(57)【要約】【課題】非水系のクロマトグラフィーにおいて、分離対象とは別の酸性成分を添加することなく、分離対象となる酸性有機化合物を従来よりも良好に分離可能な酸性有機化合物の分離方法を提供すること。【解決手段】本発明の酸性有機化合物の分離方法は、脂溶性のある酸性有機化合物を分離対象として、非水系の展開溶媒を移動相、表面が酸性の官能基で修飾されたシリカゲルを固定相とするクロマトグラフィー法により、分離対象となる酸性有機化合物を含有する原料から、当該酸性有機化合物を分離する。シリカゲルの表面を修飾する酸性の官能基としては、スルホ基やカルボキシ基を導入すると好ましい。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
脂溶性のある酸性有機化合物を分離対象として、
非水系の展開溶媒を移動相、表面が酸性の官能基で修飾されたシリカゲルを固定相とするクロマトグラフィー法により、前記分離対象となる酸性有機化合物を含有する原料から、当該酸性有機化合物を分離する
ことを特徴とする酸性有機化合物の分離方法。
【請求項２】
前記酸性の官能基がスルホ基であり、当該スルホ基で表面が修飾されたシリカゲルを前記固定相とする
ことを特徴とする請求項１に記載の酸性有機化合物の分離方法。
【請求項３】
エポキシ基を有するシランカップリング剤でシリカゲルの表面を改質することにより、シリカゲルの表面にエポキシ基を導入するとともに、当該エポキシ基に亜硫酸を導入することにより、前記シリカゲルの表面にスルホ基を導入して、当該スルホ基で表面が修飾されたシリカゲルを前記固定相とする
ことを特徴とする請求項２に記載の酸性有機化合物の分離方法。
【請求項４】
前記シランカップリング剤は、γ‐グリシドキシプロピル基を有するものである
ことを特徴とする請求項３に記載の酸性有機化合物の分離方法。
【請求項５】
前記酸性の官能基がカルボキシ基であり、当該カルボキシ基で表面が修飾されたシリカゲルを前記固定相とする
ことを特徴とする請求項１に記載の酸性有機化合物の分離方法。
【請求項６】
アミノ基を有するシランカップリング剤でシリカゲルの表面を改質することにより、シリカゲルの表面にアミノ基を導入するとともに、当該アミノ基と無水ジカルボン酸を結合させることにより、前記シリカゲルの表面にカルボキシ基を導入して、当該カルボキシ基で表面が修飾されたシリカゲルを前記固定相とする
ことを特徴とする請求項５に記載の酸性有機化合物の分離方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、酸性有機化合物の分離方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
クロマトグラフィー法は、固定相の内部を移動相が通過する際に、移動相内に含まれる物質が物質毎に分離される特性を利用して、各種物質の分離、精製を行う方法で、医薬品、化粧品および電子材料など、様々な分野において有用な有機化合物を高純度で得るための精製方法として利用されている。
【０００３】
上述の固定相として利用される物質については、例えば、シリカゲルまたはその表面処理品、アルミナ、活性炭、イオン交換樹脂および多糖類など、様々なものが使用されている。中でも、シリカゲルは、高い表面積を有し、化学的な安定性も高いことから、実験室から工業分野まで、この方面で多くの利用が見られ、本件発明者らもシリカゲルを改質してなるクロマト分離用充填剤を既に提案している（例えば、特許文献１参照。）。
【０００４】
分離対象となる有用な有機化合物は、脂溶性有機化合物と水溶性有機化合物に大別できる。これらのうち、脂溶性有機化合物の場合は、主にシリカゲルを使用した順相クロマトグラフィーが利用される。一方、水溶性有機化合物の場合は、シリカゲルにアルキル基を有する疎水性シランカップリング剤を導入することで疎水化したシリカゲル（例えば、ＯＤＳ（オクタデシルシラン）シリカゲル）を使用した逆相クロマトグラフィーや、イオン交換樹脂を使用したイオン交換クロマトグラフィーが利用される。脂溶性有機化合物の分離も、逆相クロマトグラフィーで行われる場合もあるが、後処理の容易さから順相タイプのクロマトグラフィーが利用されることが多い。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特許２５４８８７４号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
ところで、上述したような脂溶性有機化合物については、その官能基の性質から、塩基性の脂溶性有機化合物、中性の脂溶性有機化合物および酸性の脂溶性有機化合物に分離されるが、それぞれの性質から順相クロマトグラフィーの吸着特性が大きく左右され、良好な分離結果が得られないことがある。
【０００７】
特に、分離対象が酸性の脂溶性有機化合物（以下、単に酸性有機化合物ともいう。）の場合、カルボキシ基やフェノール類などといった酸性の官能基を有し、その一部がイオン解離するため、解離状態によって吸着特性に差異が生じ、その結果、分離ピークが広がってしまい、鋭利な分離を行うことができない、という問題があった。
【０００８】
このような問題に対し、従来は、移動相となる液体中に、分離対象とは別の酸性成分（例えば、酢酸やリン酸など）を添加して、分離対象となる酸性有機化合物のイオン解離を抑えつつ、分離対象となる酸性有機化合物を分離する、といった方法も試みられている。
【０００９】
しかし、このような方法では、分離対象となる酸性有機化合物を含む分画を分取した後に、上記分離対象とは別の酸性成分を分離・除去する必要が生じるため、その分だけ煩雑な工程が必要になる、という別の問題を招いてしまう。
【００１０】
そのため、上述のような酸性有機化合物の分離・精製を行っている技術分野では、分離対象となる酸性有機化合物を、上記のような別の酸性成分を利用する従来法よりも簡単に分離できる技術の開発が望まれていた。
【００１１】
このような背景のもと、本件発明者らは、非水系のクロマトグラフィーにおいて、特に酸性有機化合物を良好に分離可能な手法について鋭意検討を重ね、その結果、特定の表面改質処理が施された成分を固定相として用いることにより、上記のような分離対象とは別の酸性成分を添加するようなことをしなくても、分離対象となる酸性有機化合物をきわめて良好に分離できることを見いだした。
【００１２】
本発明は、上記のような知見に基づいて完成されたものであり、その目的は、非水系のクロマトグラフィーにおいて、分離対象とは別の酸性成分を添加することなく、分離対象となる酸性有機化合物を従来よりも良好に分離可能な酸性有機化合物の分離方法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
以下、本発明において採用した構成について説明する。
請求項１に記載の酸性有機化合物の分離方法は、脂溶性のある酸性有機化合物を分離対象として、非水系の展開溶媒を移動相、表面が酸性の官能基で修飾されたシリカゲルを固定相とするクロマトグラフィー法により、前記分離対象となる酸性有機化合物を含有する原料から当該酸性有機化合物を分離することを特徴とする。
【００１４】
請求項２に記載の酸性有機化合物の分離方法は、請求項１に記載の酸性有機化合物の分離方法において、前記酸性の官能基がスルホ基であり、当該スルホ基で表面が修飾されたシリカゲルを前記固定相とすることを特徴とする。
【００１５】
請求項３に記載の酸性有機化合物の分離方法は、請求項２に記載の酸性有機化合物の分離方法において、エポキシ基を有するシランカップリング剤でシリカゲルの表面を改質することにより、シリカゲルの表面にエポキシ基を導入するとともに、当該エポキシ基に亜硫酸を導入することにより、前記シリカゲルの表面にスルホ基を導入して、当該スルホ基で表面が修飾されたシリカゲルを前記固定相とすることを特徴とする。
【００１６】
請求項４に記載の酸性有機化合物の分離方法は、請求項３に記載の酸性有機化合物の分離方法において、前記シランカップリング剤は、γ‐グリシドキシプロピル基を有するものであることを特徴とする。
【００１７】
請求項５に記載の酸性有機化合物の分離方法は、請求項１に記載の酸性有機化合物の分離方法において、前記酸性の官能基がカルボキシ基であり、当該カルボキシ基で表面が修飾されたシリカゲルを前記固定相とすることを特徴とする。
【００１８】
請求項６に記載の酸性有機化合物の分離方法は、請求項５に記載の酸性有機化合物の分離方法において、アミノ基を有するシランカップリング剤でシリカゲルの表面を改質することにより、シリカゲルの表面にアミノ基を導入するとともに、当該アミノ基と無水ジカルボン酸を結合させることにより、前記シリカゲルの表面にカルボキシ基を導入して、当該カルボキシ基で表面が修飾されたシリカゲルを前記固定相とすることを特徴とする。
【００１９】
以下、本発明の構成について、具体的な例示を交えながら、さらに詳細に説明する。
本発明は、シリカゲル表面のシラノール基を改質して、シラノール基の代わりに酸性の官能基を導入することで、酸性性状を有するように表面改質を行ったシリカゲルを使用する点に特徴がある。
【００２０】
シリカゲル表面に導入される酸性の官能基としては、様々な官能基を考え得るが、工業的に利用することやコスト的な面を考慮すると、スルホ基（‐ＳＯ3Ｈ）、あるいはカルボキシ基（‐ＣＯＯＨ）などを利用するのが好ましい。
【００２１】
このような酸性の官能基を有するシリカゲルそのものは既に市販されている。しかし、こうした市販品は、いずれも水系のクロマトグラフィーにおいてイオン交換体として利用されており、本発明のように、非水系のクロマトグラフィーにおいて利用されているものではない。なお、ここでいう非水系とは、移動相の展開溶媒として、実質的に水と混ざらない溶媒を利用する系のことを言う。
【００２２】
また、イオン交換体であれば酸性の官能基を有するイオン交換樹脂なども存在する。しかし、この種のイオン交換樹脂は、非水系において利用すると基材となる樹脂そのものが体積変化を起こし、固定相の特性が変動するため、本発明において利用できるものではない。
【００２３】
つまり、水系のクロマトグラフィーにおいて酸性基を有するシリカゲルやイオン交換樹脂がイオン交換体として利用される例や、分離対象となる酸性有機化合物とは別の酸性成分が添加された非水系の展開溶媒を移動相とした非水系のクロマトグラフィーといった技術は、従来例として存在したが、これらの従来例とは異なり、本発明においては、非水系の移動相を用いるものの、この移動相には上記のような別の酸性成分を添加せず、固定相として、表面が酸性の官能基で修飾されたシリカゲルを利用することで、分離対象となる酸性有機化合物を分離するのである。
【００２４】
このような分離方法とした場合、分離対象となる酸性有機化合物は、上記のような酸性基を有するシリカゲル上ではイオン解離が抑制され、イオン解離に伴う物性のばらつきが解消される。したがって、水素結合性の相互作用のみによって異なる物質が互いに分離されるため、それら異なる物質毎に良好な分離ピークを得ることができる。よって、この種の酸性有機化合物を分離する際、分離対象となる酸性有機化合物とは別の酸性成分を添加しないと、鋭利な分離ピークを得ることが難しかった従来技術に比べ、分離対象となる酸性有機化合物を効率良く分離・回収することができ、その収率を従来以上に改善することができる。また、不要な別の酸性成分を後処理で除去するような手間も不要となる。
【００２５】
ところで、以上のような方法で酸性有機化合物の分離を行うに当たって、シリカゲルにスルホ基やカルボキシ基を導入するための具体的な手法については、様々な方法を考え得るが、工業的に実施することを考慮すると、次のような方法を採用すると好ましい。
【００２６】
まず、スルホ基の導入方法については、以下のような３種の方法を考え得る。一つは、下記化学式１に例示するように、メルカプト基（‐ＳＨ）を有するシランカップリング剤を導入し、ついで過酸化水素により酸化してスルホ基に変換する方法である。
【００２７】
このようなメルカプト基を有するカップリング剤としては、メルカプトメチルメチルジエトキシシラン、３‐メルカプトプロピルメチルジメトキシシラン、３‐メルカプトプロピルトリエトキシシラン、３‐メルカプトプロピルトリメトキシシラン等を挙げることができる。
【００２８】
【化１】
2010203794.tif 000002
もう一つの方法は、下記化学式２に例示するように、エポキシ基を有するシランカップリング剤を導入し、ついでエポキシ基に亜硫酸を導入させることでスルホ基を導入する方法である。
【００２９】
このようなエポキシ基を有するシランカップリング剤としては、（３‐グリシドキシプロピル）ジメチルエトキシシラン、（３‐グリシドキシプロピル）メチルジエトキシシラン、（３‐グリシドキシプロピル）トリエトキシシラン、（３‐グリシドキシプロピル）ジメチルメトキシシラン、（３‐グリシドキシプロピル）メチルジメトキシシラン（３‐グリシドキシプロピル）トリメトキシシラン等を挙げることができる。
【００３０】
【化２】
2010203794.tif 000003
さらにもう一つの方法は、下記化学式３に例示するように、クロロスルホニル基を有するシランカップリング剤を導入し、ついで酸によりクロロスルホニル基をスルホ基に変換する方法である。クロロスルホニル基を有するシランカップリング剤としては、２‐（４クロロスルホニルフェニル）エチルトリクロロシラン等を挙げることができる。
【００３１】
【化３】
2010203794.tif 000004
これら３種の方法は、いずれもスルホ基をシリカゲル表面に導入できる点で有益な処理方法であるが、中でも上記化学式２に例示したような方法は、他の方法に比べ、比較的製造コストを抑えることができる点で好ましい。
【００３２】
一方、カルボキシ基を導入する方法については、以下のような２種の方法を考え得る。一つは、下記化学式４に例示するように、エポキシ基を酸により加水分解させジオール体とした後、過マンガン酸やクロム酸などの酸化剤で酸化してカルボン酸とする方法である。この場合、エポキシ基を有するシランカップリング剤については、スルホ基を導入する場合について例示したものと同じものが使用できる。
【００３３】
【化４】
2010203794.tif 000005
もう一つの方法は、下記化学式５に例示するように、一級アミンまたは二級アミンを有するシランカップリング剤を導入し、続いて無水ジカルボン酸と反応させる方法である。
【００３４】
このようなアミノ基を有するシランカップリング剤としては、４‐アミノブチルトリエトキシシラン、１‐アミノ‐２‐（ジメチルエトキシシリル）プロパン、Ｎ‐（２‐アミノエチル）‐３‐アミノイソブチルジメチルメトキシラン、Ｎ‐（２‐アミノエチル）‐３‐アミノイソブチルメチルジメトキシラン、（アミノエチルアミノメチル）フェネチルトリエトキシシラン、Ｎ‐（２‐アミノエチル）‐３‐アミノプロピルメチルジメトキシシラン、Ｎ‐（２‐アミノエチル）‐３‐アミノプロピルシシラントリオール、Ｎ‐（２‐アミノエチル）‐３‐アミノプロピルトリエトキシシラン、Ｎ‐（２‐アミノエチル）‐３‐アミノプロピルトリメトキシシラン、Ｎ‐（６‐アミノヘキシル）‐３‐アミノメチルトリメトキシシラン、Ｎ‐（６‐アミノヘキシル）‐３‐アミノメチルトリエトキシシラン、Ｎ‐（２‐アミノエチル）‐１１‐アミノウンデシルトリメトキシシラン、
アミノメチルトリメトキシシラン、３‐（ｍ‐アミノフェノキシ）プロピルトリメトキシシラン、ｍ‐アミノフェニルトリメトキシシラン、ｐ‐アミノフェニルトリメトキシシラン、アミノフェニルトリメトキシシラン、Ｎ‐３‐〔アミノ（ポリプロピレンオキシ）〕アミノプロピルトリメトキシシラン、３‐アミノプロピルジイソプロピルエトキシシラン、３‐アミノプロピルメチルビス（トリメチルシロキシ）シラン、３‐アミノプロピルジメチルエトキシシラン、３‐アミノプロピルメチルジエトキシシラン、アミノプロピルシラントリオール、３‐アミノプロピルトリエトキシシラン、３‐アミノプロピルトリメトキシシラン、１１‐アミノウンデシルトリエトキシシラン、１，３‐ビス（２‐アミノエチルアミノメチル）‐テトラメチルジシロキサン、１，３‐ビス（２‐アミノプロピル）‐テトラメチルジシロキサン、ｎ‐ブチルアミノプロピルトリメトキシシラン、ｔ‐ブチルアミノプロピルトリメトキシシラン、Ｎ‐メチルアミノプロピルメチルジメトキシシラン、Ｎ‐メチルアミノプロピルトリメトキシシラン、Ｎ‐フェニルアミノメチルトリエトキシシラン、Ｎ‐フェニルアミノプロピルトリメトキシシラン等を挙げることができる。
【００３５】
また、無水ジカルボン酸としては、無水コハク酸、無水マレイン酸、グルタル酸無水物等を挙げることができる。
【００３６】
【化５】
2010203794.tif 000006
これら２種の方法は、いずれもカルボキシ基をシリカゲル表面に導入できる点で有益な処理方法であるが、中でも上記化学式５に例示したような方法は、他の方法に比べ、比較的製造コストを抑えることができる点で好ましい。
【００３７】
さらに、基材として使用するシリカゲルについては、通常クロマトグラフィー用に使用される表面積、細孔容積、平均細孔径および平均粒子径のものであれば、いずれも利用可能である。代表的な物性を例示すれば、例えば、表面積として２０ｍ2／ｇから７００ｍ2／ｇ、細孔容積として０．３ｍＬ／ｇから１．５ｍＬ／ｇ、平均細孔径として３ｎｍから１００ｎｍ、平均粒子径としては３μｍ、５μｍ、１０μｍ、３０μｍ、６０μｍ、１００μｍ、５００μｍなどが好適である。
【００３８】
加えて、本発明の分離方法を実施するに当たっては、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、カートリッジ、またはガラスカラムによる中圧液体クロマトグラフィー、フラッシュクロマトグラフィーおよびオープンカラムクロマトグラフィーなどを利用できる。特にｐＨ調整のためのバッファーを使用することなく、分離対象となる酸性有機化合物を分離することができるので、本発明は、分離精製を主とした分取液体クロマトグラフィーに利用するのに好適である。
【図面の簡単な説明】
【００３９】
【図１】実施例２のスルホン化シリカを使用したクロマトグラム。
【図２】実施例４のスルホン化シリカを使用したクロマトグラム。
【図３】実施例６のカルボキシル化シリカを使用したＨＰＬＣクロマトグラム。
【図４】比較例１のシリカゲルを使用したＨＰＬＣクロマトグラム。
【発明を実施するための形態】
【００４０】
次に、本発明の実施形態について、いくつかの具体例を挙げて説明する。なお、以下に例示する具体例は、本発明の特徴とするところを、より具体的かつ詳細に説明するために例示するものであるが、本発明が以下に説明する具体的な例だけに限定されるものではないのはもちろんである。
【００４１】
〔実施例１〕…スルホン化シリカゲルの製造（その１）
市販の球状シリカゲル（商品名：スーパーマイクロビーズシリカゲル、富士シリシア化学株式会社製、グレード：ＳＭＢ１００−５μｍ）１０ｇを１８０℃で乾燥したのち、冷却器、撹拌機を設置した２００ｍＬ三つ口フラスコに入れた。
【００４２】
トルエン１００ｍＬを加え、スラリーを撹拌しながらγ‐グリシドキシプロピルトリメトキシシラン２．１ｇを加え、窒素雰囲気下で１１０℃、３時間加熱撹拌した。冷却後、スラリーを吸引ろ過し、シリカゲルをトルエン２００ｍＬ、メチルアルコール２００ｍＬで洗浄した後、８０℃で１２時間乾燥させ、エポキシ化シリカゲルを１１．２ｇ得た。
【００４３】
３００ｍＬビーカーに１ｍｏｌ／Ｌ亜硫酸ナトリウム水溶液４０ｍＬを入れ、エポキシ化シリカゲル１０ｇを加え、８０℃で５時間撹拌した。常温まで冷却後、スラリーを吸引ろ過し、次いで０．５ｍｏｌ／Ｌ塩酸６０ｍＬをゆっくり通液させた。
【００４４】
次いで、イオン交換水６０ｍＬ、メチルアルコール４０ｍＬで洗浄した後、８０℃で１２時間乾燥させ、スルホン化シリカゲル１０．８ｇを得た。炭素分析でＣ＝４．０％、ＮａＯＨ滴定でＳＯ3Ｈ量は０．４０ｍｍｏｌ／ｇであった。
【００４５】
〔実施例２〕…スルホン化シリカゲルカラムの作成と評価（その１）
上記実施例１で得られたスルホン化シリカゲル試料２．７ｇを、グリセリン／メチルアルコール混合溶液（１：２）３５ｍＬに加え、超音波で分散させ、内径４．６ｍｍ×長さ２５０ｍｍのステンレスカラムに３０Ｍｐａの圧力で充填した。ＨＰＬＣ装置に接続して以下の条件でカルボン酸類の分析を行った。
【００４６】
［条件］
移動相：１０％イソプロパノール：ｎ‐ヘキサン（１：９）（Ｖ／Ｖ）
流速：１ｍＬ／ｍｉｎ、検出：ＵＶ２５４ｎｍ
試料：１．ｏ‐トルイル酸、２．安息香酸、３．ｔｒａｎｓ‐桂皮酸、
４．サリチル酸、５．フタル酸
結果として、図１のクロマトグラムに示されるように良好な分離結果が得られた。図１中に示した数字は、それぞれ１．ｏ‐トルイル酸、２．安息香酸、３．ｔｒａｎｓ‐桂皮酸、４．サリチル酸、５．フタル酸のピークを表す。このように、上記のようなスルホン化シリカゲルを固定相に利用すれば、酸性有機化合物を良好に分離・回収することができる。
【００４７】
〔実施例３〕…スルホン化シリカゲルの製造（その２）
市販の球状シリカゲル（商品名：スーパーマイクロビーズシリカゲル、富士シリシア化学株式会社製、グレードＳＭＢ１００−２０／４５μｍ）１００ｇを１８０℃で乾燥したのち、冷却器、撹拌機を設置した５００ｍＬ三つ口フラスコに入れた。
【００４８】
トルエン５００ｍＬを加え、スラリーを撹拌しながらγ‐グリシドキシプロピルトリメトキシシラン２１ｇを加え、窒素雰囲気下で１１０℃、３時間加熱撹拌した。冷却後、スラリーを吸引ろ過し、シリカゲルをトルエン２０００ｍＬ、メチルアルコール２０００ｍＬで洗浄した後、８０℃で１２時間乾燥させ、エポキシ化シリカゲルを１１０ｇ得た。
【００４９】
３リットルビーカーに１ｍｏｌ／Ｌ亜硫酸ナトリウム水溶液４００ｍＬを入れ、エポキシ化シリカゲルを１００ｇを加え、８０℃で５時間撹拌した。常温まで冷却後、スラリーを吸引ろ過し、次いで０．５ｍｏｌ／Ｌ塩酸６００ｍＬをゆっくり通液させた。
【００５０】
次いで、イオン交換水６００ｍＬ、メチルアルコール４００ｍＬで洗浄した後、８０℃で１２時間乾燥させ、スルホン化シリカゲル１０８ｇを得た。炭素分析でＣ＝５．０％、ＮａＯＨ滴定でＳＯ3Ｈ量は０．３６ｍｍｏｌ／ｇであった。
【００５１】
〔実施例４〕…スルホン化シリカゲルカラムの作成と評価（その２）
実施例３で得られたスルホン化シリカゲル試料３０ｇを使用して、内径２８ｍｍのカートリッジカラムに乾式充填した（長さ１００ｍｍ）。分取用液体クロマトグラフィー装置に接続して以下の条件でカルボン酸類の分取を行った。
【００５２】
［条件］
移動相：酢酸エチル：ｎ‐ヘキサン（１５：８５）（Ｗ／Ｗ）
流速：２８ｍＬ／ｍｉｎ、検出：ＵＶ２５４ｎｍ
試料：１．ベンゼン、２．サリチル酸、３．ｔｒａｎｓ‐桂皮酸
結果として、図２のクロマトグラムに示されるように良好な分離が得られた。図２中に示した数字は、それぞれ１．ベンゼン、２．サリチル酸、３．ｔｒａｎｓ‐桂皮酸のピークを表す。このように、上記のようなスルホン化シリカゲルを固定相に利用すれば、酸性有機化合物を良好に分離・回収することができる。
【００５３】
〔実施例５〕…カルボキシル化シリカゲルの製造
球状シリカゲル（商品名：スーパーマイクロビーズシリカゲル、富士シリシア化学株式会社製、グレード：ＳＭＢ１００−５μｍ）１０ｇを１８０℃で乾燥したのち、冷却器、撹拌機を設置した２００ｍＬ三つ口フラスコに入れた。
【００５４】
トルエン１００ｍＬを加え、スラリーを撹拌しながらγ‐アミノプロピルトリエトキシシラン２．２ｇを加え、窒素雰囲気下で１１０℃、３時間加熱撹拌した。冷却後、スラリーを吸引ろ過し、シリカゲルをトルエン２００ｍＬ、メチルアルコール２００ｍＬで洗浄した後、８０℃で１２時間乾燥させ、アミノ化シリカゲルを１１ｇ得た。
【００５５】
３００ｍＬビーカーに３％コハク酸アセトニトリル溶液４０ｇを入れ、エポキシ化シリカゲルを１０ｇ加え、室温で３時間撹拌した。その後スラリーを吸引ろ過し、次いでメチルアルコール６０ｍＬで洗浄した後、８０℃で１２時間乾燥させカルボキシル化シリカゲル１０．４ｇを得た。炭素分析でＣ＝７．１％、Ｎ＝１．３％、またＮａＯＨを加え、ＨＣｌ逆滴定でＣＯＯＨ量は０．３９ｍｍｏｌ／ｇであった。
【００５６】
〔実施例６〕…カルボキシル化シリカゲルカラムの作成と評価
実施例５で得られたカルボキシル化シリカゲル試料２．７ｇを採取し、グリセリン／メチルアルコール混合溶液（１：２）３５ｍＬに加え、超音波で分散させ、内径４．６ｍｍ×長さ２５０ｍｍのステンレスカラムに３０Ｍｐａの圧力で充填した。ＨＰＬＣ装置に接続して、以下の条件でカルボン酸類の分析を行った。
【００５７】
［条件］
カラム：カルボキシル化シリカゲル
（シリカゲル細孔径１０ｎｍ、粒子径５μｍベース）
カラムサイズ：内径４．６ｍｍ×長さ２５０ｍｍ  ステンレスカラム
移動相：１０％イソプロパノール：ｎ‐ヘキサン（１：９）（Ｖ／Ｖ）
流速：１ｍＬ／ｍｉｎ、検出：ＵＶ２５４ｎｍ
試料：１．ｏ‐トルイル酸、２．安息香酸、３．ｔｒａｎｓ‐桂皮酸
結果として、図３のクロマトグラムに示されるように良好な分離が得られた。図３中に示した数字は、それぞれ１．ｏ‐トルイル酸、２．安息香酸、３．ｔｒａｎｓ‐桂皮酸のピークを表す。このように、上記のようなカルボキシル化シリカゲルを固定相に利用すれば、酸性有機化合物を良好に分離・回収することができる。
【００５８】
〔比較例１〕
実施例６と同様の分離試験をシリカゲルカラムを使用して行った。
［条件］
カラム：シリカゲル（細孔径１０ｎｍ、粒子径５μｍ）
カラムサイズ：内径４．６ｍｍ×長さ２５０ｍｍ  ステンレスカラム
移動相：１０％イソプロパノール：ｎ‐ヘキサン（１：９）（Ｖ／Ｖ）
流速：１ｍＬ／ｍｉｎ、検出：ＵＶ２５４ｎｍ
試料：１．ｏ‐トルイル酸、２．安息香酸、３．ｔｒａｎｓ‐桂皮酸
結果として、図４のクロマトグラムに示されるように良好な分離は行われなかった。
【００５９】
以上、本発明の実施形態について説明したが、本発明は上記の具体的な一実施形態に限定されず、この他にも種々の形態で実施することができる。
例えば、上記実施形態では、特定の物性を持つシリカゲルを利用してスルホン化およびカルボキシル化を行っていたが、クロマトグラフィー用として利用可能なシリカゲルであれば任意に利用することができる。
【００６０】
また、上記実施形態では、移動相の展開溶媒について特定の非水系溶媒を利用していたが、これも他の非水系溶媒を利用してもよく、また、２種以上の非水系溶媒を混合して用いる場合には、その配合比を変更してもよい。
【００６１】
さらに、上記実施形態では特定の方法でシリカゲルをスルホン化する例、およびカルボキシル化する例を示したが、これについても、課題を解決するための手段の欄で説明した通り、他の方法でスルホン化またはカルボキシル化を行ってもよい。
【図１】
2010203794.tif 000007
【図２】
2010203794.tif 000008
【図３】
2010203794.tif 000009
【図４】
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