(57)【要約】【課題】ＮＰＣ１Ｌ１遺伝子の発現を抑制する新規なＮＰＣ１Ｌ１発現抑制剤を提供する。【解決手段】寒天、アラビアガム、グアーガム、ジェランガム及びアルギン酸塩からなる群より選択される少なくとも１種の多糖類を有効成分とすることを特徴とするＮＰＣ１Ｌ１発現抑制剤である。【選択図】図１
2020110160.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
寒天、アラビアガム、グアーガム、ジェランガム及びアルギン酸塩からなる群より選択される少なくとも１種の多糖類を有効成分とすることを特徴とするＮＰＣ１Ｌ１発現抑制剤。
【請求項２】
前記多糖類の還元糖量が１．０〜１０．０の範囲内であることを特徴とする請求項１に記載のＮＰＣ１Ｌ１発現抑制剤。
【請求項３】
請求項１又は２に記載のＮＰＣ１Ｌ１発現抑制剤を含有することを特徴とする食品。
【請求項４】
前記ＮＰＣ１Ｌ１発現抑制剤を１ｍｇ以上含有することを特徴とする請求項３に記載の食品。
【請求項５】
請求項１又は２に記載のＮＰＣ１Ｌ１発現抑制剤を含有することを特徴とする医薬品。
【請求項６】
前記ＮＰＣ１Ｌ１発現抑制剤を１ｍｇ以上含有することを特徴とする請求項５に記載の医薬品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、コレステロール吸収阻害剤及びこれを含む食品並びに医薬品に関する。
【背景技術】
【０００２】
コレステロールは、細胞膜の構成成分として、また胆汁酸、ステロイドホルモン、ビタミンＤなどの前駆体として重要な脂質である。しかし、血中コレステロール値が高値の高コレステロール血症は、動脈硬化の主な原因であり、脳梗塞などの疾患を招く危険性がある。
【０００３】
従来の高コレステロール血症に対する治療としては、コレステロール合成阻害剤、陰イオン交換樹脂製剤、コレステロール酸化抑制剤などを用いる方法が一般的である。しかし、これらの薬物の長期連用による副作用も報告されていることから、より副作用のリスクが低い方法、たとえば、食品由来のコレステロール吸収阻害剤を用いる方法が望ましい。
【０００４】
従来の食品由来のコレステロール吸収阻害剤としては、ビフィドバクテリウム細菌を有効成分とするコレステロール吸収抑制剤（特許文献１参照）、ホエイの限外濾過濃縮物のゲル濾過画分によるコレステロール吸収抑制組成物（特許文献２参照）、ルテオリンやケルセチンなどのポリフェノールによるコレステロール吸収抑制作用（非特許文献１参照）などが知られている。
【０００５】
「Ｎｉｅｍａｎｎ  Ｐｉｃｋ  Ｔｙｐｅ  Ｃ  １  ｌｉｋｅ  １」（ＮＰＣ１Ｌ１）は、小腸のコレステロール吸収を担う膜蛋白質であり、ＮＰＣ１Ｌ１の機能を阻害することがコレステロールの吸収を直接阻害することになる。しかしながら、ビフィドバクテリウム細菌やホエイの限外濾過濃縮物のゲル濾過画分は、ＮＰＣ１Ｌ１の機能を阻害するものではないため、その効果は限定的であった。また、ルテオリンやケルセチンなどのポリフェノールは、ＮＰＣ１Ｌ１の機能を阻害するものであるが、それらのポリフェノールは植物中の含有量が少ないため大量に抽出物を得ることが困難な場合があった。さらに、これらのポリフェノールは、水に溶解しないものも多いため、抽出には有機溶媒を使用せざるを得ず、水を主体とする一般的な食品や医薬品には使用しづらいという問題があった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特許第５１１６４７３号公報（請求項１など）
【特許文献２】特許第２９３５８３７号公報（請求項１など）
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】“ＰＬｏＳ  ＯＮＥ”、２０１４年、ｖｏｌ．９（５），ｐ．１−９
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明は、上記問題点に鑑みてなされたものであり、従来のポリフェノール類よりもコレステロール吸収阻害効果が高く新規なコレステロール吸収阻害剤を提供することを目的とする。また、本発明の他の目的は、このようなコレステロール吸収阻害剤を含有する食品及び医薬品を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者らは、寒天、アラビアガム、グアーガム、ジェランガム又はアルギン酸塩に、コレステロールの吸収を阻害する機能があることを見出し、本発明を完成させるに至った。
【００１０】
すなわち本発明は、寒天、アラビアガム、グアーガム、ジェランガム及びアルギン酸塩からなる群より選択される少なくとも１種の多糖類を有効成分とすることを特徴とするコレステロール吸収阻害剤である。
【００１１】
この場合において、前記多糖類の還元糖量が１．２〜７．５の範囲内であることが好ましい。あるいは、コレステロール吸収促進遺伝子の発現を抑制することによりコレステロールの吸収を阻害する作用を有すること、さらには前記コレステロール吸収促進遺伝子がＮＰＣ１Ｌ１であることが好ましい。
【００１２】
また、本発明は、上記のコレステロール吸収阻害剤を含有することを特徴とする食品に関する。あるいは、本発明は、上記のコレステロール吸収阻害剤を含有することを特徴とする医薬品に関する。これらの場合において、前記コレステロール吸収阻害剤を１ｍｇ以上含有することが好ましい。
【発明の効果】
【００１３】
本発明によれば、従来のポリフェノール類よりもコレステロール吸収阻害効果が高く新規なコレステロール吸収阻害剤を提供することができる。また、本発明によれば、コレステロール吸収阻害効果の高い食品及び医薬品を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】実施例のコレステロール吸収阻害効果を示すグラフである。
【図２】実施例のコレステロール吸収阻害効果を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
１．コレステロール吸収阻害剤
以下、本発明のコレステロール吸収阻害剤について説明する。本発明のコレステロール吸収阻害剤（以下、単に「コレステロール吸収阻害剤」ということがある）は、寒天、アラビアガム、グアーガム、ジェランガム及びアルギン酸塩からなる群より選択される少なくとも１種の多糖類を有効成分とする。
【００１６】
コレステロール吸収阻害剤は、上記の多糖類において還元末端を有するものであることが好ましい。上記の多糖類の還元糖量は、通常は０．１〜２５．０の範囲内であり、１．０〜１０の範囲内がより好ましく、１．２〜７．５の範囲内であることが特に好ましい。還元糖量が０．１を下回ったり２５．０を上回ったりした場合は、コレステロール吸収抑制効果が小さくなる傾向がある。なお、還元糖量は、後述する実施例に記載したＰａｒｋ−Ｊｏｈｎｓｏｎ法によって測定することができる。
【００１７】
以下、本発明の多糖類について説明する。本発明の多糖類の１つである寒天は、テングサ属、オゴノリ属及びオバクサ属のうち少なくとも１以上の海藻を原料とし、アルカリ処理後水洗し、熱水で抽出してろ過した後、ろ液を冷却してゲル化させ、そのゲル化物を脱水及び乾燥させることにより得たものを、加熱及び／又は酸処理によって分子を切断することにより得ることができる。
【００１８】
アラビアガムは、アカシア属セネガル種及びセアール種のうち少なくとも１以上の樹液を原料とし、樹液を選別、溶解してろ過した後、ろ液をスプレードライにより粉末化させることにより得たものを、加熱及び／又は酸処理によって分子を切断することにより得ることができる。
【００１９】
グアーガムは、Ｃｙａｍｏｐｓｉｓ  ｔｅｔｒａｇｏｎｏｌｏｂａという一年生豆科植物の種子を原料とし、種子を解砕して胚乳部分のみを回収し、それを洗浄、粉砕することにより得たものを、加熱及び／又は酸処理によって分子を切断することにより得ることができる。
【００２０】
ジェランガムは、微生物スフィンゴモナス・エロディア（Ｓｐｈｉｎｇｏｍｏｎａｓ  ｅｌｏｄｅａ）がブドウ糖などを栄養源として菌体外に蓄積した多糖類を原料とし、アルカリ処理、分離、アルコール沈殿により精製し、乾燥、粉砕することにより得たものを、加熱及び／又は酸処理によって分子を切断することにより得ることができる。
【００２１】
アルギン酸塩は、褐藻類を原料とし、アルカリ処理、分離、カルシウム添加による沈殿、酸処理、塩処理による中和、乾燥、粉砕することにより得たものを、加熱及び／又は酸処理によって分子を切断することにより得ることができる。なお、アルギン酸塩としては、ナトリウム型、カリウム型、カルシウム型など、カウンターイオンの形態は特に限定するものではない。
【００２２】
上記において、分子の切断は、酸処理のみ、加熱処理のみ、酸処理と加熱処理との併用のいずれで行ってもよい。これらのうち、加熱処理のみで分子を切断する方法では、酸処理を行わずに加熱処理のみで分子を切断するため、切断された分子末端の還元糖量が多くなりすぎることがなく、還元糖量を０．１〜２５．０の範囲内、特に好ましくは１．２〜７．５の範囲内とすることができる。
【００２３】
加熱処理の温度は、１００〜１５０℃の範囲内が好ましく、１２０〜１４０℃の範囲内がより好ましい。また、加熱時間は、１〜１０時間の範囲内が好ましく、１〜５時間の範囲内がより好ましい。酸処理で使用される酸の種類は、特には限定されないが、塩酸、リン酸、酢酸、硝酸、シュウ酸、硫酸などから選択される１又は２種類以上を挙げることができる。酸処理の時間は、１〜１０時間の範囲内が好ましく、１〜５時間の範囲内がより好ましい。酸処理の温度は、５０〜１５０℃の範囲内が好ましく、７０〜１２０℃の範囲内がより好ましい。
【００２４】
コレステロール吸収阻害剤は、コレステロール吸収を阻害する効果がある。コレステロール吸収阻害剤を摂取すると、小腸での吸収系において、コレステロール吸収をつかさどるＮＰＣ１Ｌ１遺伝子の発現が抑制される。これによって、小腸においてコレステロール吸収を担う膜タンパク質の発現が抑制され、コレステロール吸収阻害効果が得られると考えられる。したがって、コレステロール吸収阻害剤は、ＮＰＣ１Ｌ１発現抑制剤ということもできる。
【００２５】
コレステロール吸収阻害剤によるコレステロール吸収阻害効果は、ＮＰＣ１Ｌ１遺伝子の発現量を測定することで評価することができる。ＮＰＣ１Ｌ１遺伝子の発現量は、ヒトやマウスを使って評価することができる。ヒトを使った評価では、ヒト大腸由来のＣａｃｏ−２細胞を用いることができる。この評価法としては、例えば、これらのＮＰＣ１Ｌ１遺伝子に相補的なｍＲＮＡをリアルタイムＰＣＲ（ＲＴ−ＰＣＲ）などで定量的に測定する方法などを挙げることができる。
【００２６】
ＮＰＣ１Ｌ１の発現量は、コレステロール吸収阻害剤を摂取しないときと比較して、１．２倍〜１０倍とすることが可能であり、さらには１．５倍〜５倍とすることも可能である。
【００２７】
コレステロール吸収阻害剤を摂取することにより、コレステロール吸収阻害効果が得られる。これにより、血中コレステロールレベルを低下させることが可能となり、高コレステロール血症やそれによる動脈硬化、心疾患、脳こうそくなどの脳疾患などを予防することが可能となる。コレステロール吸収阻害剤の摂取方法としては、経口摂取、皮下注射等、各種の方法を挙げることができる。
【００２８】
したがって、コレステロール吸収阻害剤を使用する方法の発明として、ヒト又は哺乳動物（ヒト以外）のコレステロール吸収阻害方法であって、寒天、アラビアガム、グアーガム、ジェランガム及びアルギン酸塩からなる群より選択される少なくとも１種の多糖類を有効成分とすることを特徴とするコレステロール吸収阻害方法ということができる。
【００２９】
２ ． 食品・医薬品
コレステロール吸収阻害剤は、食品又は医薬品に含有して摂取することが好ましい。食品としては、一般的な食品のほか、栄養補助食品、機能性食品、飲料などを挙げることができる。一般的な食品としては、特に限定されないが、例えば、キャンディー、ゼリー、ケーキ、チョコレート等の菓子、ハンバーグ、蒲鉾、はんぺん、さつま揚げ等の肉製品、ドレッシング、マヨネーズなどの調味料、清涼飲料、コーヒー、スポーツドリンク、ビール等の飲料などが挙げられる。また、医薬品としては、特に限定されないが、錠剤、カプセル剤、丸剤、散剤、顆粒剤、細粒剤、ゼリー剤、液剤、軟膏剤、クリーム剤、懸濁剤、乳剤、ローション剤などを挙げることができる。
【００３０】
食品又は医薬品に含まれるコレステロール吸収阻害剤の含有量としては、特に制限はないが、通常は１ｍｇ以上であり、１０〜１００００ｍｇの範囲内が好ましく、１００〜１０００ｍｇの範囲内が特に好ましい。
【実施例】
【００３１】
以下、本発明を実施例に基づいて具体的に説明するが、これらは本発明の目的を限定するものではない。
【００３２】
１．実験例１：原料の調整
（１）多糖類の調製方法（加熱処理、無処理）：実施例１〜１０
（ａ）寒天
寒天粉末を１３０℃で３時間加熱処理し、冷却することにより実施例１に係る寒天を得た。実施例２に係る寒天として加熱処理しないものを用いた。
（ｂ）アラビアガム
アラビアガム粉末を１３０℃で３時間加熱処理し、冷却することにより実施例３に係るアラビアガムを得た。実施例４に係るアラビアガムとして加熱処理しないものを用いた。
（ｃ）グアーガム
グアーガム粉末を１３０℃で３時間加熱処理し、冷却することにより実施例５に係るグアーガムを得た。実施例６に係るグアーガムとして加熱処理しないものを用いた。
（ｄ）ジェランガム
ジェランガム粉末を１３０℃で３時間加熱処理し、冷却することにより実施例７に係るジェランガムを得た。実施例８に係るジェランガムとして加熱処理しないものを用いた。
（ｅ）アルギン酸塩
アルギン酸ナトリウム粉末を１３０℃で３時間加熱処理し、冷却することにより実施例９に係るアルギン酸ナトリウムを得た。実施例１０に係るアルギン酸ナトリウムとして加熱処理しないものを用いた。
【００３３】
（２）多糖類の調製方法（酸処理）：実施例１１〜１５
酸処理（対粉０．５％リン酸混合後９０℃で３時間加熱処理）した寒天（実施例１１）、アラビアガム（実施例１２）、グアーガム（実施例１３）、ジェランガム（実施例１４）、アルギン酸ナトリウム（実施例１５）を用いた。
【００３４】
（３）他素材：比較例１〜１０
１２０℃〜１４０℃で加熱処理した難消化性デキストリン（比較例１）、加熱処理しない（無処理）難消化性デキストリン（比較例２）、以下同様に加熱処理グアーファイバー（比較例３）、無処理グアーファイバー（比較例４）、加熱処理ペクチン（比較例５）、無処理ペクチン（比較例６）、加熱処理キサンタンガム（比較例７）、無処理キサンタンガム（比較例８）、加熱処理コンニャクマンナン（比較例９）、無処理コンニャクマンナン（比較例１０）を得た。
【００３５】
（４）還元糖量（％）の測定
各種多糖類素材０．０１ｇを水１００ｇに分散させ、１１０℃で５分間加温し、溶解させた溶液についてＰａｒｋ−Ｊｏｈｎｓｏｎ法により還元糖量を測定した。なお、検量線はガラクトースを使用して作製した。
【００３６】
【表１】
2020110160.tif 000003
【００３７】
以上より、多糖類を加熱処理することにより、非加熱（無処理）の場合と比較して、還元糖量が多くなることがわかる。また、多糖類を酸処理することにより、無処理及び加熱処理と比較して、還元糖量が多くなることがわかる。
【００３８】
２．実験例２：各種素材によるＮＰＣ１Ｌ１の発現抑制効果
ＮＰＣ１Ｌ１の発現抑制効果を評価するために、ヒト大腸由来Ｃａｃｏ−２細胞を用いた。Ｃａｃｏ−２細胞の密度を調整し、３７℃、５％ＣＯ２の条件下で培養した。培地には、１０％牛血清と１％非必須アミノ酸（×１００）（和光純薬工業社製）を含むＥＭＥＭを使用した。１０５／ｃｍ２に達した時点から、２週間、３７℃、５％ＣＯ２の条件下で細胞培養した。
【００３９】
その後、実施例１〜１０と比較例１〜１５の各種素材を１０μＭの濃度で培養細胞系に添加し、２４時間後にセルスクレーパーで細胞を回収した。細胞培養系に素材を添加しなかった系（無添加の系）も作製し、同様に２４時間後にセルスクレーパーで細胞を回収した。回収した細胞を、ＴＲＩｚｏｌ（チオシアニン酸グアニジン・フェノール・クロロホルム）、クロロホルム及びイソプロパノールを用いて全ＲＮＡを単離した。次いで逆転写酵素を用いてｃＤＮＡを調製し、それを鋳型にＮＰＣ１Ｌ１  ｍＲＮＡの発現量をリアルタイムＰＣＲで測定した。その結果を図１に示す。
【００４０】
この図に示すように、実施例１〜１５の素材を使用した場合は、比較例１〜１０の素材を使用した場合と比較して、ＮＰＣ１Ｌ１遺伝子のｍＲＮＡの発現が低下していることがわかった。したがって、寒天、アラビアガム、グアーガム、ジェランガム及びアルギン酸ナトリウムのいずれかであって、かつ還元糖量が０．１〜２５．０の範囲内の多糖類では、コレステロール吸収抑制効果があることがわかった。
【００４１】
また、実施例１〜１０と実施例１１〜１５とを比較すると、還元糖量が低いほうがｍＲＮＡの発現がより低下していることがわかった。したがって、寒天、アラビアガム、グアーガム、ジェランガム及びアルギン酸ナトリウムのいずれかの多糖類であって、特に還元糖量が１．２〜７．５の範囲内のものが、コレステロール吸収抑制効果が高いことが分かった。
【００４２】
３．実験例３：寒天、アラビアガム、グアーガム、ジェランガム及びアルギン酸ナトリウムとポリフェノールとの比較
実験例２と同様に、ヒト大腸由来Ｃａｃｏ−２細胞を用いた。Ｃａｃｏ−２細胞の密度を調整し、３７℃、５％ＣＯ２の条件下で培養した。培地には、１０％牛血清と１％ＭＥＭ非必須アミノ酸溶液（×１００）（和光純薬工業社製）を含むＥＭＥＭを使用した。所定の細胞密度に達した時点で、実施例１に係る寒天、実施例３に係るアラビアガム、実施例５に係るグアーガム、実施例７に係るジェランガム及び実施例９に係るアルギン酸ナトリウムを終濃度１０μＭになるように培地に添加した系を調製した。
【００４３】
比較として、無添加の系、ルテオリン（比較例１１）、ケルセチン（比較例１２）を、終濃度１０μＭになるように培地に添加した系も調製した。これらの添加後、３７℃、５％ＣＯ２の条件下で２４時間培養し、２４時間後にセルスクレーパーで細胞を回収した。回収した細胞を、ＴＲＩｚｏｌ（チオシアニン酸グアニジン・フェノール・クロロホルム）、クロロホルム及びイソプロパノールを用いて全ＲＮＡを単離した。次いで逆転写酵素を用いてｃＤＮＡを調製し、それを鋳型にＮＰＣ１Ｌ１遺伝子のｍＲＮＡの発現量をリアルタイムＰＣＲで測定した。結果を図２に示す。
【００４４】
この図に示すように、実施例の多糖類は、比較例のポリフェノールと比較して、コレステロール吸収遺伝子の発現が抑制されること、すなわち、コレステロール吸収抑制効果が高いことがわかった。
【００４５】
４．実験例４：食品及び医薬組成物の作製
＜実施例１６＞
以下の配合でコレステロール吸収の阻害を目的とした食品を作製した。
実施例１に係る寒天                  ２．０ｇ
ショ糖                            ５０．０ｇ
クエン酸                            ５．０ｇ
オレンジ果汁（５倍濃縮）        ２００．０ｇ
オレンジ香料                            適量
＜実施例１７＞
以下の配合でコレステロール吸収の阻害を目的とした錠剤（１錠０．５ｇ）を作製した。
実施例１に係る寒天                ５０．０％
乳糖                              ３０．０％
結晶セルロース                    １９．５％
ステアリン酸マグネシウム            ０．５％
＜実施例１８＞
以下の配合でコレステロール吸収の阻害を目的とした散剤を作製した。
実施例１に係る寒天                ５０．０％
乳糖                              ４０．０％
コーンスターチ                      ９．７％
ステアリン酸マグネシウム            ０．３％
【００４６】
５．実験例５：コレステロール吸収阻害試験
健常成人９名でコレステロール吸収阻害試験を行った。具体的には、血中コレステロール値が正常値（総コレステロール値１４０〜１９９ｍｇ／ｄＬ）である９人を選択し、実施例１６〜１８のいずれかの食品２００ｇ又は医薬組成物を１ｇと、卵黄を用いてコレステロール値を５００ｍｇ／１００ｇに調製したものを１００ｇ摂取させた。摂取終了後、１時間及び３時間後の血中コレステロール値について測定を行なった。なお、被験者９人には本試験の１０日前に実施例１６〜１８に係る食品又は医薬品を摂取せず、卵黄を用いてコレステロール値を５００ｍｇ／１００ｇに調製したもののみを１００ｇ摂取させ、その時との比較を行なった。
【００４７】
（摂取品目）
被験者１〜３：実施例１６
被験者４〜６：実施例１７
被験者７〜９：実施例１８
（結果）
摂取しない時に比べ血中コレステロール値の低下率が３０〜４０％    １人／９人
摂取しない時に比べ血中コレステロール値の低下率が２０〜３０％    ２人／９人
摂取しない時に比べ血中コレステロール値の低下率が１０〜２０％    ２人／９人
摂取しない時に比べ血中コレステロール値の低下率が１〜１０％      ４人／９人
摂取しない時に比べ血中コレステロール値が増加                    ０人／９人
【００４８】
以上のように、すべての人で摂食後血中コレステロール値が低下した。このように、本発明品を配合した食品や医薬品には、コレステロール吸収阻害効果が認められた。
【図１】
2020110160.tif 000004
【図２】
2020110160.tif 000005