(57)【要約】【課題】ヒトの白血病、リンパ腫などの造血器腫瘍のモデル動物の提供。【解決手段】ヒトMLL/AF4融合遺伝子が導入されたトランスジェニック非ヒト動物。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒトMLL/AF4融合遺伝子が導入されたトランスジェニック非ヒト動物。
【請求項２】
ヒトMLL/AF4融合遺伝子が配列番号１で表される塩基配列からなる、請求項１記載のトランスジェニック非ヒト動物。
【請求項３】
染色体上にヒトMLL/AF4融合遺伝子を保有し、体細胞においてヒトMLL/AF4タンパク質を発現する請求項１又は２に記載のトランスジェニック非ヒト動物。
【請求項４】
以下の(i)〜(iii)の特性、以下の(iv)及び(v)の特性、又は以下の(i)〜(v)の特性を有する請求項１〜３のいずれか１項に記載のトランスジェニック非ヒト動物。
(i) 骨髄造血不全を有する
(ii) 貧血を呈する
(iii) 血小板減少を有する
(iv) 肝臓、腎臓及び肺臓にB及びTリンパ球の浸潤を呈する
(v) B及びT混合型リンパ球増殖性疾患を呈する
【請求項５】
ヒトにおける腫瘍又は骨髄不全のモデル動物として用い得る請求項１〜４のいずれか１項に記載のトランスジェニック非ヒト動物。
【請求項６】
非ヒト動物がマウスである、請求項１〜５のいずれか１項に記載のトランスジェニック非ヒト動物。
【請求項７】
非ヒト動物がマウスであり、受精卵が受領番号NITE AP-688として寄託されている、請求項６記載のトランスジェニック非ヒト動物。
【請求項８】
配列番号１で表される塩基配列からなるヒトMLL/AF4融合遺伝子導入トランスジェニックマウス作成用導入遺伝子。
【請求項９】
配列番号１で表される塩基配列からなるヒトMLL/AF4融合遺伝子が導入された、ヒトMLL/AF4融合遺伝子導入トランスジェニックマウス作成用ベクター。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ヒトMLL/AF4融合遺伝子が導入されたトランスジェニック非ヒト動物に関する。
【背景技術】
【０００２】
MLL遺伝子（Mixed lineage leukemia）は、様々な急性白血病で高頻度にみられる染色体転座により融合遺伝子を生じる。
【０００３】
特に11q23転座の頻度は、急性リンパ性白血病（ALL）及び急性骨髄性白血病（AML）全体として5〜10％程度であるが、1歳未満に発症する乳児白血病の場合にはALLの70〜80％、AMLの50〜60％もの高率に出現することが知られている。また、トポイソメラーゼII阻害薬などの薬剤治療により誘発される治療関連（二次性）白血病（TRL）でも11q23転座が認められている。
【０００４】
近年の分子生物学的解析結果から、11q23領域には少なくとも3種類の転座関連遺伝子（PLZF，MLL，RCK）が存在し、このうち乳児白血病及びTRLの発症に関与するのは「MLL」であることが明らかになっている。さらに相互転座における相手側遺伝子として4q21（AF-4/FEL/LTG4）、6q27（AF-6）、9p22（AF-9/LTG9）、19p13（ENL/LTG19）など20種類以上がすでに同定されている。その結合相手によってそれぞれ違う疾患の原因になると考えられている。
【０００５】
このうちAF8という短い遺伝子については既にMLL／AF8がクローニングされている。また、今回の発明であるMLL/AF4についても、MLLがマウス由来、AF4がヒト由来であるMLL/AF4融合遺伝子導入マウスが作成されている（非特許文献１及び２を参照）が、MLL、AF4ともにヒト由来であるMLL/AF4融合遺伝子導入マウスはまだ作られていない。
【０００６】
【非特許文献１】M Metzler et al. Oncogene(2006) 25, 3093-3103
【非特許文献２】Weili Chen et al., Blood, 15July2006, Vol.108, Number 2, 660-677
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、ヒトの白血病、リンパ腫などの造血器腫瘍のモデル動物の提供を目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本願発明者は、7KBあるヒトのMLL/AF4融合遺伝子を７つに分断しRT-PCR法にて別々にクローニング後、3つに統合し、さらにひとつに統合してMLL／AF4 cDNA全長配列のクローニングに成功した。その後、トランスジェニックマウスを作成するためにMLL／AF4 cDNAをトランスジェニックマウス作成用ウイルスベクターに組み込み、適当な制限酵素でMLL／AF4 cDNA発現一式DNA断片を切り出した。マウス受精卵にこのMLL／AF4 cDNA発現一式DNA断片を受精卵に注入し、この遺伝子を組み込んだトランスジェニックマウスの作成に成功した。作成したマウス40種のうち、系統維持が可能であった３種から更に子供を生みやすいマウスの選抜を行った結果、系統維持を確立した。作成したトランスジェニックマウスは骨髄不全症状を起こし、白血病、リンパ腫を発症することが確認された。
【０００９】
すなわち、本発明は以下のとおりである。
[１]  ヒトMLL/AF4融合遺伝子が導入されたトランスジェニック非ヒト動物。
[２]  ヒトMLL/AF4融合遺伝子が配列番号１で表される塩基配列からなる、[１]のトランスジェニック非ヒト動物。
[３]  染色体上にヒトMLL/AF4融合遺伝子を保有し、体細胞においてヒトMLL/AF4タンパク質を発現する[１]又は[２]のトランスジェニック非ヒト動物。
【００１０】
[４]  以下の(i)〜(iii)の特性、以下の(iv)及び(v)の特性、又は以下の(i)〜(v)の特性を有する[１]〜[３]のいずれかのトランスジェニック非ヒト動物。
(i) 骨髄造血不全を有する
(ii) 貧血を呈する
(iii) 血小板減少を有する
(iv) 肝臓、腎臓及び肺臓にB及びTリンパ球の浸潤を呈する
(v) B及びT混合型リンパ球増殖性疾患を呈する
【００１１】
[５]  ヒトにおける腫瘍又は骨髄不全のモデル動物として用い得る[１]〜[４]のいずれかのトランスジェニック非ヒト動物。
[６]  非ヒト動物がマウスである、[１]〜[５]のいずれかのトランスジェニック非ヒト動物。
[７]  非ヒト動物がマウスであり、受精卵が受領番号NITE AP-688として寄託されている、[６]のトランスジェニック非ヒト動物。
【００１２】
[８]  配列番号１で表される塩基配列からなるヒトMLL/AF4融合遺伝子導入トランスジェニックマウス作成用導入遺伝子。
[９]  配列番号１で表される塩基配列からなるヒトMLL/AF4融合遺伝子が導入された、ヒトMLL/AF4融合遺伝子導入トランスジェニックマウス作成用ベクター。
【発明の効果】
【００１３】
MLL及びAF4が共にヒト由来である融合遺伝子導入マウスは今までに作成されたことのない、全く新規な疾患モデルマウスである。
【００１４】
また、この疾患マウスは同じ病状でもマウス、ヒト由来によるMLL/AF4融合遺伝子導入マウスとは発症時期が異なることや、骨髄不全症状を起こし白血病、リンパ腫を発症するなどの違いを有するので、ヒトの白血病の機序解析に用いることができ、さらに化合物の白血病等に対する薬効を調べる際に使うことができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１５】
以下、本発明を詳細に説明する。
本発明のトランスジェニック非ヒト動物は、ヒトMLL/AF4キメラタンパク質をコードする遺伝子(ヒトMLL/AF4融合遺伝子）を含む。ここで、ヒトMLL/AF4キメラタンパク質をコードする遺伝子とは、急性リンパ性白血病、乳児白血病等の白血病で認められる11q23転座の染色体異常において認められるMLL(mixed lineage leukemia)遺伝子とAF4タンパク質をコードする遺伝子が転座（t(4;11)（q21;q23）転座）により融合した融合遺伝子である。MLL遺伝子は36個のエクソンより構成され、3969個のアミノ酸からなるタンパク質をコードする遺伝子であり、そのcDNAの全長は約15kbである。
【００１６】
非ヒト動物は、非ヒト霊長類動物、マウス、ラット等のげっ歯類動物、ヒツジ、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ等のような哺乳動物を含む。好ましくはげっ歯類動物であり、さらに好ましくはマウスである。以下の説明においては、マウスを用いた例を挙げるが、当業者ならば他の動物についてもヒトMLL/AF4融合遺伝子を導入したノックイン非ヒト動物を作成することができる。
【００１７】
ヒトMLL/AF4キメラタンパク質をコードする遺伝子は、転座によりMLL/AF4融合遺伝子が生じた細胞から得ることができる。このような細胞は、急性リンパ性白血病等の白血病患者から得ることができる。細胞は株化細胞を用いてもよい。例えば、白血病細胞からトータルRNAを抽出し、逆転写酵素によりcDNAを作製し、プライマーを用いてMLL/AF4融合cDNAを増幅すればよい。この際、MLL/AF4融合遺伝子中の制限酵素部位を利用して部分ごとに増幅し、その後に連結して全長MLL/AF4 cDNAを得てもよい。ヒトMLL/AF4融合遺伝子の塩基配列を配列番号１に、該塩基配列からなるDNAにコードされるタンパク質のアミノ酸配列を配列番号２に示す。
【００１８】
本発明の非ヒト動物に導入するヒトMLL/AF4融合遺伝子は、その配列の一部に変異を有していてもよい。そのような変異はSNP（一塩基置換）であってもよく、配列番号１で表されるMLL/AF4融合遺伝子の塩基配列と少なくとも80％、好ましくは90％、さらに好ましくは95％以上の同一性、さらに好ましくは少なくとも98％の同一性を有するDNAである。同一性の数値は、BLAST[J. Mol. Biol., 215, 403-410 (1990)]、FASTA[Methods. Enzymol., 183, 63-98 (1990)]等の当業者に公知の同一性検索プログラムを用いて算出される数値であり、好ましくはBLASTにおいてデフォルト（初期設定）のパラメータを用いて算出される数値、又はFASTAにおいてデフォルト（初期設定）のパラメータを用いて算出される数値である。
【００１９】
さらに、ヒトMLL/AF4融合遺伝子の変異遺伝子は、例えば配列番号１で表されるヒトMLL/AF4融合遺伝子の塩基配列において、１〜数個の塩基が置換、欠失若しくは付加された変異遺伝子であり、あるいは配列番号１で表されるヒトMLL/AF4融合遺伝子の塩基配列と相補的な塩基配列とストリンジェントな条件でハイブリダイズし得る変異遺伝子である。ここで、ストリンジェントな条件とは、例えば、「１XSSC、0.1％  SDS、37℃」程度の条件であり、より厳しい条件としては「0.5XSSC、0.1％  SDS、42℃」程度の条件であり、さらに厳しい条件としては「0.2XSSC、0.1％  SDS、65℃」程度の条件である。
【００２０】
また、上記ヒトMLL/AF4融合遺伝子の変異体は、配列番号１で表されるヒトMLL/AF4融合遺伝子と同じ機能を有する。すなわち、変異体をマウス等の非ヒト動物に導入した場合、該非ヒト動物に、(i) 骨髄造血不全を有する、(ii) 貧血を呈する、(iii) 血小板減少を有する、(iv) 肝臓、腎臓及び肺臓にB及びTリンパ球の浸潤を呈する、(v) B及びT混合型リンパ球増殖性疾患を呈する、等の症状を起こさせる。
【００２１】
マウスに導入する該cDNAは、動物細胞中で発現可能なプロモーターと連結する。発現可能なプロモーターとして、例えば、マウスホスホグリセリン酸キナーゼ（マウスPGK）プロモーターなどの哺乳動物細胞由来のプロモーターや、サイトメガロウイルス（CMV）プロモーター、シミアンウイルス40（SV40）プロモーター、レトロウイルスプロモーター、ポリオーマウイルスプロモーター、アデノウイルスプロモーターなどのウイルスプロモーターが挙げられる。また、遺伝子の発現を増強するエンハンサーを組込んでもよい。MLL/AF4融合遺伝子をプロモーターと作動可能に連結し、ベクターに導入する。ベクターとしては、導入遺伝子を動物の生体内で発現誘導させることができるものであればよく、あらかじめプロモーターが組込まれたベクターを用いてもよい。例えば、pMSCVpuro、pMSCVneo、pMSCVhyg（いずれもBDバイオサイエンス・クロンテック社から入手可能）を挙げることができる。
【００２２】
トランスジェニックマウスは、例えば、Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:7380-7384(1980)に記載の方法により作出することができる。用いるマウスは、限定されないが、例えば、C57Bl/6Nマウス（B6マウス）、BALB/cマウス等が用いられる。
【００２３】
上記のMLL/AF4融合遺伝子を導入したベクターを、マウスの全能性細胞に導入し、この細胞を個体へと発生させる。全能性細胞としては、受精卵、初期胚のほか、ES細胞（胚性幹細胞）などの多能性細胞が挙げられる。初期胚を用いる場合、８細胞期以前の胚が好ましい。ベクターの細胞への導入の方法は、限定されないが、リン酸カルシウム法、電気パルス法、リポフェクション法、凝集法、マイクロインジェクション法、パーティクルガン法、DEAE−デキストラン法等により行うことができる。この中でもマウス受精卵の雄性前核へのマイクロインジェクションが好ましい。
【００２４】
次いで、MLL/AF4融合遺伝子を導入した細胞を、レシピエントマウスの卵管に移植する。レシピエントマウスとしては、好ましくは精管を切断したオスと交配させて偽妊娠状態としたメスが利用される。
【００２５】
発生した個体から、体細胞及び生殖細胞中に導入遺伝子が組み込まれた個体を選別することによって、目的とするMLL/AF4融合遺伝子がノックインされたトランスジェニックキメラマウスを得ることができる。トランスジェニックキメラマウスにMLL/AF4融合遺伝子が導入されていることを確認し、該キメラマウスを正常マウスと交配し、F1マウスを得る。ヘテロ接合体は、選択された生殖系列キメラを同種の野生型と交雑することによって得られる、いわゆるF1動物から選択できる。ヘテロ接合体の選択は、例えば、F1動物の尾部より分離抽出した染色体DNAをサザンハイブリダイゼーション又はPCR法によりスクリーニングすることにより検定できる。
【００２６】
本発明のノックイン非ヒト動物のホモ接合体は、このヘテロ接合体同士を交配させることによって得ることができる。
【００２７】
本発明のトランスジェニック動物は、骨髄不全症状を起こし、白血病、リンパ腫を発症する。また、通常のマウスならば、再生が可能な肝臓の再生が起こらず、骨髄の密度が低下し、リンパ腫が増加する。詳細には、以下の特徴を有する。
(i) 骨髄造血不全を有する
(ii) 貧血を呈する
(iii) 血小板減少を有する
(iv) 肝臓、腎臓及び肺臓にB及びTリンパ球の浸潤を呈する
(v) B及びT混合型リンパ球増殖性疾患を呈する
【００２８】
また、マウスMLLとヒトAF4の融合遺伝子を導入したトランスジェニックマウスとで上記の症状の発症時期が異なる。すなわち、マウスMLLとヒトAF4の融合遺伝子を導入したマウスでは、骨髄不全症状がでるまでに誕生から３〜４ヶ月かかるが（M Metzler et al. Oncogene(2006) 25, 3093-3103；Weili Chen et al., Blood, 15July2006, Vol.108, Number 2, 660-677）、本発明のヒトMLL/AF4融合遺伝子導入マウスでは誕生から約６カ月で症状がでる。特に、生後１年程度でリンパ腫が多くは肺臓様で発症が観察される。
【００２９】
さらに、本発明のトランスジェニックマウスは、白血球の減少が認められ、これは本発明のトランスジェニックマウスが白血病若しくはリンパ腫を発症することを意味する。
【００３０】
本発明のトランスジェニックマウスとして、例えば受精卵が2008年12月11日付けで独立行政法人製品評価技術基盤機構（NITE）特許微生物寄託センター（NPMD)（日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２−５−８）に受領番号NITE AP-688で寄託されているマウス（MLL/AF4 08/2/8 n=12)が挙げられる。
【００３１】
本発明のヒトMLL/AF4融合遺伝子を導入したトランスジェニックマウスは、MLL/AF4融合遺伝子が関与するヒト白血病、リンパ腫などの造血器腫瘍の病態モデルマウスとして利用することができる。例えば、白血病、リンパ腫の発症メカニズム又は病態の解明、骨髄不全状態の病態の解明、ヒト白血病の治療薬、抗がん剤、増血剤のスクリーニングに用いることができる。また、本発明のトランスジェニックマウスは、MLL/AF4融合遺伝子と協調して白血病を発症させる遺伝子の分子生物学的解明に用いることができ、さらに、MLL/AF4融合遺伝子を標的とする標的分子薬のスクリーニングや開発に用いることができる。
【００３２】
例えば、スクリーニングは、本発明のトランスジェニックマウスに治療薬候補化合物である被験物質を投与し、トランスジェニックマウスにおいて以下の効果の少なくとも１つの効果が認められるか否かを指標にヒト白血病の治療薬、抗がん剤、増血剤として用い得る化合物を選択することができる。
(i) 骨髄造血不全を緩和する効果
(ii) 貧血を緩和する効果
(iii) 血小板を増加させる効果
(iv) 肝臓、腎臓及び肺臓にB及びTリンパ球の浸潤を緩和する効果
(v) B及びT混合型リンパ球増殖性疾患を緩和する効果
【実施例】
【００３３】
本発明を以下の実施例によって具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例によって限定されるものではない。
MLL/AF4cDNAのクローニング
図１にクローニングのプロトコールを示す。図１に示すように、MLL/AF4 cDNAを(1)〜(7)の７つの部分に分断し、RT-PCR法により別々にクローニングし、一旦(8)〜(10)の３つに統合し、さらに1つに統合し(11)、最終的に全長MLL/AF4 cDNAとしてクローニングを行った。
【００３４】
最初に、急性リンパ性白血病ALL患者由来のMLL/AF4 mRNA発現ヒト白血病細胞よりRNAを抽出し、逆転写酵素にてcDNAを作成した。該患者はt(4;11)(q21;q23)を有し、MLL/AF4陽性であり、N-ras codon 12 mutationを有していた（GGT→GAT(G12D))。また、CD19、CD34、HLA-DR、CD15陽性であった。その後、Ex TaqポリメラーゼでPCRを施行した。ただし、(5)(6)のEcoRI部位は、PCR時にアミノ酸配列の変異を伴わない塩基変異を起こして作製した。その後platinum pfx polymeraseで(8)-(10)部位を増幅した。その後、pBluescriptベクターのEcoRI / HindIII / KpnIに(3)(4)に相当するcDNAを導入した。また、別個にpBluescriptベクターのKpnI / HindIII / BamHIに(3)(4) に相当するcDNAを導入した。そしてpBluescriptのBamHI / EcoRI / HindIII / ClaIに(5)(6)(7) に相当するcDNAを導入した。ただし、(7)にEcoRI部位があるため、(7)は最後に導入した。 pUC18ベクターのEcoRI / KpnI / BamHI / SalI部位に(8)(9)(10)を導入した。ただし、(10)にEcoRI部位があるため、導入する順序に注意した。最後にEcoRV / XhoIで切断し、DNA断片を切り出した。pcDNA3.1(+)をEcoRV / XhoIで開裂し、切り出したDNA断片（MLL/AF4cDNA）を導入した。その後pMSCVneoベクターのMSC部位のEcoRIと3’LTR上流のClaIにMLL/AF4cDNAを挿入した。
【００３５】
単離したヒトMLL/AF4 cDNAのアガロースゲル電気泳動解析の結果を図２に示す。
単離したヒトMLL/AF4融合遺伝子cDNAの塩基配列を配列番号１に、該塩基配列からなるDNAにコードされるタンパク質のアミノ酸配列を配列番号２に示す。
【００３６】
トランスジェニックマウスの作成
トランスジェニックマウスは、Gordonらの方法：1980. Proc.Natl.Acad.Sci. 77:7380-7384により作成した。
【００３７】
図３にMSCVneoMLL/AF4コンストラクションの構造を示す。クローニングしたMLL/AF4cDNAをpMSCVneoベクターのEcoR I制限酵素部位のＢｌｕｎｔPsp1406I及びNde I制限酵素で断片化した。アガロースゲル電気泳動後エチジウムブロミド染色にて12.6kbサイズDNAバンドを切り出し目的とする注入用ＤＮＡ断片を調製した。QIAquick Gel Extraction Kit (QIAGEN)を用いて切り出しDNAを精製した（図４）。マイクロインジェクションはC57BL/6N Crjマウス由来の前核期胚200個を行った。MLL/AF4cDNA発現するDNA断片を注入した注入胚をrecipientマウス（Crj: CD-1,プラグ確認の偽妊娠雌）卵管内へ移植した。自然分娩させて産仔を得た。4週齢の離乳後に尾を採材し遺伝子解析（PCR法）にて確認した（図５）。図５に示すように、遺伝子導入Founderマウスよりさらに産仔を産出しF1マウスでも遺伝子伝達が良好であった。Founder、F1にて各臓器における遺伝子発現（RT-PCR法）を確認した（図６）。図６に示すように、臓器によりMLL/AF４cDNA発現程度に差があった。
【００３８】
得られたトランスジェニックマウスの受精卵を、2008年12月11日付けで独立行政法人製品評価技術基盤機構（NITE）特許微生物寄託センター（NPMD)（日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２−５−８）に受領番号NITE AP-688で寄託した。識別表示は、MLL/AF4 08/2/8 n=12である。
【００３９】
トランスジェニックマウス表現型の解析
末梢血の血液学的な解析を随時行い、病理解剖、脾臓及び骨髄表面マーカー解析は生存マウスを安楽死させ行った。
【００４０】
生後２ヶ月及び１０ヶ月のトランスジェニックマウス（Tgマウス）並びに正常マウス（野生型マウス）より末梢血を採取し、血液学的解析を行った。また、併せて創始マウス(Found.)の14ヶ月及び18ヶ月目の血液解析も行った。表１に結果を示す。表中、WBCは白血球数、RBCは赤血球数、Hbはヘモグロビン濃度、Pltは血小板数を示す。表１に示すように、生後徐々に白血球数の低下と貧血症状が認められた。
【００４１】
【表１】
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【００４２】
図７に脾臓の摘出標本を示す。野生型と比較し腫大している。トランスジェニックマウスを解剖し、脾臓、肝臓、肺及び骨髄を採取し、切片標本を作成し、顕微鏡観察を行った。
【００４３】
図８に脾臓の弱拡大像を示す。図８A及びBはトランスジェニックマウスの脾臓である。図に示すようにトランスジェニックマウスにおいて、脾臓の正常構造がリンパ腫様細胞浸潤にて破壊されていた。
【００４４】
図９にトランスジェニックマウスの肺臓を示す。図に示すように多発性にリンパ腫細胞浸潤が認められた。
【００４５】
図１０にトランスジェニックマウスの肺臓の免疫染色を示す。図に示すように肺臓に表面形質B及びT細胞形質を示すリンパ腫細胞の浸潤が認められ、腎臓にもリンパ腫細胞浸潤が認められた（図１１）。
【００４６】
肝臓組織にリンパ腫細胞の浸潤が多数認められた。（図１２）。
さらに、末梢血液に出現した核小体明瞭のリンパ腫細胞も出現する（図１３）。この結果より、このトランスジェニックマウスはリンパ増殖性疾患を発症することがわかった。
【００４７】
さらに、トランスジェニックマウス及び正常マウスの骨髄を観察した（図１４）。トランスジェニックマウスにおいて、正常マウスと比較して顆粒球、巨核球などの骨髄造血細胞密度は比較的低く、その間隙に核の濃染したリンパ球が増加しているのが認められた。
【図面の簡単な説明】
【００４８】
【図１】ヒトMLL/AF4融合遺伝子のクローニングのプロトコールを示す図である。
【図２】クローニングしたヒトMLL/AF4 cDNAのEcoRV,XhoI制限酵素切断後のアガロース電気泳動写真である。
【図３】マウスに導入するのに用いたMSCVneoMLL/AF4cDNAコンストラクションの構造を示す図である。
【図４】Psp1406I及びNde I制限酵素で切断・DNA断片化し抽出精製した12.6KbのMSCVneoMLL/AF4cDNA（lane 3）の電気泳動の結果を示す写真である。
【図５】MSCVneoMLL/AF4cDNA発現陽性Founderマウスより生まれた産仔（F1）尾のDNAによるMLL/AF4cDNA伝達解析の結果を示す図である。
【図６】得られたトランスジェニックマウス（F１）の各臓器におけるMLL AF4 cDNAの発現解析の結果を示す図である。
【図７】摘出脾臓の写真である。（A）は脾腫を示すP230bcr/ablトランスジェニックマウス脾臓を、(B)は同種正常マウス脾臓を、(C)はMLL/AF4cDNA発現陽性トランスジェニックマウス脾臓を示す。脾腫を示す。
【図８】MLL/AF4cDNA発現陽性トランスジェニックマウスの脾臓の弱拡大像（A）と強拡大像(B)を示す写真である。脾臓正常構造がリンパ腫細胞浸潤で破壊されている。
【図９】トランスジェニックマウスの肺臓の写真である。(A)は弱拡大像を、(B)は強拡大像を示す。矢印はリンパ腫細胞浸潤を示す。
【図１０】肺浸潤細胞の免疫染色の結果を示す写真である。CD3(DAB・茶色）及びCD45(FITC・蛍光緑)の２重染色を行った。写真はｘ４０倍、右上はｘ８００倍である。CD3はTリンパ球、CD45はBリンパ球の表面形質を示す。
【図１１】トランスジェニックマウスの腎臓の写真である。矢印はリンパ腫浸潤を示す。
【図１２】トランスジェニックマウスの肝臓の写真である。(A)は弱拡大像を、(B)は強拡大像を示す。矢印はリンパ腫浸潤を示す。
【図１３】末梢血塗抹標本を示す写真である。核小体明瞭のリンパ芽球細胞が認められる。
【図１４】トランスジェニックマウスの骨髄の写真である。(A)は トランスジェニックマウス骨髄を示し、(B)は 正常マウス骨髄を示す。トランスジェニックマウス骨髄では核が濃染したリンパ腫細胞浸潤がわかる。
【配列表フリーテキスト】
【００４９】
配列番号１及び２：合成
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【配列表】
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