(57)【要約】      （修正有）【課題】ケモカインが関与する免疫及び炎症疾患の予防及び治療のための有効な薬剤、及び、治療対象におけるケモカイン産生を阻害する方法等を提供する。【解決手段】一般式（１）で示されるピロール化合物、その塩又はその水和物を有効成分として含有するケモカイン産生阻害剤：2010173956.tif 000006（式（１）中、置換基Ｒ１は水素原子及び置換されていても良いアルキル基から成る群から選択され、置換基Ｒ２、Ｒ３、及び、Ｒ４は、夫々、水素原子及びハロゲン原子から成る群から選択される。）。【選択図】図１
2010173956.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式（１）で示されるピロール化合物、その塩又はその水和物を有効成分として含有するケモカイン産生阻害剤：
【化１】
2010173956.tif 000005
（式（１）中、置換基Ｒ１は水素原子及び置換されていても良いアルキル基から成る群から選択され、置換基Ｒ２、Ｒ３、及び、Ｒ４は、夫々、水素原子及びハロゲン原子から成る群から選択される）。
【請求項２】
一般式（１）において、置換基Ｒ１はｎ‐ブチル基，ｎ‐ペンチル基，ｎ‐ヘキシル基，ｎ‐ヘプチル基、及びｎ‐オクチル基から成る群から選択され、置換基Ｒ２、Ｒ３、及び、Ｒ４は、夫々、塩素原子及び臭素原子から成る群から選択される、請求項１記載のケモカイン産生阻害剤。
【請求項３】
ピロール化合物が（３−クロロ−５−ヘキシル−２，６−ジヒドロキシ−フェニル）−（４，５−ジクロロ−１Ｈ−ピロール−２−イル）−メタノン又はその誘導体である、請求項２記載のケモカイン産生阻害剤。
【請求項４】
ケモカインが、CXC 又はCCサブファミリーに属する、請求項１〜３のいずれか一項にケモカイン産生阻害剤。
【請求項５】
ケモカインがIL-8 又はMCP-1である、請求項４記載のケモカイン産生阻害剤。
【請求項６】
抗炎症性肺疾患又は抗関節炎剤としての用途を有する、請求項１〜５のいずれか一項に記載のケモカイン産生阻害剤。
【請求項７】
請求項１〜６記載のケモカイン産生阻害剤を対象に投与することを含む、ケモカインが関与する免疫及び炎症疾患の予防及び治療方法。
【請求項８】
ケモカインが関与する免疫及び炎症疾患が炎症性肺疾患又は関節炎である、請求７記載の方法。
【請求項９】
対象が哺乳動物である、請求項８記載の方法。
【請求項１０】
対象がヒトである、請求項９記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ピロール化合物を有効成分として含有するケモカイン産生阻害剤、及び、ピロール化合物を治療対象に投与することを含む、該治療対象におけるケモカイン産生を阻害する方法等に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
ケモカイン(chemokine)は、Gタンパク質共役受容体を介してその作用を発現する塩基性タンパク質であり、サイトカインの一群である。ケモカインは低分子量(8-14kDa程度)のタンパク質であり、特定の白血球に作用して血管内から炎症組織内への白血球の遊走をもたらすことが知られている。現在までにインターロイキン‐８ （Interleukin-8:IL-8）及びMCP-1 (Monocyte ChemotacticProtein -1) 等の５０種類以上のケモカインが同定されており、これらはいずれも良く保存された４つのシステイン残基を有しており、Ｎ末端側の２個のシステイン残基が形成するモチーフに基づき、CXC, CC, CX3C及びCの４つのサブファミリーに分類されている。因みに、IL-8及びMCP-1は、夫々、CXC 及びCCサブファミリーに属している。
【０００３】
ケモカインは生体の炎症反応に重要な役割を担っており、正常組織では検出されずに炎症部位で検出され、白血球の組織炎症部位への浸潤を促進させ、炎症に惹起に関与する。例えば、慢性下気道感染症、間質性肺炎、肺線維症などのような炎症性肺疾患、急性及び慢性リューマチ関節炎の患者には、IL-8 及びMCP-1の両方又はいずれか一方のケモカインの産生が亢進していることが知られている（非特許文献１）。従って、IL-8 及びMCP-1のようなケモカインの産生を抑制・阻害する活性・作用を有する化合物は、抗炎症性肺疾患及び抗関節炎剤として用いられるものと考えられる。
【０００４】
ところで、本願発明のピロール化合物の一部と同じ化合物を有効成分とする除草剤、殺菌剤、駆虫剤、殺線虫剤および／または抗コクシジウム剤に関する発明が、WO99/53758（特許文献１）に記載されている（参考例１５に記載の化合物No.47）。又、同化合物と同一の物理化学データを有する化合物が、放線菌から抗菌物質として単離され、その抗菌活性及び除草活性が記載されている（非特許文献２）。しかしながら、これらの文献には、本願発明のピロール化合物がケモカイン産生を阻害・抑制することに関しては何等教示又は示唆されていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】WO99/53758
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Seminars in Arthritis and Rheumatism, 26, 526-538 (1996); Cytokine and Growth Factor Reviews, 9, 9-23 (1998)
【非特許文献２】Planta, 216, 162-167 (2002)
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明が解決しようとする問題点は、ケモカインが関与する免疫及び炎症疾患の予防及び治療のための有効な薬剤等を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者は、ピロール化合物がケモカイン産生を有意に阻害・抑制する作用を有することを始めて見出し、本発明を完成した。即ち、本発明は以下の態様に係る。
【０００９】
［態様１］一般式（１）で示されるピロール化合物、その塩又はその水和物を有効成分として含有するケモカイン産生阻害剤：
【００１０】
【化１】
2010173956.tif 000003
（式（１）中、置換基Ｒ１は水素原子及び置換されていても良いアルキル基から成る群から選択され、置換基Ｒ２、Ｒ３、及び、Ｒ４は、夫々、水素原子及びハロゲン原子から成る群から選択される。）。
［態様２］一般式（１）において、置換基Ｒ１はｎ‐ブチル基，ｎ‐ペンチル基，ｎ‐ヘキシル基，ｎ‐ヘプチル基、及びｎ‐オクチル基から成る群から選択され、置換基Ｒ２、Ｒ３、及び、Ｒ４は、夫々、塩素原子及び臭素原子から成る群から選択される、態様１記載のケモカイン産生阻害剤。
［態様３］ピロール化合物が（３−クロロ−５−ヘキシル−２，６−ジヒドロキシ−フェニル）−（４，５−ジクロロ−１Ｈ−ピロール−２−イル）−メタノン又はその誘導体である、態様２記載のケモカイン産生阻害剤。
［態様４］ケモカインが、CXC 又はCCサブファミリーに属する、態様１〜３のいずれか一項にケモカイン産生阻害剤。
［態様５］ケモカインがIL-8 又はMCP-1である、態様４記載のケモカイン産生阻害剤。
［態様６］抗炎症性肺疾患又は抗関節炎剤としての用途を有する、態様１〜５のいずれか一項に記載のケモカイン産生阻害剤。
［態様７］態様１〜６記載のケモカイン産生阻害剤を対象に投与することを含む、ケモカインが関与する免疫及び炎症疾患の予防及び治療方法。
［態様８］ケモカインが関与する免疫及び炎症疾患が炎症性肺疾患又は関節炎である、請求７記載の方法。
［態様９］対象が哺乳動物である、態様８記載の方法。
［態様１０］対象がヒトである、態様９記載の方法。
【発明の効果】
【００１１】
セラストラマイシンＡに代表される本願発明に係るピロール化合物は、IL-8 及びMCP-1のようなケモカイン産生を有意に阻害・抑制する作用を有する。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】図１は、ピロール化合物がIL-8 及びMCP-1産生を有意に阻害・抑制する作用を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
本発明のケモカイン産生阻害剤の有効成分は、一般式（１）で示されるピロール化合物、その塩又はその水和物である。
【００１４】
【化１】
2010173956.tif 000004
【００１５】
一般式（１）において、置換基Ｒ１は水素原子及び置換されていても良いアルキル基から成る群から選択され、置換基Ｒ２、Ｒ３、及び、Ｒ４は、夫々、水素原子、及びハロゲン原子から成る群から選択される。
【００１６】
更に、一般式（１）において、置換基Ｒ１は、炭素数４〜１０個のアルキル基、特に、直鎖アルキル基、例えば、ｎ‐ブチル基，ｎ‐ペンチル基，ｎ‐ヘキシル基，ｎ‐ヘプチル基，及びｎ‐オクチル基から成る群から選択され、置換基Ｒ２、Ｒ３、及び、Ｒ４は、夫々、塩素原子及び臭素原子から成る群から選択されることが好ましい。
【００１７】
上記ピロール化合物は、例えば、特開平９−５９２４９号公報に記載の方法等の当業者に公知の任意の方法で合成することができる。該ピロール化合物の一具体例として、（３−クロロ−５−ヘキシル−２，６−ジヒドロキシ−フェニル）−（４，５−ジクロロ−１Ｈ−ピロール−２−イル）−メタノン（セラストラマイシンＡ）又はその誘導体を挙げることが出来る。この化合物の物理化学的特性も特開平９−５９２４９号公報に記載されている。
【００１８】
本発明における塩としては、硫酸、塩酸、燐酸などの鉱酸との塩、酢酸、シュウ酸、乳酸、酒石酸、フマール酸、マレイン酸、メタンスルホン酸などの有機酸との塩、トリメチルアミン、メチルアミンなどのアミンとの塩、またはナトリウムイオン、カリウムイオン、カルシウムイオンなどの金属イオンとの塩などの、当業者に公知の任意の塩を挙げることが出来る。
【００１９】
ケモカインは５０種類以上のケモカインが同定されており、Ｎ末端側の２個のシステイン残基が形成するもモチーフに基づき、CXC, CC, CX3C及びCの４つのサブファミリーに分類されている。以下の実施例に示したIL-8及びMCP-1は、夫々、CXC 及びCCサブファミリーに属している。
【００２０】
慢性下気道感染症、間質性肺炎、肺線維症などのような炎症性肺疾患、急性及び慢性リューマチ関節炎の患者には、IL-8 及びMCP-1の両方又はいずれか一方のケモカインの産生が亢進していることが知られている。従って、本発明のケモカイン産生阻害剤は、例えば、抗炎症性肺疾患及び抗関節炎剤のような、このようなケモカインが関与する免疫及び炎症疾患に対する有効な薬剤となる。
【００２１】
本発明は更に、上記のケモカイン産生阻害剤を対象に投与することを含む、ケモカインが関与する免疫及び炎症疾患の方法に係るものである。予防及び治療の対象の一例として、ヒト等の霊長類を含む哺乳動物を挙げることが出来る。
【００２２】
本発明のケモカイン産生阻害剤は有効成分として上記のピロール化合物を薬理学上の有効量含む。従って、本発明は、本発明のケモカイン産生阻害剤を対象に投与することを含む、ケモカインが関与する免疫及び炎症疾患の予防及び治療方法にも係る。
【００２３】
例えば、本発明のケモカイン産生阻害剤（組成物）には、その使用目的、ピロール化合物の種類・量、形態等の諸条件を考慮して、投与対象においてケモカイン産生を有功に阻害・抑制するに十分な量の本発明の上記のピロール化合物を薬理学上の有効量として含有させることが出来る。例えば、該組成物重量当たり、０．０１〜５０重量％、好ましくは、０．１〜２０重量％の割合で含有させることができる。
【００２４】
本発明の組成物には、有効成分である上記のピロール化合物のほかに、製剤用担体又は補助剤として当業者に公知の任意の物質が含まれていても良い。尚、かかる物質は上記のピロール化合物と実質的に反応しない物質であることが必要である。
【００２５】
このような製剤用担体又は補助剤の具体的としては、例えば、乳糖、ブドウ糖、マンニット、デキストリン、シクロデキストリン、でん粉、ショ糖、メタ珪酸アルミン酸マグネシウム、合成ケイ酸アルミニウム、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ヒドロキシプロピルデンプン、カルボキシメチルセルロースカルシウム、イオン交換樹脂、メチルセルロース、ゼラチン、アラビアゴム、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、軟質無水ケイ酸、ステアリン酸マグネシウム、タルク、トラガント、ベントナイト、ビーガム、酸化チタン、ソルビタン脂肪酸エステル、ラウリル硫酸ナトリウム、グリセリン、脂肪酸グリセリンエステル、精製ラノリン、グリセロゼラチン、ポリソルベート、マクロゴール、植物油、ろう、流動パラフィン、白色ワセリン、フルオロカーボン、非イオン性界面活性剤、プロピレングルコール、水等が挙げられる。
【００２６】
本発明の組成物は投与経路、患者の症状、年齢等に応じて、任意の剤型をとることが可能である。例えば、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、シロップ剤、懸濁剤、坐剤、軟膏、クリーム剤、ゲル剤、貼付剤、注射剤等が挙げられる。これらの製剤は常法に従って調製することが出来る。なお、液体製剤にあっては、適用に際して、水又は他の適当な溶媒に溶解又は懸濁する形であってもよい。また錠剤、顆粒剤を、周知の方法でコーティングしてもよい。注射剤の場合には、上記のピロール化合物を水に溶解させて調製されるが、必要に応じて生理食塩水あるいはブドウ糖溶液に溶解させてもよく、また緩衝剤や保存剤を添加してもよい。
【００２７】
本発明のケモカイン産生阻害剤は、当業者に公知の任意の投与経路、例えば、経口投与、非経口投与、及び直腸内投与等で投与することが出来る。本発明のケモカイン産生阻害剤に含まれるピロール化合物の投与量は、投与方法、患者の症状、年齢等に応じて当業者が適宜決めることが出来るが、対象がヒトの場合、例えば、体重当たり、通常1回０．１〜３０mg／kg、好ましくは、１〜１０mg／kgを1日当たり１回 〜複数回である。
【実施例１】
【００２８】
以下、実施例に則して本発明を具体的に説明するが、本発明の技術的範囲はこれらの記載によって何等制限されるものではない。
【００２９】
IL-8及びMCP-1産生抑制作用
96ウェルプレートで培養したヒト臍帯血管内皮細胞（HUVEC）にピロール化合物（セラストラマイシンＡ）を0.01、0.03、0.1 μg/mlの濃度で加え、37℃で1.5時間培養した。続いてヒトTNF-α（最終濃度 1 ng/ml）を添加し37℃で12時間培養した後、培養液を採取した。培養液中のIL-8及びMCP-1濃度をELISAキット（R&D systems）で測定した。IL-8及びMCP-1の絶対量を定量するために、ELISAキット添付のIL-8またはMCP-1を希釈し測定することにより検量線を作成し、培養液中のIL-8及びMCP-1の濃度を算出した。なお、サイトカイン産生抑制のポジティブコントロールとして、Dexamethazone（10及び100 μg/ml）及び5-Z-7-oxo-zeaenol（0.1及び 0.01 μg/ml）を使用し、ピロール化合物と同時に評価した。試験結果を図１に培養液中のIL-8及びMCP-1濃度で示す。
【産業上の利用可能性】
【００３０】
本願発明に係るセラストラマイシンＡに代表されるピロール化合物は、IL-8 及びMCP-1のようなケモカイン産生を有意に阻害・抑制する作用を有するので、抗炎症性肺疾患及び抗関節炎剤に有効成分として有用である。
【図１】
2010173956.tif 000007