(57)【要約】【課題】生物試料の網膜組織を、煩雑な操作を要することなく、単純暴露を行う事で染色可能な網膜組織染色組成物を提供することである。また、本発明の別の目的は、網膜組織を選択的に染色する方法を提供することである。【解決手段】生物試料の網膜組織を染色するための染色組成物であって、該生物試料の網膜組織に暴露することにより、網膜組織を染色可能な化合物を含むことを特徴とする網膜組織染色組成物。【選択図】図５
2010148447.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
生物試料の網膜組織を染色するための染色組成物であって、
該生物試料の網膜組織に暴露することにより、少なくとも網膜の視細胞層を染色可能な化合物を含むことを特徴とし、
前記化合物が一般式（Ｉ）または一般式（ＩＩ）で表される構造を部分骨格にもつ色素化合物である事を特徴とする網膜組織染色組成物：
【化１】
2010148447.tif 000026
［一般式（Ｉ）中、Ｒ1〜Ｒ2は各々独立して水素原子、アルキル基、または、アリール基を表し、Ｒ1とＲ2は互いに結合して環を形成しても良く、
Ａは、下記一般式（ＩＩＩ）〜（ＩＸ）で表わされる骨格構造を示し；
【化２】
2010148447.tif 000027
［一般式（ＩＩＩ）中、Ｒ6はアリール基を表し、Ｒ7〜Ｒ8、Ｒ10〜Ｒ11は各々独立して水素原子、アルキル基、アリール基、またはハロゲン原子を表し、Ｒ9はカウンターアニオンを有するアンモニウム塩基を表し、
一般式（ＩＶ）中、Ｒ12〜Ｒ13は各々独立して水素原子、アルキル基、アリール基、またはヘテロ環基を表し、Ｒ14〜Ｒ16は各々独立して水素原子、アルキル基、アリール基、ヘテロ環基、ハロゲン原子、またはアミノ基を表し、
一般式（Ｖ）中、Ｒ17〜Ｒ18は各々独立してアルキル基、またはアルコキシ基を表し、Ｒ19〜Ｒ20は各々独立してアルキル基、アルコキシ基、水酸基、またはシアノ基を表し、Ｒ21は、ヘテロ環基、または−ＣＨ＝Ｃ（Ｒ22）（Ｒ23）を表し、Ｒ22〜Ｒ23は各々独立して水素原子、シアノ基、ヘテロ環基、カルボン酸基、またはカルボン酸エステル基を表し、Ｒ1とＲ17、Ｒ2とＲ18、Ｒ22とＲ23は各々独立して互いに結合して環を形成しても良く、
一般式（ＶＩ）中、Ｒ24は各々独立して水素原子、アルキル基、アリール基、またはヘテロ環基を表し、
一般式（ＶＩＩ）中、Ｒ25は酸素原子、硫黄原子、または−Ｎ（Ｒ27）を表し、Ｒ26は水素原子、アルキル基、アルコキシ基、またはスルホン酸基を表す。Ｒ27は水素原子、アルキル基、またはアリール基を表し、
一般式（ＶＩＩＩ）中、Ｒ28は水素原子、アルキル基、またはアリール基を表し、
一般式（ＩＸ）中、Ｒ29は水素原子、アルキル基、またはアリール基を表し、］、
Ａはまた、下記一般式（Ｘ）で表わされる骨格構造で表される骨格構造を示し；
【化３】
2010148447.tif 000028
［一般式（Ｘ）中、Ｒ31〜Ｒ32はスルホン酸基、またはそれらの塩類を表し、Ｒ33〜Ｒ34は水素原子、アルキル基、アルコキシ基、またはハロゲン原子を表し、一般式（Ｉ）においてＲ1とＲ2の２つが合わさり、１つの置換基：＝Ｎ−Ｒ30を表し、Ｒ30はアリール基、またはヘテロ環基を表し、］、
一般式（ＩＩ）中、Ｒ3〜Ｒ4は各々独立して水素原子、アルケニル基、シアノ基、カルボン酸基、カルボン酸エステル基、スルホン酸基、アシル基、またはヘテロ環基を表し、Ｒ3とＲ4は互いに結合して環を形成しても良く、Ｒ5は水素原子、アルキル基、アリール基、またはヘテロ環基を表し、
Ｒ3およびＲ4の一方が水素原子、他方が一般式（ＸＩ）で表されるヘテロ環基を示し、
【化４】
2010148447.tif 000029
一般式（ＸＩ）中、Ｒ35はアルキル基、またはアリール基を表し、Ｒ36〜Ｒ39は各々独立して水素原子、アルキル基、アリール基、アルコキシ基、カルボン酸基、スルホン酸基、ヘテロ環基、アミノ基、またはハロゲン原子を表し、また、Ｒ36とＲ37、Ｒ37とＲ38、またはＲ38とＲ39は互いに結合して環を形成しても良く、Ｘ-は陰イオン性基を表し、Ｑ1は硫黄原子、酸素原子、−Ｃ（Ｒ40）（Ｒ41）−、−ＣＨ＝ＣＨ−、または−Ｎ（Ｒ42）−を表し、Ｒ40〜Ｒ42は水素原子、アルキル基、またはアリール基を表し、
一般式（ＩＩ）中で表されるＲ3とＲ4が互いに結合して形成される環は、下記一般式（ＸＩＩ）〜（ＸＶ）で表され；
【化５】
2010148447.tif 000030
［一般式（ＸＩＩ）中、Ｒ43は水素原子、アルキル基、アリール基、またはヘテロ環基を表し、Ｒ44はアルキル基、アリール基、カルボン酸基、カルボン酸エステル基、ヒドロキシル基、またはアミノ基を表し、
一般式（ＸＩＩＩ）中、Ｑ2は、酸素原子、硫黄原子、または−Ｎ（Ｒ52）−を表し、Ｒ45は水素原子、アルキル基、アリール基、またはヘテロ環基を表し、Ｒ46は硫黄原子、酸素原子、＝ＮＲ53、ヘテロ環、またはジシアノメチレン基を表し、Ｒ52及びＲ53は水素原子、アルキル基、アリール基、またはヘテロ環基を表し、
一般式（ＸＩＶ）中、Ｒ47は硫黄原子、酸素原子、３位に置換基を有する２−チオキソチアゾリジン−４−オン、Ｒ48は水素原子、アルキル基、アリール基、またはヘテロ環基を表し、
一般式（ＸＶ）中、Ｒ49〜Ｒ50は各々独立して水素原子、アルキル基、アリール基を表し、Ｒ51は酸素原子、または硫黄原子を表し、］、
Ｂは、下記一般式（ＸＶＩ）〜（ＸＶＩＩＩ）で表わされる骨格構造を示し；
【化６】
2010148447.tif 000031
［一般式（ＸＶＩ）中、Ｒ54は水素原子、アルキル基、アラルキル基、アルケニル基、アリール基、ヘテロ環基、またはアシル基を表し、Ｒ55〜Ｒ58は各々独立して水素原子、アルキル基、アリール基、カルボン酸基、カルボン酸エステル基、またはアシル基を表し、Ｒ55とＲ57が互いに結合して環を形成しても良く、Ｒ59は水素原子、アルキル基、アルコキシ基、またはハロゲン原子を表し、
一般式（ＸＶＩＩ）中、Ｒ60は水素原子、アルキル基、またはアリール基を表し、Ｒ61〜Ｒ64は各々独立して水素原子、アルキル基、アリール基、アルコキシ基、カルボン酸基、スルホン酸基、ヘテロ環基、アミノ基、またはハロゲン原子を表し、又、Ｒ61とＲ62、Ｒ62とＲ63、またはＲ63とＲ64は互いに結合して環を形成しても良く、Ｑ3は硫黄原子、酸素原子、−Ｃ（Ｒ65）（Ｒ66）−、−ＣＨ＝ＣＨ−、または−Ｎ（Ｒ67）−を表し、Ｒ65〜Ｒ67は水素原子、アルキル基、またはアリール基を表し、
一般式（ＸＶＩＩＩ）中、Ｒ68〜Ｒ69は各々独立して水素原子、アルキル基、アリール基を表し、Ｒ70は酸素原子、または硫黄原子を表す。］。
【請求項２】
前記化合物の分子量が２，０００以下であることを特徴とする網膜組織染色組成物。
【請求項３】
前記化合物が、桿体細胞、および波長領域に対する感度が異なる複数種の錐体細胞から選択される少なくとも一種の細胞を選択的に染色することを特徴とする請求項１または２に記載の網膜組織染色組成物。
【請求項４】
前記化合物が０．００１ｎｇ／ｍＬ以上、１００μｇ／ｍＬ以下の濃度で含むことを特徴とする、請求項１〜３のいずれかに記載の網膜組織染色組成物。
【請求項５】
前記化合物が蛍光性化合物である事を特徴とする、請求項１から４のいずれかに記載の網膜組織染色組成物。
【請求項６】
請求項１から５のいずれかに記載の網膜組織染色組成物と網膜組織とを接触させる工程を有する、網膜組織の染色方法。
【請求項７】
網膜色素上皮層、視細胞層、外境界膜、外顆粒層、外網状層、内顆粒層、内網状層、神経節細胞層、神経線維層、および内境界膜から選択される少なくとも１つの層を染色することを特徴とする、請求項６に記載の網膜組織の染色方法。
【請求項８】
桿体細胞および、波長領域に対する感度が異なる複数種の錐体細胞から選択される少なくとも一種の細胞を選択的に染色することを特徴とする、請求項６または７に記載の網膜組織の染色方法。
【請求項９】
生物試料の網膜組織を外科的損傷なく染色する事を特徴とする、請求項６から８のいずれかに記載の網膜組織の染色方法。
【請求項１０】
請求項１から５のいずれかに記載の網膜組織染色組成物の少なくとも一種を含む、複数種の染色組成物を用いる眼組織の多重染色方法。
【請求項１１】
前記複数の染色組成物が少なくとも一種の抗体を含む事を特徴とする、請求項１０に記載の多重染色方法。
【請求項１２】
励起光を照射し、蛍光を観察する工程を含むことを特徴とする、請求項６から１１のいずれかに記載の網膜組織の染色方法で染色した網膜組織のイメージング方法。
【請求項１３】
請求項１２に記載の網膜組織のイメージング方法を用いた、生物試料の網膜の状態の評価方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、生物試料の網膜組織染色組成物の提供と網膜組織の染色方法に関する。より詳しくは、網膜組織に暴露することにより、少なくとも網膜の視細胞層を染色するための技術に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、高齢化社会が進むにつれ、眼科疾患の患者数も増加傾向にある。眼疾患により弱視化が進むと、最悪の場合失明に至り、患者は生活の質を著しく損なわれる。そのため、早期に疾患を検出して治療または進行を遅らせる手段を施す事が求められている。中途失明の原因となる代表的な疾患としては、糖尿病性網膜症、黄斑変性疾患、及び緑内障等が挙げられ、眼底網膜が関連する疾患が多い。これらの疾患の診断には、視野検査による視機能の評価や、眼底カメラ、光干渉断層計（ＯＣＴ）、及び走査レーザー検眼鏡等を用いた眼底網膜の形態評価による診断が行われている。
【０００３】
網膜性疾患では網膜が変性して神経細胞が障害されることにより、視機能の低下が引き起こされる。近年、疾患時に網膜組織の層構造の状態をＯＣＴ技術により可視化する事が可能となり、網膜病変の生体組織に関する新知見が多く得られてきている。しかしながら、現在のＯＣＴで得られる画像は解像度が低く、網膜を構成する細胞の形態まで可視化することは出来なかった。
【０００４】
眼科研究や眼科の病理診断などでは、眼球の切片を作製して染色することで、生体外での病理診断や解析が行われている。代表的な染色方法としてはヘマトキシリン・エオシンによる組織染色（ＨＥ染色）が行われている。ＨＥ染色では網膜組織が全体的に染色されるが、通常可視光で観察を行うため、濃厚溶液で染色を行う必要がある。また、エオシン自体は微弱な蛍光を有するが、十分な蛍光強度を得るためには、この場合も濃厚溶液の使用が必要であった。また、網膜構造の特定部位だけを選択的に可視化する事は出来なかった。一方、蛍光抗体法を用いれば網膜の特定の組織・細胞を染色することが可能であるが、十分な感度を得るためには、抗体の選択、希釈率の検討、洗浄、などの染色条件を注意深く決定する必要があった。また、抗体のロット差の影響が大きかった。
【０００５】
従来から、眼組織の可視化技術としては、眼組織を造影・染色するために化合物を利用する方法が知られている。例えば、インドシアニングリーンやフルオレセインのような蛍光色素を用いて脈絡膜血管や網膜血管を可視化する方法がある（非特許文献１）。また、角膜の染色方法として、ローズベンガルやフルオレセインを用いる方法も知られている（非特許文献２）。
【０００６】
一方、硝子体、網膜、及び視神経のような眼内組織の可視化技術としては、主に手術時に硝子体腔へ染色組成物を投与する方法が開示されている。例えば、硝子体網膜手術の際に網膜の膜を染色する組成物（特許文献１）、白内障摘出手術の際に水晶体被膜を染色する組成物（特許文献２）、硝子体を染色するための蛍光ナノ粒子を含む染色組成物（特許文献３）等がある。又、薬物を生体内に送達するためのデリバリーシステムとして、硝子体内へ注入した送達物質が網膜に滞留する事が開示されている（特許文献４）。他に、ラットの網膜神経節細胞を造影するために、網膜神経節に連絡する中脳上丘に逆行性軸索輸送トレーサーを注入し、レーザー眼底鏡を用いて観察を行った報告がある（非特許文献３）。このように、眼内組織の可視化のためには直接的に眼内へ染色組成物を投与する必要があった。
【特許文献１】特許第３４６９１９８号明細書
【特許文献２】特許第３４６９１９９号明細書
【特許文献３】特開２００７−１９１４５４号公報
【特許文献４】特開２００７−２６２０７８号公報
【非特許文献１】眼科写真，２３，３−１０頁（２００７年）
【非特許文献２】ＥＹＥ  ＣＯＮＴＡＣＴ  ＬＥＮＳ，３４，６１−４４頁（２００８年）
【非特許文献３】Ｉｎｖｅｓｔ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  Ｖｉｓ  Ｓｃｉ，４７（１０），４１９８頁（２００６年）
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明の目的は、生物試料の網膜組織を、煩雑な操作を要することなく、暴露を行う事で染色可能な網膜組織染色組成物を提供する事である。又、本発明の別の目的は、網膜組織を選択的に染色する方法を提供する事である。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者らは、上記課題を解決するために鋭意検討した結果、網膜組織を染色可能な化合物を見出し、網膜組織染色組成物を得た。また、網膜組織を染色する方法を確立した。
【０００９】
すなわち、本発明は以下の通りである。
【００１０】
本発明は、生物試料の網膜組織を染色するための染色組成物であって、
該生物試料の網膜組織に暴露することにより、少なくとも網膜の視細胞層を染色可能な化合物を含むことを特徴とし、
前記化合物が一般式（Ｉ）または一般式（ＩＩ）で表される構造を部分骨格にもつ色素化合物である事を特徴とする網膜組織染色組成物：
【００１１】
【化７】
2010148447.tif 000003
【００１２】
［一般式（Ｉ）中、Ｒ1〜Ｒ2は各々独立して水素原子、アルキル基、または、アリール基を表し、Ｒ1とＲ2は互いに結合して環を形成しても良く、
Ａは、下記一般式（ＩＩＩ）〜（ＩＸ）で表わされる骨格構造を示し；
【００１３】
【化８】
2010148447.tif 000004
【００１４】
［一般式（ＩＩＩ）中、Ｒ6はアリール基を表し、Ｒ7〜Ｒ8、Ｒ10〜Ｒ11は各々独立して水素原子、アルキル基、アリール基、またはハロゲン原子を表し、Ｒ9はカウンターアニオンを有するアンモニウム塩基を表し、
一般式（ＩＶ）中、Ｒ12〜Ｒ13は各々独立して水素原子、アルキル基、アリール基、またはヘテロ環基を表し、Ｒ14〜Ｒ16は各々独立して水素原子、アルキル基、アリール基、ヘテロ環基、ハロゲン原子、またはアミノ基を表し、
一般式（Ｖ）中、Ｒ17〜Ｒ18は各々独立してアルキル基、またはアルコキシ基を表し、Ｒ19〜Ｒ20は各々独立してアルキル基、アルコキシ基、水酸基、またはシアノ基を表し、Ｒ21は、ヘテロ環基、または−ＣＨ＝Ｃ（Ｒ22）（Ｒ23）を表し、Ｒ22〜Ｒ23は各々独立して水素原子、シアノ基、ヘテロ環基、カルボン酸基、またはカルボン酸エステル基を表し、Ｒ1とＲ17、Ｒ2とＲ18、Ｒ22とＲ23は各々独立して互いに結合して環を形成しても良く、
一般式（ＶＩ）中、Ｒ24は各々独立して水素原子、アルキル基、アリール基、またはヘテロ環基を表し、
一般式（ＶＩＩ）中、Ｒ25は酸素原子、硫黄原子、または−Ｎ（Ｒ27）を表し、Ｒ26は水素原子、アルキル基、アルコキシ基、またはスルホン酸基を表す。Ｒ27は水素原子、アルキル基、またはアリール基を表し、
一般式（ＶＩＩＩ）中、Ｒ28は水素原子、アルキル基、またはアリール基を表し、
一般式（ＩＸ）中、Ｒ29は水素原子、アルキル基、またはアリール基を表し、］、
Ａはまた、下記一般式（Ｘ）で表わされる骨格構造で表される骨格構造を示し；
【００１５】
【化９】
2010148447.tif 000005
【００１６】
［一般式（Ｘ）中、Ｒ31〜Ｒ32はスルホン酸基、またはそれらの塩類を表し、Ｒ33〜Ｒ34は水素原子、アルキル基、アルコキシ基、またはハロゲン原子を表し、一般式（Ｉ）においてＲ1とＲ2の２つが合わさり、１つの置換基：＝Ｎ−Ｒ30を表し、Ｒ30はアリール基、またはヘテロ環基を表し、］、
一般式（ＩＩ）中、Ｒ3〜Ｒ4は各々独立して水素原子、シアノ基、カルボン酸基、カルボン酸エステル基、スルホン酸基、またはヘテロ環基を表し、Ｒ3とＲ4は互いに結合して環を形成しても良く、Ｒ5は水素原子、アルキル基、アリール基、またはヘテロ環基を表し、
Ｒ3およびＲ4の一方が水素原子、他方が一般式（ＸＩ）で表されるヘテロ環基を示し、
【００１７】
【化１０】
2010148447.tif 000006
【００１８】
一般式（ＸＩ）中、Ｒ35はアルキル基、またはアリール基を表し、Ｒ36〜Ｒ39は各々独立して水素原子、アルキル基、アリール基、アルコキシ基、カルボン酸基、スルホン酸基、ヘテロ環基、アミノ基、またはハロゲン原子を表し、また、Ｒ36とＲ37、Ｒ37とＲ38、またはＲ38とＲ39は互いに結合して環を形成しても良く、Ｘ-は陰イオン性基を表し、Ｑ1は硫黄原子、酸素原子、−Ｃ（Ｒ40）（Ｒ41）−、−ＣＨ＝ＣＨ−、または−Ｎ（Ｒ42）−を表し、Ｒ40〜Ｒ42は水素原子、アルキル基、またはアリール基を表し、
一般式（ＩＩ）中で表されるＲ3とＲ4が互いに結合して形成される環は、下記一般式（ＸＩＩ）〜（ＸＶ）で表され；
【００１９】
【化１１】
2010148447.tif 000007
【００２０】
［一般式（ＸＩＩ）中、Ｒ43は水素原子、アルキル基、アリール基、またはヘテロ環基を表し、Ｒ44はアルキル基、アリール基、カルボン酸基、カルボン酸エステル基、ヒドロキシル基、またはアミノ基を表し、
一般式（ＸＩＩＩ）中、Ｑ2は、酸素原子、硫黄原子、または−Ｎ（Ｒ52）−を表し、Ｒ45は水素原子、アルキル基、アリール基、またはヘテロ環基を表し、Ｒ46は硫黄原子、酸素原子、＝ＮＲ53、ヘテロ環、またはジシアノメチレン基を表し、Ｒ52及びＲ53は水素原子、アルキル基、アリール基、またはヘテロ環基を表し、
一般式（ＸＩＶ）中、Ｒ47は硫黄原子、酸素原子、３位に置換基を有する２−チオキソチアゾリジン−４−オン、Ｒ48は水素原子、アルキル基、アリール基、またはヘテロ環基を表し、
一般式（ＸＶ）中、Ｒ49〜Ｒ50は各々独立して水素原子、アルキル基、アリール基を表し、Ｒ51は酸素原子、または硫黄原子を表し、］、
Ｂは、下記一般式（ＸＶＩ）〜（ＸＶＩＩＩ）で表わされる骨格構造を示し；
【００２１】
【化１２】
2010148447.tif 000008
【００２２】
［一般式（ＸＶＩ）中、Ｒ54は水素原子、アルキル基、アラルキル基、アルケニル基、アリール基、ヘテロ環基、またはアシル基を表し、Ｒ55〜Ｒ58は各々独立して水素原子、アルキル基、アリール基、カルボン酸基、カルボン酸エステル基、またはアシル基を表し、Ｒ55とＲ57が互いに結合して環を形成しても良く、Ｒ59は水素原子、アルキル基、アルコキシ基、またはハロゲン原子を表し、
一般式（ＸＶＩＩ）中、Ｒ60は水素原子、アルキル基、またはアリール基を表し、Ｒ61〜Ｒ64は各々独立して水素原子、アルキル基、アリール基、アルコキシ基、カルボン酸基、スルホン酸基、ヘテロ環基、アミノ基、またはハロゲン原子を表し、又、Ｒ61とＲ62、Ｒ62とＲ63、またはＲ63とＲ64は互いに結合して環を形成しても良く、Ｑ3は硫黄原子、酸素原子、−Ｃ（Ｒ65）（Ｒ66）−、−ＣＨ＝ＣＨ−、または−Ｎ（Ｒ67）−を表し、Ｒ65〜Ｒ67は水素原子、アルキル基、またはアリール基を表し、
一般式（ＸＶＩＩＩ）中、Ｒ68〜Ｒ69は各々独立して水素原子、アルキル基、アリール基を表し、Ｒ70は酸素原子、または硫黄原子を表す。］、であることを特徴とする。
【発明の効果】
【００２３】
本発明の網膜組織染色組成物の提供により、簡便な方法で網膜組織を染色する事が可能となり、簡便、且つ、高精細に網膜組織の層構造の状態や細胞形態等の評価や解析を安定して行うことが出来るようになる。また、本発明の網膜組織染色組成物を用いることにより、眼科領域の研究・診断に有効な新規なツールを提供する事ができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２４】
以下に、本発明を詳細に説明する。
【００２５】
＜生物試料について＞
本発明の網膜組織染色組成物で染色可能な生物試料としては、特に限定されるものではないが、例えば、脊椎動物としては、トラフグ、クサフグ、ミドリフグ、メダカ、ゼブラフィッシュ等の硬骨魚類、アフリカツメガエル等の両生類、ニワトリ、ウズラ等の鳥類、ラット、マウス、ハムスター等の小動物、ヤギ、ブタ、イヌ、ネコ、ウシ、ウマ等の大動物、サル、チンパンジー、ヒト等が挙げられる。これら生物試料の個体、またはその一部を取り出した組織試料や組織ブロック、または組織切片等に含まれる網膜組織を染色することが出来る。生物試料としては、人を除外してもよい。
【００２６】
網膜組織のスクリーニングとして用いる場合には、ゼブラフィッシュを用いることが好都合である。ゼブラフィッシュは受精後６−７日で主要な臓器が形成され、眼球の組織学的形態もほぼ完成される。そのため、７日胚の使用は個体差の影響をほとんど受けずに試験を行う事が出来る。又、ゼブラフィッシュは１回の産卵で約２００個以上の受精卵が得られるため同じ遺伝的背景持ったゼブラフィッシュが得られる。
【００２７】
＜網膜組織について＞
本発明の網膜組織染色組成物が染色できる網膜組織は、特に限定されるものではないが、網膜色素上皮層、視細胞層、外境界膜、外顆粒層、外網状層、内顆粒層、内網状層、神経節細胞層、神経線維層、および内境界膜等が挙げられる。これら網膜組織の疾患状態組織、疾患による新生組織や癌組織、生物種類・発生段階・発生異常等によって前記と異なる網膜組織が存在する場合は、それらの組織も本発明の網膜組織に含むことができる。
【００２８】
本発明の網膜組織に含まれる細胞としては、特に限定されるものではないが、アマクリン細胞、水平細胞、双極細胞、インタープレキシフォルム細胞、錐体細胞、桿体細胞、線維芽細胞、ミューラーグリア細胞、およびこれらの腫瘍細胞、これらの未分化状態の細胞（幹細胞）等が挙げられる。また、錐体細胞は波長感度の異なる複数種の細胞からなる。本発明の網膜組織染色組成物は、これらの一種または複数種の細胞を好適に染色することが出来る。
【００２９】
さらに、本発明の網膜組織染色組成物は、視細胞層に存在する光受容細胞である桿体細胞と、波長領域に対する感度が異なる複数種類の錐体細胞から選ばれるひとつ以上の細胞とを染め分けることが出来る。これにより、視細胞層に存在する視細胞の種類ごとの分布を解析することが可能になる。
【００３０】
本発明において、網膜の細胞形態を染色するとは、網膜細胞を構成する少なくとも一種の細胞が染色され、細胞の種類毎に細胞形態を判別する事が可能な状態になる事である。
【００３１】
＜暴露方法について＞
本発明において、網膜組織染色剤を網膜組織に暴露するとは、生物試料の網膜組織や、その一部を取り出した組織試料や組織ブロック、または組織切片等について、その状態からさらに切開や網膜組織または網膜組織に連絡する組織への針刺し等、該当する組織に外科的な損傷を与える事なく染色する事である。
【００３２】
網膜組織に対して損傷を与える事なく染色する方法としては、特に限定されるものではないが、例えば、ｉｎ  ｖｉｖｏの場合は染色組成物を、生物個体の一部または全体に暴露する方法、経口接触による方法、経肺接触による方法、経鼻接触による方法、経消化管接触による方法、経粘膜接触による方法、経体液接触による方法、舌下接触による方法、静脈または動脈等の血管内接触による方法、腹腔内接触による方法、腹膣内、皮下、皮内、膀胱内、気管（気管支）内等への注入方法、噴霧または塗布等の手段による生体内への接触による方法等が挙げられる。一方、ｉｎ  ｖｉｔｒｏの場合は網膜組織や、その一部を取り出した組織試料や組織ブロック、または組織切片等について染色組成物を含む溶液に生物試料を浸漬させる、または生物試料に染色組成物を接触させる方法等が挙げられる。
【００３３】
＜化合物について＞
本発明の網膜組織染色組成物に含まれる化合物は、少なくとも網膜の視細胞層が染色可能であることを特徴とする。
【００３４】
本発明の網膜組織染色組成物に含まれる化合物は、染色の対象となる網膜組織に直接接触させることから、低分子化合物であることが好ましく、特に分子量が２，０００以下であるものが選択される。好ましくは分子量が１，５００以下の化合物、特に分子量が１，０００以下の化合物である事が好ましい。
【００３５】
又、本発明の化合物は蛍光性を有する蛍光性化合物である事が好ましい。蛍光性の化合物であれば感度が高いため、低濃度で染色することができ、必要とする化合物の量を相対的に減らすことができる。また、染色部位が異なり、蛍光スペクトルの異なる化合物等の組み合わせを選択し、複数組織の多重染色が可能になるため、一度の観察で複数の情報を得ることが出来るようになる等有用性が高い。
【００３６】
本発明の眼内組織染色組成物で用いられる化合物は、一般式（Ｉ）または一般式（ＩＩ）で表される構造を部分骨格にもつ色素化合物である事が好ましい。
【００３７】
【化１３】
2010148447.tif 000009
【００３８】
一般式（Ｉ）中、Ｒ1〜Ｒ2は各々独立して水素原子、アルキル基、またはアリール基を表す。Ｒ1とＲ2は互いに結合して環を形成しても良い。
【００３９】
Ｒ1〜Ｒ2におけるアルキル基としては、特に限定されるものではないが、例えば、メチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基、オクチル基、ノニル基、デシル基、ウンデシル基、ドデシル基、トリデシル基、テトラデシル基、ペンタデシル基、ヘキサデシル基、ヘプタデシル基、オクタデシル基、ノナデシル基、シクロプロピル基、シクロブチル基、またはシクロペンチル基等の直鎖、分岐または環状の炭素数１〜２０個のアルキル基等が挙げられる。
【００４０】
Ｒ1〜Ｒ2におけるアリール基としては、特に限定されるものではないが、例えば、フェニル基、ナフチル基、フェナントリル基、またはアントラセニル基等の６〜１４員環の単環式または多環式アリール基が挙げられる。
【００４１】
Ｒ1〜Ｒ2は、更に置換基を有していてもよく、色素化合物の保存安定性を著しく阻害するものでなければ特に特に限定されるものではないが、例えば、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、またはｔｅｒｔ−ブチル基等のアルキル基；フェニル基、またはナフチル基等のアリール基；メトキシ基、エトキシ基、またはブトキシ基等のアルコキシ基；フェノキシ基、またはナフチルオキシ基等のアリールオキシ基；チオメチル基、チオエチル基、チオプロピル基、チオブチル基、またはチオフェニル基等のアルキルスルファニル基；メチルアミノ基、またはブチルアミノ基等のモノ置換アミノ基；ジメチルアミノ基、Ｎ−エチル−Ｎ−フェニルアミノ基、またはジフェニルアミノ基等のジ置換アミノ基；アセチル基、ベンゾイル基、カルボン酸基、カルボン酸エステル基、またはカルバモイル基等のアシル基；スルホン酸基、スルホン酸エステル基、またはスルファモイル基等のスルホニル基；ピリジル基、トリアジニル基、またはベンゾチアゾリル基等のヘテロ環基；ニトロ基；フッ素原子、塩素原子、臭素原子、またはヨウ素原子等のハロゲン原子；ポリエチレングリコール基；４級アンモニウム塩、カルボン酸塩、スルホン酸塩等の塩類等が挙げられる。これらの置換基で水溶性を向上させる性質のある置換基を有する事が好ましく、これらに限定されるわけではないが、例えば、カルボン酸基、スルホン酸基、ポリエチレングリコール基、カルボン酸塩、スルホン酸塩が特に好ましい。Ｒ1とＲ2が互いに結合して形成する環としては、特に限定されるものではないが、例えば、ピペリジン環、ピペラジン環、モルフォリン環、チオモルフォリン環、ピリジニウム環等のヘテロ環、等が挙げられる。
【００４２】
Ａは、下記一般式（ＩＩＩ）〜（ＩＸ）で表わされる骨格構造を示す。
【００４３】
【化１４】
2010148447.tif 000010
【００４４】
一般式（ＩＩＩ）中、Ｒ6はアリール基を表す。Ｒ7〜Ｒ8、Ｒ10〜Ｒ11は各々独立して水素原子、アルキル基、アリール基、またはハロゲン原子を表す。Ｒ9はカウンターアニオンを有するアンモニウム塩基を表す。
【００４５】
Ｒ6におけるアリール基としては、特に限定されるものではないが、例えば、フェニル基、ナフチル基、フェナントリル基、またはアントラセニル基等の６〜１４員環の単環式または多環式アリール基が挙げられる。更に該環には、置換基を有していてもよく、色素化合物の保存安定性を著しく阻害するものでなければ特に限定されるものではない。例えば、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、またはｔｅｒｔ−ブチル基等のアルキル基；フェニル基、またはナフチル基等のアリール基；メトキシ基、エトキシ基、またはブトキシ基等のアルコキシ基；フェノキシ基、またはナフチルオキシ基等のアリールオキシ基；チオメチル基、チオエチル基、チオプロピル基、チオブチル基、またはチオフェニル基等のアルキルスルファニル基；メチルアミノ基、またはブチルアミノ基等のモノ置換アミノ基；ジメチルアミノ基、Ｎ−エチル−Ｎ−フェニルアミノ基、またはジフェニルアミノ基等のジ置換アミノ基；アセチル基、ベンゾイル基、カルボン酸基、カルボン酸エステル基、またはカルバモイル基等のアシル基；スルホン酸基、スルホン酸エステル基、またはスルファモイル基等のスルホニル基；ピリジル基、トリアジニル基、またはベンゾチアゾリル基等のヘテロ環基；ニトロ基；フッ素原子、塩素原子、臭素原子、またはヨウ素原子等のハロゲン原子；ポリエチレングリコール基；４級アンモニウム塩、カルボン酸塩、スルホン酸塩等の塩類等が挙げられる。
【００４６】
これらの置換基で水溶性を向上させる性質のある置換基を有する事が好ましく、これらに限定されるわけではないが、例えば、カルボン酸基、スルホン酸基、ポリエチレングリコール基、カルボン酸塩、スルホン酸塩が特に好ましい。
【００４７】
Ｒ6としては、フェニル基またはナフチル基が好ましく、特にカルボン酸基やスルホン酸基、ポリエチレングリコール基、カルボン酸塩、またはスルホン酸塩等の水溶性の置換基またはそれらの塩を有するフェニル基の場合は、水溶性が向上する点からも好ましい。
【００４８】
Ｒ7〜Ｒ8及びＲ10〜Ｒ11におけるアルキル基としては、特に限定されるものではないが、例えば、メチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基、オクチル基、ノニル基、デシル基、ウンデシル基、ドデシル基、トリデシル基、テトラデシル基、ペンタデシル基、ヘキサデシル基、ヘプタデシル基、オクタデシル基、ノナデシル基、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基等の直鎖、または分岐または環状の炭素数１〜２０個のアルキル基等が挙げられる。
【００４９】
Ｒ7〜Ｒ8及びＲ10〜Ｒ11におけるアリール基としては、特に限定されるものではないが、例えば、フェニル基、ナフチル基、フェナントリル基、またはアントラセニル基等の６〜１４員環の単環式または多環式アリール基が挙げられる。
【００５０】
Ｒ7〜Ｒ8及びＲ10〜Ｒ11におけるハロゲン原子としては、例えば、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、またはヨウ素原子等が挙げられる。
【００５１】
Ｒ7〜Ｒ8及びＲ10〜Ｒ11としては、水素原子、アルキル基、またはハロゲン原子が好ましく、化合物の安定性から水素原子が特に好ましい。
【００５２】
Ｒ9におけるカウンターアニオンを有するアンモニウム塩基としては、特に限定されるものではないが、例えば、アミノ基を４級塩化したアミノ基であり、カウンターアニオンとしては、特に限定されるものではないが、例えば、フッ化物イオン、塩化物イオン、臭化物イオン、またはヨウ化物イオン等のハロゲンイオン；硫酸イオン、リン酸イオン、硝酸イオン、テトラフルオロホウ酸イオン、またはヘキサフルオロリン酸イオン等の無機酸イオン；テトラクロロアルミニウムイオン等の含ルイス酸イオン；酢酸イオン、乳酸イオン、メタンスルホン酸イオン、ベンゼンスルホン酸イオン、ｐ−トルエンスルホン酸イオン、トリフルオロ酢酸イオン、トリフルオロメタンスルホン酸イオン、またはテトラフェニルホウ酸イオンなどの有機酸イオン等が挙げられる。
【００５３】
前記一般式（ＩＩＩ）で表される分子構造において、Ｒ6がオルト位にスルホン酸基、またはカルボン酸基を有する芳香環の時、下記一般式（ＩＩＩ’）または（ＩＩＩ’’）の互変異性体が存在する。本発明の色素化合物が有する一般式（ＩＩＩ）で表わされる構造は、下記一般式（ＩＩＩ’）または（ＩＩＩ’’）等で表わされる構造も包含する。
【００５４】
【化１５】
2010148447.tif 000011
【００５５】
［一般式（ＩＩＩ’）及び（ＩＩＩ’’）中のＲ7〜Ｒ11は、前記一般式（ＩＩＩ）におけるＲ7〜Ｒ11と同意義を有する。］
一般式（ＩＶ）中、Ｒ12〜Ｒ13は各々独立して水素原子、アルキル基、アリール基、またはヘテロ環基を表す。Ｒ14〜Ｒ16は各々独立して水素原子、アルキル基、アリール基、ヘテロ環基、ハロゲン原子、またはアミノ基を表す。
【００５６】
Ｒ12〜Ｒ13におけるアルキル基としては、特に限定されるものではないが、例えば、メチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基、オクチル基、ノニル基、デシル基、ウンデシル基、ドデシル基、トリデシル基、テトラデシル基、ペンタデシル基、ヘキサデシル基、ヘプタデシル基、オクタデシル基、ノナデシル基、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基等の直鎖、または分岐または環状の炭素数１〜２０個のアルキル基等が挙げられる。
【００５７】
Ｒ12〜Ｒ13におけるアリール基としては、特に限定されるものではないが、例えば、フェニル基、ナフチル基、フェナントリル基、またはアントラセニル基等の６〜１４員環の単環式または多環式アリール基が挙げられる。
【００５８】
Ｒ12〜Ｒ13におけるヘテロ環基としては、特に限定されるものではないが、例えば、４〜１０員環の単環式または二環式の窒素、酸素及び硫黄から選択される１〜４個の原子を含有するヘテロ環基が挙げられ、例えば、ピリジル基、ピラジニル基、ピリミジニル基、ピロリル基、チエニル基、フリル基、ピラニル基、オキサゾリル基、チアゾリル基、トリアゾリル基、テトラゾリル基、イミダゾリル基、ピラゾリル基、モルホリニル基、チオモルホリニル基、ピペリジニル基、ピペラジニル基、キノリル基、イソキノリル基、インドリル基、イソインドリル基、ベンゾフリル基、またはベンゾチエニル基等が挙げられる。
【００５９】
Ｒ12〜Ｒ13は、アルキル基が好ましく、メチル基、エチル基、プロピル基、またはブチル基が特に好ましい。
【００６０】
Ｒ14〜Ｒ16におけるアルキル基としては、特に限定されるものではないが、例えば、メチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基、オクチル基、ノニル基、デシル基、ウンデシル基、ドデシル基、トリデシル基、テトラデシル基、ペンタデシル基、ヘキサデシル基、ヘプタデシル基、オクタデシル基、ノナデシル基、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基等の直鎖、または分岐または環状の炭素数１〜２０個のアルキル基等が挙げられる。
【００６１】
Ｒ14〜Ｒ16におけるアリール基としては、特に限定されるものではないが、例えば、フェニル基、ナフチル基、フェナントリル基、またはアントラセニル基等の６〜１４員環の単環式または多環式アリール基が挙げられる。
【００６２】
Ｒ14〜Ｒ16におけるヘテロ環基としては、特に限定されるものではないが、例えば、４〜１０員環の単環式または二環式の窒素、酸素及び硫黄から選択される１〜４個の原子を含有するヘテロ環基が挙げられ、例えば、ピリジル基、ピラジニル基、ピリミジニル基、ピロリル基、チエニル基、フリル基、ピラニル基、オキサゾリル基、チアゾリル基、トリアゾリル基、テトラゾリル基、イミダゾリル基、ピラゾリル基、モルホリニル基、チオモルホリニル基、ピペリジニル基、ピペラジニル基、キノリル基、イソキノリル基、インドリル基、イソインドリル基、ベンゾフリル基、またはベンゾチエニル基等が挙げられる。
【００６３】
Ｒ14〜Ｒ16におけるハロゲン原子としては、例えば、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、またはヨウ素原子等が挙げられる。
【００６４】
Ｒ14〜Ｒ16におけるアミノ基としては、特に限定されるものではないが、例えば、無置換アミノ基；Ｎ−メチルアミノ基、Ｎ−ブチルアミノ基、Ｎ−ヘキシルアミノ基、Ｎ−テトラデシルアミノ基、Ｎ−フェニルアミノ基、またはＮ−ナフチルアミノ基等のモノ置換アミノ基；Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ基、Ｎ，Ｎ−ジエチルアミノ基、Ｎ，Ｎ−ジフェニルアミノ基、またはＮ，Ｎ−メチルプロピルアミノ基等のジ置換アミノ基；アセチルアミノ基、エチルカルボニルアミノ基、ｔｅｒｔ−ブチルカルボニルアミノ基、ベンゾイルアミノ基、ナフトイルアミノ基、またはメトキシカルボニルアミノ基等のカルボニルアミノ基；メチルスルホニルアミノ基、エチルスルホニルアミノ基、ｔｅｒｔ−ブチルスルホニルアミノ基、またはｉｓｏ−プロポキシスルホニルアミノ基等のスルホニルアミノ基が挙げられる。
【００６５】
Ｒ14〜Ｒ16は、水素原子、アルキル基、ハロゲン原子、アミノ基が好ましく、水素原子が特に好ましい。
【００６６】
一般式（Ｖ）中、Ｒ17〜Ｒ18は各々独立してアルキル基またはアルコキシ基を表す。Ｒ19〜Ｒ20は各々独立してアルキル基、アルコキシ基、水酸基、シアノ基を表す。Ｒ21は、ヘテロ環基、−ＣＨ＝Ｃ（Ｒ22）（Ｒ23）を表す。Ｒ22〜Ｒ23は各々独立して水素原子、シアノ基、ヘテロ環基、カルボン酸基、カルボン酸エステル基を表す。Ｒ1とＲ17、Ｒ2とＲ18、Ｒ22とＲ23は各々独立して互いに結合して環を形成しても良い。
【００６７】
Ｒ17〜Ｒ20におけるアルキル基としては、特に限定されるものではないが、例えば、メチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基、オクチル基、ノニル基、デシル基、ウンデシル基、ドデシル基、トリデシル基、テトラデシル基、ペンタデシル基、ヘキサデシル基、ヘプタデシル基、オクタデシル基、ノナデシル基、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基等の直鎖、または分岐または環状の炭素数１〜２０個のアルキル基等が挙げられる。
【００６８】
Ｒ17〜Ｒ20におけるアルコキシ基としては、特に限定されるものではないが、例えば、メトキシ基、エトキシ基、プロポキシ基、ブトキシ基、ペンチルオキシ基、デシルオキシ基、ヘキシルオキシ基、ヘプチルオキシ基、オクチルオキシ基、ノニルオキシ基、デシルオキシ基、ドデシルオキシ基、またはオクタデシルオキシ基等の炭素数１〜２０個のアルコキシ基が挙げられる。
【００６９】
Ｒ17〜Ｒ20は、水素原子、またはアルコキシ基が好ましく、化合物の安定性から水素原子が特に好ましい。
【００７０】
Ｒ21〜Ｒ23におけるヘテロ環基としては、特に限定されるものではないが、例えば、４〜１０員環の単環式または二環式の窒素、酸素及び硫黄から選択される１〜４個の原子を含有するヘテロ環基が挙げられ、例えば、ピリジル基、ピラジニル基、ピリミジニル基、ピロリル基、チエニル基、フリル基、ピラニル基、オキサゾリル基、チアゾリル基、トリアゾリル基、テトラゾリル基、イミダゾリル基、ピラゾリル基、モルホリニル基、チオモルホリニル基、ピペリジニル基、ピペラジニル基、キノリル基、イソキノリル基、インドリル基、イソインドリル基、ベンゾフリル基、またはベンゾチエニル基等が挙げられる。
【００７１】
Ｒ21〜Ｒ23におけるカルボン酸エステル基としては、特に限定されるものではないが、例えば、カルボン酸メチル基、カルボン酸エチル基、カルボン酸プロピル基、またはカルボン酸ブチル基等が挙げられる。
【００７２】
Ｒ21〜Ｒ23は、ピリジル基、ピラジニル基、ピリミジニル基、オキサゾリル基、チアゾリル基、トリアゾリル基、テトラゾリル基、イミダゾリル基、またはピラゾリル基が好ましく、化合物の安定性から、オキサゾリル基、チアゾリル基、またはイミダゾリル基が特に好ましい。
【００７３】
一般式（Ｖ）中、Ｒ1とＲ17、Ｒ2とＲ18、またはＲ22とＲ23が、各々独立して互いに結合して形成する環としては、特に限定されるものではないが、例えば、ベンゼン環、ナフタレン環等の炭素数３〜１０の芳香環、シクロオクタン環、シクロヘプタン環、シクロヘキサン環、シクロペンタン環、シクロブタン環等の飽和環、シクロペンテン環、シクロヘキセン環等の部分飽和環、ピリジン環、テトラヒドロピリジン環、またはピリミジン環等のヘテロ環が挙げられる。更に該環には、置換基を有していてもよく、色素化合物の保存安定性を著しく阻害するものでなければ特に限定されるものではない。例えば、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、またはｔｅｒｔ−ブチル基等のアルキル基；フェニル基、またはナフチル基等のアリール基；メトキシ基、エトキシ基、またはブトキシ基等のアルコキシ基；フェノキシ基、またはナフチルオキシ基等のアリールオキシ基；チオメチル基、チオエチル基、チオプロピル基、チオブチル基、またはチオフェニル基等のアルキルスルファニル基；メチルアミノ基、またはブチルアミノ基等のモノ置換アミノ基；ジメチルアミノ基、Ｎ−エチル−Ｎ−フェニルアミノ基、またはジフェニルアミノ基等のジ置換アミノ基；アセチル基、ベンゾイル基、カルボン酸基、カルボン酸エステル基、またはカルバモイル基等のアシル基；スルホン酸基、スルホン酸エステル基、またはスルファモイル基等のスルホニル基；ピリジル基、トリアジニル基、またはベンゾチアゾリル基等のヘテロ環基；ニトロ基；フッ素原子、塩素原子、臭素原子、またはヨウ素原子等のハロゲン原子；ポリエチレングリコール基；４級アンモニウム塩、カルボン酸塩、スルホン酸塩等の塩類等が挙げられる。これらの置換基で水溶性を向上させる性質のある置換基を有する事が好ましく、これらに限定されるわけではないが、例えば、カルボン酸基、スルホン酸基、ポリエチレングリコール基、カルボン酸塩、スルホン酸塩が特に好ましい。
【００７４】
Ｒ1とＲ17、Ｒ2とＲ18、またはＲ22とＲ23が各々独立して互いに結合して形成する環として、ヘテロ環が好ましく、テトラヒドロピリジン環が特に好ましい。
【００７５】
一般式（ＶＩ）中、Ｒ24は各々独立して水素原子、アルキル基、アリール基、ヘテロ環基を表す。
【００７６】
Ｒ24におけるアルキル基としては、特に限定されるものではないが、例えば、メチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基、オクチル基、ノニル基、デシル基、ウンデシル基、ドデシル基、トリデシル基、テトラデシル基、ペンタデシル基、ヘキサデシル基、ヘプタデシル基、オクタデシル基、ノナデシル基、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基等の直鎖、または分岐または環状の炭素数１〜２０個のアルキル基等が挙げられる。更に該環には、置換基を有していてもよく、色素化合物の保存安定性を著しく阻害するものでなければ特に限定されるものではない。例えば、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、またはｔｅｒｔ−ブチル基等のアルキル基；フェニル基、またはナフチル基等のアリール基；メトキシ基、エトキシ基、またはブトキシ基等のアルコキシ基；フェノキシ基、またはナフチルオキシ基等のアリールオキシ基；チオメチル基、チオエチル基、チオプロピル基、チオブチル基、またはチオフェニル基等のアルキルスルファニル基；メチルアミノ基、またはブチルアミノ基等のモノ置換アミノ基；ジメチルアミノ基、Ｎ−エチル−Ｎ−フェニルアミノ基、またはジフェニルアミノ基等のジ置換アミノ基；アセチル基、ベンゾイル基、カルボン酸基、カルボン酸エステル基、またはカルバモイル基等のアシル基；スルホン酸基、スルホン酸エステル基、またはスルファモイル基等のスルホニル基；ピリジル基、トリアジニル基、またはベンゾチアゾリル基等のヘテロ環基；ニトロ基；フッ素原子、塩素原子、臭素原子、またはヨウ素原子等のハロゲン原子；ポリエチレングリコール基；４級アンモニウム塩、カルボン酸塩、スルホン酸塩等の塩類等が挙げられる。これらの置換基で水溶性を向上させる性質のある置換基を有する事が好ましく、これらに限定されるわけではないが、例えば、カルボン酸基、スルホン酸基、ポリエチレングリコール基、カルボン酸塩、スルホン酸塩が特に好ましい。
【００７７】
Ｒ24におけるアリール基としては、特に限定されるものではないが、例えば、フェニル基、ナフチル基、フェナントリル基、またはアントラセニル基等の６〜１４員環の単環式または多環式アリール基が挙げられる。
【００７８】
Ｒ24におけるヘテロ環基としては、特に限定されるものではないが、例えば、４〜１０員環の単環式または二環式の窒素、酸素及び硫黄から選択される１〜４個の原子を含有するヘテロ環基が挙げられ、例えば、ピリジル基、ピラジニル基、ピリミジニル基、ピロリル基、チエニル基、フリル基、ピラニル基、オキサゾリル基、チアゾリル基、トリアゾリル基、テトラゾリル基、イミダゾリル基、ピラゾリル基、モルホリニル基、チオモルホリニル基、ピペリジニル基、ピペラジニル基、キノリル基、イソキノリル基、インドリル基、イソインドリル基、ベンゾフリル基、またはベンゾチエニル基等が挙げられる。
【００７９】
Ｒ24は、アルキル基が好ましく、化合物の安定性から、メチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基、ペンチル基、またはヘキシル基が特に好ましい。
【００８０】
一般式（ＶＩＩ）中、Ｒ25は酸素原子、硫黄原子、−Ｎ（Ｒ27）を表す。Ｒ26は水素原子、アルキル基、アルコキシ基、スルホン酸基を表す。Ｒ27は水素原子、アルキル基、叉はアリール基を表す。
【００８１】
Ｒ26におけるアルキル基としては、特に限定されるものではないが、例えば、メチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基、オクチル基、ノニル基、デシル基、ウンデシル基、ドデシル基、トリデシル基、テトラデシル基、ペンタデシル基、ヘキサデシル基、ヘプタデシル基、オクタデシル基、ノナデシル基、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基等の直鎖、または分岐または環状の炭素数１〜２０個のアルキル基等が挙げられる。
【００８２】
Ｒ26におけるアルコキシ基としては、特に限定されるものではないが、例えば、メトキシ基、エトキシ基、プロポキシ基、ブトキシ基、ペンチルオキシ基、デシルオキシ基、ヘキシルオキシ基、ヘプチルオキシ基、オクチルオキシ基、ノニルオキシ基、デシルオキシ基、ドデシルオキシ基、またはオクタデシルオキシ基等の炭素数１〜２０個のアルコキシ基が挙げられる。
【００８３】
Ｒ26は、水素原子またはスルホン酸基が好ましく、水素原子が特に好ましい。
【００８４】
Ｒ27におけるアルキル基としては、特に限定されるものではないが、例えば、メチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基、オクチル基、ノニル基、デシル基、ウンデシル基、ドデシル基、トリデシル基、テトラデシル基、ペンタデシル基、ヘキサデシル基、ヘプタデシル基、オクタデシル基、ノナデシル基、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基等の直鎖、または分岐または環状の炭素数１〜２０個のアルキル基等が挙げられる。
【００８５】
Ｒ27におけるアリール基としては、特に限定されるものではないが、例えば、フェニル基、ナフチル基、フェナントリル基、またはアントラセニル基等の６〜１４員環の単環式または多環式アリール基が挙げられる。
【００８６】
一般式（ＶＩＩＩ）中、Ｒ28は水素原子、アルキル基、またはアリール基を表す。
【００８７】
Ｒ28におけるアルキル基としては、特に限定されるものではないが、例えば、メチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基、オクチル基、ノニル基、デシル基、ウンデシル基、ドデシル基、トリデシル基、テトラデシル基、ペンタデシル基、ヘキサデシル基、ヘプタデシル基、オクタデシル基、ノナデシル基、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基等の直鎖、または分岐または環状の炭素数１〜２０個のアルキル基等が挙げられる。更に該環には、置換基を有していてもよく、色素化合物の保存安定性を著しく阻害するものでなければ特に限定されるものではない。例えば、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、またはｔｅｒｔ−ブチル基等のアルキル基；フェニル基、またはナフチル基等のアリール基；メトキシ基、エトキシ基、またはブトキシ基等のアルコキシ基；フェノキシ基、またはナフチルオキシ基等のアリールオキシ基；チオメチル基、チオエチル基、チオプロピル基、チオブチル基、またはチオフェニル基等のアルキルスルファニル基；メチルアミノ基、またはブチルアミノ基等のモノ置換アミノ基；ジメチルアミノ基、Ｎ−エチル−Ｎ−フェニルアミノ基、またはジフェニルアミノ基等のジ置換アミノ基；アセチル基、ベンゾイル基、カルボン酸基、カルボン酸エステル基、またはカルバモイル基等のアシル基；スルホン酸基、スルホン酸エステル基、またはスルファモイル基等のスルホニル基；ピリジル基、トリアジニル基、またはベンゾチアゾリル基等のヘテロ環基；ニトロ基；フッ素原子、塩素原子、臭素原子、またはヨウ素原子等のハロゲン原子；ポリエチレングリコール基；４級アンモニウム塩、カルボン酸塩、スルホン酸塩等の塩類等が挙げられる。これらの置換基で水溶性を向上させる性質のある置換基を有する事が好ましく、これらに限定されるわけではないが、例えば、カルボン酸基、スルホン酸基、ポリエチレングリコール基、カルボン酸塩、スルホン酸塩が特に好ましい。
【００８８】
Ｒ28におけるアリール基としては、特に限定されるものではないが、例えば、フェニル基、ナフチル基、フェナントリル基、またはアントラセニル基等の６〜１４員環の単環式または多環式アリール基が挙げられる。
【００８９】
一般式（ＩＸ）中、Ｒ29は水素原子、アルキル基、またはアリール基を表す。
【００９０】
Ｒ29におけるアルキル基としては、特に限定されるものではないが、例えば、メチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基、オクチル基、ノニル基、デシル基、ウンデシル基、ドデシル基、トリデシル基、テトラデシル基、ペンタデシル基、ヘキサデシル基、ヘプタデシル基、オクタデシル基、ノナデシル基、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基等の直鎖、または分岐または環状の炭素数１〜２０個のアルキル基等が挙げられる。更に該環には、置換基を有していてもよく、色素化合物の保存安定性を著しく阻害するものでなければ特に限定されるものではない。例えば、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、またはｔｅｒｔ−ブチル基等のアルキル基；フェニル基、またはナフチル基等のアリール基；メトキシ基、エトキシ基、またはブトキシ基等のアルコキシ基；フェノキシ基、またはナフチルオキシ基等のアリールオキシ基；チオメチル基、チオエチル基、チオプロピル基、チオブチル基、またはチオフェニル基等のアルキルスルファニル基；メチルアミノ基、またはブチルアミノ基等のモノ置換アミノ基；ジメチルアミノ基、Ｎ−エチル−Ｎ−フェニルアミノ基、またはジフェニルアミノ基等のジ置換アミノ基；アセチル基、ベンゾイル基、カルボン酸基、カルボン酸エステル基、またはカルバモイル基等のアシル基；スルホン酸基、スルホン酸エステル基、またはスルファモイル基等のスルホニル基；ピリジル基、トリアジニル基、またはベンゾチアゾリル基等のヘテロ環基；ニトロ基；フッ素原子、塩素原子、臭素原子、またはヨウ素原子等のハロゲン原子；ポリエチレングリコール基；４級アンモニウム塩、カルボン酸塩、スルホン酸塩等の塩類等が挙げられる。これらの置換基で水溶性を向上させる性質のある置換基を有する事が好ましく、これらに限定されるわけではないが、例えば、カルボン酸基、スルホン酸基、ポリエチレングリコール基、カルボン酸塩、スルホン酸塩が特に好ましい。
【００９１】
Ｒ29におけるアリール基としては、特に限定されるものではないが、例えば、フェニル基、ナフチル基、フェナントリル基、またはアントラセニル基等の６〜１４員環の単環式または多環式アリール基が挙げられる。
【００９２】
Ａが下記一般式（Ｘ）で表わされる骨格構造の場合、一般式（Ｉ）中、Ｒ1とＲ2の２つが合わさり、１つの置換基：＝Ｎ−Ｒ30を表わす。Ｒ30はアリール基、またはヘテロ環基を表す。
【００９３】
【化１６】
2010148447.tif 000012
【００９４】
一般式（Ｘ）中、Ｒ31〜Ｒ32はスルホン酸基、またはそれらの塩類を表わす。Ｒ33〜Ｒ34は水素原子、アルキル基、アルコキシ基、またはハロゲン原子を表す。
【００９５】
Ｒ33〜Ｒ34におけるアルキル基としては、特に限定されるものではないが、例えば、メチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基、オクチル基、ノニル基、デシル基、ウンデシル基、ドデシル基、トリデシル基、テトラデシル基、ペンタデシル基、ヘキサデシル基、ヘプタデシル基、オクタデシル基、ノナデシル基、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基等の直鎖、または分岐または環状の炭素数１〜２０個のアルキル基等が挙げられる。
【００９６】
Ｒ33〜Ｒ34におけるアルコキシ基としては、特に限定されるものではないが、例えば、メトキシ基、エトキシ基、プロポキシ基、ブトキシ基、ペンチルオキシ基、デシルオキシ基、ヘキシルオキシ基、ヘプチルオキシ基、オクチルオキシ基、ノニルオキシ基、デシルオキシ基、ドデシルオキシ基、またはオクタデシルオキシ基等の炭素数１〜２０個のアルコキシ基が挙げられる。
【００９７】
Ｒ33〜Ｒ34におけるハロゲン原子としては、例えば、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、またはヨウ素原子等が挙げられる。
【００９８】
Ｒ33〜Ｒ34は、水素原子、アルコキシ基、またはハロゲン原子が好ましく、水素原子が特に好ましい。
【００９９】
Ｒ30におけるアリール基としては、特に限定されるものではないが、例えば、フェニル基、ナフチル基、フェナントリル基、またはアントラセニル基等の６〜１４員環の単環式または多環式アリール基が挙げられる。
【０１００】
Ｒ30は、アリール基が好ましく、ナフチル基が特に好ましい。
【０１０１】
さらに、
一般式（ＩＩ）中、Ｒ3〜Ｒ4は各々独立して水素原子、アルケニル基、シアノ基、カルボン酸基、カルボン酸エステル基、スルホン酸基、アシル基またはヘテロ環基を表す。Ｒ3とＲ4は互いに結合して環を形成しても良い。Ｒ5は水素原子、アルキル基、アリール基、またはヘテロ環基を表す。
【０１０２】
前記一般式（ＩＩ）中のＲ3及びＲ4におけるアルケニル基としては、特に制限されるものではないが、例えば、ビニル基、２,２−ジフェニルビニル基、３−ブテニル基、またはシクロヘキセニル基等の炭素数２〜２０個のアルケニル基が挙げられる。
【０１０３】
Ｒ3及びＲ4におけるカルボン酸エステル基としては、特に限定されるものではないが、例えば、カルボン酸メチル基、カルボン酸エチル基、カルボン酸プロピル基、またはカルボン酸ブチル基等が挙げられる。
【０１０４】
Ｒ3及びＲ4におけるアシル基としては、特に限定されるものではないが、例えば、アセチル基、プロピオニル基、ブチリル基、ペンタノイル基、ベンゾイル基、１−ナフトイル基、または２−ナフトイル基等が挙げられる。
【０１０５】
Ｒ3及びＲ4におけるヘテロ環基としては、特に限定されるものではないが、例えば、４〜１０員環の単環式または二環式の窒素、酸素及び硫黄から選択される１〜４個の原子を含有するヘテロ環基が挙げられ、例えば、ピリジル基、ピラジニル基、ピリミジニル基、ピロリル基、チエニル基、フリル基、ピラニル基、オキサゾリル基、チアゾリル基、トリアゾリル基、テトラゾリル基、イミダゾリル基、ピラゾリル基、モルホリニル基、チオモルホリニル基、ピペリジニル基、ピペラジニル基、キノリル基、イソキノリル基、インドリル基、イソインドリル基、ベンゾフリル基、またはベンゾチエニル基等が挙げられる。
【０１０６】
Ｒ3及びＲ4は、化合物の合成の容易さからＲ3もしくはＲ4のどちらか一方が、シアノ基、またはカルボン酸基、ヘテロ環基が好ましく、Ｒ3もしくはＲ4のどちらか一方はシアノ基が特に好ましい。
【０１０７】
Ｒ3及びＲ4は、一方が水素原子であり、他方が一般式（ＸＩ）のヘテロ環基であることもまた好ましい。
【０１０８】
【化１７】
2010148447.tif 000013
【０１０９】
一般式（ＸＩ）中、Ｒ35はアルキル基、またはアリール基を表す。Ｒ36〜Ｒ39は各々独立して水素原子、アルキル基、アリール基、アルコキシ基、カルボン酸基、スルホン酸基、ヘテロ環基、アミノ基、またはハロゲン原子を表す。Ｒ36とＲ37、Ｒ37とＲ38、またはＲ38とＲ39は互いに結合して環を形成しても良い。Ｘ-は陰イオン性基を表す。Ｑ1は硫黄原子、酸素原子、−Ｃ（Ｒ40）（Ｒ41）−、−ＣＨ＝ＣＨ−、または−Ｎ（Ｒ42）−を表す。Ｒ40〜Ｒ42は水素原子、アルキル基、またはアリール基を表す。
【０１１０】
Ｒ35におけるアルキル基としては、特に限定されるものではないが、例えば、メチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基、オクチル基、ノニル基、デシル基、ウンデシル基、ドデシル基、トリデシル基、テトラデシル基、ペンタデシル基、ヘキサデシル基、ヘプタデシル基、オクタデシル基、ノナデシル基、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基等の直鎖、または分岐または環状の炭素数１〜２０個のアルキル基等が挙げられる。
【０１１１】
Ｒ35におけるアリール基としては、特に限定されるものではないが、例えば、フェニル基、ナフチル基、フェナントリル基、またはアントラセニル基等の６〜１４員環の単環式または多環式アリール基が挙げられる。
【０１１２】
Ｒ35は、更に置換基を有していてもよく、色素化合物の保存安定性を著しく阻害するものでなければ特に限定されるものではない。例えば、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、またはｔｅｒｔ−ブチル基等のアルキル基；フェニル基、またはナフチル基等のアリール基；メトキシ基、エトキシ基、またはブトキシ基等のアルコキシ基；フェノキシ基、またはナフチルオキシ基等のアリールオキシ基；チオメチル基、チオエチル基、チオプロピル基、チオブチル基、またはチオフェニル基等のアルキルスルファニル基；メチルアミノ基、またはブチルアミノ基等のモノ置換アミノ基；ジメチルアミノ基、Ｎ−エチル−Ｎ−フェニルアミノ基、またはジフェニルアミノ基等のジ置換アミノ基；アセチル基、ベンゾイル基、カルボン酸基、カルボン酸エステル基、またはカルバモイル基等のアシル基；スルホン酸基、スルホン酸エステル基、またはスルファモイル基等のスルホニル基；ピリジル基、トリアジニル基、またはベンゾチアゾリル基等のヘテロ環基；ニトロ基；フッ素原子、塩素原子、臭素原子、またはヨウ素原子等のハロゲン原子；ポリエチレングリコール基；４級アンモニウム塩、カルボン酸塩、スルホン酸塩等の塩類等が挙げられる。これらの置換基で水溶性を向上させる性質のある置換基を有する事が好ましく、これらに限定されるわけではないが、例えば、カルボン酸基、スルホン酸基、ポリエチレングリコール基、カルボン酸塩、スルホン酸塩が特に好ましい。
【０１１３】
Ｒ35は、アルキル基が好ましく、さらに該アルキル基にカルボン酸基、スルホン酸基、ポリエチレングリコール基、カルボン酸の塩、またはスルホン酸の塩等の置換基を有すると化合物の水溶性が増し、蛍光強度も増すので好ましい。
【０１１４】
Ｒ36〜Ｒ39におけるアルキル基としては、特に限定されるものではないが、例えば、メチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基、オクチル基、ノニル基、デシル基、ウンデシル基、ドデシル基、トリデシル基、テトラデシル基、ペンタデシル基、ヘキサデシル基、ヘプタデシル基、オクタデシル基、ノナデシル基、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基等の直鎖、または分岐または環状の炭素数１〜２０個のアルキル基等が挙げられる。
【０１１５】
Ｒ36〜Ｒ39におけるアリール基としては、特に限定されるものではないが、例えば、フェニル基、ナフチル基、フェナントリル基、またはアントラセニル基等の６〜１４員環の単環式または多環式アリール基が挙げられる。
【０１１６】
Ｒ36〜Ｒ39におけるアルコキシ基としては、特に限定されるものではないが、例えば、メトキシ基、エトキシ基、プロポキシ基、ブトキシ基、ペンチルオキシ基、デシルオキシ基、ヘキシルオキシ基、ヘプチルオキシ基、オクチルオキシ基、ノニルオキシ基、デシルオキシ基、ドデシルオキシ基、またはオクタデシルオキシ基等の炭素数１〜２０個のアルコキシ基が挙げられる。
【０１１７】
Ｒ36〜Ｒ39におけるヘテロ環基としては、特に限定されるものではないが、４〜１０員環の単環式または二環式の窒素、酸素及び硫黄から選択される１〜４個の原子を含有するヘテロ環基が挙げられ、例えば、ピリジル基、ピラジニル基、ピリミジニル基、ピロリル基、チエニル基、フリル基、ピラニル基、オキサゾリル基、チアゾリル基、トリアゾリル基、テトラゾリル基、イミダゾリル基、ピラゾリル基、モルホリニル基、チオモルホリニル基、ピペリジニル基、ピペラジニル基、キノリル基、イソキノリル基、インドリル基、イソインドリル基、ベンゾフリル基、またはベンゾチエニル基等が挙げられる。
【０１１８】
Ｒ36〜Ｒ39におけるアミノ基としては、特に限定されるものではないが、例えば、無置換アミノ基；Ｎ−メチルアミノ基、Ｎ−ブチルアミノ基、Ｎ−ヘキシルアミノ基、Ｎ−テトラデシルアミノ基、Ｎ−フェニルアミノ基、またはＮ−ナフチルアミノ基等のモノ置換アミノ基；Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ基、Ｎ，Ｎ−ジエチルアミノ基、Ｎ，Ｎ−ジフェニルアミノ基、またはＮ，Ｎ−メチルプロピルアミノ基等のジ置換アミノ基；アセチルアミノ基、エチルカルボニルアミノ基、ｔｅｒｔ−ブチルカルボニルアミノ基、ベンゾイルアミノ基、ナフトイルアミノ基、またはメトキシカルボニルアミノ基等のカルボニルアミノ基；メチルスルホニルアミノ基、エチルスルホニルアミノ基、ｔｅｒｔ−ブチルスルホニルアミノ基、またはｉｓｏ−プロポキシスルホニルアミノ基等のスルホニルアミノ基が挙げられる。
【０１１９】
Ｒ36〜Ｒ39におけるハロゲン原子としては、例えば、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、またはヨウ素原子等が挙げられる。
【０１２０】
Ｒ36〜Ｒ39は、水素原子、カルボン酸基、スルホン酸基、アミノ基、ハロゲン原子が好ましく、水素原子、スルホン酸基の場合は化合物の水溶性があがるため特に好ましい。
【０１２１】
Ｒ36とＲ37、Ｒ37とＲ38、またはＲ38とＲ39が互いに結合して形成する環としては、特に限定されるものではないが、例えば、ベンゼン環、ナフタレン環等の炭素数３〜１０の芳香環、シクロオクタン環、シクロヘプタン環、シクロヘキサン環、シクロペンタン環、シクロブタン環等の飽和環、シクロペンテン環、シクロヘキセン環等の部分飽和環、ピリジン環、またはピリミジン環等のヘテロ環が挙げられる。更に該環には、更に置換基を有していてもよく、色素化合物の保存安定性を著しく阻害するものでなければ特に限定されるものではない。例えば、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、またはｔｅｒｔ−ブチル基等のアルキル基；フェニル基、またはナフチル基等のアリール基；メトキシ基、エトキシ基、またはブトキシ基等のアルコキシ基；フェノキシ基、またはナフチルオキシ基等のアリールオキシ基；チオメチル基、チオエチル基、チオプロピル基、チオブチル基、またはチオフェニル基等のアルキルスルファニル基；メチルアミノ基、またはブチルアミノ基等のモノ置換アミノ基；ジメチルアミノ基、Ｎ−エチル−Ｎ−フェニルアミノ基、またはジフェニルアミノ基等のジ置換アミノ基；アセチル基、ベンゾイル基、カルボン酸基、カルボン酸エステル基、またはカルバモイル基等のアシル基；スルホン酸基、スルホン酸エステル基、またはスルファモイル基等のスルホニル基；ピリジル基、トリアジニル基、またはベンゾチアゾリル基等のヘテロ環基；ニトロ基；フッ素原子、塩素原子、臭素原子、またはヨウ素原子等のハロゲン原子；ポリエチレングリコール基；４級アンモニウム塩、カルボン酸塩、スルホン酸塩等の塩類等が挙げられる。これらの置換基で水溶性を向上させる性質のある置換基を有する事が好ましく、これらに限定されるわけではないが、例えば、カルボン酸基、スルホン酸基、ポリエチレングリコール基、カルボン酸塩、スルホン酸塩が特に好ましい。
【０１２２】
又、Ｒ36とＲ37、Ｒ37とＲ38、またはＲ38とＲ39が互いに結合して形成する環として、化合物の保存安定性が向上するため、ベンゼン環の場合が好ましい。
【０１２３】
Ｘ-は陰イオン性基を表す。ここで陰イオン性基としては、特に限定されるものではないが、例えば、フッ化物イオン、塩化物イオン、臭化物イオン、またはヨウ化物イオン等のハロゲンイオン；硫酸イオン、リン酸イオン、硝酸イオン、テトラフルオロホウ酸イオン、またはヘキサフルオロリン酸イオン等の無機酸イオン；テトラクロロアルミニウムイオン等の含ルイス酸イオン；酢酸イオン、乳酸イオン、メタンスルホン酸イオン、ベンゼンスルホン酸イオン、ｐ−トルエンスルホン酸イオン、トリフルオロ酢酸イオン、トリフルオロメタンスルホン酸イオン、またはテトラフェニルホウ酸イオンなどの有機酸イオン等を表す。
【０１２４】
Ｘ-の陰イオン性基としては、塩化物イオン、臭化物イオン、ヨウ化物イオン、硫酸イオン、硝酸イオン、メタンスルホン酸イオン等が好ましく、より好ましくは化合物合成の容易さからも臭化物イオン、ヨウ化物イオンの場合である。
【０１２５】
Ｑ1は硫黄原子、酸素原子、−Ｃ（Ｒ40）（Ｒ41）−、−ＣＨ＝ＣＨ−、または−Ｎ（Ｒ42）−を表す。
【０１２６】
Ｑ1中、Ｒ40〜Ｒ42におけるアルキル基としては、特に限定されるものではないが、例えば、メチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基、オクチル基、ノニル基、デシル基、ウンデシル基、ドデシル基、トリデシル基、テトラデシル基、ペンタデシル基、ヘキサデシル基、ヘプタデシル基、オクタデシル基、ノナデシル基、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基等の直鎖、または分岐または環状の炭素数１〜２０個のアルキル基等が挙げられる。
【０１２７】
Ｒ40〜Ｒ42におけるアリール基としては、特に限定されるものではないが、例えば、フェニル基、ナフチル基、フェナントリル基、またはアントラセニル基等の６〜１４員環の単環式または多環式アリール基が挙げられる。
【０１２８】
Ｑ1は、酸素原子、硫黄原子、または−Ｃ（ＣＨ3）（ＣＨ3）−が、化合物の保存安定性が良いため特に好ましい。
【０１２９】
一般式（ＩＩ）中で表されるＲ3とＲ4が互いに結合して形成される環は、下記一般式（ＸＩＩ）〜（ＸＶ）で表される。
【０１３０】
【化１８】
2010148447.tif 000014
【０１３１】
一般式（ＸＩＩ）中、Ｒ43は水素原子、アルキル基、アリール基、またはヘテロ環基を表し、Ｒ44はアルキル基、アリール基、カルボン酸基、カルボン酸エステル基、ヒドロキシル基、またはアミノ基を表す。
【０１３２】
Ｒ43及びＲ44におけるアルキル基としては、特に限定されるものではないが、例えば、メチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基、オクチル基、ノニル基、デシル基、ウンデシル基、ドデシル基、トリデシル基、テトラデシル基、ペンタデシル基、ヘキサデシル基、ヘプタデシル基、オクタデシル基、ノナデシル基、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基等の直鎖、または分岐または環状の炭素数１〜２０個のアルキル基等が挙げられる。
【０１３３】
Ｒ43及びＲ44におけるアリール基としては、特に限定されるものではないが、例えば、フェニル基、ナフチル基、フェナントリル基、またはアントラセニル基等の６〜１４員環の単環式または多環式アリール基が挙げられる。更に該環には、置換基を有していてもよく、色素化合物の保存安定性を著しく阻害するものでなければ特に限定されるものではない。例えば、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、またはｔｅｒｔ−ブチル基等のアルキル基；フェニル基、またはナフチル基等のアリール基；メトキシ基、エトキシ基、またはブトキシ基等のアルコキシ基；フェノキシ基、またはナフチルオキシ基等のアリールオキシ基；チオメチル基、チオエチル基、チオプロピル基、チオブチル基、またはチオフェニル基等のアルキルスルファニル基；メチルアミノ基、またはブチルアミノ基等のモノ置換アミノ基；ジメチルアミノ基、Ｎ−エチル−Ｎ−フェニルアミノ基、またはジフェニルアミノ基等のジ置換アミノ基；アセチル基、ベンゾイル基、カルボン酸基、カルボン酸エステル基、またはカルバモイル基等のアシル基；スルホン酸基、スルホン酸エステル基、またはスルファモイル基等のスルホニル基；ピリジル基、トリアジニル基、またはベンゾチアゾリル基等のヘテロ環基；ニトロ基；フッ素原子、塩素原子、臭素原子、またはヨウ素原子等のハロゲン原子；ポリエチレングリコール基；４級アンモニウム塩、カルボン酸塩、スルホン酸塩等の塩類等が挙げられる。これらの置換基で水溶性を向上させる性質のある置換基を有する事が好ましく、これらに限定されるわけではないが、例えば、カルボン酸基、スルホン酸基、ポリエチレングリコール基、カルボン酸塩、スルホン酸塩が特に好ましい。
【０１３４】
Ｒ43におけるヘテロ環基としては、特に限定されるものではないが、４〜１０員環の単環式または二環式の窒素、または酸素及び硫黄から選択される１〜４個の原子を含有するヘテロ環基が挙げられ、例えば、ピリジル基、ピラジニル基、ピリミジニル基、ピロリル基、チエニル基、フリル基、ピラニル基、オキサゾリル基、チアゾリル基、トリアゾリル基、テトラゾリル基、イミダゾリル基、ピラゾリル基、モルホリニル基、チオモルホリニル基、ピペリジニル基、ピペラジニル基、キノリル基、イソキノリル基、インドリル基、イソインドリル基、ベンゾフリル基、またはベンゾチエニル基等が挙げられる。
【０１３５】
Ｒ43として好ましくは、化合物の安定性からアリール基の場合である。更に該アリール基にカルボン酸のような水溶性の置換基を有していると水溶性が向上するため好ましい。
【０１３６】
Ｒ44におけるカルボン酸エステル基としては、特に限定されるものではないが、例えば、カルボン酸メチル基、カルボン酸エチル基、カルボン酸プロピル基、またはカルボン酸ブチル基等が挙げられる。
【０１３７】
Ｒ44におけるアミノ基としては、特に限定されるものではないが、例えば、無置換アミノ基；Ｎ−メチルアミノ基、Ｎ−ブチルアミノ基、Ｎ−ヘキシルアミノ基、Ｎ−テトラデシルアミノ基、Ｎ−フェニルアミノ基、Ｎ−ナフチルアミノ基等のモノ置換アミノ基；Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ基、Ｎ，Ｎ−ジエチルアミノ基、Ｎ，Ｎ−ジフェニルアミノ基、またはＮ，Ｎ−メチルプロピルアミノ基等のジ置換アミノ基；アセチルアミノ基、エチルカルボニルアミノ基、ｔｅｒｔ−ブチルカルボニルアミノ基、ベンゾイルアミノ基、ナフトイルアミノ基、またはメトキシカルボニルアミノ基等のカルボニルアミノ基；メチルスルホニルアミノ基、エチルスルホニルアミノ基、ｔｅｒｔ−ブチルスルホニルアミノ基、またはｉｓｏ−プロポキシスルホニルアミノ基等のスルホニルアミノ基が挙げられる
Ｒ44は、化合物の合成の容易さからアルキル基、アリール基、カルボン酸基、またはアミノ基が好ましく、アルキル基、またはカルボン酸基が特に好ましい。
【０１３８】
一般式（ＸＩＩＩ）中、Ｑ2は、酸素原子、硫黄原子、または−Ｎ（Ｒ52）−を表す。Ｒ45は水素原子、アルキル基、アリール基、またはヘテロ環基であり、Ｒ46は硫黄原子、酸素原子、＝ＮＲ53、ヘテロ環、またはジシアノメチレン基である。Ｒ52及びＲ53は水素原子、アルキル基、アリール基、またはヘテロ環基である。
【０１３９】
Ｒ45及びＲ52〜Ｒ53におけるアルキル基としては、特に限定されるものではないが、例えば、メチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基、オクチル基、ノニル基、デシル基、ウンデシル基、ドデシル基、トリデシル基、テトラデシル基、ペンタデシル基、ヘキサデシル基、ヘプタデシル基、オクタデシル基、ノナデシル基、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基等の直鎖、または分岐または環状の炭素数１〜２０個のアルキル基等が挙げられる。更に置換基を有していてもよく、色素化合物の保存安定性を著しく阻害するものでなければ特に限定されるものではない。例えば、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、またはｔｅｒｔ−ブチル基等のアルキル基；フェニル基、またはナフチル基等のアリール基；メトキシ基、エトキシ基、またはブトキシ基等のアルコキシ基；フェノキシ基、またはナフチルオキシ基等のアリールオキシ基；チオメチル基、チオエチル基、チオプロピル基、チオブチル基、またはチオフェニル基等のアルキルスルファニル基；メチルアミノ基、またはブチルアミノ基等のモノ置換アミノ基；ジメチルアミノ基、Ｎ−エチル−Ｎ−フェニルアミノ基、またはジフェニルアミノ基等のジ置換アミノ基；アセチル基、ベンゾイル基、カルボン酸基、カルボン酸エステル基、またはカルバモイル基等のアシル基；スルホン酸基、スルホン酸エステル基、またはスルファモイル基等のスルホニル基；ピリジル基、トリアジニル基、またはベンゾチアゾリル基等のヘテロ環基；ニトロ基；フッ素原子、塩素原子、臭素原子、またはヨウ素原子等のハロゲン原子；ポリエチレングリコール基；４級アンモニウム塩、カルボン酸塩、スルホン酸塩等の塩類等が挙げられる。これらの置換基で水溶性を向上させる性質のある置換基を有する事が好ましく、これらに限定されるわけではないが、例えば、カルボン酸基、スルホン酸基、ポリエチレングリコール基、カルボン酸塩、スルホン酸塩が特に好ましい。
【０１４０】
Ｒ45及びＲ52〜Ｒ53におけるアリール基としては、特に限定されるものではないが、例えば、フェニル基、ナフチル基、フェナントリル基、またはアントラセニル基等の６〜１４員環の単環式または多環式アリール基が挙げられる。
【０１４１】
Ｒ45及びＲ52〜Ｒ53におけるヘテロ環基としては、特に限定されるものではないが、４〜１０員環の単環式または二環式の窒素、または酸素及び硫黄から選択される１〜４個の原子を含有するヘテロ環基が挙げられ、例えば、ピリジル基、ピラジニル基、ピリミジニル基、ピロリル基、チエニル基、フリル基、ピラニル基、オキサゾリル基、チアゾリル基、トリアゾリル基、テトラゾリル基、イミダゾリル基、ピラゾリル基、モルホリニル基、チオモルホリニル基、ピペリジニル基、ピペラジニル基、キノリル基、イソキノリル基、インドリル基、イソインドリル基、ベンゾフリル基、またはベンゾチエニル基等が挙げられる。
【０１４２】
Ｒ45は、アルキル基が好ましく、更に該アルキル基にカルボン酸基、スルホン酸基、ポリエチレングリコール基、カルボン酸の塩、またはスルホン酸の塩等カルボン酸基、またはスルホン酸基等の置換基を有すると化合物の水溶性が増し、蛍光強度も増すので好ましい。
【０１４３】
Ｒ46は、硫黄原子、酸素原子、またはヘテロ環が好ましい。
【０１４４】
Ｒ46が硫黄原子の場合は染色性が良くなる傾向があり、３位に置換基を有する２−チオキソチアゾリジン−４−オンの場合は、最大蛍光波長の検出が近赤外波長の領域に長波長化するものが多いため、近赤外での応用に用いる事が出来るためより好ましい。
【０１４５】
一般式（ＸＩＶ）中、Ｒ47は硫黄原子、酸素原子、３位に置換基を有する２−チオキソチアゾリジン−４−オン、Ｒ48は水素原子、アルキル基、アリール基、またはヘテロ環基を表す。
【０１４６】
Ｒ47としては硫黄原子、３位に置換基を有する２−チオキソチアゾリジン−４−オンが好ましく、３位に置換基を有する２−チオキソチアゾリジン−４−オンの場合は、最大蛍光波長の検出が近赤外波長の領域に長波長化するものが多いため、近赤外での応用に用いる事が出来るためより好ましい。
【０１４７】
Ｒ48におけるアルキル基としては、特に限定されるものではないが、例えば、メチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基、オクチル基、ノニル基、デシル基、ウンデシル基、ドデシル基、トリデシル基、テトラデシル基、ペンタデシル基、ヘキサデシル基、ヘプタデシル基、オクタデシル基、ノナデシル基、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基等の直鎖、または分岐または環状の炭素数１〜２０個のアルキル基等が挙げられる。
【０１４８】
Ｒ48におけるアリール基としては、特に限定されるものではないが、例えば、フェニル基、ナフチル基、フェナントリル基、またはアントラセニル基等の６〜１４員環の単環式または多環式アリール基が挙げられる。
【０１４９】
Ｒ48におけるヘテロ環基としては、特に限定されるものではないが、４〜１０員環の単環式または二環式の窒素、または酸素及び硫黄から選択される１〜４個の原子を含有するヘテロ環基が挙げられ、例えば、ピリジル基、ピラジニル基、ピリミジニル基、ピロリル基、チエニル基、フリル基、ピラニル基、オキサゾリル基、チアゾリル基、トリアゾリル基、テトラゾリル基、イミダゾリル基、ピラゾリル基、モルホリニル基、チオモルホリニル基、ピペリジニル基、ピペラジニル基、キノリル基、イソキノリル基、インドリル基、イソインドリル基、ベンゾフリル基、またはベンゾチエニル基等が挙げられる。
【０１５０】
Ｒ48は、アルキル基が好ましく、更に該アルキル基にカルボン酸基、スルホン酸基、ポリエチレングリコール基、カルボン酸の塩、またはスルホン酸の塩等の置換基を有すると化合物の水溶性が増し、蛍光強度も増すので好ましい。
【０１５１】
一般式（ＸＶ）中、Ｒ49〜Ｒ50は各々独立して水素原子、アルキル基、アリール基を表す。Ｒ51は酸素原子、または硫黄原子を表わす。
【０１５２】
Ｒ49〜Ｒ50におけるアルキル基としては、特に限定されるものではないが、例えば、メチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基、オクチル基、ノニル基、デシル基、ウンデシル基、ドデシル基、トリデシル基、テトラデシル基、ペンタデシル基、ヘキサデシル基、ヘプタデシル基、オクタデシル基、ノナデシル基、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基等の直鎖、または分岐または環状の炭素数１〜２０個のアルキル基等が挙げられる。
【０１５３】
Ｒ49〜Ｒ50におけるアリール基としては、特に限定されるものではないが、例えば、フェニル基、ナフチル基、フェナントリル基、またはアントラセニル基等の６〜１４員環の単環式または多環式アリール基が挙げられる。
【０１５４】
Ｂは、下記一般式（ＸＶＩ）〜（ＸＶＩＩＩ）で表わされる骨格構造を示す。
【０１５５】
【化１９】
2010148447.tif 000015
【０１５６】
一般式（ＸＶＩ）中、Ｒ54は水素原子、アルキル基、アラルキル基、アルケニル基、アリール基、ヘテロ環基、またはアシル基を表す。Ｒ55〜Ｒ58は各々独立して水素原子、アルキル基、アリール基、カルボン酸基、カルボン酸エステル基、またはアシル基を表し、Ｒ55とＲ57が互いに結合して環を形成しても良い。Ｒ59は水素原子、アルキル基、アルコキシ基、またはハロゲン原子を表す。
【０１５７】
Ｒ54におけるアルキル基としては、特に限定されるものではないが、例えば、メチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基、オクチル基、ノニル基、デシル基、ウンデシル基、ドデシル基、トリデシル基、テトラデシル基、ペンタデシル基、ヘキサデシル基、ヘプタデシル基、オクタデシル基、ノナデシル基、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基等の直鎖、分岐または環状の炭素数１〜２０個のアルキル基等が挙げられる。
【０１５８】
Ｒ54におけるアラルキル基としては、特に限定されるものではないが、例えば、ベンジル基、またはフェネチル基等が挙げられる。
【０１５９】
Ｒ54におけるアルケニル基としては、特に限定されるものではないが、例えば、ビニル基、２，２−ジフェニルビニル基、３−ブテニル基、またはシクロヘキセニル基等の炭素数２〜２０個のアルケニル基が挙げられる。
【０１６０】
Ｒ54におけるアリール基としては、特に限定されるものではないが、例えば、フェニル基、ナフチル基、フェナントリル基、またはアントラセニル基等の６〜１４員環の単環式または多環式アリール基が挙げられる。
【０１６１】
Ｒ54におけるヘテロ環基としては、特に限定されるものではないが、例えば、４〜１０員環の単環式または二環式の窒素、酸素及び硫黄から選択される１〜４個の原子を含有するヘテロ環基が挙げられ、例えば、ピリジル基、ピラジニル基、ピリミジニル基、ピロリル基、チエニル基、フリル基、ピラニル基、オキサゾリル基、チアゾリル基、トリアゾリル基、テトラゾリル基、イミダゾリル基、ピラゾリル基、モルホリニル基、チオモルホリニル基、ピペリジニル基、ピペラジニル基、キノリル基、イソキノリル基、インドリル基、イソインドリル基、ベンゾフリル基、またはベンゾチエニル基等が挙げられる。
【０１６２】
Ｒ54におけるアシル基としては、特に限定されるものではないが、例えば、アセチル基、プロピオニル基、ブチリル基、ペンタノイル基、ベンゾイル基、１−ナフトイル基、または２−ナフトイル基等が挙げられる。
【０１６３】
Ｒ54は、更に置換基を有していてもよく、色素化合物の保存安定性を著しく阻害するものでなければ特に限定されるものではない。例えば、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、またはｔｅｒｔ−ブチル基等のアルキル基；フェニル基、またはナフチル基等のアリール基；メトキシ基、エトキシ基、またはブトキシ基等のアルコキシ基；フェノキシ基、またはナフチルオキシ基等のアリールオキシ基；チオメチル基、チオエチル基、チオプロピル基、チオブチル基、またはチオフェニル基等のアルキルスルファニル基；メチルアミノ基、またはブチルアミノ基等のモノ置換アミノ基；ジメチルアミノ基、Ｎ−エチル−Ｎ−フェニルアミノ基、またはジフェニルアミノ基等のジ置換アミノ基；アセチル基、ベンゾイル基、カルボン酸基、カルボン酸エステル基、またはカルバモイル基等のアシル基；スルホン酸基、スルホン酸エステル基、またはスルファモイル基等のスルホニル基；ピリジル基、トリアジニル基、またはベンゾチアゾリル基等のヘテロ環基；ニトロ基；フッ素原子、塩素原子、臭素原子、またはヨウ素原子等のハロゲン原子；ポリエチレングリコール基；４級アンモニウム塩、カルボン酸塩、スルホン酸塩等の塩類等が挙げられる。これらの置換基で水溶性を向上させる性質のある置換基を有する事が好ましく、これらに限定されるわけではないが、例えば、カルボン酸基、スルホン酸基、ポリエチレングリコール基、カルボン酸塩、スルホン酸塩が特に好ましい。
【０１６４】
Ｒ54は、上記に列挙した置換基から、それぞれ独立に且つ任意に選択できるが、好ましい形態としてはアラルキル基、アルケニル基、またはアリール基等の場合が蛍光の強度が強いため好ましく、具体的には、フェニル基、ブロモフェニル基、ベンジル基、ブロモベンジル基、メチルチオフェニル基、メトキシフェニル基、メトキシナフチル基、ベンジルフェニル基、２，２−ジフェニルビニル基、または２，２−ジフェニルビニルフェニル基等が好ましい。更に好ましくは、フェニル基、ブロモフェニル基、ベンジル基、メチルチオフェニル基、メトキシフェニル基、またはメトキシナフチル基が好ましく、特に、メチルチオフェニル基の場合はストークスシフト（最大励起波長と最大蛍光波長の差）が飛躍的に大きくなる傾向が認められるため好ましい。
【０１６５】
Ｒ55〜Ｒ58におけるアルキル基としては、特に限定されるものではないが、例えば、メチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基、オクチル基、ノニル基、デシル基、ウンデシル基、ドデシル基、トリデシル基、テトラデシル基、ペンタデシル基、ヘキサデシル基、ヘプタデシル基、オクタデシル基、ノナデシル基、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基等の直鎖、または分岐または環状の炭素数１〜２０個のアルキル基等が挙げられる。
【０１６６】
Ｒ55〜Ｒ58におけるアリール基としては、特に限定されるものではないが、例えば、フェニル基、ナフチル基、フェナントリル基、またはアントラセニル基等の６〜１４員環の単環式または多環式アリール基が挙げられる。
【０１６７】
Ｒ55〜Ｒ58におけるカルボン酸エステル基としては、特に限定されるものではないが、例えば、カルボン酸メチル基、カルボン酸エチル基、カルボン酸プロピル基、またはカルボン酸ブチル基等が挙げられる。
【０１６８】
Ｒ55〜Ｒ58におけるアシル基としては、特に限定されるものではないが、例えば、アセチル基、プロピオニル基、ブチリル基、ペンタノイル基、ベンゾイル基、１−ナフトイル基、または２−ナフトイル基等が挙げられる。Ｒ55〜Ｒ58は更に置換基を有していてもよく、色素化合物の保存安定性を著しく阻害するものでなければ特に限定されるものではないが、例えば、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、またはｔｅｒｔ−ブチル基等のアルキル基；フェニル基、またはナフチル基等のアリール基；メトキシ基、エトキシ基、またはブトキシ基等のアルコキシ基；フェノキシ基、またはナフチルオキシ基等のアリールオキシ基；チオメチル基、チオエチル基、チオプロピル基、チオブチル基、またはチオフェニル基等のアルキルスルファニル基；メチルアミノ基、またはブチルアミノ基等のモノ置換アミノ基；ジメチルアミノ基、Ｎ−エチル−Ｎ−フェニルアミノ基、またはジフェニルアミノ基等のジ置換アミノ基；アセチル基、ベンゾイル基、カルボン酸基、カルボン酸エステル基、またはカルバモイル基等のアシル基；スルホン酸基、スルホン酸エステル基、またはスルファモイル基等のスルホニル基；ピリジル基、トリアジニル基、またはベンゾチアゾリル基等のヘテロ環基；ニトロ基；フッ素原子、塩素原子、臭素原子、またはヨウ素原子等のハロゲン原子；ポリエチレングリコール基；４級アンモニウム塩、カルボン酸塩、スルホン酸塩等の塩類等が挙げられる。これらの置換基で水溶性を向上させる性質のある置換基を有する事が好ましく、これらに限定されるわけではないが、例えば、カルボン酸基、スルホン酸基、ポリエチレングリコール基、カルボン酸塩、スルホン酸塩が特に好ましい。
【０１６９】
Ｒ55とＲ57が互いに結合して形成する環としては、特に限定されるものではないが、例えば、シクロオクタン環、シクロヘプタン環、シクロヘキサン環、シクロペンタン環、またはシクロブタン環等の飽和脂肪族環、シクロペンテン環、またはシクロヘキセン環等の部分飽和脂肪族環等が挙げられる。更に該環には、置換基を有していてもよく、色素化合物の保存安定性を著しく阻害するものでなければ特に限定されるものではない。例えば、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、またはｔｅｒｔ−ブチル基等のアルキル基；フェニル基、またはナフチル基等のアリール基；メトキシ基、エトキシ基、またはブトキシ基等のアルコキシ基；フェノキシ基、またはナフチルオキシ基等のアリールオキシ基；チオメチル基、チオエチル基、チオプロピル基、チオブチル基、またはチオフェニル基等のアルキルスルファニル基；メチルアミノ基、またはブチルアミノ基等のモノ置換アミノ基；ジメチルアミノ基、Ｎ−エチル−Ｎ−フェニルアミノ基、またはジフェニルアミノ基等のジ置換アミノ基；アセチル基、ベンゾイル基、カルボン酸基、カルボン酸エステル基、またはカルバモイル基等のアシル基；スルホン酸基、スルホン酸エステル基、またはスルファモイル基等のスルホニル基；ピリジル基、トリアジニル基、またはベンゾチアゾリル基等のヘテロ環基；ニトロ基；フッ素原子、塩素原子、臭素原子、またはヨウ素原子等のハロゲン原子；ポリエチレングリコール基；４級アンモニウム塩、カルボン酸塩、スルホン酸塩等の塩類等が挙げられる。これらの置換基で水溶性を向上させる性質のある置換基を有する事が好ましく、これらに限定されるわけではないが、例えば、カルボン酸基、スルホン酸基、ポリエチレングリコール基、カルボン酸塩、スルホン酸塩が特に好ましい。Ｒ55〜Ｒ58は、各々独立して水素原子、アルキル基、またはアリール基、Ｒ55とＲ57が互いに結合して環を形成していることが好ましく、Ｒ55とＲ57が互いに結合して環を形成している場合が化学構造上安定であるのでより好ましい。具体的には、シクロオクタン環、シクロヘプタン環、シクロヘキサン環、シクロペンタン環、またはシクロブタン環が挙げられる。より好ましくはシクロペンタン環が保存安定性の上からも好ましい。
【０１７０】
Ｒ59におけるアルキル基としては、特に限定されるものではないが、例えば、メチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基、オクチル基、ノニル基、デシル基、ウンデシル基、ドデシル基、トリデシル基、テトラデシル基、ペンタデシル基、ヘキサデシル基、ヘプタデシル基、オクタデシル基、ノナデシル基、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基等の直鎖、または分岐または環状の炭素数１〜２０個のアルキル基等が挙げられる。
【０１７１】
Ｒ59におけるアルコキシ基としては、特に限定されるものではないが、例えば、メトキシ基、エトキシ基、プロポキシ基、ブトキシ基、ペンチルオキシ基、デシルオキシ基、ヘキシルオキシ基、ヘプチルオキシ基、オクチルオキシ基、ノニルオキシ基、デシルオキシ基、ドデシルオキシ基、またはオクタデシルオキシ基等の炭素数１〜２０個のアルコキシ基が挙げられる。
【０１７２】
Ｒ59におけるハロゲン原子としては、例えば、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、またはヨウ素原子等が挙げられる。
【０１７３】
Ｒ59は、水素原子、ハロゲン原子、またはアルコキシ基が好ましく、水素原子、またはハロゲン原子がより好ましい。
【０１７４】
一般式（ＸＶＩＩ）中、Ｒ60は水素原子、アルキル基、またはアリール基を表す。Ｒ61〜Ｒ64は各々独立して水素原子、アルキル基、アリール基、アルコキシ基、カルボン酸基、スルホン酸基、ヘテロ環基、アミノ基、またはハロゲン原子を表す。又、Ｒ61とＲ62、Ｒ62とＲ63、またはＲ63とＲ64は互いに結合して環を形成しても良い。
【０１７５】
Ｒ60におけるアルキル基としては、特に限定されるものではないが、例えば、メチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基、オクチル基、ノニル基、デシル基、ウンデシル基、ドデシル基、トリデシル基、テトラデシル基、ペンタデシル基、ヘキサデシル基、ヘプタデシル基、オクタデシル基、ノナデシル基、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基等の直鎖、または分岐または環状の炭素数１〜２０個のアルキル基等が挙げられる。
【０１７６】
Ｒ60におけるアリール基としては、特に限定されるものではないが、例えば、フェニル基、ナフチル基、フェナントリル基、またはアントラセニル基等の６〜１４員環の単環式または多環式アリール基が挙げられる。
【０１７７】
Ｒ60は、更に置換基を有していてもよく、色素化合物の保存安定性を著しく阻害するものでなければ特に限定されるものではない。例えば、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、またはｔｅｒｔ−ブチル基等のアルキル基；フェニル基、またはナフチル基等のアリール基；メトキシ基、エトキシ基、またはブトキシ基等のアルコキシ基；フェノキシ基、またはナフチルオキシ基等のアリールオキシ基；チオメチル基、チオエチル基、チオプロピル基、チオブチル基、またはチオフェニル基等のアルキルスルファニル基；メチルアミノ基、またはブチルアミノ基等のモノ置換アミノ基；ジメチルアミノ基、Ｎ−エチル−Ｎ−フェニルアミノ基、またはジフェニルアミノ基等のジ置換アミノ基；アセチル基、ベンゾイル基、カルボン酸基、カルボン酸エステル基、またはカルバモイル基等のアシル基；スルホン酸基、スルホン酸エステル基、またはスルファモイル基等のスルホニル基；ピリジル基、トリアジニル基、またはベンゾチアゾリル基等のヘテロ環基；ニトロ基；フッ素原子、塩素原子、臭素原子、またはヨウ素原子等のハロゲン原子；ポリエチレングリコール基；４級アンモニウム塩、カルボン酸塩、スルホン酸塩等の塩類等が挙げられる。これらの置換基で水溶性を向上させる性質のある置換基を有する事が好ましく、これらに限定されるわけではないが、例えば、カルボン酸基、スルホン酸基、ポリエチレングリコール基、カルボン酸塩、スルホン酸塩が特に好ましい。Ｒ60は、アルキル基が好ましく、更に該アルキル基にカルボン酸基、スルホン酸基、ポリエチレングリコール基、カルボン酸塩、またはスルホン酸の塩等の置換基を有すると化合物の水溶性が増し、蛍光強度も増すので好ましい。
【０１７８】
Ｒ61〜Ｒ64におけるアルキル基としては、特に限定されるものではないが、例えば、メチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基、オクチル基、ノニル基、デシル基、ウンデシル基、ドデシル基、トリデシル基、テトラデシル基、ペンタデシル基、ヘキサデシル基、ヘプタデシル基、オクタデシル基、ノナデシル基、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基等の直鎖、または分岐または環状の炭素数１〜２０個のアルキル基等が挙げられる。
【０１７９】
Ｒ61〜Ｒ64におけるアリール基としては、特に限定されるものではないが、例えば、フェニル基、ナフチル基、フェナントリル基、またはアントラセニル基等の６〜１４員環の単環式または多環式アリール基が挙げられる。
【０１８０】
Ｒ61〜Ｒ64におけるアルコキシ基としては、特に限定されるものではないが、例えば、メトキシ基、エトキシ基、プロポキシ基、ブトキシ基、ペンチルオキシ基、デシルオキシ基、ヘキシルオキシ基、ヘプチルオキシ基、オクチルオキシ基、ノニルオキシ基、デシルオキシ基、ドデシルオキシ基、またはオクタデシルオキシ基等の炭素数１〜２０個のアルコキシ基が挙げられる。
【０１８１】
Ｒ61〜Ｒ64におけるヘテロ環基としては、特に限定されるものではないが、４〜１０員環の単環式または二環式の窒素、酸素及び硫黄から選択される１〜４個の原子を含有するヘテロ環基が挙げられ、例えば、ピリジル基、ピラジニル基、ピリミジニル基、ピロリル基、チエニル基、フリル基、ピラニル基、オキサゾリル基、チアゾリル基、トリアゾリル基、テトラゾリル基、イミダゾリル基、ピラゾリル基、モルホリニル基、チオモルホリニル基、ピペリジニル基、ピペラジニル基、キノリル基、イソキノリル基、インドリル基、イソインドリル基、ベンゾフリル基、またはベンゾチエニル基等が挙げられる。
【０１８２】
Ｒ61〜Ｒ64におけるアミノ基としては、特に限定されるものではないが、例えば、無置換アミノ基；Ｎ−メチルアミノ基、Ｎ−ブチルアミノ基、Ｎ−ヘキシルアミノ基、Ｎ−テトラデシルアミノ基、Ｎ−フェニルアミノ基、またはＮ−ナフチルアミノ基等のモノ置換アミノ基；Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ基、Ｎ，Ｎ−ジエチルアミノ基、Ｎ，Ｎ−ジフェニルアミノ基、またはＮ，Ｎ−メチルプロピルアミノ基等のジ置換アミノ基；アセチルアミノ基、エチルカルボニルアミノ基、ｔｅｒｔ−ブチルカルボニルアミノ基、ベンゾイルアミノ基、ナフトイルアミノ基、またはメトキシカルボニルアミノ基等のカルボニルアミノ基；メチルスルホニルアミノ基、エチルスルホニルアミノ基、ｔｅｒｔ−ブチルスルホニルアミノ基、またはｉｓｏ−プロポキシスルホニルアミノ基等のスルホニルアミノ基が挙げられる。
【０１８３】
Ｒ61〜Ｒ64におけるハロゲン原子としては、例えば、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、またはヨウ素原子等が挙げられる。
【０１８４】
Ｒ61〜Ｒ64は、水素原子、カルボン酸基、スルホン酸基、アミノ基、ハロゲン原子が好ましく、水素原子、スルホン酸基の場合は化合物の水溶性があがるためより好ましい。
【０１８５】
Ｒ61とＲ62、Ｒ62とＲ63、またはＲ63とＲ64が互いに結合して形成する環としては、特に限定されるものではないが、例えば、ベンゼン環、ナフタレン環等の炭素数３〜１０の芳香環、シクロオクタン環、シクロヘプタン環、シクロヘキサン環、シクロペンタン環、シクロブタン環等の飽和環、シクロペンテン環、シクロヘキセン環等の部分飽和環、ピリジン環、またはピリミジン環等のヘテロ環が挙げられる。更に該環には、置換基を有していてもよく、色素化合物の保存安定性を著しく阻害するものでなければ特に限定されるものではない。例えば、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、またはｔｅｒｔ−ブチル基等のアルキル基；フェニル基、またはナフチル基等のアリール基；メトキシ基、エトキシ基、またはブトキシ基等のアルコキシ基；フェノキシ基、またはナフチルオキシ基等のアリールオキシ基；チオメチル基、チオエチル基、チオプロピル基、チオブチル基、またはチオフェニル基等のアルキルスルファニル基；メチルアミノ基、またはブチルアミノ基等のモノ置換アミノ基；ジメチルアミノ基、Ｎ−エチル−Ｎ−フェニルアミノ基、またはジフェニルアミノ基等のジ置換アミノ基；アセチル基、ベンゾイル基、カルボン酸基、カルボン酸エステル基、またはカルバモイル基等のアシル基；スルホン酸基、スルホン酸エステル基、またはスルファモイル基等のスルホニル基；ピリジル基、トリアジニル基、またはベンゾチアゾリル基等のヘテロ環基；ニトロ基；フッ素原子、塩素原子、臭素原子、またはヨウ素原子等のハロゲン原子；ポリエチレングリコール基；４級アンモニウム塩、カルボン酸塩、スルホン酸塩等の塩類等が挙げられる。これらの置換基で水溶性を向上させる性質のある置換基を有する事が好ましく、これらに限定されるわけではないが、例えば、カルボン酸基、スルホン酸基、ポリエチレングリコール基、カルボン酸塩、スルホン酸塩が特に好ましい。
【０１８６】
又、Ｒ61とＲ62、Ｒ62とＲ63、またはＲ63とＲ64が互いに結合して形成する環として、化合物の保存安定性が向上するため、ベンゼン環の場合が好ましい。
【０１８７】
一般式（ＸＶＩＩ）中、Ｑ3は硫黄原子、酸素原子、−Ｃ（Ｒ65）（Ｒ66）−、−ＣＨ＝ＣＨ−、または−Ｎ（Ｒ67）−を表す。Ｒ65〜Ｒ67は水素原子、アルキル基、またはアリール基を表す。
【０１８８】
Ｑ3中、Ｒ65〜Ｒ67におけるアルキル基としては、特に限定されるものではないが、例えば、メチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基、オクチル基、ノニル基、デシル基、ウンデシル基、ドデシル基、トリデシル基、テトラデシル基、ペンタデシル基、ヘキサデシル基、ヘプタデシル基、オクタデシル基、ノナデシル基、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基等の直鎖、または分岐または環状の炭素数１〜２０個のアルキル基等が挙げられる。
【０１８９】
Ｒ65〜Ｒ67におけるアリール基としては、特に限定されるものではないが、例えば、フェニル基、ナフチル基、フェナントリル基、またはアントラセニル基等の６〜１４員環の単環式または多環式アリール基が挙げられる。
【０１９０】
Ｑ3は、硫黄原子、酸素原子、または−Ｃ（Ｒ65）（Ｒ66）−が好ましく、酸素原子、硫黄原子、または−Ｃ（ＣＨ3）（ＣＨ3）−が特に好ましい。
【０１９１】
一般式（ＸＶＩＩＩ）中、Ｒ68〜Ｒ69は各々独立して水素原子、アルキル基、アリール基を表す。Ｒ70は酸素原子、または硫黄原子を表わす。
【０１９２】
Ｒ68〜Ｒ69におけるアルキル基としては、特に限定されるものではないが、例えば、メチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基、オクチル基、ノニル基、デシル基、ウンデシル基、ドデシル基、トリデシル基、テトラデシル基、ペンタデシル基、ヘキサデシル基、ヘプタデシル基、オクタデシル基、ノナデシル基、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基等の直鎖、または分岐または環状の炭素数１〜２０個のアルキル基等が挙げられる。
【０１９３】
Ｒ68〜Ｒ69におけるアリール基としては、特に限定されるものではないが、例えば、フェニル基、ナフチル基、フェナントリル基、またはアントラセニル基等の６〜１４員環の単環式または多環式アリール基が挙げられる
Ｒ68〜Ｒ69は、更に置換基を有していてもよく、色素化合物の保存安定性を著しく阻害するものでなければ特に限定されるものではない。例えば、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、またはｔｅｒｔ−ブチル基等のアルキル基；フェニル基、またはナフチル基等のアリール基；メトキシ基、エトキシ基、またはブトキシ基等のアルコキシ基；フェノキシ基、またはナフチルオキシ基等のアリールオキシ基；チオメチル基、チオエチル基、チオプロピル基、チオブチル基、またはチオフェニル基等のアルキルスルファニル基；メチルアミノ基、またはブチルアミノ基等のモノ置換アミノ基；ジメチルアミノ基、Ｎ−エチル−Ｎ−フェニルアミノ基、またはジフェニルアミノ基等のジ置換アミノ基；アセチル基、ベンゾイル基、カルボン酸基、カルボン酸エステル基、またはカルバモイル基等のアシル基；スルホン酸基、スルホン酸エステル基、またはスルファモイル基等のスルホニル基；ピリジル基、トリアジニル基、またはベンゾチアゾリル基等のヘテロ環基；ニトロ基；フッ素原子、塩素原子、臭素原子、またはヨウ素原子等のハロゲン原子；ポリエチレングリコール基；４級アンモニウム塩、カルボン酸塩、スルホン酸塩等の塩類等が挙げられる。これらの置換基で水溶性を向上させる性質のある置換基を有する事が好ましく、これらに限定されるわけではないが、例えば、カルボン酸基、スルホン酸基、ポリエチレングリコール基、カルボン酸塩、スルホン酸塩が特に好ましい。
【０１９４】
前記、一般式（Ｉ）〜（ＸＶＩＩＩ）から構成される化合物中にカルボン酸基、スルホン酸基、またはポリエチレングリコール基を少なくとも１つ以上有すると水溶性が向上するため好ましい。又、カルボン酸基もしくはスルホン酸基の塩類も本発明の範疇である。具体的にカルボン酸基もしくはスルホン酸基の塩としては、特に限定されるものではないが、例えば、ナトリウム塩、またはカリウム塩等のアルカリ金属塩；マグネシウム塩、またはカルシウム塩等のようなアルカリ土類塩；アンモニウム塩、ピリジニウム塩、ピペリジニウム塩、またはトリエチルアンモニウム塩等のアミン塩；トリプトファン塩、リジン塩、ロイシン塩、フェニルアラニン塩、バリン塩、またはアルギニン塩等のアミノ酸塩が挙げられる。好ましくは、ナトリウム塩、カリウム塩、アンモニウム塩、ピリジニウム塩、またはピペリジニウム塩等である。
【０１９５】
＜合成例＞
本発明にかかる一般式（Ｉ）〜（ＸＶＩＩＩ）から構成される色素化合物は、市販品を容易に入手する事が可能である。また、各々公知の方法により容易に合成する事も出来る。例えば、一般式（Ｉ）中、Ａが一般式（ＩＩＩ）で表わされる色素化合物の場合は、例えば、特開２００８−９４８９７号公報等を参考にして容易に合成することが出来る。また、一般式（Ｉ）中、Ａが一般式（Ｖ）及び（ＶＩＩ）で表わされる色素化合物の場合は、例えば、特開２００１−３１５４３７号公報に記載の方法で合成することが出来る。一方、一般式（ＩＩ）中、Ｂが一般式（ＸＶＩ）で表される色素化合物は、例えば、Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍ．，２４巻，３０３６−３０３７頁（２００３）等により容易に合成することができる。
【０１９６】
次に、本発明の一般式（Ｉ）中、Ａが一般式（ＩＩＩ）で表される色素化合物の製造方法についての一態様を示すが、合成方法がこれに限定されるわけではない。以下に合成スキームの一例を示す。
【０１９７】
【化２０】
2010148447.tif 000016
【０１９８】
上記式中のＲ1〜Ｒ2及びＲ6〜Ｒ11は、前記Ｒ1〜Ｒ2及びＲ6〜Ｒ11と同義である。
【０１９９】
先ず、縮合（１）工程では、化合物（Ａ）とアミン誘導体とを、有機溶剤中（または溶剤の非存在下）、縮合剤の存在下（または縮合剤の非存在下）で加熱し縮合させ化合物（Ｂ）を得る。次に、化合物（Ｂ）を、上記に示したアミン誘導体と再び加熱縮合させる。この結果、本発明にかかる色素化合物（ＩＩＩ）が得られる。
【０２００】
上記に例示した合成スキームの縮合反応において使用することができる好ましい有機溶剤としては、縮合（１）工程では、反応に関与しなければ、特に制限はないが、例えば、メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノール及びｎ−ブタノール等を、単独で、若しくは混合して使用することができる。縮合（２）工程において使用することができる好ましい有機溶剤としては、反応に関与しなければ、特に制限はないが、例えば、エチレングリコール、Ｎ−メチルピロリドン、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、スルホラン、クロロベンゼン、ジクロロベンゼン、トリクロロベンゼン及びニトロベンゼン等が挙げられる。
【０２０１】
縮合（１）工程における反応温度は、０℃〜２００℃の範囲内で行われ、好ましくは、１０〜１５０℃、より好ましくは、２０℃〜１００℃の範囲内であることが好ましい。又、縮合（２）工程における反応温度は、５０〜２５０℃の範囲内で行われ、好ましくは、１００〜２３０℃、より好ましくは１５０℃〜２２０℃である。
【０２０２】
反応させるアミン誘導体の置換基におけるＲ1とＲ2とが同一の置換基であって、且つ、Ｒ1'とＲ2'とが同一の置換基である化合物の場合には、同一のアミン誘導体を使用する事が出来るため、化合物（Ａ）より一段階の縮合工程で一般式（ＩＩＩ）の色素化合物を得ることができる。その際における反応温度は、縮合（２）工程に準ずる。
【０２０３】
縮合工程で用いられる縮合剤としては、反応に関与しなければ、特に制限はされないが、例えば、酸化マグネシウム、塩化亜鉛及び塩化アルミニウム等から選択して用いることができる。
【０２０４】
得られた色素化合物（ＩＩＩ）は、通常の有機化合物の単離・精製方法を用いる事ができる。例えば、反応液を塩酸等で酸性にして、酸析する事によって固体をろ別し、水酸化ナトリウム等で中和し、濃縮すれば、粗成物が得られる。更に、粗成物をアセトン、メタノール等を用いた再結晶、シリカゲルを用いたカラム精製等により精製する。これらの方法は、単独または２つ以上組み合わせて精製を行う事により高純度で得る事が可能である。
【０２０５】
また、本発明にかかる一般式（Ｖ）および、（ＶＩＩ）で表される色素化合物は、例えば特開２００１−３１５４３７号公報に記載の方法で合成することが出来る。
【０２０６】
以下に、本発明の具体例（１）〜（９５）を示すが、下記例に限定されるものではない。
【０２０７】
【化２１−１】
2010148447.tif 000017
【０２０８】
【化２１−２】
2010148447.tif 000018
【０２０９】
【化２１−３】
2010148447.tif 000019
【０２１０】
【化２１−４】
2010148447.tif 000020
【０２１１】
【化２１−５】
2010148447.tif 000021
【０２１２】
【化２１−６】
2010148447.tif 000022
【０２１３】
＜放射線標識＞
本発明の網膜組織染色組成物は放射性核種で標識されたプローブとして用いることも可能である。
【０２１４】
標識に用いる放射性核種の種類は、特に制限されるものではないが、使用の態様によって適宜選択する事が出来る。
【０２１５】
放射性核種で標識した網膜組織用プローブは、例えば、オートラジオグラフィー、陽電子（ポジトロン）放出核種を用いる放射断層撮影法（ＰＥＴ）、様々なガンマ線放出核種を用いる単一光子放射断層撮影法（ＳＰＥＣＴ）等によって画像化を行う事が出来る。又、フッ素原子核に由来するＭＲ信号や13Ｃを利用した核磁気共鳴法（ＭＲＩ）で検出してもよい。更に、次世代分子イメージング装置として複数分子同時イメージングが可能なコンプトンカメラ（ＧＲＥＩ）等によって画像化する事も可能である。また、例えば、液体シンチレーションカウンター、Ｘ線フィルム、イメージングプレート等を用いて網膜組織用プローブの定量をする事も可能である。
【０２１６】
また、14Ｃ等の放射性同位元素で標識した眼内組織用染色組成物は、加速器質量分析法（ＡＭＳ）等によって、血液中（または、尿中もしくは糞中）の濃度を測定して、標識化した物質の未変化体や代謝物の薬物動態学的情報（薬物血中濃度−時間曲線下面積（ＡＵＣ）、血中濃度半減期（Ｔ1/2）、最高血中濃度（Ｃmax）、最高血中濃度到達時間（Ｔmax）、分布容積、初回通過効果、生物学的利用率、糞尿中排泄率等）を得る事が可能である。
【０２１７】
放射性核種としては、特に限定されるものではないが、使用の態様によって適宜選択する事が出来る。
【０２１８】
ＰＥＴによる測定の場合は、例えば、11Ｃ、14Ｃ、13Ｎ、15Ｏ、18Ｆ、19Ｆ、62Ｃｕ、68Ｇａ、または78Ｂｒ等の陽電子放出核種を用いる事が出来る。好ましくは、11Ｃ、13Ｎ、15Ｏ、または18Ｆ等であり、特に好ましくは、11Ｃ、または18Ｆ等である。
【０２１９】
ＳＰＥＣＴによる測定の場合は、例えば、99mＴｃ、111Ｉｎ、67Ｇａ、201Ｔｌ、123Ｉ、または133Ｘｅ等のγ線放射核種を用いる事が出来る。好ましくは、99mＴｃ、または123Ｉ等である。
【０２２０】
ヒト以外の動物を測定する場合には、例えば、125Ｉのようなより半減期の長い放射線核種を用いる事が出来る。
【０２２１】
ＧＲＥＩによる測定の場合は、例えば、131Ｉ、85Ｓｒ、65Ｚｎ等を用いる事が出来る。
【０２２２】
放射線核種は、一般式（Ｉ）〜（ＸＶＩＩＩ）で表わされる化合物に含まれる形でも、結合する形でもよい。
【０２２３】
放射線核種の標識の方法は、特に限定されるものではなく、一般的に用いられている方法で良い。又、一般式（Ｉ）〜（ＸＶＩＩＩ）で表わされる化合物を構成する元素の少なくとも一部を放射性核種で置換する形でも、結合する形でも良い。
【０２２４】
一般式（Ｉ）〜（ＸＶＩＩＩ）で表わされる化合物を放射性核種で標識した場合、１ｍＭあたり、１〜１００μＣｉ程度の放射性を有することが好ましい。
【０２２５】
この時、用いる網膜組織染料組成物の投与量は、影響がなければ特に制限はされず、化合物の種類及び標識に用いた放射性核種の種類により適宜選択される。
【０２２６】
＜眼内組織用染色組成物の調整＞
本発明の眼内組織用染色組成物に含まれる化合物の濃度は、網膜組織を検出する事が出来れば特に限定されるものではないが、標的とする部位や使用される化合物によって適宜調節される。通常は０．００１ｎｇ／ｍＬ以上、１００μｇ／ｍＬ以下の濃度で用いられ、より好ましくは０．００１ｎｇ／ｍＬ以上、１０μｇ／ｍＬ以下、より好ましくは０．００１ｎｇ／ｍＬ以上、５μｇ／ｍＬ以下の濃度で用いられる。
【０２２７】
本発明の網膜組織染色組成物は、前記一般式（Ｉ）〜（ＸＶＩＩＩ）で表される色素化合物の少なくとも１種を適当な溶媒に溶解させて用いる。生体に影響がなければ特に限定されるものではないが、例えば、生体との親和性が高い水性の液体が好ましい。具体的には、水；生理食塩水；リン酸緩衝液（ＰＢＳ）、Ｔｒｉｓ等の緩衝液；メタノール、エタノール、イソプロパノール、ブタノール、エチレングリコール、グリセリン等のアルコール系溶媒；Ｎ，Ｎ−ジメチルスルホキシド（以下、ＤＭＳＯと略する）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（以下、ＤＭＦと略する）等の有機溶媒；Ｄ−ＭＥＭ、ＨＢＳＳ等の細胞培養用培地、または乳酸リンゲル液等の輸液が挙げられる。特に水を５０％以上含む事が好ましい。又、これらの溶媒を２種以上混合して用いる事も出来る。
【０２２８】
本発明の網膜組織染色組成物の作製方法は、特に限定されるものではないが、例えば、上記のような溶媒に溶解させた化合物の濃厚溶液を希釈して作成しても良い。化合物の水溶性が低い場合には、適当な溶媒に溶解させてから精製水に希釈させて用いる事が出来る。特に好ましくは、メタノール、エタノール、ＤＭＳＯである。
【０２２９】
本発明の網膜組織染色組成物には、生体に適した塩濃度やｐＨ等を制御する事が必要であれば、添加剤を一種類または複数種組み合わせて添加する事が出来る。本発明に用いられる添加剤としては、網膜組織染色組成物に影響がなければ特に限定されるものではないが、例えば、保湿剤、表面張力調製剤、増粘剤、塩化ナトリウムのような塩類、各種ｐＨ調製剤、ｐＨ緩衝剤、防腐剤、抗菌剤、甘味剤、または香料等が挙げられる。
【０２３０】
ｐＨ調製剤としては、ｐＨを５〜９に調製する事が好ましく、特に限定されるものではないが、例えば、塩酸、酢酸、リン酸、クエン酸、リンゴ酸、水酸化ナトリウム、または炭酸水素ナトリウム等が挙げられる。
【０２３１】
＜試験方法について＞
本発明における網膜組織染色組成物に含まれる化合物は、下記に示す試験方法を行って、最大輝度値の比（Ｌａ／Ｌｂ）が３以上である事が好ましい。本発明に用いられる化合物を選択するための試験方法の詳細を以下に示す。
【０２３２】
３個体のゼブラフィッシュ７日胚を４％パラホルムアルデヒド溶液で固定し、ゼブラフィッシュの片眼球の固定化切片ａ１〜ａ３、及びｂ１〜ｂ３を作製する。固定化切片ａ１〜ａ３は、試験化合物を溶解した１μｇ／ｍＬの水溶液に１時間暴露した後、精製水で２回洗浄する。本試験方法では、少なくとも硝子体と網膜の層構造が全て含まれる固定化切片を使用する。
【０２３３】
固定化切片ａ１〜ａ３を用いて、眼球の網膜切片が観察可能な倍率に調製し、網膜組織内の蛍光強度が最大となる励起波長及び蛍光波長を設定する。網膜切片が観察可能な倍率としては、硝子体と網膜の層構造が確認できれば厳密に調整する必要は無いが、好ましくは眼の組織切片の全体が含まれる倍率であることが好ましく、具体的には、１０倍から４００倍、より好ましくは４０倍から２００倍に設定することで、網膜組織の構造を可視化できる。一方、固定化切片ｂ１〜ｂ３の網膜色素上皮と硝子体に挟まれた任意の大きさの網膜領域における最大輝度値の平均値をＬｂとし、値が２〜６の範囲になるように励起光強度及び撮影感度を設定する。
【０２３４】
各設定した観察条件で固定化切片ａ１〜ａ３の網膜色素上皮と硝子体に挟まれた任意の大きさの網膜領域における最大輝度値の平均値をＬａとし、Ｌａ／Ｌｂ値を計算する。
【０２３５】
本試験方法において用いられるゼブラフィッシュの系統は特に限定されるものではないが、例えば、遺伝子変異を持たない野生型や、特に、目に関連する遺伝子変異を持たない系統が好ましく用いられる。具体的には、ＲＩＫＥＮ  ＷＴ（ＲＷ）、ＡＢ  ｓｔｒａｉｎ、ＴＵ  ｓｔｒａｉｎ等が好適に用いられる。
【０２３６】
ゼブラフィッシュの眼球における固定化切片の作製は、特に限定されるものではないが、例えば、低温融解アガロースゲルにゼブラフィッシュを包埋して市販の切片作製装置で切片化する事が出来る。
【０２３７】
市販の切片作製装置としては、切片が作製されるものであれば特に制限されるものではないが、例えば、ビブラトームやリニアスライサー等が挙げられる。特に、リニアスライサーを用いると切片がより良好に作製されるので好ましい。このように切片作製装置で作製した固定化切片をスライドガラスへ乗せ、観察を行う。
【０２３８】
又、凍結組織切片用コンパウンドにゼブラフィッシュを包埋して液体窒素等で急速凍結させてから凍結切片作製装置等で切片化する事も出来る。凍結切片作製装置としては、特に制限されるものではないが、市販のクライオスタットを好適に使用することが出来る。このようにして作製した凍結切片をスライドガラスに乗せ、乾燥させた後、観察を行う。
【０２３９】
切片を作製する際の切片の厚みは、試験時に一定であれば特に限定されるものではないが、例えば、５μｍ以上の厚みがあるとスライドへ移す際に形態を保ちやすいので好ましい。
【０２４０】
切片の染色は、スライドガラス上の切片を試験溶液に接触させて行うことが出来る。染色後は洗浄することにより、非特異的な染色部位を排除した観察を行うことが出来る。
【０２４１】
網膜組織内の蛍光強度が最大となる励起波長及び蛍光波長への調整は、例えば次に示す方法が挙げられる。試験化合物を含む水溶液に暴露した切片試料を観察し、任意の波長の励起波長を照射したときに、励起波長よりも少なくとも１０ｎｍ以上、より好ましくは２０ｎｍ以上長波長の蛍光を検出したときに、励起光の映り込みが少なく、最も蛍光強度が高くなるように蛍光フィルターセットを切り替える。これにより調整を行なうことができる。
【０２４２】
網膜組織を含む領域の最大輝度値の測定は、用いる試験化合物に応じて、観察装置の励起波長と蛍光波長を設定する必要がある。
【０２４３】
用いる観察装置としては、蛍光観察が出来る装置であれば特に限定されるものではないが、例えば、実体蛍光顕微鏡、蛍光顕微鏡、または共焦点レーザー蛍光顕微鏡等が挙げられる。
【０２４４】
本試験方法では、固定化切片ｂ１〜ｂ３の網膜領域が含まれる画像を取得し、取得画像の任意の領域が最大輝度値を示す値を測定する。
【０２４５】
最大輝度値の測定は、ソフトウェア等を用いて測定するが、取得した画像をグレースケールに変換して測定することが好ましい。最大輝度値の測定に用いるソフトは任意の領域内の最大輝度値が求められるものであれば特に限定されるものではないが、例えば、ＮＩＨ  Ｉｍａｇｅ、Ｓｃｉｏｎ  Ｉｍａｇｅ、またはＩｍａｇｅ  Ｊ等を挙げる事が出来る。
【０２４６】
これらのソフトウェアを使用して、固定化切片ｂ１〜ｂ３の最大輝度値が２〜６の範囲になるように励起光強度及び撮影感度を調節し、固定化切片ｂ１〜ｂ３の最大輝度値の平均値Ｌｂを得る。
【０２４７】
次に、上記で設定した条件で固定化切片ａ１〜ａ３の網膜領域を含む画像を取得し、上記と同様に固定化切片ａ１〜ａ３の最大輝度値の平均値Ｌａを取得する。
【０２４８】
本発明の網膜組織染色組成物に含まれる化合物は、前記の試験方法で得られたＬａとＬｂの比（Ｌａ／Ｌｂ）が３以上であることが好ましい。Ｌａ／Ｌｂが３以上の化合物は眼内組織を眼組織や眼組織に連絡する神経組織を傷つけることなく明瞭に染色することが出来る。Ｌａ／Ｌｂが５以上が好ましく、Ｌａ／Ｌｂが１０以上であると、化合物濃度が低くても眼内組織を明瞭に識別可能な状態に染色されるためより好ましい。
【０２４９】
＜染色方法＞
本発明の網膜組織の染色方法は、前記一般式（Ｉ）〜（ＸＶＩＩＩ）で表される色素化合物を少なくとも１種類含む網膜組織用染色剤を用いて行うことが出来る。生きた生物個体の眼内組織を染色するとは、染色組成物が眼組織の切開や、眼組織または眼組織に連絡する組織への針刺し等の外科的損傷なく染色することである。
【０２５０】
外科的損傷なく染色する方法としては特に限定されるものではないが、例えば、網膜組織染色組成物を生物個体の一部または全体に暴露する方法、経口接触による方法、経肺接触による方法、経鼻接触による方法、経消化管接触による方法、経粘膜接触による方法、経体液接触による方法、舌下接触による方法、静脈または動脈等の血管内接触による方法、腹腔内接触による方法、腹膣内、皮下、皮内、膀胱内、気管（気管支）内等への注入方法、噴霧または塗布等の手段による生体内への接触による方法等が挙げられる。また、眼球、または眼球の一部を単離した試料、または眼球を含む組織切片を生物試料として用いてもよい。
【０２５１】
本発明の染色方法で用いることが出来る生物試料の組織切片は、スライドガラスに生物試料の組織切片を貼り付けたものを好適に用いることが出来る。切片試料は、自分で組織切片を作成してもよいし、市販の組織切片スライドを使用することが出来る。市販の組織切片スライドはヒトやマウスなどの様々な動物種の組織切片をスライドに貼り付けたものであり、必要に応じて眼球組織が含まれた組織切片を使用することが出来る。これらの組織切片試料を眼組織染色組成物の溶液に浸漬してもよいし、試料に眼組織染色組成物の溶液をマウントしてもよい。
【０２５２】
＜観察方法＞
本発明の観察方法は、本発明の網膜組織染色組成物を用いる事を特徴とする。その測定及び検出方法は当業者には公知の方法を用いて行われる。
【０２５３】
本発明で用いられる観察方法は、眼組織と網膜組織染色組成物に影響を与えなければ特に限定されるものではないが、生物試料の状態及び変化を画像とし捉える方法である。例えば、眼組織に可視光、近赤外光、または赤外光を照射してカメラやＣＣＤ等で観察する可視光観察、近赤外光観察、赤外光観察、レーザー顕微鏡観察、または蛍光内視鏡等のように生物試料に対して励起光光源から励起光を照射して、発光している生物試料の蛍光を観察する蛍光観察、蛍光顕微鏡観察、蛍光内視鏡観察、共焦点顕微鏡観察、多光子励起蛍光顕微鏡観察、狭帯域光観察、または共光干渉断層画像観察（ＯＣＴ）、更に、軟エックス線顕微鏡による観察等が挙げられる。
【０２５４】
本発明で用いられる励起するための波長は、生物試料に影響を与えなければ特に限定されるものではないが、使用する前記一般式（Ｉ）〜（ＸＶＩＩＩ）で表される色素化合物によって異なり、本発明の前記一般式（Ｉ）〜（ＸＶＩＩＩ）で表される色素化合物が効率よく蛍光を発すれば特に限定されるものではない。通常、２００〜１０１０ｎｍ、好ましくは４００〜９００ｎｍ、より好ましくは４８０〜８００ｎｍである。近赤外領域の光を用いる場合は、通常６００〜１０００ｎｍで、好ましくは生体透過性に優れている６８０〜９００ｎｍの波長が用いられる。
【０２５５】
本発明で用いられる蛍光励起光源としては、特に限定されるものではないが、各種レーザー光源を用いることが出来る。例えば、色素レーザー、半導体レーザー、イオンレーザー、ファイバーレーザー、ハロゲンランプ、キセノンランプ、またはタングステンランプ等が挙げられる。又、各種光学フィルターを用いて、好ましい励起波長を得たり、蛍光のみを検出したりする事が出来る。
【０２５６】
このように生物個体に励起光を照射する事により、眼組織の内部において発光させた状態で眼内組織を撮像すれば発光部位を容易に検出する事が出来る。又、可視光を照射して得られた明視野画像と励起光を照射して得られた蛍光画像を画像処理手段で組み合わせる事で、より詳細に眼内組織を観察する事も出来る。
【０２５７】
組織切片の観察には、スライドガラススキャナや、自動ＸＹステージつきの顕微鏡などを用いることが出来る。これらの装置を使用することで、切片上の染色性を簡便に確認することが出来る。
【実施例】
【０２５８】
以下に実施例を挙げて、本発明をより詳細に説明するが、これらの実施例は、本発明のより一層の深い理解のために示される具体例であって、本発明は、これらの具体例に何ら限定されるものではない。なお、特に表示していない限りは「％」は質量基準である。
【０２５９】
＜実施例１＞
ゼブラフィッシュ７日胚の稚魚を、４％パラホルムアルデヒドを含むリン酸緩衝溶液中で１時間放置して、固定した。次に、ウェルから稚魚を取り出し、５％低温融解アガロースゲルに包埋し、リニアスライサー（堂阪イーエム社製）を用いて眼組織の切片を作成し、スライドガラスに載せた。作製した切片に、色素化合物２を１ｍｇ／ｍＬで溶解したＤＭＳＯ溶液を蒸留水に１μｇ／ｍＬになるよう加えて作成した染色液を１時間暴露し、蒸留水で３回洗浄し、染色を行った。次に、共焦点顕微鏡（Ｚｅｉｓｓ社製  Ｐａｓｃａｌ  Ｅｘｃｉｔｅｒ）を用いて切片試料の眼組織の観察を行った。
【０２６０】
＜実施例２〜５０＞
実施例１の色素化合物２を表１に記載の色素化合物に変更した以外は、実施例１と同様の操作を行い、観察を行った。
【０２６１】
＜比較例１〜２＞
実施例１の色素化合物１を、表１に記載のように、色素化合物なし、または、エオシンに変更した以外は、実施例１と同様の操作を行い、観察を行った。
【０２６２】
網膜組織染色性の評価
前記実施例１〜５０、および、前記比較例１〜２について、染色性（◎：組織が強く染色される、○：網膜組織の染色が確認される、×：染色されない）及び、染色部位（１：視細胞層が強く染色される、２：網膜組織が全体的に可視化されている、Ｌ：硝子体が染色されている）を評価した。
【０２６３】
以上の結果を表１に示す。なお、色素化合物の励起波長および蛍光波長は、１０ｍｇ／ｍＬのＤＭＳＯ溶液を精製水に５００倍希釈した水溶液を日立ハイテク社製ＦＬ４５００蛍光分光測定機で測定して求めた。
【０２６４】
【表１−１】
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【０２６５】
【表１−２】
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【０２６６】
【表１−３】
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【０２６７】
表１から明らかなように、本発明の網膜組織染色組成物は、比較例では見られなかった網膜組織の染色性が認められ、主に視細胞層を含む複数の層が染色されるもの（図１）、網膜組織が全体的に染色されるもの（図２）、また、視細胞層が特異的に強く染色されるもの（図３）などが観察され、細胞の形態が判別可能に染色された（図４）。いずれの実施例においても蛍光感度が優れ、その染色性は非常に優れていた。
【０２６８】
凍結切片の染色
＜実施例５１＞
ゼブラフィッシュ７日胚（７ｄｐｆ）の稚魚の眼球を４％パラフォルムアルデヒド（ＰＦＡ）のＰＢＳ溶液で固定後、３０％スクロースのＰＢＳ溶液で置換し、ティッシュー・テック社製ＯＣＴ  ｃｏｍｐｏｕｎｄで包埋して液体窒素で凍結させた。凍結サンプルをクライオスタット（サクラファインテック社製  ティッシュー・テック  クライオ３）で７μｍに薄切りし、ＭＡＳコートスライドグラス（松浪硝子工業社製）上に伸展させ、ゼブラフィッシュ眼球組織切片スライドを得た。スライドグラスをブロッキング溶液（ナカライ社製  Ｂｌｏｃｋｉｎｇ  ｏｎｅ）で室温下、３０分間処理し、ＰＢＳで希釈した抗Ｚｐｒ−１抗体（赤、緑の錐体細胞を染色する）を一次抗体としてスライドガラスにマウントし、４℃で１２時間処理した。次に、スライドグラスをＰＢＳで１０分３回洗浄し、二次抗体（Ａｌｅｘａ４８８−抗マウスＩｇＧ抗体）と１μｇ／ｍＬの化合物５をＰＢＳに希釈してスライドガラスに１時間、室温でマウントした。スライドグラスをＰＢＳで１０分３回洗浄し、Ｆｌｕｏｒｏｍｏｕｎｔ  Ｇ（Ｓｏｕｔｈｅｍ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社製）をマウントしてカバーグラスをかけた。得られたゼブラフィッシュ眼球組織切片の染色スライドを共焦点顕微鏡で観察を行った。
【０２６９】
＜実施例５２＞
実施例５１で使用した一次抗体を抗Ｚｐｒ−３抗体（桿体細胞を染色する）に変えた以外は実施例５１と同様の操作を行い、ゼブラフィッシュ眼球組織切片の染色スライドを作製し、共焦点顕微鏡で観察を行った。
【０２７０】
＜実施例５３＞
実施例５１のゼブラフィッシュ組織切片スライドを、ヒト正常網膜組織切片スライド（ＵＳ  Ｂｉｏｍａｘ社製）に変え、一次抗体を抗ｍＧｌｕＲ５抗体（錐体細胞を染色する）、二次抗体をＡｌｅｘａ４８８−抗ウサギＩｇＧ抗体に変えた以外は実施例５１と同様の操作を行い、ヒト正常網膜組織切片の染色スライドを作製し、共焦点顕微鏡で観察を行った。
【０２７１】
染色スライドの評価
実施例５１では、視細胞層において化合物５とＺｐｒ−１抗体の染色像は重ならなかったが（図５）、実施例５２では、視細胞層において化合物５とＺｐｒ−３抗体の染色像が一部重なった。このことは、化合物５は視細胞層への染色性を持つが、視細胞層中で赤と緑の錐体細胞は染色しない事を示している。一方、実施例５２の結果から、化合物５は桿体細胞及び、青または紫外線の錐体細胞の少なくとも一種類以上の細胞種類を染色していることが示されている。このことから、化合物５は視細胞層中の細胞種類を選択的に染色していることが確認された。
【０２７２】
実施例５３ではヒトの正常網膜の凍結切片で、ゼブラフィッシュの網膜で共通する視細胞層が染色されることが確認される。また、ｍＧｌｕＲ５抗体による染色部位が異なることから、ヒトにおいても視細胞層中で特定の細胞種類だけを選択的に染色していることが確認される。
【図面の簡単な説明】
【０２７３】
【図１】実施例６で観察された網膜組織の染色を示す
【図２】実施例１２で観察された網膜組織の染色を示す
【図３】実施例２１で観察された網膜組織の染色を示す
【図４】実施例３７で観察された網膜組織の拡大図を示す
【図５】実施例５１で観察されたゼブラフィッシュ眼球の凍結切片の染色像を示す
【図６】実施例５３で観察されたヒト眼球凍結切片の染色像を示す
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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