(57)【要約】【課題】生きたままの魚介類をより元気な状態で低死亡率で輸送する。【解決手段】この発明の水生生物の輸送方法は、多種類の生物を灰化して抽出した生物ミネラル、またはこの生物ミネラルに水を加えて抽出して得た水溶性の生物ミネラル、あるいは該生物ミネラルまたは水溶性の生物ミネラルの含有成分と略同一の成分になるように鉱物より抽出又は薬品を調合した配合ミネラルの少なくとも一種類を含有し、当該ミネラルを輸送前または輸送中に経口投与または浸漬処理することによって、水生動物の輸送中のストレスを抑制し、その免疫力を向上させるとともに、飼育環境を安定に保つことにより鮮度を保ちながら輸送するものである。上記ミネラルは飼料あるいは飼育水へ添加して用いる。【選択図】図５
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
多種類の生物を灰化して抽出した生物ミネラル、またはこの生物ミネラルに水を加えて抽出して得た水溶性の生物ミネラル、あるいは該生物ミネラルまたは水溶性の生物ミネラルの含有成分と略同一の成分になるように鉱物より抽出又は薬品を調合した配合ミネラルの少なくとも一種類を含有し、当該ミネラルを輸送前または輸送中に経口投与または浸漬処理することによって、水生動物の輸送中のストレスを抑制し、その免疫力を向上させるとともに、飼育環境を安定に保つことにより鮮度を保ちながら輸送する食用および観賞用水生動物の輸送方法。
【請求項２】
ミネラルを飼料あるいは飼育水へ添加して用いる請求項１の食用および観賞用水生動物の輸送方法。
【請求項３】
前記ミネラルが少なくともナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウムに加え複数種の微量ミネラルを含む請求項１の観賞用水生動物の輸送方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
この発明は、食用および観賞用水生動物の輸送方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
従来の活魚輸送方法は、海水などの飼育水を低温に保ったり、水中の各種ガス濃度を調整してその麻酔効果を利用したり、動きを制限されるような狭い隙間を人工的に作り、そこに魚を個別に収容することで水生動物の活動を抑制し、過度の運動による鮮度の劣化を抑制することを目的に、水温を低く維持できる水槽を用いたり、各種ガスの発生装置や同微細化装置を装備したり、個別に収容可能な小部屋を持つ運搬用トレーを水槽内に収容したりする場合が多い（特許文献１，同２参照）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
【特許文献１】特開２００７−２１８５７０
【特許文献２】特開２００３−１４４００２
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
しかし、これらの方法は様々な付帯設備を必要とし、コストがかさんだりスペースが必要になったりする他、生物に適度な温度やガス濃度、個室環境の範囲等が狭いことも多く、それらの調節には極めて細心の注意をはらう必要があり、作業も煩雑になることが常であった。それでもなお、生物にはスレができたり、過剰なストレスが負荷されたりし、病原体が他魚に付着してしまったりすることで、輸送時には魚が死なないまでも、到着後に病気が発生したり、生物の生残率が著しく低下したり、その肉質や外観が悪くなり、商品価値が著しく低下するという問題も生じている。
【０００５】
また、観賞魚を輸送する時は、酸素を充填した一つのビニール袋に多数の魚を収容し、過密状態で輸送することが多いため、魚同士が擦れ合って創傷ができたり、病原体が他魚に付着してしまったりする可能性が高まるほか、観賞魚に過剰なストレスをかけてしまうことにもなりかねない。観賞魚の場合、ヒレや体表などに傷ができると、その商品価値が下がってしまうことや、輸送中のストレスにより魚の病原菌や寄生虫に対する抵抗力が弱まり、病気が発生しやすい状態になる等の問題も頻発している。また、輸送中に魚が暴れるなどにより、水が汚れるといった問題もあった。そこで、この対策として、絶食させる、ストレス軽減物質や免疫増強剤を飼料に添加して食べさせる等という方法が行われてきたが、上記の問題を解決することは困難であった。
【０００６】
本発明は、食用および観賞用水生動物の輸送中に生ずるストレスを軽減させることにより、各種病気に対する抵抗力を高まり、食用および観賞用水生動物を無傷に近く、かつ、健康な状態で輸送、流通させる方法を提供するものである。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
上記課題を解決するための本発明の食用および観賞用水生動物の輸送方法は、第１に、多種類の生物を灰化して抽出した生物ミネラル、またはこの生物ミネラルに水を加えて抽出して得た水溶性の生物ミネラル、あるいは該生物ミネラルまたは水溶性の生物ミネラルの含有成分と略同一の成分になるように鉱物より抽出又は薬品を調合した配合ミネラルの少なくとも一種類を含有し、当該ミネラルを輸送前または輸送中に経口投与または浸漬処理することによって、水生動物の輸送中のストレスを抑制し、その免疫力を向上させるとともに、飼育環境を安定に保つことにより鮮度を保ちながら輸送することを特徴としている。
【０００８】
第２に、ミネラルを飼料あるいは飼育水へ添加して用いることを特徴としている。
【０００９】
第３に、前記ミネラルが少なくともナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウムに加え複数種の微量ミネラルを含むことを特徴としている。
【発明の効果】
【００１０】
以上のように構成される本発明の輸送方法によれば、輸送前又は輸送中に多種類のミネラルを含むミネラル複合体を経口投与又は該ミネラル水溶液に浸漬することにより、魚介類等の水生動物のストレスの軽減、ストレスによる体重減少や死亡の防止又は死亡率の低減、生体防御活性の向上、寄生虫の感染予防又は治療、鮮度回復等の効果が得られる。
【００１１】
上記生物ミネラル又は生物ミネラルと略同様な組成に配合されたミネラルは、元来動物が摂取を必要とする生物体中に含有されるミネラルであり、急性毒性および変異原性試験などにより、生体に対する種々の安全性が確認されている。また生物ミネラルは無機物であるので、水生動物が成育する水（海水、汽水、淡水問わず）に当初から含まれている成分であり、残留したとしても極めて安全である。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】本発明に用いた生物ミネラルを分析電子顕微鏡により定性分析した結果を示す図である。
【図２】本発明に用いた生物ミネラルをＰＩＸＥ（荷電粒子Ｘ線放射化分析：Ｐａｒｔｉｃｌｅ Ｉｎｄｕｃｅｄ Ｘ-ｒａｙ Ｅｍｉｓｓｉｏｎ）法により定性分析した結果を示す図である。
【図３】本発明に用いた水溶性生物ミネラル末を分析電子顕微鏡により定性分析した結果を示す図である。
【図４】本発明に用いた水溶性生物ミネラル末をＰＩＸＥ（荷電粒子Ｘ線放射化分析：Ｐａｒｔｉｃｌｅ Ｉｎｄｕｃｅｄ Ｘ-ｒａｙ Ｅｍｉｓｓｉｏｎ）法により定性分析した結果を示す図である。
【図５】生物ミネラルを経口投与したヒラメと通常飼育したヒラメにストレスを負荷した後の、それぞれのヒラメの血漿中のコルチゾル濃度の経時変化を示すグラフである。
【図６】水溶性生物ミネラル末の水溶液への浸漬処理による白点虫感染魚の生残率変化を示すグラフである。
【図７】生物ミネラルを経口投与、または水溶性生物ミネラル末の水溶液への浸漬処理しつつ擬似輸送試験を行った際の、ネオンテトラ体内の血漿中コルチゾル濃度の経時変化を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
本発明の食用および観賞用水生動物の輸送方法に用いる生物ミネラルの主成分は、生物体中に存在する多種類の元素から構成され、主として生物由来のミネラル粉末または溶液である。
【００１４】
水生動物等の動物や海草・海藻類、陸上の植物を灰化して多種類のミネラルを抽出する方法は、古くから特開昭５１−１２１５６２号、特公昭６１−８７２１号、特公平６−９２２７３号等に示される方法が知られている。
【００１５】
また上記のように灰化抽出した生物ミネラルは加熱によって気化又は昇華された元素を除く、原材料が含有するすべてのミネラルを総合ミネラルであるが、この抽出ミネラルに水を加えて撹拌し、水分と固体成分とを分離して得た水溶液は、水溶性ミネラルのみを含んだミネラル溶液である。
【００１６】
さらに上記ミネラル水溶液を濃度調整した調整液（液状ミネラル）とし、あるいはさらに水分を除去することによって水溶性ミネラルをさらに微粉砕してパウダーとして以下の実験に使用する水溶性生物ミネラル末（生物ミネラルパウダー）を得ることができる。この水溶性生物ミネラル末も水溶性ミネラルのみを含んだミネラル溶液（液状ミネラル）と成分上変わりがない。
【００１７】
次に本発明の試験に使用する生物ミネラルおよび水溶性生物ミネラルの製法について説明する。
１．生物ミネラル原末の製造方法
本発明で使用される生物としては野草類（クズ、イタドリ、ドクダミ、ヨモギ等）、樹木枝葉類（マツ枝葉、ヒノキ枝葉、スギ枝葉、イチョウ葉等）、海藻類（ホンダワラ、コンブ等）、竹、熊笹、苔類、シダ類、シジミ、カニ殻等が対象となる。生物は人工的に育成されたものではなく、自然の条件下で育った野性のものが、多様なミネラル成分を比較的多量に含む点で望ましい。これらの食物を原料毎に洗浄及び天日乾燥後、２００〜２０００℃の温度下で１次的に灰化させ、さらにその灰化物を同様に加熱して残存未燃焼有機物を除去する２次加熱工程を経て、粗粉砕後２０メッシュにかけて選別し、金属探知機による金属除去工程を経て、微粉砕して生物ミネラル原末を得る。
【００１８】
多種類の原料を用いることにより、ミネラル成分の種類を豊富にし、生物ミネラルを生産毎に概ね同一の成分とすることができる。また上記灰化物は所定のミネラルバランスに対応した配分量となるよう１種類または２種類以上の乾燥原料を予め混合して灰化してもよいが、原料毎に灰化したものを所定のミネラルバランスを考慮して適量ずつ配合して用いてもよい。後者の方法によれば、生産毎に得られる生物ミネラルの成分がより均一化される。上記方法によって得られた生物ミネラルの定性データは図１、図２に示す通りである。
【００１９】
２．水溶性生物ミネラル末（水溶性生物ミネラルパウダー）の製造
前記生物ミネラル原末に加水して加熱抽出を行い、該抽出液をデカンテーションし、粗ろ過後、１次濃縮を行い液状ミネラルを得る。さらにこの液状ミネラルを遠心脱水及び乾燥の２次濃縮工程を経て粉砕後６０メッシュにて選別して水溶性生物ミネラル末を得る。
【００２０】
水溶性生物ミネラル末の定性データは図３、図４に示す通りである。なお液状ミネラル及び水溶性ミネラル末が含有するミネラルのバランスは、液状ミネラルより水分のみを除去したものが水溶性生物ミネラル末であることから、ほぼ等しいものである。
【実施例１】
【００２１】
「ヒラメ稚魚への生物ミネラルの経口投与による生体防御活性賦活化効果およびストレス軽減効果に関する実験」
＜材料及び方法＞
１）供試品
本実験では表１に示した成分を有する生物ミネラルを供試品とした。
２）供試魚
ヒラメ（平均体重５．９ｇ、平均体長８５ｍｍ）２００尾を水槽に導入し、１日馴致後、無作為に５０尾ずつ４区（水槽）に分けた。その後３日間、表２に示す対照飼料を投与し、試験環境に馴致させ、試験に供した。
３）試験環境
試験用水槽は屋外型陸上養殖用水槽（平面４ｍ×５ｍ×高さ２ｍ）を用いた。水温調節は行わず、海水温のまま水槽に海水を常時流入させた。
４）試験区の設定
供試品を含まない対照飼料を投与する対照区と、供試品を０．２５％の割合で対照飼料に配合した飼料を投与するミネラル投与区の計２群を設定した。なお５０尾ずつ分けた４水槽に、各試験区を４反復群ずつ割り付けて４２日間（６週間）の飼育を行った。投与量は飽食を目安とし、１日の投与を３回以上に分け、残餌状況に応じ投与量を調整した。
＜調査項目及び方法＞
５）体重、体長
試験区間の成長の差を検証するため、試験終了後の各試験区より１０尾ずつ無作為に採取し体重・体長の測定を行った。
６）生体防御活性賦活化効果の確認
生体防御能の向上が図られたか否かを確認するため、飼育６週目の生体防御活性指標として赤血球数、顆粒球数の測定および顆粒球の貪食能、顆粒球の殺菌能を示すＮＢＴ（ニトロブルーテトラゾリウム）還元能を測定した。
７）ストレス負荷試験
ストレスの軽減効果を有するかを検証するため、飼育６週目にストレスを負荷しないヒラメ５尾に加え、各区から１５尾のヒラメを取り上げ、籠の中に入れた後、空中に引き上げ１０分間放置するストレス負荷試験を実施した。これによりエラ呼吸が主体の魚にとっては窒息というストレスが負荷されたことになる。このようにしてストレスを負荷したヒラメは、水槽へ戻してから１、３、２０時間後に取り上げ採血を行った。その後、ストレス指標となる血漿中のコルチゾル濃度の測定をコルチゾルＥＩＡキット（ＯＸＦＯＲＤ ＢＩＯＭＥＤＩＣＡＬ ＲＥＳＥＡＲＣＨ社製）を用いて行った。なおコルチゾルとはストレスによって間腎腺（哺乳類の副腎皮質に相当する内分泌器官）から分泌されるホルモンでストレスが負荷されるほど値は高くなる。
【００２２】
【表１】
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【００２３】
【表２】
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【００２４】
＜結果＞
１）体重、体長
試験終了後の各試験区の体重・体長を測定した結果、対照区では平均体重が４８．５ｇ、４８．３ｇであるのに対し、ミネラル投与区では６２．３ｇ、５４．７ｇであり、生物ミネラル投与区のほうが対照区に比べ平均体重が大きい傾向がみられた。
２）免疫指標
生体防御能の向上が図られたか否かを検証した際のヒラメの飼育６週目の生体防御活性指標を表３に示した。なお、各欄には平均値±標準偏差が示されている。表３より対照区に比べ、ミネラル投与区では、生体防御活性に関係する顆粒球数の増加および顆粒球の貪食能の上昇、顆粒球の殺菌能を示すＮＢＴ（ニトロブルーテトラゾリウム）還元能値の上昇が認められた。
３）ストレス負荷試験
ストレスの軽減効果を有するかを検証した際の、ヒラメの血漿中のコルチゾル濃度の測定結果を図５に示した。図５より、空中曝露によるストレス負荷前（０時間）においては、血漿コルチゾル濃度はミネラル投与区が対照区に比べ低値となる傾向を示した。ストレス負荷終了後の回復期間では、１時間後、３時間後および２０時間後において、ミネラル投与区の血漿コルチゾル濃度は対照区のそれに対して有意に低い値となることが確認できた。
【００２５】
【表３】
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【００２６】
＜考察＞
以上の結果から、ヒラメに生物ミネラルを摂取させることで、空中放置に伴うストレスが軽減、すなわち過剰なストレス応答が抑制され、ストレスに対する免疫機能が向上していることが確認できた。このことから、輸送前後、あるいは輸送中に生物ミネラルを摂取させることで、ストレスを軽減しつつ輸送が可能となると考えられる。
【実施例２】
【００２７】
「外部寄生虫（ウミチョウ：アルグルス・スカチフォルミス））の寄生予防実験」
【００２８】
＜実験方法＞
１）供試魚
トラフグ６０尾（平均体重約３００ｇ、平均体長約２３ｃｍ）を水槽に導入し、１日馴致後、無作為に３０尾ずつ別々の水槽に分けた。その後５日間、表４に示す飼料を与え、試験環境になじませて試験に供した。
２）飼育試験環境
各水槽は屋外型陸上養殖用水槽（平面４ｍ×５ｍ、深さ２ｍ）を用いた。海水はポンプを用いて沖合５０ｍ地点から採水し、水温調節は行わず海水温のまま水槽に常時流入させた。ちなみに上記の各水槽は同一箇所から採水された海水を用いているので、全ての水槽に略同一種且つ同一数の寄生虫が存在している。
３）試験区の設定
上記２つの水槽の内の一方を飼料のみを与える対照区とし、他方を表１に示した生物ミネラルを２．５％の割合で混合したものを与える投与区として、３１日間の飼育を行った。給餌量は飽食を目安とし、１日の給餌を２回以上に分け、残餌状況に応じ給餌量を調整した。
【００２９】
【表４】
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【００３０】
＜結果＞
対照区と投与区からそれぞれ３匹ずつ、無作為にトラフグを選び、これらのトラフグの状態を観察した。その結果、対照区では３匹のトラフグ全てにウミチョウの寄生が確認されたが、投与区では３匹のトラフグの何れにもウミチョウの寄生が確認されなかった。同一の海水を流入させていること、および各区においては同じ水槽内にて飼育していることから、外部寄生虫の寄生の有無が、取り上げた３匹のみに偏っていることは統計学上考え難く、生物ミネラルの経口摂取により外部寄生虫の寄生が予防あるいは駆除できることが確認できた。このことから、活魚輸送において仮に寄生虫が付着したまま輸送を開始したとしても、ストレスを軽減しつつ、同所に収容されている魚への寄生虫の感染を予防あるいは駆除できることが明らかとなった。
【実施例３】
【００３１】
「キンギョへの水溶性生物ミネラル浸漬処理による白点虫感染症の治療に関する実験」
＜実験方法＞
白点虫に感染したキンギョ１０尾（平均体重約１５ｇ、平均体長約９ｃｍ）を２つの容量６０Lのガラス水槽に分けて収容した後、一方には魚病治療のうち殺菌処理を目的とした場合に一般的に行われる方法である「一日当たり、３０分間の浸漬処理×２回」の処理を行い、もう一方には何も処理を１０日間飼育した。なお、浸漬処理に用いた処理液は表５に示した水溶性生物ミネラル末を３０ｐｐｍ含む水溶液とした。
【００３２】
【表５】
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【００３３】
＜結果＞
飼育試験期間中のキンギョの生残率を図６に示した。飼育開始２日目において対照区で斃死が認められ、その後３〜５日目の間に大量斃死が起こり、全数が死滅した。しかしミネラル浸漬区においては明らかに白点虫の寄生個体数が減り、斃死数も対照区が全数死滅した５日後でも７５％、試験終了時の１０日後においても５５％と高い生残率を示した。
【００３４】
＜考察＞
前述の結果より、対照区においては白点虫の寄生状況に変化が認められず、大量の斃死個体もみられたが、ミネラル浸漬区では明らかに白点虫の寄生率が低下し、生残率も高まったことから、水溶性生物ミネラル末水溶液の浸漬により外部寄生虫症を治療できることが確認できた。このことから、活魚輸送において仮に寄生虫が付着したまま輸送を開始したとしてもストレスを軽減しつつ、同所に収容されている魚への寄生虫の感染を予防あるいは治療できることが明らかとなった。
【実施例４】
【００３５】
「生物ミネラル粉末による赤貝の鮮度回復効果」
輸入生鮮赤貝は鮮度が著しく低下する。鮮度が低下した赤貝は海水浴槽に蓄養しても斃死することが多いため、それを回復する方法として生物ミネラル粉末を溶かした海水浴槽にて赤貝を蓄養し、鮮度回復を試みた。試験方法は以下の通りである。
＜実験方法１  ミネラル濃度およびエアレーション時間を変えた場合の鮮度回復効果＞
30L水槽に海水を１５Ｌ入れ、表１に示した生物ミネラル粉末を０％(コントロール）、０．１％、０．５％、１．０％入れた浴槽を調整した。各浴槽に入荷して直ぐの鮮度が低下した赤貝（舌かみをしている赤貝）を10個体入れ、エアレーションをしつつ１、３、６、１２、２４時間浸漬した。舌かみの有無を観察し舌かみをしなくなった赤貝を効果ありとした。
【００３６】
＜結果＞
生物ミネラル粉末濃度０．１％が最も優れた鮮度回復効果を示し、その場合の浸漬３時間で舌かみが7割改善された。
＜実験方法２  鮮度回復した赤貝の長期飼育実験＞
鮮度が回復した赤貝で最大１週間、長期飼育が可能か検討した。１５Ｌの海水に生物ミネラル粉末を０．１％入れた浴槽に鮮度が低下した赤貝を5個体入れ、エアレーションをしつつ3時間浸漬した。この赤貝を通常の飼育方法（底面に砂を敷き詰め、海水を常時流水する）で飼育した。飼育開始後１日ごとに生存を観察し、斃死したものは解剖し舌かみ部分の回復具合を観察した。
【００３７】
＜結果および考察＞
生物ミネラル粉末で処理したものは斃死数が減った。実験１、２の結果より、生物ミネラル粉末を添加した海水にて、鮮度低下した赤貝を浸漬することで鮮度が回復すること、鮮度が回復した赤貝は長期飼育が可能であることが分かった。このことから、魚だけでなく他の水生動物においても生きたまま高い鮮度を維持しつつ輸送でき、かつ鮮度が低下しつつある個体についても、その回復を図ることが可能であることが示された。
【実施例５】
【００３８】
「小型観賞魚（ネオンテトラ）を用いた擬似運搬試験」
＜実験方法＞
１）供試魚および試験区の設定
ネオンテトラ（平均体重約５５ｍｇ）５尾を１試料群として，３試料群×４回サンプリング分×３試験区分＝２４０尾を準備した。
試験区は、通常の飼料を体重の２％給餌した対照区、通常の飼料に、表１で示した生物ミネラルを０．１％添加した餌を１日当たり体重の２％給餌した区（ミネラル経口投与区）、生物ミネラルを２００ｐｐｍ添加した水にて３日間飼育した後、振とう時にも生物ミネラルを２００ｐｐｍ添加した状態で実験した区（ミネラル浸漬区）とした。
２）擬似運搬試験環境および測定項目
運搬時の揺れや振動を再現するため、２４℃、１秒間１回の頻度で，２４時間振とう機にて振とう後、振とう終了直後、振とう終了１２時間後、２４時間後、７２時間後に試料（５個体群）を取り上げ、５個体の魚体重量の９倍量の緩衝液（ｐＨ７．４の３ｍｍｏｌ／ＬのＴｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液）内ですり潰した後、１０，０００ｇで遠心し，上清を２倍量のジエチルエーテルに移し入れて溶解した。その後、エーテルを揮発させ、コルチゾル濃度をコルチゾルＥＩＡキット（Ｏｘｆｏｒｄ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ｒｅｓｅｒｃｈ社製）で測定した。
【００３９】
＜結果および考察＞
図７に、振とうストレス負荷に伴う体内コルチゾル含量の経時変化（ストレス負荷前の値を１００とした相対値で表示）を示す。ストレス負荷直後およびストレス負荷終了から７２時間後では、３区間に差は無かったが、ストレス負荷終了から１２時間後においてミネラル経口投与区およびミネラル浸漬区は対照区に比べ低い傾向にあり、特にストレス負荷終了から２４時間後においては、ミネラル経口投与区およびミネラル浸漬区において、対照区に比べ有意に低い値が認められた。このことから、輸送前後あるいは輸送中に生物ミネラルを経口投与あるいは水溶性生物ミネラル溶液に浸漬することで、ストレス負荷を受けても回復が早まる状態で輸送が可能となることが示され、運搬後の免疫低下や病気発生、生残率の低下が効率よく防げると考えられた。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図６】
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【図７】
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【図５】
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