(57)【要約】【課題】有機溶媒の使用量を低減しながら非重合体カテキン類の回収率を向上させた精製茶抽出物の製造方法を提供すること。【解決手段】茶抽出物を、微細且つ／均一な粒子径を有する合成吸着剤に接触させて茶抽出物中に含まれる非重合体カテキン類を合成吸着剤に吸着させる吸着工程と、  合成吸着剤に有機溶媒水溶液を接触させて非重合体カテキン類を溶出させる溶出工程とを含む、精製茶抽出物の製造方法。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
茶抽出物を、微細且つ／又は均一な粒子径を有する合成吸着剤に接触させて茶抽出物中に含まれる非重合体カテキン類を合成吸着剤に吸着させる吸着工程と、
合成吸着剤に有機溶媒水溶液を接触させて非重合体カテキン類を溶出させる溶出工程と
を含む、精製茶抽出物の製造方法。
【請求項２】
合成吸着剤として、平均粒子径（ｄ50）が１００〜５００μｍであるものを用いる、請求項１記載の製造方法。
【請求項３】
合成吸着剤として、最大粒子径と最小粒子径との差（Δｄ）が３０〜６００μｍであるものを用いる、請求項１又は２記載の製造方法。
【請求項４】
合成吸着剤として、平均粒子径（ｄ50）と、最大粒子径と最小粒子径の差（Δｄ）との比（ｄ50／Δｄ）が０．６５以上であるものを用いる、請求項１〜３のいずれか１項に記載の製造方法。
【請求項５】
茶抽出物中の非重合体カテキン類の全質量と、合成吸着剤の全容量との比が２０〜６０（ｇ／Ｌ）となる量の合成吸着剤を使用する、請求項１〜４のいずれか１項に記載の製造方法。
【請求項６】
有機溶媒水溶液として、エタノール水溶液を用いる、請求項１〜５のいずれか１項に記載の製造方法。
【請求項７】
エタノール水溶液として、エタノール濃度が１０〜７０質量％であるものを用いる、請求項６記載の製造方法。
【請求項８】
有機溶媒水溶液を、非重合体カテキン類の全質量に対して０．０１〜０．３（Ｌ／ｇ）用いる、請求項１〜７のいずれか１項に記載の製造方法。
【請求項９】
吸着工程後且つ溶出工程前において、合成吸着剤の全容量に対して１〜３（Ｌ／Ｌ）の水又は有機溶媒水溶液を通液して合成吸着剤を洗浄する洗浄工程を有する、請求項１〜８のいずれか１項に記載の製造方法。
【請求項１０】
溶出工程後において、溶出液を活性炭と接触させる工程を有する、請求項１〜９のいずれか１項に記載の製造方法。
【請求項１１】
茶抽出物として、加水分解処理したものを用いる、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の製造方法。
【請求項１２】
請求項１〜１１のいずれか１項に記載の製造方法により得られた精製茶抽出物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、精製茶抽出物の製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
カテキンを含む飲料の製造方法として、緑茶抽出物の濃縮物等の茶抽出物を利用し、カテキンを飲料に溶解状態で添加する方法が用いられている。しかしながら、例えば、紅茶飲料や炭酸飲料など飲料の種類によっては、カテキンを高濃度に配合するとカフェイン及び緑茶由来の苦渋味が強くなり、飲料の商品価値を大きく損ねることがある。
【０００３】
このような問題を解決すべく、茶抽出物からカフェイン等の夾雑物を取り除く方法として、吸着法（特許文献１〜７）、抽出法（特許文献８、９）等が提案されている。これらの方法においては、有機溶媒を大量に使用して夾雑物を除去しつつ茶抽出物中のカテキンを回収するが、カテキンの回収率が必ずしも十分ではなかった。
【０００４】
一方、ポリフェノールの１種であるイソフラボンの分離精製方法として、合成吸着剤を用いて大豆抽出物からイソフラボンを分離する方法（特許文献１０）、スチレン・ジビニルベンゼン重合体を基本骨格に有し、かつ所定の粒子分布を有する均一粒径の陰イオン交換樹脂を用いて、蛋白質含有量を調整した大豆抽出液からイソフラボンを分離する方法（特許文献１１）等が提案されている。しかしながら、特許文献１１には、特許文献１０に記載の合成吸着剤を使用する方法はイソフラボンを高濃度で得られるものの、不快味成分をイソフラボンと分離することが困難であるため、却って苦味及び不快味を増大させてしまうと記載されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開平５−１５３９１０号公報
【特許文献２】特開平８―１０９１７８号公報
【特許文献３】特開２００２−３３５９１１号公報
【特許文献４】特開２００６−３６６４５号公報
【特許文献５】特開平１−１７５９７８号公報
【特許文献６】特開２００１−９７９６８号公報
【特許文献７】特開２００６−１６０６５６号公報
【特許文献８】特開平１−２８９４４７号公報
【特許文献９】特開昭５９−２１９３８４号公報
【特許文献１０】特開昭６２−１２６１８６号公報
【特許文献１１】特開２００２−８０４７４号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明はこのような実情に鑑みてなされたものであり、その課題は有機溶媒の使用量を低減しながら非重合体カテキン類の回収率を向上させた精製茶抽出物の製造方法及び該製造方法により得られた精製茶抽出物を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
そこで、本発明者らは、茶抽出物を合成吸着剤に吸着させた後に有機溶媒水溶液にて非重合体カテキン類を溶出させる精製茶抽出物の製造方法において、合成吸着剤として特定性状を有するものを用いることで、有機溶媒の使用量を低減しながら非重合体カテキン類を高収率に回収できることを見出した。
【０００８】
すなわち、本発明は、茶抽出物を、微細且つ／又は均一な粒子径を有する合成吸着剤に接触させて茶抽出物中に含まれる非重合体カテキン類を合成吸着剤に吸着させる吸着工程と、
合成吸着剤に有機溶媒水溶液を接触させて非重合体カテキン類を溶出させる溶出工程とを含む、精製茶抽出物の製造方法を提供するものである。
本発明はまた、上記製造方法により得られた精製茶抽出物を提供するものである。
【発明の効果】
【０００９】
本発明によれば、有機溶媒の使用量を低減したにも拘らず、精製前後における非重合体カテキン類の組成変化が殆どなく非重合体カテキン類を高収率かつ効率よく回収することが可能であり、しかも、イオン交換樹脂による吸着や有機溶媒による抽出などの従来不可欠であった精製手段を要することなく、非重合体カテキン類中の組成変化を抑制しつつ没食子酸、カフェイン等の夾雑物を低減して呈味の良好な茶抽出物の精製物を効率良く製造することができる。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
先ず、本明細書で使用する用語について説明する。
本明細書において「（Ａ）非重合体カテキン類」とは、カテキン、ガロカテキン、カテキンガレート及びガロカテキンガレート等の非エピ体カテキン類、並びにエピカテキン、エピガロカテキン、エピカテキンガレート及びエピガロカテキンガレート等のエピ体カテキン類を併せての総称である。非重合体カテキン類濃度は、上記８種の合計量に基づいて定義される。
【００１１】
本明細書において「（Ｂ）非重合体カテキン類のガレート体」とは、カテキンガレート、ガロカテキンガレート、エピカテキンガレート、エピガロカテキンガレート等を併せての総称である。非重合体カテキン類中のガレート体率は、非重合体カテキン類の総量に対する上記ガレート体の質量比率である。
本明細書において「（Ｃ）非重合体カテキン類のガロ体」とは、エピガロカテキンガレート、ガロカテキンガレート、エピガロカテキン、ガロカテキン等を併せての総称である。非重合体カテキン類中のガロ体率は、非重合体カテキン類の総量に対する上記ガロ体の質量比率である。
【００１２】
本明細書において「微細な粒子径」とは、平均粒子径が５００μｍ以下、好ましくは５００μｍ未満であることをいう。ここで、本明細書において「平均粒子径」とは、ミー（Ｍｉｅ）散乱理論に基づくレーザー回折・散乱法により測定したものであり、具体的には、レーザー回折・散乱法粒度分布測定装置により合成吸着剤の粒度分布を個数基準で作成して得られたメディアン径（ｄ50）を平均粒子径としたものである。また、「均一な粒子径」とは、最大粒子径（ｄmax）と最小粒子径（ｄmin）との差（Δｄ）が８００μｍ未満であることをいう。ここで、本明細書において「最大粒子径」及び「最小粒子径」とは、上記装置で測定された各粒子径の頻度（％）のうち、頻度（％）が０．１％となる粒子径の最小値を最大粒子径（ｄmax）とし、頻度（％）が０．１％となる粒子径の最大値を最小粒子径（ｄmin）と定義する。また、最大粒子径と最小粒子径との差「ｄmax−ｄmin」を「Δｄ」と定義する。
【００１３】
次に、本発明の精製茶抽出物の製造方法について説明する。
本発明の精製茶抽出物の製造方法は、上記のとおり、吸着工程と、溶出工程を含むものである。以下、各製造工程について詳細に説明する。
（吸着工程）
本発明に係る吸着工程は、茶抽出物を、微細且つ／又は均一な粒子径を有する合成吸着剤に接触させて茶抽出物中に含まれる非重合体カテキン類を合成吸着剤に吸着させる工程である。
【００１４】
本発明で用いる茶抽出物としては、例えば、茶葉から得られた抽出物が例示される。その他のカフェイン含有植物由来、例えばコーヒー等のカフェイン含有抽出物と茶抽出液との混合物等も用いることができる。使用する茶葉としては、より具体的には、Camellia属、例えばC.sinensis、C.assamica、やぶきた種又はそれらの雑種等から得られる茶葉から製茶された茶葉が例示される。製茶された茶葉には、煎茶、番茶、玉露、てん茶、釜炒り茶等の緑茶類、烏龍茶に代表される半発酵茶、紅茶に代表される発酵茶がある。また、超臨界状態の二酸化炭素接触処理を施した茶葉を用いてもよい。本発明で用いる茶抽出物としては、非重合体カテキン類の含有量の点から緑茶抽出物が好ましい。
茶を抽出する方法としては、攪拌抽出、ドリップ抽出等の従来の方法を採用することができる。また、抽出時の水にあらかじめアスコルビン酸又はそのナトリウム塩等の有機酸又はその塩を添加してもよい。さらに、煮沸脱気や窒素ガス等の不活性ガスを通気して溶存酸素を除去しつつ、いわゆる非酸化的雰囲気下で抽出する方法を併用してもよい。このようにして得られた茶抽出液は、そのままでも、乾燥、濃縮しても本発明に使用できる。茶抽出物の形態としては、例えば、液体、スラリー、半固体、固体が例示される。
【００１５】
また、茶抽出物として、茶葉から抽出した茶抽出物を使用する代わりに、茶抽出物の濃縮物を水又は有機溶媒に溶解又は希釈して用いても、茶抽出物と茶抽出物の濃縮物とを併用してもよい。ここで、茶抽出物の濃縮物とは、茶葉から熱水又は有機溶媒水溶液により抽出された抽出物を濃縮したものをいい、例えば、特開昭５９−２１９３８４号公報、特開平４−２０５８９号公報、特開平５−２６０９０７号公報、特開平５−３０６２７９号公報等に記載の方法により調製することができる。また、茶抽出物の濃縮物として市販品を使用してもよく、例えば、三井農林（株）「ポリフェノン」、伊藤園（株）「テアフラン」、太陽化学（株）「サンフェノン」等が例示される。
【００１６】
また、本発明においては、茶抽出物として加水分解処理したものを使用してもよい。これにより、非重合体カテキン類中のガレート体率を低下させることが可能になる。その結果、苦味及び渋味が十分に低減された、より一層風味の良好な茶抽出物を得ることができる。
加水分解処理には、タンナーゼ活性を有する酵素を用いることが好ましい。タンナーゼ活性を有する酵素としては、例えば、アスペルギルス属、ペニシリウム属、リゾプス属のタンナーゼ生産菌を培養して得られるタンナーゼが例示される。中でも、アスペルギルス  オリゼー由来のものが好ましい。タンナーゼ処理においては、茶抽出物中の非重合体カテキン類の全質量に対して、タンナーゼを１〜３００Ｕｎｉｔ／ｇ、更に３〜２００Ｕｎｉｔ／ｇ、特に５〜１５０Ｕｎｉｔ／ｇになるように添加することが好ましい。ここで、「１Ｕｎｉｔ」とは、３０℃の水中においてタンニン酸に含まれるエステル結合を１マイクロモル加水分解する酵素量を示す。タンナーゼ処理の温度は、酵素活性が得られる１５〜４０℃が好ましく、特に２０〜３０℃が好ましい。タンナーゼ処理時のｐＨ（２５℃）は、酵素活性が得られる４〜６が好ましく、更に４．３〜５．８、特に４．５〜５．５が好ましい。
【００１７】
タンナーゼ処理においては、タンナーゼ活性を有する酵素を添加後、非重合体カテキン類中のガレート体率が１〜６０質量％に達するまで、茶抽出物を２０〜５０℃、特に２５〜４０℃に保持することが好ましい。この場合、非重合体カテキン類中のガレート体率は、３〜５５質量％、特に５〜５０質量％に調整することが好ましい。タンナーゼ処理によるガレート体率の制御は、処理時の茶抽出物のｐＨ挙動によって反応の終点を決定することが好ましく、そのｐＨ（２５℃）は３〜６、特に３．５〜５．５が好ましい。
その後、できるだけ速やかに４５〜９８℃、好ましくは７５〜９５℃まで昇温し、タンナーゼを失活させ反応を停止させる。これにより、その後のガレート体率の低下を防止できるため、所望のガレート体率を有する茶抽出物を簡便に得ることができる。
【００１８】
本発明に使用する合成吸着剤は、微細な粒子径且つ／又は均一な粒子径を有するものであるが、イオン交換能が１ｍｅｑ／ｇ未満であり、かつ不溶性の三次元架橋構造を有するポリマーからなるものが好ましい。
本発明に使用する合成吸着剤の粒子形状は、球形、不均一形状等のいずれの形状であってもよいが、良好な分離条件を満たすために球形であることが好ましい。
【００１９】
本発明に使用する合成吸着剤としては、下記の特定性状を有するものが好適である。
平均粒子径（ｄ50）は、１００〜５００μｍ、更に１２０〜４８０μｍ、殊更に２５０〜４５０μｍ、特に３００〜４３０μｍであることが好ましい。
また、本発明に使用する合成吸着剤は粒度分布が狭いもの、特に正規分布に近いものが好ましい。具体的には、最大粒子径（ｄmax）と最小粒子径（ｄmin）との差（Δｄ）が３０〜６００μｍ、更に４０〜５００μｍ、殊更に５０〜４５０μｍ、特に６０〜４００μｍであることが好ましい。また、平均粒子径（ｄ50）と、最大粒子径と最小粒子径との差（Δｄ）との比（ｄ50／Δｄ）が０．６５以上、更に０．８０以上、殊更に１．０以上、特に１.２５以上であることが好ましい。なお、ｄ50／Δｄの上限は、製造コストの点から、３０、更に１５、殊更に１０、特に５であることが好ましい。
このような性状を有する合成吸着剤を使用することで、非重合体カテキン類の回収率を格段に向上させることが可能になるだけなく、非重合体カテキン類中の組成変化を抑制しながら没食子酸、カフェイン等の夾雑物を効率的に除去することができる。
【００２０】
このような合成吸着剤は公知の方法により製造してもよいが、例えば、市販の合成吸着剤を篩にかけて所望の平均粒子径及び粒度分布を有する合成吸着剤を採取してもよい。
市販の合成吸着剤としては、例えば、アンバーライトＸＡＤ４、ＸＡＤ１６ＨＰ、ＸＡＤ１１８０、ＸＡＤ２０００（供給元：米国ローム＆ハース社）、ダイヤイオンＨＰ２０、ＨＰ２１（三菱化学社製）、セパビーズＳＰ−８５０、ＳＰ−８２５、ＳＰ−７００、ＳＰ−７０（三菱化学社製）、ＶＰＯＣ１０６２（Ｂａｙｅｒ社製）等のスチレン系；セパビーズＳＰ２０５、ＳＰ２０６、ＳＰ２０７（三菱化学社製）等の芳香環に臭素原子を導入して吸着能を高めた置換スチレン系；ダイヤイオンＨＰ１ＭＧ、ＨＰ２ＭＧ（三菱化学社製）等のメタクリル系；アンバーライトＸＡＤ７６１（ロームアンドハース社製）等のフェノール系；アンバーライトＸＡＤ７ＨＰ（ロームアンドハース社製）等のアクリル系；ＴＯＹＯＰＥＡＲＬ、ＨＷ-４０Ｃ（東ソー社製）等のポリビニル系；ＳＥＰＨＡＤＥＸ、ＬＨ−２０（ファルマシア社製）等のデキストラン系が例示される。
中でも、合成吸着剤としては、その母体が、スチレン系、メタクリル系、アクリル系、ポリビニル系であるものが好ましく、特にスチレン系であるものが非重合体カテキン類と夾雑物との分離性の点から好ましい。
【００２１】
合成吸着剤の使用量としては、茶抽出物中の非重合体カテキン類の全質量と、合成吸着剤の全容量との比が２０〜６０ｇ／Ｌ、更に２５〜５５ｇ／Ｌ、特に３０〜５０ｇ／Ｌとなる量を選択することが、夾雑物の除去効率、非重合体カテキン類の回収率の向上の観点から好ましい。
【００２２】
吸着工程においては、茶抽出物又はその水溶液に合成吸着剤を添加し撹拌して吸着させた後、ろ過操作により合成吸着剤を回収するバッチ方法、あるいは合成吸着剤を充填したカラムを用いて連続的に吸着処理を行なうカラム方法を採用することができるが、生産性の点からカラムによる連続処理方法が好ましい。
【００２３】
なお、吸着工程前においては、合成吸着剤中の不純物の除去、非重合体カテキン類の吸着能の向上の観点から、合成吸着剤を洗浄することが好ましい。洗浄方法としては、例えば、通液速度がＳＶ（空間速度）＝０．５〜１０［ｈ-1］であり、かつ通液倍数が合成吸着剤の全容量に対して２〜１０［Ｌ／Ｌ］である有機溶媒水溶液を合成吸着剤が充填されたカラムに通液して合成吸着剤中の不純物を除去した後、通液速度がＳＶ＝０．５〜１０［ｈ-1］であり、かつ通液倍数が合成吸着剤の全容量に対して２〜１０［Ｌ／Ｌ］である水をカラムに通液してカラム内のエタノールを水に置換する方法が例示される。使用する有機溶媒としては、例えば、アセトン等のケトン、メタノール、エタノール等のアルコールが例示される。中でも、食品への使用の観点から、アルコール、特にエタノールが好ましい。有機溶媒水溶液中の有機溶媒の濃度は８５質量％以上、特に９０質量％以上が好ましい。なお、有機溶媒の濃度の上限は、９９質量％、特に９８質量％であることが好ましい。
【００２４】
また、茶抽出物を、合成吸着剤を充填したカラムに通液する条件としては、通液速度がＳＶ＝０．５〜１０[ｈ-1]であり、かつ通液倍数が合成吸着剤の全容量に対して０．５〜２０[Ｌ／Ｌ]であることが好ましい。このような通液速度及び通液量であると、茶抽出物中の非重合体カテキン類を合成吸着剤に十分吸着させることができる。
【００２５】
茶抽出物を吸着後、合成吸着剤を水又は有機溶媒水溶液で洗浄してもよい。合成吸着剤の洗浄に使用する水としては、例えば、水道水、精製水、イオン交換水が例示され、有機溶媒と混合して使用することもできる。有機溶媒としては、上記と同様にケトン、アルコールが例示されるが、中でも、アルコール、特にエタノールが好ましい。有機溶媒の濃度は、５質量％未満、更に２質量％未満、特に１質量％未満であることが、非重合体カテキン類の回収率の点から好ましい。
【００２６】
この洗浄工程においては、通液速度をＳＶ＝０．５〜１０[ｈ-1]とし、また通液倍数を合成吸着剤の全容量に対して１〜３[Ｌ／Ｌ]、更に１．１〜２．５[Ｌ／Ｌ]、特に１．２〜２[Ｌ／Ｌ]として通液することが好ましい。これにより、合成吸着剤に付着した夾雑物を効率よく除去しながら非重合体カテキン類の回収率を向上させることができる。
【００２７】
（溶出工程）
次に、溶出工程を行う。溶出工程は、合成吸着剤に吸着された非重合体カテキン類を有機溶媒水溶液で溶出させる工程である。
溶出工程に使用する有機溶媒水溶液としては、水溶性有機溶媒と水との混合系が用いられる。水溶性有機溶媒としては、上記と同様にケトン、アルコールが例示される。中でも、飲食品への使用の観点から、アルコール、特にエタノールが好ましい。有機溶媒水溶液中の水溶性有機溶媒の濃度は、通常１０〜７０質量％であるが、１５〜５０質量％、更に２０〜４０質量％、特に２５〜３５質量％であることが好ましい。これにより、非合体カテキン類の回収率を格段に向上させるとともに、呈味をより一層改善することができる。
【００２８】
有機溶媒水溶液の通液条件は、通液速度がＳＶ＝０．５〜１０[ｈ-1]であり、かつ通液倍数が合成吸着剤の全容量に対して０．７〜４[Ｌ／Ｌ]であることが好ましく、更に通液速度がＳＶ＝１〜８[ｈ-1]であり、かつ通液倍数が０．８〜３．５[Ｌ／Ｌ]であることが好ましい。これにより、より少ない有機溶媒の使用量で、非重合体カテキン類を高収率で回収するとともに、精製前後における非重合体カテキン類の組成変化を抑制することができる。
また、非重合体カテキン類の全質量に対する有機溶媒水溶液の使用量は、０．０１〜０．３０（Ｌ／ｇ）が好ましく、更に０．０１〜０．２５（Ｌ／ｇ）、特に０．０３〜０．２０（Ｌ／ｇ）が好ましい。これにより、製造負荷を軽減し、かつ風味の良好な高品質の精製茶抽出物を得ることができる。
さらに、平均粒子径（ｄ50）が４３０μｍ以下の合成吸着剤を使用する場合には、所定の濃度に調整されたエタノール水溶液を使用し、下記の条件で溶出することが好ましい。これにより、非重合体カテキン類の回収率がより一層高められるとともに、酸味、苦味の抑制された風味の良好な精製茶抽出物を得ることができる。
（ｉ）エタノール濃度が２２．５質量％以上２７．５質量％未満である場合、非重合体カテキン類の全質量に対する有機溶媒水溶液の使用量を好ましくは０．０２〜０．２０（Ｌ／ｇ）、更に好ましくは０．０５〜０．１５（Ｌ／ｇ）とする。
（ii）エタノール濃度が２７．５〜５０．０質量％、好ましくは２７．５〜３２．５質量％の場合、非重合体カテキン類の全質量に対する有機溶媒水溶液の使用量を好ましくは０．０１〜０．０９５（Ｌ／ｇ）、更に好ましくは０．０３〜０．０８８（Ｌ／ｇ）とする。
【００２９】
溶出工程により得られた溶出液は、濃縮又はこれに加水することにより沈殿物を析出させた後、固液分離して沈殿物を除去してもよい。これにより、精製茶抽出物の呈味及び安定性をより一層向上させることができる。濃縮又は加水後の溶出液中の有機溶媒濃度は、呈味及び析出した夾雑物の分離性の点から、０．０１〜４０質量％、更に０．１〜３０質量％、特に０．２〜２０質量％であることが好ましい。
また、濁り成分を析出させる熟成時間は特に限定されないが、例えば、２分〜５０時間、更に２分〜２４時間、特に５分〜６時間であることが好ましい。また、濁り成分の析出温度は、沈殿物の溶解度低下、及び濁り成分析出後の濁り成分の分離性の点から、−５〜４０℃、更に５〜２５℃であることが好ましい。
【００３０】
固液分離の操作としては食品工業で通常使用されている方法を適用できるが、例えば、ろ過、遠心分離処理等が例示され、これらは組み合わせて行うことができる。溶出液を固液分離して得られる水溶性部分である精製茶抽出物水溶液の濁度は、０．１〜１００ＮＴＵ、更に０．５〜７０ＮＴＵ、特に１〜５０ＮＴＵであると、飲料の呈味及び安定性の点で好ましい。濁度は、２１００Ｐ型（ハック社製）にて測定し、ここで得られた値[単位：ＮＴＵ]を以って、分離清澄性の指標とすることができる。
【００３１】
固液分離を膜ろ過で行う場合の膜ろ過条件としては、例えば、温度が５〜７０℃、更に１０〜４０℃であることが好ましい。膜孔径は、濁度調整のしやすさ、ろ過に要する時間及び濁り成分の分離性の点から、０．１〜１０μｍ、更に０．１〜５μｍ、特に０．１〜２μｍであることが好ましい。膜孔径の測定方法としては、水銀圧入法、バブルポイント試験、細菌ろ過法等を用いた一般的な測定方法が例示されるが、バブルポイント試験で求めた値を用いることが好ましい。膜ろ過で使用する膜の材質としては、高分子膜、セラミック膜、ステンレス膜等が例示される。
また、遠心分離機は、分離板型、円筒型、デカンター型等の一般的な機器が好ましい。遠心分離条件としては、温度が５〜７０℃、更に１０〜４０℃であることが好ましい。回転数と時間は所定の濁度に調整できれば特に限定されないが、例えば、分離板型の場合、３０００〜１００００ｒ／ｍｉｎ、更に５０００〜１００００ｒ／ｍｉｎ、特に６０００〜１００００ｒ／ｍｉｎで、０．２〜３０分、更に０．２〜２０分、特に０．２〜１５分であることが好ましい。
【００３２】
（活性炭処理工程）
また、本発明においては、溶出工程により得られた溶出液を活性炭と接触させることができる。この活性炭処理工程により、精製茶抽出物の酸味、苦味及び雑味の改善に加えて、エグ味をより一層低減することが可能になる。
本工程で使用する活性炭の原料としては、例えば、ヤシ殻、木質、石炭が挙げられるが、中でも木質のものが好ましい。活性炭の賦活方法としては、例えば、水蒸気賦活法、ガス賦活法、薬品賦活法が挙げられるが、中でも薬品賦活法が好ましい。
また、製品の色調改善、活性炭の使用量低減及び回収率向上の点から、活性炭としては以下のものが好ましい。平均細孔径は０.５〜１０ｎｍ（ナノメーター）、更に１〜９ｎｍ、特に２〜８ｎｍであるものが好ましい。細孔容積は０．０１〜２．５ｍＬ／ｇ、更に０．１〜２．０ｍＬ／ｇ、特に０．５〜１．７ｍＬ／ｇであるものが好ましい。また、比表面積は８００〜２０００ｍ2／ｇ、更に９００〜１６００ｍ2／ｇ、特に１０００〜１５００ｍ2／ｇの範囲のものが好ましい。なお、これらの物性値は窒素吸着法に基づく値である。
【００３３】
このような性状を有する活性炭として、例えば、ＺＮ−５０、Ｙ−１０Ｓ、ＧＳ-１、ＧＳ-Ｂ（味の素ファインテクノ製）、クラレコールＧＬＣ、クラレコールＰＫ−Ｄ、クラレコールＰＷ−Ｄ、クラレコールＧＷ、クラレコールＧＡ、クラレコールＧＡ-Ｄ、クラレコールＲＰ−１５（クラレケミカル社製）、白鷺ＡＷ５０、白鷺Ａ、白鷺Ｐ、白鷺ＫＬ、白鷺Ｍ、白鷺Ｃ、カルボラフィン、ＷＨ２Ｃ（日本エンバイロケミカルズ製）、ＧＭ１３０Ａ、ＣＷ１３０Ａ、ＣＷ１３０ＡＲ、ＣＷ３５０ＡＲ、ＧＬ１３０Ａ、ＳＧ、ＳＧＡ、ＳＧＰ（フタムラ化学製）、ヤシコール、ＭＡＳ印、梅蜂印、梅蜂Ｆ印（太平化学産業製）、ＣＰＧ、ＣＡＬ、Ｓ８０Ａ（三菱化学カルゴン製）等の市販品を用いることができる。
【００３４】
活性炭の使用量は、精製効果や、非重合体カテキン類の回収率向上の点、ろ過工程におけるケーク抵抗が小さい点から、溶出液中の非重合体カテキン類１質量部に対して、０．１〜２質量部、更に０．２〜１．５質量部、特に０．３〜１．２質量部であることが好ましい。
【００３５】
溶出液を活性炭と接触させる際には、溶出液を有機溶媒水溶液で希釈して使用することが好ましい。有機溶媒としては、水溶性有機溶媒が好ましく、上記と同様のケトン、アルコールが好適に使用される。中でも、食品への使用の観点から、アルコール、特にエタノールが好ましい。希釈後の溶出液（以下、「溶出希釈液」という）中の有機溶媒濃度は、得られる製品の色調、非重合体カテキン類の回収率、不純物量等の点から、１〜８０質量％、更に２〜７０質量％、殊更に５〜５０質量％、特に７〜４０質量％であることが好ましい。また、溶出希釈液中の非重合体カテキン類の濃度は、精製効果、回収率向上の点から、０．３〜２０質量％、更に０．５〜１５質量％、特に１〜８質量％であることが好ましい。なお、有機溶媒濃度及び非重合体カテキン類濃度は、水や有機溶媒水溶液の添加量、減圧濃縮、膜濃縮、脱溶媒等により調整することができる。
【００３６】
活性炭と接触させる手段としては、例えば、溶出液に活性炭を添加、撹拌し吸着後、ろ過操作により活性炭を回収するバッチ方法、又は活性炭を充填したカラムを用いて連続処理により接触させるカラム方法を採用することができるが、生産性の点からカラムによる連続処理方法が好ましい。また、活性炭との接触は、０〜６０℃、更に１０〜５０℃、特に１５〜４０℃で行うことが好ましい。
【００３７】
活性炭処理後においては、非重合体カテキン類の回収率の点から、使用した活性炭を水又は有機溶媒水溶液で洗浄し、洗浄液を回収してもよい。洗浄に使用する水としては、上記洗浄工程と同様のものが例示される。また、有機溶媒としては、上記と同様の水溶性有機溶媒を使用することができる。有機溶媒の濃度は、夾雑物低減の点から、低濃度であることが好ましく、具体的には１０質量％以下、更に５質量％以下、特に３質量％以下であることが好ましい。
水又は有機溶媒水溶液の使用量としては、活性炭の全質量に対する水又は有機溶媒水溶液の全容量の比が２〜２０［ｍＬ／ｇ］が好ましく、５〜１０［ｍＬ／ｇ］がより好ましい。これにより、非重合体カテキン類の回収率を格段に向上させるとともに、呈味をより一層改善することができる。
【００３８】
そして、活性炭処理後の溶出希釈液は、必要により回収された洗浄液と混合し、減圧蒸留、薄膜蒸留、膜濃縮等の公知の方法により濃縮することができる。濃縮倍率は、有機溶媒水溶液の使用量により適宜選択することが可能であるが、２〜５００倍、更に２〜２５０倍、特に２〜１２５倍であることが好ましい。
【００３９】
このようにして、非重合体カテキン類を、７０質量％を越える収率で、更に７５〜１００質量％、より更に８０〜１００質量％、より更に８３〜１００質量％、より更に８５〜９９質量％、特に８８〜９８質量％という高収率で、精製茶抽出物中に得ることができる。さらに、得られた精製茶抽出物は下記の特性（ｉ）〜（viii）を有することができる。
（ｉ）（Ｂ）非重合体カテキン類中のガレート体率は通常２０〜７０質量％であるが、苦渋味低減の点から、２５〜５０質量％、特に３０〜３５．５質量％であることが好ましい。
（ii）（Ｃ）非重合体カテキン類中のガロ体率は通常６０〜９０質量％であるが、非重合体カテキン類による生理効果の点から、７０〜８８質量％、特に７５〜８５質量％であることが好ましい。
（iii）（Ｄ）カフェインと（Ａ）非重合体カテキン類の含有質量比［（Ｄ）／（Ａ）］は通常０〜０．２５であるが、呈味改善の点から、０．００１〜０．２０、特に０．０１〜０．１８であることが好ましい。
（iv）（Ｅ）没食子酸と（Ａ）非重合体カテキン類の含有質量比［（Ｅ）／（Ａ）］は通常０〜０．１であるが、呈味改善、色調の点から、０．０００１〜０．０５、特に０．０００２〜０．０１であることが好ましい。
（ｖ）精製前後における非重合体カテキン類中のガレート率の変化量（Δガレート体率）は通常−１０〜＋１０質量％であるが、精製茶抽出物の安定供給の点から、−８〜＋５質量％、特に−６〜＋４質量％であることが好ましい。
（vi）精製前後における非重合体カテキン類中のガロ体率の変化量（Δガロ体率）は通常−１０〜＋１０質量％であるが、精製茶抽出物の安定供給の点から、−５〜＋８質量％、特に−２．５〜＋６質量％であることが好ましい。
（vii）カフェイン残存率は通常０〜８０質量％であるが、製造負荷と製品の品質の点から、更に５〜７０質量％、特に１０〜６０質量％が好ましい。
（viii）没食子酸残存率は通常２０質量％以下であるが、製造負荷と製品の品質の点から、更に０．０５〜１５質量％、特に０．０７５〜１０質量％が好ましい。
なお、カフェイン及び没食子酸の残存率は、原料として使用した茶抽出物を基準とするものである。
【００４０】
このように、本発明の製造方法によれば、非重合体カテキン類を高濃度に含有する精製茶抽出物を高収率で回収することが可能になるだけでなく、精製前後における非重合体カテキン類の組成変化を抑制しつつ（Ｄ）カフェイン、（Ｅ）没食子酸等の夾雑物を低減化することができる。
【００４１】
本発明の精製茶抽出物は、酸味、苦味、雑味、エグ味が改善されるだけでなく、着色も抑制されているため幅広い用途展開が可能である。例えば、本発明の精製茶抽出物をそのまま、又は希釈若しくは濃縮して食品又は飲料に配合して使用することができるが、とりわけ容器詰飲料が好ましい。また、精製茶抽出物の製品形態として粉体が望ましい場合は、噴霧乾燥や凍結乾燥等の公知の方法により粉体化することができる。
【００４２】
本発明の容器詰飲料は、茶系飲料又は非茶系飲料とすることができる。非茶系飲料としては、具体的には、甘味料及び／又はフルーツフレーバーを含有した酸性飲料、スポーツ飲料、アイソトニック飲料が挙げられる。スポーツ飲料又はアイソトニック飲料とする場合には、ナトリウムイオン及び／又はカリウムイオンを含有させることが好ましい。
なお、本発明の容器詰飲料には、酸化防止剤、各種エステル類、無機塩類、色素類、乳化剤、保存料、調味料、甘味料、酸味料、ガム、乳化剤、油、ビタミン、アミノ酸、野菜エキス類、花蜜エキス類、苦渋味抑制剤、ｐＨ調整剤、品質安定剤等の添加剤を単独、あるいは併用して配合できる。
本発明の容器詰飲料のｐＨ（２５℃）は、２〜７、好ましくは２〜６．５とするのが呈味及び非重合体カテキン類の安定性の点で好ましい。
【００４３】
また、本発明の容器詰飲料は、例えば、金属缶のように容器に充填後、加熱殺菌できる場合にあっては食品衛生法に定められた殺菌条件で製造される。ＰＥＴボトル、紙容器のようにレトルト殺菌できないものについては、あらかじめ上記と同等の殺菌条件、例えばプレート式熱交換器などで高温短時間殺菌後、一定の温度迄冷却して容器に充填する等の方法が採用される。また無菌下で、充填された容器に別の成分を配合して充填してもよい。
【実施例】
【００４４】
［非重合体カテキン類、カフェイン及び没食子酸の測定］
試料をフィルター（０．４５μｍ）で濾過し、高速液体クロマトグラフ（型式ＳＣＬ−１０ＡＶＰ、島津製作所製）を用い、オクタデシル基導入液体クロマトグラフ用パックドカラム（Ｌ−カラムＴＭ  ＯＤＳ、４．６ｍｍφ×２５０ｍｍ：財団法人  化学物質評価研究機構製）を装着し、カラム温度３５℃でグラジエント法で分析した。移動相Ａ液は酢酸を０．１ｍｏｌ／Ｌ含有する蒸留水溶液、Ｂ液は酢酸を０．１ｍｏｌ／Ｌ含有するアセトニトリル溶液とし、試料注入量は１０μＬ、ＵＶ検出器波長は２８０ｎｍの条件で行った。
【００４５】
［粒子径の測定］
合成吸着剤の粒子径測定には、レーザー回折・散乱法粒度分布測定装置（ＬＳ １３ ３２０、ＢＥＣＫＭＡＮ  ＣＯＵＬＴＥＲ）を用いた。そして、本装置により粒子分布を個数基準で作成し、メディアン径（ｄ50）、最大粒子径（ｄmax）及び最小粒子径（ｄmin）を求めた。
【００４６】
［風味の評価］
各実施例及び参考例で得られた精製緑茶抽出物を非重合体カテキン類含有率が０．１７５質量％となるようにイオン交換水で希釈し、その４０ｍＬを５０ｍＬの耐圧製ガラス容器に入れた。そこにアスコルビン酸ナトリウムを０．１質量％添加し、５質量％重炭酸ナトリウム水溶液でｐＨを６．４に調整し、窒素置換を行い、オートクレーブにて１２１℃で１０分間加熱滅菌した。その後、評価パネラー６名によって酸味、苦味、雑味及びエグ味について下記の基準で評価した。その後、酸味、苦味、雑味及びエグ味について、協議により最終スコアを決定した。
【００４７】
（酸味の評価基準）
評点５：酸味少ない
４：酸味やや少ない
３：酸味やや多い
２：酸味多い
１：酸味かなり多い
【００４８】
（硫酸キニーネ法による苦味の評価）
表１に記載の苦味標準溶液濃度を指標として苦味低減レベルをパネラー６名により官能試験し、評点の平均値を表２の基準に基づいて判定した。なお、表１に示す苦味強度は数値が大きいほど、苦味が強くなることを意味する。
【００４９】
【表１】
2010213682.tif 000002
【００５０】
【表２】
2010213682.tif 000003
【００５１】
（雑味の評価基準）
評点５：雑味少ない
４：雑味やや少ない
３：雑味やや多い
２：雑味多い
１：雑味かなり多い
【００５２】
（エグ味の評価基準）
評点５：エグ味少ない
４：エグ味やや少ない
３：エグ味やや多い
２：エグ味多い
１：エグ味かなり多い
【００５３】
［生産性の評価］
各実施例及び参考例の溶出工程における非重合体カテキン類に対する有機溶媒水溶液の使用量、及び非重合体カテキン類の回収率について、下記の基準で評価を行った。
【００５４】
（非重合体カテキン類に対する有機溶媒水溶液の使用量の評価基準）
評点８：０超０．１１以下      [Ｌ/ｇ]
６：０．１１超０．１６以下[Ｌ/ｇ]
４：０．１６超０．２０以下[Ｌ/ｇ]
２：０．２０超０．３０以下[Ｌ/ｇ]
０：０．３０超１．０以下  [Ｌ/ｇ]
【００５５】
（非重合体カテキン類の回収率の評価基準）
評点７：８８超１００  [％]
５：８０超８８以下[％]
３：７５超８０以下[％]
１：７０超７５以下[％]
０：０超７０以下  [％]
【００５６】
実施例１
緑茶葉（ケニア産、大葉種）３ｋｇに８８℃の熱水４５ｋｇを添加し、６０分間攪拌バッチ抽出した後、１００メッシュ金網で粗ろ過した。次いで、抽出液中の微粉を除去する為に遠心分離操作を行い、「緑茶抽出液（１）」３７．２ｋｇ（ｐＨ５．４）を得た。得られた緑茶抽出液（１）中の非重合体カテキン類濃度は１．０３質量％、緑茶抽出液（１）中のガレート体率は５２．５質量％、カフェイン含有量は０．１８２質量％であった。
次いで、この緑茶抽出液（１）を温度１５℃に保持し、タンナーゼ（キッコーマン社製、タンナーゼＫＴＦＨ、５００Ｕ／ｇ）を緑茶抽出液（１）に対して４３０ｐｐｍとなる濃度で添加し、５５分間保持した。次いで、ガレート体率が３０．５質量％になったところで、９０℃に溶液を加熱して、２分間保持し酵素を失活させ、反応を止めた（ｐＨ４．９）。次いで、７０℃、６．７ｋｐａの条件下で、減圧濃縮によりＢｒｉｘ濃度２０％まで濃縮処理を行い、更に噴霧乾燥して粉末状の「タンナーゼ処理した緑茶抽出物（１）」０．９ｋｇを得た。得られた緑茶抽出物（１）は、非重合体カテキン類濃度が２８．７質量％、非重合体カテキン類中のガレート体率が３２．３質量％、非重合体カテキン類中のガロ体率が７７．３質量％、カフェイン／非重合体カテキン類が０．１８、没食子酸／非重合体カテキン類が０．１２８であった。
次いで、「タンナーゼ処理した緑茶抽出物（１）」２８５ｇを、イオン交換水８５５０ｇに２５℃で３０分間攪拌溶解した（タンナーゼ処理液（１））。
【００５７】
次いで、合成吸着剤ＳＰ−７０（三菱化学（株）製）の袋を開封し、平らな容器に均等に合成吸着剤を分散させた後、２日間自然乾燥した。次いで、４２５μｍの篩下の回収物を１８０μｍの篩にかけ、１８０μｍの篩上の粒子のみを回収した。この回収した合成吸着剤は、平均粒子径（ｄ50）が３３２．７μｍ、最大粒子径と最小粒子径との差（Δｄ）が２１６μｍ、ｄ50／Δｄが１．５４であった。
次いで、採取された合成吸着剤５５ｍＬを、ステンレスカラム（内径２２ｍｍ×高さ１４５ｍｍ、容積５５ｍＬ）に充填した。次いで、通液速度がＳＶ＝１．５（ｈ-1）、通液倍数が合成吸着剤の全容量に対して１０倍体積量の９２質量％エタノール水溶液を通液後、通液速度がＳＶ＝１．５（ｈ-1）、通液倍数が合成吸着剤の全容量に対して１０倍体積量の水を通液して洗浄した。次いで、タンナーゼ処理液（１）２２０ｇ（４倍体積対合成吸着剤）を通液速度ＳＶ＝１．０（ｈ-1）でカラムに通液し透過液を廃棄した。次いで、通液速度がＳＶ＝１．０（ｈ-1）、通液倍数が合成吸着剤の全容量に対して１．５倍体積量の水を通液し洗浄した。
【００５８】
水洗後、通液速度がＳＶ＝１．０（ｈ-1）、通液倍数が合成吸着剤の全容量に対して０．９８倍体積量の５０質量％エタノール水溶液を通液して、溶出液５１．７ｇを回収した。
次いで、溶出液を減圧濃縮してエタノールを除去し、精製緑茶抽出物２３．９ｇを得た。この精製緑茶抽出物は、非重合体カテキン類濃度が８．０質量％、非重合体カテキン類中のガレート体率が３３．６質量％、非重合体カテキン類中のガロ体率が８０．０質量％、カフェイン／非重合体カテキン類が０．１２２、没食子酸／非重合体カテキン類が０．００６０、精製前後における非重合体カテキン類のガレート体率の変化量（Δガレート体率）が＋１．３質量％、精製前後における非重合体カテキン類のガロ体の変化量（Δガロ体率）が＋２．７質量％であった。また、緑茶抽出液（１）からの非重合体カテキン類の回収率は９４．０％、カフェインの残存率は６１．０％、没食子酸の残存率は３．８％であった。
【００５９】
実施例２
原料として、実施例１と同様な方法で得たタンナーゼ処理液（１）を使用した。各成分の分析値は、非重合体カテキン類濃度が２８．８質量％、非重合体カテキン類中のガレート体率は３２．４質量％、非重合体カテキン類中のガロ体率は７７．３質量％、カフェイン／非重合体カテキン類は０．１８、没食子酸／非重合体カテキン類は０．１２８であった。
【００６０】
次いで、合成吸着剤の使用量、溶出工程における通液条件を表３に記載のものに変更したこと以外は、実施例１と同様の操作により精製緑茶抽出物を得た。得られた精製緑茶抽出物は、非重合体カテキン類濃度が８．０質量％、非重合体カテキン類中のガレート体率が３２．２質量％、非重合体カテキン類中のガロ体率が７９．２質量％、カフェイン／非重合体カテキン類が０．１３５、没食子酸／非重合体カテキン類が０．００４０、Δガレート体率が−０．２質量％、Δガロ体率が＋１．９質量％であった。また、緑茶抽出液（１）からの非重合体カテキン類の回収率は９４．０％、カフェインの残存率は６０．３％、没食子酸の残存率は２．５％であった。
【００６１】
実施例３
原料として、実施例１と同様な方法で得た緑茶抽出液（１）とタンナーゼ処理液（１）の混合溶液を使用した。各成分の分析値は、非重合体カテキン類濃度が３２．０質量％、非重合体カテキン類中のガレート体率は３５．７質量％、非重合体カテキン類中のガロ体率は７９．０質量％、カフェイン／非重合体カテキン類は０．１７７、没食子酸／非重合体カテキン類は０．０８６であった。
【００６２】
次いで、合成吸着剤の種類及び使用量、溶出工程における通液条件を表３に記載のものに変更したこと以外は、実施例１と同様の操作により精製緑茶抽出物を得た。得られた精製緑茶抽出物は、非重合体カテキン類濃度が８．０質量％、非重合体カテキン類中のガレート体率が３５．０質量％、非重合体カテキン類中のガロ体率が８０．３質量％、カフェイン／非重合体カテキン類が０．１３３、没食子酸／非重合体カテキン類が０．００１０、Δガレート体率が−０．７質量％、Δガロ体率が＋１．３質量％であった。また、緑茶抽出液（１）からの非重合体カテキン類の回収率は９７．０％、カフェインの残存率は７２．５％、没食子酸の残存率は０．９０％であった。
【００６３】
実施例４
原料として、実施例１と同様な方法で得た緑茶抽出液（１）とタンナーゼ処理液（１）の混合溶液を使用した。各成分の分析値は、実施例３と同様であった。次いで、合成吸着剤の種類及び使用量、溶出工程における通液条件を表３に記載のものに変更したこと以外は、実施例１と同様の操作により精製緑茶抽出物を得た。得られた精製緑茶抽出物は、非重合体カテキン類濃度が８．０質量％、非重合体カテキン類中のガレート体率が３４．０質量％、非重合体カテキン類中のガロ体率が８１．４質量％、カフェイン／非重合体カテキン類が０．１１２、没食子酸／非重合体カテキン類が０．００１１、Δガレート体率が−１．７質量％、Δガロ体率が＋２．４質量％であった。また、緑茶抽出液（１）からの非重合体カテキン類の回収率は９５．０％、カフェインの残存率は６０．０％、没食子酸の残存率は０．８４％であった。
【００６４】
実施例５
原料として、実施例１と同様な方法で得たタンナーゼ処理液（１）を使用した。各成分の分析値は、非重合体カテキン類濃度が３２．０質量％、非重合体カテキン類中のガレート体率が３２．３質量％、非重合体カテキン類中のガロ体率が７７．３質量％、カフェイン／非重合体カテキン類が０．１８１、没食子酸／非重合体カテキン類が０．１２８であった。
【００６５】
次いで、合成吸着剤の種類及び使用量、溶出工程における通液条件を表３に記載のものに変更したこと以外は、実施例１と同様の操作により精製緑茶抽出物を得た。得られた精製緑茶抽出物は、非重合体カテキン類濃度が８．０質量％、非重合体カテキン類中のガレート体率が３１．０質量％、非重合体カテキン類中のガロ体率が７９．６質量％、カフェイン／非重合体カテキン類が０．１３３、没食子酸／非重合体カテキン類が０．００１０、Δガレート体率が−１．３質量％、Δガロ体率が＋２．３質量％であった。また、緑茶抽出液（１）からの非重合体カテキン類の回収率は９３．９％、カフェインの残存率は６４．１％、没食子酸の残存率は０．７０％であった。
【００６６】
実施例６
原料として、実施例１と同様な方法で得たタンナーゼ処理液（１）を使用した。その分析値は実施例５と同様であった。次いで、合成吸着剤の種類及び使用量、溶出工程における通液条件を表３に記載のものに変更したこと以外は、実施例１と同様の操作により精製緑茶抽出物を得た。得られた精製緑茶抽出物は、非重合体カテキン類濃度が８．０質量％、非重合体カテキン類中のガレート体率が３１．９質量％、非重合体カテキン類中のガロ体率が７８．４質量％、カフェイン／非重合体カテキン類が０．１２２、没食子酸／非重合体カテキン類が０．００２４、Δガレート体率が−０．４質量％、Δガロ体率が＋１．１質量％であった。また、緑茶抽出液（１）からの非重合体カテキン類の回収率は９３．９％、カフェインの残存率は６２．０％、没食子酸の残存率は１．６２％であった。
【００６７】
実施例７
原料として、実施例１と同様な方法で得たタンナーゼ処理液（１）を使用した。各成分の分析値は、非重合体カテキン類濃度が２８．８質量％、非重合体カテキン類中のガレート体率は３３．０質量％、非重合体カテキン類中のガロ体率は７７．３質量％、カフェイン／非重合体カテキン類は０．１７９、没食子酸／非重合体カテキン類は０．１２７であった。
【００６８】
次いで、合成吸着剤の種類及び使用量、溶出工程における通液条件を表３に記載のものに変更したこと以外は、実施例１と同様の操作により精製緑茶抽出物を得た。得られた精製緑茶抽出物は、非重合体カテキン類濃度が８．０質量％、非重合体カテキン類中のガレート体率は３５．４質量％、非重合体カテキン類中のガロ体率は７６．３質量％、カフェイン／非重合体カテキン類が０．１２９、没食子酸／非重合体カテキン類は、０．０００１、Δガレート体率は＋２．４質量％、Δガロ体率は−１．０質量％であった。また、緑茶抽出液（１）からの非重合体カテキン類の回収率は９４．０％、カフェインの残存率は６２．０％、没食子酸の残存率は０．０９％であった。
【００６９】
【表３】
2010213682.tif 000004
【００７０】
参考例１
原料として、実施例１と同様な方法で得た緑茶抽出液（１）とタンナーゼ処理液（１）の混合溶液を使用した。各成分の分析値は、非重合体カテキン類濃度が３２．４質量％、非重合体カテキン類中のガレート体率が３５．４質量％、非重合体カテキン類中のガロ体率が７７．５質量％、カフェイン／非重合体カテキン類が０．１７６、没食子酸／非重合体カテキン類が０．１０７であった。
【００７１】
次いで、粒度調整を行っていない合成吸着剤を使用し、その使用量、溶出工程における通液条件を表４に記載のものに変更したこと以外は、実施例１と同様の操作により精製緑茶抽出物を得た。得られた精製緑茶抽出物は、非重合体カテキン類濃度が８．０質量％、非重合体カテキン類中のガレート体率が３７．２質量％、非重合体カテキン類中のガロ体率が７６．９質量％、カフェイン／非重合体カテキン類が０．１２３、没食子酸／非重合体カテキン類が０．００２、Δガレート体率が＋１．８質量％、Δガロ体率が−０．６質量％であった。また、緑茶抽出液（１）からの非重合体カテキン類の回収率は８７．８％、カフェインの残存率は６１．７％、没食子酸の残存率は１．３％であった。
【００７２】
参考例２
原料として、実施例１と同様な方法で得た緑茶抽出液（１）とタンナーゼ処理液（１）の混合溶液を使用した。各成分の分析値は、非重合体カテキン類濃度が３１．３質量％、非重合体カテキン類中のガレート体率は３１．３質量％、非重合体カテキン類中のガロ体率は７８．３質量％、カフェイン／非重合体カテキン類は０．１７４、没食子酸／非重合体カテキン類は０．１２５であった。
【００７３】
次いで、粒度調整を行っていない合成吸着剤を使用し、その使用量、溶出工程における通液条件を表４に記載のものに変更したこと以外は、実施例１と同様の操作により精製緑茶抽出物を得た。得られた精製緑茶抽出物は、非重合体カテキン類濃度が８．０質量％、非重合体カテキン類中のガレート体率が３５．８質量％、非重合体カテキン類中のガロ体率が７４．９質量％、カフェイン／非重合体カテキン類が０．１４０、没食子酸／非重合体カテキン類が０．００１、Δガレート体率が＋４．５質量％、Δガロ体率が−３．４質量％であった。また、緑茶抽出液（１）からの非重合体カテキン類の回収率は６８．３％、カフェインの残存率は５７．４％、没食子酸の残存率は０．６９％であった。
【００７４】
参考例３
蒸し製法により製造された緑茶１，２００ｇを、９５℃のイオン交換水２４，０００ｇで１０分間抽出し冷却した。搾汁後、金網によりろ過し、ｐＨ５．５７の緑茶抽出液（２）１８，８１０ｇを得た。緑茶抽出液（２）中の非重合体カテキン類の濃度は７１２ｍｇ／１００ｍＬであり、１３３．９ｇの非重合体カテキン類が含まれ、非重合体カテキン類中のガレート体率７０．２質量％、非重合体カテキン類中のガロ体率７０．０質量％であった。又、カフェイン濃度は８８．３ｍｇ／１００ｍＬであり、１６．６ｇのカフェインが含まれ、カフェイン／非重合体カテキン類比は０．１２４であった。没食子酸濃度は、０．４７ｍｇ／１００ｍＬであり、０．８９ｇの没食子酸が含まれていた。
【００７５】
次いで、得られた緑茶抽出液（２）の全量をステンレス容器に投入し、２１℃、１５０ｒｐｍの攪拌条件下で、イオン交換水１６ｇ中にタンナーゼ（キッコーマン社製、タンナーゼＫＴＦＨ、Industrial Grade、５００Ｕ／ｇ以上）４．０ｇ（非重合体カテキン類に対して３．０質量％）を溶解した液を添加した。４０分後にｐＨが４．９８に低下した時点で酵素反応を終了した。次いで、９５℃の温浴に浸漬したＳＵＳ製ホールディングチューブに１．２Ｌ／ｍｉｎで通液し、回収液を９０℃、１０分間保持して酵素活性を完全に失活させた。次いで、２５℃まで冷却し遠心分離を行い、「タンナーゼ処理した緑茶抽出物」２２，１６０ｇを得た（タンナーゼ処理液（２））。得られた緑茶抽出物は非重合体カテキン類濃度が３３．９質量％、非重合体カテキン類中のガレート体率は６０．６質量％、非重合体カテキン類中のガロ体率は７１．２質量％、カフェイン／非重合体カテキン類は０．１２６、没食子酸／非重合体カテキン類は０．０６３７であった。
【００７６】
次いで、ステンレスカラム（内径７２．３ｍｍ×高さ１，６００ｍｍ、容積５，７４５ｍＬ）に、粒度調整を行っていない合成吸着剤セパビーズＳＰ−２０７（三菱化学（株）製）５，１９２ｍＬを充填し、ＳＶ＝６．９（ｈ-1）で９２質量％エタノール水溶液２５，９６０ｍＬによる洗浄を行い、次いでＳＶ＝６．９（ｈ-1)で２５，９６０ｍＬの水で洗浄した。その後、得られたタンナーゼ処理液（２）の全量（４．３倍体積対合成吸着剤）をＳＶ＝４．６（ｈ-1）で通液し通過液は廃棄した。通過液には、非重合体カテキン類０．７ｇ、没食子酸４．８ｇが含まれており、殆どの非重合体カテキン類は合成吸着剤に吸着されていた。
次いでＳＶ＝６．９（ｈ-1)で２０，７６０ｍＬ（４倍体積対合成吸着剤）の水で洗浄した。洗浄液には、非重合体カテキン類０．７ｇ、没食子酸３．１ｇが含まれており、非重合体カテキン類の溶出は殆どなかった。
水洗後、９２質量％エタノール水溶液をＳＶ＝４．６（ｈ-1）で２５，９６０ｍＬ通液した（５倍体積対合成吸着剤）。カラム内の残留水３，０００ｍＬを端切り後、溶出液２２，１５８ｇを回収し、減圧濃縮してエタノールを除去し、精製緑茶抽出物を得た。得られた精製緑茶抽出物は、非重合体カテキン類濃度が８．０質量％、非重合体カテキン類中のガレート体率は５７．３質量％、非重合体カテキン類中のガロ体率は７２．５質量％、カフェイン／非重合体カテキン類が０．１０２、没食子酸／非重合体カテキン類は０．００１２、Δガレート体率は−３．３質量％、Δガロ体率は＋１．３質量％であった。また、緑茶抽出液（２）からの非重合体カテキン類の回収率は８６．０％、カフェインの残存率は７３．２％、没食子酸の残存率は１．７％であった。
【００７７】
【表４】
2010213682.tif 000005
【００７８】
表３及び４から明らかなように、茶抽出物を、特定性状を有する合成吸着剤に吸着させた後、有機溶媒水溶液で溶出することにより、有機溶媒の使用量を低減しながら非重合体カテキン類を高収率かつ効率よく回収することが可能であり、しかも従来公知の精製手段を要することなく、精製前後における非重合体カテキン類の組成変化を抑制しつつ没食子酸、カフェイン等の夾雑物を低減して呈味の良好な精製茶抽出物が得られることが確認された。
【００７９】
実施例８
原料として、実施例１と同様な方法で得たタンナーゼ処理液（１）を使用した。各成分の分析値は、実施例２と同様であった。次いで、合成吸着剤の種類及び使用量、溶出工程における通液条件を表５に記載のものに変更したこと以外は、実施例１と同様の操作により精製緑茶抽出物を得た。得られた精製緑茶抽出物は、非重合体カテキン類濃度が８．０質量％、非重合体カテキン類中のガレート体率が２８．１質量％、非重合体カテキン類中のガロ体率が８２．０質量％、カフェイン／非重合体カテキン類が０．０５４、没食子酸／非重合体カテキン類が０．００４１、Δガレート体率が−４．３質量％、Δガロ体率が＋４．７質量％であった。また、緑茶抽出液（１）からの非重合体カテキン類の回収率は８９．１％、カフェインの残存率は２３．０％、没食子酸の残存率は２．４３％であった。
【００８０】
実施例９
原料として、実施例１と同様な方法で得たタンナーゼ処理液（１）を使用した。各成分の分析値は、非重合体カテキン類濃度が２８．５質量％、非重合体カテキン類中のガレート体率が３２．３質量％、非重合体カテキン類中のガロ体率が７７．３質量％、カフェイン／非重合体カテキン類が０．１８、没食子酸／非重合体カテキン類が０．１２７であった。
【００８１】
次いで、合成吸着剤の種類及び使用量、溶出工程における通液条件を表５に記載のものに変更したこと以外は、実施例１と同様の操作により精製緑茶抽出物を得た。得られた精製緑茶抽出物は、非重合体カテキン類濃度が８．０質量％、非重合体カテキン類中のガレート体率が２８．１質量％、非重合体カテキン類中のガロ体率が８２．３質量％、カフェイン／非重合体カテキン類が０．０３１、没食子酸／非重合体カテキン類が０．００７０、Δガレート体率が−４．２質量％、Δガロ体率が＋５．０質量％であった。また、緑茶抽出液（１）からの非重合体カテキン類の回収率は８９．８％、カフェインの残存率は１４．２％、没食子酸の残存率は４．２％であった。
【００８２】
実施例１０
原料として、実施例１と同様な方法で得た緑茶抽出液（１）とタンナーゼ処理液（１）の混合溶液を使用した。各成分の分析値は、実施例４と同様であった。次いで、合成吸着剤の種類及び使用量、溶出工程における通液条件を表５に記載のものに変更したこと以外は、実施例１と同様の操作により精製緑茶抽出物を得た。得られた精製緑茶抽出物は、非重合体カテキン類濃度が８．０質量％、非重合体カテキン類中のガレート体率が３２．３質量％、非重合体カテキン類中のガロ体率が８２．９質量％、カフェイン／非重合体カテキン類が０．００４５、没食子酸／非重合体カテキン類が０．００２７、Δガレート体率が−３．４質量％、Δガロ体率が＋３．９質量％であった。また、緑茶抽出液（１）からの非重合体カテキン類の回収率は９１．０％、カフェインの残存率は２３．０％、没食子酸の残存率は０．７６％であった。
【００８３】
実施例１１
原料として、実施例１と同様な方法で得たタンナーゼ処理液（１）を使用した。各成分の分析値は、実施例５と同様であった。次いで、合成吸着剤の種類及び使用量、溶出工程における通液条件を表５に記載のものに変更したこと以外は、実施例１と同様の操作により精製緑茶抽出物を得た。得られた精製緑茶抽出物は、非重合体カテキン類濃度が８．０質量％、非重合体カテキン類中のガレート体率が２７．５質量％、非重合体カテキン類中のガロ体率が８２．２質量％、カフェイン／非重合体カテキン類が０．０５３、没食子酸／非重合体カテキン類が０．００２６、Δガレート体率が−４．８質量％、Δガロ体率が＋４．９質量％であった。また、緑茶抽出液（１）からの非重合体カテキン類の回収率は８８．７％、カフェインの残存率は２４．０％、没食子酸の残存率は０．６７％であった。
【００８４】
参考例４
緑茶葉（ケニア産、大葉種）３ｋｇに８８℃の熱水４５ｋｇを添加し、６０分間攪拌バッチ抽出した後、１００メッシュ金網で粗ろ過した。次いで、抽出液中の微粉を除去する為に遠心分離操作を行い、「緑茶抽出液（３）」３７．２ｋｇ（ｐＨ５．４）を得た（緑茶抽出液（２）中の非重合体カテキン類濃度＝０．８９質量％、緑茶抽出液（３）中のガレート体率＝５２．３質量％、カフェイン０．１７質量％）。この緑茶抽出液（３）を温度１５℃に保持し、タンナーゼ（キッコーマン社製、タンナーゼＫＴＦＨ、５００Ｕ／ｇ）を緑茶抽出液（３）に対して４３０ｐｐｍとなる濃度で添加し、５５分間保持し、ガレート体率が３０．５質量％になったところで、９０℃に溶液を加熱して、２分間保持し酵素を失活させ、反応を止めた（ｐＨ５．１）。次いで、７０℃、６．７ｋｐａの条件下で、減圧濃縮でＢｒｉｘ濃度２０％まで濃縮処理を行い、更に噴霧乾燥して粉末状の「タンナーゼ処理した緑茶抽出物（３）」０．９ｋｇを得た。得られた緑茶抽出物（３）は、非重合体カテキン類含有量が２７．８質量％、非重合体カテキンガレート体率が３０．３質量％、非重合体カテキン類中のガロ体率が７７．９質量％、カフェイン／非重合体カテキン類が０．２４２、没食子酸／非重合体カテキン類が０．１２９であった。「タンナーゼ処理した緑茶抽出物（３）」２８５ｇを、イオン交換水８５５０ｇに２５℃で３０分間攪拌溶解した。
【００８５】
次いで、合成吸着剤の種類及び使用量、溶出工程における通液条件を表５に記載のものに変更したこと以外は、実施例１と同様の操作により精製緑茶抽出物を得た。得られた精製緑茶抽出物は、非重合体カテキン類濃度が８．０質量％、非重合体カテキン類中のガレート体率が２７．４質量％、非重合体カテキン類中のガロ体率が７９．９質量％、カフェイン／非重合体カテキン類が０．１４７、没食子酸／非重合体カテキン類が０．００３９、Δガレート体率が−２．９質量％、Δガロ体率が＋２．０質量％であった。また、緑茶抽出液（３）からの非重合体カテキン類の回収率は８１．２％、カフェインの残存率は４９．３％、没食子酸の残存率は２．５％であった。
【００８６】
参考例５
原料として、参考例３と同様な方法で得たタンナーゼ処理液（２）を使用した。各成分の分析値は、参考例３と同様であった。次いで、合成吸着剤の種類及び使用量、溶出工程における通液条件を表５に記載のものに変更したこと以外は、実施例１と同様の操作により精製緑茶抽出物を得た。得られた精製緑茶抽出物は、非重合体カテキン類濃度が８．０質量％、非重合体カテキン類中のガレート体率が５１．２質量％、非重合体カテキン類中のガロ体率が７６．９質量％、カフェイン／非重合体カテキン類が０．０３８、没食子酸／非重合体カテキン類が０．００１４、Δガレート体率が−９．４質量％、Δガロ体率が＋５．７質量％であった。また、緑茶抽出液（２）からの非重合体カテキン類の回収率は７３．６％、カフェインの残存率は２３．７％、没食子酸の残存率は１．７％であった。
【００８７】
【表５】
2010213682.tif 000006
【００８８】
表５から明らかなように、茶抽出物を、特定性状を有する合成吸着剤に吸着させた後、有機溶媒水溶液で溶出することにより、有機溶媒の使用量を低減しながら非重合体カテキン類を高収率かつ効率よく回収することが可能であり、しかも従来公知の精製手段を要することなく、精製前後における非重合体カテキン類の組成変化を抑制しつつ没食子酸、カフェイン等の夾雑物を低減して呈味の良好な精製茶抽出物が得られることが確認された。
【００８９】
実施例１２
原料として、実施例１と同様な方法で得た緑茶抽出液（１）とタンナーゼ処理液（１）の混合溶液を使用した。各成分の分析値は、非重合体カテキン類濃度が０．９５質量％、非重合体カテキン類中のガレート体率が３８．０質量％、非重合体カテキン類中のガロ体率が７７．３質量％、カフェイン／非重合体カテキン類が０．１８８、没食子酸／非重合体カテキン類が０．０７６であった。
次いで、合成吸着剤の種類及び使用量、溶出工程における通液条件を表６に記載のものに変更したこと以外は、実施例１と同様の操作により溶出液２１２５ｇ（エタノール濃度：１９．６質量％、非重合体カテキン類濃度が１．８０質量％）を回収した。
次いで、溶出液に７２７ｍＬの９２質量％エタノール水溶液（非重合体カテキン類に対する有機溶媒水溶液の使用量が０．０１９Ｌ／ｇ）を加えて「溶出希釈液」（エタノール濃度が３５．８質量％、非重合体カテキン類濃度が１．３４質量％）を作製した。
次いで、５．５ｇの活性炭（ＳＧＰ：フタムラ化学製（平均細孔径４．４ｎｍ、細孔容積１．０８ｍＬ／ｇ、比表面積１０５０ｍ2／ｇ））が充填されたステンレスカラム（直径：２．２ｃｍ、長さ：１０．５ｃｍ、容積３９．９ｍＬ）に通液速度ＳＶ＝１．９（ｈ-1）で溶出希釈液５１７ｇを通液して「処理液１」を回収した。次いで、３９．９ｍＬのイオン交換水を、上記ステンレスカラムに「溶出希釈液」と同条件で通液して「処理液２」を回収し、「処理液１」と「処理液２」とから「混合液」を調製した。
次いで、「混合液」を減圧濃縮してエタノールを除去し、精製緑茶抽出物８１ｇを得た。この精製緑茶抽出物は、非重合体カテキン類濃度が７．３質量％、非重合体カテキン類中のガレート体率が３３．８質量％、非重合体カテキン類中のガロ体率が８０．５質量％、カフェイン／非重合体カテキン類が０．０１７、没食子酸／非重合体カテキン類が０、精製前後における非重合体カテキン類のガレート体率の変化量（Δガレート体率）が−４．２質量％、精製前後における非重合体カテキン類のガロ体の変化量（Δガロ体率）が＋３．２質量％であった。また、緑茶抽出液（１）からの非重合体カテキン類の回収率は８０．０％、カフェインの残存率は５．９％、没食子酸の残存率は０％であった。
【００９０】
実施例１３
原料として、実施例１と同様な方法で得た緑茶抽出液（１）とタンナーゼ処理液（１）の混合溶液を使用した。各成分の分析値は、実施例１２と同様であった。次いで、実施例１２と同一の条件にて吸着、洗浄及び溶出の各工程を行って溶出液を得た後、更に同様の操作により「溶出希釈液」を作製した。
次いで、６．３ｇの活性炭（ＳＧＰ：フタムラ化学製）が充填されたステンレスカラム（直径：２．２ｃｍ、長さ：１２．０ｃｍ、容積４５．６ｍＬ）に通液速度ＳＶ＝１．６（ｈ-1）で溶出希釈液４８０ｇを通液して「処理液１」を回収した。次いで、４５．６ｍＬのイオン交換水を、上記ステンレスカラムに「溶出希釈液」と同条件で通液して「処理液２」を回収し、「処理液１」と「処理液２」とから「混合液」を調製した。
次いで、「混合液」を減圧濃縮してエタノールを除去し、精製緑茶抽出物６７ｇを得た。この精製緑茶抽出物は、非重合体カテキン類濃度が７．６質量％、非重合体カテキン類中のガレート体率が３３．１質量％、非重合体カテキン類中のガロ体率が８０．８質量％、カフェイン／非重合体カテキン類が０、没食子酸／非重合体カテキン類が０、精製前後における非重合体カテキン類のガレート体率の変化量（Δガレート体率）が−４．９質量％、精製前後における非重合体カテキン類のガロ体の変化量（Δガロ体率）が＋３．５質量％であった。また、緑茶抽出液（１）からの非重合体カテキン類の回収率は７５．３％、カフェインの残存率は０％、没食子酸の残存率は０％であった。
【００９１】
【表６】
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【００９２】
表６から明らかなように、、茶抽出物を特定性状を有する合成吸着剤に吸着して有機溶媒水溶液で溶出し、得られた溶出液を活性炭処理することにより、精製前後における非重合体カテキン類の組成変化を抑制しつつ没食子酸、カフェイン等の夾雑物を格段に低減して、より一層呈味に優れた精製茶抽出物を効率よく回収できることが確認された。
【００９３】
実施例１３
実施例１で得られた精製緑茶抽出物を用いて表７に記載の容器詰飲料を調製した。食品衛生法に基づく殺菌処理及びホットパック充填を行って容器詰飲料を得た。次いで、得られた容器詰飲料を３７℃で３０日間保存した後、外観を目視で観察し呈味を確認した。容器詰飲料は、長期間保存後においても外観及び呈味が良好であり、安定性に優れるものであった。
【００９４】
【表７】
2010213682.tif 000008