(57)【要約】【課題】遠心分離機等の大がかりな装置を使用することなく、冷凍保存された細胞を清浄な状態で簡易に取り出す。【解決手段】密閉された外部容器２と、該外部容器２内に配置され、細胞の通過を制限し、液体の通過を許容するメッシュ状の内部容器３と、外部容器２を貫通し、内部容器３内に開口する第１のポート４と、外部容器２を貫通し、該外部容器２と内部容器３との間の空間Ａに開口する第２のポート５とを備える細胞冷凍保存用バッグ１を提供する。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
密閉された外部容器と、
該外部容器内に配置され、細胞の通過を制限し、液体の通過を許容するメッシュ状の内部容器と、
前記外部容器を貫通し、前記内部容器内に開口する第１のポートと、
前記外部容器を貫通し、該外部容器と前記内部容器との間の空間に開口する第２のポートとを備える細胞冷凍保存用バッグ。
【請求項２】
前記第１のポートおよび前記第２のポートに、それぞれ各ポートを開閉するバルブが設けられている請求項１に記載の細胞冷凍保存用バッグ。
【請求項３】
前記外部容器を貫通し、前記内部容器内または該外部容器と前記内部容器との間の空間のいずれかに開口する第３のポートを備える請求項１または請求項２に記載の細胞冷凍保存用バッグ。
【請求項４】
前記外部容器を貫通し、前記内部容器内または該外部容器と前記内部容器との間の空間のいずれかに開口する第４のポートを備える請求項３に記載の細胞冷凍保存用バッグ。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、細胞冷凍保存用バッグに関するものである。
【背景技術】
【０００２】
従来、細胞治療のために必要とされる細胞は、人体から採取された後、細胞治療に使用されるまでの間、冷凍保存用バッグに入れて凍結され、保存されている。この冷凍保存用バッグとしては、ポリイミドフィルムとフッ素化エチレンプロピレン重合体フィルムとの積層フィルムからなるもの等により袋状に構成され、少なくとも２つの頂点に流出ポートと流入ポートとを備えているものが知られている（例えば、特許文献１参照。）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
【特許文献１】特許第４０３４８５０号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
しかしながら、特許文献１の凍結保存用バッグを使用して、細胞治療に使用するような細胞と保存液との混合液を凍結保存し、使用に際して細胞を取り出すには、解凍した状態の凍結保存用バッグを遠心分離機にかけて、細胞と保存液とに分離する必要がある。したがって、大がかりな遠心分離機が必要となるという不都合がある。さらに、このようにして分離された細胞には保存液が付着しているので、別途の工程において洗浄作業を行う必要がある。したがって、別途の洗浄装置が必要となり、装置が大がかりとなるという不都合がある。
【０００５】
本発明は上述した事情に鑑みてなされたものであって、遠心分離機等の大がかりな装置を使用することなく、冷凍保存された細胞を清浄な状態で簡易に取り出すことができる細胞冷凍保存用バッグを提供することを目的としている。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
上記目的を達成するために、本発明は以下の手段を提供する。
本発明は、密閉された外部容器と、該外部容器内に配置され、細胞の通過を制限し、液体の通過を許容するメッシュ状の内部容器と、前記外部容器を貫通し、前記内部容器内に開口する第１のポートと、前記外部容器を貫通し、該外部容器と前記内部容器との間の空間に開口する第２のポートとを備える細胞冷凍保存用バッグを提供する。
【０００７】
本発明によれば、第１のポートを介して内部容器内に細胞と保存液との混合液を供給すると、混合液内の細胞が内部容器内に保持されるとともに、保存液は内部容器および外部容器の両方に収容される。この状態で、混合液を細胞用冷凍保存用バッグごと凍結することにより、細胞を長期にわたって保存することができる。
【０００８】
そして、細胞を使用する場合には、混合液を細胞用冷凍保存用バッグごと加温して解凍し、第２のポートを開放することにより、外部容器内の保存液が第２のポートを介して外部に流出させられる。このとき、細胞は内部容器内から出ることができず、内部容器内に保持される。
【０００９】
そして、この後に、第１のポートまたは第２のポートを介して洗浄液を内部容器内に供給し、洗浄後の洗浄液を第２のポートから排出することにより、内部容器内の細胞を洗浄して保存液を除去する。さらに、第１のポートまたは第２のポートから乳酸リンゲル液のような移植液を供給して、内部容器内の細胞を懸濁することにより、移植に使用される形態の細胞懸濁液を得ることができる。このようにして得られた細胞懸濁液は、第１のポートを介して容易に細胞冷凍保存用バッグ外に取り出すことができる。
【００１０】
上記発明においては、前記第１のポートおよび前記第２のポートに、それぞれ各ポートを開閉するバルブが設けられていてもよい。
このようにすることで、バルブの操作によって第１のポートおよび第２のポートをそれぞれ開閉し、保存液の排出や洗浄液の供給および排出を簡易に行うことができる。
【００１１】
また、上記発明においては、前記外部容器を貫通し、前記内部容器内または該外部容器と前記内部容器との間の空間のいずれかに開口する第３のポートを備えていてもよい。
このようにすることで、第３のポートから洗浄液および乳酸リンゲル液等の移植用の液体を供給し、第１のポートから移植に使用される形態の細胞懸濁液を容易に取り出すことができる。
【００１２】
また、上記発明においては、前記外部容器を貫通し、前記内部容器内または該外部容器と前記内部容器との間の空間のいずれかに開口する第４のポートを備えていてもよい。
このようにすることで、第１〜第４のポートをそれぞれ独立した用途に使用することができ、各ポートへの接続を切り替える必要がないので、さらに簡易に構成することができる。
【発明の効果】
【００１３】
本発明によれば、遠心分離機等の大がかりな装置を使用することなく、冷凍保存された細胞を清浄な状態で簡易に取り出すことができるという効果を奏する。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】本発明の一実施形態に係る細胞冷凍保存用バッグを示す正面図である。
【図２】図１の細胞冷凍保存用バッグへの混合液の供給を説明する正面図である。
【図３】図１の細胞冷凍保存用バッグに混合液を封入し冷凍した状態を示す正面図である。
【図４】図１の細胞冷凍保存用バッグの混合液を解凍し、保存液を排出する状態を説明する正面図である。
【図５】図１の細胞冷凍保存用バッグの内部容器内に残る細胞を洗浄液によって洗浄する状態を説明する正面図である。
【図６】図１の細胞冷凍保存用バッグの内部容器内に残る洗浄された細胞に対して移植用の液体を供給する状態を説明する正面図である。
【図７】図１の細胞冷凍保存用バッグ内に生成された細胞懸濁液を外部に放出する状態を説明する正面図である。
【図８】図１の細胞冷凍保存用バッグの第１の変形例を示す正面図である。
【図９】図１の細胞冷凍保存用バッグの第２の変形例を示す正面図である。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
本発明の一実施形態に係る細胞冷凍保存用バッグ１について、図面を参照して以下に説明する。
本実施形態に係る細胞冷凍保存用バッグ１は、任意の細胞と保存液との混合液を凍結して保存し、移植手術に際して解凍して細胞を取り出すことができる容器であって、図１に示されるように、外部容器２と内部容器３と２つのポート４，５とを備えている。
【００１６】
外部容器２は、従来と同様の公知の材質、例えば、ポリイミドフィルムとフッ素化エチレンプロピレン重合体フィルムとの積層フィルムや、４フッ化エチレンとエチレンの共重合体フィルム等を重ね合わせ、周縁を溶着して密封したシール部２ａを有する形態のものである。
【００１７】
内部容器３は、メッシュ容器であって、細胞の透過を制限できるような細胞の外径寸法より小さく、液体の自由な流通を可能とする口径、例えば、０．２〜８μｍ、好ましくは、１〜４μｍを有する多数の透孔を有している。
内部容器３の表面には、親水性処理が施され、内部に収容された細胞が接着しないようになっている。
【００１８】
第１のポート４は、外部容器２の周縁のシール部２ａを貫通して外部容器２の内外に延び、内部の一端が内部容器３内に開口して配置されている。
また、第２のポート５は、同じく、外部容器２の周縁のシール部２ａを貫通して外部容器２の内外に延び、外部容器２と内部容器３との間の空間Ａに開口している。この第２のポート５の先端部５ａは初期状態において閉塞されている。
【００１９】
第１のポート４および第２のポート５は、塩化ビニル樹脂、シリコーン樹脂、ポリウレタン樹脂、ポリエチレン樹脂等のある程度の透明性と可撓性を有する材質のチューブにより構成されている。これらチューブは熱により容易に溶着および切断することができ、チューブシーラによって無菌的に切断および接続することができるものである。
【００２０】
このように構成された本実施形態に係る細胞冷凍保存用バッグ１の作用について以下に説明する。
本実施形態に係る細胞冷凍保存用バッグ１を用いて細胞を冷凍保存するには、図２に示されるように、第１のポート４を介して細胞と保存液との混合液Ｂを内部容器３内に供給した後に、図３に示されるように、第１のポート４を構成しているチューブを溶着および切断して密封する。混合液Ｂ内の細胞Ｃは内部容器３の透孔を通過できずに内部容器３内に保持され、保存液は透孔を自由に流通して内部容器３および外部容器２の両方に収容される。
この状態で、混合液Ｂを細胞冷凍保存用バッグ１ごと冷凍する。
【００２１】
次に、本実施形態に係る細胞冷凍保存用バッグ１によって冷凍保存されている細胞を使用する際には、細胞冷凍保存用バッグ１ごと加温して混合液Ｂを解凍した状態で、第２のポート５を構成しているチューブを切断して開放する。これにより、図４に示されるように、外部容器２内および内部容器３内に収容されていた保存液Ｄが外部に排出される。
【００２２】
この状態で、細胞冷凍保存用バッグ１内には、細胞Ｃが内部容器３内に保持された状態に残り、大部分の保存液Ｄが排出されるが、その一部は細胞Ｃ等に付着した状態で残る。
そこで、第１のポート４を構成しているチューブに洗浄液Ｅを貯留している洗浄液容器（図示略）を接続し、図５に示されるように、洗浄液容器から洗浄液Ｅを細胞冷凍保存用バッグ１内に供給する。これにより、洗浄液Ｅが内部容器３内に供給されて、細胞Ｃが洗浄され、内部容器３の透孔を通過することで内部容器３および外部容器２の内面も洗浄される。そして、洗浄後の洗浄液Ｅ’は第２のポート５から外部に排出される。
【００２３】
洗浄後の洗浄液Ｅ’が排出され終わった状態で、図６に示されるように、第２のポート５を溶着によって閉塞し、第１のポート４を移植用の乳酸リンゲル液容器（図示略）に接続し直して、細胞冷凍保存用バッグ１内に乳酸リンゲル液Ｆを供給する。これにより、細胞Ｃが乳酸リンゲル液Ｆによって懸濁されて細胞懸濁液Ｇが構成されるので、図７に示されるように、第１のポート４から乳酸リンゲル液容器を切り離し、細胞冷凍保存用バッグ１を反転することにより、第１のポート４を介して細胞冷凍保存用バッグ１内の細胞懸濁液Ｇを外部に放出することができるようになる。
【００２４】
このように、本実施形態に係る細胞冷凍保存用バッグ１によれば、解凍された混合液Ｂの中から細胞Ｃのみを取り出す際に、遠心分離機のような大がかりな装置が不要となり、極めて容易に取り出すことができるという利点がある。また、洗浄装置のような特別な装置を使用することなく、保存液Ｄを除去した清浄な細胞Ｃを含む細胞懸濁液Ｇを取り出すことができ、そのまま移植に使用することができる。
【００２５】
なお、本実施形態においては、２つのポート４，５を有する場合について説明したが、これに代えて、図８に示されるように３つのポート４，５，６あるいは図９に示されるように４つのポート４，５，６，１０を有することにしてもよい。
【００２６】
図８に示される第３のポート６は、内部容器３内に開口している。そして、第３のポート６を構成するチューブ６ａ，６ｂは２つに分岐して、それぞれバルブ７，８が設けられている。また、第２のポート５にもバルブ９が設けられている。
【００２７】
第３のポート６にを構成する一方のチューブ６ａには、洗浄液Ｅを貯留した洗浄液容器（図示略）または移植に使用する乳酸リンゲル液Ｆを貯留した移植液容器（図示略）が択一的に接続されるようになっている。
このようにすることで、第１のポート４から細胞Ｃと保存液Ｄとの混合液Ｂを供給した後には、第１のポート４を溶着して閉塞し、その後の洗浄液Ｅおよび乳酸リンゲル液Ｆの供給を一方のチューブ６ａから、細胞懸濁液Ｇの放出を他方のチューブ６ｂから、第３のポート６のバルブ７，８を開閉して、それぞれ行うことができる。また、保存液Ｄの排出および洗浄後の洗浄液Ｅ’の排出は第２のポート５のバルブ９を開閉することにより行うことができる。
【００２８】
また、図９に示される第４のポート１０は、上記第３のポート６の２つのチューブ６ａ，６ｂに対してそれぞれポートを割り当てるために設けられ、バルブ１１が備えられている。すなわち、第３のポート６を構成する一方のチューブ６ａには、洗浄液Ｅを貯留した洗浄液容器（図示略）が接続され、他方のチューブ６ｂには移植に使用する乳酸リンゲル液Ｆを貯留した移植液容器（図示略）が接続される。そして、第４のポート１０からは細胞懸濁液Ｇの放出を行うことができる。これにより、洗浄液Ｅや乳酸リンゲル液Ｆの供給と細胞懸濁液Ｇの放出との切替を行わずに済み、簡易に構成することができるという利点がある。
【００２９】
細胞懸濁液Ｇを放出するための第４のポート１０を設ける場合には、洗浄液Ｅまたは乳酸リンゲル液Ｆを細胞冷凍保存用バッグ１内に供給する第３のポート６は、外部容器２と内部容器３との間の空間Ａに開口していてもよい。
【符号の説明】
【００３０】
Ａ  空間
Ｄ  保存液（液体）
Ｅ  洗浄液（液体）
Ｅ’  洗浄液（液体）
Ｆ  乳酸リンゲル液（液体）
１  細胞冷凍保存用バッグ
２  外部容器
３  内部容器
４  第１のポート
５  第２のポート
６  第３のポート
７，８  バルブ
１０  第４のポート
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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