(57)【要約】【課題】ペプチドの経口送達のための医薬組成物を提供する。【解決手段】少なくとも１つの薬学的に許容されるｐＨ低下剤を含む第１層および医療上有効な量のペプチドを含む第２層を有する形成層を有する医薬組成物を提供する。第２層は医療上有効な量のペプチドを含む。組成物はまた、ペプチドのバイオアベイラビリティを促進するのに有効な少なくとも１つの吸収向上剤を好ましくは第２層に、および腸溶性被膜を形成層の周りに含む。錠剤の好ましい投与形において、ｐＨ低下剤と腸溶性被膜との接触を実質的に防ぐ水溶性被膜を、形成層と腸溶性被膜との間に設ける。好ましい実施態様において、ペプチドはサケ・カルシトニン、ｐＨ低下剤はクエン酸、吸収向上剤はラウロイル ｌ-カルニチンである。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ペプチドの経口送達のための錠剤の製造方法であって、以下の工程：
ｐＨ低下剤を顆粒化して、第１層材料をつくること；
ペプチドと少なくとも１つの吸収向上剤を混合して、第２層材料をつくること；
該第１層材料を鋳型に添加し、第２層材料を鋳型に添加したときに第１層材料と第２層材料間の実質的な混合が抑制されるように、該第１層材料を圧縮して、第１層をつくること；
該第２層材料を該鋳型に添加すること；
該第１層材料および該第２層材料をともに圧縮して、２層からなる形成層をつくること、ここで、該第１層および該第２層は互いに接触する接触面を有し、該接触面においてはペプチドの０．１％未満がｐＨ低下剤に接触するようにして第１層材料と第２層材料の間の実質的な混合を抑制し、ペプチドとｐＨ低下剤が形成層内で相互作用することを避ける；
該形成層を水溶性被膜で被覆して、被覆された形成層をつくること；および
腸溶性被膜を該被覆された形成層上に適用して、錠剤をつくること、ここで該水溶性被膜は、該第１層材料が該腸溶性被膜と接触することを実質的に抑制する、
を含む、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、経口ペプチド医薬投与形(pharmaceutical dosage form)、経口投与されたペプチドのバイオアベイラビリティを高める方法、および本発明におけるペプチドの経口投与によるヒトでの障害の処置に有用な錠剤投与形(tableted dosage form)を製造する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
サケ・カルシトニンは、骨からのカルシウムの摂取を低下するペプチドホルモンである。このホルモンは、骨関連疾患およびカルシウム障害（骨粗しょう症、パジェット病、悪性腫瘍の高カルシウム血症など）の処置に使用されたとき、骨密度を保持するのを助ける作用を有する。多くの型のカルシトニンが単離されている。ヒト・カルシトニン、サケ・カルシトニン、ウナギ・カルシトニン、エルカトニン、ブタ・カルシトニン、チキン・カルシトニンである。種々のカルシトニン型において顕著な構造的非相同性が存する。例えば、ヒト・カルシトニンを形成するアミノ酸とサケ・カルシトニンを形成するアミノ酸の相同性は、５０％である。
【０００３】
先行技術で用いられるサケ・カルシトニンは、注射または経鼻投与により通常は投与されている。しかし、カルシトニン投与についてのこれらの様式は、経口投与に比して非常に不便であり、多くの患者に不快感をもたらす。この不便や不快感はしばしば治療処置において患者が実質的に服用しないことにつながる。しかし、経口投与されたときに、サケ・カルシトニンなどのペプチドの再製的血中レベルを達成する能力について、先行技術での報告は見られない。このことは、これらのペプチドが消化管で十分な安定性を欠くこと、および腸管から血液への移行が乏しいことによると思われる。
【０００４】
胃および腸のタンパク質分解酵素が、サケ・カルシトニンを分解し、カルシトニンが血流に吸収される前に不活化する。胃のプロテアーゼ（典型的に最適の酸性ｐＨを有する）によるタンパク質分解変性を受けなかったサケ・カルシトニンは、後に小腸でのプロテアーゼおよび膵臓分泌の酵素（典型的に最適の中性から塩基性ｐＨを有する）に遭遇する。サケ・カルシトニンの経口投与から生じる問題は、分子の比較的大きいサイズおよびその有する電荷分布にある。これによって、サケ・カルシトニンが腸壁の粘膜を通過したり、腸刷毛境界膜から血中に移行するのが一層困難になる。これらの追加的な問題がサケ・カルシトニンのバイオアベイラビリティを制限するさらなる原因となり得る。
【０００５】
Stern et al. の米国特許５,９１２,０１４（特許０１４）はサケ・カルシトニンを小腸に送達するのに治療的に有用な経口の医薬組成物を開示している。この特許によれば、腸溶被覆でサケ・カルシトニンを保護すると、胃でのサケ・カルシトニンのタンパク質分解変性などを減少できるようである。特許０１４は、錠剤形態でのサケ・カルシトニンの投与を記載しているが、一般的にペプチドを含む市販可能な投与形を開示していない。例えば、特許０１４で調製された組成物の打錠時に、いくつかの材料が機器の表面に非可逆的に付着する。さらに、典型的な一層錠は室温条件で保存されたとき、安定性に乏しい。特許０１４はまた、営業的規模での製造のための単一腸溶被覆中にペプチド、界面活性剤およびｐＨ低下剤を併用することでおきる問題の解決について記載していない。
【０００６】
上記のことにもかかわらず、ｐＨ低下剤の存在でペプチドの安定性を維持する営業的に可能な投与形が当技術分野で必要である。
【発明の概要】
【０００７】
（発明の要旨）
ひとつの態様において、本発明は、ペプチドの経口送達のための医薬組成物を提供する。この組成物は少なくとも２層を有する形成層を含む。第１層は少なくとも１つの薬学的に許容されるｐＨ低下剤を含む。第２層は医療上有効な量のペプチドを含む。組成物はまた、ペプチドのバイオアベイラビリティを促進するのに有効な少なくとも１つの吸収向上剤を含む。第２層にあるのが好ましい。組成物はまた、形成層の周りに腸溶性被膜を含む。
【０００８】
本発明の第２態様は、経口送達されたペプチドのバイオアベイラビリティを高めるための方法を提供する。この方法は、ペプチドが少なくとも１つのｐＨ低下剤および少なくとも１つの吸収向上剤とともに、患者の腸に選択的に放出されることを含む。この放出は、腸溶皮膜および水溶性皮膜の保護のもとに、患者の口および胃を経てペプチド、ｐＨ低下剤、吸収向上剤が通過した後になされる。腸溶性被膜は胃プロテアーゼとペプチドとの接触を実質的に防ぎ、水溶性皮膜はさらにｐＨ低下剤と腸溶性被膜との接触を防ぐ。
【０００９】
本発明の第３態様は、ペプチドの送達のための錠剤投与形およびそれをつくる方法を提供する。この投与形は、少なくとも１つの薬学的に許容されるｐＨ低下剤を含む第１層、および医療上有効な量のペプチドを含む第２層を有する形成層を含む。この投与形はまた、ペプチドのバイオアベイラビリティの促進に有効な少なくとも１つの吸収向上剤、形成層上につくられた水溶性被膜、水溶性被膜上につくられた腸溶性被膜を含む。下記するように、水溶性皮膜はｐＨ低下剤と腸溶性被膜との接触を実質的に防ぎ、それによってｐＨ低下剤による腸溶性被膜の溶解阻止を実質的に防ぐ。
【００１０】
投与形をつくる方法において、ｐＨ低下剤を顆粒にして、第１層材料をつくる。ペプチドおよび少なくとも１つの吸収向上剤を合わせて第２層材料をつくる。次いで、第１層材料および第２層材料で、少なくとも２層を有する形成層をつくる。この方法は、水溶性皮膜で形成層を被覆し、被膜された形成層をつくり、ついでその形成層上に腸溶性被膜をつくることを含む。
【００１１】
上記の一般的な説明および下記の詳細な説明は、本発明についての例示的なものであって、制限的なものでないと理解されるべきである。
【００１２】
（発明の詳細な説明）
本発明において、カルシトニンやサケ・カルシトニンなどのペプチドでの処置を必要とする患者に、製薬産業において通常の大きさの錠剤中にペプチドを含有する経口投与形を提供する。本発明において、投与形または組成物は少なくとも２層を有する形成層を含む。本明細書で使用される用語「形成層」は、確実に結合された材料の層からなるもの、しかし層間にほとんど相互作用のないものについての通常の意味を有する。第１層は少なくとも１つの薬学的に許容されるｐＨ低下剤を含み、第２層は医療上有効な量のペプチドを含む。組成物はまた、ペプチドのバイオアベイラビリティを促進するのに有効な少なくとも１つの吸収向上剤、および形成層の周りに腸溶性被膜を含む。組成物はカプセルまたは錠剤の形態であってよく、錠剤の形態が好ましい。この場合、水溶性被膜を形成層の上、形成層と腸溶性被膜の間に適用する。下記する理由により、ペプチドがサケ・カルシトニンであり、ｐＨ低下剤がクエン酸であるとき、ラウロイルｌ-カルニチン(lauroyl l-carnitine)などの吸収向上剤を第２層に組み込むのが望ましい。投与の量および回数は当技術分野で周知の方法による。
【００１３】
利益を受け得る患者は、ペプチドの投与により処置可能な障害および疾患の患者である。本発明は、例えば、骨粗しょう症、パジェット病、悪性腫瘍の高カルシウム血症などのペプチドで処置し得る疾患に使用し得る。
【００１４】
サケ・カルシトニンが本発明における使用に好ましいペプチドである。なぜなら、このものは、広く特性が解明されており、性質が知られ、ヒト・カルシトニンに勝る多くの利点を有し、ヒト患者用の医薬として使用されているからである。ヒト骨粗しょう症の処置のためにヒト・カルシトニンの代わりにサケ・カルシトニンを用いることにより提供される利点は、大きい力価、無痛性、大きい半減期である。
【００１５】
本発明の医薬組成物は、バイオアベイラビリティに対する一連の異なる非関連の天然バリアーを克服する。医薬組成物の種々の構成成分が各々に適したメカニズムによって異なるバリアーを克服するように作用して、その結果としてペプチドのバイオアベイラビリティに対する相乗的作用を得る。しかし、下記するように、ペプチド、腸溶性被膜、ｐＨ低下剤の本来の物理化学的性質は、それ以上でないが、併用されたときに、バイオアベイラビリティを強化するのに、また投与形の安定性向上に反生産的でもある。
【００１６】
本発明のペプチドは、典型的には経口投与する。本発明において、胃のプロテアーゼ（大部分が酸性ｐＨ領域で活性）および腸または膵臓のプロテアーゼ（大部分が中性または塩基性ｐＨ領域で活性）によりペプチドのタンパク質分解変性が減少する。さらに、安定性が高まり、界面活性剤が腸上皮バリアーを経るペプチド活性物質の通過を助ける。
【００１７】
理論に縛られるものではないが、本発明において、ペプチドとそれを変性し得る胃プロテアーゼとの接触を実質的に防ぐ腸溶皮膜などの適当な運搬体の保護の下に、ペプチドが胃を経て運ばれる。従って、投与形が胃プロテアーゼに曝露されない十分な時間、医薬組成物を被膜が実質的に保護するような腸溶性被膜についての材料および被膜の適当な厚さを選択することが望ましい。本発明の医薬組成物が胃を通過し、そして塩基性から中性のｐＨが支配的であり、プロテアーゼが塩基性から中性のｐＨを最適とする腸領域に入ると、本組成物は、ペプチドと酸を放出する（互いに接して)。
【００１８】
酸が局所の腸ｐＨを下げ、活性物質が多くの腸プロテアーゼにとっての最適領域以下のレベルに放出されると考えられる。このｐＨの低下は腸プロテアーゼのタンパク質分解活性を減少し、起こり得る変性からペプチドを保護する。換言すると、これらのプロテアーゼの活性がｐＨ低下剤による一時的な酸性環境でもって減少する。好ましくは、局所腸ｐＨが５.５以下、特に約４.０と５.５との範囲に一時的に低下するように十分な酸を供給する。下記するような（および米国特許５,９１２,０１４（出典明示により本明細書の一部とする））炭酸水素ナトリウム塩試験が必要な酸の量の指標になる。好ましくは、低下した腸ｐＨの条件が、タンパク質変性からペプチド物質を保護するのに十分な時間、ペプチド物質の少なくともいくらか（好ましくは、大部分またはすべて）が腸壁から血流に通る機会を有するまで、持続する。
【００１９】
吸収向上剤は、溶解性向上剤および/または運送向上剤であって（特許０１４に記載のように)、ペプチド物質の腸から血液への運送を助け、運送が腸ｐＨの低下および腸タンパク質分解活性の低下の期間によく生じるように、プロセスの速度を速める。多くの界面活性剤が溶解性向上剤および摂取向上剤の両方として作用し得る。さらに、理論に縛られる意図でないが、溶解性の向上が（１）本発明活性成分の腸の水性部分へのいっそうの同時的放出、(２）腸壁の粘膜層でのペプチドの優れた溶解性およびそれを経る運送を提供すると考えられる。ペプチドが腸壁に達すると、摂取向上剤が腸の刷毛境界膜から血液へのよりよい輸送を、細胞または周辺通過で提供する。さらに詳しく下記するように、多くの好ましい化合物は両機能を提供し得る。この場合、両機能を用いる好ましい実施態様は、わずか１つの追加構成成分を医薬組成物に加えることにより、両機能を提供できる。なお、吸収向上剤が両機能をかならずしも提供しなければならないわけでない。注意すべきは、本明細書での用語「吸収向上剤」が溶解性向上剤あるいは運送向上剤、またはその両方として機能し得ることである。特に、ラウロイルｌ-カルニチンに関して、この吸収向上剤は少なくとも溶解性向上剤として機能するようである。
【００２０】
本発明の医薬組成物の好ましい成分の各々を別個に下記で説明する。複数のｐＨ低下剤または界面活性剤の組合せを、単一のｐＨ低下剤または界面活性剤を用いるのと同様に使用できる。いくつかの好ましい組合せを下記する。
【００２１】
ペプチド
ペプチドは市販されている典型的な投与形で医療上有効な量で存在する。その厳密な量は、使用するペプチド、溶解性、処置される疾患または病状、バイオアベイラビリティ、さらには当技術分野で周知の多くの他の因子によって変る。ペプチドがサケ・カルシトニンであるとき、ペプチドが全医薬組成物（被膜は除く）の全重量に比して約０.０２−０.２重量％の量で存在し得ることが分かった。カルシトニンが本発明で使用する典型的なペプチドであり、サケ・カルシトニンが好ましいが、本発明で使用される他のペプチドは特許０１４に記載のペプチドを含む。
【００２２】
ペプチド前駆体を公知の化学的または組換えの合成法によりつくり得る。しかし、後者が非常に費用効率的である。組換えサケ・カルシトニン（ｒｓＣＴ）は、例えば、グリシン伸長サケ・カルシトニンを大腸菌中でグルタチオン-Ｓ-トランスフェラーゼとの溶解性融合タンパク質として、特許０１４に記載のように、つくり得る。
【００２３】
ｐＨ低下剤
ペプチドの毎投与とともに投与されるｐＨ低下剤の全量は、放出されたときに腸の局所領域に存在するプロテアーゼの最適ｐＨ以下に局所腸ｐＨを実質的に低下するのに十分な量であることが好ましい。必要とする量は、使用される化合物のタイプおよび実施において化合物により提供されるプロトンの均等物を含むいくつかの因子により必然的に変り得る。投与されたペプチドの優れたバイオアベイラビリティを提供するのに要する典型的な量は、０.１Ｍ炭酸水素ナトリウム１０ｍｌの溶液に加えたときに、その炭酸水素ナトリウム水溶液のｐＨを５.５以下に、好ましくは４.０−５.５に低下する量である。
【００２４】
本発明のｐＨ低下剤は、消化管において毒性がなく、水素イオンを放出し得るか（移行性の酸）または局所環境から高い水素イオンを誘導し得るような、薬学的に許容される塩であり得る。またこのような化合物のいかなる組合せでもあり得る。化合物の例は、特許０１４に記載のように周知である。本発明において、クエン酸が好ましい。
【００２５】
吸収向上剤
１以上の吸収向上剤（本明細書で界面活性剤ともいう）が、ペプチドのバイオアベイラビリティを促進するのになんらかの改善を示す量で好ましくは存在する。典型的には、この量は医薬組成物（腸溶性被膜は除く）の全重量に比して約０.１−２０.０重量％を構成する。好ましい吸収向上剤は、溶解性向上剤あるいは摂取向上剤またはその両方として作用する界面活性剤である。上記したように、「溶解性向上剤」は、本発明の活性構成成分が最初に放出された水性環境に溶解するか、腸壁を形成する粘膜層の親油性環境に溶解するか、またはその両方についての能力を改善する。「摂取向上剤」（しばしば、溶解性向上剤として使用されるのと同じ界面活性剤である）は、ペプチド物質が腸壁を通過するのを容易にするものである。
【００２６】
本発明の範囲内において、１以上の吸収向上剤はひとつの機能のみをなし得るか（例えば、溶解性)、または１以上の吸収向上剤は他の機能のみを発揮し得る。いくつかの化合物の混合物であることも可能であり、米国特許５,９１２,０１４に記載のように、そのある物は溶解性を改善し、ある物は摂取を改善し、および/または、ある物は両方を改善する。理論に縛られる意図でないが、摂取向上剤は、(１）腸壁外膜の疎水性領域の乱雑を増加し、細胞通過の輸送を行うこと、(２）膜タンパク質のろ過により細胞通過の輸送を増加すること、または（３）細胞周辺の輸送増加のための細胞間のポア間隔を広げることにより作用し得ると考えられる。
【００２７】
界面活性剤を吸収向上剤として使用するとき、この物は混合を容易にするために自由に流動し得る粉末であることが好ましい。しかし、ペプチドの本来の特性（例えば、等電点、分子量、アミノ酸組成など）からして、ある種の界面活性剤が好ましい。実際、ある物はペプチドの電荷部分と相互作用して、その吸収を妨げて、バイオアベイラビリティの低下という望ましくない結果をもたらすことがある。どのような界面活性剤がペプチドのバイオアベイラビリティを増加するのに最も適しているかを決めることは当業者の知るところである。例えば、ペプチドがサケ・カルシトニンを含むとき、吸収向上剤として使用される界面活性剤は、下記よりなる群から選択できる：（ｉ）コレステロール誘導体であるアニオン界面活性剤（例えば、胆汁酸)、（ii）カチオン界面活性剤（例えば、アシルカルニチン、ホスホリピドなど)、（iii）非イオン界面活性剤、（iv）アニオン界面活性剤（特に直線状炭化水素領域を有するもの）のサケ・カルシトニンについての負電荷中和剤との混合物。
【００２８】
ペプチドがサケ・カルシトニンであるとき、負電荷中和剤は、限定でないが、アシルカルニチン、塩化セシルピリジニウムなどを含む。好ましくは、電荷中和剤はラウロイル ｌ-カルニチンである。吸収向上剤が酸性ｐＨ、特にｐＨ＝３.０〜５.０の範囲で溶性であることが好ましい。単一の吸収向上剤のみを用いるとき、カチオン界面活性剤が好ましい。これは、ペプチドの血中への吸収を妨害するようなペプチドとの相互作用を避けるのがその意図である。
【００２９】
他の選択的成分
本発明のすべての医薬組成物は、ポビドンなどの通常の医薬結合剤、稀釈剤、滑剤、微結晶性セルロース、ステアリン酸マグネシウムなどの滑沢剤、クロスカルメロース・ナトリウムなどの崩壊剤、保存剤、色素などを通常の大きさおよび量で選択的に含み得る。ある実施態様において、腸プロテアーゼの基質として作用し得るペプチドを加える（好ましくは、全医薬組成物（腸溶性被膜は除く）の重量に比して０.２〜１０.０％)。
【００３０】
腸溶性被膜
胃プロテアーゼからペプチドを保護し、本発明の活性構成成分を腸に放出するすべての腸溶性被膜が適している。腸溶性被膜は、胃などの低いｐＨ環境で溶解しない被膜を提供することにより機能する。多くの腸溶性被膜は当技術分野で知られており、本発明において有用である。例として、酢酸フタル酸セルロース、コハク酸ヒドロキシプロピルメチルエチルセルロース、フタル酸ヒドロキシプロピルメチルエチルセルロース、酢酸フタル酸ポリビニル、メタクリル酸-メタクリル酸メチル共重合物（methacrylic acid-methyl methacrylate copolymer）がある。
【００３１】
すべての活性構成成分が投与形から放出され、できるだけ同時に腸内環境で溶解されることが非常に望ましい。好ましくは、投与形が小腸中に活性構成成分を放出する。このために、腸溶性被膜材料を使用するのが望ましい。好ましくは、腸溶性被膜は医薬組成物の残留物（腸溶性被膜を除く）重量の２０％を越えない。さらに好ましくは、非被膜組成物重量の３〜１５％である。
【００３２】
水溶性被膜
ｐＨ低下剤と腸溶性被膜との接触を実質的に防ぐいかなる水溶性被膜も適当である。多くの水溶性被膜が当技術分野で知られており、本発明において有用である。例として、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、メチルセルロースがある。
【００３３】
上記のように、すべての活性構成成分が投与形から放出され、できるだけ同時に腸内環境で溶解されることが非常に望ましい。しかし、ｐＨ低下剤は、局所のｐＨを下げることで、腸溶性被膜の分解を通常は阻止する。この問題を解決するために、本発明のひとつの実施態様において、投与形と腸溶性被膜との間に位置する水溶性被膜を準備する。この被膜によって、投与形と腸溶性被膜との接触を実質的に防止する。
【００３４】
好ましくは、腸溶性被膜は医薬組成物の残留物（水溶性腸溶性被膜を除く）の２０重量％を越えない。典型的には、非被膜組成物の０.５〜１５重量％である。さらに好ましくは、非被膜組成物の０.５〜５重量％である。
【００３５】
投与形およびその製造
本発明の投与形は、少なくとも２層の形成層をもつ錠剤を典型的に含む。第１層の主要成分は典型的に上記のようなｐＨ低下剤である。第２層の主要成分は典型的にペプチドであり、選択的に吸収向上剤である。上記のように組合せたときに、構成物は少なくとも２層を有する錠剤を形成する。製造が比較的容易なことから２層錠が好ましいが、第２層が実質的にペプチドからなり、第３層が界面活性剤を含むような３以上の層を有することも可能である。
【００３６】
第１層は、第１層材料を形成する少なくとも１つのｐＨ低下剤を顆粒にして製造する。クエン酸が好ましいｐＨ低下剤であるが、クエン酸単独では必要な圧縮性を発揮しない。従って、顆粒化の際または後に、他の物質をｐＨ低下剤に加えて、機械的な性質を改善できる。具体的には、流動性基底における顆粒化の際に、微結晶性セルロースなどの充填剤およびポビドン結合剤を、当技術分野で周知の量で加え得る。ついで、得た顆粒を乾燥し、当業者に周知の方法でミルで適当なサイズとする。さらに、上記のように、滑剤および滑沢剤と組み合せて顆粒の圧縮性および流動性を改善して、第１層をつくる。
【００３７】
第２層材料は、ペプチドと少なくとも１つの吸収向上剤（すなわち、界面活性剤）を組み合せてつくる。第２層も流動基底でつくることができる。ペプチドが少量で比較的高い活性を表すので、ペプチドとポビドンなどの結合剤を界面活性剤または少なくとも１つの賦形剤と界面活性剤の上に噴霧して、第２層をつくる。上記のように、本発明において、界面活性剤は典型的にアシルカルニチンであって、ラウロイル ｌ-カルニチンが好ましい。選択的な賦形剤は、微結晶性セルロースなどの充填剤を、当業者に理解されるように、層間の適当な接着を提供するのに十分な量で典型的に含む。得られた顆粒を乾燥し、当業者に周知の方法で適当なサイズにする。最後に顆粒を混合機に移す。そこで、顆粒をクロスカルメロースなどの崩壊剤または１以上の他の崩壊剤と選択的に混合する。崩壊剤の量は顆粒の約１０.０重量％までであり、約２.０重量％が好ましい。崩壊剤のないのは選択的であるが、ペプチドのバイオアベイラビリティが弱まることがある。ペプチドの完全な放出がｐＨ低下剤と同じ時に起こり得ないからである。
【００３８】
ステアリン酸マグネシウムやステアリン酸などの他の滑沢剤および接着剤、およびコロイド状ニ酸化ケイ素やポビドンなどの他の賦形剤を加えて、当技術分野で知られている方法で、第２層材料の性質を改善できる。
【００３９】
ついで、一部の第１層材料を標準的な二層打錠機に移し鋳型に充填する。第１層材料を部分的に圧縮して第１層をつくる。部分的圧縮は、第２層材料を鋳型に加えるときに、第１層材料と第２層材料との実質的な混合を防ぐために必要である。第１層材料の部分的圧縮に続き、第２層材料を第１層含有の鋳型に加える。ついで、第１および第２層材料を一緒に圧縮して、２層をもつ錠剤をつくる。
【００４０】
典型的には、第１層材料は最終錠剤の全重量の約５０〜９０％を占める。好ましくは、第１層材料は最終錠剤の全重量の約７０％を占める。典型的には、第２層材料は最終錠剤の全重量の約５０〜１０％を占める。好ましくは、第２層材料は最終錠剤の全重量の約３０％を占める。
【００４１】
第１層材料を層中に前もって部分的に圧縮してあるので、第２層材料と第１層材料との実質的な混合を回避できる。本発明の２層構造がｐＨ低下剤とペプチドおよび界面活性剤との接触を実質的に防ぐ。具体的には、２層間で、０.１％以下のペプチドがｐＨ低下剤と典型的には接触する。
【００４２】
錠剤を打錠機から移し、２層錠芯を上記の組成物を有する水溶性被膜またはシール被膜で被覆する。被覆は当技術分野で知られている方法で行う。上記のように、水溶性被膜がｐＨ低下剤と適用の腸溶性被膜との接触を実質的に防止する。
【００４３】
水溶性被膜を乾燥した後、錠剤に腸溶性被膜を被覆する。上記のように、腸溶性被膜は、酸性条件（低ｐＨ）で溶解しないので、腸溶性被膜が胃の酸性状態で錠剤の溶解を実質的に防ぎ、錠中のペプチドを胃中に存在する種々のプロテアーゼおよび消化酵素から保護する。被覆された錠剤が小腸（高い局所ｐＨを有する）に入ると、腸溶性被膜が溶解する。しかし、本発明において、腸溶性被膜とｐＨ低下剤との間に位置する別個の被膜がないと、ｐＨ低下剤が腸溶性被膜の溶解を、ｐＨ低下剤による低局所ｐＨでもって阻止することが分かった。このように、腸溶性被膜を効率的に溶解し、活性物質の放出の遅延を防ぐために、本発明のひとつの実施態様では、腸溶性被膜の前に水溶性被膜でもって錠剤を被覆する。従って、腸溶性被膜が錠剤中に存在するｐＨ低下剤による阻害なしに容易に溶解できる。
【００４４】
下記の実施例は、本発明の代表的なものであり、限定的なものでない。
【実施例】
【００４５】
実施例１
表１は、本発明の典型的な実施態様についての例示的な記述である。第１層ｐＨ低下剤顆粒をＧＰＣＧ-５流体基底ユニット（Glatt Air Techniques, Inc. 製）でもって処理した。さらに、第２層ペプチド／界面活性剤顆粒をＧＰＣＧ-３流体基底ユニット（Glatt Air Techniques, Inc. 製）でもって処理した。サイズ００スクリーン装着の市販 Fitzmill を用い高速のハンマー・フォワード・モードで、顆粒化の前に界面活性剤を粉にした。水は処理のためにのみ存在し、錠への圧縮の前に蒸発せしめた。
【００４６】
表１：第１および第２層の典型的な顆粒／混合物の組成
【表１】
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【００４７】
サケ・カルシトニン／結合物質溶液を界面活性剤および賦形剤に適用する際に、顆粒のサイズが徐々に大きくなる。しかし、これらの顆粒は乾燥中に小さい粒子に砕けて、中程度の流動性をもつ材料となることを認めた。
【００４８】
ポビドン結合剤溶液をクエン酸と微結晶性セルロースとの流体基底上に噴霧して、クエン酸を顆粒にした。得られる乾燥材料は高度に顆粒化され、塊がなく流動性である。表１の下部の「最終混合」成分は、最初の顆粒化、乾燥、粉化の後に各々の顆粒に加えたものである。
【００４９】
２層錠を Key BBC-4 ２層打錠機（Key International, Inc., Englishtown, New Jersey 市販）でもって打錠した。クエン酸混合物を第１層として使用し、打錠機の鋳型にまず入れ、ついで部分的に圧縮した。部分的圧縮の後にサケ・カルシトニンと界面活性剤の顆粒を鋳型に加え、両層を一緒に圧縮して層化された錠剤を作った。比較例として、単層錠剤の溶解性試験を行った。ここでは、ペプチド、界面活性剤、ｐＨ低下剤を単一層に組合せた。表３に示す。
【００５０】
表１記載の材料から製造された錠剤の相対的溶解性を調べるために、表に示す組成を有する錠剤を２つの１ｇ乾燥剤円筒とともに誘導密封９０ｃｃＨＤＰＥ瓶に入れた。溶解性試験の結果を表２に示す。表２において、高圧液体クロマトグラフィ−を用いて、％ＬＤ（ラベル・クレーム）を３錠の平均値として決定した。従って、最初の％ＬＣを投与形中に存在するペプチドの量に関し、続く測定のベースラインとしてのみ使用した。「回収％」を最終％ＬＣ÷最初％ＬＣｘ１００で計算した。％表示の「保存条件」を相対湿度（ＲＨ）％として記載する。
【００５１】
表２：上記の２層打錠により製造されたサケ・カルシトニン（ペプチド）０.２ｍｇ２層腸溶被覆錠剤の３か月の回収
【表２】
2010184945.tif 000003
【００５２】
表３記載の錠剤は、表１に表示と類似の材料を用いて Manestry Beta Press で製造した。各錠はペプチド約２ｍｇ、ｐＨ低下剤約５００ｍｇ、界面活性剤約５０ｍｇを含有する。最後の例において、各錠は微結晶性セルロース約１００ｍｇも含有する。構成成分を表３記載の方法で組み合せて単層錠をつくる。
【００５３】
表３：単層腸溶性被膜錠中のサケ・カルシトニンペプチドの保存３か月後の安定性についての異なる安定化法の評価
【表３】
2010184945.tif 000004
【００５４】
表２と３のデータを比較すると、多層錠においてペプチドをｐＨ低下剤と分離することにより、ペプチドの在庫可能期間が有意に増加するのがわかる。例えば、表２に示すように、４０℃および７５％相対湿度で、７１.８％のペプチドを２層錠から３か月後に回収した。しかし、単層錠については、表３に示すように、４０℃および７５％相対湿度で、安定化法に応じて１４％、２３％、４５％のペプチドしか３か月後に回収し得なかった。
【００５５】
次の実施例において、一連の２層錠を強度範囲０.０５〜０.５ｍｇで製造し、１セットの分析に供した。表４は、サケ・カルシトニン０.５ｍｇ２層腸溶錠の正確な組成を示す。ステアリン酸マグネシウムが好ましいが、表４に示すように、ステアリン酸を第２層に使用した。医薬活性成分が他の成分に比して少量存在するので、結合液中のサケ・カルシトニンの比較的少量を溶解することで、他の成分の量を保持しながら、すべての低い錠剤強度をつくった。ＫｅｙＢＢＣ-４回転圧を用いて、表５に揚げるガイドに従って、最終混合物を楕円形の無地表面２層錠（０.７２０ｘ０.３６５ｘ０.０５２）に打錠した。次いで錠芯をシールし、腸溶性被膜を施した。
【００５６】
表４：サケ・カルシトニン０.５ｍｇ２層腸溶錠の組成
【表４】
2010184945.tif 000005
【００５７】
表５：サケ・カルシトニン０.５ｍｇ２層腸溶錠の打錠に用いられたガイド
【表５】
2010184945.tif 000006
【００５８】
活性医薬成分を錠剤中に非常に低レベルで組み込む。従って、錠含量の均一性に問題があるかも知れない。このために、方法の初期段階において、トップ噴霧流動基底方法がポリペプチドを多量の賦形剤に均質に分布するのに最上の手段であると結論した。表６は、サケ・カルシトニン０.０５、０.１、０.２、０.５ｍｇの２層腸溶性被膜錠についての均質的含量均一性、溶解、安定性を示す。
【００５９】
表６：サケ・カルシトニン（ペプチド）２層腸溶性被膜錠についての含量均一性、溶解、安定性
【表６】
2010184945.tif 000007
【００６０】
１．１０錠を用いてサケ・カルシトニンおよびラウロイル ｌ-カルニチンの平均含量均一性および％ＲＳＲを決定した。
２．溶解結果は６錠の平均および範囲を示す。
３．３０錠を２つの１ｇ乾燥剤円筒とともに誘発密封９０ｃｃＨＤＰＥ瓶に入れた。安定性は３錠の平均値の結果である。
４．最終％ＬＣ＋最初ＬＣに従い計算した。
５．腸溶性被膜錠の酸性段階の溶解を緩衝段階の１２０分前に試験した。
註：すべてのサンプルをＨＰＬＣで試験した。０.０５、０.１、０.２ｍｇ錠についての安定性試験は、内容単一性および溶解データを得るのに使用したバッチと異なるバッチに由来する。
【００６１】
最終錠剤のアッセイによると、すべての強度がサケ・カルシトニンおよびラウロイル ｌ-カルニチンの両者について優れた含量均一性を有し、米国薬局方の含量均一性基準（全錠がＬＣの８５％−１１５％、ＲＳＤ＜６％）に合格する。個々の試験錠剤のほとんどすべてがラベルクレーム値の５％内にあり、いずれの錠剤もＬＣから７％を越えて異ならなかった。さらに、錠剤の相対標準偏差は範囲が０.９〜１.６％で小さかった。溶解検査において試験錠剤のいずれの酸性媒質に活性医薬成分を検出しなかった。これは、すべての錠剤用量が腸溶性被膜錠についての米国薬局方溶解要件を満足することを表す。表６に示すように、腸溶膜はサケ・カルシトニンの溶解を緩衝液中で少なくとも１５分間遅らす。その後６０−７５分を、坦持された錠剤の７５％以上の溶解に必要とする。３強度の安定結果によると、活性医薬成分の最初量の９０％以上を室温保存３月後に回収できた。さらに、わずかに１５％を越える薬剤しか０.５ｍｇ錠から室温での保存６か月後に認められなかった。これらのデータから、室温保存の安定性はおそらく３から６か月であろう。６か月間の冷蔵庫での保存サンプルについての分析によると、サケ・カルシトニン錠の長期間保存に５℃が必要条件であろう。
【００６２】
次のサンプルで、サケ・カルシトニン０.５ｍｇの２層腸溶性被膜錠の臨床バッチを、表４を用いて製造した。この試験で第１層および第２層の顆粒をＧＰＧＣ−５液体床処理機で調製した。乾燥顆粒を Comil (Quadro Engineering, Inc., Ontario, Canada)で砕き、顆粒を砕かれた顆粒外賦形剤と２４リットル Matcon Buls bin 混合機で別個に混合した。Key BBC-4 ２層回転圧縮機を用いて、最終混合物を楕円形の無被覆２層錠（０.７２０ｘ０.３６５ｘ０.０５２）に打錠した。表５に記載の指針による。粉砕強度を打錠後すぐに硬度テスターで測定した。錠芯を密封被覆し、24" Accella-Cota 機で腸溶性被膜を施した。
【００６３】
サケ・カルシトニン０.５ｍｇ臨床用バッチを、オープンラベル、単一用量、無作為、３処置フェーズ交差設計（Hammersmith II 試験）を採用する単一センター試験で検査した。全１６人の健常ボランティアー、男性８人および女性８人が薬物試験に参加した。各対象者が試験錠の経口投与を受け、別時にポジティブ対照として吸入カルシトニン処方の１投与（０.０４ｍｇ）を受けた。対象者は投与日の前夜から絶食したが、水は自由に飲むことが許されていた。各経口フェーズについて、血液サンプルを投与前および投与後３０分毎に３００分まで採取した。７日の洗い出し期間を次の処置フェーズまでの間に設けた。血漿カルシトニン濃度を PPD Pharmoco, Richmond, Virginia により測定した。臨床試験用証拠からの試験結果の解析で、典型的な２層製剤がサケ・カルシトニンポリペプチドの経口吸収を促進するのに有効であることを確認した。サケ・カルシトニンの定量的レベルを経口投与形の投与後に大部分（８０％以上）の対象者の血漿で検出できた。一般的に、薬力学パラメーターは大きい対象者間の差異を示した。経口錠投与の平均Ｃｍａｘ値は範囲０−８００で１６７±２１８ｐｇ／ｍｌであった。Ｔは応答を示す対象者において範囲が１３５−３６０分であり、平均値が２１６±７０であった。非常に対照的に、吸入投与を受けた対象者の１９％未満が検出可能な血液レベルであった。
【００６４】
次の実施例で、プラセボおよび活性サケ・カルシトニン０.１ｍｇ２層腸溶性被膜錠のパイロット的規模拡大バッチを調製し、完全な製造法に問題がないかを調べ、規模拡大での製造条件を定め、この方法の製造部署への移行の助けとした。錠剤の調製を、表４に表示の一般処方の使用で０.５ｍｇよりも０.１ｍｇで行い、あるいはプラセボバッチの場合に非活性医薬成分で行った。
【００６５】
第１層および第２層の顆粒を、表７に記載の製造条件で、ＧＰＧＣ−６０液体床製造機およびトップ噴霧形態で製造した。
【００６６】
表７．クエン酸およびサケ・カルシトニン／ラウロイル ｌ-カルニチンの顆粒のパイロット的規模での製造に用いられた方法条件、Glatt Air Techniques, Inc. 製のＧＰＧＣ−６０液体床製造機を使用
【表７】
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【００６７】
クエン酸顆粒の２サブロット（各６５ｋｇバッチ）およびサケ・カルシトニン／界面活性剤顆粒の１ロット（４８ｋｇバッチ）を調製した。クエン酸の各サブロットは同じ条件で顆粒化した。すなわち、ポビドン結合剤溶液をクエン酸および微結晶性セルロースの液体床上に噴霧し、ついで湿気含量１ｗ／ｗ％以下に乾燥した。クエン酸顆粒は高度に顆粒化されており、基本的に塊がなく、流動性である。サケ・カルシトニン／界面活性剤顆粒の調製は、ポビドンおよびサケ・カルシトニンの溶液を微結晶性セルロースおよびラウロイル ｌ-カルニチンの床上に適用して行い、ついで顆粒をチェンバー内で湿気含量１ｗ／ｗ％以下に乾燥した。得られた調製物は中程度の流動性を有する細かい物であった。３顆粒の粒子サイズ分布密度を表８に示す。
【００６８】
表８．パイロット的規模のＧＰＧＣ−６０で製造された第１および第２層の顆粒の粒子サイズ分布および密度
【表８】
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【００６９】
すべての顆粒が、５００ＰＰＭでセットされ、サイズ 2F094R037/41 スクリーンを備える Comil (Quadro Engineering, Inc., Ohtario, Canada)を通過した。両クエン酸顆粒を、５分間１５ＲＰＭで１工程で塊のない顆粒外賦形剤とともに５００Ｌの Matcon Buls Bin 混合機で混合した。その後、ステアリン酸滑沢剤を混合物に加え、さらに３分間混合を続けた。すべての混合物は取り出す際に bin から円滑に流れ出た。
【００７０】
Key BBC-4 ２層回転圧縮機を用いて、最終混合物を楕円形の無被覆２層錠（０.７２０ｘ０.３６５ｘ０.０５２）に打錠した。表５に記載の指針による。圧縮を３５ステーションで完全にし、１８ＲＰＭで行った。粉砕強度を打錠後すぐに硬度テスターで測定した。個々の層重量は全圧縮操作を通じて一定であった。粘着の問題を、２層処方の長時間圧縮後で認めなかった。
【００７１】
錠芯の脆砕性検査により、錠剤がチッピングおよび/または２層への欠損をほとんど起こさなかった（４分間の回転後で０.０１％脆砕性)。錠芯を密封被覆し、24" Accella-Cota 機で腸溶性被膜を施した。最終の腸溶性被膜錠は視覚的に合格した。
【００７２】
すべての錠芯を被覆レベル３ｗ／ｗ％のヒドロキシプロピルメチルセルロース被膜系で密封被覆した。ついで１００部の固形ポリマー、２０部のクエン酸トリエチル、１０部のタルク（全２０ｗ／ｗ％固体含量）を含量する Eudragit L30D を基にする（メタクリル酸およびメタクリル酸塩ポリマー（methacrylic and methacrylate polymer））腸溶性被膜分散液で、標的被覆レベル１０ｗ／ｗ％で腸溶被覆した。被覆操作を、被膜しようとする錠芯の量によって次のいずれかを用い行った。Freund Hi-Coater Model HCT-30, Vector Corp., Marion, IA USA (＜１ｋｇ錠芯)、24" Accela-Cota, Thomas Engineering, Inc., Hoffman Estates, IL, IA USA (＜６ｋｇ錠芯)、48" Accela-Cota (＞９０ｋｇ錠芯)。
【００７３】
いくつかの具体的な実施態様および実施例を参照して本発明を説明および記述したが、本発明はこのような詳細説明に限定されるべきものではない。むしろ、特許請求の範囲は、その範囲および均等域内に、本発明の精神を逸脱しない限り、種々の修飾を含むと解されるべきものである。
【００７４】
本発明は、例えば以下の発明を含む。
１：ペプチドの経口送達のための医薬組成物であって、
少なくとも１つの薬学的に許容されるｐＨ低下剤を含む第１層および医療上有効な量のペプチドを含む第２層を有する形成層；
該ペプチドのバイオアベイラビリティを促進するのに有効な少なくとも１つの吸収向上剤(absorption enhancer)；
形成層の周りに腸溶性被膜；
を含む医薬組成物。
２：該第２層が該吸収向上剤をさらに含む、上記１の医薬組成物。
３：該医薬組成物が形成層の周りで該形成層と該腸溶性被膜との間に位置する水溶性被膜をさらに含む、上記１の医薬組成物。
４：該腸溶性被膜が、医薬組成物の該腸溶性被膜を除く残留物重量の２０％を越えない重量で存在する、上記１の医薬組成物。
５：該腸溶性被膜が、医薬組成物の該腸溶性被膜を除く残留物重量の５−１５％の重量で存在する、上記１の医薬組成物。
６：該吸収向上剤が界面活性剤（surface active agent）である、上記１の医薬組成物。
７：該界面活性剤が吸収性またはバイオ分解性である、上記６の医薬組成物。
８：該界面活性剤をアシルカルニチン、ホスホリピド、胆汁酸よりなる群から選択する、上記６の医薬組成物。
９：該界面活性剤がラウロイル−ｌ-カルニチンを含む、上記６の医薬組成物。
１０：該ペプチドがサケ・カルシトニンを含む、上記１の医薬組成物。
１１：該ｐＨ低下剤を、０.１Ｍ炭酸水素ナトリウム水溶液１０ｍｌのｐＨを５.５以下に低下するのに十分な量で加える、上記１０の医薬組成物。
１２：賦形剤をさらに含む、上記１の医薬組成物。
１３：該賦形剤が微結晶性セルロースを含む、上記１２の医薬組成物。
１４：該ｐＨ低下剤がクエン酸を含む、上記１の医薬組成物。
１５：経口送達されたペプチドのバイオアベイラビリティを高める方法であって、
該ペプチドが、少なくとも１つのｐＨ低下剤および少なくとも１つの吸収向上剤とともに、腸溶性被膜および水溶性被膜の保護のもとに、患者の口および胃を経て該ペプチド、ｐＨ低下剤、吸収向上剤が通過した後に患者の腸に選択的に放出されること；
なお、該腸溶性被膜は胃プロテアーゼと該ペプチドとの接触を実質的に防ぎ、そして；
該水溶性皮膜はさらに該ｐＨ低下剤と該腸溶性被膜との接触を実質的に防ぐものである；
を含む方法。
１６：該ｐＨ低下剤が、０.１Ｍ炭酸水素ナトリウム水溶液１０ｍｌのｐＨを５.５以下に低下するのに十分な量で該医薬組成物中に存在する、上記１５の方法。
１７：ペプチドの経口送達のための錠剤投与形（tableted dosage form）であって、
少なくとも１つの薬学的に許容されるｐＨ低下剤を含む第１層、および医療上有効な量のペプチドを含む第２層を有する形成層；
該ペプチドのバイオアベイラビリティの促進に有効な少なくとも１つの吸収向上剤；
該形成層上で形成された水溶性被膜；
該水溶性被膜上で形成された腸溶性被膜、なお、該水溶性被膜は該ｐＨ低下剤と該腸溶性被膜との接触を実質的に防ぐ；
を含む投与形。
１８：該ペプチドがサケ・カルシトニンを含む、上記１７の投与形(dosage form)。
１９：該ｐＨ低下剤が、０.１Ｍ炭酸水素ナトリウム水溶液１０ｍｌのｐＨを５.５以下に低下するのに十分な量で存在する、上記１８の投与形。
２０：該ｐＨ低下剤がクエン酸を含む、上記１７の投与形。
２１：該吸収向上剤がラウロイル−ｌ-カルニチンを含む、上記１７の投与形。
２２：該水溶性被膜がヒドロキシプロピルメチルセルロースを含む、上記１７の投与形。
２３：該腸溶性被膜がメタクリル酸とメタクリル酸塩の重合物である、上記１７の投与形。
２４：該第１層が崩壊剤をさらに含む、上記１７の投与形。
２５：該崩壊剤がクロスカルメロース・ナトリウムを含む、上記１７の投与形。
２６：該ペプチドがサケ・カルシトニンを含み；
該ｐＨ低下剤が、０.１Ｍ炭酸水素ナトリウム水溶液１０ｍｌのｐＨを５.５以下に低下するのに十分な量で存在するクエン酸を含み；
該吸収向上剤がラウロイル−ｌ-カルニチンを含み、
該水溶性被膜がヒドロキシプロピルメチルセルロースを含み、
該腸溶性被膜がメタクリル酸とメタクリル酸塩の重合物を含み、
第２層がクロスカルメロース・ナトリウムをさらに含む、
上記１７の投与形。
２７：投与形をつくる方法であって、下記の工程：
ｐＨ低下剤を顆粒化して、第１層材料をつくること；
ペプチドおよび少なくとも１つの吸収向上剤を組合せて第２層材料をつくること；
該第１層材料を鋳型に加えること；
該第２層材料を鋳型に加えること；
該第１層材料および該第２層材料をともに圧縮して、２層を有する形成層をつくりこと；
該形成層を水溶性被膜で被覆して、被覆された形成層をつくること；
該被覆された形成層に腸溶性被膜を適用して、錠剤をつくること、なお、該水溶性被膜は該第１層と該腸溶性被膜との接触を実質的に防ぐものである；
を含む方法。
２８：該第２層を鋳型に加える前に該第１層を部分的に圧縮する、上記２７の方法。
２９：組合せ工程が、賦形剤を該ペプチドおよび該吸収向上剤と組合すことをさらに含む、上記２７の方法。
３０：該賦形剤が微結晶性セルロースを含む、上記２９の方法。