(57)【要約】【課題】簡単な構成で、嫌気性菌の培養を容易にすることができる雰囲気インジケータおよび嫌気性菌培養キットを提供する。【解決手段】密封容器１１が、互いに通気可能な複数の区画２３ａ，２３ｂを有している。培地１２が、嫌気性の菌を培養可能で、密封容器１１の一つの区画２３ａに収納されている。脱酸素剤１３および雰囲気インジケータ１４が、培地１２が収納された区画２３ａとは異なる区画２３ｂに収納されている。雰囲気インジケータ１４は、酸素と二酸化炭素とを透過させる透過膜により形成された収納袋２７の内部に、酸素の濃度変化により色が変化する酸素指示薬と、二酸化炭素の濃度変化により色が変化する二酸化炭素指示薬とを含む指示液２６を収納して成っている。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
酸素を透過させる透過膜により形成された袋の内部に、酸素の濃度変化により色が変化する酸素指示薬を含む指示液を収納して成ることを、特徴とする雰囲気インジケータ。
【請求項２】
前記透過膜は二酸化炭素も透過可能であり、前記指示液は二酸化炭素の濃度変化により色が変化する二酸化炭素指示薬を含んでいることを、特徴とする請求項１記載の雰囲気インジケータ。
【請求項３】
前記酸素指示薬はレサズリンを含み、前記二酸化炭素指示薬はチモールブルーまたはフェノールフタレインを含んでいることを、特徴とする請求項２記載の雰囲気インジケータ。
【請求項４】
互いに通気可能な複数の区画を有する密封容器と、
嫌気性の菌を培養可能で、前記密封容器の一つの区画に収納された培地と、
前記培地が収納された区画とは異なる区画に収納された脱酸素剤と、
前記培地が収納された区画とは異なる区画に収納された請求項１、２または３記載の雰囲気インジケータとを、
有することを特徴とする嫌気性菌培養キット。
【請求項５】
前記指示液、前記透過膜、前記密封容器および前記培地は透光性であることを、特徴とする請求項４記載の嫌気性菌培養キット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、雰囲気インジケータおよび嫌気性菌培養キットに関する。
【背景技術】
【０００２】
従来の嫌気性菌の検査では、試料を添加した寒天培地を、嫌気チャンバーや脱酸素剤とともに嫌気ジャーに入れて培養し、培養により分裂増殖した嫌気性菌を確認することにより、嫌気性菌が試料中に存在していたかどうかを判定している（例えば、特許文献１、２または３参照）。なお、寒天培地を通過する光による投影像に基づいて、細菌を正確かつ迅速に検出することができる投影検出法が本発明者等により提案されている（例えば、特許文献４参照）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
【特許文献１】特開２００３−２７４９３４号公報
【特許文献２】特開平７−１５５１７１号公報
【特許文献３】特許第３０７５５６９号公報
【特許文献４】特開２００３−８５５３３号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
しかしながら、特許文献１、２または３に記載の方法では、嫌気性菌を培養するための設備が大型となり、操作も煩雑であるという課題があった。また、嫌気性菌の成長検出を確認するたびに、各寒天培地を嫌気チャンバーや嫌気ジャーから取り出さなければならず、手間がかかり煩雑であるという課題もあった。
【０００５】
本発明は、このような課題に着目してなされたもので、簡単な構成で、嫌気性菌の培養を容易にすることができる雰囲気インジケータおよび嫌気性菌培養キットを提供することを目的としている。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
上記目的を達成するために、本発明に係る雰囲気インジケータは、酸素を透過させる透過膜により形成された袋の内部に、酸素の濃度変化により色が変化する酸素指示薬を含む指示液を収納して成ることを、特徴とする。
【０００７】
本発明に係る雰囲気インジケータは、袋を形成している透過膜が酸素を透過させるため、周囲の酸素濃度が変化すると、袋の内部に収納された酸素指示薬を含む指示液の色が変化する。このため、指示液の色の変化により、周囲の酸素濃度を容易に把握することができる。指示液は液体であるため、色の変化が袋の内部全体に拡がりやすく、確認しやすい。
【０００８】
本発明に係る雰囲気インジケータは、酸素がない状態を容易に確認することができるため、酸素がある状態では発育できない嫌気性菌を培養するときに使用すると効果的である。特に、脱酸素剤とともに使用することにより、嫌気チャンバーや嫌気ジャーなどの大型の設備が不要となり、簡単な構成で、嫌気性菌の培養を容易にすることができる。
【０００９】
酸素指示薬は、酸素が存在している状態の色調と、酸素が存在していない状態の色調とが互いに変化する色素であれば、いかなるものであってもよく、例えば、メチレンブルー、ニューメチレンブルー、ニュートラルレッド、インジゴカルミン、アシッドレッド、サフラニンＴ、フェノサフラニン、カプリブルー、ナイルブルー、ジフェニルアミン、キシレンシアノール、ニトロジフェニルアミン、フェナントロリン鉄(II)（フェロイン）、Ｎ−フェニルアントラニル酸、レサズリン、インジゴテトラスルホン酸、ジフェニルベンジジン、ジフェニルアミンスルホン酸、5,6-ジメチルフェナントロリン鉄(II)（5,6-ジメチルフェロイン）、エリオグラウシンA、5-メチルフェナントロリン鉄(II)（5-メチルフェロイン）、5-ニトロフェナントロリン鉄(II)（ニトロフェロイン）などがある。また、指示液は、これらの酸素指示薬を、均一かつ安定に溶解または分散することができる溶媒に溶かして成ることが好ましい。指示液は、例えば、酸素指示薬の水溶液、または複数の酸素指示薬の混合液から成ることが好ましい。
【００１０】
透過膜は、外部に存在する液体と袋の内部に収納された指示液とを確実に分離できるものから成ることが好ましく、例えば、未延伸ポリプロピレン、延伸ポリプロピレン、低密度ポリエチレン、高密度ポリエチレンなどのフィルムを用いることができる。その他にも、透過膜は、シリコンゴムまたはポリアルキルスルホンから成る均質膜から成っても、ポリテトラフルオロエチレンまたはポリスルホンから成る多孔質膜から成っても、ポリプロピレンとシリコンとの複合膜またはポリプロピレンとポリアルキルスルホンとの複合膜から成ってもよい。
【００１１】
本発明に係る雰囲気インジケータで、前記透過膜は二酸化炭素も透過可能であり、前記指示液は二酸化炭素の濃度変化により色が変化する二酸化炭素指示薬を含んでいることが好ましい。この場合、周囲の酸素濃度の変化だけでなく、二酸化炭素濃度の変化によっても指示液の色が変化するため、周囲の二酸化炭素濃度も把握することができる。嫌気性菌を培養するためには、酸素がないだけでなく、二酸化炭素が５％程度存在している必要があることから、嫌気性菌の培養条件をより効果的に確認することができる。二酸化炭素指示薬は、二酸化炭素が存在している状態の色調と、二酸化炭素が存在していない状態の色調とが互いに変化する色素であれば、いかなるものであってもよく、例えば、チモールフタレイン、チモールブルー、フェノールフタレインなどがある。
【００１２】
本発明に係る雰囲気インジケータで、前記酸素指示薬はレサズリンを含み、前記二酸化炭素指示薬はチモールブルーまたはフェノールフタレインを含んでいることが好ましい。この場合、周囲の酸素濃度が変化するときの指示液の色の変化と、二酸化炭素濃度が変化するときの指示液の色の変化とが異なるため、酸素濃度および二酸化炭素濃度を同時かつ正確に把握することができる。
【００１３】
本発明に係る嫌気性菌培養キットは、互いに通気可能な複数の区画を有する密封容器と、嫌気性の菌を培養可能で、前記密封容器の一つの区画に収納された培地と、前記培地が収納された区画とは異なる区画に収納された脱酸素剤と、前記培地が収納された区画とは異なる区画に収納された本発明に係る雰囲気インジケータとを、有することを特徴とする。
【００１４】
本発明に係る嫌気性菌培養キットは、試験試料の中に嫌気性の菌が存在するかどうかを調べるために、以下のようにして使用される。まず、密封容器の一つの区画に収納された培地に試料を入れ、その培地が収納された区画とは異なる区画に脱酸素剤および本発明に係る雰囲気インジケータを収納する。密封容器を密封し、雰囲気インジケータにより密封容器内の雰囲気が嫌気性菌の培養条件を満たしていることを確認しながら、培養を行う。このとき、密封容器の各区画が互いに通気可能であるため、雰囲気インジケータの指示液の色の変化により、培地の周囲の酸素濃度や二酸化炭素濃度を容易に把握することができる。
【００１５】
培養後、増殖した嫌気性菌を確認することにより、嫌気性菌が試験試料中に存在していたかどうかを判定することができる。このように、本発明に係る嫌気性菌培養キットによれば、嫌気チャンバーや嫌気ジャーなどの大型の設備が不要となり、簡単な構成で、嫌気性菌の培養および検出を容易に行うことができる。なお、培地は、嫌気性菌を培養可能なものであればいかなるものであってもよく、例えば、寒天培地から成っていてもよい。
【００１６】
本発明に係る嫌気性菌培養キットで、前記指示液、前記透過膜、前記密封容器および前記培地は透光性であることが好ましい。この場合、密封容器に光を当てて、寒天培地を通過する光による投影像に基づいて、嫌気性菌を正確かつ迅速に検出することができる。一般的な固体の酸素インジケータでは、光を当てると陰になり色の確認ができなかったのに対し、雰囲気インジケータは透光性の液体であるため、光を当てて色を確認することができ、酸素濃度や二酸化炭素濃度を容易に把握することができる。
【発明の効果】
【００１７】
本発明によれば、簡単な構成で、嫌気性菌の培養を容易にすることができる雰囲気インジケータおよび嫌気性菌培養キットを提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
【図１】本発明の実施の形態の雰囲気インジケータおよび嫌気性菌培養キットを示す斜視図である。
【図２】本発明の実施の形態の嫌気性菌培養キットの分画シャーレの変形例を示す斜視図である。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
以下、図面に基づき本発明の実施の形態について説明する。
図１および図２は、本発明の実施の形態の雰囲気インジケータおよび嫌気性菌培養キットを示している。
図１に示すように、嫌気性菌培養キット１０は、密封容器１１と培地１２と脱酸素剤１３と雰囲気インジケータ１４とを有している。
【００２０】
密封容器１１は、分画シャーレ２１と密封袋２２とを有している。分画シャーレ２１は、透明で、中央に、内部を左右２つの区画２３ａ，２３ｂに分ける仕切り２４を有している。分画シャーレ２１は、蓋２５を閉じたとき、仕切り２４の上部と蓋２５との間に隙間があいて、各区画２３ａ，２３ｂが互いに通気可能になっている。密封袋２２は、透明で通気性のないビニール製で、分画シャーレ２１を収納した後、内部の空気を抜いて口を閉じ、密封するようになっている。
【００２１】
培地１２は、透光性で、嫌気性の菌を培養可能な寒天培地から成っている。培地１２は、分画シャーレ２１の一方の区画２３ａに収納されている。
脱酸素剤１３は、酸素を吸収可能な市販の脱酸素剤から成っている。脱酸素剤１３は、分画シャーレ２１の他方の区画２３ｂに収納されている。
【００２２】
雰囲気インジケータ１４は、分画シャーレ２１の他方の区画２３ｂに収納され、指示液２６と収納袋２７とを有している。指示液２６は、透光性で、酸素の濃度変化により色が変化する酸素指示薬と、二酸化炭素の濃度変化により色が変化する二酸化炭素指示薬とを含んだ水溶液から成っている。収納袋２７は、透明なポリエチレン製で、酸素と二酸化炭素とを透過可能な透過膜から成り、内部に指示液２６を収納している。収納袋２７は、外部に存在する液体と内部に収納された指示液２６とを確実に分離できるようになっている。
【００２３】
次に、作用について説明する。
嫌気性菌培養キット１０は、試験試料の中に嫌気性の菌が存在するかどうかを調べるために、以下のようにして使用される。まず、密封容器１１の分画シャーレ２１の一方の区画２３ａに収納された培地１２に試料を入れ、他方の区画２３ｂに脱酸素剤１３および雰囲気インジケータ１４を収納する。密封容器１１を密封し、雰囲気インジケータ１４により密封容器１１内の雰囲気が嫌気性菌の培養条件を満たしていることを確認しながら、培養を行う。
【００２４】
このとき、密封容器１１の各区画２３ａ，２３ｂが互いに通気可能であるため、雰囲気インジケータ１４の指示液２６の色の変化により、培地１２の周囲の酸素濃度および二酸化炭素濃度を容易に把握することができる。なお、雰囲気インジケータ１４の透過膜が酸素と二酸化炭素とを透過させるため、周囲の酸素濃度や二酸化炭素濃度が変化すると、収納袋２７の内部に収納された酸素指示薬と二酸化炭素指示薬とを含む指示液２６の色が変化する。このため、指示液２６の色の変化により、周囲の酸素濃度および二酸化炭素濃度を容易に把握することができる。指示液２６は液体であるため、色の変化が収納袋２７の内部全体に拡がりやすく、確認しやすい。
【００２５】
培養後、増殖した嫌気性菌を確認することにより、嫌気性菌が試験試料中に存在していたかどうかを判定することができる。このとき、指示液２６、透過膜から成る収納袋２７、密封容器１１および培地１２が透光性であるため、密封容器１１に光を当てて、培地１２を通過する光による投影像に基づいて、嫌気性菌を正確かつ迅速に検出することができる。このように、嫌気性菌培養キット１０によれば、嫌気チャンバーや嫌気ジャーなどの大型の設備が不要となり、簡単な構成で、嫌気性菌の培養および検出を容易に行うことができる。
【００２６】
嫌気性菌を培養するためには、酸素がないだけでなく、二酸化炭素が５％程度存在している必要がある。雰囲気インジケータ１４は、酸素がない状態や、周囲の二酸化炭素濃度も容易に把握することができるため、嫌気性菌の培養条件をより効果的に確認することができる。
【００２７】
一般的な固体の酸素インジケータでは、光を当てると陰になり色の確認ができなかったのに対し、雰囲気インジケータ１４は透光性の液体であるため、培養中であっても、光を当てて色を確認することができ、酸素濃度や二酸化炭素濃度を容易に把握することができる。また、嫌気性菌培養キット１０は、光を当てて嫌気性菌を検出することができるため、好気性や嫌気性の菌を培養するシャーレや、他の嫌気性菌培養キット１０などとともに、同時に検査を行うことができる。
【００２８】
なお、図２に示すように、分画シャーレ５１は、周壁と同心円状に設けられた仕切り５２を有し、中央部５３ａと周辺部５３ｂの２つの区画に分けられていてもよい。この場合、蓋５４を閉じても、中央部５３ａと周辺部５３ｂとが互いに通気可能になっており、例えば、中央部５３ａに培地１２を収納し、周辺部５３ｂに脱酸素剤１３と雰囲気インジケータ１４とを収納することができる。
【００２９】
［酸素指示薬および二酸化炭素指示薬の組合せ試験］
酸素指示薬および二酸化炭素指示薬の最適な組合せを調べるために、以下の試験を行った。酸素指示薬として、レサズリンを使用し、二酸化炭素指示薬として、チモールブルー、チモールフタレイン、フェノールフタレインを使用した。酸素指示薬と各二酸化炭素指示薬とを組合せて指示液２６を作成し、酸素濃度および二酸化炭素濃度の変化による色の変化について観測を行った。観測は、各指示液２６で雰囲気インジケータ１４を作成し、脱酸素剤１３または放二酸化炭素剤を密封容器１１に封入して行った。作成した各指示液２６の組成を表１に、各指示液２６の色の変化を表２に示す。
【００３０】
【表１】
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【００３１】
【表２】
2010276387.tif 000004
【００３２】
表２に示すように、試験の結果、酸素指示薬がレサズリン、二酸化炭素指示薬がチモールブルーまたはフェノールフタレインの組合せが適していることが確認された。これらの組合せの場合、周囲の酸素濃度が変化するときの指示液２６の色の変化と、二酸化炭素濃度が変化するときの指示液２６の色の変化とが異なるため、酸素濃度および二酸化炭素濃度を同時かつ正確に把握することができる。
【００３３】
具体的には、酸素指示薬がレサズリン、二酸化炭素指示薬がチモールブルーの組合せの場合、橙色のとき嫌気性菌雰囲気であり、緑色のとき二酸化炭素が発生しているが、脱酸素されていない、青色のとき脱酸素されず、二酸化炭素も発生していない、紫色のとき脱酸素されているが、二酸化炭素が発生していない状態を表している。また、酸素指示薬がレサズリン、二酸化炭素指示薬がフェノールフタレインの組合せの場合、桃色のとき嫌気性菌雰囲気であり、青色のとき二酸化炭素が発生しているが、脱酸素されていない、青紫色のとき脱酸素されず、二酸化炭素も発生していない、赤紫色のとき脱酸素されているが、二酸化炭素が発生していない状態を表している。
【符号の説明】
【００３４】
１０  嫌気性菌培養キット
１１  密封容器
１２  培地
１３  脱酸素剤
１４  雰囲気インジケータ
２１  分画シャーレ
２２  密封袋
２３ａ，２３ｂ  区画
２４  仕切り
２５  蓋
２６  指示液
２７  収納袋
【図１】
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【図２】
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