(57)【要約】【課題】  抗ＪＣウイルス剤、及びＪＣウイルスによって発症する進行性多巣性白質脳症に対する治療剤を提供する。【解決手段】  キサンチン誘導体を有効成分とする抗ＪＣウイルス剤。本発明は、これまでにない作用機序に基づいた抗ＪＣウイルス治療剤及び進行性多巣性白質脳症治療剤として利用することができ、これまで根本的な治療剤，治療方法が無かった進行性多巣性白質脳症治療剤として提供し得ることが期待される。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
キサンチン誘導体を有効成分とする抗ＪＣウイルス剤。
【請求項２】
キサンチン誘導体が下記一般式（Ｉ）
【化１】
2010083854.tif 000006
（式中，Ｒ１はアルキル基を表し，Ｒ２はアルキル基又は−（ＣＨ２）ｎ−Ｏ−ＣＨ３を表し、Ｒ３はアルキル基又は水素を表し，ｎは１〜１０を表す。）で表される化合物である、請求項１に記載の抗ＪＣウイルス剤。
【請求項３】
キサンチン誘導体が下式（ＩＩ）〜（ＩＶ）のいずれかで表される化合物である、請求項２に記載のＪＣウイルスを原因とする疾患治療剤。
【化２】
2010083854.tif 000007
【請求項４】
請求項１〜３のいずれかに記載の抗ＪＣウイルス剤を有効成分とする進行性多巣性白質脳症治療剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】  本発明は，抗ＪＣウイルス剤及び抗ＪＣウイルス剤を有効成分とする進行性多巣性白質脳症に対する治療剤に関する。
【背景技術】
【０００２】  ＪＣウイルスはポリオーマウイルス科ポリオーマウイルス属に属するウイルスであり，成人の約７０％が不顕性感染しているとも報告されている。ＪＣウイルスの感染者がエイズや慢性リンパ性白血病などにより免疫不全状態に陥ると，潜伏感染していたＪＣウイルスが再活性化し，脳内で増殖し，進行性多巣性白質脳症（ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅ  ｍｕｌｔｉｆｏｃａｌ  ｌｅｕｋｏｅｎｃｅｐｈａｌｏｐａｔｈｙ，ＰＭＬ）を発症することが知られている。【０００３】  一旦ＰＭＬを発症した患者の転帰は致死的であり，セロトニン受容体拮抗剤，移植後免疫療法中の患者の場合には免疫不全状態を引き起こす薬剤投与の中止や，エイズ患者の場合には抗エイズ治療法であるＨＡＡＲＴ療法等により症状の改善が認められることもあるが，全ての患者に対して奏効する治療薬，治療方法は未だ見出されていない。【０００４】  一方，キサンチン類は，興奮剤や気管支拡張剤としての効果が知られている。キサンチン類の１種であるテオフィリンはホスホジエステラーゼ阻害によりアドレナリンβ作用を強め，気管支平滑筋を弛緩させるため，気管支喘息の治療薬として用いられている。また同じくキサンチン類の１種であるカフェインはアデノシン受容体に拮抗することにより，覚醒作用を示すことが知られており，コーヒー，緑茶，チョコレートなどに含まれることが知られている。またペントキシフィリンなどのキサンチン類がＧ２細胞周期停止に関連するＡＴＭ／ＡＴＲを阻害することにより，放射線増感剤としての作用を持つことが知られている（非特許文献１）。だが，いずれもＪＣウイルスとの関連についての報告は為されていない。
【非特許文献１】Ｌｏｔｈａｒ  Ｂｏｈｍら，Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ，１９３巻，２００３年，第１５３〜１６０頁
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】  本発明は、新たな抗ＪＣウイルス剤及びＪＣウイルスによって引き起こされる進行性多巣性白質脳症の治療剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】  本発明者らは、ＪＣウイルスの感染が感染細胞をＧ２細胞周期に停止させること、及びこの停止をキサンチン誘導体の投与によって解除させることができ、その結果ＪＣウイルスの増殖を抑制させることができることを見いだし、本発明を完成した。【０００７】（１）キサンチン誘導体を有効成分とする抗ＪＣウイルス剤。【０００８】（２）キサンチン誘導体が下記一般式（Ｉ）
【化３】
2010083854.tif 000002
（式中，Ｒ１はアルキル基を表し，Ｒ２はアルキル基又は−（ＣＨ２）ｎ−Ｏ−ＣＨ３を表し、Ｒ３はアルキル基又は水素を表し，ｎは１〜１０を表す。）で表される化合物である、（１）に記載の抗ＪＣウイルス剤。【０００９】（３）キサンチン誘導体が下式（ＩＩ）〜（ＩＶ）のいずれかで表される化合物である、（２）に記載のＪＣウイルスを原因とする疾患治療剤。
【化４】
2010083854.tif 000003
【００１０】（４）（１）〜（３）のいずれかに記載の抗ＪＣウイルス剤を有効成分とする進行性多巣性白質脳症治療剤。
【発明の効果】
【００１１】  本発明は、これまでにない作用機序に基づいた抗ＪＣウイルス治療剤及び進行性多巣性白質脳症治療剤として利用することができ、これまで根本的な治療剤，治療方法が無かった進行性多巣性白質脳症治療剤として提供し得ることが期待される。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１２】  本発明は、キサンチン誘導体を有効成分とする抗ＪＣウイルス剤である。キサンチン誘導体は、下記一般式で表される化合物である。
【化５】
2010083854.tif 000004
【００１３】  上記一般式（Ｉ）においてＲ１はＣ１〜Ｃ１０のアルキル基、好ましくはＣ１〜Ｃ４のアルキル基、より好ましくはメチル基を表し，Ｒ２はＣ１〜Ｃ１０のアルキル基、好ましくはＣ１〜Ｃ４のアルキル基、より好ましくはメチル基、又は−（ＣＨ２）ｎ−Ｏ−ＣＨ３（ｎは１〜１０，好ましくは３〜６，より好ましくは４）を表し，Ｒ３はＣ１〜Ｃ１０のアルキル基、好ましくはＣ１〜Ｃ４のアルキル基、より好ましくはメチル基又は水素を表す。【００１４】  上記一般式（Ｉ）に示される化合物のうち、好ましい化合物は下記の式（ＩＩ）〜（ＩＶ）に示される式ＩＩ〜式（ＩＶ）に示される化合物である。
【化６】
2010083854.tif 000005
【００１５】  式（ＩＩ）〜（ＩＶ）の化合物はそれぞれカフェイン、テオフィリン、ペントキシフェリンとして知られている化合物であり、いずれも市販され、又既知の方法によって有機化学的に合成することができる。【００１６】  カフェイン、テオフィリン、ペントキシフェリンは覚醒作用や気管支拡作用を有することが知られているが、これらの化合物がＪＣウイルスの増殖抑制効果を有していることは知られていない。【００１７】  ＪＣウイルスはヒトに進行性多巣性白質脳症を惹起するウイルスであるが、本発明者らは、ＪＣウイルスに感染した細胞のセルサイクルがＧ２期において停止されており、この停止はＪＣウイルスがコードするタンパク質であるＬａｒｇｅ  Ｔ  Ａｎｔｉｇｅｎ（ＴＡｇ）の発現を伴うことを、実験的に確認した。そして、ＪＣウイルスに感染した細胞に前記キサンチン誘導体、特にカフェイン、テオフィリン又はペントキシフェリンを投与することによって、ＪＣウイルスの複製ないし増殖を抑制することができること、すなわちキサンチン誘導体が抗ＪＣウイルス剤として利用可能であることが確認された。【００１８】  また、本発明に係るキサンチン誘導体、特にカフェイン、テオフィリン、ペントキシフェリンは抗ＪＣウイルス剤としてＪＣウイルスの増殖を抑制することができることから、ＪＣウイルスの感染によって発症することが知られている進行性多巣性白質脳症に対しても治療効果を示すものと期待される。【００１９】  キサンチン誘導体、特にカフェイン、テオフィリン、ペントキシフェリンなどは、食品に含まれる成分として、また気管支喘息治療薬として、それ単独で、又は様々な食品用あるいは医薬用賦形剤と、あるいは他の食品素材や医薬と組み合わせて使用されている。本発明においても、キサンチン誘導体を投与する形態、剤型ないしそれらを構成する賦形剤やその他の成分には特に制限は無く、ＪＣウイルスの増殖抑制効果を損なわない限り、任意の賦形剤あるいは食品・医薬等を組み合わせて使用することができる。【００２０】  以下、非限定的な実施例を挙げて、本発明を更に詳細に説明する。
【実施例】
【００２１】＜実施例１＞キサンチン誘導体のＪＣウイルス増殖抑制効果の確認
（１）ヘマグルチニンアッセイ
１０％ＦＢＳ、２ｍＭグルタミン及び０．１ｍＭ非必須アミノ酸を添加したＤＭＥＭ培地に懸濁させたＪＣウイルス感染の許容細胞であるヒト神経芽細胞腫ＩＭＲ−３２（Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ  Ｂａｎｋ、ＨＳＲＲＢ、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｉｈｓｔ．ｏｒ．ｊｐ）にＪＣウイルス（Ｎｕｋｕｚｕｍａら，Ｊ．Ｍｅｄｉｃａｌ．Ｖｉｒｏｌ．，１９９５年，第４７巻，第３７０−３７７頁）を感染させて、ＪＣウイルスに感染したＩＭＲ−３２（感染細胞）を調製した。【００２２】  感染後１３日間又は１６日間培養した感染細胞にカフェインをそれぞれ１ｍＭから２ｍＭの濃度で培地に加え，３７℃で６〜９日間インキュベーションを行った後，ヘマグルチニン（ＨＡ）アッセイを行った（図１）。【００２３】  その結果、カフェインの添加により、ＪＣウイルスによる血球凝集能が著しく抑制されることが確認された。【００２４】（２）感染細胞数の計測
前記感染細胞にカフェインを添加して９日間インキュベーションした後の細胞数を計測したところ、カフェインの代わりに水（ＤＷ）を添加したコントロールと比べて、感染細胞数はより多く残存していることが確認された（図２）【００２５】（３）感染細胞中のウイルスタンパク質の発現
感染後１０日間又は１３日間培養した感染細胞にカフェインをそれぞれ１ｍＭから２ｍＭの濃度で培地に加え，３７℃で３日間及び６日間インキュベーションを行った後，ウイルス前期タンパク質であるＴＡｇ、後期タンパク質であるＶＰ１及びＡｇｎｏｐｒｏｔｅｉｎの発現をウエスタンブロテッィングで確認した。【００２６】  その結果、カフェインの添加によっていずれのウイルスタンパク質の発現も抑制されることが確認された（図３）。【００２７】  さらに、キサンチン誘導体の一種であるテオフィリン及びペントキシフェリンについても同様の実験を行い、いずれのキサンチン誘導体もカフェインと同様にウイルスタンパク質の発現を抑制することが確認された（図４）。【００２８】（４）ウイルス複製に対するカフェインの効果
Ｏｒｂａら（Ｖｉｒｏｌｏｇｙ、２００８年、第３７０巻、第１７３−１８３頁）に記載された「ＪＣＶｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ａｓｓａｙ」に従い、ｐＢＳＪＣｏｒｉで形質転換させたＩＭＲ−３２細胞にカフェインを２．５ｍＭの濃度で培地に加え，３７℃で２４時間インキュベーションを行った後に細胞からＤＮＡを抽出し、ｐＢＳＪＣｏｒｉに対するプローブを用いてサザンブロッティングを行った。
その結果、カフェインの添加によって感染細胞における複製したＪＣウイルスＤＮＡ量が抑制されることが確認された（図５）。【００２９】（５）フローサイトメトリー解析
前記感染細胞について、抗ＶＰ１抗体、ＡＰＣでラベルされた抗ウサギＩｇＧ抗体及びＦＩＴＣでラベルされた抗ＴＡｇ抗体を用いたフローサイトメトリー解析を行い、またそれぞれの細胞のＤＮＡ含量をＰｒｏｐｉｄｉｕｍ  ｉｏｄｉｄｅ（ＰＩ）で測定し、その結果をグラフ化した（図６（Ａ）、図６（Ｂ））。図６（Ｂ）に示されるように、ＪＣウイルスタンパク質であるＴＡｇを発現している細胞は、細胞周期がＧ２期に停止していることが確認された。
【図面の簡単な説明】
【００３０】
【図１】ＪＣウイルスに感染したＩＭＲ−３２細胞にカフェインを添加したときの血球凝集能の抑制効果を示すグラフである。図中、ＤＷはカフェインに代えて水を添加したコントロールである。
【図２】ＪＣウイルスに感染したＩＭＲ−３２細胞にカフェインを添加したときの残存細胞数を表すグラフである。図中、ＤＷはカフェインに代えて水を添加したコントロールである。
【図３】ＪＣウイルスに感染したＩＭＲ−３２細胞に対するカフェインのＪＣウイルスタンパク質の発現抑制効果を示すウエスタンブロッティングの写真である。
【図４】ＪＣウイルスに感染したＩＭＲ−３２細胞に対するカフェイン、テオフィリン（ＴＰ）、ペントキシフェリン（ＰＴＸ）のＪＣウイルスタンパク質の発現抑制効果を示すウエスタンブロッティングの写真である。
【図５】ＪＣウイルスに感染したＩＭＲ−３２細胞に対するカフェインのＪＣウイルスＤＮＡ複製の抑制効果を示すサザンブロッティングの写真（左図）及びその結果を定量化したグラフ（右図）である。
【図６】ＪＣウイルスに感染したＩＭＲ−３２細胞に対してフローサイトメトリー解析を行った結果を示すチャート（図６（Ａ））とこれをまとめたグラフ（図６（Ｂ））である。
【図１】
2010083854.tif 000008
【図２】
2010083854.tif 000009
【図３】
2010083854.tif 000010
【図４】
2010083854.tif 000011
【図５】
2010083854.tif 000012
【図６】
2010083854.tif 000013