(57)【要約】【課題】  新規なナトリウム依存性胆汁酸トランスポータタンパク質、Na+/H+交換輸送体タンパク質、P型ATPaseタンパク質ならびにバニロイド受容体タンパク質、これらのタンパク質をコードするポリヌクレオチド、該ポリヌクレオチドのアンチセンスポリヌクレオチド、これらのタンパク質に対する抗体、該タンパク質の活性を促進または阻害する化合物または該タンパク質遺伝子の発現を促進または阻害する化合物のスクリーニング方法、該スクリーニング方法で得られる化合物などの提供。【解決手段】  本発明のタンパク質は、例えば、高脂血症、動脈硬化、生殖器疾患または消化器疾患；呼吸器疾患、腎疾患または消化器疾患；膵臓疾患、中枢神経系疾患、消化器疾患または呼吸器疾患；炎症性疾患、リウマチ性疾患または糖尿病性神経症などの診断マーカー等として有用であり、該タンパク質を用いるスクリーニング法により得られる該タンパク質の活性を促進または阻害する化合物などは、例えば、上記疾患の予防・治療剤などとして使用することができる。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号：１または配列番号：１４で表されるアミノ酸配列を含有するタンパク質またはその塩を用いる、該タンパク質またはその塩の活性を促進または阻害する化合物またはその塩のスクリーニング方法であって、
上記タンパク質またはその塩の活性が、上記タンパク質の基質の輸送活性であり、
上記タンパク質の基質が、卵胞ホルモン、黄体ホルモン、男性ホルモン、ミネラルコルチコイド、グルココルチコイド、ステロイド系薬剤またはこれらの硫酸抱合体もしくはグルクロン酸抱合体である、スクリーニング方法。
【請求項２】
（i）上記タンパク質またはその塩を産生する能力を有する細胞の基質の輸送活性と（ii）上記タンパク質またはその塩を産生する能力を有する細胞と試験化合物の混合物の基質の輸送活性の比較を行なうことを特徴とする請求項１記載のスクリーニング方法。
【請求項３】
上記（i）と（ii）の場合において、標識した基質の、上記タンパク質またはその塩を産生する能力を有する細胞への取り込み量を測定し、比較する請求項２記載のスクリーニング方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規なナトリウム依存性胆汁酸トランスポータタンパク質、Na+/H+交換輸送体タンパク質、P型ATPaseタンパク質ならびにバニロイド受容体タンパク質、これらのタンパク質をコードするポリヌクレオチド、該ポリヌクレオチドのアンチセンスポリヌクレオチド、これらのタンパク質に対する抗体、該タンパク質の活性を促進または阻害する化合物または該タンパク質遺伝子の発現を促進または阻害する化合物のスクリーニング方法、該スクリーニング方法で得られる化合物などを提供する。
【背景技術】
【０００２】
胆汁酸は肝臓において合成され、小腸に分泌されるが、小腸において脂質や脂溶性ビタミン、コレステロールなどの吸収を促すという重要な働きを担っている。胆汁酸は主に、小腸（回腸）から効率良く再吸収され、門脈を経て肝臓に戻り、再び胆汁中に排泄される（腸肝循環）。体内コレステロールプールサイズは、食事中のコレステロールだけでなく、腸肝循環の胆汁酸によってもフィードバック制御されることから、胆汁酸吸着薬（陰イオン交換樹脂）を用いた胆汁酸の腸における再吸収の抑制により、高コレステロール血症の治療が行われている。
ナトリウム依存性胆汁酸トランスポータは胆汁酸の運搬に寄与すると考えられている。ヒトでは、ナトリウム依存性胆汁酸トランスポータのアイソフォームが２つ同定されており、NTCP（Na+/taurocholate cotransporting polypeptide）は主に肝臓で発現し（J. Clin. Invest.、93巻、1326-1331頁、1994年）、ISBT（Ileal sodium/bile salt cotransporter）は主に回腸・腎臓で発現している（非特許文献１ J. Biol. Chem.、270巻、27228-27234頁、1995年）。ISBTに関しては、アミノ酸置換を伴う遺伝子の変異と胆汁酸吸収不良との直接的な関連が示唆されている（J. Clin. Invest.、99巻、1880-1887頁、1997年）。
Na+/H+交換輸送体（NHE）は、動物細胞においてNa+流入とカップルしてH+を排出する代表的なカチオンアンチポータである。NHEは10〜13回の膜貫通領域を含む約500アミノ酸を含むアミノ末端側（N）領域と約300アミノ酸を含むカルボキシル末端側（C）領域の２つの大きな部分に分けられ、この全体の構造は各アイソフォームで共通である。前者はアミロライド結合部位を含むイオン輸送領域であり、後者は活性制御領域として機能することが知られている。
NHEのアイソフォームとして、ヒトではNHE1〜3および5〜7の6種が報告されている。NHE1は広範な組織に分布し、細胞内pH、細胞容積の調節に関わっている。NHE1の活性は増殖因子や高浸透圧刺激により亢進し、その結果、細胞内のpHが上昇する。NHE3は、腎臓や小腸に発現しており、Na+吸収に重要な役割を果たしているなど、アイソフォームごとにその発現分布、調節機構、阻害剤の作用が異なっていることが知られている。
NHE1は虚血後の細胞内のNa+濃度の上昇に関与しており、心筋の障害を引き起こす要因の一つと考えられている。さらに、高血圧の患者では、NHE1の活性が正常者に比較して優位に高いことも報告されている。また、てんかんの自然発症マウスにおいてNHEの変異が原因になっていることが確認されている（Cell 91巻, 139-148頁，1997年）。
P型ATPaseは、ATP加水分解のエネルギーを利用して種々の基質の輸送を担う膜型酵素である。P型ATPaseは、その基質により3種類に分類されている。タイプ1は、Cu2+イオンやCd2+イオンなどの重金属を基質とし、N末端側に重金属との結合に関与する特徴的構造を持っており、8回膜貫通型の構造を有している。Wilson病は、肝臓での銅の排泄に関わるCu2+-ATPaseの異常に伴う疾患である。タイプ2は、アルカリ金属（K+イオン、Na+イオン）、アルカリ土類金属（Ca2+イオン）またはプロトン（H+）を基質とする。その中でも、胃酸分泌細胞におけるH+,K+-ATPase（プロトンポンプ）は、胃潰瘍・十二指腸潰瘍・逆流性食道炎の治療薬であるプロトンポンプ阻害剤（オメプラゾール、ランソプラゾールなど）の薬物標的である。また、Na+,K+-ATPase（ナトリウムポンプ）は心疾患に使用されてい
る強心配糖体の薬物標的であり、その活性はウワバインにより阻害される。タイプ3は、最も新しく同定されたタイプであり、アミノリン脂質を基質とする。アミノリン脂質トランスロカーゼ（フリッパーゼ）とも呼ばれ、ATP加水分解によって生じるエネルギーを用いて、特定のリン脂質を選択的に外層から内層に反転運動させる。これにより、生体膜の脂質の不均一な分布が保たれていると考えられている。タイプ2とタイプ3には構造上大きな差は認められず、ともに10回膜貫通型の構造を有している（Biochemistry、第34巻、15607-15613頁、1995年；Science、第272巻、1495-1497頁、1996年）。
これまで、タイプ3のP型ATPaseは哺乳動物で17種類のアイソフォームが同定されている。その中でも、FIC1は、膵臓、小腸、肝臓などの組織で発現し、その遺伝子の変異と遺伝性胆汁うっ滞との相関が報告されている（Nature Genet.、第18巻、219-224頁、1998年）。
タイプ3のP型ATPaseは、アミノリン脂質の運搬や生体膜における脂質の不均一な分布などに重要な役割を果たしていると考えられるが、各アイソフォームの詳細な機能や構造、および疾患との関連についてはまだそれほど明らかになっていない。
痛みの受容体であるバニロイド受容体サブタイプ1（VR1）は、外向き整流性を有するCa2+透過性の高い非選択性カチオンチャネルである。6回の膜貫通領域をもち、第5、第6膜貫通部位の間にポアを形成すると考えられるH5領域を有しており、N末端には3つのankyrin repeat domainを持つことが知られている。現在までにヒトではVR1（非特許文献４ Biochemicaland Biophysical Research Communications、281巻、1183頁、2001年）以外にVRL（vanilloid receptor-like protein）1とVRL2の2種がクローニングされているが、それぞれVR1に対して40％程のホモロジーを有している（Physiol Genomics 4巻, 165-174頁, 2001年）。
カプサイシンはvanillyl基を有することよりバニロイドと呼ばれており、バニロイド受容体の外来性のリガンドである。現在のところ内在性のリガンドは未だ明らかとはなっていない。VR1は、カプサイシンにより電気生理学的に直接活性化されることが、単一電流測定により明らかにされている。また、VR1はカプサイシンのような化学刺激のみならず、痛み刺激とされる熱刺激（ヒトで痛みを惹起する温度閾値である43℃以上）や酸刺激（炎症や虚血では組織は酸性化している）でも活性化される多刺激受容体である
VR1は、カプサイシン、熱、プロトンなど生体内で痛みを惹起する刺激により活性化されるが、病的な状態ではこれらの刺激は単独ではなく、同時に存在していると考えられる。また生体での痛みの受容が全てVR1で説明されるわけではなく、他のホモログ、補助因子の存在も推定される。事実、現在までに報告済みのVRファミリーにおいても、発現部位、刺激感受性に多様性があり、それらが相互依存的に機能し合うことにより、痛みの刺激が伝達されると考えられる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
【特許文献１】WO 02/04520号公報
【非特許文献】
【０００４】
【非特許文献１】J. Biol. Chem.、270巻、27228-27234頁、1995年
【非特許文献２】Biochem. Biophys. Res. Commun.、第257巻、333-339頁、1999年
【非特許文献３】Physiol. Genomics (Online) 、第1巻、139-150頁、1999年）
【非特許文献４】Biochemicaland Biophysical Research Communications、281巻、1183頁、2001年
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
ナトリウム依存性胆汁酸トランスポータは、肝臓や小腸における胆汁酸の運搬において重要な役割を果たしていると考えられているが、その詳細なメカニズムや疾患との関連についてはそれほど明らかにされていない。ナトリウム依存性胆汁酸トランスポータの詳細な基質特異性や胆汁酸代謝などにおける役割を解明することが、胆汁酸代謝などが関与する疾患の治療薬開発につながる。
上記のようにNHEは多くの病態に関与しており、NHEの各アイソフォームの活性化と調節のメカニズムを解明することが、治療薬開発につながる。
タイプ3のP型ATPaseの詳細な機能を明らかにすることが、代謝疾患、中枢神経疾患、生殖器疾患、癌などタイプ3のP型ATPaseが関与する疾患の治療薬開発につながる。
上記したカプサイシンは、糖尿病性神経症や関節リウマチの痛みを軽減する目的で鎮痛薬として使用されていることから、VRファミリーの構造や、機能、相互関係を明らかにすることにより、痛み全般に対する治療薬開発につながると考えられる。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者らは、上記の課題を解決するために鋭意研究を重ねた結果、新規ナトリウム依存性胆汁酸トランスポータタンパク質を見出した。該タンパク質はヒトISBTとアミノ酸レベルで44％の相同性を示し、エストロン硫酸およびデヒドロエピアンドロステロン硫酸が基質であることを見出し、さらに検討を重ねた結果、本発明を完成するに至った。
本発明者らは、上記の課題を解決するために鋭意研究を重ねた結果、新規な、Na+/H+交換輸送体タンパク質を見出した。該タンパク質のＮ末端側のアミノ酸707残基は、WO 02/04520号公報（特許文献１）に記載のTRICH-21のアミノ酸配列と同一であった。該タンパク質を抑制する方法としては、例えば、Na+やK+などのカチオンとH+の交換輸送を阻害したり、該タンパク質の転写を抑制して発現レベルを低下させることが考えられる。該タンパク質を賦活化する方法としては、例えばNa+やK+などのカチオンとH+の交換輸送を促進したり、該タンパク質のプロモーターを活性化したり、mRNAを安定化することで発現レベルを亢進することが考えられる。これらの知見に基づいて、さらに検討を重ねた結果、本発明を完成するに至った。
本発明者らは、上記の課題を解決するために鋭意研究を重ねた結果、新規P型ATPaseを見出した。このタンパク質はアミノ酸レベルで、タイプ3のP型ATPaseであるヒトP型ATPase 8A1（ATP8A1）（非特許文献２ Biochem. Biophys. Res. Commun.、第257巻、333-339頁、1999年）と67％、マウスP型ATPase 8A2（ATP8A2）（非特許文献３ Physiol. Genomics (Online) 、第1巻、139-150頁、1999年）と95％の相同性を示し、タイプ3のP型ATPaseとして機能し得るものである。該タンパク質を抑制する方法としては、例えば、アミノリン脂質の輸送を阻害したり、該タンパク質の転写を抑制して発現レベルを低下させることが考えられる。該タンパク質を賦活化する方法としては、例えばアミノリン脂質の輸送を促進したり、該タンパク質のプロモーターを活性化したり、mRNAを安定化することで発現レベルを亢進することが考えられる。これらの知見に基づいて、さらに検討を重ねた結果、本発明を完成するに至った。
本発明者らは、上記の課題を解決するために鋭意研究を重ねた結果、新規バニロイド受容体を見出した。このタンパク質はアミノ酸レベルで、ヒトバニロイド受容体サブタイプ1と43％の相同性を示し、バニロイド受容体として機能し得るものである。該タンパク質を抑制する方法としては、例えば、カチオンの透過を阻害したり、該タンパク質の転写を抑制して発現レベルを低下させることが考えられる。該タンパク質を賦活化する方法としては、例えばカチオンの透過を促進したり、該タンパク質のプロモーターを活性化したり、mRNAを安定化することで発現レベルを亢進することが考えられる。これらの知見に基づいて、さらに検討を重ねた結果、本発明を完成するに至った。
【０００７】
すなわち、本発明は、
（１）  配列番号：１、配列番号：１４または配列番号：１０４で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質またはその塩、
（２）  配列番号：１または配列番号：１４で表されるアミノ酸配列からなるタンパク質またはその塩、
（３）  配列番号：１０４で表されるアミノ酸配列からなるタンパク質またはその塩、
（４）  上記（１）記載のタンパク質の部分ペプチドまたはその塩、
（５）  上記（１）記載のタンパク質または上記（４）記載の部分ペプチドをコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、
（６）  ＤＮＡである上記（５）記載のポリヌクレオチド、
（７）  配列番号：２、配列番号：１１、配列番号：１２、配列番号：１４、配列番号：１０５または配列番号：１１２で表される塩基配列からなるＤＮＡ、
（８）  上記（５）記載のポリヌクレオチドを含有する組換えベクター、
（９）  上記（８）記載の組換えベクターで形質転換された形質転換体、
（１０）  上記（９）記載の形質転換体を培養し、上記（１）記載のタンパク質または上記（４）記載の部分ペプチドを生成、蓄積せしめ、これを採取することを特徴とする上記（１）記載のタンパク質もしくは上記（４）記載の部分ペプチドまたはその塩の製造法、
（１１）  上記（１）記載のタンパク質もしくは上記（４）記載の部分ペプチドまたはその塩を含有してなる医薬、
（１２）  上記（５）記載のポリヌクレオチドを含有してなる医薬、
（１３）  上記（１）記載のタンパク質もしくは上記（４）記載の部分ペプチドまたはその塩に対する抗体、
（１４）  上記（１３）記載の抗体を含有してなる医薬、
（１５）  上記（１３）記載の抗体を含有してなる診断薬、
（１６）  上記（５）記載のポリヌクレオチドの塩基配列に相補的もしくは実質的に相補的な塩基配列またはその一部を含有するポリヌクレオチド、
（１７）  上記（１６）記載のポリヌクレオチドを含有してなる医薬、
（１８）  上記（１）記載のタンパク質もしくは上記（４）記載の部分ペプチドまたはその塩を用いることを特徴とする、上記（１）記載のタンパク質もしくは上記（４）記載の部分ペプチドまたはその塩の活性を促進または阻害する化合物またはその塩のスクリーニング方法、
（１９）  上記（１）記載のタンパク質もしくは上記（４）記載の部分ペプチドまたはその塩の活性が、該タンパク質の基質の輸送活性である上記（１８）記載のスクリーニング方法、
（１９ａ）  基質が、ステロイドホルモンもしくはその代謝物または胆汁酸である上記（１９）記載のスクリーニング方法、
（１９ｂ）  基質が、ステロイドホルモンまたはその代謝物である上記（１９ａ）記載のスクリーニング方法、
（１９ｃ）  ステロイドホルモンまたはその代謝物が、卵胞ホルモン、黄体ホルモン、男性ホルモン、ミネラルコルチコイドもしくはグルココルチコイドまたはその硫酸抱合体もしくはグルクロン酸抱合体である上記（１９ｂ）記載のスクリーニング方法、
（１９ｄ）  ステロイドホルモンまたはその代謝物が、卵胞ホルモンもしくは男性ホルモンまたはその硫酸抱合体である上記（１９ｂ）記載のスクリーニング方法、
（１９ｅ）  基質が、エストロン、デヒドロエピアンドロステロンまたはこれらの硫酸抱合体である上記（１９ａ）記載のスクリーニング方法、
（２０）  上記（１）記載のタンパク質もしくは上記（４）記載の部分ペプチドまたはその塩を含有してなる、上記（１）記載のタンパク質もしくは上記（４）記載の部分ペプチドまたはその塩の活性を促進または阻害する化合物またはその塩のスクリーニング用キット、
（２１）  上記（１８）記載のスクリーニング方法または上記（１９）記載のスクリーニング用キットを用いて得られる、上記（１）記載のタンパク質もしくは上記（４）記載の部分ペプチドまたはその塩の活性を促進または阻害する化合物またはその塩、
（２２）  上記（２１）記載の化合物またはその塩を含有してなる医薬、
（２３）  上記（５）記載のポリヌクレオチドを用いることを特徴とする、上記（１）記載のタンパク質遺伝子の発現を促進または阻害する化合物またはその塩のスクリーニング方法、
（２４）  上記（５）記載のポリヌクレオチドを含有してなる、上記（１）記載のタンパク質遺伝子の発現を促進または阻害する化合物またはその塩のスクリーニング用キット、
（２５）  上記（２３）記載のスクリーニング方法または上記（２４）記載のスクリーニング用キットを用いて得られる、上記（１）記載のタンパク質遺伝子の発現を促進または阻害する化合物またはその塩、
（２６）  上記（２５）記載の化合物またはその塩を含有してなる医薬、
（２７）  高脂血症、動脈硬化、生殖器疾患または消化器疾患の予防・治療剤である上記（１１）、（１２）、（１４）、（１７）、（２２）または（２６）記載の医薬、
（２８）  哺乳動物に対して、上記（２１）または（２５）記載の化合物またはその塩の有効量を投与することを特徴とする高脂血症、動脈硬化、生殖器疾患または消化器疾患の予防・治療方法、
（２９）  高脂血症、動脈硬化、生殖器疾患または消化器疾患の予防・治療剤を製造するための上記（２１）または（２５）記載の化合物またはその塩の使用、
【０００８】
（３０）  配列番号：１８で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質またはその塩、
（３１）  配列番号：１８で表されるアミノ酸配列からなるタンパク質またはその塩、
（３２）  上記（３０）記載のタンパク質の部分ペプチドまたはその塩、
（３３）  上記（３０）記載のタンパク質または上記（３２）記載の部分ペプチドをコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、
（３４）  ＤＮＡである上記（３３）記載のポリヌクレオチド、
（３５）  配列番号：１９または配列番号：４１で表される塩基配列からなるＤＮＡ、
（３６）  上記（３３）記載のポリヌクレオチドを含有する組換えベクター、
（３７）  上記（３６）記載の組換えベクターで形質転換された形質転換体、
（３８）  上記（３７）記載の形質転換体を培養し、上記（３０）記載のタンパク質または上記（３２）記載の部分ペプチドを生成、蓄積せしめ、これを採取することを特徴とする上記（３０）記載のタンパク質もしくは上記（３２）記載の部分ペプチドまたはその塩の製造法、
（３９）  上記（３０）記載のタンパク質もしくは上記（３２）記載の部分ペプチドまたはその塩を含有してなる医薬、
（４０）  上記（３３）記載のポリヌクレオチドを含有してなる医薬、
（４１）  上記（３０）記載のタンパク質もしくは上記（３２）記載の部分ペプチドまたはその塩に対する抗体、
（４２）  上記（４１）記載の抗体を含有してなる医薬、
（４３）  上記（４１）記載の抗体を含有してなる診断薬、
（４４）  上記（３３）記載のポリヌクレオチドの塩基配列に相補的もしくは実質的に相補的な塩基配列またはその一部を含有するポリヌクレオチド、
（４５）  上記（４４）記載のポリヌクレオチドを含有してなる医薬、
（４６）  上記（３０）記載のタンパク質もしくは上記（３２）記載の部分ペプチドまたはその塩を用いることを特徴とする、上記（３０）記載のタンパク質もしくは上記（３２）記載の部分ペプチドまたはその塩の活性を促進または阻害する化合物またはその塩のスクリーニング方法、
（４７）  上記（３０）記載のタンパク質もしくは上記（３２）記載の部分ペプチドまたはその塩を含有してなる、上記（３０）記載のタンパク質もしくは上記（３２）記載の部分ペプチドまたはその塩の活性を促進または阻害する化合物またはその塩のスクリーニング用キット、
（４８）  上記（４６）記載のスクリーニング方法または上記（４７）記載のスクリーニング用キットを用いて得られる、上記（３０）記載のタンパク質もしくは上記（３２）記載の部分ペプチドまたはその塩の活性を促進または阻害する化合物またはその塩、
（４９）  上記（４８）記載の化合物またはその塩を含有してなる医薬、
（５０）  上記（３３）記載のポリヌクレオチドを用いることを特徴とする、上記（３０）記載のタンパク質遺伝子の発現を促進または阻害する化合物またはその塩のスクリーニング方法、
（５１）  上記（３３）記載のポリヌクレオチドを含有してなる、上記（３０）記載のタンパク質遺伝子の発現を促進または阻害する化合物またはその塩のスクリーニング用キット、
（５２）  上記（５０）記載のスクリーニング方法または上記（５１）記載のスクリーニング用キットを用いて得られる、上記（３０）記載のタンパク質遺伝子の発現を促進または阻害する化合物またはその塩、
（５３）  上記（５２）記載の化合物またはその塩を含有してなる医薬、
（５４）  呼吸器疾患、腎疾患または消化器疾患の予防・治療剤である上記（３９）、（４０）、（４２）、（４５）、（４９）または（５３）記載の医薬、
（５５）  哺乳動物に対して、上記（４８）または（５２）記載の化合物またはその塩の有効量を投与することを特徴とする呼吸器疾患、腎疾患または消化器疾患の予防・治療方法、
（５６）  呼吸器疾患、腎疾患または消化器疾患の予防・治療剤を製造するための上記（４８）または（５２）記載の化合物またはその塩の使用、
【０００９】
（５７）  配列番号：４２で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質またはその塩、
（５８）  配列番号：４２で表されるアミノ酸配列からなるタンパク質またはその塩、
（５９）  上記（５７）記載のタンパク質の部分ペプチドまたはその塩、
（６０）  上記（５７）記載のタンパク質または上記（５９）記載の部分ペプチドをコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、
（６１）  ＤＮＡである上記（６０）記載のポリヌクレオチド、
（６２）  配列番号：４３、配列番号：６０、配列番号：６１または配列番号：６２で表される塩基配列からなるＤＮＡ、
（６３）  上記（６０）記載のポリヌクレオチドを含有する組換えベクター、
（６４）  上記（６３）記載の組換えベクターで形質転換された形質転換体、
（６５）  上記（６４）記載の形質転換体を培養し、上記（５７）記載のタンパク質または上記（５９）記載の部分ペプチドを生成、蓄積せしめ、これを採取することを特徴とする上記（５７）記載のタンパク質もしくは上記（５９）記載の部分ペプチドまたはその塩の製造法、
（６６）  上記（５７）記載のタンパク質もしくは上記（５９）記載の部分ペプチドまたはその塩を含有してなる医薬、
（６７）  上記（６０）記載のポリヌクレオチドを含有してなる医薬、
（６８）  上記（５７）記載のタンパク質もしくは上記（５９）記載の部分ペプチドまたはその塩に対する抗体、
（６９）  上記（６８）記載の抗体を含有してなる医薬、
（７０）  上記（６８）記載の抗体を含有してなる診断薬、
（７１）  上記（６０）記載のポリヌクレオチドの塩基配列に相補的もしくは実質的に相補的な塩基配列またはその一部を含有するポリヌクレオチド、
（７２）  上記（７１）記載のポリヌクレオチドを含有してなる医薬、
（７３）  上記（５７）記載のタンパク質もしくは上記（５９）記載の部分ペプチドまたはその塩を用いることを特徴とする、上記（５７）記載のタンパク質もしくは上記（５９）記載の部分ペプチドまたはその塩の活性を促進または阻害する化合物またはその塩のスクリーニング方法、
（７４）  上記（５７）記載のタンパク質もしくは上記（５９）記載の部分ペプチドまたはその塩を含有してなる、上記（５７）記載のタンパク質もしくは上記（５９）記載の部分ペプチドまたはその塩の活性を促進または阻害する化合物またはその塩のスクリーニング用キット、
（７５）  上記（７３）記載のスクリーニング方法または上記（７４）記載のスクリーニング用キットを用いて得られる、上記（５７）記載のタンパク質もしくは上記（５９）記載の部分ペプチドまたはその塩の活性を促進または阻害する化合物またはその塩、
（７６）  上記（７５）記載の化合物またはその塩を含有してなる医薬、
（７７）  上記（６０）記載のポリヌクレオチドを用いることを特徴とする、上記（５７）記載のタンパク質遺伝子の発現を促進または阻害する化合物またはその塩のスクリーニング方法、
（７８）  上記（６０）記載のポリヌクレオチドを含有してなる、上記（５７）記載のタンパク質遺伝子の発現を促進または阻害する化合物またはその塩のスクリーニング用キット、
（７９）  上記（７７）記載のスクリーニング方法または上記（７８）記載のスクリーニング用キットを用いて得られる、上記（５７）記載のタンパク質遺伝子の発現を促進または阻害する化合物またはその塩、
（８０）  上記（７９）記載の化合物またはその塩を含有してなる医薬、
（８１）  膵臓疾患、中枢神経系疾患、消化器疾患または呼吸器疾患の予防・治療剤である上記（６６）、（６７）、（６９）、（７２）、（７６）または（８０）記載の医薬、
（８２）  哺乳動物に対して、上記（７５）または（７９）記載の化合物またはその塩の有効量を投与することを特徴とする膵臓疾患、中枢神経系疾患、消化器疾患または呼吸器疾患の予防・治療方法、
（８３）  膵臓疾患、中枢神経系疾患、消化器疾患または呼吸器疾患の予防・治療剤を製造するための上記（７５）または（７９）記載の化合物またはその塩の使用、
【００１０】
（８４）  配列番号：６６で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質またはその塩、
（８５）  配列番号：６６で表されるアミノ酸配列からなるタンパク質またはその塩、
（８６）  上記（８４）記載のタンパク質の部分ペプチドまたはその塩、
（８７）  上記（８４）記載のタンパク質または上記（８６）記載の部分ペプチドをコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、
（８８）  ＤＮＡである上記（８７）記載のポリヌクレオチド、
（８９）  配列番号：６７または配列番号：１０３で表される塩基配列からなるＤＮＡ、
（９０）  上記（８６）記載のポリヌクレオチドを含有する組換えベクター、
（９１）  上記（９０）記載の組換えベクターで形質転換された形質転換体、
（９２）  上記（９１）記載の形質転換体を培養し、上記（８４）記載のタンパク質または上記（８６）記載の部分ペプチドを生成、蓄積せしめ、これを採取することを特徴とする上記（８４）記載のタンパク質もしくは上記（８６）記載の部分ペプチドまたはその塩の製造法、
（９３）  上記（８４）記載のタンパク質もしくは上記（８６）記載の部分ペプチドまたはその塩を含有してなる医薬、
（９４）  上記（８７）記載のポリヌクレオチドを含有してなる医薬、
（９５）  上記（８４）記載のタンパク質もしくは上記（８６）記載の部分ペプチドまたはその塩に対する抗体、
（９６）  上記（９５）記載の抗体を含有してなる医薬、
（９７）  上記（９５）記載の抗体を含有してなる診断薬、
（９８）  上記（８７）記載のポリヌクレオチドの塩基配列に相補的もしくは実質的に相補的な塩基配列またはその一部を含有するポリヌクレオチド、
（９９）  上記（９８）記載のポリヌクレオチドを含有してなる医薬、
（１００）  上記（８４）記載のタンパク質もしくは上記（８６）記載の部分ペプチドまたはその塩を用いることを特徴とする、上記（８４）記載のタンパク質もしくは上記（８６）記載の部分ペプチドまたはその塩の活性を促進または阻害する化合物またはその塩のスクリーニング方法、
（１０１）  上記（８４）記載のタンパク質もしくは上記（８６）記載の部分ペプチドまたはその塩を含有してなる、上記（８４）記載のタンパク質もしくは上記（８６）記載の部分ペプチドまたはその塩の活性を促進または阻害する化合物またはその塩のスクリーニング用キット、
（１０２）  上記（１００）記載のスクリーニング方法または上記（１０１）記載のスクリーニング用キットを用いて得られる、上記（８４）記載のタンパク質もしくは上記（８６）記載の部分ペプチドまたはその塩の活性を促進または阻害する化合物またはその塩、
（１０３）  上記（１０２）記載の化合物またはその塩を含有してなる医薬、
（１０４）  上記（８７）記載のポリヌクレオチドを用いることを特徴とする、上記（８４）記載のタンパク質遺伝子の発現を促進または阻害する化合物またはその塩のスクリーニング方法、
（１０５）  上記（８７）記載のポリヌクレオチドを含有してなる、上記（８４）記載のタンパク質遺伝子の発現を促進または阻害する化合物またはその塩のスクリーニング用キット、
（１０６）  上記（１０４）記載のスクリーニング方法または上記（１０５）記載のスクリーニング用キットを用いて得られる、上記（８４）記載のタンパク質遺伝子の発現を促進または阻害する化合物またはその塩、
（１０７）  上記（１０６）記載の化合物またはその塩を含有してなる医薬、
（１０８）  上記（８４）記載のタンパク質もしくは上記（８６）記載の部分ペプチドまたはその塩を用いることを特徴とする該タンパク質もしくは部分ペプチドまたはその塩に対するリガンドの決定方法、
（１０９）  上記（８４）記載のタンパク質もしくは上記（８６）記載の部分ペプチドまたはその塩を用いることを特徴とする、リガンドと該タンパク質もしくは部分ペプチドまたはその塩との結合性を変化させる化合物またはその塩のスクリーニング方法、
（１１０）  上記（８４）記載のタンパク質もしくは上記（８６）記載の部分ペプチドまたはその塩を含有することを特徴とする、リガンドと該タンパク質もしくは部分ペプチドまたはその塩との結合性を変化させる化合物またはその塩のスクリーニング用キット、
（１１１）  上記（１０９）記載のスクリーニング方法または上記（１１０）記載のスクリーニング用キットを用いて得られうる、リガンドと上記（８４）記載のタンパク質もしくは上記（８６）記載の部分ペプチドまたはその塩との結合性を変化させる化合物またはその塩、
（１１２）  上記（１１１）記載の化合物またはその塩を含有してなる医薬、
（１１３）  炎症性疾患、リウマチ性疾患または糖尿病性神経症の予防・治療剤である上記（９３）、（９４）、（９６）、（９９）、（１０３）、（１０７）または（１１２）記載の医薬、
（１１４）  哺乳動物に対して、上記（１０２）、（１０６）記載または（１１１）記載の化合物またはその塩の有効量を投与することを特徴とする炎症性疾患、リウマチ性疾患または糖尿病性神経症の予防・治療方法、
（１１５）  炎症性疾患、リウマチ性疾患または糖尿病性神経症の予防・治療剤を製造するための上記（１０２）、（１０６）または（１１１）記載の化合物またはその塩の使用などを提供する。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】ヒトTCH230および回腸ナトリウム依存性胆汁酸トランスポータ（ISBT）のアミノ酸配列の比較を表す図である。図中、TCH230はヒトTCH230のアミノ酸配列を、ISBTは回腸ナトリウム依存性胆汁酸トランスポータ（ISBT）のアミノ酸配列を、＊は遺伝子多型（SNPs）に由来するアミノ酸置換（Ile→Val）の生じる位置を示す。□は、ヒトTCH230とISBTの一致するアミノ酸を示す。
【図２】ヒトTCH230遺伝子産物の各組織における発現量を表す図である。発現量はcDNA溶液1μl当たりのコピー数で表した。
【図３】ヒトTCH230遺伝子産物の各組織における発現量を表す図である。発現量はcDNA溶液1μl当たりのコピー数で表した。
【図４】ヒトTCH230遺伝子産物の各組織における発現量を表す図である。発現量はcDNA溶液1μl当たりのコピー数で表した。
【図５】ヒトTCH230遺伝子産物の各組織における発現量を表す図である。発現量はcDNA溶液1μl当たりのコピー数で表した。
【図６】ヒトTCH234、ラットNHE4およびヒトNHE2のアミノ酸配列の比較を表す図である。図中、TCH234はヒトTCH234のアミノ酸配列を、ratNHE4はラットNHE4のアミノ酸配列を、humanNHE2はヒトNHE2のアミノ酸配列を、Aはアミロライド結合部位を、TM1〜TM13は膜貫通領域を示す。□は、ヒトTCH234に一致するアミノ酸を示す。
【図７】ヒトTCH234遺伝子産物の各組織における発現量を表す図である。発現量はcDNA溶液1μl当たりのコピー数で表した。
【図８】ヒトTCH212、ATP8A1およびmATP8A2のアミノ酸配列の比較を表す図である。図中、TCH212はヒトTCH212のアミノ酸配列を、ATP8A1はP型ATPase 8A1のアミノ酸配列を、mATP8A2はマウスP型ATPase 8A2のアミノ酸配列を示す。□は、ヒトTCH212に一致するアミノ酸を示す。TM1〜10は、膜貫通領域を示す。（図９へつづく）
【図９】ヒトTCH212、ATP8A1およびmATP8A2のアミノ酸配列の比較を表す図である。図中、TCH212はヒトTCH212のアミノ酸配列を、ATP8A1はP型ATPase 8A1のアミノ酸配列を、mATP8A2はマウスP型ATPase 8A2のアミノ酸配列を示す。□は、ヒトTCH212に一致するアミノ酸を示す。TM1〜10は、膜貫通領域を示す。（図８のつづき。図１０へつづく。）
【図１０】ヒトTCH212、ATP8A1およびmATP8A2のアミノ酸配列の比較を表す図である。図中、TCH212はヒトTCH212のアミノ酸配列を、ATP8A1はP型ATPase 8A1のアミノ酸配列を、mATP8A2はマウスP型ATPase 8A2のアミノ酸配列を示す。□は、ヒトTCH212に一致するアミノ酸を示す。TM1〜10は、膜貫通領域を示す。（図９のつづき）
【図１１】ヒトTCH212遺伝子産物の各組織における発現量を表す図である。発現量はcDNA溶液1μl当たりのコピー数で表した。
【図１２】ヒトTCH212遺伝子産物の各組織における発現量を表す図である。発現量はcDNA溶液1μl当たりのコピー数で表した。
【図１３】ヒトTCH200、HumanVR1のアミノ酸配列の比較を表す図である。図中、TCH200はヒトTCH200のアミノ酸配列を、hVR1はHumanVR1のアミノ酸配列を示す。TM1〜6は、膜貫通領域を示す。A1〜3ｈ、Ankyrin繰り返し配列を示す。□は、両配列に一致するアミノ酸を示す。
【図１４】ヒトTCH200遺伝子産物の各組織における発現量を表す図である。発現量はcDNA溶液1μl当たりのコピー数で表した。
【図１５】マウスTCH230（配列番号：112）およびヒトTCH230（配列番号：1）のアミノ酸配列の比較を表す図である。図中、hTCH230はヒトTCH230のアミノ酸配列を、mTCH230はマウスTCH230のアミノ酸配列を示す。□は、２配列で一致するアミノ酸を示す。
【図１６】マウスTCH230遺伝子産物の各組織cDNAにおける発現量を表す図である。発現量はcDNA溶液1μl当たりのコピー数で表した。
【図１７】マウスTCH230遺伝子産物の各組織における発現量を表す図である。発現量は、cDNA溶液1μl当たりのマウスTCH230のコピー数を、等量の各組織cDNAにおけるrodent GAPDHのコピー数で割った値で表した。
【図１８】ラットTCH230遺伝子産物の各組織における発現量を表す図である。発現量は、cDNA溶液1μl当たりのラットTCH230のコピー数を、等量の各組織cDNAにおけるrodent GAPDHのコピー数で割った値で表した。
【図１９】ヒトTCH230発現CHO細胞株における[6,7-3H(N)]-Estrone sulfateの取り込みを測定した結果を表す図である。取り込み量は、[6,7-3H(N)]-Estrone sulfateを1時間取り込ませた際のカウント(cpm)で表した。独立した3wellのカウントの平均値および標準偏差により示した。図中、ベクターpcDNA3.1(+)を導入した細胞をMock、ヒトTCH230発現CHO細胞をTCH230で表し、NaClバッファーで[6,7-3H(N)]-Estrone sulfateを取り込ませたものをそれぞれ、Mock/NaCl、TCH230/NaClで、NMDGバッファーで[6,7-3H(N)]-Estrone sulfateを取り込ませたものをそれぞれ、Mock/NMDG、TCH230/NMDGで表した。
【図２０】ヒトTCH230発現CHO細胞株における[1,2,6,7-3H(N)]-DHEA-Sの取り込みを測定した結果表す図である。取り込み量は、[1,2,6,7-3H(N)]-DHEA-Sを1時間取り込ませた際のカウント(cpm)で表した。独立した3wellのカウントの平均値および標準偏差により示した。図中、ベクターpcDNA3.1(+)を導入した細胞をMock、ヒトTCH230発現CHO細胞をTCH230で表し、NaClバッファーで[1,2,6,7-3H(N)]-DHEA-Sを取り込ませたものをそれぞれ、Mock/NaCl、TCH230/NaClで、NMDGバッファーで[1,2,6,7-3H(N)]-DHEA-Sを取り込ませたものをそれぞれ、Mock/NMDG、TCH230/NMDGで表した。
【図２１】マウスTCH234遺伝子産物の各組織における発現量を表す図である。発現量は、cDNA溶液1μl当たりのマウスTCH234のコピー数を、等量の各組織cDNAにおけるrodent GAPDHのコピー数で割った値で表した。
【図２２】ラットTCH234遺伝子産物の各組織における発現量を表す図である。図中、縦軸は発現量を示し、cDNA溶液１μｌ当たりのラットTCH234のコピー数を、等量の各組織cDNAにおけるrodent GAPDHのコピー数で割り、10万倍した値で表した。
【図２３】ヒトTCH234遺伝子産物の各組織における発現量を表す図である。図中、縦軸は発現量を示し、TCH234のcDNA溶液1μl当たりのコピー数を、等量の各組織cDNAにおけるGAPDHのコピー数で割り、10万倍した値で表した。
【図２４】マウスTCH212遺伝子産物の各組織における発現量を表す図である。発現量は、cDNA溶液1μl当たりのマウスTCH212のコピー数を、等量の各組織cDNAにおけるrodent GAPDHのコピー数で割った値で表した。
【図２５】ラットTCH212遺伝子産物の各組織における発現量を表す図である。発現量は、cDNA溶液1μl当たりのラットTCH212のコピー数を、等量の各組織cDNAにおけるrodent GAPDHのコピー数で割った値で表した。
【図２６】マウスTCH200遺伝子産物の各組織における発現量を表す図である。発現量は、cDNA溶液1μl当たりのマウスTCH200のコピー数を、等量の各組織cDNAにおけるrodent GAPDHのコピー数で割り、10万倍した値で表した。
【図２７】ヒトTCH230遺伝子産物の正常細胞における発現量を表す図である。発現量は、相対的発現量を1万倍した値で表した。
【図２８】ヒトTCH234遺伝子産物の正常細胞における発現量を表す図である。発現量は、相対的発現量を1万倍した値で表した。
【図２９】ヒトTCH200遺伝子産物の正常細胞における発現量を表す図である。発現量は、相対的発現量を1万倍した値で表した。
【図３０】マウスTCH234遺伝子産物のCOPDモデルマウス肺における発現量を表す図である。発現量は、相対的発現量を1億倍した値で表した。結果は各群における平均値と標準誤差を示す。
【図３１】マウスTCH212遺伝子産物のCOPDモデルマウス肺における発現量を表す図である。発現量は、相対的発現量を1億倍した値で表した。結果は各群における平均値と標準誤差を示す。
【図３２】マウスTCH230遺伝子産物の大腸炎モデルマウスの大腸における発現量を表す図である。発現量は、相対的発現量を1千万倍した値で表した。結果は、TaqMan PCR測定を独立に2回行い平均した値を示す。
【図３３】ヒトTCH212遺伝子産物の各組織における発現量を表す図である。発現量はcDNA溶液1μl当たりのコピー数で表した。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
配列番号：１、配列番号：１４、配列番号：１０４、配列番号：１８、配列番号：４２または配列番号：６６で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質（以下、本発明のタンパク質と称することもある）は、ヒトや温血動物（例えば、モルモット、ラット、マウス、ニワトリ、ウサギ、ブタ、ヒツジ、ウシ、サルなど）の細胞（例えば、肝細胞、脾細胞、神経細胞、グリア細胞、膵臓β細胞、骨髄細胞、メサンギウム細胞、ランゲルハンス細胞、表皮細胞、上皮細胞、杯細胞、内皮細胞、平滑筋細胞、繊維芽細胞、繊維細胞、筋細胞、脂肪細胞、免疫細胞（例、マクロファージ、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー細胞、肥満細胞、好中球、好塩基球、好酸球、単球）、巨核球、滑膜細胞、軟骨細胞、骨細胞、骨芽細胞、破骨細胞、乳腺細胞、肝細胞もしくは間質細胞、またはこれら細胞の前駆細胞、幹細胞もしくはガン細胞など）もしくはそれらの細胞が存在するあらゆる組織、例えば、脳、脳の各部位（例、嗅球、扁桃核、大脳基底球、海馬、視床、視床下部、大脳皮質、延髄、小脳）、脊髄、下垂体、胃、膵臓、腎臓、肝臓、生殖腺、甲状腺、胆のう、骨髄、副腎、皮膚、筋肉、肺、消化管（例、大腸、小腸）、血管、心臓、胸腺、脾臓、顎下腺、末梢血、前立腺、睾丸、卵巣、胎盤、子宮、骨、関節、骨格筋などに由来するタンパク質であってもよく、合成タンパク質であってもよい。
【００１３】
配列番号：１で表されるアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列としては、配列番号：１で表わされるアミノ酸配列と約５０％以上、好ましくは約７０％以上、好ましくは約８０％以上、好ましくは約９０％以上、好ましくは約９５％以上の相同性を有するアミノ酸配列などが挙げられる。
配列番号：１で表されるアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質としては、例えば、前記の配列番号：１で表されるアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列を含有し、配列番号：１で表されるアミノ酸配列を有するタンパク質と実質的に同質の活性を有するタンパク質などが好ましい。
配列番号：１４で表されるアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列としては、配列番号：１４で表わされるアミノ酸配列と約５０％以上、好ましくは約７０％以上、好ましくは約８０％以上、好ましくは約９０％以上、好ましくは約９５％以上の相同性を有するアミノ酸配列などが挙げられる。
配列番号：１４で表されるアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質としては、例えば、前記の配列番号：１４で表されるアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列を含有し、配列番号：１４で表されるアミノ酸配列を有するタンパク質と実質的に同質の活性を有するタンパク質などが好ましい。
配列番号：１０４で表されるアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列としては、配列番号：１０４で表わされるアミノ酸配列と約７５％以上、好ましくは約８０％以上、好ましくは約９０％以上、好ましくは約９５％以上の相同性を有するアミノ酸配列などが挙げられる。
配列番号：１０４で表されるアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質としては、例えば、前記の配列番号：１０４で表されるアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列を含有し、配列番号：１０４で表されるアミノ酸配列を有するタンパク質と実質的に同質の活性を有するタンパク質などが好ましい。
実質的に同質の活性としては、例えば、基質の輸送などが挙げられる。
基質としては、例えば、ステロイドホルモン、胆汁酸などが挙げられる。
ステロイドホルモンとしては、例えば、卵胞ホルモン、黄体ホルモン、男性ホルモン、ミネラルコルチコイド、グルココルチコイド、ステロイド系薬剤またはこれらの代謝物（例、硫酸抱合体、グルクロン酸抱合体など）などが挙げられる。
卵胞ホルモンとしては、例えば、エストロン、エストラジオール、エストリオール、エステトロールなどが挙げられる。
黄体ホルモンとしては、例えば、プロゲステロン、プレグナンジオールなどが挙げられる。
男性ホルモンとしては、例えば、デヒドロエピアンドロステロン、テストステロン、アンドロステンジオン、５α−ジヒドロテストステオロン、アンドロステロンなどが挙げられる。
ミネラルコルチコイドとしては、例えば、アルドステロンなどが挙げられる。
グルココルチコイドとしては、例えば、コルチゾール、コルチゾン、コルチコステロン、デヒドロコルチコステロンなどが挙げられる。
ステロイド系薬剤としては、例えば、デキサメタゾン、ベタメタゾン、プレドニゾロン、トリアムシノロン、フルオロコルチゾン、クロミフェン、タモキシフェン、ダナゾールなどが挙げられる。
胆汁酸としては、例えば、タウロコール酸、グリココール酸、コール酸、リトコール酸、デオキシコール酸、タウロデオキシコール酸、タウロウルソデオキシコール酸、ケノデオキシコール酸、グリコケノデオキシコール酸、グリコデオキシコール酸などが挙げられる。
実質的に同質とは、それらの性質が性質的に（例、生理学的にまたは薬理学的に）同質であることを示す。したがって、上記基質の輸送が同等（例、約０．０１〜１００倍、好ましくは約０．１〜１０倍、より好ましくは０．５〜２倍）であることが好ましいが、これらの活性の程度、タンパク質の分子量などの量的要素は異なっていてもよい。
上記基質の輸送などの活性の測定は、公知の方法に準じて行うことができ、例えば、Am. J. Physiol.、274巻、G157-169頁、1998年に記載の方法またはそれに準じる方法に従って測定することができる。
【００１４】
配列番号：１８で表されるアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列としては、配列番号：１８で表わされるアミノ酸配列と約９０％以上、好ましくは約９５％以上、好ましくは約９７％以上、好ましくは約９９％以上の相同性を有するアミノ酸配列などが挙げられる。
配列番号：１８で表されるアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質としては、例えば、前記の配列番号：１８で表されるアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列を含有し、配列番号：１８で表されるアミノ酸配列を有するタンパク質と実質的に同質の活性を有するタンパク質などが好ましい。
実質的に同質の活性としては、例えば、カチオン（好ましくは一価のカチオン、例えばNa+、K+など）とH+の交換輸送活性などが挙げられる。実質的に同質とは、それらの性質が性質的に（例、生理学的にまたは薬理学的に）同質であることを示す。したがって、カチオン（好ましくは一価のカチオン、例えばNa+、K+など）とH+の交換輸送活性が同等（例、約０．０１〜１００倍、好ましくは約０．１〜１０倍、より好ましくは０．５〜２倍）であることが好ましいが、これらの活性の程度、タンパク質の分子量などの量的要素は異なっていてもよい。
カチオン（好ましくは一価のカチオン、例えばNa+、K+など）とH+の交換輸送などの活性の測定は、公知の方法に準じて行うことができ、例えば、J. Biol. Chem., 274巻, 3978-3987頁, 1998年に記載の方法またはそれに準じる方法に従って測定することができる。
【００１５】
配列番号：４２で表されるアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列としては、配列番号：４２で表わされるアミノ酸配列と９６％以上、好ましくは約９７％以上、好ましくは約９８％以上、好ましくは約９９％以上を有するアミノ酸配列などが挙げられる。
配列番号：４２で表されるアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質としては、例えば、前記の配列番号：４２で表されるアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列を含有し、配列番号：４２で表されるアミノ酸配列を含有するタンパク質と実質的に同質の活性を有するタンパク質などが好ましい。
実質的に同質の活性としては、例えば、アミノリン脂質の輸送などが挙げられる。実質的に同質とは、それらの性質が性質的に（例、生理学的にまたは薬理学的に）同質であることを示す。したがって、アミノリン脂質の輸送が同等（例、約０．０１〜１００倍、好ましくは約０．１〜１０倍、より好ましくは０．５〜２倍）であることが好ましいが、これらの活性の程度、タンパク質の分子量などの量的要素は異なっていてもよい。
アミノリン脂質の輸送などの活性の測定は、公知の方法に準じて行うことができ、例えば、J. Biol. Chem.、275巻、23378-23386頁、1998年 に記載の方法またはそれに準じる方法に従って測定することができる。
配列番号：６６で表されるアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列としては、配列番号：６６で表わされるアミノ酸配列と約４５％以上、好ましくは約５０％以上、好ましくは約７０％以上、好ましくは約８０％以上、好ましくは約９０％以上、好ましくは約９５％以上の相同性を有するアミノ酸配列などが挙げられる。
【００１６】
配列番号：６６で表されるアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質としては、例えば、前記の配列番号：６６で表されるアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列を含有し、配列番号：６６で表されるアミノ酸配列を有するタンパク質と実質的に同質の活性を有するタンパク質などが好ましい。
実質的に同質の活性としては、例えば、カチオン（例、Ca2+など）チャネル活性などが挙げられる。実質的に同質とは、それらの性質が性質的に（例、生理学的にまたは薬理学的に）同質であることを示す。したがって、カチオンチャネル活性が同等（例、約０．０１〜１００倍、好ましくは約０．１〜１０倍、より好ましくは０．５〜２倍）であることが好ましいが、これらの活性の程度、タンパク質の分子量などの量的要素は異なっていてもよい。
カチオンチャネル活性などの活性の測定は、公知の方法に準じて行うことができ、例えばネイチャー（Nature）、389巻、816頁、1997年などに記載の方法またはそれに準じる方法に従って測定することができる。
【００１７】
また、本発明のタンパク質としては、例えば、（１）（i）配列番号：１、配列番号：１４または配列番号：１０４で表されるアミノ酸配列中の１または２個以上（例えば１〜２００個程度、好ましくは１〜１５０個程度、好ましくは１〜１００個程度、好ましくは１〜５０個程度、好ましくは１〜３０個程度、好ましくは１〜１０個程度、さらに好ましくは数（１〜５）個）のアミノ酸が欠失したアミノ酸配列、（ii）配列番号：１、配列番号：１４または配列番号：１０４で表されるアミノ酸配列に１または２個以上（例えば１〜２００個程度、好ましくは１〜１５０個程度、好ましくは１〜１００個程度、好ましくは１〜５０個程度、好ましくは１〜３０個程度、好ましくは１〜１０個程度、さらに好ましくは数（１〜５）個）のアミノ酸が付加したアミノ酸配列、（iii）配列番号：１、配列番号：１４または配列番号：１０４で表されるアミノ酸配列に１または２個以上（例えば１〜２００個程度、好ましくは１〜１５０個程度、好ましくは１〜１００個程度、好ましくは１〜５０個程度、好ましくは１〜３０個程度、好ましくは１〜１０個程度、さらに好ましくは数（１〜５）個）のアミノ酸が挿入されたアミノ酸配列、（iv）配列番号：１、配列番号：１４または配列番号：１０４で表されるアミノ酸配列中の１または２個以上（例えば１〜２００個程度、好ましくは１〜１５０個程度、好ましくは１〜１００個程度、好ましくは１〜５０個程度、好ましくは１〜３０個程度、好ましくは１〜１０個程度、さらに好ましくは数（１〜５）個）のアミノ酸が他のアミノ酸で置換されたアミノ酸配列、または（v）それらを組み合わせたアミノ酸配列を含有するタンパク質などのいわゆるムテイン、
（２）（i）配列番号：１８で表されるアミノ酸配列中の１または２個以上（好ましくは１〜９０個程度、好ましくは１〜５０個程度、好ましくは１〜３０個程度、好ましくは１〜１０個程度、さらに好ましくは数（１〜５）個）のアミノ酸が欠失したアミノ酸配列、（ii）配列番号：１８で表されるアミノ酸配列に１または２個以上（例えば１〜２００個程度、好ましくは１〜１５０個程度、好ましくは１〜１００個程度、好ましくは１〜５０個程度、好ましくは１〜３０個程度、好ましくは１〜１０個程度、さらに好ましくは数（１〜５）個）のアミノ酸が付加したアミノ酸配列、（iii）配列番号：１８で表されるアミノ酸配列に１または２個以上（例えば１〜２００個程度、好ましくは１〜１５０個程度、好ましくは１〜１００個程度、好ましくは１〜５０個程度、好ましくは１〜３０個程度、好ましくは１〜１０個程度、さらに好ましくは数（１〜５）個）のアミノ酸が挿入されたアミノ酸配列、（iv）配列番号：１８で表されるアミノ酸配列中の１または２個以上（例えば１〜２００個程度、好ましくは１〜１５０個程度、好ましくは１〜１００個程度、好ましくは１〜５０個程度、好ましくは１〜３０個程度、好ましくは１〜１０個程度、さらに好ましくは数（１〜５）個）のアミノ酸が他のアミノ酸で置換されたアミノ酸配列、または（v）それらを組み合わせたアミノ酸配列を含有するタンパク質などのいわゆるムテイン、
（３）（i）配列番号：４２で表されるアミノ酸配列中の１または２個以上（例えば１〜５０個程度、好ましくは１〜３０個程度、好ましくは１〜１０個程度、さらに好ましくは数（１〜５）個）のアミノ酸が欠失したアミノ酸配列、（ii）配列番号：４２で表されるアミノ酸配列に１または２個以上（例えば１〜２００個程度、好ましくは１〜１５０個程度、好ましくは１〜１００個程度、好ましくは１〜５０個程度、好ましくは１〜３０個程度、好ましくは１〜１０個程度、さらに好ましくは数（１〜５）個）のアミノ酸が付加したアミノ酸配列、（iii）配列番号：４２で表されるアミノ酸配列に１または２個以上（例えば１〜２００個程度、好ましくは１〜１５０個程度、好ましくは１〜１００個程度、好ましくは１〜５０個程度、好ましくは１〜３０個程度、好ましくは１〜１０個程度、さらに好ましくは数（１〜５）個）のアミノ酸が挿入されたアミノ酸配列、（iv）配列番号：４２で表されるアミノ酸配列中の１または２個以上（例えば１〜２００個程度、好ましくは１〜１５０個程度、好ましくは１〜１００個程度、好ましくは１〜５０個程度、好ましくは１〜３０個程度、好ましくは１〜１０個程度、さらに好ましくは数（１〜５）個）のアミノ酸が他のアミノ酸で置換されたアミノ酸配列、または（v）それらを組み合わせたアミノ酸配列を含有するタンパク質などのいわゆるムテイン、
（４）（i）配列番号：６６で表されるアミノ酸配列中の１または２個以上（例えば１〜２００個程度、好ましくは１〜１５０個程度、好ましくは１〜１００個程度、好ましくは１〜５０個程度、好ましくは１〜３０個程度、好ましくは１〜１０個程度、さらに好ましくは数（１〜５）個）のアミノ酸が欠失したアミノ酸配列、（ii）配列番号：６６で表されるアミノ酸配列に１または２個以上（例えば１〜２００個程度、好ましくは１〜１５０個程度、好ましくは１〜１００個程度、好ましくは１〜５０個程度、好ましくは１〜３０個程度、好ましくは１〜１０個程度、さらに好ましくは数（１〜５）個）のアミノ酸が付加したアミノ酸配列、（iii）配列番号：６６で表されるアミノ酸配列に１または２個以上（例えば１〜２００個程度、好ましくは１〜１５０個程度、好ましくは１〜１００個程度、好ましくは１〜５０個程度、好ましくは１〜３０個程度、好ましくは１〜１０個程度、さらに好ましくは数（１〜５）個）のアミノ酸が挿入されたアミノ酸配列、（iv）配列番号：６６で表されるアミノ酸配列中の１または２個以上（例えば１〜２００個程度、好ましくは１〜１５０個程度、好ましくは１〜１００個程度、好ましくは１〜５０個程度、好ましくは１〜３０個程度、好ましくは１〜１０個程度、さらに好ましくは数（１〜５）個）のアミノ酸が他のアミノ酸で置換されたアミノ酸配列、または（v）それらを組み合わせたアミノ酸配列を含有するタンパク質などのいわゆるムテインなども含まれる。
上記のようにアミノ酸配列が挿入、欠失または置換されている場合、その挿入、欠失または置換の位置は、とくに限定されない。
【００１８】
本明細書におけるタンパク質は、ペプチド標記の慣例に従って左端がＮ末端（アミノ末端）、右端がＣ末端（カルボキシル末端）である。配列番号：１で表わされるアミノ酸配列を含有するタンパク質をはじめとする、本発明のタンパク質は、Ｃ末端がカルボキシル基（-COOH）、カルボキシレート（-COO-）、アミド（-CONH2）またはエステル（-COOR）のいずれであってもよい。
ここでエステルにおけるＲとしては、例えば、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチルなどのＣ1-6アルキル基、例えば、シクロペンチル、シクロヘキシルなどのＣ3-8シクロアルキル基、例えば、フェニル、α−ナフチルなどのＣ6-12アリール基、例えば、ベンジル、フェネチルなどのフェニル−Ｃ1-2アルキル基もしくはα−ナフチルメチルなどのα−ナフチル−Ｃ1-2アルキル基などのＣ7-14アラルキル基、ピバロイルオキシメチル基などが用いられる。
本発明のタンパク質がＣ末端以外にカルボキシル基（またはカルボキシレート）を有している場合、カルボキシル基がアミド化またはエステル化されているものも本発明のタンパク質に含まれる。この場合のエステルとしては、例えば上記したＣ末端のエステルなどが用いられる。
【００１９】
さらに、本発明のタンパク質には、Ｎ末端のアミノ酸残基（例、メチオニン残基）のアミノ基が保護基（例えば、ホルミル基、アセチル基などのＣ１−６アルカノイルなどのＣ１−６アシル基など）で保護されているもの、生体内で切断されて生成するＮ末端のグルタミン残基がピログルタミン酸化したもの、分子内のアミノ酸の側鎖上の置換基（例、-OH、-SH、アミノ基、イミダゾール基、インドール基、グアニジノ基など）が適当な保護基（例、ホルミル基、アセチル基などのＣ1-6アルカノイル基などのＣ1-6アシル基など）で保護されているもの、あるいは糖鎖が結合したいわゆる糖タンパク質などの複合タンパク質なども含まれる。
【００２０】
本発明のタンパク質の具体例としては、例えば、配列番号：１で表されるアミノ酸配列を含有するタンパク質、配列番号：１４で表されるアミノ酸配列を含有するタンパク質、配列番号：１０４で表されるアミノ酸配列を含有するタンパク質、配列番号：１８で表されるアミノ酸配列を含有するタンパク質、配列番号：４２で表されるアミノ酸配列を含有するタンパク質、配列番号：６６で表されるアミノ酸配列を含有するタンパク質などがあげられる。
【００２１】
本発明のタンパク質の部分ペプチドとしては、本発明のタンパク質の部分ペプチドであって、好ましくは、本発明のタンパク質と同様の性質を有するものであればいずれのものでもよい。
例えば、本発明のタンパク質の構成アミノ酸配列のうち少なくとも５個以上、好ましくは１０個以上、好ましくは２０個以上、好ましくは５０個以上、さらに好ましくは７０個以上、より好ましくは１００個以上、最も好ましくは２００個以上のアミノ酸配列を有するペプチドなどが用いられる。
また、本発明の部分ペプチドは、そのアミノ酸配列中の１または２個以上（例えば１〜２０個程度、好ましくは１〜１０個程度、さらに好ましくは数（１〜５）個）のアミノ酸が欠失し、または、そのアミノ酸配列に１または２個以上（例えば１〜２０個程度、好ましくは１〜１０個程度、さらに好ましくは数（１〜５）個）のアミノ酸が付加し、または、そのアミノ酸配列に１または２個以上（例えば１〜２０個程度、好ましくは１〜１０個程度、さらに好ましくは数（１〜５）個）のアミノ酸が挿入され、または、そのアミノ酸配列中の１または２個以上（例えば１〜２０個程度、好ましくは１〜１０個程度、より好ましくは数個、さらに好ましくは１〜５個程度）のアミノ酸が他のアミノ酸で置換されていてもよい。
本発明の部分ペプチドとしては、例えば、配列番号：１または配列番号：１４で表されるアミノ酸配列において例えば第１〜２８番目、第９９〜１２９番目、第１８０〜１９３番目、第２４６〜２８６番目のアミノ酸配列を有するペプチド、配列番号：１８で表されるアミノ酸配列において例えば第４０番目〜６０番目、第３３０番目〜３５０番目のアミノ酸配列を有するペプチド、配列番号：４２で表されるアミノ酸配列において例えば第３０１〜３２２番目、第９４１〜９５２番目、第１０１２〜１０２８番目のアミノ酸配列を有するペプチド、配列番号：６６で表されるアミノ酸配列において例えば第４６０番目〜第４８５番目、第６１０番目〜第６３０番目のアミノ酸配列を有するペプチド、配列番号：１０４で表されるアミノ酸配列において例えば第１〜２８番目、第９９〜１２９番目、第１８０〜１９３番目、第２４５〜２８５番目のアミノ酸配列を有するペプチドなどがあげられる。
【００２２】
また、本発明の部分ペプチドはＣ末端が通常カルボキシル基（-COOH）またはカルボキシレート（-COO-）であるが、前記本発明のタンパク質のごとく、Ｃ末端がアミド（-CONH2）またはエステル（-COOR）であってもよい。
さらに、本発明の部分ペプチドには、前記本発明のタンパク質と同様に、Ｃ末端以外にカルボキシル基（またはカルボキシレート）を有しているもの、Ｎ末端のアミノ酸残基（例、メチオニン残基）のアミノ基が保護基で保護されているもの、Ｎ端側が生体内で切断され生成したグルタミン残基がピログルタミン酸化したもの、分子内のアミノ酸の側鎖上の置換基が適当な保護基で保護されているもの、あるいは糖鎖が結合したいわゆる糖ペプチドなどの複合ペプチドなども含まれる。
本発明の部分ペプチドは抗体作成のための抗原としても用いることができる。たとえば、後述する本発明の抗体を調製する目的には、例えば、配列番号：１または配列番号：１４で表されるアミノ酸配列において第１〜２８番目、第９９〜１２９番目、第１８０〜１９３番目、第２４６〜２８６番目のアミノ酸配列を有するペプチド、配列番号：１８で表されるアミノ酸配列において例えば、第４０番目〜６０番目、第３３０番目〜３５０番目のアミノ酸配列を有するペプチド、配列番号：４２で表されるアミノ酸配列において例えば、第３０１〜３２２番目、第９４１〜９５２番目、第１０１２〜１０２８番目のアミノ酸配列を有するペプチド、配列番号：６６で表されるアミノ酸配列において例えば第４６０番目〜第４８５番目、第６１０番目〜第６３０番目のアミノ酸配列を有するペプチド、配列番号：１０４で表されるアミノ酸配列において例えば第１〜２８番目、第９９〜１２９番目、第１８０〜１９３番目、第２４５〜２８５番目のアミノ酸配列を有するペプチドなどがあげられる。
【００２３】
本発明のタンパク質または部分ペプチドの塩としては、生理学的に許容される酸（例、無機酸、有機酸）や塩基（例、アルカリ金属塩）などとの塩が用いられ、とりわけ生理学的に許容される酸付加塩が好ましい。この様な塩としては、例えば、無機酸（例えば、塩酸、リン酸、臭化水素酸、硫酸）との塩、あるいは有機酸（例えば、酢酸、ギ酸、プロピオン酸、フマル酸、マレイン酸、コハク酸、酒石酸、クエン酸、リンゴ酸、蓚酸、安息香酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸）との塩などが用いられる。
本発明のタンパク質もしくはその部分ペプチドまたはその塩は、前述したヒトや温血動物の細胞または組織から公知のタンパク質の精製方法によって製造することもできるし、タンパク質をコードするＤＮＡを含有する形質転換体を培養することによっても製造することができる。また、後述のペプチド合成法に準じて製造することもできる。
ヒトや哺乳動物の組織または細胞から製造する場合、ヒトや哺乳動物の組織または細胞をホモジナイズした後、酸などで抽出を行ない、該抽出液を逆相クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィーなどのクロマトグラフィーを組み合わせることにより精製単離することができる。
【００２４】
本発明のタンパク質もしくは部分ペプチドまたはその塩、またはそのアミド体の合成には、通常市販のタンパク質合成用樹脂を用いることができる。そのような樹脂としては、例えば、クロロメチル樹脂、ヒドロキシメチル樹脂、ベンズヒドリルアミン樹脂、アミノメチル樹脂、４−ベンジルオキシベンジルアルコール樹脂、４−メチルベンズヒドリルアミン樹脂、ＰＡＭ樹脂、４−ヒドロキシメチルメチルフェニルアセトアミドメチル樹脂、ポリアクリルアミド樹脂、４−（２',４'−ジメトキシフェニル−ヒドロキシメチル）フェノキシ樹脂、４−（２',４'−ジメトキシフェニル−Ｆｍｏｃアミノエチル）フェノキシ樹脂などを挙げることができる。このような樹脂を用い、α−アミノ基と側鎖官能基を適当に保護したアミノ酸を、目的とするタンパク質の配列通りに、公知の各種縮合方法に従い、樹脂上で縮合させる。反応の最後に樹脂からタンパク質または部分ペプチドを切り出すと同時に各種保護基を除去し、さらに高希釈溶液中で分子内ジスルフィド結合形成反応を実施し、目的のタンパク質もしくは部分ペプチドまたはそれらのアミド体を取得する。
上記した保護アミノ酸の縮合に関しては、タンパク質合成に使用できる各種活性化試薬を用いることができるが、特に、カルボジイミド類がよい。カルボジイミド類としては、ＤＣＣ、Ｎ,Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド、Ｎ−エチル−Ｎ’−（３−ジメチルアミノプロリル）カルボジイミドなどが用いられる。これらによる活性化にはラセミ化抑制添加剤（例えば、ＨＯＢｔ，ＨＯＯＢｔ）とともに保護アミノ酸を直接樹脂に添加するかまたは、対称酸無水物またはＨＯＢｔエステルあるいはＨＯＯＢｔエステルとしてあらかじめ保護アミノ酸の活性化を行なった後に樹脂に添加することができる。
【００２５】
保護アミノ酸の活性化や樹脂との縮合に用いられる溶媒としては、タンパク質縮合反応に使用しうることが知られている溶媒から適宜選択されうる。例えば、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド，Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド，Ｎ−メチルピロリドンなどの酸アミド類、塩化メチレン，クロロホルムなどのハロゲン化炭化水素類、トリフルオロエタノールなどのアルコール類、ジメチルスルホキシドなどのスルホキシド類、ピリジン，ジオキサン，テトラヒドロフランなどのエーテル類、アセトニトリル，プロピオニトリルなどのニトリル類、酢酸メチル，酢酸エチルなどのエステル類あるいはこれらの適宜の混合物などが用いられる。反応温度はタンパク質結合形成反応に使用され得ることが知られている範囲から適宜選択され、通常約−２０℃〜５０℃の範囲から適宜選択される。活性化されたアミノ酸誘導体は通常１．５〜４倍過剰で用いられる。ニンヒドリン反応を用いたテストの結果、縮合が不十分な場合には保護基の脱離を行なうことなく縮合反応を繰り返すことにより十分な縮合を行なうことができる。反応を繰り返しても十分な縮合が得られないときには、無水酢酸またはアセチルイミダゾールを用いて未反応アミノ酸をアセチル化することによって、後の反応に影響を与えないようにすることができる。
【００２６】
原料のアミノ基の保護基としては、例えば、Ｚ、Ｂｏｃ、ｔ−ペンチルオキシカルボニル、イソボルニルオキシカルボニル、４−メトキシベンジルオキシカルボニル、Ｃｌ−Ｚ、Ｂｒ−Ｚ、アダマンチルオキシカルボニル、トリフルオロアセチル、フタロイル、ホルミル、２−ニトロフェニルスルフェニル、ジフェニルホスフィノチオイル、Ｆｍｏｃなどが用いられる。
カルボキシル基は、例えば、アルキルエステル化（例えば、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ｔ−ブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロオクチル、２−アダマンチルなどの直鎖状、分枝状もしくは環状アルキルエステル化）、アラルキルエステル化（例えば、ベンジルエステル、４−ニトロベンジルエステル、４−メトキシベンジルエステル、４−クロロベンジルエステル、ベンズヒドリルエステル化）、フェナシルエステル化、ベンジルオキシカルボニルヒドラジド化、ｔ−ブトキシカルボニルヒドラジド化、トリチルヒドラジド化などによって保護することができる。
セリンの水酸基は、例えば、エステル化またはエーテル化によって保護することができる。このエステル化に適する基としては、例えば、アセチル基などの低級（Ｃ１−６）アルカノイル基、ベンゾイル基などのアロイル基、ベンジルオキシカルボニル基、エトキシカルボニル基などの炭酸から誘導される基などが用いられる。また、エーテル化に適する基としては、例えば、ベンジル基、テトラヒドロピラニル基、ｔ−ブチル基などである。
チロシンのフェノール性水酸基の保護基としては、例えば、Ｂｚｌ、Ｃｌ２−Ｂｚｌ、２−ニトロベンジル、Ｂｒ−Ｚ、ｔ−ブチルなどが用いられる。
ヒスチジンのイミダゾールの保護基としては、例えば、Ｔｏｓ、４−メトキシ−２，３，６−トリメチルベンゼンスルホニル、ＤＮＰ、ベンジルオキシメチル、Ｂｕｍ、Ｂｏｃ、Ｔｒｔ、Ｆｍｏｃなどが用いられる。
【００２７】
原料のカルボキシル基の活性化されたものとしては、例えば、対応する酸無水物、アジド、活性エステル〔アルコール（例えば、ペンタクロロフェノール、２，４，５−トリクロロフェノール、２，４−ジニトロフェノール、シアノメチルアルコール、パラニトロフェノール、ＨＯＮＢ、Ｎ−ヒドロキシスクシミド、Ｎ−ヒドロキシフタルイミド、ＨＯＢｔ）とのエステル〕などが用いられる。原料のアミノ基の活性化されたものとしては、例えば、対応するリン酸アミドが用いられる。
保護基の除去（脱離）方法としては、例えば、Ｐｄ−黒あるいはＰｄ−炭素などの触媒の存在下での水素気流中での接触還元や、また、無水フッ化水素、メタンスルホン酸、トリフルオロメタンスルホン酸、トリフルオロ酢酸あるいはこれらの混合液などによる酸処理や、ジイソプロピルエチルアミン、トリエチルアミン、ピペリジン、ピペラジンなどによる塩基処理、また液体アンモニア中ナトリウムによる還元なども用いられる。上記酸処理による脱離反応は、一般に約−２０℃〜４０℃の温度で行なわれるが、酸処理においては、例えば、アニソール、フェノール、チオアニソール、メタクレゾール、パラクレゾール、ジメチルスルフィド、１,４−ブタンジチオール、１,２−エタンジチオールなどのようなリガンド作動性カチオン捕捉剤の添加が有効である。また、ヒスチジンのイミダゾール保護基として用いられる２,４−ジニトロフェニル基はチオフェノール処理により除去され、トリプトファンのインドール保護基として用いられるホルミル基は上記の１,２−エタンジチオール、１,４−ブタンジチオールなどの存在下の酸処理による脱保護以外に、希水酸化ナトリウム溶液、希アンモニアなどによるアルカリ処理によっても除去される。
【００２８】
原料の反応に関与すべきでない官能基の保護ならびに保護基、およびその保護基の脱離、反応に関与する官能基の活性化などは公知の基または公知の手段から適宜選択しうる。
タンパク質または部分ペプチドのアミド体を得る別の方法としては、例えば、まず、カルボキシ末端アミノ酸のα−カルボキシル基をアミド化して保護した後、アミノ基側にペプチド（タンパク質）鎖を所望の鎖長まで延ばした後、該ペプチド鎖のＮ末端のα−アミノ基の保護基のみを除いたタンパク質または部分ペプチドとＣ末端のカルボキシル基の保護基のみを除去したタンパク質または部分ペプチドとを製造し、これらのタンパク質またはペプチドを上記したような混合溶媒中で縮合させる。縮合反応の詳細については上記と同様である。縮合により得られた保護タンパク質またはペプチドを精製した後、上記方法によりすべての保護基を除去し、所望の粗タンパク質またはペプチドを得ることができる。この粗タンパク質またはペプチドは既知の各種精製手段を駆使して精製し、主要画分を凍結乾燥することで所望のタンパク質またはペプチドのアミド体を得ることができる。
タンパク質またはペプチドのエステル体を得るには、例えば、カルボキシ末端アミノ酸のα−カルボキシル基を所望のアルコール類と縮合しアミノ酸エステルとした後、タンパク質またはペプチドのアミド体と同様にして、所望のタンパク質またはペプチドのエステル体を得ることができる。
【００２９】
本発明の部分ペプチドまたはそれらの塩は、公知のペプチドの合成法に従って、あるいは本発明のタンパク質を適当なペプチダーゼで切断することによって製造することができる。ペプチドの合成法としては、例えば、固相合成法、液相合成法のいずれによっても良い。すなわち、本発明の部分ペプチドを構成し得る部分ペプチドもしくはアミノ酸と残余部分とを縮合させ、生成物が保護基を有する場合は保護基を脱離することにより目的のペプチドを製造することができる。公知の縮合方法や保護基の脱離としては、例えば、以下の（a）〜（e）に記載された方法が挙げられる。
（a）M. Bodanszky および M.A. Ondetti、ペプチド・シンセシス (Peptide Synthesis), Interscience Publishers, New York (1966年)
（b）SchroederおよびLuebke、ザ・ペプチド(The Peptide), Academic Press, New York (1965年)
（c）泉屋信夫他、ペプチド合成の基礎と実験、 丸善(株) （1975年）
（d）矢島治明 および榊原俊平、生化学実験講座 １、 タンパク質の化学ＩＶ、 205、(1977年)
（e）矢島治明監修、続医薬品の開発、第14巻、ペプチド合成、広川書店
また、反応後は通常の精製法、例えば、溶媒抽出・蒸留・カラムクロマトグラフィー・液体クロマトグラフィー・再結晶などを組み合わせて本発明の部分ペプチドを精製単離することができる。上記方法で得られる部分ペプチドが遊離体である場合は、公知の方法あるいはそれに準じる方法によって適当な塩に変換することができるし、逆に塩で得られた場合は、公知の方法あるいはそれに準じる方法によって遊離体または他の塩に変換することができる。
【００３０】
本発明のタンパク質をコードするポリヌクレオチドとしては、前述した本発明のタンパク質をコードする塩基配列を含有するものであればいかなるものであってもよい。好ましくはＤＮＡである。ＤＮＡとしては、ゲノムＤＮＡ、ゲノムＤＮＡライブラリー、前記した細胞・組織由来のｃＤＮＡ、前記した細胞・組織由来のｃＤＮＡライブラリー、合成ＤＮＡのいずれでもよい。
ライブラリーに使用するベクターは、バクテリオファージ、プラスミド、コスミド、ファージミドなどいずれであってもよい。また、前記した細胞・組織よりtotalＲＮＡまたはｍＲＮＡ画分を調製したものを用いて直接Reverse Transcriptase Polymerase Chain Reaction（以下、ＲＴ-ＰＣＲ法と略称する）によって増幅することもできる。
【００３１】
本発明のタンパク質をコードするＤＮＡとしては、例えば（１）配列番号：２もしくは配列番号：１１で表される塩基配列を含有するＤＮＡ、または配列番号：２もしくは配列番号：１１で表される塩基配列とハイストリンジェントな条件下でハイブリダイズする塩基配列を有し、配列番号：１で表されるアミノ酸配列を含有するタンパク質と実質的に同質の性質を有するタンパク質をコードするＤＮＡ、（２）配列番号：１３もしくは配列番号：１２で表される塩基配列を含有するＤＮＡ、または配列番号：１３もしくは配列番号：１２で表される塩基配列とハイストリンジェントな条件下でハイブリダイズする塩基配列を有し、配列番号：１４で表されるアミノ酸配列を含有するタンパク質と実質的に同質の性質を有するタンパク質をコードするＤＮＡ、（３）配列番号：１０５もしくは配列番号：１１２で表される塩基配列を含有するＤＮＡ、または配列番号：１０５もしくは配列番号：１１２で表される塩基配列とハイストリンジェントな条件下でハイブリダイズする塩基配列を有し、配列番号：１０４で表されるアミノ酸配列を含有するタンパク質と実質的に同質の性質を有するタンパク質をコードするＤＮＡ、（４）配列番号：１９もしくは配列番号：４１で表される塩基配列を含有するＤＮＡ、または配列番号：１９もしくは配列番号：４１で表される塩基配列とハイストリンジェントな条件下でハイブリダイズする塩基配列を有し、配列番号：１８で表されるアミノ酸配列を含有するタンパク質と実質的に同質の性質を有するタンパク質をコードするＤＮＡ、（５）配列番号：４３、配列番号：６０、配列番号：６１もしくは配列番号：６２で表される塩基配列を含有するＤＮＡ、または配列番号：４３、配列番号：６０、配列番号：６１もしくは配列番号：６２で表される塩基配列とハイストリンジェントな条件下でハイブリダイズする塩基配列を有し、配列番号：４２で表されるアミノ酸配列を含有するタンパク質と実質的に同質の性質を有するタンパク質をコードするＤＮＡ、（６）配列番号：６７もしくは配列番号：１０３で表される塩基配列を含有するＤＮＡ、または配列番号：６７もしくは配列番号：１０３で表される塩基配列とハイストリンジェントな条件下でハイブリダイズする塩基配列を有し、配列番号：６６で表されるアミノ酸配列を含有するタンパク質と実質的に同質の性質を有するタンパク質をコードするＤＮＡであれば何れのものでもよい。
【００３２】
配列番号：２もしくは配列番号：１１で表される塩基配列とハイストリンジェントな条件下でハイブリダイズできるＤＮＡとしては、例えば、配列番号：２もしくは配列番号：１１で表される塩基配列と約５０％以上、好ましくは約６０％以上、好ましくは約７０％以上、好ましくは約８０％以上、好ましくは約９０％以上の相同性を有する塩基配列を含有するＤＮＡなどが用いられる。
配列番号：１３もしくは配列番号：１２で表される塩基配列とハイストリンジェントな条件下でハイブリダイズできるＤＮＡとしては、例えば、配列番号：１３もしくは配列番号：１２で表される塩基配列と約５０％以上、好ましくは約６０％以上、好ましくは約７０％以上、好ましくは約８０％以上、好ましくは約９０％以上の相同性を有する塩基配列を含有するＤＮＡなどが用いられる。
配列番号：１０５もしくは配列番号：１１２で表される塩基配列とハイストリンジェントな条件下でハイブリダイズできるＤＮＡとしては、例えば、配列番号：１０５もしくは配列番号：１１２で表される塩基配列と約５０％以上、好ましくは約６０％以上、より好ましくは約７５％以上、好ましくは約８０％以上、好ましくは約９０％以上、好ましくは約９５％以上の相同性を有する塩基配列を含有するＤＮＡなどが用いられる。
【００３３】
配列番号：１９もしくは配列番号：４１で表される塩基配列とハイストリンジェントな条件下でハイブリダイズできるＤＮＡとしては、例えば、配列番号：１９もしくは配列番号：４１で表される塩基配列と約９０％以上、好ましくは約９５％以上、好ましくは約９７％以上、好ましくは約９９％以上の相同性を有する塩基配列を含有するＤＮＡなどが用いられる。
配列番号：４３、配列番号：６０、配列番号：６１もしくは配列番号：６２で表される塩基配列とハイストリンジェントな条件下でハイブリダイズできるＤＮＡとしては、例えば、配列番号：４３、配列番号：６０、配列番号：６１もしくは配列番号：６２で表される塩基配列と９６％以上、好ましくは約９７％以上、好ましくは約９８％以上、好ましくは約９９％以上の相同性を有する塩基配列を含有するＤＮＡなどが用いられる。
配列番号：６７もしくは配列番号：１０３で表される塩基配列とハイストリンジェントな条件下でハイブリダイズできるＤＮＡとしては、例えば、配列番号：６７もしくは配列番号：１０３で表される塩基配列と約４５％以上、好ましくは約５０％以上、好ましくは約７０％以上、好ましくは約８０％以上、好ましくは約９０％以上、好ましくは約９５％以上の相同性を有する塩基配列を含有するＤＮＡなどが用いられる。
【００３４】
ハイブリダイゼーションは、公知の方法あるいはそれに準じる方法、例えば、モレキュラー・クローニング（Molecular Cloning）２nd（J. Sambrook et al., Cold Spring Harbor Lab. Press, 1989）に記載の方法などに従って行なうことができる。また、市販のライブラリーを使用する場合、添付の使用説明書に記載の方法に従って行なうことができる。より好ましくは、ハイストリンジェントな条件に従って行なうことができる。
ハイストリンジェントな条件とは、例えば、ナトリウム濃度が約１９〜４０ｍＭ、好ましくは約１９〜２０ｍＭで、温度が約５０〜７０℃、好ましくは約６０〜６５℃の条件を示す。特に、ナトリウム濃度が約１９ｍＭで温度が約６５℃の場合が最も好ましい。
より具体的には、配列番号：１で表されるアミノ酸配列を含有するタンパク質をコードするＤＮＡとしては、配列番号：２もしくは配列番号：１１で表される塩基配列を含有するＤＮＡなどが、配列番号：１４で表されるアミノ酸配列を含有するタンパク質をコードするＤＮＡとしては、配列番号：１３もしくは配列番号：１２で表される塩基配列を含有するＤＮＡなどが、配列番号：１０４で表されるアミノ酸配列を含有するタンパク質をコードするＤＮＡとしては、配列番号：１０５もしくは配列番号：１１２で表される塩基配列を含有するＤＮＡなどが、配列番号：１８で表されるアミノ酸配列を含有するタンパク質をコードするＤＮＡとしては、配列番号：１９もしくは配列番号：４１で表される塩基配列を含有するＤＮＡなどが、配列番号：４２で表されるアミノ酸配列を含有するタンパク質をコードするＤＮＡとしては、配列番号：４３、配列番号：６０、配列番号：６１もしくは配列番号：６２で表される塩基配列を含有するＤＮＡなどが、配列番号：６６で表されるアミノ酸配列を含有するタンパク質をコードするＤＮＡとしては、配列番号：６７もしくは配列番号：１０３で表される塩基配列を含有するＤＮＡなどが用いられる。
【００３５】
本発明の部分ペプチドをコードするポリヌクレオチドとしては、前述した本発明の部分ペプチドをコードする塩基配列を含有するものであればいかなるものであってもよい。好ましくはＤＮＡである。ＤＮＡとしては、ゲノムＤＮＡ、ゲノムＤＮＡライブラリー、前記した細胞・組織由来のｃＤＮＡ、前記した細胞・組織由来のｃＤＮＡライブラリー、合成ＤＮＡのいずれでもよい。
本発明の部分ペプチドをコードするＤＮＡとしては、例えば、配列番号：２、配列番号：１１、配列番号：１２、配列番号：１３、配列番号：１９、配列番号：４１、配列番号：４３、配列番号：６０、配列番号：６１、配列番号：６２、配列番号：６７、配列番号：１０３、配列番号：１０５もしくは配列番号：１１２で表される塩基配列を有するＤＮＡの一部分を有するＤＮＡ、または配列番号：２、配列番号：１１、配列番号：１２、配列番号：１３、配列番号：１９、配列番号：４１、配列番号：４３、配列番号：６０、配列番号：６１、配列番号：６２、配列番号：６７、配列番号：１０３、配列番号：１０５もしくは配列番号：１１２で表される塩基配列とハイストリンジェントな条件下でハイブリダイズする塩基配列を含有し、本発明のタンパク質と実質的に同質の活性を有するタンパク質をコードするＤＮＡの一部分を含有するＤＮＡなどが用いられる。
配列番号：２、配列番号：１１、配列番号：１２、配列番号：１３、配列番号：１９、配列番号：４１、配列番号：４３、配列番号：６０、配列番号：６１、配列番号：６２、配列番号：６７、配列番号：１０３、配列番号：１０５もしくは配列番号：１１２で表される塩基配列とハイブリダイズできるＤＮＡは、前記と同意義を示す。
ハイブリダイゼーションの方法およびハイストリンジェントな条件は前記と同様のものが用いられる。
【００３６】
本発明のタンパク質、部分ペプチド（以下、これらをコードするＤＮＡのクローニングおよび発現の説明においては、これらを単に本発明のタンパク質と略記する場合がある）を完全にコードするＤＮＡのクローニングの手段としては、本発明のタンパク質をコードする塩基配列の一部分を有する合成ＤＮＡプライマーを用いてＰＣＲ法によって増幅するか、または適当なベクターに組み込んだＤＮＡを本発明のタンパク質の一部あるいは全領域をコードするＤＮＡ断片もしくは合成ＤＮＡを用いて標識したものとのハイブリダイゼーションによって選別することができる。ハイブリダイゼーションの方法は、例えば、モレキュラー・クローニング（Molecular Cloning）２nd（J. Sambrook et al., Cold Spring Harbor Lab. Press, 1989）に記載の方法などに従って行なうことができる。また、市販のライブラリーを使用する場合、添付の使用説明書に記載の方法に従って行なうことができる。
ＤＮＡの塩基配列の変換は、ＰＣＲや公知のキット、例えば、MutanTM-super Express Km（宝酒造（株））、MutanTM-K（宝酒造（株））等を用いて、ODA-LA PCR法やGapped duplex法やKunkel法等の公知の方法あるいはそれらに準じる方法に従って行なうことができる。
クローン化されたタンパク質をコードするＤＮＡは目的によりそのまま、または所望により制限酵素で消化したり、リンカーを付加したりして使用することができる。該ＤＮＡはその５’末端側に翻訳開始コドンとしてのＡＴＧを有し、また３’末端側には翻訳終止コドンとしてのＴＡＡ、ＴＧＡまたはＴＡＧを有していてもよい。これらの翻訳開始コドンや翻訳終止コドンは、適当な合成ＤＮＡアダプターを用いて付加することもできる。
本発明のタンパク質の発現ベクターは、例えば、（イ）本発明のタンパク質をコードするＤＮＡから目的とするＤＮＡ断片を切り出し、（ロ）該ＤＮＡ断片を適当な発現ベクター中のプロモーターの下流に連結することにより製造することができる。
【００３７】
ベクターとしては、大腸菌由来のプラスミド（例、ｐＢＲ３２２，ｐＢＲ３２５，ｐＵＣ１２，ｐＵＣ１３）、枯草菌由来のプラスミド（例、ｐＵＢ１１０，ｐＴＰ５，ｐＣ１９４）、酵母由来プラスミド（例、ｐＳＨ１９，ｐＳＨ１５）、λファージなどのバクテリオファージ、レトロウイルス，ワクシニアウイルス，バキュロウイルスなどの動物ウイルスなどの他、ｐＡ１−１１、ｐＸＴ１、ｐＲｃ／ＣＭＶ、ｐＲｃ／ＲＳＶ、ｐｃＤＮＡＩ／Ｎｅｏなどが用いられる。
本発明で用いられるプロモーターとしては、遺伝子の発現に用いる宿主に対応して適切なプロモーターであればいかなるものでもよい。例えば、動物細胞を宿主として用いる場合は、ＳＲαプロモーター、ＳＶ４０プロモーター、ＬＴＲプロモーター、ＣＭＶプロモーター、ＨＳＶ-ＴＫプロモーターなどが挙げられる。
これらのうち、ＣＭＶ（サイトメガロウイルス）プロモーター、ＳＲαプロモーターなどを用いるのが好ましい。宿主がエシェリヒア属菌である場合は、ｔｒｐプロモーター、ｌａｃプロモーター、ｒｅｃＡプロモーター、λＰＬプロモーター、ｌｐｐプロモーター、Ｔ７プロモーターなどが、宿主がバチルス属菌である場合は、ＳＰＯ１プロモーター、ＳＰＯ２プロモーター、ｐｅｎＰプロモーターなど、宿主が酵母である場合は、ＰＨＯ５プロモーター、ＰＧＫプロモーター、ＧＡＰプロモーター、ＡＤＨプロモーターなどが好ましい。宿主が昆虫細胞である場合は、ポリヘドリンプロモーター、Ｐ１０プロモーターなどが好ましい。
【００３８】
発現ベクターには、以上の他に、所望によりエンハンサー、スプライシングシグナル、ポリＡ付加シグナル、選択マーカー、ＳＶ４０複製オリジン（以下、ＳＶ４０ｏｒｉと略称する場合がある）などを含有しているものを用いることができる。選択マーカーとしては、例えば、ジヒドロ葉酸還元酵素（以下、ｄｈｆｒと略称する場合がある）遺伝子〔メソトレキセート（ＭＴＸ）耐性〕、アンピシリン耐性遺伝子（以下、Ａｍｐｒと略称する場合がある）、ネオマイシン耐性遺伝子（以下、Ｎｅｏｒと略称する場合がある、Ｇ４１８耐性）等が挙げられる。特に、ｄｈｆｒ遺伝子欠損チャイニーズハムスター細胞を用いてｄｈｆｒ遺伝子を選択マーカーとして使用する場合、目的遺伝子をチミジンを含まない培地によっても選択できる。
また、必要に応じて、宿主に合ったシグナル配列を、本発明のタンパク質のＮ端末側に付加する。宿主がエシェリヒア属菌である場合は、ＰｈｏＡ・シグナル配列、ＯｍｐＡ・シグナル配列などが、宿主がバチルス属菌である場合は、α−アミラーゼ・シグナル配列、サブチリシン・シグナル配列などが、宿主が酵母である場合は、ＭＦα・シグナル配列、ＳＵＣ２・シグナル配列など、宿主が動物細胞である場合には、インシュリン・シグナル配列、α−インターフェロン・シグナル配列、抗体分子・シグナル配列などがそれぞれ利用できる。
このようにして構築された本発明のタンパク質をコードするＤＮＡを含有するベクターを用いて、形質転換体を製造することができる。
【００３９】
宿主としては、例えば、エシェリヒア属菌、バチルス属菌、酵母、昆虫細胞、昆虫、動物細胞などが用いられる。
エシェリヒア属菌の具体例としては、例えば、エシェリヒア・コリ(Escherichia coli）Ｋ１２・ＤＨ１〔プロシージングズ・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンシイズ・オブ・ザ・ユーエスエー（Proc. Natl. Acad. Sci. USA），６０巻，１６０(１９６８)〕，ＪＭ１０３〔ヌクイレック・アシッズ・リサーチ（Nucleic Acids Research），９巻，３０９(１９８１)〕，ＪＡ２２１〔ジャーナル・オブ・モレキュラー・バイオロジー（Journal of Molecular Biology）〕，１２０巻，５１７(１９７８)〕，ＨＢ１０１〔ジャーナル・オブ・モレキュラー・バイオロジー，４１巻，４５９(１９６９)〕，Ｃ６００〔ジェネティックス（Genetics），３９巻，４４０(１９５４)〕などが用いられる。
バチルス属菌としては、例えば、バチルス・サブチルス（Bacillus subtilis）ＭＩ１１４〔ジーン，２４巻，２５５(１９８３)〕，２０７−２１〔ジャーナル・オブ・バイオケミストリー（Journal of Biochemistry），９５巻，８７(１９８４)〕などが用いられる。
酵母としては、例えば、サッカロマイセス  セレビシエ（Saccharomyces cerevisiae）ＡＨ２２，ＡＨ２２Ｒ−，ＮＡ８７−１１Ａ，ＤＫＤ−５Ｄ，２０Ｂ−１２、シゾサッカロマイセス  ポンベ（Schizosaccharomyces pombe）ＮＣＹＣ１９１３，ＮＣＹＣ２０３６、ピキア  パストリス（Pichia pastoris）ＫＭ７１などが用いられる。
【００４０】
昆虫細胞としては、例えば、ウイルスがＡｃＮＰＶの場合は、夜盗蛾の幼虫由来株化細胞（Spodoptera frugiperda cell；Ｓｆ細胞）、Trichoplusia niの中腸由来のＭＧ１細胞、Trichoplusia niの卵由来のHigh FiveTM細胞、Mamestra brassicae由来の細胞またはEstigmena acrea由来の細胞などが用いられる。ウイルスがＢｍＮＰＶの場合は、蚕由来株化細胞（Bombyx mori N 細胞；ＢｍＮ細胞）などが用いられる。該Ｓｆ細胞としては、例えば、Ｓｆ９細胞（ATCC CRL1711）、Ｓｆ２１細胞（以上、Vaughn, J.L.ら、イン・ヴィボ（In Vivo）,13, 213-217,(1977)）などが用いられる。
昆虫としては、例えば、カイコの幼虫などが用いられる〔前田ら、ネイチャー（Nature），３１５巻，５９２(１９８５)〕。
動物細胞としては、例えば、サル細胞ＣＯＳ−７，Ｖｅｒｏ，チャイニーズハムスター細胞ＣＨＯ（以下、ＣＨＯ細胞と略記），ｄｈｆｒ遺伝子欠損チャイニーズハムスター細胞ＣＨＯ（以下、ＣＨＯ（ｄｈｆｒ-）細胞と略記），マウスＬ細胞，マウスＡｔＴ−２０，マウスミエローマ細胞，ラットＧＨ３，ヒトＦＬ細胞などが用いられる。
エシェリヒア属菌を形質転換するには、例えば、プロシージングズ・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンジイズ・オブ・ザ・ユーエスエー（Proc. Natl. Acad. Sci. USA），６９巻，２１１０(１９７２)やジーン（Gene），１７巻，１０７(１９８２)などに記載の方法に従って行なうことができる。
【００４１】
バチルス属菌を形質転換するには、例えば、モレキュラー・アンド・ジェネラル・ジェネティックス（Molecular ＆ General Genetics），１６８巻，１１１(１９７９)などに記載の方法に従って行なうことができる。
酵母を形質転換するには、例えば、メソッズ・イン・エンザイモロジー（Methods in Enzymology），１９４巻，１８２−１８７（１９９１）、プロシージングズ・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンシイズ・オブ・ザ・ユーエスエー（Proc. Natl. Acad. Sci. USA），７５巻，１９２９(１９７８）などに記載の方法に従って行なうことができる。
昆虫細胞または昆虫を形質転換するには、例えば、バイオ／テクノロジー（Bio/Technology）,6, 47-55(1988)などに記載の方法に従って行なうことができる。
動物細胞を形質転換するには、例えば、細胞工学別冊８  新細胞工学実験プロトコール．２６３−２６７（１９９５）（秀潤社発行）、ヴィロロジー（Virology），５２巻，４５６(１９７３)に記載の方法に従って行なうことができる。
このようにして、タンパク質をコードするＤＮＡを含有する発現ベクターで形質転換された形質転換体を得ることができる。
宿主がエシェリヒア属菌、バチルス属菌である形質転換体を培養する際、培養に使用される培地としては液体培地が適当であり、その中には該形質転換体の生育に必要な炭素源、窒素源、無機物その他が含有せしめられる。炭素源としては、例えば、グルコース、デキストリン、可溶性澱粉、ショ糖など、窒素源としては、例えば、アンモニウム塩類、硝酸塩類、コーンスチープ・リカー、ペプトン、カゼイン、肉エキス、大豆粕、バレイショ抽出液などの無機または有機物質、無機物としては、例えば、塩化カルシウム、リン酸二水素ナトリウム、塩化マグネシウムなどが挙げられる。また、酵母エキス、ビタミン類、生長促進因子などを添加してもよい。培地のｐＨは約５〜８が望ましい。
【００４２】
エシェリヒア属菌を培養する際の培地としては、例えば、グルコース、カザミノ酸を含むＭ９培地〔ミラー（Miller），ジャーナル・オブ・エクスペリメンツ・イン・モレキュラー・ジェネティックス（Journal of Experiments in Molecular Genetics），４３１−４３３，Cold Spring Harbor Laboratory, New York １９７２〕が好ましい。ここに必要によりプロモーターを効率よく働かせるために、例えば、３β−インドリルアクリル酸のような薬剤を加えることができる。
宿主がエシェリヒア属菌の場合、培養は通常約１５〜４３℃で約３〜２４時間行ない、必要により、通気や撹拌を加えることもできる。
宿主がバチルス属菌の場合、培養は通常約３０〜４０℃で約６〜２４時間行ない、必要により通気や撹拌を加えることもできる。
宿主が酵母である形質転換体を培養する際、培地としては、例えば、バークホールダー（Burkholder）最小培地〔Bostian, K. L. ら、プロシージングズ・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンシイズ・オブ・ザ・ユーエスエー（Proc. Natl. Acad. Sci. USA），７７巻，４５０５(１９８０)〕や０.５％カザミノ酸を含有するＳＤ培地〔Bitter, G. A. ら、プロシージングズ・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンシイズ・オブ・ザ・ユーエスエー（Proc. Natl. Acad. Sci. USA），８１巻，５３３０（１９８４）〕が挙げられる。培地のｐＨは約５〜８に調整するのが好ましい。培養は通常約２０℃〜３５℃で約２４〜７２時間行ない、必要に応じて通気や撹拌を加える。
宿主が昆虫細胞または昆虫である形質転換体を培養する際、培地としては、Grace’s Insect Medium（Grace, T.C.C.,ネイチャー（Nature）,195,788(1962)）に非動化した１０％ウシ血清等の添加物を適宜加えたものなどが用いられる。培地のｐＨは約６．２〜６．４に調整するのが好ましい。培養は通常約２７℃で約３〜５日間行ない、必要に応じて通気や撹拌を加える。
宿主が動物細胞である形質転換体を培養する際、培地としては、例えば、約５〜２０％の胎児牛血清を含むＭＥＭ培地〔サイエンス（Science），１２２巻，５０１(１９５２)〕，ＤＭＥＭ培地〔ヴィロロジー（Virology），８巻，３９６(１９５９)〕，ＲＰＭＩ １６４０培地〔ジャーナル・オブ・ザ・アメリカン・メディカル・アソシエーション（The Journal of the American Medical Association）１９９巻，５１９(１９６７)〕，１９９培地〔プロシージング・オブ・ザ・ソサイエティ・フォー・ザ・バイオロジカル・メディスン（Proceeding of the Society for the Biological Medicine），７３巻，１(１９５０)〕などが用いられる。ｐＨは約６〜８であるのが好ましい。培養は通常約３０℃〜４０℃で約１５〜６０時間行ない、必要に応じて通気や撹拌を加える。
以上のようにして、形質転換体の細胞内、細胞膜または細胞外に本発明のタンパク質を生成せしめることができる。
【００４３】
上記培養物から本発明のタンパク質を分離精製するには、例えば、下記の方法により行なうことができる。
本発明のタンパク質を培養菌体あるいは細胞から抽出するに際しては、培養後、公知の方法で菌体あるいは細胞を集め、これを適当な緩衝液に懸濁し、超音波、リゾチームおよび／または凍結融解などによって菌体あるいは細胞を破壊したのち、遠心分離やろ過によりタンパク質の粗抽出液を得る方法などが適宜用いられる。緩衝液の中に尿素や塩酸グアニジンなどのタンパク質変性剤や、トリトンＸ−１００ＴＭなどの界面活性剤が含まれていてもよい。培養液中にタンパク質が分泌される場合には、培養終了後、公知の方法で菌体あるいは細胞と上清とを分離し、上清を集める。
このようにして得られた培養上清、あるいは抽出液中に含まれるタンパク質の精製は、公知の分離・精製法を適切に組み合わせて行なうことができる。これらの公知の分離、精製法としては、塩析や溶媒沈澱法などの溶解度を利用する方法、透析法、限外ろ過法、ゲルろ過法、およびＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動法などの主として分子量の差を利用する方法、イオン交換クロマトグラフィーなどの荷電の差を利用する方法、アフィニティークロマトグラフィーなどの特異的親和性を利用する方法、逆相高速液体クロマトグラフィーなどの疎水性の差を利用する方法、等電点電気泳動法などの等電点の差を利用する方法などが用いられる。
【００４４】
かくして得られるタンパク質が遊離体で得られた場合には、公知の方法あるいはそれに準じる方法によって塩に変換することができ、逆に塩で得られた場合には公知の方法あるいはそれに準じる方法により、遊離体または他の塩に変換することができる。
なお、組換え体が産生するタンパク質を、精製前または精製後に適当な蛋白修飾酵素を作用させることにより、任意に修飾を加えたり、ポリペプチドを部分的に除去することもできる。蛋白修飾酵素としては、例えば、トリプシン、キモトリプシン、アルギニルエンドペプチダーゼ、プロテインキナーゼ、グリコシダーゼなどが用いられる。
かくして生成する本発明のタンパク質の存在は、特異抗体を用いたエンザイムイムノアッセイやウエスタンブロッティングなどにより測定することができる。
【００４５】
本発明のタンパク質もしくは部分ペプチドまたはその塩に対する抗体は、本発明のタンパク質もしくは部分ペプチドまたはその塩を認識し得る抗体であれば、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体の何れであってもよい。
本発明のタンパク質もしくは部分ペプチドまたはその塩（以下、抗体の説明においては、これらを単に本発明のタンパク質と略記する場合がある）に対する抗体は、本発明のタンパク質を抗原として用い、公知の抗体または抗血清の製造法に従って製造することができる。
〔モノクローナル抗体の作製〕
（ａ）モノクローナル抗体産生細胞の作製
本発明のタンパク質は、温血動物に対して投与により抗体産生が可能な部位にそれ自体あるいは担体、希釈剤とともに投与される。投与に際して抗体産生能を高めるため、完全フロイントアジュバントや不完全フロイントアジュバントを投与してもよい。投与は通常２〜６週毎に１回ずつ、計２〜１０回程度行われる。用いられる温血動物としては、例えば、サル、ウサギ、イヌ、モルモット、マウス、ラット、ヒツジ、ヤギ、ニワトリが挙げられるが、マウスおよびラットが好ましく用いられる。
モノクローナル抗体産生細胞の作製に際しては、抗原で免疫された温血動物、例えばマウスから抗体価の認められた個体を選択し最終免疫の２〜５日後に脾臓またはリンパ節を採取し、それらに含まれる抗体産生細胞を同種または異種動物の骨髄腫細胞と融合させることにより、モノクローナル抗体産生ハイブリドーマを調製することができる。抗血清中の抗体価の測定は、例えば、後記の標識化タンパク質と抗血清とを反応させたのち、抗体に結合した標識剤の活性を測定することにより行なうことができる。融合操作は既知の方法、例えば、ケーラーとミルスタインの方法〔ネイチャー（Nature)、256、495 (1975)〕に従い実施することができる。融合促進剤としては、例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）やセンダイウィルスなどが挙げられるが、好ましくはＰＥＧが用いられる。
【００４６】
骨髄腫細胞としては、例えば、ＮＳ−１、Ｐ３Ｕ１、ＳＰ２／０、ＡＰ−１などの温血動物の骨髄腫細胞が挙げられるが、Ｐ３Ｕ１が好ましく用いられる。用いられる抗体産生細胞（脾臓細胞）数と骨髄腫細胞数との好ましい比率は１：１〜２０：１程度であり、ＰＥＧ（好ましくはＰＥＧ１０００〜ＰＥＧ６０００）が１０〜８０％程度の濃度で添加され、２０〜４０℃、好ましくは３０〜３７℃で１〜１０分間インキュベートすることにより効率よく細胞融合を実施できる。
モノクローナル抗体産生ハイブリドーマのスクリーニングには種々の方法が使用できるが、例えば、タンパク質抗原を直接あるいは担体とともに吸着させた固相（例、マイクロプレート）にハイブリドーマ培養上清を添加し、次に放射性物質や酵素などで標識した抗免疫グロブリン抗体（細胞融合に用いられる細胞がマウスの場合、抗マウス免疫グロブリン抗体が用いられる）またはプロテインＡを加え、固相に結合したモノクローナル抗体を検出する方法、抗免疫グロブリン抗体またはプロテインＡを吸着させた固相にハイブリドーマ培養上清を添加し、放射性物質や酵素などで標識したタンパク質を加え、固相に結合したモノクローナル抗体を検出する方法などが挙げられる。
モノクローナル抗体の選別は、公知あるいはそれに準じる方法に従って行なうことができる。通常ＨＡＴ（ヒポキサンチン、アミノプテリン、チミジン）を添加した動物細胞用培地で行なうことができる。選別および育種用培地としては、ハイブリドーマが生育できるものならばどのような培地を用いても良い。例えば、１〜２０％、好ましくは１０〜２０％の牛胎児血清を含むＲＰＭＩ １６４０培地、１〜１０％の牛胎児血清を含むＧＩＴ培地（和光純薬工業（株））あるいはハイブリドーマ培養用無血清培地（ＳＦＭ−１０１、日水製薬（株））などを用いることができる。培養温度は、通常２０〜４０℃、好ましくは約３７℃である。培養時間は、通常５日〜３週間、好ましくは１週間〜２週間である。培養は、通常５％炭酸ガス下で行なうことができる。ハイブリドーマ培養上清の抗体価は、上記の抗血清中の抗体価の測定と同様にして測定できる。
【００４７】
（ｂ）モノクローナル抗体の精製
モノクローナル抗体の分離精製は、公知の方法、例えば、免疫グロブリンの分離精製法〔例、塩析法、アルコール沈殿法、等電点沈殿法、電気泳動法、イオン交換体（例、ＤＥＡＥ）による吸脱着法、超遠心法、ゲルろ過法、抗原結合固相あるいはプロテインＡあるいはプロテインＧなどの活性吸着剤により抗体のみを採取し、結合を解離させて抗体を得る特異的精製法〕に従って行なうことができる。
【００４８】
〔ポリクローナル抗体の作製〕
本発明のポリクローナル抗体は、公知あるいはそれに準じる方法に従って製造することができる。例えば、免疫抗原（タンパク質抗原）自体、あるいはそれとキャリアータンパク質との複合体をつくり、上記のモノクローナル抗体の製造法と同様に温血動物に免疫を行ない、該免疫動物から本発明のタンパク質に対する抗体含有物を採取して、抗体の分離精製を行なうことにより製造することができる。
温血動物を免疫するために用いられる免疫抗原とキャリアータンパク質との複合体に関し、キャリアータンパク質の種類およびキャリアーとハプテンとの混合比は、キャリアーに架橋させて免疫したハプテンに対して抗体が効率良くできれば、どの様なものをどの様な比率で架橋させてもよいが、例えば、ウシ血清アルブミンやウシサイログロブリン、ヘモシアニン等を重量比でハプテン１に対し、約０．１〜２０、好ましくは約１〜５の割合でカプルさせる方法が用いられる。
また、ハプテンとキャリアーのカプリングには、種々の縮合剤を用いることができるが、グルタルアルデヒドやカルボジイミド、マレイミド活性エステル、チオール基、ジチオビリジル基を含有する活性エステル試薬等が用いられる。
縮合生成物は、温血動物に対して、抗体産生が可能な部位にそれ自体あるいは担体、希釈剤とともに投与される。投与に際して抗体産生能を高めるため、完全フロイントアジュバントや不完全フロイントアジュバントを投与してもよい。投与は、通常約２〜６週毎に１回ずつ、計約３〜１０回程度行なわれる。
ポリクローナル抗体は、上記の方法で免疫された温血動物の血液、腹水など、好ましくは血液から採取することができる。
抗血清中のポリクローナル抗体価の測定は、上記の抗血清中の抗体価の測定と同様にして測定できる。ポリクローナル抗体の分離精製は、上記のモノクローナル抗体の分離精製と同様の免疫グロブリンの分離精製法に従って行なうことができる。
【００４９】
本発明のタンパク質または部分ペプチドをコードするＤＮＡ（以下、アンチセンスポリヌクレオチドの説明においては、これらのＤＮＡを本発明のＤＮＡと略記する場合がある）の塩基配列に相補的な、または実質的に相補的な塩基配列またはその一部を有するアンチセンスポリヌクレオチドとしては、本発明のＤＮＡの塩基配列に相補的な、または実質的に相補的な塩基配列またはその一部を有し、該ＤＮＡの発現を抑制し得る作用を有するものであれば、いずれのアンチセンスポリヌクレオチドであってもよいが、アンチセンスＤＮＡが好ましい。
本発明のＤＮＡに実質的に相補的な塩基配列とは、例えば、本発明のＤＮＡに相補的な塩基配列（すなわち、本発明のＤＮＡの相補鎖）の全塩基配列あるいは部分塩基配列と約７０％以上、好ましくは約８０％以上、より好ましくは約９０％以上、最も好ましくは約９５％以上の相同性を有する塩基配列などが挙げられる。特に、本発明のＤＮＡの相補鎖の全塩基配列うち、本発明のタンパク質のＮ末端部位をコードする部分の塩基配列（例えば、開始コドン付近の塩基配列など）の相補鎖と約７０％以上、好ましくは約８０％以上、より好ましくは約９０％以上、最も好ましくは約９５％以上の相同性を有するアンチセンスポリヌクレオチドが好適である。
【００５０】
具体的には、配列番号：２、配列番号：１１、配列番号：１２、配列番号：１３、配列番号：１９、配列番号：４１、配列番号：４３、配列番号：６０、配列番号：６１、配列番号：６２、配列番号：６７、配列番号：１０３、配列番号：１０５もしくは配列番号：１１２で表わされる塩基配列を有するＤＮＡの塩基配列に相補的な、もしくは実質的に相補的な塩基配列、またはその一部分を有するアンチセンスポリヌクレオチド、好ましくは例えば、配列番号：２、配列番号：１１、配列番号：１２、配列番号：１３、配列番号：１９、配列番号：４１、配列番号：４３、配列番号：６０、配列番号：６１、配列番号：６２、配列番号：６７、配列番号：１０３、配列番号：１０５もしくは配列番号：１１２で表わされる塩基配列を有するＤＮＡの塩基配列に相補な塩基配列、またはその一部分を有するアンチセンスポリヌクレオチドなどが挙げられる。
アンチセンスポリヌクレオチドは通常、１０〜４０個程度、好ましくは１５〜３０個程度の塩基から構成される。
ヌクレアーゼなどの加水分解酵素による分解を防ぐために、アンチセンスＤＮＡを構成する各ヌクレオチドのりん酸残基（ホスフェート）は、例えば、ホスホロチオエート、メチルホスホネート、ホスホロジチオネートなどの化学修飾りん酸残基に置換されていてもよい。これらのアンチセンスポリヌクレオチドは、公知のＤＮＡ合成装置などを用いて製造することができる。
【００５１】
本発明に従えば、本発明のタンパク質遺伝子の複製または発現を阻害することのできる該遺伝子に対応するアンチセンスポリヌクレオチド（核酸）を、クローン化した、あるいは決定されたタンパク質をコードするＤＮＡの塩基配列情報に基づき設計し、合成しうる。かかるアンチセンスポリヌクレオチドは、本発明のタンパク質遺伝子のＲＮＡとハイブリダイズすることができ、該ＲＮＡの合成または機能を阻害することができるか、あるいは本発明のタンパク質関連ＲＮＡとの相互作用を介して本発明のタンパク質遺伝子の発現を調節・制御することができる。本発明のタンパク質関連ＲＮＡの選択された配列に相補的なポリヌクレオチド、および本発明のタンパク質関連ＲＮＡと特異的にハイブリダイズすることができるポリヌクレオチドは、生体内および生体外で本発明のタンパク質遺伝子の発現を調節・制御するのに有用であり、また病気などの治療または診断に有用である。用語「対応する」とは、遺伝子を含めたヌクレオチド、塩基配列または核酸の特定の配列に相同性を有するあるいは相補的であることを意味する。ヌクレオチド、塩基配列または核酸とタンパク質との間で「対応する」とは、ヌクレオチド（核酸）の配列またはその相補体から誘導される（指令にある）タンパク質のアミノ酸を通常指している。タンパク質遺伝子の５’端ヘアピンループ、５’端６−ベースペア・リピート、５’端非翻訳領域、ポリペプチド翻訳開始コドン、タンパク質コード領域、ＯＲＦ翻訳終止コドン、３’端非翻訳領域、３’端パリンドローム領域または３’端ヘアピンループなどは、好ましい対象領域として選択しうるが、タンパク質遺伝子内の如何なる領域も対象として選択しうる。
目的核酸と、対象領域の少なくとも一部に相補的なポリヌクレオチドとの関係については、目的核酸が対象領域とハイブリダイズすることができる場合は、その目的核酸は、当該対象領域のポリヌクレオチドに対して「アンチセンス」であるということができる。アンチセンスポリヌクレオチドは、２−デオキシ−Ｄ−リボースを含有しているポリヌクレオチド、Ｄ−リボースを含有しているポリヌクレオチド、プリンまたはピリミジン塩基のＮ−グリコシドであるその他のタイプのポリヌクレオチド、非ヌクレオチド骨格を有するその他のポリマー（例えば、市販のタンパク質核酸および合成配列特異的な核酸ポリマー）または特殊な結合を含有するその他のポリマー（但し、該ポリマーはＤＮＡやＲＮＡ中に見出されるような塩基のペアリングや塩基の付着を許容する配置をもつヌクレオチドを含有する）などが挙げられる。それらは、２本鎖ＤＮＡ、１本鎖ＤＮＡ、２本鎖ＲＮＡ、１本鎖ＲＮＡ、ＤＮＡ：ＲＮＡハイブリッドであってもよく、さらに非修飾ポリヌクレオチド（または非修飾オリゴヌクレオチド）、公知の修飾の付加されたもの、例えば当該分野で知られた標識のあるもの、キャップの付いたもの、メチル化されたもの、１個以上の天然のヌクレオチドを類縁物で置換したもの、分子内ヌクレオチド修飾のされたもの、例えば非荷電結合（例えば、メチルホスホネート、ホスホトリエステル、ホスホルアミデート、カルバメートなど）を持つもの、電荷を有する結合または硫黄含有結合（例、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエートなど）を持つもの、例えばタンパク質（例、ヌクレアーゼ、ヌクレアーゼ・インヒビター、トキシン、抗体、シグナルペプチド、ポリ−Ｌ−リジンなど）や糖（例、モノサッカライドなど）などの側鎖基を有しているもの、インターカレント化合物（例、アクリジン、ソラレンなど）を持つもの、キレート化合物（例えば、金属、放射活性をもつ金属、ホウ素、酸化性の金属など）を含有するもの、アルキル化剤を含有するもの、修飾された結合を持つもの（例えば、αアノマー型の核酸など）であってもよい。ここで「ヌクレオシド」、「ヌクレオチド」および「核酸」とは、プリンおよびピリミジン塩基を含有するのみでなく、修飾されたその他の複素環型塩基をもつようなものを含んでいて良い。このような修飾物は、メチル化されたプリンおよびピリミジン、アシル化されたプリンおよびピリミジン、あるいはその他の複素環を含むものであってよい。修飾されたヌクレオチドおよび修飾されたヌクレオチドはまた糖部分が修飾されていてよく、例えば、１個以上の水酸基がハロゲンとか、脂肪族基などで置換されていたり、またはエーテル、アミンなどの官能基に変換されていてよい。
本発明のアンチセンスポリヌクレオチドは、ＲＮＡ、ＤＮＡまたは修飾された核酸（ＲＮＡ、ＤＮＡ）である。修飾された核酸の具体例としては、核酸の硫黄誘導体、チオホスフェート誘導体、ポリヌクレオシドアミドやオリゴヌクレオシドアミドの分解に抵抗性のものなどが挙げられる。本発明のアンチセンスポリヌクレオチドは、例えば、以下のように設計されうる。すなわち、細胞内でのアンチセンスポリヌクレオチドをより安定なものにする、アンチセンスポリヌクレオチドの細胞透過性をより高める、目標とするセンス鎖に対する親和性をより大きなものにする、また、もし毒性があるような場合はアンチセンスポリヌクレオチドの毒性をより小さなものにする。このような修飾は、例えばPharm Tech Japan, 8巻, 247頁または395頁, 1992年、Antisense Research and Applications, CRC Press, 1993年などで数多く報告されている。
【００５２】
本発明のアンチセンスポリヌクレオチドは、変化せしめられたり、修飾された糖、塩基、結合を含有していて良く、リポゾーム、ミクロスフェアのような特殊な形態で供与されたり、遺伝子治療により適用されたり、付加された形態で与えられることができうる。こうして付加形態で用いられるものとしては、リン酸基骨格の電荷を中和するように働くポリリジンのようなポリカチオン体、細胞膜との相互作用を高めたり、核酸の取込みを増大せしめるような脂質（例、ホスホリピド、コレステロールなど）などの疎水性のものが挙げられる。付加するに好ましい脂質としては、コレステロールやその誘導体（例、コレステリルクロロホルメート、コール酸など）が挙げられる。こうしたものは、核酸の３’端または５’端に付着させることができ、塩基、糖、分子内ヌクレオシド結合を介して付着させることができうる。その他の基としては、核酸の３’端または５’端に特異的に配置されたキャップ用の基で、エキソヌクレアーゼ、ＲＮａｓｅなどのヌクレアーゼによる分解を阻止するためのものが挙げられる。こうしたキャップ用の基としては、ポリエチレングリコール、テトラエチレングリコールなどのグリコールをはじめとした当該分野で知られた水酸基の保護基が挙げられるが、それに限定されるものではない。
アンチセンスポリヌクレオチドの阻害活性は、本発明の形質転換体、本発明の生体内や生体外の遺伝子発現系、または本発明のタンパク質の生体内や生体外の翻訳系を用いて調べることができる。
【００５３】
以下に、本発明のタンパク質もしくは部分ペプチドまたはその塩（以下、本発明のタンパク質と略記する場合がある）、本発明のタンパク質または部分ペプチドをコードするＤＮＡ（以下、本発明のＤＮＡと略記する場合がある）、本発明のタンパク質もしくは部分ペプチドまたはその塩に対する抗体（以下、本発明の抗体と略記する場合がある）、および本発明のＤＮＡのアンチセンスポリヌクレオチド（以下、本発明のアンチセンスポリヌクレオチドと略記する場合がある）の用途を説明する。
また、配列番号：１、配列番号：１４または配列番号：１０４で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質を「本発明のタンパク質Ａ」、配列番号：１８で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質を「本発明のタンパク質Ｂ」、配列番号：４２で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質を「本発明のタンパク質Ｃ」、配列番号：６６で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質を「本発明のタンパク質Ｄ」と略称することもある。
【００５４】
〔１〕本発明のタンパク質が関与する各種疾病の予防・治療剤
本発明のタンパク質Ａは、基質の輸送に寄与するとともに、その基質代謝などに重要な役割を果たしている。以下、本発明のタンパク質Ａの基質を「基質Ａ」と略記することもある。
基質Ａとしては、例えば、ステロイドホルモン、胆汁酸などが挙げられる。
ステロイドホルモンとしては、例えば、卵胞ホルモン、黄体ホルモン、男性ホルモン、ミネラルコルチコイド、グルココルチコイド、ステロイド系薬剤またはこれらの代謝物（例、硫酸抱合体、グルクロン酸抱合体など）などが挙げられる。中でも、好ましくは、ステロイドホルモンまたはその代謝物である。さらに好ましくは卵胞ホルモンもしくは男性ホルモンまたはその代謝物（好ましくは、硫酸抱合体など）などである。最も好ましくは、エストロン、デヒドロエピアンドロステロンまたはこれらの硫酸抱合体である。
卵胞ホルモンとしては、例えば、エストロン、エストラジオール、エストリオール、エステトロールなどが挙げられる。
黄体ホルモンとしては、例えば、プロゲステロン、プレグナンジオールなどが挙げられる。
男性ホルモンとしては、例えば、デヒドロエピアンドロステロン、テストステロン、アンドロステンジオン、5α−ジヒドロテストステオロン、アンドロステロンなどが挙げられる。
ミネラルコルチコイドとしては、例えば、アルドステロンなどが挙げられる。
グルココルチコイドとしては、例えば、コルチゾール、コルチゾン、コルチコステロン、デヒドロコルチコステロンなどが挙げられる。
ステロイド系薬剤としては、例えば、デキサメタゾン、ベタメタゾン、プレドニゾロン、トリアムシノロン、フルオロコルチゾン、クロミフェン、タモキシフェン、ダナゾールなどが挙げられる。
胆汁酸としては、例えば、タウロコール酸、グリココール酸、コール酸、リトコール酸、デオキシコール酸、タウロデオキシコール酸、タウロウルソデオキシコール酸、ケノデオキシコール酸、グリコケノデオキシコール酸、グリコデオキシコール酸などが挙げられる。
【００５５】
したがって、本発明のタンパク質ＡをコードするＤＮＡに異常があったり、欠損している場合あるいは本発明のタンパク質Ａの発現量が減少している場合には、例えば、高脂血症、生殖器疾患（例、前立腺肥大症、前立腺炎、精巣神経症、卵巣嚢腫など）、消化器疾患（例、過敏性腸症候群、潰瘍性大腸炎、クローン病、虚血性大腸炎、胃炎、消化性潰瘍、直腸炎、逆流性食道炎、十二指腸炎など）、呼吸器疾患（例、慢性閉塞性肺疾患、気管支喘息など）、自己免疫疾患（例、重症筋無力症、糸球体腎炎、多発性硬化症、シェーグレン症候群、全身性エリテマトーデスなど）、アレルギー性疾患（例、花粉症、アレルギー性鼻炎、アナフィラキシーショック、アトピー性皮膚炎など）、リウマチ性疾患（例、慢性関節リウマチ、変形関節症、痛風など）、胸腺疾患、免疫不全（例、白血球異常、脾機能不全または胸腺異常にともなう免疫不全など）、糖尿病、甲状腺機能低下、循環器疾患（例、心不全、不整脈、ＱＴ延長症候群、動脈硬化、狭心症など）、膵臓疾患（例、膵炎、膵嚢胞性線維症などの膵機能不全など）、癌（例、精巣腫瘍、卵巣癌、乳癌、食道癌、肺癌、腎臓癌、肝臓癌、非小細胞肺癌、前立腺癌、胃癌、膀胱癌、子宮頸部癌、結腸癌、直腸癌、膵臓癌、胸腺腫、筋肉腫など）などの種々の疾患が発症する。
したがって、本発明のタンパク質ＡおよびそれをコードするＤＮＡは、例えば、高脂血症、生殖器疾患（例、前立腺肥大症、前立腺炎、精巣神経症、卵巣嚢腫など）、消化器疾患（例、過敏性腸症候群、潰瘍性大腸炎、クローン病、虚血性大腸炎、胃炎、消化性潰瘍、直腸炎、逆流性食道炎、十二指腸炎など）、呼吸器疾患（例、慢性閉塞性肺疾患、気管支喘息など）、自己免疫疾患（例、重症筋無力症、糸球体腎炎、多発性硬化症、シェーグレン症候群、全身性エリテマトーデスなど）、アレルギー性疾患（例、花粉症、アレルギー性鼻炎、アナフィラキシーショック、アトピー性皮膚炎など）、リウマチ性疾患（例、慢性関節リウマチ、変形関節症、痛風など）、胸腺疾患、免疫不全（例、白血球異常、脾機能不全または胸腺異常にともなう免疫不全など）、糖尿病、甲状腺機能低下、循環器疾患（例、心不全、不整脈、ＱＴ延長症候群、動脈硬化、狭心症など）、膵臓疾患（例、膵炎、膵嚢胞性線維症などの膵機能不全など）、癌（例、精巣腫瘍、卵巣癌、乳癌、食道癌、肺癌、腎臓癌、肝臓癌、非小細胞肺癌、前立腺癌、胃癌、膀胱癌、子宮頸部癌、結腸癌、直腸癌、膵臓癌、胸腺腫、筋肉腫など）などの予防・治療剤などの安全な医薬として使用することができる。好ましくは高脂血症、動脈硬化、生殖器疾患、消化器疾患などの予防・治療剤である。
【００５６】
例えば、生体内において本発明のタンパク質Ａが減少あるいは欠損しているために、基質Ａの輸送活性が十分に、あるいは正常に発揮されない患者がいる場合に、（i）本発明のタンパク質ＡをコードするＤＮＡを該患者に投与し、生体内で本発明のタンパク質Ａを発現させることによって、（ii）細胞に上記ＤＮＡを挿入し、本発明のタンパク質Ａを発現させた後に、該細胞を患者に移植することによって、または（iii）本発明のタンパク質Ａを該患者に投与することなどによって、該患者における本発明のタンパク質の役割を十分に、あるいは正常に発揮させることができる。
【００５７】
本発明のタンパク質Ｂは、カチオン（好ましくは一価のカチオン、例えばNa+、K+など）とH+の交換輸送活性などを有し、細胞内のｐＨの調節、細胞容積調節、腎臓や小腸におけるNa+の再吸収などの重要な役割を果たしている。
したがって、本発明のタンパク質ＢをコードするＤＮＡに異常があったり、欠損している場合あるいは本発明のタンパク質Ｂの発現量が減少している場合には、例えば、腎疾患（例、腎不全、尿毒症など）、消化器疾患（例、過敏性腸症候群、潰瘍性大腸炎、クローン病、虚血性大腸炎、胃炎、消化性潰瘍、直腸炎、逆流性食道炎、十二指腸炎など）、呼吸器疾患（例、慢性閉塞性肺疾患、喘息など）、膵臓疾患（例、膵炎、膵嚢胞性線維症などの膵機能不全など）、自己免疫疾患（例、重症筋無力症、糸球体腎炎、多発性硬化症、シェーグレン症候群、全身性エリテマトーデスなど）、アレルギー性疾患（例、花粉症、アレルギー性鼻炎、アナフィラキシーショック、アトピー性皮膚炎など）、リウマチ性疾患（例、慢性関節リウマチ、変形関節症、痛風など）、胸腺疾患、免疫不全（例、白血球異常、脾機能不全または胸腺異常にともなう免疫不全など）、生殖器疾患（例、前立腺肥大症、前立腺炎、精巣神経症、卵巣嚢腫など）、脾臓疾患、癌（例、精巣腫瘍、卵巣癌、乳癌、食道癌、肺癌、腎臓癌、肝臓癌、非小細胞肺癌、前立腺癌、胃癌、膀胱癌、子宮頸部癌、結腸癌、直腸癌、膵臓癌、胸腺腫、筋肉腫など）、糖尿病、高血圧、虚血後再灌流障害、中枢神経系疾患（例、アルツハイマー病、パーキンソン症候群、統合失調症、脳血管性痴呆、脳虚血、てんかんなど）などの予防・治療剤などの安全な医薬として使用することができる。好ましくは、呼吸器疾患、腎疾患、消化器疾患などの種々の疾患が発症する。
したがって、本発明のタンパク質ＢおよびそれをコードするＤＮＡは、例えば、腎疾患（例、腎不全、尿毒症など）、消化器疾患（例、過敏性腸症候群、潰瘍性大腸炎、クローン病、虚血性大腸炎、胃炎、消化性潰瘍、直腸炎、逆流性食道炎、十二指腸炎など）、呼吸器疾患（例、慢性閉塞性肺疾患、喘息など）、膵臓疾患（例、膵炎、膵嚢胞性線維症などの膵機能不全など）、自己免疫疾患（例、重症筋無力症、糸球体腎炎、多発性硬化症、シェーグレン症候群、全身性エリテマトーデスなど）、アレルギー性疾患（例、花粉症、アレルギー性鼻炎、アナフィラキシーショック、アトピー性皮膚炎など）、リウマチ性疾患（例、慢性関節リウマチ、変形関節症、痛風など）、胸腺疾患、免疫不全（例、白血球異常、脾機能不全または胸腺異常にともなう免疫不全など）、生殖器疾患（例、前立腺肥大症、前立腺炎、精巣神経症、卵巣嚢腫など）、脾臓疾患、癌（例、精巣腫瘍、卵巣癌、乳癌、食道癌、肺癌、腎臓癌、肝臓癌、非小細胞肺癌、前立腺癌、胃癌、膀胱癌、子宮頸部癌、結腸癌、直腸癌、膵臓癌、胸腺腫、筋肉腫など）、糖尿病、高血圧、虚血後再灌流障害、中枢神経系疾患（例、アルツハイマー病、パーキンソン症候群、統合失調症、脳血管性痴呆、脳虚血、てんかんなど）などの予防・治療剤などの安全な医薬として使用することができる。好ましくは、呼吸器疾患、腎疾患、消化器疾患などの予防・治療剤である。
【００５８】
例えば、生体内において本発明のタンパク質Ｂが減少あるいは欠損しているために、カチオン（好ましくは一価のカチオン、例えばNa+、K+など）とH+の交換輸送活性が十分に、あるいは正常に発揮されない患者がいる場合に、（i）本発明のタンパク質ＢをコードするＤＮＡを該患者に投与し、生体内で本発明のタンパク質Ｂを発現させることによって、（ii）細胞に上記ＤＮＡを挿入し、本発明のタンパク質Ｂを発現させた後に、該細胞を患者に移植することによって、または（iii）本発明のタンパク質Ｂを該患者に投与することなどによって、該患者における本発明のタンパク質Ｂの役割を十分に、あるいは正常に発揮させることができる。
【００５９】
本発明のタンパク質Ｃは、アミノリン脂質の輸送活性などを有し、アミノリン脂質の輸送に寄与するとともに、生体膜の脂質分布などに重要な役割を果たしている。
したがって、本発明のタンパク質ＣをコードするＤＮＡに異常があったり、欠損している場合あるいは本発明のタンパク質Ｃの発現量が減少している場合には、例えば、膵臓疾患（例、膵炎、膵嚢胞性線維症などの膵機能不全など）、生殖器疾患（例、前立腺肥大症、前立腺炎、精巣神経症、卵巣嚢腫など）、中枢神経系疾患（例、アルツハイマー病、パーキンソン症候群、統合失調症、脳血管性痴呆、脳虚血、てんかんなど）、消化器疾患（例、過敏性腸症候群、潰瘍性大腸炎、クローン病、虚血性大腸炎、胃炎、消化性潰瘍、直腸炎、逆流性食道炎、十二指腸炎など）、呼吸器疾患（例、慢性閉塞性肺疾患、喘息など）、糖尿病、高脂血症、胆汁うっ滞、または癌（例、精巣腫瘍、卵巣癌、乳癌、食道癌、肺癌、腎臓癌、肝臓癌、非小細胞肺癌、前立腺癌、胃癌、膀胱癌、子宮頸部癌、結腸癌、直腸癌、膵臓癌、胸腺腫、筋肉腫など）など、好ましくは、膵臓疾患、中枢神経系疾患、消化器疾患、呼吸器疾患などの種々の疾患が発症する。
したがって、本発明のタンパク質ＣおよびそれをコードするＤＮＡは、例えば、膵臓疾患（例、膵炎、膵嚢胞性線維症などの膵機能不全など）、生殖器疾患（例、前立腺肥大症、前立腺炎、精巣神経症、卵巣嚢腫など）、中枢神経系疾患（例、アルツハイマー病、パーキンソン症候群、統合失調症、脳血管性痴呆、脳虚血、てんかんなど）、消化器疾患（例、過敏性腸症候群、潰瘍性大腸炎、クローン病、虚血性大腸炎、胃炎、消化性潰瘍、直腸炎、逆流性食道炎、十二指腸炎など）、呼吸器疾患（例、慢性閉塞性肺疾患、喘息など）、糖尿病、高脂血症、胆汁うっ滞、または癌（例、精巣腫瘍、卵巣癌、乳癌、食道癌、肺癌、腎臓癌、肝臓癌、非小細胞肺癌、前立腺癌、胃癌、膀胱癌、子宮頸部癌、結腸癌、直腸癌、膵臓癌、胸腺腫、筋肉腫など）などの予防・治療剤などの安全な医薬として使用することができる。好ましくは、膵臓疾患、中枢神経系疾患、消化器疾患、呼吸器疾患などの予防・治療剤である。
【００６０】
例えば、生体内において本発明のタンパク質Ｃが減少あるいは欠損しているために、アミノリン脂質の輸送活性が十分に、あるいは正常に発揮されない患者がいる場合に、（i）本発明のタンパク質ＣをコードするＤＮＡを該患者に投与し、生体内で本発明のタンパク質Ｃを発現させることによって、（ii）細胞に上記ＤＮＡを挿入し、本発明のタンパク質Ｃを発現させた後に、該細胞を患者に移植することによって、または（iii）本発明のタンパク質Ｃを該患者に投与することなどによって、該患者における本発明のタンパク質の役割を十分に、あるいは正常に発揮させることができる。
【００６１】
本発明のタンパク質Ｄは、カチオンチャネル活性を有し、痛みなどの刺激の認識に重要な役割を果たしている。温度感受性カチオンチャネルとしても機能しうる。
したがって、本発明のタンパク質ＤをコードするＤＮＡに異常があったり、欠損している場合あるいは本発明のタンパク質Ｄの発現量が減少している場合には、例えば、炎症性疾患（例、敗血症、肺炎、脳炎、髄膜炎、肝炎、心筋炎、胸膜炎など）、自己免疫疾患（例、重症筋無力症、糸球体腎炎、多発性硬化症、シェーグレン症候群、全身性エリテマトーデスなど）、アレルギー性疾患（例、花粉症、アレルギー性鼻炎、アナフィラキシーショック、アトピー性皮膚炎など）、リウマチ性疾患（例、慢性関節リウマチ、変形関節症、痛風など）、糖尿病性神経症、胸腺疾患、免疫不全（例、白血球異常、脾機能不全または胸腺異常にともなう免疫不全など）、消化器疾患（例、過敏性腸症候群、潰瘍性大腸炎、クローン病、虚血性大腸炎、胃炎、消化性潰瘍、直腸炎、逆流性食道炎、十二指腸炎など）、呼吸器疾患（例、慢性閉塞性肺疾患、喘息など）、循環器疾患（例、心不全、不整脈、ＱＴ延長症候群、動脈硬化、狭心症など）、肝臓疾患(例、肝硬変など)、腎疾患（例、腎不全、尿毒症など）、筋肉疾患（例、筋萎縮症など）、膵臓疾患（例、膵炎、膵嚢胞性線維症などの膵機能不全など）、生殖器疾患（例、前立腺肥大症、前立腺炎、精巣神経症、卵巣嚢腫など）、熱傷、疼痛症候群（例、癌性疼痛、関連痛など）、癌（例、精巣腫瘍、卵巣癌、乳癌、食道癌、肺癌、腎臓癌、肝臓癌、非小細胞肺癌、前立腺癌、胃癌、膀胱癌、子宮頸部癌、結腸癌、直腸癌、膵臓癌、胸腺腫、筋肉腫など）など、好ましくは、炎症性疾患、リウマチ性疾患、糖尿病性神経症などの種々の疾患が発症する。
したがって、本発明のタンパク質ＤおよびそれをコードするＤＮＡは、例えば、炎症性疾患（例、敗血症、肺炎、脳炎、髄膜炎、肝炎、心筋炎、胸膜炎など）、自己免疫疾患（例、重症筋無力症、糸球体腎炎、多発性硬化症、シェーグレン症候群、全身性エリテマトーデスなど）、アレルギー性疾患（例、花粉症、アレルギー性鼻炎、アナフィラキシーショック、アトピー性皮膚炎など）、リウマチ性疾患（例、慢性関節リウマチ、変形関節症、痛風など）、糖尿病性神経症、胸腺疾患、免疫不全（例、白血球異常、脾機能不全または胸腺異常にともなう免疫不全など）、消化器疾患（例、過敏性腸症候群、潰瘍性大腸炎、クローン病、虚血性大腸炎、胃炎、消化性潰瘍、直腸炎、逆流性食道炎、十二指腸炎など）、呼吸器疾患（例、慢性閉塞性肺疾患、喘息など）、循環器疾患（例、心不全、不整脈、ＱＴ延長症候群、動脈硬化、狭心症など）、肝臓疾患(例、肝硬変など)、腎疾患（例、腎不全、尿毒症など）、筋肉疾患（例、筋萎縮症など）、膵臓疾患（例、膵炎、膵嚢胞性線維症などの膵機能不全など）、生殖器疾患（例、前立腺肥大症、前立腺炎、精巣神経症、卵巣嚢腫など）、熱傷、疼痛症候群（例、癌性疼痛、関連痛など）、癌（例、精巣腫瘍、卵巣癌、乳癌、食道癌、肺癌、腎臓癌、肝臓癌、非小細胞肺癌、前立腺癌、胃癌、膀胱癌、子宮頸部癌、結腸癌、直腸癌、膵臓癌、胸腺腫、筋肉腫など）などの予防・治療剤などの安全な医薬として使用することができる。好ましくは、炎症性疾患、リウマチ性疾患、糖尿病性神経症などの予防・治療剤である。
【００６２】
例えば、生体内において本発明のタンパク質Ｄが減少あるいは欠損しているために、カチオンチャネル活性が十分に、あるいは正常に発揮されない患者がいる場合に、（i）本発明のタンパク質ＤをコードするＤＮＡを該患者に投与し、生体内で本発明のタンパク質Ｄを発現させることによって、（ii）細胞に上記ＤＮＡを挿入し、本発明のタンパク質Ｄを発現させた後に、該細胞を患者に移植することによって、または（iii）本発明のタンパク質Ｄを該患者に投与することなどによって、該患者における本発明のタンパク質の役割を十分に、あるいは正常に発揮させることができる。
【００６３】
本発明のＤＮＡを上記の予防・治療剤として使用する場合は、該ＤＮＡを単独あるいはレトロウイルスベクター、アデノウイルスベクター、アデノウイルスアソシエーテッドウイルスベクターなどの適当なベクターに挿入した後、常套手段に従って、ヒトまたは温血動物に投与することができる。本発明のＤＮＡは、そのままで、あるいは摂取促進のための補助剤などの生理学的に認められる担体とともに製剤化し、遺伝子銃やハイドロゲルカテーテルのようなカテーテルによって投与できる。
本発明のタンパク質を上記の予防・治療剤として使用する場合は、少なくとも９０％、好ましくは９５％以上、より好ましくは９８％以上、さらに好ましくは９９％以上に精製されたものを使用するのが好ましい。
【００６４】
本発明のタンパク質は、例えば、必要に応じて糖衣を施した錠剤、カプセル剤、エリキシル剤、マイクロカプセル剤などとして経口的に、あるいは水もしくはそれ以外の薬学的に許容し得る液との無菌性溶液、または懸濁液剤などの注射剤の形で非経口的に使用できる。例えば、本発明のタンパク質等を生理学的に認められる担体、香味剤、賦形剤、ベヒクル、防腐剤、安定剤、結合剤などとともに一般に認められた製剤実施に要求される単位用量形態で混和することによって製造することができる。これら製剤における有効成分量は指示された範囲の適当な用量が得られるようにするものである。
錠剤、カプセル剤などに混和することができる添加剤としては、例えば、ゼラチン、コーンスターチ、トラガント、アラビアゴムのような結合剤、結晶性セルロースのような賦形剤、コーンスターチ、ゼラチン、アルギン酸などのような膨化剤、ステアリン酸マグネシウムのような潤滑剤、ショ糖、乳糖またはサッカリンのような甘味剤、ペパーミント、アカモノ油またはチェリーのような香味剤などが用いられる。調剤単位形態がカプセルである場合には、前記タイプの材料にさらに油脂のような液状担体を含有することができる。注射のための無菌組成物は注射用水のようなベヒクル中の活性物質、胡麻油、椰子油などのような天然産出植物油などを溶解または懸濁させるなどの通常の製剤実施に従って処方することができる。
注射用の水性液としては、例えば、生理食塩水、ブドウ糖やその他の補助薬を含む等張液（例えば、Ｄ−ソルビトール、Ｄ−マンニトール、塩化ナトリウムなど）などが挙げられ、適当な溶解補助剤、例えば、アルコール（例えば、エタノールなど）、ポリアルコール（例えば、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールなど）、非イオン性界面活性剤（例えば、ポリソルベート８０ＴＭ、ＨＣＯ−５０など）などと併用してもよい。油性液としては、例えば、ゴマ油、大豆油などが挙げられ、溶解補助剤として安息香酸ベンジル、ベンジルアルコールなどと併用してもよい。また、緩衝剤（例えば、リン酸塩緩衝液、酢酸ナトリウム緩衝液など）、無痛化剤（例えば、塩化ベンザルコニウム、塩酸プロカインなど）、安定剤（例えば、ヒト血清アルブミン、ポリエチレングリコールなど）、保存剤（例えば、ベンジルアルコール、フェノールなど）、酸化防止剤などと配合してもよい。調製された注射液は、通常、適当なアンプルに充填される。
本発明のＤＮＡが挿入されたベクターも上記と同様に製剤化され、通常、非経口的に使用される。
【００６５】
このようにして得られる製剤は、安全で低毒性であるので、例えば、温血動物（例えば、ヒト、ラット、マウス、モルモット、ウサギ、トリ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ウマ、ネコ、イヌ、サル、チンパンジーなど）に対して投与することができる。
本発明のタンパク質Ａの投与量は、対象疾患、投与対象、投与ルートなどにより差異はある。例えば、高脂血症の治療目的で本発明のタンパク質Ａを経口投与する場合、一般的に成人（60kgとして）においては、一日につき該タンパク質を約0.1〜100mg、好ましくは約1.0〜50mg、より好ましくは約1.0〜20mg投与する。非経口的に投与する場合は、該タンパク質の１回投与量は投与対象、対象疾患などによっても異なるが、例えば、高脂血症の治療目的で本発明のタンパク質Ａを注射剤の形で成人（体重60kgとして）に投与する場合、一日につき該タンパク質を約0.01〜30mg、好ましくは約0.1〜20mg、より好ましくは約0.1〜10mgを患部に注射することにより投与するのが好都合である。他の動物の場合も、60kg当たりに換算した量を投与することができる。
【００６６】
本発明のタンパク質Ｂの投与量は、対象疾患、投与対象、投与ルートなどにより差異はある。例えば、腎不全の治療目的で本発明のタンパク質Ｂを経口投与する場合、一般的に成人（60kgとして）においては、一日につき該タンパクを約0.1〜100mg、好ましくは約1.0〜50mg、より好ましくは約1.0〜20mg投与する。非経口的に投与する場合は、該タンパク質の１回投与量は投与対象、対象疾患などによっても異なるが、例えば、腎不全の治療目的で本発明のタンパク質Ｂを注射剤の形で成人（体重60kgとして）に投与する場合、一日につき該タンパク質を約0.01〜30mg、好ましくは約0.1〜20mg、より好ましくは約0.1〜10mgを患部に注射することにより投与するのが好都合である。他の動物の場合も、60kg当たりに換算した量を投与することができる。
【００６７】
本発明のタンパク質Ｃの投与量は、対象疾患、投与対象、投与ルートなどにより差異はあるが、例えば、糖尿病の治療目的で本発明のタンパク質Ｃを経口投与する場合、一般的に成人（60kgとして）においては、一日につき該タンパク質を約0.1〜100mg、好ましくは約1.0〜50mg、より好ましくは約1.0〜20mg投与する。非経口的に投与する場合は、該タンパク質の１回投与量は投与対象、対象疾患などによっても異なるが、例えば、糖尿病の治療目的で本発明のタンパク質Ｃを注射剤の形で成人（体重60kgとして）に投与する場合、一日につき該タンパク質を約0.01〜30mg、好ましくは約0.1〜20mg、より好ましくは約0.1〜10mgを患部に注射することにより投与するのが好都合である。他の動物の場合も、60kg当たりに換算した量を投与することができる。
【００６８】
本発明のタンパク質Ｄの投与量は、対象疾患、投与対象、投与ルートなどにより差異はあるが、例えば、慢性関節リウマチの治療目的で本発明のタンパク質Ｄを経口投与する場合、一般的に成人（60kgとして）においては、一日につき該タンパク質を約0.1〜100mg、好ましくは約1.0〜50mg、より好ましくは約1.0〜20mg投与する。非経口的に投与する場合は、該タンパク質の１回投与量は投与対象、対象疾患などによっても異なるが、例えば、慢性関節リウマチの治療目的で本発明のタンパク質等を注射剤の形で成人（体重60kgとして）に投与する場合、一日につき該タンパク質を約0.01〜30mg、好ましくは約0.1〜20mg、より好ましくは約0.1〜10mgを患部に注射することにより投与するのが好都合である。他の動物の場合も、60kg当たりに換算した量を投与することができる。
【００６９】
〔２〕疾病に対する医薬候補化合物のスクリーニング
本発明のタンパク質は、本発明のタンパク質の活性を促進または阻害する化合物またはその塩のスクリーニングのための試薬として有用である。
本発明は、（１）本発明のタンパク質Ａを用いることを特徴とする本発明のタンパク質Ａの活性（例、基質Ａの輸送活性など）を促進または阻害する化合物またはその塩（以下、それぞれ促進剤、阻害剤と略記する場合がある）のスクリーニング方法を提供する。より具体的には、例えば、（２）（i）本発明のタンパク質Ａを産生する能力を有する細胞の基質Ａの輸送活性と（ii）本発明のタンパク質Ａを産生する能力を有する細胞と試験化合物の混合物の基質Ａの輸送活性の比較を行なうことを特徴とする促進剤または阻害剤のスクリーニング方法を提供する。
具体的には、上記スクリーニング方法においては、例えば、（i）と（ii）の場合において、標識した基質Ａの、上記細胞への取り込み量を測定し、比較する。
標識剤としては、例えば、放射性同位元素（例、〔3H〕、〔125I〕、〔14C〕、〔32P〕、〔33P〕、〔35S〕など）、蛍光物質（例、シアニン蛍光色素（例、Cy2、Cy3、Cy5、Cy5.5、Cy7（アマシャムバイオサイエンス社製）など）、フルオレセインなど）、発光物質（例、ルミノールなど）、酵素（例、ペルオキシダーゼなど）またはランタニド元素などが用いられる。
標識した基質Ａとしては、例えば、[6,7-3H(N)]-Estrone sulfate、[1,2,6,7-3H(N)]-Dehydroepiandrosterone Sulfateなどが用いられる。
試験化合物としては、例えば、ペプチド、タンパク、非ペプチド性化合物、合成化合物、発酵生産物、細胞抽出液、植物抽出液、動物組織抽出液などが挙げられ、これら化合物は新規な化合物であってもよいし、公知の化合物であってもよい。
【００７０】
上記のスクリーニング方法を実施するには、本発明のタンパク質Ａを産生する能力を有する細胞をスクリーニングに適したバッファーに浮遊して調製する。バッファーには、ｐＨ約４〜１０（望ましくは、ｐＨ約６〜８）のリン酸バッファー、ほう酸バッファーなどの、本発明のタンパク質Ａの活性を阻害しないバッファーであればいずれでもよい。
本発明のタンパク質Ａを産生する能力を有する細胞としては、例えば、前述した本発明のタンパク質ＡをコードするＤＮＡを含有するベクターで形質転換された宿主（形質転換体）が用いられる。宿主としては、例えば、ＣＨＯ細胞などの動物細胞が好ましく用いられる。該スクリーニングには、例えば、前述の方法で培養することによって、本発明のタンパク質Ａを細胞膜上に発現させた形質転換体が好ましく用いられる。
基質Ａの輸送活性は、公知の方法、例えば、Am. J. Physiol.、274巻、G157-169頁、1998年に記載の方法あるいはそれに準じる方法に従って測定することができる。
例えば、上記（ii）の場合における基質Ａの輸送活性を、上記（i）の場合に比べて、約２０％以上、好ましくは３０％以上、より好ましくは約５０％以上促進する試験化合物を本発明のタンパク質Ａの活性を促進する化合物またはその塩として選択することができる。
また、例えば、上記（ii）の場合における基質Ａの輸送活性を、上記（i）の場合に比べて、約２０％以上、好ましくは３０％以上、より好ましくは約５０％以上阻害（または抑制）する試験化合物を本発明のタンパク質Ａの活性を阻害する化合物またはその塩として選択することができる。
【００７１】
具体例を以下に記載する。
まず、上記細胞をマルチウェルプレート等に培養する。スクリーニングを行うにあたり、前もって新鮮な培地または細胞に毒性を示さない適当なバッファーに交換したのち、一定量（5000〜500000cpm）の標識した基質Ａを添加し、同時に10-10〜10-7Mの試験化合物を共存させる。反応は0〜50℃、好ましくは4〜37℃で、20分〜24時間、好ましくは30分〜3時間行う。反応後、培地またはバッファーを除去し、適量のバッファー（例、PBSなど）で洗浄した後、該細胞に取り込まれた標識した基質Ａによる放射活性を液体シンチレーションカウンターで計測する。拮抗する物質がない場合のカウントを100％とした時、拮抗する物質がある場合のカウントが例えば50％以下になる試験化合物を、拮抗阻害能力のある候補物質として選択することができる。
また、本発明のタンパク質Ａ遺伝子のプロモーター下流に分泌型アルカリホスファターゼ、ルシフェラーゼなどの遺伝子を挿入し、上記の各種細胞に発現させ、該細胞に上記試験化合物を接触させた場合における酵素活性を賦活化または阻害する化合物またはその塩を探索することによって本発明のタンパク質Ａの発現を促進または抑制（すなわち、本発明のタンパク質Ａの活性を促進または阻害）する化合物またはその塩をスクリーニングすることができる。
【００７２】
本発明は、（１')本発明のタンパク質Ｂを用いることを特徴とする本発明のタンパク質Ｂの活性〔例えば、カチオン（好ましくは一価のカチオン、例えばNa+、K+など）とH+の交換輸送など〕促進または阻害する化合物またはその塩（以下、それぞれ促進剤、阻害剤と略記する場合がある）のスクリーニング方法を提供する。より具体的には、例えば、（２'）（i'）本発明のタンパク質Ｂを産生する能力を有する細胞のカチオン（好ましくは一価のカチオン、例えばNa+、K+など）とH+の交換輸送活性と（ii'）本発明のタンパク質Ｂを産生する能力を有する細胞と試験化合物の混合物のカチオン（好ましくは一価のカチオン、例えばNa+、K+など）とH+の交換輸送活性の比較を行なうことを特徴とする促進剤または阻害剤のスクリーニング方法を提供する。
具体的には、上記スクリーニング方法においては、例えば、（i'）と（ii'）の場合において、カチオン（好ましくは一価のカチオン、例えばNa+、K+など）とH+の交換輸送活性を蛍光色素で測定し、カチオン（好ましくは一価のカチオン、例えばNa+、K+など）とH+の交換輸送活性の指標として比較することを特徴とするものである。
試験化合物としては、例えば、ペプチド、タンパク、非ペプチド性化合物、合成化合物、発酵生産物、細胞抽出液、植物抽出液、動物組織抽出液などが挙げられ、これら化合物は新規な化合物であってもよいし、公知の化合物であってもよい。
【００７３】
上記のスクリーニング方法を実施するには、本発明のタンパク質Ｂを産生する能力を有する細胞をスクリーニングに適したバッファーに浮遊して調製する。バッファーには、ｐＨ約４〜１０（望ましくは、ｐＨ約６〜８）のリン酸バッファー、ほう酸バッファーなどの、本発明のタンパク質Ｂのカチオン（好ましくは一価のカチオン、例えばNa+、K+など）とH+の交換輸送活性を阻害しないバッファーであればいずれでもよい。
本発明のタンパク質Ｂを産生する能力を有する細胞としては、例えば、前述した本発明のタンパク質をコードするＤＮＡを含有するベクターで形質転換された宿主（形質転換体）が用いられる。宿主としては、例えば、ＣＨＯ細胞などの動物細胞が好ましく用いられる。該スクリーニングには、例えば、前述の方法で培養することによって、本発明のタンパク質Ｂを細胞膜上に発現させた形質転換体が好ましく用いられる。
本発明のタンパク質Ｂのカチオン（好ましくは一価のカチオン、例えばNa+、K+など）とH+の交換輸送活性は、公知の方法、例えば、J. Biol. Chem. 274巻, 3978-3987頁, 1998年に記載の方法あるいはそれに準じる方法に従って測定することができる。
例えば、上記（ii'）の場合におけるカチオン（好ましくは一価のカチオン、例えばNa+、K+など）とH+の交換輸送活性を、上記（i'）の場合に比べて、約２０％以上、好ましくは３０％以上、より好ましくは約５０％以上促進する試験化合物を本発明のタンパク質Ｂの活性を促進する化合物またはその塩として選択することができる。
また、例えば、上記（ii'）の場合におけるカチオン（好ましくは一価のカチオン、例えばNa+、K+など）とH+の交換輸送活性を、上記（i'）の場合に比べて、約２０％以上、好ましくは３０％以上、より好ましくは約５０％以上阻害（または抑制）する試験化合物を本発明のタンパク質Ｂの活性を阻害する化合物またはその塩として選択することができる。
また、本発明のタンパク質Ｂ遺伝子のプロモーター下流に分泌型アルカリホスファターゼ、ルシフェラーゼなどの遺伝子を挿入し、上記の各種細胞に発現させ、該細胞に上記試験化合物を接触させた場合における酵素活性を賦活化または阻害する化合物またはその塩を探索することによって本発明のタンパク質Ｂの発現を促進または抑制（すなわち、本発明のタンパク質Ｂの活性を促進または阻害）する化合物またはその塩をスクリーニングすることができる。
【００７４】
本発明は、（１''）本発明のタンパク質Ｃを用いることを特徴とする本発明のタンパク質Ｃの活性（例えば、アミノリン脂質の輸送など）を促進または阻害する化合物またはその塩（以下、それぞれ促進剤、阻害剤と略記する場合がある）のスクリーニング方法を提供する。より具体的には、例えば、
（２''）（i''）本発明のタンパク質Ｃを産生する能力を有する細胞のアミノリン脂質の輸送活性と（ii''）本発明のタンパク質Ｃを産生する能力を有する細胞と試験化合物の混合物のアミノリン脂質の輸送活性の比較を行なうことを特徴とする促進剤または阻害剤のスクリーニング方法を提供する。
具体的には、上記スクリーニング方法においては、例えば、（i''）と（ii''）の場合において、アミノリン脂質の輸送を、放射標識した基質または蛍光色素で測定し、アミノリン脂質の輸送を指標として比較することを特徴とするものである。
試験化合物としては、例えば、ペプチド、タンパク、非ペプチド性化合物、合成化合物、発酵生産物、細胞抽出液、植物抽出液、動物組織抽出液などが挙げられ、これら化合物は新規な化合物であってもよいし、公知の化合物であってもよい。
【００７５】
上記のスクリーニング方法を実施するには、本発明のタンパク質Ｃを産生する能力を有する細胞をスクリーニングに適したバッファーに浮遊して調製する。バッファーには、ｐＨ約４〜１０（望ましくは、ｐＨ約６〜８）のリン酸バッファー、ほう酸バッファーなどの、本発明のタンパク質Ｃのアミノリン脂質の輸送活性を阻害しないバッファーであればいずれでもよい。
本発明のタンパク質Ｃを産生する能力を有する細胞としては、例えば、前述した本発明のタンパク質ＣをコードするＤＮＡを含有するベクターで形質転換された宿主（形質転換体）が用いられる。宿主としては、例えば、ＣＨＯ細胞などの動物細胞が好ましく用いられる。該スクリーニングには、例えば、前述の方法で培養することによって、本発明のタンパク質Ｃを細胞膜上に発現させた形質転換体が好ましく用いられる。
本発明のタンパク質Ｃのアミノリン脂質の輸送活性は、公知の方法、例えば、J. Biol. Chem.、275巻、23378-23386頁、1998年に記載の方法あるいはそれに準じる方法に従って測定することができる。
例えば、上記（ii''）の場合におけるアミノリン脂質の輸送活性を、上記（i''）の場合に比べて、約２０％以上、好ましくは３０％以上、より好ましくは約５０％以上促進する試験化合物を本発明のタンパク質Ｃの活性を促進する化合物またはその塩として選択することができる。
また、例えば、上記（ii''）の場合におけるアミノリン脂質の輸送活性を、上記（i''）の場合に比べて、約２０％以上、好ましくは３０％以上、より好ましくは約５０％以上阻害（または抑制）する試験化合物を本発明のタンパク質Ｃの活性を阻害する化合物またはその塩として選択することができる。
また、本発明のタンパク質Ｃ遺伝子のプロモーター下流に分泌型アルカリホスファターゼ、ルシフェラーゼなどの遺伝子を挿入し、上記の各種細胞に発現させ、該細胞に上記試験化合物を接触させた場合における酵素活性を賦活化または阻害する化合物またはその塩を探索することによって本発明のタンパク質Ｃの発現を促進または抑制（すなわち、本発明のタンパク質Ｃの活性を促進または阻害）する化合物またはその塩をスクリーニングすることができる。
【００７６】
本発明は、（１'''）本発明のタンパク質Ｄを用いることを特徴とする本発明のタンパク質の活性（例えば、カチオンチャネル活性など）を促進または阻害する化合物またはその塩（以下、それぞれ促進剤、阻害剤と略記する場合がある）のスクリーニング方法を提供する。より具体的には、例えば、
（２'''）（i'''）本発明のタンパク質Ｄを産生する能力を有する細胞のカチオンチャネル活性と（ii'''）本発明のタンパク質Ｄを産生する能力を有する細胞と試験化合物の混合物のカチオンチャネル活性の比較を行なうことを特徴とする促進剤または阻害剤のスクリーニング方法を提供する。
具体的には、上記スクリーニング方法においては、例えば、（i'''）と（ii'''）の場合において、カチオンチャネル活性をパッチ・クランプ法で測定し、カチオンチャネル活性の指標として比較することを特徴とするものである。
試験化合物としては、例えば、ペプチド、タンパク、非ペプチド性化合物、合成化合物、発酵生産物、細胞抽出液、植物抽出液、動物組織抽出液などが挙げられ、これら化合物は新規な化合物であってもよいし、公知の化合物であってもよい。
【００７７】
上記のスクリーニング方法を実施するには、本発明のタンパク質Ｄを産生する能力を有する細胞をスクリーニングに適したバッファーに浮遊して調製する。バッファーには、ｐＨ約４〜１０（望ましくは、ｐＨ約６〜８）のリン酸バッファー、ほう酸バッファーなどの、本発明のタンパク質Ｄのカチオンチャネル活性を阻害しないバッファーであればいずれでもよい。
本発明のタンパク質を産生する能力を有する細胞としては、例えば、前述した本発明のタンパク質をコードするＤＮＡを含有するベクターで形質転換された宿主（形質転換体）が用いられる。宿主としては、例えば、ＣＨＯ細胞などの動物細胞が好ましく用いられる。該スクリーニングには、例えば、前述の方法で培養することによって、本発明のタンパク質を細胞膜上に発現させた形質転換体が好ましく用いられる。
本発明のタンパク質Ｄのカチオンチャネル活性は、公知の方法、例えば、Nature、389巻、816頁、1997年に記載の方法あるいはそれに準じる方法に従って測定することができる。
例えば、上記（ii'''）の場合におけるカチオンチャネル活性を、上記（i'''）の場合に比べて、約２０％以上、好ましくは３０％以上、より好ましくは約５０％以上促進する試験化合物を本発明のタンパク質Ｄの活性を促進する化合物またはその塩として選択することができる。
また、例えば、上記（ii'''）の場合におけるカチオンチャネル活性を、上記（i'''）の場合に比べて、約２０％以上、好ましくは３０％以上、より好ましくは約５０％以上阻害（または抑制）する試験化合物を本発明のタンパク質Ｄの活性を阻害する化合物またはその塩として選択することができる。
また、本発明のタンパク質Ｄ遺伝子のプロモーター下流に分泌型アルカリホスファターゼ、ルシフェラーゼなどの遺伝子を挿入し、上記の各種細胞に発現させ、該細胞に上記試験化合物を接触させた場合における酵素活性を賦活化または阻害する化合物またはその塩を探索することによって本発明のタンパク質Ｄの発現を促進または抑制（すなわち、本発明のタンパク質Ｄの活性を促進または阻害）する化合物またはその塩をスクリーニングすることができる。
【００７８】
本発明のタンパク質Ｄを用い、または組換え型本発明のタンパク質Ｄの発現系を用いたリガンド結合アッセイ系を用いることにより、本発明のタンパク質Ｄと、そのリガンド（以下、本発明のリガンドと略記する）との結合性を変化させる化合物（例えば、ペプチド、蛋白質、非ペプチド性化合物、合成化合物、発酵生産物など）またはその塩を効率よくスクリーニングすることもできる。
具体的には、（A）本発明のタンパク質Ｄに、本発明のリガンドを接触させた場合と（B）本発明のタンパク質Ｄに、本発明のリガンドおよび試験化合物を接触させた場合との比較を行なう。比較は、例えば、本発明のタンパク質Ｄに対する本発明のリガンドの結合量などを測定して行う。
【００７９】
本発明のスクリーニング方法としての具体例としては、例えば、
（a）本発明のリガンドを本発明のタンパク質Ｄに接触させた場合と、本発明のリガンドおよび試験化合物を本発明のタンパク質Ｄに接触させた場合における、本発明のリガンドの本発明のタンパク質Ｄに対する結合量を測定し、比較することを特徴とする、本発明のリガンドと本発明のタンパク質Ｄとの結合性を変化させる化合物またはその塩のスクリーニング方法、
（b）本発明のリガンドを、本発明のタンパク質Ｄを含有する細胞または該細胞の膜画分に接触させた場合と、本発明のリガンドおよび試験化合物を本発明のタンパク質Ｄを含有する細胞または該細胞の膜画分に接触させた場合における、本発明のリガンドの該細胞または該膜画分に対する結合量を測定し、比較することを特徴とする、本発明のリガンドと本発明のタンパク質Ｄとの結合性を変化させる化合物またはその塩のスクリーニング方法、
（c）本発明のタンパク質Ｄが、本発明のタンパク質ＤをコードするＤＮＡを含有する形質転換体を培養することによって細胞膜上に発現した本発明のタンパク質Ｄである上記（b）記載のスクリーニング方法、
（d）本発明のリガンドが、標識したリガンドである上記（a）〜（c）のスクリーニング方法などが挙げられる。
【００８０】
本発明のタンパク質Ｄとしては、ヒトや温血動物の臓器の膜画分などが好適に用いられる。しかし、特にヒト由来の臓器は入手が極めて困難なことから、スクリーニングに用いられるものとしては、組換え体を用いて大量発現させた本発明のタンパク質Ｄなどが適している。
本発明のタンパク質Ｄを製造するには、前述の本発明のタンパク質Ｄの製造方法などが用いられる。
上記スクリーニング方法において、本発明のタンパク質Ｄを含有する細胞あるいは該細胞膜画分などを用いる場合、後述の調製法に従えばよい。
本発明のタンパク質Ｄを含有する細胞を用いる場合、該細胞をグルタルアルデヒド、ホルマリンなどで固定化してもよい。固定化方法はそれ自体公知の方法に従って行うことができる。
本発明のタンパク質Ｄを含有する細胞としては、本発明のタンパク質Ｄを発現した宿主細胞をいうが、該宿主細胞としては、前述の大腸菌、枯草菌、酵母、昆虫細胞、動物細胞などが挙げられる。製造方法は前述と同様である。
膜画分としては、細胞を破砕した後、それ自体公知の方法で得られる細胞膜が多く含まれる画分のことをいう。細胞の破砕方法としては、Potter−Elvehjem型ホモジナイザーで細胞を押し潰す方法、ワーリングブレンダーやポリトロン（Kinematica社製）による破砕、超音波による破砕、フレンチプレスなどで加圧しながら細胞を細いノズルから噴出させることによる破砕などがあげられる。細胞膜の分画には、分画遠心分離法や密度勾配遠心分離法などの遠心力による分画法が主として用いられる。例えば、細胞破砕液を低速（500〜3000rpm）で短時間（通常、約1〜10分）遠心し、上清をさらに高速（15000〜30000rpm）で通常30分〜2時間遠心し、得られる沈澱を膜画分とする。該膜画分中には、発現した本発明のタンパク質Ｄと細胞由来のリン脂質や膜蛋白質などの膜成分が多く含まれる。
該本発明のタンパク質Ｄを含有する細胞や膜画分中の本発明のタンパク質Ｄの量は、１細胞当たり103〜108分子であるのが好ましく、105〜107分子であるのが好適である。なお、発現量が多いほど膜画分当たりのリガンド結合活性（比活性）が高くなり、高感度なスクリーニング系の構築が可能になるばかりでなく、同一ロットで大量の試料を測定できるようになる。
【００８１】
前記のスクリーニング方法を実施するためには、例えば、本発明のタンパク質Ｄ画分と、本発明のリガンド（例、標識した本発明のリガンド）などが用いられる。本発明のタンパク質Ｄ画分としては、天然型の本発明のタンパク質Ｄ画分か、またはそれと同等の活性を有する組換え型本発明のタンパク質Ｄ画分などが望ましい。ここで、同等の活性とは、同等のリガンド結合活性などを示す。標識したリガンドとしては、例えば、放射性同位元素（例、〔3H〕、〔125I〕、〔14C〕、〔32P〕、〔33P〕、〔35S〕など）、蛍光物質（例、シアニン蛍光色素（例、Cy2、Cy3、Cy5、Cy5.5、Cy7（アマシャムバイオサイエンス社製）など）、フルオレセインなど）、発光物質（例、ルミノールなど）、酵素（例、ペルオキシダーゼなど）またはランタニド元素などで標識されたリガンドなどを用いることができる。
具体的には、本発明のリガンドと本発明のタンパク質Ｄとの結合性を変化させる化合物またはその塩のスクリーニングを行うには、本発明のタンパク質Ｄを含有する細胞または細胞の膜画分を、スクリーニングに適したバッファーに懸濁することによりレセプター標品を調製する。バッファーには、pH4〜10（望ましくはpH6〜8）のリン酸バッファー、トリス−塩酸バッファーなどのリガンドと受容体との結合を阻害しないバッファーであればいずれでもよい。また、非特異的結合を低減させる目的で、CHAPS、Tween-80TM（花王−アトラス社）、ジギトニン、デオキシコレートなどの界面活性剤をバッファーに加えることもできる。さらに、プロテアーゼによる本発明のタンパク質Ｄの分解を抑える目的でPMSF、ロイペプチン、E-64（ペプチド研究所製）、ペプスタチンなどのプロテアーゼ阻害剤を添加することもできる。0.01〜10mlの該タンパク質溶液に、一定量（5000〜500000cpm）の標識した本発明のリガンドを添加し、同時に10-10〜10-7Mの試験化合物を共存させる。非特異的結合量（NSB）を知るために大過剰の未標識の本発明のリガンドを加えた反応チューブも用意する。反応は0〜50℃、望ましくは4〜37℃で20分〜24時間、望ましくは30分〜3時間行う。反応後、ガラス繊維濾紙等で濾過し、適量の同バッファーで洗浄した後、ガラス繊維濾紙に残存する放射活性を液体シンチレーションカウンターまたはγ−カウンターで計測する。拮抗する物質がない場合のカウント（B0）から非特異的結合量（NSB）を引いたカウント（B0-NSB）を100％とした時、特異的結合量（B-NSB）が例えば50％以下になる試験化合物を、拮抗阻害能力のある候補物質として選択することができる。
本発明のスクリーニング方法を用いて得られうる化合物またはその塩は、本発明のタンパク質Ｄと本発明のリガンドとの結合を変化させる化合物またはその塩である。
【００８２】
本発明のタンパク質をコードするポリヌクレオチドは、本発明のタンパク質遺伝子の発現を促進または阻害する化合物またはその塩のスクリーニングのための試薬として有用である。
本発明は、（３）本発明のタンパク質をコードするポリヌクレオチドを用いることを特徴とする本発明のタンパク質遺伝子の発現を促進または阻害する化合物またはその塩（以下、それぞれ促進剤、阻害剤と略記する場合がある）のスクリーニング方法を提供し、より具体的には、例えば、
（４）（iii）本発明のタンパク質を産生する能力を有する細胞を培養した場合と（iv）本発明のタンパク質を産生する能力を有する細胞と試験化合物の混合物を培養した場合との比較を行うことを特徴とする促進剤または阻害剤のスクリーニング方法を提供する。
上記スクリーニング方法においては、例えば、（iii）と（iv）の場合における、本発明のタンパク質遺伝子の発現量（具体的には、本発明のタンパク質量または前記タンパク質をコードするｍＲＮＡ量）を測定して、比較する。
試験化合物としては、例えば、ペプチド、タンパク質、非ペプチド性化合物、合成化合物、発酵生産物、細胞抽出液、植物抽出液、動物組織抽出液などが挙げられ、これら化合物は新規な化合物であってもよいし、公知の化合物であってもよい。
【００８３】
上記のスクリーニング方法を実施するには、本発明のタンパク質を産生する能力を有する細胞をスクリーニングに適したバッファーに浮遊して調製する。バッファーには、ｐＨ約４〜１０（望ましくは、ｐＨ約６〜８）のリン酸バッファー、ほう酸バッファーなどの、本発明のタンパク質の発現を阻害しないバッファーであればいずれでもよい。
本発明のタンパク質を産生する能力を有する細胞としては、例えば、前述した本発明のタンパク質をコードするＤＮＡを含有するベクターで形質転換された宿主（形質転換体）が用いられる。宿主としては、例えば、ＣＨＯ細胞などの動物細胞が好ましく用いられる。該スクリーニングには、例えば、前述の方法で培養することによって、本発明のタンパク質を細胞膜上に発現させた形質転換体が好ましく用いられる。
本発明のタンパク質量の測定は、公知の方法、例えば、本発明のタンパク質を認識する抗体を用いて、細胞抽出液中などに存在する前記タンパク質を、ウェスタン解析、ＥＬＩＳＡ法などの方法またはそれに準じる方法に従い測定することができる。
本発明のタンパク質遺伝子の発現量は、公知の方法、例えば、ノーザンブロッティングやReverse transcription-polymerase chain reaction（RT-PCR）、リアルタイムPCR解析システム（アプライドバイオシステムズ社製、TaqMan polymerase chain reaction）などの方法あるいはそれに準じる方法にしたがって測定することができる。
例えば、上記（iv）の場合における本発明のタンパク質遺伝子の発現量を、上記（iii）の場合に比べて、約２０％以上、好ましくは３０％以上、より好ましくは約５０％以上促進する試験化合物を本発明のタンパク質遺伝子の発現を促進する化合物またはその塩として選択することができる。
例えば、上記（iv）の場合における本発明のタンパク質遺伝子の発現量を、上記（iii）の場合に比べて、約２０％以上、好ましくは３０％以上、より好ましくは約５０％以上阻害する試験化合物を本発明のタンパク質遺伝子の発現を阻害する化合物またはその塩として選択することができる。
【００８４】
さらに、本発明の抗体は、本発明のタンパク質の発現を促進または阻害する化合物またはその塩のスクリーニングのための試薬として有用である。
本発明は、（５）本発明の抗体を用いることを特徴とする本発明のタンパク質の発現を促進または阻害する化合物またはその塩（以下、それぞれ促進剤、阻害剤と略記する場合がある）のスクリーニング方法を提供し、より具体的には、例えば、
（６）（v）本発明のタンパク質を産生する能力を有する細胞を培養した場合と（vi）本発明のタンパク質を産生する能力を有する細胞と試験化合物の混合物を培養した場合との比較を行うことを特徴とする促進剤または阻害剤のスクリーニング方法を提供する。
上記スクリーニング方法においては、例えば、本発明の抗体を用いて（v）と（vi）の場合における、本発明のタンパク質の発現量（具体的には、本発明のタンパク質量）を測定（例、本発明のタンパク質の発現を検出、本発明のタンパク質の発現量を定量等）して、比較する。
試験化合物としては、例えば、ペプチド、タンパク質、非ペプチド性化合物、合成化合物、発酵生産物、細胞抽出液、植物抽出液、動物組織抽出液などが挙げられ、これら化合物は新規な化合物であってもよいし、公知の化合物であってもよい。
【００８５】
上記のスクリーニング方法を実施するには、本発明のタンパク質を産生する能力を有する細胞をスクリーニングに適したバッファーに浮遊して調製する。バッファーには、ｐＨ約４〜１０（望ましくは、ｐＨ約６〜８）のリン酸バッファー、ほう酸バッファーなどの、本発明のタンパク質の活性を阻害しないバッファーであればいずれでもよい。
本発明のタンパク質を産生する能力を有する細胞としては、例えば、前述した本発明のタンパク質をコードするＤＮＡを含有するベクターで形質転換された宿主（形質転換体）が用いられる。宿主としては、例えば、ＣＨＯ細胞などの動物細胞が好ましく用いられる。該スクリーニングには、例えば、前述の方法で培養することによって、本発明のタンパク質を細胞膜上に発現させた形質転換体が好ましく用いられる。
本発明のタンパク質量の測定は、公知の方法、例えば、本発明のタンパク質を認識する抗体を用いて、細胞抽出液中などに存在する前記タンパク質を、ウェスタン解析、ＥＬＩＳＡ法などの方法またはそれに準じる方法に従い測定することができる。
例えば、上記（vi）の場合における本発明のタンパク質の発現量を、上記（v）の場合に比べて、約２０％以上、好ましくは３０％以上、より好ましくは約５０％以上促進する試験化合物を本発明のタンパク質の発現を促進する化合物またはその塩として選択することができる。
例えば、上記（vi）の場合における本発明のタンパク質の発現量を、上記（v）の場合に比べて、約２０％以上、好ましくは３０％以上、より好ましくは約５０％以上阻害する試験化合物を本発明のタンパク質の発現を阻害する化合物またはその塩として選択することができる。
【００８６】
本発明のスクリーニング用キットは、本発明のタンパク質もしくは部分ペプチドまたはその塩、本発明のタンパク質もしくは部分ペプチドを産生する能力を有する細胞、本発明のリガンド、本発明の抗体などを含有するものである。
本発明のスクリーニング方法またはスクリーニング用キットを用いて得られる化合物またはその塩は、上記した試験化合物、例えば、ペプチド、タンパク、非ペプチド性化合物、合成化合物、発酵生産物、細胞抽出液、植物抽出液、動物組織抽出液、血漿などから選ばれた化合物またはその塩であり、本発明のタンパク質の活性を促進または阻害する化合物またはその塩、本発明のタンパク質遺伝子の発現を促進または阻害する化合物またはその塩、本発明のタンパク質の発現を促進または阻害する化合物またはその塩、本発明のタンパク質Ａと本発明のリガンドとの結合性を変化させる化合物またはその塩などである。
該化合物の塩としては、前記した本発明のタンパク質の塩と同様のものが用いられる。
【００８７】
本発明のタンパク質Ａの活性を促進する化合物またはその塩、本発明のタンパク質Ａ遺伝子の発現を促進する化合物またはその塩、および本発明のタンパク質Ａの発現を促進する化合物またはその塩は、例えば、高脂血症、生殖器疾患（例、前立腺肥大症、前立腺炎、精巣神経症、卵巣嚢腫など）、消化器疾患（例、過敏性腸症候群、潰瘍性大腸炎、クローン病、虚血性大腸炎、胃炎、消化性潰瘍、直腸炎、逆流性食道炎、十二指腸炎など）、呼吸器疾患（例、慢性閉塞性肺疾患、気管支喘息など）、自己免疫疾患（例、重症筋無力症、糸球体腎炎、多発性硬化症、シェーグレン症候群、全身性エリテマトーデスなど）、アレルギー性疾患（例、花粉症、アレルギー性鼻炎、アナフィラキシーショック、アトピー性皮膚炎など）、リウマチ性疾患（例、慢性関節リウマチ、変形関節症、痛風など）、胸腺疾患、免疫不全（例、白血球異常、脾機能不全または胸腺異常にともなう免疫不全など）、糖尿病、甲状腺機能低下、循環器疾患（例、心不全、不整脈、ＱＴ延長症候群、動脈硬化、狭心症など）、膵臓疾患（例、膵炎、膵嚢胞性線維症などの膵機能不全など）、癌（例、精巣腫瘍、卵巣癌、乳癌、食道癌、肺癌、腎臓癌、肝臓癌、非小細胞肺癌、前立腺癌、胃癌、膀胱癌、子宮頸部癌、結腸癌、直腸癌、膵臓癌、胸腺腫、筋肉腫など）などの予防・治療剤、好ましくは高脂血症、動脈硬化、生殖器疾患、消化器疾患などの予防・治療剤などの低毒性で安全な医薬として有用である。
本発明のタンパク質Ａの活性を阻害する化合物またはその塩、本発明のタンパク質Ａ遺伝子の発現を阻害する化合物またはその塩、および本発明のタンパク質Ａの発現を阻害する化合物またはその塩は、例えば、高脂血症、生殖器疾患（例、前立腺肥大症、前立腺炎、精巣神経症、卵巣嚢腫など）、消化器疾患（例、過敏性腸症候群、潰瘍性大腸炎、クローン病、虚血性大腸炎、胃炎、消化性潰瘍、直腸炎、逆流性食道炎、十二指腸炎など）、呼吸器疾患（例、慢性閉塞性肺疾患、気管支喘息など）、自己免疫疾患（例、重症筋無力症、糸球体腎炎、多発性硬化症、シェーグレン症候群、全身性エリテマトーデスなど）、アレルギー性疾患（例、花粉症、アレルギー性鼻炎、アナフィラキシーショック、アトピー性皮膚炎など）、リウマチ性疾患（例、慢性関節リウマチ、変形関節症、痛風など）、胸腺疾患、免疫不全（例、白血球異常、脾機能不全または胸腺異常にともなう免疫不全など）、糖尿病、甲状腺機能低下、循環器疾患（例、心不全、不整脈、ＱＴ延長症候群、動脈硬化、狭心症など）、膵臓疾患（例、膵炎、膵嚢胞性線維症などの膵機能不全など）、癌（例、精巣腫瘍、卵巣癌、乳癌、食道癌、肺癌、腎臓癌、肝臓癌、非小細胞肺癌、前立腺癌、胃癌、膀胱癌、子宮頸部癌、結腸癌、直腸癌、膵臓癌、胸腺腫、筋肉腫など）などの予防・治療剤、好ましくは高脂血症、動脈硬化、生殖器疾患、消化器疾患などの予防・治療剤などの低毒性で安全な医薬として有用である。
【００８８】
本発明のタンパク質Ｂの活性を促進する化合物またはその塩、本発明のタンパク質Ｂ遺伝子の発現を促進する化合物またはその塩、および本発明のタンパク質Ｂの発現を促進する化合物またはその塩は、例えば、腎疾患（例、腎不全、尿毒症など）、消化器疾患（例、過敏性腸症候群、潰瘍性大腸炎、クローン病、虚血性大腸炎、胃炎、消化性潰瘍、直腸炎、逆流性食道炎、十二指腸炎など）、呼吸器疾患（例、慢性閉塞性肺疾患、喘息など）、膵臓疾患（例、膵炎、膵嚢胞性線維症などの膵機能不全など）、自己免疫疾患（例、重症筋無力症、糸球体腎炎、多発性硬化症、シェーグレン症候群、全身性エリテマトーデスなど）、アレルギー性疾患（例、花粉症、アレルギー性鼻炎、アナフィラキシーショック、アトピー性皮膚炎など）、リウマチ性疾患（例、慢性関節リウマチ、変形関節症、痛風など）、胸腺疾患、免疫不全（例、白血球異常、脾機能不全または胸腺異常にともなう免疫不全など）、生殖器疾患（例、前立腺肥大症、前立腺炎、精巣神経症、卵巣嚢腫など）、脾臓疾患、癌（例、精巣腫瘍、卵巣癌、乳癌、食道癌、肺癌、腎臓癌、肝臓癌、非小細胞肺癌、前立腺癌、胃癌、膀胱癌、子宮頸部癌、結腸癌、直腸癌、膵臓癌、胸腺腫、筋肉腫など）、糖尿病、高血圧、虚血後再灌流障害、中枢神経系疾患（例、アルツハイマー病、パーキンソン症候群、統合失調症、脳血管性痴呆、脳虚血、てんかんなど）などの予防・治療剤、好ましくは、呼吸器疾患、腎疾患、消化器疾患などの予防・治療剤などの低毒性で安全な医薬として有用である。
本発明のタンパク質Ｂの活性を阻害する化合物またはその塩、本発明のタンパク質Ｂ遺伝子の発現を阻害する化合物またはその塩、および本発明のタンパク質Ｂの発現を阻害する化合物またはその塩は、例えば、腎疾患（例、腎不全、尿毒症など）、消化器疾患（例、過敏性腸症候群、潰瘍性大腸炎、クローン病、虚血性大腸炎、胃炎、消化性潰瘍、直腸炎、逆流性食道炎、十二指腸炎など）、呼吸器疾患（例、慢性閉塞性肺疾患、喘息など）、膵臓疾患（例、膵炎、膵嚢胞性線維症などの膵機能不全など）、自己免疫疾患（例、重症筋無力症、糸球体腎炎、多発性硬化症、シェーグレン症候群、全身性エリテマトーデスなど）、アレルギー性疾患（例、花粉症、アレルギー性鼻炎、アナフィラキシーショック、アトピー性皮膚炎など）、リウマチ性疾患（例、慢性関節リウマチ、変形関節症、痛風など）、胸腺疾患、免疫不全（例、白血球異常、脾機能不全または胸腺異常にともなう免疫不全など）、生殖器疾患（例、前立腺肥大症、前立腺炎、精巣神経症、卵巣嚢腫など）、脾臓疾患、癌（例、精巣腫瘍、卵巣癌、乳癌、食道癌、肺癌、腎臓癌、肝臓癌、非小細胞肺癌、前立腺癌、胃癌、膀胱癌、子宮頸部癌、結腸癌、直腸癌、膵臓癌、胸腺腫、筋肉腫など）、糖尿病、高血圧、虚血後再灌流障害、中枢神経系疾患（例、アルツハイマー病、パーキンソン症候群、統合失調症、脳血管性痴呆、脳虚血、てんかんなど）、好ましくは、呼吸器疾患、腎疾患、消化器疾患などの予防・治療剤、などの低毒性で安全な医薬として有用である。
【００８９】
本発明のタンパク質Ｃの活性を促進する化合物またはその塩、本発明のタンパク質Ｃ遺伝子の発現を促進する化合物またはその塩、および本発明のタンパク質Ｃの発現を促進する化合物またはその塩は、例えば、膵臓疾患（例、膵炎、膵嚢胞性線維症などの膵機能不全など）、生殖器疾患（例、前立腺肥大症、前立腺炎、精巣神経症、卵巣嚢腫など）、中枢神経系疾患（例、アルツハイマー病、パーキンソン症候群、統合失調症、脳血管性痴呆、脳虚血、てんかんなど）、消化器疾患（例、過敏性腸症候群、潰瘍性大腸炎、クローン病、虚血性大腸炎、胃炎、消化性潰瘍、直腸炎、逆流性食道炎、十二指腸炎など）、呼吸器疾患（例、慢性閉塞性肺疾患、喘息など）、糖尿病、高脂血症、胆汁うっ滞、または癌（例、精巣腫瘍、卵巣癌、乳癌、食道癌、肺癌、腎臓癌、肝臓癌、非小細胞肺癌、前立腺癌、胃癌、膀胱癌、子宮頸部癌、結腸癌、直腸癌、膵臓癌、胸腺腫、筋肉腫など）などの予防・治療剤、好ましくは膵臓疾患、中枢神経系疾患、消化器疾患、呼吸器疾患などの予防・治療剤などの低毒性で安全な医薬として有用である。
本発明のタンパク質Ｃの活性を阻害する化合物またはその塩、本発明のタンパク質Ｃ遺伝子の発現を阻害する化合物またはその塩、および本発明のタンパク質Ｃの発現を阻害する化合物またはその塩は、例えば、膵臓疾患（例、膵炎、膵嚢胞性線維症などの膵機能不全など）、生殖器疾患（例、前立腺肥大症、前立腺炎、精巣神経症、卵巣嚢腫など）、中枢神経系疾患（例、アルツハイマー病、パーキンソン症候群、統合失調症、脳血管性痴呆、脳虚血、てんかんなど）、消化器疾患（例、過敏性腸症候群、潰瘍性大腸炎、クローン病、虚血性大腸炎、胃炎、消化性潰瘍、直腸炎、逆流性食道炎、十二指腸炎など）、呼吸器疾患（例、慢性閉塞性肺疾患、喘息など）、糖尿病、高脂血症、胆汁うっ滞、または癌（例、精巣腫瘍、卵巣癌、乳癌、食道癌、肺癌、腎臓癌、肝臓癌、非小細胞肺癌、前立腺癌、胃癌、膀胱癌、子宮頸部癌、結腸癌、直腸癌、膵臓癌、胸腺腫、筋肉腫など）などの予防・治療剤、好ましくは膵臓疾患、中枢神経系疾患、消化器疾患、呼吸器疾患などの予防・治療剤などの低毒性で安全な医薬として有用である。
【００９０】
本発明のタンパク質Ｄの活性を促進する化合物またはその塩、本発明のタンパク質Ｄ遺伝子の発現を促進する化合物またはその塩、および本発明のタンパク質Ｄの発現を促進する化合物またはその塩は、例えば、炎症性疾患（例、敗血症、肺炎、脳炎、髄膜炎、肝炎、心筋炎、胸膜炎など）、自己免疫疾患（例、重症筋無力症、糸球体腎炎、多発性硬化症、シェーグレン症候群、全身性エリテマトーデスなど）、アレルギー性疾患（例、花粉症、アレルギー性鼻炎、アナフィラキシーショック、アトピー性皮膚炎など）、リウマチ性疾患（例、慢性関節リウマチ、変形関節症、痛風など）、糖尿病性神経症、胸腺疾患、免疫不全（例、白血球異常、脾機能不全または胸腺異常にともなう免疫不全など）、消化器疾患（例、過敏性腸症候群、潰瘍性大腸炎、クローン病、虚血性大腸炎、胃炎、消化性潰瘍、直腸炎、逆流性食道炎、十二指腸炎など）、呼吸器疾患（例、慢性閉塞性肺疾患、喘息など）、循環器疾患（例、心不全、不整脈、ＱＴ延長症候群、動脈硬化、狭心症など）、肝臓疾患(例、肝硬変など)、腎疾患（例、腎不全、尿毒症など）、筋肉疾患（例、筋萎縮症など）、膵臓疾患（例、膵炎、膵嚢胞性線維症などの膵機能不全など）、生殖器疾患（例、前立腺肥大症、前立腺炎、精巣神経症、卵巣嚢腫など）、熱傷、疼痛症候群（例、癌性疼痛、関連痛など）、癌（例、精巣腫瘍、卵巣癌、乳癌、食道癌、肺癌、腎臓癌、肝臓癌、非小細胞肺癌、前立腺癌、胃癌、膀胱癌、子宮頸部癌、結腸癌、直腸癌、膵臓癌、胸腺腫、筋肉腫など）などの予防・治療剤、好ましくは、炎症性疾患、リウマチ性疾患、糖尿病性神経症などの予防・治療剤などの低毒性で安全な医薬として有用である。
本発明のタンパク質Ｄの活性を阻害する化合物またはその塩、本発明のタンパク質Ｄ遺伝子の発現を阻害する化合物またはその塩、および本発明のタンパク質Ｄの発現を阻害する化合物またはその塩は、例えば、炎症性疾患（例、敗血症、肺炎、脳炎、髄膜炎、肝炎、心筋炎、胸膜炎など）、自己免疫疾患（例、重症筋無力症、糸球体腎炎、多発性硬化症、シェーグレン症候群、全身性エリテマトーデスなど）、アレルギー性疾患（例、花粉症、アレルギー性鼻炎、アナフィラキシーショック、アトピー性皮膚炎など）、リウマチ性疾患（例、慢性関節リウマチ、変形関節症、痛風など）、糖尿病性神経症、胸腺疾患、免疫不全（例、白血球異常、脾機能不全または胸腺異常にともなう免疫不全など）、消化器疾患（例、過敏性腸症候群、潰瘍性大腸炎、クローン病、虚血性大腸炎、胃炎、消化性潰瘍、直腸炎、逆流性食道炎、十二指腸炎など）、呼吸器疾患（例、慢性閉塞性肺疾患、喘息など）、循環器疾患（例、心不全、不整脈、ＱＴ延長症候群、動脈硬化、狭心症など）、肝臓疾患(例、肝硬変など)、腎疾患（例、腎不全、尿毒症など）、筋肉疾患（例、筋萎縮症など）、膵臓疾患（例、膵炎、膵嚢胞性線維症などの膵機能不全など）、生殖器疾患（例、前立腺肥大症、前立腺炎、精巣神経症、卵巣嚢腫など）、熱傷、疼痛症候群（例、癌性疼痛、関連痛など）、癌（例、精巣腫瘍、卵巣癌、乳癌、食道癌、肺癌、腎臓癌、肝臓癌、非小細胞肺癌、前立腺癌、胃癌、膀胱癌、子宮頸部癌、結腸癌、直腸癌、膵臓癌、胸腺腫、筋肉腫など）などの予防・治療剤、好ましくは、炎症性疾患、リウマチ性疾患、糖尿病性神経症などの予防・治療剤などの低毒性で安全な医薬として有用である。
本発明のタンパク質Ｄと本発明のリガンドとの結合性を変化させる化合物またはその塩は、例えば、炎症性疾患（例、敗血症、肺炎、脳炎、髄膜炎、肝炎、心筋炎、胸膜炎など）、自己免疫疾患（例、重症筋無力症、糸球体腎炎、多発性硬化症、シェーグレン症候群、全身性エリテマトーデスなど）、アレルギー性疾患（例、花粉症、アレルギー性鼻炎、アナフィラキシーショック、アトピー性皮膚炎など）、リウマチ性疾患（例、慢性関節リウマチ、変形関節症、痛風など）、糖尿病性神経症、胸腺疾患、免疫不全（例、白血球異常、脾機能不全または胸腺異常にともなう免疫不全など）、消化器疾患（例、過敏性腸症候群、潰瘍性大腸炎、クローン病、虚血性大腸炎、胃炎、消化性潰瘍、直腸炎、逆流性食道炎、十二指腸炎など）、呼吸器疾患（例、慢性閉塞性肺疾患、喘息など）、循環器疾患（例、心不全、不整脈、ＱＴ延長症候群、動脈硬化、狭心症など）、肝臓疾患(例、肝硬変など)、腎疾患（例、腎不全、尿毒症など）、筋肉疾患（例、筋萎縮症など）、膵臓疾患（例、膵炎、膵嚢胞性線維症などの膵機能不全など）、生殖器疾患（例、前立腺肥大症、前立腺炎、精巣神経症、卵巣嚢腫など）、熱傷、疼痛症候群（例、癌性疼痛、関連痛など）、癌（例、精巣腫瘍、卵巣癌、乳癌、食道癌、肺癌、腎臓癌、肝臓癌、非小細胞肺癌、前立腺癌、胃癌、膀胱癌、子宮頸部癌、結腸癌、直腸癌、膵臓癌、胸腺腫、筋肉腫など）などの予防・治療剤、好ましくは炎症性疾患、リウマチ性疾患、糖尿病性神経症などの予防・治療剤などの低毒性で安全な医薬として有用である。
【００９１】
本発明のスクリーニング方法またはスクリーニング用キットを用いて得られる化合物またはその塩を上述の予防・治療剤として使用する場合、常套手段に従って製剤化することができる。例えば、錠剤、カプセル剤、エリキシル剤、マイクロカプセル剤、無菌性溶液、懸濁液剤などとすることができる。
このようにして得られる製剤は安全で低毒性であるので、例えば、ヒトまたは温血動物（例えば、マウス、ラット、ウサギ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ウマ、トリ、ネコ、イヌ、サル、チンパンジーなど）に対して経口的にまたは非経口的に投与することができる。
上記化合物またはその塩の投与量は、その作用、対象疾患、投与対象、投与ルートなどにより差異はあるが、例えば、高脂血症治療の目的で本発明のタンパク質Ａの活性または発現を促進する化合物またはその塩を経口投与する場合、一般的に成人（体重60kgとして）においては、一日につき該化合物またはその塩を約0.1〜100mg、好ましくは約1.0〜50mg、より好ましくは約1.0〜20mg投与する。非経口的に投与する場合は、該化合物またはその塩の１回投与量は投与対象、対象疾患などによっても異なるが、例えば、高脂血症治療の目的で上記化合物またはその塩を注射剤の形で通常成人（体重60kgとして）に投与する場合、一日につき該化合物またはその塩を約0.01〜30mg、好ましくは0.1〜20mg、より好ましくは約0.1〜10mgを静脈注射により投与するのが好都合である。他の動物の場合も、体重60kg当たりに換算した量を投与することができる。
【００９２】
上記化合物またはその塩の投与量は、その作用、対象疾患、投与対象、投与ルートなどにより差異はあるが、例えば、腎不全治療の目的で本発明のタンパク質Ｂの活性または発現を促進する化合物またはその塩を経口投与する場合、一般的に成人（体重60kgとして）においては、一日につき該化合物またはその塩を約0.1〜100mg、好ましくは約1.0〜50mg、より好ましくは約1.0〜20mg投与する。非経口的に投与する場合は、該化合物またはその塩の１回投与量は投与対象、対象疾患などによっても異なるが、例えば、腎不全治療の目的で上記化合物またはその塩を注射剤の形で通常成人（体重60kgとして）に投与する場合、一日につき該化合物またはその塩を約0.01〜30mg、好ましくは0.1〜20mg、より好ましくは約0.1〜10mgを静脈注射により投与するのが好都合である。他の動物の場合も、体重60kg当たりに換算した量を投与することができる。
上記化合物またはその塩の投与量は、その作用、対象疾患、投与対象、投与ルートなどにより差異はあるが、例えば、糖尿病治療の目的で本発明のタンパク質Ｃの活性または発現を促進する化合物またはその塩を経口投与する場合、一般的に成人（体重60kgとして）においては、一日につき該化合物またはその塩を約0.1〜100mg、好ましくは約1.0〜50mg、より好ましくは約1.0〜20mg投与する。非経口的に投与する場合は、該化合物またはその塩の１回投与量は投与対象、対象疾患などによっても異なるが、例えば、糖尿病治療の目的で上記化合物またはその塩を注射剤の形で通常成人（体重60kgとして）に投与する場合、一日につき該化合物またはその塩を約0.01〜30mg、好ましくは0.1〜20mg、より好ましくは約0.1〜10mgを静脈注射により投与するのが好都合である。他の動物の場合も、体重60kg当たりに換算した量を投与することができる。
【００９３】
上記化合物またはその塩の投与量は、その作用、対象疾患、投与対象、投与ルートなどにより差異はあるが、例えば、慢性関節リウマチ治療の目的で本発明のタンパク質Ｄの活性または発現を促進する化合物またはその塩、または本発明のタンパク質Ｄと本発明のリガンドとの結合性を変化させる化合物またはその塩を経口投与する場合、一般的に成人（体重60kgとして）においては、一日につき該化合物またはその塩を約0.1〜100mg、好ましくは約1.0〜50mg、より好ましくは約1.0〜20mg投与する。非経口的に投与する場合は、上記化合物またはその塩の１回投与量は投与対象、対象疾患などによっても異なるが、例えば、慢性関節リウマチ治療の目的で上記化合物またはその塩を注射剤の形で通常成人（体重60kgとして）に投与する場合、一日につき該化合物またはその塩を約0.01〜30mg、好ましくは約0.1〜20mg、より好ましくは約0.1〜10mgを静脈注射により投与するのが好都合である。他の動物の場合も、体重60kg当たりに換算した量を投与することができる。
【００９４】
〔３〕本発明のタンパク質、その部分ペプチドまたはその塩の定量
本発明の抗体は、本発明のタンパク質を特異的に認識することができるので、被検液中の本発明のタンパク質の定量、特にサンドイッチ免疫測定法による定量などに使用することができる。
すなわち、本発明は、
（ｉ）本発明の抗体と、被検液および標識化された本発明のタンパク質とを競合的に反応させ、該抗体に結合した標識化された本発明のタンパク質の割合を測定することを特徴とする被検液中の本発明のタンパク質の定量法、および（ii）被検液と担体上に不溶化した本発明の抗体および標識化された本発明の別の抗体とを同時あるいは連続的に反応させたのち、不溶化担体上の標識剤の活性を測定することを特徴とする被検液中の本発明のタンパク質の定量法を提供する。
上記（ii）の定量法においては、一方の抗体が本発明のタンパク質のＮ端部を認識する抗体で、他方の抗体が本発明のタンパク質のＣ端部に反応する抗体であることが望ましい。
【００９５】
また、本発明のタンパク質に対するモノクローナル抗体（以下、本発明のモノクローナル抗体と称する場合がある）を用いて本発明のタンパク質の定量を行なえるほか、組織染色等による検出を行なうこともできる。これらの目的には、抗体分子そのものを用いてもよく、また、抗体分子のF(ab’)2 、Fab’、またはFab画分を用いてもよい。
本発明の抗体を用いる本発明のタンパク質の定量法は、特に制限されるべきものではなく、被測定液中の抗原量（例えば、タンパク質量）に対応した抗体、抗原もしくは抗体−抗原複合体の量を化学的または物理的手段により検出し、これを既知量の抗原を含む標準液を用いて作製した標準曲線より算出する測定法であれば、いずれの測定法を用いてもよい。例えば、ネフロメトリー、競合法、イムノメトリック法およびサンドイッチ法が好適に用いられるが、感度、特異性の点で、後述するサンドイッチ法を用いるのが特に好ましい。
標識物質を用いる測定法に用いられる標識剤としては、例えば、放射性同位元素（例、〔125I〕、〔131I〕、〔3H〕、〔14C〕など）、蛍光物質〔例、シアニン蛍光色素（例、Cy2、Cy3、Cy5、Cy5.5、Cy7（アマシャムバイオサイエンス社製）など）、フルオレスカミン、フルオレッセンイソチオシアネートなど〕、酵素（例、β−ガラクトシダーゼ、β−グルコシダーゼ、アルカリホスファターゼ、パーオキシダーゼ、リンゴ酸脱水素酵素など）、発光物質（例、ルミノール、ルミノール誘導体、ルシフェリン、ルシゲニンなど）、ビオチン、ランタニド元素などが用いられる。さらに、抗体あるいは抗原と標識剤との結合にビオチン−アビジン系を用いることもできる。
【００９６】
抗原あるいは抗体の不溶化に当っては、物理吸着を用いてもよく、また通常タンパク質あるいは酵素等を不溶化、固定化するのに用いられる化学結合を用いる方法でもよい。担体としては、アガロース、デキストラン、セルロースなどの不溶性多糖類、ポリスチレン、ポリアクリルアミド、シリコン等の合成樹脂、あるいはガラス等が挙げられる。
サンドイッチ法においては不溶化した本発明のモノクローナル抗体に被検液を反応させ（１次反応）、さらに標識化した別の本発明のモノクローナル抗体を反応させ（２次反応）たのち、不溶化担体上の標識剤の活性を測定することにより被検液中の本発明のタンパク質量を定量することができる。１次反応と２次反応は逆の順序に行っても、また、同時に行なってもよいし時間をずらして行なってもよい。標識化剤および不溶化の方法は前記のそれらに準じることができる。また、サンドイッチ法による免疫測定法において、固相用抗体あるいは標識用抗体に用いられる抗体は必ずしも１種類である必要はなく、測定感度を向上させる等の目的で２種類以上の抗体の混合物を用いてもよい。
本発明のサンドイッチ法による本発明のタンパク質の測定法においては、１次反応と２次反応に用いられる本発明のモノクローナル抗体は、本発明のタンパク質の結合する部位が相異なる抗体が好ましく用いられる。すなわち、１次反応および２次反応に用いられる抗体は、例えば、２次反応で用いられる抗体が、本発明のタンパク質のＣ端部を認識する場合、１次反応で用いられる抗体は、好ましくはＣ端部以外、例えばＮ端部を認識する抗体が用いられる。
【００９７】
本発明のモノクローナル抗体をサンドイッチ法以外の測定システム、例えば、競合法、イムノメトリック法あるいはネフロメトリーなどに用いることができる。
競合法では、被検液中の抗原と標識抗原とを抗体に対して競合的に反応させたのち、未反応の標識抗原(Ｆ）と、抗体と結合した標識抗原（Ｂ）とを分離し（Ｂ／Ｆ分離）、Ｂ，Ｆいずれかの標識量を測定し、被検液中の抗原量を定量する。本反応法には、抗体として可溶性抗体を用い、Ｂ／Ｆ分離をポリエチレングリコール、前記抗体に対する第２抗体などを用いる液相法、および、第１抗体として固相化抗体を用いるか、あるいは、第１抗体は可溶性のものを用い第２抗体として固相化抗体を用いる固相化法とが用いられる。
イムノメトリック法では、被検液中の抗原と固相化抗原とを一定量の標識化抗体に対して競合反応させた後固相と液相を分離するか、あるいは、被検液中の抗原と過剰量の標識化抗体とを反応させ、次に固相化抗原を加え未反応の標識化抗体を固相に結合させたのち、固相と液相を分離する。次に、いずれかの相の標識量を測定し被検液中の抗原量を定量する。
また、ネフロメトリーでは、ゲル内あるいは溶液中で抗原抗体反応の結果生じた不溶性の沈降物の量を測定する。被検液中の抗原量が僅かであり、少量の沈降物しか得られない場合にもレーザーの散乱を利用するレーザーネフロメトリーなどが好適に用いられる。
【００９８】
これら個々の免疫学的測定法を本発明の定量方法に適用するにあたっては、特別の条件、操作等の設定は必要とされない。それぞれの方法における通常の条件、操作法に当業者の通常の技術的配慮を加えて本発明のタンパク質の測定系を構築すればよい。これらの一般的な技術手段の詳細については、総説、成書などを参照することができる。
例えば、入江  寛編「ラジオイムノアッセイ」（講談社、昭和４９年発行）、入江  寛編「続ラジオイムノアッセイ」（講談社、昭和５４年発行）、石川栄治ら編「酵素免疫測定法」（医学書院、昭和５３年発行）、石川栄治ら編「酵素免疫測定法」（第２版）（医学書院、昭和５７年発行）、石川栄治ら編「酵素免疫測定法」（第３版）（医学書院、昭和６２年発行）、「Methods in ENZYMOLOGY」 Vol. 70(Immunochemical Techniques(Part A))、 同書 Vol. 73(Immunochemical Techniques(Part B))、 同書 Vol. 74(Immunochemical Techniques(Part C))、 同書 Vol. 84(Immunochemical Techniques(Part D:Selected Immunoassays))、 同書 Vol. 92(Immunochemical Techniques(Part E:Monoclonal Antibodies and General Immunoassay Methods))、 同書 Vol. 121(Immunochemical Techniques(Part I:Hybridoma Technology and Monoclonal Antibodies))(以上、アカデミックプレス社発行)などを参照することができる。
以上のようにして、本発明の抗体を用いることによって、本発明のタンパク質を感度良く定量することができる。
【００９９】
本発明の抗体を用いて本発明のタンパク質Ａの濃度を定量することによって、本発明のタンパク質Ａの濃度の減少が検出された場合、例えば、高脂血症、生殖器疾患（例、前立腺肥大症、前立腺炎、精巣神経症、卵巣嚢腫など）、消化器疾患（例、過敏性腸症候群、潰瘍性大腸炎、クローン病、虚血性大腸炎、胃炎、消化性潰瘍、直腸炎、逆流性食道炎、十二指腸炎など）、呼吸器疾患（例、慢性閉塞性肺疾患、気管支喘息など）、自己免疫疾患（例、重症筋無力症、糸球体腎炎、多発性硬化症、シェーグレン症候群、全身性エリテマトーデスなど）、アレルギー性疾患（例、花粉症、アレルギー性鼻炎、アナフィラキシーショック、アトピー性皮膚炎など）、リウマチ性疾患（例、慢性関節リウマチ、変形関節症、痛風など）、胸腺疾患、免疫不全（例、白血球異常、脾機能不全または胸腺異常にともなう免疫不全など）、糖尿病、甲状腺機能低下、循環器疾患（例、心不全、不整脈、ＱＴ延長症候群、動脈硬化、狭心症など）、膵臓疾患（例、膵炎、膵嚢胞性線維症などの膵機能不全など）、癌（例、精巣腫瘍、卵巣癌、乳癌、食道癌、肺癌、腎臓癌、肝臓癌、非小細胞肺癌、前立腺癌、胃癌、膀胱癌、子宮頸部癌、結腸癌、直腸癌、膵臓癌、胸腺腫、筋肉腫など）など、好ましくは、高脂血症、動脈硬化、生殖器疾患、消化器疾患などが発症している可能性が高いと診断することができる。反対に、例えば、本発明のタンパク質Ａの濃度の上昇が検出された場合、例えば、高脂血症、生殖器疾患（例、前立腺肥大症、前立腺炎、精巣神経症、卵巣嚢腫など）、消化器疾患（例、過敏性腸症候群、潰瘍性大腸炎、クローン病、虚血性大腸炎、胃炎、消化性潰瘍、直腸炎、逆流性食道炎、十二指腸炎など）、呼吸器疾患（例、慢性閉塞性肺疾患、気管支喘息など）、自己免疫疾患（例、重症筋無力症、糸球体腎炎、多発性硬化症、シェーグレン症候群、全身性エリテマトーデスなど）、アレルギー性疾患（例、花粉症、アレルギー性鼻炎、アナフィラキシーショック、アトピー性皮膚炎など）、リウマチ性疾患（例、慢性関節リウマチ、変形関節症、痛風など）、胸腺疾患、免疫不全（例、白血球異常、脾機能不全または胸腺異常にともなう免疫不全など）、糖尿病、甲状腺機能低下、循環器疾患（例、心不全、不整脈、ＱＴ延長症候群、動脈硬化、狭心症など）、膵臓疾患（例、膵炎、膵嚢胞性線維症などの膵機能不全など）、癌（例、精巣腫瘍、卵巣癌、乳癌、食道癌、肺癌、腎臓癌、肝臓癌、非小細胞肺癌、前立腺癌、胃癌、膀胱癌、子宮頸部癌、結腸癌、直腸癌、膵臓癌、胸腺腫、筋肉腫など）など、好ましくは、高脂血症、動脈硬化、生殖器疾患、消化器疾患などが発症している可能性が高いと診断することが出来る。
【０１００】
本発明の抗体を用いて本発明のタンパク質Ｂの濃度を定量することによって、本発明のタンパク質Ｂの濃度の減少が検出された場合、例えば、腎疾患（例、腎不全、尿毒症など）、消化器疾患（例、過敏性腸症候群、潰瘍性大腸炎、クローン病、虚血性大腸炎、胃炎、消化性潰瘍、直腸炎、逆流性食道炎、十二指腸炎など）、呼吸器疾患（例、慢性閉塞性肺疾患、喘息など）、膵臓疾患（例、膵炎、膵嚢胞性線維症などの膵機能不全など）、自己免疫疾患（例、重症筋無力症、糸球体腎炎、多発性硬化症、シェーグレン症候群、全身性エリテマトーデスなど）、アレルギー性疾患（例、花粉症、アレルギー性鼻炎、アナフィラキシーショック、アトピー性皮膚炎など）、リウマチ性疾患（例、慢性関節リウマチ、変形関節症、痛風など）、胸腺疾患、免疫不全（例、白血球異常、脾機能不全または胸腺異常にともなう免疫不全など）、生殖器疾患（例、前立腺肥大症、前立腺炎、精巣神経症、卵巣嚢腫など）、脾臓疾患、癌（例、精巣腫瘍、卵巣癌、乳癌、食道癌、肺癌、腎臓癌、肝臓癌、非小細胞肺癌、前立腺癌、胃癌、膀胱癌、子宮頸部癌、結腸癌、直腸癌、膵臓癌、胸腺腫、筋肉腫など）、糖尿病、高血圧、虚血後再灌流障害、中枢神経系疾患（例、アルツハイマー病、パーキンソン症候群、統合失調症、脳血管性痴呆、脳虚血、てんかんなど）、好ましくは、呼吸器疾患、腎疾患、消化器疾患などが発症している可能性が高いと診断することができる。反対に、例えば、本発明のタンパク質Ｂの濃度の上昇が検出された場合、例えば、腎疾患（例、腎不全、尿毒症など）、消化器疾患（例、過敏性腸症候群、潰瘍性大腸炎、クローン病、虚血性大腸炎、胃炎、消化性潰瘍、直腸炎、逆流性食道炎、十二指腸炎など）、呼吸器疾患（例、慢性閉塞性肺疾患、喘息など）、膵臓疾患（例、膵炎、膵嚢胞性線維症などの膵機能不全など）、自己免疫疾患（例、重症筋無力症、糸球体腎炎、多発性硬化症、シェーグレン症候群、全身性エリテマトーデスなど）、アレルギー性疾患（例、花粉症、アレルギー性鼻炎、アナフィラキシーショック、アトピー性皮膚炎など）、リウマチ性疾患（例、慢性関節リウマチ、変形関節症、痛風など）、胸腺疾患、免疫不全（例、白血球異常、脾機能不全または胸腺異常にともなう免疫不全など）、生殖器疾患（例、前立腺肥大症、前立腺炎、精巣神経症、卵巣嚢腫など）、脾臓疾患、癌（例、精巣腫瘍、卵巣癌、乳癌、食道癌、肺癌、腎臓癌、肝臓癌、非小細胞肺癌、前立腺癌、胃癌、膀胱癌、子宮頸部癌、結腸癌、直腸癌、膵臓癌、胸腺腫、筋肉腫など）、糖尿病、高血圧、虚血後再灌流障害、中枢神経系疾患（例、アルツハイマー病、パーキンソン症候群、統合失調症、脳血管性痴呆、脳虚血、てんかんなど）など、好ましくは、呼吸器疾患、腎疾患、消化器疾患などが発症している可能性が高いと診断することが出来る。
【０１０１】
本発明の抗体を用いて本発明のタンパク質Ｃの濃度を定量することによって、本発明のタンパク質Ｃの濃度の減少が検出された場合、例えば、膵臓疾患（例、膵炎、膵嚢胞性線維症などの膵機能不全など）、生殖器疾患（例、前立腺肥大症、前立腺炎、精巣神経症、卵巣嚢腫など）、中枢神経系疾患（例、アルツハイマー病、パーキンソン症候群、統合失調症、脳血管性痴呆、脳虚血、てんかんなど）、消化器疾患（例、過敏性腸症候群、潰瘍性大腸炎、クローン病、虚血性大腸炎、胃炎、消化性潰瘍、直腸炎、逆流性食道炎、十二指腸炎など）、呼吸器疾患（例、慢性閉塞性肺疾患、喘息など）、糖尿病、高脂血症、胆汁うっ滞、または癌（例、精巣腫瘍、卵巣癌、乳癌、食道癌、肺癌、腎臓癌、肝臓癌、非小細胞肺癌、前立腺癌、胃癌、膀胱癌、子宮頸部癌、結腸癌、直腸癌、膵臓癌、胸腺腫、筋肉腫など）など、好ましくは、膵臓疾患、中枢神経系疾患、消化器疾患、呼吸器疾患などが発症している可能性が高いと診断することができる。反対に、例えば、本発明のタンパク質Ｃの濃度の上昇が検出された場合、例えば、膵臓疾患（例、膵炎、膵嚢胞性線維症などの膵機能不全など）、生殖器疾患（例、前立腺肥大症、前立腺炎、精巣神経症、卵巣嚢腫など）、中枢神経系疾患（例、アルツハイマー病、パーキンソン症候群、統合失調症、脳血管性痴呆、脳虚血、てんかんなど）、消化器疾患（例、過敏性腸症候群、潰瘍性大腸炎、クローン病、虚血性大腸炎、胃炎、消化性潰瘍、直腸炎、逆流性食道炎、十二指腸炎など）、呼吸器疾患（例、慢性閉塞性肺疾患、喘息など）、糖尿病、高脂血症、胆汁うっ滞、または癌（例、精巣腫瘍、卵巣癌、乳癌、食道癌、肺癌、腎臓癌、肝臓癌、非小細胞肺癌、前立腺癌、胃癌、膀胱癌、子宮頸部癌、結腸癌、直腸癌、膵臓癌、胸腺腫、筋肉腫など）など、好ましくは、膵臓疾患、中枢神経系疾患、消化器疾患、呼吸器疾患などが発症している可能性が高いと診断することが出来る。
【０１０２】
本発明の抗体を用いて本発明のタンパク質Ｄの濃度を定量することによって、本発明のタンパク質Ｄの濃度の減少が検出された場合、例えば、炎症性疾患（例、敗血症、肺炎、脳炎、髄膜炎、肝炎、心筋炎、胸膜炎など）、自己免疫疾患（例、重症筋無力症、糸球体腎炎、多発性硬化症、シェーグレン症候群、全身性エリテマトーデスなど）、アレルギー性疾患（例、花粉症、アレルギー性鼻炎、アナフィラキシーショック、アトピー性皮膚炎など）、リウマチ性疾患（例、慢性関節リウマチ、変形関節症、痛風など）、糖尿病性神経症、胸腺疾患、免疫不全（例、白血球異常、脾機能不全または胸腺異常にともなう免疫不全など）、消化器疾患（例、過敏性腸症候群、潰瘍性大腸炎、クローン病、虚血性大腸炎、胃炎、消化性潰瘍、直腸炎、逆流性食道炎、十二指腸炎など）、呼吸器疾患（例、慢性閉塞性肺疾患、喘息など）、循環器疾患（例、心不全、不整脈、ＱＴ延長症候群、動脈硬化、狭心症など）、肝臓疾患(例、肝硬変など)、腎疾患（例、腎不全、尿毒症など）、筋肉疾患（例、筋萎縮症など）、膵臓疾患（例、膵炎、膵嚢胞性線維症などの膵機能不全など）、生殖器疾患（例、前立腺肥大症、前立腺炎、精巣神経症、卵巣嚢腫など）、熱傷、疼痛症候群（例、癌性疼痛、関連痛など）、癌（例、精巣腫瘍、卵巣癌、乳癌、食道癌、肺癌、腎臓癌、肝臓癌、非小細胞肺癌、前立腺癌、胃癌、膀胱癌、子宮頸部癌、結腸癌、直腸癌、膵臓癌、胸腺腫、筋肉腫など）など、好ましくは、炎症性疾患、リウマチ性疾患、糖尿病性神経症が発症している可能性が高いと診断することができる。反対に、例えば、本発明のタンパク質Ｄの濃度の上昇が検出された場合、例えば、炎症性疾患（例、敗血症、肺炎、脳炎、髄膜炎、肝炎、心筋炎、胸膜炎など）、自己免疫疾患（例、重症筋無力症、糸球体腎炎、多発性硬化症、シェーグレン症候群、全身性エリテマトーデスなど）、アレルギー性疾患（例、花粉症、アレルギー性鼻炎、アナフィラキシーショック、アトピー性皮膚炎など）、リウマチ性疾患（例、慢性関節リウマチ、変形関節症、痛風など）、糖尿病性神経症、胸腺疾患、免疫不全（例、白血球異常、脾機能不全または胸腺異常にともなう免疫不全など）、消化器疾患（例、過敏性腸症候群、潰瘍性大腸炎、クローン病、虚血性大腸炎、胃炎、消化性潰瘍、直腸炎、逆流性食道炎、十二指腸炎など）、呼吸器疾患（例、慢性閉塞性肺疾患、喘息など）、循環器疾患（例、心不全、不整脈、ＱＴ延長症候群、動脈硬化、狭心症など）、肝臓疾患(例、肝硬変など)、腎疾患（例、腎不全、尿毒症など）、筋肉疾患（例、筋萎縮症など）、膵臓疾患（例、膵炎、膵嚢胞性線維症などの膵機能不全など）、生殖器疾患（例、前立腺肥大症、前立腺炎、精巣神経症、卵巣嚢腫など）、熱傷、疼痛症候群（例、癌性疼痛、関連痛など）、癌（例、精巣腫瘍、卵巣癌、乳癌、食道癌、肺癌、腎臓癌、肝臓癌、非小細胞肺癌、前立腺癌、胃癌、膀胱癌、子宮頸部癌、結腸癌、直腸癌、膵臓癌、胸腺腫、筋肉腫など）など、好ましくは、炎症性疾患、リウマチ性疾患、糖尿病性神経症などが発症している可能性が高いと診断することが出来る。
また、本発明の抗体は、体液や組織などの被検体中に存在する本発明のタンパク質を検出するために使用することができる。また、本発明のタンパク質を精製するために使用する抗体カラムの作製、精製時の各分画中の本発明のタンパク質の検出、被検細胞内における本発明のタンパク質の挙動の分析などのために使用することができる。
【０１０３】
〔４〕遺伝子診断薬
本発明のＤＮＡは、例えば、プローブとして使用することにより、ヒトまたは温血動物（例えば、ラット、マウス、モルモット、ウサギ、トリ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ウマ、ネコ、イヌ、サル、チンパンジーなど）における本発明のタンパク質またはその部分ペプチドをコードするＤＮＡまたはｍＲＮＡの異常（遺伝子異常）を検出することができるので、例えば、該ＤＮＡまたはｍＲＮＡの損傷、突然変異あるいは発現低下や、該ＤＮＡまたはｍＲＮＡの増加あるいは発現過多などの遺伝子診断薬として有用である。
本発明のＤＮＡを用いる上記の遺伝子診断は、例えば、公知のノーザンハイブリダイゼーションやPCR-SSCP法（Genomics，第5巻，874〜879頁（1989年）、Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America，第86巻，2766〜2770頁（1989年））などにより実施することができる。
【０１０４】
例えば、ノーザンハイブリダイゼーションにより本発明のタンパク質Ａ遺伝子の発現増加が検出された場合、例えば高脂血症、生殖器疾患（例、前立腺肥大症、前立腺炎、精巣神経症、卵巣嚢腫など）、消化器疾患（例、過敏性腸症候群、潰瘍性大腸炎、クローン病、虚血性大腸炎、胃炎、消化性潰瘍、直腸炎、逆流性食道炎、十二指腸炎など）、呼吸器疾患（例、慢性閉塞性肺疾患、気管支喘息など）、自己免疫疾患（例、重症筋無力症、糸球体腎炎、多発性硬化症、シェーグレン症候群、全身性エリテマトーデスなど）、アレルギー性疾患（例、花粉症、アレルギー性鼻炎、アナフィラキシーショック、アトピー性皮膚炎など）、リウマチ性疾患（例、慢性関節リウマチ、変形関節症、痛風など）、胸腺疾患、免疫不全（例、白血球異常、脾機能不全または胸腺異常にともなう免疫不全など）、糖尿病、甲状腺機能低下、循環器疾患（例、心不全、不整脈、ＱＴ延長症候群、動脈硬化、狭心症など）、膵臓疾患（例、膵炎、膵嚢胞性線維症などの膵機能不全など）、癌（例、精巣腫瘍、卵巣癌、乳癌、食道癌、肺癌、腎臓癌、肝臓癌、非小細胞肺癌、前立腺癌、胃癌、膀胱癌、子宮頸部癌、結腸癌、直腸癌、膵臓癌、胸腺腫、筋肉腫など）など、好ましくは、高脂血症、動脈硬化、生殖器疾患、消化器疾患などである可能性が高いと診断することが出来る。反対に、上記発現の低下が検出された場合、PCR-SSCP法によりＤＮＡの突然変異が検出された場合は、例えば、高脂血症、生殖器疾患（例、前立腺肥大症、前立腺炎、精巣神経症、卵巣嚢腫など）、消化器疾患（例、過敏性腸症候群、潰瘍性大腸炎、クローン病、虚血性大腸炎、胃炎、消化性潰瘍、直腸炎、逆流性食道炎、十二指腸炎など）、呼吸器疾患（例、慢性閉塞性肺疾患、気管支喘息など）、自己免疫疾患（例、重症筋無力症、糸球体腎炎、多発性硬化症、シェーグレン症候群、全身性エリテマトーデスなど）、アレルギー性疾患（例、花粉症、アレルギー性鼻炎、アナフィラキシーショック、アトピー性皮膚炎など）、リウマチ性疾患（例、慢性関節リウマチ、変形関節症、痛風など）、胸腺疾患、免疫不全（例、白血球異常、脾機能不全または胸腺異常にともなう免疫不全など）、糖尿病、甲状腺機能低下、循環器疾患（例、心不全、不整脈、ＱＴ延長症候群、動脈硬化、狭心症など）、膵臓疾患（例、膵炎、膵嚢胞性線維症などの膵機能不全など）、癌（例、精巣腫瘍、卵巣癌、乳癌、食道癌、肺癌、腎臓癌、肝臓癌、非小細胞肺癌、前立腺癌、胃癌、膀胱癌、子宮頸部癌、結腸癌、直腸癌、膵臓癌、胸腺腫、筋肉腫など）など、好ましくは、高脂血症、動脈硬化、生殖器疾患、消化器疾患などである可能性が高いと診断することができる。
【０１０５】
例えば、ノーザンハイブリダイゼーションにより本発明のタンパク質Ｂ遺伝子の発現増加が検出された場合、例えば腎疾患（例、腎不全、尿毒症など）、消化器疾患（例、過敏性腸症候群、潰瘍性大腸炎、クローン病、虚血性大腸炎、胃炎、消化性潰瘍、直腸炎、逆流性食道炎、十二指腸炎など）、呼吸器疾患（例、慢性閉塞性肺疾患、喘息など）、膵臓疾患（例、膵炎、膵嚢胞性線維症などの膵機能不全など）、自己免疫疾患（例、重症筋無力症、糸球体腎炎、多発性硬化症、シェーグレン症候群、全身性エリテマトーデスなど）、アレルギー性疾患（例、花粉症、アレルギー性鼻炎、アナフィラキシーショック、アトピー性皮膚炎など）、リウマチ性疾患（例、慢性関節リウマチ、変形関節症、痛風など）、胸腺疾患、免疫不全（例、白血球異常、脾機能不全または胸腺異常にともなう免疫不全など）、生殖器疾患（例、前立腺肥大症、前立腺炎、精巣神経症、卵巣嚢腫など）、脾臓疾患、癌（例、精巣腫瘍、卵巣癌、乳癌、食道癌、肺癌、腎臓癌、肝臓癌、非小細胞肺癌、前立腺癌、胃癌、膀胱癌、子宮頸部癌、結腸癌、直腸癌、膵臓癌、胸腺腫、筋肉腫など）、糖尿病、高血圧、虚血後再灌流障害、中枢神経系疾患（例、アルツハイマー病、パーキンソン症候群、統合失調症、脳血管性痴呆、脳虚血、てんかんなど）など、好ましくは、呼吸器疾患、腎疾患、消化器疾患などである可能性が高いと診断することが出来る。反対に、上記発現の低下が検出された場合、PCR-SSCP法によりＤＮＡの突然変異が検出された場合は、例えば、腎疾患（例、腎不全、尿毒症など）、消化器疾患（例、過敏性腸症候群、潰瘍性大腸炎、クローン病、虚血性大腸炎、胃炎、消化性潰瘍、直腸炎、逆流性食道炎、十二指腸炎など）、呼吸器疾患（例、慢性閉塞性肺疾患、喘息など）、膵臓疾患（例、膵炎、膵嚢胞性線維症などの膵機能不全など）、自己免疫疾患（例、重症筋無力症、糸球体腎炎、多発性硬化症、シェーグレン症候群、全身性エリテマトーデスなど）、アレルギー性疾患（例、花粉症、アレルギー性鼻炎、アナフィラキシーショック、アトピー性皮膚炎など）、リウマチ性疾患（例、慢性関節リウマチ、変形関節症、痛風など）、胸腺疾患、免疫不全（例、白血球異常、脾機能不全または胸腺異常にともなう免疫不全など）、生殖器疾患（例、前立腺肥大症、前立腺炎、精巣神経症、卵巣嚢腫など）、脾臓疾患、癌（例、精巣腫瘍、卵巣癌、乳癌、食道癌、肺癌、腎臓癌、肝臓癌、非小細胞肺癌、前立腺癌、胃癌、膀胱癌、子宮頸部癌、結腸癌、直腸癌、膵臓癌、胸腺腫、筋肉腫など）、糖尿病、高血圧、虚血後再灌流障害、中枢神経系疾患（例、アルツハイマー病、パーキンソン症候群、統合失調症、脳血管性痴呆、脳虚血、てんかんなど）など、好ましくは、呼吸器疾患、腎疾患、消化器疾患などである可能性が高いと診断することができる。
【０１０６】
例えば、ノーザンハイブリダイゼーションにより本発明のタンパク質Ｃ遺伝子の発現増加が検出された場合、例えば膵臓疾患（例、膵炎、膵嚢胞性線維症などの膵機能不全など）、生殖器疾患（例、前立腺肥大症、前立腺炎、精巣神経症、卵巣嚢腫など）、中枢神経系疾患（例、アルツハイマー病、パーキンソン症候群、統合失調症、脳血管性痴呆、脳虚血、てんかんなど）、消化器疾患（例、過敏性腸症候群、潰瘍性大腸炎、クローン病、虚血性大腸炎、胃炎、消化性潰瘍、直腸炎、逆流性食道炎、十二指腸炎など）、呼吸器疾患（例、慢性閉塞性肺疾患、喘息など）、糖尿病、高脂血症、胆汁うっ滞、または癌（例、精巣腫瘍、卵巣癌、乳癌、食道癌、肺癌、腎臓癌、肝臓癌、非小細胞肺癌、前立腺癌、胃癌、膀胱癌、子宮頸部癌、結腸癌、直腸癌、膵臓癌、胸腺腫、筋肉腫など）など、好ましくは、膵臓疾患、中枢神経系疾患、消化器疾患、呼吸器疾患などである可能性が高いと診断することが出来る。反対に、上記発現の低下が検出された場合、PCR-SSCP法によりＤＮＡの突然変異が検出された場合は、例えば、膵臓疾患（例、膵炎、膵嚢胞性線維症などの膵機能不全など）、生殖器疾患（例、前立腺肥大症、前立腺炎、精巣神経症、卵巣嚢腫など）、中枢神経系疾患（例、アルツハイマー病、パーキンソン症候群、統合失調症、脳血管性痴呆、脳虚血、てんかんなど）、消化器疾患（例、過敏性腸症候群、潰瘍性大腸炎、クローン病、虚血性大腸炎、胃炎、消化性潰瘍、直腸炎、逆流性食道炎、十二指腸炎など）、呼吸器疾患（例、慢性閉塞性肺疾患、喘息など）、糖尿病、高脂血症、胆汁うっ滞、または癌（例、精巣腫瘍、卵巣癌、乳癌、食道癌、肺癌、腎臓癌、肝臓癌、非小細胞肺癌、前立腺癌、胃癌、膀胱癌、子宮頸部癌、結腸癌、直腸癌、膵臓癌、胸腺腫、筋肉腫など）など、好ましくは、膵臓疾患、中枢神経系疾患、消化器疾患、呼吸器疾患などである可能性が高いと診断することができる。
【０１０７】
例えば、ノーザンハイブリダイゼーションにより本発明のタンパク質Ｄ遺伝子の発現増加が検出された場合、例えば、炎症性疾患（例、敗血症、肺炎、脳炎、髄膜炎、肝炎、心筋炎、胸膜炎など）、自己免疫疾患（例、重症筋無力症、糸球体腎炎、多発性硬化症、シェーグレン症候群、全身性エリテマトーデスなど）、アレルギー性疾患（例、花粉症、アレルギー性鼻炎、アナフィラキシーショック、アトピー性皮膚炎など）、リウマチ性疾患（例、慢性関節リウマチ、変形関節症、痛風など）、糖尿病性神経症、胸腺疾患、免疫不全（例、白血球異常、脾機能不全または胸腺異常にともなう免疫不全など）、消化器疾患（例、過敏性腸症候群、潰瘍性大腸炎、クローン病、虚血性大腸炎、胃炎、消化性潰瘍、直腸炎、逆流性食道炎、十二指腸炎など）、呼吸器疾患（例、慢性閉塞性肺疾患、喘息など）、循環器疾患（例、心不全、不整脈、ＱＴ延長症候群、動脈硬化、狭心症など）、肝臓疾患(例、肝硬変など)、腎疾患（例、腎不全、尿毒症など）、筋肉疾患（例、筋萎縮症など）、膵臓疾患（例、膵炎、膵嚢胞性線維症などの膵機能不全など）、生殖器疾患（例、前立腺肥大症、前立腺炎、精巣神経症、卵巣嚢腫など）、熱傷、疼痛症候群（例、癌性疼痛、関連痛など）、癌（例、精巣腫瘍、卵巣癌、乳癌、食道癌、肺癌、腎臓癌、肝臓癌、非小細胞肺癌、前立腺癌、胃癌、膀胱癌、子宮頸部癌、結腸癌、直腸癌、膵臓癌、胸腺腫、筋肉腫など）など、好ましくは、炎症性疾患、リウマチ性疾患、糖尿病性神経症などである可能性が高いと診断することが出来る。反対に、上記発現の低下が検出された場合、PCR-SSCP法によりＤＮＡの突然変異が検出された場合は、例えば、炎症性疾患（例、敗血症、肺炎、脳炎、髄膜炎、肝炎、心筋炎、胸膜炎など）、自己免疫疾患（例、重症筋無力症、糸球体腎炎、多発性硬化症、シェーグレン症候群、全身性エリテマトーデスなど）、アレルギー性疾患（例、花粉症、アレルギー性鼻炎、アナフィラキシーショック、アトピー性皮膚炎など）、リウマチ性疾患（例、慢性関節リウマチ、変形関節症、痛風など）、糖尿病性神経症、胸腺疾患、免疫不全（例、白血球異常、脾機能不全または胸腺異常にともなう免疫不全など）、消化器疾患（例、過敏性腸症候群、潰瘍性大腸炎、クローン病、虚血性大腸炎、胃炎、消化性潰瘍、直腸炎、逆流性食道炎、十二指腸炎など）、呼吸器疾患（例、慢性閉塞性肺疾患、喘息など）、循環器疾患（例、心不全、不整脈、ＱＴ延長症候群、動脈硬化、狭心症など）、肝臓疾患(例、肝硬変など)、腎疾患（例、腎不全、尿毒症など）、筋肉疾患（例、筋萎縮症など）、膵臓疾患（例、膵炎、膵嚢胞性線維症などの膵機能不全など）、生殖器疾患（例、前立腺肥大症、前立腺炎、精巣神経症、卵巣嚢腫など）、熱傷、疼痛症候群（例、癌性疼痛、関連痛など）、癌（例、精巣腫瘍、卵巣癌、乳癌、食道癌、肺癌、腎臓癌、肝臓癌、非小細胞肺癌、前立腺癌、胃癌、膀胱癌、子宮頸部癌、結腸癌、直腸癌、膵臓癌、胸腺腫、筋肉腫など）など、好ましくは、炎症性疾患、リウマチ性疾患、糖尿病性神経症などである可能性が高いと診断することができる。
【０１０８】
〔５〕アンチセンスポリヌクレオチドを含有する医薬
本発明のタンパク質ＡをコードするＤＮＡに相補的に結合し、該ＤＮＡの発現を抑制することができる本発明のアンチセンスポリヌクレオチドは低毒性であり、生体内における上記タンパク質またはＤＮＡの機能や活性を抑制することができるので、例えば、高脂血症、生殖器疾患（例、前立腺肥大症、前立腺炎、精巣神経症、卵巣嚢腫など）、消化器疾患（例、過敏性腸症候群、潰瘍性大腸炎、クローン病、虚血性大腸炎、胃炎、消化性潰瘍、直腸炎、逆流性食道炎、十二指腸炎など）、呼吸器疾患（例、慢性閉塞性肺疾患、気管支喘息など）、自己免疫疾患（例、重症筋無力症、糸球体腎炎、多発性硬化症、シェーグレン症候群、全身性エリテマトーデスなど）、アレルギー性疾患（例、花粉症、アレルギー性鼻炎、アナフィラキシーショック、アトピー性皮膚炎など）、リウマチ性疾患（例、慢性関節リウマチ、変形関節症、痛風など）、胸腺疾患、免疫不全（例、白血球異常、脾機能不全または胸腺異常にともなう免疫不全など）、糖尿病、甲状腺機能低下、循環器疾患（例、心不全、不整脈、ＱＴ延長症候群、動脈硬化、狭心症など）、膵臓疾患（例、膵炎、膵嚢胞性線維症などの膵機能不全など）、癌（例、精巣腫瘍、卵巣癌、乳癌、食道癌、肺癌、腎臓癌、肝臓癌、非小細胞肺癌、前立腺癌、胃癌、膀胱癌、子宮頸部癌、結腸癌、直腸癌、膵臓癌、胸腺腫、筋肉腫など）、好ましくは、高脂血症、動脈硬化、生殖器疾患、消化器疾患などの予防・治療剤などとして使用することができる。
【０１０９】
本発明のタンパク質ＢをコードするＤＮＡに相補的に結合し、該ＤＮＡの発現を抑制することができる本発明のアンチセンスポリヌクレオチドは低毒性であり、生体内における上記タンパク質またはＤＮＡの機能や活性を抑制することができるので、例えば、腎疾患（例、腎不全、尿毒症など）、消化器疾患（例、過敏性腸症候群、潰瘍性大腸炎、クローン病、虚血性大腸炎、胃炎、消化性潰瘍、直腸炎、逆流性食道炎、十二指腸炎など）、呼吸器疾患（例、慢性閉塞性肺疾患、喘息など）、膵臓疾患（例、膵炎、膵嚢胞性線維症などの膵機能不全など）、自己免疫疾患（例、重症筋無力症、糸球体腎炎、多発性硬化症、シェーグレン症候群、全身性エリテマトーデスなど）、アレルギー性疾患（例、花粉症、アレルギー性鼻炎、アナフィラキシーショック、アトピー性皮膚炎など）、リウマチ性疾患（例、慢性関節リウマチ、変形関節症、痛風など）、胸腺疾患、免疫不全（例、白血球異常、脾機能不全または胸腺異常にともなう免疫不全など）、生殖器疾患（例、前立腺肥大症、前立腺炎、精巣神経症、卵巣嚢腫など）、脾臓疾患、癌（例、精巣腫瘍、卵巣癌、乳癌、食道癌、肺癌、腎臓癌、肝臓癌、非小細胞肺癌、前立腺癌、胃癌、膀胱癌、子宮頸部癌、結腸癌、直腸癌、膵臓癌、胸腺腫、筋肉腫など）、糖尿病、高血圧、虚血後再灌流障害、中枢神経系疾患（例、アルツハイマー病、パーキンソン症候群、統合失調症、脳血管性痴呆、脳虚血、てんかんなど）など、好ましくは、呼吸器疾患、腎疾患、消化器疾患などの予防・治療剤などとして使用することができる。
【０１１０】
本発明のタンパク質ＣをコードするＤＮＡに相補的に結合し、該ＤＮＡの発現を抑制することができる本発明のアンチセンスポリヌクレオチドは低毒性であり、生体内における上記タンパク質またはＤＮＡの機能や活性を抑制することができるので、例えば、膵臓疾患（例、膵炎、膵嚢胞性線維症などの膵機能不全など）、生殖器疾患（例、前立腺肥大症、前立腺炎、精巣神経症、卵巣嚢腫など）、中枢神経系疾患（例、アルツハイマー病、パーキンソン症候群、統合失調症、脳血管性痴呆、脳虚血、てんかんなど）、消化器疾患（例、過敏性腸症候群、潰瘍性大腸炎、クローン病、虚血性大腸炎、胃炎、消化性潰瘍、直腸炎、逆流性食道炎、十二指腸炎など）、呼吸器疾患（例、慢性閉塞性肺疾患、喘息など）、糖尿病、高脂血症、胆汁うっ滞、または癌（例、精巣腫瘍、卵巣癌、乳癌、食道癌、肺癌、腎臓癌、肝臓癌、非小細胞肺癌、前立腺癌、胃癌、膀胱癌、子宮頸部癌、結腸癌、直腸癌、膵臓癌、胸腺腫、筋肉腫など）など、好ましくは、膵臓疾患、中枢神経系疾患、消化器疾患、呼吸器疾患などの予防・治療剤などとして使用することができる。
【０１１１】
本発明のタンパク質ＤをコードするＤＮＡに相補的に結合し、該ＤＮＡの発現を抑制することができる本発明のアンチセンスポリヌクレオチドは低毒性であり、生体内における上記タンパク質またはＤＮＡの機能や活性を抑制することができるので、例えば、炎症性疾患（例、敗血症、肺炎、脳炎、髄膜炎、肝炎、心筋炎、胸膜炎など）、自己免疫疾患（例、重症筋無力症、糸球体腎炎、多発性硬化症、シェーグレン症候群、全身性エリテマトーデスなど）、アレルギー性疾患（例、花粉症、アレルギー性鼻炎、アナフィラキシーショック、アトピー性皮膚炎など）、リウマチ性疾患（例、慢性関節リウマチ、変形関節症、痛風など）、糖尿病性神経症、胸腺疾患、免疫不全（例、白血球異常、脾機能不全または胸腺異常にともなう免疫不全など）、消化器疾患（例、過敏性腸症候群、潰瘍性大腸炎、クローン病、虚血性大腸炎、胃炎、消化性潰瘍、直腸炎、逆流性食道炎、十二指腸炎など）、呼吸器疾患（例、慢性閉塞性肺疾患、喘息など）、循環器疾患（例、心不全、不整脈、ＱＴ延長症候群、動脈硬化、狭心症など）、肝臓疾患(例、肝硬変など)、腎疾患（例、腎不全、尿毒症など）、筋肉疾患（例、筋萎縮症など）、膵臓疾患（例、膵炎、膵嚢胞性線維症などの膵機能不全など）、生殖器疾患（例、前立腺肥大症、前立腺炎、精巣神経症、卵巣嚢腫など）、熱傷、疼痛症候群（例、癌性疼痛、関連痛など）、癌（例、精巣腫瘍、卵巣癌、乳癌、食道癌、肺癌、腎臓癌、肝臓癌、非小細胞肺癌、前立腺癌、胃癌、膀胱癌、子宮頸部癌、結腸癌、直腸癌、膵臓癌、胸腺腫、筋肉腫など）など、好ましくは、炎症性疾患、リウマチ性疾患、糖尿病性神経症などの予防・治療剤などとして使用することができる。
【０１１２】
上記アンチセンスポリヌクレオチドを上記の予防・治療剤として使用する場合、公知の方法に従って製剤化し、投与することができる。
例えば、該アンチセンスポリヌクレオチドを用いる場合、該アンチセンスポリヌクレオチドを単独あるいはレトロウイルスベクター、アデノウイルスベクター、アデノウイルスアソシエーテッドウイルスベクターなどの適当なベクターに挿入した後、常套手段に従って、ヒトまたは哺乳動物（例、ラット、ウサギ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ネコ、イヌ、サルなど）に対して経口的または非経口的に投与することができる。該アンチセンスポリヌクレオチドは、そのままで、あるいは摂取促進のために補助剤などの生理学的に認められる担体とともに製剤化し、遺伝子銃やハイドロゲルカテーテルのようなカテーテルによって投与できる。
該アンチセンスポリヌクレオチドの投与量は、対象疾患、投与対象、投与ルートなどにより差異はあるが、例えば、高脂血症の治療の目的で本発明のアンチセンスポリヌクレオチドを消化器の特定の臓器に局所投与する場合、一般的に成人（体重60kg）においては、一日につき該アンチセンスポリヌクレオチドを約0.1〜100mg投与する。
さらに、該アンチセンスポリヌクレオチドは、組織や細胞における本発明のＤＮＡの存在やその発現状況を調べるための診断用オリゴヌクレオチドプローブとして使用することもできる。
【０１１３】
さらに、本発明は、（i）本発明のタンパク質をコードするＲＮＡの一部とそれに相補的なＲＮＡを含有する二重鎖ＲＮＡ、
（ii）前記二重鎖ＲＮＡを含有してなる医薬、
（iii）本発明のタンパク質をコードするＲＮＡの一部を含有するリボザイム、（iv）前記リボザイムを含有してなる医薬、
（v）前記リボザイムをコードする遺伝子（ＤＮＡ）を含有する発現ベクターなども提供する。
上記アンチセンスポリヌクレオチドと同様に、二重鎖ＲＮＡ、リボザイムなども、本発明のＤＮＡから転写されるＲＮＡを破壊またはその機能を抑制することができる。
本発明のタンパク質ＡまたはそれをコードするＤＮＡの機能を抑制することができる二重鎖ＲＮＡ、リボザイムなどは、例えば、高脂血症、生殖器疾患（例、前立腺肥大症、前立腺炎、精巣神経症、卵巣嚢腫など）、消化器疾患（例、過敏性腸症候群、潰瘍性大腸炎、クローン病、虚血性大腸炎、胃炎、消化性潰瘍、直腸炎、逆流性食道炎、十二指腸炎など）、呼吸器疾患（例、慢性閉塞性肺疾患、気管支喘息など）、自己免疫疾患（例、重症筋無力症、糸球体腎炎、多発性硬化症、シェーグレン症候群、全身性エリテマトーデスなど）、アレルギー性疾患（例、花粉症、アレルギー性鼻炎、アナフィラキシーショック、アトピー性皮膚炎など）、リウマチ性疾患（例、慢性関節リウマチ、変形関節症、痛風など）、胸腺疾患、免疫不全（例、白血球異常、脾機能不全または胸腺異常にともなう免疫不全など）、糖尿病、甲状腺機能低下、循環器疾患（例、心不全、不整脈、ＱＴ延長症候群、動脈硬化、狭心症など）、膵臓疾患（例、膵炎、膵嚢胞性線維症などの膵機能不全など）、癌（例、精巣腫瘍、卵巣癌、乳癌、食道癌、肺癌、腎臓癌、肝臓癌、非小細胞肺癌、前立腺癌、胃癌、膀胱癌、子宮頸部癌、結腸癌、直腸癌、膵臓癌、胸腺腫、筋肉腫など）など、好ましくは、高脂血症、動脈硬化、生殖器疾患、消化器疾患などの予防・治療剤などとして使用することができる。
【０１１４】
本発明のタンパク質ＢまたはそれをコードするＤＮＡの機能を抑制することができる二重鎖ＲＮＡ、リボザイムなどは、例えば、腎疾患（例、腎不全、尿毒症など）、消化器疾患（例、過敏性腸症候群、潰瘍性大腸炎、クローン病、虚血性大腸炎、胃炎、消化性潰瘍、直腸炎、逆流性食道炎、十二指腸炎など）、呼吸器疾患（例、慢性閉塞性肺疾患、喘息など）、膵臓疾患（例、膵炎、膵嚢胞性線維症などの膵機能不全など）、自己免疫疾患（例、重症筋無力症、糸球体腎炎、多発性硬化症、シェーグレン症候群、全身性エリテマトーデスなど）、アレルギー性疾患（例、花粉症、アレルギー性鼻炎、アナフィラキシーショック、アトピー性皮膚炎など）、リウマチ性疾患（例、慢性関節リウマチ、変形関節症、痛風など）、胸腺疾患、免疫不全（例、白血球異常、脾機能不全または胸腺異常にともなう免疫不全など）、生殖器疾患（例、前立腺肥大症、前立腺炎、精巣神経症、卵巣嚢腫など）、脾臓疾患、癌（例、精巣腫瘍、卵巣癌、乳癌、食道癌、肺癌、腎臓癌、肝臓癌、非小細胞肺癌、前立腺癌、胃癌、膀胱癌、子宮頸部癌、結腸癌、直腸癌、膵臓癌、胸腺腫、筋肉腫など）、糖尿病、高血圧、虚血後再灌流障害、中枢神経系疾患（例、アルツハイマー病、パーキンソン症候群、統合失調症、脳血管性痴呆、脳虚血、てんかんなど）など、好ましくは、呼吸器疾患、腎疾患、消化器疾患などの予防・治療剤などとして使用することができる。
【０１１５】
本発明のタンパク質ＣまたはそれをコードするＤＮＡの機能を抑制することができる二重鎖ＲＮＡ、リボザイムなどは、例えば、膵臓疾患（例、膵炎、膵嚢胞性線維症などの膵機能不全など）、生殖器疾患（例、前立腺肥大症、前立腺炎、精巣神経症、卵巣嚢腫など）、中枢神経系疾患（例、アルツハイマー病、パーキンソン症候群、統合失調症、脳血管性痴呆、脳虚血、てんかんなど）、消化器疾患（例、過敏性腸症候群、潰瘍性大腸炎、クローン病、虚血性大腸炎、胃炎、消化性潰瘍、直腸炎、逆流性食道炎、十二指腸炎など）、呼吸器疾患（例、慢性閉塞性肺疾患、喘息など）、糖尿病、高脂血症、胆汁うっ滞、または癌（例、精巣腫瘍、卵巣癌、乳癌、食道癌、肺癌、腎臓癌、肝臓癌、非小細胞肺癌、前立腺癌、胃癌、膀胱癌、子宮頸部癌、結腸癌、直腸癌、膵臓癌、胸腺腫、筋肉腫など）など、好ましくは、膵臓疾患、中枢神経系疾患、消化器疾患、呼吸器疾患などの予防・治療剤などとして使用することができる。
【０１１６】
本発明のタンパク質ＤまたはそれをコードするＤＮＡの機能を抑制することができる二重鎖ＲＮＡ、リボザイムなどは、例えば、炎症性疾患（例、敗血症、肺炎、脳炎、髄膜炎、肝炎、心筋炎、胸膜炎など）、自己免疫疾患（例、重症筋無力症、糸球体腎炎、多発性硬化症、シェーグレン症候群、全身性エリテマトーデスなど）、アレルギー性疾患（例、花粉症、アレルギー性鼻炎、アナフィラキシーショック、アトピー性皮膚炎など）、リウマチ性疾患（例、慢性関節リウマチ、変形関節症、痛風など）、糖尿病性神経症、胸腺疾患、免疫不全（例、白血球異常、脾機能不全または胸腺異常にともなう免疫不全など）、消化器疾患（例、過敏性腸症候群、潰瘍性大腸炎、クローン病、虚血性大腸炎、胃炎、消化性潰瘍、直腸炎、逆流性食道炎、十二指腸炎など）、呼吸器疾患（例、慢性閉塞性肺疾患、喘息など）、循環器疾患（例、心不全、不整脈、ＱＴ延長症候群、動脈硬化、狭心症など）、肝臓疾患(例、肝硬変など)、腎疾患（例、腎不全、尿毒症など）、筋肉疾患（例、筋萎縮症など）、膵臓疾患（例、膵炎、膵嚢胞性線維症などの膵機能不全など）、生殖器疾患（例、前立腺肥大症、前立腺炎、精巣神経症、y卵巣嚢腫など）、熱傷、疼痛症候群（例、癌性疼痛、関連痛など）、癌（例、精巣腫瘍、卵巣癌、乳癌、食道癌、肺癌、腎臓癌、肝臓癌、非小細胞肺癌、前立腺癌、胃癌、膀胱癌、子宮頸部癌、結腸癌、直腸癌、膵臓癌、胸腺腫、筋肉腫など）など、好ましくは、炎症性疾患、リウマチ性疾患、糖尿病性神経症などの予防・治療剤などとして使用することができる。
【０１１７】
二重鎖ＲＮＡは、公知の方法（例、Nature, 411巻, 494頁, 2001年）に準じて、本発明のポリヌクレオチドの配列を基に設計して製造することができる。
リボザイムは、公知の方法（例、TRENDS in Molecular Medicine, 7巻, 221頁, 2001年）に準じて、本発明のポリヌクレオチドの配列を基に設計して製造することができる。例えば、公知のリボザイムの配列の一部を本発明のタンパク質をコードするＲＮＡの一部に置換することによって製造することができる。本発明のタンパク質をコードするＲＮＡの一部としては、公知のリボザイムによって切断され得るコンセンサス配列ＮＵＸ（式中、Ｎはすべての塩基を、ＸはＧ以外の塩基を示す）の近傍の配列などが挙げられる。
上記の二重鎖ＲＮＡまたはリボザイムを上記予防・治療剤として使用する場合、アンチセンスポリヌクレオチドと同様にして製剤化し、投与することができる。また、前記（v）の発現ベクターは、公知の遺伝子治療法などと同様に用い、上記予防・治療剤として使用する。
【０１１８】
〔６〕本発明のＤＮＡを有する動物の作出
本発明は、外来性の本発明のタンパク質をコードするＤＮＡ（以下、本発明の外来性ＤＮＡと略記する）またはその変異ＤＮＡ（本発明の外来性変異ＤＮＡと略記する場合がある）を有する非ヒト哺乳動物を提供する。
すなわち、本発明は、
（１）本発明の外来性ＤＮＡまたはその変異ＤＮＡを有する非ヒト哺乳動物、
（２）非ヒト哺乳動物がゲッ歯動物である上記（１)記載の動物、
（３）ゲッ歯動物がマウスまたはラットである上記（２）記載の動物、および
（４）本発明の外来性ＤＮＡまたはその変異ＤＮＡを含有し、哺乳動物において発現しうる組換えベクターなどを提供する。
本発明の外来性ＤＮＡまたはその変異ＤＮＡを有する非ヒト哺乳動物（以下、本発明のＤＮＡ導入動物と略記する）は、未受精卵、受精卵、精子およびその始原細胞を含む胚芽細胞などに対して、好ましくは、非ヒト哺乳動物の発生における胚発生の段階（さらに好ましくは、単細胞または受精卵細胞の段階でかつ一般に８細胞期以前）に、リン酸カルシウム法、電気パルス法、リポフェクション法、凝集法、マイクロインジェクション法、パーティクルガン法、ＤＥＡＥ−デキストラン法などにより目的とするＤＮＡを導入することによって作出することができる。また、該ＤＮＡ導入方法により、体細胞、生体の臓器、組織細胞などに目的とする本発明の外来性ＤＮＡを導入し、細胞培養、組織培養などに利用することもでき、さらに、これら細胞を上述の胚芽細胞と公知の細胞融合法により融合させることにより本発明のＤＮＡ導入動物を作出することもできる。
非ヒト哺乳動物としては、例えば、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ウサギ、イヌ、ネコ、モルモット、ハムスター、マウス、ラットなどが用いられる。なかでも、病体動物モデル系の作成の面から個体発生および生物サイクルが比較的短く、また、繁殖が容易なゲッ歯動物、とりわけマウス（例えば、純系として、Ｃ５７ＢＬ／６系統，ＤＢＡ２系統など、交雑系として、Ｂ６Ｃ３Ｆ１系統，ＢＤＦ１系統，Ｂ６Ｄ２Ｆ１系統，ＢＡＬＢ／ｃ系統，ＩＣＲ系統など）またはラット（例えば、Ｗｉｓｔａｒ，ＳＤなど）などが好ましい。
哺乳動物において発現しうる組換えベクターにおける「哺乳動物」としては、上記の非ヒト哺乳動物の他にヒトなどがあげられる。
【０１１９】
本発明の外来性ＤＮＡとは、非ヒト哺乳動物が本来有している本発明のＤＮＡではなく、いったん哺乳動物から単離・抽出された本発明のＤＮＡをいう。
本発明の変異ＤＮＡとしては、元の本発明のＤＮＡの塩基配列に変異（例えば、突然変異など）が生じたもの、具体的には、塩基の付加、欠損、他の塩基への置換などが生じたＤＮＡなどが用いられ、また、異常ＤＮＡも含まれる。
該異常ＤＮＡとしては、異常な本発明のタンパク質を発現させるＤＮＡを意味し、例えば、正常な本発明のタンパク質の機能を抑制するタンパク質を発現させるＤＮＡなどが用いられる。
本発明の外来性ＤＮＡは、対象とする動物と同種あるいは異種のどちらの哺乳動物由来のものであってもよい。本発明のＤＮＡを対象動物に導入するにあたっては、該ＤＮＡを動物細胞で発現させうるプロモーターの下流に結合したＤＮＡコンストラクトとして用いるのが一般に有利である。例えば、本発明のヒトＤＮＡを導入する場合、これと相同性が高い本発明のＤＮＡを有する各種哺乳動物（例えば、ウサギ、イヌ、ネコ、モルモット、ハムスター、ラット、マウスなど）由来のＤＮＡを発現させうる各種プロモーターの下流に、本発明のヒトＤＮＡを結合したＤＮＡコンストラクト（例、ベクターなど）を対象哺乳動物の受精卵、例えば、マウス受精卵へマイクロインジェクションすることによって本発明のＤＮＡを高発現するＤＮＡ導入哺乳動物を作出することができる。
【０１２０】
本発明のタンパク質の発現ベクターとしては、大腸菌由来のプラスミド、枯草菌由来のプラスミド、酵母由来のプラスミド、λファージなどのバクテリオファージ、モロニー白血病ウィルスなどのレトロウィルス、ワクシニアウィルスまたはバキュロウィルスなどの動物ウイルスなどが用いられる。なかでも、大腸菌由来のプラスミド、枯草菌由来のプラスミドまたは酵母由来のプラスミドなどが好ましく用いられる。
上記のＤＮＡ発現調節を行なうプロモーターとしては、例えば、（i）ウイルス（例、シミアンウイルス、サイトメガロウイルス、モロニー白血病ウイルス、ＪＣウイルス、乳癌ウイルス、ポリオウイルスなど）に由来するＤＮＡのプロモーター、（ii）各種哺乳動物（ヒト、ウサギ、イヌ、ネコ、モルモット、ハムスター、ラット、マウスなど）由来のプロモーター、例えば、アルブミン、インスリンＩＩ、ウロプラキンＩＩ、エラスターゼ、エリスロポエチン、エンドセリン、筋クレアチンキナーゼ、グリア線維性酸性タンパク質、グルタチオンＳ−トランスフェラーゼ、血小板由来成長因子β、ケラチンＫ１，Ｋ１０およびＫ１４、コラーゲンＩ型およびＩＩ型、サイクリックＡＭＰ依存タンパク質キナーゼβＩサブユニット、ジストロフィン、酒石酸抵抗性アルカリホスファターゼ、心房ナトリウム利尿性因子、内皮レセプターチロシンキナーゼ（一般にＴｉｅ２と略される）、ナトリウムカリウムアデノシン３リン酸化酵素（Ｎａ，Ｋ−ＡＴＰａｓｅ）、ニューロフィラメント軽鎖、メタロチオネインＩおよびＩＩＡ、メタロプロティナーゼ１組織インヒビター、ＭＨＣクラスＩ抗原（Ｈ−２Ｌ）、Ｈ−ｒａｓ、レニン、ドーパミンβ−水酸化酵素、甲状腺ペルオキシダーゼ（ＴＰＯ）、ポリペプチド鎖延長因子１α（ＥＦ−１α）、βアクチン、αおよびβミオシン重鎖、ミオシン軽鎖１および２、ミエリン基礎タンパク質、チログロブリン、Ｔｈｙ−１、免疫グロブリン、Ｈ鎖可変部（ＶＮＰ）、血清アミロイドＰコンポーネント、ミオグロビン、トロポニンＣ、平滑筋αアクチン、プレプロエンケファリンＡ、バソプレシンなどのプロモーターなどが用いられる。なかでも、全身で高発現することが可能なサイトメガロウイルスプロモーター、ヒトポリペプチド鎖延長因子１α（ＥＦ−１α）のプロモーター、ヒトおよびニワトリβアクチンプロモーターなどが好適である。
上記ベクターは、ＤＮＡ導入哺乳動物において目的とするｍＲＮＡの転写を終結する配列（一般にターミネターと呼ばれる）を有していることが好ましく、例えば、ウイルス由来および各種哺乳動物由来の各ＤＮＡの配列を用いることができ、好ましくは、シミアンウイルスのＳＶ４０ターミネターなどが用いられる。
【０１２１】
その他、目的とする外来性ＤＮＡをさらに高発現させる目的で各ＤＮＡのスプライシングシグナル、エンハンサー領域、真核ＤＮＡのイントロンの一部などをプロモーター領域の５’上流、プロモーター領域と翻訳領域間あるいは翻訳領域の３’下流  に連結することも目的により可能である。
正常な本発明のタンパク質の翻訳領域は、ヒトまたは各種哺乳動物（例えば、ウサギ、イヌ、ネコ、モルモット、ハムスター、ラット、マウスなど）由来の肝臓、腎臓、甲状腺細胞、線維芽細胞由来ＤＮＡおよび市販の各種ゲノムＤＮＡライブラリーよりゲノムＤＮＡの全てあるいは一部として、または肝臓、腎臓、甲状腺細胞、線維芽細胞由来ＲＮＡより公知の方法により調製された相補ＤＮＡを原料として取得することが出来る。また、外来性の異常ＤＮＡは、上記の細胞または組織より得られた正常なポリペプチドの翻訳領域を点突然変異誘発法により変異した翻訳領域を作製することができる。
該翻訳領域は導入動物において発現しうるＤＮＡコンストラクトとして、前記のプロモーターの下流および所望により転写終結部位の上流に連結させる通常のＤＮＡ工学的手法により作製することができる。
受精卵細胞段階における本発明の外来性ＤＮＡの導入は、対象哺乳動物の胚芽細胞および体細胞のすべてに存在するように確保される。ＤＮＡ導入後の作出動物の胚芽細胞において、本発明の外来性ＤＮＡが存在することは、作出動物の後代がすべて、その胚芽細胞および体細胞のすべてに本発明の外来性ＤＮＡを保持することを意味する。本発明の外来性ＤＮＡを受け継いだこの種の動物の子孫はその胚芽細胞および体細胞のすべてに本発明の外来性ＤＮＡを有する。
本発明の外来性正常ＤＮＡを導入した非ヒト哺乳動物は、交配により外来性ＤＮＡを安定に保持することを確認して、該ＤＮＡ保有動物として通常の飼育環境で継代飼育することが出来る。
受精卵細胞段階における本発明の外来性ＤＮＡの導入は、対象哺乳動物の胚芽細胞および体細胞の全てに過剰に存在するように確保される。ＤＮＡ導入後の作出動物の胚芽細胞において本発明の外来性ＤＮＡが過剰に存在することは、作出動物の子孫が全てその胚芽細胞および体細胞の全てに本発明の外来性ＤＮＡを過剰に有することを意味する。本発明の外来性ＤＮＡを受け継いだこの種の動物の子孫はその胚芽細胞および体細胞の全てに本発明の外来性ＤＮＡを過剰に有する。
導入ＤＮＡを相同染色体の両方に持つホモザイゴート動物を取得し、この雌雄の動物を交配することによりすべての子孫が該ＤＮＡを過剰に有するように繁殖継代することができる。
【０１２２】
本発明の正常ＤＮＡを有する非ヒト哺乳動物は、本発明の正常ＤＮＡが高発現させられており、内在性の正常ＤＮＡの機能を促進することにより最終的に本発明のタンパク質の機能亢進症を発症することがあり、その病態モデル動物として利用することができる。例えば、本発明の正常ＤＮＡ導入動物を用いて、本発明のタンパク質の機能亢進症や、本発明のタンパク質が関連する疾患の病態機序の解明およびこれらの疾患の治療方法の検討を行なうことが可能である。
また、本発明の外来性正常ＤＮＡを導入した哺乳動物は、遊離した本発明のタンパク質の増加症状を有することから、本発明のタンパク質に関連する疾患に対する治療薬のスクリーニング試験にも利用可能である。
一方、本発明の外来性異常ＤＮＡを有する非ヒト哺乳動物は、交配により外来性ＤＮＡを安定に保持することを確認して該ＤＮＡ保有動物として通常の飼育環境で継代飼育することが出来る。さらに、目的とする外来ＤＮＡを前述のプラスミドに組み込んで原科として用いることができる。プロモーターとのＤＮＡコンストラク卜は、通常のＤＮＡ工学的手法によって作製することができる。受精卵細胞段階における本発明の異常ＤＮＡの導入は、対象哺乳動物の胚芽細胞および体細胞の全てに存在するように確保される。ＤＮＡ転移後の作出動物の胚芽細胞において本発明の異常ＤＮＡが存在することは、作出動物の子孫が全てその胚芽細胞および体細胞の全てに本発明の異常ＤＮＡを有することを意味する。本発明の外来性ＤＮＡを受け継いだこの種の動物の子孫は、その胚芽細胞および体細胞の全てに本発明の異常ＤＮＡを有する。導入ＤＮＡを相同染色体の両方に持つホモザイゴート動物を取得し、この雌雄の動物を交配することによりすべての子孫が該ＤＮＡを有するように繁殖継代することができる。
【０１２３】
本発明の異常ＤＮＡを有する非ヒト哺乳動物は、本発明の異常ＤＮＡが高発現させられており、内在性の正常ＤＮＡの機能を阻害することにより最終的に本発明のタンパク質の機能不活性型不応症となることがあり、その病態モデル動物として利用することができる。例えば、本発明の異常ＤＮＡ導入動物を用いて、本発明のタンパク質の機能不活性型不応症の病態機序の解明およびこの疾患を治療方法の検討を行なうことが可能である。
また、具体的な利用可能性としては、本発明の異常ＤＮＡ高発現動物は、本発明のタンパク質の機能不活性型不応症における本発明の異常タンパク質による正常タンパク質の機能阻害（dominant negative作用）を解明するモデルとなる。
また、本発明の外来異常ＤＮＡを導入した哺乳動物は、遊離した本発明のタンパク質の増加症状を有することから、本発明のタンパク質またはその機能不活性型不応症に対する治療薬スクリーニング試験にも利用可能である。
また、上記２種類の本発明のＤＮＡ導入動物のその他の利用可能性として、例えば、
（i）組織培養のための細胞源としての使用、
（ii）本発明のＤＮＡ導入動物の組織中のＤＮＡもしくはＲＮＡを直接分析する、またはＤＮＡにより発現されたポリペプチド組織を分析することによる、本発明のタンパク質により特異的に発現あるいは活性化するタンパク質との関連性についての解析、
（iii）ＤＮＡを有する組織の細胞を標準組織培養技術により培養し、これらを使用して、一般に培養困難な組織からの細胞の機能の研究、
（iv）上記（iii）記載の細胞を用いることによる細胞の機能を高めるような薬剤のスクリーニング、および
（v）本発明の変異タンパク質を単離精製およびその抗体作製などが考えられる。
さらに、本発明のＤＮＡ導入動物を用いて、本発明のタンパク質の機能不活性型不応症などを含む、本発明のタンパク質に関連する疾患の臨床症状を調べることができ、また、本発明のタンパク質に関連する疾患モデルの各臓器におけるより詳細な病理学的所見が得られ、新しい治療方法の開発、さらには、該疾患による二次的疾患の研究および治療に貢献することができる。
また、本発明のＤＮＡ導入動物から各臓器を取り出し、細切後、トリプシンなどのタンパク質分解酵素により、遊離したＤＮＡ導入細胞の取得、その培養またはその培養細胞の系統化を行なうことが可能である。さらに、本発明のタンパク質産生細胞の特定化、アポトーシス、分化あるいは増殖との関連性、またはそれらにおけるシグナル伝達機構を調べ、それらの異常を調べることなどができ、本発明のタンパク質およびその作用解明のための有効な研究材料となる。
さらに、本発明のＤＮＡ導入動物を用いて、本発明のタンパク質の機能不活性型不応症を含む、本発明のタンパク質に関連する疾患の治療薬の開発を行なうために、上述の検査法および定量法などを用いて、有効で迅速な該疾患治療薬のスクリーニング法を提供することが可能となる。また、本発明のＤＮＡ導入動物または本発明の外来性ＤＮＡ発現ベクターを用いて、本発明のタンパク質が関連する疾患のＤＮＡ治療法を検討、開発することが可能である。
【０１２４】
〔７〕ノックアウト動物
本発明は、本発明のＤＮＡが不活性化された非ヒト哺乳動物胚幹細胞および本発明のＤＮＡ発現不全非ヒト哺乳動物を提供する。
すなわち、本発明は、
（１）本発明のＤＮＡが不活性化された非ヒト哺乳動物胚幹細胞、
（２）該ＤＮＡがレポーター遺伝子（例、大腸菌由来のβ−ガラクトシダーゼ遺伝子）を導入することにより不活性化された上記（１）記載の胚幹細胞、
（３）ネオマイシン耐性である上記（１）記載の胚幹細胞、
（４）非ヒト哺乳動物がゲッ歯動物である上記（１）記載の胚幹細胞、
（５）ゲッ歯動物がマウスである上記（４）記載の胚幹細胞、
（６）本発明のＤＮＡが不活性化された該ＤＮＡ発現不全非ヒト哺乳動物、
（７）該ＤＮＡがレポーター遺伝子（例、大腸菌由来のβ−ガラクトシダーゼ遺伝子）を導入することにより不活性化され、該レポーター遺伝子が本発明のＤＮＡに対するプロモーターの制御下で発現しうる上記（６）記載の非ヒト哺乳動物、
（８）非ヒト哺乳動物がゲッ歯動物である上記（６）記載の非ヒト哺乳動物、
（９）ゲッ歯動物がマウスである上記（８）記載の非ヒト哺乳動物、および
（１０）上記（７）記載の動物に、試験化合物を投与し、レポーター遺伝子の発現を検出することを特徴とする本発明のＤＮＡに対するプロモーター活性を促進または阻害する化合物またはその塩のスクリーニング方法を提供する。
本発明のＤＮＡが不活性化された非ヒト哺乳動物胚幹細胞とは、該非ヒト哺乳動物が有する本発明のＤＮＡに人為的に変異を加えることにより、ＤＮＡの発現能を抑制するか、あるいは該ＤＮＡがコードしている本発明のタンパク質の活性を実質的に喪失させることにより、ＤＮＡが実質的に本発明のタンパク質の発現能を有さない（以下、本発明のノックアウトＤＮＡと称することがある）非ヒト哺乳動物の胚幹細胞（以下、ＥＳ細胞と略記する）をいう。
非ヒト哺乳動物としては、前記と同様のものが用いられる。
【０１２５】
本発明のＤＮＡに人為的に変異を加える方法としては、例えば、遺伝子工学的手法により該ＤＮＡ配列の一部又は全部の削除、他ＤＮＡを挿入または置換させることによって行なうことができる。これらの変異により、例えば、コドンの読み取り枠をずらしたり、プロモーターあるいはエキソンの機能を破壊することにより本発明のノックアウトＤＮＡを作製すればよい。
本発明のＤＮＡが不活性化された非ヒト哺乳動物胚幹細胞（以下、本発明のＤＮＡ不活性化ＥＳ細胞または本発明のノックアウトＥＳ細胞と略記する）の具体例としては、例えば、目的とする非ヒト哺乳動物が有する本発明のＤＮＡを単離し、そのエキソン部分にネオマイシン耐性遺伝子、ハイグロマイシン耐性遺伝子を代表とする薬剤耐性遺伝子、あるいはｌａｃＺ（β−ガラクトシダーゼ遺伝子）、ｃａｔ（クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ遺伝子）を代表とするレポーター遺伝子等を挿入することによりエキソンの機能を破壊するか、あるいはエキソン間のイントロン部分に遺伝子の転写を終結させるＤＮＡ配列（例えば、ｐｏｌｙＡ付加シグナルなど）を挿入し、完全なｍＲＮＡを合成できなくすることによって、結果的に遺伝子を破壊するように構築したＤＮＡ配列を有するＤＮＡ鎖（以下、ターゲッティングベクターと略記する）を、例えば相同組換え法により該動物の染色体に導入し、得られたＥＳ細胞について本発明のＤＮＡ上あるいはその近傍のＤＮＡ配列をプローブとしたサザンハイブリダイゼーション解析あるいはターゲッティングベクター上のＤＮＡ配列とターゲッティングベクター作製に使用した本発明のＤＮＡ以外の近傍領域のＤＮＡ配列をプライマーとしたＰＣＲ法により解析し、本発明のノックアウトＥＳ細胞を選別することにより得ることができる。
【０１２６】
また、相同組換え法等により本発明のＤＮＡを不活化させる元のＥＳ細胞としては、例えば、前述のような既に樹立されたものを用いてもよく、また公知のEvansとKaufmanの方法に準じて新しく樹立したものでもよい。例えば、マウスのＥＳ細胞の場合、現在、一般的には１２９系のＥＳ細胞が使用されているが、免疫学的背景がはっきりしていないので、これに代わる純系で免疫学的に遺伝的背景が明らかなＥＳ細胞を取得するなどの目的で例えば、Ｃ５７ＢＬ／６マウスやＣ５７ＢＬ／６の採卵数の少なさをＤＢＡ／２との交雑により改善したＢＤＦ1マウス（Ｃ５７ＢＬ／６とＤＢＡ／２とのＦ1）を用いて樹立したものなども良好に用いうる。ＢＤＦ1マウスは、採卵数が多く、かつ、卵が丈夫であるという利点に加えて、Ｃ５７ＢＬ／６マウスを背景に持つので、これを用いて得られたＥＳ細胞は病態モデルマウスを作出したとき、Ｃ５７ＢＬ／６マウスとバッククロスすることでその遺伝的背景をＣ５７ＢＬ／６マウスに代えることが可能である点で有利に用い得る。
また、ＥＳ細胞を樹立する場合、一般には受精後３.５日目の胚盤胞を使用するが、これ以外に８細胞期胚を採卵し胚盤胞まで培養して用いることにより効率よく多数の初期胚を取得することができる。
また、雌雄いずれのＥＳ細胞を用いてもよいが、通常雄のＥＳ細胞の方が生殖系列キメラを作出するのに都合が良い。また、煩雑な培養の手間を削減するためにもできるだけ早く雌雄の判別を行なうことが望ましい。
ＥＳ細胞の雌雄の判定方法としては、例えば、ＰＣＲ法によりＹ染色体上の性決定領域の遺伝子を増幅、検出する方法が、その１例としてあげることができる。この方法を使用すれば、従来、核型分析をするのに約１０6個の細胞数を要していたのに対して、１コロニー程度のＥＳ細胞数（約５０個）で済むので、培養初期におけるＥＳ細胞の第一次セレクションを雌雄の判別で行なうことが可能であり、早期に雄細胞の選定を可能にしたことにより培養初期の手間は大幅に削減できる。
【０１２７】
また、第二次セレクションとしては、例えば、Ｇ−バンディング法による染色体数の確認等により行うことができる。得られるＥＳ細胞の染色体数は正常数の１００％が望ましいが、樹立の際の物理的操作等の関係上困難な場合は、ＥＳ細胞の遺伝子をノックアウトした後、正常細胞（例えば、マウスでは染色体数が２ｎ＝４０である細胞）に再びクローニングすることが望ましい。
このようにして得られた胚幹細胞株は、通常その増殖性は大変良いが、個体発生できる能力を失いやすいので、注意深く継代培養することが必要である。例えば、ＳＴＯ繊維芽細胞のような適当なフィーダー細胞上でＬＩＦ（1〜10000U/ml）存在下に炭酸ガス培養器内（好ましくは、5％炭酸ガス、95％空気または5％酸素、5％炭酸ガス、90％空気）で約37℃で培養するなどの方法で培養し、継代時には、例えば、トリプシン／EDTA溶液（通常0.001〜0.5％トリプシン/0.1〜5mM EDTA、好ましくは約0.1％トリプシン/1mM EDTA）処理により単細胞化し、新たに用意したフィーダー細胞上に播種する方法などがとられる。このような継代は、通常１〜３日毎に行なうが、この際に細胞の観察を行い、形態的に異常な細胞が見受けられた場合はその培養細胞は放棄することが望まれる。
ＥＳ細胞は、適当な条件により、高密度に至るまで単層培養するか、または細胞集塊を形成するまで浮遊培養することにより、頭頂筋、内臓筋、心筋などの種々のタイプの細胞に分化させることが可能であり〔M. J. Evans及びM. H. Kaufman, ネイチャー（Nature）第292巻、154頁、1981年；G. R. Martin  プロシーディングス・オブ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンス・ユーエスエー（Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A.）第78巻、7634頁、1981年；T. C. Doetschman ら、ジャーナル・オブ・エンブリオロジー・アンド・エクスペリメンタル・モルフォロジー、第87巻、27頁、1985年〕、本発明のＥＳ細胞を分化させて得られる本発明のＤＮＡ発現不全細胞は、インビトロにおける本発明のタンパク質の細胞生物学的検討において有用である。
本発明のＤＮＡ発現不全非ヒト哺乳動物は、該動物のｍＲＮＡ量を公知方法を用いて測定して間接的にその発現量を比較することにより、正常動物と区別することが可能である。
該非ヒト哺乳動物としては、前記と同様のものが用いられる。
【０１２８】
本発明のＤＮＡ発現不全非ヒト哺乳動物は、例えば、前述のようにして作製したターゲッティングベクターをマウス胚幹細胞またはマウス卵細胞に導入し、導入によりターゲッティングベクターの本発明のＤＮＡが不活性化されたＤＮＡ配列が遺伝子相同組換えにより、マウス胚幹細胞またはマウス卵細胞の染色体上の本発明のＤＮＡと入れ換わる相同組換えをさせることにより、本発明のＤＮＡをノックアウトさせることができる。
本発明のＤＮＡがノックアウトされた細胞は、本発明のＤＮＡ上またはその近傍のＤＮＡ配列をプローブとしたサザンハイブリダイゼーション解析またはターゲッティングベクター上のＤＮＡ配列と、ターゲッティングベクターに使用したマウス由来の本発明のＤＮＡ以外の近傍領域のＤＮＡ配列とをプライマーとしたＰＣＲ法による解析で判定することができる。非ヒト哺乳動物胚幹細胞を用いた場合は、遺伝子相同組換えにより、本発明のＤＮＡが不活性化された細胞株をクローニングし、その細胞を適当な時期、例えば、８細胞期の非ヒト哺乳動物胚または胚盤胞に注入し、作製したキメラ胚を偽妊娠させた該非ヒト哺乳動物の子宮に移植する。作出された動物は正常な本発明のＤＮＡ座をもつ細胞と人為的に変異した本発明のＤＮＡ座をもつ細胞との両者から構成されるキメラ動物である。
該キメラ動物の生殖細胞の一部が変異した本発明のＤＮＡ座をもつ場合、このようなキメラ個体と正常個体を交配することにより得られた個体群より、全ての組織が人為的に変異を加えた本発明のＤＮＡ座をもつ細胞で構成された個体を、例えば、コートカラーの判定等により選別することにより得られる。このようにして得られた個体は、通常、本発明のタンパク質のヘテロ発現不全個体であり、本発明のタンパク質のヘテロ発現不全個体同志を交配し、それらの産仔から本発明のタンパク質のホモ発現不全個体を得ることができる。
卵細胞を使用する場合は、例えば、卵細胞核内にマイクロインジェクション法でＤＮＡ溶液を注入することによりターゲッティングベクターを染色体内に導入したトランスジェニック非ヒト哺乳動物を得ることができ、これらのトランスジェニック非ヒト哺乳動物に比べて、遺伝子相同組換えにより本発明のＤＮＡ座に変異のあるものを選択することにより得られる。
このようにして本発明のＤＮＡがノックアウトされている個体は、交配により得られた動物個体も該ＤＮＡがノックアウトされていることを確認して通常の飼育環境で飼育継代を行なうことができる。
さらに、生殖系列の取得および保持についても常法に従えばよい。すなわち、該不活化ＤＮＡの保有する雌雄の動物を交配することにより、該不活化ＤＮＡを相同染色体の両方に持つホモザイゴート動物を取得しうる。得られたホモザイゴート動物は、母親動物に対して、正常個体１，ホモザイゴート複数になるような状態で飼育することにより効率的に得ることができる。ヘテロザイゴート動物の雌雄を交配することにより、該不活化ＤＮＡを有するホモザイゴートおよびヘテロザイゴート動物を繁殖継代する。
本発明のＤＮＡが不活性化された非ヒト哺乳動物胚幹細胞は、本発明のＤＮＡ発現不全非ヒト哺乳動物を作出する上で、非常に有用である。
また、本発明のＤＮＡ発現不全非ヒト哺乳動物は、本発明のタンパク質により誘導され得る種々の生物活性を欠失するため、本発明のタンパク質の生物活性の不活性化を原因とする疾病のモデルとなり得るので、これらの疾病の原因究明及び治療法の検討に有用である。
【０１２９】
〔７ａ〕本発明のＤＮＡの欠損や損傷などに起因する疾病に対して予防・治療効果を有する化合物のスクリーニング方法
本発明のＤＮＡ発現不全非ヒト哺乳動物は、本発明のＤＮＡの欠損や損傷などに起因する疾病に対して予防・治療効果を有する化合物のスクリーニングに用いることができる。
すなわち、本発明は、本発明のＤＮＡ発現不全非ヒト哺乳動物に試験化合物を投与し、該動物の変化を観察・測定することを特徴とする、本発明のＤＮＡの欠損や損傷などに起因する疾病に対して予防・治療効果を有する化合物またはその塩のスクリーニング方法を提供する。
該スクリーニング方法において用いられる本発明のＤＮＡ発現不全非ヒト哺乳動物としては、前記と同様のものがあげられる。
試験化合物としては、例えば、ペプチド、タンパク質、非ペプチド性化合物、合成化合物、発酵生産物、細胞抽出液、植物抽出液、動物組織抽出液、血漿などがあげられ、これら化合物は新規な化合物であってもよいし、公知の化合物であってもよい。
具体的には、本発明のＤＮＡ発現不全非ヒト哺乳動物を、試験化合物で処理し、無処理の対照動物と比較し、該動物の各器官、組織、疾病の症状などの変化を指標として試験化合物の予防・治療効果を試験することができる。
試験動物を試験化合物で処理する方法としては、例えば、経口投与、静脈注射などが用いられ、試験動物の症状、試験化合物の性質などにあわせて適宜選択することができる。また、試験化合物の投与量は、投与方法、試験化合物の性質などにあわせて適宜選択することができる。
【０１３０】
例えば、高脂血症に対して治療効果を有する化合物のスクリーニングをする場合、普通食あるいはコレステロール含有普通食で飼育した本発明のタンパク質ＡをコードするＤＮＡ発現不全非ヒト哺乳動物に試験化合物を投与し、該動物の糞便中の総胆汁酸量または血漿総コレステロール量を経時的に測定する。
例えば、腎不全に対して予防・治療効果を有する化合物をスクリーニングする場合、本発明のタンパク質ＢをコードするＤＮＡ発現不全非ヒト哺乳動物に試験化合物を投与し、該動物の血中クレアチニン量や、尿タンパク質量などを経時的に測定する。
例えば、糖尿病に対して治療効果を有する化合物のスクリーニングをする場合、本発明のタンパク質ＣをコードするＤＮＡ発現不全非ヒト哺乳動物に糖負荷処置を行ない、糖負荷処置前または処置後に試験化合物を投与し、該動物の血糖値、尿量、尿糖および体重変化などを経時的に測定する。
例えば、慢性関節リウマチに対して予防・治療効果を有する化合物をスクリーニングする場合、本発明のタンパク質ＤをコードするＤＮＡ発現不全非ヒト哺乳動物に試験化合物を投与し、該動物の関節の腫れの体積などを経時的に測定したり、エックス線、ＭＲＩ、組織学的手法などにより関節破壊の程度を経時的に評価する。
該スクリーニング方法を用いて得られる化合物は、上記した試験化合物から選ばれた化合物であり、本発明のタンパク質の欠損や損傷などによって引き起こされる疾患に対して予防・治療効果を有するので、該疾患に対する安全で低毒性な予防・治療剤などの医薬として使用することができる。さらに、上記スクリーニングで得られた化合物から誘導される化合物も同様に用いることができる。
【０１３１】
該スクリーニング方法で得られた化合物は塩を形成していてもよく、該化合物の塩としては、生理学的に許容される酸（例、無機酸、有機酸など）や塩基（例、アルカリ金属など）などとの塩が用いられ、とりわけ生理学的に許容される酸付加塩が好ましい。この様な塩としては、例えば、無機酸（例えば、塩酸、リン酸、臭化水素酸、硫酸など）との塩、あるいは有機酸（例えば、酢酸、ギ酸、プロピオン酸、フマル酸、マレイン酸、コハク酸、酒石酸、クエン酸、リンゴ酸、蓚酸、安息香酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸など）との塩などが用いられる。
該スクリーニング方法で得られた化合物またはその塩を含有する医薬は、前記した本発明のタンパク質を含有する医薬と同様にして製造することができる。
このようにして得られる製剤は、安全で低毒性であるので、例えば、ヒトまたはその他の哺乳動物（例えば、ラット、マウス、モルモット、ウサギ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ウマ、ネコ、イヌ、サルなど）に対して投与することができる。
【０１３２】
該化合物またはその塩の投与量は、対象疾患、投与対象、投与ルートなどにより差異はあるが、例えば、該化合物を経口投与する場合、一般的に成人（体重60kgとして）の高脂血症の患者においては、一日につき該化合物を約0.1〜100mg、好ましくは約1.0〜50mg、より好ましくは約1.0〜20mg投与する。非経口的に投与する場合は、該化合物の１回投与量は投与対象、対象疾患などによっても異なるが、例えば、該化合物を注射剤の形で通常成人（60kgとして）の高脂血症の患者に投与する場合、一日につき該化合物を約0.01〜30mg、好ましくは0.1〜20mg、より好ましくは約0.1〜10mgを静脈注射により投与するのが好都合である。他の動物の場合も、60kg当たりに換算した量を投与することができる。
【０１３３】
〔７ｂ〕本発明のＤＮＡに対するプロモーターの活性を促進または阻害する化合物のスクリーニング方法
本発明は、本発明のＤＮＡ発現不全非ヒト哺乳動物に、試験化合物を投与し、レポーター遺伝子の発現を検出することを特徴とする本発明のＤＮＡに対するプロモーターの活性を促進または阻害する化合物またはその塩のスクリーニング方法を提供する。
上記スクリーニング方法において、本発明のＤＮＡ発現不全非ヒト哺乳動物としては、前記した本発明のＤＮＡ発現不全非ヒト哺乳動物の中でも、本発明のＤＮＡがレポーター遺伝子を導入することにより不活性化され、該レポーター遺伝子が本発明のＤＮＡに対するプロモーターの制御下で発現しうるものが用いられる。
試験化合物としては、前記と同様のものがあげられる。
レポーター遺伝子としては、前記と同様のものが用いられ、β−ガラクトシダーゼ遺伝子（ｌａｃＺ）、可溶性アルカリホスファターゼ遺伝子またはルシフェラーゼ遺伝子などが好適である。
【０１３４】
本発明のＤＮＡをレポーター遺伝子で置換された本発明のＤＮＡ発現不全非ヒト哺乳動物では、レポーター遺伝子が本発明のＤＮＡに対するプロモーターの支配下に存在するので、レポーター遺伝子がコードする物質の発現をトレースすることにより、プロモーターの活性を検出することができる。
例えば、本発明のタンパク質をコードするＤＮＡ領域の一部を大腸菌由来のβ−ガラクトシダーゼ遺伝子（ｌａｃＺ）で置換している場合、本来、本発明のタンパク質の発現する組織で、本発明のタンパク質の代わりにβ−ガラクトシダーゼが発現する。従って、例えば、５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリル−β−ガラクトピラノシド（Ｘ−ｇａｌ）のようなβ−ガラクトシダーゼの基質となる試薬を用いて染色することにより、簡便に本発明のタンパク質の動物生体内における発現状態を観察することができる。具体的には、本発明のタンパク質欠損マウスまたはその組織切片をグルタルアルデヒドなどで固定し、リン酸緩衝生理食塩液（ＰＢＳ）で洗浄後、Ｘ−ｇａｌを含む染色液で、室温または３７℃付近で、約３０分ないし１時間反応させた後、組織標本を１ｍＭ  ＥＤＴＡ／ＰＢＳ溶液で洗浄することによって、β−ガラクトシダーゼ反応を停止させ、呈色を観察すればよい。また、常法に従い、ｌａｃＺをコードするｍＲＮＡを検出してもよい。
上記スクリーニング方法を用いて得られる化合物またはその塩は、上記した試験化合物から選ばれた化合物であり、本発明のＤＮＡに対するプロモーター活性を促進または阻害する化合物である。
【０１３５】
該スクリーニング方法で得られた化合物は塩を形成していてもよく、該化合物の塩としては、生理学的に許容される酸（例、無機酸など）や塩基（例、有機酸など）などとの塩が用いられ、とりわけ生理学的に許容される酸付加塩が好ましい。この様な塩としては、例えば、無機酸（例えば、塩酸、リン酸、臭化水素酸、硫酸など）との塩、あるいは有機酸（例えば、酢酸、ギ酸、プロピオン酸、フマル酸、マレイン酸、コハク酸、酒石酸、クエン酸、リンゴ酸、蓚酸、安息香酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸など）との塩などが用いられる。
【０１３６】
本発明のタンパク質ＡをコードするＤＮＡに対するプロモーター活性を促進する化合物またはその塩は、本発明のタンパク質Ａの発現を促進し、該タンパク質の機能を促進することができるので、例えば、高脂血症、生殖器疾患（例、前立腺肥大症、前立腺炎、精巣神経症、卵巣嚢腫など）、消化器疾患（例、過敏性腸症候群、潰瘍性大腸炎、クローン病、虚血性大腸炎、胃炎、消化性潰瘍、直腸炎、逆流性食道炎、十二指腸炎など）、呼吸器疾患（例、慢性閉塞性肺疾患、気管支喘息など）、自己免疫疾患（例、重症筋無力症、糸球体腎炎、多発性硬化症、シェーグレン症候群、全身性エリテマトーデスなど）、アレルギー性疾患（例、花粉症、アレルギー性鼻炎、アナフィラキシーショック、アトピー性皮膚炎など）、リウマチ性疾患（例、慢性関節リウマチ、変形関節症、痛風など）、胸腺疾患、免疫不全（例、白血球異常、脾機能不全または胸腺異常にともなう免疫不全など）、糖尿病、甲状腺機能低下、循環器疾患（例、心不全、不整脈、ＱＴ延長症候群、動脈硬化、狭心症など）、膵臓疾患（例、膵炎、膵嚢胞性線維症などの膵機能不全など）、癌（例、精巣腫瘍、卵巣癌、乳癌、食道癌、肺癌、腎臓癌、肝臓癌、非小細胞肺癌、前立腺癌、胃癌、膀胱癌、子宮頸部癌、結腸癌、直腸癌、膵臓癌、胸腺腫、筋肉腫など）、好ましくは、高脂血症、動脈硬化、生殖器疾患、消化器疾患などの予防・治療剤などの医薬として有用である。
本発明のタンパク質ＡをコードするＤＮＡに対するプロモーター活性を阻害する化合物またはその塩は、本発明のタンパク質Ａの発現を阻害し、該タンパク質の機能を阻害することができるので、例えば高脂血症、生殖器疾患（例、前立腺肥大症、前立腺炎、精巣神経症、卵巣嚢腫など）、消化器疾患（例、過敏性腸症候群、潰瘍性大腸炎、クローン病、虚血性大腸炎、胃炎、消化性潰瘍、直腸炎、逆流性食道炎、十二指腸炎など）、呼吸器疾患（例、慢性閉塞性肺疾患、気管支喘息など）、自己免疫疾患（例、重症筋無力症、糸球体腎炎、多発性硬化症、シェーグレン症候群、全身性エリテマトーデスなど）、アレルギー性疾患（例、花粉症、アレルギー性鼻炎、アナフィラキシーショック、アトピー性皮膚炎など）、リウマチ性疾患（例、慢性関節リウマチ、変形関節症、痛風など）、胸腺疾患、免疫不全（例、白血球異常、脾機能不全または胸腺異常にともなう免疫不全など）、糖尿病、甲状腺機能低下、循環器疾患（例、心不全、不整脈、ＱＴ延長症候群、動脈硬化、狭心症など）、膵臓疾患（例、膵炎、膵嚢胞性線維症などの膵機能不全など）、癌（例、精巣腫瘍、卵巣癌、乳癌、食道癌、肺癌、腎臓癌、肝臓癌、非小細胞肺癌、前立腺癌、胃癌、膀胱癌、子宮頸部癌、結腸癌、直腸癌、膵臓癌、胸腺腫、筋肉腫など）、好ましくは、高脂血症、動脈硬化、生殖器疾患、消化器疾患などの予防・治療剤などの医薬として有用である。
【０１３７】
本発明のタンパク質ＢをコードするＤＮＡに対するプロモーター活性を促進する化合物またはその塩は、本発明のタンパク質Ｂの発現を促進し、該タンパク質の機能を促進することができるので、例えば、腎疾患（例、腎不全、尿毒症など）、消化器疾患（例、過敏性腸症候群、潰瘍性大腸炎、クローン病、虚血性大腸炎、胃炎、消化性潰瘍、直腸炎、逆流性食道炎、十二指腸炎など）、呼吸器疾患（例、慢性閉塞性肺疾患、喘息など）、膵臓疾患（例、膵炎、膵嚢胞性線維症などの膵機能不全など）、自己免疫疾患（例、重症筋無力症、糸球体腎炎、多発性硬化症、シェーグレン症候群、全身性エリテマトーデスなど）、アレルギー性疾患（例、花粉症、アレルギー性鼻炎、アナフィラキシーショック、アトピー性皮膚炎など）、リウマチ性疾患（例、慢性関節リウマチ、変形関節症、痛風など）、胸腺疾患、免疫不全（例、白血球異常、脾機能不全または胸腺異常にともなう免疫不全など）、生殖器疾患（例、前立腺肥大症、前立腺炎、精巣神経症、卵巣嚢腫など）、脾臓疾患、癌（例、精巣腫瘍、卵巣癌、乳癌、食道癌、肺癌、腎臓癌、肝臓癌、非小細胞肺癌、前立腺癌、胃癌、膀胱癌、子宮頸部癌、結腸癌、直腸癌、膵臓癌、胸腺腫、筋肉腫など）、糖尿病、高血圧、虚血後再灌流障害、中枢神経系疾患（例、アルツハイマー病、パーキンソン症候群、統合失調症、脳血管性痴呆、脳虚血、てんかんなど）など、好ましくは、呼吸器疾患、腎疾患、消化器疾患などの予防・治療剤などの医薬として有用である。
本発明のタンパク質ＢをコードするＤＮＡに対するプロモーター活性を阻害する化合物またはその塩は、本発明のタンパク質Ｂの発現を阻害し、該タンパク質の機能を阻害することができるので、例えば腎疾患（例、腎不全、尿毒症など）、消化器疾患（例、過敏性腸症候群、潰瘍性大腸炎、クローン病、虚血性大腸炎、胃炎、消化性潰瘍、直腸炎、逆流性食道炎、十二指腸炎など）、呼吸器疾患（例、慢性閉塞性肺疾患、喘息など）、膵臓疾患（例、膵炎、膵嚢胞性線維症などの膵機能不全など）、自己免疫疾患（例、重症筋無力症、糸球体腎炎、多発性硬化症、シェーグレン症候群、全身性エリテマトーデスなど）、アレルギー性疾患（例、花粉症、アレルギー性鼻炎、アナフィラキシーショック、アトピー性皮膚炎など）、リウマチ性疾患（例、慢性関節リウマチ、変形関節症、痛風など）、胸腺疾患、免疫不全（例、白血球異常、脾機能不全または胸腺異常にともなう免疫不全など）、生殖器疾患（例、前立腺肥大症、前立腺炎、精巣神経症、卵巣嚢腫など）、脾臓疾患、癌（例、精巣腫瘍、卵巣癌、乳癌、食道癌、肺癌、腎臓癌、肝臓癌、非小細胞肺癌、前立腺癌、胃癌、膀胱癌、子宮頸部癌、結腸癌、直腸癌、膵臓癌、胸腺腫、筋肉腫など）、糖尿病、高血圧、虚血後再灌流障害、中枢神経系疾患（例、アルツハイマー病、パーキンソン症候群、統合失調症、脳血管性痴呆、脳虚血、てんかんなど）など、好ましくは、呼吸器疾患、腎疾患、消化器疾患などの予防・治療剤などの医薬として有用である。
【０１３８】
本発明のタンパク質ＣをコードするＤＮＡに対するプロモーター活性を促進する化合物またはその塩は、本発明のタンパク質Ｃの発現を促進し、該タンパク質の機能を促進することができるので、例えば、膵臓疾患（例、膵炎、膵嚢胞性線維症などの膵機能不全など）、生殖器疾患（例、前立腺肥大症、前立腺炎、精巣神経症、卵巣嚢腫など）、中枢神経系疾患（例、アルツハイマー病、パーキンソン症候群、統合失調症、脳血管性痴呆、脳虚血、てんかんなど）、消化器疾患（例、過敏性腸症候群、潰瘍性大腸炎、クローン病、虚血性大腸炎、胃炎、消化性潰瘍、直腸炎、逆流性食道炎、十二指腸炎など）、呼吸器疾患（例、慢性閉塞性肺疾患、喘息など）、糖尿病、高脂血症、胆汁うっ滞、または癌（例、精巣腫瘍、卵巣癌、乳癌、食道癌、肺癌、腎臓癌、肝臓癌、非小細胞肺癌、前立腺癌、胃癌、膀胱癌、子宮頸部癌、結腸癌、直腸癌、膵臓癌、胸腺腫、筋肉腫など）など、好ましくは、膵臓疾患、中枢神経系疾患、消化器疾患、呼吸器疾患などの予防・治療剤などの医薬として有用である。
本発明のタンパク質ＣをコードするＤＮＡに対するプロモーター活性を阻害する化合物またはその塩は、本発明のタンパク質Ｃの発現を阻害し、該タンパク質の機能を阻害することができるので、例えば膵臓疾患（例、膵炎、膵嚢胞性線維症などの膵機能不全など）、生殖器疾患（例、前立腺肥大症、前立腺炎、精巣神経症、卵巣嚢腫など）、中枢神経系疾患（例、アルツハイマー病、パーキンソン症候群、統合失調症、脳血管性痴呆、脳虚血、てんかんなど）、消化器疾患（例、過敏性腸症候群、潰瘍性大腸炎、クローン病、虚血性大腸炎、胃炎、消化性潰瘍、直腸炎、逆流性食道炎、十二指腸炎など）、呼吸器疾患（例、慢性閉塞性肺疾患、喘息など）、糖尿病、高脂血症、胆汁うっ滞、または癌（例、精巣腫瘍、卵巣癌、乳癌、食道癌、肺癌、腎臓癌、肝臓癌、非小細胞肺癌、前立腺癌、胃癌、膀胱癌、子宮頸部癌、結腸癌、直腸癌、膵臓癌、胸腺腫、筋肉腫など）など、好ましくは、膵臓疾患、中枢神経系疾患、消化器疾患、呼吸器疾患などの予防・治療剤などの医薬として有用である。
【０１３９】
本発明のタンパク質ＤをコードするＤＮＡに対するプロモーター活性を促進する化合物またはその塩は、本発明のタンパク質Ｄの発現を促進し、該タンパク質の機能を促進することができるので、例えば、炎症性疾患（例、敗血症、肺炎、脳炎、髄膜炎、肝炎、心筋炎、胸膜炎など）、自己免疫疾患（例、重症筋無力症、糸球体腎炎、多発性硬化症、シェーグレン症候群、全身性エリテマトーデスなど）、アレルギー性疾患（例、花粉症、アレルギー性鼻炎、アナフィラキシーショック、アトピー性皮膚炎など）、リウマチ性疾患（例、慢性関節リウマチ、変形関節症、痛風など）、糖尿病性神経症、胸腺疾患、免疫不全（例、白血球異常、脾機能不全または胸腺異常にともなう免疫不全など）、消化器疾患（例、過敏性腸症候群、潰瘍性大腸炎、クローン病、虚血性大腸炎、胃炎、消化性潰瘍、直腸炎、逆流性食道炎、十二指腸炎など）、呼吸器疾患（例、慢性閉塞性肺疾患、喘息など）、循環器疾患（例、心不全、不整脈、ＱＴ延長症候群、動脈硬化、狭心症など）、肝臓疾患(例、肝硬変など)、腎疾患（例、腎不全、尿毒症など）、筋肉疾患（例、筋萎縮症など）、膵臓疾患（例、膵炎、膵嚢胞性線維症などの膵機能不全など）、生殖器疾患（例、前立腺肥大症、前立腺炎、精巣神経症、卵巣嚢腫など）、熱傷、疼痛症候群（例、癌性疼痛、関連痛など）、癌（例、精巣腫瘍、卵巣癌、乳癌、食道癌、肺癌、腎臓癌、肝臓癌、非小細胞肺癌、前立腺癌、胃癌、膀胱癌、子宮頸部癌、結腸癌、直腸癌、膵臓癌、胸腺腫、筋肉腫など）など、好ましくは、炎症性疾患、リウマチ性疾患、糖尿病性神経症などの予防・治療剤などの医薬として有用である。
本発明のタンパク質ＤをコードするＤＮＡに対するプロモーター活性を阻害する化合物またはその塩は、本発明のタンパク質Ｄの発現を阻害し、該タンパク質の機能を阻害することができるので、例えば、炎症性疾患（例、敗血症、肺炎、脳炎、髄膜炎、肝炎、心筋炎、胸膜炎など）、自己免疫疾患（例、重症筋無力症、糸球体腎炎、多発性硬化症、シェーグレン症候群、全身性エリテマトーデスなど）、アレルギー性疾患（例、花粉症、アレルギー性鼻炎、アナフィラキシーショック、アトピー性皮膚炎など）、リウマチ性疾患（例、慢性関節リウマチ、変形関節症、痛風など）、糖尿病性神経症、胸腺疾患、免疫不全（例、白血球異常、脾機能不全または胸腺異常にともなう免疫不全など）、消化器疾患（例、過敏性腸症候群、潰瘍性大腸炎、クローン病、虚血性大腸炎、胃炎、消化性潰瘍、直腸炎、逆流性食道炎、十二指腸炎など）、呼吸器疾患（例、慢性閉塞性肺疾患、喘息など）、循環器疾患（例、心不全、不整脈、ＱＴ延長症候群、動脈硬化、狭心症など）、肝臓疾患(例、肝硬変など)、腎疾患（例、腎不全、尿毒症など）、筋肉疾患（例、筋萎縮症など）、膵臓疾患（例、膵炎、膵嚢胞性線維症などの膵機能不全など）、生殖器疾患（例、前立腺肥大症、前立腺炎、精巣神経症、卵巣嚢腫など）、熱傷、疼痛症候群（例、癌性疼痛、関連痛など）、癌（例、精巣腫瘍、卵巣癌、乳癌、食道癌、肺癌、腎臓癌、肝臓癌、非小細胞肺癌、前立腺癌、胃癌、膀胱癌、子宮頸部癌、結腸癌、直腸癌、膵臓癌、胸腺腫、筋肉腫など）など、好ましくは、炎症性疾患、リウマチ性疾患、糖尿病性神経症などの予防・治療剤などの医薬として有用である。
さらに、上記スクリーニングで得られた化合物から誘導される化合物も同様に用いることができる。
【０１４０】
該スクリーニング方法で得られた化合物またはその塩を含有する医薬は、前記した本発明のタンパク質またはその塩を含有する医薬と同様にして製造することができる。
このようにして得られる製剤は、安全で低毒性であるので、例えば、ヒトまたはその他の哺乳動物（例えば、ラット、マウス、モルモット、ウサギ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ウマ、ネコ、イヌ、サルなど）に対して投与することができる。
該化合物またはその塩の投与量は、対象疾患、投与対象、投与ルートなどにより差異はあるが、例えば、本発明のＤＮＡに対するプロモーター活性を促進する化合物を経口投与する場合、一般的に成人（体重60kgとして）の高脂血症患者においては、一日につき該化合物を約0.1〜100mg、好ましくは約1.0〜50mg、より好ましくは約1.0〜20mg投与する。非経口的に投与する場合は、該化合物の１回投与量は投与対象、対象疾患などによっても異なるが、例えば、本発明のＤＮＡに対するプロモーター活性を促進する化合物を注射剤の形で通常成人（60kgとして）の高脂血症患者に投与する場合、一日につき該化合物を約0.01〜30mg、好ましくは0.1〜20mg、より好ましくは約0.1〜10mgを静脈注射により投与するのが好都合である。他の動物の場合も、60kg当たりに換算した量を投与することができる。
【０１４１】
一方、例えば、本発明のＤＮＡに対するプロモーター活性を阻害する化合物を経口投与する場合、一般的に成人（体重60kgとして）の高脂血症患者においては、一日につき該化合物を約0.1〜100mg、好ましくは約1.0〜50mg、より好ましくは約1.0〜20mg投与する。非経口的に投与する場合は、該化合物の１回投与量は投与対象、対象疾患などによっても異なるが、例えば、本発明のＤＮＡに対するプロモーター活性を阻害する化合物を注射剤の形で通常成人（60kgとして）の高脂血症患者に投与する場合、一日につき該化合物を約0.01〜30mg、好ましくは0.1〜20mg、より好ましくは約0.1〜10mgを静脈注射により投与するのが好都合である。他の動物の場合も、60kg当たりに換算した量を投与することができる。
このように、本発明のＤＮＡ発現不全非ヒト哺乳動物は、本発明のＤＮＡに対するプロモーターの活性を促進または阻害する化合物またはその塩をスクリーニングする上で極めて有用であり、本発明のＤＮＡ発現不全に起因する各種疾患の原因究明または予防・治療薬の開発に大きく貢献することができる。
また、本発明のタンパク質のプロモーター領域を含有するＤＮＡを使って、その下流に種々のタンパク質をコードする遺伝子を連結し、これを動物の卵細胞に注入していわゆるトランスジェニック動物（遺伝子導入動物）を作出すれば、特異的にそのポリペプチドを合成させ、その生体での作用を検討することも可能となる。さらに上記プロモーター部分に適当なレポーター遺伝子を結合させ、これが発現するような細胞株を樹立すれば、本発明のタンパク質そのものの体内での産生能力を特異的に促進もしくは抑制する作用を持つ低分子化合物の探索系として使用できる。
【０１４２】
〔８〕本発明のタンパク質Ｄに対するリガンドの決定
本発明のタンパク質Ｄもしくはその部分ペプチドまたはその塩は、本発明のタンパク質Ｄまたはその塩に対するリガンドを探索し、または決定するための試薬として有用である。
すなわち、本発明は、本発明のタンパク質Ｄもしくはその部分ペプチドまたはその塩と、試験化合物とを接触させることを特徴とする本発明のタンパク質Ｄに対するリガンドの決定方法を提供する。
【０１４３】
試験化合物としては、公知のリガンド（例えば、アンギオテンシン、ボンベシン、カナビノイド、コレシストキニン、グルタミン、セロトニン、メラトニン、ニューロペプチドＹ、オピオイド、プリン、バソプレッシン、オキシトシン、ＰＡＣＡＰ（例、ＰＡＣＡＰ２７，ＰＡＣＡＰ３８）、セクレチン、グルカゴン、カルシトニン、アドレノメジュリン、ソマトスタチン、ＧＨＲＨ、ＣＲＦ、ＡＣＴＨ、ＧＲＰ、ＰＴＨ、ＶＩＰ（バソアクティブ  インテスティナル  アンド  リレイテッド  ポリペプチド）、ソマトスタチン、ドーパミン、モチリン、アミリン、ブラジキニン、ＣＧＲＰ（カルシトニンジーンリレーティッドペプチド）、ロイコトリエン、パンクレアスタチン、プロスタグランジン、トロンボキサン、アデノシン、アドレナリン、ケモカインスーパーファミリー（例、ＩＬ−８，ＧＲＯα，ＧＲＯβ，ＧＲＯγ，ＮＡＰ−２，ＥＮＡ−７８，ＧＣＰ−２，ＰＦ４，ＩＰ−１０，Ｍｉｇ，ＰＢＳＦ／ＳＤＦ−１などのＣＸＣケモカインサブファミリー；ＭＣＡＦ／ＭＣＰ−１，ＭＣＰ−２，ＭＣＰ−３，ＭＣＰ−４，ｅｏｔａｘｉｎ，ＲＡＮＴＥＳ，ＭＩＰ−１α、ＭＩＰ−１β，ＨＣＣ−１，ＭＩＰ−３α／ＬＡＲＣ、ＭＩＰ−３β／ＥＬＣ，Ｉ−３０９，ＴＡＲＣ，ＭＩＰＦ−１，ＭＩＰＦ−２／ｅｏｔａｘｉｎ−２，ＭＤＣ，ＤＣ−ＣＫ１／ＰＡＲＣ，ＳＬＣなどのＣＣケモカインサブファミリー；ｌｙｍｐｈｏｔａｃｔｉｎなどのＣケモカインサブファミリー；ｆｒａｃｔａｌｋｉｎｅなどのＣＸ３Ｃケモカインサブファミリー等）、エンドセリン、エンテロガストリン、ヒスタミン、ニューロテンシン、ＴＲＨ、パンクレアティックポリペプタイド、ガラニン、リゾホスファチジン酸（ＬＰＡ）、スフィンゴシン１−リン酸、バニロイド、ヌクレオチドなど）の他に、例えば、哺乳動物（例えば、ヒト、マウス、ラット、ブタ、ウシ、ヒツジ、サルなど）の組織抽出物、細胞培養上清などが用いられる。例えば、該組織抽出物、細胞培養上清などを本発明のタンパク質Ｄに添加し、カチオンチャネル活性などを測定しながら分画し、最終的に単一のリガンドを得ることができる。
具体的には、本発明のリガンド決定方法は、本発明のタンパク質Ｄを用いるか、または組換え型タンパク質Ｄの発現系を構築し、該発現系を用いたリガンド結合アッセイ系を用いることによって、本発明のタンパク質Ｄに結合してカチオンチャネル活性（例、Ca2+チャネル活性など）を有する化合物（例えば、ペプチド、タンパク質、非ペプチド性化合物、合成化合物、発酵生産物、ヌクレオチドなど）またはその塩を決定する方法である。
【０１４４】
本発明のリガンド決定方法においては、本発明のタンパク質Ｄと試験化合物とを接触させた場合の、例えば、該タンパク質Ｄまたは該部分ペプチドに対する試験化合物の結合量や、カチオンチャネル活性などを測定することを特徴とする。
より具体的には、本発明は、
（i）標識した試験化合物を、本発明のタンパク質Ｄもしくはその部分ペプチドまたはその塩に接触させた場合における、標識した試験化合物の該タンパク質もしくはその塩、または該部分ペプチドもしくはその塩に対する結合量を測定することを特徴とする本発明のタンパク質Ｄまたはその塩に対するリガンドの決定方法、
（ii）標識した試験化合物を、本発明のタンパク質Ｄを含有する細胞または該細胞の膜画分に接触させた場合における、標識した試験化合物の該細胞または該膜画分に対する結合量を測定することを特徴とする本発明のタンパク質Ｄまたはその塩に対するリガンドの決定方法、
（iii）標識した試験化合物を、本発明のタンパク質ＤをコードするＤＮＡを含有する形質転換体を培養することによって細胞膜上に発現したタンパク質Ｄに接触させた場合における、標識した試験化合物の該タンパク質Ｄまたはその塩に対する結合量を測定しすることを特徴とする本発明のタンパク質Ｄに対するリガンドの決定方法、（iv）試験化合物を、本発明のタンパク質Ｄを含有する細胞に接触させた場合における、タンパク質Ｄを介したカチオンチャネル活性（例、Ca2+チャネル活性など）を測定することを特徴とする本発明のタンパク質Ｄまたはその塩に対するリガンドの決定方法を提供する。
特に、上記（i）〜（iii）の試験を行ない、試験化合物が本発明のタンパク質Ｄに結合することを確認した後に、上記（iv）の試験を行うことが好ましい。
【０１４５】
まず、リガンド決定方法に用いるタンパク質Ｄとしては、上記した本発明のタンパク質Ｄまたは本発明の部分ペプチドを含有するものであれば何れのものであってもよいが、動物細胞を用いて大量発現させたタンパク質が適している。
本発明のタンパク質Ｄを製造するには、上記の発現方法が用いられるが、該タンパク質ＤをコードするＤＮＡを哺乳動物細胞や昆虫細胞で発現することにより行うことが好ましい。目的とするタンパク質部分をコードするＤＮＡ断片には、通常、相補ＤＮＡが用いられるが、必ずしもこれに制約されるものではない。例えば、遺伝子断片や合成ＤＮＡを用いてもよい。本発明のタンパク質ＤをコードするＤＮＡ断片を宿主動物細胞に導入し、それらを効率よく発現させるためには、該ＤＮＡ断片を昆虫を宿主とするバキュロウイルスに属する核多角体病ウイルス（nuclear polyhedrosis virus；ＮＰＶ）のポリヘドリンプロモーター、ＳＶ４０由来のプロモーター、レトロウイルスのプロモーター、メタロチオネインプロモーター、ヒトヒートショックプロモーター、サイトメガロウイルスプロモーター、ＳＲαプロモーターなどの下流に組み込むのが好ましい。発現したチャネルの量と質の検査は公知の方法で行うことができる。例えば、文献〔Nambi，P．ら、ザ・ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー（J. Biol. Chem.）,267巻,19555〜19559頁,1992年〕に記載の方法に従って行うことができる。
したがって、本発明のリガンド決定方法において、本発明のタンパク質Ｄもしくはその部分ペプチドまたはその塩を含有するものとしては、公知の方法に従って精製したタンパク質Ｄもしくはその部分ペプチドまたはその塩であってもよいし、該タンパク質Ｄを含有する細胞またはその細胞膜画分を用いてもよい。
本発明のリガンド決定方法において、本発明のタンパク質Ｄを含有する細胞を用いる場合、該細胞をグルタルアルデヒド、ホルマリンなどで固定化してもよい。固定化方法は公知の方法に従って行うことができる。
【０１４６】
本発明のタンパク質Ｄを含有する細胞としては、本発明のタンパク質Ｄを発現した宿主細胞をいうが、該宿主細胞としては、大腸菌、枯草菌、酵母、昆虫細胞、動物細胞などが用いられる。
細胞膜画分としては、細胞を破砕した後、公知の方法で得られる細胞膜が多く含まれる画分のことをいう。細胞の破砕方法としては、Potter−Elvehjem型ホモジナイザーで細胞を押し潰す方法、ワーリングブレンダーやポリトロン（Kinematica社製）による破砕、超音波による破砕、フレンチプレスなどで加圧しながら細胞を細いノズルから噴出させることによる破砕などが挙げられる。細胞膜の分画には、分画遠心分離法や密度勾配遠心分離法などの遠心力による分画法が主として用いられる。例えば、細胞破砕液を低速（500〜3000rpm）で短時間（通常、約1〜10分）遠心し、上清をさらに高速（15000〜30000rpm）で通常30分〜2時間遠心し、得られる沈澱を膜画分とする。該膜画分中には、発現したタンパク質Ｄと細胞由来のリン脂質や膜タンパク質などの膜成分が多く含まれる。
該タンパク質Ｄを含有する細胞やその膜画分中のタンパク質Ｄの量は、１細胞当たり103〜108分子であるのが好ましく、105〜107分子であるのが好適である。なお、発現量が多いほど膜画分当たりのリガンド結合活性（比活性）が高くなり、高感度なスクリーニング系の構築が可能になるばかりでなく、同一ロットで大量の試料を測定できるようになる。
【０１４７】
本発明のタンパク質Ｄまたはその塩に対するリガンドを決定する上記の（i）〜（iii）の方法を実施するためには、適当なタンパク質Ｄ画分と、標識した試験化合物が必要である。
タンパク質Ｄ画分としては、天然型のタンパク質Ｄ画分か、またはそれと同等の活性を有する組換え型チャネル画分などが望ましい。ここで、同等の活性とは、同等のリガンド結合活性、カチオンチャネル活性などを示す。
標識した試験化合物としては、〔3H〕、〔125I〕、〔14C〕、〔35S〕などで標識したアンギオテンシン、ボンベシン、カナビノイド、コレシストキニン、グルタミン、セロトニン、メラトニン、ニューロペプチドＹ、オピオイド、プリン、バソプレッシン、オキシトシン、ＰＡＣＡＰ（例、ＰＡＣＡＰ２７，ＰＡＣＡＰ３８）、セクレチン、グルカゴン、カルシトニン、アドレノメジュリン、ソマトスタチン、ＧＨＲＨ、ＣＲＦ、ＡＣＴＨ、ＧＲＰ、ＰＴＨ、ＶＩＰ（バソアクティブ  インテスティナル  アンド  リイテッド  ポリペプチド）、ソマトスタチン、ドーパミン、モチリン、アミリン、ブラジキニン、ＣＧＲＰ（カルシトニンジーンリレーティッドペプチド）、ロイコトリエン、パンクレアスタチン、プロスタグランジン、トロンボキサン、アデノシン、アドレナリン、ケモカインスーパーファミリー（例、ＩＬ−８，ＧＲＯα，ＧＲＯβ，ＧＲＯγ，ＮＡＰ−２，ＥＮＡ−７８，ＧＣＰ−２，ＰＦ４，ＩＰ−１０，Ｍｉｇ，ＰＢＳＦ／ＳＤＦ−１などのＣＸＣケモカインサブファミリー；ＭＣＡＦ／ＭＣＰ−１，ＭＣＰ−２，ＭＣＰ−３，ＭＣＰ−４，ｅｏｔａｘｉｎ，ＲＡＮＴＥＳ，ＭＩＰ−１α、ＭＩＰ−１β，ＨＣＣ−１，ＭＩＰ−３α／ＬＡＲＣ、ＭＩＰ−３β／ＥＬＣ，Ｉ−３０９，ＴＡＲＣ，ＭＩＰＦ−１，ＭＩＰＦ−２／ｅｏｔａｘｉｎ−２，ＭＤＣ，ＤＣ−ＣＫ１／ＰＡＲＣ，ＳＬＣなどのＣＣケモカインサブファミリー；ｌｙｍｐｈｏｔａｃｔｉｎなどのＣケモカインサブファミリー；ｆｒａｃｔａｌｋｉｎｅなどのＣＸ３Ｃケモカインサブファミリー等）、エンドセリン、エンテロガストリン、ヒスタミン、ニューロテンシン、ＴＲＨ、パンクレアティックポリペプタイド、ガラニン、リゾホスファチジン酸（ＬＰＡ）、スフィンゴシン１−リン酸、バニロイド、ヌクレオチドなどが好適である。
【０１４８】
具体的には、本発明のタンパク質Ｄまたはその塩に対するリガンドの決定方法を行うには、まず本発明のタンパク質Ｄを含有する細胞または細胞の膜画分を、決定方法に適したバッファーに懸濁することによりチャネル標品を調製する。バッファーには、ｐＨ４〜１０（望ましくはｐＨ６〜８）のリン酸バッファー、トリス−塩酸バッファーなどのリガンドとタンパク質Ｄとの結合を阻害しないバッファーであればいずれでもよい。また、非特異的結合を低減させる目的で、CHAPS、Tween-80TM（花王−アトラス社）、ジギトニン、デオキシコレートなどの界面活性剤やウシ血清アルブミンやゼラチンなどの各種タンパク質をバッファーに加えることもできる。さらに、プロテアーゼによるリセプターやリガンドの分解を抑える目的でＰＭＳＦ、ロイペプチン、Ｅ−６４（ペプチド研究所製）、ペプスタチンなどのプロテアーゼ阻害剤を添加することもできる。0.01〜10mlの該タンパク質溶液に、一定量（5000〜500000cpm）の〔3H〕、〔125I〕、〔14C〕、〔35S〕などで標識した試験化合物を共存させる。非特異的結合量（ＮＳＢ）を知るために大過剰の未標識の試験化合物を加えた反応チューブも用意する。反応は約0〜50℃、望ましくは約4〜37℃で、約20分〜24時間、望ましくは約30分〜3時間行う。反応後、ガラス繊維濾紙等で濾過し、適量の同バッファーで洗浄した後、ガラス繊維濾紙に残存する放射活性を液体シンチレーションカウンターあるいはγ−カウンターで計測する。全結合量（B）から非特異的結合量（NSB）を引いたカウント（B-NSB）が0cpmを越える試験化合物を本発明のタンパク質Ｄまたはその塩に対するリガンドとして選択することができる。
【０１４９】
本発明のタンパク質Ｄまたはその塩に対するリガンドを決定する上記の（iv）の方法を実施するためには、該タンパク質Ｄを介するカチオンチャネル活性（例、Ca2+チャネル活性など）を公知の方法または市販の測定用キットを用いて測定することができる。具体的には、まず、タンパク質Ｄを含有する細胞をマルチウェルプレート等に培養する。リガンド決定を行うにあたっては前もって新鮮な培地あるいは細胞に毒性を示さない適当なバッファーに交換し、蛍光Ca2+プローブ（例、Fura-2、Fluo-3など）を取り込ませた後に、試験化合物などを添加して、一定時間FLIPR（モレキュラー・デバイス社製）などにより蛍光強度を測定する。
本発明のタンパク質Ｄまたはその塩に結合するリガンド決定用キットは、本発明のタンパク質Ｄもしくはその塩、本発明の部分ペプチドもしくはその塩、本発明のタンパク質Ｄを含有する細胞、または本発明のタンパク質Ｄを含有する細胞の膜画分などを含有するものである。
【０１５０】
本明細書および図面において、塩基やアミノ酸などを略号で表示する場合、ＩＵＰＡＣ−ＩＵＢ  Commission on Biochemical Nomenclature による略号あるいは当該分野における慣用略号に基づくものであり、その例を下記する。またアミノ酸に関し光学異性体があり得る場合は、特に明示しなければＬ体を示すものとする。
ＤＮＡ          ：デオキシリボ核酸
ｃＤＮＡ        ：相補的デオキシリボ核酸
Ａ            ：アデニン
Ｔ            ：チミン
Ｇ            ：グアニン
Ｃ            ：シトシン
ＲＮＡ          ：リボ核酸
ｍＲＮＡ        ：メッセンジャーリボ核酸
ｄＡＴＰ        ：デオキシアデノシン三リン酸
ｄＴＴＰ        ：デオキシチミジン三リン酸
ｄＧＴＰ        ：デオキシグアノシン三リン酸
ｄＣＴＰ        ：デオキシシチジン三リン酸
ＡＴＰ          ：アデノシン三リン酸
ＥＤＴＡ        ：エチレンジアミン四酢酸
ＳＤＳ          ：ドデシル硫酸ナトリウム
Ｇｌｙ  ：グリシン
Ａｌａ  ：アラニン
Ｖａｌ  ：バリン
Ｌｅｕ  ：ロイシン
Ｉｌｅ  ：イソロイシン
Ｓｅｒ  ：セリン
Ｔｈｒ  ：スレオニン
Ｃｙｓ  ：システイン
Ｍｅｔ  ：メチオニン
Ｇｌｕ  ：グルタミン酸
Ａｓｐ  ：アスパラギン酸
Ｌｙｓ  ：リジン
Ａｒｇ  ：アルギニン
Ｈｉｓ  ：ヒスチジン
Ｐｈｅ  ：フェニルアラニン
Ｔｙｒ  ：チロシン
Ｔｒｐ  ：トリプトファン
Ｐｒｏ  ：プロリン
Ａｓｎ  ：アスパラギン
Ｇｌｎ  ：グルタミン
ｐＧｌｕ：ピログルタミン酸
【０１５１】
また、本明細書中で繁用される置換基、保護基および試薬を下記の記号で表記する。
Ｍｅ            ：メチル基
Ｅｔ            ：エチル基
Ｂｕ            ：ブチル基
Ｐｈ            ：フェニル基
ＴＣ            ：チアゾリジン−４（Ｒ）−カルボキサミド基
Ｔｏｓ          ：ｐ−トルエンスルフォニル
ＣＨＯ          ：ホルミル
Ｂｚｌ          ：ベンジル
Cl2-Bzl         ：２，６−ジクロロベンジル
Ｂｏｍ          ：ベンジルオキシメチル
Ｚ              ：ベンジルオキシカルボニル
Ｃｌ−Ｚ        ：２−クロロベンジルオキシカルボニル
Ｂｒ−Ｚ        ：２−ブロモベンジルオキシカルボニル
Ｂｏｃ          ：ｔ−ブトキシカルボニル
ＤＮＰ          ：ジニトロフェニル
Ｔｒｔ          ：トリチル
Ｂｕｍ          ：ｔ−ブトキシメチル
Ｆｍｏｃ        ：Ｎ−９−フルオレニルメトキシカルボニル
ＨＯＢｔ        ：１−ヒドロキシベンズトリアゾール
ＨＯＯＢｔ      ：３,４−ジヒドロ−３−ヒドロキシ−４−オキソ−
１,２,３−ベンゾトリアジン
ＨＯＮＢ        ：1-ヒドロキシ-5-ノルボルネン-2,3-ジカルボキシイミド
ＤＣＣ          ：Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド
【０１５２】
本願明細書の配列表の配列番号は、以下の配列を示す。
〔配列番号：１〕
実施例１で取得した３７７アミノ酸のヒトＴＣＨ２３０タンパク質のアミノ酸配列を示す。
〔配列番号：２〕
配列番号：１で表されるアミノ酸配列を有するヒトＴＣＨ２３０タンパク質をコードするＤＮＡの塩基配列を示す。
〔配列番号：３〕
実施例１で用いられたプライマーＯＦの塩基配列を示す。
〔配列番号：４〕
実施例１で用いられたプライマーＯＲ１の塩基配列を示す。
〔配列番号：５〕
実施例１で用いられたプライマーＯＦ１の塩基配列を示す。
〔配列番号：６〕
実施例１で用いられたプライマーＯＲの塩基配列を示す。
〔配列番号：７〕
実施例１、実施例１３で用いられたプライマーＳＰ６の塩基配列を示す。
〔配列番号：８〕
実施例１、実施例１３、実施例１８、実施例２５、実施例３３で用いられたプライマーＴ７の塩基配列を示す。
〔配列番号：９〕
実施例１、実施例１８で用いられたプライマーＢ１の塩基配列を示す。
〔配列番号：１０〕
実施例１、実施例１８で用いられたプライマーＦ１の塩基配列を示す。
〔配列番号：１１〕
実施例１で取得したＴＣＨ２３０全長遺伝子を含むヒト小腸ｃＤＮＡ由来のｃＤＮＡの塩基配列を示す。
〔配列番号：１２〕
実施例１で取得したＴＣＨ２３０全長遺伝子を含むヒト骨格筋ｃＤＮＡ由来のｃＤＮＡの塩基配列を示す。
〔配列番号：１３〕
配列番号：１４で表されるアミノ酸配列を含有するヒトＴＣＨ２３０タンパク質をコードするＤＮＡの塩基配列を示す。
〔配列番号：１４〕
配列番号：１３で表される塩基配列がコードするアミノ酸配列を含有するヒトＴＣＨ２３０タンパク質のアミノ酸配列を示す。
〔配列番号：１５〕
実施例２、実施例１９、実施例３８で用いられたプライマーＴＦの塩基配列を示す。
〔配列番号：１６〕
実施例２、実施例１９、実施例３８で用いられたプライマーＴＲの塩基配列を示す。
〔配列番号：１７〕
実施例２、実施例１９、実施例３８で用いられたＴａｑＭａｎプローブＴ１の塩基配列を示す。
〔配列番号：１８〕
実施例１で取得したヒトＴＣＨ２３４タンパク質のアミノ酸配列を示す。
〔配列番号：１９〕
配列番号：１９で表されるアミノ酸配列を有するヒトＴＣＨ２３４タンパク質をコードするＤＮＡの塩基配列を示す。
〔配列番号：２０〕
実施例３で用いられたプライマーＡＰ１の塩基配列を示す。
〔配列番号：２１〕
実施例３で用いられたプライマーｒｒ０の塩基配列を示す。
〔配列番号：２２〕
実施例３で用いられたプライマーＡＰ２の塩基配列を示す。
〔配列番号：２３〕
実施例３で用いられたプライマーｒｒ１の塩基配列を示す。
〔配列番号：２４〕
実施例４で用いられたプライマーｆｆ１の塩基配列を示す。
〔配列番号：２５〕
実施例４、実施例５、実施例２５で用いられたプライマーｆｆ２の塩基配列を示す。
〔配列番号：２６〕
実施例５で用いられたプライマーＯＲＦＦ１の塩基配列を示す。
〔配列番号：２７〕
実施例５で用いられたプライマーＯＲＦＲ１の塩基配列を示す。
〔配列番号：２８〕
実施例５で用いられたプライマーＯＲＦＦ２の塩基配列を示す。
〔配列番号：２９〕
実施例５で用いられたプライマーＯＲＦＲ２の塩基配列を示す。
〔配列番号：３０〕
実施例５で用いられたプライマーＭ１３Ｆの塩基配列を示す
〔配列番号：３１〕
実施例５で用いられたプライマーＭ１３Ｒの塩基配列を示す。
〔配列番号：３２〕
実施例６、実施例２７、実施例２８、実施例３８で用いられたプライマーＴＭＦの塩基配列を示す。
〔配列番号：３３〕
実施例６、実施例２７、実施例２８、実施例３８で用いられたプライマーＴＭＲの塩基配列を示す。
〔配列番号：３４〕
実施例５で用いられたプライマーＦ２の塩基配列を示す
〔配列番号：３５〕
実施例５、実施例２５で用いられたプライマーＦ３の塩基配列を示す。
〔配列番号：３６〕
実施例５で用いられたプライマーＲ１の塩基配列を示す。
〔配列番号：３７〕
実施例５、実施例２５で用いられたプライマーＲ２の塩基配列を示す。
〔配列番号：３８〕
実施例６、実施例２７、実施例２８、実施例３８で用いられたＴａｑＭａｎプローブＰ１の塩基配列を示す。
〔配列番号：３９〕
実施例３で取得したｃＤＮＡの塩基配列を示す。
〔配列番号：４０〕
実施例４で取得したｃＤＮＡの塩基配列を示す。
〔配列番号：４１〕
実施例５で取得したｃＤＮＡの塩基配列を示す。
〔配列番号：４２〕
実施例７で取得したヒトＴＣＨ２１２タンパク質のアミノ酸配列を示す。
〔配列番号：４３〕
配列番号：４２で表されるアミノ酸配列を有するヒトＴＣＨ２１２タンパク質をコードするＤＮＡの塩基配列を示す。
〔配列番号：４４〕
実施例７で用いられたプライマーＡ３の塩基配列を示す。
〔配列番号：４５〕
実施例７で用いられたプライマーＢ３の塩基配列を示す。
〔配列番号：４６〕
実施例７で用いられたプライマーＳＰ６の塩基配列を示す。
〔配列番号：４７〕
実施例７で用いられたプライマーＴ７の塩基配列を示す。
〔配列番号：４８〕
実施例７、実施例３３で用いられたプライマーＡ２の塩基配列を示す。
〔配列番号：４９〕
実施例７、実施例３３で用いられたプライマーＢ１の塩基配列を示す。
【０１５３】
〔配列番号：５０〕
実施例７、実施例３３で用いられたプライマーＢ２の塩基配列を示す。
〔配列番号：５１〕
実施例７、実施例３３で用いられたプライマーＦ１の塩基配列を示す。
〔配列番号：５２〕
実施例７、実施例３３で用いられたプライマーＦ２の塩基配列を示す。
〔配列番号：５３〕
実施例７、実施例３３で用いられたプライマーＦ３の塩基配列を示す。
〔配列番号：５４〕
実施例７、実施例３３で用いられたプライマーＦ４の塩基配列を示す。
〔配列番号：５５〕
実施例７、実施例３３で用いられたプライマーＦ５の塩基配列を示す。
〔配列番号：５６〕
実施例７、実施例３３で用いられたプライマーＲ１の塩基配列を示す。
〔配列番号：５７〕
実施例７、実施例３３で用いられたプライマーＲ２の塩基配列を示す。
〔配列番号：５８〕
実施例７、実施例３３で用いられたプライマーＲ３の塩基配列を示す。
〔配列番号：５９〕
実施例７、実施例３３で用いられたプライマーＲ４の塩基配列を示す。
〔配列番号：６０〕
実施例７で取得したヒトＴＣＨ２１２全長遺伝子を含むｃＤＮＡの塩基配列を示す。
〔配列番号：６１〕
実施例７で取得したヒトＴＣＨ２１２クローン＃２の全長遺伝子を含むｃＤＮＡの塩基配列を示す。
〔配列番号：６２〕
実施例７で取得したヒトＴＣＨ２１２クローン＃２のＯＲＦの塩基配列を示す。
〔配列番号：６３〕
実施例８、実施例３８で用いられたプライマーＴＦの塩基配列を示す。
〔配列番号：６４〕
実施例８、実施例３８で用いられたプライマーＴＲの塩基配列を示す。
〔配列番号：６５〕
実施例８、実施例３８で用いられたＴａｑＭａｎプローブＴ１の塩基配列を示す。
〔配列番号：６６〕
ヒトＴＣＨ２００タンパク質のアミノ酸配列を示す。
〔配列番号：６７〕
配列番号：６６で表されるアミノ酸配列を含有するヒトＴＣＨ２００タンパク質をコードするＤＮＡの塩基配列を示す。
〔配列番号：６８〕
実施例９で用いられたプライマーＡＰ１の塩基配列を示す。
〔配列番号：６９〕
実施例９で用いられたプライマーＲ１の塩基配列を示す。
〔配列番号：７０〕
実施例９で用いられたプライマーＡＰ２の塩基配列を示す。
〔配列番号：７１〕
実施例９で用いられたプライマーｒｒ２の塩基配列を示す。
〔配列番号：７２〕
実施例９で用いられたプライマーＭ１３Ｆの塩基配列を示す。
〔配列番号：７３〕
実施例９で用いられたプライマーＭ１３Ｒの塩基配列を示す。
〔配列番号：７４〕
実施例９で用いられたプライマーｒｒ４の塩基配列を示す。
〔配列番号：７５〕
実施例９で用いられたプライマーｒｒ６の塩基配列を示す。
〔配列番号：７６〕
実施例１０で用いられたプライマーｒ１の塩基配列を示す。
〔配列番号：７７〕
実施例１０で用いられたプライマーｒ２の塩基配列を示す。
〔配列番号：７８〕
実施例１０で用いられたプライマーｆ１の塩基配列を示す
〔配列番号：７９〕
実施例１０で用いられたプライマーｆ２の塩基配列を示す。
〔配列番号：８０〕
実施例１０で用いられたプライマーｆ４の塩基配列を示す。
〔配列番号：８１〕
実施例１１で用いられたプライマーＦ０の塩基配列を示す。
〔配列番号：８２〕
実施例１１で用いられたプライマーＲ７の塩基配列を示す。
〔配列番号：８３〕
実施例１１で用いられたプライマーＦ００の塩基配列を示す。
〔配列番号：８４〕
実施例１１で用いられたプライマーＲ００の塩基配列を示す。
〔配列番号：８５〕
実施例１１で用いられたプライマーＦ１の塩基配列を示す。
〔配列番号：８６〕
実施例１１で用いられたプライマーＦ２の塩基配列を示す。
〔配列番号：８７〕
実施例１１で用いられたプライマーＦ５の塩基配列を示す。
〔配列番号：８８〕
実施例１１で用いられたプライマーＦ７の塩基配列を示す。
〔配列番号：８９〕
実施例１１で用いられたプライマーｆｆ３の塩基配列を示す。
〔配列番号：９０〕
実施例１１で用いられたプライマーｆｆ４の塩基配列を示す。
〔配列番号：９１〕
実施例１１で用いられたプライマーｆ３の塩基配列を示す。
〔配列番号：９２〕
実施例１１で用いられたプライマーｒｒ１の塩基配列を示す。
〔配列番号：９３〕
実施例１１で用いられたプライマーｒｒ３の塩基配列を示す。
〔配列番号：９４〕
実施例１２、実施例３７、実施例３８で用いられたプライマーＴＭＦの塩基配列を示す。
〔配列番号：９５〕
実施例１２、実施例３７、実施例３８で用いられたプライマーＴＭＲの塩基配列を示す。
〔配列番号：９６〕
実施例１２、実施例３７、実施例３８で用いられたＴａｑＭａｎプローブＰ１の塩基配列を示す。
〔配列番号：９７〕
実施例９で取得したｃＤＮＡの塩基配列を示す。
〔配列番号：９８〕
実施例９で取得したｃＤＮＡの塩基配列を示す。
〔配列番号：９９〕
実施例１０で取得したｃＤＮＡの塩基配列を示す。
【０１５４】
〔配列番号：１００〕
実施例１０で取得したｃＤＮＡの塩基配列を示す。
〔配列番号：１０１〕
実施例１０で取得したｃＤＮＡの塩基配列を示す。
〔配列番号：１０２〕
実施例１１で取得したｃＤＮＡの塩基配列を示す。
〔配列番号：１０３〕
配列番号：６６で表されるアミノ酸配列を含有するヒトＴＣＨ２００タンパク質をコードするＤＮＡの塩基配列を示す。
〔配列番号：１０４〕
実施例１３で取得した３７３アミノ酸のマウスＴＣＨ２３０タンパク質のアミノ酸配列を示す。
〔配列番号：１０５〕
配列番号：１０４で表されるアミノ酸配列を有するマウスＴＣＨ２３０タンパク質をコードするＤＮＡの塩基配列を示す
〔配列番号：１０６〕
実施例１３で用いられたプライマーｍ２３０Ａ１の塩基配列を示す。
〔配列番号：１０７〕
実施例１３で用いられたプライマーｍ２３０Ｂ２の塩基配列を示す。
〔配列番号：１０８〕
実施例１３で用いられたプライマーｍ２３０Ｆ１の塩基配列を示す。
〔配列番号：１０９〕
実施例１３で用いられたプライマーｍ２３０Ｆ２の塩基配列を示す。
〔配列番号：１１０〕
実施例１３で用いられたプライマーｍ２３０Ｒ１の塩基配列を示す。
〔配列番号：１１１〕
実施例１３で用いられたプライマーｍ２３０Ｒ２の塩基配列を示す。
〔配列番号：１１２〕
実施例１３で取得したマウスＴＣＨ２３０全長遺伝子を含むｃＤＮＡの塩基配列を示す。
〔配列番号：１１３〕
実施例１４、実施例１５、実施例４０で用いられたプライマーｍ２３０ＴＦの塩基配列を示す。
〔配列番号：１１４〕
実施例１４、実施例１５、実施例４０で用いられたプライマーｍ２３０ＴＲの塩基配列を示す。
〔配列番号：１１５〕
実施例１４、実施例１５、実施例４０で用いられたＴａｑＭａｎプローブｍ２３０Ｔ１の塩基配列を示す。
〔配列番号：１１６〕
実施例１６で同定したラットＴＣＨ２３０遺伝子ｃＤＮＡの部分配列の塩基配列を示す。
〔配列番号：１１７〕
実施例１６で用いられたプライマーｒ２３０ＯＦの塩基配列を示す。
〔配列番号：１１８〕
実施例１６で用いられたプライマーｒ２３０ＯＲの塩基配列を示す。
〔配列番号：１１９〕
実施例１７で用いられたプライマーｒ２３０ＴＦの塩基配列を示す。
〔配列番号：１２０〕
実施例１７で用いられたプライマーｒ２３０ＴＲの塩基配列を示す。
〔配列番号：１２１〕
実施例１７で用いられたＴａｑＭａｎプローブｒ２３０Ｔ１の塩基配列を示す。
〔配列番号：１２２〕
実施例１８で用いられたプライマー２３０ＯＦ２の塩基配列を示す。〔配列番号：１２３〕
実施例１８で用いられたプライマー２３０ＯＲ２の塩基配列を示す。〔配列番号：１２４〕
実施例１８で用いられたプライマーＢＧＨＲＶの塩基配列を示す。〔配列番号：１２５〕
実施例２１で同定したマウスＴＣＨ２３４遺伝子ｃＤＮＡの部分配列の塩基配列を示す。
〔配列番号：１２６〕
実施例２１で用いられたプライマーｍ２３４−１４８５Ｆの塩基配列を示す。
〔配列番号：１２７〕
実施例２１で用いられたプライマーｍ２３４−１８０１Ｒの塩基配列を示す。
〔配列番号：１２８〕
実施例２２、実施例３９で用いられたプライマーｍ２３４−ＴＭＦの塩基配列を示す。
〔配列番号：１２９〕
実施例２２、実施例３９で用いられたプライマーｍ２３４−ＴＭＲの塩基配列を示す。
〔配列番号：１３０〕
実施例２２、実施例３９で用いられたプライマーｍ２３４Ｔ１の塩基配列を示す。
〔配列番号：１３１〕
実施例２３で同定したラットＴＣＨ２３４遺伝子ｃＤＮＡの部分配列の塩基配列を示す。
〔配列番号：１３２〕
実施例２３で用いられたプライマーｒ２３４−８１５Ｆの塩基配列を示す。
〔配列番号：１３３〕
実施例２３で用いられたプライマーｒ２３４−１１７７Ｒの塩基配列を示す。
〔配列番号：１３４〕
実施例２４で用いられたプライマーｒ２３４−ＴＭＦの塩基配列を示す。
〔配列番号：１３５〕
実施例２４で用いられたプライマーｒ２３４−ＴＭＲの塩基配列を示す。
〔配列番号：１３６〕
実施例２４で用いられたプライマーｒ２３４−Ｐ１の塩基配列を示す。
〔配列番号：１３７〕
実施例２５で用いられたプライマー２３４ＯＦの塩基配列を示す。
〔配列番号：１３８〕
実施例２５で用いられたプライマー２３４ＯＲの塩基配列を示す。
〔配列番号：１３９〕
実施例２５で用いられたプライマー２３４Ｆ２１の塩基配列を示す。
〔配列番号：１４０〕
実施例２５で用いられたプライマー２３４Ｆ２２の塩基配列を示す。
〔配列番号：１４１〕
実施例２５で用いられたプライマー２３４Ｆ２３の塩基配列を示す。
〔配列番号：１４２〕
実施例２５で用いられたプライマー２３４Ｒ２４の塩基配列を示す。
〔配列番号：１４３〕
実施例２９で同定したマウスＴＣＨ２１２遺伝子ｃＤＮＡの部分配列の塩基配列を示す。
〔配列番号：１４４〕
実施例２９、実施例３１で用いられたプライマーｍ２１２Ａ１の塩基配列を示す。
〔配列番号：１４５〕
実施例２９、実施例３１で用いられたプライマーｍ２１２Ｂ１の塩基配列を示す。
〔配列番号：１４６〕
実施例３０で用いられたプライマーｍ２１２ＴＦの塩基配列を示す。
〔配列番号：１４７〕
実施例３０で用いられたプライマーｍ２１２ＴＲの塩基配列を示す。
〔配列番号：１４８〕
実施例３０で用いられたＴａｑＭａｎプローブｍ２１２Ｔ１の塩基配列を示す。
〔配列番号：１４９〕
実施例３１で同定したラットＴＣＨ２１２遺伝子ｃＤＮＡの部分配列の塩基配列を示す
【０１５５】
〔配列番号：１５０〕
実施例３２で用いられたプライマーｒ２１２ＴＦの塩基配列を示す。
〔配列番号：１５１〕
実施例３２で用いられたプライマーｒ２１２ＴＲの塩基配列を示す。
〔配列番号：１５２〕
実施例３２で用いられたプライマーｒ２１２Ｔ１の塩基配列を示す。
〔配列番号：１５３〕
実施例３３で用いられたプライマー２１２ＯＦの塩基配列を示す。
〔配列番号：１５４〕
実施例３３で用いられたプライマー２１２ＯＲの塩基配列を示す。
〔配列番号：１５５〕
実施例３４で同定したマウスＴＣＨ２００遺伝子ｃＤＮＡの部分配列の塩基配列を示す。
〔配列番号：１５６〕
実施例３４で用いられたプライマーｍ２００Ａ１の塩基配列を示す。
〔配列番号：１５７〕
実施例３４で用いられたプライマーｍ２００Ｂ１の塩基配列を示す。
〔配列番号：１５８〕
実施例３４、実施例３５で用いられたプライマーｍ２００Ａ２の塩基配列を示す。
〔配列番号：１５９〕
実施例３４、実施例３５で用いられたプライマーｍ２００Ｂ２の塩基配列を示す。
〔配列番号：１６０〕
実施例３５で用いられたＴａｑＭａｎプローブｍ２００Ｔ１の塩基配列を示す。
〔配列番号：１６１〕
実施例３６で用いられたプライマーＴＣＨ２００Ｆの塩基配列を示す。
〔配列番号：１６２〕
実施例３６で用いられたプライマーＴＣＨ２００Ｒの塩基配列を示す。
〔配列番号：１６３〕
実施例３６で用いられたプライマーＴ７の塩基配列を示す。
〔配列番号：１６４〕
実施例３６で用いられたプライマーＡＦの塩基配列を示す。
〔配列番号：１６５〕
実施例３６で用いられたプライマーＢＦの塩基配列を示す。
〔配列番号：１６６〕
実施例３６で用いられたプライマーＣＦの塩基配列を示す。
〔配列番号：１６７〕
実施例３６で用いられたプライマーＤＦの塩基配列を示す。
〔配列番号：１６８〕
実施例３６で用いられたプライマーＢＧＨ  ＲＶの塩基配列を示す。
〔配列番号：１６９〕
実施例３６で用いられたプライマーＤＲの塩基配列を示す。
〔配列番号：１７０〕
実施例３６で用いられたプライマーＣＲの塩基配列を示す
〔配列番号：１７１〕
実施例３６で用いられたプライマーＢＲの塩基配列を示す。
〔配列番号：１７２〕
実施例３６で用いられたプライマーＡＲの塩基配列を示す。
【０１５６】
後述の実施例１で得られた形質転換体エシェリヒア・コリ（Escherichia coli）TOP10/pCR-BluntII-TCH230は、2002年1月31日から茨城県つくば市東1丁目1番地1 中央第6（郵便番号305-8566）の独立行政法人産業技術総合研究所  特許生物寄託センターに寄託番号FERM BP-7869として、2002年1月17日から大阪府大阪市淀川区十三本町2丁目17番85号（郵便番号532-8686）の財団法人発酵研究所（IFO）に受託番号IFO 16749として寄託されている。
後述の実施例３で得られた形質転換体エシェリヒア・コリ（Escherichia coli）TOP10/pCR-BluntII-TCH234は、2002年2月18日から茨城県つくば市東1丁目1番地1 中央第6（郵便番号305-8566）の独立行政法人産業技術総合研究所  特許生物寄託センターに寄託番号FERM BP-7906として、2002年2月7日から大阪府大阪市淀川区十三本町2丁目17番85号（郵便番号532-8686）の財団法人発酵研究所（IFO）に受託番号IFO 16758として寄託されている。
後述の実施例７で得られた形質転換体エシェリヒア・コリ（Escherichia coli）JM109/pCR-BluntII-TCH212は、2002年2月12日から茨城県つくば市東1丁目1番地1 中央第6（郵便番号305-8566）の独立行政法人産業技術総合研究所  特許生物寄託センターに寄託番号FERM BP-7888として、2002年1月31日から大阪府大阪市淀川区十三本町2丁目17番85号（郵便番号532-8686）の財団法人発酵研究所（IFO）に受託番号IFO 16755として寄託されている。
後述の実施例９で得られた形質転換体エシェリヒア・コリ（Escherichia coli）TOP10/pCR-BluntII-TCH200は、2002年2月4日から茨城県つくば市東1丁目1番地1 中央第6（郵便番号305-8566）の独立行政法人産業技術総合研究所  特許生物寄託センターに寄託番号FERM BP-7874として、2002年1月22日から大阪府大阪市淀川区十三本町2丁目17番85号（郵便番号532-8686）の財団法人発酵研究所（IFO）に受託番号IFO 16750として寄託されている。
【実施例】
【０１５７】
以下に実施例を示して、本発明をより詳細に説明するが、これらは本発明の範囲を限定するものではない。なお、大腸菌を用いての遺伝子操作法は、モレキュラー・クローニング(Molecular cloning)に記載されている方法に従った。
実施例１
ヒトTCH230遺伝子ｃＤＮＡのクローニング
２種のプライマーＤＮＡ、プライマーＯＦ（配列番号：3）およびプライマーＯＲ１（配列番号：4）を用いて、ヒト小腸Marathon-Ready cDNAおよびヒト骨格筋Marathon-Ready cDNA（いずれもクロンテック社製）に対して、Pyrobest DNA Polymerase（宝酒造社製）により、以下の条件(1)〜(3)で一次ＰＣＲを行った。
(1)９４℃２分間
(2)９８℃ １０秒間−６８℃ ３０秒間−７２℃ ３分間を３０サイクル
(3)７２℃１０分間
さらに、この一次ＰＣＲの産物を鋳型として、、プライマーＯＦ１（配列番号：5）とプライマーＯＲ（配列番号：6）を用いて、Pyrobest DNA polymerase（宝酒造社製）により以下の条件(4)〜(6)でnested PCRを行った。
(4)９４℃２分間
(5)９８℃ １０秒間−６８℃ ３０秒間−７２℃ ３分間を３５サイクル
(6)７２℃１０分間
得られた増幅産物をZero Blunt TOPO Cloning kit（インビトロジェン社製）を用いてクローニングし、プラスミドpCR-BluntII-TCH230を得た。
これをプライマーＤＮＡ〔プライマーＳＰ６（配列番号：7）、プライマーＴ７（配列番号：8）、プライマーＢ１（配列番号：9）、プライマーＦ１（配列番号：10）〕およびBigDye Terminator Cycle Sequencing Kit（アプライドバイオシステムズ社製）を用いて反応を行い、挿入されているｃＤＮＡ断片の塩基配列をＤＮＡシークエンサーABI PRISM 3100 DNAアナライザ（アプライドバイオシステムズ社製）を用いて決定した。その結果、ヒト小腸cDNAから取得したクローンは１１５２個の塩基配列を有していた（配列番号：11）。該ｃＤＮＡ断片には３７７個のアミノ酸配列（配列番号：1）がコードされており（配列番号：2）、該アミノ酸配列を有するタンパク質を、ヒトTCH230タンパク質と命名した。
該ｃＤＮＡ断片を含むプラスミドを有する形質転換体を、エシェリヒア  コリ（Escherichia coli）TOP10/pCR-BluntII-TCH230と命名した。
また、ヒト骨格筋ｃＤＮＡから取得したクローンは、１箇所（配列番号：11で表される塩基配列の340番目）に塩基置換が認められた。この塩基置換A340Gは、Ile→Valのアミノ酸置換を伴うものであり、遺伝子多型（SNPs）に由来する可能性があると考えられる。このクローンの有するｃＤＮＡ全長の塩基配列を配列番号：12に、この塩基配列中のＯＲＦの塩基配列を配列番号：13に示す。配列番号：13で表される塩基配列がコードするアミノ酸配列を、配列番号：14に示す。
Blast P〔Nucleic Acids Res.、第25巻、3389頁、1997年〕を用いてｏｗｌに対してホモロジー検索を行ったところ、ヒトTCH230タンパク質をコードするｃＤＮＡはナトリウム依存性胆汁酸トランスポータファミリーに属する新規遺伝子であることが判明した（図１）。ヒトで報告されている回腸ナトリウム依存性胆汁酸トランスポータであるISBT〔J. Biol. Chem.、第270巻、27228頁、1995年〕とは塩基レベルで46％、アミノ酸レベルで44％の相同性を示した。
【０１５８】
実施例２
ヒトTCH230遺伝子産物の組織分布の解析
ヒトTCH230の配列から設計した、２種のプライマーＤＮＡ、プライマーＴＦ（配列番号：15）およびプライマーＴＲ（配列番号：16）と、TaqManプローブＴ１（配列番号：17）を用いて、ヒトの各組織のｃＤＮＡにおけるヒトTCH230の発現量をTaqMan PCRにより測定した。反応はTaqMan Universal PCR Master Mix（アプライドバイオシステムズ社製）を用いて、ABI PRISM 7900 sequence detection system（アプライドバイオシステムズ社製）にて、最初５０℃２分間、さらに９５℃１０分間おいた後で、９５℃で１５秒、６０℃で１分を１反応サイクルとして４０サイクル繰り返し、同時に検出を行った。測定に用いたヒトの各組織のｃＤＮＡを〔表１〕に示す。
【表１】
2010051322.tif 000002
結果を図２、図３、図４および図５に示す。
ヒトTCH230遺伝子産物（mRNA）はHuman MTC panel IおよびMTC panel IIにおいては、心臓、脳、肝臓、骨格筋、腎臓、結腸、末梢血白血球でわずかな発現が見られ、胎盤、肺、膵臓、脾臓、胸腺、前立腺、小腸で若干の発現が見られ、精巣、卵巣で強い発現が見られた。Human digestive system MTC panelにおいては、胃から直腸まですべての部位で強い発現が見られた（食道で特に強い発現が見られた）。また、肝臓でも強い発現が見られた。Human fetal MTC panelにおいては、胎児心臓、胎児骨格筋、胎児脾臓でわずかな発現が見られ、胎児脳、胎児肝臓、胎児腎臓、胎児肺で若干の発現が見られ、胎児胸腺で強い発現が見られた。Human tumor MTC panelにおいては、肺癌、結腸癌、前立腺癌、膵臓癌でわずかな発現が見られ、乳癌で若干の発現が見られ、卵巣癌で強い発現が見られた。
【０１５９】
実施例３
ヒトTCH234タンパク質をコードするｃＤＮＡの５’上流端のクローニング
５’RACE PCR クローニングによりヒトTCH234タンパク質をコードするｃＤＮＡの５’上流塩基配列を明らかにした。
２種のプライマーＤＮＡ、プライマーＡＰ１（配列番号：20）およびプライマーｒｒ０（配列番号：21）を用いて、ヒト膵臓Marathon-Ready cDNA（クロンテック社製）に対して、Advantage 2 DNA Polymerase（クロンテック社製）により、以下の条件(1)〜(3)で一次ＰＣＲを行った。
(1)９４℃３０秒間
(2)９４℃１０秒間−６８℃２分間を３５サイクル
(3)６８℃５分間
さらに、この一次ＰＣＲの産物を鋳型として、プライマーＡＰ２（配列番号：22）とプライマーｒｒ１（配列番号：23）を用いて、Advantage 2 DNA Polymerase（クロンテック社製）により以下の条件(4)〜(6)でnested PCRを行った。
(4)９４℃３０秒間
(5)９４℃１０秒間−６８℃２分間を３０サイクル
(6)６８℃５分間
上記nested PCR反応液  ５μｌにPCR Product Pre-Sequencing Kit（ユーエスビ社製）中のExonucleaseIとShrimp Alkaline Posphataseをいずれも１μｌずつ加え、３７℃・１５分、８５℃・１５分の反応を行った。これをプライマーｒｒ１（配列番号：23）およびBigDye Terminator Cycle Sequencing Kit（アプライドバイオシステムズ社製）を用いて反応を行い、増幅したＤＮＡ断片の塩基配列をＤＮＡシークエンサーABI PRISM 3100 DNAアナライザ（アプライドバイオシステムズ社製）を用いて決定した。その結果、配列番号：39に示す塩基配列を得た。
【０１６０】
実施例４
ヒトTCH234タンパク質をコードするｃＤＮＡの３’下流端のクローニング
３’RACE PCR クローニングによりヒトTCH234タンパク質をコードするｃＤＮＡの３’下塩基配列を明らかにした。
２種のプライマーＤＮＡ、プライマーＡＰ１（配列番号：20）およびプライマーｆｆ１（配列番号：24）を用いて、ヒト膵臓Marathon-Ready cDNA（クロンテック社製）に対して、Advantage 2 DNA Polymerase（クロンテック社製）により、以下の条件(1)〜(3)で一次ＰＣＲを行った。
(1)９４℃３０秒間
(2)９４℃１０秒間−６８℃２分間を３５サイクル
(3)６８℃５分間
さらに、この一次ＰＣＲの産物を鋳型として、プライマーＡＰ２（配列番号：22）とプライマーｆｆ２（配列番号：25）を用いて、Advantage 2 DNA Polymerase（クロンテック社製）により以下の条件(4)〜(6)でnested PCRを行った。
(4)９４℃３０秒間
(5)９４℃１０秒間−６８℃２分間を３０サイクル
(6)６８℃５分間
上記nested PCR反応液  ５μｌにPCR Product Pre-Sequencing Kit（ユーエスビ社製）中のExonucleaseIとShrimp Alkaline Posphataseをいずれも１μｌずつ加え、３７℃・１５分、８５℃・１５分の反応を行った。これをプライマーｆｆ２（配列番号：25）およびBigDye Terminator Cycle Sequencing Kit（アプライドバイオシステムズ社製）を用いて反応を行い、増幅したＤＮＡ断片の塩基配列をＤＮＡシークエンサーABI PRISM 3100 DNAアナライザ（アプライドバイオシステムズ社製）を用いて決定した。その結果、配列番号：40に示す塩基配列を得た。
【０１６１】
実施例５
ヒトTCH234タンパク質をコードするｃＤＮＡのクローニング
２種のプライマーＤＮＡ、プライマーＯＲＦＦ１（配列番号：26）およびプライマーＯＲＦＲ１（配列番号：27）を用いて、ヒト膵臓Marathon-Ready cDNA（クロンテック社製）に対して、pfu turbo DNA Polymerase（ストラタジーン社製）により、以下の条件(1)〜(3)で一次ＰＣＲを行った。
(1)９４℃３０秒間
(2)９４℃１０秒間−５４℃５秒間−７２℃２．５分間を３５サイクル
(3)７２℃５分間
さらに、この一次ＰＣＲの産物を鋳型として、プライマーＯＲＦＦ２（配列番号：28）とプライマーＯＲＦＲ２（配列番号：29）を用いて、pfu turbo DNA Polymerase（ストラタジーン社製）により以下の条件(4)〜(6)でnested PCRを行った。
(4)９４℃３０秒間
(5)９４℃１０秒間−５５℃５秒間−７２℃２．５分間を３０サイクル
(6)７２℃５分間
上記nested PCR反応液をQIAquick PCR Purification Kit（キアゲン社製）を用いて精製した。このＤＮＡを、Zero Blunt TOPO PCR Cloning Kit (インビトロジェン社製)のプロトコールに従ってpCR-Blunt II-TOPOベクターへクローニングした。これをエシェリヒア コリ（Escherichia coli）TOP10 competent cell（インビトロジェン社製）に導入して形質転換した後、ｃＤＮＡ挿入断片を持つクローンをカナマイシンを含むＬＢ寒天培地で選択し、形質転換体を得た。個々のクローンをカナマイシンを含むＬＢ培地で一晩培養し、QIAwell 8 Plasmid Kit（キアゲン社製）を用いてプラスミドＤＮＡを調製し、プラスミドクローンpCR-BluntII-TCH234の２クローン＃１、＃２および＃３を得た。これをプライマーＤＮＡ〔プライマーＭ１３Ｆ（配列番号：30）、プライマーＭ１３Ｒ（配列番号：31）、プライマーＯＲＦＦ２（配列番号：28） 、プライマーＯＲＦＲ２（配列番号：29）、プライマーＴＭＦ（配列番号：32）、プライマーＴＭＲ（配列番号：33）、プライマーＦ２（配列番号：34）、プライマーＦ３（配列番号：35）、プライマーＲ１（配列番号：36） 、プライマーＲ２（配列番号：37）、プライマーｆｆ２（配列番号：25）〕およびBigDye Terminator Cycle Sequencing Kit（アプライドバイオシステムズ社製）を用いて反応を行い、挿入されているｃＤＮＡ断片の塩基配列をＤＮＡシークエンサーABI PRISM 3100 DNAアナライザ（アプライドバイオシステムズ社製）を用いて決定した。その結果、取得した３クローンは同一のＤＮＡ断片を含んでおり２４２６個の塩基配列を有していた（配列番号：41）。断片には７９８個のアミノ酸配列（配列番号：18）がコードされており（配列番号：19）、配列番号：1８で表されるアミノ酸配列を含有するタンパク質を、ヒトTCH234タンパク質と命名した。
該ｃＤＮＡ断片を含むプラスミドを有する形質転換体を、エシェリヒア・コリ（Escherichia coli）TOP10/pCR-BluntII-TCH234と命名した。
Blast P〔Nucleic Acids Res.、第25巻、3389頁、1997年〕を用いてＯＷＬに対してホモロジー検索を行ったところ、該ｃＤＮＡはＮａ＋／Ｈ＋交換輸送体に属する新規遺伝子であることが判明した（図６）。
ヒトTCH234は、ヒトで報告されているＮａ＋／Ｈ＋交換輸送体であるNHE2〔Genomics、第30巻、25頁、1995年〕とはアミノ酸レベルで53％の相同性、またラットNHE4（J. Biol. Chem.、第267巻、9331頁、1992年）とはアミノ酸レベルで84％の相同性を示し、該タンパク質は１３回膜貫通型の構造を有すると推測された。
【０１６２】
実施例６
ヒトTCH234遺伝子産物の組織分布の解析
ヒトTCH234の配列から設計した、２種のプライマーＤＮＡ、プライマーＴＭＦ（配列番号：32）およびプライマーＴＭＲ（配列番号：33）と、ＴａｑＭａｎプローブＰ１（配列番号：38）を用いて、ヒトの各組織（心臓、脳、胎盤、肺、肝臓、骨格筋、腎臓、膵臓、脾臓、胸腺、前立腺、精巣、卵巣、小腸、結腸、末梢血白血球）のｃＤＮＡ（Human MTC panel I、およびHuman MTC panel II：クロンテック社製）におけるヒトTCH234の発現量をＴａｑＭａｎ ＰＣＲにより測定した。反応はTaqMan Universal PCR Master Mix（アプライドバイオシステムズ社製）を用いて、ABI PRISM 7900 sequence detection system（アプライドバイオシステムズ社製）にて最初５０℃２分間、さらに９５℃１０分間おいた後、９５℃で１５秒、６０℃で１分を１反応サイクルとして４０サイクル繰り返し、同時に検出を行った。
結果を図７に示す。ヒトTCH234遺伝子産物（ｍＲＮＡ）は腎臓に強く発現していた。前立腺や膵臓、精巣、脾臓、胸腺、卵巣でも若干の発現が認められた。
【０１６３】
実施例７
ヒトTCH212遺伝子ｃＤＮＡのクローニング
２種のプライマーＤＮＡ、プライマーＡ３（配列番号：44）およびプライマーＯＢ３（配列番号：45）を用いて、ヒト精巣Marathon-Ready cDNA（クロンテック社製）に対して、Pyrobest DNA Polymerase(宝酒造社製)により、以下の条件(1)〜(3)でＰＣＲを行った。
(1)９４℃２分間
(2)９８℃ １０秒間−６８℃ ３０秒間−７２℃ ７分間を３５サイクル
(3)７２℃１０分間
得られた増幅産物をZero Blunt TOPO Cloning kit（インビトロジェン社製）を用いてクローニングし、プラスミドpCR-BluntII-TCH212を得た。
これをプライマーＤＮＡ〔プライマーＳＰ６（配列番号：46）、プライマーＴ７（配列番号：47）、プライマーＡ２（配列番号：48）、プライマーＢ１（配列番号：49）、プライマーＢ２（配列番号：50）、プライマーＦ１（配列番号：51）、プライマーＦ２（配列番号：52）、プライマーＦ３（配列番号：53）、プライマーＦ４（配列番号：54）、プライマーＦ５（配列番号：55）、プライマーＲ１（配列番号：56）、プライマーＲ２（配列番号：57）、プライマーＲ３（配列番号：58）、プライマーＲ４（配列番号：59）〕およびBigDye Terminator Cycle Sequencing Kit（アプライドバイオシステムズ社製）を用いて反応を行い、挿入されているｃＤＮＡ断片の塩基配列をＤＮＡシークエンサーABI PRISM 3100 DNAアナライザ（アプライドバイオシステムズ社製）を用いて決定した。その結果、取得したクローンは３６４３個の塩基配列を有していた（配列番号：60）。該ｃＤＮＡ断片には１１４８個のアミノ酸配列（配列番号：42）がコードされており（配列番号：43）、該アミノ酸配列を有するタンパク質を、ヒトTCH212タンパyク質と命名した。
また、取得したクローンには、１箇所（配列番号：60で表される塩基配列の1592番目）に塩基置換が認められるものもあった（クローン＃２とする）。この塩基置換C1592Tは、アミノ酸置換を伴わないものであり、遺伝子多型（SNPs）に由来すると考えられる。このクローンの有するｃＤＮＡ全長の塩基配列を配列番号：61に、この塩基配列中のＯＲＦの塩基配列を配列番号：6２に示す。
配列番号：60で表される塩基配列を含有するｃＤＮＡを含むプラスミドを有する形質転換体を、エシェリヒア コリ（Escherichia coli）JM109/pCR-BluntII-TCH212と命名した。
Blast P［Nucleic Acids Res.、第25巻、3389頁、1997年］を用いてｏｗｌに対してホモロジー検索を行ったところ、ヒトTCH212をコードするｃＤＮＡはＰ型ATPaseファミリーに属する新規遺伝子であることが判明した（図８〜図１０）。ヒトで報告されているP型ATPase 8A1（ATP8A1）〔Biochem. Biophys. Res. Commun.、第257巻、333-339頁、1999年〕とは塩基レベルで60％、アミノ酸レベルで67％の相同性を示した。また、マウスで報告されているP型ATPase 8A2〔Physiol. Genomics (Online) 、第1巻、139-150頁、1999年〕とは塩基レベルで86％、アミノ酸レベルで95％の相同性を示した。
【０１６４】
実施例８
ヒトTCH212遺伝子産物の組織分布の解析
ヒトTCH212の配列から設計した、２種のプライマーＤＮＡ、プライマーＴＦ（配列番号：63）およびプライマーＴＲ（配列番号：64）と、TaqManプローブＴ１（配列番号：65）とを用いて、ヒトの各組織におけるヒトTCH212の発現量をTaqMan PCRにより測定した。反応はTaqMan Universal PCR Master Mix（アプライドバイオシステムズ社製）を用いて、ABI PRISM 7900 sequence detection system（アプライドバイオシステムズ社製）にて、最初５０℃２分間、さらに９５℃１０分間おいた後で、９５℃で１５秒、６０℃で１分を１反応サイクルとして４０サイクル繰り返し、同時に検出を行った。測定に用いたヒトの各組織のｃＤＮＡを〔表２〕に示す。
【表２】
2010051322.tif 000003
結果を図１１、図１２および図３３に示す。
ヒトTCH212遺伝子産物（mRNA）は、Human MTC panel IおよびMTC panel IIにおいては、脳で若干の発現が見られ、膵臓、精巣で強い発現を示した。
Human fetal MTC panelにおいては、胎児腎臓で若干の発現が見られ、胎児脳で強い発現が見られた。
Human tumor MTC panelにおいては、結腸癌（GI-112）でわずかな発現が見られた。
【０１６５】
実施例９
ヒトTCH200タンパク質をコードするｃＤＮＡの５’上流端のクローニング
５’RACE PCR クローニングによりヒトTCH200タンパク質をコードするｃＤＮＡの５’上流塩基配列を明らかにした。
ヒト小腸Marathon-Ready cDNA（クロンテック社製）を鋳型として、プライマーＡＰ１（配列番号：68）とプライマーＲ1（配列番号：69）を用いて、ＰＣＲ反応を行ない、次にこのＰＣＲ反応液を鋳型として、プライマーＡＰ２（配列番号：70）およびプライマーｒｒ２（配列番号：71）を用いてＰＣＲ反応を行なった。ＰＣＲの反応液組成および反応条件を以下に示す。 反応液はヒト小腸Marathon-Ready cDNA ２．５μｌ、プライマーＡＰ１  ５μＭ、プライマーR1  ５μＭ、dNTPs ０．４ｍＭ、Advantage2 Polymerase mix（クロンテック社製）０．５μｌおよびAdvantage2 Polymerase mixに添付のバッファー（クロンテック社製）で総反応量を２５μｌとし、サーマルサイクラー９７００（アプライドバイオシステムズ社製）を用い、９４℃・３０秒の加熱の後、９４℃・５秒、６８℃・４分のサイクルを３５回繰り返した。次に、Tricine-EDTA Bufferで５０倍希釈した上記ＰＣＲ反応液（ＡＰ１/Ｒ１で反応）２．５μｌ、プライマーＡＰ２  ５μＭ、プライマーｒｒ２  ５μＭ、dNTPs ０．４ｍＭ、Advantage2 Polymerase mix（クロンテック社製）０．５μｌおよびAdvantage2 Polymerase mixに添付のバッファー（クロンテック社製）で総反応量を２５μｌとし、サーマルサイクラー９７００（アプライドバイオシステムズ社製）を用い、９４℃・３０秒の加熱の後、９４℃・５秒、６８℃・４分のサイクルを３０回繰り返した。増幅したＤＮＡを１．５％のアガロースゲル電気泳動により分離した後、約７００塩基長のＤＮＡをカミソリで切り出し、ＤＮＡをQIAquick Gel Extraction Kit（キアゲン社製）を用いて回収した。このＤＮＡを、TOPO TA Cloning Kit (インビトロジェン社製)のプロトコールに従ってpCR2.1-TOPOベクターへクローニングした。これをエシェリヒア コリ(Escherichia coli) TOP10 competent cell（インビトロジェン社製）に導入して形質転換した後、ｃＤＮＡ挿入断片を持つクローンをアンピシリンを含むＬＢ寒天培地で選択し、形質転換体を得た。個々のクローンをアンピシリンを含むＬＢ培地で一晩培養し、QIAwell 8 Plasmid Kit（キアゲン社製）を用いてプラスミドＤＮＡを調製した。これをプライマーＤＮＡ〔プライマーＭ１３Ｆ（配列番号：72）、プライマーＭ１３Ｒ（配列番号：73）、プライマーｒｒ２（配列番号：71）〕およびBigDye Terminator Cycle Sequencing Kit（アプライドバイオシステムズ社製）を用いて反応を行い、挿入されているｃＤＮＡ断片の塩基配列をＤＮＡシークエンサーABI PRISM 3100 DNAアナライザ（アプライドバイオシステムズ社製）を用いて決定した。その結果、配列番号：97に示す塩基配列を得た。
次に配列番号：97で示した塩基配列をもとにプライマーｒｒ４（配列番号：74）とプライマーｒｒ６（配列番号：75）を設計した。更に上流の塩基配列を得るためにプライマーＡＰ１（配列番号：68）とプライマーｒｒ４（配列番号：74）を用いて、ＰＣＲ反応を行ない、次にこのＰＣＲ反応液を鋳型として、プライマーＡＰ２（配列番号：70）およびプライマーｒｒ６（配列番号：75）を用いてＰＣＲ反応を行なった。ＰＣＲの反応液組成および反応条件を以下に示す。反応液はヒト小腸Marathon-Ready cDNA ２．５μｌ、プライマーＡＰ１  ５μＭ、プライマーｒｒ４  ５μＭ、dNTPs ０．４ｍＭ、Advantage2 Polymerase mix（クロンテック社製）０．５μｌおよびAdvantage2 Polymerase mixに添付のバッファー（クロンテック社製）で総反応量を２５μｌとし、サーマルサイクラー９７００（アプライドバイオシステムズ社製）を用い、９４℃・３０秒の加熱の後、９４℃・５秒、６８℃・１．５分のサイクルを３５回繰り返した。次に、Tricine-EDTA Bufferで５０倍希釈した上記ＰＣＲ反応液（ＡＰ１/ｒｒ４で反応）２．５μｌ、プライマーＡＰ２  ０．５μＭ、プライマーｒｒ６ ０．５μＭ、dNTPs ０．４ｍＭ、Advantage2 Polymerase mix（クロンテック社製）０．５μｌおよびAdvantage2 Polymerase mixに添付のバッファー（クロンテック社製）で総反応量を２５μｌとし、サーマルサイクラー９７００（アプライドバイオシステムズ社製）を用い、９４℃・３０秒の加熱の後、９４℃・５秒、６８℃・１．５分のサイクルを３０回繰り返した。１．５％のアガロースゲル電気泳動により増幅した約２８０塩基長のＤＮＡを確認した後、上記ＰＣＲ反応液（ＡＰ２/ｒｒ６で反応）５μｌにPCR Product Pre-Sequencing Kit（ユーエスビ社製）中のExonucleaseIとShrimp Alkaline Posphataseをいずれも１μｌずつ加え、３７℃・１５分、８５℃・１５分の反応を行った。この反応液を超純水で３倍希釈し、これをプライマーｒｒ６（配列番号：75）およびBigDye Terminator Cycle Sequencing Kit（アプライドバイオシステムズ社製）を用いて反応を行い、増幅したＤＮＡ断片の塩基配列をＤＮＡシークエンサーABI PRISM 3100 DNAアナライザ（アプライドバイオシステムズ社製）を用いて決定した。その結果、配列番号：98に示す塩基配列を得た。
【０１６６】
実施例１０
ヒトTCH200タンパク質をコードするｃＤＮＡの３’下流端のクローニング
３’下流端のクローニングは、ヒト小腸Marathon-Ready cDNA（クロンテック社製）を鋳型として、プライマーＡＰ１（配列番号：68）およびプライマーｒ１（配列番号：76）を用いてＰＣＲ反応を行ない、次にこのＰＣＲ反応液を鋳型として、プライマーＡＰ２（配列番号：70）およびプライマーｒ２（配列番号：77）を用いてＰＣＲ反応を行なった。ＰＣＲの反応液組成と反応条件を以下に示す。反応液はヒト小腸Marathon-Ready cDNA２．５μｌ、プライマーＡＰ１  ５μＭ、プライマーｒ１  ５μＭ、dNTPs ０．４ｍＭ、Advantage2 Polymerase mix（クロンテック社製）０．５μｌおよびAdvantage2 Polymerase mixに添付のバッファー（クロンテック社製）で総反応量を２５μｌとし、サーマルサイクラー９７００（アプライドバイオシステムズ社製）を用い、９４℃・３０秒の加熱の後、９４℃・５秒、６８℃・４分のサイクルを３５回繰り返した。次に、Tricine-EDTA Bufferで５０倍希釈した上記ＰＣＲ反応液（ＡＰ１/ｒ１で反応）２．５μｌ、プライマーＡＰ２  ５μＭ、プライマーｒ２  ５μＭ、dNTPs ０．４ｍＭ、Advantage2 Polymerase mix（クロンテック社製）０．５μｌおよびAdvantage2 Polymerase mixに添付のバッファー（クロンテック社製）で総反応量を２５μｌとし、サーマルサイクラー９７００（アプライドバイオシステムズ社製）を用い、９４℃・３０秒の加熱の後、９４℃・５秒、６８℃・４分のサイクルを３０回繰り返した。増幅したＤＮＡを１．５％のアガロースゲル電気泳動により分離した後、約６００塩基長のＤＮＡをカミソリで切り出し、ＤＮＡをQIAquick Gel Extraction Kit（キアゲン社製）を用いて回収した。このＤＮＡを、TOPO TA Cloning Kit（インビトロジェン社製）のプロトコールに従ってpCR2.1-TOPOベクターへクローニングした。これをエシェリヒア コリ(Escherichia coli) TOP10 competent cell（インビトロジェン社製）に導入して形質転換した後、ｃＤＮＡ挿入断片を持つクローンをアンピシリンを含むＬＢ寒天培地で選択し、形質転換体を得た。個々のクローンをアンピシリンを含むＬＢ培地で一晩培養し、QIAwell 8 Plasmid Kit （キアゲン社製）を用いてプラスミドＤＮＡを調製した。これをプライマーＤＮＡ〔プライマーＭ１３Ｆ（配列番号：72）、プライマーＭ１３Ｒ（配列番号：73）、プライマーｒ２（配列番号：77）〕およびBigDye Terminator Cycle Sequencing Kit（アプライドバイオシステムズ社製）を用いて反応を行い、挿入されているｃＤＮＡ断片の塩基配列をＤＮＡシークエンサーABI PRISM 3100 DNAアナライザ（アプライドバイオシステムズ社製）を用いて決定した。
その結果配列番号：99に示す塩基配列を得た。
更に３’下流端の塩基配列を得るためにヒト小腸Marathon-Ready cDNA（クロンテック社製）を鋳型として、プライマーＡＰ１（配列番号：68）およびプライマーｆ１（配列番号：78）を用いてＰＣＲ反応を行ない、次にこのＰＣＲ反応液を鋳型として、プライマーＡＰ２（配列番号：70）およびプライマーｆ２（配列番号：79）を用いてＰＣＲ反応を行なった。ＰＣＲの反応液組成と反応条件を以下に示す。反応液はヒト小腸Marathon-Ready cDNA２．５μｌ、プライマーＡＰ１  ５μＭ、プライマーｆ１  ５μＭ、dNTPs ０．４ｍＭ、Advantage2 Polymerase mix（クロンテック社製）０．５μｌおよびAdvantage2 Polymerase mixに添付のバッファー（クロンテック社製）で総反応量を２５μｌとし、サーマルサイクラー９７００（アプライドバイオシステムズ社製）を用い、９４℃・３０秒の加熱の後、９４℃・５秒、６８℃・１．５分のサイクルを３５回繰り返した。次に、Tricine-EDTA Bufferで５０倍希釈した上記ＰＣＲ反応液（ＡＰ１/ｆ１で反応）２．５μｌ、プライマーＡＰ２  ５μＭ、プライマーｆ２  ５μＭ、dNTPs ０．４ｍＭ、Advantage2 Polymerase mix（クロンテック社製）０．５μｌおよびAdvantage2 Polymerase mixに添付のバッファー（クロンテック社製）で総反応量を２５μｌとし、サーマルサイクラー９７００（アプライドバイオシステムズ社製）を用い、９４℃・３０秒の加熱の後、９４℃・５秒、６８℃・１．５分のサイクルを３０回繰り返した。１．５％のアガロースゲル電気泳動により増幅した約３００塩基長のＤＮＡを確認した後、上記ＰＣＲ反応液（ＡＰ２/ｆ２で反応）５μｌにPCR Product Pre-Sequencing Kit（ユーエスビ社製）中のExonucleaseIとShrimp Alkaline Posphataseをいずれも１μｌずつ加え、３７℃・１５分、８５℃・１５分の反応を行った。この反応液を超純水で３倍希釈し、これをプライマーｆ２（配列番号：79）およびBigDye Terminator Cycle Sequencing Kit（アプライドバイオシステムズ社製）を用いて反応を行い、増幅したＤＮＡ断片の塩基配列をＤＮＡシークエンサーABI PRISM 3100 DNAアナライザ（アプライドバイオシステムズ社製）を用いて決定した。その結果、配列番号：100に示す塩基配列を得た。
次に配列番号：100で示した塩基配列をもとにプライマーｆ４（配列番号：80）を設計した。更に下流の塩基配列を得るためにプライマーＡＰ１（配列番号：68）とプライマーｆ２（配列番号：79）を用いて、一回目のＰＣＲ反応を行ない、次にこのＰＣＲ反応液を鋳型として、プライマーＡＰ２（配列番号：70）およびプライマーｆ４（配列番号：80）を用いて二回目のＰＣＲ反応を行なった。ＰＣＲの反応液組成および反応条件を以下に示す。反応液はヒト精巣Marathon-Ready cDNA ２．５μｌ、プライマーＡＰ１  ５μＭ、プライマーｆ２  ５μＭ、dNTPs ０．４ｍＭ、Advantage2 Polymerase mix（クロンテック社製）０．５μｌおよびAdvantage2 Polymerase mixに添付のバッファー（クロンテック社製）で総反応量を２５μｌとし、サーマルサイクラー９７００（アプライドバイオシステムズ社製）を用い、９４℃・３０秒の加熱の後、９４℃・５秒、６８℃・１．５分のサイクルを３５回繰り返した。次に、Tricine-EDTA Bufferで５０倍希釈した上記ＰＣＲ反応液（ＡＰ１/ｆ２で反応）２．５μｌ、プライマーＡＰ２  ５μＭ、プライマーｆ４５μＭ、dNTPs ０．４ｍＭ、Advantage2 Polymerase mix（クロンテック社製）０．５μｌおよびAdvantage2 Polymerase mixに添付のバッファー（クロンテック社製）で総反応量を２５μｌとし、サーマルサイクラー９７００（アプライドバイオシステムズ社製）を用い、９４℃・３０秒の加熱の後、９４℃・５秒、６８℃・１．５分のサイクルを３０回繰り返した。１．５％のアガロースゲル電気泳動により増幅した約１５０塩基長のＤＮＡを確認した後、上記ＰＣＲ反応液（ＡＰ２/ｆ４で反応）５μｌにPCR Product Pre-Sequencing Kit（ユーエスビ社製）中のExonucleaseIとShrimp Alkaline Posphataseをいずれも１μｌずつ加え、３７℃・１５分、８５℃・１５分の反応を行った。この反応液を超純水で３倍希釈し、これをプライマーＤＮＡ〔プライマーＡＰ２（配列番号：70）、プライマーｆ４（配列番号：80）〕およびBigDye Terminator Cycle Sequencing Kit（アプライドバイオシステムズ社製）を用いて反応を行い、増幅したＤＮＡ断片の塩基配列をＤＮＡシークエンサーABI PRISM 3100 DNAアナライザ（アプライドバイオシステムズ社製）を用いて決定した。その結果、配列番号：101に示す塩基配列を得た。
【０１６７】
実施例１１
ヒトTCH200タンパク質をコードするｃＤＮＡのクローニング
ヒトTCH200タンパク質をコードするｃＤＮＡのクローニングは、Nested PCR法により行った。
ヒトTCH200タンパク質をコードするｃＤＮＡのクローニングのために実施例１および実施例２で得た塩基配列（配列番号：97，配列番号：98，配列番号：99，配列番号：100，配列番号：101）をもとに、プライマーＦ０（配列番号：81）およびプライマーＲ７（配列番号：82）およびプライマーＦ００（配列番号：83）およびプライマーＲ００（配列番号：84）を設計した。一回目のＰＣＲ反応は、ヒト小腸Marathon-Ready cDNA（クロンテック社製）を鋳型とし、プライマーＦ０およびプライマーＲ７を用いて行った。次にこのＰＣＲ反応液を鋳型とし、プライマーＦ００およびプライマーＲ００を用いて２回目のＰＣＲ反応を行なった。ＰＣＲの反応液組成および反応条件を以下に示す。反応液はヒト小腸Marathon-Ready cDNA ２．０μｌ、プライマーＦ０  １２．５μＭ、プライマーＲ７  １２．５μＭ、dNTPs ０．４ｍＭ、pfu turbo DNA Polymerase （ストラタジーン社製）０．５μｌおよびAdvantage2 Polymerase mixに添付のバッファー（クロンテック社製）で総反応量を２０μｌとし、サーマルサイクラー９７００（アプライドバイオシステムズ社製）を用い、９４℃・３０秒の加熱の後、９４℃・１０秒、５６℃・５秒、７２℃・２.５分のサイクルを３５回繰り返した。次にこのＰＣＲ反応液（Ｆ０/Ｒ７で反応）１μｌ、プライマーＦ００  １２．５μＭ、プライマーＲ００  １２．５μＭ、ｄＮＴＰｓ０．４ｍＭ、pfu turbo DNA Polymerase（ストラタジーン社製）０．５μｌおよびAdvantage2 Polymerase mixに添付のバッファー（クロンテック社製）で総反応量を２０μｌとし、サーマルサイクラー９７００（アプライドバイオシステムズ社製）を用い、９４℃・３０秒の加熱の後、９４℃・１０秒、５６℃・５秒、７２℃・２．５分のサイクルを３０回繰り返した。増幅したＤＮＡを１．５％のアガロースゲル電気泳動により分離した後、２３７６塩基長のＤＮＡをカミソリで切り出し、ＤＮＡをQIAquick Gel Extraction Kit（キアゲン社製）を用いて回収した。このＤＮＡを、Zero Blunt TOPO PCR Cloning Kit (インビトロジェン社製)のプロトコールに従ってpCR-Blunt II-TOPOベクターへクローニングした。これをエシェリヒア コリ（Escherichia coli） TOP10 competent cell（インビトロジェン社製）に導入して形質転換した後、ｃＤＮＡ挿入断片を持つクローンをカナマイシンを含むＬＢ寒天培地で選択し、形質転換体を得た。個々のクローンをカナマイシンを含むＬＢ培地で一晩培養し、QIAwell 8 Plasmid Kit （キアゲン社製）を用いてプラスミドＤＮＡを調製し、プラスミドクローンpCR-BluntII-TCH200の２クローン＃１、＃２および＃３を得た。これをプライマーＤＮＡ〔プライマーＭ１３Ｆ（配列番号：72）、プライマーＭ１３Ｒ（配列番号：73）、プライマーＦ００（配列番号：83） 、プライマーＲ００（配列番号：84）、プライマーＦ１（配列番号：85）、プライマーＦ２（配列番号：86）、プライマーＦ５（配列番号：87）、プライマーＦ７（配列番号：88）、プライマーＲ１（配列番号：69） 、プライマーｆｆ３（配列番号：89）、プライマーｆｆ４（配列番号：90）、プライマーｆ２（配列番号：80）、プライマーｆ３（配列番号：91）、プライマーｒｒ１（配列番号：92）、プライマーｒｒ２（配列番号：71）、プライマーｒｒ３（配列番号：93）〕およびBigDye Terminator Cycle Sequencing Kit（アプライドバイオシステ���ズ社製）を用いて反応を行い、挿入されているｃＤＮＡ断片の塩基配列をＤＮＡシークエンサーABI PRISM 3100 DNAアナライザ（アプライドバイオシステムズ社製）を用いて決定した。その結果、取得した２クローンは同一のＤＮＡ断片を含んでおり２３７６個の塩基配列を有していた（配列番号：102）。断片には７９１個のアミノ酸配列（配列番号：66）がコードされており（配列番号：97）、配列番号：66で表されるアミノ酸配列を含有するタンパク質を、ヒトTCH200タンパク質と命名した。
該ｃＤＮＡ断片（配列番号：102）を含むプラスミドを有する形質転換体を、エシェリヒア・コリ（Escherichia coli）TOP10/pCR-BluntII-TCH200と命名した。
この取得した配列（配列番号：102）を公共のゲノムデータベースに対してホモロジー検索を行ったところ、１箇所（配列番号：67で表される塩基配列の558番目のCがAに置換）に塩基置換が認められた（配列番号：103）。この塩基置換C558Aは、アミノ酸置換を伴わないものであり、遺伝子多型（SNPs）に由来する可能性があると考えられる。
Blast P〔Nucleic Acids Res.、第25巻、3389頁、1997年〕を用いてＧＥＮＥＭＢＬに対してホモロジー検索を行ったところ、配列番号：67で表される塩基配列を含有するｃＤＮＡはヒト  バニロイド  レセプターに属する新規遺伝子であることが判明した（図１３）。ヒトで報告されているバニロイド受容体あるHumanVR1〔Biochemicaland Biophysical Research Communications、281巻、1183頁、2001年〕とは塩基レベルで５８％、アミノ酸レベルで４３％の相同性を示し、ヒトTCH200タンパク質は６回膜貫通型の構造を有すると推測された。
【０１６８】
実施例１２
ヒトTCH200遺伝子産物の組織分布の解析
ヒトTCH200の配列から設計した、２種のプライマーＤＮＡ、プライマーＴＭＦ（配列番号：94）およびプライマーＴＭＲ（配列番号：95）と、ＴａｑＭａｎプローブＰ１（配列番号：96）を用いて、ヒトの各組織（心臓、脳、胎盤、肺、肝臓、骨格筋、腎臓、膵臓、脾臓、胸腺、前立腺、精巣、卵巣、小腸、大腸、末梢血白血球）のｃＤＮＡ（Human MTC panel I、およびHuman MTC panel II：クロンテック社製）におけるヒトTCH200の発現量をＴａｑＭａｎ ＰＣＲにより測定した。反応はTaqMan Universal PCR Master Mix（アプライドバイオシステムズ社製）を用いて、ABI PRISM 7900 sequence detection system（アプライドバイオシステムズ社製）にて最初５０℃２分間、さらに９５℃１０分間おいた後で、９５℃で１５秒、６０℃で１分を１反応サイクルとして４０サイクル繰り返し、同時に検出を行った。
結果を図１４に示す。ヒトTCH200遺伝子産物（mRNA）は広い組織で発現が認められたが、なかでも胸腺、精巣、卵巣、小腸、結腸で比較的強い発現を示したが、胎盤ではほとんど認められなかった。
【０１６９】
実施例１３
マウスTCH230タンパク質をコードするｃＤＮＡのクローニング
２種のプライマーＤＮＡ、プライマーｍ２３０Ａ１（配列番号：106）およびプライマーｍ２３０Ｂ２（配列番号：107）を用いて、マウス精巣Marathon-Ready cDNA（クロンテック社製）に対して、Pyrobest DNA Polymerase（タカラバイオ社製）により、以下の条件（１）〜（３）でＰＣＲを行った。
（１）９４℃２分間
（２）９８℃１０秒間−７２℃２分間を３０サイクル
（３）７２℃１０分間
得られた増幅産物をZero Blunt TOPO Cloning kit（インビトロジェン社製）を用いてクローニングし、プラスミドpCR-BluntII-mTCH230を得た。
これをプライマーＤＮＡ〔プライマーSP6（配列番号：7）、プライマーT7（配列番号：8）、プライマーm230F1（配列番号：108）、プライマーm230F2（配列番号：109）、プライマーm230R1（配列番号：110）、プライマーm230R2（配列番号：111）〕およびBigDye Terminator Cycle Sequencing Kit（アプライドバイオシステムズ社製）を用いて反応を行い、挿入されているｃＤＮＡ断片の塩基配列をＤＮＡシークエンサーABI PRISM 3100 DNAアナライザ（アプライドバイオシステムズ社製）を用いて決定した。その結果、クローンは１２３７個の塩基配列を有していた（配列番号：112）。該ｃＤＮＡ断片には３７３個のアミノ酸配列（配列番号：104）がコードされており（配列番号：105）、該アミノ酸配列を有するタンパク質を、マウスTCH230タンパク質と命名した。
該ｃＤＮＡ断片を含むプラスミドを有する形質転換体を、エシェリヒア  コリ（Escherichia coli）TOP10/pCR-BluntII-mTCH230と命名した。
マウスTCH230はヒトTCH230と塩基レベルで74％、アミノ酸レベルで70％の相同性を示し、マウスTCH230がヒトTCH230のマウスオルソログであることが判明した。(図１５)
【０１７０】
実施例１４
マウスTCH230遺伝子産物の組織分布の解析
マウスTCH230の配列から設計した、２種のプライマーＤＮＡ、プライマーm230TF（配列番号：113）およびプライマーm230TR（配列番号：114）と、TaqManプローブm230T1（配列番号：115）を用いて、マウスの各組織（骨髄、目、リンパ節、平滑筋、前立腺、胸腺、胃、子宮、心臓、脳、脾臓、肺、肝臓、骨格筋、腎臓、精巣、胚（7日）、胚（11日）、胚（15日）、胚（17日））のｃＤＮＡ（Mouse MTC panel IおよびMouse MTC panel II：クロンテック社製）におけるマウスTCH230の発現量を、TaqMan PCRにより測定した。反応はTaqMan Universal PCR Master Mix（アプライドバイオシステムズ社製）を用いて、ABI PRISM 7900 sequence detection system（アプライドバイオシステムズ社製）にて、最初５０℃２分間、さらに９５℃１０分間おいた後で、９５℃で１５秒、６０℃で１分を１反応サイクルとして４０サイクル繰り返し、同時に検出を行った。
結果を図１６に示す。
マウスTCH230遺伝子産物（mRNA）は、Mouse MTC panel IおよびMTC panel IIにおいては、目、リンパ節、前立腺、胸腺、子宮、脾臓、肝臓、腎臓、胚（15日）で僅かな発現が見られ、胃、骨格筋、精巣、胚（7日）、胚（17日）で若干の発現が見られ、心臓で強い発現が見られ、肺で最も強い発現が見られた。
【０１７１】
実施例１５
マウスTCH230遺伝子産物の7週齢BALB/cマウスにおける組織分布の解析
（１）正常マウス各組織のcDNAの調製
7週齢BALB/cマウスの各組織[大脳、小脳、海馬、延髄、脊髄、坐骨神経、皮膚、骨格筋、眼球、心臓、肺、気管、膵臓、腎臓、肝臓、前胃、後胃、十二指腸、空回腸、盲腸、結腸、直腸、脾臓、胸腺、骨髄、卵巣、子宮、前立腺、精巣 （卵巣および子宮は雌から、それ以外は雄から、各1-10匹分を採取）]より、ISOGEN（ニッポンジーン社製）、またはRNeasy Mini Kit（キアゲン社製）を用いてtotal RNAを調製した。調製したtotal RNA に対してTaqMan Reverse Transcription Reagents（アプライドバイオシステムズ社製）を用いて逆転写反応を行いcDNAを調製した。
（２）マウスTCH230遺伝子産物の組織分布の解析
実施例１４で用いた２種のプライマーＤＮＡ、プライマーm230TF（配列番号：113）およびプライマーm230TR（配列番号：114）と、TaqManプローブm230T1（配列番号：115）を用いて、上記のマウス各組織のcDNAにおけるマウスTCH230の発現量（コピー数）をTaqMan PCRにより測定した。同じcDNAについてTaqMan rodent GAPDH control reagents（アプライドバイオシステムズ社製）を用いてrodent glyceraldehide-3-phosphate dehydrogenase (GAPDH)の発現量（コピー数）も測定した。反応はTaqMan Universal PCR Master Mix（アプライドバイオシステムズ社製）を用いて、ABI PRISM 7900 sequence detection system（アプライドバイオシステムズ社製）にて最初50℃2分間、さらに95℃10分間おいた後で、95℃で15秒、60℃で1分を1反応サイクルとして40サイクル繰り返し、同時に検出を行った。
結果を図１７に示す。
マウスTCH230遺伝子産物（mRNA）は7週齢BALB/cマウスの各組織においては、卵巣、空回腸、盲腸、結腸、直腸、前立腺、脾臓、眼球、後胃、膵臓、心臓で僅かな発現が見られ、坐骨神経、気管、精巣、子宮で若干の発現が見られ、皮膚、肺で高い発現が見られ、前胃で最も高い発現が見られた。
【０１７２】
実施例１６
ラットTCH230遺伝子の部分配列の同定
２種のプライマーＤＮＡ、プライマーr230OF（配列番号：117）およびプライマーr230OR（配列番号：118）を用いて、ラット精巣Marathon-Ready cDNA（クロンテック社製）に対して、Advantage 2 DNA Polymerase（クロンテック社製）により、以下の条件(1)〜(3)でＰＣＲを行った。
(1)９５℃１分間
(2)９５℃３０秒間−６８℃３分間を３５サイクル
(3)６８℃３分間
得られた増幅産物をゲル電気泳動後、約1．0ｋｂの断片を切り出し、QIAquick Gel Extraction Kit（キアゲン社製）を用いて精製し、これをプライマーr230OF（配列番号：117）、プライマーr230OR（配列番号：118）およびBigDye Terminator Cycle Sequencing Kit（アプライドバイオシステムズ社製）を用いて反応を行い、PCR増幅産物の塩基配列をDNAシークエンサーABI PRISM 3100 DNAアナライザ（アプライドバイオシステムズ社製）を用いて決定した。その結果、配列番号：116で表される1046個の塩基配列を有するラットTCH230遺伝子cDNAの部分配列を同定した。
【０１７３】
実施例１７
（１）正常ラット各組織のcDNAの調製
12週齢Wistarラット雄の各組織（大脳、小脳、肝臓、腎臓、前立腺、心臓、肺、十二指腸、空回腸、結腸、皮膚、眼球）より、RNeasy Mini Kit（キアゲン社製）を用いてtotal RNAを調製した。調製したtotal RNA に対してTaqMan Reverse Transcription Reagents（アプライドバイオシステムズ社製）を用いて逆転写反応を行いcDNAを調製した。
（２）ラットTCH230遺伝子産物の組織分布の解析
配列番号：116の配列から設計した、２種のプライマーDNA、プライマーr230TF（配列番号：119）およびプライマーr230TR（配列番号：120）と、TaqManプローブr230T1（配列番号：121）を用いて、上記のラット各組織のcDNAにおけるラットTCH230の発現量（コピー数）をTaqMan PCRにより測定した。同じcDNAについてTaqMan rodent GAPDH control reagents（アプライドバイオシステムズ社製）を用いてrodent glyceraldehide-3-phosphate dehydrogenase (GAPDH)の発現量（コピー数）も測定した。反応はTaqMan Universal PCR Master Mix（アプライドバイオシステムズ社製）を用いて、ABI PRISM 7900 sequence detection system（アプライドバイオシステムズ社製）にて最初50℃2分間、さらに95℃10分間おいた後で、95℃で15秒、60℃で1分を1反応サイクルとして40サイクル繰り返し、同時に検出を行った。
結果を図１８に示す。
ラットTCH230遺伝子産物（mRNA）は12週齢Wistarラットの組織においては、全ての組織で発現が見られたが、中でも、大脳、前立腺、空回腸、結腸、皮膚などで高い発現が見られ、肺で最も高い発現が見られた。
【０１７４】
実施例１８
ヒトTCH230発現ベクターの構築
ヒトTCH230（配列番号：1）発現ベクターを、以下の方法により作成した。
実施例１により得られたプラスミド10ngを鋳型として、プライマー230OF2（配列番号：122）およびプライマー230OR2（配列番号：123）を用いて、Pyrobest DNA Polymerase（タカラバイオ社製）により以下の条件（1）〜（3）でPCRを行った。5’末端側プライマー230OF2および3’末端側プライマー230OR2は、ベクターへのクローニングのために5’末端側にそれぞれHind IIIサイトおよびXba Iサイトを付加するように設計した。
（1）９４℃２分間
（2）９８℃１０秒間−６５℃３０秒間−７２℃３．５分間を３０サイクル
（3）７２℃１０分間
上記ＰＣＲ反応液をゲル電気泳動後、主要バンドを精製した。これにより得られたPCR断片を、制限酵素Hind IIIおよびXba Iを用いて、37℃で1時間保温することにより消化し、この反応液をゲル電気泳動後、精製した。これを、動物細胞発現ベクターであるpcDNA3.1(+)（インビトロジェン社製）のHind IIIサイトおよびXba Iサイトに、Takara ligation kit ver.2（タカラバイオ社製）を用いてライゲーションした。このライゲーション反応液をエタノール沈殿処理後、コンピーテント細胞である大腸菌（Escherichia coli）TOP10（インビトロジェン社製）に形質転換した。これにより得られた複数のコロニーからプラスミドを調製し、この塩基配列をプライマーＤＮＡ〔プライマーBGH RV（配列番号：124）、プライマーＴ７（配列番号：8）、プライマーＢ１（配列番号：9）、プライマーＦ１（配列番号：10）〕、およびBigDye Terminator Cycle Sequencing Kit（アプライドバイオシステムズ社製）を用いて反応を行い、塩基配列をDNAシークエンサーABI PRISM 3100 DNAアナライザ（アプライドバイオシステムズ社製）を用いて確認した。このプラスミドを有する形質転換体を、Escherichia coli TOP10/pCDNA3.1(+)-TCH230と命名した。
【０１７５】
実施例１９ 
ヒトTCH230発現CHO細胞株の作製および導入遺伝子発現量の測定
Escherichia coli TOP10/pCDNA3.1(+)-TCH230を培養し、この大腸菌体からEndoFree Plasmid Maxi Kit（キアゲン社製）を用いてプラスミドDNAを調製した。このプラスミドDNAをFuGENE 6 Transfection Reagent（ロシュ社製）を用いて添付のプロトコールに従ってCHO dhfr-細胞に導入した。2μgのプラスミドDNAとトランスフェクション試薬との混合液を、24時間前に3×105個のCHO dhfr-細胞を播種した直径6 cmシャーレに添加した。10％ウシ胎児血清（JRHバイオサイエンス社製）を含むMEMα培地（インビトロジェン社製）で１日間培養した後、トリプシン処理により細胞をはがし、回収した細胞を1 wellあたり10-50個で96 well plateに播種した。さらに24時間後、培地に0.5mg/mlのジェネティシン（インビトロジェン社製）を添加し、その後7日間0.5-1.0mg/mlのジェネティシンを含んだ培地中でTCH230発現細胞を選択した。1 wellあたり1-3コロニーの増殖が見られた22 wellについて、6 well plateに培養し、増殖した細胞からRNeasy Mini KitまたはRNeasy 96 Kit（ともにキアゲン社製）を用いてtotal RNAを調製した。調製したtotal RNA に対してTaqMan Reverse Transcription Reagents（アプライドバイオシステムズ社製）を用いて逆転写反応を行いcDNAを調製した。これについて、実施例２で用いたプライマーＴＦ（配列番号：15）およびプライマーＴＲ（配列番号：16）と、TaqManプローブT1（配列番号：17）とを用いて、TCH230の発現量をTaqMan PCRにより測定した。反応はTaqMan Universal PCR Master Mix（アプライドバイオシステムズ社製）を用いて、ABI PRISM 7900 sequence detection system（アプライドバイオシステムズ社製）にて、最初５０℃２分間、さらに９５℃１０分間おいた後で、９５℃で１５秒、６０℃で１分を１反応サイクルとして４０サイクル繰り返し、同時に検出を行った。ヒトTCH230遺伝子高発現細胞株（ポリクローナル）として、クローンNo.19およびNo.26を選択した。これらを1 wellあたり0.5個で96 well plateに播種し、ジェネティシン含有培地中で7-10日間培養し、モノクローナルなクローンを得た。これについて、total RNAを調製し、ヒトTCH230遺伝子の発現量をTaqMan PCRにより測定した。ヒトTCH230遺伝子高発現細胞株（モノクローナル）として、クローンNo.19-6を選択した。
【０１７６】
実施例２０
ヒトTCH230発現CHO細胞株における[6,7-3H(N)]-Estrone sulfateおよび[1,2,6,7-3H(N)]-Dehydroepiandrosterone Sulfate取り込みの測定
実施例19で取得したヒトTCH230発現CHO細胞株クローンNo.19-6を用いて、[6,7-3H(N)]-Estrone sulfateおよび[1,2,6,7-3H(N)]-Dehydroepiandrosterone Sulfate（以下、[1,2,6,7-3H(N)]-DHEA-Sと称することもある）取り込みを測定した。
ヒトTCH230発現CHO細胞株クローンNo.19-6を、96 well plateに1 wellあたり4×104個播種し、5mM  sodium butyrateを含むMEMα培地(インビトロジェン社製)で、37℃で24時間培養した。培地を除き、150μL NMDGバッファー（140mM  N-メチル-D(-)-グルカミン、5.4mM  KCl、0.34mM  Na2HPO4、0.44mM  KH2PO4、1.26mM  CaCl2、0.41mM  MgSO4、0.49mM  MgCl2、5.55mM  Glucose、pH  7.4-7.6）で3回洗い、150μL NMDGバッファーを入れ37℃で1時間培養した。バッファーを90μL NaClバッファー（140mM  NaCl、5.4mM  KCl、0.34mM  Na2HPO4、0.44mM  KH2PO4、1.26mM  CaCl2、0.41mM  MgSO4、0.49mM  MgCl2、5.55mM  Glucose、pH  7.4-7.6）または90μL NMDGバッファーに置換したのち、2.5μM  Estrone sulfate, ammonium salt, [6,7-3H(N)]-もしくは1.37μM  Dehydroepiandrosterone Sulfate, sodium salt, [1,2,6,7-3H(N)]-（いずれもパーキンエルマー・ライフサイエンス社製）を10μL加えた。これを37℃で1時間培養したのち、バッファーを除去し、200μL  PBS（タカラバイオ社製）で3回洗い、0.1N  NaOHを10μL加え細胞を溶解した。100μL  SuperMixシンチレータ（パーキンエルマー・ライフサイエンス社製）を加え、攪拌したのち、細胞に取り込まれた[6,7-3H(N)]-Estrone sulfateもしくは[1,2,6,7-3H(N)]-DHEA-S量を放射活性により測定した。測定は、1450 MICROBETA PLUS LIQUID SCINTILLATION COUNTER（パーキンエルマー・ライフサイエンス社製）により行った。同様の操作を、CHO dhfr-細胞にベクターpcDNA3.1(+)を導入した細胞（以下、Mockと称することもある）においても行い、放射活性を測定した。
結果を、[6,7-3H(N)]-Estrone sulfateについては図１９に、[1,2,6,7-3H(N)]-DHEA-Sについては図２０にそれぞれ示す。
これより、ヒトTCH230発現CHO細胞は、140mM NaCl存在下で[6,7-3H(N)]-Estrone sulfateおよび[1,2,6,7-3H(N)]-DHEA-Sを取り込むことが明らかとなった。
【０１７７】
実施例２１
マウスTCH234遺伝子の部分配列の同定
2種のプライマーDNA、プライマーm234-1485F（配列番号：126）およびプライマーm234-1801R（配列番号：127）を用いて、マウス精巣Marathon-Ready cDNA（クロンテック社製）に対して、Advantage 2 DNA Polymerase（クロンテック社製）により、以下の条件(1)〜(5)でPCRを行った。
(1)94℃30秒間
(2)94℃10秒間−62℃10秒間−68℃30秒間を35サイクル
(3)68℃3分間
得られた増幅産物をゲル電気泳動後、約0.3kbの断片を切り出し、QIAquick Gel Extraction Kit（キアゲン社製）を用いて精製し、これをプライマーm234-1485F（配列番号：126）、プライマーm234-1801R（配列番号：127）およびBigDye Terminator Cycle Sequencing Kit（アプライドバイオシステムズ社製）を用いて反応を行い、PCR増幅産物の塩基配列をDNAシークエンサーABI PRISM 3100 DNAアナライザ（アプライドバイオシステムズ社製）を用いて決定した。
その結果、配列番号：125で表される317個の塩基配列を有するマウスTCH234遺伝子cDNAの部分配列を同定した。
【０１７８】
実施例２２
マウスTCH234遺伝子産物の組織分布の解析
配列番号：125で表される塩基配列から設計した、2種のプライマーDNA、プライマーm234-TMF（配列番号：128）およびプライマーm234-TMR（配列番号：129）と、TaqManプローブm234T1（配列番号：130）を用いて、実施例１５で調製したマウス各組織のcDNAにおけるマウスTCH234の発現量（コピー数）をTaqMan PCRにより測定した。同じcDNAについてTaqMan rodent GAPDH control reagents（アプライドバイオシステムズ社製）を用いてrodent glyceraldehide-3-phosphate dehydrogenase (GAPDH)の発現量（コピー数）も測定した。反応はTaqMan Universal PCR Master Mix（アプライドバイオシステムズ社製）を用いて、ABI PRISM 7900 sequence detection system（アプライドバイオシステムズ社製）にて最初50℃2分間、さらに95℃10分間おいた後で、95℃で15秒、60℃で1分を1反応サイクルとして40サイクル繰り返し、同時に検出を行った。
結果を図２１に示す。
マウスTCH234遺伝子産物（mRNA）は7週齢BALB/cマウスの各組織においては、坐骨神経、卵巣、皮膚、空回腸、結腸、前胃、前立腺、腎臓、子宮、胸腺、大脳で僅かな発現が見られ、肺、海馬、十二指腸、精巣、気管で若干の発現が見られ、後胃で特に高い発現が見られた。
【０１７９】
実施例２３
ラットＴＣＨ234遺伝子の部分配列の同定
２種のプライマーＤＮＡ、プライマーr234-815F（配列番号：132）およびプライマーr234-1177R（配列番号：133）を用いて、ラット腎臓Marathon-Ready cDNA（クロンテック社製）に対して、Advantage 2 DNA Polymerase（クロンテック社製）により、以下の条件(1)〜(3)でＰＣＲを行った。
(1)94℃30秒間
(2)94℃10秒間−62℃10秒間−68℃30秒間を35サイクル
(3)68℃3分間
得られた増幅産物をゲル電気泳動後、約０．３５ｋｂの断片を切り出し、QIAquick Gel Extraction Kit（キアゲン社製）を用いて精製し、これをプライマーr234-815F（配列番号：132）、プライマーr234-1177R（配列番号：133）およびBigDye Terminator Cycle Sequencing Kit（アプライドバイオシステムズ社製）を用いて反応を行い、PCR増幅産物の塩基配列をDNAシークエンサーABI PRISM 3100 DNAアナライザ（アプライドバイオシステムズ社製）を用いて決定した。その結果、配列番号：131で表される363個の塩基配列を有するラットTCH234遺伝子cDNAの部分配列を同定した。
【０１８０】
実施例２４
ラットTCH234遺伝子産物の組織分布の解析
配列番号：131で表される塩基配列から設計した、２種のプライマーDNA、プライマーr234-TMF（配列番号：134）およびプライマーr234-TMR（配列番号：135）と、TaqManプローブr234-P1（配列番号：136）を用いて、実施例17で調製したラット各組織のcDNAにおけるラットTCH234の発現量（コピー数）をTaqMan PCRにより測定した。同じcDNAについてTaqMan rodent GAPDH control reagents（アプライドバイオシステムズ社製）を用いてrodent glyceraldehide-3-phosphate dehydrogenase (GAPDH)の発現量（コピー数）も測定した。反応はTaqMan Universal PCR Master Mix（アプライドバイオシステムズ社製）を用いて、ABI PRISM 7900 sequence detection system（アプライドバイオシステムズ社製）にて最初50℃2分間、さらに95℃10分間おいた後で、95℃で15秒、60℃で1分を1反応サイクルとして40サイクル繰り返し、同時に検出を行った。
結果を図２２に示す。
ラットTCH234遺伝子産物（mRNA）は12週齢Wistarラットの各組織においては、小脳、肝臓、空回腸、結腸で若干の発現が見られ、大脳、十二指腸、眼で高い発現が見られ、腎臓で最も高い発現が見られた。
【０１８１】
実施例２５
ヒトTCH234発現ベクターの構築
ヒトTCH234（配列番号：18）発現ベクターを、以下の方法により作成した。
実施例５により得られたプラスミド10ngを鋳型として、プライマー234OF（配列番号：137）およびプライマー234OR（配列番号：138）を用いて、Pyrobest DNA Polymerase（タカラバイオ社製）により以下の条件（1）〜（3）でＰＣＲを行った。5’末端側プライマー234ＯＦおよび3’末端側プライマー234ＯＲは、ベクターへのクローニングのために5’末端側にそれぞれHind IIIサイトおよびXba Iサイトを付加するように設計した。
（1）94℃1分間
（2）94℃30秒間−55℃30秒間−72℃3分間を25サイクル
（3）72℃5分間
上記ＰＣＲ反応液をゲル電気泳動後、主要バンドを精製した。これにより得られたPCR断片を、制限酵素Hind IIIおよびXba Iを用いて、37℃で1時間保温することにより消化し、この反応液をゲル電気泳動後、精製した。これを、動物細胞発現ベクターであるpcDNA3.1(+)（インビトロジェン社製）のHind IIIサイトおよびXba Iサイトに、Takara ligation kit ver.2（タカラバイオ社製）を用いてライゲーションした。このライゲーション反応液を、コンピーテント細胞である大腸菌（Escherichia coli）JM109（タカラバイオ社製）に形質転換した。
これにより得られた複数のコロニーからプラスミドを調製し、この塩基配列をプライマーＤＮＡ〔プライマーBGH RV（配列番号：124）、プライマーＴ７（配列番号：8）、プライマーF3（配列番号：35）、プライマーR2（配列番号：37）、プライマーff2（配列番号：25）、プライマー234F21（配列番号：139）、プライマー234F22（配列番号：140）、プライマー234F23（配列番号：141）、プライマー234R24（配列番号：142）〕、およびBigDye Terminator Cycle Sequencing Kit（アプライドバイオシステムズ社製）を用いて反応を行い、塩基配列をDNAシークエンサーABI PRISM 3100 DNAアナライザ（アプライドバイオシステムズ社製）を用いて確認した。このプラスミドを有する形質転換体を、Escherichia coli JM109/pCDNA3.1(+)-TCH234と命名した。
【０１８２】
実施例２６
ヒトTCH234発現CHO細胞株の作製
Escherichia coli JM109/pCDNA3.1(+)-TCH234を培養し、この大腸菌体からEndoFree Plasmid Maxi Kit（キアゲン社製）を用いてプラスミドDNAを調製した。このプラスミドDNAをFuGENE 6 Transfection Reagent（ロシュ社製）を用いて添付のプロトコールに従ってCHO dhfr-細胞に導入した。2μgのプラスミドDNAとトランスフェクション試薬との混合液を24時間前に3×105個のCHO dhfr-細胞を播種した直径6cmシャーレに添加した。10%ウシ胎児血清（JRHバイオサイエンス社製）を含むMEMα培地(インビトロジェン社製)で１日間培養した後、トリプシン処理により細胞をはがし、回収した細胞を適宜希釈して10cmシャーレに播種した。さらに24時間後、培地に0.5mg/mlのジェネティシン（インビトロジェン社製）を添加し、その後10日間0.5-1.0mg/mlのジェネティシンを含んだMEMα培地中でヒトTCH234発現細胞を選択した。ジェネティシン含有選択培地中に増殖してくるモノクローナルなヒトTCH234発現細胞のコロニーを104個選択した。
【０１８３】
実施例２７
TaqMan PCR法を用いたヒトTCH234発現CHO細胞株における導入遺伝子発現量の測定
実施例26で作製したヒトTCH234発現CHO細胞株を96well plateに培養し、増殖した細胞からSV 96 Total RNA Isolateion System（プロメガ社製）を用いてtotal RNAを調製した。調製したtotal RNA に対してTaqMan Reverse Transcription Reagents（アプライドバイオシステムズ社製）を用いて逆転写反応を行いcDNAを調製した。これについて、実施例6で用いられたプライマーTMF（配列番号：32）およびプライマーTMR（配列番号：33）と、TaqManプローブP1（配列番号：38）とを用いて、ヒトTCH234の発現量をTaqMan PCRにより測定した。反応はTaqMan Universal PCR Master Mix（アプライドバイオシステムズ社製）を用いて、ABI PRISM 7900 sequence detection system（アプライドバイオシステムズ社製）にて、最初５０℃２分間、さらに９５℃１０分間おいた後で、９５℃で１５秒、６０℃で１分を１反応サイクルとして４０サイクル繰り返し、同時に検出を行った。ヒトTCH234遺伝子高発現細胞株として、クローンNo.104を選択した。
【０１８４】
実施例２８
ヒトTCH234遺伝子産物のヒト消化管組織における組織分布の解析
実施例６で用いた、プライマーTMF（配列番号：32）およびプライマーTMR（配列番号：33）およびTaqManプローブP1（配列番号：38）を用いて、ヒトの消化管各組織（肝臓、食道、胃、十二指腸、空腸、回腸、回盲部、盲腸、上行結腸、横行結腸、下行結腸、直腸）のcDNA（Human digestive system MTC panel；クロンテック社製）におけるヒトTCH234の発現量(コピー数)をTaqMan PCRにより測定した。同じcDNAについて、TaqMan GAPDH control reagents（アプライドバイオシステムズ社製）を用いてglyceraldehide-3-phosphate dehydrogenase（GAPDH）の発現量（コピー数）も測定した。反応はTaqMan Universal PCR Master Mix（アプライドバイオシステムズ社製）を用いて、ABI PRISM 7900 sequence detection system（アプライドバイオシステムズ社製）にて、最初50℃2分間、さらに95℃10分間おいた後で、95℃で15秒、60℃で1分を1反応サイクルとして40サイクル繰り返し、同時に検出を行った。
結果を図２３に示す。
ヒトTCH234遺伝子産物（mRNA）は消化管組織においては、回盲部で僅かな発現が見られ、十二指腸で高い発現が見られ、胃で最も高い発現を示した。
【０１８５】
実施例２９
マウスTCH212遺伝子の部分配列の同定
２種のプライマーＤＮＡ、プライマーｍ212Ａ１（配列番号：144）およびプライマーｍ212Ｂ１（配列番号：145）を用いて、マウス精巣Marathon-Ready cDNA（クロンテック社製）に対して、Advantage 2 DNA Polymerase（クロンテック社製）により、以下の条件(1)〜(3)でＰＣＲを行った。
(1)９５℃１分間
(2)９５℃３０秒間−６８℃３分間を３５サイクル
(3)６８℃３分間
得られた増幅産物をゲル電気泳動後、約0.8kbの断片を切り出し、QIAquick Gel Extraction Kit（キアゲン社製）を用いて精製し、プライマーm212A1（配列番号：144）およびプライマーm212B1（配列番号：145）およびBigDye Terminator Cycle Sequencing Kit（アプライドバイオシステムズ社製）を用いて反応を行い、PCR増幅産物の塩基配列をDNAシークエンサーABI PRISM 3100 DNAアナライザ（アプライドバイオシステムズ社製）を用いて決定した。その結果、配列番号：143で表される680個の塩基配列を有するマウスTCH212遺伝子cDNAの部分配列を同定した。
【０１８６】
実施例３０
マウスTCH212遺伝子産物の組織分布の解析
配列番号：143で表される塩基配列から設計した、２種のプライマーDNA、プライマーm212TF（配列番号：146）およびプライマーm212TR（配列番号：147）と、TaqManプローブｍ212Ｔ１（配列番号：148）を用いて、実施例１５で調製したマウス各組織のcDNAにおけるマウスTCH212の発現量（コピー数）をTaqMan PCRにより測定した。同じcDNAについてTaqMan rodent GAPDH control reagents（アプライドバイオシステムズ社製）を用いてrodent glyceraldehide-3-phosphate dehydrogenase (GAPDH)の発現量（コピー数）も測定した。反応はTaqMan Universal PCR Master Mix（アプライドバイオシステムズ社製）を用いて、ABI PRISM 7900 sequence detection system（アプライドバイオシステムズ社製）にて最初50℃2分間、さらに95℃10分間おいた後で、95℃で15秒、60℃で1分を1反応サイクルとして40サイクル繰り返し、同時に検出を行った。
結果を図２４に示す。
マウスTCH212遺伝子産物（mRNA）は７週齢BALB/cマウスの各組織においては、気管、前胃、前立腺、十二指腸、子宮、脾臓、眼球、胸腺、後胃、心臓、肺、海馬、骨髄で僅かな発現が見られ、卵巣、皮膚、空回腸、盲腸、直腸、膵臓、小脳、大脳で若干の発現が見られ、坐骨神経、結腸、延髄、脊髄で高い発現が見られ、精巣で最も高い発現が見られた
【０１８７】
実施例３１
ラットTCH212遺伝子の部分配列の同定
実施例29で用いた２種のプライマーＤＮＡ、プライマーm212A1（配列番号：144）およびプライマーm212B1（配列番号：145）を用いて、ラット精巣Marathon-Ready cDNA（クロンテック社製）に対して、Advantage 2 DNA Polymerase（クロンテック社製）により、以下の条件(1)〜(3)でＰＣＲを行った。
(1)９５℃１分間
(2)９５℃３０秒間−６０℃３０秒間―６８℃３分間を３５サイクル
(3)６８℃３分間
得られた増幅産物をゲル電気泳動後、約0.8kbの断片を切り出し、QIAquick Gel Extraction Kit（キアゲン社製）を用いて精製し、プライマーm212A1（配列番号：144）およびプライマーm212B1（配列番号：145）およびBigDye Terminator Cycle Sequencing Kit（アプライドバイオシステムズ社製）を用いて反応を行い、PCR増幅産物の塩基配列をDNAシークエンサーABI PRISM 3100 DNAアナライザ（アプライドバイオシステムズ社製）を用いて決定した。その結果、配列番号：149で表される771個の塩基配列を有するラットTCH212遺伝子cDNAの部分配列を同定した。
【０１８８】
実施例３２
ラットTCH212遺伝子産物の組織分布の解析
配列番号：149で表される塩基配列から設計した、２種のプライマーDNA、プライマーr212TF（配列番号：150）およびプライマーr212TR（配列番号：151）と、TaqManプローブr212T1（配列番号：152）を用いて、実施例１７で調製したラット各組織のcDNAにおけるラットTCH212の発現量（コピー数）をTaqMan PCRにより測定した。同じcDNAについてTaqMan rodent GAPDH control reagents（アプライドバイオシステムズ社製）を用いてrodent glyceraldehide-3-phosphate dehydrogenase (GAPDH)の発現量（コピー数）も測定した。反応はTaqMan Universal PCR Master Mix（アプライドバイオシステムズ社製）を用いて、ABI PRISM 7900 sequence detection system（アプライドバイオシステムズ社製）にて最初50℃2分間、さらに95℃10分間おいた後で、95℃で15秒、60℃で1分を1反応サイクルとして40サイクル繰り返し、同時に検出を行った。
結果を図２５に示す。
ラットTCH212遺伝子産物（mRNA）は12週齢Wistarラットの各組織においては、全ての組織で発現が見られたが、中でも、肺、十二指腸、空回腸で若干の発現が見られ、大脳、小脳、前立腺、結腸、眼球で高い発現が見られた。
【０１８９】
実施例３３
ヒトTCH212発現ベクターの構築
ヒトTCH212（配列番号：42）発現ベクターを、以下の方法により作成した。
実施例7により得られたプラスミド10ngを鋳型として、プライマー212OF（配列番号：153）およびプライマー212OR（配列番号：154）を用いて、KOD DNA Polymerase（東洋紡社製）により以下の条件（1）〜（3）でＰＣＲを行った。5’末端側プライマー212OFおよび3’末端側プライマー212ORは、ベクターへのクローニングのために5’末端側にそれぞれBamH IサイトおよびNot Iサイトを付加するように設計した。
（1）94℃2分間
（2）94℃15秒間−60℃30秒間−68℃3.5分間を35サイクル
（3）68℃3分間
上記PCR反応液をゲル電気泳動後、主要バンドを精製した。これにより得られたPCR断片を、制限酵素BamH IおよびNot Iで、37℃で1時間保温することにより消化し、この反応液をゲル電気泳動後、精製した。これを、動物細胞発現ベクターであるpcDNA3.1(+)（インビトロジェン社製）のBamH IおよびNot Iサイトに、Takara ligation kit ver.2（タカラバイオ社製）を用いてライゲーションした。このライゲーション反応液を、コンピーテント細胞である大腸菌（Escherichia coli）JM109（タカラバイオ社製）に形質転換した。
これにより得られた複数のコロニーからプラスミドを調製し、約3.5kbpの断片の挿入が確認された2クローンについて、塩基配列をプライマーＤＮＡ〔プライマーBGH RV（配列番号：124）、プライマーＴ７（配列番号：8）、プライマーA２（配列番号：48）、プライマーＢ１（配列番号：49）、プライマーＢ２（配列番号：50）、プライマーＦ１（配列番号：51）、プライマーＦ２（配列番号：52）、プライマーＦ３（配列番号：53）、プライマーＦ４（配列番号：54）、プライマーＦ５（配列番号：55）、プライマーＲ１（配列番号：56）、プライマーＲ２（配列番号：57）、プライマーＲ３（配列番号：58）、プライマーＲ４（配列番号：59）〕、およびBigDye Terminator Cycle Sequencing Kit（アプライドバイオシステムズ社製）を用いて反応を行い、塩基配列をDNAシークエンサーABI PRISM 3100 DNAアナライザ（アプライドバイオシステムズ社製）を用いて決定した。その結果、配列番号：43と比較して、いずれも1塩基置換が見られた。すなわち、「クローン1」では配列番号：43の1185番目のCがAに変化し、「クローン2」では、2509番目のAがTに変化し、フレーム上ではいずれも終止コドンへの変化を伴っていた。
そこで、以下のような修正作業を行った。まず、開始コドンの上流に同一フレームの終止コドンを入れるため、上記「クローン2」のプラスミドDNAをNhe Iで切断し、平滑化処理後、ライゲーションにより再環化し、大腸菌JM109に形質転換した。得られた「修正クローン2」のプラスミドDNAをBstE IIおよびNot Iで切断し、2509番目の1塩基置換を有するDNA断片（約1.1kbp）を除去した。一方、「クローン1」のプラスミドDNAをBstE IIおよびNot Iで切断し、所定の配列であるDNA断片（約1.1kbp）を調製した。上記2種のDNA断片をライゲーションし、大腸菌JM109に形質転換した。形質転換後に寒天培地上で30℃で2日間培養し、2日目に現れたコロニーからプラスミドの抽出を行った。このクローンについて、上記と同様に塩基配列を決定し、配列番号：43に一致することを確認した。このプラスミドを有する形質転換体を、Escherichia coli JM109/pCDNA3.1(+)-NheBlunt-TCH212と命名した。
【０１９０】
実施例３４
マウスTCH200遺伝子の部分配列の同定
2種のプライマーDNA、プライマーm200A1（配列番号：156）およびプライマーm200B1（配列番号：157）を用いて、実施例15で調製したマウス皮膚cDNAに対して、Advantage 2 DNA Polymerase（クロンテック社製）により、以下の条件(1)〜(5)でPCRを行った。
(1)94℃3分間
(2)94℃5秒間−72℃1分間を5サイクル
(3)94℃5秒間−70℃1分間を5サイクル
(4)94℃5秒間−68℃1分間を25サイクル
(5)70℃10分間
得られた増幅産物をゲル電気泳動後、約1.1kbの断片を切り出し、QIAquick Gel Extraction Kit（キアゲン社製）を用いて精製した。これをm200A1（配列番号：156）およびプライマーm200B1（配列番号：157）を用いてBigDye Terminator Cycle Sequencing Kit（アプライドバイオシステムズ社製）を用いて反応を行い、PCR増幅産物の塩基配列をDNAシークエンサーABI PRISM 3100 DNAアナライザ（アプライドバイオシステムズ社製）を用いて決定した。ここで決定された配列から2種のプライマーDNA、m200A2（配列番号：158）およびプライマーm200B2（配列番号：159）を設計し、これを用いて、PCR増幅産物のさらなる塩基配列決定を行った。その結果、配列番号：155で表される1064個の塩基配列を有するマウスTCH200遺伝子cDNAの部分配列を同定した。
【０１９１】
実施例３５
マウスTCH200遺伝子産物の組織分布の解析
配列番号：155で表される塩基配列から設計したTaqManプローブm200T1（配列番号：160）と、実施例34で用いた、2種のプライマーDNA、プライマーm200A2（配列番号：158）およびプライマーm200B2（配列番号：159）を用いて、実施例15で調製したマウス各組織のcDNAにおけるマウスTCH200の発現量（コピー数）をTaqMan PCRにより測定した。同じcDNAについてTaqMan rodent GAPDH control reagents（アプライドバイオシステムズ社製）を用いてrodent glyceraldehide-3-phosphate dehydrogenase (GAPDH)の発現量（コピー数）も測定した。反応はTaqMan Universal PCR Master Mix（アプライドバイオシステムズ社製）を用いて、ABI PRISM 7900 sequence detection system（アプライドバイオシステムズ社製）にて最初50℃2分間、さらに95℃10分間おいた後で、95℃で15秒、60℃で1分を1反応サイクルとして40サイクル繰り返し、同時に検出を行った。
結果を図２６に示す。
マウスTCH200遺伝子産物（mRNA）は7週齢BALB/cマウスの各組織においては、大脳、延髄、脊髄、坐骨神経、十二指腸、盲腸、結腸、卵巣、子宮で若干の発現が見られ、前胃、空回腸、前立腺で高い発現が見られ、皮膚、直腸で特に高い発現が見られた。
【０１９２】
実施例３６
ヒトTCH200発現ベクターの構築
ヒトTCH200（配列番号：66）発現ベクターを、以下の方法により作製した。実施例１１により得られたプラスミドを鋳型として、プライマーTCH200F (配列番号：161)およびプライマーTCH200R（配列番号：162）を用いて、Pyrobest DNA Polymerase（タカラバイオ社製）により、以下の条件(1)−(5)でPCRを行った。5’末端側プライマーTCH200Fおよび3’末端側プライマーTCH200Rは、ベクターへのクローニングのために5’末端側にそれぞれKpnIサイト及びNotIサイトを付加するように設計した。
(1) 98℃5秒間
(2) 98℃5秒間−68℃290秒間を2サイクル
(3) 98℃5秒間−66℃290秒間を23サイクル
(4) 98℃5秒間−64℃290秒間を3サイクル
(5) 72℃7分間
上記ＰＣＲ反応液を1％アガロースゲル電気泳動後、主要バンドを精製した。これにより得られたPCR断片を、制限酵素、KpnI及びNotIを用いて、37℃で1時間保温することにより消化し、この反応液を1%アガロースゲル電気泳動後、精製した。これを、動物細胞発現ベクターであるpcDNA3.1(+)（インビトロジェン社製）のKpnIサイト及びNotIサイトに、Takara ligation kit ver.2（タカラバイオ社製）を用いてライゲーションした。このライゲーション反応液をコンピーテント細胞である大腸菌（Escherichia coli）JM109（タカラバイオ社製）にヒートショック法により形質転換した。これにより得られた複数のコロニーからプラスミドを調製し、この塩基配列をプライマーＤＮＡ〔プライマーT7（配列番号：163）、プライマーAF（配列番号：164）、プライマーBF（配列番号：165）、プライマーCF（配列番号：166）、プライマーDF（配列番号：167）、プライマーBGH RV（配列番号：168）、プライマーDR（配列番号：169）、プライマーCR（配列番号：170）、プライマーBR（配列番号：171）、プライマーAR（配列番号：172）〕、およびBigDye Terminator Cycle Sequencing Kit（アプライドバイオシステムズ社製）を用いて反応を行い、塩基配列をDNAシークエンサーABI PRISM 3100 DNAアナライザ（アプライドバイオシステムズ社製）を用いて確認した。このプラスミドを有する形質転換体を、Escherichia coli JM109/pCDNA3.1(+)/TCH200と命名した。
【０１９３】
実施例３７
ヒトTCH200発現CHO細胞株の作製および導入遺伝子発現量の測定
Escherichia coli JM109/pCDNA3.1(+)/TCH200を培養し、この大腸菌体からEndoFree Plasmid Maxi Kit（キアゲン社製）を用いてプラスミドDNAを調製した。このプラスミドDNAをNucleofector（アマクサ社製）およびCell Line Nucleofector Kit T（アマクサ社製）を用いて添付のプロトコールに従ってCHO-K1細胞に導入した。キットに添付されているsupplementを添加した常温のsolution T 100μlで1×106個のCHO-K1細胞を懸濁し、この懸濁液に2μgのプラスミドDNAを混合したのち、キュベットに入れ、NucleofetorのプログラムU-27を施行した。直ちに37℃に暖めておいた10％ウシ胎児血清（ICNバイオメディカルズ社製）を含むRPMI1640培地（日研生物医学研究所社製）を500μl加え、さらに10％ウシ胎児血清を含むHam's F12培地（日研生物医学研究所社製）を1ml入れて、37℃に暖めておいた6 well plateに滴下し培養を行なった。3日後に0.4mg/mlのジェネティシン（インビトロジェン社製）を含む培地に交換し、ヒトTCH200発現細胞の選択を開始した。選択を開始してから4日後に、トランスフェクションした細胞を剥がし、回収した細胞を1wellあたり100個で、24 well plateに10％ウシ胎児血清を含むFBS-Ham's F12培地で播いた。4日後、各wellに生育したコロニー数とコロニー1個当たりのおよその細胞数を計測することにより、１well当たりの細胞数を算出し、この数値を元に96 well plate に1wellあたり1個となるように細胞を播き、ヒトTCH200発現細胞のモノクローン化を行った。
増殖したヒトTCH200発現モノクローン細胞からRNeasy 96 Kit（キアゲン社製）を用いてtotal RNAを調製した。調製したtotal RNA に対してTaqMan Reverse Transcription Reagents（アプライドバイオシステムズ社製）を用いて逆転写反応を行いcDNAを調製した。これについて、実施例１２で用いたプライマーTMF（配列番号：94）およびプライマーTMR（配列番号：95）と、TaqManプローブP1（配列番号：96）とを用いて、ヒトTCH200の発現量をTaqMan PCRにより測定した。
反応はTaqMan Universal PCR Master Mix（アプライドバイオシステムズ社製）を用いて、ABI PRISM 7900 sequence detection system（アプライドバイオシステムズ社製）にて、最初50℃2分間、さらに95℃10分間おいた後で、95℃で15秒、60℃で1分を1反応サイクルとして40サイクル繰り返し、同時に検出を行った。ヒトTCH200遺伝子高発現細胞株として、クローンNo.G10を選択した。
【０１９４】
実施例３８
ヒトTCH230、ヒトTCH234、ヒトTCH212およびヒトTCH200遺伝子の市販正常ヒト細胞における発現解析
（１）正常ヒト細胞cDNAの調製
正常ヒト細胞はCambrex BioScience Walkersvill社製品を購入し、製品添付の使用説明書記載の方法に従って培養した。実験に使用した細胞と各々の細胞の培養に用いた培地を表３に示す。
【表３】
2010051322.tif 000004
各細胞を75cm2培養フラスコにサブコンフルエントになるよう培養して、トリプシン-EDTA処理により細胞を回収した。回収した細胞から、ISOGEN（ニッポンジーン社製）、またはRNeasy Mini Kit（キアゲン社製）を用いてtotal RNAを調製した（いずれの場合もDNase処理により混入DNAを除去した）。調製したtotal RNA に対してTaqMan Reverse Transcription Reagents（アプライドバイオシステムズ社製）を用いて逆転写反応を行いcDNAを調製した。
（２）ヒトTCH230、ヒトTCH234、ヒトTCH212およびヒトTCH200遺伝子の市販正常ヒト細胞における発現解析
上記の各cDNAにおける発現量（Ct値）をTaqMan PCRにより以下のように測定した。ヒトTCH230については、実施例２で用いられたプライマーTF（配列番号：15）およびプライマーTR（配列番号：16）と、TaqManプローブＴ1（配列番号：17）とを用い、ヒトTCH234については、実施例6で用いた、プライマーTMF（配列番号：32）およびプライマーTMR（配列番号：33）と、TaqManプローブP1（配列番号：38）とを用い、ヒトTCH212については、実施例8で用いた、プライマーTF（配列番号：63）およびプライマーTR（配列番号：64）と、TaqManプローブＴ1（配列番号：65）とを用い、ヒトTCH200については実施例12で用いたプライマーTMF(配列番号:94)およびプライマーTMR(配列番号:95) と、TaqManプローブP1（配列番号：96）とを用いた。同じcDNAについてTaqMan GAPDH control reagents（アプライドバイオシステムズ社製）を用いてglyceraldehide-3-phosphate dehydrogenase (GAPDH)の発現量（Ct値）も測定した。反応はTaqMan Universal PCR Master Mix（アプライドバイオシステムズ社製）を用いて、ABI PRISM 7900 sequence detection system（アプライドバイオシステムズ社製）にて最初50℃2分間、さらに95℃10分間おいた後で、95℃で15秒、60℃で1分を1反応サイクルとして40サイクル繰り返し、同時に検出を行った。
以上の方法で得た測定値をもとにして、各TCH遺伝子（ヒトTCH230、ヒトTCH234、ヒトTCH212およびヒトTCH200）のGAPDHに対する相対的発現量を次式に従って算出した。
相対的発現量＝１／２Ａ−Ｂ
上記式において、ＡはヒトTCH230遺伝子、ヒトTCH234遺伝子、ヒトTCH212遺伝子またはヒトTCH200遺伝子のCt値を、ＢはGAPDH遺伝子のCt値をそれぞれ表す。
ヒトTCH230遺伝子の結果を図２７に示す。
ヒトTCH230は大動脈血管内皮細胞、冠状動脈血管内皮細胞、大動脈平滑筋細胞、冠状動脈平滑筋細胞、子宮平滑筋細胞、乳腺上皮細胞、肺繊維芽細胞、腎臓近位尿細管上皮細胞、メサンギウム細胞、腎臓皮質上皮細胞、膝関節軟骨細胞および骨芽細胞で若干の発現が見られ、気管支上皮細胞（RA添加）および気管支上皮細胞（RA無添加）で強い発現が見られた。
ヒトTCH234遺伝子の結果を図２８に示す。
ヒトTCH234は大動脈血管内皮細胞、冠状動脈血管内皮細胞および腎臓近位尿細管上皮細胞で若干の発現が見られ、腎臓皮質上皮細胞で特に強い発現が見られた。
ヒトTCH200遺伝子の結果を図２９に示す。
ヒトTCH200は大動脈血管内皮細胞、冠状動脈血管内皮細胞、大動脈平滑筋細胞、骨格筋衛星細胞および肺繊維芽細胞で若干の発現が見られ、腎臓皮質上皮細胞で強い発現が見られ、乳腺上皮細胞、気管支上皮細胞（RA添加）および気管支上皮細胞（RA無添加）で特に強い発現が見られた。
ヒトTCH212はいずれの細胞でも発現が見られなかった。
【０１９５】
実施例３９
慢性閉塞性肺疾患（COPD）モデルマウス肺におけるマウスTCH234およびマウスTCH212遺伝子産物の発現解析
(1)タバコ煙曝露によるCOPDモデルマウスの作製と肺cDNAの調製
COPDモデルは、C57BL/6Nマウス（6週齡、日本チャールスリバー社製）にKentucky Reference Cigarette 1R1から発生する主流煙を、1〜4時間/日、5日/週ずつ計6ヶ月間吸入させて作製した。すなわち、Kentucky Reference Cigarette 1R1をタバコ煙発生装置（SG-200、柴田科学社製）に装着し、35 ml/puff、10 puff/min、25 puff/cigaretteの条件で主流煙を採取した。得られた主流煙を空気で3％（V/V）に希釈した後に、マウスを入れたアクリル製の曝露チャンバーに送気し、自発呼吸下のマウスに所定の時間タバコ煙を吸入させた。なお、コントロール群には正常マウスを用いた。
最終曝露が終了した翌日にマウスをペントバルビタール麻酔により致死させ、気管支肺胞洗浄を施行した後に肺を摘出した。摘出肺は液体窒素中で凍結させ、凍結組織破砕装置で粉砕した後に、その湿重量の10倍量に相当するISOGEN（ニッポンジーン社製）に浸した。1ヶ月タバコ煙曝露群（n=10）、そのコントロール群（n=6）、3ヶ月タバコ煙曝露群（n=8）、そのコントロール群（n=8）、6ヶ月タバコ煙曝露群（n=8）、そのコントロール群（n=8）からISOGENを用いて、添付のマニュアルに従い、total RNAを抽出した。さらにQIAGEN RNeasy Mini kit（キアゲン社製）とRNase-Free DNase set（キアゲン社製）を用いて、混入DNAを除去した。調製したtotal RNA に対してTaqMan Reverse Transcription Reagents（アプライドバイオシステムズ社製）を用いて逆転写反応を行いcDNAを調製した。
【０１９６】
(2) COPDモデルマウス肺におけるマウスTCH234遺伝子産物の発現解析
実施例22で用いた、2種のプライマーDNA、プライマーm234-TMF（配列番号：128）およびプライマーm234-TMR（配列番号：129）と、TaqManプローブm234T1（配列番号：130）を用いて、上記(1)で調製したCOPDモデルマウス肺cDNAにおけるマウスTCH234の発現量（Ct値）をTaqMan PCRにより測定した。同じcDNAについて、Eukaryotic 18S rRNA Pre-Developed TaqMan Assay Reagents（アプライドバイオシステムズ社製）を用いて、18S rRNAの発現量（Ct値）も測定した。反応はTaqMan Universal PCR Master Mix（アプライドバイオシステムズ社製）を用いて、ABI PRISM 7900 sequence detection system（アプライドバイオシステムズ社製）にて最初50℃2分間、さらに95℃10分間おいた後で、95℃で15秒、60℃で1分を1反応サイクルとして40サイクル繰り返し、同時に検出を行った。
以上の方法で得た測定値をもとにして、マウスTCH234の18S rRNAに対する相対的発現量を次式に従って算出した。
相対的発現量＝１／２Ａ−Ｂ
上記式において、ＡはマウスTCH234遺伝子のCt値を、Ｂは18S rRNA遺伝子のCt値をそれぞれ表す。
統計解析にはSASソフトウェア（SAS社製）を用いて、Studentのt検定を行い、p<0.05を有意であるとした。
結果を図３０に示す。
マウスTCH234はCOPDモデルマウス肺で、1ヶ月、3ヶ月、6ヶ月の全てにおいて、タバコ煙曝露群で有意な発現増加が見られた（1ヶ月:p=0.0415、3ヶ月:p=0.0058、6ヶ月:p=0.0001）。このことから、TCH234はCOPDなどの呼吸器疾患に関与する可能性が考えられた。
【０１９７】
(3) COPDモデルマウス肺におけるマウスTCH212遺伝子産物の発現解析
実施例30で用いた、2種のプライマーDNA、プライマーm212TF（配列番号：146）およびプライマーm212TR（配列番号：147）と、TaqManプローブm212T1（配列番号：148）を用いて、上記(1)で調製したCOPDモデルマウス肺cDNAにおけるマウスTCH212の発現量（Ct値）をTaqMan PCRにより測定し、上記(2)と同様に18S rRNAに対する相対的発現量を算出した。統計解析は上記(2)と同様に行った。
結果を図31に示す。マウスTCH212はCOPDモデルマウス肺で、1ヶ月、3ヶ月、6ヶ月の全てにおいて、タバコ煙曝露群で有意な発現減少が見られた（1ヶ月:p=0.0014、3ヶ月:p=0.0004、6ヶ月:p=0.0001）。このことから、TCH212はCOPDなどの呼吸器疾患に関与する可能性が考えられた。
【０１９８】
実施例４０
大腸炎モデルマウス大腸におけるマウスTCH230遺伝子産物の発現解析
（１）DSS投与による大腸炎モデルマウスの作製と大腸cDNAの調製
大腸炎モデルマウスはBALB/cAマウス（オス、6週齢、日本クレア社製）にDSS（Dextran Sulfate Sodium 5000、和光純薬社製）を投与することで作製した。
すなわち、マウスに5％DSS溶液を自由飲水させて、下痢の症状が現れる2日目、および出血も合わせて認められるようになる7日目に、二酸化炭素ガス下に動物を屠殺し、大腸の一部（肛門輪から5cm）を摘出した。なお、コントロール群には正常マウスを用いた。摘出した大腸は、生理食塩水で洗浄後、3匹分をまとめて、ISOGEN（ニッポンジーン社製）を用いて、添付のマニュアルに従い、total RNAを抽出した。さらにQIAGEN RNeasy Mini kitとRNase-Free DNase set（キアゲン社製）を用いて、混入DNAを除去した。調製したtotal RNA に対してTaqMan Reverse Transcription Reagents（アプライドバイオシステムズ社製）を用いて逆転写反応を行いcDNAを調製した。
【０１９９】
（２）大腸炎モデルマウス大腸におけるマウスTCH230遺伝子産物の発現解析  実施例14で用いた、2種のプライマーDNA、プライマーm230TF（配列番号：113）およびプライマーm230TR（配列番号：114）と、TaqManプローブm230T1（配列番号：115）を用いて、上記(1)で調製した大腸炎モデルマウスの大腸のcDNAにおけるマウスTCH230の発現量（Ct値）をTaqMan PCRにより測定した。同じcDNAについて、Eukaryotic 18S rRNA Pre-Developed TaqMan Assay Reagents（アプライドバイオシステムズ社製）を用いて、18S rRNAの発現量（Ct値）も測定した。反応はTaqMan Universal PCR Master Mix（アプライドバイオシステムズ社製）を用いて、ABI PRISM 7900 sequence detection system（アプライドバイオシステムズ社製）にて最初50℃2分間、さらに95℃10分間おいた後で、95℃で15秒、60℃で1分を1反応サイクルとして40サイクル繰り返し、同時に検出を行った。
以上の方法で得た測定値をもとにして、マウスTCH230の18S rRNAに対する相対的発現量を次式に従って算出した。
相対的発現量＝１／２Ａ−Ｂ
上記式において、ＡはマウスTCH230遺伝子のCt値を、Ｂは18S rRNA遺伝子のCt値をそれぞれ表す。
結果を図３２に示す。
マウスTCH230は大腸炎モデルマウスの大腸で、2日目と7日目のいずれにおいても、DSS投与群で発現増加が見られた。このことから、TCH230は潰瘍性大腸炎、クローン病、虚血性大腸炎などの大腸炎に関与する可能性が考えられた。
【産業上の利用可能性】
【０２００】
本発明のタンパク質Ａ、それをコードするポリヌクレオチドおよびそれに対する抗体、アンチセンスポリヌクレオチドなどは、例えば高脂血症、生殖器疾患（例、前立腺肥大症、前立腺炎、精巣神経症、卵巣嚢腫など）、消化器疾患（例、過敏性腸症候群、潰瘍性大腸炎、クローン病、虚血性大腸炎、胃炎、消化性潰瘍、直腸炎、逆流性食道炎、十二指腸炎など）、呼吸器疾患（例、慢性閉塞性肺疾患、気管支喘息など）、自己免疫疾患（例、重症筋無力症、糸球体腎炎、多発性硬化症、シェーグレン症候群、全身性エリテマトーデスなど）、アレルギー性疾患（例、花粉症、アレルギー性鼻炎、アナフィラキシーショック、アトピー性皮膚炎など）、リウマチ性疾患（例、慢性関節リウマチ、変形関節症、痛風など）、胸腺疾患、免疫不全（例、白血球異常、脾機能不全または胸腺異常にともなう免疫不全など）、糖尿病、甲状腺機能低下、循環器疾患（例、心不全、不整脈、ＱＴ延長症候群、動脈硬化、狭心症など）、膵臓疾患（例、膵炎、膵嚢胞性線維症などの膵機能不全など）、癌（例、精巣腫瘍、卵巣癌、乳癌、食道癌、肺癌、腎臓癌、肝臓癌、非小細胞肺癌、前立腺癌、胃癌、膀胱癌、子宮頸部癌、結腸癌、直腸癌、膵臓癌、胸腺腫、筋肉腫など）など、好ましくは、高脂血症、動脈硬化、生殖器疾患、消化器疾患などの診断マーカー等として有用である。本発明のタンパク質Ａ、それをコードするポリヌクレオチドおよび抗体などは、該タンパク質の活性を促進または阻害する化合物、該タンパク質遺伝子の発現を促進または阻害する化合物、該タンパク質の発現を促進または阻害する化合物またはその塩のスクリーニングなどに有用である。該タンパク質の活性を促進または阻害する化合物、該タンパク質遺伝子の発現を促進または阻害する化合物またはその塩などは、例えば、高脂血症、生殖器疾患（例、前立腺肥大症、前立腺炎、精巣神経症、卵巣嚢腫など）、消化器疾患（例、過敏性腸症候群、潰瘍性大腸炎、クローン病、虚血性大腸炎、胃炎、消化性潰瘍、直腸炎、逆流性食道炎、十二指腸炎など）、呼吸器疾患（例、慢性閉塞性肺疾患、気管支喘息など）、自己免疫疾患（例、重症筋無力症、糸球体腎炎、多発性硬化症、シェーグレン症候群、全身性エリテマトーデスなど）、アレルギー性疾患（例、花粉症、アレルギー性鼻炎、アナフィラキシーショック、アトピー性皮膚炎など）、リウマチ性疾患（例、慢性関節リウマチ、変形関節症、痛風など）、胸腺疾患、免疫不全（例、白血球異常、脾機能不全または胸腺異常にともなう免疫不全など）、糖尿病、甲状腺機能低下、循環器疾患（例、心不全、不整脈、ＱＴ延長症候群、動脈硬化、狭心症など）、膵臓疾患（例、膵炎、膵嚢胞性線維症などの膵機能不全など）、癌（例、精巣腫瘍、卵巣癌、乳癌、食道癌、肺癌、腎臓癌、肝臓癌、非小細胞肺癌、前立腺癌、胃癌、膀胱癌、子宮頸部癌、結腸癌、直腸癌、膵臓癌、胸腺腫、筋肉腫など）など、好ましくは、高脂血症、動脈硬化、生殖器疾患、消化器疾患などの予防・治療剤などとして使用することができる。
本発明のタンパク質Ｂ、それをコードするポリヌクレオチドおよびそれに対する抗体、アンチセンスポリヌクレオチドなどは、例えば腎疾患（例、腎不全、尿毒症など）、消化器疾患（例、過敏性腸症候群、潰瘍性大腸炎、クローン病、虚血性大腸炎、胃炎、消化性潰瘍、直腸炎、逆流性食道炎、十二指腸炎など）、呼吸器疾患（例、慢性閉塞性肺疾患、喘息など）、膵臓疾患（例、膵炎、膵嚢胞性線維症などの膵機能不全など）、自己免疫疾患（例、重症筋無力症、糸球体腎炎、多発性硬化症、シェーグレン症候群、全身性エリテマトーデスなど）、アレルギー性疾患（例、花粉症、アレルギー性鼻炎、アナフィラキシーショック、アトピー性皮膚炎など）、リウマチ性疾患（例、慢性関節リウマチ、変形関節症、痛風など）、胸腺疾患、免疫不全（例、白血球異常、脾機能不全または胸腺異常にともなう免疫不全など）、生殖器疾患（例、前立腺肥大症、前立腺炎、精巣神経症、卵巣嚢腫など）、脾臓疾患、癌（例、精巣腫瘍、卵巣癌、乳癌、食道癌、肺癌、腎臓癌、肝臓癌、非小細胞肺癌、前立腺癌、胃癌、膀胱癌、子宮頸部癌、結腸癌、直腸癌、膵臓癌、胸腺腫、筋肉腫など）、糖尿病、高血圧、虚血後再灌流障害、中枢神経系疾患（例、アルツハイマー病、パーキンソン症候群、統合失調症、脳血管性痴呆、脳虚血、てんかんなど）など、好ましくは、呼吸器疾患、腎疾患、消化器疾患などの診断マーカー等として有用である。本発明のタンパク質Ｂ、それをコードするポリヌクレオチドおよび抗体などは、該タンパク質の活性を促進または阻害する化合物、該タンパク質遺伝子の発現を促進または阻害する化合物、該タンパク質の発現を促進または阻害する化合物またはその塩のスクリーニングに有用である。該タンパク質の活性を促進または阻害する化合物、該タンパク質遺伝子の発現を促進または阻害する化合物、該タンパク質の発現を促進または阻害する化合物またはその塩などは、例えば、腎疾患（例、腎不全、尿毒症など）、消化器疾患（例、過敏性腸症候群、潰瘍性大腸炎、クローン病、虚血性大腸炎、胃炎、消化性潰瘍、直腸炎、逆流性食道炎、十二指腸炎など）、呼吸器疾患（例、慢性閉塞性肺疾患、喘息など）、膵臓疾患（例、膵炎、膵嚢胞性線維症などの膵機能不全など）、自己免疫疾患（例、重症筋無力症、糸球体腎炎、多発性硬化症、シェーグレン症候群、全身性エリテマトーデスなど）、アレルギー性疾患（例、花粉症、アレルギー性鼻炎、アナフィラキシーショック、アトピー性皮膚炎など）、リウマチ性疾患（例、慢性関節リウマチ、変形関節症、痛風など）、胸腺疾患、免疫不全（例、白血球異常、脾機能不全または胸腺異常にともなう免疫不全など）、生殖器疾患（例、前立腺肥大症、前立腺炎、精巣神経症、卵巣嚢腫など）、脾臓疾患、癌（例、精巣腫瘍、卵巣癌、乳癌、食道癌、肺癌、腎臓癌、肝臓癌、非小細胞肺癌、前立腺癌、胃癌、膀胱癌、子宮頸部癌、結腸癌、直腸癌、膵臓癌、胸腺腫、筋肉腫など）、糖尿病、高血圧、虚血後再灌流障害、中枢神経系疾患（例、アルツハイマー病、パーキンソン症候群、統合失調症、脳血管性痴呆、脳虚血、てんかんなど）など、好ましくは、呼吸器疾患、腎疾患、消化器疾患などの予防・治療剤などとして使用することができる。
本発明のタンパク質Ｃ、それをコードするポリヌクレオチドおよびそれに対する抗体、アンチセンスポリヌクレオチドなどは、例えば膵臓疾患（例、膵炎、膵嚢胞性線維症などの膵機能不全など）、生殖器疾患（例、前立腺肥大症、前立腺炎、精巣神経症、卵巣嚢腫など）、中枢神経系疾患（例、アルツハイマー病、パーキンソン症候群、統合失調症、脳血管性痴呆、脳虚血、てんかんなど）、消化器疾患（例、過敏性腸症候群、潰瘍性大腸炎、クローン病、虚血性大腸炎、胃炎、消化性潰瘍、直腸炎、逆流性食道炎、十二指腸炎など）、呼吸器疾患（例、慢性閉塞性肺疾患、喘息など）、糖尿病、高脂血症、胆汁うっ滞、または癌（例、精巣腫瘍、卵巣癌、乳癌、食道癌、肺癌、腎臓癌、肝臓癌、非小細胞肺癌、前立腺癌、胃癌、膀胱癌、子宮頸部癌、結腸癌、直腸癌、膵臓癌、胸腺腫、筋肉腫など）など、好ましくは、膵臓疾患、中枢神経系疾患、消化器疾患、呼吸器疾患などの診断マーカー等として有用である。本発明のタンパク質Ｃ、それをコードするポリヌクレオチドおよび抗体などは、該タンパク質の活性を促進または阻害する化合物、該タンパク質遺伝子の発現を促進または阻害する化合物、該タンパク質の発現を促進または阻害する化合物またはその塩のスクリーニングに有用である。該タンパク質の活性を促進または阻害する化合物、該タンパク質遺伝子の発現を促進または阻害する化合物、該タンパク質の発現を促進または阻害する化合物またはその塩などは、例えば、膵臓疾患（例、膵炎、膵嚢胞性線維症などの膵機能不全など）、生殖器疾患（例、前立腺肥大症、前立腺炎、精巣神経症、卵巣嚢腫など）、中枢神経系疾患（例、アルツハイマー病、パーキンソン症候群、統合失調症、脳血管性痴呆、脳虚血、てんかんなど）、消化器疾患（例、過敏性腸症候群、潰瘍性大腸炎、クローン病、虚血性大腸炎、胃炎、消化性潰瘍、直腸炎、逆流性食道炎、十二指腸炎など）、呼吸器疾患（例、慢性閉塞性肺疾患、喘息など）、糖尿病、高脂血症、胆汁うっ滞、または癌（例、精巣腫瘍、卵巣癌、乳癌、食道癌、肺癌、腎臓癌、肝臓癌、非小細胞肺癌、前立腺癌、胃癌、膀胱癌、子宮頸部癌、結腸癌、直腸癌、膵臓癌、胸腺腫、筋肉腫など）など、好ましくは、膵臓疾患、中枢神経系疾患、消化器疾患、呼吸器疾患などの予防・治療剤などとして使用することができる。
本発明のタンパク質Ｄ、それをコードするポリヌクレオチドおよびそれに対する抗体、アンチセンスポリヌクレオチドなどは、例えば、炎症性疾患（例、敗血症、肺炎、脳炎、髄膜炎、肝炎、心筋炎、胸膜炎など）、自己免疫疾患（例、重症筋無力症、糸球体腎炎、多発性硬化症、シェーグレン症候群、全身性エリテマトーデスなど）、アレルギー性疾患（例、花粉症、アレルギー性鼻炎、アナフィラキシーショック、アトピー性皮膚炎など）、リウマチ性疾患（例、慢性関節リウマチ、変形関節症、痛風など）、糖尿病性神経症、胸腺疾患、免疫不全（例、白血球異常、脾機能不全または胸腺異常にともなう免疫不全など）、消化器疾患（例、過敏性腸症候群、潰瘍性大腸炎、クローン病、虚血性大腸炎、胃炎、消化性潰瘍、直腸炎、逆流性食道炎、十二指腸炎など）、呼吸器疾患（例、慢性閉塞性肺疾患、喘息など）、循環器疾患（例、心不全、不整脈、ＱＴ延長症候群、動脈硬化、狭心症など）、肝臓疾患(例、肝硬変など)、腎疾患（例、腎不全、尿毒症など）、筋肉疾患（例、筋萎縮症など）、膵臓疾患（例、膵炎、膵嚢胞性線維症などの膵機能不全など）、生殖器疾患（例、前立腺肥大症、前立腺炎、精巣神経症、卵巣嚢腫など）、熱傷、疼痛症候群（例、癌性疼痛、関連痛など）、癌（例、精巣腫瘍、卵巣癌、乳癌、食道癌、肺癌、腎臓癌、肝臓癌、非小細胞肺癌、前立腺癌、胃癌、膀胱癌、子宮頸部癌、結腸癌、直腸癌、膵臓癌、胸腺腫、筋肉腫など）など、好ましくは、炎症性疾患、リウマチ性疾患、糖尿病性神経症などの診断マーカー等として有用である。本発明のタンパク質Ｄ、それをコードするポリヌクレオチドおよび抗体などは、該タンパク質の活性を促進または阻害する化合物、該タンパク質遺伝子の発現を促進または阻害する化合物、該タンパク質の発現を促進または阻害する化合物、該タンパク質とそのリガンドとの結合性を変化させる化合物またはその塩のスクリーニングに有用である。該タンパク質の活性を促進または阻害する化合物、該タンパク質遺伝子の発現を促進または阻害する化合物、該タンパク質の発現を促進または阻害する化合物、該タンパク質とそのリガンドとの結合性を変化させる化合物またはその塩などは、例えば、炎症性疾患（例、敗血症、肺炎、脳炎、髄膜炎、肝炎、心筋炎、胸膜炎など）、自己免疫疾患（例、重症筋無力症、糸球体腎炎、多発性硬化症、シェーグレン症候群、全身性エリテマトーデスなど）、アレルギー性疾患（例、花粉症、アレルギー性鼻炎、アナフィラキシーショック、アトピー性皮膚炎など）、リウマチ性疾患（例、慢性関節リウマチ、変形関節症、痛風など）、糖尿病性神経症、胸腺疾患、免疫不全（例、白血球異常、脾機能不全または胸腺異常にともなう免疫不全など）、消化器疾患（例、過敏性腸症候群、潰瘍性大腸炎、クローン病、虚血性大腸炎、胃炎、消化性潰瘍、直腸炎、逆流性食道炎、十二指腸炎など）、呼吸器疾患（例、慢性閉塞性肺疾患、喘息など）、循環器疾患（例、心不全、不整脈、ＱＴ延長症候群、動脈硬化、狭心症など）、肝臓疾患(例、肝硬変など)、腎疾患（例、腎不全、尿毒症など）、筋肉疾患（例、筋萎縮症など）、膵臓疾患（例、膵炎、膵嚢胞性線維症などの膵機能不全など）、生殖器疾患（例、前立腺肥大��、前立腺炎、精巣神経症、卵巣嚢腫など）、熱傷、疼痛症候群（例、癌性疼痛、関連痛など）、癌（例、精巣腫瘍、卵巣癌、乳癌、食道癌、肺癌、腎臓癌、肝臓癌、非小細胞肺癌、前立腺癌、胃癌、膀胱癌、子宮頸部癌、結腸癌、直腸癌、膵臓癌、胸腺腫、筋肉腫など）など、好ましくは、炎症性疾患、リウマチ性疾患、糖尿病性神経症などの予防・治療剤などとして使用することができる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
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【図３１】
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【図３２】
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【図３３】
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【配列表】
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