(57)【要約】【課題】免疫賦活性核酸、その組成物、および免疫賦活性核酸を使用する方法を提供する。【解決手段】本発明は、免疫応答を刺激するために有用である、５’ＴＣＧモチーフ、あるいは５’末端またはその付近にＣＧを含むＣｐＧ免疫刺激オリゴヌクレオチドのクラスに関する。本発明は、５’ＣｐＧを有しているＣｐＧ免疫賦活性オリゴヌクレオチドの特異的なサブクラスが、免疫賦活作用を仲介することにおいて非常に有効であるという発見に関する。これらのＣｐＧ核酸は、ガン、感染性疾患、アレルギー、喘息、および他の障害を処置するため、ならびに、ガンの化学療法後の日和見感染に対する防御を補助するために免疫系を刺激することに関して、治療的および予防的に有用である。【選択図】図１
2010148524.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
明細書中に記載の発明。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（発明の分野）
本発明は、一般に、免疫賦活性核酸、その組成物、および免疫賦活性核酸を使用する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
（発明の背景）
細菌のＤＮＡは、Ｂ細胞およびナチュラルキラー細胞を活性化する免疫賦活作用を有しているが、脊椎動物のＤＮＡはそうではない（Ｔｏｋｕｎａｇａ、Ｔ．ら，１９８８、Ｊｐｎ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．７９：６８２−６８６；Ｔｏｋｕｎａｇａ，Ｔ．ら，１９８４，ＪＮＣＩ  ７２：９５５−９６２；Ｍｅｓｓｉｎａ，Ｊ．Ｐ．ら，１９９１，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：１７５９−１７６４；およびＫｒｉｅｇ，１９９８，Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｃ．Ａ．ＳｔｅｉｎおよびＡ．Ｍ．Ｋｒｉｅｇ（編），Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ，ｐｐ４３１−４４８、およびＫｒｉｅｇ．Ａ．Ｍ．，ＣｐＧ  ｍｏｔｉｆｓ  ｉｎ  ｂａｃｔｅｒｉａｌ  ＤＮＡ  ａｎｄ  ｔｈｅｉｒ  ｉｍｍｕｎｅ  ｅｆｆｅｃｔｓ（２００２）Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０：７０９−７６０に概説されている）。これらの細菌ＤＮＡの免疫賦活作用は、特定の塩基の前後関係においてメチル化されていないＣｐＧジヌクレオチド（ＧｐＧモチーフ）が存在する結果であると現在理解されている。このモチーフは細菌ＤＮＡに共通のものであるが、脊椎動物ＤＮＡにおいてはメチル化されており、実際以下に評価されている（Ｋｒｉｅｇら，１９９５  Ｎａｔｕｒｅ  ３７４：５４６−５４９；Ｋｒｉｅｇ，１９９９  Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ  ９３３２１：１−１０）。細菌ＤＮＡの免疫賦活作用は、これらのＣｐＧモチーフを含んでいる合成オリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）を用いて模倣することができる。このようなＣｐＧ  ＯＤＮはヒトおよびマウスの白血球に対して高い賦活作用を有し、その作用としては、Ｂ細胞の増殖；サイトカインおよび免疫グロブリンの分泌；ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞溶解活性、およびＩＦＮ−γの分泌；ならびに樹状細胞（ＤＣ）および他の抗原提示細胞の活性化による共賦活分子を発現し、サイトカイン、特に、Ｔｈ１様Ｔ細胞応答の発生を促進することにおいて重要なＴｈ１様サイトカインを分泌する作用が挙げられる。天然のホスホジエステル骨格ＣｐＧ  ＯＤＮのこれらの免疫賦活作用は、ＣｐＧモチーフがメチル化されてＧｐＣに変化した場合、または別の方法で除去されたかもしくは変化した場合に、この作用が大幅に低下するという点で、高度にＣｐＧ特異的である（Ｋｒｉｅｇら，１９９５  Ｎａｔｕｒｅ  ３７４：５４６−５４９；Ｈａｒｔｍａｎｎら，１９９９，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９６：９３０５−１０）。
【０００３】
初期の研究では、免疫賦活性ＣｐＧモチーフは、式プリン−プリン−ＣｐＧ−ピリミジン−ピリミジンの後に続くと考えられていた（Ｋｒｉｅｇら，１９９５  Ｎａｔｕｒｅ  ３７４：５４６−５４９；Ｐｉｓｅｔｓｋｙ，１９９６  Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５６：４２１−４２３；Ｈａｃｋｅｒら，１９９８  ＥＭＢＯ  Ｊ．１７：６２３０−６２４０；Ｌｉｐｆｏｒｄら，１９９８  Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．６：４９６−５００）。しかし、現在は、マウスのリンパ球が、この「式」の後には続かないホスホジエステルＣｐＧモチーフに対して極めてよく応答すること（Ｙｉら、１９９８  Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６０：５８９８−５９０６）、そして同じことがヒトのＢ細胞と樹状細胞についても当てはまること（Ｈａｒｔｍａｎｎら、１９９９、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９６：９３０５−１０；Ｌｉａｎｇ，１９９６  Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９８：１１１９−１１２９）が明らかである。それでもなお、用語「ＣｐＧモチーフ」は、一般に、ＣｐＧジヌクレオチドが中心に位置しているヘキサマーモチーフを言及するために使用される。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００４】
（発明の要旨）
本発明は、５’ＣｐＧを有しているＣｐＧ免疫賦活性オリゴヌクレオチドの特異的なサブクラスが、免疫賦活作用を仲介することにおいて非常に有効であるという発見に関する。これらのＣｐＧ核酸は、ガン、感染性疾患、アレルギー、喘息、および他の障害を処置するため、ならびに、ガンの化学療法後の日和見感染に対する防御を補助するために免疫系を刺激することに関して、治療的および予防的に有用である。ＣｐＧ刺激によって生じる強くさらにその上バランスのとれた細胞性および体液性の免疫応答は、侵襲性の病原体およびガン性の細胞に対する体自身の天然の防御システムを反映する。
【０００５】
詳細には、５’ＴＣＧモチーフを有している免疫賦活ＣｐＧ含有オリゴヌクレオチドは、通常のヘキサマーモチーフよりも重要な治療特性を有している。さらなるメチル化されていないＣｐＧモチーフを全く含まない５’ＴＣＧモチーフを有しているオリゴヌクレオチドは、強い免疫賦活能力を有していることが見出されている。１つの局面において、本発明は、以下のオリゴヌクレオチドを含む組成物である。
５’ＴＣＧＸ１Ｘ２Ｎ１３’（ここで、Ｎ１は２〜９５ヌクレオチドであり、Ｘ１がＣまたはＡである場合は、Ｘ２はＡ、Ｔ、またはＣであり（配列番号６１）、Ｘ１がＴである場合は、Ｘ２はＡまたはＧであり（配列番号６２）、Ｘ１がＧである場合は、Ｘ２は任意のヌクレオチドである（配列番号６３））。
【０００６】
他の局面においては、本発明は、５’ＴＣＧＴＮ１３’（配列番号６４）を含むオリゴヌクレオチドに関する。このオリゴヌクレオチドにおいては、Ｎ１は３〜９６ヌクレオチドであるが、Ｎ１が１６ヌクレオチドである場合は、Ｎ１はＣ１２（５’−ＣＣＣＣＣＣＣＣＣＣＣ−３’、配列番号６５）を含まず、Ｎ１が８ヌクレオチドである場合は、Ｎ１は少なくとも５０％がＣまたは７０％がＴである（配列番号６６）。
【０００７】
他の態様によれば、５’ＴＣＧＡＮ１３’（配列番号６７）を含むオリゴヌクレオチドが提供される。このオリゴヌクレオチドにおいては、Ｎ１は３〜９６ヌクレオチドであるが、Ｎ１が１９ヌクレオチドである場合は、Ｎ１は少なくとも５５％がピリミジンであり（配列番号６８）、Ｎ１が８ヌクレオチドである場合は、Ｎ１は少なくとも５０％がＴまたはＣである（配列番号６９）。
【０００８】
他の態様によれば、５’ＴＣＧＮ１３’を含むオリゴヌクレオチドが提供される。このオリゴヌクレオチドにおいては、Ｎ１は１０〜９６ヌクレオチドであり、オリゴヌクレオチドのＣ含量は６０％以下、オリゴヌクレオチドのＡ含量は３０％以下である。
【０００９】
他の態様によれば、５’ＴＹＺＮ１３’を含むオリゴヌクレオチドが提供される。このオリゴヌクレオチドにおいては、Ｎ１は４〜９７ヌクレオチドであり、このオリゴヌクレオチドはメチル化されていないＣＧモチーフは含まない。Ｙは、シトシンまたは修飾されたシトシンである。Ｚは、グアニンまたは修飾されたグアニンである。１つの態様では、Ｙは、５’メチルシトシン、５−メチル−デオキシシトシン、５−メチル−デオキシイソシトシン、５−ヒドロキシ−デオキシシトシン、デオキシウリジン、Ｎ４−エチル−デオキシシトシン、２’−デオキシウリジン、５−フルオロ−２’−ｄＵ，およびｄＳｐａｃｅｒである。他の実施形態では、Ｚは、７−デアザグアニン、７−デアザ−７−置換グアニン（例えば、７−デアザ−７−（Ｃ２−Ｃ６）アルキニルグアニン）、７−デアザ−８−置換グアニン、ヒポキサンチン、２，６−ジアミノプリン、２−アミノプリン、プリン、８−ヒドロキシグアニンのような８−置換グアニン、および６−チオグアニン、イノシン、２−アミノプリン、ネブラリン、およびｄＳｐａｃｅｒである。
【００１０】
これらのオリゴヌクレオチドの式においては、５’はオリゴヌクレオチドの遊離の５’末端を意味し、３’はオリゴヌクレオチドの遊離の３’末端を意味する。
【００１１】
いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは以下の構造の１つを有する：５’Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ａ＊Ｇ＊Ｇ＊Ａ＊Ｃ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｔ＊Ｃ＊Ａ＊Ｇ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｔ３’（配列番号５０）または５’Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ３’（配列番号２）。＊は、ホスホロチオエート結合を意味する。
【００１２】
１つの実施形態によれば、オリゴヌクレオチドには少なくとも１つの修飾されたヌクレオチド間結合が含まれる。他の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、少なくとも５０％の修飾されたナヌクレオチド間結合を含む。状況によっては、オリゴヌクレオチドの全てのヌクレオチド間結合が修飾される。安定化されたヌクレオチド間結合は、ホスホロチオエート結合であり得る。
【００１３】
いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは２０〜１００ヌクレオチドの長さである。他の実施形態では、４０ヌクレオチドまたはそれ未満の長さである。
【００１４】
Ｎ１はメチル化されていないＣＧモチーフは含まない。Ｎ１はＮ２Ｎ３によって定義することができる場合がある。ここでは、Ｎ２は８〜９４ヌクレオチドであるか、またはいくつかの実施形態では８〜４０ヌクレオチドであり、Ｎ３は２〜５個のピリミジンである。いくつかの実施形態では、Ｎ３はＴＴＴＴＴ、ＴＴＴＴ、ＴＴＴ、またはＴＴである。他の実施形態によれば、Ｎ１は少なくとも５０％がピリミジンである場合があり、また少なくとも８０％がピリミジンである場合もある。さらに他の実施形態では、Ｎ１はポリＡ配列およびポリＧ配列を含まない。他の実施形態では、Ｎ１はＴＮ２であり、Ｎ２は８〜９４ヌクレオチドである。
【００１５】
本発明は、１つの態様において、免疫刺激ヌクレオチドの５’配列、それらの長さ、およびヌクレオチド間結合が、誘導される免疫応答のサイトカインプロファイルに対して特異的な影響を有していることの発見、およびこれらの発見を、改良された免疫刺激特性を有するＣｐＧ免疫刺激オリゴヌクレオチドのサブセットの設計に使用できることの発見に関係している。好ましいＣｐＧ免疫刺激オリゴヌクレオチドは、以下の６つの一般式の１つに含まれる：５’−Ｘ１ＹＲＭ１−３’、５’−Ｘ２ＣＧＭ２−３’、５’−Ｘ３ＣＧＭ３−３’、５’−Ｘ４ＣＧＭ４−３’、５’−Ｘ５ＣＧＭ５−３’、および５’−ＴＴＧＭ６−３’。これらの式によって、優れた免疫刺激特性を示し、別のメチル化されていないＣｐＧモチーフをそれ以上は含まないＣｐＧオリゴヌクレオチドのクラスのサブセットが定義される。これらの式においては、５’はオリゴヌクレオチドの遊離の５’末端を意味し、３’はオリゴヌクレオチドの遊離の３’末端を意味する。
【００１６】
本発明の１つの態様では、ＯＤＮは、一般式５’−Ｘ１ＹＲＭ１−３’を有する。式中、Ｘ１は１ヌクレオチドであり；Ｙはシトシンまたは修飾されたシトシンであり；Ｒはグアニンまたは修飾されたグアニンであり；そしてＭ１は１〜３ヌクレオチドの核酸である。本発明の他の実施形態によれば、オリゴヌクレオチドのヌクレオチド間結合は全てが安定化されたホスホロチオエートヌクレオチド間結合である。１つの実施形態では、ＹとＲとの間のヌクレオチド間結合は、Ｒｐ立体配置のホスホジエステル結合である。本発明のいくつかの実施形態では、修飾されたシトシンはＣ５置換されており、そして／または修飾されたグアニンはＣ８またはＣ７置換されている。本発明の特定の実施形態では、置換されたまたは修飾されたＣまたはＧは、５−置換シトシン（例えば、５−メチル−シトシン、５−フルオロ−シトシン、５−クロロ−シトシン、５−ブロモ−シトシン、５−ヨード−シトシン、５−ヒドロキシ−シトシン、５−ヒドロキシメチル−シトシン、５−ジフルオロメチル−シトシン、および未置換もしくは置換された５−アルキニル−シトシン）、６−置換シトシン、Ｎ４−置換シトシン（例えば、Ｎ４−エチル−シトシン）、５−アザ−シトシン、２−メルカプト−シトシン、イソシトシン、シュード−イソシトシン、縮合環系を有しているシトシン類似体（例えば、Ｎ，Ｎ’−プロピレンシトシンまたはフェノキサジン）、ならびにウラシルおよびその誘導体（例えば、５−フルオロ−ウラシル、５−ブロモ−ウラシル、５−ブロモビニル−ウラシル、４−チオ−ウラシル、５−ヒドロキシ−ウラシル、５−プロピニル−ウラシル）、チミン誘導体（例えば、２−チオチミン、４−チオチミン、６−置換チミン）、７−デアザグアニン、７−デアザ−７−置換グアニン（例えば、７−デアザ−７−（Ｃ２−Ｃ６）アルキニルグアニン）、７−デアザ−８−置換グアニン、７−デアザ−８−アザ−グアニン、ヒポキサンチン、Ｎ２−置換グアニン（例えば、Ｎ２−メチル−グアニン）、５−アミノ−３−メチル−３Ｈ，６Ｈ−チアゾロ［４，５−ｄ］ピリミジン−２，７−ジオン、２，６−ジアミノプリン、２−アミノプリン、プリン、インドール、アデニン、置換アデニン（例えば、Ｎ６−メチル−アデニン、８−オキソ−アデニン）、８−置換グアニン（例えば、８−ヒドロキシグアニン、および８−ブロモグアニン）、および６−チオグアニンからなる群より選択される。本発明の別の実施形態では、塩基は、一般的な塩基（例えば、４−メチル−インドール、５−ニトロ−インドール、３−ニトロピロール、Ｐ塩基、およびＫ塩基）、芳香環系（例えば、ベンゾイミダゾール、またはジクロロ−ベンゾイミダゾール、１−メチル−１Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−カルボン酸アミド）、芳香環系（例えば、フルオロベンゼン、またはジフルオロベンゼン）、および水素原子（ｄＳｐａｃｅｒ）によって置換される。本発明の１つの実施形態によれば、オリゴヌクレオチドは、オリゴヌクレオチドの３’末端に連結された担体を用いて結合させられる。いくつかの実施形態では、担体は、微粒子、デンドリマー、リポソーム、カチオン錯体、および抗原からなる群より選択される。本発明のさらに別の実施形態では、ＯＤＮは、抗原とともに被験体に投与される。さらに別の実施形態では、ＣｐＧ免疫刺激オリゴヌクレオチドは、被験体への治療プロトコールの投与と組み合わせた被験体の処置に有用である。本発明のいくつかの実施形態では、治療プロトコールは外科手術である。
【００１７】
いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは担体とは結合されない。他の実施形態では、オリゴヌクレオチドは多量体化された複合体である。必要に応じて、多量体化された複合体は、第２のオリゴヌクレオチドに対して多量体化単位によって連結させられたオリゴヌクレオチドを含む。第２のオリゴヌクレオチドは、式５’−Ｘ１ＹＲＭ１−３’を有している場合もある。
【００１８】
１つの態様では、本発明の免疫刺激オリゴヌクレオチドは、オリゴヌクレオチドの３’末端に連結された多量体化単位を有している一般式５’−Ｘ２ＹＲＭ２−３’を有する。Ｘ２は、１ヌクレオチド、またはジヌクレオチド、またはＣＧジヌクレオチドを含まないトリヌクレオチドから構成されている核酸である。Ｙはシトシンまたは修飾されたシトシンである。Ｒはグアニンまたは修飾されたグアニンである。Ｍ２は０〜２７ヌクレオチドの核酸である。いくつかの実施形態では、免疫刺激オリゴヌクレオチドは、以下の構造を有する：５’−ＴＣＧ−３’、５’−ＴＣＧＴ−３’、５’−ＵＣＧ−３’、５’−ＵＣＧＴ−３’。さらに別の実施形態では、Ｍ２はＣＧジヌクレオチドを含まない。本発明の別の実施形態によれば、Ｘ２は１ヌクレオチドであり、Ｘ２はピリミジンである。本発明の他の実施形態によれば、オリゴヌクレオチドのヌクレオチド間結合は全て、安定なホスホジエステルヌクレオチド間結合である。
【００１９】
いくつかの実施形態では、多量体化単位は、微粒子、デンドリマー、リポソーム、カチオン錯体、コレステロール、および抗原からなる群より選択される担体である。他の実施形態では、多量体化単位は、オリゴヌクレオチドの３’末端と第２のオリゴヌクレオチドとの間のリンカーである。
【００２０】
本発明のさらに別の実施形態では、ＯＤＮは抗原とともに被験体に投与される。さらに別の実施形態では、ＣｐＧ免疫刺激オリゴヌクレオチドは、被験体に対する治療プロトコールの投与と組み合わせて被験体を処置するために有用である。本発明のいくつかの実施形態では、治療プロトコールは外科手術である。
【００２１】
本発明の別の態様によれば、免疫刺激オリゴヌクレオチドは、一般式５’−Ｘ３ＣＧＭ３−３’を有する。式中、Ｘ３はＣＧジヌクレオチドを含まない１ヌクレオチドであり；Ｍ３はＣＧジヌクレオチドを含まない３〜２７ヌクレオチドの核酸であり、Ｍ３は以下の特性の少なくとも１つを有する：ＴＣジヌクレオチドを含まない、少なくとも３０％がＴヌクレオチドである、Ａ、Ｔ、およびＧから構成される、または少なくとも１つの修飾されたヌクレオチド間結合を有しているＣＣＴＴＣＣヘキサマーを含まない。いくつかの実施形態では、Ｍ３のうち、少なくとも３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％がＴまたはその修飾されたバージョンである。
【００２２】
別の態様では、免疫刺激オリゴヌクレオチドは、一般式５’−Ｘ４ＣＧＭ４−３’を有する。式中、Ｘ４はＣＧジヌクレオチドを含まないジヌクレオチドであり、Ｍ４はＣＧジヌクレオチドを含まない２〜２６ヌクレオチドの核酸であり、Ｍ４は以下の特性の少なくとも１つを有する：ＴＧまたはＧＴジヌクレオチドを含まない、少なくとも３８％がＴヌクレオチドである、またはＡおよびＴから構成される。いくつかの実施形態では、Ｍ４のうち、少なくとも４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％がＡもしくはＴ、またはそれらの修飾されたバージョンである。
【００２３】
さらに別の態様では、免疫刺激オリゴヌクレオチドは、一般式５’−Ｘ５ＣＧＭ５−３’を有する。式中、Ｘ５はＣＧジヌクレオチドを含まないトリヌクレオチドであり、Ｍ５はＣＧジヌクレオチドを含まない１〜２５ヌクレオチドの核酸であり、Ｍ５は以下の特性の少なくとも１つを有する：ＣＴジヌクレオチドを含まず、少なくとも１つのホスホロチオエート結合は含まない、少なくとも４１％がＴヌクレオチドである、またはＡおよびＣから構成される。いくつかの実施形態では、Ｍ４のうち、少なくとも４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％がＴまたはその修飾されたバージョンである。
【００２４】
本発明の別の態様によれば、免疫刺激オリゴヌクレオチドは、一般式５’−ＴＴＧＭ６−３’を有する。式中、Ｍ６は５〜２１ヌクレオチドからなる核酸であり、Ｍ６はＣＧジヌクレオチドを含まず、Ｍ６は、少なくとも３０％がＴヌクレオチドから構成され、上記ヌクレオチドは１０〜２４ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、Ｍ４のうち、少なくとも３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％がＴまたはその修飾されたバージョンである。
【００２５】
いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは以下の構造の１つを有する：
５’−Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ−３’（配列番号３２）
５’−Ｔ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ−３’（配列番号２７）
５’−Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ−３’（配列番号２８）。
【００２６】
記号＊は、安定なヌクレオチド間結合の存在を示し、＿：はホスホジエステル結合の存在を意味する。
【００２７】
５’−Ｘ６ＣＧＭ７−３’を含むオリゴヌクレオチドが、本発明の１つの態様にしたがって提供される。５’はオリゴヌクレオチドの５’末端を示し、３’はオリゴヌクレオチドの３’末端を示し、Ｘ６は１〜３ヌクレオチドであり、ＣＧジヌクレオチドを含まない。Ｍ７は６〜２７ヌクレオチドの核酸であり、少なくとも３個のＣＧジヌクレオチドを含み、少なくとも５０％がＴヌクレオチドである。１つの実施形態では、Ｍ７は１６〜１８ヌクレオチドの長さである。
【００２８】
いくつかの実施形態では、Ｍ７は少なくとも４個のＣＧジヌクレオチドを含む。他の実施形態では、少なくとも１つのＣＧジヌクレオチドにホスホジエステルヌクレオチド間結合が含まれる。状況によっては、少なくとも３個のＣＧジヌクレオチドにホスホジエステルヌクレオチド間結合が含まれる。オリゴヌクレオチドは、配列番号３３、３４、３５、３６、および３７からなる群より選択することができる。
【００２９】
別の態様では、本発明は、５’−’ＴＴＧＭ８−３’を含むオリゴヌクレオチドである。式中、５’はオリゴヌクレオチドの５’末端を示し、３’はオリゴヌクレオチドの３’末端を示し、Ｍ７は６〜１８ヌクレオチドの核酸であり、少なくとも１つのＣＧジヌクレオチドを含み、少なくとも５０％がＴヌクレオチドである。状況によっては、Ｍ８は１４ヌクレオチドの長さである。
【００３０】
免疫刺激オリゴヌクレオチドは、一般に、３から３５ヌクレオチドの間の範囲の長さを有する。いくつかの実施形態では、長さは４〜６、３〜３２、６〜３０、または１０〜２４ヌクレオチドの範囲、あるいはその間の範囲にある任意の整数である。
【００３１】
１つの実施形態によれば、オリゴヌクレオチドには、少なくとも１つの修飾されたヌクレオチド間結合が含まれる。他の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、少なくとも５０％の修飾されたヌクレオチド間結合を含む。状況によっては、オリゴヌクレオチドの全てのヌクレオチド間結合が修飾される。安定なヌクレオチド間結合はホスホロチオエート結合であり得る。
【００３２】
別の態様では、本発明は、アレルギーまたは喘息を処置するための方法に関する。この方法は、アレルギーまたは喘息を処置するために有効な量の本明細書中に記載される免疫刺激ＣｐＧオリゴヌクレオチドを、アレルギーまたは喘息を有しているか、あるいはアレルギーまたは喘息を有するリスクのある被験体に投与することによって行われる。１つの実施形態では、オリゴヌクレオチドは粘膜表面に、例えば、呼吸組織に投与される。他の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、エアゾール処方物として投与される。状況によっては、オリゴヌクレオチドは鼻腔内に投与される。他の実施形態では、被験体はアレルギー性喘息を有しているか、またはアレルギー性喘息を発症するリスクがある。
【００３３】
サイトカインの産生を誘導するための方法は、本発明の別の態様にしたがって提供される。この方法は、ＩＰ１０、ＩＬ６、ＩＬ８、ＩＬ１２、ＩＬ１８、ＴＮＦ、ＩＦＮ−α、ケモカイン、およびＩＦＮ−γからなる群より選択されるサイトカインを誘導するために有効な量の本明細書中に記載される免疫刺激ＣｐＧオリゴヌクレオチドを被験体に投与することによって行われる。
【００３４】
別の態様では、本発明は、抗原または他の治療用化合物、例えば、抗菌剤または抗ガン剤と組み合わせた、本明細書中に記載されるＣｐＧ免疫刺激オリゴヌクレオチドの組成物である。抗菌剤は、例えば、抗ウイルス剤、抗寄生虫剤、抗細菌剤、または抗真菌剤であり得る。
【００３５】
組成物には、必要に応じて薬学的担体が含まれ得、そして／または送達デバイス中に処方され得る。いくつかの実施形態では、送達デバイスは、カチオン性脂質、細胞浸透性タンパク質、および徐放デバイスからなる群より選択される。１つの実施形態では、徐放デバイスは生分解性ポリマーまたは微粒子である。
【００３６】
本発明の別の態様によれば、免疫応答を刺激する方法が提供される。この方法には、被験体の免疫応答を誘導するために有効な量のＣｐＧ免疫刺激オリゴヌクレオチドを被験体に投与する段階が含まれる。好ましくは、ＣｐＧ免疫刺激オリゴヌクレオチドは、経口で、局所的に、徐放デバイスにおいて、粘膜から、全身に、非経口的に、または筋肉内に投与される。ＣｐＧ免疫刺激オリゴヌクレオチドが粘膜表面に投与される場合は、これは、粘膜の免疫応答または全身の免疫応答を誘導するために有効な量で送達することができる。好ましい実施形態では、粘膜表面は、口腔表面、鼻腔表面、直腸表面、膣表面、または眼球表面である。
【００３７】
いくつかの実施形態では、この方法には、抗原に対して被験体をさらす段階が含まれる。ここでは、免疫応答は抗原特異的免疫応答である。いくつかの実施形態では、抗原は、腫瘍抗原、ウイルス抗原、細菌抗原、寄生虫抗原、およびペプチド抗原からなる群より選択される。
【００３８】
ＣｐＧ免疫刺激オリゴヌクレオチドは、広域スペクトルの免疫応答を誘発することができる。例えば、これらのＣｐＧ免疫刺激オリゴヌクレオチドは、Ｔｈ２免疫応答からＴｈ１免疫応答へと向け直すために使用することができる。ＣｐＧ免疫刺激オリゴヌクレオチドはまた、リンパ球（例えば、Ｂ細胞およびＴ細胞）、樹状細胞、およびＮＫ細胞のような免疫細胞を活性化するために使用することもできる。活性化は、インビボ、インビトロ、またはエキソビボで、すなわち、被検体から免疫細胞を単離し、免疫細胞を、免疫細胞を活性化させるために有効な量のＣｐＧ免疫刺激オリゴヌクレオチドと接触させ、活性化された免疫細胞を被験体に再び投与することによって行うことができる。いくつかの実施形態では、樹状細胞はガン抗原を提示する。樹状細胞は、エキソビボでガン抗原にさらすことができる。
【００３９】
ＣｐＧ免疫刺激オリゴヌクレオチドによって生じた免疫応答はまた、サイトカインの産生、例えば、ＩＰ１０、ＩＬ６、ＩＬ８、ＩＬ１２、ＩＬ１８、ＴＮＦ、ＩＦＮ−α、ケモカイン、およびＩＦＮ−γの産生の誘導を生じる場合がある。
【００４０】
さらに別の実施形態では、ＣｐＧ免疫刺激オリゴヌクレオチドは、ガンを有しているか、またはガンを発症するリスクのある被験体においてガンを処置するために有用である。ガンは、胆管ガン、乳ガン、子宮頸ガン、絨毛ガン、結腸ガン、子宮内膜ガン、胃ガン、上皮内ガン、リンパ腫、肝臓ガン、肺ガン（例えば、小細胞肺ガン、および非小細胞肺ガン）、黒色腫、神経芽細胞腫、口腔ガン、卵巣ガン、膵臓ガン、前立腺ガン、直腸ガン、肉腫、甲状腺ガン、および腎臓ガン、ならびに他のガン腫および肉腫からなる群より選択することができる。いくつかの重要な実施形態では、ガンは、骨のガン、脳および中枢神経のガン、結合組織のガン、食道ガン、眼のガン、ホジキンリンパ腫、喉頭ガン、口腔ガン、皮膚ガン、および睾丸ガンからなる群より選択される。
【００４１】
ＣｐＧ免疫刺激オリゴヌクレオチドはまた、状況に応じて、ＣｐＧ免疫刺激オリゴヌクレオチドが抗ガン治療と組み合わせて投与される場合には、ガン細胞のガン治療（すなわち、抗ガン治療）に対する反応性を増大させるためにも使用することができる。抗ガン治療とは、例えば、化学療法、ワクチン（例えば、インビトロで感作した樹状細胞ワクチンまたはガン抗原ワクチン）、または抗体に基づく治療のような免疫療法薬であり得る。この後者の治療法には、例えばガン細胞の、細胞表面抗原に特異的な抗体を投与することが含まれる場合がある。ここでは、免疫応答により、抗体依存性細胞傷害作用（ＡＤＣＣ）が生じる。１つの実施形態では、抗体は、リブタキシン（Ｒｉｂｕｔａｘｉｎ）、ハーセプチン（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ）、クアドラメット（Ｑｕａｄｒａｍｅｔ）、パノレックス（Ｐａｎｏｒｅｘ）、ＩＤＥＣ−Ｙ２Ｂ８、ＢＥＣ２、Ｃ２２５、オンコリン（Ｏｎｃｏｌｙｍ）、ＳＭＡＲＴ  Ｍ１９５、ＡＴＲＡＧＥＮ、オバレックス（Ｏｖａｒｅｘ）、ベキサール（Ｂｅｘｘａｒ）、ＬＤＰ−０３、ｉｏｒ  ｔ６、ＭＤＸ−２１０、ＭＤＸ−１１、ＭＤＸ−２２、ＯＶ１０３、３６２２Ｗ９４、抗ＶＥＧＦ、ゼナパックス（Ｚｅｎａｐａｘ）、ＭＤＸ−２２０、ＭＤＸ−４４７、ＭＥＬＩＭＭＵＮＥ−２、ＭＥＬＩＭＭＵＮＥ−１、ＣＥＡＣＩＤＥ、プレターゲット（Ｐｒｅｔａｒｇｅｔ）、ＮｏｖｏＭＡｂ−Ｇ２、ＴＮＴ、Ｇｌｉｏｍａｂ−Ｈ、ＧＮＩ−２５０、ＥＭＤ−７２０００、リンフォシド（ＬｙｍｐｈｏＣｉｄｅ）、ＣＭＡ  ６７６、Ｍｏｎｏｐｈａｒｍ−Ｃ、４Ｂ５、ｉｏｒ  ｅｇｆ．ｒ３、ｉｏｒ  ｃ５、ＢＡＢＳ、抗ＦＬＫ−２、ＭＤＸ−２６０、ＡＮＡ  Ａｂ、ＳＭＡＲＴ  １Ｄ１０  Ａｂ、ＳＭＡＲＴ  ＡＢＬ  ３６４  Ａｂ、およびＩｍｍｕＲＡＩＴ−ＣＥＡからなる群より選択することができる。
【００４２】
したがって、本発明のいくつかの態様にしたがうと、ガンを有しているか、またはガンを有するリスクのある被験体には、ＣｐＧ免疫刺激オリゴヌクレオチドと抗ガン治療が投与される。いくつかの実施形態では、抗ガン治療は、化学療法薬、免疫療法薬、およびガンワクチンからなる群より選択される。
【００４３】
ガンを処置することに関するこれらの方法のさらに別の実施形態では、被験体にはさらに、インターフェロン−αを投与することができる。
【００４４】
他の態様では、本発明は、先天性の免疫応答を活性化するために有効な量のＣｐＧ免疫刺激オリゴヌクレオチドを被験体に投与することによる、先天性の免疫応答を誘導するための方法である。
【００４５】
本発明の別の態様によれば、ウイルス感染またはレトロウイルス感染を処置するための方法が提供される。この方法には、ウイルス感染またはレトロウイルス感染を有しているか、またはそれらの感染を有するリスクのある被験体に、ウイルス感染またはレトロウイルス感染を処置するために有効な量の本発明のいずれかの組成物を投与する段階が含まれる。いくつかの実施形態では、ウイルス感染は、肝炎ウイルス（例えば、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス）、ＨＩＶ、ヘルペスウイルス、またはパピローマウイルスによって引き起こされる。
【００４６】
細菌感染を処置するための方法が、本発明の別の態様にしたがって提供される。この方法には、細菌感染を有しているか、または細菌感染を有するリスクのある被験体に、細菌感染を処置するために有効な量の本発明のいずれかの組成物を投与する段階が含まれる。１つの実施形態では、細菌感染は細胞内の細菌が原因である。
【００４７】
別の態様では、本発明は、寄生虫感染を有しているか、または寄生虫感染を有するリスクのある被験体に、寄生虫感染を処置するために有効な量の本発明のいずれかの組成物を投与することにより、寄生虫感染を処置するための方法である。１つの実施形態では、寄生虫感染は、細胞内の寄生虫が原因である。別の実施形態では、寄生虫感染は、蠕虫以外の寄生虫が原因である。
【００４８】
いくつかの実施形態では被験体はヒトであり、他の実施形態では、被験体はヒト以外の脊椎動物、例えば、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、ブタ、シチメンチョウ、ヤギ、魚類、サル、ニワトリ、ラット、マウス、またはヒツジである。
【００４９】
別の態様では、本発明は、ＴＨ１免疫応答を生じるために有効な量の本発明のいずれかの組成物を被験体に投与することにより、ＴＨ１免疫応答を誘導するための方法に関する。
【００５０】
本発明の限定のそれぞれには、本発明の種々の実施形態を含めることができる。したがって、任意の１つの要素または要素の組み合わせを含む本発明の限定のそれぞれには、本発明のそれぞれの態様を含めることができると考えられる。
【００５１】
本発明は、添付の図面と組み合わせると、より容易に、そして完全に理解することができる。
本発明はまた、以下の項目を提供する。
（項目１）
以下：
５’ＴＣＧＸ１Ｘ２Ｎ１３’
を含むオリゴヌクレオチドであって、
式中、Ｘ１は任意のヌクレオチドであり、Ｘ２はＸ１がＣまたはＡである場合にはＡ、Ｔ、またはＣであり、Ｘ２はＸ１がＴである場合にはＡまたはＧであり、Ｘ２はＸ１がＧである場合には任意のヌクレオチドであり、Ｎ１は２〜９５ヌクレオチドであり、５’はオリゴヌクレオチドの５’末端を示し、３’はオリゴヌクレオチドの３’末端を示し、そしてＮ１はメチル化されていないＣＧモチーフは含まない、オリゴヌクレオチド。
（項目２）
以下：
５’ＴＣＧＴＮ１３’
を含むオリゴヌクレオチドであって、
式中、Ｎ１は３〜９６ヌクレオチドであり、５’はオリゴヌクレオチドの５’末端を示し、３’はオリゴヌクレオチドの３’末端を示し、Ｎ１はメチル化されていないＣＧモチーフは含まず、Ｎ１が１６ヌクレオチドである場合にはＮ１はＣ１２は含まず、Ｎ１が８ヌクレオチドである場合にはＮ１は少なくとも５０％がＣまたは７０％がＴである、オリゴヌクレオチド。
（項目３）
以下：
５’ＴＣＧＡＮ１３’
を含むオリゴヌクレオチドであって、
式中、Ｎ１は３〜９６ヌクレオチドであり、５’はオリゴヌクレオチドの５’末端を示し、３’はオリゴヌクレオチドの３’末端を示し、Ｎ１はメチル化されていないＣＧモチーフは含まず、Ｎ１が１９ヌクレオチドである場合にはＮ１は少なくとも５５％がピリミジンであり、Ｎ１が８ヌクレオチドである場合にはＮ１は少なくとも５０％がＴまたはＣである、オリゴヌクレオチド。
（項目４）
以下：
５’ＴＣＧＮ１３’
を含むオリゴヌクレオチドであって、
式中、Ｎ１は１０〜９６ヌクレオチドであり、５’はオリゴヌクレオチドの５’末端を示し、３’はオリゴヌクレオチドの３’末端を示し、オリゴヌクレオチドのＣ含量は６０％以下、Ａ含量は３０％以下であり、Ｎ１はメチル化されていないＣＧモチーフは含まない、オリゴヌクレオチド。
（項目５）
以下：
５’ＴＹＺＮ１３’
を含むオリゴヌクレオチドであって、
式中、Ｙはシトシンまたは修飾されたシトシンであり、Ｚはグアニンまたは修飾されたグアニンであり、Ｎ１は４〜９７ヌクレオチドであり、５’はオリゴヌクレオチドの５’末端を示し、３’はオリゴヌクレオチドの３’末端を示し、オリゴヌクレオチドはメチル化されていないＣＧモチーフは含まない、オリゴヌクレオチド。
（項目６）
オリゴヌクレオチドが少なくとも１つの修飾されたヌクレオチド間結合を含む、項目１〜５のいずれか１項に記載のオリゴヌクレオチド。
（項目７）
オリゴヌクレオチドが少なくとも５０％の修飾されたヌクレオチド間結合を含む、項目１〜５のいずれか１項に記載のオリゴヌクレオチド。
（項目８）
オリゴヌクレオチドの全てのヌクレオチド間結合が修飾されている、項目１〜５のいずれか１項に記載のオリゴヌクレオチド。
（項目９）
オリゴヌクレオチドが２０〜１００ヌクレオチドの長さである、項目１〜５のいずれか１項に記載のオリゴヌクレオチド。
（項目１０）
安定化されたヌクレオチド間結合がホスホロチオエート結合である、項目６に記載のオリゴヌクレオチド。
（項目１１）
以下の構造：５’Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ａ＊Ｇ＊Ｇ＊Ａ＊Ｃ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｔ＊Ｃ＊Ａ＊Ｇ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｔ３’（配列番号５０）を有する項目３または４のいずれか１項に記載のオリゴヌクレオチドであって、式中、＊はホスホロチオエート結合を示す、オリゴヌクレオチド。
（項目１２）
以下の構造：５’Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ３’（配列番号２）を有する項目２または４のいずれか１項に記載のオリゴヌクレオチドであって、式中、＊はホスホロチオエート結合を示す、オリゴヌクレオチド。
（項目１３）
Ｎ１がＮ２Ｎ３であり、Ｎ２が８〜９４ヌクレオチドであり、Ｎ３が２〜５個のピリミジンである、項目１〜５のいずれか１項に記載のオリゴヌクレオチド。
（項目１４）
Ｎ３がＴＴＴＴＴである、項目１３に記載のオリゴヌクレオチド。
（項目１５）
Ｎ３がＴＴである、項目１３に記載のオリゴヌクレオチド。
（項目１６）
Ｎ２が８〜４０ヌクレオチドである、項目１３に記載のオリゴヌクレオチド。
（項目１７）
Ｎ１は少なくとも５０％がピリミジンである、項目１〜５のいずれか１項に記載のオリゴヌクレオチド。
（項目１８）
Ｎ１は少なくとも８０％がピリミジンである、項目１〜５のいずれか１項に記載のオリゴヌクレオチド。
（項目１９）
Ｎ１はポリＡ配列およびポリＧ配列を含まない、項目１〜５のいずれか１項に記載のオリゴヌクレオチド。
（項目２０）
Ｎ１がＴＮ２であり、Ｎ２が８〜９４ヌクレオチドである、項目１〜５のいずれか１項に記載のオリゴヌクレオチド。
（項目２１）
Ｙが、５−メチルシトシン、５−メチル−イソシトシン、５−ヒドロキシ−シトシン、５−ハロゲノシトシン、ウラシル、Ｎ４−エチル−シトシン、５−フルオロ−ウラシル、および水素からなる修飾されたシトシン塩基の群より選択される、項目１〜５のいずれか１項に記載のオリゴヌクレオチド。
（項目２２）
Ｚが、７−デアザグアニン、７−デアザ−７−置換グアニン（例えば、７−デアザ−７−（Ｃ２−Ｃ６）アルキニルグアニン）、７−デアザ−８−置換グアニン、ヒポキサンチン、２，６−ジアミノプリン、２−アミノプリン、プリン、８−ヒドロキシグアニンのような８−置換グアニン、６−チオグアニン、２−アミノプリン、および水素からなる修飾されたグアニン塩基の群より選択される、項目１〜５のいずれか１項に記載のオリゴヌクレオチド。
（項目２３）
オリゴヌクレオチドが１つまたは２つの利用可能な５’末端を有している３’−３’結合を有する、項目１〜５のいずれか１項に記載のオリゴヌクレオチド。
（項目２４）
オリゴヌクレオチドが２つの利用可能な５’末端を有しており、そのそれぞれが５’ＴＣＧである、項目２３に記載のオリゴヌクレオチド。
（項目２５）
アレルギーまたは喘息を処置する方法であって、以下の工程：
アレルギーまたは喘息を処置するために有効な量の項目１〜５のいずれか１項に記載のオリゴヌクレオチドを、アレルギーもしくは喘息を有しているか、またはアレルギーもしくは喘息を有するリスクのある被験体に投与する工程、
を包含する、方法。
（項目２６）
オリゴヌクレオチドが呼吸器系組織に投与される、項目２５に記載の方法。
（項目２７）
被験体がアレルギー性喘息を有しているか、またはアレルギー性喘息を発症するリスクがある、項目２５に記載の方法。
（項目２８）
サイトカインの生産を誘導する方法であって、以下の工程：
ＩＰ１０、ＩＬ６、ＩＬ１２、ＩＬ１８、ＴＮＦ、ケモカイン、ＩＦＮ−α、およびＩＦＮ−γからなる群より選択されるサイトカインを誘導するために有効な量の項目１〜５のいずれか１項に記載のオリゴヌクレオチドを、被検体に投与する工程、
を包含する、方法。
（項目２９）
感染性疾患を処置する方法であって、以下の工程：
感染性疾患を処置するために有効な量の項目１〜５のいずれか１項に記載のオリゴヌクレオチドを、感染性疾患を有しているか、または感染性疾患を有するリスクのある被験体に対して投与する工程、
を包含する、方法。
（項目３０）
被験体が細菌感染を有しているか、または細菌感染を有するリスクがある、項目２９に記載の方法。
（項目３１）
被験体がウイルス感染を有しているか、またはウイルス感染を有するリスクがある、項目２９に記載の方法。
（項目３２）
ガンを処置する方法であって、以下の工程：
ガンを処置するために有効な量の項目１〜５のいずれか１項に記載のオリゴヌクレオチドを、ガンを有しているか、またはガンを有するリスクがある被験体に投与する工程、を包含する、方法。
（項目３３）
ガンが、胆管ガン、乳ガン、子宮頸ガン、絨毛ガン、結腸ガン、子宮内膜ガン、胃ガン、上皮内ガン、リンパ腫、肝臓ガン、肺ガン（例えば、小細胞肺ガン、および非小細胞肺ガン）、黒色腫、神経芽細胞腫、卵巣ガン、膵臓ガン、前立腺ガン、直腸ガン、肉腫、甲状腺ガン、腎臓ガン、骨のガン、脳および中枢神経のガン、結合組織のガン、食道ガン、眼のガン、ホジキンリンパ腫、喉頭ガン、口腔ガン、皮膚ガン、および睾丸ガン、ならびに他のガン腫および肉腫からなる群より選択される、項目３２に記載の方法。
（項目３４）
抗ガン剤を投与する工程を包含する、項目３２に記載の方法。
（項目３５）
被験体の先天性免疫を誘導する方法であって：
先天性免疫を誘導するために有効な量の項目１〜５のいずれか１項に記載のオリゴヌクレオチドを被験体に投与する工程、
を包含する、方法。
（項目３６）
Ｔｈ１免疫応答を誘導する方法であって：
Ｔｈ１免疫応答を誘導するために有効な量の項目１〜５のいずれか１項に記載のオリゴヌクレオチドを被験体に投与する工程、
を包含する、方法。
（項目３７）
被験体の免疫応答を調節する方法であって、該方法は、免疫応答を調節するために有効な量の以下：
５’−Ｘ１ＹＲＭ１−３’
を含むオリゴヌクレオチドを被験体に投与する工程を包含し、
式中、５’はオリゴヌクレオチドの５’末端を示し、３’はオリゴヌクレオチドの３’末端を示し、
Ｘ１はヌクレオチドであり、
Ｙはシトシンまたは修飾されたシトシンであり、
Ｒはグアニンまたは修飾されたグアニンであり、
そしてＭ１は１〜３ヌクレオチドの核酸である、方法。
（項目３８）
オリゴヌクレオチドのヌクレオチド間結合が安定化されたホスホロチオエートヌクレオチド間結合である、項目３７に記載の方法。
（項目３９）
ＹとＲとの間のヌクレオチド間結合がＲｐ立体配置のホスホジエステル結合である、項目３８に記載の方法。
（項目４０）
修飾されたシトシンがＣ５置換を有している、項目３７に記載の方法。
（項目４１）
修飾されたグアニンがＣ８またはＣ７置換を有している、項目３７に記載の方法。
（項目４２）
修飾されたシトシンまたは修飾されたグアニンが、５−置換シトシン（例えば、５−メチル−シトシン、５−フルオロ−シトシン、５−クロロ−シトシン、５−ブロモ−シトシン、５−ヨード−シトシン、５−ヒドロキシ−シトシン、５−ヒドロキシメチル−シトシン、５−ジフルオロメチル−シトシン、および未置換もしくは置換された５−アルキニル−シトシン）、６−置換シトシン、Ｎ４−置換シトシン（例えば、Ｎ４−エチル−シトシン）、５−アザ−シトシン、２−メルカプト−シトシン、イソシトシン、シュード−イソシトシン、縮合環システムを有しているシトシン類似体（例えば、Ｎ，Ｎ’−プロピレンシトシンまたはフェノキサジン）、ならびにウラシルおよびその誘導体（例えば、５−フルオロ−ウラシル、５−ブロモ−ウラシル、５−ブロモビニル−ウラシル、４−チオ−ウラシル、５−ヒドロキシ−ウラシル、５−プロピニル−ウラシル）、チミン誘導体（例えば、２−チオチミン、４−チオチミン、６−置換チミン）、７−デアザグアニン、７−デアザ−７−置換グアニン（例えば、７−デアザ−７−（Ｃ２−Ｃ６）アルキニルグアニン）、７−デアザ−８−置換グアニン、７−デアザ−８−アザ−グアニン、ヒポキサンチン、Ｎ２−置換グアニン（例えば、Ｎ２−メチル−グアニン）、５−アミノ−３−メチル−３Ｈ，６Ｈ−チアゾロ［４，５−ｄ］ピリミジン−２，７−ジオン、２，６−ジアミノプリン、２−アミノプリン、プリン、インドール、アデニン、置換されたアデニン（例えば、Ｎ６−メチル−アデニン、８−オキソ−アデニン）、８−置換グアニン（例えば、８−ヒドロキシグアニン、および８−ブロモグアニン）、および６−チオグアニンからなる群より選択される、項目３７に記載の方法であって、本発明の別の実施形態では、塩基は、一般的な塩基（例えば、４−メチル−インドール、５−ニトロ−インドール、３−ニトロピロール、Ｐ塩基、およびＫ塩基）、芳香環システム（例えば、ベンズイミダゾール、またはジクロロ−ベンズイミダゾール、１−メチル−１Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−カルボン酸アミド）、芳香環システム（例えば、フルオロベンゼン、またはジフルオロベンゼン）、および水素原子（ｄＳｐａｃｅｒ）によって置換される、方法。
（項目４３）
オリゴヌクレオチドは、オリゴヌクレオチドの３’末端に連結された担体と結合させられている、項目３７に記載の方法。
（項目４４）
担体が、微粒子、デンドリマー、コレステロール、リポソーム、カチオン錯体、および抗原からなる群より選択される、項目４３に記載の方法。
（項目４５）
抗原を被験体に投与する工程をさらに含む、項目３７に記載の方法。
（項目４６）
被験体に治療プロトコールを投与する工程をさらに含む、項目３７に記載の方法。
（項目４７）
治療プロトコールが外科手術である、項目４６に記載の方法。
（項目４８）
オリゴヌクレオチドが担体とは結合させられていない、項目３７に記載の方法。
（項目４９）
オリゴヌクレオチドが多量体化された複合体である、項目３７に記載の方法。
（項目５０）
多量体化された複合体が第２のオリゴヌクレオチドに対する多量体化単位によって連結されたオリゴヌクレオチドを含む、項目４９に記載の方法。
（項目５１）
第２のオリゴヌクレオチドが式５’−Ｘ１ＹＲＭ１−３’を有している、項目４９に記載の方法。
（項目５２）
以下：
５’−Ｘ２ＹＲＭ２−３’を含むオリゴヌクレオチドであって、
式中、Ｘ２は、モノヌクレオチド、またはＣＧジヌクレオチドを含まないジヌクレオチドもしくはトリヌクレオチドから構成されている核酸であり、Ｙはシトシンまたは修飾されたシトシンであり、Ｒはグアニンまたは修飾されたグアニンであり、Ｍ２は０〜２７ヌクレオチドの核酸である、オリゴヌクレオチド；および
オリゴヌクレオチドの３’末端に連結された多量体化単位の多量体化された複合体を含む、組成物。
（項目５３）
多量体化単位が、微粒子、デンドリマー、リポソーム、カチオン錯体、コレステロール、および抗原からなる群より選択される担体である、項目５２に記載の組成物。
（項目５４）
オリゴヌクレオチドが、５’ＴＣＧ３’、５’ＴＣＧＴ３’、５’ＵＣＧ３’、または５’ＵＣＧＴ３’である、項目５２に記載の組成物。
（項目５５）
Ｘ２が１ヌクレオチドである、項目５２に記載の組成物。
（項目５６）
Ｘ２がピリミジンである、項目５２に記載の組成物。
（項目５７）
オリゴヌクレオチドがホスホジエステルヌクレオチド間結合を有している、項目５２に記載の組成物。
（項目５８）
Ｍ２がＣＧジヌクレオチドを含まない、項目５２に記載の組成物。
（項目５９）
抗原を被験体に投与することをさらに含む、項目５２に記載の組成物。
（項目６０）
治療プロトコールを被験体に投与することをさらに含む、項目５２に記載の組成物。
（項目６１）
治療プロトコールが外科手術である、項目６０に記載の組成物。
（項目６２）
多量体化単位がオリゴヌクレオチドの３’末端と第２のオリゴヌクレオチドとの間のリンカーである、項目５２に記載の組成物。
（項目６３）
以下：
５’−Ｘ３ＣＧＭ３−３’
を含むオリゴヌクレオチドであって、
式中、５’はオリゴヌクレオチドの５’末端を示し、３’はオリゴヌクレオチドの３’末端を示し、Ｘ３はＣＧジヌクレオチドを含まない１ヌクレオチドであり、Ｍ３はＣＧジヌクレオチドを含まない３〜２７ヌクレオチドの核酸であり、Ｍは以下の特性の少なくとも１つを有する：ＴＣジヌクレオチドを含まない、少なくとも３０％がＴヌクレオチドである、Ａ、Ｔ、およびＧから構成される、または少なくとも１つの修飾されたヌクレオチド間結合を有しているＣＣＴＴＣＣヘキサマーを含まない、オリゴヌクレオチド。
（項目６４）
以下：
５’−Ｘ４ＣＧＭ４−３’
を含むオリゴヌクレオチドであって、
式中、５’はオリゴヌクレオチドの５’末端を示し、３’はオリゴヌクレオチドの３’末端を示し、Ｘ４はＣＧジヌクレオチドを含まないジヌクレオチドであり、ＭはＣＧジヌクレオチドを含まない２〜２６ヌクレオチドの核酸であり、Ｍ４は以下の特性の少なくとも１つを有する：ＴＧまたはＧＴジヌクレオチドを含まない、少なくとも３８％がＴヌクレオチドである、またはＡおよびＴから構成される、オリゴヌクレオチド。
（項目６５）
以下：
５’−Ｘ５ＣＧＭ５−３’
を含むオリゴヌクレオチドであって、
式中、５’はオリゴヌクレオチドの５’末端を示し、３’はオリゴヌクレオチドの３’末端を示し、Ｘ５はＣＧジヌクレオチドを含まないトリヌクレオチドであり、Ｍ５はＣＧジヌクレオチドを含まない１〜２５ヌクレオチドの核酸であり、かつＭ５は以下の特性の少なくとも１つを有する：ＣＴジヌクレオチドを含まず、少なくとも１つのホスホロチオエート結合を含まない、少なくとも４１％がＴヌクレオチドである、またはＡおよびＣから構成される、オリゴヌクレオチド。
（項目６６）
ＣヌクレオチドとＧヌクレオチドとの間のヌクレオチド間結合がホスホジエステル結合である、項目６５に記載のオリゴヌクレオチド。
（項目６７）
オリゴヌクレオチドが少なくとも２つの修飾されたヌクレオチド間結合を含む、項目６５に記載のオリゴヌクレオチド。
（項目６８）
以下：
５’−ＴＴＧＭ６−３’
を含むオリゴヌクレオチドであって、
式中、５’はオリゴヌクレオチドの５’末端を示し、３’はオリゴヌクレオチドの３’末端を示し、Ｍ６は５〜２１ヌクレオチドからなる核酸であり、ＭはＣＧジヌクレオチドを含まず、Ｍ６は、少なくとも３０％がＴヌクレオチドから構成され、上記ヌクレオチドは１０〜２４ヌクレオチドの長さである、オリゴヌクレオチド。
（項目６９）
以下：
５’−Ｘ６ＣＧＭ７−３’
を含むオリゴヌクレオチドであって、
式中、５’はオリゴヌクレオチドの５’末端を示し、３’はオリゴヌクレオチドの３’末端を示し、Ｘ６は１〜３ヌクレオチドでありかつＣＧジヌクレオチドを含まず、Ｍ７は６〜２７ヌクレオチドの核酸であり、少なくとも３個のＣＧジヌクレオチドを含みかつ少なくとも５０％がＴヌクレオチドである、オリゴヌクレオチド。
（項目７０）
Ｍ７が少なくとも４個のＣＧジヌクレオチドを含む、項目６９に記載のオリゴヌクレオチド。
（項目７１）
少なくとも１つのＣＧジヌクレオチドがホスホジエステルヌクレオチド間結合を含む、項目６９に記載のオリゴヌクレオチド。
（項目７２）
少なくとも３個のＣＧジヌクレオチドがホスホジエステルヌクレオチド間結合を含む、項目６９に記載のオリゴヌクレオチド。
（項目７３）
Ｍ７が１６〜１８ヌクレオチドの長さである、項目６９に記載のオリゴヌクレオチド。
（項目７４）
オリゴヌクレオチドが配列番号３３、３４、３５、３６、および３７からなる群より選択される、項目６９に記載のオリゴヌクレオチド。
（項目７５）
以下：
５’−’ＴＴＧＭ８−３’
を含むオリゴヌクレオチドであって、
式中、５’はオリゴヌクレオチドの５’末端を示し、３’はオリゴヌクレオチドの３’末端を示し、Ｍ７は６〜１８ヌクレオチドの核酸でありかつ少なくとも１つのＣＧジヌクレオチドを含みかつ少なくとも５０％がＴヌクレオチドである、オリゴヌクレオチド。
（項目７６）
Ｍ８が１４ヌクレオチドの長さである、項目７５に記載のオリゴヌクレオチド。
（項目７７）
オリゴヌクレオチドが配列番号３８、３９、および４０からなる群より選択される、項目７５に記載のオリゴヌクレオチド。
（項目７８）
免疫応答を誘導する方法であって、以下の工程：
免疫応答を誘導するために有効な量の項目６３から７７のいずれか１項に記載のオリゴヌクレオチド、または項目５２に記載の組成物を被験体に投与する工程、
を包含する、方法。
（項目７９）
オリゴヌクレオチドが、Ｉ型およびＩＩ型のＩＦＮからなる群より選択されるサイトカインを誘導するために有効な量で被験体に投与される、項目７８に記載の方法。
（項目８０）
オリゴヌクレオチドが、感染性疾患を処置するために有効な量で被験体に投与される、項目７８に記載の方法。
（項目８１）
被験体が細菌感染を有しているか、または細菌感染を有するリスクがある、項目７８に記載の方法。
（項目８２）
被験体がウイルス感染を有しているか、またはウイルス感染を有するリスクがある、項目７８に記載の方法。
（項目８３）
オリゴヌクレオチドがガンを処置するために有効な量で被験体に投与される、項目７８に記載の方法。
（項目８４）
ガンが、胆管ガン、乳ガン、子宮頸ガン、絨毛ガン、結腸ガン、子宮内膜ガン、胃ガン、上皮内ガン、リンパ腫、肝臓ガン、肺ガン（例えば、小細胞肺ガン、および非小細胞肺ガン）、黒色腫、神経芽細胞腫、卵巣ガン、膵臓ガン、前立腺ガン、直腸ガン、肉腫、甲状腺ガン、腎臓ガン、骨のガン、脳および中枢神経のガン、結合組織のガン、食道ガン、眼のガン、ホジキンリンパ腫、喉頭ガン、口腔ガン、皮膚ガン、および睾丸ガン、ならびに他のガン腫および肉腫からなる群より選択される、項目７８に記載の方法。
（項目８５）
抗ガン剤を投与する工程をさらに含む、項目７８に記載の方法。
（項目８６）
オリゴヌクレオチドが先天性免疫を誘導するために有効な量で被験体に投与される、項目７８に記載の方法。
（項目８７）
オリゴヌクレオチドがＴｈ１免疫応答を誘導するために有効な量で被験体に投与される、項目７８に記載の方法。
（項目８８）
オリゴヌクレオチドがアレルギーを処置するために有効な量で被験体に投与される、項目７８に記載の方法。
（項目８９）
オリゴヌクレオチドが喘息を処置するために有効な量で被験体に投与される、項目７８に記載の方法。
【図面の簡単な説明】
【００５２】
【図１】図１は、ＩＬ−１０の誘導を通じてＣｐＧではないＯＤＮまたはＣｐＧ  ＯＤＮの免疫刺激活性に対する５’−ＴＣＧモチーフの影響を示す棒グラフである。
【図２】図２は、ＩＦＮ−αの誘導を通じてＣｐＧではないＯＤＮまたはＣｐＧ  ＯＤＮの免疫刺激活性に対する５’−ＴＣＧモチーフの影響を示す棒グラフである。
【図３】図３は、ポリＡ配列およびポリＴ配列に対する５’ＴＣＧの影響を示す棒グラフである。
【図４】図４は、ＯＤＮの５’末端から３’末端へのＣｐＧジヌクレオチドの移動の影響を示す棒グラフである。
【図５】図５は、５’−ＴＣＧに加えて、ＯＤＮの長さも、刺激活性に対して影響を与えることを示す棒グラフである。
【図６】図６は、５’−ＴＣＧに加えて、他の５’修飾の影響を示す棒グラフである。
【図７Ａ】図７は、種々の細胞性の作用によって示される、ＣｐＧ  ＯＤＮの刺激能力に対する５’−ＴＣＧ修飾の影響を示す棒グラフである：７Ａ（ＩＬ−１０の誘導）。
【図７Ｂ】図７は、種々の細胞性の作用によって示される、ＣｐＧ  ＯＤＮの刺激能力に対する５’−ＴＣＧ修飾の影響を示す棒グラフである：７Ｂ（ＩＦＮ−αの誘導）。
【図７Ｃ】図７は、種々の細胞性の作用によって示される、ＣｐＧ  ＯＤＮの刺激能力に対する５’−ＴＣＧ修飾の影響を示す棒グラフである：７Ｃ（ＩＬ−６の誘導）。
【図８】図８は、５’−ＴＣＧを有しているＯＤＮによって誘導されたＩＬ−１０の分泌を示す棒グラフのセットである。
【図９】図９は、５’−ＴＣＧと、漸増数のチミジンを有しているＯＤＮによって誘導されたＩＬ−１０の分泌を示す棒グラフのセットである。
【図１０】図１０は、強いＴｈ−１媒介性免疫応答を誘導する最も強力であり効果的であるＯＤＮとして、５’−ＴＣＧを有しているＯＤＮを示す棒グラフのセットである：１０Ａ（ＩＬ−１０の誘導）および１０Ｂ（ＩＦＮ−αの誘導）。
【図１１】図１１は、免疫刺激ＯＤＮ中のＣｐＧジヌクレオチドの位置によってＩ型ＩＦＮの分泌の強さがどのように決定されるかを示す棒グラフのセットである。
【図１２】図１２は、短い５’−ＴＣＧ  ＯＤＮによって誘導されたＩ型ＩＦＮの分泌を示す棒グラフのセットである。
【図１３Ａ】図１３は、本明細書中に記載された観察にしたがって新たに作成されたＣｐＧ  ＯＤＮのパネルによるインビトロでの免疫刺激を示す棒グラフのセットである：１３Ａ（ＩＬ−１０の誘導）。
【図１３Ｂ】図１３は、本明細書中に記載された観察にしたがって新たに作成されたＣｐＧ  ＯＤＮのパネルによるインビトロでの免疫刺激を示す棒グラフのセットである：１３Ｂ（ＩＦＮ−αの誘導）。
【図１４】図１４は、短いＣｐＧ  ＯＤＮによるＢ細胞の刺激を示す棒グラフのセットである。
【図１５】図１５は、ＣｐＧ  ＯＤＮのパネルによるＩＬ−１０の誘導を示す棒グラフであり、これは、ＣとＧの間にホスホジエステル結合を有しているいくつかのＯＤＮが高い効力を有していることを示している。
【図１６】図１６は、ＣｐＧ  ＯＤＮのパネルによるＩＬ−１０の誘導を示す棒グラフであり、これは、修飾された５’ＴＣＧを有しているいくつかのＯＤＮによってＩＬ−１０が誘導されたことを示している。
【発明を実施するための形態】
【００５３】
本発明は、１つの態様において、５’ＴＣＧを有しているＣｐＧ免疫刺激オリゴヌクレオチドの特異的なサブクラスが免疫刺激作用を仲介することにおいて非常に効果的であることを発見したことに関する。これらのＣｐＧ核酸は、ガン、感染性疾患、アレルギー、喘息、および他の障害を処置するため、ならびに、ガンの化学療法後の日和見感染からの防御を促進するために免疫系を刺激することについて、治療的および予防的に有用である。ＣｐＧ刺激によって生じる強く、さらにその上バランスのとれた細胞性および体液性の免疫応答は、侵襲性の病原体およびガン性の細胞に対する体自身の生まれつき備わっている防御システムを反映する。
【００５４】
本発明は、１つの態様において、ＣｐＧ免疫刺激オリゴヌクレオチドのサブセットが、改良された免疫刺激特性を有していることの発見に関する。好ましいＣｐＧ免疫刺激オリゴヌクレオチドは、以下の５つの一般式の１つに含まれる：５’ＴＣＧＸ１Ｘ２Ｎ１３’、５’ＴＣＧＴＮ１３’、５’ＴＣＧＡＮ１３’、５’ＴＣＧＮ１３’、および５’ＴＹＺＮ１３’（配列番号６１〜６９）。Ｘ１およびＸ２は、１ヌクレオチドを意味する。
【００５５】
これらの式は、優れた免疫刺激特性を示し、さらに別のメチル化されていないＣｐＧモチーフは含まない、ＣｐＧオリゴヌクレオチドのクラスのサブクラスを定義している。これらの式において、５’はオリゴヌクレオチドの遊離の５’末端を示し、３’はオリゴヌクレオチドの遊離の３’末端を意味している。
【００５６】
Ｎ１には、ヌクレオチド配列の可変のセットが含まれる。ヌクレオチド配列は２〜９７ヌクレオチドの長さの範囲、またはこれらの間の範囲の任意の整数であり得る。本発明の発見は、ＣｐＧモチーフまたはＹｐＺモチーフの位置効果の重要性の発見に一部基づく。さらに別のメチル化されていないＣｐＧモチーフをその中には含まない５’ＴＣＧまたは５’ＴＹＺを有しているオリゴヌクレオチドは、免疫刺激能力が強いことが発見されている。オリゴヌクレオチドの残りは分子の５’末端に不可欠なモチーフが含まれている限りは、ヌクレオチドまたは修飾されたヌクレオチドの任意の組み合わせであってよい。
【００５７】
Ｎ１のいくつかの配列は、５’ＴＣＧまたは５’ＴＹＺと組み合わせた場合に、さらに強い免疫刺激活性を有する分子を生じることもまた発見されている。例えば、Ｎ１の少なくとも５０％がピリミジンである場合は、このオリゴヌクレオチドによってＴｈ１に強く偏った免疫誘導が生じる。いくつかの実施形態では、Ｎ１は、少なくとも５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％がピリミジン、例えば、ＣまたはＴである。ピリミジンはＴまたはＣ、あるいはそれらの修飾されたバージョンである。いくつかの実施形態では、Ｎ１の最も３’のヌクレオチドはピリミジンである。例えば、３’末端は、ＴＴＴＴＴ、ＴＴＴＴ、ＴＴＴ、ＴＴ、Ｔ、ＣＣＣＣＣ、ＣＣＣＣ、ＣＣＣ、ＣＣ、Ｃ、ＣＴＴ、ＣＣＴＴ、またはピリミジンの任意の他の可能な組み合わせであり得る。いくつかの限られた実施形態では、Ｎ１は、Ｃ１２（５’−ＣＣＣＣＣＣＣＣＣＣＣＣ−３’（配列番号６５））を含まない。
【００５８】
本発明は、１つの態様において、免疫刺激ヌクレオチドの５’配列、その長さ、およびヌクレオチド間結合が、誘導される免疫応答のサイトカインプロファイルに特異的な影響を有していることの発見、これらの発見を、改良された免疫刺激特性を有しているＣｐＧ免疫刺激オリゴヌクレオチドのサブセットを設計するために使用できることの発見に関係している。好ましいＣｐＧ免疫刺激オリゴヌクレオチドは、以下の６つの一般式の１つに含まれる：５’−Ｘ１ＹＲＭ１−３’、５’−Ｘ２ＣＧＭ２−３’、５’−Ｘ３ＣＧＭ３−３’、５’−Ｘ４ＣＧＭ４−３’、５’−Ｘ５ＣＧＭ５−３’、および５’−ＴＴＧＭ６−３’。
【００５９】
これらの式によって、優れた免疫刺激特性を示し、別のメチル化されていないＣｐＧモチーフを含まないＣｐＧオリゴヌクレオチドのクラスのサブセットが定義される。これらの式においては、５’はオリゴヌクレオチドの遊離の５’末端を意味し、３’はオリゴヌクレオチドの遊離の３’末端を意味する。
【００６０】
一般式５’−Ｘ１ＹＲＭ１−３’を有する好ましい実施形態では、Ｘ１は１ヌクレオチドであり；Ｙはシトシンまたは修飾されたシトシンであり；Ｒはグアニンまたは修飾されたグアニンであり；そしてＭ１は１〜３ヌクレオチドの核酸である。例えばオリゴヌクレオチドは、以下であり得る。
【００６１】
一般式５’−Ｘ２ＣＧＭ２−３’を有する好ましい実施形態では、Ｘ２は、モノヌクレオチド、ジヌクレオチド、またはＣＧジヌクレオチドを含まないトリヌクレオチドから構成されている核酸であり；Ｍ２は０〜２７ヌクレオチドの核酸である。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、以下の構造を有する：５’−ＴＣＧ−３’、５’−ＴＣＧＴ−３’、５’−ＵＣＧ−３’、５’−ＵＣＧＴ−３’。他の実施形態では、Ｍ２はＣＧジヌクレオチドを含まない。
【００６２】
一般式５’−Ｘ３ＣＧＭ３−３’を有する好ましい実施形態では、Ｘ３は、ＣＧジヌクレオチドは含まない１ヌクレオチドであり；Ｍ３はＣＧジヌクレオチドを含まない３〜２７ヌクレオチドの核酸であり；Ｍ３は以下の特性の少なくとも１つを有する：ＴＣジヌクレオチドを含まない、少なくとも３０％がＴヌクレオチドである、Ａ、Ｔ、およびＧから構成される、または少なくとも１つの修飾されたヌクレオチド間結合を有しているＣＣＴＴＣＣヘキサマーを含まない。いくつかの実施形態では、Ｍ３のうち、少なくとも３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％がＴまたはその修飾されたバージョンである。
【００６３】
一般式５’−Ｘ４ＣＧＭ４−３’を有する好ましい実施形態では、Ｘ４はＣＧジヌクレオチドを含まないジヌクレオチドであり、Ｍ４はＣＧジヌクレオチドを含まない２〜２６ヌクレオチドの核酸であり、Ｍ４は以下の特性の少なくとも１つを有する：ＴＧまたはＧＴジヌクレオチドを含まない、少なくとも３８％がＴヌクレオチドである、またはＡおよびＴから構成される。いくつかの実施形態では、Ｍ４のうち、少なくとも４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％がＡもしくはＴ、またはそれらの修飾されたバージョンである。
【００６４】
一般式５’−Ｘ５ＣＧＭ５−３’を有する好ましい実施形態では、Ｘ５はＣＧジヌクレオチドを含まないトリヌクレオチドであり、Ｍ５はＣＧジヌクレオチドを含まない１〜２５ヌクレオチドの核酸であり、Ｍ５は以下の特性の少なくとも１つを有する：ＣＴジヌクレオチドを含まず、少なくとも１つのホスホロチオエート結合は含まない、少なくとも４１％がＴヌクレオチドである、またはＡおよびＣから構成される。いくつかの実施形態では、Ｍ５のうち、少なくとも４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％がＴまたはその修飾されたバージョンである。
【００６５】
一般式５’−ＴＴＧＭ６−３’を有する好ましい実施形態では、Ｍ６は５〜２１ヌクレオチドからなる核酸であり、Ｍ６はＣＧジヌクレオチドを含まず、Ｍ６は、少なくとも３０％がＴヌクレオチドから構成され、上記ヌクレオチドは１０〜２４ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、Ｍ６のうち、少なくとも３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％がＴまたはその修飾されたバージョンである。
【００６６】
いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは以下の構造の１つを有する：
５’−Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ−３’（配列番号３２）
５’−Ｔ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ−３’（配列番号２７）
５’−Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ−３’（配列番号２８）。
【００６７】
記号＊は、安定なヌクレオチド間結合の存在を示し、＿：はホスホジエステル結合の存在を意味する。
【００６８】
これらのオリゴヌクレオチドは、１つまたは２つの利用可能な５’末端を有している場合がある。５’ＴＣＧモチーフおよび５’ＴＹＺモチーフの重要性が明らかにされているので、このような５’末端を２つ有するように修飾されたオリゴヌクレオチドを作製することも可能である。このことは、例えば、１つまたは２つの利用可能な５’末端を有しているオリゴヌクレオチドを生じるように、３’−３’結合によって２つのオリゴヌクレオチドを結合させることによって行うことができる。このような構造は、５’ＴＣＧＮ１−Ｎ１ＧＣＴ５’（配列番号１３）のような式を有する場合がある。３’−３’結合はホスホジエステル、ホスホロチオエート、または任意の他の修飾されたヌクレオシド間架橋であり得る。このような結合を行うための方法は当該分野で公知である。例えば、このような結合は、Ｓｅｌｉｇｅｒ，Ｈ等，Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  ａｎａｌｏｇｓ  ｗｉｔｈ  ｔｅｒｍｉｎａｌ  ３’−３’−  ａｎｄ  ５’−５’−ｉｎｔｅｒｎｕｃｌｅｏｔｉｄｉｃ  ｌｉｎｋａｇｅｓ  ａｓ  ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ
ｏｆ  ｖｉｒａｌ  ｇｅｎｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ  ＆  Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ（１９９１），１０（１−３），４６９−７７、およびＪｉａｎｇ等，Ｐｓｅｕｄｏ−ｃｙｃｌｉｃ  ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ：ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ａｎｄ  ｉｎ  ｖｉｖｏ  ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ  ＆  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（１９９９），７（１２），２７２７−２７３５に記載されている。
【００６９】
さらに、３’末端のヌクレオシド間の結合がホスホジエステル、ホスホロチオエート、または他の修飾された架橋ではない３’−３’結合ＯＤＮを、トリ−またはテトラ−エチレングリコールホスフェート部分のようなさらなるスペーサーを使用して調製することができる（Ｄｕｒａｎｄ，Ｍ．等，Ｔｒｉｐｌｅ−ｈｅｌｉｘ  ｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ｂｙ
ａｎ  ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  ｏｎｅ  （ｄＡ）１２  ａｎｄ  ｔｗｏ  （ｄＴ）１２  ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｂｒｉｄｇｅｄ  ｂｙ  ｔｗｏ  ｈｅｘａｅｔｈｙｌｅｎｅ  ｇｌｙｃｏｌ  ｃｈａｉｎｓ，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（１９９２），３１（３８），９１９７−２０４，米国特許第５６５８７３８号、および米国特許第５６６８２６５号）。あるいは、ヌクレオチドではないリンカーは、標準的なホスホルアミダイト化学を使用して、エタンジオール、プロパンジオールから誘導することができ、また、塩基性のデオキシリボース（ｄＳｐａｃｅｒ）単位から誘導することもできる（Ｆｏｎｔａｎｅｌ，Ｍａｒｉｅ  Ｌａｕｒｅｎｃｅ等，Ｓｔｅｒｉｃｌ  ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ  ｂｙ  Ｔ４  ｐｏｌｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  ｋｉｎａｓｅ  ｏｆ
ｎｏｎ−ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｉｃ  ｍｏｉｅｔｉｅｓ  ５’−ａｔｔａｃｈｅｄ  ｔｏ
ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ；Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ（１９９４），２２（１１），２０２２−７）。ヌクレオチドではないリンカーは、１回または複数回組み込むことができ、また、連結される２つのＯＤＮの３’末端の間に任意の望ましい距離を生じるように互いに結合させることもできる。
【００７０】
オリゴヌクレオチドは、いくつかの実施形態では、５’ＴＣＧ以外にはメチル化されていないＣＧモチーフは含まない。
【００７１】
いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは以下の構造の１つを有する：
５’Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ａ＊Ｇ＊Ｇ＊Ａ＊Ｃ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｔ＊Ｃ＊Ａ＊Ｇ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｔ３’（配列番号５０）
５’Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｃ＊Ｃ＊Ｃ＊Ｃ＊Ｃ＊Ｃ＊Ｃ＊Ｃ＊Ｃ＊Ｃ＊Ｃ＊Ｃ＊Ｃ３’（配列番号５１）
５’Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ３’（配列番号１３）
５’Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｕ＊Ｕ＊Ｕ＊Ｕ＊Ｕ＊Ｕ＊Ｕ＊Ｕ＊Ｕ＊Ｕ＊Ｕ＊Ｕ＊Ｕ＊Ｕ３’（配列番号４８）
５’Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ３’（配列番号２５）
５’Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ３’（配列番号１４）。
【００７２】
記号＊は、安定なヌクレオチド間結合の存在を示し、＿：はホスホジエステル結合の存在を意味する。
【００７３】
免疫刺激オリゴヌクレオチドは、一般に、７から１００ヌクレオチドの間の範囲の長さを有する。いくつかの実施形態では、長さは７〜４０、１３〜１００、１３〜４０、１３〜３０、１５〜５０、または１５〜３０ヌクレオチドの範囲、あるいはそれらの間の範囲の任意の整数である。
【００７４】
いくつかの好ましい実施形態では、オリゴヌクレオチドは、限定はされないが上記リンカーおよび方法によって、３’末端に連結させられた担体と結合させられる。担体は、微粒子、デンドリマー、リポソーム、カチオン錯体、および抗原からなる群より選択されるが、これらに限定されない。
【００７５】
用語「核酸」および「オリゴヌクレオチド」は、複数のヌクレオチド（すなわち、リン酸基と交換可能な有機塩基とに結合させられた糖（例えば、リボースまたはデオキシリボース）を含む分子であり、置換されたピリミジン（例えば、シトシン（Ｃ）、チミン（Ｔ）、またはウラシル（Ｕ）、または置換されたプリン（例えば、アデニン（Ａ）、またはグアニンＧ）のいずれかである）を意味するように交換可能に使用される。本明細書中で使用される場合は、用語「核酸」および「オリゴヌクレオチド」は、オリゴリボヌクレオチド、さらにはオリゴデオキシリボヌクレオチドを意味する。用語「核酸」および「オリゴヌクレオチド」には、当然、ポリヌクレオシド（すなわち、ポリヌクレオチドからリン酸を除去したもの）および高分子を含む任意の他の有機塩基も含まれる。核酸分子は、既存の核酸の供給源（例えば、ゲノムまたはｃＤＮＡ）から得ることができるが、合成のもの（例えば、核酸合成によって産生されたもの）が好ましい。
【００７６】
用語「核酸」および「オリゴヌクレオチド」には、例えば、塩基および／または糖において置換または修飾を有している核酸またはオリゴヌクレオチドも含まれる。例えば、これらには、２’位置でヒドロキシル基以外の低分子量の有機基に、そして５’位置ではリン酸基またはヒドロキシル基以外に共有結合させられている糖骨格を有している核酸が含まれる。このように修飾された核酸には、２’−Ｏ−アルキル化リボース基が含まれる場合がある。さらに、修飾された核酸には、リボースの代わりにアラビノースまたは２’−フルオロアラビノースのような糖が含まれる場合もある。したがって、核酸はペプチド−核酸（核酸塩基を含むアミノ酸骨格を有する）のように互いに連結されたポリマー単位の任意の可能な組み合わせを含むことによって、骨格の構成において異種物質を含むものであり得る。他の例は、以下にさらに詳細に記載される。
【００７７】
本発明の免疫刺激オリゴヌクレオチドは、天然のＲＮＡおよびＤＮＡと比較して、種々の化学的な改変および置換を含み得る。これには、ホスホジエステルヌクレオシド間架橋、β−Ｄ−リボース単位、および／または天然のヌクレオシド塩基（アデニン、グアニン、シトシン、チミン、ウラシル）が含まれる。化学的改変の複数の例が当業者に公知であり、例えば、Ｕｈｌｍａｎｎ  Ｅら（１９９０）Ｃｈｅｍ  Ｒｅｖ  ９０：５４３；「Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｆｏｒ  Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  Ａｎａｌｏｇｓ」Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ  ＆  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ａｎｄ  Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，Ｓ．Ａｇｒａｗａｌ編，Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＵＳＡ  １９９３；Ｃｒｏｏｋｅ  ＳＴら（１９９６）Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｔｏｘｉｃｏｌ  ３６：１０７−１２９；およびＨｕｎｚｉｋｅｒ  Ｊら（１９９５）Ｍｏｄ  Ｓｙｎｔｈ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ７：３３１−４１７に記載されている。本発明のオリゴヌクレオチドは、１つ以上の改変を含み得、それぞれの改変は、天然のＤＮＡまたはＲＮＡから構成される同じ配列のオリゴヌクレオチドと比較して、特定のホスホジエステルヌクレオシド間架橋、および／または特定のβ−Ｄ−リボース単位、および／または特定の天然のヌクレオシド塩基の位置に、配置される。
【００７８】
例えば、オリゴヌクレオチドは、１つ以上の改変を含み得、それぞれの改変は以下から別々に選択される：
ａ）改変されたヌクレオシド間架橋による、ヌクレオシドの３’末端および／または５’末端に配置されたホスホジエステルヌクレオシド間架橋の置換、
ｂ）デホスホ架橋による、ヌクレオシドの３’末端および／または５’末端に配置されるホスホジエステル架橋の置換、
ｃ）別の単位による、糖リン酸骨格の糖リン酸単位の置換、
ｄ）改変された糖単位による、β−Ｄ−リボースの置換、および
ｅ）改変されたヌクレオシド塩基による、天然のヌクレオシド塩基の置換。
【００７９】
オリゴヌクレオチドの化学的改変についてのさらに詳細な例は、以下の通りである。
【００８０】
オリゴヌクレオチドは、上記のａまたはｂに記載したような改変されたヌクレオチド間結合を含み得る。これらの改変された結合は、分解に対して部分的に抵抗性であり得る（例えば、安定化されている）。「安定なオリゴヌクレオチド分子」は、当然、このような改変の結果生じる、インビボ分解（例えば、エキソヌクレアーゼによる分解またはエンドヌクレアーゼによる分解）に対して比較的抵抗性があるオリゴヌクレオチドを意味する。ホスホロチオエート結合を有しているオリゴヌクレオチドは、いくつかの実施形態では、最大活性を提供し得、かつ細胞内エキソヌクレアーゼおよび細胞内エンドヌクレアーゼによる分解からオリゴヌクレオチドを保護し得る。
【００８１】
ヌクレオシドの３’末端および／または５’末端に配置されたホスホジエステルヌクレオシド間架橋は、改変されたヌクレオシド間架橋によって置換され得、ここでは、改変されたヌクレオシド間架橋は、例えば、ホスホロチオエート架橋、ホスホロジチオエート架橋、ＮＲ１Ｒ２−ホスホルアミダイト架橋、ボラノホスフェート架橋、α−ヒドロキシベンジルホスホネート架橋、リン酸−（Ｃ１−Ｃ２１）−Ｏ−アルキルエステル架橋、ホスフェート−［（Ｃ６−Ｃ１２）アリール−（Ｃ１−Ｃ２１）−Ｏ−アルキル］エステル架橋、（Ｃ１−Ｃ８）アルキルホスホネート架橋、および／または（Ｃ６−Ｃ１２）アリールホスホネート架橋、（Ｃ７−Ｃ１２）−α−ヒドロキシメチル−アリール（例えば、国際公開番号ＷＯ９５／０１３６３に開示されているもの）から選択される。式中、（Ｃ６−Ｃ１２）アリール、（Ｃ６−Ｃ２０）アリールおよび（Ｃ６−Ｃ１４）アリールは、必要に応じて、ハロゲン、アルキル、アルコキシ、ニトロ、シアノで置換され、Ｒ１およびＲ２は、互いに独立して、水素、（Ｃ１−Ｃ１８）−アルキル、（Ｃ６−Ｃ２０）−アリール、（Ｃ６−Ｃ１４）−アリール−（Ｃ１−Ｃ８）−アルキルであり、好ましくは、水素、（Ｃ１−Ｃ８）−アルキルであり、好ましくは、（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルおよび／またはメトキシエチルであるか、あるいはＲ１とＲ２とが、それらが保有している窒素原子と共に、Ｏ、Ｓ、およびＮからの別のヘテロ原子をさらに含み得る５〜６員複素環を形成する。
【００８２】
デホスホ架橋（デホスホ架橋は、例えば、Ｕｈｌｍａｎｎ  Ｅ  ａｎｄ  Ｐｅｙｍａｎ
Ａ，「Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ」，第２０巻，「Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｆｏｒ  Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  Ａｎａｌｏｇｓ」，Ｓ．Ａｇｒａｗａｌ編，Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ  １９９３，第１６章，ｐｐ．３５５ｆｆに記載されている）によるヌクレオシドの３’末端および／または５’末端に配置されているホスホジエステル結合の置換。ここで、デホスホ架橋は、例えば、ホルムアセタール、３’−チオホルムアセタール、メチルヒドロキシルアミン、オキシム、メチレンジメチル−ヒドラゾ、ジメチレンスルホン、および／またはシアリル基のデホスホ架橋から選択される。
【００８３】
糖リン酸骨格に由来する糖リン酸単位（すなわち、β−Ｄ−リボースとホスホジエステルヌクレオシド間架橋とが一緒になって糖リン酸単位を形成する）（すなわち、糖リン酸骨格は、糖リン酸単位から構成される）は、別の単位により置換され得る。ここでは、他の単位は、例えば、「モルホリノ誘導」オリゴマーを組み立てるために適切なもの（例えば、Ｓｔｉｒｃｈａｋ  ＥＰら（１９８９）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ  １７：６１２９−４１）であり、すなわち例えば、モルホリノ誘導単位による置換である；または、ポリアミド核酸（「ＰＮＡ」；例えば、Ｎｉｅｌｓｅｎ  ＰＥら（１９９４）Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ  Ｃｈｅｍ  ５：３−７に記載されているもの）を組み立てるために適切なものであり、すなわち例えば、ＰＮＡ骨格単位（例えば、２−アミノエチルグリシン）による置換である。オリゴヌクレオチドは、他の炭化水素骨格の改変および置換物（例えば、リン酸基を有しているペプチド核酸（ＰＨＯＮＡ）、ロック（ｌｏｃｋｅｄ）核酸（ＬＮＡ）、およびアルキルリンカーもしくはアミノリンカーを有している骨格部分を有するオリゴヌクレオチド）を有し得る。アルキルリンカーは、分岐したもの、または分岐していないもの、置換されたもの、または置換されていないもの、およびキラル純粋なもの、またはラセミ混合物であり得る。
【００８４】
β−リボース単位またはβ−Ｄ−２’デオキシリボース単位は、改変された糖単位で置換され得る。ここでは、改変された糖単位は、例えば、β−Ｄ−リボース、α−Ｄ−２’−デオキシリボース、Ｌ−２’−デオキシリボース、２’−Ｆ−２’−デオキシリボース、２’−Ｆ−アラビノース、２’−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ６）アルキルリボースから選択され、好ましくは、２’−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ６）アルキルリボースは、２’−Ｏ−メチルリボース、２’−Ｏ−（Ｃ２−Ｃ６）アルケニル−リボース、２’−［Ｏ−（Ｃ１−Ｃ６）アルキル−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ６）アルキル］−リボース、２’−ＮＨ２−２’−デオキシリボース、β−Ｄ−キシロ−フラノース、α−アラビノフラノース、２，４−ジデオキシ−β−Ｄ−エリスロ−ヘキソ−ピラノース、および炭素環式の糖アナログ（例えば、Ｆｒｏｅｈｌｅｒ  Ｊ（１９９２）Ａｍ  Ｃｈｅｍ  Ｓｏｃ  １１４：８３２０に記載されている）および／または開鎖の糖アナログ（例えば、Ｖａｎｄｅｎｄｒｉｅｓｓｃｈｅら（１９９３）Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  ４９：７２２３に記載されている）、および／または二環糖アナログ（例えば、Ｔａｒｋｏｖ  Ｍら（１９９３）Ｈｅｌｖ  Ｃｈｉｍ  Ａｃｔａ  ７６：４８１に記載されている）である。
【００８５】
いくつかの実施形態では、糖は、特に、ホスホジエステル様ヌクレオシド間結合またはホスホジエステル様ヌクレオシド間結合によって連結された、１つまたは両方のヌクレオチドについて、２’−Ｏ−メチルリボースである。
【００８６】
核酸にはまた、置換プリンおよび置換ピリミジン（例えば、Ｃ−５プロピンピリミジンおよび７−デアザ−７−置換プリン改変塩基）も含まれる。Ｗａｇｎｅｒ  ＲＷら（１９９６）Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  １４：８４０−４。プリンおよびピリミジンとしては、アデニン、シトシン、グアニン、およびチミジン、ならびに置換芳香族部分および非置換芳香族部分を有する、他の天然に存在する核酸塩基および天然には存在しない核酸塩基が挙げられるがこれらに限定されない。
【００８７】
改変された塩基とは、ＤＮＡおよびＲＮＡ中に通常見出され得る天然に存在する塩基（例えば、Ｔ、Ｃ，Ｇ、Ａ、およびＵ）とは化学的に異なる任意の塩基である。しかし改変された塩基は、これらの天然に存在する塩基と共通の基本的化学構造を有している。改変型ヌクレオシド塩基は、例えば、ヒポキサンチン、ウラシル、ジヒドロウラシル、プソイドウラシル、２−チオウラシル、４−チオウラシル、５−アミノウラシル、５−（Ｃ１−Ｃ６）−アルキルウラシル、５−（Ｃ２−Ｃ６）−アルケニルウラシル、５−（Ｃ２−Ｃ６）−アルキニルウラシル、５−（ヒドロキシメチル）ウラシル、５−クロロウラシル、５−フルオロウラシル、５−ブロモウラシル、５−ヒドロキシシトシン、５−（Ｃ１−Ｃ６）−アルキルシトシン、５−（Ｃ２−Ｃ６）−アルケニルシトシン、５−（Ｃ２−Ｃ６）−アルキニルシトシン、５−クロロシトシン、５−フルオロシトシン、５−ブロモシトシン、Ｎ２−ジメチルグアニン、２，４−ジアミノ−プリン、８−アザプリン、置換７−デアザプリン（好ましくは、７−デアザ−７−置換プリンおよび／または７−デアザ−８−置換プリン）、５−ヒドロキシメチルシトシン、Ｎ４−アルキルシトシン（例えば、Ｎ４−エチルシトシン）、５−ヒドロキシデオキシシチジン、５−ヒドロキシメチルデオキシシチジン、Ｎ４−アルキルデオキシシチジン（例えば、Ｎ４−エチルデオキシシチジン）、６−チオデオキシグアノシン、およびニトロピロールのデオキシリボヌクレオシド、Ｃ５−プロピニルピリミジン、およびジアミノプリン（例えば、２，６−ジアミノプリン）、イノシン、５−メチルシトシン、２−アミノプリン、２−アミノ−６−クロロプリン、ヒポキサンチン、あるいは天然のヌクレオシド塩基の他の改変体から選択され得る。このリストは、例示であって、限定するものと解釈されるべきではない。
【００８８】
本明細書中に記載される特定の式においては、改変型塩基のセットが定義される。例えば、文字Ｙは、シトシンまたは改変型シトシンを含むヌクレオチドをいうために使用される。本明細書中で使用される場合は、改変型（改変された）シトシンとは、オリゴヌクレオチドの免疫刺激活性を損なうことなくこの塩基を置換し得る、シトシンの天然に存在するかまたは天然には存在しないピリミジン塩基アナログである。改変型シトシンとしては、５−置換シトシン（例えば、５−メチルシトシン、５−フルオロ−シトシン、５−クロロ−シトシン、５−ブロモ−シトシン、５−ヨード−シトシン、５−ヒドロキシ−シトシン、５−ヒドロキシメチル−シトシン、５−ジフルオロメチル−シトシン、および非置換５−アルキニル−シトシンもしくは置換５−アルキニル−シトシン）、６−置換シトシン、Ｎ４−置換シトシン（例えば、Ｎ４−エチル−シトシン）、５−アザ−シトシン、２−メルカプト−シトシン、イソシトシン、プソイド−イソシトシン、縮合環系を有しているシトシンアナログ（例えば、Ｎ，Ｎ’−プロピレンシトシンまたはフェノキサジン）、ならびにウラシルおよびその誘導体（例えば、５−フルオロ−ウラシル、５−ブロモ−ウラシル、５−ブロモビニル−ウラシル、４−チオ−ウラシル、５−ヒドロキシ−ウラシル、５−プロピニル−ウラシル）が挙げられるが、これらに限定されない。好ましいシトシンのいくつかとしては、５−メチル−シトシン、５−フルオロ−シトシン、５−ヒドロキシ−シトシン、５−ヒドロキシメチル−シトシン、およびＮ４−エチル−シトシンが挙げられる。本発明の別の実施形態では、シトシン塩基は、普遍的塩基（例えば、３−ニトロピロール，Ｐ塩基）、芳香環系（例えば、フルオロベンゼン、またはジフルオロベンゼン）、または水素原子（ｄＳｐａｃｅｒ）によって置換される。文字Ｚは、グアニンまたは改変型グアニン塩基をいうために使用される。改変型（改変された）グアニンとは、本明細書中で使用される場合は、オリゴヌクレオチドの免疫刺激活性を損なうことなくこの塩基を置換し得る、グアニンの天然に存在するかまたは天然には存在しないプリン塩基アナログである。改変型グアニンとしては、７−デアザグアニン、７−デアザ−７−置換グアニン（例えば、７−デアザ−７−（Ｃ２−Ｃ６）アルキニルグアニン）、７−デアザ−８−置換グアニン、ヒポキサンチン、Ｎ２−置換グアニン（例えば、Ｎ２−メチル−グアニン）、５−アミノ−３−メチル−３Ｈ，６Ｈ−チアゾロ［４，５−ｄ］ピリミジン−２，７−ジオン、２，６−ジアミノプリン、２−アミノプリン、プリン、インドール、アデニン、置換アデニン（例えば、Ｎ６−メチル−アデニン、８−オキソ−アデニン）、８−置換グアニン（例えば、８−ヒドロキシグアニン、および８−ブロモグアニン）、および６−チオグアニンが挙げられるが、これらに限定されない。本発明の別の実施形態では、グアニン塩基は、普遍的塩基（例えば、４−メチル−インドール、５−ニトロ−インドール、およびＫ塩基）、芳香環系（例えば、ベンズイミダゾール、またはジクロロ−ベンズイミダゾール、１−メチル−１Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−カルボン酸アミド）、または水素原子（ｄＳｐａｃｅｒ）によって置換される。
【００８９】
本発明の使用のために、本発明のオリゴヌクレオチドは、当該分野で周知の多数の手順のいずれかを使用して新規に合成され得る。例えば、β−シアノエチルホスホロアミダイト法（Ｂｅａｕｃａｇｅ，Ｓ．Ｌ．ａｎｄ  Ｃａｒｕｔｈｅｒｓ，Ｍ．Ｈ．，Ｔｅｔ．Ｌｅｔ．２２：１８５９，１９８１）；ヌクレオシドＨ−リン酸法（Ｇａｒｅｇｇら，Ｔｅｔ．Ｌｅｔ．２７：４０５１−４０５４，１９８６；Ｆｒｏｅｈｌｅｒら，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄ．Ｒｅｓ．１４：５３９９−５４０７，１９８６；Ｇａｒｅｇｇら，Ｔｅｔ．Ｌｅｔ．２７：４０５５−４０５８，１９８６，Ｇａｆｆｎｅｙら，Ｔｅｔ．Ｌｅｔ．２９：２６１９−２６２２，１９８８）。これらの化学反応は、市販されている種々の自動核酸合成装置によって行う得る。これらのオリゴヌクレオチドは、合成オリゴヌクレオチドと呼ばれる。単離されたオリゴヌクレオチドとは、一般に、自然界において通常付随している成分から分離されているオリゴヌクレオチドをいう。例として、単離されたオリゴヌクレオチドは、細胞から分離されたものであっても、核から分離されたものであっても、ミトコンドリアから分離されたものであっても、またはクロマチンから分離されたものであってもよい。
【００９０】
本発明の免疫刺激核酸分子は、ホスホジエステルヌクレオチド間結合を含み得る。ホスホジエステルヌクレオチド間結合は、天然で見出される核酸に特徴的な結合の型である。図２０に示すように、ホスホジエステルヌクレオチド間結合には、２つの架橋している酸素原子が隣接して存在しておりかつ２つの別の酸素原子（一方は電荷を有しており、もう一方は電荷を有していない）によっても結合されている、リン原子が含まれる。ホスホジエステルヌクレオチド間結合は、オリゴヌクレオチドの組織半減期を短くすることが重要である場合に、特に好ましい。
【００９１】
ホスホジエステル様ヌクレオチド間結合は、ホスホジエステルと化学的および／またはジアステレオマー的に類似している、リンを含む架橋基である。ホスホジエステルに対する類似性の尺度として、ヌクレアーゼ消化に対する感受性、およびＲＮＡｓｅＨを活性化する能力が挙げられる。従って、ホスホジエステルオリゴヌクレオチドとホスホロチオエートオリゴヌクレオチドのいずれもがＲＮＡｓｅＨを活性化するが、例えば、ホスホジエステルオリゴヌクレオチドは、ヌクレアーゼ消化に対して感受性であり、ホスホロチオエートオリゴヌクレオチドはそうではない。好ましい実施形態では、ホスホジエステル様ヌクレオチド間結合は、ボラノホスフェート（または同等の、ボラノホスホネート）結合である。米国特許第５１７７１９８号；米国特許第５８５９２３１号；米国特許第６１６０１０９号；米国特許第６２０７８１９号；Ｓｅｒｇｕｅｅｖら（１９９８）Ｊ  Ａｍ  Ｃｈｅｍ  Ｓｏｃ  １２０：９４１７−２７。別の好ましい実施形態では、ホスホジエステル様ヌクレオチド間結合は、ジアステレオマー的に純粋なＲｐホスホロチオエートである。ジアステレオマー的に純粋なＲｐホスホロチオエートは、ヌクレアーゼ消化に対してさらに高い感受性であり、混合ホスホロチオエートまたはジアステレオマー的に純粋なＳｐホスホロチオエートよりも、ＲＮＡｓｅＨを活性化することにおいて優れていると考えられる。ＣｐＧオリゴヌクレオチドの立体異性体は、１９９９年７月２７日に出願された同時係属中の米国特許出願番号０９／３６１，５７５、および公開されたＰＣＴ出願番号ＰＣＴ／ＵＳ９９／１７１００（国際公開番号ＷＯ００／０６５８８）の対象である。本発明の目的のためには、用語「ホスホジエステル様ヌクレオチド間結合」は、ホスホロジチオエートヌクレオチド間結合およびメチルホスホネートヌクレオチド間結合を特に排除することに、注意すべきである。
【００９２】
本発明の免疫刺激核酸分子は、キメラ骨格を有し得る。本発明の目的のためには、キメラ骨格とは、部分的に安定な骨格をいう。ここでは、少なくとも１つのヌクレオチド間結合が、ホスホジエステルまたはホスホジエステル様であり、少なくとも１つの他のヌクレオチド間結合が、安定なヌクレオチド間結合であり、上記少なくとも１つのホスホジエステルまたはホスホジエステル様結合と、上記少なくとも１つの安定な結合は、異なる。ボラノホスホネート結合がホスホジエステル結合と比較して安定であることが報告されているので、上記骨格のキメラ性質の目的のためには、ボラノホスホネート結合は、文脈に依存して、ホスホジエステル様として、または安定なものとしてのいずれかに、分類され得る。例えば、本発明のキメラ骨格は、１つの実施形態においては、少なくとも１つのホスホジエステル（ホスホジエステルまたはホスホジエステル様）結合と、少なくとも１つのボラノホスホネート（安定な）結合とを含み得る。別の実施形態では、本発明のキメラ骨格は、ボラノホスノネート（ホスホジエステルまたはホスホジエステル様）結合と、ホスホロチオエート（安定な）結合とを含み得る。「安定なヌクレオチド間結合」は、ホスホジエステルヌクレオチド間結合と比較して、インビボ分解（例えば、エキソヌクレアーゼまたはエンドヌクレアーゼによる）に対して比較的抵抗性があるヌクレオチド間結合を意味する。好ましい安定なヌクレオチド間結合としては、ホスホロチオエート結合、ホスホロジチオエート結合、メチルホスホネート結合、およびメチルホスホロトエート結合が挙げられるが、これらに限定されない。他の安定なヌクレオチド間結合としては、ペプチド結合、アルキル結合、デホスホ結合、および上記の他の結合が挙げられるが、これらに限定されない。
【００９３】
ホスホロチオエートのような改変された骨格は、ホスホロアミダイト化学またはＨ−ホスホネート化学のいずれかを使用する、自動化された技術を用いて合成され得る。アリールホスホネートおよびアルキルホスホネートは、例えば、米国特許第４４６９８６３号に記載されているように生成され得、そしてアルキルホスホトリエステル（電荷を有している酸素部分が、米国特許第５，０２３，２４３号および欧州特許第０９２，５７４号に記載されているようにアルキル化される）は、市販されている試薬を使用して、自動固相合成によって調製され得る。他のＤＮＡ骨格の改変および置換を生成するための方法が、記載されている（例えば、Ｕｈｌｍａｎｎ，Ｅ．ａｎｄ  Ｐｅｙｍａｎ，Ａ．，Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．９０：５４４，１９９０；Ｇｏｏｄｃｈｉｌｄ，Ｊ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．１：１６５，１９９０）。
【００９４】
マウスの系において強い刺激活性を有しているＣｐＧホスホロチオエートオリゴヌクレオチドは、ヒトおよび他の非げっ歯類免疫細胞に対してはより低い活性を示す傾向がある。実施例には、強いヒトＣｐＧモチーフの開発、ならびにヒトＰＢＭＣ（例えば、Ｂ細胞）および形質細胞様樹状細胞に対するその効果および作用機構の特性が、記載される。これらの５’ＴＣＧ  ＣｐＧモチーフを含むＤＮＡまたは５’ＴＹＺ  ＣｐＧモチーフを含むＤＮＡは、ＩＬ−１０、ＩＬ−６、ＩＰ−１０、およびＩＦＮ−αを生産するようにヒト末梢血細胞を強く刺激する。５’ＴＣＧを含むＯＤＮは、特定の長さのＯＤＮを選択することによって、さらに最適化され得る。例えば、２２ヌクレオチドの長さのＯＤＮは、より短いＯＤＮよりもより刺激性がある。
【００９５】
ＣｐＧ免疫刺激オリゴヌクレオチドのサブセットが、ＰＢＭＣのようなヒト細胞に対して劇的な免疫刺激作用を有していることが、本発明によって発見された。このことは、これらのＣｐＧ免疫刺激オリゴヌクレオチドが、ヒトのワクチン接種、ガンの免疫療法、喘息の免疫療法、免疫機能の全般的な強化、放射線治療後または化学療法後の造血系の回復の促進、さらには他の免疫調節用途にとって、有効な治療薬であることを示唆している。
【００９６】
本明細書中で使用される場合は、用語「処置」、「処置された」、または「処置する」は、感染性疾患、ガン、アレルギー、または喘息のような障害に関して使用される場合は、疾患の発症（例えば、病原体への感染）に対する被験体の抵抗性を増大させるか、または言い換えると、被験体が疾患を発症する（例えば、病原体に感染する）可能性を低下させる、予防的な処置、さらには、被験体が疾患を発症した後に疾患と闘う（例えば、感染を減少させるかまたは排除する）ためまたは疾患が悪化することを防ぐための処置をいう。
【００９７】
従って、ＣｐＧ免疫刺激オリゴヌクレオチドは、アレルギーまたは喘息、感染性生物による感染、もしくは特異的なガン抗原が同定されているガンを、有しているかまたはそれらを発症するリスクのある、被験体の処置のためのワクチンとしての本発明のいくつかの局面において有用である。ＣｐＧ免疫刺激オリゴヌクレオチドはまた、感染、アレルギー、もしくはガンからの防御のために抗原もしくはアレルギー誘発物質を伴わずに単独で投与され得、または、他の治療薬とともに投与され得る。反復投与により、長期間の防御が可能であり得る。「リスクのある被験体」とは、本明細書中で使用される場合には、病原体による感染、またはガン、またはアレルギー誘発物質に曝されるあらゆるリスクのある被験体、あるいはガンを発症するリスクのある被験体である。例えば、リスクのある被験体は、特定のタイプの感染因子見出されている地域に旅行することを計画している被験体、または、その人の生活習慣もしくは医学的手法を介して、感染性生物を含む可能性がある体液もしくはそのような生物に直接曝される被験体、またさらには、感染性生物もしくはアレルギー誘発物質が同定されている地域で生活する全ての被験体である。感染を発症するリスクのある被験体には、医療機関が特定の感染性生物の抗原でのワクチン接種を勧める、一般的な集団も含まれる。抗原がアレルゲンであり、被験体が特定の抗原に対してアレルギー反応を生じる場合には、被験体は、（すなわち、花粉の季節の間に）抗原に曝され、従って、この被験体は、抗原に曝されるリスクがある。アレルギーまたは喘息を発症するリスクのある被験体としては、アレルギーまたは喘息を有していると同定されているが、ＣｐＧ免疫刺激オリゴヌクレオチドでの処置の間には活発な疾患は有していない被験体、さらには、遺伝的要因または環境的要因が原因でこれらの疾患を発症するリスクがあると考えられる被験体が含まれる。
【００９８】
ガンを発症するリスクのある被験体とは、ガンを発症する可能性が高い被験体である。これらの被験体としては、例えば、その存在がガンの発症の高い可能性と相関関係があることが実証されている遺伝的な異常を有している被験体、およびタバコ、アスベスト、または他の化学的毒素のようなガンの原因因子に曝された被験体、あるいは、以前にガンを処置されていて今は見かけ上は回復している被験体が挙げられる。ガンを発症するリスクのある被験体が、ＣｐＧ免疫刺激オリゴヌクレオチド、および必要に応じて、その被験体が発症するリスクのあるガンの型に特異的な抗原で処置されると、その被験体は、ガン細胞が生じた場合にガン細胞を死滅させることが可能であり得る。腫瘍が被験体の内部で形成されはじめると、被験体は、先天性免疫応答を生じるか、または腫瘍抗原に対して特異的な免疫応答を生じる。
【００９９】
予防的処置のためのＣｐＧ免疫刺激オリゴヌクレオチドの使用に加えて、本発明にはまた、感染、アレルギー、喘息、またはガンを有している被験体の処置のための、ＣｐＧ免疫刺激オリゴヌクレオチドの使用も含まれる。
【０１００】
感染を有している被験体とは、感染性の病原体に曝されており、急性または長期的に検出可能なレベルのその病原体を体内に有している被験体である。ＣｐＧ免疫刺激オリゴヌクレオチドを、その感染性病原体のレベルを低下または全滅させ得る、先天性または抗原特異的な、全身性または粘膜の免疫応答を高めるために、抗原または他の治療薬とともに、またはそれらを伴うことなく、使用され得る。感染性疾患とは、本明細書中で使用される場合は、体内に外来微生物が存在することによって生じる疾患である。病原性物質が侵入する最初の部位である体の粘膜表面を保護するために効果的なワクチン接種ストラテジーおよび処置を開発することが、特に重要である。
【０１０１】
アレルギーを有している被験体とは、アレルゲン（アレルギー誘発物質）に反応してアレルギー反応を生じる得る被験体である。アレルギーとは、物質（アレルゲン）に対す後天性過敏性をいう。アレルギー性の状態としては、湿疹、アレルギー性鼻炎、コリーザ、枯草熱、気管支喘息、アレルギー性喘息、蕁麻疹（じんましん）および、食物アレルギー、ならびに他のアトピー性の症状が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１０２】
アレルギーは、一般的に、無害なアレルゲンに対するＩｇＥ抗体の生成によって引き起こされる。ＣｐＧ免疫刺激オリゴヌクレオチドの全身投与または粘膜投与によって誘導されるサイトカインは、主に、Ｔｈ１と呼ばれるクラスのものであり（例えば、ＩＬ−１２、ＩＰ−１０、ＩＦＮ−α、およびＩＦＮ−γ）、これらは、体液性免疫応答と細胞性免疫応答との両方を誘導する。ＩＬ−４およびＩＬ−５サイトカインの生産に関係している免疫応答の他の主要な型は、Ｔｈ２免疫応答と呼ばれる。一般に、アレルギー性疾患は、Ｔｈ２型の免疫応答によって媒介されるようである。本明細書中に記載されているＣｐＧ免疫刺激オリゴヌクレオチドがＴｈ２優勢（これはＩｇＥ抗体の生産およびアレルギーに関係している）からバランスのとれたＴｈ２／Ｔｈ１応答（これはアレルギー反応に対して防御的である）へと被験体の免疫応答をシフトさせる能力に基づいて、ＣｐＧ免疫刺激オリゴヌクレオチドの免疫応答を誘導するための有効用量が、喘息およびアレルギーを処置するために被験体に投与され得る。
【０１０３】
このように、ＣｐＧ免疫刺激オリゴヌクレオチドは、アレルギー性症状および喘息の処置において、有意な治療上の有用性を有する。Ｔｈ２サイトカイン（特に、ＩＬ−４およびＩＬ−５）は、喘息の被験体の気道において増大する。これらのサイトカインは、ＩｇＥイソ型の切り替え、好酸球の走化性および活性化、ならびに肥満細胞の増殖を含む、喘息の免疫応答の重要な局面を促進する。Ｔｈ１サイトカイン（特に、ＩＦＮ−γおよびＩＬ−１２）は、Ｔｈ２クローンの形成、およびＴｈ２サイトカインの生産を抑制し得る。喘息とは、炎症、気道の狭窄、および吸入され因子に対する気道の反応性の増大によって特徴付けられる、呼吸系の障害をいう。喘息は、多くの場合は、アトピー性症状またはアレルギー性症状に関係しているが、かならずしもそうとは限らない。従って、喘息には、アレルギー性喘息と、非アレルギー性喘息とが含まれる。
【０１０４】
ガンを有している被験体とは、検出可能なガン性細胞を有している被験体である。このガンは、悪性のガンである場合も、また悪性ではないガンである場合もある。ガンまたは腫瘍としては、胆菅ガン；脳腫瘍；乳ガン；子宮頸ガン；絨毛ガン；結腸ガン；子宮内膜ガン；食道ガン；胃ガン；上皮内ガン；リンパ腫；肝臓ガン；肺ガン（例えば、小細胞肺ガン、および非小細胞肺ガン）；黒色腫；神経芽細胞腫；口腔ガン；卵巣ガン；膵臓ガン；前立腺ガン；直腸ガン；肉腫；皮膚ガン；精巣ガン；甲状腺ガン；および腎臓ガン、ならびに他のガン腫および肉腫が挙げられるが、これらに限定されない。１つの実施形態では、上記ガンは、毛様細胞性白血病、慢性骨髄性白血病、皮膚Ｔ細胞白血病、多発性骨髄腫、濾胞性リンパ腫、悪性黒色腫、扁平上皮細胞ガン、腎細胞ガン、前立腺ガン、膀胱細胞ガン、または結腸ガン、中枢神経系のガン、結合組織のガン、食道ガン、眼のガン、ホジキンリンパ腫、喉頭ガン、口腔ガン、皮膚ガン、および精巣ガン、ならびに他のガン腫および肉腫である。
【０１０５】
被験体とは、ヒト、または脊椎動物（イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、シチメンチョウ、ニワトリ、霊長類（例えば、サル）、および魚類（水産養殖種、例えば、サケ）を含むがこれらに限定されない）を意味する。従って、上記化合物は、ヒト被験体およびヒト以外の被験体のガンおよび腫瘍、感染、ならびにアレルギー／喘息を処置するために使用され得る。ガンは、ペット（すなわち、ネコおよびイヌ）の死の主要な原因の１つである。
【０１０６】
ＣｐＧオリゴヌクレオチドが抗原とともに投与される例においては、被験体は抗原にさらされる。本明細書中で使用される場合は、用語「さらされる」とは、被験体と抗原との接触の能動的な工程、または生体内での抗原に対する被験体の受動的曝露のいずれかをいう。抗原に対して被験体を能動的にさらすための方法は当該分野で周知である。一般的には、抗原は、静脈内投与、筋肉内投与、経口投与、経皮投与、粘膜投与、鼻腔内投与、気管内投与、または皮下投与のような任意の手段によって被験体に直接投与される。抗原は全身的に、または局所的に投与され得る。抗原およびＣｐＧ免疫刺激オリゴヌクレオチドを投与するための方法は、以下にさらに詳細に記載される。被験体は、抗原が体内で免疫細胞にさらすために利用できるようになると、抗原に対して受動的にさらされる。被験体は、例えば、体内への外来の病原体の侵入によって、またはその表面上に外来抗原を発現する腫瘍細胞の発生によって、抗原に受動的にさらされ得る。
【０１０７】
被験体を抗原に対して受動的にさらす方法は、特に、ＣｐＧ免疫刺激オリゴヌクレオチドの投与のタイミングに応じて変化させることができる。例えば、ガン、または感染性の疾患、またはアレルギー応答もしくは喘息応答を生じるリスクのある被験体については、被験体にはそのリスクが最も高い時期、すなわち、アレルギーの季節の間、またはガンの原因因子への曝露の後に、定期的にＣｐＧ免疫刺激オリゴヌクレオチドを投与することができる。さらに、ＣｐＧ免疫刺激オリゴヌクレオチドは、旅行者が感染性因子に曝露されるリスクのある外国に旅行する前に、旅行者に投与される場合もある。同様に、ＣｐＧ免疫刺激オリゴヌクレオチドは、被験体がそれにさらされた場合に抗原に対する全身性または粘膜の免疫応答を誘導するように、生物戦争にさらされるリスクのある兵士または一般市民に投与され得る。
【０１０８】
抗原とは、本明細書中で使用される場合は、免疫応答を引き起こすことができる分子である。抗原としては、細胞、細胞抽出物、タンパク質、ポリペプチド、ペプチド、多糖、多糖結合体、多糖および他の分子のペプチドおよび非ペプチド模倣物、低分子、脂質、糖脂質、炭水化物、ウイルスおよびウイルス抽出物、ならびに寄生虫のような多細胞生物およびアレルゲンが挙げられるが、これらに限定されない。用語「抗原」は広い意味で、宿主の免疫系によって異物と認識されるあらゆる型の分子を含む。抗原としては、ガン抗原、微生物抗原、およびアレルゲンが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１０９】
ガン抗原とは、本明細書中で使用される場合は、腫瘍またはガン細胞の表面に結合していて、ＭＨＣ分子の状況では、抗原提示細胞の表面上で発現されると免疫応答を誘発することができる、ペプチドまたはタンパク質のような化合物である。ガン抗原は、例えば、Ｃｏｈｅｎ等，１９９４，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，５４：１０５５によって記載されているように、ガン細胞の粗抽出物を調製することによって、抗原を部分的に精製することによって、組み換え技術によって、または既知の抗原を新しく合成することによってのいずれかで、ガン細胞から調製することができる。ガン抗原としては、組み換えによって発現させられる抗原、その免疫原性部分、または腫瘍もしくはガン細胞全体が挙げられるが、これらに限定されない。このような抗原は、組み換えによって、または当該分野で公知の任意の他の手段によって単離または調製することができる。
【０１１０】
本明細書中で使用される場合は、用語「ガン抗原」および「腫瘍抗原」とは交換可能に使用され、ガン細胞によってディファレンシャルに発現され、それによってガン細胞を標的化するために活用され得る抗原をいう。ガン抗原とは、明らかに腫瘍特異的な免疫応答を刺激する可能性のある抗原である。これらの抗原のいくつかは、正常な細胞によってコードされているが、必ずしも発現されているわけではない。これらの抗原は、正常な細胞においては通常はサイレントである（すなわち、発現されていない）もの、特定の分化段階でのみ発現されるもの、ならびに胚抗原および胎児抗原のような一時的に発現されるものとして特徴付けることができる。他のガン抗原は、ガン遺伝子（例えば、活性化されたｒａｓガン遺伝子）、サプレッサー遺伝子（例えば、変異体ｐ５３）、内部欠失または染色体転座によって生じる融合タンパク質のような、変異体である細胞遺伝子によってコードされる。さらに他のガン抗原は、ＲＮＡ腫瘍ウイルスおよびＤＮＡ腫瘍ウイルスに保有されているもののような、ウイルス遺伝子によってコードされ得る。
【０１１１】
微生物抗原とは、本明細書中で使用される場合は微生物の抗原であり、これには、ウイルス、細菌、寄生虫、および真菌が含まれるがこれらに限定されない。このような抗原には、完全な微生物、さらにはその自然な状態の単離株およびフラグメントまたは誘導体が含まれ、また自然界に存在している微生物抗原と同じかまたはそれに類似しており、その微生物に特異的な免疫応答を誘導する合成化合物も含まれる。化合物は、自然界に存在している微生物抗原に対して免疫応答（体液性および／または細胞性）を誘導する場合に、自然界に存在している微生物抗原と類似している。このような抗原は当該分野で慣用的に使用されており、当業者に周知である。
【０１１２】
ヒトにおいて見出されたウイルスの例としては、レトロウイルス科（例えば、ＨＩＶ−１（ＨＴＬＶ−ＩＩＩ、ＬＡＶ、またはＨＴＬＶ−ＩＩＩ／ＬＡＶとも呼ばれる）またはＨＩＶ−ＩＩＩのようなヒト免疫不全ウイルス；およびＨＩＶ−ＬＰのような他の単離株）；ピコルナウイルス科（例えば、ポリオウイルス、Ａ型肝炎ウイルス；エンテロウイルス、ヒトコクサッキーウイルス、ライノウイルス、エコーウイルス）；カルシウイルス科（例えば、胃腸炎を生じる株）；トガウイルス科（例えば、ウマ脳炎ウイルス；風疹ウイルス）；フラビウイルス科（例えば、デングウイルス、脳炎ウイルス、黄熱病ウイルス）；コロナウイルス科（例えば、コロナウイルス）；ラブドウイルス科（例えば、水疱性口内炎ウイルス、狂犬病ウイルス）；コロナウイルス科（例えば、コロナウイルス）；ラブドウイルス科（例えば、水疱性口内炎ウイルス、狂犬病ウイルス）；フィロウイルス科（例えば、エボラウイルス）；パラミクソウイルス科（例えば、パラインフルエンザウイルス、流行性耳下腺炎ウイルス、麻疹ウイルス、ＲＳウイルス）；オルトミクソウイルス科（例えば、インフルエンザウイルス）；ブンガウイルス科（例えば、ハンターンウイルス、ブンガウイルス、フレボウイルス、およびナイロウイルス）；アレナウイルス科（出血熱ウイルス）；レオウイルス科（例えば、レオウイルス、オルビウイルス、およびロタウイルス）；ビルナウイルス科；ヘパドナウイルス科（Ｂ型肝炎ウイルス）；パルボウイルス科（パルボウイルス）；パポバウイルス科（パピローマウイルス、ポリオーマウイルス）；アデノウイルス科（ほとんどのアデノウイルス）；ヘルペスウイルス科（単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）１および２、水痘帯状疱疹ウイルス、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、ヘルペスウイルス）；ポックスウイルス科（天然痘ウイルス、ワクシニアウイルス、ポックスウイルス）；ならびにイリドウイルス科（例えば、アフリカ豚熱ウイルス）；および分類されていないウイルス（例えば、デルタ型肝炎の原因因子（Ｂ型肝炎ウイルスの欠損性付随体と考えられてる）；Ｃ型肝炎ウイルス；ノーウォークウイルスおよび関連ウイルス、およびアストロウイルス）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１１３】
グラム陰性細菌およびグラム陽性細菌のいずれもが、脊椎動物において抗原として作用する。このようなグラム陽性細菌としては、パスツレラ属（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ）の種、ブドウ球菌属（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｉ）の種、および連鎖球菌属（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）の種が挙げられるが、これらに限定されない。グラム陰性細菌としては、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）、シュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）の種、およびサルモネラ属（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）の種が挙げられるが、これらに限定されない。感染性細菌の特定の例としては、Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉｓ、Ｂｏｒｅｌｉａ  ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉ、Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌｉａ、マイコバクテリウム属の種（例えば、Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ、Ｍ．ａｖｉｕｍ、Ｍ．ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｅ、Ｍ．ｋａｎｓａｉｉ、Ｍ．ｇｏｒｄｏｎａｅ）、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ
ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ、Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ（Ａ群連鎖球菌）、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ａｇａｌａｃｔｉａｅ（Ｂ群連鎖球菌）、連鎖球菌属（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）（ビリダンス群）、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃａｌｉｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｂｏｖｉｓ、連鎖球菌属（嫌気性種）、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、病原性Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ種、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ種、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｎｔｒａｃｉｓ、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ
ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ種、Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｈｒｉｘ  ｒｈｕｓｉｏｐａｔｈｉａｅ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｒｓ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｔｅｔａｎｉ、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ  ａｅｒｏｇｅｎｅｓ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｐａｓｔｕｒｅｌｌａ  ｍｕｌｔｏｃｉｄａ、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ種、Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｎｕｃｌｅａｔｕｍ、Ｓｔｒｅｐｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｍｏｎｉｌｉｆｏｒｍｉｓ、Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ  ｐａｌｌｉｄｉｕｍ、Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ  ｐｅｒｔｅｎｕｅ、Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ、Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ、およびＡｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓ  ｉｓｒａｅｌｌｉが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１１４】
真菌の例としては、Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ、Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ  ｃａｐｓｕｌａｔｕｍ、Ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ  ｉｍｍｉｔｉｓ、Ｂｌａｓｔｏｍｙｃｅｓ  ｄｅｒｍａｔｉｔｉｄｉｓ、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ、Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓが挙げられる。
【０１１５】
他の感染性生物（すなわち、原生生物）としては、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｍａｌａｒｉａｅ、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｏｖａｌｅ、およびＰｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｖｉｖａｘのようなＰｌａｓｍｏｄｉｕｍ種、ならびにＴｏｘｏｐｌａｓｍａ  ｇｏｎｄｉｉが挙げられる。血液感染性の寄生虫および／または組織寄生虫としては、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ種、Ｂａｂｅｓｉａ  ｍｉｃｒｏｔｉ、Ｂａｂｅｓｉａ  ｄｉｖｅｒｇｅｎｓ、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｔｒｏｐｉｃａ、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ種、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｂｒａｚｉｌｉｅｎｓｉｓ、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｄｏｎｏｖａｎｉ、Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ  ｇａｍｂｉｅｎｓｅ、およびＴｒｙｐａｎｏｓｏｍａ  ｒｈｏｄｅｓｉｅｎｓｅ（アフリカ睡眠病）、Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ  ｃｒｕｚｉ（シャーガス病）、およびＴｏｘｏｐｌａｓｍａ  ｇｏｎｄｉｉが挙げられる。
【０１１６】
他の医学的に関連する微生物は、文献に広く記載されており、例えば、Ｃ．Ｇ．Ａ．Ｔｈｏｍａｓ，Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，Ｂａｉｌｌｉｅｒｅ  Ｔｉｎｄａｌｌ，Ｇｒｅａｔ  Ｂｒｉｔａｉｎ  １９８３を参照のこと。その内容全体が、参考として本明細書中に組み込まれる。
【０１１７】
アレルゲンとは、敏感な被験体においてアレルギー応答または喘息の応答を誘導することができる物質（抗原）をいう。アレルゲンのリストは莫大なものであり、これには、花粉、昆虫毒、動物の角質が剥がれたごみ、真菌芽胞、および薬物（例えば、ペニシリン）が含まれ得る。自然界に存在している動物および植物のアレルゲンの例としては、以下の属に特異的なタンパク質が挙げられるが、これらに限定されない：Ｃａｎｉｎｅ（Ｃａｎｉｓ  ｆａｍｉｌｉａｒｉｓ）；Ｄｅｒｍａｔｏｐｈａｇｏｉｄｅｓ（例えば、Ｄｅｒｍａｔｏｐｈａｇｏｉｄｅｓ  ｆａｒｉｎａｅ）；Ｆｅｌｉｓ（Ｆｅｌｉｓ  ｄｏｍｅｓｔｉｃｕｓ）；Ａｍｂｒｏｓｉａ（Ａｍｂｒｏｓｉａ  ａｒｔｅｍｉｉｓｆｏｌｉａ）；Ｌｏｌｉｕｍ（例えば、Ｌｏｌｉｕｍ  ｐｅｒｅｎｎｅまたはＬｏｌｉｕｍ  ｍｕｌｔｉｆｌｏｒｕｍ）；Ｃｒｙｐｔｏｍｅｒｉａ（Ｃｒｙｐｔｏｍｅｒｉａ  ｊａｐｏｎｉｃａ）；Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ  ａｌｔｅｒｎａｔａ；Ａｌｄｅｒ；Ａｌｎｕｓ（Ａｌｎｕｓ  ｇｕｌｔｉｎｏａｓａ）；Ｂｅｔｕｌａ（Ｂｅｔｕｌａ  ｖｅｒｒｕｃｏｓａ）；Ｑｕｅｒｃｕｓ（Ｑｕｅｒｃｕｓ  ａｌｂａ）；Ｏｌｅａ（Ｏｌｅａ  ｅｕｒｏｐａ）；Ａｒｔｅｍｉｓｉａ（Ａｒｔｅｍｉｓｉａ  ｖｕｌｇａｒｉｓ）；Ｐｌａｎｔａｇｏ（例えば、Ｐｌａｎｔａｇｏ  ｌａｎｃｅｏｌａｔａ）；Ｐａｒｉｅｔａｒｉａ（例えば、Ｐａｒｉｅｔａｒｉａ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓまたはＰａｒｉｅｔａｒｉａ  ｊｕｄａｉｃａ）；Ｂｌａｔｔｅｌｌａ（例えば、Ｂｌａｔｔｅｌｌａ  ｇｅｒｍａｎｉｃａ）；Ａｐｉｓ（例えば、Ａｐｉｓ  ｍｕｌｔｉｆｌｏｒｕｍ）；Ｃｕｐｒｅｓｓｕｓ（例えば、Ｃｕｐｒｅｓｓｕｓ  ｓｅｍｐｅｒｖｉｒｅｎｓ）、Ｃｕｐｒｅｓｓｕｓ  ａｒｉｚｏｎｉｃａ、およびＣｕｐｒｅｓｓｕｓ  ｍａｃｒｏｃａｒｐａ）；Ｊｕｎｉｐｅｒｕｓ（例えば、Ｊｕｎｉｐｅｒｕｓ  ｓａｂｉｎｏｉｄｅｓ、Ｊｕｎｉｐｅｒｕｓ  ｖｉｒｇｉｎｉａｎａ、Ｊｕｎｉｐｅｒｕｓ  ｃｏｍｍｕｎｉｓ、およびＪｕｎｉｐｅｒｕｓ  ａｓｈｅｉ）；Ｔｈｕｙａ（例えば、Ｔｈｕｙａ  ｏｒｉｅｎｔａｌｉｓ）；Ｃｈａｍａｅｃｙｐａｒｉｓ（例えば、Ｃｈａｍａｅｃｙｐａｒｉｓ  ｏｂｔｕｓａ）；Ｐｅｒｉｐｌａｎｅｔａ（例えば、Ｐｅｒｉｐｌａｎｅｔａ  ａｍｅｒｉｃａｎａ）；Ａｇｒｏｐｙｒｏｎ（例えば、Ａｇｒｏｐｙｒｏｎ  ｒｅｐｅｎｓ）；Ｓｅｃａｌｅ（例えば、Ｓｅｃａｌｅ  ｃｅｒｅａｌｅ）；Ｔｒｉｔｉｃｕｍ（例えば、Ｔｒｉｔｉｃｕｍ  ａｅｓｔｉｖｕｍ）；Ｄａｃｔｙｌｉｓ（例えば、Ｄａｃｔｙｌｉｓ  ｇｌｏｍｅｒａｔａ）；Ｆｅｓｔｕｃａ（例えば、Ｆｅｓｔｕｃａ  ｅｌａｔｉｏｒ）；Ｐｏａ（例えば、Ｐｏａ  ｐｒａｔｅｎｓｉｓまたはＰｏａ  ｃｏｍｐｒｅｓｓａ）；Ａｖｅｎａ（例えば、（Ａｖｅｎａ  ｓａｔｉｖａ）；Ｈｏｌｃｕｓ（例えば、Ｈｏｌｃｕｓ  ｌａｎａｔｕｓ）；Ａｎｔｈｏｘａｎｔｈｕｍ（例えば、Ａｎｔｈｏｘａｎｔｈｕｍ  ｏｄｏｒａｔｕｍ）；Ａｒｒｈｅｎａｔｈｅｒｕｍ（例えば、Ａｒｒｈｅｎａｔｈｅｒｕｍ  ｅｌａｔｉｕｓ）；Ａｇｒｏｓｔｉｓ（例えば、Ａｇｒｏｓｔｉｓ  ａｌｂａ）；Ｐｈｌｅｕｍ（例えば、Ｐｈｌｅｕｍ  ｐｒａｔｅｎｓｅ）��Ｐｈａｌａｒｉｓ（例えば、Ｐｈａｌａｒｉｓ  ａｒｕｎｄｉｎａｃｅａ）；Ｐａｓｐａｌｕｍ（例えば、Ｐａｓｐａｌｕｍ  ｎｏｔａｔｕｍ）；Ｓｏｒｇｈｕｍ（例えば、Ｓｏｒｇｈｕｍ  ｈａｌｅｐｅｎｓｉｓ）；およびＢｒｏｍｕｓ（例えば、Ｂｒｏｍｕｓ  ｉｎｅｒｍｉｓ）。
【０１１８】
抗原は実質的に精製されている場合もある。用語「実質的に精製されている」は、本明細書中で使用される場合には、他のタンパク質、脂質、炭水化物、またはそれらと自然界において結合している他の物質を実質的に含まない抗原、すなわち、ポリペプチドをいう。当業者は、タンパク質精製のための標準的な技術を使用してポリペプチド抗原を精製することができる。実質的に純粋なポリペプチドは、しばしば、非還元性ポリアクリルアミドゲル上で単一の際立ったバンドを生じる。部分的にグリコシル化されたポリペプチド、またはいくつかの開始コドンを有しているものの場合には、非還元性ポリアクリルアミドゲル上にいくつかのバンドが存在する場合があるが、これらは、そのポリペプチドについて異なったパターンを形成する。ポリペプチド抗原の精製はまた、アミノ末端のアミノ酸配列分析によって決定することもできる。多糖、低分子、模倣物などのような他の型の抗原が本発明に含まれ、これらは状況によっては実質的に純粋なものである場合もある。
【０１１９】
本発明のオリゴヌクレオチドは、抗菌剤とともに被験体に投与することができる。抗菌剤とは、本明細書中で使用される場合は、感染性微生物を死滅させるかまたは阻害することができる、自然界に存在している化合物または合成の化合物をいう。本発明に従って有用である抗菌剤の型は、被験体が感染しているか、または被験体が感染するリスクのある微生物の型に依存する。抗菌剤としては、抗細菌剤、抗ウイルス剤、抗真菌剤、および抗寄生虫剤が挙げられるが、これらに限定されない。「抗感染剤」、「抗細菌剤」、「抗ウイルス剤」、「抗真菌剤」、「抗寄生虫剤」、および「殺寄生虫薬」のような語句は、当業者にとって十分に確立されている意味を有し、標準的な医学的テキストにおいて定義されている。簡単には、抗細菌剤は、細菌を死滅させるかまたは阻害し、これには、抗生物質および同様の機能を有している他の合成化合物または自然界に存在している化合物が含まれる。抗生物質は、細胞、例えば、微生物によって二次代謝産物として生産される低分子量の分子である。一般には、抗生物質は、微生物に特異的であり、宿主細胞中には存在しない、１つ以上の細菌の機能または構造を妨害する。抗ウイルス剤は自然界の供給源から単離することができるか、または合成することができ、ウイルスを死滅させるまたは阻害するために有用である。抗真菌剤は、表在性の真菌による感染、および日和見的な初期の全身的な真菌感染を処置するために使用される。抗寄生虫剤は、寄生虫を死滅させるか、または阻害する。
【０１２０】
ヒトへの投与に有用な殺寄生虫薬とも呼ばれる、抗寄生虫剤の例として、アルベンダゾール、アンホテリシンＢ、ベンズイミダゾール、ビチオノール、クロロキンＨＣｌ、リン酸クロロキン、クリンダマイシン、デヒドロエメチン、ジエチルカルバマジン、ジロキサニドフロエート、エフロルニチン、フラゾリダオン（ｆｕｒａｚｏｌｉｄａｏｎｅ）、グルココルチコイド、ハロファントリン、ヨードキノール、イベルメクチン、メベンダゾール、メフロキン、メグルミンアンチモニエート、メラルソプロール、メトリフォネート、メトロニダゾール、ニクロサミド、ニフルティモックス、オキサムニキン、パルモマイシン、ペンタミジン、イセチオネート、ピペラジン、プラジカンテル、リン酸プリマキン、プログアニル、パモ酸ピランテル、ピリメタミンスルフォンアミド、ピリメタミンスルファドキシン、キナクリンＨＣｌ、硫酸キニーネ、グルコン酸キニジン、スピラマイシン、スチボグルコネート・ナトリウム（グルコン酸アンチモニルナトリウム）、スラミン、テトラサイクリン、ドキシサイクリン、チアベンダゾール、チニダゾール、トリメトロプリム・スルファメトキサゾール、およびトリパルサミドが挙げられるが、これらに限定されない。これらのいくつかは、単独で、または他のものと組み合わせて使用される。
【０１２１】
抗細菌剤は、細菌を死滅させるか、または細菌の増殖もしくは機能を阻害する。抗細菌剤の大きなクラスは抗生物質である。広い範囲の細菌を死滅させるかまたは阻害するために有効な抗生物質は、広域抗生物質と呼ばれる。他の型の抗生物質は、主に、グラム陽性またはグラム陰性のクラスの細菌に対して有効である。これらの型の抗生物質は、狭域抗生物質と呼ばれる。単一の生物または疾患に有効であるが、他の型の細菌に対しては有効ではない他の抗生物質は、限定抗生物質（ｌｉｍｉｔｅｄ  ｓｐｅｃｔｒｕｍ  ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ）と呼ばれる。抗細菌剤は、時々、それらの最初の作用形態に基づいて分類される。一般的には、抗細菌剤は、細胞壁合成のインヒビター、細胞膜のインヒビター、タンパク質合成のインヒビター、核酸合成または核酸機能のインヒビター、および競合インヒビターである。
【０１２２】
抗ウイルス剤は、ウイルスによる細胞の感染、または細胞内でのウイルスの複製を妨げる化合物である。抗ウイルス剤は、抗細菌剤である薬剤よりもずっと少ない。なぜなら、ウイルスの複製プロセスは、宿主細胞内でのＤＮＡ複製とあまりに密接に関係しており、多くの場合に非特異的な抗ウイルス剤が宿主に対して毒性であるからである。抗ウイルス剤によって遮断または阻害することができるウイルス感染のプロセスにはいくつかの段階がある。これらの段階には、宿主細胞へのウイルスの付着（免疫グロブリンまたは結合ペプチド）、ウイルスの脱殻（例えば、アマンタジン）、ウイルスｍＲＮＡの合成または転位（例えば、インターフェロン）、ウイルスＲＮＡまたはＤＮＡの複製（例えば、ヌクレオシド類似体）、新しいウイルスタンパク質の成熟（例えば、プロテアーゼインヒビター）、およびウイルスの出芽および放出が含まれる。
【０１２３】
ヌクレオチド類似体とは、ヌクレオチドと類似しているが、不完全であるかあるいは異常なデオキシリボースまたはリボース基を有している合成の化合物である。一度、ヌクレオチド類似体が細胞中に存在すると、これらはリン酸化され、ウイルスＤＮＡまたはＲＮＡ中への取り込みについて正常なヌクレオチドと競合する、三リン酸形態を生じる。一度、このヌクレオチド類似体の三リン酸形態が成長しつつある核酸鎖に組み込まれると、これはウイルスポリメラーゼとの不可逆的な結合を生じ、これにより鎖の終結を生じる。ヌクレオチド類似体としては、アシクロビル（単純ヘルペスウイルスおよび水痘帯状疱疹ウイルスの処置に使用される）、ガンシクロビル（サイトメガロウイルスの処置に有用である）、イドクスウリジン、リバビリン（呼吸器合胞体ウイルスの処置に有用である）、ジデオキシイノシン、ジデオキシシチジン、ジドブジン（アジドチミジン）、イミキモド、およびレジミキモド（ｒｅｓｉｍｉｑｕｉｍｏｄ）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１２４】
インターフェロンは、ウイルスに感染した細胞、ならびに免疫細胞によって分泌されるサイトカインである。インターフェロンは、感染した細胞に隣接する細胞上の特異的受容体に結合することにより作用して、ウイルスによる感染から細胞を防御する細胞内での変化を生じる。αおよびβインターフェロンはまた、感染した細胞の表面上でのクラスＩおよびクラスＩＩのＭＨＣ分子の発現を誘導して、宿主免疫細胞の認識のための抗原提示を増大させる。αおよびβインターフェロンは、組み換え形態として利用することができ、慢性Ｂ型肝炎およびＣ型肝炎感染の処置に使用されている。抗ウイルス治療に有効な投与量では、インターフェロンには、発熱、倦怠感、および体重の減少のような重度の副作用がある。
【０１２５】
本発明において有用な抗ウイルス剤としては、免疫グロブリン、アマンタジン、インターフェロン、ヌクレオシド類似体、およびプロテアーゼインヒビターが挙げられるが、これらに限定されない。抗ウイルス剤の特異的な例としては、エースマンナン；アシクロビル；アシクロビルナトリウム；アデフォビル；アロブジン；アルビルセプトスドトックス（Ａｌｖｉｒｃｅｐｔ  Ｓｕｄｏｔｏｘ）；塩酸アマンタジン；アラノチン（Ａｒａｎｏｔｉｎ）；アリルドン（Ａｒｉｌｄｏｎｅ）；メシル酸アテビルジン（Ａｔｅｖｉｒｄｉｎ  Ｍｅｓｙｌａｔｅ）；アブリジン（Ａｖｒｉｄｉｎｅ）；シドフォビル（Ｃｉｄｏｆｏｖｉｒ）；シパムフィリン（Ｃｉｐａｍｆｙｌｌｉｎｅ）；塩酸シタラビン；メシル酸デラビルジン；デシクロビル；ディダノシン；ディソキサリル（Ｄｉｓｏｘａｒｉｌ）；エドクスジン（Ｅｄｏｘｕｄｉｎｅ）；エンビラデン（Ｅｎｖｉｒａｄｅｎｅ）；エンビロキシム（Ｅｎｖｉｒｏｘｉｍｅ）；ファムシクロビル；塩酸ファモチン（Ｆａｍｏｔｉｎｅ  Ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）；フィアシタビン（Ｆｉａｃｉｔａｂｉｎｅ）；フィアルジビン（Ｆｉａｌｕｒｉｄｉｎｅ）；フォサリレート（Ｆｏｓａｒｉｌａｔｅ）；ホスカルネットナトリウム；ホスフォネットナトリウム（Ｆｏｓｆｏｎｅｔ  Ｓｏｄｉｕｍ）；ガンシクロビル；ガンシクロビルナトリウム；イドクスウリジン；ケトキサール（Ｋｅｔｈｏｘａｌ）；ラミブジン；ロブカビル（Ｌｏｂｕｃａｖｉｒ）；塩酸メモチン（Ｍｅｍｏｔｉｎｅ  Ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）；メチサゾン（Ｍｅｔｈｉｓａｚｏｎｅ）；ネビラピン；ペンシクロビル；ピロダビル（Ｐｉｒｏｄａｖｉｒ）；リバビリン；塩酸リマンタジン；メシル酸サキナビル；塩酸ソマンタジン（Ｓｏｍａｎｔａｄｉｎｅ  Ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）；ソリブジン；スタットロン（Ｓｔａｔｏｌｏｎ）；スタブジン；塩酸チロロン；トリフルウリジン；塩酸バラシクロビル；ビダラビン；リン酸ビダラビン；リン酸ビダラビンナトリウム（Ｖｉｄａｒａｂｉｎｅ  Ｓｏｄｉｕｍ  Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ）；ビルオキシム（Ｖｉｒｏｘｉｍｅ）；ザルシタビン；ジドブジン；およびジンビルオキシム（Ｚｉｎｖｉｒｏｘｉｍｅ）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１２６】
抗真菌剤は、感染性の真菌の処置および予防に有用である。抗真菌剤は、時々、それらの作用機構によって分類される。いくつかの抗真菌剤は、グルコースの合成を阻害することによって細胞壁インヒビターとして機能する。これらとしては、バシウンジン（ｂａｓｉｕｎｇｉｎ）／ＥＣＢが挙げられるがこれに限定されない。他の抗真菌剤は、膜の完全性を不安定化させることによって機能する。これらとしては、クロトリマゾール、セルタコンゾール、フルコナゾール、イトラコンゾール、ケトコナゾール、ミコナゾール、およびボリコナゾール（ｖｏｒｉｃｏｎａｃｏｌｅ）のようなイミダゾール、ならびにＦＫ４６３、アンホテリシンＢ、ＢＡＹ３８−９５０２、ＭＫ９９１、パラジマイシン、ＵＫ２９２、ブテナフィン、およびテルビナフィンが挙げられるが、これらに限定されない。他の抗真菌剤は、キチンを崩壊させることによって（例えば、キチナーゼ）、または免疫抑制によって（５０１クリーム）作用する。
【０１２７】
ＣｐＧ免疫刺激オリゴヌクレオチドは、免疫応答を強化するために、アジュバントのような他の治療薬と混合することができる。ＣｐＧ免疫刺激オリゴヌクレオチドおよび他の治療薬は、同時にまたは連続して投与することができる。他の治療薬が同時に投与される場合には、これらは、同じ処方物中で、または別の処方物中で投与することができるが、同時に投与される。他の治療薬およびＣｐＧ免疫刺激オリゴヌクレオチドの投与が時間的に分けられる場合には、他の治療薬は互いに、そしてＣｐＧ免疫刺激オリゴヌクレオチドと連続して投与される。これらの化合物の投与の間の間隔はほんの数分である場合もあり、またそれよりも長い場合もある。他の治療薬としては、アジュバント、サイトカイン、抗体、抗原などが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１２８】
本発明の組成物はまた、核酸ではないアジュバントと共に投与される場合もある。核酸ではないアジュバントとは、体液性および／または細胞性免疫応答を刺激することができる、本明細書中に記載されているＣｐＧ免疫刺激オリゴヌクレオチド以外の任意の分子または化合物である。核酸ではないアジュバントとしては、例えば、デポー効果を生じるアジュバント、免疫刺激アジュバント、およびデポー効果を生じ、かつ免疫系を刺激するアジュバントが挙げられる。
【０１２９】
ＣｐＧ免疫刺激オリゴヌクレオチドはまた、粘膜のアジュバントとしても有用である。全身性および粘膜の免疫の両方が、ＣｐＧ核酸の粘膜への送達によって誘導されることが以前に発見されている。したがって、オリゴヌクレオチドは、他の粘膜のアジュバントと組み合わせて投与される場合もある。
【０１３０】
免疫応答はまた、ＣｐＧ免疫刺激オリゴヌクレオチドとの、サイトカインの（ＢｕｅｌｅｒおよびＭｕｌｌｉｇａｎ，１９９６；Ｃｈｏｗ等，１９９７；Ｇｅｉｓｓｌｅｒ等，１９９７；Ｉｗａｓａｋｉ等，１９９７；Ｋｉｍ等，１９９７）、あるいはＢ７のような同時刺激分子（Ｉｗａｓａｋｉ等，１９９７；Ｔｓｕｊｉ等，１９９７）の同時投与または同一線形的な（ｃｏ−ｌｉｎｅａｒ）発現によって誘導するか、または増大させることができる。用語「サイトカイン」は、ナノモルからピコモルの濃度で体液性の調節因子として作用し、正常な条件下または病理学的条件下のいずれかで、個々の細胞および組織の機能的活性を調節する、可溶性タンパク質およびペプチドの異なる群についての総称として使用される。これらのタンパク質はまた、細胞間の相互作用を直接媒介し、細胞外環境で生じるプロセスを調節する。サイトカインの例としては、ＩＰ−１０、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１８、顆粒球−マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、インターフェロン−γ（γ−ＩＦＮ）、ＩＦＮ−α、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、ＴＧＦ−β、ＦＬＴ−３リガンド、およびＣＤ４０リガンドが挙げられるが、これらに限定されない。サイトカインに加えて、ＣｐＧオリゴヌクレオチドは、抗ＩＬ−１０および抗ＴＧＦ−βのような特定のサイトカインに対する抗体、ならびにＣｏｘインヒビター、すなわち、ＣＯＸ−１およびＣＯＸ−２インヒビターと組み合わせて使用される場合もある。
【０１３１】
オリゴヌクレオチドはまた、Ｔｈ２免疫応答からＴｈ１免疫応答へと、免疫応答を向け直すためにも有用である。これにより、比較的バランスのとれたＴｈ１／Ｔｈ２環境が生じる。Ｔｈ２免疫応答からＴｈ１免疫応答への免疫応答の変更は、核酸に応答して生産される（例えば、単球細胞、およびＩＬ−１２、ＩＦＮ−γ、およびＧＭ−ＣＳＦを含むＴｈ１サイトカインを生産する他の細胞を誘導することによる）サイトカインのレベルを測定することによって評価することができる。Ｔｈ２応答からＴｈ１応答への免疫応答の変更またはバランスを取り戻すことは、喘息の処置に特に有用である。例えば、喘息を処置するために有効な量は、喘息に関係しているＴｈ２型の免疫応答をＴｈ１型の応答へと向け直すために、またはバランスのとれたＴｈ１／Ｔｈ２環境へと向け直すために有用な量であり得る。Ｔｈ２サイトカイン、特に、ＩＬ−４およびＩＬ−５は、喘息の被験体の気道において増加する。本明細書中に記載されているＣｐＧ免疫刺激オリゴヌクレオチドは、免疫系のバランスを取り戻すことを助けるＴｈ１サイトカインの増加を引き起こし、優勢なＴｈ２免疫応答に関係している有害な作用を防ぐかまたは軽減する。
【０１３２】
ＣｐＧ免疫刺激オリゴヌクレオチドは、細胞の生存性、分化、樹状細胞の活性化および成熟を促進する特有の能力を有しており、樹状細胞を含むインビトロ、インビボ、またはエキソビボでの方法に有用である。
【０１３３】
ＣｐＧ免疫刺激オリゴヌクレオチドはまた、ナチュラルキラー細胞溶解活性、および抗体依存性細胞傷害作用（ＡＤＣＣ）を増大させる。ＡＤＣＣは、ガン細胞のような細胞標的に特異的な抗体と組み合わせてＣｐＧ免疫刺激オリゴヌクレオチドを使用して行うことができる。ＣｐＧ免疫刺激オリゴヌクレオチドは、抗体と組み合わせて被験体に投与されると、被験体の免疫系を、腫瘍細胞を死滅させるように誘導する。ＡＤＣＣ手順において有用である抗体としては、体内の細胞と相互作用する抗体が挙げられる。多くのこのような細胞標的に特異的な抗体が当該分野で記載されており、多くが市販されている。
【０１３４】
ＣｐＧ免疫刺激オリゴヌクレオチドはまた、抗ガン治療と組み合わせて投与される場合もある。抗ガン治療には、ガン用の医薬、放射線治療、および外科手術手順が含まれる。本明細書中で使用される場合は、「ガン用の医薬」とは、ガンの処置の目的のために被験体に投与される薬剤をいう。本明細書中で使用される場合は、「ガンを処置すること」には、ガンの発症を防ぐこと、ガンの症状を緩和すること、および／または確立されたガンの増殖を阻害することが含まれる。他の態様では、ガン用の医薬は、ガンを発症するリスクを少なくする目的のために、ガンを発症するリスクのある被験体に投与される。ガンの処置のための種々の型の医薬が、本明細書中に記載されている。本明細書の目的については、ガン用の医薬は、化学療法薬、免疫治療薬、ガンワクチン、ホルモン治療、および生物学的応答変更因子として分類される。
【０１３５】
さらに、本発明の方法は、ＣｐＧ免疫刺激オリゴヌクレオチドに加えて、１つ以上の癌用の薬物の使用を含むように意図される。一例として、適切である場合には、ＣｐＧ免疫刺激オリゴヌクレオチドは、化学療法薬および免疫治療薬の両方と組み合わせて投与される場合がある。あるいは、癌用の薬剤は、癌に罹患しているかまたは癌を発症する可能性があるある患者を処置する目的のために、その患者に対して、免疫治療薬と癌ワクチンを投与すること、または化学療法薬と癌ワクチンを投与すること、または化学療法薬、免疫治療薬および癌ワクチンの全ての投与を投与することが包含される。
【０１３６】
化学療法薬は、メトトレキサレート、ビンクリスチン、アドリアマイシン、シスプラチン、糖を含まないクロロエチルニトロソウレア、５−フルオロウラシル、マイトマイシンC、ブレオマイシン、ドキソルビシン、ダカルバジン、タキソール、フラジリン（ｆｒａ
ｇｙｌｉｎｅ）、メグラミンＧＬＡ（Ｍｅｇｌａｍｉｎｅ  ＧＬＡ）、バルルビシン、カルムスタイン（ｃａｒｍｕｓｔａｉｎｅ）、およびポリフェルポサン（ｐｏｌｉｆｅｒｐｏｓａｎ）、ＭＭＩ２７０、ＢＡＹ１２−９５６６、ＲＡＳファメシルトランスフェラーゼ阻害因子（ＲＡＳ  ｆａｍｅｓｙｌ  ｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ）、ファメシルトランスフェラーゼ阻害因子（ｆａｍｅｓｙｌ  ｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ）、ＭＭＰ、ＭＴＡ／ＬＹ２３１５１４、ＬＹ２６４６１８／ロメテキソール（Ｌｏｍｅｔｅｘｏｌ）、グラモレック（Ｇｌａｍｏｌｅｃ）、ＣＩ−９９４、ＴＮＰ−４７０、ハイカムチン／トポテカン、ＰＫＣ４１２、バルスポダール／ＰＳＣ８３３、ノバントロン／ミトロキサントロン（Ｍｉｔｒｏｘａｎｔｒｏｎｅ）、メタレット（Ｍｅｔａｒｅｔ）／スラミン、バチマスタット、Ｅ７０７０、ＢＣＨ−４５５６、ＣＳ−６８２、９−ＡＣ、ＡＧ３３４０、ＡＧ３４３３、Ｉｎｃｅｌ／ＶＸ−７１０、ＶＸ−８５３、ＺＤ０１０１、ＩＳＩ６４１、ＯＤＮ６９８，ＴＡ２５１６／マルミスタット（Ｍａｒｍｉｓｔａｔ）、ＢＢ２５１６／マルミスタット（Ｍａｒｍｉｓｔａｔ）、ＣＤＰ８４５、Ｄ２１６３、ＰＤ１８３８０５、ＤＸ８９５１ｆ、レモナールＤＰ２２０２、ＦＫ３１７、ピシバニール／ＯＫ−４３２、ＡＤ３２／バルルビシン、メタストロン（Ｍｅｔａｓｔｒｏｎ）／ストロンチューム誘導体、テモダール／テモゾロミド、エバセット（Ｅｖａｃｅｔ）／リポソーム封入ドキソルビシン、イエタキサン（Ｙｅｗｔａｘａｎ）／パクリタキセル、タキソール／パクリタキセル、キセロード（Ｘｅｌｏａｄ）／カペシタビン、フルツロン／ドキシフルリジン、シクロパックス（Ｃｙｃｌｏｐａｘ）／経口パクリタキセル、経口タキソイド、ＳＰＵ−０７７／シスプラチン、ＨＭＲ１２７５／フラボピリドール、ＣＰ−３５８（７７４）／ＥＧＦＲ、ＣＰ−６０９（７５４）／ＲＡＳ腫瘍遺伝子阻害因子、ＢＭＳ−１８２７５１／経口白金（ｏｒａｌ  ｐｌａｔｉｎｕｍ）、ＵＦＴ（テガフール／ウラシル）、エルガミソール（Ｅｒｇａｍｉｓｏｌ）／レバミソール、エニルウラシル／７７６Ｃ８５／５ＦＵエンハンサー、カンプト／レバミソール、カンプトサール／イリノテカン、ツモデックス（Ｔｕｍｏｄｅｘ）／ラリトレックス（Ｒａｌｉｔｒｅｘｅｄ）、ロイスタチン／クラドリビン、Ｐａｘｅｘ／パクリタキセル、ドキシル／リポソーム封入ドキソルビシン、カエリックス（Ｃａｅｌｙｘ）／リポソーム封入ドキソルビシン、フルダラ／フルダラビン、ファーマルビシン（Ｐｈａｒｍａｒｕｂｉｃｉｎ）／エピルビシン、ＤｅｐｏＣｙｔ、ＺＤ１８３９、ＬＵ７９５５３／Ｂｉｓ−ナフタルイミド、ＬＵ１０３７９３／ドラスタイン（Ｄｏｌａｓｔａｉｎ）、カエティックス（Ｃａｅｔｙｘ）／リポソーム封入ドキソルビシン、ジェムザール／ジェムシタビン、ＺＤ０４７３／アノーメッド（Ａｎｏｒｍｅｄ）、ＹＭ１１６、ロジンシード（ｌｏｄｉｎｅ
ｓｅｅｄ）、ＣＤＫ４およびＣＤＫ２阻害因子、ＰＡＲＰ阻害因子、Ｄ４８０９／デキシフォスアミド（Ｄｅｘｉｆｏｓａｍｉｄｅ）、Ｉｆｅｓ／メスナ／イフォスファミド、ブモン／テニポシド、パラプラチン／カルボプラチン、プラチノール／シスプラチン、ベペシド／エトポシド、ＺＤ９３３１、タキソティア／ドセタキセル、グアニンアラビノシドのプロドラッグ、タキサン類似体、ニトロソウレア、メルフェランおよびシクロフォスファミドのようなアルキル化剤、アミノグルテチミド、アスパラギナーゼ、ブスルファン、カルボプラチン、クロロクロロムブシル（Ｃｈｌｏｒｏｍｂｕｃｉｌ）、シタラビンＨＣｌ、ダクチノマイシン、ダウノルビシンＨＣｌ、エストラムスチンリン酸ナトリウム、エトポシド（ＶＰ１６−２１３）、フロクスウリジン、フルオロウラシル（５−ＦＵ）、フルタミド、ヒドロキシウレア（ヒドロキシカルバミド）、イフォスファミド、インターフェロンα−２ａ、α−２ｂ、酢酸ロイプロリド（ＬＨＲＨ放出因子類似体）、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、メクロレタミンＨＣｌ（ナイトロジェンマスタード）、メルカプトプリン、メスナ、ミトタン（ｏ．ｐ’−ＤＤＤ）、ミトキサントロンＨＣｌ、オクトレオチド、プリカマイシン、プロカルバジンＨＣｌ、ストレプトゾシン、クエン酸タモキシフェン、チオグアニン、チオテパ、硫酸ビンブラスチン、アムサクリン（ｍ−ＡＭＳＡ）、アザシチジン、エリスロポエチン、ヘキサメチルメラミン（ＨＭＭ）、インターロイキン２、ミトグアゾン（メチル−ＧＡＧ；メチルグリオキサールビス−グアニルヒドラゾン；ＭＧＢＧ）、ペントスタチン（２’デオキシコホルマイシン）、セムスチン（メチル−ＣＣＮＵ）、テニポシド（ＶＭ−２６）、および硫酸ビンデシンからなる群より選択することができるが、これらに限定されない。
【０１３７】
免疫治療薬は、リブタキシン（Ｒｉｂｕｔａｘｉｎ）、ハーセプチン、クアドラメット、パノレックス、ＩＤＥＣ−Ｙ２Ｂ８、ＢＥＣ２、Ｃ２２５、オンコリム（Ｏｎｃｏｌｙｍ）、ＳＭＡＲＴ  Ｍ１９５、ＡＴＲＡＧＥＮ、オバレックス、ベキサール、ＬＤＰ−０３、ｉｏｒ  ｔ６、ＭＤＸ−２１０、ＭＤＸ−１１、ＭＤＸ−２２、ＯＶ１０３、３６２２Ｗ９４、抗ＶＥＧＦ、ゼナパックス、ＭＤＸ−２２０、ＭＤＸ−４４７、ＭＥＬＩＭＭＵＮＥ−２、ＭＥＬＩＭＭＵＮＥ−１、ＣＥＡＣＩＤＥ、プレターゲット（Ｐｒｅｔａｒｇｅｔ）、ＮｏｖｏＭＡｂ−Ｇ２、ＴＮＴ、Ｇｌｉｏｍａｂ−Ｈ、ＧＮＩ−２５０、ＥＭＤ−７２０００、ＬｉｍｐｈｏＣｉｄｅ、ＣＭＡ６７６、Ｍｏｎｏｐｈａｒｍ−Ｃ、４Ｂ５、ｉｏｒ  ｅｇｆ．ｒ３、ｉｏｒ  ｃ５、ＢＡＢＳ、抗ＦＬＫ−２、ＭＤＸ−２６０、ＡＮＡ  Ａｂ、ＳＭＡＲＴ  １Ｄ１０  Ａｂ、ＳＭＡＲＴ  ＡＢＬ  ３６４  Ａｂ、およびＩｍｍｕＲＡＩＴ−ＣＥＡからなる群より選択することができるが、これらに限定されない。
【０１３８】
癌ワクチンは、ＥＧＦ、抗イディオタイプ癌ワクチン、Ｇｐ７５抗原、ＧＭＫ黒色腫ワクチン、ＭＧＶガングリオシド結合ワクチン、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、オバレックス、Ｍ−Ｖａｘ、Ｏ−Ｖａｘ、Ｌ−Ｖａｘ、ＳＴｎ−ＫＨＬテラトープ（ｔｈｅｒａｔｏｐｅ）、ＢＬＰ２５（ＭＵＣ−１）、リポソーム封入イディオタイプワクチン、メラシン、ペプチド抗原ワクチン、毒素／抗原ワクチン、ＭＶＡに基づくワクチン、ＰＡＣＩＳ、ＢＣＧワクチン、ＴＡ−ＨＰＶ、ＴＡ−ＣＩＮ，ＤＩＳＣウイルス、およびＩｍｍｕＣｙｓｔ／ＴｈｅｒａＣｙｓからなる群より選択することができるが、これらに限定されない。
【０１３９】
モノクローナル抗体のような免疫治療薬と組み合わせたＣｐＧ免疫刺激オリゴヌクレオチドの使用により、ＡＤＣＣ（上記）の顕著な増大、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の活性化、およびＩＦＮαレベルの上昇を含む多数の機構を通じて、長期間にわたって生存性を高めることが可能である。それらの核酸は、モノクローナル抗体と組み合わせて使用された場合には、生物学的な結果を達成するために必要な抗体の用量を減少させるように作用する。
【０１４０】
本発明はまた、ＣｐＧ免疫刺激オリゴヌクレオチドを使用する、抗原非特異的な先天性免疫の活性化、および感染源による攻撃に対して広域スペクトルの耐性を誘導するための方法も含む。用語「先天性免疫の活性化」とは、本明細書中で使用される場合は、記憶Ｂ細胞以外の免疫細胞の活性化をいい、これらとしては、例えば、ＮＫ細胞、Ｔ細胞、および／または抗原依存的様式で応答することができる他の免疫細胞の活性化が挙げられる。感染攻撃に対する広域スペクトルの耐性は、免疫細胞が活性な形態であり、任意の侵襲性の化合物または微生物に応答して感作されることが原因で誘導される。それらの細胞は、必ずしも特定の抗原に対して特異的に感作されなくてもよい。このことは、生物戦争において、そして旅行者のような上記の他の状況において、特に有用である。
【０１４１】
ＣｐＧ免疫刺激オリゴヌクレオチドは、被験体に直接投与されるか、または核酸送達複合体と組み合わせて投与される場合もある。核酸送達複合体とは、当然、標的化手段（例えば、細胞を標的化するための高い親和性結合を生じる分子）と結合した（例えば、標的化手段に対するイオン結合もしくは共有結合した；または標的化手段の中にカプセル化された）核酸分子を意味する。核酸送達複合体の例としては、ステロール（例えば、コレステロール）、脂質（例えば、陽イオン性脂質、人工ウイルス粒子、またはリポソーム）、あるいは標的細胞に特異的な結合試薬（例えば、標的細胞特異的受容体によって認識されるリガンド）と結合した核酸が挙げられる。好ましい複合体は、標的細胞による内在化の前の著しい脱共役を防ぐために、生体内で十分に安定であり得る。しかし、複合体は、細胞内の適切な条件下で切断され、その結果、オリゴヌクレオチドを機能的な形態で放出することができる。
【０１４２】
ＣｐＧ免疫刺激オリゴヌクレオチドおよび／または抗原および／または他の治療薬は、単独で（例えば、生理食塩水中または緩衝液中で）、あるいは当該分野で公知の任意の送達ビヒクルを使用して投与することができる。例えば、以下の送達ビヒクルが記載されている：コヒレート（Ｃｏｃｈｌｅａｔｅｓ）（Ｇｏｕｌｄ−Ｆｏｇｅｒｉｔｅ等、１９９４，１９９６）；エマルサム（Ｖａｎｃｏｔｔ等，１９９８、Ｌｏｗｅｌｌ等，１９９７）；ＩＳＣＯＭ（Ｍｏｗａｔ等，１９９３，Ｃａｒｌｓｓｏｎ等，１９９１，Ｈｕ等，１９９８，Ｍｏｒｅｉｎ等，１９９９）；リポソーム（Ｃｈｉｌｄｅｒｓ等，１９９９，Ｍｉｃｈａｌｅｋ等，１９８９，１９９２，ｄｅ  Ｈａａｎ  １９９５ａ，１９９５ｂ）；生存細菌ベクター（例えば、サルモネラ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）、バシラス・カルマット−グエリン（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃａｌｍａｔｔｅ−ｇｕｅｒｉｎ）、志賀菌（Ｓｈｉｇｅｌｌａ）、乳酸菌（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）（Ｈｏｎｅ等，１９９６，Ｐｏｕｗｅｌｓ等，１９９８，Ｃｈａｔｆｉｅｌｄ等，１９９３，Ｓｔｏｖｅｒ等，１９９１，Ｎｕｇｅｎｔ等，１９９８）；生存ウイルスベクター（例えば、ワクシニアウイルス、アデノウイルス、単純ヘルペスウイルス）（Ｇａｌｌｉｃｈａｎ等，１９９３，１９９５，Ｍｏｓｓ等，１９９６，Ｎｕｇｅｎｔ等，１９９８，Ｆｌｅｘｎｅｒ等，１９９８，Ｍｏｒｒｏｗ等，１９９９）；マイクロスフェア（Ｇｕｐｔａ等，１９９８，Ｊｏｎｅｓ等，１９９６，Ｍａｌｏｙ等，１９９４，Ｍｏｏｒｅ等，１９９５，Ｏ’Ｈａｇａｎ等，１９９４，Ｅｌｄｒｉｇｅ等，１９８９）；核酸ワクチン（Ｆｙｎａｎ等，１９９３，Ｋｕｋｌｉｎ等，１９９７，Ｓａｓａｋｉ等，１９９８，Ｏｋａｄａ等，１９９７，Ｉｓｈｉｉ等，１９９７）；ポリマー（例えば、カルボキシメチルセルロース、キトサン）（Ｈａｍａｊｉｍａ等，１９９８，Ｊａｂｂａｌ−Ｇｉｌｌ等，１９９８）；ポリマー環（Ｗｙａｔｔ等，１９９８）；プロテオソーム（Ｖａｎｃｏｔｔ等，１９９８，Ｌｏｗｅｌｌ等，１９８８，１９９６，１９９７）；フッ化ナトリウム（Ｈａｓｈｉ等，１９９８）；トランスジェニック植物（Ｔａｃｋｅｔ等，
１９９８，Ｍａｓｏｎ等，１９９８，Ｈａｑ等，１９９５）；人工ウイルス粒子（Ｇｌｕｃｋ等，１９９２，Ｍｅｎｇｉａｒｄｉ等，１９９５，Ｃｒｙｚ等，１９９８）；ウイルス様粒子（Ｊｉａｎｇ等，１９９９，Ｌｅｉｂｌ等，１９９８）。他の送達ビヒクルが当該分野で公知である。
【０１４３】
用語「ＣｐＧ免疫刺激オリゴヌクレオチドの有効量」とは、望まれる生物学的効果を得るために必要であるかまたは十分である量をいう。例えば、粘膜の免疫を誘導するための抗原とともに投与されるＣｐＧ免疫刺激オリゴヌクレオチドの有効量は、抗原にさらされた際に抗原に応答してＩｇＡの発生を生じるために必要な量であり、一方、全身性免疫を誘導するために必要な量は、抗原にさらされた際に抗原に応答してＩｇＧの発生を生じるために必要な量である。本明細書中に提供される教示と組み合わせて、種々の活性環化合物の中から選択し、効力、相対的な生体利用性、患者の体重、有害な副作用の重篤度、好ましい投与の態様のような要素を計測することにより、実施的な毒性を生じることがなく、なお、特定の被験体を処置するために完全に有効である有効な、予防的または治療的処置レジュメを計画することができる。任意の特定の用途についての有効量は、処置される疾患または症状、投与される特定のＣｐＧ免疫刺激オリゴヌクレオチド、被験体の大きさ、あるいは疾患または症状の重篤度のような要因によって変化し得る。当業者は、特定のＣｐＧ免疫刺激オリゴヌクレオチドおよび／または抗原および／または他の治療薬の有効量を、過度な実験の必要なく、経験的に決定することができる。
【０１４４】
粘膜投与または局所投与について本明細書中に記載されている化合物の対象用量は、通常、１回の投与について約０．１μｇから１０ｍｇまでの範囲であり、これは、適用によって異なるが、１日に１回、１週間に１回、または１ヶ月に１回、およびこれらの間の任意の他の量、または必要に応じて別の量で、投与することができる。より一般的な粘膜または局所用量は、１回の投与について約１０μｇから５ｍｇまでの範囲であり、最も典型的には、約１００μｇから１ｍｇまでであり、２回〜４回の投与が、数日から数週間の間隔をあけて行われる。より一般的には、免疫刺激用量は、１回の投与について１μｇから１０ｍｇまでの範囲であり、最も典型的には、１０μｇから１ｍｇまでで、１日１回または１週間に１回の投与である。抗原特異的免疫応答を誘導する目的のための非経口投与についての本明細書中に記載されている化合物の対象用量は（ここでは、化合物は、別の治療薬ではなく抗原とともに投与される）、通常、ワクチンアジュバントまたは免疫刺激適用について有効な粘膜での用量よりも５から１００００倍多く、より一般的には、１０から１０００倍多く、最も典型的には、２０から１００倍多い。先天性の免疫応答を誘導する目的のため、またはＡＤＣＣを増大させるため、または抗原特異的免疫応答を誘導するための非経口投与についての本明細書中に記載される化合物の用量は、ＣｐＧ免疫刺激オリゴヌクレオチドが他の治療薬と組み合わせて、または球形の送達ビヒクル中で投与される場合には、通常、１回の投与について約１．０μｇから１００ｍｇまでの範囲であり、これは適用に応じて、１日に１回、１週間に１回、または１ヶ月に１回、およびこれらの間の任意の他の量、または必要に応じて別の量で、投与することができる。これらの目的についてのより一般的な非経口用量は、１回の投与について約１００μｇから５０ｍｇまでの範囲であり、最も典型的には、約２００μｇから２ｍｇまでで、２回〜４回の投与が、数日から数週間の間隔をあけて行われる。しかし、いくつかの実施形態では、これらの目的についての非経口用量は、上記に記載される通常の用量よりも５から１００００倍多い範囲で使用される場合がある。
【０１４５】
本明細書中に記載される任意の化合物についての治療有効量は、最初に動物モデルから決定することができる。治療有効量はまた、ヒトにおいて試験されている他のＣｐＧオリゴヌクレオチドについてのヒトのデータ（ヒトでの臨床試験が進行中である場合）、および同様の薬理学的活性を示すことが既知である他のアジュバントのような化合物（例えば、ＬＴおよびワクチン接種の目的のための他の抗原）についてのヒトのデータから決定することもできる。非経口投与にはさらに多い用量が必要な場合もある。投与される用量は、相対的な生体利用性、投与される化合物の効力に基づいて調節することができる。上記に記載される方法、および当該分野で周知の他の方法に基づいて最大効力を達成するように用量を調節することは、十分に当業者の能力の範囲内である。
【０１４６】
本発明の処方物は、薬学的に許容される濃度の塩、緩衝化剤、保存料、適合性担体、アジュバント、および必要である場合には、他の治療用成分を規定どおり含むことができる、薬学的に許容される溶液中で投与される。
【０１４７】
治療において使用するためには、有効量のＣｐＧ免疫刺激オリゴヌクレオチドおよび／または他の治療薬を、望まれる表面に化合物を送達する任意の様式によって、例えば、局所、粘膜、全身によって、被験体に投与することができる。本発明の薬学的組成物の投与は、当業者に公知の任意の手段によって達成することができる。好ましい投与経路としては、経口、非経口、筋肉内、鼻腔内、舌下、気管内、吸入、眼、膣、および直腸が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１４８】
経口投与については、化合物（すなわち、ＣｐＧ免疫刺激オリゴヌクレオチド、抗原、および／または他の治療薬）は、活性のある化合物（単数または複数）を当該分野で周知の薬学的に許容される担体と混合することによって容易に処方することができる。このような担体は、本発明の化合物が、処置される被験体による経口摂取のための錠剤、丸剤、糖衣錠、カプセル剤、液剤、ゲル剤、シロップ剤、スラリー、懸濁剤などとして処方されることを可能にする。経口での使用のための薬学的調製物は、必要に応じて得られた混合物を粉砕し、所望される場合には、錠剤または糖衣錠の核を得るために適切な補助剤を加えた後で、顆粒状の混合物を処理することによって、固形の賦形剤として得ることができる。適切な賦形剤は、具体的には、乳糖、ショ糖、マンニトール、またはソルビトールを含む糖類のような増量剤；例えば、トウモロコシ澱粉、コムギ澱粉、コメ澱粉、ジャガイモデンプン、ゼラチン、トラガカントガム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、および／またはポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）のようなセルロース調製物である。所望される場合には、架橋されたポリビニルピロリドン、寒天、またはアルギン酸、あるいはアルギン酸ナトリウムのようなそれらの塩などの崩壊剤が添加される場合もある。状況に応じて、経口処方物はまた、内部の酸性条件を中和するために生理食塩水または緩衝液中に処方される場合もあり、また、いずれの担体も伴わずに投与される場合もある。
【０１４９】
糖衣錠の核には、適切なコーティングが施される。この目的のためには、濃縮された糖溶液が使用され、これは、必要に応じて、アラビアゴム、タルク、ポリビニルピロリドン、カルボポールゲル、ポリエチレングリコール、および／または二酸化チタン、ラッカー溶液、および適切な有機溶媒または溶媒混合物を含むこともできる。活性のある化合物の用量の同定、または種々の組み合わせを特徴付けるために、染料または色素が錠剤または糖衣錠に加えられる場合もある。
【０１５０】
経口で使用することができる薬学的調製物としては、ゼラチンでできている押し込み型のカプセル、さらにはゼラチンおよび可塑剤（例えば、グリセロールまたはソルビトール）でできている軟らかいシールされたカプセルが挙げられる。押し込み型のカプセルには、乳糖、澱粉のような結合剤、および／または、タルクもしくはステアリン酸マグネシウムのような潤滑剤、必要に応じて、安定剤と混合された活性のある成分を含めることができる。軟カプセルにおいては、活性のある化合物は、脂肪油、流動パラフィン、または液体ポリエチレングリコールのような適切な液体中に溶解させられるか、または懸濁させられる場合がある。さらに、安定剤が添加される場合もある。経口投与のために処方されるマイクロスフェアを使用することもできる。このようなマイクロスフェアは、当該分野で十分に定義されている。経口投与のための全ての処方物は、このような投与に適切な投与量であるはずである。
【０１５１】
口腔投与については、組成物は、従来の様式で処方された錠剤またはトローチ剤の形態をとる場合がある。
【０１５２】
化合物は、標準的な吸入装置を使用して、肺に、具体的には、気管支に、さらに具体的には、肺の奥深くの肺胞に、吸入によって投与することができる。化合物は、適切な高圧ガス（例えば、ジクロロジフルオソメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素、または他の適切な気体）の使用によって、加圧型のパックまたはネブライザーからのエアゾールスプレーの提示の形態で投与することができる。加圧型エアゾールの場合には、投与量単位は、定量を投与する値に設定することによって決定することができる。吸入装置を、被験体に化合物を投与するために使用することができる。吸入装置とは、本明細書中で使用される場合は、化合物の乾燥粉末形態のような、エアゾールを投与するための任意の機器である。この型の装置は当該分野で周知であり、詳細に記載されており、例えば、そのような記載は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，第１９版，１９９５，Ｍａｃ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ，ｐｐ１６７６−１６９２において見ることができる。米国特許第６，１１６，２３７号のような多くの米国特許にもまた、吸入機器が記載されている。
【０１５３】
「粉末」とは、本明細書中で記載される場合は、微細に分散させられた固形粒子から構成される組成物を意味する。好ましくは、化合物は吸入機器の中で比較的自由に浮遊し、分散させることができ、その後、被験体によって吸入され、その結果、化合物が肺に達して肺胞への吸入が可能になる。「乾燥粉末」とは、エアゾールを形成するための吸入機器において粒子を容易に分散させることができる程度の水分含量を有している粉末組成物をいう。水分含量は、一般的には、約１０重量％（％ｗ）未満の水であり、いくつかの実施形態においては、約５％ｗ未満であり、好ましくは、約３％ｗ未満である。粉末は、ポリマーとともに処方することができ、また状況に応じて、リポソーム、アルブミン、および／または他の担体のような他の物質とともに処方することもできる。
【０１５４】
エアゾールの投与量および送達システムは、当業者によって特定の治療投与について選択することができる。例えば、Gｏｎｄａ，Ｉ．「Ａｅｒｏｓｏｌｓ  ｆｏｒ  ｄｅｌｉ
ｖｅｒｙ  ｏｆ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ａｎｄ  ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ  ａｇｅｎｔｓ  ｔｏ  ｔｈｅ  ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ  ｔｒａｃｔ」，Ｃｒｉｔｉｃａｌ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  ｉｎ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｄｒｕｇ  Ｃａｒｒｉｅｒ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，６：２７３−３１３（１９９０）、およびＭｏｒｅｎ，「Ａｅｒｏｓｏｌ  ｄｏｓａｇｅ  ｆｏｒｍｓ  ａｎｄ  ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ」，Ａｅｒｏｓｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ．Ｐｒｉｎｃｉｐｅｓ，Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ  ａｎｄ  Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｍｏｒｅｎ等編，Ｅｓｅｖｉｅｒ，Ａｍｓｔｅｒｄａｍ，１９８５に記載されている。
【０１５５】
それらの化合物は、それが全身的に投与されることが望ましい場合には、注射による、例えば、ボーラス注入法、または静注による非経口投与のために処方することができる。注射のための処方物は、別の保存剤とともに単位投与量形態で、例えば、アンプル中に、または多用量の容器中に調製することができる。組成物は、坐剤、油性もしくは水性のビヒクル中の液剤または乳濁液のような形態をとることができ、また、懸濁剤、安定剤、および／または分散剤のような処方のための薬剤を含むこともできる。
【０１５６】
非経口投与のための薬学的処方物としては、水溶性の形態の活性のある化合物の水溶液が挙げられる。さらに、活性のある化合物の懸濁液を、適切な油状の注射用懸濁液として調製することもできる。適切な親油性溶媒またはビヒクルとしては、ゴマ油のような脂肪油、またはオレイン酸エチルもしくはトリグリセリドのような合成の脂肪酸エステル、またはリポソームが挙げられる。水性の注射用懸濁液には、懸濁液の粘性を増大させる物質、例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ソルビトール、またはデキストランが含まれる場合がある。必要に応じて、懸濁液には、適切な安定剤、または化合物の可溶性を増大させて高度に濃縮された溶液を調製することを可能にするための試薬を含めることもできる。
【０１５７】
あるいは、活性のある化合物は、使用前に、適切なビヒクル、例えば、滅菌の発熱物質を含まない水を用いて構成される粉末形態である場合もある。
【０１５８】
それらの化合物はまた、例えば、ココアバターまたは他のグリセリドのような一般的な坐剤の基剤を含む、坐剤または停留浣腸のような直腸または膣用の組成物に処方することもできる。
【０１５９】
上記に記載される処方物に加えて、化合物は、デポー調製物として処方される場合もある。このような長期作用性の処方物は、適切なポリマー材料もしくは疎水性材料を用いて（例えば、許容される油中の乳濁液として）またはイオン交換樹脂を用いて処方されるか、あるいはやや溶けにくい誘導体として、例えば、やや溶けにくい塩として処方される場合もある。
【０１６０】
薬学的組成物はまた、適切な固体またはゲル相の担体または賦形剤を含む場合がある。このような担体または賦形剤の例としては、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、種々の糖、澱粉、セルロース誘導体、ゼラチン、およびポリエチレングリコールのようなポリマーが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１６１】
適切な液体または固体の薬学的調製物の形態は、例えば、吸入用の水溶液または生理食塩溶液、マイクロカプセル化された、渦巻状に巻かれた、金微粒子上にコーティングされた、リポソーム中に含められた、霧状にされたエアゾール、皮膚への移植用の、または皮膚を引っ掻く鋭利なものの上に乾燥させられた小丸薬である。薬学的組成物としてはまた、顆粒、粉末、錠剤、コーティングされた錠剤、（マイクロ）カプセル、坐剤、シロップ剤、乳濁剤、懸濁剤、クリーム剤、点滴剤、または活性のある化合物の持続的な放出を伴う調製物が挙げられる。これらの調製においては、賦形剤および添加剤、ならびに／または、崩壊剤、結合剤、コーティング剤、膨張剤、潤滑剤、香味剤、甘味剤、または安定剤のような補助剤が、上記のように習慣的に使用される。これらの薬学的組成物は、種々の薬物送達システムでの使用に適切である。薬物投与のための方法の簡単な概要については、Ｌａｎｇｅｒ，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４９：１５２７−１５３３，１９９０を参照のこと。これは引用により本明細書中に組み込まれる。
【０１６２】
ＣｐＧ免疫刺激オリゴヌクレオチド、ならびに、場合によっては他の治療薬および／または抗原は、それ自体が投与される場合もある（ニート）が、薬学的に許容される塩の形態で投与される場合もある。医薬品において使用される場合は、塩は、薬学的に許容されるものでなければならないが、薬学的には許容されない塩が、その薬学的に許容される塩を調製するために使用されることが好都合である場合もある。そのような塩としては、以下の酸から調製されるものが挙げられるが、これらに限定されない：塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸、マレイン酸、酢酸、サリチル酸、ｐ−トルエンスルホン酸、酒石酸、クエン酸、メタンスルホン酸、ギ酸、マロン酸、コハク酸、ナフタレン−２−スルホン酸、およびベンゼンスルホン酸。また、このような塩は、カルボン酸基の、ナトリウム、カリウムまたはカルシウム塩のようなアルカリ金属塩またはアルカリ土類金属塩として調製することができる。
【０１６３】
適切な緩衝化剤として、以下が挙げられる：酢酸および塩（１〜２％ｗ／ｖ）；クエン酸および塩（１〜３％ｗ／ｖ）；ホウ酸および塩（０．５〜２．５％ｗ／ｖ）；およびリン酸および塩（０．８〜２％ｗ／ｖ）。適切な保存剤としては、塩化ベンズアルコニウム（０．００３〜０．０３％ｗ／ｖ）；クロロブタノール（０．３〜０．９％ｗ／ｖ）；パラベン（０．０１〜０．２５％ｗ／ｖ）、およびチメロサール（０．００４〜０．０２％ｗ／ｖ）が挙げられる。
【０１６４】
本発明の薬学的組成物は、有効量のＣｐＧ免疫刺激オリゴヌクレオチドと、必要に応じて、状況に応じて薬学的に許容される担体中に含まれる抗原および／または他の治療薬を含む。用語「薬学的に許容される担体」とは、ヒトまたは他の脊椎動物への投与に適している、１つ以上の適合性の固体または液体の増量剤、希釈剤、またはカプセル化物質を意味する。用語「担体」とは、適用を容易にするために有効成分と混合される、天然または合成の有機成分または無機成分を示す。薬学的組成物の成分はまた、本発明の化合物と、および互いに、所望される薬学的効力を実質的に損なうような相互作用が生じないような様式で、混合することができる。
【０１６５】
本発明は、以下の実施例によってさらに説明される。実施例は、更なる限定としては決して解釈されるべきではない。本明細書中で引用される全ての引用文献（参考文献、発行された特許、公開された特許出願、および同時係属中の特許出願を含む）の全ての内容が、引用により本明細書中に明確に援用される。
【実施例】
【０１６６】
（材料および方法）
（オリゴヌクレオチド）
全てのＯＤＮは、Ｃｏｌｅｙ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  ＧｍｂＨ（Ｌａｇｇｅｎｆｅｌｄ，Ｇｅｒｍａｎｙ）によって提供された。ＯＤＮをリン酸緩衝生理食塩水（Ｓｉｇｍａ，Ｇｅｒｍａｎｙ）で希釈し、−２０℃で保存した。全ての希釈を、発熱物質を含まない試薬を用いて行った。下記の研究において使用したＯＤＮを表１に示す。
【０１６７】
【表１】
2010148524.tif 000003
2010148524.tif 000004
2010148524.tif 000005
（細胞の精製）
健常な男性および女性のヒトドナーに由来する抹消血軟膜の調製物を、Ｇｅｒｍａｎ  Ｒｅｄ  Ｃｒｏｓｓ（Ｒａｔｈｉｎｇｅｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）、またはＢｌｏｏｄ  Ｂａｎｋ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｄｕｅｓｓｅｌｄｏｒｆ（Ｇｅｒｍａｎｙ）から入手し、これらからＰＢＭＣを、Ｆｉｃｏｌｌ−Ｈｙｐａｑｕｅ（Ｓｉｇｍａ）での遠心分離によって精製した。精製したＰＢＭＣを、新鮮なまま使用した（ほとんどのアッセイについて）か、または凍結培地中に懸濁して−７０℃で保存したかのいずれかであった。必要な場合には、これらの細胞のアリコートを解凍し、洗浄し、５％（ｖ／ｖ）の熱不活化ヒトＡＢ血清（ＢｉｏＷｈｉｔｔａｋｅｒ，Ｂｅｌｇｉｕｍ）または１０％（ｖ／ｖ）の熱不活化ＦＣＳ、１．５ｍＭのＬ−グルタミン、１００Ｕ／ｍｌのペニシリンと、１００μｇ／ｍｌのストレプトマイシン（全てＳｉｇｍａ製）を補充したＲＰＭＩ  １６４０培養培地中に再懸濁した。
【０１６８】
（サイトカインの検出）
解凍したＰＢＭＣまたは新鮮なＰＢＭＣを、３×１０６／ｍｌから５×１０６／ｍｌの濃度で再懸濁し、予め種々の濃度のＯＤＮを加えたかまたは何も加えていないプレートに添加した。細胞を、加湿インキュベーター中で３７℃にて培養した。指示した時点後に、培養上清を回収した。すぐに使用しない場合は、上清を必要になるまで−２０℃で凍結させた。上清中のサイトカインの量を、市販のＥＬＩＳＡキットか、または市販の抗体（例えば、Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を用いて開発した自社製のＥＬＩＳＡを使用して評価した。
【０１６９】
（実施例１：５’−ＴＣＧは非ＣｐＧ  ＯＤＮまたはＣｐＧ  ＯＤＮの免疫刺激活性を増強する（ＩＬ−１０）。）
２人の代表ドナーのヒトＰＢＭＣを、指示したＯＤＮとともに４８時間インキュベートした（図１）。上清を収集し、ＩＬ−１０を「材料および方法」に記載したようにＥＬＩＳＡによって測定した。非ＣｐＧ  ＯＤＮ（例えば、ポリＴ  ＯＤＮ）または別の非ＣｐＧ  ＯＤＮ（配列番号６）の活性は、その５’末端にＴＣＧトリヌクレオチドを付加することによって大きく増強された。配列番号３のような５’−ＴＣＧを欠いているＣｐＧ  ＯＤＮ（Ｍａｇｏｎｅら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０００；３０：１８４１−１８５０）もまた、５’ＴＣＧの付加を用いてより高い効力（ｐｏｔｅｎｃｙ）および／または有効性（ｅｆｆｉｃａｃｙ）を示すように修飾し得た。
【０１７０】
（実施例２：ＴＣＧは非ＣｐＧ  ＯＤＮまたはＣｐＧ  ＯＤＮの免疫刺激活性を増強する（ＩＦＮ−α）。）
２人の代表ドナーのヒトＰＢＭＣを、指示したＯＤＮとともに４８時間インキュベートした（図２）。上清を収集し、ＩＦＮ−αを「材料および方法」に記載したようにＥＬＩＳＡによって測定した。このＩＦＮ−αアッセイにおいても、図１に示したような同じＯＤＮについて５’−ＴＣＧ修飾の効果が実証された。
（実施例３：免疫応答の増強はＣｐＧジヌクレオチドに依存する。）
２人の代表ドナーのヒトＰＢＭＣを、指示したＯＤＮとともに４８時間インキュベートした（図３）。上清を収集し、ＩＬ−１０を「材料および方法」に記載したようにＥＬＩＳＡによって測定した。５’−ＴＧＣ（配列番号２）およびポリＴ配列（配列番号８）の効果を示す。５’−ＴＣＧ（配列番号１０）は、ごくわずかな効果しか有し得ないが、５’−ＴＣＧ修飾は、明らかに、サイトカインの分泌に関して非常に強い増強を生じた。１７マーのポリＡ  ＯＤＮの５’−ＴＣＧ修飾は、効果がないようであった（配列番号９）。同様の結果がインターフェロンの分泌についても得られた。５’−ＴＣＧ  ＋  ポリＡ
ＯＤＮとは対照的に、ポリウラシルの状況における５’−ＴＣＧ  ＯＤＮは、ＩＬ−１０の分泌の増加を導いた（図６に示される）。
【０１７１】
（実施例４：ＯＤＮの５’から３’末端へのＣｐＧジヌクレオチドの移動は免疫刺激能力の段階的な損失を生じる。）
２人の代表ドナーのヒトＰＢＭＣを、指示したＯＤＮとともに４８時間インキュベートした（図４）。上清を収集し、ＩＬ−１０を「材料および方法」に記載したようにＥＬＩＳＡによって測定した。ＯＤＮの５’末端のＣｐＧジヌクレオチドは、増強したＩＬ１０−分泌を生じた（配列番号２）。ＣｐＧをポリＴ  ＯＤＮの３’末端に移動させることにより（配列番号１１）、サイトカインの分泌の大幅な減少が生じた。５’−ＣＧ（配列番号１２）もまた、増強効果を有していたが、５’−ＴＣＧはサイトカイン応答を増強することにおいてさらに効果的であった。同様の結果が、インターフェロン分泌についても得られた。
【０１７２】
（実施例５：５’−ＴＣＧに加えてＯＤＮの長さも刺激活性に対して効果を有する。）
２人の代表ドナーのヒトＰＢＭＣを、指示したＯＤＮとともに４８時間インキュベートした（図５）。上清を収集し、ＩＬ−１０を「材料および方法」に記載したようにＥＬＩＳＡによって測定した。このデータは、５’−ＴＣＧ  ＯＤＮに加えてＣｐＧ  ＯＤＮの長さも、刺激活性において役割を果たすことを示している。２１マーは、１７マーよりも強力であり効果的であり、１７マーは１５マーまたは１３マーよりも強力である。
【０１７３】
（実施例６：５’−ＴＣＧは最も刺激性の高い５’修飾であるが、他の修飾もまた増強した免疫刺激を導く。）
３人の代表ドナーのヒトＰＢＭＣを、指示したＯＤＮとともに４８時間インキュベートした（図６）。上清を収集し、ＩＬ−１０を「材料および方法」に記載したようにＥＬＩＳＡによって測定した。上記の実験で示したように、５’−ＴＣＧは明らかに最も強力な５’修飾である。それにもかかわらず、他の５’修飾もまた、ヒト細胞におけるポリＴ  ＯＤＮの刺激能力を増強し得た。驚くべきことに、５’−ＴＣ単独で、サイトカインの分泌を増強し得た。他の５’トリヌクレオチド（例えば、ＡＣＧ、ＣＣＧ、およびＧＣＧ）もまた増強したＩＬ−１０分泌をもたらしたが、５’−ＴＣＧは最も強い効果を示した。さらに、５’−ＴＴＧが純粋なポリＴ  ＯＤＮよりも刺激性が高いことが示された。さらに、配列の３’を５’−ＴＣＧへ特異的に修飾することは、免疫刺激を保持した。５’−ＴＣＧ  ＋  ポリＡ  ＯＤＮ（図３）とは対照的に、ポリウラシルの状況における５’−ＴＣＧ  ＯＤＮは、ＩＬ−１０分泌の増強を導く。
【０１７４】
（実施例７）
５’−ＴＣＧ修飾により、種々の細胞性効果によって示されるように、ＣｐＧ  ＯＤＮの刺激能力が高められる。
【０１７５】
ａ．３人のそれぞれのドナーのヒトＰＢＭＣを、示したＯＤＮとともに４８時間インキュベートし、上清を回収し、ＩＬ−１０を材料および方法に記載したようにＥＬＩＳＡによって測定した（図７Ａ）。
【０１７６】
ｂ．３人のそれぞれのドナーのヒトＰＢＭＣを、示したＯＤＮとともに４８時間インキュベートし、上清を回収し、ＩＦＮ−αを材料および方法に記載したようにＥＬＩＳＡによって測定した（図７Ｂ）。
【０１７７】
ｃ．３人のそれぞれのドナーのヒトＰＢＭＣを、示したＯＤＮとともに２０時間インキュベートし、上清を回収し、ＩＬ−６を材料および方法に記載したようにＥＬＩＳＡによって測定した（図７Ｃ）。
【０１７８】
図７Ａから７Ｃは、５’−ＴＣＧが種々のアッセイにおいてＯＤＮの刺激能力を高めることができることを示している。もとのＣｐＧ  ＯＤＮ（配列番号１８）は５’末端には直接はＣｐＧジヌクレオチドを有していない。５'−ＴＣＧでの配列の修飾（配列番号１
９）もまた、ＣｐＧ  ＯＤＮの活性を高めた。
【０１７９】
（実施例８）
５’−ＴＣＧを有するＯＤＮによって誘導されるＩＬ−１０の分泌。
【０１８０】
ヒトＰＢＭＣを漸増濃度の示したＯＤＮとともに４８時間インキュベートした。上清を回収し、ＩＬ−１０を材料および方法に記載したようにＥＬＩＳＡによって測定した。３人の個々のドナーについての結果を示す。この実験は、１μＭまでのＯＤＮ濃度を用いた、５’−ＴＣＧトリヌクレオチドのチミジン３’の寄与を調べる用量応答研究であった。図８に示すように、１μＭでは、サイトカインの分泌（ＩＬ−１０）の低い刺激を、配列番号９（５’−ＴＣＧプラスポリＡ）を用いて観察することができた。
【０１８１】
（実施例９）
５’−ＴＣＧと漸増数のチミジンを有しているＯＤＮによって誘導されるＩＬ−１０の分泌。
【０１８２】
ヒトＰＢＭＣを示したＯＤＮとともに４８時間インキュベートした。上清を回収し、ＩＬ−１０を材料および方法に記載したようにＥＬＩＳＡによって測定した。３人の個々のドナーについての結果を示す。ＯＤＮの３’末端へのチミジンの付加が、インビトロでサイトカインの生産を増加させるかどうかを調べるために、ＯＤＮを、アデノシンをチミジンに交換する数を増加させることによって修飾した。ポリＡテールへのわずか１つのチミジンの付加は、配列番号４１で観察できるように、免疫刺激の増大を導いた（図９）。さらにチミジンを付加することにより、チミジンの数に依存してＩＬ−１０の生産のさらなる増加が誘導された。ヌクレオチド配列のホスホロチオエートＯＤＮ依存性によって免疫刺激を高めるためには、５’−ＴＣＧで十分である。それにもかかわらず、ピリミジンの数を増加させることによって、この刺激はさらに助長される。５’−ＴＣＧの３’側のわずかに２個から４個のチミジン（ここでは、少なくとも約２０％がチミジンである）で、サイトカインの分泌の顕著な増加を導くには十分であった（配列番号４２および配列番号４３）。
【０１８３】
（実施例１０）
５’−ＴＣＧを有しているＯＤＮは、強力なＴｈ１媒介性免疫応答を誘導することについて最も強力であり、効果的なＯＤＮである。
【０１８４】
３人のそれぞれのドナーのヒトＰＢＭＣを、示したＯＤＮ濃度で４８時間インキュベートした（図１０Ａおよび１０Ｂ）。上清を回収し、ＩＬ−１０およびＩＦＮ−αを材料および方法に記載したようにＥＬＩＳＡによって測定した。平均±標準偏差を示す。５’−ＴＣＧは試験した全てのＯＤＮのうち最も強力で効果的な免疫刺激を導いた（Ｂ細胞関連サイトカインＩＬ−１０に関して）。それにもかかわらず、種々の５’末端を有しているＯＤＮのＴｈ１関連サイトカインＩＦＮ−αを誘導する能力を測定すると、５’−ＴＣＧによってのみこのサイトカインの強い分泌がサポートされていることが観察された（図１０Ｂ）。
【０１８５】
（実施例１１）
免疫刺激ＯＤＮ中のＣｐＧジヌクレオチドの位置によってＩ型ＩＦＮの分泌の強さが決定される。
【０１８６】
３人のそれぞれのドナーのヒトＰＢＭＣを、示したＯＤＮ濃度で４８時間インキュベートした。上清を回収し、ＩＦＮ−αを材料および方法に記載したようにＥＬＩＳＡによって測定した。平均を示す。ＣｐＧジヌクレオチド（十分な免疫刺激のためには不可欠である）の５’から３’末端への移動は、免疫刺激の段階的な消失を導いた（Ｂ細胞関連サイトカインＩＬ−１０の分泌に関して測定した）。図１１は、ＣｐＧの位置もまた、Ｉ型ＩＦＮの分泌の強さに大きく影響することを示している。驚くべきことに、ＣｐＧをわずか１から３位３’末端方向へ移動させることにより、特にＯＤＮ（配列番号２７および配列番号２８）を用いた場合に、大きく増加したＩＦＮ−αの分泌が導かれた。さらに３’末端へと移動させることにより、配列番号２（５’−ＴＣＧ）のレベルを下回るＩＦＮ−αの大きな減少が導かれた。
【０１８７】
（実施例１２）
短い５’−ＴＣＧ  ＯＤＮによって誘導されるＩ型ＩＦＮの分泌。
【０１８８】
３人のそれぞれのドナーのヒトＰＢＭＣを、示したＯＤＮ濃度で４８時間インキュベートした。上清を回収し、ＩＦＮ−αを材料および方法に記載したようにＥＬＩＳＡによって測定した。平均±標準偏差を示す。先の結果では、ＯＤＮの長さを短くした場合には免疫刺激の低下（ＩＬ−１０の分泌として測定した）が示されている。それにもかかわらず、短いＯＤＮ（例えば、５’−ＴＣＧを有している１３マー（配列番号３２））によるＩＦＮ−αの分泌を測定した場合には、驚くべきことに、１７マー（配列番号２）と比較して大きく増加したＩＦＮ−αの分泌が観察された（図１２）。
【０１８９】
（実施例１３）
本明細書中に記載した観察にしたがって新しく作成したＣｐＧ  ＯＤＮのパネルによるインビトロでの免疫刺激。
【０１９０】
先の実施例で記載した重要な観察は以下である：
ａ．５’ＴＣＧは、効率的であり強力なＩＦＮ−α（Ｔｈ１関連サイトカイン）さらにはＩＬ−１０の分泌（Ｂ細胞関連サイトカイン）をサポートしている；
ｂ．ＣｐＧジヌクレオチドを５’から３’末端へと移動させることにより最初に、Ｉ型ＩＦＮの分泌の増加が導かれ、さらに３’へと移動させることにより、減少が導かれた（Ｂ細胞の活性化は減少するのみであったか、またはＣｐＧの移動によってごくわずかに変化した）；
ｃ．５’−ＴＣＧを有しているＯＤＮを短くすることにより、ＩＦＮ−αを誘導する能力の大幅な増大が導かれた（他の効果、例えば、ＩＬ−１０の分泌とは対照的である）。
【０１９１】
これらの観察を組み合わせて、短いＣｐＧ  ＯＤＮのパネルを作成し、これを、ＩＦＮ−αの分泌を誘導するそれらの能力、さらにはＢ細胞を活性化する能力について試験した。３人のそれぞれのドナーのヒトＰＢＭＣを、示したＯＤＮ濃度で４８時間インキュベートした。上清を回収し、ＩＬ−１０およびＩＦＮ−αを材料および方法に記載したようにＥＬＩＳＡによって測定した。平均±標準偏差を示す。図１３Ａに示すように、２０ヌクレオチド未満の長さを有するＯＤＮを作成した。これは、典型的な２４マーのＢクラスのＯＤＮ（配列番号２６）よりも効果的にＩＦＮ−αの分泌を誘導した。図１３ＡのＯＤＮ（配列番号３６）（ＰＳ）と配列番号３５（セミソフト）との違いによって、ベル型の曲線からより低いＯＤＮ濃度（活性曲線の下方への湾曲を配列番号３５を用いてより低いＯＤＮ濃度で観察することができる）への移動が示された。さらに、配列番号３８から配列番号４０のような全てのＣｐＧジヌクレオチドについての１ヌクレオチドの欠失は、サイトカインの分泌の減少を導き、このことによって、観察された効果がＣｐＧ依存性であることを確認した。図１３Ｂ（および図１４）は、このような短いＯＤＮがＢ細胞の活性化を誘導することが完全に可能であることを明らかにしている（ＣＤ１９陽性Ｂ細胞についてのＣＤ８０のアップレギュレーションとして、さらにはＢ細胞によって生産されるサイトカインＩＬ−１０の分泌として測定した）。
【０１９２】
（実施例１４）
短いＣｐＧ  ＯＤＮは効果的なＢ細胞の刺激を完全に誘導することができる。
【０１９３】
３人のそれぞれのドナーのヒトＰＢＭＣを、示したＯＤＮ濃度で２４時間インキュベートし、細胞を回収し、ＣＤ１９、ＣＤ１４、およびＣＤ８０について染色した。ＣＤ１９陽性Ｂ細胞上でのＣＤ８０の発現を、記載したようにフローサイトメトリーによって測定した。図１４は、このような短いＯＤＮがＢ細胞の活性化を完全に誘導できることを示している（ＣＤ１９陽性Ｂ細胞についてのＣＤ８０のアップレギュレーション、さらにはＢ細胞によって生産されるサイトカインＩＬ−１０の分泌として測定した）。
【０１９４】
（実施例１５）
５’ＣｐＧジヌクレオチドのＣとＧとの間のホスホジエステル結合は免疫刺激能力を高める。
【０１９５】
３人のそれぞれのドナーのヒトＰＢＭＣを、示したＯＤＮ濃度で４８時間インキュベートした。上清を回収し、ＩＬ−１０を上記のようにＥＬＩＳＡによって測定した。５’−ＴＣＧを有するＯＤＮ中のＣｐＧジヌクレオチドの間へのホスホジエステル結合の導入（配列番号２５）により、修飾されていない５’−ＴＣＧを有しているＯＤＮ（配列番号２）と比較して、ＩＬ−１０の分泌はより低いＯＤＮ濃度へとシフトするように導かれた。データを図１５に示す。同様の結果が、ＩＦＮ−αの分泌についても得られた。
【０１９６】
（実施例１６）
５’−ＣＧの前でのＴの修飾が可能である。
【０１９７】
３人のそれぞれのドナーのヒトＰＢＭＣを、示したＯＤＮ濃度で４８時間インキュベートした。上清を回収し、ＩＬ−１０を上記のようにＥＬＩＳＡによって測定した。図１６に示す結果は以下のことを表している：
１．５’−ＵＣＧを有するＯＤＮ（配列番号５４）は、５’−ＴＣＧを有するＯＤＮ（配列番号２）と同様の強いサイトカインの分泌を誘導した。いずれのＯＤＮも、純粋なポリＴ  ＯＤＮ（配列番号８）よりも優れていた。この結果は、ＣｐＧの５’側にある種々の化学的に修飾されたヌクレオチドが、免疫刺激の増大を誘導できることを示唆している。
【０１９８】
２．５’−ＴＣＵを有するＯＤＮ（配列番号５５）または５’−ＴＵＧを有するＯＤＮ（配列番号５６）もまた、ポリＴ  ＯＤＮ（配列番号８）と比較した場合にサイトカインの分泌の増加を示した。それにもかかわらず、５’−ＴＣＧはこれらの２つの修飾よりも優れており、５’−ＴＣＵは５’−ＴＵＧよりも効果的にＩＬ−１０の分泌を誘導した。これらの結果は、ＣｐＧジヌクレオチドでの種々の化学的修飾により、免疫刺激の増大を誘導できることを示唆している。
【０１９９】
上記の明細書は、当業者が本発明を実施できるために十分であると考えられる。本明細書中に示し、記載したものに加えて、本発明に対する種々の変更が、上記から当業者に明らかであるが、これらは添付の特許請求の範囲に含まれる。本発明の利点および目的は、本発明のそれぞれの実施形態に必ずしも含まれるとは限らない。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
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【図７Ｃ】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３Ａ】
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【図１３Ｂ】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【配列表】
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