(57)【要約】      （修正有）【課題】リボヌクレオシド誘導体および／又はこのリボヌクレオシド誘導体を構成単位として含むオリゴ核酸誘導体の２’−水酸基の置換カルバモイル基を選択的に効率良く脱保護する方法を提供する。【解決手段】２’−水酸基にカルバモイル保護基を有するリボヌクレオシド誘導体および／又はこのリボヌクレオシド誘導体を構成単位として含むオリゴ核酸誘導体を、Ｒ4ＮＦと反応させ、２’−水酸基の脱保護を行う、高純度のオリゴ核酸を効率よく製造する方法。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式（１）：
【化１】
2010254616.tif 000008
［式中、Ｒ1は置換基を有していても良い炭素数１〜１８のアルキル基、置換基を有していても良い炭素数１〜１８のシクロアルキル基、置換基を有していても良い炭素数６〜１８のアリール基、置換基を有していても良い炭素数７〜１８のアラルキル基、置換基を有していても良いスルホニル基、又は置換基を有していても良いシリル基を表し、Ｒ2は水素又は水酸基の保護基又はオリゴ核酸を表し、Ｒ3はオリゴ核酸を表す。Ｘはヘテロ原子を表す。Ｙは水素、ヒドロキシル基、アルコキシ基、又はチオール基を表す。Ｂは、下記式：
【化２】
2010254616.tif 000009
（Ｒ4は、水素或いはアミノ基の保護基を表す）で表されるアデニン、グアニン、シトシン、ウラシルまたはそれらから誘導される基を表す。ｍは１より大きい自然数を表す］で表される２’−水酸基を保護したリボヌクレオシド誘導体および／又はこのリボヌクレオシド誘導体を構成単位として含むオリゴ核酸誘導体を、一般式（２）：
Ｒ54ＮＦ    （２）
［式中、Ｒ5は置換基を有していても良い炭素数１〜１８のアルキル基、置換基を有していても良い炭素数１〜１８のシクロアルキル基、又は置換基を有していても良い炭素数６〜１８のアリール基、置換基を有していても良い炭素数７〜１８のアラルキル基表す］と反応させることを特徴とする、一般式（３）：
【化３】
2010254616.tif 000010
［式中、Ｒ2、Ｒ3、Ｂ、Ｘ、Ｙ、ｍは前記と同じ。］で表されるリボヌクレオシド誘導体及び／又はこのリボヌクレオシドを構成単位として含むオリゴ核酸誘導体の製造法。
【請求項２】
Ｒ5がアルキル基である請求項１記載の製造法。
【請求項３】
Ｒ5のアルキル基がブチル基である請求項２記載の製造法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、リボヌクレオシド誘導体及び／またはオリゴ核酸誘導体の製造方法に関する。より詳細には、２’−水酸基が保護されたリボヌクレオシド誘導体及び／またはオリゴ核酸を脱保護してリボヌクレオシド誘導体及び／またはオリゴ核酸誘導体を得る方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
オリゴＲＮＡは、アンチセンス医薬、リボザイム医薬、デコイオリゴ医薬、ＳｉＲＮＡ医薬、ｍｉＲＮＡ医薬、アプタマー医薬等の核酸医薬品や診断薬など主として医療用途に用いられている有用な材料である。これらの用途に用いられるオリゴＲＮＡは、化学合成法を用いて製造されることが多い。
【０００３】
オリゴＲＮＡの化学合成法の中でも現在主流となっている化学合成法は、ホスホロアミダイト法である。このホスホロアミダイト法の特徴は、他の方法に比べて高い収率でインターヌクレオチド形成反応が進行することである。
【０００４】
ホスホロアミダイト法に用いられるホスホロアミダイトモノマーは、５’−，２’−水酸基に酸やフッ素化合物で脱保護できる保護基を有し、３’−水酸基にリン原子上をアルコキシ基とアミノ基を有している。このホスホロアミダイトモノマーと所望のヌクレオシド或いはヌクレオチドを活性化剤共存下で反応させることでインターヌクレオチド結合が形成される。その後酸化することで所望のオリゴヌクレオチドが取得できる。
【０００５】
こうして取得したオリゴヌクレオチドは塩基部、リン酸、５’−，３’−，２’−水酸基が全て保護されているため、脱保護することが必要である。この脱保護の際には、所定の保護基の脱保護条件で他の保護基の脱保護やオリゴ核酸の分解が起こらないことが必要とされる。とりわけ２’−水酸基の脱保護は、他の保護基を脱保護した後に実施するため、特に厳密な条件が必要とされる。２’−水酸基の保護基に求められる具体的な条件とは、５’−水酸基の脱保護条件下で安定であること、カップリング反応を阻害しないこと、カップリング反応条件下で安定であること、リン酸と塩基部の脱保護条件で安定であること、脱保護条件でオリゴ鎖の開裂とうによる分解が起こらないことが挙げられる（非特許文献１）。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】ＲＮＡｉ法とアンチセンス法、関根光雄、多比良和誠編、１０．
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明者らは、最近、リボヌクレオシドの２’−水酸基にカルバモイル基を導入した場合、高い位置選択性で、効率よく２'−水酸基に保護基が導入できることを見出している。
【０００８】
カルバモイル基は、脱トリチル化反応条件下、カップリング反応条件下、リン酸と塩基部の脱保護条件で分解等が起こらないため、オリゴ核酸合成に適した保護基である。しかし、オリゴ核酸の２’−水酸基に導入したカルバモイル基の効率的な脱保護方法はこれまで報告されていなかった。脱カルバモイル化反応の一般的な脱保護条件としては、金属水酸化物や金属アルコキシドを用いる方法が知られているが、例えば水酸化ナトリウムを用いた場合、リン原子を介したインターヌクレオチドでの分解や３’−から２’−水酸基へのリン酸基の転位を伴っていた。また、他の脱カルバモイル化反応としては水素化アルミニウムヒドリド等のヒドリドイオンを用いる方法も報告されているが、このような条件では、オリゴ核酸の分解が懸念される。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者らは、かかる問題を解決するために鋭意検討を行った結果、２’−水酸基にカルバモイル保護基を有するリボヌクレオシド誘導体および／又はこのリボヌクレオシド誘導体を構成単位として含むオリゴ核酸誘導体を、Ｒ4ＮＦと反応させることで効率よく脱保護が行えることを見出し、本発明を完成するに至った。
【００１０】
即ち、本発明は、一般式（１）：
【００１１】
【化１】
2010254616.tif 000002
【００１２】
［式中、Ｒ1は置換基を有していても良い炭素数１〜１８のアルキル基、置換基を有していても良い炭素数１〜１８のシクロアルキル基、置換基を有していても良い炭素数６〜１８のアリール基、置換基を有していても良い炭素数７〜１８のアラルキル基、置換基を有していても良いスルホニル基、又は置換基を有していても良いシリル基を表す。Ｒ2は水素、水酸基の保護基、又はオリゴ核酸を表す。Ｒ3はオリゴ核酸を表す。Ｘはヘテロ原子を表す。Ｙは水素、ヒドロキシル基、アルコキシ基、又はチオール基を表す。Ｂは、下記式：
【００１３】
【化２】
2010254616.tif 000003
【００１４】
（Ｒ4は、水素又はアミノ基の保護基を表す）で表されるアデニン、グアニン、シトシン、ウラシルまたはそれらから誘導される基を表す。ｍは１より大きい自然数を表す］で表される２’−水酸基を保護したリボヌクレオシド誘導体および／又はこのリボヌクレオシド誘導体を構成単位として含むオリゴ核酸誘導体を、一般式（２）：
Ｒ54ＮＦ
［式中、Ｒ5は置換基を有していても良い炭素数１〜１８のアルキル基、置換基を有していても良い炭素数１〜１８のシクロアルキル基、置換基を有していても良い炭素数６〜１８のアリール基、又は置換基を有していても良い炭素数７〜１８のアラルキル基を表す］と反応させることで２’−水酸基を脱保護し、一般式（３）：
【００１５】
【化３】
2010254616.tif 000004
【００１６】
［式中、Ｒ2、Ｒ3、Ｂ、Ｘ、Ｙ、ｍは前記と同じ。］で表されるリボヌクレオシド誘導体及び／又はこのリボヌクレオシドを構成単位として含むオリゴ核酸誘導体に変換する方法に関する。
【００１７】
なお、オリゴ核酸の２’−水酸基に導入した置換カルバモイル基の脱保護反応にフッ素化合物を用いることはこれまで報告されていなかった。
【発明の効果】
【００１８】
本発明にかかる方法によれば、２’−水酸基を置換カルバモイル保護したリボヌクレオシド誘導体および／又はこのリボヌクレオシド誘導体を構成単位として含むオリゴ核酸誘導体から簡便にリボヌクレオシド誘導体および／又はこのリボヌクレオシド誘導体を構成単位として含むオリゴ核酸誘導体を製造することができる。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
以下、本発明について詳細に説明する。
【００２０】
本発明においては、一般式（１）：
【００２１】
【化４】
2010254616.tif 000005
【００２２】
で表されるリボヌクレオシド誘導体および／又はこのリボヌクレオシド誘導体を構成単位として含むオリゴ核酸誘導体と、一般式（２）：
Ｒ54ＮＦ    （２）
と反応させ、一般式（３）：
【００２３】
【化５】
2010254616.tif 000006
【００２４】
で表されるリボヌクレオシド又はこのリボヌクレオシドを構成単位として含むオリゴ核酸誘導体に変換することができる。
【００２５】
まず、本反応に用いられる化合物について以下に説明する。
【００２６】
オリゴ核酸誘導体とは、オリゴＤＮＡ及びオリゴＲＮＡを表し、化学修飾を受けている物や天然型及び非天然型のいずれも含み、さらにオリゴ体構造のいずれかの場所にペプチドや糖やポリマーなどを含んでいても良い。
【００２７】
前記式（１）中、Ｒ1は置換基を有していても良い炭素数１〜１８のアルキル基、置換基を有していても良い炭素数１〜１８のシクロアルキル基、置換基を有していても良い炭素数６〜１８のアリール基、置換基を有していても良い炭素数７〜１８のアラルキル基、置換基を有していても良いスルホニル基、又は置換基を有していても良いシリル基を表す。
【００２８】
Ｒ1としては、具体的には、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、tert−ブチル、ペンチル、イソペンチル、ヘキシル、イソヘキシル、ヘプチル、イソヘプチル、オクチル、イソオクチル等のアルキル基；シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル等のシクロアルキル基；ベンジル、１−フェニルエチル、２−フェニルエチル、１−メチルナフチル、２−メチルナフチル、１−エチルナフチル、２−エチルナフチル等のアラルキル基；フェニル、１−ナフチル、２−ナフチル、１−アントリル、２−アントリル、９−アントリル、１−フェナントリル、９−フェナントリル、１０−フェナントリル等のアリール基；メタンスルホニル、エタンスルホニル、ベンゼンスルホニル、トルエンスルホニル等のスルホニル基；トリメチルシリル、トリエチルシリル、トリフェニルシリル、tert−ブチルジメチルシリル、tert−ブチルジフェニルシリル、ジメチルフェニルシリル、ジメチルベンジルシリル、ジフェニルメチルシリル等のシリル基などを挙げることができ、好ましくはアルキル基とアリール基であり、更に好ましくはアリール基であり、特に好ましくはフェニル基である。
【００２９】
これらは置換基を有していてもよく、置換基としては、例えば、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素原子等のハロゲン原子；メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、tert−ブチル、ペンチル、イソペンチル、ヘキシル、イソヘキシル、ヘプチル、イソヘプチル、オクチル、イソオクチル等のアルキル基；シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル等のシクロアルキル基；ベンジル、１−フェニルエチル、２−フェニルエチル、１−メチルナフチル、２−メチルナフチル、１−エチルナフチル、２−エチルナフチル等のアラルキル基；フェニル、１−ナフチル、２−ナフチル、１−アントリル、２−アントリル、９−アントリル、１−フェナントリル等のアリール基；メチルオキシ、エチルオキシ、プロピルオキシ、ｔ−ブチルオキシ、ペンチルオキシ、イソペンチオキシ、ヘキシルオキシ、ヘプチルオキシ、オクチルオキシ、シクロプロピルオキシ、シクロブチルオキシ、２−メチルシクロプロピルオキシ、シクロプロピルメチルオキシ、シクロペンチルオキシ、シクロヘキシルオキシ等のアルコキシ基；アミノ基；Ｎ−メチルアミノ、Ｎ−シクロへキシルアミノ、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ、Ｎ，Ｎ−ジエチルアミノ、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノ等のモノ又はジアルキルアミノ基；Ｎ−フェニルアミノ、Ｎ−ナフチルアミノ、Ｎ，Ｎ−ジフェニルアミノ、Ｎ−ナフチル−Ｎ−フェニルアミノ基等のモノ又はジアリールアミノ基；Ｎ−ベンジルアミノ、Ｎ，Ｎ−ジベンジルアミノ基等のモノ又はジアラルキル基；ニトロ基を挙げることができる。置換基は１または２以上であっても良く、置換基の位置は特に限定されるものではない。
【００３０】
Ｒ2は水素、水酸基の保護基、又はオリゴ核酸を表す。ここで、水酸基の保護基としては、一般的な水酸基の保護基、例えば４，４’−ジメトキシトリチル基、４−メトキシトリチル基等のトリチル基、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル基、ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル、トリイソプロピルシリル基等のシリル基等を挙げることができる。
【００３１】
Ｒ3はオリゴ核酸を表す。
【００３２】
Ｘはヘテロ原子を表し、具体的には酸素、硫黄、ホウ素が挙げられる。
【００３３】
Ｙは水素、水酸基、アルコキシ基、又はチオール基を表す。アルコキシ基としては、メトキシ基やシアノエチル基等を挙げることができる。
【００３４】
Ｂは、下記式：
【００３５】
【化６】
2010254616.tif 000007
【００３６】
（Ｒ4は、水素又はアミノ基の保護基を表す）で表される、アデニン、グアニン、シトシン、ウラシルまたはその誘導体を表す。
【００３７】
Ｂのうち、アデニン、グアニン、シトシンに含まれるアミノ基上のＲ4は、水素原子またはアミノ基の保護基を表す。アミノ基の保護基としては、一般的によく用いられるアミノ基の保護基が用いられ、具体的には、例えばアセチル、ベンゾイル、フェノキシアセチル等のアシル基；ベンジルやジメトキシトリチル等のアルキル基；ｔｅｒｔ−ブチルジカーボネートやベンジルカーバメート等のカルバメート基；フタルイミドなどの環状イミド基；トルエンスルホニル等のスルホ基；ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル等のシリル基；Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノメチルやＮ，Ｎ−ジブチルアミノメチル等のイミノ基等を挙げることができる。
【００３８】
ｍは１より大きい自然数を表す。
【００３９】
前記式（２）中、Ｒ5は置換基を有していても良い炭素数１〜１８のアルキル基、置換基を有していても良い炭素数１〜１８のシクロアルキル基、置換基を有していても良い炭素数６〜１８のアリール基、置換基を有していても良い炭素数７〜１８のアラルキル基を表す。
【００４０】
Ｒ5としては、具体的には、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、tert−ブチル、ペンチル、イソペンチル、ヘキシル、イソヘキシル、ヘプチル、イソヘプチル、オクチル、イソオクチル等のアルキル基；シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル等のシクロアルキル基；ベンジル、１−フェニルエチル、２−フェニルエチル、１−メチルナフチル、２−メチルナフチル、１−エチルナフチル、２−エチルナフチル等のアラルキル基；フェニル、１−ナフチル、２−ナフチル、１−アントリル、２−アントリル、９−アントリル、１−フェナントリル、９−フェナントリル、１０−フェナントリル等のアリール基などを挙げることができ、好ましくはアルキル基とアリール基であり、更に好ましくはアルキル基であり、特に好ましくはブチル基である。
【００４１】
これらは置換基を有していてもよく、置換基としては、Ｒ1の場合と同様のものを挙げることができる。置換基は１または２以上であっても良く、置換基の位置は特に限定されるものではない。
【００４２】
本反応においては、通常、反応溶媒を用いる。反応溶媒としては、反応を阻害しない溶媒であれば特に制限は無いが、例えば、アセトニトリル、プロピオニトリル等のニトリル系溶媒、tert−ブチルメチルエーテル、ジエチルエーテル、ジメチルエーテル、ジイソプロピルエーテル、テトラヒドロフラン、ジオキサン等のエーテル系溶媒、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド等のアミド系溶媒、ジメチルスルホキシド等のスルホキシド系溶媒、塩化メチレン、１，２−ジクロロエチレン、クロロホルム、四塩化炭素等のハロゲン化炭化水素系溶媒、メチルアルコール、エチルアルコール、イソプロパノール、フェノール等のアルコール系溶媒および水が挙げられ、好ましくはテトラヒドロフランである。これらは２種以上を混合しても良い。混合溶媒を用いる場合、混合割合に特に制限は無い。
【００４３】
次に反応について詳細に説明する。
【００４４】
本反応においては、前記式（１）で表されるオリゴリボヌクレオシド（オリゴリボヌクレオシド（１））とＲ54ＮＦを反応させる。
【００４５】
本発明に用いるＲ54ＮＦの量は、特に制限されるものではないが、通常、ｍ＝１の場合、オリゴリボヌクレオシド（１）に対して１〜３０００モル、好ましくは１〜１０００モル、特に好ましくは５〜５００モル使用すればよい。ｍ＝１以上の場合は、ｍの数に対応してＲ54ＮＦの量を増やしてもよい。
【００４６】
反応を行う際の各化合物の混合順は特に限定されるものではないが、一般的にはオリゴリボヌクレオシド（１）の溶液にＲ54ＮＦを添加すればよい。
【００４７】
反応を行う際の化合物の濃度は用いる反応溶媒によって異なるが、一般的には０．０１〜１００重量％で反応を実施することができ、好ましくは１〜５０重量％である。
【００４８】
反応時の反応温度は、用いる化合物、Ｒ54ＮＦの種類によって異なるが、通常は用いる反応溶媒の凝固点から沸点以下の範囲である。反応を短時間で完了させるためには温度を高めて実施するほうが良く、オリゴリボヌクレオシドの分解等の進行を抑制する観点からは温度は低く設定して実施するほうが良い。好ましくは、−７８℃〜１００℃であり、特に好ましくは−１０℃〜８０℃である。
【００４９】
反応時の反応時間は、用いる化合物、Ｒ54ＮＦの種類によって異なるが、反応温度を−３０℃〜８０℃で実施した場合、通常０．１〜２００時間程度が好ましい。
【００５０】
反応は、常圧、減圧、加圧のいずれの状態でも実施可能である。また、空気中で実施しても良いし、或いは窒素、ヘリウム、アルゴン等の不活性気体雰囲気下で実施しても良い。
【００５１】
反応は、反応速度を加速することを目的として、添加剤共存下で実施しても良い。添加剤としては、特に制限は無く、反応溶媒に可溶、不溶のいずれでも良い。添加剤としては、水酸化テトラブチルアンモニウム、モレキュラーシーブス、無機フッ素化合物、有機塩基を挙げることができる。
【００５２】
本反応の後処理としては、反応液から生成物を取得するための一般的な処理を行えば良い。得られた生成物は、一般的精製を行い、更に純度を高めても良い。
【実施例】
【００５３】
以下に実施例を挙げ、本発明を詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例によってなんら限定されるものではない。なお、各実施例における物性の測定に用いた装置は次のとおりである。
高速液体クロマトグラフィー：島津製作所社製  ＳＰＤ−１０Ａｖｐ、ＬＣ−１０ＡＤｖｐ、ＳＣＬ−１０Ａｖｐ、ＤＧＵ−１２Ａ、ＣＴＯ−１０ＡＳｖｐ、Ｃ−Ｒ８Ａ
【実施例１】
【００５４】
脱保護されたウリジル酸２量体の製造法
２’−Ｏ−フェニルカルバモイルウリジル酸２量体（３７．６ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ）をＴＢＡＦ（テトラブチルアンモニウムフルオリド）の１ＭＴＨＦ溶液（１．５ｍＬ、１．５ｍｍｏｌ）に加え、６６℃にて１６時間撹拌した。ＨＰＬＣにて確認すると、脱保護されたウリジル酸２量体が変換率９９％以上で生成していた。
［ＨＰＬＣ分析条件］
カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ、溶離液：アセトニトリル／１０ｍＭ酢酸アンモニウム水溶液＝０／１００→９０／１０（グラジエント）、流速：１．０ｍＬ／ｍｉｎ．、検出波長：２５４ｎｍ、カラム温度：４０℃、保持時間：２’−Ｏ−フェニルカルバモイルウリジル酸２量体＝２４分、脱保護されたウリジル酸２量体＝１２分。
【実施例２】
【００５５】
脱保護されたウリジル酸２量体の製造法
２’−Ｏ−フェニルカルバモイルウリジル酸２量体（３７．６ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ）をＴＢＡＦ（テトラブチルアンモニウムフルオリド）の１ＭＴＨＦ溶液（１．５ｍＬ、１．５ｍｍｏｌ）に加え、５０℃にて１６１時間撹拌した。ＨＰＬＣにて確認すると、脱保護されたウリジル酸２量体が変換率９９％で生成していた。
【実施例３】
【００５６】
脱保護されたウリジル酸２量体の製造法
２’−Ｏ−フェニルカルバモイルウリジル酸２量体（３７．６ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ）をＴＢＡＦ（テトラブチルアンモニウムフルオリド）の１ＭＴＨＦ溶液（１．５ｍＬ）に加えた後、水酸化テトラブチルアンモニウムのメタノール溶液（０．１５ｍＬ、０．１５ｍｍｏｌ）を加えた。５０℃にて９８時間撹拌した後、ＨＰＬＣにて確認すると、脱保護されたウリジル酸２量体が変換率９９％以上で生成していた。
【実施例４】
【００５７】
脱保護されたウリジル酸２量体の製造法
２’−Ｏ−フェニルカルバモイルウリジル酸２量体（３０．１ｍｇ、０．０４ｍｍｏｌ）をＴＢＡＦ（テトラブチルアンモニウムフルオリド）の１ＭＴＨＦ溶液（１．２ｍＬ、１．２ｍｍｏｌ）に加えた後、ＭＳ４Ａ（５．０ｍｇ）を加えた。６７℃にて２２時間撹拌した後、ＨＰＬＣにて確認すると、脱保護されたウリジル酸２量体が変換率９６％で生成していた。
【実施例５】
【００５８】
２’水酸基が脱保護された５’−Ｏ−ジメトキシトリチルウリジル酸２量体の製造法
５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−２’−Ｏ−フェニルカルバモイルウリジル酸２量体（４８．６ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ）をＴＢＡＦ（テトラブチルアンモニウムフルオリド）の１ＭＴＨＦ溶液（５．０ｍＬ、５ｍｍｏｌ）に加え、６６℃にて１５時間撹拌した。ＨＰＬＣにて確認すると、５’−Ｏ−ジメトキシトリチル保護されたウリジル酸２量体が変換率９９％以上で生成していた。
［ＨＰＬＣ分析条件］
カラム：μ−ＢＯＮＤＡＳＰＨＥＲＥ、溶離液：アセトニトリル／１０ｍＭ酢酸アンモニウム水溶液＝１０／９０→９０／１０（グラジエント）、流速：１．０ｍＬ／ｍｉｎ．、検出波長：２５４ｎｍ、カラム温度：４０℃、保持時間：５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−２’−Ｏ−フェニルカルバモイルウリジル酸２量体＝２６分、２’水酸基が脱保護された５’−Ｏ−ジメトキシトリチルウリジル酸２量体の製造法
＝２４分。
【実施例６】
【００５９】
２’水酸基が脱保護された５’−Ｏ−ジメトキシトリチルウリジル酸２量体の製造法
５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−２’−Ｏ−フェニルカルバモイルウリジル酸２量体（４８．６ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ）をＴＢＡＦ（テトラブチルアンモニウムフルオリド）の１ＭＴＨＦ溶液（５．０ｍＬ、５ｍｍｏｌ）に加え、５０℃にて９６時間撹拌した。ＨＰＬＣにて確認すると、５’−Ｏ−ジメトキシトリチル保護されたウリジル酸２量体が変換率９９％以上で生成していた。
【比較例】
【００６０】
２’−Ｏ−フェニルカルバモイルウリジル酸２量体（２３．０ｍｇ、０．０３３ｍｍｏｌ）を水酸化ナトリウムの１Ｍ水溶液（１．０ｍＬ、１．０ｍｍｏｌ）に加えた後、５０℃にて２．５時間撹拌した後、ＨＰＬＣにて確認すると、原料は０．１エリア％以下まで消費され、脱保護されたウリジル酸２量体が３エリア％、分解生成物であるウリジル酸が１６エリア％、５´−リン酸が２４エリア％、ウリジンが３９エリア％生成していた。