(57)【要約】【課題】チオアラビノフラノシル化合物の新規調製方法を提供する。【解決手段】Ａ）２，３，５−トリ−Ｏ−アリール若しくはアルキル４−キシロースジアリール又はジアルキルジチオアセタールを、脱離基の存在下、４水酸基位で反応させ、対応する１，４−ジチオ−Ｄ−アラビノフラノシドを製造し；Ｂ）工程Ａ）からの前記アラビノフラノシドを反応させ、酸分解して、対応するＯ−アセチル−４−チオ−Ｄ−アラビノフラノースを形成し；Ｃ）工程Ｂ）からの前記Ｏ−アセチル−４−チオ−アラビノフラノースを、シトシン、５−アザ化合物、６−アザ化合物及びそのブロック誘導体からなる群より選択される化合物と反応させ、対応する４−チオ−α，β−Ｄ−アラビノフラノシル化合物を形成し；Ｄ）工程Ｃ）からの前記アラビノフラノシル化合物を、加水分解で対応するチオ糖誘導体に変換して；そしてＥ）工程Ｄ）のアノマー混合物のα型を分離して、所望の化合物を得る：ことからなるチオアラビノフラノシル化合物の製造方法。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ａ）２，３，５−トリ−Ｏ−アリール若しくはアルキル４−キシロースジアリール又はジアルキルジチオアセタールを、脱離基の存在下、４水酸基位で反応させ、対応する１，４−ジチオ−Ｄ−アラビノフラノシドを製造し；
Ｂ）工程Ａ）からの前記アラビノフラノシドを反応させ、酸分解して、対応するＯ−アセチル−４−チオ−Ｄ−アラビノフラノースを形成し；
Ｃ）工程Ｂ）からの前記Ｏ−アセチル−４−チオ−アラビノフラノースを、シトシン、５−アザ化合物、６−アザ化合物及びそのブロック誘導体からなる群より選択される化合物と反応させ、対応する４−チオ−α，β−Ｄ−アラビノフラノシル化合物を形成し；
Ｄ）工程Ｃ）からの前記アラビノフラノシル化合物を、加水分解で対応するチオ糖誘導体に変換して；そして
Ｅ）工程Ｄ）のアノマー混合物のα型を分離して、式１：
【化１】
2010202655.tif 000027
式中、各Ｒは、独立してＨ、脂肪族アシル基、又は、芳香族アシル基を表す；Ａは、
【化２】
2010202655.tif 000028
【化３】
2010202655.tif 000029
【化４】
2010202655.tif 000030
及び
【化５】
2010202655.tif 000031
からなる群より選択される；
式中Ｘは、水素、フッ素、アルコキシ基、アルキル基、ハロアルキル基、アルケニル基、ハロアルケニル基、アルキニル基、アミノ基、モノアルキルアミノ基、ジアルキルアミノ基、シアノ基及びニトロ基からなる群より選択される：
で表される化合物を得る：
ことからなる
式１の化合物の製造方法。
【請求項２】
工程Ｃ）における前記化合物はシトシンであることを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項３】
工程Ｄ）における前記加水分解は、工程Ｃ）からの前記アラビノフラノシル化合物を三塩化ホウ素で反応することからなることを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項４】
工程Ｅ）は、工程Ｄ）からのラセミ混合物を４，４’−ジメトキシトリチルクロライドで反応させて、５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−４’−チオ−α−β−Ｄ−アラビノフラノシルシトシンを製造し、５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−４’−チオ−β−Ｄアラビノフラノシルシトシンを分離して；そして５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−４’−チオ−β−Ｄ−アラビノフラノシルシトシンを、トリフルオロ酢酸で反応させて式１の化合物を得ることからなることを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項５】
工程Ａ）における前記ジチオアセタール化合物は、２，３，５−トリ−Ｏ−ベンジル−キシロースジベンジルジチオアセタールからなることを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項６】
前記ジチオアセタールは、Ｌ−キシロースをメタノールで反応させて、メチルＬ−キシロフラノシドを製造し、前記メチルＬ−キシロフラノシドを臭化ベンゼンで反応させることにより得られることを特徴とする請求項１記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、あるチオアラビノフラノシル化合物の患者への投与によるガン患者の治療に関する。本発明により用いられる化合物は、良い抗ガン活性を示した。本発明により用いられる化合物は、抗ガン活性を示すことができないα−配置とは対照的に、β−配置である。本発明は、チオアラビノフラノシル化合物との接触による哺乳類細胞中のＤＮＡ複製阻害にも関する。本発明は、本発明により用いられる化合物の新規調製方法にも関する。
【背景技術】
【０００２】
腫瘍細胞を阻害し殺害することによるガン治療の発展に関し、甚大な数の研究が何年間にもわたり蓄積されている。このような研究で、臨床上定評のある治療の発見にある程度の成功を得る結果が得られたものもあった。にもかかわらず、確実な抗ガン治療を解明することが非常に困難であることから、より多くの努力が続けられている。例えば、ある化合物が細胞毒を有することが発見された場合でも、ガン細胞に対して選択的であるか否かは予測できない。
使用され、広まっている特定の化合物のひとつに、一般にＡｒａ−Ｃと称される、シトシンアラビノシドがある。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
本発明は、チオアラビノフラノシル化合物の新規調製方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
本発明により、チオアラビノフラノシルシトシン化合物が抗ガン剤として適していることが発見された。驚くべくことに、チオ糖基の存在により良好な抗腫瘍活性を得ることが可能となる。より具体的には、本発明は、以下の式１：
【０００５】
【化１】
2010202655.tif 000002
【０００６】
式中、各Ｒは、独立して、Ｈ、又は、脂肪族若しくは芳香族アシル基を表す；
Ａは、
【０００７】
【化２】
2010202655.tif 000003
【０００８】
【化３】
2010202655.tif 000004
【０００９】
【化４】
2010202655.tif 000005
【００１０】
及び
【００１１】
【化５】
2010202655.tif 000006
【００１２】
からなる群より選択される；
Ｘは、水素、フッ素、アルコキシ基、アルキル基、ハロアルキル基、アルケニル基、ハロアルケニル基、アルキニル基、アミノ基、モノアルキルアミノ基、ジアルキルアミノ基、シアノ基及びニトロ基からなる群より選択される：
で表される少なくとも１つの化合物を、抗ガンに効果的な量で抗ガン治療を必要とする哺乳類ホストへ投与することによる哺乳類ホストの治療に関する。
本発明により、上記開示した式１の化合物は、これらの化合物の少なくとも１つと細胞との接触による哺乳類細胞中のＤＮＡ複製阻害に使用できることも発見された。
【００１３】
本発明は、上記定義した化合物を調製する方法にも関する。本発明により用いられる化合物は、
Ａ）２，３，５−トリ−Ｏ−ベンジル−Ｌ−キシロース−ジベンジルジチオアセタール等の２，３，５−トリ−Ｏ−アリール若しくはアルキル４−キシロースジアリール又はジアルキルジチオアセタールを、脱離基の存在下、４水酸基で反応させ、ベンジル２，３，５−トリ−Ｏ−ベンジル−１，４−ジチオ−Ｄ−アラビノフラノシド等の対応する１，４−ジチオ−Ｄ−アラビノフラノシドを製造し；
Ｂ）工程Ａ）の生成物を酸分解して、２，３，５−トリ−Ｏ−ベンジル−１−Ｏ−アセチル−４−チオ−アラビノフラノース等の対応するＯ−アセチル−４−チオ−アラビノフラノースを形成し；
Ｃ）工程Ｂの生成物を、シトシン、５−若しくは６−アザ化合物、又は、それらの好適なブロック誘導体で反応させ、シトシンの場合は１−（２，３，５−トリ−Ｏ−ベンジル−４−チオ−α，β−Ｄ−アラビノフラノシルシトシン等の対応する４−チオ−α，β−Ｄ−アラビノフラノシル化合物を形成し；
Ｄ）工程Ｃ）の化合物を、加水分解で１−（４−チオ−α，β−Ｄ−アラビノフラノシル）シトシン等の対応するチオ糖誘導体に変換して；
Ｅ）工程Ｄ）のアノマー混合物のα型を分離して、１−（４−チオ−β−Ｄ−アラビノフラノシル）シトシン等の所望の式１の化合物を得る：
ことにより調製することができる。
【発明の効果】
【００１４】
さらに他の本発明の目的及び利点は、以下の詳細な記載から当該技術者に容易に明らかになるが、その記載は単に本発明の実施を企図した最良の形態を例証することにより本発明の好ましい実施形態のみが示され記載されたものである。本発明を実現するにあたり、その他の異なる実施形態が可能であるが、そのいくつかの項目は、本発明から逸れることなく種々の明確な観点から改良することができる。従って、ここに含有される記載は、本来例示的なものであり、制限的なものでないと顧慮される。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】図１ａ及び１ｂは、２−ジオキシシチジン、２’−ジオキシチオシチジン、ａｒａ−ｃ及びｔｈｉｏ  ａｒａ−ｃの、そのそれぞれのトリホスフェートへの代謝を示すグラフである。
【図２】図２は、ＣＥＭ細胞中のａｒａ−ｃトリホスフェート及びｔｈｉｏ  ａｒａ−ｃトリホスフェートの保持量を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
本発明は、少なくとも、式１：
【００１７】
【化６】
2010202655.tif 000007
【００１８】
で表される化合物を、抗ガンに効果的な量で抗ガン治療の必要な哺乳類ホストへ投与することからなる哺乳類ホストの治療に関する。
式１中、各Ｒは、独立して、Ｈ、又は、脂肪族若しくは芳香族アシル基であることが好ましい。
典型的な脂肪族アシル基は１〜６の炭素原子を含有するものであり、ホルミル基、アセチル基、プロピオニル基が挙げられる。典型的な芳香族アシル基として、芳香族基中７〜１０の炭素原子を含有する無置換若しくはアルキル置換芳香族基が挙げられる。置換されている場合、アルキル基は典型的に１〜６の炭素原子を含有する。典型的な芳香族アシル基として、ベンゾイル基及びパラ−トルイル基が挙げられる。
式１中のＡは、
【００１９】
【化７】
2010202655.tif 000008
【００２０】
【化８】
2010202655.tif 000009
【００２１】
【化９】
2010202655.tif 000010
【００２２】
及び
【００２３】
【化１０】
2010202655.tif 000011
【００２４】
であることが好ましい。
Ｘとして、好適なモノアルキルアミノ基は１〜６の炭素原子を含有し、モノメチルアミノ基、モノエチルアミノ基、モノ−イソプロピルアミノ基、モノ−ｎ−プロピルアミノ基、モノ−イソブチル−アミノ基、モノ−ｎ−ブチルアミノ基及びモノ−ｎ−ヘキシルアミノ基が挙げられる。
Ｙ及びＸとして好適なジアルキルアミノ基は、各アルキル基中に１〜６の炭素原子を含有する。アルキル基は、同一又は異なっていてもよく、直鎖又は分岐鎖であってよい。いくつかの好適な基の例として、ジメチルアミノ、ジエチルアミノ基、エチルメチルアミノ基、ジプロピルアミノ基、ジブチルアミノ基、ジペンチルアミノ基、ジヘキシルアミノ基、メチルペンチルアミノ基、エチルプロピルアミノ基及びエチルヘキシルアミノ基が挙げられる。
Ｘとして好適なハロゲン基には、Ｃｌ基、Ｂｒ基及びＦ基がある。
Ｘとして好適なアルキル基は、典型的に１〜６の炭素原子を含有し、直鎖又は分岐鎖であってよい。いくつかの例として、メチル基、エチル基、ｉ−プロピル基、ｎ−プロピル基、ｉ−ブチル基、ｎ−ブチル基、ペンチル基及びヘキシル基が挙げられる。
【００２５】
好適なハロアルキル基は、典型的に１〜６の炭素原子を含有するものであり、直鎖又は分岐鎖であってよく、特に上記したアルキル基を含有するＣｌ、Ｂｒ又はＦ置換アルキル基が挙げられる。
好適なアルコキシ基は、典型的に１〜６の炭素原子を含有するものであり、メトキシ基、エトキシ基、プロポキシ基及びブトキシ基が挙げられる。
好適なアルケニル基は、典型的に２〜６の炭素原子を含有するものであり、エテニル基及びプロペニル基が挙げられる。
好適なハロアルケニル基は、典型的に１〜６の炭素原子を含有するものであり、特に上記したアルケニル基を含有するＣｌ、Ｂｒ又はＦ置換アルケニル基が挙げられる。
好適なアルキニル基は、典型的に１〜６の炭素原子を含有するものであり、エチニル基及びプロピニル基が挙げられる。
本発明の製法により用いられる好ましい化合物として、１−（４−チオ−β−Ｄ−アラビノフラノシル）シトシンが挙げられる。
本発明は、メラノーマ、前立腺ガン、乳ガン、腎臓ガン、結腸ガン、肺ガン、白血病及びリンパ球ガン等のガンにかかったヒトを含む哺乳類ホストを治療するのに好適である。
【００２６】
本発明により用いられる化合物は、２，３，５−トリ−Ｏ−ベンジル−Ｌ−キシロース−ジベンジル  ジチオアセタール等、２，３，５−トリ−Ｏ−アリール若しくはアルキル−４−キシロースジアリール又はジアルキルジチオアセタールを、支持基の存在下４水酸基位で反応し、ベンジル２，３，５−トリ−Ｏ−ベンジル−１，４−ジチオ−Ｄ−アラビノフラノシド等、対応する１，４−ジチオ−Ｄ−アラビノフラノシドベンジルを製造することにより調製される。本工程は、フォスフィン、ヨード及びイミダゾールを用いて行うことができる。上記工程の生成物を酸分解させ、２，３，５−トリ−Ｏ−ベンジル−１−Ｏ−アセチル−４−チオ−アラビノフラノース等の対応するＯ−アセチル−４−チオ−Ｄ−アラビノフラノースを形成する。例えば、酢酸水銀の存在下で酢酸を使用することができる。
【００２７】
上記工程の生成物は、シトシン、５−若しくは６−アザ化合物又はそれらの好適なブロック誘導体で反応させ、シトシンの場合は１−（２，３，５−トリ−Ｏ−ベンジル−４−チオ−α，β−Ｄ−アラビノフラノシル）シトシン等の対応する４−チオ−α，β−Ｄ−アラビノフラノシル化合物を形成する。好適なブロック誘導体として、アシル及びトリメチルシリル化誘導体が挙げられる。上記工程の化合物は、加水分解で１−（４−チオ−α，β−Ｄ−アラビノフラノシル）シトシン等の対応するチオ糖誘導体に変換される。
上記工程のアノマー混合物のα型を分離して、１−（４−チオ−β−Ｄ−アラビノフラノシル）シトシン等の所望の式１の化合物を得る。
【００２８】
本発明による化合物は、製造工程の理解を促す為に、好ましい化合物、１−（４−チオ−β−Ｄ−アラビノフラノシル）シトシンが例示された、以下に記述されたスキーム１並びに実施例１及び２で示された製造工程により調製することができる。使用される前駆体、２，３，５−チオ−Ｏ−ベンジル−Ｌ−キシロースジベンジルジチオアセタールは、参照により本願に包括された開示である、Ｓｅｃｒｉｓｔ，ＩＩＩらにより記されたＮｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ  ＆  Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ，１９９５年、１４（３５）、６７５〜６８６頁、「ある４’−チオヌクレオシドの合成及び生物活性」で記述されている方法で製造される。本発明の方法により、所望の化合物を多量に製造する比較的効果的な方法が与えられる。従来技術の手法は非常に煩雑で、所望量の化合物を製造することがたやすく適してなかった。
【００２９】
【化１１】
2010202655.tif 000012
【００３０】
投与されるべき本発明の活性化合物の製薬上許容できる効果的な投与量は、温血動物（哺乳類）の種類、体重、年齢、個体の状態及び投与形態に依存する。
医薬組成物は、本発明で使用される化合物を治療すべき哺乳類の大動脈へ運搬する経口、非経口、座薬又はその他の形態でよい。
本発明の化合物は、個々の治療剤又は治療剤の組み合わせのいずれかとして、薬品に関する使用に有効な従来の手段のいずれによっても投与することができる。それらは、単独で投与することができるが、一般に選択した投与経路及び標準的な製薬慣行に基づき選択された薬品基剤と一緒に投与される。
投与される投薬量は、もちろん、その薬剤の薬物動力学特性、及び、その投与形態及び経路等；受容者の年齢、健康状態、体重；症状の性質及び程度；同時に行う治療の種類；治療の頻度；及び所望の効果等、既知の要素に依存して変化する。活性成分の１日の投与量は、体重１キログラム（ｋｇ）当たり、約０．００１〜１０００ミリグラム（ｍｇ）、好ましくは０．１〜約３０ｍｇ／ｋｇである。
投薬形態（投与に好適な組成物）は、典型的にユニット当たり約１ｍｇ〜約１００ｍｇの活性成分を含有する。その医薬組成物中、活性成分は、通常、組成物全体量に対して約０．５〜９５％量存在する。
【００３１】
活性成分は、カプセル、錠剤及び粉末等の固形投薬形態、又は、エリキシル、シロップ及び懸濁液等の液体投薬形態で経口投与できる。それは、滅菌液体投薬形態で非経口投与することもできる。活性成分は、鼻腔内投与（点鼻液）又は吸入による投与もできる。その他の投薬形態は、貼付剤の手法又は軟膏を介して、経皮投与等も可能であるかもしれない。
ゼラチンカプセルは、活性成分、及び、ラクトース、デンプン、セルロース誘導体、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸等の粉末基剤を含有する。類似した賦形剤は、圧縮錠剤の作成に使用できる。錠剤及びカプセルは持続性放出物として製造でき、何時間もの間連続して薬物放出することができる。圧縮錠剤は、糖被覆若しくは膜被覆して、何がしかの不快な味を隠し、空気から錠剤を保護するか、又は、胃腸管中で選択的に分解するよう腸溶性被覆することができる。
経口投与のための液体投薬形態は、患者の許容性を増加させるために着色料及び香料を含有してもよい。
【００３２】
一般に、水、好適な油、塩水、水溶性デキストロース（グルコース）、関連する糖溶液及びプロピレングリコール、ポリエチレングリコール等のグリコールは、非経口溶液に好適な基剤である。非経口投与用の溶液は、活性成分の水溶性塩、好適な安定剤、及び、必要であれば緩衝液物質を含有することが好ましい。重亜硫酸ナトリウム、亜硫酸ナトリウム、アスコルビン酸等の抗酸化剤は、単独又は組み合わせで、安定化剤に適している。クエン酸及びその塩、並びに、ＥＤＴＡナトリウムも使用できる。加えて、非経口溶液は、塩化ベンズアルコニウム、メチル−又はプロピルパラベン及びクロロブタノール等の保存料を含有することができる。
好適な医薬基剤は、本分野の標準参照テキストである、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  ＣｏｍｐａｎｙのＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓに記載されている。
【００３３】
本発明による化合物の投与の為の実用的な薬品投与形態は、以下に例証できる：
カプセル
多数のユニットのカプセルを、それぞれ１００ｍｇ粉末活性成分、１５０ｍｇラクトース、５０ｍｇセルロース及び６ｍｇステアリン酸マグネシウムを、標準２ピース硬ゼラチンカプセルに詰め込み調製した。
軟ゼラチンカプセル
大豆油、綿実油、オリーブ油等の消化可能な油中に活性成分混合物を調製して、容積移送式ポンプでゼラチンへ注入し、１００ｍｕ活性成分を含有する軟ゼラチンカプセルを形成した。カプセルは、洗浄し、乾燥した。
錠剤
多数の錠剤を従来の製法で調製して、投薬ユニットを１００ｍｇ活性成分、０．２ｍｇ膠質二酸化珪素、５ｍｇステアリン酸マグネシウム、２７５ｍｇ微晶質セルロース、１１ｍｇデンプン及び９８．８ｍｇラクトースとした。好適な被覆をして、嗜好性を増加させ吸収を遅くした。
【００３４】
ここに示し記載したものに加えて、本発明の様々な改良は、先の記載より当業者に明らかであろう。そのような改良も添付したクレームの範疇に入ることを意図している。
先の開示は、当業者が請求した発明を実行可能にするのに不可欠だと考えられる情報を全て包含する。なぜなら引用した出願はさらに実用的な情報を与えるので、これらの引用した資料は、全体的に参照することにより本願に包括される。
【実施例】
【００３５】
以下の実施例は、制限することなく、さらに本発明を例証する。
実施例１
１−（４−チオ−β−Ｄ−アラビノフラノシル）シトシンの調製
２，３，５−トリ−Ｏ−ベンジル−Ｌ−キシロース−ジベンジルジチオアセタール（４）。Ｘ−キシロース（１，２５ｇ，１６７ｍｍｏｌ）を、０．５％塩酸のメタノール（６７５ｍＬ）中で、室温で５時間攪拌して、それからＡｍｂｅｒｌｉｔｅ  ＩＲＡ−４００  ＯＨ陰イオン交換樹脂で中和した。濾液及び洗浄液を合わせて、吸引乾燥して、粗成物をシリカゲルクロマトグラフィー（ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ，９２：８）で精製して、２６．２ｇＬ−キシロフラノシドメチル（２，収率９５％）を、α及びβ（１：１）混合物として得られた。ＭＳ１６４（Ｍ−），１６５（Ｍ＋Ｈ）＋，１３３（Ｍ−ＯＣＨ３）＋
【００３６】
氷冷した乾燥テトラヒドロフラン（３５０ｍＬ）中の２（１０ｇ，６０．９ｍｍｏｌ）の溶液へ、水素化ナトリウム（鉱物油中に６０％分散、１４．８ｇ，３７０ｍｍｏｌ）を添加して、反応混合液を１５分間Ｎ２下で攪拌した。この反応混合液へ、テトラブチルアンモニウムヨード化物（０．３６ｇ，０．９６ｍｍｏｌ）を加え、ベンジルブロマイド（３６．６ｇ，２１４ｍｍｏｌ）を滴下し、添加した。反応混合液を、３日間室温で攪拌した。メタノール（２５ｍＬ）添加後、溶液を減圧下吸引乾燥し、粗成物をシリカゲルクロマトグラフィー（シクロヘキサン／ＥｔＯＡｃ，９：１）で精製して、純粋な２，３，５−トリ−Ｏ−ベンジル−Ｌ−キシロフラノシドメチル（３，２３ｇ，収率８７％）を得た。ＭＳ４３５（Ｍ＋Ｈ）＋，４３３（Ｍ−Ｈ）＋，４０３（Ｍ−ＯＣＨ３）＋；１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ７．３８−７．２５（ｍ，３０Ｈ，芳香族Ｈ＝ｓ），４．９４（ｄ，１Ｈ，Ｈ−４α，Ｊ１，２＝４．３Ｈｚ），４．８７（ｄ，１Ｈ，Ｈ−１β，Ｊ１，２＝０．９Ｈｚ），４．６４−４．４５（ｍ，１２Ｈ，ＰｈＣＨ２’ｓ），４．３７（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４α），４．２７（ｄｔ，１Ｈ，Ｈ−４β，Ｊ４，５ａ＝３．７Ｈｚ，Ｊ４，５ｂ＝６．５Ｈｚ，Ｊ３，４＝６．２Ｈｚ），４．１７（ｔ，１Ｈ，Ｈ−３α，Ｊ３，４＝６．９Ｈｚ，Ｊ２，３＝５．６Ｈｚ），４．０７（ｄｄ，１Ｈ，Ｈ−３β，Ｊ３，４＝６．２Ｈｚ，Ｊ２，３＝２．５Ｈｚ），４．００（ｄｄ，１Ｈ，Ｈ−２α，Ｊ２，３＝５．６Ｈｚ），３．９５（ｔ，１Ｈ，Ｈ−２β，Ｊ２，３＝２．５Ｈｚ），３．７０（ｄｄ，１Ｈ，Ｈ−５ａα，Ｊ４，５β＝４．５Ｈｚ，Ｊ５ａ，５ｂ＝１０．４Ｈｚ），３．６６（ｄｄ，１Ｈ，Ｈ−５ａβ，Ｊ４，５ａ＝３．７Ｈｚ，Ｊ５ａ，５ｂ＝１０．７Ｈｚ），３．５４（ｄｄ，１Ｈ，Ｈ−５ｂα，Ｊ４，５ｂ＝７．５Ｈｚ），３．４９（ｄｄ，１Ｈ，Ｈ−５ｂβ，Ｊ４，５ｂ＝６．５Ｈｚ），
【００３７】
ジクロロメタン（１０００ｍＬ）中の３（４２ｇ，９７ｍｍｏｌ）の溶液へ、ベンジルメルカプタン（４９．６ｇ，４００ｍｍｏｌ）及び塩化スズ（４．９３ｇ，１８．９ｍｍｏｌ）を添加して、反応混合液を室温で１晩攪拌した。５％ＮａＨＣＯ３水溶液（７５０ｍＬ）で中和後、有機相を分離して、水相をジクロロメタン（５００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相へ、吸引乾燥し、粗成物４をシリカゲルクロマトグラフィー（シクロヘキサン／ＥｔＯＡｃ，９９：１）で精製して、４（８．５３ｇ，収率５７％）が、前に進めるのに充分な純度で得られた。
ＭＳ６５７（Ｍ＋Ｌｉ）＋；１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ７．３５−７．２９（ｍ，１９Ｈ，芳香族Ｈ＝ｓ），７．１９−７．１３（ｍ，４Ｈ，芳香族Ｈ＝ｓ），７．０１−６．９６（ｍ，２Ｈ，芳香族Ｈ＝ｓ），４．８６（ｄ，１Ｈ，ＰｈＣＨＨ，Ｊ＝１１．１Ｈｚ），４．７０（２つが２重に重なる，ｄ＝ｓ，ＰｈＣＨＨ，ＰｈＣＨＨ，Ｊ＝１１．１Ｈｚ，Ｊ＝１１．２Ｈｚ），４．４３（ｄ，１Ｈ，ＰｈＣＨＨ，１１．２Ｈｚ），４．４０（ｄ，１Ｈ，ＰｈＣＨＨ，Ｊ＝１１．９Ｈｚ），４．３６（ｄ，１Ｈ，ＰｈＣＨＨ，Ｊ＝１１．９Ｈｚ），４．０７（ｄｄ，１Ｈ，Ｈ−２，Ｊ１，２＝３．０Ｈｚ，Ｊ２，３＝７．５Ｈｚ），３．７５−３．６７（ｍ，４Ｈ，ｔｗｏ  ＰｈＣＨ２＝ｓ），３．６８（ｄ，１Ｈ，Ｈ−１，Ｊ１，２＝３．０Ｈｚ），３．３６−３．２５（ｍ，２Ｈ，Ｈ−４，Ｈ−５ａ），３．１５−３．１２（ｍ，１Ｈ，Ｈ−５ｂ），２．２２（ｄ，１Ｈ，４−ＯＨ，Ｊ＝６．２Ｈｚ） 
【００３８】
２，３，５−トリ−Ｏ−ベンジル−１−Ｏ−アセチル−４−チオ−Ｄ−アラビノフラノース（６）。乾燥２：１トルエン／アセトニトリル（２００ｍＬ）中の４（１３．０ｇ，２０ｍｍｏｌ）の溶液へ、トリフェニルフォスフィン（１５．７ｇ，６０ｍｍｏｌ）、ヨー素（１２．７ｇ，５０ｍｍｏｌ）及びイミダゾール（５．４４ｇ，８０ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合液を９０℃で２４時間攪拌し、その後吸引乾燥した。粗成物をシリカゲルクロマトグラフィー（シクロヘキサン／ＥｔＯＡｃ，４：１）で精製して、ベンジル２，３，５−トリ−Ｏ−ベンジル−１，４−ジチオ−Ｄ−アラビノフラノシドをシロップ（５，９．０ｇ，８３％）として得られた。ＭＳ５３４（Ｍ＋Ｈ）＋；１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ７．４０−７．２０（ｍ，２０Ｈ，芳香族Ｈ＝ｓ），４．６９−４．４２（ｍ，６Ｈ，３つのＰｈＣＨ２Ｏ＝ｓ），４．３７（ｍ，１Ｈ，Ｈ−１），４．２０（ｍ，２Ｈ，Ｈ−２，Ｈ−３），３．８７（ｓ，２Ｈ，ＰｈＣＨ２Ｓ−），３．８０（ｄｄ，１Ｈ，Ｈ−５ａ，Ｊ４，５ａ＝７．４Ｈｚ，Ｊ５ａ，５ｂ＝９．３Ｈｚ），３．５５（ｄｄ，１Ｈ，Ｈ−５ｂ，Ｊ４，５ｂ＝７．１Ｈｚ），３．４７（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４），Ａｎａｌ．（Ｃ３３Ｈ３４Ｏ３Ｓ２＠０．２５Ｈ２Ｏ）Ｃ．Ｈ．
【００３９】
酢酸（９６ｇ）中の酢酸水銀（７．２９ｇ，２２．９ｍｍｏｌ）の懸濁液へ、５（５．４２ｇ，１０ｍｍｏｌ）を添加して、得られた混合液を室温で２時間攪拌した。反応混合液をジクロロメタン（２００ｍＬ）で希釈して、水、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液、５％ＫＣＮ水溶液で連続して洗浄した。有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥、濃縮した。シクロヘキサン：酢酸エチル（９８：２）を溶出液として用いて、粗成物のクロマトグラフィーを行い、６（３．７３ｇ，７８％）のα及びβ（１：１）アノマーが、無色のシロップとして得られた。ＭＳ４７９（Ｍ＋Ｈ）＋；１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ７．３５−７．２３（ｍ，１５Ｈ，芳香族Ｈ＝ｓ），６．０７（ｄ，０．２５Ｈ，Ｈ−１β，Ｊ１，２＝４．０Ｈｚ），５．９８（ｄ，０．７５Ｈ，Ｈ−１α，Ｊ１，２＝２．８Ｈｚ），４．８３−４．５５（ｍ，６Ｈ，ＰｈＣＨ２’ｓ），４．２６（ｄｄ，０．７５Ｈ，Ｈ−２α，Ｊ２，３＝５．４Ｈｚ），４．１７−４．１４（ｍ，５Ｈ，Ｈ−２β，Ｈ−３β），４．０３（ｔ，０．７５Ｈ，Ｈ−３α，Ｊ３，４＝６Ｈｚ），３．８６−３．６７（ｍ，１．２５Ｈ，Ｈ−４α，Ｈ−５ａα，Ｈ−５ａβ），３．５３−３．３９（ｍ，１．７５Ｈ，Ｈ−５ｂα，Ｈ−４β，Ｈ−５ｂβ），２．０６（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３−α，ＣＨ３−β），Ａｎａｌ．（Ｃ２８Ｈ３０Ｏ５Ｓ＠０．７５Ｈ２Ｏ）Ｃ．Ｈ．
【００４０】
１−（２，３，５−トリ−Ｏ−ベンジル−４−チオ−α，β−Ｄ−アラビノフラノシル）シトシン（７）。無水アセトニトリル（２５ｍＬ）中の１−Ｏ−アセチル  ２，３，５−トリ−Ｏ−ベンジル−４−チオ−Ｄ−アラビノフラノース（４７８ｍｇ，１ｍｍｏｌ）及びシトシン（１１１．０ｍｇ，１ｍｍｏｌ）へ、連続的にヘキサメチルジシラザン（ＨＭＤＳ，１６２ｍｇ，１ｍｍｏｌ）、クロロトリメチルシラン（ＴＭＳＣｌ，４３４ｍｇ，４ｍｍｏｌ）を添加し、混合液を室温で０．５時間攪拌した。この溶液を−７８℃で冷却した。トリメチルシリルトリフルオロメタンスルホン酸（２６７ｍｇ，１．２ｍｍｏｌ）を添加し、得られた溶液を−７８℃で２．５時間攪拌し、反応を実質上終えた。混合液を室温に温め、少量（５ｍＬ）に濃縮し、塩化メチレン（５０ｍＬ）で希釈して、水（２０ｍＬ）、続いて二炭酸ナトリウム、水で洗浄した。有機相をＭｇＳＯ４で乾燥して、吸引乾燥した。残渣をシリカゲルのクロマトグラフィー（５０ｇ，ＣＨＣｌ３／ＭＥＯＨ，９８：２で溶出）で精製して、７（４１２ｍｇ，７７．５％）が無色シロップとして得られた。
ＴＬＣ（９５：５  ＣＨＣｌ３／ＭＥＯＨ）Ｒβ  ０．６５；ＭＳ  ｚ／ｅ５３６（Ｍ＋Ｌｉ）＋
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ８．２２（ｄ，１Ｈ，Ｈ−６β，Ｊ＝７．６）；（ｄ，１，Ｈ−６α，Ｊ５，６＝７．５Ｈｚ）；７．３８−７．０９（ｍ，３０，芳香族Ｈ’ｓ）；６．６５（ｄ，１Ｈ，Ｈ−１’β，Ｊ１’，２’＝５．７Ｈｚ）；６．３６（ｄ，１Ｈ，Ｈ−１’α，Ｊ１’，２’＝１．２Ｈｚ）；５．４４（ｄ，１，Ｈ−５α）；５．２６（ｄ，１Ｈ，Ｈ−５β）；４．９７−４．３３（複数が２重に重なる，１２，Ｃ６Ｈ５ＣＨ２），４．２６（ｄｄ，Ｈ−２’β，Ｊ２’，３’＝６．８Ｈｚ）；４．２２（ｍ，１，Ｈ−３’α，Ｊ３’，４’＝１Ｈｚ）；４．１６（ｄｄ，１，Ｈ−３’β，Ｊ３’，４’＝６．４Ｈｚ）；４．１３（ｍ，１，Ｈ−２’α，Ｊ２’，３’＝１．７Ｈｚ）；３．９１（ｍ，１，Ｈ−４’α）；３．７８（ｍ，１，Ｈ−５’α，）；３．７３−３．６３（ｍ，２，Ｈ−５’β）；３．５５（ｍ，１，Ｈ−５’α）；３．４６（ｍ，１，Ｈ−４’β）
【００４１】
１−（４−チオ−α，β−Ｄ−アラビノフラノシル）シトシン（８）。−７８℃に冷却した乾燥ジクロロメタン（７ｍＬ，７ｍｍｏｌ）中の三塩化ホウ素溶液（１Ｍ溶液）へ、乾燥ジクロロメタン（１０ｍＬ）中の化合物７（２６５ｍｇ，０．５ｍｍｏｌ）の溶液を３０分間滴下して添加した。一晩、−２０℃で攪拌し続けた。溶液を真空除去し、残渣をジクロロメタン（４Ｘ２０ｍＬ）と共蒸散させた。残渣を飽和ＮａＨＣＯ３（２５ｍＬ）で中和して、クロロホルム（１５ｍＬ）で洗浄した。水相を陽イオン交換（Ｈ＋）カラムへ供して、水で溶出し塩を除去して、１Ｎ  ＮＨ４ＯＨで溶出して、所望の化合物８（１１０ｍｇ，８５％）を得た。ＭＳｚ／ｅ２６０（Ｍ＋Ｈ）＋；１Ｈ  ＮＭＲ（Ｍｅ２ＳＯ−ｄ６）δ７．９４（ｄ，．６７，Ｈ−６−β，Ｊ５．６＝７．５Ｈｚ）；７．９０（ｄ．０．３３，Ｈ−６α，Ｊ５．６＝７．５Ｈｚ）；７．１７−７．０３（ｏｖｅｒｌａｐｐｉｎｇ  ｂｓ，２，ＮＨ’ｓ）；６．３３（ｄ，０．６７，Ｈ−１’β，Ｊ１’２’＝４．６Ｈｚ）；５．８６（ｄ．０．３３，Ｈ−１’α，Ｊ１’２’＝７．３Ｈｚ）；５．７７（ｄ，０．３３，Ｈ−５α）：５．７０（ｄ．０．６７，Ｈ−５β）；５．６１  ａｎｄ  ５．５９（２重に重なる，１，２’−ＯＨβ，Ｊ２’，２’−ＯＨ＝５．１Ｈｚ，２’−ＯＨα，Ｊ２’，２’−ＯＨ＝５．９Ｈｚ）；５．４７（ｄ，０．３３，３’−ＯＨα，Ｊ３’，３’−ＯＨ＝５．１Ｈｚ）；５．３８（ｄ，０．６７．３’−ＯＨβ，Ｊ３’，３’−ＯＨ＝４．２Ｈｚ）；５．０８（ｔ，０．６７，５’−ＯＨβ，Ｊ５’，５’−ＯＨ＝５．４Ｈｚ）；４．９０（ｔ，０．３３，５’−ＯＨα，Ｊ５’，５’−ＯＨ＝５．２Ｈｚ）；４．００−３．９３（ｍ，１．６７，Ｈ−２’α，Ｈ−２’β，Ｈ−３’β）；３．８６−３．７６−３．５５（ｍ，１．Ｈ−５’β＋Ｈ−３’α）；３．４９−３．３３（ｍ，０．６７，Ｈ−４’α，Ｈ−５’α）：３．１７（ｍ，０．６７，Ｈ−４’β）．
【００４２】
１−（５−Ｏ−ジメトキシトリチル−４−チオ−β−Ｄ−アラビノフラノシル）シトシン（９）。乾燥ピリジン（１０ｍＬ）中の化合物８（１００ｍｇ，０．３８ｍｍｏｌ）へ、４，４’−ジメトキシトリチルクロライド（１３５ｍｇ，０．６ｍｍｏｌ）添加し、溶液を２時間、室温で攪拌した。反応混合液を吸引除去し、粗成物を酢酸エチル（２０ｍＬ）に溶解させ、水で洗浄し、シリカゲルカラム（ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ，９８：２）で精製し、吸引乾燥して、固体とし、純粋化合物９（９６ｍｇ，８のα，β−混合物の１：１混合物を基準に９０％）を得た。
ＭＳ（ｚ／ｅ５６８．３（Ｍ＋Ｌｉ）＋；１Ｈ  ＮＭＲ（Ｍｅ２ＳＯ−ｄ６）δ７．７７（ｄ，１，Ｈ−６，Ｊ５．６＝７．５Ｈｚ）；７．４２−７．２３（ｍ，９，芳香族  Ｈ’ｓ）；７．１７（ｂｓ，１．ＮＨ）；７．０５（ｂｓ，１．ＮＨ）；６．９１−６．８８（ｍ，４，芳香族  Ｈ’ｓ）；６．３６（ｄ，１，Ｈ−１’，Ｊ１’．２’＝４．８Ｈｚ）；５．６５（ｄ，１，Ｈ−５）；５．７６（ｄ，１，２’−ＯＨ，Ｊ２’，２’−ＯＨ＝４．６Ｈｚ）；５．４３（ｄ，１，３’−ＯＨ，Ｊ３’，３’−ＯＨ＝３．３Ｈｚ）；３．９８−３．９１（ｍ，２，Ｈ−２’，Ｈ−３’）；３．７５（ｓ，６．ＯＣＨ３）；３．３９−３．２５（ｍ，Ｂ，Ｈ−４’，Ｈ−５’）．
【００４３】
１−（４−チオ−β−Ｄ−アラビノフラノシル）シトシン（１０）。化合物９（９０ｍｇ，０．１６ｍｍｏｌ）をクロロホルム（５ｍＬ）中のトリフルオロ酢酸（２２ｍｇ）で、室温で１０分間処理した。反応混合液をＮａＨＣＯ３水溶液で中和して、水相を陽イオン交換カラムへ供して、最初は水で溶出して塩を除去して、最終的に１Ｎ  ＮＨ４ＯＨで溶出して、化合物１０（３５ｍｇ，８５％）を得た。融点２１８〜２２０℃（ｌｉｔ１２２１−２２２℃）。ＭＳｚ／ｅ２６０（Ｍ＋Ｈ）＋。  
１Ｈ  ＮＭＲ（Ｍｅ２ＳＯ−ｄ６）δ７．９４（ｄ，１，Ｈ−６，Ｊ５．６＝７．５Ｈｚ）；７．１２（ｂｓ，１，ＮＨ）；７．０４（ｂｓ，１，ＮＨ）；６．３３（ｄ，１，Ｈ−１’，Ｊ１’，２’＝４．６Ｈｚ）；５．７０（ｄ，１，Ｈ−５）；５．６１（ｂｄ，１，２’−ＯＨ，Ｊ２’，２’−ＯＨ＝３．１Ｈｚ）；５．３８（ｂｄ，１，３’−ＯＨ，Ｊ３’，３’−ＯＨ＝３．５Ｈｚ）；５．０８（ｂｔ，１，５’−ＯＨ，Ｊ５’５’−ＯＨ＝４．９Ｈｚ）；４．００−３．９３（ｍ，２，Ｈ−２’，Ｈ−３’）；３．７８（ｍ，１，Ｈ−５’ａ）；３．６１（ｍ，１，Ｈ−５’ｂ）；３．１６（ｍ，１，Ｈ−４’）．
【００４４】
実施例２
１−（４−チオ−β−Ｄ−アラビノフラノシル）５−フルオロシトシンの調製
１−（２，３，５−トリ−Ｏ−ベンジル−４−チオ−α，β−Ｄ−アラビノフラノシル）５−フルオロシトシン（７ａ）。無水アセトニトリル（２５ｍｍｏｌ）中の１−Ｏ−アセチル  ２，３，５−トリ−Ｏ−ベンジル−４−チオ−Ｄ−アラビノフラノース（４７８ｍｇ，１ｍｍｏｌ）及びシトシン（１２９．０ｍｇ，１ｍｍｏｌ）へ、連続的にヘキサメチルジシラザン（ＨＭＤＳ，１６２ｍｇ，１ｍｍｏｌ）及びクロロトリメチルシラン（ＴＭＳＣｌ，４３４ｍｇ，４ｍｍｏｌ）を添加し、混合液を室温で０．５時間攪拌した。この溶液を−７８℃で冷却した。トリメチルシリルトリフルオロメタンスルホネート（２６７ｍｇ，１．２ｍｍｏｌ）を添加し、得られた溶液を−７８℃でさらに２．５時間攪拌し、反応を実質上終えた。混合液を室温に温め、少量（５ｍＬ）に濃縮し、塩化メチレン（５０ｍＬ）で希釈して、水（２０ｍＬ）、続いて二炭酸ナトリウム、水で洗浄した。有機相をＭｇＳＯ４で乾燥して、吸引乾燥した。残渣をシリカゲルのクロマトグラフィー（５０ｇ，ＣＨＣｌ３／ＭＥＯＨ，９８：２で溶出）で精製して、２：１α，β混合物として７（４２５．２ｍｇ，８０．０％）が無色シロップＴＬＣ（９５：５，ＣＨＣｌ３／ＭＥＯＨ  Ｒβ０．６５）；ＭＳ  ｚ／ｅ  ５５３（Ｍ＋Ｌｉ）−として得られた。
【００４５】
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ８．４０（ｄ，１，Ｈ−６β，Ｊ＝７．６）；８．１０（ｄ，１，Ｈ−６α，Ｊ５．６＝７．５Ｈｚ）；７．３８−７．０９（ｍ，３０，芳香族  Ｈ’ｓ）；６．５５（ｄ，１，Ｈ−１’β，Ｊ１’２’＝１．２Ｈｚ）；４．９０（ｄ，１，Ｈ−５α）；４．７８（ｄ，１，Ｈ−５β）；４．３０−４．５５（複数が重なる．１２，Ｃ６Ｈ５ＣＨ３）．４．１５（ｄｄ，１Ｈ−２’β，Ｊ２’３’＝６．８Ｈｚ）；４．１０（ｍ，１，Ｈ−３’α，Ｊ３’，４’＝１Ｈｚ）；３．９０（ｄｄ，１，Ｈ−３’β，Ｊ３’，４’＝６．４Ｈｚ）；３．７５（ｍ，１，Ｈ−２’α，Ｊ２’３’＝１．７Ｈｚ）；３．７０（ｍ，１，Ｈ−４’α）；３．６５（ｍ，１．Ｈ−５’α）：３．５０−３．５５（ｍ，２，Ｈ−５’β）；３．４５（ｍ，１，Ｈ−５’α）；３．４０（ｍ，１，Ｈ−４’α）．
【００４６】
１−（４−チオ−β−Ｄ−アラビノフラノシル）５−フルオロシトシン（１０ａ）。−７８℃に冷却した乾燥ジクロロメタン（７ｍＬ，７ｍｍｏｌ）中の三塩化ホウ素溶液（１Ｍ溶液）へ、乾燥ジクロロメタン（１０ｍＬ）中の化合物７（２２７３ｍｇ，０．５ｍｍｏｌ）の溶液を３０分間滴下して添加した。一晩、−２０℃で攪拌し続け、溶液を真空除去し、残渣をジクロロメタン（４Ｘ２０ｍＬ）と共蒸散させた。残渣を飽和ＮａＨＣＯ３（２５ｍＬ）で中和して、クロロホルム（１５ｍＬ）で洗浄した。水相を陽イオン交換（Ｈ＋）カラムへ供して、水で溶出し塩を除去し、それから１Ｎ  ＮＨ４ＯＨで溶出して、所望の化合物８ａを２：１α，β混合物として得て、水で結晶化して、純粋な１０ａ（３２．２ｍｇ，２５％）を得た。ＭＳ  ｚ／ｅ  ２７８（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００４７】
１Ｈ  ＮＭＲ（Ｍｅ２ＳＯ−ｄ６）δ８．１５（ｄ，１，Ｈ−６，Ｊ５，６＝７．５Ｈｚ）；７．７５（ｂｓ，１，ＮＨ）；７．５０（ｂｓ，１，ＮＨ）；６．２５（ｄ，１，Ｈ−１’，Ｊ１’，２’＝４．６Ｈｚ）；５．６５（ｄ，１，Ｈ−５）；５．６０（ｂｄ，１，２’−ＯＨ，Ｊ２’，２’−ＯＨ＝３．１Ｈｚ）；５．４０（ｂｄ，１．３’−ＯＨ，Ｊ３’３’−ＯＨ＝３．５Ｈｚ）；５．２０（ｂｔ，１，５’−ＯＨ，Ｊ５’，５’−ＯＨ＝４．９Ｈｚ）；４．００−３．９０（ｍ，２，Ｈ−２’，Ｈ−３’）；３．７５（ｍ，１，Ｈ−５’ａ）；３．６５（ｍ，１，Ｈ−５’ｂ）；３．１５（ｍ，１，Ｈ−４’）．
Ｏｔｏｔａｎｉ，Ｈ．；Ｗｈｉｓｌｅｒ，Ｒ．Ｌ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．  １９７４，１７，５３５−５３７，２，２’−無水−１−β−Ｄ−アラビノフラノシルシトシンの４’−チオアナログの調製及び抗腫瘍活性
実施例３
以下のｉｎ  ｖｉｔｒｏ試験を実施した。
【００４８】
【表１】
2010202655.tif 000013
【００４９】
上記試験は、ＳＲＢ検定に処したＳＫ−ＭＥＬ２８以外、全ての細胞種に対しＮａｔｕｒａｌ  Ｒｅｄ検定を用い、化合物へ７２時間照射して行った。
実施例４
以下の生体内試験を実施し、本発明の化合物の効果の例証を行った。
【００５０】
【表２】
2010202655.tif 000014
【００５１】
【表３】
2010202655.tif 000015
【００５２】
【表４】
2010202655.tif 000016
【００５３】
上記試験から評価できるように、大抵の細胞種中で、ＡＲＡ−Ｃは、本発明のＡＲＡ−Ｃと比較して、ガン治療として本発明の化合物の使用を思いとどめるような高い毒性を示す。しかしながら、驚くべきことに、１−（４−チオ−β−Ｄ−アラビノフラノシル）シトシンは、ＡＲＡ−Ｃより強力であり、より選択的に生体内でガン細胞を殺す。本発明により用いられる化合物は、低い毒性と共に、より良い抗ガン活性を示す。このことは、放射線標識物質を使用して表５で示された、１−（４−チオ−β−Ｄ−アラビノフラノシル）シトシンがＡｒａＣほど速くシチジンデアミナーゼにより脱アミノ化されないという事実によるものであろう。ＡｒａＣに対するシチジンデアミナーゼの良好な基質活性は、薬品の半減期を減少させるだけでなく、活性物質でないＡｒａＵｒｉｄｉｎｅに変換することから、本薬品の主要な問題であった。
【００５４】
【表５】
2010202655.tif 000017
【００５５】
以下の試験を実施し、哺乳類細胞中のＤＮＡ複製を阻害する本発明のチオアラビノフラノシル化合物の効能を例証した。以下の試験において、ｄＣｙｄは２’−デオキシシチジンを表し、ＴＣｙｄはチオデオキシシチジンを表し、Ｔ−ａｒａＣは１−（４−チオ（３−Ｄ−アラビノフラノシル）シトシンを表し、Ａｒａ−Ｃは「シトシンアラビノシド」を表す。“ｄＣＴＰ”、“Ｔ−ｄＣＴＰ”、“ａｒａＣＴＰ”及び“ＴａｒａＣＴＰ”という用語は、対応するトリフォスフェートを表す。“ｄＵＲＤ”という用語は、２−デオキシウリジンを表す。“Ｆ−ｄＵｒｄ”という用語は、フッ素化２−デオキシウリジンを表す。“Ｆ−ｄＵＭＰ”という用語は、フッ素化２−デオキシウリジンモノフォスフェートを表す。
ｄＣｙｄ、Ｔ−ｄＣｙｄ、ａｒａＣ及びＴ−ａｒａＣのそれぞれのトリフォスフェートへの代謝を例証した図１ａ及び１ｂで参照できる。特に、ＣＥＭ細胞は、２０００ｎＭ［５−３Ｈ］Ｔ−ｄＣｙｄ、５ｎＭ［５−３Ｈ］ａｒａＣ又は２５ｎＭ［５−３Ｈ］Ｔ−ａｒａＣと一緒に、表示した時間インキュベートした。５’−トリフォスフェートのピークにおける放射能は、ＳＡＸ  ＨＰＬＣを用いて同定した。各化合物について、５’−トリフォスフェートのピークにおける放射能の量は、ＳＡＸ  ＨＰＬＣカラムから溶出した放射能全量の９０％以上であった。
【００５６】
ＣＥＭ細胞成長阻害に関する試験結果を、以下表６に示す。
ＣＥＭ細胞は、様々な濃度の各化合物と一緒にインキュベートして、細胞数における影響をコールターカウンターを用いて同定した。ＩＣ５０を、コントロールの成長パーセント対薬物濃度のプロットから同定した。存在するデータは、３つの別々の実験から得られた平均と標準分散である。ＣＥＭ細胞がコントロールの速度で成長する時間である１カ月近く、１５０ｎＭ  ａｒａＣの存在下でＣＥＭ細胞をインキュベートして、ａｒａＣ耐性細胞を得た。
【００５７】
【表６】
2010202655.tif 000018
【００５８】
野生株及びａｒａＣ耐性ＣＥＭ細胞中の代謝に関する試験結果を、以下の表７で示した。
ＣＥＭ細胞（野生株又はａｒａＣ耐性細胞）は、１００ｎＭ［５−３Ｈ］ｄＣｙｄ、［５−３Ｈ］Ｔ−ｄＣｙｄ、［５−３Ｈ］ａｒａＣ又は［５−３Ｈ］Ｔ−ａｒａＣと一緒に、表示した時間インキュベートした。５’−トリフォスフェートのピークにおける放射能及び酸不溶性部分（ＤＮＡ）中の放射能の混入を同定した。各化合物について、５’−トリフォスフェートのピークにおける放射能の量は、ＳＡＸ  ＨＰＬＣカラムから溶出した放射能全量の９０％以上であった。
【００５９】
【表７】
2010202655.tif 000019
【００６０】
無細胞ＣＥＭ抽出液中のリン酸化を例証した結果を、以下の表８で示した。
粗細胞抽出液を野生株及びａｒａＣ耐性ＣＥＭ細胞から調製し、ｄＣｙｄ、ａｒａＣ及びＴ−ａｒａＣをリン酸化する性能を同定した。括弧内の数は、実施した試験の数である。５０ｍＭＴｒｉｓ（ｐＨ８．０），５ｍＭＡＴＰ，７．５ｍＭＭｇＣｌ２，２０ｍＭＮａＦ，抽出物、及び１μｍ［５−３Ｈ］ｄＣｙｄ、［５−３Ｈ］ａｒａＣ又は［５−３Ｈ］Ｔ−ａｒａＣを含有する溶液中で反応を行った。試験開始後、様々な時間で、各反応ボリュームの分画を取って、ＤＥ−８１フィルター上に置いた。フィルターを１ｍＭ蟻酸アンモニウム及びエタノールで洗浄して、各フィルター上の放射能量を同定した。各化合物のリン酸化は、時間に対して線状に増加した。本検定は、ＨＰＬＣにより検証した。
【００６１】
【表８】
2010202655.tif 000020
【００６２】
以下の表９で、デオキシシチジンデアミナーゼ活性を例証した。特に、デオキシシチジンデアミナーゼ活性は、記載（Ｓｈｅｗａｃｈら、Ｍｏｌ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．４２：５１８−５２４，１９９２）のように、Ｍｏｌｔ−４細胞より精製した。各検定は、２回行われ、速度定数は、１／速度対１／基質濃度の二重逆数直線プロットより同定した。最も良い線は少なくとも５つの基準点からの回帰直線により同定され、Ｋｍ及びＶｍａｘは、ｘ及びｙの２点で切り取って同定した。
【００６３】
【表９】
2010202655.tif 000021
【００６４】
以下の表１０でも、デオキシシチジンデアミナーゼ活性を例証した。
デオキシシチジンデアミナーゼ活性分をヒト胎盤から精製し、ｄＣｙｄ、Ｔ−ｄＣｙｄ、ａｒａＣ及びＴ−ａｒａＣのＫｍ及びＶｍａｘを同定した。２０ｍＭリン酸カリウム（ｐＨ７．４），１００ｍＭ  ＫＣｌ，さまざまな濃度の放射能標識ヌクレオシド及び酵素を含有する溶液中で反応を行った。反応を酸で停止して、ペーパークロマトグラフィーで生成物から基質を分離して、各反応中の放射能を同定した。速度定数は、１／速度対１／基質濃度の二重逆数直線プロットより同定した。最も良い線は少なくとも５つの基準点からの回帰直線により同定され、Ｋｍ及びＶｍａｘは、ｘ及びｙの２点で切り取って同定した。存在するデータは、異なる３回の実験の平均及び標準分散である。
【００６５】
【表１０】
2010202655.tif 000022
【００６６】
以下の表１１に、ＣＥＭ細胞中の半減期試験の結果をまとめた。
１００ｎＭ［５−３Ｈ］ｄＣｙｄ、［５−３Ｈ］Ｔ−ｄＣｙｄ、［５−３Ｈ］ａｒａＣ又は［５−３Ｈ］Ｔ−ａｒａＣと一緒に１時間ＣＥＭ細胞をインキュベートした後、細胞を回収して、新鮮な溶媒で洗浄し、放射能標識したヌクレオシドを含有しない新鮮な溶媒で再懸濁した。細胞を新鮮な溶媒で再懸濁した後、サンプルを様々な時間で回収し、５’−トリフォスフェートのピークにおける放射能の量を、ＳＡＸ  ＨＰＬＣを用いて同定した。存在するデータは、異なる３回の実験の平均及び標準分散である。
【００６７】
【表１１】
2010202655.tif 000023
【００６８】
ＣＥＭ細胞中のａｒａＣＴＰ、Ｔ−ａｒａＣＴＰの残存量に関する試験の結果は、図２に示している。試験は以下のように行った；
５ｎＭ［５−３Ｈ］ａｒａＣ又は２００ｎＭ［５−３Ｈ］Ｔ−ａｒａＣと一緒に１時間ＣＥＭ細胞をインキュベートした後、細胞を回収し、新鮮な溶媒で洗浄し、放射能標識したヌクレオシドを含有しない新鮮な溶媒で再懸濁した。細胞を新鮮な溶媒で再懸濁した後、サンプルを様々な時間で回収し、５’−トリフォスフェートのピークにおける放射能の量を、ＳＡＸ  ＨＰＬＣを用いて同定した。
本実験において、放射能標識化合物と一緒に１時間インキュベートした後、０．６３９ｐｍｏｌｅｓ  ａｒａＣＴＰ／１０６細胞、及び、０．２４６ｐｍｏｌｅｓ  Ｔ−ａｒａＣＴＰが存在した。
ＣＥＭ細胞中の代謝に関する結果は、以下の表１２で示している。特に、ＣＥＭ細胞は、１００ｎＭ［５−３Ｈ］ｄＣｙｄ、［５−３Ｈ］Ｔ−ｄＣｙｄ、［５−３Ｈ］ａｒａＣ又は［５−３Ｈ］Ｔ−ａｒａＣと一緒に表示した時間インキュベートした。各化合物の完全な代謝を同定した：溶媒を、もとの化合物、その脱アミノ型及び水に関し、逆相ＨＰＬＣを使用して分析した：酸溶解性抽出物を、リン酸化代謝産物に関し、ＳＡＸ  ＨＰＬＣで分析した；酸−沈降性物質（ＤＮＡ）中の放射能の取り込みを同定した。全体のもとの放射能は、各分画中で計算された。各化合物について、５’−トリフォスフェートのピークにおける放射能の量は、ＳＡＸ  ＨＰＬＣカラムから溶出した放射能全量の９０％以上であった。
【００６９】
【表１２】
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【００７０】
代謝におけるＦ−ｄＵｒｄの影響に関する試験の結果は、表１３で示している。
代謝してＦ−ｄＵＭＰ（チミジル酸シンセターゼの強力な阻害剤）となるＦ−ｄＵｒｄの１０μＭ存在下又は無しで、１００ｎＭ［５−３Ｈ］ｄＣｙｄ、［５−３Ｈ］Ｔ−ｄＣｙｄ、［５−３Ｈ］ａｒａＣ又は［５−３Ｈ］Ｔ−ａｒａＣと一緒に、ＣＥＭ細胞を表示した時間インキュベートした。各化合物の完全な代謝を、表１２の説明で記載した通りに同定し、各化合物の脱アミノ代謝産物のパーセントを同定した。Ｆ−ｄＵｒｄ無しでは、ｄＣｙｄに対する脱アミノ物は、チミジル酸シンセターゼによりＦ−ｄＵＭＰの５位で［３Ｈ］が脱離した［３Ｈ］Ｈ２Ｏである。Ｆ−ｄＵｒｄ存在下では、ｄＣｙｄ、Ｔ−ｄＣｙｄ及びａｒａＣの脱アミノ物は、それぞれｄＵｒｄ、Ｔ−ｄＵｒｄ又はａｒａＵである。
【００７１】
【表１３】
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【００７２】
ＤＮＡ、ＲＮＡ及びタンパク質合成の影響に関する試験の結果は以下の表１４で示している。
ＣＥＭ細胞は、６０μＭ  Ｔ−ｄＣｙｄ、１５０ｎＭ  ａｒａＣ又は７５０ｎＭＴ−ａｒａＣと一緒にインキュベートした。ＤＮＡ［３Ｈ］ｄＴｈｄ、ＲＮＡ（［３Ｈ］Ｕｒｄ）及びタンパク質（［３Ｈ］ロイシン）の放射能標識前駆体を、各化合物添加３０分後に各処理物へ添加した。放射能標識前駆体の添加１、２、３及び４時間後に、サンプルをとった。ＲＮＡ、ＤＮＡ又はタンパク質の放射能の取り込みを記載されたように（Ｐａｒｋｅｒら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．５５：１６７３−１６８１、１９９８）同定した。各数値は、２つの実験の平均を表す。
【００７３】
【表１４】
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【００７４】
上で明かなように、本発明によるチオアラビノフラノシル化合物は、哺乳類細胞中のＤＮＡ複製を阻害するのに使用することができる。これらの結果は、この免疫調製剤としての効能を示唆するものであり、自己免疫疾患の治療に適していることを示す。このことは、さらにグアノシンアナログが免疫系を刺激することが示された事実（Ｗｅｉｇｌｅ，Ｗ．Ｏ．，ＣＲＤ  Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１９８７，７，２８５；Ｌｉｎら、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，１９８５，２８，１１９４−１１９８；Ｒｅｉｔｚら、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，１９９４，３７，３５６１−３５７８；Ｍｉｃｈａｅｌら、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，１９９３，３６，３４３１−３４３６）より支持される。ある３−β−リボフラノシルチアゾール［４，５−ｄ］ピリミジンは、ハツカネズミ脾臓細胞増殖及びセムリキ森林ウイルスに対する生体内活性を含め、有意な免疫活性を示す（Ｎａｇａｈａｒａら、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，１９９０，３３，４０７−４１５）。
【００７５】
本発明の先の記載により、本発明が例証され、記述された。さらに、本開示は、本発明の好ましい実施形態のみを示し記述するが、上に示したように、本発明は、ここで示したような本発明の概念、上記教示、及び／又は、関連技術の技能若しくは知識と同一基準の範囲内で、他のさまざまな組み合わせ、改良、環境で使用することができ、また変更又は改良することができる。上記で記載された実施形態は、本発明を実施するのに知られている最良の形態を説明し、他の当業者が本発明をそのように、又は、本発明の特定の適用若しくは使用により要求された様々な改良をした実施を行うことができるようにされている。従って、本記載は、ここに開示された形態に制限されるものでない。また、添付のクレームは選択的な実施を包含するように構成されている。
【図１】
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【図２】
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