(57)【要約】      （修正有）【課題】自己組織化膜を形成し、タンパク質の非特異吸着や血液凝固を抑制することが可能な表面修飾材料を提供する。【解決手段】下記の（式１）で表される、ホスホコリン−オリゴエチレングリコールアルキルチオール化合物。（式１）2010047496.tif 000076（式中ｍ＝０，１、ｎ＝１〜１０、Ｒは炭素数５〜２０のアルキル鎖）【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記（式１）で表されるホスホコリン−オリゴエチレングリコールアルキルチオール化合物；
（式１）
2010047496.tif 000063
（式中、ｍ＝０，１、ｎ＝１〜１０、Ｒは炭素数５〜２０のアルキル鎖）。
【請求項２】
下記（式２）で表される、請求項１に記載のホスホコリン−オリゴエチレングリコールアルキルチオール化合物；
（式２）
2010047496.tif 000064
（式中、ｎ＝１〜１０、Ｒは炭素数５〜２０のアルキル鎖）。
【請求項３】
下記（式３）で表される、請求項１に記載のホスホコリン−オリゴエチレングリコールアルキルチオール化合物；
（式３）
2010047496.tif 000065
（式中、ｎ＝１〜１０、Ｒは炭素数５〜２０のアルキル鎖）。
【請求項４】
下記の工程（ａ）〜（ｅ）を含む工程により製造されることを特徴とする、請求項１又は２に記載のホスホコリン−オリゴエチレングリコールアルキルチオール化合物の製造方法;
（ａ）
2010047496.tif 000066
（式中、ｎ＝１〜１０、Ｒは炭素数５〜２０のアルキル鎖、Ｘはハロゲン）
（ｂ）
2010047496.tif 000067
（式中、ｎ＝１〜１０、Ｒは炭素数５〜２０のアルキル鎖、Ｘはハロゲン）
（ｃ）
2010047496.tif 000068
（式中、ｎ＝１〜１０、Ｒは炭素数５〜２０のアルキル鎖、Ｔｒはトリチル基）
（ｄ）
2010047496.tif 000069
（式中、ｎ＝１〜１０、Ｒは炭素数５〜２０のアルキル鎖、Ｔｒはトリチル基、Ｔｓはトシル基）
（ｅ）
2010047496.tif 000070
（式中、ｎ＝１〜１０、Ｒは炭素数５〜２０のアルキル鎖、Ｔｒはトリチル基）。
【請求項５】
下記の工程（ａ）〜（ｅ）を含む工程により製造されることを特徴とする、請求項１又は３に記載のホスホコリン−オリゴエチレングリコールアルキルチオール化合物の製造方法;
（ａ）
2010047496.tif 000071
（式中、ｎ＝１〜１０、Ｒは炭素数５〜２０のアルキル鎖、Ｘはハロゲン）
（ｂ）
2010047496.tif 000072
（式中、ｎ＝１〜１０、Ｒは炭素数５〜２０のアルキル鎖）
（ｃ）
2010047496.tif 000073
（式中、ｎ＝１〜１０、Ｒは炭素数５〜２０のアルキル鎖、Ｔｒはトリチル基）
（ｄ）
2010047496.tif 000074
（式中、ｎ＝１〜１０、Ｒは炭素数５〜２０のアルキル鎖、Ｔｒはトリチル基、Ｔｓはトシル基）
（ｅ）
2010047496.tif 000075
（式中、ｎ＝１〜１０、Ｒは炭素数５〜２０のアルキル鎖、Ｔｒはトリチル基）。
【請求項６】
請求項１〜３のいずれかに記載のホスホコリン−オリゴエチレングリコールアルキルチオール化合物からなる薄膜により表面がコートされた装置又はその基材。
【請求項７】
前記装置又はその基材が、あらかじめ金属薄膜又は金属コロイドでコートされていることを特徴とする、請求項６に記載の装置又はその基材。
【請求項８】
前記装置又はその基材が、生体関連物質計測デバイス又は人工臓器の１部として用いられるものである、請求項６又は７に記載の装置又はその基材。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規化合物であるホスホコリン−オリゴエチレングリコールアルキルチオール及び、当該新規化合物のタンパク質非特異吸着抑制表面構築等、バイオコンパチブル表面修飾材料としての用途に関する。
【背景技術】
【０００２】
ホルモン、タンパク質等生体関連物質の計測法や透析器を始めとする人工臓器を開発するにあたって、血液凝固やタンパク質非特異吸着を抑制できる修飾表面の構築は必須である。その一方で、チオールを有する有機化合物は、金属薄膜でコートされた基板や金属コロイドに対して自己組織化膜を構築することができる有用な表面修飾材料であるため、チオールを導入した種々の表面修飾材料が開発されている。
タンパク質の非特異吸着を抑制する修飾表面を構築できるチオール化合物として、ホスホコリンを直接アルキルチオールに導入したホスホコリン−アルキルチオール化合物が開発された（非特許文献１）。血液凝固に対する抑制効果は期待できるが、タンパク質の非特異的な吸着の抑制が不十分であったため、より高感度、高性能な生体関連物質計測デバイスや人工透析機材を始めとする人工臓器などの表面を修飾するための材料として、さらにタンパク質吸着性を押さえた材料の開発が望まれていた。
【非特許文献１】R. E. Holmlin, X. Chen, R. G. Chapman, S. Takayama, and G. M. Whitesides, Langmuir, 2001, 17, 2841-2850
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
本発明は、自己組織化膜を形成するチオール化合物であって、血液凝固抑制能を有し、タンパク質の非特異吸着抑制能が高い表面修飾材料となる新規化合物を提供しようとするものである。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
本発明では、自己組織化膜を形成するチオール化合物に、さらにタンパク質の非特異吸着や血液凝固を抑制するために、ホスホコリンと共に、オリゴエチレングリコール部位を導入することで、新規化合物であるホスホコリン−オリゴエチレングリコール化合物を合成した。さらに、アルキル基の両側にオリゴエチレングリコール部位を導入したホスホコリン−オリゴエチレングリコール化合物も合成した。いずれのホスホコリン−オリゴエチレングリコール化合物も、金属薄膜でコートされた基板や金属コロイドに対して自己組織化膜を形成することができ、血液凝固抑制能も高く、しかも従来知られたチオール化合物よりも格段に膜表面へのタンパク質の非特異吸着抑制能力が高いという特性を見いだし、本発明を完成させた。
【０００５】
即ち、本発明は下記のホスホコリン−オリゴエチレングリコールアルキルチオール及びその用途に係るものである。
〔１〕  下記（式１）で表されるホスホコリン−オリゴエチレングリコールアルキルチオール化合物；
（式１）
2010047496.tif 000002
（式中、ｍ＝０，１、ｎ＝１〜１０、Ｒは炭素数５〜２０のアルキル鎖）。
〔２〕  下記（式２）で表される、前記〔１〕に記載のホスホコリン−オリゴエチレングリコールアルキルチオール化合物；
（式２）
2010047496.tif 000003
（式中、ｎ＝１〜１０、Ｒは炭素数５〜２０のアルキル鎖）。
〔３〕  下記（式３）で表される、前記〔１〕に記載のホスホコリン−オリゴエチレングリコールアルキルチオール化合物；
（式３）
2010047496.tif 000004
（式中、ｎ＝１〜１０、Ｒは炭素数５〜２０のアルキル鎖）。
〔４〕  下記の工程（ａ）〜（ｅ）を含む工程により製造されることを特徴とする、前記〔１〕又は〔２〕に記載のホスホコリン−オリゴエチレングリコールアルキルチオール化合物の製造方法;
（ａ）
2010047496.tif 000005
（式中、ｎ＝１〜１０、Ｒは炭素数５〜２０のアルキル鎖、Ｘはハロゲン）
（ｂ）
2010047496.tif 000006
（式中、ｎ＝１〜１０、Ｒは炭素数５〜２０のアルキル鎖、Ｘはハロゲン）
（ｃ）
2010047496.tif 000007
（式中、ｎ＝１〜１０、Ｒは炭素数５〜２０のアルキル鎖、Ｔｒはトリチル基）
（ｄ）
2010047496.tif 000008
（式中、ｎ＝１〜１０、Ｒは炭素数５〜２０のアルキル鎖、Ｔｒはトリチル基、Ｔｓはトシル基）
（ｅ）
2010047496.tif 000009
（式中、ｎ＝１〜１０、Ｒは炭素数５〜２０のアルキル鎖、Ｔｒはトリチル基）。
〔５〕  下記の工程（ａ）〜（ｅ）を含む工程により製造されることを特徴とする、前記〔１〕又は〔３〕に記載のホスホコリン−オリゴエチレングリコールアルキルチオール化合物の製造方法;
（ａ）
2010047496.tif 000010
（式中、ｎ＝１〜１０、Ｒは炭素数５〜２０のアルキル鎖、Ｘはハロゲン）
（ｂ）
2010047496.tif 000011
（式中、ｎ＝１〜１０、Ｒは炭素数５〜２０のアルキル鎖）
（ｃ）
2010047496.tif 000012
（式中、ｎ＝１〜１０、Ｒは炭素数５〜２０のアルキル鎖、Ｔｒはトリチル基）
（ｄ）
2010047496.tif 000013
（式中、ｎ＝１〜１０、Ｒは炭素数５〜２０のアルキル鎖、Ｔｒはトリチル基、Ｔｓはトシル基）
（ｅ）
2010047496.tif 000014
（式中、ｎ＝１〜１０、Ｒは炭素数５〜２０のアルキル鎖、Ｔｒはトリチル基）。
〔６〕  前記〔１〕〜〔３〕のいずれかに記載のホスホコリン−オリゴエチレングリコールアルキルチオール化合物からなる薄膜により表面がコートされた装置又はその基材。
〔７〕  前記装置又はその基材が、あらかじめ金属薄膜又は金属コロイドでコートされていることを特徴とする、前記〔６〕に記載の装置又はその基材。
〔８〕  前記装置又はその基材が、生体関連物質計測デバイス又は人工臓器の１部として用いられるものである、前記〔６〕又は〔７〕に記載の装置又はその基材。
【発明の効果】
【０００６】
本発明は、新規化合物であるホスホコリン−オリゴエチレングリコールアルキルチオール化合物は、チオールによって自己組織化膜を形成し、さらにホスホコリン、オリゴエチレングリコール部位によってタンパク質の非特異吸着や血液凝固を抑制することが可能な表面修飾材料を提供するものであり、生体関連物質計測デバイスや人工臓器の修飾表面材料としてきわめて有用である。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００７】
本発明のホスホコリン−オリゴエチレングリコールアルキルチオールは、文献未記載の新規化合物であり、その自己組織化膜はタンパク質の非特異吸着を抑制するものである。
上記一般式１で表される化合物において、ｎ＝１〜１０、好ましくはｎ＝２〜４である。また、Ｒは炭素数５〜２０個、好ましくは８〜１５個、より好ましくは１０〜１４個のアルキル基であり、分岐してもよいが直鎖アルキル基が好ましい。
【０００８】
以下、本発明化合物の製造法を説明する。
製造法は式１において、ｍ＝０とｍ＝１の二通りに別れる。
（１）ｍ＝０の場合
（式２）
2010047496.tif 000015
（式中、ｎ＝１〜１０、Ｒは炭素数５〜２０のアルキル鎖）。
【０００９】
まず下記反応式に従って、オリゴエチレングリコールとα、ω−アルキルジハライドを反応させることによってオリゴエチレングリコールアルキルハライドを得ることができる。
2010047496.tif 000016
この反応は、触媒として水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水素化ナトリウム、金属ナトリウム、カリウム−ｔ−ブトキシド等の塩基性化合物を用いて行うことができる。好ましくはカリウム−ｔ−ブトキシドが使用される。ハライドとしては、塩化物、臭化物、ヨウ化物を用いて行うことができ、好ましくは臭化物が使用される。使用される溶媒としては、ジオキサン、テトラヒドロフラン、ｔ−ブタノール、ジメチルホルムアミド等の有機溶媒、好ましくはテトラヒドロフランが使用される。α、ω−アルキルジハライドに対するオリゴエチレングリコールの反応割合は、前者１モルに対して後者を１モル以上、好ましくは５〜１２モル程度とすればよい。触媒の使用量は、α、ω−アルキルジハライド１モルに対して０．５〜３モル、好ましくは１モル程度とすればよい。反応温度は、０〜１２０℃程度、好ましくは７０〜８０℃とすればよい。反応時間は２〜２４時間程度とすればよい。
【００１０】
次に下記反応式に従って、オリゴエチレングリコールアルキルハライドをチオ尿素、続いてエチレンジアミンで処理することによってオリゴエチレングリコールアルキルチオールを得ることができる。
2010047496.tif 000017
この反応に使用される溶媒としては、メタノール、エタノール、プロパノール、ジオキサン、テトラヒドロフラン、アセトニトリル等の有機溶媒、好ましくはエタノールが使用される。オリゴエチレングリコールアルキルハライドに対するチオ尿素の反応割合は、前者１モルに対して後者を１モル以上、好ましくは３モル程度とすればよい。続くエチレンジアミンの反応割合は、オリゴエチレングリコールアルキルハライド１モルに対して１モル以上、好ましくは１０〜２５モル程度とすればよい。チオ尿素を用いる段階の反応温度は０〜１２０℃程度、好ましくは７０〜９０℃とすればよい。反応時間は６〜４８時間程度とすればよい。エチレンジアミンを用いる段階の反応温度は−４０〜６０℃程度、好ましくは０℃程度とすればよい。反応時間は６〜２４時間程度とすればよい。
【００１１】
次に下記反応式に従って、オリゴエチレングリコールアルキルチオールとトリチルクロライドを反応させることによって（オリゴエチレングリコールアルキル）（トリチル）チオエーテルを得ることができる。
2010047496.tif 000018
この反応は、触媒として水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム等の塩基性化合物を用いて行うことができる。好ましくは炭酸カリウムが使用される。使用される溶媒としては、ジオキサン、テトラヒドロフラン、アセトニトリル、ジメチルホルムアミド等の有機溶媒、好ましくはアセトニトリルが使用される。オリゴエチレングリコールアルキルチオールに対するトリチルクロライドの反応割合は、前者１モルに対して後者を０．５〜１．５モル、好ましくは１モル程度とすればよい。触媒及の使用量は、オリゴエチレングリコールアルキルチオール１モルに対して１モル以上、好ましくは１．５モル程度とすればよい。反応温度は、０〜１２０℃程度、好ましくは７０〜８０℃とすればよい。反応時間は６〜２４時間程度とすればよい。
【００１２】
以上のようにして合成した（オリゴエチレングリコールアルキル）（トリチル）チオエーテルを下記反応式に従ってコリントシラートと反応させることによって、ホスホコリン−オリゴエチレングリコールアルキル（トリチル）チオエーテルを得ることができる。
2010047496.tif 000019
この反応は、塩化ホスホリルとの反応、コリントシラートとの反応、加水分解の三段階からなる。第一段階では、触媒としてピリジン、トリエチルアミン、ジメチルアミノピリジン等の塩基性化合物を用いて行うことができる。好ましくはトリエチルアミンが使用される。この反応に使用される溶媒としては、ベンゼン、クロロホルム、ジクロロメタン等の有機溶媒、好ましくはクロロホルムが使用される。（オリゴエチレングリコールアルキル）（トリチル）チオエーテルに対する塩化ホスホリルの反応割合は、前者１モルに対して後者を２モル以上、好ましくは１０モル程度とすればよい。触媒の使用量は、（オリゴエチレングリコールアルキル）（トリチル）チオエーテル１モルに対して０．５〜２モル程度、好ましくは等モル程度とすればよい。反応温度は、０〜５０℃程度、好ましくは室温とすればよい。反応時間は１〜４時間程度とすればよい。第二段階では、この反応に使用される溶媒としては、ピリジン、トリエチルアミン、クロロホルム、ジクロロメタン等の有機溶媒、好ましくはピリジンが使用される。（オリゴエチレングリコールアルキル）（トリチル）チオエーテルに対するコリントシラートの反応割合は、前者１モルに対して後者を２モル以上、好ましくは５モル程度とすればよい。反応温度は、−２０〜５０℃程度、好ましくは０℃程度とすればよい。反応時間は１２〜７２時間程度とすればよい。第三段階は、反応液に水を加えることによって行うことができる。加える水の量は、第二段階で溶媒として用いたピリジンの半分程度とすればよい。反応温度は、０〜８０℃程度、好ましくは室温とすればよい。反応時間は３〜１２時間程度とすればよい。
【００１３】
次に下記反応式に従ってホスホコリン−オリゴエチレングリコールアルキル（トリチル）チオエーテルのトリチル基を脱保護することによって本発明の一般式（１）で表されるホスホコリン−オリゴエチレングリコールアルキルチオールを得ることができる。
2010047496.tif 000020
この反応は、トリエチルシラン、鉱酸等を用いて行うことができる。好ましくはトリエチルシランが使用される。使用される溶媒としては、ジクロロメタン、クロロホルム、ベンゼン、トルエン等の有機溶媒とトリフルオロ酢酸の混合物、好ましくはジクロロメタンとの混合物が使用される。ホスホコリン−オリゴエチレングリコールアルキル（トリチル）チオエーテルに対するトリエチルシランの反応割合は、前者１モルに対して後者を１モル以上、好ましくは１〜２モル程度とすればよい。反応温度は、０〜５０℃程度、好ましくは室温とすればよい。反応時間は３０分〜１時間程度とすればよい。このようにして得られる本発明化合物は、通常のチオール化合物の精製方法が適用でき、例えばＨＰＬＣ法、カラムクロマトグラフィー法などにより反応混合物から容易に単離、精製できる。
また、本発明の目的物が合成できたことは、ＮＭＲや質量分析等により確認できる。
【００１４】
（２）ｍ＝１の場合
（式３）
2010047496.tif 000021
（式中、ｎ＝１〜１０、Ｒは炭素数５〜２０のアルキル鎖）
【００１５】
下記反応式に従ってオリゴエチレングリコールアルキルハライドをＮ−メチルベンジルアミンと反応させることによって、オリゴエチレングリコールアルキルメチルベンジルアミンを得ることができる。
2010047496.tif 000022
この反応は、触媒として水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム等の塩基性化合物を用いて行うことができる。好ましくは炭酸カリウムが使用される。使用される溶媒としては、ジオキサン、テトラヒドロフラン、アセトニトリル、ジメチルホルムアミド等の有機溶媒、好ましくはアセトニトリルが使用される。オリゴエチレングリコールアルキルハライドに対するＮ−メチルベンジルアミンの反応割合は、前者１モルに対して後者を１モル以上、好ましくは３〜６モル程度とすればよい。触媒の使用量は、オリゴエチレングリコールアルキルハライド１モルに対して１モル以上、好ましくは３〜６モル程度とすればよい。反応温度は、０〜１２０℃程度、好ましくは７０〜９０℃とすればよい。反応時間は６〜４８時間程度とすればよい。
【００１６】
次に下記反応式に従ってオリゴエチレングリコールアルキルメチルベンジルアミンと水素を反応させることによって、オリゴエチレングリコールアルキルメチルアミンを得ることができる。
2010047496.tif 000023
この反応は、触媒としてパラジウムカーボン、白金粉末等の金属触媒を用いて行うことができる。好ましくはパラジウムカーボンが使用される。この反応に使用される溶媒としては、メタノール、エタノール、トルエン等の有機溶媒、好ましくはエタノールが使用される。使用する水素の圧力は１気圧以上、好ましくは５〜１０気圧程度とすればよい。触媒の使用量は、オリゴエチレングリコールアルキルメチルベンジルアミン１モルに対して５ｗｔ％パラジウムカーボン１０〜１００ｇ、好ましくは５０ｇ程度とすればよい。反応温度は、５０〜１５０℃程度、好ましくは１００〜１２０℃とすればよい。反応時間は６〜４８時間程度とすればよい。
【００１７】
次に下記反応式に従ってオリゴエチレングリコールアルキルメチルアミンとトリチルメルカプトエトキシ酢酸クロライドを反応させることによって、オリゴエチレングリコールアルキル（トリチルメルカプトエトキシ酢酸）アミドを得ることができる。
2010047496.tif 000024
この反応は、触媒としてピリジン、トリエチルアミン、ジメチルアミノピリジン等の塩基性化合物を用いて行うことができる。好ましくはトリエチルアミンが使用される。この反応に使用される溶媒としては、ベンゼン、テトラヒドロフラン、クロロホルム、ジクロロメタン等の有機溶媒、好ましくはテトラヒドロフランが使用される。オリゴエチレングリコールアルキルメチルアミンに対するトリチルメルカプトエトキシ酢酸クロライドの反応割合は、前者１モルに対して後者を０．５〜１．５モル程度、好ましくは等モル程度とすればよい。触媒の使用量は、オリゴエチレングリコールアルキルメチルアミン１モルに対して１モル以上、好ましくは３〜５モル程度とすればよい。反応温度は、０〜５０℃程度、好ましくは０〜室温（２７℃）とすればよい。反応時間は６〜２４時間程度とすればよい。
【００１８】
以上のようにして合成したオリゴエチレングリコールアルキル（トリチルメルカプトエトキシ酢酸）アミドを下記反応式に従ってコリントシラートと反応させることによって、ホスホコリン−オリゴエチレングリコールアルキル（トリチル）チオエーテルを得ることができる。
2010047496.tif 000025
この反応は、塩化ホスホリルとの反応、コリントシラートとの反応、加水分解の三段階からなる。第一段階では、触媒としてピリジン、トリエチルアミン、ジメチルアミノピリジン等の塩基性化合物を用いて行うことができる。好ましくはトリエチルアミンが使用される。この反応に使用される溶媒としては、ベンゼン、クロロホルム、ジクロロメタン等の有機溶媒、好ましくはクロロホルムが使用される。オリゴエチレングリコールアルキル（トリチルメルカプトエトキシ酢酸）アミドに対する塩化ホスホリルの反応割合は、前者１モルに対して後者を２モル以上、好ましくは１０モル程度とすればよい。触媒の使用量は、トリチルメルカプトエトキシ酢酸アミド１モルに対して０．５〜２モル程度、好ましくは等モル程度とすればよい。反応温度は、０〜５０℃程度、好ましくは室温とすればよい。反応時間は１〜４時間程度とすればよい。第二段階では、この反応に使用される溶媒としては、ピリジン、トリエチルアミン、クロロホルム、ジクロロメタン等の有機溶媒、好ましくはピリジンが使用される。オリゴエチレングリコールアルキル（トリチルメルカプトエトキシ酢酸）アミドに対するコリントシラートの反応割合は、前者１モルに対して後者を２モル以上、好ましくは５モル程度とすればよい。反応温度は、−２０〜５０℃程度、好ましくは０℃程度とすればよい。反応時間は１２〜７２時間程度とすればよい。第三段階は、反応液に水を加えることによって行うことができる。加える水の量は、第二段階で溶媒として用いたピリジンの半分程度とすればよい。反応温度は、０〜８０℃程度、好ましくは室温とすればよい。反応時間は３〜１２時間程度とすればよい。
【００１９】
次に下記反応式に従ってホスホコリン−オリゴエチレングリコールアルキル（トリチル）チオエーテルのトリチル基を脱保護することによって本発明の一般式（１）で表されるホスホコリン−オリゴエチレングリコールアルキルチオールを得ることができる。
2010047496.tif 000026
この反応は、トリエチルシラン、鉱酸等を用いて行うことができる。好ましくはトリエチルシランが使用される。使用される溶媒としては、ジクロロメタン、クロロホルム、ベンゼン、トルエン等の有機溶媒とトリフルオロ酢酸の混合物、好ましくはジクロロメタンとの混合物が使用される。ホスホコリン−オリゴエチレングリコールアルキル（トリチル）チオエーテルに対するトリエチルシランの反応割合は、前者１モルに対して後者を１モル以上、好ましくは１．５〜２モル程度とすればよい。反応温度は、０〜５０℃程度、好ましくは室温とすればよい。反応時間は３０分〜１時間程度とすればよい。このようにして得られる本発明化合物は、通常のチオール化合物の精製方法が適用でき、例えばＨＰＬＣ法、カラムクロマトグラフィー法などにより反応混合物から容易に単離、精製できる。
また、本発明の目的物が合成できたことは、ＮＭＲや質量分析等により確認できる。
【００２０】
本発明のホスホコリン−オリゴエチレングリコールアルキルチオエーテルは、チオールによる自己組織化膜構築機能を持ち、ホスホコリン、オリゴエチレングリコール部位によってタンパク質の非特異吸着抑制機能を示すことから、バイオコンパチブル表面修飾材料として有効に利用できる。
本発明の化合物を用いて自己組織化膜を構築するための手法は、化合物の溶液を調整し、その溶液に修飾したい基材を浸積するといった公知の方法が適用できる。具体的には、化合物１０μＭ、ＰＢＳ緩衝剤１０ｍＭ、塩化ナトリウム０．１Ｍを含む２０％エタノール水溶液を調整し、その溶液に３０分間基材の金属表面を浸積することによって目的とする自己組織化膜を構築した。金属コロイドの場合も同様な手法で金属コロイド表面に自己組織化膜を構築できる。または、調整した溶液を装置又はその基材の表面に、塗布又は噴霧してもよい。
ここで、本発明の対象とする装置又はその基材としては、その１部に血液や蛋白質含有溶液と接する表面を有するものであり、典型的には、各種病態検出用マーカーなどの検出用キット、検出センサーなどを備えた各種生体関連物質計測デバイス装置の信号検出部位である金属表面、あるいは人工臓器などの血液、体液など蛋白質含有溶液が直接接触する基材の金属表面部位である。
その際の、金属としては金、銀などを用いることができ、金が好ましく、単結晶の金は特に好ましい。本発明の装置又は基材自体をこれらの金属製とすることもできるが、プラスチックまたは他の金属で製造し、その血液や蛋白質含有溶液と接する部位表面を、あらかじめこれら金属薄膜でコートしておいてもよい。
【実施例】
【００２１】
以下、実施例を挙げて本発明を説明するが、本発明はそれに限られるものではない。
（実施例１）ホスホコリンモノエチレングリコールドデシルチオールの合成（Ｐ１Ｅ）
（１）エチレングリコールドデシルブロマイドの合成
2010047496.tif 000027
三口フラスコ（１Ｌ）に１，１２−ジブロモドデカン１３．１ｇ（４０ｍｍｏｌ）、エチレングリコール２４．８ｇ（４００ｍｍｏｌ）、ＴＨＦ８００ｍＬを入れ、室温で撹拌した。カリウム−ｔ−ブトキシド４．４８ｇ（４０ｍｏｌ）を加え、４８時間加熱還流した。放冷後ＴＨＦを留去し、５ｗｔ％塩酸２００ｍＬを加え、クロロホルム２００ｍＬで抽出した。クロロホルムを留去し、シリカゲルカラム（展開溶媒クロロホルム）にて目的物を精製した。
無色液体
収率３７％
【００２２】
（２）エチレングリコールドデシルチオールの合成
2010047496.tif 000028
三口フラスコ（３００ｍＬ）に窒素雰囲気下エチレングリコールドデシルブロマイド３．０９ｇ（１０ｍｍｏｌ）とエタノール２００ｍＬを入れ、室温で撹拌した。チオ尿素２．２８ｇ（３０ｍｏｌ）を加え、窒素雰囲気下２４時間加熱還流した。
反応液を冷却し、窒素雰囲気下０℃で撹拌した。エチレンジアミン１５．０ｇ（２５０ｍｏｌ）のエタノール溶液５０ｍＬを加え、窒素雰囲気下１２時間室温で撹拌した。反応液を氷上に注ぎ、濃塩酸で中和して水２００ｍＬを加え、クロロホルム２００ｍＬで抽出した。クロロホルム、エタノールを留去し、シリカゲルカラム（展開溶媒クロロホルム）にて目的物を精製した。
無色固体
収率９５％
【００２３】
（３）（エチレングリコールドデシル）（トリチル）チオエーテルの合成
2010047496.tif 000029
三口フラスコ（５００ｍＬ）に窒素雰囲気下エチレングリコールドデシルチオール２．６２ｇ（１０ｍｍｏｌ）、トリチルクロライド２．７９ｇ（１０ｍｍｏｌ）、アセトニトリル３５０ｍＬとＴＨＦ１００ｍＬを入れ、室温で撹拌した。炭酸カリウム２．０７ｇ（１５ｍｏｌ）を加え、窒素雰囲気下１２時間加熱還流した。放冷後アセトニトリルとＴＨＦを留去し、えられた残渣に５ｗｔ％塩酸２００ｍＬを加え、クロロホルム２００ｍＬで抽出した。クロロホルムを留去し、ＧＰＣにて目的物を精製した。
無色液体
収率７５％
【００２４】
（４）コリントシラートの合成
2010047496.tif 000030
三口フラスコ（３００ｍＬ）にジメチルアミノエタノール４．４６ｇ（５０ｍｍｏｌ）とＴＨＦ２００ｍＬを入れ、室温で撹拌した。メチルトシラート１０．２ｇ（５５ｍｏｌ）のＴＨＦ溶液５０ｍＬを滴下し、２４時間室温で撹拌した。ＴＨＦを留去し、アセトン２００ｍＬで再結晶にて目的物を精製した。
無色固体
収率９５％
【００２５】
（５）（ホスホコリンエチレングリコールドデシル）（トリチル）チオエーテルの合成
2010047496.tif 000031
ナスフラスコ（２００ｍＬ）にオキシ塩化リン３．０６ｇ（２０ｍｍｏｌ）とクロロホルム４０ｍＬを入れ、室温で撹拌した。（エチレングリコールドデシル）（トリチル）チオエーテル１．０１ｇ（２ｍｍｏｌ）とトリエチルアミン２０２ｍｇ（２ｍｍｏｌ）の混合クロロホルム溶液２０ｍＬを滴下し、さらに室温で３時間撹拌した。過剰のオキシ塩化リンとクロロホルムを留去し、減圧乾燥した。得られた粗生成物にピリジン４０ｍＬを加え、０℃で撹拌した。コリントシラート２．７６ｇ（１０ｍｍｏｌ）をよく撹拌しながら加え、室温で４８時間撹拌した。反応液に水２０ｍＬを加え、さらに６時間室温で撹拌した。ピリジンを留去して５ｗｔ％塩酸１００ｍＬを加えてクロロホルム２００ｍＬで抽出し、もう一度クロロホルム１００ｍＬで抽出した。クロロホルムを留去し、シリカゲルカラム（展開溶媒メタノール：クロロホルム＝１００：１００→０）で目的物を精製した。
ワックス状無色固体
収率３５％
【００２６】
（６）ホスホコリンモノエチレングリコールドデシルチオールの合成
2010047496.tif 000032
ナスフラスコ（２００ｍＬ）に（ホスホコリンエチレングリコールドデシル）（トリチル）チオエーテル１．３４ｇ（２ｍｍｏｌ）、トリフルオロ酢酸２０ｍＬ、ジクロロメタン２０ｍＬを入れ、室温で撹拌した。トリエチルシラン２７９ｍｇ（２．４ｍｍｏｌ）のジクロロメタン溶液３０ｍＬを加え、室温で３０分撹拌した。トリフルオロ酢酸、ジクロロメタンを留去し、シリカゲルカラム（展開溶媒メタノール：クロロホルム＝１００：１００→０）で目的物を精製した。
ワックス状無色固体
収率４０％
１Ｈ−ＮＭＲ；（ＣＤＣｌ３、５００ＭＨｚ）δ：１．１９〜１．３８（１７Ｈ、ｍ）、１．４５〜１．６２（４Ｈ、ｍ）、２．４６〜２．５２（２Ｈ、ｍ）、３．３２〜３．４１（１１Ｈ、ｍ）、３．５４（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝５．０３Ｈｚ）、３．７６〜３．８３（２Ｈ、ｍ）、３．９２（２Ｈ、ｑ、Ｊ＝５．４８Ｈｚ）、４．２３〜４．３０（２Ｈ、ｍ）
【００２７】
（実施例２）ホスホコリンジエチレングリコールドデシルチオールの合成（Ｐ２Ｅ）
（１）ジエチレングリコールドデシルブロマイドの合成
2010047496.tif 000033
三口フラスコ（１Ｌ）に１，１２−ジブロモドデカン１３．１ｇ（４０ｍｍｏｌ）、ジエチレングリコール４２．４ｇ（４００ｍｍｏｌ）、ＴＨＦ８００ｍＬを入れ、室温で撹拌した。カリウム−ｔ−ブトキシド４．４８ｇ（４０ｍｏｌ）を加え、６時間加熱還流した。放冷後ＴＨＦを留去し、５ｗｔ％塩酸２００ｍＬを加え、クロロホルム２００ｍＬで抽出した。クロロホルムを留去し、シリカゲルカラム（展開溶媒クロロホルム）にて目的物を精製した。
無色液体
収率４４％
【００２８】
（２）ジエチレングリコールドデシルチオールの合成
2010047496.tif 000034
三口フラスコ（３００ｍＬ）に窒素雰囲気下ジエチレングリコールドデシルブロマイド３．５３ｇ（１０ｍｍｏｌ）とエタノール２００ｍＬを入れ、室温で撹拌した。チオ尿素２．２８ｇ（３０ｍｏｌ）を加え、窒素雰囲気下２４時間加熱還流した。
反応液を冷却し、窒素雰囲気下０℃で撹拌した。エチレンジアミン１５．０ｇ（２５０ｍｏｌ）のエタノール溶液５０ｍＬを加え、窒素雰囲気下１２時間室温で撹拌した。反応液を氷上に注ぎ、濃塩酸で中和して水２００ｍＬを加え、クロロホルム２００ｍＬで抽出した。クロロホルム、エタノールを留去し、シリカゲルカラム（展開溶媒クロロホルム）にて目的物を精製した。
無色固体
収率７３％
【００２９】
（３）（ジエチレングリコールドデシル）（トリチル）チオエーテルの合成
2010047496.tif 000035
三口フラスコ（３００ｍＬ）に窒素雰囲気下粗ジエチレングリコールドデシルチオール３．０７ｇ（１０ｍｍｏｌ）、トリチルクロライド２．７９ｇ（１０ｍｍｏｌ）、アセトニトリル２００ｍＬを入れ、室温で撹拌した。炭酸カリウム２．０７ｇ（１５ｍｏｌ）を加え、窒素雰囲気下１２時間加熱還流した。放冷後アセトニトリルを留去し、えられた残渣に５ｗｔ％塩酸２００ｍＬを加え、クロロホルム２００ｍＬで抽出した。クロロホルムを留去し、ＧＰＣにて目的物を精製した。
無色液体
収率７９％
【００３０】
（４）（ホスホコリンジエチレングリコールドデシル）（トリチル）チオエーテルの合成
2010047496.tif 000036
ナスフラスコ（２００ｍＬ）にオキシ塩化リン３．０６ｇ（２０ｍｍｏｌ）とクロロホルム４０ｍＬを入れ、室温で撹拌した。（ジエチレングリコールドデシル）（トリチル）チオエーテル１．１０ｇ（２ｍｍｏｌ）とトリエチルアミン２０２ｍｇ（２ｍｍｏｌ）の混合クロロホルム溶液２０ｍＬを滴下し、さらに室温で３時間撹拌した。過剰のオキシ塩化リンとクロロホルムを留去し、減圧乾燥した。得られた粗生成物にピリジン４０ｍＬを加え、０℃で撹拌した。コリントシラート２．７６ｇ（１０ｍｍｏｌ）をよく撹拌しながら加え、室温で４８時間撹拌した。反応液に水２０ｍＬを加え、さらに６時間室温で撹拌した。ピリジンを留去して５ｗｔ％塩酸１００ｍＬを加えてクロロホルム２００ｍＬで抽出し、もう一度クロロホルム１００ｍＬで抽出した。クロロホルムを留去し、シリカゲルカラム（展開溶媒メタノール：クロロホルム＝１００：１００→０）で目的物を精製した。
ワックス状無色固体
収率３０％
【００３１】
（５）ホスホコリンジエチレングリコールドデシルチオールの合成
2010047496.tif 000037
ナスフラスコ（２００ｍＬ）に（ホスホコリンジエチレングリコールドデシル）（トリチル）チオエーテル１．４３ｇ（２ｍｍｏｌ）、トリフルオロ酢酸２０ｍＬ、ジクロロメタン２０ｍＬを入れ、室温で撹拌した。トリエチルシラン２７９ｍｇ（２．４ｍｍｏｌ）のジクロロメタン溶液３０ｍＬを加え、室温で３０分撹拌した。トリフルオロ酢酸、ジクロロメタンを留去し、シリカゲルカラム（展開溶媒メタノール：クロロホルム＝１００：１００→０）で目的物を精製した。
ワックス状無色固体
収率５７％
１Ｈ−ＮＭＲ；（ＣＤＣｌ３、５００ＭＨｚ）δ：１．２０〜１．３８（１７Ｈ、ｍ）、１．４９〜１．６３（４Ｈ、ｍ）、２．５１（２Ｈ、ｑ、Ｊ＝７．３２Ｈｚ）、３．３３〜３．４２（１１Ｈ、ｍ）、３．５１〜３．５４（２Ｈ、ｍ）、３．５８〜３．６２（２Ｈ、ｍ）、３．６４（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝４．８０Ｈｚ）、３．７９〜３．８５（２Ｈ、ｍ）、３．９９（２Ｈ、ｑ、Ｊ＝５．５０Ｈｚ）、４．２８〜４．３６（２Ｈ、ｍ）
【００３２】
（実施例３）ホスホコリントリエチレングリコールドデシルチオールの合成（Ｐ３Ｅ）
（１）トリエチレングリコールドデシルブロマイドの合成
2010047496.tif 000038
三口フラスコ（１Ｌ）に１，１２−ジブロモドデカン１３．１ｇ（４０ｍｍｏｌ）、トリエチレングリコール６０．１ｇ（４００ｍｍｏｌ）、ＴＨＦ８００ｍＬを入れ、室温で撹拌した。カリウム−ｔ−ブトキシド４．４８ｇ（４０ｍｏｌ）を加え、６時間加熱還流した。放冷後ＴＨＦを留去し、５ｗｔ％塩酸２００ｍＬを加え、クロロホルム２００ｍＬで抽出した。クロロホルムを留去し、シリカゲルカラム（展開溶媒クロロホルム：ヘキサン＝１００：１００→０）にて目的物を精製した。
無色液体
収率４３％
【００３３】
（２）トリエチレングリコールドデシルチオールの合成
2010047496.tif 000039
三口フラスコ（３００ｍＬ）に窒素雰囲気下トリエチレングリコールドデシルブロマイド３．９７ｇ（１０ｍｍｏｌ）とエタノール２００ｍＬを入れ、室温で撹拌した。チオ尿素２．２８ｇ（３０ｍｏｌ）を加え、窒素雰囲気下２４時間加熱還流した。
反応液を冷却し、窒素雰囲気下０℃で撹拌した。エチレンジアミン１５．０ｇ（２５０ｍｏｌ）のエタノール溶液５０ｍＬを加え、窒素雰囲気下１２時間室温で撹拌した。反応液を氷上に注ぎ、濃塩酸で中和して水２００ｍＬを加え、クロロホルム２００ｍＬで抽出した。クロロホルム、エタノールを留去し、シリカゲルカラム（展開溶媒クロロホルム）にて目的物を精製した。
無色固体
収率７９％
【００３４】
（３）（トリエチレングリコールドデシル）（トリチル）チオエーテルの合成
2010047496.tif 000040
三口フラスコ（３００ｍＬ）に窒素雰囲気下トリエチレングリコールドデシルチオール３．５１ｇ（１０ｍｍｏｌ）、トリチルクロライド２．７９ｇ（１０ｍｍｏｌ）、アセトニトリル２００ｍＬを入れ、室温で撹拌した。炭酸カリウム２．０７ｇ（１５ｍｏｌ）を加え、窒素雰囲気下１２時間加熱還流した。放冷後アセトニトリルを留去し、えられた残渣に５ｗｔ％塩酸２００ｍＬを加え、クロロホルム２００ｍＬで抽出した。クロロホルムを留去し、ＧＰＣにて目的物を精製した。
無色液体
収率７３％
【００３５】
（４）（ホスホコリントリエチレングリコールドデシル）（トリチル）チオエーテルの合成
2010047496.tif 000041
ナスフラスコ（２００ｍＬ）にオキシ塩化リン３．０６ｇ（２０ｍｍｏｌ）とクロロホルム４０ｍＬを入れ、室温で撹拌した。（トリエチレングリコールドデシル）（トリチル）チオエーテル１．１９ｇ（２ｍｍｏｌ）とトリエチルアミン２０２ｍｇ（２ｍｍｏｌ）の混合クロロホルム溶液２０ｍＬを滴下し、さらに室温で３時間撹拌した。過剰のオキシ塩化リンとクロロホルムを留去し、減圧乾燥した。得られた粗生成物にピリジン４０ｍＬを加え、０℃で撹拌した。コリントシラート２．７６ｇ（１０ｍｍｏｌ）をよく撹拌しながら加え、室温で４８時間撹拌した。反応液に水２０ｍＬを加え、さらに６時間室温で撹拌した。ピリジンを留去して５ｗｔ％塩酸１００ｍＬを加えてクロロホルム２００ｍＬで抽出し、もう一度クロロホルム１００ｍＬで抽出した。クロロホルムを留去し、シリカゲルカラム（展開溶媒メタノール：クロロホルム＝１００：１００→０）で目的物を精製した。
ワックス状無色固体
収率４３％
【００３６】
（５）ホスホコリントリエチレングリコールドデシルチオールの合成
2010047496.tif 000042
ナスフラスコ（２００ｍＬ）に（ホスホコリントリエチレングリコールドデシル）（トリチル）チオエーテル１．５２ｇ（２ｍｍｏｌ）、トリフルオロ酢酸２０ｍＬ、ジクロロメタン２０ｍＬを入れ、室温で撹拌した。トリエチルシラン２７９ｍｇ（２．４ｍｍｏｌ）のジクロロメタン溶液３０ｍＬを加え、室温で３０分撹拌した。トリフルオロ酢酸、ジクロロメタンを留去し、シリカゲルカラム（展開溶媒メタノール：クロロホルム＝１００：１００→０）で目的物を精製した。
ワックス状無色固体
収率４０％
１Ｈ−ＮＭＲ；（ＣＤＣｌ３、５００ＭＨｚ）δ：１．１９〜１．３８（１７Ｈ、ｍ）、１．４８〜１．６２（４Ｈ、ｍ）、２．５０（２Ｈ、ｑ、Ｊ＝７．３３Ｈｚ）、３．３６（９Ｈ、ｓ）、３．４０（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝７．１０Ｈｚ）、３．５１〜３．６４（１０Ｈ、ｍ）、３．７８〜３．８４（２Ｈ、ｍ）、３．９６（２Ｈ、ｑ、Ｊ＝５．３５Ｈｚ）、４．２７〜４．３３（２Ｈ、ｍ）
【００３７】
（実施例４）ホスホコリンテトラエチレングリコールドデシルチオールの合成（Ｐ４Ｅ）
（１）テトラエチレングリコールドデシルブロマイドの合成
2010047496.tif 000043
三口フラスコ（１Ｌ）に１，１２−ジブロモドデカン１３．１ｇ（４０ｍｍｏｌ）、テトラエチレングリコール７７．７ｇ（４００ｍｍｏｌ）、ＴＨＦ８００ｍＬを入れ、室温で撹拌した。カリウム−ｔ−ブトキシド４．４８ｇ（４０ｍｏｌ）を加え、６時間加熱還流した。放冷後ＴＨＦを留去し、５ｗｔ％塩酸２００ｍＬを加え、クロロホルム２００ｍＬで抽出した。クロロホルムを留去し、シリカゲルカラム（展開溶媒クロロホルム：ヘキサン＝１００：１００→０）にて目的物を精製した。
無色液体
収率４３％
【００３８】
（２）テトラエチレングリコールドデシルチオールの合成
2010047496.tif 000044
三口フラスコ（３００ｍＬ）に窒素雰囲気下テトラエチレングリコールドデシルブロマイド４．４１ｇ（１０ｍｍｏｌ）とエタノール２００ｍＬを入れ、室温で撹拌した。チオ尿素２．２８ｇ（３０ｍｏｌ）を加え、窒素雰囲気下２４時間加熱還流した。
反応液を冷却し、窒素雰囲気下０℃で撹拌した。エチレンジアミン１５．０ｇ（２５０ｍｏｌ）のエタノール溶液５０ｍＬを加え、窒素雰囲気下１２時間室温で撹拌した。反応液を氷上に注ぎ、濃塩酸で中和して水２００ｍＬを加え、クロロホルム２００ｍＬで抽出した。クロロホルム、エタノールを留去し、シリカゲルカラム（展開溶媒クロロホルム）にて目的物を精製した。
無色固体
収率７８％
【００３９】
（３）（テトラエチレングリコールドデシル）（トリチル）チオエーテルの合成
2010047496.tif 000045
三口フラスコ（３００ｍＬ）に窒素雰囲気下テトラエチレングリコールドデシルチオール３．９４ｇ（１０ｍｍｏｌ）、トリチルクロライド２．７９ｇ（１０ｍｍｏｌ）、アセトニトリル２００ｍＬを入れ、室温で撹拌した。炭酸カリウム２．０７ｇ（１５ｍｏｌ）を加え、窒素雰囲気下１２時間加熱還流した。放冷後アセトニトリルを留去し、えられた残渣に５ｗｔ％塩酸２００ｍＬを加え、クロロホルム２００ｍＬで抽出した。クロロホルムを留去し、ＧＰＣにて目的物を精製した。
無色液体
収率７７％
【００４０】
（４）（ホスホコリンテトラエチレングリコールドデシル）（トリチル）チオエーテルの合成
2010047496.tif 000046
ナスフラスコ（２００ｍＬ）にオキシ塩化リン３．０６ｇ（２０ｍｍｏｌ）とクロロホルム４０ｍＬを入れ、室温で撹拌した。（テトラエチレングリコールドデシル）（トリチル）チオエーテル１．２７ｇ（２ｍｍｏｌ）とトリエチルアミン２０２ｍｇ（２ｍｍｏｌ）の混合クロロホルム溶液２０ｍＬを滴下し、さらに室温で３時間撹拌した。過剰のオキシ塩化リンとクロロホルムを留去し、減圧乾燥した。得られた粗生成物にピリジン４０ｍＬを加え、室温で撹拌した。コリントシラート２．７６ｇ（１０ｍｍｏｌ）をよく撹拌しながら加え、室温で４８時間撹拌した。反応液に水２０ｍＬを加え、さらに６時間室温で撹拌した。ピリジンを留去して５ｗｔ％塩酸１００ｍＬを加えてクロロホルム２００ｍＬで抽出し、もう一度クロロホルム１００ｍＬで抽出した。クロロホルムを留去し、シリカゲルカラム（展開溶媒メタノール：クロロホルム＝１００：１００→０）で目的物を精製した。
ワックス状無色固体
収率１３％
【００４１】
（５）ホスホコリンテトラエチレングリコールドデシルチオールの合成
2010047496.tif 000047
ナスフラスコ（２００ｍＬ）に（ホスホコリンテトラエチレングリコールドデシル）（トリチル）チオエーテル１．６０ｇ（２ｍｍｏｌ）、トリフルオロ酢酸２０ｍＬ、ジクロロメタン２０ｍＬを入れ、室温で撹拌した。トリエチルシラン２７９ｍｇ（２．４ｍｍｏｌ）のジクロロメタン溶液３０ｍＬを加え、室温で３０分撹拌した。トリフルオロ酢酸、ジクロロメタンを留去し、シリカゲルカラム（展開溶媒メタノール：クロロホルム＝１００：１００→０）で目的物を精製した。
ワックス状無色固体
収率６１％
１Ｈ−ＮＭＲ；（ＣＤＣｌ３、５００ＭＨｚ）δ：１．１９〜１．３９（１７Ｈ、ｍ）、１．５０〜１．６２（４Ｈ、ｍ）、２．５０（２Ｈ、ｑ、Ｊ＝７．３２Ｈｚ）、３．３４（９Ｈ、ｓ）、３．４１（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝６．８８Ｈｚ）、３．５１〜３．６４（１４Ｈ、ｍ）、３．７６〜３．８３（２Ｈ、ｍ）、３．９６（２Ｈ、ｑ、Ｊ＝５．３５Ｈｚ）、４．２７〜４．３４（２Ｈ、ｍ）
【００４２】
（実施例５）ホスホコリンジエチレングリコールドデシルアミドチオールの合成（Ｐ２Ｅ２Ｅ）
（１）ジエチレングリコールドデシルブロマイドの合成
2010047496.tif 000048
三口フラスコ（１Ｌ）に１，１２−ジブロモドデカン１３．１ｇ（４０ｍｍｏｌ）、ジエチレングリコール４２．４ｇ（４００ｍｍｏｌ）、ＴＨＦ８００ｍＬを入れ、室温で撹拌した。カリウム−ｔ−ブトキシド４．４８ｇ（４０ｍｏｌ）を加え、６時間加熱還流した。放冷後ＴＨＦを留去し、５ｗｔ％塩酸２００ｍＬを加え、クロロホルム２００ｍＬで抽出した。クロロホルムを留去し、シリカゲルカラム（展開溶媒クロロホルム）にて目的物を精製した。
無色液体
収率４４％
【００４３】
（２）ジエチレングリコールドデシルメチルベンジルアミンの合成
2010047496.tif 000049
三口フラスコ（１Ｌ）に窒素雰囲気下ジエチレングリコールドデシルブロマイド７．０７ｇ（２０ｍｍｏｌ）、メチルベンジルアミン１２．１ｇ（１００ｍｍｏｌ）、アセトニトリル８００ｍＬを入れ、室温で撹拌した。炭酸カリウム１３．８ｇ（１００ｍｏｌ）を加え、窒素雰囲気下２４時間加熱還流した。放冷後アセトニトリルを留去し、水２００ｍＬを加え、クロロホルム２００ｍＬで抽出した。クロロホルムを留去し、シリカゲルカラム（展開溶媒クロロホルム：メタノール＝１００：０→２）にて目的物を精製した。
無色液体
収率９９％
【００４４】
（３）ジエチレングリコールドデシルメチルアミンの合成
2010047496.tif 000050
オートクレーブ（３００ｍＬ）にジエチレングリコールドデシルメチルベンジルアミン７．６３ｇ（２０ｍｍｏｌ）、５ｗｔ％パラジウムカーボン１．００ｇ、エタノール１５０ｍＬを入れ、蓋をした。８気圧の水素で置換を４回行い、１００℃で２４時間撹拌した。水素圧が減少した場合には水素を補充した。放冷後脱圧し、蓋を開けた。パラジウムカーボンを濾別し、エタノールを留去した。ベンゼン１００ｍＬを加え、不溶物を濾別した。ベンゼンを留去し、減圧乾燥してそのまま次の反応に用いた。
無色固体
粗収率９５％
【００４５】
（４）ジアゾ酢酸エチルの合成
2010047496.tif 000051
三口フラスコ（１ｌ）に亜硝酸ナトリウム３８．１ｇ（０．５５ｍｏｌ）、グリシンエチルエステル塩酸塩６８．４ｇ（０．４９ｍｏｌ）、酢酸ナトリウム１．３６ｇ、水２５０ｍｌを入れ、溶かした後に０℃に冷却する一方で、１０ｗｔ％硫酸水溶液２００ｍｌ、１０ｗｔ％炭酸ナトリウム水溶液５００ｍｌを調製し、同様に０℃に冷却した。冷却したジクロロメタン８０ｍｌと１０ｗｔ％硫酸水溶液３ｍｌを加え、０℃で５分間撹拌した後に分液ロートにてジクロロメタン層を分離し、水溶液は三口フラスコに、ジクロロメタン層は直ちに冷却した炭酸ナトリウム水溶液５０ｍｌで洗浄した後０℃で保存した。再び冷却したジクロロメタン８０ｍｌを加え、１０ｗｔ％硫酸水溶液１５ｍｌを３分かけて滴下し、０℃で３分間撹拌した後に分液ロートにてジクロロメタン層を分離し、水溶液は三口フラスコに、ジクロロメタン層は直ちに冷却した炭酸ナトリウム水溶液５０ｍｌで洗浄した後０℃で保存した。この操作をジクロロメタン層に黄色い着色がなくなるまで繰り返した（７〜８回）。集めたジクロロメタン層をまとめて等量の水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムを用いて一晩脱水し、溶液のまま次の反応に用いた。
黄色液体
粗収率８０％
【００４６】
（５）クロロエトキシ酢酸エチルエステルの合成
2010047496.tif 000052
三口フラスコ（１Ｌ）にエチレンクロロヒドリン４７．３ｇ（５８８ｍｍｏｌ）、粗ジアゾ酢酸エチルエステル２２．６ｇ（１９６ｍｍｏｌ、ジクロロメタン溶液）、ジクロロメタン合計６００ｍＬを入れ、加熱還流した。三フッ化ホウ素エチルエーテル錯体エーテル溶液０．７５ｍＬのジクロロメタン溶液２０ｍＬを２０分かけてゆっくり滴下し、３時間加熱還流した。放冷後反応液を５ｗｔ％塩酸１Ｌに注ぎ、ジクロロメタン層を分離した。ジクロロメタンを留去し、減圧蒸留にて目的物を精製した。
無色液体、ｂ．ｐ．５１〜５２℃／０．１５ｍｍＨｇ
収率８４％
【００４７】
（６）アセチルメルカプトエトキシ酢酸エチルエステルの合成
2010047496.tif 000053
三口フラスコ（３００ｍＬ）に窒素雰囲気下クロロエトキシ酢酸エチルエステル８．３３ｇ（５０ｍｍｏｌ）とＤＭＦ２００ｍＬを入れ、室温で撹拌した。チオ酢酸カリウム８．５７ｇ（７５ｍｍｏｌ）を加え、窒素雰囲気下室温で１２時間撹拌した。反応液を５ｗｔ％塩酸２００ｍＬに注ぎ、クロロホルム２００ｍＬで抽出した。クロロホルム、ＤＭＦを留去し、減圧乾燥してそのまま次の反応に用いた。
淡黄色液体
粗収率１００％
【００４８】
（７）メルカプトエトキシ酢酸の合成
2010047496.tif 000054
三口フラスコ（１Ｌ）に窒素雰囲気下粗アセチルメルカプトエトキシ酢酸エチルエステル１０．３ｇ（５０ｍｍｏｌ）とエタノール３００ｍＬを入れ、室温で撹拌した。水酸化ナトリウム２０．０ｇ（５００ｍｍｏｌ）の水溶液３００ｍＬを加え、窒素雰囲気下室温で１２時間撹拌した。反応液に濃塩酸を加えて中和し、エタノール、水を留去した。得られた残渣にクロロホルム２００ｍＬを加え、可溶成分を分離した。クロロホルムを留去し、減圧乾燥してそのまま次の反応に用いた。
無色液体
粗収率７７％
【００４９】
（８）トリチルメルカプトエトキシ酢酸の合成
2010047496.tif 000055
三口フラスコ（１００ｍＬ）に窒素雰囲気下粗メルカプトエトキシ酢酸１．７０ｇ（１２．５ｍｍｏｌ）、トリフェニルメタノール２．６０ｇ（１０ｍｍｏｌ）、酢酸４０ｍＬを入れ、室温で撹拌した。三フッ化ホウ素エーテル錯体溶液４．５３ｇ（４７％、１５ｍｍｏｌ）を加え、窒素雰囲気下室温で１２時間撹拌した。反応液を５ｗｔ％塩酸１００ｍＬに注ぎ、クロロホルム１００ｍＬで抽出した。クロロホルム層は、５ｗｔ％塩酸１００ｍＬで洗浄した。クロロホルムを留去し、ヘキサン：酢酸エチル＝２００：４ｍＬを用いて再結晶を行い目的物を精製した。
淡黄色固体
収率４６％
【００５０】
（９）トリチルメルカプトエトキシ酢酸クロライドの合成
2010047496.tif 000056
ナスフラスコ（２００ｍＬ）にトリチルメルカプトエトキシ酢酸３．７８ｇ（１０ｍｍｏｌ）、オキザリルクロライド１．９０ｇ（１５ｍｍｏｌ）、ベンゼン５０ｍＬを入れ、室温で撹拌した。ＤＭＦを３滴加え、室温で６時間撹拌した。ベンゼン、オキザリルクロライドを留去し、減圧乾燥してそのまま次の反応に用いた。
淡褐色液体
粗収率１００％
【００５１】
（１０）（ジエチレングリコールドデシル）（メチル）（トリチルメルカプトエトキシ酢酸）アミドの合成
2010047496.tif 000057
三口フラスコ（３００ｍＬ）に窒素雰囲気下ジエチレングリコールドデシルメチルアミン３．０３ｇ（１０ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン５．０５ｇ（５０ｍｍｏｌ）、ＴＨＦ１５０ｍＬを入れ、０℃で撹拌した。粗トリチルメルカプトエトキシ酢酸クロライド３．９８ｇ（１０ｍｍｏｌ）のＴＨＦ溶液４０ｍＬを滴下し、窒素雰囲気下室温で１２時間撹拌した。ＴＨＦを留去し、５ｗｔ％塩酸１５０ｍＬを加え、クロロホルム１５０ｍＬで抽出した。クロロホルムを留去し、ＧＰＣにて目的物を精製した。
淡黄色液体
収率６６％
【００５２】
（１１）（ホスホコリンジエチレングリコールドデシル）（メチル）（トリチルメルカプトエトキシ酢酸）アミドの合成
2010047496.tif 000058
ナスフラスコ（２００ｍＬ）にオキシ塩化リン３．０６ｇ（２０ｍｍｏｌ）とクロロホルム４０ｍＬを入れ、室温で撹拌した。（ジエチレングリコールドデシル）（メチル）（トリチルメルカプトエトキシ酢酸）アミド１．３３ｇ（２ｍｍｏｌ）とトリエチルアミン２０２ｍｇ（２ｍｍｏｌ）の混合クロロホルム溶液２０ｍＬを滴下し、さらに室温で３時間撹拌した。過剰のオキシ塩化リンとクロロホルムを留去し、減圧乾燥した。得られた粗生成物にピリジン４０ｍＬを加え、０℃で撹拌した。コリントシラート２．７６ｇ（１０ｍｍｏｌ）をよく撹拌しながら加え、室温で４８時間撹拌した。反応液に水２０ｍＬを加え、さらに６時間室温で撹拌した。ピリジンを留去して５ｗｔ％塩酸１００ｍＬを加えてクロロホルム２００ｍＬで抽出した。水層はクロロホルム１００ｍＬでもう一度抽出した。クロロホルムを留去し、シリカゲルカラム（展開溶媒メタノール：クロロホルム＝１００：１００→０）で目的物を精製した。
ワックス状無色固体
収率４０％
【００５３】
（１２）ホスホコリンジエチレングリコールドデシルアミドチオールの合成
2010047496.tif 000059
ナスフラスコ（２００ｍＬ）に（ホスホコリンジエチレングリコールドデシル）（メチル）（トリチルメルカプトエトキシ酢酸）アミド１．６６ｇ（２ｍｍｏｌ）、トリフルオロ酢酸２０ｍＬ、ジクロロメタン２０ｍＬを入れ、室温で撹拌した。トリエチルシラン２７９ｍｇ（２．４ｍｍｏｌ）のジクロロメタン溶液２０ｍＬを加え、室温で３０分撹拌した。トリフルオロ酢酸、ジクロロメタンを留去し、シリカゲルカラム（展開溶媒メタノール：クロロホルム＝１００：１００→０）で目的物を精製した。
ワックス状無色固体
収率３８％
１Ｈ−ＮＭＲ；（ＣＤＣｌ３、５００ＭＨｚ）δ：１．１９〜１．３４（１６Ｈ、ｍ）、１．４７〜１．５８（４Ｈ、ｍ）、１．５９〜１．６４（１Ｈ、ｍ）、２．７０〜２．７６（２Ｈ、ｍ）、２．９３（３Ｈ、ｄ、Ｊ＝２５．２Ｈｚ）、３．２３（１Ｈ、ｔ、Ｊ＝７．５８Ｈｚ）、３．３１〜３．４３（１２Ｈ、ｍ）、３．５０〜３．５４（２Ｈ、ｍ）、３．６２〜３．６８（２Ｈ、ｍ）、３．７８〜３．８５（２Ｈ、ｍ）、３．９８（２Ｈ、ｑ、Ｊ＝５．３３Ｈｚ）、４．１７（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝９．７０Ｈｚ）、４．２７〜４．３６（２Ｈ、ｍ）
【００５４】
（実施例６）
実施例１〜５のようにして合成したホスホコリン−オリゴエチレングリコールアルキルチオールを用いて金表面上に自己集合膜を構築した。比較のために、前記非特許文献１に記載されたホスホコリン−アルキルチオール（下記式：Ｐ０Ｅ）も合成し、同様に自己集合膜を構築した。（なお、文献ではアルキル鎖の長さはＣ１１であるが、本発明におけるホスホコリン−オリゴエチレングリコールアルキルチオールとより正確に比較するために下記式のアルキル鎖がＣ１２であるホスホコリン−アルキルチオールを合成して用いた。）
式：Ｐ０Ｅ
2010047496.tif 000060
金表面上に構築した自己集合膜構造を検討するため、膜の表面濃度測定を行った。さらにタンパク質非特異吸着抑制機能を評価するため、糖鎖に結合することが知られているタンパク質の中でも代表的なタンパク質であるコンカナバリンＡを指標として用いた。構築した自己集合膜表面への吸着量測定は、ビアコアを用いて行った。それらの結果を表１に示した。
金表面上に単分子膜を形成することが知られている長鎖アルキルチオール膜の理論的表面濃度は７．７×１０−１０ｍｏｌ／ｃｍ２であることから、構築した自己集合膜はいずれも金表面に吸着し、分子のかさ高さや柔軟性を反映した単分子膜を形成していることが明らかになった。ホスホコリンを導入した修飾表面は、未修飾金表面と比較していずれもコンカナバリンＡの吸着を効果的に抑制することを見いだした。特記すべき特徴は、オリゴエチレングリコール鎖ユニット数が０又は１（式１においてｎが０又は１）であるＰ０ＥやＰ１Ｅと比較して、オリゴエチレングリコール鎖ユニット数が２以上（式１においてｎが２以上）の場合はコンカナバリンＡの吸着量が約半分以下と、さらに顕著にコンカナバリンＡの吸着が抑制されることである。これより導入するオリゴエチレングリコール鎖が長い方がより効果的にタンパク質の非特異吸着を抑制し、構築した自己集合膜はオリゴエチレングリコール鎖ユニット数が２以上（式１においてｎが２以上）において顕著なタンパク質非特異吸着抑制機能を発揮することが明らかになった。
＜表１＞
2010047496.tif 000061
【００５５】
（実施例７）
フィブリノーゲンは血液凝固因子として知られ、その吸着量は血液凝固抑制評価指標として用いられている。そこで構築した自己集合膜の血液凝固抑制機能を評価するため、実施例６と同様にビアコアを用いて自己集合膜へのフィブリノーゲン吸着量を測定した。その結果を表２に示した。
ホスホコリンを導入した修飾表面は、未修飾金表面と比較してフィブリノーゲンの吸着を効果的に抑制し、オリゴエチレングリコール鎖長に関係なくいずれも優れた血液凝固抑制機能を持つ表面を与えることが明らかになった。
＜表２＞
2010047496.tif 000062
以上の結果より、本発明のホスホコリン−オリゴエチレングリコールアルキルチオール化合物は自己組織化膜を形成し、血液凝固抑制機能を有する点で従来公知のチオール化合物と同様に人工臓器など血液と接触する可能性のある器具表面の修飾材料としての有用性があることと共に、修飾表面に、公知チオール化合物以上の高いタンパク質非特異吸着抑制機能を与えることができることが確認できた。特にオリゴエチレングリコール鎖ユニット数が２以上（式１においてｎが２以上）の化合物は、タンパク質非特異吸着抑制機能が顕著であることから、より多様な生体関連物質計測デバイスや人工臓器の開発に資する修飾表面を提供することができるバイオコンパチブル表面修飾材料として期待される。