(57)【要約】【課題】  抗腫瘍活性を有する海産海綿動物由来の新規化合物を提供する。【解決手段】  ヤスピス属に属する海綿動物抽出液から単離した下記式（I）で表される化合物又はその製薬学的に許容される塩。【化１】2010270058.tif 000011（式中、R1、R2、R3、R4、R5、R6はそれぞれ独立にOH、H、CH3から選択されるいずれか任意のものであるか、R1とR2、R3とR4、R5とR6がそれぞれ結合して形成された二重結合のものであるか、又は、R1、R4はそれぞれ独立にOH、H、CH3から選択されるいずれか任意のものであり、R2とR3、R5とR6はそれぞれ結合して形成された二重結合のもののいずれかを表す。）【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式（I）で示される化合物またはその製薬学的に許容される塩。
【化１】
2010270058.tif 000008
（式中、R1、R2、R3、R4、R5、R6はそれぞれ独立にOH、H、CH3から選択されるいずれか任意のものであるか、R1とR2、R3とR4、R5とR6がそれぞれ結合して形成された二重結合のものであるか、又は、R1、R4はそれぞれ独立にOH、H、CH3から選択されるいずれか任意のものであり、R2とR3、R5とR6はそれぞれ結合して形成された二重結合のもののいずれかを表す。）
【請求項２】
一般式（II）で示される請求項１の化合物またはその製薬学的に許容される塩。
【化２】
2010270058.tif 000009
（式中、R1とR2、R3とR4はそれぞれ結合して形成された二重結合のものであるか、又は、R2とR3が結合して形成された二重結合であり、R1、R4はそれぞれ独立にOH、H、CH3から選択されるいずれか任意のものであるもののいずれかを示す。）
【請求項３】
請求項１又は２記載の化合物又はその製薬学的に許容される塩を有効成分とする医薬組成物。
【請求項４】
請求項１又は２記載の化合物又はその製薬学的に許容される塩を有効成分とする抗腫瘍剤。
【請求項５】
海産の海綿動物、好ましくは、ヤスピス属に属し、請求項１又は２の化合物を生産する能力を有する海綿動物を抽出し、その抽出物から請求項１又は２の化合物を単離することを特徴とする、請求項１又は２の化合物の製造法。
【請求項６】
請求項１又は２の化合物より誘導されることを特徴とする一般式（III）で表される化合物又はその製薬学的に許容される塩。
【化３】
2010270058.tif 000010
（式中、
R9及びR10、R11及びR12 、R13及びR14はそれぞれ（以下ハロゲンをXと略称する）(X,X)、(H,X)、(X,H)、(OH,H)、(H,OH)、(X,OH)、(OH,X)、(H,NH2)、(NH2,H) のいずれかの組み合わせ、又は両者が-O-と結合したエポキシから選ばれる任意のものであり、
R７は、-NH、-N（低級アルキル）-Oから選ばれる任意のものであり、
R8は、-CH2NH2、-CH2NH(低級アルキル)、-CH2N (低級アルキル)2、-CH2OH、-CH2O(低級アルキル)から選ばれる任意のものである。）
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規なイソプレニルアルカロイド、その製造方法および用途に関する。本発明のイソプレニルアルカロイド化合物は癌細胞の増殖阻害作用を有し、医薬特に抗腫瘍活剤として有用である。
【背景技術】
【０００２】
これまでの精力的研究により、多くの抗腫瘍活性を有する化合物が実用化されている。一方、現在臨床で使用されている抗癌剤は癌の一時的な退縮、消失が見られるものの正常な細胞に対しても非選択的な毒性を併せ持つことから重篤な副作用を引き起こし、使用が制限されている。また、抗癌剤が無効な自然耐性癌の他にも、再発症を中心として見られる抗癌剤に対する耐性の獲得も臨床上の問題となっている。このような状況下、新たな抗腫瘍剤の創製が今なお切望されている。
海綿からの抽出物については多数の報告があり、抗腫瘍活性を有する化合物が得られたという報告も多数ある（特許文献１〜１５参照）。しかし、いずれも本願発明の化合物とは骨格が異なるものである。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
【特許文献１】特開平０５−００４９９８号
【特許文献２】特開平０５−００９１９３号
【特許文献３】特開平０５−０５９０３７号
【特許文献４】特開平０５−０５９０８１号
【特許文献５】特開平０５−２１３９８８号
【特許文献６】特開平０６−００１７２２号
【特許文献７】特開平０６−３０５９７０号
【特許文献８】特開平０８−１９８７９８号
【特許文献９】特開平０８−２６９０８５号
【特許文献１０】特開昭６３−１９８６７８号
【特許文献１１】特開平０１−０５２７８１号
【特許文献１２】特開２００１−３０２６６３号
【特許文献１３】特開２００１−５２７０７６号
【特許文献１４】特開２００３−２３８５８８号
【特許文献１５】特開２００４−２３１５５２号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明は、天然物由来の新規物質を見出し、抗腫瘍活性を有する新規化合物を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明者らは海産海綿動物の抽出液より、下記式（１）の構造を有する新規化合物を単離し、その活性を探索したところ、抗腫瘍活性を有することを見出し、本発明を完成させた。
【０００６】
本発明は下記式（１）で表される新規化合物またはその製薬的に許容される塩に関する。以下、下記式（１）で表される化合物を化合物１と略称する。
【０００７】
【化１】
2010270058.tif 000002
【０００８】
本発明は、以下の発明を要旨とする。
（１）一般式（I）で示される化合物またはその製薬学的に許容される塩。
【０００９】
【化２】
2010270058.tif 000003
（式中、R1、R2、R3、R4、R5、R6はそれぞれ独立にOH、H、CH3から選択されるいずれか任意のものであるか、R1とR2、R3とR4、R5とR6がそれぞれ結合して形成された二重結合のものであるか、又は、R1、R4はそれぞれ独立にOH、H、CH3から選択されるいずれか任意のものであり、R2とR3、R5とR6はそれぞれ結合して形成された二重結合のもののいずれかを表す。）
（２）一般式（II）で示される（１）の化合物またはその製薬学的に許容される塩。
【００１０】
【化３】
2010270058.tif 000004
（式中、R1とR2、R3とR4はそれぞれ結合して形成された二重結合のものであるか、又は、R2とR3が結合して形成された二重結合であり、R1、R4はそれぞれ独立にOH、H、CH3から選択されるいずれか任意のものであるもののいずれかを示す。）
（３）（１）又は（２）記載の化合物又はその製薬学的に許容される塩を有効成分とする医薬組成物。
（４）（１）又は（２）記載の化合物又はその製薬学的に許容される塩を有効成分とする抗腫瘍剤。
（５）ヤスピス属(Jaspis sp.)に属し、（１）又は（２）の化合物を生産する能力を有する海綿動物を有機溶媒で抽出し、その抽出物から（１）又は（２）の化合物を単離することを特徴とする、（１）又は（２）の化合物の製造法。
（６）（１）又は（２）の化合物より誘導されることを特徴とする一般式（III）で表される化合物又はその製薬学的に許容される塩。
【００１１】
【化４】
2010270058.tif 000005
（式中、
R9及びR10、R11及びR12 、R13及びR14はそれぞれ（以下ハロゲンをXと略称する）(X,X)、(H,X)、(X,H)、(OH,H)、(H,OH)、(X,OH)、(OH,X)、(H,NH2)、(NH2,H) のいずれかの組み合わせ、又は両者が-O-と結合したエポキシから選ばれる任意のものであり、
R７は、-NH、-N（低級アルキル）-Oから選ばれる任意のものであり、
R8は、-CH2NH2、-CH2NH(低級アルキル)、-CH2N (低級アルキル)2、-CH2OH、-CH2O(低級アルキル)から選ばれる任意のものである。）
【発明の効果】
【００１２】
本発明化合物は抗腫瘍活性を有するので、抗腫瘍剤として使用できる。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
本発明の化合物１は海綿動物、好ましくはヤスピス属に属する当該物質を産生する海綿動物を有機溶媒で抽出し、その抽出物より定法によって得ることができる。
【００１４】
海綿動物から本発明化合物を単離するには、海綿動物代謝産物の抽出、精製の手段が利用できる。例えば、有機溶媒による抽出、分配、シリカゲルやODSを用いたカラムクロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィー、ゲルろ過クロマトグラフィーなどを適宜組み合わせて、あるいは反復して使用することで精製できる。
【００１５】
上記海綿動物から単離した本発明化合物を原料としてさらに、官能基に対して化学修飾することにより本発明化合物を中間体とする誘導体を合成することができる。本発明化合物には二重結合、アミノ基などの反応しやすい官能基が存在するのでそれらの化学修飾を容易に行うことができる。
誘導体化の手法としては、自体公知の方法、例えば、実験化学講座第４版２５（日本化学会編）31-34頁の有機リチウム化合物を用いる合成反応あるいはそれに準ずる反応、実験化学講座第5版１３（日本化学会編）355−356頁、420−422頁のジハロゲン化反応あるいはそれに準ずる反応、実験化学講座第5版１３（日本化学会編）428−430頁のハロゲン化水素の付加反応あるいはそれに準ずる反応、実験化学講座第４版２０（日本化学会編）75−76頁のBrownヒドロホウ素化反応あるいはそれに準ずる反応、Comprehensive
Organic Synthesis，（1991年），４巻，300-305頁のヒドロキシ水銀化−脱水銀化反応あるいはそれに準ずる反応、Journal of Organic Chemistry，（2005年），70巻，6721−6734頁のハロゲン化ヒドリンを経由するヒドロキシル化反応あるいはそれに準ずる反応、Journal of American Chemical Society，（1964年)，86巻，3565−3566頁のBrownヒドロホウ素化アミノ化反応、実験化学講座第４版２０（日本化学会編）213−214頁のエポキシドの合成反応あるいはそれに準ずる反応などが挙げられる。
【００１６】
以下の実施例によって本発明を具体的に説明するが、本発明の範囲はこれらの実施例によって限定されるものではない。
【実施例１】
【００１７】
愛媛県佐田岬沖で採集したヤスピス属の海綿動物1.8 kgをメタノールおよびエタノールで順次抽出し、抽出物を濃縮後、水(H2O) と酢酸エチルで二層分配した。得られた酢酸エチル層を減圧濃縮後、75％メタノール水溶液と酢酸エチルで二層分配した。75％メタノール水溶液画分を、逆相HPLC[C18 JAI, MeOH/H2O]を用いて、保持時間8.60〜9.32分のピークを分取した。得られたフラクションを分取薄層クロマトグラフィー（移動相：MeOH/CHCl3 1/4）によって精製した結果、ディユオアステラミン  (duoasteramine 15.1 mg)を得た。上記の実施例で得られたディユオアステラミンの化学構造式と物理化学的性状を以下に示す。
【実施例２】
【００１８】
単離した化合物１の物理的性状は下記の通りであった。またNMRスペクトルの結果を表１（1H NMRスペクトル（400 MHz, CD3OD）、13C NMRスペクトル（100 MHz, CD3OD））に示す。これらの情報から化合物１の構造を以下のとおり決定した。
【００１９】
化合物１
（１）   色及び性状：黄色オイル状
（２）   分子式：C23H36N2O2
（３）   高分解能質量分析（Waters LTC-Premier XE）
実測値  m/z 373.2897（C23H36N2O2 + H）
理論値  m/z 373.2857
（４）   赤外吸収スペクトルλmax(KBr)cm-1：3346, 2964, 2928, 2871, 1652, 1598, 1537, 1449, 1386, 1310, 1247,1135, 973
（５）   Rf値（Merck silica gel 60F254) ：0.20（展開溶媒：クロロホルム/メタノール＝4/1）
（６）   構造式
【００２０】
【化５】
2010270058.tif 000006
【００２１】
【表１】
2010270058.tif 000007
【実施例３】
【００２２】
HeLa細胞（ヒト子宮癌細胞）を用いて化合物１の細胞増殖阻害作用を評価した。HeLa細胞を、10% 牛胎児血清・MEM+GlutaMax-1 (Invitrogen) with NEAA(Non-essential amino acid, Invitrogen)培地にて、1000 cells/well/50uLの濃度で96穴培養プレートに巻き込み、37℃で24時間培養後、各種濃度に調製した試験化合物を50uL/wellでプレートに加え、37℃で72時間培養した。培養終了後、WST-8（Cell counting kit-8, 同仁化学研究所）を10uL/wellでプレートに加えて、吸光度(450nm)を測定し、試料濃度と阻害率からIC50値（５０％阻害のための濃度）を求めた。その結果、化合物１は234 mMにおいて50％の細胞増殖阻害作用を示した。
【産業上の利用可能性】
【００２３】
本発明の化合物は抗腫瘍活性を有する。新規抗腫瘍剤を提供することができる。