(57)【要約】【課題】本発明は、免疫学の分野に関するもので、より具体的には癌免疫療法に関するものである。特に、腫瘍細胞の成長を阻害する、及び／又は腫瘍細胞を除去するための免疫療法的併用及び治療方法に関するものである。【解決手段】本発明中に記載した方法は、チロシン残基中のプロテインキナーゼ活性を有するレセプター（レセプターチロシンキナーゼ、ＲＴＫ）及びこれらのレセプターのリガンドを阻害することに基づく。  免疫併用療法とは、受動及び能動免疫療法の併用によってＲＴＫレセプター及び／又はそのリガンドを阻害する治療として定義される。記載した手順は、これらのレセプターを過剰発現する上皮由来腫瘍の種々の臨床期にある患者に対して適用可能である。能動及び受動免疫の併用は、治療手順を進行疾患の患者に用いるか、もしくは補助的治療として用いるかにかかわらず、同時に実施しても順次実施してもよい。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
その成長がレセプターＲＴＫ類の系に依存する細胞に対して効果を発揮する、腫瘍治療のための免疫療法的併用であって、Ａ＋Ｂ；又はＡ＋Ｃ；又はＡ＋Ｄ；又はＢ＋Ｃ；又はＢ＋Ｄ；又はＣ＋Ｄ（ただし、Ａ、Ｂ、Ｃ及びＤは、
Ａ．−レセプターＲＴＫに対する抗体；
Ｂ．−レセプターＲＴＫのリガンド（類）に対する抗体；
Ｃ．−レセプターＲＴＫを含むワクチンであって、当該レセプターＲＴＫに対する抗体を誘導するもの；
Ｄ．−レセプターＲＴＫのリガンド（類）を含むワクチンであって、当該リガンド（類）に対する抗体を誘導するもの；ａ．−ＲＴＫレセプターに対する抗体、
ｂ．−有効成分がＲＴＫレセプターであるワクチンであって、このレセプターに対する抗体を誘導するもの、である）
を、同時又は連続して投与することを含む上記免疫療法的併用。
【請求項２】
レセプターＲＴＫに対する抗体がＥＧＦレセプターに対する抗体である請求項１記載の免疫療法的併用。
【請求項３】
ＥＧＦレセプターに対する抗体がヒト化抗体である請求項２記載の免疫療法的併用。
【請求項４】
ＥＧＦレセプターに対するヒト化抗体が、ＥＣＡＣＣ、イングラテラ（Ｉｎｇｌａｔｅｒｒａ）における（ｅｎ）登録番号９５１１１０１０１として寄託されたＩＯＲ  Ｒ３である請求項３記載の免疫療法的併用。
【請求項５】
レセプターＲＴＫのリガンド（類）に対する抗体がＥＧＦに対する抗体である請求項１記載の免疫療法的併用。
【請求項６】
レセプターＲＴＫのリガンド（類）に対する抗体がＴＧＦアルファに対する抗体である請求項１記載の免疫療法的併用。
【請求項７】
ワクチンがＥＧＦレセプターを含む請求項１〜６のいずれか一項に記載の免疫療法的併用。
【請求項８】
ワクチンがＥＧＦを含む請求項１〜６のいずれか一項に記載の免疫療法的併用。
【請求項９】
ワクチンが、ＥＧＦと髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）からのＰ６４Ｋとの結合（ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ）タンパク質を含む請求項８記載の免疫療法的併用。
【請求項１０】
ワクチンがＴＧＦアルファを含む請求項１〜６のいずれか一項に記載の免疫療法的併用。
【請求項１１】
ワクチンが、ＴＧＦアルファと髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）からのＰ６４Ｋとの結合（ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ）タンパク質を含む請求項１０記載の免疫療法的併用。
【請求項１２】
その成長がレセプターとそのリガンドとの間の相互作用に依存する細胞の成長及び／又は増殖を、そのレセプターチロシンキナーゼ（ＲＴＫ）系において制御するための方法であって、請求項１〜１１のいずれか一項に定義された療法的併用による治療を含む上記方法。
【請求項１３】
請求項１〜１１のいずれか一項に定義された療法的併用の同時又は連続的な投与を含む請求項１２記載の方法。
【請求項１４】
請求項１〜１１のいずれか一項に定義された療法的併用の、任意の順序での投与を含む請求項１３記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は免疫学、特に癌免疫療法に関するものである。特に、腫瘍細胞の成長速度を遅くさせる、及び／又は腫瘍細胞を除去するための免疫療法的併用及び治療方法を提供するものである。
【背景技術】
【０００２】
ＥＧＦレセプター（ＥＧＦ−Ｒ）とそのリガンドの系は分子複合体を形成し、その相互作用によって細胞の成長が特異的に制御される。また、上皮細胞由来の腫瘍の無制限成長に対して効果を発揮することが確認されている。腫瘍形成の間に、成長因子の合成速度が高くなるため、及び／又はレセプターの突然変異が起こるために成長因子が過剰産生され、それによってＥＧＦ−Ｒ活性化のパラクリン及びオートクリン制御が解除される。
【０００３】
ＥＧＦ−Ｒは、１１８６個のアミノ酸から成る分子量１７０ｋＤの膜貫通型糖タンパク質で、正常組織中で広く発現される。それは胚形成における幾つかの段階で関与している。
【０００４】
その特異的リガンドであるＥＧＦ又はＴＧＦアルファが結合することによって、ＨＥＲ−２のようなＥｒｂＢファミリーの他のメンバーとのヘテロダイマー化と同様、レセプターのダイマー化が誘導される（Ｃｏｈｅｎ  ＢＤら（１９９６）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７１：７６２０−７６２９）。リガンドがレセプターに結合することにより、細胞内シグナルのカスケードが開始され（Ｕｌｌｒｉｃｈ  ＴＯ及びＳｃｈｌｅｓｓｉｎｇｅｒ  Ｊ（１９９０）Ｃｅｌｌ  ６１：２０３−２１２）、細胞の成長及び分化を引き起こす。主として上皮由来のある種の癌ではレセプターの過剰発現が発生する。これが癌免疫療法のターゲットとなってきた。例として乳癌、膀胱癌、卵巣癌、子宮癌、結腸癌、肺癌、脳腫瘍、前立腺癌及び頭頸部癌が挙げられる。乳癌においては、ＥＧＦ−Ｒの発現が予後の悪さの指標となることが証明されている（Ｐｅｒｅｚ  Ｒら（１９８４）Ｂｒｅａｓｔ  Ｃａｎｃｅｒ  ａｎｄ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ４：１８９−１９３）。腫瘍の成長におけるＥＧＦＲ及びそのリガンドの役割についてはまだ不明であるが、腫瘍細胞でＥＧＦ−Ｒが発現することによりオートクリン刺激のための機序が誘発され、これらの細胞の無制限増殖が起こることが示唆されている（Ｓｃｈｌｅｓｓｉｎｇｅｒ  Ｊら（１９８３）Ｃｒｉｔ  Ｒｅｖ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  １４（２)：９３−１１１）。
【０００５】
この系の主なリガンドは、上皮成長因子（ＥＧＦ）と形質転換成長因子アルファ（ＴＧＦアルファ）である。他にも、アンフィレグリン（ａｍｐｈｉｒｅｇｕｌｉｎｅ）（ＡＲ）、クリプト（ｃｒｙｐｔｏ）−１（ＣＲ１）、ヘパリン成長因子、ベータセルリン（ｂｅｔａｃｅｌｌｕｌｉｎ）、エピレグリン（ｅｐｉｒｅｇｕｌｉｎ）など、ＥＧＦスーパーファミリーに属するリガンドがある。
【０００６】
ＥＧＦは、５３個のアミノ酸から成る分子量６０４５Ｄａのポリペプチドで、上皮由来の細胞に対して有糸分裂促進作用を示す。その作用は、ＥＧＦ−Ｒへの結合によって起こる主としてパラクリン性のものである。
【０００７】
ＴＧＦアルファは、５０個のアミノ酸から成るポリペプチドで、ＥＧＦ−Ｒへの結合に対してＥＧＦと競合し得る。抗ＥＧＦ抗体はＴＧＦアルファを認識することができない（Ｔｏｄａｒｏ  Ｇ  Ｊら（１９７６），Ｎａｔｕｒｅ  ２６４：２６−３１）ことから、両成長因子は免疫学的に異なると考えられる。
【０００８】
ＥＧＦＲ−リガンド系は、このレセプターを多量に発現する腫瘍において、薬剤、毒素、あるいは放射性同位元素と結合させたＥＧＦ−Ｒに対する天然型モノクローナル抗体（Ｍａｂ）を利用する受動免疫療法（ＰＩ）のターゲットとなっている（Ｖｏｌｌｍａｒ  ＡＭら（１９８７）Ｊ  Ｃｅｌｌ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  １３１：４１８−４２５）。これらの抗体は、ＥＧＦのレセプターへの結合を阻害する能力によって選択される（中和抗体）。Ｍａｂを使用した臨床試験が幾つか実施されており、有望な結果が得られているものもある。例として、乳癌、膵臓癌及び腎臓癌におけるＭａｂ  Ｃ２２５を用いたフェーズＩＩ臨床試験や、頭頸部癌におけるフェーズＩＩＩ臨床試験（Ｍｅｎｄｅｌｓｏｈｎ，Ｊら（１９９９）Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  Ｍｅｅｔｉｎｇ）。他に、肺癌においてＭａｂ  ＩＯＲ−Ｒ３を使用して実施されたフェーズＩＩ臨床試験も良好な結果を示している（Ｃｒｏｍｂｅｔ  Ｔら（２０００）Ｃａｎｃｅｒ  Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｙ  ａｎｄ  Ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ、原稿受理済み）。
【０００９】
ＩＯＲ−Ｒ３  Ｍａｂ（ＥＰ５８６００２Ｂ１）を用いた受動免疫療法（ＥＧＦ−Ｒに対して特異的）から、ＩＯＲ−Ｒ３がレセプターに特異的に結合することによってＥＧＦ／ＥＧＦ−Ｒ結合を阻害し、その後のＥＧＦＲの自己リン酸化も阻害することが確認された。また、ＩＯＲ−Ｒ３を用いた受動免疫療法により、ヌードマウスにおけるヒト腫瘍細胞の成長が阻害され、臨床試験では数人の患者において腫瘍成長速度が低下した。この系はまた、特異的な癌能動免疫療法のターゲットにもなっている。１つの例として、ＥＧＦ−Ｒの主なリガンドの１つであるＥＧＦをキャリアタンパク質と結合させたワクチンの利用が挙げられる（ＵＳ５，８９４，０１８）。このワクチンは自己ＥＧＦに対する特異的な抗体反応を誘発し、ＥＧＦ／ＥＧＦ−Ｒ結合を阻害するため、この結合によって誘発される増殖機序を阻害することができる。前臨床試験から、キャリアタンパク質に結合させた自己ＥＧＦを有効なアジュバントと共に投与することによりマウスを免疫すると、エーリッヒ（Ｅｈｒｌｉｃｈ）腹水腫瘍（ＥＡＴ）細胞を移植したマウスの生存率が上昇することが示された（Ｇｏｎｚａｌｅｚ  Ｇら（１９９６），Ｖａｃｃｉｎｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５（４）：２３３−２４３；Ｇｏｎｚａｌｅｚ  Ｇら（１９９７）Ｖａｃｃｉｎｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ６（２）：９１−１００）。
【００１０】
ヒト組換え型ＥＧＦを含有するワクチンに関してフェーズＩ臨床試験からの結果が報告されており、ワクチン接種の免疫原性と安全性が実証された（Ｇｏｎｚａｌｅｚ  Ｇら（１９９８），Ａｎｎａｌｓ  ｏｆ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  ９：１−５）。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
本発明は、チロシンキナーゼ活性を持つレセプター（ＲＴＫ）及びそのリガンドを標的とした免疫併用療法を利用し、最新の研究で報告されているレセプター／リガンド系の構成要素のうちの１つだけに向けられた各種免疫療法を単独で実施した場合に得られる効果を増強することを目的としている。両有効成分を含有する治療方法においてリガンドとレセプターの両方が阻害されることにより、この増強が裏付けられる。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明は特に、腫瘍治療のための免疫療法的併用に関するものであり、その効果は、成長がレセプターＲＴＫの系に依存する細胞に対するもので、Ａ＋Ｃ；又はＡ＋Ｄ；又はＢ＋Ｃ；又はＢ＋Ｄを、同時又は連続して投与することから成る。ただし、Ａ、Ｂ、Ｃ及びＤはそれぞれ以下のとおりである：
Ａ．−レセプターＲＴＫに対する抗体；
Ｂ．−レセプターＲＴＫのリガンド（類）に対する抗体；
Ｃ．−レセプターＲＴＫを含有するワクチンで、当該レセプターＲＴＫに対する抗体を産生させる；
Ｄ．−レセプターＲＴＫのリガンド（類）を含有するワクチンで、当該リガンド（類）に対する抗体を産生させる。
【００１３】
本発明の望ましい態様として、レセプターＲＴＫに対するモノクローナル抗体が上皮成長因子のレセプターＲ−ＥＧＦに対する抗体であり、さらに具体的にはイギリスＥＣＡＣＣ中にアクセス番号９５１１１０１０１として供託されているＥＧＦ−Ｒに対するヒト抗体ｈＲ３である。
【００１４】
本発明の別の態様として、レセプターＲＴＫのリガンドに対する抗体はＥＧＦ又はＴＧＦアルファに対する抗体でもよい。
【００１５】
本発明はまた、ＥＧＦ−Ｒ、ＥＧＦ、ＴＧＦアルファ、又はこれらの分子を髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｓ）のｐ６４Ｋタンパク質と結合させたものを含むワクチンを用いた免疫療法的併用にも関する。
【００１６】
すなわち、本発明の別の局面として、成長がレセプターＲＴＫ系に依存する細胞の成長及び／又は増殖を制御するための方法を含み、本発明の療法的併用を用いた治療から成る。これは同時又は連続的に実施することが可能であり、併用の要素を投与する順序は問わない。
【００１７】
本発明は、ＲＴＫレセプター及びそのリガンドを阻害することにより腫瘍細胞の成長を阻害し、それらの細胞を消失させるための免疫療法的併用及び投与方法に関するものである。この阻害は、他のアプローチの中で、成長因子（すなわちＥＧＦ、ＴＧＦα）及びそのレセプター（すなわちＥＧＦ−Ｒ）を標的とした能動免疫療法（治療用ワクチン）及び受動免疫療法（Ｍａｂ）の、同時又は連続的な併用を用いて達成することができる。
【００１８】
成長因子又はそのレセプターを阻害することによって、細胞の増殖が阻害される。本発明において我々は、リガンド及び／又はレセプターを同時に阻害することで細胞増殖に対する阻害作用が増強されることを示す。この治療概念は、基本的に細胞増殖の速度が増大することによって発生する悪性腫瘍を治療する上で非常に重要である。
【００１９】
免疫療法的併用とは、能動及び受動の免疫療法的併用によってＲＴＫレセプター及び／又はそのリガンドの阻害を引き起こすものと説明されている。
【００２０】
ここに記載する手順は、ＥＧＦ−Ｒを過剰発現する上皮由来の腫瘍をもつ患者に対して種々の臨床段階において応用可能である。
【００２１】
能動及び受動の免疫療法の併用は、疾患の進行した患者において用いる治療手段にかかわらず、同時でも連続的でもよく、また補助的治療として行ってもよい。
【００２２】
進行した疾患の場合に提案する療法的併用は、ＲＴＫレセプターを認識するＭａｂ及び／又はこのレセプターのリガンドを認識するＭａｂを用いた受動免疫療法と、第一次治療（ｆｉｒｓｔ  ｌｉｎｅ  ｔｈｅｒａｐｙ）として選択する腫瘍特異的治療とを併用した後、治療効果を維持するためにレセプターのリガンド及び／又はレセプターを標的とするワクチンを用いた能動免疫療法を行うというものである。
【００２３】
補助的治療の場合に提案する療法的併用は、ＲＴＫレセプター及び／又はそのリガンドのどちらかを認識するＭａｂを用いた受動免疫療法と、レセプターのリガンド又はレセプター自体を標的とするワクチンを用いた能動免疫療法とを併用するというものである。もしくは、ＲＴＫレセプター又はそのリガンドのどちらかを認識するＭａｂによる受動免疫療法をアタック（ａｔｔａｃｋ）療法として実施した後、維持療法としてレセプターのリガンドあるいはレセプター自体を標的とするワクチンを用いた能動免疫療法を実施する。
【図面の簡単な説明】
【００２４】
【図１】実施例１に記載した方法に従い免疫した患者ＭＭＧにおける抗ＥＧＦ抗体反応の動態。矢印は再免疫を実施した時期を示す。
【図２】実施例２に記載した方法に従い免疫した患者ＡＭＣにおける抗ＥＧＦ抗体反応の動態。矢印は再免疫を実施した時期を示す。
【図３】患者ＡＭＣにおいて見られた腫瘍後退。左図で、治療開始時に腫瘍塊が認められる。右図で、治療開始から１２ヵ月後に腫瘍塊が消失しているのが認められる。
【図４】実施例３に記載した方法に従い免疫した患者ＦＮＲにおける抗ＥＧＦ抗体反応の動態。矢印は再免疫を実施した時期を示す。
【図５】実施例４に記載した方法に従い免疫した患者ＪＰＧにおける抗ＥＧＦ抗体反応の動態。矢印は再免疫を実施した時期を示す。
【図６】抗ＥＧＦ抗体反応良好者（ＧＡＲ）と抗ＥＧＦ抗体反応不良者（ＢＡＲ）、及び同等病歴対照群の患者のＫａｐｌａｎ−Ｍａｉｅｒ生存曲線。  図から明らかなように、ＧＡＲでは、ＢＡＲ又は同等病歴対照者のどちらと比較した場合にも、生存率が有意に上昇している。
【図７】実施例７に記載した方法に従い治療を実施した患者ＲＭＬにおける腫瘍緩解を示す写真。
【図８】実施例８に記載した方法に従い治療を実施した患者ＥＰＧにおける腫瘍後退を示す写真。
【図９】実施例９に記載した方法に従い治療を実施した患者ＣＨＡにおける腫瘍を示す写真。
【図１０】実施例１０に記載した方法に従いそれぞれ０．５ｍｇのＭａｂ  ＩＯＲ−Ｒ３及びＥＧＦ−１によって免疫したマウスと、０．５ｍｇのＩＯＲ−Ｒ３＋０．５ｍｇのＥＧＦ−１の併用によって免疫したマウスの群。両Ｍａｂを併用して投与した群では、腫瘍成長抑制に対する相乗効果が認められた。
【図１１】実施例１０に記載した方法に従いそれぞれ１ｍｇのＭａｂ  ＩＯＲ−Ｒ３及びＥＧＦ−１によって免疫したマウスと、１ｍｇのＩＯＲ−Ｒ３＋１ｍｇのＥＧＦ−１の併用によって免疫したマウスの群。両Ｍａｂを併用して投与した群では、腫瘍成長抑制に対する相乗効果が認められた。
【図１２】Ｍａｂ  ＩＯＲ−Ｒ３及びＥＧＦワクチンによる併用療法：時間軸上方の矢印はＭａｂを投与した日を示し（第１、７、１４、２１、２８及び３５日）、時間軸下方の矢印はＥＧＦワクチンによって免疫した日を示す（第２、８、１５、２２及び５２日）。
【発明を実施するための形態】
【００２５】
本発明は以下に記載する手順によって説明される。
【００２６】
手順１：進行期の上皮腫瘍患者に対してＲＴＫレセプター（すなわちＥＧＦ−Ｒ）及び／又はレセプターのリガンド（すなわちＥＧＦ、ＴＧＦアルファ）を認識するＭａｂによる受動免疫療法を実施した後、レセプター及び／又はそのリガンドを標的とするワクチンによる能動療法を行うことを含む療法的併用。
【００２７】
この治療は、他の腫瘍特異的療法に適さない進行癌患者に対して実施されるであろう。
【００２８】
治療の第一段階は、ＲＴＫレセプター（すなわちＥＧＦ−Ｒ）を認識するＭａｂであって、レセプターリガンド（すなわちＥＧＦ、ＴＧＦアルファ）を認識するこのレセプター及び／又はＭａｂを阻害する特性を有するものを用いた受動免疫療法である。これは腫瘍緩解を目的とする急性療法であり、この期の疾患に対して確立された腫瘍特異的療法と併用することができる。
【００２９】
次に、新たな転移を避け疾患をより長期にわたって安定化させることを目的として、レセプター阻害抗体（すなわち抗ＥＧＦ−Ｒ）及び／又はリガンド阻害抗体（すなわち抗ＥＧＦ、抗ＴＧＦアルファ）を産生させるワクチンを用いた能動免疫療法を実施する。
【００３０】
具体的な手順として、進行期の上皮由来腫瘍患者に対し、ＥＧＦ−Ｒを認識し阻害するＭａｂ及び／又はレセプターのリガンドを認識するＭａｂを１００〜４００ｍｇの範囲の用量で４回〜２０回投与する。投与間隔は６日〜１０日とする。確立された腫瘍特異的療法と併用して、１〜２４ヶ月にわたって徹底治療を続行することが可能である。腫瘍の部分後退あるいは完全後退が見られるまで、もしくは治療を中止せざるを得ない副作用が発生するまで、治療を続行する。
【００３１】
この治療を実施してから１〜４週間後に、ＥＧＦ−Ｒ又はそのリガンド（すなわちＥＧＦ、ＴＧＦアルファ）を標的としキャリアタンパク質（すなわちＰ６４Ｋ髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｅｓ）組換え型タンパク質）に結合させたワクチンによる免疫スケジュールを開始し、適切なアジュバント、すなわちａｌｕｍ（１〜２ｍｇ／用量）又はＭｏｎｔａｎｉｄｅ  ＩＳＡ  ５１（０．６〜１．２ｍｌ／用量）中に混合して投与する。各投与内容は、キャリアタンパク質に結合させた５０〜８００μｇの有効成分（レセプター又はリガンド）を最終容積０．６〜５ｍｌとなるよう調製する。免疫スケジュールは、７〜１４日の間隔で反応を誘発するための初回免疫を５〜８回実施する。免疫に先立ち、初回免疫の２〜４日前に１００〜５００ｍｇ／ｍ２体重のシクロホスファミドを投与することも可能である。ワクチンは、他のワクチン媒体（すなわちリポソーム、ＤＮＡワクチン、ウイルスベクター）中で製剤化してもよい。
【００３２】
ワクチンは、独立した製品として、あるいは独自のワクチン製剤として製剤化することができる。
【００３３】
この期間中に患者から採血して、血液生化学指標及びワクチンの標的となるリガンド又はレセプターに対する特異的抗体力価を測定する。採血は週に１度もしくは月に１度実施する。
【００３４】
その後、抗体力価が低下した場合には、１〜２年間にわたって１〜４ヶ月ごとに再免疫を実施する。
【００３５】
手順２：ＲＴＫレセプター（すなわちＥＧＦ−Ｒ）及び／又はそのリガンド（すなわちＥＧＦ、ＴＧＦアルファ）を認識するＭａｂを用いた受動免疫療法と、補助的治療としてレセプター及び／又はそのリガンドを標的とするワクチンを用いた能動免疫療法とを同時に実施する免疫療法的併用。
【００３６】
患者の診断確定及び／又は外科手術の直後に、患者に対してＲＴＫレセプター（すなわちＥＧＦ−Ｒ）を認識しその活性を阻害するＭａｂ及び／又はレセプターのリガンド（すなわちＥＧＦ、ＴＧＦアルファ）を認識するＭａｂを用いた受動治療と、レセプター及び／又はそのリガンドを阻害する抗体反応を誘発するワクチンを用いた能動治療とを同時に実施する。
【００３７】
これらの治療を併用して実施することにより相乗効果が得られ、より高率での後退及び／又は臨床的疾患安定化が可能となる。
【００３８】
この治療は上皮由来の腫瘍を持つ患者に有効であり、ＲＴＫレセプター及び／又はそのリガンドを認識し阻害するＭａｂを１００〜４００ｍｇの範囲で４〜２０回投与することから成る。投与間隔は６〜１０日間とし、１〜２４ヶ月にわたって投与を続行することができる。腫瘍の部分後退あるいは完全後退が見られるまで、もしくは治療を中止せざるを得ない副作用が発生するまで、治療を続行する。
【００３９】
手順＃１に記載したスケジュールに従い、ワクチンによる免疫を同時に実施する。
【００４０】
手順３：
ＲＴＫレセプター（すなわちＥＧＦ−Ｒ）及び／又はそのリガンド（すなわちＥＧＦ、ＴＧＦアルファ）を認識するＭａｂを用いた受動免疫療法の後、補助的治療としてレセプター及び／又はそのリガンドを標的とするワクチンを用いた能動免疫療法を実施する免疫療法的併用。
【００４１】
患者の診断確定及び／又は外科手術の直後に、この治療を実施する。
【００４２】
この治療の目標は、ＲＴＫレセプター（すなわちＥＧＦ−Ｒ）を認識し阻害するＭａｂ及び／又はそのリガンド（すなわちＥＧＦ、ＴＧＦアルファ）を認識するＭａｂを用いた初回受動免疫療法により、腫瘍緩解を得るための急性治療を実施することである。その後、レセプター（すなわちＥＧＦ−Ｒ）又はそのリガンド（すなわちＥＧＦ、ＴＧＦアルファ）に対する阻害抗体を産生させるワクチンを用いた能動免疫療法を開始する。２回目の治療の目的は、新たな転移の出現を防ぎ、より長い無疾患期間を得ることである。
【００４３】
手順は、上皮由来の進行期癌の患者に対して、ＥＧＦ−Ｒ及び／又はそのリガンドを認識し阻害するＭａｂを１００〜４００ｍｇの用量で４〜２０回投与するものである。投与間隔は６〜１０日間とし、投与期間は１〜２４ヶ月間の範囲である。腫瘍の部分後退あるいは完全後退が見られるまで、もしくは治療を中止せざるを得ない副作用が発生するまで、治療を続行する。
【００４４】
治療終了から１〜４週間後に、手順＃１に記載したスケジュールに従い、ＥＧＦ−Ｒ又はＥＧＦ−Ｒのいくつかのリガンド（すなわちＥＧＦ、ＴＧＦアルファ）を標的とするワクチンによる免疫スケジュールを開始する。
【実施例１】
【００４５】
ａｌｕｍをアジュバントとするＥＧＦワクチンを用いた癌患者における免疫スケジュール。
ＥＧＦの免疫原性及び安全性を証明することを主目標として、Ｐ６４Ｋをキャリアタンパク質として、またａｌｕｍをアジュバントとして使用したＥＧＦワクチン（ＵＳ５，８９４，０１８）により１０人の患者を免疫する臨床試験を実施した。
【００４６】
患者１．１（ＭＭＧ）は、転移性肺類表皮癌の診断で試験に参加し、疾患は進行性で、他の腫瘍特異的療法には適さなかった。
この患者に対し、ＥＧＦ  ５０μｇ及びａｌｕｍ  ２ｍｇを含有するワクチンを第１日、７日、１４日、２１日及び５１日の５回にわたって初回投与するスケジュールに従い、免疫を行った。
第０日、１５日、３０日、４５日、６０日、そしてその後は月に１回、採血を実施し、血液生化学検査とＥＧＦ特異的抗体の測定を行った。
ＥＬＩＳＡ試験によって抗体力価を測定した。抗体力価は、ＥＬＩＳＡ試験において陽性の結果を示す最大血清希釈として定義した。（ブランクの２倍以上のＯ．Ｄ．値）。
抗体力価の低下が認められた場合には、同一用量のワクチンを用いて再免疫を行った。
【００４７】
患者ＭＭＧは、最大力価１：８０００までの抗ＥＧＦ抗体反応を示した。抗体反応の動態を図１に示す。
ワクチン接種スケジュールを開始した後、患者の疾患は１５ヶ月間にわたって臨床的にも放射線学的にも安定していた。患者は初回ワクチン接種から２３．２ヶ月後に死亡した。
【実施例２】
【００４８】
Ｍｏｎｔａｎｉｄｅ  ＩＳＡ  ５１をアジュバントとするＥＧＦワクチンを用いた癌患者における免疫スケジュール。
ＥＧＦの免疫原性及び安全性を証明することを主目標として、Ｐ６４Ｋをキャリアタンパク質として、またＭｏｎｔａｎｉｄｅ  ＩＳＡ  ５１をアジュバントとして使用し、１０人の患者を免疫する臨床試験を実施した。
患者２．１（ＡＭＧ）は、肺類表皮癌の診断で試験に参加し、疾患は進行性で、他の腫瘍特異的療法には適さなかった。
【００４９】
この患者に対し、総容積０．６ｍＬ中にＥＧＦ  ５０μｇを含有するワクチンを使用直前に０．６ｍＬのＭｏｎｔａｎｉｄｅ  ＩＳＡ  ５１中で乳化した製剤を、第１日、７日、１４日、２１日及び５１日の５回にわたって初回投与する日程に従い、免疫を行った。
第０日、１５日、３０日、４５日、６０日、そしてその後は月に１回、採血を実施し、血液生化学検査と抗ＥＧＦ特異的抗体の測定を行った。
ＥＬＩＳＡ試験によって抗体力価を測定した。抗体力価は、ＥＬＩＳＡ試験において陽性の結果を示す最大血清希釈として定義した。（ブランクの２倍以上のＯ．Ｄ．値）。
抗体力価の低下が認められた場合には、同一用量のワクチンを用いて再免疫を行った。
【００５０】
患者ＡＭＧは、最大力価１：３２０００までの抗ＥＧＦ抗体反応を示した。抗体反応の動態を図２に示す。
ワクチン接種スケジュールを開始した後、患者の疾患は１２ヶ月間にわたって安定状態となり、その時点で臨床的及び放射線学的に腫瘍後退と診断された。
ワクチン接種を開始してから１４ヶ月後に、第二の原発腫瘍が発生した。患者は、試験参加から１８ヵ月後にこの第二の腫瘍の外科手術による合併症が原因で死亡した。
【実施例３】
【００５１】
ａｌｕｍをアジュバントとするＥＧＦワクチンを用い低用量シクロホスファミドの前投与を行う、癌患者における免疫スケジュール。
ＥＧＦワクチンの免疫原性及び安全性を証明することを主目標として、シクロホスファミド前投与の後にＰ６４Ｋをキャリアタンパク質として、またａｌｕｍをアジュバントとして使用し、１０人の患者を免疫する臨床試験を実施した。
患者３．１（ＦＮＲ）は、肺類表皮癌の診断で試験に参加し、疾患は進行性で、他の腫瘍特異的療法には適さなかった。
【００５２】
ＥＧＦワクチンによる初回免疫の３日前に、患者に対しシクロホスファミド（１００ｍｇ／ｍ２体表面積）を投与した。ワクチン接種スケジュールは、ＥＧＦ  ５０μｇ及びａｌｕｍ  ２ｍｇを含有するワクチンを第１日、７日、１４日、２１日及び５１日の５回にわたって投与するというものであった。
第０日、１５日、３０日、４５日、６０日、そしてその後は月に１回、採血を実施し、血液化学検査と抗ＥＧＦ特異的抗体の測定を行った。
ＥＬＩＳＡ試験によって抗体力価を測定した。抗体力価は、ＥＬＩＳＡ試験において陽性の結果を示す最大血清希釈として定義した。（ブランクの２倍以上のＯ．Ｄ．値）。
抗体力価の低下が認められた場合には、同一用量のワクチンを用いて再免疫を行った。
【００５３】
患者は、図４に示すように、最大力価１：８０００までの抗ＥＧＦ抗体反応を示した。
ワクチン接種スケジュールを開始した後、患者の疾患は１９ヶ月間にわたって安定状態となった。
【実施例４】
【００５４】
Ｍｏｎｔａｎｉｄｅ  ＩＳＡ  ５１をアジュバントとして用いシクロホスファミドの前投与を行う、癌患者におけるＥＧＦワクチン免疫スケジュール。
ＥＧＦワクチンの免疫原性及び安全性を証明することを主目標として、シクロホスファミド前投与の後にＰ６４Ｋをキャリアタンパク質として、またＭｏｎｔａｎｉｄｅ  ＩＳＡ  ５１をアジュバントとして使用し、１０人の患者を免疫する臨床試験を実施した。患者４．１（ＪＰＧ）は、非小細胞肺腺癌の診断で試験に参加し、疾患は進行性で、他の腫瘍特異的療法には適さなかった。
【００５５】
ＥＧＦワクチンによる初回免疫の３日前に、患者に対しシクロホスファミド（１００ｍｇ／ｍ２体表面積）を投与した。ワクチン接種スケジュールは、総容積０．６ｍＬ中にＥＧＦ  ５０μｇを含有するワクチンを使用直前に０．６ｍＬのＭｏｎｔａｎｉｄｅ  ＩＳＡ  ５１中で乳化した製剤を、第１日、７日、１４日、２１日及び５１日の５回にわたって投与するというものであった。
第０日、１５日、３０日、４５日、６０日、そしてその後は月に１回、採血を実施し、血液化学検査と抗ＥＧＦ特異的抗体の測定を行った。
ＥＬＩＳＡ試験によって抗体力価を測定した。抗体力価は、ＥＬＩＳＡ試験において陽性の結果を示す最大血清希釈として定義した。（ブランクの２倍以上のＯ．Ｄ．値）。
抗体力価の低下が認められた場合には、同一用量のワクチンを用いて再免疫を行った。
【００５６】
患者ＪＰＧは、図５に示すように、最大力価１：４０００００までの抗ＥＧＦ抗体反応を示した。
ワクチン接種スケジュールを開始した後、患者の疾患は６ヶ月間にわたって安定状態となった。
【実施例５】
【００５７】
癌患者におけるＥＧＦワクチン接種の免疫原性及び疾患安定化との関連。
２０人の患者においてフェーズＩ試験を実施し、異なるアジュバントを使用する２つの群のどちらか一方に患者を無作為に割り付けた。
【００５８】
第ＩＩＩ期又は第ＩＶ期の非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）患者１０人に対し、ＥＧＦ  ５０μｇ及びａｌｕｍ  ２ｍｇを含有するワクチン製剤を第１、７、１４、２１及び５１日の５回にわたって初回投与した。
【００５９】
別の患者１０人（ＮＳＣＬＣ、第ＩＩＩ期又は第ＩＶ期）に対し、総容積０．６ｍｌ中にＥＧＦ  ５０μｇを含有するワクチンを同一容積（０．６ｍＬ）のＭｏｎｔａｎｉｄｅ  ＩＳＡ  ５１で乳化した製剤を５回投与することによって免疫した。
【００６０】
ＥＬＩＳＡ試験によって抗体力価を測定した。抗体力価は、ＥＬＩＳＡ試験において陽性の結果を示す最大血清希釈として定義した。（ブランクの２倍以上のＯ．Ｄ．値）。
【００６１】
本試験では、５０％の患者において１：４０００以上の抗体力価を示す抗ＥＧＦ抗体反応が見られ（抗体反応良好者、ＧＡＲ群）、５０％は抗体力価が１：４０００未満であった（抗体反応不良者、ＢＡＲ群）。
【００６２】
ＧＡＲ群では、患者の８７．５％において投与開始後少なくとも３ヶ月間にわたり臨床的及び放射線学的な疾患安定化が見られた。
ＢＡＲ群では、このような安定化を示した患者はわずか１１．１％であった（表１）。
【００６３】
これらのデータから、抗ＥＧＦ抗体の量と腫瘍安定化との間に関連があることが証明される。
チャート１：抗体反応と臨床的及び放射線学的な疾患安定化との関連。
【表１】
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【実施例６】
【００６４】
ＥＧＦワクチン接種の免疫原性及びこの治療を受けた癌患者の生存率との関連。
各群１０人から成る第ＩＩＩ期／ＩＶ期ＮＳＣＬＣ患者４０人に対し、実施例１、２、３及び４に記載したスケジュールに従って治療を実施した。
実施例６に示した基準に従い、患者をＧＡＲとＢＡＲに分類した。
前述のスケジュールに従って治療を実施した患者のうち、５０％がＧＡＲで５０％がＢＡＲと分類された。
【００６５】
ＧＡＲとＢＡＲの患者の間で生存パターンを比較したところ、統計学的に有意な差が認められ、ＧＡＲの平均生存期間は９．１ヶ月、ＢＡＲの平均生存期間は４．５ヶ月であった（ｐ＜０．０２）。この結果は図６に示す。
【実施例７】
【００６６】
放射線療法とＭａｂ  ＩＯＲ−Ｒ３との併用による治療効果：
第ＩＶ期ランゲージベース類上皮癌と診断された患者ＲＭＬが、放射線療法（ＲＴＰ）及びＩＯＲ−Ｒ３を併用する臨床試験に参加した。患者は、週に１回、２００ｍｇのＭａｂの投与を６週間にわたって受けた。Ｍａｂの累積用量は１２００ｍｇであり、総照射線量は６０Ｇｙであった。
【００６７】
併用療法が終了した時点で、患者は原発腫瘍及びその転移巣の完全緩解を示した（図７）。この反応は１３ヶ月以上維持された。
【実施例８】
【００６８】
放射線療法とＭａｂ  ＩＯＲ−Ｒ３との併用による治療効果：
頸部アデノパシーを伴う第ＩＩＩ期扁桃類上皮癌と診断された患者ＥＰＧが、放射線療法（ＲＴＰ）及びＩＯＲ−Ｒ３を併用する臨床試験に参加した。患者は、週に１回、２００ｍｇのＭａｂの投与を６週間にわたって受け、総照射線量は６４Ｇｙであった。
【００６９】
治療後、患者は腫瘍病変部の完全緩解を示した（図８）。この反応は１３ヶ月以上維持された。
【実施例９】
【００７０】
放射線療法とＭａｂ  ＩＯＲ−Ｒ３との併用による治療効果：
両側性頸部アデノパシーを伴う第ＩＶ期扁桃腫瘍と診断された患者ＣＨＡが、放射線療法（ＲＴＰ）及びＩＯＲ−Ｒ３を併用する臨床試験に参加した。患者は、週に１回、４００ｍｇのＭａｂの投与を６週間にわたって受け、累積用量は２４００ｍｇであった。同時に、総照射線量６４Ｇｙの照射も受けた。
【００７１】
治療が終了した時点で、この患者は原発腫瘍及び非遠隔転移の完全緩解を示した（図９）。反応は１２ヶ月間維持された。
【実施例１０】
【００７２】
抗ＥＧＦ−Ｒ抗体（ＩＯＲ−Ｒ３）及び抗ＥＧＦ−Ｒリガンドモノクローナル（ＥＧＦ−１）を併用する受動療法のヌードマウスにおける評価。
投与用量に応じた抗腫瘍効果の評価。この実験はまた、抗ＥＧＦ−Ｒ  ＭａｂとＥＧＦワクチンとの併用投与の起こり得る効果を判定するものでもある。ワクチンは、抗ＥＧＦ抗体反応を誘発するという、同一の特異性をもつＭａｂの受動投与と同等の効果を示すだけでなく、実施例１、２、３及び４（免疫した患者における抗ＥＧＦ抗体力価の動態）で見られたように得られた抗体反応が長期にわたって維持されるという利点も持っている。
【００７３】
ＮＭＲＩ遺伝子由来（異系交配種）の胸腺摘出マウスの７種類の群に対し、以下の免疫を行った：
第１群：０．５ｍｇのＥＧＦ−１  Ｍａｂを１０回、腹腔内投与、１日１回。
第２群：１ｍｇのＥＧＦ−１  Ｍａｂを１０回、腹腔内投与、１日１回。
第３群：０．５ｍｇのＩＯＲ−Ｒ３  Ｍａｂを１０回、腹腔内投与、１日１回。
第４群：１ｍｇのＩＯＲ−Ｒ３  Ｍａｂを１０回、腹腔内投与、１日１回。
第５群：リン酸緩衝液（ＰＢＳ）を１０回、腹腔内投与、１日１回（陰性対照）。
第６群：０．５ｍｇのＥＧＦ−１  Ｍａｂ及び０．５ｍｇのＩＯＲ−Ｒ３  Ｍａｂを１０回、腹腔内投与、１日１回。
第７群：１ｍｇのＥＧＦ−１  Ｍａｂ及び１ｍｇのＩＯＲ−Ｒ３  Ｍａｂを１０回、腹腔内投与、１日１回。
【００７４】
Ｍａｂの投与を開始した日に、マウスに対し１ｘ１０６個のＨ１２５ヒト腫瘍細胞を移植した。この細胞株はＥＧＦ−Ｒを過剰発現する。
結果を図１０及び１１に示す。両治療法を併用した場合に抗腫瘍効果が増強され、用量が高いほど効果も高かった。
【実施例１１】
【００７５】
進行期癌患者におけるＭａｂ  ＩＯＲ−Ｒ３／ＥＧＦワクチン併用療法のスケジュール：
頭頸部類上皮癌と診断された患者ＡＲＰに対し、Ｍａｂ  ＩＯＲ−Ｒ３及びＥＧＦワクチンを順次投与した。
患者に対して２００ｍｇのＭａｂを週に１回、６週間にわたって投与すると同時に、週に５回の放射線療法を６週間にわたり計３０回実施した。累積照射線量は６０Ｇｙであった。
治療が終了した時点で、患者は原発腫瘍の完全緩解を示した。
【００７６】
Ｍａｂによる治療が終了してから１ヵ月後に、ＥＧＦワクチンを用いた免疫スケジュールを開始した。患者に対し、総容積０．６ｍｌ中にＰ６４ｋタンパク質に結合させたＥＧＦ  ５０μｇを含有するワクチンを使用直前に０．６ｍｌのＭｏｎｔａｎｉｄｅ  ＩＳＡ  ５１で乳化した製剤を５回投与した。第１、７、１４、２１及び５１日に免疫を実施した。
患者は現在追跡期間中である。
【実施例１２】
【００７７】
進行期癌患者におけるＭａｂ  ＩＯＲ−Ｒ３／ＥＧＦワクチン併用療法のスケジュール：
肺類上皮癌と診断された患者ＭＲＭは、外科的治療を受けた。患者に対して、外科手術から１ヶ月後に、Ｍａｂ  ＩＯＲ−Ｒ３による受動免疫療法とＥＧＦワクチンとによる併用療法を開始した。
【００７８】
図１２に投与間隔についての詳細なスケジュールを示す。患者は現在追跡期間中である。
【図１】
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【図２】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図３】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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