(57)【要約】      （修正有）【課題】種子全般について広範な病原菌による発病率を従来よりも低減することができる種子の消毒方法を提供する。【解決手段】種子を温水と冷水に交互に浸漬させて消毒する種子の消毒方法に関する。種子を少なくとも２回以上温水に浸漬させる。温水の温度が４０〜７５℃であると共に、冷水の温度が０〜３０℃であること、温水に浸漬させる時間が１〜３０分であると共に、冷水に浸漬させる時間が１〜１０分であることを特徴とする。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
種子を温水と冷水に交互に浸漬させて消毒する種子の消毒方法において、種子を少なくとも２回以上温水に浸漬させることを特徴とする種子の消毒方法。
【請求項２】
温水の温度が４０〜７５℃であると共に、冷水の温度が０〜３０℃であることを特徴とする請求項１に記載の種子の消毒方法。
【請求項３】
温水に浸漬させる時間が１〜３０分であると共に、冷水に浸漬させる時間が１〜１０分であることを特徴とする請求項１又は２に記載の種子の消毒方法。
【請求項４】
温水と冷水の両方又は一方に農薬と有機酸の両方又は一方が含有されていることを特徴とする請求項１乃至３のいずれか１項に記載の種子の消毒方法。
【請求項５】
請求項１乃至４のいずれか１項に記載の方法を使用して消毒されていることを特徴とする種子。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、野菜や果物等の種子を消毒する際に使用される種子の消毒方法、及びこの方法を使用して消毒された種子に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
果実汚斑細菌病は１９８９〜１９９５年にアメリカで大発生して甚大な被害をもたらした。そのため、病原細菌であるAcidvorax avenae subsp.citrulli（以下「Ａａｃ」という。）は、植物防疫法施行規則において栽培地検査を要する植物等として指定され、わが国への侵入を警戒している。しかし、１９９８年に山形県で初めて確認されて以来、スイカ産地において散発的に発生しており、２００５年にはメロンでも発生が確認され、本病害のさらなる侵入、定着が警戒されている（例えば、非特許文献１、２参照。）。Ａａｃは、ウリ科植物に広く感染して発病させることが知られており、わが国でも種子伝染による発生が問題となっていることから、種子消毒技術の確立が急務である。
【０００３】
これまで種子の消毒方法として、銅水和剤と有機酸の混合液浸漬処理や過酢酸溶液浸漬処理が開発されている（例えば、非特許文献３参照。）。しかし、この消毒方法はスイカ、メロン種子では有効であるものの、カボチャ種子など他の作物の種子では防除効果が低いものであった。特にカボチャ種子では乾熱滅菌法でも十分な防除効果を期待することができない。
【０００４】
また、オキシテトラサイクリン、オキシテトラサイクリン・ストレプトマイシン、オキシテトラサイクリン・ストレプトマイシン・銅水和剤等の抗生物質を用いた消毒方法も開発され（例えば、非特許文献４参照。）、Ａａｃに対して一定の成果を挙げているものの、なお改良の余地がある上に、その他の多くの病原菌に対しても有効であるか不明である。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】白川隆（２００５）施設と園芸１３１：３６−３９．
【非特許文献２】白川隆・菊池繁美・加藤智弘・我孫子和雄・川合昭（２０００）日植病報６６：２２３−２３１．
【非特許文献３】原一晃・氷上涼子・島津樹一・白川隆（２００６）関西病虫研報（４８）：５７−６０．
【非特許文献４】原一晃・白川隆・氷上涼子・島津樹一，「平成１９年度  日本植物病理学会大会  プログラム・講演要旨予稿集」，平成１９年３月１２日，ｐ．１６９
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は上記の点に鑑みてなされたものであり、種子全般について広範な病原菌による発病率を従来よりも低減することができる種子の消毒方法、及びこの方法を使用して消毒された種子を提供することを目的とするものである。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明の請求項１に係る種子の消毒方法は、種子を温水と冷水に交互に浸漬させて消毒する種子の消毒方法において、種子を少なくとも２回以上温水に浸漬させることを特徴とするものである。
【０００８】
請求項２に係る発明は、請求項１において、温水の温度が４０〜７５℃であると共に、冷水の温度が０〜３０℃であることを特徴とするものである。
【０００９】
請求項３に係る発明は、請求項１又は２において、温水に浸漬させる時間が１〜３０分であると共に、冷水に浸漬させる時間が１〜１０分であることを特徴とするものである。
【００１０】
請求項４に係る発明は、請求項１乃至３のいずれか１項において、温水と冷水の両方又は一方に農薬と有機酸の両方又は一方が含有されていることを特徴とするものである。
【００１１】
本発明の請求項５に係る種子は、請求項１乃至４のいずれか１項に記載の方法を使用して消毒されていることを特徴とするものである。
【発明の効果】
【００１２】
本発明の請求項１に係る種子の消毒方法によれば、種子全般について広範な病原菌による発病率を従来よりも低減することができるものである。
【００１３】
請求項２に係る発明によれば、発病率をさらに低減することができるものである。
【００１４】
請求項３に係る発明によれば、発病率をさらに低減することができるものである。
【００１５】
請求項４に係る発明によれば、温水による加熱で病原菌に物理的損傷を与えるほか、温水と冷水の両方又は一方を薬液とし、その農薬や有機酸で化学的に損傷を与えて病原菌を死滅させることによって、発病率をさらに低減することができるものである。
【００１６】
本発明の請求項５に係る種子によれば、広範な病原菌による発病率が従来よりも低減していることによって、安全性の高い作物を供給することができるものである。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】メロンつる割病菌小胞子懸濁液中の小胞子数（縦軸）と、メロンつる割病菌小胞子懸濁液を４７．５℃に保持している積算時間（横軸）との関係を示すグラフである。
【図２】キュウリ斑点細菌病細菌懸濁液中の細菌数（縦軸）と、キュウリ斑点細菌病細菌懸濁液を４５℃に保持している積算時間（横軸）との関係を示すグラフである。
【図３】アブラナ科黒腐病細菌懸濁液中の細菌数（縦軸）と、アブラナ科黒腐病細菌懸濁液を４５℃に保持している積算時間（横軸）との関係を示すグラフである。
【図４】ユウガオ褐斑細菌病細菌懸濁液中の細菌数（縦軸）と、ユウガオ褐斑細菌病細菌懸濁液を４２．５℃に保持している積算時間（横軸）との関係を示すグラフである。
【図５】トマトかいよう病細菌懸濁液中の細菌数（縦軸）と、トマトかいよう病細菌懸濁液を４５℃に保持している積算時間（横軸）との関係を示すグラフである。
【図６】果実汚斑細菌病菌（Ａａｃ）懸濁液中の細菌数（縦軸）と、Ａａｃ懸濁液を５０℃に保持している積算時間（横軸）との関係を示すグラフである。
【図７】消毒した人工汚染種子の発病率（縦軸）と、人工汚染種子を５０℃の温水に浸漬している積算時間（横軸）との関係を示すグラフである。
【図８】実施例３〜９及び比較例３〜９の防除価を示す棒グラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
以下、本発明の実施の形態を説明する。
【００１９】
本発明において消毒の対象となる種子としては、特に限定されるものではないが、例えば、スイカ、メロン、キュウリ、カボチャ、ユウガオ、トウガン等のウリ科野菜、トマト、ピーマン、ナス等のナス科野菜、ダイコン、ハクサイ、キャベツ等のアブラナ科野菜、ホウレンソウ等のアガサ科野菜、イネ、コムギ、オオムギ等の作物の種子を挙げることができる。さらに、もやし、アルファルファ、カイワレダイコン等のめもの野菜種子等も挙げることができる。
【００２０】
また本発明により死滅させることのできる病原菌としては、特に限定されるものではないが、例えば、糸状菌、細菌、ウイルス等を挙げることができ、センチュウ等も本発明により死滅させることができる。このうち糸状菌としては、例えば、つる割病菌、萎凋病菌、黒斑病菌、炭疽病菌、いもち病菌、こま葉枯病菌、ばか苗病菌、なまぐさ黒穂病菌、裸黒穂病菌、斑葉病菌等を挙げることができる。また細菌としては、例えば、果実汚斑細菌病菌（Ａａｃ）、かいよう病菌、斑点細菌病菌、黒腐病菌、褐斑細菌病菌、もみ枯細菌病菌等を挙げることができる。
【００２１】
そして、本発明に係る種子の消毒方法は、上記のような病原菌で汚染された種子を温水（蒸留水等の水を所定温度に加熱したもの）と冷水（蒸留水等の水を所定温度に冷却したもの）に交互に浸漬させて消毒するものであるが、特に種子を少なくとも２回以上温水に浸漬させるものである。例えば、温水→冷水→温水の順に種子を浸漬させるものであり、これが最も基本的な消毒方法であるが、「温水→冷水→温水」の部分が含まれている限り、最初及び最後の浸漬は、温水への浸漬又は冷水への浸漬のいずれであってもよい。最後の浸漬が終了した種子は、風乾した後、０〜２０℃で保存するのが好ましいが、この保存温度に限定されるものではない。
【００２２】
従来、種子消毒の物理的方法として、温湯浸漬法や冷水温湯浸漬法が知られているが、これらの方法はいずれも種子を温水に一度だけ浸漬させるというものである。しかし、温水への一度だけの浸漬では、より広範な病原菌を完全には死滅させることができず、発病率を十分に低減することができない。そこで、種子を温水に長時間浸漬させることも考えられるが、連続して浸漬させる時間が長くなると、却って病原菌が周囲の環境に適応して耐熱性を持つようになったり、種子そのものが長時間の連続した加熱で傷んだりするおそれがある。これに対して、本発明では種子を少なくとも２回以上温水に浸漬させるようにしているので、広範な病原菌を完全に死滅させることができ、発病率を従来よりも低減し、発芽率を向上させることができるものである。また、本発明では種子を温水に連続して長時間浸漬させるのではなく、種子を温水と冷水に交互に短時間ずつ浸漬させるようにしているので、種子が置かれている環境をこのように頻繁に変えることによって、種子を汚染する広範な病原菌に対してストレスを与え、耐熱性など環境に適応する能力をこれらの病原菌に獲得させないようにすることができると共に、種子そのものが傷むのを防止することができるものである。さらに、本発明では種子を少なくとも２回以上温水に浸漬させる以外に特に煩雑な処理を必要としないので、広範な病原菌で汚染された種子全般について本発明に係る種子の消毒方法を適用することができるものである。なお、温水に浸漬させる回数は、後述する温水の温度及び浸漬時間により異なるが、その上限は例えば２０回程度である。
【００２３】
ここで、温水の温度は４０〜７５℃であることが好ましく、冷水の温度は０〜３０℃であることが好ましい。このように、温水及び冷水の温度を設定することによって、発病率をさらに低減することができるものである。しかし、温水温度が４０℃より低いと、耐熱性の低い病原菌は死滅させることができても、耐熱性の高い病原菌は完全には死滅しないで残存するおそれがある。逆に温水温度が７５℃より高いと、広範な病原菌を完全に死滅させることができても、種子そのものが熱による損傷を受けて発芽しなくなるおそれがある。また冷水温度が０℃より低いと、発芽障害が発生するおそれがある。逆に冷水温度が３０℃より高いと、温水との温度差が小さくなって、種子を温水に連続して長時間浸漬させるのと変わらなくなるおそれがある。
【００２４】
また、温水に浸漬させる時間は１〜３０分であることが好ましく、冷水に浸漬させる時間は１〜１０分であることが好ましい。このように、温水及び冷水に浸漬させる時間を設定することによって、発病率をさらに低減することができるものである。しかし、温水浸漬時間が１分より短いと、種子を温水の温度まで加熱することができなかったり、温水浸漬回数が増加したりするおそれがある。逆に温水浸漬時間が３０分より長いと、広範な病原菌を完全に死滅させることができても、種子そのものが熱による損傷を受けて発芽しなくなるおそれがある。また冷水浸漬時間が１分より短いと、種子を冷水の温度まで冷却することができず、種子を温水に連続して長時間浸漬させるのと変わらなくなるおそれがある。逆に冷水浸漬時間が１０分より長いと、種子消毒に要する全体の時間が長くなるおそれがある。
【００２５】
また、温水と冷水の両方又は一方に薬剤として農薬と有機酸の両方又は一方が含有されているのが好ましい。このように、温水による加熱で病原菌に物理的損傷を与えるほか、温水と冷水の両方又は一方を薬液とし、その農薬や有機酸で化学的に損傷を与えて病原菌を死滅させることによって、発病率をさらに低減することができるものである。特に、薬液が複数の農薬や有機酸を用いて調製されていると、これらの相乗効果により発病率をさらに低減することができるものである。
【００２６】
ここで、農薬としては、例えば、銅水和剤等を用いることができる。銅水和剤を用いる場合、その水による希釈倍数は５０〜２０００倍であることが好ましい。このように、銅水和剤が温水や冷水に含有されていることによって、発病率をさらに低減することができるものである。しかし、銅水和剤の希釈倍数が２０００倍より大きいと、銅水和剤による発病率低減の効果を十分に得ることができないおそれがあり、逆に銅水和剤の希釈倍数が５０倍より小さいと、発芽障害が発生するおそれがあると共に、消毒の際の薬剤のコストが増加するおそれがある。
【００２７】
他方、有機酸としては、例えば、アスコルビン酸、酢酸、過酢酸、リンゴ酸、乳酸等を用いることができる。アスコルビン酸を用いる場合、その含有量は０．０１〜０．５Ｍであることが好ましい。このように、アスコルビン酸が温水や冷水に含有されていることによって、発病率をさらに低減することができるものである。しかし、アスコルビン酸の含有量が０．０１Ｍより少ないと、アスコルビン酸による発病率低減の効果を十分に得ることができないおそれがあり、逆にアスコルビン酸の含有量が０．５Ｍより多いと、発芽障害が発生するおそれがあると共に、消毒の際の薬剤のコストが増加するおそれがある。また、酢酸を用いる場合、その含有量は０．０１〜０．５Ｍであることが好ましい。このように、酢酸が温水や冷水に含有されていることによって、発病率をさらに低減することができるものである。しかし、酢酸の含有量が０．０１Ｍより少ないと、酢酸による発病率低減の効果を十分に得ることができないおそれがあり、逆に酢酸の含有量が０．５Ｍより多いと、発芽障害が発生するおそれがあると共に、消毒の際の薬剤のコストが増加するおそれがある。また、過酢酸を用いる場合、その含有量は８００〜３２００μｇ／ｍｌであることが好ましい。このように、過酢酸が温水や冷水に含有されていることによって、発病率をさらに低減することができるものである。しかし、過酢酸の含有量が８００μｇ／ｍｌより少ないと、過酢酸による発病率低減の効果を十分に得ることができないおそれがあり、逆に過酢酸の含有量が３２００μｇ／ｍｌより多いと、発芽障害が発生するおそれがあると共に、消毒の際の薬剤のコストが増加するおそれがある。
【００２８】
また、本発明では種子を温水と冷水に交互に浸漬させて消毒するものであるが、各浸漬時間が短時間であると、種子の表面部分の温度は短時間で温水又は冷水の温度に等しくすることができても、種子内部の温度は短時間では温水又は冷水の温度に等しくすることができないおそれがある。そこで、最初に温水又は冷水に種子を浸漬させる前に、５〜３５℃に設定した蒸留水等の水又は５〜３５℃に設定した既述の薬液に種子を１０〜１２０分間浸漬させておくのが好ましい。このように、水又は薬液を用いて種子に対して前処理を行うと、種子内部まで水又は薬液が浸透して熱が伝わりやすくなり、種子内部の温度を短時間で温水又は冷水の温度に等しくすることができるものである。そして特に薬液を用いた前処理の場合、上記効果に加えて、種子表面及び内部に存在する病原菌をあらかじめ薬液により大部分死滅させておくことができるという効果も得ることができるものである。なお、前処理の浸漬時間が１０分より短いと、種子内部まで水又は薬液を浸透させることができないおそれがある。逆に前処理の浸漬時間が１２０分より長いと、種子の保存性に悪影響を及ぼすおそれがある。
【００２９】
以上のように、本発明に係る種子の消毒方法を使用して消毒された種子にあっては、広範な病原菌による発病率が従来よりも低減していることによって、安全性の高い作物を供給することができるものである。
【００３０】
なお、本発明と技術分野は異なるが、食品分野における牛乳やビール等の消毒や、医療分野における血漿等の消毒に本発明を応用することができるものと考えられる。
【実施例】
【００３１】
以下、本発明を実施例によって具体的に説明する。
【００３２】
［メロンつる割病菌小胞子懸濁液の消毒］
メロンつる割病菌レース１．２ｙ（Me102065）をフラスコ中のＰＳ培地において４日間振盪培養した。次にこれをガーゼでろ過した後３５００ｒｐｍで２０分間遠心分離した。そして上清を捨てて、燐酸緩衝液に懸濁した後、トーマ血球計算盤を用いて小胞子数を計測し、その小胞子数が１０６ｃｆｕ／ｍＬとなるようにさらに燐酸緩衝液を加えることによって、メロンつる割病菌小胞子懸濁液を調製した。
【００３３】
次に、上記のようにして調製したメロンつる割病菌小胞子懸濁液を１００μＬ加えたＰＣＲ用マイクロチューブをＤＮＡ増幅装置（バイオ・ラッド  ラボラトリーズ（株）製）に装着し、下記第１〜第３の方法で消毒した。なお、ＤＮＡ増幅装置は、温度制御のために用いたのであって、ＤＮＡ増幅のために用いたのではない。以下も同様である。
【００３４】
第１の方法では、メロンつる割病菌小胞子懸濁液を４７．５℃で１０分間保持した後に４℃で２分間保持するという処理を１サイクルとして６回繰り返し行った。
【００３５】
また、第２の方法では、メロンつる割病菌小胞子懸濁液を４７．５℃で５分間保持した後に４℃で２分間保持するという処理を１サイクルとして１２回繰り返し行った。
【００３６】
さらに、第３の方法では、メロンつる割病菌小胞子懸濁液を４７．５℃で６０分間保持した。
【００３７】
そして、上記第１〜第３の方法において、各メロンつる割病菌小胞子懸濁液中の生存している小胞子数をＰＳＡ培地を用いた平板希釈法により測定した。その結果を図１に示す。なお、図１のグラフの横軸は、メロンつる割病菌小胞子懸濁液を４７．５℃に保持している積算時間である。
【００３８】
図１に示すように、メロンつる割病菌小胞子懸濁液を４７．５℃に保持している積算時間が６０分に達した時点において、第３の方法に比べて、第１、第２の方法では、小胞子数が著しく減少していることが確認された。しかも、第２の方法では、メロンつる割病菌小胞子懸濁液を４７．５℃に保持している積算時間が４０分に達した時点において、メロンつる割病菌小胞子が完全に死滅していることが確認された。
【００３９】
［キュウリ斑点細菌病細菌懸濁液の消毒］
キュウリ斑点細菌病細菌（MAFF730011）をバイアル中のＹＰ培地において２５℃で２４時間撹拌培養した。次にこれを３５００ｒｐｍで２０分間遠心分離した後、上清を捨てて、ＹＰ培地の２０倍量の燐酸緩衝液に懸濁させることによって、キュウリ斑点細菌病細菌懸濁液を調製した。
【００４０】
次に、上記のようにして調製したキュウリ斑点細菌病細菌懸濁液を１００μＬ加えたＰＣＲ用マイクロチューブをＤＮＡ増幅装置（バイオ・ラッド  ラボラトリーズ（株）製）に装着し、下記第１〜第３の方法で消毒した。
【００４１】
第１の方法では、キュウリ斑点細菌病細菌懸濁液を４５℃で１０分間保持した後に２０℃で２分間保持するという処理を１サイクルとして４回繰り返し行った。
【００４２】
また、第２の方法では、キュウリ斑点細菌病細菌懸濁液を４５℃で５分間保持した後に２０℃で２分間保持するという処理を１サイクルとして８回繰り返し行った。
【００４３】
さらに、第３の方法では、キュウリ斑点細菌病細菌懸濁液を４５℃で４０分間保持した。
【００４４】
そして、上記第１〜第３の方法において、各キュウリ斑点細菌病細菌懸濁液中の生存している細菌数をＹＰＡ培地を用いた平板希釈法により測定した。その結果を図２に示す。なお、図２のグラフの横軸は、キュウリ斑点細菌病細菌懸濁液を４５℃に保持している積算時間である。
【００４５】
図２に示すように、キュウリ斑点細菌病細菌懸濁液を４５℃に保持している積算時間が４０分に達した時点において、第１、第２の方法では、キュウリ斑点細菌病細菌が完全に死滅しているのに対し、第３の方法では、キュウリ斑点細菌病細菌がなお残存していることが確認された。しかも、第２の方法では、キュウリ斑点細菌病細菌懸濁液を４５℃に保持している積算時間が３０分に達した時点において、細菌数が０となり、第１の方法の場合よりも早くキュウリ斑点細菌病細菌が完全に死滅したことが確認された。
【００４６】
［アブラナ科黒腐病細菌懸濁液の消毒］
アブラナ科黒腐病細菌（Xcc9501）をバイアル中のＹＰ培地において２５℃で２４時間撹拌培養した。次にこれを３５００ｒｐｍで２０分間遠心分離した後、上清を捨てて、ＹＰ培地の２０倍量の燐酸緩衝液に懸濁させることによって、アブラナ科黒腐病細菌懸濁液を調製した。
【００４７】
次に、上記のようにして調製したアブラナ科黒腐病細菌懸濁液を１００μＬ加えたＰＣＲ用マイクロチューブをＤＮＡ増幅装置（バイオ・ラッド  ラボラトリーズ（株）製）に装着し、下記第１〜第３の方法で消毒した。
【００４８】
第１の方法では、アブラナ科黒腐病細菌懸濁液を４５℃で１０分間保持した後に２０℃で２分間保持するという処理を１サイクルとして４回繰り返し行った。
【００４９】
また、第２の方法では、アブラナ科黒腐病細菌懸濁液を４５℃で５分間保持した後に２０℃で２分間保持するという処理を１サイクルとして８回繰り返し行った。
【００５０】
さらに、第３の方法では、アブラナ科黒腐病細菌懸濁液を４５℃で４０分間保持した。
【００５１】
そして、上記第１〜第３の方法において、各アブラナ科黒腐病細菌懸濁液中の生存している細菌数をＹＰＡ培地を用いた平板希釈法により測定した。その結果を図３に示す。なお、図３のグラフの横軸は、アブラナ科黒腐病細菌懸濁液を４５℃に保持している積算時間である。
【００５２】
図３に示すように、アブラナ科黒腐病細菌懸濁液を４５℃に保持している積算時間が４０分に達した時点において、第３の方法に比べて、第１、第２の方法では、細菌数が著しく減少していることが確認された。しかも、第２の方法では、アブラナ科黒腐病細菌懸濁液を４５℃に保持している積算時間が４０分に達した時点において、アブラナ科黒腐病細菌が完全に死滅していることが確認された。
【００５３】
［ユウガオ褐斑細菌病細菌懸濁液の消毒］
ユウガオ褐斑細菌病細菌（MAFF301081）をバイアル中のＹＰ培地において２５℃で２４時間撹拌培養した。次にこれを３５００ｒｐｍで２０分間遠心分離した後、上清を捨てて、ＹＰ培地の２０倍量の燐酸緩衝液に懸濁させることによって、ユウガオ褐斑細菌病細菌懸濁液を調製した。
【００５４】
次に、上記のようにして調製したユウガオ褐斑細菌病細菌懸濁液を１００μＬ加えたＰＣＲ用マイクロチューブをＤＮＡ増幅装置（バイオ・ラッド  ラボラトリーズ（株）製）に装着し、下記第１〜第３の方法で消毒した。
【００５５】
第１の方法では、ユウガオ褐斑細菌病細菌懸濁液を４２．５℃で１０分間保持した後に２０℃で２分間保持するという処理を１サイクルとして４回繰り返し行った。
【００５６】
また、第２の方法では、ユウガオ褐斑細菌病細菌懸濁液を４２．５℃で５分間保持した後に２０℃で２分間保持するという処理を１サイクルとして８回繰り返し行った。
【００５７】
さらに、第３の方法では、ユウガオ褐斑細菌病細菌懸濁液を４２．５℃で４０分間保持した。
【００５８】
そして、上記第１〜第３の方法において、各ユウガオ褐斑細菌病細菌懸濁液中の生存している細菌数をＹＰＡ培地を用いた平板希釈法により測定した。その結果を図４に示す。なお、図４のグラフの横軸は、ユウガオ褐斑細菌病細菌懸濁液を４２．５℃に保持している積算時間である。
【００５９】
図４に示すように、ユウガオ褐斑細菌病細菌懸濁液を４２．５℃に保持している積算時間が４０分に達した時点において、第３の方法に比べて、第１、第２の方法では、細菌数が著しく減少していることが確認された。しかも、第２の方法では、ユウガオ褐斑細菌病細菌懸濁液を４２．５℃に保持している積算時間が４０分に達した時点において、ユウガオ褐斑細菌病細菌が完全に死滅していることが確認された。
【００６０】
［トマトかいよう病細菌懸濁液の消毒］
トマトかいよう病細菌（MAFF730041）をバイアル中のＹＰ培地において２５℃で４８時間撹拌培養した。次にこれを３５００ｒｐｍで２０分間遠心分離した後、上清を捨てて、ＹＰ培地の２０倍量の燐酸緩衝液に懸濁させることによって、トマトかいよう病細菌懸濁液を調製した。
【００６１】
次に、上記のようにして調製したトマトかいよう病細菌懸濁液を１００μＬ加えたＰＣＲ用マイクロチューブをＤＮＡ増幅装置（バイオ・ラッド  ラボラトリーズ（株）製）に装着し、下記第１〜第３の方法で消毒した。
【００６２】
第１の方法では、トマトかいよう病細菌懸濁液を４５℃で１０分間保持した後に２０℃で２分間保持するという処理を１サイクルとして４回繰り返し行った。
【００６３】
また、第２の方法では、トマトかいよう病細菌懸濁液を４５℃で５分間保持した後に２０℃で２分間保持するという処理を１サイクルとして８回繰り返し行った。
【００６４】
さらに、第３の方法では、トマトかいよう病細菌懸濁液を４５℃で４０分間保持した。
【００６５】
そして、上記第１〜第３の方法において、各トマトかいよう病細菌懸濁液中の生存している細菌数を１Ｌ当たり５ｇのショ糖加用ＹＰＡ培地を用いた平板希釈法により測定した。その結果を図５に示す。なお、図５のグラフの横軸は、トマトかいよう病細菌懸濁液を４５℃に保持している積算時間である。
【００６６】
図５に示すように、トマトかいよう病細菌懸濁液を４５℃に保持している積算時間が４０分に達した時点において、第３の方法に比べて、第１、第２の方法では、細菌数が減少していることが確認された。
【００６７】
［果実汚斑細菌病菌（Ａａｃ）懸濁液の消毒］
Ａａｃ（スイカ分離菌株：Aac9801）をバイアル中のＹＰ培地において３６℃で２４時間撹拌培養した。次にこれを３５００ｒｐｍで２０分間遠心分離した後、上清を捨てて、燐酸緩衝液に懸濁した。そして、分光光度計を用いてこの懸濁液の波長６６０ｎｍにおける吸光度を測定した後、検量線を用いて菌密度が１０８ｃｆｕ／ｍＬとなるように燐酸緩衝液を加えることによって、Ａａｃ懸濁液を調製した。
【００６８】
次に、上記のようにして調製したＡａｃ懸濁液を１００μＬ加えたＰＣＲ用マイクロチューブをＤＮＡ増幅装置に装着し、下記第１〜第３の方法で消毒した。
【００６９】
すなわち、第１の方法では、Ａａｃ懸濁液を５０℃で１０分間保持した後に２０℃で２分間保持するという処理を１サイクルとして４回繰り返し行った。
【００７０】
また、第２の方法では、Ａａｃ懸濁液を５０℃で５分間保持した後に２０℃で２分間保持するという処理を１サイクルとして８回繰り返し行った。
【００７１】
さらに、第３の方法では、Ａａｃ懸濁液を５０℃で４０分間保持した。
【００７２】
そして、上記第１〜第３の方法において、Ａａｃ用選択培地ＡａｃＳＭ基礎培地を用いた平板希釈法により、各Ａａｃ懸濁液中の生存している細菌数を測定した。その結果を図６に示す。なお、図６のグラフの横軸は、Ａａｃ懸濁液を５０℃に保持している積算時間である。
【００７３】
図６に示すように、Ａａｃ懸濁液を５０℃に保持している積算時間が４０分に達した時点において、第１、第２の方法では、Ａａｃが完全に死滅しているのに対し、第３の方法では、Ａａｃがなお残存していることが確認された。
【００７４】
以上のように、メロンつる割病菌小胞子懸濁液、キュウリ斑点細菌病細菌懸濁液、アブラナ科黒腐病細菌懸濁液、ユウガオ褐斑細菌病細菌懸濁液、トマトかいよう病細菌懸濁液、Ａａｃ懸濁液は、高温と低温に交互に保持し、かつ少なくとも２回以上高温に保持すれば、消毒できることが確認されたので、これらの懸濁液に含まれる各種病原菌で汚染された種子も、同様に温水と冷水に交互に浸漬させ、かつ少なくとも２回以上温水に浸漬させれば、消毒できるものと考えられる。
【００７５】
［果実汚斑細菌病菌（Ａａｃ）で汚染されたカボチャ種子の消毒］
（人工汚染種子の作成）
Ａａｃを三角フラスコ中において３６℃で２４時間撹拌培養した。次にこれを３５００ｒｐｍで２０分間遠心分離した後、上清を捨てて、燐酸緩衝液に懸濁した。そして、分光光度計を用いてこの懸濁液の波長６６０ｎｍにおける吸光度を測定した後、検量線を用いて菌密度が１０８ｃｆｕ／ｍＬとなるように燐酸緩衝液を加えることによって、Ａａｃ懸濁液を２Ｌ調製した。
【００７６】
そして、上記のようにして調製したＡａｃ懸濁液にカボチャ‘アクア新土佐’３Ｌ（約６０００粒）を浸漬し、アスピレーターで３０分間減圧した後、風乾することによって、Ａａｃで汚染されたカボチャ種子を作成した。
【００７７】
（人工汚染種子の消毒１）
〈実施例１〉
まず２０℃に設定した蒸留水に人工汚染種子を６０分間浸漬させた。
【００７８】
次に、蒸留水を入れた１Ｌのビーカーを２つのウォーターバスにそれぞれ設置し、一方のビーカー中の蒸留水の温度は５０℃、他方のビーカー中の蒸留水の温度は１５℃に調整した。そして、上記のように前処理を行った人工汚染種子を５０℃の温水に１０分間浸漬させた後に１５℃の冷水に５分間浸漬させるという処理を１サイクルとして４回繰り返し行った後、風乾した。
【００７９】
〈実施例２〉
薬液として、銅水和剤（北興化学工業（株）製、塩基性塩化銅８４．１質量％及び鉱物質微粉等１５．９質量％からなる）を蒸留水で５００倍に希釈し、かつアルコルビン酸を０．５Ｍ含有するものを調製した。
【００８０】
そしてまず２０℃に設定した薬液に人工汚染種子を６０分間浸漬させた。
【００８１】
次に、温水及び冷水として、上記と同一組成の薬液を用いるようにした以外は、実施例１と同様の処理を１サイクルとして４回繰り返し行った後、風乾した。
【００８２】
〈比較例１〉
２０℃に設定した蒸留水に人工汚染種子を６０分間浸漬させた後に風乾した以外は消毒しないでそのまま後述の防除効果の検定に用いた。
【００８３】
〈比較例２〉
まず２０℃に設定した蒸留水に人工汚染種子を６０分間浸漬させた。
【００８４】
次に、上記のように前処理を行った人工汚染種子を５０℃の温水に連続して４０分間浸漬させた後、風乾した。
【００８５】
（防除効果の検定）
内径１４ｍｍ、長さ１００ｍｍの試験管に水を含んだミズゴケを詰め、実施例１、２及び比較例２の消毒した人工汚染種子を１粒ずつ播種した。これらの人工汚染種子が発芽した後、潅水し、２５−３５℃、１２時間の変温、１２時間日長の下に置き発病を促した。そして、１週間から１０日間置き、発病した個体について、ラテックス凝集法を用いて、Ａａｃによる発病であるか否かを調査し、発病率を求めた。その結果を表１及び図７に示す。
【００８６】
【表１】
2010200628.tif 000003
【００８７】
表１及び図７に示すように、人工汚染種子を５０℃の温水に浸漬している積算時間が４０分に達した時点において、実施例１、２では、発病率が０％となったのに対し、比較例２では、発病率が０％にはならなかったことが確認された。しかも、実施例２では、人工汚染種子を５０℃の温水に浸漬している積算時間が２０分に達した時点において、発病率が０％となり、実施例１の場合よりも早く発病率が０％となったことが確認された。
【００８８】
（人工汚染種子の消毒２）
〈比較例３〉
薬液として、銅水和剤（北興化学工業（株）製、塩基性塩化銅８４．１質量％及び鉱物質微粉等１５．９質量％からなる）を蒸留水で５００倍に希釈し、かつ酢酸を０．２Ｍ含有するものを調製した。
【００８９】
そしてまず２０℃に設定した薬液に人工汚染種子を６０分間浸漬させた。
【００９０】
その後、上記のように前処理を行った人工汚染種子を５５℃の薬液（前処理で用いたものと同一組成）に連続して４０分間浸漬させた後、風乾した。
【００９１】
〈比較例４〉
薬液として、蒸留水にアスコルビン酸を０．２Ｍ含有させたものを用いるようにした以外は、比較例３と同様の処理を行った。
【００９２】
〈比較例５〉
薬液として、蒸留水にアスコルビン酸を０．５Ｍ含有させたものを用いるようにした以外は、比較例３と同様の処理を行った。
【００９３】
〈比較例６〉
薬液として、銅水和剤（北興化学工業（株）製、塩基性塩化銅８４．１質量％及び鉱物質微粉等１５．９質量％からなる）を蒸留水で５００倍に希釈し、かつアスコルビン酸を０．２Ｍ含有するものを用いるようにした以外は、比較例３と同様の処理を行った。
【００９４】
〈比較例７〉
薬液として、銅水和剤（北興化学工業（株）製、塩基性塩化銅８４．１質量％及び鉱物質微粉等１５．９質量％からなる）を蒸留水で５００倍に希釈し、かつアスコルビン酸を０．５Ｍ含有するものを用いるようにした以外は、比較例３と同様の処理を行った。
【００９５】
〈比較例８〉
薬液として、蒸留水に過酢酸を１６００μｇ／ｍｌ含有させたものを用いるようにした以外は、比較例３と同様の処理を行った。
【００９６】
〈比較例９〉
２０℃に設定した蒸留水に人工汚染種子を６０分間浸漬させた後に風乾した以外は消毒しないでそのまま後述の防除効果の検定に用いた。
【００９７】
〈実施例３〉
薬液として、銅水和剤（北興化学工業（株）製、塩基性塩化銅８４．１質量％及び鉱物質微粉等１５．９質量％からなる）を蒸留水で５００倍に希釈し、かつ酢酸を０．２Ｍ含有するものを調製した。
【００９８】
そしてまず２０℃に設定した薬液に人工汚染種子を６０分間浸漬させた。
【００９９】
その後、上記と同一組成の薬液を入れた１Ｌのビーカーを２つのウォーターバスにそれぞれ設置し、一方のビーカー中の薬液の温度は５５℃、他方のビーカー中の薬液の温度は１５℃に調整した。そして、人工汚染種子を５５℃の薬液に１０分間浸漬させた後に１５℃の薬液に１０分間浸漬させるという処理を１サイクルとして４回繰り返し行った後、風乾した。
【０１００】
〈実施例４〉
薬液として、蒸留水にアスコルビン酸を０．２Ｍ含有させたものを用いるようにした以外は、実施例３と同様の処理を行った。
【０１０１】
〈実施例５〉
薬液として、蒸留水にアスコルビン酸を０．５Ｍ含有させたものを用いるようにした以外は、実施例３と同様の処理を行った。
【０１０２】
〈実施例６〉
薬液として、銅水和剤（北興化学工業（株）製、塩基性塩化銅８４．１質量％及び鉱物質微粉等１５．９質量％からなる）を蒸留水で５００倍に希釈し、かつアスコルビン酸を０．２Ｍ含有するものを用いるようにした以外は、実施例３と同様の処理を行った。
【０１０３】
〈実施例７〉
薬液として、銅水和剤（北興化学工業（株）製、塩基性塩化銅８４．１質量％及び鉱物質微粉等１５．９質量％からなる）を蒸留水で５００倍に希釈し、かつアスコルビン酸を０．５Ｍ含有するものを用いるようにした以外は、実施例３と同様の処理を行った。
【０１０４】
〈実施例８〉
薬液として、蒸留水に過酢酸を１６００μｇ／ｍｌ含有させたものを用いるようにした以外は、実施例３と同様の処理を行った。
【０１０５】
〈実施例９〉
まず２０℃に設定した蒸留水に人工汚染種子を６０分間浸漬させた。
【０１０６】
その後、蒸留水を入れた１Ｌのビーカーを２つのウォーターバスにそれぞれ設置し、一方のビーカー中の蒸留水の温度は５５℃、他方のビーカー中の蒸留水の温度は１５℃に調整した。そして、人工汚染種子を５５℃の蒸留水に１０分間浸漬させた後に１５℃の蒸留水に１０分間浸漬させるという処理を１サイクルとして４回繰り返し行った後、風乾した。
【０１０７】
（防除効果の検定）
内径１４ｍｍ、長さ１００ｍｍの試験管に水を含んだミズゴケを詰め、実施例３〜９及び比較例３〜７の消毒した人工汚染種子及び比較例９の消毒していない人工汚染種子を１粒ずつ播種した。これらの人工汚染種子が発芽した後、潅水し、２５−３５℃、１２時間の変温、１２時間日長の下に置き発病を促した。そして、１週間から１０日間置き、発病した個体について、ラテックス凝集法を用いて、Ａａｃによる発病であるか否かを調査し、発病率を求めた。その結果を表２及び図８に示す。なお、防除効果の検定は、５０粒の人工汚染種子について３反復（計１５０粒）行った。
【０１０８】
【表２】
2010200628.tif 000004
【０１０９】
表２及び図８に示すように、高温の蒸留水と低温の蒸留水に交互に浸漬させる実施例９よりも、高温の薬液と低温の薬液に交互に浸漬させる実施例３〜８の方が、防除価が向上することが確認された。
【０１１０】
また薬液を用いる場合であっても、高温の薬液に連続して長時間浸漬させる比較例３〜８よりも、高温の薬液と低温の薬液に交互に短時間浸漬させる実施例３〜８の方が、防除価が向上することが確認された。
【図１】
2010200628.tif 000005
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
2010200628.tif 000009
【図６】
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【図７】
2010200628.tif 000011
【図８】
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