(57)【要約】      （修正有）【課題】インフルエンザウイルスの治療および予防のための抗体、組成物および方法の提供。【解決手段】インフルエンザＢヤマガタクレードおよびインフルエンザＢビクトリアクレードそれぞれの１つまたは複数の株に対して１０ｎＭまたはこれより強い結合親和性（ＫＤ）を示す、単離ヒト抗体またはその抗原結合フラグメント。前記抗体または抗原結合フラグメントは改変された単一特異性抗体および多重特異性ヒトモノクローナル抗体からなる群より選択される。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
インフルエンザＢヤマガタクレードおよびインフルエンザＢビクトリアクレードそれぞれの１つまたは複数の株に対して１０ｎＭまたはこれより強い結合親和性（ＫＤ）を示す、単離ヒト抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項２】
インフルエンザＢヤマガタクレードおよびインフルエンザＢビクトリアクレードそれぞれの１つまたは複数の株に対して３ｎＭまたはこれより強い結合親和性（ＫＤ）を示す、請求項１に記載の抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項３】
改変された単一特異性抗体および多重特異性ヒトモノクローナル抗体からなる群より選択される、請求項１に記載の抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項４】
インフルエンザＢヤマガタクレードおよびインフルエンザＢビクトリアクレードの１つまたは複数の株による細胞の感染を中和する、請求項１に記載の抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項５】
（ａ）重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、（ｂ）重鎖相補性決定領域２（ＨＣＤＲ２）および（ｃ）重鎖相補性決定領域３（ＨＣＤＲ３）または１つもしくは複数のＣＤＲドメイン配列内に１〜３個のアミノ酸置換を含むその高度に相同な変異体を含み、ＨＣＤＲ１／ＨＣＤＲ２／ＨＣＤＲ３が、配列番号３１／３２／３３；４１／４２／４３；５１／５２／５３；６１／６２／６３；７１／７２／７３；８１／８２／８３；９１／９２／９３；１０１／１０２／１０３；１１１／１１２／１１３；１２１／１２２／１２３；１３１／１３２／１３３；１４１／１４２／１４３；１５１／１５２／１５３；１６１／１６２／１６３；１７１／１７２／１７３；１８１／１８２／１８３；１９１／１９２／１９３；２０１／２０２／２０３；２１１／２１２／２１３；２２１／２２２／２２３；２３１／２３２／２３３；２４１／２４２／２４３；２５１／２５２／２５３；２６１／２６２／２６３；２７１／２７２／２７３および２８１／２８２／２８３からなる群より選択され、前記変異体および前記抗体またはフラグメントが、インフルエンザウイルスと結合し、かつ／または阻害する特性を有する、単離ヒト抗体もしくはその抗原結合フラグメント。
【請求項６】
（ａ）軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、（ｂ）軽鎖相補性決定領域２（ＬＣＤＲ２）；および（ｃ）軽鎖相補性決定領域３（ＬＣＤＲ３）または１つもしくは複数のＣＤＲドメイン配列内に１〜３個のアミノ酸置換を含むその高度に相同な変異体をさらに含み、ＬＣＤＲ１／ＬＣＤＲ２／ＬＣＤＲ３が、配列番号３４／３５／３６；４４／４５／４６；５４／５５／５６；６４／６５／６６；７４／７５／７６；８４／８５／８６；１０４／１０５／１０６；１１４／１１５／１６；１２４／１２５／１２６；１３４／１３５／１３６；１４４／１４５／１４６；１５４／１５５／１５６；１６４／１６５／１６６；１７４／１７５／１７６；１８４／１８５／１８６；１９４／１９５／１９６；２０４／２０５／２０６；２１４／２１５／２１６；２２４／２２５／２２６；２３４／２３５／２３６；２４４／２４５／２４６；２５４／２５５／２５６；２６４／２６５／２６６；２７４／２７５／２７６；および２８４／２８５／２８６からなる群より選択され、前記変異体および前記抗体またはフラグメントが、インフルエンザウイルスと結合し、かつ／または阻害する特性を有する、請求項５に記載の抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項７】
前記重鎖および軽鎖ＣＤＲ配列ＨＣＤＲ１／ＨＣＤＲ２／ＨＣＤＲ３／ＬＣＤＲ１／ＬＣＤＲ２／ＬＣＤＲ３が、配列番号３１／３２／３３／３４／３５／３６；４１／４２／４３／４４／４５／４６；５１／５２／５３／５４／５５／５６；６１／６２／６３／６４／６５／６６；７１／７２／７３／７４／７５／７６；８１／８２／８３／８４／８５／８６；９１／９２／９３／９４／９５／９６；１０１／１０２／１０３／１０４／１０５／１０６；１１１／１１２／１１３／１１４／１１５／１１６；１２１／１２２／１２３／１２４／１２５／１２６；１３１／１３２／１３３／１３４／１３５／１３６；１４１／１４２／１４３／１４４／１４５／１４６；１５１／１５２／１５３／１５４／１５５／１５６；１６１／１６２／１６３／１６４／１６５／１６６；１７１／１７２／１７３／１７４／１７５／１７６；１８１／１８２／１８３／１８４／１８５／１８６；１９１／１９２／１９３／１９４／１９５／１９６；２０１／２０２／２０３／２０４／２０５／２０６；２１１／２１２／２１３／２１４／２１５／２１６；２２１／２２２／２２３／２２４／２２５／２２６；２３１／２３２／２３３／２３４／２３５／２３６；２４１／２４２／２４３／２４４／２４５／２４６；２５１／２５２／２５３／２５４／２５５／２５６；２６１／２６２／２６３／２６４／２６５／２６６；２７１／２７２／２７３／２７４／２７５／２７６；および２８１／２８２／２８３／２８４／２８５／２８６または１つもしくは複数のＣＤＲドメイン配列内に１〜３個のアミノ酸置換を含むその高度に相同な変異体からなる群より選択され、前記変異体および前記抗体またはフラグメントが、インフルエンザウイルスと結合し、かつ／または阻害する特性を有する、請求項６に記載の抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項８】
インフルエンザＢヤマガタクレードおよびインフルエンザＢビクトリアクレード両方のそれぞれの１つまたは複数の株と特異的に結合し、配列番号３９、４９、５９、６９、７９、８９、９９、１０９、１１９、１２９、１３９、１４９、１５９、１６９、１７９、１８９、１９９、２０９、２１９、２２９、２３９、２４９、２５９、２６９、２７９および２８９からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）または前記ＨＣＶＲと少なくとも８０％の配列同一性を有するその相同変異体を含み、前記変異体および前記抗体またはフラグメントが、インフルエンザウイルスと結合し、かつ／または阻害する特性を有する、単離ヒト抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項９】
配列番号４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０および２９０からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変配列（ＬＣＶＲ）または前記ＬＣＶＲと少なくとも８０％の配列同一性を有するその相同変異体を含み、前記変異体および前記抗体またはフラグメントが、インフルエンザウイルスと結合し、かつ／または阻害する特性を有する、請求項８に記載の抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項１０】
３９／４０、４９／５０、５９／６０、６９／７０、７９／８０、８９／９０、９９／１００、１０９／１１０、１１９／１２０、１２９／１３０、１３９／１４０、１４９／１５０、１５９／１６０、１６９／１７０、１７９／１８０、１８９／１９０、１９９／２００、２０９／２１０、２１９／２２０、２２９／２３０、２３９／２４０、２４９／２５０、２５９／２６０、２６９／２７０、２７９／２８０および２８９／２９０からなる群より選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ配列対あるいは前記ＨＣＶＲおよび／またはＬＣＶＲを少なくとも８０％の配列同一性を有するその相同変異体を含み、前記変異体および前記抗体が、インフルエンザウイルスと結合し、かつ／または阻害する特性を有する、請求項９に記載の抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項１１】
配列番号７９／８０、１２９／１３０、２１９／２２０、２２９／２３０、２３９／２４０、２４９／２５０および２６９／２７０からなる群より選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ対あるいは前記ＨＣＶＲおよび／またはＬＣＶＲと少なくとも８０％の配列同一性を有するその相同変異体を含み、前記変異体および前記抗体が、インフルエンザウイルスと結合し、かつ／または阻害する特性を有する、請求項１０に記載の抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項１２】
配列番号３０７、３０８、３０９、３１０、３１１、３１２および３１３からなる群より選択される１つまたは複数のエピトープまたはその不連続エピトープと結合する、請求項１に記載の抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項１３】
インフルエンザＢヤマガタクレードおよびインフルエンザＢビクトリアクレードそれぞれの１つまたは複数の株との結合に関して、１００倍未満過剰に存在する場合に請求項１〜１１のいずれか１項に記載の抗体またはフラグメントとしてその少なくとも５０％と置き換わることにより競合する、単離ヒト抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項１４】
請求項５〜１３のいずれか１項に記載の抗体をコードする、単離コドン最適化核酸分子。
【請求項１５】
請求項１４に記載の核酸分子を含む、発現ベクター。
【請求項１６】
請求項１５に記載の発現ベクターを含む、組換えポリペプチドを発現させるための宿主細胞。
【請求項１７】
抗インフルエンザＢ抗体またはその抗原結合フラグメントを作製する方法であって、前記抗体またはそのフラグメントの産生が可能な条件下で請求項１６に記載の宿主細胞を増殖させることと、そのようにして産生された前記抗体またはそのフラグメントを回収することとを含む、方法。
【請求項１８】
請求項１に記載の抗体または抗原結合フラグメントと、薬学的に許容される担体とを含む、医薬組成物。
【請求項１９】
請求項５に記載の抗体または抗原結合フラグメントと、薬学的に許容される担体とを含み、前記抗体またはフラグメントのＰＢＳ中で測定した第一の融解温度（Ｔｍ１）は５５℃以上である、医薬組成物。
【請求項２０】
インフルエンザＡの少なくとも１つの株に対する結合特異性を有する１つまたは複数のヒト抗体またはその抗原結合フラグメントをさらに含む、請求項１９に記載の医薬組成物。
【請求項２１】
インフルエンザＡに対する特異性を有する前記抗体または抗原結合フラグメントが、第１群および第２群両方の１つまたは複数の株に対する特異性を含む、請求項２０に記載の医薬組成物。
【請求項２２】
（ａ）配列番号１１、１２、１３のＨＣＤＲ１／ＨＣＤＲ２／ＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含む重鎖アミノ酸配列および配列番号１４、１５、１６のＬＣＤＲ１／ＬＣＤＲ２／ＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含む軽鎖アミノ酸配列または１つもしくは複数のＣＤＲドメイン配列内に１〜３個のアミノ酸置換を含むその高度に相同な変異体を含み、前記変異体が、インフルエンザウイルスと結合し、かつ／または阻害することが可能である、第一の抗体またはその抗原結合フラグメントと、
（ｂ）配列番号２１、２２、２３のＨＣＤＲ１／ＨＣＤＲ２／ＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含む重鎖アミノ酸配列および配列番号２４、２５、２６のＣＤＲドメイン配列ＬＣＤＲ１／ＬＣＤＲ２／ＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含む軽鎖アミノ酸配列または１つもしくは複数のＣＤＲドメイン配列内に１〜３個のアミノ酸置換を含むその高度に相同な変異体を含み、前記変異体が、インフルエンザウイルスと結合し、かつ／または阻害することが可能である、第二の抗体またはその抗原結合フラグメントと、
（ｃ）第三の抗体またはその抗原結合フラグメントであって、それぞれ
（ｉ）配列番号７１、７２、７３および配列番号７４、７５、７６；
（ｉｉ）配列番号９１、９２、９３および配列番号９４、９５、９６；
（ｉｉｉ）配列番号１０１、１０２、１０３および配列番号１０４、１０５、１０６；
（ｉｖ）配列番号１２１、１２２、１２３および配列番号１２４、１２５、１２６；
（ｖ）配列番号１８１、１８２、１８３および配列番号１８４、１８５、１８６；
（ｖｉ）配列番号１９１、１９２、１９３および配列番号１９４、１９５、１９６；
（ｖｉｉ）配列番号２０１、２０２、２０３および配列番号２０４、２０５、２０６；
（ｖｉｉｉ）配列番号２１１、２１２、２１３および配列番号２１４、２１５、２１６；
（ｉｘ）配列番号２２１、２２２、２２３および配列番号２２４、２２５、２２６；
（ｘ）配列番号２３１、２３２、２３３および配列番号２３４、２３５、２３６；
（ｘｉ）配列番号２４１、２４２、２４３および配列番号２４４、２４５、２４６；
（ｘｉｉ）配列番号２６１；２６２、２６３および配列番号２６４、２６５、２６６；もしくは
（ｘｉｉｉ）配列番号２７１、２７２、２７３および配列番号２７４、２７５、２７６
から選択される、ＨＣＤＲ１／ＨＣＤＲ２／ＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含む重鎖アミノ酸配列および軽鎖ＣＤＲドメイン配列ＬＣＤＲ１／ＬＣＤＲ２／ＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含む軽鎖アミノ酸配列または１つもしくは複数のＣＤＲドメイン配列内に１〜３個のアミノ酸置換を含むその高度に相同な変異体を含み、前記変異体および前記抗体またはフラグメントが、インフルエンザウイルスと結合し、かつ／または阻害することが可能である、第三の抗体またはその抗原結合フラグメントと
を含む、医薬組成物。
【請求項２３】
前記第一の抗体またはフラグメントが、配列番号１９／２０のＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ対またはＨＣＶＲもしくはＬＣＶＲドメイン配列の一方もしくは両方に少なくとも８０％の配列同一性を含むその高度に相同な変異体を含み、前記変異体および前記抗体またはフラグメントが、インフルエンザウイルスと結合し、かつ／または阻害する特性を有する、請求項２２に記載の組成物。
【請求項２４】
前記第二の抗体またはフラグメントが、配列番号２９／３０のＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ対またはＨＣＶＲもしくはＬＣＶＲドメイン配列の一方もしくは両方に少なくとも８０％の配列同一性を含むその高度に相同な変異体を含み、前記変異体および前記抗体またはフラグメントが、インフルエンザウイルスと結合し、かつ／または阻害する特性を有する、請求項２２に記載の組成物。
【請求項２５】
前記第三の抗体またはフラグメントが、配列番号７９／８０、９９／１００、１０９／１１０、１２９／１３０、１８９／１９０、１９９／２００、２０９／２１０、２１９／２２０、２２９／２３０、２３９／２４０、２４９／２５０、２６９／２７０および２７９／２８０からなる群より選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ対またはＨＣＶＲもしくはＬＣＶＲドメイン配列の一方もしくは両方に少なくとも８０％の配列同一性を含みその高度に相同な変異体を含み、前記変異体および前記抗体またはフラグメントが、インフルエンザウイルスと結合し、かつ／または阻害する特性を有する、請求項２２に記載の組成物。
【請求項２６】
前記第三の抗体またはフラグメントが、配列番号７９／８０、１２９／１３０、２１９／２２０、２２９／２３０、２３９／２４０、２４９／２５０および２６９／２７０からなる群より選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ対またはＨＣＶＲもしくはＬＣＶＲドメイン配列の一方もしくは両方に少なくとも８０％の配列同一性を含むその高度に相同な変異体を含み、前記変異体および前記抗体またはフラグメントが、インフルエンザウイルスと結合し、かつ／または阻害する特性を有する、請求項２２に記載の組成物。
【請求項２７】
前記第一の抗体、第二の抗体および第三の抗体またはフラグメントがそれぞれ、いずれも２ポイントの範囲内に収まる等電点（ｐＩ）を示す、請求項２２に記載の組成物。
【請求項２８】
前記第一の抗体が、配列番号１７／１８のＨＣ／ＬＣアミノ酸配列を含むＴＲＬ０５３／Ｍａｂ５３であり、前記第二の抗体が、配列番号２７／２８のＨＣ／ＬＣアミノ酸配列を含む抗体ＴＲＬ５７９／Ｍａｂ５７９であり、前記第三の抗体が、それぞれ２２７／２２８、２０７／２０８、２４７／２４８、２３７／２３８、２１７／２１８、２６７／２６８、７７／７８および１２７／１２８からなる群より選択されるＨＣ／ＬＣアミノ酸配列を含むＴＲＬ８４７、ＴＲＬ８４５、ＴＲＬ８４９、ＴＲＬ８４８、ＴＲＬ８４６、ＴＲＬ８５４、ＴＲＬ８０９およびＴＲＬ８３２またはＨＣもしくはＬＣドメイン配列の一方もしくは両方に少なくとも８０％の配列同一性を含むその高度に相同な変異体からなる群より選択され、前記変異体および前記抗体またはフラグメントが、インフルエンザウイルスと結合し、かつ／または阻害する特性を有する、請求項２２に記載の組成物。
【請求項２９】
前記第一の抗体、第二の抗体および第三の抗体またはフラグメントがそれぞれ、必要とする対象のインフルエンザＡおよびインフルエンザＢによる感染症または疾患の治療または予防に有効な量で単回用量に製剤化されている、請求項２８に記載の組成物。
【請求項３０】
前記第一の抗体、第二の抗体および第三の抗体またはフラグメントが、それぞれ１用量当たり１００ｍｇ／ｋｇ以下の量で前記組成物中に存在する、請求項２９に記載の組成物。
【請求項３１】
前記第一の抗体、第二の抗体および第三の抗体またはフラグメントが、それぞれ１用量当たり１０ｍｇ／ｋｇ以下の量で前記組成物中に存在する、請求項２９に記載の組成物。
【請求項３２】
前記第一の抗体、第二の抗体および第三の抗体またはフラグメントが、それぞれ１用量当たり１ｍｇ／ｋｇ以下の量で前記組成物中に存在する、請求項２９に記載の組成物。
【請求項３３】
前記第一の抗体、第二の抗体および第三の抗体またはフラグメントがそれぞれ、抗体または抗体フラグメント全体で１用量当たり１０ｍｇ／ｋｇ以下の量で前記組成物中に存在する、請求項２９に記載の組成物。
【請求項３４】
前記担体が、経鼻送達または肺送達用の希釈剤および／または補形剤を含む、請求項２９に記載の組成物。
【請求項３５】
抗ウイルス治療薬、ウイルス複製阻害剤、プロテアーゼ阻害剤、ポリメラーゼ阻害剤、赤血球凝集素阻害剤、気管支拡張薬または吸入副腎皮質ステロイド剤のうちの１つまたは複数をさらに含む、請求項２９に記載の組成物。
【請求項３６】
前記抗体またはその抗原結合フラグメントの１つまたは複数が、１１／１２／１３、２１／２２／２３、７１／７２／７３、７４／７５／７６、９１／９２／９３、１０１／１０２／１０３、１２１／１２２／１２３、１８１／１８２／１８３、１９１／１９２／１９３、２０１／２０２／２０３、２１１／２１２／２１３、２２１／２２２／２２３、２３１／２３２／２３３、２４１／２４２／２４３、２６１／２６２／２６３および２７１／２７２／２７３からなる群より選択されるＨＣＤＲ１／ＨＣＤＲ２／ＨＣＤＲ３アミノ酸配列または１つもしくは複数のＣＤＲドメイン配列内に１〜３個のアミノ酸置換を含むその高度に相同な変異体を含むＦａｂ、Ｆａｂ’およびＦ（ａｂ’）２、ｓｃＦｖ、ｄＡｂまたは多重特異性抗体から選択される、抗体フラグメントであり、前記変異体および前記抗体が、インフルエンザウイルスと結合し、かつ／または阻害する特性を有する、請求項２２に記載の組成物。
【請求項３７】
対象のインフルエンザ感染症を治療または予防する方法であって、対象に
（ａ）第一の抗体またはその抗原結合フラグメントであって、配列番号１１、１２、１３のＨＣＤＲ１／ＨＣＤＲ２／ＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含む重鎖アミノ酸配列および配列番号１４、１５、１６のＬＣＤＲ１／ＬＣＤＲ２／ＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含む軽鎖アミノ酸配列または１つもしくは複数のＣＤＲドメイン配列内に１〜３個のアミノ酸置換を含むその高度に相同な変異体を含み、前記変異体および前記抗体またはフラグメントが、インフルエンザウイルスと結合し、かつ／または阻害することが可能である、第一の抗体またはその抗原結合フラグメントと、
（ｂ）第二の抗体またはその抗原結合フラグメントであって、配列番号２１、２２、２３のＨＣＤＲ１／ＨＣＤＲ２／ＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含む重鎖アミノ酸配列および配列番号２４、２５、２６のＣＤＲドメイン配列ＬＣＤＲ１／ＬＣＤＲ２／ＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含む軽鎖アミノ酸配列または１つもしくは複数のＣＤＲドメイン配列内に１〜３個のアミノ酸置換を含むその高度に相同な変異体を含み、前記変異体および前記抗体またはフラグメントが、インフルエンザウイルスと結合し、かつ／または阻害することが可能である、第二の抗体またはその抗原結合フラグメントと、
（ｃ）第三の抗体またはその抗原結合フラグメントであって、それぞれ
（ｉ）配列番号７１、７２、７３および配列番号７４、７５、７６；
（ｉｉ）配列番号９１、９２、９３および配列番号９４、９５、９６；
（ｉｉｉ）配列番号１０１、１０２、１０３および配列番号１０４、１０５、１０６；
（ｉｖ）配列番号１２１、１２２、１２３および配列番号１２４、１２５、１２６；
（ｖ）配列番号１８１、１８２、１８３および配列番号１８４、１８５、１８６；
（ｖｉ）配列番号１９１、１９２、１９３および配列番号１９４、１９５、１９６；
（ｖｉｉ）配列番号２０１、２０２、２０３および配列番号２０４、２０５、２０６；
（ｖｉｉｉ）配列番号２１１、２１２、２１３および配列番号２１４、２１５、２１６；
（ｉｘ）配列番号２２１、２２２、２２３および配列番号２２４、２２５、２２６；
（ｘ）配列番号２３１、２３２、２３３および配列番号２３４、２３５、２３６；
（ｘｉ）配列番号２４１、２４２、２４３および配列番号２４４、２４５、２４６；
（ｘｉｉ）配列番号２６１；２６２、２６３および配列番号２６４、２６５、２６６；もしくは
（ｘｉｉｉ）配列番号２７１、２７２、２７３および配列番号２７４、２７５、２７６
から選択される、ＨＣＤＲ１／ＨＣＤＲ２／ＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含む重鎖アミノ酸配列および軽鎖ＣＤＲドメイン配列ＬＣＤＲ１／ＬＣＤＲ２／ＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含む軽鎖アミノ酸配列または１つもしくは複数のＣＤＲドメイン配列内に１〜３個のアミノ酸置換を含むその高度に相同な変異体を含み、前記変異体および前記抗体またはフラグメントが、インフルエンザウイルスと結合し阻害することが可能である、第三の抗体またはその抗原結合フラグメントと
を投与することを含む、方法。
【請求項３８】
詳細なウイルス株判定を必要とせずに前記対象のインフルエンザ感染症の状態を判定する、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
前記対象が、インフルエンザによる感染症または疾患から防御される、請求項３７に記載の方法。
【請求項４０】
前記第一の抗体、第二の抗体および第三の抗体またはフラグメントをそれぞれ、同時に、または逐次的に投与する、請求項３７に記載の方法。
【請求項４１】
前記免疫調節薬がインターフェロンベータ１ａである、請求項３５に記載の組成物。
【請求項４２】
前記抗ウイルス治療薬が、オセルタミビル、ザナミビル、ペラミビルおよびラニナミビルからなる群より選択されるノイラミニダーゼ阻害剤である、請求項３５に記載の組成物。
【請求項４３】
前記抗ウイルス治療薬が、ファビピラビル（Ｔ−７０５）およびＶＸ７８７からなる群より選択されるＲＮＡポリメラーゼ阻害剤である、請求項３５に記載の組成物。
【請求項４４】
前記抗ウイルス治療薬が、Ｆｌｕｄａｓｅ（Ｄａｓ１８１）およびＡＢ−１０３（ｐ２ＴＡ）からなる群より選択される宿主細胞標的化治療剤である、請求項３５に記載の組成物。
【請求項４５】
前記抗ウイルス治療薬が、ラマンタジンおよびアマンタジンからなる群より選択されるイオンチャネル阻害剤である、請求項３５に記載の組成物。
【請求項４６】
前記気管支拡張薬が、アルブテロール、レバルブテロールまたはサルメテロールである、請求項３５に記載の組成物。
【請求項４７】
組換え抗体またはそのフラグメントである、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の単離抗体またはフラグメント。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願の相互参照）
本願は、２０１５年２月４日にＰＣＴ国際出願として出願され、２０１４年２月４日に出願された米国特許仮出願第６１／９３５，７４６号および２０１４年９月１７日に出願された米国特許仮出願第６２／０５１，６３０号に対する優先権の利益を主張するものであり、上記の仮出願はそれぞれ、その内容全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０００２】
ＥＦＳ−ＷＥＢにより提出される配列表への言及
ＭＰＥＰ１７３０ＩＩ．Ｂ．２（ａ）（Ｃ）に認可および記載されるＵＳＰＴＯ−ＥＦＳ−ＷＥＢサーバを介して電子提出された以下の配列表は、その内容全体があらゆる目的において参照により本明細書に組み込まれる。配列表は、電子出願されたテキストファイルで以下の通りに認識される：
【表１】
2020096618.tif 000002
【０００３】
インフルエンザウイルスの治療および予防のための抗体、組成物および方法が提供される。インフルエンザ赤血球凝集素ＡのＨＡ０成熟切断部位コンセンサス配列付近に結合する抗体および抗原結合フラグメントが提供される。このほか、インフルエンザＡ株およびＢ株に効果を示す受動免疫のための抗体組成物、組合せおよび方法が提供される。
【背景技術】
【０００４】
インフルエンザは死亡および疾患の原因の上位を占めており、上気道および下気道を冒す。インフルエンザウイルスにはインフルエンザＡ、ＢおよびＣの３種類がある。ヒトインフルエンザＡおよびＢウイルスは季節的流行を引き起こす。Ｃ型インフルエンザ感染症は軽度の呼吸器疾患を引き起こすものであり、流行を引き起こすことはないと考えられている。インフルエンザＡウイルスは、ウイルス表面の２種類のタンパク質、赤血球凝集素（Ｈ）およびノイラミニダーゼ（Ｎ）に基づいていくつかの亜型に分けられる。赤血球凝集素には１７の異なる亜型があり、ノイラミニダーゼには１０の異なる亜型がある。インフルエンザＡウイルスはさらに、いくつかの異なる株に分類することができる。現在、ヒトによくみられるインフルエンザＡウイルスの亜型にはインフルエンザＡ（Ｈ１Ｎ１）ウイルスおよびインフルエンザＡ（Ｈ３Ｎ２）ウイルスがある。インフルエンザＢウイルスは亜型には分けられないが、Ｂ／ビクトリア／２／８７様およびＢ／ヤマガタ／１６／８８様の２つの異なる系統に分類される。インフルエンザＡ（例えば、Ｈ１Ｎ１）、Ａ（例えば、Ｈ３Ｎ２）およびインフルエンザＢウイルスは、インフルエンザワクチンに毎年含まれている。
【０００５】
現在、異なる頻度でヒト集団で流行している臨床的に重要なインフルエンザウイルスは５種類あり、このうち３種類がインフルエンザＡであり、２種類がインフルエンザＢである。Ａ型インフルエンザウイルスは異なる２つの系統群、１および２に分けられる。第１群には、赤血球凝集素亜型Ｈ１、Ｈ２、Ｈ５、Ｈ６、Ｈ８、Ｈ９、Ｈ１１、Ｈ１３およびＨ１６が含まれる。第２群には、Ｈ３、Ｈ４、Ｈ７、Ｈ１０、Ｈ１５およびＨ１４が含まれる。第１群のインフルエンザＡウイルスのうち現時点で重要な流行ウイルスは、ヒト起源のものとブタ起源のものとにさらに分けられる亜型Ｈ１に属するものであり、第２群の重要な流行ウイルスは、現時点で亜型Ｈ３に属するものである。季節病の大部分はインフルエンザＡウイルスに起因するものであり、米国では、過去１２回のインフルエンザの季節のうち８回はＨ３ウイルスが優位を占めている（ＣＤＣ季節性インフルエンザ；米国サーベイランスデータ）。１９６８年、Ｈ３ウイルスの１つが２０世紀の３つの主要なインフルエンザ大流行のうちの１つを引き起こし、そのとき以来、Ｈ３ウイルスがヒト疾患の重要な病原体として存在し続けている。Ｈ３インフルエンザウイルスはヒトに加えて、トリ、ブタおよびウマにもよく感染する。インフルエンザＢウイルスは１００年以上の間、ヒトで流行しており、現時点での株はヤマガタ系統およびビクトリア系統の２つの系統に分けられる。最近、三価インフルエンザワクチンは、両系統のインフルエンザＢのほかにもＨ１ウイルスおよびＨ３ウイルスをカバーする四価抗原含有ワクチンに発展した。
【０００６】
現在実施されているインフルエンザの予防および治療は十分なものではなく、効果がみられないこともある。ワクチン接種が普及しているものの、インフルエンザに感染しやすいことに変わりはない。易感染性に寄与する因子としては、（１）広範囲にわたってワクチンが不足した２００９年のＨ１Ｎ１大流行時のように、ワクチン接種によるカバーが不十分であったこと、（２）２００８年のように、ワクチン製剤が流行株に十分に対応していない年があること、（３）平均有効率が６５歳で４０〜５０％、７０歳超ではわずか１５〜３０％であるように、高齢者に対するワクチンの効果が低いこと、（４）特に懸念されるＨ５Ｎ１のような季節性ワクチンが対応していない流行株の出現が挙げられる。さらに、現在インフルエンザの治療に用いることができる抗ウイルス治療薬に対する薬物耐性が深刻な問題となっている。Ｍ２タンパク質に作用しウイルス融合を阻害する薬物であるアダマンタン（アマンチジンおよびリマンタジン）に対する耐性率は、２００４年の時点で１．９％であったものが、２００４〜２００５年のインフルエンザの季節の最初の６か月の間に１４．５％まで増加し、現時点では９０％を超えている（Ｓｈｅｕ，Ｔ．Ｇ．ら（２０１１）Ｊ  Ｉｎｆｅｃｔ  Ｄｉｓ  ２０３：１３−１７）。インフルエンザノイラミニダーゼタンパク質を阻害する抗ウイルス薬であるオセルタミビルリン酸塩（Ｔａｍｉｆｌｕ（登録商標））の耐性率は、２００６〜２００７年のインフルエンザの季節にＨ１Ｎ１ウイルスで１〜２％であったものが、２００７〜２００８年までに１２％まで急激に増加し、２００９年には季節性Ｈ１Ｎ１ウイルスで９９％を上回った。幸いなことに、２００９年に大流行したＨ１Ｎ１株はＴａｍｉｆｌｕに感受性であり、これにより死亡者数が比較的少なく済んだものと思われる。このため、新規なインフルエンザの予防法／治療法が圧倒的に必要とされる。
【０００７】
ただ、インフルエンザ株を判定する診断には通常、１２〜２４時間の作業時間を要するため、しかるべき治療法の選択に株の判定が必要な場合、治療に不利な遅れが生じる。このため、複数のクレードと結合し、それとの強い親和性を示す抗体が依然として必要とされている。特に、抗体または抗体混合物を投与する前に感染ウイルスを詳細に特徴付ける必要を回避するためには、インフルエンザＡおよびインフルエンザＢの両方に対して効果を示す抗体を含み、複数の株に広域免疫反応性を示す受動ワクチンが望ましい。インフルエンザＡおよびＢ両方の全株に効果のある広域反応性を示す抗体および組成物は、特に治療前に株の事前診断を必要としないという理由から、望ましい。さらに、薬剤の製造および投与の両方を容易にするため、効力の高いものが望ましい。
【発明の概要】
【０００８】
いくつかの実施形態では、主要なインフルエンザＢ系統であるヤマガタクレードおよびビクトリアクレードの両方に反応性を示す組換えヒト抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。
【０００９】
いくつかの実施形態では、インフルエンザＢの典型的な三量体と高い親和性で結合するモノクローナル抗体が提供される。
【００１０】
いくつかの実施形態では、例えば、これまでに同定されていないインフルエンザＢ株または約２〜３年に１度実際に流行し季節性ワクチンに含まれていないため予防できない株による感染が起こった場合に受動免疫を付与することが可能な抗体が提供される：Ｍｏｎｔｏ，Ａ．Ａ．ら，Ｖａｃｃｉｎｅ（２００９）２７：５０４３−５０５３。
【００１１】
いくつかの実施形態では、多数の株にわたって結合し、必須部位を標的とすることを示す、したがって、これまでに遭遇したことのない株でも結合する可能性のある抗体が提供される。このような抗体はほかにも、ワクチンを接種しても十分な防御応答が得られない対象または慢性閉塞性肺疾患患者のように根底に気管支機能の低下がみられるか、免疫系が脆弱である（例えば、幼少者、高齢者、移植患者および癌またはＨＩＶの化学療法を受けている患者）ためリスクが高い対象において感染を改善または予防するか、その毒性を減弱させるのに有用である。
【００１２】
いくつかの実施形態では、広域受動免疫を付与するｍＡｂの混合物を含む、組成物が提供される。
【００１３】
いくつかの実施形態では、（１）両方の主要なインフルエンザＢ系統に反応性を示す１つまたは複数の結合部分、モノクローナル抗体またはその免疫反応性フラグメントと、（２）グループ間の交差反応性を示すものを含め、型の標本としてＨ１、Ｈ２、Ｈ５、Ｈ６、Ｈ８、Ｈ９、Ｈ１１、Ｈ１３、Ｈ１６を含む第１群および／またはＨ３およびＨ７を含む第２群のインフルエンザＡウイルスに反応性を示す１つまたは複数の結合部分、モノクローナル抗体またはその免疫反応性フラグメントとを含む、組成物が提供される。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＨＡ０タンパク質に含まれるエピトープと特異的に結合し、天然の三量体型のＨＡおよびタンパク質分解により活性化された型のＨＡを認識する。
【００１４】
別の実施形態では、特異的に結合することができるウイルスの型およびクレードの範囲を拡大することが可能な二重特異性抗体、多重特異性抗体およびそのフラグメントから選択される結合部分ならびにインフルエンザＡおよびインフルエンザＢの両方に特徴的な複数の株と反応する２つ以上の結合部分を含む組成物が提供される。
【００１５】
いくつかの実施形態では、インフルエンザＢヤマガタクレードおよびインフルエンザＢビクトリアクレードそれぞれの１つまたは複数の株に対して１０ｎＭもしくはこれより強い結合親和性（ＫＤ）または３ｎＭもしくはこれより強い結合親和性ＫＤを示す、単離ヒト抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。いくつかの実施形態では、フラグメントの抗体は組換え抗体またはそのフラグメントである。
【００１６】
いくつかの実施形態では、抗体または抗原結合フラグメントは、改変された単一特異性抗体または多重特異性ヒトモノクローナル抗体である。
【００１７】
いくつかの実施形態では、インフルエンザＢヤマガタクレードおよびインフルエンザＢビクトリアクレードの１つまたは複数の株による細胞の感染を中和する抗体または抗原結合フラグメントが提供される。
【００１８】
いくつかの実施形態では、（ａ）重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、（ｂ）重鎖相補性決定領域２（ＨＣＤＲ２）および（ｃ）重鎖相補性決定領域３（ＨＣＤＲ３）のアミノ酸配列または１つもしくは複数のＣＤＲドメイン配列内に１〜３個のアミノ酸置換を含むその高度に相同な変異体を含み、ＨＣＤＲ１／ＨＣＤＲ２／ＨＣＤＲ３が、配列番号３１／３２／３３；４１／４２／４３；５１／５２／５３；６１／６２／６３；７１／７２／７３；８１／８２／８３；９１／９２／９３；１０１／１０２／１０３；１１１／１１２／１１３；１２１／１２２／１２３；１３１／１３２／１３３；１４１／１４２／１４３；１５１／１５２／１５３；１６１／１６２／１６３；１７１／１７２／１７３；１８１／１８２／１８３；１９１／１９２／１９３；２０１／２０２／２０３；２１１／２１２／２１３；２２１／２２２／２２３；２３１／２３２／２３３；２４１／２４２／２４３；２５１／２５２／２５３；２６１／２６２／２６３；２７１／２７２／２７３および２８１／２８２／２８３からなる群より選択され、前記変異体および前記抗体またはフラグメントが、インフルエンザウイルスと結合し、かつ／または阻害する特性を有する、単離ヒト抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。
【００１９】
いくつかの実施形態では、（ａ）軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、（ｂ）軽鎖相補性決定領域２（ＬＣＤＲ２）；および（ｃ）軽鎖相補性決定領域３（ＬＣＤＲ３）または１つもしくは複数のＣＤＲドメイン配列内に１〜３個のアミノ酸置換を含むその高度に相同な変異体を含み、ＬＣＤＲ１／ＬＣＤＲ２／ＬＣＤＲ３が、配列番号３４／３５／３６；４４／４５／４６；５４／５５／５６；６４／６５／６６；７４／７５／７６；８４／８５／８６；１０４／１０５／１０６；１１４／１１５／１６；１２４／１２５／１２６；１３４／１３５／１３６；１４４／１４５／１４６；１５４／１５５／１５６；１６４／１６５／１６６；１７４／１７５／１７６；１８４／１８５／１８６；１９４／１９５／１９６；２０４／２０５／２０６；２１４／２１５／２１６；２２４／２２５／２２６；２３４／２３５／２３６；２４４／２４５／２４６；２５４／２５５／２５６；２６４／２６５／２６６；２７４／２７５／２７６；および２８４／２８５／２８６からなる群より選択され、前記変異体および前記抗体またはフラグメントが、インフルエンザウイルスと結合し、かつ／または阻害する特性を有する、単離ヒト抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。
【００２０】
いくつかの実施形態では、重鎖および軽鎖ＣＤＲ配列または１つもしくは複数のＣＤＲドメイン配列内に１〜３個のアミノ酸置換を含むその高度に相同な変異体を含み、ＨＣＤＲ１／ＨＣＤＲ２／ＨＣＤＲ３／ＬＣＤＲ１／ＬＣＤＲ２／ＬＣＤＲ３が、配列番号３１／３２／３３／３４／３５／３６；４１／４２／４３／４４／４５／４６；５１／５２／５３／５４／５５／５６；６１／６２／６３／６４／６５／６６；７１／７２／７３／７４／７５／７６；８１／８２／８３／８４／８５／８６；９１／９２／９３／９４／９５／９６；１０１／１０２／１０３／１０４／１０５／１０６；１１１／１１２／１１３／１１４／１１５／１１６；１２１／１２２／１２３／１２４／１２５／１２６；１３１／１３２／１３３／１３４／１３５／１３６；１４１／１４２／１４３／１４４／１４５／１４６；１５１／１５２／１５３／１５４／１５５／１５６；１６１／１６２／１６３／１６４／１６５／１６６；１７１／１７２／１７３／１７４／１７５／１７６；１８１／１８２／１８３／１８４／１８５／１８６；１９１／１９２／１９３／１９４／１９５／１９６；２０１／２０２／２０３／２０４／２０５／２０６；２１１／２１２／２１３／２１４／２１５／２１６；２２１／２２２／２２３／２２４／２２５／２２６；２３１／２３２／２３３／２３４／２３５／２３６；２４１／２４２／２４３／２４４／２４５／２４６；２５１／２５２／２５３／２５４／２５５／２５６；２６１／２６２／２６３／２６４／２６５／２６６；２７１／２７２／２７３／２７４／２７５／２７６；および２８１／２８２／２８３／２８４／２８５／２８６からなる群より選択され；前記変異体および前記抗体またはフラグメントが、インフルエンザウイルスと結合し、かつ／または阻害する特性を有する、単離ヒト抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。
【００２１】
いくつかの実施形態では、インフルエンザＢヤマガタクレードおよびインフルエンザＢビクトリアクレード両方のそれぞれの１つまたは複数の株と特異的に結合し、配列番号３９、４９、５９、６９、７９、８９、９９、１０９、１１９、１２９、１３９、１４９、１５９、１６９、１７９、１８９、１９９、２０９、２１９、２２９、２３９、２４９、２５９、２６９、２７９および２８９からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）または前記ＨＣＶＲと少なくとも８０％の配列同一性を有するその相同変異体を含み；前記変異体および前記抗体またはフラグメントが、インフルエンザウイルスと結合し、かつ／または阻害する特性を有する、単離ヒト抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。
【００２２】
いくつかの実施形態では、配列番号４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０および２９０からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変配列（ＬＣＶＲ）または前記ＬＣＶＲと少なくとも８０％の配列同一性を有するその相同変異体を含み、前記変異体および前記抗体またはフラグメントが、インフルエンザウイルスと結合し、かつ／または阻害する特性を有する、単離ヒト抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。
【００２３】
いくつかの実施形態では、３９／４０、４９／５０、５９／６０、６９／７０、７９／８０、８９／９０、９９／１００、１０９／１１０、１１９／１２０、１２９／１３０、１３９／１４０、１４９／１５０、１５９／１６０、１６９／１７０、１７９／１８０、１８９／１９０、１９９／２００、２０９／２１０、２１９／２２０、２２９／２３０、２３９／２４０、２４９／２５０、２５９／２６０、２６９／２７０、２７９／２８０および２８９／２９０からなる群より選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ配列対あるいは前記ＨＣＶＲおよび／またはＬＣＶＲと少なくとも８０％の配列同一性を有するその相同変異体を含み；前記変異体および前記抗体が、インフルエンザウイルスと結合し、かつ／または阻害する特性を有する、単離ヒト抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。
【００２４】
いくつかの実施形態では、配列番号７９／８０、１２９／１３０、２１９／２２０、２２９／２３０、２３９／２４０、２４９／２５０および２６９／２７０からなる群より選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ対あるいは前記ＨＣＶＲおよび／またはＬＣＶＲと少なくとも８０％の配列同一性を有するその相同変異体含み；前記変異体および前記抗体が、インフルエンザウイルスと結合し、かつ／または阻害する特性を有する、単離ヒト抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。
【００２５】
いくつかの実施形態では、配列番号３０７、３０８、３０９、３１０、３１１、３１２および３１３からなる群より選択される１つまたは複数のエピトープまたはその不連続エピトープと結合する、単離ヒト抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。
【００２６】
いくつかの実施形態では、インフルエンザＢヤマガタクレードおよびインフルエンザＢビクトリアクレードそれぞれの１つまたは複数の株との結合に関して、１００倍未満過剰に存在する場合に本開示の抗体またはフラグメントとしてその少なくとも５０％と置き換わることにより競合する、単離ヒト抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。
【００２７】
いくつかの実施形態では、本開示の抗体またはフラグメントをコードする単離コドン最適化核酸分子が提供される。いくつかの実施形態では、本開示の抗体またはフラグメントをコードする核酸分子を含む発現ベクターが提供される。
【００２８】
いくつかの実施形態では、本開示の抗体またはフラグメントをコードする核酸分子を含む発現ベクターを含む、組換えポリペプチドを発現させるための宿主細胞が提供される。
【００２９】
いくつかの実施形態では、抗インフルエンザＢ抗体またはその抗原結合フラグメントを作製する方法であって、抗体またはそのフラグメントの産生が可能な条件下で宿主細胞を増殖させることと、そのようにして産生された抗体またはそのフラグメントを回収することとを含む、方法が提供される。
【００３０】
いくつかの実施形態では、インフルエンザＢヤマガタクレードおよびインフルエンザＢビクトリアクレードのそれぞれの１つまたは複数の株に対して１０ｎＭもしくはこれより強い結合親和性（ＫＤ）または３ｎＭもしくはこれより強いＫＤを示す抗体または抗原結合フラグメントと、薬学的に許容される担体とを含む、医薬組成物が提供される。
【００３１】
いくつかの実施形態では、配列番号３１／３２／３３；４１／４２／４３；５１／５２／５３；６１／６２／６３；７１／７２／７３；８１／８２／８３；９１／９２／９３；１０１／１０２／１０３；１１１／１１２／１１３；１２１／１２２／１２３；１３１／１３２／１３３；１４１／１４２／１４３；１５１／１５２／１５３；１６１／１６２／１６３；１７１／１７２／１７３；１８１／１８２／１８３；１９１／１９２／１９３；２０１／２０２／２０３；２１１／２１２／２１３；２２１／２２２／２２３；２３１／２３２／２３３；２４１／２４２／２４３；２５１／２５２／２５３；２６１／２６２／２６３；２７１／２７２／２７３および２８１／２８２／２８３から選択されるＨＣＤＲ１／ＨＣＤＲ２／ＨＣＤＲ３のアミノ酸配列または１つもしくは複数のＣＤＲドメイン配列内に１〜３個のアミノ酸置換を含むその高度に相同な変異体を含み、前記抗体またはフラグメンが、インフルエンザウイルスと結合し、かつ／または阻害する特性を有する、抗体または抗原結合フラグメントと、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物であって、前記抗体またはフラグメントのＰＢＳ中で測定した第一の融解温度（Ｔｍ１）は５５℃以上である、医薬組成物が提供される。
【００３２】
いくつかの実施形態では、インフルエンザＡの少なくとも１つの株に対する結合特異性を有する１つまたは複数のヒト抗体またはその抗原結合フラグメントを含む、組成物が提供される。いくつかの態様では、インフルエンザＡに対する特異性を有する抗体または抗原結合フラグメントは、第１群および第２群両方の１つまたは複数の株に対する特異性を含む。
【００３３】
いくつかの実施形態では、（ａ）配列番号１１、１２、１３のＨＣＤＲ１／ＨＣＤＲ２／ＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含む重鎖アミノ酸配列および配列番号１４、１５、１６のＬＣＤＲ１／ＬＣＤＲ２／ＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含む軽鎖アミノ酸配列または１つもしくは複数のＣＤＲドメイン配列内に１〜３個のアミノ酸置換を含むその高度に相同な変異体を含み、前記変異体が、インフルエンザウイルスと結合し、かつ／または阻害することが可能である、第一の抗体またはその抗原結合フラグメントと；（ｂ）配列番号２１、２２、２３のＨＣＤＲ１／ＨＣＤＲ２／ＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含む重鎖アミノ酸配列および配列番号２４、２５、２６のＣＤＲドメイン配列ＬＣＤＲ１／ＬＣＤＲ２／ＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含む軽鎖アミノ酸配列または１つもしくは複数のＣＤＲドメイン配列内に１〜３個のアミノ酸置換を含むその高度に相同な変異体を含み、前記変異体が、インフルエンザウイルスと結合し、かつ／または阻害することが可能である、第二の抗体またはその抗原結合フラグメントと；（ｃ）第三の抗体またはその抗原結合フラグメントであって、それぞれ：
（ｉ）配列番号７１、７２、７３および配列番号７４、７５、７６；
（ｉｉ）配列番号９１、９２、９３および配列番号９４、９５、９６；
（ｉｉｉ）配列番号１０１、１０２、１０３および配列番号１０４、１０５、１０６；
（ｉｖ）配列番号１２１、１２２、１２３および配列番号１２４、１２５、１２６；
（ｖ）配列番号１８１、１８２、１８３および配列番号１８４、１８５、１８６；
（ｖｉ）配列番号１９１、１９２、１９３および配列番号１９４、１９５、１９６；
（ｖｉｉ）配列番号２０１、２０２、２０３および配列番号２０４、２０５、２０６；
（ｖｉｉｉ）配列番号２１１、２１２、２１３および配列番号２１４、２１５、２１６；
（ｉｘ）配列番号２２１、２２２、２２３および配列番号２２４、２２５、２２６；
（ｘ）配列番号２３１、２３２、２３３および配列番号２３４、２３５、２３６；
（ｘｉ）配列番号２４１、２４２、２４３および配列番号２４４、２４５、２４６；
（ｘｉｉ）配列番号２６１；２６２、２６３および配列番号２６４、２６５、２６６；もしくは
（ｘｉｉｉ）配列番号２７１、２７２、２７３および配列番号２７４、２７５、２７６
から選択される、ＨＣＤＲ１／ＨＣＤＲ２／ＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含む重鎖アミノ酸配列および軽鎖ＣＤＲドメイン配列ＬＣＤＲ１／ＬＣＤＲ２／ＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含む軽鎖アミノ酸配列または１つもしくは複数のＣＤＲドメイン配列内に１〜３個のアミノ酸置換を含むその高度に相同な変異体を含み、前記変異体および前記抗体またはフラグメントが、インフルエンザウイルスと結合し、かつ／または阻害することが可能である、第三の抗体またはその抗原結合フラグメントとを含む、医薬組成物が提供される。
【００３４】
いくつかの実施形態では、前記第一の抗体またはフラグメントは、配列番号１９／２０のＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ対またはＨＣＶＲもしくはＬＣＶＲドメイン配列の一方もしくは両方に少なくとも８０％の配列同一性を含むその高度に相同な変異体を含み；前記変異体および前記抗体またはフラグメントは、インフルエンザウイルスと結合し、かつ／または阻害する特性を有する。
【００３５】
いくつかの実施形態では、前記第二の抗体またはフラグメントは、配列番号２９／３０のＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ対またはＨＣＶＲもしくはＬＣＶＲドメイン配列の一方もしくは両方に少なくとも８０％の配列同一性を含むその高度に相同な変異体を含み；前記変異体および前記抗体またはフラグメントは、インフルエンザウイルスと結合し、かつ／または阻害する特性を有する。
【００３６】
いくつかの実施形態では、前記第三の抗体またはフラグメントは、配列番号７９／８０、９９／１００、１０９／１１０、１２９／１３０、１８９／１９０、１９９／２００、２０９／２１０、２１９／２２０、２２９／２３０、２３９／２４０、２４９／２５０、２６９／２７０および２７９／２８０からなる群より選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ対またはＨＣＶＲもしくはＬＣＶＲドメイン配列の一方もしくは両方に少なくとも８０％の配列同一性を含むその高度に相同な変異体を含み；前記変異体および前記抗体またはフラグメントは、インフルエンザウイルスと結合し、かつ／または阻害する特性を有する。
【００３７】
いくつかの実施形態では、前記第三の抗体またはフラグメントは、配列番号７９／８０、１２９／１３０、２１９／２２０、２２９／２３０、２３９／２４０、２４９／２５０および２６９／２７０からなる群より選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ対またはＨＣＶＲもしくはＬＣＶＲドメイン配列の一方もしくは両方に少なくとも８０％の配列同一性を含むその高度に相同な変異体を含み、前記変異体および前記抗体またはフラグメントは、インフルエンザウイルスと結合し、かつ／または阻害する特性を有する。いくつかの実施形態では、いずれも等電点（ｐＩ）が２ポイントの範囲内に収まる前記第一、第二および第三の抗体またはフラグメントを含む、組成物が提供される。
【００３８】
特定の実施形態では、配列番号１７／１８のＨＣ／ＬＣアミノ酸配列を含むＴＲＬ０５３／Ｍａｂ５３である第一の抗体と、配列番号２７／２８のＨＣ／ＬＣアミノ酸配列を含む抗体ＴＲＬ５７９／Ｍａｂ５７９である第二の抗体と、それぞれ２２７／２２８、２０７／２０８、２４７／２４８、２３７／２３８、２１７／２１８、２６７／２６８、７７／７８および１２７／１２８からなる群より選択されるＨＣ／ＬＣアミノ酸配列を含むＴＲＬ８４７、ＴＲＬ８４５、ＴＲＬ８４９、ＴＲＬ８４８、ＴＲＬ８４６、ＴＲＬ８５４、ＴＲＬ８０９およびＴＲＬ８３２またはＨＣもしくはＬＣドメイン配列の一方もしくは両方に少なくとも８０％の配列同一性を含むその高度に相同な変異体からなる群より選択される、第三の抗体を含み；前記変異体および前記抗体またはフラグメントが、インフルエンザウイルスと結合し、かつ／または阻害する特性を有する、組成物が提供される。
【００３９】
特定の実施形態では、必要とする対象のインフルエンザＡおよびインフルエンザＢによる感染症または疾患の治療または予防に有効な量で単回用量に製剤化された本開示の前記第一、第二および第三の抗体またはフラグメントをそれぞれ含む、組成物が提供される。
【００４０】
特定の実施形態では、本開示の第一、第二および第三の抗体またはフラグメントを含み、前記第一、第二および第三の抗体またはフラグメントをそれぞれ１用量当たり１００ｍｇ／ｋｇ以下の量；前記第一、第二および第三の抗体またはフラグメントをそれぞれ１用量当たり１０ｍｇ／ｋｇ以下の量；あるいは前記第一、第二および第三の抗体またはフラグメントをそれぞれ１用量当たり１ｍｇ／ｋｇ以下の量で含む、組成物が提供される。いくつかの実施形態では、前記第一、第二および第三の抗体またはフラグメントはそれぞれ、抗体または抗体フラグメント全体で１用量当たり１０ｍｇ／ｋｇ以下の量で存在する。
【００４１】
特定の実施形態では、経鼻または肺送達用の担体、希釈剤および／または補形剤を含む組成物が提供される。
【００４２】
いくつかの実施形態では、本開示の抗体またはフラグメントを含み、さらに抗ウイルス治療薬、ウイルス複製阻害剤、プロテアーゼ阻害剤、ポリメラーゼ阻害剤、赤血球凝集素阻害剤、気管支拡張薬または吸入副腎皮質ステロイド剤のうちの１つまたは複数を含む、組成物が提供される。いくつかの実施形態では、免疫調節薬はインターフェロンベータ１ａであり；抗ウイルス治療薬は、オセルタミビル、ザナミビル、ペラミビルおよびラニナミビルからなる群より選択されるノイラミニダーゼ阻害剤であり；抗ウイルス治療薬は、ファビピラビル（Ｔ−７０５）およびＶＸ７８７からなる群より選択されるＲＮＡポリメラーゼ阻害剤であり；抗ウイルス治療薬は、Ｆｌｕｄａｓｅ（Ｄａｓ１８１）およびＡＢ−１０３（ｐ２ＴＡ）からなる群より選択される宿主細胞標的化治療薬であり；抗ウイルス治療薬は、ラマンタジンおよびアマンタジンからなる群より選択されるイオンチャネル阻害剤であり；気管支拡張薬は、アルブテロール、レバルブテロールまたはサルメテロールから選択される。
【００４３】
いくつかの実施形態では、本開示の前記第一、第二および第三の抗体またはフラグメントをそれぞれ、必要とする患者のインフルエンザＡおよびインフルエンザＢによる感染症または疾患の治療または予防に効果のある量で含み、前記抗体またはその抗原結合フラグメントのうちの１つまたは複数が、１１／１２／１３、２１／２２／２３、７１／７２／７３、７４／７５／７６、９１／９２／９３、１０１／１０２／１０３、１２１／１２２／１２３、１８１／１８２／１８３、１９１／１９２／１９３、２０１／２０２／２０３、２１１／２１２／２１３、２２１／２２２／２２３、２３１／２３２／２３３、２４１／２４２／２４３、２６１／２６２／２６３および２７１／２７２／２７３からなる群より選択されるＨＣＤＲ１／ＨＣＤＲ２／ＨＣＤＲ３アミノ酸配列または１つもしくは複数のＣＤＲドメイン配列内に１〜３個のアミノ酸置換を含むその高度に相同な変異体を含む、Ｆａｂ、Ｆａｂ’およびＦ（ａｂ’）２、ｓｃＦｖ、ｄＡｂまたは多重特異性抗体から選択される抗体フラグメントであり、前記変異体および前記抗体が、インフルエンザウイルスと結合し、かつ／または阻害する特性を有する、組成物が提供される。
【００４４】
いくつかの実施形態では、対象のインフルエンザ感染症を治療または予防する方法であって、（ａ）配列番号１１、１２、１３のＨＣＤＲ１／ＨＣＤＲ２／ＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含む重鎖アミノ酸配列および配列番号１４、１５、１６のＬＣＤＲ１／ＬＣＤＲ２／ＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含む軽鎖アミノ酸配列または１つもしくは複数のＣＤＲドメイン配列内に１〜３個のアミノ酸置換を含むその高度に相同な変異体を含み、前記変異体および前記抗体またはフラグメントが、インフルエンザウイルスと結合し、かつ／または阻害することが可能である、第一の抗体またはその抗原結合フラグメントと；（ｂ）配列番号２１、２２、２３のＨＣＤＲ１／ＨＣＤＲ２／ＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含む重鎖アミノ酸配列および配列番号２４、２５、２６のＣＤＲドメイン配列ＬＣＤＲ１／ＬＣＤＲ２／ＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含む軽鎖アミノ酸配列または１つもしくは複数のＣＤＲドメイン配列内に１〜３個のアミノ酸置換を含むその高度に相同な変異体を含み、前記変異体および前記抗体またはフラグメントが、インフルエンザウイルスと結合し、かつ／または阻害することが可能である、第二の抗体またはその抗原結合フラグメントと；（ｃ）それぞれ：（ｉ）配列番号７１、７２、７３および配列番号７４、７５、７６；（ｉｉ）配列番号９１、９２、９３および配列番号９４、９５、９６；（ｉｉｉ）配列番号１０１、１０２、１０３および配列番号１０４、１０５、１０６；（ｉｖ）配列番号１２１、１２２、１２３および配列番号１２４、１２５、１２６；（ｖ）配列番号１８１、１８２、１８３および配列番号１８４、１８５、１８６；（ｖｉ）配列番号１９１、１９２、１９３および配列番号１９４、１９５、１９６；（ｖｉｉ）配列番号２０１、２０２、２０３および配列番号２０４、２０５、２０６；（ｖｉｉｉ）配列番号２１１、２１２、２１３および配列番号２１４、２１５、２１６；（ｉｘ）配列番号２２１、２２２、２２３および配列番号２２４、２２５、２２６；（ｘ）配列番号２３１、２３２、２３３および配列番号２３４、２３５、２３６；（ｘｉ）配列番号２４１、２４２、２４３および配列番号２４４、２４５、２４６；（ｘｉｉ）配列番号２６１；２６２、２６３および配列番号２６４、２６５、２６６；もしくは（ｘｉｉｉ）配列番号２７１、２７２、２７３および配列番号２７４、２７５、２７６から選択される、ＨＣＤＲ１／ＨＣＤＲ２／ＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含む重鎖アミノ酸配列および軽鎖ＣＤＲドメイン配列ＬＣＤＲ１／ＬＣＤＲ２／ＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含む軽鎖アミノ酸配列または１つもしくは複数のＣＤＲドメイン配列内に１〜３個のアミノ酸置換を含むその高度に相同な変異体を含み、前記変異体および前記抗体またはフラグメントが、インフルエンザウイルスと結合し阻害することが可能である、第三の抗体またはその抗原結合フラグメントとを対象に投与することを含む、方法が提供される。いくつかの実施形態では、第一、第二および第三の抗体またはフラグメントを同時に、または逐次的に投与する。
【００４５】
いくつかの実施形態では、本開示の抗インフルエンザ組成物を対象に投与し、ここでは、詳細なウイルス株判定を必要とせずに前記対象のインフルエンザ感染症の状態を判定する。
【００４６】
いくつかの実施形態では、本開示の抗インフルエンザ組成物を対象に投与し、ここでは、対象がインフルエンザによる感染症または疾患から防御される。
【００４７】
当該技術分野で十分に理解されているように、フィブロネクチン、トランスフェリンまたはリポカリンをベースとする結合物質を含めた非免疫グロブリンベースのタンパク質は、抗体と同じようなエピトープ認識特性を有し得るものであり、同じく適切な実施形態を提供し得る。ほかにも、アプタマーなどの核酸ベースの部分が上記の特性を有する。
【００４８】
他の実施形態では、本発明は、本発明の結合部分を含む医薬組成物および製剤、特に、血液から肺への分配が促進されるように結合部分が赤血球と共有結合または非共有結合する医薬組成物および製剤、本発明の結合部分を、正常集団もしくは既にウイルスに曝露した可能性のある対象の予防薬または既に感染した対象の治療薬として、対象のウイルス感染症を受動的に抑制するために使用する方法に関する。本発明はこのほか、抗体またはフラグメントを作製するための組換え材料および方法、例えば対象内に抗体またはフラグメントをｉｎ  ｓｉｔｕで生じさせるためのこれらの使用などに関する。
【００４９】
いくつかの実施形態では、結合分子の組合せ、特に、インフルエンザウイルスと結合し、同ウイルスに対して効果を示すヒトモノクローナル抗体またはそのフラグメントが提供され、ここでは、組合せは第１群インフルエンザＡウイルス、第２群インフルエンザＡウイルスおよびインフルエンザＢウイルスに対して効果を示す。抗体の組合せは、インフルエンザＡおよびインフルエンザＢウイルスに対する治療および予防に効果があり、したがって、重要な流行しているインフルエンザウイルスすべてに対して効果のある薬剤を単一の組成物または用量で提供する。
【００５０】
いくつかの実施形態では、それぞれが低ｎＭまたはサブｎＭの親和性でインフルエンザと結合するモノクローナル抗体を含む、組合せ組成物が提供される。特に第１群インフルエンザＡウイルスに対する抗体または結合フラグメントと、特に第２群インフルエンザＡウイルスに対する抗体または結合フラグメントと、特にヤマガタＢおよびビクトリアＢの両系統を含めたインフルエンザＢウイルスに対する抗体または結合フラグメントとを含む、組合せ組成物が提供される。
【００５１】
いくつかの実施形態では、第１群インフルエンザＡ、より具体的な実施形態では特に少なくともＨ１インフルエンザウイルスに対する第一の抗体と、第２群インフルエンザＡ、より具体的な実施形態では特に少なくともＨ３インフルエンザウイルスに対する第二の抗体と、インフルエンザＢウイルス、より具体的な実施形態では特にヤマガタおよびビクトリアの両系統に対する第三の抗体とを含む、抗体の組合せが提供される。
【００５２】
いくつかの実施形態では、インフルエンザＡおよびインフルエンザＢの治療または予防に併用して効果のあるインフルエンザモノクローナル抗体またはそのフラグメントの組合せを含むか、これよりなる、組成物が提供される。
【００５３】
一実施形態では、本発明は、配列番号３９、４９、５９、６９、７９、８９、９９、１０９、１１９、１２９、１３９、１４９、１５９、１６９、１７９、１８９、１９９、２０９、２１９、２２９、２３９、２４９、２５９、２６９、２７９および２８９からなる群より選択される重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）または少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその相同な配列を含む、抗体または抗体の抗原結合フラグメントを含む。別の実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号７９、９９、１０９、１２９、１８９、１９９、２０９、２１９、２２９、２３９、２４９、２６９および２７９からなる群より選択されるアミノ酸配列を有する、ＨＣＶＲを含む。さらに別の実施形態では、抗体またはそのフラグメントは、配列番号２０９、２２９、２３９、２４９または２６９を含む、ＨＣＶＲを含む。
【００５４】
一実施形態では、本発明は、配列番号４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０および２９０からなる群より選択される軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）または少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に相同な配列を含む、抗体または抗体の抗原結合フラグメントを含む。別の実施形態では、抗体または抗体の抗原結合部分は、配列番号８０、１００、１１０、１３０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２７０または２８０からなる群より選択されるアミノ酸配列を有する、ＬＣＶＲを含む。さらに別の実施形態では、抗体またはそのフラグメントは、配列番号２１０、２３０、２４０、２５０または２７０を含む、ＬＣＶＲを含む。
【００５５】
一実施形態では、本発明は、配列番号３９、４９、５９、６９、７９、８９、９９、１０９、１１９、１２９、１３９、１４９、１５９、１６９、１７９、１８９、１９９、２０９、２１９、２２９、２３９、２４９、２５９、２６９、２７９および２８９のうちの１つまたは複数からなる群より選択される重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）または少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその相同な配列を含む抗体または抗原結合フラグメントを含む、組成物を含む。別の実施形態では、組成物は、配列番号７９、９９、１０９、１２９、１８９、１９９、２０９、２１９、２２９、２３９、２４９、２６９および２７９からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＶＲを含む、抗体またはその抗原結合フラグメントを含む。さらに別の実施形態では、組成物は、配列番号２０９、２２９、２３９、２４９または２６９を含むＨＣＶＲを含む、抗体またはそのフラグメントを含む。
【００５６】
一実施形態では、本発明は、配列番号４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０および２９０からなる群より選択される軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）または少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその相同な配列を含む抗体または抗体の抗原結合フラグメントを含む、組成物を含む。別の実施形態では、組成物は、配列番号８０、１００、１１０、１３０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２７０または２８０からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＶＲを含む、抗体または抗体の抗原結合部分を含む。さらに別の実施形態では、組成物は、配列番号２１０、２３０、２４０、２５０または２７０を含むＬＣＶＲを含む、抗体またはそのフラグメントを含む。
【００５７】
一実施形態では、本発明は、本明細書に提供されるＢ抗体（抗Ｂ型）またはフラグメントと、配列番号１９および２９のうちの１つまたは複数からなる群より選択される重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）または少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその相同な配列を含む抗体または抗原結合フラグメントとを含む、組成物を含む。
【００５８】
一実施形態では、本発明は、本明細書に提供されるＢ抗体またはフラグメントを含む組成物を含み、抗体または抗体の抗原結合フラグメントは、配列番号２０および３０からなる群より選択される軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）または少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその相同な配列を含む。
【００５９】
より具体的な実施形態では、組成物は、少なくとも１つのＢ抗体と、少なくとも１つまたは少なくとも２つのＡ抗体とを含む。
【００６０】
いくつかの実施形態では、ＨＣ可変領域およびＬＣ可変領域のアミノ酸配列を含む抗体または抗原結合フラグメントが提供され、ここでは、ＨＣＶＲは、配列番号３１／３２／３３；４１／４２／４３；５１／５２／５３；６１／６２／６３；７１／７２／７３；８１／８２／８３；９１／９２／９３；１０１／１０２／１０３；１１１／１１２／１１３；１２１／１２２／１２３；１３１／１３２／１３３；１４１／１４２／１４３；１５１／１５２／１５３；１６１／１６２／１６３；１７１／１７２／１７３；１８１／１８２／１８３；１９１／１９２／１９３；２０１／２０２／２０３；２１１／２１２／２１３；２２１／２２２／２２３；２３１／２３２／２３３；２４１／２４２／２４３；２５１／２５２／２５３；２６１／２６２／２６３；２７１／２７２／２７３および２８１／２８２／２８３のいずれかから選択されるＨＣＤＲ１／ＨＣＤＲ２／ＨＣＤＲ３アミノ酸配列または１つもしくは複数のＣＤＲドメイン配列内に１〜３個のアミノ酸置換を含むその高度に相同な変異体を含み、ＬＣＶＲは、配列番号３４／３５／３６；４４／４５／４６；５４／５５／５６；６４／６５／６６；７４／７５／７６；８４／８５／８６；１０４／１０５／１０６；１１４／１１５／１６；１２４／１２５／１２６；１３４／１３５／１３６；１４４／１４５／１４６；１５４／１５５／１５６；１６４／１６５／１６６；１７４／１７５／１７６；１８４／１８５／１８６；１９４／１９５／１９６；２０４／２０５／２０６；２１４／２１５／２１６；２２４／２２５／２２６；２３４／２３５／２３６；２４４／２４５／２４６；２５４／２５５／２５６；２６４／２６５／２６６；２７４／２７５／２７６；および２８４／２８５／２８６のいずれかから選択されるＬＣＤＲ１／ＬＣＤＲ２／ＬＣＤＲ３アミノ酸配列または１つもしくは複数のＣＤＲドメイン配列内に１〜３個のアミノ酸置換を含むその高度に相同な変異体を含む。
【００６１】
いくつかの実施形態では、血清中半減期を延ばすＦｃ改変を含む、抗体または抗原結合フラグメントが提供される。このような改変はＸｅｎｃｏｒ  Ｘｔｅｎｄ（商標）抗体工学技術（Ｘｅｎｃｏｒ社、メルボルン、オーストラリア）に開示されている。いくつかの態様では、Ｆｃ改変を含む抗体またはフラグメントは、配列番号２９７、１７、２７３７、４７、５７、６７、７７、８７、９７、１０７、１１７、１２７、１３７、１４７、１５７、１６７、１７７、１８７、１９７、２０７、２１７、２２７、２３７、２４７、２５７、２６７、２７７または２８７と８０％超、９０％超、９５％超または９９％超の配列同一性を有するアミノ酸配列を示す。
【００６２】
いくつかの実施形態では、理論に束縛されるものではないが、吸入製剤ではモデルＦａｂが効果的であるため、ｓｃＦｖである抗原結合フラグメントが提供される。このような改変された抗体は自然界には存在しない。いくつかの実施形態では、配列番号３１／３２／３３；４１／４２／４３；５１／５２／５３；６１／６２／６３；７１／７２／７３；８１／８２／８３；９１／９２／９３；１０１／１０２／１０３；１１１／１１２／１１３；１２１／１２２／１２３；１３１／１３２／１３３；１４１／１４２／１４３；１５１／１５２／１５３；１６１／１６２／１６３；１７１／１７２／１７３；１８１／１８２／１８３；１９１／１９２／１９３；２０１／２０２／２０３；２１１／２１２／２１３；２２１／２２２／２２３；２３１／２３２／２３３；２４１／２４２／２４３；２５１／２５２／２５３；２６１／２６２／２６３；２７１／２７２／２７３および２８１／２８２／２８３のいずれかから選択されるＨＣＤＲ１／ＨＣＤＲ２／ＨＣＤＲ３アミノ酸配列または１つもしくは複数のＣＤＲドメイン配列内に１〜３個のアミノ酸置換を含むその高度に相同な変異体を含む、改変された抗体または結合フラグメントが提供される。
【００６３】
いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体およびフラグメントを発現させるためのコドン最適化核酸が提供される。いくつかの実施形態では、このような非天然の核酸を用いて発現レベルを上昇させる。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される組換え抗体およびフラグメントの作製にコドン最適化核酸分子を用いる。
【００６４】
いくつかの実施形態では、ＨＣ可変領域およびＬＣ可変領域のアミノ酸配列を含む抗体または抗原結合フラグメントが提供され、ここでは、ＨＣＶＲは、配列番号３１／３２／３３；４１／４２／４３；５１／５２／５３；６１／６２／６３；７１／７２／７３；８１／８２／８３；９１／９２／９３；１０１／１０２／１０３；１１１／１１２／１１３；１２１／１２２／１２３；１３１／１３２／１３３；１４１／１４２／１４３；１５１／１５２／１５３；１６１／１６２／１６３；１７１／１７２／１７３；１８１／１８２／１８３；１９１／１９２／１９３；２０１／２０２／２０３；２１１／２１２／２１３；２２１／２２２／２２３；２３１／２３２／２３３；２４１／２４２／２４３；２５１／２５２／２５３；２６１／２６２／２６３；２７１／２７２／２７３および２８１／２８２／２８３のいずれかから選択されるＨＣＤＲ１／ＨＣＤＲ２／ＨＣＤＲ３アミノ酸配列または１つもしくは複数のＣＤＲドメイン配列内に１〜３個のアミノ酸置換を含むその高度に相同な変異体を含み、ＬＣＶＲは、配列番号３４／３５／３６；４４／４５／４６；５４／５５／５６；６４／６５／６６；７４／７５／７６；８４／８５／８６；１０４／１０５／１０６；１１４／１１５／１６；１２４／１２５／１２６；１３４／１３５／１３６；１４４／１４５／１４６；１５４／１５５／１５６；１６４／１６５／１６６；１７４／１７５／１７６；１８４／１８５／１８６；１９４／１９５／１９６；２０４／２０５／２０６；２１４／２１５／２１６；２２４／２２５／２２６；２３４／２３５／２３６；２４４／２４５／２４６；２５４／２５５／２５６；２６４／２６５／２６６；２７４／２７５／２７６；および２８４／２８５／２８６のいずれかから選択されるＬＣＤＲ１／ＬＣＤＲ２／ＬＣＤＲ３アミノ酸配列または１つもしくは複数のＣＤＲドメイン配列内に１〜３個のアミノ酸置換を含むその高度に相同な変異体を含む。
【００６５】
いくつかの実施形態では、血清中半減期を延ばすＦｃ改変を含む、抗体または抗原結合フラグメントが提供される。このような改変はＸｅｎｃｏｒ  Ｘｔｅｎｄ（商標）抗体工学技術（Ｘｅｎｃｏｒ社、メルボルン、オーストラリア）に開示されている。いくつかの態様では、Ｆｃ改変を含む抗体またはフラグメントは、配列番号２９７、１７、２７，３７、４７、５７、６７、７７、８７、９７、１０７、１１７、１２７、１３７、１４７、１５７、１６７、１７７、１８７、１９７、２０７、２１７、２２７、２３７、２４７、２５７、２６７、２７７または２８７と８０％超、９０％超、９５％超または９９％超の配列同一性を有するアミノ酸配列を示す。
【００６６】
いくつかの実施形態では、配列番号３１／３２／３３；４１／４２／４３；５１／５２／５３；６１／６２／６３；７１／７２／７３；８１／８２／８３；９１／９２／９３；１０１／１０２／１０３；１１１／１１２／１１３；１２１／１２２／１２３；１３１／１３２／１３３；１４１／１４２／１４３；１５１／１５２／１５３；１６１／１６２／１６３；１７１／１７２／１７３；１８１／１８２／１８３；１９１／１９２／１９３；２０１／２０２／２０３；２１１／２１２／２１３；２２１／２２２／２２３；２３１／２３２／２３３；２４１／２４２／２４３；２５１／２５２／２５３；２６１／２６２／２６３；２７１／２７２／２７３および２８１／２８２／２８３のいずれかから選択されるＨＣＤＲ１／ＨＣＤＲ２／ＨＣＤＲ３アミノ酸配列または１つもしくは複数のＣＤＲドメイン配列内に１〜３個のアミノ酸置換を含むその高度に相同な変異体を含む、改変された抗体または結合フラグメントが提供される。
【００６７】
いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体およびフラグメントを発現させるためのコドン最適化核酸が提供される。いくつかの実施形態では、このような非天然の核酸を用いて発現レベルを上昇させる。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される組換え抗体およびフラグメントの作製にコドン最適化核酸分子を用いる。
【図面の簡単な説明】
【００６８】
【図１】インフルエンザＡおよびインフルエンザＢウイルスを重要なクレードのグループに分けた当該技術分野で公知の分類（Ｓｕｚｕｋｉ，Ｙ．ら，Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．Ｅｖｏｌ．（２００２）１９：５０１−５０９を改変）を示す図である。
【図２】インフルエンザＢの２つのクレードであるヤマガタおよびビクトリアに含まれる代表的な株（Ｄｒｅｙｆｕｓ、Ｃ．ら，Ｓｃｉｅｎｃｅ（２０１２）３３７：１３４３−１３４８を描図）を示す図である。代表的なヤマガタクレードには、ミシシッピ／０４／２００８；フロリダ／４／２００６；吉林／２０／２００３；ヒューストン／Ｂ６０／１９９７；ハルビン／７／１９９４；およびナッシュビル／４５／１９９１がある。代表的なビクトリアクレードには、マレーシア／２５０６／２００４；ミシシッピ／０７／２００８；ブリスベン／６０／２００８；およびオハイオ／０１／２００５がある。
【図３】数種類の抗インフルエンザＢ  ｍＡｂおよび２種類の抗インフルエンザＡ  ｍＡｂのインフルエンザＡおよびインフルエンザＢ株に対する反応性を表す組換えＨＡのＥＬＩＳＡデータを記載した表７を示す図である。組換えＨＡのＥＬＩＳＡは３連で実施したものであり、バックグランドに対する平均反応倍数（相対蛍光単位）が示されている。図３から、抗Ｂ  ｍＡｂのＴＲＬ８０９、ＴＲＬ８１２、ＴＲＬ８１３；ＴＲＬ８３２、ＴＲＬ８４１、ＴＲＬ８４２、ＴＲＬ８４５、ＴＲＬ８４６、ＴＲＬ８４７、ＴＲＬ８４８、ＴＲＬ８４９、ＴＲＬ８５４およびＴＲＬ８５６がそれぞれ、ヤマガタクレードのＢ／フロリダ／０６、Ｂ／マサチューセッツ／１２およびＢ／ウィスコンシン／１０ならびにビクトリアクレードのＢ／ブリスベン／０８、Ｂ／マレーシア／０４およびＢ／ビクトリア／８７を含めた両系統のインフルエンザＢウイルスに対して広い交差反応性を示すことがわかる。抗インフルエンザＡ  ｍＡｂのＣＦ４０１（ｍＡｂ５３）およびＣＦ４０２（ｍＡｂ５７９）は、インフルエンザＡのＨ１（Ａ／カリフォルニア／０９）およびＨ３（Ａ／シドニー／９７）亜型のメンバーに対して反応性を示すが、インフルエンザＢ株に対しては反応性を示さない。
【図４】代表的な株であるＢ／ヤマガタ／１６／１９８８およびＢ／ビクトリア／２／１９８７に対する抗インフルエンザＢ抗体ＴＲＬ８４５、ＴＲＬ８４８、ＴＲＬ８４９、ＴＲＬ８５４、ＴＲＬ８３２およびＴＲＬ８０９の中和ＩＣ５０のデータを記載した表８を示す図である。
【図５Ａ】マウスにおける抗インフルエンザＢ抗体５Ａ７のｉｎ  ｖｉｖｏ活性を、１０×ＬＤ５０のＢ／フロリダ（ヤマガタ系統）に感染させたマウスに５Ａ７を鼻腔内（ＩＮ）投与した場合と腹腔内（ＩＰ）投与した場合のパーセント体重として示した図である。感染から２４時間後（２４ｈｐｉ）にマウスをＩＮ経路またはＩＰ経路のいずれかによりｍＡｂで治療し、疾患重症度の指標として連日体重を測定し、対照にはＰＢＳ投与マウスおよびウイルス未感染マウスを用いた。感染後１４日間、マウスの体重を連日モニターし、第０日の初期体重に対するパーセントをプロットする。体重減少が３０％を超えるマウスは安楽死させた。ＩＮが１ｍｇ／ｋｇで体重減少を完全に防ぐのに対し、ＩＰ経路による１ｍｇ／ｋｇでは体重がいくぶん減少している。ＩＮ経路で投与すると、ＩＰ経路よりも効果が増大することがわかる。
【図５Ｂ】マウスにおける抗インフルエンザＢ抗体５Ａ７のｉｎ  ｖｉｖｏ活性を、１０×ＬＤ５０のＢ／マレーシア（ビクトリア系統）に感染させ５Ａ７をＩＮ投与した場合とＩＰした場合のパーセント体重として示した図である。２４ｈｐｉにマウスをＩＮ経路またはＩＰ経路のいずれかによりｍＡｂで治療し、疾患重症度の指標として体重を連日測定した。体重減少が３０％を超えるマウスは安楽死させた。ＩＮが１ｍｇ／ｋｇで体重減少を完全に防ぐのに対し、ＩＰ経路による１ｍｇ／ｋｇでは体重がいくぶん減少している。ＩＮ経路で投与すると、ＩＰ経路よりも効果が増大することがわかる。
【図６Ａ】図６Ａ〜図６Ｄは、感染後第１日にＩＮ経路により１ｍｇ／ｋｇを投与し、感染から最大１４日目までの体重を評価したマウスモデルにおける１０×ＬＤ５０（５０％の致死率をもたらす投与量）のウイルスに対する本発明の抗インフルエンザＢ  ｍＡｂのｉｎ  ｖｉｖｏ活性を示す図であり、対照にはＰＢＳ投与マウスおよびウイルス未感染マウスを用いた。感染後１４日間、マウスの体重をモニターし、第０日の初期体重に対するパーセントをプロットする。図６Ａは、ＩＮ経路による１ｍｇ／ｋｇのｍＡｂ  ＴＲＬ８４５、ＴＲＬ８４７、ＴＲＬ８４８、ＴＲＬ８４９および５Ａ７が、ビクトリアクレードを代表するＢ／マレーシア／２５０６／０４に感染したマウスを疾患から防御することを示す図である。
【図６Ｂ】ＩＮ経路による１ｍｇ／ｋｇのｍＡｂ  ＴＲＬ８４５、ＴＲＬ８４７、ＴＲＬ８４８、ＴＲＬ８４９および５Ａ７が、ヤマガタクレードを代表するＢ／フロリダ／０４／２００６に感染したマウスを疾患から防御することを示す図である。
【図６Ｃ】ＩＮ経路による１ｍｇ／ｋｇのｍＡｂ  ＴＲＬ８４９、ＴＲＬ８４６、ＴＲＬ８５４、ＴＲＬ８５６、ＴＲＬ８４７および５Ａ７が、ビクトリアクレードを代表するＢ／マレーシア／２５０６／０４に感染したマウスを疾患から防御することを示す図である。
【図６Ｄ】ＩＮ経路による１ｍｇ／ｋｇのｍＡｂ  ＴＲＬ８４９、ＴＲＬ８４６、ＴＲＬ８５４、ＴＲＬ８５６、ＴＲＬ８４７および５Ａ７が、ヤマガタクレードを代表するＢ／フロリダ／０４／２００６に感染したマウスを疾患から防御することを示す図である。
【図７Ａ】図７Ａ〜７Ｄは、３種類の抗インフルエンザｍＡｂを共投与しても抗Ｂ  ｍＡｂの効率に干渉しないことを示す図である。マウスに１０×ＬＤ５０のウイルスを感染させ、２４ｈｐｉに抗Ｈ１  ＣＦ−４０１と、抗Ｈ３  ＣＦ−４０２と、抗Ｂ  ＴＲＬ８４５（カクテル１）、抗Ｂ  ＴＲＬ８４７（カクテル２）または抗Ｂ  ＴＲＬ８４９（カクテル３）のいずれかとからなる３ｍｇ／ｋｇの３種ｍＡｂカクテルで治療し、対照にはＰＢＳ投与マウスおよびウイルス未感染マウスを用いた。感染から１４日間、マウスの体重を連日モニターし、第０日の初期体重に対するパーセントをプロットした。図７Ａ〜図７Ｄは、全体として、カクテルがあらゆる季節性インフルエンザ亜型の代表的な株（Ｈ１Ｎ１、Ｈ３Ｎ２およびＢの両系統）に対して、カクテルに含まれる他のｍａｂによる干渉を受けずに、予想されるレベルの防御をもたらすことを示す図である。図７Ａは、１０×ＬＤ５０のＨ１Ｎ１に感染させ、２４ｈｐｉに抗Ｈ１  ＣＦ−４０１と、抗Ｈ３  ＣＦ−４０２と、抗Ｂ  ＴＲＬ８４５（カクテル１）、抗Ｂ  ＴＲＬ８４７（カクテル２）または抗Ｂ  ＴＲＬ８４９（カクテル３）のいずれかとからなる３ｍｇ／ｋｇの３種ｍＡｂカクテルで治療したマウスにおけるｉｎ  ｖｉｖｏ防御を示す図である。
【図７Ｂ】１０×ＬＤ５０のＨ３Ｎ２に感染させ、２４ｈｐｉに抗Ｈ１  ＣＦ−４０１と、抗Ｈ３  ＣＦ−４０２と、抗Ｂ  ＴＲＬ８４５（カクテル１）、抗Ｂ  ＴＲＬ８４７（カクテル２）または抗Ｂ  ＴＲＬ８４９（カクテル３）のいずれかとからなる３ｍｇ／ｋｇの３種ｍＡｂカクテルで治療したマウスにおけるｉｎ  ｖｉｖｏ防御を示す図である。
【図７Ｃ】１０×ＬＤ５０のＢ／ヤマガタ系統に感染させ、２４ｈｐｉに抗Ｈ１  ＣＦ−４０１と、抗Ｈ３  ＣＦ−４０２と、抗Ｂ  ＴＲＬ８４５（カクテル１）、抗Ｂ  ＴＲＬ８４７（カクテル２）または抗Ｂ  ＴＲＬ８４９（カクテル３）のいずれかとからなる３ｍｇ／ｋｇの３種ｍＡｂカクテルで治療したマウスにおけるｉｎ  ｖｉｖｏ防御を示す図である。
【図７Ｄ】１０×ＬＤ５０のＢ／ビクトリア系統に感染させ、２４ｈｐｉに抗Ｈ１  ＣＦ−４０１と、抗Ｈ３  ＣＦ−４０２と、抗Ｂ  ＴＲＬ８４５（カクテル１）、抗Ｂ  ＴＲＬ８４７（カクテル２）または抗Ｂ  ＴＲＬ８４９（カクテル３）のいずれかとからなる３ｍｇ／ｋｇの３種ｍＡｂカクテルで治療したマウスにおけるｉｎ  ｖｉｖｏ防御を示す図である。
【図８】ＰＥＰＳＣＡＮ社により作成されたＢ／Ｌｅｅ／１９４０／ＨＡタンパク質（配列番号２９１）のＣＬＩＰＳ（商標）ペプチドアレイを示す図である（上パネル）。Ｂ／Ｌｅｅ／１９４０／ＨＡタンパク質の影を付けた領域は、ペプチドアレイの作成に用いたａａ＿１５−６５（配列番号２９２）、ａａ＿３００−３５９（配列番号２９３）およびａａ＿３６２−４８１（配列番号２９４）の残基に対応している。表９（下パネル）は、ｍＡｂ５Ａ７エピトープ１−ａａ＿３３３−３３８（配列番号３０４）、エピトープ２−ａａ＿３４２−３４６（配列番号３０５）およびエピトープ３−ａａ＿４５７−４６３（配列番号３０６）；ｍＡｂ  ＴＲＬ８４５エピトープ−ａａ＿４５５−４６３（配列番号３０７）；ＴＲＬ８４８エピトープ１−ａａ＿６４−７１（配列番号３０８）；エピトープ２−ａａ＿３３６−３４８（配列番号３０９）；エピトープ３−ａａ＿４２４−４２８（配列番号３１０）；ｍＡｂ８４９エピトープ１−ａａ＿３１７−３２３（配列番号３１１）、エピトープ２−ａａ＿３４４−３４９３１２）、エピトープ３−ａａ＿３７８−３８３（配列番号３１３）；ｍＡｂ８５４エピトープ１−ａａ＿４５７−４６３（配列番号３１４）を示している。右下の図には、ＨＡのストーク上にその領域が濃灰色で示されている。
【図９】ＨＡタンパク質のストークに沿ったＰＥＰＳＣＡＮ（商標）解析によるエピトープマッピングを示す図である。影を付けた領域は、各ｍＡｂが結合するエピトープを表している。ｍＡｂのＴＲＬ８４８、ＴＲＬ８４５、ＴＲＬ８５４およびＴＲＬ８４９は、ＨＡのストークに沿って部分的に重複する不連続エピトープを認識する。公開されている配列に由来する対照ｍＡｂ５Ａ７では、ほぼ同じであるが固有のエピトープが得られた。
【図１０Ａ】図１０Ａ〜図１０Ｆは、ｍＡｂのＴＲＬ８４５、ＴＲＬ８４７、ＴＲＬ８４８、ＴＲＬ８４９およびＴＲＬ８５４の融解曲線アッセイを示す図である。各ｍＡｂは高い熱安定性を示した。図１０Ａは、ＴＲＬ８４５の融解曲線を示す図であり、２つの融解温度（Ｔｍ１、Ｔｍ２）がそれぞれ５８．３℃および６８．７℃にみられる。
【図１０Ｂ】図１０Ａおよび図１０Ｃ〜１０Ｆにそれぞれ示されるｍＡｂのＴＲＬ８４５、ＴＲＬ８４７、ＴＲＬ８４８、ＴＲＬ８４９およびＴＲＬ８５４の融解温度（Ｔｍ）を記載した表１０を示す図である。
【図１０Ｃ】ＴＲＬ８４７の融解曲線を示す図であり、融解温度（Ｔｍ１）は７０．３℃である。
【図１０Ｄ】ＴＲＬ８４８の融解曲線を示す図であり、融解温度（Ｔｍ１）は７０．１℃である。
【図１０Ｅ】ＴＲＬ８４９の融解曲線を示す図であり、２つの融解温度が（Ｔｍ１、Ｔｍ２）それぞれ７０℃および８１．８℃にみられる。
【図１０Ｆ】ＴＲＬ８５４の融解曲線を示す図であり、２つの融解温度（Ｔｍ１、Ｔｍ２）が５９．７℃および６８．９℃にみられる。
【図１１Ａ】同じ用量でのＩＮ投与およびＩＰ投与を示す図であり、Ｍａｂ  ＩＮの方がＩＰで投与した同じＭａｂよりも効力が１０〜１００倍高いことを示している。マウスに１０×ＬＤ５０のＨ１インフルエンザウイルス（Ａ／プエルトリコ／８／１９３４）を接種し、２４ｈｐｉに１０ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇおよび０．１ｍｇ／ｋｇのＣＡ６２６１ＭａｂでＩＮまたはＩＰにより治療し、対照にはＰＢＳ投与マウスおよびウイルス未感染マウスを用いた。感染から１４日間、マウスの体重を連日モニターし、第０日の初期体重に対するパーセントをプロットした。データから、中和抗体のＩＮ送達により、全身送達に比してその治療効果が大幅に増大したことがわかる。
【図１１Ｂ】抗体ＭＡｂ５３（ＴＲＬ０５３）のＩＮ投与およびＩＰ投与のＨ１ウイルスに対する治療効果の評価を示す図である。マウスに１０×ＬＤ５０のＨ１インフルエンザウイルスのＡ／プエルトリコ／８／１９３４（ＰＲ８）を接種し、２４ｈｐｉに１０ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇおよび０．１ｍｇ／ｋｇの中和抗体ＴＲＬ０５３（ＭＡｂ５３）をＩＮまたはＩＰ投与して治療し、対照にはＰＢＳ治療マウスおよびウイルス未感染マウスを用いた。感染から１４日間、マウスの体重を連日モニターし、第０日の初期体重に対するパーセントをプロットした。ＩＮ投与したＴＲＬ０５３の方がＩＰ投与よりも高い効果を示した。ＴＲＬ０５３は、ＩＰでは用量１０ｍｇ／ｋｇでのみ多少効果がみられた。ＩＮ用量は１０ｍｇ／ｋｇおよび１ｍｇ／ｋｇで効果がみられた。
【図１２Ａ】同じ用量でのＩＮとＩＰとの比較を示す図であり、Ｍａｂ  ＣＡ８０２０  ＩＮの方がＩＰで投与した同じＭａｂよりも効力が１０〜１００倍高いことを示している。マウスに１０×ＬＤ５０のＨ３インフルエンザウイルスを接種し、２４ｈｐｉに１０ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇおよび０．１ｍｇ／ｋｇの中和ＣＡ８０２０  Ｍａｂを用いてＩＮまたはＩＰで治療し、対照にはＰＢＳ投与マウスおよびウイルス未感染マウスを用いた。感染から１４日間、マウスの体重を連日モニターし、第０日の初期体重に対するパーセントをプロットした。
【図１２Ｂ】抗体ＭＡｂ５７９（ＴＲＬ５７９）のＩＮ投与およびＩＰ投与のＨ３ウイルスに対する治療効果の評価を示す図である。マウスに１０×ＬＤ５０のＶｉｃ／１１  Ｈ３ウイルスを接種し、２４ｈｐｉに１０ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇおよび０．１ｍｇ／ｋｇの抗体ＴＲＬ５７９をＩＮまたはＩＰ投与して治療した。感染から１４日間、マウスの体重を連日モニターした。ＴＲＬ５７９はＩＰまたはＩＮで効果を示すが、ＩＮ投与したＴＲＬ５７９の方がＩＰ投与よりも高い効果を示した。ＴＲＬ５７９は、ＩＰでは用量１０ｍｇ／ｋｇでのみ多少効果がみられた。この試験のＩＮは、用量１０ｍｇ／ｋｇおよび１ｍｇ／ｋｇで効果がみられた。
【図１３】ウイルス感染の３日または４日前の予防的ＩＮ投与およびＩＰ投与を示す図である。３×ＬＤ５０のＨ１インフルエンザウイルスＡ／プエルトリコ／８／１９３４（ＰＲ８と表す）による攻撃の３日または４日前に抗体ＣＡ６２６１をＩＮまたはＩＰで投与した。感染の３日前（−３ｄｐｉ）または感染の４日前（−４ｄｐｉ）にＣＡ６２６１抗体をＩＮ（０．１ｍｇ／ｋｇ）またはＩＰ（０．１ｍｇ／ｋｇおよび１ｍｇ／ｋｇ）で投与し、Ｈ１インフルエンザウイルスで攻撃した。対照をウイルス未感染および未治療とした。感染から１４日間、マウスの体重を連日モニターし、第０日の初期体重に対するパーセントをプロットした。図１３は、感染の最大４日前（−４ｄｐｉ）のＩＮ投与（０．１ｍｇ／ｋｇで評価した）では、マウスがウイルス攻撃から防御されたことを示している。感染３日または４日前に同じ用量（０．１ｍｇ／ｋｇ）でＩＰ投与した場合、効果は全くみられなかった。感染の３日または４日前のＩＰ投与で効果がみられたのは１ｍｇ／ｋｇであった。ＩＮ（０．１ｍｇ／ｋｇ）投与とＩＰ（１ｍｇ／ｋｇ）投与とを比較したところ、−３ｄｐｉおよび−４ｄｐｉともに、ＩＰの１０分の１のＩＮ用量でＩＰよりも高い効果がみられた。
【図１４】ウイルス感染の５日、６日または７日前の予防的ＩＮ投与およびＩＰ投与を示す図である。３×ＬＤ５０のＨ１インフルエンザウイルスＰＲ８による攻撃の５日、６日または７日前に抗体ＣＡ６２６１をＩＰ（１ｍｇ／ｋｇ）またはＩＮ（１ｍｇ／ｋｇ）で投与した。対照をＴａｍｉｆｌｕ（１０ｍｇ／ｋｇで１日２回、５日間の経口投与）投与、未治療およびウイルス未感染とした。感染から１４日間、マウスの体重を連日モニターし、第０日の初期体重に対するパーセントをプロットした。いずれの場合も、Ｔａｍｉｆｌｕよりも抗体の方が高い効果が認められた。
【図１５】より高い投与量である１０×ＬＤ５０のウイルス攻撃によるウイルス感染の５日、６日または７日前に実施した予防的ＩＮ投与およびＩＰ投与を示す図である。１０×ＬＤ５０のＨ１インフルエンザウイルスＰＲ８による攻撃の５日、６日または７日前に抗体ＣＡ６２６１をＩＰ（１ｍｇ／ｋｇ）またはＩＮ（１ｍｇ／ｋｇ）で投与した。対照をＴａｍｉｆｌｕ（１０ｍｇ／ｋｇで１日２回、５日間の経口投与）投与、未治療およびウイルス未感染とした。感染から１４日間、マウスの体重を連日モニターし、第０日の初期体重に対するパーセントをプロットした。この試験では、抗体を（鼻腔内投与により）気道に投与したマウスのみがウイルス攻撃後もすべて生存していた。ウイルス攻撃の５日、６日または７日前に１ｍｇ／ｋｇの抗体を投与して治療したマウスは十分に防御されず、感染症により死亡した。Ｔａｍｉｆｌｕには防御効果が全く認められなかった。ウイルス感染の５日前または６日前のいずれかに０．１ｍｇ／ｋｇの抗体を鼻腔内投与して治療したマウスは、ウイルス攻撃後も未感染の対照マウスとほぼ同程度に生存した。
【図１６】モノクローナル抗インフルエンザＢ抗体の赤血球凝集抑制、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでのＢ／ビクトリアおよびＢ／ヤマガタ系統の中和、予測結合部位（頭部、茎部）およびｉｎ  ｖｉｖｏでの効果の評価を記載した表１１を示す図である。ｉｎ  ｖｉｖｏの結果は、１０×ＬＤ５０のウイルスを接種し、２４ｈｐｉに示されるＴＲＬ抗体を１ｍｇ／ｋｇでＩＮ投与した動物の初期体重に対するパーセントを評価した３つの異なる試験を各場合についてまとめたものである。動物の体重は１４日間観察したものであり、観察された最も少ない体重が示されている。抗体ＴＲＬ８０９、ＴＲＬ８３２、ＴＲＬ８４６、ＴＲＬ８４５、ＴＲＬ８４７、ＴＲＬ８４８、ＴＲＬ８４９およびＴＲＬ８５４の結果が示されている。ＴＲＬ８０９、ＴＲＬ８３２、ＴＲＬ８４６、ＴＲＬ８４５、ＴＲＬ８４７、ＴＲＬ８４８、ＴＲＬ８４９およびＴＲＬ８５４はそれぞれ、ｉｎ  ｖｉｖｏでの効果の評価する期間全体を通じて動物の初期体重の少なくとも９５％を維持する効果を示した。ＴＲＬ８４５、ＴＲＬ８４７、ＴＲＬ８４８、ＴＲＬ８４９およびＴＲＬ８５４は、ｉｎ  ｖｉｖｏでの効果の評価する期間全体を通じて動物の初期体重の少なくとも９６％を維持する効果を示した。ＴＲＬ８４６は従来のｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイで中和効果を示さなかったが、放出抑制作用は示し、したがって、中和抗体であると考えられる。
【図１７】Ｂ抗体の等電点およびＢ／フロリダ（ヤマガタ系統）およびＢ／マレーシア（ビクトリア系統）インフルエンザウイルス株に対する親和性（ｎＭで表したＫＤ）に関する特徴付けを記載した表１２を示す図である。Ｂ抗体のインフルエンザウイルスに対する親和性を評価し、相対的効果の指標の一側面とした。Ｂ／マレーシアに対するＴＲＬ８４５、ＴＲＬ８４７、ＴＲＬ８４８、ＴＲＬ８４９およびＴＲＬ８５４の親和性はそれぞれ、各場合ともサブｎＭ（１．０ｎＭ未満）であった（データ不掲載）。
【図１８】Ｂ／フロリダ（ヤマガタ系統）ウイルスを投与し２４ｈｐｉに様々なインフルエンザＢ抗体を投与した動物有効性試験を示す図である。いずれの抗体も、１０×ＬＤ５０のウイルスを投与した２４ｈｐｉに１ｍｇ／ｋｇでＩＮ投与した。被験抗体をＴＲＬ８４５、ＴＲＬ８４７、ＴＲＬ８４８、ＴＲＬ８４９、５Ａ７およびＣＡ８０３３とした。ＰＢＳ投与個体およびウイルス未感染個体を対照とした。感染から１４日間、動物の体重を連日モニターし、第０日の初期体重に対するパーセントをプロットした。ＩＮ投与した抗インフルエンザＢ抗体は、投与量１０×ＬＤ５０のヤマガタ系統ウイルスによる感染に対して効果を示し、抗体で治療した感染動物の体重が１００％維持された抗体もいくつかみられた。
【図１９】Ｂ／フロリダ（ヤマガタ系統）ウイルスを投与し２４ｈｐｉに様々なインフルエンザＢ抗体を投与した動物有効性試験を示す図である。いずれの抗体も、１０×ＬＤ５０のウイルスを投与した２４ｈｐｉに１ｍｇ／ｋｇでＩＮ投与した。被験抗体をＴＲＬ８４９、ＴＲＬ８４６、ＴＲＬ８５４、ＴＲＬ８５６、ＴＲＬ８４７、５Ａ７、ＴＲＬ８０９およびＴＲＬ８４８とした。ＰＢＳ投与個体およびウイルス未感染個体を対照とした。感染から１４日間、動物の体重を連日モニターし、第０日の初期体重に対するパーセントをプロットした。ＩＮ投与した抗インフルエンザＢ抗体は、投与量１０×ＬＤ５０のヤマガタ系統ウイルスによる感染に対して効果を示し、抗体で治療した感染動物の体重が１００％維持された抗体もいくつかみられた。
【図２０】Ｂ／マレーシア（ビクトリア系統）ウイルスを投与し２４ｈｐｉに様々なインフルエンザＢ抗体を投与した動物有効性試験を示す図である。いずれの抗体も、１０×ＬＤ５０のウイルスを投与した２４ｈｐｉに１ｍｇ／ｋｇでＩＮ投与した。被験抗体をＴＲＬ８４５、ＴＲＬ８４７、ＴＲＬ８４８、ＴＲＬ８４９、５Ａ７およびＣＡ８０３３とした。ＰＢＳ投与個体およびウイルス未感染個体を対照とした。感染から１４日間、動物の体重を連日モニターし、第０日の初期体重に対するパーセントをプロットした。ＩＮ投与した抗インフルエンザＢ抗体は、投与量１０×ＬＤ５０のビクトリア系統ウイルスによる感染に対して効果を示し、抗体で治療した感染動物の体重が１００％維持された抗体もいくつかみられた。
【図２１】Ｂ／マレーシア（ビクトリア系統）ウイルスを投与し２４ｈｐｉに様々なインフルエンザＢ抗体を投与した動物有効性試験を示す図である。いずれの抗体も、１０×ＬＤ５０のウイルスを投与した２４ｈｐｉに１ｍｇ／ｋｇでＩＮ投与した。被験抗体をＴＲＬ８４９、ＴＲＬ８４６、ＴＲＬ８５４、ＴＲＬ８５６、ＴＲＬ８４７、５Ａ７、ＴＲＬ８０９およびＴＲＬ８４８とした。ＰＢＳ投与個体およびウイルス未感染個体を対照とした。感染から１４日間、動物の体重を連日モニターし、第０日の初期体重に対するパーセントをプロットした。ＩＮ投与した抗インフルエンザＢ抗体は、投与量１０×ＬＤ５０のビクトリア系統ウイルスによる感染に対して効果を示し、抗体で治療した感染動物の体重が１００％維持された抗体もいくつかみられた。
【図２２Ａ】ビクトリア系統ウイルスのＢ／マレーシア（図２２Ａ）およびヤマガタ系統ウイルスのＢ／フロリダ（図２２Ｂ）を用いた動物試験での抗インフルエンザＢ抗体の効果の評価を示す図である。マウスに１０×ＬＤ５０のウイルスを感染させ、２４ｈｐｉに１ｍｇ／ｋｇ用量の抗体によりＩＮ治療した。感染から１４日間、マウスの体重を連日モニターし、第０日の初期体重に対するパーセントをプロットした。被験抗体は、図に示されるように、ＴＲＬ８０９、ＴＲＬ８３２、抗体５Ａ７およびＴＲＬ５７９とした。ＴＲＬ５７９は抗Ｈ３抗体であり、これを陰性対照とした。ＴＲＬ８０９およびＴＲＬ８３２は、ウイルス結合を阻止することによりインフルエンザを中和する。ＩＮ投与した抗インフルエンザＢ抗体ＴＲＬ８０９、ＴＲＬ８３２および５Ａ７は、投与量１０×ＬＤ５０のビクトリア系統ウイルスによる感染に対して効果を示し、抗体で治療した感染動物の体重はほぼ１００％維持された。
【図２２Ｂ】ビクトリア系統ウイルスのＢ／マレーシア（図２２Ａ）およびヤマガタ系統ウイルスのＢ／フロリダ（図２２Ｂ）を用いた動物試験での抗インフルエンザＢ抗体の効果の評価を示す図である。マウスに１０×ＬＤ５０のウイルスを感染させ、２４ｈｐｉに１ｍｇ／ｋｇ用量の抗体によりＩＮ治療した。感染から１４日間、マウスの体重を連日モニターし、第０日の初期体重に対するパーセントをプロットした。被験抗体は、図に示されるように、ＴＲＬ８０９、ＴＲＬ８３２、抗体５Ａ７およびＴＲＬ５７９とした。ＴＲＬ５７９は抗Ｈ３抗体であり、これを陰性対照とした。ＴＲＬ８０９およびＴＲＬ８３２は、ウイルス結合を阻止することによりインフルエンザを中和する。ＩＮ投与した抗インフルエンザＢ抗体ＴＲＬ８０９、ＴＲＬ８３２および５Ａ７は、投与量１０×ＬＤ５０のビクトリア系統ウイルスによる感染に対して効果を示し、抗体で治療した感染動物の体重はほぼ１００％維持された。
【図２３】インフルエンザＡまたはインフルエンザＢウイルスに対する抗体ＴＲＬ０５３、ＴＲＬ５７９および５Ａ７の組合せのＩＮ投与を用いて抗ウイルス効果を評価した動物試験を示す図である。動物にＨ１ウイルスのＰＲ８、Ｈ３ウイルスのビクトリア／１１、インフルエンザＢウイルスのＢ／マレーシアまたはインフルエンザＢウイルスのＢ／フロリダのいずれかを感染させた後、未治療のまま放置するか、３種類の抗体のカクテルで治療した。各抗体を１ｍｇ／ｋｇの用量で含ませ、総抗体量を３ｍｇ／ｋｇとした。カクテル治療個体には、図のように、１０×ＬＤ５０のウイルスを投与して２４ｈｐｉに組合せ抗体を投与した。対照としてウイルス未感染個体が図示されている。感染から１４日間、動物の体重を連日モニターし、第０日の初期体重に対するパーセントをプロットした。図２３から、１０×ＬＤ５０のウイルスによる感染から２４時間後に単回混合用量として投与した抗体カクテルが、Ｈ１ウイルス、Ｈ３ウイルス、Ｂ／ヤマガタ系統ウイルスおよびＢ／ビクトリア系統ウイルスのそれぞれまたはいずれかによる感染に対して効果を示したという証拠が得られる。
【図２４】感染から４日後に１ｍｇ／ｋｇのＣＦ−４０１の単回投与で治療した場合、１００％のマウスが致死量のＨ１Ｎ１による攻撃後も生存した動物試験を示す図である。標準治療のＴａｍｉｆｌｕを投与しても防御作用は示さないが、ＣＦ−４０１  ｍＡｂ療法に加えると、さらに体重減少が抑えられる。第４〜８日に１日２回、１０ｍｇ／ｋｇのＴａｍｉｆｌｕを経口投与した。データは、標準治療（Ｔａｍｉｆｌｕ）にｍＡｂ療法を加えると、遅い時点で投与しても効果が得られることがわかる。
【図２５】ＣＡ６２６１抗体のモデル抗体フラグメントＦａｂのＨ１ウイルスに対する治療効果をＩＮ投与とＩＰ投与とで比較した結果を示す図である。マウスに１０×ＬＤ５０のＨ１インフルエンザウイルスを接種し、２４ｈｐｉに１０ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇおよび０．１ｍｇ／ｋｇの中和ＣＡ６２６１  ＦａｂをＩＮまたはＩＰで投与し、対照にはＰＢＳ治療マウスおよびウイルス未感染マウスを用いた。感染から１４日間、マウスの体重を連日モニターし、第０日の初期体重に対するパーセントをプロットした。ＩＮ投与したＦａｂ  ＣＡ６２６１抗体はいずれの用量でも、いずれのＩＰ投与したいずれの用量よりも高い効果を示した。中和ＦａｂをＩＰ投与した場合、最高用量の１０ｍｇ／ｋｇでも検出可能な効果はみられなかった。
【発明を実施するための形態】
【００６９】
（詳細な説明）
生命を脅かす季節性および流行性のインフルエンザ感染症は依然として重大な疾患であり、米国だけでも４０，０００人がこれにより死亡している。季節性ワクチンを用いることができてもインフルエンザを根絶するには至っておらず、重要な臨床的課題となっている。実際に使用されているインフルエンザの承認薬はＴａｍｉｆｌｕ（登録商標）１つのみであるが、インフルエンザには、Ｔａｍｉｆｌｕ（登録商標）をはじめとするノイラミニダーゼ阻害剤に対する耐性を発達させる傾向が強いことが明らかにされている。さらに、Ｔａｍｉｆｌｕ（登録商標）は、症状発現から４８時間後に投与すると実質的に効果が失われることがわかっている。
【００７０】
インフルエンザを標的とする抗体がワクチンに代わるものとして感染症の治療または予防に迅速に効果を発揮し得るのに対し、ワクチンは通常、有効な抗ウイルス活性を誘導するのに数週間を要する。特に魅力的なものとして、赤血球凝集素ストークと呼ばれる領域のインフルエンザ表面の主要なタンパク質である赤血球凝集素に反応性を示すモノクローナル抗体があり、赤血球凝集素は遺伝的に安定であり、季節による変化がほとんどない、または全くみられない。
【００７１】
既に特徴が明らかにされ、インフルエンザの治療用抗体として開発中の抗体が、ウイルスの保存されたエピトープに基づくものを含め多数存在する。一部の交差反応性抗体は、ワクチン接種または自然感染時に最も堅固な中和抗体を生じさせる赤血球凝集素（ＨＡ）糖タンパク質を標的とする。ＨＡは、ウイルス感染に極めて重要な成分である２つのサブユニット、ＨＡ１およびＨＡ２を含む。ＭＡｂ  ＣＲ６２６１はよく特徴付けられた抗体であり、第１群内のＨ１ウイルスおよびその他の亜型（Ｈ５）と結合すると考えられ、ＨＡ２サブユニットと結合する（Ｔｈｒｏｓｂｙ  Ｍら（２００８）ＰＬ０Ｓ  ＯＮＥ  ３：ｅ３９４２；Ｅｃｋｅｒｔ  ＤＣら（２００９）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３２４：２４６−２５１；Ｆｒｉｅｓｅｎ  ＲＨＥら（２０１０）ＰＬｏＳ  ＯＮＥ  ５（２）：ｅ１９０６；米国特許第８，１９２，９２７号）。ＭＡｂ  ＣＲ８０２０は、第２群ウイルスであるＨ３ウイルスおよび別の亜型（Ｈ７）ウイルス両方のＨＡ２の膜近位ドメイン領域と結合すると考えられている（Ｅｃｋｅｒｔ  ＤＣら（２０１１）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３３３：８４３−８５０）。スイスの研究者による抗体ＦＩ６ｖ３は、第１群（Ｈ１）および第２群（Ｈ３）両方のウイルスに存在するエピトープと結合することができると考えられているが、ＦＩ６の効果が少ないことがマウスで明らかにされている（Ｃｏｒｔｉ  Ｄら（２０１１）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３３３：８５０−８５６）。Ｐａｌｅｓｅらは、様々な赤血球凝集素を有するマウスに連続予防接種を用いて、Ｈ３インフルエンザウイルスに対して広範な防御作用を示すモノクローナル抗体を報告している（Ｗａｎｇ  ＴＴら（２０１０）ＰＬｏＳ  Ｐａｔｈｏｇ  ６（２）：ｅ１０００７９６；米国特許出願公開第２０１１００２７２７０号）。この方法を用いて、広域反応性を示すと考えられるＨ１抗体が単離されている（Ｔａｎ  ＧＳら（２０１２）Ｊ  Ｖｉｒｏｌ  ８６（１１）：６１７９−６１８８）。
【００７２】
ＨＡに対するモノクローナル抗体によるインフルエンザの治療的処置は用量依存性であるほか、感染後に時間が経過してから投与する場合には用量を高くする必要がある。広域反応性のＨＡ特異的抗体をＩＰまたはＩＶで実施する典型的な治療的投与では、致命的攻撃から防御するのに２ｍｇ／ｋｇ〜５０ｍｇ／ｋｇの範囲の用量を必要とする。感染後に時間が経過してから同じ効果を得るには、１０ｍｇ／ｋｇを超える範囲の投与が必要となる。北米の平均的な成人は約８０．７ｋｇであり、１０ｍｇ／ｋｇで投与する場合、抗体を８０７ｍｇ必要とすることになる。Ｃｒｕｃｅｌｌ  Ｈｏｌｌａｎｄ  ＢＶにより現在実施されているインフルエンザモノクローナル抗体ＣＲ６２６１およびＣＲ８０２０を対象とする２件の第１相試験では、１ｍｇ／ｋｇから５０ｍｇ／ｋｇまで漸増する単回用量での安全性および耐容性が評価されている（それぞれ試験ＮＣＴ０１４０６４１８およびＮＣＴ０１７５６９５０；ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｔｒｉａｌｓ．ｇｏｖ）。マウスでは、死に至らないようにするために上記の抗体を１５ｍｇ／ｋｇ必要とする（Ｆｒｉｅｓｅｎ，ＲＨＥら（２０１０）ＰＬｏＳ  ＯＮＥ  ５（２）：ｅ１９０６）；Ｅｋｉｅｒｔ  ＤＣら（２０１１）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３３３：８４３−８５０）。これらのＩＰまたはＩＶ投与量に基づけば、ヒト（約７０ｋｇ）の体重に基づき単一抗体が患者１人当たり１グラム前後必要となる。複数のインフルエンザ亜型を対象とするいかなる治療法でも、流行中のインフルエンザの３つの異なる亜型（インフルエンザＡ  Ｈ３、インフルエンザＡ  Ｈ１およびインフルエンザＢ）を治療するには２つ以上の抗体が必要とされることによりこの量はさらに増大し、したがって、各抗体を約１グラムと仮定すると、合計３グラム前後の抗体が必要になると考えられる。抗体がこれほど大量になると、コストが法外に高くなるほか、投与も困難であり、インフルエンザの治療用抗体を開発するうえで大きな障害となる。
【００７３】
本発明者らは、効果を著明に保持し、場合によっては改善しながらも、抗体の量を大幅に１０倍超減らす解決法をつきとめた。本発明者らは、抗体を鼻腔内に、またはより一般的には吸入により送達することで、効果がＩＶまたはＩＰ経路に比して著明かつ有意に改善されることを発見した。米国特許出願第６１／７８２，６６１号および国際出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１４／２７９３９号（参照により本明細書に組み込まれる）にはインフルエンザモノクローナル抗体の有効な経気道投与が記載されている。
【００７４】
受け入れられている既知のインフルエンザマウスモデルを用いて、中和抗体の鼻腔内（ＩＮ）送達により、治療効果を腹腔内（ＩＰ）または静脈内（ＩＶ）到達経路に比して大幅に１０倍超増大させることができるのは注目すべきことである。ＩＶまたはＩＰ経路の代わりにＩＮで投与すると、同用量の１０分の１未満の量を用いて同等の効果を得ることができる。インフルエンザの治療に現在用いられている治療デザインは、標準治療として静脈内送達を用いるものである（ＣｌｉｎｉｃａｌＴｒｉａｌｓ．ｇｏｖ識別番号：ＮＣＴ０１３９００２５、ＮＣＴ０１７５６９５０、ＮＣＴ０１４０６４１８）。抗体の中和特性を利用することが可能であるかどうかは明らかにされていないため、当該分野ではこの送達方法が標準治療となっている。抗体治療薬に関する研究の大部分はＩＶまたはＩＰ送達を用いるものであり、インフルエンザに中和抗体をＩＮ送達することで効果がＩＶまたはＩＰ送達に比して改善されることを明らかにすることはできない。
【００７５】
これまでに報告されているＩＮ送達では、ポリクローナル血清ガンマグロブリンＩＶＩＧまたは抗体のＩｇＡクラス（ＩｇＡ抗体は生得的に肺によくみられる）が評価されている（Ａｋｅｒｆｅｌｄｔ  Ｓら（１９７３）Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  ２２：２９１１−２９１７；Ｒａｍｉｓｓｅ  Ｆら（１９９８）Ｃｌｉｎ  Ｅｘｐ  Ｉｍｍｍｕｎｏｌ  １１１：５８３−５８７；Ｙｅ  Ｊら（２０１０）Ｃｌｉｎ  Ｖａｃｃｉｎｅ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １７（９）：１３６３）。あるグループは、抗体（Ｃ１７９）の腹水調製物をＩＮ経路により試験し、防御的ＩＮ送達（攻撃前）でもＩＰと差がないことを記載している（Ｓａｋａｂｅ  Ｓら（２０１０）Ａｎｔｉｖｉｒａｌ  Ｒｅｓ  ８８（３）：２４９−２５５）。Ｃ１７９は、２００９年に大流行したＨ１Ｎ１ウイルスに対する中和活性は低いが、マウスを感染から防御することが報告されている。
【００７６】
これとは対照的に、本発明者らは、重要なこととして、投与様式に関係なく、効果の増大が単に交差反応性抗インフルエンザ抗体を伴うだけではないことを発見した。一般に、ＩＮで投与すると中和作用を示さない抗体は、インフルエンザに対して効果を示さない。本発明者らの知る限り、これまで、標的とするウイルスのエピトープまたはタンパク質に関係なく、この効果をｉｎ  ｖｉｔｒｏ中和活性を示す抗体に対してより広範に適用することが可能であることを明らかにした研究はない。さらに、中和作用を示す株特異的抗体をＩＮで投与しても効果の増大がみられることから、抗体がＨＡに対して交差反応性である必要はない。本発明者らは、投与経路に応じて同等の効果を得るのに必要な抗体の量を大幅に減らすには、中和抗体（単に交差反応性の抗ＨＡ抗体であるだけではない）が不可欠であることを発見した。実際、本発明者らは、中和作用を示さない交差反応性抗ＨＡ抗体を用いると、逆のことが起こることを発見した。このような交差反応性非中和抗ＨＡ抗体を治療に用いると、鼻腔内投与によりマウスを治療する際に治療効果が著明に減少するが、ＩＰまたはＩＶ経路により投与すると、これらの抗体が相当な効果を示す。
【００７７】
理論に束縛されるものではないが、この現象の背後にあると考えられる機序は、鼻腔内送達では、気道粘膜内のＩｇＧ抗体のレベルが抗体の抗原結合部位の中和能を利用することができる程度に達するのに対し、抗体のＩＶまたはＩＰ送達はＦｃに依存することにある。気道内では、阻害機序は抗体の中和特性に依存し、Ｆｃ依存性の作用は著しく制限される。ＩＰまたはＩＶによりＩｇＧ抗体を投与すると、気道内のこの空間に到達する抗体の量が少なくなり、抗体の中和作用を利用することができない。例えば、ＩＰまたはＩＶにより中和抗体を投与する場合、観察される治療効果は、主として抗体エフェクター機能に起因するものである。本発明者らは、ＩＮではなくＩＰまたはＩＶで投与しても、中和抗体または非中和抗体の効果のレベルに差がないことを発見した。この作用が中和に依存することをさらに説明すると、Ｍ２タンパク質に対する抗体はｉｎ  ｖｉｔｒｏの中和作用を示さず、Ｆｃ仲介性の作用を示すことしかできない。Ｍ２イオンチャネル（ＨＡよりも遺伝的に保存された分子）に対する抗体を用いたこれまでの研究は、前臨床的モデルで有望であることを明らかにし、第Ｉ相試験が終了している（Ｔｈｅｒａｃｌｏｎｅ社のＴＣＮ−０３２；ＮＣＴ０１３９００２５、ＮＣＴ０１７１９８７４；Ｇｒａｎｄｅａ  ＡＧら（２０１０）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  １０７（２８）：１２６５８−１２６６３）。Ｍ２タンパク質に対する抗体はウイルスを中和することはできないが、エフェクター機能を介した治療効果が十分に確認されている（Ｗａｎｇ，Ｒ．ら（２００８）Ａｎｔｉｖｉｒａｌ  ｒｅｓｅａｒｃｈ  ８０：１６８−１７７；Ｇｒａｎｄｅａ，Ａ．Ｇ．，３ｒｄら（２０１０）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  １０７（２８）：１２６５８−１２６６３）。本発明者らは、中和抗体および非中和抗体はともに、ＩＰまたはＩＶで投与すると、主としてＭ２標的化抗体と同様のエフェクター機能を介して機能するものと考える。Ｍ２タンパク質はＨＡよりもはるかに量が少ないほか、表面から突出していない。ＨＡに対する抗体はウイルスを中和することが可能であり、なおも効果が改善される可能性を秘めている。したがって、通常、ＨＡに対する抗体の方が抗Ｍ２抗体よりも治療効果が高い。それでも、中和作用を示さなくてもＨＡを標的とする抗体は、ＩＰで投与しても中和抗体と同レベルの効果を示す可能性があり、この送達経路では、ＩＮで投与したときに利用することが可能な強力な作用を利用できないことが示唆される。さらに、ＩＰではなくＩＮで中和Ｆａｂを送達すると治療効果が得られる。ＩＮで投与した非中和Ｆａｂは治療効果を示さない。以上をまとめると、このような効果の増大を示すのはＩＮで投与した中和抗体のみである。この観察結果を拡張すると、肺送達による効果の増大というこの現象は、他のインフルエンザタンパク質（例えば、ノイラミニダーゼ）を標的とする中和抗体および他の呼吸器病原体に対する中和抗体（例えば、ＲＳＶに対するパリビズマブ）に起こり得る。この効果の増大または効果の増大のレベルは、呼吸器病原体のこのサブセットの肺尖部における複製生活環に依存するものと思われ、この場合、肺尖��空間隙では、これらのウイルスが上記の抗体の中和能による影響を受けやすい。ＩＮおよびＩＰ／ＩＶ経路による抗体の送達はともに、それぞれが異なる方法で効果を発揮し得るため、両経路を組み合わせて用いれば、中和抗体の最大の治療能を利用することが可能である。この方法は、ＩＮ経路を介した中和活性の増大およびＩＰ／ＩＶ経路によるＦｃ依存性活性の増大を利用することにより、最大の効果を可能にするものである。
【００７８】
本発明の実施例では、既知の抗体および新たに単離された抗体を含めた中和抗体の低用量での鼻腔内効果を示す。例示的な抗体として、抗体ＣＲ６２６１、ＣＲ８０２０、ＣＲ９１１４、５Ａ７、ｍＡｂ５３（ＴＲＬ０５３）、ｍＡｂ５７９（ＴＲＬ５７９）、ＴＲＬ８４５、ＴＲＬ８４６、ＴＲＬ８４７、ＴＲＬ８４８、ＴＲＬ８４９、ＴＲＬ８５４、ＴＲＬ８０９およびＴＲＬ８３２を含めた多数の異なる既知の抗体で鼻腔内効果が得られる。前臨床試験を含め、例えばＣＲ６２６１およびＣＲ８０２０などの試験が多数実施されているものの、このような活性および効果はこれまでに明らかにされていない。本明細書では、既知の抗体および新たに単離された抗体を含めた多数の異なる抗体を評価し、経気道投与で効果が得られる。
【００７９】
本発明は、インフルエンザＡおよびインフルエンザＢウイルスに対して効果を示し、有害な相互作用を伴わず著明な製剤化効率で製造および投与することができる、新規で独自の抗体の組合せに関する。本発明による組合せの抗体は、インフルエンザＡウイルスの亜型Ｈ１、Ｈ３、Ｈ５のほか、インフルエンザＢのヤマガタ系統およびビクトリア系統を含めた、互いに異なるが、いずれも臨床的に重要な亜型に対するものである。したがって、本発明は全般的には、適用可能な抗体の組合せおよびカクテルを提供し、ここでは、重要な流行中のインフルエンザウイルスを中和することができる抗体の独自の組合せまたはカクテルを、経気道投与ならびに鼻腔内などの気道から、または肺もしくは気管支粘膜への送達により本発明の抗体の組合せまたはカクテルを投与することによるインフルエンザウイルス、インフルエンザによる感染および／または伝染の治療または予防のための方法および組成物に用いることができる。本発明の抗体の組合せまたはカクテルの独自で有用な効果により、投与または使用前にインフルエンザウイルスまたは亜型の臨床評価も特異的診断も実施する必要がない。抗体フラグメント、誘導体または変異体が企図される。本明細書では、Ｆａｂを含めた抗体フラグメントで本開示に従って効果が得られることが示される。本開示の実施形態の一態様では、抗体のＦａｂフラグメントは、経気道経路（例えば、鼻腔内または吸入による）で投与すると活性および効果を示し、ＩＰまたはＩＶで投与すると無効である。図２５に示されるように、吸入製剤にはモデルＦａｂがｉｎ  ｖｉｖｏで効果を示す。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖである抗原結合フラグメントが提供される。
【００８０】
いくつかの実施形態では、インフルエンザに対する受動免疫に用いる抗体、抗原結合フラグメント、組成物および方法が提供される。いくつかの実施形態では、インフルエンザウイルスの治療または予防のための抗体の組合せ、組成物および方法が提供される。いくつかの態様では、インフルエンザＡおよびＢに対するモノクローナル抗体を含み、鼻腔内または吸入投与などの経気道投与を含めた投与により全身に、または呼吸気道に直接投与するのに適した組成物が提供される。抗体（１つまたは複数）の経気道投与または抗体の鼻腔内もしくは吸入投与と腹腔内もしくは静脈内投与の組合せにより治療または予防するための組成物および方法が提供される。
【００８１】
最近、赤血球凝集素（ＨＡ）分子内に保存されたエピトープが発見された。多種多様なインフルエンザＡウイルス亜型を認識し中和することが可能なヒトモノクローナル抗体（ＭＡｂ）の単離および特徴付けに関する報告がいくつかある。これらの多くは、ワクチン接種または自然感染時に最も堅固な中和抗体を生じさせる赤血球凝集素（ＨＡ）糖タンパク質を標的とするものである。ＨＡは、ウイルス感染に極めて重要な成分である２つのサブユニット、ＨＡ１およびＨＡ２を含む。ＨＡ１は宿主細胞の受容体シアル酸との結合に関与し、ＨＡ２はウイルスとエンドソーム膜との融合を仲介する。
【００８２】
現在用いられている抗体療法の用量は、米国で臨床承認されている２０を超えるモノクローナル抗体を含めた多数の組換え抗体に関するこれまでの研究および臨床経験に基づき十分に確立されており、１用量当たり数ｍｇ／ｋｇである（Ｎｅｗｓｏｍｅ  ＢＷおよびＥｒｎｓｔｏｆｆ  ＭＳ（２００８）Ｂｒ  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  ６６（１）：６−１９）。例えば、結腸直腸癌に承認されている抗ＥＧＦＲ完全ヒト抗体のパニツムマブは、２週間ごとに６ｍｇ／ｋｇを１〜１．５時間にわたって静脈内に投与する。ヒトの平均体重７０ｋｇを用いれば、この量は１用量当たり４２０ｍｇの抗体となる。
【００８３】
モノクローナル抗体でこれまでにインフルエンザに臨床承認されているものはない。動物を対象にインフルエンザ抗体を用いた試験の報告では、これらの抗体を治療または予防目的で静脈内または腹腔内に投与する場合、その有効量の範囲には、１ｍｇ／ｋｇから最大１００ｍｇ／ｋｇまでの範囲を必要とすることが明らかにされている。数種類のこれらの抗体（ＣＲ６２６１、ＣＲ８０２０、ＴＣＮ−０３２）を用いた米国での第Ｉ相臨床試験では、安全性および耐容性の試験に２ｍｇ／ｋｇから最大５０ｍｇ／ｋｇまで用量を漸増させて用いている（ｃｌｉｎｉｃａｌｔｒｉａｌｓ．ｇｏｖ；ＮＣＴ０１３９００２５、ＮＣＴ０１４０６４１８、ＮＣＴ０１７５６９５０）。その後、これらの抗体を用いた第ＩＩａ相試験が第Ｉ相の最大用量（例えば、３０ｍｇ／ｋｇまたは５０ｍｇ／ｋｇ）で実施されている。これほど大量の原料は、この新たな抗体治療薬の系列を開発するうえで大きな障害となる。特に、この範囲で全身投与するとなると、原料のコストが相当高くなるほか、注入に関わる時間的、空間的および人員的コストが必然的に伴う。したがって、抗体を用いたインフルエンザの治療法または予防法が実現可能な選択肢となるには、効果を増大させ、かつ／または必要な原料の量を削減することが必要になるのは避けられない。
【００８４】
インフルエンザＢはインフルエンザＡよりもいくぶん頻度は低いが、重大な健康問題であることに変わりはない。インフルエンザＢウイルスは一般に、Ｂ／ビクトリア／２／８７様およびＢ／ヤマガタ／１６／８８様の２つの系統に分類される。インフルエンザＢウイルスは、塩基性１−Ｆ２（ＰＢ１−Ｆ２）と呼ばれるタンパク質は存在しないが、インフルエンザＡには存在しない糖タンパク質Ｂ（ＮＢ）などのほかのタンパク質が存在する点でインフルエンザＡウイルスとは異なる。ほかにも相違点がいくつかある。しかし、インフルエンザＢ株のＨＡタンパク質は、一部のインフルエンザＡのＨＡが互い相同であるように、これらと相同である。
【００８５】
インフルエンザウイルスの赤血球凝集素タンパク質（ＨＡ）は、インフルエンザ株の間で不均一性の高い球状の頭部ドメインおよび細胞内への侵入に必要な融合部位を含むストーク領域を有する。ＨＡはウイルスエンベロープ上に三量体で存在する。未切断型の赤血球凝集素タンパク質（ＨＡ０）がトリプシンによりＨＡ１部分とＨＡ２部分に切断されて活性化すると、融合部位が毒性を示すようになる。２つの切断された部位は、ジスルフィド結合を用いて結合したままであるが、宿主細胞のエンドソーム区画の低ｐＨ環境内では立体構造変化を受けてウイルスと宿主細胞膜の融合を引き起こす。
【００８６】
切断部位には、インフルエンザＡおよびＢ両方の様々な株に共通するコンセンサス配列が含まれている。未切断の赤血球凝集素タンパク質三量体（ＨＡ０）は不活性型と呼ばれるのに対し、赤血球凝集素タンパク質がＨＡ１部分とＨＡ２部分に切断されると、活性化型であると言われる。
【００８７】
Ｂｉａｎｃｈｉ，Ｅ．ら，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．（２００５）７９：７３８０−７３８８には、この切断部位のコンセンサス配列に基づく「汎用」インフルエンザＢワクチンが記載されており、ここでは、この部位を含むペプチドを髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）の外膜タンパク質複合体をコンジュゲートすると、マウスに抗体を生じさせることができたとしている。このほか、コンセンサス配列と結合すると思われるモノクローナル抗体（ｍＡｂ）が記載された。さらに、マウスで抗血清の受動移入に成功するのが観察されている。その他の先行技術のワクチン、例えばインフルエンザのＭ２および／またはＨＡタンパク質に由来するペプチドを含む国際公開第２００４／０８０４０３号に記載されているワクチンなどは、株間で効果が低いか、効果がみられない抗体を誘導する。
【００８８】
当該技術分野で記載されている抗体で、ＨＡストーク領域と結合するものとしては、Ｃｒｕｃｅｌｌ社が開発した抗体、例えば国際公開第２００８／０２８９４６号（‘９４６）；Ｔｈｒｏｓｂｙ，Ｍ．ら，ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ（２００８）３：ｅ３９４２；Ｅｋｉｅｒｔ，Ｄ．Ｃ．ら，Ｓｃｉｅｎｃｅ（２０１１）３３３：８４３  ８５０；およびＳｕｉ，Ｊ．ら，Ｎａｔ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．（２００９）１６：２６５−２７３に記載されているＣＲ６２６１およびＣＲ８０２０などが挙げられる。上記のＰＣＴ公開‘９４６によれば、これらの抗体はＨ５Ｎ１だけでなく、Ｈ２、Ｈ６、Ｈ９およびＨ１とも結合する。このほか、Ｇｒａｎｄｅａ，Ａ．Ｇ．ら，ＰＮＡＳ  ＵＳＡ（２０１０）１０７：１２６５８−１２６６３により記載されているように、保存されたＭ２Ｅ抗原に対するｍＡｂが開発されている。Ｍ２Ｅはウイルスにコードされているタンパク質であり、感染細胞の表面に出現し、アマンタジンおよびリマンタジンの標的でもある。これらの抗ウイルス剤に対しては薬物耐性が広まっており、このことは、この標的が不可欠な機能を果たさないことを示唆している。
【００８９】
ほかにも、Ｌａｎｚａｖｅｃｃｈｉａのグループ：Ｃｏｒｔｉ，Ｄ．ら，Ｓｃｉｅｎｃｅ（２０１１）３３３：８５０−８５６には、インフルエンザＡの第１群および第２群両方の株と結合して中和する先行技術の抗体が記載されているが、その効力は本明細書に記載されるものほど高くはない。さらに、インフルエンザＡおよびＢ両方のストーク領域に対して免疫反応性を示すｍＡｂがＤｒｅｙｆｕｓ，Ｃ．ら，Ｓｃｉｅｎｃｅ（２０１２）３３７：１３４３−１３４８に記載されているが、検出可能な中和能は持たない。同著者らは、ＨＡの頭部基と結合するｍＡｂを２つ記載しており、そのうち一方は、インフルエンザＢの２つのクレードの株に対する親和性および効力に大きなばらつきがみられ、他方は親和性が約１ｎＭである。これらの結果から、インフルエンザＢの広域中和ｍＡｂを得ることが困難であることが確認される。
【００９０】
参照により本明細書に組み込まれるＰＣＴ出願公開第２０１１／１６００８３号には、ヒト細胞に由来し、受動ワクチンに有用なモノクローナル抗体が記載されている。この抗体は、インフルエンザウイルス第１群のクレードＨ１との結合に高い親和性を示し、その一部の抗体はほかにも、同じく第１群のＨ９ならびに／あるいは第２群のＨ７および／または第１群のＨ２に対して高い親和性を示す。開示されている抗体には、推測ではあるがコンセンサス切断領域にある、不活性化三量体型のみと結合するものもあれば、既に切断されている活性化赤血球凝集素タンパク質と結合することができるものもある。
【００９１】
参照により本明細書に組み込まれるＰＣＴ公開第２０１３／０８６０５２号には、このコンセンサス領域にあるエピトープと結合し、第１群のＨ１、Ｈ２、Ｈ５、Ｈ６、Ｈ８、Ｈ９、Ｈ１１、Ｈ１３およびＨ１６ならびに第２群のＨ３およびＨ７を含めた第１群および第２群両方の多数のインフルエンザＡウイルスと結合する、二重特異性抗体を含む一群の抗体が開示されている。さらに、最近公開されたＹａｓｕｇｉ，Ｍ．ら，ＰＬｏＳ  Ｐａｔｈｏｇｅｎｓ（２０１３）９（ｅ１００３１５０としてオンラインで公開されている）の１〜１２ページには、インフルエンザＢウイルスを中和するヒトｍＡｂ、特に、感染から７２時間後にマウスに投与しても治療効果が認められるとされる、５Ａ７と命名されたｍＡｂが記載されている。５Ａ７のＫＤは被験株に対してのみ５ｎＭであると報告されており、エピトープは高度に保存されたＣ末端ストーク領域内にあることが特定されており；報告された効力は、インフルエンザＢのいずれの株に対しても同程度であった。この結果から、インフルエンザＢに対する高親和性（サブｎＭ）ｍＡｂを得ることが困難であることが確認される。
【００９２】
いくつかの実施形態では、予防にも治療にも有用な抗体またはこれに類似した結合部分が提供される。したがって、これらは、対象のウイルスによる感染からの防御のほか、既にインフルエンザＢに曝露または感染した対象の治療に使用され得る。最終的に最も関心のある対象はヒト対象であり、ヒト対象に使用するには、従来の天然抗体またはその免疫反応性フラグメントであるヒト型またはヒト化型の結合部分が好ましい。しかし、相補性決定領域（ＣＤＲ）によって表されるしかるべき結合特性を含む抗体は、実験動物を対象とする試験に用いる場合、非ヒト特性を保持し得る。のちの実施例の試験はマウスを対象に実施されるものであるが、その試験に用いる抗体は、ヒトである可変領域および定常領域をともに含むものである。
【００９３】
定義
本開示では、当業者の技能範囲内に収まる従来の分子生物学、微生物学および組換えＤＮＡの技術を用い得る。このような技術は文献で十分に説明されている。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら，“Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ”（１９８９）；“Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ”  Ｖｏｌｕｍｅｓ  Ｉ−ＩＩＩ［Ａｕｓｕｂｅｌ，Ｒ．Ｍ．編（１９９４）］；“Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ”  第Ｉ〜ＩＩＩ巻［Ｊ．Ｅ．Ｃｅｌｉｓ編（１９９４））］；“Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ”  Ｖｏｌｕｍｅｓ  Ｉ−ＩＩＩ［Ｃｏｌｉｇａｎ，Ｊ．Ｅ．ら編（１９９４）］；“Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ”（Ｍ．Ｊ．Ｇａｉｔ編，１９８４）；“Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ”［Ｂ．Ｄ．ＨａｍｅｓおよびＳ．Ｊ．Ｈｉｇｇｉｎｓ編（１９８５）］；“Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  Ａｎｄ  Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ”［Ｂ．Ｄ．ＨａｍｅｓおよびＳ．Ｊ．Ｈｉｇｇｉｎｓ編（１９８４）］；“Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅ”［Ｒ．Ｉ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙ編（１９８６）］；“Ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ  Ｃｅｌｌｓ  Ａｎｄ  Ｅｎｚｙｍｅｓ”［ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ，（１９８６）］；Ｂ．Ｐｅｒｂａｌ，“Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｇｕｉｄｅ  Ｔｏ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ”（１９８４）を参照されたい。
【００９４】
したがって、以下に挙げる用語が記載されている場合、文脈上明らかに別の意味に解する必要がない限り、それらは以下に記載する定義を有するものとする。
【００９５】
本明細書で使用される「抗体」または「結合部分」という用語は、抗体、その免疫反応性フラグメントまたは抗原結合フラグメントのほかにも、単一特異性モノクローナル抗体、多重特異性抗体、例えば二特異性モノクローナル抗体もしくは三特異性モノクローナル抗体など、単離モノクローナル抗体、組換えモノクローナル抗体および単離ヒトもしくはヒト化モノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントを指す。２つの免疫グロブリン重鎖と２つの免疫グロブリン軽鎖とを含む分子のほか、「フラグメント」が重複して記載される場合でも、従来の抗体の免疫反応性フラグメントまたは抗原結合フラグメントを含む。したがって、抗体には、Ｆａｂフラグメント、実質的に可変領域のみを含むＦｖ一本鎖抗体、二重特異性または三重特異性抗体および依然として免疫特異性を保持しているその様々なフラグメント型のほか、より従来的な天然の抗体の可変領域の活性に近いアミノ酸配列もしくは改変アミノ酸配列（すなわち、擬似ペプチド）を含むことにより「天然の」抗体の活性を模倣するタンパク質が含まれる。したがって、この用語は、天然であるか、全部または一部が組換えによるものまたは別の方法で改変したものなど合成であるかを問わず、免疫グロブリン結合ドメインを含むあらゆるポリペプチドを含め、抗体フラグメント、抗体の誘導体、機能的同等物および相同体を包含する。したがって、免疫グロブリン結合ドメインまたは別のポリペプチドと融合した同等物を含むキメラ分子が含まれる。キメラ抗体のクローニングおよび発現については、欧州特許出願公開第０１２０６９４（Ａ）号および同第０１２５０２３（Ａ）号ならびに米国特許第４，８１６，３９７号および同第４，８１６，５６７号に記載されている。
【００９６】
「抗体」という用語はほかにも、天然であるか、一部または全部が合成により作製されたものであるかを問わず、免疫グロブリンを含む。この用語はこのほか、抗体結合ドメインであるか、これと相同である結合ドメインを有するあらゆるポリペプチドまたはタンパク質を包含する。ほかにも、ＣＤＲ移植抗体がこの用語により企図される。「抗体」とは、特異的エピトープを結合する、抗体およびそのフラグメントを含めた任意の免疫グロブリンのことである。この用語は、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体およびキメラ抗体を包含し、最後に挙げたキメラ抗体については、米国特許第４，８１６，３９７号および同第４，８１６，５６７号にさらに詳細に記載されている。「抗体（１つまたは複数）」という用語は、一般に４本の完全長ポリペプチド鎖、２本の重（Ｈ）鎖および２本の軽（Ｌ）鎖を含む野生型免疫グロブリン（Ｉｇ）分子またはこれと同等のＩｇ相同体（例えば、重鎖のみを含むラクダナノボディ）を含み；Ｉｇ分子の不可欠なエピトープ結合特性を保持する完全長のその機能的変異体、変異体または誘導体を含むほか、二重特異性抗体、二特異性抗体、多重特異性抗体および二重可変ドメイン抗体を含み；免疫グロブリン分子は、任意のクラス（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡおよびＩｇＹ）またはサブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２）のものであり得る。好ましい抗体はＩｇＧクラスのものである。
【００９７】
「抗体結合部位」とは、重鎖および軽鎖の可変領域および超可変領域からなり、抗原と特異的に結合する、抗体分子の構造的部分のことである。
【００９８】
本明細書において様々な文法形態で使用される「抗体分子」という語句は、インタクトな免疫グロブリン分子および免疫グロブリン分子の免疫学的に活性な部分をともに企図する。
【００９９】
本明細書で使用される「モノクローナル抗体」という用語は、実質的に均一な抗体の集団、すなわち、集団を構成する個々の抗体が同一であり、かつ／または同じエピトープ（１つまたは複数）と結合する集団から得られる抗体を指すが、例えば、天然の変異を含んでいる、あるいはモノクローナル抗体調製物を作製する過程で生じる可能性のある変異体は除外され、このような変異体は一般に、存在量が少ない。モノクローナル抗体とは、特定の抗原に対して免疫反応を示し得る抗体結合部位を１種類有する抗体のことである。したがって、モノクローナル抗体は通常、それが免疫反応を示す任意の抗原に対して単一の結合親和性を示す。ポリクローナル抗体調製物には通常、様々な決定基（エピトープ）に対する様々な抗体が含まれているが、これとは対照的に、モノクローナル抗体調製物の各モノクローナル抗体は抗原上の単一の決定基に対するものである。しかし、モノクローナル抗体が異なる抗原に対してそれぞれ特異的な複数の抗体結合部位を有する抗体分子を含む場合、それは例えば二重特異性（キメラ）モノクローナル抗体ように、多特異性を示し得る。「モノクローナル」という修飾語は、実質的に均一な抗体集団から得られるという抗体の性質を表すものであり、任意の特定の方法によって抗体を作製する必要があるものとして解釈されるべきではない。例えば、本開示に従って用いるモノクローナル抗体は、特に限定されないが、ハイブリドーマ法、組換えＤＮＡ法、ファージディスプレイ法およびヒト免疫グロブリン遺伝子座の全部または一部を含むトランスジェニック動物を用いる方法を含めた様々な技術によって作製され得るものであり、本明細書に記載には、上記の方法をはじめとするモノクローナル抗体を作製するための例示的方法が記載される。
【０１００】
「免疫反応性フラグメント」、「結合フラグメント」および「抗体フラグメント」と同義的に使用される「抗原結合フラグメント」は、抗原と特異的に結合して複合体を形成するポリペプチドまたは糖タンパク質であって、酵素的に得られるか、合成であるか、組換えにより「改変された」ものであるポリペプチドまたは糖タンパク質を指す。「抗体フラグメント」は、インタクト抗体の一部分を含み、インタクト抗体が結合する抗原と結合する、インタクト抗体以外の分子を指す。「改変された」抗体フラグメントの例としては、特に限定されないが、Ｆｖ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２；ダイアボディ；線状抗体；一本鎖抗体分子（例えば、ｓｃＦｖ）；および抗体フラグメントから作製される多重特異性抗体が挙げられる。さらに、抗体フラグメントは、ＶＨドメインの特徴、すなわち、ＶＬドメインとともに機能的抗原結合部位を構築して完全長抗体の抗原結合特性をもたらすことが可能であるという特徴またはＶＬドメインの特徴、すなわち、ＶＨドメインとともに機能的抗原結合部位を構築して完全長抗体の抗原結合特性をもたらすことが可能であるという特徴を有する、一本鎖ポリペプチドを含む。「抗体フラグメント」は、（ｉ）可変軽鎖（ＶＬ）ドメイン、可変重鎖（ＶＨ）ドメイン、定常軽鎖（ＣＬ）ドメインおよび定常重鎖１（ＣＨ１）ドメインからなる一価フラグメントであるＦａｂフラグメント；（ｉｉ）ヒンジ領域でジスルフィド架橋により連結された２つのＦａｂフラグメントを含む二価フラグメントであるＦ（ａｂ’）２フラグメント；（ｉｉｉ）ＶＨドメインおよびＣＨ１ドメインからなるＦａｂ（Ｆｄ）フラグメントの重鎖部分；（ｉｖ）抗体の単腕のＶＬドメインおよびＶＨドメインからなる可変フラグメント（Ｆｖ）フラグメント；（ｖ）単一の可変ドメインを含むドメイン抗体（ｄＡｂ）フラグメント（Ｗａｒｄ，Ｅ．Ｓ．ら，Ｎａｔｕｒｅ  ３４１，５４４−５４６（１９８９））；（ｖｉ）ラクダ抗体；（ｖｉｉ）単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）；（ｖｉｉｉ）ＶＨドメインとＶＬドメインがペプチドリンカーにより連結され、この２つのドメインが会合して抗原結合部位を形成することが可能な一本鎖Ｆｖフラグメント（Ｂｉｒｄら，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４２，４２３−４２６，１９８８；Ｈｕｓｔｏｎら，ＰＮＡＳ  ＵＳＡ，８５，５８７９−５８８３，１９８８）；（ｉｘ）ＶＨドメインとＶＬドメインが単一のポリペプチド鎖上に発現するが、同じ鎖上のこの２つのドメインの間で対形成ができない程度に短いリンカーが用いられており、これらのドメインを別の鎖の相補的ドメインと対形成させて、２つの抗原結合部位が生じるようにした二価の二重特異性抗体である、ダイアボディ（国際公開第９４／１３８０４号；Ｐ．Ｈｏｌｌｉｇｅｒら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０  ６４４４−６４４８，（１９９３））；ならびに（ｘ）相補的軽鎖ポリペプチドとともに１対の抗原結合領域を形成する１対の縦列Ｆｖセグメント（ＶＨ−ＣＨ１−ＶＨ−ＣＨ１）を含む、線状抗体（ｘｉ）多価抗体フラグメント（ｓｃＦｖ二量体、三量体および／または四量体（ＰｏｗｅｒおよびＨｕｄｓｏｎ，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄ��  ２４２：１９３−２０４  ９（２０００））；（ｘｉｉ）定常免疫グロブリンドメインのＣＨ３またはＣＨ４と融合し、定常ＣＨ３ドメインまたはＣＨ４ドメインが二量体形成ドメインとしての役割を果たすｓｃＦｖからなる二価分子である、ミニボディ（Ｏｌａｆｓｅｎ  Ｔら（２００４）Ｐｒｏｔ  Ｅｎｇ  Ｄｅｓ  Ｓｅｌ  １７（４）：３１５−３２３；Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ  ＰおよびＨｕｄｓｏｎ  ＰＪ（２００５）Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ  ２３（９）：１１２６−１１３６）；ならびに（ｘｉｉｉ）単独の、あるいは任意に組み合わせた、重鎖および／または軽鎖のその他の非完全長部分あるいはその突然変異体、変異体または誘導体を含めた完全長ではないポリペプチド鎖を少なくとも１つ含む分子を含む。一本鎖Ｆａｂ（ｓｃＦＡｂ）は既知であり、米国特許出願公開第２００７０２７４９８５号などに記載されている。
【０１０１】
抗原結合フラグメントは、Ｆａｂフラグメント；Ｆ（ａｂ’）２フラグメント；Ｆｄフラグメント；Ｆｖフラグメント；一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）分子；ｄＡｂフラグメント；および抗体の超可変領域（ＣＤＲ）を模倣するアミノ酸残基からなる最小限の認識単位を含む。その他の改変された分子、例えばダイアボディ、トライアボディ、テトラボディおよびミニボディも、本明細書で使用される「抗原結合フラグメント」という語句に包含される。
【０１０２】
最初に本明細書に記載され、新規なポリペプチド実体以外を構成する抗体以外で、本明細書で組み合わせて使用および言及される抗体には、報告されている周知のアミノ酸配列を有する抗体が含まれ得るほか、既知であるか、公開されているアミノ酸配列に対する改変を有し、標的の中和または認識および結合活性を含めた実質的に同じ活性を保持するか示す、抗体、タンパク質、ポリペプチドが含まれる。したがって、実質的に同じであるか、変化した活性を示すタンパク質も同様に企図される。上記の改変は、例えば部位特異的変異誘発により得られる改変など、意図的なものであって、あるいは、複合体またはその命名されたサブユニットを産生する宿主の変異により得られる改変など、偶発的なものであってもよい。抗体は、本明細書に具体的に記載されるタンパク質のほかにも、具体的に開示される抗体または公に報告されている抗体と少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％または少なくとも９９％の配列同一性を有するなどのあらゆる実質的に相同な類似体および対立遺伝子変異体をその範囲内に含むものとする。
【０１０３】
本明細書に記載されるアミノ酸残基は「Ｌ」異性体型であるのが好ましい。しかし、ポリペプチドにより免疫グロブリン結合の所望の機能的特性が保持される限り、任意のＬ−アミノ酸残基を「Ｄ」異性体型の残基に置換したものであってもよい。ＮＨ２は、ポリペプチドのアミノ末端に存在する遊離アミノ基を指す。ＣＯＯＨは、ポリペプチドのカルボキシ末端に存在する遊離カルボキシ基を指す。標準的なポリペプチド命名法（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２４３：３５５２−５９（１９６９））に従うにあたり、アミノ酸残基の略記を下の対応表１に示す。
【０１０４】
【表２】
2020096618.tif 000003
【０１０５】
本明細書では、アミノ酸残基配列がいずれも、左方向および右方向が従来のアミノ末端からカルボキシ末端に向かう方向になっている式により表されていることに留意するべきである。表１は、本明細書においていずれか一方で記載され得る３文字および１文字の表記を関連付けるために提供するものである。
【０１０６】
以下に挙げるのは、アミノ酸の様々なグループ分けの例である：非極性Ｒ基を有するアミノ酸：アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、トリプトファン、メチオニン；非荷電極性Ｒ基を有するアミノ酸：グリシン、セリン、トレオニン、システイン、チロシン、アスパラギン、グルタミン；荷電極性Ｒ基を有する（ｐＨ６．０で負に帯電する）アミノ酸：アスパラギン酸、グルタミン酸；塩基性アミノ酸（ｐＨ６．０で正に帯電する）：リジン、アルギニン、ヒスチジン（ｐＨ６．０のとき）；別のグループ分けには、フェニル基を有するアミノ酸があり得る：フェニルアラニン、トリプトファン、チロシン。
【０１０７】
また別のグループ分けには分子量（すなわち、Ｒ基の大きさ）によるものがあり得る：
【表３】
2020096618.tif 000004
【０１０８】
特に好ましい保存的アミノ酸置換は：
−正電荷が維持され得るようなＡｒｇとＬｙｓの間の相互置換；
−負電荷が維持され得るようなＧｌｕとＡｓｐの間の相互置換；
−遊離−ＯＨが維持され得るようなＳｅｒとＴｈｒの間の相互置換；および
−遊離ＮＨ２が維持され得るようなＧｌｎとＡｓｎの間の相互置換
である。
【０１０９】
ほかにも、アミノ酸置換を導入して、特有の好ましい特性を有するアミノ酸で置換し得る。例えば、Ｃｙｓを別のＣｙｓとのジスルフィド架橋が可能な部位として導入し得る。Ｈｉｓを特有の「触媒的」部位に導入し得る（すなわち、Ｈｉｓは酸または塩基として作用することが可能であり、生化学的触媒作用に最もよくみられるアミノ酸である）。タンパク質の構造にベータターンを導入する特有の平面構造を有するという理由から、Ｐｒｏを導入し得る。
【０１１０】
２つのアミノ酸配列は、アミノ酸残基の少なくとも約７０％（好ましくは、少なくとも約８０％、より具体的な実施形態では、少なくとも約９０または約９５％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％の配列同一性）が同一であるか、保存的置換であるとき、「実質的に」相同である。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の保存的アミノ酸置換を有する実質的に相同な配列が提供される。
【０１１１】
本開示の実施形態に使用する抗体またはその活性なフラグメントの調製および／または作製には、本開示に従って使用される抗体をコードする核酸を使用し得る。本明細書で提供または使用される抗体の発現または単離には、このような核酸を含むベクターを使用し得る。
【０１１２】
「レプリコン」とは、ｉｎ  ｖｉｖｏでＤＮＡ複製の自律単位として機能する、すなわち、それ自体の制御下で複製が可能な任意の遺伝要素（例えば、プラスミド、染色体、ウイルス）のことである。
【０１１３】
「ベクター」とは、別のＤＮＡセグメントを結合させて、その結合させたセグメントを複製させ得るプラスミド、ファージまたはコスミドなどのレプリコンのことである。
【０１１４】
「ＤＮＡ分子」は、一本鎖型または二本鎖へリックスのいずれかのポリマー型のデオキシリボヌクレオチド（アデニン、グアニン、チミンまたはシトシン）を指す。この用語は、分子の一次構造および二次構造のみを指すものであり、それを何らかの特定の三次形態に限定するものではない。したがって、この用語は、特に直線状ＤＮＡ分子（例えば、制限酵素断片）、ウイルス、プラスミドおよび染色体にみられる二本鎖ＤＮＡを含む。特定の二本鎖ＤＮＡ分子の構造について述べる際には、ＤＮＡの非転写鎖（すなわち、ｍＲＮＡと相同な配列を有する鎖）の５’から３’に向かう方向で表した配列のみを示すという通常の慣例配列に従って、本明細書に配列が記載され得る。
【０１１５】
「複製起点」は、ＤＮＡ合成に関与するＤＮＡ配列を指す。
【０１１６】
ＤＮＡ「コード配列」とは、しかるべき制御配列の制御下に置いたときにｉｎ  ｖｉｖｏでポリペプチドに転写および翻訳される二本鎖ＤＮＡ配列のことである。コード配列の境界は、５’（アミノ）末端の開始コドンおよび３’（カルボキシル）末端の翻訳停止コドンによって定められる。コード配列としては、特に限定されないが、原核配列、真核ｍＲＮＡのｃＤＮＡ、真核（例えば、哺乳動物）ＤＮＡのゲノムＤＮＡ配列のほか、場合によっては合成ＤＮＡ配列を挙げ得る。ポリアデニル化シグナルおよび転写終止配列は通常、コード配列の３’側に位置する。
【０１１７】
転写制御配列および翻訳制御配列とは、宿主細胞内でコード配列の配列を生じさせるＤＮＡ制御配列、例えばプロモーター、エンハンサー、ポリアデニル化シグナル、ターミネーターなどのことである。
【０１１８】
「プロモーター配列」または「プロモーター」とは、細胞内でＲＮＡポリメラーゼと結合し、下流（３’方向）のコード配列の転写を開始させることが可能なＤＮＡ調節領域のことである。本開示の実施形態を定義する目的には、プロモーター配列は、３’末端に転写開始部位が結合し、バックグランドを上回る検出可能なレベルの転写を惹起するのに必要な最小限の数の塩基または要素が含まれるよう上流（５’方向）まで延びている。プロモーター配列内には、転写開始部位（ヌクレアーゼＳ１を用いるマッピングにより好都よく定められる）のほかにも、ＲＮＡポリメラーゼの結合を担うタンパク質結合ドメイン（コンセンサス配列）が存在する。真核プロモーターには、必ずというわけではないが、「ＴＡＴＡ」ボックスおよび「ＣＡＴ」ボックスが含まれていることが多い。原核プロモーターには、−１０コンセンサス配列および−３５コンセンサス配列に加え、シャイン・ダルガーノ配列が含まれている。
【０１１９】
「発現制御配列」とは、ある形態の制御配列であり、別のＤＮＡ配列の転写および翻訳を制御および調節するＤＮＡ配列のことである。ＲＮＡポリメラーゼがコード配列をｍＲＮＡに転写し、次いでこのｍＲＮＡがそのコード配列によってコードされるタンパク質に翻訳される場合、そのコード配列は細胞内で転写制御配列および翻訳制御配列の「制御下」にある。
【０１２０】
外来ＤＮＡまたは異種ＤＮＡが細胞内に導入された場合、その細胞は「形質転換」されたことになる。形質転換ＤＮＡは、細胞のゲノムを構成する染色体ＤＮＡの中に組み込まれ（共有結合し）ても、組み込まれなくてもよい。例えば、原核生物、酵母および哺乳動物細胞では、形質転換ＤＮＡはプラスミドなどのエピソーム要素上に維持され得る。真核細胞に関して、安定に形質転換された細胞とは、形質転換ＤＮＡが、染色体複製を介して娘細胞に遺伝するよう染色体の中に組み込まれている細胞のことである。この安定性は、その真核細胞から、形質転換ＤＮＡを含む娘細胞の集団からなる細胞系またはクローンを確立することが可能であることによって示される。「クローン」とは、単一の細胞または共通の祖先から有糸分裂によって生じた細胞集団のことである。「細胞系」とは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで何世代にもわたって安定に増殖することが可能な初代細胞のクローンのことである。
【０１２１】
２つのＤＮＡ配列において、ＤＮＡ配列の定めされた長さにわたってヌクレオチドの少なくとも約７５％（好ましくは、少なくとも約８０％、最も好ましくは約９０％または９５％）が一致する場合、両ＤＮＡ配列は「実質的に相同」である。実質的に相同な配列は、配列データバンクで入手可能な標準的なソフトウェアを用いて配列を比較するか、例えばその特定の系に対して定めたストリンジェントな条件下で、サザンハイブリダイゼーション実験を実施することにより、特定することができる。しかるべきハイブリダイゼーション条件を定めることは当業者の技能の範囲内にある。例えば、Ｍａｎｉａｔｉｓら，上記；ＤＮＡ  Ｃｌｏｎｉｎｇ，第Ｉ巻および第ＩＩ巻，上記；Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ，上記を参照されたい。
【０１２２】
本開示の範囲内にはほかにも、本開示の抗体または本開示で使用する抗体をコードするＤＮＡ配列であって、元のコード配列または既知のコード配列と同じアミノ酸配列を有する抗体、ポリペプチドまたはその活性なフラグメントをコードするが、元のコード配列または既知のコード配列の縮重であるＤＮＡ配列が含まれることを理解するべきである。「〜の縮重である」は、特定のアミノ酸を指定するのに異なる３文字コドンが使用されることを意味する。特定のアミノ酸をコードするのに以下のコドンを互換的に使用し得ることが当該技術分野で周知である：
【表４】
2020096618.tif 000005
【０１２３】
上記のコドンはＲＮＡ配列に対するものであることを理解するべきである。ＤＮＡに対応するコドンは、ＵをＴに置き換えたものである。
【０１２４】
抗体または活性なフラグメントをコードする配列に変異を生じさせて、特定のコドンを異なるアミノ酸をコードするコドンに変化させることができる。このような変異は一般に、可能な最小限のヌクレオチドを変化させることによって生じさせる。この種の置換変異は、得られるタンパク質のアミノ酸を「非保存的」方法で（すなわち、特定の大きさまたは特徴を有する異なるアミノ酸のグループに属するアミノ酸から別のグループに属するアミノ酸にコドンを変化させることによって）あるいは「保存的」方法で（すなわち、あるアミノ酸のグループに属し特定の大きさまたは特徴を有するアミノ酸から同じグループに属するアミノ酸にコドンを変化させることによって）変化させるよう生じさせることができる。一般に、上記の保存的変化の方が、得られるタンパク質の構造および機能にもたらす変化が少ない。非保存的変化の方が、得られるタンパク質の構造、活性または機能が変化する可能性が高い。特定の実施形態には、アミノ酸配列中に、得られるタンパク質の活性または結合特性をあまり変化させない１個、２個、３個、４個、５個、６個または７個のアミノ酸残基の保存的変化または置換を含む配列が含まれることが考慮される。
【０１２５】
上記のように、抗体、ポリペプチドまたはその活性なフラグメントをコードするＤＮＡ配列は、クローニングするのではなく、合成により調製することができる。ＤＮＡ配列は、抗体またはフラグメントのアミノ酸配列に対するしかるべきコドンを用いて設計することができる。一般に、配列を発現に使用する場合、意図する宿主に好ましいコドンを選択する。標準的な方法により調製された重複するオリゴヌクレオチドから完全な配列を組立て、これを完全なコード配列に組み立てる。例えば、Ｅｄｇｅ，Ｎａｔｕｒｅ，２９２：７５６（１９８１）；Ｎａｍｂａｉｒら，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２２３：１２９９（１９８４）；Ｊａｙら，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２５９：６３１１（１９８４）を参照されたい。合成ＤＮＡ配列により、類似体または「ムテイン」を発現する遺伝子を都合に合わせて構築することが可能である。あるいは、天然の遺伝子またはｃＤＮＡの部位特異的変異誘発により、ムテインをコードするＤＮＡを作製することができるほか、従来のポリペプチド合成を用いてムテインを直接作製することができる。
【０１２６】
ＤＮＡ構築物の「異種」領域とは、識別可能なＤＮＡのセグメントであって、これより大きいＤＮＡ分子の中にあり、天然ではその大きい分子と一緒にはみられないセグメントのことである。したがって、異種領域が哺乳動物遺伝子をコードする場合、その遺伝子には通常、入手源生物のゲノム内で哺乳動物のゲノムＤＮＡに隣接していないＤＮＡが隣接している。異種コード配列のまた別の例には、コード配列自体が天然にはみられない構築物（例えば、ゲノムコード配列にイントロンが含まれているｃＤＮＡまたは天然の遺伝子と異なるコドンを有する合成配列）がある。対立遺伝子変異または自然に起こる変異事象から本明細書で定義されるＤＮＡの異種領域が生じることはない。
【０１２７】
発現制御配列がＤＮＡ配列の転写および翻訳を制御および調節している場合、そのＤＮＡ配列は発現制御配列と「作動可能に連結されている」。「作動可能に連結されている」という用語には、発現するＤＮＡ配列の前にしかるべき開始シグナル（例えば、ＡＴＧ）を有することのほか、発現制御配列の制御下でのＤＮＡ配列の発現およびそのＤＮＡ配列によってコードされる所望の産物の産生を可能にする正確なリーディングフレームを維持していることが含まれる。組換えＤＮＡ分子に挿入しようとする遺伝子にしかるべき開始シグナルが含まれていない場合、その遺伝子の前にこのような開始シグナルを挿入することができる。
【０１２８】
「標準的ハイブリダイゼーション条件」という用語は、ハイブリダイゼーションおよび洗浄の両方について５×ＳＳＣおよび６５℃に実質的に等しい塩および温度条件を指す。しかし、当業者であれば、このような「標準的ハイブリダイゼーション条件」が緩衝液中のナトリウムおよびマグネシウムの濃度、ヌクレオチド配列の長さおよび濃度、ミスマッチのパーセント、ホルムアミドのパーセントなどを含めた具体的な条件に左右されることが理解されよう。「標準的ハイブリダイゼーション条件」を決定するうえではほかにも、ハイブリダイズする２つの配列がＲＮＡ−ＲＮＡであるのか、ＤＮＡ−ＤＮＡであるのか、ＲＮＡ−ＤＮＡであるのかが重要となる。このような標準的ハイブリダイゼーション条件は、ハイブリダイゼーションを通常、予測されるＴｍまたは決定されたＴｍよりも１０〜２０℃低くし、必要に応じて洗浄のストリンジェンシーを高くするという周知の原則に従い当業者によって決定される。
【０１２９】
抗体およびフラグメントの「結合親和性」という用語は、当該技術分野で公知の様々な方法により求めることが可能なＫＤ（抗体とその抗原との間の平衡解離定数）として本明細書に記載されるものである。いくつかの実施形態では、抗体または抗原結合フラグメントは、インフルエンザＡウイルス、インフルエンザＢウイルスまたはそれに由来するＨＡタンパク質、例えば組換えＨＡタンパク質などに対して以下のような結合親和性を示す。一実施形態では、結合親和性は約５×１０−８Ｍ〜約５×１０−１２Ｍであり、いくつかの実施形態では、結合親和性は約５×１０−９Ｍ〜約５×１０−１１Ｍであり、いくつかの実施形態では、結合親和性は約３×１０−９Ｍ〜約５×１０−１１Ｍであり、いくつかの実施形態では、結合親和性は約５×１０−１０Ｍ〜約５×１０−１１Ｍである。いくつかの実施形態では、組換えＨＡタンパク質に対して１０ｎＭ未満、３ｎＭ未満もしくは１ｎＭ未満またはこれより強いＫＤを示す抗体および抗原結合フラグメントが提供される。いくつかの実施形態では、１０ｎＭ〜０．１ｐＭのＫＤを示す抗体およびフラグメントが提供される。いくつかの実施形態では、３ｎＭ〜１ｐＭのＫＤを示す抗体およびフラグメントが提供される。本明細書で使用される「〜より強い」という用語は、親和性が高くまたは強くなるほどＫＤ値が低くなることから、言及されるＫＤ値またはそれより小さい値（それより低いＫＤ値）を表す。いくつかの実施形態では、例えばマイクロアレイまたは流動システムの使用により、例えばＡＢＣＡＭ（登録商標）（Ｌａｎｄｒｙら，２０１２，Ａｓｓａｙ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｖ  Ｔｅｃｈｎｏｌ  １０（３），２５０−２５９を参照されたい）もしくはＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）（すなわち、表面プラズモン共鳴）により斜入射反射率差（ＯＩ−ＲＤ）を決定すること、あるいは競合結合アッセイによりＫＤを測定する。
【０１３０】
抗体の仲介によるウイルスの中和は、本明細書では、当該技術分野で定義されている、または受け入れられている通りに定義されるものであり、本明細書で言及および使用されるものは、様々な従来の中和アッセイまたは認められている中和アッセイで試験することができる。中和アッセイの例としては、培養細胞に対するウイルスの細胞変性効果（ＣＰＥ）の阻害に基づく従来の中和アッセイが挙げられる。例えば、インフルエンザに感染させたＭＤＣＫ細胞におけるＣＰＥを軽減または阻止することにより、インフルエンザ中和を試験し得る。ウイルスと中和剤を予め混合してから細胞に加え、次いでウイルス侵入の阻止を測定し得る。赤血球凝集素阻害（ＨＩ）はｉｎ  ｖｉｔｒｏで試験され得るものであり、ウイルスが赤血球と結合する能力の阻止を検出することができる。例示的な既知の受け入れられている中和アッセイについては、ＷＨＯ  Ｍａｎｕａｌ  ｏｎ  Ａｎｉｍａｌ  Ｉｎｆｌｕｅｎｚａ（ｗｈｏ／ｃｄｓ／ｃｓｒ／ｎｃｓ／２００２．５，４８〜５４ページ）に記載されている。シアル酸受容体結合部位を遮断する抗体は、ウイルスが細胞との結合するのを中和して感染を阻止する。逆に、Ｔａｍｉｆｌｕ（登録商標）などのノイラミニダーゼ阻害剤の場合のように、中和アッセイにより、ウイルス放出の阻止を検出することもある。最近、ウイルス放出を妨げることによって同様に機能する中和抗体が同定されており、このような中和の例としては、インフルエンザＢウイルスに対するＣＲ９１１４抗体（Ｄｒｅｙｆｕｓら（２０１２）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３３７：１３４３−１３４８）が挙げられる。このほか、マイクロタイタープレートとＥＬＩＳＡを併用して感染細胞中のウイルス核タンパク質（ＮＰ）を検出するマイクロ中和アッセイが用いられている。ウイルスタンパク質を測定する定量的ＰＣＲアッセイが記載されている（Ｄｒｅｙｆｕｓ  Ｃら（２０１２）Ｅｍｅｒｇｉｎｇ  Ｉｎｆ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ  １９（１０：１６８５−１６８７）。いくつかの実施形態では、別の従来のｉｎ  ｖｉｔｒｏ中和アッセイでは中和抗体であるようにはみえないが、放出阻害による中和作用を示し、したがってＩＮ投与により効果を示す抗体またはフラグメントが提供される。したがって、本明細書で定義される「中和」抗体は、従来のｉｎ  ｖｉｔｒｏ中和アッセイで中和作用を示す抗体および／または放出阻害を示す抗体を指す。したがって、放出阻害剤は、インフルエンザ感染の伝播を抑制することから、その用語の１つの意味として、中和作用を示すものである。
【０１３１】
「非中和」抗体は、ウイルスとは結合し得るが、認められている中和アッセイまたは従来の評価法においてウイルスもウイルス複製も阻害しない。ウイルスとの結合は、ウイルスと細胞、細胞受容体または細胞標的との効果的な相互作用を妨げることによりウイルスを阻害し得る。非中和抗体はウイルスの保存されたタンパク質またはタンパク質上のエピトープと結合し得る。例えば、臨床試験段階のＭ２抗体であるＴＣＮ−０３２は、広範囲のインフルエンザＡウイルスと結合することができるが、従来の中和アッセイにおいて中和作用を示さない。同じようにして、ＨＡと結合し中和作用を示さない抗体を同定することができる。
【０１３２】
本明細書で使用される「Ｆａｂフラグメント」は、軽鎖（ＣＬ）のＶＬドメインおよび定常ドメインを含む軽鎖フラグメントと、重鎖のＶＨドメインおよび第一定常ドメイン（ＣＨ１）とを含む、抗体フラグメントを指す。抗体分子のＦａｂ部分およびＦ（ａｂ’）２部分は、周知の方法による実質的にインタクトの抗体分子上でのそれぞれパパインおよびペプシンのタンパク質分解反応により調製されるか、合成または組換えにより調製され得る。このほか、Ｆａｂ’抗体分子部分が周知であり、２つの重鎖部分を連結しているジスルフィド結合をメルカプトエタノールなどで還元し、生じたタンパク質メルカプタンをヨードアセトアミドなどの試薬でアルキル化することにより、Ｆ（ａｂ’）２部分から作製され得る。
【０１３３】
本明細書の「Ｆｃドメイン」という用語は、定常領域の少なくとも一部分を含む免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義するのに用いられる。例えば、天然の抗体では、Ｆｃドメインは、ＩｇＧ、ＩｇＡおよびＩｇＤアイソタイプでは抗体の２つの重鎖の第二および第三定常ドメインに由来する２つの同一のタンパク質フラグメントからなり；ＩｇＭおよびＩｇＥのＦｃドメインは、各ポリペプチド鎖に３つの重鎖定常ドメイン（ＣＨドメイン２〜４）を含んでいる。
【０１３４】
例示的な抗体分子には、インタクトの免疫グロブリン分子、実質的にインタクトの免疫グロブリン分子および免疫グロブリン分子のパラトープを含む部分があり、免疫グロブリン分子のパラトープを含む部分としては、当該技術分野でＦａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２およびＦ（ｖ）として知られる部分が挙げられ、これらの部分は本明細書に記載される治療法に使用するのに好ましい。
【０１３５】
本開示に教示される特定の場合には、ある程度のレベルまたは量の中和活性が必要とされるほか、特に鼻腔内または吸入投与に使用するのに必要な抗体の特徴。したがって、本開示に従って鼻腔内に使用する任意のフラグメント、変異体、誘導体、合成物または抗体部分は、標的ウイルスまたは病原体、一態様ではインフルエンザウイルスに対する中和能および活性を保持している必要がある。一方、腹腔内または静脈内を含めた代替的全身経路で投与する抗体は、標的ウイルスまたは病原体、一態様ではインフルエンザウイルスと結合するか、これを認識するものでなければならないが、中和作用は必要とされない。したがって、一例として、中和作用を保持している抗体（１つまたは複数）のＦａｂフラグメントを鼻腔内に用い得る。鼻腔内投与での効果および中和作用を得るのに、Ｆｃにより仲介されるエフェクター機能は必要とされな。逆に、全身送達される抗体は、エフェクター機能によりその効果を仲介する作用が大きい。
【０１３６】
「抗原結合ドメイン」という用語は、抗原の一部分または全体と特異的に結合しこれと相補的である領域を含む、抗原結合分子の一部分を指す。抗原が大きい場合、抗原結合分子はエピトープと呼ばれる抗原の特定の部分とのみ結合し得る。抗原結合ドメインは、例えば１つまたは複数の抗体可変ドメイン（抗体可変領域とも呼ばれる）によってもたらされ得る。好ましくは、抗原結合ドメインは抗体軽鎖可変領域（ＶＬ）と抗体重鎖可変領域（ＶＨ）とを含む。
【０１３７】
「可変領域」または「可変ドメイン」という用語は、抗体と抗原との結合に関与する抗体重鎖または軽鎖のドメインを指す。天然の抗体の重鎖と軽鎖の可変ドメイン（それぞれＶＨとＶＬ）は一般に、ほぼ同じ構造をもち、各ドメインが４つの保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）と３つの超可変領域（ＨＶＲ）とを含む（例えば、Ｋｉｎｄｔら，Ｋｕｂｙ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，第６版，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｃｏ．，９１ページ（２００７）を参照されたい）。抗原結合特異性を付与するには、単一のＶＨまたはＶＬドメインで十分であると思われる。さらに、特定の抗原と結合する抗体のＶＨまたはＶＬドメインを用いて、それぞれ相補的なＶＬまたはＶＨドメインのライブラリーをスクリーニングし、その抗原と結合する抗体を単離し得る。例えば、Ｐｏｒｔｏｌａｎｏら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５０：８８０−８８７（１９９３）；Ｃｌａｒｋｓｏｎら，Ｎａｔｕｒｅ  ３５２：６２４−６２８（１９９１）を参照されたい。
【０１３８】
本明細書で使用される「抗体の抗原結合部位」という用語は、抗原結合に関与する抗体のアミノ酸残基を指す。抗体の抗原結合部分は、「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」に由来するアミノ酸残基を含む。「フレームワーク」または「ＦＲ」領域とは、本明細書で定義される超可変領域残基以外の可変ドメイン領域のことである。したがって、抗体の軽鎖および重鎖可変ドメインは、Ｎ末端からＣ末端に向かってドメインＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３およびＦＲ４を含む。特に重鎖のＣＤＲ３は、抗原結合に最も寄与する領域であり、抗体の特性を定義する。抗体は、その重鎖および軽鎖ＣＤＲによるアミノ酸配列で十分に定義され得るものであり、特に、その重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３の配列ならびにその軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３の配列により記載され、特徴付けられ得る。抗体は、重鎖および軽鎖を含む抗体またはフラグメントとして定義され得る、または特徴付けられ得るものであり、ここでは、重鎖可変領域は特有のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３の配列を含み、軽鎖可変領域は特有のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３の配列を含む。抗体のＣＤＲおよびＦＲ領域は、当業者に利用可能で既知の標準的な方法および分析により決定され得る。したがって、ＣＤＲおよびＦＲ領域は、Ｋａｂａｔら，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，第５版，Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，ベセスダ、メリーランド州．（１９９１）の標準的定義またはＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ＩｍｍｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ  ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ｓｙｓｔｅｍ（ＩＭＧＴ）（ｉｍｇｔ．ｏｒｇ；ＬｅＦｒａｎｃ，Ｍ−Ｐ（１９９９）Ｎｕｃｌ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ  ２７：２０９−２１２；ＬｅＦｒａｎｃ，Ｍ−Ｐ（２００５）Ｎｕｃｌ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ  ３３：Ｄ５３９−Ｄ５７９）に従って決定され得る。
【０１３９】
「実質的に記載される通りである」は、本開示の抗体の可変領域配列および／または特にＣＤＲ配列が、本明細書に添付される配列表に明記される配列と同一であるか、高度に相同であることを意味する。配列表にＸａａが記載される場合、それ天然に存在する任意のアミノ酸残基を表す。
【０１４０】
「高度に相同である」は、可変領域配列および／またはＣＤＲ配列内に少数の置換のみ、好ましくは１〜８個、好ましくは１〜５個、好ましくは１〜４個または１〜３個または１個もしくは２個の置換が施され得ることを企図するものである。この用語は実質的に、特に本発明の抗体の特異性および／または活性に実質的にまたは大幅に影響を及ぼさない保存的アミノ酸置換を含むことを表す。ＣＤＲ領域配列に対する保存的アミノ酸置換が企図される。例示的なＣＤＲ置換および変異体が企図され、本明細書に記載される。いくつかの態様では、ＣＤＲ配列が保持されるようＣＤＲ外部の可変領域配列に置換を施し得る。したがって、ＣＤＲ配列が維持され、可変領域配列の残りに部分が置換され得るように、可変領域配列の変化または代替的な非相同可変領域もしくは化粧張り（ｖｅｎｅｅｒｅｄ）可変領域の配列を導入または利用し得る。
【０１４１】
「エピトープ」という用語は、抗体と特異的に結合することが可能な任意のポリペプチド決定基を含む。ある特定の実施形態では、エピトープ決定基は、アミノ酸、糖側鎖、ホスホリルまたはスルホニルなどの化学的に活性な表面分子のグループを含み、ある特定の実施形態では、特有の三次元構造的特徴および／または特有の荷電的特徴を有し得る。エピトープとは、抗体が結合する抗原の領域のことである。
【０１４２】
ハイブリドーマをはじめとする手段および方法によりモノクローナル抗体を作製する方法および方法論は周知である。病原体、ウイルスまたはインフルエンザのペプチドに対して作製したモノクローナル抗体のパネルを様々な特性、すなわち、中和作用、アイソタイプ、エピトープ、親和性などについてスクリーニングすることができる。特に対象となるのは、ウイルスまたはそのサブユニットの活性を中和するモノクローナル抗体である。このようなモノクローナルは、中和活性アッセイで容易に特定することができる。このほか、効果的な結合および／または中和に、あるいは天然ウイルスまたは組換えウイルスの免疫アフィニティー精製を所望するか目的とする場合には、高親和性抗体が有用である。
【０１４３】
本開示の実施形態を実施するのに有用なモノクローナル抗体は、しかるべき抗原特異性の抗体分子を分泌するハイブリドーマを含有する栄養培地を含むモノクローナルハイブリドーマ培養を開始することにより作製することができる。ハイブリドーマが培地中に抗体分子を分泌するのに十分な条件下でそのような期間の間、培養を維持する。次いで、抗体を含有する培地を収集する。次いで、周知の技術により抗体分子をさらに単離することができる。
【０１４４】
上記の組成物を調製するのに有用な培地は当該技術分野で周知であるとともに、市販されており、合成培地、近交系マウスなどがこれに含まれる。例示的な合成培地には、４．５ｇｍ／ｌグルコース、２０ｍｍグルタミンおよび２０％ウシ胎仔血清を添加したダルベッコの最小必須培地（ＤＭＥＭ；Ｄｕｌｂｅｃｃｏら，Ｖｉｒｏｌ．８：３９６（１９５９））がある。例示的な近交系マウス系統にはＢａｌｂ／ｃがある。
【０１４５】
このほか、モノクローナル抗ウイルス抗体の作製方法が当該技術分野で周知である。Ｎｉｍａｎら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８０：４９４９−４９５３（１９８３）を参照されたい。通常、モノクローナル抗体を作製するための免疫原として、ウイルス、ウイルスタンパク質またはペプチド類似体を単独で、または免疫担体とコンジュゲートして用いる。ウイルス、タンパク質またはペプチド類似体に対して免疫反応を示す抗体を産生する能力についてハイブリドーマをスクリーニングする。
【０１４６】
抗体はほかにも、二重特異性または多重特異性、例えば、抗体の一方の結合ドメインが本発明に使用するウイルス中和抗体であり、他方の結合ドメインが異なる特異性、例えば、細胞の頂端膜側に結合する特異性、気道上皮細胞と結合する特異性などを有する、二重特異性または多重特異性であり得る。本発明の二重特異性抗体は、抗体の一方の結合ドメインが、そのフラグメントを含めた本発明に使用する中和剤であり、他方の結合ドメインが、代替の中和抗体または非中和抗体を含めた異なる抗ウイルス特異的抗体のものを含めた異なる抗体またはそのフラグメントである、二重特異性抗体を含む。他方の結合ドメインは、肺上皮特異的抗体、肺胞マクロファージ特異的抗体、ニューロン特異的抗体またはグリア細胞特異的抗体のように、特定の細胞型を認識するか、これを標的とする抗体であり得る。本発明の二重特異性抗体では、本発明の抗体の一方の結合ドメインを、他方の結合ドメインあるいは特定の細胞受容体を認識し、かつ／または特定の方法で細胞を調節する分子、例えば免疫調節薬（例えば、インターロイキン（１つまたは複数））、成長調節物質、サイトカイン、毒素（例えば、リシン）、抗有糸分裂剤、アポトーシス剤または因子と組み合わせ得る。したがって、本発明の抗体は、感染症、炎症などの適応症において、薬剤、標識、その他の分子もしくは化合物または抗体を方向付けるか標的化するのに用いられ得る。
【０１４７】
本発明に使用する二重特異性抗体は、少なくとも２つのＦａｂフラグメントを含み得るものであり、１つの例では、第二のＦａｂフラグメントの重鎖および軽鎖可変領域または定常領域のいずれかが変化している。可変領域または定常領域のいずれかが交換されていることから、前記第二のＦａｂフラグメントは、「交差Ｆａｂフラグメント」、「ｘＦａｂフラグメント」または「乗換えＦａｂフラグメント」とも呼ばれる。このような二重特異性抗体については米国特許出願公開第２０１３００６０１１号に記載されている。
【０１４８】
特定のさらなる態様では、中和抗体を抗体のＩＰまたはＩＶ投与と組み合わせて、または逐次的にＩＮ投与することにより、ウイルス感染症の治療および／または予防の効果的で増強された相乗作用手段がもたらされる。ＩＰまたはＩＶを含め全身に投与する抗体は中和性であっても非中和性であってもよく、したがって、ＩＮ投与する抗体と同じ抗体であっても、あるいは改変抗体または異なる抗体であってもよい。したがって、中和抗体である鼻腔内送達用の抗体は、それと組み合わせて使用し別の手段、特にＩＰまたはＩＶ送達を含めた全身送達で送達する抗体とは異なる抗体であり得る。
【０１４９】
本開示は、鼻腔内での効果を増大させるのに中和抗体のＦｃ機能およびＦｃ部分、ひいてはエフェクター機能が必要とされないことを示すものである。したがって、抗体およびＦａｂフラグメントなどのフラグメントまたはＦｃを欠くかエフェクター機能を欠く抗体は鼻腔内で効果を示す。これに対し、抗体（中和抗体または非中和抗体）のＦａｂフラグメントまたはＦｃを欠くかエフェクター機能を欠く抗体は、ＩＰまたはＩＶでは効果がみられない。
【０１５０】
いくつかの実施形態では、免疫複合体または抗体融合タンパク質であって、本発明に使用する抗体、抗体分子またはそのフラグメントが他の分子または薬剤をコンジュゲートまたは結合している免疫複合体または抗体融合タンパク質が提供され、このようなものとしてはさらに、特に限定されないが、化学切断剤、毒素、免疫調節薬、サイトカイン、細胞毒性薬、化学療法剤、抗ウイルス剤、抗菌剤または抗菌ペプチド、細胞壁および／または細胞膜破壊剤あるいは薬物とコンジュゲートした上記のような抗体、分子またはフラグメントが挙げられる。一態様では、免疫複合体または抗体融合体は、抗ウイルス剤、特に抗インフルエンザ剤とコンジュゲートした抗体、分子またはフラグメントを含み得る。抗インフルエンザ剤はノイラミニダーゼ阻害剤であり得る。抗インフルエンザ剤はＴａｍｉｆｌｕおよびＲｅｌｅｎｚａから選択され得る。抗インフルエンザ剤は、アマンタジンまたはリマンタジンなどのＭ２阻害剤であり得る。抗インフルエンザ剤はウイルス複製阻害剤であり得る。
【０１５１】
本発明の抗体を含めた抗体、そのフラグメントおよび組成物が治療および予防に有用な「対象（１つまたは複数）」には、ヒトに加え、インフルエンザによる感染に感受性の任意の対象が含まれる。したがって、ウシ、ブタ、ヒツジなどの様々な哺乳動物のほか、ウマおよび家庭用ペットならびにアザラシを含めたその他の哺乳動物対象に、上記の結合部分の予防的および治療的使用による利益がもたらされる。いくつかの場合には、対象種に適合させた抗体を使用する。さらに、インフルエンザは鳥類種に感染することが知られており、鳥類種にも、同じく対象種に適合させ得る本発明の抗体を含有する組成物による利益がもたらされる。
【０１５２】
抗体またはフラグメントの「治療有効量」または「有効量」とは、任意の医学的治療に適用可能な妥当な利益／リスク比で治療対象に治療効果をもたらす所定の量のことである。治療効果は客観的なもの（すなわち、何らかの試験またはマーカーにより測定可能なもの）であっても主観的なもの（すなわち、対象が効果の兆候を示すか、効果を感じる、または医師が変化を観察する）であってもよい。組成物中の各抗体の有効量は、約０．００１ｍｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇ、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ、約０．０５ｍｇ／Ｋｇ〜約１ｍｇ／ｋｇの範囲であり得る。本明細書で企図される効果には、必要に応じて医学的な治療処置および／または予防処置の両方が含まれる。治療効果および／または予防効果を得るために本開示に従って投与する具体的な抗体またはフラグメントの量は、当然のことながら、個々の事例を取り巻く状況、例えば、投与する化合物、投与経路、他の有効成分の共投与、治療対象となる状態、使用する具体的な組成物、患者の年齢、体重、全般的健康状態、性別および食事；使用する化合物の投与時間、投与経路および排泄速度ならびに治療期間を含めた状況によって決まる。投与する有効量は、医師が上記の関連する状況を考慮に入れ、妥当な医学的判断を行使することにより決定され得る。「治療有効量」は、医師をはじめとする臨床医が追求する対象の生物学的または医学的応答を誘発する薬物、化合物、抗菌剤、抗体または医薬品の量を意味する。特にウイルス感染およびウイルスの増殖に関しては、「有効量」という用語は、ウイルスの複製もしくは発症の量もしくは程度の生物学的に意義のある減少および／または対象の病状（発熱、関節痛、不快感）の長さの減少または感染者の体重減少の抑制をもたらす化合物または薬剤の有効量を含むものとする。「治療有効量」という語句は、本明細書では、ウイルス負荷、ウイルス複製、ウイルス伝染またはその他の病理の特徴、例えば、ウイルスの存在および活性に付随し得る発熱または白血球数の増加を軽減、好ましくは予防するのに十分な量を意味するのに使用される。
【０１５３】
ある特定の実施形態では、対象に治療薬を投与することに関連する「有効量」は、以下の効果を１つ、２つ、３つ、４つまたはそれ以上得るのに十分な治療薬の量を指す：（ｉ）インフルエンザウイルス感染症、インフルエンザウイルスによる疾患もしくはそれに付随する症状の重症度の軽減もしくは改善；（ｉｉ）インフルエンザウイルス感染症、インフルエンザウイルスによる疾患もしくはそれに付随する症状の持続期間の短縮；（ｉｉｉ）インフルエンザウイルス感染症、インフルエンザウイルスによる疾患もしくはそれに付随する症状の進行の予防；（ｉｖ）インフルエンザウイルス感染症、インフルエンザウイルスによる疾患もしくはそれに付随する症状の消退；（ｖ）インフルエンザウイルス感染症、インフルエンザウイルスによる疾患もしくはそれに付随する症状の発現もしくは発症の予防；（ｖｉ）インフルエンザウイルス感染症、インフルエンザウイルスによる疾患もしくはそれに付随する症状の再発の予防；（ｖｉｉ）ある細胞から別の細胞、ある組織から別の組織もしくはある臓器から別の臓器へのインフルエンザウイルスの伝播の抑制もしくは予防；（ｖｉｉｉ）ある対象から別の対象へのインフルエンザウイルスの伝播／伝染の予防もしくは抑制；（ｉｘ）インフルエンザウイルス感染症もしくはインフルエンザウイルスによる疾患を原因とする臓器不全の軽減；（ｘ）対象の入院の抑制；（ｘｉ）入院期間の短縮；（ｘｉｉ）インフルエンザウイルス感染症もしくはそれを原因とする疾患を有する対象の生存率の増大；（ｘｉｉｉ）インフルエンザウイルス感染症もしくはそれを原因とする疾患の除去；（ｘｉｖ）インフルエンザウイルス複製の阻害もしくは抑制；（ｘｖ）インフルエンザウイルスと宿主細胞（１つまたは複数）との結合もしくは融合の阻害もしくは抑制；（ｘｖｉ）インフルエンザウイルスの宿主細胞（１つまたは複数）内への侵入の阻害もしくは抑制；（ｘｖｉｉ）インフルエンザウイルスゲノム複製の阻害もしくは抑制；（ｘｖｉｉｉ）インフルエンザウイルスタンパク質合成の阻害もしくは抑制；（ｘｉｘ）インフルエンザウイルス粒子組立ての阻害もしくは抑制；（ｘｘ）宿主細胞（１つまたは複数）からのインフルエンザウイルス粒子放出の阻害もしくは抑制；（ｘｘｉ）インフルエンザウイルス力価の低下；（ｘｘｉｉ）インフルエンザウイルス感染症またはインフルエンザウイルスによる疾患に付随する症状の数の減少；（ｘｘｉｉｉ）別の治療法の予防効果もしくは治療効果（１つまたは複数）の増強、改善、補強、補完もしくは増大；（ｘｘｉｖ）インフルエンザウイルス感染症による二次感染の発症もしくは進行の予防；（ｘｘｖ）インフルエンザウイルス感染症に続発する細菌性肺炎の発症の予防もしくは疾患重症度の軽減；および／または（ｘｘｖｉ）サイトカイン、ケモカイン、補体、細胞応答などを含めたインフルエンザに対する免疫応答の変化。いくつかの実施形態では、治療薬の「有効量」は、インフルエンザウイルス感染症またはそれを原因とする疾患に有益な効果をもたらすが、それを治癒するものではない。ある特定の実施形態では、治療薬の「有効量」は、予防効果および／または治療効果を示す治療薬の量に達するよう複数回用量の治療薬を特定の頻度で投与することを包含し得る。別の状況では、治療薬の「有効量」は、単回用量の治療薬を特定の頻度で投与することを包含し得る。
【０１５４】
特にインフルエンザによる感染症、疾患または曝露を含めたウイルス感染症に付随する「症状（１つまたは複数）」としては、特に限定されないが、１００°Ｆ（約３７．８℃）以上の発熱、熱感、咳および／または咽喉痛、鼻汁または鼻詰まり、頭痛および／または身体痛、悪寒、倦怠感、全身脱力、嘔気、嘔吐および／または下痢、関節と筋肉および／または眼球周囲の鈍痛および疼痛を挙げ得る。
【０１５５】
「予防すること」または「予防」という用語は、疾患発症前に疾患の原因となる物質に曝露し得るか、疾患の素因を有し得る対象が疾患または障害に罹患するか、これを発現するリスクを低下させること（すなわち、疾患の少なくとも１つの臨床症状が発現しないようにすること）を指す。
【０１５６】
「予防法」という用語は、「予防」という用語に関連し包含され、疾患の治療または治癒ではなく予防を目的とする手段または方法を指す。任意の疾患もしくは感染症を「治療すること」または任意の疾患もしくは感染症の「治療」という用語は、一実施形態では、疾患または感染症を改善すること（すなわち、疾患または感染病原体もしくはウイルスの増殖を停止させることあるいはその少なくとも１つの臨床症状の発現、範囲または重症度を減少させること）を指す。別の実施形態では、「治療すること」または「治療」は、対象により識別不可能であり得る少なくとも１つの物理パラメータを改善することを指す。さらに別の実施形態では、「治療すること」または「治療」は、疾患または感染症を物理的な点（例えば、識別可能な症状の安定化）、生理的な点（例えば、物理パラメータの安定化）またはその両方の点で調節することを指す。さらなる実施形態では、「治療すること」または「治療」は、疾患の進行、疾患の伝染の速度を低下させることまたは感染を抑制することに関連する。
【０１５７】
本明細書で使用される「ｐｇ」はピコグラム、「ｎｇ」はナノグラム、「ｕｇ」または「μｇ」はマイクログラム、「ｍｇ」はミリグラム、「ｕｌ」または「μｌ」はマイクロリットル、「ｍｌ」はミリリットル、「ｌ」はリットルをそれぞれ意味する。
【０１５８】
予防法および治療法に用いる方法は従来のものであり、一般に周知のものである。抗体をはじめとする結合部分は通常、注射により投与されるが、このほか経口ワクチンでも効果があることがわかっている。投与のレベルおよび投与のタイミングは容易に最適化され、当業者の技能の範囲内にある。代替法では、抗体をｉｎ  ｓｉｔｕで生じさせる組換え物質を投与し得る。現在、動物対象の細胞、例えばリンパ球または筋細胞などで抗体遺伝子を発現させる技術が利用可能である（例えば、Ｊｏｈｎｓｏｎ，Ｐ．Ｒ．ら，Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ（２００９）１５：９０１−９０７を参照されたい）。このようなｉｎ  ｓｉｔｕでの抗体産生により、薬剤の製造コストの削減が可能になり、投与が簡便になる。このような方法による本発明の抗体の投与は、本発明のまた別の態様である。
【０１５９】
有用な抗体を分泌するヒト細胞（または任意の指定種由来の細胞）は、特に米国特許第７，４１３，８６８号（その内容全体が参照により本明細書に組み込まれる）に記載されているＣｅｌｌＳｐｏｔ（商標）法を用いて特定することができる。簡潔に述べれば、この方法は、ヒト（またはその他の）対象から得られた個々の細胞を、粒子標識による標識を利用するハイスループットなアッセイおよび顕微鏡観察でスクリーニングすることが可能なものである。ある例示的な実施形態では、分泌された抗体をある表面に吸着または結合させた後、それぞれ識別できる粒子標識と結合させた所望の抗原で表面を処理することにより、単一の細胞であっても、それが分泌する抗体を分析することができる。そこで、顕微鏡を用いて細胞のフットプリントを識別することができる。この技術を用いて、数百万個の細胞を所望の抗体の分泌についてスクリーニングすることが可能であり、株間にわたる受動的インフルエンザ予防接種に望ましい本明細書の抗体などのまれな抗体であっても回収することができる。ヒト対象には少なくとも一部のインフルエンザ株に対する抗体が既に存在し、また本発明の方法により得られる抗体は保存された配列と結合することから、これらの抗体は新たな株およびヒト集団が既に経験した株に対処するという目的にかなうものである。
【０１６０】
適切な抗体を入手する方法は、ＣｅｌｌＳｐｏｔ（商標）技術に限定されず、またヒト対象にも限定されない。適切な抗体を産生する細胞は様々な手段によって特定することが可能であり、その細胞は、マウスをはじめとするげっ歯類などの実験動物の細胞であってもよい。このような抗体をコードする核酸配列を単離し、非ヒト細胞によって産生されるキメラ型およびヒト化型の抗体を含めた様々な型の抗体を産生させることができる。さらに、組換えによって産生される抗体またはフラグメントとしては、一本鎖抗体またはそのＦａｂもしくはＦａｂ２領域が挙げられる。このほか、ヒト化免疫系を有するＸｅｎｏＭｏｕｓｅ（登録商標）などの宿主を用いてヒト抗体を入手してもよい。適切な結合特性をスクリーニングするための抗体を作製する手段は当該技術分野で周知である。
【０１６１】
所望の結合パターンを有するＲＮＡアプタマーを構築する手段も同様に、当該技術分野で公知である。
【０１６２】
上記のように、抗体をはじめとする結合部分は、活性化型、不活性化型またはその両方の赤血球凝集素タンパク質と結合し得る。このタンパク質の切断部位は株間で比較的保存されているため、エピトープがこの切断部位であるのが有利な場合もあるが、結合部分は三量体および活性化型の両方と結合するのが好ましい。
【０１６３】
インフルエンザＡおよびインフルエンザＢの様々な株の切断部位が知られている。例えば、上に引用したＢｉａｎｃｈｉらの論文では、数種類のこのような株の切断部位周辺の配列が表２に示されている：
【表５】
2020096618.tif 000006
【０１６４】
表に示されるように、切断部位上流のアルギニン残基から始まる厳密な一致がみられ、したがって、本発明の被験ペプチドに含まれる好ましいコンセンサス配列は、配列ＲＧＩ／Ｌ／Ｆ  ＦＧＡＩＡＧＦＬＥ（配列番号５７）を有するものである。この配列の一部分のみを被験ペプチドに用いることも可能である。
【０１６５】
上記のように、所望の抗体を分泌する細胞が特定されれば、それをコードするヌクレオチド配列を回収し、組換えにより大規模に所望の抗体を産生することは容易である。これによりほかにも、抗体が例えば、一本鎖抗体として、つまりその可変領域のみで、または二重特異性抗体として産生され得るように、抗体を操作することが可能になる。
【０１６６】
回収した核酸は、のちの組換え産生用に物理的に保管および復元してもよく、かつ／または、のちにしかるべき核酸を合成できるように抗体のコード配列に関する配列情報を回収し保管してもよい。コード配列に含まれる情報ならびに迅速な合成およびクローニング技術を既知の組換え産生法とともに用いれば、大流行をはじめとする緊急事態が発生した際に必要な抗体を迅速に作製することが可能である。
【０１６７】
参考までに、重鎖および軽鎖はともに、そのヒト定常領域の配列が既に記載されており、本明細書に配列番号３３〜３５として記載する。上で言及した国際公開第２０１１／１６００８３号および同第２０１３／０８６０５２号では、アミノ酸配列および対応するヌクレオチドコード配列が決定された可変領域を有し様々なインフルエンザ株のＨＡタンパク質と様々な親和度で結合する様々なモノクローナル抗体が復元されている。これらの抗体にはｍＡｂ５３およびｍＡｂ５７９が含まれる。ｍＡｂ５３はＨ１と特定の親和性で結合し；さらに、ｍＡｂ５３はＨ５、Ｈ７およびＨ９と強く結合する。ｍＡｂ５７９はＨ３およびＨ７と結合する。その親和性は低ナノモルないしナノモル未満の範囲内にある。ＨＥＫ２９３細胞の表面に発現するＨＡを用いて天然のＨＡの三量体に対する反応性を検証した。フローサイトメトリーにより抗体結合を測定した。エモリー大学のＳ．ＧａｌｌｏｗａｙおよびＤ．ＳｔｅｉｎｈａｕｅｒからＨＡをコードするプラスミドの提供を受け、細胞表面に提示された様々なクレードの三量体が本発明のｍＡｂによって認識された。
【０１６８】
現在、２つの別個の抗体の抗原特異性ドメインを組み込んだ単一抗体様分子（二重特異性抗体）を作製する技術が多数存在する。したがって、第１群および第２群それぞれに対して広域反応性を示す個々の抗体またはインフルエンザＢ結合と組み合わせた両グループのうちの一方のグループの抗体のＦａｂドメインを用いて、極めて広域な株との反応性を有する単一抗体を構築することができる。適切な技術がＭａｃｒｏｇｅｎｉｃｓ社（ロックビル、メリーランド州ロックビル、メリーランド州）、Ｍｉｃｒｏｍｅｔ社（ベセスダ、メリーランド州）およびＭｅｒｒｉｍａｃ社（ケンブリッジ、マサチューセッツ州ケンブリッジ、マサチューセッツ州）により記載されている（例えば、Ｏｒｃｕｔｔ，Ｋ．Ｄ．ら，“Ａ  ｍｏｄｕｌａｒ  ＩｇＧ  ｓｃＦｖ  ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｔｏｐｏｌｏｇｙ，”  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ  Ｄｅｓ  Ｓｅｌ．（２０１０）２３：２２１−２２８；Ｆｉｔｚｇｅｒａｌｄ，Ｊ．ら，“Ｒａｔｉｏｎａｌ  ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ｏｆ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ｐａｔｈｗａｙｓ，”  ＭＡｂｓ．（２０１１）１：３（３）；およびＢａｅｕｅｒｌｅ，Ｐ．Ａ．ら，“Ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｅｎｇａｇｉｎｇ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｆｏｒ  ｃａｎｃｅｒ  ｔｈｅｒａｐｙ，”  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．（２００９）６９：４９４１−４９４４を参照されたい）。
【０１６９】
したがって、二重特異性抗体を構築することにより、複数の種類の赤血球凝集素タンパク質と結合する抗体をはじめとする結合部分を得ることが特に有用である。特に有用な組合せは、ｍＡｂ５３（Ｈ１、Ｈ５およびＨ９）とｍＡｂ５７９（Ｈ３およびＨ７）の結合特異性を組み合わせるものである。
【０１７０】
ｍＡｂ５３はＨＡ０とは高い親和性で結合するが、ＨＡ１とは結合せず、相補的なＨＡ２フラグメントと結合することが示唆され、実際にその結合が確認された。ｍＡｂ５３は、ウエスタンブロット法による試験ではＨＡ０と結合しないことから、優勢なエピトープが少なくとも部分的には立体構造的であるものと考えられる。
【０１７１】
ｍＡｂ５３およびｍＡｂ５７９が示した様々な株のインフルエンザＡの赤血球凝集素タンパク質に対するＫＤおよびＩＣ５０を表３および表４に記載する。
【０１７２】
【表６】
2020096618.tif 000007
【表７】
2020096618.tif 000008
【０１７３】
上記の値はＭＤＣＫ単層マイクロ中和アッセイで得られたものである。
【０１７４】
本発明は、インフルエンザＢを認識するｍＡｂを含めた上記の抗体、例えばｍＡｂ５３およびｍＡｂ５７９を補完する特異性を有する複数の新規なｍＡｂを提供する。これらの追加のｍＡｂを用いることにより、広範囲にわたるインフルエンザ株に効果を示す受動的ワクチンを調製し、したがって、治療前に感染病原体の株を正確に決定または診断する必要性を軽減する機会がもたらされる。
【０１７５】
実際にｍＡｂである本開示のこれらの結合部分に関して、よく知られているように、その特異性は実質的に、軽鎖および重鎖の可変領域に存在する相補性決定領域（ＣＤＲ）によって決まる。重鎖ＣＤＲによる影響の方が重要であることがわかっており、軽鎖の特性の方が柔軟性が高い。したがって、ｍＡｂまたはフラグメントの全体的な特異性は通常、重鎖のＣＤＲの性質によって決まるのに対し、軽鎖に存在するＣＤＲは、抗体の特異性を実質的に同じにしたまま、より多くの変化を受ける。
【０１７６】
本開示は、二重特異性抗体そのものに加え、ウイルス感染を中和する構築物に重鎖のみを使用することを企図し；このような抗体も二重特異性であり得る。当該技術分野では、いくつかの立場では特異性の大部分が重鎖可変領域によって付与されることがわかっているため、本明細書では、ワクチンの有効成分として重鎖のみで成功を収めている。あるいは、しかるべき特異性の重鎖を様々な形態の軽鎖と結合させて、ウイルスを中和する親和性または能力を増大させてもよい。
【０１７７】
上記のように、本発明の結合部分の結合の特異性は、ほとんどが重鎖のＣＤＲによって定義されるが、加えて軽鎖のＣＤＲによっても補完される。したがって、本発明の結合部分は、３つの重鎖ＣＤＲおよび任意選択で、それに適合する３つの軽鎖ＣＤＲを含み得る。本発明はほかにも、実際にこれらのＣＤＲを含む結合部分と同じエピトープと結合する結合部分を含む。したがって、例えば、同じ結合特異性を有する、すなわち、実際にＣＤＲを含む結合部分が結合するのと同じエピトープと結合するアプタマーも含まれる。結合親和性は、フレームワークでのＣＤＲの配置の仕方によっても決まるため、本発明の結合部分は、３つの重要なＣＤＲを含む重鎖の可変領域全体のほかにも、任意選択で、軽鎖に関連する３つのＣＤＲを含み、問題の重鎖を補完する、軽鎖可変領域全体を含み得る。このことは、単一のエピトープに対して免疫特異性を示す結合部分のほか、２つの別個のエピトープと結合することができる二重特異性抗体または結合実体についてもあてはまる。
【０１７８】
したがって、親和性が適切な抗体の可変領域に由来する結合部分では、重要なアミノ酸配列はフレームワークに配置されるＣＤＲ配列であり、このフレームワークは、必ずしも特異性に影響を及ぼすことも、許容されないレベルまで親和性を低下させることもなく、変化し得る。これらのＣＤＲの定義は、当該技術分野で公知の方法により遂行される。具体的には、重要なＣＤＲを同定するのに最もよく用いられる方法に、Ｗｕ，Ｔ．Ｔ．ら，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．（１９７０）１３２：２１１−２５０およびＫａｂａｔ，Ｅ．Ａ．ら．（１９８３）の著書「Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ」，Ｂｅｔｈｅｓｄａ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，３２３ページに開示されているＫａｂａｔの方法がある。これとほぼ同じもので、よく用いられる別の方法には、Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃ．ら，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．（１９８７）１９６：９０１−９１７およびＣｈｏｔｈｉａ，Ｃ．ら，Ｎａｔｕｒｅ（１９８９）３４２：８７７−８８３に公開されているＣｈｏｔｈｉａの方法がある。また別の変法がＡｂｈｉｎａｎｄａｎ，Ｋ．Ｒ．ら，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２００８）４５：３８３２−３８３９により提唱されている。本発明は、これらの方法のいずれかにより定義されるＣＤＲを含む。
【０１７９】
いずれの方法も、様々な研究者によっていくつかの基準が一様に定められており；したがって、本明細書および特許請求の範囲で明示されるＣＤＲの変化はわずかであり得ることが理解される。得られる可変領域がその結合能を保持する限り、ＣＤＲの正確な位置は重要なことではなく、特許請求の範囲で明示されるこれらの領域は、受け入れられている任意の方法によって同定されるＣＤＲを含むものと解釈されるべきである。
【０１８０】
本発明の抗体をはじめとする結合部分は、標準的な方法および製剤を用いて、受動的ワクチンとして投与することができる。このようなワクチンは通常、注射、通常は筋肉内また皮下への注射により投与されるが、静脈内を含めた他の投与様式も決して除外されない。適切に設計することにより、ワクチンを経口投与してもよい。例えば、上記のように、開発中の技術は、ｍＡｂをヒトの筋肉またはリンパ球内でｉｎ  ｓｉｔｕで産生させることが可能になることを期待させるものであり、本発明の抗体も、この産生方法に適している。
【０１８１】
製剤化に関しては、典型的な受動的抗体ワクチン製剤用補形剤を使用し、また、結合部分をリポソーム、ミセル、ナノ粒子などの担体により投与してもよい。本発明の範囲内に含まれ方法で特に対象となるのは、ＡＣＳ  Ｎａｎｏ．のＡｎｓｅｌｍｏ，Ａ．Ｃ．らに記載され、２０１３年に１０．１０２１／ＮＮ４０４８５３Ｚとしてオンラインで公開されているように、ｍＡｂから作製したナノ粒子の吸着作用により結合部分を赤血球に付着させるものである。この技術によれば、担体粒子もしくは薬剤またはその両方を赤血球上に吸着させることにより、肺に優先的に送達され、したがって、肝臓および脾臓での処理による半減期の短縮が防止され、肺中の濃度が高められる。この技術は受動的インフルエンザワクチンに特に適しており、結合部分を赤血球に付着させる様々な方法を用いることができる。しかし、この論文によれば、必要なのは単純な吸着のみである。これ以外にも、吸入により送達するエアゾール製品など、ｍＡｂの肺への分配を増大させる方法を用いて、受動的ワクチンの効力を増大させることができる。
【０１８２】
いくつかの実施形態では、本発明は、第１群および第２群インフルエンザＡウイルスならびにインフルエンザＢウイルスに対する抗体を同時に、または組み合わせて投与することによる、インフルエンザウイルスおよびインフルエンザウイルス感染症に効果を示す治療および予防のための方法および手段を提供する。本発明では、広範囲の第１群インフルエンザＡウイルスに対する抗体または活性なフラグメントと、広範囲の第２群インフルエンザＡウイルスに対する抗体または活性なフラグメントと、広範囲のインフルエンザＢウイルスに対する抗体または活性なフラグメントとを含む、広域中和抗体の組合せを投与する。
【０１８３】
いくつかの実施形態では、インフルエンザＡおよびインフルエンザＢの両方に対して効果を示す抗体を含み、複数の株に広域反応性を示す、受動的ワクチン、抗体組成物または抗体の組合せが提供される。これにより、単回用量で効果のある抗インフルエンザ剤が提供され、初期症状が発現したとき、またはインフルエンザに曝露した後に投与することが可能になる。ほかにも、抗体または抗体混合物を投与する前に感染ウイルスを詳細に特徴付ける必要性が回避される。インフルエンザ株を決定する診断には、利用可能な臨床検査施設が必要であり、通常、最低１２〜２４時間の作業時間を要するため、しかるべき方向性の治療法を選択する前にインフルエンザ株を決定する必要がある場合、治療に好ましくない遅れが生じる。インフルエンザＡおよびインフルエンザＢ株に対して広域反応性を示す組成物があれば、治療前に株の予備診断を実施する必要がなくなる。
【０１８４】
いくつかの実施形態では、抗体の組合せまたは組み合わせた抗体の組成物を、鼻腔内または吸入投与を含め、呼吸気道または気道に直接投与することによる、インフルエンザウイルスに有効な治療および予防のための新規な方法および手段が提供される。本発明は、吸入（ＩＨ）による送達ならびに／あるいは鼻腔内（ＩＮ）への送達および投与などの気道送達を含めた中和抗体または抗体の組合せの呼吸気道への直接送達が、同じ量の同じ抗体または抗体の組合せの全身投与（ＩＶまたはＩＰ）よりも優れ、効果が高く、低い用量で効果が得られることを示すものである。ウイルスに曝露または感染する前または場合によっては後に抗体をＩＮまたはＩＨ送達する治療法または予防法で効果が得られる。
【０１８５】
いくつかの実施形態では、哺乳動物のウイルス感染症の治療または予防に効果のある経気道投与用の組成物、特に吸入組成物または鼻腔内組成物、特に抗体の組合せの組成物であって、広範囲の第１群インフルエンザＡウイルスに対する抗体または活性なフラグメントと、広範囲の第２群インフルエンザＡウイルスに対する抗体または活性なフラグメントと、広範囲のインフルエンザＢウイルスに対する抗体または活性なフラグメントとを含む、組成物が提供される。第一の態様では、本発明は、ウイルス中和モノクローナル抗体の組合せを単一単位用量で含み、哺乳動物のインフルエンザウイルス感染症の治療または予防に効果のある吸入組成物または鼻腔内組成物であって、各抗体が１ｍｇ／ｋｇ以下の投与量で用量に含まれる、組成物を提供する。本発明は、中和モノクローナル抗体の組合せを単一単位用量で含み、哺乳動物のインフルエンザウイルス感染症の治療または予防に効果のある吸入組成物または鼻腔内組成物であって、各抗体が１０ｍｇ／ｋｇ以下の有効量で投与される、組成物を提供する。本発明は、インフルエンザ中和モノクローナル抗体の組合せをそれぞれ１ｍｇ／ｋｇ未満の単一単位用量で含み、哺乳動物のインフルエンザウイルスの治療または予防に効果のある吸入組成物または鼻腔内組成物を提供する。本発明は、インフルエンザ中和モノクローナル抗体の組合せをそれぞれ０．５ｍｇ／ｋｇ未満の単一単位用量で含み、哺乳動物のインフルエンザウイルスの治療または予防に効果のある吸入組成物または鼻腔内組成物を提供する。本発明は、抗体の組合せを含み、哺乳動物のインフルエンザウイルスの治療または予防に効果のある吸入組成物または鼻腔内組成物であって、各抗体が０．１ｍｇ／ｋｇ未満の用量で投与される、組成物を提供する。
【０１８６】
さらなる態様では、本発明は、流行中のインフルエンザウイルス株に対するインフルエンザ中和抗体の組合せを含み、哺乳動物のインフルエンザウイルスの治療、予防または伝染の抑制に効果のある吸入組成物または鼻腔内組成物を提供する。一態様では、本発明は、流行中のインフルエンザウイルス株に対するインフルエンザ中和抗体の組合せからなる、特にインフルエンザＡ抗Ｈ１抗体と、インフルエンザＡ抗Ｈ３抗体と、抗インフルエンザＢ抗体とからなる、鼻腔内投与用の組成物を提供する。一態様では、組成物は、特に限定されないがＨ２、Ｈ５およびＨ７株を含めた他のインフルエンザ株に対して効果を示す、または一層高い効果を示すインフルエンザＡ抗体を含む。
【０１８７】
組成物は、使用およびインフルエンザウイルスの治療または予防に適しており、適用可能なものである。特定の態様では、組成物はインフルエンザウイルスの伝染の抑制に適している。
【０１８８】
特定の実施形態では、抗体Ｍａｂ５３（ＴＲＬ０５３）、抗体Ｍａｂ５７９（ＴＲＬ５７９）、その抗体フラグメントまたはこれらに基づく二重特異性抗体と、ＴＲＬ８４７、ＴＲＬ８４５、ＴＲＬ８４９、ＴＲＬ８４８、ＴＲＬ８４６、ＴＲＬ８５４、ＴＲＬ８０９およびＴＲＬ８３２から選択されるインフルエンザＢウイルスに対する１つまたは複数のインフルエンザ抗体とを含む抗体の組合せを含む、組成物が提供される。
【０１８９】
いくつかの実施形態では、（ａ）配列番号１１、１２、１３のＨＣＤＲ１／ＨＣＤＲ２／ＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含む重鎖アミノ酸配列および配列番号１４、１５、１６のＬＣＤＲ１／ＬＣＤＲ２／ＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含む軽鎖アミノ酸配列を含む、第一の抗体またはその抗原結合フラグメントと；（ｂ）配列番号２１、２２、２３のＨＣＤＲ１／ＨＣＤＲ２／ＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含む重鎖アミノ酸配列および配列番号２４、２５、２６のＣＤＲドメイン配列ＬＣＤＲ１／ＬＣＤＲ２／ＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含む軽鎖アミノ酸配列を含む、第二の抗体またはその抗原結合フラグメントと；（ｃ）インフルエンザＢ、特にヤマガタ系統および／またはビクトリア系統に対する１つまたは複数のインフルエンザウイルス中和抗体とを含み、抗体またはそのフラグメントが、重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）と重鎖相補性決定領域２（ＨＣＤＲ２）と重鎖相補性決定領域３（ＨＣＤＲ３）とを含む重鎖アミノ酸配列および軽鎖アミノ酸配列または１つもしくは複数のＣＤＲドメイン配列内に１〜３個のアミノ酸置換を含むその高度に相同な変異体を含む、抗体またはそのフラグメントから選択され、ＨＣＤＲ１／ＨＣＤＲ２／ＨＣＤＲ３が、配列番号３１／３２／３３；４１／４２／４３；５１／５２／５３；６１／６２／６３；７１／７２／７３；８１／８２／８３；９１／９２／９３；１０１／１０２／１０３；１１１／１１２／１１３；１２１／１２２／１２３；１３１／１３２／１３３；１４１／１４２／１４３；１５１／１５２／１５３；１６１／１６２／１６３；１７１／１７２／１７３；１８１／１８２／１８３；１９１／１９２／１９３；２０１／２０２／２０３；２１１／２１２／２１３；２２１／２２２／２２３；２３１／２３２／２３３；２４１／２４２／２４３；２５１／２５２／２５３；２６１／２６２／２６３；２７１／２７２／２７３および２８１／２８２／２８３からなる群より選択され、前記変異体および前記抗体が、インフルエンザウイルスと結合し、これを阻害する特性を有する、医薬組成物が提供される。
【０１９０】
いくつかの実施形態では、（ａ）配列番号１１、１２、１３のＨＣＤＲ１／ＨＣＤＲ２／ＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含む重鎖アミノ酸配列および配列番号１４、１５、１６のＬＣＤＲ１／ＬＣＤＲ２／ＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含む軽鎖アミノ酸配列を含む、第一の抗体またはその抗原結合フラグメントと；（ｂ）配列番号２１、２２、２３のＨＣＤＲ１／ＨＣＤＲ２／ＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含む重鎖アミノ酸配列および配列番号２４、２５、２６のＣＤＲドメイン配列ＬＣＤＲ１／ＬＣＤＲ２／ＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含む軽鎖アミノ酸配列を含む、第二の抗体またはその抗原結合フラグメントと；（ｃ）インフルエンザＢ、特にヤマガタ系統および／またはビクトリア系統に対する１つまたは複数のインフルエンザウイルス中和抗体とを含み、抗体またはそのフラグメントが、重鎖アミノ酸配列および軽鎖相補性決定領域３（ＬＣＤＲ３）を含む軽鎖アミノ酸配列または１つもしくは複数のＣＤＲドメイン配列内に１〜３個のアミノ酸置換を含むその高度に相同な変異体を含む、抗体またはそのフラグメントから選択され、ＬＣＤＲ１／ＬＣＤＲ２／ＬＣＤＲ３が、配列番号３４／３５／３６；４４／４５／４６；５４／５５／５６；６４／６５／６６；７４／７５／７６；８４／８５／８６；１０４／１０５／１０６；１１４／１１５／１６；１２４／１２５／１２６；１３４／１３５／１３６；１４４／１４５／１４６；１５４／１５５／１５６；１６４／１６５／１６６；１７４／１７５／１７６；１８４／１８５／１８６；１９４／１９５／１９６；２０４／２０５／２０６；２１４／２１５／２１６；２２４／２２５／２２６；２３４／２３５／２３６；２４４／２４５／２４６；２５４／２５５／２５６；２６４／２６５／２６６；２７４／２７５／２７６；および２８４／２８５／２８６からなる群より選択され、前記変異体が、インフルエンザウイルスと結合し、これを阻害することが可能である、医薬組成物が提供される。
【０１９１】
いくつかの実施形態では、（ａ）配列番号１１、１２、１３のＨＣＤＲ１／ＨＣＤＲ２／ＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含む重鎖アミノ酸配列および配列番号１４、１５、１６のＬＣＤＲ１／ＬＣＤＲ２／ＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含む軽鎖アミノ酸配列を含む、第一の抗体またはその抗原結合フラグメントと；（ｂ）配列番号２１、２２、２３のＨＣＤＲ１／ＨＣＤＲ２／ＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含む重鎖アミノ酸配列および配列番号２４、２５、２６のＣＤＲドメイン配列ＬＣＤＲ１／ＬＣＤＲ２／ＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含む軽鎖アミノ酸配列を含む、第二の抗体またはその抗原結合フラグメントと；（ｃ）インフルエンザＢ、特にヤマガタ系統および／またはビクトリア系統に対する１つまたは複数のインフルエンザウイルス中和抗体またはフラグメントとを含み、抗体またはフラグメントが、重鎖および軽鎖ＣＤＲ配列を含む重鎖アミノ酸配列および軽鎖アミノ酸配列または１つもしくは複数のＣＤＲドメイン配列内に１〜３個のアミノ酸置換を含むその高度に相同な変異体を含む、抗体またはそのフラグメントから選択され、ＨＣＤＲ１／ＨＣＤＲ２／ＨＣＤＲ３／ＬＣＤＲ１／ＬＣＤＲ２／ＬＣＤＲ３が、配列番号３１／３２／３３／３４／３５／３６；４１／４２／４３／４４／４５／４６；５１／５２／５３／５４／５５／５６；６１／６２／６３／６４／６５／６６；７１／７２／７３／７４／７５／７６；８１／８２／８３／８４／８５／８６；９１／９２／９３／９４／９５／９６；１０１／１０２／１０３／１０４／１０５／１０６；１１１／１１２／１１３／１１４／１１５／１１６；１２１／１２２／１２３／１２４／１２５／１２６；１３１／１３２／１３３／１３４／１３５／１３６；１４１／１４２／１４３／１４４／１４５／１４６；１５１／１５２／１５３／１５４／１５５／１５６；１６１／１６２／１６３／１６４／１６５／１６６；１７１／１７２／１７３／１７４／１７５／１７６；１８１／１８２／１８３／１８４／１８５／１８６；１９１／１９２／１９３／１９４／１９５／１９６；２０１／２０２／２０３／２０４／２０５／２０６；２１１／２１２／２１３／２１４／２１５／２１６；２２１／２２２／２２３／２２４／２２５／２２６；２３１／２３２／２３３／２３４／２３５／２３６；２４１／２４２／２４３／２４４／２４５／２４６；２５１／２５２／２５３／２５４／２５５／２５６；２６１／２６２／２６３／２６４／２６５／２６６；２７１／２７２／２７３／２７４／２７５／２７６；および２８１／２８２／２８３／２８４／２８５／２８６からなる群より選択され、前記変異体が、インフルエンザウイルスと結合し、これを阻害することが可能である、組成物が提供される。
【０１９２】
いくつかの実施形態では、（ａ）配列番号１１、１２、１３のＨＣＤＲ１／ＨＣＤＲ２／ＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含む重鎖アミノ酸配列および配列番号１４、１５、１６のＬＣＤＲ１／ＬＣＤＲ２／ＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含む軽鎖アミノ酸配列を含む、第一の抗体またはその抗原結合フラグメントと；（ｂ）配列番号２１、２２、２３のＨＣＤＲ１／ＨＣＤＲ２／ＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含む重鎖アミノ酸配列および配列番号２４、２５、２６のＣＤＲドメイン配列ＬＣＤＲ１／ＬＣＤＲ２／ＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含む軽鎖アミノ酸配列を含む、第二の抗体またはその抗原結合フラグメントと；（ｃ）インフルエンザＢ、特にヤマガタ系統および／またはビクトリア系統に対する１つまたは複数のインフルエンザウイルス中和抗体またはフラグメントとを含み、抗体またはそのフラグメントが、３９／４０、４９／５０、５９／６０、６９／７０、７９／８０、８９／９０、９９／１００、１０９／１１０、１１９／１２０、１２９／１３０、１３９／１４０、１４９／１５０、１５９／１６０、１６９／１７０、１７９／１８０、１８９／１９０、１９９／２００、２０９／２１０、２１９／２２０、２２９／２３０、２３９／２４０、２４９／２５０、２５９／２６０、２６９／２７０、２７９／２８０および２８９／２９０からなる群より選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ配列対を含む重鎖アミノ酸配列および軽鎖アミノ酸配列を含む、抗体またはそのフラグメントから選択される、医薬組成物が提供される。
【０１９３】
いくつかの実施形態では、ＩＮ送達などの気道に有用な中和抗体と、非中和抗体とを組み合わせ得る。本願は、ＩＮ投与と、ＩＰまたはＩＶ投与を含めた別の投与経路とを組み合わせて、全体および組合せとして効果を増大させることができることを示すものである。本明細書に記載されるように、抗体のＩＮ投与とＩＰ投与を組み合わせることにより、ＩＮまたはＩＰ単独の場合に比して相乗的な活性および効果が増大する。代替的な、または別の投与方法または治療法を提供することに加え、本発明は、抗体を介した治療および予防に対する増強された組合せ法を提供し、この方法では、最大の効果を得るべく、経肺投与と全身投与とを組み合わせる。
【０１９４】
いくつかの実施形態では、経肺投与により抗体を投与する代替的手段により、用量低下、用量を減らした製剤および効果的な広域抗インフルエンザ抗体組合せ組成物が可能になる。
【０１９５】
いくつかの実施形態では、インフルエンザウイルスを中和し、インフルエンザウイルスに効果を示す結合分子、特にヒトモノクローナル抗体またはそのフラグメントの組合せ、ここでは、組合せは第１群インフルエンザＡウイルス、第２群インフルエンザＡウイルスおよびインフルエンザＢウイルスに効果を示す。抗体の組合せは、インフルエンザＡおよびインフルエンザＢウイルスに対する治療または予防に効果があり、したがって、重要な流行中のあらゆるインフルエンザウイルスに対して単一の組成物または用量で効果を示す薬剤となる。
【０１９６】
本発明は、組み合わせることによりインフルエンザＡおよびインフルエンザＢの治療または予防に効果のあるインフルエンザモノクローナル抗体またはそのフラグメントの組合せを含むか、これよりなる組成物を提供する。
【０１９７】
組合せ組成物は、特徴付けも定義もされていないインフルエンザ感染症に投与しても効果が認められ得る。本発明の特定の態様では、組合せ組成物を、鼻腔内または吸入投与による投与を含め、気道に直接投与する。特に、抗体の組合せまたはカクテルを単回用量で投与するか、各抗体の複数回投与または連続投与で投与することができる。したがって、抗体のカクテルは、単一の特異的に選択した抗体が、定義されている標的インフルエンザに効果を示すのと同じように、任意の未知または未定義のインフルエンザウイルスに効果を示す。例えば、カクテルの投与は、単一の特異的抗Ｈ１ウイルス抗体の場合と同じように、所与の第１群Ｈ１ウイルスに効果を示す。
【０１９８】
いくつかの実施形態では、組み合わせた抗体は、組み合わせることで効果が得られるような、特に適用可能かつ有用になるような特定の特徴および側面を有する。特定の態様では、本発明の組合せの各抗体はいずれも、インフルエンザウイルスに対して有意な結合および親和性を示す。
【０１９９】
いくつかの実施形態では、組合せの抗体を他の抗体と共製剤化、混合または逐次投与して、ＲＳＶ、ＰＡＩＶまたはＭＰＶなどの病原体を含めた広範囲のインフルエンザ様疾患を治療し得る。
【０２００】
いくつかの実施形態では、効果のある組合せの各抗体は、複数のインフルエンザ株に対してｎＭ以下の親和性を示す。このことは、他の既知または既存の抗体に比して異なる、特に有用かつ適用可能であるという側面である。例えば、Ｍａｂ５３およびＭａｂ５７９は、それぞれ様々なＨ１（およびＨ５）またはＨ３（およびＨ７）株に対してｎＭ以下の親和性を示し、ＣＲ６２６１およびＣＲ８０２０（国際公開第２０１３／０８６０５２号）に比して有意に高い結合親和性を示す。本発明の組合せの抗インフルエンザＢ抗体も同様に、ヤマガタおよびビクトリアの両クレードのインフルエンザＢ株ｎ対してｎＭ以下の結合親和性を示す。
【０２０１】
いくつかの実施形態では、本開示の組合せ態様の抗体は、等電点（ｐＩ）を含めた生物物理学的特性がほぼ同じになるよう設計および選択される。いくつかの実施形態では、組成物に組み合わせるために選択される抗体は、それぞれが互いに±２ｐＩポイント以内、±１．５ｐＩポイント以内、±１．０ｐＩポイントまたは±０．５ｐＩポイント以内のｐＩを示す。
【０２０２】
いくつかの実施形態では、本開示の組合せ態様の抗体は、強固な熱安定性などの生物物理学的特性がほぼ同じになるよう設計および選択される。いくつかの態様では、融解曲線アッセイを５０℃以上、５５℃以上、６０℃以上、６５℃以上または７０℃以上のＰＢＳで実施したときに第一の融解温度（Ｔｍ１）を示す抗体が提供される。
【０２０３】
いくつかの実施形態では、抗体は、ほぼ同じか同等の定常領域配列とともに設計および発現されるのが好ましく、また、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４から選択される同じＩｇＧであるのが好ましい。このほか、循環血中半減期を延ばすための改変Ｆｃ配列が当該技術分野で公知である。
【０２０４】
いくつかの実施形態では、ヒトＩｇＧ１定常領域アミノ酸配列を含む抗インフルエンザＢ抗体が提供される。いくつかの実施形態では、配列番号２９７のヒトＩｇＧ１定常領域アミノ酸配列を含む抗インフルエンザＢ抗体が提供される。いくつかの実施形態では、配列番号２９５のヒト軽鎖カッパ定常領域または配列番号２９６ヒト軽鎖ラムダ定常領域を含む抗インフルエンザＢ抗体が提供される。
【０２０５】
いくつかの実施形態では、配列番号２９７のヒトＩｇＧ１定常領域を含む抗インフルエンザＢ抗体を含む、抗体組成物が提供される。いくつかの実施形態では、配列番号２９５のヒト軽鎖カッパ定常領域または配列番号２９６のヒト軽鎖ラムダ定常領域を含む抗インフルエンザＢ抗体を含む、抗体組成物が提供される。
【０２０６】
いくつかの実施形態では、１つまたは複数の抗インフルエンザＡ抗体と１つまたは複数の抗インフルエンザＢ抗体との組合せを含む、組成物が提供される。いくつかの態様では、組合せの抗体は、抗体凝集が少ないか全くみられない特性、分子間結合が存在しない特性および／または競合結合がみられない特性から選択される１つまたは複数の特性を示す。これらの態様は、本開示の組合せの抗体で示され例示される。
【０２０７】
本発明は、中和抗体（１つまたは複数）の鼻腔内または吸入投与などによる気道または呼吸気道への本発明の抗体カクテルの投与によるインフルエンザウイルス感染症に効果のある治療および予防のための新規な方法、プロトコルおよび手段の特定に関する。インフルエンザウイルス中和抗体の鼻腔内または吸入投与は、ウイルスを治療的または予防的に治療または予防するのに、ＩＰ投与などの別の投与手段よりも高い効果を示す。吸入ならびに／あるいは鼻腔内送達および投与は、同じ量の同じ抗体または抗体の組合せの全身投与（ＩＶまたはＩＰ）よりも優れ、効果が高く、低い用量で効果がみられる。ウイルスに曝露または感染する前または場合によっては後に抗体（１つまたは複数）をＩＮ送達する治療法または予防法で効果が得られる。
【０２０８】
肺用量の抗体と全身用量の抗体とを組み合わせる方法またはプロトコルは、インフルエンザウイルスの治療または予防に特に効果がある。このような方法またはプロトコルには、１つまたは複数の鼻腔内または吸入用量の抗体と、１つまたは複数のＩＰまたはＩＶ用量の抗体とを組み合わせるものが含まれる。鼻腔内または吸入用量は、ＩＰまたはＩＶ用量の前または後に投与しても、ＩＰまたはＩＶ用量と同時にまたは逐次的に投与してもよい。１つまたは複数の鼻腔内、吸入、ＩＰまたはＩＶ用量（１つまたは複数）を投与し得る。鼻腔内投与する抗体はＦｃまたはエフェクター機能を欠く抗体フラグメント、例えばＦａｂなどであり得るのに対し、ＩＰ投与する抗体はエフェクター機能または増強されたエフェクター機能を有し得る。
【０２０９】
本開示では、ウイルス、特にインフルエンザウイルスに対する効果を増大させるため、中和抗体を気道または呼吸気道に投与する。気道または呼吸気道への投与は、任意の認められている手段または既知の手段によるものであり得、吸入投与または鼻腔内投与を含み得る。効果を増大させるためには、上気道および下気道のうちの１つまたは複数に抗体を送達し、鼻腔、鼻口部、副鼻腔、咽喉、咽頭、喉頭、気管、気管支および肺を含み得る。
【０２１０】
「吸入」は、特に抗体もしくはその活性なフラグメントまたはそれを含む組成物を含めた薬剤または化合物の摂取または投与との関連において、組成物中に含まれるものを含めたその薬剤、化合物、抗体、フラグメントが呼吸気道の全体または一部分に送達される摂取を指す。呼吸気道は上気道および／または下気道を含み得る。上気道は、鼻口部、鼻腔、副鼻腔、喉頭、気管を含む。下気道は、肺、気道（気管支および細気管支）および気嚢（肺胞）を含む。吸入は、鼻口部もしくは口腔から実施しても、気管内投与のように下気道への直接投与により実施してもよい。したがって、吸入は、鼻口部のみまたは鼻口部主体の吸入、鼻腔内吸入、口腔からの吸入、経口吸入、気管内吸入、気管内注入を含み得る。したがって、吸入は、薬物、薬剤、組成物、抗体、ラグメントが、もっぱら、特異的にまたは優先的に上気道および／または下気道を含めた呼吸気道に、または呼吸気道内に到達または沈着する、任意の投与手段を提供および企図するものである。
【０２１１】
本明細書で使用される「鼻腔内」という用語は、特に限定されないが、鼻口もしくは鼻腔構造の内部に、またはこれを経由して投与または実施される投与あるいは例えば吸入による、気道送達を含む。本明細書で使用され、実施例で実施形態として例示される鼻腔内という用語は、特に、薬物、薬剤、抗体、フラグメント、組成物が呼吸気道に送達をはじめとする方法で投与され、呼吸気道内または呼吸気道への沈着をはじめとする方法で呼吸気道に分配される他の投与手段が除外されるように、鼻口部または鼻腔から直接、特異的にまたはもっぱら投与することに限定されるものでもなければ、これに限定されることを示唆するものでもないことが意図される。
【０２１２】
呼吸気道または気道（１つまたは複数）に投与または送達するための装置は、当該技術分野および臨床または医療の現場では知られ認められており、本発明の方法、プロトコルおよび組成物に適用可能である。装置としては、定量吸入器、定量噴霧ポンプ、手動バルブ噴霧器、小容量または大容量噴霧器、超音波噴霧器および乾燥粉末吸入器が挙げられる。
【０２１３】
本明細書に開示される実施形態は、特に呼吸気道を標的とする、呼吸気道に感染する、または呼吸気道を冒す病因体または病原体の治療または予防に適用および使用される。これらのウイルスは、肺尖部での複製を示すことにより、肺送達したｍＡｂまたはそのフラグメントにより中和に感受性になると考えられ、このため、全身送達に比して効果が改善されると考えられる。したがって、本発明の実施形態は、呼吸器感染症、特に呼吸器ウイルスおよび呼吸器疾患の原因となる、またはこれと因果関係にある病因体の治療または予防に適用および使用される。よくみられるウイルス性呼吸器疾患は、ほぼ同じ特色を有し上気道を冒す様々なウイルスによって引き起こされる疾患である。関与するウイルスとしては、インフルエンザウイルス、呼吸器多核体ウイルス（ＲＳＶ）、パラインフルエンザウイルスおよび呼吸器アデノウイルスを挙げ得る。パラインフルエンザウイルスは、乳幼児のクループの主要な原因となり、気管支炎、肺炎および細気管支炎を引き起こし得る。アデノウイルスは、主として呼吸気道、消化管および眼球の結膜に侵入する。アデノウイルスは、咽頭炎から肺炎、結膜炎および下痢に至る様々な疾患を引き起こし得る。症状はウイルスに曝露してから１〜１０日後に現れ得る。
【０２１４】
状態（癌、炎症状態、抗ウイルス剤、抗感染症剤）の治療または軽減のための抗体の臨床投与にはこれまで、もっぱら全身投与、一般にはＩＶ投与が用いられてきたが、これには大量かつコストのかかる量の抗体、医療従事者の補助および相当な投与時間（典型的なＩＶ投与では２時間）が必要とされる。特にこれらの抗体を扱った特許または出願では、鼻腔内などの他の投与手段に言及することもあるが、鼻腔内投与は、良くても同等の代替手段とみなされるか、全く無視されるか、追求されないかのいずれかであり、その理由としては、鼻腔内投与はＩＰまたはＩＶ投与経路に比べて、理解が進んでおらず、魅力的ではない、または効果が少ないと考えられており、免疫系の発動が間接的なものである、またはあまり直接的なものではないと考えられていることが推測される。しかし、本発明および本明細書に記載される注目すべき研究では、特に中和抗体には、鼻腔内投与の方が実際には好ましく効果の高い代替手段であることが示されている。特に、最初に病原体が侵襲または曝露する部位または位置で作用し得る中和抗体は、別の投与様式よりも効果が高くなる。したがって、インフルエンザを標的とする中和抗体は、経肺経路で投与した場合、全身経路と比較して、部分的には様々な作用機序を介してもたらされる効果に劇的な差がみられる。
【０２１５】
経気道投与は、低用量で効果があり、低用量、低コストであり、したがって、診断検査による確定を必要としない治療を実施する唯一の機会を提供する。医師がこの低用量のカクテルを、例えば乾燥粉末吸入器もしくは噴霧器として、またはその他の気道送達法により投与するには、インフルエンザの季節に症状を認めれば十分である。この診断を必要としない標準治療は現在、ＴａｍｉｆｌｕおよびＲｅｌｅｎｚａで実施されているが、費用のかかる静脈内抗体療法には不可能であり、実際的ではなく、コスト的に不可能であると思われる。診断を実施した後、高用量の抗体の投与を静脈内経路などの全身経路または経気道のいずれかで実施し得るほか、カクテルまたはインフルエンザの型に特異的な単独の特異的抗体として構成し得る。
【０２１６】
したがって、本発明では、抗体の肺送達により、ＩＶまたはＩＰ経路などの全身経路に比して著明で有意な効果の改善が得られる。さらに、中和作用を示す抗体により、鼻腔内効果の増大が示される。中和抗体、特に、受け入れられている、または既知の中和アッセイまたはウイルス阻止アッセイを用いてもインフルエンザウイルスの直接的な阻害または阻止を示さない抗体を鼻腔内に送達すると、全身またはＩＰ投与に比して効果の低下がみられる。本研究は、受け入れられている既知のインフルエンザマウスモデルを用いて、中和抗体の鼻腔内（ＩＮ）送達が治療および予防効果を腹腔内（ＩＰ）または静脈内（ＩＶ）送達経路に比して１０倍超、劇的に増大させ得ることを示す。ＩＶまたはＩＰ経路の代わりにＩＮで投与する場合、同じ用量の１０分の１未満の用量を用いて同程度の効果を得ることができる。鼻腔内などの気道に投与された中和抗体は、治療効果を数桁、具体的には１０〜１００倍または少なくとも１０〜１００倍、劇的に増大させ得る。鼻腔内に投与された中和抗体は、ほぼ同じ条件下で同じ抗体を腹腔内（ＩＰ）投与する場合の少なくとも１０倍、少なくとも５０倍、１０倍超、５０倍超、１００倍超、最大１００倍、治療効果を増大させ得る。中和抗体の鼻腔内投与は、特にインフルエンザ感染症を含めた感染症の治療または予防のための新規で予想外の方法をもたらす。ＩＮ投与は現在、効率的に実施され、他の投与形態と組み合わせて、治療および予防のためのより効果的でよりコストの低い方法をもたらし得る。ＩＮ投与を含めた経気道投与により、任意の予想されるインフルエンザウイルスに対して単回用量の抗体の組合せまたはカクテルの効果を発揮させることが可能となる。
【０２１７】
組成物
本開示では、インフルエンザに使用して効果が得られる抗体組合せ組成物が提供される。抗体組合せ組成物は、鼻腔内などの気道に直接投与する場合、低用量で効果が得られる。組成物は特に、抗体、特に中和抗体、特にモノクローナル抗体またはその活性なフラグメント、特に抗ウイルス抗体、特にインフルエンザの組合せを含む。中和抗体（１つまたは複数）は、異なる型またはグループのインフルエンザを中和する抗体と組み合わせると、２つ以上の型または亜型のインフルエンザを中和し得る。本発明の組成物は特に、流行中のインフルエンザウイルス株に対するインフルエンザ中和抗体の組合せを含む。組成物（１つまたは複数）は特に、流行中のインフルエンザウイルス株に対するインフルエンザ中和抗体、特に抗インフルエンザＡおよび抗インフルエンザＢ抗体の組合せを含む。組成物（１つまたは複数）は特に、インフルエンザ中和抗体の組合せを含み、その組合せは、全体としてしかるべき重要な流行中のインフルエンザウイルス株に対するものであり、特に、全体としてインフルエンザＡのＨ１およびＨ３亜型ならびにヤマガタ系統およびビクトリア系統のインフルエンザＢに対するものである。組成物（１つまたは複数）は、インフルエンザウイルスＡおよびＢが組合せまたは抗体によって中和される限り、３つ以上の中和抗体を含むものであってもよい。
【０２１８】
組成物（１つまたは複数）は特に、流行中のインフルエンザウイルス株に対するインフルエンザ中和抗体、特にインフルエンザＡ抗Ｈ１抗体、インフルエンザＡ抗Ｈ３抗体および抗インフルエンザＢ抗体の組合せを含み得る。組成物（１つまたは複数）は、インフルエンザＨ５株およびＨ７株に効果を示す、または一層高い効果を示すインフルエンザＡ抗体を含み得る。インフルエンザ抗体は株に特異的、非特異的または汎特異的なものであり得、Ｈ１亜型および／またはＨ３亜型および／またはＨ５および／またはＨ７をはじめとするインフルエンザＡ株の系統または亜型を含めたインフルエンザＡを中和し得るものであり、かつ／あるいはヤマガタ系統および／またはビクトリア系統を含めたインフルエンザＢを中和し得るものである。組成物は、ＩＶまたはＩＰなどの別の投与組成物として、抗体の同一の成分、異なる成分また追加の成分を有し得る。
【０２１９】
いくつかの実施形態では、中和抗体またはＦａｂフラグメントを含めたそのフラグメントを含む組成物が提供される。本発明の組成物は、インフルエンザウイルス中和抗体、特に、第１群抗体ＴＲＬ０５３／Ｍａｂ５３、第２群抗体ＴＲＬ５７９／Ｍａｂ５７９ならびにＴＲＬ８４７、ＴＲＬ８４５、ＴＲＬ８４９、ＴＲＬ８４８、ＴＲＬ８４６、ＴＲＬ８５４、ＴＲＬ８０９およびＴＲＬ８３２から選択されるＢ抗体、そのフラグメント、その合成または組換え誘導体、そのヒト化型またはキメラ型、ならびにその重鎖および軽鎖ＣＤＲを有する抗体の組合せを含み得る。
【０２２０】
ウイルス中和抗体は特に、中和が可能な抗体フラグメントであり得る。一態様では、抗体フラグメントは、Ｆｃを欠くものであり、かつ／またはエフェクター機能を欠くか、これが低下したものである。抗体フラグメントは、Ｆａｂ、Ｆａｂ’およびＦ（ａｂ’）２から選択され得る。ウイルス中和抗体またはフラグメントは、組換えタンパク質に由来するもの、活性なフラグメントとして発現するものを含めた組換えにより発現するもの、あるいはその他の手段または方法、例えば中和抗体またはそのフラグメント（１つまたは複数）をコードするＤＮＡまたはＲＮＡの送達などによる遺伝物質、ＤＮＡまたはＤＮＡベクターの発現によるものを含めた気道または呼吸気道内に中和抗体またはフラグメント（１つまたは複数）をもたらす手段または方法などにより誘導または生成されるものであり得る。
【０２２１】
本発明の組成物は、薬学的に許容される補形剤、担体または希釈剤をさらに含み得る。組成物は、経鼻または肺送達および鼻腔内または吸入投与に適したまたはふさわしい補形剤、担体、希釈剤または添加剤を含み得る。組成物は、免疫応答および／または抗体の仲介による細胞もしくは全身へ効果を刺激または増大するのに適したまたはふさわしい補形剤、担体、希釈剤または添加剤を含み得る。組成物は、免疫応答の免疫学的メディエーターまたは刺激因子を含み得る。
【０２２２】
本発明は、特にインフルエンザウイルスの伝染を治療、予防、抑制または阻害するための方法を提供する。本発明は、インフルエンザウイルスに曝露した、罹患した、または罹患している哺乳動物のウイルス感染症を治療する方法であって、本発明で提供される抗体の組合せを、鼻腔内（ＩＮ）投与または吸入などにより前記哺乳動物の気道に投与することを含む、方法を提供する。特定の態様では、組合せは、第１群抗体ＴＲＬ０５３／Ｍａｂ５３、第２群抗体ＴＲＬ５７９／Ｍａｂ５７９ならびにＴＲＬ８４７、ＴＲＬ８４５、ＴＲＬ８４９、ＴＲＬ８４８、ＴＲＬ８４６、ＴＲＬ８５４、ＴＲＬ８０９およびＴＲＬ８３２から選択されるＢ抗体、そのフラグメント、その合成または組換え誘導体、そのヒト化型またはキメラ型ならびにその重鎖および軽鎖ＣＤＲを有する抗体を含む。
【０２２３】
この方法の一態様では、組成物組合せ中のモノクローナル抗体はすべて、同じＩｇＧ亜型に属するものであり、同一またはほぼ同一の定常領域配列を有する。特定の態様では、組合せの抗体はすべてＩｇＧ１抗体である。
【０２２４】
この方法では、感染後、推定感染後、曝露後または臨床症状の発現後に抗体の組合せを投与し得る。その一態様では、感染から８時間後までの間に抗体の組合せを投与し得る。別法では、感染から２４時間後までの間に抗体の組合せを投与する。さらなる別法では、感染から４８時間後までの間に抗体の組合せを投与する。またさらなる別法では、感染から７２時間後までの間に抗体の組合せを投与する。抗体の組合せは、感染から８時間後（８ｈｐｉ）、１２ｈｐｉ、１８ｈｐｉ、２４ｈｐｉ、３６ｈｐｉ、４８ｈｐｉ、７２ｈｐｉ、感染から１日後、感染から２日後、感染から３日後、感染から４日後、感染から５日後、感染から６日後、感染から７日後、感染から１週間後、感染から１０日後、感染から２週間後、感染から３週間後、感染から４週間後、感染から１か月後、感染から数か月後までの間に、単回用量または複数回の逐次用量などで投与され得る。
【０２２５】
組合せに必要な抗体がいずれも投与時に確実に効果を発揮するように、抗体の組合せを単回用量で、または３つの個別の用量で同時もしくはほぼ同時に投与する。
【０２２６】
いくつかの実施形態では、任意の比率の２種類、３種類、４種類、５種類、６種類、７種類、８種類、９種類、１０種類またはそれ以上の抗体の組合せを含む、組成物が提供される。いくつかの実施形態では、２〜１０種類もしくは３〜５種類の抗体またはフラグメントを重量当たりの基準で、組成物中の抗体またはフラグメントの総重量当たりそれぞれ約１０〜８０重量％；２０〜５０重量％；２５〜４０重量％含む、組成物が提供される。特定の実施形態では、第一、第二および第三の抗体またはフラグメントを実質的に等しい用量または比率で、組成物中の抗体またはフラグメントの総重量当たりそれぞれ約３３重量％±３重量％含む、組成物が提供される。特定の好ましい態様では、組合せの抗体を実質的に等しい用量比、同じ投与量、１：１：１の重量比または等しい比率で投与する。
【０２２７】
いくつかの実施形態では、２〜１０種類の抗体を含み、組合せの各抗体の単回用量有効量が、１０ｍｇ／ｋｇ体重未満、５ｍｇ／ｋｇ体重未満、２ｍｇ／ｋｇ体重未満、１ｍｇ／ｋｇ体重以下である、組成物が提供される。組合せの各抗体の単回用量は、１ｍｇ／ｋｇ体重未満、０．５ｍｇ／ｋｇ未満、０．１ｍｇ／ｋｇ未満、０．０５ｍｇ／ｋｇ未満であり得る。複数回用量または抗体の組合せを投与し得る。初回用量を高くし、それ以降の用量を低くする、あるいは初回用量を低くして、それ以降の用量を高くするなど、各組合せの用量が同じであっても、用量が異なっていてもよい。１つもしくは複数の単回用量または任意の用量は、１ｍｇ／ｋｇ体重未満、０．５ｍｇ／ｋｇ未満、０．１ｍｇ／ｋｇ未満、０．０５ｍｇ／ｋｇ未満であり得る。初回用量は１ｍｇ／ｋｇを超えてもよく、のちのまたは次の用量はこれより低い用量であっても、１ｍｇ／ｋｇ未満であってもよい。
【０２２８】
抗体は、鼻腔内投与または吸入などにより複数回用量で気道に投与してよく、ここでは、各組合せ用量中の各抗体は、１用量当たり１ｍｇ／ｋｇ未満である。このような態様では、推定感染時から、曝露してから、または臨床症状が発現してから最大７２時間後以降に、複数回用量を少なくとも２時間の間隔をあけて投与し得る。したがって、抗体用量を数分、数時間または数日の間隔をあけて投与し得る。感染後、推定感染後または曝露後に数時間または数日の間隔をあけて抗体用量を投与してもよい。感染後、推定感染後または曝露後および最大２時間、４時間、６時間、８時間、１２時間、２４時間、３６時間、４８時間または７２時間後に抗体用量を投与してもよい。
【０２２９】
本発明の投与のプロトコルまたは方法は特に、特に抗体の吸入または鼻腔内投与による、気道または呼吸気道への１回目の抗体投与と、吸入または鼻腔内経路によるものではない２回目または１つもしくは複数の追加の投与、例えばＩＰまたはＩＶ投与（１つまたは複数）などの全身送達とを組み合わせたものを含む。したがって、この方法は、追加でウイルス特異的モノクローナル抗体をＩＰまたはＩＶで投与することを含み得るものであり、ここでは、追加で投与する抗体が中和抗体または非中和抗体である。この場合、初回用量を本発明の抗体の組合せとともに投与し、次いで、臨床検査または診断検査で決定されたものを含む感染ウイルスの亜型に対する単一の抗体を投与し得る。したがって、インフルエンザウイルスの型に関係なく、抗体の組合せの初回用量が最初に効果を発揮する。ウイルスの型が決定された後、その組合せ、組合せの比率を変えたもの、単一の抗原に対する抗体の２回目または追加の用量（１つまたは複数）を投与する。２回目または追加の用量（１つまたは複数）は、ＩＨまたはＩＮなどで気道に投与しても、全身投与してもよい。追加でＩＰまたはＩＶなどにより全身投与する抗体は、ＩＮまたは吸入により投与する抗体と同じ抗体であっても、ＩＮまたは吸入により投与する抗体と異なる抗体または操作した抗体であってもよい。追加で例えばＩＰまたはＩＶにより投与する抗体は、ＩＮまたは吸入により投与する抗体と同時に、逐次的にまたは後続して投与し得る。任意のこのような後続投与は、数時間後であってよく、２時間後、４時間後、６時間後、８時間後、１２時間後または最大２４時間後であり得る。後続投与は、数日後であってよく、１日後、２日後または３日後であり得る。後続投与は数日後であってよく、最大７日後、１週間後または数週間後であり得る。後続投与は、数時間後および／または数日後および／または数週間後の単回投与または複数回投与であり得る。
【０２３０】
さらなる態様では、本発明は、インフルエンザＡおよびインフルエンザＢウイルスに対する抗体の組合せを投与するためのプロトコルであって、本発明で提供される抗体の組合せの鼻腔内または吸入用量などの１回目の気道用量を投与し、後続してまたは同時に、気道にも呼吸気道にも投与せずに腹腔内または静脈内に投与し得る２回目の用量または１つもしくは複数の追加の用量を投与することを含み、２回目の用量または追加の用量（１つまたは複数）の抗体が、１回目の用量の組合せの抗体と同じ抗体または異なる抗体である、プロトコルを提供する。２回目の用量また追加の用量（１つまたは複数）の抗体は、ＩＶまたはＩＰでより効果的または有効になるよう操作または改変された操作または改変抗体である。一態様では、１回目の用量の抗体は、Ｆａｂ抗体のようなエフェクター機能を欠く抗体であり得、２回目の用量の抗体は、エフェクター機能有するか、Ｆｃを有するか、増強されたエフェクター機能を有するよう改変されたものであり得る。
【０２３１】
このプロトコルは、本発明の抗体の組合せの吸入または鼻腔内経路による複数回用量を含み得るほか、同じ組合せ、組合せの１つまたは複数の抗体または別の抗体のＩＰまたはＩＶ経路による複数回用量を含み得る。プロトコルの一態様では、抗体を投与する対象または患者の疾患またはウイルス感染症の臨床症状などをモニターし、患者または対象および感染症または疾患の状態に応じて、１つまたは複数の用量を変更、減少もしくは増大させるか、投与間隔を短く、または一層長くし得る。
【０２３２】
プロトコルの一態様では、インフルエンザウイルスは、インフルエンザＡ、インフルエンザＢまたは未知もしくは未定義のインフルエンザウイルスであり得る。呼吸気道に投与しない２回目の用量の抗体は、中和抗体であっても非中和抗体であってもよく、またエフェクター機能または増強されたエフェクター機能を有し得る。
【０２３３】
プロトコルの一態様では、１回目の鼻腔内または吸入用量は、本発明の組合せの抗体をそれぞれ１ｍｇ／ｋｇ未満、０．５ｍｇ／ｋｇ未満、０．１ｍｇ／ｋｇ未満含み得る。２回目または追加のＩＰまたはＩＶ用量は特に、１回目の鼻腔内または吸入用量よりも高い用量で投与する。２回目または追加のＩＰまたはＩＶ用量は特に、各抗体または任意の抗体の量が１回目の鼻腔内または吸入用量の少なくとも１０倍の用量で投与する。２回目または追加のＩＰまたはＩＶ用量は、少なくとも１ｍｇ／ｋｇ、少なくとも５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも１０ｍｇ／ｋｇ、少なくとも１５ｍｇ／ｋｇまたは１０ｍｇ／ｋｇ超、２０ｍｇ／ｋｇ超もしくは５０ｍｇ／ｋｇ超であり得る。
【０２３４】
プロトコルのさらなる態様では、１回目の鼻腔内または吸入用量は組合せの各抗体が１ｍｇ／ｋｇ未満であり得、２回目のＩＰまたはＩＶ用量は１回目の鼻腔内用量の少なくとも１０倍のｍｇ／ｋｇ数であり得る。プロトコルのさらなる態様では、１回目の鼻腔内または吸入用量は組合せの各抗体が１ｍｇ／ｋｇ未満であり得、２回目のＩＰまたはＩＶ用量は１回目の鼻腔内用量の少なくとも５０倍のｍｇ／ｋｇ数であり得る。ほかの態様では、１回目の鼻腔内または吸入用量は組合せの各抗体が０．５ｍｇ／ｋｇ未満であり得、２回目のＩＰまたはＩＶ用量は少なくとも５ｍｇ／ｋｇであり得る。
【０２３５】
１回目の鼻腔内または吸入用量の組合せの各抗体の用量は１０ｍｇ／ｋｇまたは１０ｍｇ／ｋｇ未満であり得、推定感染後、曝露後または臨床症状の発現後２４時間以内に投与され得る。１回目の鼻腔内または吸入用量の組合せの各抗体の用量は１０ｍｇ／ｋｇまたは１０ｍｇ／ｋｇ未満であり得、推定感染後、曝露後または臨床症状の発現後４８時間以内に投与され得る。１回目の鼻腔内または吸入用量の組合せの各抗体の用量は１０ｍｇ／ｋｇまたは１０ｍｇ／ｋｇ未満であり得、推定感染後、曝露後または臨床症状の発現後７２時間以内に投与され得る。
【０２３６】
本発明の別の態様は、呼吸器ウイルスの伝染を抑制する方法であって、インフルエンザウイルスに曝露した対象、インフルエンザウイルスに曝露するリスクのある対象またはインフルエンザウイルス感染症の臨床徴候がみられる対象の気道に本発明の抗体の組合せを鼻腔内投与または吸入により投与することを含み、各抗体を１ｍｇ／ｋｇ以下の単位用量で投与する、方法である。組合せの各抗体の単位用量は１０ｍｇ／ｋｇ未満または１ｍｇ／ｋｇ未満であり得る。この方法の単位用量は、０．５ｍｇ／ｋｇ未満、０．１ｍｇ／ｋｇ未満または０．０５ｍｇ／ｋｇ未満であり得る。
【０２３７】
本発明は、抗体組合せ組成物または経肺投与に適するか、経肺投与用に選択した抗体、特にインフルエンザ抗体、特にモノクローナルインフルエンザ抗体の組合せの組成物を提供し、ここでは、抗体の組合せは、季節性亜型および大流行亜型からなる流行中のウイルス株に対する抗体を含むか、これよりなる。例えば、季節性インフルエンザと同じく流行中の株は現在、インフルエンザＢ（ヤマガタ系統）、インフルエンザＢ（ビクトリア系統）、インフルエンザＡ  Ｈ１亜型およびインフルエンザＡ  Ｈ３亜型であり、インフルエンザＢ（ヤマガタ）、インフルエンザＢ（ビクトリア）、インフルエンザＡ  Ｈ１亜型およびインフルエンザＡ  Ｈ３亜型それぞれに対する抗体（１つまたは複数）を有するか含む、本発明の組合せ組成物が提供される。本発明は、他の亜型、例えばＨ７亜型をカバーする特異性を追加するためにカクテルに他の抗体を組み込むことを含む。
【０２３８】
いくつかの実施形態では、第１群抗体ＴＲＬ０５３／Ｍａｂ５３、第２群抗体ＴＲＬ５７９／Ｍａｂ５７９ならびにＴＲＬ７８４、ＴＲＬ７９４、ＴＲＬ７９８、ＴＲＬ７９９、ＴＲＬ８０９、ＴＲＬ８１１、ＴＲＬ８１２、ＴＲＬ８１３、ＴＲＬ８２３、ＴＲＬ８３２、ＴＲＬ８３３、ＴＲＬ８３４、ＴＲＬ８３５、ＴＲＬ８３７、ＴＲＬ８３９、ＴＲＬ８４１、ＴＲＬ８４２、ＴＲＬ８４５、ＴＲＬ８４６、ＴＲＬ８４７、ＴＲＬ８４８、ＴＲＬ８４９、ＴＲＬ８５１、ＴＲＬ８５４、ＴＲＬ８５６およびＴＲＬ８５８から選択される１つまたは複数の抗インフルエンザＢ抗体、その免疫反応性フラグメント、その合成または組換え誘導体、そのヒト化型またはキメラ型ならびにその重鎖および軽鎖ＣＤＲを有する抗体の組合せを含む、組成物が提供される。
【０２３９】
いくつかの実施形態では、第１群抗体ＴＲＬ０５３／Ｍａｂ５３、第２群抗体ＴＲＬ５７９／Ｍａｂ５７９ならびにＴＲＬ８４５、ＴＲＬ８４６、ＴＲＬ８４７、ＴＲＬ８４８、ＴＲＬ８４９およびＴＲＬ８５４から選択されるＢ抗体またはそのフラグメント、その合成または組換え誘導体、そのヒト型またはキメラ型ならびにその重鎖および軽鎖ＣＤＲを有する抗体の組合せを含む、医薬組成物が提供される。
【０２４０】
いくつかの実施形態では、第１群抗体ＴＲＬ０５３／Ｍａｂ５３、第２群抗体ＴＲＬ５７９／Ｍａｂ５７９ならびにＴＲＬ８４５、ＴＲＬ８４７およびＴＲＬ８４９から選択されるＢ抗体またはそのフラグメント、その合成または組換え誘導体、そのヒト化型またはキメラ型ならびにその重鎖および軽鎖ＣＤＲを有する抗体の組合せを含む、医薬組成物が提供される。いくつかの実施形態では、（ａ）配列番号１１、１２、１３のＣＤＲドメイン配列ＨＣＤＲ１／ＨＣＤＲ２／ＨＣＤＲ３を含む重鎖アミノ酸配列および配列番号１４、１５、１６のＣＤＲドメイン配列ＬＣＤＲ１／ＬＣＤＲ２／ＬＣＤＲ３を含む軽鎖アミノ酸配列を含む、抗体またはそのフラグメントと；（ｂ）配列番号２１、２２、２３のＣＤＲドメイン配列ＨＣＤＲ１／ＨＣＤＲ２／ＨＣＤＲ３を含む重鎖アミノ酸配列および配列番号２４、２５、２６のＣＤＲドメイン配列ＬＣＤＲ１／ＬＣＤＲ２／ＬＣＤＲ３を含む軽鎖アミノ酸配列を含む、抗体またはそのフラグメントと；（ｃ）重鎖ＣＤＲドメイン配列ＨＣＤＲ１／ＨＣＤＲ２／ＨＣＤＲ３および軽鎖ＣＤＲドメイン配列ＬＣＤＲ１／ＬＣＤＲ２／ＬＣＤＲ３をそれぞれ含み、ＨＣＤＲ１／ＨＣＤＲ２／ＨＣＤＲ３およびＬＣＤＲ１／ＬＣＤＲ２／ＬＣＤＲ３がそれぞれ：
（ｉ）配列番号７１、７２、７３および配列番号７４、７５、７６；
（ｉｉ）配列番号９１、９２、９３および配列番号９４、９５、９６；
（ｉｉｉ）配列番号１０１、１０２、１０３および配列番号１０４、１０５、１０６；
（ｉｖ）配列番号１２１、１２２、１２３および配列番号１２４、１２５、１２６；
（ｖ）配列番号１８１、１８２、１８３および配列番号１８４、１８５、１８６；
（ｖｉ）配列番号１９１、１９２、１９３および配列番号１９４、１９５、１９６；
（ｖｉｉ）配列番号２０１、２０２、２０３および配列番号２０４、２０５、２０６；
（ｖｉｉｉ）配列番号２１１、２１２、２１３および配列番号２１４、２１５、２１６；
（ｉｘ）配列番号２２１、２２２、２２３および配列番号２２４、２２５、２２６；
（ｘ）配列番号２３１、２３２、２３３および配列番号２３４、２３５、２３６；
（ｘｉ）配列番号２４１、２４２、２４３および配列番号２４４、２４５、２４６；
（ｘｉｉ）配列番号２６１；２６２、２６３および配列番号２６４、２６５、２６６；ならびに
（ｘｉｉｉ）配列番号２７１、２７２、２７３および配列番号２７４、２７５、２７６
から選択される重鎖アミノ酸配列および軽鎖アミノ酸配列を含む、抗体またはそのフラグメントとを含む、インフルエンザモノクローナル抗体またはそのフラグメントの組合せを含む、抗インフルエンザ組成物が提供される。
【０２４１】
本発明は、１つもしくは複数のＣＤＲドメイン配列に１〜３個のアミノ酸置換を含むその高度に相同な変異体を企図および例示し、ここでは、前記変異体は、インフルエンザウイルスと結合し、これを阻害することが可能であり、組成物は、第１群および第２群インフルエンザＡウイルスならびにインフルエンザＢウイルスに効果を示す。
【０２４２】
特定の実施形態では、（ａ）それぞれ配列番号１１、１２、１３および配列番号１４、１５、１６の重鎖ＣＤＲ配列ＨＣＤＲ１／ＨＣＤＲ２／ＨＣＤＲ３および軽鎖ＣＤＲ配列ＬＣＤＲ１／ＬＣＤＲ２／ＬＣＤＲ３を含む、抗体もしくはそのフラグメント；それぞれ配列番号２１、２２、２３および配列番号２４、２５、２６のＨＣＤＲ１／ＨＣＤＲ２／ＨＣＤＲ３およびＬＣＤＲ１／ＬＣＤＲ２／ＬＣＤＲ３を含む、抗体もしくはそのフラグメントならびにそれぞれ配列番号２０１、２０２、２０３および配列番号２０４、２０５、２０６のＨＣＤＲ１／ＨＣＤＲ２／ＨＣＤＲ３およびＬＣＤＲ１／ＬＣＤＲ２／ＬＣＤＲ３を含む、抗体もしくはそのフラグメント；（ｂ）それぞれ配列番号１１、１２、１３および配列番号１４、１５、１６の重鎖ＣＤＲ配列ＨＣＤＲ１／ＨＣＤＲ２／ＨＣＤＲ３および軽鎖ＣＤＲ配列ＬＣＤＲ１／ＬＣＤＲ２／ＬＣＤＲ３を含む、抗体もしくはそのフラグメント；それぞれ配列番号２１、２２、２３および配列番号２４、２５、２６のＨＣＤＲ１／ＨＣＤＲ２／ＨＣＤＲ３およびＬＣＤＲ１／ＬＣＤＲ２／ＬＣＤＲ３を含む、抗体もしくはそのフラグメントならびにそれぞれ配列番号２２１、２２２、２２３および配列番号２２４、２２５、２２６のＨＣＤＲ１／ＨＣＤＲ２／ＨＣＤＲ３およびＬＣＤＲ１／ＬＣＤＲ２／ＬＣＤＲ３を含む、抗体もしくはそのフラグメント；（ｃ）それぞれ配列番号１１、１２、１３および配列番号１４、１５、１６の重鎖ＣＤＲ配列ＨＣＤＲ１／ＨＣＤＲ２／ＨＣＤＲ３および軽鎖ＣＤＲ配列を含む、抗体もしくはそのフラグメント；それぞれ配列番号２１、２２、２３および配列番号２４、２５、２６のＨＣＤＲ１／ＨＣＤＲ２／ＨＣＤＲ３およびＬＣＤＲ１／ＬＣＤＲ２／ＬＣＤＲ３を含む、抗体もしくはそのフラグメントならびにそれぞれ配列番号２３１、２３２、２３３および配列番号２３４、２３５、２３６のＨＣＤＲ１／ＨＣＤＲ２／ＨＣＤＲ３およびＬＣＤＲ１／ＬＣＤＲ２／ＬＣＤＲ３を含む、抗体もしくはそのフラグメント；（ｄ）それぞれ配列番号１１、１２、１３および配列番号１４、１５、１６の重鎖ＣＤＲ配列ＨＣＤＲ１／ＨＣＤＲ２／ＨＣＤＲ３および軽鎖ＣＤＲ配列ＬＣＤＲ１／ＬＣＤＲ２／ＬＣＤＲ３を含む、抗体もしくはそのフラグメント；それぞれ配列番号２１、２２、２３および配列番号２４、２５、２６のＨＣＤＲ１／ＨＣＤＲ２／ＨＣＤＲ３およびＬＣＤＲ１／ＬＣＤＲ２／ＬＣＤＲ３を含む、抗体もしくはそのフラグメントならびにそれぞれ配列番号２４１、２４２、２４３および配列番号２４４、２４５、２４６のＨＣＤＲ１／ＨＣＤＲ２／ＨＣＤＲ３およびＬＣＤＲ１／ＬＣＤＲ２／ＬＣＤＲ３を含む、抗体もしくはそのフラグメント；または（ｅ）それぞれ配列番号１１、１２、１３および配列番号１４、１５、１６の重鎖ＣＤＲ配列ＨＣＤＲ１／ＨＣＤＲ２／ＨＣＤＲ３および軽鎖ＣＤＲ配列ＬＣＤＲ１／ＬＣＤＲ２／ＬＣＤＲ３を含む、抗体もしくはそのフラグメント；それぞれ配列番号２１、２２、２３および配列番号２４、２５、２６のＨＣＤＲ１／ＨＣＤＲ２／ＨＣＤＲ３およびＬＣＤＲ１／ＬＣＤＲ２／ＬＣＤＲ３を含む、抗体もしくはそのフラグメントならびにそれぞれ配列番号２６１、２６２、２６３および配列番号２６４、２６５、２６６のＨＣＤＲ１／ＨＣＤＲ２／ＨＣＤＲ３およびＬＣＤＲ１／ＬＣＤＲ２／ＬＣＤＲ３を含む、抗体もしくはそのフラグメントから選択される抗体の組合せを含む、組成物が提供される。
【０２４３】
いくつかの実施形態では、組合せの抗体は、２つ以上のインフルエンザ株または亜型、例えば図３に図示される株または亜型および本明細書に示される株または亜型などに対するものであり得る。抗体Ｍａｂ５３は、第１群および第２群のインフルエンザＡの亜型Ｈ１，Ｈ９，Ｈ７およびＨ５亜型に効果を示す。抗体Ｍａｂ５７９は、亜型Ｈ３およびＨ７に効果を示す。したがって、現在流行中のインフルエンザ株はＨ１、Ｈ３およびＢ型であるが、新たなインフルエンザの季節または単一のインフルエンザの季節に発生し出現し得る亜型を含めた追加の株および亜型に効果を示す組合せを作製することが可能であり、本明細書に提供される。
【０２４４】
組成物は特に、ＩＰまたはＩＶなどの任意の別の剤形または投与形態よりも少ない抗体の用量または量で製剤化されるか、これを含有し得る。したがって、本発明に有用な組成物は、別の投与、特にＩＰまたはＩＶ投与のための中和抗体組成物の５分の１、１０分の１、２０分の１、５０分の１、１００分の１、１０分の１未満、１００分の１未満の中和抗体を含み得る。
【０２４５】
いくつかの実施形態では、哺乳動物の体重に基づく１ｍｇ／ｋｇ未満の量で経肺投与、特に鼻腔内投与することを目的とする用量の各抗体を含む、組成物が提供される。いくつかの実施形態では、ヒトの体重に基づき、合計１０ｍｇ／ｋｇ未満、５ｍｇ／ｋｇ未満または１ｍｇ／ｋｇ未満の投与になる抗体を含む、組成物が提供される。本発明の組成物は特に、マウス、イヌ、ウマ、ネコまたはヒトなどの臨床的に重要な哺乳動物を含めた哺乳動物の体重に基づく１ｍｇ／ｋｇ未満、０．５ｍｇ／ｋｇ未満、０．１ｍｇ／ｋｇ未満、０．０５ｍｇ／ｋｇ未満、０．０１ｍｇ／ｋｇ未満、０．００５ｍｇ／ｋｇ未満、０．００２５ｍｇ／ｋｇ未満、０．００１ｍｇ／ｋｇ未満の量で投与する、特に鼻腔内投与することを目的とする用量の抗体を含み得る。いくつかの実施形態では、治療有効量は、約１００ｍｇ／ｋｇ、５０ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇまたは１ｍｇ／ｋｇから選択される。いくつかの態様では、有効な予防量または曝露後の予防量は、約１ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇまたは約０．０１ｍｇ／ｋｇから選択される。
【０２４６】
当業者は、動物モデルでの効果に基づき、臨床反応および生理反応、ウイルス負荷およびウイルス伝染率を考慮することなどにより、ヒトを含めた哺乳動物に適する有効な用量を決定することができる。したがって、本発明および投与パラメータは、本明細書に提供される具体例にも例示される具体的用量にも限定されない。本発明は、効果の観点および臨床的に発現するインフルエンザウイルス感染症を含めたウイルス感染症の作用を軽減、制限または阻止する点で、吸入または鼻腔内投与が好ましい代替法であることを示す。中和抗体の吸入または鼻腔内投与により、ＩＰまたはＩＶを含めた他の投与経路に比して効果の改善および増大がもたらされ、これは、期待も予測もされなかったことであると思われる。肺送達による効果の増大により、複数のｍＡｂをカクテルに組み込むことが実現可能性になり、あらゆるインフルエンザの型／亜型に対するカクテルの開発が可能になる。ＩＮまたは吸入経路による投与の量およびタイミングは、当業者によってさらに評価および決定され得る。本明細書に提供される試験は、ＩＮまたは吸入投与が、ＩＰまたはＩＶよりも低い用量でそれを上回る効果を示すほか、感染から数日後に実施してもなお効果を保持し得ることを示す。
【０２４７】
本明細書でマウスモデルを対象に適用され示される用量および用量範囲は、必要に応じ、当該技術分野で当業者または臨床もしくは医療の専門家により公知のパラメータを用いて、変換または適用され得るものである。したがって、マウスのｍｇ／ｋｇ投与量から、ヒトをはじめとする動物に対するこれと同等の、または適度に同等の投与量を推定することができる。例えば、実験用マウスの平均重量が２０ｇであるのに対して、ヒトの平均重量は７０ｋｇである。
【０２４８】
動物用量をヒト用量に変換することは臨床研究で慣例的に実施されていることであり、当業者であれば、このように変換した用量がヒトでも上手くいくことが強く予想されるであろう。種間での調整およびヒトでの薬物動態パラメータの予測については既に記載されている（例えば、Ｍａｈｍｏｏｄら（２００３）Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  ４３：６９２−６９７；Ｍｏｒｄｅｎｔｉ（１９８６）Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，７５：１０２８−１０４０）。例えば、治療レベルは毒性と並行することが多く、このため、動物での最小有効量をヒトでの最小有効量に変換するのに、動物毒性からヒト毒性への変換に適用される変換係数が良く用いられる。さらに、ＦＤＡは、動物（マウス）用量からヒト用量への変換に用いられる係数を含め、治療薬の臨床試験における最大安全開始用量を推定するための変換係数を記載した「Ｇｕｉｄａｎｃｅ  ｆｏｒ  Ｉｎｄｕｓｔｒｙ」提供している（例えば、ある場合には、マウス用量に０．０８を乗じる）。
【０２４９】
「薬学的に許容される」という語句は、生理学的に許容され、ヒトに投与してもアレルギー反応またはこれに類する例えば急性胃蠕動、眩暈などの有害反応を通常引き起こさない、分子的実体および組成物を指す。
【０２５０】
本発明は、本発明の治療法の実施に有用な治療用組成物をさらに企図する。対象とする治療用組成物は、薬学的に許容される補形剤（担体）と、有効成分の１つまたは複数の抗体またはその活性なフラグメント、特に本明細書に記載される中和抗体、そのポリペプチド類似体またはそのフラグメントとを混合物の形で含む。好ましい実施形態では、組成物は、標的細胞内または対象もしくは患者においてウイルス、特にインフルエンザウイルスを中和することが可能な抗体またはフラグメントを含む。
【０２５１】
抗体、ポリペプチド、類似体または活性なフラグメントを有効成分として含有する治療用組成物の調製については、当該技術分野で十分に理解されている。このような組成物は通常、液体剤または懸濁剤として投与するために調製されるが、投与前に液体に溶解または懸濁させるのに適した固体形態を調製してもよい。このほか、調製物を乳化することができる。多くの場合、活性な治療成分を薬学的に許容され有効成分と適合性のある補形剤と混合する。適切な補形剤には、例えば、水、生理食塩水、デキストロース、グリセロール、エタノールなどおよびその組合せがある。さらに、必要に応じて、有効成分の効果を増大させる湿潤剤、乳化剤、ｐＨ緩衝剤などの補助物質を少量含有の補助物質を組成物に含ませてもよい。
【０２５２】
抗体、ポリペプチド、類似体または活性なフラグメントは、中和された薬学的に許容される塩の形態で治療用組成物に製剤化し得る。薬学的に許容される塩としては、酸付加塩（ポリペプチドまたは抗体分子の遊離アミノ基と形成される）および無機酸、例えば塩酸もしくはリン酸などまたは有機酸、例えば酢酸、シュウ酸、酒石酸、マンデル酸などと形成される塩が挙げられる。ほかにも、遊離カルボキシル基から形成される塩を、無機塩基、例えば水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化アンモニウム、水酸化カルシウムまたは水酸化第二鉄などおよび有機塩基、例えばイソプロピルアミン、トリメチルアミン、２−エチルアミノエタノール、ヒスチジン、プロカインなどから誘導することができる。
【０２５３】
治療用の抗体、ポリペプチド、類似体または活性なフラグメントを含有する組成物は、例えば単位用量の投与など、従来の方法で投与される。本発明の治療用組成物と関連して使用される「単位用量」という用語は、ヒトへの単位投与として適切な物理的に分離された単位であって、それぞれが、所望の治療効果が得られるよう計算された所定量の活性物質を、必要な希釈剤、すなわち、担体または賦形剤とともに含有する単位を指す。
【０２５４】
いくつかの実施形態では、担体は、経肺投与に適した当該技術分野で公知の任意のから選択される。いくつかの実施形態では、担体は、例えばＣｓａｂａら、Ａｄｖ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖ  Ｒｅｖ．２００９、６１（２）：１４０−１５７（参照により本明細書に組み込まれる）に開示されている担体のような鼻腔内投与に適した担体から選択される。いくつかの実施形態では、担体は、ナノ粒子系またはマイクロ粒子系である。いくつかの実施形態では、担体は、分解性デンプン、可溶性デンプン、ポリスチレン、デキストラン、キトサン、微結晶性セルロース（ＭＣＣ）、ヒドロキシプロピルセルロース（ＨＰＣ）、ヒドロキシプロピルメチセルロース（ｈｙｄｒｏｘｙｐｒｏｐｙｌｍｅｔｈｙｃｅｌｌｕｌｏｓｅ）（ＨＰＭＣ）、カルボマー、Ｃａｒｂｏｐｏｌ（登録商標）９７４Ｐ、マルトデキストランワックス様トウモロコシデンプン、アルギン酸塩、Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）、ポリ（ビニルアルコール）、ゼラチンポリマー、親水性ポリエチレングリコールコーティング剤でコートしたポリ乳酸ナノ粒子（ＰＥＧ−ＰＬＡナノ粒子）（Ｖｉｌａら，Ｊ  Ａｅｒｏｓｏｌ  Ｍｅｄ  ２００４；１７（２）：１７４−１８５）；低分子量キトサンナノ粒子（Ｖｉｌａら，Ｅｕｒ  Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｂｉｏｐｈａｒｍ  ２００４  Ｊａｎ；６７（１）：１２３−１３１）；ポリアクリル酸ポリマー系粒子（Ｚａｍａｎら，Ｃｕｒｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖ  ２０１０  Ａｐｒ；７（２）：１１８−１２４）のうちの１つまたは複数から選択されるか、これを含むものである。いくつかの実施形態では、担体はリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）である。鼻腔内送達システムについては、Ｏｚｓｏｙら，Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ  ２００９，１４，３７５４−３７７９（参照により本明細書に組み込まれる）に記載されている。
【０２５５】
いくつかの実施形態では、前記ナノ粒子をＡｎｓｅｌｍｏら，ＡＣＳＮａｎｏ  ２０１３，オンライン公開１０．１０２１／ｎｎ４０４８５３ｚの技術による赤血球への吸着により、肝臓および脾臓を回避しながら肺に送達する。この方法では、ナノ粒子（例えば、例えば直径２００ｎｍまたは５００の球状ナノ粒子）を例えば、最大１００／１までの様々な粒子／ＲＢＣ比でインキュベートすることによりＲＢＣに付着させる。
【０２５６】
いくつかの実施形態では、補形剤を用いずに、あるいは有効成分（１つまたは複数）の効力に影響を及ぼさず肺に毒性を示さない補形剤を用いて安定化することができる溶液、粉末または懸濁液に抗体またはフラグメントの効力および活性を製剤化する。抗体は酸化または加水分解条件で変性させ得る。いくつかの実施形態では、抗体またはフラグメントを溶液中で安定化させるためのキレート化剤または錯化剤、例えばカフェイン、デキストランもしくはシクロデキストランまたは本明細書に提供されるその他のものなどを用いて、鼻噴霧剤または注射により抗体を送達するための水性製剤を得る。このような補形剤およびエアゾールまたは噴霧組成物のさらなる詳細は、例えば、国際公開第２００５／０２５５０６号；Ｍａｉｌｌｅｔ，Ａ．ら，２００８  Ｐｈａｒ，Ｒｅｓ．２５（６）：１３１８−１３２６；Ｈａｔｃｈａ，Ｊら，Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｅｌｌ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２０１２  ４７（５）：７０９−７１７（いずれも参照により組み込まれる）にみることができる。
【０２５７】
一部の安定剤は、局所炎症を引き起こすか、急性毒性を示すため、肺送達に適合性がない。いくつかの実施形態では、有効成分の溶液の分解をさらに抑制するため、使用直前に特殊な開封器具で開封し、ガラスの破片をろ過して除去し、注入器または噴霧塗布具に移さなければならない暗色ガラス製バイアルに抗体またはフラグメント製剤を密封する。
【０２５８】
他の実施形態では、二相性の自動注入装置形式などで有効成分の粉末と注射用液とを混合する（ガラス製バイアル、シリンジまたはブリスター包装（Ｐｏｚｅｎ  ＭＴ３００など）内で粉末部分と液体とを混合する）ことにより、使用直前に有効成分の溶液を調製することができる。ジェット噴霧または超音波噴霧による肺送達のための溶液を作製するのにこのような即時製剤法を試みることが可能である。しかし、水溶液から吸入エアゾール剤を作製するのに用いられる既知の噴霧化工程ではいずれも、有効成分が効力および活性に即時の様々な変化を引き起こすのに十分な熱および酸素濃度に曝される。安定な製剤を入手またはエアゾール化する際にはこのような困難が内在するため、有効成分は肺吸入による投与に適するものとはならなかった。また別のエアゾール送達方法では加圧噴霧式定量吸入器（ｐＭＤＩ）を使用し、この方法では、ハロカーボン噴射剤により抗体またはフラグメントの溶液または懸濁液に小さい開口部を通過させて、噴射剤滴内に抗体またはフラグメントからなる微細で吸入可能なミストを生じさせる。安定なｐＭＤＩ製剤を作製するには、抗体またはフラグメントが、噴射剤およびｐＭＤＩバルブ装置内で安定であり、かつこれらと物理化学的に適合性のある溶液または微粒子懸濁液を形成することができなければならない。経鼻または注射液剤について上に記載した溶液安定性および肺毒性の問題は、ｐＭＤＩ製剤にも同様に当てはまり、これに噴射剤の適合の必要性が加わることにより、肺に適合することが受け入れられている水またはアルコールなどの試薬の使用が不可能になる。懸濁剤では、約５．８ミクロン（肺深部まで浸透するのに必要な空気力学的質量中位径）未満の微粒子が必要とされ、その粒子は懸濁液中で安定なものでなければならない。このような粒子は、噴射剤に分散させ得る粉末を得るための破砕、微粒化、粉砕などの摩滅工程または噴霧乾燥、溶液沈殿もしくは凍結乾燥などの多相沈殿工程により、原末の抗体またはフラグメントから作製される。これらの工程は多くの場合、熱相互作用または化学相互作用により抗体またはフラグメントの物理化学的特性を直接変化させる。有効成分の中には不安定なものもあることから、これらの工程は噴射剤に再分散させ得る粉末を作製するのに適していないことが明らかにされており、また粉末が最初から分散性である場合、粒子の大きさが経時的に増大するか、製剤に曝されたときに化学組成が経時的に変化する。この不安定性は、効力、活性の変化を引き起こしたか、あるいは粒子径を３．０ミクロン超に増大させ、ｐＭＤＩ懸濁液剤法を有効成分のエアゾールの送達に適さないものにする。吸入可能なエアゾール剤を作製するほかの方法として、乾燥粉末剤吸入器を用いるものがあり、この方法では、抗体またはフラグメントの粉末製剤を使用者の呼吸により分散させて肺に吸入する。ｐＭＤＩ懸濁液剤法について上に記載した難点が、安定な乾燥粉末製剤の作製にも同じく当てはまる。当該技術分野には、有効成分の吸入に適した製剤がないことは明らかである。本開示には、肺エアゾールまたは経鼻噴霧吸入により乾燥粉末剤および噴射懸濁剤を投与するための有効成分またはその薬学的に許容される塩の新規で安���な製剤が記載される。このような製剤は、特に限定されないが片頭痛を含めた様々な病的状態および病態の治療に使用され得る。さらに、有効成分またはその薬学的に許容される塩の新規な製剤の作製方法も記載される。
【０２５９】
吸入により投与される活性成分が局所作用あるいは全身作用を示すためには、それが肺深部まで浸透しなければならない。これを達成するために、活性な抗体またはフラグメントの粒子は、直径が約０．５〜５．８μｍの空気力学的粒子径中央値（ＭＭＡＤ）を超えてはならない。結晶化の段階でこの最適な大きさの範囲の粒子が得られることはまれであり、０．５〜５．８μｍの範囲内に収まる粒子を作製するには第二の工程が必要となる。このような第二の工程としては、特に限定されないが、ジェット粉砕、微粒子化および機械的破砕による摩滅、溶液沈殿、噴霧乾燥、凍結乾燥などの多相沈殿が挙げられる。このような第二の工程は、活性な抗体もしくはフラグメントの効力および活性を直接低下させ得る大きな熱勾配および機械的勾配を用いるか、のちの処理または保管時に粒子の大きさ、形状または化学を変化させる形態的不完全性または化学的不安定性をもたらすものである。これらの第二の工程ではほかにも、粒子に相当量の自由エネルギーが付与され、一般に粒子の表面に保存される。粒子によって保存されたこの自由エネルギーから粒子を凝集させる付着力が生じ、この保存された自由エネルギーが減少する。
【０２６０】
凝集過程は極めて広範囲にわたり得るため、吸入可能な活性な抗体またはフラグメント粒子はもはや粒子製剤の形で存在しないか、付着相互作用が極めて強いため、もはや粒子製剤から作製することはできない。この過程は、吸入送達の場合、粒子が吸入装置による送達に適した形態で保管されなければならないことから悪化する。粒子は比較的長期間保管されるため、保管期間中に凝集過程が増大し得る。粒子の凝集が吸入器装置による粒子の再分散に干渉するため、肺送達および経鼻送達に必要とされる吸入可能な粒子を作製することができない。さらに、担体および／または補形剤の使用など、凝集作用を克服するのに用いられる薬学上慣例的な方法のほとんどは、これらの物質の肺毒性というプロファイルが望ましいものではないため、吸入用の医薬形態に用いることはできない。
【０２６１】
本開示には、経肺エアゾール吸入または経鼻噴霧吸入により乾燥粉末剤および噴射懸濁剤液を投与するための有効成分またはその薬学的に許容される塩の新規で安定な製剤（本明細書ではＤＨＥと呼ぶ）が記載される。一実施形態では、ＤＨＥをメシル酸塩として使用する。ＤＨＥ粉末は超臨界流体工程を用いて作製される。超臨界流体工程には、吸入送達用のＤＨＥ粒子を製造するうえで大きな利点がある。重要なのは、超臨界流体工程により、所望の大きさの吸入可能な粒子が単一の段階で製造され、粒子径を小さくする第二の工程が不要になるということである。したがって、超臨界流体工程を用いて製造される吸入可能な粒子は表面自由エネルギーが小さくなるため、付着力が低下し、凝集が軽減される。製造された粒子はほかにも、均一なサイズ分布を示す。さらに、製造された粒子は表面が滑らかであるほか、同じく凝集が軽減される傾向のある再現可能な結晶構造を有する。このような超臨界流体工程としては、急速膨張法（ＲＥＳ）、溶液強化拡散法（ＳＥＤＳ）、ガス−貧溶媒法（ＧＡＳ）、超臨界貧溶媒法（ＳＡＳ）、ガス飽和溶液からの沈殿（ＰＧＳＳ）、圧縮貧溶媒を用いる沈殿（ＰＣＡ）、エアゾール溶媒抽出法（ＡＳＥＳ）または上記工程の任意の組合せを挙げ得る。超臨界流体工程それぞれの基礎となる技術は当該技術分野で周知であり、本開示では繰り返さないことにする。ある特定の実施形態では、用いる超臨界流体工程は、Ｐａｌａｋｏｄａｔｙらにより米国特許出願第２００３０１０９４２１号に記載されているＳＥＤＳ法である。超臨界流体工程では、予め乾燥粉末吸入器（ＤＰＩ）形式に計り取ることにより直接使用することが可能な乾燥粒子が製造されるか、あるいは、定量吸入器（ＭＤＩ）形式であれば、粒子を薬学的に許容される噴射剤などの懸濁媒質に直接懸濁／分散させ得る。製造された粒子は、用いる超臨界流体工程および用いる条件に応じて、結晶質になり得るか、非晶質になり得る（例えば、ＳＥＤＳ法では非晶質粒子の製造が可能である）。上に述べたように、製造された粒子は、従来の方法によって製造された粒子よりも優れた特性を有し、そのような特性としては、特に限定されないが、滑らかで均一な表面、低いエネルギー、分布均一な粒子サイズ分布および高い純度が挙げられる。これらの特徴は、ＤＰＩ形式またはＭＤＩ形式のいずれかで使用する場合に、粒子の物理化学的安定性を増大させ、粒子の分散を促進する。粒子径は、エアゾール粒子を投与したときにＤＨＥ粒子が肺の中に吸入される程度であるべきである。一実施形態では、粒子サイズ分布は２０ミクロン未満である。別の実施形態では、粒子サイズ分布の範囲は、カスケードインパクタによる測定で約０．０５０ミクロン〜１０．０００ミクロンのＭＭＡＤであり；また別の実施形態では、粒子サイズ分布の範囲は、カスケードインパクタによる測定で好ましくは約０．４００〜３．０００ミクロンのＭＭＡＤである。上に述べた超臨界流体工程では、これらの範囲の下限に収まる粒子径が得られる。ＤＰＩ形式では、当該技術分野で公知のように、ＤＨＥ粒子を静電気的に、低温測定により、または従来の方法で計り取って剤形にする。ＤＨＥ粒子は、単独で（未希釈で）または１つもしくは複数の薬学的に許容される補形剤、例えば、特に限定されないがラクトース、マンノース、マルトースなどを含めた担体または分散粉末など、または界面活性剤などとともに使用し得る。ある好ましい製剤では、ＤＨＥ粒子を補形剤を加えずに使用する。当該技術分野でよく用いられている便利な剤形の１つにホイル製ブリスターパックがある。この実施形態では、ＤＰＩに使用するホイル製ブリスターパックに補形剤を加えずにＤＨＥ粒子を計り取る。計り取る典型的な用量の範囲は、約０．０５０ミリグラム〜２．０００ミリグラムまたは約０．２５０ミリグラム〜０．５００ミリグラムであり得る。当該技術分野で公知のように、ブリスターパックが張り裂けて開封され、静電気的、空気力学的もしくは機械的な力またはその任意の組合せによって吸気中に分散し得る。一実施形態では、予め計り取った用量の２５％超が吸入時に肺に送達され；別の実施形態では、予め計り取った用量の５０％超が吸入時に肺に送達され；また別の実施形態では、予め計り取った用量の８０％超が吸入時に肺に送達される。ＤＰＩ形式の送達により得られる吸入可能なＤＨＥ粒子の割合（米国薬局方の第６０１章に従って求められる）は２５％〜９０％の範囲にあり、ブリスターパック内に残る粒子は、予め計り取った用量の５％または予め計り取った用量〜５５％の範囲にある。ＭＤＩ形式では、粒子を薬学的に許容される噴射剤などの懸濁媒質に直接懸濁／分散させることができる。ある特定の実施形態では、懸濁媒質は噴射剤である。噴射剤は、ＤＨＥ粒子の溶媒としての役割を果たさないのが望ましい。適切な噴射剤としては、Ｃ１〜４ヒドロフルオロアルカン、例えば、特に限定されないが、単独の、または任意に組み合わせた１，１，１，２−テトラフルオロエタン（ＨＦＡ１３４ａ）および１，１，１，２，３，３，３−ヘプタフルオロ−ｎ−プロパン（ＨＦＡ２２７）などが挙げられる。このほか、二酸化炭素ならびにペンタン、イソペンタン、ブタン、イソブタン、プロパンおよびエタンなどのアルカンを噴射剤として使用するか、上記のＣヒドロフルオロアルカン噴射剤と混合することができる。混合する場合、噴射剤は０〜２５％のこのような二酸化炭素と、０〜５０％のアルカンとを含有し得る。一実施形態では、界面活性剤を用いずにＤＨＥ粒子分散液を得る。別の実施形態では、ＤＨＥ粒子分散液は、必要に応じて界面活性剤を含有してもよく、界面活性剤はＤＨＥに対する質量比０．００１〜１０で存在する。典型的な界面活性剤としては、オレイン酸、ステアリン酸、ミリスチン酸、アルキルエーテル、アルキルアリールエーテル、ソルビン酸および抗体もしくはフラグメントを吸入による送達用に製剤化するのに当業者が使用するその他の界面活性剤または上記界面活性剤の任意の組合せが挙げられる。具体的な界面活性剤としては、特に限定されないが、ソルビタンモノオレアート（ＳＰＡＮ−８０）およびミリスチン酸イソプロピルが挙げられる。ＤＨＥ粒子分散液はほかにも、界面活性剤を用いる場合にそれを可溶化させる極性溶媒を少量含有し得る。適切な極性溶媒としては、Ｃ２〜６アルコールおよびポリオール、例えばエタノール、イソプロパノール、ポリプロピレングリコールなどおよび上記極性溶媒の任意の組合せが挙げられる。極性抗体またはフラグメントは、噴射剤に対する質量比が０．０００１％〜４％の範囲になるよう添加し得る。極性溶媒の量が４％を超えると、ＤＨＥと反応するか、ＤＨＥを可溶化し得る。ある特定の実施形態では、極性抗体またはフラグメントは、噴射剤に対する質量比が０．０００１〜１％になるよう使用されるエタノールである。薬学的に許容される噴射剤および界面活性剤と平衡状態にある以外には、抗体またはフラグメントを含有する水もヒドロキシルも追加でＤＨＥ粒子製剤に加えることは一切ない。噴射剤および界面活性剤（使用する場合）は、抗体またはフラグメントを含有する水およびヒドロキシルが平衡状態点にあるように、使用前に抗体またはフラグメントを含有するヒドロキシルの水に曝露され得る。噴射剤／界面活性剤組成物に適するものである限り、標準的な定量バルブ（Ｎｅｏｔｅｃｈｎｉｃｓ社製、Ｖａｌｏｉｓ社製またはＢｅｓｐａｋ社製など）およびキャニスタ（ＰｒｅｓｓＰａｒｔ社製またはＧｅｍｉ社製など）を用いることができる。充填容積が２．０ミリリットル〜１７ミリリットルのキャニスタを用いれば、１〜数百回分の用量を投与し得る。任意選択で、ロックアウト機構を有する用量カウンタを取り付けて、充填用量に関係なく特定の用量に制限することができる。噴射剤懸濁液中のＤＨＥの総質量は通常、噴射剤１００マイクロリットル当たりＤＨＥ０．１００ミリグラム〜２．０００ミリグラムの範囲になる。５０〜１００マイクロリットルの範囲の用量の標準的なＭＤＩ定量バルブを用いれば、用量が作動１回当たり０．０５０マイクログラム〜１．０００マイクログラムの範囲で定量される。吸入の協調を最大限にするため、好ましくは呼吸で作動させる作動装置を用いることができるが、治療効果を得るのに不可欠であるというわけではない。このようなＭＤＩの吸入可能な割合は、定量された用量の２５％〜７５％の範囲内に収まるものと思われる（米国薬局方の第６０１章に従って求められる）。
【０２６２】
本明細書に記載されるように、ウイルス、特にインフルエンザウイルスの治療または予防に有効かつ有用な鼻腔内投与用の中和抗体の単位用量は、別の投与に示される、または必要とされる単位用量、例えばＩＰまたはＩＶ投与に必要とされる単位用量などと比較して少なくなる。したがって、その一態様では、投与、特に鼻腔内投与のための抗体組成物であって、単位用量が、別の投与に示される、または必要とされる単位用量、例えばＩＰまたはＩＶ投与に必要とされる単位用量などよりも桁単位、具体的には数桁単位で少ない抗体組成物が提供される。したがって、その一態様では、投与、特に鼻腔内投与のための抗体組成物であって、単位用量が、少なくとも１０分の１、１０分の１、２０分の１、２５分の１、５０分の１、少なくとも１００分の１、１００分の１、５００分の１、最大１０００分の１である抗体組成物が提供される。したがって、特に、特に同じまたは同程度の効果あるいは作用および／または活性を得るのに、ＩＰまたはＩＶ投与のための同じ単位用量に比して組成物が少なくなる。効果を改善するため、ＩＮ単位用量とＩＰまたはＩＶ用量とを組み合わせてもよい。
【０２６３】
組成物は、投与製剤に適合する方法で、かつ治療有効量で投与する。投与するべき量は、治療する対象、対象の免疫系が有効成分を利用する能力および所望のウイルスを抑制または中和する程度によって決まる。投与する必要のある有効成分の正確な量は、医師の判断によって決められ、各個人に特有のものである。しかし、適切な投与では、鼻腔内投与１回につき個人の体重１キログラム当たりの有効成分が約０．００１〜１０ミリグラム、好ましくは約０．００５〜約１ミリグラム、１未満、０．５未満、０．１未満、０．０５未満、０．０１未満、より好ましくは１ミリグラム未満、０．５ミリグラム未満、０．１ミリグラム未満の範囲内に収まり得る。初回投与および後続投与に適したレジメンも様々である。あるレジメンでは、初回投与の後、１時間ないし数時間の間隔を空けて、のちの注射をはじめとする投与により、後続用量（単一または複数の後続用量）を反復して投与する。
【０２６４】
初回ＩＮ投与の後、これより高用量の抗体をＩＰまたはＩＶをはじめとする適切な経路により投与し得る。本開示の一態様では、新規な投与方法またはパラメータが提供され、ここでは、患者または対象の鼻腔内に中和抗体を投与し、これと同時に、これに次いで、またはこの後に、ＩＰまたはＩＶ投与により中和抗体または非中和抗体を投与する。
【０２６５】
ほかの組合せ
本発明の実施形態の一態様では、特に抗体またはフラグメントが中和作用を示す、ウイルス結合抗体またはその結合フラグメントと、薬剤または薬物とを組み合わせて、本明細書に開示される実施形態に使用する、吸入または鼻腔内投与を含めた経呼吸気道または経気道投与用の抗体−薬物または抗体−薬剤コンジュゲートを形成し得る。抗体またはフラグメントと組み合わせる、またはコンジュゲートする薬物または薬剤は、ウイルスを中和する薬物または薬剤であり得る。
【０２６６】
あるいは、抗体または組合せを、特に経口抗インフルエンザ薬を含めた、抗ウイルス剤、抗ウイルス治療薬、抗インフルエンザ薬または抗インフルエンザ剤とともに投与し得る。抗インフルエンザ剤はノイラミニダーゼ阻害剤であり得る。抗インフルエンザ剤はＴａｍｉｆｌｕおよびＲｅｌｅｎｚａから選択され得る。抗インフルエンザ剤は、アマンタジンまたはリマンタジンなどのＭ２阻害剤であり得る。組み合わせるまた別の薬剤は、抗ウイルス治療薬、ウイルス複製阻害剤、プロテアーゼ阻害剤、ポリメラーゼ阻害剤、赤血球凝集素阻害剤、気管支拡張薬（例えば、アルブテロール、レバルブテロール、サルメテロール）または吸入副腎皮質ステロイド剤から選択され得る。抗ウイルス剤はウイルス結合剤またはウイルス結合阻害剤であり得る。その一態様では、ウイルス結合阻害剤は、結合により、かつより従来的な中和手段によらずにインフルエンザウイルスと結合し、インフルエンザを阻害することが可能な抗体であり得る。ＴＲＬ８０９およびＴＲＬ８３２は、特に経気道投与によりカクテルと組み合わせて効果または相乗効果を増大させるのに適するまたは有効な例示的結合抗体となり得る。特に本明細書に開示される抗体カクテルと組み合わせて、経気道投与により効果が得られるその他の薬剤としては、サーファクタントまたは気道内層モジュレーター、例えばサーファクタントナノエマルションおよびカチオン性気道内層モジュレーターなどを挙げ得る。このほか、気道炎症を調節または軽減する薬剤を本発明の抗体カクテルと組み合わせると有効または有用であり得る。
【０２６７】
いくつかの実施形態では、治療用組成物、特に経肺組成物は、有効量の中和抗体またはそのフラグメントと、以下の有効成分：抗生物質、抗ウイルス剤、ステロイド剤、抗炎症剤のうちの１つまたは複数とをさらに含み得る。特定の態様では、組成物は抗ウイルス治療薬を含み得る。組成物は抗インフルエンザ剤を含み得る。いくつかの実施形態では、本発明のｍＡｂ療法と、他の抗ウイルス治療、例えば、ノイラミニダーゼ阻害剤（例えば、オセルタミビル［Ｔａｍｉｆｌｕ（商標）］、ザナミビル［Ｒｅｌｅｎｚａ（商標）］）、ＲＮＡポリメラーゼ阻害剤（例えば、ファビピラビル、ＶＸ−７８７）、免疫調節薬（例えば、吸入インターフェロンベータ１ａ）、宿主細胞標的化剤（例えば、Ｆｌｕｄａｓｅ（商標）、Ｒａｄａｖｉｒｓｅｎ（商標））、イオンチャネル阻害剤（例えば、アマンチジン）をはじめとする抗ウイルス薬のような抗ウイルス治療薬などとを組み合わせることによって効果を改善する方法および組成物が提供される。
【０２６８】
このような抗インフルエンザ剤はいずれも、本明細書に提供される組成物の一部として混合する、または組み合わせるか、抗体またはその活性なフラグメントとともに、またはこれとは別個に投与してもよい。抗インフルエンザ剤は、本発明の抗体もしくはそのフラグメントまたは吸入もしくは鼻腔内組成物と同じ手段または別の手段（吸入または経口（例えば、丸剤）手段による投与）で投与し得る。したがって、本開示の抗体の組合せ（１つまたは複数）および本発明の吸入または鼻腔内組成物は、抗インフルエンザ剤または抗ウイルス剤、例えば、ＴａｍｉｆｌｕおよびＲｅｌｅｎｚａから選択される薬剤を含めたノイラミニダーゼ阻害剤などをさらに含み得るか、これと併用して、またはこれの後もしくは前に逐次的に投与され得る。
【０２６９】
本明細書で使用される「ｐｇ」はピコグラム、「ｎｇ」はナノグラム、「ｕｇ」もしくは「μｇ」はマイクログラム、「ｍｇ」はミリグラム、「ｕｌ」もしくは「μｌ」はマイクロリットル、「ｍｌ」はミリリットル、「ｌ」はリットルをそれぞれ意味する。
【０２７０】
組成物は、当該技術分野ならびに医療分野および臨床現場で知られており、受け入れられている方法を用いて、鼻噴霧剤または吸入液剤もしくは懸濁剤に製剤化され得る。ＦＤＡは、ｆｄａ．ｇｏｖで入手可能なＧｕｉｄａｎｃｅ  ｆｏｒ  Ｉｎｄｕｓｔｒｙの文書を含め、このような噴霧剤、液剤および懸濁剤ならびに噴霧医薬品に関するガイドラインおよび指針を提供している。Ｎａｓａｌ  Ｓｐｒａｙ  ａｎｄ  Ｉｎｈａｌａｔｉｏｎ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ，Ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ  ａｎｄ  Ｓｐｒａｙ  Ｄｒｕｇ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ−Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ  ａｎｄ  Ｃｏｎｔｒｏｌｓ  Ｄｏｃｕｍｅｎｔａｔｉｏｎと題する例示的なＪｕｌｙ  ２００２  Ｇｕｉｄａｎｃｅ  ｆｏｒ  Ｉｎｄｕｓｔｒｙの文書には、製剤の成分および組成物、その仕様、製造および密閉容器システムに関する詳細が記載されている。
【０２７１】
鼻噴霧剤とは、通常は水ベースをベースとし、ほかにも添加剤を含有し得る、経鼻吸入による使用を目的とした製剤中に溶解または懸濁した有効成分を含有する、医薬品のことである。鼻噴霧剤用の容器密閉システムには、定量、噴霧化および患者への製剤送達を引き起こすための容器および全成分が含まれている。経鼻噴霧医薬品は、治療有効成分（原薬）を添加剤（例えば、保存剤、粘度調整剤、乳化剤、緩衝剤）の溶液または混合物に溶解または懸濁させて、定量された用量の有効成分を含有する噴霧剤を送達する非加圧ディスペンサに入れたものである。用量は、スプレーポンプによって計量され得るか、製造時に予め計り取られたものであり得る。経鼻スプレーユニットは、単位投与用に設計されているか、原薬を含有する製剤のスプレーを定量して何度も放出できるものであり得る。鼻噴霧剤は、局所効果および／または全身効果を得るために鼻腔に適用される。
【０２７２】
吸入溶液および吸入懸濁液医薬品は通常、治療有効成分を含有し、ほかにも追加の添加剤を含有し得る、水ベースの製剤である。水ベースの経口吸入液剤および懸濁剤は無菌でなければならない（２１  ＣＦＲ  ２００．５１）。吸入液剤および懸濁剤は、局所および／または全身効果を得るために経口吸入により肺に送達することを目的とし、特殊な噴霧器を使用しなければならないものである。吸入噴霧医薬品は、製剤と容器密閉システムとからなる。製剤は通常、水をベースとし、噴射剤は一切含有しない。
【０２７３】
現在用いられている吸入噴霧医薬品用に設計された容器密閉システムには、機械的補助もしくは電動補助および／または患者の吸入エネルギーを用いて噴霧煙を発生させる、予め計量されたものおよび装置で計量されるものの両方が含まれる。予め計量されたものは、のちに製造時または患者が使用する前に装置に挿入するある種のユニット（例えば、１つまたは複数のブリスターをはじめとするくぼみ）に予め計量された用量または１回量を含んでいる。典型的な装置計量ユニットは、患者が作動させると装置そのものから定量噴霧剤として送達される複数回用量に十分な製剤の入ったリザーバーを有する。
【０２７４】
ほかにも、生体接着性ポリマー、マイクロスフェア、キトサンを使用することにより、あるいは製剤の粘度を増大させることにより、鼻腔内での滞留時間を延長させ得る。このほか、薬物、補形剤、保存剤および／または吸収促進剤により鼻粘液線毛クリアランスを刺激または抑制し、ひいては吸収部位への薬物送達に影響を及ぼすことができる。
【０２７５】
マイクロスフェア技術は、経鼻製品の設計に用いられている特殊なシステムの１つである。マイクロスフェアは鼻粘膜との接触時間を延ばし、ひいては吸収または効果が促進し得る。鼻に適用されるマイクロスフェアはこれまでに、デンプン、アルブミン、デキストランおよびゼラチンなどの生体適合材料を用いて調製されている（Ｂｊｏｒｋ  Ｅ，Ｅｄｍａｎ  Ｐ（１９９０）Ｉｎｔ  Ｊ  Ｐｈａｒｍ  ６２：１８７−１９２）。
【０２７６】
薬物の水溶解度は、溶液の経鼻薬物送達を制限する重要なパラメータとなり得る。従来の溶媒または共溶媒、例えばグリコール、少量のアルコール、Ｔｒａｎｓｃｕｔｏｌ（ジエチレングリコールモノエチルエーテル）、中鎖グリセリドおよびＬａｂｒａｓｏｌ（飽和ポリグリコール化Ｃ８〜Ｃ１０グリセリド）を用いて薬物の溶解度を増大させることができる。その他の選択肢としては、生体適合性の可溶化剤および安定剤としての役割を果たす界面活性剤またはＨＰ−ベータ−シクロデキストリンなどのシクロデキストリンと、脂溶性吸収促進剤との併用が挙げられる。このような場合、これらが鼻刺激性に及ぼす影響を考慮に入れるべきである。
【０２７７】
ほとんどの経鼻製剤は水をベースとするものであり、微生物の増殖を抑えるために保存剤を必要とする。経鼻製剤によく用いられる保存剤の一部として、パラベン、塩化ベンザルコニウム、フェニルエチルアルコール、ＥＤＴＡおよびベンゾイルアルコールがある。水銀含有保存剤は線毛運動に対して迅速で不可逆的な効果を示すものであるが、経鼻システムでの使用は推奨されない。
【０２７８】
薬物の酸化を防ぐため、少量の抗酸化剤が必要とされ得る。よく用いられる抗酸化剤には、二亜硫酸ナトリウム、亜硫酸水素ナトリウム、ブチル化ヒドロキシトルエンおよびトコフェロールがある。抗酸化剤は通常、薬物吸収に影響を及ぼすことも、鼻刺激を引き起こすこともないものである。抗酸化剤および保存剤と、薬物、添加剤、製造設備および包装成分との化学的／物理学的相互作用を製剤開発プログラムの一環として考慮するべきである。
【０２７９】
多くのアレルギー性疾患および慢性疾患は、粘膜の痂皮化および乾燥と関係がある場合が多い。ほかにも、添加剤の中でも特定の保存剤／抗酸化剤は、特に大量に使用したとき、鼻刺激を引き起こす可能性がある。脱水を防ぐには鼻腔内の水分が十分であることが不可欠である。このため、特にゲルベースの経鼻製品では保湿剤を添加し得る。保湿剤は鼻刺激を予防し、薬物吸収に影響を及ぼす可能性もない。一般的な例としては、グリセリン、ソルビトールおよびマンニトールが挙げられる。
【０２８０】
送達システムの選択は、使用する薬物、意図する適応症、患者集団のほか、重要なものとしてマーケティング嗜好性によって決まる。このような送達システムの一部としては、点鼻剤、鼻噴霧剤、経鼻ゲル剤および経鼻粉末剤が挙げられる。
【０２８１】
いくつかの実施形態では、鼻腔内および吸入送達用の噴霧器により投与する組成物が提供される。噴霧器とは、薬剤を呼吸気道内に吸入されるミストの形態で投与するのに使用される薬物送達装置のことである。噴霧器は、ｍＡｂを口腔および鼻を通過させて鼻腔内および吸入送達するのに使用することができ、ｍＡｂを上気道および／または下気道を送達するのに有効な装置である。噴霧器は、酸素、圧縮空気または超音波の力を利用して医薬溶液および懸濁液を分散させ、装置のマウスピースから直接吸入することが可能な微小なエアゾール滴にするものである。エアゾールとは気体粒子と液体粒子の混合物のことであり、天然に存在するエアゾールの最も良い例が霧であり、これは、気化した水の微小な粒子が周囲の温度の高い空気と混ざり、これが冷却および濃縮されて、空中に浮遊した目に見える水滴が薄い雲のようになって形成されるものである。定量吸入器（ＭＤＩ）とは、通常は患者が吸入することにより、エアゾール化した薬物が短時間噴出して自己投与される形で特定量の薬剤を肺に送達する装置のことである。乾燥粉末吸入器には微粒子化した粉末が含まれており、この粉末は多くの場合、使用者自身の呼吸により肺に吸い込まれる粉末化した薬剤を入れるブリスターまたはゲルカプセルに１回投与量で充填されている。超音波振動メッシュ技術（ＶＭＴ）が生み出されたことにより、噴霧器市場に新たに大きな技術革新がもたらされた。この技術は、レーザーで１０００〜７０００個の孔を開けたメッシュ／膜を液体リザーバーの上部で振動させ、その圧力で孔から極めて微小な液滴のミストを噴出させるものである。この技術は、液体リザーバーの底部に振動圧電素子を設けるよりも効率が高く、それにより治療時間も短縮される。利用可能なＶＭＴ噴霧器としては、Ｐａｒｉ  ｅＦｌｏｗ  Ｒｅｓｐｉｒｏｎｉｃｓ  ｉ−Ｎｅｂ、Ｏｍｒｏｎ  ＭｉｃｒｏＡｉｒ、Ｂｅｕｒｅｒ  Ｎｅｂｕｌｉｚｅｒ  ＩＨ５０およびＡｅｒｏｇｅｎ  Ａｅｒｏｎｅｂが挙げられる。
【０２８２】
別の実施形態では、組成物を再構成用の凍結乾燥粉末または粘膜噴霧装置（ＭＡＤ）により鼻腔内に投与する保存もしくは非保存無菌液体組成物として調製する。ルアーロックを介して粘膜噴霧装置（ＭＡＤ）を抗ウイルス組成物を含むシリンジに取り付ける。シリンジのプランジャーを勢いよく押して、１用量当たり約０．０１ｍＬ、０．０５ｍＬ、０．１ｍＬ、０．２ｍＬ、０．３ｍＬ、０．４ｍＬ、０．５ｍＬ、０．６ｍＬ、０．７ｍＬ、０．８ｍＬ、０．９ｍＬまたは１ｍＬのミストを鼻腔内に迅速に生じさせる。いくつかの場合には、片方の鼻孔に全量を投与するか、あるいは１用量につき１回または複数回の噴霧で、全量を両方の鼻孔に分けてもよい。
【０２８３】
経鼻製剤のｐＨは、抗体を安定させるほか、鼻粘膜の刺激を防ぎ、抗体が吸収に最適な形態で利用できるようにし、鼻道に病原菌が増殖するのを防ぎ、保存剤などの添加剤の機能性を維持し、正常な生理的線毛運動を維持するうえで重要である。いくつかの実施形態では、抗体カクテル、薬物または有効成分の物理化学的特性を考慮に入れたうえで、組成物を４．５〜８．２、５．２〜７．９または４．５〜６．５の範囲内のｐＨで調製する。経鼻製剤は一般に、２５〜２００μＬの範囲の少ない体積で投与し、１００μＬが最もよく用いられる投与体積である。
【０２８４】
投与
再び述べれば、通常に妥当な範囲で予想される抗体の治療用量は、ｍｇ範囲のＩＶまたはＩＰ用量になるよう十分に確立されている。この用量は、多数の組換え抗体を用いたこれまでの研究および臨床経験に基づくものである。米国ではこれまでに、２０を超えるモノクローナル抗体が臨床的に承認されている（例えば、Ｎｅｗｓｏｍｅ  ＢＷおよびＥｒｎｓｔｏｆｆ  ＭＳ（２００８）Ｂｒ  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  ６６（１）：６−１９を参照されたい）。臨床的に承認され現在用いられている抗体はいずれも、ｍｇ／ｋｇの範囲でＩＰまたはＩＶで利用および投与されている。
【０２８５】
これまでに臨床的に承認されたインフルエンザモノクローナル抗体はない。現時点で進行中または報告済みの試験はいずれも、標準法の静脈内送達を用いるものである。特に、ＴｈｅｒａＣｌｏｎｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ社の抗体ＴＣＮ−０３２は、１〜４０ｍｇ／ｋｇの範囲の単回用量漸増で評価された（ＮＣＴ０１３９００２５、ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｔｒａｉｌｓ．ｇｏｖ）。ＴＣＮ−０３２抗体は、インフルエンザ基質タンパク質（Ｍ２）のアミノ末端細胞外ドメイン（Ｍ２ｅ）の保存されたエピトープと結合するヒト抗体である（Ｇｒａｎｄｅａ  ＡＧら（２０１０）ＰＮＡＳ  ＵＳＡ  １０７（２８）：１２６５８−１２６６３；Ｅｐｕｂ  ２０１０  Ｊｕｌ  １）。抗体ＣＲ６２６１およびＣＲ８０２０も同様に、用量を２ｍｇ／ｋｇから５０ｍｇ／ｋｇまで２時間かけて漸増させてＩＶ投与する安全性および耐容性に関する試験で現在評価されている（それぞれ、Ｃｒｕｃｅｌｌ  Ｈｏｌｌａｎｄ  ＢＶ臨床試験ＮＣＴ０１４０６４１８およびＮＣＴ０１７５６９５０）。
【０２８６】
インフルエンザワクチンは注射により投与する。インフルエンザワクチンの１つの例外として、鼻腔内に投与するＦｌｕＭｉｓｔ生インフルエンザワクチン（ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ社）がある。ＦｌｕＭｉｓｔは、Ａ／Ｈ１Ｎ１株、Ａ／Ｈ３Ｎ２株およびＢ株の３種類の生インフルエンザ株を組み合わせたものであり、単回用量の予め充填した鼻腔内噴霧器で供給される懸濁液を用いて、０．２ｍｌの用量で投与する。ウイルス株に加えて、各用量にはグルタミン酸ナトリウム、加水分解ブタゼラチン、アルギニン、スクロース、リン酸二カリウムおよびリン酸二水素カリウムも含まれており、保存剤は含まれていない（ＦｌｕＭｉｓｔ  Ｈｉｇｈｌｉｇｈｔｓ  ｏｆ  Ｐｒｅｓｃｒｉｂｉｎｇ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ，２０１２−２０１３  Ｆｏｒｍｕｌａ，ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ，ＲＡＬ−ＦＬＵＶ１２，Ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ  Ｎｏ．：１１２９４）。
【０２８７】
本開示は、特に呼吸経路を介して感染または伝染するウイルス、特にインフルエンザウイルスを含めたウイルスの治療および予防のための新規で効果のある抗体の組合せの投与様式および抗体投与プロトコルを提供する。したがって、本開示は、任意の重要なまたは流行中のインフルエンザウイルスを中和することが可能な抗体の組合せの経肺投与によるウイルス感染症、特にインフルエンザウイルスの治療、予防または軽減を提供する。抗体の組合せは、単回ＩＮ用量により投与してもよく、あるいは、複数の個々の用量で同時にまたは実質的に同時に投与してもよい。次いで、追加の組合せまたは個々の用量を、それぞれ数分、数時間または数日空けて投与し得る。
【０２８８】
特定の態様では、本開示は、流行中のインフルエンザ株に対する抗体の組合せの経肺投与によるウイルス感染症、特にインフルエンザウイルスの治療、予防または軽減を提供する。したがって、本開示によれば、インフルエンザＢおよび流行中のインフルエンザＡウイルスに対する抗体の組合せ、特にその一態様では、抗インフルエンザＢ抗体、抗Ｈ１抗体などの抗第１群インフルエンザＡ抗体および抗Ｈ３抗体などの抗第２群インフルエンザＡ抗体の組合せの経肺投与によるウイルス感染症、特にインフルエンザウイルスの治療、予防または軽減が提供および達成される。本開示によれば、抗インフルエンザＢ抗体、抗Ｈ１抗体などの抗第１群インフルエンザＡ抗体および抗Ｈ３抗体などの抗第２群インフルエンザＡ抗体の組合せの鼻腔内投与が、インフルエンザＢまたはインフルエンザＡウイルスによるインフルエンザ感染の予防に効果がある。抗体が入手可能なものであり、かつ２つ以上のウイルス亜型または株に対して効果を示し、これらに対するものであることが本明細書で試験され示される限り、本明細書に提供および企図される組合せは、ウイルス、特に既知で流行中の株または亜型、出現しつつある株または亜型および未知で予想外の変異型の株または亜型を含めたインフルエンザウイルスの多数の株および／または亜型に効果を示す汎用カクテルまたは組合せとしての役割を果たす。
【０２８９】
本明細書に開示される実施形態で使用する抗体を鼻腔内に、または吸入により投与し、これに次いで、またはこれとともに、同時投与、併用投与または逐次もしくは個別投与を含め、別の抗体または同じ抗体の全身投与、特にＩＰまたはＩＶ投与を実施し得る。したがって、本明細書では、病原体、特にウイルス、具体的にはインフルエンザウイルスに対する効果を増大させるために鼻腔内投与とＩＰ（またはＩＶ）投与とを組み合わせる、組合せの投与プロトコルまたは投与方法が企図および提供される。実際、本明細書に記載される試験は、鼻腔内投与と別の投与（ＩＰまたはＩＶ）とを組み合わせた投与を用いると、１例を用いることができるように、組み合わさった効果がＩＮおよびＩＰともに相乗的かつ低用量になることを示している。
【０２９０】
経気道投与は、低用量で効果があり、低用量、低コストであり、したがって、診断検査による確定を必要としない治療を実施する唯一の機会を提供する。医師がこの低用量のカクテルを、例えば乾燥粉末吸入器もしくは噴霧器として、またはその他の気道送達法により投与するには、インフルエンザの季節に症状を認めれば十分である。この診断を必要としない標準治療は現在、ＴａｍｉｆｌｕおよびＲｅｌｅｎｚａで実施されているが、費用のかかる静脈内抗体療法には不可能であり、実際的ではなく、コスト的に不可能であると思われる。診断を実施した後、高用量の抗体の投与を静脈内経路などの全身経路または経気道のいずれかで実施し得るほか、カクテルまたはインフルエンザの型に特異的な単独の特異的抗体として構成し得る。
【０２９１】
本開示は、呼吸器ウイルスに曝露した、同ウイルスに曝露するリスクのある、同ウイルスに罹患した、同ウイルスによる臨床症状を呈している、または同ウイルスに罹患している哺乳動物のウイルス感染症を治療または予防する方法であって、本明細書に提供される抗体の組合せまたはカクテルを鼻腔内（ＩＮ）にまたは吸入により前記哺乳動物に投与することを含む、方法を提供する。抗体のカクテルまたは組合せは、特に、すべてがＩｇＧ抗体であり得る。
【０２９２】
感染後または推定感染後に抗体の組合せを投与することができる。その一態様では、感染から８時間後（ｈｐｉ）までの間に、２ｈｐｉ、４ｈｐｉ、６ｈｐｉ、８ｈｐｉを含め、抗体の組合せを投与することができる。別法では、感染から２４時間後までの間に、４ｈｐｉ、８ｈｐｉ、１２ｈｐｉ、１８ｈｐｉ、２４ｈｐｉを含め、抗体の組合せを投与する。さらなる別法では、感染から４８時間後までの間に、１２ｈｐｉ、２４ｈｐｉ、３６ｈｐｉ、４８ｈｐｉを含め、抗体を投与する。またさらなる別法では、感染から７２時間後までの間に、２４ｈｐｉ、３６ｈｐｉ、４８ｈｐｉ、６０ｈｐｉ、７２ｈｐｉを含め、抗体を投与する。感染もしくは推定感染から数日後または発熱、鈍痛、関節痛、嗜眠などの臨床症状が認められた後に抗体を投与してもよい。感染から１日後、感染から２日後、感染から３日後、感染から４日後、感染から５日後、感染から６日後、感染から７日後、感染から１０日後、感染から１２日後、感染から１４日後に抗体を投与してもよい。感染または推定感染から１週間後、２週間後、３週間後、４週間後、１か月後を含めた数週間後に抗体を投与してもよい。
【０２９３】
感染前に、または伝染を抑制もしくは予防するために、または病状、疾患もしくは感染の何らかの臨床徴候がみられる前に抗体の組合せを投与することができる。その一態様では、感染前または曝露もしくは曝露のリスクの可能性が考えられるか推定される前の数日間に、予防として抗体を投与することができる。１日前、２日前、３日前、４日前、５日前、６日前、７日前、１週間前、７日より前、１週間より前、最大９日前、最大１０日前に抗体の組合せを投与し得る。抗体を前に１回または複数回、数時間、数日または数週間開けて、１つまたは複数の用量で投与してもよい。
【０２９４】
抗体の組合せは、単回用量を１回投与しても、複数の組合せ用量を反復して投与してもよい。任意の好ましい態様では、組合せまたはカクテルの各抗体を同じ相対量で投与する。各用量は単位またはｍｇ／ｋｇの量が同じであっても、量が異なっていてもよい。例えば、初回用量が相対的に高くてもよく、例えば、特に限定されないが、約１ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ超、１ｍｇ／ｋｇ未満または投与する哺乳動物の最大耐量もしくは最大耐量付近または最大耐量の半分などであってよい。その後の用量は、初回用量と同じであっても、初回用量よりも少なくても多くてもよく、また、対象もしくは患者の反応もしくは応答または臨床症状の軽減もしくは程度に応じて決まり得る。
【０２９５】
各用量または任意の用量が同じである、または異なる複数の用量を数時間、数分、数日または数週間空けて投与し得る。そのタイミングは様々であってよく、応答および症状に応じて短くしても長くしてもよい。投与を例えば、特に限定されるわけではないが、少なくとも２時間、少なくとも４時間、少なくとも６時間、少なくとも８時間、少なくとも２４時間、少なくとも４８時間、少なくとも７２時間空けて実施し得る。感染後または推定感染後およびその最大２時間、４時間、６時間、８時間、１２時間、２４時間、３６時間、４８時間、７２時間後、最大１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、１週間、２週間、３週間、４週間、１か月またはそれ以上後に抗体の１つまたは複数の用量を投与し得る。
【０２９６】
この方法は、ウイルス特異的モノクローナル抗体を追加でＩＰまたはＩＶ投与することを含んでよく、ここでは、追加で投与する抗体は中和抗体または非中和抗体である。追加でＩＰまたはＩＶ投与する抗体は、ＩＮまたは吸入により投与する抗体と同じ抗体であってもよい。追加でＩＰまたはＩＶ投与する抗体は、ＩＮまたは吸入により投与する抗体と同時に投与しても、逐次的に投与しても、その後に投与してもよい。このような後続投与はいずれも、数時間後であってよく、２時間、４時間、６時間、８時間、１２時間、２４時間、３６時間、４８時間、７２時間後またはそれ以上後であり得る。後続投与は数日後であってもよく、１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日後であり得る。後続投与は数週間後であってもよく、１週間、２週間、３週間、４週間または５週間後であり得る。
【０２９７】
特に、初回のＩＮ投与、ＩＰ投与、ＩＶ投与または組み合わせた投与の後にも体調がすぐれないか、感染症または病状の症状が引き続き認められる患者または対象には、吸入または鼻腔内投与を用いて応答または効果を高めてもよい。
【０２９８】
さらなる態様では、本開示は、インフルエンザウイルスに対するモノクローナル抗体のカクテルまたは組合せを投与するためのプロトコルであって、鼻腔内にまたは吸入により１回目の抗体の組合せの投与を実施し、次いで、または同時に、腹腔内もしくは静脈内に、または再び鼻腔内にもしくは吸入により２回目の抗体投与を実施することを含み、２回目の投与の抗体の組合せが、１回目の投与の抗体の組合せと同じまたは異なる抗体の組合せである、プロトコルを提供する。２回目または任意の追加投与の抗体は、中和抗体であっても非中和抗体であってもよい。
【０２９９】
本明細書に開示される実施形態については、本発明の例示として記載される以下の非限定的な実施例を参照することによりさらに理解が進むものと思われる。以下の実施例は、好ましい実施形態または特定の実施形態をより十全に説明するために記載するものであるが、決してその広い範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。
【０３００】
抗体の構造
本発明のｍＡｂの特定の重鎖および軽鎖アミノ酸配列を以下および添付の配列表に記載する。
【０３０１】
ＴＲＬ７８４
実施例
【０３０２】
本明細書に記載する実施例には以下の原料および方法を用いる。
【０３０３】
抗体：いくつかの場合には、以下に記載するように、ファージディスプレイを用いてＭａｂを単離した。ＭａｂＣＲ８０２０およびＣＲ６２６１は、それぞれ第２群ウイルスおよび第１群ウイルスに対するよく特徴付けられた広域反応性抗体である（Ｔｈｒｏｓｂｙ  Ｍら（２００８）ＰＬ０Ｓ  ＯＮＥ  ３：ｅ３９４２；Ｅｃｋｅｒｔ  ＤＣら（２００９）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３２４：２４６−２５１；Ｆｒｉｅｓｅｎ  ＲＨＥら（２０１０）ＰＬｏＳ  ＯＮＥ  ５（２）：ｅ１９０６；米国特許第８，１９２，９２７号；Ｅｃｋｅｒｔ  ＤＣら（２０１１）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３３３：８４３−８５０）。抗体ＣＲ９１１４をＩＶ投与すると、ＨＡ茎部にある保存されたエピトープと結合し、インフルエンザＡおよびインフルエンザＢウイルスによる致死的な攻撃から防御する（Ｄｒｅｙｆｕｓ  Ｃら（２０１２）Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｅｘｒｅｓｓ  ９  Ａｕｇｕｓｔ  ２０１２  １０．１１２６／ｓｃｉｅｎｃｅ．１２２２９０８）。本発明者ら自らが可変領域を合成することによりこれらの中和抗体をクローニングし、マウスＩｇＧ２ａ発現ベクターにサブクローニングした。ＣＲ８０２０の可変領域は、公開されている重鎖ＧＩ：３３９７７９６８８および軽鎖ＧＩ：３３９８３２４４８を用いてクローニングした。ＣＲ６２６１の可変領域は、公開されている重鎖ＧＩ：３１３７４２５９４および軽鎖ＧＩ：３１３７４２５９５を用いてクローニングした。ＣＲ９１１４の可変領域は、Ｇｅｎｂａｎｋの配列重鎖アクセッション番号ＪＸ２１３６３９および軽鎖アクセッション番号ＪＸ２１３６４０を用いてクローニングした。これらの研究に用いたＣＲ６２６１、ＣＲ８０２０およびＣＲ９１１４抗体を、マウスＩｇＧ２ａと融合したヒト可変領域を含むＩｇＧ発現ベクターにクローニングする。本明細書では、マウス抗体ＣＲ６２６１、ＣＲ８０２０およびＣＲ９１１４のキメラ抗体をそれぞれＣＡ６２６１、ＣＡ８０２０およびＣＡ９１１４と呼ぶ。Ｍａｂ５Ａ７をＩＰ投与すると、ＢウイルスＨＡ上にある共通のエピトープと結合してウイルスを中和し、致死的な攻撃からマウスを防御する（Ｙａｓｕｇｉ  Ｍら（２０１３）ＰＬｏＳ  Ｐａｔｈｏｇ  ９（２）：ｅ１００３１５０，ｄｏｉ：１０．１３７１／ｊｏｕｒｎａｌ．ｐｐａｔ．１００３１５０）。
【０３０４】
ヒト抗体Ｍａｂ５３（ＴＲＬ０５３とも表される）は米国特許出願公開第２０１２／００２０９７１号および国際公開第２０１１／１６００８３号（それぞれ参照により本明細書に組み込まれる）に記載されており、第１群および第２群のＨ１、Ｈ９、Ｈ７およびＨ５亜型の中和に効果がある。
【０３０５】
抗体Ｍａｂ５７９（ＴＲＬ５７９とも表される）は国際公開第２０１３／０８６０５２号（参照により本明細書に組み込まれる）に記載されており、Ｈ３およびＨ７の中和に効果がある。
【０３０６】
抗体重鎖および軽鎖可変領域の配列を含めた公開されている配列、特に上記の抗体および本明細書に例示する抗体の重鎖および軽鎖ＣＤＲドメイン（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３）配列、特にＣＲ６２６１、ＣＲ８０２０、ＣＲ９１１４、５Ａ７、Ｍａｂ５３およびＭａｂ５７９を含めた配列は、上に記載され参照により本明細書に組み込まれる参考文献を含め、既知であって公に入手可能である。
【０３０７】
Ｆａｂの検証：Ｆａｂをコードするファージライセートを組換えＨＡに対するＥＬＩＳＡによりスクリーニングした。単一コロニーをいくつか選択して、２ＸＹＴ／Ｃａｍ／Ｇｌｃ培地を含有する３８４ウェルプレートに移し、３０℃で一晩増殖させた。Ｑｐｉｘを用いて、低グルコースの２ＸＹＴ／Ｃａｍを含有する３８４ウェル発現プレートに３８４ウェルプレートのＴＧ１細胞を再現した。プレートを３０℃、４００ｒｐｍで２〜４時間増殖させた。０．５ｍＭ  ＩＰＴＧでＦａｂ発現を誘導し、２２℃、４００ｒｐｍで一晩増殖させた。Ｂｅｎｚｏｎａｓｅを含有するＢＥＬ緩衝液を用いて、Ｆａｂ含有細胞を２２℃、４００ｒｐｍで１時間溶解させた。１２．５％ＭＰＢＳＴを用いて、Ｆａｂ含有ライセートを４００ｒｍｐ、２２℃で３０分間ブロックした。ＨＡでコートしたＥＬＩＳＡプレートにライセートを室温で１時間加えた。プレートをＰＢＳＴで５回洗浄した後、アルカリホスファターゼとコンジュゲートした抗Ｆａｂ  ＩｇＧと室温で１時間インキュベートした。プレートをＴＢＳＴで５回洗浄し、ＡｕｔｏＰｈｏｓ（Ｒｏｃｈｅ社、ニュージャージー）を用いて発光させた。Ｉｎｆｉｎｉｔｅ  Ｐｒｏ  Ｆ２００を用いてプレートを読み取った。陽性のファージライセートの配列を決定し、さらに特徴付けるため、ｃ−ｍｙｃおよびｈｉｓタグを含むＦａｂ発現構築物に固有のＦａｂをサブクローニングした。
【０３０８】
Ｆａｂ発現：Ｆａｂ発現プラスミドをＴＧ１Ｆ−細胞にエレクトロポレートし、ＬＢ／Ｃａｍ寒天プレートに播いた。プレートを３７℃で一晩インキュベートした。２ＸＹＴ／Ｃａｍ／Ｇｌｃ  ５ｍｌに単一コロニーを接種し、３０℃、３５０ｒｐｍで一晩増殖させた。２ＸＹＴ／Ｃａｍ／ｌｏｗ  Ｇｌｃ  ５００ｍｌに一晩培養物２ｍｌを接種し、ＯＤ６００ｎｍが０．５に達するまで３０℃、１８０ｒｐｍで振盪した。ＩＰＴＧを最終濃度０．７５ｍＭで添加することによりＦａｂ発現を誘導した。培養物を３０℃、１６０ｒｐｍで一晩振盪した。培養物を５，０００ｇ、４℃で３０分間、遠心分離した。細菌ペレットを最低２時間、−８０℃で凍結させた。細胞を溶解させ、０．２２ｕｍフィルターでろ過し、ＩＭＡＣ精製およびサイズ排除段階に供した。
【０３０９】
抗体のクローニングおよび発現：Ｆａｂをコードするファージの配列を決定し、それぞれの重鎖および軽鎖のＩｇＧ発現プラスミドにサブクローニングした。振盪フラスコ内のＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  ２９３Ｆ細胞またはＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  ２９３Ｅｘｐｉ細胞でＩｇＧが産生された。細胞を重鎖および軽鎖の発現プラスミドでトランスフェクトした。トランスフェクションから６日後、培養上清を回収し、プロテインＡアフィニティークロマトグラフィーおよび緩衝液交換段階を用いて精製した。
【０３１０】
マウスを用いた治療効果の試験：６〜７週齢の雌ＢＡＬＢ／ｃマウスを実験に用いた。いずれのマウスも、実験開始前に少なくとも３日間、順化させ飼育した。ウイルス攻撃当日およびその後連日２週間、マウスの体重を測定した。臨床エンドポイントおよび試験からの除外の基準として臨床スコアリングシステムを用いた。臨床徴候を以下のようにスコア化した：背中を丸めた姿勢＝３、立毛＝３、拒食または拒飲＝２、３０％以上の体重減少＝１０、神経症状＝１０。スコアが１６以上に達した場合、試験から除外し安楽死させた。動物試験は承認された動物管理使用委員会（Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ）のプロトコルに従って実施した。感染後、示される日数の時点でマウスの治療を実施した。最初にケタミン／キシラジン混合物でマウスに麻酔をかけた後、マウス１匹当たり５０ｕｌのウイルス、ＭａｂまたはＦａｂを鼻腔内に投与した。体積１００ｕｌのＭａｂまたはＦａｂを腹膜内に投与した。１４日間の試験期間中、毎日、平均体重を求め、第０日の平均体重と比較して示した。
【０３１１】
ウイルス：Ｃｏｔｔｅｙ、ＲｏｗｅおよびＢｅｎｄｅｒ（Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，２００１）に従ってインフルエンザウイルス株（Ａ／カリフォルニア／７／０９、Ａ／ビクトリア／１１、Ｂ／マレーシア／２５０６／２００４、Ｂ／フロリダ／０４／２００６を含む）をマウスに適応させた。マウス適応を３回実施した後、孵化卵でウイルスを１回増殖させた。簡潔に述べれば、６〜８週齢のマウス３匹に麻酔をかけ、ウイルス２０ｕｌを鼻腔内に感染させた。感染から３日後、マウスを安楽死させ、肺を取り出した。肺を機械的にホモジナイズし、清澄化し、遠心分離して大きいデブリを除去した。ほかにも、肺ホモジネート２０ｕｌをナイーブマウスに３回継代した。
【０３１２】
（参考文献）
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Ｆｅｎｇ  Ｊ，Ｍｏｚｄｚａｎｏｗｓｋａ  Ｋ，Ｇｅｒｈａｒｄ  Ｗ：Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ  Ｃ１ｑ  ｅｎｈａｎｃｅｓ  ｔｈｅ  ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｓｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａ  ｖｉｒｕｓ  ｈｅｍａｇｇｌｕｔｉｎｉｎ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｄｅｐｅｎｄｉｎｇ  ｏｎ  ｔｈｅｉｒ  ｆｉｎｅ  ａｎｔｉｇｅｎ  ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ  ａｎｄ  ｈｅａｖｙ  ｃｈａｉｎ  ｉｓｏｔｙｐｅ．Ｊ  Ｖｉｒｏｌ  ２００２，７６：１３６９−１３７８．
Ｍｏｚｄｚａｎｏｗｓｋａ  Ｋ，Ｆｅｎｇ  Ｊ，Ｅｉｄ  Ｍ，Ｚｈａｒｉｋｏｖａ  Ｄ，Ｇｅｒｈａｒｄ  Ｗ：Ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ｎｅｕｔｒａｌｉｚｉｎｇ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａ  ｖｉｒｕｓ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｂｙ  ｓｅｒｕｍ  ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ  ２００６，３５２：４１８−４２６．
【０３１３】
以下の実施例は、本発明を限定するのではなく、本発明を説明するために記載するものである。
【０３１４】
実施例１．モノクローナル抗体の親和性。
ＣｅｌｌＳｐｏｔ（商標）技術を用いる一次スクリーニングは本質的に、ビーズと結合した抗原の抗原−抗体相互作用が極めて弱い場合、その抗原が洗浄時に保持されないため、高親和性ｍＡｂの発見に偏ったものである。クローン化ｍＡｂの親和性を測定するセンサー機器をＦｏｒｔｅＢｉｏ（商標）Ｏｃｔｅｔとした。親和性をオン速度とオフ速度の比として測定する場合、オフ速度が極めて小さくなると精度が低下する。より正確な推定値を得るため、センサー表面に固定した抗原に様々な濃度の抗体を流した。一揃いのインフルエンザＢ  ｍＡｂをこの方法で測定したＫＤとともに表５に示す。
【０３１５】
【表８】
2020096618.tif 000009
【０３１６】
Ｙａｓｕｇｉら（段落０００８）により記載されているバイオセンサー（Ｂｉａｃｏｒｅ（商標））で測定した５Ａ７のＨＡに対する親和性（ＫＤ）は約５ｎＭである。本発明のｍＡｂ  ＴＲＬ８３５は結合に関して５Ａ７と競合するが、ＫＤはｍＡｂ  ＴＲＬ８３５の方が強く、表に示されるように０．６ｎＭである。
【０３１７】
実施例２．ｍＡｂによる組換えインフルエンザＢ  ＨＡとの結合。
ＥＬＩＳＡにより抗体結合を判定した。３８４ウェルＥＬＩＳＡプレートをｐＨ７．４のＤＰＢＳ溶液中、１ウェル当たり２０ｎｇのｒＨＡタンパク質でコートした。プレートを４℃で一晩コートした後、０．０１％Ｔｗｅｅｎ２０（ＰＢＳ−Ｔ）を含むＰＢＳで２回洗浄した。次いで、脱脂粉乳の５％ＰＢＳ−Ｔ（Ｍ−ＰＢＳ−Ｔ）溶液でプレートをブロックし、ＰＢＳ−Ｔで２回洗浄した。精製抗体をＰＢＳで希釈し、１ウェル当たり２０ｎｇを用いて各抗原をプローブした。プレートをＰＢＳ−Ｔで５回洗浄し、アルカリホスファターゼとコンジュゲートした二次抗体でプローブした。次いで、プレートをＰＢＳ−Ｔで５回洗浄し、ＡｔｔｏＰｈｏｓ  ＡＰ蛍光基質（Ｐｒｏｍｅｇａ  Ｓ１０００）を用いて発光させた。陰性対照ウェルのバックグラウンドシグナルから蛍光シグナルが発生し始めるまでプレートを連続的に読み取った。
【０３１８】
特定のＥＬＩＳＡアッセイの結果を図３に示す。組換えＨＡのＥＬＩＳＡデータは、複数の抗インフルエンザＢ  ｍＡｂおよび２種類の抗インフルエンザＡのインフルエンザＡおよびインフルエンザＢ株に対する反応性を示している。組換えＨＡのＥＬＩＳＡは３連で実施したものであり、バックグラウンドに対する平均反応倍数が示されている。図３から、抗Ｂ  ｍＡｂのＴＲＬ８０９、ＴＲＬ８１２、ＴＲＬ８１３；ＴＲＬ８３２、ＴＲＬ８４１、ＴＲＬ８４２、ＴＲＬ８４５、ＴＲＬ８４６、ＴＲＬ８４７、ＴＲＬ８４８、ＴＲＬ８４９、ＴＲＬ８５４およびＴＲＬ８５６がそれぞれ、ヤマガタクレードのＢ／フロリダ／０６、Ｂ／マサチューセッツ／１２およびＢ／ウィスコンシン／１０ならびにビクトリアクレードのＢ／ブリスベン／０８、Ｂ／マレーシア／０４およびＢ／ビクトリア／８７を含めた両系統のインフルエンザＢウイルスに対して広い交差反応を示すことがわかる。抗インフルエンザＡ  ｍＡｂのＣＦ４０１（＝ｍＡｂ５３、ＴＲＬ０５３）およびＣＦ４０２（＝ｍＡｂ５７９、ＴＲＬ５７９）は、インフルエンザＡのＨ１（Ａ／カリフォルニア／０９）およびＨ３（Ａ／シドニー／９７）亜型のメンバーに対して反応性を示すが、インフルエンザＢ株に対しては反応性を示さない。
【０３１９】
実施例３．ｍＡｂによるインフルエンザＢウイルスの中和。
抗体を２００ＰＦＵのウイルスと３７℃で１時間インキュベートした。次いで、ＭＤＣＫ細胞にこの混合物を３７℃で１時間吸着させた。プラークアッセイを実施するためにＭＤＣＫ細胞をＡｖｉｃｅｌ含有培地で覆った。２日間インキュベーションした後、プラークを判定した。特定された広域反応性インフルエンザＢ  ｍＡｂは、ヤマガタおよびビクトリアの両系統を高力価で中和することが可能である。１２時間インキュベートした後、細胞を固定し、感染細胞を検出する免疫蛍光法を実施した。データは記載しないが、対照の抗Ｂ  ｍＡｂ５Ａ７はヤマガタおよびマレーシア両系統の株の中和作用を示した。しかし、図４の表８に示されるように、本発明のｍＡｂの方が力価が高かった。
【０３２０】
選択された抗インフルエンザＢ抗体の中和アッセイの結果を抗インフルエンザＢ抗体のＴＲＬ８４５、ＴＲＬ８４８、ＴＲＬ８４９、ＴＲＬ８５４、ＴＲＬ８３２およびＴＲＬ８０９に関して図４に示す。ＩＣ５０は、この特定の中和アッセイでウイルスを阻害する濃度である。ｍＡｂはそれぞれ、ヤマガタ系統およびビクトリア系統それぞれの代表的なメンバーを中和する。この実験には両系統の確定された株を用いたが、ｍＡｂは試験したいずれのＢウイルスも中和した。
【０３２１】
実施例４．マウスインフルエンザ感染症モデルでのｉｎ  ｖｉｖｏ効果。
別途明記する場合を除けば一般に、肺送達モデルを用いてｍＡｂの効果増大を評価した。マウスに１０×ＬＤ５０を感染させ、２４ｈｐｉに鼻腔内経路を介した肺送達により１ｍｇ／ｋｇを投与して治療した。体重および生存率をモニターして相対的効果を評価した。
【０３２２】
図６Ａ〜６Ｄは、感染後第１日にＩＮ経路により１ｍｇ／ｋｇを投与し、感染から最大１４日目までの体重を評価したマウスモデルにおける１０×ＬＤ５０のウイルスに対する本発明の抗インフルエンザＢ  ｍＡｂのｉｎ  ｖｉｖｏ活性を示しており、対照にはＰＢＳ投与マウスおよびウイルス未感染マウスを用いた。感染後１４日間、マウスの体重をモニターし、第０日の初期体重に対するパーセントをプロットした。
【０３２３】
図６Ａは、ＩＮ経路による１ｍｇ／ｋｇのｍＡｂ  ＴＲＬ８４５、ＴＲＬ８４７、ＴＲＬ８４８、ＴＲＬ８４９および５Ａ７が、ビクトリアクレードを代表するＢ／マレーシア／２５０６／０４に感染したマウスを疾患から防御することを示している。
【０３２４】
図６Ｂは、ＩＮ経路による１ｍｇ／ｋｇのｍＡｂ  ＴＲＬ８４５、ＴＲＬ８４７、ＴＲＬ８４８、ＴＲＬ８４９および５Ａ７が、ヤマガタクレードを代表するＢ／フロリダ／０４／２００６に感染したマウスを疾患から防御することを示している。
【０３２５】
図６Ｃは、ＩＮ経路による１ｍｇ／ｋｇのｍＡｂ  ＴＲＬ８４９、ＴＲＬ８４６、ＴＲＬ８５４、ＴＲＬ８５６、ＴＲＬ８４７および５Ａ７が、ビクトリアクレードを代表するＢ／マレーシア／２５０６／０４に感染したマウスを疾患から防御することを示している。
【０３２６】
図６Ｄは、ＩＮ経路による１ｍｇ／ｋｇのｍＡｂ  ＴＲＬ８４９、ＴＲＬ８４６、ＴＲＬ８５４、ＴＲＬ８５６、ＴＲＬ８４７および５Ａ７が、ヤマガタクレードを代表するＢ／フロリダ／０４／２００６に感染したマウスを疾患から防御することを示している。
【０３２７】
実施例５．肺送達によるｉｎ  ｖｉｖｏ効果の増大。
別の送達方法による効果増大の可能性を評価するため、ｍＡｂのｉｎ  ｖｉｖｏ効果を検討した。マウスに１０×ＬＤ５０を感染させ、２４ｈｐｉに腹腔内投与による従来の全身送達を用いて、１０ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇおよび０．１ｍｇ／ｋｇで治療し、鼻腔内経路を介した肺送達により１．０ｍｇ／ｋｇおよび０．１ｍｇ／ｋｇ投与したｍＡｂと比較した。次いで、両者の生存率および体重を比較した。生存率および体重減少（感染の重症度の尺度）を用いて相対的活性を評価した。図５Ａおよび５Ｂには、肺送達による効果増大を示す１つの例としてｍＡｂ５Ａ７が示されている。
【０３２８】
図５Ａは、マウスにおける抗インフルエンザＢ抗体５Ａ７のｉｎ  ｖｉｖｏ活性を、１０×ＬＤ５０のＢ／フロリダ（ヤマガタ系統）に感染させたマウスに５Ａ７を鼻腔内（ＩＮ）投与した場合と腹腔内（ＩＰ）投与した場合のパーセント体重として示したものである。２４ｈｐｉにマウスをＩＮ経路またはＩＰ経路のいずれかによりｍＡｂで治療し、疾患重症度の指標として連日体重を測定し、対照にはＰＢＳ投与マウスおよびウイルス未感染マウスを用いた。感染後１４日間、マウスの体重を連日モニターし、第０日の初期体重に対するパーセントをプロットした。体重減少が３０％を超えるマウスは安楽死させた。ＩＮが１ｍｇ／ｋｇで体重減少を完全に防ぐのに対し、ＩＰ経路による１ｍｇ／ｋｇでは体重がいくぶん減少している。ＩＮ経路で投与すると、ＩＰ経路よりも効率が増大することがわかる。
【０３２９】
図５Ｂは、マウスにおける抗インフルエンザＢ抗体５Ａ７のｉｎ  ｖｉｖｏ活性を、１０×ＬＤ５０のＢ／マレーシア（ビクトリア系統）に感染させ５Ａ７をＩＮ投与した場合とＩＰした場合のパーセント体重として示したものである。２４ｈｐｉにマウスをＩＮ経路またはＩＰ経路のいずれかによりｍＡｂで治療し、疾患重症度の指標として体重を連日測定した。体重減少が３０％を超えるマウスは安楽死させた。ＩＮが１ｍｇ／ｋｇで体重減少を完全に防ぐのに対し、ＩＰ経路による１ｍｇ／ｋｇでは体重がいくぶん減少している。ＩＮ経路で投与すると、ＩＰ経路よりも効率が増大することがわかる。
【０３３０】
実施例６．ｉｎ  ｖｉｖｏ効果は抗インフルエンザＡ群ｍＡｂの存在による影響を受けない。
鼻腔内投与を用いた気道への投与の効果をほかの代替的インフルエンザ抗体で評価した。これまでに、第１群および第２群両方のインフルエンザＡウイルスを中和して効果を示すヒトモノクローナル抗体が単離されている。ヒト抗体Ｍａｂ５３（ＴＲＬ０５３とも表される）は米国特許出願公開第２０１２／００２０９７１号および国際公開第２０１１／１６００８３号に記載されており、第１群および第２群のＨ１、Ｈ９、Ｈ７およびＨ５亜型の中和に効果がある。抗体Ｍａｂ５７９（ＴＲＬ５７９とも表される）は国際公開第２０１３／０８６０５２号に記載されており、Ｈ３およびＨ７の中和に効果がある。本明細書に記載されるように、この２つのｍＡｂを調製および最適化して抗Ｈ１  ＣＦ−４０１（＝ｍＡｂ５３、ＴＲＬ０５３）、抗Ｈ３  ＣＦ−４０２（＝ｍＡｂ５７９、ＴＲＬ５７９）を作製し、本試験に用いた。
【０３３１】
マウスモデルを用いて、Ｍａｂ５７９およびＭａｂ５３抗体のインフルエンザＡウイルス感染症に対する治療効果を検討した。Ｍａｂ５７９はＨ３インフルエンザに対して検討し、Ｍａｂ５３はＨ１インフルエンザに対して検討した。ＩＮ投与とＩＰ投与とを比較し、ＩＮでは１ｍｇ／ｋｇ投与し、ＩＰではその１０倍の１０ｍｇ／ｋｇ投与した。１０×ＬＤ５０のＨ３インフルエンザウイルスＶｉｃ１１に対する治療効果の検討には、感染から２４時間後（２４ｈｐｉ）に抗体Ｍａｂ５７９を投与した（データ不掲載および図１２Ｂ）。１０×ＬＤ５０のＨ１インフルエンザウイルスＣａｌ０９およびＰＲ８に対する治療効果の検討には、感染から２４時間後（２４ｈｐｉ）に抗体Ｍａｂ５３を投与した（データ不掲載および図１１Ｂ）。同じ実験でＩＰ投与を１０倍の用量で実施しても、ＩＮ投与の方がＩＰ投与よりも高い効果が得られた。
【０３３２】
個々の抗Ｂ  ｍＡｂならびにカクテル形式の同ｍＡｂと抗Ｈ１ｍＡｂおよび抗Ｈ３ｍＡｂとの混合物ではともに、同程度の生存率および体重減少のデータが得られており、ｍＡｂが互いの活性に干渉しないことが確認された。
【０３３３】
図７Ａ〜７Ｄは、３種類の抗インフルエンザｍＡｂを共投与しても抗Ｂ  ｍＡｂの効率に干渉しないことを示している。マウスに１０×ＬＤ５０のウイルスを感染させ、２４ｈｐｉに抗Ｈ１  ＣＦ−４０１（＝ｍＡｂ５３、ＴＲＬ０５３）と、抗Ｈ３  ＣＦ−４０２（＝ｍＡｂ５７９、ＴＲＬ５７９）と、抗Ｂ  ＴＲＬ８４５（カクテル１）、抗Ｂ  ＴＲＬ８４７（カクテル２）または抗Ｂ  ＴＲＬ８４９（カクテル３）のいずれかとからなる３ｍｇ／ｋｇの３種ｍＡｂカクテルで治療し、対照にはＰＢＳ投与マウスおよびウイルス未感染マウスを用いた。感染から１４日間、マウスの体重を連日モニターし、第０日の初期体重に対するパーセントをプロットした。
【０３３４】
図７Ａ〜７Ｄは全体として、カクテルがあらゆる季節性インフルエンザ亜型の代表的な株（Ｈ１Ｎ１、Ｈ３Ｎ２およびＢの両系統）に対して、カクテルに含まれる他のｍａｂによる干渉を受けずに、予想されるレベルの防御をもたらすことを示している。
【０３３５】
図７Ａは、１０×ＬＤ５０のＨ１Ｎ１に感染させ、２４ｈｐｉに抗Ｈ１  ＣＦ−４０１と、抗Ｈ３  ＣＦ−４０２と、抗Ｂ  ＴＲＬ８４５（カクテル１）、抗Ｂ  ＴＲＬ８４７（カクテル２）または抗Ｂ  ＴＲＬ８４９（カクテル３）のいずれかとからなる３ｍｇ／ｋｇの３種ｍＡｂカクテルで治療したマウスにおけるｉｎ  ｖｉｖｏ防御を示している。
【０３３６】
図７Ｂは、１０×ＬＤ５０のＨ３Ｎ２に感染させ、２４ｈｐｉに抗Ｈ１  ＣＦ−４０１と、抗Ｈ３  ＣＦ−４０２と、抗Ｂ  ＴＲＬ８４５（カクテル１）、抗Ｂ  ＴＲＬ８４７（カクテル２）または抗Ｂ  ＴＲＬ８４９（カクテル３）のいずれかとからなる３ｍｇ／ｋｇの３種ｍＡｂカクテルで治療したマウスにおけるｉｎ  ｖｉｖｏ防御を示している。
【０３３７】
図７Ｃは、１０×ＬＤ５０のＢ／ヤマガタ系統に感染させ、２４ｈｐｉに抗Ｈ１  ＣＦ−４０１と、抗Ｈ３  ＣＦ−４０２と、抗Ｂ  ＴＲＬ８４５（カクテル１）、抗Ｂ  ＴＲＬ８４７（カクテル２）または抗Ｂ  ＴＲＬ８４９（カクテル３）のいずれかとからなる３ｍｇ／ｋｇの３種ｍＡｂカクテルで治療したマウスにおけるｉｎ  ｖｉｖｏ防御を示している。
【０３３８】
図７Ｄは、１０×ＬＤ５０のＢ／ビクトリア系統に感染させ、２４ｈｐｉに抗Ｈ１  ＣＦ−４０１と、抗Ｈ３  ＣＦ−４０２と、抗Ｂ  ＴＲＬ８４５（カクテル１）、抗Ｂ  ＴＲＬ８４７（カクテル２）または抗Ｂ  ＴＲＬ８４９（カクテル３）のいずれかとからなる３ｍｇ／ｋｇの３種ｍＡｂカクテルで治療したマウスにおけるｉｎ  ｖｉｖｏ防御を示している。
【０３３９】
実施例７．ＰｅｐＳｃａｎ（商標）を用いた抗Ｂ  ｍＡｂのエピトープマッピング。
Ｐｅｐｓｃａｎ  ＣＬＩＰＳ（商標）技術を用いて、インフルエンザＢ赤血球凝集素のストーク領域のセグメントに対応する様々な直鎖状ペプチドおよび制約を受けたペプチドを固定化したものを様々な抗Ｂ  ｍＡｂとの結合に関してスコア化することにより、抗Ｂ  ｍＡｂのエピトープをマッピングした。ビクトリア系統およびヤマガタ系統の両方の前駆体であることから、インフルエンザＢ株であるＢ  Ｌｅｅのストーク配列を選択した。ｍＡｂと結合するペプチドをエピトープとみなす。被験ｍＡｂそれぞれについて、不連続エピトープの固有のパターンを明らかにした。その結果を図８および９にまとめる。図８は、Ｂ／Ｌｅｅ／１９４０／ＨＡタンパク質（配列番号２９１）のＰＥＰＳＣＡＮ（商標）により作成したペプチドアレイを示している（上パネル）。Ｂ／Ｌｅｅ／１９４０／ＨＡタンパク質の影を付けた領域は、ペプチドアレイの作成に用いたａａ＿１５−６５（配列番号２９２）、ａａ＿３００−３５９（配列番号２９３）およびａａ＿３６２−４８１（配列番号２９４）の残基に対応している。表（下パネル）は、ｍＡｂ５Ａ７エピトープ１−ａａ＿３３３−３３８（配列番号３０４）、エピトープ２−ａａ＿３４２−３４６（配列番号３０５）およびエピトープ３−ａａ＿４５７−４６３（配列番号３０６）；ｍＡｂ  ＴＲＬ８４５エピトープａａ＿４５５−４６３（配列番号３０７）；ＴＲＬ８４８エピトープ１−ａａ＿６４−７１（配列番号３０８）；エピトープ２−ａａ＿３３６−３４８（配列番号３０９）；エピトープ３−ａａ＿４２４−４２８（配列番号３１０）；ｍＡｂ８４９エピトープ１−ａａ＿３１７−３２３（配列番号３１１）、エピトープ２−ａａ＿３４４−３４９３１２）、エピトープ３−ａａ＿３７８−３８３（配列番号３１３）；ｍＡｂ８５４エピトープ１−ａａ＿４５７−４６３（配列番号３１４）を示している。右下の図には、ＨＡのストーク上にその領域が濃灰色で示されている。
【０３４０】
図９は、ＨＡタンパク質のストークに沿ったＰＥＰＳＣＡＮ（商標）解析によるエピトープマッピングを示している。影を付けた領域は、各ｍＡｂが結合するエピトープを表している。ｍＡｂのＴＲＬ８４８、ＴＲＬ８４５、ＴＲＬ８５４およびＴＲＬ８４９は、ＨＡのストークに沿って部分的に重複する不連続エピトープを認識する。公開されている配列に由来する対照ｍＡｂ５Ａ７では、ほぼ同じであるが固有のエピトープが得られた。
【０３４１】
実施例８．ｍＡｂのｉｎ  ｖｉｖｏ発現。
いくつかの実施形態では、本発明のｍＡｂはｉｎ  ｖｉｖｏ発現を目的とするものである。これまで、ｍＡｂの遺伝情報を宿主細胞内に導入してｍＡｂをｉｎ  ｓｉｔｕ産生させる送達システムがいくつか記載されている。一実施形態では、Ｄａｖｉｄ  Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ研究室：Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  １０３（３１）：１１４７９−１１４８４（２００６）により記載されているように、表面に組織標的化抗体と結合した膜融合タンパク質を含むレンチウイルス粒子内にコードＤＮＡを封入する。標的化抗体はＣＤ２０と結合して、例えば、ベクターをＢ細胞に優先的に送達し、抗体産生を最適化する。あるいは、Ｊｏｈｎｓｏｎ，Ｐ．Ｒ．ら，Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ（２００９）１５：９０１−９０６により記載されているように、ＡＡＶベクター（アデノ随伴ウイルス）を用いる。その他の方法としては、コードｍＲＮＡをリポソームまたは脂質粒子内に封入して細胞内に取り込ませる方法が挙げられる。
【０３４２】
実施例９．融解曲線アッセイ。
ＰＢＳ中２ｕｇ／ｍＬの濃度で、ＰＣＲ  ＳｔｅｐＯｎｅ  Ｐｌｕｓ（商標）機器を１．５８℃／分で１５℃から９９℃に加熱し、連続的に蛍光を測定して、融解曲線アッセイを実施した。図１０Ａ〜１０Ｆは、ｍＡｂ  ＴＲＬ８４５、ＴＲＬ８４７、ＴＲＬ８４８、ＴＲＬ８４９およびＴＲＬ８５４の融解曲線アッセイを示している。各ｍＡｂは高い熱安定性を示した。図１０ＡはＴＲＬ８４５の融解曲線を示しており、２つの融解温度（Ｔｍ１、Ｔｍ２）がそれぞれ５８．３℃および６８．７℃にみられる。図１０Ｂは、図１０Ａおよび図１０Ｃ〜１０Ｆにそれぞれ示されるｍＡｂ  ＴＲＬ８４５、ＴＲＬ８４７、ＴＲＬ８４８、ＴＲＬ８４９およびＴＲＬ８５４の融解温度（Ｔｍ）の表を示している。融解温度が２つ（Ｔｍ１、Ｔｍ２）みられたのは、これらのｍＡｂのＦｃドメインとＦａｂドメインが別個に変性したことによるものと思われた。図１０ＣはＴＲＬ８４７の融解曲線を示しており、融解温度（Ｔｍ１）は７０．３℃である。図１０ＤはＴＲＬ８４８の融解曲線を示しており、融解温度（Ｔｍ１）は７０．１℃である。図１０ＥはＴＲＬ８４９の融解曲線を示しており、２つの融解温度が（Ｔｍ１、Ｔｍ２）それぞれ７０℃および８１．８℃にみられる。図１０ＦはＴＲＬ８５４の融解曲線を示しており、２つの融解温度（Ｔｍ１、Ｔｍ２）が５９．７℃および６８．９℃にみられる。配列番号１７／１８のＨＣ／ＬＣアミノ酸配列を含む抗体ＴＲＬ０５３および配列番号２７／２８のＨＣ／ＬＣアミノ酸配列を含むＴＲＬ５９７ではそれぞれ、表６に示す融解温度がみられた。
【０３４３】
【表９】
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【０３４４】
一部の抗体で融解温度が２つ（Ｔｍ１、Ｔｍ２）みられたのは、そのｍＡｂのＦｃドメインとＦａｂドメインが別個に変性したことによるものと思われた。したがって、特に本明細書に提供される組合せおよび組成物に使用する抗体は安定なものであり、融解温度が５５℃を上回り、いくつかの場合には６５℃を上回る。
【０３４５】
実施例１０．抗インフルエンザｍＡｂは経肺経路で送達すると防御作用を示す。
Ｈ１Ｎ１感染症の治療にＣＦ−４０１（ｍＡｂ０５３）とノイラミニダーゼ阻害剤オセルタミビルとの組合せが及ぼす効果を検討するため、マウスを３×ＬＤ５０のＨ１Ｎ１ウイルスで攻撃し、第４日目に、１ｍｇ／ｋｇのｍＡｂ  ＣＦ−４０１の単回鼻腔内投与、１０ｍｇ／ｋｇ、１日２回、４日間連日の経口オセルタミビル治療または両者の組合せで治療した。図２４に示されるように、１ｍｇ／ｋｇのＣＦ−４０１の単回投与で治療した場合、１００％のマウスが攻撃後も生存した。標準治療のオセルタミビルは、感染からこれほど遅い時点で投与すると防御作用は示さない（生存率０％）が、ＣＦ−４０１  ｍＡｂ療法と組み合わせた場合、ｍＡｂ療法単独に比してさらに体重減少が抑えられた。図２４に示される結果は、感染から４日後に１ｍｇ／ｋｇのＣＦ−４０１の単回投与で治療すると、１００％のマウスが致死量のＨ１Ｎ１による攻撃後も生存するというものである。標準治療のＴａｍｉｆｌｕを投与しても防御作用は示さないが、ＣＦ−４０１  ｍＡｂ療法に加えると、追加で体重減少が抑えられる。Ｔａｍｉｆｌｕは、第４日から第８日まで１日２回、１０ｍｇ／ｋｇで経口投与した。データは、標準治療（Ｔａｍｉｆｌｕ）にｍＡｂ療法を加えると、遅い時点で投与しても効果が得られることを示している。
【０３４６】
抗インフルエンザｍＡｂは経肺経路で投与すると防御作用を示す。いくつかの実施形態では、本発明のｍＡｂ療法と他の抗ウイルス治療薬、例えばノイラミニダーゼ阻害剤（例えば、オセルタミビル［Ｔａｍｉｆｌｕ（商標）］、ザナミビル［Ｒｅｌｅｎｚａ（商標）］）、ＲＮＡポリメラーゼ阻害剤（例えば、ファビピラビル、ＶＸ−７８７）、免疫調節薬（例えば、吸入インターフェロンベータ１ａ）、宿主細胞標的化剤（例えば、Ｆｌｕｄａｓｅ（商標）、Ｒａｄａｖｉｒｓｅｎ（商標））、イオンチャネル阻害剤（例えば、アマンチジン）をはじめとする抗ウイルス剤などとを組み合わせることにより、効果が改善され得る。
【０３４７】
実施例１１．中和抗体は鼻腔内投与で効果が得られる。
ＩＰ経路により投与した中和抗体および非中和抗体がともに致死性感染症の治療および予防に同等の効果を示すことから、全身送達した抗体の治療効果は、単に中和能に依存するだけでない。中和抗体および非中和抗体をＩＰ投与したところ、同等の効果が得られた。このことから、全身送達では治療効果に大いに寄与するのかどうかという疑問が浮上する。非中和抗体をＩＶ経路またはＩＰ経路により送達したところ、効果に有意な差は認められなかった（データ不掲載）。
【０３４８】
これに対し、中和抗体をＩＮ送達したとこと、その治療効果は全身送達に比して有意に増大した（図１１Ａ）。確立された非中和抗体は同様の治療効果増大を示さないことから、この治療効果を高める作用は中和抗体に特有のものである。中和抗体をＩＮ送達すると、ＩＰ送達の場合とは異なり、非中和抗体に比して有意な治療利益が得られる。非中和抗体がＩＮで治療効果の改善を示さなかったことから、ＩＮ療法によるこの効果増大は抗体の中和能と関係がある。ＩＮによる効果増大は認識範囲の広いＨ１ウイルスＣＡ６２６１に対する抗体（ＨＡ２サブユニットの短いαへリックスと結合するＩｇＧ２ａ抗体）により示されている（図１１Ａ）。本発明者らは、ＩＮが効果に及ぼす影響をさらに検証して、別の交差防御抗体ＣＲ９１１４を評価し、それがＩＮで極めて高い効果を示すことを明らかにした（データ不掲載および図２４）。ＣＲ９１１４をＩＶ投与すると、ＨＡ茎部の保存されたエピトープと結合し、インフルエンザＡおよびインフルエンザＢウイルスによる致死性攻撃に対する防御作用を示す（Ｄｒｅｙｆｕｓ  Ｃら（２０１２）Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓ  ９  Ａｕｇｕｓｔ  ２０１２  １０．１１２６／ｓｃｉｅｎｃｅ．１２２２９０８）。
【０３４９】
本発明者らはこれまで、異なる抗体アイソタイプを有する抗体に関してＩＮ効果に有意差は認めていない。ＩＰ投与ではアイソタイプ間に差が認められており、エフェクター機能が関連している可能性が示唆された。このほか、単一の中和抗体では、その標的であるＨ１またはＨ３ウイルスの複数の株に対する感染阻止効果が認められており、効果が株に特異的なものでも、株が限定されるものでもないことが示された。したがって、インフルエンザウイルスに対する中和抗体には、ＩＮ投与が実行可能でかつ一層効果的な代替法となる。
【０３５０】
実施例１２．中和Ｆａｂは鼻腔内投与で効果が得られる。
Ｆｃの除去がＩＰまたはＩＮ投与した中和Ｆａｂおよび非中和Ｆａｂの治療効果を打ち消すかどうかを評価する試験を実施した。図２５からわかるように、モデルＦａｂ（ＣＡ６２６１抗体Ｆａｂ）のＩＰ投与は、１０ｍｇ／ｋｇ以下でＨ１ウイルスに対する治療効果が得られない。Ｆａｂ  ＩＰで治療したマウスはいずれも、ＰＢＳで治療したマウスと同じく感染症に屈した。これに対し、用量１０ｍｇ／ｋｇおよび１ｍｇ／ｋｇの中和ＦａｂでＩＮ治療したマウスは、致死性感染症で死亡することはなかった（図２５）。ＩＮ投与した用量はいずれも（０．１ｍｇ／ｋｇでも）、ＩＰ投与したいずれの用量よりも高い効果を示した。同じ実験でＣＡ６２６１  ＦａｂをＩＮとＩＰまたはＩＶとで比較してもほぼ同じ結果が観察され、この場合、Ｆａｂ  ＣＡ６２６１はＩＰまたはＩＶのいずれで投与しても防御作用は示さなかったが、同じ用量（５ｍｇ／ｋｇ）をＩＮ投与すると有意な効果を示した（マウスの体重が９５％以上で維持された）（データ不掲載）。以上のデータから、中和抗体では、ウイルス感染症の阻止または治療にＦａｂの鼻腔内投与が効果を示すことがわかる。データはさらに、Ｆａｂが無効であったことから、全身Ｍａｂ送達で治療効果を得るにはＦｃエフェクター機能を必要とすることを示している。
【０３５１】
非中和抗体のモデルＦａｂは、ＩＮまたはＩＰのいずれの経路で投与しても治療効果が保持されなかった。Ｈ３ウイルスに感染させたマウスを例示的先行技術抗体ＣＡ８０２０（中和抗体）および非中和抗体の精製ＦａｂのＩＮ送達により治療した（データ不掲載）。中和Ｆａｂは治療効果を発揮することができるのに対し、非中和Ｆａｂは致死性攻撃からマウスを防御することができない。非中和抗体の抗体フラグメント、特にＦａｂは、ＩＮ投与しても治療効果がみられない。
【０３５２】
実施例１３．ＩＮ送達の方がＩＰ送達よりも効力が１０〜１００倍高い。
中和抗体の鼻腔内（ＩＮ）送達の方が腹腔内（ＩＰ）送達よりも効力が１０〜１００倍高い。マウスに１０×ＬＤ５０のＰＲ８ウイルス（Ｈ１ウイルス）を感染させ、２４ｈｐｉに抗体で治療した（図１１Ａ）。中和抗体ＣＡ６２６１を１０倍連続希釈し、ＩＮ経路またはＩＰ経路のいずれかにより投与した（図１１Ａ）。体重減少によって図示されるように、いずれの希釈でも、ＩＮ経路により治療したマウスの方が疾患重症度が低く、致死性感染から１００％防御された。これと比較して、ＩＰで治療したマウスでは、最高用量（１０ｍｇ／ｋｇ）にのみ一時的な体重減少と致死性感染からの保護とがみられた。ＩＰで投与した場合、これより低い希釈ではいずれも、マウスは防御されなかった。これに対し、用量０．１ｍｇ／ｋｇでＩＮ治療した場合、全個体に一時的な体重減少および生存がみられた。ＩＮ送達により用量１０ｍｇ／ｋｇおよび１ｍｇ／ｋｇで治療したマウスは、感染後のいずれの時点でも検出可能な体重減少が抑制された。ＩＰ経路により投与した抗体ではいずれの用量でも、ある程度の体重減少がみられ、感染後も生存したのは最高用量１０ｍｇ／ｋｇで治療したマウスのみであった。
【０３５３】
本発明者らは、中和抗体の鼻腔内送達が同じようにＨ３ウイルスに対する治療効果を増大させることを確認した。マウスにＨ３ウイルスを感染させ、２４ｈｐｉに治療した（図１２Ａ）。中和抗体ＣＡ８０２０を１０倍連続希釈し、ＩＮまたはＩＰにより投与した。Ｈ１ウイルスを用いた本発明者らの試験で観察されたように、ＩＮ経路により投与した抗体はいずれの希釈でも、Ｈ３ウイルスに対する生存率が１００％となり、ＩＰ経路により投与した抗体よりも体重減少が少なかった。
【０３５４】
以上のデータをまとめると、ＩＮで送達して治療効果を増大させるには中和作用が不可欠であることがわかる。さらに、中和抗体および非中和抗体ともに同レベルの効果が観察されることから、全身送達した抗体の治療効果は中和作用に依存しない。この観察結果を裏付けるように、中和ＦａｂをＩＰ投与すると治療効果が打ち消されるが、中和ＦａｂをＩＮ送達すると効果がみられる。ＩＮ投与した中和Ｆａｂは、ＩＰ投与と比較した効果の改善が、その完全Ｍａｂ対応物のＩＮ送達とほぼ同じである。
【０３５５】
実施例１４．ＩＮ抗体による予防試験
感染後に中和抗体を鼻腔内投与することにより著明な効果が得られたため、ウイルスによる感染を予防するために感染前に鼻腔内投与した場合の効果を評価する試験に着手した。これらの試験は、鼻腔内投与が、個体がインフルエンザウイルスに曝露した場合に適用可能であるかどうか、また、曝露した集団もしくは曝露するリスクのある集団内での伝染を予防もしくは抑制するのに有効な方法であるのかどうか、または感染症もしくは疾患が全般的により大きな健康上のリスクとなる患者に臨床的に有効な方法であるのかどうかを評価し明らかにするためのものである。マウス動物モデルを対象に、インフルエンザウイルス感染の数日前に実施する第１群（Ｈ１）抗体ＣＡ６２６１の投与を評価した。感染攻撃の３日、４日、５日、６日および７日前のＣＡ６２６１の投与を評価し、様々な用量のＩＮ投与とＩＰ投与とを直接比較した。
【０３５６】
最初の試験では、抗体ＣＡ６２６１をＩＮまたはＩＰ投与し、次いで、投与量３×ＬＤ５０のＨ１  ＰＲ８ウイルスでマウスを攻撃した。図１３は、ウイルス感染の３日または４日前に予防的にＩＮ投与およびＩＰ投与した試験を示している。３×ＬＤ５０のＰＲ８で攻撃する３日または４日前に抗体ＣＡ６２６１をＩＮまたはＩＰで投与した。ＣＡ６２６１抗体はＩＮ（０．１ｍｇ／ｋｇ）またはＩＰ（０．１ｍｇ／ｋｇおよび１ｍｇ／ｋｇ）で投与した。感染の最大４日前（−４ｄｐｉ）のＩＮ投与（０．１ｍｇ／ｋｇで評価した）では、マウスがウイルス攻撃から防御された。感染の３日または４日前に同じ用量（０．１ｍｇ／ｋｇ）でＩＰ投与した場合、効果は全くみられなかった。感染の３日または４日前のＩＰ投与で効果がみられたのは１ｍｇ／ｋｇであった。ＩＮ（０．１ｍｇ／ｋｇ）投与とＩＰ（１ｍｇ／ｋｇ）投与とを比較したところ、−３ｄｐｉおよび−４ｄｐｉともに、ＩＰの１０分の１のＩＮ用量でＩＰよりも高い効果がみられた。
【０３５７】
次いで、ウイルス感染の５日、６日および７日前での予防効果を評価した。１０倍の用量のＩＰ用量をＩＮ投与と比較した。３×ＬＤ５０のＨ１インフルエンザウイルスＰＲ８で攻撃する５日前、６日前または７日前のいずれかに抗体ＣＡ６２６１をＩＰ（１ｍｇ／ｋｇ）またはＩＮ（０．１ｍｇ／ｋｇ）で投与した（データ不掲載）。比較のため、ほかにもＴａｍｉｆｌｕ投与（１０ｍｇ／ｋｇで１日２回、５日間の経口投与）を評価した。−５ｄｐｉに０．１ｍｇ／ｋｇのＩＮ投与で効果が示された。ウイルス攻撃の６日または７日前に０．１ｍｇ／ｋｇでＩＮ投与したマウスでは死亡例がみられた。１０倍用量（１０ｍｇ／ｋｇ）のＩＰは攻撃５日、６日または７日前で効果がみられた。攻撃の５日前に抗体を０．１ｍｇ／ｋｇでＩＮ投与した場合、少なくとも、攻撃の７日前に１０倍の用量１ｍｇ／ｋｇでＩＰ投与した場合と同等の効果みられた。
【０３５８】
次いで、さらに高い１ｍｇ／ｋｇの用量のＩＮをウイルス攻撃の５日、６日または７日前で評価した。図１４は、３×ＬＤ５０のウイルスＰＲ８による攻撃の５日、６日または７日前に抗体ＣＡ６２６１をＩＰまたはＩＮで投与してＩＮ投与とＩＰ投与とを比較した試験が示されている。抗体を１ｍｇ／ｋｇでＩＮ投与したところ、ウイルス攻撃の最大７日前で効果がみられ、各場合とも、ＩＮの方が同じ量の抗体をＩＰで投与した場合よりも高い効果が認められた。実際、ＩＰ投与の方がウイルス攻撃に近い時点で実施された場合でも、いずれの時点（攻撃の５日、６日または７日前）でもＩＮ投与の方がいずれのＩＰ投与よりも高い効果が認められた。いずれの場合も、Ｔａｍｉｆｌｕよりも抗体の方が高い効果が認められた。
【０３５９】
以上の試験は、予防的防御にはＩＰ投与よりもＩＮ投与の方が優れていることを示している。抗体を０．１ｍｇ／ｋｇでＩＮ投与すると、感染の最大５日前（−５ｄｐｉ）で攻撃（３×ＬＤ５０）に対する防御がみられる。同じ用量０．１ｍｇ／ｋｇをＩＰで投与すると、ウイルス感染の３日〜７日前のいずれでも、（同じ投与量３×ＬＤ５０のウイルスに対する）マウスの防御がみられない。さらに高い用量で抗体をＩＮ投与すると（１ｍｇ／ｋｇを評価した）、ＩＮで投与された抗体は、最大で少なくとも７日前に投与しても攻撃に対する防御を示し得る。７日以上前のＩＮ投与は評価していないが、効果があるものと思われる。
【０３６０】
感染後の反復投与でも効果が得られ、数時間（８時間、３２時間、５２時間）の間隔を空けて複数回投与すれば、より低い用量で効果が得られる（データ不掲載）。同じように、ウイルスに感染または曝露する前に反復投与しても、効果が認められることが予想され、より低いＩＮ用量での予防的投与が可能であると思われる。
【０３６１】
より高い投与量でのウイルス攻撃、具体的には１０×ＬＤ５０のＨ１ウイルスＰＲ８による攻撃の数日前にＣＡ２６２１抗体を投与して、予防効果を評価した。１０×ＬＤ５０のＰＲ８  Ｈ１亜型ウイルスによる攻撃の３日または４日前、マウスに０．１ｍｇ／ｋｇのＣＡ６２６１抗体をＩＮまたはＩＰのいずれかで投与した（データ不掲載）。ウイルス攻撃の３日または４日前に０．１ｍｇ／ｋｇの抗体をＩＰ投与しても全く効果はみられず、ＩＰで治療したマウスは、治療を実施しなかったマウスと同じくウイルス感染症に屈した。これに対し、高力価ウイルスによる攻撃の３日前または４日前のいずれかに０．１ｍｇ／ｋｇの抗体を鼻腔内に投与したマウスは感染から防御された。
【０３６２】
抗体を１ｍｇ／ｋｇでＩＮまたはＩＰ投与して、高力価攻撃の５日、６日および７日前の抗体投与を評価した（図１５）。この試験では、抗体を（鼻腔内投与により）気道に投与したマウスのみがウイルス攻撃後もすべて生存していた。ウイルス攻撃の５日、６日または７日前に１ｍｇ／ｋｇの抗体を投与して治療したマウスは十分に防御されず、感染症により死亡した。Ｔａｍｉｆｌｕには防御効果が全く認められなかった。ウイルス感染の５日前または６日前のいずれかに０．１ｍｇ／ｋｇの抗体を鼻腔内投与して治療したマウスは、ウイルス攻撃後も未感染の対照マウスとほぼ同程度に生存した。
【０３６３】
したがって、抗インフルエンザ抗体の鼻腔内投与は、抗体感染の予防に効果のあるプロトコルおよび方法である。ウイルス感染の最大少なくとも７日前に鼻腔内投与したインフルエンザ中和抗体は、ウイルス攻撃に対する防御作用を示した。最大少なくとも７日前に鼻腔内投与することにより得られる防御作用は、ヒトがウイルスに曝露したときに常識的に予想されるよりも高い高力価のウイルスでも示された。以上の試験で観察された防御のレベルは、鼻腔内への抗体投与がヒト対象をウイルス攻撃から防御し、ウイルス伝染を阻止または抑制するのに有効であることを示している。抗体の経肺投与は、全身投与が無効である条件下およびそのような場合でも、防御作用を示す。
【０３６４】
実施例１６．インフルエンザの治療または予防のための組合せ。
流行が予想されるあらゆるインフルエンザを単一の用量または用量の組合せで治療または予防することを可能にするためには、３種類の主要なインフルエンザ株（Ｈ１、Ｈ３およびＢ）と交差反応を示す抗体の組合せが望ましい。このような組合せがあれば、抗体または抗体混合物を投与する前に感染ウイルスを特徴付ける必要性を回避することが可能になる。インフルエンザ株を決定する診断には、利用可能な臨床検査施設が必要であり、通常、最低１２〜２４時間の作業時間を要するため、しかるべき方向性の治療法を選択する前にインフルエンザ株を決定する必要がある場合、治療に好ましくない遅れが生じる。インフルエンザＡおよびインフルエンザＢ株に対して広域反応性を示す組成物があれば、治療前に株の予備診断を実施する必要がなくなる。さらに、抗体、特に中和抗体には、予防にのみ作用し、効果を発揮するまでに通常数週間を要する予防接種では得られない即時の治療効果がある。
【０３６５】
本発明者らは、インフルエンザＡ型およびＢ型をカバーする治療用のモノクローナル抗体（ｍＡｂ）の組合せを評価し特定しようとした。特に、適切で価値のある組合せとしては、Ａ型第１群、Ａ型第２群およびインフルエンザＢウイルスに効果を示す抗体が挙げられる。これにより、重要な流行中のインフルエンザに効果を示す組合せが得られ、ウイルスの型の診断評価または評価を実施する前に、または実施せずに投与することができる。治療用の組合せの基準としては、効果のある中和抗体であること；組み合わせて、重要な流行中のインフルエンザウイルス、特にインフルエンザＡ  Ｈ１およびＨ３ならびにインフルエンザＢに対して効果を示す抗体であること；組み合わせて、インフルエンザＡまたはインフルエンザＢのいずれかの攻撃に対して効果を示すこと；抗体間に顕著な相互作用も競合もみられないこと；ＩＰ、ＩＶおよびＩＮ投与または気道経路による投与のほか、全身投与でも効果のある抗体であることが挙げられる。カクテルに含まれるｍＡｂは、容易に共製剤化が可能なように生物物理学的特性に適合性があるのが好ましい。ｐＩ値が一致するのが望ましいと思われる。治療用の組合せは、患者または対象のインフルエンザを診断評価することも、特徴付けることも必要とせずに、任意の重要な流行中のインフルエンザウイルスに対して効果を発揮する。ヒトモノクローナル抗体または少なくともヒト可変領域を含む抗体、特に少なくとも重鎖および軽鎖にヒト相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む抗体が好ましく、これを用いる。
【０３６６】
適切な抗インフルエンザＡ抗体を評価した。抗Ｈ１抗体ＴＲＬ０５３（ＭＡｂ５３）は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏでＨ１を含めた第１群インフルエンザウイルスの中和に効果がある。ＴＲＬ−０５３はヒト抗体ファージライブラリーから単離されたものであり、米国特許出願公開第２０１２／００２０９７１号および国際公開第２０１１／１６００８３号に記載されており、第１群および第２群のＨ１、Ｈ９、Ｈ７およびＨ５亜型の中和に効果がある。ＴＲＬ０５３は、インフルエンザＨ１およびＨ５ウイルス株に対してｎＭまたはサブｎＭの範囲の結合親和性Ｋｄを示し、等電点（ｐＩ）が８．５４である。ＴＲＬ０５３の重鎖および軽鎖可変領域のＣＤＲ配列については、上記の可変領域全体のアミノ酸配列とともに添付の配列表に記載されている。ＴＲＬ０５３のＨ１ウイルスＰＲ８に対する効果をｉｎ  ｖｉｖｏで評価した（図１１Ｂ）。マウスに１０×ＬＤ５０のＨ１インフルエンザウイルスを接種し、２４ｈｐｉに１０ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇおよび０．１ｍｇ／ｋｇの抗体ＴＲＬ０５３（ＭＡｂ５３）をＩＮまたはＩＰ投与して治療した。感染から１４日間、体重を連日モニターした。ＴＲＬ０５３はＩＰまたはＩＮで効果を示すが、ＩＮ投与したＴＲＬ０５３の方がＩＰよりも高い効果を示した。ＴＲＬ０５３は、ＩＰでは用量１０ｍｇ／ｋｇでのみ多少効果がみられた。この試験のＩＮは、用量１０ｍｇ／ｋｇおよび１ｍｇ／ｋｇで効果がみられた。
【０３６７】
抗Ｈ１抗体ＴＲＬ５７９（ＭＡｂ５７９）は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏで第２群インフルエンザウイルスの中和に効果がある。ＴＲＬ−５７９はヒト抗体ファージライブラリーから単離されたものであり、国際公開第２０１３／０８６−５２号に記載されており、Ｈ３およびＨ７の中和に効果がある。ＴＲＬ５７９は、インフルエンザＨ３およびＨ７ウイルス株に対してｎＭまたはサブｎＭの範囲の結合親和性Ｋｄを示し、等電点（ｐＩ）は８．６０である。ＴＲＬ−５７９の重鎖および軽鎖可変領域のＣＤＲ配列については、上記の可変領域全体のアミノ酸配列とともに添付の配列表に記載されている。ＴＲＬ５７９のＨ３ウイルスＶｉｃ／１１に対する効果を評価した（図１２Ｂ）。動物に１０×ＬＤ５０のウイルスを接種し、２４ｈｐｉに１０ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇおよび０．１ｍｇ／ｋｇの抗体ＴＲＬ５７９をＩＮまたはＩＰ投与して治療した。感染から１４日間、体重を連日モニターした。ＴＲＬ５７９はＩＰまたはＩＮで効果を示すが、ＩＮ投与したＴＲＬ５７９の方がＩＰ投与よりも高い効果を示した。ＴＲＬ５７９は、ＩＰでは用量１０ｍｇ／ｋｇでのみ多少効果がみられた。この試験のＩＮは、用量１０ｍｇ／ｋｇおよび１ｍｇ／ｋｇで効果がみられた。
【０３６８】
効果のある組合せに適した抗Ｂ抗体を得るため、インフルエンザＢに対する抗体を単離した。高親和性結合抗体を特定するためのもので、２０１４年２月４日に出願された米国特許出願第６１／９３５，７４６号に最初に記載されたＣｅｌｌＳｐｏｔ（米国特許第７，４１３，８６８号）を用いて、インフルエンザの赤血球凝集素タンパク質（ＨＡ）と結合し、Ｂ／ヤマガタクレードおよびＢ／ビクトリアクレードのインフルエンザＢウイルスに効果を示すヒト抗体を特定した。Ｂ特異的抗体およびその配列、具体的には様々なＢ抗体のモノクローナル抗体重鎖および軽鎖ＣＤＲ配列が配列表に列挙されている。ＩＭＧＴ基準（ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ  ｄａｔａｂａｓｅ  ｉｍｇｔ；Ｅｈｒｅｎｍａｎｎ  Ｆ．，Ｋａａｓ  Ｑ．およびＬｅｆｒａｎｃ  Ｍ．−Ｐ．（２０１０）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．，３８，Ｄ３０１−３０７）によって決定された重鎖および軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が示されている。
【０３６９】
同一の重鎖定常領域配列を有するＢ抗体を構築し単離した。定常領域をヒト細胞での発現用にコドン最適化した。重鎖ＩｇＧ１定常領域の配列は上に記載されている（配列番号２９７）。カッパ軽鎖抗体（ＴＲＬ８４５、８４６、８４７、８０９、８４９および８５４）の軽鎖定常領域は上に記載されている（配列番号２９５）。抗体ＴＲＬ８４８および８３２は以下に示すラムダ軽鎖定常領域を有する（配列番号２９６）。
【０３７０】
Ｂ抗体の重鎖および軽鎖可変領域の配列は上および添付の配列表に記載されている。
【０３７１】
実施例１７．Ｂ抗体の特徴付け。
広範囲に効果を示す抗体の組合せに適したモノクローナル抗体を特定し特徴付けるため、インフルエンザＢに対するヒト抗体のインフルエンザＢウイルスに対する効果を評価した。図１６に、赤血球凝集抑制、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの古典的中和および様々な抗Ｂ抗体のｉｎ  ｖｉｖｏ投与を評価した評価試験の結果を表にまとめて示す。抗体はＢウイルスのヤマガタ系統およびビクトリア系統の両方に対して評価した。ｉｎ  ｖｉｖｏの結果は、１０×ＬＤ５０のウイルスを接種し、２４ｈｐｉに示されるＴＲＬ抗体を１ｍｇ／ｋｇでＩＮ投与した動物の初期体重に対するパーセントを評価した３つの異なる試験を各場合についてまとめたものである。動物の体重は１４日間観察したものであり、観察された最も少ない体重が示されている。ＴＲＬ８４５、ＴＲＬ８４７、ＴＲＬ８４８、ＴＲＬ８４９およびＴＲＬ８５４はそれぞれ、ｉｎ  ｖｉｖｏでの効果を評価する期間全体を通じて動物の初期体重の少なくとも９６％を維持する効果を示した。
【０３７２】
Ｂ抗体のインフルエンザウイルスに対する親和性を評価し、相対的効果の指標の一側面とした。特定のデータを図１７に示す。抗体の等電点が記載されている。ＴＲＬ０５３の等電点（ｐＩ）は８．５４であり、ＴＲＬ５７９のｐＩは８．６０である。Ｂ／フロリダ（ヤマガタ系統）およびＢ／マレーシア（ビクトリア系統）インフルエンザウイルス株に対する親和性を評価し、ｎＭで表したＫＤを表にまとめた。Ｂ抗体は、Ｂ／フロリダ株に対してｎＭまたはサブｎＭの親和性を示す。Ｂ／マレーシアに対するＴＲＬ８４５、ＴＲＬ８４７、ＴＲＬ８４８、ＴＲＬ８４９およびＴＲＬ８５４の親和性はそれぞれ、各場合ともサブｎＭ（１．０ｎＭ未満）であった（データ不掲載）。
【０３７３】
ヤマガタ系統およびビクトリア系統をそれぞれ代表するＢ／フロリダウイルスまたはＢ／マレーシアウイルスに感染させた動物を対象にモノクローナルインフルエンザＢ抗体の効果を検討した。１０×ＬＤ５０のウイルスを用いて、２４ｈｐｉに１ｍｇ／ｋｇでＩＮ投与することにより、抗体を評価した。Ｂ／フロリダウイルスに対する効果に関する結果を図１８、図１９および図２２Ｂに示す。Ｂ／マレーシアウイルスに対する効果に関する結果を図２０、図２１および図２２Ａに記載する。ＩＮ投与した抗インフルエンザＢ抗体は、投与量１０×ＬＤ５０のＢ系統ウイルスによる感染に対してともに効果を示し、抗体で治療した感染動物の体重が１００％維持された抗体もいくつかみられた。ｉｎ  ｖｉｖｏでの効果および親和性試験に基づき、抗体ＴＲＬ８４７、ＴＲＬ８４５、ＴＲＬ８４９、ＴＲＬ８４８、ＴＲＬ８４、ＴＲＬ８５４のほかにもＴＲＬ８０９およびＴＲＬ８３２が好ましい抗体として選択される。
【０３７４】
以上の試験から、特に、抗Ｈ１抗体および抗Ｈ３抗体と組み合わせて使用し、ヒト集団の主要なインフルエンザ株に対して交差反応性で効果のある抗体の組合せを得るのに有効なＢ抗体がいくつか得られる。抗Ｈ１抗体ＴＲＬ５３と、抗Ｈ３抗体ＴＲＬ５７９と、抗Ｂ抗体との組合せをカクテルとして検討した。Ｂ抗体５Ａ７は先の実施例に記載されており、２４ｈｐｉにＩＰまたはＩＮ投与によりＢ／フロリダまたはＢ／マレーシアを治療すると効果が得られる（図５）。経肺投与の方が効果が高く、少なくとも１ｍｇ／ｋｇまたは０．１ｍｇ／ｋｇで効果がみられるのに対し、全身送達で同等の効果を得るにはこれより高い用量が必要である。
【０３７５】
実施例１８．カクテル、組合せおよび組成物。
それぞれ１０ｍｇ／ｋｇの複数の抗体を組み合わせて投与すると、タンパク質抗体の投与量は相当なものになり、特に疾患があるか疾患のリスクのある患者には、耐容性または妥当性が十分ではない可能性がある。これよりも低い用量、具体的には１ｍｇ／ｋｇの範囲の抗体を含む抗体の組合せまたはカクテルであれば実現可能である。本明細書では、抗体のＩＮ投与が、予防として実施した場合でも、１ｍｇ／ｋｇ以下で効果が認められることを明らかにしている。第１群および第２群ウイルスに効果を示す抗インフルエンザＡ抗体、特に抗Ｈ１および抗Ｈ３抗体と、抗Ｂインフルエンザ抗体とを含むカクテルが、単一の用量または組合せで、ヒト集団で重要なあらゆるインフルエンザの株および型に対する抗体の組合せとなる。それぞれ１ｍｇ／ｋｇのＴＲＬ０５３、ＴＲＬ５７９および５Ａ７からなり、抗体の総量が３ｍｇ／ｋｇのカクテルについて、ウイルス感染症による体重減少の抑制をｉｎ  ｖｉｖｏで評価した。１０×ＬＤ５０のウイルスによる感染から２４時間後に、抗体カクテルを単回混合用量として投与した。カクテルは、Ｈ１ウイルス、Ｈ３ウイルス、Ｂ／ヤマガタ系統ウイルスおよびＢ／ビクトリア系統ウイルスのそれぞれまたはいずれかによる感染に対して効果を示した（図２３）。
【０３７６】
抗Ｈ１抗体ＴＲＬ０５３と、抗Ｈ３抗体ＴＲＬ５７９と、抗Ｂ  ＴＲＬ抗体との組合せを抗体カクテルとして評価した。これらの組合せは、重要なインフルエンザの型または株に対して効果を示し、組み合わせても適合性があり効果が認められる抗体を含むものである。これらの抗体は、同じサブタイプ骨格を用いて構築され、ｐＩがほぼ同じで、相互作用も競合もみられず、他の抗体（１つまたは複数）の存在下で干渉も濃度効果も生じずにそれぞれの標的インフルエンザウイルスを中和するものである。それぞれ１ｍｇ／ｋｇのＴＲＬ０５３、ＴＲＬ５７９および各候補Ｂ  ＴＲＬ抗体からなり、総抗体量が３ｍｇ／ｋｇのカクテルを感染後に投与し、ウイルス感染症による体重減少の抑制をｉｎ  ｖｉｖｏで評価した。Ｈ１ウイルス、Ｈ３ウイルス、Ｂ／ヤマガタ系統ウイルスおよびＢ／ビクトリア系統ウイルスのそれぞれまたはいずれかによる感染症に対して効果が認められた。図７Ａ〜７Ｄに様々なカクテルのＩＮ投与の試験結果を示す。抗体の組合せにより、Ｈ１ウイルス、Ｈ３ウイルス、Ｂ／ヤマガタ系統ウイルスおよびＢ／ビクトリア系統ウイルスによる感染症に対して完全な防御がもたらされる。図７Ａ〜７Ｄには、ＴＲＬ０５３、ＴＲＬ５７９およびＴＲＬ８４５（ｃ）（カクテル１）、ＴＲＬ０５３、ＴＲＬ５７９およびＴＲＬ８４７（カクテル２）ならびにＴＲＬ０５３、ＴＲＬ５７９およびＴＲＬ８４９（カクテル３）の３種類の例示的なカクテルの結果が示されている。
【０３７７】
図７Ａ〜７Ｄは、３種類の抗インフルエンザｍＡｂの共投与しても抗Ｂ  ｍＡｂの効率に干渉しないことを示している。マウスに１０×ＬＤ５０のウイルスを感染させ、２４ｈｐｉに抗Ｈ１  ＣＦ−４０１と、抗Ｈ３  ＣＦ−４０２と、抗Ｂ  ＴＲＬ８４５（カクテル１）、抗Ｂ  ＴＲＬ８４７（カクテル２）または抗Ｂ  ＴＲＬ８４９（カクテル３）のいずれかとからなる３ｍｇ／ｋｇの３種ｍＡｂカクテルで治療し、対照にはＰＢＳ治療マウスおよびウイルス未感染マウスを用いた。感染から１４日間、マウスの体重を連日モニターし、第０日の初期体重に対するパーセントをプロットした。
【０３７８】
図７Ａ〜７Ｄは全体として、カクテルがあらゆる季節性インフルエンザ亜型の代表的な株（Ｈ１Ｎ１、Ｈ３Ｎ２およびＢの両系統）に対して、カクテルに含まれる他のｍａｂによる干渉を受けずに、予想されるレベルの防御をもたらすことを示している。
【０３７９】
図７Ａは、１０×ＬＤ５０のＨ１Ｎ１に感染させ、２４ｈｐｉに抗Ｈ１  ＣＦ−４０１と、抗Ｈ３  ＣＦ−４０２と、抗Ｂ  ＴＲＬ８４５（カクテル１）、抗Ｂ  ＴＲＬ８４７（カクテル２）または抗Ｂ  ＴＲＬ８４９（カクテル３）のいずれかとからなる３ｍｇ／ｋｇの３種ｍＡｂカクテルで治療したマウスにおけるｉｎ  ｖｉｖｏ防御を示している。
【０３８０】
図７Ｂは、１０×ＬＤ５０のＨ３Ｎ２に感染させ、２４ｈｐｉに抗Ｈ１  ＣＦ−４０１と、抗Ｈ３  ＣＦ−４０２と、抗Ｂ  ＴＲＬ８４５（カクテル１）、抗Ｂ  ＴＲＬ８４７（カクテル２）または抗Ｂ  ＴＲＬ８４９（カクテル３）のいずれかとからなる３ｍｇ／ｋｇの３種ｍＡｂカクテルで治療したマウスにおけるｉｎ  ｖｉｖｏ防御を示している。
【０３８１】
図７Ｃは、１０×ＬＤ５０のＢ／ヤマガタ系統に感染させ、２４ｈｐｉに抗Ｈ１  ＣＦ−４０１と、抗Ｈ３  ＣＦ−４０２と、抗Ｂ  ＴＲＬ８４５（カクテル１）、抗Ｂ  ＴＲＬ８４７（カクテル２）または抗Ｂ  ＴＲＬ８４９（カクテル３）のいずれかとからなる３ｍｇ／ｋｇの３種ｍＡｂカクテルで治療したマウスにおけるｉｎ  ｖｉｖｏ防御を示している。
【０３８２】
図７Ｄは、１０×ＬＤ５０のＢ／ビクトリア系統に感染させ、２４ｈｐｉに抗Ｈ１  ＣＦ−４０１と、抗Ｈ３  ＣＦ−４０２と、抗Ｂ  ＴＲＬ８４５（カクテル１）、抗Ｂ  ＴＲＬ８４７（カクテル２）または抗Ｂ  ＴＲＬ８４９（カクテル３）のいずれかとからなる３ｍｇ／ｋｇの３種ｍＡｂカクテルで治療したマウスにおけるｉｎ  ｖｉｖｏ防御を示す図である。
【０３８３】
データは、３種類の新規な独自の抗体を組み合わせるカクテル組成物が任意の重要な、または流行中のウイルス株または型によるインフルエンザ感染症に対して効果があることを示している。組合せ抗体は、第１群および第２群インフルエンザＡウイルスのほか、インフルエンザＢウイルスに対しても効果がある。単回用量で投与する抗体の組合せにより、任意の攻撃に対する防御が得られる。単回用量の組合せが効果および耐容性を示し、コストが極めて高くなるか過剰になる抗体用量を必要としないものになるよう、カクテルとして鼻腔内投与などにより直接気道に投与する組合せに含まれる用量が低く抑えられる。これまで、あらゆる重要なインフルエンザＡおよびインフルエンザＢウイルスに対する抗体の組合せを用いて、それぞれが約１ｍｇ／ｋｇ以下の用量範囲内にある抗体の組合せで効果が得られたことはない。本明細書に記載および提供される抗体の組合せは、それ全体であらゆる重要なインフルエンザウイルスを中和するものであり、特に組合せで効果を発揮するよう設計される。各抗体は適合性のある生物物理学的特性を有する。組合せの抗体は、互いに競合することも著しく干渉することもなく、それぞれが単独の場合と同じように等しく活性を示す。各抗体は等電点がほぼ同じであり、細胞培養により同じように発現する。本明細書の一態様では、各抗体は同じＩｇＧ骨格上に構築され、定常領域の配列が同じであり、それぞれ同じ重鎖および軽鎖定常領域の配列またはこれに関連する配列とともに組換えにより発現される。
【０３８４】
本発明は、その趣旨またはそれに不可欠な特徴から逸脱することなく、他の形態で具現化されるか、他の方法で実施され得る。したがって、本開示はあらゆる態様において、説明するものであって、限定するものではないものとして解釈されるべきであり、本発明の範囲は添付の「特許請求の範囲」によって示され、また、等価性の意味および範囲に含まれる変更はいずれも、それに包含されるものとする。
【０３８５】
本明細書全体を通じて様々な参考文献が引用され、いずれもその全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【図１】
2020096618.tif 000011
【図２】
2020096618.tif 000012
【図３】
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【図４】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図６Ａ】
2020096618.tif 000017
【図６Ｂ】
2020096618.tif 000018
【図６Ｃ】
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【図６Ｄ】
2020096618.tif 000020
【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
2020096618.tif 000022
【図７Ｃ】
2020096618.tif 000023
【図７Ｄ】
2020096618.tif 000024
【図８】
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【図９】
2020096618.tif 000026
【図１０Ａ】
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【図１０Ｂ】
2020096618.tif 000028
【図１０Ｃ】
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【図１０Ｄ】
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【図１０Ｅ】
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【図１０Ｆ】
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【図１１Ａ】
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【図１１Ｂ】
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【図１２Ａ】
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【図１２Ｂ】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
2020096618.tif 000040
【図１７】
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【図１８】
2020096618.tif 000042
【図１９】
2020096618.tif 000043
【図２０】
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【図２１】
2020096618.tif 000045
【図２２Ａ】
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【図２２Ｂ】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【配列表】
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【手続補正書】
【提出日】令和2年3月6日(2020.3.6)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）配列番号２４１のアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、配列番号２４２のアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域２（ＨＣＤＲ２）および配列番号２４３のアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域３（ＨＣＤＲ３）；
（ｂ）配列番号２０１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２０２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号２０３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３；
（ｃ）配列番号２２１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２２２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、および配列番号２２３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号２３１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２３２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、および配列番号２３３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３；または
（ｅ）配列番号２６１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２６２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、および配列番号２６３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、または
１つもしくは複数のＣＤＲドメイン配列内に１〜３個のアミノ酸置換を含むそれらの高度に相同な変異体
を含み、前記変異体および前記抗体またはフラグメントが、インフルエンザウイルスと結合し、かつ／または阻害する特性を有する、単離ヒト抗体もしくはその抗原結合フラグメント。
【請求項２】
（ａ）配列番号２４４のアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、配列番号２４５のアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域２（ＬＣＤＲ２）および配列番号２４６のアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域３（ＬＣＤＲ３）；
（ｂ）配列番号２０４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２０５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号２０６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；
（ｃ）配列番号２２４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２２５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号２２６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号２３４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２３５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号２３６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３；または
（ｅ）配列番号２６４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２６５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号２６６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３、または
１つもしくは複数のＣＤＲドメイン配列内に１〜３個のアミノ酸置換を含むそれらの高度に相同な変異体
をさらに含み、前記変異体および前記抗体またはフラグメントが、インフルエンザウイルスと結合し、かつ／または阻害する特性を有する、請求項１に記載の抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項３】
前記ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３が、
（i）配列番号２４１、２４２、２４３、２４４、２４５および２４６；
（ii）配列番号２０１、２０２、２０３、２０４、２０５および２０６；
（iii）配列番号２２１、２２２、２２３、２２４、２２５および２２６；
（iv）配列番号２３１、２３２、２３３、２３４、２３５および２３６；並びに
（v）配列番号２６１、２６２、２６３、２６４、２６５および２６６；または
１つもしくは複数のＣＤＲドメイン配列内に１〜３個のアミノ酸置換を含むそれらの高度に相同な変異体
からなる群より選択され、前記変異体および前記抗体またはフラグメントが、インフルエンザウイルスと結合し、かつ／または阻害する特性を有する、請求項２に記載の抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項４】
インフルエンザＢヤマガタクレードおよびインフルエンザＢビクトリアクレード両方のそれぞれの１つまたは複数の株と特異的に結合し、
配列番号２４９、２０９、２２９、２３９および２６９からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含む、単離ヒト抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項５】
配列番号２５０、２１０、２３０、２４０および２７０からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変配列（ＬＣＶＲ）をさらに含む、請求項４に記載の抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項６】
前記ＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ配列対が、
（i）配列番号２４９および２５０；
（ii）配列番号２０９および２１０；
（iii）配列番号２２９および２３０；
（iv）配列番号２３９および２４０；並びに
（v）配列番号２６９および２７０
からなる群より選択される、請求項５に記載の抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項７】
前記ＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ配列対が、配列番号２４９および２５０である、請求項６に記載の抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項８】
配列番号３０７、３０８、３０９、３１０、３１１、３１２および３１３からなる群より選択される１つまたは複数のエピトープまたはその不連続エピトープと結合する、請求項１に記載の抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項９】
インフルエンザＢヤマガタクレードおよびインフルエンザＢビクトリアクレードそれぞれの１つまたは複数の株との結合に関して、１００倍未満過剰に存在する場合に請求項１〜７のいずれか１項に記載の抗体またはフラグメントとしてその少なくとも５０％と置き換わることにより競合する、単離ヒト抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項１０】
請求項１〜９のいずれか１項に記載の抗体をコードする、単離コドン最適化核酸分子。
【請求項１１】
請求項１０に記載の核酸分子を含む、発現ベクター。
【請求項１２】
請求項１１に記載の発現ベクターを含む、組換えポリペプチドを発現させるための宿主細胞。
【請求項１３】
抗インフルエンザＢ抗体またはその抗原結合フラグメントを作製する方法であって、前記抗体またはそのフラグメントの産生が可能な条件下で請求項１２に記載の宿主細胞を増殖させることと、そのようにして産生された前記抗体またはそのフラグメントを回収することとを含む、方法。
【請求項１４】
請求項１に記載の抗体または抗原結合フラグメントと、薬学的に許容される担体とを含む、医薬組成物。
【請求項１５】
請求項１に記載の抗体または抗原結合フラグメントと、薬学的に許容される担体とを含み、前記抗体またはフラグメントのＰＢＳ中で測定した第一の融解温度（Ｔｍ１）は５５℃以上である、医薬組成物。
【請求項１６】
インフルエンザＡの少なくとも１つの株に対する結合特異性を有する１つまたは複数のヒト抗体またはその抗原結合フラグメントをさらに含む、請求項１５に記載の医薬組成物。
【請求項１７】
インフルエンザＡに対する特異性を有する前記抗体または抗原結合フラグメントが、第１群および第２群両方の１つまたは複数の株に対する特異性を含む、請求項１６に記載の医薬組成物。
【請求項１８】
（ａ）配列番号１１のＨＣＤＲ１、配列番号１２のＨＣＤＲ２、配列番号１３のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含む重鎖アミノ酸配列および配列番号１４のＬＣＤＲ１、配列番号１５のＬＣＤＲ２、配列番号１６のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含む軽鎖アミノ酸配列または１つもしくは複数のＣＤＲドメイン配列内に１〜３個のアミノ酸置換を含むその高度に相同な変異体を含み、前記変異体が、インフルエンザウイルスと結合し、かつ／または阻害することが可能である、第一の抗体またはその抗原結合フラグメント；
（ｂ）配列番号２１のＨＣＤＲ１、配列番号２２のＨＣＤＲ２、配列番号２３のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含む重鎖アミノ酸配列および配列番号２４のＬＣＤＲ１、配列番号２５のＬＣＤＲ２、配列番号２６のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含む軽鎖アミノ酸配列または１つもしくは複数のＣＤＲドメイン配列内に１〜３個のアミノ酸置換を含むその高度に相同な変異体を含み、前記変異体が、インフルエンザウイルスと結合し、かつ／または阻害することが可能である、第二の抗体またはその抗原結合フラグメント；並びに
（ｃ）ＨＣＤＲ１／ＨＣＤＲ２／ＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含む重鎖アミノ酸配列および軽鎖ＣＤＲドメイン配列ＬＣＤＲ１／ＬＣＤＲ２／ＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含む軽鎖アミノ酸配列を含み、それぞれ
（ｉ）配列番号２４１、２４２、２４３、２４４、２４５および２４６；
（ｉｉ）配列番号２０１、２０２、２０３、２０４、２０５および２０６；
（ｉｉｉ）配列番号２２１、２２２、２２３、２２４、２２５および２２６；
（ｉｖ）配列番号２３１、２３２、２３３、２３４、２３５および２３６；または
（ｖ）配列番号２６１、２６２、２６３、２６４、２６５および２６６；または
１つもしくは複数のＣＤＲドメイン配列内に１〜３個のアミノ酸置換を含むその高度に相同な変異体
から選択され、前記変異体および前記抗体またはフラグメントが、インフルエンザウイルスと結合し、かつ／または阻害することが可能である、第三の抗体またはその抗原結合フラグメント
を含む、医薬組成物。
【請求項１９】
前記第一の抗体またはフラグメントが、配列番号１９および２０のＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ対を含む、請求項１８に記載の医薬組成物。
【請求項２０】
前記第二の抗体またはフラグメントが、配列番号２９および３０のＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ対を含む、請求項１８に記載の医薬組成物。
【請求項２１】
前記第三の抗体またはフラグメントが、配列番号２４９および２５０のＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ対を含む、請求項１８に記載の医薬組成物。
【請求項２２】
前記第一の抗体、第二の抗体および第三の抗体またはフラグメントがそれぞれ、いずれも２ポイントの範囲内に収まる等電点（ｐＩ）を示す、請求項１８に記載の医薬組成物。
【請求項２３】
前記第一の抗体が、配列番号１７および１８のＨＣ／ＬＣアミノ酸配列を含むＴＲＬ０５３／Ｍａｂ５３であり、前記第二の抗体が、配列番号２７および２８のＨＣ／ＬＣアミノ酸配列を含むＴＲＬ５７９／Ｍａｂ５７９であり、前記第三の抗体が、
（i）配列番号２４７および２４８のＨＣ／ＬＣアミノ酸配列を含むＴＲＬ８４９；
（ii）配列番号２２７および２２８のＨＣ／ＬＣアミノ酸配列を含むＴＲＬ８４７；
（iii）配列番号２０７および２０８のＨＣ／ＬＣアミノ酸配列を含むＴＲＬ８４５；
（iv）配列番号２４７および２４８のＨＣ／ＬＣアミノ酸配列を含むＴＲＬ８４９；および
（v）配列番号２６７および２６８のＨＣ／ＬＣアミノ酸配列を含むＴＲＬ８５４
からなる群より選択される、請求項１８に記載の医薬組成物。
【請求項２４】
前記第一の抗体、第二の抗体および第三の抗体またはフラグメントがそれぞれ、必要とする対象のインフルエンザＡおよびインフルエンザＢによる感染症または疾患の治療または予防に有効な量で単回用量に製剤化されている、請求項２３に記載の医薬組成物。
【請求項２５】
前記第一の抗体、第二の抗体および第三の抗体またはフラグメントが、それぞれ１用量当たり１００ｍｇ／ｋｇ以下の量で前記組成物中に存在する、請求項２４に記載の医薬組成物。
【請求項２６】
前記第一の抗体、第二の抗体および第三の抗体またはフラグメントが、それぞれ１用量当たり１０ｍｇ／ｋｇ以下の量で前記組成物中に存在する、請求項２４に記載の医薬組成物。
【請求項２７】
前記第一の抗体、第二の抗体および第三の抗体またはフラグメントが、それぞれ１用量当たり１ｍｇ／ｋｇ以下の量で前記組成物中に存在する、請求項２４に記載の医薬組成物。
【請求項２８】
前記第一の抗体、第二の抗体および第三の抗体またはフラグメントがそれぞれ、抗体または抗体フラグメント全体で１用量当たり１０ｍｇ／ｋｇ以下の量で前記組成物中に存在する、請求項２４に記載の医薬組成物。
【請求項２９】
前記担体が、経鼻送達または肺送達用の希釈剤および／または補形剤を含む、請求項２４に記載の医薬組成物。
【請求項３０】
抗ウイルス治療薬、ウイルス複製阻害剤、プロテアーゼ阻害剤、ポリメラーゼ阻害剤、赤血球凝集素阻害剤、気管支拡張薬、免疫調節薬または吸入副腎皮質ステロイド剤のうちの１つまたは複数をさらに含む、請求項２４に記載の医薬組成物。
【請求項３１】
前記抗体またはその抗原結合フラグメントの１つまたは複数が、
（ａ）配列番号２４１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２４２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号２４３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３；
（ｂ）配列番号２０１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２０２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号２０３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３；
（ｃ）配列番号２２１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２２２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号２２３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号２３１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２３２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号２３３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３；または
（ｅ）配列番号２６１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２６２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号２６３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、または
１つもしくは複数のＣＤＲドメイン配列内に１〜３個のアミノ酸置換を含むその高度に相同な変異体
を含むＦａｂ、Ｆａｂ’およびＦ（ａｂ’）２、ｓｃＦｖ、ｄＡｂまたは多重特異性抗体から選択される、抗体フラグメントであり、前記変異体および前記抗体が、インフルエンザウイルスと結合し、かつ／または阻害する特性を有する、請求項１８に記載の医薬組成物。
【請求項３２】
対象のインフルエンザ感染症を治療または予防するための請求項１８〜３１のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項３３】
詳細なウイルス株判定を必要とせずに前記対象のインフルエンザ感染症の状態が判定される、請求項３２に記載の医薬組成物。
【請求項３４】
前記対象が、インフルエンザによる感染症または疾患から防御される、請求項３２に記載の医薬組成物。
【請求項３５】
前記第一の抗体、第二の抗体および第三の抗体またはフラグメントがそれぞれ、同時に、または逐次的に投与される、請求項３２に記載の医薬組成物。
【請求項３６】
前記免疫調節薬がインターフェロンベータ１ａである、請求項３０に記載の医薬組成物。
【請求項３７】
前記抗ウイルス治療薬が、オセルタミビル、ザナミビル、ペラミビルおよびラニナミビルからなる群より選択されるノイラミニダーゼ阻害剤である、請求項３０に記載の医薬組成物。
【請求項３８】
前記抗ウイルス治療薬が、ファビピラビル（Ｔ−７０５）およびＶＸ７８７からなる群より選択されるＲＮＡポリメラーゼ阻害剤である、請求項３０に記載の医薬組成物。
【請求項３９】
前記抗ウイルス治療薬が、Ｆｌｕｄａｓｅ（Ｄａｓ１８１）およびＡＢ−１０３（ｐ２ＴＡ）からなる群より選択される宿主細胞標的化治療剤である、請求項３０に記載の医薬組成物。
【請求項４０】
前記抗ウイルス治療薬が、ラマンタジンおよびアマンタジンからなる群より選択されるイオンチャネル阻害剤である、請求項３０に記載の医薬組成物。
【請求項４１】
前記気管支拡張薬が、アルブテロール、レバルブテロールまたはサルメテロールである、請求項３０に記載の医薬組成物。
【請求項４２】
組換え抗体またはそのフラグメントである、請求項１〜９のいずれか１項に記載の単離抗体またはフラグメント。
【外国語明細書】
2020096618000001.pdf
2020096618000002.pdf
2020096618000003.pdf
2020096618000004.pdf