(57)【要約】【課題】本発明は、天然の植物素材を利用することにより、安全かつ手軽に摂取することが出来る糖尿病および／または高脂血症および／または高血圧、あるいはメタボリックシンドロームの治療、改善および／または予防用組成物を提供することを目的とする。【解決手段】オイゲノールを実質的に含まないチョウジ抽出物、特に、特定の抽出方法により得られるチョウジ抽出物を有効成分として含有する、糖尿病および／または高脂血症および／または高血圧、あるいはメタボリックシンドロームの治療、改善および／または予防用組成物を提供する。さらに本発明は、かかる組成物を有効成分として配合した食品、特に、糖尿病および／または高脂血症および／または高血圧、あるいはメタボリックシンドロームの予防食または患者食に関する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
オイゲノール（Eugenol）を実質的に含まないチョウジ抽出物を有効成分として含有する、高脂血症および／または糖尿病および／または高血圧、あるいはメタボリックシンドロームの治療、改善および／または予防用組成物。
【請求項２】
下記の工程：
（１）チョウジを１種以上の有機溶媒に浸漬し、抽出する工程、
（２）第（１）工程から得られた抽出液を除去し、チョウジ残渣をさらに水、または水と水溶性有機溶媒との混合溶液に浸漬し、抽出する工程、および
（３）第（２）工程から得られた抽出液を単離する工程
を含むことを特徴とする方法により得られるチョウジ抽出物を有効成分として含有する、高脂血症および／または糖尿病および／または高血圧、あるいはメタボリックシンドロームの治療、改善および／または予防用組成物。
【請求項３】
さらに、（４）第（２）工程で単離された抽出液から溶媒を除去する工程、を含むことを特徴とする、請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
工程（１）を同一または異なる有機溶媒を用いて、２回以上繰り返すことを特徴とする、請求項２または３に記載の組成物。
【請求項５】
工程（１）の有機溶媒が、エタノールおよび／または酢酸エチルである、請求項２〜４のいずれかに記載の組成物。
【請求項６】
工程（２）の水溶性有機溶媒が、炭素数１〜３の低級アルコールである、請求項２〜５のいずれかに記載の組成物。
【請求項７】
オイゲノールの含有量が０．５質量％以下である、請求項１〜６のいずれかに記載の組成物。
【請求項８】
チョウジの抽出物が、カスアリクチン（Casuarictin）、オイゲニイン（Eugeniin）、テリマグランジン（Tellimagrandin）および１，３−ジ−Ｏ−ガロイル−４，６−Ｏ−（Ｓ）−ヘキサヒドロキシジフェノイル−β−Ｄ−グルコースからなる群より選択される１種以上のポリフェノール類を含む、請求項１〜７のいずれかに記載の組成物。
【請求項９】
請求項１〜８のいずれかに記載の組成物を配合した食品。
【請求項１０】
食品が、高脂血症および／または糖尿病および／または高血圧、あるいはメタボリックシンドロームの予防食または患者食である、請求項９記載の食品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、オイゲノール（Eugenol）を実質的に含まないチョウジ抽出物を有効成分として含有する、糖尿病および／または高脂血症および／または高血圧、あるいはメタボリックシンドロームの治療、改善および／または予防用組成物に関する。特に、特定の抽出方法により得られるチョウジ抽出物を有効成分として含有する、糖尿病および／または高脂血症および／または高血圧、あるいはメタボリックシンドロームの治療、改善および／または予防用組成物に関する。さらに本発明は、かかる組成物を有効成分として配合した食品、特に、糖尿病および／または高脂血症および／または高血圧、あるいはメタボリックシンドロームの予防食または患者食に関する。
【背景技術】
【０００２】
メタボリックシンドロームとは、一般に肥満、高血圧、高脂血症および糖尿病（インスリン抵抗性）が重複する病態であり、動脈硬化性疾患（狭心症、心筋梗塞、脳卒中など）の重要なリスクファクターである。メタボリックシンドロームの具体的な診断基準は、人種差などもあり各国で異なるが、日本では内臓脂肪の蓄積を必須項目とし、それに高血圧（拡張期／収縮期血圧）、血清脂質異常（トリグリセリド値／ＨＤＬコレステロール値）、および高血糖（空腹時血糖値）の３項目のうちいずれか２項目以上に該当する場合をメタボリックシンドロームとするのが一般的である。
【０００３】
現在、メタボリックシンドロームを改善および／または予防するためのアプローチとしては、食事や運動などの生活習慣の改善指導による肥満の解消と共に、高血圧、高脂血症および糖尿病に個別に対処するのが一般的である。従って、これらの複数の要因（例えば、糖尿病と高脂血症の両方または糖尿病と高血圧の両方）の諸症状を同時に改善しうる医薬品や食品の開発が求められている。
【０００４】
これまでに、例えば、大豆胚芽タンパク質が血中脂質や血糖値を改善しうるとして、イソフラボンおよびサポニンの含有量が共に０．５％以下である大豆胚芽タンパク質を有効成分とするメタボリックシンドローム改善用組成物が報告されている（例えば、特許文献１参照）。また、甘草疎水性抽出物、ウコン抽出物、クローブ抽出物およびシナモン抽出物が内臓脂肪を低減させるとして、甘草疎水性抽出物、ウコン抽出物、クローブ抽出物およびシナモン抽出物からなる群より選択される少なくとも１種を含有することを特徴とするマルチプル・リスク・ファクター症候群を予防または改善するための組成物が報告されている（例えば、特許文献２参照）。このように従来公知の食品素材や生薬成分などの天然物に着目した医薬品や食品の開発は、その安全性の見地からも、メタボリックシンドロームの改善および／または予防に対するアプローチの一つとして注目されている。
【０００５】
チョウジは、フトモモ科、Syzygium aromaticum Merrill et Perryのつぼみであり、精油１５〜２０％を含み、その主成分はオイゲノール（３７〜６８％：日本薬局方より）であり、古くから芳香性健胃薬として使用されている。またクローブという名で、香辛料としても使用されている。これまでにチョウジに含まれるオイゲニイン（Eugeniin）が、α−グルコシダーゼ阻害活性を示すこと、同じくオレアノール酸（Oleanoic acid）が、リパーゼ阻害活性を示すことが報告されている（例えば、特許文献３、４参照）。しかしながら、特許文献２において内臓脂肪低減効果と血糖降下作用が確認されたのは、クローブ（すなわち、チョウジ）の酢酸エチル抽出物及びエタノール抽出物であり、その水溶性成分についての言及はない。特許文献４でリパーゼ阻害活性が報告されたオレアノール酸もまた、非水溶性のトリテルペン類である。従って、これまでにチョウジの水溶性成分が高脂血症のような脂質代謝異常の治療、改善および／または予防効果を示すことは知られていない。
【０００６】
このようにチョウジ抽出物の活性に関する報告は多いが、そのほとんどはオイゲノールなどの精油成分、オレアノール酸などの非水溶性テルペン類、またはそれらを主成分とする抽出物に関するものであり、水溶性成分の活性に着目したものは少ない。そのような例として、チョウジを低級アルコールおよび／または水で抽出した抽出物から精油成分を除去した抽出物、あるいは予め精油成分を除去したチョウジを低級アルコールおよび／または水で抽出した抽出物を含有することを特徴とする細胞増殖促進剤が報告されている（例えば、特許文献５参照）。また本発明者は、オイゲノールを含まないチョウジ抽出物にグリコーゲンホスホリラーゼ阻害活性があり、in vivoの糖尿病モデルマウス（db/dbマウス）において種々の糖尿病症状を著しく改善すること、従って糖質代謝異常の予防または治療に有用であるという知見に基づくグリコーゲンホスホリラーゼ阻害剤に関する発明を既に特許出願している（例えば、特許文献６参照）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】特許第３９４４８６４号公報
【特許文献２】国際公開第２００２／０４７６９９号
【特許文献３】特開２０００−７２６８２号公報
【特許文献４】特開平１０−２６５３２８号公報
【特許文献５】特開２００８−１３５２２号公報
【特許文献６】特願２００７−３１９１２３号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明は、糖尿病および／または高脂血症および／または高血圧、あるいはメタボリックシンドロームの新たな制御素材を提供すること、すなわち天然の植物素材を利用することにより、安全かつ手軽に摂取することが出来る糖尿病および／または高脂血症および／または高血圧、あるいはメタボリックシンドロームの治療、改善および／または予防用組成物、およびかかる組成物を配合した予防または患者用の食品を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者は、これまで糖質代謝の制御素材の探索を様々な食材・和漢薬に対して行ってきたところ、上記に述べたようにチョウジ抽出物（特にオイゲノールを含まないもの）にグリコーゲンホスホリラーゼ阻害活性があること、そしてin vivoの糖尿病モデルマウス（db/dbマウス）における種々の糖尿病症状を著しく改善し、従って糖質代謝異常の予防または治療に有用であることを見出した。db/dbマウスは、肥満を伴う糖尿病モデル動物であり、レプチン受容体の遺伝子に異常があるためレプチンの働きが悪く、過食、肥満、インスリン抵抗性および高血糖になることが知られている。またdb/dbマウスは、成長に伴って高血圧を発症することも知られている（参考文献１：Bagi, Z. et al., Type 2 diabetic mice have increased arteriolar tone and blood pressure: enhanced release of COX-2-derived constrictor prostaglandins.  Arterioscler Thromb Vasc Biol, 2005;25:1610-1616、参考文献２：Su, W. et al., Hypertension and disrupted blood pressure circadian rhythm in Type 2 diabetic db/db mice.  Am J Physiol Heart Circ Physiol. 2008;295:H1634-1641）。本発明者はこのdb/dbマウスを用いてさらに研究を進めた結果、意外にも、オイゲノールを実質的に含まないチョウジ抽出物が糖尿病のような糖質代謝異常のみならず高脂血症のような脂質代謝異常の諸症状や、さらには高血圧をも改善することを見出し、本発明を完成させた。
【００１０】
すなわち、本発明は以下に示すとおりである。
１．オイゲノールを実質的に含まないチョウジ抽出物を有効成分として含有する、高脂血症および／または糖尿病および／または高血圧、あるいはメタボリックシンドロームの治療、改善および／または予防用組成物。
２．下記の工程：
（１）チョウジを１種以上の有機溶媒に浸漬し、抽出する工程、
（２）第（１）工程から得られた抽出液を除去し、チョウジ残渣をさらに水、または水と水溶性有機溶媒との混合溶液に浸漬し、抽出する工程、および
（３）第（２）工程から得られた抽出液を単離する工程
を含むことを特徴とする方法により得られるチョウジ抽出物を有効成分として含有する、高脂血症および／または糖尿病および／または高血圧、あるいはメタボリックシンドロームの治療、改善および／または予防用組成物。
３．さらに、（４）第（３）工程で単離された抽出液から溶媒を除去する工程、を含むことを特徴とする、上記２に記載の組成物。
４．工程（１）を同一または異なる有機溶媒を用いて、２回以上繰り返すことを特徴とする、上記２または３に記載の組成物。
５．工程（１）の有機溶媒が、エタノールおよび／または酢酸エチルである、上記２〜４のいずれかに記載の組成物。
６．工程（２）の水溶性有機溶媒が、炭素数１〜３の低級アルコールである、上記２〜５のいずれかに記載の組成物。
７．オイゲノールの含有量が０．５質量％以下である、上記１〜６のいずれかに記載の組成物。
８．チョウジの抽出物が、カスアリクチン（Casuarictin）、オイゲニイン（Eugeniin）、テリマグランジン（Tellimagrandin）および１，３−ジ−Ｏ−ガロイル−４，６−Ｏ−（Ｓ）−ヘキサヒドロキシジフェノイル−β−Ｄ−グルコースからなる群より選択される１種以上のポリフェノール類を含む、上記１〜７のいずれかに記載の組成物。
９．上記１〜８のいずれかに記載の組成物を配合した食品。
１０．食品が、高脂血症および／または糖尿病および／または高血圧、あるいはメタボリックシンドロームの予防食または患者食である、上記９記載の食品。
【発明の効果】
【００１１】
本発明により提供される組成物は、糖尿病のような糖質代謝異常のみならず高脂血症のような脂質代謝異常の諸症状や、さらには高血圧をも改善する。そのため高脂血症および／または糖尿病および／または高血圧の治療および／または予防に、あるいはそれらの諸症状の改善が必要とされるメタボリックシンドロームの改善および／または予防に極めて有望である。本発明は古くから生薬または香辛料として摂取されてきた植物素材であるチョウジ抽出物を有効成分とするものであるから、食品などに添加し、安全かつ手軽に摂取しうることが期待される。特に、本発明により提供される組成物は、従来公知のチョウジの主要活性成分であるオイゲノールを実質的に必要としない。したがって、本発明は、香料、精油、または殺菌剤、麻酔剤などの医薬品として、あるいは各種医薬品などの製造原料として需要のあるオイゲノールの抽出後は、従来、廃棄されていたその抽出残渣を利用することが出来ることから、産業的・経済的にも優れている。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】チョウジに含まれている公知のポリフェノール類の構造を示す。
【図２】（Ａ）は化合物（２）〜（７）の標準混合サンプルのクロマトグラム、（Ｂ）は例１で得られたチョウジ抽出物のクロマトグラムを示す。
【図３】（Ａ）は化合物（１）と（５）の標準混合サンプルのクロマトグラム、（Ｂ）は例１で得られたチョウジ抽出物のクロマトグラムを示す。
【図４】（Ａ）はチョウジ抽出物投与群（５％および１０％）ならびに非投与群のdb/dbマウスにおける空腹時血糖値の経日変化のグラフを示す。（Ｂ）はチョウジ抽出物投与群（５％および１０％）ならびに非投与群のmistyマウスにおける空腹時血糖値の経日変化のグラフを示す。
【図５】（Ａ）はチョウジ抽出物投与群（５％および１０％）ならびに非投与群のdb/dbマウスにおけるヘモグロビンA1cの経日変化のグラフを示す。（Ｂ）はチョウジ抽出物投与群（５％および１０％）ならびに非投与群のmistyマウスにおけるヘモグロビンA1cの経日変化のグラフを示す。
【図６】（Ａ）はチョウジ抽出物投与群（５％および１０％）ならびに非投与群のdb/dbマウスにおける実験終了後の血清トリグリセリド値を示す。（Ｂ）はチョウジ抽出物投与群（５％および１０％）ならびに非投与群のmistyマウスにおける実験終了後の血清トリグリセリド値を示す。
【図７】（Ａ）はチョウジ抽出物投与群（５％および１０％）ならびに非投与群のdb/dbマウスにおける実験終了後の血清遊離脂肪酸値を示す。（Ｂ）はチョウジ抽出物投与群（５％および１０％）ならびに非投与群のmistyマウスにおける実験終了後の血清遊離脂肪酸値を示す。
【図８】（Ａ）はチョウジ抽出物投与群（５％および１０％）ならびに非投与群のdb/dbマウスにおける収縮期血圧および拡張期血圧の経日変化のグラフを示す。（Ｂ）はチョウジ抽出物非投与の各db/dbマウスにおける収縮期血圧の経日変化のグラフを示す。（Ｃ）はチョウジ抽出物投与（５％）の各db/dbマウスにおける収縮期血圧の経日変化のグラフを示す。（Ｄ）はチョウジ抽出物投与（１０％）の各db/dbマウスにおける収縮期血圧の経日変化のグラフを示す。
【図９】チョウジ抽出物投与群（５％）および非投与群のSHRラットにおける収縮期血圧の６週目までの経日変化のグラフを示す。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
本発明のチョウジは、フトモモ科（Myrtaceae）の植物、Syzygium aromaticum Merrill et Perry（Eugenia caryophyllata Thunberg）のつぼみであり、生薬または香辛料として一般に市販されているものを使用することが出来る。日本薬局方、生薬総則の「チョウジ」に掲載された規格に適合するものを使用するのが好ましい。抽出に際してはそのまま、または適宜粉砕して使用する。粉末として市販されているものをそのまま使用してもよい。日本薬局方、生薬総則の「チョウジ末」に掲載された規格に適合するものを使用するのが好ましい。
【００１４】
本発明は、オイゲノールをはじめとする精油成分を実質的に含まないチョウジ抽出物を有効成分として使用する。オイゲノール（Eugenol）は、下記：
【００１５】
【化１】
2010202639.tif 000002
【００１６】
に示す化学構造を有し、殺菌剤、麻酔剤などの医薬品としての用途が知られているが、本発明者が特許文献６で既に報告したようにグリコーゲンホスホリラーゼ阻害活性を示さない。またオイゲノールは独特の風味を有するため、特に食品へ配合を考慮した場合、オイゲノールを実質的に含まないチョウジ抽出物の使用は有利である。
【００１７】
かかるオイゲノールを実質的に含まないチョウジ抽出物は、例えば、チョウジを水、または水と水溶性有機溶媒との混合溶液による浸漬・抽出工程に付す前に、水蒸気蒸留や、有機溶媒での浸漬・抽出工程などの、チョウジからオイゲノールをはじめとする精油成分を単離するための公知の手法に付すことによって容易に得られる。
【００１８】
特に、（１）チョウジを１種以上の有機溶媒に浸漬し、抽出する工程、（２）第（１）工程から得られた抽出液を除去し、チョウジ残渣をさらに水、または水と水溶性有機溶媒との混合溶液に浸漬し、抽出する工程、および（３）第（２）工程から抽出液を単離する工程を含むことを特徴とする方法により得られるチョウジ抽出物を有効成分として使用するのが好ましい。かかるチョウジ抽出物は、オイゲノールを実質的に含まない。必要に応じて、さらに（４）第（３）工程で単離された抽出液から溶媒を除去する工程に付し、適切な濃度に調製した濃縮物、あるいは溶媒を完全に除去した乾燥物または乾燥末とすることが出来る。なお、これらの第（１）〜（４）工程は、必要に応じて各工程の一部または全部を適宜反復してもよい。例えば、チョウジからオイゲノールをはじめとする精油成分をより完全に除去するため、第（１）工程を同一または異なる溶媒で複数回、好ましくは２回以上繰り返して実施してもよい。また、チョウジからより多くの水溶性成分を抽出するため、第（２）工程の浸漬・抽出操作を複数回、好ましくは２回以上繰り返して実施してもよい。所望であれば、さらに透析、クロマトグラフィーなどの慣用の精製工程をかかる方法に適宜加えてもよい。
【００１９】
本発明の第（１）工程で用いる有機溶媒は、オイゲノールをはじめとする精油成分を溶解しうる有機溶媒であれば特に限定されないが、例えば、エタノール、プロパノールまたはイソプロパノールなどの低級アルコールや、酢酸エチルなどの酢酸エステル類などであり、特にエタノールまたは酢酸エチルが好ましい。
【００２０】
有機溶媒の使用量は、用いる有機溶媒の種類、チョウジの重量、抽出温度などに応じて適宜設定することが出来る。通常はチョウジが浸漬するのに十分な量であればよく、例えばチョウジの重量の０．５〜２０倍量（質量基準）の範囲の量を使用するのが抽出効率の点から好ましい。抽出時間は、オイゲノールを有機溶媒中に浸出させるのに十分であればよく、好ましくは６時間から３日間程度、より好ましくは１２時間から４８時間である。但し、オイゲノールの有機溶媒中への浸出が十分でなければ、第（１）工程を繰り返し実施すればよく、従って総抽出時間・回数に特に制限はない。抽出温度・圧力は各溶媒の沸点などを考慮して適宜設定することが出来るが、通常、周囲温度（１０〜３０℃）で常圧下に行えばよい。
【００２１】
本発明の第（２）工程では、まず第（１）工程から得られた抽出液を、デカント、ろ過などの慣用の方法によりチョウジ残渣から分離、除去する。次いでチョウジ残渣はそのままか、あるいは減圧乾燥、風乾などの慣用の方法により溶媒を除去した後、水、または水と水溶性有機溶媒との混合溶液による浸漬・抽出工程に付せばよい。ここで水溶性有機溶媒は、水と混合し、均一相を形成しうる極性溶媒であればよく、例えば、炭素数１〜３の低級アルコール（メタノール、エタノール、プロパノール、またはイソプロパノール）、炭素数３〜５の低級ケトン（アセトン、メチルエチルケトンなど）が挙げられる。炭素数１〜３の低級アルコールを使用するのが好ましく、特に水とメタノールまたはエタノールの混合溶媒を使用するのが好ましい。混合溶液を使用する場合、水と水溶性有機溶媒との比率は、通常３：７〜７：３、好ましくは１：２〜２：１、特に好ましくは１：１（容積比）である。従って、本発明の第（２）工程において好適な浸漬・抽出溶媒は、例えば５０％メタノール水溶液、５０％エタノール水溶液などである。
【００２２】
水、または水と水溶性有機溶媒の使用量は、用いる溶媒の種類、チョウジ残渣の量、抽出温度などに応じて適宜設定することが出来る。通常はチョウジ残渣が浸漬するのに十分な量であればよく、例えばチョウジまたはチョウジ残渣の重量の０．５〜２０倍量（質量基準）の範囲の量を使用するのが抽出効率の点から好ましい。抽出時間は、チョウジのクロモン類、ポリフェノール類をはじめとする水溶性成分を溶媒中に浸出させるのに十分であればよく、好ましくは６時間から７日間程度、より好ましくは１２時間から７２時間である。但し、水溶性成分の溶媒中への浸出が十分でなければ、第（２）工程における浸漬・抽出作業を繰り返し実施すればよく、従って総抽出時間・回数に特に制限はない。抽出温度・圧力は各溶媒の沸点などを考慮して適宜設定することが出来るが、通常、周囲温度（１０〜３０℃）で常圧下に行えばよい。
【００２３】
本発明の第（３）工程では、第（２）工程から得られた抽出液を、デカント、ろ過などの慣用の方法によりチョウジ残渣から分離、単離し、本発明の組成物に含まれるチョウジ抽出物を得る。次いで、かかるチョウジ抽出物は必要に応じて、さらに第（４）工程、すなわち蒸留、減圧蒸留、凍結乾燥などの慣用の方法に従う溶媒の除去工程に付し、適切な濃度に調製した濃縮物、または溶媒を完全に除去した乾燥物とすることが出来る。従って、本発明において「チョウジ抽出物」とは、チョウジの水、または水と水溶性有機溶媒との混合溶液による溶媒抽出物それ自体、かかる溶媒抽出物から溶媒を一部または全部除去した濃縮物、その濃縮物を乾燥した乾燥物、またはそれを粉砕した乾燥末のいずれであってもよいが、濃縮物、乾燥物または乾燥末を使用するのが好ましい。
【００２４】
本発明において使用されるチョウジには、先に示したオイゲノールに加えて、図１に示されるポリフェノール類（クロモン類、エラジタンニン類など）が含まれていることが既に知られているが、本発明の組成物に含まれるチョウジ抽出物は、後述（例えば、例２参照）に示すように、これらを含むものであることが好ましい。特にこれらの中でも、カスアリクチン、オイゲニイン、テリマグランジンおよび１，３−ジ−Ｏ−ガロイル−４，６−Ｏ−（Ｓ）−ヘキサヒドロキシジフェノイル−β−Ｄ−グルコースからなる群より選択される１種以上のポリフェノール類を含むものであるのが好ましい。上記で述べたように、これらのポリフェノール類が優れたグリコーゲンホスホリラーゼ阻害活性を有することを、本発明者は既に報告している（特許文献６参照）。これらのポリフェノール類は、例えば、前述の特許文献３に記載された方法または当業者の技術常識に従いチョウジから単離することも出来、また長良サイエンス（株）などの供給業者から試薬として入手することも出来る。
【００２５】
本発明の、糖尿病および／または高脂血症および／または高血圧、あるいはメタボリックシンドロームの治療、改善および／または予防用組成物は、上述のいずれかに従い得られたオイゲノールを実質的に含まないチョウジ抽出物を含むものである。ここで、「実質的に含まない」とは、抽出物を組成物に配合した際、オイゲノールの活性が本発明の組成物の効果を損なわない範囲であればよい。好ましくは、組成物の総重量に基づいて、オイゲノールが１．０質量％以下、特には０．５質量％以下であることが好ましい。従って、本発明で用いられるチョウジ抽出物は、組成物に配合したときにオイゲノールの含有量が１．０質量％以下、特には０．５質量％以下となるように適宜調製されればよい。
【００２６】
本発明の組成物は、経口および非経口（例えば、直腸投与、経皮投与）のいずれかの投与経路で、人を含む動物に投与することが出来る。本発明の組成物を医薬として提供する場合、必要に応じて薬学的に許容される適切な添加剤を用いて、投与経路に応じた適切な剤形、例えば、液剤、カプセル剤、錠剤、顆粒剤、散剤、丸剤、細粒剤、トローチ錠などの経口剤、直腸投与剤などに調製することが望ましい。
【００２７】
そのような薬学的に許容される適切な添加剤としては、例えば、賦形剤、増量剤、結合剤、湿潤化剤、崩壊剤、滑沢剤、分散剤、緩衝剤、保存剤、溶解補助剤、矯味矯臭剤、無痛化剤、安定化剤などが挙げられ、これらを所望の剤形に応じて適宜選択し、組み合わせたものを本発明の組成物の調製に使用してもよい。添加剤の具体例としては、例えば乳糖、果糖、ブドウ糖、デンプン、ゼラチン、炭酸マグネシウム、合成ケイ酸マグネシウム、タルク、ステアリン酸マグネシウム、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースまたはその塩、アラビアゴム、ポリエチレングリコール、ポリビニルピロリドン、グリセリン、エタノール、プロピレングリコール、クエン酸、塩化ナトリウム、亜硫酸ソーダ、リン酸ナトリウムなどが挙げられる。
【００２８】
医薬として使用する場合、本発明の組成物中におけるチョウジ抽出物の１日摂取量は、医薬の加工形態、対象とするヒトの年齢や疾患の重篤度などの種々の条件に応じて適宜設定すればよいが、例えば乾燥物または乾燥末の形態のチョウジの抽出物を１〜１０００mgとすることができる。
【００２９】
本発明の組成物はまた、食品に配合することも出来る。したがって本発明の組成物として、オイゲノールを実質的に含まないチョウジ抽出物それ自体、かかる溶媒抽出物から溶媒を除去した濃縮物、その濃縮物を乾燥した乾燥物、またはそれを粉砕した乾燥末を、そのまま食品に配合することも出来る。あるいは、上述の薬学的に許容される適切な添加剤に代えて、食品学的に許容される適切な添加剤と共に、チョウジ抽出物を有効成分として含有する食品組成物として利用することも出来る。
【００３０】
食品の種類は、例えば、種々の加工食品、栄養補助食品、清涼飲料水などの非アルコール飲料が挙げられるが、これらに限定されるものではない。本発明の食品は、糖尿病および／または高脂血症および／または高血圧の治療および／または予防用に、あるいはメタボリックシンドロームの改善および／または予防用に、特に糖尿病を有する患者、高脂血症を有する患者、糖尿病と高脂血症の両方を有する患者、糖尿病と高血圧の両方を有する患者、またはメタボリックシンドロームの患者、あるいはそれらの予備軍を対象とした予防食または患者食として有用である。食品中に配合する量は、食品の一日摂取量や加工形態、対象とするヒトの年齢や疾患の重篤度などの種々の条件に応じて適宜設定することが出来るが、例えば食品に対して、乾燥物または乾燥末の形態のチョウジの抽出物を、有効成分として０．０１〜３０質量％、特に０．１〜２０質量％配合するのが好ましい。
【実施例】
【００３１】
以下の実施例で、本発明の具体的態様を説明するが、それらは本発明の範囲を限定することを意図するものでなく、本発明の具体的態様をさらに詳細に説明するために提供するものである。
【００３２】
例１：オイゲノールを含まないチョウジ抽出物の調製
市販のザンジバル産チョウジ３．０ｋｇを粉砕し、１０Ｌの酢酸エチルに２４時間浸漬し、主要精油成分のオイゲノールを抽出した。この操作を３回行い、さらに４Ｌのエタノールに２４時間浸漬し、チョウジからオイゲノールを実質的に除去した。次いで、抽出残渣を１０Ｌの５０％エタノール水で２４時間浸漬した。この操作を３回行い、５０％エタノール水抽出物を濃縮後、凍結乾燥した。この操作によりチョウジ抽出物４５０ｇを、乾燥末として得た。
【００３３】
例２：チョウジ抽出物に含まれるポリフェノール類の定量
チョウジに含まれている公知のポリフェノール類：オイゲノール（Eugenol (1)）、クローブ ３（Clove 3 (2)）、ビフロリン（Biflorin (3)）、カスアリクチン（Casuarictin (4)）、オイゲニイン（Eugeniin (5)）、テリマグランジン（Tellimagrandin (6)）、１，３−ジ−Ｏ−ガロイル−４，６−Ｏ−（Ｓ）−ヘキサヒドロキシジフェノイル−β−Ｄ−グルコース（1,3-Di-O-galloyl-4,6-O-(S)-hexahydroxydiphenoyl-β-D-glucose (7)）について、例１で得られたチョウジ抽出物を分析し、その定量を以下のＨＰＬＣ条件にて行った。図１にその構造を示す。化合物（１）の標品は和光純薬工業株式会社から、また化合物（２）〜（７）の標品は長良サイエンス株式会社から購入した。
【００３４】
ＨＰＬＣ条件
ポンプ：Model LC-10AT (Shimadzu)
注入  ：Rheodyne injection valve with 100-μL loop (Cotati)
検出器：Model SPD-10A UV detector (Shimadzu) at 280 nm
カラム：Cosmosil 5C18-MS-II (150 mm×4.6 mm) (Nacalai Tesque)
定量  ：Chromatopac Model CR-8A integrator (Shimadzu)
移動相：アセトニトリル／水／トリフルオロ酢酸（６０：４４０：１，ｖ／ｖ／ｖ）
流速  ：０．８mL／分（室温）
【００３５】
図２（Ａ）は化合物（２）〜（７）の標準混合サンプルのクロマトグラム、（Ｂ）は例１で得られたチョウジ抽出物のクロマトグラムを示す。なお化合物（６）はα体とβ体の両アノマーが存在するために２ピーク検出される。一方、図３（Ａ）は化合物（１）と（５）の標準混合サンプルのクロマトグラム、（Ｂ）は例１で得られたチョウジ抽出物のクロマトグラムを示した。なお図３（Ａ）および（Ｂ）のクロマトグラムは、移動相としてアセトニトリル／水／トリフルオロ酢酸（２４０：７６０：１，ｖ／ｖ／ｖ）を用いた以外は上記と同様のＨＰＬＣ条件より得た。表１には、チョウジ抽出物中の各成分の含有量（％）を示す。
【００３６】
【表１】
2010202639.tif 000003
【００３７】
例３：自然発症２型糖尿病マウスへのチョウジ抽出物投与実験
例１で調製したオイゲノールを実質的に含まないチョウジ抽出物が、糖尿病、高脂血症および高血圧の諸症状を改善するかどうかを糖尿病モデル動物であるdb/dbマウスで検討した。またmistyマウスに対しても同様の実験を行い、正常マウスに及ぼす影響についても検討した。
【００３８】
あらかじめ血糖値の上昇を確認した自然発症２型糖尿病マウス（db/db：C57BLKS/J Iar-+Leprdb/+Leprdb）および正常マウス（misty: C57BLKS/J Iar-m+/m+）、５週齢、雄性をJapan SLC Inc.から購入し、それぞれチョウジ抽出物１０％投与群、チョウジ抽出物５％投与群、非投与群の３群に分け、４週間飼育した。db/dbマウスに関しては各群７匹、またmistyマウスについては各群６匹とした。動物飼育条件は、実験期間中を通して恒温（２３±１℃）、湿度（６０±３％）、明暗周期は１２時間（明周期：７時００分〜１９時００分）とした。飼料として、チョウジ抽出物投与群には、例１で得られたチョウジ抽出物凍結乾燥末を飼料（ラボＭＲストック）重量に対して１０％および５％となるように加えたものを与え、非投与群には飼料のみを与えた。なお飲料水は自由摂取とした。飼料摂取量は１週ごとに測定し、試験期間中の摂餌量を計算するとともに、１週ごとに体重の増減を測定した。血糖値は、尾静脈血をニプロフリースタイルメーターフリーダム（ニプロ株式会社）を用いて１週ごとに測定した。糖化ヘモグロビン（HbA1c）は、尾静脈血をＤＣＡ バンテージ（シーメンスメディカルソリューションズ・ダイアグノスティクス社製）を用いて開始前と４週間後に測定した。実験開始から４週間後にエーテル麻酔下、頸静脈より採血を行い、遠心後血清を得た。採血後のマウスは、頸椎脱臼により致死し、各マウスの腹腔内脂肪量を測定した。血清中インスリン濃度の測定にはインスリン測定キット（森永生化学研究所製）を、血清中総コレステロール、トリグリセリド、遊離脂肪酸の測定にはそれぞれコレステロール Ｅ-テストワコー、トリグリセライド Ｅ-テストワコー、ＮＥＦＡ  Ｃ-テストワコー（和光純薬工業株式会社）を使用した。
【００３９】
［結果］
（１）摂餌量
db/dbマウスのチョウジ抽出物１０％投与群の１週目の摂餌量は、５％投与群および非投与群と比べると著しく少なかったが、２週目以降は次第に増加した。db/dbマウスの１０％投与群における４週間の総摂餌量は、非投与群より１８．５％少なかった。mistyマウスにおいてはチョウジ抽出物投与群と非投与群との間にはほとんど摂餌量に差は見られなかった（表２）。むしろmistyマウスでは、５％投与群で８％程度の摂餌量増加が見られた。
【００４０】
【表２】
2010202639.tif 000004
【００４１】
（２）体重
db/dbマウスにおいて、非投与群、５％投与群、および１０％投与群の平均体重は、いずれも４週まで各週ごとに増加した。db/dbマウスでは、非投与群と５％投与群の体重増加にはほとんど差が見られなかったが、１０％投与群の体重増加は、非投与群の体重増加に比べて有意に低かった（表３）。一方、mistyマウスにおいて、非投与群および投与群の平均体重も４週まで少しずつ増加したが、非投与群および投与群との間には大きな差は見られなかった。しかしながら、mistyマウスでは、１０％投与群の３週目および４週目の平均体重は非投与群を下回る傾向が見られた。
【００４２】
【表３】
2010202639.tif 000005
【００４３】
（３）血糖値
１週間ごとに、空腹時血糖値を測定した。なお、絶食は測定日前日午後６時から測定日午前９時までとした。db/dbマウスでは、非投与群の血糖値は、４週目まで著しく増加し、２８日目で２８７mg/dLに達した。db/dbマウスの５％投与群では、４週目まで血糖値は緩やかに上昇し、２８日目の血糖値は１５３mg/dLであったが、１０％投与群では、４週目までほとんど血糖値の上昇は見られなかった（表４および図４（Ａ））。一方、mistyマウスにおいては、投与群および非投与群の血糖値は実験開始時と終了時でほとんど変化は見られなかった。即ち、チョウジ抽出物は糖尿病マウスの血糖値上昇を抑制するが、正常マウスの血糖値には影響を与えないことがわかった（表４および図４（Ｂ））。
【００４４】
【表４】
2010202639.tif 000006
【００４５】
（４）ヘモグロビンA1c (HbA1c)
HbA1cの測定は、投与前と実験終了日（２８日目）に行った。db/dbマウスでは、非投与群の投与前のHbA1c（％）は３．５であったが、終了時には６．２まで上昇した（表５および図５（Ａ））。db/dbマウスでは、２８日目における５％投与群のHbA1cは、非投与群のものと比べると僅かに低かったが、１０％投与群では、HbA1cは有意に低かった。一方、mistyマウスでは、HbA1cは、チョウジ抽出物投与群と非投与群では、ほとんど差が見られなかった（表５および図５（Ｂ））。
【００４６】
【表５】
2010202639.tif 000007
【００４７】
（５）血清インスリン濃度
血清中のインスリン濃度の測定は、実験終了後（２９日目）に行った。db/dbの血清インスリン濃度は、非投与群と５％投与群では大きな差は見られなかったが、１０％投与群の血清インスリン濃度は非投与群と比較すると、低い傾向が見られた。mistyマウスにおいては、チョウジ抽出物投与群と非投与群の血清インスリン濃度には差が見られなかった（表６）。
【００４８】
【表６】
2010202639.tif 000008
【００４９】
（６）血清トリグリセリド（ＴＧ）値
ＴＧの測定は、実験終了後（２９日目）に行った。２９日目のdb/dbマウスにおける非投与群のＴＧ値は、２４８mg/dLという高トリグリセリド血症状態であったが、５％投与群および１０％投与群では、ＴＧ値の上昇は有意に抑制されていた（表７および図６（Ａ））。一方、mistyマウスにおけるＴＧ値は、チョウジ抽出物投与群と非投与群にほとんど差が見られなかった（表７および図６（Ｂ））。
【００５０】
【表７】
2010202639.tif 000009
【００５１】
（７）血清遊離脂肪酸（ＮＥＦＡ）値
ＮＥＦＡの測定は、実験終了後（２９日目）に行った。ＴＧ値と同様２９日目のdb/dbマウスでは、非投与群のＮＥＦＡ値は、１．４８mEq/Lという高い値を示したが、５％投与群および１０％投与群では、ＮＥＦＡ値の上昇は有意に抑制されていた（表８および図７（Ａ））。一方、mistyマウスでは、非投与群と１０％投与群のＮＥＦＡ値には大きな差は見られなかったが、５％投与群のＮＥＦＡ値は、非投与群よりやや高い傾向が見られた（表８および図７（Ｂ））。
【００５２】
【表８】
2010202639.tif 000010
【００５３】
（８）血清コレステロール値
チョウジ抽出物には、db/dbマウスの血清コレステロール値を低下させる効果は見られなかった（表９）。またmistyマウスにおいては、チョウジ抽出物投与群と非投与群の血清コレステロール値には差は見られなかった。
【００５４】
【表９】
2010202639.tif 000011
【００５５】
（９）内臓脂肪量
実験終了後（２９日目）、マウスを開腹し、腹腔内脂肪の重量を測定した。db/dbマウスでは、５％投与群と非投与群の内臓脂肪量には差は見られなかったが、１０％投与群の内臓脂肪量は非投与群と比較すると少ない傾向が見られた（表１０）。一方、mistyマウスでは、チョウジ抽出物投与群と非投与群に差は見られなかった。
【００５６】
【表１０】
2010202639.tif 000012
【００５７】
（１０）血圧
db/dbマウスは、成長に伴って血圧が上昇することが知られている（前記参考文献１および２参照）。そこでdb/dbマウスについて、チョウジ抽出物投与前と実験終了前（２２、２３日目）の血圧を非観血式血圧測定装置MK-2000（室町機械社製）で２日間にわたって測定した。血圧は、４回以上の測定値から最小値と最大値を除く平均値を個体の代表値とした。なお測定時間は午後５時〜８時とした。チョウジ抽出物投与前の収縮期血圧は、チョウジ抽出物投与群と非投与群でほとんど差は見られなかった。しかしながら、実験終了前の収縮期血圧は非投与群で投与前より２０mmHg以上上昇したのに対して、チョウジ抽出物投与群の血圧上昇は軽度であり、１０％投与群７匹のうち５匹には血圧上昇は見られなかった（表１１および図８）。また、チョウジ抽出物非投与群の拡張期血圧は、投与前の約６０mmHgから２０mmHg以上の上昇が見られたのに対し、チョウジ抽出物投与群の血圧上昇は軽度であった。
【００５８】
【表１１】
2010202639.tif 000013
【００５９】
例４：高血圧自然発症ラットへのチョウジ抽出物投与実験
例３で、チョウジ抽出物が糖尿病モデル動物であるdb/dbマウスの成長に伴う血圧上昇を抑制することを示した。そこで例１で調製したオイゲノールを実質的に含まないチョウジ抽出物が、高血圧のモデル動物である高血圧自然発症ラットの血圧上昇を抑制するかどうかを検討した。
【００６０】
高血圧自然発症ラット（SHR/Ism）、雄、６週齢をJapan SLC Inc.より購入し、５日間予備飼育したのち、チョウジ抽出物投与群と非投与群の２群（１群３匹）に分け、室温（２４±１℃）、湿度（６０±３％）、明暗周期１２時間（明周期：７時００分〜１９時００分）で６週間飼育した。飼料としてチョウジ抽出物投与群には、例１で得られたチョウジ抽出物凍結乾燥末を飼料（ラット用ＳＰ）重量に対して５％になるように添加したものを与え、非投与群には飼料のみを与えた。なお、水は自由摂取とした。飼料摂取量を１週ごとに計測するとともに、体重の増減と収縮期血圧の変動を測定した。血圧は、非観血式血圧測定装置MK-2000（室町機械社製）を用いて測定を行い、４回以上の測定値から最小値と最大値を除く平均値を個体の代表値とした。なお測定時間は、午前９時〜１１時とした。
【００６１】
［結果］
（１）摂餌量
SHRラットにおける摂餌量は、チョウジ抽出物５％投与群では実験開始直後に非投与群よりも少なかったものの、５日目以降は非投与群の摂餌量とほとんど変わらなかった（表１２）。
【００６２】
【表１２】
2010202639.tif 000014
【００６３】
（２）体重
SHRラットにおける体重は、実験終了時にチョウジ抽出物５%投与群で非投与群よりもやや少ない傾向が見られたが、これは実験開始直後の摂餌量が非投与群より少なかったことが考えられる。
【００６４】
【表１３】
2010202639.tif 000015
【００６５】
（３）血圧
SHRラットにおける収縮期血圧は、非投与群（ｎ＝３）では成長とともに上昇し、投与前の１５０±８mmHgが６週後には１９６±１６mmHgまで上昇したのに対し、チョウジ抽出物５％投与群（ｎ＝３）での血圧上昇は軽度であった（図９）。チョウジ抽出物５％投与群の投与前の収縮期血圧１５７±７が６週後には１６６±１０mmHgまでの上昇にとどまり、非投与群よりも約３０mmHg低い値であった。
【００６６】
【表１４】
2010202639.tif 000016
【００６７】
正常マウス（misty）においては、チョウジ抽出物は糖尿病の指標となる血糖値、HbA1c、血中インスリン濃度には影響を与えないこと、また高脂血症の指標となる血中トリグリセライド、血中遊離脂肪酸、血中コレステロールおよび内臓脂肪量にも影響を与えないことがわかった。一方、糖尿病マウス（db/db）においては、チョウジ抽出物５％投与群の体重は、非投与群の体重とほとんど変わらなかったが、１０％投与群の体重増加は非投与群と比較すると抑制される傾向が見られた。チョウジ抽出物５％投与群では、血糖値の上昇は非投与群と比較するとかなり抑制されたが、HbA1cと血中インスリン濃度については、わずかな低下しか見られなかった。しかしながら血中トリグリセリドと遊離脂肪酸の４週間後の値は、非投与群と比較すると著しく低下していた。チョウジ抽出物１０％投与群では、血糖値、HbA1c、血中トリグリセリド、血中遊離脂肪酸の４週間後の値は、非投与群と比較すると有意に低く、血中インスリン濃度と内臓脂肪量の４週間後の値も非投与群より低い傾向を示した。
【００６８】
また、db/dbマウスにおいて、チョウジ抽出物投与前の収縮期血圧は、チョウジ抽出物投与群と非投与群でほとんど差は見られなかったが、実験終了前の収縮期血圧は非投与群で投与前より２０mmHg以上の上昇が見られたのに対して、チョウジ抽出物投与群の収縮期血圧の上昇は軽度であり、１０％投与群７匹のうち５匹には収縮期血圧の上昇は見られなかった（図８（Ｄ））。同様にチョウジ抽出物非投与群は、拡張期血圧においても２０mmHg以上の上昇が見られたのに対し、チョウジ抽出物投与群は、拡張期血圧の上昇も軽度であった。
【００６９】
チョウジ抽出物には、db/dbマウスの成長に伴う血圧上昇を軽減する効果が認められたので、さらに高血圧のモデル動物である高血圧自然発症ラットSHRにチョウジ抽出物５％を含む飼料を６週間投与し、血圧上昇に及ぼす影響を調べた。その結果、非投与群の収縮期血圧は成長とともに上昇を示したのに対し、チョウジ抽出物５%投与群での収縮期血圧の上昇は軽度であり、６週後の収縮期血圧は非投与群よりも約３０mmHg低い値であった。このように、高血圧自然発症ラットSHRにおいても、チョウジ抽出物には血圧上昇を軽減する効果が認められた。
【００７０】
結論として、チョウジ抽出物はdb/dbマウスの成長に伴う肥満（体重増加）、高血糖、高脂血症および高血圧を改善した。また高血圧に関しては、高血圧自然発症ラットSHRにおいても改善効果を示した。
【００７１】
例５：医薬組成物の調製
（１）錠剤
以下の配合の錠剤を、慣用の方法で製造した。
【００７２】
成分 １錠当たり
調製例１で得られた乾燥末                      １００．０mg
乳糖                                            ９５．０mg
トウモロコシデンプン                            ３５．０mg
ポリビニルピロリドン                              ８．０mg
カルボキシメチルデンプンナトリウム              １０．０mg
ステアリン酸マグネシウム                          ２．０mg
錠剤重量                                      ２５０．０mg
【００７３】
（２）カプセル剤
下記の成分を篩にかけ、混合し、サイズ２のカプセルに充填することにより、カプセル剤を製造した。
【００７４】
成分 １カプセル当たり
調製例１で得られた乾燥末                        ２５．０mg
乳糖                                          １５０．０mg
トウモロコシデンプン                            ２０．０mg
タルク                                            ５．０mg
【産業上の利用可能性】
【００７５】
本発明のオイゲノールを実質的に含まないチョウジ抽出物、特に、特定の抽出方法により得られるチョウジ抽出物を有効成分として含有する組成物は、上記で述べたように、正常動物に悪影響を与えることなく、糖尿病、高脂血症、高血圧、あるいは糖尿病と高脂血症または糖尿病と高血圧の両方を有する患者の治療および／または予防に有用である。従って、本発明の組成物は、メタボリックシンドロームの改善および／または予防にも極めて有望である。本発明の組成物は、古くから生薬または香辛料として摂取されてきた植物素材であるチョウジを有効成分とするものである。従って、医薬的なアプローチのみならず、食品などに配合し、安全かつ手軽に摂取しうるため、糖尿病および／または高脂血症および／または高血圧、あるいはメタボリックシンドロームの予防食または患者食への応用も期待される。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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