(57)【要約】【課題】口腔内の衛生状態維持、口腔内環境改善のための口腔用組成物、特に殺菌効果、細菌等の増殖抑制効果に優れ、かつ人体に対する作用が温和な口腔用殺菌組成物を提供すること。【解決手段】キコブタケ科メシマコブ（Phellinus linteus)の天然、栽培もしくは培養菌体由来のセスキテルペン誘導体を含む口腔用組成物、特に、セスキテルペン誘導体が、γ−イオニリデン誘導体及び／又はドリマン誘導体である口腔用組成物。歯周病及びその関連疾患の治療剤または予防剤として、また、歯磨き剤、洗口剤、トローチなどの形態として使用できる。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
キコブタケ科メシマコブ（Phellinus linteus)の天然、栽培もしくは培養菌体由来のセスキテルペン誘導体を含むことを特徴とする口腔用組成物。
【請求項２】
前記セスキテルペン誘導体が、γ−イオニリデン誘導体及び／又はドリマン誘導体である請求項１に記載の口腔用組成物。
【請求項３】
γ−イオニリデン誘導体が下記一般式(I) で表される化合物である、請求項２記載の口腔用組成物：
【化１】
2010047512.tif 000036
（式中、R1はCOOHまたはCH2OH を表し、R2およびR3はそれぞれＨ、OHまたはCH3を表し、R4およびR5はそれぞれＨまたはOHを表すか、あるいは一緒になってエポキシ基を形成し、…は二重結合となってもよいことを示す）。
【請求項４】
下記構造式で示される化合物(1) 〜(5) および(8) のいずれか１種または２種以上を含むことを特徴とする口腔用組成物。
【化２】
2010047512.tif 000037
【請求項５】
化合物(1) 及び／又は化合物(2) を含むことを特徴とする口腔用組成物。
【化３】
2010047512.tif 000038
【請求項６】
練歯磨き剤、液体歯磨き剤、デンタルゲル、含嗽剤、洗口剤、飴、トローチまたはチューインガム添加成分である、請求項１〜５のいずれかの項記載の口腔用組成物。
【請求項７】
歯周病及びその関連疾患の治療剤または予防剤である、請求項１〜５のいずれかに記載の口腔用組成物。
【請求項８】
誤嚥性肺炎の予防剤である請求項７に記載の口腔用組成物。
【請求項９】
インプラント処置後の殺菌剤である請求項１〜５のいずれかに記載の口腔用組成物。
【請求項１０】
下記構造式で示される化合物(3) 、化合物(5) 、化合物(6) または化合物(7) であるγ−イオニリデン誘導体：
【化４】
2010047512.tif 000039
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、殺菌効果や病原菌生育の抑制効果に優れ、かつ人体に対する作用が温和な口腔用組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
口腔内の衛生状態が悪化すると、虫歯や、歯肉炎、歯槽膿漏などのいわゆる歯周病等の口腔内疾病を引き起こす。特に歯周病は、ほとんどの成人に罹病する可能性があるとされており、高齢化が進む現在における罹病率は益々増加する傾向にある。歯周病の症状としては、歯肉からの出血や、不快な口臭の発生、歯の喪失等が挙げられるが、近年の研究では、歯周病が単に口腔内の局所的疾病に止まらず、全身の各臓器に影響を及ぼすことが報告され、歯周病と多くの成人病との関連性についても注目されている。
【０００３】
歯周病の原因とされている歯周病原菌としては、現在、ポルフィロモナス・ジンジバリス（Porphyromonas gingivalis）、タンネレラ（バクテロイデス）・フォルシチア（Tannerella (Bacteroides) forsythia）、トレポネマ・デンチコラ（Treponema denticola）、プレボテラ・インテルメディア（Prevotella intermedia）、カンピロバクター・レクタス（Campylobacter rectus）、フゾバクテリウム・ヌクレアタム（Fusobacterium nucleatum ）、アクチノバシラス・アクチノミセテムコミタンス（Actinobacillus actinomycetemcomitans）、アクチノミセス・ビスコーサス（Actinomyces viscosus）等が挙げられるが、これらは歯周ポケット（歯と歯茎の間）の歯垢や歯石中で繁殖する嫌気性細菌である。従って、歯垢や歯石を除去して口腔内をこれらの細菌が繁殖しにくい衛生状態に維持することで歯周病を予防することができる。
【０００４】
また、高齢者に多い誤嚥性肺炎は、ＭＲＳＡ（methicillin resistant Staphylococcus aureus）を含む黄色ブドウ球菌、緑膿菌やカンジダ菌が病原菌とされており、介護を必要とする高齢者や身体的に口腔洗浄が不可能な場合等に衛生状態の悪化した口腔内において、上記細菌類が著しく増殖し、それを無意識下で下気道に誤嚥することで発症するとされている。従って、高齢者の死因なるこれらの疾病は、口腔内を衛生に保つことで予防が期待できる。
【０００５】
従来、口腔内の衛生状態を維持する方法としては、歯磨き、うがい等の口腔洗浄が一般的である。しかし、多くの成人が歯周病を発症している現状からすると、充分な口腔洗浄が行われているとはいえない。特に、歯の表面をブラッシングして行う歯磨きは、歯周ポケット内の歯垢を完全に取り除くようにブラッシングするのは容易ではなく、水のみで行ううがいでは非水溶性物質の除去は困難である。従って、その際に使用する洗浄剤（例えば、歯磨き剤、うがい薬）には、単なる清涼感のみを要するのではなく、歯周ポケットに付着する歯周病菌等の殺菌効果、増殖抑制効果、及びその抑制効果の持続性に優れ、さらには日常的に頻度高く使用するものであるから人体に対して極めて安全なものが強く求められている。
【０００６】
現在、歯周病に対する殺菌剤としてはヒノキチオールやトリクロサンなどが使用されている。しかし、トリクロサンへの暴露は神経系に影響を及ぼし自閉症などを引き起こす可能性があること、また下水処理では排水中のトリクロサンの約５０％未満しか回収されないことが指摘されており、代替殺菌剤の開発が求められている状況である。
【０００７】
また、歯科治療においても口腔内衛生管理が重要である。例えば、口腔内インプラント治療は最先端医療として広く行われているが、インプラント体周囲組織への真菌類の感染の有無はインプラント手術の予後に大きく影響を与える。そのため感染防御が不可欠であるが、例えば、エタノール等による殺菌は周囲組織中のタンパク質の変性を招きインプラント定着の観点から好ましくない。現在では、一般に口腔内洗浄のほかに抗生物質の投与が行われているが、抗生物質の投与は耐性菌の誘導、菌交替等の点で問題があり、抗生物質と同等あるいはそれ以上の抗菌効果を有する安全な口腔用組成物が切望される。      
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明の目的は、口腔内の衛生状態維持その他、口腔内環境改善のための口腔用組成物、特に殺菌効果、細菌等の増殖抑制効果に優れ、かつ人体に対する作用が温和な口腔用殺菌組成物を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者らは、歯周病病原細菌に対して成長阻害活性を示す化合物について種々研究を続けた結果、キコブタケ科メシマコブ（Phellinus linteus）の天然、栽培もしくは培養菌体由来のセスキテルペン誘導体が、現在歯周病に対する殺菌剤として利用されているヒノキチオールやトリクロサンなどと同等以上の強い抗菌活性を示すことを見出し、本発明を完成するに至った。
【００１０】
さらに、本発明者らは、メシマコブ由来の精油より新規化合物を含む種々の成分を単離し、各成分について歯周病病原細菌に対する成長阻害活性を検討した結果、特に抗菌活性に優れた化合物を見出した。
【００１１】
すなわち、本発明は以下の口腔内組成物および新規化合物に関する。
１．キコブタケ科メシマコブ（Phellinus linteus）の天然、栽培もしくは培養菌体由来のセスキテルペン誘導体を含むことを特徴とする口腔用組成物。
２．前記セスキテルペン誘導体が、γ−イオニリデン誘導体及び／又はドリマン誘導体である上記１に記載の口腔用組成物。
３．γ−イオニリデン誘導体が下記一般式(I) で表される化合物である、上記２記載の口腔用組成物：
【００１２】
【化１】
2010047512.tif 000002
【００１３】
（式中、R1はCOOHまたはCH2OH を表し、R2およびR3はそれぞれＨ、OHまたはCH3 を表し、R4およびR5はそれぞれＨまたはOHを表すか、あるいは一緒になってエポキシ基を形成し、…は二重結合となってもよいことを示す）。
４．下記構造式で示される化合物(1) 〜(5) および(8) のいずれか１種または２種以上を含むことを特徴とする口腔用組成物。
【００１４】
【化２】
2010047512.tif 000003
【００１５】
５．化合物(1) 及び／又は化合物(2) を含むことを特徴とする口腔用組成物。
【００１６】
【化３】
2010047512.tif 000004
【００１７】
６．練歯磨き剤、液体歯磨き剤、デンタルゲル、含嗽剤、洗口剤、飴、トローチまたはチューインガム添加成分である、上記１〜５のいずれかの項記載の口腔用組成物。
７．歯周病及びその関連疾患の治療剤または予防剤である、上記１〜５のいずれかに記載の口腔用組成物。
【００１８】
８．誤嚥性肺炎の予防剤である上記７に記載の口腔用組成物。
９．インプラント処置後の殺菌剤である上記１〜５のいずれかに記載の口腔用組成物。
１０．下記構造式で示される化合物(3) 、化合物(5) 、化合物(6) または化合物(7) であるγ−イオニリデン誘導体：
【００１９】
【化４】
2010047512.tif 000005
【発明の効果】
【００２０】
本発明の口腔用組成物に含まれる、キコブタケ科メシマコブ（Phellinus linteus)菌体由来のセスキテルペン誘導体は、歯周病病原細菌に対して強い成長阻害活性を有する。しかも、原料となるメシマコブは天然物由来で、食用としても利用されているものであるため、本発明組成物を歯磨き剤やうがい薬等として常用して、一部が体内に吸収されても、身体には有害作用はない。従って、安全な口腔用組成物として用いて口腔内を歯周病菌等の繁殖しにくい衛生状態に保ち、歯周病などを予防、治療するのに有効である。また、本発明組成物を口腔内リンスとして用いることにより、頭頚部外科手術後の口腔衛生管理、及び高齢者の口腔ケアにも有効である。また、本発明の口腔用組成物は精油成分であるセスキテルペン誘導体を含有するため、香料としての機能も有する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２１】
本発明の口腔用組成物に用いるセスキテルペン誘導体は、キコブタケ科メシマコブ（Phellinus linteus）の菌体由来の成分であり、菌体としては、天然、栽培もしくは培養菌体が使用できる。培養は、子実体より分離した菌糸をPDA (Potate Dextrose Agar)培地、MYS (Malt Yeast Sucrose)培地Melin-Norklans培地、Norklans's C培地、浜田培地、太田培地などの培地において平板培養、液体振盪培養、液体静置培養、通気攪拌培養などの培養方法により数時間〜数ヶ月程度行えばよい。
【００２２】
口腔用組成物に含有させるセスキテルペン誘導体としては、メシマコブ菌体を水蒸気蒸留して得られる精油を用いても、あるいは、メシマコブ菌体から適宜溶媒で抽出して得られる、各種セスキテルペン誘導体を含有する抽出物を用いてもよい。または、この抽出液をさらに分離精製することにより得られる単離された化合物の１種または２種以上を用いてもよい。また、メシマコブ由来の各種セスキテルペン誘導体は、以下に説明するようにして同定され構造が決定されたので、これらの化合物を化学合成によって製造して用いることもできる。
【００２３】
メシマコブ菌体抽出物から各種化合物を単離するには、逆相カラムクロマトグラフィー、順相カラムクロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィー、薄層クロマトグラフィー、ガスクロマトグラフィー、蒸留、分配、沈殿、再結晶などの方法を適宜組み合わせたり繰り返すことにより行うことができる。本発明においては、後述の参考例１に示すようにして、Phellinus linteus 子実体より分離した菌糸を培養し、培養ろ液のAcOEt 抽出物および培養菌糸体MeOHエキスのCHCl3 画分より、新規化合物18種を含むセスキテルペン誘導体22種、コーヒー酸（3,4-ジヒドロ桂皮酸）、新規化合物１種を含む1,4- ベンゾジオキサンジカルボン酸誘導体３種、エルゴステロールを単離した。精油の成分となるセスキテルペン誘導体22種はその構造により、γ- イオニリデン型誘導体７種、bisabolane型誘導体14種、drimane 型誘導型１種に分類される。本発明において単離されたセスキテルペン誘導体22種の構造式は以下の通りである。
【００２４】
【化５】
2010047512.tif 000006
【００２５】
上記セスキテルペン化合物のうち19種 (化合物(1) 〜(9) および(11)〜(20)) について歯周病原因菌に対する抗菌活性を試験した結果、化合物(12)以外のすべての化合物について活性が認められた。中でも、イオニリデン型誘導体である化合物(1) 〜(5) およびドリマン型誘導体である化合物(8) は強い抗菌活性を示し、特に化合物(1) 、(2) は、現在歯磨き粉やデンタルリンスに使用されているトリクロサンと同等の強い活性を有する。化合物(5) 、(8) はヒノキチオールと同等の活性を示した。トリクロサンは、環境中への残留問題からあまり使われなくなってきており、γ- イオニリデン誘導体、特に化合物(1) 、(2) は、トリクロサンに代わる新規の抗歯周病菌剤として期待される。
【００２６】
また、上記セスキテルペン化合物のうち、化合物(3) 、(5) 、(6) 、(7) および(9) 〜(22)は本発明者等により初めて単離され、同定された新規化合物である。
本発明の口腔用組成物は、メシマコブ菌体由来の各種セスキテルペン化合物を含有する、メシマコブ菌体の培養により得られる培養ろ液の抽出物及び／又は培養菌糸体の抽出物を含有する組成物であっても、あるいは、単離されたセスキテルペン化合物のいずれか１種以上を含有する組成物であってもよい。本発明組成物は、好ましくはイオニリデン型誘導体及び／又はドリマン型誘導体、より好ましくはイオニリデン型誘導体である化合物(1) 〜(5) およびドリマン型誘導体である化合物(8) のいずれか１種以上を含有する。
【００２７】
口腔用組成物中のセスキテルペン誘導体の含有量は、誘導体の種類、用途、形態、適用方法、使用回数等によって異なるが、通常、組成物全量に対して0.0001〜10重量％、好ましくは0.001 〜１重量％、特に好ましくは0.01〜0.5 重量％である。
【００２８】
本発明の口腔用組成物は、上記精油の他、通常使用されている口腔用基剤や添加剤を配合し、練歯磨き剤、液体歯磨き剤、デンタルゲル、含嗽剤、洗口剤、飴、トローチまたはチューインガム等の形態とすることができる。配合しうる基剤としては、歯科用リン酸水素カルシウム、酸化アルミニウム、ソルビット液などが挙げられる。添加剤としては、粘結剤、湿潤剤、発泡剤、界面活性剤、溶剤、溶解補助剤、保存剤、甘味料、着色料などが例示でき、それぞれ当分野で慣用の成分を使用できる。また、本発明の組成物の効果を損なわない範囲で、他の抗菌性を有する成分を添加してもよい。
【００２９】
本発明の口腔用組成物は、有効成分である上記精油が、口腔内細菌、特に歯周病病原細菌に対して強い成長阻害活性を有するため、口腔内に適用して、歯周病の予防や治療に使用できる他、歯周病の関連疾患に対してもその予防等に有効であることが期待できる。さらに、本発明組成物は、歯磨き剤やうがい薬などとして口腔内の衛生状態を良好に維持したり、口腔内環境を改善しうる。また、本発明組成物は歯科用の口腔用殺菌剤としても有用であり、例えばインプラント処置後の殺菌剤として使用できる。
【実施例】
【００３０】
（実施例１）
Phellinus linteusの培養
Phellinus linteus 子実体より分離した菌糸をPDA 培地（Potato Dextrose Agar 39g, D.W. 1L ）で前培養した。その培養菌糸体周縁部を直径10 mm のコルクボーラーで打ち抜き、5disk ずつMYS 培地（Malt ext.30g, Yeast ext. 5g, sucrose 10g, D.W. 1L ）: 125mL/500mL flask に移植し、35日間振とう培養 (25℃, dark, 63 r.p.m) した。
【００３１】
抽出
MYS 培地100 本分を培養ろ液 (11L)および培養菌糸体 (fresh weight. 990.55g)に分けた。培養ろ液は6.05L に濃縮し、EtOAc 8.5Lで4 回抽出し、EtOAc 画分 (M EtOAc, 14.18g)を得た。培養菌糸体はMeOHで抽出し、得られたMeOHエキスに水を加えた後、CHCl32Lで3 回、さらにEtOAc 1.2Lで4 回抽出し、それぞれCHCl3画分 (My CHCl3, 20.99g) およびEtOAc 画分 (My EtOAc, 0.9557g)を得た。
【００３２】
化合物の単離
培養ろ液のEtOAc 画分を図１に示すように順相カラムクロマトグラフィーにてFr. 1-10に分画した。得られた画分を、カラムクロマトグラフィー、HPLCによる精製を繰り返し行い、新規化合物13種 (5, 6, 9 〜11, 13  17, 21, 22, 26) を含む計17種を単離した。また、新規化合物12は静地培養した培養ろ液のEtOAc 画分から得た。
【００３３】
培養菌糸体のCHCl3 画分を図２に示すように順相カラムクロマトグラフィーにてFr. 1-10に分画した。得られた画分を、HPLCによる精製を繰り返し行い、新規化合物５種 (3, 7, 18, 19, 20) を含む計９種を単離した。
表１には単離した化合物の収量を示す。
【００３４】
【表１】
2010047512.tif 000007
【００３５】
化合物の同定
単離した化合物(1) 〜(26)を旋光度、IR、UV、FABMS 、HRFABMS 、1H-NMR、13C-NMR 等によって分析し、以下の分析結果を得て、構造式を決定した。
【００３６】
化合物(1)：(-)-trans-g-monocyclofarnesol
無色油状物
[a]D22-6.76° (c=0.10, MeOH)
IR (KBr) nmax cm-1:3421, 2927, 2855, 1643.
UV (MeOH) lmax nm (log e): 204 (4.06).
FABMS (positive) m/z: 222[M]+, 245[M+Na]+.
HRFABMS (positive) m/z: Calcd for C15H26O [M]+, 222.1984；Found 222.1979.
1H-NMR (CDCl3) d：
0.82 (3H, s, 13-H3)，0.90 (3H, s, 12-H3)，1.20 (1H, ddd, J=12.5, 9.5, 5.0Hz, 2-Ha)，1.44 (1H, m, 2-Hb)，1.48 (1H, m, 7-Ha)，1.50 (2H, m, 3-H2)，1.56 (1H, m, 7-Hb)，1.66 (3H, d, J=1.0Hz, 15-H3)，1.68 (1H, dd, J=11.5, 3.5Hz, 6-H)，1.77 (1H, ddd, J=13.5, 10.5, 6.0Hz, 8-Ha)，1.96 (1H, m, 8-Hb)，2.00 (2H, m, 4-H2)，4.12 (2H, d, J=7.0Hz, 11- H2)，4.53 (1H, d, J=2.5Hz, 14-Ha)，4.75 (1H, ddd, J=2.5, 1.0, 1.0Hz, 14-Hb)，5.39 (1H, tq, J=7.0, 1.0Hz, 10-H)
13C-NMR (CDCl3) d：表２参照
【００３７】
化合物(2)：Phellidene A
無色油状物
[a]D23-16.8° (c=0.12, MeOH).
IR (KBr) nmax cm-1:3335, 2931, 1644.
EIMS m/z: 224 [M]+.
HREIMS m/z: Calcd for C15H28O [M]+, 224.2140；Found 224.2146.
1H-NMR (CDCl3) d：
0.82 (3H, s, 13-H3)，0.88 (3H, d, J=6.0Hz, 15-H3)，0.90 (3H, s, 12-H3)，1.10 (2H, m, 8-H2)，1.19 (1H, m, 2-Ha)，1.38 (1H, m, 10-Ha)，1.40 (2H, m, 7-H2)，1.48 (1H, m, 2-Hb)，1.52 (2H, m, 3-H2)，1.54 (1H, m, 9-H)，1.55 (1H, m, 10-Hb)，1.67 (1H, dd, J=10.0, 5.0Hz, 6-H)，1.99 (2H, m, 4-H2)，3.63 (1H, dd, J=10.0, 6.0Hz, 11-Ha)，3.69 (1H, dd, J=10.0, 6.0Hz, 11-Hb)，4.52 (1H, d, J=3.0Hz, 14-Ha)，4.73 (1H, d, J=3.0Hz, 14-Hb)
13C-NMR (CDCl3) d：表２参照
【００３８】
化合物(3)：
無色油状物
[a]D+18.8°
IR (KBr) nmax cm-1:3380, 1645.
FABMS m/z: 241[M]+, 263[M+Na]+.
1H-13C Long-Range Correlation by HMBC：表３参照
【００３９】
化合物(4)：
無色粉末
[a]D+11.7°
IR (KBr) nmax cm-1:3420, 1680, 1645, 1625, 1600.
EIMS m/z: 234[M]+
NMR：表4参照
1H-13C Long-Range Correlation by HMBC：表5参照
【００４０】
化合物(5)
無色油状物
[a]D+3.4°
IR (KBr) nmax cm-1:3420, 1710, 1645.
FABMS m/z: 239[M+H]+
NMR：表4参照
1H-13C Long-Range Correlation by HMBC：表6参照
【００４１】
化合物(6)
無色油状物
[a]D+13.7°
IR (KBr) nmax cm-1:3415, 1694, 1647.
FABMS m/z: 253[M]+, 275[M+Na]+.
1H-13C Long-Range Correlation by HMBC：表7参照
【００４２】
化合物(7)
無色粉末
[a]D+4.6°
IR (KBr) nmax cm-1:3400, 1696, 1650, 1640.
FABMS m/z: 251[M]+, 273[M+Na]+.
1H-13C Long-Range Correlation by HMBC：表8参照
【００４３】
化合物(8)
無色固体
[a]D-5.1°
FABMS m/z: 239[M]+, 261[M+Na]+.
EIMS m/z: 238[M]+
1H-13C Long-Range Correlation by HMBC：表9参照
【００４４】
化合物(9)
無色柱状晶
[a]D-69.7°
IR (KBr) nmax cm-1:3400, 1690, 1625.
FABMS m/z: 283[M+H]+, 305[M+Na]+.
NMR：表10参照
1H-13C Long-Range Correlation by HMBC：表11参照
【００４５】
化合物(10)
無色針状晶
[a]D-186°
IR (KBr) nmax cm-1:3423, 1766, 1666.
FABMS m/z: 265[M]+
NMR：表10参照
1H-13C Long-Range Correlation by HMBC：表12参照
【００４６】
化合物(11)
無色固体
[a]D+49.5°
IR (KBr) nmax cm-1:3420, 1744, 1650, 1657, 1644.
FABMS m/z: 289[M+Na]+
1H-13C Long-Range Correlation by HMBC：表13参照
【００４７】
化合物(12)
無色固体
[a]D+35.9°
IR (KBr) nmax cm-1:3441, 1742, 1693, 1650.
FABMS m/z: 319[M+Na]+
1H-13C Long-Range Correlation by HMBC：表14参照
【００４８】
化合物(13)
無色固体
[a]D+6.8°
IR (KBr) nmax cm-1:3396, 1768, 1643.
FABMS m/z: 283[M+H]+, 305[M+Na]+.
1H-13C Long-Range Correlation by HMBC：表15参照
【００４９】
化合物(14)
無色針状晶
[a]D-73.6°
IR (KBr) nmax cm-1:3190, 1715, 1660.
FABMS m/z: 289[M+Na]+
NMR：表16参照
【００５０】
化合物(15)
無色固体
[a]D-60.3°
IR (KBr) nmax cm-1:3415, 1693, 1634.
FABMS m/z: 305[M+Na]+
NMR：表16参照
1H-13C Long-Range Correlation by HMBC：表17参照
【００５１】
化合物(16)
無色固体
[a]D-19.1°
IR (KBr) nmax cm-1:3385, 1680, 1640.
FABMS m/z: 291[M+Na]+
NMR：表18参照
1H-13C Long-Range Correlation by HMBC：表19参照
【００５２】
化合物(17)
無色油状物
[a]D-58.9°
IR (KBr) nmax cm-1:3433, 1689, 1658.
FABMS m/z: 305[M+Na]+
NMR：表18参照
1H-13C Long-Range Correlation by HMBC：表20参照
【００５３】
化合物(18)
無色油状物
[a]D-14.5°
IR (KBr) nmax cm-1:3458, 1691, 1648.
FABMS m/z: 251[M+H]+, 273[M+Na]+.
NMR：表18参照
1H-13C Long-Range Correlation by HMBC：表21参照
【００５４】
化合物(19)
無色油状物
[a]D=124°
IR (KBr) nmax cm-1:3395
FABMS m/z: 261[M+Na]+
NMR：表22参照
1H-13C Long-Range Correlation by HMBC：表23参照
【００５５】
化合物(20)
無色固体
[a]D-117°
IR (KBr) nmax cm-1:3379
FABMS m/z: 261[M+Na]+
NMR：表22参照
1H-13C Long-Range Correlation by HMBC：表24参照
【００５６】
化合物(21)
黄色油状物
[a]D-0.9°
IR (KBr) nmax cm-1:3421, 1711, 1690, 1630, 1601, 1447.
FABMS m/z: 453[M+Na]+
NMR：表25参照
1H-13C Long-Range Correlation by HMBC：表26参照
【００５７】
化合物(22)
黄色油状物
[a]D-23.8°
IR (KBr) nmax cm-1:3432, 1744, 1631, 1600, 1454.
FABMS m/z: 467[M+Na]+
NMR：表25参照
1H-13C Long-Range Correlation by HMBC：表27参照
【００５８】
【表２】
2010047512.tif 000008
【００５９】
【表３】
2010047512.tif 000009
【００６０】
【表４】
2010047512.tif 000010
【００６１】
【表５】
2010047512.tif 000011
【００６２】
【表６】
2010047512.tif 000012
【００６３】
【表７】
2010047512.tif 000013
【００６４】
【表８】
2010047512.tif 000014
【００６５】
【表９】
2010047512.tif 000015
【００６６】
【表１０】
2010047512.tif 000016
【００６７】
【表１１】
2010047512.tif 000017
【００６８】
【表１２】
2010047512.tif 000018
【００６９】
【表１３】
2010047512.tif 000019
【００７０】
【表１４】
2010047512.tif 000020
【００７１】
【表１５】
2010047512.tif 000021
【００７２】
【表１６】
2010047512.tif 000022
【００７３】
【表１７】
2010047512.tif 000023
【００７４】
【表１８】
2010047512.tif 000024
【００７５】
【表１９】
2010047512.tif 000025
【００７６】
【表２０】
2010047512.tif 000026
【００７７】
【表２１】
2010047512.tif 000027
【００７８】
【表２２】
2010047512.tif 000028
【００７９】
【表２３】
2010047512.tif 000029
【００８０】
【表２４】
2010047512.tif 000030
【００８１】
【表２５】
2010047512.tif 000031
【００８２】
【表２６】
2010047512.tif 000032
【００８３】
【表２７】
2010047512.tif 000033
【００８４】
以上の結果より化合物(1) 〜(22)は前述の構造式を有することが判明し、また、化合物(23)〜(26)は以下の構造式で表される化合物である
【００８５】
【化６】
2010047512.tif 000034
【００８６】
（試験例１）
セスキテルペン類のPorphyromonas gingivalisに対する最小発育阻止濃度(MIC) の測定
(1) 検定菌Porphyromonas gingivalisとその培養
Porphyromonas gingivalis  ATCC33277(明海大学歯学部菊地先生より供与) をミュラーヒントンS ヒツジ血液寒天培地（栄研化学株式会社）に接種し、アネロパックジャー（三菱ガス化学株式会社）内で、AnaeroPack・ケンキ( 三菱ガス化学株式会社) を用い嫌気条件下37℃、暗所にて4 日間前培養を行った。
培養して得た菌をかきとり、リン酸緩衝液に溶解し10倍希釈を繰り返し接種菌液を表２8に示すように調整した。
【００８７】
(2) 検定化合物の調整とMIC 測定
検定化合物及び、コントロールであるヒノキチオール、トリクロサンをDMSOで溶解し表２８に示した濃度をスタートに変法GAM ブイヨンbroth （日水薬品株式会社）でミニ試験管10本に倍々希釈でそれぞれ1ml になるよう振り分けた。希釈された検定化合物を含む試験管にリン酸緩衝液で調整した菌液を10μL ずつ接種し、アネロパックジャー内で、AnaeroPack・ケンキを用い嫌気培養条件下37℃、暗所にて72時間培養を行った。
【００８８】
肉眼的に発育の認められなかった最小濃度をMIC とした（表２8）。
なお、各化合物への接種菌液濃度も表２8に示した通りである。
【００８９】
【表２８】
2010047512.tif 000035
【００９０】
(3) 結果
メシマコブより単離したセスキテルペン誘導体19種 (１〜９、11〜20) について歯周病原因菌の一つである Porphyromonas gingivalis に対する最小発育阻止濃度 (MIC)を測定した結果、化合物12以外の化合物で活性が認められた (表２8) 。
【００９１】
γ-Ionylidene 誘導体ではMIC 値3.3 〜310mg/mLで活性を示し、この中では化合物１および化合物２がそれぞれ5.9 、3.3mg/mLと強い活性を示した。また、(-)-dimendiol はMIC 値18.4mg/mL で活性を示した。Bisabolane誘導体では化合物12を除き、MIC 値149 〜705mg/mLで活性を示した。
【００９２】
γ-Ionylidene 誘導体の中の化合物１および化合物２は、臨床的にも利用されているヒノキチオール（MIC 値25.0mg/mL)よりも強い活性を示し、臨床的に用いられてきたトリクロサン（MIC 値3.13mg/mL)と同等の活性を示した。化合物５、８はヒノキチオールと同等の活性を示した。
（処方例１）
下記成分を混合して歯磨き剤を作製した。
【００９３】
（成分）                                        （％）
抗菌剤：(-)-trans-γ- モノシクロファルネソール         0.02％
基剤：歯科用リン酸水素カルシウム、酸化アルミニウム  50％
湿潤剤：グリセリン                                  20％
発泡剤：ウラル硫酸ナトリウム                         1％
粘着剤：カルボキシメチルセルロースナトリウム         1％
保存剤：安息香酸ナトリウム、パラオキシベンゾエート   1％
精製水                                              残量
計                                                 100％
【００９４】
（処方例２）
下記成分を混合して洗口剤を作製した。
（成分）                                        （％）
抗菌剤：フェリデンＡ                                0.02％
基剤：ソルビット液                                  0.5 ％
溶剤：エタノール                                    ５％
保存剤：安息香酸                                    0.1 ％
安息香酸ナトリウム                          0.1 ％
溶解補助剤：
ポリオキシエチレンポリオキシプロピレングリコール 2.5％
甘味料：キシリトール                                1.5 ％
甘草抽出物                                  微量
着色料：緑色３号                                    0.1％
精製水                                              残量
計                                                100％
【図面の簡単な説明】
【００９５】
【図１】培養ろ液のＡｃＯＥｔ画分の分離操作を示す図。
【図２】培養菌糸体のＣＨＣｌ３画分の分離操作を示す図。
【図１】
2010047512.tif 000040
【図２】
2010047512.tif 000041
【手続補正書】
【提出日】平成21年8月20日(2009.8.20)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３６】
化合物(1)：(-)-trans-γ-monocyclofarnesol
無色油状物
[α]D22-6.76° (c=0.10, MeOH)
IR (KBr) νmax cm-1:3421, 2927, 2855, 1643.
UV (MeOH) λmax nm (log ε): 204 (4.06).
FABMS (positive) m/z: 222[M]+, 245[M+Na]+.
HRFABMS (positive) m/z: Calcd for C15H26O [M]+, 222.1984；Found 222.1979.
1H-NMR (CDCl3) δ：
0.82 (3H, s, 13-H3)，0.90 (3H, s, 12-H3)，1.20 (1H, ddd, J=12.5, 9.5, 5.0H
z, 2-Ha)，1.44 (1H, m, 2-Hb)，1.48 (1H, m, 7-Ha)，1.50 (2H, m, 3-H2)，1.56 (1H, 
m, 7-Hb)，1.66 (3H, d, J=1.0Hz, 15-H3)，1.68 (1H, dd, J=11.5, 3.5Hz, 6-H)，1.77 
(1H, ddd, J=13.5, 10.5, 6.0Hz, 8-Ha)，1.96 (1H, m, 8-Hb)，2.00 (2H, m, 4-H2)，4.
12 (2H, d, J=7.0Hz, 11- H2)，4.53 (1H, d, J=2.5Hz, 14-Ha)，4.75 (1H, ddd, J=2.5,
1.0, 1.0Hz, 14-Hb)，5.39 (1H, tq, J=7.0, 1.0Hz, 10-H)
13C-NMR (CDCl3) δ：表２参照
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３７】
化合物(2)：Phellidene A
無色油状物
[α]D23-16.8° (c=0.12, MeOH).
IR (KBr) νmax cm-1:3335, 2931, 1644.
EIMS m/z: 224 [M]+.
HREIMS m/z: Calcd for C15H28O [M]+, 224.2140；Found 224.2146.
1H-NMR (CDCl3) δ：
0.82 (3H, s, 13-H3)，0.88 (3H, d, J=6.0Hz, 15-H3)，0.90 (3H, s, 12-H3)，1.
10 (2H, m, 8-H2)，1.19 (1H, m, 2-Ha)，1.38 (1H, m, 10-Ha)，1.40 (2H, m, 7-H2)，1
.48 (1H, m, 2-Hb)，1.52 (2H, m, 3-H2)，1.54 (1H, m, 9-H)，1.55 (1H, m, 10-Hb)，1
.67 (1H, dd, J=10.0, 5.0Hz, 6-H)，1.99 (2H, m, 4-H2)，3.63 (1H, dd, J=10.0, 6.0H
z, 11-Ha)，3.69 (1H, dd, J=10.0, 6.0Hz, 11-Hb)，4.52 (1H, d, J=3.0Hz, 14-Ha)，4.
73 (1H, d, J=3.0Hz, 14-Hb)
13C-NMR (CDCl3) δ：表２参照
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３８】
化合物(3)：
無色油状物
[α]D+18.8°
IR (KBr) νmax cm-1:3380, 1645.
FABMS m/z: 241[M]+, 263[M+Na]+.
1H-13C Long-Range Correlation by HMBC：表３参照
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３９】
化合物(4)：
無色粉末
[α]D+11.7°
IR (KBr) νmax cm-1:3420, 1680, 1645, 1625, 1600.
EIMS m/z: 234[M]+
NMR：表4参照
1H-13C Long-Range Correlation by HMBC：表5参照
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４０】
化合物(5)
無色油状物
[α]D+3.4°
IR (KBr) νmax cm-1:3420, 1710, 1645.
FABMS m/z: 239[M+H]+
NMR：表4参照
1H-13C Long-Range Correlation by HMBC：表6参照
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４１】
化合物(6)
無色油状物
[α]D+13.7°
IR (KBr) νmax cm-1:3415, 1694, 1647.
FABMS m/z: 253[M]+, 275[M+Na]+.
1H-13C Long-Range Correlation by HMBC：表7参照
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４２】
化合物(7)
無色粉末
[α]D+4.6°
IR (KBr) νmax cm-1:3400, 1696, 1650, 1640.
FABMS m/z: 251[M]+, 273[M+Na]+.
1H-13C Long-Range Correlation by HMBC：表8参照
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４３】
化合物(8)
無色固体
[α]D-5.1°
FABMS m/z: 239[M]+, 261[M+Na]+.
EIMS m/z: 238[M]+
1H-13C Long-Range Correlation by HMBC：表9参照
【手続補正９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４４】
化合物(9)
無色柱状晶
[α]D-69.7°
IR (KBr) νmax cm-1:3400, 1690, 1625.
FABMS m/z: 283[M+H]+, 305[M+Na]+.
NMR：表10参照
1H-13C Long-Range Correlation by HMBC：表11参照
【手続補正１０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４５】
化合物(10)
無色針状晶
[α]D-186°
IR (KBr) νmax cm-1:3423, 1766, 1666.
FABMS m/z: 265[M]+
NMR：表10参照
1H-13C Long-Range Correlation by HMBC：表12参照
【手続補正１１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４６】
化合物(11)
無色固体
[α]D+49.5°
IR (KBr) νmax cm-1:3420, 1744, 1650, 1657, 1644.
FABMS m/z: 289[M+Na]+
1H-13C Long-Range Correlation by HMBC：表13参照
【手続補正１２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４７】
化合物(12)
無色固体
[α]D+35.9°
IR (KBr) νmax cm-1:3441, 1742, 1693, 1650.
FABMS m/z: 319[M+Na]+
1H-13C Long-Range Correlation by HMBC：表14参照
【手続補正１３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４８】
化合物(13)
無色固体
[α]D+6.8°
IR (KBr) νmax cm-1:3396, 1768, 1643.
FABMS m/z: 283[M+H]+, 305[M+Na]+.
1H-13C Long-Range Correlation by HMBC：表15参照
【手続補正１４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４９】
化合物(14)
無色針状晶
[α]D-73.6°
IR (KBr) νmax cm-1:3190, 1715, 1660.
FABMS m/z: 289[M+Na]+
NMR：表16参照
【手続補正１５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５０】
化合物(15)
無色固体
[α]D-60.3°
IR (KBr) νmax cm-1:3415, 1693, 1634.
FABMS m/z: 305[M+Na]+
NMR：表16参照
1H-13C Long-Range Correlation by HMBC：表17参照
【手続補正１６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５１】
化合物(16)
無色固体
[α]D-19.1°
IR (KBr) νmax cm-1:3385, 1680, 1640.
FABMS m/z: 291[M+Na]+
NMR：表18参照
1H-13C Long-Range Correlation by HMBC：表19参照
【手続補正１７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５２】
化合物(17)
無色油状物
[α]D-58.9°
IR (KBr) νmax cm-1:3433, 1689, 1658.
FABMS m/z: 305[M+Na]+
NMR：表18参照
1H-13C Long-Range Correlation by HMBC：表20参照
【手続補正１８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５３】
化合物(18)
無色油状物
[α]D-14.5°
IR (KBr) νmax cm-1:3458, 1691, 1648.
FABMS m/z: 251[M+H]+, 273[M+Na]+.
NMR：表18参照
1H-13C Long-Range Correlation by HMBC：表21参照
【手続補正１９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５４】
化合物(19)
無色油状物
[α]D=124°
IR (KBr) νmax cm-1:3395
FABMS m/z: 261[M+Na]+
NMR：表22参照
1H-13C Long-Range Correlation by HMBC：表23参照
【手続補正２０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５５】
化合物(20)
無色固体
[α]D-117°
IR (KBr) νmax cm-1:3379
FABMS m/z: 261[M+Na]+
NMR：表22参照
1H-13C Long-Range Correlation by HMBC：表24参照
【手続補正２１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５６】
化合物(21)
黄色油状物
[α]D-0.9°
IR (KBr) νmax cm-1:3421, 1711, 1690, 1630, 1601, 1447.
FABMS m/z: 453[M+Na]+
NMR：表25参照
1H-13C Long-Range Correlation by HMBC：表26参照
【手続補正２２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５７】
化合物(22)
黄色油状物
[α]D-23.8°
IR (KBr) νmax cm-1:3432, 1744, 1631, 1600, 1454.
FABMS m/z: 467[M+Na]+
NMR：表25参照
1H-13C Long-Range Correlation by HMBC：表２７参照