(57)【要約】【課題】  体外排出が迅速である新規化合物を提供すること。【解決手段】  下記の式（１）で示される化合物。【化１】2010195764.tif 000035（ただし、上記式中、ｎ＝２もしくは３である。ａ、ｂは、ａ＝１〜４、かつ、ｂ＝３、５〜１０、もしくは、ａ＝５、かつ、ｂ＝１〜１０の整数である。Ｒ１乃至Ｒ８は、水素原子もしくはスルホン酸塩であり、塩はナトリウム塩、カリウム塩、アンモニウム塩、トリエチルアンモニウム塩、ピリジニウム塩、リジン塩、アルギニン塩のいずれかである。Ｒ９乃至Ｒ１２は、置換もしくは非置換の炭素数１〜３のアルキル基である。）【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記の式（１）で示される化合物。
【化１】
2010195764.tif 000027
（ただし、上記式中、ｎ＝２もしくは３である。ａ、ｂは、ａ＝１〜４、かつ、ｂ＝３、５〜１０、もしくは、ａ＝５、かつ、ｂ＝１〜１０の整数である。Ｒ１乃至Ｒ８は、水素原子もしくはスルホン酸塩であり、塩はナトリウム塩、カリウム塩、アンモニウム塩、トリエチルアンモニウム塩、ピリジニウム塩、リジン塩、アルギニン塩のいずれかである。Ｒ９乃至Ｒ１２は、置換もしくは非置換の炭素数１〜３のアルキル基である。）
【請求項２】
下記の式（２）で示される化合物。
【化２】
2010195764.tif 000028
（ただし、上記式中、ｎ＝２もしくは３である。ａ、ｂは、ａ＝１〜４、かつ、ｂ＝３、５〜１０、もしくは、ａ＝５、かつ、ｂ＝１〜１０の整数である。Ｒ１３乃至Ｒ２４は、水素原子もしくはスルホン酸塩であり、塩はナトリウム塩、カリウム塩、アンモニウム塩、トリエチルアンモニウム塩、ピリジニウム塩、リジン塩、アルギニン塩のいずれかである。Ｒ２５乃至Ｒ２８は、置換もしくは非置換の炭素数１〜３のアルキル基である。）
【請求項３】
下記の式（３）で示されるプローブ。
【化３】
2010195764.tif 000029
（ただし、上記式中、ｎ＝２もしくは３である。ａ、ｂ＝１〜１０の整数である。Ｒ１乃至Ｒ８は、水素原子もしくはスルホン酸塩であり、塩はナトリウム塩、カリウム塩、アンモニウム塩、トリエチルアンモニウム塩、ピリジニウム塩、リジン塩、アルギニン塩のいずれかである。Ｒ９乃至Ｒ１２はそれぞれ置換もしくは非置換の炭素数１〜３のアルキル基である。また、Ａは被標識物質を表す）
【請求項４】
下記の式（４）で示されるプローブ。
【化４】
2010195764.tif 000030
（ただし、上記式中、ｎ＝２もしくは３である。ａ、ｂ＝１〜１０の整数である。Ｒ１３乃至Ｒ２４は、水素原子もしくはスルホン酸塩であり、塩はナトリウム塩、カリウム塩、アンモニウム塩、トリエチルアンモニウム塩、ピリジニウム塩、リジン塩、アルギニン塩のいずれかである。Ｒ２５乃至Ｒ２８は、置換もしくは非置換の炭素数１〜３のアルキル基である。また、Ａは被標識物質を表す）
【請求項５】
下記の式（５）で示される化合物。
【化５】
2010195764.tif 000031
（ただし、上記式中、Ｘはナトリウム塩、カリウム塩、アンモニウム塩、トリエチルアンモニウム塩、ピリジニウム塩、リジン塩、アルギニン塩のいずれかである。）
【請求項６】
下記の式（６）で示される化合物。
【化６】
2010195764.tif 000032
（ただし、上記式中、Ｘはナトリウム塩、カリウム塩、アンモニウム塩、トリエチルアンモニウム塩、ピリジニウム塩、リジン塩、アルギニン塩のいずれかである。）
【請求項７】
下記の式（７）で示される化合物。
【化７】
2010195764.tif 000033
（ただし、上記式中、Ｘはナトリウム塩、カリウム塩、アンモニウム塩、トリエチルアンモニウム塩、ピリジニウム塩、リジン塩、アルギニン塩のいずれかである。）
【請求項８】
下記の式（８）で示される化合物。
【化８】
2010195764.tif 000034
（ただし、上記式中、Ｘはナトリウム塩、カリウム塩、アンモニウム塩、トリエチルアンモニウム塩、ピリジニウム塩、リジン塩、アルギニン塩のいずれかである。）
【請求項９】
請求項１乃至８のいずれかの化合物もしくはプローブを用いた蛍光イメージング用造影剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は新規化合物、該新規化合物を用いたプローブ及び該新規化合物もしくは該プローブを用いた蛍光イメージング用造影剤に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
疾病を治療する場合、疾病の初期段階において生体で起こっている変化を認識することは極めて重要である。特に腫瘍の位置と大きさを画像診断によって視覚化することは、疾病の診断や治療を行う上で大いに役立つ情報である。このような目的を達成する方法として、蛍光イメージング、超音波イメージング、光音響イメージング、Ｘ線イメージング、ＭＲＩ（核磁気共鳴画像法）、ＣＴ撮影法（コンピュータ断層撮影法）、ＰＥＴ（陽電子放射断層撮影法）等が知られている。
【０００３】
これらのイメージング方法の中でも、蛍光イメージングは、生体組織中で比較的高い透過性をもつ近赤外光を生体に照射することで、予め生体内に投与しておいた造影剤を励起し、生体内の造影剤からの蛍光発光を検出することによって、腫瘍の位置と大きさの視覚化を実現することのできる手段である。蛍光イメージングで用いられる造影剤として、近赤外光を吸収し、近赤外領域の蛍光を発光する色素が使用されている。そのような色素の中で、近年、シアニン色素が精力的に研究開発されている（特許文献１）。
【０００４】
特許文献１において、標的部位に対する選択性を付与する為に、標的部位に選択的に結合する分子（捕捉分子）をペプチド結合を介してシアニン色素に固定化した化合物が開示されている。しかしながら、従来のシアニン色素では、体外排出が遅いといった問題があった。即ち、捕捉分子をペプチド結合で固定化したシアニン色素を生体内に投与した場合、生体内に存在する酵素によってペプチド結合が切断されることがある。ペプチド結合が切断されると、単独のシアニン色素が標的部位以外にも多く存在してしまい、標的部位の蛍光イメージングを行う際、この単独のシアニン色素からの蛍光発光がバックグラウンドとなり測定感度を悪化させる原因となる。したがって、生体内から生体外へ迅速に排出される色素（クリアランスの迅速な色素）の開発が望まれていた。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】ＷＯ２００２／０２６８９１
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明の目的は、このような背景技術に鑑みてなされたものであり、体外排出が迅速である新規化合物及び該新規化合物を用いたプローブ及び該新規化合物もしくは該プローブを用いた蛍光イメージング用造影剤を提供するものである。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
第一の本発明に係る化合物は、下記の式（１）で示される化合物である。
【０００８】
【化１】
2010195764.tif 000002
【０００９】
（ただし、上記式中、ｎ＝２もしくは３である。ａ、ｂは、ａ＝１〜４、かつ、ｂ＝３、５〜１０、もしくは、ａ＝５、かつ、ｂ＝１〜１０の整数である。Ｒ１乃至Ｒ８は、水素原子もしくはスルホン酸塩であり、塩はナトリウム塩、カリウム塩、アンモニウム塩、トリエチルアンモニウム塩、ピリジニウム塩、リジン塩、アルギニン塩のいずれかである。Ｒ９乃至Ｒ１２は、置換もしくは非置換の炭素数１〜３のアルキル基である。）
第ニの本発明に係る化合物は、下記の式（２）で示される化合物である。
【００１０】
【化２】
2010195764.tif 000003
【００１１】
（ただし、上記式中、ｎ＝２もしくは３である。ａ、ｂは、ａ＝１〜４、かつ、ｂ＝３、５〜１０、もしくは、ａ＝５、かつ、ｂ＝１〜１０の整数である。Ｒ１３乃至Ｒ２４は、水素原子もしくはスルホン酸塩であり、塩はナトリウム塩、カリウム塩、アンモニウム塩、トリエチルアンモニウム塩、ピリジニウム塩、リジン塩、アルギニン塩のいずれかである。Ｒ２５乃至Ｒ２８は、置換もしくは非置換の炭素数１〜３のアルキル基である。）
第三の本発明に係るプローブは、下記の式（３）で示されるプローブである。
【００１２】
【化３】
2010195764.tif 000004
【００１３】
（ただし、上記式中、ｎ＝２もしくは３である。ａ、ｂ＝１〜１０の整数である。Ｒ１乃至Ｒ８は、水素原子もしくはスルホン酸塩であり、塩はナトリウム塩、カリウム塩、アンモニウム塩、トリエチルアンモニウム塩、ピリジニウム塩、リジン塩、アルギニン塩のいずれかである。Ｒ９乃至Ｒ１２はそれぞれ置換もしくは非置換の炭素数１〜３のアルキル基である。また、Ａは被標識物質を表す）
第四の本発明に係るプローブは、下記の式（４）で示されるプローブである。
【００１４】
【化４】
2010195764.tif 000005
【００１５】
（ただし、上記式中、ｎ＝２もしくは３である。ａ、ｂ＝１〜１０の整数である。Ｒ１３乃至Ｒ２４は、水素原子もしくはスルホン酸塩であり、塩はナトリウム塩、カリウム塩、アンモニウム塩、トリエチルアンモニウム塩、ピリジニウム塩、リジン塩、アルギニン塩のいずれかである。Ｒ２５乃至Ｒ２８は、置換もしくは非置換の炭素数１〜３のアルキル基である。また、Ａは被標識物質を表す）
第五の本発明に係る化合物は、下記の式（５）で示される化合物である。
【００１６】
【化５】
2010195764.tif 000006
【００１７】
（ただし、上記式中、Ｘはナトリウム塩、カリウム塩、アンモニウム塩、トリエチルアンモニウム塩、ピリジニウム塩、リジン塩、アルギニン塩のいずれかである。）
第六の本発明に係る化合物は、下記の式（６）で示される化合物である。
【００１８】
【化６】
2010195764.tif 000007
【００１９】
（ただし、上記式中、Ｘはナトリウム塩、カリウム塩、アンモニウム塩、トリエチルアンモニウム塩、ピリジニウム塩、リジン塩、アルギニン塩のいずれかである。）
第七の本発明に係る化合物は、下記の式（７）で示される化合物である。
【００２０】
【化７】
2010195764.tif 000008
【００２１】
（ただし、上記式中、Ｘはナトリウム塩、カリウム塩、アンモニウム塩、トリエチルアンモニウム塩、ピリジニウム塩、リジン塩、アルギニン塩のいずれかである。）
第八の本発明に係る化合物は、下記の式（８）で示される化合物である。
【００２２】
【化８】
2010195764.tif 000009
【００２３】
（ただし、上記式中、Ｘはナトリウム塩、カリウム塩、アンモニウム塩、トリエチルアンモニウム塩、ピリジニウム塩、リジン塩、アルギニン塩のいずれかである。）
【発明の効果】
【００２４】
本発明によれば、従来技術に比べて体外排出が迅速である新規化合物を提供することができる。
また、本発明に係る新規化合物によれば、蛍光イメージング用標識剤として極めて有用である。
【図面の簡単な説明】
【００２５】
【図１】本発明の式（５）で示される化合物の吸収スペクトルと蛍光スペクトルを示す図である。
【図２】本発明の式（６）で示される化合物の吸収スペクトルと蛍光スペクトルを示す図である。
【図３】本発明の式（７）で示される化合物の吸収スペクトルと蛍光スペクトルを示す図である。
【図４】本発明の式（８）で示される化合物の吸収スペクトルと蛍光スペクトルを示す図である。
【図５】本発明の式（５）で示される化合物の体内動態評価に使用したマウスの画像である。
【図６】本発明の式（５）で示される化合物のマウス投与後における蛍光強度の経時変化を示す図である。（Ａ）マウス投与後７時間後までの経時変化を示す図である。（Ｂ）マウス投与後９６時間後までの経時変化を示す図である。
【図７】本発明の式（６）で示される化合物のマウス投与後における蛍光強度の経時変化を示す図である。
【図８】本発明の式（７）で示される化合物のマウス投与後における蛍光強度の経時変化を示す図である。
【図９】本発明の式（８）で示される化合物のマウス投与後における蛍光強度の経時変化を示す図である。
【図１０】本発明の式（５）で示される化合物の退色性を示す図である。
【図１１】本発明の式（８）で示される化合物の退色性を示す図である。
【図１２】本発明の式（５）で示される化合物の腫瘍移植モデルマウス投与後１時間における腫瘍の造影結果を示す画像である。
【図１３】本発明の式（５）で示される化合物のＳｕｉｔ２腫瘍移植モデルマウス投与後における投与後〜９６時間後における担癌部位での蛍光強度の経時変化を示す図である。
【図１４】本発明の式（５）で示される化合物のＮ８７腫瘍移植モデルマウス投与後における投与後〜７２時間後における担癌部位での蛍光強度の経時変化を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００２６】
以下、本発明に係る実施形態について詳細に説明する。
【００２７】
（クリアランス）
本発明に係る化合物は、生体内に投与してから生体外へ排出されるまでの時間が短く、生体内の残存量が少ない方が、生体への負荷が少なくて好ましい。また、該化合物が生体内から生体外へ迅速に排出されると、該化合物により蛍光イメージングを行った後に、別の造影剤や治療薬等を投与し検査、治療等を行うことが可能となるため、好ましい。
【００２８】
すなわち、該化合物を投与する前の生体の表面での蛍光強度に比べて投与後の蛍光強度がより低くなることが好ましく、蛍光強度が低くなるために要する時間がより少ないほうが好ましい。
【００２９】
具体的に、本発明に係る化合物として好ましくは、該化合物を生体に投与する前の生体の表面での蛍光強度を０．０８とし、該化合物を該生体に投与してから１５分後における該生体の表面での蛍光強度を１としたときに、該化合物を該生体に投与してから２４時間以内に、該生体の表面での蛍光強度が０．２以下に低下することが好ましい。
【００３０】
（蛍光極大波長）
本発明に係る化合物において、蛍光極大波長が６００ｎｍ以上の近赤外領域にあることが、生体透過性の観点から好ましく、より好ましくは６８０ｎｍ〜８５０ｎｍの範囲にある場合である。
【００３１】
（吸収極大波長）
本発明に係る化合物において、吸収極大波長が６００ｎｍ以上の近赤外領域にあることが、生体透過性の観点から好ましく、より好ましくは６８０ｎｍ〜８５０ｎｍの範囲にある場合である。
【００３２】
（モル吸光係数）
本発明に係る化合物において、モル吸光係数が１０００００以上であると、化合物がより多くの光を吸収し、その結果、蛍光発光の強度が大きくなるため好ましく、より好ましくは２０００００以上の場合である。
【００３３】
以下、本発明に係る実施形態の一例について詳細に説明する。
【００３４】
（実施形態１）
（構造式）
本発明に係る実施形態の一例は、下記の式（１）で示される。
【００３５】
【化７】
2010195764.tif 000010
【００３６】
ただし、上記式中、ｎ＝２もしくは３である。ａ、ｂは、ａ＝１〜４、かつ、ｂ＝３、５〜１０、もしくは、ａ＝５、かつ、ｂ＝１〜１０の整数である。Ｒ１乃至Ｒ８は水素原子もしくはスルホン酸塩であり、塩はナトリウム塩、カリウム塩、アンモニウム塩、トリエチルアンモニウム塩、ピリジニウム塩、リジン塩、アルギニン塩のいずれかであるが、医薬上許容される塩であれば、これらに限定されない。Ｒ９乃至Ｒ１２はそれぞれ置換もしくは非置換の炭素数１〜３のアルキル基である。アルキル基として、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基等を挙げることができる。また、置換基として、水酸基やスルホン酸塩等を挙げることができる。スルホン酸塩の塩は、ナトリウム塩、カリウム塩、アンモニウム塩、トリエチルアンモニウム塩、ピリジニウム塩、リジン塩、アルギニン塩のいずれかであるが、医薬上許容される塩であれば、これらに限定されない。
【００３７】
（クリアランス）
なお、上記式（１）で示される化合物においてより好ましくは、該化合物を生体に投与する前の生体の表面での蛍光強度を０．０８とし、該化合物を該生体に投与してから１５分後における該生体の表面での蛍光強度を１としたときに、該化合物を該生体に投与してから２４時間以内に、該生体の表面での蛍光強度が０．１以下に低下することがより好ましい。さらに好ましくは、該化合物を該生体に投与してから３時間で、該生体の表面での蛍光強度が０．１以下に低下する化合物である。
【００３８】
（合成スキーム）
上記式（１）で示される化合物は、例えば、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．１０５  （１９９３）の文献を参考にして合成することができる。以下に合成スキームを示す。
【００３９】
【化８】
2010195764.tif 000011
【００４０】
まず、インドール（Ｉ）にスルホアルキル基を導入してインドール誘導体（ＩＩ）を合成する。次に、メチン鎖を導入してインドール誘導体（ＩＩＩ）を合成する。ｎ＝２の場合、メチン鎖の導入にはマロンアルデヒドジアニル塩酸塩を、ｎ＝３の場合、メチン鎖の導入にはグルタコンアルデヒドジアニル塩酸塩を使用する。
【００４１】
次に、インドール（ＩＶ）にカルボキシアルキル基を導入してインドール誘導体（Ｖ）を合成し、次いで、インドール誘導体（ＩＩＩ）をカップリングさせて目的とする、式（１）で示される化合物を得ることができる。
【００４２】
上述の、クリアランス、蛍光極大波長、吸収極大波長、モル吸光係数についての好ましい範囲を満たすものとして以下の式（５）から式（７）で示される化合物を挙げることができる。
【００４３】
【化９】
2010195764.tif 000012
【００４４】
ただし、上記式中、Ｘはナトリウム塩、カリウム塩、アンモニウム塩、トリエチルアンモニウム塩、ピリジニウム塩、リジン塩、アルギニン塩のいずれかであるが、医薬上許容される塩であれば、これらに限定されない。
【００４５】
【化１０】
2010195764.tif 000013
【００４６】
ただし、上記式中、Ｘはナトリウム塩、カリウム塩、アンモニウム塩、トリエチルアンモニウム塩、ピリジニウム塩、リジン塩、アルギニン塩のいずれかであるが、医薬上許容される塩であれば、これらに限定されない。
【００４７】
【化１１】
2010195764.tif 000014
【００４８】
ただし、上記式中、Ｘはナトリウム塩、カリウム塩、アンモニウム塩、トリエチルアンモニウム塩、ピリジニウム塩、リジン塩、アルギニン塩のいずれかであるが、医薬上許容される塩であれば、これらに限定されない。
【００４９】
（実施形態２）
（構造式）
別の本発明に係る実施形態の一例は、下記の式（２）で示される。
【００５０】
【化１２】
2010195764.tif 000015
【００５１】
ただし、上記式中、ｎ＝２もしくは３である。ａ、ｂは、ａ＝１〜４、かつ、ｂ＝３、５〜１０、もしくは、ａ＝５、かつ、ｂ＝１〜１０の整数である。Ｒ１３乃至Ｒ２４は、水素原子もしくはスルホン酸塩であり、塩はナトリウム塩、カリウム塩、アンモニウム塩、トリエチルアンモニウム塩、ピリジニウム塩、リジン塩、アルギニン塩のいずれかであるが、医薬上許容される塩であれば、これらに限定されない。Ｒ２５乃至Ｒ２８は置換もしくは非置換の炭素数１〜３のアルキル基である。アルキル基として、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基等を挙げることができる。また、置換基として、水酸基やスルホン酸塩等を挙げることができる。スルホン酸塩の塩は、ナトリウム塩、カリウム塩、アンモニウム塩、トリエチルアンモニウム塩、ピリジニウム塩、リジン塩、アルギニン塩のいずれかであるが、医薬上許容される塩であれば、これらに限定されない。
【００５２】
（合成スキーム）
上記式（２）で示される化合物は、上記式（１）で示される化合物の合成方法と同様にして得ることができる。
【００５３】
上述の、クリアランス、蛍光極大波長、吸収極大波長、モル吸光係数についての好ましい範囲を満たすものとして、以下の式（７）で示される化合物を挙げることができる。
【００５４】
【化１３】
2010195764.tif 000016
【００５５】
ただし、上記式中、Ｘはナトリウム塩、カリウム塩、アンモニウム塩、トリエチルアンモニウム塩、ピリジニウム塩、リジン塩、アルギニン塩のいずれかであるが、医薬上許容される塩であれば、これらに限定されない。
【００５６】
（実施形態３）
（プローブ）
上記式（１）で示される化合物に、ペプチド結合を介して被標識物質（後述）を固定化したプローブは、下記の式（３）で示される。
【００５７】
【化１４】
2010195764.tif 000017
【００５８】
ただし、上記式中、ｎ＝２もしくは３である。ａ、ｂ＝１〜１０の整数である。Ｒ１乃至Ｒ８は、水素原子もしくはスルホン酸塩であり、塩はナトリウム塩、カリウム塩、アンモニウム塩、トリエチルアンモニウム塩、ピリジニウム塩、リジン塩、アルギニン塩のいずれかであるが、医薬上許容される塩であれば、これらに限定されない。Ｒ９乃至Ｒ１２は置換もしくは非置換の炭素数１〜３のアルキル基である。アルキル基として、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基等を挙げることができる。また、置換基として、水酸基やスルホン酸塩等を挙げることができる。スルホン酸塩の塩は、ナトリウム塩、カリウム塩、アンモニウム塩、トリエチルアンモニウム塩、ピリジニウム塩、リジン塩、アルギニン塩のいずれかであるが、医薬上許容される塩であれば、これらに限定されない。またＡは被標識物質を表す。
【００５９】
上記式（３）で示されるプローブは、標的部位に対する選択性を有するため、標的部位を特異的に検出することができる。
【００６０】
（実施形態４）
（プローブ）
上記式（２）で示される化合物に
ペプチド結合を介して、被標識物質を固定化したプローブは、下記の式（４）で示される。
【００６１】
【化１５】
2010195764.tif 000018
【００６２】
ただし、上記式中、ｎは２もしくは３である。ａ、ｂ＝１〜１０の整数である。Ｒ１３乃至Ｒ２４は、水素原子もしくはスルホン酸塩であり、塩はナトリウム塩、カリウム塩、アンモニウム塩、トリエチルアンモニウム塩、ピリジニウム塩、リジン塩、アルギニン塩のいずれかであるが、医薬上許容される塩であれば、これらに限定されない。
【００６３】
Ｒ２５乃至Ｒ２８は置換もしくは非置換の炭素数１〜３のアルキル基である。アルキル基として、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基等を挙げることができる。また、置換基として、水酸基やスルホン酸塩等を挙げることができる。スルホン酸塩の塩は、ナトリウム塩、カリウム塩、アンモニウム塩、トリエチルアンモニウム塩、ピリジニウム塩、リジン塩、アルギニン塩のいずれかであるが、医薬上許容される塩であれば、これらに限定されない。またＡは被標識物質を表す。
【００６４】
上記式（４）で示されるプローブは、標的部位に対する選択性を有するため、標的部位を特異的に検出することができる。
【００６５】
（被標識物質）
本発明において、被標識物質とは、腫瘍などの標的部位に特異的に結合する物質、標的部位の周辺に存在する物質に特異的に結合する物質など、生体分子や医薬品等の化学物質などから任意に選択される物質である。具体的には、抗体、抗体フラグメント、酵素、生物活性ペプチド、グリコペプチド、糖鎖、脂質、分子認識化合物などが挙げられる。本発明において、被標識物質は、式（１）、式（２）、式（５）、式（６）、式（７）、式（８）で示される化合物の有するカルボキシル基を介して化学的に結合し、プローブを構成する。このようなプローブを用いることで、標的部位の特異的な検出、標的物質の動態、局在、薬効、代謝等の追跡を行うことができる。
【００６６】
（被標識物質の固定化方法）
本発明において、式（１）、式（２）、式（５）、式（６）、式（７）、式（８）で示される化合物に被標識物質を固定化する場合、Ｎ−ヒドロキシスルホスクシンイミド（ＮＨＳ）や１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣ）等を使用して、化合物のカルボキシル基をスクシンイミド基に置換して活性エステル化する。このスクシンイミド基（活性エステル基）に被標識物質のアミノ基を反応させて、被標識物質を固定化することができる。
【００６７】
あるいは、式（１）、式（２）、式（５）、式（６）、式（７）、式（８）で示される化合物のカルボキシル基をスクシンイミド化した後、更にマレイミド化して、チオール基を有する被標識物質もしくはチオール基を修飾した被標識物質の有するチオール基を反応させて、被標識物質を固定化しても良く、また他の方法であっても構わない。
【００６８】
（蛍光イメージング用標識剤）
また、本発明に係る化合物及びプローブは６００ｎｍ以上の近赤外領域に蛍光極大波長及び吸収極大波長をもつため、生体透過性に優れた光を吸収し、生体透過性に優れた蛍光を発光することから、蛍光イメージング用の造影剤として好適である。
【００６９】
また、本発明に係る化合物及びプローブは光音響イメージングなどの光分子イメージング用造影剤として用いることもできる。
【００７０】
なお、上記蛍光イメージング用造影剤、光音響イメージング用の造影剤などの光分子イメージング用造影剤は、生理食塩水や注射用蒸留水等の溶媒中に溶解又は懸濁して使用することができる。また、必要に応じて薬理上許容できる添加物を適宜添加しても良い。これら造影剤は、注射、経皮、皮下、又は気管支内投与によって体内に導入することができる。
【００７１】
（造影方法）
本発明に係る化合物を用いた造影方法（本発明に係る造影方法）は、以下の工程を有する。ただし、本発明に係る造影方法は、以下に示す工程以外の工程を含んでいてもよい。
（１）本発明に係る化合物もしくはプローブを生体に投与する工程
（２）生体に光を照射し、生体内に存在する本発明に係る化合物もしくはプローブからの蛍光発光を検出する工程
【００７２】
（１）について
ここで本発明に係る化合物とは、上記の式（１）（２）（５）（６）（７）（８）で示される化合物である。係る化合物を用いた場合、腫瘍部位など血管が密に存在する部位はそれ以外の部位に比べて係る化合物が多く存在するため、腫瘍部位の位置の特定、大きさの測定等を行うことができる。
【００７３】
また、本発明に係るプローブとは、上記式（３）（４）で示される化合物である。係るプローブを用いた場合、上述のプローブの有する被標識物質を適宜選択することによって、種々の標的部位を特異的に検出することができる。例えば、被標識物質として腫瘍に特異的に結合する物質を採用すれば、腫瘍の特異的検出が可能となる。また被標識物質として、疾病周辺に多く存在するタンパク質、酵素などの生体物質に特異的に結合する物質を用いれば、疾病を特異的に検出することが可能である。
【００７４】
なお、ここで生体とは、ヒト、マウスなどの動物や、生体から取り出した細胞など広い意味での生体を指す。
【００７５】
（２）について
生体に照射する光としては、生体への高い生体透過性を示す６００ｎｍ以上の近赤外波長であることが好ましい。また、光を発生させる装置、蛍光を検出する装置は特に制限されず種々のものを用いることが可能である。
【００７６】
本発明に係る化合物を用いた造影方法は、上記（１）（２）の工程を経ることで腫瘍などの部位を造影することができるため、次のような利点を有する。
【００７７】
まず、腫瘍径を測定するために上記（１）（２）という工程を踏むだけで済むので、特別な装置を必要とせず、操作も簡便である。さらに、マウスの腫瘍径を測定する場合、従来、しこり部分（腫瘍部分）をノギスで測定するという手法がとられてきたが、それに比べて簡便かつ正確に測定することができ、さらに腫瘍径の測定値の測定者依存が少ない。
【００７８】
また、本発明に係る化合物は以下の実施例で示すように生体内から生体外への排出が迅速であるため、該化合物が長時間残存することによる生体への負荷が少ない。さらに、本発明に係る造影方法を用いた後に長い時間をおくことなく、すぐに、別の造影剤を投与することで別の検査や治療などを行うことも可能となる。別の造影剤とは、核磁気共鳴法による検出のための常磁性体、磁性粒子や核磁気共鳴活性核種、γカウンター検出のための１２３Ｉ、２０１Ｔｌ、６７Ｇａ、９９ｍＴｃ、１１１Ｉｎなどの放射性核種、１５Ｏ、１３Ｎ、１１Ｃ、１８Ｆなどの陽電子放出種などを有する化合物、プローブ等が挙げられる。また治療を行うための薬剤などを投与することで、腫瘍などの疾病部位の大きさに応じた治療薬の投与が出来る。これら別の造影剤を用いることで、ＮＭＲ（Ｎｕｃｌｅａｒ  Ｍａｇｎｅｔｉｃ  Ｒｅｓｏｎａｎｃｅ、核磁気共鳴）、ＭＲＩ（Ｍａｇｎｅｔｉｃ  Ｒｅｓｏｎａｎｃｅ  Ｉｍａｇｉｎｇ、核磁気共鳴法）、ＰＥＴ（ｐｏｓｉｔｒｏｎ  ｅｍｉｓｓｉｏｎ  ｔｏｍｏｇｒａｐｈｙ、ポジトロン断層法）などの別の検査を行うことができる。
【実施例】
【００７９】
以下、実施例を用いて更に詳細に本発明を説明するが、本発明は、これらの実施例に限定されるものではない。以下の説明において、ＮＭＲ分析はＡＶＡＮＣＥ５００（Ｂｒｕｋｅｒ社製）を使用した。ＭＳ分析はＱ−Ｔｏｆ  Ｕｌｔｉｍａ（Ｗａｔｅｒｓ社製）を使用した。また、蛍光イメージングには、ＩＶＩＳ  Ｉｍａｇｉｎｇ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ｃａｌｉｐｅｒ  ｌｉｆｅ  ｓｃｉｅｎｃｅ  ｉｎｃ．）を使用した。
【００８０】
（実施例１）
（式（５）の化合物の合成）
式（５）の化合物は、以下の合成スキームに従って合成した。
【００８１】
まず、トルエン（３０ｍｌ）中でインドールモノスルホン酸カリウム（Ｉ）（２．５ｇ、ＴＲＣ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ製）と１、３−プロパンスルトン（２．０ｇ、東京化成製）を１１０℃で２４時間反応させた。反応後、反応液を室温まで冷却し、次いでトルエンを除去した後、ジエチルエーテルで反応残渣を数回洗浄して化合物（ＩＩ）を得た。
【００８２】
次に、無水酢酸（１８ｍｌ）と酢酸（９ｍｌ）中で化合物（ＩＩ）（１．４ｇ）とグルタコンアルデヒドジアニル塩酸塩（１．０ｇ）を１２０℃で３時間反応させた。反応後、反応液を室温まで冷却した後、酢酸エチルにゆっくり滴下して結晶化させた。その後、酢酸エチルを除去して化合物（ＩＩＩ）を得た。
【００８３】
次に、トルエン（２０ｍｌ）中でインドールモノスルホン酸カリウム（Ｉ）（１．５ｇ）と６−ブロモヘキサン酸（１．３ｇ、東京化成製）を２４時間反応させた。反応後、反応液を室温まで冷却し、次いでトルエンを除去した後、ジエチルエーテルで反応残渣を数回洗浄して化合物（ＩＶ）を得た。
【００８４】
次に、無水酢酸（１８ｍｌ）とピリジン（９ｍｌ）中で化合物（ＩＩＩ）（１．８ｇ）と化合物（ＩＶ）（１．１ｇ）を１１０℃で２０分間反応させた。反応後、反応液を室温まで冷却した後、酢酸エチルにゆっくり滴下して結晶化させた。その後、酢酸エチルを除去し、ＴＬＣ  ＲＰ−Ｃ１８（メルク社製）で結晶物を分離精製（展開液：水／メタノール＝１／１）して、式（５）で示される化合物を得た。式（５）示される化合物の吸収スペクトルと蛍光スペクトルを図１に示した。
【００８５】
（合成スキーム）
【００８６】
【化１６】
2010195764.tif 000019
【００８７】
式（５）のデータ：
ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、重水）δ／ｐｐｍ  １．３３−１．３９（ｍ，２Ｈ），１．５８（ｓ，６Ｈ），１．５７（ｓ，６Ｈ），１．５４−１．６３（ｍ，２Ｈ），１．７３−１．７９（ｍ，２Ｈ），２．１５（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．０  Ｈｚ），２．９９（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．０  Ｈｚ），４．０３（ｔ，２Ｈ），４．１１（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．０  Ｈｚ），６．１４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１３．５  Ｈｚ），６．１９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１３．５  Ｈｚ），６．３４−６．４４（ｍ，２Ｈ），７．１９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．５  Ｈｚ），７．２８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．５  Ｈｚ），７．３３−７．４５（ｍ，１Ｈ），７．７３（ｓ，１Ｈ），７．７８（ｓ，１Ｈ），７．６７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．５  Ｈｚ），７．７５−７．８６（ｍ，２Ｈ），７．７２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．５  Ｈｚ）
ＭＳ（ＥＳＩ，ｐｏｓｉｔｉｖｅ  ｍｏｄｅ）７７７．２１７７８［Ｍ＋３Ｈ−２Ｋ］＋  Ｅｘａｃｔ  ＭＳ：７７７．２１８５５
吸収極大波長（Ｈ２Ｏ）＝７４７ｎｍ
蛍光極大波長（Ｈ２Ｏ）＝７６８ｎｍ
モル吸光係数（Ｈ２Ｏ）＝２４６０００
【００８８】
（実施例２）
（式（６）の合成）
式（６）の化合物は、以下の合成スキームに従って合成した。
トルエン（１５ｍｌ）中でインドールモノスルホン酸カリウム（Ｉ）（２．０ｇ）と１，４−ブタンスルトン（１．２ｇ、東京化成製）を１１０℃で２４時間反応させた。反応後、反応液を室温まで冷却し、次いでトルエンを除去した後、ジエチルエーテルで反応残渣を数回洗浄して化合物（Ｖ）を得た。
【００８９】
次に、無水酢酸（１６ｍｌ）と酢酸（８ｍｌ）中で化合物（Ｖ）（０．７ｇ）とグルタコンアルデヒドジアニル塩酸塩（０．５ｇ）を１２０℃で３時間反応させた。反応後、反応液を室温まで冷却した後、酢酸エチルにゆっくり滴下して結晶化させた。その後、酢酸エチルを除去して化合物（ＶＩ）を得た。
【００９０】
次に、無水酢酸（１４ｍｌ）とピリジン（７ｍｌ）中で化合物（ＶＩ）（０．５ｇ）と化合物（ＩＶ）（０．３ｇ）１１０℃で２０分間反応させた。反応後、反応液を室温まで冷却した後、酢酸エチルにゆっくり滴下して結晶化させた。その後、酢酸エチルを除去し、ＴＬＣ  ＲＰ−Ｃ１８（メルク社製）で結晶物を分離精製（展開液：水／メタノール＝１／１）して、式（６）の化合物を得た。式（６）の化合物の吸収スペクトルと蛍光スペクトルを図２に示した。
【００９１】
（合成スキーム）
【００９２】
【化１７】
2010195764.tif 000020
【００９３】
式（６）のデータ：
ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、重水）δ／ｐｐｍ  １．３７（ｑ，２Ｈ），１．５８（ｓ，６Ｈ），１．５９（ｓ，６Ｈ），１．６１（ｍ，２Ｈ），１．７５（ｔ，２Ｈ），１．８３−１．８９（ｍ，４Ｈ），２．３２（ｔ，２Ｈ），２．９２（ｔ，２Ｈ），４．００（ｔ，４Ｈ），６．１４（ｍ，２Ｈ），６．３９（ｂｒ，２Ｈ），７．２３（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），７．３９（ｔ，１Ｈ），７．７１（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），７．７６（ｓ，２Ｈ），７．７６−７．８９（ｍ，２Ｈ）
ＭＳ（ＥＳＩ，ｐｏｓｉｔｉｖｅ  ｍｏｄｅ）７９１．２３３３［Ｍ＋３Ｈ−２Ｋ］＋  Ｅｘａｃｔ  ＭＳ：７９１．２３４２０
吸収極大波長（Ｈ２Ｏ）＝７４８ｎｍ
蛍光極大波長（Ｈ２Ｏ）＝７７２ｎｍ
モル吸光係数（Ｈ２Ｏ）＝２４２０００
【００９４】
（実施例３）
（式（７）の合成）
式（７）の化合物は、以下の合成スキームに従って合成した。
酢酸（２６ｍｌ）中でインドールモノスルホン酸カリウム（Ｉ）（２．０ｇ）と２−クロロエタンスルホニルクロリド（１．６ｇ、東京化成製）を１２０℃で９時間反応させた。反応後、反応液を室温まで冷却し、次いで酢酸エチルに加えて結晶化させた後、酢酸エチルで結晶物を数回洗浄して化合物（ＶＩＩ）を得た。
【００９５】
次に、無水酢酸（１６ｍｌ）と酢酸（８ｍｌ）中で化合物（ＶＩＩ）（１．２ｇ）とグルタコンアルデヒドジアニル塩酸塩（０．９ｇ）を１２０℃で３時間反応させた。反応後、反応液を室温まで冷却した後、酢酸エチルにゆっくり滴下して結晶化させた。その後、酢酸エチルを除去して化合物（ＶＩＩＩ）を得た。
【００９６】
次に、無水酢酸（１４ｍｌ）とピリジン（７ｍｌ）中で化合物（ＶＩＩＩ）（０．６ｇ）と化合物（ＩＶ）（０．４ｇ）１１０℃で２０分間反応させた。反応後、反応液を室温まで冷却した後、酢酸エチルにゆっくり滴下して結晶化させた。その後、酢酸エチルを除去し、ＴＬＣ  ＲＰ−Ｃ１８（メルク社製）で結晶物を分離精製（展開液：水／メタノール＝１／１）して、式（７）の化合物を得た。式（７）の化合物の吸収スペクトルと蛍光スペクトルを図３に示した。
【００９７】
（合成スキーム）
【００９８】
【化１８】
2010195764.tif 000021
【００９９】
式（７）のデータ：
ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、重水）δ／ｐｐｍ  １．３８−１．４６（ｍ，２Ｈ），１．６０−１．６９（ｍ，２Ｈ），１．６４（ｓ，６Ｈ），１．６７（ｓ，６Ｈ），１．８０−１．８７（ｍ，２Ｈ），２．３２（ｔ，２Ｈ），３．３３（ｔ，２Ｈ），４．１３（ｂｒ，２Ｈ），４．３６（ｂｒ，２Ｈ）６．１５（ｄ，１Ｈ），６．３６（ｄ，１Ｈ），６．５４（ｑ，２Ｈ），７．２３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），７．４０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），７．４９（ｔ，Ｊ＝１２．５Ｈｚ，１Ｈ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），７．７５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），７．７８（ｓ，１Ｈ），７．８０（ｂｒ，１Ｈ），７．８２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），７．８７（ｓ，１Ｈ），７．９５（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝１３．０Ｈｚ）
ＭＳ（ＥＳＩ，ｐｏｓｉｔｉｖｅ  ｍｏｄｅ）７６３．２０２４４［Ｍ＋３Ｈ−２Ｋ］＋  Ｅｘａｃｔ  ＭＳ：７６３．２０２９０
吸収極大波長（Ｈ２Ｏ）＝７４５ｎｍ
蛍光極大波長（Ｈ２Ｏ）＝７７３ｎｍ
モル吸光係数（Ｈ２Ｏ）＝２０７０００
【０１００】
（実施例４）
（式（８）の合成）
式（８）の化合物は、以下の合成スキームに従って合成した。
【０１０１】
トルエン（１５ｍｌ）中でナフチルインドールジスルホン酸カリウム（ＶＩＩ）（１．５ｇ）と１，３−プロパンスルトン（０．６ｇ）を１１０℃で２４時間反応させた。反応後、反応液を室温まで冷却し、次いでトルエンを除去した後、ジエチルエーテルで反応残渣を数回洗浄して化合物（ＶＩＩＩ）を得た。
【０１０２】
次に、無水酢酸（１８ｍｌ）と酢酸（９ｍｌ）中で化合物（ＶＩＩＩ）（１．０ｇ）とグルタコンアルデヒドジアニル塩酸塩（０．５ｇ）を１２０℃で３時間反応させた。反応後、反応液を室温まで冷却した後、酢酸エチルにゆっくり滴下して結晶化させた。その後、酢酸エチルを除去して化合物（ＩＸ）を得た。
【０１０３】
次に、トルエン（１８ｍｌ）中でナフチルインドールモノスルホン酸カリウム（ＶＩＩ）（１．０ｇ）と６−ブロモヘキサン酸（１．２ｇ）を２４時間反応させた。反応後、反応液を室温まで冷却し、次いでトルエンを除去した後、ジエチルエーテルで反応残渣を数回洗浄して化合物（Ｘ）を得た。
【０１０４】
次に、無水酢酸（１４ｍｌ）とピリジン（７ｍｌ）中で化合物（ＩＸ）（０．５ｇ）と化合物（Ｘ）（０．４ｇ）１１０℃で２０分間反応させた。反応後、反応液を室温まで冷却した後、酢酸エチルにゆっくり滴下して結晶化させた。その後、酢酸エチルを除去し、ＴＬＣ  ＲＰ−Ｃ１８（メルク社製）で結晶物を分離精製（展開液：水／メタノール＝１／１）して、式（８）で示される化合物を得た。式（８）で示される化合物の吸収スペクトルと蛍光スペクトルを図４に示した。
【０１０５】
（合成スキーム）
【０１０６】
【化１９】
2010195764.tif 000022
【０１０７】
式（８）のデータ：
ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、重水）δ／ｐｐｍ  １．３７−１．４４（ｍ，２Ｈ），１．５９（ｔ，２Ｈ），１．８０−１．９０（ｍ，２Ｈ），１．９４（ｓ，１２Ｈ），２．２９（ｔ，２Ｈ），３．０３（ｔ，２Ｈ），４．１８（ｔ，２Ｈ），４．２５（ｔ，２Ｈ），６．２６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１１．０  Ｈｚ），６．３５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１４．０Ｈｚ），６．５１−６．６２（ｍ，２Ｈ），７．５０−７．６０（ｍ，１Ｈ），７．７４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝９．０  Ｈｚ），７．７９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．０  Ｈｚ），７．９８−８．０８（ｍ，２Ｈ），８．２７（ｓ，１Ｈ），８．３２（ｓ，１Ｈ），８．７３−８．８０（ｍ，４Ｈ）
ＭＳ（ＥＳＩ，ｐｏｓｉｔｉｖｅ  ｍｏｄｅ）１０３７．１６２８９［Ｍ＋５Ｈ−４Ｋ］＋  Ｅｘａｃｔ  ＭＳ：１０３７．１６３４８
吸収極大波長（Ｈ２Ｏ）＝７７６ｎｍ
蛍光極大波長（Ｈ２Ｏ）＝８０６ｎｍ
モル吸光係数（Ｈ２Ｏ）＝２５８０００
【０１０８】
（実施例５）
（体内動態評価１）
実施例１で合成した式（５）の化合物の体内動態に関して、マウスを用いて蛍光イメージングで評価した。比較例として、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ社から市販されているＡｌｅｘａ７５０とＡｌｅｘａ７９０の化合物を使用した。
【０１０９】
まず、各化合物のＰＢＳ溶液２００μＬ（濃度：５μＭ）をマウスの尾部に静脈注射し、１５分後、１時間後、３時間後、５時間後、７時間後、２４時間後、４８時間後、７２時間後、９６時間後におけるマウスの足部蛍光の経時変化をＩＶＩＳ（登録商標）  Ｉｍａｇｉｎｇ  Ｓｙｓｔｅｍで測定した（図５）。
【０１１０】
蛍光測定の際には、マウスに吸入麻酔を行った。なお、Ａｌｅｘａ７５０とＡｌｅｘａ７９０のＮＨＳ基は、グリシンで不活性化して評価した。蛍光強度の経時変化の結果を図６（Ａ）、（Ｂ）に示した。図６（Ａ）、（Ｂ）では、化合物を生体に投与する前の生体の表面での蛍光強度を０．０８とし（バックグラウンドでの蛍光発光、図中にＢｋｇ．で表す）、化合物を生体に投与してから１５分後における該生体の表面での蛍光強度を１としている。
【０１１１】
図６（Ａ）から、式（５）の化合物は、静脈注射後３時間で蛍光強度が投与前のレベル０．０８にまで低下し、比較対象のＡｌｅｘａ７５０とＡｌｅｘａ７９０に比べて迅速な体外排出の可能性が示唆された。
【０１１２】
（実施例６）
（体内動態評価２）
実施例２で合成した式（６）の化合物の体内動態に関して、実施例５と同様にして評価した。その結果を図７に示した。図７では、各色素をマウスに投与してから、１５分後、１時間後、３時間後、５時間後、７時間後、２４時間後、４８時間後、７２時間後におけるマウスの足部蛍光の経時変化を示した。図７では、化合物を生体に投与する前の生体の表面での蛍光強度を０．０５とし（バックグラウンドでの蛍光発光、図中にＢｋｇ．で表す）、化合物を生体に投与してから１５分後における該生体の表面での蛍光強度を１としている。
【０１１３】
図７から、式（６）の化合物は、静脈注射後３時間で蛍光強度が投与前のレベル０．０５まで低下し、対象のＡｌｅｘａ７５０とＡｌｅｘａ７９０に比べて迅速な体外排出の可能性が示唆された。
【０１１４】
（実施例７）
（体内動態評価３）
実施例３で合成した式（７）の化合物の体内動態に関して、実施例５と同様にして評価した。その結果を図８に示した。図８では、各色素をマウスに投与してから、１５分後、１時間後、３時間後、５時間後、７時間後、２４時間後、４８時間後、７２時間後におけるマウスの足部蛍光の経時変化を示した。図８では、化合物を生体に投与する前の生体の表面での蛍光強度を０．０５とし（バックグラウンドでの蛍光発光、図中にＢｋｇ．で表す）、化合物を生体に投与してから１５分後における該生体の表面での蛍光強度を１としている。
【０１１５】
図８から、式（７）の化合物は、静脈注射後３時間で蛍光強度が投与前のレベル０．０５まで低下し、対象のＡｌｅｘａ７５０とＡｌｅｘａ７９０に比べて迅速な体外排出の可能性が示唆された。
【０１１６】
（実施例８）
（体内動態評価４）
実施例４で合成した式（８）の化合物の体内動態に関して、実施例５と同様にして評価した。その結果を図９に示した。図９では、各色素をマウスに投与してから、１５分後、２４時間後、４８時間後、７２時間後におけるマウスの足部蛍光の経時変化を示した。図９では、化合物を生体に投与する前の生体の表面での蛍光強度を０．０８とし（バックグラウンドでの蛍光発光、図中にＢｋｇ．で表す）、化合物を生体に投与してから１５分後における該生体の表面での蛍光強度を１としている。
【０１１７】
図９から、式（８）の化合物は、静脈注射後２４時間以内に蛍光強度が０．１６まで低下し、対象のＡｌｅｘａ７５０とＡｌｅｘａ７９０に比べて迅速な体外排出の可能性が示唆された。
【０１１８】
（実施例９）
（退色評価１）
実施例５で使用した各色素をウシ胎児血清（ＦＢＳ）に溶解させた後、６８０ＬＵＸの室内灯を照射して各化合物の退色評価を行った。化合物の濃度は５μＭで評価した。退色評価の結果を表１と図１０に示した。また、図１０の縦軸のｌｏｇ（Ａｔ／Ａ０）におけるＡ０とＡｔは、それぞれ室内灯を照射してから０時間とｔ時間における吸収極大波長の吸光度の値を示す。表１の退色率は、２４時間後における吸収極大波長の吸光度の変化割合（Ａ０−Ａ２４）／Ａ０を示す。
【０１１９】
表１と図１０から、式（５）の化合物は、Ａｌｅｘａ７５０とＡｌｅｘａ７９０に近い退色傾向を示した。従って、実施例５の式（５）で示される化合物において、静脈注射後３時間以降の蛍光強度の大きな減少は光退色によるものではなく、迅速な体外排出によるものであることが示唆された。
【０１２０】
【表１】
2010195764.tif 000023
【０１２１】
（実施例１０）
（退色評価２）
実施例８で使用した各化合物をウシ胎児血清に溶解させた後、実施例９と同様にして各化合物の退色評価を行った。退色評価の結果を表２と図１１に示した。
【０１２２】
表２と図１１から、式（８）の化合物は、Ａｌｅｘａ７５０とＡｌｅｘａ７９０に近い退色傾向を示した。従って、実施例８の式（８）で示される化合物において、静脈注射後２４時間以降の蛍光強度の大きな減少は光退色によるものではなく、迅速な体外排出であることが示唆された。
【０１２３】
【表２】
2010195764.tif 000024
【０１２４】
（実施例１１）
（腫瘍造影評価１）
実施例１で得られた式（５）の化合物を、腫瘍移植モデルマウスに投与して腫瘍造影実験を行った。腫瘍移植モデルマウスは、ヒト胃癌細胞株（以下、Ｎ８７と略すことがある），ヒト膵臓癌細胞株（以下、Ｓｕｉｔ２と略すことがある）、ヒト卵巣癌細胞株（以下、ＳＫＯＶ３と略すことがある）をそれぞれ１×１０＾６個の細胞濃度でマウス皮下に移植し作製した。腫瘍移植モデルマウスに５μＭの濃度で式（５）で示される化合物を投与し、１時間後にＩＶＩＳ（登録商標）  Ｉｍａｇｉｎｇ  Ｓｙｓｔｅｍで蛍光イメージングを行ない、腫瘍造影を行った。評価結果を図１２に示した。
【０１２５】
図１２から、式（５）の化合物を投与してから１時間後において、各腫瘍移植部位（写真矢印）において特異的な蛍光シグナルが観察された。腫瘍のサイズはＮ８７、Ｓｕｉｔ２、ＳＫＯＶ３をそれぞれ移植した腫瘍移植モデルマウスにおいて蛍光イメージングの結果からそれぞれ６．８ｍｍ，３．３ｍｍ，３．５ｍｍと腫瘍径の計測が可能であった。以上から式（５）の化合物は腫瘍造影剤として有効であることが示唆された。
【０１２６】
（実施例１２）
（腫瘍造影評価２）
実施例１１と同様の方法でＳＫＯＶ３腫瘍細胞を移植した腫瘍移植モデルマウスに対して式（５）で示される化合物を５μＭの濃度で投与してＩＶＩＳ  Ｉｍａｇｉｎｇ  Ｓｙｓｔｅｍで蛍光イメージングを実施し、腫瘍造影による径の計測を行なった。さらにノギスを用いた腫瘍径計測、摘出腫瘍に対する腫瘍径計測をしてそれらの値の比較を行なった。腫瘍径計測の結果を表３に示した。
【０１２７】
表３の結果から、本発明に係る化合物を生体に投与して腫瘍造影を行うことで腫瘍径の計測をする方法（本発明手法）は、摘出した腫瘍を計測した値に近い値を示し、本発明手法の方がノギス計測に比べて有効な方法であることが示唆された。
【０１２８】
【表３】
2010195764.tif 000025
【０１２９】
（実施例１３）
（担癌部位での蛍光動態評価）
実施例１１と同様の方法でＳｕｉｔ２、Ｎ８７腫瘍細胞を移植した腫瘍移植モデルマウスに対して実施例１で得られた式（５）の化合物を投与して蛍光イメージングにより担癌部位での蛍光動態評価を行なった。比較例として、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ社から市販されているＡｌｅｘａ７５０とＡｌｅｘａ７９０の近赤外蛍光化合物を使用した。
【０１３０】
各近赤外蛍光化合物のＰＢＳ溶液２００μＬ（濃度：５μＭ）を腫瘍移植モデルマウスの尾部に静脈注射し、移植腫瘍部位の蛍光強度をＩＶＩＳ  Ｉｍａｇｉｎｇ  Ｓｙｓｔｅｍで経時的に測定した。投与１５分後における蛍光強度を１としたときの相対値の経時変化としてＳｕｉｔ２、Ｎ８７をそれぞれ移植したマウスに関してそれぞれプロットした。その結果を図１３、１４に示す。蛍光測定の際にはマウスに吸入麻酔を行なった。なお、Ａｌｅｘａ７５０とＡｌｅｘａ７９０のＮＨＳ基は、グリシンで不活性化して評価した。
【０１３１】
図１３、１４から、式（５）の化合物は、静脈注射後５時間後には腫瘍部の蛍光強度が投与前のレベルにまで低下し、比較として投与したＡｌｅｘａ７５０とＡｌｅｘａ７９０に比べて迅速な蛍光の低下を示した。また、腫瘍特異的な蛍光蓄積性は示さなかった。
【０１３２】
続いてＳｕｉｔ２、Ｎ８７を移植した各腫瘍部位での蛍光強度変化を投与前の蛍光強度を１とした相対値を表４に示した。表４から式（５）の化合物を投与した場合、色素投与後７時間後には相対値が１．５を下回っており、投与前の蛍光強度の５０％以内にまで低下していた。一方でＡｌｅｘａ７５０を投与した移植腫瘍モデルにおいては、投与後７時間後では体表面での蛍光がバックグラウンドレベルまで低下していなかった。
【０１３３】
以上から式（５）の化合物は腫瘍の造影剤として機能した後に迅速に腫瘍部から消失することが示唆され、比較対象であるＡｌｅｘａ７５０とＡｌｅｘａ７９０に比べて迅速な体外排出の可能性が示唆された。
【０１３４】
【表４】
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【産業上の利用可能性】
【０１３５】
本発明により、体外排出が迅速である化合物を提供することができる。また、本発明は、イメージング標的部位に対する選択性を付与する為に、被標識物質を固定化した化合物を提供することができる。また、本発明の被標識物質を固定化した化合物を用いて、光分子イメージング用標識剤として利用することができる。
【０１３６】
また本発明により、造影剤を投与して一定時間が経過した後に造影剤、治療薬など種々の薬剤を投与することが可能となり、腫瘍径の経時的な追跡や薬剤の効果判定または検査等を可能にする方法が提供される。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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