(57)【要約】【課題】天然抽出物を含有したコラーゲンゲル収縮活性促進剤を提供する。【解決手段】アカブドウ（Vitis vinifera Linne）の抽出物を有効成分として含有するコラーゲンゲル収縮促進剤である。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
アカブドウ（Vitis vinifera Linne）の抽出物を有効成分として含有することを特徴とするコラーゲンゲル収縮促進剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、化粧料等の皮膚外用剤に配合して使用するのに好適なコラーゲンゲル収縮促進剤に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
皮膚は表皮、真皮、皮下組織の３層に主に分けられ、真皮はその中でも最も領域の広い部分であり、皮膚の構造の維持に極めて重要である。この真皮中の約７０％以上はコラーゲン線維で占められており、皮膚のタルミに明らかに影響を与える成分と考えられる。真皮中のコラーゲンは線維芽細胞により合成され、コラーゲン線維の配向性や太さ、線維密度などは、線維芽細胞により調節される。一方で、再構成されたコラーゲン線維は線維芽細胞に影響を与え、様々な細胞活性（形態、増殖性、細胞内酵素合成活性等）を制御するという密接な関係がある（Nishiyama，Matrix，9:193−199，1989）。
【０００３】
通常の線維芽細胞培養条件下、線維芽細胞をコラーゲンゲル中に埋包培養するとコラーゲンゲルは収縮する（Review: E. Bell et al. J. Invest. Dermatol.,81，2s，1983等）。収縮したコラーゲンゲルの線維密度は真皮での線維密度に近い値になる。これは、線維芽細胞がコラーゲン線維を引き寄せるために起こる現象である。コラーゲンゲルは、コラーゲンと線維芽細胞を含み、コラーゲン同士の疎水結合によりゲル化したものである。コラーゲンゲル中の線維芽細胞は運動性を持ち、線維芽細胞がコラーゲンと結合してコラーゲンを動かし、整列させることでコラーゲンゲルは収縮するのであり、線維芽細胞が存在しなければゲルは収縮しない。実際の皮膚中においても、線維芽細胞がコラーゲン線維を引きよせることにより、皮膚のタルミが抑制されると考えられる。
【０００４】
皮膚の老化に関しては、老齢者由来の線維芽細胞では若年者由来の線維芽細胞と比較してゲルの収縮が低下することが知られており、老化によりゲルの収縮能が低下することが明らかとなっている（M. Yamato, et al. Mech. Ageing Dev.67，149，1993）。コラーゲンゲルの収縮能が低下することは、真皮結合組織を若い頃のように収縮させて、引き締まった状態で維持することが困難になることを意味する。実際、老化するに従って、頬や首筋、腕、その他各部の皮膚に若い頃にはあまり認められなかったタルミが形成されることは周知の事実である。このように、皮膚の真皮結合組織が収縮力を失い、更には強度、弾力性を失うことにより、結果としてタルミに至ると考えられている。
【０００５】
従って、線維芽細胞を埋包したコラーゲンゲルの収縮能を高めることができれば、真皮結合組織を収縮させ、引き締め、強度を増加させることができ、皮膚を若い頃のような状態に維持することができる。また、コラーゲンゲルの収縮能を高めることにより、老化による皮膚のタルミや、低下した皮膚の弾力性を改善することができる。さらには、コラーゲンゲルの収縮を促進させることで、皮膚潰瘍やケロイド等の難治性皮膚疾患のような真皮結合組織の破壊に起因する創傷の治癒を促進することもできる（Y. Takayama et al. FEBS Letters 508，111-116，2001）。
【０００６】
以上のことから、線維芽細胞によるコラーゲンゲル収縮活性を促進することができ、しかも安全性の点でも問題のないコラーゲンゲル収縮促進剤が望まれていた。
【０００７】
ところで、ブドウ科植物であるアカブドウの抽出物については、従来、化粧料等の皮膚外用剤に配合することが知られている。
【０００８】
例えば、下記特許文献１には、皮膚線維芽細胞のコラーゲン産生能を増進させる植物抽出物と筋肉弛緩作用を有する植物抽出物とを配合してなるシワ改善用皮膚外用剤が開示され、前記コラーゲン産生能を増進させる植物抽出物としてブドウ（Vitis vinifera L）の果皮及び／又は葉を用いることが開示されている。
【０００９】
しかしながら、特許文献１におけるコラーゲン産生能は、線維芽細胞がコラーゲンを産生する能力のことであり、これを高めることでコラーゲンの量が増えるというものである。そのため、コラーゲンと結合した線維芽細胞を動かし引きよせることでコラーゲンゲルを収縮させるコラーゲンゲル収縮促進作用とは全く異なる機能である。実際、コラーゲンゲル中のコラーゲン濃度が増加すると、そのかさ高さにより摩擦が生じるためか、コラーゲンゲルの収縮が阻害されて収縮率が低下することが知られている（T. Nishiyama et al. Collagen Rel. Res. 259-273，8,1988）。特許文献１においても、真皮成分であるコラーゲンの産生能を向上させることは、真皮に張りを与え、皮膚の表面を伸ばすことによってシワの改善を早めると記載されており（段落００１１）、このことは、コラーゲン産生能を増進させることで、むしろ表皮内側の真皮の体積を増加させることによりシワを改善することを意図しており、真皮に相当するコラーゲンゲルを収縮させる点は何ら示唆されていない。また、それによる用途の点でも、コラーゲン産生能の増進では、真皮の体積を増加させることでシワを改善するのに対し、コラーゲンゲルの収縮を促進することができれば、頬肉が頬骨の下の方にたまる、目尻が下がる、目の下が膨らんだ状態になるといった皮膚のタルミを直接改善することができ、また真皮の収縮による小顔効果も期待できる。
【００１０】
また、下記特許文献２には、ブドウ（Vitis vinifera L）の葉の抽出物がメイラード反応阻害作用を有することに基づいて、該抽出物を配合することにより、肌の硬化、シワ形成、はり・つやの喪失の原因となるコラーゲンの架橋形成を抑制することができる皮膚外用剤が開示されている。
【００１１】
しかしながら、特許文献２におけるメイラード反応とは、タンパク質であるコラーゲンと糖が結合する反応のことであり、この反応を阻害することでコラーゲンの架橋形成が抑制されるにすぎない。また、メイラード反応阻害作用において薬剤の作用点はタンパク質であるコラーゲンであり、線維芽細胞を薬剤の作用点とするコラーゲンゲル収縮促進作用とは作用点が異なることからも、機能が全く異なり、よって、特許文献２には、コラーゲンゲル収縮促進作用については何ら開示されていない。また、それによる用途の点でも、特許文献２のメイラード反応阻害作用は、コラーゲンの架橋形成を抑制することで肌の硬化、シワの形成、はり・つやの喪失などを予防するのに対し、コラーゲンゲルの収縮を促進することは、たるんでしまった真皮を収縮させることでタルミを改善するという点で用途が異なる。
【００１２】
このように、従来、アカブドウの抽出物を皮膚外用剤に配合することは知られていたものの、コラーゲンゲル収縮活性促進作用については全く知られていなかった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１３】
【特許文献１】特開２００５−２０６４６６号公報
【特許文献２】特開２００６−２７３８１１号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１４】
本発明は、線維芽細胞によるコラーゲンゲル収縮活性を促進することができ、しかも安全性の点でも問題のないコラーゲンゲル収縮促進剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１５】
本発明者らは上記したような従来の課題を解決するものとして広く種々の物質についてヒト正常皮膚線維芽細胞のコラーゲンゲル収縮促進効果を鋭意検討したところ、特定の植物抽出物がコラーゲンゲル収縮活性促進作用を有することを見出し、本発明を完成するに至った。
【００１６】
すなわち、本発明は、アカブドウ（Vitis vinifera Linne）の抽出物を有効成分として含有するコラーゲンゲル収縮促進剤に関するものである。
【発明の効果】
【００１７】
本発明によれば、線維芽細胞を埋包したコラーゲンゲルの収縮能を効果的に高めることができるコラーゲンゲル収縮促進剤を提供することができる。本発明のコラーゲンゲル収縮促進剤は、優れたコラーゲンゲル収縮活性促進作用を有するので、皮膚外用剤に配合して使用するのに好適である。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
以下、本発明の実施に関連する事項について詳細に説明する。
【００１９】
本発明で用いられる植物は、ブドウ科（Vitaceae）ブドウ属（Vitis）に属するアカブドウ（Vitis vinifera Linne）であり、ヨーロッパブドウとも称される。かかるアカブドウの抽出部位としては、地上部、例えば、葉、果皮などが挙げられ、特には、葉の抽出物を用いることが好適である。
【００２０】
アカブドウの抽出物を有効成分とするコラーゲンゲル収縮促進剤を製造する場合、有効成分の抽出には、親水性溶媒を用いることが好ましい。親水性溶媒としては、例えば、メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノールなどの低級脂肪族アルコール、１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、ジプロピレングリコール、グリセリンなどの多価アルコール、及び水などが挙げられ、これらはそれぞれ単独で用いても２種以上併用してもよい。より好ましくは、低級脂肪族アルコール及び／又は多価アルコールと水とを混合してなる含水アルコールを用いることであり、含水率は特に限定するものではないが、約４０〜６０質量％のものが適当である。
【００２１】
抽出方法には特殊なものは不要であり、室温ないし還流加熱下に、任意の装置を用いて抽出することができる。簡単には、抽出溶媒を満たした処理槽に抽出原料を投入し、ときどき攪拌しながら可溶性成分を抽出させる。得られた抽出液を濃縮すると、濃い茶褐色の濃縮液（エキス）が得られる。
【００２２】
上記で得られた抽出液はそのままでもコラーゲンゲル収縮促進剤として使用することができるが、濃縮液又はその乾燥物としたものの方が利用しやすい。そのため、通常は、濃縮液又はその乾燥物をコラーゲンゲル収縮促進剤として使用すればよい。
【００２３】
抽出原料となる植物は特有の匂いを有しているため、その生理活性の低下を招かない範囲で脱色、脱臭等を目的とする精製を行なうことも可能であるが、化粧料に添加する場合には大量に使用するものではないため、未精製のままでも実使用上支障はない。精製は、具体的には活性炭処理、吸着樹脂処理、イオン交換樹脂処理等によって行なうことができる。
【００２４】
アカブドウからの抽出物は、そのままでもコラーゲンゲル収縮促進剤として使用することができるが、常法に従って製剤化して提供することもできる。製剤化する場合、保存や取扱いを容易にするために、デキストリン、シクロデキストリン等の薬学的に許容され得るキャリアーその他任意の助剤を添加することができる。
【００２５】
本発明のコラーゲンゲル収縮促進剤は、皮膚に適用した場合の安全性に優れているため、化粧料を始めとする各種皮膚外用剤に配合するのに好適である。皮膚外用剤には、コラーゲンゲル収縮促進剤のみを配合してもよいし、その他の有効素材を組み合わせて配合してもよい。
【００２６】
本発明のコラーゲンゲル収縮促進剤の配合量は、皮膚外用剤の種類や抽出物の生理活性等によって適宜調整することができ、特に限定されないが、好適な配合量は抽出物の固形分換算で約０．００１〜１０質量％である。
【００２７】
本発明のコラーゲンゲル収縮促進剤を配合しうる皮膚外用剤は特に限定されないが、その具体例としては、化粧水、美容液（エッセンス）、乳液、ジェル、クリーム、パック、入浴剤、ファンデーション等の化粧料の他、軟膏剤、パップ剤、プラスター剤などの医薬品、更には医薬部外品であってもよい。
【００２８】
本発明のコラーゲンゲル収縮促進剤を配合する皮膚外用剤には、コラーゲンゲル収縮活性促進作用の妨げにならない限り、皮膚外用剤の製造に通常使用される各種主剤及び助剤、その他任意の助剤を配合することができ、本発明のコラーゲンゲル収縮促進剤のみが主剤となるものに限られるわけではない。例えば、油脂類、ロウ類、炭化水素、脂肪酸類、アルコール類、多価アルコール類、エステル類、アミン・アミド・金属石鹸類、ガム質・水溶性高分子化合物、界面活性剤、酸化防止剤、ビタミン類、香料、色材類、防腐殺菌剤、アミノ酸類、紫外線吸収剤、金属イオン封鎖剤、消炎剤、抗ヒスタミン剤、生薬類、美白剤、保湿剤など、種々の皮膚用薬品類などを配合することができる。
【００２９】
本発明のコラーゲンゲル収縮促進剤は、線維芽細胞を埋包したコラーゲンゲルに対して優れた収縮促進作用を有するものである。そのため、上述したように、真皮結合組織を収縮させることで老化による皮膚のタルミを改善することができる。また、真皮結合組織を収縮させることで化粧料として顔に塗布した場合に小顔効果も期待でき、老化によるタルミ防止用以外の用途にも用いられる。更には、コラーゲンゲルの収縮を促進させることで、皮膚潰瘍等の難治性皮膚疾患のような真皮結合組織の破壊に起因する創傷の治癒を促進することもでき、医療用途への展開も可能である。
【実施例】
【００３０】
以下、実施例を示して本発明を更に詳細に説明する。なお、本発明の範囲はこれらの実施例等に限定されるものではない。
【００３１】
（実施例１：アカブドウ・５０％エタノール抽出物）
アカブドウの葉の粗粉砕物１ｋｇに、抽出溶媒として５０質量％含水エタノールを１０Ｌ加え、還流抽出器で８０℃にて２時間抽出し、濾過した。残渣について更に同様の抽出処理を行なった。得られた抽出液を合わせて減圧下に濃縮を行い、乾燥して当該抽出物０．１７ｋｇを得た。
【００３２】
（実施例２：アカブドウ・５０％１，３−ブチレングリコール抽出物）
アカブドウの葉の粗粉砕物１ｋｇに、抽出溶媒として５０質量％含水１，３−ブチレングリコールを５Ｌ加え、５℃にて４日間抽出し、濾過した。得られた抽出液を減圧下に濃縮を行い、乾燥して当該抽出物０．１ｋｇを得た。
【００３３】
（試験例：コラーゲンゲル収縮促進作用の評価）
ヒト正常皮膚線維芽細胞（２．０×１０４cell／ｍＬ）懸濁コラーゲン溶液（コラーゲンは高研株式会社製品Ｉ−ＡＣを使用した。）を氷冷下にて作製後、１２ウェルプレート（各ウェルの面積は３．８ｃｍ２）の各ウェルに１ｍＬずつ注入し、直ちに３７℃でゲル化させた。その後、被験物質（コントロールとして精製水、濃度は重量％）を含有するＤＭＥＭ培地（ダルベッコ変法イーグル培地「ニッスイ」(2)）を加え、ウェル壁面からゲルを剥離しコラーゲンゲル収縮を行った。４８時間後に培地交換を行い、９６時間後にコラーゲンゲルの直径を測定し、面積を算出した。結果は、コントロールの面積を１００とした相対値として表１に示す。
【００３４】
なお、比較のために、クジン（マメ科のクララの根）の５０％エタノール抽出物（比較例１）と、キイチゴの果実の５０％エタノール抽出物（比較例２）についても、上記と同様にしてコラーゲンゲル収縮促進作用を評価した結果を表１に示す。
【表１】
2010215532.tif 000002
【００３５】
表１に示すように、実施例１及び２のアカブドウの抽出物であると、コラーゲンゲルの面積が小さくなっており、コラーゲンゲルの収縮が促進されていた。
【００３６】
下記処方例１〜７の皮膚外用剤を調製した。以下においてアカブドウ葉エキス（乾燥固形物）とは、実施例１もしくは実施例２で得られた抽出物（乾燥固形物）である。
【００３７】
（処方例１：ローション（化粧水））
（配合成分）                               （重量％）
（１）グリセリン                               ５．０
（２）ジプロピレングリコール                   ４．０
（３）キサンタンガム                           ０．０２
（４）ソルビット                               １．０
（５）グリチルリチン酸ジカリウム               ０．１
（６）ハマメリス抽出液                         ０．２
（７）アカブドウ葉エキス（乾燥固形物）         ０．００２
（８）エタノール                             １０．０
（９）精製水                                    残余
（製法）
（９）に（１）〜（８）を加えて室温にて溶解する。可溶化した後、ろ過して製品とする。
【００３８】
（処方例２：エッセンス（美容液））
（配合成分）                                      （重量％）
（１）ＰＯＥオレイルアルコールエーテル（６０ＥＯ）    １．０
（２）オリーブ油                                      ０．２
（３）フェノキシエタノール                            ０．５
（４）エタノール                                      ７．０
（５）ソルビトール                                    ８．０
（６）１，３−ブチレングリコール                      ５．０
（７）ヒアルロン酸                                    ０．１
（８）ローヤルゼリーエキス                            １．０
（９）酵母エキス                                      ０．１
（１０）アカブドウ葉エキス（乾燥固形物）              ０．０１
（１１）精製水                                         残余
（製法）
（１１）に（５）〜（１０）を加えて室温にて溶解する。（４）に（１）〜（３）を順次溶解後、前述の水相に可溶化する。その後、ろ過し製品とする。
【００３９】
（処方例３：乳液）
（配合成分）                                      （重量％）
（１）スクワラン                                      ５．０
（２）ワセリン                                        ２．０
（３）ミツロウ                                        ０．５
（４）ソルビタンセスキオレイン酸エステル              ０．８
（５）ポリオキシエチレンオレイルエーテル（２０ＥＯ）  １．２
（６）１，２−ペンタンジオール                        ５．０
（７）ジプロピレングリコール                          ５．０
（８）カルボキシビニルポリマー                        ０．２
（９）エタノール                                      ５．０
（１０）水酸化カリウム                                ０．１
（１１）リン酸Ｌ−アスコルビルマグネシウム            １．０
（１２）ローズマリー抽出液                            ０．５
（１３）アカブドウ葉エキス（乾燥固形物）              ０．００５
（１４）精製水                                         残余
（製法）
（１４）に（６）〜（８）を加えて加熱混合した後、（９）を加えて７０℃とする。別に（１）〜（５）を混合し加熱溶解して７０℃とする。この油相部を前述の水相部に加えて予備乳化を行った後、（１０）を加えて中和する。これをホモミキサーにより均一に乳化した後、熱交換器により冷却する。４０℃まで温度が下がった時点で（１１）〜（１３）を添加し製品とする。
【００４０】
（処方例４：エモリエントジェル）
（配合成分）                               （重量％）
（１）ジプロピレングリコール                 １０．０
（２）カルボキシビニルポリマー                 ０．４
（３）キサンタンガム                           ０．２
（４）ソルビット                               １．０
（５）グリセリン                             １０．０
（６）水素添加大豆リン脂質                     ０．５
（７）マカデミアンナッツ油                     ３．０
（８）スクワラン                               ５．０
（９）ホホバ油                                 ３．０
（１０）水酸化カリウム                         ０．１
（１１）ダイズ抽出液                           ０．５
（１２）アカブドウ葉エキス（乾燥固形物）       ０．００５
（１３）精製水                                  残余
（製法）
（１３）に（１）〜（５）を加え、７０℃で溶解する。別に（６）〜（９）を混合し加熱溶解して７０℃とする。この油相部を前述の水相部に加えて混合した後、（１０）を添加し中和する。その後冷却し、４０℃まで温度が下がった時点で（１１）〜（１２）を加え製品とする。
【００４１】
（処方例５：洗顔料）
（配合成分）                               （重量％）
（１）ミリスチン酸                           １５．０
（２）パルミチン酸                             ８．０
（３）ステアリン酸                             ５．０
（４）グリセリン                             １６．０
（５）水酸化カリウム                           ５．０
（６）ＥＯ（１０）ラウリルエーテル             ５．０
（７）セタノール                               ３．０
（８）パラヒドロキシ安息香酸メチル             ０．１
（９）パパイン                                 ０．１
（１０）エイジツ抽出液                         ０．５
（１１）アカブドウ葉エキス（乾燥固形物）       ０．００２
（１２）精製水                                  残余
（製法）
（４）に（１）〜（３）を加え、７０℃で溶解する。これに（５）を溶解した（１２）を徐々に加え、中和する。その後、（６）〜（８）を添加し冷却する。４０℃まで温度が下がった時点で（９）〜(１１)を加え製品とする。
【００４２】
（処方例６：Ｗ／Ｏ型エモリエントクリーム）
（配合成分）                                            （重量％）
（１）マイクロクリスタリンワックス                          ９．０
（２）パラフィン                                            ２．０
（３）ミツロウ                                              ３．０
（４）ワセリン                                              ５．０
（５）還元ラノリン                                          ８．０
（６）スクワラン                                          ３４．０
（７）ヘキサデシルアジピン酸エステル                      １０．０
（８）セラミド                                              ０．１
（９）親油型モノオレイン酸グリセリン                        ３．５
（１０）ＰＯＥソルビタンモノラウリン酸エステル（２０ＥＯ）  １．０
（１１）パラヒドロキシ安息香酸メチル                        ０．１
（１２）オウバク抽出液                                      ０．２
（１３）カミツレ抽出液                                      ０．２
（１４）アカブドウ葉エキス（乾燥固形物）                    ０．００２
（１５）ジプロピレングリコール                              ２．０
（１６）精製水                                              残余
（製法）
（１６）に（１５）を加え、加熱して７０℃にする。別に（１）〜（１１）を混合し、加熱溶解して７０℃とする。この油相部に前述の水相部を加えて、ホモミキサーで均一に乳化した後、熱交換器により冷却する。４０℃まで温度が下がった時点で（１２）〜（１４）を添加し製品とする。
【００４３】
（処方例７：育毛剤）
（配合成分）                               （重量％）
（１）ヒノキチオール                           ０．０１
（２）ビタミンＥ                               ０．０１
（３）ビタミンＢ６                             ０．０１
（４）ジプロピレングリコール                   ２．０
（５）エタノール                             ６０．０
（６）プラセンタエキス                         ０．５
（７）海藻エキス                               ０．５
（８）アカブドウ葉エキス（乾燥固形物）         ０．００５
（９）精製水                                    残余
（製法）
（１）〜（５）と（６）〜（９）を別々に室温にて溶解する。その後、これらを混合し、ろ過して製品とする。
【産業上の利用可能性】
【００４４】
本発明のコラーゲンゲル収縮促進剤は、化粧料や医薬品、医薬部外品などの各種皮膚外用剤に配合して用いることができる。