(57)【要約】【課題】イムノクロマトグラフィーを利用した検査キット、特に、ラテラルフロー法検査キットに使用されるサンプルパッドであって、試験者が十分な液濡れ性を容易に判断でき、また、診断用の呈色を阻害せず、さらに、発色だけでなく文字の表示等により十分な滴下量かどうかを容易に判断することが可能なインジケーター機能を有するサンプルパッド、及びそれを用いた検査キットを、より低コストで提供する。【解決手段】体外診断薬の検査キットを構成するサンプルパッドにおいて、吸収体の裏側に着色層が配置され、吸収体のΔＬ１が２０以下、ΔＬ２が３０以上であることを特徴とする検査キット用サンプルパッド。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
体外診断薬の検査キットを構成するサンプルパッドにおいて、吸収体の裏側に着色層が配置され、吸収体のΔＬ１が２０以下、ΔＬ２が３０以上であることを特徴とする検査キット用サンプルパッド。
【請求項２】
吸収体が、セルロース繊維混率が５０％以上であり、目付けが７５〜２００ｇ／ｍ２、密度が０．０５〜０．５ｇ／ｃｍ３であることを特徴とする請求項１記載の検査キット用サンプルパッド。
【請求項３】
吸収体が、目付けが９０〜１５０ｇ／ｍ２、密度が０．１〜０．３ｇ／ｃｍ３であることを特徴とする請求項２に記載の検査キット用サンプルパッド。
【請求項４】
請求項１〜３のいずれかに記載のサンプルパッドが配置された体外診断薬の検査キット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は体外診断薬の検査キット用サンプルパッド、およびそれを用いた検査キットに関するものである。
【背景技術】
【０００２】
体外診断薬の検査キット（以下、単に検査キットと称する）では、抗原抗体反応を用いる免疫学的な検査が採用されることが一般的である。
【０００３】
具体的方法としては、酵素、金属コロイド、着色ラテックスなどの呈色識別物質で抗体を標識した標識抗体を、予めキットに含浸させておき、血液、尿、痰、鼻汁、細胞などの検体を滴下後、検体中の抗原と標識抗体が抗原抗体反応により、鍵と鍵穴に例えられる特異的な複合体を形成し、その後、予めキットに塗布された固定化抗体によって複合体が定位置に固定され呈色する。その呈色の有無あるいは程度を目視や光学的な変化として測定し、検体中の抗原の定性分析または定量分析を行う。
【０００４】
上記の検査法を用いることで、ウィルス感染の有無、妊娠の判定、疾病の確認、有害物質の存在の有無、食品中のアレルゲンの有無等を容易にかつ迅速に検査・診断できる。これらは検査キットとして開発市販されている（特許文献１参照）。
【０００５】
このような検査キットの中で、採液孔下部に配置されるサンプルパッドは、始めに尿等の検体を滴下した際に測定に十分な量の検体を吸収し、速やかに後の工程（下流側）に液を受け渡す機能を有するものである。サンプルパッドとしては、ガラス繊維、ろ紙、吸水紙、フェルト状繊維体、不織布、脱脂綿等が使用されている。
【０００６】
このような検査キットを用いた検査においては、測定に十分な検体量を採液することが必要であるが、一見して採液量を把握することは困難であるため、検体量が測定に十分であるかどうかを測定者が容易に判断できない問題があった。
検査キットにおいて、測定者が採液状態を容易に判断できる機能（以下、インジケーター機能）を持たせるために、薬品を使用することで、尿などの検体中の水分によりサンプルパッド部を発色させる方法が検討されている。
【０００７】
具体的には、吸湿・水溶液との接触により色変化を起こす試薬として、ＣｕＳＯ４、Ｃｏ（ＮＯ３）２等の脱水遷移金属塩や、ｐＨ指示薬等が挙げられ、このような試薬をサンプルパッド部に含浸させておき、十分な採液によってサンプルパッド部を発色させる方法がある。
【０００８】
しかしながら、吸湿により変色する試薬は、常温・常圧の製造工程や保存時に取り扱いにくい面がある。また、ｐＨ指示薬は、尿のｐＨが正常域で弱酸性から弱塩基性であるため、使用に適さない場合が多い。さらに、フルオレセインもしくはフルオレセインナトリウム（ウラニン）が水に濡れると橙赤色から蛍光緑色に色調変化する性質を利用したものがある（例えば、特許文献２参照）が、系を塩基性にするためあらかじめ塩基性樹脂を試験紙に含浸・乾燥する工程が必要であり、コストがかかること、薬品を使うため後の判定に影響しないか十分な吟味が必要であること、インジケーターの色が特定されてしまうことなどの問題点があった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００９】
【特許文献１】実公平７−１４８９２号公報
【特許文献２】特開平６−３００７５１号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
本発明は、イムノクロマトグラフィーを利用した検査キット、特に、ラテラルフロー法検査キットに使用されるサンプルパッドであって、試験者が十分な液濡れ性を容易に判断でき、また、診断用の呈色を阻害せず、さらに、発色だけでなく文字の表示等により十分な滴下量かどうかを容易に判断することが可能なインジケーター機能を有するサンプルパッド、及びそれを用いた検査キットを、より低コストで提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明者らは、上記課題を解決するために鋭意検討した結果、検査キットを構成するサンプルパッドが吸収体の裏側に着色層を配置した構造であると、上記課題が解決されることを見出し、本発明をなすに至った。
【００１２】
本発明のサンプルパッドは、採液によって透けて着色層の状態が目視できるような特定の吸収体を用いることにより、吸収体が乾燥状態では着色層を隠し、吸水状態では吸水により発色して、濡れているかどうかが容易に判断できる。
【００１３】
即ち、本発明は、以下のとおりである。
１．体外診断薬の検査キットを構成するサンプルパッドにおいて、吸収体の裏側に着色層が配置され、吸収体のΔＬ１が２０以下、ΔＬ２が３０以上であることを特徴とする検査キット用サンプルパッド。
【００１４】
２．吸収体が、セルロース繊維混率が５０％以上であり、目付けが７５〜２００ｇ／ｍ２、密度が０．０５〜０．５ｇ／ｃｍ３、であることを特徴とする上記１に記載の検査キット用サンプルパッド。
【００１５】
３．吸収体が、目付けが９０〜１５０ｇ／ｍ２、密度が０．１〜０．３ｇ／ｃｍ３であることを特徴とする上記２に記載の検査キット用サンプルパッド。
４．上記１〜３のいずれかに記載のサンプルパッドが配置された体外診断薬の検査キット。
【発明の効果】
【００１６】
本発明の検査キット用サンプルパッドは、乾燥時と吸湿時とで透け性能が異なる特定の吸収体の裏側に着色層を配置させることで、十分な吸液量により発色するインジケーター機能を持たせることができる。そのため、検査キットを用いた検査の際、測定者が、測定に十分な吸液量かどうかを容易に判断できる。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】検査キットの一例について、その構造を概略的に示す図（組み立て前の斜視図）である。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
本発明について以下に詳細に説明する。
本発明において、検査キットとは、体外診断薬による検査キットである。具体的には、液状の検体（尿等）を採液し、キット内で検体を標識抗体に接触させ、反応による呈色の有無や程度を目視や光学的変化として測定することができるものであり、例えば図１に示す構造のものである。
【００１９】
本発明において、検査キットの形状、メンブレン担体、標識抗体、インナーシートを形成するコンジュゲートパッド、吸水パッド等その他の部材は、公知のものを使用でき、限定されるものではない。また検査キットの使用方法は、サンプルパッド部に直接検体をかける場合が一般的であるが、他の方法、例えば、コップ等に検体を採取してから測定する方法をとってもかまわない。
【００２０】
以下、検査キットの代表的な構成を、図１に基づいて説明する。検査キットは、ハウジング１の内部に、採液〜呈色機能を有するインナーシート４が配置されている。インナーシートは、液流れの上流より採液部（サンプルパッド５）、試薬含有部（コンジュゲートパッド６）、判定表示部（メンブレン７）、吸水部・乾燥部（吸水パッド８）から構成されており、それぞれ下記の機能を有する。
【００２１】
（１）採液部
採液孔から採液部（サンプルパッド）に検体が供給される部分であり、採液の方法は特に限定されない。例えば、検体（尿等）を直接かけたり、いったん採取した検体をスポイトなどで滴下したり、採取した検体につけることで液を採取する。サンプルパッドに採液された検体は速やかに下流に移動される。
【００２２】
（２）試薬含有部
検体中に存在しうる被検物質（例えば、ｈＣＧ）に対して特異的に結合する標識化された第一試薬（例えば、金コロイドで標識化された第一の抗ｈＣＧ抗体）が含浸されており、凍結乾燥されている。サンプルパッドに吸収された検体中に被検物質が含有されている場合、この被検物質は標識化された第一試薬と結合し、次の判定表示部（メンブレン）へ展開される。
【００２３】
（３）判定表示部
判定表示部（メンブレン）は、不織布、ろ紙、ガラス繊維ろ紙、ナイロンまたはニトロセルロースなどのクロマトグラフ媒体から形成されており、被検物質と特異的に結合する第２試薬（例えば、第２の抗ｈＣＧ抗体）があらかじめ塗布され、固定されている。したがって、判定表示部においては、検体中に被検物質が含有されている場合、標識化された第１試薬と結合した被検物質が捕捉され、標識物質（例えば、金コロイド）が付着して赤紫色等に呈色する。
【００２４】
必要に応じて反応終了表示部があっても良い。例えば、フェノールフタレイン、コンゴーレッドなどのｐＨ表示薬が塗布された吸水性ろ紙が配置されていれば、検体が反応終了表示部まで浸透してくると、ｐＨ指示薬と反応して呈色し、反応が終了したことを示す。
【００２５】
（４）吸水部・乾燥部
吸水部は、上流からの検体液を吸収する目的で設けられている。吸水部がないと、検体液が多量の場合、濡れ戻りを起こす等により正常に検査できなくなる可能性がある。
【００２６】
乾燥部は、例えば、塩化カルシウムあるいはシリカゲルとパルプによりシート状に加工された乾燥剤から形成されている。この乾燥部は、各試薬などの能力を維持させる目的でも設けられている。乾燥部は必ずしも必要ないが、キット内試薬の吸湿による失活を防ぐ目的から、設けられている方が好ましい。
【００２７】
このようなインナーシートを構成するイムノクロマトアッセイは、採液部、試薬含有部、判定表示部、反応終了表示部、および、吸水部・乾燥部を構成する材料を、それぞれ両面テープあるいはスプレーのりなどにより基盤材料上に貼り付けるか、もしくは、種々の接着剤を用いて粘着加工された基盤材料上に貼り付けた後、裁断加工して製造することが可能である。
【００２８】
基盤材料としては、例えば、ポリ塩化ビニル、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリエステル、ポリスチレン、アクリル酸ポリマーなどの不透湿材料、および、紙に、前記不透湿材料をコートしたものなどが用いられる。
【００２９】
上記のイムノクロマトアッセイは、取り扱い性を考慮して、ハウジングに収められていることが一般的である。ハウジングの素材は特に限定されないが、例えば、ポリ塩化ビニル、ポリプロピレン、ポリエチレン、ポリスチレン、アクリル酸ポリマー等が用いられる。
【００３０】
本発明の検査キット用サンプルパッドは、検体が尿、便懸濁液、その他の体液で、被検物質がｈＣＧの他、ＬＨ、ＦＳＨ（卵胞刺激ホルモン）、ＴＳＨ（甲状腺刺激ホルモン）、ヘモグロビン、糖、その他タンパク質などで特に有効であり、それぞれの被検物質によって、試薬の種類、あらかじめ試薬を含有させる素材、その位置、含有させる方法などを任意に選択することができる。
【００３１】
本発明の検査キット用サンプルパッドは、サンプルパッドとしての吸水特性と、測定時に十分な液濡れを容易に判断できるインジケーター機能を付与する構造を有する。
吸水特性を発現するためには、吸収体として、繊維構造物を用いることが好ましい。繊維構造物からなる吸収体の吸水特性は構造物の目付け、密度、繊維素材等によって決まるが、サンプルパッドの性能としては、適切な一時保水量、液渡し性が重要である。
【００３２】
目付けは７５〜２００ｇ／ｍ２が好ましく、９０〜１５０ｇ／ｍ２がさらに好ましい。目付けが大きすぎると、一時保水量が滴下液量に対して大きくなりすぎてサンプルパッドが液を保持してしまい、後（下流側）の工程（コンジュゲートパッドでの抗体放出、抗原抗体複合体形成）への液渡しが不十分になり、結果として測定に十分な液量が不足する。また、目付けが小さすぎると、一時保水量が少なくなりすぎて、測定時に液で濡らした際、サンプルパッドから液があふれてしまい十分な液量が確保できず、同様に、後の工程での液量が不足する。
【００３３】
また、密度は０．０５〜０．５ｇ／ｃｍ３が好ましく、０．１〜０．３ｇ／ｃｍ３がさらに好ましい。密度が大きくなりすぎると、繊維が密の状態であるため検査液が流動しにくくなって、次の工程への液流れ性が悪くなり、測定時に液で濡らした際、パッドから液があふれてしまい十分な液量が確保できない。
【００３４】
サンプルパッドの素材は、親水化処理されている必要があるが、親水化の方法は界面活性剤を含浸するなどの常法でかまわない。素材が疎水性であると、液を滴下した際に水分をはじくため、部材がスムーズに吸液できない。
インジケーター機能は、吸収体と着色層の配置状態、および、吸収体のΔＬ１、ΔＬ２を適切な範囲とすることによって機能が発揮される。
【００３５】
本発明の検査キット用サンプルパッドは、吸収体の裏側に着色層が配置されていることを特徴とする。吸収体の裏側とは、検査キットの目視できる面（通常採液孔に面した部分）の反対面のことである。図１に示す構造の検査キットを寝かせた状態で、上部採液孔から検体を採液する場合であれば、サンプルパッドの上面に吸収体が、その下に着色層がそれぞれ配置されていれば良い。
【００３６】
本発明のサンプルパットを構成する吸収体は、後述するΔＬ１およびΔＬ２が特定範囲であることを特徴とする。
【００３７】
ΔＬ１とは、分光光度計を用いて、白色板に吸収体を重ねて測色したＬ１値と、黒色板に吸収体を重ね測色したＬ２値の差を下記式（１）により算出する。ΔＬ１が小さいほど乾燥時に吸収体裏面の着色層が透けにくく、本発明では、吸収体のΔＬ１は２０以下であることが必要であり、好ましくは１５以下である。ΔＬ１が大きすぎると、液で濡らす前に吸収体が透けるため、液で濡らした際に液濡れ性の判別が困難になる。
【００３８】
ΔＬ２とは、吸水後に同様に白色板に吸収体を重ねて測色したＬ３値と、黒色板に吸収体を重ねて測色したＬ４値の差（ΔＬ２値）を下記式（２）により算出する。ΔＬ２が大きいほど、吸水後の吸収体裏面の着色層が透ける事を意味する。本発明では、吸収体のΔＬ２は３０以上であることが必要であり、好ましくは３４以上である。ΔＬ２が小さすぎると、液で濡らした際に発色不足となり、液濡れ性の判別が困難になる。
【００３９】
ΔＬ１＝Ｌ１−Ｌ２  ……（１）
ΔＬ２＝Ｌ３−Ｌ４  ……（２）
【００４０】
ΔＬ１、ΔＬ２が上記範囲である吸収体は、吸収体の構造、構成する繊維の種類を適宜調節することで得られる。すなわち、吸収体の目付け、密度は、吸収される液量やキットのハウジングサイズ等により、適宜変えることができる。
【００４１】
吸収体を形成する繊維は短繊維でも長繊維でも良く、特にセルロース繊維が好適に用いられ、例えば、綿、パルプ、麻、キュプラ、ビスコースレーヨン、ポリノジックレーヨン、リヨセルなどが挙げられる。また、吸収体は、セルロース繊維のみで構成されていても良いし、ポリアミド系繊維、ポリオレフィン系繊維、ポリエステル系繊維、アクリル系繊維、ポリウレタン系繊維などの疎水性繊維を含有していても良い。
【００４２】
吸収体のセルロース混率は５０％以上が好ましく、さらに好ましくは８０％以上である。セルロースを混合する方法としては、上記セルロース繊維と疎水繊維をあらかじめ混合し、ニードルパンチ法やウォーターパンチ法、エアーレイド法、抄造法、バインダー法など公知の方法でシート化することができる。
【００４３】
また、特定物質の吸着を防止するための薬剤、親水性をコントロールするための界面活性剤、繊維固定用樹脂、顔料、染料などを含有してもかまわない。また、吸収体部は親水性があれば、形態は特に限定されず、例えば、布地、織物、編み物、不織布などが挙げられる。
【００４４】
着色層は、着色している素材、もしくは文字や記号等が印字されている素材であれば、素材や形態は特に限定されない。着色層の素材としては、例えば、セルロース繊維、セルロース繊維と疎水性繊維の組み合わせ、親水化処理した疎水性繊維の布地、織物、編み物、不織布、色紙、フィルム等が挙げられる。ハウジング内の吸収体底部面を着色させて着色層としても良い。着色方法も特に限定されず、例えば、染料による着色、顔料による着色、色素練り込みによる着色などが挙げられる。染料等は、検体との接触等によって後の工程への悪影響を及ぼさず、着色層の色が溶け出さないものを選べば良い。着色層が疎水性の場合には、後の工程に送液するために、コンジュゲートパッドは着色層の下部に配置されていてはならない。
【００４５】
吸収体と着色層が配置された構造としては、接着している場合だけでなく、キットを構成時に吸収体部と着色層部を重ねて検査キット内で一体化するものも含む。接着する方法としては、特に限定はされないが、通液性や吸水性を阻害しない方法で行う必要があり、ポリエチレンやエチレン酢酸ビニル系などのホットメルトパウダー、ネット状シートを用いて熱接着する方法、アクリル系樹脂やＰＶＡ樹脂等を接着剤として部分的に接着させる方法、ニードルパンチやウォーターパンチ等により物理的に交絡一体化する方法などが挙げられる。
【実施例】
【００４６】
以下、本発明を実施例により具体的に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。また、例中の測定法、評価法等は、下記のとおりである。
【００４７】
（１）厚み（ｍｍ）
厚み計を用いて１．９６Ｎ／ｍｍ２の圧力下での厚みを測定した。
【００４８】
（２）目付（ｇ／ｍ２）
０．０５ｍ２以上の面積の繊維構造体を１０５℃で一定重量になるまで乾燥後、２０℃、６５％ＲＨの恒温室に１６時間以上放置してその重量を測定し、１ｍ２当たりの重量を求めた。
【００４９】
（３）密度（ｇ／ｃｍ３）
上記の厚みおよび目付から算出した。
【００５０】
（４）ΔＬ１、ΔＬ２
分光光度計（Ｇｒｅｔａｇ  Ｍａｃｂｅｔｈ社製：Ｃｏｌｏｒ−Ｅｙｅ  ７０００Ａ）を用いて、前述の方法で測定し、算出した。
【００５１】
（５）インジケーター機能の評価
９ポイント、黒色、明朝体フォントの文字を印刷したコピー用紙を着色層として用い、吸収体を着色層に市販スプレーのりを用いて貼り合せ、１０ｍｍ×４０ｍｍのサンプルパッドを作成し、吸収体側より水を４００μｌマイクロピペットにより滴下した。
【００５２】
繊維の研究に従事する５人の検査員の目視判定により、吸水前後での文字の見え方（吸水前には文字が透けて見えず、吸水後には文字が透けて見える程度）を判定し、インジケーター機能の評価とした。
【００５３】
○：吸水前には文字が見えず、吸水後には文字が見える
△：吸水前には文字が見え、吸水後には文字が見えない判定あり
×：吸水前にも文字が見える、もしくは吸水後にも文字が見えない
【００５４】
（６）一時保水性
あらかじめ作成した１０ｍｍ×４０ｍｍのサンプルパッドを図１に示す構造を持った市販検査キットのハウジングに収め、青色インクにより着色した水４００μｌをサンプルパッドの中心にマイクロピペットにより滴下した際に液があふれるかどうかを目視により判定した。
【００５５】
○：液あふれせず速やかに吸収される
△：液あふれしないものの液が吸収されにくい
×：滴下時に液あふれする
【００５６】
（７）通液性
あらかじめ作成した１０ｍｍ×４０ｍｍのサンプルパッドを、図１に示す構造を有する市販検査キットのハウジングに収め、青色インクにより着色した水４００μｌを、サンプルパッドの中心にマイクロピペットで滴下後、後の工程（コンジュゲートパッド）に液がスムーズに移動するかどうかを、コンジュゲートパッド全体が着色するまでの時間により判定した。
【００５７】
○：５秒以内に液が移動する
△：１０秒以内に液が移動する
×：液が移動するのに１０秒より長くかかる
【００５８】
（８）インジケーター機能付サンプルパッドとしての総合判定
○：インジケーター機能、一時保水性、通液性のうち×がないとき
×：インジケーター機能、一時保水性、通液性のうち×が一つでもあるとき
【００５９】
次に、本発明の実施例の評価に使用される部材、検査液について説明する。
実施例は、図１に示す構造の市販排卵日検査キットの各部材を用いて測定を行った。検査キットは、液流れの上流より採液部（サンプルパッド）、試薬含有部（コンジュゲートパッド）、判定表示部（メンブレン）、吸水部・乾燥部（吸水パッド）から構成されている。
【００６０】
〔実施例１〕
吸収体として、目付け１１０ｇ／ｍ２、密度０．１１ｇ／ｃｍ３、ΔＬ１＝１３、ΔＬ２＝３７、セルロース混率１００％のセルロース不織布（旭化成せんい社製：商標名「ベンリーゼ」）を用い、着色層として、９ポイント、黒色、明朝体フォントを印刷した市販のコピー用紙を用いた。
【００６１】
上記吸収体と着色層を、市販のスプレーのり（３Ｍ社製：商標「スプレーのり５５カラー」）で貼り合わせ、（１０ｍｍ×４０ｍｍ）に切断して、サンプルパッドを得た。
得られたサンプルパッドを、あらかじめサンプルパッド部を取り外した上記の市販検査キットにセットし、評価した。その結果、インジケーター機能、一時保水性、通液性ともに○になりインジケーター機能付サンプルパッドとして優れたものであった。
【００６２】
〔実施例２〜８〕
目付け、密度、ΔＬ１、ΔＬ２、セルロース混率を、表１に示すように調整した吸収体を用いたこと以外は、実施例１と同様にして吸収体と着色層を一体化し、サンプルパッドを作成し、評価した。結果は表１に示すとおりであった。すなわち、インジケーター機能、一時保水性、通液性は○ないし△となり、インジケーター機能付サンプルパッドとして優れたものであった。
【００６３】
〔実施例９〕
吸収体として丸編み機（福原精機製作所製小寸丸編み機ＦＲＳ／Ｌ、２１インチ、２０Ｇ）を用いて常法により作成したサンプルパッドはインジケーター機能付サンプルパッドとして優れたものとなった。
【００６４】
〔比較例１〜６〕
目付け、密度、ΔＬ１、ΔＬ２、セルロース混率を、表１に示すように調整した吸収体を用いたこと以外は、実施例１と同様にして吸収体と着色層を一体化し、サンプルパッドを作成し、評価した。結果は表１に示すとおりであり、インジケーター機能付サンプルパッドとして不適なものであった。すなわち、インジケーター機能、もしくは一時保水性、通液性のいずれかが×となり、インジケーター機能付サンプルパッドとして使用できるものではなかった。
【表１】
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【産業上の利用可能性】
【００６５】
本発明の検査キット用サンプルパッドは、検査キットに用いることにより、十分な吸液量によって発色するインジケーター機能を持たせることができる。そのため、測定者が、測定に十分な吸液量かどうかを容易に判断できる。
【符号の説明】
【００６６】
１    ハウジング
２    採液孔
３    判定窓
４    インナーシート
５    サンプルパッド
６    試薬含有部（コンジュゲートパッド）
７    判定表示部（メンブレン）
８    吸水・乾燥部（吸水パッド）
【図１】
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