(57)【要約】      （修正有）【課題】哺乳動物におけるリンパ増殖症候群の緩和および阻害方法の提供。【解決手段】化学構造［式中、Ｘは（Ｈ，Ｈ）もしくはＯであり；Ｙは（Ｈ，ＯＨ）もしくはＯであり；Ｒ１は、アルキル、チオアルキル等より選択され；Ｒ２は、−Ｈ、アルキル等より選択され；ならびにＲ４はメチルであるか、もしくはＲ４およびＲ１は一緒になってＣ２−５アルキレン部分を形成するかのいずれかである］を有するラパマイシン誘導体を有効成分として含んで成る、ヒト患者におけるリンパ増殖症候群を緩和するための医薬組成物であって、ここで、該リンパ増殖症候群が、エプスタイン−バーウイルスに感染しているＢリンパ球の増殖によって特徴づけられる症候群、および移植後リンパ増殖症候群およびＢ細胞リンパ腫からなる群から選択される悪性リンパ増殖症候群、からなる群から選択される医薬組成物。【選択図】図８
2010090131.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
化学構造
【化１】
2010090131.tif 000007
［式中
Ｘは（Ｈ，Ｈ）もしくはＯであり；
Ｙは（Ｈ，ＯＨ）もしくはＯであり；
Ｒ１は、アルキル、チオアルキル、アリールアルキル、ヒドロキシアルキル、ジヒドロキシアルキル、ヒドロキシアルキルアリールアルキル、ジヒドロキシアルキルアリールアルキル、アルコキシアルキル、アシルオキシアルキル、アミノアルキル、アルキルアミノアルキル、アルコキシカルボニルアミノアルキル、アシルアミノアルキル、アリールスルホンアミドアルキル、アリル、ジヒドロキシアルキルアリル、ジオキソラニルアリル、カルブアルコキシアルキルおよび（Ｒ３）３Ｓｉより成る群から独立に選択され；
Ｒ２は、−Ｈ、アルキル、チオアルキル、アリールアルキル、ヒドロキシアルキル、ジヒドロキシアルキル、ヒドロキシアルキルアリールアルキル、ジヒドロキシアルキルアリールアルキル、アルコキシアルキル、アシルオキシアルキル、アミノアルキル、アルキルアミノアルキル、アルコキシカルボニルアミノアルキル、アシルアミノアルキル、アリールスルホンアミドアルキル、アリル、ジヒドロキシアルキルアリル、ジオキソラニルアリル、カルブアルコキシアルキルおよび（Ｒ３）３Ｓｉより成る群から独立に選択され；
各Ｒ３は、−Ｈ、メチル、エチル、イソプロピル、ｔｅｒｔ−ブチルおよびフェニルよりなる群から独立に選択され；ならびに
Ｒ４はメチルであるか、もしくはＲ４およびＲ１は一緒になってＣ２−５アルキレン部分を形成するかのいずれかである］
を有するラパマイシン誘導体を有効成分として含んで成る、ヒト患者におけるリンパ増殖症候群を緩和するための医薬組成物であって、
ここで、該リンパ増殖症候群が、エプスタイン−バーウイルスに感染しているＢリンパ球の増殖によって特徴づけられる症候群、および移植後リンパ増殖症候群およびＢ細胞リンパ腫からなる群から選択される悪性リンパ増殖症候群、からなる群から選択される、上記医薬組成物。
【請求項２】
ラパマイシン誘導体が、
４０−Ｏ−ベンジルラパマイシン、
４０−Ｏ−（４’−ヒドロキシメチル）ベンジルラパマイシン、
４０−Ｏ−［４’−（１，２ジヒドロキシエチル）］ベンジルラパマイシン、
４０−Ｏ−アリルラパマイシン、
４０−Ｏ−［３’−（２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４（Ｓ）−イル）プロ
プ−２’−エン−１’−イル］ラパマイシン、
（２’Ｅ，４’Ｓ）−４０−Ｏ−（４’，５’−ジヒドロキシペント−２’−エン−１’−イル）ラパマイシン、
４０−Ｏ−（２−ヒドロキシ）エトキシカルボニルメチルラパマイシン、
４０−Ｏ−（２−ヒドロキシ）エチルラパマイシン、
４０−Ｏ−（３−ヒドロキシ）プロピルラパマイシン、
４０−Ｏ−（６−ヒドロキシ）ヘキシルラパマイシン、
４０−Ｏ−［２−（２ヒドロキシ）エトキシ］エチルラパマイシン、
４０−Ｏ−［（３Ｓ）−２，２−ジメチルジオキソラン−３−イル］メチルラパマイシン、
４０−Ｏ−［（２Ｓ）−２，３−ジヒドロキシプロプ−１−イル］ラパマイシン、
４０−Ｏ−（２−アセトキシ）エチルラパマイシン、
４０−Ｏ−（２−ニコチノイルオキシ）エチルラパマイシン、
４０−Ｏ−［２−（Ｎ−モルホリノ）アセトキシ］エチルラパマイシン、
４０−Ｏ−（２−Ｎ−イミダゾリルアセトキシ）エチルラパマイシン、
４０−Ｏ−［２−（Ｎ−メチル−Ｎ’−ピペラジニル）アセトキシ］エチルラパマイシン、
３９−Ｏ−デスメチル−３９，４０−Ｏ，Ｏ−エチレンラパマイシン、
（２６Ｒ）−２６−ジヒドロ−４０−Ｏ−（２−ヒドロキシ）エチルラパマイシン、
２８−Ｏ−メチルラパマイシン、
４０−Ｏ−（２−アミノエチル）ラパマイシン、
４０−Ｏ−（２−アセトアミノエチル）ラパマイシン、
４０−Ｏ−（２−ニコチンアミドエチル）ラパマイシン、
４０−Ｏ−（２−（Ｎ−メチルイミダゾ−２’−イルカルブエトキシアミド）エチル）ラパマイシン、
４０−Ｏ−（２−エトキシカルボニルアミノエチル）ラパマイシン、
４０−Ｏ−（２−トルイルスルホンアミドエチル）ラパマイシン、および
４０−Ｏ−［２−（４’５’−ジカルボエトキシ−１’，２’，３’−トリアゾル−１’−イル）エチル］ラパマイシン
より成る群から選択される、請求項１記載の医薬組成物。
【請求項３】
第二の薬理学的有効成分を更に含んで成る、請求項１記載の医薬組成物。
【請求項４】
第二の薬理学的有効成分が免疫抑制剤である、請求項３記載の医薬組成物。
【請求項５】
悪性リンパ増殖症候群が移植後リンパ増殖症候群である、請求項１記載の医薬組成物。
【請求項６】
リンパ増殖症候群が、エプスタイン−バーウイルスに感染しているＢリンパ球の増殖を特徴とする障害である、請求項１記載の医薬組成物。
【請求項７】
悪性リンパ増殖症候群がＢ細胞リンパ腫である、請求項１記載の医薬組成物。
【請求項８】
Ｂ細胞リンパ腫が、ＡＩＤＳ関連リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、バーキットリンパ腫、びまん性大細胞型リンパ腫、腹膜滲出液Ｂ細胞リンパ腫およびモノクローン性の明白に悪性のＢ細胞リンパ腫からなる群から選択される、請求項７に記載の医薬組成物。
【請求項９】
移植後リンパ増殖症候群がポリクローン性異型リンパ組織過形成である、請求項５に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
化学構造
【化２】
2010090131.tif 000008
［式中
Ｘは（Ｈ，Ｈ）もしくはＯであり；
Ｙは（Ｈ，ＯＨ）もしくはＯであり；
Ｒ１は、アルキル、チオアルキル、アリールアルキル、ヒドロキシアルキル、ジヒドロキシアルキル、ヒドロキシアルキルアリールアルキル、ジヒドロキシアルキルアリールアルキル、アルコキシアルキル、アシルオキシアルキル、アミノアルキル、アルキルアミノアルキル、アルコキシカルボニルアミノアルキル、アシルアミノアルキル、アリールスルホンアミドアルキル、アリル、ジヒドロキシアルキルアリル、ジオキソラニルアリル、カルブアルコキシアルキルおよび（Ｒ３）３Ｓｉより成る群から独立に選択され；
Ｒ２は、−Ｈ、アルキル、チオアルキル、アリールアルキル、ヒドロキシアルキル、ジヒドロキシアルキル、ヒドロキシアルキルアリールアルキル、ジヒドロキシアルキルアリールアルキル、アルコキシアルキル、アシルオキシアルキル、アミノアルキル、アルキルアミノアルキル、アルコキシカルボニルアミノアルキル、アシルアミノアルキル、アリールスルホンアミドアルキル、アリル、ジヒドロキシアルキルアリル、ジオキソラニルアリル、カルブアルコキシアルキルおよび（Ｒ３）３Ｓｉより成る群から独立に選択され；
各Ｒ３は、−Ｈ、メチル、エチル、イソプロピル、ｔｅｒｔ−ブチルおよびフェニルより成る群から独立に選択され；ならびに
Ｒ４はメチルであるか、もしくはＲ４およびＲ１は一緒になってＣ２−５アルキレン部分を形成するかのいずれかである］
を有するラパマイシン誘導体を有効成分として含んで成る、リンパ増殖症候群を発症する危険にさらされるヒト患者におけるリンパ増殖症候群を阻害するための医薬組成物であって、
ここで、該リンパ増殖症候群が、エプスタイン−バーウイルスに感染しているＢリンパ球の増殖によって特徴づけられる症候群、および移植後リンパ増殖症候群およびＢ細胞リンパ腫からなる群から選択される悪性リンパ増殖症候群、からなる群から選択される、および悪性リンパ増殖症候群からなる群から選択される、上記医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ヒト患者におけるリンパ増殖症候群（ｌｙｍｐｈｏｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ  ｄｉｓｏｒｄｅｒ）の緩和方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
（発明の背景）
エプスタイン−バーウイルス（ＥＢＶ）に感染したＢリンパ球の拡張を通常必要とする移植後リンパ増殖症候群（ＰＴＬＤ）は、移植片拒絶を阻害するため必要な免疫抑制療法の生命を脅かす合併症である（非特許文献１；非特許文献２）。ＰＴＬＤは、ポリクローン性異型リンパ組織過形成からモノクローナル性の明白に悪性のＢ細胞リンパ腫までの範囲にわたる、リンパ増殖症候群の全スペクトルを含んで成る（非特許文献１；非特許文献２；非特許文献３；非特許文献４）。より少なく進行した形態のＰＴＬＤはより少なく攻撃的な経過の免疫抑制療法に応答する（非特許文献１；非特許文献５）。しかしながら、外来組織を拒絶しかつ破壊する身体の能力を無にする標準的免疫抑制薬の用量を低下させることは、移植片の生存を危険にさらす可能性がある。さらに、慣習的薬剤を用いる治療におけるこの改変は、移植片レシピエントに対し通常致死的である悪性のリンパ腫型のＰＴＬＤに対し有効でない。
【０００３】
リンパ腫は有意の罹患率および死亡率の原因となり、米国単独で毎年５０，０００以上の新たな診断の原因である。多くのリンパ腫がホジキンもしくは非ホジキンのいずれかのリンパ腫であり、これらは末梢の成熟Ｂ、ＴもしくはＮＫリンパ腫から生じることができる。それらの自然の経過に基づき、非ホジキンリンパ腫は低、中間および高悪性度（ｇｒａｄｅ）に分類される。低悪性度リンパ腫は通常ゆっくりと進行性であるが、しかし本質的に治療可能でない。中間および高悪性度リンパ腫の現在の５年の疾患のない治療後生存率はおよそ６０％である。これらの攻撃的な型のリンパ腫は、治療に応答しない患者の迅速な死亡をもたらす。ＡＩＤＳのような免疫無防備状態である患者および移植後患者で発生するリンパ腫の予後はとりわけ不良である。従って、リンパ腫の治癒率を向上させるための新たな治療様式が必要とされる。
【０００４】
ＳＤＺ  ＲＡＤ（４０−Ｏ−｛２−ヒドロキシエチル｝ラパマイシン）は、免疫抑制活性を表すラパマイシン誘導体の一分類の１つである（特許文献１；非特許文献６；非特許文献７；非特許文献８；非特許文献９；非特許文献１０）。ラパマイシンを包含するこの分類の化合物は、正常なＴリンパ球中にいくつかの作用点を有する。それらは、主として、ＩＬ−２レセプター（非特許文献１１）および他のサイトカインレセプター（非特許文献１２）により媒介される下流のシグナル伝達事象を阻害するが、しかしまた早期のＧ１期の細胞周期の進行にも影響を及ぼす（非特許文献１３；非特許文献１４）。ＳＤＺ  ＲＡＤおよび他のＯ−アルキル化ラパマイシン誘導体化合物により表される多くの側面をもつ免疫抑制活性は、これらの化合物を多目的に使える免疫抑制剤にする。
【０００５】
リンパ腫およびＰＴＬＤのようなリンパ増殖症候群の重症度および頻度を制限するためのより有効な治療および予防方法に対する有意の必要性が存在する。本発明はこの必要性を満足する。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】ＰＣＴ出願第ＷＯ  ９４／０９０１０号明細書
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Ｍｏｒｒｉｓｏｎら、１９９４、Ａｍ．Ｊ．Ｍｅｄ．９７：１４−２４
【非特許文献２】Ｗａｒｎｋｅら、１９９５、ＡＦＩＰ  Ｆａｓｃｉｃｌｅ  １４：５３１−５３５
【非特許文献３】Ｃｕｒｔｉｓら、１９９９、Ｂｌｏｏｄ  ９４：２２０８−２２１６
【非特許文献４】Ｈａｒｒｉｓら、１９９７、Ｓｅｍｉｎ．Ｄｉａｇｎ．Ｐａｔｈ．１４：８−１４
【非特許文献５】Ｓｉｇａｌら、１９９２、Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１０：５１９−６０
【非特許文献６】Ｓｃｈｕｕｒｍａｎら、１９９７、Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  ６４：３２−５
【非特許文献７】Ｓｃｈｕｌｅｒら、１９９７、Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  ６４：３６−４２
【非特許文献８】Ｓｅｄｒａｎｉら、１９９８、Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ．Ｐｒｏｃ．３０：２１９２−２１９４
【非特許文献９】Ｓｃｈｕｕｒｍａｎら、１９９８、Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ  Ｐｒｏｃ．３０：２１９８−２１９９
【非特許文献１０】Ｈａｕｓｅｎら、１９９９、Ｊ．Ｈｅａｒｔ  Ｌｕｎｇ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ  １８：１５０−１５９
【非特許文献１１】Ｓｅｇｈａｌ、１９９８、Ｃｌｉｎ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．３１：３３５−３４０
【非特許文献１２】Ｓａｋａｔａら、１９９９、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  ６８：３０１−３０９
【非特許文献１３】Ｔｅｒａｄａら、１９９３、Ｊ．Ｃｅｌｌ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．１５４：７−１５
【非特許文献１４】Ｆｌａｎａｇａｎら、１９９３、Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．６９６：３１−３７
【発明の概要】
【０００８】
（発明の要約）
本発明の方法は、図８の式Ｉに示される化学構造を有するラパマイシン誘導体を、該症候群を緩和するのに十分な量で該患者に投与することを含んで成る。好ましい一態様において、ラパマイシン誘導体は４０−Ｏ−（２−ヒドロキシ）エチルラパマイシンである。多数の他の有用なラパマイシン誘導体（ラパマイシンそれ自身を包含する）を本開示に記述する。本方法を使用して緩和することができるリンパ増殖症候群は、例えば、ＰＴＬＤ、およびリンパ腫のようなリンパ腺癌を包含する。該方法はまた、免疫抑制療法（例えば組織移植に伴う免疫抑制療法）により引き起こされるもしくはそれによる患者の治療に伴うリンパ増殖症候群を緩和するのにも使用することができる。
【０００９】
本発明に包含される別の方法において、リンパ増殖症候群が、こうした障害を発症する危険にさらされる患者（例えば免疫無防備状態の患者もしくは免疫抑制療法を受けている患者）で阻害もしくは予防される。
【００１０】
これらの方法において、ラパマイシン誘導体は、免疫抑制剤のような第二の薬理学的有効成分と（単一の組成物中で、もしくは別個に投与される組成物中で）共投与することができる。免疫抑制剤は、移植片拒絶の阻害方法での使用について既知であり、そして、それらの既知の方法を、移植片を受領した患者に免疫抑制剤および本明細書で開示されるラ
パマイシン誘導体の双方を投与することにより改良することができる。
【００１１】
本発明はまた、リンパ腺癌に苦しめられるヒト患者におけるリンパ腺腫瘍の転移の阻害方法も包含する。本方法は、式Ｉに示される化学構造を有するラパマイシン誘導体を、リンパ球増殖を阻害するのに十分な量で患者に投与することを含んで成る。
【００１２】
別の局面において、本発明は、ある薬剤がヒト患者におけるリンパ増殖症候群を緩和もしくは阻害するために有用であるかどうかの評価方法を包含する。本方法は、Ｂリンパ球をエプスタイン−バーウイルスで形質転換すること、該リンパ球を重症の複合免疫不全を有するマウスに注入すること、該マウスに薬剤を投与すること、およびマウスにおける腫瘍の成長を最低約２１日間監視することを含んで成る。腫瘍の退縮、腫瘍の根絶、および第二の腫瘍の非存在の１種もしくはそれ以上がマウス中で観察される場合には、これは、該薬剤が哺乳動物における移植後リンパ増殖症候群を緩和もしくは阻害するために有用であることの表示である。
【００１３】
（発明の詳細な記述）
本発明は、ヒトのような哺乳動物におけるリンパ腫および移植後リンパ増殖症候群（ＰＴＬＤ）のようなリンパ増殖症候群の緩和もしくは阻害方法に関する。該方法は、哺乳動物におけるリンパ球の増殖を阻害するのに十分な量のＳＤＺ  ＲＡＤのようなＯ−アルキル化ラパマイシン誘導体を哺乳動物に投与することを含んで成る。
【００１４】
Ｏ−アルキル化ラパマイシン誘導体は移植片拒絶を阻害することが既知である。従って、ラパマイシン誘導体を、組織もしくは器官移植片（すなわち異種移植片）を受けた哺乳動物に投与する場合、これらの誘導体の１種の投与は移植片拒絶を阻害しかつＰＴＬＤを緩和もしくは予防することの双方ができる。ＰＴＬＤの治療もしくは阻害のために、投与される量は移植片拒絶およびリンパ球の増殖の双方を阻害するのに十分であることができる。
【００１５】
本明細書に記述されるもののようなＯ−アルキル化ラパマイシン誘導体を、リンパ腫を緩和もしくは予防するのに使用することができるという事実は、他者により以前に認識されていない。ＳＤＺ  ＲＡＤのようなＯ−アルキル化ラパマイシン誘導体は、リンパ腫以外の多様なリンパ増殖症候群（例えば慢性リンパ性白血病）で発生するようなリンパ球の増殖を阻害するのにもまた使用することができる。ＳＤＺ  ＲＡＤのようなＯ−アルキル化ラパマイシン誘導体は、インビトロもしくはインビボのいずれかで細胞中で細胞周期の停止もしくはアポトーシスを誘発するため、ならびにリンパ球の成長および増殖を阻害するために使用することができる。
【００１６】
本明細書に記述される方法で有用であるＯ−アルキル化ラパマイシン誘導体は、それらの作成方法がそうであるように他者により記述されている。この点に関して、国際公開番号第ＷＯ  ９４／０９０１０号を有するＰＣＴ特許出願が、引用することにより本明細書に組み込まれる。
【００１７】
本開示に記述される方法で有用であるＯ−アルキル化ラパマイシン誘導体は、図８の式Ｉ（式中
Ｘは（Ｈ，Ｈ）もしくはＯであり；
Ｙは（Ｈ，ＯＨ）もしくはＯであり；
Ｒ１およびＲ２のそれぞれは、−Ｈ、アルキル、チオアルキル、アリールアルキル、ヒドロキシアルキル、ジヒドロキシアルキル、ヒドロキシアルキルアリールアルキル、ジヒドロキシアルキルアリールアルキル、アルコキシアルキル、アシルオキシアルキル、アミノアルキル、アルキルアミノアルキル、アルコキシカルボニルアミノアルキル、アシルアミ
ノアルキル、アリールスルホンアミドアルキル、アリル、ジヒドロキシアルキルアリル、ジオキソラニルアリル、カルブアルコキシアルキルおよび（Ｒ３）３Ｓｉより成る群から独立に選択され；
各Ｒ３は、−Ｈ、メチル、エチル、イソプロピル、ｔｅｒｔ−ブチルおよびフェニルより成る群から独立に選択され；ならびに
Ｒ４はメチルであるか、もしくはＲ４およびＲ１は一緒になってＣ２−５アルキレン部分を形成するかのいずれかである）
に示される化学的構造を有するものを包含する。
【００１８】
Ｒ１−Ｒ４の記述において、「アルク（ａｌｋ−）」もしくは「アルキル」はＣ１−６アルキル部分を指し、該部分は分枝状もしくは直鎖状であり、また、好ましくはＣ１−３アルキル部分であり、ここで、炭素鎖は場合によってはエーテル（−Ｏ−）連結により中断されることができる（例えば、−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２−）。Ｒ１−Ｒ４の記述において、「アル（ａｒ−）」もしくは「アリール」はＣ５−８アリール部分を指し、該アリール部分は場合によっては炭素原子の代わりに１もしくは２個の窒素原子を有する。Ｒ１−Ｒ４の記述において、「アリル」は−ＣＨ２−ＣＨ＝ＣＨ２を意味する。Ｒ１−Ｒ４の記述において、「アシル」はＣ１−６アルカノイル部分（すなわち、アルキル部分のメチレン部分｛すなわち−ＣＨ２−｝部分の代わりにカルボニル｛すなわち−ＣＯ−｝部分を有するアルキル部分）を指す。Ｒ１−Ｒ４の記述において、「アルキレン」はＣ１−６アルキレン部分を指し、該部分は分枝状もしくは直鎖状である。
【００１９】
本開示に記述される方法での使用に適するＯ−アルキル化ラパマイシン誘導体の例は、・４０−Ｏ−ベンジルラパマイシン、
・４０−Ｏ−（４’−ヒドロキシメチル）ベンジルラパマイシン、
・４０−Ｏ−［４’−（１，２ジヒドロキシエチル）］ベンジルラパマイシン、
・４０−Ｏ−アリルラパマイシン、
・４０−Ｏ−［３’−（２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４（Ｓ）−イル）プロプ−２’−エン−１’−イル］ラパマイシン、
・（２’Ｅ，４’Ｓ）−４０−Ｏ−（４’，５’−ジヒドロキシペント−２’−エン−１’−イル）ラパマイシン、
・４０−Ｏ−（２−ヒドロキシ）エトキシカルボニルメチルラパマイシン、
・４０−Ｏ−（２−ヒドロキシ）エチルラパマイシン、
・４０−Ｏ−（３−ヒドロキシ）プロピルラパマイシン、
・４０−Ｏ−（６−ヒドロキシ）ヘキシルラパマイシン、
・４０−Ｏ−［２−（２ヒドロキシ）エトキシ］エチルラパマイシン、
・４０−Ｏ−［（３Ｓ）−２，２−ジメチルジオキソラン−３−イル］メチルラパマイシン、
・４０−Ｏ−［（２Ｓ）−２，３−ジヒドロキシプロプ−１−イル］ラパマイシン、
・４０−Ｏ−（２−アセトキシ）エチルラパマイシン、
・４０−Ｏ−（２−ニコチノイルオキシ）エチルラパマイシン、
・４０−Ｏ−［２−（Ｎ−モルホリノ）アセトキシ］エチルラパマイシン、
・４０−Ｏ−（２−Ｎ−イミダゾリルアセトキシ）エチルラパマイシン、
・４０−Ｏ−［２−（Ｎ−メチル−Ｎ’−ピペラジニル）アセトキシ］エチルラパマイシン、
・３９−Ｏ−デスメチル−３９，４０−Ｏ，Ｏ−エチレンラパマイシン、
・（２６Ｒ）−２６−ジヒドロ−４０−Ｏ−（２−ヒドロキシ）エチルラパマイシン、
・２８−Ｏ−メチルラパマイシン、
・４０−Ｏ−（２−アミノエチル）ラパマイシン、
・４０−Ｏ−（２−アセトアミノエチル）ラパマイシン、
・４０−Ｏ−（２−ニコチンアミドエチル）ラパマイシン、
・４０−Ｏ−（２−（Ｎ−メチルイミダゾ−２’−イルカルブエトキシアミド）エチル）ラパマイシン、
・４０−Ｏ−（２−エトキシカルボニルアミノエチル）ラパマイシン、
・４０−Ｏ−（２−トルイルスルホンアミドエチル）ラパマイシン、および
・４０−Ｏ−［２−（４’５’−ジカルボエトキシ−１’，２’，３’−トリアゾル−１’−イル）エチル］ラパマイシン
を包含する。
【００２０】
本明細書に記述される方法での使用に好ましい化合物は、ＸおよびＹが双方ともＯであり、Ｒ２がＨであり、Ｒ４がメチルであり、そしてＲ１がヒドロキシアルキル、ヒドロキシアルコキシアルキル、アシルアミノアルキルおよびアミノアルキルから選択される、４０−Ｏ−置換ラパマイシンである。好ましい化合物の例は、４０−Ｏ−（２−ヒドロキシ）エチルラパマイシン（すなわちＳＤＺ  ＲＡＤ、その構造は図７に示される）、４０−Ｏ−（３−ヒドロキシ）プロピルラパマイシン、４０−Ｏ−［２−（２−ヒドロキシ）エトキシ］エチルラパマイシンおよび４０−Ｏ−（２−アセトアミノエチル）ラパマイシンを包含する。ラパマイシンそれ自身（すなわち、Ｒ１およびＲ２がそれぞれ−Ｈであり、Ｒ４がメチルであり、そしてＸおよびＹのそれぞれがＯである式Ｉの構造を有する化合物）もまた本明細書に記述される方法で使用することができる。
【００２１】
定義
本明細書で使用されるところの、以下の用語のそれぞれは、本節でそれと関連する意味を有する。
【００２２】
冠詞「ａ」および「ａｎ」は、該冠詞の文法上の目的語の１個もしくは１個以上（すなわち最低１個）を指すのに本明細書で使用する。例として、「１個の要素（ａｎ  ｅｌｅｍｅｎｔ）は、１個の要素もしくは１個以上の要素を意味する。
【００２３】
細胞の成長、細胞周期の進行、増殖もしくは腫瘍形成のような細胞中での過程は、細胞への組成物の投与もしくは細胞への治療方法の使用に際して、該組成物が投与されなかったかもしくは該治療方法が使用されなかった細胞中での同一の過程に関して該過程が変えられる場合に、該組成物もしくは該治療方法により「阻害」される。例えば、細胞中での増殖のレベルが、ＳＤＺ  ＲＡＤを含んで成る組成物の投与後に、該組成物が投与されない細胞中での増殖のレベルに比較して減少される場合には、該組成物は細胞中での増殖を阻害する。
【００２４】
腫瘍の成長、腫瘍の確立、リンパ増殖性応答もしくは移植片拒絶のような哺乳動物における過程は、哺乳動物への組成物の投与もしくは哺乳動物での治療方法の使用に際して、該組成物が投与されなかったかもしくは該治療方法が使用されなかった哺乳動物における同一の過程に関して該過程の速度もしくは大きさが減少される場合に、該組成物もしくは該治療方法により「阻害」される。例えば、哺乳動物におけるリンパ球の増殖のレベルが、ＳＤＺ  ＲＡＤを含んで成る組成物の投与後に、該組成物が投与されない哺乳動物におけるリンパ球の増殖のレベルに比較して減少される場合には、該組成物は哺乳動物におけるリンパ球の増殖を阻害する。
【００２５】
アポトーシスもしくは細胞周期の停止のような細胞中での過程は、細胞への組成物の投与もしくは細胞での治療方法の使用に際して、該組成物が投与されなかったかもしくは該治療方法が使用されなかった細胞中での過程に関して細胞中での該過程のレベルが増大される場合に、該組成物もしくは該治療方法により「誘導」される。例えば、細胞中でのアポトーシスの程度、レベルもしくは見込みが、ＳＤＺ  ＲＡＤを含んで成る組成物の投与後に、該組成物が投与されない細胞中でのアポトーシスの程度、レベルもしくは見込みに
比較して増大される場合には、該組成物は細胞中でのアポトーシスを誘導する。
【００２６】
本明細書で使用されるところの「製薬学的に許容できる担体」という用語は、それとＯ−アルキル化ラパマイシン誘導体を組み合わせることができ、かつ、組み合わせ後に被験体に該ラパマイシン誘導体を投与するのに使用することができる、化学的組成物を意味する。
【００２７】
本明細書で使用されるところの「生理学的に許容できる」エステルもしくは塩という用語は、製薬学的組成物のいずれの他の成分とも適合性でありかつ該組成物が投与されるはずである被験体に対し有害でない、エステルもしくは塩の形態のＯ−アルキル化ラパマイシン誘導体を意味する。
【００２８】
本明細書で使用されるところの、製薬学的組成物の「非経口投与」は、被験体の組織の物理的破壊、および組織中の裂け目を通っての該製薬学的組成物の投与を特徴とするいずれの投与経路も包含する。従って、非経口投与は、限定されるものでないが、製薬学的組成物の注入、外科的切開による該組成物の適用、組織を貫通する非外科的創傷による該組成物の適用などによる該組成物の投与を挙げることができる。とりわけ、非経口投与は、限定されるものでないが、皮下、腹腔内、筋肉内、胸骨内の注入、および腎臓透析注入技術を挙げることができる。
【００２９】
第一の薬理学的薬剤および第二の薬理学的薬剤は、その間の第一の作用物質に帰される薬理学的効果が少なくともその最大値の半分である期間が、その間の第二の薬剤に帰される薬理学的効果が少なくとのもの最大値の半分である期間と重なり合う時間に、２種の薬剤を十分に緊密に投与する場合に「共投与」される。共投与される薬剤は、該薬剤を含有する単一の組成物中で投与することができるか、もしくはそれらは別個の組成物中で投与することができる。
【００３０】
本明細書で使用されるところの「アポトーシスの誘導」という用語は、プログラムされた細胞死の過程を細胞に開始もしくは加速させる過程を意味する。
【００３１】
障害は、該障害もしくはその症状の１つの重症度、または該障害もしくはその症状の１つが患者により経験される頻度が低下される場合に、「緩和」される。
【００３２】
障害は、該障害もしくはその症状の１つの発生が、治療の非存在下でのその発生に関して遅延もしくは予防される場合に、該治療により「阻害」される。
【００３３】
記述
本発明は、哺乳動物におけるリンパ増殖症候群を緩和もしくは治療するためのＯ−アルキル化ラパマイシン誘導体の使用方法に関する。本明細書に記述される方法を使用して緩和もしくは阻害することができるリンパ増殖症候群は、移植後リンパ増殖症候群（ＰＴＬＤ）、リンパ腫および他の障害を包含する。本方法は、障害を阻害するのに十分な量のＯ−アルキル化ラパマイシン誘導体を哺乳動物に投与することを含んで成る。リンパ増殖症候群および移植片拒絶の双方に苦しめられる患者において、該症候群および移植片拒絶の双方を緩和もしくは阻害するのに十分な量の誘導体を投与することができる。例えば、移植片（すなわち移植された組織もしくは器官）の拒絶およびＰＴＬＤの双方を同時に緩和することができる。
【００３４】
ＰＴＬＤは、ポリクローン性異型リンパ組織過形成からモノクローナル性の明白に悪性のＢ細胞リンパ腫までの範囲にわたる広範なスペクトルのリンパ増殖症候群を含んで成る。こうした障害の例は当該技術分野で記述されており（例えば、Ｍｏｒｒｉｓｏｎら、１
９９４、Ａｍ．Ｊ．Ｍｅｄ．９７：１４−２４；Ｗａｒｎｋｅら、１９９５、ＡＦＩＰ  Ｆａｓｃｉｃｌｅ  １４：５３１−５３５；Ｃｕｒｔｉｓら、１９９９、Ｂｌｏｏｄ  ９４：２２０８−２２１６；Ｈａｒｒｉｓら、１９９７、Ｓｅｍｉｎ．Ｄｉａｇｎ．Ｐａｔｈ．１４：８−１４）、そして当業者により同定することができる。
【００３５】
本明細書に記述される方法が有用であるリンパ増殖症候群の一分類は、エプスタイン−バーウイルス（ＥＢＶ）によるリンパ球の感染を特徴とする障害である。ＥＢＶに感染したリンパ球の増殖は、免疫抑制療法の頻繁な合併症であり、そして、従って、ときに移植片拒絶の予防、癌に関係した化学療法もしくは他の免疫抑制性の医学的介入に関連した免疫抑制の間に起こる。さらに、ＥＢＶに感染したリンパ球の増殖は、ＡＩＤＳもしくは他の免疫障害に苦しめられる患者のような免疫無防備状態の患者で加速される可能性がある。本明細書に記述されるＯ−アルキル化ラパマイシン誘導体は、これらの他の免疫系に影響を及ぼす障害もしくは治療の１つの治療の前、後もしくは間に使用することができる。例えば、免疫抑制療法を受けるはずである患者に、免疫抑制療法の間のリンパ球の増殖を阻害もしくは予防するために、最初に（すなわち数分、数時間、数日もしくは数週間前に）１種もしくはそれ以上のＯ−アルキル化ラパマイシン誘導体（ラパマイシンを包含する）を投与することができる。１種もしくはそれ以上のＯ−アルキル化ラパマイシン誘導体（ラパマイシンを包含する）は、治療の間のリンパ球の増殖を低下もしくは予防するために、免疫抑制療法の経過の間に共投与（すなわち、単一の組成物中で、または時間が緊密にもしくは交互に投与される別個の組成物中で）することができる。誘導体（１種もしくは複数）は、もしあるとしても治療の前に投与される同一のもの（１種もしくは複数）である必要はない。同様に、１種もしくはそれ以上のＯ−アルキル化ラパマイシン誘導体（ラパマイシンを包含する）はまた（もしくは代わりに）、治療後のリンパ球増殖およびそれに伴う症状を緩和、阻害もしくは予防するために、免疫抑制療法を受けた患者に投与することもできる。
【００３６】
本発明の範囲内に包含される特定の一方法は、ヒトの身体中もしくは身体上への組織（すなわち同種移植片もしくは異種移植片）の移植前にヒトにＳＤＺ  ＲＡＤを投与することを含んで成る。こうした投与は、移植の前、間もしくは後、またはこれらのいずれかの組み合わせで起こることができる。例として、ＳＤＺ  ＲＡＤは、同種異系の腎移植片を受領する前、間および後にヒト患者に投与することができる。移植片の他の例は、同種異系の心、腎および肝移植片、心臓弁、血管移植片、皮膚移植片、硬膜移植片、心膜移植片、軟骨移植片および埋没物、ならびに異種移植片を包含する。
【００３７】
組織移植に関連する可能性がある（しかししばしば関連しない）リンパ増殖症候群の別の型は、リンパ腫およびリンパ性白血病を包含するリンパ腺癌である。リンパ性白血病は急性および慢性リンパ性白血病のような障害を包含する。リンパ腫はリンパ球増殖を特徴とする広範な癌を包含する。リンパ腫の例は、ＡＩＤＳ関連リンパ腫、ホジキンリンパ腫（ときにホジキン病と呼称される）、非ホジキンリンパ腫、バーキットリンパ腫、びまん性大細胞型リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫および皮膚Ｔ細胞リンパ腫を包含する。
【００３８】
患者が疾患と診断されているか疾患の症状を表しているかに関係なく、とりわけ患者が免疫抑制療法を受けることを期待される場合、もしくは患者が免疫を危うくする障害を発症する特定の危険にさらされている場合は、ＥＢＶに感染したリンパ球をもつ患者にとって、リンパ球増殖を阻害することが望ましい可能性がある。こうした患者は、該患者からリンパ球を単離すること、およびそれらのリンパ球中のＥＢＶゲノムの全部もしくは一部の存在もしくは非存在を評価することにより同定することができる。ＥＢＶが検出される場合、ラパマイシンもしくはＯ−アルキル化ラパマイシン誘導体の投与を指示することができる。
【００３９】
リンパ増殖症候群を阻害もしくは緩和するための本明細書に記述される方法は、哺乳動物にラパマイシンもしくはＯ−アルキル化ラパマイシン誘導体を投与することを含んで成る。該化合物が投与される正確な形態は決定的に重要でなく、多数の製薬学的組成物、投薬形態、ならびに製薬学的に許容できる担体および賦形剤が、当該技術分野で既知である。哺乳動物に投与される製剤は、唯一の有効成分としてラパマイシン誘導体を含有することができるか、または、それは１種もしくはそれ以上の他の有効成分（例えば、アザチオプリン、ミコフェノール酸モフェティルのようなミコフェノール酸、ＲｈＯ（Ｄ）免疫グロブリン、シクロスポリン、タクロリムス、シスプラチン、シクロホスファミドおよびレフルノミドのような免疫抑制剤）と混合することができる。
【００４０】
本発明は、有効成分として１種もしくはそれ以上のＯ−アルキル化ラパマイシン誘導体（ラパマイシンを包含する）を含んで成る医薬および製薬学的組成物の製造法および使用を包含する。こうした製薬学的組成物は、被験体への投与に適する形態の有効成分単独から成ってよいか、あるいは、製薬学的組成物は、有効成分および１種もしくはそれ以上の製薬学的に許容できる担体、１種もしくはそれ以上の付加的成分、またはこれらのなんらかの組み合わせを含んでよい。これらの製薬学的組成物の１つの被験体への投与は、本開示の別の場所で記述されるとおり、被験体におけるリンパ球の増殖を阻害するために有用である。有効成分は、当該技術分野で公知であるとおり、生理学的に許容できる陽イオンもしくは陰イオンとの組み合わせでのような生理学的に許容できるエステルもしくは塩の形態で、製薬学的組成物中に存在してよい。
【００４１】
本明細書に記述される製薬学的組成物の製剤は、既知のもしくは薬理学の技術分野で今後開発されるいずれの方法により製造されてもよい。一般に、こうした準備方法は、有効成分を担体または１種もしくはそれ以上の他の付属成分との連合にすること、およびその後、必要なもしくは望ましい場合は、生成物を所望の単独もしくは複数用量単位に造形もしくは包装することの段階を包含する。
【００４２】
本明細書に提供される製薬学的組成物の記述は、原則として、ヒトへの医師の処方による投与に適する製薬学的組成物に向けられるとは言え、こうした組成物が一般に他の哺乳動物への投与に適することが、当業者により理解されるであろう。該組成物を動物への投与に適するようにするための、ヒトへの投与に適する製薬学的組成物の改変は十分に理解されており、また、普通に熟練した家畜薬理学者は、もしあるとしても単に普通の実験だけを用いてこうした改変を設計かつ実施することができる。本発明の製薬学的組成物の投与が企図される被験者は、限定されるものでないがヒトおよび他の霊長類、ならびに畜牛、ブタ、ウマ、ヒツジ、ネコおよびイヌのような商業的に関連性のある哺乳動物を包含する哺乳動物を挙げることができる。
【００４３】
本発明の方法で有用である製薬学的組成物は、経口、直腸、膣、非経口、局所、肺、鼻内、口腔内、眼もしくは別の投与経路に適する製剤で製造、包装もしくは販売してよいとは言え、非経口投与が、リンパ増殖症候群を緩和、阻害もしくは予防する目的上のラパマイシン誘導体の最も容易に有効な投与方法であることが企図される。
【００４４】
本発明の製薬学的組成物は、バルクで、単一の単位用量として、もしくは複数の単一の単位用量として製造、包装もしくは販売してよい。本明細書で使用されるところの「単位用量」は、予め決められた量の有効成分を含んで成る別個の量の製薬学的組成物である。有効成分の量は、一般に、被験体に投与されるとみられる有効成分の投薬量、または例えばこうした投薬量の１／２もしくは１／３のようなこうした投薬量の便宜的な一部分に等しい。
【００４５】
本発明の製薬学的組成物中の有効成分、製薬学的に許容できる担体、およびいかなる付
加的成分の相対量も、治療される被験体の正体、大きさおよび病状に依存して、ならびに該組成物が投与されるはずである経路にさらに依存して、変動することができる。例として、該組成物は０．１％と１００％（ｗ／ｗ）の間の有効成分を含んでよい。本発明の製薬学的組成物の単位用量は、一般に約５０マイクログラムから約５０ミリグラムまでの有効成分を含むことができ、また、好ましくは約５００マイクログラムから約１０ミリグラムまでの有効成分を含んで成る。一般に、Ｏ−アルキル化ラパマイシン誘導体は、ラパマイシンの現在使用される量（例えば、単位用量あたり１〜５ミリグラム）と同一の桁の量で使用することができる。
【００４６】
有効成分に加え、本発明の製薬学的組成物は、１種もしくはそれ以上の付加的な製薬学的有効成分をさらに含んでよい。とりわけ企図される付加的薬剤は、アザチオプリン、ミコフェノール酸モフェティルのようなミコフェノール酸、ＲｈＯ（Ｄ）免疫グロブリン、シクロスポリン、タクロリムス、シスプラチン、シクロホスファミドおよびレフルノミドのような免疫抑制剤を包含する。
【００４７】
本発明の製薬学的組成物の制御放出もしくは徐放性製剤は、慣習的技術を使用して作成してよい。
【００４８】
非経口投与に適する製薬学的組成物の製剤は、滅菌水もしくは滅菌の等張の生理学的食塩水のような製薬学的に許容できる担体と組み合わせられた有効成分を含んで成る。こうした製剤は、ボーラス投与もしくは連続投与に適する形態で製造、包装もしくは販売してよい。注入可能な製剤は、アンプル、保存剤を含有する複数用量の容器、または自動注入もしくは医師による注入のための単回使用装置でのような単位投与剤形で製造、包装もしくは販売してよい。非経口投与のための製剤は、限定されるものでないが、懸濁剤、溶液、油性もしくは水性ベヒクル中の乳剤、パスタ剤、および埋込可能な徐放性もしくは生物分解可能な製剤を挙げることができる。こうした製剤は、限定されるものでないが懸濁化剤、安定剤もしくは分散剤を挙げることができる１種もしくはそれ以上の付加的成分をさらに含んでよい。非経口投与のための製剤の一態様において、有効成分は、再構成される組成物の非経口投与前の適するベヒクル（例えば滅菌の発熱性物質を含まない水）との再構成のための乾燥した（すなわち粉末もしくは顆粒の）形態で提供される。
【００４９】
該製薬学的組成物は、滅菌の注入可能な水性もしくは油性の懸濁剤もしくは溶液の形態で製造、包装もしくは販売してよい。本懸濁剤もしくは溶液は既知技術に従って処方してよく、また、有効成分に加えて、本明細書に記述される分散剤、湿潤剤もしくは懸濁化剤のような付加的成分を含んでよい。こうした滅菌の注入可能な製剤は、例えば水もしくは１，３−ブタンジオールのような非毒性の非経口で許容できる希釈剤もしくは溶媒を使用して製造してよい。他の許容できる希釈剤および溶媒は、限定されるものでないがリンゲル液、等張の塩化ナトリウム溶液、および合成のモノもしくはジグリセリドのような不揮発性油を挙げることができる。有用である他の非経口で投与可能な製剤は、微晶質の形態で、リポソーム製剤中に、もしくは生物分解可能なポリマー系の成分として有効成分を含んで成るものを包含する。徐放性もしくは埋込のための組成物は、乳剤、イオン交換樹脂、乏しく可溶性のポリマーもしくは乏しく可溶性の塩のような、製薬学的に許容できるポリマー性もしくは疎水性物質を含んでよい。
【００５０】
本明細書で使用されるところの「付加的成分」は、限定されるものでないが、以下、すなわち、賦形剤；界面活性剤；分散剤；不活性希釈剤；顆粒化および崩壊剤；結合剤；滑沢剤；甘味料；着香料；着色料；保存剤；ゼラチンのような生理学的に分解可能な組成物；水性のベヒクルおよび溶媒；油性のベヒクルおよび溶媒；懸濁化剤；分散もしくは湿潤剤；乳化剤、緩和剤；緩衝剤；塩；増粘剤；増量剤；乳化剤；抗酸化剤；抗生物質；抗真菌剤；安定剤；ならびに、製薬学的に許容できるポリマー性もしくは疎水性物質の１種も
しくはそれ以上を挙げることができる。本発明の製薬学的組成物中に包含してよい他の「付加的成分」は当該技術分野で既知であり、かつ、例えば、Ｇｅｎａｒｏ編、１９８５、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、マック  パブリッシング  カンパニー（Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．）、フィラデルフィア州イーストン（引用することにより本明細書に組み込まれる）に記述される。
【００５１】
本発明の製薬学的組成物は、被験者に１日あたり体重１キログラムあたり１０マイクログラムと１日あたり体重１キログラムあたり１．５ミリグラムとの間の用量を送達するように、および、また、好ましくは１日あたり体重１キログラムあたり２０と７００マイクログラムとの間の用量を送達するように投与してよい。成体のヒトについては、１日あたり０．１ないし５０ミリグラムのラパマイシンもしくはＯ−アルキル化ラパマイシン誘導体、および好ましくは１日あたり１ないし１０ミリグラムの有効成分の投与が企図される。
【００５２】
普通に熟練した医師もしくは獣医師は、被験体におけるリンパ増殖症候群を緩和もしくは阻害するのに有効な量の化合物を容易に決定かつ処方することができることが理解される。そうした処置において、医師もしくは獣医師は、例えば、最初に比較的低用量で処方してよく、その後適切な応答が得られるまで用量を増大させる。しかしながら、いずれかの特定の被験体に特定の用量レベルは、使用される特定の化合物の活性、被験体の齢、体重、全身的健康状態、性別および食餌、投与の時間、投与経路、排泄の速度、いずれかの薬物の組み合わせ、ならびに治療もしくは阻害されているリンパ増殖症候群の重症度を包含する多様な因子に依存することができることがさらに理解される。
【００５３】
本発明の別の局面は、本発明の製薬学的組成物および説明書資材を含んで成るキットに関する。本明細書で使用されるところの「説明書資材」は、リンパ球の増殖を阻害する、またはリンパ増殖症候群を緩和もしくは阻害するための本発明の製薬学的組成物の有用性を伝達するのに使用される表現の刊行物、録音、図もしくはいずれかの他の媒体を包含する。説明書資材は、例えば、本発明の製薬学的組成物の適切な用量もまた記述することができる。本発明のキットの説明書資材は、例えば、本発明の製薬学的組成物を含有する容器に添付してよいか、もしくは、該製薬学的組成物を含有する容器と一緒に発送してよい。あるいは、説明書資材を、該説明書資材および製薬学的組成物が受領者により協調的に使用されるという意図をもって容器と別個に発送することができる。
【００５４】
別の態様において、本発明は、哺乳動物における腫瘍の確立を阻害するためのＳＤＺ  ＲＡＤのようなＯ−アルキル化ラパマイシン誘導体もしくはラパマイシンの使用方法を包含する。本方法は、第一の腫瘍を有する哺乳動物に、該哺乳動物中での第一の腫瘍由来の第二の腫瘍の確立を阻害するのに十分な量のラパマイシン誘導体を投与することを必要とする。本目的上Ｏ−アルキル化ラパマイシン誘導体で治療されるべき哺乳動物は、脳、腎、肝、乳房もしくは卵巣の腫瘍のような実質的にいかなる型の第一の腫瘍も有することができる。ＳＤＺ  ＲＡＤのようなＯ−アルキル化ラパマイシン誘導体により表されることができる他の代表的抗腫瘍活性は、腫瘍形成の阻害、転移の阻害、腫瘍細胞の成長の阻害、腫瘍細胞の増殖の阻害、および腫瘍細胞の死の誘導を包含する。
【００５５】
代替の態様において、本発明は、本化合物により表される抗増殖、抗腫瘍および免疫抑制活性に関する生物学的過程に影響を及ぼしかつ治療応答を導き出すための、ＳＤＺ  ＲＡＤのようなＯ−アルキル化ラパマイシン誘導体の使用方法に関する。これらの方法は、例えば、アポトーシスを誘導するため、細胞増殖を阻害するため、または抗腫瘍、抗ＰＴＬＤもしくは免疫抑制の目的上、該誘導体を使用することを包含する。従って、該誘導体は、これらの過程を伴う障害を阻害する（すなわち、改善、予防、または重症度、頻度、速度もしくは程度を低下する）のに使用することができる。有効な抗増殖剤として、Ｏ−
アルキル化ラパマイシン誘導体は、過剰もしくは別の方法で不適切な細胞の増殖を特徴とする、実質的にいかなる障害も緩和するために有用である可能性がある。障害の例は、自己免疫疾患、アレルギー、他の超免疫障害、アテローム硬化症を包含する。
【００５６】
本発明は、哺乳動物におけるリンパ増殖症候群を緩和もしくは阻害するために有用である薬剤の同定方法を包含する。本方法は、Ｂリンパ球をＥＢＶに曝露することによりそれを形質転換することを含んで成る。こうした曝露は標準的な試薬および技術を使用し、かつ、リンパ球を形質転換することができるＥＢＶのいずれかの入手可能な株を使用して実施することができる。本方法に有用なＢリンパ球は、例えばヒトドナーから得ることができる。形質転換されたＢリンパ球を、ＳＣＩＤマウスのような重症の複合免疫不全を有するマウスに注入する。形質転換されたリンパ球は、マウスに腹腔内でもしくは皮下に注入することができる。好ましくは、形質転換されたＢリンパ球の注入は皮下である。抗リンパ増殖活性を潜在的に表す薬剤もまた該マウスに投与する。該マウスにおける腫瘍の成長を、約２１日間のような選択された時間の期間の間監視する。腫瘍の成長もしくは発生の阻害は、該薬剤が抗リンパ増殖活性を表すことの表示である。
【００５７】
本発明の一態様において、潜在的な抗リンパ増殖剤を、形質転換されたＢリンパ球の注入前にＳＣＩＤマウスに投与する。例として、ＳＤＺ  ＲＡＤのような薬剤を、形質転換されたＢリンパ球をマウスに注入する前に最低約１０日間、および好ましくは最低約３日間、１日あたり１キログラムあたり５ミリグラムの用量でＳＣＩＤマウスに投与することができる。
【００５８】
本方法の別の態様において、潜在的な抗リンパ増殖剤を、形質転換されたＢリンパ球の注入およびマウス中での生じる腫瘍の発生後にＳＣＩＤマウスに投与する。本態様において、形質転換されたＢリンパ球の注入の後に、マウス中での生じる腫瘍の成長を監視する最低約２１日、およびほぼ第２１日後に開始するマウスへの潜在的抗リンパ増殖剤の投与が続く。例として、ＳＤＺ  ＲＡＤのような薬剤を、注入後約第２１日に開始して１日あたり１キログラムあたり５ミリグラムの用量でＳＣＩＤマウスに投与することができる。
【００５９】
本明細書に記述される方法を使用して、抗リンパ増殖活性を有するとしての薬剤の評価は、注入されたマウスにおける腫瘍の退縮（すなわち、該薬剤での治療の開始に関して腫瘍の大きさの低下）、腫瘍の根絶、および第二の腫瘍の非存在の証拠に基づくことができる。同様に、ある薬剤は、注入されたマウスが、腫瘍の成長（すなわち腫瘍の大きさの増大）もしくは第二の腫瘍の発生またはその双方を表す場合に、実質的な抗リンパ増殖活性を有しない。
【００６０】
他の態様において、抗リンパ増殖剤の本明細書に記述される同定方法はまた、哺乳動物における腫瘍の確立を阻害することが可能な（例えば、リンパ腺腫瘍の拡がりもしくは転移を阻害することが可能な）薬剤を同定するのにも有用である。例えば、哺乳動物中での腫瘍の確立を阻害する薬剤は、Ｂリンパ球をＥＰＶに曝露すること（その結果、形質転換されたＢリンパ球が生成される）、ＳＣＩＤマウスのような重症の複合免疫不全を有するマウスに該薬剤を投与すること、形質転換されたＢリンパ球を該マウスに注入すること、および選択された期間（例えば最低約２１日）の間、マウスにおける腫瘍の成長を監視することにより同定することができる。腫瘍の確立を阻害することが可能な薬剤は、注入されたマウス中での腫瘍の退宿、腫瘍の根絶および第二の腫瘍の非存在の１種もしくはそれ以上を引き起こすことができる。腫瘍の確立を阻害することが可能でない薬剤は、腫瘍の成長および二次的腫瘍の発生に関して、注入されたマウスに対する観察可能な影響を有しないことができる。
【００６１】
上述された方法に関して、腫瘍の成長もしくは退縮の測定、Ｂリンパ球の注入、および
潜在的抗ＰＴＬＤ薬剤を試験するための適切な投薬量の決定のための手順は、免疫薬理学の当業者の能力内にある。本開示を読みかつ本明細書に提供される実施例１の詳細を吟味した結果、抗リンパ増殖活性を表すもしくは腫瘍の確立を阻害することが可能である化合物を同定するために本発明の方法を使用することは、当業者にとって単純な事柄である。
【００６２】
本発明は今や、以下の実施例に関して記述される。これらの実施例は具体的説明のみの目的上提供され、また、本発明はこれらの実施例に制限されないが、しかしむしろ、本明細書に提供される教示の結果として明白である全部の変形物を包含する。
【実施例】
【００６３】
実施例１
ＳＤＺ  ＲＡＤは、インビトロおよびインビボでのヒトのＥＢＶで形質転換されたＢリンパ球の成長を阻害する。
本実施例に提示される実験は、ＳＤＺ  ＲＡＤが強力な抗拒絶、抗リンパ増殖剤であり、かつ、移植後リンパ増殖症候群（ＰＴＬＤ）の阻害および治療への新規アプローチを表すことを立証する。
【００６４】
本実施例に提示される実験で使用された材料および方法を今や記述する。
【００６５】
本研究で使用された大部分の細胞系は、末梢血単核球（ＰＢＭＣ）のＥＢＶへのインビトロ感染により得られたリンパ芽球状Ｂ細胞系であった。細胞系Ａ１およびＡ２Ｄ６は正常な健康な個体から得た。細胞系１５Ａおよび２０Ａは、モノクローナル性のコールドのアグルチニンを用いて低悪性度Ｂ細胞リンパ腫を伴う２名の異なる患者から得た（Ｓｉｌｂｅｒｓｔｅｉｎら、１９９１、Ｂｌｏｏｄ  ７８：２３７２−２３８６）。双方の系統は、患者の血清中で見出されるコールドのアグルチニンと同一の特異性をもつコールドのアグルチニンを分泌した（Ｓｉｌｂｅｒｓｔｅｉｎら、１９９１、Ｂｌｏｏｄ  ７８：２３７２−２３８６）。さらに、２０Ａ細胞系は低悪性度リンパ腫でみられる細胞発生の異常を表した（４８、ＸＸ、＋３、＋１２、Ｓｉｌｂｅｒｓｔｅｉｎら、１９９１、Ｂｌｏｏｄ  ７８：２３７２−２３８６による）。ＬＣＬ  Ｂ細胞系は進行性皮膚Ｔ細胞リンパ増殖症候群を伴う患者から得た（Ｚｈａｎｇら、１９９６、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９３：９１４８−９１５３）。ＢＣ−１は腹膜滲出液Ｂ細胞リンパ腫（ＰＥＬ）由来であり、そして、ＥＢＶに加えて、ＨＨＳＶ８ウイルスをもつ（Ｃｅｓａｒｍａｎら、１９９５、Ｂｌｏｏｄ  ８６：２７０８−２７１４）。インビトロ成長阻害アッセイで対照として使用された他の３細胞系は、ＨＴＬＶ−Ｉ（＋）Ｔ細胞系ＡＴＬ−２（Ｍａｅｄａら、１９８５、Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１６２：２１６９−２１７４）；Ｃ１０ＭＪ２（Ｐｏｐｏｖｉｃら、１９８３、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２１９：８５６−８５９）；および、成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫（ＡＴＬＬ）を伴う患者由来のＨＵＴ１０２Ｂ（Ｐｏｉｅｓｃｚ、１９８０、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ７７：７４１５−７４１９；Ｂｕｎｎら、１９９６、Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｕｐｐｌ  ２４：１２−２３）であった。それらはわれわれにより、ＳＤＺ  ＲＡＤおよび関係した免疫抑制性マクロライド、ラパマイシンに対し非応答性であることが示された（Ｚｈａｎｇら、１９９９、Ｌｅｕｋｅｍｉａ  Ｒｅｓ．２３：３７３−３８４）。全部の細胞系を、標準培地、すなわち１０％（ｖ／ｖ）熱不活性化ウシ胎児血清（バイオウィッタカー（ＢｉｏＷｈｉｔｔａｋｅｒ）、メリーランド州ウォーカーズビル）、１％ペニシリン／ストレプトマイシン／フンギゾン混合物（ギブコ  ＢＲＬ（Ｇｉｂｃｏ  ＢＲＬ））および２ミリモル濃度のＬ−グルタミン（ギブコ  ＢＲＬ（Ｇｉｂｃｏ  ＢＲＬ））を補充されたＲＰＭＩ培地１６４０（ギブコ  ＢＲＬ（Ｇｉｂｃｏ  ＢＲＬ）、ニューヨーク州グランドアイランド）中で、５％ＣＯ２を含有する雰囲気中、３７℃の加湿されたインキュベーター中で維持した。
【００６６】
ＳＤＺ  ＲＡＤによるインビトロの細胞の成長の阻害を評価するためのアッセイを、記述されたとおり（Ｚｈａｎｇら、１９９９、Ｌｅｕｋｅｍｉａ  Ｒｅｓ．２３：３７３−３８４；Ｚｈａｎｇら、１９９６、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９３：９１４８−９１５３）実施した。簡潔には、細胞系を、多様な濃度のＳＤＺ  ＲＡＤ（ノバルティス  ファーマ（Ｎｏｖａｒｔｉｓ  Ｐｈａｒｍａ）、バーゼル）の存在下にウェルあたり２×１０４個の細胞で三重で３２時間培養した。０．５マイクロキュリーの３Ｈ−チミジン（ニュー  イングランド  ニュークリア（Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｎｕｃｌｅａｒ）、マサチューセッツ州ボストン）を細胞に適用しかつ細胞を次の１８時間培養した後に、細胞中への放射性同位体の取込みを測定した。増殖アッセイの結果は、三重の培養物の平均の放射活性として表した。三重内の標準偏差は＜１５％であった。
【００６７】
細胞周期の阻害およびアポトーシスの検出。
検査されるべき細胞系を、数種の濃度のＳＤＺ  ＲＡＤ（０ないし１０ナノモル濃度）とともに２４〜４８時間培養した。細胞を、ＤＰＢＳ、および３％  ＰＥＧ  ６０００、１ミリリットルあたり５０マイクログラムのＤＮＡ蛍光色素、ヨウ化プロピジウム（ＰＩ；カルバイオケム（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ）、カリフォルニア州サンディエゴ）、記述されたようなアネキシン  Ｖ−ＦＩＴＣ（Ｄｏｕｇｌａｓら、１９９８、Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ  ３２：５７−６５）０．１％（ｖ／ｖ）トリトン［ＴＲＩＴＯＮ］（商標）Ｘ（シグマ（Ｓｉｇｍａ）、ミズーリ州セントルイス）、４ミリモル濃度のクエン酸緩衝液ｐＨ７．８、および１ミリリットルあたり３６０単位のＲＮアーゼＡ（ワーシントン  バイオケミカルズ（Ｗｏｒｔｈｉｎｇｔｏｎ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ）、ニュージャージー州フリーホールド）を含有する染色溶液（ｐＨ７．２）で、３７Ｃで３０分間洗浄した。次に、塩溶液ｐＨ７．２（３％  ｗ／ｖ  ＰＥＧ  ６０００、１ミリリットルあたり５０マイクログラムのＰＩ、０．１％  ｖ／ｖ  トリトン［ＴＲＩＴＯＮ］（商標）Ｘおよび０．４モル濃度のＮａＣｌ）を添加し、そして細胞を、記述されたとおり（Ｄｏｕｇｌａｓら、１９９８、Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ  ３２：５７−６５；Ｋａｗａｍａｔａら、１９９８、Ｂｌｏｏｄ  ９１：５６１−５６９；Ｐｅｐｐｅｒら、１９９８、Ｌｅｕｋ．Ｒｅｓ．２２：４３９−４４４）、フローサイトメトリー分析を実施する前に４℃で暗所で１時間インキュベートした。
【００６８】
５ないし７週齢の免疫不全ＳＣＩＤマウス（Ｃ．Ｂ−１７およびＩＣＲ）をタコニック（Ｔａｃｏｎｉｃ）（ニュージャージー州ジャーマンタウン）から購入し、そして層流空気流設備中、発熱性物質を含まない条件下で、ペンシルバニア大学動物施設（ｔｈｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ  Ａｎｉｍａｌ  Ｆａｃｉｌｉｔｙ）で収容し、かつ、滅菌の飼料および水を供給した。毒性試験においては、５−７週齢の近交系ＢＡＬＢ／ｃマウス（タコニック（Ｔａｃｏｎｉｃ））を、ＳＣＩＤマウスに加えて使用した。
【００６９】
異種移植された腫瘍の確立および接種は記述された（Ｄｏｕｇｌａｓら、１９９８、Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ  ３２：５７−６５；Ｋａｗａｍａｔａら、１９９８、Ｂｌｏｏｄ  ９１：５６１−５６９；Ｐｅｐｐｅｒら、１９９８、Ｌｅｕｋ．Ｒｅｓ．２２：４３９−４４４）とおり実施した。マクロファージおよびＮＫ細胞を枯渇させかつ腫瘍の生着を高めるために、ＳＣＩＤマウスに、ヒトＥＢＶ＋  Ｂ細胞系の埋込４日前に１キログラムあたり３０〜４５ミリグラムのエトポシド（ベッドフォード  ラボラトリーズ（Ｂｅｄｆｏｒｄ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）、オハイオ州ベッドフォード）を腹腔内に注入した（Ｖｉｓｏｎｎｅａｕら、１９９８、Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈ．１５２：１２９９−１３１１）。使用された各系統の１，０００万個の細胞を、２００マイクロリットルのダルベッコリン酸緩衝生理的食塩水（ＤＰＢＳ；バイオウィッタカー（ＢｉｏＷｈｉｔｔａｋｅｒ）、メリーランド州ウォーカーズビル）中で、腹腔内もしくは皮下のいずれかでマウスに接種した。複水もしくは触知できる皮下腫瘍が、細胞注入３〜５週間後に発生した。
【００７０】
腫瘍の治療および成長の阻害の実験は、確立した皮下腫瘍の断片を使用して実施した（Ｐａｓｑｕａｌｕｃｃｉら、１９９５、Ｂｌｏｏｄ  ８５：２１３９−２１４６、Ｖｉｓｏｎｎｅａｕら、１９９８、Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈ．１５２：１２９９−１３１１）。本目的上、マウスを、１キログラムあたり１００ミリグラムの腹腔内注入によりケタラール［ＫＥＴＡＬＡＲ］（商標）（ケタミン、パーク−デービス（Ｐａｒｋｅ−Ｄａｖｉｓ）、ニュージャージー州モリスプレインズ）で麻酔した。次に、原発性腫瘍を無菌的に取り出し、そして壊死、脂肪および結合組織から開放し、そしてだいたい等しい大きさの小片に分割し、かつ、マウスあたり３〜４片を皮下に注入した。ＳＤＺ  ＲＡＤでの確立した腫瘍の治療は、腫瘍が直径５ミリメートルに達した場合に開始した。成長の阻害の実験においては、治療を腫瘍埋込３日前に開始した。全実験における腫瘍体積は、等式：体積＝０．４ａｂ２（式中、ａおよびｂはそれぞれ腫瘍の長および短直径を表す）から決定した。移植されたマウスを、２ヶ月までの期間の間、腫瘍の成長について監視した。１キログラムあたり５ミリグラムのＳＤＺ  ＲＡＤを、記述された（Ｓｃｈｕｕｒｍａｎら、１９９７、Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  ６４：３２−５；Ｓｃｈｕｌｅｒら  １９９７、Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  ６４：３６−４２）とおり胃管栄養法により１日１回投与した。
【００７１】
マウスを、薬物毒性試験の第２９日、腫瘍成長阻害試験の第４０〜５５日、または腫瘍がおよそ直径２センチメートルに到達した場合、または皮膚の潰瘍、重症の呼吸困難、衰弱もしくは嗜眠の兆候が出現した場合に、ホラン［ＦＯＲＡＮＥ］（商標）（イソフルラン、オーメダ（Ｏｈｍｅｄａ）、ニュージャージー州リバティプレイス）への曝露により殺した。完全な剖検を、それらの出現に関係なく試験の終了時に全部のマウスで実施した。腫瘍および内部器官（脾、肝、肺、心、腎、小腸および大腸、骨髄のための大腿骨）を１０％（ｖ／ｖ）ホルマリン中で固定し、パラフィンに埋込み、０．４ミクロンの切片に切断し、スライドガラスに移し、そしてヘマトキシリンおよびエオシンで染色した。代表的な腫瘍断片を、商業的に入手可能な試薬（リサーチ  ジェネティックス（Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）、アラバマ州ハンツビル）、抗体すなわち抗ＣＤ２０（Ｌ−２６）およびＬＭＰ−１（双方はダコー（ＤＡＫＯ）、カリフォルニア州カルピンテリアから）ならびにＫｉ６７（ｍｉｂ１；イムノテック（Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈ）、メーン州ウェストブルック）を使用する、標準的ストレプトアビジン−ビオチン複合体技術により免疫組織化学的に染色した。ＥＢＶにコードされるＲＮＡ（ＥＢＥＲ−１）、そして商業的に入手可能な試薬を使用して検出した。
【００７２】
本実施例で提示される実験の結果を今や記述する。
【００７３】
ＳＤＺ  ＲＡＤはインビトロでＥＢＶ＋  Ｂ細胞の成長を阻害する
ＳＤＺ  ＲＡＤがＰＴＬＤを模倣する細胞の増殖を阻害することができるかどうかを決定するために、６種の異なるＥＢＶ＋  Ｂ細胞系を、多様な濃度の薬物の存在下にインビトロで培養した。ＳＤＺ  ＲＡＤに抵抗性の３種のＨＴＬＶ−Ｉ＋  Ｔ細胞系（Ｚｈａｎｇら、１９９９、Ｌｅｕｋｅｍｉａ  Ｒｅｓ．、２３：３７３−３８４）を対照として使用した。図１に示されるとおり、全部のＰＴＬＤ様ＥＢＶ＋  Ｂ細胞系はＳＤＺ  ＲＡＤに非常に感受性であった。約１ナノモル濃度程度のＳＤＺ  ＲＡＤの用量が、全細胞系で成長の６０〜９５％阻害を生じさせた。本結果は、刺激された正常なＴ細胞の阻害に匹敵した（Ｓｃｈｕｕｒｍａｎら、１９９７、Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  ６４：３２−５；Ｂｏｈｌｅｒら、１９９８、Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ．Ｐｒｏｃ．３０：２１９５−２１９７）。応答の程度における若干の微妙な差異が、ＥＢＶ＋  Ｂ細胞系の間で示された。Ｂ細胞リンパ腫を伴う患者由来の、ならびに従って進行した形態のＰＴＬＤにより類似する系統（１５Ａ、２０ＡおよびＢＣ−１；材料および方法を参照されたい）は、より低い程度の阻害（８０〜９０％）を示す傾向があった。正常なＢ細胞から得られた細胞系
（すなわち、より少なく進行した型のＰＴＬＤを模倣する）はより大きく阻害された（９０〜１００％）。該細胞系に、０〜１０ナノモル濃度のＳＤＺ  ＲＡＤとともにの３２時間培養後に、トリチウム化チミジンを１８時間適用した。
【００７４】
ＳＤＺ  ＲＡＤはＥＢＶ＋  Ｂ細胞における細胞周期の進行を封鎖する
ラパマイシン、およびおそらくＳＤＺ  ＲＡＤのようなＯ−アルキル化ラパマイシン誘導体は、正常なＴ細胞において細胞周期の進行を初期段階で封鎖する（Ｔｅｒａｄａら、１９９３、Ｊ．Ｃｅｌｌ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．１５４：７−１５；Ｆｌａｎａｇａｎら、１９９３、Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．６９６：３１−３７）。チミジンの取込みを測定したわれわれの細胞の成長の阻害のデータ（図１）は、ＳＤＺ  ＲＡＤがＰＴＬＤ様Ｂ細胞中で細胞周期の進行を阻害することを示唆した。図２に示されるとおり、ＳＤＺ
ＲＡＤは、検討された全４種のＰＴＬＤ様Ｂ細胞系、すなわち、２０Ａ、Ａ１、Ａ２Ｄ６およびＬＣＬにおいて、早期のＧ０／Ｇ１期で細胞周期の進行を著しく阻害した。該効果は薬物用量および細胞系の型に依存性であった。低ＳＤＺ  ＲＡＤ用量（１〜２ナノモル濃度）はＧ０／Ｇ１の細胞のパーセンテージを５〜２５だけ増大させた一方、試験された最高用量（１０ナノモル濃度）は１０〜７０％増大をもたらした。細胞周期のより後期（Ｇ２−ＭおよびＳ）の細胞のパーセンテージは比例して減少した。Ａ１、およびより少ない程度までＡ２Ｄ６細胞系は、ＳＤＺ  ＲＡＤにとりわけ感受性であった。４種のＥＢＶ＋  Ｂ細胞系を、０〜１０ナノモル濃度のＳＤＺ  ＲＡＤとともに４８時間培養し、ヨウ化プロピジウムで標識し、そしてフローサイトメトリーにより分析した。
【００７５】
ＳＤＺ  ＲＡＤはＥＢＶ＋  Ｂ細胞におけるアポトーシスを増大させる
以前の研究は、ラパマイシンにより代表されるような免疫抑制性マクロライドが、他の薬剤により刺激されたアポトーシスを誘導するもしくは高めることができることを示している（Ｇｏｔｔｓｃｈａｌｋら、１９９４、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９１：７３５０−７３５４；Ｍｕｔｈｕｋｋｕｍａｒら、１９９５、Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  ６０：２６４−２７０；Ｓｈｉら、１９９５、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５５：１９８２−１９８８；Ｈｏｓｏｉら、１９９９、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５９：８８６−８９４）。ＳＤＺ  ＲＡＤがＰＴＬＤ様細胞におけるアポトーシス速度に影響を及ぼすかどうかを決定するために、われわれは、２０Ａ、Ａ１、Ａ２Ｄ６細胞系においてフローサイトメトリーによりアネキシンＶのアポトーシスに誘導される表面発現を試験した（図３）。最低のＳＤＺ  ＲＡＤ用量（１ナノモル濃度）でさえ、細胞の成長および細胞周期の阻害のデータに似ている若干の差異を伴い、全細胞系においてアポトーシス細胞のパーセンテージを著しく増大させた。最も感受性のＡ１系統において、ＳＤＺ  ＲＡＤは、アポトーシス細胞の数を１０から１６％までのおよそ６０％の増大をもたらした。Ａ２Ｄ６系統においては、それは１１％の増大に、また、２０Ａ系統においては１２％の増大につながった。最高用量（１０ナノモル濃度）では、ＳＤＺ  ＲＡＤは、Ａ１系統でおよそ２４０％の増大、ならびにＡ２Ｄ６および２０Ａ双方の系統で４５％の増大につながった。
【００７６】
毒性試験
以前の研究は、ラットにおけるＳＤＺ  ＲＡＤの最小有効用量は、ＳＤＺ  ＲＡＤを単独の免疫抑制剤として使用した場合に、腎および心移植モデルにおいて、それぞれ１日あたり体重１キログラムあたり５ミリグラムおよび１日あたり体重１キログラムあたり＞５ミリグラムであったことを示している（Ｓｃｈｕｕｒｍａｎら、１９９７、Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  ６４：３２−５；Ｓｃｈｕｌｅｒら、１９９７、Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  ６４：３６−４２）。ＳＤＺ  ＲＡＤへの長期の曝露が免疫能力のあるおよび免疫不全の双方のマウスに対し非毒性であるかどうかを決定するために、正常なＢＡＬＢ／ｃマウスのコホートを上の用量のＳＤＺ  ＲＡＤで２８日間処理した。１０匹の処理されたおよび５匹の対照の未処理のマウスを本試験で使用した。後に、ヒトＰＴＬＤ
様リンパ腫を移植されかつＳＤＺ  ＲＡＤで５５日まで治療されたＳＣＩＤマウスを評価した。７匹の治療されたおよび５匹の対照の未治療のＳＣＩＤマウスを本実験で評価した。薬物の最終投与を受領した後に、全部のマウスを殺し、そして以下の器官、すなわち肝、脾、腎、小腸、大腸、心、肺および骨髄のための大腿骨を、可能な毒性効果について検討するための組織病理学的評価のために収穫した。
【００７７】
処理されたマウスのいずれも、薬物毒性のいかなる目に見える兆候も示さなかった。成長および体重増加はＳＤＺ  ＲＡＤ処理された群および対照群について同一であった。全部の処理されたおよび未処理のマウスの器官の顕微鏡的評価は、薬物に帰することができた病理学的変化を示さなかった。従って、われわれは、１日あたり体重１キログラムあたり５ミリグラムの用量のＳＤＺ  ＲＡＤへの長期の曝露は、それらの免疫状態に関係なく、処理されたマウスで副作用を有しないと結論する。
【００７８】
ＳＣＩＤマウスにおけるヒトＰＴＬＤ様リンパ腫の異種移植モデルの確立。
これらの実験において、マウスに２種の異なる経路、すなわち腹腔内および皮下を介して、ＥＢＶ＋  Ｂ細胞系を注入した。腹腔内腫瘍モデルにおいて、ＳＣＩＤマウス（１群あたり５匹）に、４種の細胞系、すなわち１５Ａ、２０Ａ、Ａ２Ｄ６およびＢＣ−１からの系統あたり約１０７個の細胞を腹腔内に接種した。２１〜３５日後に、全部のマウスが腹水および衰弱もしくは嗜眠の症状を伴う致死的疾患を発症した。剖検は、腹膜壁、肝、脾および腎を巻き込む広範囲の腫瘍の浸潤を示した。腫瘍の検鏡は、浸潤性の成長パターン、高い有糸分裂率、病巣および単独細胞の壊死、ならびにいくらかの程度の形質球様細胞分化を伴う大細胞型リンパ腫を示した。リンパ腫の病巣は、肺および骨髄のような遠位の器官にもまた存在し、血行性の拡がりを示した。
【００７９】
皮下モデルにおいては、マウス（また１群あたり５匹）に、１５Ａ、２０ＡおよびＡ１系統からの約１０７個の細胞を注入した。２１〜３２日後に、全部のマウスが埋込の部位に腫瘍を発生した。剖検は隣接する骨格筋および皮膚を侵襲する皮下腫瘍を示した。腫瘍の遠位の拡がりの肉眼的証拠は存在しなかった。検鏡は、腹腔内モデルにおけると同一の型の高悪性度リンパ腫を示した。遠位の内部器官、主として肝および肺は、小さい腫瘍病巣を時折表した。これは、皮下リンパ腫が直径最低１．５ｃｍの比較的大きな大きさに達した場合にのみ起こった。免疫組織化学的染色は、腫瘍が埋込まれたヒトＥＢＶ＋  Ｂリンパ球由来であったことを確認した。図４Ａ−Ｄに示される２０Ａ系統の像は、全３種の細胞系の代表的なものである。
【００８０】
事実上全部のリンパ腫細胞がヒトＢ細胞マーカーＣＤ２０について陽性であった。大部分（５０〜８０％）は、それらの高い増殖速度と一致して、細胞周期に関係したＫｉ−６７抗原について陽性であった。ＥＢＶ関連抗原ＥＢＥＲ１についての染色は普遍的に陽性であった（細胞の１００％）。細胞の２０ないし５０％がＥＢＶ関連の潜伏性膜タンパク質１（ＬＭＰ−１）を発現した。これらの結果は、腫瘍が単形性の型のＰＴＬＤに対応するヒトＥＢＶ＋  Ｂ細胞リンパ腫を表すことを確認する。
【００８１】
皮下リンパ腫モデルは腹膜モデルを上回るいくつかの利点を有した。第一に、小さいリンパ腫でさえ容易に同定することができた。第二に、直径１．５センチメートルまでのリンパ腫が局在化されたままであり、これは大きな正確性を伴い総腫瘍体積の決定を可能にした（Ｗａｓｉｋら、１９９４、Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈ．１４４：１０８９−１０９７）。最後に、皮下腫瘍は、単独細胞懸濁物よりもむしろ腫瘍組織断片を埋込むことにより、数匹のマウスに同時に移すことができた（Ｗａｓｉｋら、１９９４、Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈ．１４４：１０８９−１０９７；Ｐａｓｑｕａｌｕｃｃｉら、１９９５、Ｂｌｏｏｄ  ８５：２１３９−２１４６；Ｖｉｓｏｎｎｅａｕら、１９９８、Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈ．１５２：１２９９−１３１１）。こうした埋込は、事実上全部のレシピエントマウスにおける非
常に類似の成長の特徴をもつ腫瘍の迅速な確立をもたらす（Ｗａｓｉｋら、１９９４、Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈ．１４４：１０８９−１０９７；Ｐａｓｑｕａｌｕｃｃｉら、１９９５、Ｂｌｏｏｄ  ８５：２１３９−２１４６；Ｖｉｓｏｎｎｅａｕら、１９９８、Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈ．１５２：１２９９−１３１１）。これらの理由から、われわれはさらなる研究に皮下モデルを選択した。
【００８２】
確立したＥＢＶ＋  Ｂ細胞腫瘍の治療。
ＰＴＬＤ様細胞に対するＳＤＺ  ＲＡＤのインビボの効果を決定するために、１５Ａ、２０ＡおよびＡ１細胞系の腫瘍を、細胞系あたり７〜１５匹のＳＣＩＤマウスに埋込んだ。治療は、腫瘍が直径５ミリメートル（５０立方ミリメートルの体積に対応する）に達したら開始した。ＳＤＺ  ＲＡＤは１キログラムあたり５ミリグラム（非毒性かつ有効な免疫抑制用量に相当する）で、毎日の胃管栄養法により投与した（Ｓｃｈｕｕｒｍａｎら、１９９７、Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  ６４：３２−５；Ｓｃｈｕｌｅｒら  １９９７、Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  ６４：３６−４２）。
【００８３】
図５に示されるとおり、ＳＤＺ  ＲＡＤは、３種の腫瘍の間の応答の程度の目に見える差異を伴い、異種移植されたＰＴＬＤ様腫瘍の成長に対する大きな阻害効果を有した。１５Ａ腫瘍を埋込まれたマウスにおいて、腫瘍の成長の著しい薬物に誘導される遅延が存在したが、しかし、絶対的な腫瘍の成長の阻害もしくは退縮は存在しなかった。第２１日に、腫瘍体積の中央値は、治療されたマウスでおよそ２４０立方ミリメートル、および対照の未治療のマウスで２７２０立方ミリメートルであった。およそ第３８日に、治療されたマウスにおける１５Ａ腫瘍は約１０００立方ミリメートルに達したのみであった。２０Ａ腫瘍に対するＳＤＺ  ＲＡＤの効果はより著しくさえあった。第１９日に、対照の２０Ａ腫瘍は１４４０立方ミリメートルの体積の中央値を表した一方、平均の治療された腫瘍はわずか５０立方ミリメートルの量があり、これは初期の腫瘍の大きさに等しかった。さらに、腫瘍体積の有意の退縮が１０匹の治療されたマウスのうち６匹でみられた。従って、第５３日の腫瘍体積の中央値は、このサブセットについてわずかに＜５立方ミリメートルであった。
【００８４】
ＳＤＺ  ＲＡＤはＡ１細胞系に対して最も有効であることが判明した。第２１日に、治療された腫瘍の体積の中央値は５０立方ミリメートルであり、腫瘍のいずれも（０／８）成長のいかなる証拠も示さなかった。その日の未治療の腫瘍の平均体積はおよそ１８００立方ミリメートルであった。さらなる治療は全８匹のマウスでの安定した退縮をもたらした。第５３日に、平均の腫瘍体積は＜５立方ミリメートルに減少し、そしてリンパ腫は４匹のマウスで検出することができず、完全な腫瘍の根絶を示した。他の４匹のマウスは顕微鏡的に確認される残余のリンパ腫を有した。注目すべき、１５Ａ、２０ＡおよびＡ１腫瘍に対するＳＤＺ  ＲＡＤのインビボの有効性の差異は、増殖（図１）ならびに他のインビトロアッセイ（図２および３）でみられる差異に相応した。この観察結果は、インビトロでの細胞分析がインビボでのＳＤＺ  ＲＡＤに対する応答を予言することを示唆する。
【００８５】
腫瘍の確立の阻害
ＳＤＺ  ＲＡＤは、免疫抑制剤として使用される場合に移植患者に慢性的に投与されるため、ＰＴＬＤに対するその主な治療的影響は、臨床的に症候性の症例を緩和することよりはむしろそれらの発生を阻害することであるかもしれない。ＳＤＺ  ＲＡＤがＰＴＬＤ様リンパ腫の確立を阻害することができるかどうかを試験するため、体重１キログラムあたり５ミリグラムの薬物での連日治療を、腫瘍埋込の３日前に開始した。図６に示されるとおり、ＳＤＺ  ＲＡＤは本モデルで極めて有効であることが判明した。ＳＤＺ  ＲＡＤに対し最も少なく感受性である１５Ａ腫瘍において（図５）、ＳＤＺ  ＲＡＤでの治療は腫瘍の成長を大きく遅延させたが、しかし腫瘍の確立を阻害することは不可能であった。第２５日に、治療された腫瘍は平均で３８立方ミリメートル、未治療はおよそ１９４０立
方ミリメートルだけの量があった。第４５日に、治療された腫瘍の体積の中央値は４８０立方ミリメートルであった。２０Ａ腫瘍においては、１１個の腫瘍のうち６個が第２５日に検出可能でなく；残存する５個の体積の中央値は２０立方ミリメートルであった。未治療の腫瘍の平均は、その日に２１０立方ミリメートルだけの量があった。第４５日に、治療された腫瘍のいずれも１５０立方ミリメートルを越えず、未治療の腫瘍の平均はおよそ４２００立方ミリメートルだけの量があった。５匹の治療されたマウスは腫瘍の兆候を示さず；埋込部位の顕微鏡的評価は悪性の細胞を示さなかった。最後に、Ａ１マウスにおいて、腫瘍は８匹の治療されたマウスのいずれにおいてもほぼ第２９日に検出することができず；未治療のマウスでの腫瘍の平均は５８０立方ミリメートルだけの量があった。第５３日に、３匹のマウスのみが、小さい（＜５立方ミリメートル）組織学的に確認されるリンパ腫を示した。残存する５匹のマウスは腫瘍の証拠を示さなかった。
【００８６】
標準的免疫抑制剤はＰＴＬＤの発生を助長する一方、これらの障害に対するＳＤＺ  ＲＡＤおよび他のマクロライドの影響は決定されないままである。ＳＤＺ  ＲＡＤは、ＰＴＬＤ様ＥＢＶ＋  Ｂ細胞において、インビトロのリンパ球増殖を大きく抑制し、細胞周期の進行を封鎖し、そしてアポトーシス速度を増大させたことが観察された。インビボのＳＣＩＤマウスの異種移植モデルにおいて、ＳＤＺ  ＲＡＤは確立したＥＢＶ＋  Ｂ細胞腫瘍の成長を著しく遅延させたか、もしくは退縮を誘導した。該薬物は治療されたマウスのサブセットにおいて、腫瘍の確立を完全に根絶もしくは阻害した。これらの知見は、ＳＤＺ  ＲＡＤのようなマクロライドが、ＰＴＬＤの阻害および治療で有効であるかもしれないことを示す。
【００８７】
ＳＤＺ  ＲＡＤは、ＰＴＬＤ様ＥＢＶ＋  Ｂ細胞において、インビトロ増殖を大きく抑制し、細胞周期の進行を早期のＧ０／Ｇ１段階で停止し、そしてアポトーシス速度を増大させた。３種の異なるＰＴＬＤ様Ｂ細胞腫瘍を異種移植されたＳＣＩＤマウスにおいて、ＳＤＺ  ＲＡＤは、とりわけ腫瘍埋込前に投与された場合に、これらの腫瘍の成長を著しく阻害した。Ａ１腫瘍において、既に確立した腫瘍の完全な根絶が、８匹のマウスのうち４匹（４／８）で達成された。試験された３系統のうち２種（２０ＡおよびＡ１）で、ＳＤＺ  ＲＡＤはマウスのおよそ５０％において腫瘍の確立を完全に阻害した（それぞれ５／１１および５／８）。ＳＤＺ  ＲＡＤの抗ＥＢＶ＋  Ｂ細胞腫瘍特性は、こうした細胞に対する免疫応答を抑制することにより間接的にのみならず、しかしまたそれらをアポトーシス前シグナルの影響から保護することにより直接的にＥＢＶ＋  Ｂ細胞の生長を高めることが最近示唆されている（Ｂｅａｔｔｙら、１９９８、Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  ６５：１２４８−１２５５）標準的免疫抑制剤シクロスポリンおよびタクロリムスとよい対比をなす。
【００８８】
これらの実験の結果は、１５Ａおよび２０Ａ系統がリンパ腫細胞由来であったためにとりわけ有望であり（Ｓｉｌｂｅｒｓｔｅｉｎら、１９９１、Ｂｌｏｏｄ  ７８：２３７２−２３８６）、そして、それ自体、進行した臨床的に攻撃的な形態のＰＴＬＤに応答するようである。従って、症例の大多数を含んで成る、他のより少なく悪性の形態のＰＴＬＤは、ＳＤＺ  ＲＡＤになおより感受性であるはずであることが妥当と思われる。正常な個体から得られたＡ１細胞系がＳＤＺ  ＲＡＤに対し１５Ａおよび２０Ａよりもより感受性であったという事実が、この仮定を支持する。
【００８９】
本実施例に提示されるデータはまた、ＳＤＺ  ＲＡＤでの単独療法が、数種の確立した明白に悪性のＰＴＬＤ腫瘍を根絶するのに十分でないかもしれないこと、ならびに、ＳＤＺ  ＲＡＤ（または別のＯ−アルキル化ラパマイシン誘導体もしくはラパマイシン）および１種もしくはそれ以上の慣習的化学療法薬の双方を使用する併用療法を、臨床の場面で考慮することができる（Ｓｈｉら、１９９５、Ｒｅｓ．５５：１９８２−１９８８；Ｍｉｋｉら、１９９８、Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ．Ｐｒｏｃ．３０：１０９１−１０９２）こと
も示唆する。
【００９０】
チミジンの取込み（図１）および細胞周期の進行（図２）により測定されるところの細胞の成長の阻害は、ＥＢＶ＋  Ｂ細胞に対するＳＤＺ  ＲＡＤの作用の主要な様式であるようであるとは言え、ＳＤＺ  ＲＡＤはこうした細胞におけるアポトーシス速度もまた増大させるという本明細書に記述される結果（図３）は、プログラムされた細胞死もまた該薬物の抗腫瘍活性の重要な一成分であるかもしれないことを示唆する。このアポトーシス前効果は、確立したＰＴＬＤ腫瘍の治療でとりわけ重要である可能性があり、ここでは腫瘍の成長の阻害単独は完全な腫瘍の退縮を達成するのに十分でないかもしれない。ＳＤＺ
ＲＡＤへの長期の曝露のみが多くの腫瘍の著しい退縮もしくは排除につながった（図５）という本明細書の観察結果は、類似の拡大された治療が、確立したＰＴＬＤを根治するのに望ましいかもしれないことを示唆する。
【００９１】
ＳＤＺ  ＲＡＤに感受性のＰＴＬＤ様Ｂ細胞系が全部ＥＢＶ＋であったとは言え、この感受性の媒介におけるウイルスの潜在的役割は、あったとしても完全に理解されていない。ＥＢＶは、標的細胞中で、サイトカインシグナル伝達経路を活性化することが可能な数種のタンパク質をコードもしくは誘導する（Ｒｏｃｈｆｏｒｄら、１９９７、Ｖｉｒａｌ
Ｉｍｍｕｎｏｌ  １０：１８３−１９５）。ＬＭＰ−１と呼称される膜に固定されるウイルスタンパク質が最良に特徴づけられたものであり、そしてＴＮＦレセプターファミリーのＴＲＡＦシグナル伝達経路を使用する（Ｍｏｓｉａｌｏｓら、１９９５、Ｃｅｌｌ  ８０：３８９−３９９；Ｄｅｖｅｒｇｎｅら、１９９８、Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７２：７９００−７９０８；Ｌｉｅｂｏｗｉｔｚら、１９９８、Ｎｅｗ  Ｅｎｇ．Ｊ．Ｍｅｄ．３３８：１４１３−１４２１）。該ファミリーに属し、かつＴＲＡＦ３タンパク質を介するシグナル伝達を包含するＬＭＰ−１と数種の特徴を共有する、ＣＤ４０を介するシグナル伝達（Ｅｌｉｏｐｏｕｌｏｓら、１９９６、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  １３：２２４３−２２５４；Ｐｕｌｌｅｎら、１９９８、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ３７：１１８３６−１１８４５）が、最近、ラパマイシンにより阻害されることが示された（Ｓａｋａｔａら、１９９９、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  ６８：３０１−３０９）ことが、この情況で興味深い。免疫組織化学的分析は、ＬＭＰ−１がＥＢＶ＋  Ｂ細胞の一サブセットによってのみ発現されることを示し、これは、ＬＭＰ−１がＰＴＬＤ様細胞の成長およびＳＤＺ
ＲＡＤに対するそれらの感受性に対して決定的に重要でないかもしれないことを示唆する。ＥＢＶはまた、ＬＭＰ−２ＡおよびＬＭＰ−２Ｂと呼称される２種の他の関係した膜タンパク質もコードする。これらのタンパク質はＥＢＶ＋  Ｂ細胞のインビボでの成長に不可欠であるようではない（Ｒｏｃｈｆｏｒｄら、１９９７、Ａｒｃｈ  Ｖｉｒｏｌ  １４２：７０７−７２０）。あるいは、ＳＤＺ  ＲＡＤは、ＴＮＦ−αおよびＴＮＦ−βのような、標的細胞においてＥＢＶにより誘導されるサイトカインにより媒介されるシグナル伝達を阻害するかもしれない（Ｒｏｃｈｆｏｒｄら、１９９７、Ｖｉｒａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １０：１８３−１９５）。
【００９２】
ＳＤＺ  ＲＡＤは、インビトロおよびインビボの双方で、ＰＴＬＤ様のＥＢＶ＋リンパ芽球状Ｂ細胞系に対する強力な阻害活性を表す。ＳＤＺ  ＲＡＤは、こうした細胞のインビトロ増殖を大きく阻害し、かつ、早期のＧ０／Ｇ１段階でそれらの細胞周期の進行を停止する。加えて、該薬物は、ＥＢＶ＋  Ｂ細胞のアポトーシス速度を増大させる。インビボで、それは、とりわけ細胞埋込の前に投与される場合に、ＳＣＩＤマウスに異種移植されたＥＢＶ＋  Ｂ細胞の成長を著しく遅延させるかもしくは完全に阻害する。ＳＤＺ  ＲＡＤは、いくつかの場合に、確立した腫瘍を根絶することが可能である。この効果は、細胞系特異的でありかつインビトロでみられる薬物の効果に比例するようである。
【００９３】
要約すれば、本実施例に提示されるデータは、ＳＤＺ  ＲＡＤがインビトロおよびインビボでＥＢＶ＋  Ｂリンパ球に対する強力な阻害効果を有することを立証する。従って、
それは、移植患者におけるＰＴＬＤの治療および阻害、もしくは他のリンパ増殖症候群の治療および阻害で有効である可能性がある。
【００９４】
新たな治療様式が、ＰＴＬＤの発症を阻害しかつその治癒率を向上させるのに必要とされる。理想的な抗ＰＴＬＤ薬は、移植片拒絶を阻害しかつ同時にＰＴＬＤの発生および発展を阻害するという二重の役割を演じるとみられる。ＰＴＬＤが治療にもかかわらず発症するとすれば、標準的な免疫抑制薬で現在なされているような薬物用量の減少よりはむしろ増加が有効であるかもしれない。薬物用量を増加させるこのアプローチは、移植片の生存を危険にさらさないという付加的な利点を有するとみられる。本実施例は、マクロライド免疫抑制剤ＳＤＺ  ＲＡＤが、抗拒絶剤および抗リンパ増殖剤の二重の役割を有することを示す、インビトロおよびインビボのデータを提示する。
【００９５】
本明細書に引用されるすべての特許、特許出願および刊行物の開示は、これによりそっくりそのまま引用することにより本明細書に組み込まれる。
【００９６】
本発明は特定の態様に関して開示された一方、本発明の他の態様および変形物が、本発明の真の技術思想および範囲から離れることなく当業者により考案されることができることが明らかである。付属として付けられる請求の範囲は、全部のこうした態様および同等の変形物を包含する。
【００９７】
以下に本発明の主な特徴と態様を列挙する。
【００９８】
１．化学構造
【化１】
2010090131.tif 000003
［式中
Ｘは（Ｈ，Ｈ）もしくはＯであり；
Ｙは（Ｈ，ＯＨ）もしくはＯであり；
Ｒ１およびＲ２のそれぞれは、−Ｈ、アルキル、チオアルキル、アリールアルキル、ヒドロキシアルキル、ジヒドロキシアルキル、ヒドロキシアルキルアリールアルキル、ジヒドロキシアルキルアリールアルキル、アルコキシアルキル、アシルオキシアルキル、アミノアルキル、アルキルアミノアルキル、アルコキシカルボニルアミノアルキル、アシルアミノアルキル、アリールスルホンアミドアルキル、アリル、ジヒドロキシアルキルアリル、ジオキソラニルアリル、カルブアルコキシアルキルおよび（Ｒ３）３Ｓｉより成る群から独立に選択され；
各Ｒ３は、−Ｈ、メチル、エチル、イソプロピル、ｔｅｒｔ−ブチルおよびフェニルより成る群から独立に選択され；ならびに
Ｒ４はメチルであるか、もしくはＲ４およびＲ１は一緒になってＣ２−５アルキレン部分を形成するかのいずれかである］
を有するラパマイシン誘導体を、リンパ増殖症候群を緩和するのに十分な量で患者に投与することを含んで成る、ヒト患者における該症候群の緩和方法。
【００９９】
２．ラパマイシン誘導体が、
ラパマイシン、
４０−Ｏ−ベンジルラパマイシン、
４０−Ｏ−（４’−ヒドロキシメチル）ベンジルラパマイシン、
４０−Ｏ−［４’−（１，２ジヒドロキシエチル）］ベンジルラパマイシン、
４０−Ｏ−アリルラパマイシン、
４０−Ｏ−［３’−（２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４（Ｓ）−イル）プロプ−２’−エン−１’−イル］ラパマイシン、
（２’Ｅ，４’Ｓ）−４０−Ｏ−（４’，５’−ジヒドロキシペント−２’−エン−１’−イル）ラパマイシン、
４０−Ｏ−（２−ヒドロキシ）エトキシカルボニルメチルラパマイシン、
４０−Ｏ−（２−ヒドロキシ）エチルラパマイシン、
４０−Ｏ−（３−ヒドロキシ）プロピルラパマイシン、
４０−Ｏ−（６−ヒドロキシ）ヘキシルラパマイシン、
４０−Ｏ−［２−（２ヒドロキシ）エトキシ］エチルラパマイシン、
４０−Ｏ−［（３Ｓ）−２，２−ジメチルジオキソラン−３−イル］メチルラパマイシン、
４０−Ｏ−［（２Ｓ）−２，３−ジヒドロキシプロプ−１−イル］ラパマイシン、
４０−Ｏ−（２−アセトキシ）エチルラパマイシン、
４０−Ｏ−（２−ニコチノイルオキシ）エチルラパマイシン、
４０−Ｏ−［２−（Ｎ−モルホリノ）アセトキシ］エチルラパマイシン、
４０−Ｏ−（２−Ｎ−イミダゾリルアセトキシ）エチルラパマイシン、
４０−Ｏ−［２−（Ｎ−メチル−Ｎ’−ピペラジニル）アセトキシ］エチルラパマイシン、
３９−Ｏ−デスメチル−３９，４０−Ｏ，Ｏ−エチレンラパマイシン、
（２６Ｒ）−２６−ジヒドロ−４０−Ｏ−（２−ヒドロキシ）エチルラパマイシン、
２８−Ｏ−メチルラパマイシン、
４０−Ｏ−（２−アミノエチル）ラパマイシン、
４０−Ｏ−（２−アセトアミノエチル）ラパマイシン、
４０−Ｏ−（２−ニコチンアミドエチル）ラパマイシン、
４０−Ｏ−（２−（Ｎ−メチルイミダゾ−２’−イルカルブエトキシアミド）エチル）ラパマイシン、
４０−Ｏ−（２−エトキシカルボニルアミノエチル）ラパマイシン、
４０−Ｏ−（２−トルイルスルホンアミドエチル）ラパマイシン、および
４０−Ｏ−［２−（４’５’−ジカルボエトキシ−１’，２’，３’−トリアゾル−１’−イル）エチル］ラパマイシン
より成る群から選択される、１．記載の方法。
【０１００】
３．ラパマイシン誘導体が
ラパマイシン、
４０−Ｏ−（２−ヒドロキシ）エチルラパマイシン、
４０−Ｏ−（３−ヒドロキシ）プロピルラパマイシン、
４０−Ｏ−［２−（２−ヒドロキシ）エトキシ］エチルラパマイシン、および
４０−Ｏ−（２−アセトアミノエチル）ラパマイシン
より成る群から選択される、１．記載の方法。
【０１０１】
４．ラパマイシン誘導体が
４０−Ｏ−（２−ヒドロキシ）エチルラパマイシン、
４０−Ｏ−（３−ヒドロキシ）プロピルラパマイシン、
４０−Ｏ−［２−（２−ヒドロキシ）エトキシ］エチルラパマイシン、および
４０−Ｏ−（２−アセトアミノエチル）ラパマイシン
より成る群から選択される、１．記載の方法。
【０１０２】
５．ラパマイシン誘導体が４０−Ｏ−（２−ヒドロキシ）エチルラパマイシンである、１．記載の方法。
【０１０３】
６．ラパマイシン誘導体が第二の薬理学的有効成分と共投与される、１．記載の方法。
【０１０４】
７．第二の薬剤が免疫抑制剤である、６．記載の方法。
【０１０５】
８．第二の薬剤が、アザチオプリン、ミコフェノール酸、ＲｈＯ（Ｄ）免疫グロブリン、シクロスポリン、タクロリムス、シスプラチン、シクロホスファミドおよびレフルノミドより成る群から選択される、７．記載の方法。
【０１０６】
９．ラパマイシン誘導体および第二の薬剤が、ラパマイシン誘導体および第二の薬剤の双方を含んで成る組成物中で患者に投与される、６．記載の方法。
【０１０７】
１０．ラパマイシン誘導体が、第二の薬剤が患者に投与される最低１時間前に患者に投与される、６．記載の方法。
【０１０８】
１１．ラパマイシン誘導体が、第二の薬剤が患者に投与される最低１時間後に患者に投与される、６．記載の方法。
【０１０９】
１２．患者が移植後リンパ増殖症候群に苦しめられる、１．記載の方法。
【０１１０】
１３．患者がリンパ腺癌に苦しめられる、１．記載の方法。
【０１１１】
１４．リンパ腺癌がリンパ性白血病である、１３．記載の方法。
【０１１２】
１５．リンパ腺癌がリンパ腫である、１３．記載の方法。
【０１１３】
１６．リンパ腫が、ＡＩＤＳ関連リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、バーキットリンパ腫、びまん性大細胞型リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫および皮膚Ｔ細胞リンパ腫より成る群から選択される、１５．記載の方法。
【０１１４】
１７．リンパ増殖症候群が、エプスタイン−バーウイルスに感染しているリンパ球の増殖を特徴とする障害である、１．記載の方法。
【０１１５】
１８．患者が免疫抑制療法を受けており、かつ、リンパ増殖症候群がリンパ腫である、１７．記載の方法。
【０１１６】
１９．リンパ増殖症候群が悪性リンパ増殖症候群である、１．記載の方法。
【０１１７】
２０．リンパ増殖症候群が、ポリクローン性異型リンパ組織過形成およびモノクローン性の明白に悪性のＢ細胞リンパ腫より成る群から選択される、１．記載の方法。
【０１１８】
２１．量が体重１キログラムあたり１０マイクログラムから体重１キログラムあたり５ミリグラムまでである、１．記載の方法。
【０１１９】
２２．ラパマイシン誘導体が患者に非経口で投与される、１．記載の方法。
【０１２０】
２３．化学構造
【化２】
2010090131.tif 000004
［式中
Ｘは（Ｈ，Ｈ）もしくはＯであり；
Ｙは（Ｈ，ＯＨ）もしくはＯであり；
Ｒ１およびＲ２のそれぞれは、−Ｈ、アルキル、チオアルキル、アリールアルキル、ヒドロキシアルキル、ジヒドロキシアルキル、ヒドロキシアルキルアリールアルキル、ジヒドロキシアルキルアリールアルキル、アルコキシアルキル、アシルオキシアルキル、アミノアルキル、アルキルアミノアルキル、アルコキシカルボニルアミノアルキル、アシルアミノアルキル、アリールスルホンアミドアルキル、アリル、ジヒドロキシアルキルアリル、ジオキソラニルアリル、カルブアルコキシアルキルおよび（Ｒ３）３Ｓｉより成る群から独立に選択され；
各Ｒ３は、−Ｈ、メチル、エチル、イソプロピル、ｔｅｒｔ−ブチルおよびフェニルより成る群から独立に選択され；ならびに
Ｒ４はメチルであるか、もしくはＲ４およびＲ１は一緒になってＣ２−５アルキレン部分を形成するかのいずれかである］
を有するラパマイシン誘導体を、リンパ増殖症候群を阻害するのに十分な量で、該症候群を発症する危険にさらされるヒト患者に投与することを含んで成る、該患者における該症候群の阻害方法。
【０１２１】
２４．ラパマイシン誘導体が４０−Ｏ−（２−ヒドロキシ）エチルラパマイシンである、２３．記載の方法。
【０１２２】
２５．免疫抑制剤、ならびに化学構造
【化３】
2010090131.tif 000005
［式中
Ｘは（Ｈ，Ｈ）もしくはＯであり；
Ｙは（Ｈ，ＯＨ）もしくはＯであり；
Ｒ１およびＲ２のそれぞれは、−Ｈ、アルキル、チオアルキル、アリールアルキル、ヒドロキシアルキル、ジヒドロキシアルキル、ヒドロキシアルキルアリールアルキル、ジヒドロキシアルキルアリールアルキル、アルコキシアルキル、アシルオキシアルキル、アミノアルキル、アルキルアミノアルキル、アルコキシカルボニルアミノアルキル、アシルアミノアルキル、アリールスルホンアミドアルキル、アリル、ジヒドロキシアルキルアリル、ジオキソラニルアリル、カルブアルコキシアルキルおよび（Ｒ３）３Ｓｉより成る群から独立に選択され；
各Ｒ３は、−Ｈ、メチル、エチル、イソプロピル、ｔｅｒｔ−ブチルおよびフェニルより成る群から独立に選択され；ならびに
Ｒ４はメチルであるか、もしくはＲ４およびＲ１は一緒になってＣ２−５アルキレン部分を形成するかのいずれかである］
を有するラパマイシン誘導体の双方をヒト患者に投与することを含んで成る、該患者における移植片拒絶の改良された阻害方法。
【０１２３】
２６．免疫抑制剤が、アザチオプリン、ミコフェノール酸、ＲｈＯ（Ｄ）免疫グロブリン、シクロスポリン、タクロリムス、シスプラチン、シクロホスファミドおよびレフルノミドより成る群から選択され、かつ、ラパマイシン誘導体が４０−Ｏ−（２−ヒドロキシ）エチルラパマイシンである、２３．記載の方法。
【０１２４】
２７．化学構造
【化４】
2010090131.tif 000006
［式中
Ｘは（Ｈ，Ｈ）もしくはＯであり；
Ｙは（Ｈ，ＯＨ）もしくはＯであり；
Ｒ１およびＲ２のそれぞれは、−Ｈ、アルキル、チオアルキル、アリールアルキル、ヒドロキシアルキル、ジヒドロキシアルキル、ヒドロキシアルキルアリールアルキル、ジヒドロキシアルキルアリールアルキル、アルコキシアルキル、アシルオキシアルキル、アミノアルキル、アルキルアミノアルキル、アルコキシカルボニルアミノアルキル、アシルアミノアルキル、アリールスルホンアミドアルキル、アリル、ジヒドロキシアルキルアリル、ジオキソラニルアリル、カルブアルコキシアルキルおよび（Ｒ３）３Ｓｉより成る群から独立に選択され；
各Ｒ３は、−Ｈ、メチル、エチル、イソプロピル、ｔｅｒｔ−ブチルおよびフェニルより成る群から独立に選択され；ならびに
Ｒ４はメチルであるか、もしくはＲ４およびＲ１は一緒になってＣ２−５アルキレン部分を形成するかのいずれかである］
を有するラパマイシン誘導体を、リンパ球増殖を阻害するのに十分な量で、リンパ腺癌に苦しめられるヒト患者に投与することを含んで成る、該患者におけるリンパ腺腫瘍の転移の阻害方法。
【０１２５】
２８．ラパマイシン誘導体が４０−Ｏ−（２−ヒドロキシ）エチルラパマイシンである、２７．記載の方法。
【０１２６】
２９．Ｂリンパ球をエプスタイン−バーウイルスに曝露すること（それにより該Ｂリンパ球が形質転換された表現型を表す）、
形質転換されたＢリンパ球を、重症の複合免疫不全を有するマウスに注入すること、
薬剤をマウスに投与すること、および
該マウスにおける腫瘍の成長を最低約２１日間監視することであって、
それにより、腫瘍の退縮、腫瘍の根絶および該マウス中での第二の腫瘍の非存在の１種もしくはそれ以上の該マウス中での観察結果が、該薬剤が哺乳動物における移植後リンパ増殖症候群を緩和もしくは阻害するために有用であることの表示である、
を含んで成る、ある薬剤がヒト患者におけるリンパ増殖症候群を緩和もしくは阻害するために有用であるかどうかの評価方法。
【図面の簡単な説明】
【０１２７】
【図１】発明にかかる、ＰＴＬＤ様ＥＢＶ＋Ｂ細胞のインビトロ増殖のＳＤＺ  ＲＡＤに媒介される阻害を具体的に説明するグラフである。ＢＣ−１は原発性滲出液リンパ腫（ＰＥＬ）由来のＥＢＶ＋／ＨＳＶ８＋  Ｂ細胞系である。他の細胞系は、低悪性度のＢ細胞リンパ腫を伴う患者（１５Ａもしくは２０Ａ）、Ｔ細胞リンパ腫を伴う患者（ＬＣＬ）または健康な個体（Ａ１もしくはＡ２Ｄ６）の１つ由来のインビトロでＥＢＶで形質転換されたＢ細胞系である。ＨＴＬＶ−Ｉ＋悪性Ｔ細胞系、ＨＵＴ−１０２、Ｃ１０ＭＪおよびＡＴＬ−２を、対照細胞系として包含した。
【図２】発明にかかる、ＰＴＬＤ様Ｂ細胞における細胞周期の進行のＳＤＺ  ＲＡＤに媒介される阻害を具体的に説明するグラフである。４種のＥＢＶ＋  Ｂ細胞系を、０〜１０ナノモル濃度のＳＤＺ  ＲＡＤの存在下で４８時間培養し、ヨウ化プロピジウムで標識し、そしてフローサイトメトリーにより分析した。
【図３】発明にかかる、ＰＴＬＤ様Ｂ細胞のアポトーシス速度のＳＤＺ  ＲＡＤに媒介される増大を具体的に説明するグラフである。３種のＥＢＶ＋  Ｂ細胞系を、０〜１０ナノモル濃度のＳＤＺ  ＲＡＤの存在下で２４時間培養し、ヨウ化プロピジウムおよび抗アネキシンＶ抗体で標識し、そしてフローサイトメトリーにより分析した。
【図４】発明にかかる、図４Ａ−４Ｄを含んで成る、ＳＣＩＤマウスに異種移植された２０Ａ腫瘍の形態学および表現型を描く一群の顕微鏡写真像である。図４Ａにおいて、ヘマトキシリン−エオシン染色は、高い有糸分裂率を伴う大細胞型リンパ腫を示す。図４Ｂにおいて、ヒトＣＤ２０（すなわちＢ細胞抗原）と特異的に結合する抗体を使用する免疫ペルオキシダーゼ染色は、全部のリンパ腫細胞における細胞膜染色を示す。図４Ｃにおいて、Ｋｉ６７（すなわち細胞増殖に関係した抗原）と特異的に結合する抗体を使用する免疫ペルオキシダーゼ染色は、５０〜８０％の細胞における核染色を示す。図４Ｄにおいて、ＥＢＶにコードされるＥＢＥＲ−１  ＲＮＡに関するインシトゥハイブリダイゼーションは、全部のリンパ腫細胞における核の陽性性を示す。
【図５】発明にかかる、図５Ａ−５Ｃを含んで成る、ＰＴＬＤ様Ｂ細胞のインビボの成長のＳＤＺ  ＲＡＤに媒介される阻害；確立した腫瘍の治療を具体的に説明する三つ組のグラフである。ＥＢＶ＋  Ｂ細胞系１５Ａ（図５Ｃ）、２０Ａ（図５Ｂ）およびＡ１（図５Ａ）由来の腫瘍の断片を、レシピエントのＳＣＩＤマウスに埋込んだ。１群あたりのマウスの数をカッコ内に示す。１日あたり体重１キログラムあたり５ミリグラムの薬物での治療を、腫瘍が直径０．４〜０．５ｃｍに達した場合に開始した。
【図６】発明にかかる、図６Ａ−６Ｃを含んで成る、悪性のＰＴＬＤ様Ｂ細胞のインビボの成長のＳＤＺ  ＲＡＤに媒介される阻害（すなわち腫瘍の成長の阻害）を具体的に説明する三つ組のグラフである。ＥＢＶ＋  Ｂ細胞系１５Ａ（図６Ｃ）、２０Ａ（図６Ｂ）およびＡ１（図６Ａ）由来の腫瘍の断片を、レシピエントのＳＣＩＤマウスに埋込んだ。１群あたりのマウスの数をカッコ内に示す。１日あたり体重１キログラムあたり５ミリグラムの薬物での治療を、腫瘍埋込３日前に開始した。
【図７】発明にかかる、ＳＤＺ  ＲＡＤの化学構造を描く。
【図８】発明にかかる、本明細書に記述される方法で使用することができるＯ−メチル化ラパマイシン誘導体の化学式（すなわち式Ｉ）を描く。
【図１】
2010090131.tif 000009
【図２】
2010090131.tif 000010
【図３】
2010090131.tif 000011
【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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