(57)【要約】      （修正有）【課題】ＬＤＬ酸化を抑制し、それによりアテローム性動脈硬化の進行を有効に抑止することにおいて高い有効性を示す新規組成物を提供する。【解決手段】ＬＤＬ酸化の抑制に有効な量のフィトエン、フィトフルエン又はそれらの混合物を含む組成物を調製し、抗アテローム性動脈硬化の治療、及びアテローム性動脈硬化の進行を抑制する。さらに、機能性食品、ダイエタリーサプリメント、食料品及び飲料における、ＬＤＬ酸化の抑制に有効な量のフィトエン、フィトフルエン又はそれらの混合物の使用。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
機能性食品、ダイエタリーサプリメント、食料品及び飲料の調製における、抗ＬＤＬ酸化に有効な量のフィトエン、フィトフルエン又はそれらの混合物の使用。
【請求項２】
０．１ｍｇのフィトエン、フィトフルエン又はそれらの混合物が、機能性食品、ダイエタリーサプリメント、食料品及び飲料に添加される、請求項１に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、天然物、及びアテローム性動脈硬化の進行を抑制するためのそれらの使用の分野に関する。より詳しくは、本発明は、フィトエン、フィトフルエン又はそれらの混合物を含む組成物、及びアテローム性動脈硬化の進行を抑制するためのそれらの使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
ＬＤＬ酸化の予防は、アテローム性動脈硬化の進行の抑制における重要な因子として認知されている。以下に従来の抗アテローム性動脈硬化剤と記述される、バスタチン類等の多様な抗アテローム性動脈硬化剤が存在する。さらに、抗酸化剤として知られているいくつかのカロテノイドが、ＬＤＬ酸化を抑制し、それによりアテローム性動脈硬化の進行を抑止することが報告されている（例として、Ｋｒｉｎｓｋｙ，Ｎ．，フリーラジカル生物学及び医薬，（１９８９）第７巻，６１７−６３５頁を参照）。ＰＣＴ／ＩＬ９８／００２８６に、ＬＤＬ酸化の抑制及びそれによるアテローム性動脈硬化の進行の抑止におけるリコピン及びビタミンＥの相乗作用混合物の有効性が開示されている。ＬＤＬ酸化の抑制におけるカロテノイドであるフィトエン及びフィトフルエンの有効性は評価されていない。
【０００３】
アテローム性動脈硬化の心臓への負担については良く知られている。従って、アテローム性動脈硬化の進行を有効に抑制する新規組成物が常に必要とされている。
【０００４】
従って、本発明の目的は、ＬＤＬ酸化を抑制し、それによりアテローム性動脈硬化の進行を有効に抑止することにおいて高い有効性を示す新規組成物を提供することである。
【０００５】
本発明のさらなる目的は、ＬＤＬ酸化を抑制するための方法を提供し、及びそれによりアテローム性動脈硬化の進行を抑制することである。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】国際特許出願番号第ＰＣＴ／ＩＬ９８／００２８６号
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Ｋｒｉｎｓｋｙ，Ｎ．，フリーラジカル生物学及び医薬，（１９８９）第７巻，６１７−６３５頁
【０００８】
本発明の他の目的は、以下の記載により明らかになるであろう。
（発明の要旨）
本発明は、抗ＬＤＬ酸化に有効な量のフィトエン、フィトフルエン又はそれらの混合物をそれを必要とする対象に投与することを含む、アテローム性動脈硬化の進行を抑制するための方法を提供するものである。
【０００９】
さらに本発明は、ＬＤＬの酸化を抑制するための、フィトエン、フィトフルエン又はそれらの混合物を含む組成物の使用を提供するものである。
【００１０】
本発明のさらなる形態は、ＬＤＬの酸化及びアテローム性動脈硬化の進行を抑制するための医薬の調製における、フィトエン、フィトフルエン又はそれらの混合物の使用である。
【００１１】
さらに本発明は、ＬＤＬ酸化の抑制に有効な量のフィトエン、フィトフルエン又はそれらの混合物を含む抗アテローム性動脈硬化組成物を提供するものである。
【００１２】
さらに本発明は、機能性食品、ダイエタリーサプリメント、食料品及び飲料における、ＬＤＬ酸化の抑制に有効な量のフィトエン、フィトフルエン又はそれらの混合物の使用を提供するものである。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】銅イオン誘発性ＬＤＬ酸化における結晶性天然リコピン及びトマトオレオレジンの有効性を示す折れ線グラフである。（図１（Ａ）、（Ｂ））
【図２】銅イオン誘発性ＬＤＬ酸化におけるフィトフルエン／フィトエンの有効性を示す折れ線グラフである。（図２（Ａ）、（Ｂ））
【図３】ＬＤＬ酸化におけるリコピン、ビタミンＥ、ベータカロチン、及びフィトフルエン／フィトエンの有効性を示す棒グラフである。
【図４】ＬＤＬ酸化における抗酸化剤と併用したリコピンの有効性を示す棒グラフである。
【図５】ＬＤＬ酸化における抗酸化剤と併用したベータカロチンの有効性を示す棒グラフである。
【図６】ＬＤＬ酸化における抗酸化剤と併用したビタミンＥの有効性を示す棒グラフである。
【図７】ＬＤＬ酸化における抗酸化剤と併用したフィトフルエン／フィトエンの有効性を示す棒グラフである。
【図８】ＬＤＬ酸化における抗酸化剤の組み合わせの有効性を示す棒グラフである。
【図９】ＬＤＬ酸化におけるカロテノイド混合物の有効性を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
（本発明の好ましい実施態様の詳細な説明）
以下の記載は本発明の好ましい実施態様を説明するものである。以下の記載は限定するものとして解釈されるべきではなく、当業者が本発明の多くの明らかな変化形を実行し得ることが理解される。
【００１５】
本記載は、フィトエン及びフィトフルエンの混合物、及びそれらの各々個別に対して適用される。従って、それらの混合物について言及する場合、それは、各々個別のカロテノイドも同様に対象となる。
【００１６】
ＬＤＬ酸化における多様なカロテノイドの有効性が研究されている一方で、驚くべきことに、フィトエン、フィトフルエン又はそれらの混合物が、ＬＤＬ酸化の抑制おいて他のカロテノイドよりも実質的により有効であることが見出された。
【００１７】
本発明の方法の詳細な実施態様に従って、血中のＬＤＬの酸化を抑制し、それによりアテローム性動脈硬化の進行を抑止するために、少なくとも０．２ｍｇ／日のフィトエン、フィトフルエン又はそれらの混合物が対象に投与される。該カロテノイドの混合物が投与される場合、混合物中のフィトエン及びフィトフルエンの間の比率は、約１：２０から２０：１である。投与は、１日毎の複数又は単一の投与形態で行われる。本方法に従って、投与は、該濃度が少なくとも０．０１μＭであるフィトエン、フィトフルエン又はそれらの混合物の抗ＬＤＬ酸化に有効な血中濃度を達成するように適用される。
【００１８】
本方法の任意の実施態様に従って、フィトエン、フィトフルエン又はそれらの混合物は、従来の抗アテローム性動脈硬化剤と併用して投与されてもよい。
【００１９】
本発明のさらなる形態に従って、抗ＬＤＬ酸化に有効な量のフィトエン、フィトフルエン又はそれらの混合物を含む組成物が提供される。該組成物は少なくとも０．１ｍｇのフィトエン、フィトフルエン又はそれらの混合物を含む。組成物はさらに薬学的に許容できる補助剤、賦形剤及び添加剤を含んでいてもよい。
【００２０】
本発明のさらなる実施態様は、少なくとも０．１ｍｇのフィトエン、フィトフルエン又はそれらの混合物を含む、錠剤、カプセル剤、硬カプセル剤、軟質ゲル剤又はゲルカプセル剤の形態である経口投与用の固形投与形態に関する。
【００２１】
本発明のまたさらなる実施態様に従って、該機能性食品、ダイエタリーサプリメント、食料品及び飲料がＬＤＬ酸化の抑制効果をもたらすように、それらがバーのような機能性食品、ダイエタリーサプリメント、飲料又は他の食品に添加される、フィトエン、フィトフルエン又はそれらの混合物の使用が提供される。本実施態様に従って、機能性食品、食料品、ダイエタリーサプリメント又は飲料は、少なくとも０．１ｍｇのフィトエン、フィトフルエン又はそれらの混合物を含む。
【００２２】
以下の実施例は、ＬＤＬ酸化の抑制における、他のカロテノイドを越えて実質的に改良されたフィトエン及びフィトフルエンの有効性を説明するものである。
【００２３】
（実施例）
（一般的手順）
検討される全ての化合物をＴＨＦ中に溶解して１ｍｇ／ｍｌの原液とした。酸化を妨害し得るいかなるＥＤＴＡをも除去するために、ＬＤＬを酸化する前にリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）で２４時間透析した。ＬＤＬ（１００μｇタンパク質／ｍｌ）を、検討される化合物を欠如して（対照）、又は各々の濃度を増加させて、同様に、２、３もしくは４つの成分を所望の天然の組成で含む多様な組み合わせでインキュベートした。５μＭの硫酸銅を３７℃で２時間添加してＬＤＬ酸化を誘発した。１ｍＭ  Ｎａ２ＥＤＴＡを添加し直ちに４℃に冷却してＬＤＬ酸化を終了させた。その後、形成されるチオバルビツール酸反応性物質（ＴＢＡＲＳ）及び過酸化脂質（ＰＤ）の量を測定して、ＬＤＬ酸化の程度を決定した。対照のＬＤＬにＴＨＦを単独で添加した。
【実施例１】
【００２４】
銅イオン誘発性ＬＤＬ酸化における結晶性天然リコピン及びトマトオレオレジンの有効性：濃度検討。
【００２５】
ＬＤＬ（１００μｇのタンパク質／ｍＬ）を、濃度を増加させた結晶性純リコピンと共に、又は（リコピンの濃度に相当する）トマトオレオレジンと共に、３７℃で３０分間前インキュベートして、その後さらに５μｍｏｌ／Ｌの硫酸銅の存在下で３７℃で２時間インキュベートした。ＬＤＬ酸化を、ＴＢＡＲＳ（Ａ）又は過酸化脂質（Ｂ）によるアッセイのそれぞれにより測定した。結果を平均値±標準偏差（ｎ＝３）として得た。リコピンの濃度を増加させて添加したことによって、銅イオン誘発性ＬＤＬ酸化を用量依存的に適度に抑制した。５０μｍｏｌ／Ｌのリコピンの使用により、ＴＢＡＲＳ（図１Ａ）及び過酸化脂質（図１Ｂ）においてそれぞれ最大２２％及び２７％の抑制が得られた。しかしながら、８．０μｍｏｌ／Ｌ及び８．４μｍｏｌ／ＬのＩＣ５０（ＬＤＬ酸化を５０％抑制するために必要な濃度）のリコピン相当量でトマトオレオレジンをリポタンパク質に添加することによって、ＴＢＡＲＳ（図１Ａ）及び過酸化脂質（図１Ｂ）のそれぞれの形成の抑制において、より高い程度（約９０％の抑制）でＬＤＬ酸化を抑制した。
【実施例２】
【００２６】
銅イオン誘発性ＬＤＬ酸化におけるフィトフルエン／フィトエンの有効性：濃度検討。
【００２７】
ＴＢＡＲＳ  ２（Ａ）及び過酸化脂質  ２（Ｂ）のアッセイのそれぞれによって測定されたように、フィトフルエン／フィトエンは、硫酸銅誘発性ＬＤＬ酸化を用量依存的に抑制した。銅イオン誘発性ＬＤＬ酸化におけるフィトフルエン／フィトエンのＩＣ５０は、それぞれ、ＴＢＡＲＳ形成の抑制において０．２５μｇ／ｍＬ、及び過酸化脂質形成の抑制において０．３５μｇ／ｍＬである。
【実施例３】
【００２８】
ＬＤＬ酸化におけるリコピン、ビタミンＥ、ベータカロチン、及びフィトフルエン／フィトエンの有効性。
【００２９】
低濃度で、Ｌｙｃ−Ｏ−Ｍａｔｏ（登録商標）の組成を模倣したリコピン（１０μｇ／ｍｌ）、ビタミンＥ（２．５μｇ／ｍｌ）及びベータカロチン（０．４μｇ／ｍｌ）は、ＬＤＬ酸化に対して顕著には効果を示さなかった。一方で、フィトフルエン／フィトエン（１．２μｇ／ｍｌ）は、ＴＢＡＲＳ及び過酸化脂質のアッセイによる分析で、実質的にＬＤＬ酸化を８５〜９０％抑制した。
【実施例４】
【００３０】
ＬＤＬ酸化における抗酸化剤と併用したリコピンの有効性。
【００３１】
リコピン（１０μｇ／ｍｌ）を、他の酸化剤のそれぞれと個別に組み合わせて（それぞれの検討につき２化合物を）使用することにおいて、リコピンにベータカロチン（０．４μｇ／ｍｌ）又はビタミンＥ（２．５μｇ／ｍｌ）を添加した場合は、リコピン単独での効果と比較してＬＤＬ酸化を（ＴＢＡＲＳアッセイで）それぞれ２２％及び１１％抑制したが、その一方でフィトフルエン／フィトエン（１．２μｇ／ｍｌ）を添加した場合は、ＬＤＬ酸化を９５％も抑制した。図４に表されるこれらの結果は、ベータカロチン又はビタミンＥのリコピンへの添加がＬＤＬ酸化の抑制に最低限に寄与するが、フィトフルエン／フィトエンは、（単独で、及びリコピンと併用して）最も強力なＬＤＬ酸化の抑制剤として作用するという最高の能力を有することを示している。過酸化脂質アッセイによるＬＤＬ酸化の分析においても同様の結果が得られた。
【実施例５】
【００３２】
ＬＤＬ酸化における抗酸化剤と併用したベータカロチンの有効性。
【００３３】
図５を参照して、ベータカロチンを主要な抗酸化剤として単独で又は他の酸化剤と組み合わせて使用することにおいて、リコピンの場合とは異なり、単独での使用又はビタミンＥとの併用で、ＬＤＬ酸化に全く効果を示さなかった。ベータカロチンをリコピンと組み合わせて添加した場合に、ＬＤＬ酸化（ＴＢＡＲＳ）における抑制効果（２２％）が見られ、及び、ベータカロチンをフィトフルエン／フィトエンと共に添加した場合に、最も強力なＬＤＬ酸化の抑制（ＴＢＡＲＳアッセイにおいて９８％抑制）が得られた。過酸化脂質アッセイによるＬＤＬ酸化の分析においても同様の結果が得られた。
【実施例６】
【００３４】
ＬＤＬ酸化における抗酸化剤と併用したビタミンＥの有効性。
【００３５】
ビタミンＥを主要な抗酸化剤として単独で又は他の酸化剤と組み合わせて使用することにおいて、リコピンの添加ではＬＤＬ酸化を１２％（ＴＢＡＲＳアッセイ）抑制したが、ベータカロチンの添加では抑制しなかった。フィトフルエン／フィトエンのビタミンＥへの添加は、ＬＤＬ酸化において９８％の抑制という結果をもたらした。図６に見られるように、過酸化脂質アッセイにおいても同様の結果が得られた。
【実施例７】
【００３６】
ＬＤＬ酸化における抗酸化剤と併用したフィトフルエン／フィトエンの有効性。
【００３７】
図７を参照して、フィトフルエン／フィトエンは、最大９０％のＬＤＬ酸化の抑制（ＴＢＡＲＳアッセイ）という結果をもたらし、試験したカロテノイドの中で最も強力な抗酸化剤であることが見出された。他の酸化剤のそれぞれの添加によってさらにＬＤＬ酸化を減少させ、リコピンの添加において最高の寄与が見られた。
【実施例８】
【００３８】
ＬＤＬ酸化における抗酸化剤の組み合わせの有効性。
【００３９】
３つの酸化剤を共に用いた多様な組み合わせの有効性の分析を評価した。フィトフルエン／フィトエンが一成分として存在した場合にのみ、３つの検討された組み合わせのいずれにおいても、実質的に９０％を超えるＬＤＬ酸化の抑制が見られた。図８のＴＢＡＲＳ及び過酸化脂質アッセイの両方で示されるように、リコピン、ベータカロチン及びビタミンＥが、フィトフルエン／フィトエンを欠如して併用された場合、ＬＤＬ酸化の抑制は最低限でのみ得られた。
【実施例９】
【００４０】
ＬＤＬ酸化におけるカロテノイドの混合物の有効性。
【００４１】
ＬＹＣ−Ｏ−Ｍａｔｏ（登録商標）の有効性を、以下の濃度；リコピン（１０μｇ／ｍｌ）、ベータカロチン（０．４μｇ／ｍｌ）、ビタミンＥ（２．５μｇ／ｍｌ）及びフィトエン／フィトフルエン（１．２μｇ／ｍｌ）での５つの抗酸化化合物の組み合わせから調製されるカロテノイドの混合物と比較した。図９を参照して、Ｌｙｃ−Ｏ−Ｍａｔｏ（登録商標）は、約７０％（ＴＢＡＲＳアッセイ）のＬＤＬ酸化の抑制を生じた。ＬＤＬ酸化におけるカロテノイド混合物の抑制効果は、９６％（ＴＢＡＲＳアッセイ）であった。過酸化脂質アッセイにおいても同様の結果が得られた。
【００４２】
本発明の実施態様を例証として記載したが、本発明は、その精神を逸脱することなく又は特許請求の範囲を越えることなく、多くの修飾、変化及び適応を用いて実施され得ることが明らかとなるであろう。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【手続補正書】
【提出日】平成21年11月2日(2009.11.2)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１３】
【図１】銅イオン誘発性ＬＤＬ酸化における結晶性天然リコピン及びトマトオレオレジンの有効性を示す折れ線グラフである。（図１（Ａ）、（Ｂ））
【図２】銅イオン誘発性ＬＤＬ酸化におけるフィトフルエン／フィトエンの有効性を示す折れ線グラフである。（図２（Ａ）、（Ｂ））
【図３】ＬＤＬ酸化におけるリコピン、ビタミンＥ、ベータカロチン、及びフィトフルエン／フィトエンの有効性を示す棒グラフである。
【図４】ＬＤＬ酸化における抗酸化剤と併用したリコピンの有効性を示す棒グラフである。
【図５】ＬＤＬ酸化における抗酸化剤と併用したベータカロチンの有効性を示す棒グラフである。
【図６】ＬＤＬ酸化における抗酸化剤と併用したビタミンＥの有効性を示す棒グラフである。
【図７】ＬＤＬ酸化における抗酸化剤と併用したフィトフルエン／フィトエンの有効性を示す棒グラフである。
【図８】ＬＤＬ酸化における抗酸化剤の組み合わせの有効性を示す棒グラフである。