｎ
Ｒｅｓ  第４８巻、ｐ．２７４）；β，βジメチルシステイン（ハントら（Hunt  et  al.  ）、１９９３年、Ｉｎｔ  Ｊ  Ｐｅｐｔ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｒｅｓ  第４２巻、ｐ
．２４９）、またはジアミノプロピオン酸（スミスら（Smith  et  al.）、１９７８年、Ｊ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ  第２１巻、ｐ．１１７）によって置き換えられて、通常のジスルフィド結合の位置に代替的な内部架橋を形成し得る。
【００２４】
さらに、１つまたはそれ以上のジスルフィド結合は、代替の共有結合による架橋、例えば、アミド結合、エステル結合、アルキル結合、チオエステル結合、ラクタム架橋、カルバモイル結合、尿素結合、チオ尿素結合、ホスホン酸エステル結合、アルキル結合、およびアルケニル結合、エーテル、チオエーテル結合、またはアミノ結合によって置き換えられ得る。例えば、レジュら（Ledu  et  al.  ）（Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  Ｎａｔ’ｌ
Ａｃａｄ  Ｓｃｉ．第１００巻、ｐ．１１２６３−７８，２００３年）は、ラクタムおよびアミドの架橋を作製するための方法を記載している。シャフマイスターら（Schafmeister
et  al.  ）（Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．第１２２巻、ｐ．５８９１、２０００年）
は、安定なあらゆる炭素架橋について記載している。ある場合において、このような代替的な架橋の生成には、Ｃｙｓ残基を他の残基、例えば、ＬｙｓもしくはＧｌｕ、または天然に存在しないアミノ酸で置き換えることが必要である。
【００２５】
配列（Ｉ）：Ｘａａ１Ｘａａ２Ｘａａ３Ｘａａ４Ｘａａ５Ｃｙｓ６Ｃｙｓ７Ｘａａ８Ｘａａ９Ｃｙｓ１０Ｃｙｓ１１Ｘａａ１２Ｘａａ１３Ｘａａ１４Ｃｙｓ１５Ｘａａ１６Ｘａａ１７Ｃｙｓ１８Ｘａａ１９Ｘａａ２０Ｘａａ２１（配列中、Ｘａａ１Ｘａａ２Ｘａａ３Ｘａａ４Ｘａａ５が欠失している、かつ／または配列Ｘａａ１９Ｘａａ２０Ｘａａ２１が欠失している）を含んでなるペプチドの場合、このペプチドはさらに、カルボキシ末端もしくはアミノ末端またはその両方の追加のアミノ酸を含み得る。例えば、本発明のペプチドは、ペプチドの組換え産生を容易にし、該ペプチドを患者へ投与する前に切断されるアミノ末端配列を含み得る。本発明のペプチドはまた、他のアミノ末端またはカルボキシ末端のアミノ酸を含み得る。ある場合において、追加のアミノ酸は、ペプチドを保護し、ペプチドを安定化し、またはペプチドの活性を変化させる。ある場合において、これらの追加のアミノ酸の一部またはすべてが、該ペプチドを患者へ投与する前に除去される。本発明のペプチドは、そのアミノ末端もしくはカルボキシ末端、またはその両方に、１、２、３、４、５、１０、１５、２０、２５、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、またはそれより多いアミノ酸を含み得る。隣接するアミノ酸の数は同じである必要
はない。例えば、本発明のペプチドのアミノ末端に１０個の追加のアミノ酸が存在し、カルボキシ末端には追加のアミノ酸が存在しなくてもよい。
【００２６】
１つの実施形態において、本発明のペプチドは、アミノ酸配列（Ｉ）：Ｘａａ１Ｘａａ２Ｘａａ３Ｘａａ４Ｘａａ５Ｃｙｓ６Ｃｙｓ７Ｘａａ８Ｘａａ９Ｃｙｓ１０Ｃｙｓ１１Ｘａａ１２Ｘａａ１３Ｘａａ１４Ｃｙｓ１５Ｘａａ１６Ｘａａ１７Ｃｙｓ１８Ｘａａ１９Ｘａａ２０Ｘａａ２１を含んでなり、前記配列中、Ｘａａ１Ｘａａ２Ｘａａ３Ｘａａ４Ｘａａ５が欠失しており；Ｘａａ８がＧｌｕであり；Ｘａａ９がＬｅｕ、Ｉｌｅ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、またはＰｈｅであり；Ｘａａ１２がＡｓｎであり；Ｘａａ１３がＰｒｏであり；Ｘａａ１４がＡｌａであり；Ｘａａ１６がＴｈｒ、Ａｌａ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｔｒｐであり；Ｘａａ１７がＧｌｙであり；Ｘａａ１９がＴｙｒまたはＬｅｕであり；およびＸａａ２０Ｘａａ２１がＡｓｐＰｈｅであるか、または欠失している。Ｘａａ２０Ｘａａ２１および／またはＸａａ１Ｘａａ２Ｘａａ３Ｘａａ４Ｘａａ５が欠失している場合、一部の実施形態では、追加の隣接アミノ酸が存在してもよい。
【００２７】
第２の態様において、本発明はまた、アミノ酸配列（Ｉ）：Ｘａａ１Ｘａａ２Ｘａａ３Ｘａａ４Ｘａａ５Ｃｙｓ６Ｃｙｓ７Ｘａａ８Ｘａａ９Ｃｙｓ１０Ｃｙｓ１１Ｘａａ１２Ｘａａ１３Ｘａａ１４Ｃｙｓ１５Ｘａａ１６Ｘａａ１７Ｃｙｓ１８Ｘａａ１９Ｘａａ２０Ｘａａ２１を含んでなるペプチドを投与する工程を包含する治療的方法または予防的方法を特徴とし、前記配列中、Ｘａａ１Ｘａａ２Ｘａａ３Ｘａａ４Ｘａａ５はＡｓｎＳｅｒＳｅｒＡｓｎＴｙｒであるか欠失しており、またはＸａａ１Ｘａａ２Ｘａａ３Ｘａａ４が欠失していてＸａａ５がＡｓｎ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ａｓｐ、Ｉｌｅ、Ｔｈｒ、またはＰｈｅであり；Ｘａａ８はＧｌｕ、Ａｓｐ、Ｇｌｎ、Ｇｌｙ、またはＰｒｏであり；Ｘａａ９はＬｅｕ、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、Ａｌａ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、またはＰｈｅであり；Ｘａａ１２はＡｓｎ、Ｔｙｒ、Ａｓｐ、またはＡｌａであり；Ｘａａ１３はＰｒｏまたはＧｌｙであり；Ｘａａ１４はＡｌａ、Ｌｅｕ、Ｓｅｒ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｇｌｕ、Ｇｌｎ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、およびＡｓｐであり；Ｘａａ１６はＴｈｒ、Ａｌａ、Ａｓｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｔｒｐであり；Ｘａａ１７はＧｌｙ、Ｐｒｏ、またはＡｌａであり；Ｘａａ１９はＴｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ、またはＬｅｕであり；ならびにＸａａ２０Ｘａａ２１がＡｓｐＰｈｅもしくは欠失しており、またはＸａａ２０がＡｓｎもしくはＧｌｕであってＸａａ２１が欠失しており、またはＸａａ１９Ｘａａ２０Ｘａａ２１が欠失している。
【００２８】
治療的方法または予防的方法の特定の実施形態において：本発明のペプチドは、アミノ酸配列（Ｉ）：Ｘａａ１Ｘａａ２Ｘａａ３Ｘａａ４Ｘａａ５Ｃｙｓ６Ｃｙｓ７Ｘａａ８Ｘａａ９Ｃｙｓ１０Ｃｙｓ１１Ｘａａ１２Ｘａａ１３Ｘａａ１４Ｃｙｓ１５Ｘａａ１６Ｘａａ１７Ｃｙｓ１８Ｘａａ１９Ｘａａ２０Ｘａａ２１を含んでなり、前記配列中、Ｘａａ１Ｘａａ２Ｘａａ３Ｘａａ４Ｘａａ５が欠失しており；Ｘａａ８はＧｌｕであり；Ｘａａ９はＬｅｕ、Ｉｌｅ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、またはＰｈｅであり；Ｘａａ１２はＡｓｎであり；Ｘａａ１３はＰｒｏであり；Ｘａａ１４はＡｌａであり；Ｘａａ１６はＴｈｒ、Ａｌａ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｔｒｐであり、またはＸａａ１６は任意のアミノ酸であり、またはＸａａ１６はＴｈｒ、Ａｌａ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｔｒｐであり、またはＸａａ１６は任意の非芳香族アミノ酸であり；Ｘａａ１７はＧｌｙであり；Ｘａａ１９はＴｒｙまたはＬｅｕであり；およびＸａａ２０Ｘａａ２１はＡｓｐＰｈｅであるかまたは欠失している。
【００２９】
特定の実施形態において、本発明は、アミノ酸配列（ＩＩ）、
Ｘａａ１Ｘａａ２Ｘａａ３Ｘａａ４Ｘａａ５Ｃｙｓ６Ｃｙｓ７Ｘａａ８Ｘａａ９Ｃｙｓ１０Ｃｙｓ１１Ａｓｎ１２Ｐｒｏ１３Ａｌａ１４Ｃｙｓ１５Ｘａａ１６Ｇｌｙ１７Ｃｙｓ１８Ｘａａ１９Ｘａａ２０Ｘａａ２１
を含んでなる精製ポリペプチドを特徴とし、前記配列中、
Ｘａａ１Ｘａａ２Ｘａａ３Ｘａａ４Ｘａａ５はＡｓｎＳｅｒＳｅｒＡｓｎＴｙｒであるかもしくは欠失しており、またはＸａａ１Ｘａａ２Ｘａａ３Ｘａａ４が欠失していてＸａａ５がＡｓｎであり；  Ｘａａ８はＧｌｕまたはＡｓｐであり；
Ｘａａ９はＬｅｕ、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、またはＰｈｅであり；
Ｘａａ１６はＴｈｒ、Ａｌａ、Ｔｒｐであり；
Ｘａａ１９はＴｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ、もしくはＬｅｕであるかまたは欠失しており；ならびにＸａａ２０Ｘａａ２１がＡｓｐＰｈｅである。
【００３０】
種々の好ましい実施形態において、本発明は、アミノ酸配列（ＩＩ）：Ｘａａ１Ｘａａ２Ｘａａ３Ｘａａ４Ｘａａ５Ｃｙｓ６Ｃｙｓ７Ｘａａ８Ｘａａ９Ｃｙｓ１０Ｃｙｓ１１Ａｓｎ１２Ｐｒｏ１３Ａｌａ１４Ｃｙｓ１５Ｘａａ１６Ｇｌｙ１７Ｃｙｓ１８Ｘａａ１９Ｘａａ２０Ｘａａ２１を含んでなる精製ポリペプチドを特徴とし、前記配列中、Ｘａａ９はＬｅｕ、Ｉｌｅ、またはＶａｌでありかつＸａａ１６はＴｒｐ、Ｔｙｒ、またはＰｈｅであり；Ｘａａ９はＴｒｐ、Ｔｙｒ、またはＰｈｅでありかつＸａａ１６はＴｈｒまたはＡｌａであり；Ｘａａ１９はＴｒｐ、Ｔｙｒ、ＰｈｅでありかつＸａａ２０Ｘａａ２１がＡｓｐＰｈｅであり；ならびにＸａａ１Ｘａａ２Ｘａａ３Ｘａａ４が欠失していてＸａａ５がＡｓｎであり；このペプチドは５０、４０、３０、または２５未満のアミノ酸を含み；Ｃｙｓ６の前にあるアミノ酸は５未満である。
【００３１】
本発明のペプチドは、鎮痛ペプチドまたは鎮痛化合物を含む種々の他の任意のペプチドと同時投与されてもよいし、または連結（例えば、共有結合）されてもよい。例えば、本発明の治療用ペプチドは、以下の：Ｃａチャンネルブロッカー（例えば、ジコノチド）、完全または部分的な５ＨＴレセプターアンタゴニスト（例えば、５ＨＴ３レセプターアンタゴニスト、５ＨＴ４レセプターアンタゴニスト、および５ＨＴ１レセプターアンタゴニスト）、完全または部分的な５ＨＴレセプターアゴニスト（５ＨＴ３レセプターアゴニスト、５ＨＴ４レセプターアゴニスト（例えばテガセロッド（tegaserod  ）、モサプリド
、およびレンザプリド）、および５ＨＴ１レセプターアゴニストを含む）、ＣＲＦレセプターアゴニスト（ＮＢＩ−３４０４１）、β−３アドレナリンレセプターアゴニスト、オピオイドレセプターアゴニスト（例えば、ロペラミド、フェドトジン、およびフェンタニル、ナロキソン、ナルトレキソン、メチルナロゾン、ナルメフェン、シプリジム、β−フナルトレキサミン、ナロキソナジン、ナルトリンドール、およびノルビナルトルフィミン、モルヒネ、ジフェニルオキシレート、エンケファリンペンタペプチド、アシマドリン（asimadoline  ）およびトリメブチン）、ＮＫ１レセプターアンタゴニスト（例えば、エ
ズロピタントおよびＳＲ−１４０３３）、ＣＣＫレセプターアゴニスト（例えば、ロキシグルミド）、ＮＫ１レセプターアンタゴニスト、ＮＫ３レセプターアンタゴニスト（例えば、タルネタント、オサネタント（ＳＲ−１４２８０１））、ノルエピネフリン−セロトニン再取り込み阻害剤（ＮＳＲＩ；例えば、ミルナシプラン）、バニロイドおよびカンナバノイドレセプターアゴニスト（例えば、アーバニル）、シアロルフィン、アミノ酸配列ＱＨＮＰＲ（配列番号）を含むシアロルフィン関連ペプチド（例えば、ＶＱＨＮＰＲ（配列番号  ）；ＶＲＱＨＮＰＲ（配列番号  ）；ＶＲＧＱＨＮＰＲ（配列番号  ）；ＶＲＧＰＱＨＮＰＲ（配列番号  ）；ＶＲＧＰＲＱＨＮＰＲ（配列番号  ）；ＶＲＧＰＲＲＱＨＮＰＲ（配列番号  ）；およびＲＱＨＮＰＲ（配列番号  ））、ネプリリシンの阻害剤である化合物またはペプチド、フラケファミド（Ｈ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ａｌａ−Ｐｈｅ（Ｆ）−Ｐｈｅ−ＮＨ２；国際公開公報第０１／０１９８４９  Ａ１号）、ロペラミド、Ｔｙｒ−Ａｒｇ（キョートルフィン）、ＣＣＫレセプターアゴニスト（セルレイン）、コノトキシンペプチド、サイムリンのペプチド類似体、ロキシグルミド、デキシロキシグルミド（ロキシグルミドのＲ異性体）（国際公開公報第８８／０５７７４号）、からなる群から選択される鎮痛剤に連結可能であり、その他の鎮痛ペプチドまたは鎮痛化合物が本発明のペプチドとともに使用されてもよいし本発明のペプチドに連結されてもよい。
【００３２】
アミノ酸、非アミノ酸、ペプチド、および非ペプチドのスペーサーが、ＧＣ−Ｃレセプターアゴニストであるペプチドと、何らかの他の生物学的機能を有するペプチド（例えば鎮痛ペプチドまたは肥満を治療するために使用されるペプチド）との間に挿入され得る。該リンカーは、インビボで隣接するペプチドから切断され得るものでもよいし、またはインビボで隣接するペプチドに連結されたままのものでもよい。例えば、グリシン、β−アラニン、グリシルグリシン、グリシル−β−アラニン、γ−アミノ酪酸、６−アミノカプロン酸、Ｌ−フェニルアラニン、Ｌ−トリプトファン、およびグリシル−Ｌ−バリル−Ｌ−フェニルアラニンがスペーサーとして使用され得るが（チャルチンら（Chaltin  et  al.）、2003  Helvetica  Chimica  Acta  86:533-547；カリセチら（Caliceti  et  al.
）、1993
FARMCO  48:919-32  ）、このことはポリエチレングリコール（バターワースら（Butterworth  et  al.）、1987  J.Med.Chem  30:1295-302  ）およびマレイミド誘導体（キングら（King  et  al.  ）、2002  Tetrahedron  Lett.43:1987-1990）がスペーサーとして
使用され得るのと同様である。種々の他のリンカーが文献に記載されている（ネストラー（Nestler  ）、1996  Molecular  Diversity  2:35-42；フィンら（Finn  et  al.  ）
、1984  Biochemistry  23:2554-8  ；クックら（Cook  et  al.  ）、1994  Tetrahedron  Lett.35:6777-80；ブロックスら（Brokx  et  al.）、2002  Journal  of  Controlled  Release  78:115-123  ；グリフィンら（Griffin  et  al.）、2003  J.Am.Chem.Soc.125:6517-6531；ロビンソンら（Robinson  et  al.  ）、1998  Proc.Natl.Acad.Sci.USA
95:5929-5934）。
【００３３】
本発明のペプチドは、脊椎動物（例えば、哺乳動物）の生物種または細菌種において天然に存在するペプチドのアミノ酸配列を含み得る。さらに、本発明のペプチドは、部分的または完全に天然には存在しないペプチドでもよい。本発明のペプチドに対応するペプチド模倣物もまた、本発明に含まれる。種々の実施形態において、患者は胃腸障害を患っており；該患者は以下、すなわち胃腸運動障害、過敏性腸症候群、慢性便秘、機能性胃腸障害、胃食道逆流性疾患、機能性胸焼け、消化不良、機能性消化不良、非潰瘍性消化不良、胃不全麻痺、慢性的な腸偽閉塞症、クローン病、潰瘍性大腸炎、過敏性腸症候群、結腸偽閉塞症、肥満、うっ血性心不全、または良性前立腺過形成、からなる群から選択される障害を患っており；本発明の組成物は経口的に投与され；本発明のペプチドは３０以下のアミノ酸を含み、本発明のペプチドは２０以下のアミノ酸を含み、そしてこのペプチドはＣｙｓ６の前に５個以下のアミノ酸を含み；本発明のペプチドは、１５０、１４０、１３０、１２０、１１０、１００、９０、８０、７０、６０、５０、４０、または３０、あるいはそれより少ないアミノ酸を含む。他の実施形態において、本発明のペプチドは２０以下のアミノ酸を含む。他の実施形態において、本発明のペプチドは、Ｃｙｓ１８の後に２０、１５、１０、または５個以下のペプチドを含む。特定の実施形態において、Ｘａａ１９はキモトリプシンまたはトリプシンの切断部位であり、Ｘａａ１９の直後に鎮痛ペプチドが存在する。
【００３４】
第３の態様において、本発明は、便秘の患者を治療するための方法を特徴とする。臨床的に受容されている便秘を規定する判断基準は、便通の頻度から、糞便の軟度、および便通の容易さの範囲にわたる。便秘の１つの一般的な定義は、便通が週に３回未満であることである。他の定義には、異常に固い大便または排便に過度のいきみを必要とすることが含まれる（シラー（Schiller）、2001,  Aliment  Pharmacol  Ther  15:749-763  ）。
便秘は、特発性のもの（機能性便秘もしくは通過の遅延による便秘）もあれば、他の原因（神経障害、代謝障害、または内分泌障害を含む）に伴って二次的に生じるものもある。これらの障害には、真正糖尿病、甲状腺機能低下症、甲状腺機能亢進症、低カルシウム血症、多発性硬化症、パーキンソン病、脊髄損傷、神経線維腫症、自律性ニューロパシー、シャーガス病、ヒルシュスプルング病、および嚢胞性線維症が含まれる。便秘はまた、外
科手術の結果（術後イレウス）の場合もあるし、または薬物（例えば鎮痛剤（オピオイドなど）、降圧剤、抗けいれん剤、抗うつ剤、鎮痙剤、および抗精神病剤など）の使用が原因の場合もある。
【００３５】
本発明の方法は、アミノ酸配列（Ｉ）：Ｘａａ１Ｘａａ２Ｘａａ３Ｘａａ４Ｘａａ５Ｃｙｓ６Ｃｙｓ７Ｘａａ８Ｘａａ９Ｃｙｓ１０Ｃｙｓ１１Ｘａａ１２Ｘａａ１３Ｘａａ１４Ｃｙｓ１５Ｘａａ１６Ｘａａ１７Ｃｙｓ１８Ｘａａ１９Ｘａａ２０Ｘａａ２１を含んでなる精製ポリペプチドを含む組成物を投与する工程を包含し、前記配列中Ｘａａ１Ｘａａ２Ｘａａ３Ｘａａ４Ｘａａ５はＡｓｎＳｅｒＳｅｒＡｓｎＴｙｒであるかまたは欠失しており、またはＸａａ１Ｘａａ２Ｘａａ３Ｘａａ４が欠失していてＸａａ５がＡｓｎ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ａｓｐ、Ｉｌｅ、Ｔｈｒ、またはＰｈｅであり；Ｘａａ８がＧｌｕ、Ａｓｐ、Ｇｌｎ、Ｇｌｙ、またはＰｒｏであり；Ｘａａ９がＬｅｕ、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、Ａｌａ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、またはＰｈｅであり；Ｘａａ１２がＡｓｎ、Ｔｙｒ、Ａｓｐ、またはＡｌａであり；Ｘａａ１３がＰｒｏまたはＧｌｙであり；Ｘａａ１４がＡｌａ、Ｌｅｕ、Ｓｅｒ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｇｌｕ、Ｇｌｎ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、およびＡｓｐであり；Ｘａａ１６はＴｈｒ、Ａｌａ、Ａｓｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｔｒｐであり；Ｘａａ１７はＧｌｙ、Ｐｒｏ、またはＡｌａであり；Ｘａａ１９はＴｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ、またはＬｅｕであり；Ｘａａ１９はＬｙｓまたはＡｒｇであり；Ｘａａ２０Ｘａａ２１がＡｓｐＰｈｅであるかもしくは欠失しており、またはＸａａ２０がＡｓｎもしくはＧｌｕでＸａａ２１が欠失しているか、またはＸａａ１９Ｘａａ２０Ｘａａ２１が欠失している。
【００３６】
本発明の方法の１つの実施形態において、ペプチドは、アミノ酸配列（Ｉ）：Ｘａａ１Ｘａａ２Ｘａａ３Ｘａａ４Ｘａａ５Ｃｙｓ６Ｃｙｓ７Ｘａａ８Ｘａａ９Ｃｙｓ１０Ｃｙｓ１１Ｘａａ１２Ｘａａ１３Ｘａａ１４Ｃｙｓ１５Ｘａａ１６Ｘａａ１７Ｃｙｓ１８Ｘａａ１９Ｘａａ２０Ｘａａ２１を含み、前記配列中、Ｘａａ１Ｘａａ２Ｘａａ３Ｘａａ４Ｘａａ５が欠失しており；Ｘａａ８がＧｌｕであり；Ｘａａ９がＬｅｕ、Ｉｌｅ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、またはＰｈｅであり；Ｘａａ１２がＡｓｎであり；Ｘａａ１３がＰｒｏであり；Ｘａａ１４がＡｌａであり；Ｘａａ１６はＴｈｒ、Ａｌａ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｔｒｐであり；Ｘａａ１７はＧｌｙであり；Ｘａａ１９はＴｙｒまたはＬｅｕであり；Ｘａａ１９はＬｙｓまたはＡｒｇであり；Ｘａａ２０Ｘａａ２１がＡｓｐＰｈｅであるかまたは欠失している。
【００３７】
種々の好ましい実施形態において、便秘は治療剤の使用に関連するものであり；便秘は神経障害と関連し；便秘は手術後の便秘（術後イレウス）であり；便秘は胃腸障害と関連し；便秘は特発性（機能性便秘もしくは通過の遅延による便秘）であり；便秘は神経障害、代謝障害、または内分泌障害（例えば、真正糖尿病、甲状腺機能低下症、甲状腺機能亢進症、低カルシウム血症、多発性硬化症、パーキンソン病、脊髄損傷、神経線維腫症、自律性ニューロパシー、シャーガス病、ヒルシュスプルング病、または嚢胞性線維症）と関連する。便秘はまた、外科手術の結果（術後イレウス）の場合もあるし、または薬物（例えば鎮痛剤（例えばオピオイド）、降圧剤、抗けいれん剤、抗うつ剤、鎮痙剤、および抗精神病剤など）の使用が原因の場合もある。
【００３８】
第４の態様において、本発明は、胃腸障害の患者を治療するための方法を特徴とし、この方法は、アミノ酸配列（Ｉ）：Ｘａａ１Ｘａａ２Ｘａａ３Ｘａａ４Ｘａａ５Ｃｙｓ６Ｃｙｓ７Ｘａａ８Ｘａａ９Ｃｙｓ１０Ｃｙｓ１１Ｘａａ１２Ｘａａ１３Ｘａａ１４Ｃｙｓ１５Ｘａａ１６Ｘａａ１７Ｃｙｓ１８Ｘａａ１９Ｘａａ２０Ｘａａ２１を含んでなる精製ポリペプチドを含む組成物を患者に投与する工程を包含し、前記配列中、Ｘａａ１Ｘａａ２Ｘａａ３Ｘａａ４Ｘａａ５はＡｓｎＳｅｒＳｅｒＡｓｎＴｙｒであるかまたは欠失しており、またはＸａａ１Ｘａａ２Ｘａａ３Ｘａａ４が欠失していてＸａａ５がＡｓｎ、Ｔｒｐ
、Ｔｙｒ、Ａｓｐ、Ｉｌｅ、Ｔｈｒ、もしくはＰｈｅであり；Ｘａａ８がＧｌｕ、Ａｓｐ、Ｇｌｎ、Ｇｌｙ、またはＰｒｏであり；Ｘａａ９がＬｅｕ、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、Ａｌａ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、またはＰｈｅであり；Ｘａａ１２がＡｓｎ、Ｔｙｒ、Ａｓｐ、またはＡｌａであり；Ｘａａ１３がＰｒｏまたはＧｌｙであり；Ｘａａ１４がＡｌａ、Ｌｅｕ、Ｓｅｒ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｇｌｕ、Ｇｌｎ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、およびＡｓｐであり；Ｘａａ１６がＴｈｒ、Ａｌａ、Ａｓｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｔｒｐであり；Ｘａａ１７がＧｌｙ、Ｐｒｏ、またはＡｌａであり；Ｘａａ１９がＴｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ、またはＬｅｕであり；Ｘａａ１９がＬｙｓまたはＡｒｇであり；Ｘａａ２０Ｘａａ２１がＡｓｐＰｈｅであるかもしくは欠失しており、またはＸａａ２０がＡｓｎもしくはＧｌｕであってＸａａ２１が欠失しており、またはＸａａ１９Ｘａａ２０Ｘａａ２１が欠失している。
【００３９】
本発明の方法の１つの実施形態において、このペプチドは、アミノ酸配列（Ｉ）：Ｘａａ１Ｘａａ２Ｘａａ３Ｘａａ４Ｘａａ５Ｃｙｓ６Ｃｙｓ７Ｘａａ８Ｘａａ９Ｃｙｓ１０Ｃｙｓ１１Ｘａａ１２Ｘａａ１３Ｘａａ１４Ｃｙｓ１５Ｘａａ１６Ｘａａ１７Ｃｙｓ１８Ｘａａ１９Ｘａａ２０Ｘａａ２１を含み、前記配列中、Ｘａａ１Ｘａａ２Ｘａａ３Ｘａａ４Ｘａａ５が欠失しており；Ｘａａ８がＧｌｕであり；Ｘａａ９がＬｅｕ、Ｉｌｅ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、またはＰｈｅであり；Ｘａａ１２がＡｓｎであり；Ｘａａ１３がＰｒｏであり；Ｘａａ１４がＡｌａであり；Ｘａａ１６がＴｈｒ、Ａｌａ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｔｒｐであり；Ｘａａ１７がＧｌｙであり；Ｘａａ１９がＴｙｒまたはＬｅｕであり；Ｘａａ１９がＬｙｓまたはＡｒｇであり；Ｘａａ２０Ｘａａ２１がＡｓｐＰｈｅであるかまたは欠失している。
【００４０】
種々の実施形態において、患者は胃腸障害を患っており；患者は、胃腸運動障害、過敏性腸症候群、慢性便秘、機能性胃腸障害、胃食道逆流性疾患、機能性胸焼け、消化不良、機能性消化不良、非潰瘍性消化不良、胃不全麻痺、慢性的な腸偽閉塞症、クローン病、潰瘍性大腸炎、炎症性腸疾患、結腸偽閉塞症、肥満、うっ血性心不全、または良性前立腺過形成、からなる群から選択される障害を患っている。
【００４１】
種々の好ましい実施形態において、Ｘａａ９がＬｅｕ、Ｉｌｅ、またはＶａｌであってＸａａ１６はＴｒｐ、Ｔｙｒ、またはＰｈｅであり；Ｘａａ９はＴｒｐ、ＴｙｒまたはＰｈｅであってＸａａ１６はＴｈｒまたはＡｌａであり；Ｘａａ１９がＴｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅであり；Ｘａａ１９がＬｙｓまたはＡｒｇであり；Ｘａａ２０Ｘａａ２１がＡｓｐＰｈｅであり；Ｘａａ１Ｘａａ２Ｘａａ３Ｘａａ４が欠失していてＸａａ５がＡｓｎである。
【００４２】
第５の態様において、本発明は、患者における胃腸の運動性を増大させるための方法を特徴とし、この方法は、アミノ酸配列（Ｉ）：Ｘａａ１Ｘａａ２Ｘａａ３Ｘａａ４Ｘａａ５Ｃｙｓ６Ｃｙｓ７Ｘａａ８Ｘａａ９Ｃｙｓ１０Ｃｙｓ１１Ｘａａ１２Ｘａａ１３Ｘａａ１４Ｃｙｓ１５Ｘａａ１６Ｘａａ１７Ｃｙｓ１８Ｘａａ１９Ｘａａ２０Ｘａａ２１を含んでなる精製ポリペプチドを含む組成物を患者に投与する工程を包含し、前記配列中、Ｘａａ１Ｘａａ２Ｘａａ３Ｘａａ４Ｘａａ５がＡｓｎＳｅｒＳｅｒＡｓｎＴｙｒであるかまたは欠失しており、またはＸａａ１Ｘａａ２Ｘａａ３Ｘａａ４が欠失していてＸａａ５がＡｓｎ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ａｓｐ、Ｉｌｅ、Ｔｈｒ、もしくはＰｈｅであり；Ｘａａ８がＧｌｕ、Ａｓｐ、Ｇｌｎ、Ｇｌｙ、またはＰｒｏであり；Ｘａａ９がＬｅｕ、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、Ａｌａ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、またはＰｈｅであり；Ｘａａ１２がＡｓｎ、Ｔｙｒ、Ａｓｐ、またはＡｌａであり；Ｘａａ１３がＰｒｏまたはＧｌｙであり；Ｘａａ１４がＡｌａ、Ｌｅｕ、Ｓｅｒ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｇｌｕ、Ｇｌｎ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、およびＡｓｐであり；Ｘａａ１６がＴｈｒ、Ａｌａ、Ａｓｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｔｒｐであり；Ｘａａ１７がＧｌｙ、Ｐｒｏ、またはＡｌａであり；Ｘａａ１
９がＴｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ、またはＬｅｕであり；Ｘａａ１９がＬｙｓまたはＡｒｇであり；Ｘａａ２０Ｘａａ２１がＡｓｐＰｈｅであるかもしくは欠失しており、またはＸａａ２０がＡｓｎもしくはＧｌｕであってＸａａ２１が欠失しており、またはＸａａ１９Ｘａａ２０Ｘａａ２１が欠失している。
【００４３】
１つの実施形態において、本発明のペプチドは、アミノ酸配列（Ｉ）：Ｘａａ１Ｘａａ２Ｘａａ３Ｘａａ４Ｘａａ５Ｃｙｓ６Ｃｙｓ７Ｘａａ８Ｘａａ９Ｃｙｓ１０Ｃｙｓ１１Ｘａａ１２Ｘａａ１３Ｘａａ１４Ｃｙｓ１５Ｘａａ１６Ｘａａ１７Ｃｙｓ１８Ｘａａ１９Ｘａａ２０Ｘａａ２１を含み、前記配列中、Ｘａａ１Ｘａａ２Ｘａａ３Ｘａａ４Ｘａａ５が欠失しており；Ｘａａ８がＧｌｕであり；Ｘａａ９がＬｅｕ、Ｉｌｅ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、またはＰｈｅであり；Ｘａａ１２がＡｓｎであり；Ｘａａ１３がＰｒｏであり；Ｘａａ１４がＡｌａであり；Ｘａａ１６がＴｈｒ、Ａｌａ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｔｒｐであり；Ｘａａ１７がＧｌｙであり；Ｘａａ１９がＴｙｒまたはＬｅｕであり；Ｘａａ１９がＬｙｓまたはＡｒｇであり；Ｘａａ２０Ｘａａ２１がＡｓｐＰｈｅであるかまたは欠失している。
【００４４】
第６の態様において、本発明は、患者における腸のグアニル酸シクラーゼ（ＧＣ−Ｃ）レセプターの活性を増大させるための方法を特徴とし、この方法は、アミノ酸配列（Ｉ）：Ｘａａ１Ｘａａ２Ｘａａ３Ｘａａ４Ｘａａ５Ｃｙｓ６Ｃｙｓ７Ｘａａ８Ｘａａ９Ｃｙｓ１０Ｃｙｓ１１Ｘａａ１２Ｘａａ１３Ｘａａ１４Ｃｙｓ１５Ｘａａ１６Ｘａａ１７Ｃｙｓ１８Ｘａａ１９Ｘａａ２０Ｘａａ２１を含んでなる精製ポリペプチドを含む組成物を患者に投与する工程を包含し、前記配列中、Ｘａａ１Ｘａａ２Ｘａａ３Ｘａａ４Ｘａａ５がＡｓｎＳｅｒＳｅｒＡｓｎＴｙｒであるかまたは欠失しており、またはＸａａ１Ｘａａ２Ｘａａ３Ｘａａ４が欠失していてＸａａ５がＡｓｎ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ａｓｐ、Ｉｌｅ、Ｔｈｒ、もしくはＰｈｅであり；Ｘａａ８がＧｌｕ、Ａｓｐ、Ｇｌｎ、Ｇｌｙ、またはＰｒｏであり；Ｘａａ９がＬｅｕ、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、Ａｌａ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、またはＰｈｅであり；Ｘａａ１２がＡｓｎ、Ｔｙｒ、Ａｓｐ、またはＡｌａであり；Ｘａａ１３がＰｒｏまたはＧｌｙであり；Ｘａａ１４がＡｌａ、Ｌｅｕ、Ｓｅｒ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｇｌｕ、Ｇｌｎ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、およびＡｓｐであり；Ｘａａ１６がＴｈｒ、Ａｌａ、Ａｓｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｔｒｐであり；Ｘａａ１７がＧｌｙ、Ｐｒｏ、またはＡｌａであり；Ｘａａ１９がＴｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ、またはＬｅｕであり；Ｘａａ１９がＬｙｓまたはＡｒｇであり；Ｘａａ２０Ｘａａ２１がＡｓｐＰｈｅであるかもしくは欠失しており、またはＸａａ２０がＡｓｎもしくはＧｌｕであってＸａａ２１が欠失しており、またはＸａａ１９Ｘａａ２０Ｘａａ２１が欠失している。
【００４５】
１つの実施形態において、本発明のペプチドは、アミノ酸配列（Ｉ）：Ｘａａ１Ｘａａ２Ｘａａ３Ｘａａ４Ｘａａ５Ｃｙｓ６Ｃｙｓ７Ｘａａ８Ｘａａ９Ｃｙｓ１０Ｃｙｓ１１Ｘａａ１２Ｘａａ１３Ｘａａ１４Ｃｙｓ１５Ｘａａ１６Ｘａａ１７Ｃｙｓ１８Ｘａａ１９Ｘａａ２０Ｘａａ２１を含み、前記配列中、Ｘａａ１Ｘａａ２Ｘａａ３Ｘａａ４Ｘａａ５が欠失しており；Ｘａａ８がＧｌｕであり；Ｘａａ９がＬｅｕ、Ｉｌｅ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、またはＰｈｅであり；Ｘａａ１２がＡｓｎであり；Ｘａａ１３がＰｒｏであり；Ｘａａ１４がＡｌａであり；Ｘａａ１６がＴｈｒ、Ａｌａ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｔｒｐであり；Ｘａａ１７がＧｌｙであり；Ｘａａ１９がＴｙｒまたはＬｅｕであり；Ｘａａ１９がＬｙｓまたはＡｒｇであり；Ｘａａ２０Ｘａａ２１がＡｓｐＰｈｅであるかまたは欠失している。
【００４６】
第７の態様において、本発明は、アミノ酸配列（Ｉ）：Ｘａａ１Ｘａａ２Ｘａａ３Ｘａａ４Ｘａａ５Ｃｙｓ６Ｃｙｓ７Ｘａａ８Ｘａａ９Ｃｙｓ１０Ｃｙｓ１１Ｘａａ１２Ｘａａ１３Ｘａａ１４Ｃｙｓ１５Ｘａａ１６Ｘａａ１７Ｃｙｓ１８Ｘａａ１９Ｘａａ２０Ｘａａ２１を含んでなるポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む単離された核酸分子
を特徴とし、前記配列中、Ｘａａ１Ｘａａ２Ｘａａ３Ｘａａ４Ｘａａ５がＡｓｎＳｅｒＳｅｒＡｓｎＴｙｒであるかもしくは欠失しており、またはＸａａ１Ｘａａ２Ｘａａ３Ｘａａ４が欠失していてＸａａ５がＡｓｎ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ａｓｐ、Ｉｌｅ、Ｔｈｒ、もしくはＰｈｅであり；Ｘａａ８がＧｌｕ、Ａｓｐ、Ｇｌｎ、Ｇｌｙ、またはＰｒｏであり；Ｘａａ９がＬｅｕ、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、Ａｌａ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、またはＰｈｅであり；Ｘａａ１２がＡｓｎ、Ｔｙｒ、Ａｓｐ、またはＡｌａであり；Ｘａａ１３がＰｒｏまたはＧｌｙであり；Ｘａａ１４がＡｌａ、Ｌｅｕ、Ｓｅｒ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｇｌｕ、Ｇｌｎ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、およびＡｓｐであり；Ｘａａ１６がＴｈｒ、Ａｌａ、Ａｓｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｔｒｐであり；Ｘａａ１７がＧｌｙ、Ｐｒｏ、またはＡｌａであり；Ｘａａ１９がＴｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ、またはＬｅｕであり；Ｘａａ１９がＬｙｓまたはＡｒｇであり；Ｘａａ２０Ｘａａ２１がＡｓｐＰｈｅであるかもしくは欠失しており、またはＸａａ２０がＡｓｎもしくはＧｌｕであってＸａａ２１が欠失しており、またはＸａａ１９Ｘａａ２０Ｘａａ２１が欠失している。
【００４７】
１つの実施形態において、本発明のペプチドは、アミノ酸配列（Ｉ）：Ｘａａ１Ｘａａ２Ｘａａ３Ｘａａ４Ｘａａ５Ｃｙｓ６Ｃｙｓ７Ｘａａ８Ｘａａ９Ｃｙｓ１０Ｃｙｓ１１Ｘａａ１２Ｘａａ１３Ｘａａ１４Ｃｙｓ１５Ｘａａ１６Ｘａａ１７Ｃｙｓ１８Ｘａａ１９Ｘａａ２０Ｘａａ２１を含み、前記配列中、Ｘａａ１Ｘａａ２Ｘａａ３Ｘａａ４Ｘａａ５が欠失しており；Ｘａａ８がＧｌｕであり；Ｘａａ９がＬｅｕ、Ｉｌｅ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、またはＰｈｅであり；Ｘａａ１２がＡｓｎであり；Ｘａａ１３がＰｒｏであり；Ｘａａ１４がＡｌａであり；Ｘａａ１６がＴｈｒ、Ａｌａ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｔｒｐであり；Ｘａａ１７がＧｌｙであり；Ｘａａ１９がＴｙｒまたはＬｅｕであり；Ｘａａ１９がＬｙｓまたはＡｒｇであり；Ｘａａ２０Ｘａａ２１がＡｓｐＰｈｅであるかまたは欠失している。
【００４８】
第８の態様において、本発明は、便秘を治療するための方法を特徴とし、この方法は、腸のグアニル酸シクラーゼ（ＧＣ−Ｃ）レセプターのアゴニストを投与する工程を包含する。種々の実施形態において、このアゴニストはペプチドであり、同ペプチドは２つのジスルフィド結合を形成する４つのシステインを含み、同ペプチドは３つのジスルフィド結合を形成する６つのシステインを含む。
【００４９】
第９の態様において、本発明は、胃腸障害、胃腸運動障害、過敏性腸症候群、慢性便秘、機能性胃腸障害、胃食道逆流性疾患、機能性胸焼け、消化不良、機能性消化不良、非潰瘍性消化不良、胃不全麻痺、慢性的な腸偽閉塞症、結腸偽閉塞症、クローン病、潰瘍性大腸炎、炎症性腸疾患、肥満、うっ血性心不全、または良性前立腺過形成を治療するための方法を特徴とし、この方法は、腸のグアニル酸シクラーゼ（ＧＣ−Ｃ）レセプターのアゴニストを、経口投与、または直腸坐薬による投与、または非経口的投与のいずれかによって投与する工程を包含する。種々の実施形態において、このアゴニストはペプチドであり、このペプチドは２つのジスルフィド結合を形成する４つのシステインを含み、このペプチドは３つのジスルフィド結合を形成する６つのシステインを含む。
【００５０】
第１０の態様において、本発明は、胃腸運動障害、過敏性腸症候群、慢性便秘、機能性胃腸障害、胃食道逆流性疾患、機能性胸焼け、消化不良、機能性消化不良、非潰瘍性消化不良、胃不全麻痺、慢性的な腸偽閉塞症、結腸偽閉塞症、クローン病、潰瘍性大腸炎、炎症性腸疾患からなる群から選択される胃腸障害を治療するための方法を特徴とし、この方法は、腸グアニル酸シクラーゼ（ＧＣ−Ｃ）レセプターのアゴニストを投与する工程を包含する。種々の実施形態において、本発明の組成物は経口的に投与され、ペプチドは３０以下のアミノ酸を含み、ペプチドは２０以下のアミノ酸を含み、またペプチドはＣｙｓ５の前に５以下のアミノ酸を含む。
【００５１】
種々の実施形態において、アゴニストはペプチドであり、該ペプチドは２つのジスルフィド結合を形成する４つのシステインを含み、また該ペプチドは３つのジスルフィド結合を形成する６つのシステインを含む。
【００５２】
第１１の態様において、本発明は肥満を治療するための方法を特徴とし、この方法は、腸のグアニル酸シクラーゼ（ＧＣ−Ｃ）レセプターのアゴニストを投与する工程を包含する。種々の実施形態において、アゴニストはペプチドであり、該ペプチドは２つのジスルフィド結合を形成する４つのシステインを含み、また該ペプチドは３つのジスルフィド結合を形成する６つのシステインを含む。
【００５３】
第１２の態様において、本発明は肥満を治療するための方法を特徴とし、この方法は、アミノ酸配列（Ｉ）：Ｘａａ１Ｘａａ２Ｘａａ３Ｘａａ４Ｘａａ５Ｃｙｓ６Ｃｙｓ７Ｘａａ８Ｘａａ９Ｃｙｓ１０Ｃｙｓ１１Ｘａａ１２Ｘａａ１３Ｘａａ１４Ｃｙｓ１５Ｘａａ１６Ｘａａ１７Ｃｙｓ１８Ｘａａ１９Ｘａａ２０Ｘａａ２１を含むポリペプチドを投与する工程を包含し、前記配列中、Ｘａａ１Ｘａａ２Ｘａａ３Ｘａａ４Ｘａａ５がＡｓｎＳｅｒＳｅｒＡｓｎＴｙｒまたは欠失しているか、またはＸａａ１Ｘａａ２Ｘａａ３Ｘａａ４が欠失していてＸａａ５がＡｓｎ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ａｓｐ、Ｉｌｅ、Ｔｈｒ、もしくはＰｈｅであり；Ｘａａ８がＧｌｕ、Ａｓｐ、Ｇｌｎ、Ｇｌｙ、またはＰｒｏであり；Ｘａａ９がＬｅｕ、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、Ａｌａ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、またはＰｈｅであり；Ｘａａ１２がＡｓｎ、Ｔｙｒ、Ａｓｐ、またはＡｌａであり；Ｘａａ１３がＰｒｏまたはＧｌｙであり；Ｘａａ１４がＡｌａ、Ｌｅｕ、Ｓｅｒ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｇｌｕ、Ｇｌｎ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、およびＡｓｐであり；Ｘａａ１６がＴｈｒ、Ａｌａ、Ａｓｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｔｒｐであり；Ｘａａ１７がＧｌｙ、Ｐｒｏ、またはＡｌａであり；Ｘａａ１９がＴｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ、またはＬｅｕであり；あるいはＸａａ２０Ｘａａ２１がＡｓｐＰｈｅもしくは欠失しており、またはＸａａ２０がＡｓｎもしくはＧｌｕでありかつＸａａ２１が欠失しており、またはＸａａ１９Ｘａａ２０Ｘａａ２１が欠失している。このペプチドは単独で投与されてもよいし、または肥満の治療のための別の薬剤（例えば、シブトラミンまたは別の薬剤（例えば本明細書中に記載される薬剤））と組み合わせて投与されてもよい。
【００５４】
１つの実施形態において、本発明のペプチドは、アミノ酸配列（Ｉ）：Ｘａａ１Ｘａａ２Ｘａａ３Ｘａａ４Ｘａａ５Ｃｙｓ６Ｃｙｓ７Ｘａａ８Ｘａａ９Ｃｙｓ１０Ｃｙｓ１１Ｘａａ１２Ｘａａ１３Ｘａａ１４Ｃｙｓ１５Ｘａａ１６Ｘａａ１７Ｃｙｓ１８Ｘａａ１９Ｘａａ２０Ｘａａ２１を含み、前記配列中、Ｘａａ１Ｘａａ２Ｘａａ３Ｘａａ４Ｘａａ５が欠失しており；Ｘａａ８がＧｌｕであり；Ｘａａ９がＬｅｕ、Ｉｌｅ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、またはＰｈｅであり；Ｘａａ１２がＡｓｎであり；Ｘａａ１３がＰｒｏであり；Ｘａａ１４がＡｌａであり；Ｘａａ１６がＴｈｒ、Ａｌａ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｔｒｐであり；Ｘａａ１７がＧｌｙであり；Ｘａａ１９がＴｙｒまたはＬｅｕであり；およびＸａａ２０Ｘａａ２１がＡｓｐＰｈｅであるかまたは欠失している。
【００５５】
第１３の態様において、本発明は、本明細書中に記載されるポリペプチドを含んでなる薬学的組成物を特徴とする。
第１４の態様において、本発明は、うっ血性心不全を治療するための方法を特徴とし、この方法は、アミノ酸配列（Ｉ）：Ｘａａ１Ｘａａ２Ｘａａ３Ｘａａ４Ｘａａ５Ｃｙｓ６Ｃｙｓ７Ｘａａ８Ｘａａ９Ｃｙｓ１０Ｃｙｓ１１Ｘａａ１２Ｘａａ１３Ｘａａ１４Ｃｙｓ１５Ｘａａ１６Ｘａａ１７Ｃｙｓ１８Ｘａａ１９Ｘａａ２０Ｘａａ２１を含んでなる精製ポリペプチドを含む組成物を患者に投与する工程を包含し、前記配列中、Ｘａａ１Ｘａａ２Ｘａａ３Ｘａａ４Ｘａａ５がＡｓｎＳｅｒＳｅｒＡｓｎＴｙｒまたは欠失しており、またはＸａａ１Ｘａａ２Ｘａａ３Ｘａａ４が欠失していてＸａａ５がＡｓｎ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ａｓｐ、Ｉｌｅ、Ｔｈｒ、もしくはＰｈｅであり；Ｘａａ８がＧｌｕ、Ａｓｐ、Ｇｌ
ｎ、Ｇｌｙ、またはＰｒｏであり；Ｘａａ９がＬｅｕ、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、Ａｌａ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、またはＰｈｅであり；Ｘａａ１２がＡｓｎ、Ｔｙｒ、Ａｓｐ、またはＡｌａであり；Ｘａａ１３がＰｒｏまたはＧｌｙであり；Ｘａａ１４がＡｌａ、Ｌｅｕ、Ｓｅｒ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｇｌｕ、Ｇｌｎ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、およびＡｓｐであり；Ｘａａ１６がＴｈｒ、Ａｌａ、Ａｓｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｔｒｐであり；Ｘａａ１７がＧｌｙ、Ｐｒｏ、またはＡｌａであり；Ｘａａ１９がＴｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ、またはＬｅｕであり；ならびにＸａａ２０Ｘａａ２１がＡｓｐＰｈｅもしくは欠失しており、またはＸａａ２０がＡｓｎもしくはＧｌｕであってＸａａ２１が欠失しており、またはＸａａ１９Ｘａａ２０Ｘａａ２１が欠失している。このペプチドは、うっ血性心不全の治療のための別の薬剤、例えば、ナトリウム利尿ペプチド（例えば心房性ナトリウム利尿ペプチド、脳ナトリウム利尿ペプチド、またはＣ型ナトリウム利尿ペプチド）、利尿剤、またはアンギオテンシン変換酵素阻害剤と組み合わせて投与され得る。
【００５６】
１つの実施形態において、このペプチドは、アミノ酸配列（Ｉ）：Ｘａａ１Ｘａａ２Ｘａａ３Ｘａａ４Ｘａａ５Ｃｙｓ６Ｃｙｓ７Ｘａａ８Ｘａａ９Ｃｙｓ１０Ｃｙｓ１１Ｘａａ１２Ｘａａ１３Ｘａａ１４Ｃｙｓ１５Ｘａａ１６Ｘａａ１７Ｃｙｓ１８Ｘａａ１９Ｘａａ２０Ｘａａ２１を含み、前記配列中、Ｘａａ１Ｘａａ２Ｘａａ３Ｘａａ４Ｘａａ５が欠失しており；Ｘａａ８がＧｌｕであり；Ｘａａ９がＬｅｕ、Ｉｌｅ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、またはＰｈｅであり；Ｘａａ１２がＡｓｎであり；Ｘａａ１３がＰｒｏであり；Ｘａａ１４がＡｌａであり；Ｘａａ１６がＴｈｒ、Ａｌａ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｔｒｐであり；Ｘａａ１７がＧｌｙであり；Ｘａａ１９がＴｙｒまたはＬｅｕであり；Ｘａａ１９がＬｙｓまたはＡｒｇであり；Ｘａａ２０Ｘａａ２１がＡｓｐＰｈｅまたは欠失している。
【００５７】
第１５の態様において、本発明は、良性前立腺過形成を治療するための方法を特徴とし、この方法は、アミノ酸配列（Ｉ）：Ｘａａ１Ｘａａ２Ｘａａ３Ｘａａ４Ｘａａ５Ｃｙｓ６Ｃｙｓ７Ｘａａ８Ｘａａ９Ｃｙｓ１０Ｃｙｓ１１Ｘａａ１２Ｘａａ１３Ｘａａ１４Ｃｙｓ１５Ｘａａ１６Ｘａａ１７Ｃｙｓ１８Ｘａａ１９Ｘａａ２０Ｘａａ２１を含んでなる精製ポリペプチドを含む組成物を患者に投与する工程を包含し、前記配列中、Ｘａａ１Ｘａａ２Ｘａａ３Ｘａａ４Ｘａａ５がＡｓｎＳｅｒＳｅｒＡｓｎＴｙｒまたは欠失しており、またはＸａａ１Ｘａａ２Ｘａａ３Ｘａａ４が欠失していてＸａａ５がＡｓｎ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ａｓｐ、Ｉｌｅ、Ｔｈｒ、もしくはＰｈｅであり；Ｘａａ８がＧｌｕ、Ａｓｐ、Ｇｌｎ、Ｇｌｙ、またはＰｒｏであり；Ｘａａ９がＬｅｕ、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、Ａｌａ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、またはＰｈｅであり；Ｘａａ１２がＡｓｎ、Ｔｙｒ、Ａｓｐ、またはＡｌａであり；Ｘａａ１３がＰｒｏまたはＧｌｙであり；Ｘａａ１４がＡｌａ、Ｌｅｕ、Ｓｅｒ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｇｌｕ、Ｇｌｎ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、およびＡｓｐであり；Ｘａａ１６がＴｈｒ、Ａｌａ、Ａｓｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｔｒｐであり；Ｘａａ１７がＧｌｙ、Ｐｒｏ、またはＡｌａであり；Ｘａａ１９がＴｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ、またはＬｅｕであり；Ｘａａ１９がＬｙｓまたはＡｒｇであり；Ｘａａ２０Ｘａａ２１がＡｓｐＰｈｅまたは欠失しており、またはＸａａ２０がＡｓｎもしくはＧｌｕであってＸａａ２１が欠失しており、またはＸａａ１９Ｘａａ２０Ｘａａ２１が欠失している。
【００５８】
このペプチドは、ＢＰＨの治療のための別の薬剤、例えば５−αレダクターゼ阻害剤（例えば、フィナステリド）またはαアドレナリン作動遮断剤（例えば、ドキサゾシン）と組み合わせて投与され得る。
【００５９】
１つの実施形態において、本発明のペプチドは、アミノ酸配列（Ｉ）：Ｘａａ１Ｘａａ２Ｘａａ３Ｘａａ４Ｘａａ５Ｃｙｓ６Ｃｙｓ７Ｘａａ８Ｘａａ９Ｃｙｓ１０Ｃｙｓ１１Ｘａａ１２Ｘａａ１３Ｘａａ１４Ｃｙｓ１５Ｘａａ１６Ｘａａ１７Ｃｙｓ１８Ｘａａ１９Ｘ
ａａ２０Ｘａａ２１を含み、前記配列中、Ｘａａ１Ｘａａ２Ｘａａ３Ｘａａ４Ｘａａ５が欠失しており；Ｘａａ８がＧｌｕであり；Ｘａａ９がＬｅｕ、Ｉｌｅ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、またはＰｈｅであり；Ｘａａ１２がＡｓｎであり；Ｘａａ１３がＰｒｏであり；Ｘａａ１４がＡｌａであり；Ｘａａ１６がＴｈｒ、Ａｌａ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｔｒｐであり；Ｘａａ１７がＧｌｙであり；Ｘａａ１９がＴｙｒまたはＬｅｕであり；およびＸａａ２０Ｘａａ２１がＡｓｐＰｈｅまたは欠失している。
【００６０】
第１６の態様において、本発明は、内臓の痛み、胃腸障害に関連する痛み、または何らかの他の障害に関連する痛みなどの痛みを治療または低減するための方法を特徴とし、この方法は、アミノ酸配列（Ｉ）：Ｘａａ１Ｘａａ２Ｘａａ３Ｘａａ４Ｘａａ５Ｃｙｓ６Ｃｙｓ７Ｘａａ８Ｘａａ９Ｃｙｓ１０Ｃｙｓ１１Ｘａａ１２Ｘａａ１３Ｘａａ１４Ｃｙｓ１５Ｘａａ１６Ｘａａ１７Ｃｙｓ１８Ｘａａ１９Ｘａａ２０Ｘａａ２１を含んでなる精製ポリペプチド（例えば、本明細書中に開示されるアミノ酸配列を含む精製ポリペプチド）を含む組成物を患者に投与する工程を包含する。
【００６１】
第１７の態様において、本発明は、胃腸管の炎症（例えば、胃腸障害または感染または何らかの他の障害と関連する炎症）などの炎症を治療するための方法を特徴とし、この方法は、アミノ酸配列（Ｉ）：Ｘａａ１Ｘａａ２Ｘａａ３Ｘａａ４Ｘａａ５Ｃｙｓ６Ｃｙｓ７Ｘａａ８Ｘａａ９Ｃｙｓ１０Ｃｙｓ１１Ｘａａ１２Ｘａａ１３Ｘａａ１４Ｃｙｓ１５Ｘａａ１６Ｘａａ１７Ｃｙｓ１８Ｘａａ１９Ｘａａ２０Ｘａａ２１を含んでなる精製ポリペプチド（例えば、本明細書中に開示されるアミノ酸配列を含む精製ポリペプチド）を含む組成物を患者に投与する工程を包含する。
【００６２】
特定の実施形態において、本発明のペプチドは、アミノ酸配列：Ｘａａ１Ｘａａ２Ｘａａ３Ｘａａ４Ｘａａ５ＣｙｓＣｙｓＧｌｕＸａａ９ＣｙｓＣｙｓＡｓｎＰｒｏＡｌａＣｙｓＴｈｒＧｌｙＣｙｓＴｙｒＸａａ２０Ｘａａ２１（ＩＩ）（配列番号＿）を含むペプチド、またはアミノ酸配列が前記配列であるペプチドを含み、前記配列中、Ｘａａ９は任意のアミノ酸であり、Ｘａａ９はＬｅｕ以外の任意のアミノ酸であり、Ｘａａ９はＰｈｅ、Ｔｒｐ、およびＴｙｒから選択され；Ｘａａ９は任意の他の天然または非天然の芳香族アミノ酸から選択され、Ｘａａ９はＴｙｒであり；Ｘａａ１Ｘａａ２Ｘａａ３Ｘａａ４Ｘａａ５がＡｓｎＳｅｒＳｅｒＡｓｎＴｙｒであり；Ｘａａ１Ｘａａ２Ｘａａ３Ｘａａ４およびＸａａ５が欠失しており；Ｘａａ１Ｘａａ２Ｘａａ３およびＸａａ４が欠失しており；Ｘａａ１Ｘａａ２およびＸａａ３が欠失しており；Ｘａａ１およびＸａａ２が欠失しており；Ｘａａ１が欠失しており；Ｘａａ２０Ｘａａ２１がＡｓｐＰｈｅまたは欠失しており、またはＸａａ２０がＡｓｎもしくはＧｌｕであってＸａａ２１が欠失しており、またはＸａａ１９Ｘａａ２０Ｘａａ２１が欠失している。配列（Ｉ）：Ｘａａ１Ｘａａ２Ｘａａ３Ｘａａ４Ｘａａ５Ｃｙｓ６Ｃｙｓ７Ｘａａ８Ｘａａ９Ｃｙｓ１０Ｃｙｓ１１Ｘａａ１２Ｘａａ１３Ｘａａ１４Ｃｙｓ１５Ｘａａ１６Ｘａａ１７Ｃｙｓ１８Ｘａａ１９Ｘａａ２０Ｘａａ２１を含むペプチドであって、前記配列中、Ｘａａ１Ｘａａ２Ｘａａ３Ｘａａ４Ｘａａ５が欠失している、および／または配列Ｘａａ１９Ｘａａ２０Ｘａａ２１が欠失しているペプチドの場合、該ペプチドはなお追加のカルボキシ末端アミノ酸またはアミノ末端アミノ酸またはその両方を含み得る。
【００６３】
有用なペプチドの中には、アミノ酸配列Ｘａａ１Ｘａａ２Ｘａａ３Ｘａａ４Ｘａａ５ＣｙｓＣｙｓＧｌｕＸａａ９ＣｙｓＣｙｓＡｓｎＰｒｏＡｌａＣｙｓＴｈｒＧｌｙＣｙｓＴｙｒＸａａ２０Ｘａａ２１（ＩＩ）（配列番号＿）を含むペプチド、アミノ酸配列が前記配列であるペプチド、または前記配列のみから実質的になるペプチドは、以下のペプチド、すなわち
【００６４】
【化１】
2010222377.tif 000002
【００６５】
2010222377.tif 000003
【００６６】
（ここで、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯは配列番号を意味する）である。
第１８の態様において、本発明は、うっ血性心不全を治療するための方法を特徴とし、この方法は、腸のグアニル酸シクラーゼ（ＧＣ−Ｃ）レセプターの完全アゴニストまたは部分的アゴニストを投与する工程を包含する。このアゴニストは、うっ血性心不全の治療のための別の薬剤、例えば、ナトリウム利尿ペプチド（例えば心房性ナトリウム利尿ペプチド、脳ナトリウム利尿ペプチド、またはＣ型ナトリウム利尿ペプチド）、利尿剤、またはアンギオテンシン変換酵素阻害剤と組み合わせて投与され得る。
【００６７】
第１９の態様において、本発明は、ＢＰＨを治療するための方法を特徴とし、この方法は、腸のグアニル酸シクラーゼ（ＧＣ−Ｃ）レセプターの完全アゴニストまたは部分的アゴニストを投与する工程を包含する。該アゴニストは、ＢＰＨの治療のための別の薬剤、例えば５−αレダクターゼ阻害剤（例えば、フィナステリド）またはαアドレナリン作動遮断剤（例えば、ドキサゾシン）と組み合わせて投与され得る。
【００６８】
第２０の態様において、本発明は、肥満を治療するための方法を特徴とし、この方法は、腸のグアニル酸シクラーゼ（ＧＣ−Ｃ）レセプターの完全アゴニストまたは部分的アゴニストを投与する工程を包含する。該アゴニストは、肥満の治療のための別の薬剤、例えば、腸ホルモンの断片ペプチドＹＹ３−３６（ＰＹＹ３−３６）、ｇｌｐ−１（グルカゴン様ペプチド−１）、エキセンディン４（ｇｌｐ−１の阻害剤）、シブトラミン、フェンテルミン、フェンジメトラジン、塩酸ベンズフェタミン（Ｄｉｄｒｅｘ、登録商標）、オーリスタット（Ｘｅｎｉｃａｌ、登録商標）、塩酸ジエチルプロピオン（Ｔｅｎｕａｔｅ、登録商標）、フルオキセチン（Ｐｒｏｚａｃ、登録商標）、ブプロピオン、エフェドラ、クロム、ガルシニアカンボジア、ベンゾカイン、ブラダーラック（学名Fucus  vesiculosus  ）、キトサン、ノマメハーバ（nomame  herba）、ガレガソウ（英名ゴーツルー（Goat's  Rue）、フレンチライラック（French  Lilac））、共役リノール酸、Ｌ−カルニ
チン、繊維（アメリカオオバコの繊維、シャゼンソウの繊維、グアー豆の繊維）、カフェイン、デヒドロエピアンドロステロン、ジャーマンダー（学名Teucrium  chamaedrys  ）、Ｂ−ヒドロキシ−β−メチル酪酸、またはピルビン酸と組み合わせて投与され得る。肥満を治療するために有用なペプチドは、別個の分子として、または本発明のペプチドとの融合タンパク質の一部として、本発明のペプチドとの同時治療として投与され得る。従って、例えば、ＰＹＹ３−３６を本発明のペプチドのカルボキシ末端またはアミノ末端に融合させることができる。このような融合タンパク質は、２つのペプチドを分離するための切断を可能にし得るキモトリプシンまたはトリプシンの切断部位を含み得る。
【００６９】
本発明のペプチドまたは腸のグアニル酸シクラーゼ（ＧＣ−Ｃ）レセプターのアゴニストは、便秘もしくは腸運動の低下、消化の遅延、または胃内容排出の遅延を治療するために使用され得る。本発明のペプチドは、ＩＢＳ（鼓脹、疼痛、便秘）、ＧＥＲＤ（食道への酸の逆流）、機能性消化不良、または胃不全麻痺（吐き気、嘔吐、鼓脹、胃排出遅延）および本明細書中に記載される他の障害の症状のうち１つまたはそれ以上を軽減するために使用され得る。
【００７０】
本発明の１つまたはそれ以上の実施形態の詳細は、付随する記載において示される。すべての刊行物、特許文献、および特許出願を本願明細書に援用する。
【図面の簡単な説明】
【００７１】
【図１ａ】組換えＭＭ−４１６７７６ペプチドおよびＭＤ−９１５ペプチドのＬＣＭＳ分析の結果を示す図。
【図１ｂ】合成ＭＤ−１１００ペプチドのＬＣＭＳ分析の結果を示す図。
【図１ｃ】合成ＭＤ−１１００ペプチド分析時のブランクのＬＣＭＳ分析の結果を示す図。
【図２】合成ＭＭ−４１６７７６ペプチド、ＭＤ−９１５ペプチド、および２つの異なるＭＤ−１１００ペプチドの、腸のＧＣ−Ｃレセプター活性アッセイの結果を示す図。
【図３ａ】マウスの胃腸内輸送モデルにおける組換えＭＭ−４１６７７６ペプチドおよびＺｅｌｎｏｒｍ（登録商標）の効果を示す図。
【図３ｂ】マウスの短時間胃腸内輸送モデルにおける合成ＭＤ−１１００ペプチドおよびＺｅｌｎｏｒｍ（登録商標）の効果を示す図。マウスの長時間胃腸内輸送モデルにおける合成ＭＤ−１１００ペプチドおよびＺｅｌｎｏｒｍ（登録商標）の効果を示す図。
【図４ａ】マウスの短時間胃腸内輸送モデルにおけるペプチドＭＤ−９１５およびＭＭ−４１６７７６の効果を示す図。
【図４ｂ】マウスの短時間胃腸内輸送モデルにおけるペプチドＭＤ−１１００およびＭＭ−４１６７７６の効果を示す図。
【図４ｃ】マウスの長時間胃腸内輸送モデルにおけるＭＤ−１１００ペプチドの効果を示す図。
【図５ａ】乳飲みマウス腸分泌モデルにおけるＭＭ−４１６７７６ペプチドおよびＺｅｌｎｏｒｍ（登録商標）の効果を示す図。
【図５ｂ】マウス腸分泌モデルにおけるＭＤ−１１００およびＺｅｌｎｏｒｍ（登録商標）の効果を示す図。
【図６ａ】マウス腸管分泌モデルにおけるＭＭ−４１６７７６ペプチドおよびＭＤ９１５ペプチドの効果を示す図。
【図６ｂ】マウス腸管分泌モデルにおけるＭＭ−４１６７７６ペプチド、ＭＤ−１１００ペプチド、およびＭＤ−９１５ペプチドの効果を示す図。
【図７】ＭＤ−１１００活性をＴＮＢＳ結腸拡張モデルにおいて分析した実験の結果を示す図。
【図８ａ】ＰＢＱライジングアッセイにおける種々の用量のＭＤ−９１５の効果を示す図。
【図８ｂ】ＰＢＱライジングアッセイにおける種々の用量のＭＤ−１１００の効果を示す図。
【図９】競合的放射性リガンド結合アッセイにおけるＭＤ−１１００を用いたＫｄ測定分析の結果を示す図。
【図１０ａ】静脈内投与および経口投与されたＭＤ−１１００についての生物学的利用率（ＥＬＩＳＡアッセイによって検出）を示す図。
【図１０ｂ】静脈内投与および経口投与されたＭＤ−１１００についての生物学的利用率（ＬＣＭＳによって検出）を示す図。
【発明を実施するための形態】
【００７２】
本発明のペプチドは、腸における水分および電解質のバランスの鍵となる制御因子である腸のグアニル酸シクラーゼ（ＧＣ−Ｃ）レセプターに結合する。腸上皮表面の頂端膜上に存在するこのレセプターは、刺激を受けると、腸上皮のサイクリックＧＭＰ（ｃＧＭＰ）の増加を引き起こす。このｃＧＭＰの増加は、水およびナトリウムの吸収の減少、ならびに塩素およびカリウムイオンの分泌の増加を引き起こし、腸の水分輸送および電解質輸送の変化、および腸運動の増加をもたらすと考えられている。腸ＧＣ−Ｃレセプターは細胞外リガンド結合領域、膜貫通領域、細胞内プロテインキナーゼ様領域、およびシクラーゼ触媒ドメインを有する。ＧＣ−Ｃレセプターについて提案されている機能は、水分および電解質のホメオスタシス、上皮細胞の増殖の調節、ならびにアポトーシスの誘導である（シャルバイ（Shalubhai  ）、2002  Curr  Opin  Drug  Dis  Devel  5:261-268  ）。
【００７３】
胃腸上皮細胞によって腸において発現されることに加えて、ＧＣ−Ｃは、腸外の組織（腎臓、肺、膵臓、下垂体、副腎、発生中の肝臓を含む）において発現され（バンドラジャー（Vaandrager）、2002  Mol  Cell  Biochem  230:73-83  において概説されている）
、ならびに雄性および雌性の生殖組織において発現される（バンドラジャー（Vaandrager）、2002  Mol  Cell  Biochem  230:73-83  において概説されている）。このことは、
ＧＣ−Ｃレセプターアゴニストが胃腸（ＧＩ）管の外側の障害（例えば、うっ血性心不全および良性前立腺過形成）の治療において使用され得ることを示唆している。
【００７４】
グレリンは、胃から分泌されるペプチドホルモンであり、ヒトにおける食欲の鍵となる制御因子である。グレリンの発現レベルは、絶食および胃が空になることによって調節される（キムら（Kim  et  al.）、2003  Neuroreprt  14:1317-20；グアリロら（Gualillo
et  al.  ）、2003  FEBS  Letts  552:105-9  ）。従って、胃腸運動を増大させるこ
とによって、ＧＣ−Ｃレセプターのアゴニストは肥満を調節するためにも使用され得る。
【００７５】
ヒトにおいて、ＧＣ−Ｃレセプターはグアニリン（Ｇｎ）（米国特許第５，９６，０９７号）、ウログアニリン（Ｕｇｎ）（米国特許第５，１４０，１０２号）およびリンホグアニリン（lymphoguanylin）（フォルトら（Forte  et  al.）、1999,  Endocrinology  140:1800-1806  ）によって活性化される。興味深いことに、これらの物質は、ＳＴと呼
ばれる細菌由来の一群のペプチド（ジアネラ（Gianella）1995,  J  Lab  Cli n  Med  125:173-181において概説されている）よりも１０−１００倍作用が弱い。ＳＴペプチドはＧＣ−Ｃのスーパーアゴニストとみなされており、またタンパク質分解に対して非常に抵抗性が高い。
【００７６】
ＳＴペプチドは腸神経系を刺激することができる（ロルフェら（Rolfe  et  al.）、1994
J.Physiolo  475:531-537  ；ロルフェら（Rolfe  et  al.）、1999  Gut  44:615-619  ；ゼッグら（Nzegwu  et  al.  ）、1996  Exp  Physiol  81:313-315  ）。また、ｃＧ
ＭＰは痛みについての複数の動物モデルにおいて抗侵害受容性の効果を有することが報告されてきた（レザロ  イバネズら（Lezaro  Ibanez  et  al.）、2001  Eur  J  Pharmacol  426:39-44；ソアレスら（Soares  et  al.  ）、2001  British  J  Pharmacol  134:127-131；ジャインら（Jain  et  al.  ）、2001  Brain  Res  909:170-178；アマランテら（Amarante  et  a l.  ）、2002  Eur
J  Pharmacol  454:19-23）。従って、ＧＣ−Ｃアゴニストは、鎮痛効果ならびに抗炎症
効果の両方を有し得る。
【００７７】
細菌においては、ＳＴペプチドは、一般的に少なくとも７０アミノ酸を有するプレプロタンパク質に由来する。プレ領域およびプロ領域は、分泌過程の一部として切断され、その結果得られる通常２０未満のアミノ酸を含む成熟タンパク質は、生物学的に活性である。
【００７８】
既知の細菌ＳＴペプチドの中には以下のものがある：成熟アミノ酸配列ＡｓｎＳｅｒＳｅｒＡｓｎＴｙｒＣｙｓＣｙｓＧｌｕＬｅｕＣｙｓＣｙｓＡｓｎＰｒｏＡｌａＣｙｓＴｈｒＧｌｙＣｙｓＴｙｒ（配列番号＿）を有する大腸菌（E.coli）のＳＴ  Ｉｂ（モズリーら（Moseley  et  al.）、1983  Infect.Immun.39:1167  ）；成熟アミノ酸配列ＡｓｎＴｈｒＰｈｅＴｙｒＣｙｓＣｙｓＧｌｕＬｅｕＣｙｓＣｙｓＡｓｎＰｒｏＡｌａＣｙｓＡｌａＧｌｙＣｙｓＴｙｒ（配列番号＿）を有する大腸菌（E.coli）のＳＴ  Ｉａ（ソーおよびマッカーシー（So  and  McCarthy  ）、1980  Proc.Natl.Acad.Sci.USA  77:4011  ）；成熟アミノ酸配列ＡｓｎＴｈｒＰｈｅＴｙｒＣｙｓＣｙｓＧｌｕＬｅｕＣｙｓＣｙｓＴｙｒＰｒｏＡｌａＣｙｓＡｌａＧｌｙＣｙｓＡｓｎ（配列番号＿）を有する大腸菌（E.coli）のＳＴＩ＊（チャンおよびジアネラ（Chan  and  Giannella）、1981  J.Biol.Chem.256:7744  ）；成熟アミノ酸配列ＡｓｎＴｈｒＰｈｅＴｙｒＣｙｓＣｙｓＧｌｕＬｅｕＣｙｓＣｙｓＡｓｎＰｒｏＡｌａＣｙｓＡｌａＧｌｙＣｙｓＴｙｒ（配列番号＿）を有するシトロバクター・フロインディ（C.freundii）のＳＴペプチド（ガリーノら（Guarino  et  al.）、1989  Infect.Immun.57:649）；エルシニア・エンテロコリティカ（Y.enterocolitica）のＳＴペプチドであるＹ−ＳＴ（Ｙ−ＳＴａ）、Ｙ−ＳＴｂ、およびＹ−ＳＴ
ｃ（ホワンら（Huang  et  al.）、1997  Microb.Pathog.22:89において概説されている
）であってそれぞれ以下のプロ型アミノ酸配列、すなわちＧｌｎＡｌａＣｙｓＡｓｐＰｒｏＰｒｏＳｅｒＰｒｏＰｒｏＡｌａＧｌｕＶａｌＳｅｒＳｅｒＡｓｐＴｒｐＡｓｐＣｙｓＣｙｓＡｓｐＶａｌＣｙｓＣｙｓＡｓｎＰｒｏＡｌａＣｙｓＡｌａＧｌｙＣｙｓ（配列番号＿）（ならびにＹ−ＳＴａのＳｅｒ−７からＬｅｕ−７への改変体（配列番号＿）（タカオら（Takao  et  al.）、1985  Eur.J.Biochem.152:199））；ＬｙｓＡｌａＣｙｓＡ
ｓｐＴｈｒＧｌｎＴｈｒＰｒｏＳｅｒＰｒｏＳｅｒＧｌｕＧｌｕＡｓｎＡｓｐＡｓｐＴｒｐＣｙｓＣｙｓＧｌｕＶａｌＣｙｓＣｙｓＡｓｎＰｒｏＡｌａＣｙｓＡｌａＧｌｙＣｙｓ（配列番号＿）；ＧｌｎＧｌｕＴｈｒＡｌａＳｅｒＧｌｙＧｌｎＶａｌＧｌｙＡｓｐＶａｌＳｅｒＳｅｒＳｅｒＴｈｒＩｌｅＡｌａＴｈｒＧｌｕＶａｌＳｅｒＧｌｕＡｌａＧｌｕＣｙｓＧｌｙＴｈｒＧｌｎＳｅｒＡｌａＴｈｒＴｈｒＧｌｎＧｌｙＧｌｕＡｓｎＡｓｐＴｒｐＡｓｐＴｒｐＣｙｓＣｙｓＧｌｕＬｅｕＣｙｓＣｙｓＡｓｎＰｒｏＡｌａＣｙｓＰｈｅＧｌｙＣｙｓ（配列番号＿）を有するペプチド；成熟アミノ酸配列ＳｅｒＡｓｐＴｒｐＣｙｓＣｙｓＧｌｕＶａｌＣｙｓＣｙｓＡｓｎＰｒｏＡｌａＣｙｓＡｌａＧｌｙＣｙｓ（配列番号＿）を有するエルシニア・クリステンセニ（Y.kristensenii）のＳＴペプチド；成熟アミノ酸配列ＩｌｅＡｓｐＣｙｓＣｙｓＧｌｕＩｌｅＣｙｓＣｙｓＡｓｎＰｒｏＡｌａＣｙｓＰｈｅＧｌｙＣｙｓＬｅｕＡｓｎ（配列番号＿）を有するコレラ菌（V.cholerae）の非Ｏ１  ＳＴペプチド（タカオら（Takao  et  al.）、1985  FEBS  Lett.193:250）；および成熟アミノ酸配列ＩｌｅＡｓｐＣｙｓＣｙｓＧｌｕＩｌｅＣｙｓＣｙｓＡｓｎＰｒｏＡｌａＣｙｓＰｈｅＧｌｙＣｙｓＬｅｕＡｓｎ（配列番号＿）を有するビブリオ・ミミカス（V.mimicus  ）のＳＴペプチド（アリタら（Arita  et  al.）、1991  FEMS  Microbiol.Lett.79:105  ）。以下の表は多数の成熟ＳＴペプチドの全体または一部の配列を提供する。
【００７９】
【表１】
2010222377.tif 000004
【００８０】
（表中、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯは配列番号を表す）。
未成熟型の（プレ領域およびプロ領域を含む）大腸菌ＳＴ−１Ａ（ＳＴ−Ｐ）タンパク質は、配列：
ｍｋｋｌｍｌａｉｆｉｓｖｌｓｆｐｓｆｓｑｓｔｅｓｌｄｓｓｋｅｋｉｔｌｅｔｋｋｃｄｖｖｋｎｎｓｅｋｋｓｅｎｍｎｎｔｆｙｃｃｅｌｃｃｎｐａｃａｇｃｙ（配列番号＿；ＧｅｎＢａｎｋ（登録商標）受入番号Ｐ０１５５９（ｇｉ：１２３７１１）を参照のこと）を有する。プレ配列は、アミノ酸１−１９にわたる。プロ配列はアミノ酸２０−５４にわたる。成熟タンパク質はアミノ酸５５−７２にわたる。未成熟型の（プレ領域およびプロ領域を含む）大腸菌ＳＴ−１Ｂ（ＳＴ−Ｈ）タンパク質は、配列：
ｍｋｋｓｉｌｆｉｆｌｓｖｌｓｆｓｐｆａｑｄａｋｐｖｅｓｓｋｅｋｉｔｌｅｓｋｋｃｎｉａｋｋｓｎｋｓｇｐｅｓｍｎｓｓｎｙｃｃｅｌｃｃｎｐａｃｔｇｃｙ（配列番号＿；ＧｅｎＢａｎｋ（登録商標）受入番号Ｐ０７９６５（ｇｉ：３９１５５８９）を参照のこと）
を有する。未成熟型の（プレ領域およびプロ領域を含む）エルシニア・エンテロコリティカＳＴタンパク質は、配列：ｍｋｋｉｖｆｖｌｖｌｍｌｓｓｆｇａｆｇｑｅｔｖｓｇｑｆｓｄａｌｓｔｐｉｔａｅｖｙｋｑａｃｄｐｐｌｐｐａｅｖｓｓｄｗｄｃｃｄｖｃｃｎｐａ
ｃａｇｃ（配列番号＿；ＧｅｎＢａｎｋ（登録商標）受入番号Ｓ２５６５９（ｇｉ：２８２０４７）を参照のこと）
を有する。
【００８１】
本発明のペプチドは、細菌のＳＴペプチドと同様に、６個のシステイン残基を有する。これらの６個のシステイン残基は、活性型の成熟ペプチドにおいて３つのジスルフィド結合を形成する。６個のシステイン残基を、ペプチドのアミノ末端からカルボキシ末端に向かってＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、およびＦとすると、ジスルフィド結合は次のように、すなわち：Ａ−Ｄ、Ｂ−Ｅ、およびＣ−Ｆとして形成される。これらの結合の形成は、ＧＣ−Ｃレセプターへの結合のために重要であると考えられている。本発明の特定のペプチドは、機能的キモトリプシン切断部位となりうる部位、例えばＣｙｓ（Ｂ）とＣｙｓ（Ｄ）との間、またはＣｙｓ（Ｅ）とＣｙｓ（Ｆ）との間のいずれかに位置するＴｒｐ、Ｔｙｒ、またはＰｈｅを含む。いずれかのキモトリプシン切断部位で切断されると、ＧＣ−Ｃレセプターに結合する該ペプチドの能力は低下または喪失する。
【００８２】
ヒトの体内では、不活性型のキモトリプシンであるキモトリプシノーゲンが膵臓において産生される。この不活性酵素は小腸に到達すると、２つのジペプチドが切除されて活性なキモトリプシンに変換される。活性なキモトリプシンは、ペプチドのＴｒｐ、Ｔｙｒ、またはＰｈｅのカルボキシ末端側のペプチド結合を切断することができる。腸管に活性なキモトリプシンが存在すると、適切に配置された機能的キモトリプシン切断部位を有する本発明の特定のペプチドの切断をもたらす可能性がある。キモトリプシンによる切断は、ペプチドが腸管を通過するにつれて、適切に配置されたキモトリプシン切断部位を有する本発明のペプチドの作用を和らげることが予測される。
【００８３】
トリプシノーゲンは、キモトリプシンと同様に、膵臓で産生されかつ消化管中に存在するセリンプロテアーゼである。その活性型であるトリプシンは、ＬｙｓまたはＡｒｇを有するペプチドを切断する。腸管における活性型トリプシンの存在は、適切に配置された機能的トリプシン切断部位を有する特定の本発明のペプチドの切断をもたらし得る。キモトリプシンによる切断は、ペプチドが腸管を通過するにつれて、適切に配置されたトリプシン切断部位を有する本発明のペプチドの作用を和らげることが予測される。
【００８４】
多くの胃腸障害（ＩＢＳを含む）は、腹部または内臓の痛みを伴う。特定の本発明のペプチドには、鎮痛性または抗侵害受容性のタグ（例えば、機能的キモトリプシン切断部位を創出するＴｒｐ、Ｔｙｒ、もしくはＰｈｅの直後、または機能的トリプシン切断部位を創出するＬｙｓもしくはＡｒｇの直後のカルボキシ末端配列ＡｓｐＰｈｅなど）が含まれる。腸管内のキモトリプシンは、そのようなペプチドのＴｒｐ残基、Ｐｈｅ残基、またはＴｙｒ残基に対してすぐカルボキシ末端側を切断してジペプチドＡｓｐＰｈｅを遊離する可能性がある。このジペプチドは、動物モデルにおいて鎮痛活性を有することが示されてきた（アブジッカイら（Abdikkahi  et  al.）、2001  Fundam  Cli n  Pharmacol  15:117-23；ニクファーら（Nikfar  et  al.  ）、1997  29:583-6  ；エドマンドソンら（Edmundson  et  al.）、1998  Clin  Pharmacol  Ther  63:580-93）。こうして、上記ペプチドは痛みと炎症の両方を治療し得る。他の鎮痛性ペプチドをペプチドのカルボキシ末端（機能的切断部位の後）に存在させることも可能であり、エンドモルフィン−１、エンドモルフィン−２、ノシスタチン、ダラルギン、ルプロン、およびサブスタンスＰが挙げられる。多数の有用なペプチドは、コア配列：ＣｙｓＣｙｓＧｌｕＬｅｕＣｙｓＣｙｓＡｓｎＰｒｏＡｌａＣｙｓＴｈｒＧｌｙＣｙｓＴｙｒに基づいている。ペプチドを不活性化することが可能な潜在的な機能的キモトリプシン切断部位を有する改変体を作製するために、Ｌｅｕ（下線部）またはＴｈｒ（下線部）のいずれかをＴｒｐ、Ｐｈｅ、またはＴｙｒによって置き換えてもよいし、あるいはこのＬｅｕおよびＴｈｒの両方を（独立して）Ｔｒｐ、Ｐｈｅ、またはＴｙｒによって置き換えてもよい。鎮痛性ジペプチドを有する改変
体を作製するために、コア配列の後にＡｓｐＰｈｅを配する。コア配列中のカルボキシ末端にＴｙｒがあれば、ＡｓｐＰｈｅジペプチドが消化管内でキモトリプシンによって遊離されることが可能となる。コア配列の前には、任意選択で、ＡｓｎＳｅｒＳｅｒＡｓｎＴｙｒまたはＡｓｎが先行し得る。
【００８５】
従って、有用な改変体は以下を含むコア配列に基づく：
【００８６】
【化２】
2010222377.tif 000005
【００８７】
2010222377.tif 000006
【００８８】
2010222377.tif 000007
【００８９】
（ここで、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯは配列番号を表す）。
ある場合において、本発明のペプチドは、アミノ末端リーダー配列：
ｍｋｋｓｉｌｆｉｆｌｓｖｌｓｆｓｐｆａｑｄａｋｐｖｅｓｓｋｅｋｉｔｌｅｓｋｋｃｎｉａｋｋｓｎｋｓｇｐｅｓｍｎ
を含むプレプロタンパク質として作製される。ペプチドが細菌細胞（例えば、大腸菌）で生産される場合、先行するリーダー配列は切断されて成熟ペプチドが細菌細胞から効率的に分泌される。米国特許第５，３９５，４９０号は、細菌細胞中でのＳＴペプチドの効率的な生産のためのベクター、発現系、および方法と、成熟ＳＴペプチドの効率的な分泌を達成するための方法とを記載している。米国特許第５，３９５，４９０号に記載されているベクター、発現系、および方法は、本発明のＳＴペプチドおよび改変体ＳＴペプチドを生産するために使用され得る。
【００９０】
（改変体ペプチド）  本発明は、配列番号＿〜＿と比較して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個（一部の実施形態においては、５未満または３未満または２以下）のアミノ酸置換を含み得る改変体ペプチドを含む。置換は保存的でも非保存的でもよい。天然型のアミノ酸は、任意のアミノ酸のＤ−異性体、非天然型のアミノ酸、および他の基によって置換され得る。保存的アミノ酸置換により、アミノ酸は同様の作用を有するアミノ酸、または同様の電荷、極性、または疎水性のアミノ酸へと変更される。部位によっては、保存的アミノ酸置換であってもペプチドの活性を低下する可能性がある。一般的に保存的であると見なされている天然に存在するアミノ酸置換には以下の：
【００９１】
【表２】
2010222377.tif 000008
【００９２】
がある。
状況によっては、腸のＧＣ−Ｃレセプターに結合して同レセプターを活性化する改変体ペプチドであって、非改変型のペプチドよりも活性が低い改変体ペプチドを用いて患者を治療することが望ましいことがあり得る。このような活性の低下は、レセプターに対するアフィニティの低下、結合したときのレセプターを活性化する能力の低下またはペプチドの安定性の低下から生じ得る。
【００９３】
一部のペプチドでは、通常ジスルフィド結合を形成するＣｙｓ残基対のうち一方または両方のＣｙｓが、ホモシステイン、３−メルカプトプロリン（コロジッジら（Kolodziej
et  al.）、1996  Int  J  Pept  Protein  Res  48:274）；β，βジメチルシステイ
ン（ハントら（Hunt  et  al.  ）、1993  Int  J  Pept  Protein  R es  42:249）、またはジアミノプロピオン酸（スミスら（Smith  et  al.）、1978  J  Med  Chem  21:117）によって置き換えられて、通常のジスルフィド結合の位置に代替的な内部架橋を形成し得る。
【００９４】
（ペプチドの産生）  有用なペプチドは、細菌（大腸菌を含むがこれに限定されない）、またはペプチドもしくはタンパク質の生産のための他の既存の系（例えば、枯草菌（Bacillus  subtilis  ）、ショウジョウバエ（Drosophila）Ｓｆ９細胞を使用するバキュロウィルス発現系、酵母または糸状菌の発現系、哺乳動物細胞発現系）のいずれかにおいて生産されてもよいし、あるいは該ペプチドが化学合成されてもよい。
【００９５】
ペプチドまたは改変体ペプチドが細菌（例えば、大腸菌）中で生産される場合、ペプチドをコードする核酸分子は、細胞からの成熟ペプチドの分泌を可能にするリーダー配列もコードすることが好ましいであろう。従って、ペプチドをコードする配列は、例えば、天然に存在する細菌ＳＴペプチドの、プレ配列およびプロ配列を含み得る。分泌された成熟ペプチドは、培養培地から精製され得る。
【００９６】
本発明のペプチドをコードする配列は、好ましくは、核酸分子を細菌細胞内に送達し維持することが可能であるベクター中に挿入される。ＤＮＡ分子は、自律的に複製するベクター（適切なベクターには、例えば、ｐＧＥＭ３ＺおよびｐｃＤＮＡ３、ならびにそれらの誘導体）内に挿入され得る。ベクター核酸は、細菌またはバクテリオファージのＤＮＡ（例えばバクテリオファージλまたはＭ１３およびそれらの誘導体）であり得る。本明細書中に記載された核酸を含むベクターを構築した後に、宿主細胞（例えば、細菌）を形質転換する。適切な細菌宿主には、大腸菌（E.coli）、枯草菌（B.subtilis）、シュードモナス（Pseudomonas  ）、サルモネラ（Salmonella）が含まれるがこれらに限定されない
。遺伝子構築物はまた、本発明のペプチドをコードする核酸分子に加えて、発現を可能にするエレメント（例えばプロモーター配列および調節配列など）を含む。発現ベクターは、転写開始を制御する転写制御配列（例えばプロモーター配列、エンハンサー配列、オペレーター配列、およびリプレッサー配列など）を含み得る。種々の転写制御配列が当業者に周知である。発現ベクターはまた、翻訳調節配列（例えば、５’非翻訳配列、３’非翻訳配列、または内部リボソーム進入部位）を含み得る。ベクターは自律的に複製可能でもよいし、またはペプチド生産の間確実に安定であるように宿主ＤＮＡに組み込まれてもよい。
【００９７】
本発明のペプチドを含むタンパク質コード配列はまた、精製を容易にするために、ポリペプチドのアフィニティタグ（例えば、グルタチオンＳ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）、マルトースＥ結合タンパク質、プロテインＡ、ＦＬＡＧタグ、ヘキサ−ヒスチジン、ｍｙｃタグまたはインフルエンザＨＡタグ）をコードする核酸に融合されてもよい。アフィニティタグまたはレポーターの融合によって、目的のペプチドのリーディングフレームがアフィニティタグをコードする遺伝子のリーディングフレームに結合され、その結果翻訳融合物が生成される。融合遺伝子が発現すると、目的のペプチドとアフィニティタグの両方を含む単一のポリペプチドが翻訳される。アフィニティタグが利用される一部の例では、プロテアーゼ認識部位をコードするＤＮＡ配列が、アフィニティタグのリーディングフレームと、目的のペプチドのリーディングフレームとの間に融合される。
【００９８】
当業者に周知の細菌以外のタンパク質発現系において本発明のペプチドおよび改変体を未成熟型および成熟型で生産するために適切な遺伝子構築物および方法もまた、生物学的系においてペプチドを生産するために使用され得る。
【００９９】
成熟ペプチドおよびその改変体は、自動ペプチドシンセサイザーを使用する固相法によって合成され得る。例えば、ペプチドは、ダブルカップリングプログラムを使用して、Ｃｙｃ（４−ＣＨ２  Ｂｘｌ）−ＯＣＨ２−４−（オキシメチル）−フェニルアセトアミドメチル樹脂上で合成され得る。保護基は、正確なジスルフィド結合パターンが作製されるように適切に使用されなければならない。例えば、以下の保護基：ｔ−ブチルオキシカルボニル（α−アミノ基）；アセトアミドメチル（Ｃｙｓ残基（Ｂ）および（Ｅ）のチオール基）；４−メチルベンジル（Ｃｙｓ残基（Ｃ）および（Ｆ）のチオール基）；ベンジル（グルタミン酸のｙ−カルボキシルおよびスレオニンのヒドロキシル基（存在する場合））；およびブロモベンジル（チロシンのフェノール基、存在する場合）が使用され得る。カップリングは、ｔ−ブトキシルカルボニルアミノ酸の対称無水物またはヒドロキシベンゾトリアゾールエステル（アスパラギン残基またはグルタミン酸残基について）を用いて実施し、そしてペプチドを脱保護され、フッ化水素、硫化ジメチル、アニソール、およびｐ−チオクレゾールの８／１／１／０．５比（ｖ／ｖ／ｖ／ｗ）の中、０℃で６０分間処理して固相支持体から切断する。減圧によるフッ化水素および硫化ジメチルの除去、ならびにエチルエーテルおよび酢酸エチルを連続して用いる抽出によるアニソールおよびｐ−チオクレゾールの除去後、粗精製ペプチドを、０．５Ｍリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ８．０）およびＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドの１／１（ｖ／ｖ）混合物で抽出する。Ｃｙ
ｓ残基（Ｂ）および（Ｅ）のジスルフィド結合はジメチルスルホキシドを使用して形成させる（タムら（Tam  et  al.）、1991  J.Am.Chem.Soc.113:6657-62）。得られるペプチ
ドを逆相クロマトグラフィーによって精製する。Ｃｙｓ残基（Ｃ）および（Ｆ）の間のジスルフィド結合は、ペプチドを５０％酢酸水溶液中に最初に溶解することによって形成させる。氷酢酸中の飽和ヨード溶液を加える（１００ｍｌ溶液あたり１ｍｌヨード溶液）。密封したガラス容器中、室温で２日間インキュベートした後、該溶液を脱イオン水で５倍希釈し、未反応のヨードを除去するためエチルエーテルで４回抽出する。遠心濃縮により残存するエチルエーテルを除去した後、粗生成物の溶液を凍結乾燥し、続いて逆相クロマトグラフィーにより精製する。
【０１００】
（腸のＧＣ−Ｃレセプター結合アッセイ）  ペプチドおよびその他の薬剤の、腸のＧＣ−Ｃレセプターへの結合能力は、以下のように試験され得る。Ｔ８４ヒト結腸がん腫細胞株（アメリカンタイプカルチャーコレクション（American  Ty pe  Culture  Collection）（米国メリーランド州ベデスダ所在））の細胞を、５％胎仔ウシ血清を補充した、ハムＦ１２培地およびダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）の１：１混合物を用いて２４ウェル培養プレート中でコンフルエントになるまで増殖させる。アッセイにおいて使用される細胞は、典型的には継代数５４−６０の間の細胞である。手短に述べると、２４ウェルプレート中のＴ８４細胞の単層を、１ｍｌの結合緩衝液（０．０５％ウシ血清アルブミンおよび２５ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、ｐＨ  ７．２を含むＤＭＥＭ）で２回洗浄し、次いで、放射活性物質で標識された大腸菌の成熟ＳＴペプチドおよび種々の濃度の試験物質の存在下で３７℃にて３０分間インキュベートする。次いで、この細胞を１ｍｌＤＭＥＭで４回洗浄し、０．５ｍｌ／ウェルの１Ｎ  ＮａＯＨで可溶化する。次いで、可溶化された物質中の放射活性のレベルを、標準的な方法を使用して決定する。
【実施例１】
【０１０１】
［改変体ＳＴペプチドおよび野生型ＳＴペプチドの調製］
（１ａ：組換えによる改変体ＳＴペプチドおよび野生型ＳＴペプチドの調製）
ＭＤ−９１５と呼ばれる改変体ＳＴペプチドを組換えにより再生産し、動物モデルにおいて試験した。ＭＤ−９１５は以下の配列：ＡｓｎＳｅｒＳｅｒＡｓｎＴｙｒＣｙｓＣｙｓＧｌｕＴｙｒＣｙｓＣｙｓＡｓｎＰｒｏＡｌａＣｙｓＴｈｒＧｌｙＣｙｓＴｙｒ（配列番号−−−）を有する。野生型ＳＴペプチドの配列を有するペプチドも作製した（ＭＭ−４１６７７６）。
【０１０２】
ＭＤ−９１５ペプチドおよびＭＭ−４１６７７６ペプチドを、以下のように作製したベクターを使用してプレプロタンパク質として生産した。熱安定性エンテロトキシンのプレプロ配列コードする配列を、オリゴヌクレオチドＭＯ３５１４（５’ＣＡＣＡＣＣＡＴＡＴＧＡＡＧＡＡＡＴＣＡＡＴＡＴＴＡＴＴＴＡＴＴＴＴＴＣＴＴＴＣＴＧ  ３’（配列番号  ））およびオリゴヌクレオチドＭＯ３５１５（５’ＣＡＣＡＣＣＴＣＧＡＧＴＴＡＧＧＴＣＴＣＣＡＴＧＣＴＴＴＣＡＧＧＡＣＣＡＣＴＴＴＴＡＴＴＡＣ  ３’（配列番号  ））を使用して、ｐＧＫ５１／ｐＧＳＫ５１（ＡＴＣＣ６７７２８）から増幅した。増幅生成物であるフラグメントをＮｄｅＩ／ＸｈｏＩで消化し、ＮｄｅＩ／ＸｈｏＩで消化したＴ７発現ベクターｐＥＴ２６ｂ（＋）（ノバゲン（Novagen  ））にライゲーションす
ることによってプラスミドＭＢ３９７６を作製した。プレプロタンパク質をコードする領域を配列決定し、アミノ酸配列：ｍｋｋｓｉｌｆｉｆｌｓｖｌｓｆｓｐｆａｑｄａｋｐａｇｓｓｋｅｋｉｔｌｅｓｋｋｃｎｉｖｋｋｓｎｋｓｇｐｅｓｍ（配列番号  ）をコードすることが見出されたが、この配列は、熱安定性エンテロトキシンａ２前駆体のアミノ酸配列（ｓｔａ２：ｍｋｋｓｉｌｆｉｆｌｓｖｌｓｆｓｐｆａｑｄａｋｐａｇｓｓｋｅｋｉｔｌｅｓｋｋｃｎｉｖｋｋｎｎｅｓｓｐｅｓｍ（配列番号＿）ＧｅｎＢａｎｋ（登録商標）受入番号Ｑ４７１８５、ＧＩ：３９１３８７６）のアミノ酸配列とは、Ｃ末端近くの３つの部位（下線部）で異なっている。プレプロ配列を有する発現ベクターを作製するために
、各々ＳＴペプチド改変体または野生型ＳＴペプチドをコードする相補性オリゴをアニーリングし、そしてＭＢ３９７６発現ベクターにクローニングした。プレプロ配列の下流に融合されたアミノ酸配列ＮＳＳＮＹＣＣＥＬＣＣＮＰＡＣＴＧＣＹ（配列番号＿）を含むＭＢ３９８４（プレプロタンパク質としてＭＭ−４１６７７６ペプチド（完全長の野生型ＳＴペプチド）をコードする）を作製するために、ＭＢ３９７６をＢｓａＩ／ＸｈｏＩで消化し、アニーリングしたオリゴＭＯ３６２１（５’ＧＣＡＴＧＡＡＴＡＧＴＡＧＣＡＡＴＴＡＣＴＧＣＴＧＴＧＡＡＴＴＧＴＧＴＴＧＴＡＡＴＣＣＴＧＣＴＴＧＴＡＣＣＧＧＧＴＧＣＴＡＴＴＡＡＴＡＡＣ  ３’（配列番号＿））およびＭＯ３６２２（５’ＴＣＧＡＧＴＴＡＴＴＡＡＴＡＧＣＡＣＣＣＧＧＴＡＣＡＡＧＣＡＧＧＡＴＴＡＣＡＡＣＡＣＡＡＴＴＣＡＣＡＧＣＡＧＴＡＡＴＴＧＣＴＡＣＴＡＴＴＣ３’（配列番号＿））にライゲーションした。プレプロ配列の下流に融合された以下のアミノ酸配列、ＮＳＳＮＹＣＣＥＹＣＣＮＰＡＣＴＧＣＹを含むＭＢ３９８５（プレプロタンパク質としてＭＤ−９１５をコードする）を作製するために、ＭＢ３９７６をＢｓａＩ／ＸｈｏＩで消化し、アニーリングしたオリゴＭＯ３５２９（５’ＧＣＡＴＧＡＡＴＡＧＴＡＧＣＡＡＴＴＡＣＴＧＣＴＧＴＧＡＡＴＡＴＴＧＴＴＧＴＡＡＴＣＣＴＧＣＴＴＧＴＡＣＣＧＧＧＴＧＣＴＡＴＴＡＡＴＡＡＣ  ３’（配列番号＿））およびＭＯ３５３０（５’ＴＣＧＡＧＴＴＡＴＴＡＡＴＡＧＣＡＣＣＣＧＧＴＡＣＡＡＧＣＡＧＧＡＴＴＡＣＡＡＣＡＡＴＡＴＴＣＡＣＡＧＣＡＧＴＡＡＴＴＧＣＴＡＣＴＡＴＴＣ３’（配列番号＿））にライゲーションした。
【０１０３】
ＭＤ−９１５ペプチドおよびＭＭ−４１６７７６ペプチドを以下のように産生させた。発現ベクターで大腸菌宿主ＢＬ２１λＤＥ３（インビトロジェン（Invitrogen））を形質転換した。単一コロニーをＬブロス＋２５ｍｇ／ｌカナマイシン中に接種し、振盪しながら３０℃で一晩増殖させた。一晩培養物を、３．２Ｌのバッチ培地（グルコース２５ｇ／ｌ、カザミノ酸５ｇ／ｌ、酵母抽出物５ｇ／ｌ、ＫＨ２ＰＯ４  １３．３ｇ／ｌ、（ＮＨ４）２ＨＰＯ４  ４ｇ／ｌ、ＭｇＳＯ４−７Ｈ２Ｏ  １．２ｇ／ｌ、クエン酸１．７ｇ／ｌ、ＥＤＴＡ  ８．４ｍｇ／ｌ、ＣｏＣｌ２−６Ｈ２Ｏ  ２．５ｍｇ／ｌ、ＭｎＣｌ２−４Ｈ２Ｏ  １５ｍｇ／ｌ、ＣｕＣｌ２−４Ｈ２Ｏ  １．５ｍｇ／ｌ、Ｈ３ＢＯ３  ３ｍｇ／ｌ、Ｎａ２ＭｏＯ４−２Ｈ２Ｏ  ２．５ｍｇ／ｌ、酢酸亜鉛二水和物１３ｍｇ／ｌ、クエン酸酸化鉄１００ｍｇ／ｌ、カナマイシン２５ｍｇ／ｌ、消泡剤ＤＦ２Ｏ４  １ｍｇ／ｌ）に加え、以下の処理パラメーター：ｐＨ  ６．７−塩基（２８％  ＮＨ４ＯＨ）のみを用いて制御、３０℃、曝気処理：５リットル／分、を使用して発酵させた。バッチ培地のグルコースを最初に消費（溶存酸素（ＤＯ）レベルをモニタして判断）した後、１．５Ｌの供給培地（グルコース７００ｇ／ｌ、カザミノ酸１０ｇ／ｌ、酵母抽出物１０ｇ／ｌ、ＭｇＳＯ４−７Ｈ２Ｏ  ４ｇ／ｌ、ＥＤＴＡ  １３ｍｇ／ｌ、ＣｏＣｌ２−６Ｈ２Ｏ  ４ｍｇ／ｌ、ＭｎＣｌ２−４Ｈ２Ｏ  ２３．５ｍｇ／ｌ、ＣｕＣｌ２−４Ｈ２Ｏ  ２．５ｍｇ／ｌ、Ｈ３ＢＯ３  ５ｍｇ／ｌ、Ｎａ２ＭｏＯ４−２Ｈ２Ｏ  ４ｍｇ／ｌ、酢酸亜鉛二水和物１６ｍｇ／ｌ、クエン酸酸化鉄４０ｍｇ／ｌ、消泡剤ＤＦ２Ｏ４  １ｍｇ／ｌ）を、２０％ＤＯを維持するように制御された供給速度で加えた。ＩＰＴＧを、供給開始から２時間後に０．２ｍＭまで加えた。全体の実行時間は約４０−４５時間であった（供給培地を消費するまで）。
【０１０４】
細胞を５，０００ｇで１０分間の遠心分離によって収集した。細胞ペレットを廃棄し、上清を、５０Ｋｄ限外濾過ユニットに通した。５０Ｋｄ濾過物（０．６リットル）を１１０ｍｌ  Ｑ‐Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（登録商標）ファストフローカラム（アマシャム  ファルマシア（Amersham  Pharmacia）、２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．５）で平衡
化）に、４００ｍｌ／時間の流速でロードした。このカラムを、６倍容量の２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．５）で洗浄し、タンパク質を５０ｍＭ酢酸で溶出させて５０ｍｌ画分を収集した。ＳＴペプチド改変体または野生型ＳＴペプチドを含む画分をプールし、遠心濃縮処理によって溶媒を除去した。乾燥した同タンパク質を１０ｍｌの８％酢酸、０．１％トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）中に再懸濁し、Ｖａｒｉａｎ  Ｐｏｌａｒｉｓ（登
録商標）Ｃ１８−Ａカラム（２５０×２１．２ｍｍ  １０μｍ、同じ緩衝液中で平衡化）に、２０ｍｌ／分の流速でロードした。カラムを、１００ｍｌの８％メタノール、０．１％
ＴＦＡで洗浄し、そして２４〜４８％グラジエントのメタノール、０．１％  ＴＦＡ（３００ｍｌ）で展開し、５ｍｌ画分を収集した。ペプチドを含む画分をプールし、溶媒を遠心濃縮処理によって除去した。ペプチドを０．１％ＴＦＡ中に溶解し、凍結乾燥した。
【０１０５】
ＭＤ−９１５ペプチドおよびＭＭ−４１６７７６ペプチドの画分を標準的なＬＣＭＳおよびＨＰＬＣによって分析した。ＬＣＭＳ分析から、ＭＤ−９１５がＭＭ−４１６７７６よりも均質であることが示された（図１ａを参照のこと；ＭＤ−９１５ペプチド（パネルＢ）がＭＭ−４１６７７６（パネルＡ）よりもピークが少ないことに注意されたい）。
【０１０６】
（１ｂ：合成による改変体ＳＴペプチドおよび野生型ＳＴペプチドの調製）
ペプチドは、商業的なペプチド合成会社によって化学合成された。化学合成の効率に依存して様々な収量のペプチドが得られた。これら４種のペプチドは、収量の多い順番に、ＣｙｓＣｙｓＧｌｕＴｙｒＣｙｓＣｙｓＡｓｎＰｒｏＡｌａＣｙｓＴｈｒＧｌｙＣｙｓＴｙｒ（配列番号−−；ＭＤ−１１００）、収量１０−２０％；ＣｙｓＣｙｓＧｌｕＬｅｕＣｙｓＣｙｓＡｓｎＰｒｏＡｌａＣｙｓＴｈｒＧｌｙＣｙｓＴｙｒ（配列番号−−；ＭＭ４１６７７４）；ＡｓｎＳｅｒＳｅｒＡｓｎＴｙｒＣｙｓＣｙｓＧｌｕＴｙｒＣｙｓＣｙｓＡｓｎＰｒｏＡｌａＣｙｓＴｈｒＧｌｙＣｙｓＴｙｒ（配列番号−−；ＭＤ−９１５）；ＡｓｎＳｅｒＳｅｒＡｓｎＴｙｒＣｙｓＣｙｓＧｌｕＬｅｕＣｙｓＣｙｓＡｓｎＰｒｏＡｌａＣｙｓＴｈｒＧｌｙＣｙｓＴｙｒ（配列番号−−；ＭＭ−４１６７７６）、収量＜５％であった。従って、ペプチドに導入された特定のアミノ酸変化により、製造上の特性を改善しうる。
【０１０７】
図１ｂは、合成により製造されたＭＤ−１１００の全イオンクロマトグラフのプロファイルを示す。図１ｃは対照のブランク試料の全イオンクロマトグラフのプロファイルを示す。ＭＤ−１１００試料中には１つの主要なピークが存在し、このピークは対照試料には存在しない。定量的分析は、ＭＤ−１１００が９８％をこえる純度であることを示唆している。
【実施例２】
【０１０８】
［改変体ＳＴペプチドおよびＳＴペプチドによる腸のＧＣ−Ｃレセプターの活性化］
ＭＤ−９１５、ＭＭ−４１６７７６、およびＭＤ−１１００が腸のＧＣ−Ｃレセプターを活性化する能力について、Ｔ８４ヒト結腸がん腫細胞株（アメリカンタイプカルチャーコレクション（American  Type  Culture  Collection）（米国メリーランド州ベデスダ
所在））を用いたアッセイにおいて評価した。このアッセイのために、細胞を、５％胎仔ウシ血清を補充したハムＦ１２培地およびダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）の１：１混合物を用いて２４ウェル培養プレート中でコンフルエントになるまで増殖させ、継代数５４−６０の間で使用した。
【０１０９】
手短に述べると、２４ウェルプレート中のＴ８４細胞の単層を、１ｍｌ／ウェルのＤＭＥＭで２回洗浄し、次いで、環状ヌクレオチドホスホジエステラーゼ阻害剤である１ｍＭイソブチルメチルキサンチン（ＩＢＭＸ）を含む０．４５ｍｌのＤＭＥＭとともに３７℃で１０分間インキュベートした。次いで、試験ペプチド（５０μｌ）を加え、３７℃で３０分間インキュベートした。培地を吸引除去した後、氷冷した０．５ｍｌの０．１Ｎ  ＨＣｌの付加によって反応を終結させた。試料を氷上に２０分間保ち、次いで、ヒートガンまたは真空遠心分離を使用して蒸発乾固させた。この乾燥試料を、ケイマンケミカル社のサイクリックＧＭＰ  ＥＩＡキット（ケイマンケミカル（Cayman  Chemical  ）、米国ミシガン州アナーバー所在）のリン酸緩衝液０．５ｍｌ中に再懸濁した。サイクリックＧＭ
Ｐを、ケイマンケミカル  サイクリックＧＭＰ  ＥＩＡキットにおいて概説された手順に従いＥＩＡによって測定した。
図２は、このＧＣ−Ｃレセプター活性アッセイにおける、化学合成されたペプチド改変体の活性を示す。本アッセイにおいて、ＭＭ−４１６７７６および２つの異なるＭＤ−１１００ペプチド（２つの異なる方法によって合成された、ＭＤ−１１００（ａ）およびＭＤ−１１００（ｂ））は、ＭＭ−４１６７７６に匹敵する活性を有した。ＭＤ−９１５およびＭＭ−４１６７７６ペプチドは、ＭＤ−１１００（ｂ）と同一の様式で化学合成されたものである。
【実施例３】
【０１１０】
［ＭＤ−９１５およびＭＭ−４１６７７６はマウスにおける腸内輸送を増大させる］
ペプチドが胃腸内輸送速度を増大させるか否かを決定するために、ペプチドおよび対照を、マウス胃腸内輸送（ＧＩＴ）アッセイ（ムーンら（Moon  et  al.  ）Ｉｎｆｅｃｔ
ｉｏｎ  ａｎｄ  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ２５：１２７，１９７９年）を使用して試験した。このアッセイにおいて、胃腸管内で視覚的な認識が容易な木炭を、試験化合物の投与後にマウスに投与する。木炭が移動した距離を測定し、結腸の全長に対する割合（％）として表現する。
【０１１１】
ペプチドまたは対照の緩衝液で処理する前に、水を自由摂取としてマウスを１２〜１６時間絶食させた。緩衝液（２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ、ｐＨ７．５）中のペプチドを、１μｇ／ｋｇ−１ｍｇ／ｋｇ経口投与し、その７分後に５％活性炭（アルドリッチ（Aldrich  ）
２４２２７６−２５０Ｇ））を経口投与した。対照マウスには、活性炭の投与の前に緩衝液のみを投与した。１５分後にマウスを屠殺し、その胃から盲腸までの腸管を解剖した。腸の全長ならびに胃から木炭が移動した最前部までの距離を各動物について測定し、その結果を、木炭が腸を移動した最前部までの腸の全長に対する割合（％）として表現する。すべての結果を、マウス１０匹の平均±標準偏差として報告する。ペプチドで処理したマウスとビヒクル単独で処理したマウスとの間の木炭が移動した距離の比較を、スチューデントのｔ検定を使用して実施し、統計学的に有意な差をｐ＜０．０５とした。Ｐ値は、分散が等しくないと仮定して両側Ｔ検定を使用して計算する。
【０１１２】
図３ａ、ｂにおいて見られるように、野生型ＳＴペプチド（ＭＭ−４１６７７６、（シグマ−アルドリッチ（Sigma-Aldrich  ）、米国ミズーリ州セントルイス所在））；０．
１ｍｇ／ｋｇ）、合成により製造されたＭＤ−１１００、ならびにＺｅｌｎｏｒｍ（登録商標）（０．１ｍｇ／ｋｇ）（セロトニンレセプター５ＨＴ４のアゴニストである、ＩＢＳに対して認可された薬物）は、このモデルにおいて胃腸管輸送速度を増大させる。図４ａは、腸内輸送速度が、組換え合成されたＭＭ−４１６７７６またはＭＤ−９１５のいずれにおいても投薬量の増加に伴って増大することを実証する研究の結果を示す。図４ｂは、化学合成されたＭＭ−４１６７７６またはＭＤ−１１００ペプチドのいずれも、Ｔｒｉｓ緩衝液単独または等用量のＺｅｌｎｏｒｍ（登録商標）よりも腸内輸送速度を増大させることを実証する研究の結果を示す。
【０１１３】
同一の実験を、ＭＤ−１１００が長期投与治療計画において有効であるか否かを決定するために実施した。手短に述べると、８週齢の雌のＣＤ１マウスに、ＭＤ−１１００（２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ（ｐＨ７．５）中、０．０６ｍｇ／ｋｇまたは０．２５ｍｇ／ｋｇ）またはビヒクル単独（２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ、ｐＨ７．５）のいずれかを、１日１回５日間、経口的に投薬する。５日目に、２００μｌの１０％木炭溶液が投与される以外は上記と同じようにＧＩＴアッセイを実施した。図４ｃは、化学合成されたＭＤ−１１００またはＺｅｌｎｏｒｍ（登録商標）のいずれも長期投与（５日間毎日）の場合にマウスの胃腸運動アッセイにおいて有効であることを実証する研究の結果を示す。これらの結果は、短期投与（１日）と並列に示されている。
【実施例４】
【０１１４】
［ＭＤ−９１５ペプチドおよびＭＭ−４１６７７６ペプチドは乳飲みマウスにおける腸分泌を増加させる（ＳｕＭｉアッセイ）］
ＭＭ−４１６７７６ペプチドおよびＭＤ−９１５を、腸分泌を増加させるその能力について、乳飲みマウスの腸分泌モデルを使用して試験した。このモデルでは、７〜９日齢の乳飲みマウスに試験化合物を投与する。マウスの屠殺後、胃から盲腸までの胃腸管を切除する（「腸」）。その残り（「屠体」）ならびに腸を重量測定し、腸の屠体に対する重量比を計算する。この比が０．０９を上回る場合、試験化合物が腸分泌を増加させると結論付けられ得る。図５ａは、このモデルにおける野生型ＳＴペプチド（ＭＭ−４１６７７６）についての用量応答曲線を示す。図５ｂは、このモデルにおけるＭＤ−１１００ペプチドについての用量応答曲線を示す。これらのデータは、野生型ＳＴペプチド（米国ペンシルベニア州ウェストチェスター所在のＴＤＴ社から購入）およびＭＤ−１１００ペプチドが腸分泌を増加させることを示している。Ｚｅｌｎｏｒｍ（登録商標）の効果についても研究した。図５からわかるように、０．２ｍｇ／ｋｇのＺｅｌｎｏｒｍ（登録商標）はこのモデルにおいて腸分泌を増加させない。図６ａは、上記の組換えＭＭ−４１６７７６ペプチドおよび上記の組換えＭＤ−９１５ペプチドについての用量応答曲線を示す。図６ａからわかるように、いずれのペプチドもこのモデルにおいて腸分泌を増加させる。同様に、図６ｂは、化学合成されたＭＤ−９１５、ＭＤ−１１００、およびＭＭ−４１６７７６、ならびに野生型ＳＴペプチド（米国ミズーリ州セントルイス所在のシグマ−アルドリッチから購入）についての用量応答曲線を示す。
【０１１５】
（慢性痛覚過敏の動物モデル）  結腸直腸の拡張に対する痛覚過敏は、ＩＢＳ患者において一般的であり、主要な痛みの症状の原因であり得る。ＩＢＳにおける内臓の痛みに対する化合物の効果を研究するために、拡張に対する内臓痛覚過敏の炎症性動物モデルおよび非炎症性動物モデルの両方が開発されている。
【０１１６】
Ｉ．トリニトロベンゼンスルホン酸（ＴＮＢＳ）誘発性直腸異痛症モデル
雄のウィスター（Wistar）ラット（２２０−２５０ｇ）に、０．５ｍｇ／ｋｇのアセプロマジンをあらかじめ腹腔内（ＩＰ）投与し、そして１００ｍｇ／ｋｇのケタミンの筋肉内投与によって麻酔した。ニクロム線の電極対（長さ６０ｃｍ、直径８０μｍ）を、腹部横紋筋に、白線から２ｃｍ側方に埋め込んだ。電極の遊離端を首の後ろ側に露出させ、皮膚に取り付けたプラスチック管で保護した。筋電図（ＥＭＧ）の記録を手術の５日後に開始した。腹部横紋筋の電気的活性を、脳波計（Ｍｉｎｉ  ＶＩＩＩ、フランス国パリ所在のアルバー（Alvar  ））を用いて、低周波数シグナル（＜３Ｈｚ）を除去するために短
い時定数（０．０３秒）を使用して記録した。
【０１１７】
外科的埋め込みの１０日後、直腸の炎症を誘発するためにトリニトロベンゼンスルホン酸（ＴＮＢＳ）を投与した。ＴＮＢＳ（０．３ｍｌの５０％エタノール中８０ｍｇ／ｋｇ）を、報告されているように（モルトら（Morteau  et  al.）、1994  Dig  Dis  Sci  39:1239）、軽度のジエチルエーテル麻酔下で肛門から３ｃｍの位置に導入されたシリコンラバーカテーテルを通して直腸内投与した。ＴＮＢＳ投与後、ラットをプラスチックトンネル内に入れ、結腸直腸拡張（ＣＲＤ）の前の数日間、ラットの動きを厳しく制限した。実験化合物をＣＲＤの１時間前に投与したが、投与はラテックス製コンドームから作られた４ｃｍ長のバルーンを直腸内の肛門から１ｃｍの位置へ挿入することによって実行された（グエら（Gue  et  al.）、1997  Neurogastroenterol.Motil.9:271  ）。このバルーンを、塞栓除去プローブ（フォガルティー（Fogarty  ））から取り外した強固なカテー
テル上に固定した。このカテーテル装着バルーンを、尾の基部に固定した。バロスタットに接続したバルーンを、２０００Ｐａ（１５ｍｍＨｇ）ごとに０から８０００Ｐａ（０から６０ｍｍＨｇ）まで漸進的に膨張させ、各々の膨張状態を５分間維持した。ＥＭＧによ
って測定される直腸感受性の評価は、ＴＮＢＳの直腸滴注の前（１−２日間）および３日後に実行した。
【０１１８】
腹部の収縮に対応する５分間あたりのスパイクの突発（バースト）数を測定した。腹部収縮の数および用量−効果の相関の評価を、一元分散分析（ＡＮＯＶＡ）に続くポストホック（スチューデント検定またはダネット検定）、ならびに適切な場合はＥＤ５０について回帰分析を実施することによって統計学的に分析した。
【０１１９】
図７は、ＭＤ−１１００活性をＴＮＢＳ結腸直腸モデルにおいて分析した実験の結果を示す。腹部の応答の有意な減少が０．３μｇ／ｋｇおよび３μｇ／ｋｇのＭＤ−１１００において観察される。これらの結果は、ＭＤ−１１００がこの動物モデルにおいて結腸直腸の拡張に関連した痛みを減少することを実証している。
【０１２０】
ＩＩ．ストレス誘発性の痛覚過敏モデル
ＴＮＢＳモデルと同様に、雄のウィスターラット（２００−２５０ｇ）にニクロム線の電極を外科的に埋め込む。外科的埋め込みの１０日後、部分的な拘束ストレス（ＰＲＳ）を、ウィリアムスら（W illiams  et  al.  ）によって報告されているように２時間実行する（ウィリアムスら、1988  Gastroenterology  64:611）。手短に述べると、軽度のエチルエーテル麻酔下で、前肩、上前肢、および胸部体幹を、身体の動きを制限するが妨害しないように紙テープ製の収容装具で包む。対照の偽ストレス動物は麻酔するが包まない。ＰＲＳ時間の終わりの３０分前に、動物に試験化合物またはビヒクルを投与する。ＰＲＳ完了の３０分〜１時間後に、ＴＮＢＳモデルについて上記に記載したように、バロスタットを用いて２０００、４０００、６０００、および８０００Ｐａ（１５、３０、４５、および６０ｍｍＨｇ）の圧力でＣＲＤ拡張処置を実行する。バーストの数についての統計学的分析を、上記のＴＮＢＳモデルと同様に決定および分析する。
【０１２１】
（フェニルベンゾキノン誘発性ライジングモデル）  本発明のペプチドおよびＧＣ−Ｃレセプターアゴニストの痛み制御活性を評価するために、ＰＢＱ誘発性ライジングモデルを使用可能である。このモデルは、ジークムントら（Siegmunt  et  al.  ）（１９５７
年、Proc.Soc.Exp.Bio.Med.95:729-731  ）によって報告されている。手短に述べると、
試験化合物、例えば、ペプチド、モルヒネ、またはビヒクルを経口投薬した１時間後に、０．０２％フェニルベンゾキノン（ＰＢＱ）溶液（１２．５ｍＬ／ｋｇ）を、腹腔内径路によってマウスに注射する。伸張反応およびライジングの数を、ＰＢＱ注射の５分後から１０分後まで記録するが、動態学的に評価するために３５分後〜４０分後および６０分後〜６５分後に計数してもよい。結果を、伸張反応およびライジングの数（平均±ＳＥＭ）として表現し、侵害受容反応の閾値の変動率をビヒクル処理群の平均値から計算する。処理群と対照群との間の全ての差異の統計学的有意性を、ＳｉｇｍａＳｔａｔ（登録商標）ソフトウェアを使用して、一元分散分析（Ｐ＜０．０５）後の残差分散を使用するダネット検定によって決定する。
【０１２２】
図８ａおよび８ｂは、ＰＢＱライジングアッセイにおける、異なる用量のＭＤ−９１５およびＭＤ−１１００の効果を示す。疼痛制御活性を有することが知られているＮＳＡＩＤ（非ステロイド性抗炎症剤）であるインドメタシンを、アッセイにおける陽性対照として使用した。ビヒクル対照と比較して、ＭＤ−９１５（１ｍｇ／ｋｇ用量）およびＭＤ−１１００（２．５ｍｇ／ｋｇ用量）についてはライジングの有意な減少が観察された。類似の方法で試験された多数の他の化合物（例えば５ＨＴ−３アンタゴニスト）についても、試験した最大用量での効力の損失が観察されている。この研究の結果は、ＭＤ−９１５とＭＤ−１１００のいずれも、この内臓の疼痛モデルにおいて、中程度の用量のインドメタシンに匹敵する抗侵害受容性効果を有することを示唆している。
【実施例５】
【０１２３】
［ＭＤ−１１００のＫｄ決定］
ラット腸粘膜において見出されたＧＣ−Ｃレセプターに対するＭＤ−１１００のアフィニティを決定するために、ラット腸上皮細胞を使用して競合的結合アッセイを実施した。ラットの小腸の上皮細胞を、ケスラーら（Kessler  et  al.）（J.Biol.Chem.245:5281-5288  （１９７０年））に記載されているようにして得た。手短に述べると、動物を屠殺
して腹腔を露出させ、小腸を３００ｍｌの氷冷生理食塩水またはＰＢＳですすいだ。幽門から測定して１０ｃｍの位置で小腸１０ｃｍを取り出し、２．５４センチメートル（１インチ）の断片に切断した。この腸を、１枚のｐａｌａｆｉｌｍ（登録商標）とＰ−１０００ピペットチップとの間で穏やかに加圧することによって腸粘膜を押し出した。腸上皮細胞を２ｍｌのＰＢＳ中に入れ、５ｍｌピペットを用いて上下にピペッティングして細胞の懸濁液を作製した。この懸濁液中のタンパク質濃度を、ブラッドフォード法を使用して測定した（Anal.Biochem.72.248-254  （１９７６年））。  競合的結合アッセイを、ジェ
ネラら（Giannella  et  al.）（Am.  J.Physiol.245:G492-G498）の方法に基づいて、［１２５Ｉ
］標識したＭＭ−４１６７７６とＭＤ−１１００との間で実施した。アッセイ混合液には、２０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ−ＫＯＨ（ｐＨ７．０）を含む０．５ｍｌのＤＭＥ、上記に列挙した細胞懸濁液０．９ｍｇ、２１．４ｆｍｏｌ［１２５Ｉ］−ＭＭ−４１６７７６（４２．８ｐＭ）、および様々な濃度の競合物ＭＤ−１１００（０．０１〜１０００ｎＭ）を含めた。この混合液を室温で１時間インキュベートし、混合物をガラス繊維フィルターＧＦ／Ｂ（ワットマン（Whatman  ））で処理することによって反応を停止させた。フィルタ
ーを５ｍｌ氷冷ＰＢＳで洗浄し、放射活性を測定した。図９は、このアッセイにおけるＭＤ−１１００のＫｄが４．５ｎＭであることを示している。％Ｂ／Ｂｏは、各試料中で捕捉された放射活性（Ｂ）を、非放射性の競合物を含まない対照試料中の放射活性（Ｂｏ）に対して比較した割合（％）である。ジェネラら（Giannella  et  al.）（Am.J.Physiol.245:G492-G498）は、このアッセイにおける野生型ＳＴペプチドについてのＫｄが約１３ｎＭであることを観察している。
【実施例６】
【０１２４】
［ＭＤ−１１００の薬物動態学的特性］
ＭＤ−１１００を薬物動態学的に検討するために、マウスにおける吸収性試験を実施した。吸収性試験は、８週齢のＣＤ１マウスに、尾静脈注射を介して静脈内に、または胃管栄養法によって経口的にＭＤ−１１００を投与することによって実施した。種々の時点で動物から血清を収集してＭＤ−１１００の存在について試験したが、この試験には競合的ＥＬＩＳＡ法（オキソイド（Oxoid  ）のＳＴ  ＥＩＡキット、カタログ番号ＴＤ０７０
０）を使用した。このアッセイでは、ＳＴペプチドに対するモノクローナル抗体（抗体はオキソイドキット内に供給されている）および合成により製造されたＭＤ−１１００を使用した。図１０ａは、ＥＬＩＳＡ法によって検出された、静脈内投与および経口投与されたＭＤ−１１００についての吸収データを示す。ＭＤ−１１００は、全身的に吸収されるのはごくわずかのようであり、生物学的利用率は＜２．２％である。
【０１２５】
同様の生物学的利用率の検討を実施したが、この検討においては、ＭＤ−１１００を検出するためにＥＬＩＳＡではなくＬＣＭＳを使用した。最初に、曝露マウスおよび対照マウスの全血から血清試料を抽出し、次いで、さらに処理はせずに、インラインの固相抽出（ＳＰＥ）カラム（ウォーターズ（Waters）Ｏａｓｉｓ（登録商標）ＨＬＢ  ２５ｍｍカラム、２．０×１５ｍｍ直接接続）に直接注入した（１０ｍＬ）。ＳＰＥカラム上の試料を、５％メタノール、９５％  ｄＨ２Ｏ溶液で洗浄し（２．１ｍＬ／分、１．０分間）、次いで、ＳＰＥカラムの流路を反転させて分析カラム（ウォーターズＸｔｅｒｒａ（登録商標）ＭＳ  Ｃ８  ５ｍｍ  ＩＳカラム、２．１×２０ｍｍ）へ配置するバルブスイッチを使用して分析カラムにロードした。逆相グラジエント（移動相Ａ：ｄＨ２Ｏ中１０ｍＭ
水酸化アンモニウム、移動相Ｂ：８０％アセトニトリル＋２０％メタノール中１０ｍＭ水酸化アンモニウム；最初の３分間を２０％Ｂとし、次いで４分間かけて９５％Ｂまで上昇させ、２分間保持する。流速はすべて０．４ｍＬ／分）を用いて、分析カラムから試料を溶出させた。９．１分の時点では、グラジエントは最初の２０％Ｂの条件に１分間で戻る。ＭＤ−１１００は１．４５分で分析カラムから溶出し、三連四重極質量スペクトル分析によって検出した（ＭＲＭ、７６４（＋２電荷状態）＞１８２（＋１電荷状態）Ｄａ；コーン電圧＝３０Ｖ；コリジョンエネルギー＝２０ｅＶ；親イオンの質量幅＝２Ｄａ（ベースピーク）；子イオンの質量幅＝２Ｄａ（ベースピーク））。同じ手順を使用して調製しマウス血清に注入した既知量の化学合成ＭＤ−１１００を用いた標準曲線との比較によって、機器の応答を濃度単位に変換した。
【０１２６】
図１０ｂは、ＬＣＭＳによって検出された、ＩＶ投与または経口投与されたＭＤ−１１００についての吸収データを示す。このアッセイにおいても同様に、ＭＤ−１１００は、全身的に吸収されるのはごくわずかのようであり、生物学的利用率は＜０．１１％である。
【０１２７】
（ペプチドおよびＧＣ−Ｃレセプターアゴニストの投与）  胃腸障害の治療のために、本発明のペプチドおよびアゴニストが、経口的に（例えば、錠剤、ゲル、ペースト、スラリー、リキッド、散剤、または何らかの他の形態で）投与されることが好ましい。経口投与される組成物は、結合剤、香料、および湿潤剤を含み得る。ペプチドおよびアゴニストは、胃腸障害を治療するために使用される他の薬剤（例えばヒスタミンＨ２レセプターアゴニスト（Ｈ２Ａ）およびプロトンポンプ阻害剤（ＰＰＩ）などの制酸剤を含むがこれらに限定されない）と同時投与され得る。ペプチドおよびアゴニストはまた、直腸坐剤によっても投与され得る。胃腸管の外の障害（例えばうっ血性心不全および良性前立腺過形成）の治療のためには、ペプチドおよびアゴニストを非経口的に投与することも経口的に投与することも好ましい。  本明細書中に記載されるペプチドは、単独で使用されても他の薬剤と組み合わせて使用されてもよい。例えば、本発明のペプチドは、鎮痛ペプチドまたは鎮痛性化合物と一緒に投与され得る。鎮痛ペプチドまたは鎮痛性化合物は、本明細書中に記載されるペプチドに共有結合されてもよいし、または併用療法において本明細書中に記載されるペプチドと同時もしくは連続的に投与される別個の薬剤であってもよい。
【０１２８】
併用療法は、２つまたはそれ以上の薬剤（例えば、本明細書中に記載されるペプチドと鎮痛ペプチドまたは鎮痛性化合物）をそれぞれ別々に製剤化および投与することによって行われてもよいし、２つまたはそれ以上の薬剤を単一の製剤として投与することによって行われてもよい。他の組み合わせもまた併用療法に含まれる。例えば、２つの薬剤を一緒に製剤化し、第３の薬剤を含む別個の製剤と組み合わせて投与されてもよい。併用療法において２つまたはそれ以上の薬剤が同時に投与されてもよいが、必須ではない。例えば、第１の薬剤（または薬剤の組み合わせ）が、第２の薬剤（または薬剤の組み合わせ）の投与よりも数分間、数時間、数日間、または数週間先に投与されてもよい。従って、２つまたはそれ以上の薬剤は、互いに数分間以内に投与されてもよいし、互いに１、２、３、６、９、１２、１５、１８、もしくは２４時間以内、または互いに１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１２、１４日以内、または互いに２、３、４、５、６、７、８、９または１０週間以内に投与されてもよい。場合によっては、より長い間隔とすることさえ可能である。多くの場合において、併用療法において使用される２つまたはそれ以上の薬剤は患者の身体中に同時に存在することが望ましいが、このことは必須ではない。
【０１２９】
併用療法はまた、組み合わせて使用される薬剤のうち１つまたは複数を２回以上投与することを含み得る。例えば、薬剤Ｘおよび薬剤Ｙが組み合わせて使用される場合、これらを任意の組み合わせで１回またはそれ以上、例えば、Ｘ−Ｙ−Ｘ、Ｘ−Ｘ−Ｙ、Ｙ−Ｘ−Ｙ、Ｙ−Ｙ−Ｘ、Ｘ−Ｘ−Ｙ−Ｙなどの順番で連続的に投与し得る。
【０１３０】
薬剤は、単独であっても組み合わせであっても、任意の薬学的に許容可能な担体または媒体と組み合わせ得る。従って、薬剤は、患者に投与された場合に、有害な反応、アレルギー性の反応、またはその他の望ましくない反応を生じない材料と組み合わせ得る。使用されるこれらの担体または媒体には、溶媒、分散剤、被覆剤、吸収促進剤、放出制御剤などが含まれ得る。
【０１３１】
遊離の形態または塩のいずれかの薬剤を、持続放出製剤を作製するために、ポリマー、例えば、ポリ乳酸−グリコール酸（ＰＬＧＡ）、ポリ−（Ｉ）−乳酸−グリコール酸−酒石酸（Ｐ（Ｉ）ＬＧＴ）（国際公開公報第０１／１２２３３号）、ポリグリコール酸（米国特許第３，７７３，９１９号）、ポリ乳酸（米国特許第４，７６７，６２８号）；ポリ（ε−カプロラクトン）と組み合わせることが可能である。このような製剤はインプラントにおいて使用可能であり、該インプラントは、ポリマー、ポリマーの粒子サイズ、およびインプラントのサイズに依存して、数日間、数週間、または数ヶ月間の期間にわたってペプチドまたは別の薬剤を放出する（例えば、米国特許第６，６２０，４２２号を参照のこと）。その他の持続放出製剤は、欧州特許出願公開第０  ４６７  ３８９  Ａ２号、国際公開公報第９３／２４１１５０号、米国特許第５，６１２，０５２号；国際公開公報第９７／４００８５号、国際公開公報第９４／１５５５８７号、米国特許第５，６７２，６５９号、米国特許第５，８９３，９８５号、米国特許第５，１３４，１２２号、米国特許第５，１９２，７４１号、米国特許第５，１９２，７４１号、および米国特許第５，４４５，８３２号に記載されている。このような持続放出製剤においては、ペプチドの微粒子がポリマーの微粒子と組み合わされる。１つまたはそれ以上の持続放出インプラントが、大腸、小腸または両方に配置され得る。
【０１３２】
本発明の薬剤は、例えば、静脈内注射、筋肉内注射、皮下注射、または他の経路によって投与され得る。薬剤は、経口的に、例えば、錠剤、ゲル、ペースト、スラリー、リキッド、散剤、または何らかの他の形態で投与され得る。経口投与される組成物は、結合剤、香料、および湿潤剤を含み得る。本発明の薬剤は歯磨剤または口腔洗浄剤に含まれ得る。従って、経口製剤は研磨剤および発泡剤を含み得る。本発明の薬剤はまた、経皮的にまたは坐剤の形態で投与され得る。
【０１３３】
本発明の薬剤は、遊離の酸もしくは塩基、または薬学的に許容可能なそれらの塩であり得る。固体は、投与の直前またはそれより前に溶解または分散されてもよい。状況によっては、調製物は、微生物の増殖を防ぐための保存剤を含む。注射に適した薬学的形態には、滅菌水または有機溶剤の溶液または分散液（例えば、水、アルコール、有機溶媒、オイル、または他の溶媒もしくは分散剤（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、および植物性オイル）を含む）が挙げられる。薬学的薬剤は、フィルター滅菌または他の適切な手段によって滅菌され得る。
【０１３４】
本発明に従う適切な薬学的組成物は一般的に、一定量の活性化合物を、許容可能な薬学的な希釈剤または賦形剤（例えば、滅菌水溶液など）とともに、意図される用途に応じて一定の範囲の最終濃度となるように含むであろう。調製の技術は、レミントンの薬剤科学（Remington's  Pharmaceutical  Sciences  ）第１８版、マックパブリッシング社（Mack  Publishing  Company  ）、１９９５年によって例示されるように、当該分野において一般に知られている。
【０１３５】
本明細書中に記載される薬剤および併用療法薬剤は、各々個別に包装または製剤化された２以上の薬剤の単一または複数の投与単位形態、あるいは組み合わせて包装または製剤化された２以上の薬剤の単一または複数の投与単位形態を含むキットとして包装され得る。従って、第１の容器内に１種またはそれ以上の薬剤が存在していてもよいし、任意選択
で、このキットが第２の容器内に１種またはそれ以上の薬剤を含んでいてもよい。この１または複数の容器は１つの包装内に入っており、この包装は任意選択で投与または調剤の指示書を含み得る。キットは、薬剤を投与するためのシリンジまたは他の手段、ならびに製剤化のための希釈剤または他の手段など、さらなる構成要素を含み得る。
【０１３６】
（鎮痛剤）  本明細書中に記載されるペプチドは、鎮痛剤（例えば、鎮痛性化合物または鎮痛ペプチド）との併用療法において使用され得る。鎮痛剤は、任意選択で、本明細書中に記載されるペプチドに共有結合させることができる。有用な鎮痛剤の中には、Ｃａチャンネルブロッカー、５ＨＴレセプターアンタゴニスト（例えば、５ＨＴ３、５ＨＴ４、および５ＨＴ１レセプターアンタゴニスト）、オピオイドレセプターアゴニスト（例えば、ロペラミド、フェドトジン、およびフェンタニル）、ＮＫ１レセプターアンタゴニスト、ＣＣＫレセプターアゴニスト（例えば、ロキシグルミド）、ＮＫ１レセプターアンタゴニスト、ＮＫ３レセプターアンタゴニスト、ノルエピネフリン−セロトニン再取り込み阻害剤（ＮＳＲＩ）、バニロイドおよびカンナバノイドレセプターアゴニスト、ならびにシアロルフィンがある。様々な種類の鎮痛剤が文献に記載されている。  有用な鎮痛ペプチドの中にはシアロルフィン関連ペプチドがあり、これらにはアミノ酸配列ＱＨＮＰＲ（配列番号  ）を含むペプチド、例えばＶＱＨＮＰＲ（配列番号  ）；ＶＲＱＨＮＰＲ（配列番号  ）；ＶＲＧＱＨＮＰＲ（配列番号  ）；ＶＲＧＰＱＨＮＰＲ（配列番号  ）；ＶＲＧＰＲＱＨＮＰＲ（配列番号  ）；ＶＲＧＰＲＲＱＨＮＰＲ（配列番号  ）；およびＲＱＨＮＰＲ（配列番号）が含まれる。シアロルフィン関連ペプチドはネプリリシンに結合し、ネプリリシンの介在によるサブスタンスＰおよびＭｅｔ−エンケファリンの分解を阻害する。従って、ネプリリシンの阻害剤である化合物またはペプチドは、同時治療において本発明のペプチドとともに投与することも、本発明のペプチドに（例えば、共有結合によって）連結させることもできる、有用な鎮痛剤である。シアロルフィンおよび関連ペプチドは米国特許第６，５８９，７５０号；Ｕ．Ｓ．２００３００７８２００Ａ１；および国際公開公報第０２／０５１４３５  Ａ２号において記載されている。
【０１３７】
オピオイドレセプターのアンタゴニストまたはアゴニストは、同時治療において本発明のペプチドとともに投与することも、本発明のペプチドに（例えば、共有結合によって）連結させることもできる。例えば、オピオイドレセプターアンタゴニスト（例えばナロキソン、ナルトレキソン、メチルナロゾン、ナルメフェン、シプリジム、β−フナルトレキサミン、ナロキソナジン、ナルトリンドール、およびノルビナルトルフィミンなど）はＩＢＳの治療において有用であると考えられている。この型のオピオイドアンタゴニストを遅延放出製剤および持続放出製剤として、該アンタゴニストが小腸の中央から末端および／または結腸で最初に放出されるようにすることは有用であり得る。このようなアンタゴニストは国際公開公報第０１／３２１８０Ａ２号に記載されている。エンケファリンペンタペプチド（ＨＯＥ８２５；Ｔｙｒ−Ｄ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌ−ホモセリン）はオピオイドレセプターであるミューおよびデルタのアゴニストであり、腸の運動性を増大させるために有用であると考えられており（Eur.J.Pharm.219:445  、１９９２年）、こ
のペプチドは本発明のペプチドと組み合わせて使用され得る。トリメブチンもまた有用であり、トリメブチンは、ミュー／デルタ／カッパオピオイドレセプターに結合し、モチリンの放出を活性化し、ガストリン、血管作用性腸ペプチド、ガストリンおよびグルカゴンの放出を調節すると考えられている。カッパオピオイドレセプターアゴニスト（例えば、フェドトジン、ケトシクラゾシン、および国際公開公報第０３／０９７０５１  Ａ２号に記載される化合物）は、本発明のペプチドとともに使用することも、本発明のペプチドに結合させることもできる。さらに、ミューオピオイドレセプターアゴニスト（例えば、モルヒネ、ジフェニルオキシレート、フラケファミド（Ｈ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ａｌａ−Ｐｈｅ（Ｆ）−Ｐｈｅ−ＮＨ２；国際公開公報第０１／０１９８４９  Ａ１号）およびロペラミド）が使用され得る。
【０１３８】
Ｔｙｒ−Ａｒｇ（キョートルフィン）は、ｍｅｔ−エンケファリンの放出を刺激することによって作用して鎮痛効果を誘発するジペプチドである（J.B  iol.Chem.262:8165,  
１９８７年）。キョートルフィンは本発明のペプチドとともに使用することも、本発明のペプチドに結合させることもできる。
【０１３９】
ＣＣＫレセプターアゴニスト（例えば、両生類および他の生物種由来のセルレインなど）は、本発明のペプチドとともに使用することも、本発明のペプチドに結合させることもできる有用な鎮痛剤である。
【０１４０】
コノトキシンペプチドは、電位依存性Ｃａチャンネル、ＮＭＤＡレセプター、またはニコチン性レセプターに作用する多種類の鎮痛ペプチドを表す。これらのペプチドは、本発明のペプチドとともに使用することも、本発明のペプチドに結合させることもできる。
【０１４１】
サイムリンのペプチドアナログ（仏国特許出願２８３０４５１号）は鎮痛活性を有する可能性があり、本発明のペプチドとともに使用することも、本発明のペプチドに結合させることもできる。
【０１４２】
ロキシグルミドおよびデキシロキシグルミド（ロキシグルミドのＲ異性体）を含むＣＣＫ（ＣＣＫａまたはＣＣＫｂ）レセプターアンタゴニスト（国際公開公報第８８／０５７７４号）は鎮痛活性を有する可能性があり、本発明のペプチドとともに使用することも、本発明のペプチドに結合させることもできる。
【０１４３】
他の有用な鎮痛剤には、テガセロッド（tegaserod  ）／ｚｅｌｎｏｒｍ（登録商標）
、およびリレキサプリドなどの５−ＨＴ４アゴニストが含まれる。このようなアゴニストは、欧州特許出願公開第１３２１１４２  Ａ１号、国際公開公報第０３／０５３４３２Ａ１号、欧州特許出願公開第５０５３２２  Ａ１号、欧州特許第５０５３２２  Ｂ１号、米国特許第５，５１０，３５３号、欧州特許出願公開第５０７６７２  Ａ１号、欧州特許第５０７６７２  Ｂ１号、および米国特許第５，２７３，９８３号において記載されている。
【０１４４】
ジコノチドおよび関連化合物などのカルシウムチャンネルブロッカーは、例えば、欧州特許第６２５１６２Ｂ１号、米国特許第５，３６４，８４２号、米国特許第５，５８７，４５４号、米国特許第５，８２４，６４５号、米国特許第５，８５９，１８６号、米国特許第５，９９４，３０５号、米国特許第６，０８７，０９１号、米国特許第６，１３６，７８６号、国際公開公報第９３／１３１２８  Ａ１号、欧州特許出願公開第１３３６４０９  Ａ１号、欧州特許出願公開第８３５１２６  Ａ１号、欧州特許第８３５１２６  Ｂ１号、米国特許第５，７９５，８６４号、米国特許第５，８９１，８４９号、米国特許第６，０５４，４２９号、国際公開公報第９７／０１３５１  Ａ１号に記載されており、本発明のペプチドとともに使用することも、本発明のペプチドに結合させることもできる。
【０１４５】
ＮＫ−１レセプター、ＮＫ−２レセプター、およびＮＫ−３レセプターの種々のアンタゴニスト（概説については、ジャルディーナら（Giardina  et  al.  ）、2003  Drugs  6:758を参照のこと）は、本発明のペプチドとともに使用することも、本発明のペプチド
に結合させることもできる。
【０１４６】
ＮＫ１レセプターアンタゴニスト（例えば：アプレピタント（メルクアンドカンパニー社（Merck  &  Co  Inc））、ボホピタント（Vofopitant）、エズロピタント（ファイザ
ー社）、Ｒ−６７３（ホフマンラロッシュ社（Hoffmann-La  Roche  Ltd  ））、ＳＲ−
１４０３３、および例えば、欧州特許出願公開第８７３７５３  Ａ１号、ＵＳ  ２００１０００６９７２  Ａ１、ＵＳ  ２００３０１０９４１７  Ａ１、国際公開公報第０１／５
２８４４
Ａ１号に記載の関連化合物）は、本発明のペプチドとともに使用することも、本発明のペプチドに結合させることもできる。
【０１４７】
ＮＫ−２レセプターアンタゴニスト（例えば、ネパズタント（メナリーニ・リケルチェ・ソシエタ・ペル・アチオニ（Menarini  Ricerche  SpA  ））、サレズタント（サノフ
ィ−シンセラボ（Sanofi-Synthelabo  ））、ＳＲ−１４４１９０（サノフィ−シンセラ
ボ）、およびＵＫ−２９０７９５（ファイザー・インコーポレイテッド（Pfizer  Inc）
）は、本発明のペプチドとともに使用することも、本発明のペプチドに結合させることもできる。
【０１４８】
ＮＫ３レセプターアンタゴニスト（例えば、オサネタント（サノフィ−シンセラボ）、タルネタントおよび例えば国際公開公報第０２／０９４１８７  Ａ２号、欧州特許出願公開第８７６３４７  Ａ１号、国際公開公報第９７／２１６８０  Ａ１号、米国特許第６，２７７，８６２号、国際公開公報第９８／１１０９０号、国際公開公報第９５／２８４１８号、国際公開公報第９７／１９９２７号、およびボーデンら（Boden  et  al.）（J  Med  Chem.39:1664-75,  １９９６年）に記載の関連化合物）は、本発明のペプチドとともに使用することも、本発明のペプチドに結合させることもできる。
【０１４９】
ノルエピネフリン−セロトニン再取り込み阻害剤（例えば、ミルナシプランおよび国際公開公報第０３／０７７８９７  Ａ１号に記載の関連化合物）は、本発明のペプチドとともに使用することも、本発明のペプチドに結合させることもできる。
【０１５０】
バニロイドレセプターアンタゴニスト（例えば、アーバニルおよび国際公開公報第０１／６４２１２  Ａ１号に記載の関連化合物）は、本発明のペプチドとともに使用することも、本発明のペプチドに結合させることもできる。
【０１５１】
鎮痛剤がペプチドであり、かつ本明細書中に記載されるペプチドに共有結合させる場合、得られるペプチドに、少なくとも１つのトリプシンまたはキモトリプシン切断部位を含めることも可能である。本発明のペプチド中に存在する場合は、鎮痛ペプチドの前（鎮痛ペプチドがカルボキシ末端にある場合）、または鎮痛ペプチドの後（ペプチドがアミノ末端にある場合）に鎮痛ペプチドの遊離を可能にするキモトリプシンまたはトリプシン切断部位があればよい。
【０１５２】
シアロルフィン関連ペプチドに加えて、鎮痛ペプチドには、ＡｓｐＰｈｅ、エンドモルフィン−１、エンドモルフィン−２、ノシスタチン、ダラルギン、ルプロン、ジコノチド、およびサブスタンスＰが含まれる。
【０１５３】
（治療の方法）  本発明のペプチドは、がん、前がん性増殖、または転移性増殖の治療または予防のために使用され得る。例えば、本発明のペプチドは、結腸直腸または局所のうち少なくともいずれかに転移した結腸直腸がん、胃腸管がん、肺がん、上皮細胞のがんまたは前がん性増殖または転移性増殖、ポリープ、乳癌、結腸直腸癌、肺癌、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、腎臓癌、胃癌、膀胱癌、肝臓癌、食道癌、および精巣癌、癌腫（例えば、基底細胞癌、基底有棘細胞癌、ブラウン−ピアス癌、腺管癌、エールリッヒ腫瘍、クレブス、メルケル細胞癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、オート細胞癌、乳頭状癌、細気管支癌、扁平上皮細胞癌、移行細胞癌、ウォーカー癌種）、白血病（例えば、Ｂ細胞白血病、Ｔ細胞白血病、ＨＴＬＶによる白血病、急性または慢性リンパ性白血病、マスト細胞性白血病、骨髄性白血病）、組織球腫、組織球増殖症、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、プラスマ細胞腫、細網内皮症、腺腫、腺癌、腺線維腫、腺リンパ腫、エナメル上皮腫、角化血管腫、好酸球随伴性血管類リンパ組織増殖症、硬化性血管腫、血管腫症、アプドーマ、
鰓腫、悪性カルチノイド症候群、カルチノイド心疾患、がん肉腫、セメント質腫、胆管腫、コレステリン腫、軟骨肉腫、軟骨芽細胞腫、軟骨肉腫、脊索腫、分離腫、頭蓋咽頭腫、軟骨腫、円柱腫、嚢胞腺癌、嚢胞腺腫、葉状嚢肉腫、未分化胚細胞腫、上衣細胞腫、ユーイング肉腫、線維腫、線維肉腫、巨細胞腫、神経節細胞腫、神経膠芽細胞腫、グロムス血管腫、顆粒膜細胞腫、ギナンドロブラストーマ、過誤腫、血管内皮腫、血管腫、血管周囲細胞腫、血管肉腫、肝細胞がん、膵島細胞腫瘍、カポジ肉腫、平滑筋腫、平滑筋肉腫、白血肉腫（leukosarcoma）、ライディッヒ細胞腫瘍、脂肪腫、脂肪肉腫、リンパ管腫、リンパ管筋腫、リンパ管肉腫、髄芽細胞腫、髄膜腫、間葉腫、中腎腫、中皮腫、筋原細胞腫、筋腫、筋肉腫、粘液腫、粘液肉腫、神経鞘腫、神経腫、神経芽細胞腫、神経上皮腫、神経線維腫、神経線維腫症、歯牙腫、骨腫、骨肉腫、乳頭腫、傍神経節腫、非クロム親和性傍神経節腫、松果体腫、横紋筋腫、横紋筋肉腫、セルトリ細胞腫瘍、奇形腫、卵胞膜細胞腫、ならびに細胞が形成異常、不死化、または形質転換されているその他の疾患、の治療または予防のために使用され得る。
【０１５４】
本発明のペプチドは、結腸がんの前段階である家族性腺腫性ポリポーシス（ＦＡＰ）（常染色体優性症候群）、遺伝性非ポリポーシス性大腸がん（ＨＮＰＣＣ）、および遺伝性常染色体優性症候群の治療および予防のために使用され得る。
【０１５５】
がん、前がん性増殖、および転移性増殖の治療または予防のために、本発明のペプチドは、放射線照射または化学療法剤、ｃＧＭＰ依存性ホスホジエステラーゼ阻害剤または選択的シクロオキシゲナーゼ−２阻害剤（多数の選択的シクロオキシゲナーゼ−２阻害剤が国際公開公報第０２０６２３６９号（本願明細書に援用する）に記載されている）を用いる併用療法において使用され得る。
【０１５６】
本発明のペプチドは、炎症の治療または予防を目的とするものであり得る。従って、本発明のペプチドを、臓器の炎症、ＩＢＤ（例えば、クローン病、潰瘍性大腸炎）、喘息、腎炎、肝炎、膵炎、気管支炎、嚢胞性線維症、虚血性腸疾患、腸の炎症／アレルギー、セリアック病、直腸炎、好酸球性胃腸炎、肥満細胞症、および他の炎症性障害の治療のために、単独で、またはｃＧＭＰ依存性ホスホジエステラーゼ阻害剤もしくは選択的シクロオキシゲナーゼ−２阻害剤と組み合わせて使用することができる。
【０１５７】
本発明のペプチドはまた、インスリン関連障害、例えば、２型糖尿病、高血糖症、肥満、細胞におけるグルコースもしくは電解質の輸送およびインスリン分泌の異常と関連する障害、または内分泌障害を、治療または予防するために使用され得る。該ペプチドは、インスリン耐性の治療ならびに手術後および非手術後のインスリン応答性の減少においても使用され得る。
【０１５８】
本発明のペプチドは、吸気障害、換気障害、粘膜分泌障害、肺高血圧症、気管および気道の慢性閉塞、ならびに気管および気管支の不可逆的閉塞を含む呼吸器障害を予防または治療するために使用され得る。
【０１５９】
本発明のペプチドは、ホスホジエステラーゼ阻害剤（当該阻害剤の例は、米国特許第６，３３３，３５４号（本願明細書に援用する）において見出され得る）との併用療法において使用され得る。
【０１６０】
本発明のペプチドはまた、網膜症、腎症、糖尿病性血管症、および浮腫形成を予防または治療するために使用され得る。
本発明のペプチドはまた、神経障害、例えば、頭痛、不安、運動障害、攻撃性、精神病、痙攣、パニック発作、ヒステリー、睡眠障害、うつ病、分裂感情障害、睡眠時無呼吸、注意欠陥障害、記憶喪失、およびナルコレプシーを予防または治療するために使用され得
る。該ペプチドはまた、鎮静剤としても使用され得る。
【０１６１】
本発明のペプチドおよび検出可能なように標識されたペプチドは、小腸の疾患および状態を同定、検出、段階付け、または診断するためのマーカーとして使用可能であり、小腸の疾患および状態には、クローン病、大腸炎、炎症性腸疾患、腫瘍、良性腫瘍（例えば良性間質腫瘍）、腺腫、血管腫、腺腫性（有茎性および無茎性）ポリープ、悪性カルチノイド腫瘍、内分泌細胞の腫瘍、リンパ腫、腺癌、前腸の癌、中腸の癌、後腸の癌、胃腸管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）（例えば平滑筋腫、細胞平滑筋腫、平滑筋芽細胞腫、および平滑筋肉腫）、胃腸自律神経腫瘍、吸収不良症候群、セリアック病、憩室症、メッケル憩室、大腸憩室、巨大結腸、ヒルシュスプルング病、過敏性腸症候群、腸間膜虚血、虚血性大腸炎、結腸大腸がん、結腸性ポリポーシス、ポリープ症候群、腸の腺癌、リドル症候群、ブロディーミオパシー、乳児痙攣、および舞踏病アテトーシスが含まれる。
【０１６２】
本発明のペプチドは、ＧＣＣレセプターを有する細胞、例えば、嚢胞性線維症病巣および腸管を裏打ちする特定の細胞を標的とするために、別の分子（例えば、診断用分子および治療用分子）と結合体化してもよい。従って、本発明のペプチドは、放射活性を有する部分または治療のための部分が腸を標的とし、結腸直腸がん／転移がん、または局所的結腸直腸がんを画像化および診断する、または治療する際の補助となり、そしてｐ５３サプレッサー遺伝子の正常なコピーを腸管に送達するために使用することができる。
【０１６３】
本発明のペプチドは、勃起障害を治療するために、単独でまたは併用療法において使用され得る。
本発明のペプチドは、内耳障害を治療するため、例えば、メニエール病（めまい、聴覚障害、耳鳴、耳の閉塞感などの同疾患の徴候を含む）を治療するため、および内耳の体液ホメオスタシスを維持するために、単独でまたは併用療法において使用され得る。
【０１６４】
本発明のペプチドは、体液またはナトリウムの保持に関連した障害、例えば、腎臓、腸、および泌尿生殖器系における電解質−水／電解質輸送系の疾患、うっ血性心不全、高血圧、低血圧、肝硬変、およびネフローゼ症候群を治療するために単独でまたは併用療法において使用され得る。さらに、本発明のペプチドは、利尿を容易にするため、または腸液を制御するために使用され得る。
【０１６５】
本発明のペプチドは、重炭酸分泌と関連した障害、例えば、嚢胞性線維症を治療するために、単独でまたは併用療法において使用され得る。
本発明のペプチドは、肝細胞の再生と関連した障害を治療するために、単独でまたは併用療法において使用され得る。
【図１ａ】
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【図１ｂ】
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【図１ｃ】
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【図２】
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【図３ａ】
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【図３ｂ】
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【図４ａ】
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【図４ｂ】
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【図４ｃ】
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【図５ａ】
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【図５ｂ】
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【図６ａ】
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【図６ｂ】
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【図７】
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【図８ａ】
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【図８ｂ】
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【図９】
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【図１０ａ】
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【図１０ｂ】
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【配列表】
2010222377000001.app
【手続補正書】
【提出日】平成22年7月22日(2010.7.22)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
アミノ酸配列（Ｉ）：Ｘａａ１Ｘａａ２Ｘａａ３Ｘａａ４Ｘａａ５Ｃｙｓ６Ｃｙｓ７Ｘａａ８Ｘａａ９Ｃｙｓ１０Ｃｙｓ１１Ｘａａ１２Ｘａａ１３Ｘａａ１４Ｃｙｓ１５Ｘａａ１６Ｘａａ１７Ｃｙｓ１８Ｘａａ１９Ｘａａ２０Ｘａａ２１を含むペプチドであって、前記配列中、Ｘａａ１Ｘａａ２Ｘａａ３Ｘａａ４Ｘａａ５がＡｓｎＳｅｒＳｅｒＡｓｎＴｙｒもしくは欠失している、またはＸａａ１Ｘａａ２Ｘａａ３Ｘａａ４が欠失しているペプチド。
【請求項２】
Ｃｙｓ６Ｃｙｓ７Ｇｌｕ８Ｘａａ９Ｃｙｓ１０Ｃｙｓ１１Ａｓｎ１２Ｐｒｏ１３Ａｌａ１４Ｃｙｓ１５Ｔｈｒ１６Ｇｌｙ１７Ｃｙｓ１８Ｔｙｒ１９を含み、Ｘａａ９がＰｈｅ、Ｔｒｐ、またはＴｙｒから選択されるＬｅｕ、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、Ａｌａ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、またはＰｈｅである、請求項１に記載のペプチド。
【請求項３】
Ｃｙｓ６Ｃｙｓ７Ｇｌｕ８Ｘａａ９Ｃｙｓ１０Ｃｙｓ１１Ａｓｎ１２Ｐｒｏ１３Ａｌａ１４Ｃｙｓ１５Ｔｈｒ１６Ｇｌｙ１７Ｃｙｓ１８Ｔｙｒ１９から成り、Ｘａａ９がＰｈｅ、Ｔｒｐ、またはＴｙｒから選択される、請求項１に記載のペプチド。
【請求項４】
Ｘａａ９がＰｈｅである、請求項１〜３のいずれかに記載のペプチドまたはその塩。
【請求項５】
Ｘａａ９がＴｒｐである、請求項１〜３のいずれかに記載のペプチドまたはその塩。
【請求項６】
Ｘａａ９がＴｙｒである、請求項１〜３のいずれかに記載のペプチドまたはその塩。
【請求項７】
請求項１〜６のいずれか１項に記載のペプチドおよび薬学的に許容可能な担体を含む薬学的組成物。
【請求項８】
（ａ）以下の（ｉ）〜（ｉｉｉ）から選択されるペプチドと、
（ｉ）Ｃｙｓ  Ｃｙｓ  Ｇｌｕ  Ｐｈｅ  Ｃｙｓ  Ｃｙｓ  Ａｓｎ  Ｐｒｏ  Ａｌａ
Ｃｙｓ  Ｔｈｒ  Ｇｌｙ  Ｃｙｓ  Ｔｙｒのアミノ酸配列を有するペプチド、
（ｉｉ）Ｃｙｓ  Ｃｙｓ  Ｇｌｕ  Ｔｙｒ  Ｃｙｓ  Ｃｙｓ  Ａｓｎ  Ｐｒｏ  Ａｌ
ａ  Ｃｙｓ  Ｔｈｒ  Ｇｌｙ  Ｃｙｓ  Ｔｙｒのアミノ酸配列を有するペプチド、および
（ｉｉｉ）Ｃｙｓ  Ｃｙｓ  Ｇｌｕ  Ｔｒｐ  Ｃｙｓ  Ｃｙｓ  Ａｓｎ  Ｐｒｏ  Ａｌａ  Ｃｙｓ  Ｔｈｒ  Ｇｌｙ  Ｃｙｓ  Ｔｙｒのアミノ酸配列を有するペプチド、
（ｂ）以下の（ｉ）〜（ｉｖ）から選択される薬剤と、
（ｉ）プロトンポンプ阻害剤、
（ｉｉ）Ｈ２受容体アゴニスト、
（ｉｉｉ）オピオイド受容体アンタゴニスト、および
（ｉｖ）オピオイド受容体アゴニスト、
（ｃ）薬学的に許容可能な担体と、
を含む請求項７に記載の薬学的組成物。
【請求項９】
請求項１〜６のいずれか１項に記載のペプチドと、追加の治療薬と、薬学的に許容可能な担体とを含む薬学的組成物。
【請求項１０】
患者の胃腸障害を治療する医薬の製造のための請求項１〜９のいずれかに記載のペプチドまたは薬学的組成物の使用方法。
【請求項１１】
前記胃腸障害が胃腸運動障害である請求項１０に記載の使用方法。
【請求項１２】
前記胃腸障害が、胃腸運動障害、過敏性腸症候群、慢性便秘、内臓痛、機能性胃腸障害、胃食道逆流性疾患、機能性胸焼け、消化不良、機能性消化不良、非潰瘍性消化不良、胃不全麻痺、慢性的な腸偽閉塞症、および結腸偽閉塞症からなる群から選択される請求項１０に記載の使用方法。
【請求項１３】
患者の胃腸障害を治療する医薬の製造のためのＧＣ−Ｃレセプターアゴニストの使用方法。
【請求項１４】
請求項１〜６のいずれか１項に記載のペプチドを製造する方法であって、
該ペプチドをコードする核酸分子を有する細胞を供給する工程、
該ペプチドが発現される条件下で細胞を培養する工程、および
発現されたペプチドを単離する工程
からなる方法。
【請求項１５】
請求項１〜６のいずれか１項に記載のペプチドを製造する方法であって、
ペプチドを化学合成する工程、および
合成されたペプチドを精製する工程
からなる方法。
【請求項１６】
以下の（ｉ）〜（ｉｉｉ）から選択されるペプチドを製造する方法であって、
（ｉ）Ｃｙｓ  Ｃｙｓ  Ｇｌｕ  Ｐｈｅ  Ｃｙｓ  Ｃｙｓ  Ａｓｎ  Ｐｒｏ  Ａｌａ
Ｃｙｓ  Ｔｈｒ  Ｇｌｙ  Ｃｙｓ  Ｔｙｒのアミノ酸配列を有するペプチド、
（ｉｉ）Ｃｙｓ  Ｃｙｓ  Ｇｌｕ  Ｔｙｒ  Ｃｙｓ  Ｃｙｓ  Ａｓｎ  Ｐｒｏ  Ａｌａ  Ｃｙｓ  Ｔｈｒ  Ｇｌｙ  Ｃｙｓ  Ｔｙｒのアミノ酸配列を有するペプチド、および
（ｉｉｉ）Ｃｙｓ  Ｃｙｓ  Ｇｌｕ  Ｔｒｐ  Ｃｙｓ  Ｃｙｓ  Ａｓｎ  Ｐｒｏ  Ａｌａ  Ｃｙｓ  Ｔｈｒ  Ｇｌｙ  Ｃｙｓ  Ｔｙｒのアミノ酸配列を有するペプチド、
（ａ）ペプチドを化学合成する工程、および
（ｂ）合成されたペプチドを精製する工程
からなる方法。
【請求項１７】
以下の（ｉ）〜（ｉｉｉ）から選択されるペプチドを含む薬学的組成物を製造する方法
であって、
（ｉ）Ｃｙｓ  Ｃｙｓ  Ｇｌｕ  Ｐｈｅ  Ｃｙｓ  Ｃｙｓ  Ａｓｎ  Ｐｒｏ  Ａｌａ
Ｃｙｓ  Ｔｈｒ  Ｇｌｙ  Ｃｙｓ  Ｔｙｒのアミノ酸配列を有するペプチド、
（ｉｉ）Ｃｙｓ  Ｃｙｓ  Ｇｌｕ  Ｔｙｒ  Ｃｙｓ  Ｃｙｓ  Ａｓｎ  Ｐｒｏ  Ａｌａ  Ｃｙｓ  Ｔｈｒ  Ｇｌｙ  Ｃｙｓ  Ｔｙｒのアミノ酸配列を有するペプチド、および
（ｉｉｉ）Ｃｙｓ  Ｃｙｓ  Ｇｌｕ  Ｔｒｐ  Ｃｙｓ  Ｃｙｓ  Ａｓｎ  Ｐｒｏ  Ａｌａ  Ｃｙｓ  Ｔｈｒ  Ｇｌｙ  Ｃｙｓ  Ｔｙｒのアミノ酸配列を有するペプチド、
（ａ）ペプチドを化学合成する工程、
（ｂ）合成されたペプチドを精製する工程、および
（ｃ）前記精製されたペプチドを薬学的に許容可能な担体と混合する工程
からなる方法。
【請求項１８】
以下の（ｉ）〜（ｉｉｉ）から選択されるペプチドを製造する方法であって、
（ｉ）Ｃｙｓ  Ｃｙｓ  Ｇｌｕ  Ｐｈｅ  Ｃｙｓ  Ｃｙｓ  Ａｓｎ  Ｐｒｏ  Ａｌａ
Ｃｙｓ  Ｔｈｒ  Ｇｌｙ  Ｃｙｓ  Ｔｙｒのアミノ酸配列を有するペプチド、
（ｉｉ）Ｃｙｓ  Ｃｙｓ  Ｇｌｕ  Ｔｙｒ  Ｃｙｓ  Ｃｙｓ  Ａｓｎ  Ｐｒｏ  Ａｌａ  Ｃｙｓ  Ｔｈｒ  Ｇｌｙ  Ｃｙｓ  Ｔｙｒのアミノ酸配列を有するペプチド、および
（ｉｉｉ）Ｃｙｓ  Ｃｙｓ  Ｇｌｕ  Ｔｒｐ  Ｃｙｓ  Ｃｙｓ  Ａｓｎ  Ｐｒｏ  Ａｌａ  Ｃｙｓ  Ｔｈｒ  Ｇｌｙ  Ｃｙｓ  Ｔｙｒのアミノ酸配列を有するペプチド、
（ａ）該ペプチドをコードする核酸分子を有する細胞を供給する工程、
（ｂ）該ペプチドが発現される条件下で細胞を培養する工程、および
（ｃ）発現されたペプチドを単離する工程
からなる方法。
【請求項１９】
以下の（ｉ）〜（ｉｉｉ）から選択されるペプチドを含む薬学的組成物を製造する方法であって、
（ｉ）Ｃｙｓ  Ｃｙｓ  Ｇｌｕ  Ｐｈｅ  Ｃｙｓ  Ｃｙｓ  Ａｓｎ  Ｐｒｏ  Ａｌａ
Ｃｙｓ  Ｔｈｒ  Ｇｌｙ  Ｃｙｓ  Ｔｙｒのアミノ酸配列を有するペプチド、
（ｉｉ）Ｃｙｓ  Ｃｙｓ  Ｇｌｕ  Ｔｙｒ  Ｃｙｓ  Ｃｙｓ  Ａｓｎ  Ｐｒｏ  Ａｌａ  Ｃｙｓ  Ｔｈｒ  Ｇｌｙ  Ｃｙｓ  Ｔｙｒのアミノ酸配列を有するペプチド、および
（ｉｉｉ）Ｃｙｓ  Ｃｙｓ  Ｇｌｕ  Ｔｒｐ  Ｃｙｓ  Ｃｙｓ  Ａｓｎ  Ｐｒｏ  Ａｌａ  Ｃｙｓ  Ｔｈｒ  Ｇｌｙ  Ｃｙｓ  Ｔｙｒのアミノ酸配列を有するペプチド、
（ａ）該ペプチドをコードする核酸分子を有する細胞を供給する工程、
（ｂ）該ペプチドが発現される条件下で細胞を培養する工程、
（ｃ）発現されたペプチドを単離する工程、
（ｄ）前記単離されたペプチドを薬学的に許容可能な担体と混合する工程
からなる方法。