(57)【要約】【課題】共焦点観察と全反射蛍光観察が可能で大型化や高コスト化を抑えた顕微鏡装置等の提供。【解決手段】照明光束で標本５面を走査する走査手段３２を含み、光源からの前記照明光束を標本５へ導く照明光学系と、標本５からの蛍光を検出する蛍光検出光学系と、前記照明光学系内に配設され前記照明光束を標本５へ導く複数の蛍光キューブ１６，７０とを有し、蛍光キューブ１６，７０の少なくとも１つはすり鉢状の凹み部を備えた板状光学部材５１と、照明光の偏光状態を変える偏光素子７１と、光軸を中心とした略同一円周上に隣接する複数の同形状のレンズ部５２ａを有してなる光学部材５２とを備え、前記照明光束の主光線を前記照明光学系の光軸に略平行にし、前記照明光の偏光状態を変え、かつ前記照明光束を対物レンズ８の瞳位置Ｐの光軸から離れた所定の輪帯領域内の適宜位置に集光する集光位置変換手段を有する。【選択図】図１
2010164834.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
照明光束で標本面を走査する走査手段を含み、光源からの前記照明光束を標本へ導く照明光学系と、
前記標本からの蛍光を検出する蛍光検出光学系と、
前記照明光学系内に配設され、前記照明光束を前記標本へ導く複数の蛍光キューブと、を有しており、
前記蛍光キューブの少なくとも１つは、すり鉢状の凹み部を備えた板状光学部材と、照明光の偏光状態を変える偏光素子と、光軸を中心とした略同一円周上に隣接する複数の同形状のレンズ部を有してなる光学部材とを備え、前記照明光束の主光線を前記照明光学系の光軸に対して略平行になるようにし、前記照明光の偏光状態を変えて、かつ前記照明光束を前記対物レンズの瞳位置の光軸から離れた所定の輪帯領域内の適宜の位置に集光するための集光位置変換手段を有することを特徴とする顕微鏡装置。
【請求項２】
前記集光位置変換手段を有する前記蛍光キューブは、前記照明光束を前記対物レンズへ導き、かつ前記標本からの反射光と蛍光とを分離するダイクロイックミラーをさらに備えていることを特徴とする請求項１に記載の顕微鏡装置。
【請求項３】
前記集光位置変換手段を有する前記蛍光キューブを光路中に配置した際に、前記照明光を前記対物レンズの瞳面上の所定位置へ導くべく前記走査手段を制御する制御手段を有することを特徴とする請求項１又は請求項２に記載の顕微鏡装置。
【請求項４】
前記集光位置変換手段を有する前記蛍光キューブは、前記板状光学部材に替えて、円錐側面形状の反射部材と、中心部分に貫通口を備えたすり鉢形状の反射部材と、を有することを特徴とする請求項１から請求項３のいずれか一項に記載の顕微鏡装置。
【請求項５】
落射照明光源からの落射照明光束を前記対物レンズを介して前記標本へ導く落射照明光学系を有することを特徴とする請求項１から請求項４のいずれか一項に記載の顕微鏡装置。
【請求項６】
前記集光位置変換手段中の前記偏光素子は、前記光学部材における前記各レンズ部に対応して光軸を中心とした略同一円周上に設けられた光学軸の方向が異なる複数の１／２波長板からなることを特徴とする請求項１から請求項５のいずれか一項に記載の顕微鏡装置。
【請求項７】
前記集光位置変換手段中の前記偏光素子は、前記光学部材における前記各レンズ部に対応して光軸を中心とした略同一円周上に設けられた光学軸の方向が異なる複数の１／４波長板からなることを特徴とする請求項１から請求項５のいずれか一項に記載の顕微鏡装置。
【請求項８】
前記集光位置変換手段中の前記偏光素子は、円偏光及びランダム偏光を直線偏光に変換するために、前記光学部材における前記各レンズ部に対応して光軸を中心とした略同一円周上に設けられた透過軸の方向が異なる複数の偏光子からなることを特徴とする請求項１から請求項５のいずれか一項に記載の顕微鏡装置。
【請求項９】
前記集光位置変換手段中の前記偏光素子は１／２波長板からなり、前記１／２波長板を光軸を中心に回転させる回転手段を有することを特徴とする請求項１から請求項５のいずれか一項に記載の顕微鏡装置。
【請求項１０】
前記集光位置変換手段中の前記偏光素子は、１／４波長板からなることを特徴とする請求項１から請求項５のいずれか一項に記載の顕微鏡装置。
【請求項１１】
前記１／４波長板を光軸を中心に回転させる回転手段を有することを特徴とする請求項１０に記載の顕微鏡装置。
【請求項１２】
前記集光位置変換手段中の前記偏光素子は円偏光及びランダム偏光を直線偏光に変換する偏光子からなり、前記偏光子を光軸を中心に回転させる回転手段を有することを特徴とする請求項１から請求項５のいずれか一項に記載の顕微鏡装置。
【請求項１３】
前記集光位置変換手段中の前記偏光素子は、前記照明光をｓ偏光のみに変換する偏光子からなることを特徴とする請求項１から請求項５のいずれか一項に記載の顕微鏡装置。
【請求項１４】
前記集光位置変換手段中の前記偏光素子は、前記照明光をｐ偏光のみに変換する偏光子からなることを特徴とする請求項１から請求項５のいずれか一項に記載の顕微鏡装置。
【請求項１５】
蛍光顕微鏡の照明光学系の光路中に交換可能に配置される蛍光キューブであって、
すり鉢状の凹み部を有する板状光学部材と、照明光の偏光状態を変える偏光素子と、光軸を中心とした略同一円周上に隣接する複数の同形状のレンズ部を有してなる光学部材とを備え、当該蛍光顕微鏡の光路に配置されたときに、対物レンズを介して標本に照射する前記照明光束の主光線を前記照明光学系の光軸に対して略平行になるようにし、前記照明光の偏光状態を変えて、かつ前記照明光束を前記対物レンズの瞳位置の光軸から離れた所定の輪帯領域内の適宜の位置に集光するための集光位置変換手段を含むことを特徴とする蛍光キューブ。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、顕微鏡装置、蛍光キューブに関する。
【背景技術】
【０００２】
従来、共焦点顕微鏡や全反射蛍光顕微鏡は、生体細胞等の標本を観察するために広く使用されており、近年では共焦点観察と全反射蛍光観察を切り替えて行うことが可能な顕微鏡が提案されている（例えば、特許文献１を参照）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
【特許文献１】特開２００５−１２１７９６号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
しかしながら上述のような従来の顕微鏡において、共焦点観察と全反射蛍光観察との切り替えは、照明光を対物レンズの瞳面の全反射条件領域に集光させるための光学部材を照明光学系中に挿脱することによって行われる。したがって従来の顕微鏡は、これを実現するための大掛かりな切り替え機構が必要となり、大型化や高コスト化を招いてしまうという問題があった。
【０００５】
そこで本発明は上記問題点に鑑みてなされたものであり、共焦点観察及び全反射蛍光観察を行うことが可能で、大型化や高コスト化を抑えた顕微鏡装置、蛍光キューブを提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
上記課題を解決するために本発明は、
照明光束で標本面を走査する走査手段を含み、光源からの前記照明光束を標本へ導く照明光学系と、
前記標本からの蛍光を検出する蛍光検出光学系と、
前記照明光学系内に配設され、前記照明光束を前記標本へ導く複数の蛍光キューブと、を有しており、
前記蛍光キューブの少なくとも１つは、すり鉢状の凹み部を備えた板状光学部材と、照明光の偏光状態を変える偏光素子と、光軸を中心とした略同一円周上に隣接する複数の同形状のレンズ部を有してなる光学部材とを備え、前記照明光束の主光線を前記照明光学系の光軸に対して略平行になるようにし、前記照明光の偏光状態を変えて、かつ前記照明光束を前記対物レンズの瞳位置の光軸から離れた所定の輪帯領域内の適宜の位置に集光するための集光位置変換手段を有することを特徴とする顕微鏡装置を提供する。
また本発明は、
蛍光顕微鏡の照明光学系の光路中に交換可能に配置される蛍光キューブであって、
すり鉢状の凹み部を有する板状光学部材と、照明光の偏光状態を変える偏光素子と、光軸を中心とした略同一円周上に隣接する複数の同形状のレンズ部を有してなる光学部材とを備え、当該蛍光顕微鏡の光路に配置されたときに、対物レンズを介して標本に照射する前記照明光束の主光線を前記照明光学系の光軸に対して略平行になるようにし、前記照明光の偏光状態を変えて、かつ前記照明光束を前記対物レンズの瞳位置の光軸から離れた所定の輪帯領域内の適宜の位置に集光するための集光位置変換手段を含むことを特徴とする蛍光キューブを提供する。
【発明の効果】
【０００７】
本発明によれば、共焦点観察及び全反射蛍光観察を行うことが可能で、大型化や高コスト化を抑えた顕微鏡装置、蛍光キューブを提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【０００８】
【図１】本発明の第１実施形態に係る顕微鏡装置１００の概略を示す図である。
【図２】本発明の第１実施形態に係る顕微鏡装置１００の光学系を示す図である。
【図３】本発明の第１実施形態において標本５の全反射蛍光観察を行う際の顕微鏡装置１００の光学系を示す図である。
【図４】（ａ）は本発明の第１実施形態における全反射蛍光キューブ７０の構成を示す図であり、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）はそれぞれ全周レンズ５２、全周楔５１、全周楔５１の変形例を照明光の入射側から見た図である。
【図５】（ａ）は本発明の第１実施形態における全反射蛍光キューブ７０の全周偏光素子７１の構成を示す図であり、（ｂ）は標本５に照射される照明光の偏光方向を示す図である。
【図６】本発明の第１実施形態に係る顕微鏡装置１００において、結像レンズ２９と対物レンズ８の瞳面Ｐとの間の照明光の振る舞いを示す図であり、（ａ）は走査型蛍光観察時及び共焦点観察時、（ｂ）は全反射蛍光観察時を示し、（ｃ）は（ｂ）の部分拡大図を示している。
【図７】本発明の第２実施形態に係る顕微鏡装置２００の光学系を示す図である。
【図８】（ａ）は本発明の第２実施形態における全反射蛍光キューブ８０の構成を示す図であり、（ｂ）はその変形例を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【０００９】
以下、本発明の各実施形態に係る顕微鏡装置を添付図面に基づいて詳細に説明する。
（第１実施形態）
図１は本発明の第１実施形態に係る顕微鏡装置の概略を示す図であり、図２は本発明の第１実施形態に係る顕微鏡装置の光学系を示す図である。
図１に示すように本実施形態に係る顕微鏡装置１００は、倒立型の顕微鏡本体２と、制御装置３とから構成されている。
【００１０】
顕微鏡本体２は、上方から光軸に沿って順に、後述する透過照明光源４からの光を標本５へ導く透過照明光学系６、標本５を載置するステージ７、倍率の異なる複数の対物レンズ８を回転切り替え可能に備えたレボルバ９、蛍光キューブホルダ１０、結像光学系１１、及び接眼鏡筒１２を備えている。
蛍光キューブホルダ１０は、公知の回転手段によって蛍光キューブ１６と全反射蛍光キューブ７０を選択的に回転切り替え可能に備えた保持部材である。蛍光キューブ１６は、ダイクロイックミラー１６ａと、その透過光路上に配置されたエミッションフィルタ１６ｂと、入射光路上に配置された波長選択フィルタ１６ｃとからなる。なお、全反射蛍光キューブ７０については後述する。
結像光学系１１は、図２に示すように蛍光キューブホルダ１０側から順に、結像レンズ１７、公知のスライド機構によって光路内へ挿脱可能なプリズム１８、ミラー１９ａ、リレーレンズ２０ａ、ミラー１９ｂ、及びリレーレンズ２０ｂからなる。
接眼鏡筒１２は、レンズ２１、ミラー２２、及び不図示の接眼レンズからなる。
【００１１】
顕微鏡本体２の外部には、図１に示すように標本５を透過照明するための透過照明光源４が上方に備えられており、側方には標本５を共焦点観察するための共焦点観察装置２５、標本５を落射照明するための落射照明装置２６、及び撮像素子２７が備えられている。なお、図２において透過照明光源４、透過照明光学系６、及び制御装置３は図示を省略している。
共焦点観察装置２５は、図２に示すように蛍光キューブホルダ１０側から順に、結像レンズ２９、公知のスライド機構によって光路内へ挿脱可能なダイクロイックミラー５５、瞳リレーレンズ３１、光を二次元的に走査する二次元スキャナ（ガルバノミラー）３２、ビームスプリッタ３３、コレクタレンズ３４、光ファイバ３５、及び不図示のレーザ光源、そしてビームスプリッタ３３の反射光路上に配置された結像レンズ３６、ピンホール３７、及び受光素子（ＰＭＴ）３８からなる。なお、本実施形態において前記不図示のレーザ光源には、直線偏光のレーザ光を出力する光源が用いられている。
【００１２】
落射照明装置２６は、図２に示すようにダイクロイックミラー５５側から順に、視野絞り４２、コレクタレンズ４３、光ファイバ４４、及び不図示の落射照明光源からなり、結像レンズ２９は共焦点観察装置２５と共用している。なお、本実施形態において落射照明光源にはレーザ光源が用いられているが、これに限られず高圧水銀ランプやキセノンランプ等を使用することもできる。
制御装置３は、顕微鏡本体２に搭載された各種装置を制御するパーソナルコンピュータ（ＰＣ）４５、及びモニタ４６等からなる。
【００１３】
斯かる構成の本実施形態に係る顕微鏡装置１００では、図２及び図３を参照して以下に述べるように、標本５を透過照明して透過光を観察する透過照明観察、標本５を落射照明して蛍光を観察する落射蛍光観察、照明光を二次元的に走査して標本５に照射し蛍光を観察する走査型蛍光観察、照明光を二次元的に走査して標本５に照射し反射光を観察する共焦点観察、及び標本５を全反射照明して蛍光を観察する全反射蛍光観察を適宜切り替えて実施することができる。なお、図３は本発明の第１実施形態において標本５の全反射蛍光観察を行う際の顕微鏡装置１００の光学系を示す図である。
【００１４】
本実施形態に係る顕微鏡装置１００によって標本５の透過照明観察を行う際には、予め、蛍光キューブホルダ１０の蛍光キューブ１６と全反射蛍光キューブ７０、及びプリズム１８を光路外へ退避させる。
この前提の下、透過照明光源４からの照明光は透過照明光学系６を介してステージ７上の標本５に照射され、標本５を透過した透過光（観察光）はレボルバ９に搭載されている対物レンズ８によって集光される。この観察光は、結像光学系１１の結像レンズ１７とミラー１９ａを介して一次像面Ｑに結像された後、リレーレンズ２０ａ、ミラー１９ｂ、リレーレンズ２０ｂを順に経て接眼鏡筒１２へ入射する。接眼鏡筒１２へ入射した観察光は、レンズ２１、ミラー２２を介して不図示の接眼レンズへ導かれる。これにより観察者は、不図示の接眼レンズを覗いて標本５の透過像を観察することが可能となり、即ち標本５の透過照明観察を行うことが可能となる。
【００１５】
本実施形態に係る顕微鏡装置１００によって標本５の落射蛍光観察を行う際には、予め、蛍光キューブホルダ１０の蛍光キューブ１６、プリズム１８、及びダイクロイックミラー５５を光路内へ配置する。
この前提の下、不図示の落射照明光源からのレーザ光は、光ファイバ４４で導かれその端面より射出された後、コレクタレンズ４３を介して略平行光束となり、視野絞り４２を経てダイクロイックミラー５５で反射される。そしてこの略平行光束は、結像レンズ２９で集光され、蛍光キューブ１６の波長選択フィルタ１６ｃを透過しダイクロイックミラー１６ａで反射されることで所定の励起波長の光が選択された後、対物レンズ８を介してステージ７上の標本５に照射される。
【００１６】
これによって標本５で発現した蛍光は、対物レンズ８で集光され、蛍光キューブ１６のダイクロイックミラー１６ａとエミッションフィルタ１６ｂを透過することで不要波長の光がカットされる。そしてこの蛍光は、結像光学系１１の結像レンズ１７を経てプリズム１８で反射され、撮像素子２７の撮像面上に結像される。これにより撮像素子２７では標本５の蛍光像が撮像され、これをＰＣ４５が画像処理してモニタ４６に表示させる。このようにして観察者は、本顕微鏡装置１００によって標本５の落射蛍光観察を行うことが可能となる。
【００１７】
本実施形態に係る顕微鏡装置１００によって標本５の走査型蛍光観察及び共焦点観察を行う際には、予め、蛍光キューブホルダ１０の蛍光キューブ１６、及びプリズム１８を光路内へ配置し、ダイクロイックミラー５５を光路外へ退避させる。
この前提の下、不図示のレーザ光源からのレーザ光は、光ファイバ３５で導かれその端面より射出された後、コレクタレンズ３４を介して略平行光束となってビームスプリッタ３３を透過する。そしてこの略平行光束は、二次元スキャナ３２で反射され、瞳リレーレンズ３１によって像面Ｒに結像された後、結像レンズ２９を介して再び略平行光束となる。このようにして略平行光束となったレーザ光は、蛍光キューブ１６の波長選択フィルタ１６ｃを透過しダイクロイックミラー１６ａで反射されることで所定の波長の光が選択された後、対物レンズ８で集光されてステージ７上の標本５に照射される。なおこのレーザ光は、二次元スキャナ３２で二次元的に走査されるため、標本５の観察領域全体にわたって照射されることとなる。これにより標本５は、レーザ光によって照明されて蛍光を発現するとともに、レーザ光を反射することとなる。
【００１８】
標本５で発現された蛍光は、対物レンズ８で集光され、蛍光キューブ１６のダイクロイックミラー１６ａとエミッションフィルタ１６ｂを透過することで不要波長の光がカットされる。そしてこの蛍光は、結像光学系１１の結像レンズ１７を経てプリズム１８で反射され、撮像素子２７の撮像面上に結像される。これにより撮像素子２７では標本５の蛍光像が撮像され、これをＰＣ４５が画像処理してモニタ４６に表示させる。このようにして観察者は、本顕微鏡装置１００によって標本５の走査型蛍光観察を行うことが可能となる。
【００１９】
一方、標本５で反射されたレーザ光は、対物レンズ８で集光され、蛍光キューブ１６のダイクロイックミラー１６ａで反射された後、波長選択フィルタ１６ｃを透過する。そしてこのレーザ光は、結像レンズ２９と瞳リレーレンズ３１を経て、二次元スキャナ３２とビームスプリッタ３３で順に反射された後、ピンホール３７を通過して受光素子３８へ達する。なお、この受光素子３８へ達する光は二次元スキャナ３２によってデスキャンされるため、受光素子３８では標本５の観察領域全体にわたる観察光が検出されることとなる。これによりＰＣ４５は、受光素子３８で得られたレーザ光の強度信号に基づいて標本５の二次元画像を生成しモニタ４６に表示させる。このようにして観察者は、本顕微鏡装置１００によって標本５の共焦点観察を行うことが可能となる。
なお、本実施形態に係る顕微鏡装置１００では、撮像素子２７から得られた蛍光画像と、受光素子３８から得られた共焦点画像とをモニタ４６に重ねて表示して観察することもできる。
【００２０】
本実施形態に係る顕微鏡装置１００によって標本５の全反射蛍光観察を行う際には、予め図３に示すように、蛍光キューブホルダ１０の全反射蛍光キューブ７０、及びプリズム１８を光路内へ配置し、ダイクロイックミラー５５を光路外へ退避させる。
ここで、本実施形態における蛍光キューブホルダ１０の全反射蛍光キューブ７０は、図４（ａ）に示すように照明光の入射側から順に、光軸に対して所定の角度だけ傾斜した照明光を光軸に対して略平行にする全周楔５１、全周楔５１からの照明光の偏光状態を変える全周偏光素子７１、全周偏光素子７１を経た照明光を対物レンズ８の瞳面Ｐ上に集光させる複数のレンズ部５２ａを備えた全周レンズ５２、及びダイクロイックミラー５０ａを有し、さらに観察光の透過光路上に配置されたエミッションフィルタ５０ｂを有してなる。なお、全周楔５１、全周偏光素子７１、及び全周レンズ５２の詳細な構成については後述する。
【００２１】
上記前提の下、図３において不図示のレーザ光源からのレーザ光は、光ファイバ３５で導かれその端面より射出され、コレクタレンズ３４によって略平行光束に変換された後、ビームスプリッタ３３を透過し二次元スキャナ３２で反射される。なお、このとき二次元スキャナ３２の反射角度は、該二次元スキャナ３２で反射された略平行光束が図６（ｂ）に示すように対物レンズ８の瞳面Ｐ上の全反射条件領域内に位置する光軸から距離ｄだけ偏心した位置（位置Ｄ）へ入射するように、ＰＣ４５によって制御されている。
ここで、全反射条件領域とは、対物レンズ８の瞳面Ｐに光を入射させた際に、この光を標本５に対して全反射角で入射させることが可能な瞳面Ｐ上の輪帯形の範囲をいう。また、上記距離ｄは、対物レンズの種類によって異なる全反射条件領域に応じて設定されるものである。
【００２２】
二次元スキャナ３２で反射された略平行光束は、瞳リレーレンズ３１によって像面Ｒに結像された後、結像レンズ２９を介して再び略平行光束となり、光軸に対して傾斜角度αだけ傾斜して全反射蛍光キューブ７０内の全周楔５１に入射する。全周楔５１に入射した略平行光束は、該全周楔５１によって屈折されることで、その光軸Ｉ１が結像レンズ２９の光軸に対して略平行で距離ｄだけ偏心した略平行光束となる（図６（ｂ）も参照。）。この略平行光束は、全周偏光素子７１を経ることで所定の偏光方向の光となり、全周レンズ５２のレンズ部５２ａへ入射する。そしてこの光は、当該レンズ部５２ａを介し、ダイクロイックミラー５０ａで反射されることで所定の波長の光が選択された後、対物レンズ８の瞳面Ｐ上における全反射条件領域内の位置Ｄに集光される。なお、本顕微鏡装置１００によって走査型蛍光観察及び共焦点観察を行う場合には、図６（ａ）に示すように結像レンズ２９からの点線で示す（＋）最大画角光束、実線で示す像中心光束、及び破線で示す（−）最大画角光束は、いずれも対物レンズ８の瞳位置Ｐに集光されることがない。
【００２３】
このようにして対物レンズ８の瞳面Ｐ上の全反射条件領域に集光された所定の偏光方向のレーザ光は、対物レンズ８を介して標本５へ全反射角で入射する、詳しくは標本５の媒質と標本５を保持する不図示のガラス基板との境界面において全反射される入射角度でもって標本５へ入射し、これによって標本５の全反射照明を実現することができる。
【００２４】
標本５が全反射照明されると、前記境界面においてエバネッセント光が発生し、このエバネッセント光によって標本５の境界面近傍部分が照明されて蛍光が発現する。この蛍光は、対物レンズ８で集光され、全反射蛍光キューブ７０のダイクロイックミラー５０ａとエミッションフィルタ５０ｂを透過することで不要波長の光がカットされる。そしてこの蛍光は、結像光学系１１の結像レンズ１７を経てプリズム１８で反射され、撮像素子２７の撮像面上に結像される。これにより撮像素子２７では標本５の蛍光像が撮像され、これをＰＣ４５が画像処理してモニタ４６に表示させる。このようにして観察者は、本顕微鏡装置１００によって標本５の全反射蛍光観察を行うことが可能となる。
【００２５】
ここで、上述の全反射蛍光キューブ７０における全周楔５１、全周偏光素子７１、及び全周レンズ５２の構成について詳細に説明する。図４（ｂ）、（ｃ）はそれぞれ本発明の第１実施形態における全反射蛍光キューブ７０の全周レンズ５２、全周楔５１を照明光の入射側から見た図である。図５は、本発明の第１実施形態における全反射蛍光キューブ７０の全周偏光素子７１の構成を示す図である。
【００２６】
全周楔５１は、図４（ａ），（ｃ）に示すように平行平面板形状のプリズム部材にすり鉢状の凹み部を形成してなり、前記凹み部を照明光の入射側へ向けている。そして全周楔５１は、図６（ｂ）,（ｃ）に示すように結像レンズ２９の光軸に対して傾斜角度αで当該全周楔５１に入射する照明光（略平行光束）を、その光軸Ｉ１が結像レンズ２９の光軸に対して略平行となるように屈折するために、次の関係式（１）を満足するように構成されている。
（１）    α＝（ｎ−１）×δ
ただし、
α：全周楔５１に入射する照明光の結像レンズ２９の光軸に対する傾斜角度
δ：全周楔５１の頂角（全周楔５１における照明光の入射面と射出面とのなす角度）
ｎ：全周楔５１を構成する媒質のｄ線（波長５８７．６ｎｍ）に対する屈折率
【００２７】
全周レンズ５２は、図４（ａ）,（ｂ）に示すように複数の同形状のレンズ部５２ａを光軸を中心とする略同一円周上に隣接して備える、即ち各レンズ部５２ａが光軸から距離ｄだけ偏心して隣接配置されたガラス部材からなる。なお、本実施形態においてレンズ部５２ａは１２個の平凸レンズ部からなり、凸面を照明光の入射側へ向けて配置されている。
なお、上記構成の全周楔５１及び全周レンズ５２は、それぞれの中心部分に照明光を入射させる必要がないため、中心部分をくり貫いた形状としてもよい。全周楔５１及び全周レンズ５２の材料は、ガラスやプラスチックに限られるものではない。全周レンズ５２はフレネルレンズによって構成することも可能であり、全周楔５１は図４（ｄ）に示すように同じ形状の複数の楔プリズムを貼り合わせて構成することも可能である。
【００２８】
全周偏光素子７１は、図５（ａ）に示すように、前述した全周レンズ５２の複数のレンズ部５２ａに対応して設けられた複数の同じ扇形に加工された波長板７１ａを、光軸を中心に隣接配置して円形の外観をなすものである。本実施形態において複数の波長板７１ａは１２枚の１／２波長板からなり、これらは隣り合う１／２波長板どうしの光学軸の方向が異なるように、詳細には図５（ａ）中に太い矢印で示すように扇形の中心角の二等分線に垂直な光学軸をそれぞれ備えるように構成されている。
なお、斯かる全周偏光素子７１の全反射蛍光キューブ７０内の配置場所は、全周楔５１と全周レンズ５２の間に限られず、全周楔５１の入射側や全周レンズ５２の射出側でもよい。特に、本実施形態のように全周楔５１と全周レンズ５２の間に全周偏光素子７１を配置することで、全周楔５１からの照明光（略平行光束）を全周偏光素子７１の波長板７１ａに対して垂直に入射させることが可能となり、波長板７１ａの特性を最大限に発揮させることができる。
また、本実施形態において標本５の全反射蛍光観察に用いられる上記不図示のレーザ光源は、上述のように直線偏光のレーザ光を出力するものであり、斯かるレーザ光が照明光として全周偏光素子７１に入射する際の偏光方向を図５（ａ）中に細い矢印で示す。
【００２９】
斯かる構成の下、直線偏光の照明光が１／２波長板である波長板７１ａに入射した際には、偏光方向が２θだけ回転されて波長板７１ａより射出されることとなる（波長板７１ａの光学軸と照明光の偏光方向とのなす角をθとする。）。具体的には例えば、図５（ａ）中に偏光方向を示す照明光が波長板７１ａのうちのＡに入射した際には、図５（ｂ）中のＡに示すように偏光方向が２θだけ回転されて射出され、この偏光方向を維持して標本５に照射されることとなる。これは図５中のＢ，Ｃについても同様であり、図５（ｂ）に示すように標本５に照射される照明光の偏光方向はいずれも異なっている。したがって、照明光をいずれの波長板７１ａに入射させるかによって標本５に照射される照明光の偏光方向を変更することが可能であり、即ち、照明光を任意の波長板７１ａに入射させることによって標本５に照射する照明光の偏光方向を指定することが可能となる。
なお、上記構成の全周偏光素子７１は、上述の全周楔５１及び全周レンズ５２と同様に、中心部分に照明光を入射させる必要がないため、中心部分をくり貫いた形状としてもよい。
【００３０】
以上は、全反射蛍光キューブ７０における全周レンズ５２中の１つのレンズ部５２ａに照明光を入射させ、対物レンズ８の瞳面Ｐにおける全反射条件領域内の１点（位置Ｄ）に照明光を集光させることにより、標本５を一方向側からのみ全反射照明する場合について説明している。本実施形態に係る顕微鏡装置１００はこれに限られず、ＰＣ４５によって二次元スキャナ３２による照明光の反射角度を制御することで、全周偏光素子７１中の任意の波長板７１ａ及び全周レンズ５２中の任意のレンズ部５２ａに照明光を入射させ、全反射条件領域内の任意の１点に照明光を集光させることも可能である。これにより、標本５を任意の偏光方向の直線偏光によって任意の方向から全反射照明することができる。言い換えれば、照明光を標本５に照射する方向と照明光の偏光方向との組み合わせを選択的に切り換えて標本５の全反射照明を行うことが可能となる。
【００３１】
ここで、一般に全反射蛍光観察を行う際に、所定の偏光方向の直線偏光を照明光として標本に照射し標本から発現した蛍光を観察する場合、標本の蛍光分子の向きによって蛍光の発現具合が異なる。このため、ある偏光方向の照明光を用いた際には蛍光を観察できるが、これと異なる偏光方向の照明光を用いた際には蛍光を観察できないといった現象が生じる場合がある。このように全反射蛍光観察においては、照明光の偏光方向によって得られる標本の情報や特徴が異なるため、必要としている情報や特徴に応じて照明光の偏光方向を変更できることが望ましい。これに対して本実施形態に係る顕微鏡装置１００は、前述のように標本５を任意の偏光方向の直線偏光によって全反射照明することができるため、照明光の偏光方向を考慮し標本５の蛍光分子の向きに最適な偏光方向の照明光によって標本５の全反射照明を行うことが可能となる。
【００３２】
また、本実施形態に係る顕微鏡装置１００では、ＰＣ４５によって二次元スキャナ３２を制御して照明光を走査することで、全周レンズ５２中の複数のレンズ部５２ａ（より好ましくは全てのレンズ部５２ａ）に照明光を順次入射させ、全反射条件領域内の複数点に照明光を集光させることも可能である。これにより、標本５を複数の方向から順次全反射照明することが可能となり、光ファイバ３５から対物レンズ８までの光路中に配置されている各光学素子の表面反射等に起因して生じるスペックルパターン、即ち照明光の強度ムラを解消してより均一な全反射照明を実現することができる。また、照明光を走査して全周レンズ５２中の複数のレンズ部５２ａに順次入射させることで、全周偏光素子７１中の複数の波長板７１ａにも照明光が順次入射することとなる。したがって、照明光の偏光方向を順次変化させながら全反射照明が行われることとなり、これによって標本５中の向きの異なる蛍光分子を適切に発現させて観察することができる。なお、以上のような場合には照明光を走査する度に標本５の画像を取得し、取得した複数の画像をＰＣ４５で積算して平均化することで、良好な標本５の画像を取得することが可能となる。
【００３３】
なお、本実施形態に係る顕微鏡装置１００において、レボルバ９に備えられた複数の対物レンズを切り替えて全反射蛍光観察を行う場合には、上記構成の全反射蛍光キューブを対物レンズ毎に予め用意して蛍光キューブホルダ１０に搭載し、対物レンズとともに全反射蛍光キューブを切り替えることで容易に全反射蛍光観察を実現することができる。なお、斯かる場合においても、対物レンズと全反射蛍光キューブの切り替えに伴い、ＰＣ４５が二次元スキャナ３２による照明光の反射角度を制御することで、対物レンズ毎に異なる全反射条件領域内の位置Ｄへ照明光を適切に入射させることが可能である。
【００３４】
以上のように本実施形態に係る顕微鏡装置１００では、標本５の透過照明観察、落射蛍光観察、走査型蛍光観察、共焦点観察、及び全反射蛍光観察を適宜切り替えて実施することができる。
そして本実施形態に係る顕微鏡装置１００では、一般的な蛍光顕微鏡に通常備えられている蛍光キューブホルダ１０に上記構成の全反射蛍光キューブ７０を搭載し、これを用いて共焦点観察と全反射蛍光観察との切り替えを実現しているため、従来技術の顕微鏡のような大掛かりな切り替え機構が不要となり、顕微鏡本体２の大型化や高コスト化を効果的に抑えることができるとともに、共焦点観察と全反射蛍光観察との切り替えを簡便で迅速に行うことができる。
【００３５】
また、本実施形態に係る顕微鏡装置１００によって全反射蛍光観察を行う際には、上述のように標本５を一方向側からのみ全反射照明するだけでなく、任意の方向や複数の異なる方向から全反射照明することが可能であるため、スペックルパターンを解消したより良好な標本５の画像を取得することができる。また上述のように、照明光の偏光方向を変更して全反射照明することが可能であるため、標本５中の蛍光分子の向きにかかわらず、蛍光分子を適切に発現させた標本５の画像を取得することができる。
【００３６】
なお、本実施形態に係る顕微鏡装置１００における全反射蛍光キューブ７０内の全周偏光素子７１は上記構成に限られず、以下のように構成することも可能である（このことは、後記第２実施形態においても同様である。）。
例えば、全反射蛍光観察に用いる光源から出力された直線偏光のレーザ光を光路中において円偏光に変換して全反射蛍光キューブ７０へ導く場合、或いは当該光源として円偏光のレーザ光を出力する光源を用いる場合には、全周偏光素子７１の扇形の各波長板７１ａを、扇形の中心角の二等分線に垂直な光学軸をそれぞれ備えた１２枚の１／４波長板で構成してもよい。この構成により、本実施形態のように各波長板７１ａを１／２波長板で構成した場合と同様の効果を奏することができる。
【００３７】
また例えば、全反射蛍光観察に用いる光源から出力された直線偏光のレーザ光を光路中において円偏光又はランダム偏光に変換して全反射蛍光キューブ７０へ導く場合、或いは当該光源として円偏光又はランダム偏光のレーザ光を出力する光源を用いる場合には、全周偏光素子７１の扇形の各波長板７１ａを、扇形の中心角の二等分線に垂直な光学軸をそれぞれ備えており円偏光及びランダム偏光を直線偏光に変換する偏光子で構成してもよい。この構成により、本実施形態のように各波長板７１ａを１／２波長板で構成した場合と同様の効果を奏することができる。
【００３８】
また例えば、全周偏光素子７１の扇形の各波長板７１ａをそれぞれの光学軸の方向が一致するように構成された１２枚の１／２波長板で構成し、或いは全周偏光素子７１を１枚の円形の１／２波長板で構成し、さらに斯かる全周偏光素子７１を光軸を中心に回転させるための公知の回転手段をさらに備えた構成としてもよい。この構成により、二次元スキャナ３２の反射角度を制御して照明光を全周レンズ５２中のいずれのレンズ部５２ａに入射させる場合でも、全周偏光素子７１を回転させることで標本５に照射される照明光の偏光方向を任意に変更することが可能となる。即ち、任意の偏光方向の直線偏光によって任意の方向から標本５を全反射照明することができる。なお、このことは、前述のように全周偏光素子７１を１／４波長板又は偏光子で構成する場合についても同様である。
【００３９】
例えば、全周偏光素子７１を、照明光をｓ偏光のみに変換する偏光子、或いは照明光をｐ偏光のみに変換する偏光子で構成してもよい。これにより、ｓ偏光のみ、或いはｐ偏光のみの照明光で標本５の全反射照明を実現することができる。
ここで、蛍光分子が蛍光を発現するための該蛍光分子の向きは双極子の向きによって決まり、蛍光分子は双極子の極軸と垂直な方向に偏って蛍光を発現する（「第７・光の鉛筆」２１ 暗視野観察法４ ４２４頁）。
したがって、標本をｓ偏光の照明光で照明すれば、標本境界面と平行な向きの蛍光分子が主に励起され、その蛍光強度分布は光軸方向（ｚ方向）で最大となる。このため、前述のようにｓ偏光のみの照明光による標本５の全反射照明を実現することで、対物レンズ８による蛍光の集光効率が高くなり、明るい蛍光像を得ることが可能となる。
一方、標本をｐ偏光の照明光で照明すれば、標本境界面と平行な向きの蛍光分子だけでなく垂直な向きの蛍光分子も励起され、後者の蛍光強度分布は光軸と垂直な方向で最大となる。このため、前述のようにｐ偏光のみの照明光による標本５の全反射照明を実現した場合には、標本境界面に垂直な向きの蛍光分子が発現する蛍光を対物レンズで集光しようとすると、蛍光強度分布が高ＮＡ側に極端に偏っているため明るい蛍光像が得られにくく、特に高ＮＡの対物レンズを使用する必要が生じるものの、ｓ偏光による全反射照明では得られない光軸方向における蛍光分子の情報を得ることが可能となる。
【００４０】
また例えば、全周偏光素子７１を、直線偏光を円偏光に変換する１／４波長板で構成してもよい。これにより、ｓ偏光とｐ偏光を混合した照明光で標本５の全反射照明を実現することができ、前述したｓ偏光による全反射照明とｐ偏光による全反射照明の両方の効果を奏することが可能となる。
【００４１】
（第２実施形態）
本実施形態において、上記第１実施形態と同様の構成である部分には同じ符号を付して説明を省略し、異なる部分について詳細に説明する。図７は本発明の第２実施形態に係る顕微鏡装置の光学系を示す図である。なお、図７において透過照明光源４、透過照明光学系６、及び制御装置３は図示を省略している。
【００４２】
図７に示すように本実施形態に係る顕微鏡装置２００は、顕微鏡本体２における蛍光キューブホルダ１０と対物レンズ８との間に、公知のスライド機構によって光路内へ挿脱可能な第１ダイクロイックミラー６１を備えている。そして第１ダイクロイックミラー６１の反射光路上には、エミッションフィルタ６２、結像レンズ６３、及び撮像素子２７からなる撮像部６４を備えている。
また、顕微鏡本体２における結像光学系１１の結像レンズ１７とミラー１９ａとの間に、上記第１実施形態のプリズム１８に代えて、公知のスライド機構によって光路内へ挿脱可能な第２ダイクロイックミラー６５を備えている。そして第２ダイクロイックミラー６５の反射光路上には、上記第１実施形態と同様の共焦点観察装置２５が配置されている。
なお、顕微鏡本体２において蛍光キューブホルダ１０の照明光の入射光路上には、上記第１実施形態と同様の落射照明装置２６のみが配置されている。
【００４３】
蛍光キューブホルダ１０には、上記第１実施形態の全反射蛍光キューブ７０に代えて、図８（ａ）に拡大図を示す全反射蛍光キューブ８０が備えられている。本実施形態における全反射蛍光キューブ８０は、照明光の入射側（結像レンズ１７側）から順に、上記第１実施形態と同様の構成の全周楔５１と全周偏光素子７１と全周レンズ５２とを有してなる。
【００４４】
斯かる構成の本実施形態に係る顕微鏡装置２００では、以下に述べるように標本５の透過照明観察、落射蛍光観察、走査型蛍光観察、共焦点観察、及び全反射蛍光観察を適宜切り替えて実施することができる。
本実施形態に係る顕微鏡装置２００によって標本５の透過照明観察を行う際には、予め、蛍光キューブホルダ１０の蛍光キューブ１６及び全反射蛍光キューブ８０、第１ダイクロイックミラー６１、及び第２ダイクロイックミラー６５を光路外へ退避させる。この前提の下、観察者は上記第１実施形態と同様に標本５の透過照明観察を行うことが可能となる。
【００４５】
本実施形態に係る顕微鏡装置２００によって標本５の落射蛍光観察を行う際には、予め蛍光キューブホルダ１０の蛍光キューブ１６、及び第１ダイクロイックミラー６１を光路内へ配置する。
この前提の下、光ファイバ４４より射出されたレーザ光は、コレクタレンズ４３を介して略平行光束となって視野絞り４２を通過する。この略平行光束は、結像レンズ２９で集光され、蛍光キューブ１６の波長選択フィルタ１６ｃを透過しダイクロイックミラー１６ａで反射されることで所定の励起波長の光が選択された後、第１ダイクロイックミラー６１を透過し、さらに対物レンズ８を介して標本５に照射される。
【００４６】
これによって標本５で発現した蛍光は、対物レンズ８で集光され、第１ダイクロイックミラー６１で反射されエミッションフィルタ６２を透過することで不要波長の光がカットされる。そしてこの蛍光は、結像レンズ６３によって撮像素子２７の撮像面上に結像される。これにより撮像素子２７では標本５の蛍光像が撮像され、これがモニタ４６に表示されることで観察者は標本５の落射蛍光観察を行うことが可能となる。
【００４７】
本実施形態に係る顕微鏡装置２００によって標本５の走査型蛍光観察及び共焦点観察を行う際には、予め、第１ダイクロイックミラー６１及び第２ダイクロイックミラー６５を光路内へ配置し、蛍光キューブホルダ１０の蛍光キューブ１６と全反射蛍光キューブ８０を光路外へ退避させる。
この前提の下、光ファイバ３５より射出されたレーザ光は、上記第１実施形態と同様に像面Ｒに結像された後、第２ダイクロイックミラー６５で反射されることで所定の波長の光が選択される。このレーザ光は、結像レンズ１７を介して再び略平行光束となり、対物レンズ８で集光されて標本５に照射される。なおこのレーザ光は、上記第１実施形態と同様に二次元スキャナ３２で二次元的に走査される。したがって標本５は、レーザ光によって励起されて蛍光を発現するとともに、当該レーザ光を反射することとなる。
【００４８】
標本５で発現された蛍光は、対物レンズ８で集光され、第１ダイクロイックミラー６１で反射されエミッションフィルタ６２を透過することで不要波長の光がカットされる。そしてこの蛍光は、結像レンズ６３を介して撮像素子２７の撮像面上に結像される。これにより撮像素子２７では標本５の蛍光像が撮像され、これがモニタ４６に表示されることで観察者は標本５の走査型蛍光観察を行うことが可能となる。
一方、標本５で反射されたレーザ光は、対物レンズ８で集光されて、第１ダイクロイックミラー６１と結像レンズ１７を経た後、第２ダイクロイックミラー６５で反射され、上記第１実施形態と同様に受光素子３８へ達する。なお、受光素子３８へ達する光は二次元スキャナ３２によってデスキャンされる。そして、受光素子３８で得られた光の強度信号に基づく標本５の二次元画像がモニタ４６に表示されることで、観察者は標本５の共焦点観察を行うことが可能となる。
【００４９】
本実施形態に係る顕微鏡装置２００によって標本５の全反射蛍光観察を行う際には、予め、図７に示すように蛍光キューブホルダ１０の全反射蛍光キューブ８０、第１ダイクロイックミラー６１、及び第２ダイクロイックミラー６５を光路内へ配置する。
この前提の下、光ファイバ３５より射出されたレーザ光は、上記第１実施形態と同様に像面Ｒに結像された後、第２ダイクロイックミラー６５で反射されることで所定の波長の光が選択される。なお、このとき二次元スキャナ３２の反射角度は、上記第１実施形態と同様、反射光が対物レンズ８の瞳面Ｐにおける全反射条件領域内の位置Ｄへ入射するようにＰＣ４５で制御されている。斯かるレーザ光は、結像レンズ１７を介して再び略平行光束となり、光軸に対して傾斜角度αだけ傾斜して全反射蛍光キューブ８０へ入射する。
【００５０】
全反射蛍光キューブ８０へ入射した略平行光束は、上記第１実施形態と同様、全周楔５１で屈折されることで光軸に対して略平行で距離ｄだけ偏心した略平行光束となり、全周偏光素子７１を経ることで所定の偏光方向の光となる。そしてこの略平行光束は、全周レンズ５２を介することで、第１ダイクロイックミラー６１を透過した後、対物レンズ８の瞳面Ｐにおける全反射条件領域内の位置Ｄに集光される。このレーザ光は、対物レンズ８を介して標本５へ全反射角で入射し、これによって所定の偏光方向のレーザ光による標本５の全反射照明を実現することができる。
【００５１】
標本５が全反射照明されると、上記第１実施形態と同様に標本５から蛍光が発現する。この蛍光は、対物レンズ８によって集光された後、第１ダイクロイックミラー６１で反射されエミッションフィルタ６２を透過することで不要波長の光がカットされ、さらに結像レンズ６３を経て撮像素子２７の撮像面上に結像される。これにより撮像素子２７では標本５の蛍光像が撮像され、これがモニタ４６に表示されることで観察者は標本５の全反射蛍光観察を行うことが可能となる。
【００５２】
なお、上記第１実施形態と同様に本顕微鏡装置２００においても、標本５を一方向側からのみ全反射照明することに限られず、ＰＣ４５によって二次元スキャナ３２の照明光の反射角度を制御することで、任意の方向や複数の異なる方向から標本５を全反射照明することが可能であるため、スペックルパターンを解消したより良好な標本５の画像を取得することができる。また上記第１実施形態と同様に、照明光の偏光方向を変更して全反射照明することが可能であるため、標本５中の蛍光分子の向きにかかわらず、蛍光分子を適切に発現させた標本５の画像を取得することができる。
【００５３】
以上のように本実施形態に係る顕微鏡装置２００では、標本５の透過照明観察、落射蛍光観察、走査型蛍光観察、共焦点観察、及び全反射蛍光観察を適宜切り替えて実施することが可能であり、上記第１実施形態と同様の効果を奏することができる。また、上記構成の全反射蛍光キューブ８０は、上記第１実施形態の全反射蛍光キューブ７０におけるダイクロイックミラー５０ａを備える必要がないため、全周楔５１と全周レンズ５２とをより容易に収納及び配置することが可能である。
【００５４】
本実施形態に係る顕微鏡装置２００において、標本５の全反射蛍光観察時に用いられる全反射蛍光キューブ８０の構成は上述のものに限られず、例えば図８（ｂ）を参照して以下に述べる全反射蛍光キューブ８１を用いることもできる。
図８（ｂ）に示すように全反射蛍光キューブ８１は、結像レンズ１７側から順に、コーン型ミラー６８、すり鉢状ミラー６９、上記第１実施形態と同様の構成の全周偏光素子７１、及び全周レンズ５２を有している。
【００５５】
コーン型ミラー６８は、円錐部材の側面にミラー面を形成してなる反射部材であって、当該ミラー面を結像レンズ１７側へ向けて光軸上に配置されている。すり鉢状ミラー６９は、平行平面板部材にすり鉢状の凹み部を設けてミラー面を形成し、さらにこのミラー面の中心部分に貫通口を設けてなる反射部材であって、当該ミラー面をコーン型ミラー６８側へ向けて光軸上に配置されている。なお、斯かるコーン型ミラー６８とすり鉢状ミラー６９の間隔、及び各ミラー面の角度は、光軸上を進行する略平行光束を光軸に対して略平行で距離ｄだけ偏心させるように設定されている。また、コーン型ミラー６８とすり鉢状ミラー６９はそれぞれ同じ形状の複数のミラーを貼り合わせて構成することも可能である。
【００５６】
上記構成の全反射蛍光キューブ８１を用いて標本５の全反射蛍光観察を行う場合、光軸上を進行して全反射蛍光キューブ８１へ入射した照明光（略平行光束）は、すり鉢状ミラー６９の貫通口を通過し、コーン型ミラー６８及びすり鉢状ミラー６９で順に反射されることにより、結像レンズ１７の光軸に略平行なリング状の照明光となって全周偏光素子７１の各波長板７１ａに入射する。各波長板７１ａに入射した照明光は、各波長板７１ａを経ることでそれぞれ異なる偏光方向の光となって、全周レンズ５２の各レンズ部５２ａへ入射する。そしてレンズ部５２ａを経た照明光は、対物レンズ８の瞳面Ｐにおける全反射条件領域内の位置Ｄ、即ち全反射条件領域内の光軸を中心とした半径が距離ｄの円周上に集光される。したがってリング状の照明光は、対物レンズ８を介して全反射角で標本５に照射されることとなり、これによってスペックルパターンを効果的に解消した良好な全反射照明を実現することが可能となる。またこのとき、リング状の照明光は複数の異なる偏光方向の直線偏光からなるため、標本５中の蛍光分子をその向きにかかわらず適切に発現させることが可能となる。なお、斯かる場合には、二次元スキャナ３２によって照明光を走査する必要がなく、また標本５の画像を複数枚撮影して積算する必要もないため、全反射蛍光観察をより迅速に行うことが可能となる。
【００５７】
以上、上記各実施形態によれば、共焦点観察及び全反射蛍光観察を行うことが可能で、大型化や高コスト化を抑えた顕微鏡装置、及びこれに用いられる蛍光キューブを実現することができる。
【符号の説明】
【００５８】
１００        顕微鏡装置
２            顕微鏡本体
３            制御装置
４            透過照明光源
５            標本
８            対物レンズ
１０          蛍光キューブホルダ
１２          接眼鏡筒
１６          蛍光キューブ
１８          プリズム
２５          共焦点観察装置
２６          落射照明装置
３２          二次元スキャナ
７０          全反射蛍光キューブ
７１          全周偏光素子
５１          全周楔
５２          全周レンズ
８０，８１    全反射蛍光キューブ
６８          コーン型ミラー
６９          すり鉢状ミラー
２００        顕微鏡装置
Ｐ            対物レンズ８の瞳面
Ｒ            像面（光源像）
【図１】
2010164834.tif 000003
【図２】
2010164834.tif 000004
【図３】
2010164834.tif 000005
【図４】
2010164834.tif 000006
【図５】
2010164834.tif 000007
【図６】
2010164834.tif 000008
【図７】
2010164834.tif 000009
【図８】
2010164834.tif 000010