(57)【要約】      （修正有）【課題】２以上の抗原または２以上のエピトープに結合できる多価及び多重特異的結合性タンパク質を提供する。【解決手段】２以上の抗原を高親和性で結合できる結合性タンパク質のファミリーを開示する。二つの親モノクローナル抗体、即ち、抗原Ａに結合するｍＡｂＡ及び抗原Ｂに結合するｍＡｂＢを使用して、二重特異的結合性タンパク質を構築するためのアプローチを開示する。ここに開示される結合性タンパク質は、抗原、サイトカイン、ケモカイン、サイトカイン受容体、ケモカイン受容体、サイトカインもしくはケモカインの関連分子、または細胞表面タンパク質に結合することができる。また、種々の疾患の予防または治療のため、またはインビトロまたはインビボで特異的抗原を検出するために斯かる結合性タンパク質を使用する方法を含む、このような多価及び多重特異的結合性タンパク質を作製及び使用する方法も開示する。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくとも二つのポリペプチド鎖を含む結合性タンパク質であって、前記ポリペプチド鎖は対合して、２以上の抗原に結合できるＩｇＧ様分子を形成し、ここで第一のポリペプチド鎖はＶＬＡ、ＣＬ、ＶＨＢ、及びＣＨ１を含み、ここでのＶＬは軽鎖可変ドメインであり、ＣＬは軽鎖定常ドメインであり、ＶＨは重鎖可変ドメインであり、ＣＨ１は前記重鎖の第一の定常ドメインであり、Ａは第一の抗原であり、かつＢは第二の抗原である、結合性タンパク質。
【請求項２】
三つのポリペプチド鎖を含み、ここで第二のポリペプチド鎖はＶＨＡ及びＣＨ１を含み、かつ第三のポリペプチド鎖はＶＬＢ及びＣＬを含む、請求項１に記載の結合性タンパク質。
【請求項３】
二つのポリペプチド鎖を含み、ここで第二のポリペプチド鎖はＶＨＡ、ＣＨ１、ＶＬＢ及びＣＬを含む、請求項１に記載の結合性タンパク質。
【請求項４】
Ｆｃを更に含む、請求項１に記載の結合性タンパク質。
【請求項５】
前記ＦｃはヒトＩｇＧ１のＦｃである、請求項４に記載の結合性タンパク質。
【請求項６】
前記ＦｃはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０の通りである、請求項４に記載の結合性タンパク質。
【請求項７】
前記Ｆｃは変異体Ｆｃである、請求項４に記載の結合性タンパク質。
【請求項８】
少なくとも一つのポリペプチドリンカーを更に含む、請求項１、２、または３に記載の結合性タンパク質。
【請求項９】
前記少なくとも一つのポリペプチドリンカーは、
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からなる群から選択される、請求項８に記載の結合性タンパク質。
【請求項１０】
第一、第二、及び第三のポリペプチド鎖構築物から、１：１：１、１：１．５：１．５、または１：３：３からなる群から選択される第一：第二：第三のモル比で調製される、請求項２に記載の結合性タンパク質。
【請求項１１】
第一のポリペプチド鎖は、アミノ末端からカルボキシル末端へとＶＬＡ−ＣＬ−ＶＨＢ−ＣＨ１−Ｆｃを含み、第二のポリペプチド鎖は、アミノ末端からカルボキシル末端へとＶＨＡ−ＣＨ１を含み、かつ第三のポリペプチド鎖は、アミノ末端からカルボキシル末端へとＶＬＢ−ＣＬを含む、請求項２に記載の結合性タンパク質。
【請求項１２】
第一のポリペプチド鎖は、アミノ末端からカルボキシル末端へとＶＨＢ−ＣＨ１−ＶＬＡ−ＣＬ−Ｆｃを含み、第二のポリペプチド鎖は、アミノ末端からカルボキシル末端へとＶＨＡ−ＣＨ１を含み、かつ第三のポリペプチド鎖は、アミノ末端からカルボキシル末端へとＶＬＢ−ＣＬを含む、請求項２に記載の結合性タンパク質。
【請求項１３】
第一及び第二のポリペプチド鎖構築物から、１：１、１：１．５、または１：３からなる群から選択される第一：第二のモル比で調製される、請求項３に記載の結合性タンパク質。
【請求項１４】
第一のポリペプチド鎖は、アミノ末端からカルボキシル末端へとＶＬＡ−ＣＬ−ＶＨＢ−ＣＨ１−Ｆｃを含み、かつ第二のポリペプチド鎖は、アミノ末端からカルボキシル末端へとＶＨＡ−ＣＨ１−ＶＬＢ−ＣＬを含む、請求項３に記載の結合性タンパク質。
【請求項１５】
第一のポリペプチド鎖は、アミノ末端からカルボキシル末端へとＶＨＢ−ＣＨ１−ＶＬＡ−ＣＬ−Ｆｃを含み、かつ第二のポリペプチド鎖は、アミノ末端からカルボキシル末端へとＶＬＢ−ＣＬ−ＶＨＡ−ＣＨ１を含む、請求項３に記載の結合性タンパク質。
【請求項１６】
第一のポリペプチド鎖のＣＬが、ＶＨＢに直接融合される、請求項１１または１４に記載の結合性タンパク質。
【請求項１７】
第一のポリペプチド鎖のＣＬが、アミノ酸リンカーまたはオリゴペプチドリンカーを介してＶＨＢに連結される、請求項１１または１４に記載の結合性タンパク質。
【請求項１８】
第一のポリペプチド鎖のＣＨ１が、ＶＬＡに直接融合される、請求項１２または１５に記載の結合性タンパク質。
【請求項１９】
第一のポリペプチド鎖のＣＨ１が、アミノ酸リンカーまたはオリゴペプチドリンカーを介してＶＬＡに連結される、請求項１２または１５に記載の結合性タンパク質。
【請求項２０】
前記リンカーは、
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からなる群から選択される、請求項１７または１９に記載の結合性タンパク質。
【請求項２１】
前記リンカーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２６及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２８からなる群から選択される、請求項２０に記載の結合性タンパク質。
【請求項２２】
前記ポリペプチド鎖がモノマーＩｇＧ様分子を形成する、請求項１〜２１のいずれか一項に記載の結合性タンパク質。
【請求項２３】
ＩＬ−１α及びＩＬ−１β、ＩＬ−１２及びＩＬ−１８、ＴＮＦα及びＩＬ−２３、ＴＮＦα及びＩＬ−１３；ＴＮＦ及びＩＬ−１８；ＴＮＦ及びＩＬ−１２；ＴＮＦ及びＩＬ−１β；ＴＮＦ及びＭＩＦ；ＴＮＦ及びＩＬ−６、ＴＮＦ及びＩＬ−６受容体、ＴＮＦ及びＩＬ−１７；ＩＬ−１７及びＩＬ−２０；ＩＬ−１７及びＩＬ−２３；ＴＮＦ及びＩＬ−１５；ＴＮＦ及びＶＥＧＦ；ＶＥＧＦＲ及びＥＧＦＲ；ＩＬ−１３及びＩＬ−９；ＩＬ−１３及びＩＬ−４；ＩＬ−１３及びＩＬ−５；ＩＬ−１３及びＩＬ−２５；ＩＬ−１３及びＴＡＲＣ；ＩＬ−１３及びＭＤＣ；ＩＬ−１３及びＭＩＦ；ＩＬ−１３及びＴＧＦ−β；ＩＬ−１３及びＬＨＲアゴニスト；ＩＬ−１３及びＣＬ２５；ＩＬ−１３及びＳＰＲＲ２ａ；ＩＬ−１３及びＳＰＲＲ２ｂ；ＩＬ−１３及びＡＤＡＭ８；並びにＴＮＦα及びＰＧＥ４、ＩＬ−１３及びＰＥＤ２、ＴＮＦ及びＰＥＧ２からなる群から選択されるサイトカインの対に結合できる、請求項１〜２２のいずれか一項に記載の結合性タンパク質。
【請求項２４】
ヒトＩＬ−１７及びヒトＩＬ−２０に結合する、請求項２３に記載の結合性タンパク質。
【請求項２５】
抗ＩＬ−１７抗体ＬＹ及び抗ＩＬ−２０抗体１５Ｄ２由来の可変重鎖及び可変軽鎖を含む、請求項２４に記載の結合性タンパク質。
【請求項２６】
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５、２５、及び２７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含んだ第一のポリペプチド鎖、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１に従うアミノ酸配列を含んだ第二のポリペプチド鎖、並びにＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３に従う配列を含んだ第三のポリペプチド鎖を含む、請求項２に記載の結合性タンパク質。
【請求項２７】
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５、２５、及び２７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含んだ第一のポリペプチド鎖、並びにＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２９、３０及び３１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含んだ第二のポリペプチド鎖を含む、請求項３に記載の結合性タンパク質。
【請求項２８】
ＣＤ１３８及びＣＤ２０；ＣＤ１３８及びＣＤ４０；ＣＤ１９及びＣＤ２０；ＣＤ２０及びＣＤ３；ＣＤ３及びＣＤ３３；ＣＤ１６及びＣＤ３３、ＣＤ３及びＣＤ１３３；ＣＤ３８及びＣＤ１３８；ＣＤ３８及びＣＤ２０；ＣＤ２０及びＣＤ２２；ＣＤ３８及びＣＤ４０；ＣＤ４０及びＣＤ２０；ＣＤ−８及びＩＬ−６；ＣＳＰＧ及びＲＧＭ Ａ；ＣＴＬＡ−４及びＢＴＮＯ２；ＩＧＦ１及びＩＧＦ２；ＩＧＦ１／２及びＥｒｂ２Ｂ；ＩＧＦ−１Ｒ及びＥＧＦＲ；ＥＧＦＲ及びＣＤ１３；ＩＧＦ−１Ｒ及びＥｒｂＢ３；ＥＧＦＲ−２及びＩＧＦＲ；ＶＥＧＦＲ−２及びＭｅｔ；ＶＥＧＦ−Ａ及びアンジオポエチン−２（Ａｎｇ−２）；ＩＬ−１２及びＴＷＥＡＫ；ＩＬ−１３及びＩＬ−１β；ＭＡＧ及びＲＧＭ Ａ；ＮｇＲ及びＲＧＭ Ａ；ＮｏｇｏＡ及びＲＧＭ  Ａ；ＯＭＧｐ及びＲＧＭ Ａ；ＰＤＬ−１及びＣＴＬＡ−４；ＰＤ−１及びＣＴＬＡ−４；ＰＤ−１及びＴＩＭ−３；ＣＤ１３７及びＣＤ２０、ＣＤ１３７及びＥＧＦＲ、ＣＤ１３７及びＨｅｒ−２；ＣＤ１３７及びＰＤ−１、ＣＤ１３７及びＰＤＬ−１、ＶＥＧＦ及びＰＤ−Ｌ１、Ｌａｇ−３及びＴＩＭ−３、ＯＸ４０及びＰＤ−１、ＴＩＭ−３及びＰＤＬ−１、ＥＧＦＲ及びＤＬＬ−４、ＰＤＧＦＲ及びＶＥＧＦ、ＥｐＣＡＭ及びＣＤ３、Ｈｅｒ２及びＣＤ３、ＣＤ１９及びＣＤ３、ＥＧＦＲ及びＨｅｒ３、ＣＤ１６ａ及びＣＤ３０、ＣＤ３０及びＰＳＭＡ、ＥＧＦＲ及びＣＤ３、ＣＥＡ及びＣＤ３、ＴＲＯＰ−２及びＨＳＧ、ＴＲＯＰ−２及びＣＤ３、ＶＥＧＦ及びＥＧＦＲ、ＨＧＦ及びＶＥＧＦ、ＶＥＧＦ及びＶＥＧＦ（同一もしくは異なるエピトープ）、ＥＧＦＲ及びｃＭｅｔ、ＰＤＧＦ及びＶＥＧＦ、ＶＥＧＦ及びＤＬＬ−４、ＯＸ４０及びＰＤ−Ｌ１、ＩＣＯＳ及びＰＤ−１、ＩＣＯＳ及びＰＤ−Ｌ１、Ｌａｇ−３及びＰＤ−１、Ｌａｇ−３及びＰＤ−Ｌ１、Ｌａｇ−３及びＣＴＬＡ−４、ＩＣＯＳ及びＣＴＬＡ−４、ＣＤ４７及びＣＤ２０、ＲＧＭ Ａ及びＲＧＭ Ｂ；Ｔｅ３８及びＴＮＦα；ＴＮＦα及びＢｌｙｓ；ＴＮＦα及びＣＤ−２２；ＴＮＦα及びＣＴＬＡ−４ドメイン；ＴＮＦα及びＧＰ１３０；ＴＮＦα及びＩＬ−１２ｐ４０；並びにＴＮＦα及びＲＡＮＫリガンドからなる群から選択される標的の対に結合できる、請求項１〜２２のいずれか一項に記載の結合性タンパク質。
【請求項２９】
ヒトＣＤ３及びヒトＣＤ２０に結合できる、請求項２８に記載の結合性タンパク質。
【請求項３０】
抗ＣＤ３抗体ＯＫＴ３及び抗ＣＤ２０抗体オファツムマブ由来の可変重鎖及び可変軽鎖を含む、請求項２９に記載の結合性タンパク質。
【請求項３１】
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４１及び４８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含んだ第一のポリペプチド鎖；  ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４４に従うアミノ酸配列を含んだ第二のポリペプチド鎖；並びにＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４６に従うアミノ酸配列を含んだ第三のポリペプチド鎖を含む、請求項２に記載の結合性タンパク質。
【請求項３２】
ＣＴＬＡ−４上の１以上のエピトープに結合できる、請求項１に記載の結合性タンパク質。
【請求項３３】
ＰＤ−１上の１以上のエピトープに結合できる、請求項１に記載の結合性タンパク質。
【請求項３４】
Ｔ細胞上の免疫チェックポイントタンパク質上の１以上のエピトープに結合できる、請求項１に記載の結合性タンパク質。
【請求項３５】
前記免疫チェックポイントタンパク質はＴＩＭ−３、Ｌａｇ３、ＩＣＯＳ、ＢＴＬＡ、ＣＤ１６０、２Ｂ４、ＫＩＲ、ＣＤ１３７、ＣＤ２７、ＯＸ４０、ＣＤ４０Ｌ、及びＡ２ａＲからなる群から選択される、請求項３４に記載の結合性タンパク質。
【請求項３６】
免疫チェックポイント活性に関与するタンパク質上の１以上のエピトープに結合できる、請求項１に記載の結合性タンパク質。
【請求項３７】
前記タンパク質はＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ガレクチン９、ＨＶＥＭ、ＣＤ４８、Ｂ７−１、Ｂ７−２、ＩＣＯＳＬ、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＣＤ１３７Ｌ、ＯＸ４０Ｌ、ＣＤ７０、及びＣＤ４０からなる群から選択される、請求項３６に記載の結合性タンパク質。
【請求項３８】
単一特異性の抗体または抗体断片に対するのと同等以上の親和性で各抗原に結合する、請求項１〜３７のいずれか一項に記載の結合性タンパク質。
【請求項３９】
免疫接着分子、造影剤、治療剤、及び細胞傷害剤からなる群から選択される剤に接合される、請求項１〜３８のいずれか一項に記載の結合性タンパク質。
【請求項４０】
請求項１〜３９の何れか１項の結合性タンパク質と、１以上の医薬的に許容可能な担体とを含む、医薬組成物。
【請求項４１】
それを必要としている対象における炎症性疾患、自己免疫疾患、神経変性疾患、癌、敗血症、代謝障害、または脊髄損傷の治療または予防方法であって、有効量の請求項４０に記載の医薬組成物を該対象に投与することを含む、方法。
【請求項４２】
前記炎症性疾患、自己免疫疾患、または神経変性疾患は、喘息、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、多発性硬化症、アルツハイマー病、またはパーキンソン病からなる群から選択される、請求項３１に記載の方法。
【請求項４３】
炎症性疾患、自己免疫疾患、神経変性疾患、癌、または脊髄損傷の治療または予防のための医薬の製造における、請求項１〜３９のいずれか一項に記載の結合性タンパク質の使用。
【請求項４４】
前記炎症性疾患、自己免疫疾患、または神経変性疾患は、喘息、関節リウマチ、ＳＬＥ、多発性硬化症、アルツハイマー病、またはパーキンソン病からなる群から選択される、請求項４３に記載の使用。
【請求項４５】
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８７に従うアミノ酸配列を含んだ第一のポリペプチド鎖、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８９に従うアミノ酸配列を含んだ第二のポリペプチド鎖、及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９１に従う配列を含んだ第三のポリペプチド鎖を含む、請求項２に記載の結合性タンパク質。
【請求項４６】
ヒトＴＮＦ及びヒトＩＬ−１７に結合できる、請求項２３に記載の結合性タンパク質。
【請求項４７】
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９２に従うアミノ酸配列を含んだ第一のポリペプチド鎖、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９５に従うアミノ酸配列を含んだ第二のポリペプチド鎖、及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９７に従う配列を含んだ第三のポリペプチド鎖を含む、請求項２に記載の結合性タンパク質。
【請求項４８】
ヒトＣＴＬＡ―４及びヒトＰＤ−１に結合できる、請求項２８に記載の結合性タンパク質。
【請求項４９】
それを必要としている対象における関節リウマチ、乾癬、骨粗鬆症、脳卒中、肝疾患、及び口腔癌からなる群から選択される疾患の治療方法であって、該方法は、請求項１に記載の結合性タンパク質を該対象に投与することを含み、該結合性タンパク質はＩＬ−１７及びＩＬ−２０に結合できる、方法。
【請求項５０】
それを必要としている対象におけるＢ細胞癌の治療方法であって、該方法は、請求項１に記載の結合性タンパク質を該対象に投与することを含み、該結合性タンパク質はＣＤ３及びＣＤ２０に結合できる、方法。
【請求項５１】
前記Ｂ細胞癌は、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、前駆Ｂ細胞リンパ芽球性白血病／リンパ腫、成熟Ｂ細胞腫瘍、Ｂ細胞慢性リンパ球性白血病／小リンパ球性リンパ腫、Ｂ細胞前リンパ球性白血病、リンパ形質細胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、皮膚濾胞中心リンパ腫、辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、有毛細胞白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、形質細胞腫、形質細胞骨髄腫、移植後リンパ増殖性障害、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、及び未分化大細胞リンパ腫からなる群から選択される、請求項５０に記載の方法。
【請求項５２】
それを必要としている対象における自己免疫疾患または炎症性疾患の治療方法であって、該方法は、請求項１に記載の結合性タンパク質を該対象に投与することを含み、該結合性タンパク質はＴＮＦ及びＩＬ−１７に結合できる、方法。
【請求項５３】
前記自己免疫疾患は、クローン病、乾癬（プラーク乾癬を含む）、関節炎（関節リウマチ、乾癬性関節炎、骨関節炎、または若年性特発性関節炎を含む）、多発性硬化症、強直性脊椎炎、脊椎関節症、全身性エリテマトーデス、ブドウ膜炎、敗血症、神経変性疾患、神経再生、脊髄損傷、原発性及び転移性癌、呼吸器疾患喘息、アレルギー性及び非アレルギー性喘息、感染による喘息、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）の感染による喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、気道炎症を伴う状態、好酸球増加症、線維症及び過剰な粘液産生、嚢胞性線維症、肺線維症、アトピー性疾患、アトピー性皮膚炎、蕁麻疹、湿疹、アレルギー性鼻炎、アレルギー性胃腸炎、皮膚の炎症状態及び／または自己免疫状態、胃腸器官の炎症状態及び／または自己免疫状態、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、潰瘍性大腸炎、肝臓の炎症状態及び／または自己免疫状態、肝硬変、肝線維症、Ｂ型及び／またはＣ型ウイルス性肝炎によって引き起こされる肝線維症、強皮症、腫瘍または癌、肝細胞癌、神経膠芽腫、リンパ腫、ホジキンリンパ腫、ウイルス感染、細菌感染、寄生虫感染、ＨＴＬＶ−１感染、１型防御免疫応答の発現の抑制、並びにワクチン接種時の１型防御免疫応答の発現の抑制からなる群から選択される、請求項５２に記載の方法。
【請求項５４】
前記自己免疫疾患は、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、または多発性硬化症である、請求項５３に記載の方法。
【請求項５５】
それを必要としている対象における癌の治療方法であって、該方法は、請求項１に記載の結合性タンパク質を該対象に投与することを含み、該結合性タンパク質はＣＴＬＡ−４及びＰＤ−１に結合できる、方法。
【請求項５６】
前記癌は、黒色腫、腎臓癌、前立腺癌、膵臓腺癌、乳癌、結腸癌、肺癌、食道癌、頭頸部の扁平上皮細胞癌、肝臓癌、卵巣癌、子宮頸癌、甲状腺癌、神経膠芽腫、神経膠腫、白血病、リンパ腫、及び他の悪性腫瘍である、請求項５５に記載の方法。
【請求項５７】
第一のポリペプチドはＶＬＡ−ＣＬ−（Ｘ１）ｎ−ＶＨＢ−ＣＨ１−（Ｘ２）ｎを含み、ここでＶＬＡはｍＡｂ  Ａの軽鎖可変ドメインであり、ＣＬは軽鎖定常ドメインであり、Ｘ１はアミノ酸リンカーもしくはオリゴペプチドリンカーを表し、ＶＨＢはｍＡｂ  Ｂの重鎖可変ドメインであり、ＣＨ１は前記重鎖の第一定常ドメインであり、Ｘ２はＦｃ領域または異なる二量体化ドメインを表し、かつｎは０または１である、請求項１に記載の結合性タンパク質。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
引用による援用
本願は、２０１３年１２月３０日に出願された国際出願番号ＰＣＴ／ＣＮ２０１３／０９０９２３の優先権を主張し、その全体を本明細書の一部として本願に援用する。 
【０００２】
発明の分野
本発明は、多価及び多重特異的結合性タンパク質に関し、また、多価及び多重特異的結合性タンパク質を製造及び使用する方法に関する。
【０００３】
電子的に提出されたテキストファイルの説明
本明細書と共に電子的に提出されたテキストファイルの内容を、その全体を本明細書の一部として援用する：配列表のコンピュータ読み取り可能な形式のコピー（ファイル名：ＥＰＢＩ＿００１＿０１ＷＯ＿ＳｅｑＬｉｓｔ＿ＳＴ２５．ｔｘｔ、記録された日付：２０１４年１２月２日、ファイルサイズ９８ＫＢ）
【背景技術】
【０００４】
発明の背景
二重特異性または多重特異性抗体が、種々の炎症性疾患、癌、及び他の障害を治療するために有用な分子を作製する試みにおいて作製されている。
【０００５】
二重特異性抗体は、二重特異性抗体の所望の特異性を有するマウス・モノクローナル抗体を発現する二つの異なるハイブリドーマ細胞株の体細胞融合に基づくクアドローマ技術を用いて生産されてきた（Ｍｉｌｓｔｅｉｎ，Ｃ． ａｎｄ Ａ．Ｃ．Ｃｕｅｌｌｏ，Ｎａｔｕｒｅ，１９８３．３０５（５９３４）：ｐ．５３７−４０参照）。二重特異性抗体は、二つの異なるｍＡｂの化学的接合によって製造することもできる（Ｓｔａｅｒｚ，Ｕ．Ｄ．，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，１９８５．３１４（６０１２）：ｐ．６２８−３１参照）。他のアプローチでは、二つの異なるモノクローナル抗体または小さい抗体フラグメントの化学的接合が使用されている（Ｂｒｅｎｎａｎ，Ｍ．，ｅｔ ａｌ．， Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９８５．２２９（４７０８）：ｐ．８１−３参照）。
【０００６】
もう一つの方法は、ヘテロ二官能性架橋剤を用いて二つの親抗体をカップリングさせることである。特に、二つの異なるＦａｂ断片が、部位特異的な方法で、それらのヒンジシステイン残基において化学的に架橋されてきた（Ｇｌｅｎｎｉｅ，Ｍ．Ｊ．，ｅｔ ａｌ．， Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ，１９８７． １３９（７）：ｐ．２３６７−７５参照）。
【０００７】
近い過去においては、他の組換え二重特異性抗体フォーマットが開発されている（Ｋｒｉａｎｇｋｕｍ，Ｊ．，ｅｔ ａｌ．， Ｂｉｏｍｏｌ Ｅｎｇ，２００１．１８（２）：ｐ．３１−４０参照）。なかでも、タンデム一本鎖Ｆｖ分子及びダイアボディ、並びにそれらの種々の誘導体が、組み換え二重特異性抗体の構築のために使用されてきた。通常、これらの分子の構築は、異なる抗原を認識する二つの一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）断片から開始される（Ｅｃｏｎｏｍｉｄｅｓ，Ａ．Ｎ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ  Ｍｅｄ，２００３．９（１）：ｐ．４７−５２参照）。タンデムｓｃＦｖ分子（ｔａＦｖ）は、追加のペプチドリンカーを備えた二つのｓｃＦｖ分子を単純に接続する簡単なフォーマットを意味する。これらのタンデムｓｃＦｖ分子に存在する二つのｓｃＦｖ断片は、別々の折畳み実体を形成する。最大６３残基の長さを有するリンカーを用いて二つのｓｃＦｖ断片を接続するために、種々のリンカーを使用することができる（Ｎａｋａｎｉｓｈｉ，Ｋ．， ｅｔ ａｌ．． Ａｎｎｕ Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，２００１．１９：ｐ４２３−７４）。
【０００８】
最近の研究において、ＣＤ２８及び黒色腫関連プロテオグリカンに向けられたタンデムｓｃＦｖの、遺伝子導入ウサギ及びウシによるインビボ発現が報告された（Ｇｒａｃｉｅ，Ｊ．Ａ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ，１９９９．１０４（１０）：ｐ．１３９３−４０１参照）。この構築物においては、二つのｓｃＦｖ分子がＣＨ１リンカーによって連結され、最大１００ｍｇ／Ｌの二重特異性抗体の血清濃度が検出された。幾つかの研究だけが、非常に短いＡｌａ３リンカーまたは長いグリシン／セリンに富むリンカーを使用して、バクテリアにおける可溶性タンデムｓｃＦｖ分子の発現を報告しているに過ぎない（Ｌｅｕｎｇ，Ｂ．Ｐ．，ｅｔ ａｌ．， Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ，２０００．１６４（１２）：ｐ．６４９５−５０２；Ｉｔｏ，Ａ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，２００３．１７０（９）：ｐ．４８０２−９； Ｋａｒｎｉ，Ａ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｎｅｕｒｏｉｍｍｕｎｏｌ，２００２．１２５（１−２）：ｐ．１３４−４０参照）。
【０００９】
最近の研究では、３または６残基長のランダム化された中央リンカーを含むタンデムｓｃＦｖレパートリーのファージディスプレイが、細菌中において可溶性かつ活性な形態で生産されるそれらの分子を豊富化した。このアプローチは、６アミノ酸残基リンカーを有する好適なタンデムｓｃＦｖ分子の単離をもたらした（Ａｒｎｄｔ，Ｍ． ａｎｄ Ｊ．Ｋｒａｕｓｓ， Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ，２００３．２０７：ｐ．３０５−２１参照）。
【００１０】
二重特異性ダイアボディ（Ｄｂ）は、発現のためのダイアボディフォーマットを利する。ダイアボディは、ＶＨ及びＶＬドメインを連結するリンカーの長さを約５残基に低減することにより、ｓｃＦｖ断片から生成される（Ｐｅｉｐｐ，Ｍ． ａｎｄ Ｔ．Ｖａｌｅｒｉｕｓ，Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｓｏｃ Ｔｒａｎｓ，２００２．３０（４）：ｐ．５０７−１１参照）。このリンカーサイズの減少は、ＶＨドメイン及びＶＬドメインの交差対合による二つのポリペプチド鎖の二量体化を促進する。二重特異性ダイアボディは、同じ細胞内において、ＶＨＡ−ＶＬＢ及びＶＨＢ−ＶＬＡ（ＶＨ−ＶＬ配置）、またはＶＬＡ−ＶＨＢ及びＶＬＢ−ＶＨＡ（ＶＬ−ＶＨ配置）の何れかの構造を有する二つのポリペプチド鎖を発現させることによって製造される。最近の比較研究は、可変ドメインの配向が、発現及び活性結合部位の形成に影響を与える得ることを実証している（Ｍａｃｋ，Ｍ．， Ｇ．Ｒｉｅｔｈｍｕｌｌｅｒ，ａｎｄ Ｐ．Ｋｕｆｅｒ， Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１９９５．９２（１５）：ｐ．７０２１−５参照）。
【００１１】
二重特異性ダイアボディの強制的生成のための一つのアプローチは、ノブ・インツー・ホール（ｋｎｏｂ−ｉｎｔｏ−ｈｏｌｅ）ダイアボディの製造である（Ｈｏｌｌｉｇｅｒ，Ｐ．，Ｔ．Ｐｒｏｓｐｅｒｏ，ａｎｄ Ｇ．Ｗｉｎｔｅｒ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，，１９９３．９０（１４）：ｐ．６４４４−８．１８参照）。これは、ＨＥＲ２及びＣＤ３に対して指向された二重特異性ダイアボディについて実証された。Ｖａｌ３７をＰｈｅと交換し且つＬｅｕ４５をＴｒｐと交換することによって大きなノブがＶＨドメインの中に導入され、また抗ＨＥＲ２または抗ＣＤ３可変ドメインの何れかにおいて、Ｐｈｅ９８をＭｅｔに変異させ且つＴｙｒ８７をＡｌａに変異させることによって相補的な孔がＶＬドメインの中に作製された。このアプローチを使用することによって、二重特異性ダイアボディの産生は、親ダイアボディ―による７２％から、ノブ・インツー・ホール−ダイアボディの９０％超まで増加させることができた。
【００１２】
一本鎖ダイアボディ―（ｓｃＤｂ）は、二重特異性ダイアボディ様分子の形成を改善するための代替戦略を表す（Ｈｏｌｌｉｇｅｒ，Ｐ． ａｎｄ Ｇ．Ｗｉｎｔｅｒ，Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ，１９９７．４５（３−４）：ｐ．１２８−３０；Ｗｕ，Ａ．Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１９９６．２（１）：ｐ．２１−３６参照）。二重特異性一本鎖ダイアボディは、長さが約１５アミノ酸残基の追加の中央リンカーを備えた二つのダイアボディ形成ポリペプチド鎖を連結することによって製造される。その結果、一本鎖ダイアボディ単量体に対応する分子量（５０〜６０キロダルトン）を持った全ての分子が二重特異性である。幾つかの研究により、二重特異性の一本鎖ダイアボディは、細菌中において可溶性かつ活性な形態で発現され、大部分が単量体として存在する純粋な分子であることが示されている（Ｈｏｌｌｉｇｅｒ，Ｐ． ａｎｄ Ｇ．Ｗｉｎｔｅｒ，Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ，１９９７．４５（３−４）：ｐ．１２８−３０；Ｗｕ，Ａ．Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１９９６．２（１）：ｐ．２１−３６；Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ，Ａ． ａｎｄ Ｐ．Ｐａｃｋ，Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１９９７．３（２）：ｐ．８３−１０５；Ｒｉｄｇｗａｙ，Ｊ．Ｂ．，ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ，１９９６．９（７）：ｐ．６１７−２１参照）。
【００１３】
ダイアボディはＦｃに融合されて、ジダイアボディと称する更なるＩｇ様分子を生成する（Ｌｕ，Ｄ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ，２００４．２７９（４）：ｐ．２８５６−６５）。加えて、ＩｇＧの重鎖に二つのＦａｂ反復を含み、四つの抗原分子に結合できる多価抗体構築物が記載されている（米国特許番号８，７２２，８５９ Ｂ２，及び Ｍｉｌｌｅｒ，Ｋ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ，２００３．１７０（９）：ｐ．４８５４−６１参照）。
【００１４】
最近の例は、四価のＩｇＧの一本鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）融合（Ｄｏｎｇ Ｊ，ｅｔ ａｌ．２０１１ ＭＡｂｓ ３：２７３-２８８；Ｃｏｌｏｍａ ＭＪ，Ｍｏｒｒｉｓｏｎ ＳＬ １９９７ Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ １５：１５９-１６３；Ｌｕ Ｄ，ｅｔ ａｌ．２００２ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ ２６７：２１３-２２６）、カツマキソマブ、三官能性ラット／マウスハイブリッド二重特異性上皮細胞接着分子−ＣＤ３抗体（Ｌｉｎｄｈｏｆｅｒ Ｈ，ｅｔ ａｌ １９９５ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １５５：２１９-２２５）、二重特異性ＣＤ１９−ＣＤ３ ｓｃＦｖ抗体ブリナツモマブ（Ｂａｒｇｏｕ Ｒ，ｅｔ ａｌ．２００８ Ｓｃｉｅｎｃｅ ３２１：９７４-９７７）、「二重作用性Ｆａｂ」（ＤＡＦ）抗体（ＢｏｓｔｒｏｍＪ，ｅｔ ａｌ．２００９  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３２３：１６１０-１６１４）、触媒性抗体に共有結合したファーマコフォアペプチド（Ｄｏｐｐａｌａｐｕｄｉ ＶＲ，ｅｔ ａｌ．２０１０ Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ １０７：２２６１１-２２６１６）、二重特異性抗体を生じさせるための半ＩｇＧ４分子間での動的交換の使用（ｖａｎ ｄｅｒ Ｎｅｕｔ Ｋｏｌｆｓｃｈｏｔｅｎ Ｍ，ｅｔ ａｌ．２００７ Ｓｃｉｅｎｃｅ ３１７：１５５４-１５５７；Ｓｔｕｂｅｎｒａｕｃｈ Ｋ，ｅｔ ａｌ．２０１０ Ｄｒｕｇ Ｍｅｔａｂ Ｄｉｓｐｏｓ ３８：８４-９１）、または二重結合性抗体の半分の抗原結合性断片（Ｆａｂ）内での重鎖及び軽鎖ドメインの交換による使用（ＣｒｏｓｓＭａｂ方式 ）（Ｓｃｈａｅｆｅｒ Ｗ ｅｔ ａｌ，２０１１ Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ １０８：１１１８７−９２）である。
【００１５】
当該技術分野においては、二重抗原結合機能を有する単一の分子実体、並びに多価及び多重特異的な結合性タンパク質を生成する方法が必要でとされている。本発明は、これらの必要性及び他の必要性に対処するものである。
【発明の概要】
【００１６】
本発明は、多価及び多重特異的結合性タンパク質、並びにそのような結合性タンパク質を製造及び使用する方法を提供する。一実施形態において、本明細書で提供される多価及び多重特異的結合性タンパク質はタンデム型Ｆａｂ免疫グロブリン（ＦＩＴ−Ｉｇ）であり、２以上の抗原、または同じ抗原の2以上のエピトープ、または同じエピトープの２以上のコピーに結合することができる。本明細書で提供される多価及び多重結合性タンパク質は、急性及び慢性の炎症性疾患及び障害、自己免疫疾患、癌、脊髄損傷、敗血症、並びに他の疾患、障害、及び状態の治療及び／または予防のために有用である。該多価及び多重特異性結合性タンパク質を含有する医薬組成物が、本明細書において提供される。加えて、このようなＦＩＴ−Ｉｇを作製するための核酸、組換え発現ベクター、及び宿主細胞が、本明細書において提供される。インビボまたはインビトロにおいて特定の抗原を検出するために、本発明のＦＩＴ−Ｉｇを使用する方法もまた、本発明に包含される。
【００１７】
本発明は、２以上の抗原を例えば高親和性で結合できる結合性タンパク質のファミリーを提供する。一つの態様において、本発明は二つの親モノクローナル抗体、即ち、抗原Ａに結合するｍＡｂＡ及び抗原Ｂに結合するｍＡｂＢを使用して、二重特異的結合性タンパク質を構築するためのアプローチを提供する。一つの実施形態において、ここに開示される結合性タンパク質は、抗原、サイトカイン、ケモカイン、サイトカイン受容体、ケモカイン受容体、サイトカインもしくはケモカインの関連分子、または細胞表面タンパク質に結合することができる。
【００１８】
従って、一態様では、２以上の抗原に結合できる結合性タンパク質が提供される。一実施形態において、本発明は少なくとも二つのポリペプチド鎖を含む結合性タンパク質を提供し、ここでのポリペプチド鎖は対合して２以上の抗原に結合できるＩｇＧ様分子を形成する。一実施形態において、該結合性タンパク質は、２本、３本、４本、または５本以上のポリペプチド鎖を含んでいる。一実施形態において、該結合性タンパク質は少なくとも一つのＶＬＡ、少なくとも一つのＶＬＢ、少なくとも一つのＶＨＡ、少なくとも一つのＶＨＢ、少なくとも一つのＣＬ、及び少なくとも一つのＣＨ１を含んでおり、ここでのＶＬは軽鎖可変ドメインであり、ＶＨは重鎖可変ドメインであり、ＣＬは軽鎖定常ドメインであり、ＣＨ１は重鎖の第一定常ドメインであり、Ａは第一の抗原であり、Ｂは第二の抗原である。更なる実施形態において、第一のポリペプチド鎖は、ＶＬＡ、ＣＬ、ＶＨＢ、及びＣＨ１を含んでいる。更なる実施形態において、前記結合性タンパク質は更にＦｃを含んでいる。別の実施形態において、該Ｆｃ領域は変異型Ｆｃ領域である。更なる実施形態において、該変異型Ｆｃ領域は、ＡＤＣＣまたはＣＤＣのような修飾されたエフェクター機能を示す。別の実施形態では、該変異型Ｆｃ領域は、１以上のＦｃγＲに対する修飾された親和性またはアビディティーを示す。
【００１９】
一実施形態において、該結合性タンパク質は三つのポリペプチド鎖を含んでおり、ここで第一のポリペプチド鎖はＶＬＡ、ＣＬ、ＶＨＢ及びＣＨ１を具備し、第二のポリペプチド鎖はＶＨＡ及びＣＨ１を具備し、また第三のポリペプチド鎖はＶＬＢ及びＣＬを具備している。更なる実施形態において、該結合性タンパク質の第一のポリペプチド鎖は、更にＦｃを含んでいる。別の実施形態において、前記結合性タンパク質は二つのポリペプチド鎖を含んでおり、ここでの第一のポリペプチド鎖はＶＬＡ、ＣＬ、ＶＨＢ及びＣＨ１を具備し、第二のポリペプチド鎖は、ＶＨＡ、ＣＨ１、ＶＬＢ、及びＣＬを具備している。更なる実施形態では、前記第一のポリペプチド鎖は、更にＦｃを備えている。
【００２０】
一実施形態において、前記結合性タンパク質は３本のポリペプチド鎖を含んでおり、同時トランスフェクション際、それらの対応するｃＤＮＡは、第一：第二：第三のモル比が１：１：１、１：１．５：１、１：３：１、１：１：１．５、１：１：３、１：１．５：１．５、１：３：１．５、１：１．５：３、または１：３：３で存在する。別の実施形態において、前記結合性タンパク質は２本のポリペプチド鎖を含んでおり、同時トランスフェクションの際、それらの対応するｃＤＮＡは、何れか所定のトランスフェクションにおいてモノマーＦＩＴ−Ｉｇ画分を最大化する努力において、最適化により、第一：第二のモル比が１：１、１：１．５もしくは１：３、または他の任意の比率で存在する。
【００２１】
一実施形態において、本発明の結合性タンパク質はペプチドリンカーを含まない。一実施形態において、本発明の結合性タンパク質は、少なくとも一つのアミノ酸またはポリペプチドリンカーを含む。更なる実施態様において、前記リンカーは、Ｇ、ＧＳ、ＳＧ、ＧＧＳ、ＧＳＧ、ＳＧＧ、ＧＧＧ、ＧＧＧＳ、ＳＧＧＧ、ＧＧＧＧＳ、ＧＧＧＧＳＧＳ、ＧＧＧＧＳＧＳ、ＧＧＧＧＳＧＧＳ、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ、ＡＫＴＴＰＫＬＥＥＧＥＦＳＥＡＲ、ＡＫＴＴＰＫＬＥＥＧＥＦＳＥＡＲＶ、ＡＫＴＴＰＫＬＧＧ、ＳＡＫＴＴＰＫＬＧＧ、ＡＫＴＴＰＫＬＥＥＧＥＦＳＥＡＲＶ、ＳＡＫＴＴＰ、ＳＡＫＴＴＰＫＬＧＧ、ＲＡＤＡＡＰ、ＲＡＤＡＡＰＴＶＳ、ＲＡＤＡＡＡＡＧＧＰＧＳ、ＲＡＤＡＡＡＡ（Ｇ４Ｓ）４、ＳＡＫＴＴＰ、ＳＡＫＴＴＰＫＬＧＧ、ＳＡＫＴＴＰＫＬＥＥＧＥＦＳＥＡＲＶ、ＡＤＡＡＰ、ＡＤＡＡＰＴＶＳＩＦＰＰ、ＴＶＡＡＰ、ＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰ、ＱＰＫＡＡＰ、ＱＰＫＡＡＰＳＶＴＬＦＰＰ、ＡＫＴＴＰＰ、ＡＫＴＴＰＰＳＶＴＰＬＡＰ、ＡＫＴＴＡＰ、ＡＫＴＴＡＰＳＶＹＰＬＡＰ、ＡＳＴＫＧＰ、ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰ、ＧＥＮＫＶＥＹＡＰＡＬＭＡＬＳ、ＧＰＡＫＥＬＴＰＬＫＥＡＫＶＳ、及びＧＨＥＡＡＡＶＭＱＶＱＹＰＡＳからなる群から選択される。前記リンカーはまた、以前に記載されたようなインビボで切断可能なペプチドリンカー、プロテアーゼ（例えばＭＭＰ類）感受性リンカー、還元により切断され得るジスルフィド結合に基づくリンカー等（バイオ医薬のための融合タンパク質技術：応用及び課題（Ｆｕｓｉｏｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ：  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ａｎｄ  Ｃｈａｌｌｅｎｇｅｓ）、Ｓｔｅｆａｎ Ｒ．Ｓｃｈｍｉｄｔ編）、または当該技術において既知の任意の切断可能なリンカーであることができる。このような切断可能なリンカーは、組織／細胞の浸透及び分布を改善するため、標的への結合を増強するため、潜在的な副作用を低減するため、並びに二つの異なるＦａｂ領域のインビボにおける機能的及び物理的な半減期を調節するために、様々な目的でトップＦａｂをインビボで放出するために使用することができる。
【００２２】
一実施形態において、前記結合性タンパク質は、アミノ末端からカルボキシル末端までＶＬＡ−ＣＬ−ＶＨＢ−ＣＨ１−Ｆｃを含む第一のポリペプチドと、アミノ末端からカルボキシル末端までＶＨＡ−ＣＨ１を含む第二のポリペプチド鎖と、アミノ末端からカルボキシル末端までＶＬＢ−ＣＬ含む第三のポリペプチド鎖を含んでなり、ここでのＶＬは軽鎖可変ドメインであり、ＣＬは軽鎖定常ドメインであり、ＶＨは重鎖可変ドメインであり、ＣＨ１は重鎖の第一定常ドメインであり、Ａは第一のエピトープまたは抗原であり、Ｂは第二のエピトープまたは抗原である。一実施形態において、Ｆｃ領域はヒトＩｇＧ１である。別の実施形態において、Ｆｃ領域は変異型Ｆｃ領域である。更なる実施形態において、Ｆｃ領域のアミノ酸配列は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０に対して、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％同一である。更なる実施形態において、第一のポリペプチド鎖のＣＬはＶＨＢに直接融合される。別の実施形態において、第一のポリペプチド鎖のＣＬは、アミノ酸リンカーまたはオリゴペプチドリンカーを介してＶＨＢに連結される。更なる実施形態において、リンカーはＧＳＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２６）またはＧＧＧＧＳＧＳ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２８）である。
【００２３】
別の実施形態において、前記結合性タンパク質は、アミノ末端からカルボキシル末端までＶＨＢ−ＣＨ１−ＶＬＡ−ＣＬ−Ｆｃを含む第一のポリペプチド、アミノ末端からカルボキシル末端までＶＨＡ−ＣＨ１を含む第二のポリペプチド鎖、及びアミノ末端からカルボキシル末端までＶＬＢ−ＣＬを含む第三のポリペプチド鎖を含んでおり、ここでのＶＬは軽鎖可変ドメインであり、ＣＬは軽鎖定常ドメインであり、ＶＨは重鎖可変ドメインであり、ＣＨ１は重鎖の第一定常ドメインであり、Ａは第一のエピトープまたは抗原であり、Ｂは第二のエピトープまたは抗原である。一実施形態において、Ｆｃ領域はヒトＩｇＧ１である。別の実施形態において、Ｆｃ領域は変異型Ｆｃ領域である。更なる実施形態において、Ｆｃ領域のアミノ酸配列は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０に対して、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％同一である。一実施形態において、第一のポリペプチド鎖のＣＨ１はＶＬＡに直接融合される。別の実施形態では、第一のポリペプチド鎖のＣＨ１は、アミノ酸リンカーまたはオリゴペプチドリンカーを介してＶＬＡに連結される。更なる実施形態において、前記リンカーはＧＳＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２６）またはＧＧＧＧＳＧＳ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２８）である。
【００２４】
別の実施形態において、前記結合性タンパク質は、アミノ末端からカルボキシル末端までＶＬＡ−ＣＬ−ＶＨＢ−ＣＨ１−Ｆｃを含む第一のポリペプチド、及びアミノ末端からカルボキシル末端までＶＨＡ−ＣＨ１−ＶＬＢ−ＣＬを含む第二のポリペプチド鎖を含んでおり、ここでのＶＬは軽鎖可変ドメインであり、ＣＬは軽鎖定常ドメインであり、ＶＨは重鎖可変ドメインであり、ＣＨ１は重鎖の第一定常ドメインであり、Ａは第一のエピトープまたは抗原であり、Ｂは第二のエピトープまたは抗原である。一実施形態において、Ｆｃ領域はヒトＩｇＧ１である。別の実施形態において、Ｆｃ領域は、変異型Ｆｃ領域である。更なる実施形態において、Ｆｃ領域のアミノ酸配列は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０に対して、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％同一である。更なる実施形態において、前記第一のポリペプチド鎖のＣＬは、ＶＨＢに直接融合される。別の実施形態では、前記第一のポリペプチド鎖のＣＬは、アミノ酸リンカーまたはオリゴペプチドリンカーを介してＶＨＢに連結される。更なる実施形態において、前記リンカーはＧＳＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２６）またはＧＧＧＧＳＧＳ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２８）である。
【００２５】
別の実施形態において、結合性タンパク質は、アミノ末端からカルボキシル末端までＶＨＢ−ＣＨ１−ＶＬＡ−ＣＬ−Ｆｃを含む第一のポリペプチド、及びアミノ末端からカルボキシル末端までＶＬＢ−ＣＬ−ＶＨＡ−ＣＨ１を含む第二のポリペプチド鎖を含んでおり、ここでのＶＬは軽鎖可変ドメインであり、ＣＬは軽鎖定常ドメインであり、ＶＨは重鎖可変ドメインであり、ＣＨ１は重鎖の第一定常ドメインであり、Ａは第一のエピトープまたは抗原であり、Ｂは第二のエピトープまたは抗原である。一実施形態において、Ｆｃ領域はヒトＩｇＧ１である。別の実施形態において、Ｆｃ領域は変異型Ｆｃ領域である。更なる実施形態では、Ｆｃ領域のアミノ酸配列は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０に対して、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％同一である。一実施形態において、第一のポリペプチド鎖のＣＨ１はＶＬＡに直接融合される。別の実施形態では、第一のポリペプチド鎖のＣＨ１は、アミノ酸リンカーまたはオリゴペプチドリンカーを介してＶＬＡに連結される。更なる実施形態において、前記リンカーはＧＳＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２６）またはＧＧＧＧＳＧＳ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２８）である。
【００２６】
本発明の結合性タンパク質は、サイトカイン対に結合することができる。例えば、本発明の結合性タンパク質は、下記からなる群から選択されるサイトカイン対に結合することができる：即ち、ＩＬ−１α及びＩＬ−１β、ＩＬ−１２及びＩＬ−１８、ＴＮＦα及びＩＬ−２３、ＴＮＦα及びＩＬ−１３、ＴＮＦ及びＩＬ−１８、ＴＮＦ及びＩＬ−１２、ＴＮＦ及びＩＬ−１β、ＴＮＦ及びＭＩＦ、ＴＮＦ及びＩＬ−６、ＴＮＦ及びＩＬ−６受容体、ＴＮＦ及びＩＬ−１７、ＩＬ−１７及びＩＬ−２０、ＩＬ−１７及びＩＬ−２３、ＴＮＦ及びＩＬ−１５、ＴＮＦ及びＶＥＧＦ、ＶＥＧＦＲ及びＥＧＦＲ、ＰＤＧＦＲ及びＶＥＧＦ、ＩＬ−１３及びＩＬ−９、ＩＬ−１３及びＩＬ−４、ＩＬ−１３及びＩＬ−５、ＩＬ−１３及びＩＬ−２５、ＩＬ−１３及びＴＡＲＣ、ＩＬ−１３及びＭＤＣ、ＩＬ−１３及びＭＩＦ、ＩＬ−１３及びＴＧＦ−β、ＩＬ−１３及びＬＨＲアゴニスト、ＩＬ−１３及びＣＬ２５、ＩＬ−１３及びＳＰＲＲ２ａ、ＩＬ−１３及びＳＰＲＲ２ｂ、ＩＬ−１３及びＡＤＡＭ８、ＴＮＦα及びＰＧＥ４、ＩＬ−１３及びＰＥＤ２、ＴＮＦ及びＰＥＧ２である。一実施形態において、本発明の結合性タンパク質は、ＩＬ−１７及びＩＬ−２０に結合することができる。本発明の結合性タンパク質は、一実施形態ではＩＬ−１７及びＩＬ−２０に結合することができ、抗ＩＬ−１７抗体ＬＹ及び抗ＩＬ−２０抗体１５Ｄ２由来の可変重鎖及び軽鎖を含んでいる。一実施形態において、本発明の結合性タンパク質は、ＩＬ−１７及びＴＮＦに結合することができる。本発明の結合性タンパク質は、一実施形態ではＩＬ−１７及びＴＮＦに結合し、抗ＩＬ−１７抗体ＬＹ及びＴＮＦ抗体ゴリムマブ由来の可変重鎖及び軽鎖を含むことが可能である。
【００２７】
一実施形態において、本発明の結合性タンパク質はＩＬ−１７及びＩＬ−２０に結合し、またＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５，２５及び２７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、該アミノ酸配列から実質的になり、または該アミノ酸配列からなる第一のポリペプチド、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１に従うアミノ酸配列を含み、該アミノ酸配列から実質的になり、または該アミノ酸配列からなる第二のポリペプチド鎖、及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３に従うアミノ酸配列を含み、該アミノ酸配列から実質的になり、または該アミノ酸配列からなる第三のポリペプチド鎖を含んでいる。別の実施形態において、本発明の結合性タンパク質はＩＬ−２７及びＩＬ−２０に結合し、またＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５、２５及び２７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、該アミノ酸配列から実質的になり、または該アミノ酸配列からなる第一のポリペプチド鎖、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２９，３０及び３１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、該アミノ酸配列から本質的になり、または該アミノ酸配列からなる第二のポリペプチド鎖を含んでいる。
【００２８】
一実施形態において、本発明の結合性タンパク質はＴＮＦ及びＩＬ−１７に結合し、またＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８７に従うアミノ段配列を含み、該アミノ酸配列から実質的になり、または該アミノ酸配列からなる第一のポリペプチド、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８９に従うアミノ酸配列を含み、該アミノ酸配列から実質的になり、または該アミノ酸配列からなると第二のポリペプチド鎖、及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９１に従う配列を含み、該配列から実質的になり、または該配列からなる第三のポリペプチド鎖を含んでいる。
【００２９】
別の実施形態では、結合性タンパク質は、下記からなる群から選択される標的対に結合することができる：即ち、ＣＤ１３７及びＣＤ２０、ＣＤ１３７及びＥＧＦＲ、ＣＤ１３７及びＨＥＲ−２、ＣＤ１３７及びＰＤ−１、ＣＤ１３７及びＰＤＬ−１、ＶＥＧＦ及びＰＤ−Ｌ１、Ｌａｇ−３及びＴＩＭ−３、ＯＸ４０及びＰＤ−１、ＴＩＭ−３及びＰＤ−１、ＴＩＭ−３及びＰＤＬ−１、ＥＧＦＲ及びＤＬＬ−４、ＣＤ１３８及びＣＤ２０、ＣＤ１３８及びＣＤ４０、ＣＤ１９及びＣＤ２０、ＣＤ２０及びＣＤ３、ＣＤ３及びＣＤ３３、ＣＤ３及びＣＤ１３３、ＣＤ４７とＣＤ２０、ＣＤ３８及びＣＤ１３８、ＣＤ３８及びＣＤ２０、ＣＤ２０及びＣＤ２２、ＣＤ３８及びＣＤ４０、ＣＤ４０及びＣＤ２０、ＣＤ−８及びＩＬ−６、ＣＳＰＧ類及びＲＧＭ Ａ、ＣＴＬＡ−４及びＢＴＮＯ２、ＩＧＦ１及びＩＧＦ２、ＩＧＦ１／２及びＥｒｂ２Ｂ、ＩＧＦ−１Ｒ及びＥＧＦＲ、ＥＧＦＲ及びＣＤ１３、ＩＧＦ−１Ｒ及びＥｒｂＢ３、ＥＧＦＲ−２及びＩＧＦＲ、ＶＥＧＦＲ−２及びＭｅｔ、ＶＥＧＦ−Ａ及びアンジオポエチン−２（Ａｎｇ−２）、ＩＬ−１２及びＴＷＥＡＫ、ＩＬ−１３及びＩＬ−１β、ＰＤＧＦＲ及びＶＥＧＦ、ＥｐＣＡＭ及びＣＤ３、Ｈｅｒ２及びＣＤ３、ＣＤ１９及びＣＤ３、ＥＧＦＲ及びＨｅｒ３、ＣＤ１６ａ及びＣＤ３０、ＣＤ３０及びＰＳＭＡ、ＥＧＦＲ及びＣＤ３、ＣＥＡ及びＣＤ３、ＴＲＯＰ−２及びＨＳＧ、ＴＲＯＰ−２及びＣＤ３、ＭＡＧ及びＲＧＭ Ａ、ＮｇＲ及びＲＧＭ Ａ、ＮｏｇｏＡ及びＲＧＭ  Ａ、ＯＭＧｐ及びＲＧＭ Ａ、ＰＤＬ−１及びＣＴＬＡ−４、ＣＴＬＡ−４及びＰＤ−１、ＰＤ−１及びＴＩＭ−３、ＲＧＭ Ａ及びＲＧＭ Ｂ、Ｔｅ３８及びＴＮＦα、ＴＮＦα及びＢｌｙｓ、ＴＮＦα及びＣＤ−２２、ＴＮＦα及びＣＴＬＡ−４ドメイン、ＴＮＦα及びＧＰ１３０、ＴＮＦα及びＩＬ−１２ｐ４０、並びにＴＮＦα及びＲＡＮＫリガンド、ＩＸａ因子、Ｘ因子である。一実施形態において、本発明の結合性タンパク質は、ＣＤ３及びＣＤ２０に結合することができる。本発明の結合性タンパク質は、一実施形態ではＣＤ３及びＣＤ２０に結合することができ、抗ＣＤ３抗体ＯＫＴ３及び抗ＣＤ２０抗体オファツムマブ由来の可変重鎖及び軽鎖を含んでいる。一実施形態では、本発明の結合性タンパク質はＣＴＬＡ−４及びＰＤ−１に結合することができる。本発明の結合性タンパク質は、一実施形態では、ＣＴＬＡ−４及びＰＤ−１に結合することができ、ＣＴＬＡ−４抗体イピリムマブとＰＤ−１抗体ニボルマブ由来の可変重鎖及び軽鎖を含んでいる。
【００３０】
一実施形態において、本発明の結合性タンパク質はＣＤ３及びＣＤ２０に結合し、またＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４１及び４８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、該アミノ酸配列から実質的になり、または該アミノ酸配列からなる第一のポリペプチド鎖、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４４に従うアミノ酸配列を含み、該アミノ酸配列から実質的になり、または該アミノ酸配列からなる第二のポリペプチド鎖、及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４６に従うアミノ酸配列を含み、該アミノ酸配列から実質的になり、または該アミノ酸配列からなる第三のポリペプチド鎖を含んでいる。
【００３１】
一実施形態において、本発明の結合の結合性タンパク質は、ＣＴＬＡ−４及びＰＤ−１に結合し、またＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９２に従うアミノ酸配列を含み、該アミノ酸配列から実質的になり、または該アミノ酸配列からなる第一のポリペプチド鎖、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９５に従うアミノ酸配列を含み、該アミノ酸配列から実質的になり、または該アミノ酸配列からなる第二のポリペプチド鎖、及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９７に従うアミノ酸配列を含み、該アミノ酸配列から実質的になり、または該アミノ酸配列からなる第三のポリペプチド鎖を含んでいる。
【００３２】
一実施形態において、本明細書で提供される結合性タンパク質は、ＣＴＬＡ−４の１以上のエピトープに結合することができる。一実施形態では、本明細書で提供される結合性タンパク質は、ＰＤ−１上の１以上のエピトープに結合することができる。
【００３３】
一実施形態において、前記結合性タンパク質は、例えばＴＩＭ−３、Ｌａｇ３、ＩＣＯＳ、ＢＴＬＡ、ＣＤ１６０、２Ｂ４、ＫＩＲ、ＣＤ１３７、ＣＤ２７、ＯＸ４０、ＣＤ４０Ｌ及びＡ２ａＲのようなＴ細胞の１以上の免疫チェックポイントタンパク質上の１以上のエピトープに結合することができる。別の実施形態において、前記結合性タンパク質は、例えば、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ガレクチン９、ＨＶＥＭ、ＣＤ４８、Ｂ７−１、Ｂ７−２、ＩＣＯＳＬ、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＣＤ１３７Ｌ、ＯＸ４０Ｌ、ＣＤ７０、及びＣＤ４０のような免疫チェックポイント経路に関与している１以上の腫瘍細胞表面タンパク質上の１以上のエピトープに結合することができる。
【００３４】
一つの態様において、本発明は、本明細書に記載の結合性タンパク質を含む医薬組成物を提供する。一実施形態において、本明細書では、特許請求の範囲の何れかの請求項に記載の結合性タンパク質と、1以上の薬学的に許容される担体を含む医薬組成物が提供される。
【００３５】
別の態様において、本発明は、それを必要とする対象における炎症性疾患、自己免疫疾患、神経変性疾患、癌、敗血症、または脊髄損傷を治療または予防する方法を提供する。一実施形態では、当該方法は、対象に対して、有効量の本明細書で提供される１以上の結合性タンパク質、または本明細書に提供される結合性タンパク質及び薬学的に許容される担体を含有する１以上の医薬組成物を投与することを包含する。本明細書ではまた、炎症性疾患、自己免疫疾患、神経変性疾患、癌、または脊髄損傷の治療または予防のための医薬の製造における、本明細書に記載の結合性タンパク質の使用が提供される。一実施形態において、前記炎症性疾患、自己免疫疾患または神経変性疾患は、喘息、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、多発性硬化症、アルツハイマー病、またはパーキンソン病からなる群から選択される。
【００３６】
一実施形態において、本開示は、それを必要としている対象に対して、関節リウマチ、乾癬、骨粗鬆症、脳卒中、肝疾患、または口腔癌を治療または予防するための方法を提供するものであり、該方法は、前記対象に対して本明細書に記載したＦＩＴ−Ｉｇ結合性タンパク質を投与することを含んでなり、該結合性タンパク質はＩＬ−１７及びＩＬ−２０に結合できることを特徴とする。更なる実施形態において、前記ＦＩＴ−Ｉｇ結合性タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５、２５、及び２７から選択されるアミノ酸配列、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１に従うアミノ酸配列並びにアミノ酸配列２３に従うアミノ酸配列を含む。別の実施形態では、前記ＦＩＴ−Ｉｇ結合性タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５、２５、及び２７から選択されるアミノ酸配列、及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２９、３０及び３１から選択されるアミノ酸配列を含んでいる。
【００３７】
一実施形態において、本開示は、それを必要とする対象においてＢ細胞癌を治療または予防するための方法を提供し、該方法は、前記対象に対してＦＩＴ−Ｉｇ結合性タンパク質を投与することを含んでなり、該ＦＩＴ−Ｉｇ結合性タンパク質は１以上のＢ細胞抗原に結合することができる。更なる実施形態では、該ＦＩＴ−Ｉｇ結合性タンパク質はＣＤ２０に結合することができる。更なる実施形態において、前記ＦＩＴ−Ｉｇの結合性タンパク質は、ＣＤ２０及び別の抗原に結合することができる。更なる実施形態において、前記結合性タンパク質は、ＣＤ３及びＣＤ２０に結合することができる。更なる実施形態において、前記癌はＢ細胞癌である。更に別の実施形態において、前記Ｂ細胞癌は、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫［ＮＨＬ］、前駆Ｂ細胞リンパ芽球性白血病／リンパ腫、成熟Ｂ細胞腫瘍、Ｂ細胞慢性リンパ球性白血病／小リンパ球性リンパ腫、Ｂ細胞前リンパ球性白血病、リンパ形質細胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、皮膚濾胞中心リンパ腫、辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、有毛細胞白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、形質細胞腫、形質細胞骨髄腫、移植後リンパ増殖性障害、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、及び未分化大細胞リンパ腫からなる群から選択される。一実施形態において、本開示は、それを必要としている対象においてＢ細胞癌を治療または予防するための方法を提供し、該方法は、前記対象に対してＦＩＴ−Ｉｇ結合性タンパク質を投与することを含んでなり、ここでの該ＦＩＴ−Ｉｇ結合性タンパク質はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４１または４８に従うアミノ酸配列、及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４４に従うアミノ酸配列、及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４６に従うアミノ酸配列を含んでいる。
【００３８】
一実施形態において、本開示は、それを必要とする対象における自己免疫疾患、炎症性疾患、または感染症を治療または予防するための方法を提供し、該方法は前記被験体に対して、本明細書に記載のＦＩＴ−Ｉｇ結合性タンパク質を投与することを含んでなり、ここでの該結合性タンパク質はＴＮＦ及びＩＬ−１７に結合することができる。更なる実施形態では、前記ＦＩＴ−Ｉｇ結合性タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８７、８９、及び９１に従う配列を含んでいる。別の実施形態において、本開示は自己免疫疾患または炎症性疾患を治療または予防するための方法を提供し、該方法は対象に対してＦＩＴ−Ｉｇ結合性タンパク質を投与することを含み、ここでの該結合性タンパク質はＴＮＦ及びＩＬ−１７に結合することができ、また前記自己免疫または炎症性疾患はクローン病、乾癬（プラーク乾癬を含む）、関節炎（関節リウマチ、乾癬性関節炎、骨関節炎、または若年性特発性関節炎を含む）、多発性硬化症、強直性脊椎炎、脊椎関節症、全身性エリテマトーデス、ブドウ膜炎、敗血症、神経変性疾患、神経再生、脊髄損傷、原発性及び転移性癌、呼吸器疾患、喘息；アレルギー性及び非アレルギー性喘息；感染による喘息；呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）の感染による喘息；慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）；気道炎症を伴う状態；好酸球増加；線維症及び過剰な粘液産生;嚢胞性線維症；肺線維症；アトピー性障害；アトピー性皮膚炎；蕁麻疹；湿疹；アレルギー性鼻炎；アレルギー性胃腸炎；皮膚の炎症及び／または自己免疫状態；胃腸器官の炎症性及び／または自己免疫状態；炎症性腸疾患（ＩＢＤ）；潰瘍性大腸炎；肝臓の炎症及び／または自己免疫状態；肝硬変；肝線維症；Ｂ型及び／またはＣ型肝炎ウイルスによって引き起こされる肝線維症；強皮症からなる群から選択される。別の実施形態において、本開示は、それを必要とする対象において癌を治療または予防するための方法を提供し、該方法は前記対象に対して、本明細書に記載のＦＩＴ−Ｉｇ結合性タンパク質を投与することを含んでなり、該結合性タンパク質はＴＮＦ及びＩＬ−１７に結合することができる。更なる実施形態において、前記癌は肝細胞癌；神経膠芽腫；リンパ腫；またはホジキンリンパ腫である。別の実施形態において、本開示は、それを必要とする対象において感染症を治療または予防するための方法を提供し、該方法は前記対象に対して、本明細書に記載のＦＩＴ−Ｉｇ結合性タンパク質を投与することを含んでなり、ここでの前記感染症は、ウイルス感染、細菌感染、寄生虫感染、ＨＴＬＶ−１感染である。一実施形態において、本開示は、１型防御免疫応答の発現を抑制し、またワクチン接種時の１型防御免疫応答の発現を抑制するための方法を提供する。
【００３９】
一実施形態において、本開示は、それを必要とする対象における関節リウマチを治療するための方法を提供するものであり、該方法は前記対象に対してＦＩＴ−Ｉｇ結合性タンパク質を投与することを含み、該結合性タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８７，８９及び９１に従う配列を含んでいる。
【００４０】
一実施形態において、本開示は、それを必要とする対象における癌を治療または予防するための方法を提供するものであり、該方法は前記対象に対して本明細書に記載のＦＩＴ−Ｉｇ結合性タンパク質を投与することを含み、ここでの結合性タンパク質は、ＣＴＬＡ−４及びＰＤ−１に結合することができる。更なる実施形態において、前記ＦＩＴ−Ｉｇの結合性タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９２，９５及び９７を含んだアミノ酸配列を含んでいる。別の実施形態において、本開示は、それを必要とする対象において癌を治療または予防するための方法を提供し、ここでの前記結合性タンパク質はＣＴＬＡ−４及びＰＤ−１に結合することができ、また前記癌は典型的に免疫療法に応答する癌である。別の実施形態において、前記癌は、免疫療法と関連しない癌である。別の実施形態において、前記癌は、難治性または再発悪性腫瘍の癌である。別の実施形態において、前記結合性タンパク質は、腫瘍細胞の増殖または生存を阻害する。別の実施形態において、前記癌は、黒色腫（例えば、転移性悪性黒色腫）、腎臓癌（例えば明細胞癌）、前立腺癌（例えば、ホルモン不応性前立腺腺癌）、膵臓腺癌、乳癌、結腸癌、肺癌（例えば、非小細胞肺癌）、食道癌、頭頸部の扁平上皮癌、肝臓癌、卵巣癌、子宮頸癌、甲状腺癌、神経膠芽腫、神経膠腫、白血病、リンパ腫、及び他の新生物悪性腫瘍からなる群から選択される。
【００４１】
一実施形態において、本開示は、それを必要とする対象における黒色腫を治療または予防するための方法を提供し、該方法は前記対象に対して本明細書に記載のＦＩＴ−Ｉｇ結合性タンパク質を投与することを含んでなり、ここでの該結合性タンパク質はＣＴＬＡ−４及びＰＤ−１に結合することができる。更なる実施態様において、本開示は、それを必要としている対象における黒色腫を治療または予防するための方法を提供するものであり、該方法は前記対象に対して、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９２，９５、及び９７に従うアミノ酸配列を含んでなるＦＩＴ−Ｉｇ結合性タンパク質を投与することを含んでいる。
【００４２】
別の実施形態において、本開示は、それを必要とする対象において感染または感染性疾患を治療または予防するための方法を提供するものであり、該方法は前記対象に対して、本明細書に記載のＦＩＴ−Ｉｇ結合性タンパク質を投与することを含んでなり、該結合性タンパク質はＣＴＬＡ−４及びＰＤ−１に結合することができる。一実施形態において、該ＦＩＴ−Ｉｇ結合性タンパク質は病原体、毒素及び自己抗原に対する免疫応答を刺激するために、単独で、またはワクチンと組み合わせて投与される。従って、一実施形態では、本明細書において提供される結合性タンパク質はヒトへの感染性ウイルスに対する免疫応答を刺激するために使用することができ、該ウイルスにはヒト免疫不全ウイルス、Ａ型、Ｂ型及びＣ型肝炎ウイルス、エプスタイン ・バーウイルス、ヒト・サイトメガロウイルス、ヒト・パピローマウイルス、ヘルペスウイルス、細菌、真菌寄生体、または他の病原体が含まれるが、これらに限定されない。
[本発明1001]
少なくとも二つのポリペプチド鎖を含む結合性タンパク質であって、前記ポリペプチド鎖は対合して、2以上の抗原に結合できるＩｇＧ様分子を形成し、ここで第一のポリペプチド鎖はＶＬＡ、ＣＬ、ＶＨＢ、及びＣＨ1を含み、ここでのＶＬは軽鎖可変ドメインであり、ＣＬは軽鎖定常ドメインであり、ＶＨは重鎖可変ドメインであり、ＣＨ1は前記重鎖の第一の定常ドメインであり、Ａは第一の抗原であり、かつＢは第二の抗原である、結合性タンパク質。
[本発明1002]
三つのポリペプチド鎖を含み、ここで第二のポリペプチド鎖はＶＨＡ及びＣＨ1を含み、かつ第三のポリペプチド鎖はＶＬＢ及びＣＬを含む、本発明1001の結合性タンパク質。
[本発明1003]
二つのポリペプチド鎖を含み、ここで第二のポリペプチド鎖はＶＨＡ、ＣＨ1、ＶＬＢ及びＣＬを含む、本発明1001の結合性タンパク質。
[本発明1004]
Ｆｃを更に含む、本発明1001の結合性タンパク質。
[本発明1005]
前記ＦｃはヒトＩｇＧ1のＦｃである、本発明1004の結合性タンパク質。
[本発明1006]
前記ＦｃはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：20の通りである、本発明1004の結合性タンパク質。
[本発明1007]
前記Ｆｃは変異体Ｆｃである、本発明1004の結合性タンパク質。
[本発明1008]
少なくとも一つのポリペプチドリンカーを更に含む、本発明1001、1002、または1003の結合性タンパク質。
[本発明1009]
前記少なくとも一つのポリペプチドリンカーは、
2020075932.tif 000003
からなる群から選択される、本発明1008の結合性タンパク質。
[本発明1010]
第一、第二、及び第三のポリペプチド鎖構築物から、1：1：1、1：1．5：1．5、または1：3：3からなる群から選択される第一：第二：第三のモル比で調製される、本発明1002の結合性タンパク質。
[本発明1011]
第一のポリペプチド鎖は、アミノ末端からカルボキシル末端へとＶＬＡ−ＣＬ−ＶＨＢ−ＣＨ1−Ｆｃを含み、第二のポリペプチド鎖は、アミノ末端からカルボキシル末端へとＶＨＡ−ＣＨ1を含み、かつ第三のポリペプチド鎖は、アミノ末端からカルボキシル末端へとＶＬＢ−ＣＬを含む、本発明1002の結合性タンパク質。
[本発明1012]
第一のポリペプチド鎖は、アミノ末端からカルボキシル末端へとＶＨＢ−ＣＨ1−ＶＬＡ−ＣＬ−Ｆｃを含み、第二のポリペプチド鎖は、アミノ末端からカルボキシル末端へとＶＨＡ−ＣＨ1を含み、かつ第三のポリペプチド鎖は、アミノ末端からカルボキシル末端へとＶＬＢ−ＣＬを含む、本発明1002の結合性タンパク質。
[本発明1013]
第一及び第二のポリペプチド鎖構築物から、1：1、1：1．5、または1：3からなる群から選択される第一：第二のモル比で調製される、本発明1003の結合性タンパク質。
[本発明1014]
第一のポリペプチド鎖は、アミノ末端からカルボキシル末端へとＶＬＡ−ＣＬ−ＶＨＢ−ＣＨ1−Ｆｃを含み、かつ第二のポリペプチド鎖は、アミノ末端からカルボキシル末端へとＶＨＡ−ＣＨ1−ＶＬＢ−ＣＬを含む、本発明1003の結合性タンパク質。
[本発明1015]
第一のポリペプチド鎖は、アミノ末端からカルボキシル末端へとＶＨＢ−ＣＨ1−ＶＬＡ−ＣＬ−Ｆｃを含み、かつ第二のポリペプチド鎖は、アミノ末端からカルボキシル末端へとＶＬＢ−ＣＬ−ＶＨＡ−ＣＨ1を含む、本発明1003の結合性タンパク質。
[本発明1016]
第一のポリペプチド鎖のＣＬが、ＶＨＢに直接融合される、本発明1011または1014の結合性タンパク質。
[本発明1017]
第一のポリペプチド鎖のＣＬが、アミノ酸リンカーまたはオリゴペプチドリンカーを介してＶＨＢに連結される、本発明1011または1014の結合性タンパク質。
[本発明1018]
第一のポリペプチド鎖のＣＨ1が、ＶＬＡに直接融合される、本発明1012または1015の結合性タンパク質。
[本発明1019]
第一のポリペプチド鎖のＣＨ1が、アミノ酸リンカーまたはオリゴペプチドリンカーを介してＶＬＡに連結される、本発明1012または1015の結合性タンパク質。
[本発明1020]
前記リンカーは、
2020075932.tif 000004
からなる群から選択される、本発明1017または1019の結合性タンパク質。
[本発明1021]
前記リンカーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：26及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：28からなる群から選択される、本発明1020の結合性タンパク質。
[本発明1022]
前記ポリペプチド鎖がモノマーＩｇＧ様分子を形成する、本発明1001〜1021のいずれかの結合性タンパク質。
[本発明1023]
ＩＬ−1α及びＩＬ−1β、ＩＬ−12及びＩＬ−18、ＴＮＦα及びＩＬ−23、ＴＮＦα及びＩＬ−13；ＴＮＦ及びＩＬ−18；ＴＮＦ及びＩＬ−12；ＴＮＦ及びＩＬ−1β；ＴＮＦ及びＭＩＦ；ＴＮＦ及びＩＬ−6、ＴＮＦ及びＩＬ−6受容体、ＴＮＦ及びＩＬ−17；ＩＬ−17及びＩＬ−20；ＩＬ−17及びＩＬ−23；ＴＮＦ及びＩＬ−15；ＴＮＦ及びＶＥＧＦ；ＶＥＧＦＲ及びＥＧＦＲ；ＩＬ−13及びＩＬ−9；ＩＬ−13及びＩＬ−4；ＩＬ−13及びＩＬ−5；ＩＬ−13及びＩＬ−25；ＩＬ−13及びＴＡＲＣ；ＩＬ−13及びＭＤＣ；ＩＬ−13及びＭＩＦ；ＩＬ−13及びＴＧＦ−β；ＩＬ−13及びＬＨＲアゴニスト；ＩＬ−13及びＣＬ25；ＩＬ−13及びＳＰＲＲ2ａ；ＩＬ−13及びＳＰＲＲ2ｂ；ＩＬ−13及びＡＤＡＭ8；並びにＴＮＦα及びＰＧＥ4、ＩＬ−13及びＰＥＤ2、ＴＮＦ及びＰＥＧ2からなる群から選択されるサイトカインの対に結合できる、本発明1001〜1022のいずれかの結合性タンパク質。
[本発明1024]
ヒトＩＬ−17及びヒトＩＬ−20に結合する、本発明1023の結合性タンパク質。
[本発明1025]
抗ＩＬ−17抗体ＬＹ及び抗ＩＬ−20抗体15Ｄ2由来の可変重鎖及び可変軽鎖を含む、本発明1024の結合性タンパク質。
[本発明1026]
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：15、25、及び27からなる群から選択されるアミノ酸配列を含んだ第一のポリペプチド鎖、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：21に従うアミノ酸配列を含んだ第二のポリペプチド鎖、並びにＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：23に従う配列を含んだ第三のポリペプチド鎖を含む、本発明1002の結合性タンパク質。
[本発明1027]
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：15、25、及び27からなる群から選択されるアミノ酸配列を含んだ第一のポリペプチド鎖、並びにＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：29、30及び31からなる群から選択されるアミノ酸配列を含んだ第二のポリペプチド鎖を含む、本発明1003の結合性タンパク質。
[本発明1028]
ＣＤ138及びＣＤ20；ＣＤ138及びＣＤ40；ＣＤ19及びＣＤ20；ＣＤ20及びＣＤ3；ＣＤ3及びＣＤ33；ＣＤ16及びＣＤ33、ＣＤ3及びＣＤ133；ＣＤ38及びＣＤ138；ＣＤ38及びＣＤ20；ＣＤ20及びＣＤ22；ＣＤ38及びＣＤ40；ＣＤ40及びＣＤ20；ＣＤ−8及びＩＬ−6；ＣＳＰＧ及びＲＧＭ Ａ；ＣＴＬＡ−4及びＢＴＮＯ2；ＩＧＦ1及びＩＧＦ2；ＩＧＦ1／2及びＥｒｂ2Ｂ；ＩＧＦ−1Ｒ及びＥＧＦＲ；ＥＧＦＲ及びＣＤ13；ＩＧＦ−1Ｒ及びＥｒｂＢ3；ＥＧＦＲ−2及びＩＧＦＲ；ＶＥＧＦＲ−2及びＭｅｔ；ＶＥＧＦ−Ａ及びアンジオポエチン−2（Ａｎｇ−2）；ＩＬ−12及びＴＷＥＡＫ；ＩＬ−13及びＩＬ−1β；ＭＡＧ及びＲＧＭ Ａ；ＮｇＲ及びＲＧＭ Ａ；ＮｏｇｏＡ及びＲＧＭ  Ａ；ＯＭＧｐ及びＲＧＭ Ａ；ＰＤＬ−1及びＣＴＬＡ−4；ＰＤ−1及びＣＴＬＡ−4；ＰＤ−1及びＴＩＭ−3；ＣＤ137及びＣＤ20、ＣＤ137及びＥＧＦＲ、ＣＤ137及びＨｅｒ−2；ＣＤ137及びＰＤ−1、ＣＤ137及びＰＤＬ−1、ＶＥＧＦ及びＰＤ−Ｌ1、Ｌａｇ−3及びＴＩＭ−3、ＯＸ40及びＰＤ−1、ＴＩＭ−3及びＰＤＬ−1、ＥＧＦＲ及びＤＬＬ−4、ＰＤＧＦＲ及びＶＥＧＦ、ＥｐＣＡＭ及びＣＤ3、Ｈｅｒ2及びＣＤ3、ＣＤ19及びＣＤ3、ＥＧＦＲ及びＨｅｒ3、ＣＤ16ａ及びＣＤ30、ＣＤ30及びＰＳＭＡ、ＥＧＦＲ及びＣＤ3、ＣＥＡ及びＣＤ3、ＴＲＯＰ−2及びＨＳＧ、ＴＲＯＰ−2及びＣＤ3、ＶＥＧＦ及びＥＧＦＲ、ＨＧＦ及びＶＥＧＦ、ＶＥＧＦ及びＶＥＧＦ（同一もしくは異なるエピトープ）、ＥＧＦＲ及びｃＭｅｔ、ＰＤＧＦ及びＶＥＧＦ、ＶＥＧＦ及びＤＬＬ−4、ＯＸ40及びＰＤ−Ｌ1、ＩＣＯＳ及びＰＤ−1、ＩＣＯＳ及びＰＤ−Ｌ1、Ｌａｇ−3及びＰＤ−1、Ｌａｇ−3及びＰＤ−Ｌ1、Ｌａｇ−3及びＣＴＬＡ−4、ＩＣＯＳ及びＣＴＬＡ−4、ＣＤ47及びＣＤ20、ＲＧＭ Ａ及びＲＧＭ Ｂ；Ｔｅ38及びＴＮＦα；ＴＮＦα及びＢｌｙｓ；ＴＮＦα及びＣＤ−22；ＴＮＦα及びＣＴＬＡ−4ドメイン；ＴＮＦα及びＧＰ130；ＴＮＦα及びＩＬ−12ｐ40；並びにＴＮＦα及びＲＡＮＫリガンドからなる群から選択される標的の対に結合できる、本発明1001〜1022のいずれかの結合性タンパク質。
[本発明1029]
ヒトＣＤ3及びヒトＣＤ20に結合できる、本発明1028の結合性タンパク質。
[本発明1030]
抗ＣＤ3抗体ＯＫＴ3及び抗ＣＤ20抗体オファツムマブ由来の可変重鎖及び可変軽鎖を含む、本発明1029の結合性タンパク質。
[本発明1031]
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：41及び48からなる群から選択されるアミノ酸配列を含んだ第一のポリペプチド鎖；  ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：44に従うアミノ酸配列を含んだ第二のポリペプチド鎖；並びにＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：46に従うアミノ酸配列を含んだ第三のポリペプチド鎖を含む、本発明1002の結合性タンパク質。
[本発明1032]
ＣＴＬＡ−4上の1以上のエピトープに結合できる、本発明1001の結合性タンパク質。
[本発明1033]
ＰＤ−1上の1以上のエピトープに結合できる、本発明1001の結合性タンパク質。
[本発明1034]
Ｔ細胞上の免疫チェックポイントタンパク質上の1以上のエピトープに結合できる、本発明1001の結合性タンパク質。
[本発明1035]
前記免疫チェックポイントタンパク質はＴＩＭ−3、Ｌａｇ3、ＩＣＯＳ、ＢＴＬＡ、ＣＤ160、2Ｂ4、ＫＩＲ、ＣＤ137、ＣＤ27、ＯＸ40、ＣＤ40Ｌ、及びＡ2ａＲからなる群から選択される、本発明1034の結合性タンパク質。
[本発明1036]
免疫チェックポイント活性に関与するタンパク質上の1以上のエピトープに結合できる、本発明1001の結合性タンパク質。
[本発明1037]
前記タンパク質はＰＤ−Ｌ1、ＰＤ−Ｌ2、ガレクチン9、ＨＶＥＭ、ＣＤ48、Ｂ7−1、Ｂ7−2、ＩＣＯＳＬ、Ｂ7−Ｈ3、Ｂ7−Ｈ4、ＣＤ137Ｌ、ＯＸ40Ｌ、ＣＤ70、及びＣＤ40からなる群から選択される、本発明1036の結合性タンパク質。
[本発明1038]
単一特異性の抗体または抗体断片に対するのと同等以上の親和性で各抗原に結合する、本発明1001〜1037のいずれかの結合性タンパク質。
[本発明1039]
免疫接着分子、造影剤、治療剤、及び細胞傷害剤からなる群から選択される剤に接合される、本発明1001〜1038のいずれかの結合性タンパク質。
[本発明1040]
本発明1001〜1039の何れかの結合性タンパク質と、1以上の医薬的に許容可能な担体とを含む、医薬組成物。
[本発明1041]
それを必要としている対象における炎症性疾患、自己免疫疾患、神経変性疾患、癌、敗血症、代謝障害、または脊髄損傷の治療または予防方法であって、有効量の本発明1040の医薬組成物を該対象に投与することを含む、方法。
[本発明1042]
前記炎症性疾患、自己免疫疾患、または神経変性疾患は、喘息、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、多発性硬化症、アルツハイマー病、またはパーキンソン病からなる群から選択される、本発明1031の方法。
[本発明1043]
炎症性疾患、自己免疫疾患、神経変性疾患、癌、または脊髄損傷の治療または予防のための医薬の製造における、本発明1001〜1039のいずれかの結合性タンパク質の使用。
[本発明1044]
前記炎症性疾患、自己免疫疾患、または神経変性疾患は、喘息、関節リウマチ、ＳＬＥ、多発性硬化症、アルツハイマー病、またはパーキンソン病からなる群から選択される、本発明1043の使用。
[本発明1045]
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：87に従うアミノ酸配列を含んだ第一のポリペプチド鎖、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：89に従うアミノ酸配列を含んだ第二のポリペプチド鎖、及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：91に従う配列を含んだ第三のポリペプチド鎖を含む、本発明1002の結合性タンパク質。
[本発明1046]
ヒトＴＮＦ及びヒトＩＬ−17に結合できる、本発明1023の結合性タンパク質。
[本発明1047]
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：92に従うアミノ酸配列を含んだ第一のポリペプチド鎖、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：95に従うアミノ酸配列を含んだ第二のポリペプチド鎖、及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：97に従う配列を含んだ第三のポリペプチド鎖を含む、本発明1002の結合性タンパク質。
[本発明1048]
ヒトＣＴＬＡ―4及びヒトＰＤ−1に結合できる、本発明1028の結合性タンパク質。
[本発明1049]
それを必要としている対象における関節リウマチ、乾癬、骨粗鬆症、脳卒中、肝疾患、及び口腔癌からなる群から選択される疾患の治療方法であって、該方法は、本発明1001の結合性タンパク質を該対象に投与することを含み、該結合性タンパク質はＩＬ−17及びＩＬ−20に結合できる、方法。
[本発明1050]
それを必要としている対象におけるＢ細胞癌の治療方法であって、該方法は、本発明1001の結合性タンパク質を該対象に投与することを含み、該結合性タンパク質はＣＤ3及びＣＤ20に結合できる、方法。
[本発明1051]
前記Ｂ細胞癌は、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、前駆Ｂ細胞リンパ芽球性白血病／リンパ腫、成熟Ｂ細胞腫瘍、Ｂ細胞慢性リンパ球性白血病／小リンパ球性リンパ腫、Ｂ細胞前リンパ球性白血病、リンパ形質細胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、皮膚濾胞中心リンパ腫、辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、有毛細胞白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、形質細胞腫、形質細胞骨髄腫、移植後リンパ増殖性障害、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、及び未分化大細胞リンパ腫からなる群から選択される、本発明1050の方法。
[本発明1052]
それを必要としている対象における自己免疫疾患または炎症性疾患の治療方法であって、該方法は、本発明1001の結合性タンパク質を該対象に投与することを含み、該結合性タンパク質はＴＮＦ及びＩＬ−17に結合できる、方法。
[本発明1053]
前記自己免疫疾患は、クローン病、乾癬（プラーク乾癬を含む）、関節炎（関節リウマチ、乾癬性関節炎、骨関節炎、または若年性特発性関節炎を含む）、多発性硬化症、強直性脊椎炎、脊椎関節症、全身性エリテマトーデス、ブドウ膜炎、敗血症、神経変性疾患、神経再生、脊髄損傷、原発性及び転移性癌、呼吸器疾患喘息、アレルギー性及び非アレルギー性喘息、感染による喘息、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）の感染による喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、気道炎症を伴う状態、好酸球増加症、線維症及び過剰な粘液産生、嚢胞性線維症、肺線維症、アトピー性疾患、アトピー性皮膚炎、蕁麻疹、湿疹、アレルギー性鼻炎、アレルギー性胃腸炎、皮膚の炎症状態及び／または自己免疫状態、胃腸器官の炎症状態及び／または自己免疫状態、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、潰瘍性大腸炎、肝臓の炎症状態及び／または自己免疫状態、肝硬変、肝線維症、Ｂ型及び／またはＣ型ウイルス性肝炎によって引き起こされる肝線維症、強皮症、腫瘍または癌、肝細胞癌、神経膠芽腫、リンパ腫、ホジキンリンパ腫、ウイルス感染、細菌感染、寄生虫感染、ＨＴＬＶ−1感染、1型防御免疫応答の発現の抑制、並びにワクチン接種時の1型防御免疫応答の発現の抑制からなる群から選択される、本発明1052の方法。
[本発明1054]
前記自己免疫疾患は、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、または多発性硬化症である、本発明1053の方法。
[本発明1055]
それを必要としている対象における癌の治療方法であって、該方法は、本発明1001の結合性タンパク質を該対象に投与することを含み、該結合性タンパク質はＣＴＬＡ−4及びＰＤ−1に結合できる、方法。
[本発明1056]
前記癌は、黒色腫、腎臓癌、前立腺癌、膵臓腺癌、乳癌、結腸癌、肺癌、食道癌、頭頸部の扁平上皮細胞癌、肝臓癌、卵巣癌、子宮頸癌、甲状腺癌、神経膠芽腫、神経膠腫、白血病、リンパ腫、及び他の悪性腫瘍である、本発明1055の方法。
[本発明1057]
第一のポリペプチドはＶＬＡ−ＣＬ−（Ｘ1）ｎ−ＶＨＢ−ＣＨ1−（Ｘ2）ｎを含み、ここでＶＬＡはｍＡｂ  Ａの軽鎖可変ドメインであり、ＣＬは軽鎖定常ドメインであり、Ｘ1はアミノ酸リンカーもしくはオリゴペプチドリンカーを表し、ＶＨＢはｍＡｂ  Ｂの重鎖可変ドメインであり、ＣＨ1は前記重鎖の第一定常ドメインであり、Ｘ2はＦｃ領域または異なる二量体化ドメインを表し、かつｎは0または1である、本発明1001の結合性タンパク質。
【図面の簡単な説明】
【００４３】
【図１】図１Ａは、ＦＩＴ１−Ｉｇ、ＦＩＴ２−Ｉｇ、及びＦＩＴ３−Ｉｇのような三つの構築物から構成されるＦＩＴ−Ｉｇの構造を示している。図１Ｂは、ＦＩＴ１−Ｉｇを調製するために使用される三つの構築物を示す。
【図２】図２Ａは、二つの構築物から構成されるＦＩＴ−Ｉｇの基本的な構造を示している。図２Ｂは、ＦＩＴ−Ｉｇを調製するために使用される二つの構築物を示す。
【図３】図３は、ビアコアにより測定されるＦＩＴ１−Ｉｇの二重特異的な抗原結合を提供する。図３の上段のパネルは、ＦＩＴ１−Ｉｇが最初にＩＬ−１７で飽和され、続いてＩＬ−２０で飽和されたビアコア結合アッセイの結果を示す。図３の下段のパネルは、ＦＩＴ１−Ｉｇが最初にＬ−２０で飽和され、続いてＩＬ−１７で飽和されたビアコアアッセイの結果を示す。
【図４】図４は、ＰＥＧ−誘導沈殿により測定された、あるｐＨ範囲における抗ＩＬ−１７／ＩＬ−２０・ＦＩＴ−Ｉｇ、またはモノクローナル抗体リツキシマブの溶解度を示す。
【図５】図５は、ＤＧ４４（５Ａ及び５Ｂ）システム及びＣＨＯ−Ｓ（５Ｃ及び５Ｄ）システムの両方における、安定したＣＨＯ細胞株発生の安定性を示す。
【図６】図６は、ＥＬＩＳＡによって評価された、ＦＩＴ１０−Ｉｇまたは親抗体イピリムマブ及びニボルマブによるＣＴＬＡ−４（図６Ａ）またはＰＤ−１（図６Ｂ）への結合を示している。
【図７】図７は、ＣＴＬＡ−４及びＰＤ−１の両方に対するＦＩＴ１０−Ｉｇの多重結合試験を示している。ＣＴＬＡ−４への結合に続くＰＤ−１への結合；及びＰＤ−１による結合に続くＣＴＬＡ−４による結合の両者が、図７に示されている。
【発明を実施するための形態】
【００４４】
詳細な説明
本発明は、多価及び多重特異的結合性タンパク質、該結合性タンパク質の製造方法、並びに急性及び慢性炎症性疾患及び障害、癌、及び他の疾患の予防及び／または治療におけるそれらの使用に関する。本発明は、２以上の抗原に結合することが可能な多価及び／または多重特異的結合性タンパク質に関する。特に、本発明は、タンデム型Ｆａｂ免疫グロブリン（ＦＩＴ−ＩＧ）、及びその医薬組成物、並びにこのようなＦＩＴ−Ｉｇを作製するための核酸、組換え発現ベクター及び宿主細胞に関する。インビトロまたはインビボの何れかで特異的抗原を検出するために、本発明のＦＩＴ−Ｉｇを使用する方法もまた本発明に包含される。
【００４５】
本明細書で提供される結合性タンパク質の新規ファミリーは、例えば、高い親和性で、２以上の抗原に結合することができる。即ち、本発明は、二つの親モノクローナル抗体：即ち、抗原ａに結合するｍＡｂ−Ａ及び抗原ｂに結合するｍＡｂ−Ｂを使用して、二重特異的結合性タンパク質を構築するためのアプローチを提供する。
【００４６】
一態様において、本発明は、第一の抗原またはエピトープに特異的な可変軽鎖、第一の軽鎖定常ドメイン、第二の抗原またはエピトープに特異的な可変重鎖、第一の重鎖ＣＨ１、前記第一の抗原またはエピトープに特異的な可変重鎖、第二の重鎖ＣＨ１、前記第二の抗原またはエピトープに特異的な可変重鎖、及び第二の軽鎖定常ドメインを含んでなる結合性タンパク質を提供する。一実施形態において、前記結合性タンパク質は更にＦｃ領域を含む。前記結合性タンパク質は、更に、前記結合性タンパク質の２以上の成分を連結する１以上のアミノ酸もしくはポリペプチドリンカーを含むことができる。例えば、前記結合性タンパク質は、軽鎖可変領域を前記軽鎖定常領域に連結するポリペプチドリンカーを含むことができる。
【００４７】
一実施形態において、本開示は、ＶＬＡ−ＣＬ−（Ｘ１）ｎ−ＶＨＢ−ＣＨ１−（Ｘ２）ｎを備えたポリペプチド鎖を含んでなる結合性タンパク質を提供するものであり、ここでのＶＬＡはｍＡｂ−Ａの軽鎖可変ドメインであり、ＣＬは軽鎖定常ドメインであり、Ｘ１はアミノ酸またはオリゴペプチドリンカーを表し、ＶＨＢはｍＡｂ−Ｂの重鎖可変ドメインであり、ＣＨ１は重鎖の第一定常ドメインであり、Ｘ２はＦｃ領域または異なる二量体化ドメインを表し、ｎは０または１である。
【００４８】
一実施形態において、本発明は、三つの異なるポリペプチド鎖を含む結合性タンパク質（図１）を提供し、第一のポリペプチド鎖（構造物＃１）はＶＬＡ−ＣＬ−（Ｘ１）ｎ−ＶＨＢ−ＣＨｌ−（Ｘ２）ｎを備え、ここでのＶＬＡはｍＡｂ−Ａの軽鎖可変ドメインであり、ＣＬは軽鎖定常ドメインであり、Ｘ１はアミノ酸もしくはオリゴペプチドリンカーを表し、ＶＨＢはｍＡｂ−Ｂの重鎖可変ドメインであり、ＣＨ１は重鎖の第一定常ドメインであり、Ｘ２はＦｃ領域もしくは異なる二量体化ドメインを表し、ｎは０または１である。第二のポリペプチド鎖（構築物＃２）は、ＶＨA−ＣＨ１を含んでなり、ここでのＶＨＡはｍＡｂ−Ａの重鎖可変ドメインであり、ＣＨ１は重鎖の第一定常ドメインである。第三のポリペプチド鎖（構築物＃３）は、ＶＬＢ−ＣＬを含んでなり、ここでのＶＬＢはｍＡｂ−Ｂの軽鎖可変ドメインであり、ＣＬは軽鎖の定常ドメインである。
【００４９】
別の実施形態において、本発明は、可変ドメインの順序が逆になっていることを除き、先の実施形態と同様の全体的分子設計をもった三つの異なるポリペプチド鎖を含む結合性タンパク質を提供する。この実施形態において、第一のポリペプチド鎖は、ＶＨＢ−ＣＨｌ−（Ｘ１）ｎ−ＶＬＡ−ＣＬ−（Ｘ２）ｎを含み、ここでのＶＬＡはｍＡｂ−Ａの軽鎖可変ドメインであり、ＣＬは軽鎖定常ドメインであり、Ｘ１はアミノ酸もしくはオリゴペプチドリンカーを表し、ＶＨＢはｍＡｂ−Ｂの重鎖可変ドメイン、ＣＨ１は重鎖の第一定常ドメインであり、Ｘ２はＦｃ領域または異なる二量体化ドメインを表し、ｎは０または１である。第二のポリペプチド鎖はＶＨＡ−ＣＨ１を含み、ここでのＶＨＡはｍＡｂ−Ａの重鎖可変ドメインであり、ＣＨ１は重鎖の第一の定常ドメインである。第三のポリペプチド鎖はＶＬＢ−ＣＬを含み、ここでのＶＬＢはｍＡｂ−Ｂの軽鎖可変ドメインであり、ＣＬは軽鎖の定常ドメインである。
【００５０】
別の実施形態において、本発明は、二つの異なるポリペプチド鎖を含む結合性タンパク質（図２）を提供し、ここでの第一のポリペプチド鎖（構築物＃１）は、ＶＬＡ−ＣＬ−（Ｘ１）ｎ−ＶＨＢ−ＣＨｌ−（Ｘ２）ｎを含んでおり、ここでのＶＬＡは、ｍＡｂ−Ａの軽鎖可変ドメインであり、ＣＬは軽鎖定常ドメインであり、Ｘ１は、アミノ酸もしくはオリゴペプチドリンカーを表し、ＶＨＢはｍＡｂ−Ｂの重鎖可変ドメインであり、ＣＨ１は重鎖の第一定常ドメインであり、Ｘ２はＦｃ領域もしくは異なる二量体化ドメインを表し、ｎは０または１である。第二のポリペプチド鎖（構築物＃４）は、ＶＨＡ−ＣＨ１−（Ｘ３）ｎ−ＶＬＢ−ＣＬを含んでなり、ここでのＶＨＡはｍＡｂ−Ａ重鎖可変ドメインであり、ＣＨ１は重鎖の第一定常ドメインであり、Ｘ３は定常ドメインではないアミノ酸もしくはポリペプチドであり、ｎは０または１であり、ＶＬＢはｍＡｂ−Ｂの軽鎖可変ドメインであり、ＣＬは軽鎖定常ドメインである。
【００５１】
別の実施形態において、本発明は、可変ドメインの順序が逆になっているのを除いて、先の実施形態と同様の全体的な分子設計を持つ二つのポリペプチド鎖を含んでなる結合性タンパク質を提供する。この実施形態において、第一のポリペプチド鎖は、ＶＨＢ−ＣＨ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＬＡ−ＣＬ−（Ｘ２）ｎを含んでなり、ここでのＶＬＡはｍＡｂ−Ａの軽鎖可変ドメインであり、ＣＬは軽鎖定常ドメイン、Ｘ１はアミノ酸もしくはオリゴペプチドリンカーを表し、ＶＨＢはｍＡｂ−Ｂの重鎖可変ドメインであり、ＣＨ１は重鎖の第一定常ドメインであり、Ｘ２はＦｃ領域または異なる二量体化ドメインを表し、ｎは０または１である。第二のポリペプチド鎖はＶＬＢ−ＣＬ−（Ｘ３）ｎ−ＶＨＡ−ＣＨ１を含んでなり、ここでのＶＨＡはｍＡｂ−Ａの重鎖可変ドメインであり、ＣＨ１は重鎖の第一定常ドメインであり、Ｘ３はアミノ酸もしくはオリゴペプチドリンカーを表し、ｎは０または１であり、ＶＬＢはｍＡｂ−Ｂの軽鎖可変ドメインであり、ＣＬは軽鎖の定常ドメインである。
【００５２】
一実施形態において、前記結合性タンパク質中のＶＨ及びＶＬドメインは、マウス重鎖／軽鎖の可変ドメイン、完全なヒト重鎖／軽鎖の可変ドメイン、ＣＤＲ移植された重鎖／軽鎖可変ドメイン、ヒト化された重鎖／軽鎖の可変ドメイン、及びそれらの混合物からなる群から選択される。好ましい実施形態において、ＶＨＡ／ＶＬＡ及びＶＨＢ／ＶＬＢは同じ抗原に結合することができる。別の実施形態において、ＶＨＡ／ＶＬＡ及びＶＨＢ／ＶＬＢは異なる抗原に結合することができる。
【００５３】
一実施形態において、前記第一のポリペプチド鎖はＶＬＡ−ＣＬ−ＶＨＢ−ＣＨ１−Ｆｃを含み、該第一のポリペプチド鎖のＣＬ及びＶＨＢは一緒に直接融合される。別の実施形態において、ＣＬ及びＶＨＢは、アミノ酸またはオリゴペプチドリンカーによって連結される。別の実施形態では、前記第一のポリペプチド鎖は、ＶＨＢ−ＣＨ１−ＶＬＡ−ＣＬ−Ｆｃを含んでおり、前記ＣＨ１及びＶＬＡは直接一緒に融合される。別の実施形態において、ＣＨ１及びＶＬＡはアミノ酸またはオリゴペプチドリンカーによって連結される。更なる実施形態において、前記オリゴペプチドリンカーまたはポリペプチドリンカーは、柔軟性を提供する任意の合理的な配列の１以上のアミノ酸を含んでいる。好ましくは、前記リンカーは、Ｇ、ＧＳ、ＳＧ、ＧＧＳ、ＧＳＧ、ＳＧＧ、ＧＧＧ、ＧＧＧＳ、ＳＧＧＧ、ＧＧＧＧＳ、ＧＧＧＧＳＧＳ、ＧＧＧＧＳＧＳ、ＧＧＧＧＳＧＧＳ、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ、ＡＫＴＴＰＫＬＥＥＧＥＦＳＥＡＲ、ＡＫＴＴＰＫＬＥＥＧＥＦＳＥＡＲＶ、ＡＫＴＴＰＫＬＧＧ、ＳＡＫＴＴＰＫＬＧＧ、ＡＫＴＴＰＫＬＥＥＧＥＦＳＥＡＲＶ、ＳＡＫＴＴＰ、ＳＡＫＴＴＰＫＬＧＧ、ＲＡＤＡＡＰ、ＲＡＤＡＡＰＴＶＳ、ＲＡＤＡＡＡＡＧＧＰＧＳ、ＲＡＤＡＡＡＡ（Ｇ４Ｓ）４、ＳＡＫＴＴＰ、ＳＡＫＴＴＰＫＬＧＧ、ＳＡＫＴＴＰＫＬＥＥＧＥＦＳＥＡＲＶ、ＡＤＡＡＰ、ＡＤＡＡＰＴＶＳＩＦＰＰ、ＴＶＡＡＰ、ＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰ、ＱＰＫＡＡＰ、ＱＰＫＡＡＰＳＶＴＬＦＰＰ、ＡＫＴＴＰＰ、ＡＫＴＴＰＰＳＶＴＰＬＡＰ、ＡＫＴＴＡＰ、ＡＫＴＴＡＰＳＶＹＰＬＡＰ、ＡＳＴＫＧＰ、ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰ、ＧＥＮＫＶＥＹＡＰＡＬＭＡＬＳ、ＧＰＡＫＥＬＴＰＬＫＥＡＫＶＳ、及びＧＨＥＡＡＡＶＭＱＶＱＹＰＡＳからなる群から選択される。一実施形態において、前記リンカーのアミノ酸配列は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２６、２８及び４９〜８６からなる群から選択され得る。一実施形態では、前記リンカーは、ＧＳＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２６）またはＧＧＧＧＳＧＳ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２８）である。前記リンカーはまた、以前に記載されたように（バイオ医薬のための融合タンパク質技術：応用及び課題（Ｆｕｓｉｏｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ：  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ａｎｄ  Ｃｈａｌｌｅｎｇｅｓ）、Ｓｔｅｆａｎ Ｒ．Ｓｃｈｍｉｄｔ編）、インビボで切断可能なペプチドリンカー、プロテアーゼ（例えばＭＭＰ）感受性リンカー、還元により切断され得るジスルフィド結合に基づくリンカー等、または当該技術において既知の何れかの切断可能なリンカーであることができる。このような切断可能なリンカーは、二つの異なるＦａｂ領域の組織／細胞の浸透及び分布を改善するため、標的への結合を増強するため、潜在的な副作用を低減するため、並びにインビボでの機能的及び物理的な半減期を調節するために、様々な目的で上部Ｆａｂをインビボで放出するために使用することができる。一実施形態において、前記結合性タンパク質はＦｃ領域を含んでいる。本明細書で使用するとき、用語「Ｆｃ領域」とは、ＩｇＧ重鎖のＣ末端領域を意味する。ヒトＩｇＧ１のＦｃ領域を含むアミノ酸配列の例は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０である。ＩｇＧのＦｃ領域は二つの定常ドメイン、即ち、ＣＨ２及びＣＨ３を含んでいる。
【００５４】
一実施形態において、前記Ｆｃ領域は変異型Ｆｃ領域である。一実施形態において、前記変異型Ｆｃ領域は、親Ｆｃ領域に対して、置換、欠失、または挿入のような１以上のアミノ酸修飾を有している。更なる実施形態において、前記Ｆｃ領域のアミノ酸修飾は、親のＦｃ領域の活性に対してエフェクター機能活性を変化させる。例えば、一実施形態において、変異型Ｆｃ領域は、変化した（即ち、増加または減少した）抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）、補体媒介性細胞傷害性（ＣＤＣ）、食作用、オプソニン作用、または細胞結合を有し得る。別の実施形態において、Ｆｃ領域のアミノ酸修飾は、親Ｆｃ領域に対して、ＦｃγＲについての変異型Ｆｃ領域の親和性を変化（即ち、増加または減少）させることができる。例えば、変異型Ｆｃ領域は、ＦｃγＲＩ、ＦｃｙＲＩＩ、ＦｃγＲＩＩＩについての親和性を変更することができる。
【００５５】
一つの好ましい実施形態において、本明細書で提供される結合性タンパク質は、1以上の標的に結合することができる。一実施形態において、前記標的は、サイトカイン、細胞表面タンパク質、酵素及び受容体からなる群から選択される。好ましくは、前記結合性タンパク質は、1以上の標的の生物学的機能を調節することができる。より好ましくは、前記結合性タンパク質は、1以上の標的を中和することができる。
【００５６】
一実施形態において、本発明の結合性タンパク質は、リンホカイン、モノカイン、及びポリペプチドホルモンからなる群から選択されるサイトカインに結合することができる。更なる実施形態において、前記結合性タンパク質は、下記からなる群から選択されるサイトカイン対に結合することができる：即ち、ＩＬ−１α及びＩＬ−１β；ＩＬ−１２及びＩＬ−１８；ＴＮＦα及びＩＬ−２３、ＴＮＦα及びＩＬ−１３；ＴＮＦ及びＩＬ−１８；ＴＮＦ及びＩＬ−１２；ＴＮＦ及びＩＬ−１β；ＴＮＦ及びＭＩＦ；ＴＮＦ及びＩＬ−６、ＴＮＦ及びＩＬ−６受容体、ＴＮＦ及びＩＬ−１７；ＩＬ−１７及びＩＬ−２０；ＩＬ−１７及びＩＬ−２３；ＴＮＦ及びＩＬ−１５；ＴＮＦ及びＶＥＧＦ；ＶＥＧＦＲ及びＥＧＦＲ；ＩＬ−１３及びＩＬ−９；ＩＬ−１３及びＩＬ−４；ＩＬ−１３及びＩＬ−５：ＩＬ−１３及びＩＬ−２５；ＩＬ−１３及びＴＡＲＣ；ＩＬ−１３及びＭＤＣ；ＩＬ−１３及びＭＩＦ；ＩＬ−１３及びＴＧＦ−β；ＩＬ−１３及びＬＨＲアゴニスト；ＩＬ−１３及びＣＬ２５；ＩＬ−１３及びＳＰＲＲ２ａ；ＩＬ−１３及びＳＰＲＲ２ｂ；ＩＬ−１３及びＡＤＡＭ８；ＴＮＦα及びＰＧＥ４、ＩＬ−１３及びＰＥＤ２、ＴＮＦ及びＰＥＧ２である。
【００５７】
別の実施形態において、本発明の結合性タンパク質は、下記からなる群から選択される標的対に結合することができる：即ち、ＣＤ１３７及びＣＤ２０、ＣＤ１３７及びＥＧＦＲ、ＣＤ１３７及びＨｅｒ−２、ＣＤ１３７及びＰＤ−１、ＣＤ１３７及びＰＤＬ−１、ＶＥＧＦ及びＰＤ−Ｌ１、Ｌａｇ−３及びＴＩＭ−３、ＯＸ４０及びＰＤ−１、ＴＩＭ−３及びＰＤ−１、ＴＩＭ−３及びＰＤＬ−１、ＥＧＦＲ及びＤＬＬ−４、ＶＥＧＦ及びＥＧＦＲ、ＨＧＦ及びＶＥＧＦ、ＶＥＧＦ及びＶＥＧＦ（同じかまたは異なるエピトープ）、ＶＥＧＦ及びＡｎｇ２、ＥＧＦＲ及びｃＭｅｔ、ＰＤＧＦ及びＶＥＧＦ、ＶＥＧＦ及びＤＬＬ−４、ＯＸ４０及びＰＤ−Ｌ１、ＩＣＯＳ及びＰＤ−１、ＩＣＯＳ及びＰＤ−Ｌ１、Ｌａｇ−３及びＰＤ−１、Ｌａｇ−３及びＰＤ−Ｌ１、Ｌａｇ−３及びＣＴＬＡ−４、ＩＣＯＳ及びＣＴＬＡ−４、ＣＤ１３８及びＣＤ２０；ＣＤ１３８及びＣＤ４０；ＣＤ１９及びＣＤ２０；ＣＤ２０及びＣＤ３；ＣＤ３及びＣＤ３３；ＣＤ３及びＣＤ１３３；ＣＤ３８＆ＣＤ１３８；ＣＤ３８及びＣＤ２０；ＣＤ２０及びＣＤ２２；ＣＤ３８及びＣＤ４０；ＣＤ４０及びＣＤ２０；ＣＤ４７及びＣＤ２０、ＣＤ−８及びＩＬ−６；ＣＳＰＧ及びＲＧＭ−Ａ；ＣＴＬＡ−４とＢＴＮＯ２；ＣＴＬＡ−４及びＰＤ−１；ＩＧＦ１及びＩＧＦ２；ＩＧＦ１／２及びＥｒｂ２Ｂ；ＩＧＦ−ＩＲ及びＥＧＦＲ；ＥＧＦＲ及びＣＤ  １３；ＩＧＦ−ＩＲ及びＥｒｂＢ３；ＥＧＦＲ−２及びＩＧＦＲ；Ｈｅｒ２及びＨｅｒ２（同じかまたは異なるエピトープ）；第ＩＸａ因子、第Ｘ因子、ＶＥＧＦＲ−２及びＭｅｔ；ＶＥＧＦ−Ａ及びアンジオポエチン−２（Ａｎｇ−２）；ＩＬ−１２及びＴＷＥＡＫ；ＩＬ−１３及びＩＬ−１β；ＭＡＧ及びＲＧＭ−Ａ；ＮｇＲ及びＲＧＭ−Ａ；ＮｏｇｏＡ及びＲＧＭ  Ａ；ＯＭＧｐ及びＲＧＭ−Ａ；ＰＤＬ−１及びＣＴＬＡ−４；ＰＤ−１及びＴＩＭ−３；ＲＧＭ−Ａ及びＲＧＭ−Ｂ；Ｔｅ３８及びＴＮＦα；ＴＮＦα及びＢｌｙｓ；ＴＮＦα及びＣＤ−２２；ＴＮＦα及びＣＴＬＡ−４ドメイン；ＴＮＦα及びＧＰ１３０；ＴＮＦα及びＩＬ−１２ｐ４０；並びにＴＮＦα及びＲＡＮＫリガンドである。
【００５８】
一実施形態において、前記結合性タンパク質は、ヒトＩＬ−１７及びヒトＩＬ−２０に結合することができる。更なる実施形態において、前記結合性タンパク質はヒトＩＬ−１７及びヒトＩＬ−２０に結合することができ、またＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５，２５及び２７からなる群から選択される配列に対して約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、８５％、約９０％、約９５％、約９９％、または１００％同一であるＦＩＴ−Ｉｇポリペプチド鎖＃１配列；ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１に対して約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９９％、または１００％同一であるポリペプチド鎖＃２配列；ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３に対して 約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９９％、１００％同一であるポリペプチド鎖＃３配列を含んでいる。別の実施形態において、前記結合性タンパク質は、ヒトＩＬ−１７及びヒトＩＬ−２０に結合することができ、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５、２５、及び２７からなる群から選択される配列に対して約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９９％、または１００％同一であるＦＩＴ−Ｉｇポリペプチド鎖＃１配列；及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２９，３０及び３１からなる群から選択される配列に対して約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９９％、または１００％同一であるポリペプチド鎖＃４を含んでいる。
【００５９】
一実施形態において、前記結合性タンパク質は、ヒトＣＤ３及びヒトＣＤ２０に結合することができる。更なる実施形態において、前記結合性タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４１及び４８からなる群から選択される配列に対して約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９９％、または１００％同一であるＦＩＴ−Ｉｇポリペプチド鎖＃１配列；ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４４に対して約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９９％、または１００％同一であるポリペプチド鎖＃２配列；及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４６に対して約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９９％、または１００％同一であるポリペプチド鎖＃３配列を含んでいる。
【００６０】
一実施形態において、前記結合性タンパク質はヒトＩＬ−１７及びヒトＴＮＦに結合することができる。更なる実施形態において、前記結合性タンパク質は、ヒトＩＬ−１７及びヒトＴＮＦに結合でき、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８７に対して約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９９％、または１００％同一であるＦＩＴ−Ｉｇポリペプチド鎖＃１配列；ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８９に対して約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９９％、または１００％同一であるポリペプチド鎖＃２配列；及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９１に対して約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９９％、または１００％同一であるポリペプチド鎖＃３配列を含んでいる。
【００６１】
一実施形態において、前記結合性タンパク質は、ヒトＣＴＬＡ−４及びヒトＰＤ−１に結合することができる。更なる実施形態において、前記結合性タンパク質は、ヒトＣＴＬＡ−４及びヒトＰＤ−１に結合することができ、またＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９２に対して約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９９％、または１００％同一であるＦＩＴ−Ｉｇポリペプチド鎖＃１配列；ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９５に対して約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９９％、または１００％同一であるポリペプチド鎖＃２配列；並びにＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９７に対して約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９９％、または１００％同一であるポリペプチド鎖＃３配列を含んでいる。
【００６２】
別の実施形態では、本発明の結合性タンパク質は、下記からなる群から選択される１または２のサイトカイン、サイトカイン関連タンパク質、及びサイトカイン受容体に結合することができる：即ち、ＢＭＰ１、ＢＭＰ２、ＢＭＰ３Ｂ（ＧＤＦ１０）、ＢＭＰ４、ＢＭＰ６、ＢＭＰ８、ＣＳＦ１（Ｍ−ＣＳＦ）、ＣＳＦ２（ＧＭ−ＣＳＦ）、ＣＳＦ３（Ｇ−ＣＳＦ）、ＥＰＯ、ＦＧＦ１（ａＦＧＦ）、ＦＧＦ２（ｂＦＧＦ）、ＦＧＦ３（ｉｎｔ−２）、ＦＧＦ４（ＨＳＴ）、ＦＧＦ５、ＦＧＦ６（ＨＳＴ−２）、ＦＧＦ７（ＫＧＦ）、ＦＧＦ９、ＦＧＦ１０、ＦＧＦ１１、ＦＧＦ１２、ＦＧＦ１２Ｂ、ＦＧＦ１４、ＦＧＦ１６、ＦＧＦ１７、ＦＧＦ１９、ＦＧＦ２０、ＦＧＦ２１、ＦＧＦ２３、ＩＧＦ１、ＩＧＦ２、ＩＦＮＡ１、ＩＦＮＡ２、ＩＦＮＡ４、ＩＦＮＡ５、ＩＦＮＡ６、ＩＦＮＡ７、ＩＦＮＢ１、ＩＦＮＧ、ＩＦＮＷ１、ＦＩＬ１、ＦＩＬ１（イプシロン）、ＦＩＬ１（ゼータ）、ＩＬ１Ａ、ＩＬ１Ｂ、ＩＬ２、ＩＬ３、ＩＬ４、ＩＬ５、ＩＬ６、ＩＬ７、ＩＬ８、ＩＬ９、ＩＬ１０、ＩＬ１１、ＩＬ１２Ａ、ＩＬ１２Ｂ、ＩＬ１３、ＩＬ１４、ＩＬ１５、ＩＬ１６、ＩＬ１７、ＩＬ１７Ｂ、ＩＬ１８、ＩＬ１９、ＩＬ２０、ＩＬ２２、ＩＬ２３、ＩＬ２４、ＩＬ２５、ＩＬ２６、ＩＬ２７、ＩＬ２８Ａ、ＩＬ２８Ｂ、ＩＬ２９、ＩＬ３０、ＰＤＧＦＡ、ＦＧＥＲ１、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３、ＥＧＦＲ、ＲＯＲ１、２Ｂ４、ＫＩＲ、ＣＤ１３７、ＣＤ２７、ＯＸ４０、ＣＤ４０Ｌ、Ａ２ａＲ、ＣＤ４８、Ｂ７−１、Ｂ７−２、ＩＣＯＳＬ、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＣＤ１３７Ｌ、ＯＸ４０Ｌ、ＣＤ７０、ＣＤ４０、ＰＤＧＦＢ、ＴＧＦＡ、ＴＧＦＢ１、ＴＧＦＢ２、ＴＧＦＢ３、ＬＴＡ（ＴＮＦ−ｂ）、ＬＴＢ、ＴＮＦ（ＴＮＦ−ａ）、ＴＮＦＳＦ４（ＯＸ４０リガンド）、ＴＮＦＳＦ５（ＣＤ４０リガンド）、ＴＮＦＳＦ６（ＦａｓＬ）、ＴＮＦＳＦ７（ＣＤ２７リガンド）、ＴＮＦＳＦ８（ＣＤ３０リガンド）、ＴＮＦＳＦ９（４−１ＢＢリガンド）、ＴＮＦＳＦ１０（ＴＲＡＩＬ）、ＴＮＦＳＦ１１（ＴＲＡＮＣＥ）、ＴＮＦＳＦ１２（ＡＰ０３Ｌ）、ＴＮＦＳＦ１３（Ａｐｒｉｌ）、ＴＮＦＳＦ１３Ｂ、ＴＮＦＳＦ１４（ＨＶＥＭ−Ｌ）、ＴＮＦＳＦ１５（ＶＥＧＩ）、ＴＮＦＳＦ１８、ＦＩＧＦ（ＶＥＧＦＤ）、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦＢ、ＶＥＧＦＣ、ＩＬ１Ｒ１、ＩＬ１Ｒ２、ＩＬＩＲＬＩ、ＩＬ１ＲＬ２、ＩＬ２ＲＡ、ＩＬ２ＲＢ、ＩＬ２ＲＧ、ＩＬ３ＲＡ、ＩＬ４Ｒ、ＩＬ５ＲＡ、ＩＬ６Ｒ、ＩＬ７Ｒ、ＩＬ８ＲＡ、ＩＬ８ＲＢ、ＩＬ９Ｒ、ＩＬ１０ＲＡ、ＩＬ１０ＲＢ、ＩＬ１１ＲＡ、ＩＬ１２ＲＢ１、ＩＬ１２ＲＢ２、ＩＬ１３ＲＡ１、ＩＬ１３ＲＡ２、ＩＬ１５ＲＡ、ＩＬ１７Ｒ、ＩＬ１８Ｒ１、ＩＬ２０ＲＡ、ＩＬ２１Ｒ、ＩＬ２２Ｒ、ＩＬ１ＨＹ１、ＩＬ１ＲＡＰ、ＩＬ１ＲＡＰＬ１、ＩＬ１ＲＡＰＬ２、ＩＬ１ＲＮ、ＩＬ６ＳＴ、ＩＬ１８ＢＰ、ＩＬ１８ＲＡＰ、ＩＬ２２ＲＡ２、ＡＩＦ１、ＨＧＦ、ＬＥＰ（レプチン）、ＰＴＮ、及びＴＨＰＯである。
【００６３】
本発明の結合性タンパク質は、下記からなる群から選択される１以上のケモカイン、ケモカイン受容体、及びケモカイン関連タンパク質に結合することができる：ＣＣＬ１（Ｉ−３０９）、ＣＣＬ２（ＭＣＰ−１／ＭＣＡＦ）、ＣＣＬ３（ＭＩＰ−１ａ）、ＣＣＬ４（ＭＩＰ−１ｂ）、ＣＣＬ５（ＲＡＮＴＥＳ）、ＣＣＬ７（ＭＣＰ−３）、ＣＣＬ８（ｍｃｐ−２）、ＣＣＬ１１（エオタキシン）、ＣＣＬ１３（ＭＣＰ−４）、ＣＣＬ１５（ＭＩＰ−１ｄ）、ＣＣＬ１６（ＨＣＣ−４）、ＣＣＬ１７（ＴＡＲＣ）、ＣＣＬ１８（ＰＡＲＣ）、ＣＣＬ１９（ＭＩＰ−３ｂ）、ＣＣＬ２０（ＭＩＰ−３ａ）、ＣＣＬ２１（ＳＬＣ／ｅｘｏｄｕｓ−２）、ＣＣＬ２２（ＭＤＣ／ＳＴＣ−１）、ＣＣＬ２３（ＭＰＩＦ−１）、ＣＣＬ２４（ＭＰＩＦ−２／エオタキシン−２）、ＣＣＬ２５（ＴＥＣＫ）、ＣＣＬ２６（エオタキシン−３）、ＣＣＬ２７（ＣＴＡＣＫ／ＩＬＣ）、ＣＣＬ２８、ＣＸＣＬ１（ＧＲＯ１）、ＣＸＣＬ２（ＧＲＯ２）、ＣＸＣＬ３（ＧＲＯ３）、ＣＸＣＬ５（ＥＮＡ−７８）、ＣＸＣＬ６（ＧＣＰ−２）、ＣＸＣＬ９（ＭＩＧ）、ＣＸＣＬ１０（ＩＰ１０）、ＣＸＣＬ１１（Ｉ−ＴＡＣ）、ＣＸＣＬ１２（ＳＤＦ１）、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＬ１４、ＣＸＣＬ１６、ＰＦ４（ＣＸＣＬ４）、ＰＰＢＰ（ＣＸＣＬ７）、ＣＸ３ＣＬ１（ＳＣＹＤ１）、ＳＣＹＥ１、ＸＣＬ１（リンホタクチン）、ＸＣＬ２（ＳＣＭ−１ｂ）、ＢＬＲｌ（ＭＤＲ１５）、ＣＣＢＰ２（Ｄ６／ＪＡＢ６１）、ＣＣＲ１（ＣＫＲ１／ＨＭ１４５）、ＣＣＲ２（ｍｃｐ−１ＲＢ／ＲＡ）、ＣＣＲ３（ＣＫＲ３／ＣＭＫＢＲ３）、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５（ＣＭＫＢＲ５／ＣｈｅｍＲ１３）、ＣＣＲ６（ＣＭＫＢＲ６／ＣＫＲ−Ｌ３／ＳＴＲＬ２２／ＤＲＹ６）、ＣＣＲ７（ＣＫＲ７／ＥＢＩ１）、ＣＣＲ８（ＣＭＫＢＲ８／ＴＥＲ１／ＣＫＲ−Ｌ１）、ＣＣＲ９（ＧＰＲ−９−６）、ＣＣＲＬ１（ＶＳＨＫ１）、ＣＣＲＬ２（Ｌ−ＣＣＲ）、ＸＣＲ１（ＧＰＲ５／ＣＣＸＣＲ１）、ＣＭＫＬＲ１、ＣＭＫＯＲ１（ＲＤＣ１）、ＣＸ３ＣＲ１（Ｖ２８）、ＣＸＣＲ４、ＧＰＲ２（ＣＣＲ１０）、ＧＰＲ３１、ＧＰＲ８１（ＦＫＳＧ８０）、ＣＸＣＲ３（ＧＰＲ９／ＣＫＲ−Ｌ２）、ＣＸＣＲ６（ＴＹＭＳＴＲ／ＳＴＲＬ３３／Ｂｏｎｚｏ）、ＨＭ７４、ＩＬ８ＲＡ（ＩＬ８Ｒａ）、ＩＬ８ＲＢ（ＩＬ８Ｒｂ）、ＬＴＢ４Ｒ（ＧＰＲ１６）、ＴＣＰ１０、ＣＫＬＦＳＦ２、ＣＫＬＦＳＦ３、ＣＫＬＦＳＦ４、ＣＫＬＦＳＦ５、ＣＫＬＦＳＦ６、ＣＫＬＦＳＦ７、ＣＫＬＦＳＦ８、ＢＤＮＦ、Ｃ５Ｒ１、ＣＳＦ３、ＧＲＣＣ１０（Ｃ１０）、ＥＰＯ、ＦＹ（ＤＡＲＣ）、ＧＤＦ５、ＨＩＦ１Ａ、ＩＬ８、ＰＲＬ、ＲＧＳ３、ＲＧＳ１３、ＳＤＦ２、ＳＬＩＴ２、ＴＬＲ２、ＴＬＲ４、ＴＲＥＭ１、ＴＲＥＭ２、及びＶＨＬである。
【００６４】
別の実施形態において、本発明の結合性タンパク質は、例えばインテグリンのような細胞表面タンパク質に結合することができる。別の実施形態では、本発明の結合性タンパク質は、キナーゼ及びプロテアーゼからなる群から選択される酵素に結合することができる。更に別の実施形態では、本発明の結合性タンパク質は、リンホカイン受容体、モノカイン受容体及びポリペプチドホルモン受容体からなる群から選択される受容体に結合することができる。
【００６５】
一実施形態において、前記結合性タンパク質は多価である。別の実施形態において、前記結合性タンパク質は多重特異的である。上記の多価の及び／または多重特異的な結合性タンパク質は、特に治療の観点から望ましい特性を有している。例えば、この多価及びまたは多重特異的結合性タンパク質は、（１）二価抗体よりも早く、当該抗体が結合する抗原を発現する細胞により内部移行（及び／または異化）することができ；（２）アゴニスト抗体であり；及び／または（３）当該多価抗体が結合できる抗原を発現する細胞の細胞死及び／またはアポトーシスを誘導する。前記多価及びまたは多重特異的結合性タンパク質の少なくとも一つの抗原結合特異性を提供する「親抗体」は、該抗体が結合する抗原を発現する細胞により内部移行（及び/または異化）されるものであることができ；及び／またはアゴニスト、細胞死誘導性及び／またはアポトーシス誘導性抗体であることができ、また本明細書に記載する多価及びまたは多重特異性結合性タンパク質は、これらの特性の１以上において改善を示すことができる。更に、前記親抗体は、これら特性の任意の1以上を欠いてもよいが、本明細書に記載の多価結合性タンパク質として構築したときには、それらを賦与することができる。
【００６６】
別の実施例において、本発明の結合性タンパク質は、下記からなる群から選択される、１以上の標的に対するオン速度定数（Ｋｏｎ）を有している：即ち、表面プラズモン共鳴により測定したときに少なくとも約１０２Ｍ−１ｓ−１、少なくとも約１０３Ｍ−１ｓ−１、少なくとも約１０４Ｍ−１ｓ−１、少なくとも約１０５Ｍ−１ｓ−１、及び少なくとも約１０６Ｍ−１ｓ−１である。好ましくは、本発明の結合性タンパク質は、表面プラズモン共鳴で測定したときに、１以上の標的に対して１０２Ｍ−１ｓ−１〜１０３Ｍ−１ｓ−１、１０３Ｍ−１ｓ−１〜１０４Ｍ−１ｓ−１、１０４Ｍ−１ｓ−１〜１０５Ｍ−１ｓ−１、または１０５Ｍ−１ｓ−１〜１０６Ｍ−１ｓ−１のオン速度乗数（Ｋｏｎ）を有する。
【００６７】
別の実施形態において、前記結合性タンパク質は下記からなる群から選択される、１以上の標的に対するオフ速度定数（Ｋｏｆｆ）を有している：即ち、表面プラズモン共鳴により測定したときに最大で約１０−３ｓ−１、最大で約１０−４ｓ−１、最大で約１０−５ｓ−１、及び最大で約１０−６ｓ−１である。好ましくは、本発明の結合性タンパク質は、表面プラズモン共鳴で測定したときに、１以上の標的に対して１０−３ｓ−１〜１０−４ｓ−１、１０−４ｓ−１〜１０−５ｓ−１、または１０−５ｓ−１〜１０−６ｓ−１のオフ速度乗数（Ｋｏｆｆ）を有する。
【００６８】
別の実施形態において、前記結合性タンパク質は下記からなる群から選択される、１以上の標的に対する解離定数（ＫＤ）を有している：即ち、最大で約１０−７Ｍ、最大で約１０−８Ｍ、最大で約１０−９Ｍ、最大で約１０−１０Ｍ、及び最大で約１０−１１Ｍ、最大で約１０−１２Ｍ、及び最大で約１０−１３Ｍである。好ましくは、本発明の結合性タンパク質は、ＩＬ−１２またはＩＬ−２３に対して、１０−７Ｍ〜１０−８Ｍ；１０−８Ｍ〜１０−９Ｍ；１０−９Ｍ〜１０−１０Ｍ；１０−１０Ｍ〜１０−１１Ｍ；１０−１１Ｍ〜１０−１２Ｍ；または１０−１２Ｍ〜１０−１３Ｍの解離定数（ＫＤ）を有している。
【００６９】
別の実施形態において、上記の結合性タンパク質は、免疫接着分子、造影剤、治療剤、及び細胞傷害剤からなる群から選択される剤を更に含む複合体である。一実施形態において、前記造影剤は、放射性標識、酵素、蛍光標識、発光標識、生物発光標識、磁気標識、及びビオチンからなる群から選択される。更なる実施形態において、前記造影剤は、３Ｈ、１４Ｃ、３５Ｓ、９０Ｙ、９９Ｔｃ、１１１Ｉｎ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１７７Ｌｕ、１６６Ｈｏ、及び１５３Ｓｍからなる群から選択される放射性標識である。一実施形態において、前記治療剤または細胞傷害剤は、免疫抑制剤、免疫刺激剤、抗代謝物質、アルキル化剤、抗生物質、成長因子、サイトカイン、抗血管新生剤、抗有糸分裂剤、アントラサイクリン、毒素及びアポトーシス剤からなる群から選択される。一実施形態において、前記結合性タンパク質は、前記薬剤に直接接合される。別の実施形態において、前記結合性タンパク質は、リンカーを介して前記薬剤に接合される。適切なリンカーには、本明細書に開示されたアミノ酸及びポリペプチドリンカーが含まれるが、これらに限定されない。リンカーは、切断可能であっても切断可能でなくてもよい。
【００７０】
別の実施形態において、上記の結合性タンパク質は結晶化された結合性タンパク質であり、結晶として存在する。好ましくは、該結晶は、担体を含まない医薬徐放性結晶である。より好ましくは、該結晶化された結合性タンパク質は、前記結合性タンパク質の可溶性対応物よりも長いインビボ半減期を有する。最も好ましくは、前記結晶化された結合性タンパク質は生物学的活性を保持する。
【００７１】
別の実施形態において、上記の結合性タンパク質はグリコシル化される。好ましくは、該グリコシル化はヒトのグリコシル化パターンである。
【００７２】
本発明の一態様は、上記で開示した結合性タンパク質の何れか一つをコードする単離された核酸に関する。更なる実施形態は、上記で開示した単離された核酸を含んでなるベクターを提供するものであり、該ベクターは、ｐｃＤＮＡ；ｐＴＴ（Ｄｕｒｏｃｈｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ２００２，Ｖｏｌ ３０，Ｎｏ．２）；ｐＴＴ３（追加の多重クローニング部位を持つｐＴＴ；ｐＥＦＢＯＳ（Ｍｉｚｕｓｈｉｍａ，Ｓ．ａｎｄ Ｎａｇａｔａ，Ｓ．，（１９９０）Ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｖｏｌ １８，Ｎｏ．１７）；ｐＢＶ；ｐＪＶ；ｐｃＤＮＡ３．１ ＴＯＰＯ、ｐＥＦ６ ＴＯＰＯ、及びｐＢＪからなる群から選択される。前記多重特異的結合性タンパク質及びその製造方法が提供される。該結合性タンパク質は、様々な技術を用いて生成することができる。結合性タンパク質を生成する発現ベクター、宿主細胞及び方法が、本開示において提供される。
【００７３】
本開示の結合性タンパク質における抗原結合性可変ドメインは、ポリクローナルＡｂ、モノクローナルＡｂ、及びまたは興味ある抗原に結合できる受容体を含む親結合性タンパク質から得ることができる。これらの親結合性タンパク質は、天然に存在し得るものであり、あるいは組換え技術によって作製することができる。当業者は、抗体及び／または単離された受容体を産生するための多くの方法に精通しており、これにはハイブリドーマ技術を使用すること、選択されたリンパ球抗体法（ＳＬＡＭ）、ファージ、酵母もしくはＲＮＡ−タンパク質融合ディスプレイまたは他のライブラリーの使用、ヒト免疫グロブリン遺伝子座の少なくとも幾つかを含む非ヒト動物を免疫化すること、並びにキメラ、ＣＤＲ移植、及びヒト化抗体の調製が含まれるが、これらに限定されない。例えば、米国特許公開番号２００９０３１１２５３Ａ１を参照されたい。可変ドメインはまた、親和性成熟技術を用いて調製することができる。前記結合性タンパク質の結合性可変ドメインは、当該技術において知られた抽出手順で（例えば、溶媒、界面活性剤、及び／または親和性精製を用いて）入手し、または当技術分野で既知の生物物理学的方法（例えば、Ｘ線結晶学、ＮＭＲ、干渉、及び／またはコンピュータモデリング）により決定された単離された受容体分子から得ることもできる。
【００７４】
前記結合性タンパク質分子に望まれる少なくとも１以上の特性を備えた親結合性タンパク質を選択することを含んでなる実施形態が提供される。一実施形態において、前記望ましい特性は、例えば、抗原特異性、抗原に対する親和性、効力、生物学的機能、エピトープ認識、安定性、溶解性、生産効率、免疫原性、薬物動態、生物学的利用能、組織交差反応性、またはオルソロガス抗原結合性のような、抗体パラメータを特徴付けるために使用されるもののうちの一つ以上である。例えば、米国特許公開番号２００９０３１１２５３を参照されたい。
【００７５】
多重特異性抗体はまた、前記抗原結合性ドメインの１以上が非機能的になるように設計することができる。前記可変ドメインは、本明細書に記載する方法の何れかによって作製された親結合性タンパク質から、組換えＤＮＡ技術を用いて得ることができる。一実施形態において、可変ドメインは、マウス重鎖または軽鎖の可変ドメインである。別の実施形態において、可変ドメインは、移植されたＣＤＲまたはヒト化可変重鎖または軽鎖ドメインである。一実施形態において、可変ドメインは、ヒト重鎖または軽鎖の可変ドメインである。
【００７６】
一実施形態では、１以上の定常ドメインが、組換えＤＮＡ技術を用いて可変ドメインに連結される。一実施形態では、１以上の重鎖可変ドメインを含む配列が重鎖定常ドメインに連結され、１以上の軽鎖可変ドメインを含む配列が軽鎖定常ドメインに連結される。一実施形態において、前記定常ドメインは、それぞれヒト重鎖定常ドメイン及びヒト軽鎖定常ドメインである。一実施形態において、前記重鎖は、更にＦｃ領域に連結される。該Ｆｃ領域は、天然配列のＦｃ領域または変異体Ｆｃ領域であることができる。別の実施形態において、前記Ｆｃ領域はヒトＦｃ領域である。別の実施形態において、前記Ｆｃ領域には、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＥ、またはＩｇＤのＦｃ領域が含まれる。
【００７７】
更に、本明細書において提供される結合性タンパク質は組織特異的送達（強化された局所ＰＫのため、従ってより高い有効性及び／またはより低い毒性のために組織マーカー及び疾患メディエータを標的とする）のために用いることができ、これには細胞内送達（内部移行する受容体及び細胞内分子を標的とする）、脳内部への送達（脳−血液関門を横断するためにトランスフェリン受容体及びＣＮＳ疾患メディエータを標的とする）が含まれる。前記結合性タンパク質は、抗原の非中和エピトープへの結合を介して該抗原を特定の場所に送達するための、また前記抗原の半減期を増加させるため担体タンパク質として機能することができる。更に、前記結合性タンパク質は、患者に移植される医療装置に物理的に連結されるように、またはこれらの医療装置をターゲッティングするために設計することができる（Ｂｕｒｋｅ ｅｔ ａｌ．（２００６） Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ．Ｒｅｖ．５８（３）：４３７−４４６；Ｈｉｌｄｅｂｒａｎｄ ｅｔ ａｌ．（２００６） Ｓｕｒｆａｃｅ ａｎｄ Ｃｏａｔｉｎｇｓ Ｔｅｃｈｎｏｌ．２００（２２−２３）：６３１８−６３２４；Ｄｒｕｇ／ｄｅｖｉｃｅ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｌｏｃａｌ ｄｒｕｇ ｔｈｅｒａｐｉｅｓ ａｎｄ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｐｒｏｐｈｙｌａｘｉｓ， Ｗｕ（２００６） Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ ２７（１１）：２４５０−２４６７；Ｍｅｄｉａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｃｙｔｏｋｉｎｅ ｎｅｔｗｏｒｋ ｉｎ ｔｈｅ ｉｍｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ｏｆ ｏｒｔｈｏｐｅｄｉｃ ｄｅｖｉｃｅｓ，Ｍａｒｑｕｅｓ（２００５） Ｂｉｏｄｅｇｒａｄａｂｌｅ Ｓｙｓｔｅｍｓ ｉｎ Ｔｉｓｓｕｅ Ｅｎｇｉｎｅｅｒ．Ｒｅｇｅｎ．Ｍｅｄ．３７７−３９７参照）。適切な種類の細胞を医療用インプラントの部位へと向けさせることにより、治癒及び正常な組織機能の回復を促進することができる。或いは、装置に結合された、または該装置を標的とする受容体抗体融合タンパク質による、装置移植の際に放出されたメディエータ（サイトカインを含むが、これに限定されない）の阻害もまた提供される。
【００７８】
一態様において、宿主細胞は上記で開示したベクターで形質転換される。一実施形態において、該宿主細胞は原核細胞である。更なる実施形態において、該宿主細胞は大腸菌である。別の実施形態において、該宿主細胞は真核細胞である。更なる実施形態において、該真核細胞は、原生生物細胞、動物細胞、植物細胞及び真菌細胞からなる群から選択される。一実施形態において、前記宿主細胞には、限定されるものではないが２９３、ＣＯＳ、ＮＳ０、及びＣＨＯを含む哺乳動物細胞、及び；またはサッカロマイセス・セレビシエ等の真菌細胞；またはＳｆ９などの昆虫細胞が含まれる。
【００７９】
本発明の別の態様は、上記に開示した結合性タンパク質を製造する方法であって、上記に開示した宿主細胞の何れかを、前記結合性タンパク質を産生するのに十分な条件下に培地中で培養することを含む方法を提供する。好ましくは、この方法で製造される前記結合性タンパク質の５０％〜７５％が、二重特異性の四価結合性タンパク質である。より好ましくは、この方法により製造される結合性タンパク質の７５％〜９０％が、二重特異的の四価結合性タンパク質である。最も好ましくは、製造される結合性タンパク質の９０％〜９５％が二重特異的の四価結合性タンパク質である。
【００８０】
別の実施形態は、上記に開示した方法に従って製造された結合性タンパク質を提供する。
【００８１】
一つの実施形態は、結合性タンパク質を放出するための組成物を提供し、ここでの組成物は、上記で開示したようにして次に結晶化される結合性タンパク質、及び成分；並びに少なくとも一つのポリマー担体を含有する製剤を含む。好ましくは、該ポリマー担体はポリ（アクリル酸）、ポリ（シアノアクリレート）、ポリ（アミノ酸）、ポリ（酸無水物）、ポリ（デプシペプチド）、ポリ（エステル）、ポリ（乳酸）、ポリ（乳酸 - ｃｏ - グリコール酸）またはＰＬＧＡ、ポリ（ｂ−ヒドロキシブチレート）、ポリ（カプロラクトン）、ポリ（ジオキサノン）、ポリ（エチレングリコール）、ポリ（（ヒドロキシプロピル）メタクリルアミド、ポリ［（オルガノ）ホスファゼン］、ポリ（オルトエステル）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリ（ビニルピロリドン）、無水マレイン酸−アルキルビニルエーテル共重合体、プルロニックポリオール、アルブミン、アルギン酸塩、セルロース及びセルロース誘導体、コラーゲン、フィブリン、ゼラチン、ヒアルロン酸、オリゴ糖、グリカミノグリカン（ｇｌｙｃａｍｉｎｏｇｌｙｃａｎｓ）、硫酸ポリサッカライド、並びにそれらの混合物及び共重合体からなる群の１以上から選択されるポリマーである。好ましくは、該成分は、アルブミン、スクロース、トレハロース、ラクチトール、ゼラチン、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン、メトキシポリエチレングリコール及びポリエチレングリコールからなる群から選択される。別の実施形態は、哺乳動物を治療する方法であって、該哺乳動物に対して、上記に開示された組成物の有効量を投与する工程を含む方法を提供する。
【００８２】
本発明はまた、上記に開示された結合性タンパク質、及び薬学的に許容される担体を含有する医薬組成物を提供する。薬学的に許容される担体としては、リン酸緩衝液または生理食塩水が含まれるが、これらに限定されない。他の一般的な非経口媒体には、リン酸ナトリウム溶液、リンゲルデキストロース、デキストロース及び塩化ナトリウム、乳酸リンゲル液、または不揮発性油が含まれる。静脈内媒体には、体液及び栄養補充液、リンゲルデキストロースに基づくような電解質補給剤等が含まれる。抗菌剤、抗酸化剤、キレート剤、及び不活性ガス等のような、防腐剤及び他の添加物も存在し得る。より具体的には、注射用に適した医薬組成物には、滅菌水溶液（水溶性の場合）または分散液、並びに滅菌注射溶液または分散液を即時調製するための滅菌粉末が含まれる。前記担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、及び液体ポリエチレングリコール等）、及びそれらの適切な混合物を含有する溶媒または分散媒であり得る。幾つかの場合、当該組成物中には等張剤、例えばマンニトール、ソルビトールのような糖、ポリアルコール、または塩化ナトリウムを含むことが好ましい。注射用組成物の持続的吸収は、当該組成物中に吸収を遅らせる薬剤、例えばモノステアリン酸アルミニウム及びゼラチンを含めることによってもたらすことができる。
【００８３】
更なる実施形態において、前記医薬組成物は、疾患を治療するための少なくとも一つの追加の治療薬を含有する。一実施形態において、該追加の薬剤は下記からなる群から選択される：即ち、治療剤、造影剤、細胞傷害剤、血管新生阻害剤（抗ＶＥＧＦ抗体またはＶＥＧＦトラップを含むがこれに限定されない）、キナーゼ阻害剤（ＫＤＲ阻害剤及びＴＩＥ−２阻害剤を含むがこれらに限定されない）；共刺激分子遮断剤（抗Ｂ７．１、抗Ｂ７．２、ＣＴＬＡ４−Ｉｇ、抗ＰＤ−１、抗ＣＤ２０を含むがこれらに限定されない）；接着分子遮断剤（抗ＬＦＡ−１・Ａｂ、抗Ｅ／ＬセレクチンＡｂ、小分子阻害剤を含むがこれらに限定されない）；抗サイトカイン抗体またはその機能性断片（抗ＩＬ−１８、抗ＴＮＦ、抗ＩＬ−６／サイトカイン受容体抗体を含むがこれらに限定されない）；メトトレキサート；シクロスポリン；ラパマイシン；ＦＫ５０６；検出可能な標識またはレポーター；ＴＮＦアンタゴニスト；抗リウマチ剤；筋弛緩薬、麻薬、非ステロイド抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、鎮痛剤、麻酔剤、鎮静剤、局所麻酔薬、神経筋遮断薬、抗菌剤、抗乾癬剤、コルチコステロイド、アナボリックステロイド、エリスロポエチン、免疫剤、免疫グロブリン、免疫抑制剤、成長ホルモン、ホルモン補充薬、放射性医薬品、抗うつ薬、抗精神病薬、興奮剤、喘息薬、ベータアゴニスト、吸入ステロイド、エピネフリンもしくは類似体、サイトカイン、及びサイトカインアンタゴニストである。
【００８４】
別の態様において、本発明は、上記に開示された結合性タンパク質によって結合され得る標的（複数可）が有害である疾患に罹患したヒト対象を治療する方法であって、前記ヒト対象における前記標的（複数可）の活性が阻害され、前記疾患の治療もしくは予防が達成されるように、前記ヒト対象に対して、上記で開示された結合性タンパク質を投与することを含んでなる方法を提供する。一実施形態において、前記疾患または障害は、炎症状態、自己免疫疾患、または癌である。一実施形態において、前記疾患または障害は下記を含んでなる群から選択される：関節炎、骨関節炎、若年性慢性関節炎、敗血症性関節炎、ライム関節炎、乾癬性関節炎、反応性関節炎、脊椎関節症、全身性エリテマトーデス、クローン病、潰瘍性大腸炎、炎症性腸疾患、インスリン依存性糖尿病、甲状腺炎、喘息、アレルギー性疾患、乾癬、強皮症の皮膚炎、移植片対宿主病、臓器移植拒絶、臓器移植に関連した急性または慢性免疫疾患、サルコイドーシス、アテローム性動脈硬化症、播種性血管内凝固症候群、川崎病、グレーブス病、ネフローゼ症候群、慢性疲労症候群、ウェゲナー肉芽腫症、ヘノッホ・シェーンライン紫斑病、腎臓の顕微鏡的血管炎、慢性活動性肝炎、ブドウ膜炎、敗血症性ショック、毒素ショック症候群、敗血症症候群、悪液質、感染性疾患、寄生虫疾患、後天性免疫不全症候群、急性横断性脊髄炎、ハンチントン舞踏病、パーキンソン疾患、アルツハイマー病、脳卒中、原発性胆汁性肝硬変、溶血性貧血、悪性腫瘍、心不全、心筋梗塞、アジソン病、散発性多腺欠損Ｉ型及び多腺欠損ＩＩ型、シュミット症候群、成人（急性）呼吸窮迫症候群、脱毛症、円形脱毛症、血清陰性関節症、関節症、ライター病、乾癬性関節症、潰瘍性大腸炎関節症、腸滑膜炎、クラミジア、エルシニア及びサルモネラ関連関節症、脊椎関節症、アテローム性疾患／動脈硬化症、アトピー性アレルギー、自己免疫水疱性疾患、尋常性天疱瘡、落葉状天疱瘡、類天疱瘡、線形ＩｇＡ疾患、自己免疫性溶血性貧血、クームス陽性溶血性貧血、後天性悪性貧血、若年悪性貧血、筋痛性脳炎／ロイヤルフリー病、慢性皮膚粘膜カンジダ症、巨細胞性動脈炎、原発性硬化性肝炎、特発自己免疫性肝炎、後天性免疫不全症候群、後天性免疫不全関連疾患、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、一般的多様性免疫不全（一般的多様性低ガンマグロブリン血症）、拡張型心筋症、女性不妊症、卵巣不全、早発卵巣不全、線維性肺疾患、特発性線維化性肺胞炎、炎症後間質性肺疾患、間質性肺炎、結合組織病関連間質性肺疾患、混合性結合組織病関連肺疾患、全身性硬化症関連間質性肺疾患、関節リウマチ関連間質性肺疾患、全身性エリテマトーデス関連肺疾患、皮膚筋炎／多発性筋炎関連肺疾患、シェーグレン病関連肺疾患、強直性脊椎炎関連肺疾患、血管炎瀰漫性肺疾患、ヘモジデリン沈着関連肺疾患、薬物誘発性間質性肺疾患、線維症、放射線線維症、閉塞性細気管支炎、慢性好酸球性肺炎、リンパ球浸潤性肺疾患、感染後間質性肺疾患、痛風性関節炎、自己免疫性肝炎、１型自己免疫性肝炎（古典的な自己免疫疾患またはルポイド肝炎）、２型自己免疫性肝炎（抗ＬＫＭ抗体肝炎）、自己免疫介在性低血糖症、黒色表皮症を伴うＢ型インスリン抵抗性、副甲状腺機能低下症、臓器移植に関連した急性免疫疾患、臓器移植に関連した慢性免疫疾患、変形性関節症、原発性硬化性胆管炎、乾癬１型、乾癬２型、特発性白血球減少症、自己免疫性好中球減少症、腎疾患ＮＯＳ、糸球体腎炎、腎臓の微視的血管炎、ライム病、円板状エリテマトーデス、男性不妊特発性またはＮＯＳ、精子自己免疫、多発性硬化症（全てのサブタイプ）、交感性眼炎、結合組織病に対する二次的肺性高血圧、グッドパスチャー症候群、結節性多発動脈炎の肺症状、急性リウマチ熱、リウマチ様脊椎炎、スティル病、全身性硬化症、シェーグレン症候群、高安病/動脈炎、自己免疫性血小板減少症、特発性血小板減少症、自己免疫性甲状腺疾患、甲状腺機能亢進症、甲状腺腫の自己免疫性甲状腺機能低下症（橋本病）、萎縮性自己免疫性甲状腺機能低下症、原発性粘液浮腫、水晶体起因性ブドウ膜炎、原発性血管炎、白斑急性肝疾患、慢性肝疾患、アルコール性肝硬変、アルコール性肝障害、胆汁鬱滞、特異体質性肝疾患、薬物誘発性肝炎、非アルコール性脂肪性肝炎、アレルギー及び喘息、Ｂ群連鎖球菌（ＧＢＳ）感染症、精神障害（例えば、鬱病及び統合失調症）、Ｔｈ２型及びＴｈ１型媒介性疾患、急性及び慢性疼痛（痛みの異なる形式）、例えば肺癌、乳癌、胃癌、膀胱癌、結腸癌、膵臓癌、卵巣癌、前立腺癌及び直腸癌及び造血器悪性腫瘍（白血病及びリンパ腫）のような癌、無ベータリポタンパク質血症、先端チアノーゼ、急性及び慢性の寄生または感染プロセス、急性白血病、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性または慢性の細菌感染症、急性膵炎、急性腎不全、腺癌、上室性期外収縮、エイズ認知症複合、アルコール誘発肝炎、アレルギー性結膜炎、アレルギー性接触皮膚炎、アレルギー性鼻炎、同種移植拒絶、α−１−アンチトリプシン欠乏症、筋萎縮性側索硬化症、貧血、狭心症、前角細胞変性、抗ｃｄ３療法、抗リン脂質症候群、抗受容体過敏反応、大動脈流及び抹消動脈瘤、大動脈解離、動脈性高血圧、動脈硬化症、動静脈瘻、運動失調、心房細動（持続性または発作性）、心房粗動、房室ブロック、Ｂ細胞リンパ腫、骨移植片拒絶、骨髄移植（ＢＭＴ）拒絶、脚ブロック、バーキットリンパ腫、火傷（Ｂｕｒｎｓ）、心不整脈、心臓スタン症候群、心臓腫瘍、心筋症、心肺バイパス炎症反応、軟骨移植拒絶、小脳皮質変性症、小脳障害、混沌または多病巣性心房頻拍、化学療法関連疾患、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性アルコール中毒、慢性炎症性病変、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、慢性サリチル酸塩中毒、結腸直腸癌、鬱血性心不全、結膜炎、接触皮膚炎、肺性心、冠動脈疾患、クロイツフェルト・ヤコブ病、培養陰性敗血症、嚢胞性線維症、サイトカイン療法関連障害、ボクサー認知症、脱髄疾患、デング出血熱、皮膚炎、皮膚疾患、糖尿病、真正糖尿病、糖尿病性アテローム硬化症病、瀰漫性レビー小体病、拡張型鬱血性心筋症、基底神経節障害、中年期ダウン症候群、中枢神経系ドーパミン受容体遮断薬により誘導される薬物誘導性運動障害、薬剤感受性、湿疹、脳脊髄炎、心内膜炎、内分泌障害、喉頭蓋炎、エプスタイン・バーウイルス感染症、肢端紅痛症、錐体外路及び小脳障害、家族性の食血細胞性リンパ組織球増多症、胎児胸腺移植拒絶、フリードライヒ失調症、機能性末梢動脈疾患、真菌性敗血症、ガス壊疽、胃潰瘍、糸球体腎炎、任意の器官及び組織の移植片拒絶、グラム陰性敗血症、グラム陽性敗血症、細胞内生物に起因する肉芽腫、毛様細胞白血病、ハレルフォルデン−スパッツ病、橋本甲状腺炎、花粉症、心臓移植拒絶、血色素症、血液透析、溶血性尿毒症症候群/血栓性血小板減少性紫斑病、出血、肝炎（Ａ）、ヒス束不整脈、ＨＩＶ感染／ＨＩＶ神経障害、ホジキン病、多動性運動障害、過敏性反応、過敏性肺炎、高血圧、運動低下運動障害、視床下部−下垂体−副腎軸評価、特発性アジソン病、特発性肺線維症、抗体媒介性細胞傷害、無力症、乳児脊髄性筋萎縮症、大動脈の炎症、インフルエンザＡ、電離放射線被曝、虹彩毛様体炎／ブドウ膜炎／視神経炎、虚血再灌流障害、虚血性脳卒中、若年性関節リウマチ、若年性脊髄性筋萎縮症、カポジ肉腫、腎臓移植拒絶反応、レジオネラ症、リーシュマニア症、ハンセン病、皮質脊髄系の病変、脂肪性浮腫、肝移植拒絶、リンパ性皮膚病、マラリア、悪性リンパ腫、悪性組織球症、悪性黒色腫、髄膜炎、髄膜炎菌血症、代謝／特発性片頭痛、ミトコンドリアのマルチシステム障害、混合型結合組織疾患、単クローン性免疫グロブリン血症、多発性骨髄腫、多重システム変性（Ｍｅｎｃｅｌ Ｄｅｊｅｒｉｎｅ− Ｔｈｏｍａｓ Ｓｈｉ−Ｄｒａｇｅｒ ａｎｄ Ｍａｃｈａｄｏ−Ｊｏｓｅｐｈ）、重症筋無力症、細胞内マイコバクテリウム・アビウム、結核菌、骨髄異形成症候群、心筋梗塞、心筋虚血性疾患、鼻咽頭癌、新生児慢性肺疾患、腎炎、ネフローゼ、神経変性疾患、神経原性筋萎縮症、好中球減少性発熱、非ホジキンリンパ腫、腹部大動脈及びその枝血管の閉塞、閉塞性動脈疾患、ｏｋｔ３療法、精巣炎／副睾丸炎、精巣炎／精管切除反転手順、臓器肥大症、骨粗鬆症、膵臓移植拒絶反応、膵臓癌、腫瘍随伴症候群／悪性腫瘍の高カルシウム血症、副甲状腺移植拒絶、骨盤内炎症性疾患、通年性鼻炎、心膜疾患、末梢アテローム硬化性疾患、末梢血管疾患、腹膜炎、悪性貧血、カリニ肺炎、肺炎、ＰＯＥＭＳ症候群（多発性神経障害、臓器肥大症、内分泌障害、単クローン性免疫グロブリン血症、及び皮膚変化症候群）、灌流後症候群、ポンプ後症候群、ＭＩ後心臓切開症候群、子癇前症、進行性核上性麻痺、原発性肺高血圧症、放射線療法、レイノー現象、レイノー病、レフサム病、規則的な狭ＱＲＳ頻拍、腎血管性高血圧症、再灌流障害、拘束型心筋症、肉腫、強皮症、老人性舞踏病、レビー小体型老人性痴呆症、血清反応陰性関節症、ショック、鎌状赤血球貧血、皮膚同種移植片拒絶反応、皮膚変化症候群、小腸移植拒絶、固形腫瘍、特異的不整脈、脊髄運動失調、脊髄小脳変性症、連鎖球菌性筋炎、小脳の構造的病変、亜急性硬化性全脳炎、失神、心臓血管系の梅毒、全身性アナフィラキシー、全身性炎症反応症候群、全身型若年性関節リウマチ、Ｔ細胞またはＦＡＢ・ＡＬＬ、毛細血管拡張症、血栓閉塞性、血小板減少症、毒性、移植、外傷／出血、ＩＩＩ型過敏性反応、ＩＶ型過敏症、不安定狭心症、尿毒症、尿路性敗血症、蕁麻疹、心臓弁膜症、静脈瘤、血管炎、静脈疾患、静脈血栓症、心室細動、ウイルス及び真菌感染症、致命的な脳炎／無菌性髄膜炎、致命的な関連血球貪食性症候群、ウェルニッケ−コルサコフ症候群、ウィルソン病、任意の臓器または組織の異種移植片拒絶である。
【００８５】
別の態様において、本発明は、疾患に罹患している患者を治療する方法であって、先に上記で開示した結合性タンパク質の何れかを、上記で述べた第二の薬剤の投与の前、それと同時に、またはその後に投与する工程を含む方法を提供する。好ましい実施形態において、前記第二の薬剤は下記からなる群から選択される：即ち、ブデノシド、上皮成長因子、コルチコステロイド、シクロスポリン、スルファサラジン、アミノサリチル酸、６−メルカプトプリン、アザチオプリン、メトロニダゾール、リポキシゲナーゼ阻害剤、メサラミン、オルサラジン、バルサラジド、抗酸化剤、トロンボキサン阻害剤、ＩＬ−１受容体アンタゴニスト、抗ＩＬ−Ιβモノクローナル抗体、抗ＩＬ−６モノクローナル抗体、成長因子、エラスターゼ阻害剤、ピリジニル−イミダゾール化合物、ＴＮＦ、ＬＴ、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１８、ＩＬ−２３、ＥＭＡＰ−ＩＩ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＦＧＦ及びＰＤＧＦの抗体またはアゴニスト、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ−１９、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ６９、ＣＤ９０またはそれらのリガンドの抗体、メトトレキセート、シクロスポリン、ＦＫ５０６、ラパマイシン、ミコフェノール酸モフェチル、レフルノミド、ＮＳＡＩＤ、イブプロフェン、コルチコステロイド、プレドニゾロン、ホスホジエステラーゼ阻害剤、アデノシンアゴニスト、抗血栓剤、補体阻害剤、アドレナリン作動薬、ＩＲＡＫ、ＮＩＫ、ＩＫＫ、Ｐ３８、ＭＡＰキナーゼ阻害剤、ＩＬ−Ιβ変換酵素阻害剤、ＴＮＦα変換酵素阻害剤、Ｔ細胞シグナル伝達阻害剤、メタロプロテイナーゼ阻害剤、スルファサラジン、アザチオプリン、６−メルカプトプリン、アンギオテンシン変換酵素阻害剤、可溶性サイトカイン受容体、可溶性ｐ５５ＴＮＦ受容体、可溶性ｐ７５ＴＮＦ受容体、ｓＩＬ−１ＲＩ、ｓＩＬ−ｌＲＩＩ、ｓＩＬ−６Ｒ、抗炎症性サイトカイン、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１３及びＴＧＦβである。
【００８６】
一実施形態において、上記に開示された医薬組成物は、非経口、皮下、筋肉内、静脈内、関節内、気管支内、腹腔内、嚢内、軟骨内、洞内、腔内、小脳内、脳室内、結腸内、頸管内、胃内、肝内、心筋内、骨内、骨盤内、心膜内、腹腔内、胸膜内、前立腺内、肺内、直腸内、腎臓内、網膜内、脊髄内、滑液包内、胸腔内、子宮内、膀胱内、ボーラス、膣、直腸、口腔、舌下、鼻腔内、及び経皮から選択される少なくとも一つの投与モードにより、前記対象に投与される。
【００８７】
本発明の一態様は、本発明の少なくとも一つの結合性タンパク質に対する少なくとも一つの抗イディオタイプ抗体を提供する。該抗イディオタイプ抗体は、本発明の結合性タンパク質に組み込むことができる免疫グロブリン分子の少なくとも一部、例えば、限定されるものではないが、重鎖もしくは軽鎖の少なくとも一つの相補性決定領域（ＣＤＲ）またはそのリガンド結合部分、重鎖もしくは軽鎖の可変領域、重鎖もしくは軽鎖の定常領域、フレームワーク領域；またはそれらの任意の部分を備えた分子を含んだ任意のタンパク質またはペプチドを含んでいる。
【００８８】
別の実施形態において、本発明の結合性タンパク質は、下記からなる群から選択される1以上の標的に結合することができる：即ち、ＡＢＣＦ１；ＡＣＶＲ１； ＡＣＶＲ１Ｂ；ＡＣＶＲ２；ＡＣＶＲ２Ｂ；ＡＣＶＲＬ１；ＡＤＯＲＡ２Ａ；アグリカン；ＡＧＲ２；ＡＩＣＤＡ；ＡＩＦ１；ＡＩＧ１；ＡＫＡＰ１；ＡＫＡＰ２；ＡＭＨ；ＡＭＨＲ２；ＡＮＧＰＴ１；ＡＮＧＰＴ２；ＡＮＧＰＴＬ３；ＡＮＧＰＴＬ４；ＡＮＰＥＰ；ＡＰＣ；ＡＰＯＣ１；ＡＲ；ＡＺＧＰ１（亜鉛−ａ−糖タンパク質）；Ｂ７．１；Ｂ７．２；ＢＡＤ；ＢＡＦＦ；ＢＡＧ１；ＢＡＩ１；ＢＣＬ２；ＢＣＬ６；ＢＤＮＦ；ＢＬＮＫ；ＢＬＲ１（ＭＤＲ１５）；ＢｌｙＳ；ＢＭＰ１；ＢＭＰ２；ＢＭＰ３Ｂ（ＧＤＦ１０）；ＢＭＰ４；ＢＭＰ６；ＢＭＰ８；ＢＭＰＲ１Ａ；ＢＭＰＲ１Ｂ；ＢＭＰＲ２；ＢＰＡＧ１（プレクチン）；ＢＲＣＡ１；Ｃ１９ｏｒｆ１０（ＩＬ２７ｗ）；Ｃ３；Ｃ４Ａ；Ｃ５；Ｃ５Ｒ１；ＣＡＮＴ１；ＣＡＳＰ１；ＣＡＳＰ４；ＣＡＶ１；ＣＣＢＰ２（Ｄ６／ＪＡＢ６１）；ＣＣＬ１（Ｉ−３０９）；ＣＣＬ１１（エオタキシン）；ＣＣＬ１３（ＭＣＰ−４）；ＣＣＬ１５（ＭＩＰ−１ｄ）；ＣＣＬ１６（ＨＣＣ−４）；ＣＣＬ１７（ＴＡＲＣ）；ＣＣＬ１８（ＰＡＲＣ）；ＣＣＬ１９（ＭＩＰ−３ｂ）；ＣＣＬ２（ＭＣＰ−１）；ＭＣＡＦ；ＣＣＬ２０（ＭＩＰ−３ａ）；ＣＣＬ２１（ＭＩＰ−２）；ＳＬＣ；ｅｘｏｄｕｓ−２；ＣＣＬ２２（ＭＤＣ／ＳＴＣ−１）；ＣＣＬ２３（ＭＰＩＦ−１）；ＣＣＬ２４（ＭＰＩＦ−２／エオタキシン−２）；ＣＣＬ２５（ＴＥＣＫ）；ＣＣＬ２６（エオタキシン−３）；ＣＣＬ２７（ＣＴＡＣＫ／ＩＬＣ）；ＣＣＬ２８；ＣＣＬ３（ＭＩＰ−１ａ）；ＣＣＬ４（ＭＩＰ−１ｂ）；ＣＣＬ５（ＲＡＮＴＥＳ）；ＣＣＬ７（ＭＣＰ−３）；ＣＣＬ８（ｍｃｐ−２）；ＣＣＮＡ１；ＣＣＮＡ２；ＣＣＮＤ１；ＣＣＮＥ１；ＣＣＮＥ２；ＣＣＲ１（ＣＫＲ１／ＨＭ１４５）；ＣＣＲ２（ｍｃｐ−１ＲＢ／ＲＡ）；ＣＣＲ３（ＣＫＲ３／ＣＭＫＢＲ３）；ＣＣＲ４；ＣＣＲ５（ＣＭＫＢＲ５／ＣｈｅｍＲ１３）；ＣＣＲ６（ＣＭＫＢＲ６／ＣＫＲ−Ｌ３／ＳＴＲＬ２２／ＤＲＹ６）；ＣＣＲ７（ＣＫＲ７／ＥＢＩ１）；ＣＣＲ８（ＣＭＫＢＲ８／ＴＥＲ１／ＣＫＲ−Ｌ１）；ＣＣＲ９（ＧＰＲ−９−６）；ＣＣＲＬ１（ＶＳＨＫ１）；ＣＣＲＬ２（Ｌ−ＣＣＲ）；ＣＤ１６４；ＣＤ１９；ＣＤ１Ｃ；ＣＤ２０；ＣＤ２００；ＣＤ−２２；ＣＤ２４；ＣＤ２８；ＣＤ３；ＣＤ３７；ＣＤ３８；ＣＤ３Ｅ；ＣＤ３Ｇ；ＣＤ３Ｚ；ＣＤ４；ＣＤ４０；ＣＤ４０Ｌ；ＣＤ４４；ＣＤ４５ＲＢ；ＣＤ４７、ＣＤ４８、ＣＤ５２；ＣＤ６９；ＣＤ７０、ＣＤ７２；ＣＤ７４；ＣＤ７９Ａ；ＣＤ７９Ｂ；ＣＤ８；ＣＤ８０；ＣＤ８１；ＣＤ８３；ＣＤ８６；ＣＤ１３７、ＣＤ１３８、Ｂ７−１、Ｂ７−２、ＩＣＯＳＬ、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＣＤ１３７Ｌ、ＯＸ４０Ｌ、ＣＤＨ１（Ｅ−カドヘリン）；ＣＤＨ１０；ＣＤＨ１２；ＣＤＨ１３；ＣＤＨ１８；ＣＤＨ１９；ＣＤＨ２０；ＣＤＨ５；ＣＤＨ７；ＣＤＨ８；ＣＤＨ９；ＣＤＫ２；ＣＤＫ３；ＣＤＫ４；ＣＤＫ５；ＣＤＫ６；ＣＤＫ７；ＣＤＫ９；ＣＤＫＮ１Ａ（ｐ２１Ｗａｐ１／Ｃｉｐ１）；ＣＤＫＮ１Ｂ（ｐ２７Ｋｉｐ１）；ＣＤＫＮ１Ｃ；ＣＤＫＮ２Ａ���ｐ１６ＩＮＫ４ａ）；ＣＤＫＮ２Ｂ；ＣＤＫＮ２Ｃ；ＣＤＫＮ３；ＣＥＢＰＢ；ＣＥＲ１；ＣＨＧＡ；ＣＨＧＢ；キチナーゼ；ＣＨＳＴ１０；ＣＫＬＦＳＦ２；ＣＫＬＦＳＦ３；ＣＫＬＦＳＦ４；ＣＫＬＦＳＦ５；ＣＫＬＦＳＦ６；ＣＫＬＦＳＦ７；ＣＫＬＦＳＦ８；ＣＬＤＮ３；ＣＬＤＮ７（クローディン−７）；ＣＬＮ３；ＣＬＵ（クラステリン）；ＣＭＫＬＲ１；ＣＭＫＯＲ１（ＲＤＣ１）；ＣＮＲ１；ＣＯＬ１８Ａ１；ＣＯＬ１Ａ１；ＣＯＬ４Ａ３；ＣＯＬ６Ａ１；ＣＲ２；ＣＲＰ；ＣＳＦ１（Ｍ−ＣＳＦ）；ＣＳＦ２（ＧＭ−ＣＳＦ）；ＣＳＦ３（ＧＣＳＦ）；ＣＴＬＡ−４；ＣＴＮＮＢ１（ｂ−カテニン）；ＣＴＳＢ（カテプシンＢ）；ＣＸ３ＣＬ１（ＳＣＹＤ１）；ＣＸ３ＣＲ１（Ｖ２８）；ＣＸＣＬ１（ＧＲＯ１）；ＣＸＣＬ１０（ＩＰ−１０）；ＣＸＣＬ１１（Ｉ−ＴＡＣ／ＩＰ−９）；ＣＸＣＬ１２（ＳＤＦ１）；ＣＸＣＬ１３；ＣＸＣＬ１４；ＣＸＣＬ１６；ＣＸＣＬ２（ＧＲＯ２）；ＣＸＣＬ３（ＧＲＯ３）；ＣＸＣＬ５（ＥＮＡ−７８／ＬＩＸ）；ＣＸＣＬ６（ＧＣＰ−２）；ＣＸＣＬ９（ＭＩＧ）；ＣＸＣＲ３（ＧＰＲ９／ＣＫＲ−Ｌ２）；ＣＸＣＲ４；ＣＸＣＲ６（ＴＹＭＳＴＲ／ＳＴＲＬ３３／ボンゾ）；ＣＹＢ５；ＣＹＣ１；ＣＹＳＬＴＲ１；ＤＡＢ２ＩＰ；ＤＥＳ；ＤＫＦＺｐ４５１Ｊ０１１８；ＤＮＣＬ１；ＤＰＰ４；Ｅ２Ｆ１；ＥＣＧＦ１；ＥＤＧ１；ＥＦＮＡ１；ＥＦＮＡ３；ＥＦＮＢ２；ＥＧＦ；ＥＧＦＲ；ＥＬＡＣ２；ＥＮＧ；ＥＮＯ１；ＥＮＯ２；ＥＮＯ３；ＥＰＨＢ４；ＥＰＯ；ＥＲＢＢ２（Ｈｅｒ−２）；ＥＲＥＧ；ＥＲＫ８；ＥＳＲ１；ＥＳＲ２；Ｆ３（ＴＦ）；ＦＡＤＤ；ＦａｓＬ；ＦＡＳＮ；ＦＣＥＲ１Ａ；ＦＣＥＲ２；ＦＣＧＲ３Ａ；ＦＧＦ；ＦＧＦ１（ａＦＧＦ）；ＦＧＦ１０；ＦＧＦ１１；ＦＧＦ１２；ＦＧＦ１２Ｂ；ＦＧＦ１３；ＦＧＦ１４；ＦＧＦ１６；ＦＧＦ１７；ＦＧＦ１８；ＦＧＦ１９；ＦＧＦ２（ｂＦＧＦ）；ＦＧＦ２０；ＦＧＦ２１；ＦＧＦ２２；ＦＧＦ２３；ＦＧＦ３（ｉｎｔ−２）；ＦＧＦ４（ＨＳＴ）；ＦＧＦ５；ＦＧＦ６（ＨＳＴ−２）；ＦＧＦ７（ＫＧＦ）；ＦＧＦ８；ＦＧＦ９；ＦＧＦＲ３；ＦＩＧＦ（ＶＥＧＦＤ）；ＦＩＬ１（イプシロン）；ＦＩＬ１（ゼータ）；ＦＬＪ１２５８４；ＦＬＪ２５５３０；ＦＬＲＴ１（フィブロネクチン）；ＦＬＴ１；ＦＯＳ；ＦＯＳＬ１（ＦＲＡ−１）；ＦＹ（ＤＡＲＣ）；ＧＡＢＲＰ（ＧＡＢＡａ）；ＧＡＧＥＢ１；ＧＡＧＥＣ１；ＧＡＬＮＡＣ４Ｓ−６ＳＴ；ＧＡＴＡ３；ＧＤＦ５；ＧＦＩ１；ＧＧＴ１；ＧＭ−ＣＳＦ；ＧＮＡＳ１；ＧＮＲＨ１；ＧＰＲ２（ＣＣＲ１０）；ＧＰＲ３１；ＧＰＲ４４；ＧＰＲ８１（ＦＫＳＧ８０）；ＧＲＣＣ１０（Ｃ１０）；ＧＲＰ；ＧＳＮ（ゲルゾリン）；ＧＳＴＰ１；ＨＡＶＣＲ２；ＨＤＡＣ４；ＨＤＡＣ５；ＨＤＡＣ７Ａ；ＨＤＡＣ９；ＨＧＦ；ＨＩＦ１Ａ；ＨＩＰ１；ヒスタミン及びヒスタミン受容体；ＨＬＡ−Ａ；ＨＬＡ−ＤＲＡ；ＨＭ７４；ＨＭＯＸ１；ＨＵＭＣＹＴ２Ａ；ＩＣＥＢＥＲＧ；ＩＣＯＳＬ；ＩＤ２；ＩＦＮ−ａ；ＩＦＮＡ１；ＩＦＮＡ２；ＩＦＮＡ４；ＩＦＮＡ５；ＩＦＮＡ６；ＩＦＮＡ７；ＩＦＮＢ１；ＩＦＮガンマ；ＩＦＮＷ１；ＩＧＢＰ１；ＩＧＦ１；ＩＧＦ１Ｒ；ＩＧＦ２；ＩＧＦＢＰ２；ＩＧＦＢＰ３；ＩＧＦＢＰ６���ＩＬ−１；ＩＬ１０；ＩＬ１０ＲＡ；ＩＬ１０ＲＢ；ＩＬ１１；ＩＬ１１ＲＡ；ＩＬ−１２；ＩＬ１２Ａ；ＩＬ１２Ｂ；ＩＬ１２ＲＢ１；ＩＬ１２ＲＢ２；ＩＬ１３；ＩＬ１３ＲＡ１；ＩＬ１３ＲＡ２；ＩＬ１４；ＩＬ１５；ＩＬ１５ＲＡ；ＩＬ１６；ＩＬ１７；ＩＬ１７Ｂ；ＩＬ１７Ｃ；ＩＬ１７Ｒ；ＩＬ１８；ＩＬ１８ＢＰ；ＩＬ１８Ｒ１；ＩＬ１８ＲＡＰ；ＩＬ１９；ＩＬ１Ａ；ＩＬ１Ｂ；ＩＬ１Ｆ１０；ＩＬ１Ｆ５；ＩＬ１Ｆ６；ＩＬ１Ｆ７；ＩＬ１Ｆ８；ＩＬ１Ｆ９；ＩＬ１ＨＹ１；ＩＬ１Ｒ１；ＩＬ１Ｒ２；ＩＬ１ＲＡＰ；ＩＬ１ＲＡＰＬ１；ＩＬ１ＲＡＰＬ２；ＩＬ１ＲＬ１；ＩＬ１ＲＬ２；ＩＬ１ＲＮ；ＩＬ２；ＩＬ２０；ＩＬ２０ＲＡ；ＩＬ２１Ｒ；ＩＬ２２；ＩＬ２２Ｒ；ＩＬ２２ＲＡ２；ＩＬ２３；ＩＬ２４；ＩＬ２５；ＩＬ２６；ＩＬ２７；ＩＬ２８Ａ；ＩＬ２８Ｂ；ＩＬ２９；ＩＬ２ＲＡ；ＩＬ２ＲＢ；ＩＬ２ＲＧ；ＩＬ３；ＩＬ３０；ＩＬ３ＲＡ；ＩＬ４；ＩＬ４Ｒ；ＩＬ５；ＩＬ５ＲＡ；ＩＬ６；ＩＬ６Ｒ；ＩＬ６ＳＴ（糖タンパク質１３０）；ＩＬ７；ＩＬ７Ｒ；ＩＬ８；ＩＬ８ＲＡ；ＩＬ８ＲＢ；ＩＬ８ＲＢ；ＩＬ９；ＩＬ９Ｒ；ＩＬＫ；ＩＮＨＡ；ＩＮＨＢＡ；ＩＮＳＬ３；ＩＮＳＬ４；ＩＲＡＫ１；ＩＲＡＫ２；ＩＴＧＡ１；ＩＴＧＡ２；ＩＴＧＡ３；ＩＴＧＡ６（ａ６インテグリン）；ＩＴＧＡＶ；ＩＴＧＢ３；ＩＴＧＢ４（ｂ４インテグリン）；ＪＡＧ１；ＪＡＫ１；ＪＡＫ３；ＪＵＮ；Ｋ６ＨＦ；ＫＡＩ１；ＫＤＲ；ＫＩＴＬＧ；ＫＬＦ５（ＧＣボックスＢＰ）；ＫＬＦ６；ＫＬＫ１０；ＫＬＫ１２；ＫＬＫ１３；ＫＬＫ１４；ＫＬＫ１５；ＫＬＫ３；ＫＬＫ４；ＫＬＫ５；ＫＬＫ６；ＫＬＫ９；ＫＲＴ１；ＫＲＴ１９（ケラチン１９）；ＫＲＴ２Ａ；ＫＲＴＨＢ６（毛髪特異的ＩＩ型ケラチン）；ＬＡＭＡ５；ＬＥＰ（レプチン）；Ｌｉｎｇｏ−ｐ７５；Ｌｉｎｇｏ−Ｔｒｏｙ；ＬＰＳ；ＬＴＡ（ＴＮＦ−ｂ）；ＬＴＢ；ＬＴＢ４Ｒ（ＧＰＲ１６）；ＬＴＢ４Ｒ２；ＬＴＢＲ；ＭＡＣＭＡＲＣＫＳ；ＭＡＧもしくはＯｍｇｐ；ＭＡＰ２Ｋ７（ｃ−Ｊｕｎ）；ＭＤＫ；ＭＩＢ１；ミッドカイン；ＭＩＦ；ＭＩＰ−２；ＭＫＩ６７（Ｋｉ−６７）；ＭＭＰ２；ＭＭＰ９；ＭＳ４Ａ１；ＭＳＭＢ；ＭＴ３（メタロチオネクチン−ＩＩＩ）；ＭＴＳＳ１；ＭＵＣ１（ムチン）；ＭＹＣ；ＭＹＤ８８；ＮＣＫ２；ニューロカン；ＮＦＫＢ１；ＮＦＫＢ２；ＮＧＦＢ（ＮＧＦ）；ＮＧＦＲ；ＮｇＲ−Ｌｉｎｇｏ；ＮｇＲ−Ｎｏｇｏ６６（Ｎｏｇｏ）；ＮｇＲ−ｐ７５；ＮｇＲ−Ｔｒｏｙ；ＮＭＥ１（ＮＭ２３Ａ）；ＮＯＸ５；ＮＰＰＢ；ＮＲ０Ｂ１；ＮＲ０Ｂ２；ＮＲ１Ｄ１；ＮＲ１Ｄ２；ＮＲ１Ｈ２；ＮＲ１Ｈ３；ＮＲ１Ｈ４；ＮＲ１Ｉ２；ＮＲ１Ｉ３；ＮＲ２Ｃ１；ＮＲ２Ｃ２；ＮＲ２Ｅ１；ＮＲ２Ｅ３；ＮＲ２Ｆ１；ＮＲ２Ｆ２；ＮＲ２Ｆ６；ＮＲ３Ｃ１；ＮＲ３Ｃ２；ＮＲ４Ａ１；ＮＲ４Ａ２；ＮＲ４Ａ３；ＮＲ５Ａ１；ＮＲ５Ａ２；ＮＲ６Ａ１；ＮＲＰ１；ＮＲＰ２；ＮＴ５Ｅ；ＮＴＮ４；ＯＤＺ１；ＯＰＲＤ１；ＰＣＳＫ９；Ｐ２ＲＸ７；ＰＡＰ；ＰＡＲＴ１；ＰＡＴＥ；ＰＡＷＲ；ＰＣＡ３；ＰＣＮＡ；ＰＤ−１；ＰＤ−Ｌ１；アルファ４ベータ７、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＴＩＭ−３、Ｌａｇ−３、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＧＤＦ８、ＣＧＲＰ、Ｌｉｎｇｏ−１、ＩＸａ因子、���因子、ＩＣＯＳ、ＧＡＲＰ、ＢＴＬＡ、ＣＤ１６０、ＲＯＲ１、２Ｂ４、ＫＩＲ、ＣＤ２７、ＯＸ４０、ＣＤ４０Ｌ、Ａ２ａＲ、ＰＤＧＦＡ；ＰＤＧＦＢ；ＰＥＣＡＭ１；ＰＦ４（ＣＸＣＬ４）；ＰＧＦ；ＰＧＲ；ホスファカン；ＰＩＡＳ２；ＰＩＫ３ＣＧ；ＰＬＡＵ（ｕＰＡ）；ＰＬＧ；ＰＬＸＤＣ１；ＰＰＢＰ（ＣＸＣＬ７）；ＰＰＩＤ；ＰＲ１；ＰＲＫＣＱ；ＰＲＫＤ１；ＰＲＬ；ＰＲＯＣ；ＰＲＯＫ２；ＰＳＡＰ；ＰＳＣＡ；ＰＴＡＦＲ；ＰＴＥＮ；ＰＴＧＳ２（ＣＯＸ−２）；ＰＴＮ；ＲＡＣ２（ｐ２１Ｒａｃ２）；ＲＡＲＢ；ＲＧＳ１；ＲＧＳ１３；ＲＧＳ３；ＲＮＦ１１０（ＺＮＦ１４４）；ＲＯＢＯ２；Ｓ１００Ａ２；ＳＣＧＢ１Ｄ２（リポフィリンＢ）；ＳＣＧＢ２Ａ１（マンマグロビン２）；ＳＣＧＢ２Ａ２（マンマグロビン１）；ＳＣＹＥ１（内皮単球活性化サイトカイン）；ＳＤＦ２；ＳＥＲＰＩＮＡ１；ＳＥＲＰＩＮＡ３；ＳＥＲＰＩＮＢ５（マスピン）；ＳＥＲＰＩＮＥ１（ＰＡＩ−１）；ＳＥＲＰＩＮＦ１；ＳＨＢＧ；ＳＬＡ２；ＳＬＣ２Ａ２；ＳＬＣ３３Ａ１；ＳＬＣ４３Ａ１；ＳＬＩＴ２；ＳＰＰ１；ＳＰＲＲ１Ｂ（Ｓｐｒ１）；ＳＴ６ＧＡＬ１；ＳＴＡＢ１；ＳＴＡＴ６；ＳＴＥＡＰ；ＳＴＥＡＰ２；ＴＢ４Ｒ２；ＴＢＸ２１；ＴＣＰ１０；ＴＤＧＦ１；ＴＥＫ；ＴＧＦＡ；ＴＧＦＢ１；ＴＧＦＢ１Ｉ１；ＴＧＦＢ２；ＴＧＦＢ３；ＴＧＦＢＩ；ＴＧＦＢＲ１；ＴＧＦＢＲ２；ＴＧＦＢＲ３；ＴＨ１Ｌ；ＴＨＢＳ１（トロンボスポンジン−１）；ＴＨＢＳ２；ＴＨＢＳ４；ＴＨＰＯ；ＴＩＥ（Ｔｉｅ−１）；ＴＩＭＰ３；組織因子；ＴＬＲ１０；ＴＬＲ２；ＴＬＲ３；ＴＬＲ４；ＴＬＲ５；ＴＬＲ６；ＴＬＲ７；ＴＬＲ８；ＴＬＲ９；ＴＮＦ；ＴＮＦ−ａ；ＴＮＦＡＩＰ２（Ｂ９４）；ＴＮＦＡＩＰ３；ＴＮＦＲＳＦ１１Ａ；ＴＮＦＲＳＦ１Ａ；ＴＮＦＲＳＦ１Ｂ；ＴＮＦＲＳＦ２１；ＴＮＦＲＳＦ５；ＴＮＦＲＳＦ６（Ｆａｓ）；ＴＮＦＲＳＦ７；ＴＮＦＲＳＦ８；ＴＮＦＲＳＦ９；ＴＮＦＳＦ１０（ＴＲＡＩＬ）；ＴＮＦＳＦ１１（ＴＲＡＮＣＥ）；ＴＮＦＳＦ１２（ＡＰＯ３Ｌ）；ＴＮＦＳＦ１３（Ａｐｒｉｌ）；ＴＮＦＳＦ１３Ｂ；ＴＮＦＳＦ１４（ＨＶＥＭ−Ｌ）；ＴＮＦＳＦ１５（ＶＥＧＩ）；ＴＮＦＳＦ１８；ＴＮＦＳＦ４（ＯＸ４０リガンド）；ＴＮＦＳＦ５（ＣＤ４０リガンド）；ＴＮＦＳＦ６（ＦａｓＬ）；ＴＮＦＳＦ７（ＣＤ２７リガンド）；ＴＮＦＳＦ８（ＣＤ３０リガンド）；ＴＮＦＳＦ９（４−１ＢＢリガ
ンド）；ＴＯＬＬＩＰ；Ｔｏｌｌ様受容体；ＴＯＰ２Ａ（トポイソメラーゼＩｉａ）；ＴＰ５３；ＴＰＭ１；ＴＰＭ２；ＴＲＡＤＤ；ＴＲＡＦ１；ＴＲＡＦ２；ＴＲＡＦ３；ＴＲＡＦ４；ＴＲＡＦ５；ＴＲＡＦ６；ＴＲＥＭ１；ＴＲＥＭ２；ＴＲＰＣ６；ＴＳＬＰ；ＴＷＥＡＫ；ＶＥＧＦ；ＶＥＧＦＢ；ＶＥＧＦＣ；バーシカン；ＶＨＬ Ｃ５；ＶＬＡ−４；ＸＣＬ１（リンホタクチン）；ＸＣＬ２（ＳＣＭ−１ｂ）；ＸＣＲ１（ＧＰＲ５／ＣＣＸＣＲ１）；ＹＹ１；及びＺＦＰＭ２である。
【００８９】
二つ以上の抗原に結合するそれらの能力を考えると、本発明の結合性タンパク質は、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）または組織免疫組織化学等の従来のイムノアッセイを用いて、抗原（例えば、血清または血漿のような生物学的サンプル中において）を検出するために使用することができる。ＦＩＴ−Ｉｇは、結合型もしくは非結合型の抗体の検出を容易にするために、直接的または間接的に検出可能な物質で標識される。適切な検出可能な物質には、種々の酵素、補欠分子族、蛍光物質、発光物質及び放射性物質が含まれる。適切な酵素の例には、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、α−ガラクトシダーゼ、またはアセチルコリンエステラーゼが含まれる。適切な補欠分子族複合体の例には、ストレプトアビジン／ビオチン及びアビジン／ビオチンが含まれる。適切な蛍光物質の例としては、ウンベリフェロン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミンフルオレセイン、ダンシルクロリドまたはフィコエリトリンが挙げられる。発光物質の例にはルミノールが含まれ、適切な放射性物質の例としては、３Ｈ、１４Ｃ、３５Ｓ、９０Ｙ、９９Ｔｃ、１１１Ｉｎ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１７７Ｌｕ、１６６Ｈｏ、または１５３Ｓｍが含まれる。
【００９０】
本発明の結合性タンパク質は、一実施形態において、インビトロ及びインビボの両方において、抗原の活性を中和することができる。従って、そのようなＦＩＴ−Ｉｇは、例えば抗原を含有する細胞培養物において、ヒト対象において、または本発明の結合性タンパク質と交差反応する抗原を有する他の哺乳動物被験体において、抗原活性を阻害するために使用することができる。別の実施形態において、本発明は、抗原活性が有害である疾患または障害に罹患している対象において、前記抗原活性を低下させるための方法を提供する。本発明の結合性タンパク質は、治療目的でヒト対象に投与することができる。
【００９１】
本明細書中で使用されるとき、「抗原活性が有害である疾患」の用語は、疾患に罹患している対象における抗原の存在が前記疾患の病態生理の原因であること、または該疾患の悪化に寄与する因子であることが示され、または疑われている疾患及び他の障害を含むことを意図している。従って、抗原活性が有害である疾患は、該抗原活性の低下により該疾患の症候及び／または進行の緩和が期待される疾患である。このような疾患は、該疾患に罹患している対象の生物学的体液中の該抗原の濃度の増大（例えば、該対象の血清、血漿、滑液等における抗原濃度の増加）によって明らかになる。本発明の結合性タンパク質で治療できる疾患の非限定的な例には、以下で説明する疾患、及び本発明の抗体の医薬組成物に関する章で述べる疾患が含まれる。
【００９２】
本発明のＦＩＴ−Ｉｇは、一つの抗原または複数の抗原に結合することがでる。このような抗原として、限定されるものではないが、以下のデータベースに列記された標的が含まれ、該データベースを本明細書の一部として援用する。これらの標的データベースに以下のリストが含まれるが、これらに限定されるものではない。
・治療標的（ｈｔｔｐ：／／ｘｉｎ．ｃｚ３．ｎｕｓ．ｅｄｕ．ｓｇ／ｇｒｏｕｐ／ｃｊｔｔｄ／ｔｔｄ．ａｓｐ）。
・サイトカイン及びサイトカイン受容体（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｙｔｏｋｉｎｅｗｅｂｆａｃｔｓ．ｃｏｍ／、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｏｐｅｗｉｔｈｃｙｔｏｋｉｎｅｓ．ｄｅ／ｃｏｐｅ．ｃｇｉ、及び
・ｈｔｔｐ：／／ｃｍｂｉ．ｂｊｍｕ．ｅｄｕ．ｃｎ／ｃｍｂｉｄａｔａ／ｃｇｆ／ＣＧＦ＿Ｄａｔａｂａｓｅ／ｃｙｔｏｋｉｎｅ．ｍｅｄｉｃ．ｋｕｍａｍｏｔｏ−ｕ．ａｃ．ｊｐ／ＣＦＣ／ｉｎｄｅｘＲ．ｈｔｍｌ）。
・ケモカイン（ｈｔｔｐ：／／ｃｙｔｏｋｉｎｅ．ｍｅｄｉｃ．ｋｕｍａｍｏｔｏ−ｕ．ａｃ．ｊｐ／ＣＦＣ／ＣＫ／Ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ．ｈｔｍｌ）。
・ケモカイン受容体及びＧＰＣＲ（ｈｔｔｐ：／／ｃｓｐ．ｍｅｄｉｃ．ｋｕｍａｍｏｔｏ−ｕ．ａｃ．ｊｐ／ＣＳＰ／Ｒｅｃｅｐｔｏｒ．ｈｔｍｌ、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇｐｃｒ．ｏｒｇ／７ｔｍ／）。
・嗅覚受容体（ｈｔｔｐ：／／ｓｅｎｓｅｌａｂ．ｍｅｄ．ｙａｌｅ．ｅｄｕ／ｓｅｎｓｅｌａｂ／ＯＲＤＢ／ｄｅｆａｕｌｔ．ａｓｐ）。
・受容体（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｉｕｐｈａｒ−ｄｂ．ｏｒｇ／ｉｕｐｈａｒ−ｒｄ／ｌｉｓｔ／ｉｎｄｅｘ．ｈｔｍ）。
・癌の標的（ｈｔｔｐ：／／ｃｇｅｄ．ｈｇｃ．ｊｐ／ｃｇｉ−ｂｉｎ／ｉｎｐｕｔ．ｃｇｉ）。
・潜在的抗体標的として分泌されたタンパク質（ｈｔｔｐ：／／ｓｐｄ．ｃｂｉ．ｐｋｕ．ｅｄｕ．ｃｎ）。
・プロテインキナーゼ（ｈｔｔｐ：／／ｓｐｄ．ｃｂｉ．ｐｋｕ．ｅｄｕ．ｃｎ／）、及び
・ヒトＣＤマーカー（ｈｔｔｐ：／／ｃｏｎｔｅｎｔ．ｌａｂｖｅｌｏｃｉｔｙ．ｃｏｍ／ｔｏｏｌｓ／６／１２２６／ＣＤ＿ｔａｂｌｅ＿ｆｉｎａｌ＿ｌｏｃｋｅｄ．ｐｄｆ）及び（Ｚｏｌａ Ｈ，２００５，ＣＤ ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ２００５：ｈｕｍａｎ ｃｅｌｌ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ，Ｂｌｏｏｄ，１０６：３１２３−６）。
【００９３】
ＦＩＴ−Ｉｇは、二つの異なる標的を同時にブロックして、有効性／安全性を高め、及び／または患者のカバレッジを高めるための治療剤として有用である。このような標的には、可溶性標的（ＩＬ−１３及びＴＮＦ）及び細胞表面受容体標的（ＶＥＧＦＲ及びＥＧＦＲ）を含み得る。それはまた、癌治療のために腫瘍細胞とＴ細胞（ＨＥＲ２及びＣＤ３）との間で、または自己免疫／移植のために自己反応性細胞とエフェクター細胞の間で、または何れか所与の疾患において疾患原因細胞を除去するために任意の標的細胞とエフェクター細胞との間で、再指向された細胞傷害性を誘導するためにも使用することができる。
【００９４】
加えて、ＦＩＴ−Ｉｇは、同じ受容体上の二つの異なるエピトープを標的とするように設計されている場合、受容体のクラスタリング及び活性化をトリガーするために使用することができる。これは、アゴニスト及びアンタゴニストの抗ＧＰＣＲ治療において利点を有することができる。この場合、ＦＩＴ−Ｉｇは、クラスタリング／シグナル伝達（二つの細胞表面分子）またはシグナル伝達（一つの分子中）のために、一つの細胞上の二つの異なるエピトープをターゲッティングするために使用できる。同様に、ＦＩＴ−Ｉｇ分子は、ＣＴＬＡ−４の細胞外ドメインの二つの異なるエピトープ（または同一エピトープの二つのコピー）を標的化することによって、ＣＴＬＡ−４ライゲーション及び負の信号をトリガーするように設計することができ、これは免疫応答のダウンレギュレーションを導く。ＣＴＬＡ−４は、多くの免疫学的疾患の治療処置のための臨床的に検証された標的である。ＣＴＬＡ−４／Ｂ７相互作用は、細胞周期の進行、ＩＬ−２産生、及び活性化後のＴ細胞の増殖を減衰させることにより、Ｔ細胞活性化を負に調節し、またＣＴＬＡ−４（ＣＤ１５２）の結合はＴ細胞活性化をダウンレギュレートして免疫寛容の誘導を促進することができる。しかし、ＣＴＬＡ−４の活性化にはライゲーションを必要とするので、ＣＴＬＡ−４のアゴニスト抗体結合によってＴ細胞の活性化を減衰させる戦略は成功していない。結晶構造解析（Ｓｔａｍｐｅｒ ２００１，Ｎａｔｕｒｅ ４１０：６０８）により示されるように、ＣＴＬＡ−４／Ｂ７の分子間相互作用は「歪んだジッパー」アレイの状態にある。しかし、現在入手可能なＣＴＬＡ−４結合試薬は、抗ＣＴＬＡ−４モノクローナル抗体を含めて、何れもライゲーション特性を有していない。この問題に対処するために、幾つかの試みがなされてきた。一つの事例では、細胞メンバーに結合した一本鎖抗体が生成され、これはマウスにおいて同種拒絶を有意に阻害した（Ｈｗａｎｇ，２００２ ＪＩ １６９：６３３）。別の事例では、ＣＴＬＡ−４に対する人工のＡＰＣ表面に連結された一本鎖抗体が生成され、Ｔ細胞応答を減衰させることが実証された（Ｇｒｉｆｆｉｎ，２０００ ＪＩ １６４：４４３３）。両方の事例において、ＣＴＬＡ−４ライゲーションは、人工システムにおいて密に局在化されたメンバー結合抗体によって達成された。これらの実験は、ＣＴＬＡ−４の負のシグナル伝達をトリガーすることによる免疫ダウンレギュレーションのための概念実証を提供するが、これらの報告で使用される試薬は治療的用途には適していない。この目的のために、ＣＴＬＡ−４細胞外ドメインの二つの異なるエピトープ（または同一エピトープの二つのコピー）をターゲッティングするＦＩＴ−Ｉｇの分子を使用することによって、ＣＴＬＡ−４ライゲーションが達成され得る。その根拠は、ＩｇＧの二つの結合部位にまたがる距離、即ち、約１５０〜１７０Åは、ＣＴＬＡ−４の活性ライゲーション（二つのＣＴＬＡ−４ホモ二量体の間の３０〜５０Å）には大きすぎるということである。しかし、ＦＩＴ−Ｉｇの（一方のアーム）上の二つの結合部位間の距離は遥かに短く、これも３０〜５０Åの範囲であり、ＣＴＬＡ−４の適切なライゲーションを可能にする。
【００９５】
同様に、ＦＩＴ−Ｉｇは、細胞表面受容体複合体の二つの異なるメンバー（例えば、ＩＬ−１２Ｒアルファ及びベータ）をターゲッティングできる。更に、ＦＩＴ−Ｉｇは、ＣＲ１及び可溶性タンパク質／病原体をターゲッティングして、該標的可溶性タンパク質／病原体の迅速なクリアランスを駆動することができる。
【００９６】
更に、本発明のＦＩＴ−Ｉｇは、細胞内送達（内部移行受容体及び細胞内分子をターゲッティングする）、脳の内部への送達（血液脳関門を通過するためにトランスフェリン受容体及びＣＮＳ疾患メディエータをターゲッティングする）を含めて、組織特異的送達（高いローカルＰＫ、従ってより高い効力及び／またはより低い毒性のために、組織マーカー及び疾患メディエータをターゲッティングする）のために用いることができる。ＦＩＴ−Ｉｇは、抗原の非中和エピトープへの結合を介して該抗原を特定の場所に送達するための担体タンパク質として働くことができ、また前記抗原の半減期を増加させることができる。更に、ＦＩＴ−Ｉｇは、患者に移植される医療装置に物理的に連結されるか、またはこれらの医療装置をターゲッティングするように設計することができる（Ｂｕｒｋｅ，Ｓａｎｄｒａ Ｅ．；Ｋｕｎｔｚ，Ｒｉｃｈａｒｄ Ｅ．；Ｓｃｈｗａｒｔｚ，Ｌｅｗｉｓ Ｂ．Ｚｏｔａｒｏｌｉｍｕｓ（ＡＢＴ−５７８） ｅｌｕｔｉｎｇ ｓｔｅｎｔｓ．Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｒｅｖｉｅｗｓ（２００６），５８（３），４３７−４４６；Ｓｕｒｆａｃｅ ｃｏａｔｉｎｇｓ ｆｏｒ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ａｎｄ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｍｅｄｉｃａｌ ｄｅｖｉｃｅｓ．Ｈｉｌｄｅｂｒａｎｄ，Ｈ．Ｆ．；Ｂｌａｎｃｈｅｍａｉｎ、Ｎ．；Ｍａｙｅｒ，Ｇ．；Ｃｈａｉ，Ｆ．；Ｌｅｆｅｂｖｒｅ，Ｍ．；Ｂｏｓｃｈｉｎ，Ｆ．Ｓｕｒｆａｃｅ ａｎｄ Ｃｏａｔｉｎｇｓ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ （２００６），２００（２２−２３），６３１８−６３２４．；Ｄｒｕｇ／ｄｅｖｉｃｅ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｌｏｃａｌ ｄｒｕｇ ｔｈｅｒａｐｉｅｓ ａｎｄ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｐｒｏｐｈｙｌａｘｉｓ．Ｗｕ，Ｐｅｎｇ；Ｇｒａｉｎｇｅｒ，Ｄａｖｉｄ Ｗ．Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ（２００６），２７（１１），２４５０−２４６７．；Ｍｅｄｉａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｃｙｔｏｋｉｎｅ ｎｅｔｗｏｒｋ ｉｎ ｔｈｅ ｉｍｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ｏｆ ｏｒｔｈｏｐｅｄｉｃ ｄｅｖｉｃｅｓ． Ｍａｒｑｕｅｓ，Ａ．Ｐ．；Ｈｕｎｔ，Ｊ．Ａ．；Ｒｅｉｓ，Ｒｕｉ Ｌ， Ｂｉｏｄｅｇｒａｄａｂｌｅ Ｓｙｓｔｅｍｓ ｉｎ Ｔｉｓｓｕｅ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ａｎｄ Ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｖｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ（２００５），３７７−３９７；Ｐａｇｅ：５２；Ｍｅｄｉａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｃｙｔｏｋｉｎｅ ｎｅｔｗｏｒｋ ｉｎ ｔｈｅ ｉｍｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ｏｆ ｏｒｔｈｏｐｅｄｉｃ ｄｅｖｉｃｅｓ． Ｍａｒｑｕｅｓ，Ａ．Ｐ．；Ｈｕｎｔ，Ｊ．Ａ．；Ｒｅｉｓ，Ｒｕｉ Ｌ．Ｂｉｏｄｅｇｒａｄａｂｌｅ Ｓｙｓｔｅｍｓ ｉｎ Ｔｉｓｓｕｅ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ａｎｄ Ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｖｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ（２００５），３７７−３９７）。簡単に言えば、適切な種類の細胞を医療用インプラントの部位へ向かわせることは、治癒及び正常な組織機能の回復を促進することができる。或いは、装置の移植の際に、該装置に結合され、または該装置をターゲッティングするＦＩＴ−Ｉｇによって放出されるメディエータ（サイトカインが含まれるが、これに限定されない）の阻害もまた提供される。例えば、ステントは、閉塞された動脈を清浄化して心筋への血流を改善するために、介入心臓病学において長年使用されてきた。しかしながら、伝統的な裸の金属ステントは、一部の患者では再狭窄（治療領域における動脈の再狭窄）を引き起こすことが知られており、血液凝固を導く可能性がある。最近、抗ＣＤ３４抗体でコーティングされたステントが記載されており、これは血液全体を循環する内皮前駆細胞（ＥＰＣ）を捕捉することによって、再狭窄を減少させ、また血栓の発生を防止するものである。内皮細胞は、血管をライニングする細胞であり、血液がスムーズに流れることを可能にする。該ＥＰＣは、滑らかな層を形成するステントの硬い表面に付着し、これは治癒を促進するだけでなく、再狭窄及び血栓、即ち、以前はステントの使用に付随するとされていた合併症を防止する（Ａｏｊｉ ｅｔ ａｌ．２００５ Ｊ Ａｍ Ｃｏｌｌ Ｃａｒｄｉｏｌ．４５（１０）：１５７４−９）。ステントを必要とする患者についての結果を改善することに加えて、心血管バイパス手術を必要とする患者についての関連性も存在する。例えば、抗ＥＰＣ抗体でコーティングされた補綴血管（人工動脈）は、バイパス手術移植のために患者の脚または腕の動脈を使用する必要性をなくすであろう。このことは手術及び麻酔の時間を減少し、ひいては冠動脈手術の死亡率を低減するであろう。ＦＩＴ−Ｉｇは、細胞の動員を促進するように、移植された装置にコーティングされた細胞表面マーカー（例えばＣＤ３４）、並びにタンパク質（または任意の種類のエピトープ：脂質及び多糖類を含むがこれに限定されない）に結合するように設計される。このようなアプローチは、他の医療用インプラントにも一般に適用することができる。或いは、ＦＩＴ−Ｉｇは医療装置上にコーティングすることができ、移植されたときには全てのＦＩＴを該装置から放出し（または既に負荷されたＦＩＴ−Ｉｇのエイジング及び変性を含む、追加の新鮮なＦＩＴ−Ｉｇを必要とし得る任意の他の必要性）、前記装置は患者への新鮮なＦＩＴ−Ｉｇの全身投与により再負荷することができ、この場合にＦＩＴ−Ｉｇは結合部位の一方の組で問題の標的（サイトカイン、細胞表面マーカー（例えばＣＤ３４）等）に結合し、また他方の組で前記装置にコーティングされた標的（タンパク質、何等かのエピトープを含み、限定されるものではないが脂質、多糖類及びポリマーを含む）に結合するように設計される。この技術は、コーティングされた移植片の有用性を延長する利点を有する。
【００９７】
本発明のＦＩＴ−Ｉｇ分子はまた、種々の疾患を治療するための治療用分子としても有用である。このようなＦＩＴ−Ｉｇ分子は、特定の疾患に関与する1以上の標的に結合することができる。種々の疾患におけるこのような標的の例を以下に記載する。
【００９８】
以下を含む多くのタンパク質が、一般的な自己免疫反応及び炎症反応に関与している：即ち、Ｃ５、ＣＣＬ１（Ｉ−３０９）、ＣＣＬ１１（エオタキシン）、ＣＣＬ１３（ｍｃｐ−４）、ＣＣＬ１５（ＭＩＰ−１ｄ）、ＣＣＬ１６（ＨＣＣ−４）、ＣＣＬ１７（ＴＡＲＣ）、ＣＣＬ１８（ＰＡＲＣ）、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２（ｍｃｐ−１）、ＣＣＬ２０（ＭＩＰ−３ａ）、ＣＣＬ２１（ＭＩＰ−２）、ＣＣＬ２３（ＭＰＩＦ−１）、ＣＣＬ２４（ＭＰＩＦ−２／エオタキシン−２）、ＣＣＬ２５（ＴＥＣＫ）、ＣＣＬ２６、ＣＣＬ３（ＭＩＰ−１ａ）、ＣＣＬ４（ＭＩＰ−１ｂ）、ＣＣＬ５（ＲＡＮＴＥＳ）、ＣＣＬ７（ｍｃｐ−３）、ＣＣＬ８（ｍｃｐ−２）、ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ１０（ＩＰ−１０）、ＣＸＣＬ１１（Ｉ−ＴＡＣ／ＩＰ−９）、ＣＸＣＬ１２（ＳＤＦ１）、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＬ１４、ＣＸＣＬ２、ＣＸＣＬ３、ＣＸＣＬ５（ＥＮＡ−７８／ＬＩＸ）、ＣＸＣＬ６（ＧＣＰ−２）、ＣＸＣＬ９、ＩＬ１３、ＩＬ８、ＣＣＬ１３（ｍｃｐ−４）、ＣＣＲ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＸ３ＣＲ１、ＩＬ８ＲＡ、ＸＣＲ１（ＣＣＸＣＲ１）、ＩＦＮＡ２、ＩＬ１０、ＩＬ１３、ＩＬ１７Ｃ、ＩＬ１Ａ、ＩＬ１Ｂ、ＩＬ１Ｆ１０、ＩＬ１Ｆ５、ＩＬ１Ｆ６、ＩＬ１Ｆ７、ＩＬ１Ｆ８、ＩＬ１Ｆ９、ＩＬ２２、ＩＬ５、ＩＬ８、ＩＬ９、ＬＴＡ、ＬＴＢ、ＭＩＦ、ＳＣＹＥ１（内皮単球活性化サイトカイン）、ＳＰＰ１、ＴＮＦ、ＴＮＦＳＦ５、ＩＦＮＡ２、ＩＬ１０ＲＡ、ＩＬ１０ＲＢ、ＩＬ１３、ＩＬ１３ＲＡ１、ＩＬ５ＲＡ、ＩＬ９、ＩＬ９Ｒ、ＡＢＣＦ１、ＢＣＬ６、Ｃ３、Ｃ４Ａ、ＣＥＢＰＢ、ＣＲＰ、ＩＣＥＢＥＲＧ、ＩＬ１Ｒ１、ＩＬ１ＲＮ、ＩＬ８ＲＢ、ＬＴＢ４Ｒ、ＴＯＬＬＩＰ、ＦＡＤＤ、ＩＲＡＫ１、ＩＲＡＫ２、ＭＹＤ８８、ＮＣＫ２、ＴＮＦＡＩＰ３、ＴＲＡＤＤ、ＴＲＡＦ１、ＴＲＡＦ２、ＴＲＡＦ３、ＴＲＡＦ４、ＴＲＡＦ５、ＴＲＡＦ６、ＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ１Ｂ、ＡＣＶＲ２、ＡＣＶＲ２Ｂ、ＡＣＶＲＬ１、ＣＤ２８、ＣＤ３Ｅ、ＣＤ３Ｇ、ＣＤ３Ｚ、ＣＤ６９、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＮＲ１、ＣＴＬＡ−４、ＣＹＳＬＴＲ１、ＦＣＥＲ１Ａ、ＦＣＥＲ２、ＦＣＧＲ３Ａ、ＧＰＲ４４、ＨＡＶＣＲ２、ＯＰＲＤ１、Ｐ２ＲＸ７、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、ＴＬＲ１０、ＢＬＲ１、ＣＣＬ１、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４、ＣＣＬ５、ＣＣＬ７、ＣＣＬ８、ＣＣＬ１１、ＣＣＬ１３、ＣＣＬ１５、ＣＣＬ１６、ＣＣＬ１７、ＣＣＬ１８、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２０、ＣＣＬ２１、ＣＣＬ２２、ＣＣＬ２３、ＣＣＬ２４、ＣＣＬ２５、ＣＣＲ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＸ３ＣＬ１、ＣＸ３ＣＲ１、ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ２、ＣＸＣＬ３、ＣＸＣＬ５、ＣＸＣＬ６、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＣＸＣＬ１２、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＲ４、ＧＰＲ２、ＳＣＹＥ１、ＳＤＦ２、ＸＣＬ１、ＸＣＬ２、ＸＣＲ１、ＡＭＨ、ＡＭＨＲ２、ＢＭＰＲ１Ａ、ＢＭＰＲ１Ｂ、ＢＭＰＲ２、Ｃ１９ｏｒｆ１０（ＩＬ２７ｗ）、ＣＥＲ１、ＣＳＦ１、ＣＳＦ２、ＣＳＦ３、ＤＫＦＺｐ４５１Ｊ０１１８、ＦＧＦ２、ＧＦＩ１、ＩＦＮＡ１、ＩＦＮＢ１、ＩＦＮＧ、ＩＧＦ１、ＩＬ１Ａ、ＩＬ１Ｂ、ＩＬ１Ｒ１、ＩＬ１Ｒ２、ＩＬ２、ＩＬ２ＲＡ、ＩＬ２ＲＢ、ＩＬ２ＲＧ、ＩＬ３、ＩＬ４、ＩＬ４Ｒ、ＩＬ５、ＩＬ５ＲＡ、ＩＬ６、ＩＬ６Ｒ、ＩＬ６ＳＴ、ＩＬ７、ＩＬ８、ＩＬ８ＲＡ、ＩＬ８ＲＢ、ＩＬ９、ＩＬ９Ｒ、ＩＬ１０、ＩＬ１０ＲＡ、ＩＬ１０ＲＢ、ＩＬ１１、ＩＬ１１ＲＡ、ＩＬ１２Ａ、ＩＬ１２Ｂ、ＩＬ１２ＲＢ１、ＩＬ１２ＲＢ２、ＩＬ１３、ＩＬ１３ＲＡ１、ＩＬ１３ＲＡ２、ＩＬ１５、ＩＬ１５ＲＡ、ＩＬ１６、ＩＬ１７、ＩＬ１７Ｒ、ＩＬ１８、ＩＬ１８Ｒ１、ＩＬ１９、ＩＬ２０、ＫＩＴＬＧ、ＬＥＰ、ＬＴＡ、ＬＴＢ、ＬＴＢ４Ｒ、ＬＴＢ４Ｒ２、ＬＴＢＲ、ＭＩＦ、ＮＰＰＢ、ＰＤＧＦＢ、ＴＢＸ２１、ＴＤＧＦ１、ＴＧＦＡ、ＴＧＦＢ１、ＴＧＦＢ１Ｉ１、ＴＧＦＢ２、ＴＧＦＢ３、ＴＧＦＢＩ、ＴＧＦＢＲ１、ＴＧＦＢＲ２、ＴＧＦＢＲ３、ＴＨ１Ｌ、ＴＮＦ、ＴＮＦＲＳＦ１Ａ、ＴＮＦＲＳＦ１Ｂ、ＴＮＦＲＳＦ７、ＴＮＦＲＳＦ８、ＴＮＦＲＳＦ９、ＴＮＦＲＳＦ１１Ａ、ＴＮＦＲＳＦ２１、ＴＮＦＳＦ４、ＴＮＦＳＦ５、ＴＮＦＳＦ６、ＴＮＦＳＦ１１、ＶＥＧＦ、ＺＦＰＭ２、及びＲＮＦ１１０（ＺＮＦ１４４）である。上記の標的の１以上に結合することができるＦＩＴ−Ｉｇをも想定される。
【００９９】
アレルギー性喘息は、好酸球増多症、杯細胞異形成、上皮細胞変化、気道過敏症（ＡＨＲ）、Ｔｈ２及びＴｈ１サイトカインの発現の存在、並びに血清ＩｇＥレベルの上昇を特徴とする。気道炎症は喘息の病因の基礎をなす重要な因子であることが現在広く認められており、これにはＴ細胞、Ｂ細胞、好酸球、肥満細胞及びマクロファージのような炎症細胞、並びにそれらが分泌するサイトカイン及びケモカインを含むメディエータの複雑な相互作用が含まれる。コルチコステロイドは、今日の喘息に対する最も重要な抗炎症治療であるが、それらの作用機序は非特異的であり、また特に若年の患者集団において安全性の問題が存在する。より特異的で且つ標的が絞られた療法の開発が正当化される。マウスにおけるＩＬ−１３は、好酸球性炎症とは独立に、ＡＨＲ、粘液分泌過多及び気道線維症を含めて、喘息の多くの特徴を模倣するとの増大する証拠が存在する（Ｆｉｎｏｔｔｏ ｅｔ ａｌ．，ＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（２００５），１７（８），９９３−１００７；Ｐａｄｉｌｌａ ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（２００５），１７４（１２），８０９７−８１０５）。
【０１００】
ＩＬ−１３は、喘息に関連した病理学的応答を生じることにおいて重要な役割を有することが示唆されている。肺におけるＩＬ−１３の影響を低減する抗ＩＬ−１３モノクローナル抗体療法の開発は、喘息のためのかなり有望な新規治療を提供するエキサイティングな新しいアプローチである。しかし、示差免疫学経路の他のメディエータもまた喘息の発病に関与し、ＩＬ−１３に加えて、これらのメディエータの遮断もまた追加の治療的利点を提供する可能性がある。このような標的対には、ＩＬ−１３と腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ−α）のような前炎症性サイトカインの対が含まれるが、これらに限定されない。ＴＮＦ−αは、喘息における炎症反応を増幅する可能性があり、また疾患の重症度に繋がる可能性もある（ＭｃＤｏｎｎｅｌｌ，ｅｔａｌ．，Ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｉｎ Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ Ｒｅｓｅａｒｃｈ（２００１），３１（Ｎｅｗ Ｄｒｕｇｓ ｆｏｒ Ａｓｔｈｍａ，Ａｌｌｅｒｇｙ ａｎｄ  ＣＯＰＤ），２４７−２５０）。これは、ＩＬ−１３及びＴＮＦ−αの両方を遮断することが、特に重篤な気道疾患において有益な効果を有し得ることを示唆する。好ましい実施形態において、本発明のＦＩＴ−Ｉｇは標的ＩＬ−１３及びＴＮＦαに結合し、喘息を治療するために使用される。
【０１０１】
炎症及びＡＨＲの両方を評価できるＯＶＡ誘発性喘息マウスモデル等の動物モデルは、当技術分野で公知であり、種々のＦＩＴ−Ｉｇ分子の喘息を治療する能力を決定することができる。喘息を研究するための動物モデルは、下記文献に開示されている：Ｃｏｆｆｍａｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ（２００５），２０１（１２），１８７５−１８７９；Ｌｌｏｙｄ， ｅｔ ａｌ．，Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（２００１），７７，２６３−２９５；Ｂｏｙｃｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ（２００５），２０１（１２），１８６９−１８７３；及びＳｎｉｂｓｏｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｔｈｅ Ｂｒｉｔｉｓｈ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｆｏｒ Ａｌｌｅｒｇｙ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（２００５），３５（２），１４６−５２。これらの標的対のルーチンの安全性評価に加えて、免疫抑制の程度についての特別な試験が正当化され、且つ最良の標的対を選択するのに役立つ（Ｌｕｓｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ（１９９４），９２（１−３），２２９−４３；Ｄｅｓｃｏｔｅｓ，ｅｔ ａｌ．，Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｓ ｉｎ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｓｔａｎｄａｒｄｉｚａｔｉｏｎ（１９９２），７７ ９９−１０２；Ｈａｒｔ ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｌｌｅｒｇｙ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（２００１），１０８（２），２５０−２５７参照）。
【０１０２】
上記に開示した原理に基づき、また有効性及び安全性のための同じ評価モデルを使用して、ＦＩＴ−Ｉｇ分子に結合し喘息を治療するのに有用であり得る他の標的対を決定することができる。好ましくは、このような標的には、限定されるものではないが次のものが含まれる：即ち、ＩＬ−１３及びＩＬ−１β（ＩＬ−１βもまた喘息における炎症反応に関与するため）；ＩＬ−１３と炎症に関与するサイトカイン及びケモカイン、例えばＩＬ−１３及びＩＬ−９；ＩＬ−１３及びＩＬ−４；ＩＬ−１３及びＩＬ−５；ＩＬ−１３及びＩＬ−２５；ＩＬ−１３及びＴＡＲＣ；ＩＬ−１３及びＭＤＣ；ＩＬ−１３及びＭＩＦ；ＩＬ−１３及びＴＧＦ−β；ＩＬ−１３及びＬＨＲアゴニスト；ＩＬ−１３及びＣＬ２５； ＩＬ−１３及びＳＰＲＲ２ａ；ＩＬ−１３及びＳＰＲＲ２ｂ；並びにＩＬ−１３及びＡＤＡＭ８である。本発明はまた、下記からなる群から選択される喘息に関与する１以上の標的に結合できるＦＩＴ−Ｉｇも想定している：ＣＳＦ１（ＭＣＳＦ）、ＣＳＦ２（ＧＭ−ＣＳＦ）、ＣＳＦ３（ＧＣＳＦ）、ＦＧＦ２、ＩＦＮＡ１、ＩＦＮＢ１、ＩＦＮＧ、ヒスタミン及びヒスタミン受容体、ＩＬ１Ａ、ＩＬ１Ｂ、ＩＬ２、ＩＬ３、ＩＬ４、ＩＬ５、ＩＬ６、ＩＬ７、ＩＬ８、ＩＬ９、ＩＬ１０、ＩＬ１１、ＩＬ１２Ａ、ＩＬ１２Ｂ、ＩＬ１３、ＩＬ１４、ＩＬ１５、ＩＬ１６、ＩＬ１７、ＩＬ１８、ＩＬ１９、ＫＩＴＬＧ、ＰＤＧＦＢ、ＩＬ２ＲＡ、ＩＬ４Ｒ、ＩＬ５ＲＡ、ＩＬ８ＲＡ、ＩＬ８ＲＢ、ＩＬ１２ＲＢ１、ＩＬ１２ＲＢ２、ＩＬ１３ＲＡ１、ＩＬ１３ＲＡ２、ＩＬ１８Ｒ１、ＴＳＬＰ、ＣＣＬ１、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４、ＣＣＬ５、ＣＣＬ７、ＣＣＬ８、ＣＣＬ１３、ＣＣＬ１７、ＣＣＬ１８、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２０、ＣＣＬ２２、ＣＣＬ２４、ＣＸ３ＣＬ１、ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ２、ＣＸＣＬ３、ＸＣＬ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＸ３ＣＲ１、ＧＰＲ２、ＸＣＲ１、ＦＯＳ、ＧＡＴＡ３、ＪＡＫ１、ＪＡＫ３、ＳＴＡＴ６、ＴＢＸ２１、ＴＧＦＢ１、ＴＮＦＳＦ６、ＹＹ１、ＣＹＳＬＴＲ１、ＦＣＥＲ１Ａ、ＦＣＥＲ２、ＬＴＢ４Ｒ、ＴＢ４Ｒ２、ＬＴＢＲ、及びキチナーゼ。
【０１０３】
全身性疾患である関節リウマチ（ＲＡ）は、関節の滑膜における慢性炎症反応を特徴とするものであり、軟骨の変性及び傍関節骨の浸食を伴う。ＴＮＦ、ケモカイン、及び増殖因子を含む多くの炎症誘発性サイトカインが、罹患した関節において発現される。ＲＡのマウスモデルに対する抗ＴＮＦ抗体またはｓＴＮＦＲ融合タンパク質の全身投与は、抗炎症性かつ関節保護的であることが示された。ＲＡ患者におけるＴＮＦの活性が、静脈内に投与インフリキシマブ（Ｈａｒｒｉｍａｎ Ｇ，Ｈａｒｐｅｒ  ＬＫ，Ｓｃｈａｉｂｌｅ ＴＦ．１９９９，Ｓｕｍｍａｒｙ ｏｆ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｔｒｉａｌｓ ｉｎ ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ ｕｓｉｎｇ  ｉｎｆｌｉｘｉｍａｂ， ａｎ ａｎｔｉ−ＴＮＦａｌｐｈａ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ．Ａｎｎ Ｒｈｅｕｍ Ｄｉｓ ５８ Ｓｕｐｐｌ １：Ｉ６１−４）、即ち、キメラ抗ＴＮＦモノクローナル抗体（ｍＡＢ）で阻止された臨床試験は、ＴＮＦが、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＭＣＰ−１、及びＶＥＧＦの産生、関節への免疫細胞及び炎症細胞の動員、血管新生、マトリックスメタロプロテイナーゼ−１及び−３の血液レベルの低下を調節するという証拠を提供した。関節リウマチにおける炎症性経路をより良く理解することにより、関節リウマチに関与する他の治療標的の同定が導かれた。インターロイキン−６アンタゴニスト（ＭＲＡ）、ＣＴＬＡ４Ｉｇ（ａｂａｔａｃｅｐｔ，Ｇｅｎｏｖｅｓｅ  Ｍｃ ｅｔ ａｌ ２００５ Ａｂａｔａｃｅｐｔ ｆｏｒ ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ ｒｅｆｒａｃｔｏｒｙ ｔｏ ｔｕｍｏｒ ｎｅｃｒｏｓｉｓ ｆａｃｔｏｒ ａｌｐｈａ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ．Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ．３５３：１１１４−２３）、及び抗Ｂ細胞療法（ｒｉｔｕｘｉｍａｂ，Ｏｋａｍｏｔｏ Ｈ，Ｋａｍａｔａｎｉ Ｎ．２００４ Ｒｉｔｕｘｉｍａｂ ｆｏｒ ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ．Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ．３５１：１９０９）のような有望な治療は、既にここ１年に亘って、ランダム対照試験により試験されている。インターロイキン１５、インターロイキン１７、インターロイキン１８を含む他のサイトカインが同定され、動物モデルにおいて有益であることが示されており、これらの薬剤の臨床試験が現在進行中である。抗ＴＮＦ及びもう一つのメディエータを組み合わせた二重特異性抗体療法は、臨床的効力及び／または患者のカバレッジを向上させことにおいて大きな可能性を秘めている。例えば、ＴＮＦ及びＶＥＧＦの両方をブロックすることは、潜在的に、炎症及び血管新生を根絶することができるが、これらは両者共にＲＡの病態生理に関与している。ＲＡに関与する他の標的対を特異的なＦＩＴ−ＩｇのＩｇでブロックすることもまた想定され、これにはＴＮＦ及びＩＬ−１８；ＴＮＦ及びＩＬ−１２；ＴＮＦ及びＩＬ−２３；ＴＮＦ及びＩＬ−１β；ＴＮＦ及びＭＩＦ；ＴＮＦ及びＩＬ−１７；並びにＴＮＦ及びＩＬ−１５が含まれるが、これらに限定されない。これら標的対のルーチン安全性評価に加えて、免疫抑制の程度についての特別な試験が、最良の標的対を選択する上で正当化され得、また有用であり得る（Ｌｕｓｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ（１９９４），９２（１−３），２２９−４３；���ｅｓｃｏｔｅｓ，ｅｔ  ａｌ．，Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｓ  ｉｎ  ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｓｔａｎｄａｒｄｉｚａｔｉｏｎ（１９９２）７７，９９−１０２；Ｈａｒｔ ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｌｌｅｒｇｙ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（２００１），１０８（２），２５０−２５７参照）。ＦＩＴ−ＩｇのＩｇ分子が関節リウマチの治療に有用であるかどうかは、コラーゲン誘発性関節炎のマウスモデルのような前臨床動物ＲＡモデルを用いて評価することができる。他の有用なモデルも当該分野において周知である（Ｂｒａｎｄ ＤＤ．，Ｃｏｍｐ Ｍｅｄ．（２００５） ５５（２）：１１４−２２参照）。
【０１０４】
全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）の顕著な免疫病原的特徴は、ポリクローナルＢ細胞の活性化であり、これは高グロブリン血症、自己抗体産生、免疫複合体形成を導く。基本的な異常は、一般化されたＴ細胞の調節不全により、Ｔ細胞が禁止されたＢ細胞クローンを抑制できないことであると思われる。加えて、Ｂ細胞及びＴ細胞の相互作用は、ＩＬ−１０のような幾つかのサイトカイン、並びに二次信号を開始するＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、Ｂ７、ＣＤ２８、及びＣＴＬＡ−４のような共刺激分子によって促進される。これらの相互作用は、免疫複合体及びアポトーシス材料の減損された貪食細胞クリアランスと共に、結果として生じる組織傷害を伴った免疫応答を永続させる。下記の標的は、ＳＬＥに関与する可能性があり、潜在的に治療的介入のためのＦＩＴ−Ｉｇアプローチのために使用できる：Ｂ細胞標的療法：ＣＤ−２０、ＣＤ−２２、ＣＤ−１９、ＣＤ２８、ＣＤ４、ＣＤ８０、ＨＬＡ−ＤＲＡ、ＩＬ１０、ＩＬ２、ＩＬ４、ＴＮＦＲＳＦ５、ＴＮＦＲＳＦ６、ＴＮＦＳＦ５、ＴＮＦＳＦ６、ＢＬＲ１、ＨＤＡＣ４、ＨＤＡＣ５、ＨＤＡＣ７Ａ、ＨＤＡＣ９、ＩＣＯＳＬ、ＩＧＢＰ１、ＭＳ４Ａ１、ＲＧＳ１、ＳＬＡ２、ＣＤ８１、ＩＦＮＢ１、ＩＬ１０、ＴＮＦＲＳＦ５、ＴＮＦＲＳＦ７、ＴＮＦＳＦ５、ＡＩＣＤＡ、ＢＬＮＫ、ＧＡＬＮＡＣ４Ｓ−６ＳＴ、ＨＤＡＣ４、ＨＤＡＣ５、ＨＤＡＣ７Ａ、ＨＤＡＣ９、ＩＬ１０、ＩＬ１１、ＩＬ４、ＩＮＨＡ、ＩＮＨＢＡ、ＫＬＦ６、ＴＮＦＲＳＦ７、ＣＤ２８、ＣＤ３８、ＣＤ６９、ＣＤ８０、ＣＤ８３、ＣＤ８６、ＤＰＰ４、ＦＣＥＲ２、ＩＬ２ＲＡ、ＴＮＦＲＳＦ８、ＴＮＦＳＦ７、ＣＤ２４、ＣＤ３７、ＣＤ４０、ＣＤ７２、ＣＤ７４、ＣＤ７９Ａ、ＣＤ７９Ｂ、ＣＲ２、ＩＬ１Ｒ２、ＩＴＧＡ２、ＩＴＧＡ３、ＭＳ４Ａ１、ＳＴ６ＧＡＬ１、ＣＤ１Ｃ、ＣＨＳＴ１０、ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−ＤＲＡ、及びＮＴ５Ｅ；共刺激信号：ＣＴＬＡ−４またはＢ７．１／Ｂ７．２；Ｂ細胞生存の阻害：ＢＬＹＳ、ＢＡＦＦ；補体の不活性化：Ｃ５；サイトカイン調節：重要な原理は、任意の組織における正味の純生物学的応答は、炎症促進性または抗炎症性サイトカインの局部的レベルの間のバランスの結果ということである（Ｓｆｉｋａｋｉｓ ＰＰ ｅｔ ａｌ ２００５ Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ １７：５５０−７参照）。ＳＬＥは、文献に記載された血清ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−１０の上昇を伴った、Ｔｈ−２に駆動される疾患と考えられている。ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＩＦＮ−α、及びＴＮＦ−αからなる群から選択される、１以上の標的に結合できるＦＩＴ−Ｉｇもまた想定される。上記で述べた標的の組み合わせはＳＬＥの治療効果を増強し、これは多くのループス前臨床モデルで試験することができる（Ｐｅｎｇ ＳＬ （２００４） Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ Ｍｅｄ．；１０２：２２７−７２参照）。
【０１０５】
多発性硬化症（ＭＳ）は、主に未知の病因による複雑なヒト自己免疫型疾患である。神経系全体に亘るミエリン塩基性タンパク質（ＭＢＰ）の免疫学的破壊が、多発性硬化症の主要な病態である。ＭＳは、ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞による浸潤、及び中枢神経系内の応答が関与する複雑な病変の疾病である。ＣＮＳでのサイトカイン、反応性窒素種及び共刺激因子分子の発現は、ＭＳにおいて全て記述されている。自己免疫の発生に貢献する免疫学的メカニズムは、主要な検討事項である。特に、抗原発現、サイトカイン及び白血球相互作用、及びＴｈ１及びＴｈ２細胞のような他のＴ細胞のバランス／調節を補助する調節Ｔ細胞は、治療標的の同定のための重要な領域である。
【０１０６】
ＩＬ−１２は、ＡＰＣによって産生され、Ｔｈ１エフェクター細胞の分化を促進する炎症促進性サイトカインである。ＩＬ−１２は、ＭＳ患者の発症している病変、ならびにＥＡＥに罹患した動物において産生される。以前、ＩＬ−１２経路における干渉は齧歯類においてＥＡＥを効果的に予防し、また抗ＩＬ−１２ｍＡｂを用いたＩＬ−１２ｐ４０のインビボ中和はコモンマーモセット類におけるミエリン誘発性ＥＡＥモデルにおいて有益な効果を有することが示された。
【０１０７】
ＴＷＥＡＫは、構成中枢神経系（ＣＮＳ）において構成的に発現するＴＮＦファミリーのメンバーであり、細胞型に依存して増殖性、炎症誘発性またはアポトーシス効果を有する。その受容体であるＦｎｌ４は、内皮細胞、反応性星状細胞及びニューロンによりＣＮＳにおいて発現される。ＴＷＥＡＫ及びＦｎｌ４ｍＲＮＡの発現は、実験的自己免疫性脳脊髄炎（ＥＡＥ）の際に脊髄において増加した。Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおいてミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質（ＭＯＧ）で誘導されたＥＡＥでの抗ＴＷＥＡＫ抗体治療は、マウスをプライミング相の後に治療したときに、疾患の重症度及び白血球浸潤の低下をもたらした。
【０１０８】
本発明の一態様は、ＩＬ−１２、ＴＷＥＡＫ、ＩＬ−２３、ＣＸＣＬ１３、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＩＬ−１８、ＶＥＧＦ、ＶＬＡ−４、ＴＮＦ、ＣＤ４５ＲＢ、ＣＤ２００、ＩＦＮガンマ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＦＧＦ、Ｃ５、ＣＤ５２、及びＣＣＲ２からなる群から選択される１以上、好ましくは二つの標的に結合できるＦＩＴ−ＩｇのＩｇ分子に関する。好ましい実施形態は、ＭＳの治療のための有益な治療薬として、二重特異性の抗ＩＬ−１２／ＴＷＥＡＫ・ＦＩＴ−ＩｇのＩｇを含んでいる。ＭＳを治療するためのＦＩＴ−Ｉｇ分子の有用性を評価する幾つかの動物モデルが、当該技術において知られている（Ｓｔｅｉｎｍａｎ Ｌ， ｅｔ ａｌ．，（２００５） Ｔｒｅｎｄｓ Ｉｍｍｕｎｏｌ． ２６（１１）：５６５−７１； Ｌｕｂｌｉｎ ＦＤ．，ｅｔ ａｌ．，（１９８５） Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｓｅｍｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌ．８（３）：１９７−２０８；Ｇｅｎａｉｎ ＣＰ，ｅｔ ａｌ．，（１９９７） Ｊ Ｍｏｌ Ｍｅｄ．７５（３）：１８７−９７；Ｔｕｏｈｙ ＶＫ，ｅｔ ａｌ．，（１９９９） Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ． １８９（７）：１０３３−４２；Ｏｗｅｎｓ Ｔ， ｅｔ ａｌ．，（１９９５） Ｎｅｕｒｏｌ Ｃｌｉｎ．１３（１）：５１−７３；及び 'ｔ Ｈａｒｔ ＢＡ，ｅｔ ａｌ．，（２００５） Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １７５（７）：４７６１−８参照）。これら標的対のルーチンの安全性評価に加えて、免疫抑制の程度についての特殊な試験が、最良の標的対を選択するために正当化され、また有用であり得る（Ｌｕｓｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ（１９９４），９２（１−３），２２９−４３；Ｄｅｓｃｏｔｅｓ，ｅｔ ａｌ．，Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｓ ｉｎ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｓｔａｎｄａｒｄｉｚａｔｉｏｎ（１９９２），７７，９９−１０２；Ｊｏｎｅｓ Ｒ．２０００ Ｒｏｖｅｌｉｚｕｍａｂ（ＩＣＯＳ  Ｃｏｒｐ）．ＩＤｒｕｇｓ．３（４）：４４２−６参照）。
【０１０９】
敗血症の病態生理は、両方のグラム陰性生物（リポ多糖［ＬＰＳ］、リピドＡ、エンドトキシン）及びグラム陽性生物（リポテイコ酸、ペプチドグリカン）の外膜成分によって開始される。これらの外膜成分は、単球表面上のＣＤ１４受容体に結合することができる。次いで、最近記載されたトール様受容体によって信号は細胞に伝達され、最終的には炎症誘発性サイトカイン腫瘍壊死因子−アルファ（ＴＮＦ−α）及びインターロイキン−１（ＩＬ−Ｉ）の産生をもたらす。圧倒的な炎症反応及び免疫応答は敗血症性ショックの本質的な特徴であり、敗血症により誘導される組織損傷、多臓器不全、及び死亡の病因において中心的な役割を果たす。サイトカイン、特に腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）及びインターロイキン（ＩＬ）−１は、敗血症性ショックの重要なメディエータであることが示されている。これらのサイトカインは、組織への直接的な毒性効果を有し；それらはまたホスホリパーゼＡ２を活性化させる。これらの効果及びその他の効果は、血小板活性化因子の増大した濃度、一酸化窒素合成酵素活性の促進、好中球による組織浸潤の促進、及び好中球活性の促進を導く。
【０１１０】
敗血症及び敗血症性ショックの治療は未だ臨床的な難問であり、炎症反応を目的として生物学的応答調節剤（即ち、抗ＴＮＦ、抗ＭＩＦ）を用いた最近のプロスペクティブ試験は、僅かな臨床的有益性を示したに過ぎない。最近は、免疫抑制の付随期間を逆転させることを目的とした治療へと興味がシフトしてきている。実験動物及び重症患者での研究により、リンパ系器官及び幾つかの実質組織の増大したアポトーシスは、この免疫抑制、アネルギー、及び器官系の機能不全に寄与することが示された。敗血症症候群の際、リンパ球アポトーシスは、ＩＬ−２の不存在によって、或いはグルココルチコイド、グランザイム、または所謂「死」サイトカイン：腫瘍壊死因子αもしくはＦａｓリガンドの放出によって誘発することができる。アポトーシスは、サイトゾルカスパーゼ及び／またはミトコンドリアカスパーゼの自己活性化を介して進行し、これはＢｃｌ−２ファミリーのプロアポトーシス及び抗アポトーシスのメンバーによって影響を受ける可能性がある。実験動物において、アポトーシス阻害剤を用いた治療はリンパ系細胞のアポトーシスを防止できるだけでなく、結果を改善する可能性もある。抗アポトーシス剤を用いた臨床試験は、殆どはそれらの投与及び組織ターゲティングに関連した技術的な問題の故に未だ成功にはほど遠いが、リンパ球アポトーシスの阻害は、敗血症患者のための魅力的な治療目標である。同様に、炎症性メディエータ及びアポトーシスメディエータの両方を標的とする二重特異性の薬剤は、追加の利益を有し得る。本発明の一つの態様は、下記からなる群から選択される敗血症に関与する１以上の標的、好ましくは二つの標的に結合できるＦＩＴ−ＩｇのＩｇに関する：即ち、ＴＮＦ、ＩＬ−１、ＭＩＦ、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１８、ＩＬ−１２、ＩＬ−２３、ＦａｓＬ、ＬＰＳ、Ｔｏｌｌ様受容体、ＴＬＲ−４、組織因子、ＭＩＰ−２、ＡＤＯＲＡ２Ａ、ＣＡＳＰ１、ＣＡＳＰ４、ＩＬ１０、ＩＬ１Ｂ、ＮＦＫＢ１、ＰＲＯＣ、ＴＮＦＲＳＦ１Ａ、ＣＳＦ３、ＩＬ１０、ＩＬ１Ｂ、ＩＬ６、ＡＤＯＲＡ２Ａ、ＣＣＲ３、ＩＬ１０、ＩＬ１Ｂ、ＩＬ１ＲＮ、ＭＩＦ、ＮＦＫＢ１、ＰＴＡＦＲ、ＴＬＲ２、ＴＬＲ４、ＧＰＲ４４、ＨＭＯＸ１、ミッドカイン、ＩＲＡＫ１、ＮＦＫＢ２、ＳＥＲＰＩＮＡ１、ＳＥＲＰＩＮＥ１、及びＴＲＥＭ１である。敗血症のための斯かるＦＩＴ−ＩｇのＩｇの有効性は、当技術分野において知られた前臨床動物モデルにおいて評価することができる（Ｂｕｒａｓ ＪＡ，ｅｔ ａｌ．，（２００５） Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ．４（１０）：８５４−６５及びＣａｌａｎｄｒａ Ｔ，ｅｔ ａｌ．，（２０００） Ｎａｔ Ｍｅｄ．６（２）：１６４−７０参照）。
【０１１１】
慢性神経変性疾患は、通常、神経機能（神経細胞死、脱髄）の進行性の喪失、モビリティ喪失及び記憶喪失によって特徴付けられる年齢依存性疾患である。慢性神経変性疾患（例えば、アルツハイマー病）の基礎をなす機構の新たな知識は複雑な病因を示し、種々の因子、例えば年齢、血糖状態、アミロイド産生及び多量体化、その受容体ＲＡＧＥ（ＡＧＥの受容体）に結合する進行した糖化の最終生成物（ＡＧＥ）の蓄積、増大した脳酸化ストレス、減少した脳血流、炎症性サイトカイン及びケモカインの放出を含む神経炎症、神経機能障害及びミクログリアの活性化が、それらの発症及び進行に寄与することが認識されてきた。従って、これらの慢性神経変性疾患は、複数の細胞型とメディエータとの間の複雑な相互作用を呈する。このような疾患の治療戦略は限られており、主に非特異的抗炎症剤（例えば、コルチコステロイド、ＣＯＸ阻害剤）で炎症プロセスを阻止すること、またはニューロン喪失及び／またはシナプス機能を防御する薬剤の何れかで構成される。これらの治療は、疾患の進行を止めることができない。最近の研究では、可溶性Ａ−βペプチド（Ａ−ｂのオリゴマー形態を含む）に対する抗体のような更にターゲッティングされた療法は、疾患の進行を停止させるだけでなく、記憶の維持に役立ち得る可能性を示唆している。これらの予備的観察は、複数の疾患メディエータ（例えばＡ−β及びＴＮＦなどの炎症性サイトカイン）を標的とする特異的治療法は、単一疾患のメカニズム（例えば、可溶性Ａ−β単独）をターゲッティングする場合に観察されるよりも、慢性神経変性疾患のためのより良い治療効果を提供できることを示唆している（Ｃ．Ｅ．Ｓｈｅｐｈｅｒｄ，ｅｔ ａｌ，Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ Ａｇｉｎｇ．２００５ Ｏｃｔ ２４；Ｎｅｌｓｏｎ ＲＢ．，Ｃｕｒｒ Ｐｈａｒｍ Ｄｅｓ． ２００５；１１：３３３５；Ｗｉｌｌｉａｍ Ｌ．  Ｋｌｅｉｎ．；Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ Ｉｎｔ． ２００２；４１：３４５；Ｍｉｃｈｅｌｌｅ Ｃ Ｊａｎｅｌｓｉｎｓ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｎｅｕｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ．２００５；２：２３；Ｓｏｌｏｍａｎ Ｂ．，Ｃｕｒｒ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ Ｒｅｓ．２００４；１：１４９；Ｉｇｏｒ Ｋｌｙｕｂｉｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｍｅｄ．２００５；１１：５５６−６１；Ａｒａｎｃｉｏ Ｏ，ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｊｏｕｒｎａｌ（２００４） １−１０；Ｂｏｒｎｅｍａｎｎ  ＫＤ，ｅｔ ａｌ．，Ａｍ Ｊ Ｐａｔｈｏｌ．２００１；１５８：６３；Ｄｅａｎｅ Ｒ，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｍｅｄ．２００３；９：９０７−１３；及びＥｌｉｅｚｅｒ Ｍａｓｌｉａｈ，ｅｔ ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｎ．２００５；４６：８５７参照）。
【０１１２】
本発明のＦＩＴ−Ｉｇの分子は、アルツハイマー病のような慢性神経変性疾患に関与する１以上の標的に結合することができる。このような標的には、ＡＤの病因に関与する任意の可溶性または細胞表面メディエータ、例えばＡＧＥ（Ｓ１００ Ａ、アンホテリン）、炎症誘発性サイトカイン（例えばＩＬ−１）、ケモカイン（例えば、ＭＣＰ１）に関与する任意のメディエータ、神経再生を阻害する分子（例えばのＮｏｇｏ、ＲＧＭ Ａ）、神経突起の成長を増強する分子（ニューロトロフィン）が含まれるが、これらに限定されない。ＦＩＴ−Ｉｇ分子の効力は、アミロイド前駆体タンパク質またはＲＡＧＥを過剰発現し、またアルツハイマー病様の症状を発症するトランスジェニックマウスのような前臨床動物モデルで検証することができる。加えて、ＦＩＴ−Ｉｇ分子を構築して、動物モデルにおいて有効性について試験することができ、またヒト患者における試験のための最良の治療的ＦＩＴ−Ｉｇを選択することができる。ＦＩＴ−Ｉｇ分子はまた、パーキンソン病のような他の神経変性疾患の治療にも使用することができる。アルファ−シヌクレインは、パーキンソンの病理学に関与している。アルファ−シヌクレイン及びＴＮＦ、ＩＬ−１、ＭＣＰ−１のような炎症性メディエータをターゲッティングできるＦＩＴ−Ｉｇは、パーキンソン病のための効果的な療法を立証でき、本発明において考慮されている。
【０１１３】
病理学的メカニズムの知識の増大にもかかわらず、脊髄損傷（ＳＣＩ）は未だ壊滅的な状態であり、高い医療の必要性により特徴付けられた医学的適応症に相当する。殆どの脊髄損傷は挫傷または圧迫傷害であり、通常、一次損傷の後には二次損傷機構（炎症性メディエータ、例えばサイトカイン及びケモカイン）が続き、これは一次損傷を悪化させて病変領域の大幅な拡大（時には１０倍以上になる）をもたらす。ＳＣＩにおけるこれらの一次及び二次カニズムは、他の手段、例えば脳卒中によって引き起こされる脳損傷の場合と非常に類似している。満足な治療法は存在せず、メチルプレドニゾロン（ＭＰ）の高用量ボーラス注射は損傷後８時間の狭い時間ウィンドウ内でのみ使用される治療法である。しかし、この治療は二次的損傷の防止を意図しているに過ぎず、有意な機能回復を生じることはない。それは、明確な有効性の欠如と、その後の感染症や重度の組織病理学的な筋変化を伴った免疫抑制のような、深刻な副作用を重く批判されている。内在性の再生能を刺激する他の薬物、生物製剤または小分子は承認されていないが、近年、有望な治療原理及び薬物候補がＳＣＩ動物モデルにおいて有効性を示した。人間のＳＣＩにおける機能回復の欠如は、大部分は、病変部位において、瘢痕組織において、ミエリンにおいて、並びに傷害関連細胞での、神経突起成長を阻害する因子によって引き起こされる。このような因子は、ミエリン関連タンパク質のＮｏｇｏＡ、ＯＭｇｐ及びＭＡＧ、ＲＧＭ Ａ、ｓｃａｒ関連ＣＳＰＧ（コンドロイチン硫酸プロテオグリカン）及び反応性星状細胞に対する阻害因子（幾つかのセマフォリン及びエフリン）である。しかし、病変部位には、成長阻害分子だけでなく、ニューロトロフィン、ラミニン、Ｌ１、その他のような神経突起成長刺激因子が見られる。神経突起成長阻害分子及び成長促進分子のこのアンサンブルは、阻害の影響の低減がバランスを成長阻害から成長促進へとシフトさせる可能性があるので、ＮｏｇｏＡまたはＲＧＭ Ａのような単一の要因をブロッキングすることが、齧歯類ＳＣＩモデルにおける顕著な機能的回復を生じることを説明することができる。しかし、単一の神経突起成長阻害分子をブロックして観察された回復は、完全ではなかった。より速く且つより顕著な回復を達成するには、二つの神経突起成長阻害分子、例えばＮｏｇｏ及びＲＧＭ Ａをブロックするか、或いは一方の神経突起成長阻害分子をブロックし、且つ神経突起成長増強分子、例えばＮｏｇｏ及びニューロトロフィンの機能を高めるか、或いは神経突起成長阻害分子（例えばＮｏｇｏ）及び炎症促進分子（例えばＴＮＦ）をブロックすることが望ましい（ＭｃＧｅｅ ＡＷ，ｅｔ ａｌ．，Ｔｒｅｎｄｓ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２００３；２６：１９３；Ｍａｒｃｏ Ｄｏｍｅｎｉｃｏｎｉ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｎｅｕｒｏｌ Ｓｃｉ．２００５；２３３：４３；Ｍｉｌａｎ Ｍａｋｗａｎａ１，ｅｔ ａｌ．，ＦＥＢＳ Ｊ．２００５；２７２：２６２８；Ｂａｒｒｙ Ｊ．Ｄｉｃｋｓｏｎ，Ｓｃｉｅｎｃｅ．２００２；２９８：１９５９；Ｆｅｌｉｃｉａ Ｙｕ Ｈｓｕａｎ Ｔｅｎｇ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ Ｒｅｓ．２００５；７９：２７３；Ｔａｒａ Ｋａｒｎｅｚｉｓ，ｅｔ ａｌ．，��ａｔｕｒｅ Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ ２００４；７，７３６；Ｇａｎｇ Ｘｕ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．２００４；９１；１０１８参照）。
【０１１４】
想定される他のＦＩＴ−Ｉｇは、下記のような標的対に結合できるものである：ＮｇＲ及びＲＧＭ Ａ；ＮｏｇｏＡ及びＲＧＭ Ａ；ＭＡＧ及びＲＧＭ Ａ；ＯＭＧｐ及びＲＧＭ Ａ；ＲＧＭ Ａ及びＲＧＭ Ｂ；ＣＳＰＧ類及びＲＧＭ Ａ；アグリカン、ミッドカイン、ニューロカン、バーシカン、ホスファカン、Ｔｅ３８及びＴＮＦ−ａ；樹状突起及び軸索発芽を促進する抗体と組み合わせたＡβグロブロマー特異的抗体。樹状突起の病理は、ＡＤの非常に初期の兆候であり、ＮＯＧＯ Ａは樹状突起成長を制限することが知られている。このようなタイプのａｂを、ＳＣＩ−候補（ミエリンタンパク質）抗体の何れかと組み合わせることができる。他のＦＩＴ−Ｉｇの標的には、ＮｇＲ−ｐ７５、ＮｇＲ−Ｔｒｏｙ、ＮｇＲ−Ｎｏｇｏ６６（Ｎｏｇｏ）、ＮｇＲ−Ｌｉｎｇｏ、Ｌｉｎｇｏ−Ｔｒｏｙ、Ｌｉｎｇｏ−ｐ７５、ＭＡＧまたはＯｍｇｐの任意の組合せが含まれ得る。加えて、標的はまた、神経突起の阻害に関与する可溶性または細胞表面の任意のメディエータ、例えばＮｏｇｏ、Ｏｍｐｇ、ＭＡＧ、ＲＧＭ Ａ、セマフォリン、エフリン、可溶性Ａ−ｂ、炎症誘発性サイトカイン（例えばＩＬ−１）、ケモカイン（例えば、ＭＩＰ １ａ）、神経再生を阻害する分子を含み得る。抗ＮＯＧＯ／抗ＲＧＭ Ａまたは類似のＦＩＴ−Ｉｇ分子の効力は、脊髄損傷の前臨床動物モデルにおいて検証することができる。加えて、これらＦＩＴ−Ｉｇ分子を構築して動物モデルで有効性を試験することができ、また最良の治療用ＦＩＴ−Ｉｇをヒト患者での試験のために選択することができる。また、単一の受容体、例えばＮｏｇｏ受容体上の二つの異なるリガンド結合部位をターゲッティングするＦＩＴ−Ｉｇ分子を構築することができ、これは三つのリガンドＮｏｇｏ、Ｏｍｐｇ、及びＭＡＧ、並びにＡ−ｂ及びＳ１００Ａに結合するＲＡＧＥに結合する。更に、神経突起成長阻害剤、例えばＮＯＧＯ及びＮＯＧＯ受容体はまた、多発性硬化症のような免疫疾患において神経再生を妨げる上で役割を果たしている。ＮＯＧＯ−ＮＯＧＯ受容体相互作用の阻害は、多発性硬化症の動物モデルにおいて回復を増強することが示されている。従って、一つの免疫メディエータ、例えばＩＬ−１２のようなサイトカイン、及び神経突起成長阻害剤分子、例えばＮＯＧＯまたはＲＧＭの機能をブロックできるＦＩＴ−Ｉｇ分子は、免疫分子または神経突起伸長阻害剤分子の何れかのみをブロックする場合よりも、速く且つ高い有効性を提供する可能性がある。
【０１１５】
モノクローナル抗体療法は、癌のための重要な治療法として浮上してきている（ｖｏｎ Ｍｅｈｒｅｎ Ｍ，ｅｔ ａｌ ２００３ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｔｈｅｒａｐｙ ｆｏｒ ｃａｎｃｅｒ．Ａｎｎｕ Ｒｅｖ Ｍｅｄ．；５４：３４３−６９）。抗体は、アポトーシスを誘導すること、リダイレクトされた細胞傷害性、リガンド−受容体相互作用を防止すること、または新生物性表現型に重要なタンパク質の発現を阻止することによって、抗腫瘍効果を発揮することができる。加えて、抗体は腫瘍微小環境の成分をターゲッティングして、腫瘍関連血管系の形成のような重要な構造を乱すことができる。抗体はまた、そのリガンドが上皮成長因子受容体のような増殖因子である受容体をターゲッティングすることができる。こうして、抗体は細胞成長を刺激する天然のリガンドが標的腫瘍細胞に結合するのを阻害する。或いは、抗体は、抗イディオタイプネットワーク、補体媒介性細胞傷害、または抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を誘導することができる。二つの別々の腫瘍メディエータを標的とする二重特異性抗体の使用は、おそらく、単一特異的療法に比べて追加の利点を提供するであろう。腫瘍学的疾患を治療するために、次の標的対に結合できるＦＩＴ−ＩｇのＩｇをもまた考慮される：即ち、ＩＧＦ１及びＩＧＦ２；ＩＧＦ１／２及びＥｒｂ２Ｂ；ＶＥＧＦＲ及びＥＧＦＲ；ＣＤ２０及びＣＤ３；ＣＤ１３８及びＣＤ２０；ＣＤ３８及びＣＤ２０；ＣＤ３８ ＆ ＣＤ１３８；ＣＤ４０及びＣＤ２０；ＣＤ１３８及びＣＤ４０；ＣＤ３８及びＣＤ４０である。標的の他の組み合わせには、ＥＧＦ／ｅｒｂ−２／ｅｒｂ−３ファミリーの１以上のメンバーが含まれる。ＦＩＴ−ＩｇのＩｇ類が結合する腫瘍疾患に関与する他の標的（１以上）には、下記からなる群から選択されるものが含まれるが、これらに限定されない：即ち、ＣＤ５２、ＣＤ２０、ＣＤ１９、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＢＭＰ６、ＩＬ１２Ａ、ＩＬ１Ａ、ＩＬ１Ｂ、ＩＬ２、ＩＬ２４、ＩＮＨＡ、ＴＮＦ、ＴＮＦＳＦ１０、ＢＭＰ６、ＥＧＦ、ＦＧＦ１、ＦＧＦ１０、ＦＧＦ１１、ＦＧＦ１２、ＦＧＦ１３、ＦＧＦ１４、ＦＧＦ１６、ＦＧＦ１７、ＦＧＦ１８、ＦＧＦ１９、ＦＧＦ２、ＦＧＦ２０、ＦＧＦ２１、ＦＧＦ２２、ＦＧＦ２３、ＦＧＦ３、ＦＧＦ４、ＦＧＦ５、ＦＧＦ６、ＦＧＦ７、ＦＧＦ８、ＦＧＦ９、ＧＲＰ、ＩＧＦ１、ＩＧＦ２、ＩＬ１２Ａ、ＩＬ１Ａ、ＩＬ１Ｂ、ＩＬ２、ＩＮＨＡ、ＴＧＦＡ、ＴＧＦＢ１、ＴＧＦＢ２、ＴＧＦＢ３、ＶＥＧＦ、ＣＤＫ２、ＥＧＦ、ＦＧＦ１０、ＦＧＦ１８、ＦＧＦ２、ＦＧＦ４、ＦＧＦ７、ＩＧＦ１、ＩＧＦ１Ｒ、ＩＬ２、ＶＥＧＦ、ＢＣＬ２、ＣＤ１６４、ＣＤＫＮ１Ａ、ＣＤＫＮ１Ｂ、ＣＤＫＮ１Ｃ、ＣＤＫＮ２Ａ、ＣＤＫＮ２Ｂ、ＣＤＫＮ２Ｃ、ＣＤＫＮ３、ＧＮＲＨ１、ＩＧＦＢＰ６、ＩＬ１Ａ、ＩＬ１Ｂ、ＯＤＺ１、ＰＡＷＲ、ＰＬＧ、ＴＧＦＢ１Ｉ１、ＡＲ、ＢＲＣＡ１、ＣＤＫ３、ＣＤＫ４、ＣＤＫ５、ＣＤＫ６、ＣＤＫ７、ＣＤＫ９、Ｅ２Ｆ１、ＥＧＦＲ、ＥＮＯ１、ＥＲＢＢ２、ＥＳＲ１、ＥＳＲ２、ＩＧＦＢＰ３、ＩＧＦＢＰ６、ＩＬ２、ＩＮＳＬ４、ＭＹＣ、ＮＯＸ５、ＮＲ６Ａ１、ＰＡＰ、ＰＣＮＡ、ＰＲＫＣＱ、ＰＲＫＤ１、ＰＲＬ、ＴＰ５３、ＦＧＦ２��、ＦＧＦ２３、ＦＧＦ９、ＩＧＦＢＰ３、ＩＬ２、ＩＮＨＡ、ＫＬＫ６、ＴＰ５３、ＣＨＧＢ、ＧＮＲＨ１、ＩＧＦ１、ＩＧＦ２、ＩＮＨＡ、ＩＮＳＬ３、ＩＮＳＬ４、ＰＲＬ、ＫＬＫ６、ＳＨＢＧ、ＮＲ１Ｄ１、ＮＲ１Ｈ３、ＮＲ１Ｉ３、ＮＲ２Ｆ６、ＮＲ４Ａ３、ＥＳＲ１、ＥＳＲ２、ＮＲ０Ｂ１、ＮＲ０Ｂ２、ＮＲ１Ｄ２、ＮＲ１Ｈ２、ＮＲ１Ｈ４、ＮＲ１Ｉ２、ＮＲ２Ｃ１、ＮＲ２Ｃ２、ＮＲ２Ｅ１、ＮＲ２Ｅ３、ＮＲ２Ｆ１、ＮＲ２Ｆ２、ＮＲ３Ｃ１、ＮＲ３Ｃ２、ＮＲ４Ａ１、ＮＲ４Ａ２、ＮＲ５Ａ１、ＮＲ５Ａ２、ＮＲ６Ａ１、ＰＧＲ、ＲＡＲＢ、ＦＧＦ１、ＦＧＦ２、ＦＧＦ６、ＫＬＫ３、ＫＲＴ１、ＡＰＯＣ１、ＢＲＣＡ１、ＣＨＧＡ、ＣＨＧＢ、ＣＬＵ、ＣＯＬ１Ａ１、ＣＯＬ６Ａ１、ＥＧＦ、ＥＲＢＢ２、ＥＲＫ８、ＦＧＦ１、ＦＧＦ１０、ＦＧＦ１１、ＦＧＦ１３、ＦＧＦ１４、ＦＧＦ１６、ＦＧＦ１７、ＦＧＦ１８、ＦＧＦ２、ＦＧＦ２０、ＦＧＦ２１、ＦＧＦ２２、ＦＧＦ２３、ＦＧＦ３、ＦＧＦ４、ＦＧＦ５、ＦＧＦ６、ＦＧＦ７、ＦＧＦ８、ＦＧＦ９、ＧＮＲＨ１、ＩＧＦ１、ＩＧＦ２、ＩＧＦＢＰ３、ＩＧＦＢＰ６、ＩＬ１２Ａ、ＩＬ１Ａ、ＩＬ１Ｂ、ＩＬ２、ＩＬ２４、ＩＮＨＡ、ＩＮＳＬ３、ＩＮＳＬ４、ＫＬＫ１０、ＫＬＫ１２、ＫＬＫ１３、ＫＬＫ１４、ＫＬＫ１５、ＫＬＫ３、ＫＬＫ４、ＫＬＫ５、ＫＬＫ６、ＫＬＫ９、ＭＭＰ２、ＭＭＰ９、ＭＳＭＢ、ＮＴＮ４、ＯＤＺ１、ＰＡＰ、ＰＬＡＵ、ＰＲＬ、ＰＳＡＰ、ＳＥＲＰＩＮＡ３、ＳＨＢＧ、ＴＧＦＡ、ＴＩＭＰ３、ＣＤ４４、ＣＤＨ１、ＣＤＨ１０、ＣＤＨ１９、ＣＤＨ２０、ＣＤＨ７、ＣＤＨ９、ＣＤＨ１、ＣＤＨ１０、ＣＤＨ１３、ＣＤＨ１８、ＣＤＨ１９、ＣＤＨ２０、ＣＤＨ７、ＣＤＨ８、ＣＤＨ９、ＲＯＢＯ２、ＣＤ４４、ＩＬＫ、ＩＴＧＡ１、ＡＰＣ、ＣＤ１６４、ＣＯＬ６Ａ１、ＭＴＳＳ１、ＰＡＰ、ＴＧＦＢ１Ｉ１、ＡＧＲ２、ＡＩＧ１、ＡＫＡＰ１、ＡＫＡＰ２、ＣＡＮＴ１、ＣＡＶ１、ＣＤＨ１２、ＣＬＤＮ３、ＣＬＮ３、ＣＹＢ５、ＣＹＣ１、ＤＡＢ２ＩＰ、ＤＥＳ、ＤＮＣＬ１、ＥＬＡＣ２、ＥＮＯ２、ＥＮＯ３、ＦＡＳＮ、ＦＬＪ１２５８４、ＦＬＪ２５５３０、ＧＡＧＥＢ１、ＧＡＧＥＣ１、ＧＧＴ１、ＧＳＴＰ１、ＨＩＰ１、ＨＵＭＣＹＴ２Ａ、ＩＬ２９、Ｋ６ＨＦ、ＫＡＩ１、ＫＲＴ２Ａ、ＭＩＢ１、ＰＡＲＴ１、ＰＡＴＥ、ＰＣＡ３、ＰＩＡＳ２、ＰＩＫ３ＣＧ、ＰＰＩＤ、ＰＲ１、ＰＳＣＡ、ＳＬＣ２Ａ２、ＳＬＣ３３Ａ１、ＳＬＣ４３Ａ１、ＳＴＥＡＰ、ＳＴＥＡＰ２、ＴＰＭ１、ＴＰＭ２、ＴＲＰＣ６、ＡＮＧＰＴ１、ＡＮＧＰＴ２、ＡＮＰＥＰ、ＥＣＧＦ１、ＥＲＥＧ、ＦＧＦ１、ＦＧＦ２、ＦＩＧＦ、ＦＬＴ１、ＪＡＧ１、ＫＤＲ、ＬＡＭＡ５、ＮＲＰ１、ＮＲＰ２、ＰＧＦ、ＰＬＸＤＣ１、ＳＴＡＢ１、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦＣ、ＡＮＧＰＴＬ３、ＢＡＩ１、ＣＯＬ４Ａ３、ＩＬ８、ＬＡＭＡ５、ＮＲＰ１、ＮＲＰ２、ＳＴＡＢ１、ＡＮＧＰＴＬ４、ＰＥＣＡＭ１、ＰＦ４、ＰＲＯＫ２、ＳＥＲＰＩＮＦ１、ＴＮＦＡＩＰ２、ＣＣＬ１１、ＣＣＬ２、ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ３、ＣＸＣＬ５、ＣＸＣＬ６、ＣＸＣＬ９、ＩＦＮＡ１、ＩＦＮＢ１、ＩＦＮＧ、ＩＬ１Ｂ、ＩＬ６、ＭＤＫ、ＥＤＧ１、ＥＦＮＡ１、ＥＦＮＡ３、ＥＦＮＢ２、ＥＧＦ、ＥＰＨＢ４、ＦＧ��Ｒ３、ＨＧＦ、ＩＧＦ１、ＩＴＧＢ３、ＰＤＧＦＡ、ＴＥＫ、ＴＧＦＡ、ＴＧＦＢ１、ＴＧＦＢ２、ＴＧＦＢＲ１、ＣＣＬ２、ＣＤＨ５、ＣＯＬ１８Ａ１、ＥＤＧ１、ＥＮＧ、ＩＴＧＡＶ、ＩＴＧＢ３、ＴＨＢＳ１、ＴＨＢＳ２、ＢＡＤ、ＢＡＧ１、ＢＣＬ２、ＣＣＮＡ１、ＣＣＮＡ２、ＣＣＮＤ１、ＣＣＮＥ１、ＣＣＮＥ２、ＣＤＨ１（Ｅ−カドヘリン）、ＣＤＫＮ１Ｂ（ｐ２７Ｋｉｐ１）、ＣＤＫＮ２Ａ（ｐ１６ＩＮＫ４ａ）、ＣＯＬ６Ａ１、ＣＴＮＮＢ１（ｂ−カテニン）、ＣＴＳＢ（カテプシンＢ）、ＥＲＢＢ２（Ｈｅｒ−２）、ＥＳＲ１、ＥＳＲ２、Ｆ３（ＴＦ）、ＦＯＳＬ１（ＦＲＡ−１）、ＧＡＴＡ３、ＧＳＮ（ゲルソリン）、ＩＧＦＢＰ２、ＩＬ２ＲＡ、ＩＬ６、ＩＬ６Ｒ、ＩＬ６ＳＴ（糖タンパク質１３０）、ＩＴＧＡ６（ａ６インテグリン）、ＪＵＮ、ＫＬＫ５、ＫＲＴ１９、ＭＡＰ２Ｋ７（ｃ−Ｊｕｎ）、ＭＫＩ６７（Ｋｉ−６７）、ＮＧＦＢ（ＮＧＦ）、ＮＧＦＲ、ＮＭＥ１（ＮＭ２３Ａ）、ＰＧＲ、ＰＬＡＵ（ｕＰＡ）、ＰＴＥＮ、ＣＴＬＡ−４、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＴＩＭ−３、Ｌａｇ−３、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＧＤＦ８、ＣＧＲＰ、Ｌｉｎｇｏ−１、ＩＣＯＳ、ＧＡＲＰ、ＢＴＬＡ、ＣＤ１６０、ＲＯＲ１、ＳＥＲＰＩＮＢ５（マスピン）、ＳＥＲＰＩＮＥ１（ＰＡＩ−１）、ＴＧＦＡ、ＴＨＢＳ１（トロンボスポンジン−１）、ＴＩＥ（Ｔｉｅ−１）、ＴＮＦＲＳＦ６（Ｆａｓ）、ＴＮＦＳＦ６（ＦａｓＬ）、ＴＯＰ２Ａ（トポイソメラーゼＩｉａ）、ＴＰ５３、ＡＺＧＰ１（亜鉛−ａ−糖タンパク質）、ＢＰＡＧ１（プレクチン）、ＣＤＫＮ１Ａ（ｐ２１Ｗａｐ１／Ｃｉｐ１）、ＣＬＤＮ７（クローディン７）、ＣＬＵ（クラステリン）、ＥＲＢＢ２（Ｈｅｒ−２）、ＦＧＦ１、ＦＬＲＴ１（フィブロネクチン）、ＧＡＢＲＰ（ＧＡＢＡａ）、ＧＮＡＳ１、ＩＤ２、ＩＴＧＡ６（ａ６インテグリン）、ＩＴＧＢ４（ｂ４インテグリン）、ＫＬＦ５（ＧＣボックスＢＰ）、ＫＲＴ１９（ケラチン１９）、ＫＲＴＨＢ６（毛髪特異的ＩＩ型ケラチン）、ＭＡＣＭＡＲＣＫＳ、ＭＴ３（メタロチオネクチン−ＩＩＩ）、ＭＵＣ１（ムチン）、ＰＴＧＳ２（ＣＯＸ−２）、ＲＡＣ２（ｐ２１Ｒａｃ２）、Ｓ１００Ａ２、ＳＣＧＢ１Ｄ２（リポフィリンＢ）、ＳＣＧＢ２Ａ１（マンマグロビン２）、ＳＣＧＢ２Ａ２（マンマグロビン１）、ＳＰＲＲ１Ｂ（Ｓｐｒ１）、ＴＨＢＳ１、ＴＨＢＳ２、ＴＨＢＳ４、及びＴＮＦＡＩＰ２（Ｂ９４）である。
【０１１６】
一実施形態において、本明細書で提供される組成物及び方法で治療または診断できる疾患には、乳房、結腸、直腸、肺、中咽頭、下咽頭、食道、胃、膵臓、肝臓、胆嚢及び胆管、小腸、尿管（腎臓、膀胱と尿路上皮を含む）、女性生殖管（子宮頸部、子宮、卵巣、ならびに絨毛癌及び妊娠性絨毛性疾患を含む）、男性生殖管（前立腺、精嚢、精巣及び胚細胞腫瘍を含む）、内分泌腺（甲状腺、副腎、及び下垂体を含む）、及び皮膚の癌、並びに血管腫、黒色腫、肉腫（骨及び軟組織から生じるもの、並びにカポジ肉腫を含む）、脳、神経、眼、及び髄膜の腫瘍（星細胞腫、神経膠腫、神経膠芽腫、網膜芽細胞腫、神経腫、神経芽細胞腫、神経鞘腫、及び髄膜腫を含む）、白血病及びリンパ腫（ホジキン及び非ホジキンリンパ腫）などの造血器悪性腫瘍から生じる固形腫瘍を含む原発性及び転移性の癌が含まれるが、これらに限定されない。
【０１１７】
一実施形態において、本明細書で提供される抗体またはその抗原結合部分は、単独で、或いは放射線療法及び/または他の化学療法剤と組み合わせて使用されたときに、癌を治療するために、または本明細書に記載の腫瘍からの転移の予防において使用される。
【０１１８】
本発明の別の実施形態によれば、ヒトの免疫エフェクター細胞は、ヒトのリンパ系細胞系統のメンバーである。この実施形態では、該エフェクター細胞は、有利にはヒトＴ細胞、ヒトＢ細胞またはヒトナチュラルキラー（ＮＫ）細胞であり得る。有利には、このような細胞は標的細胞に対して細胞障害性またはアポトーシス効果を有するであろう。特に有利には、前記ヒトのリンパ細胞は細胞傷害性Ｔ細胞であり、これは活性化されたときに標的細胞に対して細胞傷害性効果を発揮する。従って、この実施形態によれば、前記ヒトエフェクター細胞の動員される活性は、この細胞の細胞傷害活性である。
【０１１９】
好ましい実施形態によれば、前記細胞傷害性Ｔ細胞の活性化は、前記細胞傷害性Ｔ細胞表面のエフェクター抗原としてのＣＤ３抗原の、本発明のこの実施形態の二重特異性抗体による結合を介して生じ得る。ヒトＣＤ３抗原は、ヘルパーＴ細胞及び細胞傷害性Ｔ細胞の両方に存在する。ヒトＣＤ３は、多分子Ｔ細胞複合体の一部としてＴ細胞上に発現される抗原を意味し、これは三つの異なる鎖、即ち、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ３デルタ及びＣＤ３ガンマ含んでいる。
【０１２０】
Ｔ細胞の細胞傷害能の活性化は、複数のタンパク質の相互作用を必要とする複雑な現象である。Ｔ細胞レセプター（「ＴＣＲ」）タンパク質は、二つの異なる糖タンパク質サブユニットからなる、膜結合されたジスルフィド結合ヘテロダイマーである。ＴＣＲは外来のペプチド抗原を認識して結合し、該抗原自身は高度に多様なクラスの主要組織適合遺伝子複合体（「ＭＨＣ」）タンパク質のメンバーにより結合され、提示されており、抗原提示細胞（「ＡＰＣ」）の表面の前記ＭＨＣに結合されている。
【０１２１】
可変ＴＣＲは上記で概説したようにして外来抗原に結合するが、この結合が生じたことのＴ細胞へのシグナリングは、ＴＣＲに関連した他の不変のシグナル伝達タンパク質の存在に依存する。会合した形態でのこれらのシグナル伝達タンパク質は、集合的にＣＤ３複合体と称されており、ここでは一纏めにしてＣＤ３抗原と呼ぶ。
【０１２２】
従って、Ｔ細胞の細胞傷害性の活性化は、通常は先ず、ＴＣＲのＭＨＣタンパク質との結合に依存し、それ自身は外来抗原に結合し、別の細胞上に位置している。この初期のＴＣＲ−ＭＨＣ結合が行われたときにのみ、Ｔ細胞クローン増殖の原因であるＣＤ３依存性のシグナル伝達カスケードが、及び最終的にはＴ細胞の細胞傷害性が結果として生じ得る。
【０１２３】
しかしながら、本発明の二重特異性抗体の第一または第二の部分によるヒトＣＤ３抗原の結合は、独立したＴＣＲ−ＭＨＣ結合の非存在下に、Ｔ細胞を活性化させて他の細胞に対して細胞傷害効果を発揮する。このことは、Ｔ細胞がクローン的に独立した方法で、即ち、Ｔ細胞に担持された特異的なＴＣＲクローンとは独立した方法で、細胞障害的に活性化され得ることを意味する。これは、一定のクローン的同一性の特異的Ｔ細胞のみでなく、全体のＴ細胞区画の活性化を可能にする。
【０１２４】
従って、上記の説明の観点から、本発明の特に好ましい実施形態では、前記エフェクター抗原がヒトＣＤ３抗原である二重特異性抗体を提供する。本発明のこの実施形態による二重特異性抗体は、合計で二つまたは三つの抗体可変ドメインを有し得る。
【０１２５】
本発明の更なる実施形態によれば、本発明の二重特異性抗体に結合される他のリンパ細胞関連エフェクター抗原は、ヒトＣＤ１６抗原、ヒトＮＫＧ２Ｄ抗原、ヒトＮＫｐ４６抗原、ヒトＣＤ２抗原、ヒトＣＤ２８抗原またはヒトＣＤ２５抗原であり得る。
【０１２６】
本発明の別の実施形態によれば、前記ヒトエフェクター細胞はヒト骨髄細胞系列のメンバーである。有利には、前記エフェクター細胞はヒト単球、ヒト好中球顆粒球またはヒト樹状細胞であり得る。有利には、このような細胞は、標的細胞に対して細胞障害性効果またはアポトーシス効果の何れかを有している。本発明の二重特異性抗体が結合できるこの実施形態内の有利な抗原は、ヒトＣＤ６４抗原またはヒトＣＤ８９抗原であることができる。
【０１２７】
本発明の別の実施形態によれば、標的抗原は疾患状態にある標的細胞またはエフェクター細胞上に独特に発現される抗原であるが、これは健康な状態では発現されないか、低レベルで発現され、またはアクセス可能でない。本発明の二重特異性抗体によって特異的に結合され得るこのような標的抗原の例は、有利には、ＥｐＣＡＭ、ＣＣＲ５、ＣＤ１９、ＨＥＲ−２ｎｅｕ、ＨＥＲ−３、ＨＥＲ−４、ＥＧＦＲ、ＰＳＭＡ、ＣＥＡ、ＭＵＣ−１（ムチン）、ＭＵＣ２、ＭＵＣ３、ＭＵＣ４、ＭＵＣ５ＡＣ、ＭＵＣ５Ｂ、ＭＵＣ７、βｈＣＧ、Ｌｅｗｉｓ−Ｙ、ＣＤ２０、ＣＤ３３、ＣＤ３０、ガングリオシドＧＤ３、９−Ｏ−アセチル−ＧＤ３、ＧＭ２、Ｇｌｏｂｏ Ｈ、フコシルＧＭ１、ポリＳＡ、ＧＤ２、炭酸脱水酵素ＩＸ（ＭＮ／ＣＡ ＩＸ）、ＣＤ４４ｖ６、ソニック・ヘッジホッグ（Ｓｈｈ）、Ｗｕｅ−１、血漿細胞抗原、（膜結合型）ＩｇＥ、黒色腫コンドロイチン硫酸プロテオグリカン（ＭＣＳＰ）、ＣＣＲ８、ＴＮＦ−アルファ前駆体、ＳＴＥＡＰ、メソテリン、Ａ３３抗原、前立腺幹細胞抗原（ＰＳＣＡ）、Ｌｙ−６；デスモグレイン４、Ｅ−カドヘリンネオエピトープ、胎児アセチルコリン受容体、ＣＤ２５、ＣＡ１９−９マーカー、ＣＡ−１２５マーカー及びミューラー阻害物質（ＭＩＳ）受容体ＩＩ型、ｓＴｎ（シアリル化Ｔｎ抗原；ＴＡＧ−７２）、ＦＡＰ（線維芽細胞活性化抗原）、エンドシアリン、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＬＧ、ＳＡＳ及びＣＤ６３から選択される。
【０１２８】
特定の実施形態によれば、二重特異性抗体が特異的に結合する標的抗原は癌関連抗原、即ち、悪性状態に関連した抗原であり得る。このような抗原は悪性細胞上において発現され、またはアクセス可能であるのに対して、非悪性細胞上においては、該抗原は存在せず、有意に存在せず、またはアクセス可能でない。このように、本実施形態の二重特異性抗体は、標的抗原を担持し、または該標的抗原をアクセス可能にする悪性標的細胞に対して、ヒト免疫エフェクター細胞の活性を動員する二重特異性抗体である。
【０１２９】
遺伝子治療：特定の実施形態において、本明細書で提供される結合性タンパク質をコードする核酸配列、または本明細書に提供される別の予防剤もしくは治療剤は、遺伝子療法によって、疾患またはその１以上の症状を治療、予防、管理、または改善するために投与される。遺伝子治療とは、発現された、または発現可能な核酸を対象へ投与することにより行われる治療を言う。この実施形態において、該核酸は、予防効果もしくは治療効果を媒介する本明細書で提供されるそれらのコードされた抗体、または予防剤もしくは治療剤を産生する。
【０１３０】
当技術分野で利用可能な遺伝子治療のための方法は何れも、本明細書で提供される方法において使用することができる。遺伝子治療の方法の一般的な概観については以下を参照されたい：Ｇｏｌｄｓｐｉｅｌ ｅｔ ａｌ．（１９９３） Ｃｌｉｎ． Ｐｈａｒｍａｃｙ １２：４８８−５０５；Ｗｕ ａｎｄ Ｗｕ（１９９１） Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｙ ３：８７−９５；Ｔｏｌｓｔｏｓｈｅｖ（１９９３） Ａｎｎ Ｒｅｖ． Ｐｈａｒｍａｃｏｌ． Ｔｏｘｉｃｏｌ．３２：５７３−５９６；Ｍｕｌｌｉｇａｎ（１９９３） Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６０：９２６−９３２；Ｍｏｒｇａｎ ａｎｄ Ａｎｄｅｒｓｏｎ（１９９３） Ａｎｎ Ｒｅｖ． Ｂｉｏｃｈｅｍ．６２：１９１−２１７；ａｎｄ Ｍａｙ（１９９３） ＴＩＢＴＥＣＨ １１（５）：１５５−２１５。一般的に使用できる組換えＤＮＡ技術の分野で知られている方法は、下記に記載されている：Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．），Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆Ｓｏｎｓ，ＮＹ（１９９３）；及びＫｒｉｅｇｌｅｒ，Ｇｅｎｅ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ  ａｎｄ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｓｔｏｃｋｔｏｎ Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ（１９９０）。遺伝子治療の種々の方法の詳細な説明は、米国特許公開番号ＵＳ２００５００４２６６４に開示されている。
【０１３１】
診断：本明細書での開示はまた診断的応用を提供し、これには診断アッセイ法、１以上の結合性タンパク質を含む診断キット、並びに自動化及び／または半自動化システムで使用するための前記方法及びキットの適合が含まれるが、これらに限定されるものではない。この提供される方法、キット、及び適合は、個体における疾患もしくは傷害の検出、モニタリング、及び／または治療に用いることができる。これについては以下で更に説明する。
【０１３２】
Ａ．アッセイ方法：本開示はまた、本明細書に記載されるように少なくとも一つの結合性タンパク質を用いて、試験試料中のアナライトもしくはその断片の存在、その量もしくは濃度を決定する方法を提供する。当該技術分野で知られている如何なる適切なアッセイも、本方法において使用できる。例としては、免疫アッセイ及び／または質量分析法を用いる方法が含まれるが、これらに限定されない。本開示により提供される免疫アッセイには、中でもサンドイッチ免疫アッセイ、ラジオ免疫アッセイ（ＲＩＡ）、酵素免疫測定法（ＥＩＡ）、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、競合阻害免疫アッセイ、蛍光偏光免疫アッセイ（ＦＰＩＡ）、酵素多重免疫アッセイ技術（ＥＭＩＴ）、生物発光共鳴エネルギー移動（ＢＲＥＴ）、及び均質な化学発光アッセイが含まれる。化学発光微粒子免疫アッセイは、特に、ＡＲＣＨＩＴＥＣＴ（登録商標）自動分析装置（アボットラボラトリーズ社、アボットパーク、Ｉ１１）を使用するものは、免疫測定法の一例である。質量分析法を用いる方法が本開示により提供され、ＭＡＬＤＩ（マトリックス支援レーザー脱離／イオン化）またはＳＥＬＤＩ（表面増強レーザー脱離／イオン化）が含まれるが、これらに限定されない。
【０１３３】
免疫アッセイ及び質量分析を用いて生物学的試験サンプルを収集、操作、処理、及び分析する方法は当業者によく知られており、本開示の実施において提供される（ＵＳ２００９−０３１１２５３ Ａ１） 。
【０１３４】
Ｂ．キット：試験試料中におけるアナライトもしくはその断片の存在、量または濃度について試験試料をアッセイするためのキットもまた提供される。該キットは、アナライトもしくはその断片について試験試料をアッセイするための少なくとも一つの成分と、該アナライトまたはその断片について前記試験試料をアッセイするための説明書を備えている。前記アナライトもしくはその断片について前記試験試料をアッセイするための少なくとも一つの成分は、任意に固相上に固定化された本明細書に開示される結合性タンパク質、及び／または抗アナライト結合性タンパク質（またはその断片、変異体、もしくはその変異体の断片）を含有する組成物を含むことができる。必要に応じ、該キットは、単離または精製された検体を含むことができる標準物質または対照を含むことができる。該キットは、免疫アッセイ及び／または質量分析により分析物について試験試料をアッセイするための、少なくとも一つの成分を含むことができる。アナライト、結合性タンパク質、及び／もしくは抗アナライト結合性タンパク質、またはその断片を含むキット成分は、必要に応じて当該技術で既知の何れかの検出可能な標識を用いて標識することができる。本開示の実施において提供される作製のための材料及び方法は、当該技術分野の当業者に既知であろう（ＵＳ ２００９−０３１１２５３Ａ１）。
【０１３５】
Ｃ．キット及び方法の適合：ここに記載した免疫アッセイのようなアッセイによる試験試料中のアナライトの存在、量もしくは濃度を決定するためのキット（またはその成分）並びに方法は、例えば米国特許番号５，０８９，４２４及び５，００６，３０９に記載され、また例えばアボットラボラトリーズ（Ａｂｂｏｔｔ  Ｐａｒｋ，Ｉｌｌ）によりＡＲＣＨＩＴＥＣＴ（登録商標）として市販されているような、種々の自動化システム及び半自動化システム（前記固相が微小粒子を含むものを含む）において使用するために適合させることができる。アボットラボラトリーズから入手可能な他のプラットホームには、ＡｘＳＹＭ（登録商標），ＩＭｘ（登録商標、例えば米国特許番号５，２９４，４０４参照）、ＰＲＩＳＭ（登録商標）、ＥＩＡ（ビーズ）、及びＱｕａｎｔｕｍ（商標）ＩＩ、並びに他のプラットホームが含まれるが、これらに限定されない。加えて、該アッセイ、キット及びキット成分は他のフォーマット、例えば電気化学的もしくは他の手持ち型の、または医療現場でのアッセイシステムでも用いることができる。本開示は、例えば、サンドイッチ型免疫アッセイを行うアボットポイントオブケアの商業的な電気化学的免疫アッセイシステム（ｉ−ＳＴＡＴ（登録商標）、アボットラボラトリーズ）に適用可能である。免疫センサー及びその製造方法、並びに単回使用の試験装置におけるにその操作方法が、例えば米国特許番号５，０６３，０８１、７，４１９，８２１、及び７，６８２，８３３；及び米国特許公開番号２００４００１８５７７、２００６０１６０１６４及びＵＳ２００９０３１１２５３に記載されている。本明細書に記載される方法の他の適切な変更及び適合は明らかであり、本明細書に開示された実施形態の範囲から逸脱することなく適切な均等物を使用してなされ得ることは、当業者には容易に明らかであろう。ここで一定の実施形態を詳細に説明してきたが、これらの実施形態は、以下の例示のみを目的とした限定を意図しない実施例を参照することによって更に明確に理解されるであろう。
【０１３６】
上記では、理解の明確化の目的のための説明及び例により本発明を幾らか詳細に記載してきたが、本発明の教示を考慮すれば、添付の特許請求の範囲の精神または範囲を逸脱することなく、それに一定の変更及び修飾を加え得ることが、当業者には容易に明らかであろう。以下の実施例は限定のためではなく、例示のためだけに提供されるものである。当業者は、実質的に同様の結果を生じるような、変更もしくは修飾され得る種々の重要でないパラメータを容易に認識するであろう。
【実施例】
【０１３７】
実施例１．抗ＩＬ１７／ＩＬ−２０のタンデム型Ｆａｂ免疫グロブリン（ＦＩＴ−Ｉｇ）の構築、発現、精製及び分析
ＦＩＴ−Ｉｇの技術を実証するために、我々は一群の抗ＩＬ−１７／ＩＬ−２０・ＦＩＴ−Ｉｇ分子を作製した：即ち、ＦＩＴ１−Ｉｇ、ＦＩＴ２−Ｉｇ、及びＦＩＴ３−Ｉｇであり、これらの全ては図１に示すように三つの異なるポリペプチドを含んでおり、ここでは抗原ＡがＩＬ−１７であり、抗原ＢがＩＬ−２０である。ＩＬ−１７及びＩＬ−２０に結合できるＦＩＴ−Ｉｇを作製するために使用されたＤＮＡ構築物が、図１Ｂに示されている。簡単に説明すると、親ｍＡｂは二つの高親和性抗体、即ち、抗ＩＬ−１７（クローンＬＹ）（米国特許７，８３８，６３８）及び抗ｈＩＬ−２０（クローン１５Ｄ２）（米国特許出願公開番号ＵＳ２０１４／０１９４５９９）を含んでいた。ＦＩＴ−Ｉｇ構築物＃１を生成するために、ＬＹのＶＬ−ＣＬが、直接（ＦＩＴ１−Ｉｇ）、または３アミノ酸のリンカーを介して（ＦＩＴ２−ＩＧ）もしくは７アミノ酸のリンカーを介して（ＦＩＴ３−Ｉｇ）、１５Ｄ２重鎖のＮ末端に融合された（表１に示す通り）。構築物＃２はＬＹのＶＨ−ＣＨ１であり、第三の構築物は１５Ｄ２のＶＬ−ＣＬである。各ＦＩＴ−Ｉｇの三つの構築物を２９３細胞に同時トランスフェクトして、ＦＩＴ−Ｉｇタンパク質の発現及び分泌を生じさせた。
【０１３８】
我々はまた、一群の抗ＩＬ−１７／ＩＬ−２０・ＦＩＴ−Ｉｇ分子を作製した：即ち、ＦＩＴ４−Ｉｇ、ＦＩＴ５−Ｉｇ、及びＦＩＴ６−Ｉｇであり、その各々は、図２に示すように二つの異なるポリペプチドを含んでいる。ＩＬ−１７及びＩＬ−２０に結合できるＦＩＴ−Ｉｇを作製するために使用されたＤＮＡ構築物は図２Ｂに示されており、ここでの抗原ＡはＩＬ−１７、抗原ＢはＩＬ−２０である。簡単に説明すると、親ｍＡｂは、二つの高親和性抗体、抗ＩＬ−１７（クローンＬＹ）及び抗ｈＩＬ−２０（クローン１５Ｄ２）を含んでいた。ＦＩＴ−Ｉｇ構築物＃１を作製するために、ＬＹのＶＬ−ＣＬは、直接に（ＦＩＴ４−ＩＧ）、または３アミノ酸のリンカーを介して（ＦＩＴ５−ＩＧ）もしくは７アミノ酸のリンカーを介して（ＦＩＴ６−Ｉｇ）、１５Ｄ２重鎖のＮ末端に融合された（表１に示す通り）。ＦＩＴ−Ｉｇ構築物＃４を作製するために、ＬＹのＶＨ−ＣＨ１が、直接に（ＦＩＴ４−ＩＧ）、または３アミノ酸のリンカーを介して（ＦＩＴ５−ＩＧ）もしくは７アミノ酸のリンカーを介して（ＦＩＴ６−Ｉｇ）、１５Ｄ２軽鎖のＮ末端に融合された。各ＦＩＴ−Ｉｇのための二つのＤＮＡ構築物（構築物＃１及び＃４）を、２９３細胞に同時トランスフェクトして、ＦＩＴ−Ｉｇタンパク質の発現及び分泌を生じさせた。ＰＣＲクローニングの詳細な手順を以下に記載する。
【０１３９】
実施例１．１：抗ＩＬ−１７／ＩＬ−２０・ＦＩＴ−Ｉｇ分子の分子クローニング
構築物＃1のクローニングのために、ＬＹ軽鎖を、軽鎖シグナル配列にアニールする順方向プライマー及び軽鎖のＣ末端にアニールする逆方向プライマーを用いたＰＣＲにより増幅させた。１５Ｄ２の重鎖を、１５Ｄ２ＶＨのＮ末端にアニールする順方向プライマー及びＣＨのＣ末端にアニールする逆方向プライマーを用いたＰＣＲにより増幅させた。これら二つのＰＣＲ断片をゲル精製し、シグナルペプチド及びＣＨプライマー対を用いたオーバーラップＰＣＲにより合体させた。この合体されたＰＣＲ生成物を、既にヒトＦｃ配列を含んでいる２９３発現ベクターの中にクローニングした。
【０１４０】
（表１）抗ＩＬ−１７／ＩＬ−２０・ＦＩＴ−Ｉｇ分子及びＤＮＡ構築物
2020075932.tif 000005
【０１４１】
構築物＃２のクローニングのために、ＬＹ・ＶＨ−ＣＨ１を、重鎖シグナルペプチドにアニールする順方向プライマー及びＣＨ１のＣ末端にアニールする逆方向プライマーを用いたＰＣＲにより増幅させた。このＰＣＲ産物をゲル生成し、２９３発現ベクター中にクローニングした。
【０１４２】
構築物＃３については、１５Ｄ２の軽鎖を軽鎖シグナルペプチドのＮ末端にアニールする順方向プライマー及びＣＬの末端にアニールする逆方向プライマーを用いたＰＣＲにより増幅させた。このＰＣＲ産物をゲル精製し、２９３発現ベクター中にクローニングした。
【０１４３】
構造物＃４のクローニングについては、ＬＹ・ＶＨ−ＣＨ１を、重鎖シグナルペプチドのＮ末端にアニールする順方向プライマー及びＣＨ１の末端にアニールする逆方向プライマーを用いたＰＣＲにより増幅させた。１５Ｄ２・ＶＬは、１５Ｄ２・ＶＬの末端にアニールするプライマーを用いて増幅させた。両方のＰＣＲ産物をゲル精製し、オーバーラップＰＣＲによって合体させた。合体されたＰＣＲ産物をゲル精製し、２９３発現ベクター中にクローニングした。表２は、上記分子クローニングのために使用されたＰＣＲプライマーの配列を示している。
【０１４４】
（表２）抗ＩＬ−１７／抗ＣＤ２０・ＦＩＴ−Ｉｇの分子構築のために使用されるＰＣＲプライマー
2020075932.tif 000006
【０１４５】
ｈＩＬ−１７／ｈＩＬ−２０・ＦＩＴ１−Ｉｇ、ＦＩＴ２−Ｉｇ、ＦＩＴ３−Ｉｇ、ＦＩＴ４−Ｉｇ、ＦＩＴ５−Ｉｇ、及びＦＩＴ６−Ｉｇの最終的な配列が、表３に記載されている。
【０１４６】
（表３）抗ＩＬ−１７／ＩＬ−２０・ＦＩＴ−Ｉｇ分子のアミノ酸配列
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【０１４７】
実施例１．２：抗ＩＬ−１７／ＩＬ−２０・ＦＩＴ−Ｉｇタンパク質の発現、精製及び分析
各ＦＩＴ−Ｉｇの全てのＤＮＡ構築物は、ベクターベースのｐＢＯＳの中にサブクローニングされ、正確性を保証するために配列決定された。各ＦＩＴ−Ｉｇの構築物＃１、＃２、及び＃３（１、２、及び３）、または各ＦＩＴ−Ｉｇの構築物＃１及び＃４（４、５、及び６）を、ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）を用いて２９３Ｅ細胞において一過性に共発現させた。簡単に説明すると、ＦｒｅｅＳｔｙｌｅ（商標）２９３  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｍｅｄｉｕｍ中においてＤＮＡとＰＥＩとを、ＤＮＡ：ＰＥＩの比が１：２の最終濃度になるように混合し、室温で１５分間（２０分以下）インキュベートし、次いで６０μｇ ＤＮＡ/１２０ｍＬ培養で２９３Ｅ細胞に加えた（１．０〜１．２×１０６／ｍＬ，細胞生存率＞９５％）。振盪器で６〜２４時間培養した後、３７℃、８％ＣＯ２において１２５ｒｐｍ／分で振盪しながら、トランスフェクトされた細胞に最終濃度５％でペプトンを加えた。第６日ないし第７日に、遠心分離及び濾過により上清を回収し、プロテインＡクロマトグラフィー（Ｐｉｅｒｃｅ社、ロックフォード、ＩＬ）を用いて、製造業者の指示に従ってＦＩＴ−Ｉｇタンパク質を精製した。このタンパク質をＳＤＳ−ＰＡＧＥにより分析し、それらの濃度をＡ２８０及びＢＣＡ（Ｐｉｅｒｃｅ社、ロックフォード、ＩＬ）により決定した。
【０１４８】
ＦＩＴ１−Ｉｇ、ＦＩＴ２−Ｉｇ、及びＦＩＴ３−Ｉｇの発現のために、この三つの構築物の異なるＤＮＡモル比、即ち、構築物＃１：＃２：＃３＝１：１：１、構築物＃１：＃２：＃３＝１：１．５：１．５、及び構築物＃１：＃２：＃３＝１：３：３を用いた（表４）。ＦＩＴ−Ｉｇタンパク質を、プロテインＡクロマトグラフィーにより精製した。精製収率（７〜１６ｍｇ／Ｌ）は、各タンパク質についての発現培地のｈｌｇＧ定量と一致した。精製されたＦＩＴ−Ｉｇの組成及び純度を、還元条件下及び非還元条件下の両方においてＳＤＳ−ＰＡＧＥにより分析した。非還元条件下において、ＦＩＴ−Ｉｇは約２５０キロダルトンの単一バンドとして移動した。還元条件下では、ＦＩＴ−Ｉｇタンパク質の各々が二つのバンドを生じ、より高いＭＷの一つのバンドは約７５キロダルトンの構築物＃１であり、より低いＭＷ一つのバンドは約２５キロダルトンで重なった構築物＃２及び＃３の両方に対応した。このＳＤＳ−ＰＡＧＥは、各ＦＩＴ−Ｉｇが単一種として発現され、三つのポリペプチド鎖が効率的に対合してＩｇＧ様分子を形成することを示した。鎖のサイズ、並びにＦＩＴ−Ｉｇ分子の完全長タンパク質は、アミノ酸配列に基づいて計算されたそれらの分子量と一致している。
【０１４９】
（表４）ｈＩＬ−１７／ＩＬ−２０・ＦＩＴ−Ｉｇタンパク質の発現及びＳＥＣ分析
2020075932.tif 000016
【０１５０】
溶液中のＦＩＴ−Ｉｇの物理的特性を更に研究するために、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）を用いて各タンパク質を分析した。ＦＩＴ−ＩｇのＳＥＣ分析のために、ＰＢＳ中の精製されたＦＩＴ−Ｉｇを、ＴＳＫゲルＳｕｐｅｒＳＷ３０００の３００×４．６ｍｍカラム（ＴＯＳＯＨ）に適用した。ＳＥＣのために、ＨＰＬＣ機器モデルＵ３０００（ＤＩＯＮＥＸ）を使用した。２８０ｎｍ及び２１４ｎｍでのＵＶ検出を用いて、全てのタンパク質を決定した。溶出は、０．２５ｍＬ／分の流速で無勾配であった。三つの全てのＦＩＴ−Ｉｇタンパク質は単一の主要ピークを示し、単量体タンパク質としての物理的な均一性を実証した（表４）。構築物＃１：＃２：＃３＝１：３：３の比率は、全ての三つのＦＩＴ−Ｉｇタンパク質について、ＳＥＣによってより良好な単量体プロフィールを示した（表４）。
【０１５１】
表４はまた、全てのＦＩＴ−Ｉｇタンパク質の発現レベルは通常のｍＡｂの発現レベルに匹敵しており、ＦＩＴ−Ｉｇは哺乳動物細胞において効率的に発現させ得ることを示している。ＦＩＴ４−Ｉｇ、ＦＩＴ５−Ｉｇ、及びＦＩＴ６−Ｉｇの発現について、構築物のＤＮＡ比率は＃１：＃４＝１：１、発現レベルは１〜１０ｍｇ／ｍＬの範囲であり、またＳＥＣにより決定されたピークモノマー画分％は５８〜７６％であった。この特定のｍＡｂの組み合わせ（ＬＹ及び１５Ｄ２）に基づいて、３−ポリペプチドＦＩＴ−Ｉｇ構築物（ＦＩＴ１−Ｉｇ、ＦＩＴ２−Ｉｇ、及びＦＩＴ３−Ｉｇ）は、２−ポリペプチドＦＩＴ−Ｉｇ構築物（ＦＩＴ４−Ｉｇ、ＦＩＴ５−Ｉｇ、及びＦＩＴ６−Ｉｇ）よりも良好な発現を示した。従って、ＦＩＴ１−Ｉｇ、ＦＩＴ２−Ｉｇ、及びＦＩＴ３−Ｉｇは、機能的性質について更に分析された。
【０１５２】
実施例１．３  抗ＩＬ−１７／ＩＬ−２０・ＦＩＴ−Ｉｇの抗原結合親和性の決定
ｒｈＩＬ−１７及びｒｈＩＬ−２０に結合するＦＩＴ−Ｉｇの動力学が、２５℃でＨＢＳ−ＥＰ（１０ｍＭのＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４、１５０ｍＭのＮａＣｌ、３ｍＭのＥＤＴＡ、０．００５％界面活性剤Ｐ２０）を使用して、ビアコアＸ１００装置（ビアコアＡＢ、ウプサラ、スウェーデン）を備えた表面プラズモン共鳴（表５）によって決定された。簡単に説明すると、ヤギ抗ヒトＩｇＧ・Ｆｃγ断片特異的ポリクローナル抗体（ピアスバイオテクノロジー社、ロックフォード、ＩＬ）を、製造業者の指示に従って標準的なアミンカップリングキットを用い、ＣＭ５研究グレードのバイオセンサーチップの全体亘って直接固定した。精製されたＦＩＴ−Ｉｇの試料を、ヤギ抗ヒトＩｇＧ・Ｆｃ特異的反応表面の全体に亘る捕捉のためにＨＥＰＥＳ緩衝生理食塩水で希釈し、５μＬ／分の流速で反応マトリックス上に注入した。会合及び解離の速度乗数、即ち、ｋｏｎ（Ｍ−１ｓ−１）及びｋｏｆｆ（ｓ−１）を、３０μＬ／分の連続流速の下で決定した。速度定数は、１．２５〜１０００ｎＭの範囲の１０の異なる抗原濃度において、速度論的結合測定を行うことにより誘導された。ＦＩＴ−Ｉｇと標的タンパク質の間の反応の平衡解離定数（Ｍ）を、式（ＫＤ＝ｋｏｆｆ／ｋｏｎ）により動力学的速度定数から計算した。抗原サンプルのアリコートを、ブランク基準と反応ＣＭ表面上に同時に注入して、任意の非特異的結合バックグラウンドを記録し、且つ屈折率変化及び注入ノイズの大半を除去するために減算した。表面は、その後２回に亘って、２５ｍＬの１０ｍＭのグリシン（ｐＨ１．５）を１０μＬ／分の流速で注入することにより再生された。抗Ｆｃ抗体を固定化した表面は完全に再生され、１２サイクルに亘って完全な捕捉能力を保持した。
【０１５３】
（表５）抗ＩＬ−１７／ＩＬ−２０・ＦＩＴ−Ｉｇ分子の機能特徴付け
2020075932.tif 000017
【０１５４】
ビアコア分析は、ｈＩＬ−１７及びｈＩＬ−２０に対する三つのＦＩＴ−Ｉｇの全体の結合パラメータが類似していることを示し、ＦＩＴ−Ｉｇの親和性は親ｍＡｂ・ＬＹ及び１５Ｄ２のそれに非常に近似しており、また何れの抗原結合性ドメインについても結合親和性の喪失はなかった（表５）。
【０１５５】
加えて、ＦＩＴ−Ｉｇの四価二重特異性抗原はビアコアによっても分析された。ＦＩＴ１−Ｉｇは、最初にヤギ抗ヒトＦｃ抗体を介してビアコアセンサチップに捕捉され、第一の抗原が注入され、結合信号が観察された。ＦＩＴ１−Ｉｇが第一の抗原で飽和されたときに、第二の抗原が注入されて第二の信号が観測された。これはＦＩＴ２−Ｉｇについて、最初にＩＬ−１７を注入し、続いてＩＬ−２０を注入することによって、または最初にＩＬ−２０を注入し、続いてＩＬ−１７を注入することによっての何れかで行われた（図３）。何れの順番においても、二重結合活性が検出され、また両方の抗原結合性が２５〜３０ＲＵで飽和された。同様の結果が、ＦＩＴ２−Ｉｇ及びＦＩＴ３−Ｉｇについても得られた。従って、各ＦＩＴ−Ｉｇは、二重特異性の四価分子として同時に両方の抗原に結合することができた。
【０１５６】
ＦＩＴ−Ｉｇの発現プロファイル及び二重結合特性により、ＦＩＴ−Ｉｇ分子内において、ＶＬ−ＣＬはそれらの対応するＶＨ−ＣＨ１と正しくペアリングされて２官能性の結合ドメインを形成し、単一の単量体で四価及び二重特異性の全長ＦＩＴ−Ｉｇタンパク質として発現されることが明らかに示された。これは、四価ではあるが、一つの標的抗原に対する単一特異性の結合活性を示す多価抗体型分子（Ｍｉｌｌｅｒ ａｎｄ Ｐｒｅｓｔａ，米国特許番号８７２２８５９）とは対照的である。
【０１５７】
実施例１．４  抗ＩＬ−１７／ＩＬ−２０・ＦＩＴ−Ｉｇの生物学的活性の決定
ＩＬ−１７の機能を中和するＦＩＴ−Ｉｇの生物学的活性が、ＧＲＯαバイオアッセイを用いて測定された。簡単に説明すれば、Ｈｓ２７細胞を、１００００細胞／５０μＬ／ウエルで９６ウェルプレートに播種した。ＦＩＴ−Ｉｇまたは抗ＩＬ−１７対照抗体（２５μＬ）が、２．５ｎＭの出発濃度に続いて１：２の連続希釈で５ｐＭまで、二連のウエル中に加えられた。次いで、ＩＬ−１７（２５μＬ）を各ウエルに添加した。ＩＬ−１７Ａの最終濃度は０．３ｎＭであった。細胞培養上清を回収する前に、細胞を３７℃で１７時間インキュベートした。細胞培養上清中のＧＲＯ−αの濃度は、製造者のプロトコル（Ｒ＆Ｄシステム社）従い、ヒトＣＡＣＬ１／ＧＲＯアルファＱｕａｎｔｉｋｉｎｅキットにより測定した。
【０１５８】
ＩＬ−２０機能を中和するＦＩＴ−Ｉｇの生物学的活性は、ＩＬ−２０Ｒ＋ ＢＡＦ３細胞増殖アッセイを用いて測定した。簡単に言うと、２５μＬの組換えヒトＩＬ−２０を、０．８ｎＭで９６ウェルプレートの各ウエルに添加した（ＩＬ−２０の最終濃度は０．２ｎＭである）。抗ＩＬ２０抗体もしくはＦＩＴ−Ｉｇまたは他の対照抗体は、４００ｎＭに希釈し（作業濃度は１００ｎＭであった）、続いて５倍の連続希釈で希釈し、９６ウェルアッセイプレートに加えた（ウエル当たり２５μＬ）。次いで、ＩＬ−２０受容体を安定にトランスフェクトしたＢａＦ３細胞を、５０μＬの容積のＲＰＭＩ１６４０＋１０％ＦＢＳ、８００μｇ／ｍＬの濃度のハイグロマイシンＢ、８００μｇ／ｍＬの濃度のＧ４１８において、１００００細胞／ウエルの濃度で各ウエルに添加した。４８時間のインキュベーション後、１００μＬのＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ発光緩衝液を各ウエルに添加した。内容物は、細胞溶解を誘導するためにオービタル振盪器上で２分間混合し、発光シグナルを安定化させるためにプレートを室温で１０分間インキュベートした。発光はＳｐｅｃｔｒａＭａｘ・Ｍ５によって記録された。
【０１５９】
表５に示すように、全てのＦＩＴ−Ｉｇが、親抗体のそれと同じ親和性で、ｈＩＬ−２０及びｈｌＬ−１７の両方を中和することができた。ビアコア及び細胞ベースの中和アッセイの両方を使用した機能的な分析に基づけば、三つのＦＩＴ−Ｉｇの全部が親ｍＡｂの活性を完全に保持すると思われる。三つのＦＩＴ−Ｉｇの間に有意な機能的相違は存在せず、このことはリンカーがオプションであったこと、及びＦＩＴ−Ｉｇの構築物が、二つのＦａｂ結合領域間のペプチドスペーサーの非存在下において、二重結合性を可能にする十分な柔軟性及び特別な寸法を提供したことを示している。これは、下方の（第二の）可変ドメインの活性を保持するために二つのポリペプチド鎖の各々の二つの可変ドメインの間にリンカーが必要とされるＤＶＤ−Ｉｇ型の分子とは対照的である。
【０１６０】
実施例１．５  抗ＩＬ−１７／ＩＬ−２０・ＦＩＴ−Ｉｇの安定性研究
クエン酸緩衝液（ｐＨ＝６．０）中のＦＩＴ１−Ｉｇタンパク質試料を、個別に４℃、２５℃及び４０℃において１日間、３日間または７日間、一定にインキュベートした。同様に、ＦＩＴ１−Ｉｇタンパク質試料を１回、２回または３回、凍結−解凍した。１０μｇの各タンパク質試料を流速０．３ｍＬ／分で１５分間、Ｓｕｐｅｒｄｅｘ２００ ５／１５０ＧＬを装備したＵｔｉｍａｔｅ３０００ＨＰＬＣに注入して、ＳＥＣ−ＨＰＬＣにより全ての試料の無傷の完全な単量体タンパク質の画分を検出し、データを記録し、製造業者によって供給されるＣｈｒｏｍｅｌｅｏｎソフトウエアを用いて分析した。表６は、ＦＩＴ１−Ｉｇ及びＦＩＴ３−Ｉｇが、これらの熱チャレンジ条件下で完全無傷の単量体分子で残っていることを示している。
【０１６１】
（表６）ＳＥＣで完全の単量体画分％を測定することによるＦＩＴ−Ｉｇの安定性解析
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【０１６２】
実施例１．６  抗ＩＬ−１７／ＩＬ−２０・ＦＩＴ−Ｉｇの溶解度研究
ＦＩＴ１−Ｉｇの溶解度を、濃度が増大するＰＥＧ６０００（ＰＥＧ６０００は上海リンフェン化学試薬公司（Ｓｈａｎｇｈａｉ  ｌｉｎｇｆｅｎｇ  ｃｈｅｍｉｃａｌ  ｒｅａｇｅｎｔ  ｃｏ．  Ｌｔｄ）から購入した）の存在下において、沈殿の兆候を測定することにより分析した。簡単に言うと、ＰＥＧ６０００の存在下でのタンパク質の溶解度は、ＰＥＧ６０００濃度（０、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％）の関数として得られた。溶解度研究は、ｐＨ６．０の溶液において２５℃の温度で行った。簡潔に説明すると、タンパク質、ＰＥＧ及びバッファーの適切な量の緩衝ストック溶液を混合することによりタンパク質を沈殿させ、望ましい濃度の成分を得た。最終容積を２００μＬにし、タンパク質の濃度を１．０ｍｇ／ｍＬに設定した。この最終溶液を十分に混合し、１６時間平衡化させた。平衡化の後、該溶液を１３０００ｒｐｍで１０分間遠心分離し、タンパク質沈殿物を分離させた。タンパク質の溶解度が、スペクトラマックス・プラス３８４（モレキュラーデバイス社）を用いて２８０ｎｍで測定され、上清の吸光度から得られ、そしてタンパク質濃度の標準曲線に基づいて濃度が計算された（図４Ａ）。我々は、同じ実験方法を使用して、三つの異なるｐＨ条件下で市販の抗体であるリツキサンを分析した（図４Ｂ）。タンパク質溶解度はｐＨ条件に依存し、また予測されたＦＩＴ−Ｉｇの溶解度はモノクローナル抗体の範囲内であるように思われた。
【０１６３】
実施例１．７  抗ＩＬ−１７／ＩＬ−２０・ＦＩＴ−Ｉｇの薬物動態学的研究
ＦＩＴ１−Ｉｇの薬物動態学的特性を、雄のＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ系（ＳＤ）ラットで評価した。ＦＩＴ−Ｉｇタンパク質は、背部皮膚下において、頸静脈カニューレを介してまたは皮下に５ｍｇ／ｋｇの単回静脈内容量で雄のＳＤラットに投与された。血清サンプルは、２８日の期間に亘り異なる時点で採取され、サンプリングは０，５，１５、及び３０分；１，２，４，８及び２４時間；及び２，４，７，１０，１４，２１及び２８日において尾静脈を介した連続出血で行われ、ヒトＩＬ−１７捕捉及び／またはヒトＩＬ−２０捕捉のＥＬＩＳＡによって分析された。簡単に言うと、ＥＬＩＳＡプレートをヤギ抗ビオチン抗体でコーティングし（５μｇ／ｍＬ、４℃で一晩）、スーパーブロック（Ｓｕｐｅｒｂｌｏｃｋ、Ｐｉｅｒｃｅ社）でブロッキング処理し、１０％スーパーブロックＴＴＢＳ中の５０ｎｇ／ｍＬのビオチン化ヒトＩＬ−１７（ＩＬ−１７捕捉ＥＬＩＳＡ）またはＩＬ−２０（ＩＬ−２０捕捉ＥＬＩＳＡ）と共に、室温において２時間インキュベートした。血清サンプルを連続的に希釈し（０．５％血清、ＴＴＢＳ中の１０％スーパーブロック）、室温で３０分間、該プレート上でインキュベートした。検出は、ＨＲＰ標識されたヤギ抗ヒト抗体を用いて行われ、濃度は、４パラメータロジスティック適合を用い、標準曲線の補助を用いて決定された。特に皮下群の幾つかの動物は、恐らくは抗ヒト反応の発症に起因して、第１０日の後にＦＩＴ−Ｉｇ濃度の急激な低下を示した。これらの動物は、最終的な計算から除外された。薬物動態パラメータの値は、ＷｉｎＮｏｎｌｉｎソフトウエア（ファーサイト社、マウンテンビュー、カリフォルニア州）を使用して、非コンパートメントモデルによって決定した。
【０１６４】
ラットＰＫ研究、ＦＩＴ１−Ｉｇの血清濃度は、二つの異なるＥＬＩＳＡ法によって決定したときに非常に類似しており、これは分子が無傷であり、インビボにおいて両方の抗原に結合できたことを示している。ＩＶ投与の際に、ＦＩＴ１−Ｉｇは、従来のＩｇＧ分子のＰＫプロファイルに類似した、分布相及びその後の排出相からなる二相性薬物動態プロファイルを示した。二つの異なる分析方法に基づいて計算された薬物動態パラメータは非常に類似しており、表７に示されている。ＦＩＴ−Ｉｇのクリアランスは低く（〜１２ｍＬ／日／ｋｇ）、低容積の分布（Ｖｓｓ〜１３０ｍＬ／ｋｇ）は長い半減期をもたらした（Ｔ１／２＞１０日）。皮下投与後、ＦＩＴ−Ｉｇは徐々に吸収され、投与後４日目には約２６．９μｇ／ｍＬの最大血清濃度に達する。最終半減期は約１１日であり、皮下生体利用可能性は１００％に近かった。これらの結果に示されるように、ＦＩＴ１−Ｉｇの性質は、インビボでの従来のＩｇＧ分子に非常に類似しており、同等の投与計画を用いた治療的適用についての可能性を示している。
【０１６５】
ＦＩＴ−Ｉｇの薬物動態研究は、多重特異的Ｉｇ様生物製剤開発の分野において驚くべきブレークスルーを実証してきた。ラット薬物動態学的システムは、一般的に、治療用モノクローナル抗体（ｍＡｂ）の前臨床評価のために製薬業界で使用され、それはヒトにおけるｍＡｂの薬物動態プロファイルを十分に予測する。ＦＩＴ−Ｉｇの長い半減期及び低いクリアランスは、治療用モノクローナル抗体に類似した低い投与頻度で、慢性適応症のための治療的有用性を可能にする。加えて、ＩｇＧよりも１００−ｋＤａ大きいＦＩＴ−Ｉｇは、ＰＫ研究からの分布パラメータのそのＩｇＧ様容積に基づいて、組織の中に効率的に浸透するように思える。
【０１６６】
（表７）ＳＤラットにおけるＦＩＴ１−Ｉｇの薬物動態解析
2020075932.tif 000019
【０１６７】
実施例１．８  ＦＩＴ−Ｉｇの安定なＣＨＯ細胞株の発生研究
ＦＩＴ−Ｉｇは一過性トランスフェクトされた２９３Ｅ細胞において効率的に発現されることが観察されている。ＦＩＴ−Ｉｇの製造可能性を更に決定するために、ＣＨＯ−ＤＧ４４及びＣＨＯ−Ｓの両細胞株において安定なトランスフェクションが行われ、その後のクローン選択、並びに生産性分析が行われた。簡単に述べると、ＣＨＯ細胞は、フリーダムｐＣＨＯベクター（ライフテクノロジーズ社）中にサブクローニングされた２０μｇのＤＮＡ（ＣＨＯ・ＤＧ４４細胞用）または２５μｇのＤＮＡ（ＣＨＯ−Ｓ細胞用）をプラスした４００μＬのトランスフェクション溶液中において８×１０６個の細胞を用い、エレクトロポレーションによりトランスフェクトされた。安定な細胞株の選択は、ルーチンの手順を用いて行われた。手短に言えば、ＣＨＯ−ＤＧ４４の選択のためには、トランスフェクションの際に、安定したプールを選択し（−ＨＴ／２Ｐ／４００Ｇ、ここでＰはμｇ／ｍＬのピューロマイシンであり、Ｇはμｇ／ｍＬのＧ４１８である）、タンパク質産生はＩｇＧ・ＥＬＩＳＡにより分析した。トッププールが選択され、増大する濃度のＭＴＸ（５０、１００、２００及び５００ｎＭ）で数ラウンドの増幅へと進められ、続いてＩｇＧ・ＥＬＩＳＡによるタンパク質産生の分析が行われた。次いで、このトッププールはサブクローニングのために選択された。ＣＨＯ−Ｓ細胞選択については、第一相選択は１０Ｐ／４００Ｇ／１００Ｍ（ＭはｎＭのＭＴＸである）を含む培地中で行い、続いてタンパク質産生の分析を行った。次に、トッププールが選択されて３０Ｐ／４００Ｇ／５００Ｍまたは５０Ｐ／４００Ｇ／１０００Ｍの何れかにおける第二相選択へと進み、続いてＥＬＩＳＡによるタンパク質産生測定が行われた。このトッププールは、次いでサブクローニングのために選択された。タンパク質の生産性分析については、完全に回収された細胞プール（生存率＞９０％）を、１２５ｍＬの振盪フラスコ中の３０ｍＬの新鮮培地（６ｍＭのＬグルタミンを補充したＣＤ・ＦｏｒｔｉＣＨＯ（商標）培地）を使用して、５×１０５生存細胞／ｍＬ（ＣＨＯ・ＤＧ４４）または３×１０５生存細胞／ｍＬ（ＣＨＯ−Ｓ）で播種した。細胞を、３７℃、相対湿度８０％、８％ＣＯ２、及び１３０ｒｐｍにおいて、振盪プラットホーム上でインキュベートした。サンプル培養物は、毎日または規則的な間隔で（例えば第０，３，５，７，１０，１２及び１４日）、培養物の生存率が５０％未満に低下するまで、または培養の第１４日に達するまで、細胞密度、生存率、及び生産性を決定する。サンプリングの後、培養体には必要に応じてグルコースを給餌する。
【０１６８】
ＦＩＴ１−Ｉｇ・ＣＨＯ安定細胞株の全体の発生プロセスは、ＣＨＯ細胞におけるモノクローナル抗体の発生のそれと類似した特徴を示した。例えば２Ｐ／４００Ｇの下でのＤＧ４４プール分析の際に、ＶＣＤは第１０〜１２日までは約１．３Ｅ７まで増大し続けた一方、細胞生存率は第１３〜１４日までは約８０％超のまま残り、生産性は第１４日に殆ど４０ｍｇ／ｍＬに達した（図５Ａ）。５Ｐ／４００Ｇ／５０Ｍで増幅されると、生産性は第１４日に５０ｍｇ／ｍＬ超に達した（図５Ｂ）。ＣＨＯ−Ｓ細胞の選択について、力価はフェーズ１の選択の間に２００ｍｇ／ｍＬ超に達し（図５Ｃ）、フェーズ２の選択では３７０ｍｇ／ｍＬ超に達した（図５Ｄ）。これらの生産性レベルは、我々の研究室での正規のヒトｍＡｂの発生において以前に観察されていたものと同様であり、ＦＩＴ−Ｉｇが商業的応用のためのｍＡｂと同様の製造可能性を示すことを示唆している。
【０１６９】
実施例２：抗ＣＤ３／ＣＤ２０タンデム型Ｆａｂ免疫グロブリン（ＦＩＴ−Ｉｇ）の構築、発現、及び精製
ＦＩＴ−Ｉｇが細胞表面抗原に結合できるかどうかを決定するために、我々は抗ＣＤ３／ＣＤ２０・ＦＩＴ−Ｉｇ分子であるＦＩＴ７−Ｉｇ及びＦＩＴ８−Ｉｇを作製した。これらは、図１に示すような３ポリペプチド構築物である。細胞表面ＣＤ３及びＣＤ２０に結合できるＦＩＴ−Ｉｇを作製するために使用される構築物が、図１Ｂに示されている。簡単に説明すると、親ｍＡｂは二つの高親和性抗体、即ち、抗ＣＤ３（ＯＫＴ３）及び抗ＣＤ２０（オファツムマブ）を含んでいる。ＦＩＴ７−Ｉｇ構築物＃１を作製するために、ＯＫＴ３のＶＬ−ＣＬを直接（ＦＩＴ７−Ｉｇ）または７アミノ酸リンカーを介して（ＦＩＴ８−Ｉｇ）、オファツムマブ重鎖のＮ末端に融合された（表８に示す通り）。構築物＃２はＯＫＴ３のＶＨ−ＣＨ１であり、第三の構築物は、オファツムマブのＶＬ−ＣＬである。ＦＩＴ−Ｉｇのための三つの構築物が２９３細胞に同時トランスフェクトされ、ＦＩＴ−Ｉｇタンパク質の発現及び分泌をもたらした。ＰＣＲクローニングの詳細な手順は以下の通りである。
【０１７０】
実施例２．１  抗ＣＤ３／ＣＤ２０ＦＩＴ−Ｉｇの分子クローニング
この分子クローニング方法は、抗ｈＩＬ−１７／ｈＩＬ−２０・ＦＩＴ−Ｉｇの場合と同じである。
【０１７１】
（表８）抗ＣＤ３／ＣＤ２０・ＦＩＴ−Ｉｇ分子及び構築物
2020075932.tif 000020
【０１７２】
表９は、上記の分子構築のために使用されたＰＣＲプライマーの配列を示している。
【０１７３】
（表９）抗ＩＬ−１７／ＩＬ−２０・ＦＩＴ−Ｉｇの分子構築のために使用したＰＣＲプライマー
2020075932.tif 000021
【０１７４】
抗ＣＤ３／ＣＤ２０・ＦＩＴ−Ｉｇの最終的な配列を表１０に記載する。
【０１７５】
（表１０）抗ＣＤ３／ＣＤ２０・ＦＩＴ−Ｉｇのアミノ酸配列
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【０１７６】
実施例２．２  抗ＣＤ３／ＣＤ２０・ＦＩＴ−Ｉｇの発現及び精製
各ＦＩＴ−Ｉｇの全てのＤＮＡ構築物をｐＢＯＳに基づくベクターの中にサブクローニングし、正確性を保証するために配列決定した。各ＦＩＴ−Ｉｇの構築物＃１、＃２、及び＃３を、ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）を使用して２９３Ｅ細胞中で一過性共発現させた。簡単に言うと、ＦｒｅｅＳｔｙｌｅ（商標）２９３  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｍｅｄｉｕｍ中のＤＮＡをＰＥＩと混合して、ＤＮＡ：ＰＥＩ比が１：２の最終濃度とし、室温で１５分間（２０分以下）インキュベートし、次いで６０μｇ・ＤＮＡ／１２０ｍＬ培養物で２９３Ｅ細胞に添加した（１．０〜１．２×１０６／ｍＬ、細胞性生存率＞９５％）。振盪器で６〜２４時間培養した後、１２５ｒｐｍ／分で振盪しながら、３７℃、８％ＣＯ２において、ペプトンを５％の最終濃度で前記トランスフェクトされた細胞に添加した。第６日ないし第７日に、遠心分離及び濾過により上清を回収し、プロテインＡクロマトグラフィー（Ｐｉｅｒｃｅ社、ロックフォード、ＩＬ）を製造者の指示に従って使用することによりＦＩＴ−Ｉｇタンパク質を精製した。このタンパク質をＳＤＳ−ＰＡＧＥにより分析し、その濃度をＡ２８０及びＢＣＡ（Ｐｉｅｒｃｅ社、ロックフォード、ＩＬ）により決定した（表１１）。
【０１７７】
（表１１）抗ＣＤ３／ＣＤ２０・ＦＩＴ−Ｉｇタンパク質の発現及びＳＥＣ分析
2020075932.tif 000026
【０１７８】
実施例２．３  抗ＣＤ３／ＣＤ２０・ＦＩＴ−Ｉｇ分子の結合活性
両方の標的に対する抗ＣＤ３／ＣＤ２０・ＦＩＴ−Ｉｇの結合が、細胞表面にＣＤ３を発現するジャーカット細胞、及び細胞表面にＣＤ２０を発現するラージ細胞を使用して、ＦＡＣＳによって分析された。簡単に述べると、５×１０ ５個の細胞を氷冷ＰＢＳで洗浄し、氷上において１時間、２％ＦＢＳでブロックした。細胞を、抗体、ＦＩＴ−Ｉｇ（１００ｎＭ）、またはアイソタイプ対照と共に氷上で１時間インキュベートし、ＰＢＳで３回洗浄した。二次抗体（Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ４８８で標識したヤギ抗ヒトＩｇＧ、インビトロゲン社）を添加し、氷上で１時間、暗所で細胞と共にインキュベートし、ＰＢＳで３回洗浄した。サンプルをＦＡＣＳキャリバーで分析した。細胞表面結合は、ＦＩＴ７−Ｉｇ及びＦＩＴ８−Ｉｇの両方が、濃度依存的に、細胞表面抗原ＣＤ３及びＣＤ２０の両方に結合できたことを示している。親ｍＡｂの結合活性と比較すると、ＦＩＴ−Ｉｇはジャーカット細胞上のＣＤ３に対しては低下した結合強度を示したが、ラージ細胞上のＣＤ２０に対しては増強された結合強度を示した。すべての結合研究において、ＦＩＴ７−Ｉｇ及びＦＩＴ８−Ｉｇは、両方の抗原に対して類似した結合活性を示し、リンカーはＦＩＴ８−Ｉｇのその結合能に大きな影響を与えなかったことを示している（表１２）。
【０１７９】
（表１２）抗ＣＤ３／ＣＤ２０・ＦＩＴ−Ｉｇタンパク質の細胞表面抗原結合研究
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【０１８０】
実施例３：抗ＴＮＦ／ＩＬ−１７タンデム型Ｆａｂ免疫グロブリン（ＦＩＴ−Ｉｇ）の構築、発現及び精製
ヒトＩＬ−１７及びヒトＴＮＦαに結合できる別のＦＩＴ−Ｉｇ（ＦＩＴ９−Ｉｇ）はまた、図１に示すように、３ポリペプチド構築物において、抗ＩＬ−１７モノクローナル抗体クローンＬＹ、及び抗ＴＮＦモノクローナル抗体ゴリムマブを使用して作製された。ＦＩＴ９−Ｉｇ構築物＃１を作製するために、ゴリムマブのＶＬ−ＣＬは、ＬＹ重鎖のＮ末端に直接融合された（表１３に示した通り）。構築物＃２はゴリムマブのＶＨ−ＣＨ１であり、第三の構築物はＬＹのＶＬ−ＣＬである。ＦＩＴ９−Ｉｇの３構築物は２９３細胞に同時トランスフェクトされ、ＦＩＴ９−Ｉｇタンパク質の発現及び分泌をもたらした。抗ＴＮＦ／ＩＬ−１７・ＦＩＴ−Ｉｇの最終的な配列は表１４に記載されている。
【０１８１】
実施例３．１  抗ＴＮＦ／ＩＬ−１７・ＦＩＴ−Ｉｇの分子クローニング：
分子クローニングの方法は、抗ｈＩＬ−１７／ｈＩＬ−２０・ＦＩＴ−Ｉｇの場合と同じである。
【０１８２】
（表１３）抗ＴＮＦ／ＩＬ−１７・ＦＩＴ−Ｉｇ分子及び構築物
2020075932.tif 000028
【０１８３】
（表１４）抗ＴＮＦ／ＩＬ−１７・ＦＩＴ−Ｉｇ分子のアミノ酸配列
2020075932.tif 000029
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2020075932.tif 000032
【０１８４】
実施例３．２  抗ＴＮＦ／ＩＬ−１７・ＦＩＴ−Ｉｇタンパク質の発現、精製及び分析
各ＦＩＴ−Ｉｇの全てのＤＮＡ構築物は、ｐＢＯＳベースのベクターにサブクローニングし、正確性を保証するために配列決定した。ＦＩＴ９−Ｉｇの構築物＃１、＃２、及び＃３は、先に述べたようにして、２９３Ｅ細胞においてポリエチレンイミン（ＰＥＩ）を使用して一過性に共発現させ、ＦＩＴ９−Ｉｇタンパク質はプロテインＡクロマトグラフィーにより精製した。発現レベルは１０〜２３ｍｇ／Ｌであった。精製されたタンパク質は、ＩＬ−１７（Ｈｓ２７細胞によるＧＲＯαの産生）及びＴＮＦ（Ｌ９２９細胞によるＩＬ−８の産生）について細胞ベースのアッセイを用いた機能解析に付された。ヒトＴＮＦに対するＦＩＴ９−Ｉｇの中和効力は（同じ実験におけるゴリムマブによる１５．９ｐＭに比較して）１１．６ｐＭであり、ヒトＩＬ−１７に対しては１２２ｐＭ（同じ実験でのＬＹによる５１．５ｐＭに比較される）であった。全体的に、ＦＩＴ９−Ｉｇは親ｍＡｂの生物学的活性を維持した。
【０１８５】
実施例４：抗ＣＴＬＡ−４／ＰＤ−１タンデム型Ｆａｂ免疫グロブリン（ＦＩＴ−Ｉｇ）の構築、発現及び精製
ヒトＣＴＬＡ−４及びヒトＰＤ−１に結合できる別のＦＩＴ−Ｉｇ（ＦＩＴ１０−Ｉｇ）は、図１に示すように、３−ポリペプチド構築物において抗ＣＴＬＡ−４モノクローナル抗体イピリムマブ、及び抗ＰＤ−１モノクローナル抗体ニボルマブを使用して作製された。ＦＩＴ１０−Ｉｇ構築物＃１を作製するために、イピリムマブのＶＬ−ＣＬがニボルマブ重鎖のＮ末端に直接融合された（表１５に示した通り）。構築物＃２はイピリムマブのＶＨ−ＣＨ１であり、第三の構築物はニボルマブのＶＬ−ＣＬである。ＦＩＴ１０−Ｉｇの３構築物は２９３細胞に同時トランスフェクトされて、ＦＩＴ１０−Ｉｇタンパク質の発現及び分泌をもたらした。
【０１８６】
実施例４．１  抗ＣＴＬＡ−４／ＰＤ−１・ＦＩＴ−Ｉｇの分子クローニング：
この分子クローニング方法は、抗ｈＩＬ−１７／ｈＩＬ−２０・ＦＩＴ−Ｉｇの場合と同様である。抗ＣＴＬＡ−４／ＰＤ−１・ＦＩＴ−Ｉｇの最終的な配列は表１６に記載されている。
【０１８７】
（表１５）抗ＣＴＬＡ−４／ＰＤ−１・ＦＩＴ−Ｉｇ分子及び構築物
2020075932.tif 000033
【０１８８】
（表１６）抗ＣＴＬＡ−４／ＰＤ−１・ＦＩＴ−Ｉｇ分子のアミノ酸配列
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【０１８９】
実施例４．２  抗ＣＴＬＡ−４／ＰＤ−１・ＦＩＴ−Ｉｇタンパク質の発現、精製及び機能解析
各ＦＩＴ−Ｉｇの全てのＤＮＡ構築物をｐＢＯＳベースのベクターにサブクローニングし、正確性を保証するために配列決定した。ＦＩＴ１０−Ｉｇの構築物＃１、＃２、＃３を、先に述べたようにして、ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）を使用して２９３Ｅ細胞の中で一過性に共発現させ、プロテインＡクロマトグラフィーによって、ＦＩＴ９−Ｉｇタンパク質を９８％の完全な単量体タンパク質に精製した。発現レベルは、４３ｍｇ／Ｌ以下であった。この精製されたタンパク質を、組換えＣＴＬＡ−４Ｉｇ及びＰＤ−１に対するＥＬＩＳＡを使用して結合分析に供した。簡単に言えば、ＣＴＬＡ−４への結合に関しては、ヒトＣＴＬＡ−４Ｉｇ（Ｒ＆Ｄシステムズ社）を９６ウェルプレート上に固定化し、続いてルーチン洗浄及びブロッキング処理を行った。次に、ＦＩＴ−１０−Ｉｇまたはイピリムマブを種々の濃度でプレートに添加し、続いてインキュベート及び複数回の洗浄工程を行い、抗ヒトＦａｂ−ＨＲＰで検出した。ＰＤ−１に結合するため、ヒトＰＤ−１（ｈｉｓタグを有する）（Ｒ＆Ｄ  システムズ社）を９６ウェルプレート上に固定化し、続いてルーチン洗浄及びブロッキング処理を行った。次いで、種々の濃度のＦＩＴ−１０−Ｉｇまたはニボルマブを前記プレートに加え、続いてインキュベーション及び複数回の洗浄工程を行い、抗ヒトＦｃ−ＨＲＰを用いて検出した（図６）。ＦＩＴ１０−Ｉｇは、それぞれ親ｍＡｂのイピリムマブ及びニボルマブと同様の活性で、ＣＴＬＡ−４（Ａ）及びＰＤ−１（Ｂ）の両方に結合できたと思われる。
【０１９０】
加えて、複数抗原の結合研究がＯｃｔｅｔＲｅｄを用いて行われ、ＦＩＴ１０−Ｉｇが、組換えＣＴＬＡ−４及びＰＤ−１に同時に結合できるどうかが決定された。簡単に言えば、ＦＩＴ１０−Ｉｇは１０μｇ／ｍＬの濃度でＡＲ２Ｇセンサー上に固定化され、続いてアッセイ緩衝液中（ＰＢＳ、ｐＨ７．４、０．１％ＢＳＡ、０．０２％Ｔｗｅｅｎ）において８０ｎＭの濃度で、ＣＴＬＡ−４Ｉｇの結合、次いでＰＤ−１の結合（または、ＰＤ−１の結合、次いでＣＴＬＡ−４Ｉｇの結合）が行われた。実験の最後に、ｐＨ１．５の１０ｍＭグリシンで表面を５回再生させた（図７）。この実験は、ＦＩＴ１０−Ｉｇはそれが既にＣＴＬＡ−４に結合したときにＰＤ−１に結合でき、またその逆も可能であり、ＦＩＴ１０−ＩｇがＣＴＬＡ−４Ｉｇ及びＰＤ−１の両方に同時に結合できることを示した。
【０１９１】
本明細書において引用された全ての刊行物、特許出願、及び発行された特許は、各個別の刊行物、特許出願及び発行された特許が具体的に且つ個別にその全体が参照により組み込まれたのと同様に、本明細書の一部として本願に援用される。
【図１】
2020075932.tif 000040
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【配列表】
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【手続補正書】
【提出日】令和2年2月14日(2020.2.14)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくとも二つのポリペプチド鎖を含む結合性タンパク質であって、前記ポリペプチド鎖は対合して、同じ抗原の二つの異なるエピトープまたは二つの異なる抗原に結合できるＩｇＧ様分子を形成し、ここで第一のポリペプチド鎖はＶＬＡ、ＣＬ、ＶＨＢ、及びＣＨ１を含み、ＶＬは軽鎖可変ドメインであり、ＣＬは軽鎖定常ドメインであり、ＶＨは重鎖可変ドメインであり、ＣＨ１は前記重鎖の第一の定常ドメインであり、かつＡは第一のエピトープまたは抗原であり、ならびにＢは第二のエピトープまたは抗原であり、かつAおよびBは同じ抗原の異なるエピトープまたは異なる抗原である、結合性タンパク質。
【請求項２】
三つのポリペプチド鎖を含み、ここで第二のポリペプチド鎖はＶＨＡ及びＣＨ１を含み、かつ第三のポリペプチド鎖はＶＬＢ及びＣＬを含む、請求項１に記載の結合性タンパク質。