(57)【要約】【課題】高感度且つ高精度で免疫凝集を検出又は測定できる新たな手段を提供すること。【解決手段】以下の工程１及び２を含む、免疫凝集の検出又は測定方法。  （工程１）標的物質を含む可能性がある検体と、希釈用液と、下記式（１）で表される基を側鎖中に含む繰り返し単位（Ａ）を有する重合体とを接触させ、検体希釈液を得る検体希釈液調製工程  （工程２）前記検体希釈液と、標的物質に対する抗原又は抗体が固定された粒子とを混合する混合工程2020186912.tif 000033〔式（１）中、  Ｒ1は、炭素数２〜８のアルキレン基を示し、  Ｒ2は、水素原子又は炭素数１〜４０の有機基を示し、  ｎは、平均値で２以上を示す。〕【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の工程１及び２を含む、免疫凝集の検出又は測定方法。
（工程１）標的物質を含む可能性がある検体と、希釈用液と、下記式（１）で表される基を側鎖中に含む繰り返し単位（Ａ）を有する重合体とを接触させ、検体希釈液を得る検体希釈液調製工程
（工程２）前記検体希釈液と、標的物質に対する抗原又は抗体が固定された粒子とを混合する混合工程
【化１】
2020186912.tif 000023
〔式（１）中、
Ｒ1は、炭素数２〜８のアルキレン基を示し、
Ｒ2は、水素原子又は炭素数１〜４０の有機基を示し、
ｎは、平均値で２以上を示す。〕
【請求項２】
繰り返し単位（Ａ）が、下記式（２）で表される繰り返し単位である、請求項１に記載の方法。
【化２】
2020186912.tif 000024
〔式（２）中、
Ｒ3は、水素原子又はメチル基を示し、
Ｒ4は、−Ｏ−、＊−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−、＊−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＲ5−、＊−ＮＲ5−（Ｃ＝Ｏ）−（Ｒ5は、水素原子又は炭素数１〜１０の有機基を示し、＊は、式（２）中のＲ3が結合している炭素原子と結合する位置を示す。）又はフェニレン基を示し、
Ｒ1、Ｒ2及びｎは前記と同義である。〕
【請求項３】
Ｒ1が炭素数２〜４のアルキレン基であり、ｎが平均値で２〜１００である、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
前記重合体が、下記式（３）で表される繰り返し単位（Ｂ）を更に有する、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【化３】
2020186912.tif 000025
〔式（３）中、
Ｒ6は、水素原子又はメチル基を示し、
Ｚは、下記式（３ａ）又は（３ｂ）で表される基を示す。〕
【化４】
2020186912.tif 000026
〔式（３ａ）中、
Ｒ7は、水素原子又は有機基を示し、
Ｒ8は、有機基を示す。〕
【化５】
2020186912.tif 000027
〔式（３ｂ）中、
環Ｑは、置換又は非置換の３〜１６員環の複素環を示す。〕
【請求項５】
Ｒ7が、水素原子、又は置換若しくは非置換の炭素数１〜８のアルキル基であり、Ｒ8が、置換又は非置換の炭素数１〜８のアルキル基である、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
Ｒ7が、水素原子、又はヒドロキシ基、ホルミル基及びアルカノイル基から選ばれる置換基を有していてもよい炭素数１〜８のアルキル基であり、Ｒ8が、ヒドロキシ基、ホルミル基及びアルカノイル基から選ばれる置換基を有していてもよい炭素数１〜８のアルキル基である、請求項４又は５に記載の方法。
【請求項７】
式（３ｂ）で表される基が、下記式（３ｃ）で表される基である、請求項４〜６のいずれか１項に記載の方法。
【化６】
2020186912.tif 000028
〔式（３ｃ）中、
Ｒ9及びＲ10は、それぞれ独立して、置換若しくは非置換のメチレン基、又は置換若しくは非置換の炭素数２〜７のアルキレン基を示し、
Ｙは、単結合、酸素原子又は硫黄原子を示す。〕
【請求項８】
繰り返し単位（Ａ）及び（Ｂ）の合計含有量（（Ａ）＋（Ｂ））が、重合体中の全繰り返し単位に対して４０〜９７．５質量％である、請求項４〜７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
前記重合体が、下記式（５）で表される疎水性繰り返し単位（Ｃ）を更に有する、請求項１〜８のいずれか１項に記載の方法。
【化７】
2020186912.tif 000029
〔式（５）中、
Ｒ15は、水素原子又はメチル基を示し、
Ｒ16は、−Ｏ−、＊＊−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−（＊＊は、式（５）中のＲ15が結合している炭素原子と結合する位置を示す。）又はフェニレン基を示し、
Ｒ17は、Ｒ16が−Ｏ−又は＊＊−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−の場合、有機基を示し、Ｒ16がフェニレン基の場合、水素原子又は有機基を示す。〕
【請求項１０】
前記重合体の重量平均分子量が３０００〜２００万である、請求項１〜９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法に使用される、前記重合体を含む添加剤。
【請求項１２】
免疫凝集の検出又は測定方法に用いるための増感剤であって、
下記式（１）で表される基を側鎖中に含む繰り返し単位（Ａ）を有する重合体を含む、増感剤。
【化８】
2020186912.tif 000030
〔式（１）中、
Ｒ1は、炭素数２〜８のアルキレン基を示し、
Ｒ2は、水素原子又は炭素数１〜４０の有機基を示し、
ｎは、平均値で２以上を示す。〕
【請求項１３】
免疫凝集の検出又は測定の感度を増感させる方法であって、
下記式（１）で表される基を側鎖中に含む繰り返し単位（Ａ）を有する重合体を用いる、増感方法。
【化９】
2020186912.tif 000031
〔式（１）中、
Ｒ1は、炭素数２〜８のアルキレン基を示し、
Ｒ2は、水素原子又は炭素数１〜４０の有機基を示し、
ｎは、平均値で２以上を示す。〕
【請求項１４】
標的物質を含む可能性がある検体の希釈又は緩衝に使用される、免疫凝集の検出又は測定のための液剤であって、下記式（１）で表される基を側鎖中に含む繰り返し単位（Ａ）を有する重合体を含む、液剤。
【化１０】
2020186912.tif 000032
〔式（１）中、
Ｒ1は、炭素数２〜８のアルキレン基を示し、
Ｒ2は、水素原子又は炭素数１〜４０の有機基を示し、
ｎは、平均値で２以上を示す。〕
【請求項１５】
免疫凝集の検出又は測定に用いるためのキットであって、請求項１４に記載の液剤を備える、キット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、免疫凝集の検出又は測定方法、並びに当該方法に使用される添加剤、増感剤、増感方法、液剤及びキットに関する。
【背景技術】
【０００２】
標的物質である抗原（抗体）と、これに対する抗体（抗原）との間で生じる凝集反応を利用した免疫ラテックス凝集の検出又は測定法が、臨床検査、生化学研究等の領域において広く活用されているが、この方法は、他の方法（酵素増幅法、化学発光測定法等）と比較して検出や測定の感度が不足すると指摘されることがある。
【０００３】
そのため、増感剤を添加して免疫凝集の検出や測定を行うことが提案されている。このような増感剤として、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）、多価アルコール、カルボキシメチルセルロース、サッカロース、デキストラン、ポリアミノ酸、アルギン酸、アミノエタンスルホン酸誘導体、アミノプロパンスルン酸誘導体等の水溶性高分子が用いられている（特許文献１〜４）。これらの中では、ＰＥＧ、ＰＶＰが最も一般的に増感剤として使用されているものの、これらを用いた場合は、ブランク値が高くなり検出や測定の精度が低下するという問題があった。また、ＰＥＧは、増感効果も不十分であり、更にハンドリング性にも問題があった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開２００６−２６６９７０号公報
【特許文献２】特開平８−２７８３０８号公報
【特許文献３】特開２００３−２９４７５３号公報
【特許文献４】特開２００６−１０５９１０号公報
【特許文献５】特開２００９−０３１０６１号公報
【特許文献６】特開２００９−２２２６９２号公報
【特許文献７】特開２００１−０５０９６３号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
また、Ｎ，Ｎ−ジメチルアクリルアミドとメトキシエチルアクリレートとの共重合体や、Ｎ，Ｎ−ジエチルアクリルアミドと、Ｎ，Ｎ−ジメチルアクリルアミドと、メチルメタクリレートとの共重合体、ダイアセトンアクリルアミドと、Ｎ，Ｎ−ジメチルアクリルアミドと、メトキシエチルアクリレートとの共重合体等が増感剤として提案されているが（特許文献５、６）、これら重合体も、増感効果は不十分であった。
また、上記感度を改善させるために、ポリアクリロイルモルホリン等を添加した緩衝液で検体を希釈し、この検体希釈液を用いて免疫凝集を測定することが提案されているが（特許文献７）、斯様な重合体を用いても増感効果を満足させるには至っていなかった。
【０００６】
したがって、本発明が解決しようとする課題は、高感度且つ高精度で免疫凝集を検出又は測定できる新たな手段を提供することにある。
また、本発明が解決しようとする課題は、優れた増感効果を有する、免疫凝集の検出又は測定方法に用いるための増感剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
上記課題は、下記＜１＞〜＜１５＞の手段により解決された。
＜１＞  以下の工程１及び２を含む、免疫凝集の検出又は測定方法（以下、本発明の免疫凝集の検出又は測定方法とも称する）。
（工程１）標的物質を含む可能性がある検体と、希釈用液と、下記式（１）で表される基を側鎖中に含む繰り返し単位（Ａ）を有する重合体（以下、特定重合体とも称する）とを接触させ、検体希釈液を得る検体希釈液調製工程
（工程２）前記検体希釈液と、標的物質に対する抗原又は抗体が固定された粒子とを混合する混合工程
【０００８】
【化１】
2020186912.tif 000002
【０００９】
〔式（１）中、
Ｒ1は、炭素数２〜８のアルキレン基を示し、
Ｒ2は、水素原子又は炭素数１〜４０の有機基を示し、
ｎは、平均値で２以上を示す。〕
【００１０】
＜２＞  繰り返し単位（Ａ）が、下記式（２）で表される繰り返し単位である、＜１＞に記載の方法。
【００１１】
【化２】
2020186912.tif 000003
【００１２】
〔式（２）中、
Ｒ3は、水素原子又はメチル基を示し、
Ｒ4は、−Ｏ−、＊−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−、＊−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＲ5−、＊−ＮＲ5−（Ｃ＝Ｏ）−（Ｒ5は、水素原子又は炭素数１〜１０の有機基を示し、＊は、式（２）中のＲ3が結合している炭素原子と結合する位置を示す。）又はフェニレン基を示し、
Ｒ1、Ｒ2及びｎは前記と同義である。〕
【００１３】
＜３＞  Ｒ1が炭素数２〜４のアルキレン基であり、ｎが平均値で２〜１００である、＜１＞又は＜２＞に記載の方法。
＜４＞  前記重合体が、下記式（３）で表される繰り返し単位（Ｂ）を更に有する、＜１＞〜＜３＞のいずれかに記載の方法。
【００１４】
【化３】
2020186912.tif 000004
【００１５】
〔式（３）中、
Ｒ6は、水素原子又はメチル基を示し、
Ｚは、下記式（３ａ）又は（３ｂ）で表される基を示す。〕
【００１６】
【化４】
2020186912.tif 000005
【００１７】
〔式（３ａ）中、
Ｒ7は、水素原子又は有機基を示し、
Ｒ8は、有機基を示す。〕
【００１８】
【化５】
2020186912.tif 000006
【００１９】
〔式（３ｂ）中、
環Ｑは、置換又は非置換の３〜１６員環の複素環を示す。〕
【００２０】
＜５＞  Ｒ7が、水素原子、又は置換若しくは非置換の炭素数１〜８のアルキル基であり、Ｒ8が、置換又は非置換の炭素数１〜８のアルキル基である、＜４＞に記載の方法。
＜６＞  Ｒ7が、水素原子、又はヒドロキシ基、ホルミル基及びアルカノイル基から選ばれる置換基を有していてもよい炭素数１〜８のアルキル基であり、Ｒ8が、ヒドロキシ基、ホルミル基及びアルカノイル基から選ばれる置換基を有していてもよい炭素数１〜８のアルキル基である、＜４＞又は＜５＞に記載の方法。
＜７＞  式（３ｂ）で表される基が、下記式（３ｃ）で表される基である、＜４＞〜＜６＞のいずれかに記載の方法。
【００２１】
【化６】
2020186912.tif 000007
【００２２】
〔式（３ｃ）中、
Ｒ9及びＲ10は、それぞれ独立して、置換若しくは非置換のメチレン基、又は置換若しくは非置換の炭素数２〜７のアルキレン基を示し、
Ｙは、単結合、酸素原子又は硫黄原子を示す。〕
【００２３】
＜８＞  繰り返し単位（Ａ）及び（Ｂ）の合計含有量（（Ａ）＋（Ｂ））が、重合体中の全繰り返し単位に対して４０〜９７．５質量％である、＜４＞〜＜７＞のいずれかに記載の方法。
【００２４】
＜９＞  前記重合体が、下記式（５）で表される疎水性繰り返し単位（Ｃ）を更に有する、＜１＞〜＜８＞のいずれかに記載の方法。
【００２５】
【化７】
2020186912.tif 000008
【００２６】
〔式（５）中、
Ｒ15は、水素原子又はメチル基を示し、
Ｒ16は、−Ｏ−、＊＊−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−（＊＊は、式（５）中のＲ15が結合している炭素原子と結合する位置を示す。）又はフェニレン基を示し、
Ｒ17は、Ｒ16が−Ｏ−又は＊＊−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−の場合、有機基を示し、Ｒ16がフェニレン基の場合、水素原子又は有機基を示す。〕
【００２７】
＜１０＞  前記重合体の重量平均分子量が３０００〜２００万である、＜１＞〜＜９＞のいずれかに記載の方法。
【００２８】
＜１１＞  ＜１＞〜＜１０＞のいずれかに記載の方法に使用される、前記重合体を含む添加剤（以下、本発明の添加剤とも称する）。
＜１２＞  免疫凝集の検出又は測定方法に用いるための増感剤であって、特定重合体を含む、増感剤（以下、本発明の増感剤とも称する）。
＜１３＞  免疫凝集の検出又は測定の感度を増感させる方法であって、特定重合体を用いる、増感方法（以下、本発明の増感方法とも称する）。
＜１４＞  標的物質を含む可能性がある検体の希釈又は緩衝に使用される、免疫凝集の検出又は測定のための液剤であって、特定重合体を含む、液剤（以下、本発明の液剤とも称する）。
＜１５＞  免疫凝集の検出又は測定に用いるためのキットであって、＜１４＞に記載の液剤を備える、キット（以下、本発明のキットとも称する）。
【発明の効果】
【００２９】
本発明の免疫凝集の検出又は測定方法によれば、高感度且つ高精度で免疫凝集を検出又は測定できる。また、本発明の添加剤、液剤及びキットを用いることにより、高感度且つ高精度で免疫凝集を検出又は測定できる。
本発明の増感剤は、優れた増感効果を有する。また、本発明の増感剤を用いても、精度低下が発生しにくく、高精度で免疫凝集を検出又は測定できる。
【図面の簡単な説明】
【００３０】
【図１】実施例２、５、１０、比較例２、１１の各Ｒ１バッファーを用いた場合の各標的物質濃度における吸光度差の変化量（ΔＡｂｓ）の補正値を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００３１】
＜免疫凝集の検出又は測定方法＞
本発明の免疫凝集の検出又は測定方法は、以下の工程１及び２を含むものである。
（工程１）標的物質を含む可能性がある検体と、希釈用液と、特定重合体とを接触させ、検体希釈液を得る検体希釈液調製工程
（工程２）前記検体希釈液と、標的物質に対する抗原又は抗体が固定された粒子とを混合する混合工程
まず、特定重合体について詳細に説明する。
【００３２】
（繰り返し単位（Ａ））
繰り返し単位（Ａ）は、下記式（１）で表される基を側鎖中に含む繰り返し単位であるが、下記式（２）で表される繰り返し単位が好ましい。なお、特定重合体は、繰り返し単位（Ａ）に該当するもののうち１種を有していても２種以上を有していてもよい。
【００３３】
また、繰り返し単位（Ａ）としては、増感効果や検出・測定精度等の観点から、親水性繰り返し単位が好ましい。ここで、本明細書において、親水性とは、水との親和力が強い性質を持つことを意味する。具体的には１種の繰り返し単位のみからなるホモポリマー（実施例の測定法による数平均分子量が１万程度のもの）が、常温（２５℃）において純水１００ｇに対して溶解する量が１ｇ以上の場合、その繰り返し単位は親水性である。
【００３４】
【化８】
2020186912.tif 000009
【００３５】
〔式（１）中、
Ｒ1は、炭素数２〜８のアルキレン基を示し、
Ｒ2は、水素原子又は炭素数１〜４０の有機基を示し、
ｎは、平均値で２以上を示す。〕
【００３６】
【化９】
2020186912.tif 000010
【００３７】
〔式（２）中、
Ｒ3は、水素原子又はメチル基を示し、
Ｒ4は、−Ｏ−、＊−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−、＊−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＲ5−、＊−ＮＲ5−（Ｃ＝Ｏ）−（Ｒ5は、水素原子又は炭素数１〜１０の有機基を示し、＊は、式（２）中のＲ3が結合している炭素原子と結合する位置を示す。）又はフェニレン基を示し、
Ｒ1、Ｒ2及びｎは前記と同義である。〕
【００３８】
ここで、式（１）及び（２）中の各記号について説明する。
Ｒ1は、炭素数２〜８のアルキレン基を示す。ｎ個のＲ1は同一でも異なっていてもよい。
Ｒ1で示されるアルキレン基の炭素数は、好ましくは２〜４であり、より好ましくは２である。
また、Ｒ1で示されるアルキレン基は直鎖状でも分岐鎖状でもよく、具体的には、エタン−１，２−ジイル基、プロパン−１，２−ジイル基、プロパン−１，３−ジイル基、プロパン−２，２−ジイル基、ブタン−１，２−ジイル基、ブタン−１，３−ジイル基、ブタン−１，４−ジイル基等が挙げられる。これらの中でも、増感効果や検出・測定精度、入手容易性等の観点から、エタン−１，２−ジイル基が好ましい。
【００３９】
また、Ｒ2は、水素原子又は炭素数１〜４０の有機基を示す。Ｒ2で示される有機基の炭素数は、入手容易性や増感効果、溶剤への溶解性等の観点から、好ましくは１〜２０であり、より好ましくは１〜１０であり、更に好ましくは１〜４であり、特に好ましくは１である。
Ｒ2で示される有機基としては、炭化水素基が挙げられる。炭化水素基としては、脂肪族炭化水素基、脂環式炭化水素基、芳香族炭化水素基が挙げられるが、脂肪族炭化水素基、芳香族炭化水素基が好ましく、脂肪族炭化水素基がより好ましい。
Ｒ2における脂肪族炭化水素基は直鎖状でも分岐鎖状でもよい。脂肪族炭化水素基の炭素数は、好ましくは１〜２０であり、より好ましくは１〜１０であり、更に好ましくは１〜４であり、更に好ましくは１又は２であり、特に好ましくは１である。脂肪族炭化水素基としては、具体的には、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、２−エチルヘキシル基、オクチル基、デシル基、ラウリル基、パルミチル基、ステアリル基等のアルキル基が挙げられる。
また、上記芳香族炭化水素基の炭素数は、好ましくは６〜２０である。芳香族炭化水素基としては、フェニル基、ノニルフェニル基等のアリール基が挙げられる。
斯様なＲ2の中でも、水素原子又は炭素数１〜４のアルキル基が好ましく、水素原子又は炭素数１若しくは２のアルキル基がより好ましく、水素原子又はメチル基が更に好ましく、メチル基が特に好ましい。
【００４０】
また、Ｒ4は、−Ｏ−、＊−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−、＊−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＲ5−、＊−ＮＲ5−（Ｃ＝Ｏ）−又はフェニレン基を示す。斯かるフェニレン基としては、１，２−フェニレン基、１，３−フェニレン基、１，４−フェニレン基が挙げられる。
【００４１】
また、上記Ｒ5で示される有機基の炭素数は１〜１０であるが、好ましくは１〜６である。上記有機基としては、炭化水素基が挙げられる。斯かる炭化水素基は、脂肪族炭化水素基、脂環式炭化水素基及び芳香族炭化水素基を包含する概念である。
【００４２】
上記Ｒ5における脂肪族炭化水素基は直鎖状でも分岐鎖状でもよく、具体的には、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基、ヘプチル基、オクチル基、ノニル基、デシル基等のアルキル基が挙げられる。
また、上記脂環式炭化水素基は、単環の脂環式炭化水素基と橋かけ環炭化水素基に大別される。上記単環の脂環式炭化水素基としては、シクロプロピル基、シクロヘキシル基等のシクロアルキル基が挙げられる。また、橋かけ環炭化水素基としては、イソボルニル基等が挙げられる。
また、上記芳香族炭化水素基としては、フェニル基等のアリール基が挙げられる。
【００４３】
上述のようなＲ4の中でも、増感効果や検出・測定精度、製造容易性等の観点から、＊−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−、フェニレン基が好ましく、＊−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−が特に好ましい。
【００４４】
ｎは、平均値で２以上を示すが、好ましくは平均値で２〜１００であり、より好ましくは平均値で４〜５０であり、更に好ましくは平均値で８〜４５であり、特に好ましくは平均値で９〜２５である。なお、当該「平均値」はＮＭＲで測定できる。例えば、Ｒ2がアルキル基である場合は、上記式（２）の構造について、1Ｈ−ＮＭＲを測定し、Ｒ1で示されるアルキレン基と、Ｒ2で示されるアルキル基の末端のメチル基との、それぞれのプロトンピークの積分値を比較することで、ｎの平均値を算出可能である。
【００４５】
繰り返し単位（Ａ）を構成するモノマーの種類としては、（メタ）アクリレート系モノマー、（メタ）アクリルアミド系モノマー、スチレン系モノマー、不飽和ポリアルキレングリコールエーテル系モノマー等が挙げられ、（メタ）アクリレート系モノマー、スチレン系モノマーが好ましく、（メタ）アクリレート系モノマーがより好ましい。なお、これらのうち１種を単独で用いても２種以上を組み合わせて用いてもよい。
繰り返し単位（Ａ）を構成する好適なモノマーとしては、ポリエチレングリコール（メタ）アクリレート、ポリプロピレングリコール（メタ）アクリレート、ポリエチレングリコールポリプロピレングリコール（メタ）アクリレート、ポリエチレングリコールポリテトラメチレングリコール（メタ）アクリレート、ポリプロピレングリコールポリテトラメチレングリコール（メタ）アクリレート、メトキシポリエチレングリコール（メタ）アクリレート、エトキシポリエチレングリコール（メタ）アクリレート、２−エチルヘキシルオキシポリエチレングリコール（メタ）アクリレート、ラウロキシポリエチレングリコール（メタ）アクリレート、ステアロキシポリエチレングリコール（メタ）アクリレート、フェノキシポリエチレングリコール（メタ）アクリレート、フェノキシポリプロピレングリコール（メタ）アクリレート、ノニルフェノキシポリプロピレングリコール（メタ）アクリレート、２−エチルヘキシルオキシポリエチレングリコールポリプロピレングリコール（メタ）アクリレート、ノニルフェノキシポリエチレングリコールポリプロピレングリコール（メタ）アクリレート等が挙げられる。繰り返し単位（Ａ）は、これらを単独で又は２種以上を組み合わせて用いたものでもよい。
これらモノマーの中では、ポリエチレングリコール（メタ）アクリレート、メトキシポリエチレングリコール（メタ）アクリレートが好ましい。
【００４６】
繰り返し単位（Ａ）の含有量は、増感効果や検出・測定精度の観点から、特定重合体中の全繰り返し単位に対して、好ましくは１質量％以上、より好ましくは１０質量％以上、更に好ましくは１５質量％以上、特に好ましくは２０質量％以上であり、また、１００質量％以下であればよいが、増感効果や検出・測定精度の観点から、特定重合体中の全繰り返し単位に対して、好ましくは９５質量％以下、より好ましくは８０質量％以下、更に好ましくは６５質量％以下、更に好ましくは５５質量％以下、特に好ましくは５０質量％以下である。
なお、各繰り返し単位の含有量は13Ｃ−ＮＭＲ等により測定可能である。
【００４７】
（繰り返し単位（Ｂ））
特定重合体としては、下記式（３）で表される繰り返し単位（Ｂ）を更に有するものが好ましい（なお、繰り返し単位（Ｂ）は繰り返し単位（Ａ）を除く概念である）。繰り返し単位（Ｂ）を備えることにより、増感効果が更に向上する。このような効果が得られるのは、繰り返し単位（Ａ）を含むポリマー鎖が系内でより広がりやすくなることで、粒子と相互作用しやすくなるためと推測される。
【００４８】
【化１０】
2020186912.tif 000011
【００４９】
〔式（３）中、
Ｒ6は、水素原子又はメチル基を示し、
Ｚは、下記式（３ａ）又は（３ｂ）で表される基を示す。〕
【００５０】
【化１１】
2020186912.tif 000012
【００５１】
〔式（３ａ）中、
Ｒ7は、水素原子又は有機基を示し、
Ｒ8は、有機基を示す。〕
【００５２】
【化１２】
2020186912.tif 000013
【００５３】
〔式（３ｂ）中、
環Ｑは、置換又は非置換の３〜１６員環の複素環を示す。〕
【００５４】
式（３ａ）中、Ｒ7、Ｒ8で示される有機基の総炭素数は、増感効果や検出・測定精度の観点から、好ましくは１〜３０であり、より好ましくは１〜１６であり、更に好ましくは１〜１２であり、更に好ましくは１〜８であり、特に好ましくは１〜６である。
Ｒ7、Ｒ8で示される有機基としては、置換又は非置換の炭化水素基が好ましく、置換又は非置換の脂肪族炭化水素基がより好ましい。
上記脂肪族炭化水素基は直鎖状でも分岐鎖状でもよい。脂肪族炭化水素基の炭素数は、好ましくは１〜１８であり、より好ましくは１〜１０であり、更に好ましくは１〜８であり、特に好ましくは１〜４である。脂肪族炭化水素基としては、具体的には、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基等のアルキル基が挙げられる。
上記炭化水素基が有していてもよい置換基としては、ヒドロキシ基、ホルミル基、カルボキシ基、アルコキシ基、アルカノイル基、アルカノイルオキシ基、アルコキシカルボニル基が挙げられる。
アルコキシ基としては、炭素数１〜３のアルコキシ基が好ましく、メトキシ基、エトキシ基等が挙げられる。アルカノイル基としては、炭素数２〜４のアルカノイル基が好ましく、アセチル基、プロピオニル基等が挙げられる。アルカノイルオキシ基としては、炭素数２〜４のアルカノイルオキシ基が好ましく、アセトキシ基、プロパノイルオキシ基等が挙げられる。アルコキシカルボニル基としては、炭素数２〜４のアルコキシカルボニル基が好ましく、メトキシカルボニル基、エトキシカルボニル基等が挙げられる。なお、置換基の置換位置及び個数は任意であり、置換基を２個以上有する場合、該置換基は同一でも異なっていてもよい。上記置換基の中では、ヒドロキシ基、ホルミル基、アルカノイル基が好ましく、ホルミル基、アルカノイル基がより好ましい。ホルミル基又はアルカノイル基を置換基として有する炭化水素基としては、例えば、下記式（４）で表される基が挙げられる。
【００５５】
【化１３】
2020186912.tif 000014
【００５６】
〔式（４）中、
Ｒ11〜Ｒ14は、それぞれ独立して、水素原子、メチル基又はエチル基を示し（好ましくは水素原子又はメチル基である）、
Ｘは、ホルミル基又はアセチル基を示す（好ましくはアセチル基である）。〕
【００５７】
上述した中でも、Ｒ7としては、水素原子、又は置換若しくは非置換の炭素数１〜８のアルキル基が好ましく、水素原子、又はヒドロキシ基、ホルミル基、カルボキシ基、アルコキシ基、アルカノイル基、アルカノイルオキシ基及びアルコキシカルボニル基から選ばれる置換基を有していてもよい炭素数１〜８のアルキル基がより好ましく、水素原子、又はヒドロキシ基、ホルミル基及びアルカノイル基から選ばれる置換基を有していてもよい炭素数１〜８のアルキル基が更に好ましく、水素原子、又はホルミル基及びアルカノイル基から選ばれる置換基を有していてもよい炭素数１〜８のアルキル基が更に好ましい。
また、Ｒ8としては、置換又は非置換の炭素数１〜８のアルキル基が好ましく、ヒドロキシ基、ホルミル基、カルボキシ基、アルコキシ基、アルカノイル基、アルカノイルオキシ基及びアルコキシカルボニル基から選ばれる置換基を有していてもよい炭素数１〜８のアルキル基がより好ましく、ヒドロキシ基、ホルミル基及びアルカノイル基から選ばれる置換基を有していてもよい炭素数１〜８のアルキル基が更に好ましく、ホルミル基及びアルカノイル基から選ばれる置換基を有していてもよい炭素数１〜８のアルキル基が更に好ましい。
【００５８】
上記式（３ｂ）中、環Ｑは、置換又は非置換の３〜１６員環の複素環を示す。なお、式（３ｂ）中に示される窒素原子を有するため、含窒素複素環である。
上記複素環としては、４〜１２員環の複素環が好ましく、４〜１０員環の複素環がより好ましく、５〜８員環の複素環が更に好ましく、５又は６員環の複素環が特に好ましい。複素環は複素単環でも縮合複素環でもよいが、複素単環が好ましい。また、不飽和環でも飽和環でもよいが、モルホリン環、ピロリジン環、ピペリジン環等の飽和環が好ましい。また、複素環は、環を構成するヘテロ原子として、式（３ｂ）中に示される窒素原子の他に、当該窒素原子以外の窒素原子、酸素原子、硫黄原子等を１個又は２個以上有していてもよい。
複素環が有していてもよい置換基としては、ヒドロキシ基、カルボキシ基等が挙げられるが、ヒドロキシ基が好ましい。なお、置換基の置換位置及び個数は任意であり、置換基を２個以上有する場合、該置換基は同一でも異なっていてもよい。
【００５９】
式（３ｂ）で表される基としては、下記式（３ｃ）で表される基が好ましい。
【００６０】
【化１４】
2020186912.tif 000015
【００６１】
〔式（３ｃ）中、
Ｒ9及びＲ10は、それぞれ独立して、置換若しくは非置換のメチレン基、又は置換若しくは非置換の炭素数２〜７のアルキレン基を示し、
Ｙは、単結合、酸素原子又は硫黄原子を示す。〕
【００６２】
Ｒ9、Ｒ10で示される置換又は非置換のメチレン基としては、ヒドロキシ基及びカルボキシ基から選ばれる置換基を有していてもよいメチレン基が挙げられ、ヒドロキシ基を置換基として有していてもよいメチレン基が好ましく、メチレン基がより好ましい。
Ｒ9、Ｒ10で示される置換又は非置換の炭素数２〜７のアルキレン基としては、ヒドロキシ基及びカルボキシ基から選ばれる置換基を有していてもよい炭素数２〜７のアルキレン基が挙げられ、ヒドロキシ基を置換基として有していてもよい炭素数２〜７のアルキレン基が好ましく、炭素数２〜７のアルキレン基がより好ましい。
Ｒ9、Ｒ10におけるアルキレン基の炭素数は、好ましくは２〜４であり、より好ましくは２又は３であり、特に好ましくは２である。アルキレン基は直鎖状でも分岐鎖状でもよいが、直鎖状が好ましい。好適な具体例としては、エタン−１，２−ジイル基、プロパン−１，３−ジイル基が挙げられる。
また、Ｒ9及びＲ10の合計炭素数は好ましくは４〜１０である。
【００６３】
特定重合体は、繰り返し単位（Ｂ）に該当するもののうち１種を有していても２種以上を有していてもよい。
特定重合体としては、増感効果や検出・測定精度の観点から、以下の繰り返し単位（Ｂ−１）〜（Ｂ−３）から選ばれる１種又は２種以上を繰り返し単位（Ｂ）として含むものが好ましく、繰り返し単位（Ｂ−１）及び／又は（Ｂ−３）を繰り返し単位（Ｂ）として含むものがより好ましく、繰り返し単位（Ｂ−１）を繰り返し単位（Ｂ）として少なくとも含むものが更に好ましく、繰り返し単位（Ｂ−１）及び（Ｂ−３）を繰り返し単位（Ｂ）として少なくとも含むものが更に好ましい。
（Ｂ−１）  式（３）中のＺが式（３ａ）で表される基であり、Ｒ7が、水素原子又は炭素数１〜８のアルキル基であり、且つＲ8が、炭素数１〜８のアルキル基である繰り返し単位
（Ｂ−２）  式（３）中のＺが式（３ａ）で表される基であり、Ｒ7が、水素原子、又はホルミル基及びアルカノイル基から選ばれる置換基を有する炭素数１〜８のアルキル基であり、且つＲ8が、ホルミル基及びアルカノイル基から選ばれる置換基を有する炭素数１〜８のアルキル基である繰り返し単位
（Ｂ−３）  式（３）中のＺが式（３ｂ）で表される基である繰り返し単位
また、繰り返し単位（Ｂ−１）としては、式（３）中のＺが式（３ａ）で表される基であり、Ｒ7及びＲ8が、それぞれ独立して、炭素数１〜８のアルキル基であるものが好ましい。
【００６４】
繰り返し単位（Ｂ）を構成するモノマーとしては、例えば、Ｎ−メチル（メタ）アクリルアミド、Ｎ−エチル（メタ）アクリルアミド、Ｎ−プロピル（メタ）アクリルアミド、Ｎ−イソプロピル（メタ）アクリルアミド、Ｎ−ヒドロキシメチル（メタ）アクリルアミド、Ｎ−ヒドロキシエチル（メタ）アクリルアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチル（メタ）アクリルアミド、Ｎ，Ｎ−ジエチル（メタ）アクリルアミド、ダイアセトン（メタ）アクリルアミド、Ｎ−（メタ）アクリロイルモルホリン、Ｎ−（メタ）アクリロイルピペリジン、Ｎ−（メタ）アクリロイルピロリジン等が挙げられる。繰り返し単位（Ｂ）は、これらを単独で又は２種以上を組み合わせて用いたものでもよい。
これらモノマーの中では、Ｎ，Ｎ−ジメチル（メタ）アクリルアミド、Ｎ，Ｎ−ジエチル（メタ）アクリルアミド、ダイアセトン（メタ）アクリルアミド、Ｎ−（メタ）アクリロイルモルホリンが好ましい。
【００６５】
繰り返し単位（Ｂ）の含有量は、増感効果や検出・測定精度の観点から、特定重合体中の全繰り返し単位に対して、好ましくは１質量％以上、より好ましくは１０質量％以上、更に好ましくは３０質量％以上、特に好ましくは３７．５質量％以上であり、また、増感効果や検出・測定精度の観点から、特定重合体中の全繰り返し単位に対して、好ましくは８０質量％以下、より好ましくは７０質量％以下、更に好ましくは６５質量％以下、特に好ましくは６０質量％以下である。
また、繰り返し単位（Ｂ）として繰り返し単位（Ｂ−１）を含む場合、繰り返し単位（Ｂ−１）の含有量としては、特定重合体中の全繰り返し単位に対して、１〜６０質量％が好ましく、２．５〜５０質量％がより好ましい。
また、繰り返し単位（Ｂ−２）の含有量としては、特定重合体中の全繰り返し単位に対して、０〜２０質量％が好ましく、０〜１５質量％がより好ましい。
また、繰り返し単位（Ｂ）として繰り返し単位（Ｂ−３）を含む場合、繰り返し単位（Ｂ−３）の含有量としては、特定重合体中の全繰り返し単位に対して、１０〜５０質量％が好ましく、１５〜４２．５質量％がより好ましく、２０〜４０質量％が特に好ましい。
【００６６】
繰り返し単位（Ａ）及び（Ｂ）の合計含有量（（Ａ）＋（Ｂ））は、増感効果や検出・測定精度の観点から、特定重合体中の全繰り返し単位に対して、好ましくは４０質量％以上、より好ましくは５０質量％以上、更に好ましくは６０質量％以上、更に好ましくは７０質量％以上、特に好ましくは８０質量％以上であり、また、増感効果や検出・測定精度の観点から、特定重合体中の全繰り返し単位に対して、好ましくは９９質量％以下、より好ましくは９７．５質量％以下、更に好ましくは９５質量％以下、特に好ましくは９２．５質量％以下である。
【００６７】
繰り返し単位（Ａ）の含有量に対する繰り返し単位（Ｂ）の含有量の質量比〔（Ｂ）／（Ａ）〕は、増感効果や検出・測定精度の観点から、好ましくは０．１以上、より好ましくは０．５以上、更に好ましくは０．７以上、特に好ましくは０．７５以上であり、また、増感効果や検出・測定精度の観点から、好ましくは１０以下、より好ましくは７．５以下、更に好ましくは５以下、特に好ましくは４以下である。
【００６８】
（繰り返し単位（Ｃ））
特定重合体としては、下記式（５）で表される疎水性繰り返し単位（Ｃ）を更に有するものが好ましい（なお、繰り返し単位（Ｃ）は繰り返し単位（Ａ）を除く概念である）。ここで、本明細書において、疎水性とは、水との親和力が弱い性質を持つことを意味する。具体的には１種の繰り返し単位のみからなるホモポリマー（実施例の測定法による数平均分子量が１万程度のもの）が、常温（２５℃）において純水１００ｇに対して溶解する量が１ｇ未満の場合、その繰り返し単位は疎水性である。
また、特定重合体が繰り返し単位（Ｃ）を備えることにより、増感効果が更に向上する。また、溶剤に溶解させたときの粘度上昇が抑えられ、ハンドリング性も向上する。なお、特定重合体は、繰り返し単位（Ｃ）に該当するもののうち１種を有していても２種以上を有していてもよい。
【００６９】
【化１５】
2020186912.tif 000016
【００７０】
〔式（５）中、
Ｒ15は、水素原子又はメチル基を示し、
Ｒ16は、−Ｏ−、＊＊−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−（＊＊は、式（５）中のＲ15が結合している炭素原子と結合する位置を示す。）又はフェニレン基を示し、
Ｒ17は、Ｒ16が−Ｏ−又は＊＊−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−の場合、有機基を示し、Ｒ16がフェニレン基の場合、水素原子又は有機基を示す。〕
【００７１】
Ｒ16としては、増感効果や検出・測定精度の観点から、−Ｏ−、＊＊−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−が好ましく、＊＊−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−がより好ましい。
【００７２】
Ｒ17で示される有機基の総炭素数は、増感効果や検出・測定精度の観点から、好ましくは１〜１６であり、より好ましくは１〜１２であり、更に好ましくは１〜８であり、特に好ましくは１〜４である。
Ｒ17で示される有機基としては、置換又は非置換の炭化水素基が好ましく、置換又は非置換の脂肪族炭化水素基がより好ましい。
上記脂肪族炭化水素基は直鎖状でも分岐鎖状でもよいが、好ましくは直鎖状である。脂肪族炭化水素基の炭素数は、好ましくは１〜１２であり、より好ましくは１〜８であり、更に好ましくは１〜６であり、特に好ましくは１〜４である。脂肪族炭化水素基としては、具体的には、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、２−エチルヘキシル基等のアルキル基が挙げられる。
上記炭化水素基が有していてもよい置換基としては、ヒドロキシ基、カルボキシ基、アルコキシ基、アリールオキシ基、アルカノイルオキシ基、アルコキシカルボニル基等が挙げられる。アルコキシ基としては、炭素数１〜３のアルコキシ基が好ましく、メトキシ基、エトキシ基等が挙げられる。アリールオキシ基としては、炭素数６〜１２のアリールオキシ基が好ましく、フェノキシ基等が挙げられる。アルカノイルオキシ基としては、炭素数２〜４のアルカノイルオキシ基が好ましく、アセトキシ基、プロパノイルオキシ基等が挙げられる。アルコキシカルボニル基としては、炭素数２〜４のアルコキシカルボニル基が好ましく、メトキシカルボニル基、エトキシカルボニル基等が挙げられる。なお、置換基の置換位置及び個数は任意であり、置換基を２個以上有する場合、該置換基は同一でも異なっていてもよい。上記置換基の中では、ヒドロキシ基、アルコキシ基、アリールオキシ基が好ましく、ヒドロキシ基、アルコキシ基がより好ましい。
【００７３】
上述した中でも、Ｒ17としては、置換又は非置換の炭素数１〜８のアルキル基が好ましく、ヒドロキシ基、カルボキシ基、アルコキシ基、アリールオキシ基、アルカノイルオキシ基及びアルコキシカルボニル基から選ばれる置換基を有していてもよい炭素数１〜８のアルキル基がより好ましく、ヒドロキシ基、アルコキシ基及びアリールオキシ基から選ばれる置換基を有していてもよい炭素数１〜８のアルキル基が更に好ましく、ヒドロキシ基及びアルコキシ基から選ばれる置換基を有していてもよい炭素数１〜４のアルキル基が更に好ましい。
【００７４】
繰り返し単位（Ｃ）を構成するモノマーの種類としては、（メタ）アクリレート系モノマーが好ましい。
繰り返し単位（Ｃ）を構成するモノマーとしては、例えば、メチル（メタ）アクリレート、エチル（メタ）アクリレート、ｎ−ブチル（メタ）アクリレート、イソブチル（メタ）アクリレート、ｔｅｒｔ−ブチル（メタ）アクリレート、２−エチルヘキシル（メタ）アクリレート、２−ヒドロキシエチル（メタ）アクリレート、２−ヒドロキシプロピル（メタ）アクリレート、２−ヒドロキシブチル（メタ）アクリレート、２−メトキシエチル（メタ）アクリレート、２−エトキシエチル（メタ）アクリレート、フェノキシエチル（メタ）アクリレート等が挙げられる。繰り返し単位（Ｃ）は、これらを単独で又は２種以上を組み合わせて用いたものでもよい。
これらモノマーの中では、メチル（メタ）アクリレート、ｎ−ブチル（メタ）アクリレート、２−ヒドロキシエチル（メタ）アクリレート、２−メトキシエチル（メタ）アクリレートが好ましい。
【００７５】
繰り返し単位（Ｃ）の含有量は、増感効果や検出・測定精度の観点から、特定重合体中の全繰り返し単位に対して、好ましくは１質量％以上、より好ましくは２．５質量％以上、更に好ましくは５質量％以上、特に好ましくは７．５質量％以上であり、また、増感効果や検出・測定精度の観点から、特定重合体中の全繰り返し単位に対して、好ましくは５０質量％以下、より好ましくは４０質量％以下、更に好ましくは３０質量％以下、特に好ましくは２０質量％以下である。
【００７６】
繰り返し単位（Ａ）及び（Ｃ）の合計含有量（（Ａ）＋（Ｃ））は、増感効果や検出・測定精度の観点から、特定重合体中の全繰り返し単位に対して、好ましくは２０質量％以上、より好ましくは３０質量％以上、更に好ましくは３５質量％以上、特に好ましくは４０質量％以上であり、また、増感効果や検出・測定精度の観点から、特定重合体中の全繰り返し単位に対して、好ましくは９９質量％以下、より好ましくは８０質量％以下、更に好ましくは７０質量％以下、特に好ましくは６０質量％以下である。
【００７７】
繰り返し単位（Ｂ）及び（Ｃ）の合計含有量（（Ｂ）＋（Ｃ））は、増感効果や検出・測定精度の観点から、特定重合体中の全繰り返し単位に対して、好ましくは１質量％以上、より好ましくは２５質量％以上、更に好ましくは３５質量％以上、特に好ましくは４５質量％以上であり、また、増感効果や検出・測定精度の観点から、特定重合体中の全繰り返し単位に対して、好ましくは９９質量％以下、より好ましくは９０質量％以下、更に好ましくは８５質量％以下、特に好ましくは８０質量％以下である。
【００７８】
繰り返し単位（Ａ）の含有量に対する繰り返し単位（Ｃ）の含有量の質量比〔（Ｃ）／（Ａ）〕は、増感効果や検出・測定精度の観点から、好ましくは０．０１以上、より好ましくは０．０５以上、更に好ましくは０．０７５以上、特に好ましくは０．１以上であり、また、増感効果や検出・測定精度の観点から、好ましくは５以下、より好ましくは３以下、更に好ましくは１．５以下、特に好ましくは１以下である。
【００７９】
繰り返し単位（Ｃ）の含有量に対する繰り返し単位（Ｂ）の含有量の質量比〔（Ｂ）／（Ｃ）〕は、増感効果や検出・測定精度の観点から、好ましくは０．１以上、より好ましくは０．５以上、更に好ましくは１．５以上、特に好ましくは２．５以上であり、また、増感効果や検出・測定精度の観点から、好ましくは５０以下、より好ましくは２５以下、更に好ましくは７．５以下、特に好ましくは５以下である。
なお、特定重合体は、繰り返し単位（Ａ）〜（Ｃ）以外の繰り返し単位を有していてもよい。
【００８０】
特定重合体の重量平均分子量としては、３０００〜２００万が好ましく、１万〜１７５万がより好ましく、１０万〜１７０万が更に好ましく、１２．５万〜１７０万が特に好ましい。重量平均分子量を３０００以上とすることにより、増感効果を更に向上させることができる。また、重量平均分子量を２００万以下とすることにより、検出・測定の精度が低下しにくくなる。
数平均分子量としては、３０００〜２００万が好ましく、５０００〜７５万がより好ましく、１万〜５０万が特に好ましい。
分子量分布（Ｍｗ／Ｍｎ）としては、１〜１０が好ましく、１．５〜８がより好ましい。
なお、上記重量平均分子量、数平均分子量及び分子量分布は、後述する実施例に記載の方法に従い測定すればよい。
【００８１】
特定重合体としては、水溶性のものが好ましい。
ここで、本明細書において、水に溶解する（水溶性）とは、１質量％のポリマー固形分となるように重合体を水（２５℃）に添加・混合したときに、目視で透明となることをいう。
また、特定重合体としては、増感効果や検出・測定精度の観点から、非架橋型の重合体が好ましい。なお、特定重合体が共重合体である場合、当該共重合体は、ブロック共重合体、ランダム共重合体、交互共重合体のいずれであってもよい。
【００８２】
特定重合体は、例えば、繰り返し単位（Ａ）を誘導するモノマーの他、必要に応じて繰り返し単位（Ｂ）、（Ｃ）を誘導するモノマー等を混合し、この混合物を、水、アルコール、アセトニトリル等の溶媒に溶解させ、重合開始剤や連鎖移動剤を加えてラジカル重合することにより合成できる。
上記ラジカル重合を行う際に用いられる重合開始剤としては、通常のラジカル重合開始剤であれば特に限定されるものではないが、例えば、過酸化ベンゾイル、過酸化ラウロイル、ジイソプロピルペルオキシジカーボネート、ｔ−ブチルペルオキシ−２−エチルヘキサノエート、ｔ−ブチペルオキシピバレート、ｔ−ブチルペルオキシジイソブチレート、アゾビスイソブチロニトリル、アゾビスイソジメチルバレロニトリル、２，２’−アゾビス（２−メチルプロピオンアミジン）・二塩酸塩、過硫酸塩、過硫酸塩一亜硫酸水素塩系等が挙げられる。
また、重合開始剤の仕込み量は、モノマー成分１００質量部に対して０．００１〜１０質量部が好ましく、０．０１〜５質量部がより好ましい。また、重合温度は２０〜１００℃が好ましく、重合時間は０．５〜４８時間が好ましい。
【００８３】
次に、本発明の免疫凝集の検出又は測定方法の各工程について詳細に説明する。
（工程１）
工程１は、標的物質を含む可能性がある検体と、希釈用液と、特定重合体とを接触させ、検体希釈液を得る検体希釈液調製工程である。この工程によって、検出や測定が高感度化され精度も満足される。
ここで、検体と希釈用液と特定重合体との「接触」とは、検体と希釈用液と特定重合体とが接触している状態を作り出すことを意味し、その接触の順番の先後等は問わない。したがって、「接触」には、例えば、（１）検体及び希釈用液の混合液に、特定重合体及び希釈用液を含む液剤を添加すること、（２）検体と希釈用液と特定重合体とを同時に接触させること、（３）希釈用液に特定重合体を添加した後、この液剤で検体を希釈すること、（４）希釈用液に検体を添加した後、これに特定重合体を添加すること、（５）検体中の液を希釈用液に一部置換し、これに特定重合体を添加すること等が包含される。但し、工程１で調製される検体希釈液は、標的物質に対する抗原又は抗体が固定された粒子を含まないものをいう。
【００８４】
上記検体は、標的物質を含む可能性があるものであれば特に限定されないが、例えば、血清、血漿等の血液組成成分の他、尿、リンパ、髄液等の生体由来試料（好ましくは液体試料）が挙げられる。
標的物質は、抗原抗体反応を利用して検出又は測定が可能なものであればよい。例えば、抗原、抗体（なお、抗体には自己抗体や抗体のフラグメントも包含される）、各種疾病やアレルギー等の原因物質が挙げられる。より具体的には、Ｃ反応性蛋白質（ＣＲＰ）、免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）、免疫グロブリンＡ（ＩｇＡ）、免疫グロブリンＭ（ＩｇＭ）、免疫グロブリンＥ（ＩｇＥ）、ＡＳＯ（抗ストレプトリジンＯ価）、アルブミン、尿中微量アルブミン、プレアルブミン、補体Ｃ３、補体Ｃ４、トランスフェリン、ハプトグロビン、リポプロテイン（ａ）（ＬＰ（ａ））、アポリポ蛋白Ａ−Ｉ（ＡｐｏＡＩ）、アポリポ蛋白Ａ−ＩＩ（ＡｐｏＡＩＩ）、アポリポ蛋白Ｂ（ＡｐｏＢ）、アポリポ蛋白Ｃ−ＩＩ（ＡｐｏＣＩＩ）、アポリポ蛋白Ｃ−ＩＩＩ（ＡｐｏＣＩＩＩ）、アポリポ蛋白Ｅ（ＡｐｏＥ）、リウマチ因子（ＲＦ）、前立腺特異抗原（ＰＳＡ）、フェリチン（Ｆｅｒ）、β２マイクロアルブミン（β２ｍ）、ミオグロビン（Ｍｂ）、ペプシノゲン（ＰＧ）、ヒアルロン酸（ＨＡ）、クレアチンキナーゼＭＢアイソザイム（ＣＫ−ＭＢ）、梅毒ＴＰ抗体、梅毒脂質抗体、ヘリコバクターピロリ抗原・抗体、ＨＣＶ抗原・抗体、ＨＢｓ抗原・抗体、ＨＩＶ抗原・抗体、シスタチンＣ、マトリックスメタロプロティナーゼ−３（ＭＭＰ−３）、ＫＬ−６、α−フェトプロテイン（ＡＦＰ）、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、インスリン、Ｃ−ペプタイド等が挙げられる。
【００８５】
また、希釈用液としては、水性媒体が挙げられる。水性媒体としては、水の他、リン酸緩衝液、グリシン緩衝液、グッド緩衝液、トリス緩衝液、アンモニア緩衝液、ホウ酸緩衝液、ＨＥＰＥＳ緩衝液等の各種緩衝液が挙げられ、これらを１種又は２種以上含んでいてもよい。希釈用液としては、緩衝液が好ましい。なお、各種緩衝剤を用いて緩衝液としてよい。
【００８６】
工程１で得られる検体希釈液中の特定重合体の濃度は、通常０．１〜１０ｗ／ｖ％、好ましくは０．１〜５ｗ／ｖ％、より好ましくは０．１〜３ｗ／ｖ％である。また、検体は、３０〜１００容量倍程度の希釈倍率で通常希釈される。
なお、工程１においては、上記成分の他に、安定化剤（例えばアルブミン、グロブリン、水溶性ゼラチン、界面活性剤、糖類等）、防腐剤（例えばサリチル酸、安息香酸、アジ化ナトリウム、プロクリン等）等を接触させてもよい。
【００８７】
（工程２）
工程２は、前記検体希釈液と、標的物質に対する抗原又は抗体が固定された粒子とを混合する混合工程である。
標的物質に対する抗原又は抗体を固定する粒子（担体粒子）としては、特に限定されず公知のものが使用できる。例えば、赤血球、炭素粉末、ベントナイト、カオリン、レシチンのミセル、ゼラチン、合成ラテックス等が挙げられる。担体粒子としては、粒径制御が厳密にできる点で、合成ラテックスが好ましい。例えば、特開２００６−２６６９７０号公報、特開平９−３０４３８６号公報等に記載のものが使用できる。
標的物質に対する抗原又は抗体は、標的物質の種類等に応じて適宜選択すればよい。なお、標的物質に対する抗原又は抗体の固定化は、相互作用による物理吸着法、水溶性カルボジイミド系縮合剤を用いた化学結合法等の常法に従って行えばよい。
混合工程は、ｐＨ４〜１０の範囲で行うのが好ましい。また、混合温度は通常２５〜４５℃の範囲であり、混合時間は通常３０秒間〜２０分間である。
【００８８】
そして、混合工程により生じた凝集反応を光学的に検出することによって、検体中の標的物質が検出され、更に標的物質の濃度も測定できる。
検出又は測定の手法としては、免疫比濁法が好ましく、ラテックスを担体粒子として用いるラテックス凝集法が特に好ましい。ラテックス凝集法は、常法の免疫ラテックス凝集の検出又は測定と同様にして行えばよい。
【００８９】
＜添加剤＞
本発明の添加剤は、本発明の免疫凝集の検出又は測定方法に使用される、特定重合体を含む添加剤である。
本発明の添加剤は、特定重合体の他に、溶剤を含んでいてもよい。溶剤としては、上記水性媒体が挙げられる。
また、本発明の添加剤は、特定重合体と溶剤の他に、界面活性剤、ブロッキング剤等を含んでいてもよい。ブロッキング剤としては、牛血清アルブミン（ＢＳＡ）等の生体由来の水溶性ポリマーや化学合成した水溶性ポリマー等が挙げられる。添加剤のｐＨ（２５℃）は、好ましくは４〜１０の範囲である。
本発明の添加剤は、上記検体及び希釈用液に、添加剤中の特定重合体を接触させるようにして添加される。
【００９０】
＜増感剤及び増感方法＞
本発明の増感剤は、免疫凝集の検出又は測定方法に用いるための増感剤であって、特定重合体を含むことを特徴とする。本発明の増感剤は、特定重合体の他に、上記添加剤と同様の成分を含んでいてもよい。増感剤のｐＨ（２５℃）は、好ましくは４〜１０の範囲である。
本発明の増感方法は、免疫凝集の検出又は測定の感度を増感させる方法であって、特定重合体を用いることを特徴とする。
本発明の増感剤の使用法、本発明の増感方法の具体的な手法としては、例えば、検体と、検体を希釈するための液（上記希釈用液）と、特定重合体とを接触させる手法が挙げられる。より具体的には、上記工程１と同様にして行えばよい。
本発明の増感剤及び増感方法によれば、優れた増感効果が得られる。また、精度低下が発生しにくく、高精度で免疫凝集を検出又は測定できる。
【００９１】
＜液剤＞
本発明の液剤は、標的物質を含む可能性がある検体の希釈又は緩衝に使用される、免疫凝集の検出又は測定のための液剤であって、特定重合体を含むことを特徴とする。
本発明の液剤は、特定重合体の他に、上記添加剤と同様の成分を含んでいてもよい。液剤のｐＨ（２５℃）は、好ましくは４〜１０の範囲である。
＜キット＞
本発明のキットは、免疫凝集の検出又は測定に用いるためのキットであって、本発明の液剤を備えることを特徴とする。
本発明のキットとしては、本発明の液剤（第１試薬とも称する）に加えて、上記標的物質に対する抗原又は抗体が固定された粒子を含む試薬（第２試薬とも称する）を更に備えるものが好ましい。
上記第２試薬は、上記標的物質に対する抗原又は抗体が固定された粒子の他に、溶剤を含んでいてもよい。当該溶剤としては、各種緩衝液等の上記水性媒体が挙げられる。
また、本発明のキットは、上記第１試薬及び第２試薬の他に、陽性コントロール、陰性コントロール、血清希釈液等を備えていてもよい。陽性コントロール、陰性コントロールの媒体は、測定しうる標的物質が含まれていない血清、生理食塩水のほか、溶剤でもよい。当該溶剤としては、各種緩衝液等の上記水性媒体が挙げられる。
【実施例】
【００９２】
以下、実施例を挙げて本発明を詳細に説明するが、本発明はこれら実施例に限定されるものではない。
【００９３】
実施例における分子量の測定条件は以下に示すとおりである。
重量平均分子量（Ｍｗ）及び数平均分子量（Ｍｎ）は、東ソー社製ＴＳＫｇｅｌ  α−Ｍカラムを用い、流量：０．５ミリリットル／分、溶出溶媒：ＮＭＰ溶媒（Ｈ3ＰＯ4：０．０１６Ｍ、ＬｉＢｒ：０．０３０Ｍ）、カラム温度：４０℃の分析条件で、単分散ポリエチレングリコールを標準とするゲルバーミエーションクロマトグラフィー（ＧＰＣ）により測定した。
【００９４】
〔合成例１〕
エチレンオキシドの平均付加モル数９のメトキシポリエチレングリコールメタクリレート（以下、Ｍ９０Ｇと称する（新中村化学工業社製））５ｇからなるモノマーを、水４０．０５ｇと混合してフラスコに入れ、撹拌子で撹拌した。これに窒素を吹き込みながら６０℃まで昇温し、重合開始剤として２，２’−アゾビス（２−メチルプロピオンアミジン）・二塩酸塩（和光純薬社製）の２質量％水溶液５ｇ、及び連鎖移動剤としてα−チオグリセロール（旭化学工業社製）０．０２ｇを添加した。これを３時間重合させた後、室温まで冷却した。得られた重合体を重合体（Ｐ−Ａ１）と称する。重合体（Ｐ−Ａ１）のＭｗ、Ｍｎ及びＭｗ／Ｍｎを表１に示す。
【００９５】
〔合成例２〕
モノマーを、Ｍ９０Ｇ  ２．５ｇ、４−アクリロイルモルホリン（以下、ＡＣＭＯと称する（ＫＪケミカルズ社製））２．０ｇ、及びメチルメタクリレート（以下、ＭＭＡと称する）０．５ｇからなるモノマーに変更し、α−チオグリセロールの使用量を０．０１ｇに変更した以外は、合成例１と同様にして重合体を合成した。得られた重合体を重合体（Ｐ−Ａ２）と称する。重合体（Ｐ−Ａ２）のＭｗ、Ｍｎ及びＭｗ／Ｍｎを表１に示す。
【００９６】
〔合成例３〕
モノマーを、Ｍ９０Ｇ  １．５ｇ、エチレンオキシドの平均付加モル数２３のメトキシポリエチレングリコールメタクリレート（以下、Ｍ２３０Ｇと称する（新中村化学工業社製））１．５ｇ、ＡＣＭＯ  １．５ｇ、Ｎ，Ｎ−ジメチルアクリルアミド（以下、ＤＭＡＡと称する（ＫＪケミカルズ社製））０．４５ｇ及びＭＭＡ  ０．０５ｇからなるモノマーに変更した以外は、合成例１と同様にして重合体を合成した。得られた重合体を重合体（Ｐ−Ａ３）と称する。重合体（Ｐ−Ａ３）のＭｗ、Ｍｎ及びＭｗ／Ｍｎを表１に示す。
【００９７】
〔合成例４〕
モノマーを、Ｍ９０Ｇ  １．０ｇ、ＡＣＭＯ  １．０ｇ、ＤＭＡＡ  １．０ｇ、２−メトキシエチルアクリレート（以下、ＭＥＡと称する（和光純薬社製））１．５ｇ及びＭＭＡ  ０．５ｇからなるモノマーに変更し、連鎖移動剤の添加を無しに変更した以外は、合成例１と同様にして重合体を合成した。得られた重合体を重合体（Ｐ−Ａ４）と称する。重合体（Ｐ−Ａ４）のＭｗ、Ｍｎ及びＭｗ／Ｍｎを表１に示す。
【００９８】
〔合成例５〕
モノマーを、Ｍ９０Ｇ  ０．７５ｇ、Ｍ２３０Ｇ  １．２５ｇ、ＡＣＭＯ  １．５ｇ、ダイアセトンアクリルアミド（以下、ＤＡＡＭと称する（日本化成社製））０．５ｇ、ＤＭＡＡ  ０．５ｇ及びＭＭＡ  ０．５ｇからなるモノマーに変更し、重合開始剤を、２，２’−アゾビス（２−メチルプロピオンアミジン）・二塩酸塩の１質量％水溶液５ｇに変更し、連鎖移動剤の添加を無しに変更した以外は、合成例１と同様にして重合体を合成した。得られた重合体を重合体（Ｐ−Ａ５）と称する。重合体（Ｐ−Ａ５）のＭｗ、Ｍｎ及びＭｗ／Ｍｎを表１に示す。
【００９９】
〔合成例６〕
モノマーを、Ｍ２３０Ｇ  ２．５ｇ、ＡＣＭＯ  ２．０ｇ及びＤＡＡＭ  ０．５ｇからなるモノマーに変更し、α−チオグリセロールの使用量を０．０２５ｇに変更した以外は、合成例１と同様にして重合体を合成した。得られた重合体を重合体（Ｐ−Ａ６）と称する。重合体（Ｐ−Ａ６）のＭｗ、Ｍｎ及びＭｗ／Ｍｎを表１に示す。
【０１００】
〔合成例７〕
モノマーを、Ｍ９０Ｇ  ２．５ｇ、ＡＣＭＯ  １．７５ｇ及び２−ヒドロキシエチルメタクリレート（以下、ＨＥＭＡと称する（東京化成工業社製））０．７５ｇからなるモノマーに変更し、α−チオグリセロールの使用量を０．０１ｇに変更した以外は、合成例１と同様にして重合体を合成した。得られた重合体を重合体（Ｐ−Ａ７）と称する。重合体（Ｐ−Ａ７）のＭｗ、Ｍｎ及びＭｗ／Ｍｎを表１に示す。
【０１０１】
〔合成例８〕
モノマーを、Ｍ９０Ｇ  ３．５ｇ、Ｎ，Ｎ−ジエチルアクリルアミド（以下、ＤＥＡＡと称する（ＫＪケミカルズ社製））１．０ｇ及びＭＭＡ  ０．５ｇからなるモノマーに変更し、α−チオグリセロールの使用量を０．０１ｇに変更した以外は、合成例１と同様にして重合体を合成した。得られた重合体を重合体（Ｐ−Ａ８）と称する。重合体（Ｐ−Ａ８）のＭｗ、Ｍｎ及びＭｗ／Ｍｎを表１に示す。
【０１０２】
〔合成例９〕
Ｍ９０Ｇ  ２．５ｇ、ＡＣＭＯ  ２．２５ｇ及びｎ−ブチルメタクリレート（以下、ＢＭＡと称する（東京化成工業社製））０．２５ｇからなるモノマーを、アセトニトリル４５．０５ｇと混合してフラスコに入れ、撹拌子で撹拌した。これに窒素を吹き込みながら６５℃まで昇温し、重合開始剤として２，２’−アゾビス（イソブチロニトリル）０．１ｇ、及び連鎖移動剤としてα−チオグリセロール０．０１ｇを添加した。これを３時間重合させ、室温まで冷却した後、溶液を純水で透析した。得られた重合体を重合体（Ｐ−Ａ９）と称する。重合体（Ｐ−Ａ９）のＭｗ、Ｍｎ及びＭｗ／Ｍｎを表１に示す。
【０１０３】
〔合成例１０〕
モノマーを、Ｍ２３０Ｇ  １．０ｇ、ＡＣＭＯ  １．０ｇ、ＤＭＡＡ  ２．０ｇ及びＭＭＡ  １．０ｇからなるモノマーに変更し、重合開始剤を、２，２’−アゾビス（２−メチルプロピオンアミジン）・二塩酸塩の０．５質量％水溶液５ｇに変更し、連鎖移動剤の添加を無しに変更した以外は、合成例１と同様にして重合体を合成した。得られた重合体を重合体（Ｐ−Ａ１０）と称する。重合体（Ｐ−Ａ１０）のＭｗ、Ｍｎ及びＭｗ／Ｍｎを表１に示す。
【０１０４】
〔合成例１１〕
モノマーを、Ｍ９０Ｇ  １．０ｇ、Ｍ２３０Ｇ  １．５ｇ、ＡＣＭＯ  １．５ｇ、ＤＡＡＭ  ０．２５ｇ、ＤＭＡＡ  ０．２５ｇ及びＭＭＡ  ０．５ｇからなるモノマーに変更し、重合開始剤を、２，２’−アゾビス（２−メチルプロピオンアミジン）・二塩酸塩の０．３質量％水溶液５ｇに変更し、連鎖移動剤の添加を無しに変更した以外は、合成例１と同様にして重合体を合成した。得られた重合体を重合体（Ｐ−Ａ１１）と称する。重合体（Ｐ−Ａ１１）のＭｗ、Ｍｎ及びＭｗ／Ｍｎを表１に示す。
【０１０５】
〔比較合成例１〕
モノマーを、ＡＣＭＯ  ２．０ｇ、ＤＭＡＡ  ２．５ｇ及びＭＭＡ  ０．５ｇからなるモノマーに変更し、α−チオグリセロールの使用量を０．０１ｇに変更した以外は、合成例１と同様にして重合体を合成した。得られた重合体を重合体（Ｐ−Ｂ１）と称する。重合体（Ｐ−Ｂ１）のＭｗ、Ｍｎ及びＭｗ／Ｍｎを表２に示す。
【０１０６】
〔比較合成例２〕
モノマーを、ＡＣＭＯ  ５．０ｇからなるモノマーに変更し、α−チオグリセロールの使用量を０．０１ｇに変更した以外は、合成例１と同様にして重合体を合成した。得られた重合体を重合体（Ｐ−Ｂ２）と称する。重合体（Ｐ−Ｂ２）のＭｗ、Ｍｎ及びＭｗ／Ｍｎを表２に示す。
【０１０７】
〔比較合成例３〕
モノマーを、ＤＥＡＡ  １．０ｇ、ＤＭＡＡ  ３．５ｇ及びＭＭＡ  ０．５ｇからなるモノマーに変更し、α−チオグリセロールの使用量を０．０１ｇに変更した以外は、合成例１と同様にして重合体を合成した。得られた重合体を重合体（Ｐ−Ｂ３）と称する。重合体（Ｐ−Ｂ３）のＭｗ、Ｍｎ及びＭｗ／Ｍｎを表２に示す。
【０１０８】
〔比較合成例４〕
モノマーを、ＤＡＡＭ  １．０ｇ、ＤＭＡＡ  ２．０ｇ及びＭＥＡ  ２．０ｇからなるモノマーに変更し、α−チオグリセロールの使用量を０．０１ｇに変更した以外は、合成例１と同様にして重合体を合成した。得られた重合体を重合体（Ｐ−Ｂ４）と称する。重合体（Ｐ−Ｂ４）のＭｗ、Ｍｎ及びＭｗ／Ｍｎを表２に示す。
【０１０９】
〔比較合成例５〕
モノマーを、ＡＣＭＯ  ４．５ｇ及びＭＭＡ  ０．５ｇからなるモノマーに変更した以外は、合成例１と同様にして重合体を合成した。得られた重合体を重合体（Ｐ−Ｂ５）と称する。重合体（Ｐ−Ｂ５）のＭｗ、Ｍｎ及びＭｗ／Ｍｎを表２に示す。
【０１１０】
〔比較合成例６〕
モノマーを、ＤＭＡＡ  ４．０ｇ及びＭＥＡ  １．０ｇからなるモノマーに変更し、α−チオグリセロールの使用量を０．０１ｇに変更した以外は、合成例１と同様にして重合体を合成した。得られた重合体を重合体（Ｐ−Ｂ６）と称する。重合体（Ｐ−Ｂ６）のＭｗ、Ｍｎ及びＭｗ／Ｍｎを表２に示す。
【０１１１】
〔比較合成例７〕
モノマーを、ＡＣＭＯ  ４．０ｇ及びＤＡＡＭ  １．０ｇからなるモノマーに変更し、連鎖移動剤の添加を無しに変更した以外は、合成例１と同様にして重合体を合成した。得られた重合体を重合体（Ｐ−Ｂ７）と称する。重合体（Ｐ−Ｂ７）のＭｗ、Ｍｎ及びＭｗ／Ｍｎを表２に示す。
【０１１２】
〔実施例１  Ｒ１バッファーの調製〕
合成例１で得た重合体（Ｐ−Ａ１）０．５ｇを蒸留水に加え、重合体（Ｐ−Ａ１）の水溶液を得た。別途、ＨＥＰＥＳ  １．１９ｇ及び塩化ナトリウム１ｇを蒸留水７０ｇに溶解させた。この水溶液に、上記重合体（Ｐ−Ａ１）の水溶液全量とアジ化ナトリウムの２質量％水溶液４．５ｇとを加えて混合した後、ｐＨを約７．５に調整し、合計１００ｇの水溶液を得た。
得られた水溶液を、Ｒ１バッファー（Ａ１）と称する。なお、Ｒ１バッファー（Ａ１）において、重合体（Ｐ−Ａ１）の濃度は０．５質量％であり、アジ化ナトリウムの濃度は０．０９質量％である。
【０１１３】
〔実施例２〜１１  Ｒ１バッファーの調製〕
重合体（Ｐ−Ａ１）を、それぞれ重合体（Ｐ−Ａ２）〜（Ｐ−Ａ１１）に変更した以外は、実施例１と同様にしてＲ１バッファーを調製した。
得られたＲ１バッファーを、Ｒ１バッファー（Ａ２）〜（Ａ１１）と称する。
【０１１４】
〔比較例１〜７  Ｒ１バッファーの調製〕
重合体（Ｐ−Ａ１）を、それぞれ重合体（Ｐ−Ｂ１）〜（Ｐ−Ｂ７）に変更した以外は、実施例１と同様にしてＲ１バッファーを調製した。
得られたＲ１バッファーを、Ｒ１バッファー（Ｂ１）〜（Ｂ７）と称する。
【０１１５】
〔比較例８  Ｒ１バッファーの調製〕
重合体（Ｐ−Ａ１）を、ポリエチレングリコール２０，０００（以下、ＰＥＧ（α）と称する（和光純薬社製））に変更した以外は、実施例１と同様にしてＲ１バッファーを調製した。
得られたＲ１バッファーを、Ｒ１バッファー（Ｂ８）と称する。
【０１１６】
〔比較例９  Ｒ１バッファーの調製〕
重合体（Ｐ−Ａ１）を、ポリエチレングリコール２，０００，０００（以下、ＰＥＧ（β）と称する（和光純薬社製））に変更した以外は、実施例１と同様にしてＲ１バッファーを調製した。
得られたＲ１バッファーを、Ｒ１バッファー（Ｂ９）と称する。
【０１１７】
〔比較例１０  Ｒ１バッファーの調製〕
重合体（Ｐ−Ａ１）を、ポリビニルピロリドンＫ９０（以下、ＰＶＰ  Ｋ９０と称する（和光純薬社製））に変更した以外は、実施例１と同様にしてＲ１バッファーを調製した。
得られたＲ１バッファーを、Ｒ１バッファー（Ｂ１０）と称する。
【０１１８】
〔比較例１１  Ｒ１バッファーの調製〕
重合体（Ｐ−Ａ１）を添加せずに調製した以外は、実施例１と同様にしてＲ１バッファーを調製した。
得られたＲ１バッファーを、Ｒ１バッファー（Ｂ１１）と称する。
【０１１９】
【表１】
2020186912.tif 000017
【０１２０】
【表２】
2020186912.tif 000018
【０１２１】
〔調製例１  Ｒ２バッファーの調製〕
ＨＥＰＥＳ  １．１９ｇ及び塩化ナトリウム１ｇを蒸留水７０ｇに溶解させた。得られた水溶液をアジ化ナトリウムの２質量％水溶液４．５ｇと混合した後、ｐＨを約７．５に調整し、合計１００ｇの水溶液を得た。以下、得られた水溶液を、Ｒ２バッファーと称する。なお、Ｒ２バッファーにおいて、アジ化ナトリウムの濃度は０．０９質量％である。
【０１２２】
〔調製例２  抗体固定化ラテックス粒子分散液の調製〕
免疫診断用ラテックス粒子（カルボキシ基を表面に有するタイプ、平均粒子径：０．０８２μｍ（ＪＳＲライフサイエンス製ＩＭＭＵＴＥＸ  Ｐ００１１））の５．３質量％水分散液１．４ｍＬ、０．５Ｍ  ＨＥＰＥＳバッファー０．７５ｍＬ、及び蒸留水４．９ｍＬを混合した。この粒子分散液に、抗ＣＲＰ抗体（ウサギ）の１６．３ｍｇ／ｍＬ水溶液を０．４６ｍＬ添加し、室温で１時間撹拌した。次いで、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（以下、ＷＳＣと称する（同仁化学社製））の１質量％水溶液を０．１５ｍＬ添加し、室温で１時間撹拌した。次に、この粒子分散液を０．５１ｍＬずつ遠心管に移し替え、１５，０００ｒｐｍにて１０分間遠心分離して、未反応の抗ＣＲＰ抗体やＷＳＣを含む上清を除去し、抗体固定化ラテックス粒子を沈殿として回収した。
次いで、ブロッキング剤として０．５質量％のＢＳＡ水溶液１ｍＬを準備し、これを上記抗体固定化ラテックス粒子に添加し、アルミブロックシェーカーで１時間分散させた。次に、得られた粒子分散液を１５，０００ｒｐｍにて１０分間遠心分離し、残余のブロッキング剤を含む上清を除去した。調製例１で得たＲ２バッファーを５ｍＬ加え、超音波で２分間分散させた。このようにして、抗体（抗ＣＲＰ抗体）固定化ラテックス粒子分散液を得た。
【０１２３】
〔試験例１  増感効果及び精度評価試験（検量線）〕
検体として、標的物質（ＣＲＰ抗原（ウサギ））の濃度０．０１ｍｇ／ｄＬ、０．０２ｍｇ／ｄＬ、０．０３ｍｇ／ｄＬ、０．０４ｍｇ／ｄＬ、０．０５ｍｇ／ｄＬ、０．１ｍｇ／ｄＬ、０．２ｍｇ／ｄＬ又は０．５ｍｇ／ｄＬの生理食塩水希釈液、生理食塩水（標的物質濃度：０ｍｇ／ｄＬ）を準備した。
日立７１８０形自動分析装置を使用して、検体３μＬ、及び第１試薬として実施例１で得たＲ１バッファー（Ａ１）１００μＬを測定セルに加えて撹拌した。次いで、第２試薬として調製例２で得た抗体固定化ラテックス粒子分散液１００μＬを測定セルに加えて撹拌した後、測定温度：３７℃の条件で免疫ラテックス凝集測定を行った。抗原抗体反応の反応性は、反応開始点と反応終了点において、それぞれの主波長：５７０ｎｍにおける値から副波長：８００ｎｍにおける値を差し引いた吸光度差の変化量（ΔＡｂｓ）として測定した。この測定を、上記各検体を用いて行った。
また、Ｒ１バッファー（Ａ１）を、実施例２〜１１、比較例１〜１１で得たＲ１バッファーにそれぞれ変更して、上記と同様の測定を行った。なお、この測定についても、上記各検体を用いて行った。
ここで、検体として生理食塩水を用いた標的物質濃度０ｍｇ／ｄＬ条件の吸光度差の変化量（ΔＡｂｓ）をブランク値とした。ブランク値を表３、４に示す。ブランク値が０以上１００未満の範囲内の場合は、標的物質以外の要因によるラテックス粒子の凝集が抑制されていることを示しており、検出や測定の精度が低下しにくいといえる。
【０１２４】
次に、実施例１で得たＲ１バッファー（Ａ１）を用いた場合の増感効果を、比較例１１で得たＲ１バッファー（Ｂ１１）を用いて測定した吸光度差の変化量（ΔＡｂｓ）をコントロールとして以下の手法で評価した。
すなわち、Ｒ１バッファー（Ａ１）と標的物質濃度０．０１ｍｇ／ｄＬの検体を用いて測定したΔＡｂｓからブランク値を差し引いて補正値（Ｘ）を算出し、更に、Ｒ１バッファー（Ｂ１１）と標的物質濃度０．０１ｍｇ／ｄＬの検体を用いて測定したΔＡｂｓの補正値（Ｙ）も同様にして算出した。補正値（Ｘ）、（Ｙ）から下記式（α）により増感率Ｚ（％）を算出し、さらに、他の標的物質濃度の検体（生理食塩水を除く）を用いた場合における増感率についても同様にして算出し、算出された８つの増感率の平均値を求め、この値を、Ｒ１バッファー（Ａ１）を用いた場合の増感効果を示す値（％）とした。この測定値を表３に示す。この測定値が大きいほど増感効果が高いといえる。
Ｚ  ＝  （Ｘ／Ｙ−１）×１００  ・・・（α）
【０１２５】
また、Ｒ１バッファー（Ａ２）〜（Ａ１１）、（Ｂ１）〜（Ｂ１０）を用いた場合についても上記と同様にして、増感効果を示す値（％）を求めた。これら測定値を表３、４に示す。なお、比較例９で得たＲ１バッファー（Ｂ９）を用いた場合は、生理食塩水（標的物質濃度：０ｍｇ／ｄＬ）を検体としたときのΔＡｂｓであるブランク値が極めて大となり、しかも、標的物質濃度を濃くしても吸光度変化がほぼ見られない結果となったため、増感効果については測定不可とした。
また、実施例２、５、１０、比較例２、１１の各Ｒ１バッファーを用いた場合の各標的物質濃度における吸光度差の変化量（ΔＡｂｓ）の補正値を図１に示す。
【０１２６】
〔試験例２  増感効果評価試験（血清）〕
検体として、血清（ｔｒｉｎａＢａｓｅＩ（トリナバイオリアクティブ社製））に標的物質（ＣＲＰ抗原（ウサギ））を０．５ｍｇ／ｄＬ相当添加したものを準備した。
日立７１８０形自動分析装置を使用して、検体３μＬ、及び第１試薬として実施例１で得たＲ１バッファー（Ａ１）１００μＬを測定セルに加えて撹拌した。次いで、第２試薬として調製例２で得た抗体固定化ラテックス粒子分散液１００μＬを測定セルに加えて撹拌した後、測定温度：３７℃の条件で免疫ラテックス凝集測定を行った。抗原抗体反応の反応性は、反応開始点と反応終了点において、それぞれの主波長：５７０ｎｍにおける値から副波長：８００ｎｍにおける値を差し引いた吸光度差の変化量（ΔＡｂｓ）として測定した。
また、Ｒ１バッファー（Ａ１）を、実施例２〜１１、比較例１〜１１で得たＲ１バッファーにそれぞれ変更して、上記と同様の測定を行った。
次いで、Ｒ１バッファー（Ａ１）〜（Ａ１１）、（Ｂ１）〜（Ｂ１０）を用いて測定したΔＡｂｓから試験例１で測定したブランク値をそれぞれ差し引いて補正値を算出し、更に、Ｒ１バッファー（Ｂ１１）を用いて測定したΔＡｂｓの補正値も同様にして算出した。これら補正値から、試験例１で示した式（α）に準じて増感率（％）を算出して、この値を、増感効果を示す値（％）とした。この測定値を表５、６に示す。この測定値が大きいほど増感効果が高いといえる。なお、比較例９については、試験例１と同様の理由で測定不可とした。
【０１２７】
【表３】
2020186912.tif 000019
【０１２８】
【表４】
2020186912.tif 000020
【０１２９】
【表５】
2020186912.tif 000021
【０１３０】
【表６】
2020186912.tif 000022
【０１３１】
表４、６に示すとおり、比較例１〜８のＲ１バッファーを用いた場合は、増感効果が不十分であった。また、比較例８〜１０のＲ１バッファーを用いた場合は、ブランク値が１００以上となり、検出や測定の精度が低下しやすいという結果になった。
これに対し、表３、５及び図１に示すとおり、特定重合体を含む実施例１〜１１のＲ１バッファーを用いることによって、ＣＲＰ検量線試験（試験例１）、血清検体試験（試験例２）のいずれにおいても、優れた増感効果が得られた。また、ブランク値が０以上１００未満の範囲内であり、高精度で検出・測定できることがわかった。
また、図１に示す結果から、特定重合体は増感効果に優れ、標的物質が低濃度であったとしても高感度で検出・測定できることがわかった。
【図１】
2020186912.tif 000034