(57)【要約】      （修正有）【課題】鎖長が短く、かつ高いマイオスタチン阻害活性を有するペプチドの提供。【解決手段】以下の式（１）で表されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸残基数が１６以下である、ペプチド、もしくはその薬学的に許容される塩、またはそれらのプロドラッグ。2020059663.tif 000010【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の式（１）で表されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸残基数が１６以下である、ペプチド、もしくはその薬学的に許容される塩、またはそれらのプロドラッグ：
【化１】
2020059663.tif 000009
上記式（１）において、
Ｘ１は、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、ノルバリン、２−アミノ酪酸、２−シクロヘキシルグリシン、２−フェニルグリシン、ノルロイシンおよびイソバリンからなる群から選択されるアミノ酸残基または欠損であり；
Ｘ２は、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、ＡｓｐおよびＧｌｕからなる群から選択されるアミノ酸残基であり；
Ｘ３は、ＧｌｕまたはＡｓｐであり；
Ｘ４は、Ａｓｎ、Ａｓｐ、ＧｌｕおよびＧｌｎからなる群から選択されるアミノ酸残基であり；
Ｘ５は、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、２−ヒドロキシグリシンおよびホモセリンからなる群から選択されるアミノ酸残基であり；
Ｘ６は、Ｌｅｕまたは２−フェニルグリシンであり；
Ｘ７は、Ｐｈｅ、３−チエニルアラニン、ホモフェニルアラニン、２−シクロヘキシルグリシン、ＴｒｐおよびＴｙｒからなる群から選択されるアミノ酸残基であり；
Ｘ８は、Ｌｙｓ、２，４−ジアミノブタン酸、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、２，３−ジアミノプロピオン酸およびオルニチンからなる群から選択されるアミノ酸残基であり；
Ｘ９は、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、３−ナフチルアラニン、２−シクロヘキシルグリシン、４−フルオロフェニルアラニンおよびホモフェニルアラニンからなる群から選択されるアミノ酸残基であり；
Ｘ１０は、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、ノルロイシン、３−チエニルアラニン、２−フェニルグリシン、ホモフェニルアラニン、ホモメチオニン、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、２−アミノ酪酸、ノルバリン、イソバリンおよび２−シクロヘキシルグリシンからなる群から選択されるアミノ酸残基であり；
Ｘ１１は、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、ノルバリン、２−シクロヘキシルグリシン、２−フェニルグリシン、Ｌｅｕ、２−アミノ酪酸、ノルロイシンおよびイソバリンからなる群から選択されるアミノ酸残基であり；
Ｘ１２は、Ｐｈｅ、ホモフェニルアラニン、２−フェニルグリシン、３−チエニルアラニン、２−シクロヘキシルグリシン、４−フルオロフェニルアラニン、４−メトキシフェニルアラニンおよび４−クロロフェニルアラニンからなる群から選択されるアミノ酸残基であり；
Ｘ１３は、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、ＡｓｐおよびＧｌｕからなる群から選択されるアミノ酸残基であり；ならびに
Ｘ１４は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、β−アラニン、４−アミノ酪酸、２−アミノイソ酪酸およびＰｒｏからなる群から選択されるアミノ酸残基または欠損である。
【請求項２】
Ｘ７は、Ｐｈｅ、３−チエニルアラニン、ホモフェニルアラニンおよび２−シクロヘキシルグリシンからなる群から選択されるアミノ酸残基であり；
Ｘ１０は、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、ノルロイシン、３−チエニルアラニン、２−フェニルグリシン、ホモフェニルアラニン、ホモメチオニン、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、２−アミノ酪酸、ノルバリンおよびイソバリンからなる群から選択されるアミノ酸残基であり；
Ｘ１２は、Ｐｈｅ、ホモフェニルアラニン、２−フェニルグリシン、３−チエニルアラニン、２−シクロヘキシルグリシン、４−フルオロフェニルアラニンおよび４−メトキシフェニルアラニンからなる群から選択されるアミノ酸残基であり；ならびに
Ｘ１４は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、β−アラニン、４−アミノ酪酸および２−アミノイソ酪酸からなる群から選択されるアミノ酸残基または欠損である、請求項１に記載のペプチド、もしくはその薬学的に許容される塩、またはそれらのプロドラッグ。
【請求項３】
Ｘ１は、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、ノルバリン、２−アミノ酪酸、２−シクロヘキシルグリシン、２−フェニルグリシン、ノルロイシンおよびイソバリンからなる群から選択されるアミノ酸残基であり；
Ｘ１０は、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、３−チエニルアラニン、２−フェニルグリシン、ホモフェニルアラニンおよびホモメチオニンからなる群から選択されるアミノ酸残基であり；ならびに
Ｘ１４は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、β−アラニン、４−アミノ酪酸および２−アミノイソ酪酸からなる群から選択されるアミノ酸残基である、請求項２に記載のペプチド、もしくはその薬学的に許容される塩、またはそれらのプロドラッグ。
【請求項４】
Ｘ２は、ＡｓｎまたはＧｌｕであり；
Ｘ３は、Ａｓｐであり；
Ｘ４は、Ａｓｎ、ＧｌｕおよびＧｌｎからなる群から選択されるアミノ酸残基であり；
Ｘ５は、Ｔｈｒであり；
Ｘ６は、Ｌｅｕであり；
Ｘ７は、Ｐｈｅ、３−チエニルアラニンおよび２−シクロヘキシルグリシンからなる群から選択されるアミノ酸残基であり；
Ｘ１０は、Ｐｈｅ、３−チエニルアラニン、２−フェニルグリシンおよびホモフェニルアラニンからなる群から選択されるアミノ酸残基であり；
Ｘ１１は、Ｉｌｅ、Ｖａｌおよび２−シクロヘキシルグリシンからなる群から選択されるアミノ酸残基であり；
Ｘ１３は、Ａｓｎ、ＧｌｎおよびＡｓｐからなる群から選択されるアミノ酸残基であり；ならびに
Ｘ１４は、Ｇｌｙ、β−アラニンおよび４−アミノ酪酸からなる群から選択されるアミノ酸残基である、請求項３に記載のペプチド、もしくはその薬学的に許容される塩、またはそれらのプロドラッグ。
【請求項５】
Ｘ４は、ＡｓｎまたはＧｌｎであり；
Ｘ７は、Ｐｈｅであり；
Ｘ８は、Ｌｙｓであり；
Ｘ９は、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、３−（２−ナフチル）アラニン、２−シクロヘキシルグリシン、４−フルオロフェニルアラニンおよびホモフェニルアラニンからなる群から選択されるアミノ酸残基であり；
Ｘ１０は、３−チエニルアラニン、２−フェニルグリシンおよびホモフェニルアラニンからなる群から選択されるアミノ酸残基であり；ならびに
Ｘ１２は、Ｐｈｅ、２−フェニルグリシン、３−チエニルアラニン、２−シクロヘキシルグリシンおよび４−フルオロフェニルアラニンからなる群から選択されるアミノ酸残基である、請求項４に記載のペプチド、もしくはその薬学的に許容される塩、またはそれらのプロドラッグ。
【請求項６】
前記式（１）で表されるペプチドが配列番号６〜５４で表されるアミノ酸配列のいずれか１つを含む、請求項１〜５のいずれか１項に記載のペプチドもしくはその薬学的に許容される塩、またはそれらのプロドラッグ。
【請求項７】
前記式（１）で表されるペプチドが配列番号６、８および１０〜１５で表されるアミノ酸配列のいずれか１つを含む、請求項６に記載のペプチドもしくはその薬学的に許容される塩、またはそれらのプロドラッグ。
【請求項８】
前記式（１）で表されるペプチドが配列番号１３、１５〜３３、３７、３９、４１、４２および４５〜５４で表されるアミノ酸配列のいずれか１つを含む、請求項６または７に記載のペプチドもしくはその薬学的に許容される塩、またはそれらのプロドラッグ。
【請求項９】
前記式（１）で表されるペプチドが配列番号１７〜１９、２１〜２５、２７、２９〜３３、４１、４２、４５〜４９および５１〜５３で表されるアミノ酸配列のいずれか１つを含む、請求項６〜８のいずれか１項に記載のペプチドもしくはその薬学的に許容される塩、またはそれらのプロドラッグ。
【請求項１０】
請求項１〜９のいずれか１項に記載のペプチドもしくはその薬学的に許容される塩、またはそれらのプロドラッグを含む、マイオスタチン阻害剤。
【請求項１１】
請求項１〜９のいずれか１項に記載のペプチドもしくはその薬学的に許容される塩、またはそれらのプロドラッグを含む、筋萎縮障害の予防および／または治療剤。
【請求項１２】
前記筋萎縮障害が、筋ジストロフィーである、請求項１１に記載の筋萎縮障害の予防および／または治療剤。
【請求項１３】
請求項１〜９のいずれか１項に記載のペプチドもしくはその薬学的に許容される塩、またはそれらのプロドラッグの有効量を患者に投与することを含む、筋萎縮障害の予防および／または治療方法。
【請求項１４】
前記筋萎縮障害が、筋ジストロフィーである、請求項１３に記載の筋萎縮障害の予防および／または治療方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ペプチドもしくはその薬学的に許容される塩、またはそれらのプロドラッグに関する。
【背景技術】
【０００２】
筋ジストロフィーは、骨格筋の変性・壊死を主病変とし、筋力低下が進行する遺伝性疾患である。筋力の発現には、細胞内の筋原繊維で生じた張力を複数のタンパク質を介して細胞外の基底膜まで伝達する仕組みが必要である。これに携わるタンパク質群をコードする遺伝子の不具合は、筋ジストロフィー発症の原因となる。例えば、最も重篤なデュシェンヌ型の筋ジストロフィーでは、ジストロフィン遺伝子が変異し、当該タンパク質の欠失や機能不全が主因といわれている。そこで、筋ジストロフィーでの骨格筋の変性壊死に対抗する一手段として、骨格筋量を負に制御する因子であるマイオスタチン（増殖分化因子−８、ＧＤＦ−８）の機能を阻害することで筋肉量を増加させる治療法の開発が、特に有用と考えられている。
【０００３】
マイオスタチンは、ＴＧＦ−βファミリーに属し、骨格筋に多く発現する分泌性タンパク質であり、Ｎ末端側のプロドメインとＣ末端側の成熟ドメインとを含む前駆体タンパク質として細胞内で合成される。細胞から分泌されたマイオスタチンは、ｌａｔｅｎｃｙ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ（ＬＡＰ）と呼ばれるプロドメイン由来のプロペプチドが、成熟ドメイン由来の活性ダイマーと会合し、骨格筋量を負に制御する主体である活性ダイマーを不活性化する。このように不活化状態で生体内にストックされたマイオスタチンは、必要時に、プロペプチドが酵素によって分解され、活性体となると考えられている。活性体となったマイオスタチンは、アクチビンタイプＩＩＢ受容体に代表される受容体との結合を介して、骨格筋量を負に制御するシグナル分子としての機能を果たす。
【０００４】
したがって、マイオスタチンプロペプチドに由来するペプチドを用いて生体内のマイオスタチンを阻害することで、骨格筋量の増大や、筋ジストロフィーに代表されるような筋萎縮性障害の治療といった効果が期待できる。例えば、特許文献１や非特許文献１には、マイオスタチンプロペプチドに由来する、マイオスタチン阻害ペプチドに関して記載されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】国際公開第２０１４／１１９７５３号
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Ｋ．Ｔａｋａｙａｍａら、  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  （２０１５）５８、１５４４−１５４９
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
ここで、上記のようなペプチドを医薬等の生理活性剤として利用する場合、その鎖長（ペプチドの残基数）を短くすることが合成および生体内での利用率の両面から有利である。すなわち、合成されるペプチドの鎖長を短くすることにより、合成工程の簡素化や合成コストの削減を図ることができる。また、ペプチドの鎖長を短くすることで、酵素等により分解を受ける部位を減らしたり、細胞への取り込みを促進できたりするといった効果が期待できる。
【０００８】
しかしながら、従来、マイオスタチンプロペプチドに由来するペプチドの鎖長を減らすと、マイオスタチン阻害活性が低下する傾向があるという問題が存在していた。例えば、特許文献１の図６に示されるように、ペプチド鎖長が長い配列番号２を有するペプチド１と比べて、鎖長が短い同文献における配列番号４を有するペプチド３では、マイオスタチン阻害活性が低下している。また、非特許文献１の図２においても、鎖長の短いペプチド１１は、他のペプチドに比べてマイオスタチン阻害活性が低下している。
【０００９】
したがって、本発明は、上記事情を鑑みてなされたものであり、鎖長が短い、例えば、アミノ酸残基数が１６以下であり、かつ高いマイオスタチン阻害活性を有するペプチドを提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明者らは、上記の問題を解決すべく、鋭意研究を行った。その結果、フォリスタチン由来の所定のアミノ酸配列を含むペプチドによって上記課題が解決されることを見出し、本発明の完成に至った。
【００１１】
本発明の一側面は、以下の式（１）で表されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸残基数が１６以下である、ペプチド、もしくはその薬学的に許容される塩、またはそれらのプロドラッグに関する。
【００１２】
【化１】
2020059663.tif 000002
【００１３】
上記式（１）において、
Ｘ１は、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、ノルバリン、２−アミノ酪酸、２−シクロヘキシルグリシン、２−フェニルグリシン、ノルロイシンおよびイソバリンからなる群から選択されるアミノ酸残基または欠損であり；
Ｘ２は、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、ＡｓｐおよびＧｌｕからなる群から選択されるアミノ酸残基であり；
Ｘ３は、ＧｌｕまたはＡｓｐであり；
Ｘ４は、Ａｓｎ、Ａｓｐ、ＧｌｕおよびＧｌｎからなる群から選択されるアミノ酸残基であり；
Ｘ５は、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、２−ヒドロキシグリシンおよびホモセリンからなる群から選択されるアミノ酸残基であり；
Ｘ６は、Ｌｅｕまたは２−フェニルグリシンであり；
Ｘ７は、Ｐｈｅ、３−チエニルアラニン、ホモフェニルアラニン、２−シクロヘキシルグリシン、ＴｒｐおよびＴｙｒからなる群から選択されるアミノ酸残基であり；
Ｘ８は、Ｌｙｓ、２，４−ジアミノブタン酸、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、２，３−ジアミノプロピオン酸およびオルニチンからなる群から選択されるアミノ酸残基であり；
Ｘ９は、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、３−ナフチルアラニン、２−シクロヘキシルグリシン、４−フルオロフェニルアラニンおよびホモフェニルアラニンからなる群から選択されるアミノ酸残基であり；
Ｘ１０は、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、ノルロイシン、３−チエニルアラニン、２−フェニルグリシン、ホモフェニルアラニン、ホモメチオニン、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、２−アミノ酪酸、ノルバリン、イソバリンおよび２−シクロヘキシルグリシンからなる群から選択されるアミノ酸残基であり；
Ｘ１１は、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、ノルバリン、２−シクロヘキシルグリシン、２−フェニルグリシン、Ｌｅｕ、２−アミノ酪酸、ノルロイシンおよびイソバリンからなる群から選択されるアミノ酸残基であり；
Ｘ１２は、Ｐｈｅ、ホモフェニルアラニン、２−フェニルグリシン、３−チエニルアラニン、２−シクロヘキシルグリシン、４−フルオロフェニルアラニン、４−メトキシフェニルアラニンおよび４−クロロフェニルアラニンからなる群から選択されるアミノ酸残基であり；
Ｘ１３は、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、ＡｓｐおよびＧｌｕからなる群から選択されるアミノ酸残基であり；ならびに
Ｘ１４は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、β−アラニン、４−アミノ酪酸、２−アミノイソ酪酸およびＰｒｏからなる群から選択されるアミノ酸残基または欠損である。
【発明の効果】
【００１４】
本発明によれば、高いマイオスタチン阻害活性を有し、かつ高いマイオスタチン選択性を有するペプチドを提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】実施例および比較例のペプチドによる、マイオスタチン阻害活性を示す。
【図２】実施例および比較例のペプチドによる、マイオスタチン、アクチビンおよびＴＧＦ−β１への阻害活性を示す。
【図３】実施例のペプチドまたはアルブミンを両脚前腓骨筋内に投与して、４週間飼育した後の、Ｃ５７ＢＬ６Ｊマウスの前腓骨筋の筋量の結果を示す。
【図４】実施例のペプチドによる、マイオスタチン阻害活性を示す。
【図５】実施例のペプチドによる、マイオスタチン阻害活性を示す。
【図６】実施例のペプチドによる、マイオスタチン阻害活性を示す。
【図７】実施例のペプチドによる、マイオスタチン阻害活性を示す。
【図８】実施例のペプチドによる、マイオスタチン阻害活性を示す。
【図９】実施例のペプチドによる、マイオスタチン阻害活性を示す。
【図１０】実施例のペプチドによる、マイオスタチン阻害活性を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
ＴＧＦ−βファミリーに属するマイオスタチンは、筋肉量を負に制御する因子として知られている。一般に、マイオスタチンは、自身のプロドメインタンパク質、またはフォリスタチンタンパク質との相互作用により機能的阻害を受けることが知られている。
【００１７】
本発明者らは、驚くべきことに、フォリオスタチン由来の配列番号６のペプチド（ＨＦｓ４１−５４、アミノ酸残基数：１４）、すなわち本発明に係るペプチドが、高いマイオスタチン阻害活性を有することを見出した。このようなペプチドであれば、鎖長が短く、かつ高いマイオスタチン阻害活性を有するペプチドを提供することができる。
【００１８】
また、本発明に係るペプチドは、非特許文献１に記載のペプチド７よりも高いマイオスタチン選択性を有する（図２参照）。そのため、本発明に係るペプチドは、ＴＧＦ−βファミリー分子の阻害による副作用の発現をより抑えることができる。
【００１９】
以下、本発明の一形態に係る実施の形態を説明する。本発明は、以下の実施の形態のみには限定されない。
【００２０】
本明細書において、範囲を示す「Ｘ〜Ｙ」は「Ｘ以上Ｙ以下」を意味する。また、特記しない限り、操作および物性等の測定は室温（２０〜２５℃）／相対湿度４０〜５０％ＲＨの条件で測定する。
【００２１】
本明細書において、「式（１）で表されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸残基数が１６以下である、ペプチド、もしくはその薬学的に許容される塩」を、単に「本発明に係るペプチド」とも称する。
【００２２】
本発明における「アミノ酸残基」とは、ペプチドまたはタンパク質分子上で、ペプチドまたはタンパク質を構成しているアミノ酸の一単位に当たる部分を意味する。より具体的には、以下の式（２）のように表される、α−アミノ酸から誘導される２価の基を意味する：
【００２３】
【化２】
2020059663.tif 000003
【００２４】
ただし、上記Ｒ０はアミノ酸の側鎖であり、例えばＧｌｙであれば水素原子、Ａｌａであればメチル基である。
【００２５】
「アミノ酸残基」は、天然もしくは非天然のα−アミノ酸に由来し、光学活性体があり得る場合、Ｌ体、Ｄ体の何れであってもよいが、Ｌ体が好ましい。より具体的には、「アミノ酸残基」は、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ｇｌｎ、Ｈｉｓ、Ｐｒｏ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｍｅｔ、Ｃｙｓ、Ｐｈｅ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、およびＩｌｅ、ならびにこれらの類縁体が例示できる。上記の類縁体としては、例えば上記２０種のアミノ酸残基の側鎖が任意の置換基で置換された誘導体等であってもよく、例えば、上記２０種のアミノ酸残基のハロゲン化誘導体（例えば、３−クロロアラニン、４−フルオロフェニルアラニン、４−クロロフェニルアラニン）、２−アミノ酪酸、４−アミノ酪酸、ノルロイシン、ノルバリン、イソバリン、２−アミノイソ酪酸、ホモフェニルアラニン、２，３−ジアミノプロピオン酸、２，４−ジアミノブタン酸、オルニチン、２−ヒドロキシグリシン、ホモセリン、ヒドロキシリジン、ヒドロキシプロリン、３，４−ジデヒドロプロリン、ホモシステイン、ホモメチオニン、アスパラギン酸エステル（例えば、アスパラギン酸−メチルエステル、アスパラギン酸−エチルエステル、アスパラギン酸−プロピルエステル、アスパラギン酸−シクロヘキシルエステル、アスパラギン酸−ベンジルエステルなど）、グルタミン酸エステル（グルタミン酸−シクロヘキシルエステル、グルタミン酸−エチルエステル、グルタミン酸−プロピルエステル、グルタミン酸−メチルエステル、グルタミン酸−ベンジルエステルなど）、ホルミルトリプトファン、２−シクロペンチルグリシン、２−シクロヘキシルグリシン、２−フェニルグリシン、β−アラニン、３−シクロペンチルアラニン、３−シクロヘキシルアラニン、３−ピリジルアラニン、３−ピラゾリルアラニン、３−フラニルアラニン、３−チエニルアラニン、４−メトキシフェニルアラニン、および３−ナフチルアラニン（３−（１−ナフチル）アラニン、３−（２−ナフチル）アラニン）等のアミノ酸に由来するアミノ酸残基が例示できるが、これらに制限されない。また、ＩｌｅやＴｈｒのように、側鎖に不斉炭素を有するジアステレオマーが存在するものについては、天然型（例えば、（２Ｒ＊，３Ｒ＊）−２−アミノ−３−メチルペンタン酸、および（２Ｒ＊，３Ｓ＊）−２−アミノ−３−ヒドロキシブタン酸）および非天然型（例えば、（２Ｒ＊，３Ｓ＊）−２−アミノ−３−メチルペンタン酸、および（２Ｒ＊，３Ｒ＊）−２−アミノ−３−ヒドロキシブタン酸）が特に区別なく使用され得る。すなわち、「Ｉｌｅ」は（２Ｒ＊，３Ｒ＊）−２−アミノ−３−メチルペンタン酸および（２Ｒ＊，３Ｓ＊）−２−アミノ−３−メチルペンタン酸の両方を含む意味として使用され、「Ｔｈｒ」は（２Ｒ＊，３Ｓ＊）−２−アミノ−３−ヒドロキシブタン酸および（２Ｒ＊，３Ｒ＊）−２−アミノ−３−ヒドロキシブタン酸の両方を含む意味として使用される。好ましくは。天然型ジアステレオマー（すなわち、Ｉｌｅであれば（２Ｒ＊，３Ｒ＊）−２−アミノ−３−メチルペンタン酸、Ｔｈｒであれば（２Ｒ＊，３Ｓ＊）−２−アミノ−３−ヒドロキシブタン酸）が使用される。
【００２６】
本明細書に記載のアミノ酸配列は、特に言及がない限り、慣例に従ってＮ末端（アミノ末端）側からＣ末端（カルボキシル末端）側への方向に表記される。
【００２７】
各アミノ酸残基は、その側鎖の相違に基づいて、類似の性質を有するアミノ酸残基と置換し得ることが本技術分野において知られている（保存的置換）。例えば、脂肪族疎水性アミノ酸であるＶａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、２−アミノ酪酸（Ａｂｕ）、ノルロイシン（Ｎｌｅ）、ノルバリン（Ｎｖａ）、およびイソバリン（Ｉｖａ）は相互に置換し得る。側鎖が水素原子またはメチル基であるＧｌｙ、Ａｌａおよび２−アミノイソ酪酸（Ａｉｂ）は相互に置換し得る。側鎖がフェニルアルキル基であるＰｈｅおよびホモフェニルアラニン（Ｈｐｈ）は相互に置換し得る。中性極性アミノ酸であるＡｓｎおよびＧｌｎは相互に置換し得る。塩基性アミノ酸であるＡｒｇ、Ｌｙｓ、Ｈｉｓ、２，３−ジアミノプロピオン酸（Ｄｐｒ）、２，４−ジアミノブタン酸（Ｄｂｕ）、およびオルニチン（Ｏｒｎ）は相互に置換し得る。酸性アミノ酸であるＡｓｐおよびＧｌｕは相互に置換し得る。側鎖がヒドロキシ基または短鎖のヒドロキシアルキル基であるＳｅｒ、２−ヒドロキシグリシン（Ｈｙｇ）およびホモセリン（Ｈｓｅ）は相互に置換し得る。Ｐｒｏと、その側鎖のピロリジル基が脱水素した構造の側鎖を有する３，４−ジデヒドロプロリン（Ｄｈｐ）とは、相互に置換し得る。側鎖が短鎖のチオールアルキル基であるＣｙｓおよびホモシステイン（Ｈｃｙ）は相互に置換し得る。側鎖が短鎖のスルフィド構造であるＭｅｔおよびホモメチオニン（Ｈｍｅ）は相互に置換し得る。側鎖が芳香族性であるＴｒｐ、ＴｙｒおよびＰｈｅは相互に置換し得る。
【００２８】
さらに、鎖の配向に影響するアミノ酸残基であるＧｌｙおよびＰｒｏは相互に置換し得る。
【００２９】
本明細書において「薬学的に許容される塩」は、患者や被験体へ投与された後、望ましくない生理学的効果を生じさせない、金属塩、アンモニウム塩、有機酸塩、無機酸塩、または有機塩基もしくは無機塩基との塩である。より具体的には、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩、バリウム塩、アルミニウム塩、亜鉛塩、アンモニウム塩、メチルアミン塩、エチルアミン塩、アニリン塩、ジメチルアミン塩、ジエチルアミン塩、ピロリジン塩、ピペリジン塩、モルホリン塩、ピペラジン塩、トリメチルアミン塩、トリエチルアミン塩、エタノールアミン塩、ジエタノールアミン塩、トリエタノールアミン塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、硝酸塩、硫酸塩、リン酸塩、ギ酸塩、酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、フタル酸塩、フマル酸塩、シュウ酸塩、酒石酸塩、マレイン酸塩、クエン酸塩、コハク酸塩、リンゴ酸塩、メタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、およびｐ−トルエンスルホン酸塩等が例示できるが、これらに限定されない。
【００３０】
本発明に係るペプチドのプロドラッグ（以下、「本発明に係るペプチドのプロドラッグ」を、単に「プロドラッグ」とも称する。）は、本発明に係るペプチドに変換するペプチド誘導体、すなわち、胃酸や酵素等により酸化、還元、加水分解等を起こして本発明に係るペプチドに変化するペプチド誘導体を指す。これらのペプチド誘導体は、例えばＢｕｎｄｇａｒｄ，  Ｈ．，  Ｄｅｓｉｇｎ  ｏｆ  Ｐｒｏｄｒｕｇｓ，  ｐｐ．  ７−９，  ２１−２４，  Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，  Ａｍｓｔｅｒｄａｍ  １９８５等に記載の従来公知の方法によって、本発明に係るペプチドから製造することができる。
【００３１】
プロドラッグとしては、本発明に係るペプチドの側鎖がカルボキシル基を有する場合には、当該カルボキシル基とアルコールとを反応させることによって得られるエステル誘導体、または当該カルボキシル基とアミンとを反応させることによって得られるアミド誘導体が例示できる。より具体的には、例えば、ペプチド側鎖のカルボキシル基を−ＣＯＯＲ（Ｒは、炭素数１〜２０のアルキル基）で表されるエステル、または−ＣＯＮＨＲもしくは−ＣＯＮＲＲ’（ＲおよびＲ’は、それぞれ独立に、炭素数１〜２０のアルキル基）で表されるアミド基に誘導体化したペプチドが挙げられる。
【００３２】
プロドラッグとしては、本発明に係るペプチドの側鎖が水酸基を有する場合には、当該水酸基と酸無水物等を反応させてアシル化させたアシルオキシ誘導体が例示できる。より具体的には、例えば、ペプチド側鎖の水酸基を−ＯＣＯＲ（Ｒは、炭素数１〜２０のアルキル基）で表されるアシルオキシ基に誘導体化したペプチドが挙げられる。
【００３３】
プロドラッグとしては、本発明に係るペプチドの側鎖がアミノ基を有する場合には、当該アミノ基がアシル化、Ｎ−オキシド化、アルキル化、またはリン酸化された誘導体が例示できる。より具体的には、例えば、側鎖のアミノ基を−ＮＨＣＯＲ（Ｒは、炭素数１〜２０のアルキル基）や−ＮＨＣＯＣＨ（ＮＨ２）ＣＨ３で表されるアミド基に誘導体化したペプチドが挙げられる。
【００３４】
本発明に係るペプチドのＮ末端の構造は特に制限されず、例えば、水素原子（すなわち、未修飾）、または従来公知の手法により修飾基を導入した構造であってもよい。Ｎ末端の修飾基としては、炭素数１〜２０のアルキル基、炭素数１〜２０のアルケニル基、炭素数１〜２０のアルキニル基、炭素数６〜２０の芳香族炭化水素基、複素環基、下記式（３）で表される基、スルホニル基、カルボキシル基、グリオキシル基、ホルミル基；ポリエチレングリコール基（ＰＥＧ化）、ポリオキシエチレングリコール基、ポリプロピレングリコール基；ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基（Ｂｏｃ基）、ベンジルオキシカルボニル基（Ｚ基）、フルオレニルメトキシカルボニル基（Ｆｍｏｃ基）のような保護基；シクロペンチルオキシカルボニル基、シクロヘキシルオキシカルボニル基、アダマンチルオキシカルボニル基、ノルボルニルオキシカルボニル基、イソボルニルオキシカルボニル基等のシクロアルキルオキシカルボニル基；ピログルタミン酸やモロタン酸などのアミノ酸から誘導される保護基；カルバメート系保護基；ベンゼンスルホン酸などのスルホン酸やリン酸から誘導される保護基等、が例示できる。このうち、マイオスタチン阻害活性の観点から、ペプチドは、Ｎ末端が水素原子、アルキル基、芳香族炭化水素基、複素環基、下記式（３）で表される基、スルホニル基、カルボキシル基、グリオキシル基、ホルミル基またはポリエチレングリコール基であることが好ましく、水素原子、アシル基またはポリエチレングリコール基であることがより好ましく、水素原子であることがさらに好ましい。
【００３５】
ペプチドのＮ末端に存在し得るアルキル基の炭素数は、例えば１〜２０であり、好ましくは１〜１０である。アルキル基は飽和鎖、不飽和鎖、または環状の構造であって良く、分岐鎖構造を取っていても良い。より具体的には、アルキル基としては、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、シクロプロピル基、ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、アミル基、イソアミル基、ｔｅｒｔ−アミル基、ヘキシル基、シクロヘキシル基、ヘプチル基、オクチル基、２−エチルヘキシル基、ノニル基、デシル基等が例示できる。
【００３６】
ペプチドのＮ末端に存在し得る芳香族炭化水素基の炭素数は、例えば６〜２０であり、より具体的には、フェニル基、ナフチル基、トリル基、およびフェナントリル基等が例示できる。ペプチドのＮ末端に存在し得る複素環基としては、環内に窒素原子、酸素原子および硫黄原子から選択されるヘテロ原子を１〜３個含む、単環、縮合二環式または縮合三環式構造の置換基が例示でき、より具体的には、ピロリジル基、ピロール基、ピペリジル基、ピリジル基、イミダゾリル基、ピラゾリル基、オキサゾリル基、チアゾリル基、モルホリル基、インドリル基、ベンゾイミダゾリル基、キノリル基、カルバゾリル基、テトラヒドロフラニル基、テトラヒドロチオフェニル基、フラニル基、チオフェニル基、テトラヒドロピラニル基、およびテトラヒドロチオピラニル基等が例示できる。これらの芳香族炭化水素基や複素環基は、炭素数１〜６の直鎖もしくは分岐鎖のアルキル基、炭素数１〜６の直鎖もしくは分岐鎖のアルコキシ基、アミノ基、カルボキシル基、エステル基、カルバモイル基、アミド基、ニトロ基、スルホ基、スルホンアミド基、および／またはハロゲン等のさらなる置換基によって置換されていてもよい。
【００３７】
Ｎ末端の修飾基は、例えば下記式（３）で表される官能基であってもよい。
【００３８】
【化３】
2020059663.tif 000004
【００３９】
ただし、式（３）において、
Ｘ０は単結合、酸素原子もしくは硫黄原子であるか、または、アミノ基、アセチルアミノ基およびプロピオニルアミノ基からなる群から選択される置換基を有してもよい、炭素数１〜３のアルキレン基（例えば、メチレン基、エチレン基、トリメチレン基およびプロピレン基）、炭素数１〜３のオキシアルキレン基（例えば、オキシメチレン基、オキシエチレン基、オキシトリメチレン基およびオキシプロピレン基）および炭素数１〜３のアルキレンオキシ基（例えば、メチレンオキシ基、エチレンオキシ基、トリメチレンオキシ基およびプロピレンオキシ基）からなる群から選択される２価の連結基であり；
Ｒ１は、置換基を有していてもよい炭素数１〜２０のアルキル基、ならびに
【００４０】
【化４】
2020059663.tif 000005
【００４１】
からなる群から選択され、
上記Ｒ１１〜Ｒ３０はそれぞれ独立に水素原子、ハロゲン原子（例えば、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子）、炭素数１〜３のアルキル基（すなわち、メチル基、エチル基、プロピル基）、炭素数１〜３のアルコキシ基（すなわち、メトキシ基、エトキシ基、プロポキシ基）、水酸基、およびアミノ基からなる群から選択される。
【００４２】
上記式（３）において、Ｒ１が置換基を有していてもよい炭素数１〜２０のアルキル基である場合、その脂肪鎖は飽和鎖、不飽和鎖、または環状の構造であって良く、分岐鎖構造を取っていても良い。Ｒ１のアルキル基の炭素数は、２〜１２であることが好ましい。
【００４３】
Ｒ１の置換基としては、ヒドロキシ基、炭素数１〜５以下のアルコキシ基（例えばメトキシ基、エトキシ基など）、アミノ基、カルボキシル基、エステル基、カルバモイル基、アミド基、ニトロ基、スルホ基、ハロゲン（フッ素、塩素、臭素、ヨウ素）などが例示できる。
【００４４】
上記式（３）において、好ましくは、Ｘ０は単結合であるか、または、アミノ基およびアセチルアミノ基からなる群から選択される置換基を有していてもよい、炭素数１〜３のアルキレン基および炭素数１〜３のオキシアルキレン基からなる群から選択される２価の連結基である。
【００４５】
一実施形態では、上記式（３）で表される基は、アシル基である。アシル基としては、種々のカルボン酸から誘導されるアシル基が含まれる。より具体的には、脂肪鎖、芳香族環または複素環を有するアシル基であってもよく、あるいは、アミノ酸、アシル基を有するビタミン、アシル基を有する核酸塩基よりなる群から選択される化合物から誘導されるアシル基であってもよい。
【００４６】
上記式（３）におけるＲ１が置換基を有していてもよい炭素数１〜２０のアルキル基であるアシル基としては、より具体的には、アセチル基、プロピオニル基、ブチリル基、イソブチリル基、バレリル基、イソバレル基、ピバロイル基、カプロイル基、カプリノイル基、メチルヘキサノイル基、シクロプロパンカルボニル基、アミノシクロプロパンカルボニル基、シクロヘキサンカルボニル基、シクロヘキシルアセチル基、シクロペンチルプロピオニル基、シクロヘキシルプロピオニル基、シクロペンチルブタノイル基、シクロヘキシルブタノイル基、アダマンチルアセチル基、ラウロイル基、ミリストイル基、パルミトイル基、ステアロイル基、オキサリル基、マロニル基、スクシニル基、グルタリル基、アジポイル基、グリコール基、ラクトイル基、グリセロイル基、ピルボイル基、アセトアセチル基等が例示できるが、これらに限定されない。
【００４７】
アシル基を有するビタミンとしては、例えば、ニコチン酸、パントテン酸、ビオチン、プテロイルグルタミン酸（葉酸）、オロチン酸、フルオロオロチン酸、α−リポ酸、ピリドキシン酸、ビオシチン、プテロイン酸、１０−ホルミルプテロイン酸、７，８−ジヒドロ葉酸、ホモプテロイン酸、プテリン−６−カルボン酸、ジヒドロリポ酸、ハイドロオロチン酸などが挙げられる。
【００４８】
アシル基を有する核酸塩基誘導体は、ヌクレオチドを構成する塩基成分およびその誘導体を指し、好ましくはピリミジン誘導体等、例えば５−カルボキシメチルウラシル、５−カルボキシチオウラシル等を例示することができる。
【００４９】
ペプチドのＮ末端に存在し得るスルホニル基としては、例えば、上記したアシル基におけるカルボニル構造をスルホン構造に変換した構造を有するものが例示できる。
【００５０】
ペプチドのＮ末端に存在し得るポリエチレングリコール基は、エステル結合、アミン（−ＮＨ−）、アシル基（例えば、炭素数１〜１２のアシル基）等や、これらの組み合わせを介して、ポリエチレングリコールまたはその類似体が連結された構造である。ポリエチレングリコール基の炭素数は、例えば２〜２０（すなわち、−（Ｃ２Ｈ４Ｏ）ｎ−で表される構造単位を有し、ｎ＝１〜１０である。）、好ましくは４〜１６（すなわち、−（Ｃ２Ｈ４Ｏ）ｎ−で表される構造単位を有し、ｎ＝２〜８である。）である。ポリエチレングリコール基におけるペプチドのＮ末端と連結している側とは反対側の末端は、炭素数１〜６のアルキル基（例えば、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、シクロプロピル基、ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、アミル基、イソアミル基、ｔｅｒｔ−アミル基、ヘキシル基）のような、一般的に水酸基の保護に使用される保護基やアミノ基で修飾されていてもよい。
【００５１】
本発明に係るペプチドのＣ末端の構造もまた特に制限されず、カルボン酸の保護に一般的に使用される保護基で修飾された構造であってもよい。より具体的には、本発明に係るペプチドのＣ末端の構造は、例えば、カルボキシル基（−ＣＯＯＨ）、カルボキシレート（−ＣＯＯ−）、アミド（−ＣＯＮＨ２）、アルキルアミド（−ＣＯＮＨＲ３１、−ＣＯＮＲ３１Ｒ３２）、エステル（−ＣＯＯＲ３１）、ピバロイルオキシメチル基のようなアシルオキシアルキル（−Ｒ３３−ＯＣＯＲ３１）、炭素数１〜４のアルキル基もしくはアルコキシ基で置換されてもよいフタリジル基（例えば、フタリジル基、ジメチルフタリジル基、ジメトキシフタリジル基）、または（５−メチル−２−オキソ−１，３−ジオキソレン−４−イル）メチル基であり得る。このうち、ペプチドのＣ末端はアミドであることが好ましい。上記のアルキルアミド、エステル、およびアシルオキシアルキルにおけるＲ３１およびＲ３２は、それぞれ独立に、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、シクロプロピル基、ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、アミル基、イソアミル基、ｔｅｒｔ−アミル基、ヘキシル基、シクロヘキシル基等の炭素数１〜６のアルキル基；フェニル基、ナフチル等の炭素数６〜１０のアリール基；ベンジル基、フェネチル基、ベンズヒドリル基等の炭素数７〜１８のアラルキル基；グルコース等の糖；炭素数１〜６のアルキル基（例えば、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、シクロプロピル基、ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、アミル基、イソアミル基、ｔｅｒｔ−アミル基、ヘキシル基）で修飾されていてもよいポリエチレングリコール基などが挙げられる。アシルオキシアルキルにおけるＲ３３は、メチレン基、エチレン基、ｎ−プロピレン基、イソプロピレン基、ｎ−ブチレン基、イソブチレン基、ｓ−ブチレン基、ｔ−ブチレン基のような炭素数１〜４のアルキレン基である。
【００５２】
本発明に係るペプチドには、ポリマー、脂質等との共有結合によって化学的に修飾されたペプチド誘導体や、ペプチド内に含まれるα−へリックス性をさらに強化した誘導体も包含される。α−へリックス性をさらに強化した誘導体としては、アミノ酸配置としてｉ，ｉ＋４位等に塩橋を形成した誘導体や、ジスルフィド結合、炭素−炭素結合などによる架橋構造を有する誘導体が例示できる。
【００５３】
本発明に係るペプチドのアミノ酸残基数は１６以下である。アミノ酸残基数が１６以下であることにより、合成および生体内での利用率の両面から有利となる。本発明に係るペプチドのアミノ酸残基数は、例えば１２〜１６残基であり、好ましくは１２〜１５残基であり、より好ましくは１２〜１４残基であり、さらに好ましくは１３〜１４残基であり、特に好ましくは１４残基である。
【００５４】
＜ペプチド＞
本発明の一形態によれば、以下の式（１）で表されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸残基数が１６以下である、ペプチド、もしくはその薬学的に許容される塩、またはそれらのプロドラッグを提供する：
【００５５】
【化５】
2020059663.tif 000006
【００５６】
上記式（１）において、
Ｘ１は、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、ノルバリン、２−アミノ酪酸、２−シクロヘキシルグリシン、２−フェニルグリシン、ノルロイシンおよびイソバリンからなる群から選択されるアミノ酸残基または欠損であり；
Ｘ２は、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、ＡｓｐおよびＧｌｕからなる群から選択されるアミノ酸残基であり；
Ｘ３は、ＧｌｕまたはＡｓｐであり；
Ｘ４は、Ａｓｎ、Ａｓｐ、ＧｌｕおよびＧｌｎからなる群から選択されるアミノ酸残基であり；
Ｘ５は、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、２−ヒドロキシグリシンおよびホモセリンからなる群から選択されるアミノ酸残基であり；
Ｘ６は、Ｌｅｕまたは２−フェニルグリシンであり；
Ｘ７は、Ｐｈｅ、３−チエニルアラニン、ホモフェニルアラニン、２−シクロヘキシルグリシン、ＴｒｐおよびＴｙｒからなる群から選択されるアミノ酸残基であり；
Ｘ８は、Ｌｙｓ、２，４−ジアミノブタン酸、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、２，３−ジアミノプロピオン酸およびオルニチンからなる群から選択されるアミノ酸残基であり；
Ｘ９は、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、３−ナフチルアラニン、２−シクロヘキシルグリシン、４−フルオロフェニルアラニンおよびホモフェニルアラニンからなる群から選択されるアミノ酸残基であり；
Ｘ１０は、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、ノルロイシン、３−チエニルアラニン、２−フェニルグリシン、ホモフェニルアラニン、ホモメチオニン、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、２−アミノ酪酸、ノルバリン、イソバリンおよび２−シクロヘキシルグリシンからなる群から選択されるアミノ酸残基であり；
Ｘ１１は、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、ノルバリン、２−シクロヘキシルグリシン、２−フェニルグリシン、Ｌｅｕ、２−アミノ酪酸、ノルロイシンおよびイソバリンからなる群から選択されるアミノ酸残基であり；
Ｘ１２は、Ｐｈｅ、ホモフェニルアラニン、２−フェニルグリシン、３−チエニルアラニン、２−シクロヘキシルグリシン、４−フルオロフェニルアラニン、４−メトキシフェニルアラニンおよび４−クロロフェニルアラニンからなる群から選択されるアミノ酸残基であり；
Ｘ１３は、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、ＡｓｐおよびＧｌｕからなる群から選択されるアミノ酸残基であり；ならびに
Ｘ１４は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、β−アラニン、４−アミノ酪酸、２−アミノイソ酪酸およびＰｒｏからなる群から選択されるアミノ酸残基または欠損である。
【００５７】
マイオスタチン阻害活性の観点から、Ｘ１は、好ましくはＶａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、ノルバリン、２−アミノ酪酸、２−シクロヘキシルグリシン、２−フェニルグリシン、ノルロイシンおよびイソバリンからなる群から選択されるアミノ酸残基である。
【００５８】
マイオスタチン阻害活性の観点から、Ｘ２は、好ましくはＡｓｎまたはＧｌｕである。
【００５９】
マイオスタチン阻害活性の観点から、Ｘ３は、好ましくはＡｓｐである。
【００６０】
マイオスタチン阻害活性の観点から、Ｘ４は、好ましくはＡｓｎ、ＧｌｕおよびＧｌｎからなる群から選択されるアミノ酸残基であり、より好ましくはＡｓｎまたはＧｌｎである。
【００６１】
マイオスタチン阻害活性の観点から、Ｘ５は、好ましくはＴｈｒである。
【００６２】
マイオスタチン阻害活性の観点から、Ｘ６は、好ましくはＬｅｕである。
【００６３】
マイオスタチン阻害活性の観点から、Ｘ７は、好ましくはＰｈｅ、３−チエニルアラニン、ホモフェニルアラニンおよび２−シクロヘキシルグリシンからなる群から選択されるアミノ酸残基であり、より好ましくはＰｈｅ、３−チエニルアラニンおよび２−シクロヘキシルグリシンからなる群から選択されるアミノ酸残基であり、さらに好ましくはＰｈｅである。
【００６４】
マイオスタチン阻害活性の観点から、Ｘ８は、好ましくはＬｙｓである。
【００６５】
マイオスタチン阻害活性の観点から、Ｘ９は、好ましくはＰｈｅ、Ｔｒｐ、３−（２−ナフチル）アラニン、２−シクロヘキシルグリシン、４−フルオロフェニルアラニンおよびホモフェニルアラニンからなる群から選択されるアミノ酸残基である。
【００６６】
マイオスタチン阻害活性の観点から、Ｘ１０は、好ましくはＭｅｔ、Ｐｈｅ、ノルロイシン、３−チエニルアラニン、２−フェニルグリシン、ホモフェニルアラニン、ホモメチオニン、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、２−アミノ酪酸、ノルバリンおよびイソバリンからなる群から選択されるアミノ酸残基であり、より好ましくはＭｅｔ、Ｐｈｅ、３−チエニルアラニン、２−フェニルグリシン、ホモフェニルアラニンおよびホモメチオニンからなる群から選択されるアミノ酸残基であり、さらに好ましくはＰｈｅ、３−チエニルアラニン、２−フェニルグリシンおよびホモフェニルアラニンからなる群から選択されるアミノ酸残基であり、特に好ましくは３−チエニルアラニン、２−フェニルグリシンおよびホモフェニルアラニンからなる群から選択されるアミノ酸残基である。
【００６７】
マイオスタチン阻害活性の観点から、Ｘ１１は、好ましくはＩｌｅ、Ｖａｌおよび２−シクロヘキシルグリシンからなる群から選択されるアミノ酸残基である。
【００６８】
マイオスタチン阻害活性の観点から、Ｘ１２は、好ましくはＰｈｅ、ホモフェニルアラニン、２−フェニルグリシン、３−チエニルアラニン、２−シクロヘキシルグリシン、４−フルオロフェニルアラニンおよび４−メトキシフェニルアラニンからなる群から選択されるアミノ酸残基であり、より好ましくはＰｈｅ、２−フェニルグリシン、３−チエニルアラニン、２−シクロヘキシルグリシンおよび４−フルオロフェニルアラニンからなる群から選択されるアミノ酸残基である。
【００６９】
マイオスタチン阻害活性の観点から、Ｘ１３は、好ましくはＡｓｎ、ＧｌｎおよびＡｓｐからなる群から選択されるアミノ酸残基である。
【００７０】
マイオスタチン阻害活性の観点から、Ｘ１４は、好ましくはＧｌｙ、Ａｌａ、β−アラニン、４−アミノ酪酸および２−アミノイソ酪酸からなる群から選択されるアミノ酸残基または欠損であり、より好ましくはＧｌｙ、Ａｌａ、β−アラニン、４−アミノ酪酸および２−アミノイソ酪酸からなる群から選択されるアミノ酸残基であり、さらに好ましくはＧｌｙ、β−アラニンおよび４−アミノ酪酸からなる群から選択されるアミノ酸残基である。
【００７１】
本発明の好ましい実施形態では、上記式（１）において、
Ｘ１は、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、ノルバリン、２−アミノ酪酸、２−シクロヘキシルグリシン、２−フェニルグリシン、ノルロイシンおよびイソバリンからなる群から選択されるアミノ酸残基または欠損であり；
Ｘ２は、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、ＡｓｐおよびＧｌｕからなる群から選択されるアミノ酸残基であり；
Ｘ３は、ＧｌｕまたはＡｓｐであり；
Ｘ４は、Ａｓｎ、Ａｓｐ、ＧｌｕおよびＧｌｎからなる群から選択されるアミノ酸残基であり；
Ｘ５は、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、２−ヒドロキシグリシンおよびホモセリンからなる群から選択されるアミノ酸残基であり；
Ｘ６は、Ｌｅｕまたは２−フェニルグリシンであり；
Ｘ７は、Ｐｈｅ、３−チエニルアラニン、ホモフェニルアラニンおよび２−シクロヘキシルグリシンからなる群から選択されるアミノ酸残基であり；
Ｘ８は、Ｌｙｓ、２，４−ジアミノブタン酸、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、２，３−ジアミノプロピオン酸およびオルニチンからなる群から選択されるアミノ酸残基であり；
Ｘ９は、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、３−ナフチルアラニン、２−シクロヘキシルグリシン、４−フルオロフェニルアラニンおよびホモフェニルアラニンからなる群から選択されるアミノ酸残基であり；
Ｘ１０は、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、ノルロイシン、３−チエニルアラニン、２−フェニルグリシン、ホモフェニルアラニン、ホモメチオニン、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、２−アミノ酪酸、ノルバリンおよびイソバリンからなる群から選択されるアミノ酸残基であり；
Ｘ１１は、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、ノルバリン、２−シクロヘキシルグリシン、２−フェニルグリシン、Ｌｅｕ、２−アミノ酪酸、ノルロイシンおよびイソバリンからなる群から選択されるアミノ酸残基であり；
Ｘ１２は、Ｐｈｅ、ホモフェニルアラニン、２−フェニルグリシン、３−チエニルアラニン、２−シクロヘキシルグリシン、４−フルオロフェニルアラニンおよび４−メトキシフェニルアラニンからなる群から選択されるアミノ酸残基であり；
Ｘ１３は、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、ＡｓｐおよびＧｌｕからなる群から選択されるアミノ酸残基であり；ならびに
Ｘ１４は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、β−アラニン、４−アミノ酪酸および２−アミノイソ酪酸からなる群から選択されるアミノ酸残基または欠損である。
【００７２】
本発明のより好ましい実施形態では、上記式（１）において、
Ｘ１は、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、ノルバリン、２−アミノ酪酸、２−シクロヘキシルグリシン、２−フェニルグリシン、ノルロイシンおよびイソバリンからなる群から選択されるアミノ酸残基であり；
Ｘ２は、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、ＡｓｐおよびＧｌｕからなる群から選択されるアミノ酸残基であり；
Ｘ３は、ＧｌｕまたはＡｓｐであり；
Ｘ４は、Ａｓｎ、Ａｓｐ、ＧｌｕおよびＧｌｎからなる群から選択されるアミノ酸残基であり；
Ｘ５は、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、２−ヒドロキシグリシンおよびホモセリンからなる群から選択されるアミノ酸残基であり；
Ｘ６は、Ｌｅｕまたは２−フェニルグリシンであり；
Ｘ７は、Ｐｈｅ、３−チエニルアラニン、ホモフェニルアラニンおよび２−シクロヘキシルグリシンからなる群から選択されるアミノ酸残基であり；
Ｘ８は、Ｌｙｓ、２，４−ジアミノブタン酸、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、２，３−ジアミノプロピオン酸およびオルニチンからなる群から選択されるアミノ酸残基であり；
Ｘ９は、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、３−ナフチルアラニン、２−シクロヘキシルグリシン、４−フルオロフェニルアラニンおよびホモフェニルアラニンからなる群から選択されるアミノ酸残基であり；
Ｘ１０は、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、３−チエニルアラニン、２−フェニルグリシン、ホモフェニルアラニンおよびホモメチオニンからなる群から選択されるアミノ酸残基であり；
Ｘ１１は、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、ノルバリン、２−シクロヘキシルグリシン、２−フェニルグリシン、Ｌｅｕ、２−アミノ酪酸、ノルロイシンおよびイソバリンからなる群から選択されるアミノ酸残基であり；
Ｘ１２は、Ｐｈｅ、ホモフェニルアラニン、２−フェニルグリシン、３−チエニルアラニン、２−シクロヘキシルグリシン、４−フルオロフェニルアラニンおよび４−メトキシフェニルアラニンからなる群から選択されるアミノ酸残基であり；
Ｘ１３は、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、ＡｓｐおよびＧｌｕからなる群から選択されるアミノ酸残基であり；ならびに
Ｘ１４は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、β−アラニン、４−アミノ酪酸および２−アミノイソ酪酸からなる群から選択されるアミノ酸残基である。
【００７３】
本発明のさらに好ましい実施形態では、上記式（１）において、
Ｘ１は、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、ノルバリン、２−アミノ酪酸、２−シクロヘキシルグリシン、２−フェニルグリシン、ノルロイシンおよびイソバリンからなる群から選択されるアミノ酸残基であり；
Ｘ２は、ＡｓｎまたはＧｌｕであり；
Ｘ３は、Ａｓｐであり；
Ｘ４は、Ａｓｎ、ＧｌｕおよびＧｌｎからなる群から選択されるアミノ酸残基であり；
Ｘ５は、Ｔｈｒであり；
Ｘ６は、Ｌｅｕであり；
Ｘ７は、Ｐｈｅ、３−チエニルアラニンおよび２−シクロヘキシルグリシンからなる群から選択されるアミノ酸残基であり；
Ｘ８は、Ｌｙｓ、２，４−ジアミノブタン酸、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、２，３−ジアミノプロピオン酸およびオルニチンからなる群から選択されるアミノ酸残基であり；
Ｘ９は、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、３−ナフチルアラニン、２−シクロヘキシルグリシン、４−フルオロフェニルアラニンおよびホモフェニルアラニンからなる群から選択されるアミノ酸残基であり；
Ｘ１０は、Ｐｈｅ、３−チエニルアラニン、２−フェニルグリシンおよびホモフェニルアラニンからなる群から選択されるアミノ酸残基であり；
Ｘ１１は、Ｉｌｅ、Ｖａｌおよび２−シクロヘキシルグリシンからなる群から選択されるアミノ酸残基であり；
Ｘ１２は、Ｐｈｅ、ホモフェニルアラニン、２−フェニルグリシン、３−チエニルアラニン、２−シクロヘキシルグリシン、４−フルオロフェニルアラニンおよび４−メトキシフェニルアラニンからなる群から選択されるアミノ酸残基であり；
Ｘ１３は、Ａｓｎ、ＧｌｎおよびＡｓｐからなる群から選択されるアミノ酸残基であり；ならびに
Ｘ１４は、Ｇｌｙ、β−アラニンおよび４−アミノ酪酸からなる群から選択されるアミノ酸残基である。
【００７４】
本発明の特に好ましい実施形態では、上記式（１）において、
Ｘ１は、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、ノルバリン、２−アミノ酪酸、２−シクロヘキシルグリシン、２−フェニルグリシン、ノルロイシンおよびイソバリンからなる群から選択されるアミノ酸残基であり；
Ｘ２は、ＡｓｎまたはＧｌｕであり；
Ｘ３は、Ａｓｐであり；
Ｘ４は、ＡｓｎまたはＧｌｎであり；
Ｘ５は、Ｔｈｒであり；
Ｘ６は、Ｌｅｕであり；
Ｘ７は、Ｐｈｅであり；
Ｘ８は、Ｌｙｓであり；
Ｘ９は、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、３−（２−ナフチル）アラニン、２−シクロヘキシルグリシン、４−フルオロフェニルアラニンおよびホモフェニルアラニンからなる群から選択されるアミノ酸残基であり；
Ｘ１０は、３−チエニルアラニン、２−フェニルグリシンおよびホモフェニルアラニンからなる群から選択されるアミノ酸残基であり；
Ｘ１１は、Ｉｌｅ、Ｖａｌおよび２−シクロヘキシルグリシンからなる群から選択されるアミノ酸残基であり；
Ｘ１２は、Ｐｈｅ、２−フェニルグリシン、３−チエニルアラニン、２−シクロヘキシルグリシンおよび４−フルオロフェニルアラニンからなる群から選択されるアミノ酸残基であり；
Ｘ１３は、Ａｓｎ、ＧｌｎおよびＡｓｐからなる群から選択されるアミノ酸残基であり；ならびに
Ｘ１４は、Ｇｌｙ、β−アラニンおよび４−アミノ酪酸からなる群から選択されるアミノ酸残基である。
【００７５】
本発明に係るペプチドにおいて、マイオスタチン阻害活性の観点から、上記式（１）で表されるペプチドは、好ましくは配列番号６〜５４で表されるアミノ酸配列のいずれか１つを含み、より好ましくは配列番号６、８および１０〜１５で表されるアミノ酸配列のいずれか１つを含み、さらに好ましくは配列番号１３、１５〜３３、３７、３９、４１、４２および４５〜５４で表されるアミノ酸配列のいずれか１つを含み、特に好ましくは配列番号１７〜１９、２１〜２５、２７、２９〜３３、４１、４２、４５〜４９および５１〜５３で表されるアミノ酸配列のいずれか１つを含む。
【００７６】
【表１−１】
2020059663.tif 000007
【００７７】
【表１−２】
2020059663.tif 000008
【００７８】
＜ペプチドの製造方法＞
本発明に係るペプチドは、化学的合成法や組換え技術を含む従来公知の手法によって製造することができる。ペプチドを化学合成により調製するには、各アミノ酸をペプチド化学において通常用いられる方法、例えば、「ザ  ペプチド（Ｔｈｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ）」第１巻〔Ｓｃｈｒｏｄｅｒ  ａｎｄ  Ｌｕｈｋｅ著，  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  Ｕ．Ｓ．Ａ．（１９６６年）〕、「ペプチド合成の基礎と実験」（泉屋信夫ら著丸善株式会社、１９８５年）等に記載されている方法によって製造することが可能であり、液相法および固相法のいずれによっても製造できる。さらに、カラム法、バッチ法のいずれの方法も用いることができる。
【００７９】
本発明に係るペプチドはまた、例えば下記のＣｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｃｈａｐｔｅｒ  １６に記載されるような手法により、動物細胞、昆虫細胞、または微生物等を利用した組み換え技術により製造してもよい。ペプチドは、培養細胞や微生物によって生成された後、従来公知の方法によって精製し得る。ペプチドの精製および単離法は当分野の技術者に公知であり、例えばＣｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｃｈａｐｔｅｒ  １６（Ａｕｓｕｂｅｌら、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ、２００６年）等に記載の手法により行うことができる。
【００８０】
ペプチド結合を形成するための縮合方法として、アジド法、酸ハライド法、酸無水物法、カルボジイミド法、カルボジイミド−アディティブ法、活性エステル法、カルボニルイミダゾール法、酸化還元法、酵素法、ウッドワード試薬Ｋ、ＨＡＴＵ試薬、Ｂｏｐ試薬を用いる方法等を例示することができる。なお、固相法での縮合反応は上記した方法のうち、酸無水物法、カルボジイミド法、および活性エステル法が主な方法として挙げられる。
【００８１】
さらに、固相法でペプチド鎖を延長するときは、用いる有機溶媒に対して不溶な樹脂等の支持体に、Ｃ末端アミノ酸を結合する。かような樹脂としては、アミノ酸を樹脂に結合させる目的で官能基を導入した樹脂や、樹脂と官能基の間にスペーサーを挿入したもの等を目的に応じて用いることもできる。より具体的には、例えば、クロロメチル樹脂などのハロメチル樹脂、オキシメチル樹脂、４−（オキシメチル）−フェニルアセトアミドメチル樹脂、４−（オキシメチル）−フェノキシメチル樹脂、Ｒｉｎｋアミド樹脂などを挙げることができる。なお、これらの縮合反応を行う前に、通常公知の手段によって当該縮合反応に関与しないカルボキシル基やアミノ基や水酸基やアミジノ基等の保護手段を施すことができる。また逆に当該縮合反応に直接関与するカルボキシル基やアミノ基を活性化することもできる。
【００８２】
各ユニットの縮合反応に関与しない官能基の保護手段に用いる保護基としては有機化学において通常用いられている保護基、例えば、「Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（Ｇｒｅｅｎｅ著、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，  Ｉｎｃ．（１９８１年））等に記載されている保護基によって保護することが可能である。より具体的には、カルボキシル基の保護基としては、例えば、各種のメチルエステル、エチルエステル、ベンジルエステル、ｐ−ニトロベンジルエステル、ｔ−ブチルエステル、シクロヘキシルエステル等の通常公知の保護基を挙げることができる。アミノ基の保護基としては、例えば、ベンジルオキシカルボニル基、ｔ−ブトキシカルボニル基、イソボルニルオキシカルボニル基、９−フルオレニルメトキシカルボニル基（Ｆｍｏｃ基）等を挙げることができる。
【００８３】
カルボキシル基の活性化されたものとしては、例えば、当該カルボキシル基に対応する酸無水物；アジド；ペンタフルオロフェノール、２，４−ジニトロフェノール、シアノメチルアルコール、ｐ−ニトロフェノール、Ｎ−ヒドロキシコハク酸イミド、Ｎ−ヒドロキシ−５−ノルボルネン−２，３−ジカルボキシミド、Ｎ−ヒドロキシフタルイミド、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール等との活性エステル等が挙げられる。アミノ基の活性化されたものとしては、当該アミノ基に対応する燐酸アミド等を挙げることができる。
【００８４】
ペプチド合成の際の縮合反応は、通常溶媒中で行われる。当該溶媒としては、例えば、クロロホルム、ジクロロメタン、酢酸エチル、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、ピリジン、ジオキサン、テトラヒドロフラン、Ｎ−メチルピロリドン、水、メタノール等、または、これらの混合物を挙げることができる。また、当該縮合反応の反応温度は、通常の場合と同様に、−３０℃〜５０℃の範囲で行なうことができる。
【００８５】
さらに、本発明のペプチドの製造工程における保護基の脱離反応の種類は、ペプチド結合に影響を与えずに保護基を脱離させることができる限りにおいて、用いる保護基の種類に応じて選択することができる。例えば、塩化水素、臭化水素、無水フッ化水素、メタンスルホン酸、トリフルオロメタンスルホン酸、トリフルオロ酢酸、またはこれらの混合物等による酸処理、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、ヒドラジン、ジエチルアミン、ピペリジン等によるアルカリ処理、液体アンモニア中におけるナトリウム処理やパラジウム炭素による還元および、トリメチルシリルトリフラート、トリメチルシリルブロマイド等のシリル化処理等が挙げられる。なお、上記の酸またはシリル化剤処理による脱保護基反応においては、アニソール、フェノール、クレゾール、チオアニソール、エタンジチオール等のカチオン捕捉剤を添加するのが、脱保護基反応が効率的に行われるという観点から好ましい。
【００８６】
なお、固相法で合成した本発明のペプチドの固相からの切断方法も通常公知の方法に従う。例えば、上記の酸またはシリル化剤による処理等を当該切断方法として挙げることができる。このようにして製造された本発明のペプチドに対しては、上記の一連の反応の終了後に通常公知の分離、精製手段を駆使することができる。例えば、抽出、分配、再沈澱、再結晶、固相抽出、カラムクロマトグラフィー等によって、より高純度で本発明のペプチドを収得することができる。
【００８７】
得られたペプチドは、アミノ酸自動分析機、キャピラリー電気泳動、逆相高速液体クロマトグラフィー、質量分析法等によって解析できる。また、ファージディスプレイ法、ツーハイブリッド法、アフィニティークロマトグラフィー、表面プラズモン共鳴法、共免疫沈降法、プロテインチップ法、立体構造解析、ファーウェスタン法、蛍光消光法等の各種生体分子相互作用解析手法を利用し、マイオスタチンとの相互作用を指標としてペプチドを選別してもよい。
【００８８】
本発明に係るペプチドは、単離または精製されていてもよい。「単離または精製」とは、目的とする成分以外の成分を除去する操作が施されていることを意味する。単離または精製された本発明に係るペプチドの純度は、通常５０％以上（例えば、７０％以上、８０％以上、９０％以上、９５％以上、９８％以上、９９％以上、１００％）である。
【００８９】
＜マイオスタチン阻害剤、予防剤／治療剤、予防方法／治療方法＞
本発明の一実施形態では、本発明に係るペプチドまたはそのプロドラッグを含む、マイオスタチン阻害剤が提供される（以下、「本発明に係るペプチドまたはそのプロドラッグを含むマイオスタチン阻害剤」を、単に「マイオスタチン阻害剤」とも称する。）。上記マイオスタチン阻害剤の有効量を対象に投与することにより、筋肉量や筋力の維持、増加、増強、低下の抑制等の効果を達成し得る。マイオスタチン阻害剤は、本発明に係るペプチドの１種以上、もしくはそのプロドラッグの１種以上、またはこれらの混合物から構成されてもよいが、通常は、本発明に係るペプチドおよびそのプロドラッグから選択される１種以上、ならびに薬学的に許容される担体を含む医薬組成物である。
【００９０】
本発明の一実施形態は、本発明に係るペプチドまたはそのプロドラッグの有効量を患者に投与することを含む、マイオスタチンの阻害方法に関する。本発明の一実施形態は、また、マイオスタチンの阻害に使用するための、本発明に係るペプチドまたはそのプロドラッグに関する。
【００９１】
本発明の一実施形態では、本発明に係るペプチドまたはそのプロドラッグを含む、筋萎縮障害の予防および／または治療剤が提供される（以下、「本発明に係るペプチドまたはそのプロドラッグを含む筋萎縮障害の予防および／または治療剤」を、単に「筋萎縮障害の予防・治療剤」とも称する）。上記筋萎縮障害の予防・治療剤の有効量を患者に投与することにより、筋萎縮障害の進行速度の低下、進行の阻害、進行の停止、改善、治癒、および／または予防等の治療的効果を達成し得る。筋萎縮障害の予防・治療剤は、本発明に係るペプチドの１種以上、もしくはそのプロドラッグの１種以上、またはこれらの混合物から構成されてもよいが、通常は、本発明に係るペプチドおよびそのプロドラッグから選択される１種以上、ならびに薬学的に許容される担体を含む医薬組成物である。
【００９２】
本発明の一実施形態は、本発明に係るペプチドまたはそのプロドラッグの有効量を患者に投与することを含む、筋萎縮障害の予防および／または治療方法に関する。本発明の一実施形態は、また、筋萎縮障害の予防および／または治療に使用するための、本発明に係るペプチドまたはそのプロドラッグに関する。
【００９３】
マイオスタチン阻害剤、筋萎縮障害の予防・治療剤、ならびに上記予防および／または治療方法は、通常歩行に障害をもつ老人を対象とした局所投与による前脛骨筋の強化にも有効である。前脛骨筋を強化するのみでも足関節の背屈が容易になり、転倒防止に繋がる。また、たとえば、宇宙滞在時の継続的な局所投与を実施できれば、帰還後のリハビリ期間短縮等に貢献できる。
【００９４】
上記の筋萎縮障害としては、特に限定するものではないが、例えば、筋ジストロフィー、遠位型ミオパチー、先天性ミオパチー、封入体筋炎等の炎症性筋疾患、ミトコンドリアミオパチー等のミオパチー；廃用性筋萎縮；サルコペニアなどが例示できる。より好適には、筋萎縮障害の予防・治療剤は、デュシェンヌ型筋ジストロフィー、ベッカー型筋ジストロフィー、福山型先天性筋ジストロフィー、メロシン欠損型先天性筋ジストロフィー、肢体型筋ジストロフィー、顔面肩甲上腕型筋ジストロフィー、エメリー・ドレフュス型筋ジストロフィー、三好型筋ジストロフィー、および乳児型神経軸索筋ジストロフィーなどの筋ジストロフィーに有効に用いられ、この中でもデュシェンヌ型筋ジストロフィーに対して特に有効である。
【００９５】
筋萎縮障害は、筋萎縮性側索硬化症、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、癌、ＡＩＤＳ、腎不全、および関節リウマチなどの慢性疾患からも生じ得る。また、筋萎縮障害は、糖尿病および関連障害などの代謝障害からも生じうる。したがって、本発明の筋萎縮障害の予防・治療剤、ならびに上記予防および／または治療方法は、筋肉の萎縮を伴う悪液質の改善に利用できる。さらに、マイオスタチンの阻害によって、筋量を増加させると、骨強度が改善され、そして骨粗しょう症および他の変性骨疾患を減少させることも可能である。
【００９６】
本明細書において、治療上の「有効量」とは、合理的な利益／リスク比に見合う、なんらかの望ましい治療効果を生じさせるのに有効な量である。
【００９７】
本明細書において、「対象」および「患者」とは、ヒトおよび魚類を含む非ヒト動物が挙げられるが、好ましくは、ヒト、イヌ、ネコ、マウス、ラット、ハムスター、モルモット、ウマ（競走馬を含む）、ウシ、ブタ、ウサギ、およびヒツジ等の哺乳動物、ならびにニワトリ、ウズラ、および七面鳥等の家禽から選択され、ヒトであることがより好ましい。
【００９８】
上記の薬学的に許容される担体としては、特に限定されないが、乳糖、ショ糖、マンニトール、デンプン、コーンスターチ、結晶セルロース、軽質無水ケイ酸等の賦形剤；シリカ、タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム等の滑沢剤；ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ポリビニルピロリドン、結晶セルロース、デキストリン、ゼラチン等の結合剤；アスコルビン酸、亜硫酸ナトリウム、亜硫酸水素ナトリウム、トコフェロール等の酸化防止剤；エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）等のキレート剤；ホウ酸塩、重炭酸塩、Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、クエン酸塩、リン酸塩、他の有機酸等の緩衝剤；注射用水、生理食塩水、エタノール、プロパノール、エチレングリコール、プロピレングリコール、マクロゴール、オリーブ油、トウモロコシ油等の溶媒；プルロニック（登録商標）、ポリエチレングリコール、ソルビタン脂肪酸エステル、ポリソルベート、トリトン（登録商標）、レシチン、コレステロール、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、モノステアリン酸グリセリン等の界面活性剤または湿潤剤；塩化ナトリウム、塩化カリウム、グリセリン、ブドウ糖、ソルビトール、マンニトール等の等張化剤；安息香酸、サリチル酸、チメロサール、フェネチルアルコール、メチルパラベン、プロピルパラベン、クロルヘキシジン等の保存剤；錯化剤；アミノ酸；抗菌剤；着色剤；フレーバー剤および希釈剤；乳化剤；ナトリウム等の塩形成対イオン；搬送ビヒクル；希釈剤などが挙げられる（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，  第１８版，  Ａ．Ｒ．  Ｇｅｎｎａｒｏ監修，  Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，  １９９０）。
【００９９】
本発明に係るペプチドまたはそのプロドラッグの薬剤中の含有量は、薬剤全体に対して０．０１〜１００重量％であり得る。
【０１００】
本発明の化合物の投与量は、年齢、症状、投与方法などにより差異はあるが、経口投与の場合、一般的に、ヒト（体重６０ｋｇとして）に対して、一日につき約０．１〜１００ｍｇ、好ましくは約１．０〜５０ｍｇ、より好ましくは約１．０〜２０ｍｇである。非経口的に投与する場合は、その１回投与量は年齢、症状、投与方法などによっても異なるが、例えば、注射剤の形では通常、ヒト（体重６０ｋｇとして）に対して、一日につき約０．０１〜３０ｍｇ程度、好ましくは約０．１〜２０ｍｇ程度、より好ましくは約０．１〜１０ｍｇ程度を投与するのが好都合である。ヒト以外の動物の場合も、体重６０ｋｇ当たりに換算した量を投与することができる。
【実施例】
【０１０１】
本発明の効果を、以下の実施例および比較例を用いて説明する。ただし、本発明の技術的範囲が以下の実施例のみに制限されるわけではない。
【０１０２】
＜ペプチドの合成＞
（合成例１）
配列番号６のアミノ酸配列を含むペプチド：ＨＦｓ４１−５４の合成
ＶＮＤＮＴＬＦＫＷＭＩＦＮＧ−ＮＨ２（ＨＦｓ４１−５４）
ＨＦｓ４１−５４は以下に示すＦｍｏｃ固相ペプチド合成法により合成した。
【０１０３】
Ｒｉｎｋ  Ａｍｉｄｅ  ｒｅｓｉｎ（０．３７ｍｍｏｌ／ｇ，渡辺化学工業株式会社）５４ｍｇ（０．０２０ｍｍｏｌ）をＰｒｅｌｕｄｅ  ６チャンネルペプチド合成装置（Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社）用反応容器に量りとり装置にセットした。以下の反応はすべて窒素雰囲気下で行った。ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）溶液中にて室温（２５℃）で３０分間樹脂を膨潤させた後、２０％（ｖ／ｖ）ピペリジン／ＤＭＦ溶液（２．５ｍＬ）中室温（２５℃）で５分間２サイクル反応させることで樹脂上の保護基Ｆｍｏｃ（９−フルオレニルメトキシカルボニル）基を除去した。ＤＭＦ（２．５ｍＬ）で６回樹脂を洗浄し、１−ヒドロキシ−７−アザベンゾトリアゾール（ＨＯＡｔ，０．２０ｍｍｏｌ，１０ｅｑ．）、Ｏ−（７−アザ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスファート（ＨＡＴＵ，０．２０ｍｍｏｌ，１０ｅｑ．）、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ，０．２０ｍｍｏｌ，１０ｅｑ）存在下で、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ（０．２０ｍｍｏｌ，１０ｅｑ．）を室温（２５℃）で３０分間ＤＭＦ（２ｍＬ）中にて反応させ、樹脂上にアミノ酸を導入した。次のアミノ酸を縮合させるため、２０％（ｖ／ｖ）ピペリジン／ＤＭＦ溶液（２．５ｍＬ）中にて５分間２サイクル反応させることで樹脂上のＦｍｏｃ基を除去した。以下、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨの場合と同様にして順次Ｃ末端側からＦｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ（０．２０ｍｍｏｌ，１０ｅｑ．）、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ（０．２０ｍｍｏｌ，１０ｅｑ．）、Ｆｍｏｃ−Ｉｌｅ−ＯＨ（０．２０ｍｍｏｌ，１０ｅｑ．）、Ｆｍｏｃ−Ｍｅｔ−ＯＨ（０．２０ｍｍｏｌ，１０ｅｑ．）、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−ＯＨ（０．２０ｍｍｏｌ，１０ｅｑ．）、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ（０．２０ｍｍｏｌ，１０ｅｑ．）、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ（０．２０ｍｍｏｌ，１０ｅｑ．）、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ（０．２０ｍｍｏｌ，１０ｅｑ．）、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ（０．２０ｍｍｏｌ，１０ｅｑ．）、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ（０．２０ｍｍｏｌ，１０ｅｑ．）、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ（０．２０ｍｍｏｌ，１０ｅｑ．）、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ（０．２０ｍｍｏｌ，１０ｅｑ．）、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ（０．２０ｍｍｏｌ，１０ｅｑ．）を導入しペプチド鎖を伸長させた。２０％（ｖ／ｖ）ピペリジン／ＤＭＦ溶液（２．５ｍＬ）中で５分間２サイクル反応させることでＮ末端のＦｍｏｃ基を除去し、ＤＭＦ（２．５ｍＬ，６回）およびメタノール（２．５ｍＬ，５回）洗浄後、窒素パージにより樹脂を乾燥させた。各種側鎖保護基の除去および脱樹脂のため、ｍ−クレゾール（０．１２５ｍＬ）、チオアニソール（０．１２５ｍＬ）、１，２−エタンジチオール（０．０５０ｍＬ）存在下でトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）５．０ｍＬ中にて２時間反応させた。ガラスフィルター付きロートを用いてろ過することで樹脂を除去した後、ロータリーエバポレーターによりＴＦＡを減圧留去し、ジエチルエーテル４０ｍＬを加えて粗精製ペプチドを析出させた。粗精製ペプチドを１Ｍ酢���に溶解し、高速液体クロマトグラフィーを用いて精製することにより、白色固体を得た（１７．２ｍｇ，収率４７．５％）。
ＨＲＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ  １６９７．８４９６  （Ｍ＋Ｈ＋）（計算値：１６９７．８４７４）。
【０１０４】
（合成例２）
配列番号７のアミノ酸配列を含むペプチド：ＨＦｓ４２−５３の合成
ＮＤＮＴＬＦＫＷＭＩＦＮ−ＮＨ２（ＨＦｓ４２−５３）
ＨＦｓ４２−５３はＲｉｎｋ  Ａｍｉｄｅ  ｒｅｓｉｎ（０．３７ｍｍｏｌ／ｇ，渡辺化学工業株式会社）５４ｍｇ（０．０２０ｍｍｏｌ）を用いて合成例１と同様の手法により合成および精製した（８．０ｍｇ，収率２４．３％）。
ＨＲＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ  １５４１．７５７２  （Ｍ＋Ｈ＋）（計算値：１５４１．７５７５）。
【０１０５】
（合成例３）
配列番号８のアミノ酸配列を含むペプチド：Ｇ５４Ａの合成
ＶＮＤＮＴＬＦＫＷＭＩＦＮＡ−ＮＨ２（Ｇ５４Ａ）
Ｇ５４ＡはＲｉｎｋ  Ａｍｉｄｅ  ｒｅｓｉｎ（０．３７ｍｍｏｌ／ｇ，渡辺化学工業株式会社）５４ｍｇ（０．０２０ｍｍｏｌ）を用いて合成例１と同様の手法により合成および精製した（１．８ｍｇ，収率４．８％）。
ＨＲＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ  １７１１．８６５４  （Ｍ＋Ｈ＋）（計算値：１７１１．８６３０）。
【０１０６】
（合成例４）
配列番号９のアミノ酸配列を含むペプチド：Ｍ５０Ｎｌｅの合成
ＶＮＤＮＴＬＦＫＷ−Ｎｌｅ−ＩＦＮＧ−ＮＨ２（Ｍ５０Ｎｌｅ）
Ｎｌｅ：ノルロイシン
Ｍ５０ＮｌｅはＲｉｎｋ  Ａｍｉｄｅ  ｒｅｓｉｎ（０．３７ｍｍｏｌ／ｇ，渡辺化学工業株式会社）５４ｍｇ（０．０２０ｍｍｏｌ）を用いて合成例１と同様の手法により合成および精製した（７．２ｍｇ，収率２０．０％）。
ＨＲＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ  １６７９．８９２６  （Ｍ＋Ｈ＋）（計算値：１６７９．８９１０）。
【０１０７】
（合成例５）
配列番号１０のアミノ酸配列を含むペプチド：Ｍ５０Ｔｈｉの合成
ＶＮＤＮＴＬＦＫＷ−Ｔｈｉ−ＩＦＮＧ−ＮＨ２（Ｍ５０Ｔｈｉ）
Ｔｈｉ：３−チエニルアラニン
Ｍ５０ＴｈｉはＲｉｎｋ  Ａｍｉｄｅ  ｒｅｓｉｎ（０．３７ｍｍｏｌ／ｇ，渡辺化学工業株式会社）５４ｍｇ（０．０２０ｍｍｏｌ）を用いて合成例１と同様の手法により合成および精製した（１０．２ｍｇ，収率２７．９％）。
ＨＲＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ  １７１９．８３１８  （Ｍ＋Ｈ＋）（計算値：１７１９．８３１７）。
【０１０８】
（合成例６）
配列番号１１のアミノ酸配列を含むペプチド：Ｔ４５Ｓの合成
ＶＮＤＮＳＬＦＫＷ−Ｔｈｉ−ＩＦＮＧ−ＮＨ２（Ｔ４５Ｓ）
Ｔｈｉ：３−チエニルアラニン
Ｔ４５ＳはＲｉｎｋ  Ａｍｉｄｅ  ｒｅｓｉｎ（０．３７ｍｍｏｌ／ｇ，渡辺化学工業株式会社）５４ｍｇ（０．０２０ｍｍｏｌ）を用いて合成例１と同様の手法により合成および精製した（１８．８ｍｇ，収率５１．７％）。
ＬＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ＋）：ｍ／ｚ  １７０５．８８  （Ｍ＋Ｈ＋）（計算値：１７０５．８２）。
【０１０９】
（合成例７）
配列番号１２のアミノ酸配列を含むペプチド：Ｌ４６Ｐｈｇの合成
ＶＮＤＮＴ−Ｐｈｇ−ＦＫＷ−Ｔｈｉ−ＩＦＮＧ−ＮＨ２（Ｌ４６Ｐｈｇ）
Ｐｈｇ：２−フェニルグリシン
Ｌ４６ＰｈｇはＲｉｎｋ  Ａｍｉｄｅ  ｒｅｓｉｎ（０．３７ｍｍｏｌ／ｇ，渡辺化学工業株式会社）５４ｍｇ（０．０２０ｍｍｏｌ）を用いて合成例１と同様の手法により合成および精製した（２．３ｍｇ，収率６．２％）。
ＬＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ＋）：ｍ／ｚ  １７４０．２６  （Ｍ＋Ｈ＋）（計算値：１７３９．８０）。
【０１１０】
（合成例８）
配列番号１３のアミノ酸配列を含むペプチド：Ｆ４７Ｔｈｉの合成
ＶＮＤＮＴＬ−Ｔｈｉ−ＫＷ−Ｔｈｉ−ＩＦＮＧ−ＮＨ２（Ｆ４７Ｔｈｉ）
Ｔｈｉ：３−チエニルアラニン
Ｆ４７ＴｈｉはＲｉｎｋ  Ａｍｉｄｅ  ｒｅｓｉｎ（０．３７ｍｍｏｌ／ｇ，渡辺化学工業株式会社）５４ｍｇ（０．０２０ｍｍｏｌ）を用いて合成例１と同様の手法により合成および精製した（２．１ｍｇ，収率５．７％）。
ＬＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ＋）：ｍ／ｚ  １７２５．６７  （Ｍ＋Ｈ＋）（計算値：１７２５．７９）。
【０１１１】
（合成例９）
配列番号１４のアミノ酸配列を含むペプチド：Ｆ４７Ｈｐｈの合成
ＶＮＤＮＴＬ−Ｈｐｈ−ＫＷ−Ｔｈｉ−ＩＦＮＧ−ＮＨ２（Ｆ４７Ｈｐｈ）
Ｈｐｈ：ホモフェニルアラニン
Ｆ４７ＨｐｈはＲｉｎｋ  Ａｍｉｄｅ  ｒｅｓｉｎ（０．３７ｍｍｏｌ／ｇ，渡辺化学工業株式会社）５４ｍｇ（０．０２０ｍｍｏｌ）を用いて合成例１と同様の手法により合成および精製した（２０．０ｍｇ，収率５４．２％）。
ＬＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ＋）：ｍ／ｚ  １７３３．５１  （Ｍ＋Ｈ＋）（計算値：１７３３．８５）。
【０１１２】
（合成例１０）
配列番号１５のアミノ酸配列を含むペプチド：Ｆ４７Ｃｈｇの合成
ＶＮＤＮＴＬ−Ｃｈｇ−ＫＷ−Ｔｈｉ−ＩＦＮＧ−ＮＨ２（Ｆ４７Ｃｈｇ）
Ｃｈｇ：２−シクロヘキシルグリシン
Ｆ４７ＣｈｇはＲｉｎｋ  Ａｍｉｄｅ  ｒｅｓｉｎ（０．３７ｍｍｏｌ／ｇ，渡辺化学工業株式会社）５４ｍｇ（０．０２０ｍｍｏｌ）を用いて合成例１と同様の手法により合成および精製した（２１．８ｍｇ，収率５９．８％）。
ＬＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ＋）：ｍ／ｚ  １７１１．２６  （Ｍ＋Ｈ＋）（計算値：１７１１．８６）。
【０１１３】
（合成例１１）
配列番号１６のアミノ酸配列を含むペプチド：Ｗ４９（１−Ｎａｌ）の合成
ＶＮＤＮＴＬＦＫ−（１−Ｎａｌ）−Ｔｈｉ−ＩＦＮＧ−ＮＨ２（Ｗ４９（１−Ｎａｌ））
１−Ｎａｌ：３−（１−ナフチル）アラニン
Ｗ４９（１−Ｎａｌ）はＲｉｎｋ  Ａｍｉｄｅ  ｒｅｓｉｎ（０．３７ｍｍｏｌ／ｇ，渡辺化学工業株式会社）５４ｍｇ（０．０２０ｍｍｏｌ）を用いて合成例１と同様の手法により合成および精製した（８．０ｍｇ，収率２１．７％）。
ＬＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ＋）：ｍ／ｚ  １７３０．３２  （Ｍ＋Ｈ＋）（計算値：１７３０．８４）。
【０１１４】
（合成例１２）
配列番号１７のアミノ酸配列を含むペプチド：Ｗ４９（２−Ｎａｌ）の合成
ＶＮＤＮＴＬＦＫ−（２−Ｎａｌ）−Ｔｈｉ−ＩＦＮＧ−ＮＨ２（Ｗ４９（２−Ｎａｌ））
２−Ｎａｌ：３−（２−ナフチル）アラニン
Ｗ４９（２−Ｎａｌ）はＲｉｎｋ  Ａｍｉｄｅ  ｒｅｓｉｎ（０．３７ｍｍｏｌ／ｇ，渡辺化学工業株式会社）５４ｍｇ（０．０２０ｍｍｏｌ）を用いて合成例１と同様の手法により合成および精製した（４．２ｍｇ，収率１１．４％）。
ＬＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ＋）：ｍ／ｚ  １７３０．６５  （Ｍ＋Ｈ＋）（計算値：１７３０．８４）。
【０１１５】
（合成例１３）
配列番号１８のアミノ酸配列を含むペプチド：Ｗ４９Ｆの合成
ＶＮＤＮＴＬＦＫＦ−Ｔｈｉ−ＩＦＮＧ−ＮＨ２（Ｗ４９Ｆ）
Ｔｈｉ：３−チエニルアラニン
Ｗ４９ＦはＲｉｎｋ  Ａｍｉｄｅ  ｒｅｓｉｎ（０．３７ｍｍｏｌ／ｇ，渡辺化学工業株式会社）５４ｍｇ（０．０２０ｍｍｏｌ）を用いて合成例１と同様の手法により合成および精製した（５．１ｍｇ，収率１４．２％）。
ＬＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ＋）：ｍ／ｚ  １６８１．５７  （Ｍ＋Ｈ＋）（計算値：１６８０．８２）。
【０１１６】
（合成例１４）
配列番号１９のアミノ酸配列を含むペプチド：Ｗ４９Ｃｈｇの合成
ＶＮＤＮＴＬＦＫ−Ｃｈｇ−Ｔｈｉ−ＩＦＮＧ−ＮＨ２（Ｗ４９Ｃｈｇ）
Ｃｈｇ：２−シクロヘキシルグリシン
Ｗ４９ＣｈｇはＲｉｎｋ  Ａｍｉｄｅ  ｒｅｓｉｎ（０．３７ｍｍｏｌ／ｇ，渡辺化学工業株式会社）５４ｍｇ（０．０２０ｍｍｏｌ）を用いて合成例１と同様の手法により合成および精製した（１６．６ｍｇ，収率４６．１％）。
ＬＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ＋）：ｍ／ｚ  １６８６．９６  （Ｍ＋Ｈ＋）（計算値：１６８６．８７）。
【０１１７】
（合成例１５）
配列番号２０のアミノ酸配列を含むペプチド：Ｍ５０Ｆの合成
ＶＮＤＮＴＬＦＫＷＦＩＦＮＧ−ＮＨ２（Ｍ５０Ｆ）
Ｍ５０ＦはＲｉｎｋ  Ａｍｉｄｅ  ｒｅｓｉｎ（０．３７ｍｍｏｌ／ｇ，渡辺化学工業株式会社）５４ｍｇ（０．０２０ｍｍｏｌ）を用いて合成例１と同様の手法により合成および精製した（１６．５ｍｇ，４５．２％）。
ＬＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ＋）：ｍ／ｚ  １７１３．０１  （Ｍ＋Ｈ＋）（計算値：１７１３．８８）。
【０１１８】
（合成例１６）
配列番号２１のアミノ酸配列を含むペプチド：Ｍ５０Ｐｈｇの合成
ＶＮＤＮＴＬＦＫＷ−Ｐｈｇ−ＩＦＮＧ−ＮＨ２（Ｍ５０Ｐｈｇ）
Ｐｈｇ：２−フェニルグリシン
Ｍ５０ＰｈｇはＲｉｎｋ  Ａｍｉｄｅ  ｒｅｓｉｎ（０．３７ｍｍｏｌ／ｇ，渡辺化学工業株式会社）５４ｍｇ（０．０２０ｍｍｏｌ）を用いて合成例１と同様の手法により合成および精製した（１１．８ｍｇ，収率３２．６％）。
ＬＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ＋）：ｍ／ｚ  １７００．５９  （Ｍ＋Ｈ＋）（計算値：１６９９．８６）。
【０１１９】
（合成例１７）
配列番号２２のアミノ酸配列を含むペプチド：Ｍ５０Ｈｐｈの合成
ＶＮＤＮＴＬＦＫＷ−Ｈｐｈ−ＩＦＮＧ−ＮＨ２（Ｍ５０Ｈｐｈ）
Ｈｐｈ：ホモフェニルアラニン
Ｍ５０ＨｐｈはＲｉｎｋ  Ａｍｉｄｅ  ｒｅｓｉｎ（０．３７ｍｍｏｌ／ｇ，渡辺化学工業株式会社）５４ｍｇ（０．０２０ｍｍｏｌ）を用いて合成例１と同様の手法により合成および精製した（１０．７ｍｇ，収率２９．１％）。
ＬＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ＋）：ｍ／ｚ  １７２７．６８  （Ｍ＋Ｈ＋）（計算値：１７２７．８９）。
【０１２０】
（合成例１８）
配列番号２３のアミノ酸配列を含むペプチド：Ｆ５２Ｔｈｉの合成
ＶＮＤＮＴＬＦＫＷ−Ｔｈｉ−Ｉ−Ｔｈｉ−ＮＧ−ＮＨ２（Ｆ５２Ｔｈｉ）
Ｔｈｉ：３−チエニルアラニン
Ｆ５２ＴｈｉはＲｉｎｋ  Ａｍｉｄｅ  ｒｅｓｉｎ（０．３７ｍｍｏｌ／ｇ，渡辺化学工業株式会社）５４ｍｇ（０．０２０ｍｍｏｌ）を用いて合成例１と同様の手法により合成および精製した（１４．０ｍｇ，収率３８．１％）。
ＬＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ＋）：ｍ／ｚ  １７２６．５９  （Ｍ＋Ｈ＋）（計算値：１７２５．７９）。
【０１２１】
（合成例１９）
配列番号２４のアミノ酸配列を含むペプチド：Ｆ５２Ｐｈｅ（４−Ｆ）の合成
ＶＮＤＮＴＬＦＫＷ−Ｔｈｉ−Ｉ−Ｐｈｅ（４−Ｆ）−ＮＧ−ＮＨ２（Ｆ５２Ｐｈｅ（４−Ｆ））
Ｔｈｉ：３−チエニルアラニン
Ｐｈｅ（４−Ｆ）：４−フルオロフェニルアラニン
Ｆ５２Ｐｈｅ（４−Ｆ）はＲｉｎｋ  Ａｍｉｄｅ  ｒｅｓｉｎ（０．３７ｍｍｏｌ／ｇ，渡辺化学工業株式会社）５４ｍｇ（０．０２０ｍｍｏｌ）を用いて合成例１と同様の手法により合成および精製した（１４．８ｍｇ，収率４０．０％）。
ＬＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ＋）：ｍ／ｚ  １７３７．０５  （Ｍ＋Ｈ＋）（計算値：１７３７．８２）。
【０１２２】
（合成例２０）
配列番号２５のアミノ酸配列を含むペプチド：Ｆ５２Ｐｈｇの合成
ＶＮＤＮＴＬＦＫＷ−Ｔｈｉ−Ｉ−Ｐｈｇ−ＮＧ−ＮＨ２（Ｆ５２Ｐｈｇ）
Ｔｈｉ：３−チエニルアラニン
Ｐｈｇ：２−フェニルグリシン
Ｆ５２ＰｈｇはＲｉｎｋ  Ａｍｉｄｅ  ｒｅｓｉｎ（０．３７ｍｍｏｌ／ｇ，渡辺化学工業株式会社）５４ｍｇ（０．０２０ｍｍｏｌ）を用いて合成例１と同様の手法により合成および精製した（１１．０ｍｇ，収率３０．３％）。
ＬＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ＋）：ｍ／ｚ  １７０５．３０  （Ｍ＋Ｈ＋）（計算値：１７０５．８２）。
【０１２３】
（合成例２１）
配列番号２６のアミノ酸配列を含むペプチド：Ｆ５２Ｈｐｈの合成
ＶＮＤＮＴＬＦＫＷ−Ｔｈｉ−Ｉ−Ｈｐｈ−ＮＧ−ＮＨ２（Ｆ５２Ｈｐｈ）
Ｔｈｉ：３−チエニルアラニン
Ｈｐｈ：ホモフェニルアラニン
Ｆ５２ＨｐｈはＲｉｎｋ  Ａｍｉｄｅ  ｒｅｓｉｎ（０．３７ｍｍｏｌ／ｇ，渡辺化学工業株式会社）５４ｍｇ（０．０２０ｍｍｏｌ）を用いて合成例１と同様の手法により合成および精製した（１５．３ｍｇ，収率４１．４％）。
ＬＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ＋）：ｍ／ｚ  １７３３．０９  （Ｍ＋Ｈ＋）（計算値：１７３３．８５）。
【０１２４】
（合成例２２）
配列番号２７のアミノ酸配列を含むペプチド：Ｆ５２Ｃｈｇの合成
ＶＮＤＮＴＬＦＫＷ−Ｔｈｉ−Ｉ−Ｃｈｇ−ＮＧ−ＮＨ２（Ｆ５２Ｃｈｇ）
Ｔｈｉ：３−チエニルアラニン
Ｃｈｇ：２−シクロヘキシルグリシン
Ｆ５２ＣｈｇはＲｉｎｋ  Ａｍｉｄｅ  ｒｅｓｉｎ（０．３７ｍｍｏｌ／ｇ，渡辺化学工業株式会社）５４ｍｇ（０．０２０ｍｍｏｌ）を用いて合成例１と同様の手法により合成および精製した（１５．３ｍｇ，収率４１．９％）。
ＬＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ＋）：ｍ／ｚ  １７１２．１０  （Ｍ＋Ｈ＋）（計算値：１７１１．８６）。
【０１２５】
（合成例２３）
配列番号２８のアミノ酸配列を含むペプチド：Ｖ４１Ａｂｕ（２）の合成
Ａｂｕ−ＮＤＮＴＬＦＫＷ−Ｔｈｉ−ＩＦＮＧ−ＮＨ２（Ｖ４１Ａｂｕ（２））
Ａｂｕ：２−アミノ酪酸
Ｔｈｉ：３−チエニルアラニン
Ｖ４１Ａｂｕ（２）はＲｉｎｋ  Ａｍｉｄｅ  ｒｅｓｉｎ（０．３７ｍｍｏｌ／ｇ，渡辺化学工業株式会社）５４ｍｇ（０．０２０ｍｍｏｌ）を用いて合成例１と同様の手法により合成および精製した（７．８ｍｇ，収率２１．５％）。
ＬＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ＋）：ｍ／ｚ  １７０５．７２  （Ｍ＋Ｈ＋）（計算値：１７０５．８２）。
【０１２６】
（合成例２４）
配列番号２９のアミノ酸配列を含むペプチド：Ｖ４１Ｎｖａの合成
Ｎｖａ−ＮＤＮＴＬＦＫＷ−Ｔｈｉ−ＩＦＮＧ−ＮＨ２（Ｖ４１Ｎｖａ）
Ｎｖａ：ノルバリン
Ｔｈｉ：３−チエニルアラニン
Ｖ４１ＮｖａはＲｉｎｋ  Ａｍｉｄｅ  ｒｅｓｉｎ（０．３７ｍｍｏｌ／ｇ，渡辺化学工業株式会社）５４ｍｇ（０．０２０ｍｍｏｌ）を用いて合成例１と同様の手法により合成および精製した（１０．１ｍｇ，収率２７．６％）。
ＬＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ＋）：ｍ／ｚ  １７１９．５６  （Ｍ＋Ｈ＋）（計算値：１７１９．８３）。
【０１２７】
（合成例２５）
配列番号３０のアミノ酸配列を含むペプチド：Ｖ４１Ｉの合成
ＩＮＤＮＴＬＦＫＷ−Ｔｈｉ−ＩＦＮＧ−ＮＨ２（Ｖ４１Ｉ）
Ｔｈｉ：３−チエニルアラニン
Ｖ４１ＩはＲｉｎｋ  Ａｍｉｄｅ  ｒｅｓｉｎ（０．３７ｍｍｏｌ／ｇ，渡辺化学工業株式会社）５４ｍｇ（０．０２０ｍｍｏｌ）を用いて合成例１と同様の手法により合成および精製した（６．８ｍｇ，収率１８．４％）。
ＬＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ＋）：ｍ／ｚ  １７３４．２０  （Ｍ＋Ｈ＋）（計算値：１７３３．８５）。
【０１２８】
（合成例２６）
配列番号３１のアミノ酸配列を含むペプチド：Ｖ４１Ｌの合成
ＬＮＤＮＴＬＦＫＷ−Ｔｈｉ−ＩＦＮＧ−ＮＨ２（Ｖ４１Ｌ）
Ｔｈｉ：３−チエニルアラニン
Ｖ４１ＬはＲｉｎｋ  Ａｍｉｄｅ  ｒｅｓｉｎ（０．３７ｍｍｏｌ／ｇ，渡辺化学工業株式会社）５４ｍｇ（０．０２０ｍｍｏｌ）を用いて合成例１と同様の手法により合成および精製した（１１．４ｍｇ，収率３０．９％）。
ＬＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ＋）：ｍ／ｚ  １７３３．６５  （Ｍ＋Ｈ＋）（計算値：１７３３．８５）。
【０１２９】
（合成例２７）
配列番号３２のアミノ酸配列を含むペプチド：Ｖ４１Ｃｈｇの合成
Ｃｈｇ−ＮＤＮＴＬＦＫＷ−Ｔｈｉ−ＩＦＮＧ−ＮＨ２（Ｖ４１Ｃｈｇ）
Ｃｈｇ：２−シクロヘキシルグリシン
Ｔｈｉ：３−チエニルアラニン
Ｖ４１ＣｈｇはＲｉｎｋ  Ａｍｉｄｅ  ｒｅｓｉｎ（０．３７ｍｍｏｌ／ｇ，渡辺化学工業株式会社）５４ｍｇ（０．０２０ｍｍｏｌ）を用いて合成例１と同様の手法により合成および精製した（２１．７ｍｇ，収率５８．０％）。
ＬＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ＋）：ｍ／ｚ  １７５９．７９  （Ｍ＋Ｈ＋）（計算値：１７５９．８６）。
【０１３０】
（合成例２８）
配列番号３３のアミノ酸配列を含むペプチド：Ｖ４１Ｐｈｇの合成
Ｐｈｇ−ＮＤＮＴＬＦＫＷ−Ｔｈｉ−ＩＦＮＧ−ＮＨ２（Ｖ４１Ｐｈｇ）
Ｐｈｇ：２−フェニルグリシン
Ｔｈｉ：３−チエニルアラニン
Ｖ４１ＰｈｇはＲｉｎｋ  Ａｍｉｄｅ  ｒｅｓｉｎ（０．３７ｍｍｏｌ／ｇ，渡辺化学工業株式会社）５４ｍｇ（０．０２０ｍｍｏｌ）を用いて合成例１と同様の手法により合成および精製した（８．１ｍｇ，収率２１．７％）。
ＬＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ＋）：ｍ／ｚ  １７５４．０４  （Ｍ＋Ｈ＋）（計算値：１７５３．８２）。
【０１３１】
（合成例２９）
配列番号３４のアミノ酸配列を含むペプチド：Ｎ４２Ｑの合成
ＶＱＤＮＴＬＦＫＷ−Ｔｈｉ−ＩＦＮＧ−ＮＨ２（Ｎ４２Ｑ）
Ｔｈｉ：３−チエニルアラニン
Ｎ４２ＱはＲｉｎｋ  Ａｍｉｄｅ  ｒｅｓｉｎ（０．３７ｍｍｏｌ／ｇ，渡辺化学工業株式会社）５４ｍｇ（０．０２０ｍｍｏｌ）を用いて合成例１と同様の手法により合成および精製した（１１．７ｍｇ，収率３１．７％）。
ＬＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ＋）：ｍ／ｚ  １７３４．０２  （Ｍ＋Ｈ＋）（計算値：１７３３．８５）。
【０１３２】
（合成例３０）
配列番号３５のアミノ酸配列を含むペプチド：Ｎ４２Ｄの合成
ＶＤＤＮＴＬＦＫＷ−Ｔｈｉ−ＩＦＮＧ−ＮＨ２（Ｎ４２Ｄ）
Ｔｈｉ：３−チエニルアラニン
Ｎ４２ＤはＲｉｎｋ  Ａｍｉｄｅ  ｒｅｓｉｎ（０．３７ｍｍｏｌ／ｇ，渡辺化学工業株式会社）５４ｍｇ（０．０２０ｍｍｏｌ）を用いて合成例１と同様の手法により合成および精製した（１０．６ｍｇ，収率２８．９％）。
ＬＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ＋）：ｍ／ｚ  １７２１．５７  （Ｍ＋Ｈ＋）（計算値：１７２０．８２）。
【０１３３】
（合成例３１）
配列番号３６のアミノ酸配列を含むペプチド：Ｄ４３Ｅの合成
ＶＮＥＮＴＬＦＫＷ−Ｔｈｉ−ＩＦＮＧ−ＮＨ２（Ｄ４３Ｅ）
Ｔｈｉ：３−チエニルアラニン
Ｄ４３ＥはＲｉｎｋ  Ａｍｉｄｅ  ｒｅｓｉｎ（０．３７ｍｍｏｌ／ｇ，渡辺化学工業株式会社）５４ｍｇ（０．０２０ｍｍｏｌ）を用いて合成例１と同様の手法により合成および精製した（１８．０ｍｇ，収率４８．８％）。
ＬＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ＋）：ｍ／ｚ  １７３４．３３  （Ｍ＋Ｈ＋）（計算値：１７３４．８３）。
【０１３４】
（合成例３２）
配列番号３７のアミノ酸配列を含むペプチド：Ｎ４４Ｅの合成
ＶＮＤＥＴＬＦＫＷ−Ｔｈｉ−ＩＦＮＧ−ＮＨ２（Ｎ４４Ｅ）
Ｔｈｉ：３−チエニルアラニン
Ｎ４４ＥはＲｉｎｋ  Ａｍｉｄｅ  ｒｅｓｉｎ（０．３７ｍｍｏｌ／ｇ，渡辺化学工業株式会社）５４ｍｇ（０．０２０ｍｍｏｌ）を用いて合成例１と同様の手法により合成および精製した（７．７ｍｇ，収率２０．８％）。
ＬＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ＋）：ｍ／ｚ  １７３５．１６  （Ｍ＋Ｈ＋）（計算値：１７３４．８３）。
【０１３５】
（合成例３３）
配列番号３８のアミノ酸配列を含むペプチド：Ｎ４４Ｄの合成
ＶＮＤＤＴＬＦＫＷ−Ｔｈｉ−ＩＦＮＧ−ＮＨ２（Ｎ４４Ｄ）
Ｔｈｉ：３−チエニルアラニン
Ｎ４４ＤはＲｉｎｋ  Ａｍｉｄｅ  ｒｅｓｉｎ（０．３７ｍｍｏｌ／ｇ，渡辺化学工業株式会社）５４ｍｇ（０．０２０ｍｍｏｌ）を用いて合成例１と同様の手法により合成および精製した（２０．５ｍｇ，収率５５．９％）。
ＬＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ＋）：ｍ／ｚ  １７２１．３０  （Ｍ＋Ｈ＋）（計算値：１７２０．８２）。
【０１３６】
（合成例３４）
配列番号３９のアミノ酸配列を含むペプチド：Ｋ４８Ｄａｂの合成
ＶＮＤＮＴＬＦ−Ｄｂｕ−Ｗ−Ｔｈｉ−ＩＦＮＧ−ＮＨ２（Ｋ４８Ｄａｂ）
Ｄｂｕ：２，４−ジアミノブタン酸
Ｔｈｉ：３−チエニルアラニン
Ｋ４８ＤａｂはＲｉｎｋ  Ａｍｉｄｅ  ｒｅｓｉｎ（０．３７ｍｍｏｌ／ｇ，渡辺化学工業株式会社）５４ｍｇ（０．０２０ｍｍｏｌ）を用いて合成例１と同様の手法により合成および精製した（１３．９ｍｇ，収率３８．５％）。
ＬＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ＋）：ｍ／ｚ  １６９１．３６  （Ｍ＋Ｈ＋）（計算値：１６９１．８０）。
【０１３７】
（合成例３５）
配列番号４０のアミノ酸配列を含むペプチド：Ｉ５１Ｎｖａの合成
ＶＮＤＮＴＬＦＫＷ−Ｔｈｉ−Ｎｖａ−ＦＮＧ−ＮＨ２（Ｉ５１Ｎｖａ）
Ｔｈｉ：３−チエニルアラニン
Ｎｖａ：ノルバリン
Ｉ５１ＮｖａはＲｉｎｋ  Ａｍｉｄｅ  ｒｅｓｉｎ（０．３７ｍｍｏｌ／ｇ，渡辺化学工業株式会社）５４ｍｇ（０．０２０ｍｍｏｌ）を用いて合成例１と同様の手法により合成および精製した（２３．１ｍｇ，収率６３．５％）。
ＬＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ＋）：ｍ／ｚ  １７０５．４５  （Ｍ＋Ｈ＋）（計算値：１７０５．８２）。
【０１３８】
（合成例３６）
配列番号４１のアミノ酸配列を含むペプチド：Ｉ５１Ｖの合成
ＶＮＤＮＴＬＦＫＷ−Ｔｈｉ−ＶＦＮＧ−ＮＨ２（Ｉ５１Ｖ）
Ｔｈｉ：３−チエニルアラニン
Ｉ５１ＶはＲｉｎｋ  Ａｍｉｄｅ  ｒｅｓｉｎ（０．３７ｍｍｏｌ／ｇ，渡辺化学工業株式会社）５４ｍｇ（０．０２０ｍｍｏｌ）を用いて合成例１と同様の手法により合成および精製した（２２．２ｍｇ，収率６１．１％）。
ＬＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ＋）：ｍ／ｚ  １７０６．２８  （Ｍ＋Ｈ＋）（計算値：１７０５．８２）。
【０１３９】
（合成例３７）
配列番号４２のアミノ酸配列を含むペプチド：Ｉ５１Ｃｈｇの合成
ＶＮＤＮＴＬＦＫＷ−Ｔｈｉ−Ｃｈｇ−ＦＮＧ−ＮＨ２（Ｉ５１Ｃｈｇ）
Ｔｈｉ：３−チエニルアラニン
Ｃｈｇ：２−シクロヘキシルグリシン
Ｉ５１ＣｈｇはＲｉｎｋ  Ａｍｉｄｅ  ｒｅｓｉｎ（０．３７ｍｍｏｌ／ｇ，渡辺化学工業株式会社）５４ｍｇ（０．０２０ｍｍｏｌ）を用いて合成例１と同様の手法により合成および精製した（２０．３ｍｇ，収率５４．６％）。
ＬＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ＋）：ｍ／ｚ  １７４６．５９  （Ｍ＋Ｈ＋）（計算値：１７４５．８５）。
【０１４０】
（合成例３８）
配列番号４３のアミノ酸配列を含むペプチド：Ｉ５１Ｐｈｇの合成
ＶＮＤＮＴＬＦＫＷ−Ｔｈｉ−Ｐｈｇ−ＦＮＧ−ＮＨ２（Ｉ５１Ｐｈｇ）
Ｔｈｉ：３−チエニルアラニン
Ｐｈｇ：２−フェニルグリシン
Ｉ５１ＰｈｇはＲｉｎｋ  Ａｍｉｄｅ  ｒｅｓｉｎ（０．３７ｍｍｏｌ／ｇ，渡辺化学工業株式会社）５４ｍｇ（０．０２０ｍｍｏｌ）を用いて合成例１と同様の手法により合成および精製した（８．４ｍｇ，収率２２．７％）。
ＬＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ＋）：ｍ／ｚ  １７３９．７０  （Ｍ＋Ｈ＋）（計算値：１７３９．８０）。
【０１４１】
（合成例３９）
配列番号４４のアミノ酸配列を含むペプチド：Ｎ５３Ｅの合成
ＶＮＤＮＴＬＦＫＷ−Ｔｈｉ−ＩＦＥＧ−ＮＨ２（Ｎ５３Ｅ）
Ｔｈｉ：３−チエニルアラニン
Ｎ５３ＥはＲｉｎｋ  Ａｍｉｄｅ  ｒｅｓｉｎ（０．３７ｍｍｏｌ／ｇ，渡辺化学工業株式会社）５４ｍｇ（０．０２０ｍｍｏｌ）を用いて合成例１と同様の手法により合成および精製した（１０．０ｍｇ，収率２７．１％）。
ＬＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ＋）：ｍ／ｚ  １７３５．４４  （Ｍ＋Ｈ＋）（計算値：１７３４．８３）。
【０１４２】
（合成例４０）
配列番号４５のアミノ酸配列を含むペプチド：Ｎ５３Ｑの合成
ＶＮＤＮＴＬＦＫＷ−Ｔｈｉ−ＩＦＱＧ−ＮＨ２（Ｎ５３Ｑ）
Ｔｈｉ：３−チエニルアラニン
Ｎ５３ＱはＲｉｎｋ  Ａｍｉｄｅ  ｒｅｓｉｎ（０．３７ｍｍｏｌ／ｇ，渡辺化学工業株式会社）５４ｍｇ（０．０２０ｍｍｏｌ）を用いて合成例１と同様の手法により合成および精製した（２０．０ｍｇ，収率５４．２％）。
ＬＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ＋）：ｍ／ｚ  １７３３．８９  （Ｍ＋Ｈ＋）（計算値：１７３３．８５）。
【０１４３】
（合成例４１）
配列番号４６のアミノ酸配列を含むペプチド：Ｎ５３Ｄの合成
ＶＮＤＮＴＬＦＫＷ−Ｔｈｉ−ＩＦＤＧ−ＮＨ２（Ｎ５３Ｄ）
Ｔｈｉ：３−チエニルアラニン
Ｎ５３ＤはＲｉｎｋ  Ａｍｉｄｅ  ｒｅｓｉｎ（０．３７ｍｍｏｌ／ｇ，渡辺化学工業株式会社）５４ｍｇ（０．０２０ｍｍｏｌ）を用いて合成例１と同様の手法により合成および精製した（１３．１ｍｇ，収率３５．７％）。
ＬＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ＋）：ｍ／ｚ  １７１２．１３  （Ｍ＋Ｈ＋）（計算値：１７２０．８２）。
【０１４４】
（合成例４２）
配列番号４７のアミノ酸配列を含むペプチド：Ｇ５４βＡｌａの合成
ＶＮＤＮＴＬＦＫＷ−Ｔｈｉ−ＩＦＮ−ｂＡｌａ−ＮＨ２（Ｇ５４βＡｌａ）
Ｔｈｉ：３−チエニルアラニン
ｂＡｌａ：β−アラニン
Ｇ５４βＡｌａはＲｉｎｋ  Ａｍｉｄｅ  ｒｅｓｉｎ（０．３７ｍｍｏｌ／ｇ，渡辺化学工業株式会社）５４ｍｇ（０．０２０ｍｍｏｌ）を用いて合成例１と同様の手法により合成および精製した（１．９ｍｇ，収率５．１％）。
ＬＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ＋）：ｍ／ｚ  １７３４．２２  （Ｍ＋Ｈ＋）（計算値：１７３３．８５）。
【０１４５】
（合成例４３）
配列番号４８のアミノ酸配列を含むペプチド：Ｇ５４Ａｂｕ（４）の合成
ＶＮＤＮＴＬＦＫＷ−Ｔｈｉ−ＩＦＮ−４Ａｂｕ−ＮＨ２（Ｇ５４Ａｂｕ（４））
Ｔｈｉ：３−チエニルアラニン
４Ａｂｕ：４−アミノ酪酸
Ｇ５４Ａｂｕ（４）はＲｉｎｋ  Ａｍｉｄｅ  ｒｅｓｉｎ（０．３７ｍｍｏｌ／ｇ，渡辺化学工業株式会社）５４ｍｇ（０．０２０ｍｍｏｌ）を用いて合成例１と同様の手法により合成および精製した（４．７ｍｇ，収率１２．７％）。
ＬＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ＋）：ｍ／ｚ  １７４７．９６  （Ｍ＋Ｈ＋）（計算値：１７４７．６６）。
【０１４６】
（合成例４４）
配列番号４９のアミノ酸配列を含むペプチド：ＤＦ−９７の合成
Ｐｈｇ−ＮＤＮＴＬＦＫＷ−Ｈｐｈ−ＩＦＮＧ−ＮＨ２（ＤＦ−９７）
Ｐｈｇ：２−フェニルグリシン
Ｈｐｈ：ホモフェニルアラニン
ＤＦ−９７はＲｉｎｋ  Ａｍｉｄｅ  ｒｅｓｉｎ（０．３７ｍｍｏｌ／ｇ，渡辺化学工業株式会社）５４ｍｇ（０．０２０ｍｍｏｌ）を用いて合成例１と同様の手法により合成および精製した（１８．０ｍｇ，収率４８．０％）。
ＬＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ＋）：ｍ／ｚ  １７６１．０８  （Ｍ＋Ｈ＋）（計算値：１７６１．８８）。
【０１４７】
（合成例４５）
配列番号５０のアミノ酸配列を含むペプチド：ＤＦ−９８の合成
Ｐｈｇ−ＮＤＮＴＬＦＫＦ−Ｈｐｈ−ＩＦＮＧ−ＮＨ２（ＤＦ−９８）
Ｐｈｇ：２−フェニルグリシン
Ｈｐｈ：ホモフェニルアラニン
ＤＦ−９８はＲｉｎｋ  Ａｍｉｄｅ  ｒｅｓｉｎ（０．３７ｍｍｏｌ／ｇ，渡辺化学工業株式会社）５４ｍｇ（０．０２０ｍｍｏｌ）を用いて合成例１と同様の手法により合成および精製した（１８．０ｍｇ，収率４８．０％）。
ＬＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ＋）：ｍ／ｚ  １７２２．２７  （Ｍ＋Ｈ＋）（計算値：１７２２．８６）。
【０１４８】
（合成例４６）
配列番号５１のアミノ酸配列を含むペプチド：ＤＦ−９９の合成
Ｐｈｇ−ＮＤＮＴＬＦＫＷ−Ｈｐｈ−Ｉ−Ｐｈｅ（４−Ｆ）−ＮＧ−ＮＨ２（ＤＦ−９９）
Ｐｈｇ：２−フェニルグリシン
Ｈｐｈ：ホモフェニルアラニン
Ｐｈｅ（４−Ｆ）：４−フルオロフェニルアラニン
ＤＦ−９９はＲｉｎｋ  Ａｍｉｄｅ  ｒｅｓｉｎ（０．３７ｍｍｏｌ／ｇ，渡辺化学工業株式会社）５４ｍｇ（０．０２０ｍｍｏｌ）を用いて合成例１と同様の手法により合成および精製した（１８．０ｍｇ，収率４８．０％）。
ＬＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ＋）：ｍ／ｚ  １７８０．３６  （Ｍ＋Ｈ＋）（計算値：１７７９．８７）。
【０１４９】
（合成例４７）
配列番号５２のアミノ酸配列を含むペプチド：ＤＦ−１００の合成
Ｐｈｇ−ＮＤＮＴＬＦＫＦ−Ｈｐｈ−Ｉ−Ｐｈｅ（４−Ｆ）−ＮＧ−ＮＨ２（ＤＦ−１００）
Ｐｈｇ：２−フェニルグリシン
Ｈｐｈ：ホモフェニルアラニン
Ｐｈｅ（４−Ｆ）：４−フルオロフェニルアラニン
ＤＦ−１００はＲｉｎｋ  Ａｍｉｄｅ  ｒｅｓｉｎ（０．３７ｍｍｏｌ／ｇ，渡辺化学工業株式会社）５４ｍｇ（０．０２０ｍｍｏｌ）を用いて合成例１と同様の手法により合成および精製した（１８．０ｍｇ，収率４８．０％）。
ＨＲＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ  １７４０．８５４７  （Ｍ＋Ｈ＋）（計算値：１７４０．８５５０）。
【０１５０】
（合成例４８）
配列番号５３のアミノ酸配列を含むペプチド：ＤＦ−１１１の合成
Ｐｈｇ−ＮＤＮＴＬＦＫ−Ｐｈｅ（４−Ｆ）−Ｈｐｈ−Ｉ−Ｐｈｅ（４−Ｆ）−ＮＧ−ＮＨ２（ＤＦ−１１１）
Ｐｈｇ：２−フェニルグリシン
Ｐｈｅ（４−Ｆ）：４−フルオロフェニルアラニン
Ｈｐｈ：ホモフェニルアラニン
ＤＦ−１１１はＲｉｎｋ  Ａｍｉｄｅ  ｒｅｓｉｎ（０．３７ｍｍｏｌ／ｇ，渡辺化学工業株式会社）５４ｍｇ（０．０２０ｍｍｏｌ）を用いて合成例１と同様の手法により合成および精製した（１６．１ｍｇ，収率４３．０％）。
ＨＲＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ  １７５８．８４２８  （Ｍ＋Ｈ＋）（計算値：１７５８．８４５６）。
【０１５１】
（合成例４９）
配列番号５４のアミノ酸配列を含むペプチド：ＤＦ−１１５の合成
Ｐｈｇ−ＮＤＮＴＬＦＫＦ−Ｈｐｈ−Ｉ−Ｐｈｅ（４−ＯＭｅ）−ＮＧ−ＮＨ２（ＤＦ−１１５）
Ｐｈｇ：２−フェニルグリシン
Ｈｐｈ：ホモフェニルアラニン
Ｐｈｅ（４−ＯＭｅ）：４−メトキシフェニルアラニン
ＤＦ−１１５はＲｉｎｋ  Ａｍｉｄｅ  ｒｅｓｉｎ（０．３７ｍｍｏｌ／ｇ，渡辺化学工業株式会社）５４ｍｇ（０．０２０ｍｍｏｌ）を用いて合成例１と同様の手法により合成および精製した（１１．８ｍｇ，収率３１．５％）。
ＨＲＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ  １７５２．８７１９  （Ｍ＋Ｈ＋）（計算値：１７５２．８７５０）。
【０１５２】
（合成例５０）
配列番号５５のアミノ酸配列を含むペプチド：ＨＦｓ３８−５４の合成（比較例）
ＥＥＤＶＮＤＮＴＬＦＫＷＭＩＦＮＧ−ＮＨ２（ＨＦｓ３８−５４）
ＨＦｓ３８−５４はＲｉｎｋ  Ａｍｉｄｅ  ｒｅｓｉｎ（０．３７ｍｍｏｌ／ｇ，渡辺化学工業株式会社）５４ｍｇ（０．０２０ｍｍｏｌ）を用いて合成例１と同様の手法により合成および精製した（８．１ｍｇ，収率１８．４％）。
ＨＲＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ  ２０７０．９５９５  （Ｍ＋Ｈ＋）（計算値：２０７０．９５９５）。
【０１５３】
（試験例１）ｉｎ  ｖｉｔｒｏレポーターアッセイによるＨＦｓ４１−５４、ＨＦｓ４２−５３およびＨＦｓ３８−５４のマイオスタチン阻害活性評価
ＨＦｓ４１−５４、ＨＦｓ４２−５３およびＨＦｓ３８−５４のマイオスタチン阻害活性評価を以下のレポーターアッセイにより実施した。その結果を図１に示す。ＨＦｓ３８−５４と比べて、ＨＦｓ４１−５４およびＨＦｓ４２−５３は１０μＭの濃度において、阻害活性８０％以上（ルシフェラーゼ活性２０％以下）という顕著なマイオスタチン阻害活性を示した。
【０１５４】
図中、「マイオスタチンフリー」は、マイオスタチンを含まないジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）を添加した試験区についての結果を示す。「マイオスタチンのみ」は、８ｎｇ／ｍＬのマイオスタチンを含み試験試料を含まない試験区についての結果を示す。また、レポーターアッセイの結果は、８ｎｇ／ｍＬのマイオスタチンを含み試験試料を含まない試験区についての結果をマイオスタチン活性１００％（相対ルシフェラーゼ活性１００％）として算出し、各試験区あたり３ウェルの平均値±標準偏差として図示した。
【０１５５】
（１）細胞培養
ヒト胎児腎細胞ＨＥＫ２９３細胞は、１％（ｖ／ｖ）の非必須アミノ酸（富士フイルム和光純薬株式会社）が添加された１０％（ｖ／ｖ）のウシ胎児血清（ＦＢＳ）を含むＤＭＥＭ（ナカライテスク株式会社）培地を用いて、３７℃、５％（ｖ／ｖ）ＣＯ２インキュベータ内で培養した。
【０１５６】
（２）ｉｎ  ｖｉｔｒｏレポーターアッセイ
Ｄ−Ｌｙｓ−ｃｏｒｔｅｄ  ９６ウェル透明プレート（サーモフィッシャーサイエンティフィック社）にＨＥＫ２９３細胞を１ウェルあたり２．０ｘ１０４ｃｅｌｌｓ（１００μＬ  ＤＭＥＭ＋１０％（ｖ／ｖ）ＦＢＳ）播種し、２４時間培養した。
【０１５７】
その翌日、１ウェルあたり１００ｎｇのｐＧＬ４．４８［ｌｕｃ２Ｐ／ＳＢＥ／Ｈｙｇｒｏ］（プロメガ社）、およびインターナルコントロールとして１０ｎｇのｐＧＬ４［ｈＲｌｕｃ／ＴＫ］（プロメガ社）をＦｕＧＥＮＥ  ＨＤ（プロメガ社）の最終濃度が４１．２５μｇ／ｍＬになるようＯＰＴＩ−ＭＥＭを用いて混合し、ウェル中の培地に添加した。この細胞を３７℃、２４時間培養したのち、細胞培養液を無血清ＤＭＥＭに交換して８時間培養した。
【０１５８】
試験試料であるペプチドは、ストック溶液として１０ｍＭになるようＤＭＳＯを用いて懸濁させ、−３０℃で保存した。培地に添加する１時間前に、無血清ＤＭＥＭで懸濁して室温（２５℃）で２０分間静置した。次いで、１０μＭの最終濃度のペプチドと、８ｎｇ／ｍＬのマイオスタチン（メルクミリポア社）とになるように培地に添加し、その後４時間培養を行った。
【０１５９】
ポジティブコントロールとして用いたプロドメインタンパク質（ＲＳＤ社）は、ストック溶液として１０μＭになるように０．１％（ｖ／ｖ）ＢＳＡ含有ＰＢＳを用いて懸濁させ、−３０℃で保存した。培地に添加する１時間前に、無血清ＤＭＥＭで懸濁して室温（２５℃）で２０分間静置した。次いで、１０ｎＭの最終濃度のプロドメインタンパク質と、８ｎｇ／ｍＬのマイオスタチン（メルクミリポア社）とになるように培地に添加し、その後４時間培養を行った。
【０１６０】
４時間の培養後、アスピレーターで培養液を取り除き、細胞を１×ＰＢＳで洗浄した。その後、１ウェルあたり５０μＬのＰａｓｓｉｖｅ  Ｌｙｓｉｓ  ｂｕｆｆｅｒ（プロメガ社）を加えて細胞を溶解した。溶解液を４℃条件下、４５００ｒｐｍで６分間遠心分離した。遠心分離後の上清２０μＬを白色９６ウェルプレート（コスター社）へ移した後、５０μＬのＬｕｃｉｆｅｒａｓｅ  Ａｓｓａｙ  Ｒｅａｇｅｎｔ（プロメガ社）を添加し、発光をＬｕｍｉｎｏｓｋａｎ  Ａｓｃｅｎｔ（サーモフィッシャーサイエンティフィック社）で検出してホタルルシフェラーゼ活性を測定した。さらに、５０μＬのＳｔｏｐ  ＆  Ｇｌｏ  Ｂｕｆｆｅｒを添加した後、発光をＬｕｍｉｎｏｓｋａｎ  Ａｓｃｅｎｔで検出してウミシイタケルシフェラーゼ活性を測定することで、インターナルコントロールとした。
【０１６１】
（試験例２）ｉｎ  ｖｉｔｒｏレポーターアッセイによるＨＦｓ４１−５４およびマイオスタチンプロドメイン由来ペプチドのアクチビン阻害活性およびＴＧＦ−β１阻害活性評価
ＨＦｓ４１−５４のアクチビン阻害活性は、８ｎｇ／ｍＬのマイオスタチンに代えて８ｎｇ／ｍＬアクチビンを用いて、試験例１の試験方法に準じて評価した。また、ＴＧＦ−β１阻害活性は、８ｎｇ／ｍＬのマイオスタチンに代えて２．５ｎｇ／ｍＬのＴＧＦ−β１を用いて、試験例１の試験方法に準じて評価した。
【０１６２】
対照として、マイオスタチンプロドメイン由来ペプチドのアクチビン阻害活性およびＴＧＦ−β１阻害活性評価した。
【０１６３】
マイオスタチンプロドメイン由来ペプチド（ペプチド７）は、マウスマイオスタチン前駆体プロドメイン中より同定された２３残基の阻害ペプチドであり、以下の文献に開示されている：
Ｔａｋａｙａｍａ，  Ｋ．；  Ｎｏｇｕｃｈｉ，  Ｙ．；  Ａｏｋｉ，  Ｓ．；  Ｔａｋａｙａｍａ，  Ｓ．；  ｅｔ  ａｌ．  Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｍｉｎｉｍｕｍ  ｐｅｐｔｉｄｅ  ｆｒｏｍ  ｍｏｕｓｅ  ｍｙｏｓｔａｔｉｎ  ｐｒｏｄｏｍａｉｎ  ｆｏｒ  ｈｕｍａｎ  ｍｙｏｓｔａｔｉｎ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ．  Ｊ．  Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ．  ２０１５，  ５８，  １５４４−１５４９。
【０１６４】
ペプチド７のアクチビン阻害活性は、８ｎｇ／ｍＬのマイオスタチンに代えて８ｎｇ／ｍＬアクチビンを用いて、試験例１の試験方法に準じて評価した。また、ＴＧＦ−β１阻害活性は、８ｎｇ／ｍＬのマイオスタチンに代えて２．５ｎｇ／ｍＬのＴＧＦ−β１を用いて、試験例１の試験方法に準じて評価した。
【０１６５】
その結果を図２に示す。ペプチド７に比べて、ＨＦｓ４１−５４は１０μＭの濃度において、アクチビンおよびＴＧＦ−β１をほとんど阻害しなかったことが分かる。
【０１６６】
（試験例３）ＨＦｓ４１−５４のマウス前脛骨筋に及ぼす影響（ｉｎ  ｖｉｖｏ評価）
ＨＦｓ４１−５４のｉｎ  ｖｉｖｏにおける筋量増大効果を検証するため以下の手法により評価を行った。
【０１６７】
ＨＦｓ４１−５４を０．５ｍＭとなるように１％（ｖ／ｖ）ＤＭＳＯを含む生理食塩水に溶解した。２０ｎｍｏｌのＨＦｓ４１−５４（４０μＬ）を麻酔下にある１０週齢のＣ５７ＢＬ６Ｊマウス（日本エスエルシー株式会社より購入）（ｎ＝４）の片方の前脛骨筋（ｔｉｂｉａｌｉｓ  ａｎｔｅｒｉｏｒ）に筋肉内投与した。対照群（Ｃｏｎｔ）として、アルブミンを０．５ｍＭとなるように１％（ｖ／ｖ）ＤＭＳＯを含む生理食塩水に溶解した。２０ｎｍｏｌのアルブミン（４０μＬ）をＨＦｓ４１−５４を投与した方と反対側の脚の前脛骨筋に筋肉内投与した。
【０１６８】
４週間後、マウスをサクリファイスして筋肉の剖検を行った。その結果を図３に示す。ＨＦｓ４１−５４は、そのマイオスタチン阻害活性に基づいて、対照群と比べて１０％程度マウス前脛骨筋の筋量を増大させた。
【０１６９】
（試験例４）ｉｎ  ｖｉｔｒｏレポーターアッセイによるＧ５４Ａのマイオスタチン阻害活性評価
Ｇ５４Ａについて、試験例１の試験例に準じて、マイオスタチン阻害活性を評価した。その結果を図４に示す。Ｇ５４Ａは１０μＭの濃度において、阻害活性８０％以上（ルシフェラーゼ活性２０％以下）という顕著なマイオスタチン阻害活性を示した。
【０１７０】
（試験例５）ｉｎ  ｖｉｔｒｏレポーターアッセイによるＭ５０ＮｌｅおよびＭ５０Ｔｈｉのマイオスタチン阻害活性評価
Ｍ５０ＮｌｅおよびＭ５０Ｔｈｉについて、試験例１の試験例に準じて、マイオスタチン阻害活性を評価した。その結果を図５に示す。Ｍ５０Ｎｌｅは１０μＭの濃度において、阻害活性７０％以上（ルシフェラーゼ活性３０％以下）という優れたマイオスタチン阻害活性を示した。また、Ｍ５０Ｔｈｉは１０μＭの濃度において、阻害活性８０％以上（ルシフェラーゼ活性２０％以下）という顕著なマイオスタチン阻害活性を示した。
【０１７１】
（試験例６）ｉｎ  ｖｉｔｒｏレポーターアッセイによるＭ５０Ｔｈｉ誘導体のマイオスタチン阻害活性評価
合成例６〜４３において合成したペプチドについて、試験例１の試験方法に準じ、各ペプチドの濃度を３μＭにてマイオスタチン阻害活性を評価した。その結果を図６および図７に示す。いずれのペプチドも３μＭの濃度においてＭ５０Ｔｈｉと同等あるいはより強力なマイオスタチン阻害活性を示した。
【０１７２】
中でも、Ｗ４９（２−Ｎａｌ）、Ｗ４９Ｆ、Ｗ４９Ｃｈｇ、Ｍ５０Ｐｈｇ、Ｍ５０Ｈｐｈ、Ｆ５２Ｔｈｉ、Ｆ５２Ｐｈｅ（４−Ｆ）、Ｆ５２Ｐｈｇ、Ｆ５２Ｃｈｇ、Ｖ４１Ｎｖａ、Ｖ４１Ｉ、Ｖ４１Ｌ、Ｖ４１Ｃｈｇ、Ｖ４１Ｐｈｇ、Ｉ５１Ｖ、Ｉ５１Ｃｈｇ、Ｎ５３Ｑ、Ｎ５３Ｄ、Ｇ５４βＡｌａおよびＧ５４Ａｂｕ（４）は３μＭの濃度において、阻害活性４０％以上（ルシフェラーゼ活性６０％以下）という特に顕著なマイオスタチン阻害活性を示した。
【０１７３】
（試験例７）ｉｎ  ｖｉｔｒｏレポーターアッセイによるＶ４１Ｐｈｇ誘導体のマイオスタチン阻害活性評価
合成例４４〜４７において合成したペプチドについて、試験例１の試験方法に準じ、各ペプチドの濃度を３μＭにてマイオスタチン阻害活性を評価した。その結果を図８に示す。いずれのペプチドも３μＭの濃度においてＶ４１Ｐｈｇと同様にマイオスタチン阻害活性を示した。
【０１７４】
中でも、ＤＦ−９７、ＤＦ−９９およびＤＦ−１００は３μＭの濃度において、阻害活性４０％以上（ルシフェラーゼ活性６０％以下）という特に顕著なマイオスタチン阻害活性を示した。
【０１７５】
（試験例８）ｉｎ  ｖｉｔｒｏレポーターアッセイによるＤＦ−１００誘導体のマイオスタチン阻害活性評価
合成例４８〜４９において合成したペプチドについて、試験例１の試験方法に準じ、各ペプチドの濃度を３μＭにてマイオスタチン阻害活性を評価した。その結果を図９に示す。いずれのペプチドも３μＭの濃度においてＤＦ−１００と同様に顕著なマイオスタチン阻害活性を示した。
【０１７６】
（試験例９）ｉｎ  ｖｉｔｒｏレポーターアッセイによるＤＦ−１００の濃度依存的なマイオスタチン阻害活性評価
ＤＦ−１００について、試験例１の試験方法に準じ、濃度依存的（２０μＭ〜０．３１μＭ）なマイオスタチン阻害活性を評価した。その結果を図１０に示す。ＤＦ−１００は濃度依存的なマイオスタチン阻害活性を示した。ＤＦ−１００のＩＣ５０値（５０％阻害濃度）は、３．９２μＭであった。
【図１】
2020059663.tif 000011
【図２】
2020059663.tif 000012
【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
2020059663.tif 000019
【図１０】
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【配列表】
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