(57)【要約】【課題】血液中の白血球除去に伴い生じる補体の活性化及び血小板の活性化の程度が極めて低く、体外循環カラムの充填剤として使用した際に生体に対する安全性が高い白血球除去材料を提供すること。【解決手段】本発明は、担体表面にアセチル基、エステル結合及び水酸基のいずれの官能基も有さず、血漿の体積と白血球除去材料の表面積との比率を０．０５４ｍＬ／ｃｍ２として、３７℃で１時間、上記血漿と上記白血球除去材料とを接触させて上記血漿中の補体を活性化させたとき、Ｃ３ａ相対濃度が３０００ｎｇ／ｍＬ以下であり、Ｃ５ａ相対濃度が６０ｎｇ／ｍＬ以下である、白血球除去材料を提供する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
担体表面にアセチル基、エステル結合及び水酸基のいずれの官能基も有さず、
血漿の体積と白血球除去材料の表面積との比率を０．０５４ｍＬ／ｃｍ２として、３７℃で１時間、前記血漿と前記白血球除去材料とを接触させて前記血漿中の補体を活性化させたとき、Ｃ３ａ相対濃度が３０００ｎｇ／ｍＬ以下であり、Ｃ５ａ相対濃度が６０ｎｇ／ｍＬ以下である、白血球除去材料。
【請求項２】
前記Ｃ３ａ相対濃度は、１４００ｎｇ／ｍＬ以下であり、
前記Ｃ５ａ相対濃度は、３０ｎｇ／ｍＬ以下である、
請求項１記載の白血球除去材料。
【請求項３】
血液の体積と白血球除去材料の表面積との比率を０．１１ｍＬ／ｃｍ２として、３７℃で１時間、前記血液と前記白血球除去材料とを接触させて前記血液中の血小板を活性化させたとき、β−トロンボグロブリン相対濃度が１０００ｎｇ／ｍＬ以下であり、血小板第４因子相対濃度が３５０ｎｇ／ｍＬ以下である、請求項１又は２記載の白血球除去材料。
【請求項４】
前記β−トロンボグロブリン相対濃度は、４５０ｎｇ／ｍＬ以下であり、
前記血小板第４因子相対濃度は、１６０ｎｇ／ｍＬ以下である、
請求項３記載の白血球除去材料。
【請求項５】
請求項１〜４のいずれか一項記載の白血球除去材料が充填され、
プライミングボリュームと前記白血球除去材料の表面積との比率が０．０００４〜０．０２ｍＬ／ｃｍ２である、白血球除去カラム。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、白血球除去材料に関する。
【背景技術】
【０００２】
全身性エリトマトーデス、関節リウマチ、多発性硬化症、潰瘍性大腸炎、クローン病等の炎症性疾患の病因として、炎症性サイトカイン等の液性因子の関与がよく知られており、炎症疾患に関与する液性因子を低分子医薬品や抗体等の生物製剤で不活化して炎症性疾患を治療する試みがなされている。しかしながら、これらの液性因子は、単独で炎症部位に作用しているのではなく、複数の液性因子が相乗的に作用して病態を発症及び進行させるものであるため、最近では、液性因子の供給源である活性化した白血球を生体から除去することで炎症性疾患を治療しようとする試みもなされている。
【０００３】
活性化した白血球を生体から除去する方法としては、炎症性疾患患者の血液を体外循環カラムで循環させ、白血球を選択的に吸着除去する方法が知られ、体外循環に使用可能なカラムとしては、白血球又は顆粒球を除去するカラム（特許文献１及び２）や白血球と毒素を同時に吸着するカラム（特許文献３）が開発されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開昭６０−１９３４６８号公報
【特許文献２】特開平５−１６８７０６号公報
【特許文献３】特開平１４−１１３０９７号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
しかしながら、体外循環カラムで白血球を生体から除去する場合には、白血球の除去に伴って補体や血小板が活性化される。活性化された補体はアナフィラトキシンとして働き、平滑筋の収縮や血管透過性の亢進、ヒスタミン遊離などの生理的作用を引き起こすことで末梢血管が拡張し、急激な血圧低下によってアナフィラキシーを生じさせる。また血小板の活性化は凝集、粘着や崩壊を引き起こし、静脈血栓、動脈血栓や血管内凝固症候群を引き起こす可能性があるため、補体及び血小板の活性化が起こりにくい白血球除去材料の開発が望まれていた。
【０００６】
そこで本発明は、血液中の白血球除去に伴い生じる補体の活性化及び血小板の活性化の程度が極めて低く、体外循環カラムの充填剤として使用した際に生体に対する安全性が高い白血球除去材料を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
上記課題を解決するために鋭意研究を重ねた結果、本発明者らは、生体安全性の高い白血球除去材料を見出し、本発明を完成するに至った。
【０００８】
すなわち、本発明は、以下の（１）〜（５）に記載した白血球除去材料及び白血球除去カラムを提供する。
（１）  担体表面にアセチル基、エステル結合及び水酸基のいずれの官能基も有さず、血漿の体積と白血球除去材料の表面積との比率を０．０５４ｍＬ／ｃｍ２として、３７℃で１時間、上記血漿と上記白血球除去材料とを接触させて上記血漿中の補体を活性化させたとき、Ｃ３ａ相対濃度が３０００ｎｇ／ｍＬ以下であり、Ｃ５ａ相対濃度が６０ｎｇ／ｍＬ以下である、白血球除去材料。
（２）  上記Ｃ３ａ相対濃度は、１４００ｎｇ／ｍＬ以下であり、上記Ｃ５ａ相対濃度は、３０ｎｇ／ｍＬ以下である、（１）記載の白血球除去材料。
（３）  血液の体積と白血球除去材料の表面積との比率を０．１１ｍＬ／ｃｍ２として、３７℃で１時間、上記血液と上記白血球除去材料とを接触させて上記血液中の血小板を活性化させたとき、β−トロンボグロブリン相対濃度が１０００ｎｇ／ｍＬ以下であり、血小板第４因子相対濃度が３５０ｎｇ／ｍＬ以下である、（１）又は（２）記載の白血球除去材料。
（４）  上記β−トロンボグロブリン相対濃度は、４５０ｎｇ／ｍＬ以下であり、上記血小板第４因子相対濃度は、１６０ｎｇ／ｍＬ以下である、（３）記載の白血球除去材料。
（５）  （１）〜（４）のいずれかに記載の白血球除去材料が充填され、プライミングボリュームと上記白血球除去材料の表面積との比率が０．０００４〜０．０２ｍＬ／ｃｍ２である、白血球除去カラム。
【発明の効果】
【０００９】
本発明の白血球除去材料によれば、血液中の白血球除去に伴い生じる補体の活性化及び血小板の活性化の程度を抑制することが可能となり、体外循環カラムの充填剤として使用した際に、生体安全性の高い白血球除去を実現できる。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
本発明の白血球除去材料は、担体表面にアセチル基、エステル結合及び水酸基のいずれの官能基も有さず、血漿の体積と白血球除去材料の表面積との比率を０．０５４ｍＬ／ｃｍ２として、３７℃で１時間、上記血漿と上記白血球除去材料とを接触させて上記血漿中の補体を活性化させたとき、Ｃ３ａ相対濃度が３０００ｎｇ／ｍＬ以下であり、Ｃ５ａ相対濃度が６０ｎｇ／ｍＬ以下であることを特徴とする。
【００１１】
「白血球除去材料」とは、血液から白血球を吸着除去可能な材料をいう。
【００１２】
吸着とは、白血球が白血球除去材料に付着し、容易に剥離しない状態をいう。
【００１３】
上記白血球除去材料の形状としては、例えば、繊維又は粒子が挙げられる。
【００１４】
上記繊維の形状としては、例えば、織布、不織布、綿布又は中空糸が挙げられる。
【００１５】
上記繊維の材質としては、例えば、ポリスチレン、ポリエーテル、ポリアミド又はポリエチレン、ポリプロピレン、ポリプロピレン−ポリエチレン共重合体若しくはポリブチレン−ポリプロピレン共重合体などのポリオレフィンあるいは上記高分子化合物をブレンド、アロイ化したものが挙げられるが、担体表面の修飾容易性の観点からはポリスチレンが好ましく、耐熱性及び不織布の形状保持の観点からはポリプロピレン又はポリプロピレン−ポリエチレン共重合体が好ましい。さらに、繊維形状が不織布の場合には、その形状のためにポリプロピレンなどの骨格材繊維を入れることも好ましい。
【００１６】
上記繊維の繊維径は、白血球の貪食能発揮の観点から０．５〜２０μｍが好ましく、吸着性能安定化の観点から４〜２０μｍがより好ましく、顆粒球の選択的除去の観点から４〜１０μｍがさらに好ましい。
【００１７】
上記繊維の繊維径が１０μｍ未満である場合、白血球除去材料の強度を確保する観点からより太径の繊維を混合してもよいが、係る太径の繊維の繊維径は、１０〜５０μｍが好ましい。
【００１８】
繊維径とは、ランダムに小片サンプル１０個を採取して、走査型電子顕微鏡を用いて１０００〜３０００倍の写真を撮影し、各写真あたり１０箇所（計１００箇所）の繊維の直径を測定した値の平均値をいう。
【００１９】
本発明の白血球除去材料を構成する担体の表面は、白血球に対して特異的結合親和性を有する認識分子で修飾されていることが好ましい。
【００２０】
認識分子としては、例えば、アセチル基、エステル結合及び水酸基のいずれの官能基も有さない、Ｅ−セレクチン、抗体、ペプチド、タンパク質、核酸、糖鎖、糖タンパク質又は低分子化合物などが挙げられる。
【００２１】
担体表面の修飾は、担体表面へ認識分子を直接又は活性基を介して剥離しない程度に結合することにより達成され、その結合状態としては、共有結合、イオン結合、ファンデルワールス結合、水素結合若しくは疎水結合又はそれらの合力による結合が挙げられるが、認識分子の剥離抑制の観点から共有結合又は疎水結合が好ましく、共有結合がより好ましい。
【００２２】
上記の結合を形成する反応としては、例えば、置換反応、付加反応、縮合反応、重合反応又は開環反応が挙げられる。
【００２３】
「Ｃ３ａ相対濃度」とは、捕体の活性化の程度を示すパラメータであって、バッチ評価法Ａにより得られたサンプル液Ａ中のＣ３ａ濃度から、対照液Ａ中のＣ３ａ濃度を差し引いた値をいう。
【００２４】
「Ｃ３ａ相対濃度」は、血漿の体積と白血球除去材料の表面積との比率を０．０５４ｍＬ／ｃｍ２として、３７℃で１時間、上記血漿と上記白血球除去材料とを接触させて上記血漿中の補体を活性化させた場合に、３０００ｎｇ／ｍＬ以下であることが好ましく、この場合には、生体に対する安全性が大幅に改善されたということができ、体外循環カラムとして使用した場合に生じ得るアレルギー反応を顕著に抑制し、炎症性疾患の治療に安全に利用できる。また、「Ｃ３ａ相対濃度」は、１４００ｎｇ／ｍＬ以下であることがさらに好ましく、この場合には、補体の活性化がほとんど起こっていないとみなすことができる。
【００２５】
「Ｃ５ａ相対濃度」とは、Ｃ３ａ相対濃度と同様に捕体の活性化の程度を示すパラメータであって、バッチ評価法Ａにより得られたサンプルＡ液中のＣ５ａ濃度から、対照液Ａ中のＣ５ａ濃度を差し引いた値をいう。
【００２６】
「Ｃ５ａ相対濃度」は、血漿の体積と白血球除去材料の表面積との比率を０．０５４ｍＬ／ｃｍ２として、３７℃で１時間、上記血漿と上記白血球除去材料とを接触させて上記血漿中の補体を活性化させた場合に、６０ｎｇ／ｍＬ以下であることが好ましく、この場合には、生体に対する安全性が大幅に改善されたということができ、体外循環カラムとして使用した場合に生じ得るアレルギー反応を顕著に抑制し、炎症性疾患の治療に安全に利用できる。また、「Ｃ５ａ相対濃度」は、３０ｎｇ／ｍＬ以下であることがさらに好ましく、この場合には、補体の活性化がほとんど起こっていないとみなすことができる。
【００２７】
サンプル液Ａ及び対照液Ａ中のＣ３ａ濃度及びＣ５ａ濃度は、市販のキット（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社製；Ｈｕｍａｎ  Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  Ｃ３ａ  ｄｅｓ  Ａｒｇ  Ａｓｓａｙ  Ｋｉｔ，  １２５Ｉ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ）を用いたＲＩＡ２抗体法により測定される。
【００２８】
バッチ評価法Ａとは、５ｍＬのポリプロピレン製容器に、血漿の体積と白血球除去材料の表面積との比率が０．０５４ｍＬ／ｃｍ２となるようにヒト血漿と白血球除去材料とを入れて、３７℃（ポリプロピレン製容器の外温）で１時間、ローテーターを用いてポリプロピレン製容器を回転（１５ｒｐｍ）させて転倒混和し、ヒト血漿と白血球除去材料とを比較的穏やかに接触させる方法である。
【００２９】
サンプル液Ａとは、バッチ評価法Ａにより得た、白血球除去材料との接触後のヒト血漿をいう。
【００３０】
なお、対照液Ａとは、５ｍＬのポリプロピレン製容器にヒト血漿のみを入れて３７℃（ポリプロピレン製容器の外温）で１時間、ローテーターを用いてポリプロピレン製容器を回転（１５ｒｐｍ）させて転倒混和した後のヒト血漿をいう。
【００３１】
さらに本発明の白血球除去材料は、血液の体積と白血球除去材料の表面積との比率を０．１１ｍＬ／ｃｍ２として、３７℃で１時間、上記血液と上記白血球除去材料とを接触させて上記血液中の血小板を活性化させたとき、β−トロンボグロブリン（以下、β−ＴＧ）相対濃度が１０００ｎｇ／ｍＬ以下であり、血小板第４因子（以下、ＰＦ４）相対濃度が３５０ｎｇ／ｍＬ以下であることを特徴とする。
【００３２】
「β−トロンボグロブリン相対濃度」とは、血小板の活性化の程度を示すパラメータであって、バッチ評価法Ｂにより得られたサンプル液Ｂ中のβ−ＴＧ濃度から、対照液Ｂ中のβ−ＴＧ濃度を差し引いた値をいう。
【００３３】
「β−トロンボグロブリン相対濃度」は、血液の体積と白血球除去材料の表面積との比率を０．１１ｍＬ／ｃｍ２として、３７℃で１時間、前記血液と前記白血球除去材料とを接触させて上記血液中の血小板を活性化させた場合に、１０００ｎｇ／ｍＬ以下であることが好ましく、この場合には、生体に対する安全性が大幅に改善されたということができ、体外循環カラムとして使用した場合に生じ得るアレルギー反応を顕著に抑制し、炎症性疾患の治療に安全に利用できる。また、「β−トロンボグロブリン相対濃度」は、４５０ｎｇ／ｍＬ以下であることがさらに好ましく、この場合には、血小板の活性化がほとんど起こっていないとみなすことができる。
【００３４】
「血小板第４因子相対濃度」とは、β−ＴＧ相対濃度と同様に血小板の活性化の程度を示すパラメータであって、バッチ評価法Ｂにより得られたサンプルＢ液中のＰＦ４濃度から、対照液Ｂ中のＰＦ４濃度を差し引いた値をいう。
【００３５】
「血小板第４因子相対濃度」は、血液の体積と白血球除去材料の表面積との比率を０．１１ｍＬ／ｃｍ２として、３７℃で１時間、前記血液と前記白血球除去材料とを接触させて上記血液中の血小板を活性化させた場合に、３５０ｎｇ／ｍＬ以下であることが好ましく、この場合には、生体に対する安全性が大幅に改善されたということができ、体外循環カラムとして使用した場合に生じ得るアレルギー反応を顕著に抑制し、炎症性疾患の治療に安全に利用できる。また、「血小板第４因子相対濃度」は、１６０ｎｇ／ｍＬ以下であることがさらに好ましく、この場合には、血小板の活性化がほとんど起こっていないとみなすことができる。
【００３６】
サンプル液Ｂ及び対照液Ｂ中のβ−ＴＧ濃度及びＰＦ４濃度は、通常のＥＩＡ法により測定される。
【００３７】
バッチ評価法Ｂとは、５ｍＬのポリプロピレン製容器に、血液の体積と白血球除去材料の表面積との比率が０．１１ｍＬ／ｃｍ２となるようにヒト全血と白血球除去材料とを入れて、３７℃（ポリプロピレン製容器の外温）で１時間、ローテーターを用いてポリプロピレン製容器を回転（１５ｒｐｍ）させて転倒混和し、ヒト全血と白血球除去材料とを比較的穏やかに接触させる方法である。
【００３８】
サンプル液Ｂとは、バッチ評価法Ｂにより得た、白血球除去材料との接触後のヒト全血をいう。
【００３９】
なお、対照液Ｂとは、５ｍＬのポリプロピレン製容器にヒト全血のみを入れて３７℃（ポリプロピレン製容器の外温）で１時間、ローテーターを用いてポリプロピレン製容器を回転（１５ｒｐｍ）させて転倒混和した後のヒト全血をいう。
【００４０】
上記白血球除去材料が充填された本発明の白血球除去カラムの容器形状としては、血液の入口と出口を有する容器であればよいが、例えば、円柱状、三角柱状、四角柱状、六角柱状、八角柱状などの角柱状容器が挙げられ、白血球除去材料を積層状に充填できる容器、白血球除去材料を円筒状に巻いたものを充填できる容器又は血液が円筒の外周より入り内側へと流れて容器外に出る容器が好ましい。
【００４１】
また、本発明の白血球除去カラムは、上記の白血球除去材料が充填され、プライミングボリュームと上記白血球除去材料の表面積との比率が０．０００４〜０．０２ｍＬ／ｃｍ２であることを特徴としている。
【００４２】
「プライミングボリューム」とは、上記白血球除去材料が充填されるカラムの容器内部に充填できる液体の最大容積のことをいう。
【００４３】
「白血球除去材料の表面積」とは、白血球除去材料となる担体の表面の面積であって、その表面を平面上へ広げてできる展開図の面積のことをいい、例えば、担体が不織布形状の繊維の場合には水銀圧入法により測定できる。また、担体がビーズの場合には球の表面積を算出することで、担体が中空糸の場合には円筒形の内表面と外表面の面積の合計を算出することで、それぞれ測定できる。
【００４４】
上記容器のプライミングボリュームと白血球除去材料の表面積との比率は、０．０００４ｍＬ／ｃｍ２以下だと過剰の白血球除去材料が補体活性及び血小板活性を生じさせる恐れがあり、０．０２ｍＬ／ｃｍ２以上では満足な白血球除去能が得られないため、０．０００４〜０．０２ｍＬ／ｃｍ２であることが好ましく、０．００２〜０．０２ｍＬ／ｃｍ２であることがより好ましく、０．００５〜０．０１ｍＬ／ｃｍ２であることがさらに好ましい。
【実施例】
【００４５】
以下、本発明の白血球除去カラムについて、実験例により具体的に説明する。
【００４６】
（ＰＰ製不織布の作製）
３６島の海島複合繊維であって、島が更に芯鞘複合によりなるものを次の成分を用いて、紡糸速度９００ｍ／ｍｉｎ、延伸倍率２．５倍の製糸条件で得た。
島の芯成分；ポリプロピレン
島の鞘成分；ポリスチレン９０ｗｔ％、ポリプロピレン１０ｗｔ％
海成分；エチレンテレフタレート単位を主たる繰り返し単位とし、共重合成分として５−ナトリウムスルホイソフタル酸３ｗｔ％含む共重合ポリエステル
複合比率（重量比率）；芯：鞘：海＝４０：３５：２５
【００４７】
この繊維８５ｗｔ％と直径２０μｍのポリプロピレン繊維１５ｗｔ％からなる不織布を作製した後、この不織布２枚の間にシート状のポリプロピレン製ネット（厚み０．５ｍｍ、単糸径０．３ｍｍ、開口部２ｍｍ角）を挟み、ニードルパンチすることによって３層構造の不織布（ＰＰ製不織布）を得た。
【００４８】
（ＰＳｔ＋ＰＰ製不織布の作製）
ＰＰ製不織布を９５℃、３ｗｔ％の水酸化ナトリウム水溶液で処理し、海成分を溶解することによって、芯鞘繊維の直径が５μｍで、嵩密度が０．０２ｇ／ｃｍ３の不織布（ＰＳｔ＋ＰＰ製不織布、以下、不織布Ａ）を作製した。
【００４９】
（ＴＥＰＡ導入ＰＳｔ＋ＰＰ製不織布の作製）
不織布Ａに、ニトロベンゼン４６ｗｔ％、硫酸４６ｗｔ％、パラホルムアルデヒド１ｗｔ％、Ｎ−メチロール−α−クロルアセトアミド（以下、ＮＭＣＡ）７ｗｔ％を１０℃以下で混合、撹拌、溶解しＮＭＣＡ化反応液を調製した。このＮＭＣＡ化反応液を１５℃にし、不織布Ａ１ｇに対し、約４０ｍＬの固液比でＮＭＣＡ化反応液を加え、水浴中で反応液を１５〜２０℃に保ったまま２時間反応させた。その後、反応液から不織布を取り出し、ＮＭＣＡ反応液と同量のニトロベンゼンに浸漬し洗浄した。続いて不織布を取り出し、メタノールに浸漬し洗浄を行い、α−クロルアセトアミドメチル化ポリスチレン不織布（中間体１）を得た。また、テトラエチレンペンタミン（以下、ＴＥＰＡ）６．３ｇ、ｎ−ブチルアミン７．２ｇをジメチルホルムアミド（以下、ＤＭＦ）５００ｍＬに溶解した液に、１０ｇの中間体１を浸し、反応は３０℃で３時間行い、ＤＭＦで洗浄した後で水洗し、真空乾燥することにより、ＴＥＰＡ導入ＰＳｔ＋ＰＰ製不織布（以下、不織布Ｂ）を得た。
【００５０】
（ＤＭＯＡ導入ＰＳｔ＋ＰＰ不織布の作製）
不織布Ａ１ｇに対して、５０ｍＬの反応溶媒（ＤＭＳＯ７０ｗｔ％、メタノール３０ｗｔ％）に３６０ｍＭとなるようジメチルオクチルアミン（以下、ＤＭＯＡ）を加えた。この溶液にヨウ化カリウムを６０ｍＭとなるよう加えた。ここに中間体１を投入し、温水浴で５０℃に加熱しながら４時間反応させた。４時間後、反応液を抜き出し、ＤＭＯＡ導入ＰＳｔ＋ＰＰ（以下、不織布Ｃ）不織布を得た。
【００５１】
（ＤＭＨＡ導入ＰＳｔ＋ＰＰ不織布の作製）
不織布Ａ１ｇに対して、５０ｍＬの反応溶媒（ＤＭＳＯ７０ｗｔ％、メタノール３０ｗｔ％）に３６０ｍＭとなるよう、ジメチルヘキシルアミン（以下、ＤＭＨＡ）を加えた。この溶液にヨウ化カリウムを６０ｍＭとなるよう加えた。ここに中間体１を投入し、温水浴で５０℃に加熱しながら４時間反応させた。４時間後、反応液を抜き出し、ＤＭＨＡ導入ＰＳｔ＋ＰＰ不織布（以下、不織布Ｄ）を得た。
【００５２】
不織布Ａ〜Ｄの表面積は、水銀圧入法にて測定した。
【００５３】
（補体活性化実験）
（実施例１〜４）
不織布Ａ〜Ｄの白血球除去材を各々直径０．８ｃｍの円形に打ち抜き、各々５ｍＬのポリプロピレン製容器に入れてヒト血漿２．２ｍＬを添加した。その後、３７℃に設定したインキュベーター内に設置したローテーターで１時間旋回攪拌（１５ｒｐｍ）してサンプル液Ａを得た。陰性対照試験として、ヒト血漿のみを同様に旋回攪拌して対照液Ａを得た。サンプル液Ａ及び対照液ＡのＣ３ａ、Ｃ５ａの濃度はＲＩＡ２抗体法で測定した。測定結果を表１に示す。
【００５４】
【表１】
2010167174.tif 000002
【００５５】
（実施例５）
上下に血液の出入り口のある円筒状カラム（内径１ｃｍ）に、直径１ｃｍの円板状に切り抜いた不織布Ａを１０枚積層して充填し（表面積６３７．５ｃｍ２）、プライミングボリュームが０．２５５ｍＬとなるようカラムを作製した（プライミングボリューム／表面積＝０．０００４ｍＬ／ｃｍ２）。このカラムに、３７℃（外温）で保温したヒト血漿を、流量０．２５５ｍＬ／ｍｉｎで６０分間通過させた。陰性対照試験として、空のカラムに同条件でヒト血漿を通過させた。回収したＣ３ａ、Ｃ５ａの濃度はＲＩＡ２抗体法で測定した。
【００５６】
（実施例６）
上下に血液の出入り口のある円筒状カラム（内径１ｃｍ）に、直径１ｃｍの円板状に切り抜いた不織布Ａを１枚充填し（表面積６３．７ｃｍ２）、プライミングボリュームが１．２８ｍＬとなるようカラムを作製した（プライミングボリューム／表面積＝０．０２ｍＬ／ｃｍ２）。このカラムに、３７℃（外温）で保温したヒト血漿を、流量０．２５５ｍＬ／ｍｉｎで６０分間通過させた。陰性対照試験として、空のカラムに同条件でヒト血漿を通過させた。回収したＣ３ａ、Ｃ５ａの濃度はＲＩＡ２抗体法で測定した。
【００５７】
（血小板活性化実験）
（実施例１〜４）
不織布Ａ〜Ｄの白血球除去材を各々直径０．８ｃｍの円形に打ち抜き、各々５ｍＬのポリプロピレン製容器に入れてヒト全血４．４ｍＬを添加した。その後、３７℃に設定したインキュベーター内に設置したローテーターで１時間旋回攪拌（１５ｒｐｍ）してサンプル液Ｂを得た。陰性対照試験として、ヒト全血のみを同様に旋回攪拌して対照液Ｂを得た。サンプル液Ｂ及び対照液Ｂのβ−ＴＧ、ＰＦ４の濃度はＥＩＡ法で測定した。測定結果を表２に示す。
【００５８】
【表２】
2010167174.tif 000003
【００５９】
（実施例５）
上下に血液の出入り口のある円筒状カラム（内径１ｃｍ）に、直径１ｃｍの円板状に切り抜いた不織布Ａを１０枚積層して充填し（表面積６３７．５ｃｍ２）、プライミングボリュームが０．２５５ｍＬとなるようカラムを作製した（プライミングボリューム／表面積＝０．０００４ｍＬ／ｃｍ２）。このカラムに、３７℃（外温）で保温したヒト血液を、流量０．２５５ｍＬ／ｍｉｎで６０分間通過させた。陰性対照試験として、空のカラムに同条件でヒト血漿を通過させた。回収したβ−ＴＧ、ＰＦ４の濃度はＥＩＡ法で測定した。
【００６０】
（実施例６）
上下に血液の出入り口のある円筒状カラム（内径１ｃｍ）に、直径１ｃｍの円板状に切り抜いた不織布Ａを１枚充填し（表面積６３．７ｃｍ２）、プライミングボリュームが１．２８ｍＬとなるようカラムを作製した（プライミングボリューム／表面積＝０．０２ｍＬ／ｃｍ２）。このカラムに、３７℃（外温）で保温したヒト血液を、流量０．２５５ｍＬ／ｍｉｎで６０分間通過させた。陰性対照試験として、空のカラムに同条件でヒト血漿を通過させた。回収したβ−ＴＧ、ＰＦ４の濃度はＥＩＡ法で測定した。
【００６１】
（比較例１〜３）
（補体活性化実験）
ジアセチルセルロース製ビーズ（直径２ｍｍ）１００粒を、５ｍＬのポリプロピレン製容器に入れてヒト血漿２．２ｍＬを添加した（比較例１）。ＰＥＴ製不織布（繊維径１８μｍ、目付１７０ｇ／ｍ２）の白血球除去材を、直径１．３８ｃｍの円形に打ち抜き５ｍＬのポリプロピレン製容器に入れてヒト血漿２．２ｍＬを添加した（比較例２）。セルロース製中空糸（旭ホロファイバー人工腎臓ＡＭ、内径１８０μｍ、膜厚１５μｍ）を、３３３ｃｍ分を約１ｃｍ片に裁断したものを５ｍＬのポリプロピレン製容器に入れてヒト血漿２．２ｍＬを添加した（比較例３）。その後、３７℃に設定したインキュベーター内に設置したローテーターで１時間旋回攪拌（１５ｒｐｍ）してサンプル液Ａを得た。陰性対照試験として、ヒト血漿のみを同様に旋回攪拌して対照液Ａを得た。サンプル液Ａ及び対照液ＡのＣ３ａ、Ｃ５ａの濃度はＲＩＡ２抗体法で測定した。測定結果を表３に示す。
【００６２】
【表３】
2010167174.tif 000004
【００６３】
（血小板活性化実験）
（比較例１〜３）
ジアセチルセルロース製ビーズ（直径２ｍｍ）１００粒を、５ｍＬのポリプロピレン製容器に入れてヒト全血４．４ｍＬを添加した（比較例１）。ＰＥＴ製不織布（繊維径１８μｍ、目付１７０ｇ／ｍ２）の白血球除去材は、直径１．３８ｃｍの円形に打ち抜き５ｍＬのポリプロピレン製容器に入れてヒト全血４．４ｍＬを添加した（比較例２）。セルロース製中空糸（旭ホロファイバー人工腎臓ＡＭ、内径１８０μｍ、膜厚１５μｍ）を、３３３ｃｍ分を約１ｃｍ片に裁断したものを５ｍＬのポリプロピレン製容器に入れてヒト全血４．４ｍＬを添加した（比較例３）。その後、１時間、３７℃に設定したインキュベーター内に設置したローテーターで１時間旋回攪拌（１５ｒｐｍ）してサンプル液Ｂを得た。陰性対照試験として、ヒト全血のみを同様に旋回攪拌して対照液Ｂを得た。サンプル液Ｂ及び対照液Ｂのβ−ＴＧ、ＰＦ４の濃度はＥＩＡ法で測定した。測定結果を表３に示す。
【００６４】
なお、ジアセチルセルロース製ビーズの表面積は、直径２ｍｍの球の表面積（４π×０．１３＝１２．６ｃｍ２）とした。ＰＥＴ製不織布の表面積は、ＰＥＴの比重（１．３８ｇ／ｃｍ３）と使用した重量（２５４ｍｇ）から体積を算出し（０．０１８４ｃｍ３）、直径１８μｍで均一な繊維であるとして算出した。また、セルロース製中空糸の表面積は内径１８０μｍ、外径２１０μｍの円筒形の内表面（１８．８ｃｍ２）と外表面（２２．０ｃｍ２）の面積の合計を表面積とした。
【００６５】
上記実施例および比較例より、担体表面に水酸基、アセチル基およびエステル結合のいずれの官能基も有さない白血球除去材料は、Ｃ３ａ、Ｃ５ａ、β−ＴＧ、ＰＦ４の活性化を引き起こさないことは明らかである。
【００６６】
なお、実施例及び比較例で用いた各白血球除去材料がその担体表面に有する官能基を、表４に示す。
【表４】
2010167174.tif 000005
【産業上の利用可能性】
【００６７】
本発明は、医療分野の白血球除去カラムとして用いることができる。