(57)【要約】【課題】流路内を通流する試料を光学的に検出する技術において、効率的かつ確実に、アナログ−デジタル変換（ＡＤ変換）した結果の精度を高くする技術を提供すること。【解決手段】本発明に係る光学的測定装置１では、試料Ｓが流路１内を移動するという特徴を生かし、第１の各手段より下流に、第２の各手段を設けている。そのため、第１の各手段によって得られた試料の情報に基づいて、第２の光照射〜電気信号交換手段によって得られた同一の試料の電気的信号を、最適な増幅率にて増幅することが可能である。その結果、試料が無駄になることもなく、効率的かつ確実に、アナログ−デジタル変換（ＡＤ変換）した結果の精度を高くすることが実現できる。【選択図】図１
2010286341.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
試料が通流する流路と、
該流路を通流中の試料に対して光を照射する第１光照射手段と、
該第１光照射手段による光照射によって、前記試料から発せられる光学的情報を検出する第１光検出手段と、
該第１光検出手段により検出された光学的情報を電気的信号に変換する第１電気信号変換手段と、
該第１電気信号変換手段により変換された電気的信号をアナログ−デジタル変換する第１ＡＤ変換手段と、
前記第１光照射手段より下流において、前記試料に対して光を照射可能な第２光照射手段と、
該第２光照射手段による光照射によって、前記試料から発せられる光学的情報を検出可能な第２光検出手段と、
該第２光検出手段により検出された光学的情報を電気的信号に変換可能な第２電気信号変換手段と、
前記第１ＡＤ変換手段によりアナログ−デジタル変換されたデジタル信号に基づいて、前記第２電気信号変換手段により変換された電気的信号を増幅可能な増幅手段と、
該増幅手段により増幅された電気的信号をアナログ−デジタル変換可能な第２ＡＤ変換手段と、
が少なくとも備えられた光学的測定装置。
【請求項２】
前記流路を通流中の試料の流速を測定する流速測定手段が更に備えられた請求項１記載の光学的測定装置。
【請求項３】
前記流路を通流中の試料の流速を制御する流速制御手段が更に備えられた請求項１または２に記載の光学的測定装置。
【請求項４】
前記流路内の温度を制御する温度制御手段が更に備えられた請求項１から３のいずれか一項に記載の光学的測定装置。
【請求項５】
前記第１光照射手段は、前記第２光照射手段としても機能する請求項１から４のいずれか一項に記載の光学的測定装置。
【請求項６】
前記第１光検出手段は、前記第２光検出手段としても機能する請求項１から５のいずれか一項に記載の光学的測定装置。
【請求項７】
前記第１電気信号変換手段は、前記第２電気信号変換手段としても機能する請求項１から６のいずれか一項に記載の光学的測定装置。
【請求項８】
前記第１ＡＤ変換手段は、前記第２ＡＤ変換手段としても機能する請求項１から７のいずれか一項に記載の光学的測定装置。
【請求項９】
試料が通流する流路と、
該流路を通流中の試料に対して光を照射するための第１光照射手段と、
該第１光照射手段による光照射によって、前記試料から発せられる光学的情報を検出する第１光検出手段と、
該第１光検出手段により検出された光学的情報を電気的信号に変換する第１電気信号変換手段と、
該第１電気信号変換手段により変換された電気的信号をアナログ−デジタル変換する第１ＡＤ変換手段と、
前記第１光照射手段より下流において、前記試料に対して光を照射可能な第２光照射手段と、
該第２光照射手段による光照射によって、前記試料から発せられる光学的情報を検出可能な第２光検出手段と、
該第２光検出手段により検出された光学的情報を電気的信号に変換可能な第２電気信号変換手段と、
前記第１ＡＤ変換手段によりアナログ−デジタル変換されたデジタル信号に基づいて、前記第２電気信号変換手段により変換された電気的信号を増幅可能な増幅手段と、
該増幅手段により増幅された電気的信号をアナログ−デジタル変換可能な第２ＡＤ変換手段と、
該第２ＡＤ変換手段によりアナログ−デジタル変換されたデジタル信号に基づいて、前記試料を分取する分取手段と、
が少なくとも備えられたフローサイトメーター。
【請求項１０】
流路に試料を通流させる通流工程と、
前記試料に対して光を照射する第１光照射工程と、
該第１光照射工程における光照射によって、前記試料から発せられる光学的情報を検出する第１光検出工程と、
該第１光検出工程において検出された光学的情報を電気的信号に変換する第１電気信号変換工程と、
該第１電気信号変換工程において変換された電気的信号をアナログ−デジタル変換する第１ＡＤ変換工程と、
前記第１光照射工程を行う位置より下流において、前記試料に対して光を照射する第２光照射工程と、
該第２光照射工程における光照射によって、前記試料から発せられる光学的情報を検出可能な第２光検出工程と、
該第２光検出工程において検出された光学的情報を電気的信号に変換する第２電気信号変換工程と、
前記第１ＡＤ変換工程においてアナログ−デジタル変換されたデジタル信号に基づいて、前記第２電気信号変換工程において変換された電気的信号を増幅する増幅工程と、
該増幅工程において増幅された電気的信号をアナログ−デジタル変換する第２ＡＤ変換工程と、
を少なくとも行う光学的測定方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、流路を用いて試料を光学的に検出するための光学的測定装置に関する。より詳しくは、流路内を通流する試料を光学的に検出するための光学的測定装置、並びに、該光学的測定装置を用いたフローサイトメーターおよび光学的測定方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、分析手法の発展に伴い、細胞や微生物等の生体微小粒子、マイクロビーズなどの微小粒子等を流路中に通流させ、通流させる工程において前記微小粒子を個々に測定したり、測定した微小粒子を解析し、分取したりする手法が開発されつつある。このような流路を用いた微小粒子の解析又は分取の手法の代表的な一例として、フローサイトメトリーと呼ばれる分析手法の技術改良が急速に進んでいる。
【０００３】
フローサイトメトリーとは、解析の対象となる微小粒子を流体中に整列させた状態で流し込み、該微小粒子にレーザー光等を照射することにより、各微小粒子から発せられた蛍光や散乱光を検出することで微小粒子の解析、分取を行う分析手法である。フローサイトメトリーのプロセスは、以下の（１）水流系、（２）光学系、（３）電気系、（４）分取系、に大別することができる。
【０００４】
（１）水流系
水流系では、分析対象となる微小粒子をフローセル（流路）中で一列に整列させる。より具体的には、シース流を一定の流速でフローセル内に流入させ、その状態で微小粒子を含むサンプル流をフローセル中央部にゆっくりと注入する。この時、laminar flowの原理によりそれぞれの流れは互いに混合されず、層を成した流れ（層流）が形成される。そして、分析対象となる微小粒子の大きさ等に応じて、シース流とサンプル流の流入量を調節し、微小粒子を一つ一つが整列した状態で通流させる。
【０００５】
（２）光学系
光学系では、分析対象となる微小粒子にレーザなどの光を照射し、微小粒子から発せられる蛍光や散乱光を検出する。微小粒子を、前記水流系（１）において、一つ一つが整列した状態でレーザ照射部を通流させ、一つ一つの微小粒子が通過する毎に、微小粒子から発せられる蛍光や散乱光を、パラメーター毎に光学検出器を用いて検出し、微小粒子一つ一つの特性を分析する。
【０００６】
（３）電気系
電気系では、光学系において検出した光学的情報を、電気的信号（電圧パルス）に変換する。変換された電気的信号はアナログ−デジタル変換され、このデータをもとに解析用コンピューターとソフトウェアでヒストグラムを抽出し、解析を行う。
【０００７】
（４）分取系
分取系では、測定を終えた微小粒子を分離し、回収する。代表的な分取方法としては、測定を終えた微小粒子にプラス又はマイナスの電荷を加え、フローセルを、電位差を有する２つの偏向板Ｄで挟み込み、帯電された微小粒子はその電荷に応じていずれかの偏向板に引き寄せられることにより、分取する方法がある。
【０００８】
このフローサイトメトリーのような流路中の微小粒子の解析及び分取技術は、医療分野、創薬分野、臨床検査分野、食品分野、農業分野、工学分野、法医学分野、犯罪鑑識分野等、様々な分野で広く利用されている。特に医療分野においては、病理学、腫瘍免疫学、移植学、遺伝学、再生医学、化学療法などで重要な役割を担っている。
【０００９】
このように、非常に広い分野で流路中の微小粒子を解析及び分取する技術が必要とされており、前記（１）から（４）のプロセスに関わる技術も、日々、開発が進められている。例えば、特許文献１では、分析対象の粒子に染色を施したものを含む粒子懸濁液を生成してその流れに光を照射し、粒子の特徴を反映した複数種類の光信号を得て、これらをそれぞれ電気信号に変換して出力することにより、信号処理用の回路基板を複数種類用意しなくても、種類の異なる分析を行うことが可能な粒子分析装置が提案されている。
【００１０】
特許文献２では、単一の光源から放射された蛍光を、複数の蛍光に分割し、これらの蛍光を検出することで、フローサイトメーターのダイナミックレンジを拡大する方法が提案されている。
【００１１】
特許文献３には、試料に指向性光を照射して流路内における試料の位置情報を得た後、この位置情報に基づいて指向性光を照射することにより、照射むらや、照射位置やフォーカス位置のずれを防止する方法が提案されている。
【００１２】
このように、各プロセスにおいて、様々な技術が提案されているが、流路内を通流する試料の情報は、アナログ−デジタル変換（ＡＤ変換）した結果を解析することで分析されるため、最終的なＡＤ変換の結果の精度を高くすることが非常に重要である。そのため、ＡＤ変換の入力レンジを大きく、且つ出力ビット数を大きくすることが望ましいが、ＡＤ変換用ＩＣ自体の入力レンジは固定であり、現在のＡＤ変換用ＩＣでは、１６〜１８ビットが限界である。
【００１３】
また、ＡＤ変換の入力レンジをリアルタイムに調整するために、光ピックアップで得られた生データ（アナログ値）を遅延させる方法が考えられるが、このために行う電気的処理（アナログ的な遅延処理）はかえってデータを劣化させるという問題がある。
【００１４】
これらの問題を避けるために、従来の技術では、初めの数十〜数百のサンプルをゲイン調整に使うが、この方法では即ち数十〜数百のサンプルのデータが無駄になってしまうという問題がある。また、微小細胞と巨核細胞などが混じったサンプルなどではあらかじめ調整する方法では最適化は不可能である。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１５】
【特許文献１】特開２００７−１０１３１４号公報
【特許文献２】特表２００７−５１８９９１号公報
【特許文献３】特表２００９−０６３３０５号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１６】
前記のように、流路内を通流する試料を光学的に検出する技術において、アナログ−デジタル変換（ＡＤ変換）した結果の精度を高くする技術には、様々な問題があった。
【００１７】
そこで、本発明では、流路内を通流する試料を光学的に検出する技術において、効率的かつ確実に、アナログ−デジタル変換（ＡＤ変換）した結果の精度を高くする技術を提供することを主目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１８】
本願発明者らは、前記の目的を解決するために鋭意研究を行った結果、試料が流路内を移動するという特徴を生かし、得られた電気的信号の増幅方法に着目することにより、本発明を完成させるに至った。
【００１９】
即ち、本発明では、まず、試料が通流する流路と、
該流路を通流中の試料に対して光を照射する第１光照射手段と、
該第１光照射手段による光照射によって、前記試料から発せられる光学的情報を検出する第１光検出手段と、
該第１光検出手段により検出された光学的情報を電気的信号に変換する第１電気信号変換手段と、
該第１電気信号変換手段により変換された電気的信号をアナログ−デジタル変換する第１ＡＤ変換手段と、
前記第１光照射手段より下流において、前記試料に対して光を照射可能な第２光照射手段と、
該第２光照射手段による光照射によって、前記試料から発せられる光学的情報を検出可能な第２光検出手段と、
該第２光検出手段により検出された光学的情報を電気的信号に変換可能な第２電気信号変換手段と、
前記第１ＡＤ変換手段によりアナログ−デジタル変換されたデジタル信号に基づいて、前記第２電気信号変換手段により変換された電気的信号を増幅可能な増幅手段と、
該増幅手段により増幅された電気的信号をアナログ−デジタル変換可能な第２ＡＤ変換手段と、
が少なくとも備えられた光学的測定装置を提供する。
本発明に係る光学的測定装置では、試料が流路内を移動するという特徴を生かし、第１の各手段より下流に、第２の各手段を設けることで、第１の各手段によって得られた情報を、第２の各手段から得られる情報の精度向上に用いることが可能である。
なお、本発明に係る光学的測定装置には、第１の各手段に加えて第２の各手段を備えているが、第１の各手段によって得られた情報内容によっては、後述するように、第２の各手段を作動させないように制御することも可能である。
本発明に係る光学的測定装置には、流路を通流中の試料の流速を測定する流速測定手段を更に設けることも可能である。
また、本発明に係る光学的測定装置には、流路を通流中の試料の流速を制御する流速制御手段を更に設けることも可能である。
更に、本発明に係る光学的測定装置には、流路内の温度を制御する温度制御手段を更に設けることも可能である。
本発明に係る光学的測定装置における第１光照射手段、第１光検出手段、第１電気信号変換手段、第１ＡＤ変換手段は、それぞれ、第２光照射手段、第２光検出手段、第２電気信号変換手段、第２ＡＤ変換手段としても機能させることも可能である。
【００２０】
本発明に係る光学的測定装置は、フローサイトメーターおよび光学的測定方法に好適に用いることができる。
より具体的には、本発明に係る光学的測定装置に、第２ＡＤ変換手段によりアナログ−デジタル変換されたデジタル信号に基づいて、試料を分取する分取手段を加えることで、フローサイトメーターとして用いることが可能である。
【００２１】
ここで、本発明で用いる技術用語の定義付けを行う。本発明における「試料」とは、細胞や微生物、リポソーム、ＤＮＡ、タンパク質などの生体関連微小粒子、あるいはラテックス粒子やゲル粒子、工業用粒子などの合成粒子など、流路内を通流可能な物質であれば、全て包含する。
【発明の効果】
【００２２】
本発明に係る光学的測定装置では、第１の各手段によって得られた試料の情報に基づいて、第２の光照射〜電気信号交換手段によって得られた同一の試料の電気的信号を、最適な増幅率にて増幅することが可能である。そのため、試料が無駄になることもなく、効率的かつ確実に、アナログ−デジタル変換（ＡＤ変換）した結果の精度を高くすることが実現できる。
【図面の簡単な説明】
【００２３】
【図１】本発明に係る光学的測定装置１の一実施形態を模式的に示す模式概念図である。
【図２】本発明に係る光学的測定装置１の図１とは異なる実施形態を模式的に示す模式概念図である。
【図３】２つの試料Ｓが連なって流れてきた場合（Doublet）および３つの試料が連なって流れてきた場合（Triplet）のパルス信号の様子を示す図面代用グラフである。
【図４】本発明に係る光学的測定装置１の図１および図２とは異なる実施形態を模式的に示す模式概念図である。
【図５】本発明に係る光学的測定装置１の図１、図２および図４とは異なる実施形態を模式的に示す模式概念図である。
【図６】本発明に係る光学的測定装置１の図１、図２、図４および図５とは異なる実施形態を模式的に示す模式概念図である。
【図７】本発明に係るフローサイトメーター１０の一実施形態を模式的に示す模式概念図である。
【図８】本発明に係る光学的測定方法のフロー図である。
【発明を実施するための形態】
【００２４】
以下、本発明を実施するための好適な形態について図面を参照しながら説明する。以下に説明する実施形態は、本発明の代表的な実施形態の一例を示したものであり、これにより本発明の範囲が狭く解釈されることはない。なお、説明は以下の順序で行う。
１．光学的測定装置１
（１）流路２
（２）第１光照射手段１１
（３）第１光検出手段１２
（４）第１電気信号変換手段１３
（５）第１ＡＤ変換手段１４
（６）第２光照射手段２１
（７）第２光検出手段２２
（８）第２電気信号変換手段２３
（９）増幅手段３
（１０）第２ＡＤ変換手段２４
（１１）流速測定手段４
（１２）流速制御手段５
（１３）温度制御手段６
２．フローサイトメーター
（１）分取手段７
３．光学的測定方法
（１）通流工程Ｉ
（２）第１光照射工程II
（３）第１光検出工程III
（４）第１電気信号変換工程IV
（５）第１ＡＤ変換工程Ｖ
（６）第２光照射工程VI
（７）第２光検出工程VII
（８）第２電気信号変換工程VIII
（９）増幅工程IX
（１０）第２ＡＤ変換工程Ｘ
（１１）流速測定工程XI
（１２）流速制御工程XII
（１３）温度制御工程XIII
（１４）分取工程XIV
【００２５】
＜１．光学的測定装置＞
図１は、本発明に係る光学的測定装置１の一実施形態を模式的に示す模式概念図である。
本発明に係る光学的測定装置１は、大別すると、流路２、第１光照射手段１１、第１光検出手段１２、第１電気信号変換手段１３、第１ＡＤ変換手段１４、第２光照射手段２１、第２光検出手段２２、第２電気信号変換手段２３、増幅手段３、第２ＡＤ変換手段２４、を少なくとも備える。また、必要に応じて、流速測定手段４、流速制御手段５、温度制御手段６、などを備えることも可能である。以下、各々について、詳細に説明する。
【００２６】
（１）流路２
流路２には試料Ｓが通流し、その所定部位において、後述する第１光照射手段１１および第２光照射手段２１より光照射が行われ、各種光学的情報検出が行われる。
【００２７】
本発明に係る光学的測定装置１に用いることができる流路２の形態は特に限定されず、自由に設計することができる。例えば、図１に示すような２次元又は３次元のプラスチックやガラス等の基板Ｔ内に形成した流路２に限らず、図２に示すように、従来のフローサイトメーターで用いられているような流路２も、本発明に係る光学的測定装置１に用いることができる。
【００２８】
また、前記流路２の流路幅、流路深さ、流路断面形状も、層流を形成し得る形態であれば特に限定されず、自由に設計することができる。例えば、流路幅１ｍｍ以下のマイクロ流路においても、本発明に係る光学的測定装置１に用いることが可能である。特に、流路幅１０μｍ以上１ｍｍ以下程度のマイクロ流路を用いれば、後述する本発明に係る光学的測定方法をより好適に行うことができる。
【００２９】
なお、基板Ｔ上に形成した流路２を採用する場合には、流路２の底面を透視性のある材料で形成することが好ましい。図１に示すように、後述の第１光検出手段１２および第２光検出手段２２を、後述の第１光照射手段１１および第２光照射手段２１と基板Ｔを挟んで逆側に配置し、流路２の底面側からの光学的情報を検出できるようにするためである。
【００３０】
（２）第１光照射手段１１
第１光照射手段１１は、流路１を通流中の試料Ｓに対して光Ｌを照射するための手段である。
【００３１】
第１光照射手段１１から照射される光の種類は特に限定されないが、試料Ｓから蛍光や散乱光を確実に発生させるためには、光方向、波長、光強度が一定の光が望ましい。一例としては、レーザー、ＬＥＤ等を挙げることができる。レーザーを用いる場合、その種類も特に限定されないが、アルゴンイオン（Ar）レーザー、ヘリウム−ネオン（He-Ne）レーザー、ダイ（dye）レーザー、クリプトン（Cr）レーザー等を、１種又は２種以上、自由に組み合わせて用いることができる。
【００３２】
（４）第１光検出手段１２
第１光検出手段１２は、第１光照射手段１１による光照射によって、試料Ｓから発せられた光学的情報を検出する手段である。
【００３３】
本発明に係る光学的測定装置１に用いることができる第１光検出手段１２は、光学的情報の検出ができれば、その種類は特に限定されず、公知の光検出器を自由に選択して採用することができる。例えば、蛍光測定器、散乱光測定器、透過光測定器、反射光測定器、回折光測定器、紫外分光測定器、赤外分光測定器、ラマン分光測定器、ＦＲＥＴ測定器、ＦＩＳＨ測定器その他各種スペクトラム測定器、複数の光検出器をアレイ状に並べた、いわゆるマルチチャンネル光検出器、などを１種又は２種以上自由に組み合わせて採用することができる。
【００３４】
また、本発明に係る光学的測定装置１における第１光検出手段１２の設置箇所は、試料Ｓから発せられた光学的情報が検出できれば特に限定されず、自由に設計することができる。例えば、図１および図２に示すように、流路２を挟んで第１光照射手段１１と逆側に配置することも可能である。第１光検出手段１２を、流路２を挟んで第１光照射手段１１と逆側に配置することで、第１光照射手段１１や後述する第２光照射手段２１をより自由な構成で配置させることができる。
【００３５】
（４）第１電気信号変換手段１３
第１電気信号変換手段１３は、第１光検出手段により検出された光学的情報を、電気的信号に変換する手段である。光学的情報を、電気的信号に変換すると、例えば、図１中符号１３の矢印に示すような、電圧パルスを得ることができる。
【００３６】
（５）第１ＡＤ変換手段１４
第１ＡＤ変換手段１４は、第１電気信号変換手段１３により変換された電気的信号をアナログ−デジタル変換（以下「ＡＤ変換」とする。）する手段である。
【００３７】
従来の光学的測定装置においては、電気的信号をＡＤ変換する際、電気的信号（電圧パルス）を、予め設定した増幅率で増幅した後に、ＡＤ変換が行われるのが通常である。しかし、本発明においては、予め増幅率を設定する必要がなく、本発明の第１ＡＤ変換手段１４では、任意の増幅率で増幅した後にＡＤ変換を行えばよい。勿論、電気的信号（電圧パルス）を増幅せずに、ＡＤ変換を行ってもよい。
【００３８】
第１ＡＤ変換手段１４によってＡＤ変換された結果（デジタル信号）は、後述する増幅手段３において、増幅率の決定に用いられる。
【００３９】
（６）第２光照射手段２１
第２光照射手段２１は、第１光照射手段１１より下流において、前記試料Ｓに対して光Ｌを照射可能な手段である。つまり、第２光照射手段２１は、第１光照射手段１１によって光照射された試料Ｓと同一の試料Ｓに対して、再度、光照射することが可能な手段である。流路を用いた従来の光学的測定装置では、通流中の試料Ｓの光学的測定は、一度しか行わないことがほとんどであるが、試料Ｓが流路２内を通流中であれば何度でも測定は可能である。そこで、本発明においては、第１光照射手段１１によって光照射された試料Ｓが流路２内を移動する間に、再度、光照射することが可能な第２光照射手段２１を設けている。
【００４０】
なお、第１の各手段によって測定された結果によっては、第２光照射手段２１を作動させないことも自由である。例えば、第１の各手段によって測定された結果が、既に理想的なデータであり、第２の各手段を用いて、より精密な測定を行うまでもない場合などが考えられる。
【００４１】
また、２以上の試料Ｓが連なって流れてきた場合などは、第２の各手段により測定を行ったとしても、試料Ｓを分析可能なデータを得ることができない。例えば、図３に示すように、２つの試料Ｓ（細胞など）が連なって流れてきた場合（図３中Doubletグラフ参照）や、３つの試料が連なって流れてきた場合（図３中Tripletグラフ参照）などには、パルス信号のピークが複数に分かれてしまい、試料Ｓの分析が不可能である。そこで、このような結果が第１の各手段で得られた場合には、第２光照射手段２１を作動させないように制御することも可能である。このように、無駄な測定を省くことで、効率的な測定が可能である。また、分析不能なデータを予め排除することで、得られたデータの解析時に必要なアルゴリズムを、簡単にすることが可能である。
【００４２】
第２光照射手段２１から照射される光の種類も特に限定されないが、試料Ｓから蛍光や散乱光を確実に発生させるためには、光方向、波長、光強度が一定の光が望ましい。一例としては、レーザー、ＬＥＤ等を挙げることができる。レーザーを用いる場合、その種類も特に限定されないが、アルゴンイオン（Ar）レーザー、ヘリウム−ネオン（He-Ne）レーザー、ダイ（dye）レーザー、クリプトン（Cr）レーザー等を、１種又は２種以上、自由に組み合わせて用いることができる。
【００４３】
第２光照射手段２１は、第１光照射手段１１と別に備えていても良いが、例えば、図４に示すように、第１光照射手段１１から照射された光Ｌの光路を分割することにより、第１光照射手段１１を、第２光照射手段２１として機能させることも可能である。このように、第１光照射手段１１と第２光照射手段２１を、同一の光源にすれば、装置の小型化に貢献することができる。
【００４４】
（７）第２光検出手段２２
第２光検出手段２２は、第２光照射手段２１による光照射によって、試料Ｓから発せられる光学的情報を検出可能な手段である。本発明においては、第１光検出手段１２によって光学的情報が検出された試料Ｓが流路内を移動する間に、再度、光検出することが可能な第２光検出手段２２を設けている。
【００４５】
なお、第１の各手段によって測定された結果に基づいて、第２光照射手段２１を作動させない場合には、第２光検出手段２２も作動させないように制御することも可能である。
【００４６】
本発明に係る光学的測定装置１１に用いることができる第２光検出手段２２は、光学的情報の検出ができれば、その種類は特に限定されず、公知の光検出器を自由に選択して採用することができる。例えば、蛍光測定器、散乱光測定器、透過光測定器、反射光測定器、回折光測定器、紫外分光測定器、赤外分光測定器、ラマン分光測定器、ＦＲＥＴ測定器、ＦＩＳＨ測定器その他各種スペクトラム測定器、複数の光検出器をアレイ状に並べた、いわゆるマルチチャンネル光検出器、などを１種又は２種以上自由に組み合わせて採用することができる。
【００４７】
また、本発明に係る光学的測定装置１における第２光検出手段２２の設置箇所は、試料Ｓから発せられた光学的情報が検出できれば特に限定されず、自由に設計することができる。例えば、図１および図２に示すように、流路２を挟んで第２光照射手段２１と逆側に配置することも可能である。第２光検出手段２２を、流路２を挟んで第２光照射手段２１と逆側に配置することで、第２光照射手段２１や前述した第１光照射手段１１をより自由な構成で配置させることができる。
【００４８】
第２光検出手段２２は、第１光検出手段１２と別に備えていても良いが、例えば、図４に示すように、第１光検出手段１２を、第２光検出手段２２として機能させることも可能である。この場合、第１光照射手段１１から照射された光Ｌの光路上を通流中の試料Ｓと、第２光照射手段２１から照射された光Ｌの光路上を通流中の別の試料Ｓからの光学的情報が、同時に検出されないように、後述のように、試料Ｓの流速を制御することが好ましい。このように、第１光検出手段１２と第２光検出手段２２を、同一の光検出器にすれば、装置の小型化に貢献することができる。
【００４９】
（８）第２電気信号変換手段２３
第２電気信号変換手段２３は、第２光検出手段２２により検出された光学的情報を電気的信号に変換可能な手段である。
【００５０】
なお、第１の各手段によって測定された結果に基づいて、第２光照射手段２１、第２光検出手段２２を作動させない場合には、第２電気信号変換手段２３も作動させないように制御することも可能である。
【００５１】
第２電気信号変換手段２３は、第１電気信号変換手段１３と別に備えていても良いが、例えば、図４に示すように、第１電気信号変換手段１３を、第２電気信号変換手段２３として機能させる、即ち、同一の電気基板８上で行うことも可能である。このように、第１電気信号変換手段１３と第２電気信号変換手段２３を、同一の電気基板８上に設ければ、装置の小型化に貢献することができる。また、前述した第１ＡＤ変換手段１４、後述する増幅手段３、第２ＡＤ変換手段２４も、第１電気信号変換手段１３、第２電気信号変換手段２３と同一の電気基板８上に設けることも可能である。
【００５２】
（９）増幅手段３
増幅手段３は、第２電気信号変換手段により変換された電気的信号を増幅可能な手段である。増幅手段３における増幅は、第１ＡＤ変換手段１４によりアナログ−デジタル変換されたデジタル信号に基づいて行う。例えば、第２電気信号変換手段により変換された電気的信号（図１中符号２３の矢印参照）を、図１中符号３の矢印に示すような電圧パルスに増幅することができる。
【００５３】
従来の光学的測定装置においては、試料Ｓの種類を予測し、予め増幅率を設定した上で、電気的信号（電圧パルス）を増幅した後に、ＡＤ変換が行われるのが通常である。しかし、この方法では、通流する試料Ｓの大きさがまちまちであったり、種類が異なっていたりする場合などには、対応しきれないのが現状である。そのため、予め、試料Ｓの種類を分類した上で流路に通流させたり（先行技術文献中、特許文献１参照）、解析可能なデータが得られなかった試料Ｓを無駄にしたりする場合があった。
【００５４】
しかし、本発明においては、流路２を通流中の試料Ｓの測定データが、第１の各手段により得られているため、得られたデジタル信号に基づいて、増幅率を決定することで、試料Ｓの大きさや種類に応じた最適な増幅率で、電気的信号を増幅することができる。また、最適な増幅率で増幅することが可能であるため、分析不能な結果になる場合は非常に少なく、試料Ｓの無駄を最低限に抑えることが可能である。
【００５５】
なお、第１の各手段によって測定された結果に基づいて、第２光照射手段２１、第２光検出手段２２、第２電気信号変換手段２３を作動させない場合には、増幅手段３も作動させないように制御することも可能である。
【００５６】
増幅手段３の設置箇所は特に限定されない。例えば、前述した第１電気信号変換手段１３、第１ＡＤ変換手段１４、後述する第２ＡＤ変換手段２４と同一の電気基板８上に設けることも可能である。
【００５７】
（１０）第２ＡＤ変換手段２４
第２ＡＤ変換手段２４は、増幅手段３により増幅された電気的信号をアナログ−デジタル変換可能な手段である。
【００５８】
本発明に係る光学的測定装置１では、前記増幅手段３によって、第２電気信号変換手段により変換された電気的信号を、最適な増幅率で増幅している。そのため、この増幅した電気的信号をＡＤ変換すれば、正確で詳細なデータを得ることができる。
【００５９】
第２ＡＤ変換手段２４は、第１ＡＤ変換手段１４と別に備えていても良いが、例えば、図４に示すように、第１ＡＤ変換手段１４を、第２ＡＤ変換手段２４として機能させる、即ち、同一の電気基板８上で行うことも可能である。このように、第１ＡＤ変換手段１４と第２ＡＤ変換手段２４を、同一の電気基板８上に設ければ、装置の小型化に貢献することができる。
【００６０】
（１１）流速測定手段４
流速測定手段４は、流路２を通流中の試料Ｓの流速を測定する手段である。本発明では必須の手段ではないが、流速測定手段４を備えることで、前述した第１光照射手段１１や第２光照射手段２１からの光照射のタイミングを、試料Ｓの通流速度に伴って制御することができる。
【００６１】
流速測定手段４の設置箇所は、流路２を通流中の試料Ｓの流速が測定できれば特に限定されず、自由に設計することが可能である。例えば、図５に示すように、流路１の比較的上流に設置することができる。
【００６２】
また、流速測定手段４の設置個数も特に限定されず、流路２の上流と下流における流速の差を測定したり、より正確に流速を測定したりするために、２以上設置することも可能である。
【００６３】
なお、本発明に係る光学的測定装置１１に用いることができる流速測定手段４は、流路２を通流中の試料Ｓの流速を測定することができれば、その種類は特に限定されず、公知の流量計などを自由に選択して採用することができる。
【００６４】
（１２）流速制御手段５
流速制御手段５は、流路２を通流中の試料Ｓの流速を制御する手段である。本発明では必須の手段ではないが、流速制御手段５を備えることで、前述した第１光照射手段１１や第２光照射手段２１からの光照射のタイミングに合わせて、試料Ｓの通流速度を制御することができる。光照射のタイミングに合わせて、試料Ｓの通流速度を制御することができれば、より確実に試料Ｓからの各種データを検出することができ、測定精度の向上を図ることが可能である。
【００６５】
また、前述したとおり、第１光照射手段１１から照射された光Ｌの光路上を通流中の試料Ｓと、第２光照射手段２１から照射された光Ｌの光路上を通流中の別の試料Ｓからの光学的情報が、同時に検出されないように、試料Ｓの流速を制御することも可能である。このように制御すれば、第１光検出手段１２と第２光検出手段２２を、同一の光検出器とすることができ、装置の小型化に貢献できる。
【００６６】
流速制御手段５の設置箇所は、流路２を通流中の試料Ｓの流速を制御することができれば特に限定されず、自由に設計することができる。図示しないが、例えば、前述した第１電気信号変換手段１３、第１ＡＤ変換手段１４、第２電気信号変換手段２３、増幅手段３、第２ＡＤ変換手段２４、と同一の電気基板上に設けることも可能である。
【００６７】
流速制御手段５によって行う制御方法は、流路２を通流中の試料Ｓの流速を制御することができれば特に限定されず、自由な方法を用いることができる。例えば、図示しないが、前述した第１光照射手段１１や第２光照射手段２１からの光照射のタイミングに合わせて、流路２に導入するシース流Ｆ１０２（後述の図７参照、以下同じ。）およびサンプル流Ｆ１０１の流量を調整する方法が挙げられる。
【００６８】
（１３）温度制御手段６
温度制御手段６は、流路２内の温度を制御する手段である。前述したとおり、本発明では、流路２の異なる箇所でそれぞれ測定を行うため、流路２内の温度が場所によって異なってしまうと、正確な測定を行うことができない。そこで、本発明に係る光学的測定装置１には、温度制御手段６を設けることが好ましい。
【００６９】
温度制御手段６に用いる制御方法は特に限定されず、流路２内の温度を制御することができれば、公知のあらゆる方法を自由に選択して用いることができる。例えば、基板に電極をパターニングした加熱部や、ペルチェ素子などを用いた温度調整部Ｈ（図６参照）を設けるとともに、流路２に温度センサーＧを設け、測定した温度をフィードバックすることにより、流路２内の温度を制御することができる。
【００７０】
＜２．フローサイトメーター＞
本発明に係る光学的測定装置１は、その精度の高さを利用してフローサイトメーターに好適に用いることができる。図７は、本発明に係るフローサイトメーター１０の一実施形態を模式的に示す模式概念図である。
【００７１】
本発明に係るフローサイトメーター１０は、大別すると、流路２、第１光照射手段１１、第１光検出手段１２、第１電気信号変換手段１３、第１ＡＤ変換手段１４、第２光照射手段２１、第２光検出手段２２、第２電気信号変換手段２３、増幅手段３、第２ＡＤ変換手段２４、分取手段７、を少なくとも備える。なお、流路２、第１光照射手段１１、第１光検出手段１２、第１電気信号変換手段１３、第１ＡＤ変換手段１４、第２光照射手段２１、第２光検出手段２２、第２電気信号変換手段２３、増幅手段３、第２ＡＤ変換手段２４については、前記光学的測定装置１と同様であるため、ここでは説明を割愛する。
【００７２】
（１）分取手段７
分取手段７は、第２ＡＤ変換手段２４によりアナログ−デジタル変換されたデジタル信号に基づいて、試料Ｓを分取する手段である。例えば、分取手段７では、第２ＡＤ変換手段２４により得られた試料Ｓの大きさ、形態、内部構造等のデジタル情報に基づいて、流路２の下流において、偏向板Ｄなどを用いて試料Ｓの分取が行われる。
【００７３】
なお、図７においては、流路２の下流に、分取のための分岐流路を備えているが、本発明では、これに限定されない。例えば、図示しないが、流路２の下流において、超音波により試料Ｓを含む液滴を発生させ、これに電荷を加え、偏向板Ｄなどを用いて試料Ｓの分取を行ってもよい。
【００７４】
＜３．光学的測定方法＞
図８は、本発明に係る光学的測定方法のフロー図である。
本発明に係る光学的測定方法１００は、大別して、通流工程Ｉ、第１光照射工程II、第１光検出工程III、第１電気信号変換工程IV、第１ＡＤ変換工程Ｖ、第２光照射肯定VI、第２光検出工程VII、第２電気信号変換工程VIII、増幅工程IX、第２ＡＤ変換工程Ｘ、を少なくとも行う方法である。また、必要に応じて、流速測定工程XI、流速制御工程XII、温度制御工程XIII、分取工程XIV、をそれぞれ行うことも可能である。以下、各工程について、詳細に説明する。
【００７５】
（１）通流工程Ｉ
通流工程Ｉは、流路２に試料Ｓを通流させる工程である。
【００７６】
試料Ｓの流路２中への通流方法は特に限定されないが、例えば、図７に示すように、整流を促す流体媒体（シース流Ｆ１０２）で、試料Ｓ含むサンプル流Ｆ１０１を挟み込みながら搬送する方法が挙げられる。このように搬送すれば、試料Ｓを含むサンプル流Ｆ１０１の層流を形成することができ、より好適である。前記流体媒体は試料Ｓを含むサンプル流の整流を促す機能を有すれば、その種類は特に限定されないが、例えば、試料Ｓが細胞である場合には、生理食塩水等を用いることができる。
【００７７】
試料Ｓには、後述する第１光照射工程IIおよび第２光検出工程VIIにおいて、光学的情報が検出できるように、蛍光色素等の蛍光物質、放射性物質、インターカレーター、またはマイクロビーズなどの標識物質で修飾しておくことが好ましい。例えば、蛍光色素を用いる場合、その種類は特に限定されず、公知のあらゆる蛍光色素を用いることができる。例えば、Cascade Blue、Pacific Blue、Fluorescein isothiocyanate(FITC)、Phycoerythrin(PE)、Propidium iodide(PI)、Texas red(TR)、Peridinin chlorophyll protein(PerCP)、Allophycocyanin(APC)、4’,6-Diamidino-2-phenylindole(DAPI)、 Cy3、Cy5、Cy7等を、１種又は２種以上自由に組み合わせて用いることができる。
【００７８】
なお、蛍光タンパク質のように、試料Ｓ自体が発光する場合には、標識物質で修飾する必要はない。また、流路２内で物質間相互作用を進行させることにより、ＦＲＥＴの原理のように、その物質の蛍光色等を変化させることができる物質等を試料Ｓとして用いる場合も、標識物質で試料Ｓを修飾する必要はない。
【００７９】
（２）第１光照射工程II
第１光照射工程IIは、流路２を通流中の試料Ｓに対して、光を照射する工程である。
【００８０】
第１光照射工程IIにおいて、照射する光の種類は特に限定されないが、試料Ｓから蛍光や散乱光を確実に発生させるためには、光方向、波長、光強度が一定の光が望ましい。一例としては、レーザー、ＬＥＤ等を挙げることができる。レーザーを用いる場合、その種類も特に限定されないが、アルゴンイオン（Ar）レーザー、ヘリウム−ネオン（He-Ne）レーザー、ダイ（dye）レーザー、クリプトン（Cr）レーザー等を、１種又は２種以上自由に組み合わせて用いることができる。
【００８１】
（３）第１光検出工程III
第１光検出工程IIIは、第１光照射工程IIで光Ｌを照射することにより、流路２を通流中の試料Ｓから発せられる光学的情報を、光検出手段１２を用いて検出する工程である。
【００８２】
第１光検出工程IIIでは、試料Ｓからの光学的情報が検出できれば、その取得方法は特に限定されず、公知の方法を自由に選択して採用することができる。例えば、蛍光測定法、散乱光測定法、透過光測定法、反射光測定法、回折光測定法、紫外分光測定法、赤外分光測定法、ラマン分光測定法、ＦＲＥＴ測定法、ＦＩＳＨ測定法その他各種スペクトラム測定法、複数の色素を検出できる、いわゆるマルチカラー検出法等を用いた方法等を、１種又は２種以上自由に組み合わせて採用することができる。
【００８３】
（４）第１電気信号変換工程IV
第１電気信号変換工程IVは、第１光検出工程IIIにおいて検出された光学的情報を、電気的信号に変換する工程である。光学的情報を、電気的信号に変換すると、例えば、図１中符号１３の矢印に示すような、電圧パルスを得ることができる。
【００８４】
（５）第１ＡＤ変換工程Ｖ
第１ＡＤ変換工程Ｖは、第１電気信号変換工程IVにおいて変換された電気的信号をアナログ−デジタル変換する工程である。
【００８５】
従来の光学的測定方法においては、電気的信号をＡＤ変換する際、電気的信号（電圧パルス）を、予め設定した増幅率で増幅した後に、ＡＤ変換が行われるのが通常である。しかし、本発明においては、予め増幅率を設定する必要がなく、本発明の第１ＡＤ変換工程Ｖでは、任意の増幅率で増幅した後にＡＤ変換を行えばよい。勿論、電気的信号（電圧パルス）を増幅せずに、ＡＤ変換を行ってもよい。
【００８６】
第１ＡＤ変換工程ＶにおいてＡＤ変換された結果（デジタル信号）は、後述する増幅工程IXにおいて、増幅率の決定に用いられる。
【００８７】
（６）第２光照射工程VI
第２光照射工程VIは、第１光照射工程IIを行う位置より下流において、試料Ｓに対して光Ｌを照射する工程である。つまり、第２光照射工程VIは、第１光照射工程IIにおいて光照射された試料Ｓと同一の試料Ｓに対して、再度、光照射する工程である。流路２を用いた従来の光学的測定方法では、通流中の試料Ｓの光学的測定は、一度しか行わないことがほとんどであるが、試料Ｓが流路２内を通流中であれば何度でも測定は可能である。そこで、本発明においては、第１光照射手段１１によって光照射された試料Ｓが流路２内を移動する間に、再度、光照射する第２光照射工程VIを行っている。
【００８８】
なお、第１の各工程によって測定された結果によっては、第２光照射工程VIを行わないことも自由である。例えば、第１の各工程によって測定された結果が、既に理想的なデータであり、第２の各工程を行って、より精密な測定を行うまでもない場合などが考えられる。
【００８９】
また、２以上の試料Ｓが連なって流れてきた場合などは、第２の各工程により測定を行ったとしても、試料Ｓを分析可能なデータを得ることができない。例えば、図３に示すように、２つの試料Ｓ（細胞など）が連なって流れてきた場合（図３中Doubletグラフ参照）や、３つの試料が連なって流れてきた場合（図３中Tripletグラフ参照）などには、パルス信号のピークが複数に分かれてしまい、試料Ｓの分析が不可能である。そこで、このような結果が第１の各工程で得られた場合には、第２光照射工程VIは行う必要がない。このように、無駄な測定を省くことで、効率的な測定が可能である。また、分析不能なデータを予め排除することで、得られたデータの解析時に必要なアルゴリズムを、簡単にすることが可能である。
【００９０】
第２光照射工程VIにおいて照射する光の種類も特に限定されないが、試料Ｓから蛍光や散乱光を確実に発生させるためには、光方向、波長、光強度が一定の光が望ましい。一例としては、レーザー、ＬＥＤ等を挙げることができる。レーザーを用いる場合、その種類も特に限定されないが、アルゴンイオン（Ar）レーザー、ヘリウム−ネオン（He-Ne）レーザー、ダイ（dye）レーザー、クリプトン（Cr）レーザー等を、１種又は２種以上、自由に組み合わせて用いることができる。
【００９１】
（７）第２光検出工程VII
第２光検出工程VIIは、第２光照射工程VIにおける光照射によって、試料Ｓから発せられる光学的情報を検出する工程である。本発明においては、第１光検出工程IVにおいて、光学的情報が検出された試料Ｓが流路２内を移動する間に、再度、光検出するために第２光検出工程VIIを行う。
【００９２】
なお、第１の各工程において測定された結果に基づいて、第２光照射工程VIを行わない場合には、第２光検出工程VIIも行う必要はない。
【００９３】
第２光検出工程VIIにおいて、用いることができる光検出方法は、光学的情報の検出ができれば、その種類は特に限定されず、公知の光検出器を用いた方法を自由に選択して採用することができる。例えば、蛍光測定器、散乱光測定器、透過光測定器、反射光測定器、回折光測定器、紫外分光測定器、赤外分光測定器、ラマン分光測定器、ＦＲＥＴ測定器、ＦＩＳＨ測定器その他各種スペクトラム測定器、複数の光検出器をアレイ状に並べた、いわゆるマルチチャンネル光検出器、などを１種又は２種以上自由に組み合わせて用いることができる。
【００９４】
（８）第２電気信号変換工程VIII
第２電気信号変換工程VIIIは、第２光検出工程VIIにおいて検出された光学的情報を電気的信号に変換する工程である。
【００９５】
なお、第１の各工程において測定された結果に基づいて、第２光照射工程VI、第２光検出工程VIIを行わない場合には、第２電気信号変換工程VIIIも行う必要はない。
【００９６】
（９）増幅工程IX
増幅工程IXは、第２電気信号変換工程VIIIにおいて変換された電気的信号を増幅する工程である。増幅工程IXにおける増幅は、第１ＡＤ変換工程Ｖにおいてアナログ−デジタル変換されたデジタル信号に基づいて行う。例えば、第２電気信号変換工程VIIIにおいて変換された電気的信号（図１中符号２３の矢印参照）を、図１中符号３の矢印に示すような電圧パルスに増幅することができる。
【００９７】
従来の光学的測定方法においては、試料Ｓの種類を予測し、予め増幅率を設定した上で、電気的信号（電圧パルス）を増幅した後に、ＡＤ変換が行われるのが通常である。しかし、この方法では、通流する試料Ｓの大きさがまちまちであったり、種類が異なっていたりする場合などには、対応しきれないのが現状である。そのため、予め、試料Ｓの種類を分類した上で流路に通流させたり（先行技術文献中、特許文献１参照）、解析可能なデータが得られなかった試料Ｓを無駄にしたりする場合があった。
【００９８】
しかし、本発明においては、流路２を通流中の試料Ｓの測定データが、第１の各手段により得られているため、得られたデジタル信号に基づいて、増幅率を決定することで、試料Ｓの大きさや種類に応じた最適な増幅率で、電気的信号を増幅することができる。また、最適な増幅率で増幅することが可能であるため、分析不能な結果になる場合は非常に少なく、試料Ｓの無駄を最低限に抑えることが可能である。
【００９９】
なお、第１の各手段によって測定された結果に基づいて、第２光照射工程VI、第２光検出工程VII、第２電気信号変換工程VIIIを行わない場合には、増幅工程IXも行う必要はない。
【０１００】
（１０）第２ＡＤ変換工程Ｘ
第２ＡＤ変換工程Ｘは、増幅工程IXにおいて増幅された電気的信号をアナログ−デジタル変換する工程である。
【０１０１】
本発明に係る光学的測定方法では、増幅工程IXによって、第２電気信号変換工程VIIIおいて変換された電気的信号を、最適な増幅率で増幅している。そのため、この増幅した電気的信号をＡＤ変換すれば、正確で詳細なデータを得ることができる。
【０１０２】
（１１）流速測定工程XI
流速測定工程XIは、流路２を通流中の試料Ｓの流速を測定する工程である。本発明では必須の工程ではないが、流速測定工程XIを行うことで、前述した第１光照射工程IIや第２光照射工程VIにおける光照射のタイミングを、試料Ｓの通流速度に伴って制御することができる。
【０１０３】
流速測定工程XIを行う順番、回数は、通流工程Ｉを行った後であれば特に限定されず、自由に行うことができる。本発明においては、特に、第１光照射工程IIの前と、第２光照射工程VIの前に、行うことが好ましい（図８参照）。光照射のタイミングを、試料Ｓの通流速度に伴って制御するためである。
【０１０４】
なお、流速測定工程XIでは、流路２を通流中の試料Ｓの流速を測定することができれば、その方法は特に限定されず、公知の流量計などを用いた方法などを自由に選択して採用することができる。
【０１０５】
（１２）流速制御工程XII
流速制御工程XIIは、流路２を通流中の試料Ｓの流速を制御する工程である。本発明では必須の工程ではないが、流速制御工程XIIを行うことで、前述した第１光照射工程IIや第２光照射工程VIにおける光照射のタイミングに合わせて、試料Ｓの通流速度を制御することができる。光照射のタイミングに合わせて、試料Ｓの通流速度を制御することができれば、より確実に試料Ｓからの各種データを検出することができ、測定精度の向上を図ることが可能である。
【０１０６】
また、前述した通り、第１光照射工程IIにおいて照射された光Ｌの光路上を通流中の試料Ｓと、第２光照射工程VIにおいて照射された光Ｌの光路上を通流中の別の試料Ｓからの光学的情報が、同時に検出されないように、試料Ｓの流速を制御することも可能である。このように制御すれば、第１光照射工程IIと第２光照射工程VIを、同一の光検出器で行うことができ、装置の小型化に貢献できる。
【０１０７】
流速制御工程XIIを行う順番、回数は、通流工程Ｉを行った後であれば特に限定されず、自由に行うことができる。本発明においては、特に、第１光照射工程IIの前と、第２光照射工程VIの前に、行うことが好ましい（図８参照）。光照射のタイミングに合わせて、試料Ｓの通流速度を制御するためである。
【０１０８】
流速制御工程XIIにおいて行う制御方法は、流路２を通流中の試料Ｓの流速を制御することができれば特に限定されず、自由な方法を用いることができる。例えば、図示しないが、前述した第１光照射工程IIや第２光照射工程VIにおける光照射のタイミングに合わせて、流路２に導入するシース流Ｆ１０２およびサンプル流Ｆ１０１の流量を調整する方法が挙げられる。
【０１０９】
（１３）温度制御工程XIII
温度制御工程XIIIは、流路２内の温度を制御する工程である。前述したとおり、本発明では、流路２の異なる箇所でそれぞれ測定を行うため、流路２内の温度が場所によって異なってしまうと、正確な測定を行うことができない。そこで、本発明に係る光学的測定方法では、温度制御工程XIIIを行うことが好ましい。
【０１１０】
温度制御工程XIIIを行う順番、回数は特に限定されず、自由に行うことができる。本発明においては、特に、流路２内を通流する試料Ｓの温度を一定に保つために、測定中は、常に温度制御することが好ましい（図８参照）。測定精度を向上させるためである。
【０１１１】
温度制御工程XIIIにおいて行う制御方法は特に限定されず、流路２内の温度を制御することができれば、公知のあらゆる方法を自由に選択して用いることができる。例えば、基板に電極をパターニングした加熱部や、ペルチェ素子などを用いた温度調整部Ｈ（図６参照）を設けるとともに、流路２に温度センサーＧを設け、測定した温度をフィードバックすることにより、流路２内の温度を制御することができる。
【０１１２】
（１４）分取工程XIV
分取工程XIVは、第２ＡＤ変換工程Ｘにおいてアナログ−デジタル変換されたデジタル信号に基づいて、試料Ｓを分取する工程である。本発明では必須の工程ではないが、分取工程XIVを行うことで、本発明に係る光学的測定方法をフローサイトメトリーの一工程として行うことが可能である。
【０１１３】
分取方法の具体的手法としては、例えば、第２ＡＤ変換工程Ｘにおいて得られた試料Ｓの大きさ、形態、内部構造等のデジタル情報に基づいて、流路２の下流において、偏向板Ｄなどを用いて試料Ｓを分取する方法が挙げられる。
【産業上の利用可能性】
【０１１４】
本発明に係る光学的測定装置では、第１の各手段によって得られた試料の情報に基づいて、第２の光照射〜電気信号交換手段によって得られた同一の試料の電気的信号を、最適な増幅率にて増幅することが可能である。そのため、試料が無駄になることもなく、効率的かつ確実に、アナログ−デジタル変換（ＡＤ変換）した結果の精度を高くすることが実現できる。この技術を用いることで、医療分野（病理学、腫瘍免疫学、移植学、遺伝学、再生医学、化学療法など）、創薬分野、臨床検査分野、食品分野、農業分野、工学分野、法医学分野、犯罪鑑識分野、など様々な分野における分析・解析技術の向上に貢献することができる。
【符号の説明】
【０１１５】
１  光学的測定装置
２  流路
１１  第１光照射手段
１２  第１光検出手段
１３  第１電気信号変換手段
１４  第１ＡＤ変換手段
２１  第２光照射手段
２２  第２光検出手段
２３  第２電気信号変換手段
２４  第２ＡＤ変換手段
３  増幅手段
Ｓ  試料
Ｔ  基板
Ｌ  光
４  流速測定手段
５  流速制御手段
６  温度制御手段
７  分取手段
８  電気基板
Ｈ  温度調整部
Ｇ  温度センサー
１０  フローサイトメーター
Ｆ１０１  サンプル流
Ｆ１０２  シース流
Ｄ  偏光板
I  通流工程
II  第１光照射工程
III  第１光検出工程
IV  第１電気信号変換工程
Ｖ  第１ＡＤ変換工程
VI  第２光照射工程
VII  第２光検出工程
VIII  第２電気信号変換工程
IX  増幅工程
Ｘ  第２ＡＤ変換工程
XI  流速測定工程
XII  流速制御工程
XIII  温度制御工程
XIV  分取工程
【図１】
2010286341.tif 000003
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
2010286341.tif 000009
【図８】
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