(57)【要約】【課題】  粘膜免疫賦活作用や免疫バランス調整作用をなどの機能を有する経腸栄養剤を提供すること。【解決手段】  ラクトバチルス・ブレビスに属する乳酸菌、たんぱく質、脂質および糖質を含有する経腸栄養剤。および、ラクトバチルス・ブレビスに属する乳酸菌の、生菌体、菌体処理物または死菌体を有効成分とする経腸栄養剤用添加物。ラクトバチルス・ブレビスに属する乳酸菌としては、ラクトバチルス・ブレビス・サブスピーシス  コアギュランスが好ましい。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ラクトバチルス・ブレビスに属する乳酸菌を含有する経腸栄養剤。
【請求項２】
たんぱく質、脂質および糖質を含有する請求項１記載の経腸栄養剤。
【請求項３】
経腸栄養剤中の乳酸菌細胞数が１０，０００個/kcal以上であり、かつ糖質としてデキストリンを、タンパク質としてカゼインを含有することを特徴とする請求項１または２に記載の経腸栄養剤。
【請求項４】
ラクトバチルス・ブレビスに属する乳酸菌が、ラクトバチルス・ブレビス・サブスピーシス  コアギュランスである請求項１〜３いずれか１項に記載の経腸栄養剤。
【請求項５】
ラクトバチルス・ブレビスに属する乳酸菌の、生菌体、菌体処理物または死菌体を有効成分とする経腸栄養剤用添加物。
【請求項６】
ラクトバチルス・ブレビスに属する乳酸菌が、ラクトバチルス・ブレビス・サブスピーシス  コアギュランスである請求項５記載の経腸栄養剤用添加物。
【請求項７】
粘膜免疫賦活剤および／または免疫バランス調整剤として使用される、請求項５または６に記載の経腸栄養剤用添加物。
【請求項８】
腸菅免疫活性化剤として使用される請求項５または６に記載の経腸栄養剤用添加物。
【請求項９】
ＩｇＡ抗体産生促進剤として使用される請求項５または６に記載の経腸栄養剤用添加物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は乳酸菌を含有する経腸栄養剤、さらに詳しくは粘膜免疫賦活作用および／または免疫バランス調整作用を有する経腸栄養剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
高齢や傷病、障害といった要因によって食物の経口摂取に困難をきたすものが栄養を摂取するための方法に経腸栄養法がある。経腸栄養剤は、鼻腔を経由して胃に挿入されたチューブを経由する経鼻胃管投与および胃瘻を経由した投与がある。胃瘻は患者の苦痛が少ないこと、嚥下リハビリテーションが容易であることから最近では胃瘻を経由した投与が普及してきている。
【０００３】
経管栄養法の利用者の多くは術後患者や寝たきりの高齢者であるため、術後の傷や褥創からの細菌感染や個人の免疫力低下による感染が起こりやすい。また経腸栄養法利用者は胃腸の働きが低下しやすく、便秘や下痢便臭の悪化を伴うことが多い。
【０００４】
また、経管栄養法の利用者である術後患者や寝たきりの高齢者は、免疫力が低下している場合が多い。人体の中で、口腔、鼻腔、呼吸器官、消化管などの体の内側で外界に接している部分は、粘膜と呼ばれるバリアーで保護され、その粘膜は、外部より取り込まれた異物抗原を排除する機能を有する。特に、消化器官である腸管は、人間の食事や飲水といった生命活動により、常に病原菌、アレルギー物質及び環境ホルモンなどの有害物質に暴露されている。近年、食生活の変化、ストレス又は加齢による腸内細菌叢の悪化などの原因によって、腸管免疫が低下し、感染症、アレルギー、潰瘍又は癌などの疾患を引き起こす人が増加している。 
【０００５】
多くの感染症の場合、抗原となる細菌やウィルスなどが粘膜上皮に定着し、さらに上皮細胞内に侵入することにより、疾患が引き起こされる。粘膜上では病原体の侵入を防止するため、特別な種類の抗体であるイムノグロブリンＡ（ＩｇＡ）が分泌される。ＩｇＡ抗体は、パイエル板やリンパ小節の細胞により誘導・生産される２量体又は多量体の抗体で、ポリＩｇレセプター（ｐＩｇＲ）で分泌成分（ＳＣ）と結合し分泌型ＩｇＡとなり上皮細胞により粘膜分泌物中に運ばれ、病原体を架橋、被覆し細胞内への侵入を阻止する。つまり、病原体を効率良く除去するには、ＩｇＡの産生を増加させる必要がある。 
【０００６】
長野県のすんき漬由来のラクトバチルス・ブレビス（特許文献１）やラクトバチルス・プランタムＦＥＲＭ  ＢＰ−１００６４およびＦＥＲＭ  ＢＰ−１００６５（特許文献２）において免疫調節機能を有することが知られている。しかしながらこれらの乳酸菌のＩｇＡ産生活性化効果は実際に経口摂取した場合は必ずしも充分な効果を発揮しているとは言いがたい。
【０００７】
また、近年、免疫バランスの不調から生ずる疾患が問題となっている。例えば、先進国において多くみられるアレルギー性疾患は、体内の免疫バランスが崩れることによって過剰に防御反応が働き、本来は異物として認識すべきでないものに対してまでも異物認識をしてしまう。
【０００８】
アレルギー疾患はその作用機序によりI型からIV型までに分類されているが、現在我が国で多くの人を悩ませている花粉症、アトピー性皮膚炎、気管支喘息、アレルギー性鼻炎、アレルギー性結膜炎、食物アレルギー等のアレルギー疾患は、ＩｇＥ抗体依存性のI型アレルギーである。
【０００９】
I型アレルギー発症の過程では、まず血液中に存在するヘルパーＴ細胞のうちI型ヘルパーＴ細胞（Ｔｈ１）とII型ヘルパーＴ細胞（Ｔｈ２）のバランスが平衡状態からＴｈ２優勢に傾く。その結果、Ｔｈ２から分泌された抗体産生物質がＢ細胞を活性化してＩｇＥ抗体を産生させる。組織内のマスト細胞や血中の好塩基球表面のＦｃεレセプターにアレルゲン特異的ＩｇＥ抗体が結合し、次いで、アレルゲンがＩｇＥ抗体に結合し、ＩｇＥ抗体間に架橋が形成される。この架橋によりマスト細胞や好塩基球が刺激されてヒスタミン、セロトニン、ロイコトリエン、ヘパリン等化学伝達物質を遊離し、それらの作用によって様々なアレルギー症状が現われる。
【００１０】
免疫機構は、「液性免疫」と「細胞性免疫」に大別されるが、身体内に侵入してきた異物に対して液性免疫と細胞性免疫のいずれを誘導するかについての調節機構においては、免疫細胞のへルパーＴ細胞（Ｔｈ細胞）が重要な働きを果たす。
【００１１】
ヘルパーＴ細胞（Ｔｈ細胞）は、Ｂ細胞やＴ細胞などの増殖や働きを調節するサイトカインを分泌して、液性免疫や細胞性免疫を誘導する。ヘルパーＴ細胞は、そのサイトカインの産生パターンから、１型ヘルパーＴ細胞（Ｔｈ1細胞）と２型ヘルパーＴ細胞（Ｔｈ２細胞）との二種類に分類され、Ｔｈ１は細胞性免疫を活性化し、Ｔｈ２細胞は液性免疫を活性化することが知られている。アレルギーバランスとは一般に、このＴｈ１とＴｈ２との間のバランスを指し、例えば患者のアレルギー状態を示す指標などとして広く利用されている。具体的には、アレルギー患者の身体中では、Ｔｈ１／Ｔｈ２バランスが崩れてＴｈ２側に以上に偏ると、日常的に接触する花粉などの異物に対してもＩｇＥ抗体が過剰につくされ、アレルギー状態になると知られている。興味深いことにＴｈ１とＴｈ２とは互いに相反関係にあることが知られ、一方の量や活性が強くなるともう一方は抑制されることが明らかになっている。従って、Ｔｈ１の量や活性を高めてやることで、Ｔｈ２側に以上に偏った免疫バランスは正常に戻るように調整され、ＩｇＥ抗体の産生が抑制され、アレルギー状態は改善される。
Ｔｈ１／Ｔｈ２バランスについては、Ｔｈ１活性がＴｈ２活性よりも高い時、血清中のイムノグロブリンＧ２ａ（ＩｇＧ２ａ）濃度が上昇し、Ｔｈ２活性がＴｈ１活性よりも高い時、血清中のイムノグロブリンＧ１（ＩｇＧ１）濃度が上昇することから、これらの抗体はＴｈ１／Ｔｈ２バランスの指標とされる。
【００１２】
腸管免疫機構では、腸管壁に存在するパイエル板においてその中に存在するマクロファージ（Ｍφ）が異物を認識し、Ｔｈ０のＴｈ１またはＴｈ２への分化が誘導され、そうすることで細胞性免疫または液性免疫のいずれかが誘導される。全身性免疫の約６割は、この腸管免疫に拠るとも言われている。
【００１３】
従来、I型アレルギーに対しては上記化学伝達物質の放出抑制作用を有する抗アレルギー剤、放出された化学伝達物質の作用を抑制するのに有効な抗ヒスタミン剤、抗炎症作用を有するステロイド剤等を用いた対症療法が行われているが、これら従来の薬剤は多かれ少なかれ副作用を伴うので使用法が難しいという問題点があった。
【００１４】
I型アレルギーの発症の第一段階で重要な役割を演じるＩｇＥ抗体の産生を抑制することができれば根本的な予防と治療につながると期待されるが、ＩｇＥ抗体の産生抑制に有効な手段は殆ど開発されていない。
【特許文献１】特開２００７−３０８４１９号
【特許文献２】特許第３８１８３１９号
【特許文献３】特開平５−２５２９００号
【特許文献４】特許平９−２９５９号
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１５】
本発明の目的は、粘膜免疫賦活作用や免疫バランス調整作用などの機能を有する経腸栄養剤を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１６】
本発明者らは上記課題を解決するために鋭意研究を重ねた結果、特定の乳酸菌が粘膜免疫賦活作用および免疫バランス調整作用を有し、この乳酸菌を含有する経腸栄養剤は、該効果を発揮しうることを見出して本発明を完成させた。
【００１７】
すなわち、本発明は、ラクトバチルス・ブレビスに属する乳酸菌を含有する経腸栄養剤に関する。また、本発明は、ラクトバチルス・ブレビスに属する乳酸菌の、生菌体、菌体処理物または死菌体を有効成分とする経腸栄養剤用添加物にも関する。
【発明の効果】
【００１８】
本発明の経腸栄養剤は、優れた粘膜免疫賦活作用および免疫バランス調整作用を有し、下痢や便秘などの改善や感染症の予防、更には全身の免疫機能の活性化にも有効であることから、経腸栄養法を利用している高齢者や患者の健康維持、ＱＯＬの向上などに有用である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１９】
以下、本発明について、さらに詳しく説明する。 
【００２０】
本発明の経腸栄養剤は、ラクトバチルス・ブレビスに属する乳酸菌を含有する、経鼻胃管用チューブや胃瘻用カテーテルを通じて投与される流動性をもつ栄養組成物であれば特に限定されず、医薬品である成分栄養剤、消化態栄養剤、医薬品または食品である半消化態栄養剤などの一般的な経腸栄養剤の他、濃厚流動食（人工濃厚流動食）やミキサー食などの流動食も含まれる。本発明の経腸栄養剤には、さらに、たんぱく質、脂質、糖質などの栄養成分が含まれているのが好ましく、さらにはたんぱく質、脂質、糖質のすべてが含まれているのがより好ましい。
【００２１】
本発明の経腸栄養剤に含まれるたんぱく質としては特に限定されず、乳タンパク、カゼイン、ホエイ、大豆タンパク、卵白、卵黄およびそれらの分解物が好ましく用いられるが、風味、浸透圧、塩濃度、代謝速度などの観点から、乳タンパク、カゼイン、大豆タンパクあるいはそれらの分解物を含むことが好ましく、少なくともカゼインを含むことがより好ましい。またこれらの成分は複数組み合わせて含有させてもかまわない。
【００２２】
本発明の経腸栄養剤に含まれる脂質としては特に限定されず、大豆油、なたね油、オリーブ油、パーム油などの植物油のほか、魚油、牛脂、豚脂、鳥脂、脂肪酸、脂肪酸の誘導体が好ましく用いられる。また、脂質として高度不飽和脂肪酸や短鎖脂肪酸などの機能性油脂も利用できる。またこれらの成分は複数組み合わせて含有させてもかまわない。
【００２３】
本発明の経腸栄養剤に含まれる糖質としては特に限定されず、デキストリン、でんぷん、しょ糖、グルコース、フルクトース、オリゴ糖が好ましく用いられる。浸透圧、代謝速度の観点から糖質としてデキストリンを含むことがより好ましい。またこれらの成分は複数組み合わせて含有させてもかまわない。
【００２４】
本発明の経腸栄養剤中のたんぱく質、脂質および糖質の配合比は任意に設定できるが、経腸栄養剤１００ｍｌあるいは１００ｇあたりの総カロリーが、５０〜２５０ kcalとなるようにするのが好ましく、例えばたんぱく質含有量としては０〜５０重量％、糖質含有量としては０〜８５重量％、脂質含有量としては０〜６０重量％の範囲で自由に設定することができる。そのなかでもたんぱく質を５〜３０重量％、糖質を５〜３０重量％、脂質を５〜３０重量％の範囲で含有させるのが好ましい。
【００２５】
本発明の経腸栄養剤に含有させることのできる乳酸菌は、ラクトバチルス・ブレビスに属する乳酸菌であれば特に限定されない。ラクトバチルス・ブレビスに属する乳酸菌としては、例えば、ラクトバチルス・ブレビス・サブスピーシス  コアギュランス、ラクトバチルス・ブレビスＳＡＭ２４４７株、ラクトバチルス・ブレビスＫＢ２９０株、ラクトバチルス・ブレビスＩＦＯ−１２００５株、ラクトバチルス・ブレビス亜種ブレビス等が挙げられるが、この中でもラクトバチルス・ブレビス・サブスピーシス  コアギュランスがその有している機能から好ましい。ラクトバチルス・ブレビス・サブスピーシス  コアギュランスは、例えば、Ｌ．ｂｒｅｖｉｓ  ｋａｎｅｋａ−０１株として、独立行政法人製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センター（郵便番号２９２−０８１８  千葉県木更津市かずさ鎌足２−５−８）に２００８年４月１１日付、受託番号ＮＩＴＥ  Ｐ−５５８で寄託されている。
【００２６】
本発明の経腸栄養剤に含有させる乳酸菌は、ＭＲＳ培地のような一般的な乳酸菌用培地で培養された菌体であっても、それを改良した合成培地で培養された菌体であってもよく、さらには京都すぐき漬に見られるように植物を栄養源として増殖した菌体であっても、果物やその他の植物の搾汁液、磨砕物または破砕物を用いて増殖した菌体であってもよい。充分な菌体量を得るためには、一般的な乳酸菌用培地など当該菌が充分に増殖可能な培地において培養されるのが好ましい。培養後、乳酸菌を集菌し、さらに水あるいは生理食塩水で１回以上洗菌したのちに使用するのが好ましい。
【００２７】
本発明の経腸栄養剤に含有させる乳酸菌の形態は、生菌体であっても菌体処理物であっても死菌体であってもよいが、保存安定性を向上させるためには、望ましくは菌体処理物あるいは死菌体であり、より望ましくは死菌体の形態で含有させるのが好ましい。ラクトバチルス・ブレビスに属する乳酸菌の菌体処理物あるいは死菌体を調整する手段としては、特に限定されず、公知の方法を採用することができる。好ましくは、菌体を水あるいは生理食塩水で懸濁して得られる菌体溶液を、６０〜１２５℃で３０秒〜６時間、より好ましくは９０〜９５℃で５〜３０分間熱処理をして得られる死菌体を用いることができる。菌体処理物としては、例えば、熱処理、物理的破砕、ガンマ線照射、高圧処理、減圧処理、薬品処理などを行ったものを使用できる。なお、これら処理を行う前に、公知の方法で生菌数を把握しておくのが好ましい。
【００２８】
本発明においては、上記ラクトバチルス・ブレビスに属する乳酸菌、たんぱく質、脂質、糖質、その他必要に応じて他の成分や水を、公知の方法で混合調製して経腸栄養剤を製造することもできるし、たんぱく質、脂質、糖質を含有する従来の一般的な経腸栄養剤に、ラクトバチルス・ブレビスに属する乳酸菌を混合して製造することもできる。一般的な経腸栄養剤に菌体を混合後にさらにレトルト殺菌しても構わない。この時使用される一般的な経腸栄養剤としては市販品を利用してもよく、そのような市販品としては、明治乳業株式会社製のエンシュア・リキッド（登録標章）や森永乳業株式会社製のＭＡ−７（エムエーセブン、販売元：株式会社クリニコ）などを用いることができる。本発明の経腸栄養剤は、ラクトバチルス・ブレビスに属する乳酸菌が混合された状態で出荷、保存、投与されるものである。
【００２９】
本発明の経腸栄養剤に含有される乳酸菌の含有量は、特に限定されないが、経腸栄養剤１ｋｃａｌあたりに含まれる細胞数として、１０，０００個以上となるようにするのが好ましい。すなわち、乳酸菌として菌体処理物あるいは死菌体を使用する場合には、処理・殺菌前の生菌数として１０，０００ＣＦＵ/ｋｃａｌ以上となるように経腸栄養剤に混合することができる。また、その上限としては特に限定されないが、あまりに乳酸菌含有量が多いと、胃にもたれたり、消化不良を起こす可能性も否定できないことから、５,０００,０００ＣＦＵ／ｋｃａｌ以下が望ましい。
【００３０】
本発明の経腸栄養剤は成人一人に対し、１日に９００〜２０００ kcalの範囲で経管あるいは経口で投与することが望ましい。
【００３１】
また、ラクトバチルス・ブレビスに属する乳酸菌の、生菌体、菌体処理物または死菌体は、経腸栄養剤用の添加物として好ましく使用される。すなわち、ラクトバチルス・ブレビスに属する乳酸菌の、生菌体、菌体処理物または死菌体を有効成分とする、経腸栄養剤用添加物も、本発明の一態様である。本発明の経腸栄養剤用添加物に使用されるラクトバチルス・ブレビスに属する乳酸菌としては、ラクトバチルス・ブレビス・サブスピーシス  コアギュランスが、後述する実施例に示すとおり、すぐれた粘膜免疫賦活作用および免疫バランス調整作用を有することから、好ましい。従って、本発明の経腸栄養剤用添加物は、粘膜免疫賦活剤または免疫バランス調整剤として使用することもできるし、さらには腸菅免疫活性化剤、ＩｇＡ抗体産生促進剤として使用することもできる。本発明の経腸栄養剤用添加物は、ＩｇＡ抗体産生を促進するだけでなく、血液中免疫グロブリンＧ２ａ（ＩｇＧ２ａ）／Ｇ１（ＩｇＧ１）比の上昇を抑制することから、Ｔｈ２側に偏った免疫バランスを正常に戻すことで、ＩｇＥ抗体の産生を抑制し、アレルギー状態を改善することができる。
【００３２】
以下に実施例を示し、本発明を具体的に説明するが、本発明はこの実施例になんら限定されるものではない。
【実施例】
【００３３】
以下の方法で、ラクトバチルス・ブレビスに属する乳酸菌である、ラクトバチルス・ブレビス・サブスピーシス  コアギュランスの機能について評価した。
【００３４】
（製造例１）ラクトバチルス・ブレビス生菌体の調整
市販の乳酸菌用培地（Ｍ．Ｒ．Ｓ培地、ＯＸＯＩＤ社製）を、濃度が６２ｇ／Ｌとなるように蒸留水に溶解させ、１２１℃で１５分間オートクレーブ滅菌した。続いて、該滅菌済み培地に、ラクトバチルス・ブレビス・サブスピーシス  コアギュランスとして、Ｌ．ｂｒｅｖｉｓ  ｋａｎｅｋａ−０１株（ＮＩＴＥ Ｐ−５５８）を植菌し、３０℃で約２４時間培養した。 
【００３５】
培養後菌体を集菌して培地成分を除き、得られた菌体を水で１回洗菌した。洗浄後の菌体を生菌数換算で１×１０１１ＣＦＵ/ｍｌになるように水に懸濁した。
【００３６】
（製造例２）ラクトバチルス・ブレビス死菌体の調整
市販の乳酸菌用培地（Ｍ．Ｒ．Ｓ培地、ＯＸＯＩＤ社製）を、濃度が６２ｇ／Ｌとなるように蒸留水に溶解させ、１２１℃で１５分間オートクレーブ滅菌した。続いて、該滅菌済み培地に、ラクトバチルス・ブレビス・サブスピーシス  コアギュランスとして、Ｌ．ｂｒｅｖｉｓ  ｋａｎｅｋａ−０１株（ＮＩＴＥ Ｐ−５５８）を植菌し、３０℃で約２４時間培養した。 
【００３７】
培養後菌体を集菌して培地成分を除き、得られた菌体を水で１回洗菌した。洗浄後の菌体を生菌数換算で１×１０１１ＣＦＵ/ｍｌになるように水に懸濁した。その菌体の懸濁液を９５℃で１５分熱処理し、死菌体の懸濁液とした。処理後の菌体はＭＲＳ寒天培地に塗布して３０℃で４８時間保温することにより、コロニーが出現しないことを確認した。
【００３８】
（実施例１）糞便中ＩｇＡ濃度の評価  
ＢＡＬＢ／ｃ系ＳＰＦ雄性マウス(日本チャールスリバー製)１８匹を６週齢で購入し、１週間馴化飼育後、７週齢にて、Ｃｏｎｔｒｏｌ群および製造例２のラクトバチルス・ブレビス死菌体高用量投与群と低用量投与群の計３群（各６匹）に分けた。ラクトバチルス・ブレビス死菌体の懸濁液の投与量は、熱処理前の生菌数換算で、高用量投与群は１．０×１０9ＣＦＵ/ｍｏｕｓｅ、低用量投与群は１．０×１０5ＣＦＵ/ｍｏｕｓｅとなるように、それぞれ１日１回、合計４２日間強制経口投与した。Ｃｏｎｔｒｏｌ群には、蒸留水を０．０１ｍｌ／１ｇ−マウス体重の割合で投与した。被験物質投与開始前（０日）、開始後３、７，１４，２１，２８，３５，４２日目の糞便を回収した。回収後糞便乾燥重量０．１ｇに対し９倍量のＰＢＳ（５０ｍＭ  ＥＤＴＡ、０．１ｍｇ/ｍＬ トリプシン阻害剤、０．００１ｍｏｌ／Ｌ フッ化フェニルメチルスルホニルを含む）を加え４℃下で1時間静置後ホモジナイズした。その後４℃下において ３０００ｒｐｍ、１０分間遠心して得た上清を総ＩｇＡ測定用サンプルとした。
【００３９】
糞便中ＩｇＡ濃度はＥＬＩＳＡキット（マウスＥＬＩＳＡ ＩｇＡ測定キット、ＥＬＩＳＡ Ｓｔａｒｔｅｒ Ａｃｃｅｓｏｒｙ Ｐａｃｋａｇｅ Ｋｉｔ（以上すべてＢＥＴＨＹＬ製）を用いて測定した。
【００４０】
【表１】
2010150206.tif 000002
【００４１】
表１に示した通り、低用量投与群、高用量投与群ともに有意なＩｇＡ濃度の増加がみられた。以上の結果から、ラクトバチルス・ブレビスに属する乳酸菌の死菌体に腸管免疫賦活作用があることが確認された。
【００４２】
（実施例２）
ＢＡＬＢ／ｃ系ＳＰＦ雄性マウス(日本チャールスリバー製)１２匹を６週齢で購入し、１週間馴化飼育後、７週齢にて、Ｃｏｎｔｒｏｌ群およびラクトバチルス・ブレビス生菌体投与群の２群（各６匹）に分けた。生菌体投与群には、製造例１のラクトバチルス・ブレビスの生菌体を、１．０×１０9 ＣＦＵ/ｍｏｕｓｅの投与量となるよう、１日１回、合計２８日間強制経口投与した。
【００４３】
被験物質投与開始後２、３、および４週目の糞便を回収した。回収後糞便乾燥重量０.１ｇに対し９倍量のＰＢＳ（５０ｍＭ ＥＤＴＡ、０．１ｍｇ/ｍＬ トリプシン阻害剤、０．００１ｍｏｌ／Ｌ フッ化フェニルメチルスルホニルを含む）を加え４℃下で1時間静置後ホモジナイズした。その後４℃下において ３０００ｒｐｍ、１０分間遠心して得た上清を総ＩｇＡ測定用サンプルとした。
【００４４】
糞便中ＩｇＡ濃度はＥＬＩＳＡキット（マウスＥＬＩＳＡ ＩｇＡ測定キット、ＥＬＩＳＡ Ｓｔａｒｔｅｒ Ａｃｃｅｓｏｒｙ Ｐａｃｋａｇｅ Ｋｉｔ（以上すべてＢＥＴＨＹＬ製）を用いて測定した。
【００４５】
その結果を図１にまとめた。図１に示した通り、投与後３週目以降において生菌体投与群で有意なＩｇＡ濃度の増加がみられた。以上の結果から、ラクトバチルス・ブレビスに属する乳酸菌の生菌体に腸管免疫賦活作用があることが確認された。
【００４６】
（実施例３）血清中ＩｇＧ１およびＩｇＧ２ａ濃度の評価  
実施例１の投与実験終了後（投与開始から４４日目）、各群のマウスをイソフルラン麻酔下で開腹し、腹部大静脈より全採血した。採取する血液は室温で約２時間静置した後、３０００rpm、１５分間遠心分離し血清を得た。得られた血清はＩｇＧ１およびＩｇＧ２ａ測定用サンプルとし、測定日まで−８０℃下で凍結保存した。血清中ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ濃度はＥＬＩＳＡキット（マウスＥＬＩＳＡ ＩｇＧ１測定キット、マウスＥＬＩＳＡ ＩｇＧ２ａ測定キット、ＥＬＩＳＡ Ｓｔａｒｔｅｒ Ａｃｃｅｓｓｏｒｙ Ｐａｃｋａｇｅ Ｋｉｔ（以上すべてＢＥＴＨＹＬ製））を用いて測定した。  
【００４７】
その結果を図２にまとめた。図２に示した通り、高用量投与群で、投与後４週目の血清中ＩｇＧ１濃度の減少、ＩｇＧ２ａ濃度の上昇、ＩｇＧ２ａ／ＩｇＧ1比の増加が見られた。以上の結果から、ラクトバチルス・ブレビスの死菌体に免疫バランス調整作用が認められた。
【００４８】
（実施例４）
実施例２の投与実験終了後（投与開始から２８日目）、各群のマウスをイソフルラン麻酔下で開腹し、腹部大静脈より全採血した。採取する血液は室温で約２時間静置した後、３０００rpm、１５分間遠心分離し血清を得た。得られた血清はＩｇＧ１およびＩｇＧ２ａ測定用サンプルとし、測定日まで-８０℃下で凍結保存した。血清中ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ濃度はＥＬＩＳＡキット（マウスＥＬＩＳＡ ＩｇＧ１測定キット、マウスＥＬＩＳＡ ＩｇＧ２ａ測定キット、ＥＬＩＳＡ Ｓｔａｒｔｅｒ Ａｃｃｅｓｓｏｒｙ Ｐａｃｋａｇｅ Ｋｉｔ（以上すべてＢＥＴＨＹＬ製））を用いて測定した。  
【００４９】
その結果を図３にまとめた。図３に示した通り、Ｃｏｎｔｒｏｌ群と比べ、生菌群で投与後４週目の血清中ＩｇＧ1濃度の有意な減少、ＩｇＧ２ａ濃度の上昇、有意なＩｇＧ２ａ／ＩｇＧ1比の増加が見られた。以上の結果から、ラクトバチルス・ブレビスの生菌体に、免疫バランス調整作用が認められた。
【００５０】
以上の結果から、ラクトバチルス・ブレビスに属する乳酸菌に、優れた腸管免疫賦活作用と生体の免疫バランスの調整作用が確認できた。従って、ラクトバチルス・ブレビスに属する乳酸菌を含有する本発明の経腸栄養剤は、免疫賦活効果が高く、免疫バランスを調整することによりアレルギーを抑制する作用を持つことが期待できる。本発明のの経腸栄養剤に含有される乳酸菌は、食経験のある、人体に極めて安全な物質であり、食品、医薬品等に使用することが十分可能である。腸管免疫能が弱まっているヒトに本発明の経腸栄養剤を使用した場合、ＩｇＡの産生が亢進され、感染症などに対する抵抗力が増進する。また、免疫バランス調整作用によりアレルギー患者などのＴｈ２側に偏った免疫バランスが正常に戻るように調整され、その結果ＩｇＥ抗体の産生の抑制につながり、アレルギー状態が改善されることによって服用者の健康に大きく貢献するものと考えられる。
【図面の簡単な説明】
【００５１】
【図１】ラクトバチルス・ブレビス生菌投与による、糞便中IgA濃度の変化
【図２】ラクトバチルス・ブレビス死菌投与４２日目の、血清中IgG1濃度、IgG2a濃度、IgG2a/ IgG1比
【図３】ラクトバチルス・ブレビス生菌投与２８日目の、血清中IgG1濃度、IgG2a濃度、IgG2a/ IgG1比
【図１】
2010150206.tif 000003
【図２】
2010150206.tif 000004
【図３】
2010150206.tif 000005