(57)【要約】    【課題】  アテローム性動脈硬化症を予防し、また症状を改善せしめることの可能な、動脈硬化症予防改善剤を提供すること。    【解決手段】  小豆種皮を有効成分として含有するアテローム性動脈硬化症予防改善剤は、血圧の上昇を抑制し、血管内皮における活性酸素の産生を抑制し、ＮＡＤ（Ｐ）Ｈオキシダーゼのサブユニットの発現を抑制し、炎症性サイトカイン（ＭＣＰ−１）を抑制し、炎症反応で誘導されるシクロオキシゲナーゼ−２（ＣＯＸ−２）の発現を抑制することができ、アテローム性動脈硬化症の予防改善を可能とする。【選択図】  図２
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
小豆種皮を有効成分として含有する血圧上昇抑制剤。
【請求項２】
小豆種皮を有効成分として含有する動脈硬化症予防改善剤。
【請求項３】
血圧上昇によって大動脈で過剰産生される血管内皮での活性酸素（特に、スーパーオキシド）量を抑制できることを特徴とする、請求項２に記載の動脈硬化症予防改善剤。
【請求項４】
スーパーオキシドの主な発生源であり血管内皮で活性化するＮＡＤ（Ｐ）ＨオキシダーゼのサブユニットのｍＲＮＡ発現量を抑制できることを特徴とする、請求項２または３に記載の動脈硬化症予防改善剤。
【請求項５】
動脈硬化症の発症に関連するマクロファージの活性・遊走因子（ＭＣＰ−１）の血管内皮での発現を抑制できることを特徴とする、請求項２ないし４のいずれかに記載の動脈硬化症予防改善剤。
【請求項６】
動脈硬化症の発症に関連する炎症反応時に誘導されるＣＯＸ−２の発現を抑制できることを特徴とする、請求項２ないし５のいずれかに記載の動脈硬化症予防改善剤。
【請求項７】
対象疾病がアテローム性動脈硬化症であることを特徴とする、請求項２ないし６のいずれかに記載の動脈硬化症予防改善剤。
【請求項８】
請求項２ないし７のいずれかに記載の動脈硬化症予防改善剤を用いることによる、動脈硬化症予防方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は動脈硬化症予防改善剤および動脈硬化症予防方法に係り、特に身近な食材である植物資源を用いて、動脈硬化症、殊にアテローム性動脈硬化症を予防し、また症状を改善せしめることの可能な、動脈硬化症予防改善剤および動脈硬化症予防方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
小豆は和菓子の原料や料理の素材として日本人にはなじみが深い食物のひとつである。特に、あんの加工やあんの色調などに関連した知見は数多く得られている。古来より薬用としても用いられた小豆は、「健康によい」とされながら、生活習慣病をはじめとする疾病の予防・改善に関連した実証例は従来ほとんど存在しない。
【０００３】
後掲特許文献１は、ガン、肝疾患、内分泌代謝疾患および腎臓疾患用の治療食の提供を目的として、玄米に、大豆・黒豆・小豆などの豆類の群、大麦・ハト麦・丸麦・小麦などの麦類の群、そしてキビ・アワおよびヒエの雑穀群から選ばれた少なくとも１種の穀類を加え、さらに葉緑素・酵素・胚芽を混ぜた治療食を提案している。しかし、ここでも小豆は、原材料として選択し得る豆類の一例に過ぎず、生活習慣病を始めとする疾病の予防・改善に関連した実証例といえるものではない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開２００１−１７２１９２号公報「治療食」
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
さて、高血圧の長期放置によって生じるアテローム性動脈硬化症およびその合併症では、血管内皮機能の障害がその一因であることが知られている。つまり、
〈１〉ＮＡＤ（Ｐ）Ｈオキシダーゼ（ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸オキシダーゼ）、キサンチンオキシダーゼ等の酸化酵素の活性化による活性酸素（特に、スーパーオキシド）の産生の増大、
〈２〉マクロファージ系等の炎症細胞の遊走・活性化の増大、
〈３〉さらに遊走・活性化を誘発するｍｏｎｏｃｙｔｅ  ｃｈｅｍｏｔａｃｔａｎｔ  ｐｒｏｔｅｉｎ−１（ＭＣＰ−１）などのサイトカイン産生の亢進や炎症反応を進行させるプロスタノイド産生に関わるシクロオキシゲナーゼ−２（ＣＯＸ−２）の活性化等、が血管内皮機能障害を引き起こし、アテローム性動脈硬化症の発症や進展に関与するということである。
【０００６】
そこで本発明が解決しようとする課題は、これら因子や活性の増大を抑制することによって動脈硬化症、殊にアテローム性動脈硬化症を予防し、また症状を改善せしめることの可能な、動脈硬化症予防改善剤および動脈硬化症予防方法を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
ところで本願発明者らはこれまで、小豆種皮における疾病改善効果の可能性に着目し、研究を重ね、得られた知見を開示してきた。たとえば、「糖尿病モデルラットにおける腎症の小豆種皮による軽減改善効果」（Ｓａｔｏ  Ｓ．ｅｔ  ａｌ．  Ｊ  Ｎｕｔｒ  Ｂｉｏｃｈｅｍ，１６，５４７−５５３，２００５．）、「抗がん剤（シスプラチン）誘発される腎障害の小豆種皮による軽減改善効果」（Ｓａｔｏ  Ｓ．ｅｔ  ａｌ．  Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ，２１，５０４−５１１，２００５．）であり、小豆種皮の有する血漿中の過酸化脂質の産生抑制効果、それによる酸化ストレス軽減効果等を明らかにしてきた。
【０００８】
今般、本願発明者は上記課題への取り組みとして、アテローム性動脈硬化症における小豆種皮の予防改善効果の如何を明らかにするために検討を行った。つまり、小豆種皮を高血圧自然発症ラット（ＳＨＲ）に投与し、
〈１〉血圧上昇を抑制するか、
〈２〉血管内皮の活性酸素の生成を抑制するか、
〈３〉血管内皮の活性酸素を産生するＮＡＤ（Ｐ）Ｈオキシダーゼのサブユニットの発現を抑制するか、
〈４〉血管内皮の炎症性サイトカイン（ＭＣＰ−１）の発現量を抑制するか、
〈５〉炎症反応の進行においてサイトカインなどの刺激により誘導されるシクロオキシゲナーゼ−２（ＣＯＸ−２）の発現量を抑制するか、
を調べ、アテローム性動脈硬化症の予防改善剤としての有効性を検討した。
【０００９】
その結果、アテローム性動脈硬化症の予防改善剤として小豆種皮が有効であることを見出し、本発明の完成に至った。すなわち、上記課題を解決するための手段として本願で特許請求される発明、もしくは少なくとも開示される発明は、以下の通りである。
【００１０】
〔１〕  小豆種皮を有効成分として含有する血圧上昇抑制剤。
〔２〕  小豆種皮を有効成分として含有する動脈硬化症予防改善剤。
〔３〕  血圧上昇によって大動脈で過剰産生される血管内皮での活性酸素（特に、スーパーオキシド）量を抑制できることを特徴とする、〔２〕に記載の動脈硬化症予防改善剤。
〔４〕  スーパーオキシドの主な発生源であり血管内皮で活性化するＮＡＤ（Ｐ）ＨオキシダーゼのサブユニットのｍＲＮＡ発現量を抑制できることを特徴とする、〔２〕または〔３〕に記載の動脈硬化症予防改善剤。
〔５〕  動脈硬化症の発症に関連するマクロファージの活性・遊走因子（ＭＣＰ−１）の血管内皮での発現を抑制できることを特徴とする、〔２〕ないし〔４〕のいずれかに記載の動脈硬化症予防改善剤。
【００１１】
〔６〕  動脈硬化症の発症に関連する炎症反応時に誘導されるＣＯＸ−２の発現を抑制できることを特徴とする、〔２〕ないし〔５〕のいずれかに記載の動脈硬化症予防改善剤。
〔７〕  対象疾病がアテローム性動脈硬化症であることを特徴とする、〔２〕ないし〔６〕のいずれかに記載の動脈硬化症予防改善剤。
〔８〕  〔２〕ないし〔７〕のいずれかに記載の動脈硬化症予防改善剤を用いることによる、動脈硬化症予防方法。
【発明の効果】
【００１２】
本発明の動脈硬化症予防改善剤および動脈硬化症予防方法は上述のように構成されるため、これによれば、殊にアテローム性動脈硬化症発症の要因となる血管内皮での活性酸素（特に、スーパーオキシド）量を抑制するなど、関係する因子や活性の増大を抑制できるため、それによって動脈硬化症、殊にアテローム性動脈硬化症を予防し、また症状改善に役立てることができる。
【００１３】
具体的には、本発明の動脈硬化症予防改善剤および動脈硬化症予防方法によって、次のような効果が得られる。
〈１〉血圧上昇の抑制。
〈２〉血圧上昇によって大動脈で過剰産生される血管内皮での活性酸素（特に、スーパーオキシド）量の抑制＜活性酸素産生抑制作用＞。このことは、酸化ストレスを軽減できるということである。
【００１４】
〈３〉スーパーオキシドの主な発生源であり、血管内皮で活性化するＮＡＤ（Ｐ）Ｈオキシダーゼのサブユニット（ｐ４７ｐｈｏｘ）のｍＲＮＡ発現量の抑制＜すなわち、サブユニットの発現の抑制作用＞。
〈４〉動脈硬化症の発症に関連するマクロファージの活性・遊走因子（ＭＣＰ−１）の血管内皮での発現の抑制＜ＭＣＰ−１の抑制作用＞。
【００１５】
〈５〉動脈硬化症の発症に関連する炎症反応時に誘導されるＣＯＸ−２の発現の抑制＜ＣＯＸ−２の発現の抑制作用＞。
なお、このことから、炎症時にＣＯＸ−２を介して亢進するプロスタグランジンＥ２（血管透過性などに作用）やプロスタグランジンＩ２（血管拡張および発痛などに作用）をも抑制しているものと考えられる。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】小豆種皮の製造工程を示すフロー図である。
【図２】小豆種皮投与による収縮期血圧の経時変化を示すグラフである。
【図３】小豆種皮投与による活性酸素量の変化を示すグラフである。
【図４】小豆種皮投与によるＮＡＤ（Ｐ）Ｈオキシダーゼを構成する各サブユニットのｍＲＮＡ発現状況を示すグラフである。
【図５】ＮＡＤ（Ｐ）Ｈオキシダーゼのサブユニット構成を示す説明図である。
【図６】小豆種皮投与によるマクロファージの活性・遊走因子の発現状況を示すグラフである。
【図７】小豆種皮投与によるＣＯＸ−２タンパク質の発現状況を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
本発明の動脈硬化症予防改善剤は、有効成分として含まれる小豆種皮によって、血圧上昇抑制作用、血管内皮における活性酸素（特に、スーパーオキシド）の産生抑制作用、ＮＡＤ（Ｐ）Ｈオキシダーゼのサブユニットの発現の抑制作用、炎症性サイトカイン（ＭＣＰ−１）の抑制作用、炎症反応で誘導されるＣＯＸ−２の発現の抑制作用を有する。これにより本発明によれば、動脈硬化症、特にアテローム性動脈硬化症の予防改善が可能である。
【実施例】
【００１８】
以下、実施例により本発明をより詳細に説明するが、本発明が実施例に限定されるものではない。
＜１  小豆種皮の調製＞
図１は、小豆種皮の製造工程を示すフロー図である。図示するように、まず使用する小豆粒の重量を測定し（○付き数字１  以下｛１｝のように示す）、これに４容量（ｗｅｉｇｈｔ／ｖｏｌｕｍｅ）の蒸留水を加える｛２｝。そしてそのまま２５℃で一晩静置し｛３｝た後、小豆粒から種皮を剥離する｛４｝。その後、剥離した小豆種皮を３７℃にて乾燥させる｛５｝。このようにして、小豆粒に対して約８％（重量比）の小豆種皮を得ることができた。なお、小豆はエリモショウズ（学名；Ｖｉｇｎａ  ａｎｇｕｌａｒｉｓ）を用いた。
【００１９】
＜２  小豆種皮の成分＞
表１は、調製した小豆種皮の成分測定結果を示す。小豆種皮は、総ポリフェノール量と食物繊維量が多いのが特徴である。
【００２０】
【表１】
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【００２１】
＜３  試験の方法＞
調製した小豆種皮を、標準動物飼料であるＭＦ固形試料（オリエンタル酵母工業）に０．１％、および１．０％の濃度で添加して飼料を作製した。ＳＨＲ（高血圧自然発症ラット）と正常血圧のＷｉｓｔａｒ  Ｋｙｏｔｏ  ｒａｔ（ＷＫＹ）に標準動物食（通常食；ＭＦ飼料）または異なる濃度（０．１および１．０％）の小豆種皮含有飼料を８週間投与した。表２に試験区の構成を示す。
【００２２】
【表２】
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【００２３】
試験項目および方法の実際は、次の通りである。
〈１〉血圧を、尾部カフ法により測定した。
〈２〉大動脈のＮＡＤ（Ｐ）Ｈオキシダーゼ由来のスーパーオキシド（Ｏ２−）量を、ルシゲニンを用いた化学発光法により測定した。
〈３〉大動脈から総ＲＮＡを抽出し、ＮＡＤ（Ｐ）ＨオキシダーゼのサブユニットであるＮＯＸ４、ｐ２２ｐｈｏｘおよびｐ４７ｐｈｏｘのｍＲＮＡの発現量をリアルタイムＰＣＲ法にて測定した。
【００２４】
〈４〉大動脈から総ＲＮＡを抽出し、ｍｏｎｏｃｙｔｅ  ｃｈｅｍｏｔａｃｔａｎｔ  ｐｒｏｔｅｉｎ−１（ＭＣＰ−１）のｍＲＮＡの発現量をリアルタイムＰＣＲ法にて測定した。
〈５〉大動脈をホモジネイトして、そのＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動を行った後、一次抗体として抗ＣＯＸ−２抗体を用いたウエスタンブロット法により、ＣＯＸ−２タンパク質の発現量を測定した。
【００２５】
＜４  結果と考察＞
〈１〉血圧
図２は、小豆種皮投与による収縮期血圧の経時変化を示すグラフである。図示するように、小豆種皮を投与した結果、高血圧自然発症ラット（ＳＨＲ）の血圧上昇が抑制された。また、対照であるＷｉｓｔａｒ  Ｋｙｏｔｏ  ｒａｔ  （ＷＫＹ）では、小豆種皮の投与にかかわらず変化はなかった。すなわち、小豆種皮はＳＨＲの血圧上昇を抑制することが示された。
【００２６】
〈２〉活性酸素（スーパーオキシド）量
図３は、小豆種皮投与による活性酸素量の変化を示すグラフである。図示するように、小豆種皮を投与した結果、血圧上昇によって大動脈で過剰産生される血管内皮での活性酸素（特に、スーパーオキシド）量が抑制された。このことは、酸化ストレスを軽減したことを示す。
【００２７】
〈３〉ＮＡＤ（Ｐ）ＨオキシダーゼのサブユニットのｍＲＮＡ発現量
図４は、小豆種皮投与によるＮＡＤ（Ｐ）Ｈオキシダーゼを構成する各サブユニットのｍＲＮＡ発現状況を示すグラフである。図示するように、小豆種皮を投与した結果、スーパーオキシドの主な発生源であり血管内皮で活性化するＮＡＤ（Ｐ）Ｈオキシダーゼのサブユニットのうち、サブユニットｐ４７ｐｈｏｘのｍＲＮＡ発現量が抑制された。
【００２８】
なお図５は、ＮＡＤ（Ｐ）Ｈオキシダーゼのサブユニット構成を示す説明図である。図示するように、スーパーオキシドを産生する酵素であるＮＡＤ（Ｐ）Ｈオキシダーゼは、サブユニット（ｇｐ９１ｐｈｏｘ／Ｎｏｘ２／Ｎｏｘ４、ｐ２２ｐｈｏｘ、ｐ４７ｐｈｏｘ、Ｒａｃ１など）から構成されている。本実施例ではこのうち、Ｎｏｘ４、ｐ２２ｐｈｏｘおよびｐ４７ｐｈｏｘの各サブユニットのｍＲＮＡ発現量を調べたものである（図４）。
【００２９】
〈４〉マクロファージの活性・遊走因子の発現
図６は、小豆種皮投与によるマクロファージの活性・遊走因子の発現状況を示すグラフである。図示するように、小豆種皮を投与した結果、動脈硬化症の発症に関連するマクロファージの活性・遊走因子（ＭＣＰ−１）の血管内皮での発現が抑制された。
【００３０】
〈５〉ＣＯＸ−２の発現
図７は、小豆種皮投与によるＣＯＸ−２タンパク質の発現状況を示すグラフである。図示するように、小豆種皮を投与した結果、動脈硬化症の発症に関連する炎症反応時に誘導されるＣＯＸ−２の発現が抑制された。このことから、炎症時にＣＯＸ−２を介して亢進するプロスタグランジンＥ２（血管透過性などに作用）やプロスタグランジンＩ２（血管拡張および発痛などに作用）が抑制されていることが示唆された。
【産業上の利用可能性】
【００３１】
本発明の動脈硬化症予防改善剤および動脈硬化症予防方法によれば、殊にアテローム性動脈硬化症において関係する因子や活性の増大を抑制できるため、これを予防し、また症状改善に役立てることができる。したがって、産業上利用性が高い発明である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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