(57)【要約】【課題】      ＰＭ２．５や黄砂、ハウスダストなどの浮遊粒子状物質によって誘発される炎症を抑制するのに有効な浮遊粒子状物質誘発性炎症抑制剤及び浮遊粒子状物質誘発性炎症抑制用食品を提供する。【解決手段】    本発明にかかる浮遊粒子状物質誘発性炎症抑制剤は、ナリンゲニン及び／又はナリルチンを有効成分とする。本発明にかかる浮遊粒子状物質誘発性炎症抑制剤は、また、ジャバラ果皮成分を有効成分とする。本発明にかかる浮遊粒子状物質誘発性炎症抑制用食品は、ナリンゲニン及び／又はナリルチンを有効成分とする。本発明にかかる浮遊粒子状物質誘発性炎症抑制用食品は、また、ジャバラ果皮成分を有効成分とする。【選択図】      なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ナリンゲニン及び／又はナリルチンを有効成分とする、浮遊粒子状物質誘発性炎症抑制剤。
【請求項２】
ジャバラ果皮成分を有効成分とする、浮遊粒子状物質誘発性炎症抑制剤。
【請求項３】
浮遊粒子状物質が都市大気粉塵である、請求項１又は２に記載の浮遊粒子状物質誘発性炎症抑制剤。
【請求項４】
浮遊粒子状物質が黄砂である、請求項１又は２に記載の浮遊粒子状物質誘発性炎症抑制剤。
【請求項５】
浮遊粒子状物質がハウスダストである、請求項１又は２に記載の浮遊粒子状物質誘発性炎症抑制剤。
【請求項６】
浮遊粒子状物質がダニ由来物質である、請求項１又は２に記載の浮遊粒子状物質誘発性炎症抑制剤。
【請求項７】
ナリンゲニン及び／又はナリルチンを有効成分とする、浮遊粒子状物質誘発性炎症抑制用食品。
【請求項８】
ジャバラ果皮成分を有効成分とする、浮遊粒子状物質誘発性炎症抑制用食品。
【請求項９】
浮遊粒子状物質が都市大気粉塵である、請求項７又は８に記載の浮遊粒子状物質誘発性炎症抑制用食品。
【請求項１０】
浮遊粒子状物質が黄砂である、請求項７又は８に記載の浮遊粒子状物質誘発性炎症抑制用食品。
【請求項１１】
浮遊粒子状物質がハウスダストである、請求項７又は８に記載の浮遊粒子状物質誘発性炎症抑制用食品。
【請求項１２】
浮遊粒子状物質がダニ由来物質である、請求項７又は８に記載の浮遊粒子状物質誘発性炎症抑制用食品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、浮遊粒子状物質誘発性炎症抑制剤及び浮遊粒子状物質誘発性炎症抑制用食品に関し、詳しくは、ＰＭ２．５や黄砂などの浮遊粒子状物質によって誘発される炎症を抑制するための浮遊粒子状物質誘発性炎症抑制剤及び浮遊粒子状物質誘発性炎症抑制用食品に関する。
【背景技術】
【０００２】
アレルギー症状の緩和には、アレルゲンだけでなくアレルギー増悪因子にも注意する必要がある。ヒトは１日当たり１５〜２０ｍ3の空気を吸っており、汚染された空気の吸入は健康に大きな影響を与えることが示唆される。
大気中には、花粉やカビ胞子のようなアレルゲンの他、主にダニやカビなどの微生物の残骸を主成分とするハウスダスト、ＰＭ２．５、黄砂、タバコの煙、建材や香料由来の化学物質などの物質が含まれており、これらがアレルギー症状の悪化や呼吸器疾患の増悪に関与することが危惧されている。
【０００３】
近年、近隣諸国の急速な工業化に伴い、当地での大気汚染が深刻化している。偏西風により、その大気汚染物質が運ばれてくるため、わが国でもＰＭ２．５に代表される大気汚染物質問題が顕在化している。
また、気候変動や乾燥地域での家畜の過放牧により砂漠化が進んでいる。そのため、東アジア地域の砂漠地域西側では、偏西風に乗って黄砂が飛来する。中国や韓国の大陸では、視界が非常に悪くなるなど、日常生活に支障を来たすレベルの黄砂の飛来が、毎年観測されている。わが国においても、黄砂の飛散は、花粉やＰＭ２．５同様に問題となっており、天気予報での飛散予想や注意喚起がされている。これらは、アレルギー患者の増悪分子と考えられており、黄砂誘導型炎症への対応も重要である。
【０００４】
一方、屋外由来の大気汚染物質とは別に、空気の汚染物質を考える上で忘れてならないのが、室内環境の微生物汚染由来の浮遊物質である。ダニやカビに代表される微生物汚染は、総称してハウスダストと呼ばれることが多いが、これには、居住者個人が対応しなければならないという特徴がある。花粉や、ＰＭ２．５、黄砂などの屋外由来の大気汚染物質は屋内で増殖することはないが、ダニやカビは生物であるため、放置すると住居内で増加の一途をたどる可能性がある。特にダニは、昨今の高断熱・高気密住宅の登場により、一年中生息することが可能となっただけでなく、人の生活と深く関係している。ダニの餌はフケ、垢、カビなどであり、生息場所は、布団などの寝具、カーペットなどである。つまり、「人の生活空間」は「ダニの生息場所」と同じといえる。ダニの餌の最大の供給源はヒトであるため、放置しておくとヒトの日常生活の場でダニは爆発的に増加するといわれている。ダニの虫体や糞は、乾燥と物理的な破砕により微粒子化され、ヒトの日常行動の中で大気中に浮遊する。
【０００５】
大気汚染物質の有害性から、それらの生体への曝露を防止することが試みられている。具体的には、空気清浄機の使用やマスクの着用である。
【０００６】
室内のような閉鎖系空間では、空気清浄機の稼働が考えられるが、家庭内で空気清浄機を稼働させても、床掃除をしないと微細な埃で床が白くなる、あるいは、空気清浄機の上部に埃が積もることからも、不十分であることが示唆される。実際に、閉鎖空間内の空気清浄度を維持するには、クリーンルームのような大掛かりな装置が必要不可欠である。
【０００７】
屋外のような開放空間では、マスク着用者を街でよく見かける。マスク素材の微粒子通過阻止性がフィルターとしての効果を発揮すると期待されるようであるが、実際は、マスク素材の阻止性能が十分発揮されるためには、医療用のＮ９５マスクのように、マスクが顔表面に完全に密着し、隙間があってはならない。吸気時にはマスクの体内側が陰圧になるため、マスクと顔の間に隙間があると、空気は抵抗の高いマスク面よりも、抵抗のない隙間から入り込むため、マスクの阻止機能は十分機能しない。また、Ｎ９５マスク装着時の呼吸は呼吸器官への負荷が高く息苦しいため、長時間の装着は不向きである。
【０００８】
以上のことから、大気汚染物質をフィルター除去するだけで生体への曝露を予防するには限界があることが示唆される。
このように、生体への大気汚染物質の曝露が不可避であることを前提とした大気汚染物質の有害性から生体を守る方法として、生体に抗炎症作用を導入することが有効な手段と考えられる。
【０００９】
屋外由来の大気汚染物質による健康被害を受ける対象者は、現在、ＰＭ２．５等の飛散時に体調を悪化させるわが国の国民は当然のこと、工業化の急速な進展に環境対策が追いつかない中国、インド、ベトナム等の国々、およびその近隣諸国の国民も考えられる。わが国のみならず上記の多くの国々で健康被害を訴える人々にとっても、健康回復に貢献することが期待される。
屋内の大気汚染物質であるハウスダストによる健康被害を受ける対象者は、高気密高断熱住宅が増加している先進国および急速に都市化が発展している新興国の人々である。
【００１０】
なお、ジャバラの果汁や果皮には、抗花粉症作用があることが知られているが（例えば、特許文献１など参照）、浮遊粒子状物質誘発性炎症抑制については報告されていない。また、これまでの抗炎症研究では、リポ多糖（ＬＰＳ）を炎症誘発剤として使用していたが（例えば、非特許文献１など参照）、本発明者らの検討によれば、後述するように、ＬＰＳと浮遊粒子状物質とでは、組成が大きく異なる上、炎症誘発機序も異なることが示唆された。
従って、従来の研究結果からは、ナリンゲニンが浮遊粒子状物質誘発性炎症抑制作用を奏することは全く示唆されず、かつ、自明と認識され得るような事実でもなかった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１１】
【特許文献１】特開２０１２−１１１７４３号公報
【非特許文献】
【００１２】
【非特許文献１】"Anti-inflammatory effects of flavonoids in Citrus jabara fruit peels", Trends in Immunotherapy (2018) doi:10.24294/ti.v2i2.844
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１３】
上述の現状に鑑み、本発明は、ＰＭ２．５や黄砂などの浮遊粒子状物質によって誘発される炎症を抑制するのに有効な浮遊粒子状物質誘発性炎症抑制剤及び浮遊粒子状物質誘発性炎症抑制用食品を提供することを目的としている。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
上記課題を解決するため、本発明は下記構成を備える。
すなわち、本発明にかかる浮遊粒子状物質誘発性炎症抑制剤は、ナリンゲニン及び／又はナリルチンを有効成分とする。
本発明にかかる浮遊粒子状物質誘発性炎症抑制剤は、また、ジャバラ果皮成分を有効成分とする。
本発明にかかる浮遊粒子状物質誘発性炎症抑制用食品は、ナリンゲニン及び／又はナリルチンを有効成分とする。
本発明にかかる浮遊粒子状物質誘発性炎症抑制用食品は、また、ジャバラ果皮成分を有効成分とする。
【発明の効果】
【００１５】
本発明にかかる浮遊粒子状物質誘発性炎症抑制剤及び浮遊粒子状物質誘発性炎症抑制用食品によれば、ＰＭ２．５に代表される大気汚染物質によって誘発される炎症を抑制することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】本発明にかかる浮遊粒子状物質誘発性炎症抑制剤及び浮遊粒子状物質誘発性炎症抑制用食品の効果の実証実験結果（実験１）を示す図である。
【図２】本発明にかかる浮遊粒子状物質誘発性炎症抑制剤及び浮遊粒子状物質誘発性炎症抑制用食品の効果の実証実験結果（実験２）を示す図である。
【図３】本発明にかかる浮遊粒子状物質誘発性炎症抑制剤及び浮遊粒子状物質誘発性炎症抑制用食品の効果の実証実験結果（実験３）を示す図である。
【図４】本発明にかかる浮遊粒子状物質誘発性炎症抑制剤及び浮遊粒子状物質誘発性炎症抑制用食品の効果の実証実験結果（実験４）を示す図である。
【図５】本発明にかかる浮遊粒子状物質誘発性炎症抑制剤及び浮遊粒子状物質誘発性炎症抑制用食品の効果の実証実験結果（実験５）を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
以下、本発明にかかる浮遊粒子状物質誘発性炎症抑制剤及び浮遊粒子状物質誘発性炎症抑制用食品の好ましい実施形態について、詳しく説明するが、本発明の範囲はこれらの説明に拘束されることはなく、以下の例示以外についても、本発明の趣旨を損なわない範囲で適宜変更実施し得る。
【００１８】
「浮遊粒子状物質」とは、一般に、大気中に浮遊する粒子状物質のうち、粒径が１０μｍ以下のものと定義されている。このうち、直径２．５μｍ以下のものは、「ＰＭ２．５」と呼ばれている。
浮遊粒子状物質には、工場などから排出される煤塵や粉塵、ディーゼル車の排出ガス中に含まれる黒煙（ディーゼル排気微粒子：ＤＰＥ）など人為的発生源によるものや、黄砂などに代表される土壌の飛散や、ダニやカビなどの微生物あるいはその死骸など自然発生源によるものなど、実に様々である。また、生成機構の違いから分類すると、発生源から直接粒子として大気中に排出される一次粒子と、ガス状物質として排出されたものが大気中で光化学反応などにより粒子に変化した二次粒子に分類される。具体的事例としては、ＰＭ２．５、黄砂、大気粉塵、化石燃料の燃焼物、ＤＰＥ、ハウスダスト、ダニ虫体および糞の分解物、カビの分解物などがこれに当たる。
本発明にかかる浮遊粒子状物質誘発性炎症抑制剤及び浮遊粒子状物質誘発性炎症抑制用食品は、上記の如き浮遊粒子状物質によって誘発される炎症を抑制するものである。
【００１９】
ナリルチンは、フラボノイドの一種であり、アグリコンがナリンゲニンであり、糖部分がβ−ルチノースであるフラバノン配糖体である。
本発明者の検討によれば、ナリンゲニンは浮遊粒子状物質誘発性炎症抑制作用を発揮する。そして、ナリルチンは、ナリンゲニンに脱グリコシル化された後、結腸細胞に吸収されるので、ナリンゲニンを生体内での活性体とするプロドラッグのように機能するものと考えられる。
従って、本発明の浮遊粒子状物質誘発性炎症抑制剤及び浮遊粒子状物質誘発性炎症抑制用食品は、活性本体であるナリンゲニン、及び／又は、生体内でナリンゲニンに変換されるナリルチンを有効成分とするものである。
【００２０】
また、ナリルチンは、ユズ、カボス、グレープフルーツ、ミカンなど柑橘類全般に含有され、特に果皮に多く含有されている。そして、柑橘類の中では、とりわけジャバラに多く含まれる。
従って、本発明の浮遊粒子状物質誘発性炎症抑制剤及び浮遊粒子状物質誘発性炎症抑制用食品は、また、ジャバラ果皮成分を有効成分とするものである。
【００２１】
ジャバラ果皮は、ジャバラ果実から手で剥いたもの、公知の自動皮むき機により剥いたもの、果汁圧搾機により果汁を搾った後に残る残渣などが使用できるが、手間を考えると果汁圧搾機の残渣が好ましい。
上記において、ジャバラ果実は、特に限定することなく使用できるが、なかでも、単位重量当たりのナリルチンの含有量が多いことから、摘果された果実や果皮が黄変する以前の未成熟段階の果実が好ましい。未成熟段階の果実は、具体的には、着果から３月〜４月後に摘果した果実が好ましい。なお、ジャバラは、一般的に６月ごろに着果することから、９月〜１０月ごろに収穫された果実が好ましい。
【００２２】
ジャバラ果皮は、例えば、生の状態で砂糖などととともにジャムやジュースなどに加工してもよいが、保存性をより高めるため、乾燥させた乾燥果皮が好ましい。乾燥果皮としては、一般的な方法、すなわち、果皮果実をそのまま又は細切したのち、日陰、陽干し、若しくは乾燥機によって乾燥する熱乾燥法、フリーズドライ法、スプレードライ法又はこれらの方法を組み合わせて製造したものが、例示できる。
【００２３】
なお、フリーズドライ法で乾燥したのち、熱乾燥法によって乾燥することによって製造したものが好ましく、８０℃で熱乾燥したものがより好ましい。このようにして製造したじゃばら乾燥果皮は、高いナリルチン濃度を維持したまま、乾燥果皮に含まれるリモネンを蒸発させ、その苦味を抑えることができる。
【００２４】
なお、この乾燥果皮はそのままでも使用できるが、食べやすさなどを考慮して、一般的な方法、すなわちボールミル等により粉末状に加工してから使用するほうがより好ましい。
【００２５】
粉末状に加工した乾燥果皮は、それ単独でも使用できるが、フリカケ、お茶漬けのもと等と混ぜて使用することにより、又は還元麦芽糖等の糖類と混ぜて顆粒状にすることにより、食味を向上させることができる。また、顆粒状に加工した乾燥果皮は、腸溶カプセル等のカプセルに収容してカプセル剤としてもよく、ステアリン酸マグネシウム等の公知の添加剤、賦形等と混合して、公知の製剤技術により錠剤としてもよい。
【００２６】
本発明にかかる浮遊粒子状物質誘発性炎症抑制剤及び浮遊粒子状物質誘発性炎症抑制用食品の生体への投与形態として、経口摂取による消化管を介した吸収、あるいは、塗布・噴霧による上皮細胞層を介した吸収などが考えられるが、この限りではない。
【００２７】
本発明にかかる浮遊粒子状物質誘発性炎症抑制用食品としては、ヒト用の一般食品、保健機能食品（特定保健用食品、栄養機能食品）、健康食品、栄養補助食品などが含まれる。食品として、具体的には、かまぼこ、ちくわ、はんぺん等の水産加工製品、ソーセージ、ハム、ウインナー等の食肉加工製品、豆腐や油揚げ、コンニャク等の農産加工製品、菓子類、調味料、香辛料や、各種野菜・果実の缶詰・瓶詰等の加工野菜・果実類、チーズ、バター、ヨーグルト等の乳製品、果実ジュース、野菜ジュース、乳清飲料、清涼飲料、健康茶、薬用酒類等の飲料、その他、栄養補強（栄養補助）等を目的とする健康維持のための錠剤、飲料、顆粒等の健康志向の飲食品類などが例示できるが、これらに限定されるものではない。
【００２８】
以下、本発明にかかる浮遊粒子状物質誘発性炎症抑制剤及び浮遊粒子状物質誘発性炎症抑制用食品の効果を実証する実験データを示す。
【００２９】
〔実験１〕
＜実験方法＞
ジャバラ果皮中の主要成分であるフラバノン配糖体ナリルチンのアグリコンであるナリンゲニンはＫＬＴ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙより購入し、ジメチルスルホキシドに溶解し試料とした。マウス・マクロファージ様細胞株ＲＡＷ２６４細胞は理化学研究所バイオリソースセンターから入手し、１０％ウシ胎児血清および１００ｕｎｉｔｓ／ｍｌのペニシリンと１００μｇ／ｍｌのストレプトマイシンを含むＤ−ＭＥＭ（以下、培養液と略す）で培養したものを用いた。リポ多糖（ＬＰＳ）は、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈより購入した。都市大気粉塵（ＮＩＥＳ  ＣＲＭ  Ｎｏ．２８）は、国立環境研究所から入手した。
９６ウェルプレートに細胞を１ウェル当たり１．０×１０5個播種し、ナリンゲニンを含む培養液（終濃度：０、５０、１００、２００μＭ）を添加した後、２時間後にＬＰＳ（終濃度１μｇ／ｍｌ）もしくは都市大気粉塵（終濃度：０、１００、２００、３００、４００、５００μｇ／ｍｌ）を含む培養液を添加し、３７℃・５％二酸化炭素雰囲気下の培養装置内で２４時間培養し、培養上清を回収した。回収した培養上清は１５，０００ｒｐｍで１０分間遠心分離し、得られた上清中の一酸化窒素（ＮＯ）はＰｒｏｍｅｇａ社製Ｇｒｉｅｓｓ  ｒｅａｇｅｎｔ  ｓｙｓｔｅｍを、ＩＬ−６、ＭＣＰ−１、ＴＮＦ−αの濃度はＢｉｏＬｅｇｅｎｄ社製ＥＬＩＳＡキットを用いて、それぞれ定量した。
【００３０】
＜これまでの抗炎症研究との相違点＞
これまでの研究では、リポ多糖（ＬＰＳ）を炎症誘導剤として使用していた。ＬＰＳはグラム陰性菌細胞の細胞壁外膜の構成成分であり、脂質と多糖から構成された糖脂質である。一方、本実験で用いた大気汚染物質は、国立環境研究所から入手した都市大気粉塵ＮＩＥＳ  ＣＲＭ  Ｎｏ．２８（１９９６年から２００５年の１０年間に北京市中心部のビルの換気フィルターに捕集された大気粉塵で粒径１０μｍ以下が９９％、２μｍ以下が４０％以上）である。その組成分析は、Ａｎａｌ  Ｂｉｏａｎａｌ  Ｃｈｅｍ（２００８）３９１：１９９７−２００３に示されているように、明らかにＬＰＳとは異なる。実験に用いた都市大気粉塵の組成をみると、ケイ素（Ｓｉ）が１４．９％、硫黄（Ｓ）が３．９１％と、多く含まれることが特徴的である。ケイ素（Ｓｉ）の存在は黄砂のような土埃成分が多く含まれていること、硫黄（Ｓ）の存在は化石燃料の燃焼由来の化学物質が多く含まれることが推察される。化石燃料の燃焼物が多く含まれるということは、化石燃料由来の芳香性化合物や窒素酸化物も同時に多く含まれることが推察される。
ＬＰＳと都市大気粉塵の炎症誘導作用を、一酸化窒素（ＮＯ）、ＩＬ−６、ＭＣＰ−１、ＴＮＦ−αを指標に比較した。ＬＰＳ濃度は多くの論文で使用される１μｇ／ｍｌとし、マウス・マクロファージ様細胞株ＲＡＷ２６４細胞を刺激した。
図１に示す通り、ＬＰＳ刺激２４時間後のＮＯ濃度は１１．６μＭであったが、都市大気粉塵は添加量１００〜５００μｇ／ｍｌで４．３２〜７．０３μＭであり、ＬＰＳ添加量１μｇ／ｍｌよりも低値を示した。一方、刺激２４時間後のＩＬ−６、ＭＣＰ−１、ＴＮＦ−α濃度では、都市大気粉塵添加１００μｇ／ｍｌのＩＬ−６濃度を除いて、都市大気粉塵添加系は、ＬＰＳ添加量１μｇ／ｍｌでの値を大きく上回り、ＬＰＳ添加時の５倍以上の値を示した。都市大気粉塵は、種々の成分の混合物であることから、炎症誘導物質も種々存在することが予想され、この結果は妥当と考えられる。
以上のことから、ＬＰＳと都市大気粉塵は、ともに炎症誘導作用を示すが、組成は大きく異なるだけでなく、炎症誘導機序は異なることが示唆された。炎症誘導作用機序が異なる以上、ＬＰＳ添加系で観察された抗炎症作用が、都市大気粉塵添加系で同様に発揮される保証はなく、実測して評価する必要があると考えられる。
【００３１】
＜ナリンゲニンによる都市大気粉塵誘導性炎症反応の抑制効果＞
図１の通り、ナリンゲニンは、都市大気粉塵添加（添加量１００〜５００μｇ／ｍｌ）によるＮＯ、ＩＬ−６、ＭＣＰ−１の産生誘導を添加量依存的に抑制した。これより、ナリンゲニンには、都市大気粉塵による炎症誘導を抑制する作用があることが示唆された。
但し、ＴＮＦ−αに関しては、抑制効果はほとんど認められず、この点はＬＰＳ刺激時の結果（非特許文献１参照）と異なった。これは、ＬＰＳと都市大気粉塵の炎症誘導機序の違いによることを意味する可能性もある。
【００３２】
〔実験２〕
国立環境研究所から入手したゴビ黄砂ＮＩＥＳ  ＣＲＭ  Ｎｏ．３０（ゴビ砂漠南西部の黄砂発生源地域で採取した黄砂を含む表層土をもとに、風工学的手法で分離捕集した砂塵系ダストで、２０１１年５月の黄砂発生シーズンに北緯４４度、東経１０９度付近の４地点で、１２００ｋｇの黄砂を含む表層土を採取し、Ｓａｉｎｓｈａｎｄ気象観測センター内の管理施設に設置したダスト発生チャンバーを用い、その表層土から砂塵を発生させたもので、サイクロン型分粒器（分離限界径１０μｍ）を用いて、微小ダストのみを分離捕集し、約２ｋｇの二次原料を得た。その後国立環境研究所において、精製分離と回転ブレンダーによる均質化を行い１．２ｋｇの最終原料を得、60Ｃｏ照射（２５ｋＧｙ）による滅菌処理をしたもの）を用いた。その組成は、Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ，２０１３，５，４０８８−４０９５に記載されるように、ケイ素（Ｓｉ）が２４．１％を占めるが硫黄（Ｓ）は検出限界以下と推定される。
黄砂濃度を１００μｇ／ｍｌの条件で、ＬＰＳと都市大気粉塵の実験（実験１）と同様に、マウス・マクロファージ細胞株ＲＡＷ２６４細胞に添加し、ナリンゲニンの効果を評価した。結果を図２に示す。
ナリンゲニンは、都市大気粉塵添加時と同様、ＮＯ産生とＩＬ−６産生には、濃度依存的に効果的な阻害効果を示したが、ＭＣＰ−１およびＴＮＦ−αに対しては、阻害効果は緩慢であった。黄砂の炎症誘導作用とナリンゲニンによる阻害作用は、ＬＰＳとは異なるため、従来のＬＰＳ刺激におけるナリンゲニンの抗炎症作用が黄砂刺激においても同様に発揮される保証はなく、実測して評価する必要があると考えられる。
【００３３】
〔実験３〕
細胞をヒト気道上皮細胞株ＢＥＡＳ−２Ｂ細胞（ＤＳファーマバイオメディカル株式会社より購入）を用い、ＢＥＧＭ培地（ＬＯＮＺＡより購入）を培養液として、ＲＡＷ２６４細胞での実験と同様に、炎症誘導刺激物質としてＬＰＳ、都市大気粉塵、黄砂を用い、ナリンゲニン（濃度：０、１００、２００μＭ）の抗炎症効果を、ＩＬ−６の産生抑制作用により評価した。結果を図３に示す。
都市大気粉塵は、ＢＥＡＳ−２Ｂ細胞へのＩＬ−６産生誘導作用は認められなかった。ＬＰＳと黄砂によるＩＬ−６の産生誘導は認められ、ナリンゲニンの添加濃度依存的に産生阻害作用が認められた。
【００３４】
〔実験４〕
株式会社ビオスタから入手したダニ虫体抽出物を、最終濃度１００、５０、１０、５μｇ／ｍｌの条件で、ＬＰＳと都市大気粉塵の実験（実験１）と同様に、マウス・マクロファージ細胞株ＲＡＷ２６４細胞に添加し、ナリンゲニンの効果を評価した。
＜ナリンゲニンによるダニ虫体抽出物誘導性炎症反応の抑制効果＞
図４の通り、ナリンゲニンは、ダニ虫体抽出物添加（添加量５〜１００μｇ／ｍｌ）によるＮＯ、ＩＬ−６、ＭＣＰ−１の産生誘導を添加量依存的に抑制した。これより、ナリンゲニンには、ダニ虫体抽出物による炎症誘導を抑制する作用があることが示唆された。但し、ＴＮＦ−αに関しては、抑制効果はほとんど認められず、この点はＬＰＳ刺激時の結果（非特許文献１参照）と異なった。これは、ＬＰＳとダニ虫体抽出物の炎症誘導機序の違いによることを意味する可能性もある。
【００３５】
〔実験５〕
株式会社ビオスタから入手したダニ糞抽出物を、最終濃度１００、５０、１０、５μｇ／ｍｌの条件で、ＬＰＳと都市大気粉塵の実験（実験１）と同様に、マウス・マクロファージ細胞株ＲＡＷ２６４細胞に添加し、ナリンゲニンの効果を評価した。
＜ナリンゲニンによるダニ糞抽出物誘導性炎症反応の抑制効果＞
図５の通り、ナリンゲニンは、ダニ虫体抽出物添加（添加量５〜１００μｇ／ｍｌ）によるＮＯ、ＩＬ−６、ＭＣＰ−１の産生誘導を添加量依存的に抑制した。これより、ナリンゲニンには、ダニ虫体抽出物による炎症誘導を抑制する作用があることが示唆された。但し、ＴＮＦ−αに関しては、抑制効果はほとんど認められず、この点はＬＰＳ刺激時の結果（非特許文献１参照）と異なった。これは、ＬＰＳとダニ虫体抽出物の炎症誘導機序の違いによることを意味する可能性もある。
また、ダニ抽出物でも、虫体抽出物と糞抽出物で、炎症誘導作用とナリンゲニンによる抑制効果の度合いが異なることから、従来のＬＰＳ刺激におけるナリンゲニンの抗炎症作用がダニ刺激においても同様に発揮される保証はなく、実測して評価する必要があると考えられる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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