(57)【要約】【課題】天然ポリペプチドまたはその変異体を含む、新規な血小板凝集抑制剤、血栓形成抑制剤または循環器疾患の治療薬を提供する。【解決手段】ペントラキシン３またはペントラキシン３変異体を含む、血小板凝集抑制剤、血栓形成抑制剤および循環器疾患の治療薬。【選択図】図８
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
ペントラキシン３またはペントラキシン３変異体を含む、血小板凝集抑制剤。
【請求項２】
ペントラキシン３またはペントラキシン３変異体をコードする遺伝子と、
前記遺伝子の発現を制御する制御遺伝子と、
を備えるベクターを含む、
血小板凝集抑制剤。
【請求項３】
請求項１または２記載の血小板凝集抑制剤において、
前記ペントラキシン３は、配列番号：１のアミノ酸配列を含むタンパク質であり、
前記ペントラキシン３変異体は、
（１）配列番号：１のアミノ酸配列に８０％以上の相同性を有するアミノ酸配列、
（２）配列番号：１のアミノ酸配列のうち１以上のアミノ酸を欠失・置換・付加してなるアミノ酸配列、または
（３）配列番号：１のアミノ酸配列をコードする塩基配列に相補的な塩基配列にストリンジェントな条件で結合する塩基配列によってコードされるアミノ酸配列
のいずれかを含み、前記ペントラキシン３と同様の血小板凝集抑制活性を有するタンパク質である、
血小板凝集抑制剤。
【請求項４】
ペントラキシン３またはペントラキシン３変異体を含む、血栓形成抑制剤。
【請求項５】
ペントラキシン３またはペントラキシン３変異体をコードする遺伝子と、
前記遺伝子の発現を制御する制御遺伝子と、
を備えるベクターを含む、
血栓形成抑制剤。
【請求項６】
請求項４または５記載の血栓形成抑制剤において、
前記ペントラキシン３は、配列番号：１のアミノ酸配列を含むタンパク質であり、
前記ペントラキシン３変異体は、
（１）配列番号：１のアミノ酸配列に８０％以上の相同性を有するアミノ酸配列、
（２）配列番号：１のアミノ酸配列のうち１以上のアミノ酸を欠失・置換・付加してなるアミノ酸配列、または
（３）配列番号：１のアミノ酸配列をコードする塩基配列に相補的な塩基配列にストリンジェントな条件で結合する塩基配列によってコードされるアミノ酸配列
のいずれかを含み、前記ペントラキシン３と同様の血栓形成抑制活性を有するタンパク質である、
血栓形成抑制剤。
【請求項７】
ペントラキシン３またはペントラキシン３変異体を含む、
不安定狭心症、心筋梗塞および脳梗塞からなる群より選ばれる循環器疾患の治療薬。
【請求項８】
ペントラキシン３またはペントラキシン３変異体をコードする遺伝子と、
前記遺伝子の発現を制御する制御遺伝子と、
を備えるベクターを含む、
不安定狭心症、心筋梗塞および脳梗塞からなる群より選ばれる循環器疾患の治療薬。
【請求項９】
請求項７または８記載の循環器疾患の治療薬において、
前記ペントラキシン３は、配列番号：１のアミノ酸配列を含むタンパク質であり、
前記ペントラキシン３変異体は、
（１）配列番号：１のアミノ酸配列に８０％以上の相同性を有するアミノ酸配列、
（２）配列番号：１のアミノ酸配列のうち１以上のアミノ酸を欠失・置換・付加してなるアミノ酸配列、または
（３）配列番号：１のアミノ酸配列をコードする塩基配列に相補的な塩基配列にストリンジェントな条件で結合する塩基配列によってコードされるアミノ酸配列
のいずれかを含み、前記ペントラキシン３と同様の血栓形成抑制活性を有するタンパク質である、
循環器疾患の治療薬。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ペントラキシン３またはペントラキシン３変異体を含む、血小板凝集抑制剤、血栓形成抑制剤および循環器疾患の治療薬に関する。
【背景技術】
【０００２】
一般に、不安定狭心症、心筋梗塞、脳梗塞等の循環器疾患においては、血小板凝集によってできる血栓が病態の原因の一つであり、治療には血小板凝集抑制剤が用いられている。例えば、アスピリンやチクロピジン等が心筋梗塞や脳梗塞に伴う血栓・塞栓の治療、血流障害の改善、再発防止等のために投与される。しかし、これらの薬効は必ずしも十分ではなく、今もなお新たな血小板抑制剤（特許文献１〜３）の探索および開発が続けられている。
【０００３】
血小板は、血球成分の１つであり、止血機構に不可欠な細胞である。さらには組織修復、創傷治癒などにも関与する。一方で、血小板は動脈硬化病変など病的状態での血栓形成にも関与する。
【０００４】
血液は、正常な血管内では血栓を形成することなく、また凝固することなく循環している。血管内腔には、１層の血管内皮細胞があり、一酸化窒素（ＮＯ）やプロスタサイクリン等の血小板機能抑制物質により血小板は非活性化状態を維持して循環することができるからである。
【０００５】
しかし、血管内皮が障害されたり、動脈硬化病変において動脈狭小化に伴いずり応力が増加するとともにプラークが破綻したりすると、血小板はコラーゲン線維に富む血管内皮下組織と反応し、粘着する。粘着した血小板は活性化し、細胞内顆粒を放出し、血小板が凝集する。また、血小板から放出されるＡＤＰ等や、活性化血小板膜上あるいは内皮下組織で産生されるトロンビン等によって、凝固系が活性化され血栓をより強固にする。
【０００６】
血小板のコラーゲンへの粘着性はずり応力に影響される。低ずり応力下と高ずり応力下では、血栓形成の最終段階としての血小板凝集は異なる機序を取ることが知られており、低ずり応力下では血小板膜蛋白ＧＰＩＩｂ／ＩＩＩａとフィブリノゲン、高ずり応力下ではｖｏｎ  Ｗｉｌｌｅｂｒａｎｄ因子（ｖＷＦ）とＧＰＩｂ／ＩＸおよびＧＰＩＩｂ／ＩＩＩａの結合が中心となる。血小板凝集抑制剤は、これらの機序のいずれかを阻害して血小板凝集を抑制するものである。
【０００７】
ＰＴＸ３は、Ｐｅｎｔｒａｘｉｎ、Ｐｅｎｔａｘｉｎ、ＴＳＧ−１４、ＭＰＴＸ３とも呼ばれ、インターロイキン１(ＩＬ−１)刺激を受けたヒト臍帯内皮細胞に発現しているものとして発見されたペントラキシン（Ｐｅｎｔｒａｘｉｎ）ファミリーに属する分泌タンパク質である（非特許文献１、非特許文献２）。
【０００８】
ペントラキシンファミリーはＬｏｎｇ  ＰｅｎｔｒａｘｉｎとＳｈｏｒｔ  Ｐｅｎｔｒａｘｉｎに大別される。炎症性タンパクとして知られているＣ  ｒｅａｃｔｉｖｅ  ｐｒｏｔｅｉｎ（ＣＲＰ）やｓｅｒｕｍ  ａｍｙｌｏｉｄ  Ｐ  ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ（ＳＡＰ）はＳｈｏｒｔ  Ｐｅｎｔｒａｘｉｎに属し、炎症により生じるＩＬ−６に反応して肝臓で産生される。しかし、ＰＴＸ３はＣＲＰやＳＡＰと異なりＩＬ−６による誘導を受けない（非特許文献３）。
【０００９】
ＰＴＸ３は、炎症や自然免疫に関与し（非特許文献４）、自己免疫疾患、炎症性疾患、癌等の新生物、感染症に対して抑制効果があることが知られているが（特許文献４、特許文献５など）、血栓形成を抑制する作用については知られていない。
【００１０】
Ｎａｐｏｌｅｏｎらは、ＰＴＸ３が組織因子（ＴＦ）を誘導・活性化することを報告し、ＰＴＸ３が血栓形成を促進する作用を持つことを示唆している（非特許文献１）。また、Ｓａｖｃｈｅｎｋｏらは、心筋梗塞患者の血管閉塞部位より取り出した血栓中にＰＴＸ３が存在することを報告しているが、ＰＴＸ３が血栓形成に関与するか否かは全く示唆されていない（非特許文献５）。
【００１１】
【特許文献１】特許３５８１１７４号明細書
【特許文献２】特許３３４７７４８号明細書
【特許文献３】特公平６−３１３１７号公報
【特許文献４】国際公開ＷＯ２００２／３６１５１号パンフレット
【特許文献５】国際公開ＷＯ２００２／３８１６９号パンフレット
【非特許文献１】Napoleone E et al., J Leukocyte Biology ; 76(1):203-9, 2004
【非特許文献２】Napoleone E et al., Arterioscler Thromb Vasc Biol.;22(5):782-7、2002
【非特許文献３】Breviario et al.: J. Biol. Chem., 267(31):22190-7, 1992
【非特許文献４】Mantovani A., J Clin Immunol ; 28(1):1-13, 2008
【非特許文献５】Savachenko AS., J Pathol ; 215(1):48-55, 2008
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
上述のように、不安定狭心症、心筋梗塞、脳梗塞等の循環器疾患においては、血小板凝集によってできる血栓が血管狭窄の原因の一つであり、治療には様々な血小板凝集抑制剤が用いられているが、これらの薬効は必ずしも十分ではなく、今もなお新たな血小板抑制剤の探索および開発が続けられている。
【００１３】
本発明は上記事情に鑑みてなされたものであり、天然ポリペプチドまたはその変異体を含む、新規な血小板凝集抑制剤、血栓形成抑制剤または循環器疾患の治療薬を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
本発明によれば、ペントラキシン３またはペントラキシン３変異体を含む、血小板凝集抑制剤が提供される。この組成によれば、優れた血小板凝集抑制作用を示すペントラキシン３またはペントラキシン３変異体を含むため、優れた血小板凝集抑制作用を示す血小板凝集抑制剤が得られる。
【００１５】
また、本発明によれば、ペントラキシン３またはペントラキシン３変異体をコードする遺伝子と、その遺伝子の発現を制御する制御遺伝子と、を備えるベクターを含む、血小板凝集抑制剤が提供される。この組成によれば、優れた血小板凝集抑制作用を示すペントラキシン３またはペントラキシン３変異体を所定の制御に応じて発現するベクターを含むため、優れた血小板凝集抑制作用を示す血小板凝集抑制剤が得られる。
【００１６】
また、本発明によれば、ペントラキシン３またはペントラキシン３変異体を含む、血栓形成抑制剤が提供される。この組成によれば、優れた血栓形成抑制作用を示すペントラキシン３またはペントラキシン３変異体を含むため、優れた血栓形成抑制作用を示す血栓形成抑制剤が得られる。
【００１７】
また、本発明によれば、ペントラキシン３またはペントラキシン３変異体をコードする遺伝子と、その遺伝子の発現を制御する制御遺伝子と、を備えるベクターを含む、血栓形成抑制剤が提供される。この組成によれば、優れた血栓形成抑制作用を示すペントラキシン３またはペントラキシン３変異体を所定の制御に応じて発現するベクターを含むため、優れた血栓形成抑制作用を示す血栓形成抑制剤が得られる。
【００１８】
また、本発明によれば、ペントラキシン３またはペントラキシン３変異体を含む、不安定狭心症、心筋梗塞および脳梗塞からなる群より選ばれる循環器疾患の治療薬が提供される。この組成によれば、優れた血小板凝集抑制作用または血栓形成抑制作用を示すペントラキシン３またはペントラキシン３変異体を含むため、不安定狭心症、心筋梗塞、脳梗塞等に伴う血栓・塞栓の治療、血流障害の改善、再発防止等に有効であり、不安定狭心症、心筋梗塞および脳梗塞からなる群より選ばれる循環器疾患の優れた治療薬が得られる。
【発明の効果】
【００１９】
本発明によれば、ペントラキシン３またはペントラキシン３変異体を含むため、優れた血小板凝集抑制作用、血栓形成抑制作用または不安定狭心症、心筋梗塞および脳梗塞からなる群より選ばれる循環器疾患の治療効果が奏される。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２０】
以下、本発明の実施の形態について、図面を用いて説明する。尚、すべての図面において、同様な構成要素には同様の符号を付し、適宜説明を省略する。
【００２１】
＜実施形態１：血小板凝集抑制剤＞
本実施形態は、ペントラキシン３またはペントラキシン３変異体を含む、血小板凝集抑制剤である。後述の実施例に示すように、ペントラキシン３またはペントラキシン３変異体は血小板凝集を抑制するため、それを含む血小板凝集抑制剤も血小板凝集を抑制する。
【００２２】
ここで、本実施形態における「血小板凝集抑制作用」とは、血小板の凝集を抑制することができれば、いかなる態様をとるものであってもよい。すなわち、以下に説明する血小板の一次凝集を抑制する態様であっても良く、二次凝集を抑制する態様であってもよい。
【００２３】
一般に、血小板の表面は糖蛋白質で覆われ、血管内皮細胞は陰性荷電を帯びている。その為、正常な血管内では、血小板と血管内皮細胞は結合しない。そして、血管内皮細胞が産生するＰＧＩ２は、血小板の活性化を阻害する。しかしながら、血管壁が損傷すると、血管内皮細胞下組織のコラーゲンが露出し、コラーゲンに血漿中のｖｏｎ  Ｗｉｌｌｅｂｒａｎｄ因子（ｖＷＦ：フォン・ウィルブランド因子、フォン・ヴィレブランド因子）が結合する。なお、血液中の凝固因子が、血管内皮細胞下組織のコラーゲンに接触すると、内因系血液凝固が開始される。このｖＷＦに、血小板が、血小板膜糖蛋白のＧＰＩｂ受容体（ＧＰＩｂ−Ｖ−ＩＸ）を介してつながれ、血管内皮細胞下組織に粘着して停滞する（一次凝集）。
【００２４】
こうして粘着した血小板は、刺激伝達機構が働いて、活性化される。円盤状だった血小板は、長い偽足を出して、中央部が隆起した目玉焼き状に胞体を進展させる。活性化された血小板では、開放小管系を介するＣａ２＋流入や、貯蔵Ｃａ２＋の放出が起こり、細胞内Ｃａ２＋が上昇する。その結果、脱顆粒が起こり、濃染顆粒（密顆粒）のＡＤＰやセロトニンが、細胞外に放出される。また、細胞内のホスホリパーゼＡ２（ＰＬＡ２）が活性化され、ＴＸＡ２が放出される。その結果、最初に活性化された血小板周囲の血小板も、二次的に活性化される。二次的に活性化された血小板表面に、血小板膜糖蛋白のＧＰＩＩｂ／ＩＩＩａ受容体が発現する。血小板のＧＰＩＩｂ／ＩＩＩａ受容体どうしを、血漿中のｖｏｎ  Ｗｉｌｌｅｂｒａｎｄ因子（ｖＷＦ）やフィブリノゲンがつなぎ、血小板が凝集する。血流のずり応力により、ｖＷＦ（やフィブリノゲン）によりつながれた血小板は、引っ張られて刺激される。ここで、ずり応力とは血小板を歪ませて引きちぎろうとする血流の力のことである。高いずり応力が働くと、ＧＰＩＩｂ／ＩＩＩａ受容体を介するｖＷＦとの結合が盛んに行われ、血小板の凝集が進む。ずり応力で刺激された血小板は活性化され、濃染顆粒から放出されるアデノシンニリン酸（ＡＤＰ）やセロトニン、アラキドン酸から生成されるＴＸＡ２は、新たに他の血小板のＧＰＩＩｂ／ＩＩＩａ受容体を活性化させ、凝集を促進させる。また、α顆粒から放出されるフィブリノゲンが、ＧＰＩＩｂ／ＩＩＩａ受容体（γ鎖）どうしをつなぎ、血小板の結合が強固にされる。なお、フィブリノゲンを介したＧＰＩＩｂ／ＩＩＩａ受容体（γ鎖）による血小板の結合より、ｖＷＦを介するＧＰＩＩｂ／ＩＩＩａ受容体（α鎖）による血小板の結合の方が、血小板どうしの結合力が強い。また、血小板から、マイクロパーティクルと呼ばれる微小な膜小胞体が放出される。こうして円盤状だった血小板は、棘状の偽足を出して、球状に変形し、相互に接触し、凝集する（二次凝集）。
【００２５】
なお、本実施形態の血小板凝集抑制剤は、血管壁の損傷等によって開始する血小板凝集抑制作用がアスピリンやチクロピジン等よりも強いことが好ましいが、必ずしもアスピリンやチクロピジン等よりも強い必要はない。たとえば、本実施形態の血小板凝集抑制剤は、アスピリンやチクロピジン等の血小板凝集抑制作用と比較して、単位投与量あたり５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％もしくは１００％、２００％、３００％以上の血小板凝集抑制作用を示してもよい。
【００２６】
（ｉ）ペントラキシン３
本実施形態で用いられるペントラキシン３（Ｐｅｎｔｒａｘｉｎ３、ＰＴＸ３）とは、体内の炎症により現れる炎症性タンパク質の一種を意味する。一般的に、動脈硬化／血管中のプラーク形成／進行／破綻の過程には、損傷された組織、および炎症部位に浸潤した白血球や肥満細胞、マクロファージなどから放出される多くの炎症メディエーターの関与が知られているが、ＰＴＸ３もその一つである。
【００２７】
よく知られている炎症性タンパク質としてＣ反応性タンパク質（ＣＲＰ）があるが、ＰＴＸ３もＣＲＰと同じペントラキシンファミリーに分類される。しなしながら、ＣＲＰが肝臓で産生されるのに対し、ＰＴＸ３は、動脈硬化と密接な関係を持つ血管内皮細胞、血管平滑筋、マクロファージ、好中球から、短時間に、直接産生されるという特徴をもっている。また、ＰＴＸ３は、心疾患リスクファクター（コレステロール、喫煙、ヘモグロビンＡ１ｃ等）に影響を受けない有用なマーカーである可能性が、最近の研究で示唆されている。さらに、こうした研究に加え、ヒト内皮細胞にスタチンを作用させることで、最も発現抑制される遺伝子がＰＴＸ３であること、また、心筋梗塞のみならず不安定狭心症で、ＰＴＸ３値が上昇することなども報告されている。
【００２８】
ここで、天然のヒトペントラキシン３のアミノ酸配列を以下の配列番号：１としてＮ末端からＣ末端方向に向けて示す。なお、天然のペントラキシン３は、下記の配列に示されるように、３８１アミノ酸からなるタンパク質である。ここに記載されるペントラキシン３は、組換え又は合成方法により調製しても種々の供給源から単離してもよい。
【００２９】
配列番号１：Ｎ末端―ＭＨＬＬＡＩＬＦＣＡＬＷＳＡＶＬＡＥＮＳＤＤＹＤＬＭＹＶＮＬＤＮＥＩＤＮＧＬＨＰＴＥＤＰＴＰＣＡＣＧＱＥＨＳＥＷＤＫＬＦＩＭＬＥＮＳＱＭＲＥＲＭＬＬＱＡＴＤＤＶＬＲＧＥＬＱＲＬＲＥＥＬＧＲＬＡＥＳＬＡＲＰＣＡＰＧＡＰＡＥＡＲＬＴＳＡＬＤＥＬＬＱＡＴＲＤＡＧＲＲＬＡＲＭＥＧＡＥＡＱＲＰＥＥＡＧＲＡＬＡＡＶＬＥＥＬＲＱＴＲＡＤＬＨＡＶＱＧＷＡＡＲＳＷＬＰＡＧＣＥＴＡＩＬＦＰＭＲＳＫＫＩＦＧＳＶＨＰＶＲＰＭＲＬＥＳＦＳＡＣＩＷＶＫＡＴＤＶＬＮＫＴＩＬＦＳＹＧＴＫＲＮＰＹＥＩＱＬＹＬＳＹＱＳＩＶＦＶＶＧＧＥＥＮＫＬＶＡＥＡＭＶＳＬＧＲＷＴＨＬＣＧＴＷＮＳＥＥＧＬＴＳＬＷＶＮＧＥＬＡＡＴＴＶＥＭＡＴＧＨＩＶＰＥＧＧＩＬＱＩＧＱＥＫＮＧＣＣＶＧＧＧＦＤＥＴＬＡＦＳＧＲＬＴＧＦＮＩＷＤＳＶＬＳＮＥＥＩＲＥＴＧＧＡＥＳＣＨＩＲＧＮＩＶＧＷＧＶＴＥＩＱＰＨＧＧＡＱＹＶＳ―Ｃ末端
【００３０】
また、ペントラキシン３のｍＲＮＡの塩基配列を以下の配列番号：２として５’末端から３’末端方向に向けて示す。なお、ＲＮＡであるため、本来ならばＴではなくＵで示すべきところ、説明の便宜のためにＵの代わりにＴを用いてＲＮＡ配列を示すものとする。
【００３１】
配列番号：２  ５’末端−ＣＡＴＴＴＡＴＴＡＡＧＧＡＣＴＣＴＣＴＧＣＴＣＣＡＧＣＣＴＣＴＣＡＣＴＣＴＣＡＣＴＣＴＣＣＴＣＣＧＣＴＣＡＡＡＣＴＣＡＧＣＴＣＡＣＴＴＧＡＧＡＧＴＣＴＣＣＴＣＣＣＧＣＣＡＧＣＴＧＴＧＧＡＡＡＧＡＡＣＴＴＴＧＣＧＴＣＴＣＴＣＣＡＧＣＡＡＴＧＣＡＴＣＴＣＣＴＴＧＣＧＡＴＴＣＴＧＴＴＴＴＧＴＧＣＴＣＴＣＴＧＧＴＣＴＧＣＡＧＴＧＴＴＧＧＣＣＧＡＧＡＡＣＴＣＧＧＡＴＧＡＴＴＡＴＧＡＴＣＴＣＡＴＧＴＡＴＧＴＧＡＡＴＴＴＧＧＡＣＡＡＣＧＡＡＡＴＡＧＡＣＡＡＴＧＧＡＣＴＣＣＡＴＣＣＣＡＣＴＧＡＧＧＡＣＣＣＣＡＣＧＣＣＧＴＧＣＧＡＣＴＧＣＧＧＴＣＡＧＧＡＧＣＡＣＴＣＧＧＡＡＴＧＧＧＡＣＡＡＧＣＴＣＴＴＣＡＴＣＡＴＧＣＴＧＧＡＧＡＡＣＴＣＧＣＡＧＡＴＧＡＧＡＧＡＧＣＧＣＡＴＧＣＴＧＣＴＧＣＡＡＧＣＣＡＣＧＧＡＣＧＡＣＧＴＣＣＴＧＣＧＧＧＧＣＧＡＧＣＴＧＣＡＧＡＧＧＣＴＧＣＧＧＧＡＧＧＡＧＣＴＧＧＧＣＣＧＧＣＴＣＧＣＧＧＡＡＡＧＣＣＴＧＧＣＧＡＧＧＣＣＧＴＧＣＧＣＧＣＣＧＧＧＧＧＣＴＣＣＣＧＣＡＧＡＧＧＣＣＡＧＧＣＴＧＡＣＣＡＧＴＧＣＴＣＴＧＧＡＣＧＡＧＣＴＧＣＴＧＣＡＧＧＣＧＡＣＣＣＧＣＧＡＣＧＣＧＧＧＣＣＧＣＡＧＧＣＴＧＧＣＧＣＧＴＡＴＧＧＡＧＧＧＣＧＣＧＧＡＧＧＣＧＣＡＧＣＧＣＣＣＡＧＡＧＧＡＧＧＣＧＧＧＧＣＧＣＧＣＣＣＴＧＧＣＣＧＣＧＧＴＧＣＴＡＧＡＧＧＡＧＣＴＧＣＧＧＣＡＧＡＣＧＣＧＡＧＣＣＧＡＣＣＴＧＣＡＣＧＣＧＧＴＧＣＡＧＧＧＣＴＧＧＧＣＴＧＣＣＣＧＧＡＧＣＴＧＧＣＴＧＣＣＧＧＣＡＧＧＴＴＧＴＧＡＡＡＣＡＧＣＴＡＴＴＴＴＡＴＴＣＣＣＡＡＴＧＣＧＴＴＣＣＡＡＧＡＡＧＡＴＴＴＴＴＧＧＡＡＧＣＧＴＧＣＡＴＣＣＡＧＴＧＡＧＡＣＣＡＡＴＧＡＧＧＣＴＴＧＡＧＴＣＴＴＴＴＡＧＴＧＣＣＴＧＣＡＴＴＴＧＧＧＴＣＡＡＡＧＣＣＡＣＡＧＡＴＧＴＡＴＴＡＡＡＣＡＡＡＡＣＣＡＴＣＣＴＧＴＴＴＴＣＣＴＡＴＧＧＣＡＣＡＡＡＧＡＧＧＡＡＴＣＣＡＴＡＴＧＡＡＡＴＣＣＡＧＣＴＧＴＡＴＣＴＣＡＧＣＴＡＣＣＡＡＴＣＣＡＴＡＧＴＧＴＴＴＧＴＧＧＴＧＧＧＴＧＧＡＧＡＧＧＡＧＡＡＣＡＡＡＣＴＧＧＴＴＧＣＴＧＡＡＧＣＣＡＴＧＧＴＴＴＣＣＣＴＧＧＧＡＡＧＧＴＧＧＡＣＣＣＡＣＣＴＧＴＧＣＧＧＣＡＣＣＴＧＧＡＡＴＴＣＡＧＡＧＧＡＡＧＧＧＣＴＣＡＣＡＴＣＣＴＴＧＴＧＧＧＴＡＡＡＴＧＧＴＧＡＡＣＴＧＧＣＧＧＣＴＡＣＣＡＣＴＧＴＴＧＡＧＡＴＧＧＣＣＡＣＡＧＧＴＣＡＣＡＴＴＧＴＴＣＣＴＧＡＧＧＧＡＧＧＡＡＴＣＣＴＧＣＡＧＡＴＴＧＧＣＣＡＡＧＡＡＡＡＧＡＡＴＧＧＣＴＧＣＴＧＴＧＴＧＧＧＴＧＧＴＧＧＣＴＴＴＧＡＴＧＡＡＡＣＡＴＴＡＧＣＣＴＴＣＴＣＴＧＧＧＡＧＡＣＴＣＡＣＡＧＧＣＴＴＣＡＡＴＡＴＣＴＧＧＧＡＴＡＧＴＧＴＴＣＴＴＡＧＣＡＡＴＧＡＡＧＡＧＡＴＡＡＧＡＧＡＧＡＣＣＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧＡＧＴＣＴＴＧＴＣＡＣＡＴＣＣＧＧＧＧＧＡＡＴＡＴＴＧＴＴＧＧＧＴＧＧＧＧＡＧＴＣＡＣＡＧＡＧＡＴＣＣＡＧＣＣＡＣＡＴＧＧＡＧＧＡＧＣＴＣＡＧＴＡＴＧＴＴＴＣＡＴＡＡＡＴＧＴＴＧＴＧＡＡＡＣＴＣＣＡＣＴＴＧＡＡＧＣＣＡＡＡＧＡＡＡＧＡＡＡＣＴＣＡＣＡＣＴＴＡＡＡＡＣＡＣＡＴＧＣＣＡＧＴＴＧＧＧＡＡＧＧＴＣＴＧＡＡＡＡＣＴＣＡＧＴＧＣＡＴＡＡＴＡＧ���ＡＡＣＡＣＴＴＧＡＧＡＣＴＡＡＴＧＡＡＡＧＡＧＡＧＡＧＴＴＧＡＧＡＣＣＡＡＴＣＴＴＴＡＴＴＴＧＴＡＣＴＧＧＣＣＡＡＡＴＡＣＴＧＡＡＴＡＡＡＣＡＧＴＴＧＡＡＧＧＡＡＡＧＡＣＡＴＴＧＧＡＡＡＡＡＧＣＴＴＴＴＧＡＧＧＡＴＡＡＴＧＴＴＡＣＴＡＧＡＣＴＴＴＡＴＧＣＣＡＴＧＧＴＧＣＴＴＴＣＡＧＴＴＴＡＡＴＧＣＴＧＴＧＴＣＴＣＴＧＴＣＡＧＡＴＡＡＡＣＴＣＴＣＡＡＡＴＡＡＴＴＡＡＡＡＡＧＧＡＣＴＧＴＡＴＴＧＴＴＧＡＡＣＡＧＡＧＧＧＡＣＡＡＴＴＧＴＴＴＴＡＣＴＴＴＴＣＴＴＴＧＧＴＴＡＡＴＴＴＴＧＴＴＴＴＧＧＣＣＡＧＡＧＡＴＧＡＡＴＴＴＴＡＣＡＴＴＧＧＡＡＧＡＡＴＡＡＣＡＡＡＡＴＡＡＧＡＴＴＴＧＴＴＧＴＣＣＡＴＴＧＴＴＣＡＴＴＧＴＴＡＴＴＧＧＴＡＴＧＴＡＣＣＴＴＡＴＴＡＣＡＡＡＡＡＡＡＡＴＧＡＴＧＡＡＡＡＣＡＴＡＴＴＴＡＴＡＣＴＡＣＡＡＧＧＴＧＡＣＴＴＡＡＣＡＡＣＴＡＴＡＡＡＴＧＴＡＧＴＴＴＡＴＧＴＧＴＴＡＴＡＡＴＣＧＡＡＴＧＴＣＡＣＧＴＴＴＴＴＧＡＧＡＡＧＡＴＡＧＴＣＡＴＡＴＡＡＧＴＴＡＴＡＴＴＧＣＡＡＡＡＧＧＧＡＴＴＴＧＴＡＴＴＡＡＴＴＴＡＡＧＡＣＴＡＴＴＴＴＴＧＴＡＡＡＧＣＴＣＴＡＣＴＧＴＡＡＡＴＡＡＡＡＴＡＴＴＴＴＡＴＡＡＡＡＣＴＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡ−３’末端
【００３２】
（ｉｉ）ペントラキシン３変異体
本実施形態で用いられるペントラキシン３変異体とは、天然のペントラキシン３の変異体を意味する。このペントラキシン３変異体は、天然のペントラキシン３と同様の血小板凝集抑制作用、血栓形成抑制作用または循環器疾患の治療効果を奏するが、必ずしも完全に同一の作用効果を奏する必要はない。たとえば、天然のペントラキシン３の血小板凝集抑制作用、血栓形成抑制作用または循環器疾患の治療効果と比較して、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％もしくは１００％の血小板凝集抑制作用、血栓形成抑制作用または循環器疾患の治療効果を示してもよい。また、このペントラキシン３変異体の具体例としては、特に限定する趣旨ではないが、以下の３種類の変異体が挙げられる。
【００３３】
すなわち、このペントラキシン３変異体の具体例としては、（１）配列番号：１のアミノ酸配列に８０％以上の相同性を有するアミノ酸配列、（２）配列番号：１のアミノ酸配列のうち１以上のアミノ酸を欠失・置換・付加してなるアミノ酸配列、または（３）配列番号：１のアミノ酸配列をコードする塩基配列に相補的な塩基配列にストリンジェントな条件で結合する塩基配列によってコードされるアミノ酸配列のいずれかを含み、ペントラキシン３と同様の血小板凝集抑制活性を有するタンパク質が挙げられる。このような３種類のペントラキシン３変異体のアミノ酸配列は、天然のペントラキシン３のアミノ酸配列と類似しているため、通常はペントラキシン３と同様の血小板凝集抑制活性を有するものと想定される。そのため、天然のペントラキシン３の代わりに、このようなペントラキシン３変異体を用いたとしても、同様の作用効果が得られることになる。
【００３４】
本実施形態で用いられるペントラキシン３変異体には、天然配列ペントラキシン３の全長天然アミノ酸配列において一又は複数（例えば、２、３・・・）のアミノ酸残基が付加、置換若しくは欠失されたペントラキシン３変異体が含まれる。通常、ペントラキシン３変異体は、配列番号：１として開示された全長天然配列ペントラキシン３のアミノ酸配列と８０％以上のアミノ酸配列同一性、好ましくは９０％以上のアミノ酸配列同一性、より好ましくは９５％以上のアミノ酸配列同一性を有している。
【００３５】
ここに定義される「パーセント（％）アミノ酸配列同一性」は、配列を整列させ、最大のパーセント配列同一性が得られるように間隙を導入してもよく、保存的置換を配列同一性の一部と考えないとした、ペントラキシン３配列のアミノ酸残基と同一である候補配列中のアミノ酸残基のパーセントとして定義される。パーセントアミノ酸配列同一性を決定する目的のためのアラインメントの選択は、当業者によく知られた方法、例えばＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ−２、ＡＬＩＧＮ又はＭｅｇＡｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）のような公に入手可能なコンピュータソフトウエアを使用することにより可能である。当業者であれば、比較される配列の全長に対して最大のアラインメントを達成するために必要な任意のアルゴリズムを含むアラインメントを測定するために、適切なパラメータを決定することができる。また、ペントラキシン３の変異体として、可溶化処理されたペントラキシン３、断片化されたペントラキシン３なども挙げられる。
【００３６】
本実施形態で用いられるペントラキシン３変異体をコードする変異体ポリヌクレオチドは、ここに開示する全長天然配列ペントラキシン３ポリペプチドをコードする核酸配列に対して８０％以上の核酸配列同一性、好ましくは９０％の核酸配列同一性、より好ましくは９５％の核酸配列同一性を有している。
【００３７】
ここで同定される天然のペントラキシン３コード化核酸配列に対する「パーセント（％）核酸配列同一性」は、配列を整列させ、最大のパーセント配列同一性が得られるように間隙を導入してもよく、天然のペントラキシン３コード化核酸配列のヌクレオチドと同一である候補配列中のヌクレオチドのパーセントとして定義される。パーセント核酸配列同一性を決定する目的のためのアラインメントの選択は、当業者にはよく知られた方法、例えばＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ−２、ＡＬＩＧＮ又はＭｅｇＡｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）のような公に入手可能なコンピュータソフトウエアを使用することにより可能である。当業者であれば、比較される配列の全長に対して最大のアラインメントを達成するために必要な任意のアルゴリズムを含むアラインメントを測定するために、適切なパラメータを決定することができる。
【００３８】
また、「ペントラキシン３変異体ポリヌクレオチド」とは、ペントラキシン３変異体ポリペプチドをコードし、好ましくはストリンジェントなハイブリダイゼーション及び洗浄条件下で、配列番号：１に示すポリペプチドをコードする核酸配列（配列番号：２）に相補的な塩基配列にハイブリダイゼーションする核酸分子であってもよい。ペントラキシン３変異体ポリペプチドは、ペントラキシン３変異体ポリヌクレオチドにコードされるものであってもよい。
【００３９】
ここで、ストリンジェントなハイブリダイゼーションおよび洗浄条件とは、例えば、ザンブルーク（Ｓａｍｂｒｏｏｋ）ら編「モレキュラー・クローニング：ア・ラボラトリーマニュアル第２版（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ  ２ｎｄ  Ｅｄ．）」〔（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ  （１９８９）〕等に記載の条件が挙げられる。具体的には、例えば、（ｉ）６×ＳＳＣ（１×ＳＳＣの組成：０．１５Ｍ  ＮａＣｌ、０．０１５Ｍ  クエン酸ナトリウム、ｐＨ７．０）と０．５％  ＳＤＳと５×デンハルトと１００μｇ／ｍＬ変性断片化サケ精子ＤＮＡと５０％ホルムアミドを含む溶液中、プローブと共に４２℃で一晩保温し、（ｉｉ）非特異的にハイブリダイズしたプローブを洗浄により除去するステップ、ここで、より精度を高める観点から、より低イオン強度、例えば、２×ＳＳＣ、よりストリンジェントには、０．１×ＳＳＣ等の条件及び／又はより高温、例えば、用いられる核酸のＴｍ値の４０℃下、よりストリンジェントには、３０℃下、さらにストリンジェントには、２５℃下、よりさらにストリンジェントには、１０℃下、具体的には、用いられる核酸のＴｍ値により異なるが、２５℃以上、よりストリンジェントには、３７℃以上、さらにストリンジェントには、４２℃以上、よりさらにストリンジェントには、５０℃以上、より一層ストリンジェントには、６０℃以上等の条件下で洗浄を行う、という条件が挙げられる。
【００４０】
本実施形態における剤は、単体または製剤上許容される担体を加えて、医薬とすることができる。製剤上許容される担体とは、例えば、賦形剤、希釈剤、添加剤、崩壊剤、結合剤、被覆剤、湿潤剤、滑走剤、滑沢剤、風味剤、甘味剤、可溶化剤等を挙げることができ、具体的には、炭酸マグネシウム、二酸化チタン、ラクトース、マンニトール及びその他の糖類、タルク、ゼラチン、デンプン、セルロース及びセルロース誘導体、動物油及び植物油、ポリエチレングリコール、水、一価または多価アルコールを挙げることができる。
【００４１】
また、本実施形態における剤の剤形は特に限定されないが、例えばカプセル剤、錠剤、丸剤、液剤、シロップ剤、トローチ剤、散剤、顆粒剤、輸液剤および注射剤等が挙げられるが、好ましくは製剤化が容易な錠剤、顆粒剤、散剤またはカプセル剤である。
【００４２】
また、本実施形態の剤は、経口的又は非経口的に投与することができる。すなわち通常用いられる投与形態、例えば粉末、顆粒、カプセル剤、シロップ剤、懸濁液等の剤型で経口的に投与することができ、あるいは、例えば溶液、乳剤、懸濁液等の剤型にしたものを注射の型で非経口に局所に投与することができる他、液状、シート状又はチューブ状にして神経損傷部位に接触するように投与することもできる。
【００４３】
さらに、本実施形態における剤は、ペントラキシン３またはペントラキシン３変異体のタンパク質をコードする核酸配列からなる遺伝子と、その遺伝子の発現を制御する制御遺伝子とを有するベクターを含む、剤とすることもできる。本実施形態のベクターとして、例えばプラスミド、ファージ、コスミド、ミニクロモゾーム、またはウイルスが挙げられる。あるいはまた、ベクターは、宿主細胞に導入されると宿主細胞ゲノムに一体化されそしてその中に一体化された一つまたは複数のクロモゾームと共に複製されるものであってよい。適切なベクターの例は細菌発現ベクターおよび酵母発現ベクターである。前記ウイルスベクターの例として、アデノウイルス、レトロウイルス、ＳＶ４０のようなパポバウイルス、ワクシニアウイルス、鶏痘ウイルス、仮性狂犬病ウイルス等のウイルス由来のベクター等が挙げられるがこれらに限定されるものではない。ここで、所望のタンパク質をコードする核酸配列からなる遺伝子の発現を制御する制御遺伝子として適したプロモーターを選択して作製したベクターを含む剤とすることにより、所望の部位において、所望の量のペントラキシン３またはペントラキシン３変異体タンパク質を発現することができる。
【００４４】
＜実施形態２：血栓形成抑制剤＞
本実施形態は、ペントラキシン３またはペントラキシン３変異体を含む、血栓形成抑制剤である。後述の実施例に示すように、ペントラキシン３またはペントラキシン３変異体は血栓形成を抑制するため、それを含む血栓形成抑制剤も血栓形成を抑制する。
【００４５】
ここで、本実施形態における「血栓形成抑制作用」とは、血栓の形成を抑制することができれば、いかなる態様をとるものであってもよい。すなわち、本実施形態における血栓形成抑制作用とは、そのメカニズムを限定するものではない。
【００４６】
一般に、血栓とは、血管内の血液が何らかの原因で塊を形成することであり、血栓ができる病態のことを血栓症という。血栓の形成は、主に血管壁が傷害されることにより起こる。通常、血栓の役割は止血である。止血が完了し障害された部位が修復されると血栓は消えるが、これを線溶作用と言う。血栓症では、その線溶作用が働かずに血栓が増大し血管を塞ぐことにより、血栓が生じた部位より末梢の組織において虚血や梗塞が引き起こされる。また、血栓がはがれて別の場所の血管をふさぐことを血栓塞栓症という。
【００４７】
そのため、本実施形態における血栓形成抑制作用とは、そのメカニズムを限定するものではなく、結果として血栓の形成が抑制されればよいので、例えば、血小板凝集が抑制されるために血栓の形成が抑制される作用であってもよく、その逆に、血栓の線溶作用が活性化されるために血栓の消滅が促進されて血栓の形成が抑制される作用であってもよい。
【００４８】
その他の点は、本実施形態の血栓形成抑制剤は、実施形態１の血小板凝集抑制剤の場合と同様であるため、説明を省略する。すなわち、ここで説明していない事項については、実施形態１の血小板凝集抑制剤の説明を参照されたい。
【００４９】
＜実施形態３：循環器疾患の治療薬＞
本実施形態は、ペントラキシン３またはペントラキシン３変異体を含む、不安定狭心症、心筋梗塞および脳梗塞からなる群より選ばれる循環器疾患の治療薬である。後述の実施例に示すように、ペントラキシン３またはペントラキシン３変異体は優れた血小板凝集抑制作用または血栓形成抑制作用を示すため、それを含む循環器疾患の治療薬も不安定狭心症、心筋梗塞、脳梗塞等に伴う血栓・塞栓の治療、血流障害の改善、再発防止等に有効であり、不安定狭心症、心筋梗塞および脳梗塞からなる群より選ばれる循環器疾患の優れた治療効果を示す。
【００５０】
（ｉ）不安定狭心症の治療効果
ここで、本実施形態における「不安定狭心症の治療効果」とは、不安定狭心症の治療効果の症状の一部または全部を改善することができれば、いかなる態様をとるものであってもよい。すなわち、本実施形態における不安定狭心症の治療効果とは、そのメカニズムを限定するものではない。
【００５１】
一般に、狭心症とは、心臓の筋肉（心筋）に酸素を供給している冠動脈の異常による一過性の心筋の虚血のために胸痛・胸部圧迫感などの主症状を起こす、虚血性心疾患の一つである。完全に冠動脈が閉塞、または著しい狭窄が起こり、心筋が壊死してしまった場合には心筋梗塞という。一般的に狭心症は心臓の冠動脈の硬化巣が進行しプラークという盛り上がった病変ができ、血液の通り道を狭くすることによって起こるものであり、誘因としては高血圧、高脂血症、肥満、高尿酸血症、ストレス、性格などが考えられる。
【００５２】
狭心症の症状としては、狭心痛（締め付けられるような痛み；絞扼感や圧迫感）が主症状である。痛みは前胸部が最も多いが他の部位にも生じる事がある（心窩部から、頸部や左肩へ向かう放散痛など）。発作は大体１５分以内には消失する。他に、動悸・不整脈、呼吸困難、頭痛、嘔吐など。症状を放置した場合、心筋梗塞、心室細動などを引き起こす場合がある。いつも定まった状況で症状を起こし、それがニトログリセリンなどの舌下錠で容易に消失する状態が安定型狭心症で、それ程さし迫った危険はないとされている。これに対して発作の頻度と強さ、そして持続が増し、ニトログリセリンが効きにくい状態は不安定型狭心症（不安定狭心症）と呼ばれ、これは心筋梗塞の前兆で非常に危険であるとされている。これらの狭心症の治療方法としても、抗血栓薬が用いられることがある。
【００５３】
すなわち、本実施形態ペントラキシン３またはペントラキシン３変異体を含む、不安定狭心症の治療薬は、不安定狭心症の治療の際に特に好適に用いられるものである。特に好適には、冠インターベンション（ＰＣＩ）施行時またはその前後の期間に用いられる。この場合には、医師等によって、点滴または注射剤として血液中に投与されることが有効であるが、不安定狭心症の治療の予後においても、経口による服用を行ってもよいのはもちろんである。
【００５４】
（ｉｉ）心筋梗塞の治療効果
ここで、本実施形態における「心筋梗塞の治療効果」とは、心筋梗塞の症状の一部または全部を改善することができれば、いかなる態様をとるものであってもよい。すなわち、本実施形態における心筋梗塞の治療効果とは、そのメカニズムを限定するものではない。
【００５５】
一般に、心筋梗塞は、虚血性心疾患のうちの一つであり、心臓が栄養としている冠動脈の血流量が下がり、心筋が虚血状態になり壊死してしまった状態を意味する。通常は急性に起こる「急性心筋梗塞（ＡＭＩ）」のことを指すことが多い。冠動脈の血流量減少は、主に動脈硬化などの何らかの要因によって狭窄を起こすことによる。心筋が虚血状態に陥っても壊死にまで至らない前段階を狭心症といい、狭心症から急性心筋梗塞までの一連の病態を総称して「急性冠症候群」（ａｃｕｔｅ  ｃｏｒｏｎａｒｙ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ；  ＡＣＳ）と言う概念が提唱されている。
【００５６】
心筋梗塞の症状としては、胸が締め付けられるような痛みを生じる。「痛い」よりも「胸が苦しい」「重い感じがする」などと訴えることが多い。通常狭心症では胸痛の持続時間は数分程度であるが、安静にしていても３０分以上胸痛の持続する場合は急性心筋梗塞を強く疑う。左肩や顎への放散痛は特徴的といわれる。歯痛や、左上腕の重い感じのみを訴えることもある。糖尿病患者では痛みなどの症状に乏しいこともあり、めまい、嘔吐、心窩部痛など不定愁訴で発症することもあるため、見逃しにつながりやすい。特に食後、寒い日の早朝、入浴前後、飲酒後、階段の昇降時、真夏、特に早朝のゴルフ中などの脱水症状から発症することが多い。
【００５７】
心筋梗塞の治療においては、特に急性期には、絶対安静が原則である。心筋梗塞は、心筋に対する相対的・絶対的酸素供給不足が原因であり、安静にして酸素吸入を行う。また鎮痛および体の酸素消費低下目的で、モルヒネを投与する場合もある。急性期には心筋梗塞の病巣拡大を防ぐことが最大の目的となる。一般的に「アスピリン内服」「酸素吸入」「モルヒネ」「硝酸薬」などが中心に行われ、Ｍｏｒｐｈｉｎｅ，Ｏｘｙｇｅｎ，Ｎｉｔｒａｔｅ，Ａｓｐｉｒｉｎの頭文字をとって「ＭＯＮＡ」という名称で心筋梗塞のＦｉｒｓｔ  Ａｉｄとして知られている。発症６時間以内の心筋梗塞の場合、積極的に閉塞した冠動脈の再灌流療法を行うことで、心筋の壊死範囲を縮小可能である。これに限らず、発症から２４時間以内の症例では、再灌流療法を行う意義が高いとされる。大別してカテーテル的治療（ＰＴＣＡ，ＰＣＩ）を行う場合と、血栓溶解療法（ＰＴＣＲ）があり、国により、保険により、医師の判断により治療方針が分かれていることがある。
【００５８】
すなわち、本実施形態ペントラキシン３またはペントラキシン３変異体を含む、心筋梗塞の治療薬は、心筋梗塞の血栓溶解療法（ＰＴＣＲ）の際に特に好適に用いられるものである。この場合には、医師等によって、点滴または注射剤として血液中に投与されることが有効であるが、心筋梗塞の血栓溶解療法（ＰＴＣＲ）の予後においても、経口による服用を行ってもよいのはもちろんである。特に好適には、冠インターベンション（ＰＣＩ）施行時またはその前後の期間において用いられる。
【００５９】
（ｉｉｉ）脳梗塞の治療効果
ここで、本実施形態における「脳梗塞の治療効果」とは、脳梗塞の症状の一部または全部を改善することができれば、いかなる態様をとるものであってもよい。すなわち、本実施形態における脳梗塞の治療効果とは、そのメカニズムを限定するものではない。
【００６０】
一般に、脳梗塞（cerebral infarction、別名：脳軟化症）とは、脳を栄養する動脈の閉塞、または狭窄のため、脳虚血を来たし、脳組織が酸素、または栄養の不足のため壊死、または壊死に近い状態になる事をいう。また、それによる諸症状も脳梗塞と呼ばれる事がある。なかでも、症状が激烈で（片麻痺、意識障害、失語など）突然に発症したものは、他の原因によるものも含め、一般に脳卒中と呼ばれる。それに対して、緩徐に進行して痴呆（脳血管性痴呆）などの形をとるものもある。日本人の死亡原因の中でも多くを占めている高頻度な疾患である上、後遺症を残して介護が必要となることが多く福祉の面でも大きな課題を伴う疾患である。ちなみに「脳軟化症」の名の由来は、脳細胞は壊死すると溶けてしまうため（「融解壊死」という）こう呼ぶ。
【００６１】
脳梗塞の治療方法としては、血栓溶解療法が多用されている。すなわち、アテローム血栓や塞栓症の場合、発症直後（３時間以内）であり、施設の整った医療機関であれば血管内カテーテルによってウロキナーゼを局所動脈内投与する血栓溶解療法が可能である。また、２００５年１０月からｔ−ＰＡのうちアルテプラーゼ（遺伝子組換え）の静脈内投与による超急性期虚血性脳血管障害の治療について日本国内での治療も健康保険適応となっている。しかし、１９９５年の米国の報告では予後改善効果も認められるが脳出血の副作用も６．４％と対照の０．６％より大幅に増えていたとされている。日本での治験（Ｊ−ＡＣＴ）では脳出血例５．８％（６／１０３例）であったとされており、心筋梗塞の治療でｔ−ＰＡを使うときも承認前１．７６％（７／３９８例）、市販後１４例（１４，３６０回投与中）の脳出血例が報告されている。
【００６２】
すなわち、本実施形態のペントラキシン３またはペントラキシン３変異体を含む、脳梗塞の治療薬は、脳梗塞の血栓溶解療法（ＰＴＣＲ）の際に特に好適に用いられるものである。この場合には、医師等によって、点滴または注射剤として血液中に投与されることが有効であるが、脳梗塞の血栓溶解療法（ＰＴＣＲ）の予後においても、経口による服用を行ってもよいのはもちろんである。本実施形態のペントラキシン３またはペントラキシン３変異体によれば、ｔ−ＰＡで問題になっている脳出血例の副作用を減少することができるのではないかと期待されている。
【００６３】
その他の点は、本実施形態の不安定狭心症、心筋梗塞および脳梗塞からなる群より選ばれる循環器疾患の治療薬は、実施形態１の血小板凝集抑制剤の場合と同様であるため、説明を省略する。すなわち、ここで説明していない事項については、実施形態１の血小板凝集抑制剤の説明を参照されたい。
【００６４】
以上、図面を参照して本発明の実施形態について述べたが、これらは本発明の例示であり、上記以外の様々な構成を採用することもできる。
【００６５】
例えば、上記実施形態３では、循環器疾患の治療薬として、不安定狭心症、心筋梗塞および脳梗塞からなる群より選ばれる循環器疾患の治療薬について説明したが、特にこれらに限定する趣旨ではない。本実施形態のペントラキシン３またはペントラキシン３変異体を含む、循環器疾患の治療薬は、他にも深部静脈血栓症、肺血栓塞栓症（エコノミークラス症候群）、血栓性血小板減少性紫斑病、閉塞性動脈硬化症または播種性血管内凝固（ＤＩＣ）などの症状の治療にも有効であると考えられる。さらに、心筋梗塞、脳血管障害の治療後の血栓に起因する病態を予防する目的で予防的に投与することもできると考えられる。例えば、冠動脈バイパス手術や冠インターベンション（ＰＣＩ）などの治療の前後に投与することにより、その後の虚血性イベント等（心血管死亡、心筋梗塞、脳卒中など）のリスクを減少させることができると考えられる。これらの症状も、上述の血小板の凝集による血栓の形成によるものであるため、上述の血栓溶解療法（ＰＴＣＲ）が有効な治療方法であると考え得られているためである。
【実施例】
【００６６】
以下、本発明を実施例によりさらに説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【００６７】
＜実施例１＞
本実施例では、血栓形成に対するＰＴＸ３の抑制効果―血小板凝集計およびフローチャンバーシステムを用いた検討を行った。
【００６８】
（ｉ）対象
健常者７例（Ａ；４３歳男性、Ｂ；３６歳男性、Ｃ；５０歳男性、Ｄ；３３歳女性、Ｅ；３５歳男性、Ｆ；２３歳女性、Ｇ；４１歳男性）を対象とした。
【００６９】
（ｉｉ）採血法
血小板凝集計：１９Ｇ針を用いて静脈血を採血し、３．８％クエン酸ナトリウム（９：１，ｖ／ｖ）と混和後、９００ｒｐｍで１０分間遠沈して多血小板血漿（ＰＲＰ）を分離した。３７℃で保存して採血後２時間以内に使用した。
【００７０】
フローチャンバーシステム：１９Ｇ針を用いて静脈血を採血し、Ｘａ因子インヒビター液（終濃度  ８０μｇ／ｍｌ）（ＡＲＩＸＴＲＡＯＲ、一般名；ｆｏｎｄａｐａｒｉｎｕｘ  ｓｏｄｉｕｍ）（グラクソスミスクライン株式会社、東京）と混和した。３７℃で保存して採血後２時間以内に使用した。
【００７１】
（ｉｉｉ）試薬
血小板凝集計：前記の方法で調整したＰＲＰに対して、ＰＴＸ３（終濃度：１，１０，１００ｎｇ／ｍｌ）（ペルセウスプロテオミクス株式会社、東京、＊全長ＰＴＸ３）あるいはコントロールとしてリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）を加えて室温で１０分間インキュベーションした後、血小板凝集の惹起物質としてＡＤＰ（終濃度：５μＭ）（Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｎｃａｌ  ＣＯ．）、コラーゲン（終濃度：５μｇ／ｍｌ）（Ｎｙｃｏｍｅｄ  Ｐｈａｒｍａ  ＧＭＢＨ．）を添加した。
【００７２】
フローチャンバーシステム：前記の方法で採血した血液に対して、ＰＴＸ３（終濃度：１、１０、１００ng／ｍｌ、１０ｍｉｃｒｏｇｒａｍ/ｍｌ）（ペルセウスプロテオミクス株式会社、東京、＊全長ＰＴＸ３）あるいはコントロールとしてリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）を加えて室温で１０分間インキュベーションした後、メパクリン（ｑｕｉｎａｃｒｉｎｅ  ｄｉｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ，  Ｓｉｇｍａ，  Ｓｔ．  Ｌｏｕｉｓ，  ＭＯ；  ｆｉｎａｌ  ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ  １０  μＭ）を用いて血小板に標識を行った。
【００７３】
（ｉｖ）血小板凝集計
血小板凝集能は、レーザー散乱光法（機器；血小板凝集計ＰＡ−２００，興和株式会社、名古屋）を用いて測定した。
【００７４】
すなわち、ＰＲＰ（ＰＴＸ３あるいはＰＢＳ添加後）に血小板凝集惹起物質（コラーゲン、ＡＤＰ）を加えて攪拌すると、血小板は急速に凝集塊をつくり、それに伴ってＰＲＰの透光度が増していく。その変化（凝集曲線）を記録して、ＰＴＸ３の血小板凝集に対する作用を検討した。
【００７５】
（ｖ）フローチャンバーシステム
Ｇｏｔｏ  Ｓらの方法を用いた（参考文献１：Goto S, Ikeda Y, Saldivar E, Ruggeri ZM. Distinct mechanisms of platelet aggregation as a consequence of different shearing flow conditions. J Clin Invest. 1998;101:479-486.）（参考文献２：Goto S, Tamura N, Handa S, Arai M, Kodama K, Takayama H. Involvement of glycoprotein VI in platelet thrombus formation on both collagen and von Willebrand factor surfaces under flow conditions. Circulations. 2002;106:266-272.）（図３）。
【００７６】
簡単に述べると、コラーゲン０．１ｍｉｃｒｏｇｒａｍ／ｍｌ（ＫＯＫＥＮＣＥＬＬＧＥＮ，  Ｃｏｌｌａｇｅｎ  Ａｃｉｄｉｃ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ，  Ｉ−ＡＣ，  株式会社高研、東京）を固層化したガラス板（２４ｘ５０ｍｍ）上に、蛍光標識（メパクリン標識）した血小板を含む全血（ＰＴＸ３あるいはＰＢＳ添加後）を灌流し、倒立型蛍光顕微鏡（ＩＸ  ７１，  オリンパス株式会社、東京）によるイメージング後（ＣＣＤ  カメラ：ＤＰ７０，  オリンパス株式会社）、画像解析装置（Ｗｉｎｌｏｏｆ，  三谷商事株式会社，  福井）を用いて形成された血栓の面積を計測した。この方法によれば、実際に生体内で血流の影響下において生じる血栓の形成について評価することが可能である。
【００７７】
（ｖｉ）実験結果
血小板凝集計：図４〜７に結果を示す。この測定には、通常「凝集惹起物質」を添加して測定するが、凝集惹起物質としてコラーゲンを添加したのが図４、５の検体Ａ〜Ｇの結果で、凝集惹起物質としてＡＤＰを添加したのが図６、７の検体Ａ〜Ｇの結果である。コラーゲンを用いた凝集反応における検討では、ＰＴＸ３添加群とＰＢＳ添加群を比較すると、７名中５名（Ｂ，Ｃ，Ｄ，Ｅ，Ｇ）においてＰＴＸ３添加により血小板凝集は抑制された（図４，５）。また、ＡＤＰを用いた凝集反応における検討では、７名中６名（Ａ，Ｂ，Ｃ，Ｄ，Ｆ，Ｇ）においてＰＴＸ３添加により血小板凝集は抑制された（図６，７）。
【００７８】
フローチャンバーシステム：コラーゲン上に形成された血栓の面積率は、ＰＴＸ３添加群とＰＢＳ添加群を比較すると灌流初期では両群で優位な差は認めなかったが、灌流６分後においては高ずり速度下（１５００／Ｓ：動脈に相当）および低ずり速度下（２６０／Ｓ：静脈に相当）の両速度下領域において、ＰＴＸ３添加群の血栓面積率は優位に抑制されていた（図８〜１０）。対象の健常者Ａ、Ｃ、Ｄのすべてにおいて同様の結果が得られた。
【００７９】
以上、本発明を実施例に基づいて説明した。この実施例はあくまで例示であり、種々の変形例が可能なこと、またそうした変形例も本発明の範囲にあることは当業者に理解されるところである。
【００８０】
たとえば、上記実施例では、ＰＴＸ３として天然のヒトＰＴＸ３を用いたが、特に限定する趣旨ではなく、ヒトＰＴＸ３の変異体を用いてもよい。この場合にも、ヒトＰＴＸ３の変異体は、天然のヒトＰＴＸ３と同様のヒト体内における血小板凝集抑制作用、血栓形成抑制作用および循環器疾患の治療効果を奏するため、やはり図４〜図１０に示した結果と同様の結果が得られると考えられるためである。
【００８１】
また、上記実施例では、ＰＴＸ３として天然のヒトＰＴＸ３を用いたが、特に限定する趣旨ではなく、天然のマウスＰＴＸ３またはマウスＰＴＸ３変異体を用いてもよい。天然のマウスＰＴＸ３またはマウスＰＴＸ３変異体を用いれば、マウス体内における血小板凝集抑制作用、血栓形成抑制作用および循環器疾患の治療効果を奏するため、被験者の代わりにマウスを使って実験をすれば、やはり図４〜図１０に示した結果と同様の結果が得られると考えられるためである。
【００８２】
また、上記実施例では、ＰＴＸ３として天然のヒトＰＴＸ３のタンパク質を用いたが、特に限定する趣旨ではなく、天然のヒトＰＴＸ３またはヒトＰＴＸ３変異体をコードするＰＴＸ３遺伝子およびその遺伝子の制御配列を含むベクターを投与してもよい。天然のヒトＰＴＸ３またはヒトＰＴＸ３変異体をコードするＰＴＸ３遺伝子およびその遺伝子の制御配列を含むベクター用いれば、ベクターから発現するｍＲＮＡが翻訳されて生成する天然のヒトＰＴＸ３またはヒトＰＴＸ３変異体タンパク質がヒト体内における血小板凝集抑制作用、血栓形成抑制作用および循環器疾患の治療効果を奏するため、やはり図４〜図１０に示した結果と同様の結果が得られると考えられるためである。
【図面の簡単な説明】
【００８３】
【図１】ＰＴＸ３とＣＲＰおよびＳＡＰのアミノ酸配列の違いを説明するための模式図である。
【図２】ＰＴＸ３の免疫応答について説明するための模式図である。
【図３】フローチャンバーシステムについて説明するための模式図である。
【図４】凝集惹起物質としてコラーゲンを添加した場合の血小板凝集計による測定結果を説明するためのグラフである（健常者Ａ，Ｂ，Ｃ，Ｄ）。
【図５】凝集惹起物質としてコラーゲンを添加した場合の血小板凝集計による測定結果を説明するためのグラフである（健常者Ｅ，Ｆ，Ｇ）。
【図６】凝集惹起物質としてＡＤＰを添加した場合の血小板凝集計による測定結果を説明するためのグラフである（健常者Ａ，Ｄ，Ｅ）。
【図７】凝集惹起物質としてＡＤＰを添加した場合の血小板凝集計による測定結果を説明するためのグラフである（健常者Ｂ，Ｃ，Ｆ，Ｇ）。
【図８】フローチャンバーを用いた血栓形成能の検討結果を説明するための顕微鏡写真およびグラフである（健常者Ａ）。
【図９】フローチャンバーを用いた血栓形成能の検討結果を説明するための顕微鏡写真およびグラフである（健常者Ｃ）。
【図１０】フローチャンバーを用いた血栓形成能の検討結果を説明するための顕微鏡写真およびグラフである（健常者Ｄ）。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【配列表】
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【手続補正書】
【提出日】平成21年8月31日(2009.8.31)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】変更
【補正の内容】
【配列表】
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