(57)【要約】【課題】  摂食中枢抑制物質の製造方法を提供する。【解決手段】  ここでいう摂食中枢抑制物質の製造方法とは、カラルマ果実、カフェインを乳酸菌により発酵させる工程からなる。ここでいう摂食中枢抑制物質とは、プレグナン１分子、カフェイン１分子からなり、プレグナンの水酸基にカフェインがエステル結合している。カフェインが結合していることにより、中枢に移動しやすい特徴がある。この製造方法ではカラルマの果実１重量に対し、カフェインは０．１〜０．９重量、乳酸菌は０．００４〜０．０２重量が添加される。発酵は、３５〜４９℃に加温され、２３〜９７時間行われる。さらに、摂食中枢抑制物質は、医薬品製剤、食品、化粧料として利用される。【選択図】      なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
カラルマ粉末、カフェイン粉末を乳酸菌により発酵させ、還元処理する工程からなる下記の式（１）で示される摂食中枢抑制物質の製造方法。
【化１】
2010193809.tif 000004
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
この発明は、カラルマ粉末、カフェイン粉末を乳酸菌により発酵させ、還元処理する工程からなる摂食中枢抑制物質の製造方法に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
日本における死因の一番が癌であるが、第２位と第３位は、血管病変に起因する心血管障害及び脳血管障害である。これらの疾患は粗悪な生活習慣に起因する部分が多い。
【０００３】
特に、脂肪の摂取過多に起因したメタボリック症候群と血管病変の発症には関係が深い。メタボリック症候群及び血管病変の発症は４０歳以上の男性に多く認められる。
【０００４】
厚生労働省はこれらの血管障害の発症を事前に防ぐ目的で、体重の適切な管理を推奨しているものの、精神的なストレスにより過食に陥り、過体重とメタボリック症候群、さらに、血管障害を発症するものと推察される。
【０００５】
精神的なストレスによる過食を防止する目的で、摂食中枢に働きかける医薬品の開発がすすめられており、たとえば、アンフェタミンと構造の類似したマジンドールがある。しかし、マジンドールには、アンフェタミンと特性の類似が見られることより、精神的依存性、短期間での耐性の発現が認められるという重篤な副作用がある。マジンドールのその他の副作用として肺高血圧症も認められる。そのため、マジンドールは高度の肥満症にのみ使用が限定されている。
【０００６】
食欲抑制剤に関する発明が認められているものの、化学的に合成された物質であり、セロトニン神経を刺激することから嘔吐や悪心などの副作用が認められる（例えば、特許文献１参照。）。
【０００７】
化学合成された物質やアンフェタミンなどには副作用が発現しやすいことから、摂食中枢を抑制する物質を天然物より採取する研究が進められている。
【０００８】
天然物であるカラルマを用いた発明も認められ、肥満、肥満に関連する障害、および他の障害の治療／管理におけるプレグナン配糖体の使用がある（例えば、特許文献２参照。）。
【０００９】
食欲抑制剤のための送達システムの発明がある。（例えば、特許文献３参照。）
【００１０】
また、カラルマ抽出物の製造方法および使用に関する発明がある（例えば、特許文献４参照。）。
【００１１】
しかし、いずれの発明も、カラルマそのものを利用する範囲内であり、有効性の高い成分の特定にはいたらず、製造方法についても一般的である。
【００１２】
ここでは、摂食中枢抑制作用を有する天然物由来の物質を製造する方法を発明したので、報告する。
【特許文献１】特許平０５−２９３７６１
【特許文献２】特表２００７−５３４７４７
【特許文献３】特表２００９−５０４７４５
【特許文献４】特表２００６−５２６６１５
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１３】
従来の摂食中枢抑制剤は、化学合成された物質が多く、アンフェタミンや覚せい剤などの副作用が認められることから、使用が制限されるという問題点がある。
【００１４】
また、天然物由来の成分では働きが軽度であるという問題点がある。
【００１５】
この発明は上記のような従来技術に存在する問題点に着目してなされたものである。その目的とするところは、副作用が弱く、優れた摂食中枢抑制作用を有する物質の製造方法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１６】
上記の目的を達成するために、請求項１に記載の発明は、カラルマ粉末、カフェイン粉末を乳酸菌により発酵させ、還元処理する工程からなる下記の式（１）で示される摂食中枢抑制物質の製造方法に関するものである。
【００１７】
【化１】
2010193809.tif 000002
【００１８】
この発明は、以上のように構成されているため、次のような効果を奏する。
【００１９】
請求項１に記載のカラルマ粉末、カフェイン粉末を乳酸菌により発酵させ、還元処理する工程からなる製造方法によれば、摂食中枢抑制物質を効率良く得ることができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２０】
以下、この発明を実施するための最良の形態について詳細に説明する。
【００２１】
カラルマ粉末、カフェイン粉末を乳酸菌により発酵させ、還元処理する工程からなる下記の式（１）で示される摂食中枢抑制物質の製造方法について説明する。
【００２２】
【化２】
2010193809.tif 000003
【００２３】
そもそも、ここでいう摂食中枢抑制物質とはプレグナン１分子とカフェイン１分子がエステル結合した物質である。
【００２４】
この摂食中枢抑制物質のプレグナンは、カラルマ粉末由来であり、プレグナンの３位の水酸基とカフェインのメチル基が脱メチルされてエステル結合している。
【００２５】
前記のエステル結合は、乳酸菌のエステル結合酵素により結合され、つまり、プレグナンの水酸基がカフェインのメチル基と反応し、酸素を残存させたエステル結合が形成される。
【００２６】
ここで示される製造方法はカラルマの粉末にカフェイン粉末と乳酸菌を添加し、発酵した溶液をアルカリ還元処理する工程からなる。
【００２７】
原料となるカラルマ粉末とは、学名はＣａｒａｌｌｕｍａ  ａｄｓｃｅｎｄｅｎｓ  ｖａｒ．ｆｉｍｂｒｉａｔａ、または、Ｃａｒａｌｌｕｍａ  Ｆｉｍｂｒｉａｔａと命名された植物の実または根から得られる粉末である。
【００２８】
カラルマはインドで生のまま食べ、または、チャツネやピクルスなどに利用されており、食経験が豊富である。
【００２９】
利用されるカラルマは、インド、中国、チベット、マレーシア、ミャンマー、台湾、日本の他、アジア、アメリカ、アフリカで、野生に存在するもの、及び  栽培されたいずれの植物でも、用いることが可能である。特に、栽培されたものは、農薬や肥料の使用について追跡できる点から好ましい。
【００３０】
このカラルマの実や根にはプレグナンが含有されていることから、目的とする摂食中枢抑制物質の生成のために、好ましい。カラルマの実や根は粉末とされる。
【００３１】
カラルマの実は、採取された後に、水洗されることは雑菌を除外できる点から好ましい。水洗後、乾燥後、粉砕されることは、以降の工程を効率良く行う点から好ましい。
【００３２】
乾燥機として西村鐵工所製のＣＤドライヤー、株式会社大川原製作所製のバイブロンやロートスルー、株式会社奈良機械製作所製の旋回気流乾燥機、トルネッシュドライヤー、流動層乾燥などが用いられる。
【００３３】
粉砕機として株式会社奈良機械製作所製の自由ミル、スーパー自由ミル、サンプルミル、ゴブリン、スーパークリーンミル、マイクロス、減圧乾燥機として東洋理工製の小型減圧乾燥機、株式会社マツイ製の小型減圧伝熱式乾燥機ＤＰＴＨ−４０、エーキューエム九州テクノス株式会社製のクリーンドライＶＤ−７、ＶＤ−２０などが用いられる。
【００３４】
原料として用いるカフェイン粉末は緑茶、コーヒーなどの植物に含有されるカフェインの粉末である。カフェインは中枢刺激作用や覚醒作用を有し、食品添加物としても認められており、その安全性は確立されている。
【００３５】
ここで用いるカフェイン粉末は植物由来のものでも良く、または、化学合成された原料のいずれのものでも良い。その純度は高いものが好ましい。白鳥製薬株式会社のカフェイン粉末は品質が高いことから好ましい。
【００３６】
このカフェインは血液脳関門を通過しやすいことから、カフェインをエステル結合した目的とする摂食中枢抑制物質が脳に入りやすくなる。
【００３７】
さらに、原料となる乳酸菌とは、ラクトバチルスに属する微生物であり、ヨーグルト、チーズ、ぬか漬けなどの食品加工用に用いられる有用菌の一種である。このうち、植物性の乳酸菌は、ブドウ糖を利用して発酵が効率的に実施できることから好ましい。また、小林製薬製やビオフェルミン製薬製の植物性乳酸菌は品質が安定していることから好ましい。
【００３８】
前記の発酵に関するそれぞれの添加量は、カラルマの果実１重量に対し、カフェインは０．１〜０．９重量が好ましく、乳酸菌は０．００４〜０．０２重量が好ましい。さらに、ブドウ糖を発酵エネルギー源として添加することは、発酵を短期間に実施できることから、好ましい。
【００３９】
前記の発酵は清浄な培養用タンクで実施され、水道水により前記の材料を混合することは好ましい。
【００４０】
また、この発酵は、３５〜４９℃に加温され、発酵は、２３〜９７時間行われる。発酵後に、以下の抽出を効率良く実施するために、水道水で希釈される。
【００４１】
この発酵の工程によって、プレグナンとカフェインが結合した目的の摂食中枢抑制物質が得られる。
【００４２】
前記の発酵により生成された発酵物は３９〜７０℃の温水で抽出され、この製造工程により、生成物を分解から守り、効率良く回収でき、かつ、次の工程を実施しやすい。
【００４３】
得られた発酵物は真空乾燥や凍結乾燥などにより、濃縮することは、好ましい。
【００４４】
この発酵物は還元される。還元の工程は、水素を利用した還元やアルカリ還元がある。このうち、アルカリ還元装置やアルカリ還元整水器により実施されることは反応を均一にできる点から好ましい。
【００４５】
たとえば、ゼマイティス製のアルカリ還元水・強酸化水連続生成器「プロテックＡＴＸ−５０１」、エヌアイシー製のアルカリ還元水製造装置「テクノスーパー５０２」、マルタカ製「ミネリア・ＣＥ−２１２」、クレッセント製「アキュラブルー」、株式会社日本鉱泉研究所製「ミネラル還元整水器などの装置が好ましい。
【００４６】
前記の発酵物から、目的とする摂食中枢抑制物質を分離し、精製することは純度の高い物質として摂取量を減少させることができる点から好ましい。この精製の方法としては、分離用の樹脂などの精製操作を利用することが好ましい。
【００４７】
分離用担体または樹脂としては、表面がコーティングされた、多孔性の多糖類、酸化珪素物質、ポリアクリルアミド、ポリスチレン、ポリプロピレン、スチレン−ビニルベンゼン共重合体等が用いられる。適切な分離用溶媒により分離し、精製され、有機溶媒を除去して目的とする精製物を得ることは好ましい。
【００４８】
分離用溶媒としてはメタノール、エタノール、クロロホルム、ヘキサン、酢酸エチル、ベンゼン、エーテルなどが用いられ、このうち、食品加工用エタノールまたは含水エタノールはその利用範囲が高いことから好ましい。
【００４９】
このようにして得られる摂食中枢抑制物質は、液体または粉末として得られる。得られた摂食中枢抑制物質は医薬品、食品製剤、化粧料、衛生用具、衣類や繊維、プラスチックなどに利用される。
【００５０】
医薬品としてはメタボック症候群の治療、生活習慣病の改善、ダイエットを目的として医薬品製剤や医薬部外品製剤に利用される。また、メタボリックシンドロームや生活習慣病の予防や改善などに利用される。さらに、動物に用いる獣医用の医薬品やペットに用いる医薬品としても利用される。
【００５１】
前記の食品製剤としては、サプリメント、ジュースへの添加物や食品添加物としてメタボリックシンドロームや生活習慣病の予防や改善を目的として使用される。また、動物に用いる獣医用の食品や食品製剤、又はペットに用いる食品製剤としても体重管理や脂肪の除去の目的として利用される。
【００５２】
食品製剤として利用される場合には、腸管からの吸収を促進する目的で、アルファ−シクロデキストリンで包接されることは、好ましい。
【００５３】
化粧料としては、脂肪除去を目的として化粧料やメラニン産生抑制を目的とした化粧料、医薬部外品として利用される。また、動物に用いる獣医用の化粧料やペットに用いる化粧料としても利用される。
【００５４】
以下、前記実施形態を実施例及び試験例を用いて具体的に説明する。まず、目的とする摂食中枢抑制物質の製造について具体的に説明する。
【実施例１】
【００５５】
インドで栽培されたカラルマより果実を採取した。これを水洗後、乾燥機により乾燥し、粉砕機（クイジナート）により粉砕して、カラルマ粉末１ｋｇを得た。さらに、食品添加物規格に合格したカフェイン粉末を白鳥製薬株式会社から購入した。
【００５６】
清浄な発酵タンク（滅菌された発酵用丸形２０リットルタンク）の容器に、カラルマ粉末１ｋｇとカフェイン粉末０．５ｋｇを入れてさらに、水道水５ｋｇを添加し、攪拌した。
【００５７】
これに、グルコース０．３ｋｇを添加し、さらに、粉末乳酸菌（ワカモト製薬株式会社製）５ｇを発酵タンクに供し、攪拌後、４０〜４３℃の温度範囲内で発酵させた。
【００５８】
発酵過程の途中段階で３回攪拌した。発酵終了の判定には、目的とする摂食中枢抑制物質の生成量を指標とした。
【００５９】
その方法は、質量分析器付き高速液体クロマトグラフィ（ＨＰＬＣ、島津製作所）に発酵液を供して分析し、目的とする物質の生成を確認した。
【００６０】
その結果、発酵３５時間後に、ＨＰＬＣにより確認した結果、目的とする物質が十分量生成された。この発酵時間を４２時間として発酵を終了させた。この発酵液に３９℃の温水２ｋｇを添加した。
【００６１】
この発酵液を珪藻土を敷いたろ過器に供し、ろ過した。得られたろ過液を日本エフディ製の凍結乾燥機に供し、目的とする目的とする摂食中枢抑制物質を粉末として２１６ｇを得た。これを検体１とした。
【００６２】
以下に、目的とする摂食中枢抑制物質の精製物について説明する。
【実施例２】
【００６３】
実施例１で得られた物質１００ｇをエタノール１００ｍＬに懸濁し、三菱化学製ダイヤイオンの１２３９ｇを充填したカラムに供した。これを１０％エタノール含有水１２００ｍＬで洗浄した。さらに２０％エタノール含有水１０００ｍＬで洗浄後、８０％エタノール含有水７００ｍＬで溶出した。
【００６４】
８０％エタノール分画を減圧乾燥機に供してエタノールと水を留去した後、日本エフディ製の凍結乾燥機により目的とする物質の精製物１９ｇを得た。これを実施例２の検体とした。
【００６５】
以下に、目的とする摂食中枢抑制物質の同定試験について説明する。
（試験例１）
【００６６】
上記のように得られた実施例１及び実施例２で得られた物質を精製エタノールに溶解し、質量分析器付き高速液体クロマトグラフィ（ＨＰＬＣ、島津製作所）で分析し、さらに、核磁気共鳴装置（ＮＭＲ、ブルカー製、ＡＣ−２５０）により解析した。
【００６７】
その結果、実施例１及び実施例２の検体から、目的とする摂食中枢抑制物質としてプレグナンとカフェインよりなる物質が同定された。この物質にはカフェイン１分子に対して、プレグナン１分子が含有され、かつ、水酸基を介して結合していた。
【００６８】
以下に、目的とする物質の神経刺激試験について説明する。
（試験例２）
【００６９】
マウス胎児の脳より得られた神経細胞を用いた。妊娠１７日目のマウスを安楽致死させ、子宮から胎児を摘出した。この胎児の脳を採取し、１％コラゲナーゼ含有リン酸緩衝生理食塩液（ＰＢＳ）中、３７℃で、３０分間分散した。これを滅菌された粗い格子のフィルターを通し、ＰＢＳで希釈して遠心分離した。
【００７０】
得られたペレットを培養液（１０％ウシ胎児血清含有ＭＥＭ培地）に分散し、再度、遠心分離した。得られたペレットを再度、培養液に分散した。
【００７１】
これを２４穴マイクロプレートに１００００個の細胞ずつ１ｍＬの培養液ともに、播種し、３７℃、５％炭酸ガス下で、２４時間培養した。
【００７２】
これに前記の検体１及び検体２を培養液に分散して、０．１ｍｇ／ｍＬの最終濃度になるように、添加した。添加２４時間後に、蛍光試薬Ｆｌｕｏ−３を添加して細胞内Ｃａの動態を共焦点レーザー顕微鏡（ニコン製）にて分析した。
【００７３】
神経が活性化されると細胞内Ｃａが増加し、抑制されると細胞内Ｃａが減少することが知られており、本方法は、神経の活性化状態を確認する方法として確立され、豊富な試験成績が得られている。
【００７４】
その結果、実施例１の検体１の添加により、ＰＢＳのみの溶媒対照に対して７６％の細胞内Ｃａの減少が確認された。また、実施例２の検体２の添加により、ＰＢＳのみの溶媒対照に対して５１％の細胞内Ｃａの減少が確認された。
【００７５】
これらの結果から、実施例１及び実施例２の目的とする物質は優れた神経抑制作用を呈するものと結論された。
【実施例３】
【００７６】
以下に、摂食中枢抑制物質からなるダイエット用食品について説明する。
【００７７】
前記の実施例１で得られた摂食中枢抑制物質１００ｇに株式会社コサナ製のアルファ−シクロデキストリン２００ｇを添加し、エタノール１５００ｍＬを添加し、５０℃で８時間混合させた。これを減圧蒸留し、エタノールを完全に除去して接合組成物を得た。
【００７８】
この組成物に、キトサン８００ｇを添加し、混合した。これを実施例３のダイエット食品粉末とした。
【００７９】
以下に、実施例３を用いたダイエット試験について説明する。
（試験例３）
【００８０】
３２〜５６才の男性２０例を対象に、ダイエット食品粉末の試験を行なった。
【００８１】
すなわち、２０例に前記の実施例３の検体を１日当たり３ｇずつ、１４日間、夕食前１０分に、水道水に分散して摂食させた。摂取前と摂取１４日の体重、体脂肪率（タニタ体脂肪計インナースキャン５０Ｖ）及び腹囲（メジャーによる計測）を計測して比較した。同時に、食事カロリー量をモニターした。
【００８２】
その結果、摂取１４日の体重は、摂取前に比して平均値で２３％の減少が認められた。また、摂取前に比して平均値で３１％の減少が認められた。さらに、腹囲については摂取前に比して平均値で１６％の減少が認められた。
【００８３】
また、摂取１４日間の食事カロリーは、摂取前１４日間の値に比して平均値で、３０％減少していた。
【００８４】
一方、使用感において違和感や不都合な点は認められなかった。この結果、実施例３で得られた食品には、体重減少、体脂肪率及び腹囲の減少作用が認められた。
【産業上の利用可能性】
【００８５】
本発明である目的とする摂食中枢抑制物質は、中枢の摂食神経を抑制することから、過体重や脂肪過多による生活習慣病の患者又はその予備軍のＱＯＬを改善する。また、医療分野の産業の育成にも寄与するものである。
【００８６】
また、本発明である目的とする摂食中枢抑制物質からなる食品製剤は、食事量を減少させることから、メタボリック症候群の原因である内臓脂肪の蓄積を改善又は予防し、国民生活の質的向上に寄与するものである。