(57)【要約】      （修正有）【課題】植物個体への障害が少なく入手容易な天然資源を用いて得られる新規な抗アレルギー剤の提供。【解決手段】キリンケツヤシ樹脂の抽出物を有効成分とする抗アレルギー剤、並びに該抽出物からの分離生成物である下記化合物：2010173939.tif 000019等から選択されるフェノール誘導体。好ましい抽出溶媒はアルコール類、酢酸エステル類、ケトン類、アルカン類またはそれらの混合物であり、該化合物の分離はシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＳｉｇｅｌＣＣ）により行う。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
キリンケツヤシ（Daemonorops draco）樹脂の抽出物を有効成分とする抗アレルギー剤。
【請求項２】
キリンケツヤシ（Daemonorops draco）樹脂の抽出物が、有機溶媒の抽出エキスまたはその分離生成物である請求項１に記載の抗アレルギー剤。
【請求項３】
有機溶媒がアルコール類、酢酸エステル類、ケトン類、アルカン類またはそれらの混合物である請求項２記載の抗アレルギー剤。
【請求項４】
分離生成物が下記化合物ＤＤ−１〜ＤＤ−６から選択されるいずれかの化合物である請求項２に記載の抗アレルギー剤。
【化１】
2010173939.tif 000015
【化２】
2010173939.tif 000016
【請求項５】
下記化合物ＤＤ−３〜ＤＤ−６から選択されるフェノール誘導体。
【化３】
2010173939.tif 000017
【化４】
2010173939.tif 000018
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は抗アレルギー剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
キリンケツヤシ（麒麟血椰子；Daemonorops draco）は、つる性のヤシ科（Arecaceae）植物に分類され、スマトラ、ボルネオ、マレー半島などに分布している。本植物の直径２ｃｍほどの球形果実から分泌された紅色樹脂を塊状に固めたものを、中国では麒麟血あるいは血竭、ヨーロッパではDragon’s bloodと呼び、ニス、香料、染料として使うほか、外傷による止血や、びらんの治療あるいは活血止痛の目的で民間薬として用いられてきた（非特許文献１）。
【０００３】
麒麟血に含まれる化学成分については、１９３０年代より，その赤色色素に関する研究がBrockmann、Robertsonらにより始められ、キノン類であるdracorhodinおよびdracorubinが単離報告されており（非特許文献２，３）、後に、両化合物に抗菌活性（非特許文献４）、dracorhodin過塩素酸塩にはアポトーシス誘導作用が見出されている（非特許文献５〜７）。また、その後半世紀以上にわたり、その芳香族成分に関する更なる研究が行なわれ、キノン類、レトロカルコン、フラバンなど（非特許文献８〜１０）の他，セコビフラボノイド（非特許文献１１）、ベンゾジオキセピン誘導体（非特許文献１２）、セコトリフラボノイド（非特許文献１３）、Ａ型デオキシプロアントシアニジン（非特許文献１４）など，フラバンを基本骨格に有するコンプレックスフラボノイドの単離が報告されており、いくつかの化合物には生物活性が見出されている。以上のように、キリンケツ樹脂は天然物として特異な構造を有する多くの芳香族化合物を含んでいるため、本樹脂のさらなる成分研究により、未知の化合物の単離が期待できる。
【０００４】
また、果実や樹脂は、その他の部位に比べ植物個体への障害が少なく入手できる天然資源であり，そこに含まれる有用化合物の探索は薬用資源の枯渇が問題となっている近年、薬用資源の確保や種の保護の観点からも有用だと考えられる。そこで，有用な化合物を探索し解明することで，本樹脂のさらなる有効活用を図ることが期待できる。
【０００５】
一方、花粉症やアトピー性皮膚炎などのアレルギー性疾患が社会的問題になって久しいが、これら免疫系にかかわる疾病の予防、治療に対する有効な医薬品を開発することは今なお重要な課題である。現在、その治療にはヒスタミン、プロスタグランジン、ロイコトリエン、トロンボキサンなどのケミカルメディエーターの有利抑制薬、合成阻害薬および拮抗薬の他、副腎皮質ステロイド薬が用いられているが、根本的な予防または治療法ではなく副作用も懸念される。このような現在臨床に用いられている抗アレルギー薬だけでは、今なお増え続ける多種多様な免疫疾患に対応することは困難であり、その予防や治療には、新しい取り組みが必要とされる。これまでのアレルギーに関する分子レベルでの研究から、アレルギーに関する個々の細胞はそれぞれ独立して反応するのではなく、相互に影響しあいながらかつ経時的にシステムで展開することが明らかになっており、アレルギー抑制物質を天然から探索するためには、生体内でのさまざまな反応を総合的に評価できる実験モデルを考案することが望まれる。
【０００６】
このような考えのもと、卵白リゾチーム（ＨＥＬ）を用いて、高原特異的にＩｇＥ抗体依存性の重篤なＩ型アレルギー（アナフィラキシー）を短期間に誘発するモデルマウスが作製され（非特許文献１５）、数種のｉｎ  ｖｉｖｏアッセイ法やスクリーニング法が確立され、天然から多くのアレルギー抑制物質が探索されてきた。その過程でＨＥＬ感作後、すなわちアレルギーのプロモーションの段階で末梢血管の血流量が顕著に低下する現象が見出されている。そして、このＨＥＬ感作による血流量低下を指標として、天然資源より新しいメカニズムを有するアレルギー予防薬のリード化合物探索を目的とした新規アッセイ法が確立された（非特許文献１６）。また、本血流量低下の詳細なメカニズムを解析するとともに、数種の植物から新規活性物質を見出した（非特許文献１７）。さらに、駆お血剤として臨床応用される代表的な漢方処方や生薬も本法で評価され、本法が、駆お血薬の探索にも有用であることが明らかにされている（非特許文献１７，１８，１９）。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】難波恒雄  原色和漢薬図鑑（下）Ｐ１９４  保育社  昭和５５発刊
【非特許文献２】Ｂｅｒ．Ｄｔｓｃｈ．Ｃｈｅｍ．Ｇｅｓ．Ｂ  ７６Ｂ，７５１−７６３（１９４３）
【非特許文献３】Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１８８２−１８８４（１９５０）
【非特許文献４】Ｊ．Ｎａｔ．Ｐｒｏｄ．，４５，（５），６４６−６４８（１９８２）
【非特許文献５】Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｓｃｉ．（Ｔｏｋｙｏ，Ｊｐｎ．），９５，（２），  ２７３−２８３（２００４）
【非特許文献６】Ｂｉｏｌ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．，２８，（２），２２６−２３２（２００５）
【非特許文献７】Ｊ．Ａｓｉａｎ  Ｎａｔ．Ｐｒｏｄ．Ｒｅｓ．，８，（４），３３５−３４３（２００６）
【非特許文献８】Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｃ，（２３），３９６７−３９７０（１９７１）
【非特許文献９】Ｎａｔ．Ｐｒｏｄ．Ｒｅｓ．，Ｐａｒｔ  Ｂ，２１，（４），３７７−３８０（２００７）
【非特許文献１０】Ｃｏｎｖ．Ｉｎｔ．Ｐｏｌｉｆｅｎｏｌｉ，［Ｒｅｌａｚ．Ｃｏｍｕｎ．］，２００−２０５（１９７５）
【非特許文献１１】Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，Ｐｅｒｋｉｎ  Ｔｒａｎｓ．１，（１４），１５７０−１５７６（１９７６）
【非特許文献１２】Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｅｓ，２９，（６），１１１９−１１２５（１９８９）
【非特許文献１３】Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，Ｐｅｒｋｉｎ  Ｔｒａｎｓ．１，（１０），  ２６３７−２６４０（１９９０）
【非特許文献１４】Ｊ．Ｎａｔ．Ｐｒｏｄ．，６０，（１０），９７１−９７５（１９９７）
【非特許文献１５】Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｌｅｔｔ．，３，５７−６１（１９８１）
【非特許文献１６】Ｂｉｏｌ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．，２８，１４９０−１４９５（２００５）
【非特許文献１７】薬学雑誌、１２３，１７２−１７５（２００３）
【非特許文献１８】日本薬学会第１２４年会要旨集、２，ｐ１１５（２００４）
【非特許文献１９】Ｂｉｏｌ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．，２８，１７８６−１７９０（２００５）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明の目的は、植物個体への障害が少なく入手容易な天然資源を用いて得られる新規な抗アレルギー剤を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者らは、上記目的を達成すべく鋭意研究を重ねた結果、キリンケツヤシ樹脂の抽出物に優れた抗アレルギー作用を有するとの知見を得た。この知見に基づいて活性化合物の探索研究をした結果、複数の化合物に優れた抗アレルギー作用を有することの知見を得、本発明を完成するに至った。
【００１０】
すなわち、本発明は、
（１）キリンケツヤシ（Daemonorops draco）樹脂の抽出物を有効成分とする抗アレルギー剤。
（２）キリンケツヤシ（Daemonorops draco）樹脂の抽出物が、有機溶媒の抽出エキスまたはその分離生成物ある前記（１）に記載の抗アレルギー剤。
（３）有機溶媒がアルコール類、酢酸エステル類、ケトン類、アルカン類またはそれらの混合物である前記（２）記載の抗アレルギー剤。
（４）分離生成物が下記化合物ＤＤ−１〜ＤＤ−６から選択されるいずれかの化合物である前記（２）に記載の抗アレルギー剤。
【化１】
2010173939.tif 000002
【化２】
2010173939.tif 000003
（５）下記化合物ＤＤ−３〜ＤＤ−６から選択されるフェノール誘導体。
【化３】
2010173939.tif 000004
【化４】
2010173939.tif 000005
【発明の効果】
【００１１】
本発明の抗アレルギー剤は、植物個体への障害が少ない植物樹脂を利用するものであり、薬用資源の確保や種の保護の観点からも有用である。また、本発明の抗アレルギー剤は、ＨＥＲ感作による血流低下を指標として見出された新規な抗アレルギー剤である点に特徴を有する。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】製造例２における抽出・分離工程を示す図である。
【図２】実験例１におけるアッセイ法の実験スケジュール（投与３回の場合）を示す図である。
【図３】キリンケツヤシの樹脂の酢酸エチル抽出エキス（図中、単に麒麟血と表示）を投与した場合の感作マウスの血流量変化を示す図である。
【図４】分画１〜４を投与した場合の感作マウスの血流量変化を示す図である。
【図５】分画１〜４を投与した場合の感作マウスの９日目の血流量を比較した図である。
【図６】化合物ＤＤ−１〜ＤＤ−５を投与した場合の感作マウスの血流量変化を示す図である。
【図７】化合物ＤＤ−６〜ＤＤ−７を投与した場合の感作マウスの血流量変化を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
本発明の一つの態様は、キリンケツヤシ樹脂の抽出物を有効成分とする抗アレルギー剤である。
【００１４】
キリンケツヤシ（麒麟血椰子；Daemonorops draco）は、つる性のヤシ科（Arecaceae）植物であるトウ類（籐類；Rattan）に分類され、スマトラ、ボルネオ、マレー半島などに分布している。このキリンケツヤシ樹脂の抽出物は、溶媒抽出エキスまたはその分離生成物などが包含される。
【００１５】
キリンケツヤシ樹脂からのエキス抽出に際しては、有機溶媒が好適に用いられる。有機溶媒としては、アルコール類（メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノールなど）、酢酸エステル類（酢酸エチル、酢酸ブチルなど）、ケトン類（アセトン、エチルメチルケトンなど）などが挙げられる。また、抽出エキスからの分離生成物としては、前記した化合物ＤＤ−１、ＤＤ−２、ＤＤ−３、ＤＤ−４、ＤＤ−５、ＤＤ−６から選ばれるいずれかの化合物が挙げられる。
【００１６】
有機溶媒としてアセトンを用いる場合について説明すると、キリンケツ樹脂を粉砕後、アセトンに溶解し、濾過後、減圧濃縮することによりアセトン抽出エキスが得られる。このアセトン抽出エキスはそのままでも使用することができるが、水や極性溶媒に再度溶解したり、あるいはこのアセトン抽出エキスをカラムクロマトグラフィー等による分画処理を行った後に用いてもよい。分画処理後、さらに分離精製して活性化合物を取得し、活性化合物としても使用できる。上記の分画処理や分離精製は、例えば次のようにして行うことができる。
【００１７】
まず、上記で得られたアセトン抽出エキスをシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＳｉｇｅｌＣＣ）に付し、適当な溶媒にて溶出する。溶出溶媒としては、例えばｎ−ヘキサン・酢酸エチル混合溶媒を好適に用いることができる。このように得られる粗分画をさらに、各分画についてシリカゲルカラムクロマトグラフィー、ＯＤＳやＤＭＳを担体とした逆相カラムクロマトグラフィー（ＯＤＳＣＣ、ＤＭＳＣＣ）、減圧液体クロマトグラフィー（ＶＬＣ）、セファデックスＬＨ−２０カラムクロマトグラフィー（ＬＨ−２０ＣＣ）、調製薄層クロマトグラフィー（ＰＴＬＣ）等の分離操作を組み合わせ、分離精製を行うことにより、下記化合物１〜１１を得ることができる。
【００１８】
【化５】
2010173939.tif 000006
【００１９】
上記化合物のうち、化合物８−１１は、ＩＤおよび２Ｄ核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトルをはじめとした各種機器スペクトルデータの解析を行い、それらを文献値と比較することにより、その構造を確定した。すなわち化合物８は（２Ｓ）−５−メトキシフラバン−７−オール、化合物９は（２Ｓ）−５−メトキシ−６−メチルフラバン−７−オール、化合物１０ａはドラコフラバンＢ１（dracoflavan Ｂ１）、化合物１０ｂはドラコフラバンＢ２（dracoflavan Ｂ２）、化合物１１ａはドラコフラバンＣ１（dracoflavan Ｃ１）、化合物１１ｂはドラコフラバンＣ２（dracoflavan Ｃ２）と同定された。
【００２０】
上記化合物１〜１１のうち、化合物１〜７は新規化合物である。
【００２１】
なお、化合物ＤＤ−１〜ＤＤ−６並びに後記試験例で用いた化合物ＤＤ−７と上記化合物１〜１１との関係、ならびに化学名（下段は慣用名）は次の通りである。
ＤＤ−１（化合物８）
５−メトキシ−２−フェニルクロマン−７−オール
＝５−メトキシフラバン−７−オール
ＤＤ−２（化合物９）
５−メトキシ−６−メチル−２−フェニルクロマン−７−オール
＝５−メトキシ−６−メチルフラバン−７−オール
ＤＤ−３（化合物６）
５−メトキシ−６−メチル−２−フェニル−４Ｈ−クロメン−７−オール
＝５−メトキシ−６−メチルフラベン−７−オール
ＤＤ−４（化合物４）
３−（２，４−ジヒドロキシ−６−メトキシ−３−メチルフェニル）−１−フェニルプロパン−１−オン
＝２，４−ジヒドロキシ−６−メトキシ−３−メチルジヒドロカルコン
ＤＤ−５（化合物５）
３−（４，６−ジヒドロキシ−２−メトキシ−３−メチルフェニル）−１−フェニルプロパン−１−オン
＝２，４−ジヒドロキシ−６−メトキシ−３−メチルジヒドロカルコン
ＤＤ−６（化合物１）
８，８’−メチレンビス（５−メトキシ−２−フェニルクロマン−７−オール）
ＤＤ−７（化合物２）
６，８’−メチレネビス（５−メトキシ−２−フェニルクロマン−７−オール）
【００２２】
上記化合物につき、ＨＥＲ感作による血流量低下抑制作用を指標として抗アレルギー作用を評価したところ、化合物ＤＤ−１〜ＤＤ−６に優れた作用活性が認められた。
【００２３】
本発明の有効成分であるキリンケツヤシ樹脂の抽出エキスまたはその分離生成物（化合物ＤＤ−１〜ＤＤ−６）は、上述の通り血流量低下改善効果を有するので、抗アレルギー剤（医薬品）として用いることができ、喘息、花粉症、アトピー性皮膚炎、気管狭窄などのアレルギー性疾患の予防・治療のための使用に適している。また食品素材と混合して飲食品とすることや、化粧品素材として混合して化粧品とすることもできる。なお、抽出エキスは、化合物ＤＤ−１〜ＤＤ−６のうち少なくとも１つの化合物を含有するものであればよい。
【００２４】
有効成分は単独で用いても、これらの複数種を混合して使用しても差し支えない。また、有効成分を薬理的に許容しうる担体と混合して、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、液剤、シロップ剤、のど飴等の経口剤や、貼付剤、点液剤などによる非経口投与剤など一般的な剤形とすることができる。
【００２５】
有効成分を医薬品として人体に投与するときは、１回あたり０．１〜１０００ｍｇ（乾燥重量）／ｋｇ体重の量、好ましくは０．３〜３００ｍｇ（乾燥重量）／ｋｇ体重の量を、１日１ないし数回経口投与するのが好ましい。
【００２６】
また飲食品とする場合は、キリンケツヤシ樹脂の抽出エキスまたはその分離生成物と混合する食品素材は固形物（粉状、薄片状、塊状など）、半固形物（ゼリー状、水飴状など）、もしくは液状物などの何れであってもよい。飲食品の種類としては、清涼飲料、ジュース、栄養ドリンクなどの飲料、パン類、麺類、タブレット、キャンディーなどの菓子類などが挙げられる。飲食品１ｇ当たり有効成分の含有量は、０．３〜３００ｍｇ（乾燥重量）であることが好ましい。
【００２７】
さらに、化粧品とする場合、キリンケツヤシ樹脂の抽出エキスまたはその分離生成物と混合する化粧品素材は固形物（パウダーなど）、半固形物（クリームなど）、もしくは液状物（ローション、乳剤など）などの何れであってもよい。化粧品１ｇ当たり有効成分の含有量は０．３〜３００ｍｇ（乾燥重量）であることが好ましい。
【実施例】
【００２８】
以下、製造例および試験例をあげて本発明を説明するが、本発明はこれら製造例や試験例に何ら制限されるものではない。
【００２９】
〔製造例１〕
松浦薬業より購入したキリンケツヤシ（Daemonorops draco）の樹脂（５０ｇ）を破砕後、室温下酢酸エチルに溶解し、濾過後、減圧濃縮することにより酢酸エチル抽出エキス（４８ｇ）を調製した。
【００３０】
〔製造例２〕
（１）抽出および分離
本製造例には、松浦薬業より購入したキリンケツヤシ（Daemonorops draco）の樹脂を用い、図１に示す手順で抽出・分離を行った。
すなわち、本樹脂（２５５ｇ）を破砕後、室温下アセトンに溶解し、濾過後、減圧濃縮することによりアセトン抽出エキス（２５０ｇ）を調製した。得られたアセトン抽出エキスをシリカゲルカラムクロマトグラフィー（Ｓｉ  ｇｅｌ  ＣＣ）に付し、ｎ−ヘキサン／酢酸エチル混合溶媒系により溶出することで７つのフラクションに粗分画した(フラクション１−７)。ｎ−ヘキサン：酢酸エチル＝８：１により溶出したフラクション２について、ＤＭＳカラムクロマトグラフィー（ＤＭＳ  ＣＣ；水−メタノール  システム）、セファデックス  ＬＨ−２０カラムクロマトグラフィー（メタノール）、減圧液体クロマトグラフィー（ＶＬＣ；ベンゼン）により繰り返し精製を行なった結果、化合物１（３．４ｍｇ）、化合物３（２．３ｍｇ）、化合物５（４９．０ｍｇ）を得た。ｎ−ヘキサン：酢酸エチル＝５：１により溶出したフラクション３について、ＤＭＳを担体とした逆相カラムクロマトグラフィー（水−メタノール  システム）、セファデックスＬＨ−２０カラムクロマトグラフィー（メタノール）、減圧液体クロマトグラフィー（ベンゼン）、調製薄層クロマトグラフィー（ｃ−ヘキサン：エタノール＝２０：１）、再結晶（メタノール）により繰り返し精製を行なった結果、化合物１（２３０．６ｍｇ）、化合物２（４．３  ｍｇ）、化合物５（１８．７ｍｇ）、（２Ｓ）−５−メトキシフラバン−７−オール（化合物８）（１５３．２ｍｇ）、（２Ｓ）−５−メトキシ−６−メチルフラバン−７−オール（化合物９）（１００．６ｍｇ）を得た。また、ｎ−ヘキサン：酢酸エチル＝１：１により得られたフラクション５について、ＤＭＳを担体とした逆相カラムクロマトグラフィー（水−メタノール  システム）、セファデックスＬＨ−２０  カラムクロマトグラフィー（メタノール）、減圧液体クロマトグラフィー（ｃ−ヘキサン−エタノール  システム）、調製薄層クロマトグラフィー（ｃ−ヘキサン：エタノール＝２０：１）により繰り返し精製を行なった結果、化合物４（３２．２ｍｇ）、化合物６（４０．０ｍｇ）、化合物７（４８．０ｍｇ）、及び立体異性体の混合物としてドラコフラバン（Dracoflavan）Ｂ１およびＢ２（化合物１０ａ、１０ｂ）（２１．７ｍｇ）、ドラコフラバンＣ１およびＣ２（化合物１１ａ、１１ｂ）（２３．７ｍｇ）を得た。
【００３１】
（２）化合物の物理化学的性質
化合物１：
無色固体.
［α］Ｄ＝  −１１８°（ｃ＝０．１，ＣＨＣｌ３）．
ＵＶ（ＣＨＣｌ３）λｍａｘｎｍ（ｌｏｇε）：２７７（３．５２）．
１Ｈ−ａｎｄ１３Ｃ−ＮＭＲ：表１に記載した。
ＥＩＭＳ：５２４（５６，Ｍ＋，Ｃ３３Ｈ３２Ｏ６＋），５０５（１６），４２０（２８），４０１（８），３１６（８），２６９（１００），２５６（４３），１６５（４４），１０４（５０）．ＨＲ−ＥＩＭＳ：５２４．２２０７（Ｍ＋，Ｃ３３Ｈ３２Ｏ６＋；ｃａｌｃ．５２４．２１９９）．
【００３２】
【表１】
2010173939.tif 000007
【００３３】
化合物２：
無色固体.
［α］Ｄ＝  −１１６°（ｃ＝０．１，ＣＨＣｌ３）．
ＵＶ（ＣＨＣｌ３）λｍａｘｎｍ（ｌｏｇε）：２８１（３．６３）．
１Ｈ−ａｎｄ１３Ｃ−ＮＭＲ：表２に記載した。
ＥＩＭＳ：５２４（３７，Ｍ＋，Ｃ３３Ｈ３２Ｏ６＋），４２０（８），４０１（８），２６９（１００），２５６（５４），１６５（３４），１０４（４２）．
ＨＲ−ＥＩＭＳ：５２４．２２０５（Ｍ＋，Ｃ３３Ｈ３２Ｏ６＋；ｃａｌｃ．５２４．２１９９）．
【００３４】
【表２】
2010173939.tif 000008
【００３５】
化合物３：
無色固体.
［α］Ｄ＝  −８５°（ｃ＝０．１，ＣＨＣｌ３）．
ＵＶ（ＣＨＣｌ３）λｍａｘｎｍ（ｌｏｇε）：２７３（３．８２）．
１Ｈ−ａｎｄ１３Ｃ−ＮＭＲ：表３に記載した。
ＥＩＭＳ：５３８（８０，Ｍ＋，Ｃ３４Ｈ３４Ｏ６＋），４３４（８），２８２（８８），２６９（１００），２５６（４０），１７９（２８），１６５（６０），１５２（２４），１０４（８２）．
ＨＲ−ＥＩＭＳ：５３８．２３６２（Ｍ＋，Ｃ３４Ｈ３４Ｏ６＋；ｃａｌｃ．５３８．２３５５）．
【００３６】
【表３】
2010173939.tif 000009
【００３７】
化合物４：
無色固体.
ＵＶ（ＭｅＯＨ）λｍａｘｎｍ（ｌｏｇε）：２８１（３．８３），２３０（４．６９）．
１Ｈ−ａｎｄ１３Ｃ−ＮＭＲ：表４に記載した。
ＥＩＭＳ：２７２（１００，Ｍ＋，Ｃ１６Ｈ１６Ｏ４＋），１５３（９３），１２０（１２０）．
ＨＲ−ＥＩＭＳ：２７２．１０４４（Ｍ＋，Ｃ１６Ｈ１６Ｏ４＋；ｃａｌｃ．２７２．１０４９）．
【００３８】
【表４】
2010173939.tif 000010
【００３９】
化合物５：
赤色固体.
ＵＶ（ＭｅＯＨ）λｍａｘｎｍ（ｌｏｇε）：３１６（３．０７），２８３（３．６５），２２８（４．２６）．
１Ｈ−ａｎｄ１３Ｃ−ＮＭＲ：表５に記載した。
ＥＩＭＳ：２６８（１００，Ｍ＋，Ｃ１７Ｈ１６Ｏ３＋），２５２（１６），２３７（１２），１９１（２０）．
ＨＲ−ＥＩＭＳ：２６８．１１０７（Ｍ＋，Ｃ１７Ｈ１６Ｏ３＋；ｃａｌｃ．２６８．１１００）．
【００４０】
【表５】
2010173939.tif 000011
【００４１】
化合物６：
無色固体.
ＵＶ（ＭｅＯＨ）λｍａｘｎｍ（ｌｏｇε）：２７９（３．１６），２３８（３．９８）．
１Ｈ−ａｎｄ１３Ｃ−ＮＭＲ：表６に記載した。
ＥＩＭＳ：２８６（６０，Ｍ＋，Ｃ１７Ｈ１８Ｏ４＋），２６７（８），２５６（７），１６７（１００），１５４（７１），１３７（１１），１０５（３３），７７（２２）．
ＨＲ−ＥＩＭＳ：２８６．１２１１（Ｍ＋，Ｃ１７Ｈ１８Ｏ４＋；ｃａｌｃ．２８６．１２０５）．
【００４２】
【表６】
2010173939.tif 000012
【００４３】
化合物７（２，４−ジヒドロキシ−６−メトキシジヒドロカルコン）：
無色固体.
ＵＶ（ＭｅＯＨ）λｍａｘｎｍ（ｌｏｇε）：２８２（３．５９），２４１（４．１５）．
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：２．０９（ｓ，３−Ｍｅ）；２．９５（ｂｒ  ｔ，  Ｊ＝８．０，ＣＨ２（α）；３．４２（ｂｒ  ｔ，Ｊ＝８．０，ＣＨ２（β））；３．７５（ｓ，  ２−ＯＭｅ）；５．３３（ｂｒ  ｓ，６−ＯＨ）；６．２７（ｓ，Ｈ‐Ｃ（５））；７．４２（ｂｒ  ｔ，Ｊ＝８．０，Ｈ‐Ｃ（３′，５′））；７．５４（ｂｒ  ｔ，Ｊ＝８．０  Ｈ‐Ｃ（２′，  ６′））；７．９６（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝８．０，Ｈ‐Ｃ（４′））；８．３０（ｓ，４−ＯＨ）．
１３Ｃ−ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：８．８（３−Ｍｅ），１７．３（Ｃ（β））；  ３９．９（Ｃ（α）；６０．６（２−ＯＭｅ）；１００．８（Ｈ‐Ｃ（５））；１０９．４（Ｃ（３））；１１３．７（Ｃ（１））；１２８．４（Ｃ（３′，５′））；１２８．６（Ｃ（２′，  ６′））；１３３．８（Ｃ（４′））；１３６．１（Ｃ（１′））；１５３．５（Ｃ（４））；１５４．１（Ｃ（６））；１５８．１（Ｃ（２））；２０３．１（Ｃ＝Ｏ）．
ＥＩＭＳ：２８６（５８，Ｍ＋，Ｃ１７Ｈ１８Ｏ４＋），２６７（１６），２５６（７），１６７  （９０），１５４（１００），１３７（１８），１０５（４９），７７（３６）．
ＨＲ−ＥＩＭＳ：２８６．１２１８（Ｍ＋，Ｃ１７Ｈ１８Ｏ４＋；ｃａｌｃ．２８６．１２０５）．
【００４４】
【表７】
2010173939.tif 000013
【００４５】
化合物８（（２Ｓ）−５−メトキシフラバン−７−オール）：
無色固体.
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：２．００（ｄｄｄｄ，Ｊ＝１３．７，１１．１，１０．２，５．９，１Ｈ  ｏｆ  ＣＨ２（３））；２．１７（ｄｄｄｄ，Ｊ＝１３．７，  ５．９，３．１７，２．２，Ｈ  ｏｆ  ＣＨ２（３））；２．６１（ｄｄｄ，Ｊ＝１６．７，  １１．１，５．９，１Ｈ  ｏｆ  ＣＨ２（４））；２．７１（ｄｄｄ，Ｊ＝１６．７，５．９，  ３．２，１Ｈ  ｏｆ  ＣＨ２（４））；３．７６（ｓ，５−ＯＭｅ）；４．９７（ｄｄ，Ｊ＝１０．２，２．２，Ｈ‐Ｃ（２））；５．０４（ｓ，７−ＯＨ）；６．０１（ｄ，Ｊ＝２．３，Ｈ‐Ｃ（６））；６．０４（ｄ，Ｊ＝２．３，Ｈ‐Ｃ（８））；７．３５（ｍ，５Ｈ  ｏｆ  Ｈ‐Ｃ（２′‐６′））．
１３Ｃ−ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：２０．１（Ｃ（４））；３０．４（Ｃ（３））；  ５６．４（５−ＯＭｅ）；７８．６（Ｈ‐Ｃ（２））；９２．５（Ｃ（６））；９７．１（Ｃ（８））；１０４．２（Ｃ（１０））；１２６．９（Ｃ（２′，６′））；１２８．７（Ｃ（４′））；１２９．４（  Ｃ（３′，５′））；１４２．５（Ｃ（１′））；１５６．０（Ｃ（９））；１５７．１（  Ｃ（７））；１５９．６（Ｃ（５））．
【００４６】
化合物９（（２Ｓ）−５−メトキシ−６−メチルフラバン−７−オール）：
無色固体.
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：２．００（ｍ，１Ｈ  ｏｆ  ＣＨ２（３））；２．１１（ｓ，６−Ｍｅ）；２．１６（ｍ，１Ｈ  ｏｆ  ＣＨ２（３））；２．７９（ｍ，２Ｈ  ｏｆ  ＣＨ２（４））；３．７１（ｓ，５−ＯＭｅ）；４．９７（ｄｄ，Ｊ＝１０．０，２．０，  Ｈ‐Ｃ（２））；５．３３（ｓ，７−ＯＨ）；６．２０（ｓ，Ｈ‐Ｃ（８））；７．３１（ｍ，５Ｈ  ｏｆ  Ｈ‐Ｃ（２′‐６′））．
１３Ｃ−ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：８．４（６−Ｍｅ），１９．７（Ｃ（４））；２９．７（Ｃ（３））；６０．０（５−ＯＭｅ）；７７．６（Ｈ‐Ｃ（２））；９９．５（Ｃ（８））；１０７．９（Ｃ（６））；１０９．５（Ｃ（１０））；１２６．０（Ｃ（２′，  ６′））；１２７．８（Ｃ（４′））；１２８．４（Ｃ（３′，５′））；１４１．７（Ｃ（１′）；１５３．５（Ｃ（９））；１５３．９（Ｃ（７））；１５７．１（Ｃ（５））．
【００４７】
化合物１０ａと１０ｂ（ドラコフラバンＢ１とＢ２）：
無色固体.
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：１．７７−２．２２（ｍ，ＣＨ２（３″））；１．９９  ａｎｄ  ２．０９（ｓ，  ６−Ｍｅ）；２．０９，２．７１（ｍ，ＣＨ２（４″））；  ３．３２  ａｎｄ  ３．４８（ｓ，５−ＯＭｅ）；３．７２  ａｎｄ  ３．７３（ｓ，５″−ＯＭｅ）；４．１７  ａｎｄ  ４．２４（ｂｒ  ｓ，Ｈ‐Ｃ（３））；４．７３  ａｎｄ  ４．７６（ｄ，Ｈ‐Ｃ（４））；４．９６  ａｎｄ  ５．０５（ｄ，Ｈ‐Ｃ（２″））；６．１５  ａｎｄ  ６．１６（ｓ，Ｈ‐Ｃ（６″））；６．３４  ａｎｄ  ６．３６（ｓ，Ｈ‐Ｃ（８））；  ７．３６（ｍ，Ｈ‐Ｃ（４′，４′″））；７．４７（ｍ，Ｈ‐Ｃ（３′，５′，３′″，５′″））；７．５３  ａｎｄ  ７．６２（ｄ，Ｈ‐Ｃ（２′″，６′″））；７．６８（ｍ，Ｈ‐Ｃ（２′，  ６′））．
１３Ｃ−ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：８．７５  ａｎｄ  ８．７８（６−Ｍｅ），１９．６  ａｎｄ  ２０．０（Ｃ（３″））；２８．４  ａｎｄ  ２９．２（Ｃ（４″））；２９．７（Ｃ（４））；５５．４６  ａｎｄ  ５５．４９（５″−ＯＭｅ）；６０．５  ａｎｄ  ６０．８（５−ＯＭｅ）；６７．８（Ｃ（３））；７７．６  ａｎｄ  ７８．５（Ｃ（２″））；９１．２（Ｃ（６″））；９８．７  ａｎｄ  ９８．８（Ｃ（８））；９９．３  ａｎｄ  ９９．４（Ｃ（２））；１０４．３  ａｎｄ  １０４．５（Ｃ（１０″））；１０６．５  ａｎｄ  １０６．６（Ｃ（８））；１０８．２  ａｎｄ  １０８．４（Ｃ（１０））；１１１．４  ａｎｄ  １１１．６（Ｃ（６））；１２６．２  ａｎｄ  １２６．６（Ｃ（２″′，６″′））；１２６．８（Ｃ（２′，６′））；１２７．６  ａｎｄ  １２７．７（Ｃ（４′））；１２８．２  ａｎｄ  １２８．３（Ｃ（３″′，５″′））；１２８．４（Ｃ（３′，５′））；１２９．１（Ｃ（４′″））；１３８．５  ａｎｄ  １３８．６（Ｃ（１′）），１４１．６  ａｎｄ  １４２．２（Ｃ（１″′）），１５０．２  ａｎｄ  １５０．５（Ｃ（９）），１５０．９  ａｎｄ  １５１．１（Ｃ（７）），１５１．９  ａｎｄ  １５２．５（Ｃ（９）；１５４．１５  ａｎｄ  １５４．２０（Ｃ（７））；１５７．２  ａｎｄ  １５７．３（Ｃ（５″））；  １５８．１  ａｎｄ  １５８．３（Ｃ（５））．
【００４８】
化合物１１ａと１１ｂ（ドラコフラバンＣ１とＣ２）：
無色固体.
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：１．９０−２．２２（ｍ，ＣＨ２（３）ａｎｄ  ＣＨ２（３″））；２．０１  ａｎｄ  ２．１０（ｓ，６−Ｍｅ）；２．６３−２．７７（ｍ，  ＣＨ２（４″））；３．３２  ａｎｄ  ３．４７（ｓ，５−ＯＭｅ）；３．７３  ａｎｄ  ３．７４（ｓ，５″−ＯＭｅ）；４．６９  ａｎｄ  ４．７３（ｔ，Ｈ‐Ｃ（４））；４．９５  ａｎｄ  ５．０６（ｂｒ  ｄ，Ｈ‐Ｃ（２″））；６．２１  ａｎｄ  ６．２２（ｓ，Ｈ‐Ｃ（６″））；  ６．３０  ａｎｄ  ６．３１（ｓ，  Ｈ‐Ｃ（８））；７．３０−７．４３（ｍ，Ｈ‐Ｃ（３′，４′，５′，３′″，４′″，５′″））；７．５３  ａｎｄ  ７．６３（ｄ，Ｈ‐Ｃ（２′″，６′″））；７．６９（ｍ，Ｈ‐Ｃ（２′，６′））．
１３Ｃ−ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：８．７３  ａｎｄ  ８．７７（６−Ｍｅ），１９．５  ａｎｄ  ２０．０（Ｃ（４″））；２１．０  ａｎｄ  ２１．１（Ｃ（４））；２９．７  ａｎｄ  ３０．８（Ｃ（３″））；３４．７（Ｃ（３））；５３．７  ａｎｄ  ５５．４（５″−ＯＭｅ）；６０．３  ａｎｄ  ６０．７（５−ＯＭｅ）；６９．８（Ｃ（３））；７８．３（Ｃ（２″））；９１．６（Ｃ（６″））；９８．２  ａｎｄ  ９８．３（Ｃ（８））；９９．３（Ｃ（２））；１０３．８  ａｎｄ  １０４．０（Ｃ（１０″））；１０７．６８  ａｎｄ  １０７．７２（Ｃ（８））；１１０．５  ａｎｄ  １１０．６（Ｃ（１０））；１１２．１  ａｎｄ  １１２．３（Ｃ（６））；１２５．７  ａｎｄ  １２６．１（Ｃ（２′，６′））；１２６．６  ａｎｄ  １２６．２（Ｃ（２′″，６″′））；１２７．６  ａｎｄ  １２７．４（Ｃ（４′″））；１２８．２（Ｃ（３′，５′））；１２８．２（Ｃ（３′″，５″′））；１２８．５  ａｎｄ  １２８．３（Ｃ（４′″））；１４１．７  ａｎｄ  １４１．８（Ｃ（１′）），１４２．３（Ｃ（１″′）），１５１．１  ａｎｄ  １５１．３（Ｃ（９）），１５１．６  ａｎｄ  １５１．７（Ｃ（７）），１５１．９  ａｎｄ  １５２．２（Ｃ（９）；１５３．８６  ａｎｄ  １５３．９１（Ｃ（７））；１５６．５  ａｎｄ  １５６．６（Ｃ（５″））；１５６．７  ａｎｄ  １５６．８（Ｃ（５））．
【００４９】
（３）化合物の構造
化合物１〜１１の構造式は下記の通りである。
【化６】
2010173939.tif 000014
【００５０】
〔製造例３〕
製造例２で得られたキリンケツヤシ樹脂のアセトン抽出エキス３０ｇを９０ｍｌのシリカゲルに吸着させ、乾燥後、６００ｍｌのシリカゲルを詰めたカラムに積層し、ドライクロマトカラムを調製した。展開溶媒にはヘキサン：酢酸エチル混合溶媒を用い、混合比率８：１から順次極性を上げながら溶出させ分画した。最終的に次の４分画を取得した。
分画１：ｎ−ヘキサン：酢酸エチル＝８：１  （８．８４ｇ）
分画２：ｎ−ヘキサン：酢酸エチル＝５：１  （３．８７ｇ）
分画３：ｎ−ヘキサン：酢酸エチル＝３：１  （５．４２ｇ）
分画４：アセトン→メタノール              （２．９９ｇ）
【００５１】
〔試験例〕ＨＥＬ感作マウスの血流量低下抑制作用
１）試験物質および投与量
試験物質および投与量は下記の通りである。
ｉ）製造例１で得られたキリンケツヤシ樹脂の酢酸エチル抽出エキス：
１００ｍｇ／ｋｇ（ｐ．ｏ）
ｉｉ）製造例２で得られたＤＤ−１（化合物８）、ＤＤ−２（化合物９）、ＤＤ−３（化合物６）、ＤＤ−４（化合物４）、ＤＤ−５（化合物５）、ＤＤ−６（化合物１）、ＤＤ−７（化合物２）：
４０μｍｏｌ／ｋｇ（ｐ．ｏ）
ｉｉｉ）製造例３で得られた分画１〜４（Ｆｒ．１〜４）：
１００ｍｇ／ｋｇ（ｐ．ｏ）
【００５２】
２）アッセイ法
５週令の雄性ｄｄＹ系マウス（日本ＳＬＣより購入；１群３匹、コントロール群は５匹）を２４±２℃で飼育した。固形飼料ＣＥ−２（オリエンタル酵母社製）および水は自由に与えた。このマウスに、卵白リゾチーム（ＨＥＬ）（Ｓｉｇｍａ社製）５０μｇをコンプリートアジュバント（Ｄｉｆｕｃｏ社製）と生理食塩水の等量混合溶液５０μｌに懸濁して調製した溶液を腹腔内投与し、感作した。
感作日を０日目とし、９日目までマウスの尾部皮下の静脈微小循環血流量を無麻酔下、レーザー血流量を用いてモニターした。この間、すなわちプロモーター段階で、徐々に低下する血流量をコントロールとし、これに対し試験物質を投与した場合の血流量低下への改善効果を評価した。なお、試験物質の投与は０（感作前）、３、６日目に行い、データは平常血流に対する割合（％）で表した。なお、２元配置分散分析を行い、有意な差が認められたことから、ダンネットテスト（Dunnett’s test）を行い、ボンフェロニ（Bonferroni）で補正を行った。
上記アッセイ法の実験スケジュール（投与３回の場合）を示すと図２の通りである
【００５３】
３）試験物質の投与
前記１）の試験物質をそれぞれ蒸留水に溶解した。この溶液を所定の投与量となるように上記実験スケジュール（キリンケツヤシ樹脂の酢酸エチル抽出物および分画１〜４は０、３、６日目の４回；ＤＤ−１〜ＤＤ−７は０、３、６日目の３回）にしたがって経口投与し、血流量を測定した。
【００５４】
４）実験結果
実験結果は図３〜７の通りである。これらの結果から次のことが分かる。
図３：キリンケツヤシ樹脂酢酸エチル抽出エキスの投与群は、コントロール群に対して９日目で有意な血流量低下抑制効果を示した（ｐ＜０．０５）。
図４：分画３および４の投与群はコントロールに対して７日目および９日目で有意な血流量低下抑制効果を示した（７日目：ｐ＜０．０５、９日目：ｐ＜０．００１）。しかし、分画１および２の投与群は若干の抑制効果を示したが、有意差はなかった。
図５：９日目において、分画３および分画４はコントロールに対して有意な血流量低下抑制効果を示した（ｐ＜０．００１）。しかし、分画１および２は若干の血流量低下抑制効果を示したが、有意差はなかった。
図６：コントロール群の血流量は感作後、徐々に低下し、７日目で最低値を示したのち９日目でわずかに回復した。これに対し、化合物ＤＤ−１〜ＤＤ−５の投与群では９日間ほぼ変動せず、いずれも血流量低下が改善された。コントロール群の血流量が最も低下した７日目では、すべての化合物がコントロールに対し有意な血流量低下抑制効果を示した（ｐ＜０．０５）。
図７：コントロール群の血流量は感作後、徐々に低下し９日目で最低値を示した。これに対し、化合物ＤＤ−６投与群では血流量低下を改善し、７日目ではコントロールに対し有意な抑制効果を示した（ｐ＜０．０５）。一方、化合物ＤＤ−７は若干の改善傾向を示したが、有意差はなかった。
【産業上の利用可能性】
【００５５】
本発明の有効成分はＨＥＬ感作マウスの血流量低下を抑制する作用を示し、抗アレルギー剤として有用である。
【図１】
2010173939.tif 000020
【図２】
2010173939.tif 000021
【図３】
2010173939.tif 000022
【図４】
2010173939.tif 000023
【図５】
2010173939.tif 000024
【図６】
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【図７】
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