(57)【要約】【課題】ＮＴ−４の発現を阻害して育毛養毛効果を奏しうる新たな有効成分を有する育毛養毛剤を提供する。【解決手段】育毛養毛剤にクイーンズデライトの抽出物を含ませる。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
クイーンズデライトの抽出物を含むことを特徴とする育毛養毛剤。
【請求項２】
請求項１に記載の育毛養毛剤を含むことを特徴とする育毛養毛組成物。
【請求項３】
クイーンズデライトの抽出物を含むことを特徴とするＮＴ−４発現阻害剤。
【請求項４】
請求項１記載の育毛養毛剤の製造方法であって、
クイーンズデライトの抽出処理を行う工程を有することを特徴とする育毛養毛剤の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、育毛養毛剤、育毛養毛組成物及びＮＴ−４発現阻害剤、並びに育毛養毛剤の製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
脱毛症の発症原因及び発症機序については多くの研究がなされているが、未だ不明な点が多い。例えば特許文献１，２では、５α−リダクターゼ阻害及び抗酸化等の作用を有する化合物及び植物抽出物等が発毛促進効果を有することが報告されている。また、例えば特許文献３には、所定の科に属する植物に由来する抽出物が発毛促進効果を有することが報告されている。しかし、このような従来の育毛養毛剤の効果は非常に個人差が大きく、満足するものは見出されていない。
【０００３】
一方で、非特許文献１においては、アポトーシスを誘導する神経栄養因子−４（Ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｎ−４。ＮＴ−４ともいう。）が脱毛に寄与することが報告されている。本発明者らも、ＮＴ−４の発現を阻害し得る有効成分としてのペプチド群及び植物種を見出し、これらを育毛養毛剤として使用することを特許文献４，５において提案している。特許文献４，５で提案した有効成分は、本発明者らの検討によれば、男性型脱毛症（Ａｎｄｒｏｇｅｎｅｔｉｃ  ａｌｏｐｅｃｉａ。ＡＧＡともいう。）のモデル動物を用いた評価においても良好な結果を示した。このことから、ＮＴ−４の発現を低下させる作用を有する育毛養毛剤は、ＡＧＡの根本的解決に繋がるものと考えられる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開２００３−２８６１６５号公報
【特許文献２】特開２００５−２２５７６４号公報
【特許文献３】特開平０８−１１３５１６号公報
【特許文献４】特開２００７−１３７８１１号公報
【特許文献５】特開２００６−２３２８２８号公報
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】ＦＡＳＥＢ  Ｊ．（１９９９），１３（２）：３９５−４１０
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
特許文献４，５記載の育毛養毛剤の有効成分と同等もしくはそれ以上の効果を有する別の有効成分を得ることができれば、原料確保の点からも、育毛養毛効果を有する整髪料などの育毛養毛組成物を製造する場合の製剤化の自由度を確保する点からも、好ましい。本発明は上記の課題に鑑みてなされたものであって、ＮＴ−４の発現を阻害して育毛養毛効果を奏しうる新たな有効成分を有する育毛養毛剤及び育毛養毛組成物を提供すること、前記の育毛養毛剤の製造方法を提供すること、並びに、ＮＴ−４の発現を阻害する新たなＮＴ−４発現阻害剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、高い育毛養毛効果を有する成分を見出すべく、ＮＴ−４の遺伝子の発現を高感度で検出できるプロモーター活性評価系を採用し、ＮＴ−４の遺伝子の発現そのものを制御し得る成分のスクリーニングを行った。その結果、トウダイグサ科植物の１つである「クイーンズデライト（学名；Ｓｔｉｌｌｉｎｇｉａ  ｓｙｌｖａｔｉｃａ）」の抽出物がＮＴ−４遺伝子の発現阻害活性を顕著に示すことが初めて見出された。さらに、この抽出物を用いてＡＧＡモデル動物の育毛養毛効果の評価を実施したところ、前記の抽出物は育毛養毛効果を奏することが判明した。
【０００８】
本発明は、上記の知見に基づいてなされたものである。すなわち、本発明の育毛養毛剤は、クイーンズデライトの抽出物を含むことを特徴とする。
本発明の育毛養毛組成物は、本発明の育毛養毛剤を含むことを特徴とする。
本発明のＮＴ−４発現阻害剤は、クイーンズデライトの抽出物を含むことを特徴とする。
本発明の育毛養毛剤の製造方法は、クイーンズデライトの抽出処理を行う工程を有することを特徴とする。
【発明の効果】
【０００９】
本発明に係る育毛養毛剤及び育毛養毛組成物は、ＮＴ−４の発現を阻害することができ、更には育毛養毛効果を奏することができる。
本発明に係る育毛養毛剤の製造方法によれば、本発明に係る育毛養毛剤を得ることができる。
本発明に係るＮＴ−４発現阻害剤によれば、ＮＴ−４の発現を阻害することができる。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
以下に、実施形態及び例示物等を示して本発明について詳細に説明するが、本発明は以下に示す実施形態及び例示物等に限定されるものではなく、本発明の要旨を逸脱しない範囲において任意に変更して実施できる。
【００１１】
［１．概要］
本発明に係る育毛養毛剤は、クイーンズデライト（Ｑｕｅｅｎ’ｓ  ｄｅｌｉｇｈｔ，学名；Ｓｔｉｌｌｉｎｇｉａ  ｓｙｌｖａｔｉｃａ）の抽出物（以下、適宜「クイーンズデライト抽出物」ということがある。）を含む。なお、本発明で言う「育毛養毛剤」とは、育毛および養毛を促進する作用を有する薬剤をいう。育毛養毛剤を目的の組成物に含ませることにより、育毛及び養毛を促進する効果を付与した育毛養毛用組成物を調製することができる。本発明に係る育毛養毛剤又はそれを含む育毛養毛用組成物を、哺乳類の主に頭皮に適用することにより、育毛養毛を促進する効果が得られる。
【００１２】
［２．クイーンズデライト抽出物］
クイーンズデライトとは、トウダイグサ科（Ｅｕｐｈｏｒｂｉａｅａｅ）に属する植物であり、ハーブの１種である。従来、クイーンズデライトの根部からの抽出物は去痰作用を有し、気管支炎、喉頭炎等の呼吸器系疾患の治療に用いることが知られている（Ｒｉｃｈａｒｄ  Ｍａｂｅｙ著、Ｔｈｅ  Ｃｏｍｐｌｅｔｅ  Ｎｅｗ  Ｈｅｒｂａｌ  ハーブ大全、小学館）。
【００１３】
クイーンズデライトの用部（即ち、抽出する対象となる部分）に特に限定は無いが、根が好適である。また、クイーンズデライトは種子、幼木及び成木のいずれを用いてもよいが、成木を用いることが好ましい。さらに、クイーンズデライトの産地にも制限は無いが、アメリカ合衆国産のクイーンズデライトを使用することが好ましい。いずれも、クイーンズデライト抽出物の有効性を十分に発揮させる観点からである。
クイーンズデライト抽出物は、市販品を用いてもよく、適切な抽出方法により得られるものを用いてもよい。以下、クイーンズデライトの抽出方法の一例を説明するが、クイーンズデライトの抽出方法は以下に例示する方法に限定されるものではない。
【００１４】
クイーンズデライトの抽出方法では、まず、クイーンズデライトを用意する。このクイーンズデライトは、生木をそのまま用いてもよく、予め乾燥させてもよい。
抽出処理に先立ち、クイーンズデライトは粉砕して破砕物にしておくことが好ましい。抽出処理を効率的に行うためである。
【００１５】
用意したクイーンズデライトは、適切な溶媒（以下、適宜「抽出溶媒」ということがある。）による抽出処理を行うことによって、クイーンズデライトに含まれるＮＴ−４の発現を阻害する物質を抽出する工程を行う。
抽出処理は、通常、クイーンズデライトを適切な抽出溶媒に浸漬させて行う。また、クイーンズデライトを浸漬させる際、攪拌を行うようにすると抽出処理を効率的に行えるため好ましい。
【００１６】
抽出溶媒としては、例えば、水、有機溶媒等が挙げられる。クイーンズデライト抽出物に含まれる物質のうちＮＴ−４の発現を阻害する物質は、水に溶解するもの及び有機溶媒に溶解するもののいずれもが存在すると推察されるため、水及び有機溶媒のいずれを用いた場合でもＮＴ−４の発現を阻害する物質をクイーンズデライトから抽出することができると思料される。好適な有機溶媒の例を挙げると、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール等の一価アルコール類；プロピレングリコール、ブチレングリコール等の多価アルコール類；酢酸エチル等のエステル類；ジエチルエーテル等のエーテル類などが挙げられる。有機溶媒の中でも一価アルコールが好ましく、エタノールがより好ましい。なお、抽出溶媒は、１種類のみを用いてもよく、２種類以上を任意の比率で組み合わせて用いてもよい。また、抽出溶媒には、本発明の効果を著しく損なわない限り、その他の成分が含まれていてもよい。
【００１７】
抽出処理の際、クイーンズデライトと抽出溶媒との比率は、「（クイーンズデライトの質量）／（抽出溶媒の質量）」で表される質量比で、１／５０以上が好ましく、１／３０以上がより好ましく、１／２０以上が特に好ましく、また、１／２以下が好ましく、１／５以下がより好ましく、１／１０以下が特に好ましい。前記の質量比を前記範囲の下限以上とすることで抽出溶媒の使用量を抑制して製造コストを抑制でき、また、上限以下とすることでＮＴ−４の発現を阻害する物質をクイーンズデライトから効率的に抽出できる。
【００１８】
抽出処理の際の抽出溶媒の温度（以下、適宜「抽出温度」ということがある。）は、通常５℃以上、好ましくは１０℃以上、より好ましくは２５℃以上であり、通常１００℃以下である。抽出温度を前記範囲の下限以上とすることでＮＴ−４の発現を阻害する物質をクイーンズデライトから効率的に抽出できる。
【００１９】
抽出処理を行う時間（以下、適宜「抽出時間」ということがある。）は、通常１時間以上、好ましくは５時間以上、より好ましくは１０時間以上であり、通常１週間以下、好ましくは５日以下、より好ましくは３日以下である。抽出時間を前記範囲の下限以上とすることでＮＴ−４の発現を阻害する物質をクイーンズデライトからより確実に抽出することができ、上限以下とすることで抽出処理に要する時間を短縮して製造効率を高めることが可能となる。
【００２０】
また、抽出処理は、ＮＴ−４の発現を阻害する物質をクイーンズデライトから抽出できる限り上述した浸漬以外の操作によって行ってもよい。例えば、気体状又は霧状の抽出溶媒による蒸気抽出によって抽出処理を行うようにしてもよい。
【００２１】
抽出処理により、ＮＴ−４の発現を阻害する物質はクイーンズデライトから抽出溶媒に移動し、少なくともＮＴ−４の発現を阻害する物質と抽出溶媒とを含む組成物が本発明に係るクイーンズデライト抽出物として得られる。そこで、抽出処理の後で、通常は、クイーンズデライト抽出物と残渣とを分離する。分離方法に制限は無いが、例えば、ろ過、遠心分離等が挙げられる。
【００２２】
得られたクイーンズデライト抽出物は、必要に応じて濃縮又は乾燥を行ってもよい。濃縮及び乾燥の方法としては、例えば、加熱、減圧等による濃縮及び乾燥などが挙げられる。また、例えば凍結乾燥を行うようにしてもよい。なお、前記の濃縮方法及び乾燥方法は、任意に組み合わせて行ってもよい。
【００２３】
上述した方法により、抽出処理前のクイーンズデライトの質量を１００％として、固形分相当で通常１％以上、好ましくは５％以上、より好ましくは１０％以上のクイーンズデライト抽出物が得られる。
【００２４】
得られたクイーンズデライト抽出物のＮＴ−４発現阻害率は、入手先によってある程度の変動があるが、クイーンズデライト抽出物の固形分１ｐｐｍ当たりで、通常３０％以上、好ましくは５０％以上、より好ましくは８０％以上であり、大変高い値である。なお、前記のＮＴ−４発現阻害率の上限に特に制限は無いが、通常は９５％以下である。
ここで「ＮＴ−４発現阻害率」とは、培養細胞系において活性型男性ホルモン（ＤＨＴ）によって誘導されるＮＴ−４の発現量を基準に、クイーンズデライト抽出物を添加した場合の発現阻害量の割合として定義される値である。また、本明細書において量の比率を表す単位としてのｐｐｍは、特に断らない限り重量／体積（ｍｇ／Ｌ）を基準とした比率を表す。
【００２５】
［３．育毛養毛剤］
本発明に係る育毛養毛剤は、少なくとも上述したクイーンズデライト抽出物を有効成分として含む。本発明に係る育毛養毛剤は前記のクイーンズデライト抽出物のみからなる薬剤として用いてもよいが、通常は溶媒を含み、溶液の状態で保存、運搬及び使用される。
【００２６】
本発明に係る育毛養毛剤が含むクイーンズデライト抽出物の量は、クイーンズデライト抽出物の固形分換算で、０．００１質量％以上が好ましく、０．０１質量％以上がより好ましい。育毛養毛剤の使用時に十分な育毛養毛効果を得るようにするためである。なお、上限に特に制限は無いが、１０質量％以下とすることが好ましく、５質量％以下とすることがより好ましい。過度に多いクイーンズデライト抽出物を含ませても、育毛養毛効果はそれ以上向上しない傾向があるからである。
【００２７】
育毛養毛剤が含む溶媒の種類は、例えば、水、エタノール等の非毒性の溶媒が挙げられる。なお、溶媒は１種類のみを用いてもよく、２種類以上を任意の比率で組み合わせて用いてもよい。
前記の溶媒は、通常、前記のクイーンズデライト抽出物の製造後にクイーンズデライト抽出物に混合すればよい。このようにクイーンズデライト抽出物と溶媒とを混合する場合、乾燥によりクイーンズデライト抽出物から抽出溶媒を留去した後で、溶媒と混合し希釈することが望ましい。
また、前記のクイーンズデライト抽出物の抽出溶媒が例えば水、エタノール、及びそれらの混合物（例えば、含水エタノール等）などの非毒性の溶媒である場合は、抽出溶媒を含むクイーンズデライト抽出物を育毛養毛剤としてそのまま用いてもよく、クイーンズデライト抽出物と前記溶媒とを混合して希釈液として用いてもよい。さらに、前記のようにクイーンズデライト抽出物を濃縮して濃縮エキスとして用いてもよく、乾燥して粉末等にして用いてもよく、ペースト状に調製して用いてもよい。
【００２８】
本発明に係る育毛養毛剤は、炭素鎖長が１１、１３、１５、及び１７の奇数鎖脂肪酸からなる群より選ばれる少なくとも１種の脂肪酸を含むことが好ましい。前記の脂肪酸とクイーンズデライト抽出物とを組み合わせることで、相乗的な育毛養毛効果を得ることができるためである。なお、前記の脂肪酸は１種類のみを用いてもよく、２種類以上を任意の比率で組み合わせて用いてもよい。
【００２９】
育毛養毛剤における前記の脂肪酸の濃度は、好ましくは０．０００５質量％以上、より好ましくは０．２５質量％以上であり、好ましくは５０質量％以下、より好ましくは２５質量％以下である。前記脂肪酸の量を前記範囲の下限以上とすることで使用時に十分な育毛養毛効果を得ることができ、また上限以下とすることで育毛養毛組成物の安定性を高めることができる。さらに、前記脂肪酸の量が多すぎると効果が頭打ちになる可能性がある。
【００３０】
本発明に係る育毛養毛剤は、その使用目的に応じて、クイーンズデライト抽出物、溶媒、及び前記の脂肪酸以外にその他の成分を含んでいてもよい。
例えば、本発明に係る育毛養毛剤は、既存の育毛養毛成分を含んでいてもよい。既存の育毛養毛成分としては、例えば、ＰＤＧ（ペンタデカン酸グリセリド）、特開平０９−１５７１３６号公報記載のコレウスエキス、特開平１０−４５５３９号公報記載のゲンチアナエキス、マツカサエキス、ローヤルゼリーエキス、クマザサエキス等の化学物質及びエキス類等が挙げられる。中でも、育毛養毛効果の点から、ＰＤＧ及びコレウスエキスが好ましい。
【００３１】
前記の既存の育毛養毛成分は、市販品あるいは公知の方法によって得られたものを使用できる。特に、前記のエキス類は植物成分の抽出により得ることができる。この場合、抽出に用いる溶媒としては、水；メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール等の一価アルコール類；プロピレングリコール、ブチレングリコール等の多価アルコール類などが挙げられる。なお、前記の溶媒は１種類のみを用いてもよく、２種類以上を任意の比率で組み合わせて用いてもよい。抽出方法は、通常の植物エキスの抽出法などの方法に準じて行えばよく、必要により公知の方法で脱臭、脱色等の処理を施してから用いてもよい。また、市販の抽出物も用いることができる。
【００３２】
本発明に係る育毛養毛剤が含むその他の成分の例を更に挙げると、非イオン性界面活性剤、糖質系界面活性剤等の界面活性剤；セルロース類；油脂類；エステル油；高分子樹脂；色剤；香料；紫外線吸収剤；タンパク質、ビタミン類、ホルモン類、血管拡張剤、アミノ酸類、抗炎症剤、皮膚機能亢進剤、角質溶解剤等の薬効成分などが挙げられる。
【００３３】
界面活性剤としては、例えば、ソルビタン脂肪酸エステル類（ソルビタンモノラウレート、ソルビタンモノオレート等）、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油モノ又はイソステアレート、グリセリン脂肪酸エステル、ポリグリセリン脂肪酸エステル（モノミリスチン酸デカグリセリン、モノミリスチン酸ペンタグリセリン）等が挙げられる。
【００３４】
セルロース類としては、例えば、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース等が挙げられる。
油脂類としては、例えば、多価アルコール脂肪酸エステル（トリ−２エチルヘキサン酸グリセリン、トリイソステアリン酸トリメチロールプロパン酸等）、サフラワー油、月見草油、ホホバ油等が挙げられる。
【００３５】
エステル油としては、例えば、不飽和脂肪酸アルキルエステル（オレイン酸エチル、リノール酸イソプロピル等）、ミリスチン酸メチル、ミリスチン酸イソプロピル等が挙げられる。
高分子樹脂としては、例えば、両性、カチオン性、アニオン性及びノニオン性ポリマー等が挙げられる。
【００３６】
紫外線吸収剤としては、例えば、メトキシケイ皮酸オクチル（ネオヘリオパンＡＶ）、オキシベンゾン、ウロカニン酸等が挙げられる。
アミノ酸類としては、例えば、メチオニン、セリン、グリシン、シスチン等が挙げられる。
角質溶解剤としては、例えば、サリチル酸、レゾルシン等が挙げられる。
なお、その他の成分は、１種類のみを用いてもよく、２種類以上を任意の比率で組み合わせて用いてもよい。
【００３７】
［４．育毛養毛組成物］
本発明に係る育毛養毛剤を、所定の目的組成物に含ませることにより、その目的組成物に養毛育毛効果を付与した育毛養毛組成物を得ることができる。
【００３８】
本発明に係る育毛養毛剤を所定の目的組成物に含ませる場合、その目的組成物中におけるクイーンズデライト抽出物の量は、その製品形態及び使用頻度により異なり一概に規定することはできないが、育毛養毛組成物全体に対するクイーンズデライト抽出物の量は、固形物換算で、通常０．００１質量％以上、好ましくは０．０１質量％以上であり、通常１．０質量％以下である。クイーンズデライト抽出物の量を前記範囲の下限以上とすることで使用時に十分な育毛養毛効果を得ることができ、また上限以下とすることで育毛養毛組成物の安定性及び使用感を高めることができる。
【００３９】
本発明に係る育毛養毛組成物の態様の例としては、各種の外用製剤類（動物用に使用する製剤も含む）全般が挙げられる。具体例を挙げると、カプセル状、粉末状、顆粒状、固形状、液状、ゲル状、軟膏状、或いは気泡性の、（１）医薬品類、（２）医薬部外品類、（３）局所又は全身用の皮膚化粧品類、（４）頭皮・頭髪に適用する薬用及び／又は化粧用の製剤類（例えば、シャンプー剤、リンス剤、トリートメント剤、パーマネント液、染毛料、整髪料、ヘアートニック剤、育毛養毛料など）が挙げられる。
【００４０】
本発明に係る育毛養毛組成物の具体例の主なものとしては、育毛養毛用毛髪化粧料及び育毛養毛用医薬品等が挙げられる。育毛養毛用毛髪化粧料及び育毛養毛用医薬品には、本発明の効果を著しく損なわない範囲において、既知の薬効成分を必要に応じて適宜含ませることができる。既知の薬効成分としては、例えば、抗菌剤、抗炎症剤、保湿剤等が挙げられる。なお、既知の薬効成分は、１種類のみを用いてもよく、２種類以上を任意の比率で組み合わせて用いてもよい。
【００４１】
前記の育毛養毛用毛髪化粧料及び育毛養毛用医薬品は、常法に従って例えば均一溶液、ローション、ジェルなどの形態で外用により使用することができる。
また、前記の養毛育毛用毛髪化粧料は、例えばエアゾールの形態をとることができる。その場合、養毛育毛用毛髪化粧料は、前記の成分以外に、例えばｎ−プロピルアルコール及びイソプロピルアルコール等の低級アルコール：ブタン、プロパン、イソブタン、液化石油ガス、ジメチルエーテル等の可燃性ガス：窒素ガス、酸素ガス、炭酸ガス、亜酸化窒素ガス等の圧縮ガスなどを含ませることができる。
【００４２】
［５．ＮＴ−４発現阻害剤］
本発明に係る育毛養毛剤は、上述したように、ＮＴ−４の発現を阻害することができる。したがって、本発明に係る育毛養毛剤は、ＮＴ−４発現阻害剤として使用することもできる。
【００４３】
本発明に係るＮＴ−４発現阻害剤の組成及び形態は、少なくともクイーンズデライト抽出物を含む限り、ＮＴ−４発現阻害剤の具体的な用途に応じて任意に設定することができる。ただし、通常は、ＮＴ−４発現阻害剤の組成及び形態は、上述した本発明に係る育毛養毛剤と同様に設定すればよい。
前記のＮＴ−４発現阻害剤は、上述した育毛養毛用途に加え、例えばＮＴ−４により誘導されるアポトーシスを抑制する作用を利用し、前記アポトーシスが主な原因と推測される病気の治療薬の有効成分として使用できる。例えば、アルツハイマー病治療薬、脳梗塞治療薬等に用いることが期待される。
【実施例】
【００４４】
以下、実施例に基づき、本発明について更に具体的に説明する。ただし、本発明は下記実施例に限定されるものではない。
【００４５】
〔調製例１〕
クイーンズデライトの乾燥根部を粉砕機にて破砕し、１００．８ｇの破砕物を得た。これに２０００ｍＬの７０体積％エタノールを加え、室温にて一昼夜撹拌した。桐山ろ紙にて残渣を除去し、得られた抽出物についてエバポレーターにて減圧乾固し、５．２ｇの固形分（本発明に係るクイーンズデライト抽出物に相当）を得た。以下、この固形分を「ＱＤ７０％ＥｔＯＨ抽出物」という。
【００４６】
〔調製例２〕
クイーンズデライトの乾燥根部を粉砕機にて破砕し、１０１．６ｇの破砕物を得た。これに２０００ｍＬの蒸留水を加え、室温にて一昼夜撹拌した。桐山ろ紙にて残渣を除去し、得られた抽出物について凍結乾燥し、５．０ｇの固形分（本発明に係るクイーンズデライト抽出物に相当）を得た。以下、この固形分を「ＱＤ水抽出物」という。
【００４７】
〔調製例３〕
クイーンズデライトの乾燥根部を粉砕機にて破砕し、１２４．２ｇの破砕物を得た。これに２５００ｍＬの酢酸エチルを加え、室温にて一昼夜撹拌した。桐山ろ紙にて残渣を除去し、得られた抽出物についてエバポレーターにて減圧乾固し、４．７ｇの固形分（本発明に係るクイーンズデライト抽出物に相当）を得た。以下、この固形分を「ＱＤ酢酸エチル抽出物」という。
【００４８】
〔評価方法１：ＮＴ−４発現阻害作用の評価方法〕
ＮＴ−４上流配列約２０００ｂｐ（配列番号１）を、ｐＧＬ３−ｂａｓｉｃ（Ｐｒｏｍｅｇａ社製）にサブクローニングを行った。本プラスミドを、内部標準としてのｐＲＬ−ＳＶ４０（Ｐｒｏｍｅｇａ社製）とともに、ＨｅＬａ細胞に導入した。１日培養後、調製例１、調製例２又は調製例３にて得られたＱＤ７０％ＥｔＯＨ抽出物を固形分換算にて１ｐｐｍ（実施例１）、ＱＤ７０％ＥｔＯＨ抽出物を固形分換算にて１０ｐｐｍ（実施例２）、ＱＤ水抽出物を固形分換算にて１ｐｐｍ（実施例３）、ＱＤ水抽出物を固形分換算にて１０ｐｐｍ（実施例４）、ＱＤ酢酸エチル抽出物を固形分換算にて１ｐｐｍ（実施例５）、およびＱＤ酢酸エチル抽出物を固形分換算にて１０ｐｐｍ（実施例６）と、１０−７Ｍ  ｄｉｈｙｄｒｏｔｅｓｔｏｓｔｅｒｏｎｅ（ＤＨＴ）とを含む培地に交換した。また、比較例１としては、ＱＤ７０％ＥｔＯＨ抽出物、ＱＤ水抽出物、及びＱＤ酢酸エチル抽出物を含まず、代わりに０．１体積％のエタノールと１０−７Ｍ  ＤＨＴとを含む培地を用いた。コントロール群としてはＤＨＴを含まない培地を用いた。２４時間後にデュアル−ルシフェラーゼ  レポーター  アッセイ  システム（Ｄｕａｌ−Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ  Ｒｅｐｏｒｔｅｒ  Ａｓｓａｙ  Ｓｙｓｔｅｍ；Ｐｒｏｍｅｇａ社製）を用いてルシフェラーゼアッセイ（Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ  ａｓｓａｙ）を行った。培養は、１０体積％チャコール処理済ＦＢＳを添加したＤＭＥＭ（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ  ｍｏｄｉｆｉｅｄ  Ｅａｇｌｅ’ｓ  Ｍｅｄｉｕｍ、フェノールレッド不含）培地で行った。
【００４９】
（ＮＴ−４発現阻害作用の評価結果）
各サンプルのルシフェラーゼ相対活性（Ｒｅｌａｔｉｖｅ  Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ  Ａｃｔｉｖｉｔｙ）を算出した。このルシフェラーゼ相対活性は、ＮＴ−４上流配列とｐＧＬ３−ｂａｓｉｃのサブクローニングにより得られたベクターにより発現するホタルルシフェラーゼの活性値を、内部標準として導入したｐＲＬ−ＳＶ４０により発現するウミシイタケルシフェラーゼの活性値で除することにより求められる値である。
【００５０】
次に、このルシフェラーゼ相対活性からＮＴ−４発現阻害率（％）を、以下の式（１）に基づいて算出した。なお、式（１）中、ＲＬＡＣｏｎｔはコントロール群のＮＴ−４発現率（ルシフェラーゼ相対活性）を表し、ＲＬＡＤＨＴはＤＨＴ添加群のＮＴ−４発現率を表し、ＲＬＡＳａｍｐは各サンプル添加群のＮＴ−４発現率を表す。
NT-4発現阻害率 (%) =[1-(RLASamp-RLACont)/(RLADHT-RLACont)] × 100      （１）
【００５１】
上述のようにして求めた各実施例サンプルのＮＴ−４発現阻害率（％）を下記表１に示す。
【００５２】
【表１】
2010215595.tif 000002
【００５３】
表１から分かるように、実施例のサンプルはいずれも高いＮＴ−４発現阻害率を有する。したがって、クイーンズデライト抽出物を有効成分として有することにより、本発明に係る育毛養毛剤はＮＴ−４の発現を効果的に阻害できることが確認できた。
【００５４】
〔評価方法２：育毛養毛効果の評価方法〕
毛周期において休止期にある雄のＣ５７ＢＬ／６マウス（７週齢）を用い、小川らの方法（フレグランスジャーナル，Ｖｏｌ．１７，Ｎｏ．５，ｐ２０−２９，１９８９．参照）を参考にして実験を行った。
マウスの背部体毛を約２×４ｃｍの大きさに電気バリカン及び電気シェーバーにて除毛し、毛周期における毛髪成長期を誘導した。除毛後、ＤＨＴ３０ｍｇを各マウスに皮下投与し、発毛を遅延させた。翌日より１日１回１００μＬずつ週５回、４５日間サンプル塗布を行い、除毛部分に対し毛再生が始まった部分の面積比の変化を求め、下記１１段階評価にて、毛再生の早さを比較した。
【００５５】
サンプルは、前記のＱＤ７０％ＥｔＯＨ抽出物（実施例７）、ＱＤ水抽出物（実施例８）、及びＱＤ酢酸エチル抽出物（実施例９）を、それぞれエタノールに１質量％の濃度で溶解させたものを使用した。また、コントロール群（比較例２）には、溶媒であるエタノールを塗布した。各群ともに１群７匹として実験に供した。除毛及び皮下投与後から３０日後の平均発毛面積率スコアを表２に示す。
【００５６】
（育毛養毛効果の評価基準（発毛スコア））
除毛された部分の全体面積に対する毛再生が始まった部分の面積の割合（％）に下記の点数を付し、点数の大きさによって育毛養毛効果を評価した。
（点数）：（毛再生面積率（％））
０点：０〜４％
１点：５〜１４％
２点：１５〜２４％
３点：２５〜３４％
４点：３５〜４４％
５点：４５〜５４％
６点：５５〜６４％
７点：６５〜７４％
８点：７５〜８４％
９点：８５〜９４％
１０点：９５〜１００％
【００５７】
【表２】
2010215595.tif 000003
【００５８】
表２から分かるように、実施例７、８及び９では比較例２と比較して高いスコアが得られている。したがって、本発明に係る育毛養毛剤及び育毛養毛組成物が高い育毛養毛効果を奏することが確認された。また、表１に示したように、本発明に係る育毛養毛剤はＮＴ−４の遺伝子発現を低下させる作用を示したことから、前記の育毛養毛効果は、クイーンズデライト抽出物が有するＮＴ−４阻害活性によるものであることが分かる。
【００５９】
〔育毛養毛剤の処方例〕
本発明に係る育毛養毛剤の処方例を、以下の表３及び表４に示す。ただし、表３及び表４に示す処方例はあくまで例示であり、本発明は表３及び表４に示す処方に限定されるものではない。なお、表４においてＰＯＥ（４０）とはポリオキシエチレンの付加モル数が４０モルであることを表す。
【００６０】
【表３】
2010215595.tif 000004
【００６１】
【表４】
2010215595.tif 000005
【配列表】
2010215595000001.app