(57)【要約】【課題】新規なエリスロポエチン産生促進用組成物を提供することを課題とする。【解決手段】ラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属、リューコノストック（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ）属およびペディオコッカス（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ）属に属する菌の菌体を有効成分とすることにより、エリスロポエチン産生促進作用を有する飲食品および飼料を提供する。【選択図】図１
2020132561.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属、リューコノストック（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ）属またはペディオコッカス（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ）属に属する菌の菌体を有効成分とするエリスロポエチン産生促進用組成物。
【請求項２】
Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属、Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ属またはＰｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ属に属する菌が、ラクトバチルス  ムコサエ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｍｕｃｏｓａｅ）、ラクトバチルス  パラカゼイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐａｒａｃａｓｅｉ）、ラクトバチルス  プランタラム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐｌａｎｔａｒｕｍ）、ラクトバチルス  ラムノーサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒｈａｍｎｏｓｕｓ）、ラクトバチルス  バギナリス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｖａｇｉｎａｌｉｓ）、リューコノストック  メセンテロイデス  サブスピーシーズ  クレモリス（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ  ｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｓｕｂｓｐ．  ｃｒｅｍｏｒｉｓ）、リューコノストック  シュードメセンテロイデス（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ  ｐｓｅｕｄｏｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓ）、ペディオコッカス  ペントサセウス（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｅｎｔｏｓａｃｅｕｓ）から選択されるひとつ以上であることを特徴とする請求項１に記載のエリスロポエチン産生促進用組成物。
【請求項３】
Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属、Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ属またはＰｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ属に属する菌が、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｍｕｃｏｓａｅ  ＳＢＴ２９５８（ＮＩＴＥ  Ｐ−０２８０３）、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐａｒａｃａｓｅｉ  ＳＢＴ０２２８（ＮＩＴＥ  Ｐ−０２８０５）、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐｌａｎｔａｒｕｍ  ＳＢＴ００９２（ＮＩＴＥ  Ｐ−０２８０６）、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒｈａｍｎｏｓｕｓ  ＳＢＴ２４９０（ＮＩＴＥ  Ｐ−０２８０７）、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｖａｇｉｎａｌｉｓ  ＳＢＴ０３３７（ＮＩＴＥ  Ｐ−０２８０８）、Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ  ｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｓｕｂｓｐ．  ｃｒｅｍｏｒｉｓ  ＳＢＴ１３９５（ＮＩＴＥ  Ｐ−０２８０９）、Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ  ｐｓｅｕｄｏｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓ  ＳＢＴ０８３５（ＮＩＴＥ  Ｐ−０２８１０）、Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｅｎｔｏｓａｃｅｕｓ  ＳＢＴ３３１６（ＮＩＴＥ  Ｐ−０２８０４）から選択されるひとつ以上であることを特徴とする請求項２に記載のエリスロポエチン産生促進用組成物。
【請求項４】
請求項１〜３のいずれか一項に記載のエリスロポエチン産生促進用組成物を含む、エリスロポエチン産生促進用飼料組成物、エリスロポエチン産生促進用医薬組成物、又はエリスロポエチン産生促進用食品組成物。
【請求項５】
新規乳酸菌ラクトバチルス  ムコサエ  ＳＢＴ２９５８。
【請求項６】
新規乳酸菌ラクトバチルス  パラカゼイ  ＳＢＴ０２２８。
【請求項７】
新規乳酸菌ラクトバチルス  プランタラム  ＳＢＴ００９２。
【請求項８】
新規乳酸菌ラクトバチルス  ラムノーサス  ＳＢＴ２４９０。
【請求項９】
新規乳酸菌ラクトバチルス  バギナリス  ＳＢＴ０３３７。
【請求項１０】
新規乳酸菌リューコノストック  メセンテロイデス  サブスピーシーズ  クレモリス  ＳＢＴ１３９５。
【請求項１１】
新規乳酸菌リューコノストック  シュードメセンテロイデス  ＳＢＴ０８３５。
【請求項１２】
新規乳酸菌ペディオコッカス  ペントサセウス  ＳＢＴ３３１６。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、乳酸菌の菌体を有効成分とするエリスロポエチン産生促進用組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
エリスロポエチンは赤血球の産生を促進する造血因子の一つである。腎性貧血の治療薬として遺伝子組み換えエリスロポエチンが上市されており、２０１７年度の売り上げは８００億円を超える。
【０００３】
貧血気味の高齢者にエリスロポエチン製剤を投与することで、疲労感の改善ができることが報告されている（非特許文献１）。
【０００４】
一方で、エリスロポエチンは赤血球を増加させることで血中ヘモグロビン濃度が上昇するため、持久運動能力の向上に効果がある。そのため、エリスロポエチンの投与はスポーツ選手におけるドーピングのひとつとして問題視されている。
【０００５】
そこで、エリスロポエチンを投与することなく、体内のエリスロポエチンの産生を促進することができれば、ドーピングに該当しない持久力改善や疲労感軽減が達成できると考えられる。特許文献１では転写因子ＧＡＴＡの阻害によるエリスロポエチンの発現阻害解除によってエリスロポエチンの産生を誘導する化合物が示されている。
【０００６】
しかしながら、手軽に摂取できる食品で体内のエリスロポエチンの産生を誘導する事例はこれまでに報告されていない。
【０００７】
ところで、乳酸菌およびビフィズス菌は、古来より発酵食品の製造に使用される細菌であるが、近年の研究で様々な健康機能の増進に寄与することが明らかとなりつつある。乳酸菌が獣乳を分解することにより産生されるペプチドが、筋力増強および疲労感の軽減に効果があることが特許文献２で示されている。しかしながら、乳酸菌の菌体そのものがエリスロポエチンの産生促進に関与するか否かは、いずれの文献にも開示も示唆もされていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】特開２０１７−２２３５１８号
【特許文献２】特許５８８８７０１号
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｇｅｒｉａｔｒｉｃｓ  Ｓｏｃｉｅｔｙ（２００７）、５５、１５５７−６５
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
本発明は、新規なエリスロポエチン産生促進用組成物を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
上記課題を解決するために、本発明者らは鋭意検討した結果、エリスロポエチン産生促進作用を有する乳酸菌を見出し、本発明を完成させた。
すなわち、本発明は乳酸菌を有効成分とする新規のエリスロポエチン産生促進用組成物を提供するものである。また、本発明は産業上利用可能な新規の乳酸菌株を提供するものである。
したがって、本発明は以下の構成を有する。
＜１＞ラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属、リューコノストック（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ）属またはペディオコッカス（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ）属に属する菌の菌体を有効成分とするエリスロポエチン産生促進用組成物、
＜２＞Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属、Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ属またはＰｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ属に属する菌が、ラクトバチルス  ムコサエ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｍｕｃｏｓａｅ）、ラクトバチルス  パラカゼイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐａｒａｃａｓｅｉ）、ラクトバチルス  プランタラム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐｌａｎｔａｒｕｍ）、ラクトバチルス  ラムノーサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒｈａｍｎｏｓｕｓ）、ラクトバチルス  バギナリス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｖａｇｉｎａｌｉｓ）、リューコノストック  メセンテロイデス  サブスピーシーズ  クレモリス（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ  ｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｓｕｂｓｐ．  ｃｒｅｍｏｒｉｓ）、リューコノストック  シュードメセンテロイデス（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ  ｐｓｅｕｄｏｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓ）、ペディオコッカス  ペントサセウス（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｅｎｔｏｓａｃｅｕｓ）から選択されるひとつ以上であることを特徴とする＜１＞に記載のエリスロポエチン産生促進用組成物、
＜３＞Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属、Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ属またはＰｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ属に属する菌が、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｍｕｃｏｓａｅ  ＳＢＴ２９５８（ＮＩＴＥ  Ｐ−０２８０３）、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐａｒａｃａｓｅｉ  ＳＢＴ０２２８（ＮＩＴＥ  Ｐ−０２８０５）、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐｌａｎｔａｒｕｍ  ＳＢＴ００９２（ＮＩＴＥ  Ｐ−０２８０６）、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒｈａｍｎｏｓｕｓ  ＳＢＴ２４９０（ＮＩＴＥ  Ｐ−０２８０７）、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｖａｇｉｎａｌｉｓ  ＳＢＴ０３３７（ＮＩＴＥ  Ｐ−０２８０８）、Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ  ｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｓｕｂｓｐ．  ｃｒｅｍｏｒｉｓ  ＳＢＴ１３９５（ＮＩＴＥ  Ｐ−０２８０９）、Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ  ｐｓｅｕｄｏｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓ  ＳＢＴ０８３５（ＮＩＴＥ  Ｐ−０２８１０）、Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｅｎｔｏｓａｃｅｕｓ  ＳＢＴ３３１６（ＮＩＴＥ  Ｐ−０２８０４）から選択されるひとつ以上であることを特徴とする＜２＞に記載のエリスロポエチン産生促進用組成物、
＜４＞＜１＞〜＜３＞のいずれかに記載のエリスロポエチン産生促進用組成物を含む、エリスロポエチン産生促進用飼料組成物、エリスロポエチン産生促進用医薬組成物、又はエリスロポエチン産生促進用食品組成物、
＜５＞新規乳酸菌ラクトバチルス  ムコサエ  ＳＢＴ２９５８、
＜６＞新規乳酸菌ラクトバチルス  パラカゼイ  ＳＢＴ０２２８、
＜７＞新規乳酸菌ラクトバチルス  プランタラム  ＳＢＴ００９２、
＜８＞新規乳酸菌ラクトバチルス  ラムノーサス  ＳＢＴ２４９０、
＜９＞新規乳酸菌ラクトバチルス  バギナリス  ＳＢＴ０３３７、
＜１０＞新規乳酸菌リューコノストック  メセンテロイデス  サブスピーシーズ  クレモリス  ＳＢＴ１３９５、
＜１１＞新規乳酸菌リューコノストック  シュードメセンテロイデス  ＳＢＴ０８３５、並びに
＜１２＞新規乳酸菌ペディオコッカス  ペントサセウス  ＳＢＴ３３１６。
【発明の効果】
【００１２】
本発明によれば、ラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属、リューコノストック（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ）属およびペディオコッカス（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ）属に属する乳酸菌の菌体を有効成分とするエリスロポエチン産生促進用組成物を提供することができる。また、本発明によれば、産業上利用可能な新規の乳酸菌株を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】ヒト肝臓癌由来細胞株ＨＥＰ−３Ｂに、様々な乳酸菌加熱死菌体を添加して４８時間培養後の培養上清中エリスロポエチン量を示したグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
（乳酸菌）
本発明の乳酸菌は、ラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属、リューコノストック（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ）属およびペディオコッカス（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ）属に分類される乳酸菌であればどのようなものでも用いることができる。
具体的には、ラクトバチルス  ムコサエ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｍｕｃｏｓａｅ）、ラクトバチルス  パラカゼイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐａｒａｃａｓｅｉ）、ラクトバチルス  プランタラム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐｌａｎｔａｒｕｍ）、ラクトバチルス  ラムノーサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒｈａｍｎｏｓｕｓ）、ラクトバチルス  バギナリス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｖａｇｉｎａｌｉｓ）、リューコノストック  メセンテロイデス  サブスピーシーズ  クレモリス（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ  ｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｓｕｂｓｐ．  ｃｒｅｍｏｒｉｓ）、リューコノストック  シュードメセンテロイデス（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ  ｐｓｅｕｄｏｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓ）、ペディオコッカス  ペントサセウス（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｅｎｔｏｓａｃｅｕｓ）等を例示できるが、これらに限定されるものではない。
【００１５】
本発明の乳酸菌は、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｍｕｃｏｓａｅ  ＳＢＴ２９５８（ＮＩＴＥ  Ｐ−０２８０３）、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐａｒａｃａｓｅｉ  ＳＢＴ０２２８（ＮＩＴＥ  Ｐ−０２８０５）、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐｌａｎｔａｒｕｍ  ＳＢＴ００９２（ＮＩＴＥ  Ｐ−０２８０６）、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒｈａｍｎｏｓｕｓ  ＳＢＴ２４９０（ＮＩＴＥ  Ｐ−０２８０７）、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｖａｇｉｎａｌｉｓ  ＳＢＴ０３３７（ＮＩＴＥ  Ｐ−０２８０８）、Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ  ｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｓｕｂｓｐ．  ｃｒｅｍｏｒｉｓ  ＳＢＴ１３９５（ＮＩＴＥ  Ｐ−０２８０９）、Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ  ｐｓｅｕｄｏｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓ  ＳＢＴ０８３５（ＮＩＴＥ  Ｐ−０２８１０）、Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｅｎｔｏｓａｃｅｕｓ  ＳＢＴ３３１６（ＮＩＴＥ  Ｐ−０２８０４）であることが好ましい。
【００１６】
（乳酸菌の調製）
乳酸菌は、各菌の培養の常法に従って培養し、所望の量を調製すればよい。調製の一例を以下に示す。ＭＲＳ培地（Ｄｉｆｃｏ）を用いて培養し、得られた培養物を遠心分離により集菌することにより菌体を得る。得られた菌体をそのまま用いてもよいし、濃縮、乾燥、凍結乾燥処理に供した菌体を用いることもできる。菌体は死菌体にしたものを用いることもできる。死菌体は、例えば、加熱乾燥、酸処理、超音波破砕等により調製することができる。
【００１７】
（新規乳酸菌株）
本発明は、新規乳酸菌株に関するものである。これらの新規乳酸菌株とはＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｍｕｃｏｓａｅ  ＳＢＴ２９５８（ＮＩＴＥ  Ｐ−０２８０３）、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐａｒａｃａｓｅｉ  ＳＢＴ０２２８（ＮＩＴＥ  Ｐ−０２８０５）、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐｌａｎｔａｒｕｍ  ＳＢＴ００９２（ＮＩＴＥ  Ｐ−０２８０６）、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒｈａｍｎｏｓｕｓ  ＳＢＴ２４９０（ＮＩＴＥ  Ｐ−０２８０７）、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｖａｇｉｎａｌｉｓ  ＳＢＴ０３３７（ＮＩＴＥ  Ｐ−０２８０８）、Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ  ｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｓｕｂｓｐ．  ｃｒｅｍｏｒｉｓ  ＳＢＴ１３９５（ＮＩＴＥ  Ｐ−０２８０９）、Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ  ｐｓｅｕｄｏｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓ  ＳＢＴ０８３５（ＮＩＴＥ  Ｐ−０２８１０）、Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｅｎｔｏｓａｃｅｕｓ  ＳＢＴ３３１６（ＮＩＴＥ  Ｐ−０２８０４）である。以下、同乳酸菌株を「本発明の乳酸菌」、「本発明の乳酸菌株」、又は単にＳＢＴ２９５８、ＳＢＴ０２２８、ＳＢＴ００９２、ＳＢＴ２４９０、ＳＢＴ０３３７、ＳＢＴ１３９５、ＳＢＴ０８３５、ＳＢＴ３３１６株と記載することがある。
本発明の乳酸菌であるＳＢＴ２９５８、ＳＢＴ０３３７はヒト糞便を、ＳＢＴ０２２８はアルコール飲料を、ＳＢＴ００９２、ＳＢＴ２４９０、ＳＢＴ１３９５、ＳＢＴ０８３５は発酵乳を、ＳＢＴ３３１６は発酵食品を分離源として分離された。これらの乳酸菌株は、２０１８年１０月３１日に、独立行政法人製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センター（郵便番号２９２−０８１８ 千葉県木更津市かずさ鎌足２−５−８ １２２号室）に、ＳＢＴ２９５８はＮＩＴＥ  Ｐ−０２８０３、ＳＢＴ０２２８はＮＩＴＥ  Ｐ−０２８０５、ＳＢＴ００９２はＮＩＴＥ  Ｐ−０２８０６、ＳＢＴ２４９０はＮＩＴＥ  Ｐ−０２８０７、ＳＢＴ０３３７はＮＩＴＥ  Ｐ−０２８０８、ＳＢＴ１３９５はＮＩＴＥ  Ｐ−０２８０９、ＳＢＴ０８３５はＮＩＴＥ  Ｐ−０２８１０、ＳＢＴ３３１６はＮＩＴＥ  Ｐ−０２８０４の受託番号で寄託されている。
本発明の乳酸菌は、上記寄託乳酸菌株に制限されず、これらの寄託乳酸菌株と実質的に同等の乳酸菌株であってもよい。実質的に同等の乳酸菌株とは、ラクトバチルス  ムコサエ、ラクトバチルス  パラカゼイ、ラクトバチルス  プランタラム、ラクトバチルス  ラムノーサス、ラクトバチルス  バギナリス、リューコノストック  メセンテロイデス  サブスピーシーズ  クレモリス、リューコノストック  シュードメセンテロイデス、ペディオコッカス  ペントサセウスに属する乳酸菌株であって、寄託乳酸菌株と同程度の高いエリスロポエチン産生促進作用を有する乳酸菌株を言う。「寄託乳酸菌株と同程度の高いエリスロポエチン産生促進作用を有する乳酸菌株」とは、例えば、以下の手順１）〜４）により測定したエリスロポエチン量が、各々の寄託乳酸菌株におけるエリスロポエチン量と有意差がない乳酸菌株を意味する。
１）  １０％ＦＢＳ、１％ペニシリン−ストレプトマイシン（Ｓｉｇｍａ）を含むダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）（Ｓｉｇｍａ）に、ヒト肝臓癌由来細胞株ＨＥＰ−３Ｂを６×１０４  ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌで播種し２４時間培養する。
２）  培地を取り除き、各種乳酸菌加熱死菌体を５０μｇ／ｍｌで懸濁した培地１５０μｌを細胞に添加して、４８時間培養し、培養上清を回収し、１２，０００×ｇ、４℃で１０分間遠心して細胞の破片などを取り除く。
３）  前記２）で得られた細胞培養上清５０μｌ原液をＨｕｍａｎ  Ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｉｅｔｉｎ  ＤｕｏＳｅｔ（登録商標）  ＥＬＩＳＡ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）により測定する。具体的には、発色試薬としてＱｕａｎｔａＢｌｕＴＭ  Ｆｌｕｏｒｏｇｅｎｉｃ  Ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ  Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ  Ｋｉｔ（Ｔｈｅｒｍｏ）を使用して、前記２）で得られた細胞培養上清５０μｌ中のエリスロポエチンタンパク質を発色させる。
４）発色後の溶液をＣｏｒｎｉｎｇＴＭ  ９６−Ｗｅｌｌ  Ｓｏｌｉｄ  Ｗｈｉｔｅ  Ｐｏｌｙｓｔｙｒｅｎｅ  Ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅｓ（Ｃｏｒｎｉｎｇ）に移してプレートリーダー（Ｂｉｏｔｅｋ）にてＥｘ．３２５ｎｍ、Ｅｍ．４２０ｎｍで蛍光強度を測定する。
本発明の乳酸菌は、前記手順１）〜４）によりエリスロポエチン産生促進機能の評価を行った場合に、好ましくは、測定したエリスロポエチン量が、乳酸菌株を添加していないコントロールにおけるエリスロポエチン量よりも１．５倍以上多いものである。本発明の乳酸菌は、前記手順１）〜４）によりエリスロポエチン産生促進機能の評価を行った場合に、測定されたエリスロポエチン量が、乳酸菌株を添加していないコントロールにおけるエリスロポエチン量よりも、好ましくは５ｍIU／ｍL、より好ましくは１０ｍIU／ｍL、さらに好ましくは１５ｍIU／ｍL以上多いものである。
なお、上記の評価方法に限定されず、当業者に公知であるエリスロポエチン産生促進作用評価方法を採用して、エリスロポエチン産生促進作用を評価可能であることは言うまでもない。
また、実質的に同等の乳酸菌株は、さらに、その１６Ｓ ｒＲＮＡ遺伝子の塩基配列が、上記寄託乳酸菌株の１６Ｓ ｒＲＮＡ遺伝子の塩基配列と９８％以上、好ましくは９９％以上、より好ましくは１００％の相同性を有し、且つ、好ましくは上記寄託乳酸菌株と同一の菌学的性質を有する。さらに、本発明の乳酸菌は、本発明の効果が損なわれない限り、寄託乳酸菌株、又はそれと実質的に同等の乳酸菌株から、変異処理、遺伝子組換え、自然変異株の選択等によって育種された乳酸菌株であってもよい。
【００１８】
（利用方法）
上記のとおり、本発明の組成物は濃縮、乾燥、凍結乾燥処理に供した菌体、有効成分とすることができることから、製剤、飲食品、飼料の原料として広く用いることができる。死菌体は、例えば、加熱乾燥、酸処理、超音波破砕等により調製することができる。
本発明の組成物の投与対象は特に限定されず、ヒトに対して投与することができるが、投与対象はヒト以外の動物（例えば、イヌ、ネコ、ウマ又はウサギ等）であっても良い。投与対象がヒトである場合は、２０歳未満の未成年、成人、男女、又は６５歳以上の高齢者などに投与することができる。
本発明の組成物の摂取量は、投与対象者の症状、年齢、及び性別などを考慮してそれぞれ個別に決定されるが、通常成人の場合、一日当たりの菌体の摂取量として、０．５−５０００ｍｇであればよく、０．５−５００ｍｇが望ましく、０．５−５０ｍｇが最も望ましい。
【００１９】
本発明の組成物は、腎性貧血及び貧血の予防又は改善の目的で対象に投与することができる。本発明の組成物は、既に腎性貧血及び貧血を罹患している対象に投与してもよく、未だ罹患していない健康な対象に、腎性貧血及び貧血の予防のために投与することもできる。
本発明の組成物は、疲労感の改善、持久運動能力向上、及び／又は筋力増強のために対象に投与することができる。投与タイミングとしては、運動を行う前、運動をしている最中、及び／又は運動の後に投与することができる。運動としては、例えば、ウオーキング、ランニング、サッカー、バスケットボール、バレーボール、水泳、自転車競技及びテニス等が挙げられる。
【００２０】
（エリスロポエチン産生促進）
「エリスロポエチン産生促進」は、例えば、前記手順１）〜４）によりエリスロポエチン産生促進機能の評価を行った場合に、測定されたエリスロポエチン量が、コントロールにおけるエリスロポエチン量と比較して有意に多い場合を意味し、好ましくは、測定したエリスロポエチン量が乳酸菌株を添加していないコントロールにおけるエリスロポエチン量よりも１．５倍以上多いことを意味する。
【００２１】
（エリスロポエチン産生促進能の評価方法）
実施例に記載の方法で評価が可能である。すなわち、前記手順１）〜４）により評価が可能である。
【００２２】
以下、本発明の実施例をもとにさらに詳細に説明するが、本発明は係る実施例に限定して解釈されるものではない。なお、特に説明のない場合、％は重量％を示す。
【実施例】
【００２３】
（実施例品１）乳酸菌加熱死菌体
下記（１）の各供試菌を、ラクトバチルス属、リューコノストック属、ペディオコッカス属に属する乳酸菌はＭＲＳ培地（Ｄｉｆｃｏ）を用いて、ラクトコッカス属、ストレプトコッカス属に属する乳酸菌はＭ１７培地（Ｄｉｆｃｏ）、ビフィドバクテリウム属に属するビフィズス菌は、１％グルコース含有ＧＡＭブイヨン（日水）を用いてそれぞれ培養した。培養物を、生理食塩水にて２回、滅菌水にて１回洗浄し、洗浄菌体を得た。この洗浄菌体を凍結乾燥処理して菌体粉末を得た。菌体粉末を１０ｍｇ/ｍｌになるように滅菌ＰＢＳ（−）で懸濁し、８０℃にて３０分間加熱して加熱死菌体を得た。加熱死菌体は５０μｇ/ｍｌとなるように１０％ＦＢＳ（Ｇｉｂｃｏ）、１％ペニシリン−ストレプトマイシン（Ｓｉｇｍａ）を含むＤＭＥＭ（Ｓｉｇｍａ）で希釈した。
【００２４】
（１）供試菌
ラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属、リューコノストック（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ）属、ペディオコッカス（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ）属、ラクトコッカス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ）属、ストレプトコッカス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）属ビフィドバクテリウム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属、の下記１１株を供試菌とした。
Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｍｕｃｏｓａｅ  ＳＢＴ２９５８（ＮＩＴＥ  Ｐ−０２８０３）、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐａｒａｃａｓｅｉ  ＳＢＴ０２２８（ＮＩＴＥ  Ｐ−０２８０５）、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐｌａｎｔａｒｕｍ  ＳＢＴ００９２（ＮＩＴＥ  Ｐ−０２８０６）、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒｈａｍｎｏｓｕｓ  ＳＢＴ２４９０（ＮＩＴＥ  Ｐ−０２８０７）、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｖａｇｉｎａｌｉｓ  ＳＢＴ０３３７（ＮＩＴＥ  Ｐ−０２８０８）、Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ  ｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｓｕｂｓｐ．  ｃｒｅｍｏｒｉｓ  ＳＢＴ１３９５（ＮＩＴＥ  Ｐ−０２８０９）、Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ  ｐｓｅｕｄｏｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓ  ＳＢＴ０８３５（ＮＩＴＥ  Ｐ−０２８１０）、Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｅｎｔｏｓａｓｅｕｓ  ＳＢＴ３３１６（ＮＩＴＥ  Ｐ−０２８０４）、Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｌａｃｔｉｓ  ｓｕｂｓｐ．  ｌａｃｔｉｓＪＣＭ５８０５Ｔ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ  ＪＣＭ１７８３４Ｔ、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｌｏｎｇｕｍ  ｓｕｂｓｐ．  ｌｏｎｇｕｍＪＣＭ１２１７Ｔ。
【００２５】
[試験例１]
乳酸菌によるエリスロポエチン産生促進効果に関する試験
実施例品１を以下の試験に供した。
４８  ｗｅｌｌ  ｐｌａｔｅ（ＢＤ）に、ヒト肝臓癌由来細胞株ＨＥＰ−３Ｂを６×１０４  ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌで播種し、１０％ＦＢＳ（Ｇｉｂｃｏ）、１％ペニシリン−ストレプトマイシン（Ｓｉｇｍａ）を含むＤＭＥＭ（Ｓｉｇｍａ）で２４時間培養した。培地を取り除いた後、試験群には各種菌体を５０μｇ／ｍｌで懸濁した培地を、コントロール群には菌体を含まない培地を１５０μｌ添加して、４８時間培養した。ポジティブコントロールとして、塩化コバルト（ＣｏＣｌ２、Ｓｉｇｍａ）を終濃度５０μＭで同様に添加した。その後、培養上清を回収し、１２，０００×ｇ、４℃で１０分間遠心して細胞の破片などを取り除いた。
【００２６】
細胞培養上清中のエリスロポエチンタンパク質は、Ｈｕｍａｎ  Ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｉｅｔｉｎ  ＤｕｏＳｅｔ（登録商標）  ＥＬＩＳＡ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）により測定した。培養上清５０μｌ原液を測定サンプルとして使用した。発色試薬にＱｕａｎｔａＢｌｕＴＭ  Ｆｌｕｏｒｏｇｅｎｉｃ  Ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ  Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ  Ｋｉｔ（Ｔｈｅｒｍｏ）を使用した。発色後の溶液をＣｏｒｎｉｎｇＴＭ  ９６−Ｗｅｌｌ  Ｓｏｌｉｄ  Ｗｈｉｔｅ  Ｐｏｌｙｓｔｙｒｅｎｅ  Ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅｓ（Ｃｏｒｎｉｎｇ）に移してプレートリーダー（Ｂｉｏｔｅｋ）にてＥｘ．３２５ｎｍ、Ｅｍ．４２０ｎｍで蛍光強度を測定した。
【００２７】
（試験結果）
ＨＥＰ−３Ｂ細胞に、乳酸菌１１株のいずれかを添加して４８時間培養した時の、培養上清中へのエリスロポエチンタンパク質産生量を図１に示した。その結果、８株の乳酸菌（ＳＢＴ２９５８、ＳＢＴ０２２８、ＳＢＴ００９２、ＳＢＴ２４９０、ＳＢＴ０３３７、ＳＢＴ１３９５、ＳＢＴ０８３５、ＳＢＴ３３１６）がエリスロポエチン産生を亢進した。一方、３株の乳酸菌基準株（ＪＣＭ５８０５Ｔ、ＪＣＭ１７８３４Ｔ、ＪＣＭ１２１７Ｔ）はエリスロポエチン産生を亢進しなかった。
これらの結果から、ラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属、リューコノストック（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ）属およびペディオコッカス（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ）属に属する乳酸菌がエリスロポエチンの産生を亢進することが明らかとなった。
【産業上の利用可能性】
【００２８】
ラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属、リューコノストック（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ）属およびペディオコッカス（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ）属に属する菌の菌体を有効成分とする、エリスロポエチン産生促進用組成物を提供することができる。
【受託番号】
【００２９】
＜寄託生物材料への言及＞
（１）ラクトバチルス  ムコサエ  ＳＢＴ２９５８
イ  当該生物材料を寄託した寄託機関の名称及び住所
独立行政法人  製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センター
日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２−５−８ １２２号室（郵便番号２９２−０８１８）
ロ  イの寄託機関に生物材料を寄託した日付
２０１８年１０月３１日
ハ  イの寄託機関が寄託について付した受託番号
ＮＩＴＥ  Ｐ−０２８０３
（２）ラクトバチルス  パラカゼイ  ＳＢＴ０２２８
イ  当該生物材料を寄託した寄託機関の名称及び住所
独立行政法人  製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センター
日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２−５−８ １２２号室（郵便番号２９２−０８１８）
ロ  イの寄託機関に生物材料を寄託した日付
２０１８年１０月３１日
ハ  イの寄託機関が寄託について付した受託番号
ＮＩＴＥ  Ｐ−０２８０５
（３）ラクトバチルス  プランタラム  ＳＢＴ００９２
イ  当該生物材料を寄託した寄託機関の名称及び住所
独立行政法人  製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センター
日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２−５−８ １２２号室（郵便番号２９２−０８１８）
ロ  イの寄託機関に生物材料を寄託した日付
２０１８年１０月３１日
ハ  イの寄託機関が寄託について付した受託番号
ＮＩＴＥ  Ｐ−０２８０６
（４）ラクトバチルス  ラムノーサス  ＳＢＴ２４９０
イ  当該生物材料を寄託した寄託機関の名称及び住所
独立行政法人  製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センター
日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２−５−８ １２２号室（郵便番号２９２−０８１８）
ロ  イの寄託機関に生物材料を寄託した日付
２０１８年１０月３１日
ハ  イの寄託機関が寄託について付した受託番号
ＮＩＴＥ  Ｐ−０２８０７
（５）ラクトバチルス  バギナリス  ＳＢＴ０３３７
イ  当該生物材料を寄託した寄託機関の名称及び住所
独立行政法人  製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センター
日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２−５−８ １２２号室（郵便番号２９２−０８１８）
ロ  イの寄託機関に生物材料を寄託した日付
２０１８年１０月３１日
ハ  イの寄託機関が寄託について付した受託番号
ＮＩＴＥ  Ｐ−０２８０８
（６）リューコノストック  メセンテロイデス  サブスピーシーズ  クレモリス  ＳＢＴ１３９５
イ  当該生物材料を寄託した寄託機関の名称及び住所
独立行政法人  製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センター
日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２−５−８ １２２号室（郵便番号２９２−０８１８）
ロ  イの寄託機関に生物材料を寄託した日付
２０１８年１０月３１日
ハ  イの寄託機関が寄託について付した受託番号
ＮＩＴＥ  Ｐ−０２８０９
（７）リューコノストック  シュードメセンテロイデス  ＳＢＴ０８３５
イ  当該生物材料を寄託した寄託機関の名称及び住所
独立行政法人  製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センター
日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２−５−８ １２２号室（郵便番号２９２−０８１８）
ロ  イの寄託機関に生物材料を寄託した日付
２０１８年１０月３１日
ハ  イの寄託機関が寄託について付した受託番号
ＮＩＴＥ  Ｐ−０２８１０
（８）ペディオコッカス  ペントサセウス  ＳＢＴ３３１６
イ  当該生物材料を寄託した寄託機関の名称及び住所
独立行政法人  製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センター
日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２−５−８ １２２号室（郵便番号２９２−０８１８）
ロ  イの寄託機関に生物材料を寄託した日付
２０１８年１０月３１日
ハ  イの寄託機関が寄託について付した受託番号
ＮＩＴＥ  Ｐ−０２８０４
【図１】
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