(57)【要約】【課題】本発明の目的は、本発明は、従来の増粘剤を用いた化粧料にないさっぱりとした爽快な使用感を与える酸性増粘剤、及び該酸性増粘剤を含有する化粧料を提供することにある。【解決手段】ポリ−γ−Ｌ−グルタミン酸架橋体・フリー体を含むことを特徴とする酸性増粘剤、及び該酸性増粘剤を含むことを特徴とする化粧料を提供する。本発明により、塩水溶液中においても粘度を低下させることの少ない酸性増粘剤、及び該酸性増粘剤を含有する化粧料を提供することができる。【選択図】  図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
ポリ−γ−Ｌ−グルタミン酸・フリー体の架橋体を含んでなることを特徴とする酸性増粘剤。
【請求項２】
ｐＨが４．９以下であることを特徴とする請求項１に記載の酸性増粘剤。
【請求項３】
請求項１又は２に記載の酸性増粘剤を含むことを特徴とする化粧料。
【請求項４】
請求項１又は２に記載の酸性増粘剤を添加することを特徴とする化粧料の製造方法。
【請求項５】
請求項１又は２に記載の酸性増粘剤を添加することを特徴とする化粧料の粘度を増加する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、酸性増粘剤に関する。さらに詳しくは、塩水溶液中においても粘度を低下させることの少なく、かつ使用感に優れたポリ−γ−Ｌ−グルタミン酸架橋体・フリー体を含む酸性増粘剤、化粧料として好適な酸性増粘剤に関する。
【０００２】
また、本発明は、上記ポリ−γ−Ｌ−グルタミン酸架橋体・フリー体を含む酸性増粘剤を配合した化粧料に関するものであり、例えば、皮膚や毛髪を含む広汎な化粧料に利用できる。
【背景技術】
【０００３】
医薬品および化粧料を含む広汎な分野で使用できる増粘剤としては、種々の多糖類、ゼラチンなどの天然高分子、ポリオキシエチレン、架橋ポリ（メタ）アクリル酸などの合成高分子、モンモリロナイト、シリカなどの無機鉱物などが挙げられる。特に、これらの中でも架橋ポリ（メタ）アクリル酸は安価で増粘効果が高く、少量でゲル化するため、医薬品および化粧品業界において高頻度に用いられている。
また、特に化粧料においては、増粘剤あるいは安定化剤として上記の水溶性増粘剤を配合している。
【０００４】
しかしながら、架橋ポリ（メタ）アクリル酸はｐＨ５以下の酸性下や塩の存在する水溶液中では、カルボキシル基の解離が抑えられ、粘度が極端に低下しゲル化しなくなる。このため、酸性条件や塩共存系が要求される処方では使えない。特に、使用性が重要なポイントを占める化粧料のゲル化剤としては、この特徴が致命的な欠点となることもある。例えば、ｐＨ５以下の酸性条件下では、増粘剤として用いられる架橋ポリ（メタ）アクリル酸は急激に粘度低下を起こすため、十分な粘度を保持するためにはその配合量を大幅に増やさなければならず、その結果、使用性が悪くなる。また、架橋ポリ（メタ）アクリル酸で増粘 ゲル化させた化粧料を肌に塗布しようとすると、肌表面に存在する塩 で水分を離してしまい、上滑り感のある使用性となってしまう。発汗直後の使用に際しては、特にこの上滑り感が顕著に現われる。
【０００５】
一方で、微生物が生産するバイオポリマーが有望視されている。バイオポリマーの中でも、アミノ酸が縮重合して構成されるポリアミノ酸と呼ばれる一群のバイオポリマーには様々な機能が見出されており、その潜在能力に注目が集まっている。これまでに、ポリアミノ酸として、ポリ−γ−グルタミン酸（以下、「ＰＧＡ」と表記することもある）、ポリ−ε−リジンおよびシアノファイシンの３種類が同定されている。
【０００６】
ＰＧＡは、グルタミン酸のα−アミノ基とγ−カルボキシル基とがアミド結合したポリアミノ酸であり、古くから日本人に親しまれている納豆の糸引きの主体物質として知られる吸水性のポリアミノ酸である。このＰＧＡがこのように親しまれてきた背景として、その魅力的な機能によるところが大きい。即ち、ＰＧＡの魅力的な機能としては、生分解性及び高吸水性を兼ね備えている点が知られている。これらの機能を利用して、上述した化粧料をはじめ、医療品、食品等、種々の分野、用途への使用が期待されている。
【０００７】
ＰＧＡは、Ｌ−グルタミン酸及びＤ−グルタミン酸の両光学異性体が不規則に結合してなるＰＧＡが一般的であるが、Ｌ−グルタミン酸のみが結合してなるＰＧＡ（特許文献１）（以下、「Ｌ−ＰＧＡ」と表記することもある）や、Ｄ−グルタミン酸のみが結合してなるＰＧＡ（非特許文献１）（以下、「Ｄ−ＰＧＡ」と表記することもある）も報告されている。
【０００８】
また、特許文献２では、ＰＧＡの架橋体を吸水性樹脂として用いている。即ち、ポリ−γ−グルタミン酸架橋体は、ポリ−γ−グルタミン酸の一部が架橋した構造を有するものであり、水を吸収して膨潤し、一旦吸収した水は荷重をかけても放出しにくいという性質を持っている。さらに、ポリ−γグルタミン酸架橋体は高い保水性を有するとともに、生分解性があることでも知られている。
【０００９】
ポリ−γ−グルタミン酸架橋体（以下、「ＰＧＡ架橋体」と表記することもある）の化粧料への応用として、例えば特許文献３ではＰＧＡ架橋体の化粧料素材としての使用性や生分解性が示され、また特許文献４では、使用時にべたつかないとともに、肌や毛髪へのなじみがよく、保湿効果に優れたＰＧＡ架橋体を配合した化粧料が示されている。
【００１０】
しかしながら、従来のＰＧＡおよびＰＧＡ架橋体を単純に化粧料組成物中に配合したのでは、塩存在下において粘度低下がしばしば問題となることがあった。
【００１１】
特許文献５では、Ｄ−グルタミン酸及びＬ−グルタミン酸が結合してなるＰＧＡ（以下、「ＤＬ−ＰＧＡ」と表記することもある）のＮａ塩、Ｋ塩、ＮＨ４塩又はＭｇ塩の架橋剤を用いた架橋方法が示されているが、フリー体（Ｈ体）の具体的な架橋方法は示されていない。
【００１２】
また、Ｌ−ＰＧＡの製造方法（特許文献６）、光学純度が均一なＬ−ＰＧＡの架橋方法とＬ−ＰＧＡ架橋体（特許文献７）、およびＬ−ＰＧＡ及びＬ−ＰＧＡ架橋体のうち少なくとも一方を含むことを特徴とする皮膚外用剤（特許文献８）の報告がある。
【００１３】
【特許文献１】特表２００２−５１７２０４号公報
【特許文献２】特開平１０−２５１４０２号公報
【特許文献３】特開２００１−７２７６４号公報
【特許文献４】特開２００３−１２４４２号公報
【特許文献５】特開２００６−１９３４５１号公報
【特許文献６】特開２００７−３１４４３４号公報
【特許文献７】特開２００８−１２０９１０号公報
【特許文献８】特開２００８−１２０７２５号公報
【非特許文献１】Makino, S., I. Uchida, N. Terakado, C. Sasakawa, and M. Yoshikawa, Molecular characterization and protein analysis of the cap region, which is essential for encapsulation in Bacillus anthracis, Journal of Bacteriology, 1989, 171, 722-730.
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１４】
本発明の目的は、塩水溶液中においても粘度を低下させることの少ないＬ−ＰＧＡ・フリー体の架橋体を含むことを特徴とする酸性増粘剤を提供することにある。また、本発明は、従来の増粘剤を用いた化粧料にないさっぱりとした爽快な使用感を与える酸性増粘剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１５】
本発明者らは上記課題の解決のため、高い粘度を有し、所望の品質を安定して製造することができる、天然物由来の生分解性素材を得るべく鋭意検討を行った。その結果、高分子量を有するＬ−ＰＧＡを独自に開発し、該Ｌ−ＰＧＡは、Ｌ−グルタミン酸のみが結合してなるため、光学活性が均一であり、かつ、分子量が高いことから優れた粘度を有し、かつ塩水溶液中においても粘度が低下し難い酸性増粘剤であることを見出した。例えば医薬品や化粧品を含む広汎な分野に利用できる。
【００１６】
以下に示す手段により、上記課題を解決できることを見出し、本発明に到達した。
１．ポリ−γ−Ｌ−グルタミン酸・フリー体の架橋体を含むことを特徴とする酸性増粘剤。
２．ｐＨが４．９以下であることを特徴とする１に記載の酸性増粘剤。
３．１又は２に記載の酸性増粘剤を含むことを特徴とする化粧料。
４．１又は２に記載の酸性増粘剤を添加することを特徴とする化粧料の製造方法。
５．１又は２に記載の酸性増粘剤を添加することを特徴とする化粧料の粘度を増加する方法。
【発明の効果】
【００１７】
本発明に係る酸性増粘剤は、以上のように、ポリ−γ−Ｌ−グルタミン酸・フリー体の架橋体を含む。そのため、優れた粘度を有し、かつ塩水溶液中においても粘度を低下させることの少ない酸性増粘剤を安定に提供することができるという効果を奏する。さらに、従来の増粘剤を用いた化粧料にないさっぱりとした爽快な使用感を与える。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１８】
本発明の実施の一形態に説明すれば、以下のとおりである。なお、本発明の範囲はこれらの説明に拘束されることはなく、以下の例示以外についても、本発明の趣旨を損なわない範囲で適時変更して実施することができる。
【００１９】
本明細の「Ｌ−ＰＧＡ」とは、Ｌ−グルタミン酸のみからなるホモポリマ−である。その構造は式（Ｉ）にて示される構造である。式（Ｉ）において、ｎはＬ−ＰＧＡの重合数を示す。ｎ＞７８
【００２０】
【化１】
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【００２１】
本明細の「分子量」とはプルラン標準物質の分子量換算にて算出した数平均分子量（Mn）のことを指す。
【００２２】
本発明の「Ｌ−ＰＧＡ架橋体」とは、Ｌ−グルタミン酸のみからなるホモポリマ−であるＬ−ＰＧＡを架橋したものである。
【００２３】
本発明のＬ−ＰＧＡ架橋体は、既存の方法で得ることができる。たとえば、特許文献６に記載された方法で、Ｌ−ＰＧＡを得て、それを特許文献７に記載された方法によりγ線架橋して得ることができる。以下に、一例として、特許文献６および７を参考にしたＬ−ＰＧＡ架橋体の製造方法を述べるがこれに限定されるものではない。
【００２４】
〔Ｌ−ＰＧＡの製造方法〕
たとえば、独立行政法人産業技術総合研究所特許生物寄託センタ−に、ナトリアルバ  エジプチアキア（Ｎａｔｒｉａｌｂａ ａｅｇｙｐｔｉａｃａ）０８３０−８２株（受託機関名：独立行政法人産業技術総合研究所特許生物寄託センタ−、 受託日：平成１８年４月４日、受託番号：ＦＥＲＭ  ＢＰ−２０８７２）、ナトリアルバ  エジプチアキア（Ｎａｔｒｉａｌｂａ ａｅｇｙｐｔｉａｃａ）０８３０−２４３株（受託機関名：独立行政法人産業技術総合研究所特許生物寄託センタ−、 受託日：平成１８年４月４日、受託番号：ＦＥＲＭ  ＢＰ−２０８７３）、またはナトリアルバ  エジプチアキア（Ｎａｔｒｉａｌｂａ ａｅｇｙｐｔｉａｃａ）０８３１−２６４株（受託機関名：独立行政法人産業技術総合研究所特許生物寄託センタ−、 受託日：平成１８年４月４日、受託番号：ＦＥＲＭ  ＢＰ−２０８７４）として寄託されている菌株をもちいてポリ−γ−Ｌ−グルタミン酸を得る場合、液体培養によりＬ−ＰＧＡを得ることができる。または、特許文献６に記載された方法で微生物を変異処理し、液体培養によりＬ−ＰＧＡを生産できる微生物を作製し、Ｌ−ＰＧＡを生産することもできる。また、ナトリアルバ  エジプチアキア（Ｎａｔｒｉａｌｂａ ａｅｇｙｐｔｉａｃａ）を常法により固相培養し、Ｌ−ＰＧＡを生産することもできる。
【００２５】
液体培養する場合には、振とう培養、通気攪拌培養など好気条件などで行うことが望ましい。その際の培養温度は、３０〜５０℃、好ましくは３５〜４５℃が適当である。また、培地のｐＨは、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、アンモニア、塩酸、硫酸またそれらの水溶液などによって調整できるが、ｐＨ調整できれば限定されない。培養ｐＨ５．０−９．０、好ましくはｐＨ６．０−８．５で培養するのが望ましい。また、培養期間は、通常２〜７日間程度でよい。また、培養時のＮａＣｌ濃度は１０〜３０％、好ましくは１５〜２５％で培養するのが望ましい。また、Ｙｅａｓｔ  Ｅｘｔｒａｃｔ濃度は０．１〜１０％、好ましくは０．５〜５．０％濃度で培養するのが望ましい。また、固体培養の場合においても前期液体培養の場合と応用に、培養温度は３０〜５０℃、好ましくは３５〜４５℃、培養時のｐＨは５．０−９．０、好ましくはｐＨ６．０−８．５、培養時のＮａＣｌ濃度は１０−３０％、好ましくは１５〜２５％、Ｙｅａｓｔ  Ｅｘｔｒａｃｔ濃度は０．１−１０％、好ましくは０．５−５％濃度が採用される。このようにして培養すると、Ｌ−ＰＧＡは、主として菌体外に蓄積されて前記した培養物中に含まれる。特に限定はされないが、ＰＧＡ生産液体培地−１（２２.５％ ＮａＣｌ、２％ ＭｇＳＯ４・７Ｈ２Ｏ、０.２％ ＫＣｌ、３％ Ｔｒｉｓｏｄｉｕｍ  Ｃｉｔｒａｔｅ、１％ Ｙｅａｓｔ  Ｅｘｔｒａｃｔ、０.７５％ Ｃａｓａｍｉｎｏ  ａｃｉｄ）を使用してもよく、各添加量は菌株にあわせて適宜調整すればよい。
【００２６】
培養液中のＬ−ＰＧＡの定量方法としては、Ｌ−ＰＧＡを含む試料から、硫酸銅やエタノ−ルを用いて沈澱させ、その沈殿物の重量測定およびＫｉｊｅｒｄｅｒ法による総窒素の測定を行なうもの（Ｍ．Ｂｏｖａｒｎｉｃｋ，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，１４５巻、４１５ペ−ジ、１９４２年）、塩酸加水分解後のグルタミン酸量を測定する方法（Ｒ．Ｄ．Ｈｏｕｓｅｗｒｉｇｔ，Ｃ．Ｂ．Ｔｈｏｒｎｅ，Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．，６０巻、８９ペ−ジ、１９５０年）及び、塩基性色素との定量的な結合を利用した比色法（Ｍ．Ｂｏｖａｒｎｉｃｋ ｅｔ ａｌ．， Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２０７巻、５９３ペ−ジ、１９５４年）が知られているが好ましくは、塩基性色素との定量的な結合を利用した比色法である。
【００２７】
塩基性色素としてはクリスタルバイオレット、アニリンブル−、サフラニンオ−、メチレンブル−、メチルバイオレット、トルイジネブル−、コンゴレッド、アゾカルマイン、チオニン、ヘマトキシリンなどがあげられるが、サフラニンオ−が好ましい。
【００２８】
この培養物からＬ−ＰＧＡを分離、採取するには、硫酸銅やエタノ−ルを用いて沈澱させるなどの前記の公知の方法を用いればよい。一例を挙げると、例えば、培養液を遠心分離し、菌体を取り除く。続いて、得られた上清液に３倍量の水を加え希釈した後、ｐＨを３．０に調整する。ｐＨ調整後、５時間  室温で攪拌した。その後、３倍量のエタノ−ルを加え、Ｌ−ＰＧＡを沈殿物として回収した。沈殿物を０．１ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ８．０）に溶解させ、低分子物質を透析により除去する。透析後、得られた液を核酸除去のため、ＤＮａｓｅ、ＲＮａｓｅ処理を行っても良いし、次いでタンパク質除去のために、Ｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ処理を行っても良い。Ｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ処理後、透析により低分子物質を除去しても良い。透析後、凍結乾燥等により、乾燥Ｌ−ＰＧＡを得ればよい。また、必要により陰イオン交換樹脂を用いた精製を行うことができるが、一般的な条件で精製可能である。
【００２９】
本発明に使用するＬ−ＰＧＡの分子量は、特に限定されないが、好ましくは５０万以上、より好ましくは８０万以上、さらに好ましくは１００万以上、特に好ましくは１３０万以上である。
【００３０】
Ｌ−ＰＧＡの分子量の上限値は特に限定されるものではないが、前述のＬ−ＰＧＡの製造方法によれば、例えば、６００万、最大で１５００万のＬ−ＰＧＡを得ることができる。
【００３１】
このＬ−ＰＧＡは、古細菌によって生産されるために、納豆菌によって生産されるＤＬ−ＰＧＡと比べて特有の臭気が軽減されるため、化粧品、医薬部外品、医療用品、衛生用品または医薬品の用途に利用しても品質を損なうことがない。
【００３２】
〔Ｌ−ＰＧＡ・フリー体の製造方法〕
【００３３】
Ｌ−ＰＧＡがＮａなどの塩等である場合、酸処理をすることで、Ｌ−ＰＧＡ・フリー体を得ることができる。例えば、Ｌ−ＰＧＡ・Ｎａ塩を含む溶液をＨＣｌなどで酸性にしたのち、アルコール沈殿を行えばよい。得られた沈殿物は、透析などにより低分子物質を除いても良い。得られたＬ−ＰＧＡ・フリー体を凍結乾燥などにより粉末化してもよい。Ｌ−ＰＧＡ・フリー体の溶液のｐＨは、特に限定されるものではないが、ｐＨ４．９以下が好ましく、さらに好ましくはｐＨ２．５以下である。
【００３４】
〔Ｌ−ＰＧＡ架橋体・フリー体の製造方法〕
【００３５】
Ｌ−ＰＧＡ架橋体・フリー体の製造方法は、Ｌ−ＰＧＡ・フリー体の分子同士を架橋させる架橋工程を含んでいればよい。Ｌ−グルタミン酸のみからなる、光学活性が均一なＬ−ＰＧＡ・フリー体を原料として、これを架橋させることで、Ｌ−ＰＧＡ架橋体・フリー体の分子毎の性質が均一となる。よって、所望の品質を有するＬ−ＰＧＡ架橋体・フリー体を安定して製造することができる。
【００３６】
Ｌ−ＰＧＡ・フリー体は、溶媒に溶解させてＬ−ＰＧＡ・フリー体の溶液を作製した上で、架橋反応に供すればよい。Ｌ−ＰＧＡ・フリー体を溶解させる溶媒としては、Ｌ−ＰＧＡ・フリー体を溶解させることができる限り限定されるものではないが、例えば、水、アルコ−ル、アセトン、酢酸メチル、酢酸エチル等が挙げられ、中でも、水、メチルアルコ−ル、エチルアルコ−ルが好ましく、水がさらに好ましい。これらの溶媒に溶解させるときのＬ−ＰＧＡ・フリー体の濃度は、特に限定されるものではないが、好ましくは１重量％以上２０重量％以下であり、さらに好ましくは２．５重量％以上１５重量％以下であり、特に好ましくは５重量％以上１０重量％以下である。
【００３７】
Ｌ−ＰＧＡ・フリー体の溶液に架橋反応を施すと、該溶液中でＬ−ＰＧＡの架橋体・フリー体が形成され、該Ｌ−ＰＧＡ架橋体・フリー体が該溶媒を含んで膨潤することで、ハイドロゲルが得られる。これは後述する本発明に係るハイドロゲルの態様の一つである。さらに、該ハイドロゲルを凍結乾燥等することによって、溶媒成分を除去することによって、該溶媒成分を含まないＬ−ＰＧＡ架橋体・フリー体を得ることができる。なお、本発明に係るハイドロゲルについては後述する。
【００３８】
上述のＬ−ＰＧＡ架橋体・フリー体の製造方法によれば、上述した架橋反応において、例えば、５０％以上１００％以下、特に７０％以上１００％以下のゲル化率でＬ−ＰＧＡ架橋体・フリー体を得ることができる。
【００３９】
なお、本明細書において「ゲル化率」とは、原料として用いたＬ−ＰＧＡ・フリー体の重量に対する、架橋反応によって架橋体を形成したＬ−ＰＧＡ・フリー体の重量の百分率を意図する。換言すれば、「ゲル化率」とは、原料として用いたＬ−ＰＧＡ・フリー体に対して、得られるＬ−ＰＧＡ架橋体・フリー体ひいてはハイドロゲルの収率を表す。具体的には、架橋反応によって得たハイドロゲルの乾燥重量を、該架橋反応に供したＬ−ＰＧＡ・フリー体の乾燥重量で割って得た数値に、百を乗じて算出する。
【００４０】
Ｌ−ＰＧＡ・フリー体の架橋反応の方法は、Ｌ−ＰＧＡ・フリー体の分子同士を架橋させることができる限り限定されるものではなく、従来公知の方法で行なえばよい。例えば、架橋剤を用いてもよく、放射線を用いてもよいが、中でも放射線を用いることが好ましい。放射線を用いれば、架橋反応後に、架橋剤を除去する操作を必要とせず、高純度のＬ−ＰＧＡ架橋体・フリー体を製造することができる。
【００４１】
Ｌ−ＰＧＡ架橋体・フリー体の製造方法で使用可能な放射線としては、特に限定されるものではなく、α線、β線、γ線、電子線、中性子線、Ｘ線等を用いればよい。中でも、γ線が好ましい。γ線は、例えばコバルト６０を線源とする照射装置等、従来公知の方法、機器を用いて発生させればよい。
【００４２】
また、Ｌ−ＰＧＡ・フリー体に照射する放射線の照射線量は、０．５ｋＧｙ以上３０ｋＧｙ以下が好ましく、さらに好ましくは２ｋＧｙ以上２０ｋＧｙ以下であり、特に好ましくは３ｋＧｙ以上１５ｋＧｙ以下であるが、製造するＬ−ＰＧＡ架橋体・フリー体の用途等に応じて適宜設定すればよい。一般に照射線量が多ければ硬質のハイドロゲルを得ることができ、照射線量が少なければ軟質のハイドロゲルを得ることができる。例えば、照射線量を２．７ｋＧｙとした場合、平板上に置いても自然に水平方向に広がる、流動性の高いハイドロゲルが得られ、照射線量が７ｋＧｙ、１１ｋＧｙでは、平板上に置いても水平方向に広がることなく静置可能な、流動性の低いハイドロゲルが得られる。
【００４３】
また、Ｌ−ＰＧＡ・フリー体の架橋に放射線を用いる場合、Ｌ−ＰＧＡ・フリー体の溶液を放射線透過性容器に入れて用いればよい。放射線透過性容器としては、特に限定されるものではなく、例えばガラス製バイアル瓶等、ガラス製容器等を用いることができる。
【００４４】
Ｌ−ＰＧＡ・フリー体の溶液を放射線透過性容器に入れた後は、そのまま放射線を照射してもよいが、予め、該溶液に対して窒素を用いてバブリングしておくことが好ましい。該溶液中に含有される酸素を除去することで、架橋反応の阻害を防ぐことができる。
【００４５】
なお、Ｌ−ＰＧＡ・フリー体の架橋に架橋剤を用いる場合は、エポキシ化合物、カルボン酸基及び／又はカルボキシレート基を含有する多糖、アミノ酸等、従来公知の架橋剤を用いればよく、特に限定されるものではない。例えば、エポキシ化合物としては、グリセリントリグリシジルエーテル、ジ−グリセリンポリグリシジルエーテル、ポリ−グリセリンポリグリシジルエーテル、ポリオキシエチレンソルビトールポリグリシジルエーテル、多糖類としては、グルコースとフルクトースとガラクトースとグルクロン酸とからなる混合物、ラムノースとグルコースとガラクトースとグルクロン酸とからなる混合物、及びヒアルロン酸を主成分とするポリカルボン酸、アミノ酸としては、ポリアスパラギン酸、ポリリシン、アスパラギン酸、リシン、アルギニン、及びこれらの混合物が挙げられる。これらは単独で用いてもよく、適宜２種類以上を混合して用いてもよい。
【００４６】
上述のＬ−ＰＧＡ架橋体・フリー体の製造方法で用いるＬ−ＰＧＡ・フリー体としては、Ｌ−ＰＧＡ・フリー体の分子同士が架橋することができる限り、限定されるものではないが、上述の通り、平均分子量が大きいＬ−ＰＧＡ・フリー体であることが好ましい。
【００４７】
Ｌ−ＰＧＡ架橋体・フリー体のハイドロゲルを凍結乾燥後、すり鉢等で粉砕することでＬ−ＰＧＡ架橋体・フリー体粉末を得てもよい。
【００４８】
〔酸性増粘剤〕
本発明に係る酸性増粘剤はＬ−ＰＧＡ架橋体・フリー体を含めばよく、その他の具体的な構成は特に限定されるものではない。
【００４９】
Ｌ−ＰＧＡ・フリー体は、Ｌ−グルタミン酸が結合してなるため、光学活性が均一であり、分子毎の性質も均一である。よって、Ｌ−ＰＧＡ・フリー体から得られるＬ−ＰＧＡ架橋体・フリー体も、所望の品質で安定に製造することができる。そのため、Ｌ−ＰＧＡ架橋体・フリー体を用いることで、所望の品質を有する酸性増粘剤を安定して提供することができる。
【００５０】
さらに、Ｌ−ＰＧＡ架橋体・フリー体は、粘性に優れているため、本発明に係る酸性増粘剤は、酸性増粘剤及び／または化粧料として好適に用いることができる。
【００５１】
本発明に係る酸性増粘剤を化粧料として用いる場合、具体的には、乳液、美容液、クリーム、ローション、洗顔料、メイク落とし等のフェイスケア製品、ハンドケア製品の他、ボディケア製品、フットケア製品、ヘッドケア製品、及びヘアケア製品、ネイルケア製品、又はマウスケア製品等が挙げられる。
【００５２】
本発明における酸性増粘剤の皮膚外用剤への配合量は、その効果や添加した際の臭い、色調の点から考え、好ましくは０．００００１〜５０重量％（以下、単に「％」と記す）、より好ましくは０．００５〜３０％、より好ましくは、０．００１％以上１０％以下、更に好ましくは０．０１〜１０％の濃度範囲とすることがよい。Ｌ−ＰＧＡ及び／又はＬ−ＰＧＡの塩の場合は０．００１％以上５％以下がよく、Ｌ−ＰＧＡ架橋体及び／又はＬ−ＰＧＡ架橋体の場合は０．００１％以上３％以下がよい。
【００５３】
Ｌ−ＰＧＡ架橋体・フリー体濃度を、０．００１重量％以上３重量％にした場合、ｐＨは４．９以下となる。
【００５４】
Ｌ−ＰＧＡ架橋体・フリー体のハイドロゲルを酸性増粘剤として用いる場合は、Ｌ−ＰＧＡ架橋体・フリー体粉末を、水または水性成分に溶解させることでゲルを形成しても良い。上記化合物の水または水性成分への溶解は、混合、加熱等によって行うことができる。
【００５５】
ゲル化（固化）は、溶解撹拌後、放置（静置）することにより行う。
【００５６】
水性成分としては、化粧料、医薬品分野において用いられ得る水性成分であれば特に限定されるものでなく、例えば１,３−ブチレングリコール、プロピレングリコール等のグリコール類や、エタノール、プロパノール等の低級アルコールのほか、一般に化粧料の水相成分として配合される成分を含有することができる。具体的には、メタリン酸塩、エデト酸塩等のキレート剤や、ｐＨ調整剤、防腐剤等が例示されるが、これら例示に限定されるものでない。
【００５７】
上記ハイドロゲルをミクロゲルとして用いてもよい。ミクロゲルを作製する場合、ゲルのゲル強度は、ゲル自体がその形状を維持でき、また次工程のミクロゲルを得ることができる程度のものであれば特に限定されるものでない。本発明では、ゲル強度がかなり高いものでも使用することができ、例えばゼリー強度が１,０００ｇ／ｃｍ2（日寒水式測定）若しくはそれ以下程度の高ゼリー強度のものでも用いることができる一方、ゼリー強度３０ｇ／ｃｍ2程度のかなり弱いゲル強度でもミクロゲルを得ることができる。使用性向上の点からはゼリー強度１００ｇ／ｃｍ2前後のものが好ましい。
【００５８】
次いで、上記形成されたゲルをホモジナイザー、ディスパー、メカニカルスターラー等により破砕し、望みのミクロゲルを得る。本発明においてミクロゲルの平均粒径は０．１〜１,０００μｍであり、好ましくは１〜３００μｍ程度、より好ましくは１０〜２００μｍ程度である。ミクロゲルの平均粒径が１,０００μｍ超では、指どれが悪くなるなど使用性上問題となる場合があり、一方、０．１μｍ未満ではゲル製剤としての粘性が保てなくなる場合もある。破砕の度合いは、得られるミクロゲルの平均粒径が上記本発明での範囲を逸脱しない程度において、目的に応じて調節可能であり、より滑らかな使用性が必要とされる場合には高速攪拌により十分に破砕し、細かな粒径のミクロゲルとし、一方、ミクロゲル自体の触感を必要とする場合には軽い攪拌により破砕の度合いを弱めてやや大き目の粒径のミクロゲルとする。
【００５９】
このようにして得られるミクロゲルの粘度は、酸性増粘剤として配合される皮膚外用剤の剤型等によって異なり、一概にいえないが、例えば寒天を用いた場合、寒天濃度０．５〜２％程度で、Ｂ型粘度計（回転数０．６ｒｐｍ、２５℃）による測定で２,０００〜１,０００,０００ｍＰａ・ｓ程度のものが好ましい。
【００６０】
本発明により得られるミクロゲルを酸性増粘剤として皮膚外用剤に用いることにより、使用感の向上（べたつき感のなさ）を図ることができる。
【００６１】
本発明の酸性増粘剤は、必要に応じ、本発明の効果を損なわない範囲内で、通常化粧料、医薬部外品、医薬品等に一般的に用いられる成分、例えば、炭化水素類、油脂類等の油性成分、ロウ類、シリコーン類、アルコール類、脂肪酸、酸化防止剤、抗菌剤、紫外線吸収剤、薬剤、精製水等の水性成分、植物抽出物、中和剤、他の増粘剤、保湿剤、防腐剤、界面活性剤、香料、着色剤、各種皮膚栄養剤等の添加物を添加してもよい。
【００６２】
以下に、これらの添加物の具体例を挙げるが、これに限定されるものではない。また、これらの添加物は、単独で用いてもよく、2種以上を混合してもよい。
【００６３】
上記炭化水素類としては、例えば、流動パラフィン、スクワラン、マイクロクリスタリンワックス、セレシンワックス、パラフィンワックス、ワセリン等が挙げられる。
【００６４】
上記油脂類としては、例えば、アボガド油、ツバキ油、マカデミアナッツ油、オリーブ油、ラノリン、ヒマシ油、オリーブ油、グレープシード油、カカオ油、ヤシ油、木ロウ、ホホバ油等の植物油脂類等が挙げられる。
【００６５】
上記ロウ類としては、例えば、ホホバ油、カルナバロウ、キャンデリラロウ、ミツロウ、鯨ロウ等が挙げられる。
【００６６】
上記シリコーン類としては、例えば、ジメチルポリシロキサン、メチフェニルシロキサン等が挙げられる。
【００６７】
上記アルコール類としては、例えば、カプリルアルコール、ラウリルアルコール、ミリスチルアルコール、セチルアルコール、コレステロール、フィトステロール、セタノール、ステアリルアルコール、ヘキシルデカノール、オクチルドデカノール等の高級アルコール類、エタノールなどの低級アルコール類が挙げられる。
【００６８】
上記脂肪酸としては、例えば、カプリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、ベヘニン酸、ラノリン脂肪酸、リノール酸、リノレン酸、ラウリン酸、オレイン酸、イソステアリン酸等の高級脂肪酸等が挙げられる。
【００６９】
上記酸化防止剤としては、例えば、ブチルヒドロキシトルエン、トコフェロール、フィチン等が挙げられる。
【００７０】
上記抗菌剤としては、例えば、安息香酸、サリチル酸、ソルビン酸、パラオキシ安息香酸アルキルエステル、ヘキサクロロフェン等が挙げられる。
【００７１】
上記紫外線吸収剤としては、例えば、パラアミノ安息香酸系紫外線吸収剤、アントラニル酸系紫外線吸収剤、サリチル酸系紫外線吸収剤、ケイ皮酸系紫外線吸収剤、ベンゾフェノン系紫外線吸収剤、糖系紫外線吸収剤、３−（４’−メチルベンジリデン）−ｄ−カンファー、３−ベンジリデン−ｄ、１−カンファー、ウロカニン酸、ウロカニン酸エチルエステル、２−フェニル−５−メチルベンゾキサゾール、２、２’−ヒドロキシ−５−メチルフェニルベンゾトリアゾール、２−（２’−ヒドロキシ−５’−ｔ−オクチルフェニル）ベンゾトリアゾール、２−（２’−ヒドロキシ−５’−メチルフェニルベンゾトリアゾール、ジベンザラジン、ジアニソイルメタン、４−メトキシ−４’−ｔ−ブチルジベンゾイルメタン、５−（３，３−ジメチル−２−ノルボルニリデン）−３−ペンタン−２−オン等が挙げられる。
【００７２】
上記薬剤としては、例えばグリシン、アラニン、バリン、ロイシン、トレオニン、フェニルアラニン、チロシン、アスパラギン酸、アスパラギン、グルタミン、タウリン、アルギニン、ヒスチジン等のアミノ酸およびこれらのアルカリ金属塩と塩酸塩；アシルサルコシン酸（例えばラウロイルサルコシンナトリウム）、グルタチオン、クエン酸、リンゴ酸、酒石酸、乳酸等の有機酸；ニコチン酸アミド、ニコチン酸ベンジル、γ−オリザノール、アラントイン、グリチルリチン酸（塩）、グリチルレチン酸およびその誘導体、ヒノキチオール、ビサボロール、ユーカルプトーン、チモール、イノシトール、サイコサポニン、ニンジンサポニン、ヘチマサポニン、ムクロジサポニン等のサポニン類、パントテニルエチルエーテル、エチニルエストラジオール、トラネキサム酸、アルブチン、セファランチン、プラセンタエキス等が挙げられる。
【００７３】
上記各種皮膚栄養剤としては、ビタミンＡおよびその誘導体、ビタミンＢ6塩酸塩、ビタミンＢ6トリパルミテート、ビタミンＢ6ジオクタノエート、ビタミンＢ2およびその誘導体、ビタミンＢ12、ビタミンＢ15およびその誘導体等のビタミンＢ類、アスコルビン酸、アスコルビン酸硫酸エステル（塩）、アスコルビン酸リン酸エステル（塩）、アスコルビン酸ジパルミテート等のビタミンＣ類、α−トコフェロール、β−トコフェロール、γ−トコフェロール、ビタミンＥアセテート等のビタミンＥ類、ビタミンＤ類、ビタミンＨ、パントテン酸、パンテチン等のビタミン類などが挙げられる。
【００７４】
上記中和剤としては、特に限定されるものではないが、例えば、水酸化カリウム、水酸化ナトリウム、炭酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、リン酸水素二ナトリウム、酢酸ナトリウム、２−アミノ−２−めちる−１−プロパノール、２−アミノ−２−メチル−１，３プロパンジオール、トリエタノールアミン等が挙げられる。
【００７５】
上記界面活性剤としては、例えば、ポリオキシエチレンラウリルエーテル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンセチルエーテル、ポリオキシエチレンステアリルエーテル、ポリオキシエチレンオレイルエーテル、ポリオキシエチレン高級アルコールエーテル、ポリオキシアルキルアリルエーテル、ポリオキシエチレンジスチレン化フェニルエーテル、ポリオキシエチレン誘導体、ソルビタンモノラウレート、ソルビタンモノオレート、ソルビタンセスキオレート、ソルビタンモノライレート、ポリオキシエチレンモノラウレート、ポリオキシエチレンソルビタンラウレート、ポリオキシエチレンソルビタンモノステアレート、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート、１−ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート、テトラオレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン、ポリエチレングリコールモノラウレート、ポリエチレングリコールモノオレート、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ポリオキシチエレンヒマシ油、ポリオキシエチレンラノリン等のノニオン界面活性剤や、グリシン型、アルキルアミノベタイン、イミダゾリン型、Ｌ−アルギニン型、Ｌ−リジン型等の両性界面活性剤が挙げられる。
【００７６】
次に実施例を示し、本発明の実施の形態についてさらに詳しく説明する。もちろん、本発明は以下の実施例に限定されるものではなく、細部については様々な態様が可能であることは言うまでもない。さらに、本発明は上述した実施形態に限定されるものではなく、請求項に示した範囲で種々の変更が可能であり、それぞれ開示された技術的手段を適宜組み合わせて得られる実施形態についても本発明の技術的範囲に含まれる。
【実施例】
【００７７】
以下に実施例を示し、本発明の実施の形態についてさらに詳しく説明する。もちろん、本発明は以下の実施例に限定されるものではなく、細部については様々な態様が可能であることはいうまでもない。さらに、本発明は上述した実施形態に限定されるものではなく、請求項に示した範囲で種々の変更が可能であり、それぞれ開示された技術的手段を適宜組み合わせて得られる実施形態についても本発明の技術的範囲に含まれる。
【００７８】
また、本明細書中に記載された学術文献および特許文献の全てが、本明細書中において参考として援用される。なお、以下の実施例に示す「％」は全て「重量％」である。
【００７９】
（実施例１）Ｌ−ＰＧＡの製造  
特許文献６に基づき得られ、かつ独立行政法人産業技術総合研究所特許生物寄託センタ−に寄託されているナトリアルバ  エジプチアキア（Ｎａｔｒｉａｌｂａ ａｅｇｙｐｔｉａｃａ）０８３１−２６４株 (受託番号：ＦＥＲＭ  ＢＰ−２０８７４)のシングルコロニーを白金耳で１白金耳掻き取り、３ｍｌのＰＧＡ生産培地（22.5％ ＮａＣｌ、2.0％ MgSO４・7Ｈ2O、0.2％ KＣｌ、3.0％ Trisodium Citrate、1.0％ Yeast Extract、0.75％ Casamino acid）／18ml容試験管×5本に植菌し、37℃  300rpmで3日間培養した。得られた培養液0.5mlを 50mＬ−ＰＧＡ生産液体培地−１／500ml容坂口フラスコ×10本に植菌し、37℃で5日間培養した。得られた培養液を遠心し、菌体を取り除いた。続いて、得られた上清液に3倍量の水を加え希釈した後、ｐＨを3.0に調整した。ｐＨ調整後、5時間  室温で攪拌した。その後、3倍量のエタノ−ルを加え遠心分離を行い、Ｌ−ＰＧＡを沈殿物として回収した。沈殿物を0.1mM Tris−ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ8.0）に溶解させ、低分子物質を除去するために透析した。透析後、得られた液を核酸除去のため、１mM MgＣｌ２ 、10U／ml DＮａseＩ（TAKARA社製）、20μg／ml RＮａseＩ(NIPPON GENE社製)となるように加え37℃で2時間インキュベ−トした。次いでタンパク質除去のために、3U／ml  ProteiＮａse K（TAKARA社製）処理を37℃  5時間インキュベ−トした。ProteiＮａse K処理後、蒸留水で透析し、低分子物質を除去した。透析後、Ｌ−ＰＧＡを陰イオン交換樹脂、Q sepharose Fast Flow（AmershamBiosciences社製）に吸着させ、洗浄後１M ＮａＣｌで溶出した。得られた溶液を蒸留水で透析し、透析後の溶液を凍結乾燥することにより、Ｌ−ＰＧＡ・Ｎａ塩を得た。
得られたＬ−ＰＧＡのＨ−ＮＭＲのスペクトル（500ＭＨｚ）を重水を用いて測定し、Ｌ−ＰＧＡであることを確認した。
【００８０】
（実施例２）Ｌ−ＰＧＡ・フリー体の調製
実施例１で得たＬ−ＰＧＡ・Ｎａ塩を100mg/mlとなるように溶解した。次いで、0.5M ＮａＣｌとなるようにＮａＣｌを加えた後、ｐＨ２．５となるようにＨＣｌを加えた。3倍量のエタノールを添加し、Ｌ−ＰＧＡ・フリー体沈殿物を得た。得られた沈殿を10mg/mlとなるように溶解し、透析により低分子物質を取り除いた。低分子物質を取り除いたＬ−ＰＧＡ・フリー体溶液を凍結乾燥により粉末化しＬ−ＰＧＡ・フリー体粉末を得た。
【００８１】
（実施例３）Ｌ−ＰＧＡ架橋体・フリー体の調整
実施例２で得たＬ−ＰＧＡ・フリー体を50mg/mlとなるように溶解し、15mlのガラス瓶に5mlを添加した。次に、Ｌ−ＰＧＡ・フリー体水溶液を、窒素ガスを用いて5分間バブリングした。
【００８２】
次に、線源をコバルト６０とするγ線照射装置を用いてγ線を照射した。照射線量は、2.7kGy、7kGy、11kGyとなるように照射した。γ線照射後に得られた生成物を、サンプル瓶から取り出し、余分な水分を８０メッシュの金網で水切りした後、凍結乾燥することで、Ｌ−ＰＧＡ架橋体・フリー体粉末を得た。なお、上記余分な水分には、未架橋のＬ−ＰＧＡ・フリー体が含まれており、該水切りは、未架橋のＬ−ＰＧＡ・フリー体を除去することが主たる目的である。
【００８３】
次に、得られたＬ−ＰＧＡ架橋体・フリー体の粉末を、該Ｌ−ＰＧＡ架橋体・フリー体粉末が膨潤するために十分量の水に入れて１週間静置した。静置した後、８０メッシュの金網で濾過することで、未架橋のＬ−ＰＧＡを除去して、ハイドロゲルを得た。
【００８４】
本実施例により得たＬ−ＰＧＡ架橋体・フリー体の吸水倍率は、本実施例により得たハイドロゲルの湿重量から、該ハイドロゲルの作製に用いたＬ−ＰＧＡ架橋体・フリー体粉末の乾燥重量を引いた値を、該Ｌ−ＰＧＡ架橋体・フリー体粉末の乾燥重量で割って算出した。
【００８５】
算出したＬ−ＰＧＡ架橋体・フリー体の吸水倍率と、Ｌ−ＰＧＡ架橋体・フリー体の作製において照射したγ線の照射線量との関係を比較した結果を表１及び図１に示す。
【００８６】
【表１】
2010150148.tif 000004
【００８７】
表１及び図１に示すとおり、本実施例おいて得られたＬ−ＰＧＡ架橋体・フリー体は、吸水倍率が１０倍〜２１１５倍であることが確認できた。
【００８８】
（実施例４）増粘速度の測定
【００８９】
100mlビーカーに50mlの0.9%NaClを注ぎ、600rpmでスターラーを回転させる。そこに2.0gの被検物質を添加すると同時にストップウォッチを押し、液表面がフラットになる（＝スターラーが回らなくなる）時点をストップとし、粘度を生じるまでの速度を測定した。Ｌ−ＰＧＡ架橋体・フリー体とポリアクリル酸(SIGMA社製)を用いて行った。結果は表２に示した。
【００９０】
【表２】
2010150148.tif 000005
【００９１】
表２から明らかなように、Ｌ−ＰＧＡ架橋体・フリー体は、ポリアクリル酸(SIGMA社製)と比較して、増粘効果を速やかに発揮できることがわかる。
【００９２】
（実施例５）Ｌ−ＰＧＡ架橋体・フリー体のｐＨ測定
Ｌ−ＰＧＡ架橋体・フリー体濃度を、０．００１、０．００５、０．０１、０．１、１、３％になるよう蒸留水に溶解し、ｐＨを測定した。その結果、いずれの濃度であってもｐＨ４．９以下の範囲であった。
【００９３】
（実施例５〜１０）Ｌ−ＰＧＡ架橋体・フリー体を含むローションの製造
以下に示す組成のローションを常法により製造した。Ｌ−ＰＧＡ架橋体・フリー体は実施例２に記載されているＬ−ＰＧＡ架橋体・フリー体を用いた。Ｌ−ＰＧＡ架橋体・フリー体濃度Ｘは０．００１、０．００５、０．０１、０．１、１、３％にてそれぞれ配合した。コントロールとして、Ｌ−ＰＧＡ架橋体・フリー体を含まないローション（比較例１）及びＬ−ＰＧＡ架橋体・フリー体をＤＬ−ＰＧＡ架橋体に代替したローション（比較例２〜７）も常法により製造した。
（組成）                                                    （重量％）
油相成分：ステアリン酸                                        ３．０
スクワラン                                                    ５．０
オリーブ油                                                    ５．０
ポリ-γ-L-グルタミン酸架橋体・フリー体                            Ｘ
乳化剤：ＰＯＥソルビタンモノラウレート                        ５．０
ソルビタンモノステアレート                                    ５．０
アルカリ：トリエタノールアミン                                ２．０
水相成分：プロピレングリコール                                ５．０
精製水    全体で１００となる量
【００９４】
（実施例１１）ローションの官能評価
実施例５〜１０および比較例１〜７を用いて官能評価を行った。酸性増粘剤としての効果を目安として皮膚感触状態（のびのよさ、べたつきのなさ、使用後のさらさら感、みずみずしさ）についてアンケート調査をして行った。判定基準：
◎：２０名中１８名以上が良好と評価した。
○：２０名中１５名が良好と評価した。
△：２０名中１０名が良好と評価した。
×：２０名中２名以下が良好と評価した。
【００９５】
【表３】
2010150148.tif 000006
【００９６】
いずれの場合も、Ｌ−ＰＧＡ架橋体・フリー体（表３参照）により、酸性増粘剤の効果を目安として評価したのびのよさ、べたつきのなさ、使用後のさらさら感、みずみずしさが改善され、使用感を向上させることが明らかとなった。
【産業上の利用可能性】
【００９７】
本発明により、塩水溶液中においても粘度の低下が少ない酸性増粘剤であり、生分解性を有した安全性の高い吸水性素材として産業界に大きく寄与することが期待される。また、製品に対し優れた粘度や展延性、良好な伸び等の優れた使用感を付与すると同時に、皮膚の水分含有量の低下を抑制し、皮膚のカサツキや肌荒れ等を抑制又は改善するものである。そして、本発明の酸性増粘剤は人体に対しても非常に安全性の高いものであり、医薬品、医薬部外品、化粧品の分野において広い範囲での使用を可能とするものである。また、本発明は、従来の増粘剤を用いた化粧料にないさっぱりとした爽快な使用感を与える酸性増粘剤である。
【図面の簡単な説明】
【００９８】
【図１】Ｌ−ＰＧＡ架橋体・フリー体の吸水倍率と、Ｌ−ＰＧＡ架橋体・フリー体の作製において照射したγ線の照射線量との関係を比較した結果を示す図である。
【図１】
2010150148.tif 000007