(57)【要約】【課題】グラム陽性菌に効果がある抗菌剤、特に食品などに添加しても安全な天然物由来の抗菌剤及び抗菌方法を提供する。【解決手段】ベータ酸含有ホップ抽出物とシソ科植物抽出物、好ましくは非油溶性シソ科植物抽出物とを含有する抗菌剤。  この抗菌剤は、臭気が抑制されており、スタフィロコッカス属、ラクトバシルス属、リステリア属、アリシクロバシルス属、及び、バシルス属などのグラム陽性菌に対して優れた抗菌活性を示す。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ベータ酸含有ホップ抽出物とシソ科植物抽出物とを含有することを特徴とする抗菌剤。
【請求項２】
シソ科植物抽出物が、非油溶性シソ科植物抽出物である、請求項１に記載の抗菌剤。
【請求項３】
ベータ酸含有ホップ抽出物と非油溶性シソ科植物抽出物との含有割合が、成分の重量比で９９：１〜１：９９である、請求項１又は２に記載の抗菌剤。
【請求項４】
臭気が抑制されたものである、請求項１乃至３の何れか１項に記載の抗菌剤。
【請求項５】
グラム陽性菌に属する細菌に対して抗菌活性を示す、請求項１乃至４の何れか１項に記載の抗菌剤。
【請求項６】
グラム陽性菌に属する細菌が、スタフィロコッカス（Staphyrococcus）属、ラクトバシルス（Lactobacillus）属、リステリア（Listeria）属、アリシクロバシルス（Alicyclobacillus）属、及び、バシルス（Bacillus）属から成る群より選ばれる何れかの属に属する細菌である、請求項５に記載の抗菌剤。
【請求項７】
請求項１乃至６の何れか１項に記載の抗菌剤を、試料中に含有させることを特徴とする抗菌方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、抗菌剤及び抗菌方法に関し、さらに詳しくは、ベータ酸含有ホップ抽出物とシソ科植物抽出物とを含有する抗菌剤及びそれを用いる抗菌方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
最近の研究から、リステリア種（Listeria）、特にリステリア・モノシトジェネス（Listeria monocytogenes）によって起こされるヒトでのリステリア症は、様々な種類の食品、特にソフトチーズ及びパテ並びにハム及び他のプレパッケージ食用獣肉及び鳥肉製品の摂取に関連することが明らかにされている（例えば、PHLS食品チェーンの１６の公衆衛生研究所での調査（非特許文献１）参照）。
【０００３】
食品病原菌であるリステリア・モノシトジェネスは年間約７０例の死亡の原因となっており、これは他の食品病原菌の場合の数字の２倍を超えている。また、リステリアの主たる汚染源は食品製造者であると一般に考えられている。一方、ホップ酸及びそれらの関連酸は以前から細菌阻害剤として認識されている（特許文献１参照）。
【０００４】
【特許文献１】特表平８−５０２８８７号公報
【非特許文献１】「Listeria Monocytogenesin Prepacked Ready-To-Eat Sliced Meat」S．Velani及びR．J．Gilbert，PHLS Microbiology Digest，７巻（１９７７）
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
しかしながら、一般的に抗菌剤（特に天然物由来の抗菌剤）は、微生物の種類によりその抗菌活性が異なることが知られており、従来の抗菌剤は、サルモネラ菌、病原性大腸菌などに対して抗菌活性は有するものの、リステリア属の細菌などのグラム陽性菌に効果がある抗菌剤、特に食品などに添加しても安全な天然物由来の抗菌剤は余り知られていない。また、ホップ酸（特にベータ酸含有ホップ抽出物）は、リステリア菌に対する抗菌活性を有することが知られているが、特有の臭気があり、それにより使用の制限を余儀なくされていた。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者らは、上記課題を解決するべく鋭意検討した結果、ベータ酸含有ホップ抽出物とシソ科植物抽出物とを配合して使用することにより、スタフィロコッカス属、ラクトバシルス属、リステリア属、アリシクロバシルス属、及び、バシルス属などのグラム陽性菌に対して相乗的な抗菌活性を持ち、かつホップ抽出物の特有の臭気が抑制された抗菌剤を取得できることを見出し、本発明を完成させた。
【０００７】
即ち、本発明は、次の［１］〜［７］に記載される事項により特定される、次のとおりのものである。
［１］ベータ酸含有ホップ抽出物とシソ科植物抽出物とを含有することを特徴とする抗菌剤。
［２］シソ科植物抽出物が、非油溶性シソ科植物抽出物である、上記［１］に記載の抗菌剤。
［３］ベータ酸含有ホップ抽出物と非油溶性シソ科植物抽出物との含有割合が、成分の重量比で９９：１〜１：９９である、上記［１］又は［２］に記載の抗菌剤。
［４］臭気が抑制されたものである、上記［１］乃至［３］の何れかに記載の抗菌剤。
［５］グラム陽性菌に属する細菌に対して抗菌活性を示す、上記［１］乃至［４］の何れかに記載の抗菌剤。
［６］グラム陽性菌に属する細菌が、スタフィロコッカス（Staphyrococcus）属、ラクトバシルス（Lactobacillus）属、リステリア（Listeria）属、アリシクロバシルス（Alicyclobacillus）属、及び、バシルス（Bacillus）属から成る群より選ばれる何れかの属に属する細菌である、上記［５］に記載の抗菌剤。 
［７］上記［１］乃至［６］の何れかに記載の抗菌剤を、試料中に含有させることを特徴とする抗菌方法。
【発明の効果】
【０００８】
本発明の抗菌剤を使用することにより、試料に対して非常に少ない添加量で、スタフィロコッカス属、ラクトバシルス属、リステリア属、アリシクロバシルス属、及び、バシルス属などのグラム陽性菌、特にリステリア属に属する細菌に対して十分な抗菌効果が発揮される。本発明の抗菌剤は、ホップ抽出物の特有の臭気が抑制されているので、例えば、食品、飲料、医療、医薬品、環境安全の分野において広く使用することができるが、特に食品保存剤として有用であり、本発明の抗菌方法は、特に食品の保存方法として有用である。 
【発明を実施するための最良の形態】
【０００９】
以下、本発明を詳細に説明するが、この説明は本発明の実施態様の一例（代表例）であり、本発明はその要旨を超えない限り、以下の内容に限定されるものではない。
【００１０】
本発明の抗菌剤は、ベータ酸含有ホップ抽出物とシソ科植物抽出物を有効成分として含有する。
本発明で用いられるベータ酸含有ホップ抽出物としては、ホップ抽出物であって、ルプロン、コルプロン、アルドプロン等のベータ酸を含むものであれば特に制限されず、如何なる方法で調製されたものでも良い。
【００１１】
ベータ酸含有ホップ抽出物を得る方法としては、液状または臨界状態の二酸化炭素抽出による方法を採用することが望ましい。この方法は、それ自体既知の方法であり、その詳細は、特開昭６１−１３７４号公報や特開平６−２４０２８８号公報等に記載されている。この方法によれば、一般にベータ酸を５０重量％以上含有するホップ抽出物（残部はホップ樹脂やホップ精油である）を効率よく得ることができる。この方法で得られる抽出物は市販もされており、市販品としては、例えば、ステイナー社（S. S. Steiner Inc.）製のベータ・アロマ・エクストラクト（BETA AROM EXTRACT：商品名）が挙げられる。
【００１２】
なお、ベータ酸含有ホップ抽出物を得る方法は上記の方法に限定されるものではなく、例えば、熱水で抽出する方法、エタノールやアセトンや酢酸エチルなどの有機溶媒で抽出する方法、水酸化ナトリウムや炭酸ナトリウムや水酸化カリウムやリン酸ナトリウムなどのアルカリ性水溶液で抽出する方法などであってもよい。
【００１３】
本発明で用いられるシソ科植物抽出物としては、例えばシソ、アオジソ、セージ、タイム、オレガノ、チリメンジソ、ローズマリー（マンネンロウ）等のシソ科植物の抽出物であれば、如何なる方法で調製されたものであっても良い。これらの中で、特にローズマリー抽出物が好ましい。また、本発明においては、シソ科植物抽出物としては非油溶性植物抽出物が好ましい。従って、本発明においては、シソ科植物（特にローズマリー）の非油溶性植物抽出物が最も好ましい。シソ科植物からは、各種のテルペン類が抽出される。
【００１４】
テルペン類には、モノテルペン、セスキテルペン、ジテルペン、トリテルペン等があり、具体的には、モノテルペノイドアルコール又はモノテルペノイドケトン、例えばリナロール、イソボルネオール、ボルナン−２−オン、ボルナン−２，３−ジオン、フェカン−２−オール、フェカン−２−オン、ｐ−メンタン−３−オール、ｐ−メンタン−１（６），８−ジエン−２−オ−ル、ｐ−メンタ−１，８−ジエン−７−オール、ｐ−メンタ−１−エン−８−オール、ｐ−メンタン−３−オン、ｐ−メンタ−１（６），８−ジエン−２−オン、ｐ−メンタ−１−エン−３−オン、ｐ−メンタ−４（８）−エン−３−オン、ピナ−２−エン−７−オン、ピナ−２−エン−４−オン、ツジャン−３−オン等が挙げられる。また、本発明においては、ロスマリン酸、カルノソール、カルノジック酸、ロスマノール、エピロスマノール、エピイソロスマノール、ロスマリジオール、ルテオリン等のジテルペン及びトリテルペンも好適に使用することができる。これらの中では、特に、ロスマリン酸、カルノソール又はカルノジック酸が好ましい。なお、上記のテルペノイドアルコール、テルペノイドケトン、ジテルペン、トリテルペンは合成品であってもよい。
【００１５】
ロスマリン酸は、フェノールカルボン酸の一つであり、特にローズマリーの中に多く含まれている。その構造は、フェノールカルボン酸が２個結合した形である。従って、構造的、機能的に、フェルラ酸、カフェ酸、クロロゲン酸などのフェノールカルボン酸より、フェノール性水酸基が多いので、酸化防止効力が高い。また、ＳＯＤ（スーパーオキシドデスムターゼ）様などの酵素阻害活性効果も高い。また、構造中に共役二重結合を有しているため、光劣化防止効力が高い。使用するロスマリン酸は、安全の観点から、天然からの抽出物が好ましく、ロスマリン酸が多量に存在するローズマリーからの抽出物が好ましい。
【００１６】
ロスマリン酸の一般的な製法は次の通りである。原料としては、シソ科植物、例えばローズマリーの全草、または、その葉、根、茎、花、果実、種子の何れを使用してもよいが、好ましくは葉を使用する。通常、抽出効率を高めるため、刻んでから使用する。ロスマリン酸は、ローズマリーの水溶性（非油溶性）抽出物として得られる。従って、含水エタノールで抽出処理し、当該抽出液に水を添加して非水溶性成分を析出させ、非水溶性成分を分離した溶液を減圧濃縮することにより得られる。含水エタノールとしては含水率４０〜６０重量％のものが好適に使用される。
【００１７】
カルノソール及びカルノジック酸は、セージ、タイム、オレガノ等のシソ科抽出物系香辛料中に多く含まれている。その構造は、他の抗酸化剤と異なり、イソプレン骨格のアピエタンの構造を有している。油脂などの酸化防止効果が他の抗酸化剤よりも格段に強い。また、構造中に共役二重結合を有しており、更に、光により生じたラジカルの影響を受けても互変異性の構造を有する為、ラジカル安定化構造をとりやすく、光劣化防止効力が高い。
【００１８】
使用するカルノソール及びカルノジック酸は、安全の観点から、天然からの抽出物が好ましい。この天然物は、セージ、タイム、オレガノ等のシソ科抽出物系の植物から抽出されるが、多量に存在する、ローズマリーからの抽出物が好ましい。
【００１９】
カルノソール及びカルノジック酸は、その製法の一例は次の通りである。先ず、前述の水溶性抽出物の場合と同様に、含水エタノールで抽出し、当該抽出液に水を添加して非水溶性成分を析出させ、活性炭を加えて撹拌した後、非水溶性成分と活性炭との混合物を分離し、得られた混合物をエタノールで抽出処理し、得られた抽出液からエタノールを留去し、粉末状の濃縮物として、カルノソール及びカルノジック酸を得る。その詳細は、特公昭５９−４４６９号公報の記載を参照することができる。
【００２０】
本発明の抗菌剤におけるベータ酸含有ホップ抽出物とシソ科植物抽出物との含有割合は、本発明の効果を奏する割合であれば特に限定されないが、ベータ酸含有ホップ抽出物の含有割合が少なすぎると、抗菌活性が劣る傾向があり、またシソ科植物抽出物の含有割合が少なすぎると、臭気抑制効果が劣る傾向がある。従って、ベータ酸含有ホップ抽出物と非油溶性シソ科植物抽出物との含有割合は、成分の重量比で、通常９９：１〜１：９９、好ましくは９９：１〜２０：８０、より好ましくは９５：５〜５０：５０、特に好ましくは９０：１０〜７０：３０である。
【００２１】
本発明の抗菌剤には、必要に応じ、乳化剤、増量剤などを添加することができる。また、本発明の抗菌剤は、粉末、造粒物などの固体としても使用できるが、使用上の便を考慮し、水、エタノール等の溶液として使用することもできる。
【００２２】
上記の乳化剤として、例えば、ポリグリセリンラウリン酸エステル、ポリグリセリンミリスチン酸エステル、ポリグリセリンパルミチン酸エステル、ポリグリセリンステアリン酸エステル、ポリグリセリンオレイン酸エステル、ポリグリセリンベヘン酸エステル等のポリグリセリン脂肪酸エステル；ショ糖オクタン酸エステル、ショ糖デカン酸エステル、ショ糖ラウリン酸エステル、ショ糖ミリスチン酸エステル、ショ糖パルミチン酸エステル、ショ糖ステアリン酸エステル、ショ糖オレイン酸エステル等のショ糖脂肪酸エステル；ポリソルベート４０、６０、６５、８０等のポリソルベート類が挙げられ、これらは２種以上を併用してもよい。乳化剤の含有量は、通常０．０１〜９０重量％、好ましくは０．１〜５０重量％、更に好ましくは１〜２０重量％である。
【００２３】
上記の増量剤としては、例えば、デキストリン、α−シクロデキストリン、β−シクロデキストリン、γ−シクロデキストリン、化工でんぷんの他、ショ糖、乳糖などの糖類；オリゴトース、トレハロース、キシリトール、エリスリトール等の糖アルコール類；ベツリン酸、ベツリン酸エステル誘導体等のトリテルペン類が挙げられ、これらは２種以上を併用してもよい。増量剤の含有量は、通常０．１〜９０重量％、好ましくは０．５〜５０重量％、更に好ましくは１〜２０重量％である。
【００２４】
本発明においては、ビタミンＣ、トコフェロール、ビタミンＰ、クロロゲン酸、コーヒー豆抽出物、ひまわり抽出物、ぶどう種子物、α−Ｇルチン、カテキン、緑茶抽出物などの他の酸化防止剤を併用してもよい。これらは２種以上を併用してもよく、その含有量は、通常０．１〜５０重量％、好ましくは０．５〜３０重量％、更に好ましくは１〜２０重量％である。
【００２５】
本発明の抗菌剤は、前記の各成分を混合して製造される。混合順序や方法は特に制限されない。ベータ酸含有ホップ抽出物、シソ科植物抽出物、その他の成分の割合（重量比）は、上記のとおり、特に限定されず広い範囲から選択することができる。
【００２６】
通常、本発明の抗菌剤の１つの剤形は、前記の各成分を水またはエタノール−水の混合溶媒に溶解させた溶液である。他の剤形は、上記の溶液をスプレードライ又は凍結乾燥した粉体である。粉体の場合は、常法に従い、賦形剤などの各種の添加剤が使用される。
【００２７】
また、本発明の抗菌剤は、徐放性を発揮し得る形態で使用することができる。例えば、劣化臭防止剤を包む吸湿性のカプセル粒子を作成し、一定の湿度以上の雰囲気下で当該物質を放出し得るような、サイクロデキストリン、アラビアガム、ゼラチン、ヘミセルロース、微生物産生多糖類、改質デンプン等の水溶性フィルム形成剤と必要に応じて粉末賦形剤を水中に溶解および／または分散させた後、本発明の劣化臭防止剤を乳化処理することで得られた乳化液を噴霧乾燥して粉末化することにより製造することができる。乳化処理の際は必要に応じて乳化剤を使用してもよい。
【００２８】
本発明の抗菌剤は、上記のように、用途に合わせ、溶解液、乳化製剤、粉末その他任意の剤形で使用でき、用途により適宜付加することもできる。
【００２９】
本発明の抗菌剤は、諸種の微生物に対して効果的な抗菌活性を示すが、特にグラム陽性菌、例えば、スタフィロコッカス（Staphyrococcus）属、ラクトバシルス（Lactobacillus）属、リステリア（Listeria）属、アリシクロバシルス（Alicyclobacillus）属、及び、バシルス（Bacillus）属から成る群より選ばれる何れかの属に属する細菌に対して使用することが好ましい。 
【００３０】
特に、本発明の抗菌剤は、スタフィロコッカス・アウレウス（Staphyrococcus aureusu）、ラクトバシルス・プランタルム（Lactobacillus plantarum）、リステリア・モノシトジェネス（Listeria monocytogenes）、アリシクロバシルス・アシドテレストリス（Alicyclobacillus acidoterrestris）、及び、バシルス・サブチルス（Bacillus subtilis）から成る群より選ばれる種に属する細菌に対して顕著な効果を発揮する。また、本発明の抗菌剤は、リステリア（Listeria）属に属する細菌、例えばリステリア・モノシトジェネス（Listeria monocytogenes）に対する抗菌剤として特に有効である。
【００３１】
本発明の抗菌剤は、例えば、食品、飲料、医療、医薬品、環境安全の分野において広く使用することができるが、特に食品保存剤として有用である。本発明の抗菌剤を、これら分野における諸種の試料に添加することにより、試料中における抗菌活性を発現することができる。
本発明の抗菌剤を添加する試料としては、微生物の生育し易い食品が好適であり、その具体例としては、水産、畜肉、油脂加工品が挙げられる。特に、劣化し易い水産、畜肉、油脂加工品及び長期間保存する水産、畜肉、油脂加工品に好ましく使用できる。その具体例としては、鮮魚、干物、一夜干し、みりん干し、貝類、赤魚、甲殻類の色素維持剤、すり身、水産練り製品、珍味、魚肉ソーセージ、塩蔵品、ノリ、海藻食品、鶏肉、豚肉、牛肉、羊肉、ソーセージ、ハム、それを加工した製品などがある。
【００３２】
本発明の抗菌剤の試料への添加濃度は、ベータ酸量として、通常１〜１５０ｐｐｍ、好ましくは３〜１００ｐｐｍ、更に好ましくは５〜５０ｐｐｍである。また、本発明の抗菌剤は、他の抗菌剤（例えば、グラム陰性菌に効力のあるポリリジン、グレープフルーツ種子抽出物、カラシ抽出物等）と組み合わせて使用することにより、より効率的に抗菌活性を示すことができる。
【実施例】
【００３３】
以下、実施例をあげて本発明を更に詳細に説明するが、本発明は、その要旨を超えない限り、以下の実施例に制限されるものではない。
【００３４】
（非油溶性ローズマリー抽出物）
ローズマリー１ｋｇに５０％含水エタノール１０Ｌを加えて３時間加熱還流し、温時に濾過して濾液を得た。残渣を５０％含水エタノール６Ｌで同様に抽出する操作を更に２回繰り返して濾液を得た。これらの濾液を合わせ、水５Ｌを加えて沈殿物を析出させた。これに活性炭１００ｇを加え、１時間撹拌し、一夜冷所で保存した後に濾過して濾液Ａを得た。また、ローズマリー１ｋｇに５０％含水エタノール１０Ｌを加えて３時間加熱還流し、温時に濾過して濾液を得た。残渣を５０％含水エタノール６Ｌで同様に抽出する操作を更に２回繰り返して濾液を得た。これらの濾液を合わせ、水５Ｌを加えて沈殿物を析出させた。これに活性炭１００ｇを加え、１時間撹拌し、一夜冷所で保存した後に濾過して沈殿と活性炭の混合物を得た。この混合物にエタノール４Ｌを加え、３時間加熱還流し、温時に濾過して濾液を得た。残渣をエタノール２．４Ｌで同様に抽出する操作を更に２回繰り返して濾液Ｂを得た。濾液Ａと濾液Ｂを合わせ、減圧濃縮して、粉末状の非油溶性ローズマリー抽出物を得た。以下の実施例では、かくして得られた非油溶性ローズマリー抽出物（ＲＭ抽出物）を用いた。
【００３５】
（ホップ抽出物）
市販ホップエキス製品を用いてもよく、具体的にはステイナー社の超臨界抽出ホップエキス（商品名：ベータ・アロマ・エクストラクト）が好適に使用できる。
このものは、ベータ酸濃度が約４０〜５０％程度である。更にこのものを精製して用いることもできる。精製法はホップエキスを水酸化ナトリウム等のアルカリ溶液でベータ酸類を溶解した後浮遊する油分を除去する。油分除去後塩酸等で中和するとベータ酸７０％程度の高濃度のものが得られる。以下の実施例では、かくして得られたベータ酸濃度が７０％程度のホップ抽出物（ＨＯＰ抽出物）を用いた。
【００３６】
実施例１（リステリア・モノシトジェネスに対する抗菌活性）
増殖培地として、ブレインハートインヒュージョンブイヨン（ＢＨＩ）「ニッスイ」、試験培地として、ニュートリエントブロス（ＮＢ）「ニッスイ」を使用した（何れも日水製薬社製）。
先ず、ＢＨＩ培地中で３７℃、一晩増殖培養させたリステリア・モノシトジェネス（L.monocytogenes）(ATCC49594）の菌液を滅菌リン酸緩衝液で希釈し、１．６×１０4 個／ｍｌの試験菌液を調製した。
一方、上記ＲＭ抽出物１ｇをエタノール１０ｍLに懸濁させ、１０重量％ローズマリー非水溶生物エタノール懸濁液を作成し、滅菌水で希釈して５、１０、３０、５０、１００ｐｐｍの非水溶性物ローズマリー抽出物の水溶液（ＲＭ水溶液）を調製した。
また、ＨＯＰ抽出物は１ｇをエタノール１０ｍｌに溶解させ１０％重量ホップエタノール液を作成し、滅菌水で希釈して１０、５０、１００、２００、５００、７５０ｐｐｍのホップ抽出物の水溶液（ＨＯＰ水溶液）を調製した。
【００３７】
次いで、ＮＢ培地４．０ｍｌの入った滅菌済み試験管に、各濃度のＲＭ水溶液及びＨＯＰ水溶液を各０．５ｍｌ添加した。これらに、調製した菌液０．１  ｍｌを添加し、溶液が均一になるように攪拌した。肉眼観察時の対照として、菌液の替わりに滅菌精製水０．１ｍｌ添加したものを、各濃度ごとに１本ずつ作成した。
３７℃、２４時間培養後に試験液の濁りを肉眼観察して増殖抑制を判定した。その結果を表１に示す。なお、表１〜５中、「−」は「液は対照液と同じ透明性で菌の増殖を認めない」、「＋」は「液は対照液より白濁し菌の増殖を認める」を示す。
【００３８】
【表１】
2010037282.tif 000002
【００３９】
実施例２（スタフィロコッカス・アウレウスに対する抗菌活性）
増殖培地として、ブレインハートインヒュージョンブイヨン（ＢＨＩ）「ニッスイ」、試験培地として、ニュートリエントブロス（ＮＢ）「ニッスイ」を使用した（何れも日水製薬社製）。
先ず、ＢＨＩ培地中で３７℃、一晩増殖培養させたスタフィロコッカス・アウレウス（S.aureus）(IFO12732）の菌液を滅菌リン酸緩衝液で希釈し、３．２×１０4 個／ｍｌの試験菌液を調製した。以後の操作は実施例１と同様に行い増殖抑制の試験を実施した。その結果を表２に示す。
【００４０】
【表２】
2010037282.tif 000003
【００４１】
実施例３（ラクトバシルス・プランタルムに対する抗菌活性）
増殖培地として、ブレインハートインヒュージョンブイヨン（ＢＨＩ）「ニッスイ」、試験培地として、ニュートリエントブロス（ＮＢ）「ニッスイ」を使用した（何れも日水製薬社製）。
先ず、ＢＨＩ培地中で３７℃、一晩増殖培養させたラクトバシルス・プランタルム（L.plantarum）(TFC2005）の菌液を滅菌リン酸緩衝液で希釈し、２．０×１０4 個／ｍｌの試験菌液を調製した。以後の操作は実施例１と同様に行い増殖抑制の試験を実施した。その結果を表３に示す。
【００４２】
【表３】
2010037282.tif 000004
【００４３】
実施例４（バシルス・サブチルスに対する抗菌活性）
増殖培地として、ブレインハートインヒュージョンブイヨン（ＢＨＩ）「ニッスイ」、試験培地として、ニュートリエントブロス（ＮＢ）「ニッスイ」を使用した（何れも日水製薬社製）。
先ず、ＢＨＩ培地中で３７℃、一晩増殖培養させたバシルス・サブチルス（B.subtillis）(ATCC6633）の菌液を滅菌リン酸緩衝液で希釈し、２．８×１０4 個／ｍｌの試験菌液を調製した。以後の操作は実施例１と同様に行い増殖抑制の試験を実施した。その結果を表４に示す。
【００４４】
【表４】
2010037282.tif 000005
【００４５】
実施例５（アリシクロバシルス・アシドテレストリスに対する抗菌活性）
増殖培地および試験培地として、硫酸でｐＨ３．８に調製したブレインハートインヒュージョンブイヨン（ＢＨＩ）「ニッスイ」を使用した（日水製薬社製）。
先ず、ＢＨＩ培地中で４０℃、一晩増殖培養させたアリシクロバシルス・アシドテレストリス（A.acidterrestris）(ATCC49025）の菌液を滅菌リン酸緩衝液で希釈し、９．３×１０３ 個／ｍｌの試験菌液を調製した。以後の操作は、培養温度を０℃に試験培地を硫酸でｐＨ３．８に調製したＢＨＩに変更した以外は実施例１と同様に行った。その結果を表５に示す。
【００４６】
【表５】
2010037282.tif 000006
【００４７】
実施例６（臭気抑制作用）
（１）官能試験
上記７０％ＨＯＰ抽出物をエタノールに溶解し、１重量％溶液（１％ＨＯＰ溶液）とした。また、上記ＲＭ抽出物をエタノールに溶解し、１重量％溶液（１％ＲＭ溶液）とした。これら溶液を表６に示す割合で混合し、臭いの評価を行った。
【００４８】
【表６】
2010037282.tif 000007
【００４９】
その結果、サンプルＮｏ．１１と比べて、サンプルＮｏ．１０と８の間（１％ＨＯＰ溶液／１％ＲＭ溶液＝９０／１０〜７０／３０）で、ホップ臭が急激に弱まり、さらに１％ＲＭ溶液の混合割合高いサンプルＮｏ．４と３の間（１％ＨＯＰ溶液／１％ＲＭ溶液＝２０／８０〜３０／７０）で、ホップ臭が完全に消失した。この結果から、ホップ臭を抑制に関して、官能面からのＨＯＰ抽出物とＲＭ抽出物の混合割合は、成分比でホップ濃度が高い条件では、９０：１０〜７０：３０が好ましく、ホップ臭が消える条件は２０：８０よりもＲＭ濃度が高いことが好ましいことがわかった。
【００５０】
（２）ガスクロマトグラフィー分析
上記の官能試験に供したサンプルを用いて、ヘッドスペース固相マイクロ抽出法（ＨＳ−ＳＰＭＥ）で臭気成分を抽出し、ＧＣ／ＭＳにより分析を行った。ＨＳ−ＳＰＭＥ装置はＭＰＳ２（ＧＥＲＳＴＥＬ社製）、ＧＣ／ＭＳ装置はＨＰ６８９０（Ａｇｉｌｅｎｔ社製）／Ｍａｓｓ  Ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ  Ｄｅｔｅｃｔｏｒ  ５９７３Ｎ（Ａｇｉｌｅｎｔ社製）を用いた。
その結果を表７に示す。表７中の値は、サンプルＮｏ．１１（１％ＨＯＰ溶液／１％ＲＭ溶液＝１００／０）の測定値を１００％とする相対値である。
【００５１】
【表７】
2010037282.tif 000008
【００５２】
表７の結果から明らかなとおり、１％ＲＭ溶液の混合割合が高いほど臭気成分は減少し、サンプルＮｏ．１１（１％ＨＯＰ溶液／１％ＲＭ溶液＝１００／０）と比較し、サンプルＮｏ．１０（１％ＨＯＰ溶液／１％ＲＭ溶液＝９０／１０）では、２−メチル−１，３−ブタンジエンが５４％減少、２−メチル−３−ブテナールが３４％減少した。この結果は、上記官能試験の結果と一致するものであった。