(57)【要約】      （修正有）【課題】サトウキビを効率よく活用し、かつ製造コストを削減できる、バイオサーファクタントの製造方法を提供する。【解決手段】成分Ａ及びＢを含む培地を用いて、微生物を培養する。成分Ａ：サトウキビの液状成分、成分Ｂ：サトウキビの液状成分から回収した糖以外のコロイド物質。微生物が、クロボキン科（Ｕｓｔｉｌａｇｉｎａｃｅａｅ）に属する微生物、ならびにキャンディダ（Ｃａｎｄｉｄａ）属及びスターメレラ（Ｓｔａｒｍｅｒｅｌａ）属の微生物からなる群より選択されるバイオサーファクタント生産菌。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
成分Ａ及びＢを含む培地を用いて、微生物を培養することを特徴とするバイオサーファクタントの製造方法、
成分Ａ：サトウキビの液状成分、
成分Ｂ：サトウキビの液状成分から回収した糖以外のコロイド物質。
【請求項２】
上記成分Ａが、サトウキビ搾汁であることを特徴とする請求項１に記載の製造方法。
【請求項３】
上記培地における上記サトウキビ搾汁が５重量％以上５０重量％以下であることを特徴とする請求項２に記載の製造方法。
【請求項４】
上記成分Ｂがサトウキビの液状成分のライミング残渣であることを特徴とする請求項１〜３のいずれか１項に記載の製造方法。
【請求項５】
上記培地における上記成分Ｂが１重量％以上５重量％以下であることを特徴とする請求項１〜４のいずれか１項に記載の製造方法。
【請求項６】
上記微生物を、３日間以上１４日間以内において培養することを特徴とする請求項１〜５のいずれか１項に記載の製造方法。
【請求項７】
上記微生物は、クロボキン科（Ｕｓｔｉｌａｇｉｎａｃｅａｅ）に属する微生物、ならびにキャンディダ（Ｃａｎｄｉｄａ）属及びスターメレラ（Ｓｔａｒｍｅｒｅｌａ）属の微生物からなる群より選択されるバイオサーファクタント生産菌であることを特徴とする請求項１〜６のいずれか１項に記載の製造方法。
【請求項８】
上記微生物は、シュードザイマ（Ｐｓｅｕｄｏｚｙｍａ）属又はウスチラゴ（Ｕｓｔｉｌａｇｏ）属のバイオサーファクタント生産菌であることを特徴とする請求項１〜７のいずれか１項に記載の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、サトウキビ由来の成分を有効利用してバイオサーファクタント生産菌を培養する、バイオサーファクタントの製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
サトウキビやトウモロコシは、燃料用エタノール（バイオエタノール）などの工業用アルコールを発酵により製造するための原料として、世界中において用いられている（例えば非特許文献１）。また、サトウキビは、バイオプラスチックの原料としても注目されており、今後もバイオプロセスの出発材料としての需要が増加するものと予想される。例えば、特許文献１には、サトウキビなどのシュクロースを含む原料から糸状菌アミロミセス・ルキシイによってＬ−乳酸を製造する方法が記載されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
【特許文献１】特開２００６−４２６９９号明細書（２００６年２月１６日公開）
【非特許文献】
【０００４】
【非特許文献１】Oscar J. Sanchez and Carlos A. Cardna, Bioresource Technology 99: 5270-5295 (2008)
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
しかし、サトウキビやトウモロコシなどの農作物は高価であるため、安価なバイオエタノールなどの原料として使用するのは効率的ではない。また、将来、地球規模での食料不足が予測される点からも、食料としても貴重なこれらの農作物をエタノール発酵の原料として用いることは効率的とはいえない。
【０００６】
したがって、微生物による生産プロセスにおいてサトウキビを効率よく活用するためには、より高い付加価値を有するバイオ素材を製造する技術の開発が望まれており、またこのような開発は、サトウキビ産業にとって重要な研究課題である。
【０００７】
ところで、高い付加価値を有するバイオ素材になりうるものとして、バイオサーファクタントが知られている。バイオサーファクタントは、微生物が生産する両親媒性の物質であり、優れた界面活性剤である。さらに、自己組織化可能であり、また特異な生化学的特性を示すことから、単なる界面活性剤としてではなく、高機能なバイオ素材として、幅広い産業での実用化が期待されている。
【０００８】
従来、バイオサーファクタントは油脂系バイオマスを原料として生産されているが、この方法では油脂類が生産物に混在し、生産物の回収が困難であるという問題を有している。したがって、バイオサーファクタントの製造技術においても、生産物の回収コストを低減させて製造コストを削減できる、効率よい技術の開発が望まれる。
【０００９】
本発明は上記の課題に鑑みてなされたものであり、その目的は、サトウキビを効率よく活用し、かつ製造コストを削減できる、バイオサーファクタントの製造方法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明者は、上記課題を解決するために鋭意検討を重ねた結果、サトウキビの液状成分と、サトウキビの液状成分から回収した糖以外のコロイド物質とを混合することで、バイオサーファクタント生産に適した組成物が得られることを見出し、本発明を完成するに至った。
【００１１】
すなわち、本発明に係るバイオサーファクタントの製造方法は、成分Ａ及びＢを含む培地を用いて、微生物を培養することを特徴としている。
成分Ａ：サトウキビの液状成分、
成分Ｂ：サトウキビの液状成分から回収した糖以外のコロイド物質。
【００１２】
また、本発明に係るバイオサーファクタントの製造方法では、上記成分Ａが、サトウキビ搾汁であることが好ましい。
【００１３】
また、本発明に係るバイオサーファクタントの製造方法では、上記培地における上記サトウキビ搾汁が５重量％以上５０重量％以下であることが好ましい。
【００１４】
また、本発明に係るバイオサーファクタントの製造方法では、上記成分Ｂがサトウキビの液状成分のライミング残渣であることが好ましい。
【００１５】
また、本発明に係るバイオサーファクタントの製造方法では、上記培地における上記成分Ｂが１重量％以上５重量％以下であることが好ましい。
【００１６】
また、本発明に係るバイオサーファクタントの製造方法では、上記微生物を、３日間以上１４日間以内において培養することが好ましい。
【００１７】
また、本発明に係るバイオサーファクタントの製造方法では、上記微生物は、クロボキン科（Ｕｓｔｉｌａｇｉｎａｃｅａｅ）に属する微生物、ならびにキャンディダ（Ｃａｎｄｉｄａ）属及びスターメレラ（Ｓｔａｒｍｅｒｅｌａ）属の微生物からなる群より選択されるバイオサーファクタント生産菌であることが好ましい。
【００１８】
また、本発明に係るバイオサーファクタントの製造方法では、上記微生物は、シュードザイマ（Ｐｓｅｕｄｏｚｙｍａ）属又はウスチラゴ（Ｕｓｔｉｌａｇｏ）属のバイオサーファクタント生産菌であることが好ましい。
【発明の効果】
【００１９】
本発明に係るバイオサーファクタントの製造方法は、上述したように、サトウキビの液状成分と、サトウキビの液状成分から回収した糖以外のコロイド物質とを含む培地を用いて、微生物を培養するので、サトウキビを効率よく活用することができるとともに、製造コストを削減することができるので、付加価値の高いバイオサーファクタントを製造することができる。
【図面の簡単な説明】
【００２０】
【図１】実施例１における、バイオサーファクタント生産に対するサトウキビ搾汁及びライミング残渣の効果を示す図である。
【図２】比較例１における、各バイオサーファクタント生産菌により生産されたＭＥＬの種類及び量を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００２１】
以下、本発明を詳細に説明する。
【００２２】
本発明に係るバイオサーファクタントの製造方法は、サトウキビの液状成分と、サトウキビの液状成分から回収した糖以外のコロイド物質とを含む培地を用いて、微生物を培養すればよい。
【００２３】
〔バイオサーファクタント〕
バイオサーファクタント（以下、「ＢＳ」と略記することもある）とは、微生物が生産する両親媒性の物質であればよい。
【００２４】
バイオサーファクタントとしては、例えば、糖脂質系、アシルペプタイド系、リン脂質系、脂肪酸系及び高分子系の界面活性物質等が挙げられる。糖脂質系の界面活性物質としては、マンノシルエリスリトールリピッド（ｍａｎｎｏｓｙｌ  ｅｒｙｔｈｒｉｔｏｌ  ｌｉｐｉｄ、以下、「ＭＥＬ」と略記することもある）、ソホロリピッド（以下、「ＳＬ」と略記することもある）、セロビオースリピッド（以下、「ＣＬ」と略記することもある）等が挙げられる。
【００２５】
なお、ＭＥＬはマンノースにエリスリトールと０〜２個の脂肪酸と２個のアセチル基が結合した糖脂質であり、アセチル基の結合位置と数によって、４種類のＭＥＬ（ＭＥＬ‐Ａ、ＭＥＬ‐Ｂ、ＭＥＬ‐Ｃ、ＭＥＬ‐Ｄ）が存在することが知られている。また、ＭＥＬは、界面活性能以外にも抗微生物活性、白血病細胞、神経系細胞などの細胞分化誘導活性、糖タンパク質結合活性、抗炎症・抗アレルギー活性、アポトーシス誘導活性、癌細胞増殖抑制活性など多様な機能が知られている。
【００２６】
〔微生物〕
本発明における微生物としては、バイオサーファクタント生産菌を用いることが好ましい。バイオサーファクタント生産菌とは、バイオサーファクタント生産能を有する菌株であればよく、例えば既にバイオサーファクタント生産菌として知られているものでもよいし、新たに見出されたものであってもよい。
【００２７】
本発明における微生物としては、例えば、クロボキン科に属するバイオサーファクタント生産菌、キャンディダ属、スターメレラ属等に属するバイオサーファクタント生産菌等が挙げられる。クロボキン科に属するバイオサーファクタント生産菌としては、シュードザイマ属、ウスチラゴ属等が挙げられる。
【００２８】
バイオサーファクタント生産菌の例としては、マンノシルエリスリトールリピッド生産菌、ソホロリピッド生産菌、セロビオースリピッド生産菌等が挙げられる。マンノシルエリスリトールリピッド生産菌としては、シュードザイマ  アンタークティカ（Ｐｓｅｕｄｏｚｙｍａ  ａｎｔａｒｃｔｉｃａ）、シュードザイマ  ルグローザ（Ｐ．  ｒｕｇｕｒｏｓａ）、シュードザイマ  アヒディス（Ｐ．  ａｐｈｉｄｉｓ）、シュードザイマ  ツクバエンシス（Ｐ．  ｔｓｕｋｕｂａｅｎｓｉｓ）、シュードザイマ  クラッサ（Ｐ．  ｃｒａｓｓａ）、シュードザイマ  シアメンシス（Ｐ．  ｓｉａｍｅｎｓｉｓ）、シュードザイマ  ヒュベイエンシス（Ｐ．  ｈｕｂｅｉｅｎｓｉｓ）、シュードザイマ  グラミニコーラ（Ｐ．  ｇｒａｍｉｎｉｃｏｌａ）、シュードザイマ  シャンクシエンシス（Ｐ．  ｓｈａｎｘｉｅｎｓｉｓ）、シュードザイマ  パランタークティカ（Ｐ．  ｐａｒａｎｔａｒｃｔｉｃａ）、ウスチラゴ  メイディス（Ｕｓｔｉｌａｇｏ  ｍａｙｄｉｓ）、ウスチラゴ  シノドンティス（Ｕ．  ｃｙｎｏｄｏｎｔｉｓ）、ウスチラゴ  サイタミネア（Ｕ．  ｓｃｉｔａｍｉｎｅａ）等が挙げられる。ソホロリピッド生産菌としては、スターメレラ  ボンビコーラ（Ｓｔａｒｍｅｒｅｌａ  ｂｏｍｂｉｃｏｌａ）、キャンディダ  アピコーラ（Ｃａｎｄｉｄａ  ａｐｉｃｏｌａ）等が挙げられる。セロビオースリピッド生産菌としては、ウスチラゴ  メイディス（Ｕｓｔｉｌａｇｏ  ｍａｙｄｉｓ）等が挙げられる。
【００２９】
また、本発明における微生物として用いる菌株は、上述した微生物の菌株であれば、微生物株保存機関のものでもよいし、自然界から分離したものでもよい。
【００３０】
〔培養〕
次に、本発明に係る製造方法における培養について、以下に説明する。
【００３１】
本発明における培養とは、上述したような微生物を、成分Ａ及びＢを含む培地を用いて培養すればよい。成分Ａとはサトウキビの液状成分を表し、成分Ｂとはサトウキビの液状成分から回収した糖以外のコロイド物質を表す。
【００３２】
成分Ａ、つまりサトウキビの液状成分とは、サトウキビ由来の液状成分であればよく、例えばサトウキビから圧搾又は抽出した液状成分などを用いることができる。このような液状成分としては、例えば、サトウキビ搾汁、糖蜜等が挙げられる。サトウキビ搾汁とは、サトウキビを搾って得られるサトウキビの搾り汁（サトウキビジュース）、あるいはこれに相当するサトウキビ由来の液状の成分を含むものであればよい。糖蜜とは、サトウキビから糖を製造する過程において、糖液を濃縮結晶させた残りの液などであってもよい。また、これらの液状成分は、サトウキビを加工する際に生じる副産物として得られるものであってもよい。
【００３３】
本発明では、サトウキビの液状成分として、サトウキビ搾汁を用いることが好ましい。また、培地におけるサトウキビ搾汁の含有量は、５重量％以上５０重量％以下であることがより好ましい。
【００３４】
また、本発明では、サトウキビの液状成分として、糖蜜を用いてもよい。この場合には、培地における糖蜜の含有量は、１重量％以上２０重量％以下であることが好ましい。
【００３５】
成分Ｂ、つまりサトウキビの液状成分から回収した糖以外のコロイド物質とは、サトウキビの液状成分に含まれる糖以外のコロイド物質を回収したものであればよい。例えば、サトウキビを圧搾して得られる液状成分、またはサトウキビを用いた抽出工程から得られた液状成分などのｐＨを中性付近に調整し、その結果析出した糖以外のコロイド物質を、沈殿物として分離したものなどを用いることができる。
【００３６】
本明細書において、糖とは糖類をさすものである。また、コロイド物質とは、コロイド粒子などともよばれる微粒子であればよく、またはこれに類似する物質であってもよい。また、コロイド物質とは、液体中に分散してコロイド状態になっているものだけでなく、互いに凝集して沈殿したものであってもよい。つまり、本発明におけるコロイド物質とは、サトウキビの液状成分中に含まれる微粒子などであり、これらが凝集して沈殿した沈殿物をも含むものである。
【００３７】
成分Ｂとしては、例えば、ライミング残渣などを用いることが好ましい。ライミング残渣とは、サトウキビの液状成分をライミング処理して得られる残渣であり、例えばサトウキビからの原料糖の製造工程（製糖工程）におけるライミング処理により得られる沈殿物などである。ライミング処理とは、例えば、サトウキビを圧搾又は抽出することなどによって得られる、サトウキビの液状成分に、石灰を添加してｐＨを中性付近に調整し、糖以外のコロイド物質を析出させ、沈殿物として分離する処理である。なお、ライミング処理には、加温工程及び冷却工程などが含まれることがある。
【００３８】
また、成分Ｂとしては、上述したライミング残渣のように製糖工程において得られるものに限らず、サトウキビを加工する際に生じる副産物として得られるものを用いてもよい。
【００３９】
本発明における培地には、サトウキビの液状成分と、当該液状成分とは別のサトウキビの液状成分から回収した糖以外のコロイド物質とが含まれているので、培地における糖以外のコロイド物質の含有量を高めることができる。なお、本発明において、成分Ｂは、培地における糖以外のコロイド物質の含有量を高めることを目的とするものであり、糖の含有量が少しでも高くなることを排除することを目的とするものではない。つまり、成分Ｂを得る際に、成分Ｂ中に糖が残存しても本発明の範疇である。
【００４０】
また、培地における成分Ｂの含有量は、１重量％以上５重量％以下であることが好ましい。
【００４１】
このように、本発明においては、サトウキビを加工する際に生じる副産物を用いることができるので、バイオマス資源としてのサトウキビを再利用することにより有効活用することができる。また、これらの材料は、比較的安価に入手可能であるため、製造コストを削減することができる。
【００４２】
本発明において用いる培地は、サトウキビの液状成分と、サトウキビの液状成分から回収した糖以外のコロイド物質とを含んでいればよいが、さらに他の成分を含んでいてもよい。他の成分としては、当該技術分野で通常用いられる炭素源、窒素源、有機栄養源等が用いられる。
【００４３】
炭素源としては、上述した微生物が資化し得るものであればよく、炭水化物（グルコース、マンノース、グリセロール、マンニトール等の単糖、ショ糖、麦芽糖、乳糖等のオリゴ糖、デンプン等）、有機酸（酢酸、プロピオン酸、マレイン酸、フマル酸、リンゴ酸等）、アルコール類（エタノール、プロパノール等）などが用いられる。
【００４４】
窒素源としては、塩化アンモニウム、硫酸アンモニウム、硝酸アンモニウム、リン酸アンモニウム等の無機酸若しくは有機酸のアンモニウム塩、又はペプトン、酵母エキス、麦芽エキス、肉エキス、コーンスチープリカー等の含窒素化合物が用いられる。
【００４５】
以上のような成分を培地に含ませることにより、菌体の生育、及びバイオサーファクタントの生産量をさらに向上させることができる。
【００４６】
なお、本発明では、サトウキビに含まれるスクロース、グルコース等の糖質バイオマスのみを原料とすることができるので、培地に油脂類を添加しなくてもよい。培地に油脂類を添加しない場合には、生産物に油脂類が混在しないため、生産物を回収する際にカラム精製等による精製プロセスを行わなくてもよく、生産物の取り扱いが容易になる。例えば、溶媒抽出のみにより、９０％以上の純度を有するバイオサーファクタント抽出液を調製することが可能となる。したがって、本発明では、培地に油脂類を添加しないことが好ましい。これにより、バイオサーファクタントの製造プロセスをさらに改良でき、製造をより容易にすることができるとともに、コスト低減がさらに可能になる。
【００４７】
培地の調製方法は、例えば、まずサトウキビの液状成分に水を加えて希釈した溶液を作成し、次に、該溶液にサトウキビの液状成分から回収した糖以外のコロイド物質を添加して調製することができる。
【００４８】
培養温度は、例えば、室温であることが好ましく、具体的には、好ましくは２０〜３０℃であり、より好ましくは２２〜２８℃である。培養日数としては、バイオサーファクタントの生産量に応じて適宜設定すればよいが、３日以上１４日以下であれば、生産速度が速く効率がよいため好ましく、５日間以上１０日以下であることがより好ましい。これにより、十分な量のバイオサーファクタントを生産することができる。
【００４９】
培養方法としては、好気培養が好ましい。好気培養するためには、培養液に酸素を供給すればよく、例えば培養液に空気を通気しながら撹拌する、振とう培養を行う等の方法が挙げられる。例えば、振盪培養、通気撹拌培養等の公知の一般的な微生物の培養方法を適用することができる。これにより、微生物を良好に生育させ、かつバイオサーファクタントを良好に生産させることができる。
【００５０】
また、微生物の菌体を培養する前に、該菌体の前培養を行うことが好ましい。前培養は、例えば、数ｍｌの培養液を用いて、上述した培養方法等により行うことができる。その後、バイオサーファクタント生産のための培養（以下、「本培養」ともいう）に用いる培養液に、前培養した培養液を混和することが好ましい。例えば、本培養における培養液１Ｌあたり、前培養液を１０〜２００ｍＬ、好ましくは５０〜１００ｍＬ用いることが好ましい。これにより、該菌体を活性化してその増殖能を高めることができるため、その結果、単位培養液及び単位時間あたりのバイオサーファクタントの生産量をも高めることができる。
【００５１】
また、培養液中の所望のバイオサーファクタント蓄積量が最高に達した時点で、本発明における培養を終了させることができるように、培養液中のバイオサーファクタントをガスクロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィー、薄層クロマトグラフィー等の周知の方法により測定しながら行うことが好ましい。
【００５２】
上記培養において、微生物の形態は、特に限定されず、微生物の菌体、菌体処理物（例えば、菌体破砕物）などをいう。
【００５３】
微生物の菌体または菌体処理物は、固定化して用いることもできる。固定化法としては、従来公知の担体結合法、架橋化法、包括法などの方法が挙げられる。担体結合法では、担体に菌体を固定させればよい。固定する方法としては、物理的吸着、イオン結合、共有結合などを用いることができる。また、担体としては、多糖（アセチルセルロース、アガロース）、無機物質（多孔質ガラス、金属酸化物）、合成高分子（ポリアクリルアミド、ポリスチレン）等を用いることができる。架橋化法では、グルタルアルデヒド等の二官能性試薬を用いて菌体同士を架橋、結合させることによって固定化する。また、包括法では、多糖（アルギン酸、カラギーナン等）、ポリアクリルアミド、コラーゲン、ポリウレタン等の高分子ゲルの格子や半透膜カプセル等により菌体を包み込むことによって固定化する。
【００５４】
培養液中に蓄積されたバイオサーファクタントは、培養終了後、培養液を抽出することによって回収できる。
【００５５】
抽出は、酢酸エチル等の有機溶媒を用いて行うことができる。抽出は当該分野において通常行われる方法に従って行えばよく、例えば、培養液１Ｌあたり０．５〜１．５Ｌ程度の有機溶媒を用いて１〜数回抽出操作を行ない、有機溶媒層を合わせて溶媒を留去する。
【００５６】
なお、回収したバイオサーファクタントは、冷暗所で保管することが好ましい。
【００５７】
上述したように、本発明によれば、安価に入手可能なサトウキビの液状成分と、サトウキビの液状成分から回収した糖以外のコロイド物質とから、付加価値の高い高機能なバイオサーファクタントを生産できるので、利潤を高くすることができる。また、サトウキビの加工の際に生じる材料を原料として用いることができるので、サトウキビを無駄なく活用することができる。したがって、本発明によれば、バイオマス資源としてのサトウキビを有効活用することが可能となり、サトウキビ産業の活性化への貢献が期待できる。また、本発明によれば、バイオサーファクタントを効率よく生産・回収することができ、製造コストを削減することが可能となるので、付加価値の高いバイオサーファクタントを製造することができる。
【００５８】
本発明は上述した実施形態に限定されるものではなく、請求項に示した範囲で種々の変更が可能である。すなわち、請求項に示した範囲で適宜変更した技術的手段を組み合わせて得られる実施形態についても本発明の技術的範囲に含まれる。
【実施例】
【００５９】
〔実施例１〕
実施例１では、培地における成分Ａとしてサトウキビ搾汁、及び成分Ｂとしてライミング残渣を用い、バイオサーファクタント（ＢＳ）生産菌のバイオサーファクタント生産量に対する、サトウキビ搾汁及びライミング残渣の培養液における含有量の効果について調べた。その結果を図１に示す。図１は、実施例１における、バイオサーファクタント生産に対するサトウキビ搾汁及びライミング残渣の効果を示す図である。
【００６０】
ＭＥＬ及びＣＬ生産菌であり、ＭＥＬ−Ａ、ＭＥＬ−Ｃ及びＣＬを主生産物とするＵ．  ｍａｙｄｉｓ、ＭＥＬ生産菌であり、ＭＥＬ−Ａ、ＭＥＬ−Ｃ及びｍｏｎｏ−ＭＥＬを主生産物とするＰ．  ａｎｔａｒｃｔｉｃａ  ＪＣＭ  １０３１７株、ならびにＭＥＬ生産菌であり、ＭＥＬ−Ａ及びＭＥＬ−Ｃを主生産物とするＰ．  ａｎｔａｒｃｔｉｃａ  Ｔ−３４株を、それぞれ図１に示す組成にてサトウキビ搾汁（搾汁）及びライミング残渣を含む培養液中において、２５℃で７日間振とう培養した。
【００６１】
各菌株における培養液中に蓄積した脂質成分を、等量の酢酸エチルで回収し、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）により展開した後、アンスロン発色試薬を用いて糖脂質の検出を行った。
【００６２】
その結果、上述した３株とも、サトウキビ搾汁を含む培養液中でバイオサーファクタントを生産可能であり、さらに図１に矢印で示すように、ライミング残渣を添加することで生産量が大幅に増加した。これらの結果から、サトウキビ搾汁とライミング残渣とを含む培養液が、バイオサーファクタント生産に適していることが示された。さらに、本実施例の結果から、培地におけるサトウキビ搾汁の含有量は５％以上であることが好ましく、ライミング残渣の含有量は１％以上であることが好ましいことが示された。
【００６３】
〔比較例１〕
比較例１では、サトウキビ搾汁を含む培養液を用いて数種のバイオサーファクタント生産菌を培養し、培養液に蓄積するバイオサーファクタントの種類及び量について調べた。
【００６４】
ＭＥＬ及びＣＬ生産菌として知られるＵｓｔｉｌａｇｏ  ｍａｙｄｉｓ、ＭＥＬ生産菌として知られるＰｓｅｕｄｏｚｙｍａ  ｈｕｂｅｉｅｎｓｉｓ、Ｐ．  ｔｓｕｋｕｂａｅｎｓｉｓ、Ｐ．  ｇｒａｍｉｎｉｃｏｌａ、Ｐ．  ｓｈａｎｘｉｅｎｓｉｓ、Ｐ．  ｃｒａｓｓａ、Ｐ．  ａｎｔａｒｃｔｉｃａ、Ｐ．  ｒｕｇｕｌｏｓａ、Ｐ．  ａｐｈｉｄｉｓ、Ｐ．  ｐａｒａｎｔａｒｃｔｉｃａを、それぞれ、蒸留水で２倍希釈したサトウキビ搾汁（オートクレイブ滅菌済み）中において、２５℃で７日間振とう培養した。
【００６５】
各菌株における培養液中に蓄積した脂質成分を、等量の酢酸エチルで回収し、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）により展開した後、アンスロン発色試薬を用いて糖脂質の検出を行った。その結果を図２に示す。図２は、比較例１における、各バイオサーファクタント生産菌により生産されたＭＥＬの種類及び量を示す図である。
【００６６】
図２に示すように、ＴＬＣの結果から、各バイオサーファクタント生産菌は、ＭＥＬのうちＭＥＬ−Ａ、ＭＥＬ−Ｂ及びＭＥＬ−Ｃに相当する糖脂質成分を培地中に蓄積していた。また、図には示していないが、ＴＬＣの結果から、ＣＬ生産菌及びＳＬ生産菌は、ＣＬ及びＳＬに相当する糖脂質成分を培地中に蓄積していた。なお、ＣＬ及びＳＬについては、本比較例に記載の条件において得られるＣＬ及びＳＬのＴＬＣにおける移動度が分かっていること、ならびに既知のＣＬ生産菌及びＳＬ生産菌を用いていることから、ＴＬＣ中におけるスポットを、それぞれＣＬ及びＳＬに相当するものと判定した。
【００６７】
また、このとき、溶媒抽出液中には油脂成分がほとんど含まれておらず、上記ＴＬＣ及びさらなるＨＰＬＣの結果から、それぞれのバイオサーファクタントの純度が少なくとも９０％以上であることが明らかになった。
【００６８】
上述した結果により、試験した全てのバイオサーファクタント生産菌が、サトウキビ搾汁を含む培養液中においてバイオサーファクタントを生産できることが示された。したがって、サトウキビ搾汁が、バイオサーファクタント生産に必要な成分を十分に含んでいることが明らかになった。
【産業上の利用可能性】
【００６９】
本発明は、サトウキビを効率よく活用し、かつ製造コストを削減できる、バイオサーファクタントの製造方法を提供することができるので、サトウキビ産業の活性化に貢献するだけでなく、化粧品・食品からライフサイエンス領域までの幅広い産業分野において機能性バイオ素材として実用化が期待されている、各種のバイオサーファクタント製造に、好適に利用することができる。
【図１】
2010200695.tif 000002
【図２】
2010200695.tif 000003