(57)【要約】      （修正有）【課題】骨粗鬆症治療剤として有用な新規ビタミンＤ３誘導体の提供。【解決手段】下記式（１）で表される１９−ノルプレビタミンＤ３誘導体またはその医薬上許容される溶媒和物。2010111593.tif 000018［式中、Ｒ１およびＲ２は、双方とも水素原子、どちらか一方が水素原子で他方がＣ１−Ｃ６のアルキル基、双方一緒になってメチレン基、または双方一緒になってＣ１−Ｃ５アルキルメチレン基を表す。］【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式（１）で表される１９−ノルプレビタミンＤ３誘導体またはその医薬上許容される溶媒和物。
【化１】
2010111593.tif 000016
［式中、Ｒ１およびＲ２は、双方とも水素原子、どちらか一方が水素原子で他方がＣ１−Ｃ６のアルキル基、双方一緒になってメチレン基、または双方一緒になってＣ１−Ｃ５アルキルメチレン基を表す。］
【請求項２】
前記式（１）のＲ１およびＲ２が、双方とも水素原子である請求項１に記載の１９−ノルプレビタミンＤ３誘導体またはその医薬上許容される溶媒和物。
【請求項３】
前記式（１）のＲ１およびＲ２が、どちらか一方が水素原子で他方がメチル基である請求項１に記載の１９−ノルプレビタミンＤ３誘導体またはその医薬上許容される溶媒和物。
【請求項４】
前記式（１）のＲ１およびＲ２が、双方一緒になってメチレン基である請求項１に記載の１９−ノルプレビタミンＤ３誘導体またはその医薬上許容される溶媒和物。
【請求項５】
請求項１から４のいずれかに記載の１９−ノルプレビタミンＤ３誘導体またはその医薬上許容される溶媒和物を有効成分として含有する骨粗鬆症治療剤。
【請求項６】
下記式（２）で表される１９−ノルプレビタミンＤ３誘導体の製造中間体。
【化２】
2010111593.tif 000017
［式中、Ｒ３およびＲ４は、双方とも水素原子、どちらか一方が水素原子で他方がＣ１−Ｃ６のアルキル基、双方一緒になってメチレン基、または双方一緒になってＣ１−Ｃ５アルキルメチレン基を表す。］
【請求項７】
前記式（２）のＲ３およびＲ４が、双方とも水素原子である請求項６に記載の１９−ノルプレビタミンＤ３誘導体の製造中間体。
【請求項８】
前記式（２）のＲ３およびＲ４が、どちらか一方が水素原子で他方がメチル基である請求項６に記載の１９−ノルプレビタミンＤ３誘導体の製造中間体。
【請求項９】
前記式（２）のＲ３およびＲ４が、双方一緒になってメチレン基である請求項６に記載の１９−ノルプレビタミンＤ３誘導体の製造中間体。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、医薬品として有用な１４−エピ−１９−ノルプレビタミンＤ３誘導体またはその医薬上許容される溶媒和物、およびそれらを用いた骨粗鬆症治療剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
活性型ビタミンＤ３誘導体は、小腸でのカルシウム吸収促進作用を有し、骨では骨吸収、骨形成を調節する等の作用を有し、骨粗鬆症の治療剤として使用されている。また、副甲状腺ホルモン（ＰＴＨ）の分泌抑制作用を有し、ＰＴＨの亢進した二次性副甲状腺機能亢進症の治療に用いられている。さらに、これらの作用に加えて免疫調節作用、細胞増殖抑制作用や細胞分化誘導作用が見いだされ、例えば、癌、乾癬、関節リウマチ、真性糖尿病、高血圧症、アクネ、湿疹、皮膚炎等の疾患治療剤への適応が検討されている。
【０００３】
一般にビタミンＤ３誘導体（３）は、下記スキーム１に示すようにプレ体（４）との平衡状態で存在する。なお、下記スキーム１は代表的な活性型ビタミンＤ３である１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３の場合を示している。
【０００４】
【化１】
2010111593.tif 000002
【０００５】
この平衡におけるプレ体の存在比は一般に小さいことから、プレ体の医薬品への適用可能性は詳しく研究されていない。
【０００６】
ところで、ビタミンＤ３誘導体の１４位をエピ化させた１４−エピ体は、平衡がプレ体に偏り、これが比較的安定に存在することがオカムラらにより報告されている（下記スキーム２、非特許文献１参照）。
【０００７】
【化２】
2010111593.tif 000003
【０００８】
しかしながら、これまでにプレ体（６）についてビタミンＤレセプター（ＶＤＲ）への親和性やｉｎ  ｖｉｖｏでの小腸カルシウム吸収、骨カルシウム動員などが報告されているものの（非特許文献１、特許文献１参照）、これらの活性は活性型ビタミンＤ３誘導体に比較して非常に弱く、プレ体（６）についてはビタミンＤ様作用を利用したさまざまな疾患に対する治療剤としての効果は期待できなかった。
【０００９】
一方、ビタミンＤ３骨格の２位への化学修飾は、ビタミンＤレセプターへの親和性向上をはじめとして様々な活性を向上させることが知られている（非特許文献２参照）。この知見に基づき、上記のプレビタミンＤ３誘導体（６）の２位へ化学修飾したところ、ビタミンＤ３骨格と同様に活性向上することが明らかとなった（化合物（８）、第２３６回ＡＣＳ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｍｅｅｔｉｎｇｓ、２００８年８月）。
【００１０】
【化３】
2010111593.tif 000004
【００１１】
しかしながら、この誘導体（８）はスキーム３に示すようにビタミンＤ３骨格（７）への平衡変換があることから単一誘導体として存在せず、医薬品としての適用に課題があると考えられる。
【００１２】
【化４】
2010111593.tif 000005
【００１３】
なお、１４位が天然型の立体配置で（水素原子が紙面に対して向側）、Ｒ１およびＲ２が双方とも水素原子である化合物が知られているが（非特許文献４）、この化合物の生物活性は非常に弱いと報告されている（非特許文献５、６）。この化合物は、本発明化合物と１４位がエピ型立体である点、Ｒ１およびＲ２として置換基を有することができる点で異なる。
【００１４】
【特許文献１】国際公開第９５／０１７１９７号パンフレット
【非特許文献１】ジャーナル・オブ・メディシナル・ケミストリー（Ｊ．  Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．）、３７巻、２３８７−２３９３頁、１９９４年
【非特許文献２】ビタミンＤ・アナログス・イン・キャンサー・プリベンション・アンド・セラピー、リーセント・リザルツ・イン・キャンサー・リサーチ（ＶｉｔａｍｉｎＤ  Ａｎａｌｏｇｓ  ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｔｈｅｒａｐｙ，  Ｒｅｃｅｎｔ  Ｒｅｓｕｌｔｓ  ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅｒｃｈ）、１６４巻、２８９−３１７頁、２００３年
【非特許文献３】ネイチャー・レビューズ・ドラッグ・ディスカバリー（Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ）、３巻、２７−４１頁、２００４年
【非特許文献４】テトラヘドロン・レターズ（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．）、３３巻、５４４５−５４４８頁、１９９２年
【非特許文献５】ジャーナル・オブ・ボーン・アンド・ミネラル・リサーチ（Ｊ．Ｂｏｎｅ．Ｍｉｎｅｒ．Ｒｅｓ．）、８巻、１００９−１０１５頁、１９９３年
【非特許文献６】ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．）、２７８巻、３５４７６−３５４８２頁、２００３年
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１５】
本発明の目的は、ビタミンＤ様作用を有するプレビタミンＤ３誘導体を提供することである。また、本発明の目的は、骨粗鬆症治療剤を提供することである。また、本発明の目的は、ビタミンＤ様作用を有するプレビタミンＤ３誘導体の製造中間体を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１６】
本発明者らは上記目的で鋭意研究した結果、以下の発明に到達した。
すなわち、本発明は下記式（１）で表される１９−ノルプレビタミンＤ３誘導体またはその医薬上許容される溶媒和物である。
【００１７】
【化５】
2010111593.tif 000006
【００１８】
ここで式（１）中のＲ１およびＲ２は、双方とも水素原子、どちらか一方が水素原子で他方がＣ１−Ｃ６のアルキル基、双方一緒になってメチレン基、または双方一緒になってＣ１−Ｃ５アルキルメチレン基を表す。
【００１９】
また、本発明は上記式（１）で表される１９−ノルプレビタミンＤ３誘導体またはその医薬上許容される溶媒和物を有効成分として含有する骨粗鬆症治療剤である。
【００２０】
また、本発明は下記式（２）で表される１９−ノルプレビタミンＤ３誘導体の製造中間体である。
【００２１】
【化６】
2010111593.tif 000007
【００２２】
ここで式（２）中のＲ３およびＲ４は、双方とも水素原子、どちらか一方が水素原子で他方がＣ１−Ｃ６のアルキル基、双方一緒になってメチレン基、または双方一緒になってＣ１−Ｃ５アルキルメチレン基を表す。
【発明の効果】
【００２３】
本発明化合物は、既知の１９−天然型プレビタミンＤ３誘導体（６）、（８）に比べて骨芽細胞における強い転写活性能を有している。また、既知の１９−天然型プレビタミンＤ３誘導体（６）、（８）に存在するビタミンＤ３骨格との平衡変換がなく、単一化合物として存在する。これらのことから、本発明化合物は骨粗鬆症の治療剤としての有用性が高い。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２４】
本発明における用語の定義は以下の通りである。
アルキル基とは、直鎖、分岐鎖、あるいは環状の脂肪族炭化水素基をいう。Ｃ１−Ｃ６のアルキル基とは、炭素数１から６のアルキル基を意味し、例えばメチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、イソブチル基、ペンチル基、イソペンチル基、ヘキシル基、シクロプロピル基、シクロプロピルメチル基、シクロヘキシル基を具体的な基として挙げることができる。
【００２５】
メチレン基とは、本発明の場合、Ｒ１およびＲ２が双方一緒になって表現されるものであり、具体的には下記のような誘導体である。
【００２６】
【化７】
2010111593.tif 000008
【００２７】
アルキルメチレン基とは、本発明の場合、Ｒ１およびＲ２が双方一緒になって表現されるものであり、具体的には下記のような誘導体である。なお、アルキルメチレン基に付した炭素数は、アルキルメチレン基のアルキル基部分の炭素数を示す。
【００２８】
【化８】
2010111593.tif 000009
【００２９】
上記式（１）中、Ｒ１およびＲ２は、双方とも水素原子、どちらか一方が水素原子で他方がＣ１−Ｃ６のアルキル基、双方一緒になってメチレン基、または双方一緒になってＣ１−Ｃ５アルキルメチレン基を表す。これらの中でも、双方とも水素原子、どちらか一方が水素原子で他方がメチル基、双方一緒になってメチレン基が好ましい。
【００３０】
上記式（２）中、Ｒ３およびＲ４は、双方とも水素原子、どちらか一方が水素原子で他方がＣ１−Ｃ６のアルキル基、双方一緒になってメチレン基、または双方一緒になってＣ１−Ｃ５アルキルメチレン基を表す。これらの中でも、双方とも水素原子、メチル基、双方一緒になってメチレン基が好ましい。
【００３１】
上記式（１）および（２）中、Ｒ１およびＲ２、Ｒ３およびＲ４が、双方一緒になってＣ１−Ｃ５アルキルメチレン基の場合、該基中の炭素−炭素二重結合の幾何化学は、（Ｅ）体、（Ｚ）体のいずれであってもよく、さらにこれらの混合物でもよい。
【００３２】
なお、上記式（１）および（２）中、Ｒ１およびＲ２、Ｒ３およびＲ４が、どちらか一方が水素原子で他方がＣ１−Ｃ６のアルキル基の場合、Ｒ１およびＲ２の置換する炭素原子の立体化学は、ステロイド立体表記法に従い、上記式（１）の場合、Ｃ１−Ｃ６のアルキル基が紙面に対して向側にあるものをα体、手前にあるものをβ体とし、上記式（２）の場合、Ｃ１−Ｃ６のアルキル基が紙面に対して手前にあるものをα体、向側にあるものをβ体とする。
【００３３】
本発明の１９−ノルプレビタミンＤ３誘導体は、必要に応じてその医薬上許容される溶媒和物に変換することができる。そのような溶媒としては、水、メタノ−ル、エタノ−ル、１−プロパノール、２−プロパノール、ブタノ−ル、ｔ−ブタノ−ル、アセトニトリル、アセトン、メチルエチルケトン、クロロホルム、酢酸エチル、ジエチルエ−テル、ｔ−ブチルメチルエ−テル、ベンゼン、トルエン、ＤＭＦ、ＤＭＳＯ等を挙げることができる。特に、水、メタノ−ル、エタノ−ル、１−プロパノール、２−プロパノール、アセトニトリル、アセトン、メチルエチルケトン、酢酸エチルを好ましいものとして挙げることができる。
【００３４】
本発明の１９−ノルプレビタミンＤ３誘導体（１）の具体例としては、以下のものが挙げられる。
化合物（１ａ）：１４−エピ−１α、２５−ジヒドロキシ−１９−ノルプレビタミンＤ３
化合物（１ｂ）：２−メチル−１４−エピ−１α、２５−ジヒドロキシ−１９−ノルプレビタミンＤ３
化合物（１ｃ）：２−メチレン−１４−エピ−１α、２５−ジヒドロキシ−１９−ノルプレビタミンＤ３
【００３５】
上記式（１）で表される１９−ノルビタミンＤ３誘導体の製造はいかなる方法で行ってもよいが、例えば以下のように行うことができる。
Ｒ１およびＲ２が双方とも水素原子の場合はスキーム５のようにして製造できる。すなわち、文献既知の化合物（１０）（ウーら（Ｙ．Ｗｕ  ｅｔ  ａｌ．）、ヨーロピアン・ジャーナル・オブ・オーガニック・ケミストリー（Ｅｕｒ．Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．）、３７７９−３８１８頁、２００１年）をトリフレート（１１）に導き、これと文献既知の化合物（１２ａ）（サランデセスら（Ｌ．Ａ．Ｓａｒａｎｄｅｓｅｓ  ｅｔ  ａｌ．）、テロラヘドロン・レターズ（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．）、３３巻、５４４５−５４４８頁、１９９２年）をカップリングした後、水酸基の保護基を脱保護し、化合物（１３ａ）を得る。これをリンドラー触媒による水素還元を行うことで、（１）（Ｒ１＝Ｒ２＝水素原子）を得ることができる。
【００３６】
【化９】
2010111593.tif 000010
【００３７】
Ｒ１とＲ２のどちらか一方が水素原子で他方がＣ１−Ｃ６のアルキル基、双方一緒になってメチレン基、または双方一緒になってＣ１−Ｃ５アルキルメチレン基の場合はスキーム６のようにして製造できる。すなわち、文献既知の化合物（１０）（ウーら（Ｙ．Ｗｕ  ｅｔ  ａｌ．）、ヨーロピアン・ジャーナル・オブ・オーガニック・ケミストリー（Ｅｕｒ．Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．）、３７７９−３８１８頁、２００１年）をトリフレート（１１）に導き、これとスキーム７に示すようにして合成できる（１２ｂ）をカップリングした後、水酸基の保護基を脱保護し、化合物（２）（Ｒ１とＲ２が水素原子とメチレン基、あるいは水素原子とＣ１−Ｃ５のアルキルメチレン基）を得る。これをロジウム触媒下で水素還元し、次いでリンドラー触媒下で水素還元を行うことで、（１）（Ｒ１とＲ２のどちらか一方が水素原子で他方がＣ１−Ｃ６のアルキル基、Ｒ１とＲ２のどちらか一方が水素原子で他方がＣ１−Ｃ５のメチレン基、あるいはどちらか一方が水素原子で他方がＣ１−Ｃ５のアルキルメチレン基）、および（２）（Ｒ１とＲ２のどちらか一方が水素原子で他方がＣ１−Ｃ６のアルキル基）を得ることができる。
【００３８】
【化１０】
2010111593.tif 000011
【００３９】
【化１１】
2010111593.tif 000012
【００４０】
（スキーム６およぴスキーム７中、Ｒは水素原子またはＣ１−Ｃ５のアルキル基を表す。スキーム７中、Ｒ’はフェニル基などのアリール基、メチル基やエチル基などの低級アルキル基を表す。）
【００４１】
以上のようにして得られる１９−ノルプレビタミンＤ３誘導体（１）は、必要に応じて前述のような医薬上許容される溶媒和物に変換することができる。
かかる溶媒和物は、フリーの化合物（１）を該溶媒、あるいは該溶媒を含有する混合溶媒より再結晶することにより得ることができる。
【００４２】
本発明の１９−ノルプレビタミンＤ３誘導体またはその医薬上許容される溶媒和物を有効成分として含有する骨粗鬆症症治療剤は、通常製剤化に用いられる担体や賦形剤、その他の添加剤を用いて調製される。製剤用の担体や賦形剤としては、固体または液体いずれでもよく、例えば乳糖、ステアリン酸マグネシウム、スターチ、タルク、ゼラチン、寒天、ペクチン、アラビアゴム、オリーブ油、ゴマ油、カカオバター、エチレングリコール等やその他常用のものが挙げられる。投与は錠剤、丸剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、液剤等による経口投与、あるいは静注、筋注等の注射剤、坐剤、経皮等による非経口投与のいずれの形態であってもよい。
【００４３】
本発明の有効成分の治療有効量は、投与経路、患者の年齢、性別、疾患の程度によって異なるが、通常０．００１〜１００００μｇ／日程度であり、投与回数は通常１〜３回／日ないし１〜３回／週であり、このような条件を満足するように製剤を調製するのが好ましい。
なお、本発明の疾患治療剤は、既存の薬剤と併用することも可能である。
【実施例】
【００４４】
以下、実施例により本発明をさらに詳細に説明するが、本発明はこれによって限定され
るものではない。
【００４５】
［実施例１］
１４−エピ−１α、２５−ジヒドロキシ−１９−ノルプレビタミンＤ３（化合物（１ａ））の製造
【化１２】
2010111593.tif 000013
【００４６】
（１）ジイソプロピルアミン（８０μＬ、０．５７ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（２ｍＬ）に溶解し、０℃に冷却した。ｎ−ＢｕＬｉ（２０６μＬ、２．７７Ｍ  ヘキサン溶液、０．５７ｍｍｏｌ）を加え、０℃で４０分間攪拌した。その後、−７８℃に冷却し、文献既知の方法（ウーら（Ｙ．Ｗｕ ｅｔ  ａｌ．）、ヨーロピアン・ジャーナル・オブ・オーガニック・ケミストリー（Ｅｕｒ．Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．）、３７７９−３８１８頁、２００１年）で得られる（１０）（１５０ｍｇ、０．３８ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１ｍＬ）溶液を加え、ゆっくりと昇温した。８０分後、室温に達したところで再び−７８℃に冷却し、ＴＨＦ（２ｍＬ）に溶解したＰｈＮ（Ｔｆ）２（２７２ｍｇ、０．７６ｍｍｏｌ）を加え、ゆっくりと昇温し、室温で終夜攪拌した。１４時間後、０℃に冷却し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加え、酢酸エチルで抽出した。合わせた有機層を飽和食塩水で洗浄した後、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過、減圧濃縮した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝１００：１−５０：１）に付すことにより、（１１）（１２２ｍｇ、６１％）を無色油状物として得た。
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 5.71 (dt, J = 1.5, 4.2 Hz, 1H), 2.26 (m, 1H), 2.15-2.18 (m, 2H), 1.85-1.99 (m, 2H), 1.28-1.62 (m, 11H), 1.21 (m, 1H), 1.19 (s, 3H), 1.19 (s, 3H), 0.98 (s, 3H), 0.94 (t, J = 8.1 Hz, 9H), 0.93 (s, 3H), 0.56 (q, J = 8.1 Hz, 6H);
13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 152.5, 120.0, 116.7, 73.4, 51.3, 51.0, 45.5, 44.4, 35.9, 33.8, 33.2, 30.1, 29.9, 28.8, 26.7, 21.6, 21.6, 21.2, 19.5, 7.2, 6.9;
LRMS (ESI+) m/z 549 (M + Na)+;
HRMS (ESI+) calcd for C25H45O4F3SiNaS, 549.2652, found: 549.2653.
【００４７】
（２）上記で得られた（１１）（２２ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ）、文献記載の方法（サランデセスら（Ｓａｒａｎｄｅｓｅｓ  ｅｔ．ａｌ）、テトラヘドロン・レターズ（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．）、３３巻、５４４５−５４４８頁、１９９２年）で得られる化合物（１２ａ）（２６ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（０．５ｍＬ）に溶解し、ジエチルアミン（０．５ｍＬ）、ＣｕＩ（４．８ｍｇ、０．０２５ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ＰＰｈ３）２（ＯＡｃ）２（５．６ｍｇ、０．００７５ｍｍｏｌ）を順次加え、室温で２時間攪拌した。その後氷冷し、ジエチルエーテルを加え、飽和食塩水で洗浄した後、有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過、減圧濃縮した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：ジエチルエーテル＝２００：１−１００：１）に付すことにより無色油状物として得た。これを直ちにＴＨＦ（２ｍＬ）に溶解し、テトラブチルアンモニウムフルオリド（５００μＬ、１Ｍ  ＴＨＦ溶液、０．５ｍｍｏｌ）を加え、室温で１４時間攪拌した。その後０℃に冷却し、飽和食塩水を加え、酢酸エチルで抽出した。合わせた有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過、減圧濃縮した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝１：１−０：１）に付すことにより、（１３ａ）（１６ｍｇ、８０％）を無色油状物として得た。
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 6.04-6.09 (m, 2H), 4.43-4.48 (m, 1H), 4.12-4.20 (m, 1H), 2.52 (dd, J = 4.2, 17.3 Hz, 1H), 1.56-2.15 (m, 7H), 1.30-1.60 (m, 10H), 1.20-1.30 (m, 2H), 1.21 (s, 3H), 1.21 (s, 3H), 0.97-1.07 (m, 2H), 0.93 (d, J = 6.3 Hz, 3H), 0.92 (s, 3H);
13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 134.0, 133.0, 124.6, 121.7, 90.9, 87.0, 71.1, 65.1, 63.9, 51.8, 51.3, 44.4, 41.2, 39.1, 38.6, 36.0, 34.1, 33.4, 29.4, 29.3, 28.9, 28.6, 23.1, 21.9, 21.4, 19.4;
[α]D25 = + 18.2 (c 0.54, CHCl3);
LRMS (ESI+) m/z 423 (M + Na)+;
HRMS (ESI+) calcd for C26H40O3Na, 423.2870, found: 423.2851.
【００４８】
（３）上記で得られた（１３ａ）（１４ｍｇ、０．０３５ｍｍｏｌ）をメタノール（２ｍＬ）とＣＨ２Ｃｌ２（１ｍＬ）の混合溶媒に溶解し、Ｑｕｉｎｏｌｉｎｅ（０．０５ｍＬ）、Ｌｉｎｄｌａｒ触媒（１１ｍｇ）を順次加え、水素雰囲気下で４．５時間激しく攪拌した。その後、セライトを用いてろ過、減圧濃縮した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル）に付すことにより得られた粗生成物をさらにプレパラティブクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝１：４）によって分離し、（１ａ）（５．５ｍｇ、３９％）を無色油状物として得た。
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 5.86 (d, J = 12.5 Hz, 1H), 5.81 (d, J = 12.5 Hz, 1H), 5.55 (m, 1H), 4.56 (m, 1H), 4.07-4.15 (m, 1H), 2.60 (dd, J = 4.5, 17.1 Hz, 1H), 1.96-2.07 (m, 4H), 1.77-1.94 (m, 4H), 1.26-1.58 (m, 12H), 1.21 (s, 3H), 1.21 (s, 3H), 1.12 (m, 1H), 0.95 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 0.93 (s, 3H);
13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 138.5, 136.6, 133.2, 129.5, 128.1, 125.5, 71.1, 65.7, 64.6, 52.0, 51.5, 44.5, 41.3, 39.8, 37.5, 36.0, 34.3, 33.9, 29.7, 29.2, 29.1, 28.9, 22.8, 21.9, 20.9, 19.7;
[α]D24 = -74.0 (c 0.23, CHCl3);
LRMS (ESI+) m/z 425 (M + Na)+;
HRMS (ESI+) calcd for C26H42O3Na, 425.3026, found: 425.3024.
【００４９】
［実施例２］
２−メチル−１４−エピ−１α、２５−ジヒドロキシ−１９−ノルプレビタミンＤ３（化合物（１ｂ））および２−メチレン−１４−エピ−１α、２５−ジヒドロキシ−１９−ノルプレビタミンＤ３（化合物（１ｃ））の製造
【化１３】
2010111593.tif 000014
【００５０】
（１）文献記載の方法（シシンスキーら（Ｓｉｃｉｎｓｋｉ  ｅｔ．ａｌ）、ジャーナル・オブ・メディシナル・ケミストリー（Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．）、４１巻、４６６２−４６７４頁、１９９８年）で得られる（１５）（Ｒ＝水素原子）（６００ｍｇ、１．３９ｍｍｏｌ）をピリジン（３ｍＬ）に溶解し、ＰＯＣｌ３（１９５μＬ、２．０９ｍｍｏｌ）を加え、４８時間攪拌した。その後０℃に冷却し、水を加え、酢酸エチルで抽出した。合わせた有機層を飽和食塩水で洗浄した後、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過、減圧濃縮した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝１００：１−５０：１）に付すことにより、（１６）（Ｒ＝水素原子）（４８８ｍｇ、８５％）を無色油状物として得た。
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 6.75 (m, 1H), 5.08 (s, 1H), 5.02 (s, 1H), 4.91 (m, 1H), 4.56 (dd, J = 5.1, 5.6 Hz, 1H), 3.73 (s, 3H), 2.67 (ddd, J = 1.9, 5.1, 17.6 Hz, 1H), 2.31 (ddd, J = 1.7, 5.6, 17.6 Hz, 1H), 0.91 (s, 9H), 0.89 (s, 9H), 0.12 (s, 3H), 0.09 (s, 3H), 0.07 (s, 3H), 0.06 (s, 3H);
13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 167.1, 148.8, 139.5, 129.2, 108.1, 69.5, 69.0, 51.8, 36.8, 25.9, 25.8, 18.3, 18.2, -4.7, -4.7, -4.8, -4.9;
LRMS (ESI+) m/z 435 (M + Na)+;
HRMS (ESI+) calcd for C21H40O4Si2Na, 435.2363, found: 435.2363.
【００５１】
（２）上記で得られた（１６）（Ｒ＝水素原子）（３３０ｍｇ、０．８０ｍｍｏｌ）をトルエン（３ｍＬ）に溶解し、０℃に冷却した。ＤＩＢＡＬ−Ｈ（２．４２ｍＬ、０．９９Ｍ  トルエン溶液、２．４０ｍｍｏｌ）を加え、室温で４２時間攪拌した。その後０℃に冷却し、水（０．１ｍＬ）、１５％水酸化ナトリウム水溶液（０．１ｍＬ）、水（０．３ｍＬ）を順次加え、室温で終夜攪拌した。反応液に硫酸マグネシウムを加えて攪拌後、セライトを用いてろ過、減圧濃縮した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝８：１−６：１）によって分離し、（１７）（Ｒ＝水素原子）（２６７ｍｇ、８７％）を無色油状物として得た。
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 5.64 (m, 1H), 5.08 (s, 1H), 4.97 (s, 1H), 4.77 (m, 1H), 4.60 (dd, J = 5.3, 6.7 Hz, 1H), 3.99 (s, 1H), 2.40 (dd, J = 5.3, 16.7 Hz, 1H), 2.06 (dd, J = 6.7, 16.7 Hz, 1H), 0.90 (s, 9H), 0.90 (s, 9H), 0.10 (s, 3H), 0.08 (s, 3H), 0.06 (s, 3H), 0.05 (s, 3H);
13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 150.4, 138.2, 124.1, 107.4, 69.9, 69.1, 66.0, 38.3, 25.9, 25.9, 25.8, 25.7, 18.4, 18.3, -4.5, -4.6, -4.8, -4.9;
LRMS (ESI+) m/z 407 (M + Na)+;
HRMS (ESI+) calcd for C20H40O3Si2Na, 407.2414, found: 407.2418.
【００５２】
（３）上記で得られた（１７）（Ｒ＝水素原子）（４７０ｍｇ、１．２２ｍｍｏｌ）を塩化メチレン（６ｍＬ）に溶解し、ＭＳ４Ａ（６１０ｍｇ）、ＮＭＯ（２１５ｍｇ、１．８３ｍｍｏｌ）、ＴＰＡＰ（２１ｍｇ、０．０６１ｍｍｏｌ）を順次加え、室温で２時間攪拌した。その後、セライトを用いてろ過、減圧濃縮し、得られた粗生成物を中性のシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝１００：１−５０：１）に付すことによりアルデヒドを無色油状物として得た。これを直ちに以下の反応に用いた。ＴＭＳＣＨＮ２（６８６μＬ、２．０Ｍエーテル溶液、１．３７ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（４ｍＬ）に溶解し、−７８℃に冷却した。ｎ−ＢｕＬｉ（４７９μＬ、２．７７Ｍヘキサン溶液、１．３３ｍｍｏｌ）を加え、３０分間攪拌した。ＴＨＦ（１ｍＬ）に溶解したアルデヒドを加え、ゆっくりと昇温した。２時間後、０℃に達したらその温度でさらに１５分間攪拌した。その後、飽和塩化アンモニウム水溶液を加え、酢酸エチルで抽出した。合わせた有機層を飽和食塩水で洗浄した後、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過、減圧濃縮した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝１００：１−５０：１）に付すことにより、（１２ｂ）（Ｒ＝水素原子）（２２９ｍｇ、５０％（２ｓｔｅｐｓ））を無色油状物として得た。
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 6.05 (m, 1H), 5.09 (s, 1H), 5.01 (s, 1H), 4.80 (m, 1H), 4.56 (dd, J = 5.4, 6.6 Hz, 1H), 2.85 (s, 1H), 2.52 (ddd, J = 1.5, 5.4, 17.1 Hz, 1H), 2.22 (ddd, J = 1.6, 6.6, 17.1 Hz, 1H), 0.90 (s, 9H), 0.90 (s, 9H), 0.10 (s, 3H), 0.08 (s, 3H), 0.08 (s, 3H), 0.06 (s, 3H);
13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 148.9, 137.0, 119.8, 108.0, 83.9, 76.2, 69.5, 68.8, 41.3, 25.9, 25.8, 18.3, 18.3, -4.6, -4.7, -4.8, -4.9;
LRMS (ESI+) m/z 401 (M+ Na)+;
HRMS (ESI+) calcd for C21H38O2Si2Na, 401.2303, found: 401.2304.
【００５３】
（４）（１２ｂ）（Ｒ＝水素原子）（１６２ｍｇ、０．４２８ｍｍｏｌ）、実施例１（１）で得られた（１１）（１５０ｍｇ、０．２８５ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１．５ｍＬ）に溶解し、ジエチルアミン（１．５ｍＬ）、ＣｕＩ（２７ｍｇ、０．１４３ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ＰＰｈ３）２（ＯＡｃ）２（３２ｍｇ、０．０４２８ｍｍｏｌ）を順次加え、室温で９０分間攪拌した。その後氷冷し、ジエチルエーテルを加え、飽和食塩水で洗浄した後、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過、減圧濃縮した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：ジエチルエーテル＝２００：１−１００：１）に付すことにより、無色油状物を得た。これを直ちにＴＨＦ（４ｍＬ）に溶解し、テトラブチルアンモニウムフルオリド（２．８５ｍＬ、１Ｍ  ＴＨＦ溶液、２．８５ｍｍｏｌ）を加え、室温で１９時間攪拌した。その後０℃に冷却し、飽和食塩水を加え、酢酸エチルで抽出した。合わせた有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過、減圧濃縮した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝１：１−１：３）に付すことにより、（２）（Ｒ１／Ｒ２＝メチレン基）（１００ｍｇ、８５％）を無色油状物として得た。
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 6.07-6.09 (m, 1H), 6.03-6.05 (m, 1H), 5.21 (d, J = 1.0 Hz, 1H), 5.19 (d, J = 1.0 Hz, 1H), 4.83 (m, 1H), 4.64 (dd, J = 5.1, 7.1 Hz, 1H), 2.66 (ddd, J = 1.5, 5.1, 17.1 Hz, 1H), 2.28 (ddd, J = 1.5, 7.1, 17.1 Hz, 1H), 1.93-2.09 (m, 4H), 1.78-1.82 (m, 1H), 1.29-1.57 (m, 10H), 1.25 (m, 1H), 1.21 (s, 3H), 1.21 (s, 3H), 1.06 (m, 1H), 0.95 (d, J = 6.5 Hz, 3H), 0.91 (s, 3H);
13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 148.8, 134.1, 132.4, 124.5, 122.2, 109.2, 91.3, 86.6, 71.1, 69.1, 68.2, 51.8, 51.3, 44.5, 41.3, 40.4, 36.1, 34.2, 33.4, 29.6, 29.5, 27.3, 27.3, 23.2, 22.0, 21.4, 19.5.;
[α]D25 = + 19.2 (c 0.85, CHCl3);
LRMS (ESI+) m/z 435 (M + Na)+;
HRMS (ESI+) calcd for C27H40O3Na, 435.2870, found: 435.2859.
【００５４】
（５）（ＰＰｈ３）３ＲｈＣｌ（１０５ｍｇ、０．１１４ｍｍｏｌ）をベンゼン（２ｍＬ）に溶解し、水素気流下で４０分間攪拌した。反応液に上記で得られた（２）（Ｒ１／Ｒ２＝メチレン基）（４７ｍｇ、０．１１４ｍｍｏｌ）をベンゼン（２ｍＬ）と塩化メチレン（１ｍＬ）の混合溶媒に溶解したものを加え、水素気流下で２時間激しく攪拌した。その後減圧濃縮し、得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン：メタノール＝２０：１−１５：１）に付すことにより得られたものを直ちにメタノール（２ｍＬ）と塩化メチレン（１ｍＬ）の混合溶媒に溶解し、これにＱｕｉｎｏｌｉｎｅ（０．０５ｍＬ）、Ｌｉｎｄｌａｒ触媒（１８ｍｇ）を順次加え、水素雰囲気下で１５時間激しく攪拌した。その後、セライトを用いてろ過、減圧濃縮した。これをシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝１：１−１：３）に付すことにより得られた粗精製物をさらにプレパラティブクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝１：１）によって分離し、異性体混合物の（１ｂ）を無色油状物として得た。この異性体混合物をＨＰＬＣ（ＣＨ３ＣＮ：Ｈ２Ｏ＝９：１）で分離し、（１ｂ）−１（１２ｍｇ、２５％）、（１ｂ）−２（１５ｍｇ、３２％）を得た。また、合わせて微量の（１ｃ）、（２）（Ｒ３／Ｒ４＝水素原子／メチル基）の２つの異性体（２）−１、（２）−２を得た。なお、（１ｂ）−１と（１ｂ）−２は一般式（１）のＲ１／Ｒ２に相当するメチル基が結合する炭素原子の不斉に基づくもの、（２）−１と（２）−２は一般式（２）のＲ３／Ｒ４に相当するメチル基が結合する炭素原子の不斉に基づくものである。
【００５５】
（１ｂ）−１：
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 5.88 (d, J = 12.2 Hz, 1H), 5.76 (d, J = 12.2 Hz, 1H), 5.72 (m, 1H), 5.53 (m, 1H), 4.08 (m, 1H), 4.04 (m, 1H), 2.25-2.57 (m, 1H), 2.15 (dd, J = 4.9, 17.8 Hz, 1H), 1.97-2.05 (m, 3H), 1.65-1.88 (m, 3H), 1.32-1.55 (m, 13H), 1.23 (s, 3H), 1.23 (s, 3H), 1.07-1.13 (m, 1H), 1.09 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 0.95 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 0.92 (s, 3H);
13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 138.5, 135.4, 132.9, 129.8, 128.7, 125.3, 77.2, 71.2, 69.3, 51.9, 51.6, 44.5, 41.2, 41.1, 36.1, 35.6, 34.3, 33.9, 29.8, 29.1, 29.0, 22.8, 21.9, 20.8, 19.7, 13.1;
[α]D24 = -120.9 (c 0.23, CHCl3);
LRMS (ESI+) m/z 439 (M + Na)+;
HRMS (ESI+) calcd for C27H44O3Na, 439.3183, found: 439.3193.
（１ｂ）−２：
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 5.83 (s, 1H), 5.83 (s, 1H), 5.74 (m, 1H), 5.56 (m, 1H), 4.26 (m, 1H), 3.77 (m, 1H), 2.64 (dd, J = 4.9, 17.6 Hz, 1H), 1.95-2.08 (m, 4H), 1.74-1.87 (m, 3H), 1.28-1.59 (m, 14H), 1.22 (s, 3H), 1.22 (s, 3H), 1.11 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 0.95 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 0.93 (s, 3H);
13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 138.6, 136.9, 133.3, 129.3, 128.0, 125.4, 77.2, 71.1, 69.2, 68.8, 52.0, 51.4, 44.4, 41.3, 40.7, 37.1, 35.9, 34.2, 33.9, 29.7, 29.1, 29.1, 28.8, 22.8, 21.8, 20.8, 19.6, 12.3;
[α]D24 = -39.5 (c 0.62, CHCl3);
LRMS (ESI+) m/z 439 (M + Na)+;
HRMS (ESI+) calcd for C27H44O3Na, 439.3183, found: 439.3176.
（１ｃ）：
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 5.88 (d, J = 12.2 Hz, 1H), 5.81 (d, J = 12.2 Hz, 1H), 5.75 (m, 1H), 5.54 (m, 1H), 5.19 (s, 1H), 5.16 (s, 1H), 4.82 (m, 1H), 4.58 (m, 1H), 2.73 (dd, J = 5.2, 16.7 Hz, 1H), 2.18 (dd, J = 7.3, 16.7 Hz, 1H), 1.96-2.06 (m, 4H), 1.76-1.87 (m, 2H), 1.27-1.56 (m, 9H), 1.22 (s, 3H), 1.22 (s, 3H), 1.07-1.14 (m, 1H), 0.95 (d, J = 7.4 Hz, 3H), 0.88 (s, 3H);
13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 138.5, 137.2, 133.5, 129.2, 128.1, 125.7, 108.5, 77.2, 71.2, 69.5, 58.7, 52.0, 51.5, 44.4, 41.2, 39.1, 35.9, 34.2, 33.9, 29.7, 29.7, 29.1, 28.8, 22.8, 21.8, 20.8, 19.6;
[α]D24 = -209.0 (c 0.27, CHCl3);
LRMS (ESI+) m/z 437 (M + Na)+;
HRMS (ESI+) calcd for C27H42O3Na, 437.3026, found: 437.3010.
（２）−１：
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 6.07-6.09 (m, 1H), 6.03-6.05 (m, 1H), 4.05-4.08 (m, 2H), 2.50 (m, 1H), 2.24 (m, 1H), 1.93-2.09 (m, 4H), 1.95-2.10 (m, 4H), 1.71-1.84 (m, 2H), 1.28-1.57 (m, 13H), 1.22 (s, 3H), 1.22 (s, 3H), 1.09 (d, J = 7.1 Hz, 3H), 1.06 (m, 1H), 0.93 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 0.92 (s, 3H);
13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 133.8, 133.4, 124.6, 120.5, 90.7, 87.0, 77.2, 70.6, 68.7, 51.8, 51.3, 44.5, 41.3, 40.8, 37.1, 36.1, 34.2, 33.5, 29.8, 29.5, 29.3, 29.0, 28.6, 23.1, 22.0, 21.4, 19.5, 13.6; [α] D25 = + 28.5 (c 0.15, CHCl3);
LRMS (ESI+) m/z 437 (M + Na)+;
HRMS (ESI+) calcd for C27H42O3Na, 437.3026, found: 437.3017.
（２）−２：
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 6.06-6.10 (m, 2H), 4.28 (m, 1H), 4.28 (m, 1H), 3.85 (m, 1H), 2.58 (dd, J = 5.4, 17.6 Hz, 1H), 2.11-2.17 (m, 1H), 1.95-2.09 (m, 4H), 1.75-1.85 (m, 2H), 1.20-1.60 (m, 13H), 1.22 (s, 1H), 1.22 (s, 3H), 1.10 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 1.04-1.09 (m, 1H), 0.94 (d, J = 6.3 Hz, 3H), 0.92 (s, 3H);
13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 133.9, 132.8, 124.5, 121.9, 90.9, 86.9, 77.2, 71.1, 68.7, 68.2, 51.8, 51.3, 44.6, 41.3, 40.2, 38.3, 36.1, 34.2, 33.5, 29.8, 29.3, 29.0, 28.6, 23.1, 22.0, 21.4, 19.5, 12.2;
[α] D25 = -2.2 (c 0.69, CHCl3);
LRMS (ESI+) m/z 437 (M + Na)+;
HRMS (ESI+) calcd for C27H42O3Na, 437.3026, found: 437.3033.
【００５６】
［実施例３］
ヒト骨芽細胞（ＨＯＳ細胞）におけるＶＤＲ転写活性
（１）レポーターベクターとしてｐＧＬ３ベクター（ｐｒｏｍｅｇａ社）を用い、ルシフェラーゼ遺伝子の上流に、文献既知の方法（Ｏｚｏｎｏら、ザ・ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー（Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）、２６５巻、２１８８１―２１８８８頁、１９９０年）で得られるヒトオステオカルシン遺伝子プロモーター部分の配列を、ＨＯＳ細胞（ＡＴＣＣより入手）から取得したｃＤＮＡよりクローニングし、組み込んだ。発現ベクターはｐＣＤＮＡ３ベクター（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社）にヒトＶＤＲおよびヒトＲＸＲをコードするＤＮＡ配列を挿入して構築した。ＨＯＳ細胞は１０％Ｆ
ＢＳを含むＤＭＥＭ培地で３７℃、５％ＣＯ２の条件で培養し、２日あるいは３日ごとに継代した。
【００５７】
（２）継代培養していた細胞を遠心回収し、無血清、フェノールレッド不含のＤＭＥＭ培地に４×１０５ｃｅｌｌｓ／ｍｌの密度で分散させ、９６ウェルプレートに０．１ｍＬ／ウェルで播種した。この系に、（１）に記載した各種ベクターをＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎ２０００（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社）試薬を用いてウェルあたり０．０５ｍＬ添加した。３７℃で３時間インキュベートした後、各ウェルに１×１０−１３〜１×１０−７Ｍの被験化合物エタノール溶液あるいはコントロールとしてエタノールを２μＬずつ添加した。３７℃で２４時間インキュベートした後、培地を取り除き、ＰＢＳ（−）で一度洗浄した後、ＤｕａｌＧｌｏ−Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ  Ａｓｓａｙ  ｋｉｔ（Ｐｒｏｍｅｇａ社）を用いてルミノメーター（ベルトールド社）によりルシフェラーゼ活性を測定した。被験化合物の活性をその処理濃度に対してプロットし、１×１０−７Ｍの１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３処理での活性を１００％、コントロールのエタノール処理での活性を０％としたとき、５０％となる被験化合物の処理濃度をＥＣ５０値（ｎＭ）として算出した。結果を表１に示す。また、比較実施例として対応する１９位天然型化合物（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）の活性を測定した。結果を合わせて表１に示す。
【００５８】
【表１】
2010111593.tif 000015
【００５９】
（Ａ）１４−エピ−１α、２５−ジヒドロキシプレビタミンＤ３
（Ｂ）２β−メチル−１４−エピ−１α、２５−ジヒドロキシプレビタミンＤ３
（Ｃ）２α−メチル−１４−エピ−１α、２５−ジヒドロキシプレビタミンＤ３
この結果から、本発明の化合物は、既知のプレビタミンＤ３誘導体（８）に比べ、著しく強い転写活性を有することが判明した。
【産業上の利用可能性】
【００６０】
本発明の１９−ノルプレビタミンＤ３誘導体は、骨粗鬆症の治療剤の有効成分として用いられる。