(57)【要約】【課題】本発明の目的は、肌に存在するアクネ菌を効率的に除去できるアクネ菌除去用清拭剤を提供することである。【解決手段】グリチルリチン酸、グリチルリチン酸の塩、及びアロエエキスからなる群より選択される少なくとも１種を含む液剤を、化粧用コットン等の拭取具に含浸させて、肌の清拭を行うことによって、肌に存在するアクネ菌を効率的に除去できる。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
拭取具に含浸させて使用されるアクネ菌除去用清拭剤であって、
グリチルリチン酸、グリチルリチン酸の塩、及びアロエエキスからなる群より選択される少なくとも１種を含む、アクネ菌除去用清拭剤。
【請求項２】
グリチルリチン酸及び／又はその塩、並びにアロエエキスを含む、請求項１に記載のアクネ菌除去用清拭剤。
【請求項３】
更に、多価アルコールを含む、請求項１又は２に記載のアクネ菌除去用清拭剤。
【請求項４】
更に、１価の低級アルコールを含む、請求項１〜３のいずれかに記載のアクネ菌除去用清拭剤。
【請求項５】
前記拭取具が、化粧用コットン又は不織布シートである、請求項１〜４いずれかに記載のアクネ菌除去用清拭剤。
【請求項６】
請求項１〜５いずれかに記載のアクネ菌除去用清拭剤が、拭取具に含浸されてなる、アクネ菌除去用拭取具。
【請求項７】
請求項６に記載のアクネ菌除去用拭取具を用いて肌の清拭を行う、アクネ菌の除去方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、肌に存在するアクネ菌を効率的に除去できるアクネ菌除去用清拭剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
尋常性座創とも称されるニキビは、角化以上、脂質代謝異常、皮膚常在菌の増殖が関与して発症する皮膚疾患である。ニキビは、皮膚常在菌のバランスが崩れ、キューティバクテリウム・アクネス（Cutibacterium acnes、以下「アクネ菌」）が過剰に増殖した状態になり、アクネ菌が分泌するリパーゼにより毛穴に詰まった皮脂が分解され、生成した過剰の遊離脂肪酸が酸化されることで炎症を発症するとされている。
【０００３】
従来、ニキビの予防又は治療には、肌に存在するアクネ菌を殺菌する手法が有効であると考えられており、アクネ菌に対する殺菌剤又は抗菌剤を配合した外用剤が種々報告されている。例えば、特許文献１には、リタ（Sapindus  trifoliatus）の果実の抽出物を含有する皮膚洗浄料が、アクネ菌の割合を減少させるのに有効であることが報告されている。また、特許文献２には、ヴィオラセインを含有する化粧品が、抗アクネ菌作用を発揮できることが報告されている。また、特許文献３には、アキノキリンソウ（Solidago virgaurea）抽出物には、アクネ菌に対して優れた抗菌活性があり、皮膚外用剤に配合することにより、ニキビの予防に有効であることが報告されている。
【０００４】
しかしながら、アクネ菌に対する殺菌剤又は抗菌剤を配合した外用剤では、アクネ菌が過剰に増殖した状態の肌に対しては、アクネ菌を十分に減少できず、皮膚常在菌の健全なバランスに戻せないことがある。また、殺菌剤又は抗菌剤を長期的に使用すると、耐性菌が生じることがあり、また、殺菌剤又は抗菌剤が体質に合わず、アレルギー症状や発疹等の副作用が生じることもある。そのため、肌に存在するアクネ菌を殺菌する手法以外で、肌からアクネ菌を除去する手法の開発が望まれている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開2017-7984号公報
【特許文献２】特開2015-105264号公報
【特許文献３】特開2013-35801号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
肌に存在するアクネ菌を、拭き取り等の簡便な操作で除去することが可能になれば、ニキビの予防又は改善に有効になるが、従来、肌に存在するアクネ菌を除去する手法については知られていない。
【０００７】
そこで、本発明は、肌に存在するアクネ菌を効率的に除去できるアクネ菌除去用清拭剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者は、前記課題を解決すべく鋭意検討を行ったところ、グリチルリチン酸、グリチルリチン酸の塩、及びアロエエキスからなる群より選択される少なくとも１種を含む液剤を、化粧用コットン等の拭取具に含浸させて、肌の清拭を行うことによって、肌に存在するアクネ菌を効率的に除去できることを見出した。本発明は、かかる知見に基づいてさらに検討を重ねることにより完成したものである。
【０００９】
即ち、本発明は、下記に掲げる態様の発明を提供する。
項１．  拭取具に含浸させて使用されるアクネ菌除去用清拭剤であって、
グリチルリチン酸、グリチルリチン酸の塩、及びアロエエキスからなる群より選択される少なくとも１種を含む、アクネ菌除去用清拭剤。
項２．  グリチルリチン酸及び／又はその塩、並びにアロエエキスを含む、項１に記載のアクネ菌除去用清拭剤。
項３．  更に、多価アルコールを含む、項１又は２に記載のアクネ菌除去用清拭剤。
項４．  更に、１価の低級アルコールを含む、項１〜３のいずれかに記載のアクネ菌除去用清拭剤。
項５．  前記拭取具が、化粧用コットン又は不織布シートである、項１〜４いずれかに記載のアクネ菌除去用清拭剤。
項６．  項１〜５いずれかに記載のアクネ菌除去用清拭剤が、拭取具に含浸されてなる、アクネ菌除去用拭取具。
項７．  項６に記載のアクネ菌除去用拭取具を用いて肌の清拭を行う、アクネ菌の除去方法。
【発明の効果】
【００１０】
本発明によれば、肌に存在するアクネ菌を清拭という簡便な操作で効率的に除去することが可能になるので、アクネ菌が過剰に増殖するのを抑制したり、過剰に増殖したアクネ菌を除去して皮膚常在菌を健全な状態に戻したりすることができ、ニキビを効果的に予防又は改善することが可能になる。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】試験例２において、試験開始前、験開始から２週間後及び４週間後に、１１名の被験者ニキビの総数を計測した結果を示す。
【図２】試験例２において、試験開始前及び験開始から４週間後に、１名の被験者についてニキビがある部位を撮影した写真を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
１．アクネ菌除去用清拭剤
本発明のアクネ菌除去用清拭剤は、グリチルリチン酸、グリチルリチン酸の塩、及びアロエエキスからなる群より選択される少なくとも１種を含み、拭取具に含浸させて使用されることを特徴とする。以下、本発明のアクネ菌除去用清拭剤について詳述する。
【００１３】
［含有成分］
本発明のアクネ菌除去用清拭剤は、グリチルリチン酸、グリチルリチン酸の塩、及びアロエエキスからなる群より選択される少なくとも１種を含有する。これらの成分が拭取具に含浸させた状態で肌を清拭することにより、肌に存在するアクネ菌を効率的に除去することが可能になる。
【００１４】
グリチルリチン酸は、抗炎症作用や抗アレルギー作用等を有することが知られている公知の薬剤である。また、グリチルリチン酸の塩としては、薬学的又は香粧学的に許容されることを限度として特に制限されないが、例えば、ナトリウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属塩；アンモニウム塩等が挙げられる。これらの塩の中でも、好ましくはカリウム塩（即ち、グリリルリチン酸ジカリウム）が挙げられる。
【００１５】
アロエエキスは、アロエを抽出処理することにより得られる成分である。アロエエキスの抽出原料となるアロエの種類については、特に制限されないが、例えば、キダチアロエ（学名：Aloe arborescens）、アロエベラ（学名：Aloe vera）、アロエ・エルー（学名：Aloe eru）、アロエ・カメロニー（又はアロエ・カメロン）（学名：Aloe cameronii）、アロエ・ケドンゲンシス（学名：Aloe kedongensis）、アロエ・フェロックス（学名：Aloe ferox）、アロエ・アフリカーナ（学名：Aloe africana）、アロエ・アンドンゲンシス（学名：Aloe andongensis）及びアロエ・トーメントーサ（学名：Aloe tomentosa）、これらの改良種、これらの交配種等が挙げられる。これらの中でも、アクネ菌を除去する作用をより一層向上させるという観点から、好ましくはキダチアロエが挙げられる。
【００１６】
抽出処理に供されるアロエは、アロエの植物全体、葉部（外皮と葉肉を含む）、葉の外皮、葉肉等のいずれを使用してもよいが、調製容易性等の観点から、好ましくは植物全体又は葉部が挙げられる。また、抽出処理に供されるアロエは、未乾燥物、乾燥物又は凍結物のいずれであってもよく、また、抽出効率を高めるために、細切又は粉砕されたものであってもよい。
【００１７】
アロエエキスの抽出処理に使用される抽出溶媒としては、水、有機溶媒、及びこれらの混合溶媒が挙げられる。有機溶媒としては、親水性有機溶媒が好ましく、例えば、炭素数１〜５の1価アルコール（エタノール、メタノール、プロパノール、イソプロパノール等）、炭素数２〜５の多価アルコール（グリセリン、イソプロピレングリコール、プロピレングリコール及び１，３−ブチレングリコール等）、エステル（酢酸メチル等）、ケトン（アセトン等）等が挙げられる。これらの有機溶媒は、１種を単独で使用してもよく、また２種以上を組み合わせて使用してもよい。これらの抽出溶媒の中でも、安全性及び有効成分の抽出効率の点から、好ましくは、水、エタノール、1,3-ブチレングリコール、及びこれらの混合溶媒、更に好ましくは水、水とエタノールの混合溶媒、及び水と１，３−ブチレングリコールの混合溶媒、特に好ましくは水が挙げられる。
【００１８】
抽出溶媒として、水及びエタノールの混合溶媒を用いる場合は、混合溶媒中のエタノールの含有量としては、例えば、０．１〜９９．５重量%程度、好ましくは５〜９５重量%程度、更に好ましくは５０〜９０重量%程度、特に好ましくは６０〜８０重量%程度が挙げられる。
【００１９】
また、抽出溶媒として水と１，３−ブチレングリコールの混合溶媒を用いる場合は、混合溶媒中の１，３−ブチレングリコールの含有量としては、例えば、０．１〜７０重量%程度、好ましくは５〜６０重量%程度、更に好ましくは１０〜５０重量%程度が挙げられる。
【００２０】
アロエエキスの抽出処理における抽出方法については、特に制限されず、植物エキスの製造に使用される一般的な抽出手法であればよいが、例えば、抽出溶媒中に原生薬を冷浸、温浸等によって浸漬し、必要に応じて撹拌する方法；パーコレーション法；水蒸気蒸留法、超音波抽出法等が挙げられる。
【００２１】
抽出処理により得られた抽出液を、必要に応じてろ過、遠心分離等によって固形物を除去することにより、アロエエキスを回収できる。
【００２２】
本発明のアクネ菌除去用清拭剤では、前記抽出処理により得られた液状のアロエエキスをそのまま使用してもよいが、必要に応じて、一部又は全ての溶媒を除去して濃縮液若しくは乾燥物（乾燥エキス）として使用してもよい。また、これらの濃縮液若しくは乾燥物（乾燥エキス）を更に精製処理に供してもよく、更にこれらを適当な溶剤に溶解若しくは懸濁して用いることもできる。
【００２３】
本発明のアクネ菌除去用清拭剤では、グリチルリチン酸、グリチルリチン酸の塩、及びアロエエキスの中から１種の成分を単独で使用してもよく、また２種以上の成分を組み合わせて使用してもよい。これらの中でも、アクネ菌を除去する作用をより一層向上させるという観点から、好ましくは、グリチルリチン酸及び／又はその塩、或はリチルリチン酸及び／又はその塩とアロエエキスとの組み合わせが挙げられる。
【００２４】
グリチルリチン酸及び／又はその塩とアロエエキスとを併用する場合、これらの比率としては、例えば、グリチルリチン酸及び／又はその塩１００重量部当たり、アロエエキスが乾燥重量換算で０．０１〜１００重量部、好ましくは０．１〜５０重量部、更に好ましくは０．５〜２０重量部、特に好ましくは０．５〜１０重量部が挙げられる。
【００２５】
本発明のアクネ菌除去用清拭剤において、グリチルリチン酸、グリチルリチン酸の塩、及び／又はアロエエキスの含有量については、付与すべきアクネ菌の除去作用に応じて適宜設定すればよいが、例えば、グリチルリチン酸及び／又はその塩の場合であれば、０．０１〜５重量％、好ましくは０．０３〜１重量％、更に好ましくは０．０５〜０．５重量％；アロエエキスの場合であれば、乾燥重量換算で０．０００１〜５重量％、好ましくは０．０００５〜１重量％、更に好ましくは０．０００５〜０．１重量％が挙げられる。
【００２６】
本発明のアクネ菌除去用清拭剤には、アクネ菌に対する抗菌又は殺菌剤が含まれていてもよい。アクネ菌に対する抗菌又は殺菌剤が含まれている場合には、アクネ菌を除去する作用に加えて、アクネ菌を殺菌する作用を具備でき、ニキビの予防又は改善効果をより一層向上させることができる。
【００２７】
アクネ菌に対する抗菌又は殺菌剤としては、具体的には、イソプロピルメチルフェノール、ヒノキチオール、塩酸クロルヘキシジン、グルコン酸クロルヘキシジン、トリクロサン、塩化リゾチーム、スルファジアジン、塩化ベンザルコニウム、塩化デカリニウム、塩化ベンゼトニウム、塩化セチルピリジニウム等が挙げられる。これらの抗菌又は殺菌剤は、１種単独で使用してもよく、また２種以上を組み合わせて使用してもよい。
【００２８】
これらの抗菌又は殺菌剤の中でも、好ましくはイソプロピルメチルフェノールが挙げられる。
【００２９】
本発明のアクネ菌除去用清拭剤において抗菌又は殺菌剤を含有させる場合、その含有量については、特に制限されないが、例えば、０．００１〜１重量％、好ましくは０．００５〜０．５重量％、更に好ましくは０．０１〜０．１重量％が挙げられる。
【００３０】
本発明のアクネ菌除去用清拭剤は、更に多価アルコールを含んでいてもよい。多価アルコールを含む場合には、アクネ菌を除去する作用を効果的に発揮させつつ、保湿効果を奏させることが可能になる。
【００３１】
本発明で使用される多価アルコールについては、特に制限されないが、例えば、エチレングリコール、１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、イソプレングリコール、ジエチレングリコール、ジプロピレングリコール、ポリプロピレングリコール、グリセリン、ポリエチレングリコール等が挙げられる。これらの多価アルコールは、１種単独で使用してもよく、また２種以上を組み合わせて使用してもよい。
【００３２】
これらの多価アルコールの中でも、好ましくはプロピレングリコール、グリセリン、及びポリエチレングリコールの少なくとも１種、更に好ましくこれらの３種の併用が挙げられる。
【００３３】
本発明のアクネ菌除去用清拭剤に多価アルコールを含有させる場合、その含有量については、特に制限されないが、例えば、多価アルコールの総量で、１〜３０重量％、好ましくは３〜２５重量％、更に好ましくは５〜２０重量％が挙げられる。より具体的には、多価アルコールが、プロピレングリコール、グリセリン、及びポリエチレングリコールである場合には、それらの含有量の好適な範囲は以下の通りである。
プロピレングリコールの含有量：好ましくは０．３〜１０．０重量％、更に好ましくは１．０〜８．０重量％、特に好ましくは１．６〜６．５重量％。
グリセリンの含有量：好ましくは０．６〜１８．０重量％、更に好ましくは１．８〜１５．２重量％、特に好ましくは３．０〜１２．０重量％。
ポリエチレングリコールの含有量：好ましくは０．１〜２．０重量％、更に好ましくは０．２〜１．８重量％、特に好ましくは０．４〜１．５重量％。
【００３４】
本発明のアクネ菌除去用清拭剤は、更に１価低級アルコールが含まれていてもよい。１価低級アルコールを含む場合には、アクネ菌を除去する作用を効果的に発揮させつつ、含有成分を安定に可溶化又は乳化させ易くすることができる。
【００３５】
１価低級アルコールとしては、薬学的又は香粧学的に許容されることを限度として特に制限されないが、例えば、炭素数２〜５の１価アルコール、好ましくはエタノール、プロパノール、イソプロパノール、ブタノール、更に好ましくはエタノールが挙げられる。これらの１価低級アルコールは、１種単独で使用してもよく、また２種以上を組み合わせて使用してもよい。
【００３６】
本発明のアクネ菌除去用清拭剤に１価低級アルコールを含有させる場合、その含有量については、特に制限されないが、例えば、０．５〜２０重量％、好ましくは１〜２０重量％、更に好ましくは３〜１５重量％が挙げられる。
【００３７】
また、本発明のアクネ菌除去用清拭剤は、拭取具に含浸させ易くするために、基剤として水を含むことが好ましい。本発明のアクネ菌除去用清拭剤における水の含有量については、配合する成分以外の残部であればよいが、例えば、５０〜９８重量％、好ましくは５５〜９５重量％、更に好ましくは６０〜９０重量％が挙げられる。
【００３８】
本発明のアクネ菌除去用清拭剤は、前述する成分の他に、必要に応じて外用組成物において使用される薬理成分や添加剤等を含有していてもよい。
【００３９】
本発明のアクネ菌除去用清拭剤に配合可能な薬理成分としては、例えば、抗ヒスタミン剤（クロルフェニラミンマレイン酸塩等）、局所麻酔剤（プロカイン、テトラカイン、ブピパカイン、メピパカイン、クロロプロカイン、プロパラカイン、メプリルカイン又はこれらの塩、オルソカイン、オキセサゼイン、オキシポリエントキシデカン、ロートエキス、ペルカミンパーゼ、テシットデシチン等）、抗炎症剤（グリチルレチン酸、アラントイン、εアミノカプロン酸、インドメタシン、フェルビナク、ジクロフェナクナトリウム、ロキソプロフェンナトリウム等）、皮膚保護剤（コロジオン、ヒマシ油等）、血行促進成分（ノニル酸ワニリルアミド、ニコチン酸ベンジルエステル、カプサイシン、トウガラシエキス等）、清涼化剤（メントール、カンフル等）、ムコ多糖類（コンドロイチン硫酸ナトリウム、グルコサミン等）等が挙げられる。これらの薬理成分は、１種単独で使用してもよく、また２種以上を組み合わせて使用してもよい。これらの薬理成分を含有させる場合、その含有量については、使用する薬理成分の種類、期待する効果等に応じて適宜設定すればよい。
【００４０】
本発明のアクネ菌除去用清拭剤に配合可能な添加剤としては、例えば、界面活性剤（非イオン性界面活性剤、陰イオン性界面活性剤、陽イオン性界面活性剤、両イオン性界面活性剤）、防腐剤（メチルパラベン、プロピルパラベン、安息香酸、安息香酸ナトリウム、ソルビン酸等）、着香剤（シトラール、１，８−シオネール、シトロネラール、ファルネソール等）、着色剤（タール色素（褐色２０１号、青色２０１号、黄色４号、黄色４０３号等）、カカオ色素、クロロフィル、酸化アルミニウム等）、粘稠剤（ポリビニルピロリドン、アルギン酸ナトリウム、エチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、キサンタンガム、カラギーナン等）、ｐＨ調整剤（リン酸、塩酸、クエン酸、クエン酸ナトリウム、コハク酸、酒石酸、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、トリエタノールアミン、トリイソプロパノールアミン等）、湿潤剤（ｄｌ−ピロリドンカルボン酸ナトリウム液、Ｄ−ソルビトール液等）、安定化剤（ジブチルヒドロキシトルエン、ブチルヒドロキシアニソール、エデト酸ナトリウム、メタリン酸ナトリウム、Ｌ−アルギニン、Ｌ−アスパラギン酸、ＤＬ−アラニン、グリシン、エリソルビン酸ナトリウム、没食子酸プロピル、亜硫酸ナトリウム、二酸化硫黄、クロロゲン酸、カテキン、ローズマリー抽出物等）、酸化防止剤、紫外線吸収剤、キレート剤、粘着剤、緩衝剤、溶解補助剤、可溶化剤等の添加剤が挙げられる。これらの添加剤は、１種単独で使用してもよく、また２種以上を組み合わせて使用してもよい。これらの添加剤の含有量は、製剤形態等に応じて適宜設定することができる。
【００４１】
［製剤形態］
本発明のアクネ菌除去用清拭剤は、拭取具に含浸させて使用されるため、拭取具に含浸し易い形態、具体的には、液状又は半固形状（ジェル状、軟膏状、ペースト状）であることが好ましい。
【００４２】
本発明のアクネ菌除去用清拭剤の製剤形態として、具体的には、液剤、乳液剤、ローション剤、ジェル剤、軟膏剤、クリーム剤等が挙げられる。これらの製剤形態の中でも、好ましくは、液剤、乳液剤、ローション剤が挙げられる。
【００４３】
［使用方法］
本発明のアクネ菌除去用清拭剤は、適量を拭取具に含浸させた状態にして、アクネ菌の除去が求められる肌を清拭することにより使用される。
【００４４】
本発明のアクネ菌除去用清拭剤を含浸させる拭取具については、肌の清拭に使用可能であるものであればよく、例えば、化粧用コットン、化粧用パフ、不織布シート、織布シート（ガーゼ等）、スポンジ等が挙げられる。これらの拭取具の構成素材については、特に制限されず、例えば、天然繊維、再生繊維、半合成繊維、合成繊維、合成樹脂等のいずれであってもよいが、清拭する際の使用感を高めつつ、より一層効果的にアクネ菌を除去させるという観点から、好ましくは天然繊維、更に好ましくは綿が挙げられる。
【００４５】
これらの拭取具の中でも、清拭する際の使用感及びアクネ菌の除去作用の観点から、好ましくは化粧用コットン、不織布シート、更に好ましくは化粧用コットンが挙げられる。
【００４６】
本発明のアクネ菌除去用清拭剤の適用対象となる肌は、アクネ菌の除去が求められる肌であればよく、具体的には、ニキビの予防又は改善が求められる肌が挙げられる。また、適用対象となる肌の部位については、アクネ菌の除去が求められる部位であればよいが、好ましくは顔が挙げられる。
【００４７】
本発明のアクネ菌除去用清拭剤を拭取具に含浸させて肌を清拭することにより、アクネ菌が除去されるので、肌を健全な状態に維持又は改善することができ、ニキビの予防又は改善が可能になる。
【００４８】
２．アクネ菌除去用清拭具
本発明のアクネ菌除去用清拭具は、前記アクネ菌除去用清拭剤が拭取具に含浸されていることを特徴とする。本発明のアクネ菌除去用清拭具において、使用されるアクネ菌除去用清拭剤の組成や製剤形態、拭取具の種類や素材等については、前記「１．アクネ菌除去用清拭剤」の欄に記載の通りである。
【実施例】
【００４９】
以下、本発明について実施例を挙げて、更に詳細に説明するが、本発明は、これらの実施例によって限定されて解釈されるものではない。
【００５０】
試験例１
表１に示す組成のアクネ菌除去用清拭剤（実施例１）を調製し、ニキビができやすい体質の男性（３７歳）を被験者として以下の試験に使用した。
【００５１】
【表１】
2020075897.tif 000002
【００５２】
化粧用コットン（綿１００％、７ｃｍ×５ｃｍ、４枚重ね）にアクネ菌除去用清拭剤４ｍｌを含浸させてアクネ菌除去用清拭具を調製した。被験者に洗顔させて顔の皮脂を十分に洗い流した状態にした。次いで、アクネ菌除去用清拭具を用いて、洗顔後の顔に対して３〜４回拭き取り操作を行った。次いで拭き取り操作後のアクネ菌除去用清拭具から、DNA抽出キット（MORA-EXTRACT、極東製薬工業株式会社）によって全DNAの抽出液を得た。
【００５３】
得られた全ＤＮＡ抽出液を用いて、TB Green Premix Ex Taq II (Tli RNaseH Plus)(
タカラバイオ株式会社)リアルタイムＰＣＲにより、grpE遺伝子（アクネ菌（Cutibacterium acnes）固有の遺伝子）及びgmk遺伝子（常在菌（Staphylococcus epidermidis）固有の遺伝子）のコピー数を定量した。なお、リアルタイムPCRでは、grpE遺伝子に対するプライマーは、株式会社テクノスルガ・ラボ製の「P.acnes_grpE_F及びP.acnes_grpE_R」を使用し、gmk遺伝子に対するプライマーは「S.epi gmkF及びS.epi gmkR」（J Bacteriol. 2001 Dec;183(24):7094-101.参照）を使用した。また、コピー数の定量には、Cutibacterium acnes（JCM6425）及びStaphylococcus epidermidis（NBRC100911）の菌懸濁液の希釈系列を使用した検量線を使用した。
【００５４】
また、前記で得られた全DNA抽出液中に含まれる細菌16S rRNA遺伝子のV3〜V4領域（341f-R806）をPCRにより増幅させた。次いで、次世代シークエンス装置（MiSeqTM、イルミナ社製）を用いてペアエンド法によりシークエンシングした後に、データベース（微生物同定データベース DB-BA13.0(TechnoSuruga Laboratony,Japan）)で解析し、拭き取り操作後のアクネ菌除去用清拭具に含まれる菌の種類と割合を分析した。
【００５５】
拭き取り操作後のアクネ菌除去用清拭具に含まれるgrpE遺伝子とgmk遺伝子のコピー数を測定した結果を表２に示す。なお、grpE遺伝子１コピーはアクネ菌（Cutibacterium acnes）の菌数が１であり、gmk遺伝子１コピーは常在菌（Staphylococcus epidermidis）の菌数が１であることを示している。また、拭き取り操作後のアクネ菌除去用清拭具に含まれる菌群について、次世代シーケンス・アプリコン解析によって分析した結果を表３に示す。この結果から、グリチルリチン酸ジカリウムを含むアクネ菌除去用清拭剤を化粧用コットンに含浸させたアクネ菌除去用清拭具を使用して、肌の清拭を行ことによって、アクネ菌を効率的に除去できていることが確認された。
【００５６】
【表２】
2020075897.tif 000003
【００５７】
【表３】
2020075897.tif 000004
【００５８】
試験例２
前記表１に示す組成のアクネ菌除去用清拭剤（実施例１）を調製し、医師によって「肌荒れ」と「顔にニキビが３個以上」あると判定された女性（２０〜４９歳、１１名）を被験者として以下の試験を行った。
【００５９】
アクネ菌除去用清拭剤４ｍｌ程度を化粧用コットン（綿１００％、５．５ｃｍ×７ｃｍ、「ビューティーアップコットンＦ」、株式会社資生堂）に含浸させたアクネ菌除去用清拭具を用いて、被験者に、４週間、朝晩２回の頻度で洗顔後に顔を清拭させた。試験開始前、試験開始から２週間後及び４週間後に、医師によって顔のニキビの個数を計測した。
【００６０】
ニキビの個数を計測した結果を図１に示し、１名の被験者についてニキビがある部位を撮影した写真を図２に示す。図１における縦軸のニキビ個数は、被験者１１名におけるニキビの個数の総数を示す。この結果、グリチルリチン酸ジカリウムを含むアクネ菌除去用清拭剤を化粧用コットンに含浸させたアクネ菌除去用清拭具を使用することにより、ニキビを効果的に予防及び改善できることが確認された。
【００６１】
製剤例
表４に示す組成のアクネ菌除去用清拭剤を調製した。これらのアクネ菌除去用清拭剤について、試験例１と同様の方法で評価したところ、顔からアクネ菌を効率的に除去できることが確認された。
【００６２】
【表４】
2020075897.tif 000005
【図１】
2020075897.tif 000006
【図２】
2020075897.tif 000007