(57)【要約】【課題】キャピラリ針内への目的物の逆流を防止し、かつ、キャピラリ針からの目的物の漏れを抑制することのできる適正な逆流防止圧を高精度に計測すること。【解決手段】細胞内に注入する目的物を内部に充填したキャピラリ針に対して、逆流防止圧を加えるマイクロインジェクション装置であって、キャピラリ針に対して圧力を加えて、当該キャピラリ針の先端から目的物を吐出させる吐出部と、吐出部によって吐出された目的物の単位時間あたりの吐出量である吐出レートを算出する吐出レート算出部と、吐出レート算出部によって算出された吐出レートが、所定の閾値以下となるまで、吐出部によってキャピラリ針に対して加えられる圧力を減少させる減圧部と、吐出レート算出部によって算出された吐出レートが、所定の閾値以下となったときの圧力を、逆流防止圧として決定する逆流防止圧決定部とを備える。【選択図】        図３
2010148454.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
細胞内に注入する目的物を内部に充填したキャピラリ針に対して、逆流防止圧を加えるマイクロインジェクション装置であって、
前記キャピラリ針に対して圧力を加えて、当該キャピラリ針の先端から前記目的物を吐出させる吐出部と、
前記吐出部によって吐出された前記目的物の単位時間あたりの吐出量である吐出レートを算出する吐出レート算出部と、
前記吐出レート算出部によって算出された前記吐出レートが、所定の閾値以下となるまで、前記吐出部によって前記キャピラリ針に対して加えられる圧力を減少させる減圧部と、
前記吐出レート算出部によって算出された前記吐出レートが、前記所定の閾値以下となったときの前記圧力を、前記逆流防止圧として決定する逆流防止圧決定部と
を備えることを特徴とするマイクロインジェクション装置。
【請求項２】
前記吐出部によって吐出された前記目的物の画像を所定の間隔時間で撮像する撮像装置をさらに備え、
前記吐出レート算出部は、
前記吐出部によって前記目的物が吐出された直後に前記撮像装置によって撮像された前記目的物の画像と、前記吐出部によって前記目的物が吐出された直後から前記所定の間隔時間を経過した後に前記撮像装置によって撮像された前記目的物の画像との差分画像の輝度総和に基づいて、前記目的物の吐出量を算出し、この算出した前記目的物の吐出量を、前記所定の間隔時間で除算することにより、前記吐出レートを算出することを特徴とする請求項１に記載のマイクロインジェクション装置。
【請求項３】
前記減圧部は、
前記吐出部によって前記キャピラリ針に対して加えられる圧力を一定量ずつ減少させることを特徴とする請求項１又は２に記載のマイクロインジェクション装置。
【請求項４】
前記吐出部によって前記キャピラリ針に対して今回までに加えられた各圧力に対する前記吐出レートの近似直線を生成する近似直線生成部と、
前記近似直線生成部によって生成された前記近似直線上で、吐出レートがゼロとなる圧力であるゼロ圧力を算出するゼロ圧力算出部と、
前記吐出部によって前記キャピラリ針に対して今回加えられた圧力と、前記ゼロ圧力算出部によって算出された前記ゼロ圧力との平均値を算出する平均値算出部とをさらに備え、
前記減圧部は、
前記平均値算出部によって算出された前記平均値を、前記吐出部によって前記キャピラリ針に対して次回加えるべき圧力に設定すると共に、前記吐出部によって前記キャピラリ針に対して今回加えられた圧力を前記平均値まで減少させることを特徴とする請求項１又は２に記載のマイクロインジェクション装置。
【請求項５】
細胞内に注入する目的物を内部に充填したキャピラリ針に対して、逆流防止圧を加えるマイクロインジェクション装置において当該逆流防止圧を計測する逆流防止圧計測方法であって、
前記キャピラリ針に対して圧力を加えて、前記キャピラリ針の先端から前記目的物を吐出させる吐出ステップと、
前記吐出ステップによって吐出された前記目的物の単位時間あたりの吐出量である吐出レートを算出する吐出レート算出ステップと、
前記吐出レート算出ステップによって算出された前記吐出レートが、所定の閾値以下となるまで、前記吐出ステップによって前記キャピラリ針に対して加える圧力を減少させる圧力減少ステップと、
前記吐出レート算出ステップによって算出された前記吐出レートが、前記所定の閾値以下となったときの前記圧力を、前記逆流防止圧として決定する逆流防止圧決定ステップと
を含むことを特徴とする逆流防止圧計測方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
この発明は、マイクロインジェクション装置及び逆流防止圧計測方法に関し、特に、キャピラリ針内への目的物の逆流を防止し、かつ、キャピラリ針からの目的物の漏れを抑制することのできる適正な逆流防止圧を高精度に計測することができるマイクロインジェクション装置及び逆流防止圧計測方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、細胞内に薬液等の目的物を注入することにより、細胞の遺伝情報の改変を観察する研究が盛んに行われており、その際、遺伝子や薬液等の目的物を細胞内に注入する手法の一つとして、マイクロインジェクション法が広く用いられている。
【０００３】
マイクロインジェクション法では、遺伝子や薬液等の目的物が充填された中空針（キャピラリ針）を、シャーレ内の緩衝液中に浸漬された細胞に突き刺し、このキャピラリ針中の目的物を細胞内に吐出することで、細胞内に目的物を注入する。目的物の注入を終えると、キャピラリ針を細胞から引き抜き、その先端をシャーレ内の緩衝液に浸漬しておく。
【０００４】
ところで、シャーレ内の緩衝液にキャピラリ針を浸漬しておくと、毛細管現象によってキャピラリ針の内部へ目的物が逆流する恐れがある。このため、一般に、マイクロインジェクション法では、目的物の逆流を防止するための所定の圧力（以下、「逆流防止圧」と言う。）がキャピラリ針に対して加えられる。
【０００５】
ただし、キャピラリ針に対して過剰な逆流防止圧が加えられると、図１４の左側に示すように、キャピラリ針中の目的物が漏れ出してしまい、例えば、水銀ランプなどの蛍光励起光照明を細胞に照射する蛍光観察を行う場合には、目的物に蛍光物質を混ぜているため、図１４の右側に示すように、漏れ出た目的物によって細胞等の観察が阻害される。
【０００６】
そこで、マイクロインジェクション法においては、キャピラリ針内への目的物の逆流を防止し、かつ、キャピラリ針からの目的物の漏れを抑制することのできる適正な逆流防止圧を計測し、これをキャピラリ針に対して加えることが重要である。
【０００７】
かかる逆流防止圧を計測する技術としては、パルス的（断続的）な圧力（パルス吐出圧）に対する目的物の吐出量の関係を近似直線として求め、この近似直線からの外挿により逆流防止圧を計測するものがある。すなわち、図１１に示すように、互いに値の異なる複数のパルス吐出圧をキャピラリ針に加えて、キャピラリ針の先端から目的物を吐出させ、蛍光観察により目的物の画像を撮像する。また、蛍光観察による目的物の画像から各パルス吐出圧に対する目的物の吐出量を求める。さらに、各パルス吐出圧に対する目的物の吐出量の近似直線を生成し、この近似直線上で吐出量がゼロとなる圧力を逆流防止圧として決定する。
【０００８】
【特許文献１】特開２００４−０８１０８４号公報
【特許文献２】特開２００７−２８９０８１号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
しかしながら、上述した近似直線からの外挿により逆流防止圧を計測する従来の技術は、逆流防止圧の計測精度が悪いという問題があった。すなわち、図１２に示すように、各パルス吐出圧に対する目的物の吐出量の値に測定バラツキがあった場合、各パルス吐出圧に対する目的物の吐出量の近似直線と真の吐出量の値とが互いにかけ離れるため、近似直線から外挿により得られた逆流防止圧も真の値からずれてしまう恐れがある。
【００１０】
また、図１３に示すように、パルス吐出圧と目的物の吐出量との関係は、実際には完全な線形関係ではなく、微小吐出量の領域における両者の関係は、非線形関係となっているため、近似直線から外挿により得られた逆流防止圧は真の値からずれている恐れがある。
【００１１】
開示の技術は、上述した従来技術による問題点を解消するためになされたものであり、キャピラリ針内への目的物の逆流を防止し、かつ、キャピラリ針からの目的物の漏れを抑制することのできる適正な逆流防止圧を高精度に計測することができるマイクロインジェクション装置及び逆流防止圧計測方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
上述した課題を解決し、目的を達成するため、本願の開示するマイクロインジェクション装置は、一つの態様において、細胞内に注入する目的物を内部に充填したキャピラリ針に対して、逆流防止圧を加えるマイクロインジェクション装置であって、前記キャピラリ針に対して圧力を加えて、当該キャピラリ針の先端から前記目的物を吐出させる吐出部と、前記吐出部によって吐出された前記目的物の単位時間あたりの吐出量である吐出レートを算出する吐出レート算出部と、前記吐出レート算出部によって算出された前記吐出レートが、所定の閾値以下となるまで、前記吐出部によって前記キャピラリ針に対して加えられる圧力を減少させる減圧部と、前記吐出レート算出部によって算出された前記吐出レートが、前記所定の閾値以下となったときの前記圧力を、前記逆流防止圧として決定する逆流防止圧決定部とを備える。
【００１３】
この態様によれば、キャピラリ針内への目的物の逆流を防止し、かつ、キャピラリ針からの目的物の漏れを抑制することのできる適正な逆流防止圧を高精度に計測することができる。
【００１４】
なお、本願の開示するマイクロインジェクション装置の構成要素、表現または構成要素の任意の組合せを、方法、装置、システム、コンピュータプログラム、記録媒体、データ構造などに適用したものも上述した課題を解決するために有効である。
【発明の効果】
【００１５】
本願の開示するマイクロインジェクション装置の一つの態様によれば、キャピラリ針内への目的物の逆流を防止し、かつ、キャピラリ針からの目的物の漏れを抑制することのできる適正な逆流防止圧を高精度に計測することができるという効果を奏する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１６】
以下に添付図面を参照して、本願の開示するマイクロインジェクション装置及び逆流防止圧計測方法の好適な実施の形態を詳細に説明する。
【実施例１】
【００１７】
まず、本実施例に係る逆流防止圧計測方法の概略を説明する。本実施例に係る逆流防止圧計測方法は、細胞内に注入する薬液等の目的物を内部に充填したキャピラリ針に対して、当該キャピラリ針の内部への目的物の逆流を防止する圧力である逆流防止圧を加えるマイクロインジェクション装置に適用される。
【００１８】
図１は、本実施例に係る逆流防止圧計測方法の概略を説明するための図である。図１に示すように、本実施例に係る逆流防止圧計測方法では、まず、キャピラリ針に対して圧力を加えて、キャピラリ針の先端から、蛍光物質を含む薬液等の目的物を吐出させる。続いて、吐出された目的物を対物レンズで拡大しつつカメラにより所定の時間間隔で撮像し、この目的物の画像を用いて、キャピラリ針の先端から吐出された目的物の単位時間あたりの吐出量である吐出レートを算出する。
【００１９】
続いて、算出した吐出レートが、所定の閾値以下となるまで、キャピラリ針に対して加える圧力を減少させる。この場合、キャピラリ針に対して加える圧力を減少するたびに、その減少後の圧力で吐出された目的物の吐出レートを、上記と同様に目的物の画像を用いて算出する。そして、算出された吐出レートが所定の閾値以下となったときの、キャピラリ針に対して加えられた圧力を逆流防止圧として決定する。
【００２０】
このように、本実施例に係る逆流防止圧計測方法では、従来のように近似直線からの外挿により逆流防止圧を計測するのではなく、キャピラリ針に対して加えられる圧力を繰り返し減少させるたびに、キャピラリ針から吐出された目的物の吐出レートを算出し、吐出レートを閾値判定することで、逆流防止圧を直接計測している。このため、キャピラリ針内への目的物の逆流を防止し、かつ、キャピラリ針からの目的物の漏れを抑制することのできる適正な逆流防止圧を高精度に計測することが可能となる。
【００２１】
次に、本実施例に係る逆流防止圧計測方法を適用したマイクロインジェクション装置の構成について説明する。図２は、本実施例に係るマイクロインジェクション装置の概略構成を示す図である。図２に示すように、マイクロインジェクション装置１００は、キャピラリ針１１０と、シャーレ１２０と、ステージ１３０と、カメラモジュール１４０と、吐出装置１５０と、キャピラリ針駆動装置１６０と、ステージ駆動装置１７０と、対物レンズ駆動装置１８０と、システム制御装置１９０とを有する。
【００２２】
キャピラリ針１１０は、先端を微細化した中空のガラス針であり、シャーレ１２０上の細胞内に注入する薬液等の目的物を内部に充填している。また、キャピラリ針１１０は、吐出装置１５０に接続されており、吐出装置１５０から加えられる圧力により、内部に充填した目的物を連続的に吐出する。また、キャピラリ針１１０は、キャピラリ針駆動装置１６０に取り付けられており、水平面上を移動するとともに、長手方向に進退自在に構成されている。
【００２３】
シャーレ１２０は、平皿形状の透明な容器であり、細胞の生存可能な緩衝液で内部を満たされている。また、シャーレ１２０は、ステージ１３０上に載置されており、ステージ１３０とともに水平面上を移動する。
【００２４】
ステージ１３０は、ステージ駆動装置１７０に取り付けられ、ステージ駆動装置１７０の制御によって水平方向に移動可能なＸＹステージである。また、ステージ１３０は、シャーレ１２０を上面に搭載可能に構成されており、カメラモジュール１４０がシャーレ１２０の内部を撮影することができるように、透明な材料で製造されているか、又は、一部に撮影用の穴が設けられている。
【００２５】
カメラモジュール１４０は、対物レンズ１４１と、励起光源１４２と、励起フィルタ１４３と、反射鏡１４４と、蛍光フィルタ１４５と、カメラ１４６とを有する。対物レンズ１４１は、シャーレ１２０上の一部分、例えば、キャピラリ針１１０の先端付近を拡大した画像を得るためのレンズである。励起光源１４２は、蛍光物質を含む薬液等の目的物がキャピラリ針１１０の先端から吐出された際に、この目的物に対して蛍光励起光を照射するための光源である。励起フィルタ１４３は、励起光源１４２から照射される蛍光励起光を所定の波長に絞り、反射鏡１４４へと送り出すフィルタである。
【００２６】
反射鏡１４４は、対物レンズ１４１により得られた画像を蛍光フィルタ１４５に向けて反射し、また、励起光源１４２から照射される蛍光励起光をシャーレ１２０に向けて反射するための鏡である。蛍光フィルタ１４５は、対物レンズ１４１により得られた画像から蛍光波長以外の波長の光を除去し、この画像をカメラ１４６の映像素子上に結像させるフィルタである。
【００２７】
カメラ１４６は、反射鏡１４４により反射された画像を撮像する装置であり、撮像した画像をシステム制御装置１９０へ出力する。カメラ１４６は、例えば、対物レンズ１４１により得られたキャピラリ針１１０の先端付近の拡大画像、すなわち、キャピラリ針１１０の先端から吐出された目的物の画像を撮像し、システム制御装置１９０へ出力する。
【００２８】
吐出装置１５０は、システム制御装置１９０の指示に従って、キャピラリ針１１０に対して圧力を加えて、キャピラリ針１１０の先端から目的物を吐出させる装置である。キャピラリ針駆動装置１６０は、システム制御装置１９０の指示に従って、キャピラリ針１１０を駆動する装置である。例えば、キャピラリ針駆動装置１６０は、逆流防止圧の計測時に、キャピラリ針１１０の先端が対物レンズ１４１の鉛直上方に位置するように、キャピラリ針１１０を水平移動させる。
【００２９】
ステージ駆動装置１７０は、システム制御装置１９０の指示に従って、ステージ１３０を制御する装置である。例えば、ステージ駆動装置１７０は、逆流防止圧の計測時に、キャピラリ針１１０の先端から吐出された目的物が対物レンズ１４１の鉛直上方に位置するように、ステージ１３０を水平移動させる。
【００３０】
対物レンズ駆動装置１８０は、システム制御装置１９０の指示に従って、対物レンズ１４１を駆動する装置である。例えば、対物レンズ駆動装置１８０は、対物レンズ１４１がキャピラリ針１１０の鉛直下方に位置するように、対物レンズ１４１を水平移動させる。
【００３１】
システム制御装置１９０は、マイクロインジェクション装置１００を全体制御する制御装置であり、カメラ１４６や、吐出装置１５０、キャピラリ針駆動装置１６０、ステージ駆動装置１７０、対物レンズ駆動装置１８０の動作を制御する。
【００３２】
このような構成の下、実施例１に係るマイクロインジェクション装置１００では、逆流防止圧の計測を行う場合、システム制御装置１９０の指示に従って、キャピラリ針駆動装置１６０がキャピラリ針１１０を移動させ、ステージ駆動装置１７０がステージ１３０を移動させ、対物レンズ駆動装置１８０が対物レンズを移動させ、吐出装置１５０がキャピラリ針１１０に対して圧力を加えて、キャピラリ針１１０の先端から目的物をシャーレ１２０内の緩衝液中に吐出する。
【００３３】
このとき、マイクロインジェクション装置１００では、カメラ１４６が、キャピラリ針１１０から吐出された目的物を所定の時間間隔で撮像し、この目的物の画像を用いて、システム制御装置１９０が、キャピラリ針１１０の先端から吐出された目的物の吐出レートを算出する。
【００３４】
続いて、マイクロインジェクション装置１００では、吐出レートが、所定の閾値以下となるまで、システム制御装置１９０が、吐出装置１５０に指示してキャピラリ針１１０に対して加える圧力を減少させる。この場合、吐出装置１５０がキャピラリ針１１０に対して加える圧力を減少するたびに、システム制御装置１９０が、その減少後の圧力でキャピラリ針１１０の先端から吐出された目的物の吐出レートを算出する。そして、システム制御装置１９０が、吐出レートが所定の閾値以下となったときの、吐出装置１５０によってキャピラリ針１１０に対して加えられた圧力を、逆流防止圧として決定する。
【００３５】
このように、本実施例に係るマイクロインジェクション装置１００では、従来例のように近似直線からの外挿により逆流防止圧を計測するのではなく、キャピラリ針１１０に対して加えられる圧力を減少させるたびに、キャピラリ針１１０から吐出された目的物の吐出レートを算出し、その吐出レートを閾値判定することで、逆流防止圧を直接計測する。このため、キャピラリ針内への目的物の逆流を防止し、かつ、キャピラリ針からの目的物の漏れを抑制することのできる適正な逆流防止圧を従来に比べて高精度に計測することができる。
【００３６】
次に、図２に示すシステム制御装置１９０の構成について具体的に説明する。図３は、図２に示すシステム制御装置１９０の構成を示すブロック図である。図３に示すように、システム制御装置１９０は、吐出装置１５０と、キャピラリ針駆動装置１６０と、ステージ駆動装置１７０と、対物レンズ駆動装置１８０と、カメラ１４６とバス等を介して接続されている。
【００３７】
また、システム制御装置１９０は、吐出装置制御部１９１と、駆動装置制御部１９２と、撮像部１９３と、画像記憶部１９４と、吐出レート算出条件記憶部１９５と、吐出レート算出部１９６と、吐出レート判定部１９７と、減圧部１９８と、逆流防止圧決定部１９９とを有する。
【００３８】
吐出装置制御部１９１は、吐出装置１５０を制御して、キャピラリ針１１０に対して圧力を加え、キャピラリ針１１０の先端から目的物を吐出させる処理部である。また、吐出装置制御部１９１は、減圧部１９８によって減少された減少後の圧力をキャピラリ針１１０に対して加えて、この減少後の圧力でキャピラリ針１１０の先端から目的物を吐出させるように吐出装置１５０に対して指示する。なお、キャピラリ針１１０に対して加えられる圧力は、パルス的（断続的）な圧力ではなく、連続的な圧力であるものとする。
【００３９】
駆動装置制御部１９２は、キャピラリ針駆動装置１６０、ステージ駆動装置１７０及び対物レンズ駆動装置１８０を制御して、キャピラリ針１１０、ステージ１３０、対物レンズ１４１をそれぞれ移動させる処理部である。
【００４０】
具体的には、駆動装置制御部１９２は、逆流防止圧の計測開始時に、キャピラリ針駆動装置１６０を制御して、キャピラリ針１１０の先端が対物レンズ１４１の鉛直上方に位置するように、キャピラリ針１１０を水平移動させる。また、駆動装置制御部１９２は、逆流防止圧の計測開始時に、ステージ駆動装置１７０を制御して、キャピラリ針１１０の先端から吐出された目的物が対物レンズ１４１の鉛直上方に位置するように、ステージ１３０を水平移動させる。また、駆動装置制御部１９２は、逆流防止圧の計測開始時に、対物レンズ駆動装置１８０を制御して、対物レンズ１４１がキャピラリ針１１０の鉛直下方に位置するように、対物レンズ１４１を水平移動させる。
【００４１】
また、駆動装置制御部１９２は、減圧部１９８からキャピラリ針１１０に対して加える圧力を減少した旨の通知を受け取ったときに、キャピラリ針１１０及び対物レンズ１４１、あるいは、ステージ１３０を現在の位置と異なる位置に水平移動させる。言い換えると、駆動装置制御部１９２は、減圧部１９８による減圧前の圧力でキャピラリ針１１０の先端から既に吐出された目的物の位置と、減圧部１９８による減圧後の圧力でキャピラリ針１１０の先端からこれから吐出される目的物の位置とがずれるように、キャピラリ針１１０等を水平移動させる。これにより、減圧部１９８による減少前の圧力でキャピラリ針１１０の先端から吐出された目的物と、減圧部１９８による減少後の圧力でキャピラリ針１１０の先端から吐出される目的物とがシャーレ１２０内の緩衝液中の同じ位置で重畳し、対物レンズ１４１により得られる画像の画質が低下することを防ぐことができる。その結果、カメラ１４６により撮像された目的物の画像の画質が低下することを防ぐことができる。
【００４２】
撮像部１９３は、マイクロインジェクションの実行時に、シャーレ１２０上の細胞等をカメラ１４６に撮像させ、その撮像画像を画像記憶部１９４に記憶させる処理部である。また、撮像部１９３は、逆流防止圧の計測時に、キャピラリ針１１０の先端から吐出された目的物の画像を所定の時間間隔でカメラ１４６に撮像させ、その撮像画像を画像記憶部１９４に記憶させる処理部である。具体的には、撮像部１９３は、後述の吐出レート算出部１９６によって吐出レート算出処理が実行されるたびに、キャピラリ針１１０の先端から目的物が吐出された直後の目的物の画像と、キャピラリ針１１０の先端から目的物が吐出された直後から上記所定の時間間隔を経過した後の目的物の画像とをカメラ１４６に撮像させる。なお、以下では、カメラ１４６により目的物の画像を撮像する所定の時間間隔を「撮像間隔時間」と呼ぶこととする。
【００４３】
画像記憶部１９４は、カメラ１４６により撮像された画像を記憶する記憶部である。この画像記憶部１９４に記憶された画像は、後述する吐出レート算出部１９６による吐出レートの算出に用いられる。
【００４４】
吐出レート算出条件記憶部１９５は、吐出レート算出条件を記憶する記憶部である。具体的には、吐出レート算出条件記憶部１９５は、カメラ１４６の露光時間、キャピラリ針１１０の内部に充填された目的物中の蛍光物質の濃度、予め計測した蛍光物質の輝度総和とその吐出量との換算係数などを吐出レート算出条件として記憶する。
【００４５】
吐出レート算出部１９６は、画像記憶部１９４に記憶された画像及び吐出レート算出条件記憶部１９５に記憶された吐出レート算出条件を用いて、キャピラリ針１１０の先端から吐出された目的物の単位時間あたりの吐出量である吐出レートを算出する処理部である。また、吐出レート算出部１９６は、キャピラリ針１１０に対して加える圧力を減少した旨の通知を減圧部１９８から受けたるたびに、減圧部１９８による減圧後の圧力でキャピラリ針１１０の先端から吐出された目的物の吐出レートを繰り返し算出する。ここで、図６を用いて、吐出レート算出部１９６による吐出レート算出処理について具体的に説明する。図６は、吐出レート算出処理を説明するための図である。
【００４６】
図６に示すように、まず、吐出レート算出部１９６は、キャピラリ針１１０の先端から目的物が吐出された直後にカメラ１４６によって撮像された目的物の画像（以下、「吐出直後の目的物の画像」という。）Ａと、当該目的物が吐出された直後から撮像間隔時間を経過した後にカメラ１４６によって撮像された目的物の画像（以下、「撮像間隔時間経過後の目的物の画像」という。）Ｂとを画像記憶部１９４から読み出す。なお、吐出レート算出部１９６は、吐出レート算出処理を実行するたびに、撮像部１９３に指示して、吐出直後の目的物の画像Ａ及び撮像間隔時間経過後の目的物の画像Ｂをカメラ１４６に新たに撮像させ、これらの撮像画像を画像記憶部１９４に記憶させる。
【００４７】
続いて、吐出レート算出部１９６は、吐出直後の目的物の画像Ａと、撮像間隔時間経過後の目的物の画像Ｂとの差分画像Ｃの輝度総和を算出する。
【００４８】
以下に、吐出直後の目的物の画像Ａと、撮像間隔時間経過後の目的物の画像Ｂとの差分画像Ｃの輝度総和を算出する手法について説明する。すなわち、カメラ１４６によって撮像された画像における横方向のピクセル位置をｘ、同画像における縦方向のピクセル位置をｙとし、吐出直後の目的物の画像Ａのピクセル位置（ｘ，ｙ）における輝度をＦＬ１（ｘ，ｙ）、撮像間隔時間経過後の目的物の画像Ｂのピクセル位置（ｘ，ｙ）における輝度をＦＬ２（ｘ，ｙ）とすると、差分画像Ｃの輝度総和Ｉは、以下の式で表される。
Ｉ＝Σ（ＦＬ２（ｘ，ｙ）−ＦＬ１（ｘ，ｙ））    ・・・（１）
【００４９】
続いて、吐出レート算出部１９６は、上記のようにして算出した差分画像Ｃの輝度総和Ｉに基づいて、目的物の吐出量を算出する。具体的には、吐出レート算出部１９６は、差分画像Ｃの輝度総和及び吐出レート算出条件記憶部１９５に記憶された吐出レート算出条件を用いて、目的物の吐出量を算出する。すなわち、吐出レート算出条件に含まれるカメラ１４６の露光時間をＴｅ、キャピラリ針１１０の内部に充填された目的物の蛍光物質の濃度をρ、予め計測した蛍光物質の輝度総和とその吐出量との換算係数をαとすると、目的物の吐出量Ｖは、以下の式で表される。
Ｖ＝α・Ｉ／（ρ・Ｔｅ）                        ・・・（２）
【００５０】
最後に、吐出レート算出部１９６は、上記のようにして算出した目的物の吐出量を、撮像間隔時間で除算することにより、キャピラリ針１１０の先端から吐出された目的物の吐出レートを算出する。なお、吐出レート算出部１９６は、このようにして算出した吐出レートを吐出レート判定部１９７へ通知する。
【００５１】
図３の説明に戻って、吐出レート判定部１９７は、キャピラリ針１１０の先端から吐出された目的物の吐出レートの通知を吐出レート算出部１９６から受けた場合に、この吐出レートが、所定の閾値以下であるか否かを判定する処理部である。吐出レート判定部１９７は、キャピラリ針１１０の先端から吐出された目的物の吐出レートが、所定の閾値よりも大きい場合に、その旨を減圧部１９８へ通知する一方、キャピラリ針１１０の先端から吐出された目的物の吐出レートが、所定の閾値以下である場合に、その旨を逆流防止圧決定部１９９へ通知する。
【００５２】
ここで、上記所定の閾値は、０．０１〜１ｐｌ／ｓｅｃであることが好ましい。これは、吐出レートが０．０１ｐｌ未満である場合には、キャピラリ針１１０の内部への目的物の逆流が発生する恐れがある一方、吐出レートが１ｐｌ／ｓｅｃよりも大きい場合には、キャピラリ針１１０の先端から目的物の過剰な漏れが発生する恐れがあるからである。
【００５３】
減圧部１９８は、吐出レート算出部１９６によって算出された吐出レートが、所定の閾値以下となるまで、キャピラリ針１１０に対して加えられる圧力を減少させる処理部である。すなわち、キャピラリ針１１０の先端から吐出された目的物の吐出レートが、所定の閾値よりも大きいと吐出レート判定部１９７によって判定された場合に、減圧部１９８は、キャピラリ針１１０に対して加えられる圧力を減少させる。なお、減圧部１９８は、キャピラリ針１１０に対して加えられる圧力を減少するたびに、その減少後の圧力を、所定の記憶部（図示せず）に記憶する。
【００５４】
また、減圧部１９８は、キャピラリ針１１０に加えられる圧力を減少すると、その減少後の圧力を吐出装置制御部１９１に通知して、その減少後の圧力をキャピラリ針１１０に対して加えるように吐出装置制御部１９１に指示する。また、減圧部１９８は、キャピラリ針１１０に対して加える圧力を減少した旨を吐出レート算出部１９６にも通知して、その減少後の圧力でキャピラリ針１１０の先端から吐出された目的物の吐出レートを算出させる。また、減圧部１９８は、キャピラリ針１１０に対して加える圧力を減少した旨を駆動装置制御部１９２へ通知して、駆動装置制御部１９２を制御することでキャピラリ針１１０、ステージ１３０、対物レンズ１４１を所定の位置へ移動させる。
【００５５】
逆流防止圧決定部１９９は、吐出レート算出部１９６によって算出された吐出レートが、所定の閾値以下となったときの、キャピラリ針１１０に対して加えられた圧力を逆流防止圧として決定する処理部である。すなわち、キャピラリ針１１０の先端から吐出された目的物の吐出レートが、所定の閾値以下である旨の通知を吐出レート判定部１９７から受けた場合に、逆流防止圧決定部１９９は、減圧部１９８によって所定の記憶部に記憶された減少後の圧力を、逆流防止圧として決定する。
【００５６】
次に、実施例１に係るマイクロインジェクション装置１００による逆流防止圧計測処理の処理手順について説明する。図４は、実施例１に係るマイクロインジェクション装置１００による逆流防止圧計測処理の処理手順を示すフローチャートである。なお、逆流防止圧計測処理の開始時に、駆動装置制御部１９２は、キャピラリ針駆動装置１６０、ステージ駆動装置１７０を制御して、シャーレ１２０内に満たされた緩衝液内にキャピラリ針１１０の先端が浸漬されるように、キャピラリ針１１０、ステージ１３０をそれぞれ水平移動しているものとする。また、駆動装置制御部１９２は、逆流防止圧の計測開始時に、対物レンズ駆動装置１８０を制御して、対物レンズ１４１がキャピラリ針１１０の鉛直下方に位置するように、対物レンズ１４１を水平移動しているものとする。
【００５７】
図４に示すように、マイクロインジェクション装置１００の吐出装置制御部１９１は、吐出装置１５０を制御して、キャピラリ針１１０に対して初期圧力を加え、キャピラリ針１１０の先端から目的物を吐出する（ステップＳ１０１）。
【００５８】
続いて、駆動装置制御部１９２は、ステージ駆動装置１７０を制御して、ステージ１３０を現在の位置と異なる位置に水平移動させる（ステップＳ１０２）。なお、この処理において、駆動装置制御部１９２は、キャピラリ針駆動装置１６０及び対物レンズ駆動装置１８０を制御して、キャピラリ針１１０及び対物レンズ１４１を現在の位置と異なる位置に水平移動させてもよい。
【００５９】
続いて、吐出レート算出部１９６は、吐出レート算出処理を開始する（ステップＳ１０３）。すなわち、吐出レート算出部１９６は、画像記憶部１９４に記憶された画像及び吐出レート算出条件記憶部１９５に記憶された吐出レート算出条件を用いて、キャピラリ針１１０の先端から吐出された目的物の吐出レートを算出し、算出した吐出レートを吐出レート判定部１９７へ通知する。なお、吐出レート算出部１９６によって実行される吐出レート算出処理については、図５を参照して後に詳細に説明する。
【００６０】
続いて、吐出レート判定部１９７は、吐出レートが、所定の閾値以下であるか否かを判定する（ステップＳ１０４）。吐出レート判定部１９７によって、吐出レートが所定の閾値よりも大きいと判定された場合（ステップＳ１０４：Ｎｏ）、減圧部１９８は、キャピラリ針１１０に対して加えられる圧力を一定量ずつ減少させ、その減少後の圧力を所定の記憶部に記憶し（ステップＳ１０５）、処理をステップＳ１０２へ戻す。ステップＳ１０５の処理で、減圧部１９８は、減少後の圧力を吐出装置制御部１９１に通知して、その減少後の圧力をキャピラリ針１１０に対して加えるように吐出装置制御部１９１に指示する。吐出装置制御部１９１は、減圧部１９８からの指示に従って、吐出装置１５０を制御して、減圧部１９８による減少後の圧力をキャピラリ針１１０に対して加えて、この減少後の圧力でキャピラリ針１１０の先端から目的物を吐出させる。
【００６１】
このようにして、本実施例では、キャピラリ針１１０の先端から吐出された目的物の吐出レートが所定の閾値以下となるまで、キャピラリ針１１０に対して加えられる圧力の減少及び吐出レートの算出が繰り返される（ステップＳ１０２〜ステップＳ１０５参照）。
【００６２】
一方、吐出レート判定部１９７によって、吐出レートが所定の閾値以下であると判定された場合（ステップＳ１０４：Ｙｅｓ）、逆流防止圧決定部１９９は、ステップＳ１０５にて減圧部１９８によって所定の記憶部に記憶された減少後の圧力を、逆流防止圧として決定し（ステップＳ１０６）、逆流防止圧計測処理を終了する。
【００６３】
次に、図５を参照して、実施例１に係るマイクロインジェクション装置１００による吐出レート算出処理（ステップＳ１０３）の処理手順について説明する。図５は、実施例１に係るマイクロインジェクション装置１００による吐出レート算出処理の処理手順を示すフローチャートである。
【００６４】
図５に示すように、マイクロインジェクション装置１００の撮像部１９３は、吐出直後の目的物の画像をカメラ１４６に撮像させる（ステップＳ２０１）。続いて、撮像部１９３は、撮像画像を画像記憶部１９４に記憶させる（ステップＳ２０２）。
【００６５】
続いて、撮像部１９３は、キャピラリ針１１０の先端から目的物が吐出された直後から撮像間隔時間が経過したか否かを判定する（ステップＳ２０３）。キャピラリ針１１０の先端から目的物が吐出された直後から撮像間隔時間が経過したと判定すると（ステップＳ２０３：Ｙｅｓ）、撮像部１９３は、撮像時間経過後の目的物の画像をカメラ１４６に撮像させる（ステップＳ２０４）。続いて、撮像部１９３は、撮像画像を画像記憶部１９４に記憶させる（ステップＳ２０５）。
【００６６】
続いて、吐出レート算出部１９６は、吐出直後の目的物の画像と、撮像間隔時間経過後の目的物の画像とを画像記憶部１９４から読み出す（ステップＳ２０６）。続いて、吐出レート算出部は、吐出直後の目的物の画像と、撮像間隔時間経過後の目的物の画像との差分画像の輝度総和を算出する（ステップＳ２０７）。
【００６７】
続いて、吐出レート算出部１９６は、算出した差分画像の輝度総和に基づいて、目的物の吐出量を算出する（ステップＳ２０８）。具体的には、吐出レート算出部１９６は、差分画像Ｃの輝度総和及び吐出レート算出条件記憶部１９５に記憶された吐出レート算出条件を用いて、目的物の吐出量を算出する。
【００６８】
続いて、吐出レート算出部１９６は、算出した目的物の吐出量を、撮像間隔時間で除算することにより、キャピラリ針１１０の先端から吐出された目的物の吐出レートを算出し（ステップＳ２０９）、吐出レート算出処理を終了する。
【００６９】
上述してきたように、実施例１に係るマイクロインジェクション装置１００は、キャピラリ針１１０に対して加えられる圧力を減少させるたびに、キャピラリ針１１０から吐出された目的物の吐出レートを算出し、その算出した吐出レートを閾値判定することで、逆流防止圧を直接計測する。このため、近似直線からの外挿によって逆流防止圧を計測する従来の方式に比べて、キャピラリ針内への目的物の逆流を防止し、かつ、キャピラリ針からの目的物の漏れを抑制することのできる適正な逆流防止圧を高精度に計測することができる。
【００７０】
また、実施例１に係るマイクロインジェクション装置１００では、減圧部１９８は、キャピラリ針１１０に対して加える圧力を一定量ずつ減少させるので、圧力の減少量を計算するための処理部を別途設ける必要がなくなり、装置構成を簡略化することができる。
【実施例２】
【００７１】
上記実施例１では、減圧部１９８が、キャピラリ針１１０に対して加えられる圧力を一定量ずつ減少する例について説明したが、キャピラリ針１１０に対して加えられる圧力の減少量を変更するように構成してもよい。そこで、実施例２では、キャピラリ針１１０に対して加えられる圧力の減少量を変更するように構成したマイクロインジェクション装置について説明する。
【００７２】
まず、実施例２に係るマイクロインジェクション装置が有するシステム制御装置の構成について説明する。図７は、実施例２に係るマイクロインジェクション装置が有するシステム制御装置の構成を示すブロック図である。なお、以下では、図３に示した構成部位と同様の機能を有する部位には同一符号を付すこととして、その詳細な説明を省略する。また、実施例２に係るマイクロインジェクション装置の概略構成は、図２に示した概略構成と同様であるため、ここでは、その説明を省略する。
【００７３】
図７に示すように、システム制御装置２９０は、図３に示したシステム制御装置１９０が有する減圧部１９８の代わりに、減圧部２９８と、減圧後圧力記憶部２９１と、近似直線生成部２９２と、ゼロ圧力算出部２９３と、平均値算出部２９４とを新たに有する。
【００７４】
減圧部２９８は、図３に示した減圧部１９８と同様に、吐出レート算出部１９６によって算出された吐出レートが、所定の閾値以下となるまで、キャピラリ針１１０に対して加えられる圧力を減少させる処理部である。加えて、実施例２に係る減圧部２９８は、吐出レート算出部１９６によって算出された吐出レートが、所定の閾値以下となるまで、吐出レート算出部１９６による吐出レートの算出回数を取得し、この取得した吐出レートの算出回数に応じて、キャピラリ針１１０に対して加えられる圧力の減少量を変更する。
【００７５】
すなわち、吐出レート算出部１９６による吐出レートの算出回数が１回である場合、減圧部２９８は、キャピラリ針１１０に対して加えられる圧力を一定量だけ減少させる。一方、吐出レート算出部１９６による吐出レートの算出回数が２回以上である場合、減圧部２９８は、平均値算出部２９４によって算出された後述の圧力平均値を、キャピラリ針１１０に対して次回加えるべき圧力に設定すると共に、キャピラリ針１１０に対して今回加えられた圧力を圧力平均値まで減少させる。なお、このような減圧部２９８による減圧処理については、後に詳細に説明する。
【００７６】
また、減圧部２９８は、キャピラリ針１１０に対して加えられる圧力を減少するたびに、その減少後の圧力と、その減少後の圧力でキャピラリ針１１０の先端から吐出された目的物の吐出レートとを対応付けて減圧後圧力記憶部２９１に記憶する。
【００７７】
減圧後圧力記憶部２９１は、減圧部２９８による減少後の圧力と、その減少後の圧力でキャピラリ針１１０の先端から吐出された目的物の吐出レートを対応付けて記憶する記憶部である。すなわち、減圧後圧力記憶部２９１は、キャピラリ針１１０に対して今回までに加えられた各圧力と、その各圧力に対する吐出レートとを対応付けて記憶している。
【００７８】
近似直線生成部２９２は、キャピラリ針１１０に対して今回までに加えられた各圧力及びその各圧力に対する吐出レートを減圧後圧力記憶部２９１から取得し、キャピラリ針１１０に対して今回までに加えられた各圧力に対する吐出レートの近似直線を生成する。ゼロ圧力算出部２９３は、近似直線生成部２９２によって生成された近似直線上で、吐出レートがゼロとなる圧力であるゼロ圧力を算出する。
【００７９】
平均値算出部２９４は、キャピラリ針１１０に対して今回加えられた圧力を減圧後圧力記憶部２９１から取得し、この取得した圧力と、ゼロ圧力算出部２９３によって算出されたゼロ圧力との平均値（以下、「圧力平均値」という。）を算出する。なお、平均値算出部２９４は、算出した圧力平均値を減圧部２９８に通知する。
【００８０】
ここで、図１０を参照して、減圧部２９８による減圧処理について具体的に説明する。図１０は、減圧処理を説明するための図である。なお、図１０に示す例では、吐出レート算出部１９６による吐出レートの算出回数が４回目である場合に、吐出レートが所定の閾値以下となったものとする。
【００８１】
図１０に示すように、吐出レート算出部１９６による吐出レートの算出回数が１回である場合、減圧部２９８は、キャピラリ針１１０に対して加えられる圧力を一定量だけ減少させる。なお、減圧部２９８によって一定量だけ減少された後の圧力、すなわち、吐出レート算出部１９６による吐出レートの算出回数が２回目である場合にキャピラリ針１１０に対して加えられる圧力をＰ２とする。
【００８２】
また、吐出レート算出部１９６による吐出レートの算出回数が２回である場合、減圧部２９８は、キャピラリ針１１０に対して今回（２回目に）加えられた圧力Ｐ２を圧力平均値ＡＶ１まで減少させる。
【００８３】
具体的には、吐出レート算出部１９６による吐出レートの算出回数が２回である場合、まず、近似直線生成部２９２が、キャピラリ針１１０に対して２回目までに加えられた各圧力に対する吐出レートの近似直線Ｌ１を生成する。次いで、ゼロ圧力算出部２９３が、近似直線Ｌ１上で、吐出レートがゼロとなる圧力であるゼロ圧力ＰＬ１を算出する。次いで、平均値算出部２９４が、キャピラリ針１１０に対して今回（２回目に）加えられた圧力Ｐ２と、ゼロ圧力算出部２９３によって算出されたゼロ圧力ＰＬ１との圧力平均値ＡＶ１（＝（Ｐ２＋ＰＬ１）／２）を算出する。最後に、減圧部２９８は、平均値算出部２９４によって算出された圧力平均値ＡＶ１を、キャピラリ針１１０に対して次回（３回目に）加えるべき圧力Ｐ３に設定すると共に、キャピラリ針１１０に対して今回（２回目に）加えられた圧力Ｐ２を圧力平均値ＡＶ１（＝Ｐ３）まで減少させる。
【００８４】
さらに、吐出レート算出部１９６による吐出レートの算出回数が３回である場合、減圧部２９８は、キャピラリ針１１０に対して今回（３回目に）加えられた圧力Ｐ３を圧力平均値ＡＶ２まで減少させる。
【００８５】
具体的には、吐出レート算出部１９６による吐出レートの算出回数が３回である場合、まず、近似直線生成部２９２が、キャピラリ針１１０に対して３回目までに加えられた各圧力に対する吐出レートの近似直線Ｌ２を生成する。次いで、ゼロ圧力算出部２９３が、近似直線Ｌ２上で、吐出レートがゼロとなる圧力であるゼロ圧力ＰＬ２を算出する。次いで、平均値算出部２９４が、キャピラリ針１１０に対して今回（３回目に）加えられた圧力Ｐ３と、ゼロ圧力算出部２９３によって算出されたゼロ圧力ＰＬ２との圧力平均値ＡＶ２（＝（Ｐ３＋ＰＬ２）／２）を算出する。最後に、減圧部２９８は、平均値算出部２９４によって算出された圧力平均値ＡＶ２を、キャピラリ針１１０に対して次回（４回目に）加えるべき圧力Ｐ４に設定すると共に、キャピラリ針１１０に対して今回（３回目に）加えられた圧力Ｐ３を圧力平均値ＡＶ２（＝Ｐ４）まで減少させる。
【００８６】
次に、実施例２に係るマイクロインジェクション装置２００による逆流防止圧計測処理の処理手順について説明する。図８は、実施例２に係るマイクロインジェクション装置２００による逆流防止圧計測処理の処理手順を示すフローチャートである。なお、ここでは、図４に示した処理手順と同様の処理手順（ステップＳ３０１〜ステップＳ３０４、ステップＳ３０６）については、説明を省略する。
【００８７】
図８に示すように、吐出レート判定部１９７によって、吐出レートが所定の閾値よりも大きいと判定された場合（ステップＳ３０４：Ｎｏ）、減圧部２９８は、減圧処理を開始する（ステップＳ３０５）。減圧処理を終了すると、減圧部２９８は、処理をステップＳ３０２へ戻す。
【００８８】
次に、図９を参照して、実施例２に係るマイクロインジェクション装置２００による減圧処理の処理手順について説明する。図９は、実施例２に係るマイクロインジェクション装置２００による減圧処理の処理手順を示すフローチャートである。
【００８９】
図９に示すように、マイクロインジェクション装置２００の減圧部２９８は、吐出レート算出部１９６による吐出レートの算出回数を取得する（ステップＳ４０１）。続いて、減圧部２９８は、吐出レート算出部１９６による吐出レートの算出回数が２回以上であるか否かを判定する（ステップＳ４０２）。
【００９０】
吐出レート算出部１９６による吐出レートの算出回数が１回であると判定すると（ステップＳ４０２：Ｎｏ）、減圧部２９８は、キャピラリ針１１０に対して加えられる圧力を一定量だけ減少させる（ステップＳ４０３）。その後、減圧部２９８は、その減少後の圧力と、その減少後の圧力でキャピラリ針１１０の先端から吐出された目的物の吐出レートとを関連付けて減圧後圧力記憶部２９１に記憶し（ステップＳ４０８）、減圧処理を終了する。
【００９１】
一方、吐出レート算出部１９６による吐出レートの算出回数が２回以上であると判定すると（ステップＳ４０２：Ｙｅｓ）、減圧部２９８は処理をステップＳ４０４へ移行する。
【００９２】
ステップＳ４０４において、近似直線生成部２９２は、キャピラリ針１１０に対して今回までに加えられた各圧力に対する吐出レートの近似直線を生成する（ステップＳ４０４）。具体的には、近似直線生成部２９２は、キャピラリ針１１０に対して今回までに加えられた各圧力及びその各圧力に対する吐出レートを減圧後圧力記憶部２９１から取得し、キャピラリ針１１０に対して今回までに加えられた各圧力に対する吐出レートの近似直線を生成する。
【００９３】
続いて、ゼロ圧力算出部２９３は、近似直線生成部２９２によって生成された近似直線上で、ゼロ圧力を算出する（ステップＳ４０５）。続いて、平均値算出部２９４は、キャピラリ針１１０に対して今回加えられた圧力と、ゼロ圧力算出部２９３によって算出されたゼロ圧力との平均値である圧力平均値を算出する（ステップＳ４０６）。具体的には、平均値算出部２９４は、キャピラリ針１１０に対して今回加えられた圧力を減圧後圧力記憶部２９１から取得し、この取得した圧力と、ゼロ圧力算出部２９３によって算出されたゼロ圧力との平均値を算出する。
【００９４】
続いて、減圧部２９８は、平均値算出部２９４によって算出された圧力平均値を、キャピラリ針１１０に対して次回加えるべき圧力に設定すると共に、キャピラリ針１１０に対して今回加えられた圧力を圧力平均値まで減少させる（ステップＳ４０７）。その後、減圧部２９８は、その減少後の圧力と、その減少後の圧力でキャピラリ針１１０の先端から吐出された目的物の吐出レートとを関連付けて減圧後圧力記憶部２９１に記憶し（ステップＳ４０８）、減圧処理を終了する。
【００９５】
上述してきたように、実施例２に係るマイクロインジェクション装置２００は、実施例１と同様に、近似直線からの外挿によって逆流防止圧を計測する従来の方式に比べて、キャピラリ針内への目的物の逆流を防止し、かつ、キャピラリ針からの目的物の漏れを抑制することのできる適正な逆流防止圧を高精度に計測することができる。しかも、実施例２に係るマイクロインジェクション装置２００では、吐出レートの算出回数が２回以上である場合、キャピラリ針１１０に対して今回加えられた圧力を、圧力平均値まで減少させることとしたので、キャピラリ針１１０に対して加えられる圧力を一定量ずつ減少するよりも、逆流防止圧の計測時間を短縮化することができる。
【図面の簡単な説明】
【００９６】
【図１】実施例１に係る逆流防止圧計測方法の概略を説明するための図である。
【図２】実施例１に係るマイクロインジェクション装置の概略構成を示す図である。
【図３】図２に示すシステム制御装置の構成を示すブロック図である。
【図４】実施例１に係るマイクロインジェクション装置による逆流防止圧計測処理の処理手順を示すフローチャートである。
【図５】実施例１に係るマイクロインジェクション装置による吐出レート算出処理の処理手順を示すフローチャートである。
【図６】吐出レート算出処理を説明するための図である。
【図７】実施例２に係るマイクロインジェクション装置が有するシステム制御装置の構成を示すブロック図である。
【図８】実施例２に係るマイクロインジェクション装置による逆流防止圧計測処理の処理手順を示すフローチャートである。
【図９】実施例２に係るマイクロインジェクション装置による減圧処理の処理手順を示すフローチャートである。
【図１０】減圧処理を説明するための図である。
【図１１】従来の逆流防止圧計測方法を説明するための図である。
【図１２】従来の逆流防止圧計測方法における問題点を説明するための図である。
【図１３】従来の逆流防止圧計測方法における問題点を説明するための図である。
【図１４】キャピラリ針中の目的物が漏れ出た状態を示す図である。
【符号の説明】
【００９７】
１００        マイクロインジェクション装置
１１０        キャピラリ針
１２０        シャーレ
１３０        ステージ
１４０        カメラモジュール
１４１        対物レンズ
１４２        励起光源
１４３        励起フィルタ
１４４        反射鏡
１４５        蛍光フィルタ
１４６        カメラ
１５０        吐出装置
１６０        キャピラリ針駆動装置
１７０        ステージ駆動装置
１８０        対物レンズ駆動装置
１９０        システム制御装置
１９１        吐出装置制御部
１９２        駆動装置制御部
１９３        撮像部
１９４        画像記憶部
１９５        吐出レート算出条件記憶部
１９６        吐出レート算出部
１９７        吐出レート判定部
１９８        減圧部
１９９        逆流防止圧決定部
２００        マイクロインジェクション装置
２９０        システム制御装置
２９１        減圧後圧力記憶部
２９２        近似直線生成部
２９３        ゼロ圧力算出部
２９４        平均値算出部
２９８        減圧部
【図１】
2010148454.tif 000003
【図２】
2010148454.tif 000004
【図３】
2010148454.tif 000005
【図４】
2010148454.tif 000006
【図５】
2010148454.tif 000007
【図６】
2010148454.tif 000008
【図７】
2010148454.tif 000009
【図８】
2010148454.tif 000010
【図９】
2010148454.tif 000011
【図１０】
2010148454.tif 000012
【図１１】
2010148454.tif 000013
【図１２】
2010148454.tif 000014
【図１３】
2010148454.tif 000015
【図１４】
2010148454.tif 000016