(57)【要約】      （修正有）【課題】ｒａｆキナーゼ阻害活性を有する化合物の提供および該化合物による癌性細胞成長の処置の提供。【解決手段】下記式に代表される５−ブロモメチル−３−（３−ｐ−トリルウレイド）−チオフェン−２−カルボン酸メチルエステルや５−ｔ−ブチル−３−〔３−（５−トリフルオロメチル−〔１，３，４〕−チアジアゾール−２−イル）ウレイド〕−チオフェン−２−カルボキシル酸メチルエステルなどのウレイド−チオフェン−カルボキシル酸メチルエステル誘導体。2010065047.tif 000050【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式の化合物。
【化１】
2010065047.tif 000044
2010065047.tif 000045
2010065047.tif 000046
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2010065047.tif 000049
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明の背景
ｐ２１ｒａｓがん遺伝子は、ヒト固形がんの発生および進行に対する主要な貢献者であり、すべてのヒトがんの３０％において突然変異している。Ｂｏｌｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎｕａｌ  Ｒｅｐｏｒｔｓ  ｉｎ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２９，１６５−１７４（１９９４）；Ｂｏｓ，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，４９，４６８２（１９８９）
【０００２】
その正常な非変異形において、ｒａｓタンパクは殆ど成長因子受容体によって指令されるシグナルトランスダクションカスケードのキーエレメントである。Ｊ．Ａｖｒｕｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，ＴＩＢＳ（１９），２７９−２８３（１９９４）を見よ。生化学的には、ｒａｓはグアニンヌクレオチド結合タンパクであり、そしてＧＴＰ結合活性化とＧＤＰ結合休止型の間のサイクリングは、ｒａｓの内因性ＧＴＰアーゼ活性および他の調節タンパクによって厳密にコントロールされる。がん細胞におけるｒａｓ突然変異体においては、内因性ＧＴＰアーゼ活性が緩和され、それ故このタンパクは酵素ｒａｆキナーゼのような下流エフェクターへ構成性成長シグナルを送る。これはこれらの突然変異体を持っている細胞のがん性成長へ導く。Ｍａｇｎｕｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，５，２４７−２５３（１９９４）ｒａｆキナーゼに対する不活性化抗体を投与することにより、または優先ネガティブｒａｆキナーゼもしくは優先ネガティブＭＥＫの同時発現によってｒａｆキナーゼシグナル経路を阻害することにより活性ｒａｆの効果を阻害することは、形質転換された細胞の正常成長表現型への逆転へ導くことが示された。Ｄａｕｍ  ｅｔ  ａｌ．，ＴＩＢＳ  １９，４７４−４８０（１９９４）；Ｆｒｉｄｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２６９，３０１０５−３０１０８（１９９４）を見よ。Ｋｏｌｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３４９，４２６−４２８（１９９１）は、アンチセンスＲＮＡによるｒａｆ発現の阻害は膜関連がん遺伝子において細胞増殖をブロックすることをさらに指示した。同様に、ｒａｆキナーゼの阻害（アンチセンスオリゴデオキシヌクレオチドにより）は、種々のタイプのヒト腫瘍タイプの成長の阻害とインビトロおよびインビボにおいて相関していた。Ｍａｎｉａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ２（６）：６６８−６７５（１９９６）
【０００３】
本発明の概要
本発明は、ｒａｆキナーゼによって仲介されるがん性細胞成長の処置のための化合物および方法に向けられる。以下の式の化合物が含まれる。式中、Ｅｔはエチル、Ｐｔはプロピル、Ｂｕはブチルである。
【０００４】
【化１】
2010065047.tif 000002
５−イソプロピル−３−（３−ｐ−トリル−ウレイド）−チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル
【０００５】
【化２】
2010065047.tif 000003
５−ｔ−ブチル−３−（３−ｐ−トリルウレイド）−チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル
【０００６】
【化３】
2010065047.tif 000004
５−ｔ−ブチル−３−（３−ｐ−トリルウレイド）−チオフェン−２−カルボン酸エチルエステル
【０００７】
【化４】
2010065047.tif 000005
５−ブロモメチル−３−（３−ｐ−トリルウレイド）−チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル
【０００８】
【化５】
2010065047.tif 000006
５−ｔ−ブチル−３−（３−チオフェン−２−イルウレイド）−チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル
【０００９】
【化６】
2010065047.tif 000007
５−ｔ−ブチル−３−〔３−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）ウレイド〕−チオフェンカルボン酸メチルエステル
【００１０】
【化７】
2010065047.tif 000008
５−ｔ−ブチル−３−（３−ｐ−トリルウレイド）−チオフェンカルボン酸メチルアミド
【００１１】
【化８】
2010065047.tif 000009
５−ｔ−ブチル−３−〔３−（５−トリフルオロメチル〔１，３，４〕チアジアゾール−２−イル）−ウレイド〕−チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル
【００１２】
【化９】
2010065047.tif 000010
５−ｔ−ブチル−３−〔３−（５−メチルチオフェン−２−イル）ウレイド〕−チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル
【００１３】
【化１０】
2010065047.tif 000011
５−ｔ−ブチル−３−〔３−（５−ｔ−ブチル−〔１，３，４〕チアジアゾール−２−イル）−ウレイド〕チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル
【００１４】
【化１１】
2010065047.tif 000012
５−ｔ−ブチル−３−〔３−（１Ｈ−インドール−５−イル）ウレイド〕−チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル
【００１５】
【化１２】
2010065047.tif 000013
５−ｔ−ブチル−３−〔３−（５−メチルチアゾール−２−イル）ウレイド〕−チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル
【００１６】
【化１３】
2010065047.tif 000014
５−ｔ−ブチル−３−〔３−（５−メチル〔１，３，４〕チアジアゾール−２−イル）ウレイド〕−チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル
【００１７】
【化１４】
2010065047.tif 000015
５−ｔ−ブチル−３−〔３−（２−（１−メチル−１Ｈ−ピロール−２−イル）エチル）ウレイド〕−チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル
【００１８】
【化１５】
2010065047.tif 000016
５−ｔ−ブチル−３−〔３−（１−エチル−１Ｈ−ピロール−３−イル）ウレイド〕−チオフェンカルボン酸メチルエステル
【００１９】
【化１６】
2010065047.tif 000017
５−ｔ−ブチル−３−〔３−（５−エチル−〔１，３，４〕チアジアゾール−２−イル）−ウレイド〕−チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル
【００２０】
【化１７】
2010065047.tif 000018
５−ｔ−ブチル−３−〔３−（５−シクロプロピル〔１，３，４〕チアジアゾール−２−イル）ウレイド〕−チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル
【００２１】
【化１８】
2010065047.tif 000019
５−ｔ−ブチル−３−〔３−（４−メチルチオフェン−２−イル）ウレイド〕−チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル
【００２２】
【化１９】
2010065047.tif 000020
５−ｔ−ブチル−３−〔３−（１−プロピル−１Ｈ−ピロール−３−イル〕ウレイド〕−チオフェンカルボン酸メチルエステル
【００２３】
【化２０】
2010065047.tif 000021
５−ｔ−ブチル−３−〔３−（１−イソプロピル−１Ｈ−ピロール−３−イル）ウレイド〕−チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル
【００２４】
【化２１】
2010065047.tif 000022
５−ｔ−ブチル−３−（３−ｐ−トリルウレイド）−フラン−２−カルボン酸メチルエステル
【００２５】
【化２２】
2010065047.tif 000023
５−ｔ−ブチル−３−（３−ｐ−トリルウレイド）−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸メチルエステル
【００２６】
【化２３】
2010065047.tif 000024
５−ｔ−ブチル−２−（３−ｐ−トリルウレイド）−チオフェン−３−カルボン酸メチルエステル
【００２７】
【化２４】
2010065047.tif 000025
５−ｔ−ブチル−３−〔３−（１−エチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）ウレイド〕チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル
【００２８】
【化２５】
2010065047.tif 000026
５−ｔ−ブチル−３−〔３−（３，４−ジクロロフェニル）ウレイド〕−フラン−２−カルボン酸メチルエステル
【００２９】
【化２６】
2010065047.tif 000027
５−ｔ−ブチル−１−メチル−３−（３−ｐ−トリルウレイド）−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸メチルエステル
【００３０】
【化２７】
2010065047.tif 000028
５−ｔ−ブチル−２−（３−フェニルウレイド）−チオフェン−３−カルボン酸メチルエステル
【００３１】
【化２８】
2010065047.tif 000029
５−ｔ−ブチル−２−（３−（５−エチル〔１，３，４〕チアジアゾール−２−イル）ウレイド〕−チオフェン−３−カルボン酸メチルエステル
【００３２】
【化２９】
2010065047.tif 000030
５−イソプロピル−２−〔３−（５−メチルチオフェン−２−イル）ウレイド〕−チオフェン−３−カルボン酸メチルエステル
【００３３】
【化３０】
2010065047.tif 000031
５−イソプロピル−２−（３−ｐ−トリルウレイド）−チオフェン−３−カルボン酸メチルエステル
【００３４】
好ましい化合物は例えば以下の化合物を含む。
【００３５】
【化３１】
2010065047.tif 000032
2010065047.tif 000033
【００３６】
もっと好ましいのは以下の化合物である。
【００３７】
【化３２】
2010065047.tif 000034
【００３８】
これら化合物は、単位投与製剤として経口的、局所的、非経口的、吸入もしくはスプレーにより、または直腸的に投与することができる。ここで使用する非経口的なる用語は、皮下注射、静脈内、筋肉内、胸骨内注射または注入技術を指す。一以上の化合物が一以上の薬学的に許容し得る無毒性担体およびもし望むならば他の活性成分と組合せて存在することができる。好ましい投与方法は非経口である。
【００３９】
経口投与を意図した組成物は、薬剤組成物製造のため当業者に既知の任意の適当な方法に従って製造することができる。そのような組成物は服用し得る製剤を提供するため、希釈剤、甘味剤、香料、着色剤および保存剤からなる群から選ばれた一以上の剤を含むことができる。錠剤は、錠剤の製造に適した非毒性の薬学的に許容し得る賦形剤と混合した活性成分を含んでいる。これらの賦形剤は、例えば炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、乳糖、リン酸カルシウムまたはリン酸ナトリウムのような不活性希釈剤；顆粒化および崩壊剤例えばコーンスターチまたはアルギン酸；および結合剤例えばステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸またはタルクでよい。錠剤は未被覆でよく、またはそれらの胃腸管内において崩壊および吸収をおくらせ、それによって長期間にわたって持続作用を提供するために既知の技術によって被覆されてもよい。例えば、グルセリルモノステアレートまたはグリセリルジステアレートのような時間遅延材料を使用することができる。これらの化合物は固形の急速放出形に調製することもできる。
【００４０】
経口使用のための製剤は活性成分が不活性固体希釈剤、例えば炭酸カルシウム、リン酸カルシウムまたはカオリンと混合される硬カプセルとして、または活性成分が水もしくは油性媒体、例えば落下生油、液状パラフィンもしくはオリーブ油と混合される軟カプセルとして提供することもできる。
【００４１】
水性懸濁液は水性懸濁液の製造に適した賦形剤と混合した活性物質を含んでいる。そのような賦形剤は懸濁剤、例えばカルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、トラガントガムおよびアカシアガムであり、分散もしくは湿潤剤は天然に存在するフォスファチド、例えばレシチン、またはアルキレンオキシドと脂肪酸の縮合生成物例えばポリオキシエチレンステアレート、またはエチレンオキシドと長鎖脂肪族アルコールの縮合生成物例えばヘプタデカエチレンオキシセタノール、またはエチレンオキシドと脂肪酸およびヘキシトールから得られた部分エステルの縮合生成物例えばポリオキシエチレンソルビトールモノオレエート、またはエチレンオキシドと脂肪酸およびヘキシトール無水物から得られた部分エステルの縮合生成物例えばポリオキシエチレンソルビタンモノオレエートでよい。水性懸濁液は一以上の保存剤例えばｐ−ヒドロキシ安息香酸エチルもしくはプロピル、一以上の着色剤、一以上の矯味剤、および一以上の甘味剤例えばショ糖もしくはサッカリンを含むことができる。
【００４２】
水の添加によって水性懸濁液を調製するために適した分散粉末および顆粒は、分散剤、懸濁剤および一以上の保存剤と混合した活性成分を提供する。適当な分散または湿潤剤および懸濁剤は既に述べたものによって例示される。追加の補助剤、例えば甘味剤、矯味剤および着色剤も存在し得る。
【００４３】
化合物は非水液体製剤の形、例えば活性成分を植物油例えばアラキス油、オリーブ油、ゴマ油または落下生油中に、または液体パラフィンのような鉱物油中に分散することによって製剤化し得る油性懸濁液でもよい。油性懸濁液は増粘剤、例えば蜜ロウ、硬パラフィンもしくはセチルアルコールを含有し得る。上で述べたような甘味剤および矯味剤は服用し得る経口製剤を提供するために添加し得る。これらの組成物はアスコルビン酸のような抗酸化剤の添加によって保存することができる。
【００４４】
本発明の薬剤組成物は水中油型エマルジョンの形であってもよい。油相は植物油例えばオリーブ油もしくはアラキス油、または鉱油例えば液状パラフィン、またはこれらの混合物でよい。適当な乳化剤は天然ガム、例えばアカシアガムもしくはトラガントガム、天然フォスファチド、例えば大豆レシチン、および脂肪酸とヘキシトール無水物から得られるエステルおよび部分エステル、例えばソルビタンモノオレエート、および前記部分エステルとエチレンオキシドの縮合生成物、例えばポリオキシエチレンソルビタンモノオレエートでよい。エマルジョンは甘味剤および矯味剤を含有し得る。
【００４５】
シロップおよびエリキサーは甘味剤、例えばグリセロール、プロピレングリコール、ソルビトールもしくはショ糖と配合し得る。そのような製剤は緩和剤、保存剤および着色剤も含有し得る。
【００４６】
化合物は薬物の経大腸投与のための坐剤の形で投与してもよい。これら組成物は薬物を、常温では固体であるが、しかし大腸温度において液体であり、それ故大腸内で溶融して薬物を放出する適当な非刺激性賦形剤と混合することによって製造することができる。そのような材料はココアバターおよびポリエチレングリコールである。
【００４７】
当業者には、特定の投与方法は治療剤を投与する時すべて考慮される種々のファクターに依存することが認められるであろう。
【００４８】
本発明の化合物は、典型的には０．０１ないし２００ｍｇ／日，
好ましくは２００ｍｇ／ｋｇ  ｉｐの投与量において使用される。
【００４９】
しかしながら、特定の患者のための特定の投与レベルは、使用する特定化合物の活性、年令、体重、一般的健康状態、性別、投与時間、投与ルート、および排泄速度、薬物組合せおよび治療を受ける重篤度を含む、種々のファクターに依存することが理解されるであろう。
【００５０】
本発明の化合物は酵素ｒａｆキナーゼの阻害剤である。この酵素はｐ２１ｒａｓの下流エフェクターであるので、この阻害剤はｒａｆキナーゼの阻害が指示されるヒトまたは動物使用のための薬剤組成物において、例えばｒａｆキナーゼによって仲介される腫瘍および／またはがん細胞成長の処置において有用である。特に、化合物はヒトのまたは動物例えばネズミの固形がんの処置に有用である。何故ならばこれらがんの進行はｒａｓタンパクシグナルトランスダクションカスケードに依存し、それ故このカスケードの中断により、すなわちｒａｆキナーゼを阻害することによって処置に応答し易いからである。
【００５１】
ｒａｆキナーゼを阻害する与えられた化合物の活性は、例えばここに開示した操作に従って日常的にアッセイすることができる。
【００５２】
そのようなインビトロキナーゼアッセイにおいて、ｒａｆは２ｍＭ  ２−メルカプトエタノールおよび１００ｍＭ  ＮａＣｌを含有する２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ，ｐＨ８．２中のＭＥＫとインキュベートされる。このタンパク溶液２０μｌは水５μｌと、またはＤＭＳＯに溶解した１０ｍＭストック溶液から蒸留水で希釈した化合物と混合される。キナーゼ反応は８０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ，ｐＨ７．５，１２０ｍＭ  ＮａＣｌ，１．６ｍＭ  ＤＴＴ，１６ｍＭ  ＭｇＣｌ2 中の２．５μｌ〔ｒ−33Ｐ〕ＡＴＰ（１０００〜３０００ｄｐｍ／ｐｍｏｌ）を加えることによって開始される。反応混合物は３２℃において通常２２分間インキュベートされ、そしてタンパクへの33Ｐの取込みは反応物をフォスフオセルロースマット上に収穫し、１％リン酸で遊離カウントを洗浄除去し、そして液体シンチレーション計数によってフォスォリル化を定量することによってアッセイされる。高スループットスクリーニングのために１０μＭ  ＡＴＰおよび０．４μＭ  ＭＥＫが使用される。一部の実験においては、キナーゼ反応は等量のＬａｅｍｍｌｉサンプルバッファを加えることによって停止される。サンプルは３分間煮沸され、そしてタンパクは７．５％Ｌａｅｍｍｌｉゲル上の電気泳動によって分離される。ゲルは固定され、乾燥され、造影プレート（フジ）へ露出される。フォスフォリル化はＦｕｊｉｘ  Ｂｉｏ−Ｉｍａｇｉｎｇ  アナライザーシステムを用いて分析される。ヒストン１のタンパクキナーゼＣ（０．０５ｍＵ；ベーリンガー、マンハイム）フォスフォリル化は製造者の指示書に従ってアッセイされる。
【００５３】
インビトロ成長アッセイのため、形質転換しないＮＩＨ３Ｔ３線維芽細胞、または安定的にそれらのＶ−Ｈ−ｒａｓ，ｖ−Ｒａｆもしくはｖ−ｆｏｓを発現する形質転換した線維芽細胞が得られる（Ｏｎｙｘ）。線維芽細胞ラインは胎児ウシ血清１０％およびグルタミン２００ｍＭを含んでいる高グルコースを有するＤｕｌｂｅｃｃｏの修飾イーグル培地中に維持される。ヒト結腸カルシノーマ細胞ライン、ＤＬＤ−１，Ｃｏｌｏ  ２０５およびＨＣＴ１１６はＡＴＣＣ（Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ）から得られ、胎児ウシ血清１０％およびグルタミン２００ｍＭを加えたＲＰＭＩ中に維持される。細胞培養培地および添加剤は、胎児ウシ血清（ＪＲＨ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，Ｌｅｎｅｘａ，ＫＳ）を除いてＧｉｂｃｏ／ＢＲＬ（Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ）から得られる。一部の実験では、３×１０3 細胞が９６ウエルプレートへ接種され、一夜５％ＣＯ2 インキュベーター中３７℃で成長が許容される。増殖は、細胞が培養の最後の１８時間の期間 3Ｈ−チミジンを取込むことを許容し、細胞をガラス繊維マット上に収穫し、そして液体シンチレーション計数によって 3Ｈ−チミジン取込みを測定することによって決定される。
【００５４】
これらのアッセイは、先の式の化合物はｒａｆキナーゼ活性を阻害し、そして発がん性細胞成長を阻止することを確立する。
ｒａｆキナーゼによって仲介される腫瘍（例えば固形がん）に対する化合物の阻害効果のインビボアッセイは以下のように実施することができる。
【００５５】
ＣＤＩｎｕ／ｎｕマウス（６〜８週令）は横腹においてヒト結腸アデノカルシノーマ細胞ラインの細胞１×１０6 皮下注射される。マウスは腫瘍サイズが５０〜１００ｍｇの間である時、１０日に始まって５０，１００および２００ｍｇ／ｋｇにおいて腹腔内投与される。動物は１０日間１日１回投与され、３５日まで週２回キャリパーで腫瘍サイズがモニターされる。
【００５６】
化合物のｒａｆキナーゼに対する、従ってｒａｆキナーゼによって仲介される腫瘍（例えば固形がん）に対する阻害効果は、Ｍｏｎｉａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，２（６）：６６８−６７５（１９９６）の技術に従ってインビボで証明することができる。
【００５７】
このように本発明の化合物は、例えばカルシノーマ（例えば肺、膵臓、甲状腺、ぼうこうまたは結腸）、骨髄系障害（例えば骨髄性白血病）またはアデノーマ（例えば絨毛結腸アデノーマ）のような固形がんの処置に有用である。
【００５８】
本発明の化合物は、既知化合物から（または既知化合物からつくることができる出発物質から）例えば以下に示す一般的製造方法によってつくることができる。
【００５９】
【化３３】
2010065047.tif 000035
2010065047.tif 000036
2010065047.tif 000037
2010065047.tif 000038
【００６０】
使用した略号：
ＡＣ＝アセチル；Ａｒ＝アリール；Ｂｏｃ＝ｔ−ブトキシカルボニル；Ｂｎ＝ベンジル；Ｃｂｚ＝カルボベンジルオキシ；ＤＣＣ＝ジシクロヘキシルカルボジイミド；ＤＭＡＰ＝４−ジメチルアミノピリジン；ＤＭＦ＝Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド；Ｅｔ＝エチル；ＥｔＯＡｃ＝エチルアセテート；ＬＲＭＳ＝低解像力質量スペクトル分析；Ｍｅ＝メチル；ＮＭＭ＝Ｎ−メチルモルホリン；Ｐｈ＝フェニル；Ｐｒ＝プロピル；Ｐｙｒ＝ピリジン；ＴＬＣ＝薄層クロマトグラフィー；ＴＦＡ＝トリフルオロ酢酸；ＴＭＳ＝トリメチルシリル；Ｔｓ＝ｐ−トルエンスルホニル。
【００６１】
これ以上考究することなく、当業者は以上の説明を用いて本発明をその全範囲において利用することができるものと信じられる。それ故以下の好ましい特定具体例は、単に例証的であり開示の残部を少しも限定するものでないと考えるべきである。
【００６２】
以上および以下の実施例において、すべての温度は摂氏で述べられ、そして特記しない限りすべての部および％は重量による。
【００６３】
以上および以下において引用したすべての特許出願、特許および文献の全体の記載は参照として取り入れられる。
【００６４】
実施例
実験：
フラッシュクロマトグラフィーはＥＭ  Ｓｃｉｅｎｃｅからのシリカゲル６０（２３０〜４００メッシュサイズ）を使用して実施された。質量スペクトルデータは、特記しない限り急速原子衝撃技術（ＦＡＢ）を用いるＫｒａｔｏ−ＭＳ８０ＲＦＡスペクトロメーターで得られた。融点はＴｈｏｍａｓ−Ｈｏｏｖｅｒ  Ｕｎｉ−Ｍｅｌｔ装置で測り、そして補正しなかった。
【００６５】
【表１】
2010065047.tif 000039
【００６６】
【表２】
2010065047.tif 000040
2010065047.tif 000041
【００６７】
【表３】
2010065047.tif 000042
【００６８】
【表４】
2010065047.tif 000043
【００６９】
上に掲げた一般的方法に従って以下の化合物が合成された。
方法Ａ
５−イソプロピル−３−（３−ｐ−トリルウレイド）チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル（実施例１）の合成：
ステップ１
メタノール（１Ｌ）中ナトリウムメトキサイド（１４ｇ）の懸濁液へ、チオグリコール酸メチル（２２．３ｍｌ）を加えた。溶液を５分間かきまぜ、次にメタノール中の３−クロロ−４−メチル−２−ペンテンニトリル（３２．４ｇ）（Ｈａｃｋｌｅｒ，Ｒ．Ｅ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ  Ｃｈｅｍ．１９８９，２６，１５７５；Ｈａｒｔｍａｎｎ，Ｈ，Ｌｉｅｂｓｈｅｒ，Ｊ．Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  １９８４，２７５；Ｇｕｐｔｏｎ，Ｊ．Ｔ．ｅｔ  ａｌ．，Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ  Ｃｏｍｍ．１９８２，１２，３４）を加え、溶液を９０分間還流へ加熱した。２０℃へ冷却後、溶媒を減圧留去した。残渣を酢酸エチルへ溶かし、１Ｎ  ＨＣｌで洗い、ＭｇＳＯ4 上で乾燥し、溶媒を減圧留去した。残渣はヘキサン／酢酸エチルを用いてフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、所望のアミノチオフェン８．０ｇ（１６％）を得た。
ステップ２：
トルエン（１０ｍＬ）中の３−アミノ−５−イソプロピル−２−メチルエステル−チオフェン（２３３ｍｇ）の溶液を還流へ加熱した。トルエン（５ｍＬ）中のｐ−メチルフェニルイソシアネート（１５０ｍＬ）の溶液を１時間にわたってシリンジポンプにより加えた。反応混合物を１時間還流加熱し、２０℃へ冷却し、そして溶媒を減圧留去した。残渣はヘキサン／ジクロロメタン混液を用いるフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、泡として実施例１化合物２６５ｍｇ（６８％）を得た。 1ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 ）ｄ１．２８（ｓ，６Ｈ），２．３０（ｓ，３Ｈ），３．０６（ｍ，１Ｈ），３．７５（ｓ，３Ｈ）７．１１（ｄ，２Ｈ），７．３０（ｄ，２Ｈ），７．７２（ｓ，１Ｈ），７．８３（ｓ，１Ｈ），９．６７（ｓ，１Ｈ）
５−ｔ−ブチル−３−（３−ｐ−トリルウレイド）チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル（実施例２）は、３−クロロ−４−メチル−２−ペンテンニトリルの代わりに３−クロロ−４，４−ジメチル−２−ペンテンニトリルを用いてこの操作に従って合成された。
【００７０】
方法Ｂ
５−ｔ−ブチル−３−（３−ｐ−トリルウレイド）チオフェン−２−カルボン酸エチルエステル（実施例３）の合成：
チタニウムイソプロポキサイド（１ｍＬ）、３−（４−メチルフェニル尿素）−５−ｔ−ブチルチオフェン−２−カルボン酸メチル（５００ｍｇ，１．４４ｍｍｏｌ）、およびエタノール（１０ｍＬ）の溶液を２４時間還流加熱した。溶液を減圧留去し、得られるオイルを塩化メチレンに溶解し、フラッシュクロマトグラフィー（酢酸エチル／ヘキサン）によって精製した。減圧濃縮は実施例３化合物１１９ｍｇ（２３％）を与えた。 1ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 ）ｄ９．７１（ｓ，１Ｈ），７．８７（ｓ，１Ｈ），７．２９（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，２Ｈ），７．１５（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，２Ｈ），４．２８（ｑ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，２Ｈ），２．３３（ｓ，３Ｈ），１．２９（ｍ，１２Ｈ）
【００７１】
方法Ｃ
５−ｔ−ブチル−３−（３−ｐ−トリルウレイド）チオフェン−２−カルボン酸メチルアミド（実施例４）の合成：
ステップ１
３−アミノ−５−ｔ−ブチルチオフェン−２−カルボン酸メチル（２０．０ｇ，９３．９ｍｍｏｌ），ベンジルクロロホルメート（８０．４ｍＬ，５６３ｍｍｏｌ）、炭酸ナトリウム１．１０ｇ，９．９３ｍｍｏｌ），トルエン（４００ｍＬ）および水（５０ｍＬ）の溶液を１８時間還流した。溶液を減圧留去し、得られるオイルを酢酸エチルに溶解し、水および食塩水で洗い、硫酸マグネシウム上で乾燥し、減圧濃縮し、対応するベンジルカルバメートエステルを定量的粗収率で得た。
ステップ２
上のカルバメートエステル（１３．６ｇ，３９．２ｍｍｏｌ）をねじ栓つき容器中の飽和メチルアミン／メタノール（２００ｍＬ）に溶かした。シアン化ナトリウム（０．９８ｇ，２０ｍｍｏｌ）をこの溶液へ懸濁した。容器をシールし、５０℃へ８時間加熱した。溶液を水（５００ｍＬ）へ注ぎ、酢酸エチルで抽出した。酢酸エチル層を水および食塩水で洗い、硫酸ナトリウム上で乾燥し、減圧濃縮した。粗生成物を酢酸エチル／ヘキサンでフラッシュクロマトグラフィー精製し、Ｎ−メチルアミドカルバメート２．７６ｇ（２０％）を得た。
ステップ３
上のカルバメート（２．７６ｇ，８ｍｍｏｌ）を１：１の４８％臭化水素酸／酢酸にとかし、３０℃へ２４時間加熱した。酸性溶液を冷却し、飽和重炭酸ナトリウムでｐＨ４へ中和した。テトラヒドロフラン中メチルアミン（４ｍＬ，２Ｍ）を加え、塩化メチレンで抽出した。減圧下溶媒を留去してＮ−メチルアミドアミン９２２．５ｍｇ（５４％）を得た。
ステップ４
上のアミン（６００ｍｇ，２．８３ｍｍｏｌ）、ｐ−トリルイソシアネート（３５６．４μＬ，２．８３ｍｍｏｌ）およびトルエン２ｍＬの溶液を１８時間還流加熱した。溶媒を減圧留去し、得られるオイルを酢酸エチル／塩化メチレンを使用するフラッシュクロマトグラフィーで精製し、実施例４化合物４１７ｍｇ（４４％）を得た。 1ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 ）ｄ１０．５３（ｓ，１Ｈ），７．９０（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．５Ｈｚ），７．１１（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．５Ｈｚ），５．５９（ｂｓ，１Ｈ），２．９１（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝４．９Ｈｚ），２．３１（ｓ，３Ｈ），１．３８（ｓ，９Ｈ）；ｍｐ２０２−２０４℃
【００７２】
方法Ｄ
５−ブロモメチル−３−（３−ｐ−トリルウレイド）チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル（実施例５）の合成：
ステップ１
氷浴中冷却に保った無水メタノール（１０ｍＬ）を入れた乾燥３頸フラスコへ、ナトリウム球（１１６ｍｇ，５．０６ｍｍｏｌ）を加えた。ナトリウム球が完全に溶解した後、チオグリコール酸メチル（５３７ｍｇ，５．０６ｍｍｏｌ）を加えた。約５分後、メタノール（１０ｍＬ）中の粗製４−（２−テトラヒドロピラノキシ）−２−ブチルニトリル（０．７６ｇ，４．６０ｍｍｏｌ）（Ｍｕｒｒａｙ，Ｒ．，Ｚｗｅｉｆｅｌ，Ｇ．，Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，１９８０，１５０）を混合物へ加えた。混合物を室温まで暖め、この温度に２時間保った。混合物を濃縮し、濃縮物をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）とＨ2 Ｏ（５０ｍＬ）間で分配した。有機層を食塩水（２×５０ｍＬ）で洗い、乾燥（ＭｇＳＯ4 ）し、減圧濃縮した。粗生成物はＣｈｒｏｍａｔｏｔｒｏｎ（４ｍｍプレート，ヘキサン／ＥｔＯＡｃ＝９／１）により精製し、オレンジ色オイルとしてアミノチオフェン（５９３ｍｇ，４８％）を得た。 1ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 ）ｄ６．５７（ｓ，１Ｈ），５．００（ｂｒｓ，２Ｈ），４．７９−４．７２（ｍ，１Ｈ），４．６２（ｓ，２Ｈ），３．９０−３．８０（ｍ，１Ｈ），３．８２（ｓ，３Ｈ），３．５８−３．５３（ｍ，１Ｈ），１．９０−１．５２（ｍ，６Ｈ），ＧＣ−ＭＳ２７１〔Ｍ〕+
ステップ２
２−アミノ−５−トリフルオロメチル−１，３，４−チアジアゾールの代わりにトルイジンを用いて、方法Ｅに従ってステップ１のアミンを５−ヒドロキシメチル−３−（３−ｐ−トリルウレイド）チオフェン−２−カルボン酸メチルエステルへ変換した。 1ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6 ）ｄ９．８６（ｓ，１Ｈ），９．４８（ｓ，１Ｈ），７．８３（ｓ，１Ｈ），７．３４（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，２Ｈ），７．０７（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，２Ｈ），５．７１（ｔ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，１Ｈ），４．６１（ｄ，Ｊ＝４．４Ｈｚ，２Ｈ），３．７９（ｓ，３Ｈ），２．２１（ｓ，３Ｈ）；ＭＳ（ＦＡＢ−ＬＳＩＭＳ）３２１．２〔Ｍ＋Ｈ〕+ ；ｍｐ１６６−１６８℃
ステップ３
無水ＤＭＦ中、５−ヒドロキシメチル−３−（３−ｐ−トリルウレイド）チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル（２５ｍｇ，０．０７８ｍｍｏｌ）の溶液へ、Ｎ−ブロモスクシンイミド（２８ｍｇ，０．１５６ｍｍｏｌ）とトリフェニルフォスフィン（４１ｍｇ，０．１５６ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を５０℃へ加熱し、この温度へ１時間保った。混合物を室温へ冷却した。過剰の試薬を分解するためメタノール（０．５ｍＬ）を加えた。１０分後Ｅｔ2 Ｏ（２５ｍＬ）を加え、混合物を水（１０ｍＬ），飽和ＮａＨＣＯ2 （２×１０ｍＬ）および食塩水（１０ｍＬ）で洗った。有機層を乾燥（ＭｇＳＯ4 ）し、減圧濃縮した。粗生成物はＣｈｒｏｍａｔｏｔｒｏｎ（２ｍｍプレート，ヘキサン中２％ＥｔＯＡｃ）により精製し、白色固体として実施例５化合物（１２．５ｍｇ，４２％）を得た。 1ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 ）ｄ９．５９（ｓ，１Ｈ），８．１０（ｓ，１Ｈ），７．２８（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．５Ｈｚ），７．１７（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．１Ｈｚ），６．７０（ｂｓ，１Ｈ），４．５９（ｓ，２Ｈ），３．８２（ｓ，ＯＣＨ3 ），２．３４（ｓ，３Ｈ）；ＭＳ（ＦＡＢ−ＬＳＩＭＳ）３８２，３８４〔Ｍ＋Ｈ〕+ ；ｍｐ１５７−１５８℃
【００７３】
方法Ｅ
５−ｔ−ブチル−３−〔３−（５−トリフルオロメチル）−〔１，３，４〕チアジアゾール−２−イル）ウレイド〕チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル（実施例６）の合成：
ステップ１
−１５℃のジクロロメタン（９０ｍＬ）中のトルエン（３７．８ｍＬ，７３．０ｍｍｏｌ）中２０％ホスゲン溶液へジクロロメタン（６０ｍＬ）中のピリジン（５．９ｍＬ，７３．０ｍｍｏｌ）および３−アミノ−５−ｔ−ブチルチオフェン−２−カルボン酸メチル（１０．３９ｇ，４８．７ｍｍｏｌ）を加えた。反応は２０℃へ１８時間を要してゆっくり暖めることによって許容した。得られたスラリーを減圧濃縮して乾固し、エチルエーテルへ再懸濁し、ガラスフリットを通してアルゴン圧力で濾過した。溶媒を減圧留去し、イソシアネート残渣はトルエン中に０．２Ｍへ希釈した。
ステップ２
ステップ１からのトルエン溶液（４００μｍｏｌ）中の２−アノ−５−トリフルオロメチル−１，３，４−チアジアゾール（８４．５ｍｇ，５００μｍｏｌ）の溶液を１８時間かきまぜ、溶媒を減圧留去した。粗生成物は酢酸エチル／ヘキサンによるフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、泡として実施例６化合物１４４．３ｍｇ（８８％）を得た。 1ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 ）ｄ１２．５（ｂｓ，１Ｈ），１０．３（ｓ，１Ｈ），７．８（ｓ，１Ｈ），３．８（ｓ，３Ｈ），１．４（ｓ，９Ｈ）；ＦＡＢ−ＭＳ（Ｍ＋Ｈ）+ ４０９
５−ｔ−ブチル−３−〔３−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）ウレイド〕チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル（実施例９）は、２−アミノ−５−トリフルオロメチル−１，３，４−チアジアゾールの代わりにＮ−メチル−３−アミノピラゾールを用いてこの操作に従って合成された。
５−ｔ−ブチル−３−〔３−（５−ｔ−ブチル−〔１，３，４〕チアジアゾール−３−イル）ウレイド〕チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル（実施例１０）は、２−アミノ−５−トリフルオロメチル−１，３，４−チアジアゾールの代わりに２−アミノ−５−ｔ−ブチル−１，３，４−チアジアゾールを用いてこの操作に従って合成された。
５−ｔ−ブチル−３−〔３−（１Ｈ−インドール−５−イル）ウレイド〕チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル（実施例１１）は、２−アミノ−５−トリフルオロメチル−１，３，４−チアジアゾールの代わりに５−アミノインドールを用いてこの操作に従って合成された。
５−ｔ−ブチル−３−〔３−（５−メチルチアゾール−２−イル）ウレイド〕チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル（実施例１２）は、２−アミノ−５−トリフルオロメチル−１，３，４−チアジアゾールの代わりの２−アミノ−５−メチルチアゾールを用いてこの操作に従って合成された。
５−ｔ−ブチル−３−〔３−（５−エチル−〔１，３，４〕チアジアゾール−２−イル）ウレイド〕チアゾール−２−カルボン酸メチルエステル（実施例１３）は、２−アミノ−５−トリフルオロメチル−１，３，４−チアジアゾールの代わりに２−アミノ−５−エチル−１，３，４−チアジアゾールを用いてこの操作に従って合成された。
５−ｔ−ブチル−３−〔３−（５−メチル−〔１，３，４〕チアジアゾール−２−イル）ウレイド〕チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル（実施例１４）は、２−アミノ−５−トリフルオロメチル−１，３，４−チアジアゾールの代わりに２−アミノ−５−メチル−１，３，４−チアジアゾールを用いてこの操作に従って合成された。
５−ｔ−ブチル−３−〔３−（５−シクロプロピル−〔１，３，４〕チアジアゾール−２−イル〕チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル（実施例１５）は、２−アミノ−５−トリフルオロメチル−１，３，４−チアジアゾールの代わりに２−アミノ−５−シクロプロピル−１，３，４−チアジアゾールを用いてこの操作に従って合成された。
５−ｔ−ブチル−３−〔３−（２−（１−メチル−１Ｈ−ピロール−２−イル）エチル）ウレイド〕チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル（実施例１６）は、２−アミノ−５−トリフルオロメチル−１，３，４−チアジアゾールの代わりに２−（２−アミノエチル）−１−メチルピロールを用いてこの操作に従って合成された。
【００７４】
方法Ｆ
５−ｔ−ブチル−３−〔３−（４−メチフェン−２−イル）ウレイド〕チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル（実施例１７）の合成：
ステップ１
酢酸（５００ｍＬ）中３−メチルチオフェン（５ｍＬ，５１．５７ｍｍｏｌ）と過硫酸ナトリウム（１８．４８ｇ，７７．６ｍｍｏｌ）と酢酸パラジウム（５．８１ｇ，２５．９ｍｍｏｌ）の溶液を還流加熱した。一酸化炭素のゆるい流れをこの溶液中３時間泡立てた。反応液を２０℃へ冷却し、減圧濃縮した。残渣をジクロロメタンに溶かし、セライトを加え、溶液を濾過し、次にシリカゲルのパッドを通し、そして減圧濃縮した。残渣を酢酸エチルに溶かし、２Ｎ水酸化カリウムで抽出した。水層を酢酸エチルで洗い、ｐＨをＨＣｌ（コンク）でゼロへ低下させた。生成物は酢酸エチルへ抽出し、飽和食塩水で洗い、減圧濃縮し、３−メチル−２−チオフェンカルボン酸と４−メチル−２−チオフェンカルボン酸の混合物１．８ｇ（２５％）を得た。
ステップ２
アセトン（７５ｍｌ）中の３−メチル−２−チオフェンカルボン酸および４−メチル−２−チオフェンカルボン酸（１．１１ｇ，７．８１ｍｍｏｌ）とトリメチルアミン（１．３ｍＬ，９．３８ｍｍｏｌ）の溶液を−１５℃へ冷却し、エチルクロロホルメート（１．１２ｍＬ，１１．７２ｍｍｏｌ）をゆっくり加えた。混合物を１５分間かきまぜ、水（１５ｍＬ）中のアジ化ナトリウム（８６３ｍｇ，１３．２８ｍｍｏｌ）を加えた。反応液を３０分間かきまぜ、次にジクロロメタンで希釈し、５０％飽和食塩水で洗った。有機層を硫酸マグネシウムで乾燥し、溶媒を減圧留去した。残渣をヘキサン／酢酸エチルでのフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、アジドエステルの混合物９１３ｍｇ（７０％）を得た。
ステップ３
上のアジドエステル混合物（１２０ｍｇ，７１８μｍｏｌ）をトルエン（３ｍＬ）にとかし、１００℃へ５時間加熱し、次に２０℃へ冷却した。３−アミノ−５−ｔ−ブチル−２−チオフェンカルボン酸メチルエステル（１０６ｍｇ，５００μｍｏｌ）を加え、反応液を９５℃へ１８時間加熱した。反応液を２０℃へ冷却し、溶媒を減圧留去した。粗生成物はヘキサン／酢酸エチルを用いてフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、次にジクロロメタンで順相ＨＰＬＣにより精製し、実施例１７化合物８２．１ｍｇ（４６％）と、３−メチルチオフェン誘導体１８ｍｇ（１０％）を得た。
５−ｔ−ブチル−３−（３−チオフェン−２−イルウレイド）チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル（実施例７）は、３−メチル−２−チオフェンカルボン酸に代えて２−チオフェンカルボン
酸を用いて、この操作のステップ２および３に従って合成された。
５−ｔ−ブチル−３−〔３−（５−メチルチオフェン−２−イル）ウレイド〕チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル（実施例８）は、３−メチル−２−チオフェンカルボン酸に代えて５−メチル−２−チオフェンカルボン酸を用い、この操作のステップ２および３に従って合成された。
【００７５】
方法Ｇ
５−ｔ−ブチル−３−〔３−（１−エチル−１Ｈ−ピロール−３−イル）ウレイド〕チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル（実施例１８）の合成：
ステップ１
ＤＭＦ（１０ｍＬ）中の３−ニトロピロール（４４６ｍｇ，４．１６ｍｍｏｌ）、炭酸セシウム（１．６３ｇ，４．９９ｍｍｏｌ）、ヨードエタン（９９８μＬ，１２．４８ｍｍｏｌ）の溶液を２０℃で２．５時間かきまぜた。反応液を酢酸エチルで希釈し、１Ｎ塩酸（×３）で洗い、硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧留去した。粗生成物は１００％ジクロロメタンでフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、オイルとして４８０ｍｇ（８２％）を得た。
ステップ２
メタノール（１０ｍＬ）中のステップ１の生成物（４８０ｍｇ，３．４３ｍｍｏｌ）の溶液へ炭末上の１０％パラジウム（３０ｍｇ）を加えた。混合物を大気圧で２０℃において１８時間水素添加し、濾過した。溶媒を減圧留去し、オイルとして３４２ｍｇ（９１％）を得た。
ステップ３
ステップ２の生成物（３４２ｍｇ，３．１１ｍｍｏｌ）と５−ｔ−ブチル−３−イソシアナートチオフォン−２−カルボン酸メチル（トルエン２ｍＬ中０．２Ｍ）の溶液を２０℃で２０時間かきまぜた。溶媒を減圧留去し、粗生成物を酢酸エチル／ヘキサンを使ってフラッシュクロマトグラフィーで精製し、泡として実施例１８化合物１３６ｍｇ（６５％）を得た。 1ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 ）ｄ９．７（ｓ，１Ｈ），８．０（ｓ，１Ｈ），７．７５（ｓ，１Ｈ），７．６５（ｍ，２Ｈ），７．３（ｍ，２Ｈ），３．８（ｓ，３Ｈ），１．３（ｓ，９Ｈ）；ＦＡＢ−ＭＳ（Ｍ＋Ｈ）+ ３５０
５−ｔ−ブチル−３−〔３−（１−プロピル−１Ｈ−ピロール−３−イル）ウレイド〕チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル（実施例１９）は、ヨードエタンに代わって臭化アリルを用いてこの操作に従って合成された。
５−ｔ−３−〔３−（１−プロピル−１Ｈ−ピロール−３−イル）ウレイド〕チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル（実施例２０）は、ヨードエタンに代わって２−ブロモプロパンを用いてこの操作に従って合成された。
５−ｔ−ブチル−３−〔３−（１−エチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）ウレイド〕チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル（実施例２１）は、３−ニトロピロールに代わって３−ニトロピラゾールを用いてこの操作に従って合成された。
【００７６】
方法Ｈ
５−ｔ−ブチル−３−〔３−ｐ−トリルウレイド）フラン−２−カルボン酸メチルエステル（実施例２２）の合成：
ステップ１
乾燥ＴＨＦ６０ｍＬ中の２−ｔ−ブチルフラン４．５ｇ（３６ｍｍｏｌ）の溶液へ、−７８℃においてＮ2 下ｎ−ブチルリチウム（２５ｍＬ，４ｍｍｏｌ，ヘキサン溶液中１．６Ｍ，１．１当量）を滴加した。３０分後冷却浴を氷浴にかえ、混合物を０℃で１時間かきまぜた。ドライアイスから発生させ、そして無水ＮａＳＯ4 塔で乾燥した乾燥ＣＯ2 を−７８℃で２０分間、次に０℃で反応混合物中に泡立てた。反応混合物を１Ｍ  ＨＣｌでｐＨ１へ酸性化し、酢酸エチルで抽出した。有機層を食塩水で洗い、乾燥（Ｎａ2 ＳＯ4 ）し、濃縮して淡黄色固体として２−ｔ−ブチル−５−フランカルボン酸４．２ｇ（６９％）を得た。 1ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 ）ｄ１１．０（ｂｒｓ，１Ｈ），７．１９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．３Ｈｚ），６．１１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．３Ｈｚ，１．２９（ｓ，９Ｈ）
ステップ２
乾燥ＴＨＦ３０ｍＬの上のフランカルボン酸２．０ｇ（１１．９ｍｍｏｌ）の溶液をＮ2 下−７８℃へ冷却し、これへｎ−ブチルリチウム１５．６ｍＬ（２５ｍｍｏｌ，ヘキサン溶液中１．６Ｍ，２．１当量）を滴下した。３０分後乾燥ＴＨＦ３ｍＬ（３ｍＬ洗浄液）中のＴｓＮ3 ２．３ｇ（１１．９ｍｍｏｌ，１．１当量）をカニューレにより滴下した。黄色の溶液は２時間にわたって０℃へ暖められるのを許容され、次に酢酸カリウム６ｇ（６０ｍｍｏｌ，５当量）が加えられ、懸濁液は室温で１４時間かきまぜられた。混合物をエーテルで希釈し、水で抽出した。水相を１Ｍ  ＨＣｌでｐＨ１へ酸性化し、酢酸エチルで良く抽出した。有機相を食塩水でさらに洗い、Ｎａ2 ＳＯ4 上で乾燥し、濃縮した。ＴＭＳＣＨＮ2 のヘキサン溶液（４５ｍＬ，９０ｍｍｏｌ，２．０Ｍ）をエーテル１５０ｍＬおよびメタノール２０ｍＬ中でこの赤色オイルへ加えた。３０分後、混合物を濃縮し、フラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン中酢酸エチル１０％）へ付し、無色オイル１．７２ｇを得た。生成物の 1ＨＮＭＲによる分析は、目的化合物と、同時に溶出された５−ｔ−ブチル−２−フランガルボン酸メチルとの２：３混合物であることを示した。混合物はさらに精製することなく用いた。ＦＴＩＲ（フィルム）ｃｍ-1２９６５（ｓ），２１１８（ｓ），１７２３（ｓ）；1ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 ）ｄ５．９９（ｓ，１Ｈ），３．８０（ｓ，３Ｈ），１．２５（ｓ，９Ｈ）
ステップ３
上の反応で得た混合物１．７２ｇと、セロソルブ３０ｍＬ中Ｐｄ（カーボン上１０％）０．５ｇを入れたパールボトルを継続して脱気し、Ｈ2 ガスで３回パージした。次に反応混合物をＨ2 雰囲気下（４０ｐｓｉ）１時間振とうし、酢酸エチルで希釈し、セライトを通して濾過した。濃縮液をフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン中酢酸エチル２０％）に付し、結晶性固体としてアミン０．５９ｇ（総収率２５％）と、回収したメチルエステル０．７３ｇ（３４％）を得た。ＦＴＩＲ（フィルム）ｃｍ-1３３３０−２９５０（ｓ，ｂｒ），２８５０（ｍ），１６８０（ｓ），１６３７（ｓ），１５３７（ｓ），１３４６（ｓ），１１３１（ｓ）； 1ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 ）ｄ５．７６（ｓ，１Ｈ），４．２４（ｂｒｓ，２Ｈ），１．２９（ｓ，９Ｈ）；13ＣＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 ）ｄ１７８．７，１６８．１，１６０．５，１４４．９（ｂｒ），１２４．１，９８．３，５０．５，３２．８，２８．３
ステップ４
ホスゲン（１．３ｍＬ，１．９３ｍｍｏｌ，トルエン中１．９３Ｍ溶液、１０当量）を乾燥ピリジン１．０ｍＬおよび乾燥トルエン５ｍＬ中のステップ３からの生成物５０ｍｇ（０．２５ｍｍｏｌ）の溶液へ室温でＮ2 下急速に加えた。３０分後、オレンジ色懸濁液を減圧濃縮し、乾燥トルエン１ｍＬを次々に負荷し、蒸発（２回）した。最後にトルエン３ｍＬを加え、トルイジン１００ｍｇ（０．９３ｍｍｏｌ，３．７当量）を加えた。オレンジ色混合物を一夜かきまぜ、酢酸エチルで希釈し、食塩水で洗い、乾燥し（Ｎａ2 ＳＯ4 ）、そして濃縮した。残渣をフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、淡黄色オイルとして実施例２２の化合物８０ｍｇ（９６％）を得た。ＦＴＩＲ（フィルム）ｃｍ-1３４００−３２００（ｍ，ｂｒ），２９６６（ｓ），１６７６（ｓ），１５３６（ｓ），１０９７（ｍ）； 1ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 ）ｄ８．６８（ｂｒｓ，１Ｈ），７．８７（ｂｒｓ，１Ｈ），７．２７（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．１Ｈｚ），７．１１（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．１Ｈｚ），７．０２（ｓ，２Ｈ），３．７７（ｓ，３Ｈ），１．２８（ｓ，９Ｈ），13ＣＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 ）ｄ１６８．２，１６０．５，１５２．５，１３７．７，１３４．８，１３４．０，１２９．５，１２６．０，１２１．４，１００．１，５１．０，３３．０，２８．３，２０．６
５−ｔ−ブチル−３−〔３−（３，４−ジクロロフェニル）ウレイド〕フラン−２−カルボン酸メチルエステル（実施例２３）は、トルイジンの代わりにアミノ−３，４−ジクロロベンゼンを用いてこの操作に従って合成された。
【００７７】
方法Ｉ
５−ｔ−ブチル−３−（３−ｐ−トリルウレイド）−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸メチルエステル（実施例２４）の合成：
ステップ１
クロロトリメチルシラン（１７．９ｍＬ，１４１ｍｍｏｌ，２．５当量）を乾燥メタノール（１００ｍＬ）中のピロール−２−カルボン酸（６．２８ｇ，５６．５ｍｍｏｌ）溶液へＮ2 下室温で一時に加える。一夜攪拌後、反応混液を減圧濃縮し、ジクロロメタンに再溶解し、水洗し、乾燥（Ｎａ2 ＳＯ4 ）し、そして濃縮して黄褐色半結晶固体としてピロール−２−カルボン酸メチル４．６２ｇを得る。これはさらに精製することなく使用した。 1ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 ）ｄ９．３（ｂｒｓ，１Ｈ），６．９６（ｂｒｍ，１Ｈ），６．９２（ｂｒｍ，１Ｈ），６．２９（ｂｒｑ，１Ｈ），３．８６（ｓ，３Ｈ）
ステップ２
塩化アルミニウム（０．７１０ｇ，５．３３ｍｍｏｌ，２．２当量）を乾燥ジクロロメタン（１２ｍＬ）中のピロール−２−カルボン酸メチル（０．３０ｇ，２．４２ｍｍｏｌ）溶液へ室温Ｎ2 下一時に加える。次に２−クロロ−２−メチルプロパン（０．２６ｍＬ，２．４２ｍｍｏｌ，１．０当量）をシリンジにより一時に加える。２時間後、オレンジ色の溶液を飽和炭酸ナトリウム溶液へゆっくり注ぐことによって反応停止する。得られる白色懸濁液をジエチルエーテル（２×）で抽出する。合併した有機層を乾燥（Ｎａ2 ＳＯ4 ）し、減圧濃縮して灰色の固体として５−ｔ−ブチルピロール−２−カルボン酸メチル０．４０ｇを得る。フラッシュクロマトグラフィー（ジクロロメタン中ヘキサン４０％）は白色無定形固体として所望生成物０．３６ｇ（８１％）を与える。 1ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 ）ｄ８．８２（ｂｒｓ，１Ｈ），６．８１（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝３．３Ｈｚ），６．００（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝３．３Ｈｚ），３．８３（ｓ，３Ｈ），１．３１（ｓ，９Ｈ）
ステップ３
発煙硝酸（０．５７ｍＬ，１３．６ｍｍｏｌ，１．５当量）をシリンジにより濃硫酸（１９ｍＬ）中の５−ｔ−ブチルピロール−２−カルボン酸メチル（１．６５ｇ，９．１０ｍｍｏｌ）の不均一混合物へＮ2 下室温で一時に加える。１時間後、反応物を氷水へ注ぎ、固体炭酸ナトリウムでｐＨ７へゆっくり中和し、ジエチルエーテルで抽出（×２）し、乾燥し（ＮａＳＯ4 ）、減圧濃縮する。残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ジクロロメタン中３０％ヘキサン）へ付し、高い移動度を有するビスニトロ化物０．２７ｇに加え、所望生成物０．４４ｇを得た。混合フラクションの再クロマトグラフィーは５−ｔ−ブチル−３−ニトロピロール−２−カルボン酸メチル０．２２ｇをさらに与える（総収率３２％）。モノニトロ化物 1ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 ）ｄ９．２２（ｂｒｓ，１Ｈ），６．５６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．３Ｈｚ），３．９３（ｓ，３Ｈ），１．３３（ｓ，９Ｈ）；ビスニトロ化物 1ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 ）ｄ９．１７（ｂｒｓ，１Ｈ），３．９１（ｓ，３Ｈ），１．５２（ｓ，９Ｈ）
経路Ａ
ステップ４
１６×１００ｍｍ使い捨てガラスカルチャー管を取り付けたパール水素化ボトルに、乾燥メタノール（１ｍＬ）中の５−ｔ−ブチル−３−ニトロピロール−２−カルボン酸メチル（１４ｍｇ，０．０６２ｍｍｏｌ）とＰｄ（カーボン上１０％，３ｍｇ）を仕込む。反応容器は次第に脱気し、Ｈ2 ガスで３回パージする。次に反応混合物をＨ2 雰囲気下（３５ｐｓｉ）１時間振とうし、ジクロロメタンで希釈し、セライトを通して濾過する。濾液を減圧濃縮し、明黄色オイルとして３−アミノ−５−ｔ−ブチルピロール−２−カルボン酸メチルを得る（粗収率１００％）。 1ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 ）ｄ７．８９（ｂｒｓ，２Ｈ），５．５２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．８Ｈｚ），３．８２（ｓ，３Ｈ），１．２６（ｓ，９Ｈ）
ステップ５
ホスゲン（０．３２ｍＬ，０．６２ｍｍｏｌ，トルエン中１．９３Ｍ，１０当量）を乾燥トルエン中３−アミノ−５−ｔ−ブチルピロール−２−カルボン酸メチル（１２．２ｍｇ，０．０６２ｍｍｏｌ）およびピリジン（２４７ｍＬ，３．０６ｍｍｏｌ，４９．４当量）の溶液へ加える。３０分後、オレンジ色懸濁液を減圧濃縮し、次に乾燥トルエンを次々に仕込み、蒸発（２×）した。最後にトルエン（２ｍＬ）を加え、ｐ−トルイジン（１０ｍｇ，０．０９４ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を３時間加熱し、減圧濃縮する。残渣は調製的ＴＬＣ（２プレート，厚み０．２５ｍｍ，２０×２０ｃｍ，ジクロロメタン中メタノール２％）によって精製する。大きなＵＶバンドを単離し、生成物をジクロロメタン中２％メタノールで抽出し、淡黄色無定形固体として実施例２４の化合物１６．４ｍｇ（８０％）を得る。ＦＴ−ＩＲ（ＫＢｒペレット）ｃｍ-1３３４１（ｓ），２９４７（ｍ），１６７６（ｓ），１５８３（ｓ），１５４８（ｓ），１４５６（ｓ），１２７９（ｓ），１０９４（ｓ）；ＭＳ（ＥＳ）＝３３０．１（ｍ＋１）； 1ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 ）ｄ８．４５（ｂｒｓ，１Ｈ），８．１９（ｂｒｓ，１Ｈ），７．２７（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝７．３Ｈｚ），７．１４（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．４Ｍｚ），６．９５（ｂｒｓ，１Ｈ），６．７８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．８Ｈｚ），３．７３（ｓ，３Ｈ），２．３２（ｓ，３Ｈ），１．２９（ｓ，９Ｈ）；13ＣＮＭＲ（ＭｅＯＤ，ＣＤＣｌ3 ）ｄ１６１．８９，１５３．５１，１４７．６２，１３６．１５，１３２．１７，１２８．９０，１１９．５８，１０５．９２，９７．３６，５０．００，３１．４２，２８．９９，１９．６５
５−ｔ−ブチル−１−メチル−３−（３−ｐ−トリルウレイド）−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸メチルエステル（実施例２５）の合成：
経路Ｂ
ステップ６
ジクロロメタン（１ｍＬ）中の５−ｔ−ブチル−３−ニトロピロール−２−カルボン酸メチル（１００ｍｇ，０．４４ｍｍｏｌ）、ベンジルトリメチルアンモニウムブロマイド（１５８ｍｇ，０．４４ｍｍｏｌ；１当量）およびジメチル硫酸（４６ｍＬ，０．４９ｍｍｏｌ，１．１当量）の冷溶液（−１０℃）へ、水酸化ナトリウム（０．２１ｇ，２．６５ｍｍｏｌ，５０％水溶液，６当量）を加える。５分後冷却浴を除去し、混合物を室温で４時間かきまぜる。反応混合物をジクロロメタンで希釈し、水（１×），１０％酢酸アンモニウム（２×）で洗い、乾燥（Ｎａ2 ＳＯ4 ）し、減圧濃縮し、明黄色オイルを得る。残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ジクロロメタン中３０％ヘキサン）により精製し、放置すると固化する淡黄色オイルとして、５−ｔ−ブチル−１−メチル−３−ニトロピロール−２−カルボン酸メチルエステル６１ｍｇ（６２％）を得る。 1ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 ）ｄ６．４７（ｓ，１Ｈ），３．９２（ｓ，３Ｈ），３．８０（ｓ，３Ｈ），１．３８（ｓ，９Ｈ）
ステップ７
上のニトロ化合物を３−アミノ−５−ｔ−ブチルピロール−２−カルボン酸メチルと同様な態様で還元し、３−アミノ−１−メチル−５−ｔ−ブチルピロール−２−カルボン酸メチルをオイルとして５９ｍｇ得る（粗収率１００％）。 1ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 ）ｄ５．４８（ｓ，１Ｈ），４．３４（ｂｒｓ，２Ｈ），３．８５（ｓ，３Ｈ），１．３３（ｓ，９Ｈ）；13ＣＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 ）ｄ１６２．２４，１４８．９５，１４２．２７，１０７．３９，９５．７３，５０．５５，５０．０４，３４．７３，３１．９２，２９．６７
ステップ５
乾燥ピリジン（１ｍＬ）および乾燥トルエン（２ｍＬ）中の３−アミノ−１−メチル−５−ｔ−ブチルピロール−２−カルボン酸メチル（５９ｍｇ，０．２８０ｍｍｏｌ）の溶液へ、ホスゲン（１．４５ｍＬ，２．８０ｍｍｏｌ），トルエン中１．９３Ｍ溶液）をすばやく加える。追加の乾燥トルエン（３ｍＬ）を不均一混合物の攪拌を助けるために加える。３０分後、オレンジ色懸濁液を減圧濃縮し、次々に乾燥トルエン（１ｍＬ）を加え蒸発（２×）する。最後にトルエン（３ｍＬ）を加え、ｐ−トルイジン（１１１ｍｇ，１．０４ｍｍｏｌ，３．７当量）を加える。生成する均一混合物を一夜攪拌し、ジクロロメタンで希釈し、１Ｍ  ＨＣｌで洗う。水相をジクロロメタンで逆抽出（２×）し、合併した有機相を乾燥（Ｎａ2 ＳＯ4 ）し、減圧濃縮し、フラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン中酢酸エチル１０％と２５％）によって精製し、淡黄色固体として実施例２５の化合物６６ｍｇ（６９％）を得る。ＦＴ−ＩＲ（ＫＢｒペレット）ｃｍ-1２３６４（ｓ），２３３５（ｓ），１６５９（ｍ），１５７９（ｍ），１５４２（ｍ），１３５４（ｗ），１２３２（ｗ）； 1ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 ）ｄ８．８１（ｂｒｓ，１Ｈ），７．２６（ａｐｄ，３Ｈ（２Ｈ＋１ＮＨ），Ｊ＝８．４Ｈｚ），７．１１（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ），６．８０（ｓ，１Ｈ），３．８８（ｓ，３Ｈ），３．６４（ｓ，３Ｈ），２．３１（ｓ，３Ｈ），１．３５（ｓ，９Ｈ）；13ＣＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 ）ｄ１６１．９５，１５３．０１，１４８．５９，１５３．３４，１３３．９７，１３３．７８，１２９．５４，１２２．０２，１０８．８２，９８．７６，５０．３８，３５．０３，３２．１２，３１．３７，２９．７６
【００７８】
方法Ｊ
５−ｔ−ブチル−２−（３−ｐ−トリルウレイド）チオフェン−３−カルボン酸メチルエステル（実施例２６）の合成：
ステップ１
シアン酢酸メチル（４．００ｇ，４０．４ｍｍｏｌ），イオウ（１．２９ｇ，４０．４ｍｍｏｌ）およびＤＭＦ（２０ｍＬ）の溶液へ室温でトリメチルアミン（３．０４ｍＬ，２１．８ｍｍｏｌ）を加えた。３，３−ジメチルブチルアルデヒド（５．０８ｇ，４０．４ｍｍｏｌ）を加え、１時間攪拌し、水（２００ｍＬ）中へ注いだ。固体を濾去し、濾液を酢酸エチルで抽出した。酢酸エチル層をシリカゲル詰物を通して濾過し、減圧濃縮した。フラッシュクロマトグラフィーによる精製は２−アミノ−５−ｔ−ブチルチオフェン−３−カルボン酸メチル４．１９ｇ（４９％）を与えた。
ステップ２
次に２−アミノ−５−ｔ−ブチルチオフェン−３−カルボン酸メチルを方法Ａ，ステップ２に記載した条件のもとにｐ−トリルイソシアネートと縮合し、実施例２６の化合物２９ｍｇ（１８％）を製造した。 1ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 ）ｄ１０．３７（ｓ，１Ｈ），７．３２（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，２Ｈ），７．１６（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，２Ｈ），６．８２（ｓ，１Ｈ），６．７５（ｂｒｓ，１Ｈ），３．８１（ｓ，３Ｈ），２．３４（ｓ，３Ｈ），１．３８（ｓ，９Ｈ）；ｍｐ１０９−１１１℃
５−ｔ−ブチル−２−（３−フェニルウレイド）チオフェン−３−カルボン酸メチルエステル（実施例２７）は、ｐ−トリルイソシアネートに代えてフェニルイソシアネートを使用し、この方法に従って合成された。
５−ｔ−ブチル−２−（３−（５−エチル−〔１，３，４〕チアジアゾール−２−イル）ウレイド）チオフェン−３−カルボン酸メチルエステル（実施例２８）は、２−アミノ−５−トリフルオロメチル−１，３，４−チアジアゾールに代えて２−アミノ−５−エチル−１，３，４−チアジアゾールを使用し、この方法および次に方法Ｅに従って合成された。
５−イソプロピル−２−（３−ｐ−トリルウレイド）チオフェン−３−カルボン酸メチルエステル（実施例２９）は、３，３，−ジメチルブチルアルデヒドに代えて３−メチルブチルアルデヒドを使用し、この方法ステップ１と、２−アミノ−５−トリフルオロメチル−１，３，４−チアジアゾールに代えてトルイジンを使用し、方法Ｅに従って合成された。
５−イソプロピル−２−〔３−（５−メチルチオフェン−２−イル）ウレイド〕チオフェン−３−カルボン酸メチルエステル（実施例３０）は、３，３−ジメチルブチルアルデヒドに代えて３−メチルブチルアルデヒドを使用し、この方法ステップ１と、３−メチル−２−チオフェンカルボン酸に代えて５−メチルチオフェン−２−カルボン酸を使用する方法Ｆステップ２および３に従って合成された。
以上の実施例は、以上の実施例に使用したものを本発明の一般的にまたは特定的に記載した反応剤および／または作業条件に代えることによって同様な成功度をもってくり返すことができる。
以上の記載から、当業者は本発明の本質的特徴を容易に確かめることができ、そしてその精神および範囲から逸脱することなく本発明を種々の用途および条件に適応させるように種々の変更および修飾を加えることができる。