(57)【要約】【課題】本発明の主題は、対象が、抗高血圧薬（例えば、アンギオテンシン変換酵素インヒビター（ＡＣＥインヒビター）、アンギオテンシン受容体ブロッカー（ＡＲＢ）、β−アドレナリン受容体ブロッカー（β−ブロッカー）及び／又はスタチン）を用いた血圧降下療法により低下させられ得る血管リスクを有するかどうかを決定する方法の提供。【解決手段】前記対象の血液サンプルにおけるヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）及び／又はそのアイソフォームのレベルを決定し、及び、前記血液サンプル中のｈＧＨ及び／又はそのアイソフォームの前記決定されたレベルと、所定の閾値とを比較する工程を包含する方法。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象が、抗高血圧薬（例えば、アンギオテンシン変換酵素インヒビター（ＡＣＥインヒビター）、アンギオテンシン受容体ブロッカー（ＡＲＢ）、β−アドレナリン受容体ブロッカー（β−ブロッカー）及び／又はスタチン）を用いた血圧降下療法により低下させられ得る血管リスクを有するかどうかを決定する方法であって、
・前記対象の血液サンプルにおけるヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）及び／又はそのアイソフォームのレベルを決定し、及び
・前記血液サンプル中のｈＧＨ及び／又はそのアイソフォームの前記決定されたレベルと、所定の閾値とを比較する工程を包含し、ここで
・ｈＧＨ及び／又はそのアイソフォームの決定されたレベルが前記所定の閾値を上回る場合、対象は、抗高血圧薬（例えば、アンギオテンシン変換酵素インヒビター（ＡＣＥインヒビター）、アンギオテンシン受容体ブロッカー（ＡＲＢ）、β−アドレナリン受容体ブロッカー（β−ブロッカー）及び／又はスタチン）を用いた血圧降下療法により低下させられ得る血管リスクを有するものとして同定され、及び
・ｈＧＨ及び／又はそのアイソフォームの決定されたレベルが前記所定の閾値未満である場合、対象は、抗高血圧薬（例えば、アンギオテンシン変換酵素インヒビター（ＡＣＥインヒビター）、アンギオテンシン受容体ブロッカー（ＡＲＢ）、β−アドレナリン受容体ブロッカー（β−ブロッカー）及び／又はスタチン）を用いた血圧降下療法により低下させられ得る血管リスクを有さないものとして同定される、方法。
【請求項２】
前記対象が、高血圧（少なくとも＞１４０ｍｍＨＧ（収縮期）〜９０ｍｍＨＧ（拡張期））を有さない、
請求項１に記載の、対象が、抗高血圧薬を用いた血圧降下療法により低下させられ得る血管リスクを有するかどうかを決定する方法。
【請求項３】
前記血液サンプルが、抗高血圧薬によりまだ治療されていない対象から採取される、
請求項１又は２に記載の、対象が、抗高血圧薬を用いた血圧降下療法により低下させられ得る血管リスクを有するかどうかを決定する方法。
【請求項４】
対象における血圧を低下させることによる血管リスクを低下させることが、前記対象における主要心血管イベント及び／又は心血管疾患を予防することを意味する、
請求項１、２又は３に記載の、対象が、抗高血圧薬を用いた血圧降下療法により低下させられ得る血管リスクを有するかどうかを決定する方法。
【請求項５】
前記対象が、主要心血管イベントをこれまでに有したことがなく、かつ、何れの心血管疾患もこれまでに有したことがない、
請求項１〜４の何れか１項に記載の、対象が、抗高血圧薬を用いた血圧降下療法により低下させられ得る血管リスクを有するかどうかを決定する方法。
【請求項６】
前記対象が、過去２週間以内に、好ましくは過去１週間以内に、好ましくは過去３６時間以内に急性心筋梗塞又は急性心不全に罹患している、
請求項１〜４の何れか１項に記載の、対象が、抗高血圧薬を用いた血圧降下療法により低下させられ得る血管リスクを有するかどうかを決定する方法。
【請求項７】
前記抗高血圧薬が、アンギオテンシン変換酵素インヒビター（ＡＣＥインヒビター）、アンギオテンシン受容体ブロッカー（ＡＲＢ）、及びβ−アドレナリン受容体ブロッカー（β−ブロッカー）、スタチン、又はそれらの組み合わせを含む群から選択される、
請求項１〜６の何れか１項に記載の、対象が、抗高血圧薬を用いた血圧降下療法により低下させられ得る血管リスクを有するかどうかを決定する方法。
【請求項８】
前記血管サンプルが、全血、血清及び血漿を包含する群から選択される、
請求項１〜７の何れか１項に記載の、対象が、抗高血圧薬を用いた血圧降下療法により低下させられ得る血管リスクを有するかどうかを決定する方法。
【請求項９】
前記血液サンプルが、空腹時のサンプルである、
請求項１〜８の何れか１項に記載の、対象が、抗高血圧薬を用いた血圧降下療法により低下させられ得る血管リスクを有するかどうかを決定する方法。
【請求項１０】
ｈＧＨ及び／又はそのアイソフォームの前記レベルを決定するために使用される前記測定方法が、少なくとも５０ｐｇ／ｍＬの感度を有する、
請求項１〜９の何れか１項に記載の、対象が、抗高血圧薬を用いた血圧降下療法により低下させられ得る血管リスクを有するかどうかを決定する方法。
【請求項１１】
ｈＧＨ及び／又はそのアイソフォームの前記レベルを決定するために使用される前記測定方法が、少なくとも５０ｐｇ／ｍＬのアッセイ感度を有するイムノアッセイである、
請求項１〜１０の何れか１項に記載の、対象が、抗高血圧薬を用いた血圧降下療法により低下させられ得る血管リスクを有するかどうかを決定する方法。
【請求項１２】
前記所定の閾値が、３３０ｐｇ／ｍＬ又はそれ以上、好ましくは１３７０ｐｇ／ｍＬ又はそれ以上である、
請求項１〜１１の何れか１項に記載の、対象が、抗高血圧薬を用いた血圧降下療法により低下させられ得る血管リスクを有するかどうかを決定する方法。
【請求項１３】
ｈＧＨ及び／又はそのアイソフォームの前記レベルが、ｈＧＨ及び／又はそのアイソフォームに結合する少なくとも２つの抗体を含むイムノアッセイにより決定される、
請求項１〜１２の何れか１項に記載の、対象が、抗高血圧薬を用いた血圧降下療法により低下させられ得る血管リスクを有するかどうかを決定する方法。
【請求項１４】
ｈＧＨ及び／又はそのアイソフォームに結合する前記少なくとも２つの抗体の個々が、ｈＧＨ及び／又はそのアイソフォームに対し、少なくとも１０8Ｍ-1の親和性を有する、
請求項１１に記載の、対象が、抗高血圧薬を用いた血圧降下療法により低下させられ得る血管リスクを有するかどうかを決定する方法。
【請求項１５】
前記方法が、心不全、アテローム性動脈硬化症、高血圧、心筋症、心筋梗塞及び脳卒中を包含する群から選択される、前記対象における主要心血管イベント及び／又は心血管疾患の予防のために使用される、
請求項１〜１４の何れか１項に記載の、対象が、抗高血圧薬を用いた血圧降下療法により低下させられ得る血管リスクを有するかどうかを決定する方法。
【請求項１６】
前記方法がさらに、
・ｈＧＨ及び／又はそのアイソフォームの決定されたレベルが、前記所定の閾値以上であり、及び、抗高血圧薬を用いた血圧降下療法により低下させられ得る血圧リスクを有するものとして同定されている対象への、抗高血圧薬（例えば、アンギオテンシン変換酵素インヒビター（ＡＣＥインヒビター）、アンギオテンシン受容体ブロッカー（ＡＲＢ）、β−アドレナリン受容体ブロッカー（β−ブロッカー）及び／又はスタチン）の投与の勧告、又は
・ｈＧＨ及び／又はそのアイソフォームの決定されたレベルが、前記所定の閾値以下であり、及び、抗高血圧薬を用いた血圧降下療法により低下させられ得る血圧リスクを有さないものとして同定されている対象への、抗高血圧薬（例えば、アンギオテンシン変換酵素インヒビター（ＡＣＥインヒビター）、アンギオテンシン受容体ブロッカー（ＡＲＢ）、β−アドレナリン受容体ブロッカー（β−ブロッカー）及び／又はスタチン）の留保の勧告、
を包含する、請求項１〜１５の何れか１項に記載の、対象が、抗高血圧薬を用いた血圧降下療法により低下させられ得る血管リスクを有するかどうかを決定する方法。
【請求項１７】
前記方法がさらに、
・ｈＧＨ及び／又はそのアイソフォームの決定されたレベルが、前記所定の閾値以上であり、及び、抗高血圧薬を用いた血圧降下療法により低下させられ得る血圧リスクを有するものとして同定されている対象への、抗高血圧薬（例えば、アンギオテンシン変換酵素インヒビター（ＡＣＥインヒビター）、アンギオテンシン受容体ブロッカー（ＡＲＢ）、β−アドレナリン受容体ブロッカー（β−ブロッカー）及び／又はスタチン）の投与、又は、
・ｈＧＨ及び／又はそのアイソフォームの決定されたレベルが、前記所定の閾値以下であり、及び、抗高血圧薬を用いた血圧降下療法により低下させられ得る血圧リスクを有さないものとして同定されている対象への、抗高血圧薬（例えば、アンギオテンシン変換酵素インヒビター（ＡＣＥインヒビター）、アンギオテンシン受容体ブロッカー（ＡＲＢ）、β−アドレナリン受容体ブロッカー（β−ブロッカー）及び／又はスタチン）の留保
を包含する、請求項１〜１６の何れか１項に記載の、対象が、抗高血圧薬を用いた血圧降下療法により低下させられ得る血管リスクを有するかどうかを決定する方法。
【請求項１８】
ｈＧＨ及び／又はそのアイソフォームの決定されたレベルが前記所定の閾値以上であり、及び、抗高血圧薬を用いた血圧降下療法により低下させられ得る血管リスクを有するものとして、請求項１〜１７の何れか１項に記載の方法により同定された対象における、主要心血管イベント及び／又は心血管疾患の予防方法への使用のための、抗高血圧薬（例えば、アンギオテンシン変換酵素インヒビター（ＡＣＥインヒビター）、アンギオテンシン受容体ブロッカー（ＡＲＢ）、β−アドレナリン受容体ブロッカー（β−ブロッカー）及び／又はスタチン）。
【請求項１９】
ｈＧＨ及び／又はそのアイソフォームの決定されたレベルが前記所定の閾値以上であり、及び、抗高血圧薬を用いた血圧降下療法により低下させられ得る血管リスクを有するものとして、請求項１〜１７の何れか１項に記載の方法により同定された対象（高血圧を有さない）における、主要心血管イベント及び／又は心血管疾患の予防方法への使用のための抗高血圧薬（例えば、アンギオテンシン変換酵素インヒビター（ＡＣＥインヒビター）、アンギオテンシン受容体ブロッカー（ＡＲＢ）、β−アドレナリン受容体ブロッカー（β−ブロッカー）及び／又はスタチン）。
【請求項２０】
抗高血圧薬（例えば、アンギオテンシン変換酵素インヒビター（ＡＣＥインヒビター）、アンギオテンシン受容体ブロッカー（ＡＲＢ）、β−アドレナリン受容体ブロッカー（β−ブロッカー）及び／又はスタチン）により処置される、血管リスクにおける、対象の治療応答をモニターするための方法であって、下記工程：
・時点Ｘ１で採取される、抗高血圧薬を用いる前記対象の血液サンプルにおけるｈＧＨ及び／又はそのアイソフォームのレベルを決定し、及び
・時点Ｘ２で採取される、抗高血圧薬を用いる前記対象の血液サンプルにおけるｈＧＨ及び／又はそのアイソフォームのレベルを決定し、及び
・ここで時点Ｘ１が、治療の開始の前又は治療の開始の後の何れかであるが、何れの場合でも、時点Ｘ２よりも早く、及び
・ここで、時点Ｘ２は、治療の開始の後であり、かつ、何れの場合でも、時点Ｘ１よりも後であり、
・時点Ｘ１で採取される血液サンプルにおけるｈＧＨ及び／又はそのアイソフォームの前記決定されたレベルと、時点Ｘ２で採取される血液サンプルにおけるｈＧＨ及び／又はそのアイソフォームの前記決定されたレベルとを比較し、
・ここで、時点Ｘ１で採取された血液サンプルにおけるｈＧＨ及び／又はそのアイソフォームの前記レベルと比較して、時点Ｘ２で採取された血液サンプルにおけるｈＧＨ及び／又はそのアイソフォームのより低いレベルが、治療応答を示唆する、
方法。
【請求項２１】
時点Ｘ１で採取される前記血液サンプルにおけるｈＧＨ及び／又はそのアイソフォームの前記決定されたレベルが、所定の閾値以上であり、及び、前記対象が抗高血圧薬（例えば、アンギオテンシン変換酵素インヒビター（ＡＣＥインヒビター）、アンギオテンシン受容体ブロッカー（ＡＲＢ）、β−アドレナリン受容体ブロッカー（β−ブロッカー）及び／又はスタチン）を用いた血圧降下療法により低下させられ得る血管リスクを有するものとして同定されている、
請求項２０に記載の、抗高血圧薬（例えば、アンギオテンシン変換酵素インヒビター（ＡＣＥインヒビター）、アンギオテンシン受容体ブロッカー（ＡＲＢ）、β−アドレナリン受容体ブロッカー（β−ブロッカー）及び／又はスタチン）により処置される、血管リスクにおける、対象の治療応答をモニターするための方法。
【請求項２２】
前記時点Ｘ１が、治療の開始の前である、
請求項２０又は２１に記載の、抗高血圧薬（例えば、アンギオテンシン変換酵素インヒビター（ＡＣＥインヒビター）、アンギオテンシン受容体ブロッカー（ＡＲＢ）、β−アドレナリン受容体ブロッカー（β−ブロッカー）及び／又はスタチン）により処置される、血管リスクにおける、対象の治療応答をモニターするための方法。
【請求項２３】
前記時点Ｘ２が、時点Ｘ１の後の１２か月、２４ケ月又は３６ヶ月である、
請求項２０〜２２の何れか１項に記載の、抗高血圧薬（例えば、アンギオテンシン変換酵素インヒビター（ＡＣＥインヒビター）、アンギオテンシン受容体ブロッカー（ＡＲＢ）、β−アドレナリン受容体ブロッカー（β−ブロッカー）及び／又はスタチン）により処置される、血管リスクにおける、対象の治療応答をモニターするための方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明の主題は、対象が、抗高血圧薬（例えば、アンギオテンシン変換酵素インヒビター（ＡＣＥインヒビター）、アンギオテンシン受容体ブロッカー（ＡＲＢ）、β−アドレナリン受容体ブロッカー（β−ブロッカー））又はＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビター（スタチン）を用いた血圧降下療法により低下させられ得る血管リスクを有するかどうかを決定する方法であり、
・前記対象の血液サンプルにおけるｈＧＨ及び／又はそのアイソフォームのレベルを決定する工程、及び
・前記血液サンプル中のｈＧＨ及び／又はそのアイソフォームの前記決定されたレベルと、所定の閾値とを比較する工程、を包含し、ここで
・ｈＧＨ及び／又はそのアイソフォームの決定されたレベルが前記所定の閾値を上回る場合、前記対象は、抗高血圧薬（例えば、アンギオテンシン変換酵素インヒビター（ＡＣＥインヒビター）、アンギオテンシン受容体ブロッカー（ＡＲＢ）、β−アドレナリン受容体ブロッカー（β−ブロッカー）及び／又はスタチン）を用いた血圧降下療法により低下させられ得る血管リスクを有するものとして同定され、及び
・ｈＧＨ及び／又はそのアイソフォームの決定されたレベルが前記所定の閾値未満である場合、対象は、抗高血圧薬（例えば、アンギオテンシン変換酵素インヒビター（ＡＣＥインヒビター）、アンギオテンシン受容体ブロッカー（ＡＲＢ）、β−アドレナリン受容体ブロッカー（β−ブロッカー）及び／又はスタチン）を用いた血圧降下療法により低下させられ得る血管リスクを有さないものとして同定される。
【背景技術】
【０００２】
好結果をもたらす薬理学的介入のために心血管疾患を罹患しているか、又はその疾患を発症する危険性がある患者の識別化のためへのバイオマーカーの使用が、主に知られている。しかしながら、これは、血管作用性又は炎症活性に関連するバイオマーカーにこれまで制限されて来た。例えば、国際公開第２０１０／１２８０７１号、Ｒｉｃｈａｒｄｓ  ＡＭ，ｅｔ  ａｌ．Ａｕｓｔｒａｌｉａ−Ｎｅｗ  Ｚｅａｌａｎｄ  Ｈｅａｒｔ  Ｆａｉｌｕｒｅ  Ｇｒｏｕｐ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｏｌｌｅｇｅ  ｏｆ  Ｃａｒｄｉｏｌｏｇｙ  ２００１，３７（７）：１７８１−１７８７、及びＲｉｄｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ：Ｔｈｅ  Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ２００８，３５９（２１）：２１９５−２２０７。
【０００３】
ヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）は、この文脈においては、これまでに記載されたことがない。正常集団（特に、男性）における比較的高レベルの血漿ｈＧＨが、国際公開第２０１４／１０８３９６号によれば、起こりうる有害な心臓イベントの高められた発症リスクに関連していることのみが知られている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
ここで、本発明者は、対象における高レベルの血漿ｈＧＨ及び／又はそのアイソフォームが高血圧薬（例えば、アンギオテンシン変換酵素インヒビター（ＡＣＥインヒビター）、アンギオテンシン受容体ブロッカー（ＡＲＢ）、β−アドレナリン受容体ブロッカー（β−ブロッカー）及び／又はスタチン）による療法の成功と関連するが、ところがそのような療法は比較的低レベルの血漿ｈＧＨ及び／又はそのアイソフォームを有する患者では有効でないことを記載する。従って、対象におけるｈＧＨ及び／又はアイソフォームの測定が、薬理学的療法のために患者を分別することに適切である。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明の主題は、対象が、抗高血圧薬（例えば、アンギオテンシン変換酵素インヒビター（ＡＣＥインヒビター）、アンギオテンシン受容体ブロッカー（ＡＲＢ）、β−アドレナリン受容体ブロッカー（β−ブロッカー）及び／又はスタチン）を用いた血圧降下療法により低下させられ得る血管リスクを有するかどうかを決定する方法であり、
・前記対象の血液サンプルにおけるヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）及び／又はそのアイソフォームのレベルを決定し、及び
・前記血液サンプル中のｈＧＨ及び／又はそのアイソフォームの前記決定されたレベルと、所定の閾値とを比較する工程を包含し、ここで
・ｈＧＨ及び／又はそのアイソフォームの決定されたレベルが前記所定の閾値を上回る場合、対象は、抗高血圧薬（例えば、アンギオテンシン変換酵素インヒビター（ＡＣＥインヒビター）、アンギオテンシン受容体ブロッカー（ＡＲＢ）、β−アドレナリン受容体ブロッカー（β−ブロッカー）及び／又はスタチン）を用いた血圧降下療法により低下させられ得る血管リスクを有するものとして同定され、及び
・ｈＧＨ及び／又はそのアイソフォームの決定されたレベルが前記所定の閾値未満である場合、対象は、抗高血圧薬（例えば、アンギオテンシン変換酵素インヒビター（ＡＣＥインヒビター）、アンギオテンシン受容体ブロッカー（ＡＲＢ）、β−アドレナリン受容体ブロッカー（β−ブロッカー）及び／又はスタチン）を用いた血圧降下療法により低下させられ得る血管リスクを有さないものとして同定される。
【図面の簡単な説明】
【０００６】
【図１】図１は、典型的なｕｓ−ｈＧＨアッセイの用量／シグナル曲線を示す。
【図２】図２は、三分位値１においてｈＧＨ濃度を有する患者におけるＭＡＣＥに対するＡＣＥ／ＡＲＢ処置の有効性についてのカプラン−マイヤープロットを示す。
【図３】図３は、三分位値２においてｈＧＨ濃度を有する患者におけるＭＡＣＥに対するＡＣＥ／ＡＲＢ処置の有効性についてのカプラン−マイヤープロットを示す。
【図４】図４は、三分位値３においてｈＧＨ濃度を有する患者におけるＭＡＣＥに対するＡＣＥ／ＡＲＢ処置の有効性についてのカプラン−マイヤープロットを示す。
【図５】図５は、三分位値１においてｈＧＨ濃度を有する患者におけるＭＡＣＥに対するβ−ブロッカー処置の有効性についてのカプラン−マイヤープロットを示す。
【図６】図６は、三分位値２においてｈＧＨ濃度を有する患者におけるＭＡＣＥに対するβ−ブロッカー処置の有効性についてのカプラン−マイヤープロットを示す。
【図７】図７は、三分位値３においてｈＧＨ濃度を有する患者におけるＭＡＣＥに対するβ−ブロッカー処置の有効性についてのカプラン−マイヤープロットを示す。
【図８】図８は、それぞれ、三分位値１、２及び３においてｈＧＨ濃度を有する患者におけるＭＡＣＥに対するβ−ブロッカー又はＡＣＥ／ＡＲＢ処置の有効性についてのカプラン−マイヤープロットを示す。
【発明を実施するための形態】
【０００７】
１つの特定の実施形態によれば、前記対象は、高血圧（少なくとも＞１４０ｍｍＨＧ（収縮期）〜９０ｍｍＨＧ（拡張期））を有さない。
【０００８】
１つの特定の実施形態によれば、前記対象は、抗高血圧薬（例えば、アンギオテンシン変換酵素インヒビター（ＡＣＥインヒビター）、アンギオテンシン受容体ブロッカー（ＡＲＢ）、β−アドレナリン受容体ブロッカー（β−ブロッカー）及び／又はスタチン）によりまだ治療されたことはない。
【０００９】
１つの実施態様によれば、対象における血圧を低下させることによる血管リスクの低減とは、前記対象における主要心血管イベント及び／又は心血管疾患の予防を意味する。
【００１０】
本発明の方法の１つの特定の実施形態によれば、前記対象は、過去２週間以内、好ましくは過去１週間以内、好ましくは過去３６時間以内に、急性心筋梗塞又は急性心不全に罹患している。
【００１１】
本発明の方法の１つの特定の実施形態によれば、前記対象は、主要心血管イベントをこれまでに有したことがなく、及び、何れの心血管疾患もこれまでに有したことがない。本発明の別の特定の実施形態によれば、前記対象は、頸動脈プラークを有するが、しかし頸動脈疾患の症状はない。アテローム性動脈硬化症の存在を検出し、そしてその退行、停止又は進行をモニターする確立された方法は、内膜−中膜厚（ＩＭＴ）の測定である（ｄｅ  Ｇｒｏｏｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｃａｒｄｉｏｌｏｇｙ  ５，２８０−２８８（Ｍａｙ  ２００８）｜ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｃｐｃａｒｄｉｏ１１６３）。これは、動脈の壁の最も内側の２つの層である内膜及び中膜の厚さの測定である。測定は通常、外部超音波により、場合によっては、内部侵襲性超音波カテーテルにより行われる。ＦＤＡは、臨床試験における適用のためのアテローム性動脈硬化症の代理マーカーとしてＩＭＴを承認している。ＩＭＴの程度は、薬物の有効性を伴う、心血管の結果及びその経時的変化（１年当たりのＩＭＴの統計学的有意性）に関連している（ｄｅ  Ｇｒｏｏｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｃａｒｄｉｏｌｏｇｙ  ５，２８０−２８８（Ｍａｙ  ２００８）｜ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｃｐｃａｒｄｉｏ１１６３；Ｈｅｄｂｌａｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ．２００１；１０３：１７２１−１７２６．）。
【００１２】
前記主要心血管イベント又は心血管疾患は、心不全、アテローム性動脈硬化症、高血圧、心筋症、心筋梗塞及び脳卒中を包含する群から選択され得る。
【００１３】
本発明の１つの実施形態によれば、前記対象は雄である。
【００１４】
本発明の方法の１つの実施形態によれば、前記方法は、主要心血管イベントの予防、又は心血管疾患の予防のために使用される。
【００１５】
前記主要血管イベントは、心筋梗塞、急性心不全、発作及び心臓血管死を包含する群から選択され得る。
【００１６】
前記血液サンプルは、全血、血清及び血漿を包含する群から選択され得る。
【００１７】
本発明の１つの実施形態によれば、血液サンプルは、空腹時サンプルである。
【００１８】
空腹時サンプルとは、血液サンプリングの少なくとも８時間前、何れの食物又は溶解された栄養物も消化していない対象から採取されたサンプルを意味する。特定の実施形態によれば、そのような空腹時サンプルは、対象が少なくとも８時間、絶食した後、午前７：００〜１１：３０の間に対象から採取される。
【００１９】
別の実施形態によれば、成長ホルモン（ｈＧＨ）の空腹時レベルとは、サンプル採取の１２時間前に食物摂取しなかった絶食された対象の血液、血清又は血漿において決定された成長ホルモン（ｈＧＨ）のレベルを意味する。前記実施形態によれば、絶食された対象とは、サンプル採取の１２時間前、食物摂取をしなかった対象を意味する。
【００２０】
用語「対象（ｓｕｂｊｅｃｔ）」とは、本明細書において使用される場合、生存するヒト又は非ヒト生物を言及する。好ましくは、本明細書においては、対象は、ヒト対象である。対象は、特に言及されなければ、健康であっても又は病的であっても良い。用語「高められたレベル（ｅｌｅｖａｔｅｄ  ｌｅｖｅｌ）」とは、一定の閾値以上のレベルを意味する。
【００２１】
本発明の１つの特定の実施形態によれば、ｈＧＨ及び／又はそのアイソフォームのレベルを決定するために使用される測定方法又はアッセイは、２０％を越えないアッセイ間ＣＶを伴う、絶食した健康な、好ましくは少なくとも４０歳の男性からの正常範囲の最も低い第９５パーセンタイルを定量化するために十分である、分析感度を有する。そのアッセイの例は、国際公開第２０１４／１０８３９６号に記載されている。
【００２２】
アッセイ感度は、例えばｈＧＨ枯渇（ｄｅｐｌｅｔｅｄ）サンプルの２０回の測定値の中央シグナル＋２標準偏差（ＳＤ）のｈＧＨ濃度（標準曲線読出し）として定義される「分析」アッセイ感度により定義され得る。
【００２３】
他方では、アッセイ感度は、臨床ルーチンにおける検出限界をより反映する「機能的（ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ）」アッセイ感度により定義され得る。機能的アッセイ感度は、異なったＧＨ濃度を有する種々の個々のサンプルにおける血漿（患者サンプル）のアッセイ間変動係数（ＣＶ）の決定として定義される。機能的アッセイ感度は、最も低いｈＧＨ濃度であり、アッセイ間ＣＶは２０％未満である。
【００２４】
アッセイ感度は、較正の使用方法、及び使用されるｈＧＨアッセイに依存する。異なるｈＧＨアッセイは、異なるセットのｈＧＨアイソフォームを検出することができ、アッセイ及び使用される較正方法に依存することを必要とする、異なる閾値及び感度をもたらすことを意味する異なる定量的結果を導く。
【００２５】
異なるｈＧＨアッセイの当該可能性ある不均一性を克服するために、アッセイ較正が、個々の対象の血漿ｈＧＨ値を相関させることにより補正され得る。相関曲線の傾きが１とは異なる場合、ｈＧＨ値（較正）は、同等の較正、同等の感度分析及び同等の閾値をもたらす差分要素（ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ  ｆａｃｔｏｒ）により補正され得る。
【００２６】
上記補正は、異なるアッセイにより得られる結果を比較するために、実施され得る。
【００２７】
実施例１に記載されるアッセイは、主にｈＧＨアイソフォーム１を認識し、そして組換えヒト成長ホルモン（ＮＩＢＳＣ  ｃｏｄｅ  ９８／５７４，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｓｔａｎｄａｒｄｓ  ａｎｄ  Ｃｏｎｔｒｏｌ，Ｈｅｒｆｏｒｄｓｈｉｒｅ，ＵＫ）により較正される。
【００２８】
本発明の特定の方法によれば、体液中の成長ホルモン（ｈＧＨ）及び／又はそのアイソフォームの前記空腹時レベルは、１００ｐｇ／ｍＬ未満、好ましくは５０ｐｇ／ｍＬ未満、好ましくは３０ｐｇ／ｍＬ未満、好ましくは２０ｐｇ／ｍＬ未満、好ましくは１０ｐｇ／未満、好ましくは５ｐｇ／ｍＬ未満、好ましくは２ｐｇ／ｍＬの分析アッセイ感度（ｈＧＨ枯渇サンプルの２０の測定値の中央シグナル＋２標準偏差（ＳＤ）でのｈＧＨ濃度として定義される）を有する超高感度アッセイにより決定される。ｈＧＨの測定値は、ｎｇ／ｍＬ（１ｎｇ／ｍＬ＝２．６ｍＵ／Ｌ）で表される。
【００２９】
他方では、４００ｐｇ／ｍＬ未満、好ましくは２００ｐｇ／ｍＬ未満、好ましくは１２０ｐｇ／ｍＬ未満、好ましくは８０ｐｇ／ｍＬ未満、好ましくは４０ｐｇ／ｍＬ未満、好ましくは２０ｐｇ／ｍＬ未満、好ましくは１０ｐｇ／ｍＬ未満、最も好ましくは８．５ｐｇ／ｍＬ未満の機能的アッセイ感度（上記を参照のこと）を有する超高感度アッセイが使用される。ｈＧＨの測定値は、ｎｇ／ｍＬで表される。
【００３０】
アッセイは、イムノアッセイ又は別の検出方法、例えば質量分析法であり得る。
【００３１】
免疫化及び較正のために、本発明者は、組み換えヒト成長ホルモン（ＮＩＢＳＣ  ｃｏｄｅ  ９８／５７４，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｓｔａｎｄａｒｄｓ  ａｎｄ  Ｃｏｎｔｒｏｌ，Ｈｅｒｆｏｒｄｓｈｉｒｅ，ＵＫ）を使用した。
【００３２】
本発明の１つの実施形態によれば、前記アッセイは実施例１に記載のようにして実施される。
【００３３】
前記アッセイは、１つの特定ｈＧＨアイソフォームのために選択的であるか、又は前記体液におけるｈＧＨアイソフォーム１、アイソフォーム２、アイソフォーム３及びアイソフォーム４（配列番号１〜４を参照のこと）を包含する群から選択されたｈＧＨの１以上又はすべての分泌されたアイソフォームを特定する。
【００３４】
成長ホルモン（ｈＧＨ）のアイソフォームは、ｈＧＨアイソフォーム１（２２ＫＤ）、ｈＧＨアイソフォーム２、ｈＧＨアイソフォーム３及びｈＧＨアイソフォーム４を包含する群から選択され得る。
【００３５】
アイソフォームの配列：
配列番号１:ｈＧＨアイソフォーム１（２２ＫＤ）
ＭＡＴＧＳＲＴＳＬＬＬＡＦＧＬＬＣＬＰＷＬＱＥＧＳＡＦＰＴＩＰＬＳＲＬＦＤＮＡＭＬＲＡＨＲＬＨＱＬＡＦＤＴＹＱＥＦＥＥＡＹＩＰＫＥＱＫＹＳＦＬＱＮＰＱＴＳＬＣＦＳＥＳＩＰＴＰＳＮＲＥＥＴＱＱＫＳＮＬＥＬＬＲＩＳＬＬＬＩＱＳＷＬＥＰＶＱＦＬＲＳＶＦＡＮＳＬＶＹＧＡＳＤＳＮＶＹＤＬＬＫＤＬＥＥＧＩＱＴＬＭＧＲＬＥＤＧＳＰＲＴＧＱＩＦＫＱＴＹＳＫＦＤＴＮＳＨＮＤＤＡＬＬＫＮＹＧＬＬＹＣＦＲＫＤＭＤＫＶＥＴＦＬＲＩＶＱＣＲＳＶＥＧＳＣＧＦ
【００３６】
配列番号２：ｈＧＨアイソフォーム２
ＭＡＴＧＳＲＴＳＬＬＬＡＦＧＬＬＣＬＰＷＬＱＥＧＳＡＦＰＴＩＰＬＳＲＬＦＤＮＡＭＬＲＡＨＲＬＨＱＬＡＦＤＴＹＱＥＦＮＰＱＴＳＬＣＦＳＥＳＩＰＴＰＳＮＲＥＥＴＱＱＫＳＮＬＥＬＬＲＩＳＬＬＬＩＱＳＷＬＥＰＶＱＦＬＲＳＶＦＡＮＳＬＶＹＧＡＳＤＳＮＶＹＤＬＬＫＤＬＥＥＧＩＱＴＬＭＧＲＬＥＤＧＳＰＲＴＧＱＩＦＫＱＴＹＳＫＦＤＴＮＳＨＮＤＤＡＬＬＫＮＹＧＬＬＹＣＦＲＫＤＭＤＫＶＥＴＦＬＲＩＶＱＣＲＳＶＥＧＳＣＧＦ
【００３７】
配列番号３：ｈＧＨアイソフォーム３
ＭＡＴＧＳＲＴＳＬＬＬＡＦＧＬＬＣＬＰＷＬＱＥＧＳＡＦＰＴＩＰＬＳＲＬＦＤＮＡＭＬＲＡＨＲＬＨＱＬＡＦＤＴＹＱＥＦＥＥＡＹＩＰＫＥＱＫＹＳＦＬＱＮＰＱＴＳＬＣＦＳＥＳＩＰＴＰＳＮＲＥＥＴＱＱＫＳＮＬＥＬＬＲＩＳＬＬＬＩＱＴＬＭＧＲＬＥＤＧＳＰＲＴＧＱＩＦＫＱＴＹＳＫＦＤＴＮＳＨＮＤＤＡＬＬＫＮＹＧＬＬＹＣＦＲＫＤＭＤＫＶＥＴＦＬＲＩＶＱＣＲＳＶＥＧＳＣＧＦ
【００３８】
配列番号４：ｈＧＨアイソフォーム４
ＭＡＴＧＳＲＴＳＬＬＬＡＦＧＬＬＣＬＰＷＬＱＥＧＳＡＦＰＴＩＰＬＳＲＬＦＤＮＡＭＬＲＡＨＲＬＨＱＬＡＦＤＴＹＱＥＦＥＥＡＹＩＰＫＥＱＫＹＳＦＬＱＮＰＱＴＳＬＣＦＳＥＳＩＰＴＰＳＮＲＥＥＴＱＱＫＳＮＬＥＬＬＲＩＳＬＬＬＩＱＳＷＬＥＰＶＱＩＦＫＱＴＹＳＫＦＤＴＮＳＨＮＤＤＡＬＬＫＮＹＧＬＬＹＣＦＲＫＤＭＤＫＶＥＴＦＬＲＩＶＱＣＲＳＶＥＧＳＣＧＦ
【００３９】
本発明の１つの特定の実施形態によれば、ｈＧＨ及び／又はそのアイソフォームのレベルを決定するために使用される測定方法は、少なくとも５０ｐｇ／ｍＬのアッセイ感度を有するアッセイである。
【００４０】
本発明の１つの特定の実施形態によれば、ｈＧＨ及び／又はそのアイソフォームのレベルを決定するために使用される測定方法は、少なくとも５０ｐｇ／ｍＬのアッセイ感度を有するイムノアッセイである。
【００４１】
本発明の１つの実施形態によれば、前記所定の閾値は、３３０ｐｇ／ｍＬ以上、好ましくは１３７０ｐｇ／ｍＬ以上である。本発明の１つの実施形態によれば、所定の閾値は、過去２週間以内、好ましくは過去１週間以内、好ましくは過去３６時間以内に急性心筋梗塞を罹患している対象において、３３０ｐｇ／ｍＬ以上、好ましくは１３７０ｐｇ／ｍＬ以上である。
【００４２】
１つの実施形態によれば、閾値は以下のようにして予め決定され得る：
・前記対象から得られた体液中のｈＧＨ及び／又はそのアイソフォームの濃度と、前記対象と同等の基本条件を有する、ランダムに選択された対象集団における所定のサンプルのアンサンブルから得られた体液中のｈＧＨ及び／又はそのアイソフォームのレベルの中央値との比較、
・前記対象から得られた体液中のｈＧＨ及び／又はそのアイソフォームの濃度と、前記対象と同等の基本条件を有する、対象集団における所定のサンプルのアンサンブルから得られた体液中のｈＧＨ及び／又はそのアイソフォームのレベルの分位値との比較、
・Ｃｏｘ  Ｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎａｌ  Ｈａｚａｒｄｓ分析に基づいて、又はリスク指標計算、例えばＮＲＩ（Ｎｅｔ  Ｒｅｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ  Ｉｎｄｅｘ）又はＩＤＩ（Ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ  Ｄｉｓｃｒｉｍｉｎａｔｉｏｎ  Ｉｎｄｅｘ）を用いることによる計算。
【００４３】
当業者は、所定の閾値が、使用されるアッセイ、使用される較正方法及び他の要因の文脈において見られるべきであることを理解している。
【００４４】
本発明の主題は、成長ホルモン（ｈＧＨ）及び／又はそのアイソフォームのレベル、このましくは空腹時レベルが、成長ホルモン（ｈＧＨ）及び／又はそのアイソフォームにバインダー（ｂｉｎｄｅｒ）を用いることにより決定される方法である。
【００４５】
本発明の１つの実施形態によれば、前記接合剤は、抗体、抗体フラグメント、又は成長ホルモン（ｈＧＨ）及び／又はそのアイソフォームに結合する非−Ｉｇ−スキャフォールドを包含する群から選択される。
【００４６】
本発明の１つの特定の実施形態によれば、ｈＧＨ及び／又はそのアイソフォームに結合する少なくとも２種の抗体を含むイムノアッセイが使用される。
【００４７】
本発明によれば、診断バインダーは、抗体、例えばＩｇＧ、典型的な全長免疫グロブリン、又は、Ｈ鎖及び／又はＬ鎖のＦ−可変ドメインを少なくとも含む抗体フラグメント（例えば化学的にカップリングされた抗体（フラグメント抗原結合）としての抗体フラグメント：限定されないが、Ｆａｂミニボディ、単鎖Ｆａｂ抗体、エピトープタグを有する単価Ｆａｂ抗体を含むＦａｂ−フラグメント、例えばＦａｂＶ５Ｓｘ２を包含する）；ＣＨ３ドメインにより二量体化された二価Ｆａｂ（ミニ抗体）；異種ドメインの援助による多量体化、例えばｄＨＬＸドメインの二量体化を通して形成された二価Ｆａｂ又は多価Ｆａｂ、例えばＦａｂ−ｄＨＬＸ−ＦＳｘ２；Ｆ（ａｂ’）２−フラグメント、ｓｃＦｖ−フラグメント、多量体化された多価及び／又は多重特異的ｓｃＦｖ−フラグメント、二価及び／又は二重特異的ダイアボディ―、ＢＩＴＥ（登録商標）（二重特異的Ｔ細胞エンゲージャ―）、三機能性抗体、多価抗体（例えば、Ｇ以外の異なった種類からの）；単一ドメイン抗体、例えばラクダ又は魚類免疫グロブリン由来のナノボディー、から成る群から選択される。
【００４８】
好ましい実施形態によれば、ｈＧＨ及び／又はそのアイソフォームに結合する少なくとも２つの抗体の個々は、少なくとも１０7Ｍ-1、好ましくは１０8Ｍ-1のｈＧＨ及び／又はそのアイソフォームに対する親和性を有し、好ましくは、親和性定数は、１０9Ｍ-1以上、最も好ましくは１０10Ｍ-1以上である。当業者は、より多い用量の化合物の適用により、低い親和性を補うことが考えられ得、そしてこの措置が本発明の範囲外になることはないことを知っている。結合親和性は、Ｂｉａｆｆｉｎ，Ｋａｓｓｅｌ，Ｇｅｒｍａｎｙ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｂｉａｆｆｉｎ．ｃｏｍ／ｄｅ／）で、サービス分析として提供されるＢｉａｃｏｒｅ法を用いて決定され得る。
【００４９】
抗体の親和性を決定するために、固定された抗体へのｈＧＨの結合の動態は、Ｂｉａｃｏｒｅ  ２０００システム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｅｕｒｏｐｅ  ＧｍｂＨ，Ｆｒｅｉｂｕｒｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を用いて、ラベルフリーの表面プラズモン共鳴により決定された。抗体の可逆的固定化が、製造業者の説明書（マラス抗体捕捉キット；ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に従って、ＣＭ５センサー表面に高密度で共有結合される抗−マウスＦｃ抗体を用いて実施された（Ｌｏｒｅｎｚ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ＩｓａＡ  ｏｆ  Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ  Ａｕｇｍｅｎｔ  Ｈｏｓｔ  Ｉｍｍｕｎｅ  Ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ａｎｄ  Ｏｐｅｎ  Ｎｅｗ  Ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅｓ  ｆｏｒ  Ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ  Ｔｈｅｒａｐｙ”；Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ  Ａｇｅｎｔｓ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．２０１１  Ｊａｎｕａｒｙ；５５（１）：１６５-１７３）。
【００５０】
抗体の他に、他のバイオポリマースキャフォールドは、標的分子を複合体化することが当該技術分野において良く知られており、そして高い標的特異的バイオポリマーの生成のために使用されて来た。例としては、アプタマー、シュピーゲルマー、アンチカリン及びコノトキシンを挙げることができる。非−Ｉｇスキャフォールドは、タンパク質スキャフォールドであり得、そしてそれらはリガンド又は抗原に結合できるので、抗体模倣体として使用され得る。非−Ｉｇスキャフォールドは、次のものを包含する群から選択され得る：テトラネクチンベースの非−Ｉｇスキャフォールド（例えば、米国特許第２０１０／００２８９９５号に記載される）、フィブロネクチンスキャフォールド（例えば、欧州特許第１２６６０２５号に記載される）、リポカリンベースのスキャフォールド（例えば、国際公開第２０１１／１５４４２０号に記載される）、ユビキチンスキャフォールド（例えば、国際公開第２１１／０７３２１４号に記載される）、トランスファーリング（ｔｒａｎｓｆｅｒｒｉｎｇ）スキャフォールド（例えば、米国特許第２００４／００２３３３４号に記載される）、プロテインＡスキャフォールド（例えば、欧州特許第２２３１８６号に記載される）、アンキリンリピートベースのスキャフォールド（例えば、国際公開第２０１０／０６０７４８号に記載される）、マイクロタンパク質（好ましくはシスチンノットを形成するマイクロタンパク質）スキャフォールド（例えば、欧州特許第２３１４３０８号に記載される）、Ｆｙｎ  ＳＨ３ドメインベースのスキャフォールド（例えば、国際公開第２０１１／０２３６８５号に記載される）、ＥＧＦＲ−Ａ−ドメインベースのスキャフォールド（例えば、国際公開第２００５／０４０２２９号に記載される）、及びＫｕｎｉｔｚドメインベースのスキャフォールド（例えば、欧州特許第１９４１８６７号に記載される）。
【００５１】
本発明の１つの実施形態によれば、それは、完全自動化アッセイシステムを必要とせずに、患者の近くで１時間以内に試験を行うことを可能にする試験技術である、いわゆるＰＯＣ試験（ポイントオブケア）であり得る。この技法についての１つの例は、イムノクロマトグラフィー試験技法である。
【００５２】
本発明の１つの実施形態によれば、そのようなアッセイは、酵素標識、化学発光標識、電気化学発光標識、好ましくは完全自動化アッセイ（それらだけには制限されない）を包含する任意の種類の検出技法を用いるサンドイッチイムノアッセイである。本発明の１つの実施形態によれば、そのようなアッセイは、酵素標識化されたサンドイッチアッセイである。自動又は完全自動化アッセイの例は、次のシステムの１つに使用され得るアッセイを包含する：Ｒｏｃｈｅ  Ｅｌｅｃｓｙｓ（登録商標）、Ａｂｂｏｔｔ  Ａｒｃｈｉｔｅｃｔ（登録商標）、Ｓｉｅｍｅｎｓ  Ｃｅｎｔａｕｅｒ（登録商標）、Ｂｒａｈｍｓ  Ｋｒｙｐｔｏｒ（登録商標）、Ｂｉｏｍｅｒｉｅｕｘ  Ｖｉｄａｓ（登録商標）、Ａｌｅｒｅ  Ｔｒｉａｇｅ（登録商標）。
【００５３】
種々のイムノアッセイが知られており、そして本発明のアッセイ及び方法のために使用され得、それらは次のものを包含する：ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、同種酵素増幅イムノアッセイ（ＥＭＩＴ）、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、アポ酵素再活性化イムノアッセイ（ＡＲＩＳ）、ディップスティックイムノアッセイ及び免疫クロマトグラフィーアッセイ。
【００５４】
本発明の１つの実施形態によれば、前記２種のバインダーの少なくとも１つは、検出されるために標識される。
【００５５】
好ましくは、検出方法は、様々なフォーマットでのイムノアッセイ、例えばラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、化学発光及び蛍光イムノアッセイ、酵素結合イムノアッセイ（ＥＬＩＳＡ）、Ｌｕｍｉｎｅｘベースのビーズアレイ、タンパク質マイクロアレイアッセイ、及び迅速なテストフォーマット、例えば免疫クロマトグラフィーストリップ試験を包含する。
【００５６】
好ましい実施形態によれば、前記標識は、化学発光標識、酵素標識、蛍光標識、放射性ヨウ素標識を含む群から選択される。
【００５７】
アッセイは、同種又は異種アッセイ、競争及び非競争アッセイであり得る。１つの実施形態によれば、アッセイは、非競争イムノアッセイであるサンドイッチアッセイの形態であり、ここで、検出される及び／又は定量化される分子は、第１抗体及び第２抗体に結合されている。第１抗体は、固相、例えばビーズ、ウェル又は他の容器の表面、チップ又はストリップに結合され得、そして第２抗体は、例えば色素、放射性同位体、又は反応性又は触媒活性部分により標識される抗体である。次に、分析物に結合された標識抗体の量が、適切な方法により測定される。「サンドイッチアッセイ」により包含される一般的な組成及び方法は、十分に確立されており、そして当業者に知られている（Ｌｕｄｖｉｇｓｓｏｎ  Ｊ，Ａｎｄｅｒｓｓｏｎ  Ｅ，Ｅｋｂｏｍ  Ａ，Ｆｅｙｃｈｔｉｎｇ  Ｍ，Ｋｉｍ  Ｊ−Ｌ，Ｒｅｕｔｅｒｗａｌｌ  Ｃ，ｅｔ  ａｌ．Ｅｘｔｅｒｎａｌ  ｒｅｖｉｅｗ  ａｎｄ  ｖａｌｉｄａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｓｗｅｄｉｓｈ  ｎａｔｉｏｎａｌ  ｉｎｐａｔｉｅｎｔ  ｒｅｇｉｓｔｅｒ．ＢＭＣ  Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ．２０１１；１１（１）：４５０）。
【００５８】
別の実施形態によれば、アッセイは２種の捕獲分子、好ましくは液体反応混合物において分散体として両者とも存在する抗体を含み、分析物への両捕獲分子の結合に基づいて、サンプルを含む溶液中で形成されるサンドイッチ複合体の検出を可能にする測定可能シグナルが生成されるように、ここで第１標識成分は、第１捕獲分子に結合され、ここで前記第１標識成分は蛍光−又は化学発光−消光又は増幅に基づく標識系の一部であり、そして前記マーキングシステムの第２標識成分は、第２捕獲分子に結合されている。
【００５９】
別の実施形態によれば、前記標識系は、蛍光色素又は化学発光色素、特にシアニン型の色素と組合して、希土類クリプテート又は希土類キレートを含む。
【００６０】
本発明によれば、蛍光ベースのアッセイは、例えば、ＦＡＭ（５−又は６−カルボキシフルオレセイン）、ＶＩＣ、ＮＥＤ、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）、ＩＲＤ−７００/８００、シアニン色素、例えば、ＣＹ３、ＣＹ５、ＣＹ３．５、ＣＹ５．５、Ｃｙ７、キサンテン、６−カルボキシ−２’,４’,７’,４，７−ヘキサクロロフルオレセイン（ＨＥＸ）、ＴＥＴ、６−カルボキシ−４',５’−ジクロロ−２',７’−ジメトキシフルオレセイン（ＪＯＥ）、Ｎ,Ｎ,Ｎ',Ｎ’−テトラメチル−６−カルボキシローダミン（ＴＡＭＲＡ）、６−カルボキシ−Ｘ−ローダミン（ＲＯＸ）、５−カルボキシローダミン−６Ｇ（Ｒ６Ｇ５）、６−カルボキシローダミン−６Ｇ（ＲＧ６）、ローダミン、ローダミングリーン、ローダミンレッド、ローダミン１１０、ＢＯＤＩＰＹ色素、例えばＢＯＤＩＰＹ ＴＭＲ、オレゴングリーン、クマリン、例えばウンベリフェロン、ベンズイミド、例えばＨｏｅｃｈｓｔ３３２５８；フェナントリジン、例えばテキサスレッド、ヤキマイエロー、アレクサフルオロ、ＰＥＴ、臭化エチジウム、アクリジニウム色素、カルバゾール色素、フェノキサジン色素、ポルフィリン色素、ポリメチン色素、及び同様のものを包含する群から選択され得る色素の使用を包含する。
【００６１】
本発明によれば、化学発光ベースのアッセイは、Ｄ'Ａｇｏｓｔｉｎｏ  ＲＢ，Ｓｒ．，Ｖａｓａｎ  ＲＳ，Ｐｅｎｃｉｎａ  ＭＪ，Ｗｏｌｆ  ＰＡ，Ｃｏｂａｉｎ  Ｍ，Ｍａｓｓａｒｏ  ＪＭ，ｅｔ  ａｌ．Ｇｅｎｅｒａｌ  ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ  ｒｉｓｋ  ｐｒｏｆｉｌｅ  ｆｏｒ  ｕｓｅ  ｉｎ  ｐｒｉｍａｒｙ  ｃａｒｅ：ｔｈｅ  Ｆｒａｍｉｎｇｈａｍ  Ｈｅａｒｔ  Ｓｔｕｄｙ．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ．２００８；１１７（６）：７４３−５３．Ｅｐｕｂ  ２００８／０１／２４に化学発光材料について記載される物理的原理に基づいて、色素の使用を包含する。好ましい化学発光色素は、アクリジニウムエステルである。
【００６２】
本明細書において言及される場合、「アッセイ（ａｓｓａｙ）」又は「診断アッセイ」とは、診断の分野に適用される任意のタイプのものであり得る。そのようなアッセイは、一定の親和性で１以上の捕獲プローブに対する、検出される分析物の結合に基づいてもよい。捕獲分子と標的分子又は目的の分子との間の相互作用に関して、親和性定数は好ましくは、１０8Ｍ-1よりも大きい。
【００６３】
本発明によれば、「バインダー分子（ｂｉｎｄｅｒ  ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ）」とは、サンプルからの標的分子又は目的の分子、すなわち分析物（すなわち、本発明によれば、ｈＧＨ及び／又はそのアイソマー）を結合するために使用され得る分子である。従って、バインダー分子は、標的分子又は目的の分子を特異的に結合するために、表面電荷、疎水性、親水性、ルイスドナー及び／又は受容体の存在又は非存在などの空間的特徴及び表面特徴の両者において適切に成形されるべきである。これにより、結合は例えば、イオン性、ファンデルワールス、ｐｉ−ｐｉ、シグマ−ｐｉ、疎水性又は水素結合相互作用、又は捕獲分子と標的分子又は目的の分子との間の前述の相互作用の２つ以上の組み合わせにより媒介され得る。本発明によれば、バインダー分子は例えば、核酸分子、炭水化物分子、ＰＮＡ分子、タンパク質、抗体、ペプチド又は糖タンパク質を包含する群から選択され得る。好ましくは、バインダー分子は、目的の標的又は分子に対して十分な親和性を有するそのフラグメントを含み、かつ、組換え抗体又は組換え抗体フラグメント、並びに、少なくともその１２個の長さのアミノ酸を有する変異鎖由来の前記抗体若しくはフラグメントの化学的及び／又は生化学的に修飾された誘導体を含む、抗体である。
【００６４】
化学発光標識は、アクリジニウムエステル標識、ステロイド標識、例えばイソルミノール標識及び同様のものであり得る。
【００６５】
酵素標識は、乳酸デヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ）、クレアチニンキナーゼ（ＣＰＫ）、アルカリホスファターゼ、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）、酸性ホスファターゼ、グルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼ、等であり得る。
【００６６】
本発明の１つの実施形態によれば、前記２種のバインダーの少なくとも１つは、磁気粒子として固相に及びポリスチレン表面に結合される。
【００６７】
本発明に従ってサンプル中の成長因子（ｈＧＨ）及び／又はそのアイソフォームのレベルを決定するためのアッセイの１つの実施形態によれば、そのようなアッセイは、サンドイッチアッセイ、好ましくは完全自動化アッセイである。それは、完全自動化された又は手動性ＥＬＩＳＡであり得る。それは、いわゆるＰＯＣ−試験（ポイントオブケア）であり得る。自動又は完全自動アッセイの例は、次のシステムの１つに使用され得るアッセイを包含する：Ｒｏｃｈｅ  Ｅｌｅｃｓｙｓ（登録商標）、Ａｂｂｏｔｔ  Ａｒｃｈｉｔｅｃｔ（登録商標）、Ｓｉｅｍｅｎｓ  Ｃｅｎｔａｕｅｒ（登録商標）、Ｂｒａｈｍｓ  Ｋｒｙｐｔｏｒ（登録商標）、Ｂｉｏｍｅｒｉｅｕｘ  Ｖｉｄａｓ（登録商標）、Ａｌｅｒｅ  Ｔｒｉａｇｅ（登録商標）。試験フォーマットの例は、上記に提供される。
【００６８】
本発明に従ってサンプル中の成長因子（ｈＧＨ）及び／又はそのアイソフォームのレベルを決定するためのアッセイの１つの実施形態によれば、前記２種のバインダーの少なくとも１つは、検出されるために標識される。標識の例は、上記に提供される。
【００６９】
本発明に従ってサンプル中の成長因子（ｈＧＨ）及び／又はそのアイソフォームのレベルを決定するためのアッセイの１つの実施形態によれば、前記２種のバインダーの少なくとも１つは、固相に結合される。固相の例は、上記に提供される。
【００７０】
本発明に従ってサンプル中の成長因子（ｈＧＨ）及び／又はそのアイソフォームのレベルを決定するためのアッセイの１つの実施形態によれば、前記標識は、化学発光標識、酵素標識、蛍光標識、放射性ヨウ素標識を包含する群から選択される。
【００７１】
本発明のさらなる主題は、本発明のアッセイを包含するキットであり、ここで前記アッセイの成分は１又は２以上の容器に含まれ得る。
【００７２】
本発明の１つの実施形態によれば、ｈＧＨ及び／又はそのアイソフォームのレベルは、質量分析により決定される。
【００７３】
１つの特定の実施形態によれば、本発明の前記方法は、前記対象の血管リスクをモニターするために使用される。従って、本発明の主題はまた、対象が、抗高血圧薬（例えば、アンギオテンシン変換酵素インヒビター（ＡＣＥインヒビター）、アンギオテンシン受容体ブロッカー（ＡＲＢ）、β−アドレナリン受容体ブロッカー（β−ブロッカー）及び／又はスタチン）を用いた血圧降下療法により低下させられ得る血管リスクを有するかどうかを、年に少なくとも２回、好ましくは年１回、決定するための方法でもあり、ここで前記方法は、
・前記対象の血液サンプルにおけるヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）及び／又はそのアイソフォームのレベルを決定し、及び
・前記血液サンプル中のｈＧＨ及び／又はそのアイソフォームの前記決定されたレベルと、所定の閾値とを比較する工程を包含し、ここで
・ｈＧＨ及び／又はそのアイソフォームの決定されたレベルが前記所定の閾値を上回る場合、対象は、抗高血圧薬（例えば、アンギオテンシン変換酵素インヒビター（ＡＣＥインヒビター）、アンギオテンシン受容体ブロッカー（ＡＲＢ）、β−アドレナリン受容体ブロッカー（β−ブロッカー）及び／又はスタチン）を用いた血圧降下療法により低下させられ得る血管リスクを有するものとして同定され、及び
・ｈＧＨ及び／又はそのアイソフォームの決定されたレベルが前記所定の閾値未満である場合、対象は、抗高血圧薬（例えば、アンギオテンシン変換酵素インヒビター（ＡＣＥインヒビター）、アンギオテンシン受容体ブロッカー（ＡＲＢ）、β−アドレナリン受容体ブロッカー（β−ブロッカー）及び／又はスタチン）を用いた血圧降下療法により低下させられ得る血管リスクを有さないものとして同定される。
【００７４】
前記モニタリング方法によれば、上記方法の工程は、年、少なくとも１回、実施される。
【００７５】
本発明の方法は、本発明の１つの実施形態において、さらに、
・ｈＧＨ及び／又はそのアイソフォームの決定されたレベルが、前記所定の閾値以上であり、及び、抗高血圧薬を用いた血圧降下療法により低下させられ得る血圧リスクを有するものとして同定されている対象への、抗高血圧薬（例えば、アンギオテンシン変換酵素インヒビター（ＡＣＥインヒビター）、アンギオテンシン受容体ブロッカー（ＡＲＢ）、β−アドレナリン受容体ブロッカー（β−ブロッカー）及び／又はスタチン）の投与の勧告、又は
・ｈＧＨ及び／又はそのアイソフォームの決定されたレベルが、前記所定の閾値以下であり、及び、抗高血圧薬を用いた血圧降下療法により低下させられ得る血圧リスクを有さないものとして同定されている対象への、抗高血圧薬（例えば、アンギオテンシン変換酵素インヒビター（ＡＣＥインヒビター）、アンギオテンシン受容体ブロッカー（ＡＲＢ）、β−アドレナリン受容体ブロッカー（β−ブロッカー）及び／又はスタチン）の留保の勧告、を包含する。
【００７６】
本発明の方法は、本発明の１つの実施形態によれば、さらに、
・ｈＧＨ及び／又はそのアイソフォームの決定されたレベルが、前記所定の閾値以上であり、及び、抗高血圧薬を用いた血圧降下療法により低下させられ得る血圧リスクを有するものとして同定されている対象への、抗高血圧薬（例えば、アンギオテンシン変換酵素インヒビター（ＡＣＥインヒビター）、アンギオテンシン受容体ブロッカー（ＡＲＢ）、β−アドレナリン受容体ブロッカー（β−ブロッカー）及び／又はスタチン）の投与、又は
・ｈＧＨ及び／又はそのアイソフォームの決定されたレベルが、前記所定の閾値以下であり、及び、抗高血圧薬を用いた血圧降下療法により低下させられ得る血圧リスクを有さないものとして同定されている対象への、抗高血圧薬（例えば、アンギオテンシン変換酵素インヒビター（ＡＣＥインヒビター）、アンギオテンシン受容体ブロッカー（ＡＲＢ）、β−アドレナリン受容体ブロッカー（β−ブロッカー）及び／又はスタチン）の留保、を包含する。
【００７７】
本発明の１つの実施形態によれば、高血圧薬は、アンギオテンシン変換酵素インヒビター（ＡＣＥインヒビター）、アンギオテンシン受容体ブロッカー（ＡＲＢ）、β−アドレナリン受容体ブロッカー（β−ブロッカー）、スタチン、及びそれらの組み合わせ、並びに他の薬物、例えば利尿薬との組み合わせを包含する群から選択される。
【００７８】
本発明の１つの実施形態によれば、アンギオテンシン変換酵素インヒビター（ＡＣＥインヒビター）は、ベナゼプリル、カプトプリル、シラザプリル、エナラプリル、フォシノプリル、イミダプリル、リシノプリル、モエキシプリル、ペリンドプリル、キナプリル、ラミプリル、スピラプリル、トランドラプリル、及びゾフェノプリルを包含する群から選択される。
【００７９】
本発明の１つの実施形態によれば、アンギオテンシン受容体ブロッカー（ＡＲＢ）は、アジルサルタン、アジルサルタンメドキソミル、カンデサルタン、カンデサルタンシレキセチル、エプロサルタン、フィマサルタン、イルベサルタン、ロサルタン、ミルファサルタン、オルメサルタン、ポミサルタン、プラトサルタン、リピサルタン、サプリサルタン、タソサルタン、テルミサルタン、及びバルサルタンを包含する群から選択される。
【００８０】
本発明の１つの実施形態によれば、β−アドレナリン受容体ブロッカー（β−ブロッカー）は、アテノロール、ビソプロロール、メトプロロール、ネビボロール、エスモロール、ベタキソロール、アセブトロール、セリプロロール、プロプラノロール、ブプラノロール、チモロール、カルベジロール、ソタロール、ナドロール、ピンドロール、オキシプレノロール、アルプレノロール及びカルテオロールを包含する群から選択される。
【００８１】
本発明の１つの実施形態によれば、スタチンは、アトルバスタチン、フルバスタチン、ロバスタチン、ピタバスタチン、プラバスタチン、ロスバスタチン、シンバスタチン、セリバスタチン及びメルバスタチン（コンパクチン）、及びそれらの組み合わせ、並びに他の薬物との組み合わせを包含する群から選択される。
【００８２】
本発明の主題は、ｈＧＨ及び／又はそのアイソフォームの決定されたレベルが前記所定の閾値以上であり、及び、抗高血圧薬を用いた血圧降下療法により低下させられ得る血管リスクを有するものとして、本発明の方法に従って同定されている対象における主要心血管イベント及び／又は心血管疾患の予防への使用のための抗高血圧薬（例えば、アンギオテンシン変換酵素インヒビター（ＡＣＥインヒビター）、アンギオテンシン受容体ブロッカー（ＡＲＢ）、β−アドレナリン受容体ブロッカー（β−ブロッカー）、及び/又はスタチン）である。
【００８３】
本発明の主題は、ｈＧＨ及び／又はそのアイソフォームの決定されたレベルが前記所定の閾値以上であり、及び、抗高血圧薬を用いた血圧降下療法により低下させられ得る血管リスクを有するものとして、本発明の方法に従って同定されている対象（高血圧を有さない）における主要心血管イベント及び／又は心血管疾患の予防への使用のための抗高血圧薬（例えば、アンギオテンシン変換酵素インヒビター（ＡＣＥインヒビター）、アンギオテンシン受容体ブロッカー（ＡＲＢ）、β−アドレナリン受容体ブロッカー（β−ブロッカー）、及び/又はスタチン）である。
【００８４】
本発明の主題は、ｈＧＨ及び／又はそのアイソフォームの決定されたレベルが前記所定の閾値以上であり、及び、抗高血圧薬を用いた血圧降下療法により低下させられ得る血管リスクを有するものとして、本発明の方法に従って同定されている対象（高血圧を有さない）における主要心血管イベント及び／又は心血管疾患の予防への使用のための抗高血圧薬（例えば、アンギオテンシン変換酵素インヒビター（ＡＣＥインヒビター）、アンギオテンシン受容体ブロッカー（ＡＲＢ）、β−アドレナリン受容体ブロッカー（β−ブロッカー）、及び/又はスタチン）であり、そして前記アンギオテンシン変換酵素インヒビター（ＡＣＥインヒビター）は、ベナゼプリル、カプトプリル、シラザプリル、エナラプリル、フォシノプリル、イミダプリル、リシノプリル、モエキシプリル、ペリンドプリル、キナプリル、ラミプリル、スピラプリル、トランドラプリル、及びゾフェノプリルを包含する群から選択される。
【００８５】
本発明の主題は、ｈＧＨ及び／又はそのアイソフォームの決定されたレベルが前記所定の閾値以上であり、及び、抗高血圧薬を用いた血圧降下療法により低下させられ得る血管リスクを有するものとして、本発明の方法に従って同定されている対象（高血圧を有さない）における主要心血管イベント及び／又は心血管疾患の予防への使用のための抗高血圧薬（例えば、アンギオテンシン変換酵素インヒビター（ＡＣＥインヒビター）、アンギオテンシン受容体ブロッカー（ＡＲＢ）、β−アドレナリン受容体ブロッカー（β−ブロッカー）、及び/又はスタチン）であり、そして前記アンギオテンシン受容体ブロッカー（ＡＲＢ）は、アジルサルタン、アジルサルタンメドキソミル、カンデサルタン、カンデサルタンシレキセチル、エプロサルタン、フィマサルタン、イルベサルタン、ロサルタン、ミルファサルタン、オルメサルタン、ポミサルタン、プラトサルタン、リピサルタン、サプリサンタン、タソサルタン、テルミサルタン、及びバルサルタンを包含する群から選択される。
【００８６】
本発明の主題は、ｈＧＨ及び／又はそのアイソフォームの決定されたレベルが前記所定の閾値以上であり、及び、抗高血圧薬を用いた血圧降下療法により低下させられ得る血管リスクを有するものとして、本発明の方法に従って同定されている対象（高血圧を有さない）における主要心血管イベント及び／又は心血管疾患の予防への使用のための抗高血圧薬（例えば、アンギオテンシン変換酵素インヒビター（ＡＣＥインヒビター）、アンギオテンシン受容体ブロッカー（ＡＲＢ）、β−アドレナリン受容体ブロッカー（β−ブロッカー）、及び／又はスタチン）であり、そして前記スタチンは、アトルバスタチン、フルバスタチン、ロバスタチン、ピタバスタチン、プラバスタチン、ロスバスタチン、シンバスタチン、セリバスタチン及びメルバスタチン（コンパクチン）、及びそれらの組み合わせ、並びに他の薬物との組み合わせを包含する群から選択される。
【００８７】
本発明の主題は、ｈＧＨ及び／又はそのアイソフォームの決定されたレベルが前記所定の閾値以上であり、及び、抗高血圧薬を用いた血圧降下療法により低下させられ得る血管リスクを有するものとして、本発明の方法に従って同定されている対象（高血圧を有さない）における主要心血管イベント及び／又は心血管疾患の予防への使用のための抗高血圧薬（例えば、アンギオテンシン変換酵素インヒビター（ＡＣＥインヒビター）、アンギオテンシン受容体ブロッカー（ＡＲＢ）、β−アドレナリン受容体ブロッカー（β−ブロッカー）、及び／又はスタチン）であり、そして前記β−アドレナリン受容体ブロッカー（β−ブロッカー）は、アテノロール、ビソプロロール、メトプロロール、ネビボロール、エスモロール、ベタキソロール、アセブトロール、セリプロロール、プロプラノロール、ブプレノロール、チモロール、カルベジロール、ソタロール、ナドロール、ピンドロール、オキシプレノロール、アルプレノロール及びカルテオロールを包含する群から選択される。
【００８８】
上記化合物のほとんどでは、異なった塩形態で製剤化され得る。医薬的に許容できる塩は、通常の方法を用いて得られる。従って、主題はまた、上記活性化合物の全ての医薬的に許容できる塩でもある。
【００８９】
そのような塩形態は、それぞれの有機又は無機酸による変換から得られる通常のアルカリ及び酸付加塩であり得る。活性化合物の塩を形成する酸は、次のものを包含する：硫酸、スルホン酸、リン酸、亜硝酸、硝酸、過塩素酸、臭化水素酸、塩酸、ギ酸、酢酸、プロピオン酸、コハク酸、シュウ酸、グルクロン酸（左及び右旋性の形態で）、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、（ヒドロキシマロン酸、ヒドロキシプロパンジカルボン酸）、フマル酸、クエン酸、アスコルビン酸、マレイン酸、マロン酸、ヒドロキシマレイン酸、ピルビン酸、フェニル酢酸（ｏ−、ｍ−、ｐ−）、トルイル酸、安息香酸、ｐ−アミノ安息香酸、サリチル酸、ｐ−アミノサリチル酸、メチルスルホン酸、エチルスルホン酸、ヒドロキシメチルスルホン酸、エチレンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、ナフタレンスルホン酸、ナフチルアミノスルホン酸、スルファニル酸、ショウノウスルホン酸、キナ酸、ｏ−メチルマンデル酸、ピクリン酸（２，４，６−トリニトロフェノール）、アジピン酸、アミノ酸、例えばメチオニン、トリプトファン、アルギニン、及び特に、酸性アミノ酸、例えばグルタミン又はアスパラギン酸。
【００９０】
前記酸性置換基が前記活性化合物中に存在する場合、塩基性付加塩もまた、特にアルカリ金属、及びアミノ酸により形成され得る。従って、アルカリ金属塩、例えばナトリウム、カリウム、リチウム塩、又はマグネシウム、カルシウム塩、アルキルアミノ塩、又はアミノ酸、例えばリシンアルカリにより形成される塩を例として挙げることができる。本発明の好ましい特定の塩は、硫酸塩、重硫酸塩、硝酸塩、リン酸塩、リン酸水素塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、酢酸塩、酒石酸塩、乳酸塩、クエン酸塩、グルコン酸塩、フマル酸塩、マレイン酸塩、ヒドロキシルマレイン酸塩、コハク酸塩、パモ酸塩、安息香酸塩、プロピオン酸塩、ピルビン酸塩、シュウ酸塩、マロン酸塩、桂皮酸塩、サリチル酸塩、アルキルスルホン酸塩、アリールスルホン酸塩、及びアラルキルスルホン酸塩を包含する群から選択される。
【００９１】
活性化合物の適切な塩は、すべての酸付加塩又はすべての塩基付加塩である。薬局で慣習的に使用される、医薬的に許容される無機及び有機酸及び塩基が特に言及され得る。
【００９２】
一方では、適切なものは、酸、例えば塩酸、臭化水素酸、リン酸、硝酸、硫酸、酢酸、クエン酸、Ｄ−グルコン酸、安息香酸、２−（４−ヒドロキシベンゾイル）安息香酸、酪酸、スルホサリチル酸、マレイン酸、ラウリン酸、リンゴ酸、例えば（−）−Ｌ−リンゴ酸又は（＋）−Ｄ−リンゴ酸、フマル酸、コハク酸、シュウ酸、酒石酸、例えば（＋）−Ｌ−酒石酸又は（−）−Ｄ−酒石酸又はメソ酒石酸、エンボン酸、ステアリン酸、トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸又は、３−ヒドロキシ−２−ナフトエ酸による、水不溶性及び特に、水溶性酸付加塩であり、前記酸は、一塩基又は多塩基酸が、関与するかどうか、及びどの塩が所望されるかにどうかに依存して、等モル量比又はそれとは異なる比で、塩調製に使用される。
【００９３】
産業規模での本発明の化合物の調製の間、プロセス生成物又は副生成物として得られる医薬的に許容できない塩は、当業者に知られている方法により、医薬的に許容できる塩に転換される。
【００９４】
本発明における用語「医薬的に許容できる（ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  ａｃｃｅｐｔａｂｌｅ）」とは、本発明の関連する誘導体、機能的等価物、塩、溶媒和物、水和物、賦形剤、担体、希釈剤及び溶媒が、それぞれ、哺乳類に含まれる使用のために安全且つ効果的であり、そして所望する生物学的活性及び／又は機能を有することを意味する。
【００９５】
本発明のいくつかの選択された実施形態が下記に列挙される：
１）対象が、抗高血圧薬（例えば、アンギオテンシン変換酵素インヒビター（ＡＣＥインヒビター）、アンギオテンシン受容体ブロッカー（ＡＲＢ）、β−アドレナリン受容体ブロッカー（β−ブロッカー）及び／又はスタチン）を用いた血圧降下療法により低下させられ得る血管リスクを有するかどうかを決定する方法であって、
・前記対象の血液サンプルにおけるヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）及び／又はそのアイソフォームのレベルを決定し、及び
・前記血液サンプル中のｈＧＨ及び／又はそのアイソフォームの前記決定されたレベルと、所定の閾値とを比較する工程を包含し、ここで
・ｈＧＨ及び／又はそのアイソフォームの決定されたレベルが前記所定の閾値を上回る場合、対象は、抗高血圧薬（例えば、アンギオテンシン変換酵素インヒビター（ＡＣＥインヒビター）、アンギオテンシン受容体ブロッカー（ＡＲＢ）、β−アドレナリン受容体ブロッカー（β−ブロッカー）及び／又はスタチン）を用いた血圧降下療法により低下させられ得る血管リスクを有するものとして同定され、及び
・ｈＧＨ及び／又はそのアイソフォームの決定されたレベルが前記所定の閾値未満である場合、対象は、抗高血圧薬（例えば、アンギオテンシン変換酵素インヒビター（ＡＣＥインヒビター）、アンギオテンシン受容体ブロッカー（ＡＲＢ）、β−アドレナリン受容体ブロッカー（β−ブロッカー）及び／又はスタチン）を用いた血圧降下療法により低下させられ得る血管リスクを有さないものとして同定される。
【００９６】
２）前記対象が、高血圧（少なくとも＞１４０ｍｍＨＧ（収縮期）〜９０ｍｍＨＧ（拡張期））を有さない、上記１に記載の、対象が、抗高血圧薬を用いた血圧降下療法により低下させられ得る血管リスクを有するかどうかを決定する方法。
【００９７】
３）前記血液サンプルが、抗高血圧薬によりまだ治療されていない対象から採取される、上記１又は２に記載の、対象が、抗高血圧薬を用いた血圧降下療法により低下させられ得る血管リスクを有するかどうかを決定する方法。
【００９８】
４）対象における血圧を低下させることによる血管リスクを低下させることが、前記対象における主要心血管イベント及び／又は心血管疾患を予防することを意味する、上記１、２又は３に記載の、対象が、抗高血圧薬を用いた血圧降下療法により低下させられ得る血管リスクを有するかどうかを決定する方法。
【００９９】
５）前記対象が、主要心血管イベントをこれまでに有したことはなく、そして何れの心血管疾患もこれまでに有したことがない、上記１〜４の何れか１つに記載の、対象が、抗高血圧薬を用いた血圧降下療法により低下させられ得る血管リスクを有するかどうかを決定する方法。
【０１００】
６）前記対象が、過去２週間以内に、好ましくは過去１週間以内に、好ましくは過去３６時間以内に急性心筋梗塞又は急性心不全に罹患している、上記１〜４の何れか１つに記載の、対象が、抗高血圧薬を用いた血圧降下療法により低下させられ得る血管リスクを有するかどうかを決定する方法。
【０１０１】
７）前記抗高血圧薬が、アンギオテンシン変換酵素インヒビター（ＡＣＥインヒビター）、アンギオテンシン受容体ブロッカー（ＡＲＢ）、及びβ−アドレナリン受容体ブロッカー（β−ブロッカー）、スタチン、又はそれらの組み合わせを含む群から選択される、上記１〜６の何れか１つに記載の、対象が、抗高血圧薬を用いた血圧降下療法により低下させられ得る血管リスクを有するかどうかを決定する方法。
【０１０２】
８）前記血管サンプルが、全血、血清及び血漿を包含する群から選択される、上記１〜７の何れか１つに記載の、対象が、抗高血圧薬を用いた血圧降下療法により低下させられ得る血管リスクを有するかどうかを決定する方法。
【０１０３】
９）前記血液サンプルが、空腹時のサンプルである、上記１〜８の何れか１つに記載の、対象が、抗高血圧薬を用いた血圧降下療法により低下させられ得る血管リスクを有するかどうかを決定する方法。
【０１０４】
１０）ｈＧＨ及び／又はそのアイソフォームのレベルを決定するために使用される測定方法が、少なくとも５０ｐｇ／ｍＬの感度を有する、上記１〜９の何れか１つに記載の、対象が、抗高血圧薬を用いた血圧降下療法により低下させられ得る血管リスクを有するかどうかを決定する方法。
【０１０５】
１１）ｈＧＨ及び／又はそのアイソフォームのレベルを決定するために使用される測定方法が、少なくとも５０ｐｇ／ｍＬのアッセイ感度を有するイムノアッセイである、上記１〜１０の何れか１つに記載の、対象が、抗高血圧薬を用いた血圧降下療法により低下させられ得る血管リスクを有するかどうかを決定する方法。
【０１０６】
１２）前記所定の閾値が、１３７０ｐｇ／ｍＬ、好ましくは３３０ｐｇ／ｍＬである、上記１〜１１の何れか１つに記載の、対象が、抗高血圧薬を用いた血圧降下療法により低下させられ得る血管リスクを有するかどうかを決定する方法。
【０１０７】
１３）ｈＧＨ及び／又はそのアイソフォームのレベルが、ｈＧＨ及び／又はそのアイソフォームに結合する少なくとも２種の抗体を含むイムノアッセイにより決定される、上記１〜１２の何れか１つに記載の、対象が、抗高血圧薬を用いた血圧降下療法により低下させられ得る血管リスクを有するかどうかを決定する方法。
【０１０８】
１４）ｈＧＨ及び／又はそのアイソフォームに結合する前記少なくとも２種の抗体の個々が、少なくとも１０8Ｍ-1の、ｈＧＨ及び／又はそのアイソフォームに対する親和性を有する、上記１１に記載の、対象が、抗高血圧薬を用いた血圧降下療法により低下させられ得る血管リスクを有するかどうかを決定する方法。
【０１０９】
１５）前記方法が、心不全、アテローム性動脈硬化症、高血圧、心筋症、心筋梗塞及び脳卒中を包含する群から選択される、前記対象における主要心血管イベント及び／又は心血管疾患の予防のために使用される、上記１〜１４の何れか１つに記載の、対象が、抗高血圧薬を用いた血圧降下療法により低下させられ得る血管リスクを有するかどうかを決定する方法。
【０１１０】
１６）前記方法がさらに、
・ｈＧＨ及び／又はそのアイソフォームの決定されたレベルが、前記所定の閾値以上であり、及び、抗高血圧薬を用いた血圧降下療法により低下させられ得る血圧リスクを有するものとして同定されている対象への、抗高血圧薬（例えば、アンギオテンシン変換酵素インヒビター（ＡＣＥインヒビター）、アンギオテンシン受容体ブロッカー（ＡＲＢ）、β−アドレナリン受容体ブロッカー（β−ブロッカー）及び／又はスタチン）の投与の勧告、又は
・ｈＧＨ及び／又はそのアイソフォームの決定されたレベルが、前記所定の閾値以下であり、及び、抗高血圧薬を用いた血圧降下療法により低下させられ得る血圧リスクを有さないものとして同定されている対象への、抗高血圧薬（例えば、アンギオテンシン変換酵素インヒビター（ＡＣＥインヒビター）、アンギオテンシン受容体ブロッカー（ＡＲＢ）、β−アドレナリン受容体ブロッカー（β−ブロッカー）及び／又はスタチン）の留保の勧告
を包含する、上記１〜１５の何れか１つに記載の、対象が、抗高血圧薬を用いた血圧降下療法により低下させられ得る血管リスクを有するかどうかを決定する方法。
【０１１１】
１７）前記方法がさらに、
・ｈＧＨ及び／又はそのアイソフォームの決定されたレベルが、前記所定の閾値以上であり、及び、抗高血圧薬を用いた血圧降下療法により低下させられ得る血圧リスクを有するものとして同定されている対象への、抗高血圧薬（例えば、アンギオテンシン変換酵素インヒビター（ＡＣＥインヒビター）、アンギオテンシン受容体ブロッカー（ＡＲＢ）、β−アドレナリン受容体ブロッカー（β−ブロッカー）及び／又はスタチン）の投与、又は
・ｈＧＨ及び／又はそのアイソフォームの決定されたレベルが、前記所定の閾値以下であり、及び、抗高血圧薬を用いた血圧降下療法により低下させられ得る血圧リスクを有さないものとして同定されている対象への、抗高血圧薬（例えば、アンギオテンシン変換酵素インヒビター（ＡＣＥインヒビター）、アンギオテンシン受容体ブロッカー（ＡＲＢ）、β−アドレナリン受容体ブロッカー（β−ブロッカー）及び／又はスタチン）の留保
を包含する、上記１〜１６の何れか１つに記載の、対象が、抗高血圧薬を用いた血圧降下療法により低下させられ得る血管リスクを有するかどうかを決定する方法。
【０１１２】
１８）ｈＧＨ及び／又はそのアイソフォームの決定されたレベルが前記所定の閾値以上であり、及び、抗高血圧薬を用いた血圧降下療法により低下させられ得る血管リスクを有するものとして、上記１〜１７の何れか１つに記載の方法により同定された対象における主要心血管イベント及び／又は心血管疾患の予防方法への使用のための抗高血圧薬（例えば、アンギオテンシン変換酵素インヒビター（ＡＣＥインヒビター）、アンギオテンシン受容体ブロッカー（ＡＲＢ）、β−アドレナリン受容体ブロッカー（β−ブロッカー）及び／又はスタチン）。
【０１１３】
１９）ｈＧＨ及び／又はそのアイソフォームの決定されたレベルが前記所定の閾値以上であり、及び、抗高血圧薬を用いた血圧降下療法により低下させられ得る血管リスクを有するものとして、上記１〜１７の何れか１つに記載の方法により同定された対象（高血圧を有さない）における主要心血管イベント及び／又は心血管疾患の予防方法への使用のための抗高血圧薬（例えば、アンギオテンシン変換酵素インヒビター（ＡＣＥインヒビター）、アンギオテンシン受容体ブロッカー（ＡＲＢ）、β−アドレナリン受容体ブロッカー（β−ブロッカー）及び／又はスタチン）。
【実施例】
【０１１４】
実施例１：ｕｓ−ｈＧＨアッセイ
血漿サンプルを、国際公開第２０１４／１０８３９６号に記載されているように、ｈＧＨアッセイを用いて測定した。測定を、超感度化学発光イムノアッセイにより実施した（実施例１  ｕｓ−ｈＧＨアッセイを参照のこと）。検出限界は、２ｐｇ／ｍＬであり、機能的アッセイ感度は８．５ｐｇ／ｍＬであった。ｈＧＨの測定値を、ｎｇ／ｍＬ（１ｎｇ／ｍＬ＝２．６ｍＵ／Ｌ）で表す。
【０１１５】
化学薬品：
特にことわらない限り、化学薬品は、Ｍａｒｃｋ（Ｄａｒｍｓｔａｄｔ，Ｇｅｒｍａｎｙ）からｐ．ａ．等級で得た。
【０１１６】
抗原：
免疫化及び較正のために、本発明者は、組み換えヒト成長ホルモン（ＮＩＢＳＣ  ｃｏｄｅ  ９８／５７４，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｓｔａｎｄａｒｄｓ  ａｎｄ  Ｃｏｎｔｒｏｌ，Ｈｅｒｆｏｒｄｓｈｉｒｅ，ＵＫ）を使用した。
【０１１７】
抗体の開発
ｈＧＨに対するマウスモノクローナル抗体を、ＵＮＩＣＵＳ（Ｋａｒｌｓｂｕｒｇ，  Ｇｅｒｍａｎｙ）により開発した。
【０１１８】
抗体を、次の方法に従って生成した：
ＢＡＬＢ／ｃマウスを、０及び１４日目、１００μｇのｈＧＨ（完全フロイントアジュバントに乳化された）により、及び２１及び２８日目、５０μｇのｈＧＨ（１００μLの不完全フロントアジュバント中）により免疫した。融合実験が実施される３日前、動物は、１回の腹腔内注射及び１回の静脈内注射として与えられる、１００μＬの生理食塩水に溶解されたコンジュゲート５０μｇを受けた。
【０１１９】
免疫化されたマウスの脾細胞及び骨髄腫細胞系ＳＰ２／０の細胞を、３７℃で３０秒間、１ｍｌの５０％ポリエチレングリコールと融合させた。洗浄の後、細胞を、９６ウェル細胞培養プレートに播種した。ハイブリッドクローンを、ＨＡＴ培地［２０％ウシ胎児血清及びＨＡＴサプリメントにより補充されたＲＰＭＩ１６４０培養培地］において増殖することにより選択した。２週間後、ＨＡＴ培地を、３継代の間、ＨＴ培地と交換し、続いて正常培養培地に戻す。
【０１２０】
細胞培養上清液を、融合の３週間後、抗原特異的ＩｇＧ抗体について一次スクリーニングした。試験された陽性微生物を、増殖のために２４ウェルプレートに移した。再試験の後、選択された培養物をクローン化し、そして制限希釈技法を用いて再クローン化し、そしてアイソタイプを決定した。（Ｌａｎｅ，Ｒ．Ｄ．“Ａ  ｓｈｏｒｔ−ｄｕｒａｔｉｏｎ  ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅ  ｇｌｙｃｏｌ  ｆｕｓｉｏｎｔｅｃｈｎｉｑｕｅ  ｆｏｒ  ｉｎｃｒｅａｓｉｎｇ  ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｓｅｃｒｅｔｉｎｇ  ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ”，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．８１：２２３−２２８；（１９８５）−Ｚｉｅｇｌｅｒ，Ｂ．ｅｔ  ａｌ．“Ｇｌｕｔａｍａｔｅ  ｄｅｃａｒｂｏｘｙｌａｓｅ（ＧＡＤ）ｉｓ  ｎｏｔ  ｄｅｔｅｃｔａｂｌｅ  ｏｎ  ｔｈｅ  ｓｕｒｆａｃｅ  ｏｆ  ｒａｔ  ｉｓｌｅｔ  ｃｅｌｌｓ  ｅｘａｍｉｎｅｄ  ｂｙ  ｃｙｔｏｆｌｕｏｒｏｍｅｔｒｙ  ａｎｄ  ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ  ｏｆ  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ＧＡＤ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ”，Ｈｏｒｍ．Ｍｅｔａｂ．Ｒｅｓ．２８：１１−１５，（１９９６））。
【０１２１】
モノクローナル抗体の生成
本発明者らは、さらなる研究のために、５つの抗体を選択した。
【０１２２】
抗体を、標準抗体生成方法（Ｍａｒｘ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ（１９９７），ＡＴＬＡ  ２５，１２１）により生成し、そしてプロテインＡ−クロマトグラフィーを通して精製した。抗体の純度は、ＳＤＳゲル電気泳動分析に基づけば、＞９５％であった。
【０１２３】
抗体の標識及びコーティング
全抗体を、次の方法に従って、アクリジニンエステルにより標識した：
【０１２４】
標識された化合物（トレーサー）：１００μｇ（１００μＬ）の抗体（ＰＢＳ（ｐＨ７．４）中、１ｍｇ／ｍＬ）を、１０μＬのアクリジニウムＮＨＳ−エステル（アセトニトリル中、１ｍｇ／ｍＬ、ＩｎＶｅｎｔ  ＧｍｂＨ，Ｇｅｒｍａｎｙ）（欧州特許第０３５３９７１号）と共に混合し、そして室温で２０分間インキュベートした。標識された抗体を、Ｂｉｏ−Ｓｉｌ  ＳＥＣ  ４００−５（Ｂｉｏ−Ｒａｄ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．，ＵＳＡ）上でのゲル−濾過ＨＰＬＣにより精製した。精製された標識抗体を、（３００ｍｍｏｌ／Ｌのリン酸カリウム、１００ｍｍｏｌ／ＬのＮａＣｌ、１０ｍｍｏｌ／ＬのＮａ−ＥＤＴＡ、５ｇ／Ｌのウシ血清アルブミン、ｐＨ７．０）により希釈した。最終濃度は、２００μＬ当たり約８００．０００相対光単位（ＲＬＵ）の標識された化合物（約２０ｎｇの標識された抗体）であった。アクリジニウムエステル化学発光を、ＡｕｔｏＬｕｍａｔ  ＬＢ  ９５３（Ｂｅｒｔｈｏｌｄ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  ＧｍｂＨ  ＆  Ｃｏ．ＫＧ）を用いることにより測定した。
【０１２５】
固相抗体（コーティングされた抗体）：
固相：ポリスチレンチューブ（Ｇｒｅｉｎｅｒ  Ｂｉｏ−Ｏｎｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ＡＧ，Ａｕｓｔｒｉａ）を、抗体（１．５μｇの抗体／０．３ｍｌの１００ｍｍｏｌ／ＬのＮａＣｌ、５０ｍｍｏｌ／Ｌのトリス／ＨＣｌ、ｐＨ７．８）によりコーティングした（室温で１８時間）。５％ウシ血清アルブミンによりブロックした後、チューブを、ＰＢＳ（ｐＨ７．４）により洗浄し、そして真空乾燥した。
【０１２６】
ｈＧＨイムノアッセイ：
５０μLのサンプル（又はキャリブレーター）を、コーティングされたチューブ中にピペットで取り入れ、標識された抗体（２００μＬ）の添加の後、チューブを、１８〜２５℃で２時間インキュベートした。未結合トレーサーを、洗浄溶液（２０ｍｍｏｌ／ＬのＰＢＳ、ｐＨ７．４、０．１％Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００）によって５回（それぞれ、１ｍｌ）の洗浄により除去した。チューブ結合標識抗体を、ＬＢ９５３を用いることにより測定した。固定濃度１ｎｇ／ｍＬのｈＧＨを用いる。異なった抗体の組み合わせに関するシグナル（１ｎｇのｈＧＨ／ｍＬでのＲＬＵ）：ノイズ（ｕｓ−ｈＧＨなしでのＲＬＵ）の比が表１に与えられる。すべての抗体は、任意の他の抗体と共にサンドイッチ複合体を生成することができた。最も強いシグナル：ノイズの比（最良の感度）を有する抗体を用いて、続いてｕｓ−ｈＧＨ−イムノアッセイを実施した：ｈＧＨ  Ｇ１２抗体を、コーティングされたチューブ抗体として使用し、そしてｈＧＨ  Ｈ４抗体を、標識された抗体として使用した。
【０１２７】
【表１】
2020109407.tif 000002
【０１２８】
較正：
アッセイを、２０ｍＭのＫ2ＰＯ4、６ｍＭのＥＤＴＡ、０．５％ＢＳＡ、５０μＭのアマスタチン、１００μＭのロイペクチン、ｐＨ８．０に希釈された組換えｈＧＨ（ＷＨＯ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｓｔａｎｄａｒｄ，ＮＩＢＳＣ  ｃｏｄｅ  ９８／５７４）の希釈溶液を用いて較正した（図１）。
【０１２９】
アッセイ仕様：
分析アッセイ感度（ｈＧＨフリーサンプルの２０回の測定の平均相対光単位＋２Ｓ．Ｄ．）は２ｐｇ／ｍＬであり、そして機能的アッセイ感度（上記を参照のこと）は８．５ｐｇ／ｍＬであった。回収及び希釈は、５〜１０．０００ｐｇ／ｍＬのｈＧＨの測定範囲で＞８５％であった。ｕｓ−ｈＧＨアッセイと、組換えｈＧＨ（２２ＫＤ）に対して特異的なｈＧＨアッセイとの間のＮ＝９９７サンプル相関係数は、ｒ＝０．９８であり、そして０．９５のｒが、下垂体によって天然に産生されるｈＧＨアイソフォームを優先的に認識するアッセイで見出された（Ｂｉｄｌｉｎｇｍａｉｅｒ  Ｍ，Ｓｕｈｒ  Ｊ，Ｅｒｎｓｔ  Ａ，Ｗｕ  Ｚ，Ｋｅｌｌｅｒ  Ａ，Ｓｔｒａｓｂｕｒｇｅｒ  ＣＪ，ｅｔ  ａｌ．Ｈｉｇｈ−ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ  ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ  ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙｓ  ｆｏｒ  ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｇｒｏｗｔｈ  ｈｏｒｍｏｎｅ  ｄｏｐｉｎｇ  ｉｎ  ｓｐｏｒｔｓ．Ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．２００９；５５（３）：４４５−５３．Ｅｐｕｂ  ２００９／０１／２７）。それらは、本発明内の全てのｈＧＨアイソフォーム測定の適合性を示している。
【０１３０】
実施例２：研究集団：
本発明者らは、２００４年８月から２００７年４月まで、レスターＮＨＳトラスト大学病院に入院した９５３人のＳＴＥＭＩ及びＮＳＴＥＭＩ患者を研究した。この観察コホート研究は、ヘルシンキ宣言を遵守し、そして地元論理委員会の認識を受け；文書によるインフォームドコンセントが患者から得られた。患者が次の少なくとも１つと共に、９９パーセンタイル以上の心筋トロポニンＩレベルを有する場合、ＡＭＩと診断された：２０分を越える胸痛、又は新規病理学的Ｑ波、又はＳＴセグメント及びＴ波変化から成る診断シリアル心電図変化。前月において、既知悪性腫瘍を有する、腎代替え療法又は手術を受けた患者は除外された。推定糸球体濾過量（ｅＧＦＲ）は、単純化されたＭｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｄｉｅｔ  ｉｎ  Ｒｅｎａｌ  Ｄｉｓｅａｓｅ（ＭＤＲＤ）（Ｓｍｉｌｄｅ  ＴＤ，  ｖａｎ  Ｖｅｌｄｈｕｉｓｅｎ  ＤＪ，  Ｎａｖｉｓ  Ｇ，  Ｖｏｏｒｓ  ＡＡ，  Ｈｉｌｌｅｇｅ  ＨＬ．  Ｄｒａｗｂａｃｋｓ  ａｎｄ  ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ  ｖａｌｕｅ  ｏｆ  ｆｏｒｍｕｌａｓ  ｅｓｔｉｍａｔｉｎｇ  ｒｅｎａｌ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｃｈｒｏｎｉｃ  ｈｅａｒｔ  ｆａｉｌｕｒｅ  ａｎｄ  ｓｙｓｔｏｌｉｃ  ｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ．  Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  ２００６；１１４：１５７２−８０）から計算した。すべての患者は、標準的な治療を受けており、そして血管再生術は主治医の裁量で行った。
【０１３１】
血漿サンプル：血液サンプル（ＥＤＴＡ及びアプロチニンにより抗凝固処理されている）を、１５分の安静後、診断の直後、及び発症の３６時間以内に採取した。血漿ｈＧＨの盲検決定のために、単一バッチでアッセイするまで、血漿を−８０℃で貯蔵した。
【０１３２】
実施例３：分析：
種々の薬物による急性心筋梗塞の患者の治療の有効性を、発症後、最大３６時間以内に決定された患者のｈＧＨ濃度に応じて分析した。分析された薬物は、ａ）アンギオテンシン変換酵素インヒビター（ＡＣＥ）又はアンギオセンシン受容体ブロッカー（ＡＲＢ）、及びｂ）β−ブロッカーであった。有効性を決定するためのエンドポイントは、症状の発症後１年以内に主要有害心イベント（ＭＡＣＥ）の発生であった。ＭＡＣＥは、次のエンドポイントの組み合わせとして定義された：全原因脂肪率、心不全による入院、又は再急性心筋梗塞（再ＡＭＩ）。
【０１３３】
アンギオテンシン変換酵素インヒビター（ＡＣＥ）又はアンギオテンシン受容体ブロッカー（ＡＲＢ）：
患者コホートは、１年以内に２４５のＭＡＣＥエンドポイントを有する９５３例から構成された。種々の臨床的変数は、Ｃｏｘ回帰分析（表１）により決定されるように、１年以内にＭＡＣＥの予測と関連していた。ｈＧＨ濃度が統計モデル（表２）に加えられると、ｈＧＨは、ＭＡＣＥの独立した予測因子であり、そして驚くべきことには、またｈＧＨとＡＣＥ／ＡＲＢによる治療との相互作用もまた、独立した予測因子であった。ＡＣＥ／ＡＲＢによる治療に依存してのＭＡＣＥの発生についてのカプラン−マイヤー分析を、低（＜３３０ｐｇ／ｍＬ）、中（３３０〜１３７０ｐｇ／ｍＬ）及び高（＞１３７０ｐｇ／ｍＬ）濃度のｈＧＨを有する患者である患者集団に対して、ｈＧＨ三分位値への分離の後、実施した。サブグループについてのＭＡＣＥの数が、表３に示されている。表４に示されるように、ＭＡＣＥに対するＡＣＥ／ＡＲＢ治療効果は、ｈＧＨ三分位値に依存し、そしてｈＧＨ三分位値２及び３、すなわち中及び高ｈＧＨ濃度についてのみ有意であった。この効果は、ｈＧＨ三分位値２においてよりも、ｈＧＨ三分位値３において顕著であった。図２〜４は、３種のｈＧＨ三分位値についてのそれぞれのカプラン−マイヤープロットを示す。
【０１３４】
【表２】
2020109407.tif 000003
【０１３５】
【表３】
2020109407.tif 000004
【０１３６】
【表４】
2020109407.tif 000005
【０１３７】
【表５】
2020109407.tif 000006
【０１３８】
β−ブロッカー
同一患者コホートにおいて、多変量Ｃｏｘ回帰分析はまた、１年間のＭＡＣＥの予測に対し、ｈＧＨとβ−ブロッカーによる治療との間の有意な相互作用も示した（表５）。β−ブロッカーによる治療に依存したＭＡＣＥの発生についてのカプラン−マイヤー分析を、低、中及び高濃度のｈＧＨを有する患者である患者集団に対して、ｈＧＨ三分位値への分離の後、実施した。サブグループについてのＭＡＣＥの数が、表６に示されている。表７に示されるように、ＭＡＣＥに対するβ−ブロッカー治療効果は、ｈＧＨ三分位値に依存し、そしてｈＧＨ三分位値２及び３、すなわち中及び高ｈＧＨ濃度についてのみ有意であった。この効果は、ｈＧＨ三分位値２においてよりも、ｈＧＨ三分位値３において顕著であった。図５〜７は、３種のｈＧＨ三分位値についてのそれぞれのカプラン−マイヤープロットを示す。
【０１３９】
【表６】
2020109407.tif 000007
【０１４０】
【表７】
2020109407.tif 000008
【０１４１】
【表８】
2020109407.tif 000009
【０１４２】
入院時のｈＧＨ三分位値に従った９５３人のＡＭＩ患者の特徴が表８に示される。
【０１４３】
【表９】
2020109407.tif 000010
【０１４４】
２年間のフォローアップの間、２８１人のＭＡＣＥ、すなわち主要な複合エンドポイント（１１７人の死、７１人のＨＦ入院、及び９３人の再ＡＭＩを含む）が存在した。ＭＡＣＥを有する患者は、イベントフリー生存者（５９０[２０−２１  ６００]、Ｍａｎｎ−Ｗｈｉｔｎｅｙ検定を用いて、ｐ＜０．０００５）に比較して、高いレベルのＧＨを有した[中央値［範囲］、９１０［４０−２６  ２８０］ｐｇ／ｍＬ]。表８はまた、より高いＧＨレベルを有する患者におけるＭＡＣＥのより高い罹患率も示す。
【０１４５】
表９は、２年でのＭＡＣＥの結果に影響を与える様々な因子、療法及びバイオマーカーの単変量ハザード比を報告している。多変量分析においては、個々の療法及びＧＨレベルとのそれらの相互作用を調べた。年齢、Ｋｉｌｌｉｐクラス＞１、ｅＧＦＲは、ＧＨレベルと共に、独立した予測因子としてすべてのモデルで保持された。βブロッカー療法は、低ＭＡＣＥ（ｐ＝０．０３）に関連し、そしてＧＨレベルとの有意な相互作用を示した（ｐ＝０．０４７、表９）。ＡＣＥ／ＡＲＢによる治療はまた、ＧＨレベルとの有意な相互作用も示した（ｐ＝０．０１６、表９）。
【０１４６】
カプラン−マイヤー生存分析は、ＧＨ三分位値に従ってβブロッカー又はＡＣＥ／ＡＲＢとの治療の相互作用を視覚化するために用いられた（図８）。βブロッカー療法に関しては、第２（ｐ＝０．００９）及び第３（ｐ＜０．０００５）のＧＨ三分位値でこの治療を処方されなかった患者間のＭＡＣＥ率に比較して、処方された患者間のＭＡＣＥ率に有意な差異が存在した。対照的に、両治療に関しては、最も低い三分位値において、それらの患者におけるそれらの治療を処方されなかった患者と、治療を処方された患者との間のＭＡＣＥ率に差異は存在しなかった。
【０１４７】
【表１０】
2020109407.tif 000011
【０１４８】
実施例４：マルメ（Ｍａｌｍｏ）ダイエット及び癌研究
マルメダイエット及び癌研究−心血管コホート（ＭＤＣ−ＣＣ）は、９０年代初期に検査された前向き（ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ）コホートである。この研究についてのさらなる詳細は、以前の文献（Ｂｅｒｇｌｕｎｄ  ｅｔ  ａｌ．１９９３．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｎｔｅｒｎａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ２３３：４５−５１）に見出され得る。本発明者らは、ＭＤＣ−ＣＣにおけるｈｓ−ＧＨと内中膜複合体厚（ＩＭＴ）との関係の横断的分析を実施した。従属変数としてＩＭＴと、独立変数としてのｈｓ−ＧＨの自然対数の標準化値を用いた多重回帰モデルにおいて、本発明者は、総頚動脈（ＩＭＴcca）におけるｈｓ−ＧＨ及び平均ＩＭＴの両者についての値を有するこのコホートからの４４２５人の個体、及び分岐部（ＩＭＴbulb）における最大ＩＭＴについての値を有する３３９７人の参加者を分析した。別々のモデルを、ＩＭＴcca及びＩＭＴbulbに実施し、そしてそれらは、性別及び年齢、又は以下の従来の心血管リスク因子：性別、年齢、現在の喫煙、収縮期血圧、抗高血圧薬、ＢＭＩ、ＬＤＬ−Ｃ、ＨＤＬ−Ｃ及び糖尿病、の何れかに対して調節された。頸動脈超音波検査をベースラインで実施した。簡単に述べると、所定の範囲の右頸動脈分岐を、プラークの存在についてスキャンし、そして分岐部における最大ＩＭＴ（ＩＭＴbulb）及び総頸動脈における平均ＩＭＴ（ＩＭＴcca）を測定した。ＭＤＣ−ＣＣにおける３３９７人（１９５７人の女性、５８％）の初期横断回帰モデルにおいては、ｈｓ−ＧＨは、全コホート（Ｐ＝０．００３）及び男性（Ｐ＝０．００３）においてＩＭＴbulbと有意な正の相関を示した（表１０）。この関連性は、従来の心血管リスク因子について調節する場合、実質的に影響を受けなかった（それぞれ、Ｐ＝０．００２及びＰ＝０．００５）。女性間の結果は有意ではなかった。ｈｓ−ＧＨの空腹時レベルは、この分析で利用できる４４２５人（２６５８人の女性、６０％）において、ＩＭＴccaと関連していなかった。
【０１４９】
ｈｓ−ＧＨのより高い空腹時レベルが、男性における頸動脈球における高められたＩＭＴと関連していた。男性における頸動脈球でのｈｓ−ＧＨとＩＭＴとの間の関係は、男性においても優先的に見られる心血管疾患に関連するｈｓ−ＧＨのより高い空腹時値の以前の結果と一致する（Ｈａｌｌｇｒｅｎ  ｅｔ  ａｌ．２０１４．ＪＡＣＣ  ６４：１４５２−１４６０；Ｍａｉｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．１９９８．ＢＭＪ［Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ｅｄ］３１６：１１３２−１１３３）。ＩＭＴbulbは、アテローム性動脈硬化症の良好な尺度であり（Ｎａｑｖｉ  ａｎｄ  Ｌｅｅ．２０１４．ＪＡＣＣ  Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ  Ｉｍａｇｉｎｇ  ７：１０２５−１０３８）、従って、この発現は、ｈｓ−ＧＨと、アテローム性動脈硬化症により介在される心血管患者との間の関係についての仮説を支持する。
【０１５０】
【表１１】
2020109407.tif 000012
【０１５１】
クルードモデルは、性別及び年齢について調節された。調節モデルは、次について調節された：性別、年齢、収縮期血圧、抗高血圧薬、尿病、現在の喫煙、ＢＭＩ、ＬＤＬ−Ｃ及びＨＤＬ−Ｃ。β係数は、ｈｓ−ＧＨの自然対数の標準値の１増分当たりのＩＭＴの自然対数の標準値の増分として表される。略語：ＩＭＴccaは、総頚動脈における内膜の厚さの平均値を意味する。ＩＭＴbulbは、頸動脈分岐部における内膜の厚さの最大値を意味する。
【０１５２】
実施例５：ＢＣＡＰＳ
研究の説明
β−ブロッカーコレステロール低下無症候性プラーク研究（ＢＣＡＰＳ）は、１９９４年〜１９９９年の間に行われた、ランダム化、二重盲検、プラセボ対照、単一センター臨床試験であった。ＢＣＡＰＳの詳細な説明は、原著論文（Ｈｅｄｂｌａｄ  ｅｔ  ａｌ．２００１．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  １０３：１７２１−１７２６）に見出され得、以下は簡単な要約である。オリジナル研究集団は、ＭＤＣ−ＣＣから募集された４９〜７０歳の男性３６１人及び女性４３２人（合計ｎ＝７９３人）から構成された。ＢＣＡＰＳに包含される対象は、右頸動脈にプラークを有したが、頸動脈疾患の症状はなかった。除外基準は次の通りであった：３ヶ月以内での心筋梗塞、狭心症又は脳卒中；右頚動脈の以前の手術；β−ブロッカー又はスタチンの定期的使用；血圧＞１６０（収縮期）又は＞９５（拡張期）ｍｍＨｇ；総コレステロール＞８．０ｍｍｏｌ／Ｌ；インスリン治療を必要とすると思われる高血糖；及び治験責任者の視点において参加者を治験に不適切にする条件。すべての参加者は書面による同意を得、そして研究はルンド大学の論理委員会により承認された。
【０１５３】
この研究は４種の異なった治療グループから構成され、そして参加者は以下のうちの１つにランダム化された：プラセボ／プラセボ、メトプロロールＣＲ／ＸＬ（１日１回２５ｍｇ）／プラセボ、フルバスタチン（１日１回４０ｍｇ）／プラセボ又はメトプロロールＣＲ／ＸＬ（１日１回２５ｍｇ）／フルバスタチン（１日１回４０ｍｇ）。
【０１５４】
治療期間は３６ヶ月であった。空腹時血液サンプルは、ベースライン時、及び１２、２４及び３６ヶ月時に採取された。マルメ大学病院の臨床化学部の標準手順に従って、ＨＰＬ−Ｃ、総コレステロール及びＴＧを測定した。ＬＤＬ−Ｃレベルを、Ｆｒｉｅｄｅｗａｌｄの式に従って計算した。ＧＨレベルは、保存された空腹時血漿サンプルにおいて測定され、これらのサンプルは、異なった試験で直ちに−８０℃まで凍結されていた。フリーザーに貯蔵された多数のサンプルは、欠けていたか、ｈｓ−ＧＨの分析に血漿が不十分であった。ＧＨのベースライン値又はＧＨの１２ヶ月値のいずれかが欠落していた対象は、さらなる分析から除外された。この調整の後、研究は、４７２人から構成された。すべてのサンプルを、上記のようにして、ｈｓ−ｈＧＨイムノアッセイを用いて測定した。
【０１５５】
超音波検査
頸動脈超音波検査を、ベースライン、１８及び３６ヶ月時に実施した（Ｈｅｄｂｌａｄ  ｅｔ  ａｌ．２００１．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  １０３：１７２１−１７２６）。簡単に述べると、右頸動脈分岐の所定の範囲を、プラークの存在についてスキャンし、そして分岐部（ＩＭＴbulb）における最大ＩＭＴ及び総頚動脈（ＩＭＴcca）における平均ＩＭＴを測定した。
【０１５６】
統計学的分析
治療グループが比較される分析では、グループは４つのランダム化されたグループであるか、又はフルバスタチン対非フルバスタチン（すなわち、プラセボ）、又はメトプロロール対非メトプロロールである２つのグループに分けられる。空腹時ｈｓ−ＧＨは男性と女性との間で異なることが知られているので、すべてのモデルは、男性及び女性、並びに男女組み合わせて実施された。すべてのモデルは、年齢、性別（性別がまだ分けられてていない場合）、及びベースラインでのｈｓ−ＧＨの空腹時レベルの自然対数について調整された。空腹時ｈｓ−ＧＨがフルバスタチン又はメトプロロールによる治療により影響を受けるかどうかを調べるために、本発明者らは、従属変数としてΔＧＨ（１２ヶ月の値から差し引かれたベースライン値）及び独立変数として治療グループを用いて多重回帰分析を行った。
【０１５７】
次に、本発明者らは、従属変数として３６ヶ月におけるＩＭＴを用いた一連の多重回帰モデルにおいて、ｈｓ−ＧＨがＩＭＴに対する異なる薬剤の治療効果に影響を及ぼすかどうかを分析した。これらの分析においては、より大きなラングム化グループが、よりパワー（ｐｏｗｅｒ）を得るために使用された。この相互作用を評価するために、モデルに依存して、ΔＧＨ又はｈｓ−ＧＨの自然対数を掛けた治療グループ間の相互作用項を作成した。フォローアップの間、少数の個体が失われ、そして３６ヶ月時点でのＩＭＴの超音波検査を完結できなかった。ＩＭＴを分析する場合、それらの個体について最新のＩＭＴ−値（すなわち、１８ヶ月での）を使用し、そしてＩＭＴ−測定間の時間について分析を調整した。モデルはさらに、ベースライン時でのＩＭＴの自然対象に対して調整された。すべての分析は、ＳＰＳＳ（バージョン２２．０．０，ＳＰＳＳ  Ｉｎｃ．，Ｃｈｉｃａｇｏ，Ｉｌｌ）で実施された。０．０５未満の両側Ｐ値は、統計学的に有意であると考えられた。
【０１５８】
結果
ＢＣＡＰＳ研究集団における４７２人のベースライン特性が、表１１に示されている。すべてのグループにおける女性は、男性に比較して、ベースラインで、より高い値を有した。ｈｓ−ＧＨがベースライン又は１２ヶ月でのサンプル欠落のために測定され得ない対象は、そのベースライン特性に差異がなかった。欠落サンプルは異なる治療グループに均等に分布されていたが、一般的に、女性よりも男性の方が欠落サンプルに存在した。これにより、４つの治療グループのうち２つのグループで男性／女性比がわずかに異なっていた（表１１）。線形回帰モデルにおいては、ベースライン（ΔＧＨ）に比較して、１２ヶ月でのｈｓ−ＧＨのレベルの変化は、異なる治療グループに関連していた（表１２）。全コホートを分析する場合、分析のどれも有意ではなかった。男性においては、フルバスタチン／メトプロロールによる治療は、プラセボと比較して、ΔＧＨと有意な負の相関を示した（Ｐ＝０．０１５）。プラセボと比較して、ΔＧＨとフルバスタチン治療との間に有意な負の相関がまた存在した（Ｐ＝０．０４６）。
【０１５９】
フルバスタチンにより治療された男性対象は、フルバスタチンにより治療されなかった対象に比較して、１２ヶ月以上、ｈｓ−ＧＨのより多くの減少を示した。男性においては、プラセボ／プラセボに比較してメトプロロール／フルバスタチンによる治療は、ｈｓ−ＧＨのベースラインレベルとは無関係に１２ヶ月間の治療でｈｓ−ＧＨのより大きな減少と有意に関連した。さらに、フルバスタチン（メトプロロール／フルバスタチン及びプラセボ／フルバスタチン）を受けるすべての男性対象が、フルバスタチン治療を受けていないすべての対象と比較される場合、フルバスタチン治療はまた、ｈｓ−ＧＨのより大きな１２ヶ月減少と関連し、このことは、ｈｓ−ＧＨの空腹時値が、男性においてフルバスタチンによる治療により低減されることを示唆する。しかしながら、これに関して、フルバスタチン／プラセボグループにおける１２ヶ月間のｈｓ−ＧＨの変化は、プラセボ／プラセボグループに比較して、有意な違いがなかったことに注目すべきである。
【０１６０】
【表１２】
2020109407.tif 000013
【０１６１】
【表１３】
2020109407.tif 000014
【０１６２】
以下で調整されたモデル：年齢、及びベースライン時でｈｓ−ＧＨの自然対数の標準化された値。さらに、すべてのサブグループについて、性別について調整された。３つの異なるモデルが実行される：「すべてのグループ」においては、異なる治療グループがそれぞれプラセボと比較される。「すべてのフルバスタチン」においては、フルバスタチンを受ける個人と、フルバスタチンを受けない個人とを比較し、「すべてのメトロプロロール」において、その逆も比較する。Ｂ係数は、プラセボと比較して、当該薬剤による治療によるΔＧＨの増分として表される。
【図１】
2020109407.tif 000015
【図２】
2020109407.tif 000016
【図３】
2020109407.tif 000017
【図４】
2020109407.tif 000018
【図５】
2020109407.tif 000019
【図６】
2020109407.tif 000020
【図７】
2020109407.tif 000021
【図８】
2020109407.tif 000022
【配列表】
2020109407000001.app
【手続補正書】
【提出日】令和2年2月26日(2020.2.26)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
抗高血圧薬（例えば、アンギオテンシン変換酵素インヒビター（ＡＣＥインヒビター）、アンギオテンシン受容体ブロッカー（ＡＲＢ）、β−アドレナリン受容体ブロッカー（β−ブロッカー）及び／又はスタチン）により処置される、血管リスクにおける、対象の治療応答をモニターするための方法であって、下記工程：
・時点Ｘ１で採取される、抗高血圧薬を用いる前記対象の血液サンプルにおけるｈＧＨ及び／又はそのアイソフォームのレベルを決定し、及び
・時点Ｘ２で採取される、抗高血圧薬を用いる前記対象の血液サンプルにおけるｈＧＨ及び／又はそのアイソフォームのレベルを決定し、及び
・ここで時点Ｘ１が、治療の開始の前又は治療の開始の後の何れかであるが、何れの場合でも、時点Ｘ２よりも早く、及び
・ここで、時点Ｘ２は、治療の開始の後であり、かつ、何れの場合でも、時点Ｘ１よりも後であり、
・時点Ｘ１で採取される血液サンプルにおけるｈＧＨ及び／又はそのアイソフォームの前記決定されたレベルと、時点Ｘ２で採取される血液サンプルにおけるｈＧＨ及び／又はそのアイソフォームの前記決定されたレベルとを比較し、
・ここで、時点Ｘ１で採取された血液サンプルにおけるｈＧＨ及び／又はそのアイソフォームの前記レベルと比較して、時点Ｘ２で採取された血液サンプルにおけるｈＧＨ及び／又はそのアイソフォームのより低いレベルが、治療応答を示唆する、
方法。
【請求項２】
時点Ｘ１で採取される前記血液サンプルにおけるｈＧＨ及び／又はそのアイソフォームの前記決定されたレベルが、所定の閾値以上であり、及び、前記対象が抗高血圧薬（例えば、アンギオテンシン変換酵素インヒビター（ＡＣＥインヒビター）、アンギオテンシン受容体ブロッカー（ＡＲＢ）、β−アドレナリン受容体ブロッカー（β−ブロッカー）及び／又はスタチン）を用いた血圧降下療法により低下させられ得る血管リスクを有するものとして同定されている、
請求項１に記載の、抗高血圧薬（例えば、アンギオテンシン変換酵素インヒビター（ＡＣＥインヒビター）、アンギオテンシン受容体ブロッカー（ＡＲＢ）、β−アドレナリン受容体ブロッカー（β−ブロッカー）及び／又はスタチン）により処置される、血管リスクにおける、対象の治療応答をモニターするための方法。
【請求項３】
前記時点Ｘ１が、治療の開始の前である、
請求項１又は２に記載の、抗高血圧薬（例えば、アンギオテンシン変換酵素インヒビター（ＡＣＥインヒビター）、アンギオテンシン受容体ブロッカー（ＡＲＢ）、β−アドレナリン受容体ブロッカー（β−ブロッカー）及び／又はスタチン）により処置される、血管リスクにおける、対象の治療応答をモニターするための方法。
【請求項４】
前記時点Ｘ２が、時点Ｘ１の後の１２か月、２４ケ月又は３６ヶ月である、
請求項１〜３の何れか１項に記載の、抗高血圧薬（例えば、アンギオテンシン変換酵素インヒビター（ＡＣＥインヒビター）、アンギオテンシン受容体ブロッカー（ＡＲＢ）、β−アドレナリン受容体ブロッカー（β−ブロッカー）及び／又はスタチン）により処置される、血管リスクにおける、対象の治療応答をモニターするための方法。
【外国語明細書】
2020109407000001.pdf