(57)【要約】【課題】実用的かつ簡便に利用できる構造を備えたクロマトグラフデバイスを得る。【解決手段】試料液を展開するためのクロマトグラフ用担体５と、クロマトグラフ用担体５の反応部51を構成する一部を挟んで対向する位置に、クロマトグラフ用担体５に一端を接触可能に配された添加パッド６および吸液パッド７と、添加パッド６の他端６ｂが貯蔵液に浸漬可能な位置に配置された液体貯蔵ポッド８と、両パッド６，７がクロマトグラフ用担体５に接触しないように、両パッド６，７と、クロマトグラフ用担体５との間に挿入された接触防止シート９とを備え、接触防止シート９がクロマトグラフ用担体５と両パッド６，７との間から除去されることにより、クロマトグラフ用担体５と両パッド６，７とが接触して、添加パッド６により貯蔵液が反応部51に添加され、反応部51に添加された液が吸液パッド７に吸収されるように構成する。【選択図】図１
2010156571.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
試料液を展開するためのクロマトグラフ用担体と、
該クロマトグラフ用担体の反応部を構成する一部を挟んで対向する位置に、該クロマトグラフ用担体に一端を接触可能に配された添加パッドおよび吸液パッドと、
前記添加パッドの他端が貯蔵液に浸漬可能な位置に配置された液体貯蔵ポッドと、
前記添加パッドと前記吸液パッドとが、前記クロマトグラフ用担体に接触しないように、前記両パッドと、前記クロマトグラフ用担体との間に挿入された接触防止シートとを備え、
前記接触防止シートが前記クロマトグラフ用担体と前記両パッドとの間から除去されることにより、前記クロマトグラフ用担体と前記両パッドとが接触して、前記添加パッドにより前記貯蔵液が前記反応部に添加され、該反応部に添加された液が前記吸液パッドに吸収されるように構成されていることを特徴とするクロマトグラフデバイス。
【請求項２】
前記クロマトグラフ用担体、前記両パッド、および前記液体貯蔵ポッドが、前記反応部が外部から視認可能とされた、本体と蓋体とからなるケースに収容され、
前記蓋体の、前記液体貯蔵ポッド上に位置する部分に、押圧により該液体貯蔵ポッド方向に折れ曲がる爪部が備えられており、
前記接触防止シートは前記液体貯蔵ポッドを跨ぐように配され、該接触防止シートの、前記液体貯蔵ポッドの前記反応部から遠い側に延びた部分が、前記本体の一部に固定されており、
前記爪部の、前記液体貯蔵ポッド方向への折れ曲がり動作に伴い、前記接触防止シートが、該接触防止シートの一部が前記液体貯蔵ポッド中に押し込まれると共に、前記クロマトグラフ用担体と前記両パッドの間から引き抜かれ、同時に前記添加パッドの前記他端が、前記液体貯蔵ポッド中の液に浸漬するように構成されていることを特徴とする請求項１記載のクロマトグラフデバイス。
【請求項３】
前記接触防止シートが、前記液体貯蔵ポッドを覆うように配されて、前記液体貯蔵ポッド中に前記液を封止する機能を備えていることを特徴とする請求項１または２記載のクロマトグラフデバイス。
【請求項４】
前記両パッドが前記蓋体に固定されていることを特徴とする請求項１から３いずれか１項記載のクロマトグラフデバイス。
【請求項５】
前記両パッドが、前記接触防止シートを介して、前記クロマトグラフ用担体と一部重なるように配置されており、
前記蓋体の、前記両パッドと、前記クロマトグラフ用担体とがそれぞれ重なる部分に対応する箇所に、前記両パッドを前記クロマトグラフ用担体側に付勢する付勢部材が設けられていることを特徴とする請求項１から４いずれか１項記載のクロマトグラフデバイス。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、被験物質を検出するクロマトグラフ法を実施するための、クロマトグラフデバイスに関するものである。
【背景技術】
【０００２】
尿、血液等の生体試料中に存在する被検物質の存在を定性的に、あるいは定量的に測定する方法として、免疫学的測定方法が汎用されている。その中でもイムノクロマトグラフ法は、操作が簡便であり、短時間で測定可能であることから、利便性が高い。
【０００３】
イムノクロマトグラフ法で用いられている免疫反応としては、競合型反応、サンドイッチ型反応が広く使われている。例えば、サンドイッチ型反応を利用したイムノクロマトグラフ法では、分析対象物（例えば、抗原）に特異的に結合する抗体を特定の領域に固定した、例えば、ガラス繊維膜、ナイロン膜、またはセルロース膜などから構成されるクロマトグラフ担体中に、被験物質と特異的に結合する標識化された抗体と、被験物質を含む可能性のある検体溶液とを展開し、不溶性薄膜上支持体の上述の特定の領域に、固定化抗体−被験物質−標識化抗体の免疫複合体を形成させ、標識物の着色または発色などの信号を検出し、被験物質を測定することができる。なお、標識物としては、酵素を含む蛋白質、着色ラテックス粒子、金属コロイド、または炭素粒子を使用することができる。
【０００４】
一方、天然物、毒素、ホルモン、または農薬等の生理活性物質または環境汚染物質は、従来の一般的イムノクロマトグラフ法では検出できない極微量で作用する物質が多く、また、インフルエンザなどの感染症の感染初期は検体に含まれるウィルスが極微量であるために精度の高い検出ができない場合が多い。従って、被験物質が極微量であっても検出できる、迅速、簡便かつ高感度なイムノクロマトグラフ法の開発が求められている。
【０００５】
シグナル増幅を行い、高感度化するイムノクロマトグラフ法として、酵素による増幅方法（特許文献１）や、銀増幅による方法（特許文献２および３）などが提案されている。シグナルを増幅する際には、同時にバックグランドにある標識物によるノイズも増幅してしまうため、最終的に検出感度を上げるためには、バックグランドにある標識物によるノイズを低減することが特に必要である。特許文献１では酵素増幅イムノクロマトグラフ方において、洗浄液を流すことで、バックグランドの標識物を反応部から除去するとしている。同様に、特許文献２、３には、反応部に非特異吸着している金属標識を除去（洗浄）した上で、増幅処理を行うことが記載されている。
【特許文献１】特許３３０９９７７号公報
【特許文献２】特開２００２−２０２３０７号公報
【特許文献３】特開２００８−１３９２９６号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
しかしながら、本発明者らの検討によれば、特許文献１の方法による洗浄方法では、より高感度な検査を行うには、洗浄効果が十分であるとは言えないことが明らかになった。また、特許文献２、３においては、反応部に非特異吸着している金属標識を除去する方法としては、例えば緩衝液による洗浄によって行うことができると記載されているのみであり、具体的な方法や機構については何ら開示されていない。
【０００７】
そこで、上述のようなシグナル増幅を伴う高感度なイムノクロマトグラフ法を実現可能な実用的なクロマトグラフデバイスとして、実用的かつ簡便に、未反応の標識（非特異吸着している標識）などの不要物質を反応部から効果的に除去することができ、より高感度な検出を可能とする構造を備えたクロマトグラフデバイスが望まれている。
【０００８】
なお、クロマトグラフデバイスとしては、クロマトグラフ用担体に試料液を展開させた後、反応部に試料液とは異なる液体を毛細管力により浸透させるための構造を有するものであれば、洗浄液のみならず、別の目的の液体を流す（浸透させる）場合にも有用である。
【０００９】
本発明は、上記事情に鑑みてなされたものであり、クロマトグラフ用担体の反応部に、試料液、および該試料液とは異なる液体を順次効率よく浸透させることができる実用的かつ簡便に利用できる構造を備えたクロマトグラフデバイスを提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明のクロマトグラフデバイスは、試料液を展開するためのクロマトグラフ用担体と、
該クロマトグラフ用担体の反応部を構成する一部を挟んで対向する位置に、該クロマトグラフ用担体に一端を接触可能に配された添加パッドおよび吸液パッドと、
前記添加パッドの他端が貯蔵液に浸漬可能な位置に配置された液体貯蔵ポッドと、
前記添加パッドと前記吸液パッドとが、前記クロマトグラフ用担体に接触しないように、前記両パッドと、前記クロマトグラフ用担体との間に挿入された接触防止シートとを備え、
前記接触防止シートが前記クロマトグラフ用担体と前記両パッドとの間から除去されることにより、前記クロマトグラフ用担体と前記両パッドとが接触して、前記添加パッドにより前記貯蔵液が前記反応部に添加され、該反応部に添加された液が前記吸液パッドに吸収されるように構成されていることを特徴とするものである。
【００１１】
「試料液を展開する」とは、試料液を、クロマトグラフ用担体中を滴下位置から少なくとも反応部まで毛細管現象により浸透（流動）させることをいう。
クロマトグラフ用担体における「反応部」は、少なくとも被験物質および該被験物質と結合した標識化物質が特異的に捕捉結合される領域を含む部位であり、一般にクロマトグラフデバイスにおいては、この反応部からの標識信号を視認することにより試料液中の被験物質の有無を確認することができる。
【００１２】
添加パッドおよび吸液パッドはいずれも毛細管現象により液体が浸透（流動）可能な担体であればよい。添加パッドにより反応部に添加される、液体貯蔵ポッドに貯蔵される貯蔵液としては、反応部に非特異的に吸着している標識化物質（未反応標識化物質）を除去するための洗浄液、あるいは、シグナル増強のための増強液等が挙げられる。
【００１３】
本発明のクロマトグラフデバイスは、さらに、前記クロマトグラフ用担体、前記両パッド、および前記液体貯蔵ポッドが、前記反応部が外部から視認可能とされた、本体と蓋体とからなるケースに収容され、
前記蓋体の、前記液体貯蔵ポッド上に位置する部分に、押圧により該液体貯蔵ポッド方向に折れ曲がる爪部が備えられており、
前記接触防止シートは前記液体貯蔵ポッドを跨ぐように配され、該接触防止シートの、前記液体貯蔵ポッドの前記反応部から遠い側に延びた部分が、前記本体の一部に固定されており、
前記爪部の、前記液体貯蔵ポッド方向への折れ曲がり動作に伴い、前記接触防止シートが、該接触防止シートの一部が前記液体貯蔵ポッド中に押し込まれると共に、前記クロマトグラフ用担体と前記両パッドの間から引き抜かれ、同時に前記添加パッドの前記他端が、前記液体貯蔵ポッド中の液に浸漬するように構成されていることが好ましい。
【００１４】
さらに、前記接触防止シートは、前記液体貯蔵ポッドを覆うように配されて、前記液体貯蔵ポッド中に前記液を封止する機能を備えていることが望ましい。
【００１５】
前記両パッドは、前記接触防止シートが前記クロマトグラフ用担体と前記両パッドとの間から除去される際に、位置ズレを生じないように配置されている。両パッドはケース内に位置ズレを生じないように固定されていればどのような形態で固定されていてもよいが、特に、前記蓋体に固定されていることが望ましい。
【００１６】
さらに、前記両パッドが、前記接触防止シートを介して、前記クロマトグラフ用担体と一部重なるように配置されており、前記蓋体の、前記両パッドと、前記クロマトグラフ用担体とがそれぞれ重なる部分に対応する箇所に、前記両パッドを前記クロマトグラフ用担体側に付勢する付勢部材が設けられていることが望ましい。付勢部材は、ゴムなどの弾性体、バネ等により構成することができる。
【発明の効果】
【００１７】
本発明のクロマトグラフデバイスは、添加パッドと吸液パッドとが、クロマトグラフ用担体に接触しないように、両パッドと、クロマトグラフ用担体との間に挿入された接触防止シートを備えているので、試料液を展開させている際に、試料液が両パッドに滲出するのを防止することができ、また、接触防止シートが除去されることにより、クロマトグラフ用担体と両パッドとが接触して、添加パッドにより貯蔵液が反応部に添加され、該反応部に添加された液が吸液パッドに吸収されるように構成されているので、接触防止シートの除去という非常に簡便な操作で、反応部に対して新たな液を効率的に浸透させることができる。
【００１８】
クロマトグラフ用担体と、添加パッドおよび吸液パッドとを備えた構成においては、クロマトグラフ用担体に試料液を展開させる際に、添加パッドおよび吸液パッドがクロマトグラフ用担体に接触していると、試料液が両パッド側に流れてしまい、反応部での被験物質の反応量が減少することが考えられるが、本発明のクロマトグラフデバイスでは、両パッドをクロマトグラフ用担体と接触させることなく、試料液の展開を行うことができるため、効率よく被験物質を反応させることができ、試料液展開後に、濡れていない両パッドを反応部近傍に接触させることにより、液体貯蔵ポッド中の液体を効率的に反応部に浸透させることができる。
【００１９】
特に、ケースの蓋体の、液体貯蔵ポッド上に位置する部分に、押圧により該液体貯蔵ポッド方向に折れ曲がる爪部が備えられて、この爪部の、液体貯蔵ポッド方向への折れ曲がり動作に伴い、接触防止シートの一部が前記液体貯蔵ポッド中に押し込まれると共に、接触防止シートがクロマトグラフ用担体と両パッドの間から引き抜かれ、同時に添加パッドの他端が、液体貯蔵ポッド中の液に浸漬するように構成されていれば、一度の操作により確実に液体貯蔵ポッド中の液を反応部に供給し吸液パッド側へ浸透させることができ、非常に利便性が高い。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２０】
＜第１の実施形態＞
以下、本発明のクロマトグラフデバイスに係る実施形態として、高感度イムノクロマトグラフ法を実施することができるクロマトグラフデバイス１について説明する。図１はクロマトグラフデバイス１のケース２を構成する本体３と蓋体４とを分離した状態での全体構成を示す斜視図、図２は本体３の上面図、図３Ａ、図３Ｂは図１のクロマトグラフデバイス１において本体３と蓋体４とによりケース２を構成させた状態のクロマトグラフデバイス１の断面図であり、後述する爪部４２の押圧操作前および押圧操作時を示す。
【００２１】
本実施形態のクロマトグラフデバイス１は、被験物質として所定の抗原をサンドイッチアッセイ免疫法により検出するためのものとして説明する。なお、本発明はサンドイッチ法によるものに限定されるものでないのは言うまでもなく、抗体固定化競合法、抗原固定化競合法、および固定化抗原法などについても適用可能である。
【００２２】
クロマトグラフデバイス１はケース２を構成する本体３および蓋体４と、ケース２内に収容された、試料液を展開するためのクロマトグラフ用担体５と、クロマトグラフ用担体５の反応部５１を挟んで対向する位置に、該クロマトグラフ用担体５に一端６ａおよび７ａを接触可能に配された添加パッド６および吸液パッド７と、添加パッド６の他端６ｂが貯蔵液１５に浸漬可能な位置に配置された液体貯蔵ポッド８と、添加パッド６と吸液パッド７とが、クロマトグラフ用担体５に接触しないように、両パッド６、７と、クロマトグラフ用担体５との間に挿入された接触防止シート９とを備えている。ケース２は、クロマトグラフ用担体５の反応部５１が視認可能に構成されている。本実施形態においては、図３Ａおよび図３Ｂに示すように、本体３の反応部５１が位置する部分に開口３１が設けられており、この開口３１から反応部５１を視認可能に構成されている。
【００２３】
また、本クロマトグラフデバイス１は、接触防止シート９がクロマトグラフ用担体５と両パッド６、７との間から除去されることにより、クロマトグラフ用担体５と両パッド６、７とが接触して、添加パッド６から反応部５１に液体貯蔵ポッド８の貯蔵液１５が添加（送液）され、反応部５１の液体は吸液パッド７に吸収されるように構成されている。
【００２４】
接触防止シート９は液体貯蔵ポッド８を跨ぐように配され、接触防止シート９の、液体貯蔵ポッド８の、反応部５１から遠い側に延びた部分９ａが、本体３の一部に固定されている。
【００２５】
本実施形態においては、液体貯蔵ポッド８は本体３の一部として、本体３に一体的に構成されて、洗浄液１５を貯蔵している。また、液体貯蔵ポッド８の上面は貯蔵液である洗浄液１５が漏洩しないようにシール材１０により蓋がされている。シール材１０としては、後述の爪部４２の折れ曲がり動作時に破断される材料を適宜選択すればよい。なお、液体貯蔵ポッド８は、本体３とは別体の容器により構成され、本体３の一部に設置する形態であってもよい。
【００２６】
洗浄液１５としては、例えば、１％ＢＳＡ入りのＰＢＳバッファーを用いていることができるが、特異的な結合反応以外でクロマトグラフ用担体５に残存している、つまり非特異的に残存している標識化物質を洗浄するための液体であれば特に制限されない。洗浄効果を上げる為にそのｐＨを調整した洗浄液や、界面活性剤成分やＢＳＡなどのタンパク質、ポリエチレングリコールなどの高分子化合物を加えた洗浄液を用いても良い。
【００２７】
蓋体４は、その液体貯蔵ポッド８上に位置する部分に、スリット４１により一部分離された、押圧により液体貯蔵ポッド８方向に折れ曲がる爪部４２を備え、試料液をケース２外部からクロマトグラフ用担体５に滴下するための注入口４３を備えている。
【００２８】
蓋体４の爪部４２を、図３Ｂ矢印Ｐ方向に押圧することにより、爪部４２は液体貯蔵ポッド８の方向へ折れ曲がり、この折れ曲がり動作に伴い、接触防止シート９の一部が液体貯蔵ポッド８中に押し込まれると共に、接触防止シート９がクロマトグラフ用担体５と両パッド６、７の間から引き抜かれ、両パッド６、７はクロマトグラフ用担体５と接触し、同時に添加パッド６の他端６ｂが、液体貯蔵ポッド８中の液１５に浸漬する。これにより、添加パッド６の他端６ｂから洗浄液が毛細管現象により矢印Ｂ方向に徐々に浸透し、反応部５１を流動し、さらに、吸液パッド７側へ移動することとなる。すなわち、添加パッド６、反応部５１、吸液パッド７により、洗浄液送液の流路が構成される。なお、接触防止シート９の一端部分９ａはこの爪部４２の折れ曲がり動作時にもはずれない程度の接着力で本体３に固定されており、また、添加パッド６および吸液パッド７は、シート９が除去される際に移動しないようにケース２内に固定されている。
【００２９】
添加パッド６、吸液パッド７はそれぞれ液体を毛細管現象より浸透移動させるものであれば特に制限はないが、グラスファイバー、セルロース、ニトロセルロースあるいはそれらの混合体などからなるパッド、メンブレンなどを特に好ましく適用できる。
【００３０】
クロマトグラフ用担体５は、少なくとも、被験物質と特異的に結合可能な第１の結合物質が固定化された少なくとも１つの検出ゾーン５２を有する反応部５１を有し、試料液を毛細管現象により流動させる（展開する）ことができるものであれば特に制限はなく、一般的にクロマトグラフ法において用いられている所謂クロマトグラフ用ストリップを適用することができる。
【００３１】
クロマトグラフ用担体５の一部に設けられた反応部５１の検出ゾーン５２には、被験物質と特異的に結合する第１の結合物質が付与されており、クロマトグラフ用担体５の、試料液が滴下される注入口４３に対応する試料添加領域５４から反応部５１に至るまでの一部領域に、被験物質と特異的に結合する、視認可能に標識された第２の結合物質（標識化物質）が付与された標識化物質保持領域５５が設けられている。
【００３２】
本実施形態において被験物質は所定の抗原であり、クロマトグラフ用担体５の反応部５１の検出ゾーン５２には該所定の抗原と特異的に結合する第１の結合物質として所謂１次抗体が付加されている。また、標識化物質保持領域５５には、標識化物質として金微粒子により標識された所謂標識２次抗体が付加されている。
【００３３】
さらに、反応部５１の検出ゾーン５２よりも下流側には２次抗体と結合する参照用抗原（あるいは抗体）が付加された検査終了確認ゾーン（コントロールゾーン）５３が設けられている。また、クロマトグラフ用担体５の最も下流側端部には試料液が逆戻りすることがないように試料液を吸水する吸水領域５７が設けられている。
【００３４】
図４および図５はクロマトグラフ用担体５の具体的な一例を示す平面図および断面図である。本例のクロマトグラフ用担体５は、試料液の展開方向（矢印Ａ方向）の上流から下流に向かって、試料添加領域５４を構成する試料添加パッド、標識化物質保持領域５５を構成する標識化物質保持パッド、反応部５１を有する主クロマトグラフ担体５６、吸水領域５７を構成する吸水パッドがこの順に、透明シート５８上に配置固定されている。
【００３５】
試料添加領域５４を構成する試料添加パッドは、その材料として、セルロース濾紙、ガラス繊維、ポリウレタン、ポリアセテート、酢酸セルロース、ナイロン、及び綿布等の均一な特性を有するものが適するが、これらに限定されるものではない。試料添加パッドは、添加された被験物質を含む試料液を受入れるだけでなく、試料液中の不溶物粒子等を濾過する機能をも兼ねる。また、分析の際、試料液中の被験物質が試料添加パッドの材質に非特異的に吸着し、分析の精度を低下させることを防止するため、試料添加パッドを構成する材質は、予め非特異的吸着防止処理して用いることもある。
【００３６】
標識化物質保持領域５５を構成する標識化物質保持パッドは、標識化物質（ここでは、所謂標識２次抗体）を含む懸濁液を調製し、その懸濁液を適当な吸収パッドに塗布した後、それを乾燥することにより調製することができる。標識化物質保持パッドの素材としては、例えば、セルロース濾紙、グラスファイバー、及び不織布等が挙げられる。
【００３７】
標識としては、金微粒子のみならず、その他の金属コロイド又は金属硫化物、その他金属合金、また金属を含むポリマー粒子標識を用いることができる。粒子（又はコロイド）の平均粒径は、０．０２〜１０μｍの範囲が好ましい。例えば、金コロイド、銀コロイド、白金コロイド、鉄コロイド、水酸化アルミニウムコロイド、およびこれらの複合コロイドなどが挙げられ、好ましくは、金コロイド、銀コロイド、白金コロイド、およびこれらの複合コロイドである。特に、金コロイドと銀コロイドが適当な粒径において、金コロイドは赤色、銀コロイドは黄色を示し視認度が高い点で好ましい。金属コロイドの平均粒径としては、約１ｎｍ〜５００ｎｍが好ましく、１〜５０ｎｍがさらに好ましい。なお、信号増幅を行わない一般的なイムノクロマトグラフ法として用いる場合には、金属微粒子、着色ラテックス粒子、酵素など、有色で視認できる、または、反応により検出できるようになる標識物であればなんでも良い。信号増幅を行わない系においても、本クロマトグラフデバイスは、効率よく洗浄を行うことができることからバックグラウンドを低減させることができため、Ｓ／Ｎを向上させる効果を得ることができる。
【００３８】
標識である金属コロイドと第２の結合物質（ここでは、２次抗体）との結合は、従来公知の方法（例えばＴｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｃｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｖｏｌ．３０，Ｎｏ．７，ｐｐ６９１−６９６，（１９８２））に従い、行うことができる。すなわち、金属コロイドと第一の結合可能な物質を適当な緩衝液中で室温下５分以上混合し、反応後、遠心分離により得た沈殿を、ポリエチレングリコ−ル等の分散剤を含む溶液中に分散させることにより、目的の金属コロイド標識化物質を得ることができる。
【００３９】
主クロマトグラフ担体５６は、反応部５１として、被験物質である抗原と特異的に結合する第１の結合物質としての所謂１次抗体を固定化させた検出ゾーン５２と、標識化された第２の結合物質である所謂標識２次抗体と結合する参照用抗原（あるいは抗体）が付加された検査終了確認ゾーン（コントロールゾーン）５３を備えている。第１の結合物質は、クロマトグラフ担体５６の一部に物理的または化学的結合により直接固定化させてもいいし、第１の結合物質をラテックス粒子などの微粒子に物理的または化学的に結合させ、この微粒子をクロマトグラフ担体５６の一部にトラップさせて固定化させてもいい。参照用抗原も同様の方法で固定化させることができる。なお、主クロマトグラフ担体５６は、第１の結合物質を固定化後、不活性蛋白による処理等により非特異的吸着防止処理をして用いるのが好ましい。
【００４０】
主クロマトグラフ担体５６としては、多孔性担体が好ましい。毛細管現象により液体を移動させることができる材料であれば制限はないが、特に、ニトロセルロース膜、セルロース膜、アセチルセルロース膜、ポリスルホン膜、ポリエーテルスルホン膜、ナイロン膜、ガラス繊維、不織布、布、または糸等が好ましい。
【００４１】
吸水領域５７を構成する吸水パッドは、クロマトグラフ用担体５を矢印Ａ方向に移動してきた試料液が反応部５１側へ逆流しないように試料液を吸収するものであり、セルロ−ス濾紙、不織布、布、セルロースアセテート等吸水性材料が好適に用いられる。添加された試料液のクロマト先端部が吸水パッドに届いてからのクロマトの速度は、吸水パッドの材質、大きさなどにより変化するので、被験物質の測定に合った速度を達成する材質、大きさを選択すればよい。
【００４２】
さらに、高感度イムノクロマトグラフ法を実施するため、標識信号を増幅させるための増幅液を別途用意する。なお、増幅液はクロマトグラフデバイス１と共にセットで提供されるものとすることが好ましい。
【００４３】
反応部５１の検出ゾーン５２において、１次抗体―被験物質―標識２次抗体の複合体を形成させた後に、無機銀塩、有機銀塩などの銀を含む化合物から供給される銀イオンおよび銀イオンのために還元剤を接触させる事で、銀粒子が金属系標識を核として金属系標識上に沈着し、金属系標識が増幅され、被験物質の分析を高感度に実施することができる。
【００４４】
この銀を含む化合物および還元剤を含む増幅液としては、写真化学の分野での一般書物（例えば、「改訂写真工学の基礎-銀塩写真編-」（日本写真学会編、コロナ社）、「写真の化学」（笹井明、写真工業出版社）、「最新処方ハンドブック」（菊池真一他、アミコ出版社））に記載されているような、いわゆる現像液を用いる。液中に銀イオンを含み、液中の銀イオンが現像の核となるような金属コロイド等の金属系標識を中心に還元される、いわゆる物理現像液であればよく、還元可能な銀イオンを含む各種銀塩、銀錯体などの化合物と、銀イオンを銀に還元することができる無機、有機のいかなる材料、またはその混合物からなる還元剤とを含むものであればよい。なお、増幅液には、その他の助剤として、緩衝剤、防腐剤、例えば酸化防止剤または有機安定剤、速度調節剤を含む場合がある。緩衝剤としては、例えば、酢酸、クエン酸、水酸化ナトリウムまたはこれらのどれかの塩、またはトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンを用いた緩衝剤、その他一般的化学実験に用いられる緩衝剤を用いることができる。これら緩衝剤を適宜用いて、その増幅液に最適なｐＨに調整することができる。
【００４５】
本実施形態のクロマトグラフデバイス１においては、増幅液は、試料液を滴下する注入口４３から注入してもよい。一方、蓋体４を本体３から取り外し、添加パッド６上に増幅液を滴下して反応部５１へ浸透させてもよいし、反応部５１に、増幅液を直接滴下するようにしてもよい。さらには、本実施形態のクロマトグラフデバイス１においては、増幅液を貯蔵するポッドを備えていないが、増幅液を貯蔵する増幅液貯蔵ポッドおよび増幅液を反応部５１に浸透させるための構造をさらに備えるよう構成してもよい。
【００４６】
＜検査工程＞
本実施形態のクロマトグラフデバイス１を用いた、試料液中に所定の抗原が存在するか否かについてのイムノクロマトグラフ法による検査工程について説明する。
まず、注入口４３からクロマトグラフ用担体５の試料添加領域５４に検査対象である試料液を滴下する。試料液は、クロマトグラフ用担体５内を毛細管現象により矢印Ａ方向に徐々に浸透移動する。試料液中に被験物質である抗原が含まれている場合、試料液中の抗原はクロマトグラフ用担体５の試料添加領域５４から下流側の標識化物質保持領域５５に付加されている標識２次抗体（標識化物質）と結合し、クロマトグラフ用担体５内を反応部５１側へと浸透移動する。この際、抗原と結合していない標識２次抗体も一緒に反応部５１側へと流される。標識２次抗体と結合した抗原が、反応部５１の検出ゾーン５２に固定されている１次抗体と結合し、抗原が１次抗体と標識２次抗体で挟み込まれたいわゆるサンドイッチが形成される。さらに抗原と結合していない標識２次抗体が反応部での検査終了を確認するためのコントロールゾーン５３に固定されている参照用抗原と結合する。標識２次抗体が参照用抗原と結合するとコントロールゾーン５３において金微粒子からの赤色が視認でき、試料液が確かに検出ゾーン５２およびコントロールゾーン５３まで流れてきていることを確認することができる。
【００４７】
なお、この際、検出ゾーン５２およびその近傍に、１次抗体とサンドイッチを形成していない標識２次抗体が非特異吸着して存在し、それらは検出ゾーン５２における標識信号のバックグラウンドとなり、Ｓ／Ｎの向上を妨げる。そこで、次にこの非特異吸着している標識２次抗体を反応部５１、特には検出ゾーン５２から除去するため洗浄操作を行う。使用者が、蓋体４の爪部４２を図３Ｂ中矢印Ｐ方向に指等により押圧する。押圧により爪部４２は液体貯蔵ポッド８の方向へ折れ曲がり、この折れ曲がり動作に伴い、接触防止シート９の一部が液体貯蔵ポッド８中に押し込まれると共に、接触防止シート９がクロマトグラフ用担体５と両パッド６、７の間から引き抜かれ、両パッド６、７はクロマトグラフ用担体５と接触し、同時に添加パッド６の他端６ｂが、液体貯蔵ポッド８中の洗浄液１５に浸漬する。添加パッド６が洗浄液１５を反応部５１に供給し、吸液パッド７が反応部５１から液体を吸収することにより、洗浄液１５は反応部５１に送液され、洗浄液１５により反応部５１における非特異吸着標識２次抗体が除去される。
【００４８】
洗浄工程の後、注入口４３より増幅液を注入する。増幅液はクロマトグラフ用担体５中を反応部５１側に浸透移動し、反応部５１の金属標識に銀イオンおよび還元剤を接触させ、還元剤による銀イオンの還元により生じた銀粒子を標識に沈着させる。
【００４９】
このような状態でケース２の本体３の開口３１から免疫反応の結果を目視する。
【００５０】
本実施形態のクロマトグラフデバイス１を用いれば、上述の通り、クロマトグラフ用担体５と添加パッド６および吸液パッド７とが接触していない状態で試料液をクロマトグラフ用担体５において矢印Ａ方向に展開させ、試料液を反応部５１で反応させた後に、添加パッド６および吸液パッド７をクロマトグラフ用担体５に接触させると共に、添加パッド６の一端を洗浄液１５に浸漬させることにより、添加パッド６から反応部５１へ洗浄液１５を供給させ、反応部５１の液体を吸液パッド７により吸収することにより、洗浄液は反応部５１を経て吸液パッド７側へ吸液されることにより、反応部の洗浄工程が効率よくなされる。
【００５１】
本実施形態のクロマトグラフデバイス１によれば、爪部４２の一度の押圧操作により、洗浄液を確実に反応部に送液することができることから、非常に実用的かつ簡便に使用できる。また、洗浄液をクロマトグラフ用担体の試料展開方向（矢印Ａ方向）と反応部で交差する方向に流すことにより、洗浄効果が高く、バックグラウンドを効果的に抑制することができる。
反応領域の非特異吸着している標識を洗浄してバックグラウンドを低減させた上で、金属標識に銀粒子を沈着させることにより標識信号を増幅することができるため、増幅液による信号増幅の作用は、より効果的になり、非常に高感度な分析が可能となる。
【００５２】
上記実施形態においては、試料液展開用のクロマトグラフ用担体５と試料液とは異なる液体（上記実施形態においては洗浄液）を流すための添加パッド６および吸液パッド７とがほぼ直交する例を挙げたが、試料液の展開流路と洗浄液の流路とが、クロマトグラフ用担体５の反応部５１で交差するよう配置されていれば、直交していなくてもよい。また、添加パッド６および吸液パッド７とはほぼ直線状に配置されている構成としたが、本発明は、両パッドが直線状からずれて配置される形態を排除するものではない。両者は、クロマトグラフ用担体５の反応部５１を介して洗浄液の流路を形成するよう構成されていればよく、この洗浄液の流路を形成するとは、添加パッド６の他端６ｂから毛管力により給水された液体が、反応部５１を経て、全体として吸液パッド側に吸水される流れが形成されることをいう。
【００５３】
また、接触防止シート９は、爪部４２の折れ曲がり動作に伴いクロマトグラフ用担体５と添加パッド６および吸液パッド７との間から除去される形態に限らず、例えば、接触防止シート９の一端をケースの一部（例えば、蓋体４のスリット４１）から外部に延出させておき、その延出部を引っ張ることにより、接触防止シート９を第１の不溶性担体と第２および第３の不溶性担体の間から引き抜いて、第１の不溶性担体と第２および第３の不溶性担体との接触を確保するように構成されていてもよい。なお、この引き抜き動作に引き続き、爪部を押圧することにより、上記実施形態の場合と同様に、添加パッド６の他端６ｂを液体貯蔵ポッド８中の貯蔵液に浸漬させることができる。
【００５４】
以下、他の実施形態のクロマトグラフデバイスについて説明する。なお、以下においては、第１の実施形態のクロマトグラフデバイスと同一の要素には同一符号を付し詳細な説明を省略する。
【００５５】
＜第２の実施形態＞
図６は第２の実施形態のクロマトグラフ媒体の本体３の平面図である。なお蓋体４は第１の実施形態のものと同様である。
第２の実施形態のクロマトグラフ媒体は、接触防止シート１９が、液体貯蔵ポッド８の蓋を兼ねるものである。図６に示すように、接触防止シート１９の一端１９ａ側を液体貯蔵ポッド８の上面を覆う大きさとする。このとき、爪部４２の折れ曲がり動作の際に、シート１９はクロマトグラフ用担体５と添加パッド６および吸液パッド７との間から引き抜かれると共に、その一部が液体貯蔵ポッド８の液体中に浸漬し、シート１９上に液体が漏れ出てきて、添加パッド６の他端６ｂがシート１９上で液体に浸漬するようにすればよい。この場合もシート１９の一端１９ａは、爪部４２の折れ曲がり動作の際にもはずれない程度の固定力で固定しておく。
【００５６】
本実施形態のクロマトグラフデバイスによれば、第１の実施形態のクロマトグラフデバイスと同様の効果を得ることができると共に、さらに、接触防止シート１９が液体貯蔵ポッド８のシール材を兼ねるため、製造コストを抑制することができる。
【００５７】
＜第３の実施形態＞
図７は第３の実施形態のクロマトグラフデバイスの断面図である。
本実施形態のクロマトグラフデバイスは、蓋体１４の形状が第１の実施形態と異なり、添加パッド６および吸液パッド７はいずれも、蓋体１４側に固定されている。接触防止シート９が抜かれるときに、両パッド６、７が移動しない構成を、両パッド６、７を蓋体側に固定することにより容易に達成することができる。
【００５８】
＜第４の実施形態＞
図８は第４の実施形態のクロマトグラフデバイスの断面図である。
本実施形態のクロマトグラフデバイスにおいては、第１から第３の実施形態と同様に、添加パッド６および吸液パッド７は、接触防止シート９を介して、クロマトグラフ用担体５と一部重なるように配置されている。一方、蓋体２４の形状が第１の実施形態と異なり、蓋体２４の、両パッド６、７とクロマトグラフ用担体５とがそれぞれ重なる部分に対応する箇所に、両パッドをクロマトグラフ用担体５側に付勢する付勢部材４５が設けられている。付勢部材４５は、ゴム等の弾性部材、バネ部材等から構成され、接触防止シート９をクロマトグラフ用担体５と両パッド６、７との間から除去する際に妨げとならない程度の付勢力で両パッド６、７をクロマトグラフ用担体５側に付勢するものである。
【００５９】
洗浄液を反応部へ送液するに際には、クロマトグラフ用担体５と両パッド６、７とは接触していればよいが、この付勢部材４５により、その接触状態をより確実なものとすることができる。
【００６０】
＜設計変更例＞
なお、図９Ａおよび図９Ｂは、第１から第３の実施形態のクロマトグラフデバイスにおける設計変更例として、クロマトグラフ用担体５と両パッド６、７の他の配置を示す断面図である。
【００６１】
上記第１から第４の実施形態で示したように、クロマトグラフ用担体５と両パッド６、７とは、一部重なるように配置されていることが好ましいが、クロマトグラフ用担体５と両パッド６、７は接触防止シート９が間から除去された際に、クロマトグラフ用担体５と両パッド６、７が接触して、両パッド６、７およびクロマトグラフ用担体５の反応部５１とにより流路が構成されるように配置されていればよく、必ずしも一部重なるように配置されている必要はない。すなわち、図９Ａに示すように、クロマトグラフ用担体５と添加パッド６および吸液パッド７との間に接触防止シート９は挟まれているが、接触防止シート９を除去することにより、図９Ｂに示すように、クロマトグラフ用担体５と両パッドと６、７は端部で接触するように配置されていてもよい。なお、クロマトグラフ用担体５および両パッド６、７との間にわずかな隙間があった場合でも、クロマトグラフ用担体５および両パッド６、７の膨潤により接触するよう構成されていれば、それらは接触可能に配置されているみなすことができる。
【００６２】
上記各実施形態のクロマトグラフデバイスにおいては、クロマトグラフ用担体５の一部に予め標識２次抗体を付加してあるものとして説明したが、標識２次抗体はクロマトグラフ用担体５に付加されていなくてもよい。その場合には、試料液を注入し、抗原とクロマトグラフ用担体５の反応部５１の検出ゾーン５２において１次抗体とを結合させた後に、標識２次抗体を含む溶液を注入口４３から注入し、１次抗体と結合している抗原に標識２次抗体を結合させるようにしてもよいし、予め標識２次抗体を含む溶液と試料液とを混合させた混合試料液を調製し、試料液中の抗原と標識２次抗体とを結合させた状態で、注入口４３から混合試料液をクロマトグラフ用担体５に滴下するようにしてもよい。
【００６３】
さらに、上記各実施形態においては、試料液の展開後に、添加パッドおよび吸液パッドをクロマトグラフ用担体５に接触させて反応部に送液する液体としては洗浄液であるとして説明したが、洗浄液に代えて増幅液を液体貯蔵ポッド８に貯蔵し、添加パッドおよび吸液パッドにより構成される流路に沿って増幅液を送液するように構成することもできる。
【００６４】
＜他の例のクロマトグラフデバイス＞
図１０Ａおよび図１０Ｂは、他の例のクロマトグラフデバイスの一部を示す断面図であり、蓋体３４の押圧前および押圧時を示すものである。
図１０Ａおよび図１０Ｂに示す、他の例のクロマトグラフデバイスは、添加パッド６および吸液パッド７が蓋体３４に固定されている。本例のクロマトグラフデバイスは、防水シートを備えていない点で上述の実施形態のクロマトグラフデバイスと異なる。
【００６５】
図１０Ａに示すように、通常の状態（蓋体押圧前）では、クロマトグラフ用担体５と添加パッド６および吸液パッド７とを接触しないように離間させた状態を保つ。一方、図１０Ｂに示すように、矢印Ｑ方向へ蓋体３４を押圧することにより、蓋体３４と本体３とが近接し、蓋体３４に固定されている添加パッド６および吸液パッド７とがクロマトグラフ用担体５と接触する。
【００６６】
したがって、クロマトグラフ用担体５と両パッド６、７を離間させた状態で、試料液をクロマトグラフ用担体５に展開後、蓋体３４を矢印Ｑ方向に押圧し、両パッド６、７をクロマトグラフ用担体５に接触させた状態で、洗浄液を添加パッド側から供給することにより、上述の第１の実施形態と同様の効果を得ることができる。
【００６７】
しかしながら、クロマトグラフ用担体５と両パッド６、７とは空間的に離間させているのみであることから、使用者の誤操作等により、試料液の展開前もしくは展開中にクロマトグラフ用担体５と両パッド６、７とが接触してしまう恐れがあることは否めない。一方、既述の第１から第４の実施形態のクロマトグラフデバイスでは、試料液の展開前もしくは展開中にクロマトグラフ用担体５と両パッド６、７とが接触してしまう恐れはほとんどなく、不慣れな使用者が扱うに際しても利便性が高い。
【図面の簡単な説明】
【００６８】
【図１】本発明に係るクロマトグラフデバイスの実施形態の概略構成を示す斜視図
【図２】図１に示すクロマトグラフデバイスの本体上面図
【図３Ａ】図１に示すクロマトグラフデバイスの断面図（爪部押圧前）
【図３Ｂ】図１に示すクロマトグラフデバイスの断面図（爪部押圧時）
【図４】クロマトグラフ用担体の一例を示す平面図
【図５】図４に示すクロマトグラフ用担体の断面図
【図６】第２の実施形態のクロマトグラフデバイスの本体上面図
【図７】第３の実施形態のクロマトグラフデバイスの断面図
【図８】第４の実施形態のクロマトグラフデバイスの断面図
【図９Ａ】添加パッドおよび吸液パッドのクロマトグラフ用担体への接触可能状態の他の例を示す図
【図９Ｂ】添加パッドおよび吸液パッドのクロマトグラフ用担体への接触状態の他の例を示す図
【図１０Ａ】他の例のクロマトグラフデバイスの一部を示す断面図（蓋体押圧前）
【図１０Ｂ】他の例のクロマトグラフデバイスの一部を示す断面図（蓋体押圧時）
【符号の説明】
【００６９】
１     クロマトグラフデバイス
２     ケース
３     本体
４、１４、２４、３４  蓋体
５     クロマトグラフ用担体
６     添加パッド
７     吸液パッド
８     液体貯蔵ポッド
９、１９       接触防止シート
１０   シール材
１５   貯蔵液
３１   開口
４１   スリット
４２   爪部
４３   注入口
５１   反応部
５２   検出ゾーン
５３   コントロールゾーン
５４   試料添加領域
５５   標識化物質保持領域
５６   主クロマトグラフ担体
５７   吸水領域
５８   透明シート
【図１】
2010156571.tif 000003
【図２】
2010156571.tif 000004
【図３Ａ】
2010156571.tif 000005
【図３Ｂ】
2010156571.tif 000006
【図４】
2010156571.tif 000007
【図５】
2010156571.tif 000008
【図６】
2010156571.tif 000009
【図７】
2010156571.tif 000010
【図８】
2010156571.tif 000011
【図９Ａ】
2010156571.tif 000012
【図９Ｂ】
2010156571.tif 000013
【図１０Ａ】
2010156571.tif 000014
【図１０Ｂ】
2010156571.tif 000015