(57)【要約】【課題】本発明は、アセチルコリンエステラーゼの活性を阻害することにより認知症予防に有用である新規なアセチルコリンエステラーゼ阻害剤を提供することを課題とする。【解決手段】  本発明のアセチルコリンエステラーゼ阻害活性剤は、２’，４−ジヒドロキシカルコン骨格を基本骨格とし、当該基本骨格における３’位にゲラニル基を有するか、及び／又は、４’位に低級アルコキシ基を有するカルコン類を有効成分とする。好ましくは、４−ヒドロキシデリシン、キサントアンゲロール及びキサントアンゲロールＦからなる群より選ばれる少なくとも１種のカルコン類を有効成分とし、特に好ましくは、キサントアンゲロールＦを有効成分とする。本発明のアセチルコリンエステラーゼ阻害活性剤は、また、アシタバ中のカルコン類を有効成分とする。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
２’，４−ジヒドロキシカルコン骨格を基本骨格とし、当該基本骨格における３’位にゲラニル基を有するか、及び／又は、４’位に低級アルコキシ基を有するカルコン類を有効成分とする、アセチルコリンエステラーゼ阻害剤。
【請求項２】
４−ヒドロキシデリシン、キサントアンゲロール及びキサントアンゲロールＦからなる群より選ばれる少なくとも１種のカルコン類を有効成分とする、アセチルコリンエステラーゼ阻害剤。
【請求項３】
キサントアンゲロールＦを有効成分とする、アセチルコリンエステラーゼ阻害剤。
【請求項４】
アシタバ中のカルコン類を有効成分とする、アセチルコリンエステラーゼ阻害剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アセチルコリンエステラーゼの活性を阻害することにより認知症予防に有用なアセチルコリンエステラーゼ阻害剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
内閣府の平成２９年版高齢社会白書によると、６５歳以上の認知症高齢者数と有病率の将来推計では、平成２４（２０１２）年は認知症高齢者数が４６２万人と、６５歳以上の高齢者の約７人に１人（有病率１５．０％）であったが、平成３７（２０２５）年には患者数は約７００万人と、６５歳以上の高齢者の約５人に１人になるとされている。
【０００３】
認知症にはアルツハイマー型、血管性、レビー小体型、前頭側頭型などのタイプがあるが、アルツハイマー型認知症の患者数が最も多く、全体の６割以上を占めるとされる。
アルツハイマー型認知症では、脳内のアセチルコリンが減少するため、アセチルコリンの減少に関与するアセチルコリンエステラーゼ（以下、「ＡＣｈＥ」と略記することがある）の阻害剤が治療薬として用いられている。
【０００４】
現在、ＡＣｈＥ阻害剤として、ドネペジル塩酸塩（ｄｏｎｅｐｅｚｉｌ  ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）、ガランタミン（ｇａｌａｎｔａｍｉｎｅ）、リバスチグミン（ｒｉｖａｓｔｉｇｍｉｎｅ）の３剤が臨床使用されている。
これらの薬剤にはそれぞれの特徴があるが、より副作用が少ない薬剤や阻害部位の異なる薬剤などの開発課題もある。
【０００５】
一方、日常の食習慣から、認知症予防を目指す研究開発も進められており、緑茶を習慣的に摂取することによる予防効果の研究事例がある。この緑茶の摂取と認知症予防の関係については様々な視点から研究されており、近年、緑茶中にＡＣｈＥ阻害作用があることが報告され、ＡＣｈＥ阻害作用の高い茶の品種の同定がなされている（非特許文献１参照。）。このように、認知症予防に対するひとつのアプローチとして、日常の食習慣の中での継続的なＡＣｈＥ阻害作用食品の摂取が考えられており、現在、そのような食品の探索が行われている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】日本製紙株式会社、“高機能茶「サンルージュ」の「加齢による認知機能の低下抑制効果」を動物試験で確認”［online］、平成２８年１１月１８日、［平成３０年８月６日検索］、インターネット＜URL：https://www.nipponpapergroup.com/news/year/2016/news161118003566.html＞
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、アセチルコリンエステラーゼの活性を阻害することにより認知症予防に有用である新規なＡＣｈＥ阻害剤を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者らは、セリ科シシウド属の日本の固有種であるアシタバ（Ａｎｇｅｌｉｃａ  ｋｅｉｓｋｅｉ）の茎や根の切り口から滲み出た黄汁の主成分であるカルコン類に、ＡＣｈＥ阻害作用を見出した。イン・ビトロの酵素阻害実験での精査の結果、ＡＣｈＥ阻害作用には、２’，４−ジヒドロカルコン骨格が大きく働き、３’位のゲラニル基および４’位のアルコキシ基が効果を増強させることが分かった。
【０００９】
本発明は上記知見に基づき完成されたものである。
すなわち、本発明にかかるＡＣｈＥ阻害剤は、２’，４−ジヒドロキシカルコン骨格を基本骨格とし、当該基本骨格における３’位にゲラニル基を有するか、及び／又は、４’位に低級アルコキシ基を有するカルコン類を有効成分とする。
本発明にかかるＡＣｈＥ阻害剤は、また、アシタバ中のカルコン類を有効成分とする。
【発明の効果】
【００１０】
本発明のＡＣｈＥ阻害剤は、アセチルコリンエステラーゼの活性を阻害することにより認知症予防に有用である。特に、有効成分はアシタバから得ることができるので、日常の食習慣の中で継続的に摂取可能なＡＣｈＥ阻害作用食品として利用することができる。
中でも、キサントアンゲロールＦは、臨床応用されているガランタミン臭化水素酸塩に匹敵する高いＡＣｈＥ阻害作用を発揮する。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
以下、本発明にかかるＡＣｈＥ阻害剤について詳しく説明するが、本発明の範囲はこれらの説明に拘束されることはなく、以下の例示以外についても、本発明の趣旨を損なわない範囲で適宜変更実施し得る。
【００１２】
本発明にかかるＡＣｈＥ阻害剤の有効成分となるカルコン類は、基本骨格として、下式（１）で表される２’，４−ジヒドロキシカルコン骨格を有する。
【００１３】
【化１】
2020026400.tif 000002
【００１４】
そして、本発明にかかるＡＣｈＥ阻害剤は、上記基本骨格における３’位にゲラニル基を有するか、及び／又は、４’位に低級アルコキシ基を有するカルコン類を有効成分とする。
【００１５】
本発明者の検討した結果によれば、ＡＣｈＥ阻害作用には、２’，４−ジヒドロキシカルコン骨格が大きく働き、３’位のゲラニル基及び４’位の低級アルコキシ基によってＡＣｈＥ阻害活性が増強されることが分かった。そして、これらの両方、すなわち、３’位にゲラニル基を有し、かつ、４’位に低級アルコキシ基を有する場合に、極めて高いＡＣｈＥ阻害活性が発揮されることが分かった。
これらの特徴を備えるカルコン類であれば、本発明の効果を害しない限度で、上記基本骨格におけるベンゼン環上の水素がさらに置換されていても良い。
【００１６】
上記において、４’位の低級アルコキシ基は、例えば、炭素数１〜６の直鎖又は分岐のアルコキシ基であり、メトキシ基が好ましい。
【００１７】
上記条件を満たすカルコン類として、４−ヒドロキシデリシン、キサントアンゲロール、キサントアンゲロールＦが好ましく例示できる。
【００１８】
４−ヒドロキシデリシンは、下式（２）で表され、カルコン骨格における４’位にメトキシ基を有する。
【００１９】
【化２】
2020026400.tif 000003
【００２０】
キサントアンゲロールは、下式（３）で表され、カルコン骨格における３’位にゲラニル基を有する。
【００２１】
【化３】
2020026400.tif 000004
【００２２】
キサントアンゲロールＦは、下式（４）で表され、カルコン骨格における３’位にゲラニル基を有し、４’位にメトキシ基を有する。このように、所定の置換位置にゲラニル基及びメトキシ基の両方を有するものであるから、特にＡＣｈＥ阻害活性が高い。
【００２３】
【化４】
2020026400.tif 000005
【００２４】
本発明におけるカルコン類は、化学合成によって得られたものであっても良いが、天然物から得られたものであっても良い。
例えば、アシタバには種々のカルコン類が含まれていることが分かっており、その中には、本発明の条件を満たすカルコン類も含まれる。特に、４−ヒドロキシデリシン及びキサントアンゲロールが多く含まれており、キサントアンゲロールＦも含まれる。
【００２５】
従って、アシタバ中のカルコン類を有効成分とするアセチルコリンエステラーゼ阻害剤も本発明に含まれる。
なお、アシタバ（明日葉、Ａｎｇｅｌｉｃａ  ｋｅｉｓｋｅｉ）は、セリ科シシウド属の植物である。日本原産で、房総半島から紀伊半島と伊豆諸島の太平洋岸に自生する。
【００２６】
アシタバ中のカルコン類を有効成分として利用する場合、全草を使用してもよいし、茎、根、葉、果実、種子、種皮、花などの一部を使用してもよい。
また、アシタバの茎、根、葉には多量の黄色物質が含まれており、その破切面から黄汁が滲出するのが特徴である。この黄汁には、本発明の条件を満たすカルコン類が多く含まれており、本発明に好適に利用できる。
【００２７】
アシタバの全草、その一部または黄汁は、そのまま使用してもよいが、加工処理を施して用いても良い。加工処理としては、例えば、磨砕、乾燥、粉砕、破砕、抽出、濃縮等が挙げられる。
【００２８】
具体的には、例えば、アシタバの全草、その一部、それらの粉砕物、黄汁などの原料を用い、溶媒で抽出することにより、カルコン類を得ることができる。
【００２９】
上記抽出に用いられる溶媒としては、目的とするカルコン類を抽出することのできる溶媒であれば特に制限されず、例えば、水、メタノール、エタノール、プロパノール、アセトン、酢酸エチル、酢酸メチル等が挙げられ、酢酸エチルが好ましい。抽出溶媒は、単独で用いてもよいし、２種以上を組み合わせて使用してもよい。
【００３０】
抽出後は、必要に応じてろ過、遠心分離、濃縮等を行っても良い。
さらに、抽出液を、クロマトグラフィーなどの公知の精製法により分離・精製しても良い。
また、抽出液を、凍結乾燥、減圧乾燥、噴霧乾燥などの公知の方法により乾燥させて固体状としても良い。
【００３１】
本発明のＡＣｈＥ阻害剤は、経口投与、非経口投与のいずれの投与経路で用いても良く、健康食品（飲料も含む）、食品添加剤、サプリメント、医薬用組成物などの原料として用いることができる。
例えば、アシタバの全草、その一部、それらの粉砕物、黄汁、それらからの抽出物（抽出溶媒を含む液状、その濃縮物又はそれらを乾燥した固体状等、使用形態は問わない）などを健康食品、食品添加剤、サプリメント、医薬用組成物などの原料として用いることができる。
【００３２】
本発明のＡＣｈＥ阻害剤を各種用途の原料として用いる場合、各種用途に常用される基材や薬剤と組み合わせて処方することができる。
【実施例】
【００３３】
以下、実施例を用いて、本発明にかかるＡＣｈＥ阻害剤について詳しく説明するが、本発明はこれら実施例に限定されるものではない。
【００３４】
〔アシタバエキスの抽出〕
アシタバの茎の破切面から出てくる黄汁（１ｋｇ）を酢酸エチル（３Ｌ）で３回抽出後、減圧濃縮を行い、アシタバの酢酸エチル抽出エキス（２２１．１ｇ）を得た。
得られたエキスは、シリカゲル（２ｋｇ）のカラムクロマトグラフィー（ｎ−ヘキサン−酢酸エチル系）により分離を行い、各成分の粗分画を得た。
得られた粗分画はシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＣＨ2Ｃｌ2−メタノール系およびｎ−ヘキサン−酢酸エチル系）およびオクタデシル化シリカゲルカラムクロマトグラフィー（９０％メタノール）にて繰り返し精製を行い、カルコン類として４−ヒドロキシデリシン（１２．８ｇ）、キサントアンゲロール（１２．３ｇ）、キサントアンゲロールＦ（１．４ｇ）、イソババカルコン（０．３ｇ）、フラバノン類として４’−Ｏ−ゲラニルナリンゲニン（１．８ｇ）、プロストラトールＦ（０．３ｇ）を得た。
得られた化合物については、ＮＭＲを初めとするスペクトルデータの解析によりそれぞれの化合物の構造を決定した。
ＮＭＲスペクトルは、Ａｇｉｌｅｎｔ−ＮＭＲ−ｖｎｍｒ６００を用いて測定し、確認を行った。下記にそれぞれの化合物の1Ｈ−ＮＭＲおよび13Ｃ−ＮＭＲのスペクトルデータを示す。
【００３５】
＜４−ヒドロキシデリシン＞
４−ヒドロキシデリシンは、上述のとおり、下式（２）で表される。
【００３６】
【化５】
2020026400.tif 000006
【００３７】
1Ｈ−ＮＭＲおよび13Ｃ−ＮＭＲのスペクトルデータは以下のとおりである。
1Ｈ−ＮＭＲ（δｐｐｍ，ＣＤＣｌ3）：１３．５（１Ｈ，ｓ），７．８４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１５．４Ｈｚ），７．８０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ），７．５７（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ），７．４８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１５．４Ｈｚ），６．８９（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ），６．５０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ），５．７８（１Ｈ，ｂｒｓ），５．２３（１Ｈ，ｔｍ，Ｊ＝７．６Ｈｚ），３．９２（３Ｈ，ｓ），３．４０（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ），１．８０（３Ｈ，ｓ），１．６９（３Ｈ，ｓ）．
13Ｃ−ＮＭＲ（δｐｐｍ，ＣＤＣｌ3）：１９３．４（ｓ），１６４．０（ｓ），１６３．５（ｓ），１５９．２（ｓ），１４５．０（ｓ），１３２．６（ｓ），１３１．２（ｄ）×２，１２９．９（ｄ），１２７．８（ｓ），１２２．５（ｄ），１１８．３（ｄ），１１８．０（ｓ），１１６．６（ｄ）×２，１１５．１（ｓ），１０２．８（ｄ），５６．１（ｑ），２６．０（ｑ），２１．９（ｑ），１８．０（ｑ）．
【００３８】
＜キサントアンゲロール＞
キサントアンゲロールは、上述のとおり、下式（３）で表される。
【００３９】
【化６】
2020026400.tif 000007
【００４０】
1Ｈ−ＮＭＲおよび13Ｃ−ＮＭＲのスペクトルデータは以下のとおりである。
1Ｈ−ＮＭＲ（δｐｐｍ，ＣＤＣｌ3）：１３．８１（１Ｈ，ｓ），９．１６（１Ｈ，ｂｒｓ），８．８５（１Ｈ，ｂｒｓ），７．８１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１５．４Ｈｚ），７．６６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ），７．５２（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ），７．４３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１５．４Ｈｚ），６．８９（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ），６．４７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ），５．３０（１Ｈ，ｔｍ，Ｊ＝７．０Ｈｚ），５．０７（１Ｈ，ｍ），３．４１（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ），２．０５（２Ｈ，ｍ），２．０１（２Ｈ，ｍ），１．８１（３Ｈ，ｓ），１．６５（３Ｈ，ｓ），１．５７（３Ｈ，ｓ）．
13Ｃ−ＮＭＲ（δｐｐｍ，ＣＤＣｌ3）：１９３．２（ｓ），１６４．５（ｓ），１６２．６（ｓ），１５９．０（ｓ），１４５．１（ｄ），１４０．０（ｓ），１３２．６（ｓ），１３１．２（ｄ）×２，１２９．９（ｄ），１２８．０（ｓ），１２４．３（ｄ），１２１．５（ｄ），１１８．３（ｄ），１１６．６（ｄ）×２，１１４．８（ｓ），１１４．４（ｓ），１０８．６（ｄ），４０．０（ｔ），２６．６（ｔ），２５．９（ｑ），２１．９（ｔ），１７．９（ｑ），１６．５（ｑ）．
【００４１】
＜キサントアンゲロールＦ＞
キサントアンゲロールＦは、上述のとおり、下式（４）で表される。
【００４２】
【化７】
2020026400.tif 000008
【００４３】
1Ｈ−ＮＭＲおよび13Ｃ−ＮＭＲのスペクトルデータは以下のとおりである。
1Ｈ−ＮＭＲ（δｐｐｍ，ＣＤＣｌ3）：１３．５０（１Ｈ，ｓ），７．８２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１５．４Ｈｚ），７．７８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．１Ｈｚ），７．５２（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ），７．４５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１５．４Ｈｚ），６．８７（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ），６．４９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．１Ｈｚ），６．１０（１Ｈ，ｂｒｓ），５．２４（１Ｈ，ｔｍ，Ｊ＝６．９Ｈｚ），５．０７（１Ｈ，ｍ），３．９０（３Ｈ，ｓ），３．４０（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ），２．０５（２Ｈ，ｍ），２．０１（２Ｈ，ｍ），１．７９（３Ｈ，ｓ），１．６３（３Ｈ，ｓ），１．５６（３Ｈ，ｓ）．
13Ｃ−ＮＭＲ（δｐｐｍ，ＣＤＣｌ3）：１９３．３（ｓ），１６４．０（ｓ），１６３．６（ｓ），１５８．９（ｓ），１４４．８（ｄ），１３６．０（ｓ），１３１．７（ｓ），１３１．１（ｄ）×２，１２９．８（ｄ），１２８．１（ｓ），１２５．０（ｄ），１２２．４（ｄ），１１８．５（ｄ），１１８．５（ｓ），１１６．５（ｄ）×２，１１５．１（ｓ），１０２．７（ｄ），５６．２（ｑ），４０．１（ｔ），２６．９（ｔ），２５．９（ｑ），２１．９（ｔ），１７．９（ｑ），１６．３（ｑ）．
【００４４】
＜イソババカルコン＞
イソババカルコンは下式（５）で表される。
【００４５】
【化８】
2020026400.tif 000009
【００４６】
1Ｈ−ＮＭＲおよび13Ｃ−ＮＭＲのスペクトルデータは以下のとおりである。
1Ｈ−ＮＭＲ（δｐｐｍ，ＣＤＣｌ3）：１３．８６（１Ｈ，ｓ），７．８４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１５．２Ｈｚ），７．７３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ），７．５６（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ），７．４６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１５．２Ｈｚ），６．８８（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ），６．４２（１Ｈ，ｂｒｓ），５．５１（１Ｈ，ｂｒｓ），５．３０（１Ｈ，ｔｍ，Ｊ＝７．１Ｈｚ），３．４８（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．１Ｈｚ），１．８４（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．５Ｈｚ），１．７７（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．５Ｈｚ）．
13Ｃ−ＮＭＲ（δｐｐｍ，ＣＤＣｌ3）：１９２．２（ｓ），１６３．９（ｓ），１６１．５（ｓ），１５８．０（ｓ），１４４．０（ｄ），１３５．９（ｓ），１３０．５（ｄ）×２，１２９．２（ｄ），１２７．７（ｓ），１２１．１（ｄ），１１８．１（ｄ），１１６．０（ｄ）×２，１１４．１（ｓ），１１４．０（ｓ），１０７．７（ｄ），２５．８（ｑ），２１．８（ｔ），１７．９（ｑ）．
【００４７】
＜４’−Ｏ−ゲラニルナリンゲニン＞
４’−Ｏ−ゲラニルナリンゲニンは下式（６）で表される。
【００４８】
【化９】
2020026400.tif 000010
【００４９】
1Ｈ−ＮＭＲおよび13Ｃ−ＮＭＲのスペクトルデータは以下のとおりである。
1Ｈ−ＮＭＲ（δｐｐｍ，ＣＤＣｌ3）：１２．０４（１Ｈ，ｓ），７．３６（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ），６．９６（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ），６．２４（１Ｈ，ｂｒｓ），６．００（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．２Ｈｚ），５．９７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．２Ｈｚ），５．４９（１Ｈ，ｔｍ，Ｊ＝６．６Ｈｚ），５．３６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１３．０，３．１Ｈｚ），５．０９（１Ｈ，ｔｍ，Ｊ＝６．９Ｈｚ），４．５６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ），３．１０（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１７．２，１３．０Ｈｚ），２．７８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１７．２，３．１Ｈｚ），２．０６−２．１６（２Ｈ，ｍ），１．７４（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．４Ｈｚ），１．６８（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．４Ｈｚ），１．６０（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．４Ｈｚ）．
13Ｃ−ＮＭＲ（δｐｐｍ，ＣＤＣｌ3）：１９６．２（ｓ），１６４．７（ｓ），１６４．３（ｓ），１６３．３（ｓ），１５９．３（ｓ），１４１．６（ｓ），１３１．８（ｓ），１３０．１（ｓ），１２７．７（ｄ）×２，１２３．７（ｄ），１１９．１（ｄ），１１５．０（ｄ）×２，１０３．１（ｓ），９６．７（ｄ），９５．５（ｄ），７９．０（ｄ），６５．０（ｔ），４３．０（ｔ），３９．５（ｔ），２６．３（ｔ），２５．７（ｑ），１７．７（ｑ），１６．７（ｑ）．
【００５０】
＜プロストラトールＦ＞
プロストラトールＦは下式（７）で表される。
【００５１】
【化１０】
2020026400.tif 000011
【００５２】
1Ｈ−ＮＭＲおよび13Ｃ−ＮＭＲのスペクトルデータは以下のとおりである。
1Ｈ−ＮＭＲ（δｐｐｍ，ＣＤＣｌ3）：７．４５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ），７．３１（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ），６．９０（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ），６．７９（１Ｈ，ｂｒｓ），６．５６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ），６．３８（１Ｈ，ｂｒｓ），５．３９（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１２．９，２．９Ｈｚ），５．２４（１Ｈ，ｔｍ，Ｊ＝７．０Ｈｚ），５．０４（１Ｈ，ｔｍ，Ｊ＝６．９Ｈｚ），３．４２（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ），３．０２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１７．０，１２．９Ｈｚ），２．８３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１７．０，２．９Ｈｚ），２．０７（１Ｈ，ｍ），２．０１（１Ｈ，ｍ），１．７１（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．２Ｈｚ），１．６５（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．２Ｈｚ），１．５７（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．２Ｈｚ）．
13Ｃ−ＮＭＲ（δｐｐｍ，ＣＤＣｌ3）：１９２．７（ｓ），１６２．１（ｓ），１６１．１（ｓ），１５６．２（ｓ），１３８．７（ｓ），１３１．９（ｓ），１３０．８（ｓ），１２７．７（ｄ）×２，１２６．５（ｄ），１２３．８（ｄ），１２０．９（ｄ），１１５．６（ｄ）×２，１１４．８（ｓ），１１４．６（ｓ），１１０．８（ｄ），７９．３（ｄ），４３．７（ｔ），３９．７（ｔ），２６．４（ｄ），２５．６（ｑ），２２．２（ｔ），１７．７（ｑ），１６．２（ｑ）．
【００５３】
〔ＡＣｈＥ阻害活性の測定〕
上記で得た４−ヒドロキシデリシン、キサントアンゲロール、キサントアンゲロールＦ、イソババカルコン、４’−Ｏ−ゲラニルナリンゲニン、プロストラトールＦを試料として、各試料のＡＣｈＥ阻害活性を測定した。陰性対照試料はジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、陽性対照試料はガランタミン臭化水素酸塩とした。また、その他の参考データとして、ナリンゲニン（ＬＫＴ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．より購入）及びゲラニオール（和光純薬工業株式会社より購入）についてもＡＣｈＥ阻害活性を測定した。
【００５４】
具体的な測定方法を以下に示す。
試料をジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶解した。反応のための緩衝液は、５０ｍＭトリス塩酸緩衝液（ｐＨ＝７．８）を用いた。
９６穴マイクロプレートに緩衝液１８０μｌを入れ、そこに試料５μｌを加えた。さらに、緩衝液で調整した電気ウナギ由来アセチルコリンエステラーゼ（２ｕｎｉｔｓ／ｍｌ）を１０μｌと、ＤＭＳＯに溶解した酢酸１−ナフチル（１８ｍＭ）を１０μｌ加え、３７℃で１時間反応させた。
反応後、５％ドデシル硫酸ナトリウム水溶液２５μｌを加え反応を停止し、さらに２ｍＭのＦａｓｔ  Ｂｌｕｅ  Ｂ水溶液２５μｌを加え、５９５ｎｍの吸光度をマイクロプレートリーダーにて測定した。
阻害率（％）は、以下の式で求めた。
阻害率（％）＝１００−｛［（試料あり・酵素ありの吸光度）−（試料あり・酵素なしの吸光度）］／［（陰性対照試料・酵素ありの吸光度）−（陰性対照試料あり・酵素なしの吸光度）］×１００｝
【００５５】
＜結果及び考察＞
上記測定の結果を下表１に示す。
【００５６】
【表１】
2020026400.tif 000012
【００５７】
上記試験結果を見ると、２’，４−ジヒドロカルコン骨格が阻害活性に大きく影響を与えていることが分かる。
もっとも、イソババカルコンの結果を見ると、２’，４−ジヒドロカルコン骨格を有するだけで十分な阻害活性が得られるわけではないことが分かる。
すなわち、４−ヒドロキシデリシン、キサントアンゲロール、キサントアンゲロールＦの結果にみるように、２’，４−ジヒドロカルコン骨格を有するとともに、３’位のゲラニル基を有するか、４’位のメトキシ基を有することで効果が増強される。そして、特に両要素を同時に満たすことで、その効果が一段と増強される。
３’位のゲラニル基および４’位のメトキシ基を有し、最も高い阻害活性を示すキサントアンゲロールＦは、臨床応用されているガランタミン臭化水素酸塩に匹敵するほど阻害効果が強かった。