(57)【要約】【課題】優れた作用を有し、かつ安全性の高い、Ｉ型コラーゲン産生促進剤、アデノシン三リン酸産生促進剤、グルタチオン産生促進剤、フィラグリン産生促進剤、メラニン産生抑制剤、塩基性線維芽細胞増殖因子（ｂＦＧＦ）ｍＲＮＡ発現抑制剤、及び肌の透明感向上剤の提供。【解決手段】マタタビ（Ａｃｔｉｎｉｄｉａ ｐｏｌｙｇａｍａ）の抽出物を含有することを特徴とするＩ型コラーゲン産生促進剤、アデノシン三リン酸産生促進剤、グルタチオン産生促進剤、フィラグリン産生促進剤、メラニン産生抑制剤、塩基性線維芽細胞増殖因子（ｂＦＧＦ）ｍＲＮＡ発現抑制剤、及び肌の透明感向上剤である。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
マタタビ（Ａｃｔｉｎｉｄｉａ ｐｏｌｙｇａｍａ）の抽出物を含有することを特徴とするＩ型コラーゲン産生促進剤。
【請求項２】
マタタビ（Ａｃｔｉｎｉｄｉａ ｐｏｌｙｇａｍａ）の抽出物を含有することを特徴とするアデノシン三リン酸産生促進剤。
【請求項３】
マタタビ（Ａｃｔｉｎｉｄｉａ ｐｏｌｙｇａｍａ）の抽出物を含有することを特徴とするグルタチオン産生促進剤。
【請求項４】
マタタビ（Ａｃｔｉｎｉｄｉａ ｐｏｌｙｇａｍａ）の抽出物を含有することを特徴とするフィラグリン産生促進剤。
【請求項５】
マタタビ（Ａｃｔｉｎｉｄｉａ ｐｏｌｙｇａｍａ）の抽出物を含有することを特徴とするメラニン産生抑制剤。
【請求項６】
マタタビ（Ａｃｔｉｎｉｄｉａ ｐｏｌｙｇａｍａ）の抽出物を含有することを特徴とする塩基性線維芽細胞増殖因子（ｂＦＧＦ）ｍＲＮＡ発現抑制剤。
【請求項７】
マタタビ（Ａｃｔｉｎｉｄｉａ ｐｏｌｙｇａｍａ）の抽出物を含有することを特徴とする肌の透明感向上剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、マタタビの抽出物を含有するＩ型コラーゲン産生促進剤、アデノシン三リン酸産生促進剤、グルタチオン産生促進剤、フィラグリン産生促進剤、メラニン産生抑制剤、塩基性線維芽細胞増殖因子（ｂＦＧＦ）ｍＲＮＡ発現抑制剤、及び肌の透明感向上剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
皮膚の表皮及び真皮は、表皮細胞、皮膚線維芽細胞、及び、これらの細胞の外にあって皮膚構造を支持するコラーゲン等の細胞外マトリックスにより構成されている。若い皮膚においては、これら皮膚組織の相互作用が恒常性を保つことにより、水分保持、柔軟性、弾力性等が確保され、肌は外見的にも張りや艶があってみずみずしい状態に維持される。
ところが、紫外線（ＵＶ−Ａ、ＵＶ−Ｂ）の照射、空気の著しい乾燥、過度の皮膚洗浄、過酸化水素との接触等の外的因子の影響があったり、加齢が進んだりすると、コラーゲン等の細胞外マトリックスの産生量が減少すると共に、架橋による弾力低下を起こす。その結果、皮膚は保湿機能や弾力性が低下し、角質は異常剥離を始めるため、肌は張りや艶を失い、荒れ、シワ等の老化症状を呈するようになる。
このように皮膚の老化に伴う変化、即ち、シワ、くすみ、きめの消失、弾力性の低下等には、コラーゲン等の真皮マトリックス成分の減少乃至変性が関与していることが知られている。
コラーゲンの中でもＩ型コラーゲンは、最も多く体内に含まれるコラーゲンであり、皮膚の真皮にも多く含まれ、皮膚の強さを生み出す役割を果たしていることが知られている。
【０００３】
また、アデノシン三リン酸（ＡＴＰ）は、生体内で用いられるエネルギー成分である。ＡＴＰの産生を高めることによれば、肌細胞に活力を与え、結果的にくすんだ肌や疲れた肌の改善など、様々な皮膚症状の予防・改善に繋がると考えられる。
【０００４】
また、グルタチオンはグルタミン酸、システイン、グリシンの３つのアミノ酸からなるトリペプチドであり、細胞内の主要なシステイン残基を有する化合物である。細胞内におけるグルタチオンの役割はラジカルの捕捉、酸化還元による細胞機能の調節、各種酵素のＳＨ供与体であり、抗酸化成分としても知られている。グルタチオンの作用発現はそのシステイン残基に由来すると考えられている。しかし、皮膚中のグルタチオン量は、加齢に伴って低下することが報告されており、このことが皮膚における酸化防御能を低下させ、細胞のＤＮＡ及びタンパク質などの構成成分にダメージを与える一因であると考えられている。
このように皮膚においてグルタチオンの産生を促進することは、加齢により衰える酸化ストレスの防御を高め、かつ紫外線による酸化ストレスに対する傷害を抑制することにつながり、皮膚の老化の予防、治療、あるいはシミ等の色素沈着に対する改善が期待できると考えられる。そこで、グルタチオン産生促進作用を有するものとして、例えばビルベリー抽出物又はウォルナット抽出物（特許文献１参照）、クチナシ属植物の抽出物（特許文
献２参照）、などが開示されている。
【０００５】
また、天然保湿因子（Ｎａｔｕｒａｌ  Ｍｏｉｓｔｕｒｉｚｉｎｇ  Ｆａｃｔｏｒｓ；ＮＭＦ）の主成分であるアミノ酸は、ケラトヒアリン顆粒に由来するフィラグリンが角質層内で分解されて産生される。このフィラグリンは、角質層直下の顆粒層に存在する表皮ケラチノサイトでプロフィラグリンとして発現する。その後、直ちにリン酸化し、ケラトヒアリン顆粒に蓄積され、脱リン酸，加水分解を経てフィラグリンへと分解され、角質層に移行して、ケラチンフィラメントの凝集効率を高め、角質細胞の内部構築に関与することが報告されている（非特許文献１参照）。
近年、このフィラグリンが皮膚の水分保持に非常に重要かつ必要不可欠であること、及び乾燥などの条件によってフィラグリンの合成力が低下し、角質層におけるアミノ酸量が低下することが報告されている（非特許文献２参照）。
従って、表皮ケラチノサイトにおいてプロフィラグリンｍＲＮＡの発現促進を通じて、フィラグリンの合成を促進することによって角質層内のアミノ酸量を増大させ、角質層の水分環境を本質的に改善できることが期待される。
このため、フィラグリン合成促進剤としては、例えば、カンゾウ抽出物（特許文献３参照）、天然植物中に含まれるフラバノン配糖体として知られるリクイリチン（特許文献４参照）、プロフィラグリン及びフィラグリン蛋白産生促進剤の少なくともいずれかとして、Ｃｉｔｒｕｓ属に属する植物エキス又は酵母エキス（特許文献５参照）、などが提案されている。
【０００６】
また、皮膚においてメラニンは紫外線から生体を保護する役目も果たしているが、過剰生成や不均一な蓄積は、皮膚の黒化やシミの原因となる。一般に、メラニンは色素細胞の中で生合成される酵素チロシナーゼの働きによって、チロシンからドーパ、ドーパからドーパキノンに変化し、次いで、５，６−ジヒドロキシインドフェノール等の中間体を経て形成される。したがって、皮膚の色黒（皮膚色素沈着症）を予防・改善するため、即ち美白のためには、メラニンの産生を抑制すること、或いは既に産生したメラニンを淡色漂白することが有効であると考えられる。
【０００７】
また、塩基性線維芽細胞増殖因子（ｂａｓｉｃ  Ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ，ｂＦＧＦ）は、ＦＧＦ−２とも呼ばれ、紫外線照射により角化細胞からの遊離が促進され、遊離されたｂＦＧＦが色素細胞に作用してメラニン合成を促進し、かつ色素細胞の細胞分裂をも促進すると考えられている（非特許文献３参照）。
そのため、ｂＦＧＦの異常産生は、色素細胞の異常増殖につながり、メラニン産生を亢進させ、シミ、ソバカス、くすみ等の原因となると考えられる。
したがって、ｂＦＧＦの発現上昇を抑制することは、色素細胞の増殖を抑制し、皮膚におけるメラニンの過剰産生を抑制し、日焼け後の色素沈着、シミ、ソバカス等の予防又は抑制に有用であると考えられる。
【０００８】
また、肌の透明感は、外界の影響による角層タンパク質のカルボニル化が透明感の低下の一因と考えられている（非特許文献４参照）。
したがって、タンパク質のカルボニル化を抑制することは、肌の透明感の向上に有用であると考えられる。
【０００９】
また、マタタビ（Ａｃｔｉｎｉｄｉａ ｐｏｌｙｇａｍａ）の抽出物は、タンパク質と還元糖とのメイラード反応を抑制乃至阻害する作用を有することが知られている（特許文献６参照）が、Ｉ型コラーゲン産生促進作用、アデノシン三リン酸産生促進作用、グルタチオン産生促進作用、フィラグリン産生促進作用、メラニン産生抑制作用、塩基性線維芽細胞増殖因子（ｂＦＧＦ）ｍＲＮＡ発現抑制作用、肌の透明感向上作用、及びタンパク質のカルボニル化抑制作用を有することは知られていない。
【００１０】
このように、Ｉ型コラーゲン、アデノシン三リン酸、グルタチオン、及びフィラグリンの産生を促進すること、メラニンの産生、及び塩基性線維芽細胞増殖因子（ｂＦＧＦ）ｍＲＮＡの発現を抑制すること、肌の透明感を向上すること、タンパク質のカルボニル化を抑制することのできる物質は、非常に有用であることが考えられる。しかしながら、現在までのところ、前記したような作用を有し、かつ安全性が高く、そのため、皮膚外用剤、美容用飲食品、研究用試薬などの成分として広く利用が可能な優れた物質は、未だ提供されておらず、その速やかな提供が強く求められているのが現状である。
【００１１】
【特許文献１】特開２００６−２４１０６２号公報
【特許文献２】特開２００６−３４７９３４号公報
【特許文献３】特開２００２−３６３０５４号公報
【特許文献４】特開２００３−１４６８８６号公報
【特許文献５】特開２００１−２６１５６８号公報
【特許文献６】特許第３６９５４７２号公報
【非特許文献１】フレグランスジャーナル臨時増刊  Ｖｏｌ．１７、ｐ１４−１９、２０００年発行
【非特許文献２】「Ａｒｃｈ．  Ｄｅｒｍａｔｏｌ.  Ｒｅｓ．」Ｖｏｌ．２８８、ｐ．４４２−４４６、１９９６年発行
【非特許文献３】Ｈａｌａｂａｎ  Ｒ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｃｅｌｌ．  Ｂｉｏｌ．，  Ｎｏ．１０７，  １９８８，  ｐ．１６１１−１６１９
【非特許文献４】Ｉｃｈｉｒｏ  Ｉｗａｉ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｓｏｃ．  Ｃｏｓｍｅｔ．  Ｃｈｅｍ．  Ｊｐｎ．，  Ｖｏｌ．４２，  Ｎｏ．１，  ２００８，  ｐ．１６−２１
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
本発明は、前記従来における諸問題を解決し、以下の目的を達成することを課題とする。即ち、本発明は、第１に、優れたＩ型コラーゲン産生促進作用を有し、かつ安全性の高いＩ型コラーゲン産生促進剤を提供することを目的とする。
また、本発明は、第２に、優れたアデノシン三リン酸産生促進作用を有し、かつ安全性の高いアデノシン三リン酸産生促進剤を提供することを目的とする。
また、本発明は、第３に、優れたグルタチオン産生促進作用を有し、かつ安全性の高いグルタチオン産生促進剤を提供することを目的とする。
また、本発明は、第４に、優れたフィラグリン産生促進作用を有し、かつ安全性の高いフィラグリン産生促進剤を提供することを目的とする。
また、本発明は、第５に、優れたメラニン産生抑制作用を有し、かつ安全性の高いメラニン産生抑制剤を提供することを目的とする。
また、本発明は、第６に、優れた塩基性線維芽細胞増殖因子（ｂＦＧＦ）ｍＲＮＡ発現抑制作用を有し、かつ安全性の高い塩基性線維芽細胞増殖因子（ｂＦＧＦ）ｍＲＮＡ発現抑制剤を提供することを目的とする。
また、本発明は、第７に、優れた肌の透明感向上作用を有し、かつ安全性の高い肌の透明感向上剤を提供することを目的とする。
また、本発明は、第８に、優れたタンパク質のカルボニル化抑制作用を有し、かつ安全性の高いタンパク質のカルボニル化抑制剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明者らは、前記課題を解決するために鋭意検討を行ったところ、マタタビ（Ａｃｔｉｎｉｄｉａ ｐｏｌｙｇａｍａ）の抽出物が、優れたＩ型コラーゲン産生促進作用、アデノシン三リン酸産生促進作用、グルタチオン産生促進作用、フィラグリン産生促進作用、メラニン産生抑制作用、塩基性線維芽細胞増殖因子（ｂＦＧＦ）ｍＲＮＡ発現抑制作用、肌の透明感向上作用、及びタンパク質のカルボニル化抑制作用を有することを見出し、本発明を完成するに至った。
【００１４】
本発明は、本発明者らの前記知見に基づくものであり、前記課題を解決するための手段としては、以下の通りである。即ち、
＜１＞  マタタビ（Ａｃｔｉｎｉｄｉａ ｐｏｌｙｇａｍａ）の抽出物を含有することを特徴とするＩ型コラーゲン産生促進剤である。
＜２＞  マタタビ（Ａｃｔｉｎｉｄｉａ ｐｏｌｙｇａｍａ）の抽出物を含有することを特徴とするアデノシン三リン酸産生促進剤である。
＜３＞  マタタビ（Ａｃｔｉｎｉｄｉａ ｐｏｌｙｇａｍａ）の抽出物を含有することを特徴とするグルタチオン産生促進剤である。
＜４＞  マタタビ（Ａｃｔｉｎｉｄｉａ ｐｏｌｙｇａｍａ）の抽出物を含有することを特徴とするフィラグリン産生促進剤である。
＜５＞  マタタビ（Ａｃｔｉｎｉｄｉａ ｐｏｌｙｇａｍａ）の抽出物を含有することを特徴とするメラニン産生抑制剤である。
＜６＞  マタタビ（Ａｃｔｉｎｉｄｉａ ｐｏｌｙｇａｍａ）の抽出物を含有することを特徴とする塩基性線維芽細胞増殖因子（ｂＦＧＦ）ｍＲＮＡ発現抑制剤である。
＜７＞  マタタビ（Ａｃｔｉｎｉｄｉａ ｐｏｌｙｇａｍａ）の抽出物を含有することを特徴とする肌の透明感向上剤である。
＜８＞  タンパク質のカルボニル化抑制作用を有する前記＜７＞に記載の肌の透明感向上剤である。
＜９＞  マタタビ（Ａｃｔｉｎｉｄｉａ ｐｏｌｙｇａｍａ）の抽出物を含有することを特徴とするタンパク質のカルボニル化抑制剤である。
【発明の効果】
【００１５】
本発明によると、従来における諸問題を解決することができ、前記目的を達成することができる。
即ち、本発明によると、第１に、優れたＩ型コラーゲン産生促進作用を有し、かつ安全性の高いＩ型コラーゲン産生促進剤を提供することができる。
また、本発明によると、第２に、優れたアデノシン三リン酸産生促進作用を有し、かつ安全性の高いアデノシン三リン酸産生促進剤を提供することができる。
また、本発明によると、第３に、優れたグルタチオン産生促進作用を有し、かつ安全性の高いグルタチオン産生促進剤を提供することができる。
また、本発明によると、第４に、優れたフィラグリン産生促進作用を有し、かつ安全性の高いフィラグリン産生促進剤を提供することができる。
また、本発明によると、第５に、優れたメラニン産生抑制作用を有し、かつ安全性の高いメラニン産生抑制剤を提供することができる。
また、本発明によると、第６に、優れた塩基性線維芽細胞増殖因子（ｂＦＧＦ）ｍＲＮＡ発現抑制作用を有し、かつ安全性の高い塩基性線維芽細胞増殖因子（ｂＦＧＦ）ｍＲＮＡ発現抑制剤を提供することができる。
また、本発明によると、第７に、優れた肌の透明感向上作用を有し、かつ安全性の高い肌の透明感向上剤を提供することができる。
また、本発明によると、第８に、優れたタンパク質のカルボニル化抑制作用を有し、かつ安全性の高いタンパク質のカルボニル化抑制剤を提供することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１６】
（Ｉ型コラーゲン産生促進剤、アデノシン三リン酸産生促進剤、グルタチオン産生促進剤、フィラグリン産生促進剤、メラニン産生抑制剤、塩基性線維芽細胞増殖因子（ｂＦＧＦ）ｍＲＮＡ発現抑制剤、肌の透明感向上剤、及びタンパク質のカルボニル化抑制剤）
本発明のＩ型コラーゲン産生促進剤、アデノシン三リン酸産生促進剤、グルタチオン産生促進剤、フィラグリン産生促進剤、メラニン産生抑制剤、塩基性線維芽細胞増殖因子（ｂＦＧＦ）ｍＲＮＡ発現抑制剤、肌の透明感向上剤、及びタンパク質のカルボニル化抑制剤は、マタタビ（Ａｃｔｉｎｉｄｉａ ｐｏｌｙｇａｍａ）の抽出物を含有してなり、更に必要に応じてその他の成分を含有してなる。
前記マタタビの抽出物が含有する、前記各作用（Ｉ型コラーゲン産生促進作用、アデノシン三リン酸産生促進作用、グルタチオン産生促進作用、フィラグリン産生促進作用、メラニン産生抑制作用、塩基性線維芽細胞増殖因子（ｂＦＧＦ）ｍＲＮＡ発現抑制作用、肌の透明感向上作用、及びタンパク質のカルボニル化抑制作用）を発揮する物質の詳細については不明であるが、前記マタタビの抽出物がこのような優れた作用を有することは、従来には知られておらず、本発明者らによる新たな知見である。
【００１７】
前記マタタビ（Ａｃｔｉｎｉｄｉａ ｐｏｌｙｇａｍａ）は、マタタビ科の植物であり、日本の山野に自生し、また朝鮮半島から中国大陸北部等に分布しており、これらの地域から容易に入手可能である。
抽出原料として使用する前記マタタビの部位としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、例えば、花、蕾、果実、果皮、種子、種皮、茎、葉、枝、枝葉、幹、樹皮、根、根茎、根皮、これらの混合物などが挙げられ、これらの中でも、果実が好ましい。
【００１８】
抽出原料である前記マタタビは、例えば、乾燥した後に、そのままの状態で又は粗砕機等を用いて粉砕した状態で、溶媒抽出に供することができる。中でも、前記抽出原料としては、採取後ただちに乾燥し、粉砕したものが好ましい。前記乾燥は、例えば、天日で行ってもよいし、通常使用される乾燥機を用いて行ってもよい。なお、前記マタタビは、ヘキサン、ベンゼン等の非極性溶媒によって脱脂等の前処理を施してから抽出原料として使用してもよい。脱脂等の前処理を行うことにより、前記マタタビの極性溶媒による抽出処理を、効率よく行うことができる。
【００１９】
前記マタタビの抽出物は、植物の抽出に一般に用いられる方法を利用することによって、容易に得ることができる。また、前記マタタビの抽出物としては、市販品を使用してもよい。なお、前記マタタビの抽出物には、前記マタタビの抽出液、該抽出液の希釈液若しくは濃縮液、該抽出液の乾燥物、又は、これらの粗精製物若しくは精製物のいずれもが含まれる。
【００２０】
前記抽出に用いる溶媒としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、水、親水性有機溶媒、又は、これらの混合溶媒を、室温又は溶媒の沸点以下の温度で用いることが好ましい。前記マタタビに含まれるＩ型コラーゲン産生促進作用、アデノシン三リン酸産生促進作用、グルタチオン産生促進作用、フィラグリン産生促進作用、メラニン産生抑制作用、塩基性線維芽細胞増殖因子（ｂＦＧＦ）ｍＲＮＡ発現抑制作用、肌の透明感向上作用、及びタンパク質のカルボニル化抑制作用を示す成分は、極性溶媒を抽出溶媒とする抽出処理によって、容易に抽出することができる。
【００２１】
前記抽出溶媒として使用し得る水としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、純水、水道水、井戸水、鉱泉水、鉱水、温泉水、湧水、淡水等の他、これらに各種処理を施したものが含まれる。水に施す処理としては、例えば、精製、加熱、殺菌、ろ過、イオン交換、浸透圧の調整、緩衝化等が含まれる。したがって、前記抽出溶媒として使用し得る水には、精製水、熱水、イオン交換水、生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水等も含まれる。
【００２２】
前記抽出溶媒として使用し得る親水性有機溶媒としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、メタノール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコール等の炭素数１〜５の低級アルコール；アセトン、メチルエチルケトン等の低級脂肪族ケトン；１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等の炭素数２〜５の多価アルコールなどが挙げられ、該親水性有機溶媒と水との混合溶媒なども用いることができる。なお、前記水と前記親水性有機溶媒との混合溶媒を使用する際には、低級アルコールの場合は水１０質量部に対して１質量部〜９０質量部、低級脂肪族ケトンの場合は水１０質量部に対して１質量部〜４０質量部を混合したものを使用することが好ましい。また、多価アルコールの場合は水１０質量部に対して１質量部〜９０質量部を混合したものを使用することが好ましい。
【００２３】
抽出原料である前記マタタビから、Ｉ型コラーゲン産生促進作用、アデノシン三リン酸産生促進作用、グルタチオン産生促進作用、フィラグリン産生促進作用、メラニン産生抑制作用、塩基性線維芽細胞増殖因子（ｂＦＧＦ）ｍＲＮＡ発現抑制作用、肌の透明感向上作用、及びタンパク質のカルボニル化抑制作用を有する抽出物を抽出するにあたって、特殊な抽出方法を採用する必要はなく、室温又は還流加熱下で、任意の抽出装置を用いて抽出することができる。
具体的には、抽出溶媒を満たした処理槽内に、前記抽出原料を投入し、更に必要に応じて時々攪拌しながら、３０分〜４時間静置して可溶性成分を溶出した後、ろ過して固形物を除去し、得られた抽出液から抽出溶媒を留去し、乾燥することにより抽出物を得ることができる。抽出溶媒量は通常、抽出原料の５倍量〜１５倍量（質量比）である。抽出条件は、抽出溶媒として水を用いた場合には、通常５０℃〜９５℃にて１時間〜４時間程度である。また、抽出溶媒として水とエタノールとの混合溶媒を用いた場合には、通常４０℃〜８０℃にて３０分間〜４時間程度である。なお、溶媒で抽出することにより得られる抽出液は、抽出溶媒が安全性の高いものであれば、そのまま本発明のＩ型コラーゲン産生促進剤、アデノシン三リン酸産生促進剤、グルタチオン産生促進剤、フィラグリン産生促進剤、メラニン産生抑制剤、塩基性線維芽細胞増殖因子（ｂＦＧＦ）ｍＲＮＡ発現抑制剤、肌の透明感向上剤、及びタンパク質のカルボニル化抑制剤の有効成分として用いることができる。
【００２４】
抽出により得られる前記マタタビの抽出液は、該抽出液の希釈液若しくは濃縮液、該抽出液の乾燥物、又はこれらの粗精製物若しくは精製物を得るため、常法に従って希釈、濃縮、乾燥、精製等の処理を施してもよい。なお、得られる前記マタタビの抽出液は、そのままでもＩ型コラーゲン産生促進剤、アデノシン三リン酸産生促進剤、グルタチオン産生促進剤、フィラグリン産生促進剤、メラニン産生抑制剤、塩基性線維芽細胞増殖因子（ｂＦＧＦ）ｍＲＮＡ発現抑制剤、肌の透明感向上剤、及びタンパク質のカルボニル化抑制剤の有効成分として使用することができるが、濃縮液又はその乾燥物としたものの方が利用しやすい。抽出液の乾燥物を得るにあたっては、常法を利用することができ、また、吸湿性を改善するためにデキストリン、シクロデキストリン等のキャリアーを添加してもよい。また、抽出原料である前記マタタビは特有の匂いと味を有している場合があり、そのため、前記マタタビの抽出物に対しては、生理活性の低下を招かない範囲で、脱色、脱臭等を目的とする精製を行うことも可能であるが、例えば皮膚化粧料に添加する場合などには大量に使用するものではないから、未精製のままでも実用上支障はない。なお、精製は、具体的には、活性炭処理、吸着樹脂処理、イオン交換樹脂処理等によって行うことができる。
【００２５】
以上のようにして得られる前記マタタビの抽出物は、優れたＩ型コラーゲン産生促進作用、アデノシン三リン酸産生促進作用、グルタチオン産生促進作用、フィラグリン産生促進作用、メラニン産生抑制作用、塩基性線維芽細胞増殖因子（ｂＦＧＦ）ｍＲＮＡ発現抑制作用、肌の透明感向上作用、及びタンパク質のカルボニル化抑制作用を有し、これらの作用に基づき、本発明のＩ型コラーゲン産生促進剤、アデノシン三リン酸産生促進剤、グルタチオン産生促進剤、フィラグリン産生促進剤、メラニン産生抑制剤、塩基性線維芽細胞増殖因子（ｂＦＧＦ）ｍＲＮＡ発現抑制剤、肌の透明感向上剤、及びタンパク質のカルボニル化抑制剤の有効成分として好適に利用可能なものである。
【００２６】
前記Ｉ型コラーゲン産生促進剤、アデノシン三リン酸産生促進剤、グルタチオン産生促進剤、フィラグリン産生促進剤、メラニン産生抑制剤、塩基性線維芽細胞増殖因子（ｂＦＧＦ）ｍＲＮＡ発現抑制剤、肌の透明感向上剤、及びタンパク質のカルボニル化抑制剤中の前記マタタビの抽出物の含有量としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、また、前記Ｉ型コラーゲン産生促進剤、アデノシン三リン酸産生促進剤、グルタチオン産生促進剤、フィラグリン産生促進剤、メラニン産生抑制剤、塩基性線維芽細胞増殖因子（ｂＦＧＦ）ｍＲＮＡ発現抑制剤、肌の透明感向上剤、及びタンパク質のカルボニル化抑制剤は、前記マタタビの抽出物そのものであってもよい。
【００２７】
また、前記Ｉ型コラーゲン産生促進剤、アデノシン三リン酸産生促進剤、グルタチオン産生促進剤、フィラグリン産生促進剤、メラニン産生抑制剤、塩基性線維芽細胞増殖因子（ｂＦＧＦ）ｍＲＮＡ発現抑制剤、肌の透明感向上剤、及びタンパク質のカルボニル化抑制剤中に含まれ得る、前記マタタビの抽出物以外のその他の成分としても、本発明の効果を損なわない範囲内であれば、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、前記マタタビの抽出物を所望の濃度に希釈等するための、生理食塩液などが挙げられる。
また、前記Ｉ型コラーゲン産生促進剤、アデノシン三リン酸産生促進剤、グルタチオン産生促進剤、フィラグリン産生促進剤、メラニン産生抑制剤、塩基性線維芽細胞増殖因子（ｂＦＧＦ）ｍＲＮＡ発現抑制剤、肌の透明感向上剤、及びタンパク質のカルボニル化抑制剤は、前記その他の成分として、Ｉ型コラーゲン産生促進作用、アデノシン三リン酸産生促進作用、グルタチオン産生促進作用、フィラグリン産生促進作用、メラニン産生抑制作用、塩基性線維芽細胞増殖因子（ｂＦＧＦ）ｍＲＮＡ発現抑制作用、肌の透明感向上作用、及びタンパク質のカルボニル化抑制作用を有する、前記マタタビの抽出物以外の天然抽出物等を含んでいてもよい。前記Ｉ型コラーゲン産生促進剤、アデノシン三リン酸産生促進剤、グルタチオン産生促進剤、フィラグリン産生促進剤、メラニン産生抑制剤、塩基性線維芽細胞増殖因子（ｂＦＧＦ）ｍＲＮＡ発現抑制剤、肌の透明感向上剤、及びタンパク質のカルボニル化抑制剤中の前記その他の成分の含有量にも、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。
【００２８】
また、前記Ｉ型コラーゲン産生促進剤、アデノシン三リン酸産生促進剤、グルタチオン産生促進剤、フィラグリン産生促進剤、メラニン産生抑制剤、塩基性線維芽細胞増殖因子（ｂＦＧＦ）ｍＲＮＡ発現抑制剤、肌の透明感向上剤、及びタンパク質のカルボニル化抑制剤は、必要に応じて製剤化することにより、粉末状、顆粒状、錠剤状等、任意の剤形とすることができる。この際、助剤としては、例えば、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、安定剤、矯臭剤等を用いることができる。
【００２９】
前記Ｉ型コラーゲン産生促進剤は、有効成分として含有されるマタタビの抽出物の作用により、Ｉ型コラーゲン産生促進作用を発揮する。
前記アデノシン三リン酸産生促進剤は、有効成分として含有されるマタタビの抽出物の作用により、アデノシン三リン酸産生促進作用を発揮する。
前記グルタチオン産生促進剤は、有効成分として含有されるマタタビの抽出物の作用により、グルタチオン産生促進作用を発揮する。
前記フィラグリン産生促進剤は、有効成分として含有されるマタタビの抽出物の作用により、フィラグリン産生促進作用を発揮する。
前記メラニン産生抑制剤は、有効成分として含有されるマタタビの抽出物の作用により、メラニン産生抑制作用を発揮する。
前記塩基性線維芽細胞増殖因子（ｂＦＧＦ）ｍＲＮＡ発現抑制剤は、有効成分として含有されるマタタビの抽出物の作用により、塩基性線維芽細胞増殖因子（ｂＦＧＦ）ｍＲＮＡ発現抑制作用を発揮する。
前記肌の透明感向上剤は、有効成分として含有されるマタタビの抽出物の作用により、肌の透明感向上作用を発揮する。
前記タンパク質のカルボニル化抑制剤は、有効成分として含有されるマタタビの抽出物の作用により、タンパク質のカルボニル化抑制作用を発揮する。
【００３０】
本発明のＩ型コラーゲン産生促進剤によると、優れたＩ型コラーゲン産生促進作用を通じて、例えば、皮膚の老化に伴う変化、即ち、シワ、くすみ、きめの消失、弾力性の低下等を改善し、皮膚の老化を予防・改善することが可能となる。ただし、本発明のＩ型コラーゲン産生促進剤は、これらの用途以外にもＩ型コラーゲン産生促進作用を発揮することに意義のある全ての用途に用いることができる。
【００３１】
本発明のアデノシン三リン酸産生促進剤によると、優れたアデノシン三リン酸産生促進作用を通じて、例えば、肌細胞に活力を与え、結果的にくすんだ肌や疲れた肌などを改善し、皮膚の老化を予防・改善することが可能となる。ただし、本発明のアデノシン三リン酸産生促進剤は、これらの用途以外にもアデノシン三リン酸産生促進作用を発揮することに意義のある全ての用途に用いることができる。
【００３２】
本発明のグルタチオン産生促進剤によると、優れたグルタチオン産生促進作用を通じて、例えば、加齢により衰える酸化ストレスの防御を高め、かつ紫外線による酸化ストレスに対する傷害を抑制し、皮膚の老化の予防・改善、あるいは、シミ等の色素沈着を改善し、美白効果を得ることが可能となる。ただし、本発明のグルタチオン産生促進剤は、これらの用途以外にもグルタチオン産生促進作用を発揮することに意義のある全ての用途に用いることができる。
【００３３】
本発明のフィラグリン産生促進剤によると、優れたフィラグリン産生促進作用を通じて、例えば、角質層内のアミノ酸量を増大させ、角質層の水分環境を改善し、皮膚の老化を予防・改善することが可能となる。ただし、本発明のフィラグリン産生促進剤は、これらの用途以外にもフィラグリン産生促進作用を発揮することに意義のある全ての用途に用いることができる。
【００３４】
本発明のメラニン産生抑制剤によると、優れたメラニン産生抑制作用を通じて、例えば、皮膚の色黒（皮膚色素沈着症）を予防・改善し、美白効果を得ることが可能となる。ただし、本発明のメラニン産生抑制剤は、これらの用途以外にもメラニン産生抑制作用を発揮することに意義のある全ての用途に用いることができる。
【００３５】
本発明の塩基性線維芽細胞増殖因子（ｂＦＧＦ）ｍＲＮＡ発現抑制剤によると、優れた塩基性線維芽細胞増殖因子（ｂＦＧＦ）ｍＲＮＡ発現抑制作用を通じて、例えば、色素細胞の増殖を抑制し、皮膚におけるメラニンの過剰産生を抑制し、日焼け後の色素沈着、シミ、ソバカス等を予防又は抑制して美白効果を得ることが可能となる。ただし、本発明の塩基性線維芽細胞増殖因子（ｂＦＧＦ）ｍＲＮＡ発現抑制剤は、これらの用途以外にも塩基性線維芽細胞増殖因子（ｂＦＧＦ）ｍＲＮＡ発現抑制作用を発揮することに意義のある全ての用途に用いることができる。
【００３６】
本発明の肌の透明感向上剤によると、優れた肌の透明感向上作用を通じて、優れた肌の透明感を得ることが可能となる。
本発明の肌の透明感向上剤が有する肌の透明感向上作用は、例えば、角層タンパク質のカルボニル化抑制作用に基づいて発揮される。
なお、肌の透明感向上作用とは、肌の透明感が低下した状態（悪い状態）をより優れた状態（平常状態、又は平常状態より良い状態）とすること、平常状態をより優れた状態とすることのいずれも含む。
【００３７】
本発明のタンパク質のカルボニル化抑制剤によると、優れたタンパク質のカルボニル化抑制作用を通じて、例えば、肌の透明感の低下等を予防又は抑制して美肌効果を得ることが可能となる。ただし、本発明のタンパク質のカルボニル化抑制剤は、これらの用途以外にもタンパク質のカルボニル化抑制作用を発揮することに意義のある全ての用途に用いることができる。
【００３８】
なお、本発明のＩ型コラーゲン産生促進剤、アデノシン三リン酸産生促進剤、グルタチオン産生促進剤、フィラグリン産生促進剤、メラニン産生抑制剤、塩基性線維芽細胞増殖因子（ｂＦＧＦ）ｍＲＮＡ発現抑制剤、肌の透明感向上剤、及びタンパク質のカルボニル化抑制剤は、ヒトに対して好適に適用されるものであるが、それぞれの作用効果が奏される限り、ヒト以外の動物（例えば、マウス、ラット、ハムスター、イヌ、ネコ、ウシ、ブタ、サル等）に対して適用することもできる。
【００３９】
本発明のＩ型コラーゲン産生促進剤、アデノシン三リン酸産生促進剤、グルタチオン産生促進剤、フィラグリン産生促進剤、メラニン産生抑制剤、塩基性線維芽細胞増殖因子（ｂＦＧＦ）ｍＲＮＡ発現抑制剤、肌の透明感向上剤、及びタンパク質のカルボニル化抑制剤は、優れた作用を有するとともに、皮膚に適用した場合の使用感と安全性に優れているため、例えば、皮膚外用剤に配合するのに好適である。ここで、前記皮膚外用剤としては、その区分に制限はなく、皮膚化粧料、医薬部外品、医薬品等を幅広く含むものであり、具体的には、例えば、軟膏、クリーム、乳液、美容液、ローション、パック、ファンデーション、リップクリーム、入浴剤、ヘアートニック、ヘアーローション、石鹸、ボディシャンプー等が挙げられる。
【００４０】
また、本発明のＩ型コラーゲン産生促進剤、アデノシン三リン酸産生促進剤、グルタチオン産生促進剤、フィラグリン産生促進剤、メラニン産生抑制剤、塩基性線維芽細胞増殖因子（ｂＦＧＦ）ｍＲＮＡ発現抑制剤、肌の透明感向上剤、及びタンパク質のカルボニル化抑制剤は、優れた作用を有するとともに、経口的に摂取した場合の安全性にも優れているため、例えば、美容用飲食品に配合するのに好適である。ここで、前記美容用飲食品としては、その区分に制限はなく、経口的に摂取される一般食品、健康食品、保健機能食品、医薬部外品、医薬品等を幅広く含むものである。
【００４１】
また、本発明のＩ型コラーゲン産生促進剤、アデノシン三リン酸産生促進剤、グルタチオン産生促進剤、フィラグリン産生促進剤、メラニン産生抑制剤、塩基性線維芽細胞増殖因子（ｂＦＧＦ）ｍＲＮＡ発現抑制剤、肌の透明感向上剤、及びタンパク質のカルボニル化抑制剤は、優れた作用を有するので、Ｉ型コラーゲン、アデノシン三リン酸、グルタチオン、フィラグリン、メラニン、塩基性線維芽細胞増殖因子（ｂＦＧＦ）、肌の透明感、及びタンパク質のカルボニル化に関連する疾患の研究のための試薬としても好適に利用可能である。
【実施例】
【００４２】
以下、本発明の実施例を説明するが、本発明は、これらの実施例に何ら限定されるものではない。
【００４３】
（製造例１：マタタビの果実の水抽出物（凍結乾燥品）の製造）
マタタビの果実（乾燥物）２００ｇに、質量比で１０倍量の水を加え、還流抽出器で８０℃で２時間抽出し、熱時ろ過した。次いで、ろ液を減圧濃縮し、その後凍結乾燥して、マタタビの水抽出物（凍結乾燥品）を得た。なお、得られたマタタビの水抽出物の抽出率は、２６．４％であった。
【００４４】
（製造例２：マタタビの果実の３０質量％エタノール抽出物（凍結乾燥品）の製造）
マタタビの果実（乾燥物）２００ｇに、質量比で１０倍量の３０質量％エタノールを加え、還流抽出器で８０℃で２時間抽出し、熱時ろ過した。次いで、ろ液を減圧濃縮し、その後凍結乾燥して、マタタビの３０質量％エタノール抽出物（凍結乾燥品）を得た。なお、得られたマタタビの３０質量％エタノール抽出物の抽出率は、２１．２％であった。
【００４５】
（製造例３：マタタビの果実の８０質量％エタノール抽出物（凍結乾燥品）の製造）
マタタビの果実（乾燥物）２００ｇに、質量比で１０倍量の８０質量％エタノールを加え、還流抽出器で８０℃で２時間抽出し、熱時ろ過した。次いで、ろ液を減圧濃縮し、その後凍結乾燥して、マタタビの８０質量％エタノール抽出物（凍結乾燥品）を得た。なお、得られたマタタビの８０質量％エタノール抽出物の抽出率は、１７．６％であった。
【００４６】
（実施例１：Ｉ型コラーゲン産生促進作用試験）
前記製造例１〜３のマタタビの抽出物を被験試料として用い、下記の試験方法により、Ｉ型コラーゲン産生促進作用を試験した。
【００４７】
ヒト正常線維芽細胞（ＮＢ１ＲＧＢ）を１０質量％のＦＢＳ含有ダルベッコＭＥＭを用いて３７℃、５％ＣＯ２下で培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を１．６×１０５ｃｅｌｌｓ／ｍＬの濃度に上記培地で希釈した後、９６穴マイクロプレートに１穴当たり１００μＬずつ播種し、３７℃、５％ＣＯ２下で一晩培養した。培養終了後、培地を抜き、０．２５質量％のＦＢＳ含有ダルベッコＭＥＭに溶解した被験試料を各穴に２００μＬ添加し（試料濃度：１００ｐｐｍ又は２５ｐｐｍ）（ｐｐｍ＝μｇ/ｍＬ）、３７℃、５％ＣＯ２下で３日間培養した後、上清９０μＬをＥＬＩＳＡプレートに移し換え、４℃、一晩でプレートに吸着させた後、溶液を捨て、０．０５％Ｔｗｅｅｎ−２０を含むリン酸生理緩衝液（ＰＢＳ−Ｔ）にて、洗浄を行った。その後、１％ウシ血清アルブミンを含むリン酸生理緩衝液で、ブロッキング操作を行った。溶液を捨て、０．０５％Ｔｗｅｅｎ−２０を含むリン酸生理緩衝液（ＰＢＳ−Ｔ）にて、洗浄を行い、抗ヒトコラーゲンタイプＩ抗体（ウサギＩｇＧ；ケミコン社製）を反応させた。溶液を捨て、０．０５％Ｔｗｅｅｎ−２０を含むリン酸生理緩衝液（ＰＢＳ−Ｔ）にて、洗浄を行い、ＨＲＰ標識抗ウサギＩｇＧ抗体と反応させた後、同様の洗浄操作を行い、発色反応を行った。
Ｉ型コラーゲン産生促進率は、標準品を用いて上記ＥＬＩＳＡを行い、検量線を作成し、試料無添加時のＩ型コラーゲン産生量を１００％として算出した。各試料のＩ型コラーゲン産生促進率（％）を表１に示す。なお、Ｉ型コラーゲン産生促進率の計算方法は以下のとおりである。
Ｉ型コラーゲン産生促進率（％）＝Ａ／Ｂ×１００
ただし、前記式中、Ａは被験試料添加時のＩ型コラーゲン量、Ｂは被験試料無添加時のＩ型コラーゲン量を表す。
【００４８】
【表１】
2010120876.tif 000002
表１の結果から、マタタビの抽出物が、Ｉ型コラーゲン産生促進作用を有することが認められた。また、マタタビの抽出物のＩ型コラーゲン促進作用は、濃度依存性であることが認められた。
【００４９】
（実施例２：アデノシン三リン酸（ＡＴＰ）産生促進作用試験）
前記製造例１〜３のマタタビの抽出物を被験試料として用い、下記の試験方法により、ＡＴＰ産生促進作用を試験した。
【００５０】
正常ヒト新生児包皮表皮角化細胞（ＮＨＥＫ）を、正常ヒト表皮角化細胞長期培養用増殖培地（ＥｐｉＬｉｆｅ−ＫＧ２）を用いて、３７℃、５％ＣＯ２下で培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を２．０×１０５ｃｅｌｌｓ／ｍＬの濃度にＥｐｉＬｉｆｅ−ＫＧ２で希釈した後、コラーゲンコートした９６穴プレートに１穴当たり１００μＬずつ播種し、３７℃、５％ＣＯ２下で一晩培養した。培養終了後、培地を抜き、ＥｐｉＬｉｆｅ−ＫＧ２で溶解した被験試料（試料濃度：２０μｇ／ｍＬ）を各穴に１００μＬ添加し、３７℃、５％ＣＯ２下で２時間培養した。ＡＴＰ産生促進作用は、ホタルルシフェラーゼ発光法を用いて細胞内のＡＴＰ量を測定した。即ち、培養終了後、『「細胞の」ＡＴＰ測定試薬』（東洋ビーネット社製）を各穴に１００μＬずつ添加した。反応後、化学発光量を測定した。結果を表２に示す。
ＡＴＰ産生促進率の計算方法は以下のとおりである。
ＡＴＰ産生促進率（％）＝Ａ／Ｂ×１００
ただし、前記式中、Ａは被験試料を添加した細胞での化学発光量、Ｂは被験試料を添加しない細胞での化学発光量を表す。
【００５１】
【表２】
2010120876.tif 000003
表２の結果から、マタタビの抽出物が、ＡＴＰ産生促進作用を有することが認められた。
【００５２】
（実施例３：グルタチオン産生促進作用試験（線維芽細胞））
前記製造例１〜３のマタタビの抽出物を被験試料として用い、下記の試験方法により、グルタチオン産生促進作用を試験した。
【００５３】
ヒト正常皮膚線維芽細胞（ＮＢ１ＲＧＢ）を、１０質量％のＦＢＳ含有α−ＭＥＭ培地を用いて、３７℃、５％ＣＯ２下で培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を２．０×１０５ｃｅｌｌｓ／ｍＬの濃度に１０質量％のＦＢＳ含有α−ＭＥＭ培地で希釈した後、４８穴プレートに１穴当たり２００μＬずつ播種し、３７℃、５％ＣＯ２下で一晩培養した。培養終了後、１質量％のＦＢＳ含有Ｄ−ＭＥＭ培地に溶解した被験試料（試料濃度：１２．５μｇ／ｍＬ、５０μｇ／ｍＬ、２００μｇ／ｍＬ）を各穴に２００μＬ添加し、３７℃、５％ＣＯ２下で２４時間培養した。培養終了後、各穴から培地を抜き、４００μＬのＰＢＳ（−）にて洗浄後、１５０μＬのＭ−ＰＥＲ（Ｒ）（ＰＩＥＲＣＥ社製）を用いて細胞を溶解した。
前記溶解したうちの１００μＬを用いて、総グルタチオンの定量を行った。即ち、９６穴プレートに溶解した細胞抽出液  １００μＬ、０．１Ｍリン酸緩衝液  ５０μＬ、２ｍＭ  ＮＡＤＰＨ  ２５μＬ、及びグルタチオンレダクターゼ  ２５μＬ（終濃度  １７．５ｕｎｉｔ／ｍＬ）を加え、３７℃で１０分間加温した。次いで、１０ｍＭ  ５，５’−ｄｉｔｈｉｏｂｉｓ（２−ｎｉｔｒｏｂｅｎｚｏｉｃ  ａｃｉｄ）  ２５μＬを加え、５分後までの波長４１２ｎｍにおける吸光度（ＯＤ）を測定し、ΔＯＤ／ｍｉｎを求めた。総グルタチオン濃度は、酸化型グルタチオンを用いて作成した検量線をもとに算出した。得られた値は、総タンパク量当たりのグルタチオン量に補正した後、下記の式に従い、グルタチオン産生促進率を算出した。結果を表３に示す。
グルタチオン産生促進率（％）＝Ｂ／Ａ×１００
ただし、前記式中、Ａは被験試料を添加しない細胞中における総タンパク量当たりのグルタチオン量（対照）、Ｂは被験試料を添加した細胞中における総タンパク量当たりのグルタチオン量を表す。
【００５４】
【表３】
2010120876.tif 000004
表３の結果から、マタタビの抽出物が、線維芽細胞においてグルタチオン産生促進作用を有することが認められた。
【００５５】
（実施例４：グルタチオン産生促進作用試験（表皮角化細胞））
前記製造例１〜３のマタタビの抽出物を被験試料として用い、下記の試験方法により、グルタチオン産生促進作用を試験した。
【００５６】
正常ヒト新生児包皮表皮角化細胞（ＮＨＥＫ）を、正常ヒト表皮角化細胞長期培養用増殖培地（ＥｐｉＬｉｆｅ−ＫＧ２）を用いて、３７℃、５％ＣＯ２下で培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を１．０×１０５ｃｅｌｌｓ／ｍＬの濃度にＥｐｉＬｉｆｅ−ＫＧ２で希釈した後、コラーゲンコートした２４穴プレートに１穴当たり５００μＬずつ播種し、３７℃、５％ＣＯ２下で一晩培養した。培養終了後、ＥｐｉＬｉｆｅ−ＫＧ２で溶解した被験試料（試料濃度：３．１２５μｇ／ｍＬ、１２．５μｇ／ｍＬ）を各穴に４００μＬ添加し、さらに、３７℃、５％ＣＯ２下で２４時間培養した。培養終了後、各穴から培地を抜き、１ｍＬのＰＢＳ（−）にて洗浄後、１５０μＬのＭ−ＰＥＲ（Ｒ）（ＰＩＥＲＣＥ社製）を用いて細胞を溶解した。
前記溶解したうちの１００μＬを用いて、総グルタチオンの定量を行った。即ち、９６穴プレートに溶解した細胞抽出液  １００μＬ、０．１Ｍリン酸緩衝液  ５０μＬ、２ｍＭ  ＮＡＤＰＨ  ２５μＬ、及びグルタチオンレダクターゼ  ２５μＬ（終濃度  １７．５ｕｎｉｔ／ｍＬ）を加え、３７℃で１０分間加温した。次いで、１０ｍＭ  ５，５’−ｄｉｔｈｉｏｂｉｓ（２−ｎｉｔｒｏｂｅｎｚｏｉｃ  ａｃｉｄ）  ２５μＬを加え、５分後までの波長４１２ｎｍにおける吸光度（ＯＤ）を測定し、ΔＯＤ／ｍｉｎを求めた。総グルタチオン濃度は、酸化型グルタチオンを用いて作成した検量線をもとに算出した。得られた値は、総タンパク量当たりのグルタチオン量に補正した後、下記の式に従い、グルタチオン産生促進率を算出した。結果を表４に示す。
グルタチオン産生促進率（％）＝Ｂ／Ａ×１００
ただし、前記式中、Ａは被験試料を添加しない細胞中における総タンパク量当たりのグルタチオン量（対照）、Ｂは被験試料を添加した細胞中における総タンパク量当たりのグルタチオン量を表す。
【００５７】
【表４】
2010120876.tif 000005
表４の結果から、マタタビの抽出物が、表皮角化細胞においてグルタチオン産生促進作用を有することが認められた。
【００５８】
（実施例５：プロフィラグリン・フィラグリン産生促進作用試験）
前記製造例１〜３のマタタビの抽出物を被験試料として用い、下記の試験方法により、フィラグリン産生促進作用を試験した。
【００５９】
正常ヒト新生児皮膚表皮角化細胞（ＮＨＥＫ）を８０ｃｍ２のフラスコで正常ヒト表皮角化細胞培地（ＫＧＭ）にて３７℃、５％ＣＯ２下で培養し、常法によりにより細胞を集めた。得られた細胞を同培地にて１．５×１０５ｃｅｌｌｓ／ｍＬとなるように調整し、２ｍＬずつ６穴コラーゲンコートプレートに播種して５％ＣＯ２下、３７℃で３日間培養した。培養後、培地を０．５質量％ＤＭＳＯに溶解した被験試料（試料濃度：１２．５μｇ／ｍＬ、５０μｇ／ｍＬ）を含む、又は含まない（コントロール）ＫＧＭ  ２ｍＬに交換し、３７℃、５％ＣＯ２下で５日間培養した。培養終了後、常法により総タンパクの調製を行った。
＜ウエスタンブロッティング＞
１０μｇ／列に調製したサンプルをＳＤＳ−ＰＡＧＥにより展開し、ＰＶＤＦ膜に転写した。５％スキムミルクを含むＰＢＳ（−）でブロッキングを行った後、抗ヒトフィラグリンモノクローナル抗体（Ｈａｒｂｏｒ  Ｂｉｏ−Ｐｒｏｄｕｃｔｓ社製）、ビオチン標識抗マウスＩｇ（Ｗｈｏｌｅ  Ａｂ，Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社製）、及びストレプトアビジン−ペルオキシダーゼ複合体（ＣＡＬＢＩＯＣＨＥＭ社製）を、０．１％Ｔｗｅｅｎ２０、０．３％スキムミルクを含むＰＢＳ（−）で１，０００倍に希釈して順次反応させ、ＥＣＬ  Ｗｅｓｔｅｒｎ  ｂｌｏｔｔｉｎｇ  ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  ｒｅａｇｅｎｔｓ  ａｎｄ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｓｙｓｔｅｍ（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社製）の発光により、プロフィラグリン及びフィラグリンを検出した。検出したバンドをＫＯＤＡＫ  １Ｄ  Ｉｍａｇｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  ＥＤＡＳ２９０  Ｖｅｒｓｉｏｎ３．５にて定量的に測定した。
結果は、被験試料添加及び無添加で培養した細胞のそれぞれから調製したタンパク１０μｇ中のプロフィラグリン及びフィラグリンのＮｅｔ  ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ（バンド強度）を合算した値を用いて、被験試料のフィラグリン産生促進作用を評価し、プロフィラグリン・フィラグリン産生促進率（％）を下記式に基づいて算出した。結果を表５に示す。
プロフィラグリン・フィラグリン産生促進率(％)＝Ａ／Ｂ×１００
ただし、前記式中、Ａは「被験試料添加時のＮｅｔ  ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ（プロフィラグリン及びフィラグリンの合計値）」を、Ｂは「被験試料無添加時（コントロール）のＮｅｔ  ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ」を表す。
【００６０】
【表５】
2010120876.tif 000006
表５の結果から、マタタビの抽出物が、フィラグリン産生促進作用を有することが認められた。
【００６１】
（実施例６：メラニン産生抑制作用試験）
前記製造例１〜３のマタタビの抽出物を被験試料として用い、下記の試験方法により、メラニン産生抑制作用を試験した。
【００６２】
Ｂ１６メラノーマ細胞を、１０質量％ＦＢＳ含有のダルベッコＭＥＭ培地を用いて、３７℃、５％ＣＯ２下で培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を１０質量％ＦＢＳ及び１ｍｍｏｌ／Ｌ  テオフィリン含有のダルベッコＭＥＭ培地で２５．０×１０４ｃｅｌｌｓ／ｍＬの濃度に希釈した後、４８穴プレートに１穴当たり３００μＬずつ播種し、３７℃、５％ＣＯ２下で６時間培養した。培養終了後、１０質量％ＦＢＳ及び１ｍｍｏｌ／Ｌ  テオフィリン含有のダルベッコＭＥＭ培地で溶解した被験試料（試料濃度：１００μｇ／ｍＬ、２００μｇ／ｍＬ、４００μｇ／ｍＬ）を各穴に３００μＬ添加し、３７℃、５％ＣＯ２下で４日間培養した。培養終了後、各穴から培地を取り除き、１ｍｏｌ／ＬのＮａＯＨ溶液２００μＬを添加して超音波破砕器により細胞を破壊し、波長４７５ｎｍにおける吸光度を測定し、メラニン産生量とした。
また、細胞生存率の測定のため、同様に培養後、４００μＬのＰＢＳ（−）で洗浄し、終濃度０．０５ｍｇ／ｍＬで１０質量％ＦＢＳ含有のダルベッコＭＥＭ培地に溶解したニュートラルレッドを各穴に２００μＬ添加した。３７℃、５％ＣＯ２下で２．５時間培養した後、ニュートラルレッド溶液を捨て、エタノール・酢酸溶液（エタノール：酢酸：水＝５０：１：４９）を各穴に２００μＬ添加し、色素を抽出した。抽出後、波長５４０ｎｍにおける吸光度を測定した。
空試験として、１０質量％ＦＢＳ及び１ｍｍｏｌ／Ｌ  テオフィリン含有のダルベッコＭＥＭ培地のみで培養した細胞を同様の方法で試験した。
結果を表６に示す。なお、メラニン産生抑制作用、及び細胞生存率の計算方法は以下のとおりである。
メラニン産生抑制率（％）＝｛１−（Ｂ／Ｄ）／（Ａ／Ｃ）｝×１００
細胞生存率（％）＝（Ｄ／Ｃ）×１００
ただし、前記式中、Ａは被験試料無添加での４７５ｎｍにおける吸光度、Ｂは被験試料添加での４７５ｎｍにおける吸光度、Ｃは被験試料無添加での５４０ｎｍにおける吸光度、Ｄは被験試料添加での５４０ｎｍにおける吸光度を表す。
【００６３】
【表６】
2010120876.tif 000007
表６の結果から、マタタビの抽出物が、メラニン産生抑制作用を有することが認められた。
【００６４】
（実施例７：塩基性線維芽細胞増殖因子（ｂＦＧＦ）ｍＲＮＡ発現抑制作用試験）
前記製造例１〜３のマタタビの抽出物を被験試料として用い、下記の試験方法により、塩基性線維芽細胞増殖因子（ｂＦＧＦ）ｍＲＮＡ発現抑制作用を試験した。
【００６５】
正常ヒト新生児包皮表皮角化細胞（ｎｏｒｍａｌ  ｈｕｍａｎ  ｅｐｉｄｅｒｍｉｓ  ｋｅｒａｔｉｎｏｃｙｔｅ；ＮＨＥＫ）を、８０ｃｍ２フラスコで正常ヒト表皮角化細胞長期培養用増殖培地（ＥｐｉＬｉｆｅ−ＫＧ２）において、３７℃、５％ＣＯ２下で前培養し、トリプシン処理により細胞を集めた。
次に、ＥｐｉＬｉｆｅ−ＫＧ２を用いて３５ｍｍシャーレ（ＦＡＬＣＯＮ社製）に４０×１０４ｃｅｌｌｓ／２ｍＬ／シャーレずつ播き、３７℃、５％ＣＯ２下で一晩培養した。２４時間後に培養液を捨て、ＨＥＰＥＳ緩衝液１ｍＬを加え、ＵＶ−Ｂ照射（５０ｍＪ／ｃｍ２）を行い、その後、ＥｐｉＬｉｆｅ−ＫＧ２で必要濃度に溶解した被験試料（試料濃度：１μｇ／ｍＬ、１０μｇ／ｍＬ）を各シャーレに２ｍＬずつ添加し、３７℃、５％ＣＯ２下で２４時間培養した。培養後、培養液を捨て、ＩＳＯＧＥＮ（ＮＩＰＰＯＮ  ＧＥＮＥ社製；Ｃａｔ．Ｎｏ．３１１−０２５０１）にてｔｏｔａｌ  ＲＮＡを抽出し、それぞれのＲＮＡ量を分光光度計にて測定し、２００ｎｇ／μＬになるようにｔｏｔａｌ  ＲＮＡを調製した。
このｔｏｔａｌ  ＲＮＡを鋳型とし、ｂＦＧＦ（ｂａｓｉｃ  Ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ；塩基性線維芽細胞増殖因子）、及び内部標準であるＧＡＰＤＨのｍＲＮＡの発現量を測定した。検出はリアルタイムＰＣＲ装置（Ｓｍａｒｔ  Ｃｙｃｌｅｒ（Ｒ）、Ｃｅｐｈｅｉｄ社製）を用いて、Ｔａｋａｒａ  ＳＹＢＲ（Ｒ）  ＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔＴＭ  ＲＴ−ＰＣＲ  Ｋｉｔ（Ｐｅｒｆｅｃｔ  Ｒｅａｌ  Ｔｉｍｅ、ｃｏｄｅ  Ｎｏ．ＲＲ０６３Ａ）によるリアルタイム  ２  Ｓｔｅｐ  ＲＴ−ＰＣＲ反応により行った。
ｂＦＧＦのｍＲＮＡの発現量は、「紫外線未照射、被験試料無添加」、「紫外線照射、被験試料無添加」、及び「紫外線照射、被験試料添加」でそれぞれ培養した細胞から調製した総ＲＮＡ標品を基にして、ＧＡＰＤＨの値で補正値を求め、更に「紫外線未照射、被験試料無添加」の補正値を１００とした時の「紫外線照射、被験試料無添加」、及び「紫外線照射、被験試料添加」の補正値を算出した。結果を表７に示す。
なお、塩基性線維芽細胞増殖因子（ｂＦＧＦ）ｍＲＮＡ発現抑制率の計算方法は、以下の通りである。
塩基性線維芽細胞増殖因子（ｂＦＧＦ）ｍＲＮＡ発現抑制率（％）
＝{（Ａ−Ｂ）−（Ａ−Ｃ）}／（Ａ−Ｂ）×１００
ただし、前記式中、Ａは「紫外線未照射、被験試料無添加」時の補正値、Ｂは「紫外線照射、被験試料無添加」時の補正値、Ｃは「紫外線照射、被験試料添加」時の補正値をそれぞれ表す。
【００６６】
【表７】
2010120876.tif 000008
表７の結果から、マタタビの抽出物が、塩基性線維芽細胞増殖因子（ｂＦＧＦ）ｍＲＮＡ発現抑制作用を有することが認められた。
【００６７】
（実施例８：肌の透明感向上作用試験（角層タンパク質のカルボニル化抑制作用試験））
前記製造例２のマタタビの抽出物を被験試料として用い、下記の試験方法により、角層タンパク質のカルボニル化抑制作用を試験した。
【００６８】
頬部粘着テープを皮膚に押し付けて採取した角層を２０μｍｏｌ／Ｌ次亜塩素酸ナトリウム（和光純薬社製）水溶液０．９８ｍＬに３７℃、１６時間浸漬し、カルボニル化処理した。その際、被験試料（試料の終濃度：１０μｇ／ｍＬ、５０μｇ／ｍＬ、１００μｇ／ｍＬ）を０．０２ｍＬ共存させ、カルボニル化レベルを以下の方法で評価した。
前記カルボニル化処理によりカルボニル化された角層タンパク質のカルボニル基を、２０μｍｏｌ／Ｌ蛍光ヒドラジド（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ−５−ｔｈｉｏｓｅｍｉｃａｒｂａｚｉｄｅ、ＡｎａＳｐｅｃ社製）、０．１ｍｏｌ／Ｌ  ２−ｍｏｒｐｈｏｌｉｎｏｅｔｈａｎｅ  ｓｕｌｆｏｎｉｃ  ａｃｉｄ−Ｎａ（ｐＨ５．５）緩衝溶液に浸漬してラベル化した。
観察画像を解析し（撮影装置：蛍光顕微鏡オリンパスＩＸ７１、オリンパス社製、解析ソフト：ＩｍａｇｅＪ、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ社製）、角層面積あたりの蛍光輝度をカルボニル化レベルとした。
空試験として、２０μｍｏｌ／Ｌ次亜塩素酸ナトリウム（和光純薬社製）水溶液のみを同様の方法で試験した。
角層タンパク質のカルボニル化抑制率は、「次亜塩素酸無し、被験試料無添加」時の蛍光輝度を１００％として算出した。結果を表８に示す。なお、角層タンパク質のカルボニル化抑制率の計算方法は、以下の通りである。
角層タンパク質のカルボニル化抑制率（％）＝{（Ａ−Ｂ）／（Ａ−Ｃ）}×１００
ただし、前記式中、Ａは「次亜塩素酸有り、被験試料無添加」時の蛍光輝度、Ｂは「次亜塩素酸有り、被験試料添加」時の蛍光輝度、Ｃは「次亜塩素酸無し、被験試料無添加」時の蛍光輝度をそれぞれ表す。
【００６９】
【表８】
2010120876.tif 000009
表８の結果から、マタタビの抽出物が角層タンパク質のカルボニル化抑制作用を有することが認められ、マタタビノ抽出物が肌の透明感向上作用を有することが示唆された。
【産業上の利用可能性】
【００７０】
本発明のＩ型コラーゲン産生促進剤、アデノシン三リン酸産生促進剤、グルタチオン産生促進剤、フィラグリン産生促進剤、メラニン産生抑制剤、塩基性線維芽細胞増殖因子（ｂＦＧＦ）ｍＲＮＡ発現抑制剤、肌の透明感向上剤、及びタンパク質のカルボニル化抑制剤は、優れたＩ型コラーゲン産生促進作用、アデノシン三リン酸産生促進作用、グルタチオン産生促進作用、フィラグリン産生促進作用、メラニン産生抑制作用、塩基性線維芽細胞増殖因子（ｂＦＧＦ）ｍＲＮＡ発現抑制作用、肌の透明感向上作用、及びタンパク質のカルボニル化抑制作用を有し、かつ安全性にも優れるので、例えば、皮膚外用剤、美容用飲食品中の成分や、研究用の試薬として好適に利用可能である。