(57)【要約】【課題】ろ紙を不要とした転写装置を提供する。【解決手段】転写装置１００は、緩衝液を含んだ分離媒体１７０および転写膜１８０を格納し、緩衝液を介して分離媒体１７０に電流を流すことによって分離媒体１７０中の被転写物１７１を転写膜１８０上へ転写する、ろ紙を不要とした転写装置であって、上記緩衝液が、水酸基およびカルボニル基の少なくともいずれか一方を含有する芳香族化合物を含有している。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
緩衝液を含んだ分離媒体および転写膜を格納し、上記緩衝液を介して上記分離媒体に電流を流すことによって上記分離媒体中の被転写物を上記転写膜上へ転写する、ろ紙を不要とした転写装置であって、
上記緩衝液が、水酸基およびカルボニル基の少なくともいずれか一方を含有する芳香族化合物を含有していることを特徴とする転写装置。
【請求項２】
上記芳香族化合物が、ハイドロキノンまたはパラベンゾキノンであることを特徴とする請求項１に記載の転写装置。
【請求項３】
上記緩衝液中の上記芳香族化合物の濃度が、０．０１Ｍから０．４Ｍの範囲であることを特徴とする請求項１または２に記載の転写装置。
【請求項４】
上記分離媒体に電流を流すためのアノード電極およびカソード電極を備えており、
上記分離媒体および上記転写膜は、上記アノード電極および上記カソード電極の間に配置されていることを特徴とする請求項１から３の何れか１項に記載の転写装置。
【請求項５】
上記アノード電極および上記カソード電極の少なくともいずれか一方が、互いに平行な複数の帯状の導電体を備えていることを特徴とする請求項４に記載の転写装置。
【請求項６】
上記アノード電極および上記カソード電極の少なくともいずれか一方が、白金、銅、亜鉛、金または鉄からなる導電体を備えていることを特徴とする請求項４または５に記載の転写装置。
【請求項７】
分離媒体中の被転写物を転写膜上へ転写する、ろ紙を不要とした転写方法であって、
上記分離媒体および上記転写膜に、水酸基およびカルボニル基の少なくともいずれか一方を含有する芳香族化合物を含有する緩衝液を含ませる工程と、
上記分離媒体に上記緩衝液を介して電流を流す工程と
を包含することを特徴とする転写方法。
【請求項８】
分離媒体中の被転写物を転写膜上へ転写する、ろ紙を不要とした転写装置を作製するための作製キットであって、
アノード電極およびカソード電極と、
上記アノード電極および上記カソード電極の間に上記分離媒体および上記転写膜を格納するための格納部と
水酸基およびカルボニル基の少なくともいずれか一方を含有する芳香族化合物を含有している、緩衝液の添加剤と
を備えていることを特徴とする作製キット。
【請求項９】
水酸基およびカルボニル基の少なくともいずれか一方を含有する芳香族化合物を含有していることを特徴とする、ろ紙を不要とした転写装置に用いる緩衝液の添加剤。
【請求項１０】
上記芳香族化合物が、ハイドロキノンまたはパラベンゾキノンであることを特徴とする請求項９に記載の緩衝液の添加剤。
【請求項１１】
ハイドロキノンおよびパラベンゾキノンの両方を含有しており、ハイドロキノンの含有量に対するパラベンゾキノンの含有量の比が、１／２倍以上２倍以下であることを特徴とする請求項９に記載の緩衝液の添加剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、概して、ろ紙を不要とした転写装置に関するものであり、詳しくは、分離媒体に緩衝液を介して電流を流すことによって上記分離媒体中の被転写物質を上記転写膜上へ転写する、ろ紙を不要とした転写装置に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
タンパク質、核酸等の生体分子の解析または検査を行うため、ウェスタンブロッティング等のブロッティングと称される技術が用いられることがある。ブロッティングを行うためには、まず、生体分子を電気泳動によってゲル等の分離媒体中において分離し、分離した生体分子を上記分離媒体から転写膜上へ転写することが行われる。これにより、解析対象の生体分子を、分離した状態で転写膜上に配置することができるため、さらなる解析を首尾よく行うことができる。
【０００３】
このとき、上記分離媒体から上記転写膜への生体分子の転写のために、転写装置が用いられる。転写装置が行う転写の方法としては、毛細管現象を利用した方法、電圧を印加する方法、真空引きする方法が知られている（非特許文献１参照）。
【０００４】
上記のうち電圧を印加する方法は、転写効率がよいことが知られている。電圧を印加する方法を実施する転写装置としては、タンク式およびセミドライ式の二種類がある（非特許文献２参照）。タンク式の転写装置では、緩衝液によって満たされたタンク内に、分離媒体および転写膜を保持し、タンクに備えられた電極を用いて分離媒体および転写膜に電圧を印加する。セミドライ式の転写装置では、緩衝液に浸漬させておいたろ紙を用い、電極、ろ紙、分離媒体、転写膜、ろ紙および電極をこの順に重ねて、両電極間に電圧を印加する。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開２００８−２９８６４４（平成２０年１２月１１日公開）
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Sambrook et al., Molecular Cloning, A laboratory manual, 3rd ed., Cold Spring Harbor Laboratory(2001), 6.33-6.38
【非特許文献２】大藤道衛「電気泳動なるほどＱ＆Ａ」１６１〜１６３頁、羊土社、２００５年
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
上述した転写方法は、いずれも電極と分離媒体または転写膜との間にろ紙を挟むものである（非特許文献１のＦｉｇｕｒｅ６−１、６−２および６−３、非特許文献２の図１および図２等参照）。タンク式の転写装置においても、分離媒体および転写膜をろ紙で挟んだ状態でタンク内に保持する（非特許文献２の図１参照）。このろ紙は、伝統的に用いられているものであり、一般的なプロトコル集には必ず記載されている。それゆえか、ろ紙を不要とした転写装置について検討した報告はない。
【０００８】
ところが、本発明者らは、自らが以前発明した電気泳動および転写の両方を実施するための装置（特許文献１参照）について検討を進めていく過程において、独自の観点に基づき、ろ紙を不要とした転写装置が有用であることに想到した。
【０００９】
すなわち、特許文献１に記載の装置は、分離媒体を搬送せずに、同じ位置で、電気泳動および転写の両方を行うものであるが、本発明者らが検討したところ、上記転写のために分離媒体をろ紙で挟んだ場合、当該ろ紙によって上記電気泳動が阻害されることが見出された。この知見に基づき、本発明者らは、特許文献１に記載の装置の場合、ろ紙を不要とした転写装置を組み込むことが好ましいことに想到し、さらに検討を重ね、ろ紙を不要とした転写装置ば、特許文献１に記載の装置に組み込む場合のみに限らず、装置を構成する際にろ紙を挟む工程が不要となり、ろ紙のコストも省くことができる点において、従来の転写装置に対して有利であることに想到した。
【００１０】
本発明は、上記課題に鑑みてなされたものであり、これまで検討されていなかった、ろ紙を不要とした転写装置を提供することを主たる目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明者らは、上記課題を解決するために鋭意検討したところ、従来技術に係る転写装置から単にろ紙を取り除いただけでは、実用的なろ紙を不要とした転写装置を提供することができないことを見出した。すなわち、従来技術に係る転写装置からろ紙を取り除いた場合、転写量が極端に低下することが起こり得る。
【００１２】
本発明者らは、さらなる検討を行い、ろ紙を取り除いたことに起因する転写量の低下が、水の電気分解によって発生した気泡により電流の流れが阻害されることが原因であるという独自の知見を得た。
【００１３】
すなわち、転写装置の緩衝液に電流が流れたとき、水の電気分解が起こる場合がある。このとき、ろ紙が存在すれば、上記電気分解より生じた気泡は、ろ紙内に取り込まれるが、ろ紙を取り除いた場合、気泡が分離媒体または転写膜と電極との間に入り込む場合がある。気体は不導体であるため、電流は気泡を避けて流れ、電流の方向が散乱してしまう。そのため、被転写物質の移動方向も散乱するために、被転写物質が拡散し、転写量が低減してしまう。この問題を解決するために、本発明者らは鋭意検討を行い、本発明を完成させた。
【００１４】
すなわち、本発明に係る、ろ紙を不要とした転写装置は、緩衝液を含んだ分離媒体および転写膜を格納し、上記緩衝液を介して上記分離媒体に電流を流すことによって上記分離媒体中の被転写物を上記転写膜上へ転写する、ろ紙を不要とした転写装置であって、上記緩衝液が、水酸基およびカルボニル基の少なくともいずれか一方を含有する芳香族化合物を含有していることを特徴としている。上記転写装置は、上記分離媒体に電流を流すためのアノード電極およびカソード電極を備えており、上記分離媒体および上記転写膜は、上記アノード電極および上記カソード電極の間に配置されていることが好ましい。
【００１５】
上記の構成によれば、緩衝液を含んだ分離媒体および転写膜を格納し、上記緩衝液を介して上記分離媒体に電流を流すことによって上記分離媒体中の被転写物を上記転写膜上へ転写する、ろ紙を不要とした転写装置において、上記緩衝液が、水酸基およびカルボニル基の少なくともいずれか一方を含有する芳香族化合物を含有しているため、上記緩衝液に電流を流したときに、上記緩衝液中の水の電気分解よりも、上記芳香族化合物の酸化または還元が優先して行われるため、水の電気分解が抑制される。これにより、転写を首尾よく行うことができる、ろ紙を不要とした転写装置を提供することができる。
【００１６】
上記芳香族化合物は、ハイドロキノンまたはパラベンゾキノンであることが好ましい。また、上記緩衝液中の上記芳香族化合物の濃度は、０．０１Ｍ以上０．４Ｍ以下の範囲であることが好ましい。上記アノード電極および上記カソード電極の少なくともいずれか一方が、白金、銅、亜鉛、金または鉄からなる導電体を備えていることが好ましい。
【００１７】
このような芳香族化合物および電極を用いることによって、上記転写装置は、さらに首尾よく転写を行うことができる。
【００１８】
本発明に係る転写装置では、上記アノード電極および上記カソード電極の少なくともいずれか一方が、互いに平行な複数の帯状の導電体を備えているものであってもよい。
【００１９】
互いに平行な複数の帯状の導電体は、当該帯状の導電体が伸びる方向と直交する方向に形成される電位勾配を阻害しない。そのため、上記の構成によれば、上記アノード電極および上記カソード電極の少なくともいずれか一方は、上記分離媒体における電気泳動を疎外しないため、当該電気泳動を首尾よく行うことができる。このとき、本発明に係る転写装置は、ろ紙を不要とした転写装置であるので、ろ紙が、上記電気泳動を阻害することなく、さらに首尾よく上記電気泳動を行うことができるという効果を奏する。
【００２０】
本発明に係る転写方法は、分離媒体中の被転写物を転写膜上へ転写する、ろ紙を不要とした転写方法であって、上記分離媒体および上記転写膜に、水酸基およびカルボニル基の少なくともいずれか一方を含有する芳香族化合物を含有する緩衝液を含ませる工程と、上記分離媒体に上記緩衝液を介して電流を流す工程とを包含することを特徴としている。
【００２１】
上記の構成によれば、本発明に係る転写装置と同等の効果を奏することができる。
【００２２】
本発明に係る、ろ紙を不要とした転写装置に用いる緩衝液の添加剤は、水酸基およびカルボニル基の少なくともいずれか一方を含有する芳香族化合物を含有していることを特徴としている。上記芳香族化合物は、ハイドロキノンまたはパラベンゾキノンであることが好ましい。
【００２３】
このような緩衝液の添加剤を用いて転写装置の緩衝液を調製することにより、本発明に係る、ろ紙を不要とした転写装置を容易に構成することができる。
【００２４】
本発明に係る緩衝液の添加剤は、ハイドロキノンおよびパラベンゾキノンの両方を含有しており、ハイドロキノンの含有量に対するパラベンゾキノンの含有量の比が、１／２倍以上２倍以下であることが好ましい。
【００２５】
このような緩衝液の添加剤を用いて調製された緩衝液を用いることにより、ろ紙を不要とした転写装置において、アノード電極およびカソード電極の両方の電極における気泡の発生を効率よく抑制することができる。
【００２６】
本発明に係る作製キットは、分離媒体中の被転写物を転写膜上へ転写する、ろ紙を不要とした転写装置を作製するための作製キットであって、アノード電極およびカソード電極と、上記アノード電極および上記カソード電極の間に上記分離媒体および上記転写膜を格納するための格納部と、水酸基およびカルボニル基の少なくともいずれか一方を含有する芳香族化合物を含有している、緩衝液の添加剤とを備えていることを特徴としている。
【００２７】
本発明に係る作製キットは、本発明に係る転写装置を構成するために好適に用いることができる。
【発明の効果】
【００２８】
本発明に係る転写装置では、緩衝液が、ハイドロキノンおよびパラベンゾキノンの少なくともいずれか一方を含有しているので、緩衝液に電流を流すことによって生じる気泡の発生を抑制することができるため、転写を首尾よく行うことができる、ろ紙を不要とした転写装置を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００２９】
【図１】本発明の一実施形態（第１の実施形態）に係る転写装置の概略構成を示す斜視図である。
【図２】本発明の一実施形態（第１の実施形態）に係る転写装置の概略構成を示す断面図である。
【図３】本発明の一実施形態（第１の実施形態）に係る転写装置の機能を説明する図である。
【図４】本発明の一実施形態（第２の実施形態）に係る転写装置の概略構成を示す断面図である。
【図５】本発明の一実施形態（第３の実施形態）に係る転写装置の概略構成を示す斜視図である。
【図６】本発明の一実施形態（第３の実施形態）に係る転写装置の概略構成を示す断面図である。
【図７】本発明の一実施形態（第３の実施形態）に係る転写装置の電極の概略構造を示す模式図である。
【図８】本発明の一実施形態に係る転写装置および対照となる転写装置を用いた転写結果を示す図である。
【図９】本発明の一実施形態に係る転写装置および対照となる転写装置を用いた転写結果を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００３０】
〔第１の実施形態〕
図１は、本発明の一実施形態（第１の実施形態）に係る転写装置１００の概略構成を示す斜視図である。図２は、転写装置１００の概略構成を示す断面図である。図１および２に示すように、転写装置１００は、アノード電極１５０、カソード電極１５１、および格納部１１０（絶縁体板１４０および１４１、スペーサー１４２ならびに保持部材１４３）を備えており、アノード電極１５０およびカソード電極１５１の間に、分離媒体１７０および転写膜１８０を格納している。なお、転写装置１００は、アノード電極１５０およびカソード電極１５１間に電圧を印加するための図示しない電圧印加手段１９０を備えている。
【００３１】
（概略機能）
図３は、転写装置１００の概略機能を説明する図である。図３に示すように、分離媒体１７０には、被転写物１７１が含まれている。本実施形態において被転写物は、負の電荷を有している。また、分離媒体１７０および転写膜１８０は、還元体（ハイドロキノン（hydroquinone））１６１および酸化体（パラベンゾキノン（パラbenzoquinone））１６２を含有する緩衝液１６０を含んでいる。図３に示すように、還元体１６１および酸化体１６２は、アノード電極１５０およびカソード電極１５１の近傍にも上記緩衝液を介して供給される。
【００３２】
電圧印加手段１９０が、アノード電極１５０およびカソード電極１５１間に電圧を印加すると、緩衝液１６０を介して分離媒体１７０中を電流が流れる。電圧印加手段１９０は、カソード電極１５１に対して、アノード電極１５０の電位が高くなるように電圧を印加する。すなわち、電流は、転写膜１８０から分離媒体１７０へ向かう方向へ流れる（電子（ｅ−）は逆方向に移動する）。
【００３３】
分離媒体１７０中に電流が流れると、負の電荷を有する被転写物１７１は、電気浸透現象により分離媒体１７０から転写膜１８０へと移動する。これによって、被転写物１７１を転写膜１８０上に転写することができる。なお、正の電荷を有する被転写物を転写するときは、転写膜１８０および分離媒体１７０の位置関係を逆にすればよい。
【００３４】
このとき、アノード電極１５０およびカソード電極１５１上では、電極から緩衝液１６０への電子授受に伴う水の電気分解が起こり、気体が発生する。具体的には、アノード電極１５０（プラス極）では酸素が発生し、カソード電極１５１（マイナス電極）では水素が発生する。発生した気体は、気泡を形成する。上述したように、この気泡に起因して転写が阻害される。本発明者らは、この気泡を発生させないようにすることで、ろ紙を不要とした転写装置においても、首尾よく転写を行うことができることを見出した。
【００３５】
すなわち、本発明に係る転写装置（転写装置１００）では、電極（アノード電極１５０およびカソード電極１５１）と接する溶液（緩衝液１６０）中に、酸化還元物質（還元体１６１および酸化体１６２）を溶解させておき、転写時には、酸化還元物質と電極との間で電子授受させる事で水の電気分解を抑制する。すなわち、アノード電極１５０側では、還元体１６１が、アノード電極１５０に電子を供与して、酸化体１６２となる。カソード電極１５１側では、酸化体１６２が、カソード電極１５１から電子を受け取って、還元体１６１となる。これにより、気泡（酸素および水素）の発生を抑制することができる。
【００３６】
望ましい酸化還元物質は、水溶液に溶解し、かつ酸化還元に伴い気体を生成しない物質であり、さらに望ましくは、酸化還元に伴い固体を生成させない物質である。また、アノード電極１５０側の反応、すなわち、還元体１６１が、アノード電極１５０に電子を供与して、酸化体１６２となる反応が、水の電気分解よりも低い電位において起こり、カソード電極１５１側の反応、すなわち、酸化体１６２が、カソード電極１５１から電子を受け取って、還元体１６１となる反応が、水の電気分解よりも高い電位において起こるような物質であることが望ましい。
【００３７】
以上のような条件を満たし、転写時の気泡の発生を抑制する酸化還元物質について、本発明者らが鋭意検討したところ、上記酸化還元物質として、水酸基およびカルボニル基の少なくともいずれか一方を含有する芳香族化合物、例えば、ハイドロキノン、パラベンゾキノンが好適であることを見出した。言い換えれば、還元体１６１としてはフェノール類が、酸化体１６２としてフェノール類の酸化体（フェノール類の水酸基がカルボニル基に置換されたもの）が好適である。
【００３８】
すなわち、緩衝液を含んだ分離媒体および転写膜を格納し、上記緩衝液を介して上記分離媒体に電流を流すことによって上記分離媒体中の被転写物を上記転写膜上へ転写する、ろ紙を不要とした転写装置であって、上記緩衝液が、水酸基およびカルボニル基の少なくともいずれか一方を含有する芳香族化合物を含有している転写装置であれば、ろ紙を不要とし、かつ、首尾よく転写を行うことができる。
【００３９】
以下、転写装置１００の構成の詳細について説明する。
【００４０】
（格納部）
格納部１１０は、絶縁体１４０および１４１、スペーサー１４２ならびに保持部材１４３を備えている。格納部１１０は、アノード電極１５０、カソード電極１５１、分離媒体１７０および転写膜１８０を適切に配置するための部材であり、その形状は、当業者が適宜設計することができる。絶縁体１４０および１４１ならびにスペーサー１４２は、絶縁体によって形成されていればよい。格納部１１０を構成する部材も、本実施形態におけるものに限られず、さらに他の保持部材等を追加してもよいし、いくつかの部材を省略または一体化させてもよい。
【００４１】
絶縁体１４０上には、カソード電極１５１が設けられている。また、絶縁体１４１上には、アノード電極１５０が設けられている。そして、アノード電極１５０と、カソード電極１５１が対向し、カソード電極１５１、分離媒体１７０、転写膜１８０およびアノード電極１５０がこの順に重なるように、保持部材１４３が、絶縁体１４０および１４１を保持する。なお、アノード電極１５０およびカソード電極１５１の間には、分離媒体１７０の変形を防ぐために、スペーサー１４２を挟んでいてもよい。
【００４２】
図１および２では、カソード電極１５１が下部に記載されているが、アノード電極１５０を下部に設けてもよい。また、上述したように、転写すべき被転写物質の性質（電荷の正負）によって、分離媒体１７０および転写膜１８０の順番を入れ替えてもよい。
【００４３】
（分離媒体および転写膜）
分離媒体１７０は、被転写物１７１を含んでいる媒体であれば特に限られないが、ゲルであることが好ましく、一般に電気泳動に用いられるゲルを用いることができ、例えば、アガロースゲル、ポリアクリルアミドゲル等を好適に用いることができる。
【００４４】
被転写物１７１としては、特に限られないが、生物材料（例えば、生物個体、体液、細胞株、組織培養物、または組織断片）からの調製物等を用いることができ、さらに好ましくはポリペプチドまたポリヌクレオチドを用いることができる。これらの生体分子は、例えば、ＳＤＳで平衡化することにより、容易に負の電荷を与えることができる。
【００４５】
転写膜１８０としては、被転写物１７１を固定し得る物質からなるものであればよく、形状も特に限られないが、薄膜状のものがよい。具体的には、転写膜１８０としては、周知のウェスタンブロッティング法等の生体高分子解析技術に用いる、ニトロセルロースメンブレン、ＰＶＤＦメンブレン、ナイロンメンブレン等を好適に用いることができる。
【００４６】
また、カソード電極１５１とアノード電極１５０との間には、緩衝液１６０が供給される。すなわち、分離媒体１７０および転写膜１８０は、緩衝液１６０を含んでいる。これにより、カソード電極１５１とアノード電極１５０との間に電流を流し、分離媒体１７０中の被転写物１７１を電気泳動して転写膜１８０へと転写することができる。緩衝液１６０の供給の方法としては、分離媒体１７０および転写膜１８０を緩衝液１６０に予め浸しておくことにより、これらに緩衝液を含ませていてもよく、転写装置１００全体または一部を緩衝液１６０中に浸してもよい。例えば、還元体１６１および酸化体１６２の少なくともいずれか一方を含有する緩衝液１６０を用いて、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ等の電気泳動を実施して、分離媒体１７０中において被転写物１７１を分離し、その分離媒体１７０をそのまま用いてもよい。さらに、後述する第２および第３の実施形態のように、緩衝液１６０を供給するための緩衝液槽を設けてもよい。
【００４７】
（緩衝液）
緩衝液１６０は、転写時の気泡の発生を抑制する酸化還元物質を含有する電解液であれば、用途に応じて適宜選択すればよいが、例えば、トリス、ＣＡＰＳ、炭酸塩等の伝導性の強い緩衝効果のある試薬が含まれていることが好ましい。
【００４８】
上述したように、転写時の気泡の発生を抑制する酸化還元物質としては、水酸基およびカルボニル基の少なくともいずれか一方を含有する芳香族化合物を用いることが好ましく、ハイドロキノンまたはパラベンゾキノンを用いることがさらに好ましい。緩衝液１６０中における上記芳香族化合物の濃度は、０．０１Ｍ以上であることが好ましく、０．０２Ｍ、０．０４Ｍ、０．０６Ｍまたは０．０８Ｍ以上であることがより好ましく、また、０．４Ｍ以下であることが好ましく、０．３５Ｍ、０．３Ｍ、０．２５Ｍ、０．２Ｍまたは０．１５Ｍ以下であることがより好ましい。
【００４９】
なお、緩衝液１６０に還元体１６１および酸化体１６２の両方が含まれている場合は、還元体１６１の濃度に対する酸化体１６２の濃度の比は、等倍に近いことが好ましく、例えば、１／２倍以上２倍以下、２／３倍以上３／２倍以下、３／４倍以上４／３倍以下、４／５倍以上５／４倍以下または９／１０倍以上１０／９倍以下とすることができる。還元体１６１の濃度に対する酸化体１６２の濃度の比を等倍に近いものとすることによって、アノード電極１５０およびカソード電極１５１の両方における気泡の発生を同様に抑制することができるため効率がよい。
【００５０】
緩衝液１６０にはまた、ｐＨ調整剤、変性剤、界面活性剤、アルコール等が含まれていてもよい。例えば、ポリペプチドの転写を行う場合、ポリペプチドと転写膜１８０との結合を促進するためにアルコールが含まれていることが好ましく、ポリペプチドを変性させるためにＳＤＳが含まれていることが好ましい。また、ポリヌクレオチドの転写を行なう場合、変性剤としてはＮａＯＨ等のアルカリ塩を用いることができる。具体的には、これに限定されるものではないが、例えば、Ｔｒｉｓ／グリシン系緩衝液、酢酸緩衝溶液、炭酸ナトリウム系緩衝液、ＣＡＰＳ緩衝液、Ｔｒｉｓ／ホウ酸／ＥＤＴＡ緩衝液、Ｔｒｉｓ／酢酸／ＥＤＴＡ緩衝液、ＭＯＰＳ、リン酸緩衝液、Ｔｒｉｓ／トリシン系緩衝液等の緩衝液を用いることができる。
【００５１】
（電極および電圧印加手段）
アノード電極１５０およびカソード電極１５１は、導電性を有する素材で形成されていればよく、用いられる電解液に接触させても劣化しない素材が好ましく、具体的には、これらに限られるものではないが、白金、銅、亜鉛、金、鉄、およびそれらの合金等から形成することができる。形状としては、例えば、平板状とすることができる。
【００５２】
電圧印加手段１９０は、例えば、市販のパワーサプライを用いることができる。電圧印加手段１９０と、アノード電極１５０およびカソード電極１５１との間は、一般的な電線コード等により電気的に接続すればよい。
【００５３】
〔第２の実施形態〕
図４は、本発明の一実施形態（第２の実施形態）に係る転写装置２００の概略構成を示す断面図である。以下、転写装置２００について説明するが、第１の実施形態に係る転写装置１００と同様の部材を用いることができる場合には、同じ番号を付して説明を省略する。
【００５４】
図４に示すように、転写装置２００は、緩衝液槽２４０、アノード電極１５０、カソード電極１５１、緩衝液１６０および媒体保持部材２４１を備えている。なお、転写装置２００は、転写装置１００とは異なり、縦置きとなっている。このように、本発明に係る転写装置は、縦置きであっても横置きであってもよい。
【００５５】
媒体保持部材２４１は、絶縁体により形成されており、分離媒体１７０および転写膜１８０を保持する部材である。媒体保持部材２４１は、例えば、網目状の構造を有しており、緩衝液１６０を通過し得る。
【００５６】
緩衝液槽２４０は、緩衝液１６０を貯める。緩衝液槽２４０は媒体保持部材２４１につながっており、緩衝液槽２４０内の緩衝液１６０は、アノード電極１５０と転写膜１８０との間、分離媒体１７０とカソード電極１５１との間に侵入したり、転写膜１８０および分離媒体１７０に吸収されたりする。
【００５７】
このように本実施形態に係る転写装置２００は、緩衝液１６０を、アノード電極１５０およびカソード電極１５１に挟まれた領域に供給する緩衝液槽２４０を備えているので、緩衝液を容易に供給することができる。
【００５８】
〔第３の実施形態〕
次に、本発明に係る転写装置を、特許文献１に記載の電気泳動兼転写装置に適用した場合について説明する。
【００５９】
図５は、本発明の一実施形態（第３の実施形態）に係る転写装置３００の概略構成を示す斜視図である。図６は、転写装置３００の概略構成を示す断面図であり、図５における点線で切断した断面図である。以下、転写装置３００について説明するが、第１の実施形態に係る転写装置１００と同様の部材を用いることができる場合には、同じ番号を付して説明を省略する。
【００６０】
図５および６に示すように、転写装置３００は、アノード電極３５０、カソード電極３５１、絶縁体１４０および１４１ならびに電気泳動用電極３５２および３５３を備えている。絶縁体１４０および１４１は、格納部３１０ならびに緩衝液槽３２０および３２１を構成する。緩衝液槽３２０および３２１は、緩衝液１６０を貯める。格納部３１０は、アノード電極３５０およびカソード電極３５１の間に、分離媒体１７０および転写膜１８０を格納する。
【００６１】
図７は、転写装置３００のカソード電極３５１の概略構造を示す模式図である。図７に示すように、カソード電極３５１は、互いに平行な複数の帯状導電体３５４を備えており、帯状導電体３５４によって、転写のための電流を流すものである。帯状導電体３５４の伸びる方向は、電気泳動用電極３５２および３５３間を結ぶ方向と直交している。なお、アノード電極３５０は、平板状の電極であってもよいが、カソード電極３５１と同様、互いに平行な複数の帯状導電体を備えていてもよい。
【００６２】
なお、転写装置３００は、アノード電極３５０およびカソード電極３５１間ならびに電気泳動用電極３５２および３５３間に電圧を印加するための図示しない結線手段３５５および電圧印加手段１９０を備えている。
【００６３】
転写装置３００は、分離媒体１７０中で被転写物１７１を分離し、続けて、分離媒体１７０から転写膜１８０へ被転写物１７１を転写することができる。すなわち、分離媒体１７０に被転写物１７１を含ませ、電気泳動用電極３５２および３５３間に電圧を印加することにより、電気泳動により、分離媒体１７０中で被転写物１７１を分離することができる。
【００６４】
カソード電極３５１は、互いに平行な複数の帯状導電体３５４を備えているが、帯状導電体３５４の伸びる方向は、電気泳動の方向と直交しているため、電気泳動の方向へ形成される電位勾配を阻害しない。これにより、上記電気泳動を首尾よく行うことができる。このとき、アノード電極３５０が、平板状の電極である場合には、電気泳動時、アノード電極３５０を、絶縁体１４１とともに取り外しておくことが好ましい。
【００６５】
ここで、転写装置３００は、ろ紙を不要としているために、上記電気泳動をさらに首尾よく行うことができる。
【００６６】
電気泳動が完了したら、アノード電極３５０およびカソード電極３５１間に電圧を印加することによって、転写を行うことができる。
【００６７】
（緩衝液の添加剤）
本発明はまた、ろ紙を不要とした転写装置に用いる緩衝液の添加剤を提供する。本発明に係る緩衝液の添加剤は、水酸基およびカルボニル基の少なくともいずれか一方を含有する芳香族化合物を含有しており、例えば、転写装置１００、２００および３００において用いることができる。
【００６８】
上記芳香族化合物としては、ハイドロキノンおよびパラベンゾキノンの少なくともいずれか一方であることが好ましく、ハイドロキノンおよびパラベンゾキノンの両方であることがより好ましい。特に、ハイドロキノンに対するパラベンゾキノンの比は等倍に近いことが好ましく、例えば、１／２倍以上２倍以下、２／３倍以上３／２倍以下、３／４倍以上４／３倍以下、４／５倍以上５／４倍以下または９／１０倍以上１０／９倍以下とすることができる。ハイドロキノンに対するパラベンゾキノンの比が等倍に近ければ、上述のように、本発明に係る緩衝液を用いる転写装置において、アノード電極およびカソード電極における均等な気泡発生の抑制効果を得ることができるため、効率がよい。
【００６９】
なお、本発明に係る緩衝液の添加剤は、液体であっても、固体（粉末状、顆粒状等）であってもよく、上記芳香族化合物の他に、一般的な緩衝液に含まれ得る他の成分、例えば、Ｔｒｉｓ、グリシン、酢酸、ＥＤＴＡ、ホウ酸、ＤＭＳＯ等を含んでいてもよい。本発明に係る緩衝液の添加剤が液体である場合には、例えば、蒸留水等で希釈して用いることができ、希釈の倍率は特に限定されない。
【００７０】
（作製キット）
また、本発明は、本発明に係る転写装置を作製するための作製キットを提供する。上記作製キットは、例えば、第１の実施形態に係る転写装置１００を作製するための作製キットであり得る。転写装置１００を作製するための作製キットは、アノード電極１５０およびカソード電極１５１と、アノード電極１５０およびカソード電極１５１の間に分離媒体１７０および転写膜１８０を格納するための格納部１１０と、水酸基およびカルボニル基の少なくともいずれか一方を含有する芳香族化合物を含有している、緩衝液の添加剤とを備えていればよい。このような作製キットを用いれば、転写装置１００を容易に構成することができる。また、本発明に係る作製キットは、第２の実施形態に係る転写装置２００、第３の実施形態に係る転写装置３００等、本発明に係る、ろ紙を不要とした転写装置を作製するために好適に用いることができる。
【実施例】
【００７１】
以下、実施例および対照例に基づいて本発明をより詳細に説明するが、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。
【００７２】
〔実施例１〕
以下の操作を、実施例１、対照例１（ポジティブコントロール）および対照例２（ネガティブコントロール）についてそれぞれ行った。
【００７３】
（ゲルの調製）
ゲル作製用容器に、調整した分離ゲル溶液（１３％アクリルアミドミックス（アクリルアミド：ビスアクリルアミド＝２９．２：０．８）、３７５ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．８）、０．０５％ＡＰＳ、０．１％ＴＥＭＥＤ）を添加し、７ウェルコームで蓋をした。
【００７４】
ゲル（分離媒体）が重合した後、試料（被転写物）として用いるＳｅｅＢｌｕｅ（登録商標）Ｐｒｅ−Ｓｔａｉｎｅｄ  Ｓｔａｎｄａｒｄ（ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）と０．２５％アガロース（ＲｅａｄｙＰｒｅｐ  Ｏｖｅｒｌａｙ  Ａｇａｒｏｓｅ、ＢＩＯ−ＲＡＤ）を１：１で混合し、１ウェルあたり１５μｌを添加して垂直状態のまま約１５分間４℃で冷した。
【００７５】
（電気泳動）
試料がゲル化した後、ＰＯＷＥＲ  ＰＡＣ  ３０００（ＢＩＯ−ＲＡＤ）を電源として、定電流２０ｍＡ設定で約３０分間泳動した。
【００７６】
ここで、対照例１および２では、電気泳動用の緩衝液として、２５ｍＭ  Ｔｒｉｓ、１９２ｍＭ  グリシン＋０．１％ＳＤＳを用いた。一方、実施例１では、電気泳動用の緩衝液として、２５ｍＭ  Ｔｒｉｓ、１９２ｍＭ  グリシン＋０．１％ＳＤＳ＋５０ｍＭパラベンゾキノン＋５０ｍＭヒドロキノンを用いた。
【００７７】
（転写）
電気泳動が終了した後、ゲル作成容器からゲルを取り出し、４８ｍｍ×４８ｍｍに切り出した。同サイズの１×ＴＧＳに浸した孔径０．４５μｍセルロースメンブレン（Ｍｅｍｂｒａｎｆｉｌｔｅｒ  ｐｏｒａｆｉｌ（商標登録）  ｍｅｍｂｒａｎｅ  ｆｉｌｔｅｒｓ、ＭＡＣＨＥＲＥＹ−ＮＡＧＥＬ）と重ね、ゲルが潰れないように１ｍｍのスペーサーを左右に置き、両面をアノード電極およびカソード電極で挟みさらにガラス板で挟み大型クリップで固定した。このとき、対照例１では、１×ＴＧＳに浸したゲルと同サイズのろ紙を、アノード電極とメンブレンとの間、およびカソード電極とゲルとの間に挟んだ。
【００７８】
電源には、ＫＸ−１００Ｌ（Ｒｅｇｕｌａｔｅｄ  ＤＣ  Ｐｏｗｅｒ  Ｓｕｐｐｌｙ、ＴＡＫＡＳＡＧＯ）を用いて、Ｓｔｅｐ１：１Ｖ、６００ｓｅｃ、Ｓｔｅｐ２：２Ｖ、６００ｓｅｃ、およびＳｔｅｐ３：５Ｖ、２４００ｓｅｃを設定した。電流電圧値をＫＥＩＴＨＬＥＹ  ２０００  ＭＵＬＴＩＭＥＴＥＲでモニタリングしながら転写を行なった。転写条件は、１Ｖで６００秒、２Ｖで６００秒、５Ｖで２４００秒行った。
【００７９】
アノード電極およびカソード電極としてＰｔをスパッタリングしたＰＰＭＡ基板（Ｐｔスパッタ電極）を用いた。
【００８０】
（検出）
転写終了後のゲルを撮影した。図８（ａ）に対照例１の結果を、図８（ｂ）に対照例２の結果を、図８（ｃ）に実施例１の結果をそれぞれ示す。
【００８１】
図８（ａ）に示すように、対照例１では、濃いバンドが転写されている。一方、図８（ｂ）に示すように、対照例２では、バンドが非常に薄くなっている。すなわち、ろ紙を用いない場合、従来の転写装置では、転写量が非常に低減してしまう。
【００８２】
ここで、図８（ｃ）に示すように、実施例１では、ろ紙を用いていないにも関わらず、十分に濃いバンドが観察された。なお、実施例１において、バンドの間隔が狭まっているのは、電気泳動時の条件のためであり、本発明の効果とは関係ない。
【００８３】
〔実施例２〕
次に、電極としてストライプ電極（互いに平行な複数の帯状導電体を備えた電極）を用いた場合について実施した。以下の操作を、実施例２、対照例３（ポジティブコントロール）および対照例４（ネガティブコントロール）についてそれぞれ行った。なお、電極としてストライプ電極を用いたこと、および電圧の設定の他は、実施例２は実施例１と、対照例３は対照例１と、対照例４は、対照例２と同様の手順および条件で実施した。
【００８４】
（ストライプ電極の作製）
スパッタ装置（ＣＦＳ−４ＥパラＬＬ、芝浦メカトロニクス）を用いて、４８ｍｍ×６６ｍｍのＰＭＭＡ板（厚さ３ｍｍ）上に電極を成膜した。続いて、ＣＯ２レーザー彫刻機（Ｔｒｏｔｅｃ  ８０１０  Ｓｐｅｅｄｙ  １００  Ｃ２５、Ｔｒｏｔｅｃ  Ｃｏ．）を用いて、成膜した上記電極を加工して、導電体の幅が約３００μｍ、導電体同士の間隔が約１００μｍである互いに平行な複数の帯状の導電体を形成することにより、ストライプ電極を作製した。切断（加工）条件は、レーザーパワーを５．５％、加工スピードを２０．０％、１０００ＰＰＩとした。
【００８５】
（転写）
電圧の設定以外は、実施例１、対照例１および２と同様に実施した。電圧の設定は、Ｓｔｅｐ１：２Ｖ、６００ｓｅｃ、Ｓｔｅｐ２：４Ｖ、６００ｓｅｃ、およびＳｔｅｐ３：１０Ｖ、２４００ｓｅｃとした。
【００８６】
（結果２）
図９（ａ）に対照例３の結果を、図９（ｂ）に対照例４の結果を、図９（ｃ）に実施例２の結果をそれぞれ示す。
【００８７】
図９（ａ）に示すように、対照例１では、濃いはっきりとしたバンドが転写されている。一方、図９（ｂ）に示すように、対照例２では、バンドが非常に薄くなっている。すなわち、ろ紙を用いない場合、ストライプ電極を用いた場合であっても従来の転写装置では、転写量が非常に低減してしまう。
【００８８】
ここで、図９（ｃ）に示すように、実施例２では、ろ紙を用いていないにも関わらず、実施例１と同様、濃いバンドが観察された。なお、実施例２において、バンドの間隔が狭まっているのは、電気泳動時の条件のためであり、本発明の効果とは関係ない。
【００８９】
本発明は上述した各実施形態に限定されるものではなく、請求項に示した範囲で種々の変更が可能であり、異なる実施形態にそれぞれ開示された技術的手段を適宜組み合わせて得られる実施形態についても本発明の技術的範囲に含まれる。
【産業上の利用可能性】
【００９０】
本発明は、例えば、生体分子の解析または検査のための器具または装置等の製造分野において利用可能である。
【符号の説明】
【００９１】
１００、２００、３００  転写装置
１１０、３１０          格納部
１４０、１４１          絶縁体
１４２                  スペーサー
１４３                  保持部材
１５０、３５０          アノード電極
１５１、３５１          カソード電極
１７０                  分離媒体
１８０                  転写膜
１６０                  緩衝液
１６１                  還元体
１６２                  酸化体
１７１                  被転写物
１９０                  電圧印加手段
２４０、３２０、３２１  緩衝液槽
２４１                  媒体保持部材
３５２、３５３          電気泳動用電極
３５４                  帯状導電体
３５５                  結線部材
【図１】
2010216861.tif 000003
【図２】
2010216861.tif 000004
【図３】
2010216861.tif 000005
【図４】
2010216861.tif 000006
【図５】
2010216861.tif 000007
【図６】
2010216861.tif 000008
【図７】
2010216861.tif 000009
【図８】
2010216861.tif 000010
【図９】
2010216861.tif 000011