(57)【要約】      （修正有）【課題】人体に安全で、レジオネラ属菌に対する抗菌活性の高い化合物および当該化合物を含む抗菌剤を提供する。【解決手段】下記式（Ｉ）：2010202562.tif 000031〔式中、Ｘは、ヒドロキシル基または炭素数が１〜６個のアルコキシ基であり、Ｒ1は、水素原子または炭素数が１〜６個のアルキルオキシカルボニル基など、Ｒ2は、水素原子、炭素数が１〜６個のアルキル基またはホルミル基であり、Ｒ3は、水素原子またはハロゲン原子である〕で表されるフェノール誘導体を有効成分として含有することを特徴とするレジオネラ属菌に対する抗菌剤である。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式（Ｈ）：
【化１】
2010202562.tif 000029
で表される化合物。
【請求項２】
下記式（Ｉ）：
【化２】
2010202562.tif 000030
〔式中、
Ｘは、ヒドロキシル基または炭素数が１〜６個のアルコキシ基であり、
Ｒ1は、水素原子または炭素数が１〜６個のアルキルオキシカルボニル基、または、ヒドロキシル基もしくは炭素数が１〜６個のアルコキシ基で置換された５−メチルフェノキシカルボニル基であり、
Ｒ2は、水素原子、炭素数が１〜６個のアルキル基またはホルミル基であり、
Ｒ3は、水素原子またはハロゲン原子である〕
で表されるフェノール誘導体を有効成分として含有することを特徴とするレジオネラ属菌に対する抗菌剤。
【請求項３】
式（Ｉ）において、
Ｘがヒドロキシル基またはメトキシ基であり、
Ｒ1が水素原子、メトキシカルボニル基、エトキシカルボニル基、ｎ−プロポキシカルボニル基、イソプロポキシカルボニル基、３−メトキシ−５−メチルフェノキシカルボニル基または３−ヒドロキシ−５−メチルフェノキシカルボニル基であり、
Ｒ2が水素原子、メチル基またはホルミル基であり、
Ｒ3が水素原子または塩素原子である、請求項２記載の抗菌剤。
【請求項４】
下記の化合物Ａ〜Ｌからなる群より選ばれた１種又は２種以上のフェノール誘導体を有効成分として含有するレジオネラ属菌に対する抗菌剤。
（Ａ）メチル 2,4-ジヒドロキシ-6-メチルベンゾエート
（Ｂ）エチル 2,4-ジヒドロキシ-6-メチルベンゾエート
（Ｃ）メチル 2,4-ジヒドロキシ-3,6-ジメチルベンゾエート
（Ｄ）イソプロピル 2,4-ジヒドロキシ-6-メチルベンゾエート
（Ｅ）3-メトキシ-5-メチルフェニル 2,4-ジヒドロキシ-6-メチルベンゾエート
（Ｆ）エチル 2,4-ジヒドロキシ-3,6-ジメチルベンゾエート
（Ｇ）エチル 3-ホルミル-2,4-ジヒドロキシ-6-メチルベンゾエート
（Ｈ）イソプロピル 3-ホルミル-2,4-ジヒドロキシ-6-メチルベンゾエート
（Ｉ）3-ヒドロキシ-5-メチルフェニル-2,4-ジヒドロキシ-6-メチルベンゾエート
（Ｊ）3-ヒドロキシ-5-メチルフェニル-2-ジヒドロキシ-4-メトキシ-6-メチルベンゾエート
（Ｋ）3-メトキシ-5-メチルフェニル 2-ヒドロキシ-4-メトキシ-6-メチルベンゾエート
（Ｌ）3-クロロ-2,6-ジヒドロキシ-4-メチルベンゾエート
【請求項５】
請求項２〜４のいずれか１項に記載の抗菌剤を含有することを特徴とする浴用剤。
【請求項６】
請求項２〜４のいずれか１項に記載の抗菌剤を含有することを特徴とする工業用殺菌剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、フェノール誘導体を有効成分として含有するレジオネラ属菌に対する抗菌剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
レジオネラ（Legionella）属菌は、水系、土壌など自然界に広く分布するブドウ糖非発酵グラム陰性桿菌であり、肺炎を主徴とする細菌感染症を惹起する。本菌は細胞内増殖菌であり、生体の中ではマクロファージなどの貪食細胞の中で殺菌されずに増殖することが可能である。また、β−ラクタマーゼ産生菌であるため、一部のβ−ラクタム剤に耐性を示す。
【０００３】
レジオネラ菌感染症の多くは外来性に進入した菌により発症する。感染源としては空調用冷却水、温泉水、老朽化した給水設備による水溜まり等が挙げられている。近年、空調設備等の開放循環系冷却水の中に生存するレジオネラ属菌によるレジオネラ症（Legionnaires disease）問題が多発している。これらの冷却塔が、居室の窓や空調の外気取り入れ口等が近い場合には、冷却水のエアロゾルが室内に進入してレジオネラ症の発生原因になるのである。
特に夏場にかけての空調が必要な時期では、冷却塔の水温が高くなり（約15℃〜35℃）、塔内でレジオネラ属菌をはじめとする微生物や病原菌の増殖に好適な場所となる。
【０００４】
さらに最近では、「２４時間風呂」（24時間いつでも浴槽の湯を適温に保ち、汚れた湯を浄化する機能を備えた装置であり、水の交換や毎日の掃除をしなくてもすむ）でのレジオネラ菌増殖が問題視されている。
歴史的には、１９７６年に米国フィラデルフィア市内のホテルで全米在郷軍人大会が開催された際、原因不明の重症肺炎が集団発生し、そのうち２９名が死亡したが、その後の調査によってレジオネラ菌（菌型はレジオネラ・ニューモフィラ；Legionella pneumophila）が原因菌であることが明らかになった。
【０００５】
わが国においては１９８１年、レジオネラ肺炎の第一例が報告されて以来、病院での院内感染等多数の報告がなされている。このような微生物による問題の対策として、循環水系等に抗菌剤を注入して微生物・細菌類の増殖を抑制する方法や、装置内を物理的に清掃洗浄し、或いは洗浄剤を用いて化学的に洗浄する方法等が用いられてきた。
【０００６】
レジオネラ属菌にはエリスロマイシン、タファンピシン等の抗生物質が有効であるといわれているが、これらの抗生物質を日常的に使用することは耐性菌の出現や副作用の点で好ましくない。また、レジオネラ肺炎は進行が速く、生命予後に重大な影響を与えるので早急な治療を必要とするものの迅速な確定診断が容易でないという問題点もある。
従って、主な感染源である水冷式空調の冷却水の汚染防止が、レジオネラ症対策として最も有効な手段であると言われている。
【０００７】
空調用冷却水等の感染源を殺菌する目的で、抗菌剤を注入して細菌類の増殖を抑制する方法としては、塩素や臭素、二酸化塩素等ハロゲン系の抗菌剤や四級アンモニウム塩類等の界面活性剤、ヒドラジン類やマレイミド類、イソチアゾリン系化合物、ホスホニウム化合物、ニトロアルコール系化合物などの有機化合物が主に用いられている。
しかしながら、上記ハロゲン系化合物は設備や配管を腐食させ易いといった問題があり、一方、上記有機化合物では、皮膚刺激性や感作性、発癌性等の毒性の問題や効力が充分でないといった問題あった。
【０００８】
このような状況にあって、レジオネラ属菌の感染予防が重要であるという考え方が広がりつつあり、一般人が手軽に使用でき、安全性に問題のない抗菌活性素材の提供が強く要望されている。
こうした中、グレープフルーツ等の柑橘類果物の種子抽出物を添加することによる水系システム内のレジオネラ科グラム陰性細菌を制御する方法が提案されている（特許文献１）。
【０００９】
また、エンメイソウ、オオバンガジュツ、カラコウボク、ワコウボク、カンキョウ、キンギンカ、ケイガイ、ゲンカ（芫花）、ソウズク（草豆蒄）、タクラン、バンカ（蕃果）、ミツモウカ（蜜蒙花）、ヤクチ、リョウキョウ、グアバ葉、棕呂葉、南天葉、ユーカリ葉、ヨモギ、グアバ果実、ステビア、マンゴスチン果皮、桑枝樹皮、キャットニップ、カルダモン、スイートバイオレット、タラゴン、チャイブ、ヒソップ、ブラックベリー、マグワート、モナルダ、ヤロー、ラズベリー、ローズマリー、ワイルドストロベリーまたはプロポリスの抽出物から選択される１種または２種以上の抽出物を有効成分とする抗レジオネラ属菌組成物も提案されている（特許文献２）。しかし、その効果はレジオネラ属菌の増殖を完全に抑えるほど高いものとは認められなかった。
【００１０】
さらに、樫の樹などの表皮に着生するコケであるオークモス（Oakmoss：ラテン語名Evernia prunastri(L.)Arch.；和名ツノマタゴケ）抽出物がレジオネラ菌に対して抗菌活性を示すことを本発明者らは見出している（非特許文献１）。しかし、その効果はレジオネラ属菌の増殖を完全に抑えるには５０〜１５０ｐｐｍの濃度を必要とし、またオークモス抽出物自体が濃い茶褐色をしていること、及び強い香りを有しており実用化および汎用化には問題があった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１１】
【特許文献１】特開平６−２３３９８６号公報
【特許文献２】特開平１１−４３４４２号公報
【非特許文献】
【００１２】
【非特許文献１】第55回日本生薬学会要旨集（2008年）、第268頁
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１３】
本発明が解決しようとする課題は、日常的に使用しても人体に悪影響をもたらすことがなく安全で、しかも、レジオネラ属菌の増殖を強力に阻止できる抗菌作用を有する化合物および当該化合物を有効成分として含む抗菌剤を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
そこで、本発明者らは、従来より天然物から抗菌活性を有する成分探索研究を続けてきたが、その一環として、これまで高級ブランドの香水等に使用されてきた香料原料のオークモス抽出物に注目して鋭意研究し、オークモス抽出物中に微量に存在する特定のフェノール誘導体に強いレジオネラ属菌増殖阻害作用があることを見出し、本発明を完成するに至った。
【００１５】
すなわち本発明は、下記式（Ｈ）：
【化１】
2010202562.tif 000002
で表される化合物である。
【００１６】
また、本発明は下記式（Ｉ）：
【化２】
2010202562.tif 000003
〔式中、
Ｘは、ヒドロキシル基または炭素数が１〜６個のアルコキシ基であり、
Ｒ1は、水素原子または炭素数が１〜６個のアルキルオキシカルボニル基、または、ヒドロキシル基もしくは炭素数が１〜６個のアルコキシ基で置換された５−メチルフェノキシカルボニル基であり、
Ｒ2は、水素原子、炭素数が１〜６個のアルキル基またはホルミル基であり、
Ｒ3は、水素原子またはハロゲン原子である〕
で表されるフェノール誘導体を有効成分として含有することを特徴とするレジオネラ属菌に対する抗菌剤である。
【００１７】
そして、上記式(Ｉ)において、
Ｘがヒドロキシル基またはメトキシ基であり、  
Ｒ1が水素原子、メトキシカルボニル基、エトキシカルボニル基、ｎ−プロポキシカルボニル基、イソプロポキシカルボニル基、３−メトキシ−５−メチルフェノキシカルボニル基または３−ヒドロキシ−５−メチルフェノキシカルボニル基であり、
Ｒ2が水素原子、メチル基またはホルミル基であり、
Ｒ3が水素原子または塩素原子であることを特徴とする。
【００１８】
また、本発明は、下記の化合物Ａ〜Ｌからなる群より選ばれた１種又は２種以上のフェノール誘導体を有効成分として含有するレジオネラ属菌に対する抗菌剤である。
（Ａ）メチル 2,4-ジヒドロキシ-6-メチルベンゾエート
（Ｂ）エチル 2,4-ジヒドロキシ-6-メチルベンゾエート
（Ｃ）メチル 2,4-ジヒドロキシ-3,6-ジメチルベンゾエート
（Ｄ）イソプロピル 2,4-ジヒドロキシ-6-メチルベンゾエート
（Ｅ）3-メトキシ-5-メチルフェニル 2,4-ジヒドロキシ-6-メチルベンゾエート
（Ｆ）エチル 2,4-ジヒドロキシ-3,6-ジメチルベンゾエート
（Ｇ）エチル 3-ホルミル-2,4-ジヒドロキシ-6-メチルベンゾエート
（Ｈ）イソプロピル 3-ホルミル-2,4-ジヒドロキシ-6-メチルベンゾエート
（Ｉ）3-ヒドロキシ-5-メチルフェニル-2,4-ジヒドロキシ-6-メチルベンゾエート
（Ｊ）3-ヒドロキシ-5-メチルフェニル-2-ジヒドロキシ-4-メトキシ-6-メチルベンゾエート
（Ｋ）3-メトキシ-5-メチルフェニル 2-ヒドロキシ-4-メトキシ-6-メチルベンゾエート
（Ｌ）3-クロロ-2,6-ジヒドロキシ-4-メチルベンゾエート
【００１９】
また、本発明は、上記の抗菌剤を含有することを特徴とする浴用剤であり、さらに、上記の抗菌剤を含有することを特徴とする工業用殺菌剤である。
【発明の効果】
【００２０】
本発明の抗菌剤は、従来より香粧品香料として広く使用されてきたオークモス抽出物に由来し、日常的に使用しても人体に副作用がなく安全性があり、しかも、レジオネラ属菌の増殖を強力に阻止できる抗レジオネラ属菌剤である。
また、オークモスが有する海草・コケ様の特有の臭いを有さず、色も無色透明に近いので、日常的に頻繁に使用する浴用剤や工業用殺菌剤など各種日用品に広範な適用が可能である。
従って、本発明の抗菌剤を使用することにより、冷房・冷蔵・冷凍装置の循環冷却水や、２４時間風呂の循環温水などの冷温水系および蓄熱水系等に生存しているレジオネラ属菌を防除し、その増殖を阻止することができる。
【発明を実施するための形態】
【００２１】
〔１〕フェノール誘導体
本発明の抗菌剤の有効成分であるフェノール誘導体は、
下記式（Ｉ）：
【化３】
2010202562.tif 000004
で表されるフェノール誘導体である。
【００２２】
式(Ｉ)において、Ｘは、ヒドロキシル基（−ＯＨ）または炭素数が１〜６個のアルコキシ基（−Ｏ−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル）であり、Ｒ1は、水素原子（−Ｈ）または炭素数が１〜６個のアルキルオキシカルボニル基（−ＣＯＯ−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル）、またはヒドロキシル基もしくは炭素数が１〜６個のアルコキシ基で置換された５−メチルフェノキシカルボニル基（−ＣＯＯ−（Ｃ6Ｈ4）メチル）であり、Ｒ2は、水素原子、炭素数が１〜６個のアルキル基（−（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル）またはホルミル基（−ＣＨＯ）であり、Ｒ3は、水素原子またはハロゲン原子である。
アルコキシ基およびアルキルオキシカルボニル基中のアルキル基の炭素数は１〜４個が好ましく、特に１〜３個が好ましい。また、ハロゲン原子は塩素原子が好ましい。
【００２３】
上記の置換基Ｘ、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3において、Ｘがヒドロキシル基およびメトキシ基（−ＯＣＨ3）から選ばれる基であり、Ｒ1が水素原子、メトキシカルボニル基（−ＣＯＯＣＨ3）、エトキシカルボニル基（−ＣＯＯＣ2Ｈ5）、ｎ−プロポキシカルボニル基（−ＣＯＯＣＨ2ＣＨ2ＣＨ3）、イソプロポキシカルボニル基（−ＣＯＯＣＨ(ＣＨ3)2）、３−メトキシ−５−メチルフェノキシカルボニル基および３−ヒドロキシ−５−メチルフェノキシカルボニル基から選ばれる基であり、そしてＲ2が水素原子、メチル基（−ＣＨ3）およびホルミル基から選ばれる基であり、Ｒ3が水素原子および塩素原子から選ばれる基であることが特に好ましい。
【００２４】
式（Ｉ）で表されるフェノール誘導体の中で、特に抗菌活性が高い化合物は以下のＡ〜Ｌである。
【００２５】
【表１】
2010202562.tif 000005
【００２６】
〔２〕フェノール誘導体の製造方法
上記のフェノール誘導体は、主に欧米の樫の樹の表皮に着生するコケであるオークモスを原材料として抽出単離することができる。
まず、オークモスを、石油エーテル、ベンゼン、ヘキサン等の低極性炭化水素系溶剤で抽出し、溶剤除去してロウ分が多い固形状の抽出物（コンクリート）を得る。
次いで、ロウ分を除き溶解性をよくするために上記コンクリートをエチルアルコール等のアルコールで再度抽出し、アルコール留去することにより抽出物（アブソリュート）を得る。
【００２７】
次に、アブソリュートを分子の大きさに基づく分離法によって抗菌活性の高い分画物を選択した後、さらに吸着性に基づく分離法によって抗レジオネラ菌活性を顕著に示す目的成分を単離する。
分子の大きさに基づく分離法として、半透膜による透析、限外濾過、ゲル濾過法、分画遠心法等の超遠心が例示される。本発明においては、多糖類デキストランにエピクロルヒドリンを反応させ三次元的に架橋して網目構造をもたせたデキストランゲルを用いたゲル濾過クロマトグラフィー、例えばＧＥヘルスケアバイオサイエンス社製「セファデックスSephadex（商品名）」が好ましい。
【００２８】
吸着性に基づく分離法に使用する吸着剤として、活性炭、シリカゲル、アルミナ、ゼオライト、合成吸着剤（スチレン・ジビニルベンゼン系、（メタ）アクリル系等）、イオン交換樹脂、多孔質ガラス、シクロデキストリン等を挙げることができる。中でも、化学結合型シリカゲル（オクタデシル基結合やフェニル基結合）が充填されたカラムを用いた吸着クロマトグラフィーが好ましい。
【００２９】
具体的な単離方法としては、先ず、オークモスアブソリュートを有機溶媒、好ましくはアセトニトリルとメタノールの混合溶媒（アセトニトリル：メタノールが１０：１〜１：１０）を用い架橋高分子デキストランゲルが充填されたカラムクロマトグラフィーで第１次分画物を得る。
次いで、第２次分画として、第１次分画物をアセトニトリル水溶液（アセトニトリル：水が１０：１〜１：１０）を用い、化学結合型シリカゲルが充填されたカラムクロマトグラフィーで分画して目的物を得る方法、を例示することができる。なお、第１次分画物をメタノール又はメタノール水溶液を用い、化学結合型シリカゲルが充填されたカラムクロマトグラフィーで分画する操作を経由してから、第２次分画を行ってもよい。
【００３０】
〔３〕抗菌剤
本発明で抗菌剤として用いられる化合物群は、好ましくは下記の式（Ａ）〜（Ｌ）で表されるフェノール誘導体化合物からなるレジオネラ属菌に対する抗菌剤であり、これらは１種又は２種以上の組み合わせで用いられる。
【化４】
2010202562.tif 000006
【００３１】
すなわち、本発明で抗菌剤として用いられる化合物群は、好ましくは（Ａ）メチル 2,4-ジヒドロキシ-6-メチルベンゾエート、（Ｂ）エチル 2,4-ジヒドロキシ-6-メチルベンゾエート、（Ｃ）メチル 2,4-ジヒドロキシ-3,6-ジメチルベンゾエート、（Ｄ）イソプロピル 2,4-ジヒドロキシ-6-メチルベンゾエート、（Ｅ）3-メトキシ-5-メチルフェニル 2,4-ジヒドロキシ-6-メチルベンゾエート、（Ｆ）エチル 2,4-ジヒドロキシ-3,6-ジメチルベンゾエート、（Ｇ）エチル 3-ホルミル-2,4-ジヒドロキシ-6-メチルベンゾエート、（Ｈ）イソプロピル 3-ホルミル-2,4-ジヒドロキシ-6-メチルベンゾエート、（Ｉ）3-ヒドロキシ-5-メチルフェニル-2,4-ジヒドロキシ-6-メチルベンゾエート、（Ｊ）3-ヒドロキシ-5-メチルフェニル-2-ジヒドロキシ-4-メトキシ-6-メチルベンゾエート、（Ｋ）3-メトキシ-5-メチルフェニル 2-ヒドロキシ-4-メトキシ-6-メチルベンゾエート、（Ｌ）3-クロロ-2,6-ジヒドロキシ-4-メチルベンゾエートから選択され、これらは１種又は２種以上の組み合わせで用いられる。
これらの化合物のうち、種々の菌に対する抗菌活性が知られているものもあるが、レジオネラ属菌に対する抗菌活性については一切知られていなかった。
【００３２】
本発明の抗菌剤は、レジオネラ菌に対する抗菌活性が強いので低濃度で使用することができる。
本発明の抗菌剤の使用濃度は、使用する目的に応じて選択することが可能であるが、単独で使用する場合は一般的には０．１〜１００ｐｐｍ、好ましくは０．５〜５０ｐｐｍ、さらに好ましくは１．０〜１０ｐｐｍの範囲で用いられる。
レジオネラ属菌に対する殺菌剤としては、一般に塩素が１ｐｐｍ程度で有効とされている。循環系の施設において繰り返し使用される場合は、有効塩素の気散・分解などによる失活が起こる。しかし、本発明の抗菌剤は、気散・分解などが起こらないため、塩素と比較して同程度の抗菌活性を有する以上に有効性が高いといえる。
【００３３】
本発明の抗菌剤の有効成分である前記フェノール誘導体は、他の成分と併用して組成物として用いることが効果的である。そのようにして併用される他の成分としては、目的に応じて種々の成分が用いられるが、一般的には他の殺菌剤、香料、色素、界面活性剤などが挙げられる。中でも、抗菌活性を有する香料との組み合わせが特に好ましい。
【００３４】
本発明において、併用される他の抗菌剤としては、四級アンモニウム塩類等の界面活性剤系殺菌剤、ヒドラジン類やマレイミド類、イソチアゾリン系化合物、ホスホニウム化合物、ブロモニトロ系化合物、ピリチオン系化合物等が挙げられ、具体的には、Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ，Ｎ−ジｎ−デシルアンモニウムクロリド、Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ，Ｎ−ジｎ−オクチルアンモニウムクロリド、Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−オクチル−Ｎ−デシルアンモニウムクロリド、Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−イソノニル−Ｎ−デシルアンモニウムクロリド、Ｎ−ヘキサデシル−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムクロリド、Ｎ−ヘキサデシル−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムブロミド、Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−オクタデシル−Ｎ−（３−（トリメトキシリル）プロピル）アンモニウムクロリド、
【００３５】
ヒドラジン、水和ヒドラジン、ソルビタン酸ヒドラジン、マレイミド、Ｎ−メチルマレイミド、Ｎ−エチルマレイミド、シトラコン酸イミド、Ｎ−メチルシトラコン酸イミド、Ｎ−エチルシトラコン酸イミド、２，３−ジメチルマレイン酸イミド、Ｎ−メチル−２，３−ジメチルマレイン酸イミド、Ｎ−エチル−２，３−ジメチルマレイン酸イミド、Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）マレイミド、Ｎ−シクロヘキシルマレイミド、Ｎ−４−ヒドロキシシクロヘキシルマレイミド、Ｎ−フェニルマレイミド、Ｎ−ｐ−ヒドロキシフェニルマレイミド、
【００３６】
Ｎ−ｐ−ヒドロキシベンジルマレイミド、５−クロロ−２−メチル−４−イソチアゾリン−３−オン、２−メチル−４−イソチアゾリン−３−オン、５−クロロ−２−ｎ−オクチルイソチアゾリン−３−オン、１，２−ベンゾイソチアゾリン−３−オン、テトラキス（ヒドロキシメチル）ホスホニウム硫酸塩、テトラキス（ヒドロキシメチル）ホスホニウムリン酸塩、テトラキス（ヒドロキシメチル）ホスホニウム硝酸塩、テトラキス（ヒドロキシメチル）ホスホニウム塩酸塩、テトラキス（ヒドロキシメチル）ホスホニウム臭酸塩、テトラキス（ヒドロキシメチル）ホスホニウムフッ酸塩、２−ブロモ−２−ニトロプロパン−１，３−ジオール、２，２−ジブロモ−２−ニトロプロパン−１−エタノール、２，２−ジブロモ−３−ニトロプロピオンアミド、ビス（２−ピリジンチオール−１−オキシド）銅塩、ビス（２−ピリジンチオール−１−オキシド）亜鉛塩、ビス（２−ピリジンチオール−１−オキシド）鉄塩、２−ピリジルチオ−１−オキシドナトリウム、ピリチオンジスルフィド、グルタルアルデヒド、過酸化水素、１−ブロモ−３−クロロ−５，５−ジメチルヒダントイン、メチレンビスチオシアネート、次亜塩素酸ナトリウム、１，５−ペンタンジアール、
【００３７】
３−（３，４−ジクロロフェニル）−１，１−ジホスホン酸、２，３，３−トリヨードアリルアルコール、中でも２，２−ジブロモ−３−ニトロプロピオンアミド、２−ブロモ−２−ニトロプロパン−１，３−ジオール、５−クロロ−２−メチル−４−イソチアゾリン−３−オン、２−メチル−４−イソチアゾリン−３−オンが好ましい。これらの殺菌・抗菌剤は単一または混合して前記フェノール誘導体と併用して用いることができ、その配合量は、前記フェノール誘導体の配合量を超えないことが好ましい。
【００３８】
本発明で用いられる他の成分としては、例えば、下記に示すような浴用剤（入浴剤）などで通常使用される基剤、添加剤等を併用して製造することができる。
（１）各種油脂類：
アボカド油、アーモンド油、ウイキョウ油、エゴマ油、オリーブ油、オレンジ油、オレンジラフィー油、ゴマ油、カカオ脂、カミツレ油、カロット油、キューカンバー油、牛脂脂肪酸、ククイナッツ油、サフラワー油、シア脂、液状シア脂、大豆油、ツバキ油、トウモロコシ油、ナタネ油、パーシック油、ヒマシ油、綿実油、落花生油、タートル油、ミンク油、卵黄油、パーム油、パーム核油、ヤシ油、牛脂、豚脂又はこれら油脂類の水素添加物（硬化油等）などが例示される。
【００３９】
（２）ロウ類：
ミツロウ、モクロウ、カルナバロウ、鯨ロウ、ラノリン、液状ラノリン、還元ラノリン、硬質ラノリン、カンデリラロウ、モンタンロウ、セラックロウ、ライスワックス、スクワレン、スクワラン、プリスタンなどが例示される。
【００４０】
（３）鉱物油：
流動パラフィン、ワセリン、パラフィン、オゾケライド、セレシン、マイクロクリスタリンワックスなどが例示される。
【００４１】
（４）脂肪酸類：
ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、ベヘン酸、オレイン酸、１２−ヒドロキシステアリン酸、ウンデシレン酸、トール油脂肪酸、ラノリン脂肪酸などの天然脂肪酸、イソノナン酸、カプロン酸、２−エチルブタン酸、イソペンタン酸、２−メチルペンタン酸、２−エチルヘキサン酸などの合成脂肪酸が例示される。
【００４２】
（５）アルコール類：
エタノール、イソプロパノール、ラウリルアルコール、セタノール、ステアリルアルコール、オレイルアルコール、ラノリンアルコール、コレステロール、フィトステロールなどの天然アルコール、２−ヘキシルデカノール、イソステアリルアルコール、２−オクチルドデカノールなどの合成アルコールが例示される。
【００４３】
（６）多価アルコール類：
エチレングリコール、ジエチレングリコール、トリエチレングリコール、エチレングリコールモノエチルエーテル、エチレングリコールモノブチルエーテル、ジエチレングリコールモノメチルエーテル、ジエチレングリコールモノエチルエーテル、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、ジプロピレングリコール、ポリプロピレングリコール、
１，３−ブチレングリコール、１，２−ペンタンジオール、グリセリン、ジグリセリン、ペンタエリトリトール、ソルビトール、マンニトールなどが例示される。
【００４４】
（７）エステル類：
ミリスチン酸イソプロピル、パルミチン酸イソプロピル、ステアリン酸ブチル、ラウリン酸ヘキシル、ミリスチン酸ミリスチル、オレイン酸オレイル、オレイン酸デシル、ミリスチン酸オクチルドデシル、ジメチルオクタン酸ヘキシルデシル、乳酸セチル、乳酸ミリスチル、フタル酸ジエチル、フタル酸ジブチル、酢酸ラノリン、モノステアリン酸エチレングリコール、モノステアリン酸プロピレングリコール、ジオレイン酸プロピレングリコールなどが例示される。
【００４５】
（８）金属セッケン類：
ステアリン酸アルミニウム、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸亜鉛、ステアリン酸カルシウム、パルミチン酸亜鉛、ミリスチン酸マグネシウム、ラウリン酸亜鉛、ウンデシレン酸亜鉛などが例示される。
【００４６】
（９）ガム質、糖類又は水溶性高分子化合物：
アラビアゴム、ベンゾインゴム、ダンマルゴム、グアヤク脂、アイルランド苔、カラヤゴム、トラガントゴム、キャロブゴム、クインシード、寒天、カゼイン、乳糖、果糖、ショ糖又はそのエステル、トレハロース又はその誘導体、デキストリン、ゼラチン、ペクチン、デンプン、カラギーナン、カルボキシメチルキチン又はキトサン、エチレンオキサイドなどのアルキレン(Ｃ2〜Ｃ4)オキサイドが付加されたヒドロキシアルキル(Ｃ2〜Ｃ4)キチン又はキトサン、低分子キチン又はキトサン、キトサン塩、硫酸化キチン又はキトサン、リン酸化キチン又はキトサン、アルギン酸又はその塩、ヒアルロン酸又はその塩、コンドロイチン硫酸又はその塩、ヘパリン、エチルセルロース、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、カルボキシエチルセルロース、カルボキシエチルセルロースナトリウム、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ニトロセルロース、結晶セルロース、ポリビニルアルコール、ポリビニルメチルエーテル、ポリビニルピロリドン、ポリビニルメタアクリレート、ポリアクリル酸塩、ポリエチレンオキサイドやポリプロピレンオキサイドなどのポリアルキレンオキサイド又はその架橋重合物、カルボキシビニルポリマー、ポリエチレンイミンなどが例示される。
【００４７】
（10）界面活性剤：
アニオン界面活性剤（アルキルカルボン酸塩、アルキルスルホン酸塩、アルキル硫酸エステル塩、アルキルリン酸エステル塩）、カチオン界面活性剤（アルキルアミン塩、アルキル四級アンモニウム塩）、両性界面活性剤〔カルボン酸型両性界面活性剤（アミノ型、ベタイン型）、硫酸エステル型両性界面活性剤、スルホン酸型両性界面活性剤、リン酸エステル型両性界面活性剤〕、非イオン界面活性剤（エーテル型非イオン界面活性剤、エーテルエステル型非イオン界面活性剤、エステル型非イオン界面活性剤、ブロックポリマー型非イオン界面活性剤、含窒素型非イオン界面活性剤）、その他の界面活性剤（天然界面活性剤、タンパク質加水分解物の誘導体、高分子界面活性剤、チタン・ケイ素を含む界面活性剤、フッ化炭素系界面活性剤）などが例示される。
【００４８】
（11）各種ビタミン類：
ビタミンＡ群：レチノール、レチナール（ビタミンＡ１）、デヒドロレチナール（ビタミンＡ２）、カロチン、リコピン（プロビタミンＡ）、
ビタミンＢ群：チアミン塩酸塩、チアミン硫酸塩（ビタミンＢ１）、リボフラビン（ビタミンＢ２）、ピリドキシン（ビタミンＢ６）、シアノコバラミン（ビタミンＢ12）、葉酸類、ニコチン酸類、パントテン酸類、ビオチン類、コリン、イノシトール類、
ビタミンＣ群：ビタミンＣ酸又はその誘導体、
ビタミンＤ群：エルゴカルシフェロール（ビタミンＤ２）、コレカルシフェロール（ビタミンＤ３）、ジヒドロタキステロール、
ビタミンＥ群：ビタミンＥ又はその誘導体、ユビキノン類、
ビタミンＫ群：フィトナジオン（ビタミンＫ１）、メナキノン（ビタミンＫ２）、メナジオン（ビタミンＫ３）、メナジオール（ビタミンＫ４）、
その他、必須脂肪酸（ビタミンＦ）、カルニチン、フェルラ酸、γ−オリザノール、オロット酸、ビタミンＰ類（ルチン、エリオシトリン、ヘスペリジン）、ビタミンＵなどが例示される。
【００４９】
（12）各種アミノ酸類：
バリン、ロイシン、イソロイシン、トレオニン、メチオニン、フェニルアラニン、トリプトファン、リジン、グリシン、アラニン、アスパラギン、グルタミン、セリン、システイン、シスチン、チロシン、プロリン、ヒドロキシプロリン、アスパラギン酸、グルタミン酸、ヒドロキシリジン、アルギニン、オルニチン、ヒスチジンなどや、それらの硫酸塩、リン酸塩、硝酸塩、クエン酸塩、或いはピロリドンカルボン酸のごときアミノ酸誘導体などが例示される。
【００５０】
（13）植物又は動物系原料由来の種々の添加物：
これらは、添加しようとする製品種別、形態に応じて常法的に行われる加工（例えば、粉砕、製粉、洗浄、加水分解、醗酵、精製、圧搾、抽出、分画、ろ過、乾燥、粉末化、造粒、溶解、滅菌、pＨ調整、脱臭、脱色などを任意に選択、組合せた処理）を行い、各種の素材から任意に選択して供すればよい。
【００５１】
なお、上記植物又は動物系原料の抽出を行う場合に用いる溶媒については、供する製品の使用目的、種類、或いは後に行う加工処理等を考慮した上で選択すればよいが、通常では、水、水溶性有機溶媒（例えば、エタノール、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコールなど）の中から選ばれる１種もしくは２種以上の混液を用いるのが望ましい。但し、用途により有機溶媒の含有が好ましくない場合においては、水のみを使用したり、あるいは抽出後に除去しやすいエタノールを採用し、単独又は水との任意の混液で用いたりすれば良く、又、搾取抽出したものでも良い。
【００５２】
なお、前記植物又は動物系原料由来の添加物を、全身用又は局所用の外用剤、化粧品類に供する場合、皮膚や頭髪の保護をはじめ、保湿、感触・風合いの改善、柔軟性の付与、刺激の緩和、芳香によるストレスの緩和、細胞賦活（細胞老化防止）、炎症の抑制、肌質・髪質の改善、肌荒れ防止及びその改善、発毛、育毛、脱毛防止、光沢の付与、清浄効果、疲労の緩和、血流促進、温浴効果などの美容的効果のほか、香付け、消臭、増粘、防腐、緩衝などの効果も期待できる。
【００５３】
（14）香料：
ジャコウ、シベット、カストリウム、アンバーグリスなどの天然動物性香料、アニス精油、アンゲリカ精油、イランイラン精油、イリス精油、ウイキョウ精油、オレンジ精油、カナンガ精油、カラウェー精油、カルダモン精油、グアヤクウッド精油、クミン精油、黒文字精油、ケイ皮精油、シンナモン精油、ゲラニウム精油、コパイババルサム精油、コリアンダー精油、シソ精油、シダーウッド精油、シトロネラ精油、ジャスミン精油、ジンジャーグラス精油、杉精油、スペアミント精油、西洋ハッカ精油、大茴香精油、チュベローズ精油、丁字精油、橙花精油、冬緑精油、トルーバルサム精油、パチュリー精油、バラ精油、パルマローザ精油、桧精油、ヒバ精油、白檀精油、プチグレン精油、ベイ精油、ベチバー精油、ベルガモット精油、ペルーバルサム精油、ボアドローズ精油、芳樟精油、マンダリン精油、ユーカリ精油、ライム精油、ラベンダー精油、リナロエ精油、レモングラス精油、レモン精油、ローズマリー精油、和種ハッカ精油などの植物性香料などが例示される。
【００５４】
合成香料成分としては、脂肪族炭化水素、テルペン炭化水素、芳香族炭化水素等の炭化水素類、脂肪族アルコール、テルペンアルコール、芳香族アルコール等のアルコール類、脂肪族エーテル、芳香族エーテル等のエーテル類、脂肪族オキサイド、テルペン類のオキサイド等のオキサイド類、脂肪族アルデヒド、テルペン系アルデヒド、水素化芳香族アルデヒド、チオアルデヒド、芳香族アルデヒド等のアルデヒド類、脂肪族ケトン、テルペンケトン、水素化芳香族ケトン、脂肪族環状ケトン、非ベンゼン系芳香族ケトン、芳香族ケトン等のケトン類、アセタール類、ケタール類、フェノール類、フェノールエーテル類、脂肪酸、テルペン系カルボン酸、水素化芳香族カルボン酸、芳香族カルボン酸等の酸類、酸アマイド類、脂肪族ラクトン、大環状ラクトン、テルペン系ラクトン、水素化芳香族ラクトン、芳香族ラクトン等のラクトン類、脂肪族エステル、フラン系のカルボン酸族エステル、脂肪族環状カルボン酸エステル、芳香族カルボン酸エステル等のエステル類、ニトロムスク類、ニトリル、アミン、ピリジン類、キノリン類、ピロール、インドール等の含窒素化合物などが例示される。
【００５５】
合成香料のより具体的としては、例えば「合成香料化学と商品知識」（1996年、化学工業日報社発行，印藤元一著）や「パフューム アンド フレバー ケミカルス（Perfume and Flavor Chemicals）」（1969年，ステファンアークタンダー（STEFFENARCTAMDER）著）等に記載された香料等が好適に使用できる。
【００５６】
以下に主な香料等を示す。アルデヒドＣ6〜Ｃ12、アニスアルデヒド、アセタールＲ、アセトフェノン、アセチルセドレン、アドキサール、アリルアミルグリコレート、アリルシクロヘキサンプロピオネート、アルファダマスコン、ベータダマスコン、デルタダマスコン、アンブレットリッド、アンブロキサン、アミルシンナミックアルデヒド、アミルシンナミックアルデヒドジメチルアセタール、アミルバレリアネート、アミルサリシレート、イソアミルアセテート、イソアミルサリシレート、オーランチオール、アセチルユゲノール、バクダノール、ベンジルアセテート、ベンジルアルコール、ベンジルサリシレート、ベルガミールアセテート、ボルニルアセテート、ブチルブチレート、パラターシャリーブチルシクロヘキサノール、パラターシャリーブチルシクロヘキシルアセテート、オルトターシャリーブチルシクロヘキサノール、ベンズアルデヒド、
【００５７】
ベンジルフォーメート、カリオレフィン、カシュメラン、カルボン、セドロアンバー、セドリルアセテート、セドロール、セリストリッド、シンナミックアルコール、シンナミックアルデヒド、シスジャスモン、シトラール、シトラールジメチルアセタール、シトラサール、シトロネロール、シトロネリルアセテート、シトロネリルフォーメート、シトロネリルニトリル、シクラセット、シクラメンアルデヒド、シクラプロップ、キャロン、クマリン、シンナミルアセテート、デルタＣ6〜Ｃ13ラクトン、ジメチルベンジルカービノール、ジヒドロジャスモン、ジヒドロリナロール、ジヒドロミルセノール、ジメトール、
【００５８】
ジミルセトール、ジフェニルオキサイド、エチルワニリン、ユゲノール、フルイテート、フェンキルアルコール、フェニルエチルフェニルアセテート、ガラキソリッド、ガンマＣ6〜Ｃ13ラクトン、ゲラニオール、ゲラニルアセテート、ゲラニルフォーメート、ゲラニルニトリル、ヘディオン、ヘリオナール、ヘリオトロピン、シス−３−ヘキセノール、シス−３−ヘキセニルアセテート、シス−３−ヘキセニルルサリシレート、ヘキシルシンナミックアルデヒド、ヘキシルサリシレート、ヒヤシンスジメチルアセタール、ハイドロトロピックアルコール、ヒドロキシシトロネラール、インドール、イソボルニルアセテート、イソシクロシトラール、イソＥスーパー、イソユゲノール、イソノニルアセテート、イソブチルキノリン、ジャスマール、ジャスモラクトン、ジャスモフィラン、コアボン、リグストラール、リリアール、ライムオキサイド、リモネン、リナロール、リナロールオキサイド、リナリルアセテート等が挙げられる。
【００５９】
本発明の抗菌剤の利用用途としては、２４時間風呂の循環温水などの冷温水系、蓄熱水系等、クーリングタワー、冷凍装置の循環冷却水などの工業用殺菌剤として特に有効である。
本発明の抗菌剤は、失活や分解がないため、長時間循環される水中に生存しているレジオネラ属菌を防除し、その増殖を防止することができる。
従って、家庭用あるいは業務用の浴用剤（入浴剤）や浴槽洗浄剤などにも幅広く適用することができる。
【実施例】
【００６０】
本発明を以下の実施例を用いてさらに詳細に説明するが、以下の実施例は例示の目的にのみ用いられ、本発明はこれによって限定されるものではない。
〔製造例１〕試料の調製
（１）原材料（オークモス抽出物）：
フランス国シャラボ（Charabot）社製のオークモスアブソリュートを使用した。当該アブソリュートは、樫の木に着生するオークモス（Evernia prunastri(L.)Arch.）（ツノマタゴケ）を石油エーテル、ベンゼン、ヘキサン等の炭化水素系溶剤で抽出し溶剤を除去してコンクリートを得、それをエチルアルコールで抽出後アルコールを除去して得られた抽出物である。
【００６１】
（２）第１次分画
ＧＥヘルスケアバイオサイエンス社製の「Sephadex LH-20（商品名）」〔マトリックス：ヒドロキシプロピル化Sephadex G-25、粒子径：18〜111μｍ（粉末時）、27〜163μｍ（メタノール膨潤時）、分画範囲：100〜4000Da〕を３０×５００ｍｍ充填したオープンカラム上に原材料のオークモスアブソリュートを２．２４ｇのせ、アセトニトリル：メタノール＝１０：１の溶媒を毎分２ｍｌの割合で１５時間流して１〜９までのフラクションに分画した。
溶媒除去後の各フラクションの抽出物の量は次の通りである。
【００６２】
【表２】
2010202562.tif 000007
【００６３】
この中で、フラクション２〜５及び８に抗レジオネラ菌活性を見出し、次の分画へ使用した。
（３）第２次分画
（ａ）フラクション２の分画
フラクション２（全量514.4mg)約１０ｍｇをWaters社製の「Sep-Pak C18 Cartridges Classic（商品名）；C18(オクタテ゛シル)基が結合したシリカゲルクロマト）にのせ、２０％メタノール、４０％メタノール、６０％メタノール、８０％メタノール、１００％メタノールを各１０ｍｌ流した。
これを繰り返し、分画した。各々の流出画分の量は次の通りである。
【００６４】
【表３】
2010202562.tif 000008
【００６５】
このなかで、６０％メタノール画分、８０％メタノール画分及び１００％メタノール画分に強い抗レジオネラ菌活性を認め、また、ＵＶ２８０ｎｍ検出器により、（Ｇ）、（Ｉ）及び（Ｊ）の化合物のピークを認めた。
次に高速液体クロマトグラフィー（島津製作所製「HPLC LC-6A」）を用いて目的物の分取を行った。使用したカラムはC18(オクタデシル)基が結合したシリカゲルクロマトである資生堂製「CAPCELL PAK MG II（商品名）、品番90604」（10×250ｍｍカラム）、検出器はＵＶ２８０ｎｍ、移動層にはアセトニトリルと水を用いた。
フラクション２の６０％メタノール画分、８０％メタノール画分、１００％メタノール画分を合わせた４７１．７ｍｇを上記カラムに導入しアセトニトリル：水＝６０：４０の割合の溶媒を毎分４ｍｌ流し、ＵＶ２８０ｎｍ検出器にてモニタリングしながら、開始後１８分、３７分、４６分の流分を分取し各々（Ｇ）、（Ｉ）及び（Ｊ）を得た。
【００６６】
（ｂ）フラクション３の分画
フラクション３（全量315.6mg）約１２ｍｇを液体クロマトグラフィー（フェニル基が結合したシリカゲルクロマトであるVARIAN社製「Bond Elut PH（商品名）」）に導入し、２０％メタノール、４０％メタノール、６０％メタノール、８０％メタノール、１００％メタノールを各１０ｍｌ流した。
これを繰り返し、分画した。各々の流出画分の量は次の通りである。
【００６７】
【表４】
2010202562.tif 000009
【００６８】
このなかで、２０％メタノール画分〜８０％メタノール画分に強い抗レジオネラ活性を認め、また、ＵＶ２８０ｎｍ検出器により、（Ｂ）、（Ｃ）、（Ｄ）、（Ｅ）、（Ｆ）及び（Ｈ）の化合物のピークを認めた。
上記フラクション３の２０％メタノール画分（16.7mg）を液体クロマトグラフィー（C18(オクタデシル)基が結合したシリカゲルクロマトである資生堂製「CAPCELL PAK MG II（商品名）、品番90604」、10×250ｍｍカラム）に導入し、アセトニトリル：水＝３５：６５の割合の溶媒を毎分４ｍｌ流し、ＵＶ２８０ｎｍ検出器にてモニタリングしながら、開始後３７分、４１分の流分を分取して各々化合物（Ｂ）、（Ｃ）を得た。
【００６９】
フラクション３の４０％メタノール画分１９．３ｍｇを液体クロマトグラフィー（C18(オクタデシル)基が結合したシリカゲルクロマトである資生堂製「CAPCELL PAK MG II（商品名）、品番90604」、10×250ｍｍカラム）に導入し、アセトニトリル：水＝４５：５５の割合の溶媒を毎分４ｍｌ流し、ＵＶ２８０ｎｍ検出器にてモニタリングしながら、開始後１６分、１７分の流分を分取し各々（Ｂ）、（Ｃ）を得た。
【００７０】
フラクション３の６０％メタノール画分、８０％メタノール画分を合わせた１４２．４ｍｇを液体クロマトグラフィー（C18(オクタデシル)基が結合したシリカゲルクロマトである資生堂製「CAPCELL PAK MG II（商品名）、品番90604」、10×250ｍｍカラム）に導入し、アセトニトリル：水＝６５：３５の割合の溶媒を毎分４ｍｌ流し、ＵＶ２８０ｎｍ検出器にてモニタリングしながら、開始後９．５分、１０分、１５分、２１分の流分を分取し各々（Ｅ）、（Ｆ）、（Ｇ）、（Ｈ）を得た。
【００７１】
（ｃ）フラクション４の分画
フラクション４（全量218.4mg)約１３ｍｇをWaters社製の「Sep-Pak C18 Cartridges Classic（商品名）；C18(オクタデシル)基が結合したシリカゲルクロマト）にのせ、２０％メタノール、４０％メタノール、６０％メタノール、８０％メタノール、１００％メタノールを各１０ｍｌ流した。
これを繰り返し、分画した。各々の流出画分の量は次の通りである。
【００７２】
【表５】
2010202562.tif 000010
【００７３】
このなかで、２０％メタノール画分〜８０％メタノール画分に強い抗レジオネラ活性を認め、また、ＵＶ２８０ｎｍ検出器により、（Ｂ）、（Ｃ）および（Ｄ）の化合物のピークを認めた。
フラクション４の２０％メタノール画分、４０％メタノール画分を合わせたもの８４．９ｍｇを液体クロマトグラフィー（C18(オクタデシル)基が結合したシリカゲルクロマトである資生堂製「CAPCELL PAK MG II（商品名）、品番90604」、10×250ｍｍカラム）に導入しアセトニトリル：水＝３８：６２の割合の溶媒を毎分４ｍｌ流し、ＵＶ２８０ｎｍ検出器にてモニタリングしながら、開始後２９分、３１分の流分を分取し各々（Ｂ）、（Ｃ）を得た。
【００７４】
フラクション４の６０％メタノール画分、８０％メタノール画分を合わせた６７．９ｍｇを液体クロマトグラフィー（C18(オクタデシル)基が結合したシリカゲルクロマトである資生堂製「CAPCELL PAK MG II（商品名）、品番90604」、10×250ｍｍカラム）に導入しアセトニトリル：水＝４５：５５の割合の溶媒を毎分４ｍｌ流し、ＵＶ２８０ｎｍ検出器にてモニタリングしながら、開始後１７分、２５分、４９分の流分を分取し各々（Ｂ）、（Ｃ）、（Ｄ）を得た。
【００７５】
（ｄ）フラクション５の分画
フラクション５の２５９．４ｍｇを液体クロマトグラフィー（C18(オクタデシル)基が結合したシリカゲルクロマトである資生堂製「CAPCELL PAK MG II（商品名）、品番90604」、10×250ｍｍカラム）に導入しアセトニトリル：水＝３８：６２の割合で３５分、６５：３５の割合で１５分の条件で毎分４ｍｌ流し、ＵＶ280nm検出器にてモニタリングしながら、開始後１０分、２８分、３０分、４０分、４５分、５５分、２４分の流分を分取し各々（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）、（Ｄ）、（Ｅ）、（Ｆ）、（Ｋ）を得た。
【００７６】
フラクション６の全量７２．９ｍｇを液体クロマトグラフィー（C18(オクタデシル)基が結合したシリカゲルクロマトである資生堂製「CAPCELL PAK MG II（商品名）、品番90604」、10×250ｍｍカラム）に導入しアセトニトリル：水＝３８：６２の割合の溶媒を毎分４ｍＬ流し、ＵＶ２８０ｎｍ検出器にてモニタリングしながら、開始後２４分の流分を分取し（Ｌ）を得た。
【００７７】
得られた各化合物の合計量とその性状は以下のとおりである。
【表６】
2010202562.tif 000011
【００７８】
得られた化合物は、それぞれ機器分析によりその構造を同定した。
〔１〕化合物Ａ：メチル 2,4-ジヒドロキシ-6-メチルベンゾエート
【化５】
2010202562.tif 000012
先ず、質量分析によりM/Z：182を確認し、解裂パターンからメチル 2,4-ジヒドロキシ-6-メチルベンゾエート、またはメチル 2,4-ジヒドロキシ-4-メチルベンゾエートであることを推定した。そして2,4-ジヒドロキシ-4-メチルベンゾエートを購入し、ガスクロマトグラフィーによるリテンションタイムの比較を行った結果、一致しなかった。さらに、質量分析データを詳細に解析した結果、メチル 2,4-ジヒドロキシ-6-メチルベンゾエートと良い一致を示した。これら２点から化合物Ａを上記の構造と判定した。
【００７９】
〔２〕化合物Ｂ：エチル 2,4-ジヒドロキシ-6-メチルベンゾエート
【化６】
2010202562.tif 000013
先ず、質量分析によりM/Z：196を確認した。そして、エチル 2,4-ジヒドロキシ-6-メチルベンゾエートを購入し、ガスクロマトグラフィーによるリテンションタイムの比較を行った結果一致した。また、質量分析データを詳細に解析した結果、エチル 2,4-ジヒドロキシ-6-メチルベンゾエートと良い一致を示した。これら２点から化合物Ｂを上記の構造と判定した。
【００８０】
〔３〕化合物Ｃ：メチル 2,4-ジヒドロキシ-3,6-ジメチルベンゾエート
【化７】
2010202562.tif 000014
先ず、質量分析によりM/Z：196を確認した。そして、メチル 2,4-ジヒドロキシ-3,6-ジメチルベンゾエートを購入し、ガスクロマトグラフィーによるリテンションタイムの比較を行った結果一致した。また、質量分析データを詳細に解析した結果、メチル 2,4-ジヒドロキシ-3,6-ジメチルベンゾエートと良い一致を示した。これら２点から化合物Ｃを上記の構造と判定した。
【００８１】
〔４〕化合物Ｄ：イソプロピル 2,4-ジヒドロキシ-6-メチルベンゾエート
（１）
【表７】
2010202562.tif 000015
【００８２】
（２）質量分析
MS m/z 210 (M+)
【００８３】
〔５〕化合物Ｅ：3-メトキシ-5-メチルフェニル 2,4-ジヒドロキシ-6-メチルベンゾエート
【化８】
2010202562.tif 000016
先ず、質量分析によりM/Z：288を確認した。そして、3-メトキシ-5-メチルフェニル 2,4-ジヒドロキシ-6-メチルベンゾエートを購入し、ガスクロマトグラフィーによるリテンションタイムの比較を行った結果一致した。また、質量分析データを詳細に解析した結果、3-メトキシ-5-メチルフェニル 2,4-ジヒドロキシ-6-メチルベンゾエートと良い一致を示した。これら２点から化合物Ｅを上記の構造と判定した。
【００８４】
〔６〕化合物Ｆ：エチル 2,4-ジヒドロキシ-3,6-ジメチルベンゾエート
【化９】
2010202562.tif 000017
先ず、質量分析によりM/Z：210を確認した。そして、エチル 2,4-ジヒドロキシ-3,6-ジメチルベンゾエートを購入し、ガスクロマトグラフィーによるリテンションタイムの比較を行った結果一致した。また、質量分析データを詳細に解析した結果、エチル 2,4-ジヒドロキシ-3,6-ジメチルベンゾエートと良い一致を示した。これら２点から化合物Ｆを上記の構造と判定した。
【００８５】
〔７〕化合物Ｇ：エチル 3-ホルミル-2,4-ジヒドロキシ-6-メチルベンゾエート
【化１０】
2010202562.tif 000018
先ず、質量分析によりM/Z：224を確認した。そして、エチル 3-ホルミル-2,4-ジヒドロキシ-6-メチルベンゾエートを購入し、ガスクロマトグラフィーによるリテンションタイムの比較を行った結果一致した。また、質量分析データを詳細に解析した結果、エチル 3-ホルミル-2,4-ジヒドロキシ-6-メチルベンゾエートと良い一致を示した。これら２点から化合物Ｇを上記の構造と判定した。
【００８６】
〔８〕化合物Ｈ：イソプロピル 3-ホルミル-2,4-ジヒドロキシ-6-メチルベンゾエート
（１）1Ｈ ＮＭＲおよび13Ｃ ＮＭＲスペクトル解析
【表８】
2010202562.tif 000019
【００８７】
（２）質量分析
MS m/z 238 (M+)
【００８８】
〔９〕化合物Ｉ：3-ヒドロキシ-5-メチルフェニル-2,4-ジヒドロキシ-6-メチルベンゾエート
【化１１】
2010202562.tif 000020
先ず、質量分析によりM/Z：274を確認した。そして、3-ヒドロキシ-5-メチルフェニル-2,4-ジヒドロキシ-6-メチルベンゾエートを購入し、ガスクロマトグラフィーによるリテンションタイムの比較を行った結果一致した。また、質量分析データを詳細に解析した結果、3-ヒドロキシ-5-メチルフェニル-2,4-ジヒドロキシ-6-メチルベンゾエートと良い一致を示した。これら２点から化合物Ｉを上記の構造と判定した。
【００８９】
〔10〕化合物Ｊ：3-ヒドロキシ-5-メチルフェニル-2-ジヒドロキシ-4-メトキシ-6-メチルベンゾエート
（１）1Ｈ ＮＭＲおよび13Ｃ ＮＭＲスペクトル解析
【表９】
2010202562.tif 000021
【００９０】
（２）質量分析
MS m/z 288 (M+)
【００９１】
〔11〕化合物Ｋ：3-メトキシ-5-メチルフェニル 2-ヒドロキシ-4-メトキシ-6-メチルベンゾエート
【化１２】
2010202562.tif 000022
先ず、質量分析によりM/Z：302を確認した。そして3-メトキシ-5-メチルフェニル 2-ヒドロキシ-4-メトキシ-6-メチルベンゾエートを購入し、ガスクロマトグラフィーによるリテンションタイムの比較を行った結果一致した。また、質量分析データを詳細に解析した結果、3-メトキシ-5-メチルフェニル 2-ヒドロキシ-4-メトキシ-6-メチルベンゾエートと良い一致を示した。これら２点から化合物Ｋを上記の構造と判定した。
【００９２】
〔12〕化合物Ｌ：3-クロロ-2,6-ジヒドロキシ-4-メチルベンゾエート
（１）1Ｈ ＮＭＲおよび13Ｃ ＮＭＲスペクトル解析
【表１０】
2010202562.tif 000023
【００９３】
（２）質量分析
MS m/z 186 (M+)
【００９４】
〔試験例１〕
（１）使用菌株と培養：
菌株はLegionella peneumophila JCM7571(Philadelphia 1)株を用い、bufferd charcoal yeast extract agar supplementyed with 0.1% α-ketoglutarate (BCYE-α、Becton Dickinson,MD) 平板寒天培地で３７℃、７２時間培養した。
【００９５】
（２）抗菌試験用培地：
抗菌試験用培地としてbufferd yeast extract supplementyed with 0.1% α-ketoglutarate(BCYE-α)液体培地を使用した。
【００９６】
（３）試験菌懸濁液の調製
最小発育阻止濃度（minimum inhibitory concentration、MIC）測定には下記により調整した試験菌懸濁液を原液として、適宜希釈して用いた。ＢＣＹＥ−α平板寒天培地で培養したL.peneumophiaの菌体は、培地上に直接４ｍＬの滅菌生理食塩水を加え、コマゴメピペットで攪拌しながら懸濁液とした後、滅菌試験管に移し、ボルテックスミキサーで攪拌して均一な懸濁液とした。さらに、６００ｎｍにおける吸光度が０．１となるように滅菌生理食塩水で希釈して試験菌懸濁原液とした。
本懸濁液は、コロニー形成単位（colony forming unit：CFU）測定の結果、１．７×１０8ＣＦＵ／ｍＬを示した。
【００９７】
（４）抗菌試験：ＭＩＣの測定
ＭＩＣ測定は、基本的に米国臨床検査標準委員会（Clinical and Laboratory Standards Institute；ＣＬＳＩ）基準法の微量液体希釈法に基づく変法に準じたが、L.pneumophilaは試料の分散剤として用いるポリ(オキシエチレン)ソルビタンモノオレアート(商品名「Tween 80」)に対して感受性を示すため分散剤を使用することなく試料の希釈を行った。
ジメチルスルホキシド(DMSO)で４倍希釈した試料はＢＣＹＥ−αで希釈・攪拌して溶解または懸濁液とし、１．０（％、Ｖ／Ｖ）試料含有ＢＣＹＥ−αを作成した。得られた１．０（％、Ｖ／Ｖ）試料含有ＢＣＹＥ−αはディープウェルプレート（ビーエム機器株式会社製「ＢＭ６０２２」）とＢＣＹＥ−αを用いて１．０から０．００２０（％、Ｖ／Ｖ）までの２倍希釈列とした。試験菌懸濁液は試験菌懸濁液原液を濃度が６．０×１０5ＣＦＵ／ｍＬとなるようにＢＣＹＥ−αで希釈して調整した。
【００９８】
それぞれの試料の希釈試験液５０μＬと試験菌懸濁液５０μＬを９６穴マイクロプレート（ビーエム機器株式会社製「ＢＭ６０００」）各ウェルに分注し、攪拌・混合した後、プレートシール（三光純薬株式会社製「ＳＪ１０３−４０」）を用いて各ウェルを密閉し、３７℃、４８時間培養した。各試料のＭＩＣの判定はＣＬＳＩ基準法に基づき、培養後に増殖して沈降または浮遊する菌体の有無を目視で観察することで行った。また、試験は同一試験を２度繰り返し行った。
比較のため、抗レジオネラ菌活性を有する物質として知られている、オークモスアブソリュート、シンナミックアルデヒド及びクロルヘキシジングルコン酸塩についても同様に試験を行った。
【００９９】
各化合物と比較物質のL.pneumophilaに対するＭＩＣ測定結果を表１に示す。
【０１００】
【表１１】
2010202562.tif 000024
【０１０１】
表１の結果から、本発明の抗菌剤の有用性が示された。
【０１０２】
次に、本発明の応用範囲について、応用例を挙げて本発明を更に詳細に説明するが、本発明はこれらの応用例により何ら限定されるものではない。本発明の抗菌剤入り製品を各処方にしたがい製造した。なお、処方例は全て重量部で示した。
【０１０３】
〔応用例１〕抗菌スプレー剤
処方例１にしたがい、エチルアルコールに香料、本発明の各種化合物を室温にて混合溶解したスプレー基剤に、無水ケイ酸を０．２％配合し、スプレー容器内の圧力は３５℃で８ｋｇ／ｃｍ2以下になるようにＬＰＧとイソペンタンを封入して本発明の抗菌スプレー剤を調製した。
【０１０４】
【表１２】
2010202562.tif 000025
【０１０５】
〔応用例２〕浴用剤ａ
処方例２にしたがい、硫酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウムに、香料などを添加し混合した浴槽投入剤基剤を用意し、本発明の各種化合物を０．２％配合し、本発明の浴用剤ａを製造した。
【０１０６】
【表１３】
2010202562.tif 000026
【０１０７】
〔応用例３〕浴用剤ｂ
処方例３にしたがい、エチルアルコールに香料、本発明の各種化合物を室温にて混合溶解した浴槽投入基剤に、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油０．１％、精製水を３０．０％配合し、本発明の浴用剤ｂとした。
【０１０８】
【表１４】
2010202562.tif 000027
【０１０９】
〔応用例４〕消毒剤
処方例４にしたがい、エチルアルコールに非イオン性界面活性剤としてポリオキシエチレンラルリルエーテルリン酸ナトリウムを加え溶解した。これに、エチルアルコールに溶解した本発明の各種化合物を加えて混合溶解した。さらに精製水を加え溶解し、本発明のクーリングタワー消毒剤とした。
【０１１０】
【表１５】
2010202562.tif 000028
【産業上の利用可能性】
【０１１１】
本発明の抗菌剤により、日常的に使用しても副作用がなく、安全性があり、しかも、レジオネラ属菌の増殖を強力に阻止できる抗レジオネラ属菌剤を提供することができる。
また、本発明の抗菌剤を含有するレジオネラ属菌抗菌組成物を添加することにより、冷凍装置の循環冷却水や、２４時間風呂の循環温水などの冷温水系、蓄熱水系等に生存しているレジオネラ属菌を防除し、その増殖を防止することができる。