(57)【要約】【課題】ヒト心臓において脈管形成を誘導するための薬学的組成物およびその方法を提供すること。【解決手段】０．２μｇ／ｋｇ〜４８μｇ／ｋｇの、配列番号２のＦＧＦ−２またはその脈管形成活性フラグメントもしくは脈管形成活性ムテインを薬学的に受容可能なキャリア中に含む、単位用量組成物。冠状動脈疾患についてヒト患者を処置するための方法（１つ以上の冠状動脈または１つの末梢静脈中に、安定かつ脈管形成に有効な用量の、組換えＦＧＦ−２またはその脈管形成活性フラグメントもしくは脈管形成活性ムテインを投与する工程を包含する）。一単位用量組成物は、再処置が必要となる前に６ヶ月続く、ヒトＣＡＤ患者における脈管形成効果を提供する。患者の安全性を最適にする投与方法（液体、ヘパリンおよび／または注入速度のすべてが役割を果たす）。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
本明細書中に記載の発明。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（発明の背景）
（Ａ．発明の分野）
本発明は、ヒトにおける心臓の脈管形成を誘導するための単位用量組成物に関する。この組成物は、治療的に有効な量の、ＦＧＦ−２またはその脈管形成活性フラグメントもしくは脈管形成活性ムテインを含む。本発明はまた、一単位用量組成物をヒトに投与して、その患者に対する全身の危険を最小にしつつ、心臓の脈管形成を誘導する、方法に関する。本発明は有用である。なぜなら、開示された単位用量組成物、およびその投与方法は、冠状動脈疾患（ＣＡＤ）の処置のための、血管形成術または外科的介入の代替法を提供し、そしてさらに、ヒトにおいて心筋梗塞（ＭＩ）後損傷を減少するための補助を提供するからである。
【背景技術】
【０００２】
（Ｂ．発明の背景）
線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）は、少なくとも１８個の構造的に関連するポリペプチド（ＦＧＦ−１〜ＦＧＦ−１８と名付けられる）のファミリーであり、これらのポリペプチドは、プロテオグリカン（例えば、ヘパリン）についての高い程度の親和性により特徴付けられる。種々のＦＧＦ分子は、１５〜２３ｋＤのサイズの範囲であり、そして正常状態および悪性状態において、以下を含む、広範囲の生物学的活性を示す：神経細胞接着および分化[Ｓｃｈｕｂｅｒｔら、Ｊ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．１０４：６３５〜６４３（１９８７）]；創傷治癒[米国特許５，４３９，８１８号（Ｆｉｄｄｅｓ）]；多くの中胚葉細胞型および外胚葉細胞型へのマイトジェンとして、栄養因子として、分化誘導因子または分化阻害因子として[Ｃｌｅｍｅｎｔｓら、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ８：１３１１〜１３１６（１９９３）]および脈管形成因子として[Ｈａｒａｄａ、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．、９４：６２３〜６３０（１９９４）]。従って、ＦＧＦファミリーは、種々の程度に、線維芽細胞、平滑筋細胞、上皮細胞および神経細胞を刺激する、多能性増殖因子のファミリーである。
【０００３】
ＦＧＦが、正常な組織により、例えば、胎児の発生または創傷治癒において、放出される場合に、ＦＧＦは、時間的制御および空間的制御を受ける。しかし、このＦＧＦファミリーのメンバーの多くはまた、オンコジーンである。従って、時間的制御及び空間的制御が存在しない際に、ＦＧＦは、脈管形成を提供することによって、腫瘍増殖を刺激する潜在能力を有する。
【０００４】
冠状動脈疾患は、１つ以上の冠状動脈がプラークの形成を介して次第に閉塞される（アテローム性動脈硬化症）ヒトにおいて、進行性の状態である。この疾患を有する患者の冠状動脈は、しばしば、バルーン血管形成術、またはステントの挿入をして、部分的に閉塞した動脈を拡げるのを助けることにより、処置される。最終的には、これらの患者の多くは、大いな支出および危険がある冠状動脈バイパス手術を受ける必要がある。このような患者に、冠状動脈の血流を増強して、バイパス手術を受ける必要性を減少させる医薬を提供することが、望ましい。
【０００５】
患者が心筋梗塞を患っている場合に、ヒトにおいて、より一層重篤な状況が生じ、この状況では、１つ以上の冠状動脈または冠状細動脈が、例えば、凝固によって、完全に閉塞する。閉塞した動脈または細動脈により供給される心筋層の部分への循環を回復する緊急の必要性が存在する。失われた循環が梗塞の開始から数時間以内に回復された場合に、その閉塞より下流である心筋層に対する損傷の多くは、防止され得る。凝固溶解薬物（例えば、組織プラスミノーゲンアクチベーター（ｔＰＡ）、ストレプトキナーゼ、およびウロキナーゼ）が、この場合に有用であることが証明されている。しかし、凝固溶解薬物への補助として、脈管形成によって、損傷した心筋層または閉塞した心筋層への側副循環を得ることもまた、望ましい。
【０００６】
従って、冠状動脈疾患の間および／または急性心筋梗塞の後に、ヒト患者に心臓の脈管形成を提供する、医薬および投与様式を提供することが、本発明の目的である。より詳細には、副作用を最小にしつつ所望の特性の心臓の脈管形成を提供する、治療用量のＦＧＦおよびヒトへの投与の様式を提供することが、本発明のさらなる目的である。
【０００７】
種々のＦＧＦ分子の多くが単離され、そして心筋虚血の種々の動物モデルに投与されて、種々の、そして時には反対の、結果を生じた。Ｂａｔｔｌｅｒらによると、「心筋虚血のイヌモデルは、天然に存在する側副循環の多さが原因で、ブタモデルとは反対に、批判に値した。ブタモデルは、その天然の側副循環の相対的少なさおよびヒト冠状循環へのその類似の点で勝る」（Ｂａｔｔｌｅｒら「Ｉｎｔｒａｃｏｒｏｎａｒｙ  Ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｂａｓｉｃ  Ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｅｎｈａｎｃｅｓ  Ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ  ｉｎ  Ｉｎｆａｒｃｔｅｄ  Ｓｗｉｎｅ  Ｍｙｏｃａｒｄｉｕｍ」ＪＡＣＣ、２２（７）：２００１〜６（１９９３年１２月）、２００２ページ、第１段。しかし、Ｂａｔｔｌｅｒら（心筋梗塞モデルにおいて、ブタにウシｂＦＧＦ（すなわち、ＦＧＦ−２）を投与した）は、１つの動物種から別の種に変えると得られる種々の結果を考慮した。そしてＢａｔｔｌｅｒらは、明らかに、異なる結果「従って、異なる動物種から結果を推定する際に気を付けられなければならない注意を強調する」（Ｂａｔｔｌｅｒら、２００５頁、第１段）を開示する。さらに、Ｂａｔｔｌｅｒは、「ｂＦＧＦ[すなわち、ウシＦＧＦ−２]の投薬量および投与の様式は、達成される生物学的効果に対して、深い関係を有し得る」（Ｂａｔｔｌｅｒら、２００５頁，第１段）を指摘する。従って、ヒト患者において、ＣＡＤおよび／またはＭＩ後損傷の安全かつ効力のある処置を提供する、線維芽細胞増殖因子の投薬量および投与様式を発見することが、本発明のさらなる目的である。より一般的には、ヒト心臓において、脈管形成を誘導するための、薬学的組成物およびその方法を提供することが、本発明の目的である。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明はまた、以下の項目を提供する。
（項目１）ヒトにおいて脈管形成を誘導するための単位用量組成物であって、約０．００８ｍｇ〜約７．２ｍｇの、ＦＧＦ−２またはその脈管形成活性フラグメントもしくは脈管形成活性ムテインを薬学的に受容可能なキャリア中に含む、組成物。
（項目２）項目１に記載の単位用量組成物であって、０．３ｍｇ〜３．５ｍｇの、ＦＧＦ−２またはその脈管形成活性フラグメントもしくは脈管形成活性ムテインを含む、組成物。
（項目３）項目１に記載の単位用量組成物であって、前記ＦＧＦ−２が配列番号２のアミノ酸配列を有する、組成物。
（項目４）項目３に記載の単位用量組成物であって、０．３ｍｇ〜３．５ｍｇの、配列番号２のＦＧＦ−２またはその脈管形成活性フラグメントもしくは脈管形成活性ムテインを薬学的に受容可能なキャリア中に含む、組成物。
（項目５）項目３に記載の単位用量組成物であって、約０．００８ｍｇ〜約７．２ｍｇの、前記配列番号２のＦＧＦ−２の前記脈管形成活性ムテインを薬学的に受容可能なキャリア中に含む、組成物。
（項目６）項目５に記載の単位用量組成物であって、０．３ｍｇ〜３．５ｍｇの、前記配列番号２のＦＧＦ−２の前記脈管形成活性ムテインを薬学的に受容可能なキャリア中に含む、組成物。
（項目７）項目３に記載の単位用量組成物であって、約０．００８ｍｇ〜約７．２ｍｇの、前記配列番号２のＦＧＦ−２の前記脈管形成活性フラグメントを薬学的に受容可能なキャリア中に含む、組成物。
（項目８）項目７に記載の単位用量組成物であって、０．３ｍｇ〜３．５ｍｇの、前記配列番号２のＦＧＦ−２の前記脈管形成活性フラグメントを薬学的に受容可能なキャリア中に含む、組成物。
（項目９）項目３に記載の単位用量組成物であって、約０．００８ｍｇ〜約７．２ｍｇの、前記配列番号２のＦＧＦ−２を薬学的に受容可能なキャリア中に含む、組成物。
（項目１０）冠状動脈疾患に関してヒト患者を処置するための方法であって、該方法は、安全かつ治療的に有効な量の、組換えＦＧＦ−２またはその脈管形成活性フラグメントもしくは脈管形成活性ムテインを、該冠状動脈疾患に関する処置が必要なヒト患者中の１つ以上の冠状血管または１つの末梢静脈に投与する工程であって、該治療的に有効な量が患者の体重について約０．２μｇ／ｋｇ〜４８μｇ／ｋｇである、工程を包含する、方法。
（項目１１）項目１０に記載の方法であって、前記組換えＦＧＦ−２が配列番号２のアミノ酸配列を有する、方法。
（項目１２）項目１１に記載の方法であって、前記ヒト患者に対して、前記配列番号２の組換えＦＧＦ−２または前記その脈管形成活性フラグメントもしくは脈管形成活性ムテインを投与する約０〜３０分以内前に、約１０Ｕ／ｋｇ〜８０Ｕ／ｋｇのヘパリンを投与する工程をさらに包含する、方法。
（項目１３）項目１２に記載の方法であって、前記治療的に有効な量の、配列番号２の組換えＦＧＦ−２またはその脈管形成活性フラグメントもしくは脈管形成活性ムテインが、１つ以上の冠状血管に投与される、方法。
（項目１４）項目１３に記載の方法であって、前記配列番号２の組換えＦＧＦ−２またはその脈管形成活性フラグメントもしくは脈管形成活性ムテインの、治療的に有効な量が、約２４μｇ／ｋｇ〜４８μｇ／ｋｇである、方法。
（項目１５）項目１２に記載の方法であって、前記治療的に有効な量の、配列番号２の組換えＦＧＦ−２またはその脈管形成活性フラグメントもしくは脈管形成活性ムテインが、１つの末梢静脈に投与される、方法。
（項目１６）項目１５に記載の方法であって、前記配列番号２の組換えＦＧＦ−２またはその脈管形成活性フラグメントもしくは脈管形成活性ムテインの、治療的に有効な量が、約１８μｇ／ｋｇ〜３６μｇ／ｋｇである、方法。
（項目１７）冠状動脈疾患に関してヒト患者を処置するための方法であって、該方法は、一単位用量の、組換えＦＧＦ−２またはその脈管形成活性フラグメントもしくは脈管形成活性ムテインを、冠状動脈疾患に関する処置が必要なヒト患者中の１つ以上の冠状血管または１つの末梢静脈に投与する工程であって、該単位用量が、組換えＦＧＦ−２またはその脈管形成活性フラグメントもしくは脈管形成活性ムテイン約０．０８ｍｇ〜７．２ｍｇを含む、工程を包含する、方法。
（項目１８）項目１７に記載の方法であって、前記ＦＧＦ−２が配列番号２のアミノ酸配列を有する、方法。
（項目１９）項目１８に記載の方法であって、前記一単位用量が、前記ヒト患者において少なくとも４ヶ月続く治療利益を生成する、方法。
（項目２０）項目１９に記載の方法であって、前記一単位用量が、前記ヒト患者において少なくとも６ヶ月続く治療利益を生成する、方法。
（項目２１）項目２０に記載の方法であって、前記一単位用量が、前記ヒト患者において、第２回の単位用量の投与が約６ヶ月間必要でないような効果の大きさおよび持続期間の治療利益を生じる、方法。
（項目２２）項目２０に記載の方法であって、前記一単位用量が、１つ以上の冠状動脈に投与される、方法。
（項目２３）項目２０に記載の方法であって、前記一単位用量が、１つの末梢静脈に投与される、方法。
（項目２４）項目２０に記載の方法であって、前記単位用量が、組換えの配列番号２のＦＧＦ−２またはその脈管形成活性フラグメントもしくは脈管形成活性ムテイン０．３ｍｇ〜３．５ｍｇを含む、方法。
（項目２５）項目１９に記載の方法であって、前記患者に対して、前記単位用量を投与する約０〜３０分前に、１０Ｕ／ｋｇ〜８０Ｕ／ｋｇのヘパリンを静脈内または冠状動脈内投与する工程をさらに包含する、方法。
（項目２６）ヒト患者の心臓において脈管形成を誘導するための方法であって、該方法は、冠状動脈疾患についての処置を必要とするヒト患者中の１つ以上の冠状動脈血管または１つの末梢静脈に、一単位用量の、組換えＦＧＦ−２またはその脈管形成活性フラグメントもしくは脈管形成活性ムテインを投与する工程であって、該単位用量は、組換えＦＧＦ−２またはその脈管形成活性フラグメントもしくは脈管形成活性ムテイン約０．００８ｍｇ〜７．２ｍｇを含む、工程を包含する、方法。
（項目２７）項目２６に記載の方法であって、前記ＦＧＦ−２が配列番号２のアミノ酸配列を有する、方法。
（項目２８）項目２７に記載の方法であって、前記一単位用量が、前記ヒト患者において、１つ以上の臨床的終点の少なくとも４ヶ月続く改良を生じる、方法。
（項目２９）項目２８に記載の方法であって、前記一単位用量が、前記ヒト患者において、１つ以上の臨床的終点の６ヶ月続く改良を生じる、方法。
（項目３０）心筋梗塞についてヒト患者を処置するための方法であって、該方法は、該ヒト患者中の１つ以上の冠状動脈血管または１つの末梢静脈に、一単位用量の、組換えＦＧＦ−２またはその脈管形成活性フラグメントもしくは脈管形成活性ムテインを投与する工程であって、該単位用量は、組換えＦＧＦ−２またはその脈管形成活性フラグメントもしくは脈管形成活性ムテイン約０．００８ｍｇ〜７．２ｍｇを含む、工程を包含する、方法。
（項目３１）項目３０に記載の方法であって、前記患者に対して、前記単位用量を投与する約０〜３０分前に、１０Ｕ／ｋｇ〜８０Ｕ／ｋｇのヘパリンを静脈内または冠状動脈内投与する工程をさらに包含する、方法。
（項目３２）項目３１に記載の方法であって、前記ＦＧＦ−２が配列番号２のアミノ酸配列を有する、方法。
（項目３３）項目３０に記載の方法であって、前記一単位用量が１つの末梢静脈に投与される、方法。
（項目３４）項目３０に記載の方法であって、前記一単位用量が、前記患者の１つ以上の冠状血管に投与される、方法。
（発明の要旨）
本出願人は、約０．２μｇ／ｋｇ〜約４８μｇ／ｋｇの一単位用量のｒＦＧＦ−２またはその脈管形成活性フラグメントもしくは脈管形成活性ムテインを、冠状動脈脈管形成の必要があるヒト患者の１以上の冠状動脈脈管（ＩＣ）または末梢静脈（ＩＶ）へ投与することが、予想外に、このヒト患者へ迅速的かつ治療的な冠状動脈脈管形成を提供したことを発見した。この迅速的かつ治療的な冠状動脈脈管形成は、処置された患者の運動許容時間（ｅｘｅｒｃｉｓｅ  ｔｏｌｅｒａｎｃｅ  ｔｉｍｅ）（ＥＴＴ）の予想外に大きな増加（すなわち、２および６ヶ月での全ての群についての、ベースラインからの平均変化の９６および１００秒の増加）を生じ、この運動許容時間は、予想外に長い期間持続した（すなわち、この記載のように６ヶ月）。これらの変化は、標準的な脈管新生手順に対する必要性を減少させるはずである。本明細書中で使用される用語「冠状動脈脈管形成」は、新しい血管（冠状動脈循環における側副枝として機能する毛細血管から細動脈までのサイズの範囲に及ぶ）の形成を意味する。比較によって、血管形成術は、それが偽薬と比較して３０秒より大きな患者のＥＴＴを増加する場合に、治療的成功として見なされる。
【０００９】
従って、１局面において、本発明は、安全かつ治療的に有効な量のｒＦＧＦ−２またはその脈管形成活性フラグメントもしくは脈管形成活性ムテインを含むｒＦＧＦ−２の単位用量に関する。典型的に、この安全かつ治療的に有効な量は、理想的体重に基づいて、約０．２μｇ／ｋｇ〜約４８μｇ／ｋｇのｒＦＧＦ−２またはその脈管形成活性フラグメントもしくは脈管形成活性ムテインを含む。他の実施態様において、この安全かつ治療的に有効な量の単位用量は、０．２μｇ／ｋｇ〜２．０μｇ／ｋｇ、２．０μｇ／ｋｇより多い〜２４μｇ／ｋｇ未満、または約２４μｇ／ｋｇ〜４８μｇ／ｋｇ  ＩＣのｒＦＧＦ−２またはその脈管形成活性フラグメントもしくは脈管形成活性ムテインを含む。別の実施態様において、この安全かつ治療的に有効な量の単位用量は、１８μｇ／ｋｇ〜３６μｇ／ｋｇ  ＩＶのｒＦＧＦ−２またはその脈管形成活性フラグメントもしくは脈管形成活性ムテインを含む。絶対的な用語（ａｂｓｏｌｕｔｅ  ｔｅｒｍ）で表現される場合、本発明の単位用量は、０．００８ｍｇ〜７．２ｍｇ、より典型的には０．３ｍｇ〜３．５ｍｇの、ｒＦＧＦ−２またはその脈管形成活性フラグメントもしくは脈管形成活性ムテインを含む。適切なＦＧＦ−２は、配列番号２のｒＦＧＦ−２またはその脈管形成的活性フラグメントもしくは脈管形成活性ムテインである。
【００１０】
別の局面において、本発明は、ＣＡＤについてヒト患者を処置するか、または冠状動脈脈管形成を誘発する方法に関する。この方法は、冠状動脈疾患についての処置の必要性がある（または脈管形成の必要性がある）ヒト患者の１以上の冠状動脈または末梢静脈へ、安全かつ治療的に有効な量の組換えＦＧＦ−２（ｒＦＧＦ−２）またはその脈管形成活性フラグメントもしくは脈管形成活性ムテインを投与する工程を包含する。典型的に、この安全かつ治療的に有効な量の一部が、２つの冠状動脈脈管の各々へ投与される。この安全かつ治療的に有効な量は、薬学的に受容可能なキャリア中に、約０．２μｇ／ｋｇ〜約４８μｇ／ｋｇのｒＦＧＦ−２またはその脈管形成活性フラグメントもしくは脈管形成活性ムテインを含む。他の実施態様において、この安全かつ治療的に有効な量は、薬学的に受容可能なキャリア中に、０．２μｇ／ｋｇ〜２．０μｇ／ｋｇ、２．０μｇ／ｋｇより多い〜２４μｇ／ｋｇ未満、または約２４μｇ／ｋｇ〜４８μｇ／ｋｇのｒＦＧＦ−２またはその脈管形成活性フラグメントもしくは脈管形成活性ムテインを含む。絶対的な用語において、上記の方法において使用されるｒＦＧＦ−２またはその脈管形成活性フラグメントもしくは脈管形成活性ムテインの量は、０．００８ｍｇ〜７．２ｍｇ、より典型的には０．３ｍｇ〜３．５ｍｇの、ｒＦＧＦ−２またはその脈管形成活性フラグメントもしくは脈管形成活性ムテインを含む。
【００１１】
ＦＧＦ−２は、グリコサミノグルカン（例えば、ヘパリン）を構築するタンパク質であり、そしてグリコサミノグルカンの存在は、活性およびＡＵＣを最適化し（図３および４を参照）、本発明のｒＦＧＦ−２のＩＣ投薬量は、典型的に、グリコサミノグルカン（例えば、ヘパリン）の投与の０〜３０分前に投与される。ヘパリンは、ＩＣまたはＩＶ（典型的にはＩＶ）で投与される。必要に応じて、ヘパリンは、この単位用量組成物と組み合わされる。
【００１２】
ｒＦＧＦ−２は強力な血管拡張薬である酸化窒素を放出するので、注入の前（先行的に）および間の積極的な流体管理は、患者の安全性に対して重要である。ＩＶ流体（例えば、５００〜１０００ｍＬの通常の生理食塩水）の投与は、注入と関連する収縮期血圧の減少（例えば、＜９０ｍｍＨｇ）のために、ＩＶ流体のボーラス（例えば、２００ｍＬの通常の生理食塩水）の注入および投与の前に１２ｍｍＨｇの楔入圧を確立するために、ヒト患者へのＩＣまたはＩＶ注入によるｒＦＧＦ−２の投与の安全性を最適化した。
【００１３】
ＥＤＴＡは、通常の心筋収縮および心臓伝導のために必要とされるカルシウムの強力なキレート剤であるので、ＥＤＴＡの濃度を最小化することは、患者の完全性に重要である。単位用量組成物中１００μｇ／ｍｌ未満のＥＤＴＡの濃度は、ヒト患者へのＩＣまたはＩＶ注入によるｒＦＧＦ−２の投与の安全性を最適化した。
【００１４】
ｒＦＧＦ−２の急激なボーラスは動物における著しい低血圧と関連するので、注入の速度は患者の安全性に対して重要である。１分当たり０．５〜２ｍＬ（典型的には１分当たり１ｍＬ）での投与は、ヒト患者へのＩＣまたはＩＶ注入によるｒＦＧＦ−２の投与の安全性を最適化した。
【００１５】
冠状動脈脈管形成の必要があるヒト患者へ提供された治療的利益の予想外な大きさおよび持続は、この一単位用量が投与された２週間後というほどの早さで見られ、そしてこの一単位用量がＩＣまたはＩＶ投与された後６ヶ月間持続し、これらは、当該分野で認識された臨床的指標（ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｅｎｄｐｏｉｎｔ）（例えば、心臓の標的領域の、ＥＴＴ、「Ｓｅａｔｔｌｅ  Ａｎｇｉｎａ  Ｑｕｅｓｔｉｏｎｎａｉｒｅ」（ＳＡＱ）およびＭＲＩを測定することによって決定した。特に、５８人のヒトＣＡＤ患者のＥＴＴを、ベースラインで、ならびに一単位用量のｒＦＧＦ−２のＩＣまたはＩＶ経路による投与後１ヶ月、２ヶ月、および６ヶ月でトレッドミルによって評価した場合、臨床的利点が、全ての用量群における数人において観察された。表１を参照のこと。１ヶ月と２ヶ月との間で運動能力（ｅｘｅｒｃｉｓｅ  ｃａｐａｃｉｔｙ）の増加が見られる。平均ＥＴＴは、２ヶ月および６ヶ月で６０秒より多くまで増加し、そして中間用量群（６〜１２μｇ／ｋｇ）または低用量群（０．３３〜２．０μｇ／ｋｇ）と比較して、高用量群（２４〜４８μｇ／ｋｇ）においてより大きな利点が見られた。（表１を参照のこと）。ＩＶによって単位用量のｒＦＧＦ−２を投与された患者についての投薬後２ヶ月および６ヶ月でそれぞれ観察された９３．４秒および８７．５秒のヒト患者におけるＥＴＴの平均増加は、特に、動物モデルによってでは予想外かつ予測外であった。偽薬効果を想定してさえ、これらのＥＴＴについてのベースラインからの平均変化秒は、依然として、脈管形成を伴う結果の予想外に好ましい比較を可能にした。
【００１６】
４８人のヒトＣＡＤ患者の生活の質（ｑｕａｌｉｔｙ  ｏｆ  ｌｉｆｅ）を、有効な疾患特異的質問事項、Ｓｅａｔｔｌｅ  Ａｎｇｉｎａ  Ｑｕｅｓｔｉｏｎｎａｒｉｅ（ＳＡＱ）によって、ベースラインで（すなわち、投薬前に）、ならびにＩＣまたはＩＶ経路による本発明のｒＦＧＦ−２の一単位用量の単一受容の２および６ヶ月で評価した場合、ＳＡＱによって測定される５個のスケールについてのベースラインからの平均変化は、ＩＣまたはＩＶ投与に関わらず、全ての投薬量について臨床的に有意な様式で増加した。（表２〜６）。特に、ＳＡＱによって評価される５個のスケールは、労作能力（ｅｘｅｒｔｉｏｎａｌ  ｃａｐａｃｉｔｙ）、アンギナ安定性、アンギナ頻度、処置満足、および疾患認知である。ベースラインに対して、労作能力についての平均スコアは、２ヶ月で１０．９〜２０．２だけ；そして６ヶ月で１６．５〜２４．１だけ増加した。アンギナ安定性については、その平均スコアは、２ヶ月で３２．１〜４６．２だけ；そして６ヶ月では１６．７〜２３．２だけ増加した。アンギナ頻度については、その平均スコアは、２ヶ月で２０．０〜３２．９だけ；そして６ヶ月で１１．４〜３６．７だけ増加した。処置満足については、その平均スコアは、２ヶ月で８．５〜１９．８だけ；そして６ヶ月で６．３〜１９．８だけ増加した。疾患認知については、その平均スコアは２ヶ月で２０．２〜２７．８だけ；そして６ヶ月で２３．８〜３４．０だけ増加した。一般的に、いずれのスケールにおいても８ポイントの変化が、臨床的に有意であると考えられる。従って、８．５〜４６．２の観察された変化は、評価した５個のスケールの各々について、臨床的に有意である。ベースラインからの１４ポイントの平均変化が臨床的に有意である偽薬を想定してさえ、この結果は、依然として、評価されたほとんど全てのスケールでの予想外の優れた効果を提供する。
【００１７】
本研究の一部として、ＭＲＩがまた、ＣＡＤの診断を下された３３人のヒト患者において実施され、一単位用量のｒＦＧＦ−２の、患者らの心臓拍出（ｃａｒｄｉａｃ  ｅｊｅｃｔｉｏｎ）機能、局所心筋機能および灌流（遅延到達ゾーン）に対する効果を評価した。詳細には、これらの患者に、０．３３μｇ／ｋｇ〜４８μｇ／ｋｇ  ＩＣまたは１８μｇ／ｋｇ〜３６μｇ／ｋｇ  ＩＶの一単位用量の配列番号２のｒＦＧＦ−２を投与した。３３人のヒトＣＡＤ患者を、ベースラインで（すなわち、処置前）、ならびにＩＣまたはＩＶ経路による一単位用量の本発明のｒＦＧＦ−２による処置の１、２および６ヶ月後で、心臓の静止（ｒｅｓｔ）磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）によって評価した場合、これらの患者は、処置の方法に対して高度に統計的に有意な応答を示し、これらは、増加した標的壁肥厚（ｔａｒｇｅｔ  ｗａｌｌ  ｔｈｉｃｋｅｎｉｎｇ）、標的壁移動（ｔａｒｇｅｔ  ｗａｌｌ  ｍｏｔｉｏｎ）、および標的領域側副程度（ｔａｒｇｅｔ  ａｒｅａ  ｃｏｌｌａｔｅｒａｌ  ｅｘｔｅｎｔ）によって、ならびに減少した標的領域遅延到達程度（ｔａｒｇｅｔ  ａｒｅａ  ｄｅｌａｙｅｄ  ａｒｒｉｖａｌ  ｅｘｔｅｎｔ）によって、客観的に測定した。（表７）。要約すれば、１、２および６ヶ月で、標的壁肥厚は、ベースラインに対して、それぞれ、４．４％、６．３％および７．７％増加し；標的壁移動は、ベースラインに対して、それぞれ、２．７％、４．４．％および６．４％増加し；標的領域側副程度（ｔａｒｇｅｔ  ａｒｅａ  ｃｏｌｌａｔｅｒａｌ  ｅｘｔｅｎｔ）は、ベースラインに対して、それぞれ、８．３％、１０．９％および１１．２％増加し；そして標的領域遅延到達程度（ｔａｒｇｅｔ  ａｒｅａ  ｄｅｌａｙｅｄ  ａｒｒｉｖａｌ  ｅｘｔｅｎｔ）は、ベースラインに対して、−１０．０％、−８．３％および−１０．０％減少した。
上記のデータは、本発明に従ってＩＣまたはＩＶ投与した場合に、本発明のｒＦＧＦ−２またはその脈管形成活性フラグメントの単位用量組成物の、ヒトにおける臨床的有効性を実証する。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
【図１Ａ】図１Ａは、２０分間にわたってヒトにＩＣ注入によって投与された、８つの異なる用量のｒＦＧＦ−２（配列番号２）についての、時間プロフィールに対する平均ｒＦＧＦ−２血漿濃度のプロットである。図１Ａに示されるｒＦＧＦ−２の８つの用量は、０．３３、０．６５、２、６、１２、２４、３６、および４８μｇ／除脂肪体重ｋｇである（ＬＢＭ）。
【図１Ｂ】図１Ｂは、２０分間にわたってヒトにＩＶ注入によって投与された、２つの異なる用量のｒＦＧＦ−２（配列番号２）についての、時間プロフィールに対する平均ｒＦＧＦ−２血漿濃度のプロットである。図１Ｂに示されるｒＦＧＦ−２の２つのＩＶ用量は、１８および３６μｇ／ｋｇである。ｒＦＧＦ−２の３６μｇ／ｋｇのＩＣ投与後の平均濃度−時間プロフィールが、比較のために含まれる。
【図２】図２は、図１Ａおよび１Ｂに対応する、ｐｇ*分／ｍｌでの平均ＦＧＦ−２曲線下領域（ＡＵＣ）のプロットである。このプロットは、ＩＣまたはＩＶ注入に続く全身性ｒＦＧＦ−２曝露の用量線形性を示す。ＩＣ経路についてのこの全身性曝露は、ＩＶ投与に続いて見られるものと類似である。
【図３】図３は、「ｒＦＧＦ−２注入前の分」でのヘパリン投与の時間関数としての個々のヒト患者ＦＧＦ−２血漿クリアランス（ＣＬ）のプロットであり、そしてヘパリン投与のタイミングの、ｒＦＧＦ−２血漿クリアランス（ＣＬ）に対する影響を示す。
【図４】図４は、「ｒＦＧＦ−２注入前の分」でのヘパリン投与の時間関数としての、個々のヒト患者ＦＧＦ−２用量正規化曲線下領域（ＡＵＣ）のプロットであり、そしてヘパリン投与のタイミングの、ｒＦＧＦ−２ＡＵＣに対する影響を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
（発明の詳細な説明）
本願は、単回用量のｒＦＧＦ−２またはその脈管形成活性フラグメントもしくは脈管形成活性ムテインが、安全かつ治療的に有効な量で、ＣＡＤと診断されたヒト患者の１つ以上の冠状脈管内または末梢静脈内に投与された場合に、さらなる処置が必要とされる前に少なくとも４〜６ヶ月間、より代表的には少なくとも６ヶ月間持続する、患者の冠状動脈疾患に安全かつ治療的に有効な処置を患者に提供することを発見した。この効果の持続期間、ならびにＥＴＴ、ＳＡＱ、およびＭＲＩにおける改善の大きさは、単回用量の医薬について予期されていなかった。
【００２０】
句「治療的に有効な量」または「安全かつ治療的に有効な量」とは、ｒＦＧＦ−２に関して本明細書中で使用される場合、本発明に従って投与された場合に医学的に管理し得ない主要な合併症がなく、そして最適な医学的管理にも関わらずＣＡＤの症状を有する患者において他覚的な心臓の改善を提供する、ｒＦＧＦ−２またはその脈管形成活性フラグメントもしくは脈管形成活性ムテインの量を意味する。従って、液体の投与によって管理され得る急性低血圧症は、本発明の目的に対して「安全」とみなされる。代表的に、ｒＦＧＦ−２の安全かつ治療的に有効な量は、約０．２μｇ／ｋｇ〜約４８μｇ／ｋｇのｒＦＧＦ−２またはその脈管形成活性フラグメントもしくは脈管形成活性ムテインを含む。本発明における使用に適切なＦＧＦ−２は、配列番号２のｒＦＧＦ−２またはその脈管形成活性フラグメントもしくは脈管形成活性ムテインである。
【００２１】
従って、本発明は複数の局面を有する。その第１の局面では、本発明は、ヒト患者における脈管形成を誘導するための単位用量組成物に関する。この単位用量は、治療的に有効な（すなわち、脈管形成に有効な）量のｒＦＧＦ−２またはその脈管形成活性フラグメントもしくは脈管形成活性ムテインを含み、この量は、約０．２μｇ／ｋｇ〜約４８μｇ／ｋｇのｒＦＧＦ−２またはその脈管形成活性フラグメントもしくは脈管形成活性ムテインを含む。
【００２２】
用語「単位用量組成物」とは、本明細書中で使用される場合、本発明の方法に従ってヒト患者に投与された場合に、少なくとも４〜６ヶ月間、代表的には６ヶ月間再処置を必要としないように、有意な効力の脈管形成作用を脈管形成の必要がある代表的なヒト患者に提供する組成物を意味する。本発明の単位用量組成物は、代表的に、１つ以上の薬学的に受容可能な賦形剤またはキャリアと組み合わせて提供される。単位用量組成物の他の実施態様では、安全かつ治療的に有効な量は、約０．２μｇ／ｋｇ〜約２μｇ／ｋｇ、約２μｇ／ｋｇ〜約２４μｇ／ｋｇ、または約２４μｇ／ｋｇ〜約４８μｇ／ｋｇのｒＦＧＦ−２またはその脈管形成活性フラグメントもしくは脈管形成活性ムテインを含む。
【００２３】
処置される患者の体重に依存しない、より絶対な用語で本発明の単位用量組成物を定義することは都合が良い。このように定義する場合、単位用量組成物は、０．００８ｍｇ〜７．２ｍｇのｒＦＧＦ−２またはその脈管形成活性フラグメントもしくは脈管形成活性ムテインを含む。この実施態様では、単位用量組成物は、最小の患者（例えば、４０ｋｇ）に最低用量（約０．２μｇ／ｋｇ）から、より大きな患者（例えば、１５０ｋｇ）に最高用量（約４８μｇ／ｋｇ）まで範囲する、大多数のヒトＣＡＤ患者のいずれか一人に投薬することに適用させるために十分な量のＦＧＦ−２を含む。より代表的には、単位用量は、０．３ｍｇ〜３．５ｍｇのｒＦＧＦ−２またはその脈管形成活性フラグメントもしくは脈管形成活性ムテインを含む。単位用量組成物を、代表的に、上記で参照した量のｒＦＧＦ−２、および本明細書中で後に記載されるような有効量の１つ以上の薬学的に受容可能な緩衝液、安定剤および／または他の賦形剤を含む、溶液形態または凍結乾燥形態で提供する。
【００２４】
出願人が上記した単位用量組成物における活性因子は、組換えＦＧＦ−２またはその脈管形成活性フラグメントもしくは脈管形成活性ムテインである。組換えＦＧＦ−２を作製する方法は、当該分野において周知である。配列番号２の組換えＦＧＦ−２を、１９９２年１０月１３日に発行された「Ｂａｓｉｃ  Ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ」と表題付けられた米国特許第５，１５５，２１４号（そしてこれは、その全体において、本明細書中で明確に参考として援用される）に記載のように作製する。さらに、この文章の前に出ようと後に出ようと、本明細書中で引用されるすべての他の参考文献を、その全体において、本明細書中で明確に参考として援用する。’２１４特許に開示されるように、配列番号１のＤＮＡ（これは、配列番号２のｂＦＧＦ（本明細書中以降「ＦＧＦ−２」）をコードする）を、ｐＢＲ３２２、ｐＭＢ９、Ｃｏｌ  Ｅ１、ｐＣＲＩ、ＲＰ４、またはλ−ファージのようなクローニングベクター内に挿入し、そしてこのクローニングベクターを使用して真核生物細胞または原核生物細胞のいずれかを形質転換し、この形質転換細胞がＦＧＦ−２を発現する。１つの実施態様では、宿主細胞は、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅのような酵母細胞である。結果として生じた、発現される全長ＦＧＦ−２は、配列番号２と一致して１４６個のアミノ酸を有する。配列番号２のＦＧＦ−２は４個のシステイン（すなわち、残基の２５位、６９位、８７位、および９２位）を有するが、内部ジスルフィド結合は存在しない。［’２１４、第６欄、第５９〜６１頁］。しかし、酸化的条件の下で架橋が生じる場合には、２５位と６９位の残基の間で生じるようである。
【００２５】
１４６個のアミノ酸残基を有する配列番号２のＦＧＦ−２は、天然に存在するヒトＦＧＦ−２とは、わずか２個のアミノ酸残基で異なる。詳細には、配列番号２のＦＧＦ−２の残基１１２位および１２８位のアミノ酸はそれぞれ、ＳｅｒおよびＰｒｏであるが、ヒトＦＧＦ−２では、それらはそれぞれＴｈｒおよびＳｅｒである。事実、対応するヒトＦＧＦ−２のように、ウシＦＧＦ−２は、最初に、１５５個のアミノ酸残基を有するポリペプチドとしてインビボで合成される。Ａｂｒａｈａｍら「Ｈｕｍａｎ  Ｂａｓｉｃ  Ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ：Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｇｅｎｏｍｉｃ  Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ」、ＥＭＢＯ  Ｊ．５（１０）：２５２３−２５２８（１９８６）。配列番号２のＦＧＦ−２を、Ａｂｒａｈａｍの全長１５５残基のウシＦＧＦ−２と比較した場合、配列番号２のＦＧＦ−２は、対応する全長の分子のＮ末端で、最初の９個のアミノ酸残基のＭｅｔ  Ａｌａ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ｉｌｅ  Ｔｈｒ  Ｔｈｒ  Ｌｅｕ（配列番号３）を欠失する。本発明の組成物および方法において使用される組換えＦＧＦ−２を、０９／１１／９０に発行された「Ｂｏｖｉｎｅ  Ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ」と表題付けられた米国特許第４，９５６，４５５号（これは、その全体において、本明細書中で参考として援用される）に詳細に記載される技術を用いて、製薬用品質（９８％以上の純度）に精製した。詳細には、出願人の単位用量組成物の組換えＦＧＦ−２の精製において使用される最初の２つの工程は、「以前に記載されたような、従来のイオン交換精製工程および逆相ＨＰＬＣ精製工程」である。［米国特許第４，９５６，４５５号、これは、Ｂｏｌｅｎら、ＰＮＡＳ  ＵＳＡ  ８１：５３６４−５３６８（１９８４）を引用する］。第３の工程（これを、’４５５特許では「鍵となる精製工程」という［’４５５、第７欄、第５〜６頁］）は、ヘパリン−ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）アフィニティクロマトグラフィーであり、ここではＦＧＦ−２の強力なヘパリン結合親和性を利用して、約１．４Ｍおよび約１．９５ＭのＮａＣｌで溶出した場合に、数１０００倍の精製を達成する［’４５５、第９欄、第２０〜２５頁］。ポリペプチドの均質性を、逆相高圧液体クロマトグラフィー（ＲＰ−ＨＰＬＣ）によって確認した。緩衝液の交換を、ＳＥＰＨＡＤＥＸ（登録商標）Ｇ−２５（Ｍ）ゲル濾過クロマトグラフィーによって達成した。
【００２６】
配列番号２の１４６残基のｒＦＧＦ−２に加えて、本発明の単位用量における活性因子はまた、ＦＧＦ−２の「脈管形成活性フラグメント」を含む。用語ＦＧＦ−２の「脈管形成活性フラグメント」とは、配列番号２の１４６残基の約８０％を有し、かつ配列番号２のＦＧＦ−２の脈管形成活性の少なくとも５０％、好ましくは少なくとも８０％を保持するＦＧＦ−２のフラグメントを意味する。
【００２７】
脈管形成に活性であるために、ＦＧＦ−２フラグメントは、２つの細胞結合部位および２つのヘパリン結合部位のうちの少なくとも１つを有するべきである。類似体ヒトＦＧＦ−２の２つの推定細胞結合部位は、その残基３６位〜３９位および７７位〜８１位に存在する。Ｙｏｓｈｉｄａら「Ｇｅｎｏｍｉｃ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ｏｆ  ｈｓｔ，ａ  Ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ  Ｇｅｎｅ  Ｅｎｃｏｄｉｎｇ  ａ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓ  ｔｏ  Ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒｓ  ａｎｄ  ｔｈｅ  ｉｎｔ−２−Ｅｎｃｏｄｅｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎ」ＰＮＡＳ  ＵＳＡ  ８４：７３０５−７３０９（１９８７年１０月）の図３を参照のこと。ｈＦＧＦ−２の２つの推定ヘパリン結合部位は、その残基１８位〜２２位および１０７位〜１１１位に存在する。Ｙｏｓｈｉｄａ（１９８７）の図３を参照のこと。天然に存在するヒトＦＧＦ−２（ｈＦＧＦ−２）およびｒＦＧＦ−２（配列番号２）についてのアミノ酸配列の間９８％より高い類似性を考慮すると、ｒＦＧＦ−２（配列番号２）の２つの細胞結合部位はまた、その残基の３６位〜３９位および７７位〜８１位であり、そして２つのヘパリン結合部位は、その残基の１８位〜２２位および１０７位〜１１１位であることが予期される。上記と一致して、配列番号２のＦＧＦ−２のＮ末端短縮化（ｔｒｕｎｃａｔｉｏｎ）は、ウシにおいてその活性を除去しないことが周知である。特に、当該分野では、いくつかの天然に存在しかつ生物学的に活性なＦＧＦ−２のフラグメントを開示し、そのフラグメントは、配列番号２のＦＧＦ−２と相対的にＮ末端短縮を有している。配列番号２の残基１２〜１４６を有する活性かつ短縮化されたｂＦＧＦ−２はウシ肝臓において見出され、そして配列番号２の残基１６〜１４６を有する、別の活性かつ短縮化されたｂＦＧＦ−２はウシの腎臓、副腎、および精巣において見出された。［米国特許第５，１５５，２１４号の第６欄、第４１〜４６頁（これは、Ｕｅｎｏら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．ａｎｄ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．１３８：５８０−５８８（１９８６）を引用する）を参照のこと］。同様に、ＦＧＦ活性を有することが公知である配列番号２のｂＦＧＦ−２の他のフラグメントは、ＦＧＦ−２（２４−１２０）−ＯＨおよびＦＧＦ−２（３０−１１０）−ＮＨ2である。［米国特許第５，１５５，２１４号の第６欄、第４８〜５２頁］。これらの後者のフラグメントは、ＦＧＦ−２（配列番号２）の細胞結合部分の両方およびヘパリン結合セグメントのうちの１つ（残基１０７〜１１１）を保持する。従って、ＦＧＦ−２の脈管形成活性フラグメントとは、代表的に、配列番号２のＦＧＦ−２の残基３０〜１１０に対応し、より代表的には配列番号２のＦＧＦ−２の残基１８〜１４６に対応する残基を少なくとも有する、ＦＧＦ−２のそれらの末端を短縮化したフラグメントを包含する。
【００２８】
本発明の単位用量はまた、配列番号２のｒＦＧＦ−２の「脈管形成活性ムテイン」を含む。用語「脈管形成活性ムテイン」とは、本明細書中で使用される場合、ＭＳＰＲＣＨプログラム（Ｏｘｆｏｒｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ）で実行されるようなＳｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎ相同性検索アルゴリズム（Ｍｅｔｈ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．７０：１７３−１８７（１９９７）によって決定される場合に、任意の天然に存在するＦＧＦ−２に対して６５％の配列同一性（相同性）を有し、そして上記の少なくとも６５％の配列同一性を有する天然に存在するＦＧＦ−２の少なくとも５０％、好ましくは少なくとも８０％の脈管形成活性を保持する、単離および精製された組換えタンパク質または組換えポリペプチドを意味する。好ましくは、脈管形成活性ムテインは、天然に存在するＦＧＦ−２に対して少なくとも７５％、より好ましくは少なくとも８５％、そして最も好ましくは少なくとも９０％の配列同一性を有する。他の周知であり慣用的に使用される相同性／同一性の走査アルゴリズムのプログラムとしては、以下が挙げられる：ＰｅａｒｓｏｎおよびＬｉｐｍａｎ、ＰＮＡＳ  ＵＳＡ，８５：２４４４−２４４８（１９８８）；ＬｉｐｍａｎおよびＰｅａｒｓｏｎ，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２２：１４３５（１９８５）；Ｄｅｖｅｒｅａｕｘら、Ｎｕｃ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１２：３８７−３９５（１９８４）；または、Ａｌｔｓｃｈｕｌら、Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３−４１０（１９９０）のＢＬＡＳＴＰ、ＢＬＡＳＴＮ、またはＢＬＡＳＴＸアルゴリズム。これらのアルゴリズムを使用するコンピュータープログラムもまた利用可能であり、そして以下が挙げられるが、これらに限定されない：ＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＢＬＡＳＴ、ＦＡＳＴＡおよびＴＦＡＳＴＡ（これらは、Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｉｎｇ  Ｇｒｏｕｐ（ＧＣＧ）パッケージ、バージョン８、Ｍａｄｉｓｏｎ  ＷＩ  ＵＳＡから市販されている）；ならびに、ＣＬＵＳＴＡＬ（Ｉｎｔｅｌｌｅｇｅｎｅｔｉｃｓ、Ｍｏｕｎｔａｉｎ  Ｖｉｅｗ  ＣＡによるＰＣ／Ｇｅｎｅプログラム中）。好ましくは、配列同一性のパーセンテージを、プログラムによって決定されたデフォルトのパラメーターを用いることによって決定する。
【００２９】
句「配列同一性」は、本明細書中で使用される場合、ムテインのアミノ酸配列の特定の連続的セグメントを、天然に存在するＦＧＦ−２のアミノ酸配列と整列および比較した場合に、ムテイン配列内に類似して位置付けられることが見出される同一のアミノ酸のパーセンテージをいうことが意図される。
【００３０】
ムテインにおけるアミノ酸配列同一性のパーセンテージを考慮する場合、タンパク質またはタンパク質機能の特性に作用しない保存的アミノ酸置換の結果として、いくつかのアミノ酸残基位置が、参照タンパク質とは異なり得る。これらの場合、配列同一性のパーセンテージは、保存的に置換されたアミノ酸における類似性を説明するために、上方に調整され得る。このような調整は、当該分野において周知である。例えば、ＭｅｙｅｒｓおよびＭｉｌｌｅｒ、「Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ａｐｐｌｉｃ．Ｂｉｏ．Ｓｃｉ．４：１１−１７（１９８８）を参照のこと。
【００３１】
本発明の脈管形成因子の「脈管形成活性ムテイン」を調製するために、部位特異的変異誘発についての標準的な技術を使用し得る。これらの技術は、当該分野において公知であり、および／またはＧｉｌｍａｎら、Ｇｅｎｅ  ８：８１（１９７９）またはＲｏｂｅｒｔｓら、Ｎａｔｕｒｅ  ３２８：７３１（１９８７）に教示される。部位特異的変異誘発技術のうちの１つを使用して、配列番号１のｃＤＮＡ配列内に１つ以上の点変異を導入し、１つ以上のアミノ酸置換または内部欠失を導入する。保存的アミノ酸置換とは、置換されるアミノ酸の全体的電荷、疎水性／親水性、および／または立体的バルクを保存した置換である。例示のために、以下のグループの間の置換は保存的である：Ｇｌｙ／Ａｌａ、Ｖａｌ／Ｉｌｅ／Ｌｅｕ、Ｌｙｓ／Ａｒｇ、Ａｓｎ／Ｇｌｎ、Ｇｌｕ／Ａｓｐ、Ｓｅｒ／Ｃｙｓ／Ｔｈｒ、およびＰｈｅ／Ｔｒｐ／Ｔｙｒ。結果として生じるタンパク質またはポリペプチドが、上記に特定される制限内で脈管形成活性を保持する限り、天然に存在する脈管形成ＦＧＦ−２の配列との有意な差異（３５％まで）が許容される。
【００３２】
システインを枯渇したムテインは、本発明の範囲内のムテインである。これらのムテインを、上記のような部位特異的変異誘発を使用するか、または「Ｃｙｓｔｅｉｎｅ−Ｄｅｐｌｅｔｅｄ  Ｍｕｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｌｙ  Ａｃｔｉｖｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ」と表題付けられた米国特許第４，９５９，３１４号（「’３１４特許」）に記載の方法に従って構築する。’３１４特許は、生物学的活性および置換の効果を決定するための方法を開示する。システインの置換は、ジスルフィド形成に関与しない２つ以上のシステインを有するタンパク質において特に有用である。適切な置換としては、残基８７位および９２位のシステイン（これらは、ジスルフィド形成に関与しない）の１つまたは両方についてのセリンの置換が挙げられる。好ましくは、脈管形成活性に関連しないＦＧＦ−２のＮ末端に置換を導入する。しかし、上記で考察されたように、保存的置換は、分子の全体にわたる導入に適切である。
【００３３】
本発明の単位用量組成物は、安全かつ脈管形成に有効な用量のｒＦＧＦ−２またはその脈管形成活性フラグメントもしくは脈管形成活性ムテイン、および薬学的に受容可能なキャリアを含む。代表的に、本発明の薬学的組成物の安全かつ脈管形成に有効な用量は、ヒト患者への投与に適切な形態およびサイズにある。そしてこれは、以下を含有する：（ｉ）０．２μｇ／ｋｇ〜４８μｇ／ｋｇのｒＦＧＦ−２またはその脈管形成活性フラグメントもしくは脈管形成活性ムテイン、（ｉｉ）および薬学的に受容可能なキャリア。他の実施態様では、安全かつ脈管形成に活性な用量は、０．２μｇ／ｋｇ〜２μｇ／ｋｇ、２μｇ／ｋｇより多い〜２４μｇ／ｋｇ未満、または２４μｇ／ｋｇ〜４８μｇ／ｋｇのＦＧＦ−２またはその脈管形成活性フラグメントもしくは脈管形成活性ムテイン、および薬学的に受容可能なキャリアを含む。大多数のヒトＣＡＤ患者について絶対的な用語で表現すると、本発明の単位用量は、０．００８ｍｇ〜７．２ｍｇ、より代表的には０．３ｍｇ〜３．５ｍｇのＦＧＦ−２またはその脈管形成活性フラグメントもしくは脈管形成活性ムテインを含む。
【００３４】
本発明の単位用量組成物の２番目に列挙される成分は、「薬学的に受容可能なキャリア」である。用語「薬学的に受容可能なキャリア」とは、本明細書中で使用される場合、それ自体、その組成物を受容する患者に有害な抗体の産生を誘導せず、そして過度の毒性を伴わずに投与され得る、タンパク質様の医薬の安定化および／または投与のための当該分野において周知の任意のキャリアまたは希釈剤を意味する。薬学的に受容可能なキャリアの選択およびその後の加工は、本発明の単位用量組成物が、液状形態または固体形態のいずれかで提供されることを可能にする。
【００３５】
単位用量組成物が液状形態である場合、薬学的に受容可能なキャリアは、静脈内（「ＩＶ」）または歯冠内（「ＩＣ」）の注射または注入に適切な、安定なキャリアまたは希釈剤を含む。注射可能溶液または注入可能溶液について適切なキャリアまたは希釈剤は、使用される投薬量および濃度でヒトレシピエントに非毒性であり、そしてこれは滅菌水、糖溶液、生理食塩水溶液、タンパク質溶液、またはこれらの組み合わせを含む。
【００３６】
代表的には、薬学的に受容可能なキャリアは、緩衝剤および１以上の安定化剤、還元剤、抗酸化剤および／または抗酸化キレート剤を含む。タンパク質ベースの組成物、特に薬学的組成物の調製における緩衝剤、安定化剤、還元剤、抗酸化剤およびキレート剤の使用は、当該分野において周知である。Ｗａｎｇら、「Ｒｅｖｉｅｗ  ｏｆ  Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ  ａｎｄ  ｐＨｓ  ｆｏｒ  Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ  Ｕｓｅｄ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ」、Ｊ．Ｐａｒｅｎｔ．Ｄｒｕｇ  Ａｓｓｎ．、３４（６）：４５２〜４６２（１９８０）；Ｗａｎｇら、「Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ  Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ａｎｄ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ：Ｓｔａｂｉｌｉｔｙ  ａｎｄ  Ｓｔａｂｉｌｉｚｅｒｓ」、Ｊ．Ｐａｒｅｎｔ．Ｓｃｉ．ａｎｄ  Ｔｅｃｈ．、４２：Ｓ４〜Ｓ２６（補遺１９８８）；Ｌａｃｈｍａｎら、「Ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔｓ  ａｎｄ  Ｃｈｅｌａｔｉｎｇ  Ａｇｅｎｔｓ  ａｓ  Ｓｔａｂｉｌｉｚｅｒｓ  ｉｎ  Ｌｉｑｕｉｄ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ−Ｐａｒｔ  Ｉ」Ｄｒｕｇ  ａｎｄ  Ｃｏｓｍｅｔｉｃ  Ｉｎｄｕｓｔｒｙ、１０２（１）：３６〜３８、４０および１４６〜１４８（１９６８）；Ａｋｅｒｓ，Ｍ．Ｊ．、「Ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔｓ  ｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ」、Ｊ．Ｐａｒｅｎｔ．Ｓｃｉ．ａｎｄ  Ｔｅｃｈ．３６（５）：２２２〜２２８（１９８８）；ならびにＭｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、第ＸＸＶ巻、ＣｏｌｏｗｉｃｋおよびＫａｐｌａｎ編、Ｋｏｎｉｇｓｂｅｒｇによる「Ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｄｉｓｕｌｆｉｄｅ  Ｂｏｎｄｓ  ｉｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｗｉｔｈ  Ｄｉｔｈｉｏｔｈｒｅｉｔｏｌ」、１８５〜１８８頁を参照のこと。適切な緩衝剤には、酢酸塩、アジピン酸塩、安息香酸塩、クエン酸塩、乳酸塩、マレイン酸塩、リン酸塩、酒石酸塩、および種々のアミノ酸の塩が挙げられる。Ｗａｎｇ（１９８０）４５５項を参照のこと。適切な安定化剤には、トレロース（Ｔｈｒｅｌｏｓｅ）またはグリセロールのような糖類が挙げられる。還元されたシステインの還元を維持する適切な還元剤には、０．０１重量／重量％〜０．１重量／重量％のジチオスレイトール（クリランド試薬としても公知のＤＴＴ）またはジチオエリスリトール；０．１重量／重量％〜０．５重量／重量％のアセチルシステインまたはシステイン（ｐＨ２〜３）；ならびに０．１重量／重量％〜０．５重量／重量％のチオグリセロール（ｐＨ３．５〜７．０）およびグルタチオンが挙げられる。Ａｋｅｒｓ（１９８８）２２５〜２２６頁を参照のこと。適切な抗酸化剤には、亜硫酸水素ナトリウム、亜硫酸ナトリウム、異性重亜硫酸ナトリウム、チオ硫酸ナトリウム、ホルムアルデヒドスルホキシル酸ナトリウム（ｓｏｄｉｕｍ  ｆｏｒｍａｌｄｅｈｙｄｅ  ｓｕｌｆｏｘｙｌａｔｅ）、およびアスコルビン酸が挙げられる。Ａｋｅｒｓ（１９８８）２２５頁を参照のこと。還元されたシステインの微量金属触媒酸化を防ぐために、微量金属をキレート化する適切なキレート剤には、クエン酸塩、酒石酸塩、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）の二ナトリウム塩、四ナトリウム塩、およびカルシウム二ナト���ウム塩、ならびにジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）が挙げられる。例えば、Ｗａｎｇ（１９８０）４５７〜４５８頁および４６０〜４６１頁、ならびにＡｋｅｒｓ（１９８８）２２４〜２２７頁を参照のこと。適切な糖には、グリセロール、トレハロース、グルコース、ガラクトース、およびマンニトール、ソルビトールが挙げられる。適切なタンパク質は、ヒト血清アルブミンである。
【００３７】
液体形態において、本発明の代表的な単位用量組成物は、薬学的に受容可能なキャリアに溶解された、約０．００１ｍｇ〜８ｍｇ、より代表的には０．０３ｍｇ〜５ｍｇのｒＦＧＦ−２またはその脈管形成活性フラグメントもしくは脈管形成活性ムテインを含む。適切な薬学的に受容可能なキャリアは、１０ｍＭ  チオグリセロール、１３５ｍＭ  ＮａＣｌ、１０ｍＭ  クエン酸ナトリウム、および１ｍＭ  ＥＤＴＡ、ｐＨ５を含む。上記の単位用量組成物についての適切な希釈剤または流剤（ｆｌｕｓｈｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）は、上記のキャリアのいずれかである。代表的には、この希釈剤は、キャリア溶液である。ｒＦＧＦ−２またはその脈管形成活性フラグメントもしくは脈管形成活性ムテインは、長期間については液体形態で不安定である。液体形態の安定性および有効期間を最大化するために、この単位用量組成物は、−６０℃で凍結して貯蔵されるべきである。融解された場合、この溶液は、冷蔵条件で６ヶ月間安定である。代表的な単位用量は、単位用量中に溶解された０．００８〜７．２ｍｇのｒＦＧＦ−２または脈管形成活性フラグメントもしくは脈管形成活性ムテインを有する、約１〜４０ｍｌ、より代表的には１０〜４０ｍｌの上記の組成物を含む。単位用量における使用に適切なｒＦＧＦ−２は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２のｒＦＧＦ−２またはその脈管形成活性フラグメントもしくは脈管形成活性ムテインである。
【００３８】
別の実施態様では、単位用量組成物は、凍結乾燥された（フリーズドライされた）形態で提供される。この形態では、ｒＦＧＦ−２の単位用量は、冷蔵温度にて、実質的に６ヶ月よりも長く、治療効力を損失することなく貯蔵され得る。凍結乾燥は、複数のバイアル（各々は、本発明の単位用量のｒＦＧＦ−２の上記の液体形態をその中に含む）の減圧下で、迅速にフリーズドライする（すなわち、水分を除去する）ことによって達成される。上記の凍結乾燥を行う凍結乾燥機は、市販されており、そして当業者により容易に作動される。凍結乾燥されたケーキ（ｃａｋｅ）形態における、得られた凍結乾燥された単位用量組成物は、得られた凍結乾燥されたケーキ内に、対応する液体処方物について上記の１以上の緩衝剤、安定化剤、抗酸化剤、還元剤、塩および／または糖を含むように処方される。全てのこのような他の成分を含む凍結乾燥された単位用量組成物は、滅菌水性希釈剤（例えば、滅菌水、滅菌糖溶液、または滅菌生理食塩水）で既知の容量または濃度に再構成されることのみを必要とする。あるいは、これは、上記のような滅菌緩衝溶液で再構成され得るが、キレート剤（例えば、ＥＤＴＡ）を欠く。凍結乾燥されたケーキとして、この単位用量組成物は、冷蔵温度で６ヶ月から２年間安定である。従って、凍結乾燥形態におけるこの単位用量組成物の貯蔵は、従来の冷蔵装置を使用して容易に提供される。
【００３９】
本発明の単位用量組成物は、心臓カテーテルまたは他の注入デバイス（これは、死空間（ｄｅａｄ  ｓｐａｃｅ）を有する）を通じて投与されるので、この単位用量組成物を含むバイアルに処方して、その結果、これが、患者に投与されるよりも、約１０〜５０％多くのｒＦＧＦ−２またはその脈管形成活性フラグメントもしくは脈管形成活性ムテインを含むことが便利である。例えば、投与されるｒＦＧＦ−２の単位用量が７．２ｍｇである場合に、このバイアルは、必要に応じて、５０％までの余分（例えば、全体で約１０．８ｍｇ）のｒＦＧＦ−２またはその脈管形成活性フラグメントもしくは脈管形成活性ムテインを含むように処方される。この余分の溶液は、送達装置における死空間を充填するために適切である。死空間を許容しない代替的な実施態様では、薬学的組成物は、心臓カテーテル内に、薬学的に受容可能な緩衝剤、希釈剤またはキャリアの前にロードされ、次いで、この薬学的に受容可能な緩衝剤、希釈剤またはキャリアは、適切な量の１以上の投薬を、脈管形成を必要としている心筋における１以上の部位に送達するために使用される。
【００４０】
上記で議論したように、上記の単位用量組成物について薬学的に受容可能なキャリアは、緩衝剤、ならびに１以上の安定化剤、還元剤、抗酸化剤および抗酸化キレート剤を含む。単位用量組成物がＦＧＦ−２および内皮細胞レセプターに結合して、その結果、ＦＧＦ−２またはその脈管形成活性フラグメントもしくは脈管形成活性ムテインの脈管形成効力を増強するに効果的な量のグリコソアミノグリカン（ｇｌｙｃｏｓｏａｍｉｎｏｇｌｙｃａｎ（（「プロテオグリカン」または「ムコ多糖」としても公知）（例えば、ヘパリン）を含むことは、本発明の範囲内である。ヘパリンは、患者の体重１ｋｇあたり約１０〜８０Ｕ（Ｕ／ｋｇ）、代表的には約４０Ｕ／ｋｇの量で投与される。絶対的な用語で表されると、任意の１患者に投与されるヘパリンの総量は、５，０００Ｕを超えない。従って、再構成の際に、本発明の単位用量組成物は、脈管形成に効果的な量のｒＦＧＦ−２またはその脈管形成活性フラグメントもしくは脈管形成活性ムテインを含むのみならず、これはまた、約１０〜８０Ｕ／ｋｇ、代表的には約４０Ｕ／ｋｇのヘパリンを含む。希釈剤の代表的な容量は、約１〜４０ｍｌである。より多い容量の希釈剤が使用され得るが、このようなより多い容量は、代表的には、より長い投与時間を生じる。患者の体重ｋｇに依存して、０．２μｇ/ｋｇ〜４８μｇ／ｋｇのｒＦＧＦ−２、またはその脈管形成活性フラグメントもしくは脈管形成活性ムテインを含有する単回用量が、患者への投与のために再構成された生成物としてバイアルから引き抜かれる。従って、２４μｇ／ｋｇを服用されている平均７０ｋｇの男性は、バイアルから引き抜かれた、（７０ｋｇ×３０μｇ／ｋｇ）２１００μｇ（すなわち、２．１ｍｇ）のＩＣ注射を受けるに十分な容量の再構成された生成物を有する。その第２の局面では、本発明は、上記の単位用量組成物を使用する、ＣＡＤまたはＭＩについてヒト患者を処置するための方法に関する。特に、１つの実施態様では、本発明は、冠状動脈疾患についてヒト患者を処置するための方法に関し、この方法は、安全かつ治療的に有効な量の組換えＦＧＦ−２またはその脈管形成活性フラグメントもしくは脈管形成活性ムテインを、冠状動脈疾患についての処置を必要とするヒト患者の、１以上の（代表的には２の）冠状血管または末梢静脈に投与する工程を包含する。冠状動脈疾患の処置を必要とするヒト患者は、代表的には、任意の医学管理にもかかわらずアンギナの症候性のままである冠状動脈疾患を患うヒト患者である。好ましい冠状血管は、冠状動脈であるが、冠状血管形成術（ｃｏｒｏｎａｒｙ  ａｎｇｉｏｐｌａｓｔｙ）により提供されるように、移植された伏在静脈および移植された内胸動脈もまた、適切である。単位用量組成物を投与するために適切な末梢静脈には、流体および医薬品の投与のために、処置する医師および看護婦によって慣用的に使用されるヒト身体の至る部位に見出される末梢静脈を含む。このような静脈の例には、頭部、肘正中皮、および腕の尺側皮が挙げられる。
【００４１】
冠状内（ＩＣ）注入として投与される場合、単位用量のｒＦＧＦ−２またはその脈管形成フラグメントもしくは脈管形成活性ムテインは、代表的には、１時間以内、より代表的には約２０分の時間にわたって、患者の１以上（代表的には、２）の冠状静脈中に投与される。２０分の時間にわたって投与される場合、単位用量組成物は、代表的には、０．５〜２．０ｍｌ／分、より代表的には約１ｍｌ／分の速度で投与される。冠状静脈は、それらが閉塞されていない限り、ネイティブな血管または移植物であり得る。単位用量のｒＦＧＦ−２またはその脈管形成フラグメントもしくは脈管形成活性ムテインの容量は、代表的には１０〜４０ｍｌ；より代表的には２０ｍｌである。この単位用量の注入の時間の長さは、重要ではなく、そして注入の速度および容量に依存して短縮または延長され得る。
【００４２】
静脈（ＩＶ）内注射として投与される場合、単位用量のｒＦＧＦ−２またはその脈管形成フラグメントもしくは脈管形成活性ムテインは、代表的には１時間以内、より代表的には２０分の時間にわたって、従来のＩＶ設定を使用して末梢静脈中に投与される。２０分の時間にわたって投与される場合、単位用量組成物は、代表的には、１ｍｌ／分の速度で投与される。
【００４３】
ＣＡＤを処置するための上記の方法の第一相の臨床試験では、単回の単位用量組成物は、任意の医学管理にもかかわらずアンギナの症候性のままであるＣＡＤを有するヒト患者にＩＣまたはＩＶで投与された。本発明の方法は、脈管形成を誘導するので、本発明の方法は、ＣＡＤまたはＭＩにおける根本的な状態の処置を提供し、そして硝酸塩により提供されるような症状からの単なる一過性の解放ではない。代表的には、本発明の方法の安全かつ治療的に有効な量は、０．２μｇ／ｋｇ〜４８μｇ／ｋｇのｒＦＧＦ−２またはその脈管形成活性フラグメントもしくは脈管形成活性ムテインを薬学的に受容可能なキャリア中に含む。他の実施態様において、この安全かつ治療的に有効な量は、０．２μｇ／ｋｇ〜２μｇ／ｋｇ、＞２μｇ／ｋｇ〜＜２４μｇ／ｋｇ、または２４μｇ／ｋｇ〜４８μｇ／ｋｇのｒＦＧＦ−２またはその脈管形成活性フラグメントもしくは脈管形成活性ムテインを薬学的に受容可能なキャリア中に含む。絶対的な用語では、この安全かつ治療的に有効な量は、約０．００８ｍｇ〜約７．２ｍｇのｒＦＧＦ−２またはその脈管形成活性フラグメントもしくは脈管形成活性ムテイン；より代表的には、０．３ｍｇ〜３．５ｍｇのｒＦＧＦ−２またはその脈管形成活性フラグメントもしくは脈管形成活性ムテインである。適切なｒＦＧＦ−２は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２のｒＦＧＦ−２またはその脈管形成活性フラグメントもしくは脈管形成活性ムテインである。
【００４４】
別の局面では、本発明はまた、ヒト患者の心臓における脈管形成を誘導するための方法に関する。この方法は、組換えｒＦＧＦ−２またはその脈管形成活性フラグメントもしくは脈管形成活性ムテインの単回の単位用量組成物を、冠状脈管形成を必要とするヒト患者の１以上の冠状血管にまたは末梢静脈に投与する工程であって、上記の単位用量組成物が、約０．００８ｍｇ〜７．２ｍｇの組換えｒＦＧＦ−２またはその脈管形成活性フラグメントもしくは脈管形成活性ムテインを薬学的に受容可能なキャリア中に含む、工程を包含する。より代表的には、この単位用量組成物は、約０．３〜３．５ｍｇのｒＦＧＦ−２またはその脈管形成活性フラグメントもしくは脈管形成活性ムテインを、薬学的に受容可能なキャリア中に含む。上記のように、治療的に有効な量のｒＦＧＦ−２またはその脈管形成活性フラグメントもしくは脈管形成活性ムテインを含む、単回の単位用量組成物は、既に公知でありかつ医薬品（例えば、血栓崩壊剤、ストレプトキナーゼ、または冠状動脈を可視化するために使用される放射性を透過しない（ｒａｄｉｏ−ｏｐａｑｕｅ）色素または磁気粒子）の冠状内投与について当該分野において使用される、標準的な心臓カテーテル技術を使用して、脈管形成を必要とするヒト患者の少なくとも１つの冠状血管に投与される。例としては、冠状カテーテルは、処置を必要とする患者の動脈（例えば、大腿または鎖骨下）に挿入され、そしてこのカテーテルが、処置される患者の適切な冠状血管中に配置されるまで、見えるように前方に押し出される。明確な線を維持するために標準的な注意を使用して、溶液形態の薬学的組成物は、１０〜３０分の時間にわたって実質的に連続的に単位用量を注射することによって投与される。本発明の薬学的組成物は、より長い時間にわたって投与され得るが、出願人らは有益性およびそうすることによる血栓症の危険性の潜在的な増大を全く認知しない。代表的には、単位用量の一部（例えば、半分）は、第１の冠状血管に投与される。次いで、カテーテルは、第２の冠状血管に再び配置され、そしてこの単位用量の残留物は、このカテーテルを流しながら投与される。上記の再配置手順を使用して、単位用量の一部は、その単位用量の全体が投与されるまで、複数の冠状血管に投与され得る。投与の後に、このカテーテルは、従来の当該分野で公知のプロトコルを使用して引き抜かれる。本明細書中に記載される第一相の臨床試験において、治療の有益性が、単回の単用量のＩＣ  ｒＦＧＦ−２投与に従う２週間程度の患者により報告された。臨床的に有意な改善が、本発明の単回の単位用量のＩＣまたはＩＶ投与に従って、３０日程度で、客観的な診断基準（ＥＴＴおよび／またはＳＡＱ）により実証され、そして服用後の６ヶ月間維持された。進行性ＣＡＤ疾患を患う特定の患者では、ｒＦＧＦ−２のさらなる単位用量を、最初の単位用量後の６または１２ヶ月で投与し、しばらくの（ｉｎｔｅｒｉｕｍ）期間の間にＣＡＤの進行を克服するために必要または適切であり得る。非常に進行性のＣＡＤを患う数人の患者では、本発明の単位用量が、４ヶ月の間隔で再投与される。任意の例では、処置する担当医は、必要とされる場合、患者の臨床徴候の慣用的な評価に���づき再投与についての時間を決定し得る。
【００４５】
本発明の方法の有益性の１つは、心臓の脈管形成である。従って、別の局面において、本発明は、ヒト患者の心臓における脈管形成を誘導するための方法に関し、この方法は、脈管形成的に有効量のｒＦＧＦ−２またはその脈管形成活性フラグメントもしくは脈管形成活性ムテインを薬学的に受容可能なキャリア中に含む、単回の単位用量を、冠状脈管形成を必要とするヒト患者の１以上の冠状血管（ＩＣ）中または末梢静脈（ＩＶ）中に投与する工程を包含する。上記の方法において、脈管形成的に有効量は、約０．２μｇ／ｋｇ〜約４８μｇ／ｋｇ（または絶対的な用語では、約０．００８ｍｇ〜約７．２ｍｇ）の組換えＦＧＦ−２またはその脈管形成活性フラグメントもしくは脈管形成活性ムテインを含む。さらに代表的には、脈管形成的に有効量は、約０．３ｍｇ〜約３．５ｍｇの組換えＦＧＦ−２またはその脈管形成フラグメントもしくは脈管形成活性ムテインを含む。上記で同定された方法における使用に適切なＦＧＦ−２は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２のｒＦＧＦ−２またはその脈管形成的に活性なフラグメントである。上記の方法の１つの実施態様では、単位用量組成物は、患者の冠状血管にＩＣで、または末梢静脈にＩＶで投与される。別の実施態様では、この単位用量組成物は、本明細書中に記載されるように、ヘパリンとともに投与される。
【００４６】
上記の冠動脈新脈管形成を提供する方法はまた、１つ以上の冠動脈において心筋梗塞（ＭＩ）を経験したヒト患者において有益である。従って、別の局面において、本発明はまた、ＭＩについてヒト患者を処置するための方法に関し、この方法は、上記ヒト患者の１つ以上の冠動脈血管または末梢静脈に、治療的に有効な量のｒＦＧＦ−２またはその脈管形成活性フラグメントもしくは脈管形成活性ムテインを含む一単位用量組成物を投与する工程を包含する。上記の方法において、代表的には、単位用量組成物は、薬学的に受容可能なキャリア中に約０．２μｇ／ｋｇ〜約４８μｇ／ｋｇ（または絶対的には、約０．００８ｍｇ〜約７．２ｍｇ）の組換えＦＧＦ−２またはその脈管形成活性フラグメントもしくは脈管形成活性ムテインを含む。上記同定された方法における使用に対して適切なｒＦＧＦ−２は配列番号２のｒＦＧＦ−２またはその脈管形成活性フラグメントである。
【００４７】
血管形成を必要とする、不安定なアンギナまたは急性心筋梗塞の事象において、本明細書中に開示されている同じ用量のｒＦＧＦ−２またはその脈管形成フラグメントまたは脈管形成活性ムテインは、それらの状態を処置する際の補助治療としても有用である。従って、別の局面において、本発明は、血管形成を必要とする、不安定なアンギナまたは急性心筋梗塞について患者を処置するための改善された方法に関し、この方法は、処置の必要にある患者に血管形成を提供することを包含し；この改善は、そのヒト患者の１つ以上の冠動脈血管または末梢静脈に、治療的に有効な量のｒＦＧＦ−２またはその脈管形成活性フラグメントもしくは脈管形成活性ムテインを含む一単位用量組成物を投与することを包含する。上記の方法において、単位用量組成物は、薬学的に受容可能なキャリア中に約０．２μｇ／ｋｇ〜約４８μｇ／ｋｇ（または絶対的な用語では、約０．００８ｍｇ〜約７．２ｍｇ）の組換えＦＧＦ−２またはその脈管形成活性フラグメントもしくは脈管形成活性ムテインを含む。上記同定された方法における使用に対して適切なｒＦＧＦ−２は配列番号２のｒＦＧＦ−２またはその脈管形成活性フラグメントである。
【００４８】
本発明の任意の上記方法において、ｒＦＧＦ−２またはその脈管形成活性フラグメントもしくは脈管形成活性ムテインは、一酸化窒素（認知された平滑筋拡張薬）の放出に関連しており、患者に投与すると患者の血圧の急激な低下を引き起こす。従って、本発明の方法において、本発明の単位用量を投与する前に、ＩＶ液体を患者に補給をする（ｈｙｄｒａｔｅ）ことが好ましい。さらに、単位用量の安全性および許容性のために、ｒＦＧＦ−２投与中および投与後の積極的な液体管理もまた好まれる。結局、有効量のグリコサミノグリカン（「プロテオグリカン」または「ムコポリサッカライド」としても公知である）を投与する工程（例えば、本発明の単位用量組成物を投与する前に、ヘパリンを０〜３０分投与する工程）を包含することもまた、上記の方法の範囲内である。代表的には、投与されるグリコサミノグリカン（例えば、ヘパリン）の有効量は約１０〜８０Ｕ／ｋｇであり、より代表的には、約４０Ｕ／ｋｇである。しかし、一般的には、投薬する直前に任意の一人の患者に投与されるヘパリンの総量は、５，０００Ｕを超えない。
【００４９】
ＥＤＴＡが、通常の心筋収縮および心臓伝導に必要なカルシウムの強力なキレーターであるという理由で、ＥＤＴＡの濃度を最小化することは、患者の安全に対して重大である。１００μｇ／ｍｌ未満濃度のＥＤＴＡが、ヒト患者へのＩＣまたはＩＶ注入によりｒＦＧＦ−２の投与の安全性を最適化した。
【００５０】
ｒＦＧＦ−２の急激な大量瞬時投与は、動物における超低血圧（ｐｒｏｆｏｕｎｄ  ｈｙｐｏｔｅｎｓｉｏｎ）と関連するので、注入速度は患者の安全に対して重大である。０．５〜２ｍＬ／分での投与（代表的には、１ｍＬ／分）がヒト患者へのＩＣまたはＩＶ注入によるｒＦＧＦ−２の投与の安全性を最適化した。
【００５１】
本発明の一単位用量組成物を投与することにより、ＣＡＤについてヒト患者を処置することに関するフェーズＩの臨床試験が実施され、本明細書中の実施例１〜３に記載される。その試験において、ＣＡＤと診断された６６人のヒト患者（本明細書中の実施例２の基準を満たす）が、本発明の方法に従って、一単位用量のｒＦＧＦ−２を受けた。具体的には、５２人のヒト患者に約２０分間にわたって、ＩＣ注入により単位用量０．３３μｇ／ｋｇ〜４８μｇ／ｋｇのｒＦＧＦ−２が投与された。１４人のヒト患者に、約２０分間にわたって、ＩＶ注入により単位用量１８μｇ／ｋｇまたは３６μｇ／ｋｇのいずれかのｒＦＧＦ−２が投与された。次いで、６６人の処置された患者は、当該分野で認知された評価基準の３セット：１）患者らの運動許容時間（ＥＴＴ）の変化；２）Ｓｅａｔｔｌｅ  Ａｎｇｉｎａ  Ｑｕｅｓｔｉｏｎｎａｉｒｅ（これは、客観的な基準と主観的な基準の混合された組み合わせに基づく評価を提供する）：および３）ＭＲＩにより評価されるような心臓における物理的変化の測定を使用して、ベースライン（すなわち、一単位用量での処置の前）と比較して、そして一単位用量での処置の１ヶ月後、２ヶ月後、そして６ヶ月後に再び評価された。
【００５２】
実施例１〜３のフェーズＩの臨床試験の６６人の患者のＥＴＴを、Ｂｒｕｃｅトレッドミルプロトコールを使用して、ベースライン時、（本発明の一単位用量組成物の）投与後１ヶ月、２ヶ月、および６ヶ月に測定した。トレッドミルプロトコールがベースライン時に使用されたものと同じでない場合、その被験体はこの分析から除外された。従って、被験体の数は、時間がたつと変化した。さらに、緊急の血管再生を有するいずれの患者も、この分析から除外された。用量は、ベースラインからのＥＴＴの平均変化が６０秒よりも大きな値で増加した場合、有効であると考えられた。ＥＴＴ評価の結果は、表１に提供される。
【００５３】
【表１】
2010163457.tif 000002
表１を参照すると、１ヶ月におけるベースラインからの平均変化は、すべての投与群について６０秒未満であった。しかし、アンギナによりトレッドミル試験を中止する患者の割合は、すべての群において時間とともに減少した。投与後２ヶ月および６ヶ月におけるベースラインからの平均変化は、用量の多いＩＣ群およびＩＶ群の患者において、用量が少ないかまたは中程度のＩＣ群よりも大きかった。用量の多いＩＣ群（２４〜４８μｇ／ｋｇ）およびＩＶ群（１８および３８μｇ／ｋｇ）における各々の６ヶ月の増加したＥＴＴの持続性（１３３．１秒および８７．５秒）は予想外であった。ＥＴＴの最も大きな平均の増加はそれぞれ２ヶ月および６ヶ月の１０７．９秒および１３３．１秒であり、これらは、用量の多い（２４〜４８μｇ／ｋｇ）ＩＣ群において生じた。ＩＶ群は、それぞれ２ヶ月および６ヶ月にて９３．４秒および８７．５秒というＥＴＴの有意な平均増加を示し、このことは、本明細書中のラットおよびブタの動物モデルによっては予想されなかった。全体としては、６ヶ月におけるこの効果（ＥＴＴの増加）の持続性およびＩＣ群とＩＶ群の両群のその大きさは、全く予想外であった。
【００５４】
本明細書中の実施例１〜３に記載されるフェーズＩの臨床試験の６６人のヒト患者はまた、Ｓｅａｔｔｌｅ  Ａｎｇｉｎａ  Ｑｕｅｓｔｉｏｎｎａｉｒｅ（ＳＡＱ）を使用して、評価された。ＳＡＱは、認可され、疾患特異的な、クオリティーオブライフの手段であり、これは以下の５つのスケールを評価する：１）「労作能力」＝身体的活動の限界；２）「疾患認知」＝ＭＩの懸念；３）「処置の満足」；４）「アンギナの頻度」＝エピソード数およびニトログリセリンの舌下使用；および５）「アンギナの安定性」＝最も激しい身体的活動でのエピソード数。各々の５つのスケールの得点の可能な範囲は、０〜１００であり、より高い得点はより良いクオリティーオブライフを示す。代表的には、平均ベースライン得点（すなわち処置前）と処置後の得点の間が８ポイント以上の平均変化は「臨床的に有意」であると認識される。しかし、本分析において、ベースラインからの得点の平均変化が、１４ポイントより大きな値で増加した場合、用量は「有効」と考えられた。１４が選択された（８の代わりに）理由は、別の増殖因子（ＶＥＧＦ）の臨床試験の２ヶ月時の偽薬群において見られた改善を考慮したためであった。
【００５５】
ＳＡＱ評価を実施する際に、ＥＴＴについて評価された同じ投与量の群に従って患者を分類した（すなわち、０．３３〜２．０μｇ／ｋｇＩＣ（低）；６．０〜１２．０μｇ／ｋｇＩＣ（中）；２４〜４８μｇ／ｋｇＩＣ（高）；ならびに１８および３６μｇ／ｋｇＩＶ）。このアンケート用紙を、ベースライン時（投与前）、ならびに本発明に従ってｒＦＧＦ−２の一単位用量組成物を投与された後の２ヶ月および６ヶ月に各投与量群毎に被験体に与えた。
【００５６】
第１のＳＡＱスケールは「労作能力」である。労作能力に関するデータを、本明細書中の表２に要約する。表２において反映されるように、
【００５７】
【表２】
2010163457.tif 000003
平均得点のベースラインからの変化は、３つのＩＣ投与量群の各々について２ヶ月および６ヶ月に増加し、そして６ヶ月にはすべての投与量群（ＩＣおよびＩＶ）について増加した。すべての投与量レベルにおける全得点は、２ヶ月から６ヶ月の日を追うごとに増加し、投与後６ヶ月においてベースラインと比較して最も良い増加（２３．２、２４．１、２２．９および１６．５）が見られた。
【００５８】
評価されるべき第２のＳＡＱスケールは、「アンギナの安定性」であった。アンギナの安定性を要約するデータを、本明細書中の表３に示す。
【００５９】
【表３】
2010163457.tif 000004
表３によると、アンギナ安定性についての得点の変化は、各群について２ヶ月と６ヶ月の両方でベースラインと比較して増加した。投与後２ヶ月において見られるアンギナ安定性の改善（４６．２、３２．１、３４．３、および３９．６）は、６ヶ月において見られる得点よりも有意に大きかった（２１．４、１６．７、１７．７、および２３．２）。しかし、投与後、２ヶ月と６ヶ月の両方で見られる得点は、アンギナ安定性の増加においてすべての投与量が有効（＞１４）であることが判明したことを示した。さらに、増加の大きさおよび６ヶ月間の持続は予想外であった。
【００６０】
評価されるべき第３のＳＡＱスケールは、「アンギナの頻度」であった。アンギナの頻度を要約するデータを、本明細書中の表４に示す。
【００６１】
【表４】
2010163457.tif 000005
表４によると、アンギナ頻度についての患者の平均得点（２７．９、３２．９、２８．９および２０．０）は２ヶ月で、すべての投与量群について、そしてすべての投与方法（ＩＣまたはＩＶ）について有効量（＞１４）で増加した（ベースラインと比較して）。患者の平均得点は、中程度の用量（６．０〜１２．０μｇ／ｋｇ）群についてのみ６ヶ月で増加し続け、投与後２ヶ月のピーク効果を示唆する。しかし、中程度の用量（６．０〜１２．０μｇ／ｋｇ）群および大量の用量（２４．０〜４８．０μｇ／ｋｇ）群について、２ヶ月および６ヶ月の変化は類似しており、アンギナ頻度の６ヶ月における持続効果を示唆する。評価されるべき第３のＳＡＱスケールは、「アンギナの頻度」であった。アンギナの頻度を要約するデータを、本明細書中の表４に示す。
【００６２】
評価されるべき第４のＳＡＱスケールは、「アンギナの頻度」であった。アンギナの頻度を要約するデータを、本明細書中の表５に示す。
【００６３】
【表５】
2010163457.tif 000006
表５によると、処置の満足についての得点は２ヶ月で、中程度および大量の用量のＩＣ群ならびにＩＶ群について有効量で増加した。投与後６ヶ月において、中程度の用量群ＩＣについてのスコアだけが１４よりも大きな得点を有し、２ヶ月の処置の満足についてのピーク効果を示唆する。
【００６４】
評価されるべき第５のＳＡＱスケールは、「疾患認知」であった。疾患認知を要約するデータを、本明細書中の表６に示す。表６によると、疾患認知についての得点は、２ヶ月でベースラインから２０．２〜２９．２という得点まで増加し、６ヶ月で２３．８〜３４．０まで増加した。これらの得点は、一単位用量組成物を本発明の方法にしたがって投与することは、２ヶ月おいてと同じくらい６ヶ月において有効である（またはより有効）と考えられた。これらの得点は、一単位用量組成物の投与後、６ヶ月以上までの、疾患認知に対する本発明の方法の効果の持続性を示唆する。
【００６５】
【表６】
2010163457.tif 000007
本明細書中の実施例１〜３に記載されるフェーズＩ臨床試験のヒト患者の６０人まではまた、彼らの心臓を安静時（ｒｅｓｔｉｎｇ）磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）スキャンを使用して評価された。安静時ＭＲＩスキャンが、患者に対して、ベースライン時に、ならびに本発明の一単位用量組成物の投与後１ヶ月、２ヶ月、および６ヶ月に実施された。用量は、統計学的有意性（ｐ＜０．０５）に基づいて「有効」と考えられた。安静時ＭＲＩスキャンにより評価される客観的な基準は以下：（１）駆出率；（２）心筋梗塞の程度（％）；（３）通常の壁厚；（４）通常の壁運動（％）；（５）標的壁肥厚（％）；（６）標的壁の運動（％）；（７）標的壁領域側副程度（％）；および（８）標的領域の遅着の程度（％）である。
【００６６】
安静時ＭＲＩに基づくと、「駆出率」の変化は、すべての群について１ヶ月では観察されなかった。１ヶ月におけるすべての群（ｎ＝３３）についてのベースラインからの平均値変化は２．０％（ｐ＝０．０４２）の増加であった。２ヶ月においては、少用量のＩＣ群（ｎ＝１３）についてのベースラインからの平均変化は８．１％（ｐ＝０．００７）の増加であった；そしてすべての群について（ｎ＝５４）、ベースラインからの平均変化は３．８％の増加であった（ｐ＝０．００１）。６ヶ月において、大用量のＩＣ群（ｎ＝１９）についてのベースラインからの平均変化は５．３％（ｐ＝０．０２３）であった；そしてＩＶ群について（ｎ＝３）、１１．１％であった（ｐ＝０．０８７）；そしてすべての群について（ｎ＝３３）、５．７％であった（ｐ＝０．００１）。
【００６７】
安静時ＭＲＩに基づくと、いずれの群、または投与後の１ヶ月、２ヶ月、６ヶ月での組合せにおけるすべての群について「心筋梗塞の程度」％の統計学的に有意な変化は存在しなかった。通常の壁運動（％）および通常の壁厚が評価された場合、いづれの一つの群についての１ヶ月、２ヶ月、または６ヶ月でのベースラインからの統計学的に有意な変化は存在しなかった。しかし、標的壁運動において、１ヶ月（ｎ＝６０）、２ヶ月（ｎ＝５４）、または６ヶ月（ｎ＝３３）でのすべての群について、ベースラインからの統計学的に有意な変化は存在し、これはそれぞれ、２．７％（ｐ＝０．０１５）、４．４％（ｐ＝＜０．００１）および６．４％（ｐ＜０．００１）のベースラインからの平均増加として反映された。しかし、標的壁厚においてもまた、１ヶ月（ｎ＝６０）、２ヶ月（ｎ＝５４）、または６ヶ月（ｎ＝３３）でのすべての群について、ベースラインからの統計学的に有意な変化が存在し、これはそれぞれ、４．４％（ｐ＝０．０１５）、６．３％（ｐ＝＜０．００１）および７．７％（ｐ＜０．００１）のベースラインからの平均増加として反映された。
【００６８】
ＭＲＩにより評価された次の基準は「標的領域側副の程度」（％）であった。標的領域側副の程度におけるすべての群についてベースラインからの平均増加は、１ヶ月（ｎ＝３１）、２ヶ月（ｎ＝２７）および６ヶ月（ｎ＝１６）において高度な統計学有意性であり、ここでその増加はそれぞれ８．３％（ｐ＝＜０．００１）、１０．９％（ｐ＝＜０．００１）および１１．２％（ｐ＝＜０．００１）であった。最も大きな側副の程度の増加は、少量および中程度のＩＣ用量に対して観察され、すなわち、１ヶ月で（それぞれ１０．４％および１８．３％）、２ヶ月で（それぞれ１４．７％および１８．０％）および６ヶ月で（それぞれ１６．０％および中程度の用量に対する値はなし）であり、これは全く予想外であった。投与後１ヶ月、２ヶ月および６ヶ月において、ＩＣ大用量群について観察された標的領域側副の程度における対応する割合の増加は、それぞれ６．３％、８．０％および９．０％であった。
【００６９】
ＭＲＩにより評価された最後の基準は「標的領域の遅着の程度」（％）であった。標的領域の遅着の程度におけるすべての群についてベースラインからの平均減少は、１ヶ月（ｎ＝６０）、２ヶ月（ｎ＝５４）および６ヶ月（ｎ＝３４）において高度に統計学的有意性であり、ここでその減少はそれぞ−５．８％（ｐ＝＜０．００１）、−８．３％（ｐ＝＜０．００１）および−１０．０％（ｐ＝＜０．００１）であった。最も大きな標的領域の遅延程度の減少は、少用量のＩＣ群に対して観察され、これは高度に予想外であった。
【００７０】
従って、本発明に従ってＣＡＤ患者にｒＦＧＦ−２の単一ＩＣまたはＩＶ注入を提供することは、その患者に、ＭＲＩおよび他の従来の基準により客観的に測定されるような統計学的に有意な身体的改善を提供した。
【００７１】
（薬物動態および代謝）
ＦＧＦ−２の分子構造は、細胞表面および血管の内壁でプロテオグリカン鎖（ヘパリンおよびヘパリン様構造）に結合することが公知である正に荷電したテールを含む。Ｍｏｓｃａｔｅｌｌｉら「Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｂａｓｉｃ  Ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ  ｗｉｔｈ  Ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｍａｔｒｉｘ  ａｎｄ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ」Ａｎｎ．ＮＹ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．６３８：１７７〜１８１（１９８１）。
【００７２】
腎臓および肝臓はｒＦＧＦ−２の排泄のための主な器官である。特に、腎臓は、約６０ｋＤのタンパク質カットオフを有し、従って血清アルブミン（ＭＷ６０ｋＤ）を保持する。しかし、ＦＧＦ−２（１４６残基）は、約１６．５ｋＤの分子量を有する。従って、腎排泄が予期される。市販のウシＦＧＦ−２（ｂＦＧＦ−２）の放射線標識した生体分布研究において、肝臓および腎臓の両方が、ＩＶ注射またはＩＣ注射後１時間で放射線標識した高い計数のｂＦＧＦ−２を含むことが見られている。公表された研究において、ｂＦＧＦ−２の別の組換えヨウ素化形態がラットに与えられる場合、肝臓が排泄の主な器官であると同定された。Ｗｈａｌｅｎら、「Ｔｈｅ  Ｆａｔｅ  ｏｆ  Ｉｎｔｒａｖｅｎｏｕｓｌｙ  Ａｄｍｉｎｉｓｔｅｒｅｄ  ｂＦＧＦ  ａｎｄ  ｔｈｅ  Ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  Ｈｅｐａｒｉｎ」Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒｓ、１：１５７〜１６４（１９８９）。ＦＧＦ−２が、全身循環においてα2−マクログロブリンに結合すること、そしてこの複合体がクッパー細胞上のレセプターにより内部移行されることもまた公知である。Ｗｈａｌｅｎら（１９８９）およびＬａＭａｒｒｅら「Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  Ｂｉｎｄｉｎｇ  ａｎｄ  Ｃｌｅａｒａｎｃｅ  Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ−Ａｃｔｉｖａｔｅｄ  Ａｌｐｈａ−２−Ｍａｃｒｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓ」Ｌａｂ．Ｉｎｖｅｓｔ．，６５：３〜１４（１９９１）。Ｌａｂｅｌｌｅｄ  ＦＧＦ−２フラグメントは血漿中で見出されないが、それらは、尿中で見出され、そして細胞内分解産物に対するサイズに対応している。
【００７３】
前臨床試験において、本発明者らは、家畜のヨークシャーブタへの静脈内（ＩＶ）投与および冠内（ＩＣ）投与後、およびＳｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙ（「ＳＤ」）ラットにおけるＩＶ投与後のｒＦＧＦ−２（配列番号２）の薬物動態を決定した。このブタモデルは、線形の薬物動態を示した（０．６５μｇ／ｋｇ〜２０μｇ／ｋｇ）（ＩＣおよびＩＶ）。このブタモデルにおけるＦＧＦ−２の終末半減期は３〜４時間であった。ラットモデルは、３０〜３００μｇ／ｋｇ  ＩＶの範囲にわたる線形の薬物動態を示した。ラットモデルにおけるＦＧＦ−２の終末半減期は１時間であった。両方の種が２コンパートメントモデルを示唆する血漿濃度を示した。
【００７４】
同様に、ヒトにおいて、ＩＶおよび／またはＩＣ注入後のＦＧＦ−２血漿濃度は、最初の急激な曲線および最初の１時間の数対数スケールにわたるかなりの低下（分布相））を有する二次指数関数的な曲線を伴い、続いて、より穏やかな減少を伴った（排泄相）。図１Ａは、血漿濃度対時間の曲線を提供する。これは、以下の８つの用量のそれぞれの関数として、配列番号２のｒＦＧＦ−２のＩＣ投与後のヒトにおけるこれらの相を示す：除脂肪体重（ＬＢＭ）の０．３３μｇ／ｋｇ、０．６５μｇ／ｋｇ、２μｇ／ｋｇ、６μｇ／ｋｇ、１２μｇ／ｋｇ、２４μｇ／ｋｇ、３６μｇ／ｋｇおよび４８μｇ／ｋｇ。図１Ａは、２０分間にわたるＩＣ注入により投与されるｒＦＧＦ−２の８つの用量についての血漿用量直線性を示す。図１Ａはまた、二相性の血漿レベル低下（すなわち、最初の１時間の速い分布相、その後の排泄相（５〜７時間のＴ1/2と評価））を示す。配列番号２のＦＧＦ−２の血漿濃度を、ヒトＦＧＦ−２の分析のために販売された市販のＥＬＩＳＡ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ  ＭＮ）により決定した。このＥＬＩＳＡアッセイは、配列番号２のｒＦＧＦ−２と１００％の交差反応性を示した。ＦＧＦファミリーの他のメンバーおよび多くの他のサイトカインは、このアッセイでは検出されなかった。さらに、ヘパリンはこのアッセイを妨害しない。
【００７５】
図１Ｂは、ＩＣ投与した３６μｇ／ｋｇのｒＦＧＦ−２と比較した、ＩＶ投与の１８μｇ／ｋｇおよび３６μｇ／ｋｇのｒＦＧＦ−２についての時間の関数としての平均ＦＧＦ−２血漿濃度のプロットである。ＩＶ経路およびＩＣ経路による３６μｇ／ｋｇ用量について、図１Ｂにおける血漿濃度対時間のプロフィールは非常に印象的である。しかし、ＩＣ経路で初回通過効果は排除されない。図２は、図１Ａおよび１Ｂに対応するｐｇ＊分／ｍｌでの平均ＦＧＦ−２曲線下面積（ＡＵＣ）のプロットである。図２は、ＩＣまたはＩＶ注入後の全身性ｒＦＧＦ−２曝露（ＡＵＣ）の用量直線性を示す。詳細には図２は、ＩＣ経路およびＩＶ経路での投与後のｒＦＧＦ−２に対する全身性曝露が、実質的に類似であることを示す。
【００７６】
図３は、「ｒＦＧＦ−２注入の直前」でのヘパリン投与の時間の関数としての個々のヒト患者血漿クリアランス（ＣＬ）値（ｍｌ／分／ｋｇ）のプロットである。図３は、ＦＧＦ−２血漿クリアランス（ＣＬ）へのヘパリン投与のタイミングの影響を示す。図３は、ｒＦＧＦ−２前１００分までのヘパリン投与がＦＧＦ−２クリアランスを減少することを示すが、ヘパリン投与のための好ましい時間はｒＦＧＦ−２投与前０〜３０分である。ここでＦＧＦ−２クリアランス減少へのヘパリンの効果は最大である。
【００７７】
図４は、「ｒＦＧＦ−２注入前の分単位で」のヘパリン投与の時間の関数としての個々のヒト患者のｒＦＧＦ−２用量の正規化曲線下面積（ＡＵＣ）であり、そしてｒＦＧＦ−２  ＡＵＣへのヘパリン投与のタイミングの影響を示す。図４は、最大のＡＵＣ／用量が、有効量のグリコサミノグリカン（例えば、ヘパリン）がＩＣ  ｒＦＧＦ−２注入の３０分以内に、より好ましくはＩＣまたはＩＶ  ｒＦＧＦ−２注入の２０分以内に、前投与された場合に、達成されることを示す。代表的には、有効量のグリコサミノグリカンは１０〜８０Ｕ／ｋｇ  ヘパリンである。
【００７８】
投与の投与量および様式の関数としてのヒトにおけるｒＦＧＦ−２についての平均薬物動態パラメーターは、本明細書中の表８に要約される。表８についていえば、ヒトにおけるＦＧＦ−２のＴ1/2は、低用量（０．３３〜２μｇ／ｋｇ）ＩＣでの２．２±３．７時間から１８〜３６μｇ／ｋｇ  ＩＶの用量での７．０±３．５時間までの範囲に決定される；アッセイの限界を考慮して、終末半減期は全ての群について５〜７時間と推定される。ＦＧＦ−２のクリアランス範囲は、７０ｋｇ男性について１３．２〜１８．２Ｌ／時間にわたる。結局、定常状態容積（Ｖｓｓ）は、７０ｋｇの男性あたり１１．３±１０．４Ｌ〜１６．８±１０．７Ｌと決定された。
【００７９】
【表７】
2010163457.tif 000008
ヘパリン様構造へのＦＧＦ−２の結合は強力である（解離定数約２×１０-9Ｍ）が、特定のチロシンキナーゼレセプターへのＦＧＦ−２の結合は、およそ２ケタ大きい（解離定数約２×１０-11Ｍ）。Ｍｏｓｃａｔｅｌｌｉら（１９９１）。従って、どのような理論にも束縛されることはないが、グリコサミノグリカン（例えば、ヘパリン）とのｒＦＧＦ−２の複合体は、シグナル伝達および有糸分裂誘発を増加し得、そして／または酵素的分解からｒＦＧＦ−２を防御する。
【実施例】
【００８０】
以下の実施例は、上記のデータを生じる選択基準および第Ｉ相臨床試験についてより詳細を提供する。
【００８１】
（実施例１）
「第Ｉ相臨床試験において用いられるｒＦＧＦ−２の単位用量」
配列番号２のｒＦＧＦ−２は、単位用量でかつ薬学的組成物として処方され、そしてラット、ブタおよび最終的には、本明細書に言及される第Ｉ相臨床試験でヒトに投与される。種々の処方物は以下に記載される。
【００８２】
ｒＦＧＦ−２単位用量は、積層した灰色のブチルゴムの栓および赤色のプルトップのフタを備える３ｃｃのＩ型ガラスバイアル中の液体として提供された。ｒＦＧＦ−２の単位用量は、１０ｍＭのクエン酸ナトリウム、１０ｍＭモノチオグリセロール、１ｍＭ  二ナトリウム二水和物ＥＤＴＡ（分子量３７２．２）、１３５ｍＭ塩化ナトリウム、ｐＨ５．０中に、１．２ｍｌの０．３ｍｇ／ｍｌの配列番号２のｒＦＧＦ−２を含んでいた。従って、絶対的な用語では、それぞれのバイアル（および単位用量）は、０．３６ｍｇのｒＦＧＦ−２を含んでいた。液体形態で単位用量を含有するバイアルを２℃〜８℃で保管した。
【００８３】
ｒＦＧＦ希釈液は、積層した灰色のブチルゴムの栓および赤色のプルトップのフタを備える５ｃｃのＩ型ガラスバイアル中に供給した。ｒＦＧＦ−２希釈液は、１０ｍＭクエン酸ナトリウム、１０ｍＭモノチオグリセロール、１３５ｍＭ塩化ナトリウム、ｐＨ５．０を含む。それぞれのバイアルは５．２ｍｌのｒＦＧＦ−２希釈液を含み、それを２℃〜８℃で保存した。
【００８４】
成分を溶出させたｒＦＧＦ−２の薬学的組成物を、ｒＦＧＦ希釈液で注入容量が１０４０ｍｌであるようにｒＦＧＦ−２の単位用量を希釈することにより調製した。１００μｇ／ｍｌの予備設定限界未満のＥＤＴＡ濃度を保持するため、より高い体重を有する患者に比例してより高い絶対量のＦＧＦ−２を投与した場合、総注入容量を最大４０ｍｌに増加した。
【００８５】
（実施例２）
「ｒＦＧＦ−２での処置のための冠動脈疾患患者の選択基準」
以下の選択基準をフェーズＩの冠動脈疾患患者に適用した。彼らの活動は、最適な医療処置にもかかわらず冠動脈虚血により制限されており、そして彼らは承認された血管再生治療の候補ではなかった：
（包含基準：被験体は、以下の場合は適格である：）
・男性または女性、１８歳以上
・冠動脈疾患（ＣＡＤ）の診断
・承認された血管再生手順（例えば、血管形成術、ステント、冠動脈バイパス移植（ＣＡＢＧ））の次善の候補（またはこれらの介入を拒絶する）
・改変Ｂｒｕｃｅプロトコールを用いて少なくとも３分の運動が可能でかつ冠動脈虚血により制限されている。
・薬理学的に強調したタリウムセスタンイビ（ｓｅｓｔａｍｉｂｉ）スキャンでの少なくとも２０％の心筋の誘導性かつ可逆的な欠損
・必要な心カテーテル法のために臨床的に受容可能な範囲内のＣＢＣ、血小板、血清化学
・正常なＩＮＲか、またはクーマディンで抗凝血する場合、ＩＮＲ＜２．０
・全ての必要な研究手順および追跡の訪問を含む、本研究に参加するための書面のインフォームドコンセントに賛同しかつ受け入れ可能
（除外基準：被験体は、以下の場合は、適格でない）
・悪性腫瘍：治癒的に処置された基底細胞癌を除き、過去１０年内のなにかの悪性腫瘍の既往歴
・眼の状態：増殖性網膜症、重篤な非増殖性網膜症、網膜静脈閉塞、イールズ病、もしくは黄斑性浮腫または眼科医による眼底検査：６ヶ月以内の眼内外科の既往歴
・網膜機能：年齢で調節される正常な範囲未満のクレアチニンクリアランス；タンパク質＞２５０ｍｇまたはマイクロアルブミン＞３０ｍｇ／２４時間  尿素
・クラスＩＶの心不全（Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  Ｈｅａｒｔ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ）
・駆出率＜２０％（心エコー、タリウムスキャン、ＭＲＩまたはゲート化プール血液スキャン（ｇａｔｅｄ  ｐｏｏｌｅｄ  ｂｌｏｏｄ  ｓｃａｎ（ＭＵＧＡ）で測定）
・血行動態関連不整脈（例えば、心室性細動、持続性心室性頻脈）
・重篤な弁狭窄症（大動脈弁領域＜１．０ｃｍ2、僧坊弁領域＜１．２ｃｍ2）または重篤な弁機能不全
・３週内の狭心症または不安定狭心症の顕著な増大
・３ヶ月内の心筋梗塞（ＭＩ）の既往歴
・６ヶ月内の一過性虚血発作（ＴＩＡ）または発作の既往歴
・６ヶ月内のＣＡＢＧ、血管形成術またはステントの既往歴
・６ヶ月内の経心筋的レーザー血行再建術、ｒＦＧＦ−２または血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）での処置の既往歴
・妊娠の可能性のある女性または授乳婦
・あらゆる病理的線維症（例えば、肺線維症、強皮症）
・血管奇形の既知（例えば、ＡＶ奇形、血管腫）
・ＣＡＤの症状のアセスメントを妨害するなんらかの疾患（例えば、心膜炎、肋軟骨炎、食道炎、全身性脈管炎、鎌状赤血球病）の合併
・改変Ｂｒｕｃｅプロトコール運動ストレス試験の実施を制限するなんらかの疾患（例えば、下肢の切断術もしくは麻痺症、下肢の重篤な関節炎、重篤な慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ））の合併
・３０日以内の、治験薬、デバイスまたは手順の臨床試験への参加（または治験薬の６０日以内の計画）
・ｒＦＧＦ−２または関連する化合物に対する既知の過敏性
・研究者の意見で、被験体を本研究への参加に不適切にする任意の条件（例えば、精神病、重篤な精神遅滞、研究者とのコミュニケーション不能、薬物またはアルコール乱用）。
【００８６】
（実施例３）
（ヒトに投与された組換えＦＧＦ−２（配列番号２）に関するフェーズＩ臨床研究）
本実施例のフェーズＩ  ＣＡＤ試験は、安全性、耐容性および薬物動態学について、組換え線維芽細胞増殖因子−２（ｒＦＧＦ−２）の開放標識用量増大研究である。この研究は２箇所で実施された：ＢｏｓｔｏｎにあるＢｅｔｈ  Ｉｓｒａｅｌ  Ｄｅａｃｏｎｅｓｓ  Ｈｏｓｐｉｔａｌ（Ｈａｒｖａｒｄ）、Ａｔｌａｎｔａ、ＧＡにあるＭＡ  ａｎｄ  Ｅｍｏｒｙ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｈｏｓｐｉｔａｌ。記録は完全である。被験体は、１日目にｒＦＧＦ−２の単回注入で処置され、そして３６０日間追跡された；フォローアップは幾人の被験体ではなお終了していない。
【００８７】
被験体集団は、冠状動脈虚血により運動制限されている進行性ＣＡＤを持つ患者からなり、そして確立された再血管形成手順の１つ（例えば、ＣＡＢＧ、血管形成−−ステントとともにまたはステントなし）について（またはこれを受けたくない）準最適候補と考えれる。主要な排除規準は、悪性、非代償性心不全または左心室駆出率＜２０％、腎不全またはタンパク尿、および種々の眼症状（例えば、進行性糖尿病性網膜症、重篤な非進行性網膜症）の病歴または疑いであった。
【００８８】
６６人の被験体は、この試験で、配列番号２のｒＦＧＦ−２を受け：５２人がｒＦＧＦ−２をＩＣ注入として受け、そして１４人がそれをＩＶ注入として受けた。各被験体は病院内で少なくとも２４時間観察され、次いで、フォローアップ訪問で３６０日の間（１５、２９、５７、１８０および３６０日）外来患者として追跡された。少なくとも４人の被験体が各用量で研究された；被験体が６日以内にプロトコールにより規定されたような用量制限毒性を経験しなかった場合、用量を増大した。薬物は、冠状動脈血液供給（ＩＣ）の２つの主要な供給源間に分割された単回の２０分の注入として、（血管形成術で既に採用されているような）患者の冠状動脈中、または末梢静脈（ＩＶ）内にカテーテルを配置するための標準的な技法を用いて投与された。ＩＣ投与されたｒＦＧＦ−２の用量μｇ／ｋｇ（および患者の数）は、配列番号２のｒＦＧＦ−２の０．３３（ｎ＝４）、０．６５（ｎ＝４），２．０（ｎ＝８）、６．０（ｎ＝４）、１２．０（ｎ＝４）、２４（ｎ＝８）、３６（ｎ＝１０）および４８（ｎ＝１０）であった。ＩＶ投与されたｒＦＧＦ−２の用量μｇ／ｋｇ（および患者の数）は、配列番号２のｒＦＧＦ−２の１８．０（ｎ＝４）および３６．０（ｎ＝１０）であった。
【００８９】
アンギナ頻度および生活の質は、ベースライン（ｒＦＧＦ−２投与前）、およびｒＦＧＦ−２投与後２ヶ月ならびに６ヶ月にＳｅａｔｔｌｅ  Ａｎｇｉｎａ  Ｑｕｅｓｔｉｏｎｎａｉｒｅ（ＳＡＱ）により評価した。運動許容時間（ＥＴＴ）は、１、２、および６月目に踏み車試験（ｔｒｅａｄｍｉｌｌ  ｔｅｓｔ）により評価した。休止／運動核灌流およびゲート化セスタンイビ−決定安静（ｇａｔｅｄ  ｓｅｓｔａｍｉｂｉ−ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ）駆出率（ＥＦ）、ならびに休止磁気共鳴造影（ＭＲＩ）を、ベースライン、ならびにｒＦＧＦ−２投与の１ヶ月、２ヶ月および６ヶ月後に評価した。心臓機能および灌流における変化を％で客観的に測定すると考えられたＭＲＩ測定は；（１）駆出率；（２）心筋梗塞程度（％）；（３）正常壁肥厚；（４）正常運動（％）；（５）標的壁肥厚（％）；（６）標的壁運動（％）；（７）標的壁領域側副程度（％）；および（８）標的領域遅延到達程度（％）を含めた。
【００９０】
４人の被験体うち１人が、（プロトコールにより規定されるような）用量制限毒性を経験した場合、その用量で４人のさらなる被験体が調査され；誰もが毒性を経験しなかった場合、用量が増大され、そして別の群が研究された。最大許容用量（ＭＴＤ）は、９／１０の被験体が許容したＩＣ用量、すなわち３６μｇ／ｋｇ  ＩＣとして規定された。
【００９１】
注入前の注意深い流体管理は、ＳｗａｎＧａｎｚカテーテルを用いて処方され、そして生命徴候は、投薬の間に頻繁にモニターされた。ヘパリンを、すべての群においてｒＦＧＦ−２の注入の前にＩＶ投与した。ＥＤＴＡ濃度は、単位用量組成物中で１００μｇ／ｍｌより少なかった。投与された研究薬物の容量は、用量および被験体の体重で変化させ、そして低用量で１０ｍｌから高用量で４０ｍｌの範囲であった。
【００９２】
（予備的結果）
本明細書に提示された結果は未監査であり、そしてすべての群（１〜１０）について６ヶ月のフォローアップで６６人の被験体に対する第３回目の中間分析、およびＣｈｉｒｏｎ  Ｄｒｕｇ  Ｓａｆｅｔｙからの１９９９年７月２９日の重症の副作用（ＳＡＥ）レポートに基づく。最後の来院（３６０日目）のデータ収集および最終解析は進行中である。
【００９３】
０．３３μｇ／ｋｇ  ＩＣの開始用量は、８つの系列の群にわたって４８μｇ／ｋｇ  ＩＣまで増大させ、この用量で、１０人の被験体の２人が、プロトコールにより規定されたような用量制限毒性（低血圧症）を経験した。低血圧症は、すべての被験体において流体単独で管理可能であった（昇圧または補助デバイスなし）。３６μｇ／ｋｇ  ＩＣで、１０人の被験体の１人のみが、用量制限毒性を有し、このことは、この用量を最大許容用量（ＭＴＤ）として規定した。２つの追加の群をＩＶ注入により試験した；４人の被験体はＭＴＤの半分（１８μｇ／ｋｇ）および１０人の被験体はＭＴＤ（３６μｇ／ｋｇ）。
【００９４】
低血圧症は、Ｙｏｒｋｓｈｉｒｅブタにおける動物モデルにより予想されたように、ヒトにおける用量制限であった。しかし、３６．０μｇ／ｋｇ  ｒＦＧＦ−２  ＩＣはヒトでは耐性であった；その一方ブタでは２０．０μｇ／ｋｇ  ｒＦＧＦ−２  ＩＣは２匹の動物の１匹で難解な低血圧症を引き起こした。ヒトにおけるより良好な耐容性は、積極的な流体管理および一般的な感覚消失の不在に起因した。
【００９５】
１９９９年７月２９日付けで、３３の重篤な副作用事象（ＳＡＥ）が２４／６６の被験体で生じたが、用量関連ではなかった。１５のＳＡＥは、少なくとも潜在的にはｒＦＧＦ−２に関連したと考えられた；調査者および医療管理者により割り当てられた関連性の間に差異が存在したときは、常に、より保存的な関係が割り当てられた。ＳＡＥは５人の被験体で複数であった：０１１０３（０．３３μｇ／ｋｇ  ＩＣ）、０１１０６（０．６５μｇ／ｋｇ  ＩＣ）、０１１１３（２．０μｇ／ｋｇ  ＩＣ）、０１１３７（３６．０μｇ／ｋｇ  ＩＶ）、０２１０１（０．６５μｇ／ｋｇ  ＩＣ）。
【００９６】
１日目の最も頻繁な処置で緊急の副作用事象（ＡＥ）は、一時的な収縮期の低血圧症および一時的な徐脈であった。低血圧症は、用量依存性であり、そして２４μｇ／ｋｇ  ＩＣより大きいかまたはそれに等しい（＞または＝）用量でより頻繁に生じた；徐脈は用量依存性ではなかった。少なくとも関連する可能性があると見なされ、そして用量に関連したようであった他の副作用事象（ＡＥ）は、感染後最初の数日または１週間以内に生じ、そして胸の痛み、息切れ、不眠、不安、および吐気を含んだ。これらの事象は重篤度で軽度〜中程度であり、そしてほとんどは特定の介入を必要としなかった。
【００９７】
ＩＣ投与されたとき、この薬物は、カテーテルを患者の冠状動脈中に配置するための（血管形成ですでに採用されているような）標準的な技法を用い、冠状血液供給（ＩＣ）の２つの主要な供給源間に分割した単回注入として、約２０分にわたって投与された。ＩＶ投与されるとき、この薬物は、末梢静脈中に２０分にわたる注入として投与された。
【００９８】
予備的な安全性結果は、重篤な事象は用量に関連しなかったことを示す。これまで、８つのＩＣ用量群のうち低用量群で３人が死亡し（すなわち、０．６５μｇ／ｋｇ（２３日）、２．０μｇ／ｋｇ（５７日）および６．０μｇ／ｋｇ（６３日））、そして最も高い用量群で１人が死亡（すなわち、４８．０μｇ／ｋｇ（投薬後約４ヶ月））した。死亡のうち３人は心臓；１人の死亡は、群４（６．０μｇ／ｋｇ）の患者で投薬の３週間後に診断された大きなＢ細胞リンパ腫に起因し、この患者は投薬の２ヶ月後に死亡した。
【００９９】
急性心筋梗塞（ＭＩ）が４人の患者で生じた。すなわち、群１（０．３３μｇ／ｋｇ）、群３（２．０μｇ／ｋｇ）、群４（６．０μｇ／ｋｇ）および群７（３６．０μｇ／ｋｇ）の各々からの１人の患者である。複数のＭＩが２人の患者で生じた。すなわち、群１（０．３３μｇ／ｋｇ）から１人および群３（２．０μｇ／ｋｇ）から１人である。緊急血管再形成手順（ステントとともにまたはステントなしのＣＡＢＧまたは血管形成術）を４人の患者でフォローアップの間に実施した：群１（０．３３μｇ／ｋｇ）、群３（２．０μｇ／ｋｇ）、群４（６．０μｇ／ｋｇ）および群７（３６．０μｇ／ｋｇ）の各々から１人である。
【０１００】
注入の間または直後により高い用量で観察された急性低血圧症状は、昇圧薬の必要なしにＩＶ流体の投与により管理された。ヒトにおける最大許容用量（ＭＴＤ）は、３６μｇ／ｋｇ  ＩＣと規定された。（対照的に、ブタでは、このＭＴＤは６．５μｇ／ｋｇ  ＩＣであった。）  ４８μｇ／ｋｇ  ＩＣまでのｒＦＧＦ−２の用量が、積極的な流体管理でヒト患者に投与されたが、１０人の患者のうち２人の急性および／または起立性低血圧症に起因して、プロトコールにより「許容されない」と規定された。注入されたｒＦＧＦ−２の末端半減期は５〜７時間と推定された。
【０１０１】
本研究における配列番号２のｒＦＧＦ−２の単回ＩＣまたはＩＶ注入で処置されたヒト患者は、ＥＴＴにおいて１．５〜２分の平均増加を示した。表１を参照のこと。これは特に顕著である。なぜなら、ＥＴＴにおける３０秒より大きい（＞）増加は有意であり、そして血管形成術のような代替治療を評価するための基準と考えられているからである。ＳＡＱにより測定されるような、アンギナ頻度および生活の質は、試験された６６人の患者（ｎ＝６６）に対する５つのサブスケールの全部において２月で有意な改善を示した。表２〜壁６を参照のこと。表２〜６中、１４以上の平均変化は、「臨床的に有意」と考えられた。
【０１０２】
３３人のヒトＣＡＤ患者を、ベースライン、ならびに１、２、および６月で本発明の単回単位用量組成物をＩＣまたはＩＶ経路により受けた後、休止心臓磁気共鳴造影（ＭＲＩ）により評価したとき、高度に統計的に有意な増加が、標的壁肥厚、標的壁運動および標的領域側副程度において観察され；高度に統計的に有意な減少が標的領域遅延到達程度において観察され；そして正常壁運動、正常壁肥厚または心筋梗塞程度において統計的に有意な変化は観察されなかった。
【０１０３】
上記の規準（すなわち、ＥＴＴ  ＳＡＱ、ＭＲＩ）に加えて、脈管形成効果が少なくとも６ヶ月継続する場合に、処置は非常に成功したと考えられる。現在のフェーズＩ研究では、予期せぬ優れた脈管形成効果が、すべての投薬群の幾人かの患者で６ヶ月まで継続することが観察された。既に得られた結果に基づけば、この脈管形成効果は、患者において、１２ヶ月以上続き得、少なくとも６ヶ月は続き、必要であれば、その時点でこの手順が繰り返され得る。
【０１０４】
（実施例４）
（冠状動脈疾患を処置するためにヒトに投与されるｒＦＧＦ−２（配列番号２）に関する提案フェーズＩＩ臨床研究）
冠状動脈疾患についてヒト患者を処置するためのｒＦＧＦ−２のフェーズＩＩ臨床試験は、４つのアーム：偽薬、０．３μｇ／ｋｇ、３．０μｇ／ｋｇ、および３０μｇ／ｋｇの１回ＩＣ投与、を有するダブルブラインド／偽薬コントロール研究として実施する。この研究は、進行中であり、そして結果はまだ利用可能ではない。
【０１０５】
（実施例５）
（フェーズＩＩヒト臨床試験のためのｒＦＧＦ−２の単位用量および薬学的組成物）
配列番号２のｒＧＦＧ−２は、本明細書で参照されるフェーズＩＩ臨床試験においてヒトへの投与のための単位用量の薬学的組成物として処方された。種々の処方物を以下に記載する。
【０１０６】
ｒＦＧＦ−２単位用量を、積層された灰色のブチルゴム栓および赤色のフリップオフオーバーシールを備えた５ｃｃのタイプＩガラスバイアル中の液体として調製した。このｒＦＧＦ−２処方物は、１０ｍＭクエン酸ナトリウム、１０ｍＭモノチオグリセロール、０．３ｍＭ  ＥＤＴＡ２ナトリウム２水和物（分子量３７２．２）、１３５ｍＭ塩化ナトリウム、ｐＨ５．０中に配列番号２のｒＦＧＦ−２の０．３ｍｇ／ｍｌを含む。各バイアルは、３．７ｍｌのｒＦＧＦ−２薬物産物溶液を含んだ（バイアルあたり１．１１ｍｇのｒＦＧＦ−２）。液体形態中の得られる単位用量を−６０℃以下で貯蔵する。上記に記載した単位用量は、「ｒＦＧＦ−２偽薬」で希釈する。患者のサイズに依存して、いくつかのバイアルの内容物を組み合わせ、フェーズＩＩ研究のための３６μｇ／ｋｇの単位用量を生成し得る。
【０１０７】
ｒＦＧＦ−２偽薬を、積層された灰色のブチルゴム栓および赤色のフリップオフオーバーシールを備えた５ｃｃのタイプＩガラスバイアル中の透明無色の液体として供給する。このｒＦＧＦ−２偽薬は、薬物製品と外見上識別不能であり、そして以下の処方を有する：１０ｍＭクエン酸ナトリウム、１０ｍＭモノチオグリセロール、０．３ｍＭ  ＥＤＴＡ２ナトリウム２水和物（分子量３７２．２）、１３５ｍＭ塩化ナトリウム、ｐＨ５．０。各バイアルは、５．２ｍｌのｒＦＧＦ−２偽薬溶液を含む。単位用量とは異なり、このｒＦＧＦ−２偽薬は、２℃〜８℃で貯蔵する。
【０１０８】
注入されるｒＦＧＦ−２薬学的組成物は、ｒＦＧＦ−２単位用量を、ｒＦＧＦ希釈剤で、注入用量がフェーズＩＩ用に２０ｍｌであるように希釈することにより調製される。
（配列表）
【０１０９】
【表７−１】
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【０１１０】
【表７−２】
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【０１１１】
【表７−３】
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【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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