(57)【要約】【課題】安全性が良好で、高い抗酸化作用を示す抗酸化剤及び抗酸化用皮膚外用剤の提供。【解決手段】地衣類グラフィス  アワエンシス（Graphis awaensis；和名アカギレモジゴケ）、及び地衣類ウスネア  ロセオラ（Usnea roseola）からなる地衣類の群から選択される１種又は２種以上の培養物及び／又はその抽出物を有効成分とする抗酸化剤、ならびに抗酸化用皮膚外用剤である。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
地衣類グラフィス  アワエンシス（Graphis awaensis；和名アカギレモジゴケ）、及び地衣類ウスネア  ロセオラ（Usnea roseola）からなる地衣類の群から選択される１種又は２種以上の培養物及び／又はその抽出物を有効成分とする抗酸化剤。
【請求項２】
地衣類グラフィス  アワエンシス（Graphis awaensis；和名アカギレモジゴケ）、及び地衣類ウスネア  ロセオラ（Usnea roseola）からなる地衣類の群から選択される１種又は２種以上の培養物及び／又はその抽出物を有効成分とするラジカル消去剤。
【請求項３】
地衣類グラフィス  アワエンシス（Graphis awaensis；和名アカギレモジゴケ）、及び地衣類ウスネア  ロセオラ（Usnea roseola）からなる地衣類の群から選択される１種又は２種以上の培養物及び／又はその抽出物を有効成分とする抗酸化用皮膚外用剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、地衣類の培養物からの抽出物を有効成分とする抗酸化剤、ラジカル消去剤、及び抗酸化用皮膚外用剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
従来、化粧料等の皮膚外用剤の有効成分として、安全性の観点から、種々の天然物由来の成分が利用されている。例えば、地衣類の抽出物又は地衣類の培養物からの抽出物を、化粧料等の皮膚外用剤の有効成分として利用することが提案されている（例えば、特許文献１及び２）。一方、市場においては、より高い性能を示す化粧料等の皮膚外用剤の提供が期待されている。
【特許文献１】特開４−２８２３２０号公報
【特許文献２】特開４−２８２３２１号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
本発明は、安全性が良好であるとともに、高い抗酸化作用を示す抗酸化剤及び抗酸化用皮膚外用剤、ならびに高いラジカル消去作用を示すラジカル消去剤を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
本発明は前記課題を解決するため、地衣類グラフィス  アワエンシス（Graphis awaensis；和名アカギレモジゴケ）、及び地衣類ウスネア  ロセオラ（Usnea roseola）からなる地衣類の群から選択される１種又は２種以上の培養物及び／又はその抽出物を有効成分とする抗酸化剤、ラジカル消去剤、ならびに抗酸化用皮膚外用剤；を提供する。
これらの地衣類の培養物からの抽出物には、ラジカル消去能による高い抗酸化作用があるので、皮膚外用剤の有効成分として有用である。
なお、本明細書において、「地衣類の培養物」は、培養後の地衣菌と培養後の培地の双方を示すものとする。具体的には培養後の地衣菌及び培地のいずれか一方、又は地衣菌及び培地の混合物を示すものとする。
一方、「地衣類の培養物からの抽出物」とは上記「地衣類の培養物」から溶媒を用いて抽出して得られる物を示すものとする。具体的には、培養後の地衣菌からの抽出物、培養後の培地からの抽出物、培養後の地衣菌と培地の混合物からの抽出物のいずれも示すものとする。
【発明の効果】
【０００５】
本発明によれば、安全性が良好であるとともに、高い抗酸化作用を示す抗酸化剤及び皮膚外用剤を提供することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００６】
以下、本発明について詳細に説明する。なお、本明細書において、「〜」はその前後の数値を含む範囲を意味するものとする。
本発明は、所定の地衣類の培養物及び／又はその抽出物を有効成分とする抗酸化剤に関する。地衣類は、菌類と藻類が共生関係を結んでできた複合体である。一般的には、蘚苔（センタイ）類（コケ植物）などとともに「こけ」と認識されていることが多いが、蘚苔類とは区別されるものである。分類学（国際植物命名規約）上は、その複合体を構成する菌類（共生菌）のことを地衣類とみなし、学名が付与されている。和名が存在しないものもあるため、本発明では、学名をもって使用する地衣類を特定し、和名が存在するものについてはそれを付記している。
なお、地衣類の学名は、従前は、地衣類の体全体、つまり菌と藻の複合体に付けられていたこともあり、本発明で用いる地衣類には、他の学名が存在する場合もあるが、他の学名で呼称されていても、当該地衣類の培養物及び／又はその抽出物を抗酸化剤として利用している限り、本発明の抗酸化剤の範囲に含まれることは勿論である。
【０００７】
本発明の抗酸化剤は、地衣類グラフィス  アワエンシス（Graphis awaensis；和名アカギレモジゴケ）、及び地衣類ウスネア  ロセオラ（Usnea roseola）からなる地衣類の群から選択される１種又は２種以上の培養物及び／又はその抽出物を有効成分とする。上記した通り、地衣類は、藻類と菌類との複合体であるが、双方が融合しているわけではないので、それぞれ独立に培養することも不可能ではない。従って、本発明で用いる前記地衣類の培養物は、地衣菌細胞の培養物であってもよいし、また地衣菌細胞及び藻細胞の共培養物であってもよい。培養は、地衣類の培養に関する「地衣体を用いた地衣類の培養（地衣組織培養）山本好和  ２００２．Lichenology１：５７−６５等に記載の培養方法を参考にして行うことができる。
【０００８】
培養方法の好ましい例は、以下の通りである。
液体培地（Glucose Peptone Broth）１００ｍＬに対し、地衣菌１ｇを用意する。培地としては、高圧蒸気滅菌し、室温まで冷却したものを用意し、地衣菌は乳鉢などで粉砕したものを培養に用いる。培養条件の一例は、培養温度：２０℃、培養期間：４週間、光条件：暗所、及び振とう速度：１００ｒｐｍである。
【０００９】
本発明では、前記地衣類の培養物をそのまま用いてもよいし、その抽出物を用いてもよい。また双方の混合物を用いることもできる。該抽出物は、一般的な方法で調製することができる。例えば、前記地衣類の菌細胞等を培養した培地を、溶媒に浸漬することにより調製することができる。抽出溶媒としては特に限定されないが、例えば、水；メチルアルコール、エチルアルコール等の低級一価アルコール；グリセリン、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール等の液状多価アルコール；アセトン等のケトン類；エチルエーテル等のエーテル類；酢酸エチル等のエステル類；ヘキサン等の一種又は二種以上を用いることができる。抽出は、前記培養物を室温又は加温下で溶媒中に所定の時間浸漬することによって実施できる。また、抽出前に、得られた培養物を凍結乾燥等により乾燥処理してもよいし、当該乾燥物を粉砕等する前処理を行ってもよい。
【００１０】
前記抽出物の好ましい調製方法の例は、以下の通りである。
前記所定の地衣類の培養後の培地に、酢酸エチルを加え、２４〜２７℃程度で激しく振とうし、酢酸エチルへの着色が減退するまで抽出処理を行う。その後、酢酸エチルを留去し、抽出物を得ることができる。
【００１１】
前記培養物及びその抽出物は、液状、ペースト状、ゲル状等いずれの形態であってもよい。例えば、抽出溶媒を含む液状の抽出物や培養後の液体培地等を、減圧乾燥、又は凍結乾燥などにより乾固させて固体状とした後に用いることもできる。また、スプレードライ等により乾燥させて粉末として用いることもできる。
【００１２】
本発明は、前記所定の地衣類から選択される１種又は２種以上の培養物及び／又はその抽出物を有効成分として含有する抗酸化用皮膚外用剤にも関する。前記所定の地衣類の培養物及びその抽出物は、いずれも高いラジカル消去能を示す。特に、グラフィス  アワエンシス（Graphis awaensis；和名アカギレモジゴケ）の培養物及びその抽出物は、高いラジカル消去能を示す。スーパーオキサイド等のラジカルは、紫外線又は化学物質等の刺激によって皮膚組織内に生じ、その結果、酸化が進行して、しわなどが生じる原因となることが知られている。本発明の抗酸化剤を含有する皮膚外用剤は、該抗酸化剤によってもたらされる高いラジカル消去能により、皮膚組織内に生じるスーパーオキサイド等を消去し、皮膚に対して優れた抗酸化作用を示す、抗酸化用皮膚外用剤として有用である。但し、本発明の皮膚外用剤は、抗酸化用に限定されるものではなく、美肌用、及び老化防止用の皮膚外用剤としても有用である。前記所定の地衣類の培養物及びその抽出物の皮膚外用剤における含有量（双方の混合物である態様では、その総含有量）は、乾燥固形分に換算して、好ましくは０．００００１〜０.０５質量％（以下単に「％」で示す）であり、より好ましくは０．０００１〜０．０１％である。この範囲内であれば、前記成分を安定に配合することができ、かつ高い抗酸化効果を発揮することができる。
【００１３】
本発明の皮膚外用剤は、本発明の効果を損なわない範囲で他の有効成分、例えば、美白効果、老化防止効果、又は紫外線暴露によるシワ形成抑効果等を奏する他の有効成分、を含有していてもよい。より具体的には、美白剤、紫外線防御剤、抗菌剤、抗炎症剤、細胞賦活剤、活性酸素除去剤、保湿剤などを挙げることができるが、これらに限定されることはない。
【００１４】
使用可能な美白剤の例には、アスコルビン酸又はその誘導体、アルブチン、リノール酸、ビタミンＥ及びその誘導体、グリチルリチン酸及びその誘導体、トラネキサム酸、胎盤抽出物、カミツレ抽出物、カンゾウ抽出物、エイジツ抽出物、オウゴン抽出物、海藻抽出物、クジン抽出物、ケイケットウ抽出物、ゴカヒ抽出物、コメヌカ抽出物、小麦胚芽抽出物、サイシン抽出物、サンザシ抽出物、サンペンズ抽出物、シラユリ抽出物、シャクヤク抽出物、センプクカ抽出物、大豆抽出物、茶抽出物、糖蜜抽出物、ビャクレン抽出物、ブドウ抽出物、ホップ抽出物、マイカイカ抽出物、モッカ抽出物、ユキノシタ抽出物等が含まれる。
【００１５】
紫外線防御剤としては、例えば、パラメトキシケイ皮酸−２−エチルヘキシル、２−ヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノン、２−ヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノン−５−硫酸ナトリウム、４−ｔ−ブチル−４’−メトキシジベンゾイルメタン、２−フェニル−ベンズイミダゾール−５−硫酸、酸化チタン、酸化亜鉛等が挙げられる。
【００１６】
抗菌剤としては、例えば、安息香酸、安息香酸ナトリウム、パラオキシ安息香酸エステル、塩化ベンザルコニウム、フェノキシエタノール、イソプロピルメチルフェノール等が挙げられる。
【００１７】
抗炎症剤は日焼け後の皮膚のほてりや紅斑等の炎症を抑制する作用を有しており、例えば、イオウ及びその誘導体、グリチルリチン酸及びその誘導体、グリチルレチン酸及びその誘導体、アルテア抽出物、アシタバ抽出物、アルニカ抽出物、インチンコウ抽出物、イラクサ抽出物、オウバク抽出物、オトギリソウ抽出物、カミツレ抽出物、キンギンカ抽出物、クレソン抽出物、コンフリー抽出物、サルビア抽出物、シコン抽出物、シソ抽出物、シラカバ抽出物、ゲンチアナ抽出物等が挙げられる。
【００１８】
細胞賦活剤は肌荒れの改善等の目的で用いられ、例えば、カフェイン、鶏冠抽出物、貝殻抽出物、貝肉抽出物、ローヤルゼリー、シルクプロテイン及びその分解物又はそれらの誘導体、ラクトフェリン又はその分解物、コンドロイチン硫酸、ヒアルロン酸等のムコ多糖類またはそれらの塩、コラーゲン、酵母抽出物、乳酸菌抽出物、ビフィズス菌抽出物、醗酵代謝抽出物、イチョウ抽出物、オオムギ抽出物、センブリ抽出物、タイソウ抽出物、ニンジン抽出物、ローズマリー抽出物、グリコール酸、クエン酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、コハク酸等が挙げられる。
【００１９】
活性酸素除去剤は、過酸化脂質生成抑制等の作用を有しており、例えば、スーパーオキサイドディスムターゼ、マンニトール、クエルセチン、カテキン及びその誘導体、ルチン及びその誘導体、ボタンピ抽出物、ヤシャジツ抽出物、メリッサ抽出物、羅漢果抽出物、レチノール及びその誘導体、カロチノイド等のビタミンＡ類、チアミンおよびその誘導体、リボフラビンおよびその誘導体、ピリドキシンおよびその誘導体、ニコチン酸およびその誘導体等のビタミンＢ類、トコフェロール及びその誘導体等のビタミンＥ類、ジブチルヒドロキシトルエン及びブチルヒドロキシアニソール等が挙げられる。
【００２０】
保湿剤としては、例えば、エラスチン、ケラチン等のタンパク質またはそれらの誘導体、加水分解物並びにそれらの塩、グリシン、セリン、アスパラギン酸、グルタミン酸、アルギニン、テアニン等のアミノ酸及びそれらの誘導体、ソルビトール、エリスリトール、トレハロース、イノシトール、グルコース、蔗糖およびその誘導体、デキストリン及びその誘導体、ハチミツ等の糖類、Ｄ−パンテノール及びその誘導体、尿素、リン脂質、セラミド、オウレン抽出物、ショウブ抽出物、ジオウ抽出物、センキュウ抽出物、ゼニアオイ抽出物、タチジャコウソウ抽出物、ドクダミ抽出物、ハマメリス抽出物、ボダイジュ抽出物、マロニエ抽出物、マルメロ抽出物等が挙げられる。
【００２１】
また、本発明の皮膚外用剤には、本発明の抗酸化剤以外の任意の成分を配合することができる。そのような成分としては、例えば、アミノ酸、脂質、糖、ホルモン、酵素、核酸などの生理活性物質等を挙げることができるが、これらに限定されることはない。また、本発明の効果を損なわない範囲で、化粧料や医薬部外品、皮膚外用剤等の製造に通常使用される成分、例えば、水（精製水、温泉水、深層水等）、油剤、界面活性剤、金属セッケン、ゲル化剤、粉体、アルコール類、水溶性高分子、皮膜形成剤、樹脂、包接化合物、抗菌剤、香料、消臭剤、塩類、ｐＨ調整剤、清涼剤、植物・動物・微生物由来の抽出物、活性酸素除去剤、血行促進剤、収斂剤、抗脂漏剤、保湿剤、キレート剤、角質溶解剤、酵素、ホルモン類、他のビタミン類等を必要に応じて用いることができる。
【００２２】
本発明の皮膚外用剤は、化粧品のみならず、医薬部外品の態様も包含するものである。本発明の皮膚外用剤は、パウダー、パウダーファンデーション等の粉体；石けん、リップスティック等の固体；クリーム、乳液、クリームファンデーション等の乳化物；化粧水、美容液等の液体；など、種々の形態の化粧料組成物であるのが好ましい。但し、これらに限定されるものではない。
【実施例】
【００２３】
以下に実施例を挙げて本発明を更に具体的に説明するが、本発明の範囲は下記の実施例に限定されることはない。
［例１：グラフィス  アワエンシス（Graphis awaensis；和名アカギレモジゴケ）の培養物からの抽出物（抽出物１）の調製］
グラフィス  アワエンシス（Graphis awaensis）を、以下の通り培養した。
液体培地（Glucose Peptone Broth）１００ｍＬに対し、地衣菌１ｇを用意した。培地は高圧蒸気滅菌し、室温まで冷却したものを用意し、地衣菌は乳鉢などで粉砕したものを培養に用いた。培養条件は、培養温度：２０℃、培養期間：４週間、光条件：暗所、及び振とう速度：１００ｒｐｍとした。
次に、培養後の培地に、酢酸エチルを加え、２４〜２７℃で激しく振とうし、酢酸エチルへの着色が減退するまで抽出処理を行った。その後、酢酸エチルを留去し、抽出物を  ２４ｍｇ得た。これを抽出物１として、以下の試験等に用いた。
【００２４】
［例２：ウスネア  ロセオラ（Usnea roseola）の培養物からの抽出物（抽出物２）の調製］
ウスネア  ロセオラ（Usnea roseola）を、以下の通り培養した。
液体培地（Glucose Peptone Broth）１００ｍＬに対し、地衣菌１ｇを用意した。培地は高圧蒸気滅菌し、室温まで冷却したものを用意し、地衣菌は乳鉢などで粉砕したものを培養に用いた。培養条件は、培養温度：２０度、培養期間：４週間、光条件：暗所、及び振とう速度：１００ｒｐｍとした。
次に、培養後の培地に、酢酸エチルを加え、２４〜２７℃で激しく振とうし、酢酸エチルへの着色が減退するまで抽出処理を行った。その後、酢酸エチルを留去し、抽出物を２０ｍｇ得た。これを抽出物２として、以下の試験等に用いた。
【００２５】
［比較用抽出物の調製］
地衣類アルソニア  シンナバリナ（Arthonia cinnabarina）についても、例１及び２と同様にして、培養を行い、培地を酢酸エチルに浸漬して、例１及び２と同様にして、抽出物を調製した。これを比較例用抽出物３として、以下の試験に用いた。
【００２６】
［例３：抗酸化試験］
上記で調製した抽出物１〜２及び比較例用抽出物３をそれぞれ、９９．５％エタノールに溶解して、試料液１〜２及び比較例用試料液３をそれぞれ調製し、これらを以下の試験に用いた。
安定なラジカルである、1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl（ＤＰＰＨ）の５１７ｎｍにおける極大吸収が、各試料液を添加した時に減少する割合により抗酸化能を評価した。具体的には、ＤＰＰＨ溶液１００μＬに、各試料液を最終濃度が６７μｇ／ｍLになるように、４５μＬ加えて１５分間室温に放置した。その後、波長５１７ｎｍの吸光度（Ａ）を測定した。試料無添加のＤＰＰＨ溶液についても、同波長の吸光度（Ｂ）を測定した。この吸光度の測定値Ａ及びＢを以下の式１に代入し、ラジカル消去率を求めた。
ラジカル消去率（％）＝（Ｂ−Ａ）／Ｂ×１００    （式１）
なお、ラジカル消去率は、０〜１００％の値で表されるが、値が高いほうが抗酸化能が高いことを意味する。
結果を以下の表に示す。
【００２７】
【表１】
2010150174.tif 000002
【００２８】
上記表に示した結果から、地衣類グラフィス  アワエンシス（Graphis awaensis）及び地衣類ウスネア  ロセオラ（Usnea roseola）の培養物からの抽出物はいずれも、高いラジカル消去能を示し、その効果は、比較例用抽出物３と比較して、格段に優れていることが理解できる。
なお、比較用抽出物３の地衣類アルソニア  シンナバリナ（Arthonia cinnabarina）は、本発明で利用する地衣類と種類の異なる地衣類であり、非特許文献１の試験に試料として用いられている地衣類である。
【００２９】
［例４：化粧水］
（製法）
Ａ．下記成分（１）〜（８）を混合溶解する。
Ｂ．下記成分（９）〜（１４）を混合溶解する。
Ｃ．ＢにＡを加え混合し、化粧水を得る。
【００３０】
（成分）                                                    （質量％）
（１）メドウホーム油                                          ０．１
（２）ホホバ油                                                ０．０５
（３）香料                                                    適量
（４）防腐剤                                                  適量
（５）モノオレイン酸ポリオキシエチレン（２０Ｅ．Ｏ．）
ソルビタン                                              ０．５
（６）イソステアリン酸ポリオキシエチレン硬化
ヒマシ油（５０Ｅ．Ｏ．）                                １．０
（７）エタノール                                              ８．０
（８）酢酸トコフェロール                                      ０．０５
（９）グリチルリチン酸ジカリウム                              ０．１
（１０）グリセリン                                            ５．０
（１１）１，３−ブチレングリコール                            ５．０
（１２）ポリエチレングリコール１５００                        ０．１
（１３）グラフィス  アワエンシス培養抽出物（＊１）            ０．００１
（１４）精製水                                                残量
（＊１）例1により調製されたもの
【００３１】
［例５：化粧水］
（製法）
Ａ．下記成分（１）〜（５）を混合溶解する。
Ｂ．下記成分（６）〜（１３）を混合溶解する。
Ｃ．ＡにＢを加え混合し、化粧水を得た。
（成分）                                                    （質量％）
（１）クエン酸                                                ０．０５
（２）クエン酸ナトリウム                                      ０．２
（３）ピロリドンカルボン酸ナトリウム（５０％）液              ０．５
（４）グリセリン                                              ３．０
（５）１，３−ブチレングリコール                              ８．０
（６）精製水                                                  残量
（７）エタノール                                            １０．０
（８）カテキン                                                ０．０００１
（９）アスコルビン酸グルコシド                                ０．３
（１０）グラフィス  アワエンシス培養抽出物（＊１）            ０．００１
（１１）香料                                                  適量
（１２）防腐剤                                                適量
（１３）モノオレイン酸ポリオキシエチレン（２０Ｅ．Ｏ．）
ソルビタン                                              ０．５
（＊１）例１により調製されたもの
【００３２】
［例６：乳液］
（製法）
Ａ．  下記成分（１０）を加熱し、７０℃に保つ。
Ｂ．  下記成分（１）〜（９）および（１１）を加熱混合し、７０℃に保つ。
Ｃ．  ＢにＡを加えて混合し、均一に乳化する。
Ｄ．  Ｃを冷却後、下記成分（１２）〜（１６）を加え、均一に混合して乳液を得た。
【００３３】
（成分）                                                    （質量％）
（１）ポリオキシエチレン（１０Ｅ．Ｏ．）ソルビタン            １．０
モノステアレート
（２）ポリオキシエチレン（６０Ｅ．Ｏ．）ソルビット            ０．５
テトラオレエート
（３）グリセリルモノステアレート                              １．０
（４）ステアリン酸                                            ０．５
（５）ベヘニルアルコール                                      ０．５
（６）スクワラン                                              ８．０
（７）エタノール                                              ５．０
（８）パルミチン酸レチノール                                  ０．１
（９）グリチルリチン酸ステアリル                              ０．１
（１０）精製水                                                残量
（１１）防腐剤                                                適量
（１２）カルボキシビニルポリマー                              ０．２
（１３）水酸化ナトリウム                                      ０．１
（１４）ヒアルロン酸                                          ０．１
（１５）ウスネア  ロセオラの培養抽出物（＊２）                ０．０００３
（１６）香料                                                  適量
（＊２）例２により調製されたもの
【産業上の利用可能性】
【００３４】
本発明によれば、安全性が良好であるとともに、高い抗酸化作用を示す抗酸化剤及び抗酸化用皮膚外用剤、ならびに高いラジカル消去作用を示すラジカル消去剤を提供することができる。