(57)【要約】【課題】ヘリコバクター・ピロリ菌のテストストリップ及び検出方法を提供することを課題とする。【解決手段】本発明は、ヘリコバクター・ピロリ菌の検出に用いられるテストストリップ、及び、検出方法を提供する。テストストリップには主に第１片体、第２片体、第１ろ過層、及び、第２ろ過層が含まれる。第１片体は大まかにその中央部位に位置する凸部を備える。第２片体は第１片体の凸部に対応する凹部を備える。第１ろ過層は検体の受けに用い、円盤状の構造を有し、その大きさは第１片体の凸部と該第２片体の凹部の相互に嵌合する密閉空間内に収容され、アジ化ナトリウム（ＮａＮ3）、リン酸二水素ナトリウム（ＮａＨ2ＰＯ4）、尿素（Ｕｒｅａ）等の成分を具備する。第２ろ過層は、中空の環状構造で、密閉空間内の第１ろ過層の下方に収容され、第１ろ過層の検体内からのウレアーゼを受けることに用い、アジ化ナトリウム、フェノールレッド（ｐｈｅｎｏｌ  ｒｅｄ）と尿素等の成分を具備する。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヘリコバクター・ピロリ菌を検出することに用いられるテストストリップであって、
大まかにその中央部位に位置する凸部を備える第１片体と、
前記第１片体の凸部と相互に嵌合して１つの密閉空間を形成して凹部を備える第２片体と、
検体を受けることに用いられ、円盤状の構造を備え、前記密閉空間内に収容された第１ろ過層と、を含み
前記テストストリップは、中空の環状構造で、前記密閉空間内の前記第１ろ過層の下方に収容され、前記第１ろ過層からの検体を受けることに用いられる第２ろ過層を更に含み、且つ、前記第１ろ過層がアジ化ナトリウム、リン酸二水素ナトリウム、尿素等の成分を具備し、前記第２ろ過層がアジ化ナトリウム、フェノールレッド、尿素等の成分を具備することを特徴とする、
ヘリコバクター・ピロリ菌を検出することに用いられるテストストリップ。
【請求項２】
ヘリコバクター・ピロリ菌を検出することに用いられる検出方法であって、
第１片体、第２片体、第１ろ過層、及び、第２ろ過層を含み、前記第１片体には大まかにその中央部位に位置する凸部が設けられ、前記第２片体には前記第１片体の凸部と相互に嵌合して１つの密閉空間を形成するする凹部が設けられ、前記第１ろ過層はアジ化ナトリウム、リン酸二水素ナトリウム、尿素等の成分を具備し、円盤状の構造で、前記密閉空間内に収容され、前記第２ろ過層はアジ化ナトリウム、フェノールレッド、尿素等の成分を具備し、中空の環状構造で、前記密閉空間内の前記第１ろ過層の下方に収容されるテストストリップを提供するステップと、
検体を提供するステップと、
前記第１片体を開き、前記検体を前記テストストリップの前記第１ろ過層に置くステップと、
前記テストストリップを閉合し、前記凸部を通じて前記第１ろ過層と前記第２ろ過層を押圧して好ましい押圧、及び、閉合効果を達成するステップ、及び、
前記テストストリップの前記第１ろ過層と前記第２ろ過層の色差を比較して、前記検体中にヘリコバクター・ピロリ菌が存在するかどうかを決定するステップと、を含むことを特徴とする、
ヘリコバクター・ピロリ菌を検出することに用いられる検出方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、テストストリップ及び検出方法の提供に関し、特に、ヘリコバクター・ピロリ菌の検出に用いるものに関する。
【背景技術】
【０００２】
１９８２年、２名のオーストラリア医師であるバリー・マーシャル（Ｂａｒｒｙ  Ｊ．  Ｍａｒｓｈａｌｌ）とロビン・ウォレン（Ｒｏｂｉｎ  Ｗａｒｒｅｎ）により、胃潰瘍を引き起こす主な病因が過去周知されてきたストレス或いは生活リズムの乱れ等の要因でなく、ヘリコバクター・ピロリ菌（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ、ＨＰ）であることが発見された。これら病原菌は体内に入った後、胃と十二指腸の保護粘膜の中に寄生し、粘膜層の保護を弱らせて、胃潰瘍を引き起こしていた。
【０００３】
人体内にヘリコバクター・ピロリ菌が存在するどうかを検出する場合、従来の検出方法の一つとして尿素呼気試験（Ｕｒｅａ Ｂｒｅａｔｈ Ｔｅｓｔ、ＵＢＴ）がある。被験者は、炭素同位体の尿素検査薬を内服してから３０分間後に呼気試験を行い、このうち、上記炭素同位体は１３Ｃ或いは１４Ｃとすることができる。ヘリコバクター・ピロリ菌に感染された者からは、大量の炭素同位体を含んだ二酸化炭素が吐き出される。この試験原理は、ヘリコバクター・ピロリ菌にウレアーゼ（Ｕｒｅａｓｅ）が大量に含有し、尿素（Ｕｒｅａ）がアンモニウムイオン（ＮＨ4+）と二酸化炭素（ＣＯ2）に分解され、また二酸化炭素が呼吸器系から排出される。しかし、尿素呼気試験に使用される測定機器は非常に高価で、且つ診断結果を確立する場合、通常更に一歩進んで検体を取り出して、細菌の培養を行い、細菌培養の結果を利用することで偽陽性の状況を排除できるが、細菌培養の作業は非常に時間を費やし、且つ失敗し易い。
【０００４】
尿素をヘリコバクター・ピロリ菌の検出に使用する場合、二酸化炭素の発生量によってヘリコバクター・ピロリ菌の存在の有無を判定できるほかに、アンモニウムイオン発生の有無の検出を通じても判定できる。アンモニウムイオンが溶液の環境内において弱アルカリ性を呈するため、最初の手法は、検体を尿素及びフェノールレッドを含んだ検出溶液内に入れ、フェノールレッドの呈色反応を利用して検体中にヘリコバクター・ピロリ菌が存在するかどうかを判断する。しかしこの種検出溶液の安定性は比較的弱く、室温のもとでの保存が非常に難しいものとなっている。もう一つの検出方法は、上記反応材料をゲル中に入れ、更に一歩進ハーフウェット（ｈａｌｆ−ｗｅｔ）式試薬として改良する。しかしながら、検体の反応時間は約数時間から１日必要となり、且つ変色程度が高くない場合、変色の有無の判断が難しく、偽陰性の状況が起き、そのため使用上やはり簡便性のある方法となっていない。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
前述の問題を解決するため、本発明ではテストストリップを提供し、主に第１片体、第２片体、第１ろ過層、及び第２ろ過層が含まれる。第１片体は大まかにその中央部位に位置する凸部を備える。第２片体は第１片体の凸部に対応する凹部を備える。第１ろ過層は検体の受けに用い、円盤状の構造を有し、その大きさは該第１片体の凸部と該第２片体の凹部の相互に嵌合する密閉空間内に収容され、アジ化ナトリウム（ＮａＮ3）、リン酸二水素ナトリウム（ＮａＨ2ＰＯ4）、尿素等の成分を具備する。第２ろ過層は、中空の環状構造で、密閉空間内の第１ろ過層の下方に収容され、第１ろ過層の検体内からのウレアーゼを受けることに用いる。第２ろ過層はアジ化ナトリウム、フェノールレッド（ｐｈｅｎｏｌ  ｒｅｄ）、尿素等の成分を具備する。
【０００６】
これにより、本発明の主な目的は、ヘリコバクター・ピロリ菌を検出するためのドライ式テストストリップを提供することである。
【０００７】
本発明の別の目的は、簡単に色差を通じて検体中にヘリコバクター・ピロリ菌の存在の有無を見て取れることができるテストストリップを提供することである。
【０００８】
本発明の別の目的は、数１０分間から１時間以内で検体中にヘリコバクター・ピロリ菌の存在の有無を判断できるテストストリップを提供することである。
【０００９】
本発明では、更に一歩進んで検出方法を提供し、これは以下のステップを含む。
（a）第１片体、第２片体、第１ろ過層及び第２ろ過層を含み、第１片体には大まかにその中央部位に位置する凸部が設けられ、また第２片体には第１片体の凸部に対応する凹部が設けられ、第１ろ過層は円盤状の構造で、アジ化ナトリウム、リン酸二水素ナトリウム、尿素等の成分を具備し、第１片体の凸部と第２片体の凹部の相互に嵌合する密閉空間内に収容され、又、第２ろ過層は中空の環状構造で、アジ化ナトリウム、フェノールレッド、尿素等の成分を具備し、密閉空間内の第１ろ過層の下方に収容され、ヘリコバクター・ピロリ菌の検出に用いられるテストストリップを提供する。
（b）検体を提供する。
（c）第１片体を開き、上記の検体をテストストリップの第１ろ過層に置くと、検体内のウレアーゼが第１ろ過層から第２ろ過層へ浸透していく。
（d）テストストリップを閉合し、凸部を通じて第１ろ過層と第２ろ過層を押圧して好ましい押圧及び閉合効果を達成する。
（e）最終的に、テストストリップの第１ろ過層と第２ろ過層の色差を比較して、検体中にヘリコバクター・ピロリ菌が存在するかどうかを決定する。
【００１０】
本発明の別の目的は、ドライ式テストストリップを利用してヘリコバクター・ピロリ菌の検出を行う検出方法を提供することである。
【００１１】
本発明の別の目的は、簡単に色差を通じて検体中にヘリコバクター・ピロリ菌の存在の有無を見て取ることができる検出方法を提供することである。
【００１２】
本発明の別の目的は、数１０分間から１時間以内に検体中にヘリコバクター・ピロリ菌の存在の有無を判断できる検出方法を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
上記の目的を達成するため、本発明は、ヘリコバクター・ピロリ菌の検出に用いられるテストストリップ、及び、検出方法を提供する。テストストリップには主に第１片体、第２片体、第１ろ過層、及び、第２ろ過層が含まれる。第１片体は大まかにその中央部位に位置する凸部を備える。第２片体は第１片体の凸部に対応する凹部を備える。第１ろ過層は検体の受けに用い、円盤状の構造を有し、その大きさは第１片体の凸部と該第２片体の凹部の相互に嵌合する密閉空間内に収容され、アジ化ナトリウム（ＮａＮ3）、リン酸二水素ナトリウム（ＮａＨ2ＰＯ4）、尿素等の成分を具備する。第２ろ過層は、中空の環状構造で、密閉空間内の第１ろ過層の下方に収容され、第１ろ過層の検体内からのウレアーゼを受けることに用い、アジ化ナトリウム、フェノールレッド（ｐｈｅｎｏｌ  ｒｅｄ）と尿素等の成分を具備する。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】本発明の第１の実施例のテストストリップの分解見取図である。
【図２】本発明の第１の実施例のテストストリップの閉合見取図である。
【図３】本発明の第２の実施例の検出方法のフローチャートである。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
以下、本発明のヘリコバクター・ピロリ菌のテストストリップ及び検出方法の各実施形態について、図１〜図３を参照して説明する。
【実施例】
【００１６】
まず、本発明の第１の実施例のテストストリップ分解図について、図１を参照して説明する。テストストリップ１００は、ヘリコバクター・ピロリ菌を検出するために用いるもので、これには第１片体１１０、第２片体１２０、第１ろ過層１３０及び第２ろ過層１４０が含まれる。第１片体１１０には大まかに中央部位に位置する凸部１１２を備え、第２片体は第１片体の凸部１１２に対応する凹部１２２を備える。
【００１７】
次に、本発明の第１の実施形態におけるテストストリップ閉合図について、図２を参照して説明する。第１ろ過層１３０は検体１を受けることに用いるもので、円盤状の構造を備え、第１片体の凸部１１２と第２片体の凹部１２２の相互に嵌合する密閉空間１６０内に収容され、且つアジ化ナトリウム、リン酸二水素ナトリウム、尿素等の成分を具備する。アジ化ナトリウムは抗菌に用いられ、テストストリップ１００を比較的長時間保存させることができる。リン酸二水素ナトリウムは検出反応時の緩衝物質（ｂｕｆｆｅｒ）として用いられる。尿素はウレアーゼと反応し、検体１中にヘリコバクター・ピロリ菌の主成分が存在するかどうかを検出するものである。
【００１８】
第２ろ過層１４０は、中空の環状構造で、密閉空間１６０内の第１ろ過層１３０の下方に収容され、第１ろ過層１３０の検体１内からのウレアーゼを受けることに用いられる。第２ろ過層１４０はアジ化ナトリウム、フェノールレッド、尿素等の成分を具備する。アジ化ナトリウムの働きは上述に述べたとおりで、抗菌に用いられ、テストストリップ１００を比較的長時間保存させることができる。フェノールレッドはｐＨ値の酸アルカリ指示薬である。尿素の働きは上記にあるものと同様で、ウレアーゼと反応し、検体１中にヘリコバクター・ピロリ菌の主成分が存在するかどうかを検出することに用いられる。検体１中にウレアーゼが含まれている場合、ウレアーゼが第１ろ過層１３０及び第２ろ過層１４０内の尿素を分解して、アンモニウムイオンを生成させ、フェノールレッドを帯びた第２ろ過層１４０を変色させることで、第１ろ過層１３０と色差が生じる。正常の場合、ヘリコバクター・ピロリ菌に感染していない検体中にウレアーゼがないため、第２ろ過層１４０と第１ろ過層１３０に生じた色差によって検体１中にヘリコバクター・ピロリ菌が含有することを推察できる。
【００１９】
好ましい実施形態において、図１に示すように、検出結果の正確性を確保するため、第１ろ過層１３０と第２ろ過層１４０の間において、検体１中のヘモグロビン或いはその他干渉物質が第１ろ過層１３０から第２ろ過層１４０へ浸透することを阻止する薄膜１５０を増設できる。
【００２０】
上記各成分のテストストリップ１００における割合は、下記のものが好ましい。
【００２１】
アジ化ナトリウムの体積パーセンテージは、約０．００１％から０．００３％とする。
【００２２】
リン酸二水素ナトリウムの濃度は、約６．５ミリモル（ｍＭ）から１９．５ミリモル（ｍＭ）とする。
【００２３】
フェノールレッドの体積パーセンテージは約０．０２５％から０．０７５％であり、及び、
【００２４】
尿素の体積パーセンテージは約０．５％から１．５％とする。
【００２５】
上記テストストリップ１００はドライ式試薬紙で検体１中にヘリコバクター・ピロリ菌が存在するかどうかを検査し、数１０分間から1時間以内で結果が判明できる。従来の試薬片と比べても更にスピーディーに検出結果を得ることができる。その他、２枚式のろ過層設計において、ヘリコバクター・ピロリ菌が存在する状態で、第２ろ過層１４０にフェノールレッドが含まれることによってピンク色に変り、第１ろ過層１３０の色は変わらないので、利用者は第１ろ過層１３０と第２ろ過層１４０の色差を通じて検体１中にヘリコバクター・ピロリ菌が存在するかどうかを簡単に判断でき、使用上の簡便性を大幅に向上することができる。そのため本発明で提供するテストストリップ１００で検出した場合、迅速で正確な検出結果を得ることができる。
【００２６】
本発明は、更に第２の好ましい実施例を提供し、図３を参照して説明する。図３に示すように、ヘリコバクター・ピロリ菌を検出に用いる検出方法であり、その特徴のステップを以下に示す。
【００２７】
ステップ２１：まず、テストストリップ１００を提供し、テストストリップ１００の各部材符号は図１を参照にしてください。テストストリップ１００には第１片体１１０、第２片体１２０、第１ろ過層１３０及び第２ろ過層１４０が含まれる。第１片体が大まかに中央部位に位置する凸部１１２を備える。第２片体が第１片体の凸部１１２に対応する凹部１２２を備える。
【００２８】
ステップ２２：検体１を提供し、また該検体１は消化器検体であり、該検体１の取り出しは内視鏡或いはその他外科手術の方法を通じて採取できる。
【００２９】
ステップ２３：第１片体１１０を開き、検体１をテストストリップ１００の第１ろ過層１３０に置く。第１ろ過層１３０がアジ化ナトリウム、リン酸二水素ナトリウム、尿素等の成分を具備し、円盤状の構造で、第１片体１１０の凸部１１２と第２片体１２０の凹部１２２の相互に嵌合する密閉空間１６０内（図２に表示）に収容される。検体１中のウレアーゼは第１ろ過層１３０から第２ろ過層１４０へ浸透拡散できる。第２ろ過層１４０はアジ化ナトリウム、フェノールレッド、尿素等の成分を具備し、中空の環状構造で、密閉空間１６０内の第１ろ過層１３０の下方に収容される。
【００３０】
ステップ２４：テストストリップ１００を閉合し、凸部１１２により第１ろ過層１３０と第２ろ過層１４０を押圧することで好ましい押圧及び閉合効果を達成する。
【００３１】
ステップ２５：第１ろ過層１３０と第２ろ過層１４０の色差により、検体１内にウレアーゼが含まれる場合、ウレアーゼが第１ろ過層１３０及び第２ろ過層１４０内の尿素を分解して、アンモニウムイオンを生成し、フェノールレッドの第２ろ過層１４０を変色させる。また第１ろ過層１３０にフェノールレッド指示薬を含有していないため、依然として本来の色を保持し、第２ろ過層１４０が変色の有無の対照とすることができる。こうすることで、テストストリップ１００の第１ろ過層１３０と第２ろ過層１４０の色差によって検体１中にヘリコバクター・ピロリ菌が存在するかどうかを決定できる。
【００３２】
好ましい実施形態において、図１に示すように、検出結果の正確性を確保するため、第１ろ過層１３０と第２ろ過層１４０の間において、検体１中のヘモグロビン或いはその他干渉物質が第１ろ過層１３０から第２ろ過層１４０へ浸透することを阻止する薄膜１５０を増設できる。
【００３３】
テストストリップ１００内の上記各成分の好ましい割合は、第１の実施例内で述べることとおるため、ここでは繰り返して記述しない。
【００３４】
上記検出方法は、２層のろ過層の色差を通じて検体中にヘリコバクター・ピロリ菌が存在するかどうかを判断するため、判断上の精度と簡便性を大幅に向上させることができる。
【００３５】
以上、本発明につき各実施例及びその図面を通じて詳細に説明したが、当該技術分野における熟練者は、本発明の各実施例がこの例示で決して本発明を限定するものではないことを理解し、即ち本発明の実質的精神を逸脱しない範囲内において種々の改良変更をなし得ることは、本発明に含むものであるのが勿論である。このため、本発明は、添付されている特許請求の範囲で定義する。
【符号の説明】
【００３６】
１          検体
１００      テストストリップ
１１０      第１片体
１２０      第２片体
１３０      第１ろ過層
１４０      第２ろ過層
１１２      凸部
１２２      凹部
１５０      薄膜
１６０      密閉空間
２１、２２、２３、２４、２５  ステップ
【図１】
2010131011.tif 000003
【図２】
2010131011.tif 000004
【図３】
2010131011.tif 000005