(57)【要約】【課題】男性用経口避妊薬に加え、より有効な殺精組成物についても、伝統的な局所／外部的な避妊慣習においての使用のための必要が存在する。【解決手段】本発明は、殺精剤及び／又は殺菌剤として作用するヘキサヒドロインデノピリジン化合物、同化合物を含む殺精及び／又は殺菌組成物、同化合物及び組成物を用いた運動性精子又は菌を殺す方法に関するものである。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
(i) 殺菌剤としての有効量の式I(a)：
【化１】
2010202671.tif 000027
［式中、
R1は、水素、直鎖または分岐のあるC1-6アルキル、またはC3-8のシクロアルキルであり；
R2は、水素、直鎖または分岐のあるC1-6アルキルであり；
R3及びR5は、それぞれ、独立して、水素、SO3H、直鎖または分岐のあるC1-6アルキル、CH2OH、CH2OMe、直鎖または分岐のあるC1-6アルコキシ、カルボキシル（COOH）、哺乳動物の生理的条件下においてカルボキシル基に変換されうる非エステル基、カルボン酸エステル（COOR；ここで、RはC1-10アルキル、C6-10アリール、C7-10アラルキルである）、ヒドロキシメチルエステル（CH2OC(O)-R；ここでRは上述通りである）、CONH2、CONHR、CONR2、CH2OCONHR、CN、CH=NHNHCONH2、及びハロゲンであり；
R4は水素、ハロゲン、R3Si、またはCORである］
の化合物と、
(ii) 許容し得る担体と
を含む殺菌組成物。
【請求項２】
前記化合物が、下記式I(b)：
【化２】
2010202671.tif 000028
の化合物である、請求項１に記載の殺菌組成物。
【請求項３】
R1は、水素、メチル、エチル、n-プロピル、iso-プロピル、n-ブチル、iso-ブチル、n-ペンチル、iso-ペンチル、n-ヘキシル、iso-ヘキシル、シクロプロピル、シクロペンチル、及びシクロヘキシルからなる群から選ばれ；
R2は、水素、メチル、エチル、n-プロピル、iso-プロピル、n-ブチル、iso-ブチル、n-ペンチル、iso-ペンチル、n-ヘキシル、及びiso-ヘキシルからなる群から選ばれ；
R3は、４位にあり、水素、ヒドロキシメチル（CH2OH）、ホルミル（CHO）、カルボキシル（COOH）、カルボン酸エステル（COOR；ここでRはC1-10アルキル、C6-10アリール、C7-10アラルキルである）、ヒドロキシメチルエステル（CH2OC(O)-R；ここでRは上述の通りである）、CONH2、CONHR、CONR2、CH2OCONHR、CN、CH=NHNHCONH2、及びハロゲンからなる群から選ばれ；
R5は、水素であり；
R4は、水素、及びハロゲンからなる群から選ばれる、
請求項１に記載の殺菌組成物。
【請求項４】
R1は、メチル、エチル、n-プロピル、またはiso-プロピルであり；
R2は、メチル、エチル、n-プロピル、またはiso-プロピルであり；
R3は、4-COOHまたは4-COOR（ここで、Rは上記に規定した通りである）であり；
R5は、水素であり；
R4は、ハロゲンである、
請求項３に記載の殺菌組成物。
【請求項５】
局所適用に適した、請求項１に記載の殺菌組成物。
【請求項６】
内的適用に適した、請求項１に記載の殺菌組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は：殺精剤及び／又は殺菌剤として作用するヘキサヒドロインデノピリジン化合物：同化合物を含む殺精及び／又は殺菌組成物；同化合物及び組成物を用いた運動性精子又は菌類を殺す方法に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
合衆国や多くの西側諸国においては、ライフスタイルの好みにより、避妊（具及び薬）への需要が高く、また増大しつつあり、一方、多くの発展途上国においては、人口のコントロールが逼迫した公衆保健の問題となっている。避妊が、地球的な健康の必要から生じることを考えると、世界の別の地域においては別の考えがあるにせよ、男性用避妊薬の全市場は、合衆国において計算される数字より、ずっと大きいものと考えられる。
【０００３】
西側諸国においては、避妊薬類の市場は、過去５０年に渡り相対的には少しの変化しかない。「ピル」が１９５１年に開発され、避妊薬類の人気のある選択肢として比類のないものとなり続けているからである。避妊の研究の進歩は、２，３のより多くの選択肢を提供してきた。その全ては女性のためのもので、女性は責任、費用、健康に関するリスク（特に、ホルモン系の避妊薬の長期間の使用に関係する、心臓血管の病気の危険、及び、ある種の癌）の矛先を向けられてきた。
１６世紀に発明されたコンドームは男性にとって利用可能な、唯一の重要な形態の（「引き抜き」及びパイプカットを除く）避妊法である。コンドームについての唯一の真の革新的進歩は、１９世紀になってゴムが加硫されることにより起こった。（New Scientist, 20 April 1994, Vol 142 No 1923）
【０００４】
製薬会社が、性的機能不全の為の化合物（例えば、勃起不全の為のバイアグラ）を開発し、避妊薬類への需要は高まるものと考えられる。１９９９年の間、合衆国内でのコンドームの売り上げは、５．８％上昇し、２億６千万ドルの収入を生み、新アメリカ性的革命と呼ばれるものを引き起こした。(Drug Store News, Nov 29, 1999 v21 il9 p29) 子をもつ親の世代の女性の大多数が既に避妊を実践するが(世界中の生殖年齢にある全女性の５８％が何らかの避妊法を実践する（The Population Division of the United Nations Department of Economic and Social Affairs 2000)、まだ、妊娠の半数は、望まれずに起こる(NICHD, Contraception and Reproductive Health Branch: Report to the NACHHD Council September 1999)。 健康及び消費者団体より、他の代替物、特に、男性がより多くの避妊の責任をとることが可能となる代替物についての継続的な懇願があり、世界保健機構（WHO）や、ファミリーヘルスインターナショナル等の機関が、世界的な懸念より、男性用避妊薬の開発を促す発案をするに至っている。少なくとも二つの企業、シェリング及びオルガノンがこの１０年以内に、ホルモン系男性避妊薬を市場に導入しようと、熱心に研究をしている。
【０００５】
安全で有効なであり、経口により活性である男性用避妊薬は長年に渡り求められてきた。しかし、性欲にも影響を与えずに、安全に精子の形成を止めることができ、よって男性用避妊薬剤として機能する薬品の開発は、困難であることがわかっている。
【０００６】
理想的な男性用避妊薬とは、精子の生産を阻止し、生殖能力を阻害し、性欲若しくは付属のセックス器官、及びそれらの機能の働きに影響を与えることのないもの、並びに/又は、運動性精子を死滅させるものである。加えて、有効服用量と、有毒な服用量との間に大きな開きを有するべきであり、その方法は可逆的であるべきである。このような、理想的な男性用避妊薬は、現在のところ、未だ無い。
【０００７】
抗がん剤やアルキル化剤等の、いくつかの一般的な細胞の毒物は、精子の形成に影響する。しかし、明らかに避妊薬としては許容されない。チオ糖等の細胞エネルギープロセスと干渉する化合物は、精子形成系とも干渉する。よって、十分に選択的ではない。テストステロン等の男性ホルモン及びその類似体は、十分に高い用量用いられた場合、おそらく、視床下部−下垂体系を伴う機構を介して、精子の形成と干渉する。これらのステロイド化合物は、臨床研究において首尾よく用いられてきた。しかし、これらのステロイドの同化作用により、望まない副作用が増加しうる。
【０００８】
ゴナドトロピン放出ホルモン（GNRH）類似体は、精子形成を有効に阻害する化合物として、活発に研究されている。しかし、GNRH類似体は、内在性男性ホルモンと干渉し、補助の男性ホルモンが投与されない限り、性欲を減退させる。
【０００９】
男性用避妊薬類に対するアプローチの一つは、男性生殖過程の生化学の特定及び活用に基づくものである。睾丸は３つの機能部位からなる。第一の部位は、精子の生産について責任のある場所であり、発達中の性細胞を含む精細管により構成される。第二の部位は、セルトリ細胞であり、同様に精細管内に位置する。そして、組織的、及び、機能的な精子形成プロセスのコーディネーションに貢献し、おそらくは、パラ分泌、及び、自己分泌の役割を担う。セルトリ細胞及び発達中の性細胞の間の複雑な組織的関係、及び近接したセルトリ細胞間の緊密な連結の存在により、血液‐精巣障壁が形成され、精細管内に血液由来の化学物質や、栄養物質の直接のアクセスより孤立された部位が形成される。介在する組織中において、当該細管を取り囲むのは、パラ分泌、及び、自己分泌の機能を有し、テストステロンの発生が最もよく発見されるライディヒ細胞である。
【００１０】
性細胞は、基底膜より精細管内へ成熟しながら移動しつつ、累進的に分裂及び分化する。精原細胞は基底の部屋に存し、選択的に採用された精原細胞は、有糸分裂をし、そのまま精原細胞であり続けるか、又は一次精母細胞に分化する。
一次精母細胞は、セルトリ細胞の間の連結を介して遊走し、また、二次精母細胞を形成すべく、有糸分裂する。二次精母細胞は、精細胞を形成すべく、分裂する。精細胞は、成熟した精子へと分化する。精細胞の分化は、しばしば精子形成と定義される。しかし、この出願の目的についていえば、「精子形成」とは、精子の形成及び成熟（分化）の全工程を包含する様に規定され、「反精子形成化合物」は、この工程のいずれかの部分を阻害するものである。
【００１１】
セルトリ細胞機能の概要は、以下の通りである。（a）精上皮を維持し、栄養を与え、（ｂ）晩発の精原細胞を精細管内に放出、（c）形態学的、及び生理学的血液‐精巣障壁部の形成、（ｄ）退化していく性細胞の食作用、（e）精上皮のサイクルの調節である。
【００１２】
ライディヒ細胞は、同様に、精子形成を支援する。下垂体からの黄体化ホルモン（HG）は、ライディヒ細胞のテストステロンの発生を刺激する。テストステロンと、その代謝産物であるジヒドロテストステロンは、通常の精子形成を支援するのに不可欠のものである。テストステロン受容体は、様々な種類の性細胞に存在する。テストステロンは血液‐精巣障壁部を介して、おそらく、セルトリ細胞への伝達を介して、そこでエストラジオール、ジヒドロテストステロンへ代謝され、もしくは、そのまま変化せずに残る。
【００１３】
全ての種類の性細胞とはいかないが、それらのうちいくつかのものは、ライディヒ及び／又はセルトリ細胞と干渉する。これらの相互作用は、セルトリ、ライディヒ又は性細胞により産出される化学的メッセンジャーの形態をとる。例えば、パキテン期の精母細胞が、セルトリ細胞の蛋白様因子の分泌を調節することとなり、また、それがライディヒ細胞のステロイド発生を増進することとなる。精細胞の結合は、FSHへの暴露により反応能を有することとなり又は機能的になったセルトリ細胞にのみ生じる。ラットのセルトリ細胞は、周期的に、数種のプロテインを分泌し、その生産は、精上皮が特定の段階にあるとき、つまり、特定のグループの性細胞と関連のある時に最大値となる。クラステリンは、セルトリ細胞により、精上皮がステージVII又はVIIIの形態にある時、すなわち、FSH刺激とは無関係である時に、最大の産出量となる。このことは、性細胞により、セルトリ分泌機能が局所的に調節されることを示唆している。
【００１４】
サンドズ社により開発されたヘキサヒドロインデノピリジン化合物 No．２０−４３８（図１における化合物１）は、動物への経口投与により精子形成を可逆的に阻害することがわかっている。Arch.Toxicol. Suppl.,1984, 7:171-173; Arch.Toxicol. Suppl.,1978:323-326;及び Mutation Research，1979,66:113-127参照。
【００１５】
ラセミ体としての様々なインデノピリジン化合物の合成は公知であり、例えば、米国特許第２４７０１０８号明細書；米国特許第２４７０１０９号明細書；米国特許第２５４６６５２号明細書；米国特許第３６２７７７３号明細書；米国特許第３６７８０５７号明細書；米国特許第３４６２４４３号明細書；米国特許第３４０８３５３号明細書；米国特許第３４９７５１７号明細書；米国特許第３５７４６８６号明細書；米国特許第３６７８０５８号明細書、及び米国特許第３９９１０６６号明細書に記載されている。これらのインデノピリジン化合物は、種々の用途を持っており、例えば、抗炎症性及び鎮痛性を有するセロトニン拮抗薬、血液芽細胞凝集阻害剤、鎮静剤、神経弛緩剤、並びに潰瘍保護剤、血圧降下剤、及び食欲不振誘発剤としても用いることができる。
【００１６】
米国特許第５３１９０８４号明細書及び米国特許５９５２３３６号明細書は、パラ位に置換基を有するフェニル環によって、５位が置換されおり、反精子形成活性を有するヘキサヒドロインデノピリジン化合物が開示されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１７】
【特許文献１】米国特許第２４７０１０８号明細書
【特許文献２】米国特許第２４７０１０９号明細書
【特許文献３】米国特許第２５４６６５２号明細書
【特許文献４】米国特許第３６２７７７３号明細書
【特許文献５】米国特許第３６７８０５７号明細書
【特許文献６】米国特許第３４６２４４３号明細書
【特許文献７】米国特許第３４０８３５３号明細書
【特許文献８】米国特許第３４９７５１７号明細書
【特許文献９】米国特許第３５７４６８６号明細書
【特許文献１０】米国特許第３６７８０５８号明細書
【特許文献１１】米国特許第３９９１０６６号明細書
【特許文献１２】米国特許第５３１９０８４号明細書
【特許文献１３】米国特許５９５２３３６号明細書
【非特許文献】
【００１８】
【非特許文献１】New Scientist, 20 April 1994, Vol 142 No 1923
【非特許文献２】Drug Store News, Nov 29, 1999 v21 il9 p29
【非特許文献３】The Population Division of the United Nations Department of Economic and Social Affairs 2000
【非特許文献４】NICHD, Contraception and Reproductive Health Branch: Report to the NACHHD Council September 1999
【非特許文献５】Arch.Toxicol. Suppl.,1984, 7:171-173
【非特許文献６】Arch.Toxicol. Suppl.,1978:323-326
【非特許文献７】Mutation Research，1979,66:113-127
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１９】
この分野での広範に渡る研究にも拘らず、限定された副作用を有する活性な、可逆的男性用不妊薬へのニーズは存在し続けており、副作用を起こすかもしれない用量の既知の化合物の投与の必要が存することも、問題となり続けている。この分野においてある別の問題は、睾丸上又は内部に特定の結合部位を有する適切な造影剤が存在しないことであり、睾丸の機能の研究及び機能不全の診断において、造影剤として用いることのできる化合物の必要性が継続して存する。
【００２０】
男性用経口避妊薬に加え、より有効な殺精組成物についても、伝統的な局所／外部的な避妊慣習においての使用のための必要が存在する。
【課題を解決するための手段】
【００２１】
すなわち、本発明の一つの目的は、経口投与によって活性を示す男性用避妊薬であり、性欲に影響を与えず、高い効力と活性を示し、並びに、極小の副作用及び毒性しか有さないものである。
【００２２】
本発明の別の目的は、経口投与によって活性を示す男性用避妊薬であり、精子形成を阻害するもの、及び、上記薬を用いての精子形成阻害方法である。
【００２３】
本発明のさらに別の目的は、殺精剤として機能する組成物であり、運動性精子を殺すことにより、外用に供する避妊剤として有効なものを提供することである。
【００２４】
本発明のもう一つのさらなる別の目的は、殺菌組成物として作用する組成物を提供することにある。
【００２５】
本発明のこれらや別の目的は、本発明のヘキサヒドロインデノピリジン化合物類の発見、及びこれらの効力が極めて高く、精子形成を阻害し、運動性精子の殺精剤として作用し、及び殺菌剤としての有効性を示すものであることの発見により達成された。
【００２６】
本発明の化合物は、上述の問題を解決するものであり、本発明の化合物は、公知の化合物１より、より低い相対用量において高い効力を示し、この化合物にみられる沈静効果等の副作用の発生を抑える。また、本発明の化合物は、睾丸におけるマクロ分子的なサイトと相互作用する。放射性ラベルの等のラベルを含む本発明の化合物は、睾丸の機能の研究及び機能不全の診断において、造影剤として用いることのできる適切な化合物が存在しないという問題を克服することができる。本発明の化合物は、殺精剤としても働くことが分かっており、運動性精子を高度に有効及び効率的な方法により死滅させる。このことにより、様々な殺精組成物における使用が示唆される。本発明の化合物は、殺菌剤としても働くことも分かっている。
【図面の簡単な説明】
【００２７】
【図１】三つのヘキサヒドロインデノピリジン化合物の構造を示すものであり、また、これらの化合物の番号付与方式についても示している。
【図２】本発明の化合物の前駆体の合成方法を示している。
【図３】本発明の化合物の前駆体の鏡像異性的選択的合成を示す。
【図４】図２及び３で調製された先駆化合物のヨード化の合成スキーム及び本発明の範囲にある追加の化合物へのこのヨード化合物の変換を示すものである。
【発明を実施するための形態】
【００２８】
下記の構造I（a）を有する、好ましくは以下のI（b）に示す構造を有する、ヘキサヒドロインデノピリジン化合物は、反精子形成作用を有し、上記米国特許第５３１９０８４号に報告されている最もよく知られている化合物の経口の反精子形成剤の４０倍の活性度を示すだけでなく、運動性精子を死滅させる殺精剤として作用し、さらに、殺菌組成物としても作用することを発見した。
【００２９】
【化１】
2010202671.tif 000002
【００３０】
［式中、
４a、5、9ｂ位にある水素原子は、図示した相対的立体配置をとる（式I（ｂ）において、お互いに、４a及び５位の水素はトランスであり,４a及び９ｂの水素はシスである。）；
また、9ｂ位の相対的立体化学が逆となって、お互いに、４a及び５位の水素はトランスであり,４a及び9ｂの水素がトランスとなっていてもよい；
また、全ての３個の水素はお互いにシスであってもよい；また、
４aと５の間にある破線は、上記化合物は、４a,５−デヒドロ化合物、すなわち４a及び５位の炭素の間に二重結合を有してもよいことを示す。
さらに、式中、
R１は、水素原子、又は直鎖若しくは分岐のあるC１−６アルキル、好ましくはC１−３アルキル、又はC3−C8シクロアルキルを表し；
R２は、水素原子、又は直鎖若しくは分岐のあるC１−６アルキル、好ましくはC１−３アルキルを表し；
R３ 及びR５は、それぞれ独立に水素、ハロゲン、SO3H、直鎖又は分岐のあるC１−６アルキル、CH２OH、CH2OMe、直鎖又は分岐のあるC１−６アルコキシ、カルボキシル（COOH）、又は哺乳動物の生理学的条件下でカルボキシル基に変換可能な基、カルボン酸エステル（COORここで、RはC１−１０アルキル、C６−１０アリール、C７−１０アラルキルである。）、ヒドロキシメチルエステル（CH２OC(O)−Rここで、Rは上に規定する通りである。）、CONH２、CONHR、CONR２、CH2OCONHR、CN、CH＝NHNHCONH２、及び、ハロゲンを表し； 
R４は、水素、ハロゲン、R3Si又はCORを表す。］
【００３１】
本発明のコンテクストにおいて、用語「反精子形成」とは、睾丸中の精子生産を阻害する能力に関するものであり、「殺精剤」、又は「殺精の」とは、生成後の、より好ましくは射精後の運動性精子を死滅させる能力に関する。
【００３２】
本発明の化合物は、構造式（I）に示す相対的立体化学を有し、本発明は、別個の鏡像異性体型（基本的には、光学的に純粋）の双方を含み、同様に、これらの混合体、例えば、ラセミ体を含む。
【００３３】
構造式（I）を有する化合物で、製薬学的に許容できる塩もまた、本発明に含まれる。
製薬学的に許容できる塩は、以下のものを含むが、これらに限定されない：
塩基性官能基（例えば、アミン基であるが、これに限定されない。）が、塩酸、ヨウ化水素酸、硫酸、燐酸、二燐酸、臭化水素酸、硝酸等の無機酸と形成する塩；
塩基性官能基と有機酸との塩、例えば、酢酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、酒石酸塩、コハク酸塩、クエン酸塩、乳酸塩、メタンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、パルモエート、サリチル酸塩、ステアリン酸塩等；若しくは、
酸性官能基と、Na，K, Ca等（これらに限定されない）の金属イオンとの塩、又は 
酸性官能基と、アンモニウムイオンとの塩、又は、
酸性官能基と、アミンやテトラ置換アンモニウムイオン（これらに限定されない）等の有機イオンとの塩。
【００３４】
置換基R１は、好ましくは、直鎖アルキル（n-アルキル）、iso‐アルキル、又は、シクロアルキル基であり、例えば、メチル、エチル、ｎ−プロピル、iso−プロピル、ｎ−ブチル、ｎ−ペンチル、iso−ペンチル、ｎ−ヘキシル、iso−ヘキシル、シクロプロピル、シクロペンチル、シクロヘキシル、最も好ましくは、R１は、エチルである。
置換基R２は、上記R１と同様に、好ましくは、直鎖アルキル、又はiso‐アルキル基である。
置換基R３は、環のパラ位、つまり、４位にあることが好ましく、ヒドロキシメチル（CH２OH）、ホルミル（CHO）、カルボキシル（COOH）、カルボン酸エステル（COOR、ここで、RはC１−１０アルキル、C６−１０アリール、C７−１０アラルキルである。）、及びヒドロキシメチルエステル（CH２OC(O)−Rここで、Rは上に規定する通りである。）、CONH２、CONHR、CONR2、CH2OCONHR、CN、CH＝NHNHCONH２、並びに、ハロゲンから選択される基であることが好ましい。
置換基R４は、好ましくは、I,Br,Cl,及びFを含むハロゲンである。これらの化合物の強力な活性は驚くほどである。ハロゲンは、放射性同位元素、例えば、１２３I、１２５I、又は１３１Iであってもよい。上述の化合物中において、他の放射性同位元素、例えば、１１C、トリチウム（３H）もしくは１８F、又は臭素及び塩素の放射性同位元素が、通常の（非放射性の）同位元素の替わりに用いられてもよい。
【００３５】
化合物１は、ラセミ体である。化合物１の構造は、図１に化合物１として示されている。ヘキサヒドロインデノピリジンは、公知の命名法で規定されうる三つの不斉中心を含んでいる。代わりに、相対的立体化学は、三環系の４a、5、及び９ｂ位で炭素系に結合する水素原子のシス−トランス関係により規定し、立体化学的配置を決定してもよい。
【００３６】
カーン‐インゴルド‐プレローグ命名法によると、化合物１の立体化学及び名称は、(4aRS,5SR,9bRS)-2-エチル-2,3,4,4a,5,9b-ヘキサヒドロ-7-メチル-5-(4-メチルフェニル)-1H-インデノ[1,2-c]ピリジンである。
【００３７】
化合物１は、上述の構造式（I）の置換基R３に相当する５−フェニル基に、疎水性メチル置換基を有している。化合物１の反精子形成の活性は、基本的に、（＋）異性体（１９９５年にクックらによって記述された条件により測定した場合、右旋(光)性の旋光性を示す。）のみにあり、これは、マウスに対し有効な反精子形成薬である。このシリーズの他の化合物の反精子形成活性は、同様に、一つの鏡像異性体のみに存在する。しかしながら、立体化学を熟知している者に良く知られている様に、これらの化合物の測定された回転活性は、置換のパターンや測定状況に依存し、（＋）か（−）のどちらかとなる。一方、本発明の化合物類の殺菌性は、立体配置に依存せず、それぞれの相対的活性は異なりうるものの、（＋）及び（−）の両異性体において活性である。
【００３８】
本発明の化合物の殺精活性は、反精子形成異性体に見出されており、もう一方の異性体にも存在すると考えられる。
【００３９】
非常に極性が高いカルボキシル基や、哺乳動物の生理的条件下でカルボキシル基へと代謝されうる基は、本発明の化合物のどの位置にあってもよく、好ましくは、上記化合物の５−フェニル環のパラ位に存在し、殺精及び／又は殺菌活性は維持される。例えば、パラ位が、ヒドロキシメチル（CH２OH）、ホルミル（CHO）、カルボキシル（COOH）、メトキシカルボニル(C(O)OCH３)基により置換されたものは、強力な活性を保つ。これらの化合物は、５−フェニル環のパラ位が極性置換基で置換されているにも拘わらず、活性を示す。
【００４０】
「哺乳動物の生理的条件下で、カルボキシル基へと代謝される」とは、構造（I）を有する化合物が、反精子形成剤を必要とする生きた哺乳動物に投与されたとき、官能基R3がカルボキシル基に変換されることを意味する。
投与は、いかなる在来の方法又は経路を通じても行われ、経口、経腹膜、静脈を介して、皮下において、筋肉内において、吸引、口腔内において、及び経皮によりなされ、また、これらにより限定されることはない。殺精及び／又は殺菌療法についても、局所的投与とともに、これらの投与が利用可能である。R3基のカルボキシル基への変換は、血中や尿中における構造（I）を有する化合物の代謝産物のモニターにより容易に確認することができる。代謝産物は、質量分析（MS）、ガスクロマトグラフィー（GC）等の在来の方法により監視してもよい。
【００４１】
置換基R3の少なくとも５０％、より好ましくは少なくとも８０％、さらに好ましくは９０％、９５％、又は１００％の置換基R3が哺乳動物への投与により、カルボキシル基に代謝されることが好ましいが、このことは、殺精及び／又は殺菌の特性を得るのに不可欠なものではない。変換のパーセンテージは、血液又は尿のサンプルを定量的に分析することにより確認され、R3がカルボキシル基に変換された化合物に対する、官能基R3を含む未変換化合物の相対量を、上述の在来の方法の一つを用いることにより確認されうる。
【００４２】
化合物１の反精子形成活性は、ラットへの３０ｍｇ/ｋｇの、一度の経口投与によって得られ、２４ｈ以内に、睾丸の重量を劇的に低下させる。精細管における変性の変化が観察される。精細胞は、密になり、しばしば多核の結合体を形成した。セルトリ細胞は、細胞学的に、ノーマルのように見える。化合物１は、精細胞、又はこれら精細胞に関連するセルトリ細胞をターゲットにしていると考えられる、なぜなら、最初に、組織的変化がこれらの精細胞に観察されるからである。
【００４３】
化合物１は、無気力及び倦怠感をマウスへの３０ｍｇ/ｋｇの一度の経口投与において引き起こし、同量物を皮下に投与することにより、極度の無気力を引き起こした。無気力及び倦怠感は、明らかに避妊薬の望まざる副作用である。化合物１における、無気力及び倦怠感に比べ、本発明の化合物のものは最低限のものであった。
【００４４】
本発明の化合物により、化合物１において観察される倦怠感なしに、不妊活性を得ることが可能となる。本発明の化合物は、よって、倦怠感と無気力という望まざる副作用が著しく減ぜられた有効な不妊薬である。
【００４５】
本発明の化合物は、マウスにおける精子形成への効果が試験された。テストは以下のクックらによって記された（１９９５）方法により、一度の経口投与の三日後に行われた。このテストにおいて活性のある化合物は、不妊化合物でもあることがわかっている。
【００４６】
一日目の雄のマウスに胃管による強制栄養法により、コントロール賦形薬、ポジティブコントロール（化合物１）、又は本発明の化合物を投与することにより、化合物を選別した。投与の７２ｈ後に、動物を殺し、睾丸を切り取り、脂肪を取り除いた後、重さを量った。一つの睾丸が組織学的に精査され、精子形成の潜在的可能性について、精子形成インデックス（J.M.Whitsett, P.F.Noden, J.Cherry and A. D. Lawton, J. Reprod. Fertil., 72, 277(1984)に基づいて評価した。 このインデックスとは、睾丸の精子形成能力の半定量的評価法であり、精細管中の精子形成細胞の組織学的外観に基づくものである。１から６のスケールが用いられ、５から６が通常の状態を表す。二つ目の評価は、睾丸の重さに基づくものである。
【００４７】
表１及び２は、投与賦形薬のみを含むがインデノピリジンを含まないコントロールに対しての睾丸重量（TW）及び精子形成インデックス（SI）の変化の点での、関連する生物学的結果である。
表１及び２については、R３及びR４は、構造Iｂを表し、ここで、R3はパラ位にあり、R１はエチル；R２はメチル；R5は水素を表す。
【００４８】
8-ヨード-7-メチル−4´-カルボキシ又は4´カルボメトキシ置換パターンにおいては、ラセミ化合物を経口投与により2 μｍol/ｋｇ（１ｍｇ/ｋｇ）投与することにより、精子形成インデックスが５７−６７％減少し、８−ヨード置換基のない対応類似体の７９ μｍol/ｋｇ（３０ｍｇ/ｋｇ）と少なくとも同程度有効であった。８-ブロモ、又は８-クロロ類似体に於いては、試験した最低投与量（６又は2 μｍol/ｋｇ；３又は１ｍｇ/ｋｇ）が、ハロゲン化されていない類似体の７９μｍol/ｋｇ（３０ｍｇ/ｋｇ）の投与と、少なくとも同程度有効であった（表１参照）。活性（左旋性）光学異性体の８-ヨード-７-メチル-４´-カルボキシ類似体を８-H-７-メチル-４´-カルボキシ類似体（表２）と比較することにより、前者の化合物は０．６及び2 μｍol/ｋｇ（０．３及び１ｍｇ/ｋｇ）において、後者の化合物の２５及び７５μｍol/ｋｇ（１０及び３０ｍｇ/ｋｇ）と同程度か、それ以上の効果を有することが分かった。このようにして、モル当りの効力について、８位のハロゲン化により４０倍の増加が達成された。
【００４９】
【表１】
2010202671.tif 000003
【００５０】
【表２】
2010202671.tif 000004
【００５１】
本発明の化合物の殺精活性は、射精により生じた精液に一度適用するだけで有意のものとして存在する、すなわち、たった３μMの濃度を有する組成物が有意なものとして運動性を減じることができ、たった１００μMの濃度を有する本化合物の組成物の適用後には、運動性を０にすることができる。本発明の殺精組成物は、精子の運動性を受精不可能なレヴェルまで減少させることができるあらゆる濃度をとることができ、好ましくは１〜５００μＭ、より好ましくは３〜３００μＭ、さらに好ましくは１０〜２００μＭである。殺精活性度は、以下の方法により決定した。
【００５２】
［精子の運動性に対する作用物質の直接的効果の決定方法］
精子の運動性に対する作用物質の直接的効果は、以下のプロトコルにより決定した。基本的には、精子は、ラットの場合には、精巣上体尾より、ウサギの場合は、人口膣を用いて集められた射精により集められた得られたものを用いる。精子の初期運動性は、用手により、又は、ハミルトン ソーンのＩＶＯＳ精子分析機を用いることにより決定する。その精子を、３４℃の定温に保ち、１０ｘ１０６/ｍLの一定の濃度に希釈した後、約３ｍLの緩衝剤又は培地に加える。運動性を、再度この時点においても決定し、なんらかの変化があれば記録する。異なる濃度を持ったテストする作用試剤を、準備された精子に加える。精液のサンプルは、一時間の間一定の温度で保ち、運動度を決定する。結果は、サンプル中の動的精子のパーセントとして記録する。
【００５３】
［精子の運動性に対する作用物質の直接的効果の決定のためのプロトコル］
一般的事項：
精子は実験期間中３４℃で、保存した。精子の濃度は、約１０ｘ１０６/ｍLの濃度であった（なお、サンプルは緩衝剤又は培地によりこの濃度に達するまで希釈する必要があってもよい。）。
ラットにおける研究（精巣上体尾からの精子を使用）
ＨＢＳＳ緩衝溶液中のインデノピリジン１ｍＭストック溶液＋ＢＳＡ（5mg in 10 ＝0.5 ug/ul; 0.5 ug/ｍL=1uM） を調製し、以下の様に加えた。
1uM = 1ulストック + 949ul HBSS buffer + BSA + 希釈された精液50 ul 
3uM = 3ulストック + 947ul HBSS buffer + BSA + 希釈された精液50 ul
10uM = 10ulストック + 940ul HBSS buffer + BSA + 希釈された精液50 ul 
30uM = 30ulストック + 920ul HBSS buffer + BSA + 希釈された精液50 ul
100uM = 100ulストック + 850ul HBSS buffer + BSA + 希釈された精液50 ul
300uM = 300ulストック + 650ul HBSS buffer + BSA + 希釈された精液50 ul
1000uM = 1000ulストック + 希釈された精液50 ul 
精子の運動性を一時間後に決定した。
【００５４】
［ウサギについての研究（射精された精子を使用）］
Ｍ−１９９培地中のインデノピリジン１ｍＭストック溶液＋ＢＳＡ（2.5ｍｇ in 5 ＝0.5 ug/ul; 0.5 ug/ｍL=1uM） を調製し、以下の様に加えた。
1uM = 1ulストック + 949ul Ｍ−１９９培地 + BSA + 希釈された精液50 ul 
3uM = 3ulストック + 947ul Ｍ−１９９培地 + BSA + 希釈された精液50 ul
10uM = 10ulストック + 940ul Ｍ−１９９培地 + BSA + 希釈された精液50 ul 
30uM = 30ulストック + 920ul Ｍ−１９９培地 + BSA + 希釈された精液50 ul
100uM = 100ulストック + 850ul Ｍ−１９９培地 + BSA + 希釈された精液50 ul
300uM = 300ulストック + 650ul Ｍ−１９９培地 + BSA + 希釈された精液50 ul
1000uM = 1000ulストック + 希釈された精液50 ul
精子の運動性を一時間後に決定した。
形態変化を同定するためにスライドを作り、細胞の死の確認のために、エオシンを加えた。
殺精試験の結果を、表３（ウサギの射精による精子）及び表４（ラットの尾の精子の運動性）に示した。
【００５５】
【表３】
2010202671.tif 000005
【００５６】
【表４】
2010202671.tif 000006
【００５７】
本発明の化合物の殺菌活性は、菌のレべルを感染不可能な程度にまで低下させるのに十分ないかなる濃度においても得られ、好ましくは、１−５００μＭ，より好ましくは、２０−３００μＭ、さらに好ましくは、２０−２００μＭにおいて得られる。
【００５８】
殺菌感受性試験は、ＮＣＣＬＳガイドラインに小さな変更を加えて行われた。簡潔に言うと、Candida albicans細胞の懸濁液が、イースト麦芽（ＹＭ）抽出物培地（３５℃）において、一昼夜純培養されたものを調製し、いくつかの小さなコロニーを、ＹＭ培地プレートから取り除き、０．８５％食塩水５ｍLに移した。細胞は、１５秒の回転流により懸濁し、結果として生じる懸濁液の細胞密度を、光学光度計により決定した。セル密度は０．８５％食塩水を加えることにより、５３０ｎｍの波長の測定において、０．５マクファーランドスタンダードの透過度になるように調製した。この懸濁液の一部を、ＲＰＭＩ−ＭＯＰＳ中に１：１０００の割合で希釈し、作業用懸濁液を得た。Aspergillus fumigatusの胞子の同様の胞子懸濁液を、０．８５％の食塩水に４０℃で保存された胞子を用いて得た。これらの胞子は、上記マクファーランドスタンダードの透過度になるように０．８５％食塩水に希釈した。この懸濁液を、その後さらにＲＰＭＩ−ＭＯＰＳ中に１：５０の割合で希釈し、作業用接種懸濁液を得た。
【００５９】
これらのテスト化合物の一連の希釈溶液を、２％ＤＭＳＯを含むＲＰＭＩ−ＭＯＰＳ中に作成した。各希釈液の一部が、無菌９６−穴、平底マイクロタイタープレートのウェルに最終量が２００μｌになる様に加えられた。つまり、C.albicans 細胞懸濁液、又はA.fumigatus胞子懸濁液のいずれかを、それぞれのウェルに最終的に２００μｌになるまで加えた。これらのプレートを、３５℃において培養した。１９時間の培養の後、Ｃ.albicansの接種されたプレートを、裸眼により観察し、成長が観察できない濃度を、最低反応抑制濃度（ＭＩＣ）と決定した。A.ｆumigatusのプレートについても４８時間後に同様の決定を行った。 また、試験器官の成長を示さなかった全ての希釈液について、それぞれのウェルから１００μｌの媒体をとり、いくつかのスライドガラスの上に接種することにより、最小殺菌濃度（ＭＦＣ）を決定した。接種は、Ｃ.albicansの成長については、ＹＭ寒天培地プレート上に、A.ｆumigatusについてはポテトデキストローズ寒天培地プレート上に、面線接種することにより、それぞれ行った。
コロニー形成単位（CFU）を数え、これらの数は、作業用接種懸濁溶液に対する接種された細胞又は胞子の生存パーセントを計算するのに用いた。最小殺菌濃度（MFC）とは、２％以下の生存パーセントを持った試験化合物の最低の濃度とした。
【００６０】
殺菌試験の結果は、表４〜６に示す通りである。
【００６１】
【表５】
2010202671.tif 000007
【００６２】
【表６】
2010202671.tif 000008
【００６３】
表４−５についてのノート
ＭＦＣ＝最低殺菌濃度
CFU＝コロニー形成ユニット
Cidal＝＞９８％ 殺菌
Static＝十分にクリヤーだが、＜９８％ 殺菌
＊コロニーは良好に計数を得るには近づき過ぎていた。殺菌性を有するというに近いといえる。
０７３ｄ及びｌのウェルにおいては、ある種の沈殿が起こった様にみえる。おそらく、沈殿物が胞子を「トラップ」したのだろう。他の化合物に於いては、この沈殿物は見られなかった。
【００６４】
【表７】
2010202671.tif 000009
ＭＩＣ＝成長がないと思われる最低濃度（ug/mL）
ＭＦＣ＝ウェルの中の細胞の９８％以上を死滅させる最低濃度（ug/mL）
Fungistatic=MICを有する化合物、しかし９８％未満の細胞が死滅
太字＝A.Fumigatus のみにおいて活性な化合物
０６２の濃度：５０μLに０．１ｍｇであったとすると、最終的な定量濃度は報告されたものの１/５となるだろう。とはいっても、これらの濃度は、大まかなものである。
【００６５】
上記表において、試験で用いられた様々な化合物は以下の通りである。
インデノピリジン類似体
【化２】
2010202671.tif 000010
【化３】
2010202671.tif 000011
【化４】
2010202671.tif 000012
【化５】
2010202671.tif 000013
【００６６】
本発明の化合物の前駆体は、米国特許第3678057号において開示された方法に変更を加えた米国特許第5319084号において開示された方法により調製される。これらの特許全体を本願に援用する。
【００６７】
Ｒ３置換基は、適切なグリニァール試薬又はフェニルリチウム試薬を用いて分子に導入される。本方法により製造される鏡像異性体の混合物は、塩の形成後に、選択的結晶化、又はクロマトグラフィーにより、純粋な鏡像異性体へと分割される。例えば、C.E.CookらJ.Med.Chem.,38:753(1995)に記載の通り、化合物１の分割は、Ｓ（＋）及びＲ（−）−２，２´−（１，１´ビナフチル）燐酸との塩形成によりなされ、化合物３の分割は、Ｒ−及びＳ−マンデル酸との塩形成により行われる。
【００６８】
光学純度は、CHIRACEL−ODカラムにおける高圧液体クロマトグラフィー（HPLC）により達成された。
【００６９】
本発明の化合物は、カルボン酸２、又はそのエステルの一つ（例えば、３）から始めることにより調製される。２及び３等の化合物は、米国特許第５３１９０８４号に記述されている通りに調製される。または、これらはＦｉｇ．２に示した方法により調製される。すなわち、Ｎ−置換−３−アリールヘキサヒドロピリジン−４−カルボン酸エステル（４）がカルボン酸５に加水分解され、それが、塩化チオニルと処理されることにより、酸塩化物６を生じる。この化合物をＡｌＣｌ３を用いて処理することにより、三環系ケトン７へと環化することができる。このケトン７がｐ−ハロゲン置換フェニルマグネシウムハロゲン化物、又はｐ−ハロゲン置換フェニルリチウム（４−ブロモフェニルリチウム）とともにターシャリーアルコール８を形成する。そして、それをトリアルキルシラン、例えば、トリエチルシラン等のトリ−Ｃ１−６アルキルシラン及びＢＦ３を用いて処理することにより化合物９へと還元される。その後、強塩基（例えば、ＫＯＨ）とともに、アルコール溶媒、好ましくはｎ−ブタノール等の高沸点を有するものの中で還流により、所望の立体化学を有するブロモフェニル化合物１０を得る。さらに、ブロモフェニル基を、例えばＣ１−６アルキルリチウム化合物でリチオフェニル基に変換し、公知の試薬を用いてカルボキシル化を行うことにより、カルボン酸２を得る。当該生成物から、さらに当該分野において周知の方法により、例えばＣ１−６アルカノ−ルとの反応により、エステル３を得る。
【００７０】
上記の合成は、化合物２及び３の活性な鏡像異性体の光学選択合成のために変更されてもよく、それは図３に示された様に、本発明の活性鏡像異性体の合成に用いられてもよい。このようにして、Ｎ−置換１，２，５，６−テトラヒドロピリジン−４−カルボン酸（例、１２）は酸塩化物に変換され、又、後者の化合物は１Ｒ（＋）−（２，１０）−カンファーサルタム、又は、１Ｓ（−）−（２，１０）−カンファーサルタムをアクリル化するのに用いられる。結果として生じるエノイルサルタム（１３）がアリールマグネシウムハライドと処理されることにより、（１３）は高いジアステレオ面選択性をもって１，４−付加を行い、高い鏡像異性体過剰率で３位にアリール基が導入される。結晶化によって、純粋な鏡像異性体１４が得られる。アミド官能基は加水分解され、キラル補助剤は回復されてもよい。カルボン酸は、上述の様に、三環系ケトン７に変換される。この化合物は、図２にある様に、ブロモフェニルリチウムとの反応、及び後に続くステップにより、本質的に、鏡像異性体的に純粋な２及び３になる。それに代えて、キラルケトン７は、米国特許第５３１９０８４号におけるラセミ体の合成方法に記述されている手順により、鏡像異性的に濃縮された２及び３に変換されてもよい。
【００７１】
濃縮の度合いは、鏡像異性体であるテトラヒドロピリジン類似体が中間体５に還元される際の触媒及び温度に依存する。
【００７２】
米国特許第５３１９０８４号の図３を参照されたい。２３℃、PdCl2/NaBH4/3atm H2 において、７３％の鏡像異性的過剰率（ee）が得られるが、５５℃においては、完全なラセミ化が起こる。一方、Pt/c/Ｈ2においては、上記eeは、６０℃において、２３℃のものと同程度であった（それぞれ、６７％及び７０％）。
【００７３】
メチルエステル３等の、カルボン酸２又はそのエステルは、酸化条件下におけるヨウ素との反応、又は酸化された形態のヨウ素との反応で、ヨード化され、８−ヨード類似体１７又は１８を生ずる（図４）。例えば、酸化水銀の存在下において約１ｍLのヨウ素が３と反応することにより、８−ヨード化合物１８が高い収量で得られる。エステル及び酸は、当該分野において周知の標準的化学手法により、相互に変換可能である。ラセミ体又は鏡像異性体のどちらが用いられてもよい。１２５Ｉ、１２３Ｉ、又は１３１Ｉ等のヨウ素の放射性同位体を用いることにより、放射性ラベルされた１７又は１８の類似体を得ることができる。これらの化合物は、これらの化合物の局在化の状態及び活性部位を特定するのに有用であり、男性の生殖障害の診断の造影剤として用いることができる。
【００７４】
ヨウ素化化合物、特に８−ヨード酸１７は、この酸の金属塩、例えば、ナトリウム塩の形成後、８−金属中間体、（ここで金属はリチウム又はｔ−ＢｕＬｉ等の公知の試薬を用いることにより置換された金属である。）を形成することにより、臭素化、及び塩素化化合物に変換される。８−金属中間体とヘキサクロロエタン又は１，２−ジブロモエチレン等のハロゲン源との反応により、図４に示される化合物１９，２０等の対応する８−置換類似体が得られる。対応するフルオロ化合物は、８−金属中間体をクロロトリメチルシランと反応させ、対応する８−トリメチルシリル化合物を形成し、この化合物をＢＦ３−Ｅｔ２Ｏの存在下、四酢酸鉛と反応させることにより得られる。De Mioら １９９３，Tetrahedron，４９：８１２９−８１３８参照。
【００７５】
様々の主題となっている化合物の放射性類似体は、例えば、８―金属中間体を放射性同位体として求電子ハロゲン原子を含む試薬で処理することにより得られ、また、先に指摘した様に、化合物１７又は１８の放射活性類似体は、上述の化合物の合成において、ヨウ素の放射活性同位体で置換することにより得られる。トリチウムによりラベルされた本発明の化合物は、例えば、８−ヨウ素化合物を、パラジウム、プラチナ等の貴金属の触媒下、トリチウムガスで還元することにより得られる。カーボン１４類似体は、例えば、１４Ｃラベル化された二酸化炭素を、例えば、図２に示した化合物２の合成における段階“ｇ”において用いることにより得られる。
【００７６】
放射化学合成の分野で一般に用いられている、化合物のその他の同位体ラベル方法が用いられてもよい。
【００７７】
本発明の化合物は、人間を含む哺乳動物の受胎能を制御する男性用不妊薬として有効である。家族計画における使用可能性に加え、本発明の化合物は、屠殺が実用的、又は望ましくない、家畜、野生の又は飼いならされていない動物の繁殖力を制御するのに有用である。例えば、合衆国のいくつかの地域では、鹿の数の制御が問題となっており、鹿などの季節的に繁殖する動物に、適切な時期に、本発明の化合物の経口投与をこれらの化合物を含む餌により行うことにより、実質的に繁殖能力が減ぜられると考えられる。野生の羊、豚、馬等と同様、マウス、ラット、プレーリードッグ等の齧歯類動物もターゲットとなる動物である。本発明の化合物を動物園にいる捕獲された動物に投与することにより、数が過剰になった種の繁殖制御の手段となる。
【００７８】
ここで用いられる、「受精能をコントロールする」とは、処置される哺乳動物の受精能、又は生殖能力を減ずることを意味する。不妊期間の長さは投与量の関数であり、十分な用量により、基本的に本発明の化合物を不妊剤として用いるための、不妊のための期間を延ばすことができる；この様に、本発明の化合物は、男性不妊手術としての外科的精管切除を代替しうるものである。これらの不妊法を施す際には、本発明の化合物は、一回のみの用量、又は複数回数（２回以上）の用量により投与が施される（ここで、前記用量は哺乳動物の精子形成能力（精子形成インデックス）を不妊のレベルまで減じるのに十分なものとする。）。つまり、本発明の化合物は、精子数を繁殖に不十分な程度にまで減じるのに十分な量及び期間に渡り投与される。
【００７９】
上述の使用については、本発明の化合物の用量は当然のこととして、用いられる特定の化合物毎、投与の形態、及び不妊を望む期間に依存して異なる。しかし、動物における満足のいく結果は、経口投与において、約０．０２〜約１０ｍｇ/ｋｇ体重、好ましくは約０．１〜３ｍｇ/ｋｇ体重の投与により得られる。より大きな動物については、本発明の化合物の約１０〜約１００ｍｇ/ｋｇの毎日の用量が、一度の経口単位用量として、又は本発明の化合物を約０．１〜１０ｍｇ含む分割単位用量として投与される。一般的に、単一の活性鏡像異性体を投与する場合は、ラセミ化合物を投与する場合より少ない量を投与してもよい。所望の場合や必要な場合には、本発明の化合物は固体又は液体の担体又は希釈剤とともに、又は徐放性形態剤形において投与されてもよい。これらの製薬学的剤形の配合は当該分野においてよく知られており、本発明の化合物については、固体、液体、及び徐放性形態剤形を用意するどんな従来の方法も用いることができる。本発明の化合物については、当該分野において周知の在来の埋め込み法又は皮膚におけるパッチにより投与されてもよい。本発明の化合物は男性の人間の不妊手段として用いてもよく、精子形成を可逆的に阻害することにより、また、非外科手術的不妊法においてのどちらの方法において用いてもよい。後者の場合、適切な大用量の投与により、外科手術なしに精管切除の効果を得ることができ、また、精管切除により生じる潜在的副作用もない。
【００８０】
本発明の化合物は、また、家畜、野生の、飼いならされていない、又は動物園の動物の繁殖を制御するのに有用である。例えば、動物園の動物の繁殖の制御に本化合物が用いられてもよい。人間の居住地の近くに存在する野性及び飼いならされていない動物、例えば鹿の個体数、又は、野生のムスタングや豚等の自然の生態に大きな影響を与える動物の固体数は、選択的に餌付けをすることにより、射殺や毒殺等の屠殺手段を用いることなく、コントロールすることができる。この方法においては動物の行動は影響されず、繁殖性のみが影響される。
【００８１】
Ｒ４が放射活性ラベルである場合、本発明の化合物は、睾丸の機能の研究及び機能不全の診断に有用である。上述の用量の化合物の投与は、睾丸組織に結合することとなる。
【００８２】
反精子形成特性において、本化合物が高度の化学的、立体化学的、鏡像異性的に選択性を持ち、また、性欲等の一般的な効果の減退が生じないことにより、本化合物は、睾丸の特定のマクロ分子と相互作用していることが分かる。本化合物の放射化学的誘導体で睾丸や睾丸断片を処理し、放射化学の分野において周知の技術を用いて放射能を測定することにより、反精子形成に関与する睾丸の部位を特定し、及びそのマクロ分子を同定することができる。この様にして、睾丸の重要な構成要素であり、その要素の破壊が不妊効果に直結するという部分を検知し、特定することができる。他の化合物（本発明化合物の類似体、無作為配列ライブラリーにおけるもの等）との放射能標識された化合物の結合を阻害する能力の比較により、より選択的で強力な反精子形成化合物を得ることができる。さらに、放射能標識された化合物を小用量（生殖能に医学的に効果を有するには小さすぎるもの）動物や人間の被検体に投与し、睾丸や、睾丸の特定部位の放射能量を測定することにより、生殖能の存在する問題がこのマクロ分子欠損に関連するかどうかを示すことができる。放射能は、ＰＥＴやＳＰＥＣＴ等の生物学的組織の造影の分野において周知の技術によって、生きた動物、又は人間において測定できる。
【００８３】
この化合物は、分析目的の内的スタンダードとしてまた有用である。よって、例えば２０等の化合物は、化合物１７が投与された動物、又は人間からの血液、プラスマ、又は組織に既知量加えられてもよい。次に、血液、プラスマ、又は組織のサンプルは、有機溶媒を用いて抽出された後、高性能液体、又はガスクロマトグラフィーで分析してもよい。なお、この際、メチルエステル等の誘導体に変換後に測定を行ってもよい。１７及び２０に関連するクロマトグラフィーのピークを測定し、同じコンディションにある既知の化合物１７及び２０の面積比率と比較することにより、血液、プラスマ、又は組織中の１７の濃度を同定することが可能となる。１７と２０は構造が類似していることから、抽出についての物理化学的性質は類似しており、一方が他方のほとんど理想的なスタンダードとなるのである。
【００８４】
殺精剤としての使用について、本発明の化合物は様々な形態での投与が可能である。在来の殺精組成物は、既知の方法により調製される。この様な殺精剤は、ゲル、フォーム、ゼリー、クリーム、軟膏、サルブ（salve）等の形態をとる。在来の担体が本組成物の調製に用いられる。本発明の殺精組成物は、単独で、又は、１以上の避妊の阻害方法（ペッサリー、スポンジ、コンドーム等）ともに用いられてもよい。本組成物はペッサリー、スポンジ、コンドーム等に使用の直前に直接塗布してもよく、スポンジ又はコンドームと一緒に予めパックしてあってもよい。（ペッサリーについても同様だが、大抵のペッサリーは複数回用いるものであり、使用の度に洗浄される。
【００８５】
殺菌剤としての使用には、本発明の組成物は必要とする部位への投与に適するいかなる形態においても調製され得る。投与の形態は液体混合物に加え、上述の殺精組成物について挙げられたものを含み、またこれらに限定されるものではない。上述の一般的な投与の形態を用いて、殺精及び殺菌特性が、組み合わせて利用されるものでもあってもよい。
【００８６】
本発明の他の特徴については、以下の実施形態の記述において明らかにする。これらは本発明の説明のために用いられるものであり、本発明を限定するものではない。
【実施例】
【００８７】
実施例１
（4aRS,5SR,9bRS）2-エチル-7-メチル-2,3,4,4a,5,9b-へキサヒドロ-5-(p‐カルボキシフェニル-1H-インデノ[1,2-c]ピリジンヒドロクロリドの合成
【００８８】
メタノール（５００ｍL）中のヨードエタン（５４０ｇ、３．４１mol）を、エチルイソニコチエートに加えた。混合物を夜通し緩やかに還流し、ホウ化水素ナトリウム（１４０ｇ）を、氷浴をもちいての冷却下において少しづつ、上述の溶液に加えた。ＮａＢＨ４の添加の終わった後、混合液が室温で夜通し攪拌した。メタノールのほとんどを蒸発させ、水とエーテルを溶液に加え、エーテル層を分離した後、ドライエーテル（Ｎａ２ＳＯ４）層の蒸発により、オイルを得た。この赤いオイルの蒸留により、黄色いオイル（４７０ｇ，７８％）：沸点0.5mmで160℃、を得た。
【００８９】
ドライエーテル（２００ｍL）中の上述の化合物（１４６ｇ，０．８mol）をエーテル中の１Mｐ−トリルマグネシウムブロミド（600ｍL,1.6mol -10℃において）に滴下した。３時間にわたり攪拌した後、反応混合物を、１０％のNH4Cl水溶液（２００ｍL）に注いだ。水層をエーテルにより抽出し、ドライ（Na２SO４）エーテルの蒸発により黄色がかった茶色のオイルを得た。このオイルを、１８％塩酸（５００mＬ）に溶解し、エーテルにより抽出した。塩酸水溶液を２時間還流し、溶媒の蒸発により対応するアミノ酸（１８１ｇ、収率８０％）を得た。このうち３２ｇをポリ燐酸（５００ｇ）と混合し、140℃において３時間激しく攪拌した。反応混合物を冷却し、５０％KOH水溶液を慎重に加えた。塩基性となった溶液を、エーテルにより抽出し、ドライ（Na２SO４）エーテル層の留去により、2−エチル−7−メチル−2,3,4,4a.アルファ．5,9b−アルファ−ヘキサヒドロ−１H−インデノ[1,2-c]ピリジン−5−オンをオイル（２２．６ｇ、８７％）として得た。CHCH３中MeOH（０−５％）勾配を用いSiO2の小カラムを使用することにより、分析サンプルを得た。
【００９０】
【数１】
2010202671.tif 000014
【００９１】
テトラヒドロフラン（THF）（１５ｍL）中のパラ−安息香酸（１．６ｇ，８．０ｍmol）の機械的攪拌溶液にn-ブチルリチウム化合物（16.2mmol,ヘキサン中の２．５M溶液６mＬ）を４５分以上に渡って滴下した。混合液をさらに１．５時間攪拌した後、三環系ケトン（１．１g，５．１ｍmol）をTHF溶液（５ｍL）として、３０分以上をかけて、滴下により加えた。その後、−78℃において、攪拌を２．５ｈ続けた。混合液を氷温の1M塩酸（７５mＬ）に加え、エーテルにより抽出した（２度、３０mＬ）。酸性水層を室温において１５ｈに渡り攪拌し、減圧下、濃縮して固体を得た。この固体を、シリカのフラッシュカラムクロマトグラフィーにより、CHCH３中の１０％から２０％のMeOHの勾配溶出で精製し、2-エチル-7-メチル-2,3,4,9b−テトラヒドロ-5-(p‐カルボキシフェニル)-1H-インデノ[1,2-c]ピリジンヒドロクロリドを黄色の固体（１．１ｇ，５８％）として得た。
【００９２】
【数２】
2010202671.tif 000015
【００９３】
エタノール/水（１：１混合物４０ｍＬ）中の上述の化合物（３７９ｍｇ、1.03mmol）に、ＮａＣｌ（８１ｍｇ），ＰｄＣｌ２（９８ｍｇ）、ＮａＢＨ４（１００ｍｇ）、濃ＨＣｌ（１０滴）を加えた。混合液をパール装置により50℃、水素雰囲気下（４５ｐｓｉ）で１５時間攪拌した後、セライドにより濾過し、減圧下において濃縮した。得られた固体は、無水アルコール中に懸濁し、それをセライドにより濾過し、濾過物を減圧下で濃縮することにより、(4aRS,5RS,9bRS）2-エチル-7-メチル-2,3,4,4a,5,9b−へキサヒドロ-5-(p‐カルボキシフェニル)-1H-インデノ[1,2-c]ピリジンヒドロクロリドを得た。
【００９４】
【数３】
2010202671.tif 000016
【００９５】
ｎ−ブタノール（６０ｍＬ）中の水酸化カリウム（１５ｇ）の溶液に、上述の化合物（２．９９ｇ，８．０ｍｍｏｌ）を一度に加えた。２０時間の還流の後、濃茶の混合物を0℃まで冷却し、１８％ＨＣｌでｐＨ＝１に酸性化した。溶液を真空で除くことにより、黄色の固体を得た。この固体をＣＨＣｌ３に溶かし、セライドによりろ過し、ろ過物を真空下で濃縮し、粗(4aRS,5SR,9bRS）2-エチル-7-メチル-2,3,4,4a,5,9b−へキサヒドロ-5‐(p‐カルボキシフェニル-1H-インデノ[2,2-c]ピリジンヒドロクロリドを、オフホワイトの液体として得た。この固体を、フラッシュカラムクロマトグラフィーにより、１０％のMeOH−CHCH3を用いて精製し、１．２３ｇ（４１％）のオフホワイトの標題化合物を得た。融点280℃（分解）
【００９６】
【数４】
2010202671.tif 000017
【００９７】
実施例２
（4aRS,5SR,9bRS）‐2-エチル-7‐メチル‐2,3,4,4a,5,9b-へキサヒドロ‐5- (ｐ‐カルボキシメトキシフェニル)-1H-インデノール(1,2−c)ピリジンヒドロクロリド
【００９８】
−１０℃のメタノール（５０ｍＬ）中の実施例１のカルボン酸（３．６ｇ，９．６９ｍmol）の溶液に塩化チオニル（１．１ｍＬ，１４．５ｍmol）を１０分以上かけて加えた。得られた溶液は、5℃において、６８時間渡り冷蔵庫中に置いておかれた、その間に、生成物は、細く白い針状として晶出した。この過程を３回行うことにより得られたものを集め、２．６５ｇの標題化合物を得た。融点２０４℃（昇華）
【００９９】
【数５】
2010202671.tif 000018
【０１００】
実施例３
（4aRS,5SR,9bRS）-2-エチル-2,3,4,4a,5,9b-へキサヒドロ-8-ヨード-7-メチル-5-(4‐カルボキシメトキシフェニル)-1H-インデノ[1,2-c]ピリジンヒドロクロリド(18)及びその（ｌ）-鏡像異性体（（ｌ）-１８）の合成
【０１０１】
氷酢酸（２ｍＬ）中の（4aRS,5SR,9ｂRS）‐2-エチル-2,3,4,4a,5,9b-へキサヒドロ-7‐メチル‐5- (４‐カルボキシメトキシフェニル)-1H-インデノ[1,2-c]ピリジン（３４１ｍｇ、０．８８ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に６２％ＨＣｌＯ４（１ｍＬ）を加え、続いて、ＨｇＯ（２０５ｍｇ，０．９５ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を均一な溶液とするべく超音波処理をした。氷酢酸（１７ｍＬ）中のヨード（２３５ｍｇ，０．９２５ｍｍｏｌ）を１５分以上に渡り滴下し、結果として得られた混合物を室温で夜通し攪拌した。オレンジ−赤の混合物を水（１００ｍＬ）に注ぎ、5℃まで冷却し、３０％ＮａＯＨにより、ｐＨ１２に塩基性化した。エーテルにより抽出を行い（３ｘ７５ｍＬ）、透明で、無色の抽出物を集めた。水（２０ｍL）、及び、塩水（３０ｍL）により、連続して洗浄後、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、ろ過をし、真空中で濃縮することにより、１８の遊離塩基の粗生成物を得た（４４８ｍｇ）。この物質を３％メタノール性塩化水素を用いてＨＣｌ塩に変換し、ＥｔＯＡｃ−ＭｅＯＨから再結晶した。得られたものは、４００ｍｇ（８９％）であり、融点は190℃以上（分解）であった。
【０１０２】
【数６】
2010202671.tif 000019
【０１０３】
活性鏡像異性体(l)−18を (l)−３から開始して、同様の方法により合成した。［α］Ｄ＝−５．６（ｃ＝１．１８，ＣＨＣｌ３）
【０１０４】
実施例４
（4aRS,5SR,9bRS）-2-エチル-2,3,4,4a,5,9b−へキサヒドロ-8-ヨード-7-メチル-5-(4‐カルボキシフェニル)-1H-インデノ[1,2-c]ピリジンヒドロクロリド(17)の合成
【０１０５】
酢酸（２ｍＬ）中の（４aRS,5SR,9bRS）‐2-エチル-2,3,4,4a,5,9b−へキサヒドロ-７‐メチル‐5- (4‐カルボキシフェニル)-1H-インデノ［1,2-c］ピリジンハイドロクロライド（２５０ｍｇ，０．６７３ｍｍｏｌ）に酢酸及び過塩素酸の１：１混合物６ｍＬを加え、ＨｇＯ（１．３５ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で、ＨｇＯが溶解するまで攪拌した。酢酸（４ｍＬ）中のヨード（４２７ｍｇ，１．６８ｍｍｏｌ）及び６ｍLのＣＨ２Ｃｌ２を滴下漏斗により反応混合物に滴下し、結果として得られた混合物を室温で夜通し攪拌し、その後、セライドにより濾過した。赤の固体を、水及びＣＨ２Ｃｌ２で洗浄し、得られた２層の濾過物を、分液ロートにより分離した。有機層を、飽和亜硫酸水素ナトリウムで洗浄した後、（無水）硫酸ナトリウムで洗浄し、濾過した後、濃縮し、黄−茶色の固体２３４ｍｇを得た、その後、ハイドロクロリドに通常の方法で変換した。
【０１０６】
【数７】
2010202671.tif 000020
【０１０７】
実施例５
（4aRS,5SR,9bRS）‐2-エチル-8-ブロモ-7‐メチル‐2,3,4,4a,5,9b−へキサヒドロ-5-(4‐カルボキシフェニル)-1H-インデノ[1,2-c]ピリジンヒドロクロリド(19)の合成
（4aRS,5SR,9bRS）‐2-エチル-8-ヨード-7‐メチル‐2,3,4,4a,5,9b−へキサヒドロ-5- (4‐カルボキシフェニル)-1H-インデノ［1，２−ｃ］ピリジンヒドロクロリド（２００ｍｇ，０．４０２ｍｍｏｌ）を２０ｍＬのＴＨＦ及び０．４ｍＬのヘキサメチルホスホルアミドに溶解した。この溶液に、水素化ナトリウム（鉱物オイル中に６０％のもの）５０ｍｇを加えた。混合液を、１時間還流し、−78℃まで冷却した。Ｔｅｒｔ−ブチルリチウム溶液（0.73mL，ペンタン中１.１Ｍ，０．８０４ｍｍｏｌ）をゆっくり加え、その後、この溶液を、−78℃で20分間攪拌した。1，２−ジブロモエタン（１ｍＬ）を加え、混合物を−78℃でさらに３0分間攪拌し、室温まで温めた。５％の塩酸を、溶液が酸性になるまで加え、混合物を塩化メチレンにより抽出した。この塩化メチレン溶液を塩水で洗浄後、ＭｇＳＯ４で乾燥した。粗生成物を、フラッシュクロマトグラフィーにより精製し（シリカ；塩化メチレン及びメタノール、１０：１）、標題化合物を得た、３０ｍｇ，収量１７％，融点169.6-170.3℃。
【０１０８】
【数８】
2010202671.tif 000021
【０１０９】
実施例６
(4aRS,5SR,9bRS)‐2-エチル-8-クロロ-7‐メチル‐2,3,4,4a,5,9b-へキサヒドロ-5-(4-カルボキシフェニル)-1H-インデノ［1,2-c］ピリジンヒドロクロリド（20）の合成
(4aRS,5SR,9bRS)-2-エチル-8-ヨード-7-メチル‐2,3,4,4a,5,9b-へキサヒドロ-5-(4-カルボキシフェニル)-1H-インデノ[1,2-c]ピリジンヒドロクロリド（２５０ｍｇ，０．５ｍｍｏｌ）を２５ｍＬのＴＨＦ及び０．５ｍＬのヘキサメチルホスホアミドに溶解した。この溶液に、水素化ナトリウム（鉱物オイル中に６０％のもの）６０ｍｇを加えた。混合液を、１時間還流し、−78℃まで冷却した。Ｔｅｒｔ−ブチルリチウム溶液（ペンタン中０．９１ｍＬ，１，１Ｍ，１．０４ｍｍｏｌ）をゆっくり加え、その後、この溶液を、−78℃で20分間攪拌した。２ｍＬのＴＨＦ中のヘキサクロロエタン（２．４６ｇ，１０．４ｍｍｏｌ）溶液を加え、混合物を−78℃でさらに３0分間攪拌し、次に、室温まで温めた。５％の塩酸を、溶液が酸性になるまで加え、混合物を塩化メチレンにより抽出した。この塩化メチレン溶液を塩水で洗浄後、ＭｇＳＯ４で乾燥した。粗生成物を、フラッシュクロマトグラフィーにより精製し（塩化メチレン及びメタノール、１０：１）、標題化合物を得た、６０ｍｇ，収量３０％。
【０１１０】
【数９】
2010202671.tif 000022
【０１１１】
実施例７
(4aRS,9bRS)‐2-エチル-1,2,3,4,4a,9b-へキサヒドロ-1H-インデノ[1,2-c]ピリジン-5-オン(7)の合成
【０１１２】
１６５ｇのメチル １-エチル-１，２，５，６-テトラヒドロピリジンカルボキシレートから、類似のエチルエステルについて米国特許第５３１９０８４号に説明されているものと同様に調製された粗製メチル １-エチル-３-（４-メチルフェニル）-４-ピリジンカルボキシレートを１Ｌの１８％ＨＣｌ水溶液に溶解し、エーテル（３００ｍL）で抽出することにより、この合成で、副生成物として残っているビトリル（bitolyl）を取り除いた。この水溶液は、４８時間に渡り還流され、減圧下においてアセトニトリルの添加の下濃縮され（アゼオトロープ）、１−エチル−１，２，５，６−テトラヒドロピリジンカルボン酸ヒドロクロリド（２８３ｇ）を得、高真空、100℃において完全に乾燥した。
【０１１３】
この物質は、非常に吸湿性が高いため、窒素と共に貯蔵した。塩化チオニル（１５０ｍL）を、純粋な７（４５ｇ，１５９mmol）に5℃において加えた。その後、氷浴を取り除き、結果として生じる均一な溶液を室温で４時間に渡って攪拌した。過剰のＳＯＣｌ２が、真空下で取り除かれ、暗く、濃く、ペースト状の塊を得た。この物質に、1，２−ジクロロエタン（２５０ｍＬ）を加え、溶媒３０ｍＬを取り除くことにより、残存するＳＯＣｌ２を取り除いた。この混濁した混合液に、４５分に渡って、少しづつＡｌＣｌ３（５３ｇ、３９７mmol）を加えた。温度は、水浴により約25℃に制御した。添加後、濃い、赤茶色の溶液を35-40℃において、一時間攪拌し、次に約４００ｇの砕氷及び５０ｍLの濃塩酸を含むビーカーに注いだ。水層を、３０％NaOH（約３５０ｍL）により、氷浴による冷却下において約１２のｐＨに塩基性化した。結果として得られた混合物を、氷浴による冷却下において、エーテル（３ｘ４００ｍＬ）によって抽出し、集められたエーテル層を、水と塩水により、連続して洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ４）し、濾過した後、減圧下において濃縮をし、オレンジ−赤色のオイルを得た。このオイルを、クーゲルロール器具（０．５ｍｍＨｇにおいて１２５−１３５℃）で蒸留し、２１．６ｇ（５９％）のケトン７を輝黄色の固体として得た。当該物質は基準物質と同じＮＭＲ特性を持っていた。
【０１１４】
実施例８
(4aRS,5SR,9bRS)-2-エチル-7-メチル-5-（4-カルボメトキシフェニル）-2,3,4,4a,5,9b−へキサヒドロインデノ[1,2-c]ピリジン、及び（4aRS,5SR,9bRS）-2-エチル-7-メチル-5-（4-カルボキシフェニル）-2,3,4,4a,5,9b-へキサヒドロインデノ[1,2-c]ピリジンの鏡像異性体の合成
【０１１５】
鏡像異性体は、所定の溶媒中、ナトリウムＤ線における旋光に基づき（ｄ）または（ｌ）と表現される。同じ旋光符号を有する化合物が、必ずしも同じ絶対配置を有するとは限らない。
【０１１６】
１-エチル-4-カルボキシ-1,2,5,6‐テトラヒドロピリジンヒドロクロライド、メチル 1-エチル-1,2,5,6-テトラヒドロピリジンカルボキシレート(11)を、１．５Ｍ ＨＣｌ ２５０ｍＬ中、４時間に渡り還流した。混合物を、加熱下、窒素気流中において、乾燥するまで濃縮し、結晶性の高い個体を得た。この固体を、メタノールより再結晶し、１２のＨＣｌ塩１９．６ｇを得た。；融点＝265℃．（分解）。（元素）分析（Anal.）計算値；Ｃ８Ｈ１４ＣｌＮＯ２：C,50.14；H,7.36；N,7.31.実測値；C,50.23；H,7.36；N,7.28
【０１１７】
（ｌ）−エノイル サルタム（１Ｓ（−）−（２，１０）カンファーサルタムから得られた（ｌ）−１３））
１２のハイドロクロリド（１．３ｇ，６．７９ｍｍｏｌ）に対し、塩化チオニル（１５ｍＬ）を加え、結果として生ずる混合物を、還流下で２時間に渡り加熱した。過剰のＳＯＣｌ２を、真空下において取り除き、残余を１０ｍＬのドライトルエンとともにひき潰した後、真空中において濃縮した。ひき潰し過程は、あと２回繰り返され、黄色で粉状の固体を得た。別の容器においては、n-ブチルリチウム（15mmol,6.0mL、ヘキサン中の２．５M溶液）を１Ｓ-（−）-２，１０-カンファーサルタム（3.16g,14.7mmol）のＴＨＦ溶液（３０ｍL）に、５℃で滴下により加えた。滴下後、透明で、無色の溶液を室温にした後、さらに４５分間攪拌した。サルタムアニオンの溶液を、5℃において、塩化アミノ酸ヒドロクロライドを含むフラスコに加え、添加後、オレンジ色の混合液を、室温に戻し、１８時間に渡り攪拌した。反応は、飽和ＮＨ４Ｃｌ（約１ｍＬ）を加えることにより停止され、真空下で、茶色のタール状の残留物を得た。残留物は、水とエーテルに分配され、エーテル層は水で再度洗浄された。エーテル層は希釈したＨＣｌ溶液（約５％）でもって洗浄され、分離された。遊離したサルタム（エーテル層）を、無水エタノールからの再結晶により得た（１．２ｇ）。生成物［（ｌ）-１３］を、酸性の水層を濃ＮＨ４ＣｌでｐＨ１２に塩基性とした後、エーテルで抽出し、エーテル層の蒸発による残留物をn-ヘキサンにより再結晶化することにより、白色で、太い、針状結晶として（ｌ）−１３を、１．９ｇ得た。；融点＝120℃．，［α］Ｄ２１＝−７４．８°（ｃ＝１．０，ＣＨＣｌ３），１ＨＮＭＲにおいては、鏡像(異性)体と同じ結果であった（以下の通り）。Ｃ８Ｈ２８Ｎ２Ｏ３Ｓの分析結果（Anal.）、計算値；C,61.33；H,8.01；N,7.95.実測値；C,61.35；H,8.06；N,7.89
【０１１８】
1R(+)-(2,10)-カンファーサルタムから誘導される１３の(d)-エノイル サルタム鏡像異性体
アミノ酸１２（６．５ｇ，３４．１ｍｍｏｌ）のハイドロクロリド、及び1R-(+)-2,10-カンファーサルタム（１５．４ｇ、７１．４ｍｍｏｌ）より、上記の鏡像(異性)体と同様の方法により収率８６％において調製した。融点＝118.5℃―119.6℃（ヘキサンより再結晶される、厚い淡黄色の葉状晶）。
【０１１９】
【数１０】
2010202671.tif 000023
【０１２０】
この物質の結晶形は、ヘキサンからの沈殿の早さ、及び精製段階における濃度に依存する。
【０１２１】
(l)−13より誘導される1，４付加(l)−14
-78℃におけるトルエン（２００ｍＬ）中のエノイルサルタム（ｌ）−１３（５．６ｇ，１６．０ｍｍｏｌ）溶液に、ｐ−トリルマグネシウムブロミド（３３．６ｍmol,エーテル中１．０Ｍ溶液、3３.6mL）を、１０分以上かけて加えた。−78℃においてさらに３０分間攪拌した後、反応混合物を冷凍庫（−10℃）に一晩置き、その後、+5℃に温めた後、さらに２時間置いた。混合物に、飽和ＮＨ４Ｃｌ（２００ｍＬ）を加えて反応を止めた。水層をエーテル（４００ｍＬ）で抽出した後、エーテル層を、３％ＨＣｌ（３ｘ２００ｍＬ）により抽出した。酸性の層を集め、濃ＮＨ４ＯＨにより、塩基性とした（ｐＨ＝１２）。エーテル（３ｘ２００ｍＬ）により抽出したのち、エーテル層を、塩水で洗浄後、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過した。その後、減圧下において、濃縮し、オレンジ色の固体（７．１２ｇ）を得た。この固体をエーテル-へキサン（それぞれ１：２の混合比のもの約４０ｍＬ）により再結晶した。収量は３．６４ｇであった。二度目の操作によりさらに１．２４ｇを得、計４．６８ｇ（６６％）を得た。融点１５０．５−１５１．７℃（エーテル−へキサン系；密集して、厚い淡黄色の角柱結晶）；
【０１２２】
【数１１】
2010202671.tif 000024
【０１２３】
(l)−１４より誘導される鏡像異性的に純粋なケトン（ｄ）−７
ＴＨＦ（４０ｍL）中の１，４−付加体（ｌ）−１４（６．８６ｇ，１５．４５ｍｍｏｌ）にＬｉＯＨ・Ｈ２Ｏ（６．４３ｇ，１５３ｍｍｏｌ）の水溶液（４０ｍＬ）を加えた。結果として生じる不均一の混合物を、穏やかな還流の下、２６時間激しく攪拌した。混合物を、約+5℃まで冷却し、濃塩酸で、ｐＨ＝Ｏまで酸性化し、温かい水浴（温度＝50℃）に浸しながら、混合物の表面より、やや強い窒素ガス流に直接当てることにより、揮発性組成物の大部分を混合物より取り除いた。残りの固体を高真空下で徹底的に乾燥した。チオニルクロライド、そして後にＡｌＣｌ３を1，２−ジクロロエタン中で用いることにより、ラセミ体（上参照）と同様の方法により、この粗原料を、ケトン（ｄ）−７に環化した。このことにより、遊離塩基ケトン（ｄ）−７を１．１２ｇ得た。これは、一晩放置することにより、固化した。本材料の一部分は物理学的データを得るために、次の工程より回収した後、精製した。[α]Ｄ２０＝＋９５．９°（遊離塩基、ｃ＝１．２、ＣＨＣｌ３）；[α]Ｄ２０＝＋７１．９°（ＨＣｌ塩、ｃ＝１．１、ＣＨＣｌ３）；
【０１２４】
ケトン(d)-7より誘導された鏡像異性体的に純粋なオレフィン（ｄ）−１５
この物質は、ケトン（ｄ）−７（１．１２ｇ，４．８９ｍｍol）より、ラセミ体と同様の工程（米国特許 第５３１９０８４号参照）により得た。この収量は８５０ｍｇ（４７％）であった。[α]Ｄ１９＝＋２１．２°（ｃ＝１．２４、ＣＨＣｌ３）
【０１２５】
(l)-2-エチル-7-メチル-2,3,4,4a,5,9b-へキサヒドロ-5-(４-ブロモフェニル)-５-ヒドロキシ-１Ｈ-インデノ[1,2-c]ピリジンの合成
−78℃において、160mLのＴＨＦ中の、４−ブロモヨードベンゼン（１３．８ｇ，４８．９ｍmol）の強烈な攪拌溶液に、ｎ−ブチルリチウム溶液（１９．６ｍＬ，ペンタン中２．５Ｍ ４９ｍｍｏｌ）を非常にゆっくりと加えた。添加後、溶液を、−78℃において１０分間攪拌し、溶液は黄色で曇った色となった。さらに、４０ｍＬのＴＨＦ中の(d)−2−エチル−7−メチル-1,2,3,4,4a,5,9b−へキサヒドロインデノ[1,2−c]ピリジン−5−オン（８ｇ,３４．９ｍＭ）を加えた。その後、混合物を−78℃において、２時間に渡り攪拌した。冷却浴を除去した後、混合物を、水で反応停止した。有機層を分離し、水層を塩化メチレンにより抽出した。有機層を集め、塩水で洗浄後、ＭｇＳＯ４で乾燥した。溶媒の留去により、粗生成物を得た。これが塩化メチレンから再結晶され、標題化合物を得た（１０．８ｇ,８０％）。融点169.6−170.3℃
【０１２６】
【数１２】
2010202671.tif 000025
【０１２７】
（4aSR,5RS,9bSR）-2-エチル-7-メチル−2,3,4,4a,5,9b-ヘキサヒドロ-5-（4-ブロモフェニル）-１Ｈ-インデノ[1,2−c]ピリジン（ｌ）の（ｌ）−鏡像異性体の合成
(l)-10-2-エチル-7-メチル-2,3,4,4a,5,9b-ヘキサヒドロ−5-(4-ブロモフェニル）-5-ヒドロキシ−1Ｈ−インデノ[1,2-c]ピリジン（４．５ｇ、１３ｍmol）,及び３００ｍＬの無水塩化メチレン中の１００ｍＬトリエチルシランの溶液を、−78℃まで冷却した。トリフルオロボランガスを、溶液に１０分間に渡りバブリングした。無色の溶液がオレンジに変わった。混合物を室温まで温め、１０ｇの炭酸カリウムを加え、水も続いて加えた。有機層を分離し、水層を塩化メチレンにより抽出した。有機層を集め、塩水で洗浄後、ＭｇＳＯ４により乾燥した。溶媒を留去し、粗生成物を得た。
【０１２８】
粗生成物を４０ｍＬのｎ−ブタノールに溶解した。水酸化カリウム（９ｇ）を加え、混合物を攪拌しながら還流下において加熱した。２０時間の還流の後、混合物を室温まで冷却し、氷に注いだ。混合物を、塩化メチレンにより抽出し、塩化メチレン水溶液を、塩水で洗浄後、ＭｇＳＯ４により乾燥した。溶液を蒸発させ、粗生成物を、ジエチルエーテルと１８％塩酸溶液との間で分配した。それぞれの層が分離され、水層を、ジエチルエーテルで再度洗浄した。水層を0℃まで冷やし、５０％水酸化ナトリウム溶液でｐＨ＞１４にまで塩基性化した。混合物を、塩化メチレンで３度抽出した。有機層を塩水で洗浄後、ＭｇＳＯ４により乾燥した。溶媒の留去により、粗生成物を得た。さらに、フラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル；塩化メチレン及びメタノール、１００：３）により精製後、標題化合物（ｌ）−１０を得た。3.2g，収量67％（２段階に渡る収率）。ハイドロクロリドが、通常の方法により生成した。融点240℃（分解）
【０１２９】
【数１３】
2010202671.tif 000026
【０１３０】
（4aRS,5SR,9bRS）-2-エチル−2,3,4,4a,5,9b-ヘキサヒドロ−7−メチル−5−(4−カルボキシフェニル）−1H−インデノ[1,2−c]ピリジンヒドロクロリド[(l)-2]の（ｌ）−鏡像異性体の合成
５mLのＴＨＦ中の１００ｍｇ（０．２７ｍｍｏｌ）の（ｌ）-10の溶液を、−78℃に冷却した。この溶液に０．５４ｍLのｎ−ブチルリチウム溶液（ペンタン中２．５Ｍ １．３５ｍｍｏｌ）を加えた。添加後、溶液を、−78℃において、３０分間攪拌し、二酸化炭素ガスを、溶液に針を通じて１０分間泡状に吹き込んだ。溶液を、−78℃において、さらに１０分間攪拌し、室温へと温めた。ＴＨＦは蒸発され、残留物を１８％の塩酸により酸性化した。次に、混合物を塩化メチレンにより抽出した。塩化メチレン溶液は、塩水で洗浄後、ＭｇＳＯ４により乾燥した。乾燥試薬を濾過した後、溶液は濃縮され、粗生成物を得た。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；塩化メチレン及びメタノール、１０：１から１：１）により精製し、７２ｍｇの(−)−2を収量７１％で得た。 [α]Ｄ２０＝−１５．５°(c＝1.24、MeOH）
【０１３１】
（4aRS,5SR,9bRS）-2-エチル-2,3,4,4a,5,9b-ヘキサヒドロ−7−メチル−5−（4−カルボキメトキシフェニル）−１Ｈ−インデノ[1,2−ｃ]ピリジンヒドロクロリド[(d)-3]の（d）−鏡像異性体の合成
１mLのメタノール中の（ｌ）−２の溶液（２０ｍｇ）を、−１０℃に冷却した（氷―アセトン）。過剰の塩化チオニルを加え、その後、室温へと温め、一晩攪拌した。過剰の塩化チオニルと溶媒を窒素と共に飛ばし、残留物を真空下において乾燥した。粗生成物をＨＰＬＣ（スミキラル，ＱＡ−４９００，４ｍｍ x 25ｃｍ；溶媒：５３．８％ 1，２−ジクロロエタン，４４％ヘキサン，２．２％エタノール，及び０．１％ＴＦＡ；流量：０．８ｍＬ/min；λ＝２５４ｎｍ）により分析した結果、（ｄ）−３が、＞９７％のeeであることを示した。
【０１３２】
（4aRS,5SR,9bRS）-2エチル-2,3,4,4a,5,9b-ヘキサヒドロ-7-メチル-5-（4-カルボキシフェニル）-1Ｈ-インデノ[1,2-c]ピリジンヒドロクロリド[(d)-2]の(d)−鏡像異性体、及び
（4aRS,5SR,9bRS）-2-エチル-2,3,4,4a,5,9b-ヘキサヒドロ-7-メチル-5-(4-カルボキシメトキシフェニル）-１Ｈ−インデノ[1,2-c]ピリジンヒドロクロリド[(l)-3]の(l)-鏡像異性体、の合成
これらの二つの化合物を、上述のエノイルサルタム(d)-13を出発物質として、逆（ir）鏡像異性体の合成に用いられる連続する工程を実施することにより合成することができる。これらの化合物の特性は、既に記述されている。 Cookら、J.Med. Chem.,38：753-763(1995)参照
【０１３３】
明らかに、本発明には、上記教示に基づき様々な変更及びバリエーションが可能である。よって、本発明は、添付のクレームの範囲において、ここに特に記述したのと異なった態様において実施されてもよい。 
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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