(57)【要約】【課題】  廃棄物として処分されていた魚卵外皮を、社会的にも、産業的にも有益なものにするために、その分解物の特性を検討し、その特性を利用して、前記組成物の有効利用を図ることを目的とする。【解決手段】  タラ、ニシン、サケの腹子外皮の、収縮蛋白などの筋原線維蛋白質の分解物、特に、バチルス属が産生する蛋白分解酵素による分解物であるアミノ酸およびペプチドを、アドレナリン機能向上剤とし、健康維持食品や健康補助食品として利用し、廃棄物とされていた魚卵外皮の再利用の道を広げるものである。【選択図】      図１０
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
魚卵外皮の筋原線維蛋白質の分解物であるアミノ酸およびペプチドからなり、アドレナリンの機能を向上させること
を特徴とするアドレナリン機能向上剤。
【請求項２】
前記機能向上が、遺伝子（ＵＣＰ−１）の発現増大であること
を特徴とする請求項１に記載のアドレナリン機能向上剤。
【請求項３】
前記アドレナリンが、ノルエピネフリンであること
を特徴とする請求項１または２に記載のアドレナリン機能向上剤。
【請求項４】
前記アミノ酸およびペプチドが、
オゾン水処理した魚卵外皮の筋原線維蛋白質を、バチルス属が産生する蛋白分解酵素で分解して得られたものであること
を特徴とする請求項１〜３のいずれかに記載のアドレナリン機能向上剤。
【請求項５】
前記アミノ酸およびペプチドが、
魚卵外皮の筋原線維蛋白質を、バチルス属が産生する蛋白分解酵素で分解後、濾過により脂質を除去して得られたものであること
を特徴とする請求項１〜３のいずれかに記載のアドレナリン機能向上剤。
【請求項６】
前記魚卵外皮は、
タラ、ニシン、サケの腹子外皮であること
を特徴とする請求項４または５に記載のアドレナリン機能向上剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
この発明は、タラ、ニシン、サケなどにおける腹子外皮の収縮蛋白の分解物であるアミノ酸およびペプチドからなり、アドレナリンの機能を向上させる薬剤に関するものであって、脂肪蓄積抑制ないし放出促進作用を有する健康維持食品の原料として使用される可能性の高いもので、健康補助食品、健康維持食品等の調製技術に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
水産加工に伴い発生し、食用としては利用されない魚体の魚肉、魚皮、魚骨などは、魚粉、魚油、畜産用飼料、農業用肥料等に加工されて利用されている。
しかしながら、魚卵の加工ならびに水産加工により発生する魚卵外皮については、ほとんどが産業廃棄物として処分されてきていた。
【０００３】
それらの魚肉等の利用に関しては、魚介類を高温処理して、魚介類に含まれている自己分解酵素を不活化したのち、枯草菌産生蛋白分解酵素および麹菌産生蛋白分解酵素により成分中の蛋白を、ペプタイドアミノ酸及び遊離アミノ酸に分解して、抗潰瘍作用、インシュリン樣作用、高脂血症治癒作用等の医薬効果を有する魚介類エキスを得ることが、特公平０１−１４８８５号公報（特許文献１）に報告されている。
【０００４】
また、魚皮、魚骨、魚鱗などに関しては、魚皮、魚骨をプロテアーゼ処理等により得られたゼラチンを食品素材として利用する方法が、特開平１０−２７６６８０号公報（特許文献２）で提案されている。
また、魚鱗や魚皮から抽出したコラーゲンを、医療用生体材料あるいは化粧品材料などとして利用する方法が、特開平０５−９３０００号公報（特許文献３）や、特開２０００−５０８１１号公報（特許文献４）で提案されている。
【０００５】
これら提案に対して、魚卵外皮に関しては、その成分が、収縮蛋白質（ミオシン）などである筋原線維蛋白質であるにもかかわらず、その有効利用についての提案は、長い間なされることがなかった。
【０００６】
このような状況において、特開２００４−０７３１８６号公報（特許文献５）で、魚卵外皮を構成する収縮蛋白質（ミオシン）を分解する方法（魚卵外皮の酵素分解によるアミノ酸成分の製法）が提案された。
この方法によれば、種々の必須アミノ酸とペプチドを含む組成物が得られ、得られた組成物は、各種食品の栄養強化のための食品強化剤として、また、ペプチドを含み、ＡＣＥ阻害活性を有し、生理活性物質として有用であることが報告されている。
【０００７】
さらに、その有効利用について共同研究がなされ、特開２００８−８８１４３号公報（特許文献６）において、種々の必須アミノ酸とペプチドを含む組成物が、膵臓および肝臓機能低下抑制作用という薬効性を有することが見つけ出され薬効性組成物として利用することが提案されている。
【特許文献１】特公平  １−  １４８８５号公報（特許請求の範囲）
【特許文献２】特開平１０−２７６６８０号公報（特許請求の範囲）
【特許文献３】特開平  ５−  ９３０００号公報（特許請求の範囲）
【特許文献４】特開２０００−５０８１１号公報（特許請求の範囲）
【特許文献５】特開２００４−７３１８６号公報（特許請求の範囲）
【特許文献６】特開２００８−８８１４３号公報（特許請求の範囲）
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
特許文献５で提案された、魚卵外皮を分解して利用するという技術は、産業廃棄物として処分されていた魚卵外皮を有効利用するものであるので、環境汚染防止の面からも、極めて有意義なものである。
【０００９】
しかしながら、その前提として、特許文献５の提案する方法で得られた、アミノ酸およびペプチドを含む組成物が幅広く活用されることが必要である。
先の提案、すなわち、食品強化剤や生理活性物質として、さらには薬効性組成物としての利用は、優れて有効なものであるが、廃棄されていた魚卵外皮は大量であるので、それらを有効に活用するためには、上記薬効性組成物のさらなる利用方法が必要である。
【００１０】
そこで、発明者は、上記方法を活用し、廃棄物として処分されていた魚卵外皮を、社会的にも、産業的にもより有益なものにするために、前記薬効性組成物の特性を検討し、その特性を利用して、前記薬効性組成物の有効利用を図るべく検討を行なった。
【００１１】
その結果、発明者は、前記薬効性組成物を構成するアミノ酸およびペプチドが、脂肪の分解に寄与するホルモンであるノルアドレナリンの機能、すなわち、中性脂肪を燃焼させるタンパク質（ＵＣＰ）の発現機能を向上させることを見出し、それにより体内の脂肪蓄積抑制ないし放出促進作用が良く機能することを見出して、この発明を完成したのである。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
すなわち、この発明の請求項１に記載の発明は、
魚卵外皮の筋原線維蛋白質の分解物であるアミノ酸およびペプチドからなり、アドレナリンの機能を向上させること
を特徴とするアドレナリン機能向上剤である。
【００１３】
また、この発明の請求項２に記載の発明は、
請求項１に記載のアドレナリン機能向上剤において、
前記機能向上が、遺伝子（ＵＣＰ−１）の発現増大であること
を特徴とするものである。
【００１４】
また、この発明の請求項３に記載の発明は、
請求項１又は２に記載のアドレナリン機能向上剤において、
前記アドレナリンが、ノルエピネフリンであること
を特徴とするものである。
【００１５】
また、この発明の請求項４に記載の発明は、
請求項１〜３のいずれかに記載のアドレナリン機能向上剤において、
前記アミノ酸およびペプチドが、
オゾン水処理した魚卵外皮の筋原線維蛋白質を、バチルス属が産生する蛋白分解酵素で分解して得られたものであること
を特徴とするものである。
【００１６】
また、この発明の請求項５に記載の発明は、
請求項１〜３のいずれかに記載のアドレナリン機能向上剤において、
前記アミノ酸およびペプチドが、
魚卵外皮の筋原線維蛋白質を、バチルス属が産生する蛋白分解酵素で分解後、濾過により脂質を除去して得られたものであること
を特徴とするものである。
【００１７】
また、この発明の請求項６に記載の発明は、
請求項４または５に記載のアドレナリン機能向上剤において、
前記魚卵外皮は、
タラ、ニシン、サケの腹子外皮であること
を特徴とするものである。
【発明の効果】
【００１８】
この発明のアドレナリン機能向上剤は、先の提案の、膵臓および肝臓機能低下抑制作用という薬効性に加え、アドレナリンの機能、すなわち、タンパク質ＵＣＰの発現を増大させるという機能を有するもので、結果として、運動の際などに放出されるアドレナリンにより、体内脂肪の蓄積抑制ないし放出促進という作用を期待することができるものである。
その結果、健康維持食品や健康補助食品の素材としての用途が拡大され、魚卵外皮をより有効に利用することを可能としたものである。
また、産業廃棄物として処分されていた魚卵外皮の有効利用範囲を、さらに拡大するもので、環境汚染のうえからも、優れた効果を有するものである。
【００１９】
また、この発明のアドレナリン機能向上剤は、日常的に摂取することによっても、体内における脂肪蓄積抑制作用ないし脂肪放出促進作用が期待できるものであり、上述したように、特に、肥満状態での運動効果を高め、上記作用がより有効に機能することが期待できるものである。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２０】
この発明のアドレナリン機能向上剤は、魚卵外皮の筋原線維蛋白質の分解物であるアミノ酸およびペプチドからなるものである。
その調製方法としては、特許文献５に記載の方法が挙げられる。
この方法では、この発明のアドレナリン機能向上剤は、以下のように調製される。
【００２１】
すなわち、魚卵外皮の筋原線維蛋白質の分解物であるアミノ酸およびペプチドは、魚卵外皮を冷水で洗浄し、洗浄後、好ましくは室温以下のオゾン水で処理する。
低温のオゾン水での処理により、付着細菌の除菌及び脱脂肪等が行なわれる。
さらに、構成蛋白である筋原線維蛋白の収縮蛋白質（ミオシン）の変成が防止される。
その結果、格別精製を行なうことなく、後工程の酵素分解反応により、溶液として、また、当該溶液を濃縮・乾燥することにより、アドレナリン機能向上剤として、さらには食品用の栄養強化剤や健康食品の素材として利用することができるアミノ酸およびペプチドを粉末として得ることができる。
【００２２】
前記オゾン水処理は、洗浄、脱水した魚卵外皮を、冷水を入れたタンク中で撹拌しながら、オゾン発生装置から、オゾン濃度０．２〜１０ｐｐｍ／Ｌで供給し、５〜３０分間室温以下で実施される。
魚卵外皮が分散状態で存在しているオゾン処理液は、溶存しているオゾンを消失させるために、撹拌しながら酵素反応温度３５〜５０℃付近まで加温される。
【００２３】
オゾンが消失した後、バチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）の産生する蛋白分解酵素によって、収縮蛋白質（ミオシン）などの筋原線維蛋白質が分解される。
この処理液を温度８０℃以上に加温し、１５分間以上撹拌して酵素を失活させたのち、絲状菌（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｏｒｙｚａｅ）の産生する蛋白分解酵素を用いて、さらに低分子化と他種類の魚卵蛋白に由来する苦味や、アミノ酸臭等の分解処理を行なう。
【００２４】
この両酵素による処理は、魚卵外皮に対し０．０２〜０．２質量％の酵素を用いて、撹拌の下、処理温度３５〜５５℃、処理時間２〜５時間、いずれもほぼ同じ条件で行なわれる。
【００２５】
酵素処理を終えた処理液は、酵素を失活させた後、８００メッシュの濾布を用いた遠心分離により固形物を、さらに限外濾過法などによって、脂質やコロイド状不純物を除去する。
得られたアミノ酸およびペプチドを含む濾液は、使用目的によって、そのままの状態であるいは適度の濃度に濃縮して、液状で利用することができる。
【００２６】
アミノ酸およびペプチドを粉末として得る場合は、濾液を常圧乾燥、減圧乾燥、噴霧乾燥、凍結乾燥法などにより、成分の分解を極力回避する観点から水分を速やかに除去することが望ましい。
【００２７】
かかる観点から、乾燥方法としては、減圧乾燥法あるいは噴霧乾燥法が適している。
また、乾燥温度についても、温度１３０℃以下で実施することが望ましく、この温度を超えると有効成分の分解が始まり、品質の低下を招く。
好ましい乾燥温度は、温度７０〜１３０℃である。
【００２８】
このようにして得られた魚卵外皮の、収縮蛋白などの筋原線維蛋白質の分解物には、ペプチドおよび各種のアミノ酸が含まれる。
タンパク分解酵素、特にバチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）の産生する蛋白分解酵素の使用量が少ない場合（０．０５質量％以下）、ペプチドが多く含まれた分解物が得られる。
【００２９】
この分解物（アドレナリン機能向上剤）は、種々のアミノ酸とペプチドを含有するものであって、先の提案の、膵臓および肝臓機能低下抑制作用という薬効性に加え、アドレナリンの機能、すなわち、タンパク質ＵＣＰの発現を増大させるという機能を有するもので、結果として、運動の際などに放出されるアドレナリンにより、体内脂肪の蓄積抑制ないし放出促進という作用を期待することができ、健康食品の素材として、また、食品に栄養強化を目的に補助添加剤として用いられる他、医薬の原料としても、有効に利用されることが期待されるものである。
【実施例】
【００３０】
＜アドレナリン機能向上剤の調製＞
鮭の魚卵（筋子）外皮５ｋｇを、洗浄糟において冷水２０Ｌで３回洗浄し、籠型遠心脱水装置で脱水した。
酵素分解タンク（５Ｌ）内に、脱水魚卵外皮１．５ｋｇと冷水４．５Ｌを入れ、攪拌しながら、酵素反応温度付近まで加温した。
つぎに、この処理液に、収縮蛋白（ミオシン）などの筋原線維蛋白を分解するため、バチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓ）が産生する蛋白分解酵素（ヤクルト薬品（株）・アロアーゼＡＰ−１０）を、乾燥魚卵外皮換算で０．２質量％添加し、約４５℃の温度で約２．５時間撹拌処理して、筋原線維蛋白質を分解した。
【００３１】
さらに、この処理液に、絲状菌（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｏｒｙｚａｅ）が産生する蛋白分解酵素（ヤクルト薬品；パンチダーゼＮＰ−２）を、魚卵外皮換算で０．２質量％添加し、前記と同温度で同時間撹拌処理して、魚卵外皮が持つ魚肉蛋白等に由来する苦味成分やアミノ酸臭等をさらに分解除去し、低分子化を行った。
上記２種の蛋白分解酵素で酵素分解を行ったのち、処理液を液温８０℃に加温し、残留酵素の失活並びに減菌処理を行った。
【００３２】
失活処理した処理液（液温・６０℃）を、定量ポンプで噴霧乾燥装置に時間当たり２００ｍＬ供給し、乾燥入口熱風温度１３０℃、乾燥出口熱風温度７０℃で乾燥を行ない、含水率７％以下の魚卵外皮由来の、各種アミノ酸およびペプチドからなる乾燥粉末状の、この発明のアドレナリン機能向上剤を得た。
【００３３】
＜特性評価試験＞
得られたこの発明のアドレナリン機能向上剤（以下、ＳＯＰという。）を、脂肪細胞に添加して培養し、その状態を顕微鏡で観察するとともに、遺伝子（ＵＣＰ−１）の発現に関し、以下のように試験した。
１．試験材料
（１）被験物質
上記のＳＯＰを、内臓脂肪細胞分化メディウム（（株）プライマリーセル製）に最終濃度４００、１００、５０μｇ／ｍＬになるよう添加したものを被験物質とした。
（２）使用細胞
内臓脂肪細胞培養キットＶ−1（初代、ラット、（株）プライマリーセル製）
褐色脂肪細胞培養キットＦ−1（初代、ラット、（株）プライマリーセル製）
【００３４】
２．試験方法
２−１．培養操作
内臓脂肪細胞（ＶＡＣ）の培養
内臓脂肪前駆細胞３．０×１０６  ｃｅｌｌｓを、２４穴プレートに播種（細胞数は１．２×１０５  ｃｅｌｌｓ／ｍＬ／ｗｅｌｌ）し、４日間、内臓脂肪分化メディウムにて予備培養を行った。
予備培養後（播種後４日目）に、ＳＯＰ未添加の陰性対照物質および被験物質を、内臓脂肪分化メディウムで規定濃度に調製し、調製済み培地を細胞に添加した。
培地交換は、被験物質添加０，２，４日目（播種４，６，８日目）に行ない、回収後は新しい調製済み培地を加えた。
最終日は、ノルエピネフリン未添加群については、そのままＲＮＡの抽出を行ない、ノルエピネフリン添加群については、被験物質を規定濃度に、ＲＮＡ抽出の６時間前にノルエピネフリンを１×１０−６  Ｍ濃度に内臓脂肪分化メディウムで調製して、細胞に添加した。
顕微鏡観察は、被験物質添加日およびノルエピネフリン添加前後に行ない、代表例について、ホフマンモジュールレンズによる写真撮影を行なった。
【００３５】
＜褐色脂肪細胞（ＢＡＴ）の培養＞
２４穴プレートに播種された褐色脂肪細胞を、増殖用メディウムで３日間培養し、コンフルエントになったのを確認した。
分化誘導培地に交換して、４８時間培養し、ＳＯＰ未添加の陰性対照物質および被験物質を維持メディウムで規定濃度に調製し、調製済み培地を細胞に添加した。
培地交換は、被験物質添加０，２，４，５日目に行ない、回収後は、新しい調製済み培地を加えた。
ノルエピネフリン添加処理については、ＶＡＣと同様の処理を維持メディウムで行なった。
顕微鏡観察は、ノルエピネフリン添加前後に行ない、代表例について、ホフマンモジュールレンズによる写真撮影を行った。反復数３。
【００３６】
２−２．遺伝子発現確認試験
Ｃｅｌｌ  ｌｙｓａｔｅの調製
培養終了後に1ウェル当たり４００μLのＴＲＩ−Ｒｅａｇｅｎｔ（Ｍｏ1ｅｃｕｌａｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｅｎｔｅｒ）を加えて、ピペッティングを行ない、３ウェル分を１本のエッペンチューブに封入し、直ちに温度−８０℃で凍結保存した。
【００３７】
＜ＲＮＡの抽出＞
サンプルを解凍した後、室温で１０分間以上インキュベートした。
２００ｍＬのクロロホルムを加えて、よくボルテックスミキサーで３０秒間攪拌したのち、２０，０００×ｇ、１０分間、温度４℃の遠心操作により相分離を行った。
上清を、別の１．５ｍＬチューブに採取し、上清と同量の冷イソプロパノールを加えて攪拌した後、１０分間インキュベートし、２０，０００×ｇ、１０分間、温度４℃の遠心操作によりＲＮＡを析出させた。
上清を除去し、１ｍＬの７０％エタノールにて洗浄後、２０，０００×ｇ、５分間、温度４℃で遠心分離して上清を除き、風乾させた。
これに、ＤＥＰＣ処理した精製水を加えて、総ＲＮＡ溶液とした。
得られたＲＮＡ溶液の濃度は、吸光光度計を用いて２６０ｎｍの吸光度を測定することにより算出した。
【００３８】
＜Ｔｏｔａｌ ＲＮＡの逆転写反応＞
１ｓｔ Ｓｔｒａｎｄ ｃＤＮＡ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｋｉｔ ｆｏｒ ＲＴ-ＰＣＲ（ＡＭＶ）(Ｒｏｃｈｅ)を使用し、抽出・精製したＴｏｔａｌ ＲＮＡ２．５ｍｇ分をＲｎａｓｅ 
Ｆｒｅｅ Ｗａｔｅｒで希釈し、２３．２ｍＬにした。
これに１０×Ｒｅａｃｔｉｏｎ Ｂｕｆｆｅｒ ５ｍＬ、２５ｍＭ ＭｇＣｌ２  １０ｍＬ、Ｄｅｏｘｙｎｕｃ１ｅｏｔｉｄｅ Ｍｉｘ ５ｍＬ、Ｒａｎｄｏｍ Ｐｒｉｍｅｒ ５ｍＬを加え、よく撹幹し、スピンダウンしたのち、温度６５℃で５分間インキュベートした。
ＲＮａｓｅ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ １ｍＬと、ＡＭＶ Ｒｅｖｅｒｓｅ Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔａｓｅ ０．８ｍＬを加え、室温で１０分間、つぎに温度４２℃で６０分間、つづいて温度９５℃で５分間インキュベートし、ｃＤＮＡを合成した。
【００３９】
＜Ｒｅａｌ−ｔｉｍｅ ＰＣＲ＞
Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ ７５００ Ｒｅａ１ Ｔｉｍｅ ＰＣＲ Ｓｙｓｔｅｍ（Ａｐｐ1ｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を使用し、標準的なＴａｑＭａｎ ＰＣＲ ｋｉｔプロトコールによりＲｅａ１-ｔｉｍｅ ＰＣＲを行った。
ＴａｑＭａｎ Ｕｎｉｖｅｒｓａ１ ＰＣＲ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ、ｒｏｄｅｎｔ ＧＡＰＤＨおよびｒａｔ ｕｃｐ−１のプライマー・プローブは、全てＡｐｐ１ｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓより購入した。
５ｍＬ ＲＴ ｐｒｏｄｕｃｔ、２ｘ ＴａｑＭａｎ Ｕｎｉｖｅｒｓａ１ ＰＣＲ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ、０．２５ｍＭ ＴａｑＭａｎ ｐｒｏｂｅ、０．９ｍＭ ｆｏｒｗａｒｄ ｐｒｉｍｅｒおよび０．９ｍＭ ｒｅｖｅｒｓｅ ｐｒｉｍｅｒを含有した５０ｍＬ ＰＣＲ反応溶液を使用した。
９６穴プレート上で反応を行ない、反応条件として、温度９５℃で１０分の後、温度９５℃で１５秒に続く、温度６０℃で１分のプログラムを４０サイクル行った。
【００４０】
３．試験結果
細胞形態観察顕微鏡写真は、その代表例が図１〜図１０に示されている通である。
それらの観察結果は、以下のとおりである。
細胞形態観察顕微鏡写真（ＶＡＣ）
被験物質投与０日目(播種４日目)（図１および図２）
（内臓脂肪細胞を播種４日目に、各被験物質調製済みの培養液１ｍＬの添加時）
−各ウェルの全体を観察したところ、脂肪細胞に脂肪滴が蓄積し始めていた。
−各群間での差異はなく、試験系が各群同条件で行われたことが示された。
【００４１】
被験物質投与２日目（播種６日目）
−陰性対照群では、小さな脂肪滴を蓄積した脂肪細胞が存在するが、成熟した脂肪細胞が多く存在した。
また、肥大化した脂肪細胞が若干増えた。
−ＳＯＰ５０μｇ／ｍＬ添加群では、陰性対照群と比較し、小さな脂肪滴を蓄積した脂肪細胞が多く、肥大化した脂肪細胞は殆んど存在しなかった。
−ＳＯＰ１００μｇ／ｍＬ添加群では、陰性対照群、５０μｇ／ｍＬ添加群と比較して小さな脂肪滴を蓄積した脂肪細胞の数は同程度であったが、成熟した脂肪細胞及び肥大化した脂肪細胞は少なかった。
−ＳＯＰ４００μｇ／ｍＬ添加群では、陰性対照群、５０μｇ／ｍＬ添加群及び１００μｇ／ｍＬ添加群と比較し、小さな脂肪滴を蓄積した脂肪細胞は多く存在したが、成熟した脂肪細胞の数は更に少なかった。
−いずれの群においても、細胞障害は存在しなかった。
【００４２】
被験物質投与４日目（播種８日目）ノルエピネフリン添加前（図３および図４）
−陰性対照群では、殆どの脂肪細胞が成熟細胞になり、肥大化細胞も多く存在した。
−ＳＯＰ５０μｇ／ｍＬ添加群では、成熟した脂肪細胞が増加した。
また、肥大化した脂肪細胞も若干存在したが、陰性対照群と比較して、肥大化した脂肪細胞の数は少なかった。
−ＳＯＰ１００μｇ／ｍＬ添加群では、５０μｇ／ｍＬ添加群よりも小さな脂肪滴を蓄積した脂肪細胞が多く存在し、成熟した脂肪細胞は少なかった。
また、肥大化した脂肪細胞の数も少なかった。
−ＳＯＰ４００μｇ／ｍＬ添加群では、陰性対照群、５０μｇ／ｍＬ添加群及び１００μｇ／ｍＬ添加群と比較し、小さな脂肪滴を蓄積した脂肪細胞が多く存在した。成熟した脂肪細胞や肥大化した脂肪細胞もわずかに存在したが、脂肪細胞の数は少なかった。
−いずれの群においても、細胞障害は存在しなかった。
【００４３】
被験物質投与４日目（播種８日目）ノルエピネフリン添加後（図５および図６）
−陰性対照群では、脂肪滴が縮小している細胞も存在していたが、変化があまりないものや肥大化している細胞が多く存在した。
−ＳＯＰ５０μｇ／ｍＬ添加群では、脂肪滴が縮小したものも多かったが、肥大化した脂肪滴も陰性対照と同程度存在した。
−ＳＯＰ１００μｇ／ｍＬ添加群では、５０μｇ／ｍＬ添加群よりも脂肪滴が縮小した脂肪細胞が多く存在し、変化しない細胞が少なかった。
肥大化した脂肪滴は、５０μｇ／ｍＬ添加群よりも若干少なかった。
−ＳＯＰ４００μｇ／ｍＬ添加群では、１００μｇ／ｍＬ添加群よりも、さらに脂肪滴が縮小した脂肪細胞が多く存在し、脂肪滴の小さな脂肪細胞が多く存在した。
肥大化した脂肪滴は、１００μｇ／ｍＬ添加群と同程度存在した。
【００４４】
＜細胞形態観察顕微鏡写真（ＢＡＴ）＞
ノルエピネフリン添加前（図７および図８）
−陰性対照群では、殆どの脂肪細胞が成熟細胞になり、肥大化している細胞も多く存在した。
−ＳＯＰ４００μｇ／ｍＬ添加群では、陰性対照群に比べて小さな脂肪滴を数多く溜めている脂肪細胞が多く存在した。
−いずれの群においても、細胞障害は存在しなかった。
【００４５】
ノルエピネフリン添加後（図９および図１０）
−陰性対照群、ＳＯＰ４００μｇ／ｍＬ添加群とも殆どの脂肪細胞がＶＡＣよりも早く反応が起き、形態的にも1時間後には大きく変化した。
−ＳＯＰ４００μｇ／ｍＬ添加群では、陰性対照群に比べて、形態的変化に大きな差は存在しなかった。
【００４６】
＜遺伝子発現結果＞
遺伝子発現結果は、表１に示した通である。
なお、発現量は、Ｂ３の場合（褐色脂肪細胞（ＢＡＴ）でＳＯＰ無添加、ノルエピネフリン添加）を１．００とし、それとの対比で表したものである。
【００４７】
【表１】
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【００４８】
前記表１からは、以下のことが明らかになった。
１）ＶＡＣでは、ノルエピネフリン未添加時におけるＵＣＰ−１遺伝子発現は検出限界以下で、被験物質投与群においても、全ての群で検出限界以下であった。
２）ＶＡＣのノルエピネフリン添加群では、全ての群でＵＣＰ−１遺伝子が発現した。
３）ＶＡＣのノルエピネフリン添加群において、ＳＯＰ４００μｇ／ｍＬ添加群では、コントロールに比べて、ＵＣＰ−１遺伝子が多く発現した。
４）ＢＡＴではノルエピネフリン添加の有無に関わらずＵＣＰ−１遺伝子が発現した。
５）ＢＡＴのノルエピネフリン未添加群では、コントロールとＳＯＰ４００μｇ／ｍＬ添加群のＵＣＰ−１遺伝子発現量は、ほぼ同等であった。
６）ＢＡＴのノルエピネフリン添加処理群において、ＳＯＰ４００μｇ／ｍＬ添加群では,コントロールに比べて、ＵＣＰ−１遺伝子が僅かに多く発現した。
【００４９】
以上のことから、
イ）ＳＯＰは、その添加により、肥大化脂肪細胞の数が未添加群よりも少なく、小型の脂肪細胞が多い傾向が認められたことから、成熟脂肪細胞から肥大化脂肪細胞への移行を抑制する効果が認められた。
ロ）ＳＯＰの高用量群を４００μｇ／ｍＬに設定したが、播種８日目においても細胞毒性が見られなかったことから、サーモンオバリーペプチドを大量に摂取したとしても、内臓脂肪細胞には害を及ぼさない物質であると認められた。
ハ）ノルエピネフリンの添加によって、陰性対照群で認められない肥大化した脂肪滴の放出、過剰蓄積した脂肪滴の放出が認められた。
時間の経過とともに、脂肪放出する脂肪細胞の数は増加し、ノルエピネフリンを添加して１５時間後には、多くの細胞で蓄積した脂肪滴の放出があり、脂肪滴が抜けた細胞や、非常に小さな脂肪滴になった細胞が多く認められた。
ニ）ＵＣＰ−１遺伝子発現解析結果よって、内臓脂肪細胞、褐色脂肪細胞ともに、ＳＯＰ添加群では、ノルエピネフリン添加時におけるＵＣＰ−１遺伝子発現量を増やす傾向が見られた。
ＳＯＰは、内臓脂肪細胞の褐色脂肪化、または褐色脂肪細胞の、特にノルエピネフリン存在下における、熱産生反応促進効果が認められた。
【００５０】
以上のように、この発明のアドレナリン機能向上剤は、過剰摂取をしても、体内での脂肪細胞への悪影響は認められず、アドレナリン機能の向上により、脂肪細胞の熱産生反応に基づく抗肥満効果が認められた。
【産業上の利用可能性】
【００５１】
この発明のアドレナリン機能向上剤は、上記のような優れた特性を有し、かつ毒性を有するものではないので、健康食品産業で、それらの原料として、広く利用される可能性の高いものである。
【図面の簡単な説明】
【００５２】
【図１】ＳＯＰ無添加のＶＡＣ細胞の顕微鏡写真である。
【図２】ＳＯＰ４００μｇ／ｍＬ添加のＶＡＣ細胞の顕微鏡写真である。
【図３】図1に示される細胞の４日培養後の顕微鏡写真である。
【図４】図２に示される細胞の４日培養後の顕微鏡写真である。
【図５】図３に示される細胞に、ノルエピネフリン添加した後の顕微鏡写真である。
【図６】図４に示される細胞に、ノルエピネフリン添加した後の顕微鏡写真である。
【図７】ＳＯＰ無添加のＢＡＴ細胞の、４日培養後の顕微鏡写真である。
【図８】ＳＯＰ４００μｇ／ｍＬ添加のＢＡＴ細胞の、４日培養後の顕微鏡写真である。
【図９】図７に示される細胞に、ノルエピネフリン添加した６時間後の顕微鏡写真である。
【図１０】図８に示される細胞に、ノルエピネフリン添加した６時間後の顕微鏡写真である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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