(57)【要約】【課題】ヒトインターロイキン−２５（ＩＬ−２５）に結合する抗体およびその使用方法を提供すること。【解決手段】ある特定の実施形態によると、本発明の抗体は、ヒトＩＬ−２５に高親和性で結合する。ある特定の実施形態では、本発明は、ヒトＩＬ−２５に結合してＩＬ−２５媒介性細胞シグナル伝達を遮断する抗体を含む。本発明の抗体は、完全にヒトのものであり、天然に存在しない抗体であってもよい。本発明の抗体は、喘息、アレルギー、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、潰瘍性大腸炎およびクローン病を含めた炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、アトピー性皮膚炎（ＡＤ）、ならびにチャーグ−ストラウス症候群としても公知の好酸球性多発血管炎性肉芽腫症（ＥＧＰＡ）を含めた、ＩＬ−２５の活性または発現に関連する様々な障害の処置にとって有用である。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
本明細書に記載の発明。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、インターロイキン−２５（ＩＬ−２５）に特異的に結合する抗体およびその抗原結合性断片、抗体を含む医薬組成物ならびにその使用方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
インターロイキン−２５（ＩＬ−２５）は、構造的にインターロイキン−１７（ＩＬ−１７）に関するサイトカインであり、時にはＩＬ−１７Ｅと称する。これは、ヘテロ二量体のＩＬ−１７ＲＢ／ＩＬ−１７ＲＡ受容体と相互作用し、それを介してシグナル伝達する分泌型のホモ二量体糖タンパク質である（Ｉｗａｋｕｒａら、（２０１０年）、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ、３４巻：１４９頁）。ＩＬ−２５は、Ｔｈ２細胞、上皮細胞、内皮細胞、肺胞マクロファージ、肥満細胞、好酸球および好塩基球によって産生される（Ｒｏｕｖｉｅｒ，  Ｅ．ら、（１９９３年）、Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５０巻：５４４５〜５４５６頁；Ｐａｎ，  Ｇ．ら、（２００１年）、Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １６７巻：６５５９〜６５６７頁；Ｋｉｍ，  Ｍ．ら、（２００２年）、Ｂｌｏｏｄ  １００巻：２３３０〜２３４０頁）。ＩＬ−２５を介したシグナル伝達は、好酸球の動員、Ｔｈ２およびＴｈ９応答の開始、ならびにＴｈ１およびＴｈ１７細胞応答の抑制と関連する。ＩＬ−２５は、複数の組織におけるＩＬ−４、ＩＬ−５およびＩＬ−１３を含めた他のサイトカインの産生を誘導する（Ｆｏｒｔ，  ＭＭら、（２００１年）、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  １５巻：９８５〜９９５頁）。
【０００３】
ＩＬ−２５は、胃腸管に関連する慢性炎症に関与しており、ＩＬ−２５遺伝子は、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）などの腸管の自己免疫疾患に関連する染色体の領域において同定されている（Ｂｕｅｎｉｎｇ，Ｃ．ら、（２００３年）、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔ．  Ｏｃｔ；３０巻（５号）：３２９〜３３３頁）。ＩＬ−２５はまた、喘息を有する患者からの試料中でアップレギュレートされることも示されている（Ｓｈｅｒｋａｔ，  Ｒ．ら、（２０１４年）、Ａｓｉａ  Ｐａｃ．  Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｏｃｔ；４巻（４号）：２１２〜２２１頁）。したがって、ＩＬ−２５シグナル伝達の遮断が、ＩＬ−２５の活性または発現に関連する様々な障害の処置にとって有用であり得る。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００４】
【非特許文献１】Ｂｕｅｎｉｎｇ，Ｃ．ら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔ．（２００３年）Ｏｃｔ；３０巻（５号）：３２９〜３３３頁
【非特許文献２】Ｓｈｅｒｋａｔ，Ｒ．ら、Ａｓｉａ  Ｐａｃ．Ａｌｌｅｒｇｙ（２０１４年）Ｏｃｔ；４巻（４号）：２１２〜２２１頁
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
抗ＩＬ−２５抗体は、例えば、米国特許第８，７８５，６０５号；同第８，６５８，１６９号および同第８，２０６，７１７号；ならびにＰＣＴ公報ＷＯ２０１１／１２３５０７；ＷＯ２０１０／０３８１５５およびＷＯ２００８／１２９２６３で言及されている。それにもかかわらず、当技術分野において、ＩＬ−２５の発現および／もしくはシグナル伝達に関連する疾患もしくは障害、またはＩＬ−２５の発現および／もしくはシグナル伝達に関連する他の状態を処置するための、新規のＩＬ−２５アンタゴニスト、例えば本発明の抗ＩＬ−２５抗体が必要とされている。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明は、ヒトインターロイキン−２５（ＩＬ−２５）に特異的に結合する単離された抗体およびその抗原結合性断片を提供する。
第１の態様において、本発明は、ヒトインターロイキン−２５（ＩＬ−２５）に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合性断片であって、以下の特徴：
（ａ）完全ヒトモノクローナル抗体である；
（ｂ）２５℃で表面プラズモン共鳴によって測定して、約１２０ｐＭ未満のＫＤでヒトＩＬ−２５に結合する；
（ｃ）２５℃で表面プラズモン共鳴によって測定して、約１０５分超の解離半減期（ｔ１／２）でヒトＩＬ−２５に結合する；
（ｄ）ＩＬ−２５受容体（ＩＬ−１７ＲＡ／ＩＬ−１７ＲＢ）を発現するように工学的に操作された細胞において、約２ｎＭ未満のＩＣ５０でヒトＩＬ−２５のシグナル伝達を遮断する；
（ｅ）ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）において、約１６ｎＭ未満のＩＣ５０でヒトＩＬ−２５のシグナル伝達を遮断する；
（ｆ）ＩＬ−２５を過剰発現する哺乳動物において循環および／または肺ＩｇＥレベルを低減させる；
（ｇ）ＩＬ−２５を過剰発現する哺乳動物において杯細胞化生を低減させる；
（ｈ）表１に記載されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）内に含有される３つの重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）を含む；または
（ｉ）表１に記載されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）内に含有される３つの軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）を含む
のうちの２つまたはそれ超を示す、抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
【０００７】
本発明の単離された抗体および抗原結合性断片は、インターロイキン−２５（ＩＬ−２５）活性または発現に関連した疾患および障害を処置するためにとりわけ有用である。
【０００８】
一実施形態では、本発明は、２５℃または３７℃で表面プラズモン共鳴によって測定して、約１００ｐＭ未満のＫＤでヒトＩＬ−２５に特異的に結合する、抗ＩＬ−２５抗体または抗原結合性断片を提供する。
【０００９】
一実施形態では、本発明は、２５℃または３７℃で表面プラズモン共鳴によって測定して、約６０ｐＭ未満のＫＤでヒトＩＬ−２５に特異的に結合する、抗ＩＬ−２５抗体または抗原結合性断片を提供する。
【００１０】
一実施形態では、本発明は、２５℃または３７℃で表面プラズモン共鳴によって測定して、約４０ｐＭ未満のＫＤでヒトＩＬ−２５に特異的に結合する、抗ＩＬ−２５抗体または抗原結合性断片を提供する。
【００１１】
一実施形態では、本発明は、２５℃または３７℃で表面プラズモン共鳴によって測定して、約２０ｐＭ未満のＫＤでヒトＩＬ−２５に特異的に結合する、抗ＩＬ−２５抗体または抗原結合性断片を提供する。
【００１２】
一実施形態では、本発明は、２５℃で表面プラズモン共鳴によって測定して、約１５０分超のｔ１／２でヒトＩＬ−２５に特異的に結合する、抗ＩＬ−２５抗体または抗原結合性断片を提供する。
【００１３】
一実施形態では、本発明は、２５℃で表面プラズモン共鳴によって測定して、約２００分超のｔ１／２でヒトＩＬ−２５に特異的に結合する、抗ＩＬ−２５抗体または抗原結合性断片を提供する。
【００１４】
一実施形態では、本発明は、２５℃で表面プラズモン共鳴によって測定して、約２５０分超のｔ１／２でヒトＩＬ−２５に特異的に結合する、抗ＩＬ−２５抗体または抗原結合性断片を提供する。
【００１５】
一実施形態では、本発明は、２５℃で表面プラズモン共鳴によって測定して、約４００分超のｔ１／２でヒトＩＬ−２５に特異的に結合する、抗ＩＬ−２５抗体または抗原結合性断片を提供する。
【００１６】
一実施形態では、本発明は、ＩＬ−２５受容体（ＩＬ−１７ＲＡ／ＩＬ−１７ＲＢ）を発現するように工学的に操作された細胞において、ヒトＩＬ−２５に特異的に結合し、約７２０ｐＭ未満のＩＣ５０でヒトＩＬ−２５のシグナル伝達を遮断する、抗ＩＬ−２５抗体または抗原結合性断片を提供する。
【００１７】
一実施形態では、本発明は、ＩＬ−２５受容体（ＩＬ−１７ＲＡ／ＩＬ−１７ＲＢ）を発現するように工学的に操作された細胞において、ヒトＩＬ−２５に特異的に結合し、約５００ｐＭ未満のＩＣ５０でヒトＩＬ−２５のシグナル伝達を遮断する、抗ＩＬ−２５抗体または抗原結合性断片を提供する。
【００１８】
一実施形態では、本発明は、ＩＬ−２５受容体（ＩＬ−１７ＲＡ／ＩＬ−１７ＲＢ）を発現するように工学的に操作された細胞において、ヒトＩＬ−２５に特異的に結合し、約１００ｐＭ未満のＩＣ５０でヒトＩＬ−２５のシグナル伝達を遮断する、抗ＩＬ−２５抗体または抗原結合性断片を提供する。
【００１９】
一実施形態では、本発明は、ヒトＰＢＭＣにおいて、ヒトＩＬ−２５に特異的に結合し、約２．０ｎＭ未満のＩＣ５０でヒトＩＬ−２５のシグナル伝達を遮断する、抗ＩＬ−２５抗体または抗原結合性断片を提供する。
【００２０】
一実施形態では、本発明は、ヒトＰＢＭＣにおいて、ヒトＩＬ−２５に特異的に結合し、約７００ｐＭ未満のＩＣ５０でヒトＩＬ−２５のシグナル伝達を遮断する、抗ＩＬ−２５抗体または抗原結合性断片を提供する。
【００２１】
一実施形態では、本発明は、ヒトＰＢＭＣにおいて、ヒトＩＬ−２５に特異的に結合し、約３０ｐＭ〜約１５０ｐＭの範囲のＩＣ５０でヒトＩＬ−２５のシグナル伝達を遮断する、抗ＩＬ−２５抗体または抗原結合性断片を提供する。
【００２２】
本発明の抗体は、全長（例えば、ＩｇＧ１抗体またはＩｇＧ４抗体）であってもよく、抗原結合性部分（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２またはｓｃＦｖ断片）のみを含んでもよく、また、機能性が影響を受けるように、例えば、残留するエフェクター機能が排除されるように改変することができる（Ｒｅｄｄｙら、２０００年、Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．
１６４巻：１９２５〜１９３３頁）。
【００２３】
本発明の例示的な抗ＩＬ−２５抗体を本明細書において表１および２に列挙する。表１は、例示的な抗ＩＬ−２５抗体の重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）、軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）、重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３）、および軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３）のアミノ酸配列識別子を示す。表２は、例示的な抗ＩＬ−２５抗体のＨＣＶＲ、ＬＣＶＲ、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３の核酸配列識別子を示す。
【００２４】
本発明は、表１に列挙されているＨＣＶＲアミノ酸配列のいずれかから選択されるアミノ酸配列またはそれに対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似した配列を含むＨＣＶＲを含む、ＩＬ−２５に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
【００２５】
本発明は、表１に列挙されているＬＣＶＲアミノ酸配列のいずれかから選択されるアミノ酸配列またはそれに対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似した配列を含むＬＣＶＲを含む、ＩＬ−２５に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片も提供する。
【００２６】
本発明は、表１に列挙されているＨＣＶＲアミノ酸配列のいずれかと表１に列挙されているＬＣＶＲアミノ酸配列のいずれかの対を含むＨＣＶＲアミノ酸配列とＬＣＶＲアミノ酸配列の対（ＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ）を含む、ＩＬ−２５に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片も提供する。ある特定の実施形態によると、本発明は、表１に列挙されている例示的な抗ＩＬ−２５抗体のいずれかに含有されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対を含む抗体、またはその抗原結合性断片を提供する。
【００２７】
ヒトインターロイキン−２５（ＩＬ−２５）に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合性断片であって、（ａ）表１に記載されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）の相補性決定領域（ＣＤＲ）と、（ｂ）表１に記載されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）のＣＤＲとを含む、抗体またはその抗原結合性断片。
【００２８】
一実施形態では、ＩＬ−２５に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合性断片は、（ａ）配列番号２、１８、３４、５０、６６、８２、９８、１１４、１３０、１４６、１６２、１７８、１９４、２１０、２２６、２４２および２５８からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＶＲのＣＤＲと、（ｂ）配列番号１０、２６、４２、５８、７４、９０、１０６、１２２、１３８、１５４、１７０、１８６、２０２、２１８、２３４、２５０および２６６からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＶＲのＣＤＲとを含む。
【００２９】
一実施形態では、ＩＬ−２５に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合性断片は、（ａ）配列番号９８、１１４、１３０および１７８からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＶＲのＣＤＲと、（ｂ）配列番号１０６、１２２、１３８および１８６からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＶＲのＣＤＲとを含む。
【００３０】
一実施形態では、ＩＬ−２５に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号２、１８、３４、５０、６６、８２、９８、１１４、１３０、１４６、１６２、１７８、１９４、２１０、２２６、２４２および２５８からなる群より選択されるＨＣＶＲアミノ酸配列を含む。
【００３１】
一実施形態では、ＩＬ−２５に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１０、２６、４２、５８、７４、９０、１０６、１２２、１３８、１５４、１７０、１８６、２０２、２１８、２３４、２５０および２６６からなる群より選択されるＬＣＶＲアミノ酸配列を含む。
【００３２】
一実施形態では、ＩＬ−２５に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号２、１８、３４、５０、６６、８２、９８、１１４、１３０、１４６、１６２、１７８、１９４、２１０、２２６、２４２および２５８からなる群より選択されるＨＣＶＲアミノ酸配列と、配列番号１０、２６、４２、５８、７４、９０、１０６、１２２、１３８、１５４、１７０、１８６、２０２、２１８、２３４、２５０および２６６からなる群より選択されるＬＣＶＲアミノ酸配列とを含む。
【００３３】
一実施形態では、ＩＬ−２５に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号２／１０、１８／２６、３４／４２、５０／５８、６６／７４、８２／９０、９８／１０６、１１４／１２２、１３０／１３８、１４６／１５４、１６２／１７０、１７８／１８６、１９４／２０２、２１０／２１８、２２６／２３４、２４２／２５０および２５８／２６６からなる群より選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対のＣＤＲを含む。
【００３４】
一実施形態では、ＩＬ−２５に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号９８／１０６；１１４／１２２；１３０／１３８；および１７８／１８６からなる群より選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対のＣＤＲを含む。
【００３５】
一実施形態では、ＩＬ−２５に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号２／１０、１８／２６、３４／４２、５０／５８、６６／７４、８２／９０、９８／１０６、１１４／１２２、１３０／１３８、１４６／１５４、１６２／１７０、１７８／１８６、１９４／２０２、２１０／２１８、２２６／２３４、２４２／２５０および２５８／２６６からなる群より選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対を含む。
【００３６】
一実施形態では、ＩＬ−２５に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号９８／１０６；１１４／１２２；１３０／１３８；および１７８／１８６からなる群より選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対を含む。
【００３７】
本発明は、表１に列挙されているＨＣＤＲ１アミノ酸配列のいずれかから選択されるアミノ酸配列またはこれと少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似した配列を含む重鎖ＣＤＲ１（ＨＣＤＲ１）を含む、ＩＬ−２５に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片も提供する。
【００３８】
本発明は、表１に列挙されているＨＣＤＲ２アミノ酸配列のいずれかから選択されるアミノ酸配列またはこれと少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似した配列を含む重鎖ＣＤＲ２（ＨＣＤＲ２）を含む、ＩＬ−２５に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片も提供する。
【００３９】
本発明は、表１に列挙されているＨＣＤＲ３アミノ酸配列のいずれかから選択されるアミノ酸配列またはこれと少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似した配列を含む重鎖ＣＤＲ３（ＨＣＤＲ３）を含む、ＩＬ−２５に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片も提供する。
【００４０】
本発明は、表１に列挙されているＬＣＤＲ１アミノ酸配列のいずれかから選択されるアミノ酸配列またはこれと少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似した配列を含む軽鎖ＣＤＲ１（ＬＣＤＲ１）を含む、ＩＬ−２５に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片も提供する。
【００４１】
本発明は、表１に列挙されているＬＣＤＲ２アミノ酸配列のいずれかから選択されるアミノ酸配列またはこれと少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似した配列を含む軽鎖ＣＤＲ２（ＬＣＤＲ２）を含む、ＩＬ−２５に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片も提供する。
【００４２】
本発明は、表１に列挙されているＬＣＤＲ３アミノ酸配列のいずれかから選択されるアミノ酸配列またはこれと少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似した配列を含む軽鎖ＣＤＲ３（ＬＣＤＲ３）を含む、ＩＬ−２５に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片も提供する。
【００４３】
本発明は、表１に列挙されているＨＣＤＲ３アミノ酸配列のいずれかと表１に列挙されているＬＣＤＲ３アミノ酸配列のいずれかの対を含むＨＣＤＲ３アミノ酸配列とＬＣＤＲ３アミノ酸配列の対（ＨＣＤＲ３／ＬＣＤＲ３）を含む、ＩＬ−２５に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片も提供する。ある特定の実施形態によると、本発明は、表１に列挙されている例示的な抗ＩＬ−２５抗体のいずれかに含有されるＨＣＤＲ３／ＬＣＤＲ３アミノ酸配列対を含む抗体、またはその抗原結合性断片を提供する。ある特定の実施形態では、ＨＣＤＲ３／ＬＣＤＲ３アミノ酸配列対は、１０４／１１２；１２０／１２８；１３６／１４４および１８４／１９２からなる群より選択される。
【００４４】
本発明は、表１に列挙されている例示的な抗ＩＬ−２５抗体のいずれかに含有される６つのＣＤＲのセット（すなわち、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３）を含む、ＩＬ−２５に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片も提供する。ある特定の実施形態では、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３のアミノ酸配列のセットは、（ａ）配列番号１００、１０２、１０４、１０８、１１０、１１２；（ｂ）配列番号１１６、１１８、１２０、１２４、１２６、１２８；（ｃ）配列番号１３２、１３４、１３６、１４０、１４２、１４４；および（ｄ）配列番号１８０、１８２、１８４、１８８、１９０、１９２からなる群より選択される。
【００４５】
関連する実施形態では、本発明は、表１に列挙されている例示的な抗ＩＬ−２５抗体のいずれかによって定義されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対に含有される６つのＣＤＲのセット（すなわち、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３）を含む、ＩＬ−２５に特異的に結合する抗体、またはその抗原結合性断片を提供する。例えば、本発明は、９８／１０６；１１４／１２２；１３０／１３８および１７８／１８６からなる群より選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対に含有されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３アミノ酸配列のセットを含む、ＩＬ−２５に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片を含む。ＨＣＶＲアミノ酸配列およびＬＣＶＲアミノ酸配列内のＣＤＲを同定するための方法および技法は当技術分野で周知であり、本明細書に開示されている指定のＨＣＶＲおよび／またはＬＣＶＲアミノ酸配列内のＣＤＲを同定するために使用することができる。ＣＤＲの境界を同定するために使用することができる例示的な慣例としては、例えば、Ｋａｂａｔ定義、Ｃｈｏｔｈｉａ定義、およびＡｂＭ定義が挙げられる。大まかに言えば、Ｋａｂａｔ定義は配列の変動性に基づき、Ｃｈｏｔｈｉａ定義は構造的なループ領域の位置に基づき、ＡｂＭ定義はＫａｂａｔ手法とＣｈｏｔｈｉａ手法の折衷である。例えば、Ｋａｂａｔ、「Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ」、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、Ｍｄ．（１９９１年）；Ａｌ−Ｌａｚｉｋａｎｉら、Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ２７３巻：９２７〜９４８頁（１９９７年）；およびＭａｒｔｉｎら、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ８６巻：９２６８〜９２７２頁（１９８９年）を参照されたい。公共のデータベースも、抗体内のＣＤＲ配列を同定するために利用可能である。
【００４６】
一実施形態では、本発明は、ＩＬ−２５に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合性断片であって、
（ａ）配列番号４、２０、３６、５２、６８、８４、１００、１１６、１３２、１４８、１６４、１８０、１９６、２１２、２２８、２４４および２６０からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１ドメイン；
（ｂ）配列番号６、２２、３８、５４、７０、８６、１０２、１１８、１３４、１５０、１６６、１８２、１９８、２１４、２３０、２４６および２６２からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２ドメイン；
（ｃ）配列番号８、２４、４０、５６、７２、８８、１０４、１２０、１３６、１５２、１６８、１８４、２００、２１６、２３２、２４８および２６４からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３ドメイン；
（ｄ）配列番号１２、２８、４４、６０、７６、９２、１０８、１２４、１４０、１５６、１７２、１８８、２０４、２２０、２３６、２５２および２６８からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１ドメイン；
（ｅ）配列番号１４、３０、４６、６２、７８、９４、１１０、１２６、１４２、１５８、１７４、１９０、２０６、２２２、２３８、２５４および２７０からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２ドメイン；ならびに
（ｆ）配列番号１６、３２、４８、６４、８０、９６、１１２、１２８、１４４、１６０、１７６、１９２、２０８、２２４、２４０、２５６および２７２からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３ドメイン
を含む、抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
【００４７】
一実施形態では、本発明は、ＩＬ−２５に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合性断片であって、
（ａ）配列番号１００、１１６、１３２、および１８０からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１ドメイン；
（ｂ）配列番号１０２、１１８、１３４、および１８２からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２ドメイン；
（ｃ）配列番号１０４、１２０、１３６、および１８４からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３ドメイン；
（ｄ）配列番号１０８、１２４、１４０、および１８８からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１ドメイン；
（ｅ）配列番号１１０、１２６、１４２、および１９０からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２ドメイン；ならびに
（ｆ）配列番号１１２、１２８、１４４、および１９２からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３ドメイン
を含む、抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
【００４８】
一実施形態では、本発明は、（ａ）配列番号１００、１０２、１０４、１０８、１１０、１１２；（ｂ）配列番号１１６、１１８、１２０、１２４、１２６、１２８；（ｃ）配列番号１３２、１３４、１３６、１４０、１４２、１４４；および（ｄ）配列番号１８０、１８２、１８４、１８８、１９０、１９２からなる群より選択される６つのＣＤＲのセットを含む、単離された抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
【００４９】
一実施形態では、本発明は、ヒトインターロイキン−２５（ＩＬ−２５）に結合する単離された抗体またはその抗原結合性断片であって、表１に記載される重鎖可変領域／軽鎖可変領域（ＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ）のアミノ酸配列対を含む参照抗体と、ヒトＩＬ−２５への結合について競合する、抗体またはその抗原結合性断片を提供する。参照抗体は、配列番号２／１０、１８／２６、３４／４２、５０／５８、６６／７４、８２／９０、９８／１０６、１１４／１２２、１３０／１３８、１４６／１５４、１６２／１７０、１７８／１８６、１９４／２０２、２１０／２１８、２２６／２３４、２４２／２５０および２５８／２６６からなる群より選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対を含んでいてもよい。
【００５０】
一実施形態では、本発明は、ヒトインターロイキン−２５（ＩＬ−２５）に結合する単離された抗体またはその抗原結合性断片であって、表１に記載される重鎖可変領域／軽鎖可変領域（ＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ）のアミノ酸配列対を含む参照抗体と同じヒトＩＬ−２５上のエピトープに結合する、抗体またはその抗原結合性断片を提供する。参照抗体は、配列番号２／１０、１８／２６、３４／４２、５０／５８、６６／７４、８２／９０、９８／１０６、１１４／１２２、１３０／１３８、１４６／１５４、１６２／１７０、１７８／１８６、１９４／２０２、２１０／２１８、２２６／２３４、２４２／２５０および２５８／２６６からなる群より選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対を含んでいてもよい。
【００５１】
第２の態様では、本発明は、抗ＩＬ−２５抗体またはその一部をコードする核酸分子を提供する。例えば、本発明は、表１に列挙されているＨＣＶＲアミノ酸配列のいずれかをコードする核酸分子を提供し、ある特定の実施形態では、核酸分子は、表２に列挙されているＨＣＶＲ核酸配列のいずれかから選択されるポリヌクレオチド配列またはそれに対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似した配列を含む。
【００５２】
本発明は、表１に列挙されているＬＣＶＲアミノ酸配列のいずれかをコードする核酸分子も提供する。ある特定の実施形態では、核酸分子は、表２に列挙されているＬＣＶＲ核酸配列のいずれかから選択されるポリヌクレオチド配列またはそれに対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似した配列を含む。
【００５３】
本発明は、表１に列挙されているＨＣＤＲ１アミノ酸配列のいずれかをコードする核酸分子も提供する。ある特定の実施形態では、核酸分子は、表２に列挙されているＨＣＤＲ１核酸配列のいずれかから選択されるポリヌクレオチド配列またはそれに対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似した配列を含む。
【００５４】
本発明は、表１に列挙されているＨＣＤＲ２アミノ酸配列のいずれかをコードする核酸分子も提供する。ある特定の実施形態では、核酸分子は、表２に列挙されているＨＣＤＲ２核酸配列のいずれかから選択されるポリヌクレオチド配列またはそれに対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似した配列を含む。
【００５５】
本発明は、表１に列挙されているＨＣＤＲ３アミノ酸配列のいずれかをコードする核酸分子も提供する。ある特定の実施形態では、核酸分子は、表２に列挙されているＨＣＤＲ３核酸配列のいずれかから選択されるポリヌクレオチド配列またはそれに対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似した配列を含む。
【００５６】
本発明は、表１に列挙されているＬＣＤＲ１アミノ酸配列のいずれかをコードする核酸分子も提供する。ある特定の実施形態では、核酸分子は、表２に列挙されているＬＣＤＲ１核酸配列のいずれかから選択されるポリヌクレオチド配列またはそれに対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似した配列を含む。
【００５７】
本発明は、表１に列挙されているＬＣＤＲ２アミノ酸配列のいずれかをコードする核酸分子も提供する。ある特定の実施形態では、核酸分子は、表２に列挙されているＬＣＤＲ２核酸配列のいずれかから選択されるポリヌクレオチド配列またはそれに対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似した配列を含む。
【００５８】
本発明は、表１に列挙されているＬＣＤＲ３アミノ酸配列のいずれかをコードする核酸分子も提供する。ある特定の実施形態では、核酸分子は、表２に列挙されているＬＣＤＲ３核酸配列のいずれかから選択されるポリヌクレオチド配列またはそれに対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似した配列を含む。
【００５９】
本発明は、３つのＣＤＲのセット（すなわち、ＨＣＤＲ１−ＨＣＤＲ２−ＨＣＤＲ３）を含むＨＣＶＲをコードする核酸分子であって、ＨＣＤＲ１−ＨＣＤＲ２−ＨＣＤＲ３アミノ酸配列セットが、表１に列挙されている例示的な抗ＩＬ−２５抗体のいずれかによって定義される通りである、核酸分子も提供する。
【００６０】
本発明は、３つのＣＤＲのセット（すなわち、ＬＣＤＲ１−ＬＣＤＲ２−ＬＣＤＲ３）を含むＬＣＶＲをコードする核酸分子であって、ＬＣＤＲ１−ＬＣＤＲ２−ＬＣＤＲ３アミノ酸配列セットが、表１に列挙されている例示的な抗ＩＬ−２５抗体のいずれかによって定義される通りである、核酸分子も提供する。
【００６１】
本発明は、ＨＣＶＲおよびＬＣＶＲの両方をコードする核酸分子であって、ＨＣＶＲが、表１に列挙されているＨＣＶＲアミノ酸配列のいずれかのアミノ酸配列を含み、ＬＣＶＲが、表１に列挙されているＬＣＶＲアミノ酸配列のいずれかのアミノ酸配列を含む、核酸分子も提供する。ある特定の実施形態では、核酸分子は、表２に列挙されているＨＣＶＲ核酸配列のいずれかから選択されるポリヌクレオチド配列またはそれに対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似した配列と、表２に列挙されているＬＣＶＲ核酸配列のいずれかから選択されるポリヌクレオチド配列またはそれに対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似した配列とを含む。本発明のこの態様によるある特定の実施形態では、核酸分子は、ＨＣＶＲおよびＬＣＶＲをコードし、ＨＣＶＲおよびＬＣＶＲはどちらも表１に列挙されている同じ抗ＩＬ−２５抗体に由来する。
【００６２】
第３の態様では、本発明は、抗ＩＬ−２５抗体の重鎖可変領域または軽鎖可変領域を含むポリペプチドを発現させることができる組換え発現ベクターを提供する。例えば、本発明は、上記の核酸分子、すなわち、表１に記載されているＨＣＶＲ、ＬＣＶＲ、および／またはＣＤＲ配列のいずれかをコードする核酸分子のいずれかを含む組換え発現ベクターを含む。そのようなベクターが導入される宿主細胞、ならびに、宿主細胞を抗体または抗体断片の産生が可能になる条件下で培養し、したがって産生された抗体および抗体断片を回収することによって抗体またはその一部を産生する方法も本発明の範囲に含まれる。
【００６３】
本発明は、改変されたグリコシル化パターンを有する抗ＩＬ−２５抗体を含む。一部の実施形態では、望ましくないグリコシル化部位を除去する改変が有用であり得る、または、例えば、抗体依存性細胞性細胞傷害（ＡＤＣＣ）機能を増大させるために、抗体は、オリゴ糖鎖上に存在するフコース部分を欠く（Ｓｈｉｅｌｄら（２００２年）ＪＢＣ  ２７７巻：２６７３３頁を参照されたい）。他の適用では、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を改変するためにガラクトシル化の改変を行うことができる。
【００６４】
第４の態様では、本発明は、ＩＬ−２５に特異的に結合する少なくとも１つの本発明の抗体またはその抗原結合断片と薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物を提供する。
【００６５】
関連する態様では、本発明は、抗ＩＬ−２５抗体と第２の治療剤の組合せである組成物を特徴とする。一実施形態では、第２の治療剤は、抗ＩＬ−２５抗体と有利に組み合わせられる任意の薬剤である。第２の治療剤が、炎症性疾患もしくは障害、または炎症性疾患もしくは障害の少なくとも１つの症状を緩和するのに有用であり得る。
【００６６】
ある特定の実施形態では、第２の治療剤は、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、ステロイド、コルチコステロイド（吸入または外用）、免疫抑制剤（例えば、シクロホスファミド）、抗コリン剤（例えば、チオトロピウム）、ムスカリン作用剤（例えば、グリコピロニウム）、ホスホジエステラーゼ阻害剤（例えば、テオフィリン、ロフルミラスト、シロミラスト）、ベータ遮断薬、シクロスポリン、タクロリムス、ピメクロリムス、アザチオプリン、メトトレキセート、クロモリンナトリウム、プロテイナーゼ阻害剤、気管支拡張薬（ｂｒｏｎｃｈｉａｌ  ｄｉｌａｔｏｒ）、ベータ−２−アゴニスト、抗ヒスタミン剤、エピネフリン、うっ血除去剤、ロイコトリエン阻害剤、肥満細胞阻害剤、胸腺間質性リンパ球新生因子（ＴＳＬＰ）アンタゴニスト、ＴＮＦアンタゴニスト、ＩｇＥアンタゴニスト、ＩＬ−１アンタゴニスト、ＩＬ−４またはＩＬ−４Ｒアンタゴニスト、ＩＬ−１３またはＩＬ−１３Ｒアンタゴニスト、ＩＬ−４／ＩＬ−１３デュアルアンタゴニスト、ＩＬ−５アンタゴニスト、ＩＬ−６またはＩＬ−６Ｒアンタゴニスト、ＩＬ−８のアンタゴニスト、ＩＬ−９アンタゴニスト、ＩＬ−１２／２３アンタゴニスト、ＩＬ−２２アンタゴニスト、ＩＬ−１７アンタゴニスト、ＩＬ−３１アンタゴニスト、ＩＬ−３３アンタゴニスト、胸腺間質性リンパ球新生因子タンパク質（ＴＳＬＰ）アンタゴニスト、経口ＰＤＥ４阻害剤、およびＩＬ−２５に対する異なる抗体からなる群より選択され得る。
【００６７】
第５の態様において、本発明は、本発明の抗ＩＬ−２５抗体または抗体の抗原結合性部分を使用して、ＩＬ−２５の活性もしくは発現に関連する疾患もしくは障害、または疾患もしくは障害に関連する少なくとも１つの症状を処置するための治療方法を提供する。本発明のこの態様による治療方法は、本発明の抗体または抗体の抗原結合性断片を含む治療有効量の医薬組成物を、それを必要とする被験体に投与することを含む。処置される障害は、ＩＬ−２５を標的とすることによってかつ／またはＩＬ−２５媒介性細胞シグナル伝達を阻害することによって改善される、好転する、阻害されるまたは予防される任意の疾患または状態である。
【００６８】
ある特定の実施形態では、本発明の抗ＩＬ−２５抗体またはその抗原結合性部分で処置される疾患または障害は、喘息、アレルギー、アレルギー性鼻炎、アレルギー性気道炎症、自己免疫疾患、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、好酸球性肺炎、好酸球性食道炎、好酸球増多症候群、移植片対宿主疾患、アトピー性皮膚炎（ＡＤ）、慢性特発性じんましんを含むじんましん、乾癬、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、関節炎、ブドウ膜炎、心臓血管疾患、疼痛、多発性硬化症、狼瘡、脈管炎、および好酸球性多発血管炎性肉芽腫症（（ＥＧＰＡ）、チャーグ−ストラウス症候群としても公知）からなる群より選択され得る。
【００６９】
一実施形態では、本発明の抗体またはその抗原結合性断片によって処置され得る喘息は、アレルギー性喘息、非アレルギー性喘息、重症難治性喘息、喘息の増悪、ウイルス誘発性喘息、またはウイルス誘発性喘息の増悪、ステロイド抵抗性喘息、ステロイド感受性喘息、好酸球性喘息または非好酸球性喘息、および気道炎症または気道過敏症（ａｉｒｗａｙ  ｈｙｐｅｒｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅｎｅｓｓ）（ＡＨＲ）によって特徴付けられる他の関連障害からなる群より選択され得る。
【００７０】
一実施形態では、本発明の抗体またはその抗原結合性断片によって処置され得るＣＯＰＤは、タバコの煙、大気汚染、職業性の化学物質、アレルギーまたは気道過敏症に一部関連する、またはそれによって引き起こされる。
【００７１】
一実施形態では、本発明の抗体またはその抗原結合性断片によって処置され得るＡＤは、表皮バリアの機能不全、アレルギー、または放射線曝露に一部関連する、またはそれによって引き起こされる。
【００７２】
本発明の抗体またはその抗原結合性断片によって処置され得るアレルギーは、ある特定の食物、花粉、カビ、チリダニ（ｄｕｓｔ  ｍｉｔｅ）、動物、または動物の鱗屑に起因する可能性がある。
【００７３】
一実施形態では、本発明の抗体またはその抗原結合性断片によって処置され得るＩＢＤは、潰瘍性大腸炎、クローン病、コラーゲン蓄積大腸炎、リンパ球性大腸炎、虚血性大腸炎、空置大腸炎（ｄｉｖｅｒｓｉｏｎ  ｃｏｌｉｔｉｓ）、ベーチェット症候群、感染性大腸炎、不確定大腸炎（ｉｎｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｅ  ｃｏｌｉｔｉｓ）、および大腸または結腸の粘膜層の炎症によって特徴付けられる他の障害からなる群より選択され得る。
【００７４】
一実施形態では、本発明の抗体またはその抗原結合性断片によって処置され得る関節炎は、変形性関節症（ＯＡ）、関節リウマチおよび乾癬性関節炎からなる群より選択され得る。
【００７５】
他の実施形態は、以下の詳細な説明の概説から明らかになろう。
本発明の実施形態において、例えば以下の項目が提供される。
（項目１）
ヒトインターロイキン−２５（ＩＬ−２５）に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合性断片であって、以下の特徴：
（ａ）完全ヒトモノクローナル抗体である；
（ｂ）２５℃で表面プラズモン共鳴によって測定して、約１２０ｐＭ未満のＫＤでヒトＩＬ−２５に結合する；
（ｃ）２５℃で表面プラズモン共鳴によって測定して、約１０５分超の解離半減期（ｔ１／２）でヒトＩＬ−２５に結合する；
（ｄ）ＩＬ−２５受容体（ＩＬ−１７ＲＡ／ＩＬ−１７ＲＢ）を発現するように工学的に操作された細胞において、約２ｎＭ未満のＩＣ５０でヒトＩＬ−２５のシグナル伝達を遮断する；
（ｅ）ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）において、約１６ｎＭ未満のＩＣ５０でヒトＩＬ−２５のシグナル伝達を遮断する；
（ｆ）ＩＬ−２５を過剰発現する哺乳動物において循環および／または肺ＩｇＥレベルを低減させる；
（ｇ）ＩＬ−２５を過剰発現する哺乳動物において杯細胞化生を低減させる；
（ｈ）表１に記載されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）内に含有される３つの重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）を含む；または
（ｉ）表１に記載されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）内に含有される３つの軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）を含む
のうちの２つまたはそれ超を示す、抗体またはその抗原結合性断片。
（項目２）
２５℃または３７℃で表面プラズモン共鳴によって測定して、約１００ｐＭ未満のＫＤでヒトＩＬ−２５に結合する、項目１に記載の単離された抗体または抗原結合性断片。
（項目３）
２５℃または３７℃で表面プラズモン共鳴によって測定して、約６０ｐＭ未満のＫＤでヒトＩＬ−２５に結合する、項目１または２に記載の単離された抗体または抗原結合性断片。
（項目４）
２５℃または３７℃で表面プラズモン共鳴によって測定して、約４０ｐＭ未満のＫＤでヒトＩＬ−２５に結合する、項目１から３のいずれかに記載の単離された抗体または抗原結合性断片。
（項目５）
２５℃または３７℃で表面プラズモン共鳴によって測定して、約２０ｐＭ未満のＫＤでヒトＩＬ−２５に結合する、項目１から４のいずれかに記載の単離された抗体または抗原結合性断片。
（項目６）
２５℃で表面プラズモン共鳴によって測定して、約１５０分超のｔ１／２でヒトＩＬ−２５に結合する、項目１から５のいずれかに記載の単離された抗体または抗原結合性断片。
（項目７）
２５℃で表面プラズモン共鳴によって測定して、約２００分超のｔ１／２でヒトＩＬ−２５に結合する、項目１から６のいずれかに記載の単離された抗体または抗原結合性断片。
（項目８）
２５℃で表面プラズモン共鳴によって測定して、約２５０分超のｔ１／２でヒトＩＬ−２５に結合する、項目１から７のいずれかに記載の単離された抗体または抗原結合性断片。
（項目９）
２５℃で表面プラズモン共鳴によって測定して、約４００分超のｔ１／２でヒトＩＬ−２５に結合する、項目１から８のいずれかに記載の単離された抗体または抗原結合性断片。
（項目１０）
ＩＬ−２５受容体（ＩＬ−１７ＲＡ／ＩＬ−１７ＲＢ）を発現するように工学的に操作された細胞において、約７２０ｐＭ未満のＩＣ５０でヒトＩＬ−２５のシグナル伝達を遮断する、項目１から９のいずれかに記載の単離された抗体または抗原結合性断片。
（項目１１）
ＩＬ−２５受容体（ＩＬ−１７ＲＡ／ＩＬ−１７ＲＢ）を発現するように工学的に操作された細胞において、約５００ｐＭ未満のＩＣ５０でヒトＩＬ−２５のシグナル伝達を遮断する、項目１から１０のいずれかに記載の単離された抗体または抗原結合性断片。
（項目１２）
ＩＬ−２５受容体（ＩＬ−１７ＲＡ／ＩＬ−１７ＲＢ）を発現するように工学的に操作された細胞において、約１００ｐＭ未満のＩＣ５０でヒトＩＬ−２５のシグナル伝達を遮断する、項目１から１１のいずれかに記載の単離された抗体または抗原結合性断片。
（項目１３）
ヒトＰＢＭＣにおいて、約２．０ｎＭ未満のＩＣ５０でヒトＩＬ−２５のシグナル伝達を遮断する、項目１から１２のいずれかに記載の単離された抗体または抗原結合性断片。
（項目１４）
ヒトＰＢＭＣにおいて、約７００ｐＭ未満のＩＣ５０でヒトＩＬ−２５のシグナル伝達を遮断する、項目１から１３のいずれかに記載の単離された抗体または抗原結合性断片。
（項目１５）
ヒトＰＢＭＣにおいて、約３０ｐＭ〜約１５０ｐＭの範囲のＩＣ５０でヒトＩＬ−２５のシグナル伝達を遮断する、項目１から１４のいずれかに記載の単離された抗体または抗原結合性断片。
（項目１６）
ヒトインターロイキン−２５（ＩＬ−２５）に結合する単離された抗体またはその抗原結合性断片であって、表１に記載される重鎖可変領域／軽鎖可変領域（ＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ）のアミノ酸配列対を含む参照抗体と、ヒトＩＬ−２５への結合について競合する、抗体またはその抗原結合性断片。
（項目１７）
前記参照抗体が、配列番号２／１０、１８／２６、３４／４２、５０／５８、６６／７４、８２／９０、９８／１０６、１１４／１２２、１３０／１３８、１４６／１５４、１６２／１７０、１７８／１８６、１９４／２０２、２１０／２１８、２２６／２３４、２４２／２５０および２５８／２６６からなる群より選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対を含む、項目１６に記載の単離された抗体または抗原結合性断片。
（項目１８）
ヒトインターロイキン−２５（ＩＬ−２５）に結合する単離された抗体またはその抗原結合性断片であって、表１に記載される重鎖可変領域／軽鎖可変領域（ＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ）のアミノ酸配列対を含む参照抗体と同じヒトＩＬ−２５上のエピトープに結合する、抗体またはその抗原結合性断片。
（項目１９）
前記参照抗体が、配列番号２／１０、１８／２６、３４／４２、５０／５８、６６／７４、８２／９０、９８／１０６、１１４／１２２、１３０／１３８、１４６／１５４、１６２／１７０、１７８／１８６、１９４／２０２、２１０／２１８、２２６／２３４、２４２／２５０および２５８／２６６からなる群より選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対を含む、項目１８に記載の単離された抗体または抗原結合性断片。
（項目２０）
前記参照抗体が、配列番号９８／１０６；１１４／１２２；１３０／１３８；および１７８／１８６からなる群より選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対を含む、項目１９に記載の単離された抗体または抗原結合性断片。
（項目２１）
ヒトインターロイキン−２５（ＩＬ−２５）に結合する単離された抗体またはその抗原結合性断片であって、（ａ）表１に記載されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）の相補性決定領域（ＣＤＲ）と、（ｂ）表１に記載されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）のＣＤＲとを含む、抗体またはその抗原結合性断片。
（項目２２）
（ａ）配列番号２、１８、３４、５０、６６、８２、９８、１１４、１３０、１４６、１６２、１７８、１９４、２１０、２２６、２４２および２５８からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＶＲのＣＤＲと、（ｂ）配列番号１０、２６、４２、５８、７４、９０、１０６、１２２、１３８、１５４、１７０、１８６、２０２、２１８、２３４、２５０および２６６からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＶＲのＣＤＲとを含む、項目１から１５または２１のいずれかに記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
（項目２３）
（ａ）配列番号９８、１１４、１３０および１７８からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＶＲのＣＤＲと、（ｂ）配列番号１０６、１２２、１３８および１８６からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＶＲのＣＤＲとを含む、項目１から１５または２１から２２のいずれかに記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
（項目２４）
配列番号９８／１０６；１１４／１２２；１３０／１３８；および１７８／１８６からなる群より選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対のＣＤＲを含む、項目１から１５または２１から２３のいずれかに記載の単離された抗体または抗原結合性断片。
（項目２５）
配列番号２、１８、３４、５０、６６、８２、９８、１１４、１３０、１４６、１６２、１７８、１９４、２１０、２２６、２４２および２５８からなる群より選択されるＨＣＶＲアミノ酸配列を含む、項目１から１５または２１から２４のいずれかに記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
（項目２６）
配列番号１０、２６、４２、５８、７４、９０、１０６、１２２、１３８、１５４、１７０、１８６、２０２、２１８、２３４、２５０および２６６からなる群より選択されるＬＣＶＲアミノ酸配列を含む、項目１から１５または２１から２５のいずれかに記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
（項目２７）
配列番号２、１８、３４、５０、６６、８２、９８、１１４、１３０、１４６、１６２、１７８、１９４、２１０、２２６、２４２および２５８からなる群より選択されるＨＣＶＲアミノ酸配列と、配列番号１０、２６、４２、５８、７４、９０、１０６、１２２、１３８、１５４、１７０、１８６、２０２、２１８、２３４、２５０および２６６からなる群より選択されるＬＣＶＲアミノ酸配列とを含む、項目１から１５または２１から２６のいずれかに記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
（項目２８）
配列番号２／１０、１８／２６、３４／４２、５０／５８、６６／７４、８２／９０、９８／１０６、１１４／１２２、１３０／１３８、１４６／１５４、１６２／１７０、１７８／１８６、１９４／２０２、２１０／２１８、２２６／２３４、２４２／２５０および２５８／２６６からなる群より選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対を含む、項目１から１５または２１から２７のいずれかに記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
（項目２９）
（ａ）配列番号４、２０、３６、５２、６８、８４、１００、１１６、１３２、１４８、１６４、１８０、１９６、２１２、２２８、２４４および２６０からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１ドメイン；
（ｂ）配列番号６、２２、３８、５４、７０、８６、１０２、１１８、１３４、１５０、１６６、１８２、１９８、２１４、２３０、２４６および２６２からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２ドメイン；
（ｃ）配列番号８、２４、４０、５６、７２、８８、１０４、１２０、１３６、１５２、１６８、１８４、２００、２１６、２３２、２４８および２６４からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３ドメイン；
（ｄ）配列番号１２、２８、４４、６０、７６、９２、１０８、１２４、１４０、１５６、１７２、１８８、２０４、２２０、２３６、２５２および２６８からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１ドメイン；
（ｅ）配列番号１４、３０、４６、６２、７８、９４、１１０、１２６、１４２、１５８、１７４、１９０、２０６、２２２、２３８、２５４および２７０からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２ドメイン；ならびに
（ｆ）配列番号１６、３２、４８、６４、８０、９６、１１２、１２８、１４４、１６０、１７６、１９２、２０８、２２４、２４０、２５６および２７２からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３ドメイン
を含む、項目１から１５または２１から２８のいずれかに記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
（項目３０）
（ａ）配列番号１００、１１６、１３２、および１８０からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１ドメイン；
（ｂ）配列番号１０２、１１８、１３４、および１８２からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２ドメイン；
（ｃ）配列番号１０４、１２０、１３６、および１８４からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３ドメイン；
（ｄ）配列番号１０８、１２４、１４０、および１８８からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１ドメイン；
（ｅ）配列番号１１０、１２６、１４２、および１９０からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２ドメイン；ならびに
（ｆ）配列番号１１２、１２８、１４４、および１９２からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３ドメイン
を含む、項目１から１５または２１から２９のいずれかに記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
（項目３１）
（ａ）配列番号１００、１０２、１０４、１０８、１１０、１１２；（ｂ）配列番号１１６、１１８、１２０、１２４、１２６、１２８；（ｃ）配列番号１３２、１３４、１３６、１４０、１４２、１４４；および（ｄ）配列番号１８０、１８２、１８４、１８８、１９０、１９２からなる群より選択される６つのＣＤＲのセットを含む、項目１から１５または２１から３０のいずれかに記載の単離された抗体または抗原結合性断片。
（項目３２）
項目１から１５または２１から３１のいずれかに記載の抗体または抗原結合性断片と、薬学的に許容される担体または希釈剤とを含む医薬組成物。
（項目３３）
インターロイキン−２５（ＩＬ−２５）の活性または発現に関連する疾患または障害を処置するための方法であって、このような処置を必要とする被験体に項目３２に記載の医薬組成物を投与することを含む、方法。
（項目３４）
前記疾患または前記障害が、喘息、アレルギー、アレルギー性鼻炎、アレルギー性気道炎症、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、好酸球性肺炎、好酸球性食道炎、好酸球増多症候群、移植片対宿主疾患、アトピー性皮膚炎（ＡＤ）、乾癬、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、関節炎、ブドウ膜炎、心臓血管疾患、疼痛、多発性硬化症、狼瘡、脈管炎、慢性特発性じんましんおよび好酸球性多発血管炎性肉芽腫症（チャーグ−ストラウス症候群）からなる群より選択される、項目３３に記載の方法。
（項目３５）
前記喘息が、アレルギー性喘息、非アレルギー性喘息、重症難治性喘息、喘息の増悪、ウイルス誘発性喘息またはウイルス誘発性喘息の増悪、ステロイド抵抗性喘息、ステロイド感受性喘息、好酸球性喘息または非好酸球性喘息、および気道炎症または気道過敏症（ＡＨＲ）によって特徴付けられる他の関連障害からなる群より選択される、項目３４に記載の方法。
（項目３６）
前記ＣＯＰＤが、タバコの煙、大気汚染、職業性の化学物質、アレルギーまたは気道過敏症に一部関連する、またはそれによって引き起こされる疾患または障害である、項目３４に記載の方法。
（項目３７）
前記ＡＤが、表皮バリアの機能不全、アレルギー、または放射線曝露に一部関連する、またはそれによって引き起こされる、項目３４に記載の方法。
（項目３８）
前記アレルギーが、食物、花粉、カビ、チリダニ、動物、または動物の鱗屑に対するものである、項目３７に記載の方法。
（項目３９）
前記ＩＢＤが、潰瘍性大腸炎、クローン病、コラーゲン蓄積大腸炎、リンパ球性大腸炎、虚血性大腸炎、空置大腸炎、ベーチェット症候群、感染性大腸炎、不確定大腸炎、および大腸または結腸の粘膜層の炎症によって特徴付けられる他の障害からなる群より選択される、項目３４に記載の方法。
（項目４０）
前記関節炎が、変形性関節症、関節リウマチおよび乾癬性関節炎からなる群より選択される、項目３４に記載の方法。
（項目４１）
前記医薬組成物が、第２の治療剤と組み合わせて患者に投与される、項目３３に記載の方法。
（項目４２）
前記第２の治療剤が、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、ステロイド、コルチコステロイド（吸入または外用）、免疫抑制剤（例えば、シクロホスファミド）、抗コリン剤（例えば、チオトロピウム）、ムスカリン作用剤（例えば、グリコピロニウム）、ホスホジエステラーゼ阻害剤（例えば、テオフィリン、ロフルミラスト、シロミラスト）、ベータ遮断薬、シクロスポリン、タクロリムス、ピメクロリムス、アザチオプリン、メトトレキセート、クロモリンナトリウム、プロテイナーゼ阻害剤、気管支拡張薬、ベータ−２−アゴニスト、抗ヒスタミン剤、エピネフリン、うっ血除去剤、ロイコトリエン阻害剤、肥満細胞阻害剤、胸腺間質性リンパ球新生因子（ＴＳＬＰ）アンタゴニスト、ＴＮＦアンタゴニスト、ＩｇＥアンタゴニスト、ＩＬ−１アンタゴニスト、ＩＬ−４またはＩＬ−４Ｒアンタゴニスト、ＩＬ−１３またはＩＬ−１３Ｒアンタゴニスト、ＩＬ−４／ＩＬ−１３デュアルアンタゴニスト、ＩＬ−５アンタゴニスト、ＩＬ−６またはＩＬ−６Ｒアンタゴニスト、ＩＬ−８のアンタゴニスト、ＩＬ−９アンタゴニスト、ＩＬ−１２／２３アンタゴニスト、ＩＬ−２２アンタゴニスト、ＩＬ−１７アンタゴニスト、ＩＬ−３１アンタゴニスト、ＩＬ−３３アンタゴニスト、経口ＰＤＥ４阻害剤、およびＩＬ−２５に対する異なる抗体からなる群より選択される、項目４１に記載の方法。
【図面の簡単な説明】
【００７６】
【図１】図１、ヒトＩＬ−２５に対する抗ＩＬ−２５抗体間の交差競合。
【発明を実施するための形態】
【００７７】
本発明の説明の前に、記載される特定の方法および実験条件は変動し得るので、本発明はそのような方法および条件に限定されないことが理解されるべきである。本発明の範囲は、添付の特許請求の範囲によってのみ限定されるので、本明細書において使用される用語法は、特定の実施形態を説明するためだけのものであり、限定的なものではないことも理解されるべきである。
【００７８】
別段の定義のない限り、本明細書において使用される全ての技術用語および科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者に一般に理解されているものと同じ意味を有する。本明細書で使用される場合、「約」という用語は、特定の列挙された数値に関して使用される場合、値が列挙された値から１％以下変動し得ることを意味する。例えば、本明細書で使用される場合、「約１００」という表現は、９９および１０１、ならびにその間の全ての値（例えば、９９．１、９９．２、９９．３、９９．４など）を含む。
【００７９】
本明細書に記載の方法および材料と類似した、またはそれと等しい任意の方法および材料を本発明の実施または試験において使用することができるが、好ましい方法および材料をここで記載する。本明細書において言及される特許、出願および非特許刊行物は全て、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【００８０】
定義
「インターロイキン−２５」、「ＩＬ−２５」などの表現は、「ＩＬ−１７Ｅ」としても公知であり、受託番号ＮＰ＿０７３６２６．１のアミノ酸残基３３から１７７に記載のアミノ酸配列を含むヒトサイトカイン（別の種由来であるという指示がない限り）を指す。ｍｙｃ−ｍｙｃ−ヘキサヒスチジンタグを含有するヒトＩＬ−２５は、配列番号２７３（アミノ酸残基１〜１４５は、シグナル配列非含有のヒトＩＬ−２５であり、アミノ酸残基１４６〜１７３は、ｍｙｃ−ｍｙｃ−ヘキサヒスチジンタグである）として示される。配列番号２７４（アミノ酸残基１〜１４４は、Ｍ．ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓのＩＬ−２５であり、アミノ酸残基１４５〜１７２は、ｍｙｃ−ｍｙｃ−ヘキサヒスチジンタグである）として示される、ｍｙｃ−ｍｙｃ−ヘキサヒスチジンタグを含有するサルＩＬ−２５（受託番号ＸＰ＿００１１０７９０６．２のアミノ酸３３〜１７６）；配列番号２７５（アミノ酸残基１〜１５３は、マウスＩＬ−２５であり、アミノ酸残基１５４〜１８１は、ｍｙｃ−ｍｙｃ−ヘキサヒスチジンタグである）として示される、ｍｙｃ−ｍｙｃ−ヘキサヒスチジンタグを含有するマウスＩＬ−２５（受託番号ＮＰ＿５４２７６７．１のアミノ酸１７〜１６９）；および配列番号２７６（アミノ酸残基１〜１５３は、ラットＩＬ−２５であり、アミノ酸残基１５４〜１８１はｍｙｃ−ｍｙｃ−ヘキサヒスチジンタグである）として示される、ｍｙｃ−ｍｙｃ−ヘキサヒスチジンタグを含有するラットＩＬ−２５（受託番号ＮＰ＿００１１７８９３６．１のアミノ酸残基１７〜１６９）を含む、追加のＩＬ−２５タンパク質が本明細書に記載される。
【００８１】
タンパク質、ポリペプチドおよびタンパク質断片への言及は全て、本明細書では、非ヒト種に由来することが明記されていない限り、それぞれのタンパク質、ポリペプチドまたはタンパク質断片のヒトバージョンを指すものとする。したがって、「ＩＬ−２５」という表現は、例えば「サルＩＬ−２５」、「マウスＩＬ−２５」、「ラットＩＬ−２５」などの非ヒト種に由来することが示されていない限り、ヒトＩＬ−２５を意味する。
【００８２】
本明細書で使用される場合、「抗ＩＬ−２５抗体」という表現は、単一特異性を有する一価の抗体、ならびに、ＩＬ−２５に結合する第１のアームと第２の（標的）抗原に結合する第２のアームとを含み、抗ＩＬ−２５アームが本明細書において表１に記載されているＨＣＶＲ／ＬＣＶＲまたはＣＤＲ配列のいずれかを含む二重特異性抗体の両方を含む。「抗ＩＬ−２５抗体」という表現はまた、薬物もしくは毒素（すなわち、細胞傷害剤）にコンジュゲートした抗ＩＬ−２５抗体またはその抗原結合性部分を含む抗体−薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）も含む。「抗ＩＬ−２５抗体」という表現はまた、放射性核種にコンジュゲートした抗ＩＬ−２５抗体またはその抗原結合性部分を含む抗体−放射性核種コンジュゲート（ＡＲＣ）も含む。
【００８３】
「ＩＬ−２５抗体」という用語は、本明細書で使用される場合、ＩＬ−２５またはＩＬ−２５の一部に特異的に結合するまたはそれと相互作用する少なくとも１つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む任意の抗原結合性の分子または分子複合体を意味する。「抗体」という用語は、ジスルフィド結合によって相互接続した２つの重（Ｈ）鎖と２つの軽（Ｌ）鎖の４つのポリペプチド鎖を含む免疫グロブリン分子、ならびにその多量体（例えば、ＩｇＭ）を含む。各重鎖は重鎖可変領域（本明細書では、ＨＣＶＲまたはＶＨと省略される）および重鎖定常領域を含む。重鎖定常領域は３つのドメイン、ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３を含む。各軽鎖は軽鎖可変領域（本明細書では、ＬＣＶＲまたはＶＬと省略される）および軽鎖定常領域を含む。軽鎖定常領域は１つのドメイン（ＣＬ１）を含む。ＶＨ領域およびＶＬ領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と称されるより保存された領域が散在する、相補性決定領域（ＣＤＲ）と称される超可変性の領域にさらに細分することができる。各ＶＨおよびＶＬは、アミノ末端からカルボキシ末端まで以下の順序で配置された３つのＣＤＲと４つのＦＲで構成される：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４。本発明の異なる実施形態において、抗ＩＬ−２５抗体（またはその抗原結合性部分）のＦＲは、ヒト生殖細胞系列配列と同一であってもよく、天然にまたは人工的に改変されてもよい。アミノ酸コンセンサス配列は、２つまたはそれ超のＣＤＲのサイドバイサイド分析に基づいて定義することができる。
【００８４】
「抗体」という用語は、本明細書で使用される場合、完全長抗体分子の抗原結合性断片も含む。抗体の「抗原結合性部分」、抗体の「抗原結合性断片」などの用語は、本明細書で使用される場合、抗原に特異的に結合して複合体を形成する、任意の酵素によって得られる、合成された、または遺伝子操作されたポリペプチドまたは糖タンパク質を含む。抗体の抗原結合性断片は、例えば、完全抗体分子から、抗体可変ドメインおよび任意選択で定常ドメインをコードするＤＮＡの操作および発現を伴う、タンパク質分解性消化または組換え遺伝子工学技法などの任意の適切な標準の技法を使用して得ることができる。そのようなＤＮＡは公知であり、かつ／または、例えば、商業的な供給源、ＤＮＡライブラリー（例えば、ファージ−抗体ライブラリーを含む）から容易に入手可能である、または合成することができる。ＤＮＡは、配列決定し、例えば、１つもしくは複数の可変ドメインおよび／もしくは定常ドメインを適切な構成に配置するため、またはコドンを導入するか、システイン残基を創出するか、アミノ酸を修飾するか、付加するか、もしくは欠失させるなどのために、化学的にまたは分子生物学的技法を使用して操作することができる。
【００８５】
抗原結合性断片の非限定的な例としては、（ｉ）Ｆａｂ断片；（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２断片；（ｉｉｉ）Ｆｄ断片；（ｉｖ）Ｆｖ断片；（ｖ）単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）分子；（ｖｉ）ｄＡｂ断片；および（ｖｉｉ）抗体の超可変領域を模倣するアミノ酸残基からなる最小認識単位（例えば、ＣＤＲ３ペプチドなどの単離された相補性決定領域（ＣＤＲ））、または拘束されたＦＲ３−ＣＤＲ３−ＦＲ４ペプチドが挙げられる。ドメイン特異的抗体、単一ドメイン抗体、ドメイン欠失抗体、キメラ抗体、ＣＤＲ移植抗体、ダイアボディ（ｄｉａｂｏｄｙ）、トリアボディ（ｔｒｉａｂｏｄｙ）、テトラボディ（ｔｅｔｒａｂｏｄｙ）、ミニボディ（ｍｉｎｉｂｏｄｙ）、ナノボディ（ｎａｎｏｂｏｄｙ）（例えば、一価ナノボディ、二価ナノボディなど）、小モジュラー免疫薬（ｓｍａｌｌ  ｍｏｄｕｌａｒ  ｉｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ）（ＳＭＩＰ）、およびサメ可変ＩｇＮＡＲドメインなどの他の工学的に操作された分子も、本明細書で使用される「抗原結合性断片」という表現の範囲内に包含される。
【００８６】
抗体の抗原結合性断片は、典型的には、少なくとも１つの可変ドメインを含む。可変ドメインは、任意のサイズまたはアミノ酸組成のものであってよく、一般に、１つまたは複数のフレームワーク配列に隣接したまたはインフレームである少なくとも１つのＣＤＲを含む。ＶＬドメインと会合したＶＨドメインを有する抗原結合性断片では、ＶＨドメインおよびＶＬドメインは、互いに対して任意の適切な配置で位置していてよい。例えば、可変領域は二量体型で有り得、ＶＨ−ＶＨ二量体、ＶＨ−ＶＬ二量体またはＶＬ−ＶＬ二量体を含有してよい。あるいは、抗体の抗原結合性断片は、単量体のＶＨドメインまたはＶＬドメインを含有してよい。
【００８７】
ある特定の実施形態では、抗体の抗原結合性断片は、少なくとも１つの定常ドメインに共有結合的に連結した少なくとも１つの可変ドメインを含有してよい。本発明の抗体の抗原結合性断片内に見いだすことができる可変ドメインおよび定常ドメインの非限定的な例示的な構成としては、（ｉ）ＶＨ−ＣＨ１；（ｉｉ）ＶＨ−ＣＨ２；（ｉｉｉ）ＶＨ−ＣＨ３；（ｉｖ）ＶＨ−ＣＨ１−ＣＨ２；（ｖ）ＶＨ−ＣＨ１−ＣＨ２−ＣＨ３；（ｖｉ）ＶＨ−ＣＨ２−ＣＨ３；（ｖｉｉ）ＶＨ−ＣＬ；（ｖｉｉｉ）ＶＬ−ＣＨ１；（ｉｘ）ＶＬ−ＣＨ２；（ｘ）ＶＬ−ＣＨ３；（ｘｉ）ＶＬ−ＣＨ１−ＣＨ２；（ｘｉｉ）ＶＬ−ＣＨ１−ＣＨ２−ＣＨ３；（ｘｉｉｉ）ＶＬ−ＣＨ２−ＣＨ３；および（ｘｉｖ）ＶＬ−ＣＬが挙げられる。上に列挙されている例示的な構成のいずれかを含めた可変ドメインおよび定常ドメインの任意の構成において、可変ドメインと定常ドメインは、互いと直接連結していても、完全なもしくは部分的なヒンジまたはリンカー領域によって連結していてもよい。ヒンジ領域は、単一のポリペプチド分子において隣接する可変ドメインおよび／または定常ドメインの間に可撓性または半可撓性の連結をもたらす少なくとも２個（例えば、５、１０、１５、２０、４０、６０個またはそれ超）のアミノ酸からなってよい。さらに、本発明の抗体の抗原結合性断片は、互いとおよび／または１つもしくは複数の単量体のＶＨドメインもしくはＶＬドメインと非共有結合的に会合した（例えば、ジスルフィド結合（複数可）によって）、上に列挙されている可変ドメインおよび定常ドメイン構成のいずれかのホモ二量体またはヘテロ二量体（または他の多量体）を含んでよい。
【００８８】
完全抗体分子と同様に、抗原結合性断片は、単一特異性または多重特異性（例えば、二重特異性）であってよい。抗体の多重特異性抗原結合性断片は、典型的には、少なくとも２つの異なる可変ドメインを含み、各可変ドメインは、別々の抗原または同じ抗原上の異なるエピトープに特異的に結合することができる。本明細書に開示されている例示的な二重特異性抗体形式を含めた任意の多重特異性抗体形式を、当技術分野において利用可能な常套的な技法を使用した本発明の抗体の抗原結合性断片に関する使用に適応させることができる。
【００８９】
本発明の抗体は、ＩＬ−２５とその受容体構成成分（複数可）のうちの１つまたは複数との相互作用を遮断するかまたは別の方法で妨害することによって機能し得る。あるいは、本発明の抗体は、ＩＬ−２５とその受容体との相互作用を遮断することを含まない機構を介して、ＩＬ−２５媒介性シグナル伝達を阻害することができる。さらに他の実施形態では、本発明の抗体は、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）または抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を介して機能し得る。「補体依存性細胞傷害」（ＣＤＣ）は、補体の存在下で本発明の抗体によって抗原を発現する細胞を溶解することを指す。「抗体依存性細胞媒介性細胞傷害」（ＡＤＣＣ）は、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）を発現する非特異的な細胞傷害性細胞（例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、好中球、およびマクロファージ）が標的細胞上の結合した抗体を認識することにより標的細胞の溶解を引き起こす細胞媒介性反応を指す。ＣＤＣおよびＡＤＣＣは、当技術分野において周知であり利用可能なアッセイを使用して測定することができる。（例えば、米国特許第５，５００，３６２号および同第５，８２１，３３７号、ならびにＣｌｙｎｅｓら（１９９８年）Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．（ＵＳＡ）９５巻：６５２〜６５６頁を参照されたい）。抗体の定常領域は、補体を固定して細胞依存性細胞傷害を媒介する抗体の能力において重要である。したがって、抗体のアイソタイプは、細胞傷害を媒介することが抗体にとって望ましいかどうかに基づき選択され得る。
【００９０】
「ヒト抗体」という用語は、本明細書で使用される場合、天然には生じないヒト抗体を含むものとする。用語は、非ヒト哺乳動物においてまたは非ヒト哺乳動物の細胞において組換えで産生された抗体を含む。用語は、ヒト被験体から単離されたまたはヒト被験体において生成された抗体は含まないものとする。
【００９１】
本発明の抗体は、一部の実施形態では、組換えおよび／または天然には生じないヒト抗体であってよい。「組換えヒト抗体」という用語は、本明細書で使用される場合、宿主細胞にトランスフェクトした組換え発現ベクターを使用して発現させた抗体（以下でさらに記載する）、組換えコンビナトリアルヒト抗体ライブラリーから単離された抗体（以下でさらに記載する）、ヒト免疫グロブリン遺伝子についてトランスジェニックである動物（例えば、マウス）から単離された抗体（例えば、Ｔａｙｌｏｒら（１９９２年）Ｎｕｃｌ．  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．  ２０巻：６２８７〜６２９５頁を参照されたい）、または、ヒト免疫グロブリン遺伝子配列の他のＤＮＡ配列へのスプライシングを伴う任意の他の手段によって調製、発現、創出もしくは単離された抗体などの、組換え手段によって調製、発現、創出または単離された全てのヒト抗体を含むものとする。ある特定の実施形態では、そのような組換えヒト抗体をｉｎ  ｖｉｔｒｏ変異誘発（または、ヒトＩｇ配列についてトランスジェニックである動物を使用する場合、ｉｎ  ｖｉｖｏ体細胞変異誘発）に供し、したがって、組換え抗体のＶＨ領域およびＶＬ領域のアミノ酸配列は、ヒト生殖細胞系列ＶＨ配列およびＶＬ配列に関連するが、ｉｎ  ｖｉｖｏにおけるヒト抗体生殖細胞系列レパートリー内に天然に存在しなくてよい配列である。
【００９２】
ヒト抗体は、ヒンジの不均一性に関連する２つの形態で存在し得る。１つの形態では、免疫グロブリン分子は、二量体が鎖間の重鎖ジスルフィド結合によってひとつにまとまった、およそ１５０〜１６０ｋＤａの安定な４本鎖構築物を含む。第２の形態では、二量体は鎖間ジスルフィド結合を介して連結しておらず、共有結合的にカップリングした軽鎖および重鎖で構成される約７５〜８０ｋＤａの分子が形成される（半抗体（ｈａｌｆ−ａｎｔｉｂｏｄｙ））。これらの形態は、親和性精製後でさえ、分離するのが極めて難しい。
【００９３】
種々のインタクトなＩｇＧアイソタイプにおいて第２の形態が出現する頻度は、これだけに限定されないが、抗体のヒンジ領域アイソタイプに関連する構造的な差異に起因する。ヒトＩｇＧ４ヒンジのヒンジ領域における単一のアミノ酸置換により、第２の形態の出現が、ヒトＩｇＧ１ヒンジを使用して典型的に観察されるレベルまで有意に低下し得る（Ａｎｇａｌら（１９９３年）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ３０巻：１０５頁）。本発明は、ヒンジ、例えば、産生において、所望の抗体形態の収量を改善するために望ましい可能性があるＣＨ２領域またはＣＨ３領域における１つまたは複数の変異を有する抗体を包含する。
【００９４】
「特異的に結合する（ｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｌｙ  ｂｉｎｄｓ）」または「に特異的に結合する（ｂｉｎｄｓ  ｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｌｙ  ｔｏ）」などの用語は、抗体またはその抗原結合性断片が、生理的条件下で抗原と比較的安定な複合体を形成することを意味する。特異的な結合とは、平衡解離定数が少なくとも約１×１０−６Ｍまたはそれ未満であることによって特徴付けられ得る（例えば、ＫＤが小さいほど結合が密接であることを示す）。２つの分子が特異的に結合するかどうかを決定するための方法は当技術分野で周知であり、それらとして、例えば、平衡透析、表面プラズモン共鳴などが挙げられる。本明細書に記載の通り、抗体は、表面プラズモン共鳴、例えば、ＩＬ−２５に特異的に結合するＢＩＡＣＯＲＥ（商標）によって同定されている。さらに、ＩＬ−２５タンパク質および１つもしくは複数の追加的な抗原に結合する多重特異性抗体またはＩＬ−２５の２つの異なる領域に結合する二重特異性抗体は、それにもかかわらず、本明細書で使用される場合、「特異的に結合する」抗体と考えられる。
【００９５】
本発明の抗体は、単離された抗体であってよい。「単離された抗体」とは、本明細書で使用される場合、その天然の環境の少なくとも１つの構成成分から同定され、分離および／または回収された抗体を意味する。例えば、生物体の少なくとも１つの構成成分から、または、抗体が天然に存在するもしくは天然に産生される組織もしくは細胞から分離されたまたは取り出された抗体は、本発明の目的上、「単離された抗体」である。単離された抗体は、組換え細胞内のｉｎ  ｓｉｔｕの抗体も含む。単離された抗体は、少なくとも１つの精製または単離ステップに供された抗体である。ある特定の実施形態によると、単離された抗体は、他の細胞性材料および／または化学物質を実質的に含まなくてよい。
【００９６】
本明細書に開示されている抗ＩＬ−２５抗体は、重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインのフレームワーク領域および／またはＣＤＲ領域に１個または複数のアミノ酸置換、挿入および／または欠失を含んでよい。そのような変異は、本明細書に開示されているアミノ酸配列を例えば公共の抗体配列データベースから入手可能な配列と比較することによって容易に確認することができる。１つまたは複数の変異を含有する抗体および抗原結合性断片が得られたら、それを、例えば、改善された結合特異性、上昇した結合親和性、改善されたまたは増強されたアンタゴニスト的またはアゴニスト的生物学的性質（場合によって）、低下した免疫原性などの１つまたは複数の所望の性質について容易に試験することができる。この一般的な様式で得られる抗体および抗原結合性断片は本発明の範囲内に包含される。
【００９７】
本発明は、１個または複数の保存的置換を有する、本明細書に開示されているＨＣＶＲ、ＬＣＶＲ、および／またはＣＤＲアミノ酸配列のいずれかのバリアントを含む抗ＩＬ−２５抗体も含む。例えば、本発明は、例えば、本明細書の表１に記載されているＨＣＶＲ、ＬＣＶＲ、および／またはＣＤＲアミノ酸配列のいずれかと比較して１０個またはそれ未満、８個またはそれ未満、６個またはそれ未満、４個またはそれ未満などの保存的アミノ酸置換を伴うＨＣＶＲ、ＬＣＶＲ、および／またはＣＤＲアミノ酸配列を有する抗ＩＬ−２５抗体を含む。
【００９８】
「エピトープ」という用語は、パラトープとして公知の抗体分子の可変領域内の特異的な抗原結合性部位と相互作用する抗原決定基を指す。単一の抗原は、１つ超のエピトープを有し得る。したがって、異なる抗体が抗原上の異なるエリアに結合し得、異なる生物学的効果を有し得る。エピトープは、コンフォメーション性または直鎖状であってよい。コンフォメーションエピトープは、直鎖状ポリペプチド鎖の異なるセグメントに由来する空間的に並んだアミノ酸によって作られる。直鎖状エピトープは、ポリペプチド鎖内の隣接するアミノ酸残基によって作られるエピトープである。ある特定の状況では、エピトープは、抗原上の糖類、ホスホリル基、またはスルホニル基の部分を含み得る。
【００９９】
「実質的な同一性（ｓｕｂｓｔａｎｔｉａｌ  ｉｄｅｎｔｉｔｙ）」または「実質的に同一の（ｓｕｂｓｔａｎｔｉａｌｌｙ  ｉｄｅｎｔｉｃａｌ）」という用語は、核酸またはその断片について言及する場合、別の核酸（またはその相補鎖）と、適切なヌクレオチド挿入または欠失を伴って最適にアラインメントした場合に、以下に考察する通り、ＦＡＳＴＡ、ＢＬＡＳＴまたはＧａｐなどの任意の周知の配列同一性のアルゴリズムによって測定して、ヌクレオチド塩基の少なくとも約９５％、およびより好ましくは少なくとも約９６％、９７％、９８％または９９％のヌクレオチド配列同一性があることを示す。参照核酸分子に対して実質的な同一性を有する核酸分子は、ある特定の例では、参照核酸分子によりコードされるポリペプチドと同じまたは実質的に類似したアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードし得る。
【０１００】
ポリペプチドに適用される場合、「実質的な類似性（ｓｕｂｓｔａｎｔｉａｌ  ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ）」または「実質的に類似した（ｓｕｂｓｔａｎｔｉａｌｌｙ  ｓｉｍｉｌａｒ）」という用語は、２つのペプチド配列が、デフォルトギャップ重みづけを使用してプログラムＧＡＰまたはＢＥＳＴＦＩＴなどによって最適にアラインメントした場合に、少なくとも９５％の配列同一性、なおより好ましくは少なくとも９８％または９９％の配列同一性を共有することを意味する。同一でない残基の位置は保存的アミノ酸置換によって異なることが好ましい。「保存的アミノ酸置換」とは、アミノ酸残基が、化学的性質（例えば、電荷または疎水性）が同様である側鎖（Ｒ基）を有する別のアミノ酸残基で置換されたものである。一般に、保存的アミノ酸置換は、タンパク質の機能的性質を実質的に変化させない。２つまたはそれ超のアミノ酸配列が互いと保存的置換によって異なる場合、パーセント配列同一性または類似性の程度を上向きに調整して置換の保存的本質を補正することができる。この調整を行うための手段は当業者に周知である。例えば、参照により本明細書に組み込まれるＰｅａｒｓｏｎ（１９９４年）Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ２４巻：３０７〜３３１頁を参照されたい。化学的性質が同様である側鎖を有するアミノ酸の群の例としては、（１）脂肪族側鎖：グリシン、アラニン、バリン、ロイシンおよびイソロイシン；（２）脂肪族ヒドロキシル側鎖：セリンおよびトレオニン；（３）アミドを含有する側鎖：アスパラギンおよびグルタミン；（４）芳香族側鎖：フェニルアラニン、チロシンおよびトリプトファン；（５）塩基性側鎖：リシン、アルギニン、およびヒスチジン；（６）酸性側鎖：アスパラギン酸およびグルタミン酸、ならびに（７）硫黄を含有する側鎖はシステインおよびメチオニンである、が挙げられる。好ましい保存的アミノ酸置換の群は、バリン−ロイシン−イソロイシン、フェニルアラニン−チロシン、リシン−アルギニン、アラニン−バリン、グルタミン酸−アスパラギン酸、およびアスパラギン−グルタミンである。あるいは、保存的置き換えとは、参照により本明細書に組み込まれる、Ｇｏｎｎｅｔら（１９９２年）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５６巻：１４４３〜１４４５頁に開示されているＰＡＭ２５０対数尤度行列において正の値を有する任意の変化である。「中程度に保存的」な置き換えとは、ＰＡＭ２５０対数尤度行列において負でない値を有する任意の変化である。
【０１０１】
ポリペプチドに関する配列類似性は、配列同一性とも称され、典型的には、配列解析ソフトウェアを使用して測定される。タンパク質解析ソフトウェアは、保存的アミノ酸置換を含めた種々の置換、欠失および他の修飾に割り当てられる類似性の尺度を使用して同様の配列をマッチさせる。例えば、ＧＣＧソフトウェアは、デフォルトパラメータを用いて使用して、異なる種の生物体に由来する相同なポリペプチドなどの密接に関連するポリペプチド間、または野生型タンパク質とその変異タンパク質の間の配列相同性または配列同一性を決定することができるＧａｐおよびＢｅｓｔｆｉｔなどのプログラムを含有する。例えば、ＧＣＧバージョン６．１を参照されたい。ポリペプチド配列は、ＧＣＧバージョン６．１中のプログラムであるＦＡＳＴＡを使用し、デフォルトまたは推奨されるパラメータを使用して比較することもできる。ＦＡＳＴＡ（例えば、ＦＡＳＴＡ２およびＦＡＳＴＡ３）は、クエリ配列と検索配列の重複が最適な領域のアラインメントおよびパーセント配列同一性をもたらす（Ｐｅａｒｓｏｎ（２０００年）上記）。本発明の配列と、異なる生物体に由来する多数の配列を含有するデータベースを比較する際の別の好ましいアルゴリズムは、デフォルトパラメータを使用した、コンピュータプログラムＢＬＡＳＴ、特にＢＬＡＳＴＰまたはＴＢＬＡＳＴＮである。例えば、それぞれが参照により本明細書に組み込まれるＡｌｔｓｃｈｕｌら（１９９０年）Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ２１５巻：４０３〜４１０頁およびＡｌｔｓｃｈｕｌら（１９９７年）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．  ２５巻：３３８９〜４０２頁を参照されたい。
【０１０２】
ｐＨ依存性結合
本発明は、ｐＨ依存性結合特徴を有する抗ＩＬ−２５抗体を含む。例えば、中性ｐＨと比較して酸性ｐＨにおいて本発明の抗ＩＬ−２５抗体はＩＬ−２５への結合の低下を示し得る。あるいは、中性ｐＨと比較して酸性ｐＨにおいて本発明の抗ＩＬ−２５抗体はＩＬ−２５への結合の増強を示し得る。「酸性ｐＨ」という表現は、約６．２未満、例えば、約６．０、５．９５、５，９、５．８５、５．８、５．７５、５．７、５．６５、５．６、５．５５、５．５、５．４５、５．４、５．３５、５．３、５．２５、５．２、５．１５、５．１、５．０５、５．０、またはそれ未満のｐＨ値を含む。本明細書で使用される場合、「中性ｐＨ」という表現は、約７．０〜約７．４のｐＨを意味する。「中性ｐＨ」という表現は、約７．０、７．０５、７．１、７．１５、７．２、７．２５、７．３、７．３５、および７．４のｐＨ値を含む。
【０１０３】
ある特定の例では、「中性ｐＨと比較して酸性ｐＨにおいてＩＬ−２５への結合の低下」とは、酸性ｐＨにおけるＩＬ−２５へ結合する抗体のＫＤ値と中性ｐＨにおけるＩＬ−２５へ結合する抗体のＫＤ値との比（または逆もまた同じ）に関して表現される。例えば、抗体またはその抗原結合性断片が約３．０またはそれ超の酸性／中性ＫＤ比を示す場合、本発明の目的上、抗体またはその抗原結合性断片は、「中性ｐＨと比較して酸性ｐＨにおいてＩＬ−２５への結合の低下」を示しているとみなすことができる。ある特定の例示的な実施形態では、本発明の抗体または抗原結合性断片についての酸性／中性ＫＤ比は、約３．０、３．５、４．０、４．５、５．０、５．５、６．０、６．５、７．０、７．５、８．０、８．５、９．０、９．５、１０．０、１０．５、１１．０、１１．５、１２．０、１２．５、１３．０、１３．５、１４．０、１４．５、１５．０、２０．０．２５．０、３０．０、４０．０、５０．０、６０．０、７０．０、１００．０またはそれ超であり得る。
【０１０４】
ｐＨ依存性結合特徴を有する抗体は、例えば、抗体の集団を、中性ｐＨと比較して酸性ｐＨにおける特定の抗原への結合の低下（または増強）についてスクリーニングすることによって得ることができる。さらに、抗原結合性ドメインをアミノ酸レベルで改変することにより、ｐＨ依存性特徴を有する抗体を得ることができる。例えば、抗原結合性ドメイン（例えば、ＣＤＲ内）の１個または複数のアミノ酸をヒスチジン残基で置換することにより、中性ｐＨに対して酸性ｐＨにおける抗原結合が低下した抗体を得ることができる。
【０１０５】
Ｆｃバリアントを含む抗ＩＬ−２５抗体
本発明のある特定の実施形態によると、ＦｃＲｎ受容体への抗体結合を例えば中性ｐＨと比較して酸性ｐＨにおいて増強するまたは減少させる１つまたは複数の変異を含むＦｃドメインを含む抗ＩＬ−２５抗体が提供される。例えば、本発明は、ＦｃドメインのＣＨ２領域またはＣＨ３領域に変異を含む抗ＩＬ−２５抗体を含み、ここで、変異（複数可）により、酸性環境（例えば、ｐＨが約５．５〜約６．０の範囲のエンドソーム内）におけるＦｃドメインのＦｃＲｎに対する親和性が増大する。そのような変異により、動物に投与した際、抗体の血清半減期の増大をもたらすことができる。そのようなＦｃ改変の非限定的な例としては、例えば、２５０位（例えば、ＥまたはＱ）；２５０位および４２８位（例えば、ＬまたはＦ）；２５２位（例えば、Ｌ／Ｙ／Ｆ／ＷまたはＴ）、２５４位（例えば、ＳまたはＴ）、および２５６位（例えば、Ｓ／Ｒ／Ｑ／Ｅ／ＤまたはＴ）における改変；または、４２８位および／もしくは４３３位（例えば、Ｈ／Ｌ／Ｒ／Ｓ／Ｐ／ＱまたはＫ）および／もしくは４３４位（例えば、Ｈ／ＦまたはＹ）における改変；または２５０位および／もしくは４２８位における改変；または、３０７位もしくは３０８位（例えば、３０８Ｆ、Ｖ３０８Ｆ）、および４３４位における改変が挙げられる。一実施形態では、改変は、４２８Ｌ（例えば、Ｍ４２８Ｌ）および４３４Ｓ（例えば、Ｎ４３４Ｓ）改変；４２８Ｌ、２５９Ｉ（例えば、Ｖ２５９Ｉ）、および３０８Ｆ（例えば、Ｖ３０８Ｆ）改変；４３３Ｋ（例えば、Ｈ４３３Ｋ）および４３４（例えば、４３４Ｙ）改変；２５２、２５４、および２５６（例えば、２５２Ｙ、２５４Ｔ、および２５６Ｅ）改変；２５０Ｑおよび４２８Ｌ改変（例えば、Ｔ２５０ＱおよびＭ４２８Ｌ）；ならびに３０７および／または３０８改変（例えば、３０８Ｆまたは３０８Ｐ）を含む。
【０１０６】
例えば、本発明は、２５０Ｑおよび２４８Ｌ（例えば、Ｔ２５０ＱおよびＭ２４８Ｌ）；２５２Ｙ、２５４Ｔおよび２５６Ｅ（例えば、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４ＴおよびＴ２５６Ｅ）；４２８Ｌおよび４３４Ｓ（例えば、Ｍ４２８ＬおよびＮ４３４Ｓ）；２５７Ｉおよび３１１Ｉ（例えば、Ｐ２５７ＩおよびＱ３１１Ｉ）；ならびに４３３Ｋおよび４３４Ｆ（例えば、Ｈ４３３ＫおよびＮ４３４Ｆ）からなる群より選択される変異の１つまたは複数の対または群を含むＦｃドメインを含む抗ＩＬ−２５抗体を含む。前述のＦｃドメイン変異、および本明細書に開示されている抗体可変ドメイン内の他の変異の可能性のある組合せの全てが本発明の範囲内に入るものとする。
【０１０７】
抗体の生物学的特徴
本発明は、２５℃で表面プラズモン共鳴によって測定して、約１２０ｐＭ未満のＫＤでヒトＩＬ−２５に結合する抗ＩＬ−２５抗体を含む。ある特定の実施形態によると、本発明は、約１００ｐＭ未満、約９０ｐＭ未満、約８０ｐＭ未満、約７０ｐＭ未満、約６０ｐＭ未満、約５０ｐＭ未満、約４０ｐＭ未満、約３０ｐＭ未満、約２０ｐＭ未満、約１８ｐＭ未満、約１６ｐＭ未満、約１４ｐＭ未満、または約１２ｐＭ未満のＫＤでヒトＩＬ−２５に結合する抗ＩＬ−２５抗体を含む。
【０１０８】
本発明は、２５℃で表面プラズモン共鳴によって測定して、約１０５分超の解離半減期（ｔ１／２）でヒトＩＬ−２５に結合する抗ＩＬ−２５抗体を含む。ある特定の実施形態によると、本発明は、約１０５分超、約１５０分超、約１７５分超、約２００分超、約２５０分超、約３００分超、約３５０分超、約４００分超、約４５０分超、約５００分超、約５５０分超、約６００分超、約７００分超、約８００分超、約９００分超、約１０００分超、約１１００分超、または約１２００分超のｔ１／２でヒトＩＬ−２５に結合する抗ＩＬ−２５抗体を含む。
【０１０９】
本発明は、サルＩＬ−２５、またはマウスもしくはラットＩＬ−２５に結合してもしなくてもよい抗ＩＬ−２５抗体を含む。本明細書で使用される場合、表面プラズモン共鳴などの抗原結合アッセイで試験した場合に、このようなアッセイにおいて抗体が約１０００ｎＭ超のＫＤを示すか、または抗原結合をまったく示さない場合、抗体は特定の抗原（例えば、サル、マウスまたはラットＩＬ−２５）に「結合しない」。本発明のこの態様に従って抗体が特定の抗原に結合するかまたは結合しないかを決定するのに使用できる別のアッセイ形式は、ＥＬＩＳＡである。
【０１１０】
本発明は、ＩＬ−２５受容体（ＩＬ−１７ＲＡ／ＩＬ−１７ＲＢ）を発現するように工学的に操作された細胞において、約２．０ｎＭ未満のＩＣ５０でヒトＩＬ−２５のシグナル伝達を遮断する抗ＩＬ−２５抗体を含む。例えば、本明細書の実施例６で示されるように、ＨＥＫ２９３細胞を、ヒトＩＬ−１７ＲＡ（受託番号ＮＰ＿０５５１５４．３のアミノ酸１から８６６）およびＩＬ−１７ＲＢ（受託番号ＮＰ＿０６１１９５．２のアミノ酸１から５０２）を安定して発現するように工学的に操作した。細胞株はまた、ＩＬ−１７ＲＡ／ＩＬ−１７ＲＢ受容体を介したＩＬ−２５媒介性シグナル伝達の検出を可能にするレポーターエレメント（例えば、ルシフェラーゼレポーター、またはＩＬ−２５がその受容体に結合することにより誘導される他の検出可能なレポーター）を含んでいてもよい。ＩＣ５０値は、実施例６に記載のアッセイ形式または実質的に類似したアッセイ形式を使用して、ＩＬ−２５媒介性シグナル伝達を抗体の非存在下で観察された最大のシグナルの５０％に低減させるのに必要な抗体の濃度として計算することができる。したがって、ある特定の実施形態によると、本発明は、本明細書の実施例６に記載のアッセイ形式または実質的に類似したアッセイを使用して測定して、ＩＬ−２５受容体（ＩＬ−１７ＲＡ／ＩＬ−１７ＲＢ）を発現するように工学的に操作された細胞において、約７２０ｐＭ未満、約５００ｐＭ未満、約４００ｐＭ未満、約３００ｐＭ未満、約２００ｐＭ未満、約１００ｐＭ未満、約９０ｐＭ未満、約８０ｐＭ未満、約７０ｐＭ未満、約６０ｐＭ未満、約５０ｐＭ未満、約４０ｐＭ未満、約３０ｐＭ未満、約２０ｐＭ未満、約１０ｐＭ未満、または約５ｐＭ未満のＩＣ５０でヒトＩＬ−２５のシグナル伝達を遮断する抗ＩＬ−２５抗体を含む。
【０１１１】
本発明は、ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）において、約１６ｎＭ未満のＩＣ５０でヒトＩＬ−２５のシグナル伝達を遮断する抗ＩＬ−２５抗体を含む。例えば、本明細書の実施例７で示されるように、単離されたＰＢＭＣをＩＬ−２５および様々な量の抗ＩＬ−２５抗体と共にインキュベートし、細胞によって産生されたＩＬ−５のレベルを検出して、ＩＬ−２５媒介性シグナル伝達の程度を示した。ＩＣ５０値は、実施例７に記載のアッセイ形式または実質的に類似したアッセイ形式を使用して、ＩＬ−２５媒介性シグナル伝達を抗体の非存在下で観察された最大のシグナルの５０％に低減させるのに必要な抗体の濃度として計算することができる。したがって、ある特定の実施形態によると、本発明は、本明細書の実施例７に記載のアッセイ形式または実質的に類似したアッセイを使用して測定して、ＰＢＭＣにおいて、約５ｎＭ未満、約４ｎＭ未満、約３ｎＭ未満、約１ｎＭ未満、約９００ｐＭ未満、約８００ｐＭ未満、約７００ｐＭ未満、約６００ｐＭ未満、約５００ｐＭ未満、約４００ｐＭ未満、約３００ｐＭ未満、約２００ｐＭ未満、約１００ｐＭ未満、約９０ｐＭ未満、約８０ｐＭ未満、約７０ｐＭ未満、約６０ｐＭ未満、約５０ｐＭ未満、約４０ｐＭ未満、約３０ｐＭ未満、または約２０ｐＭ未満のＩＣ５０でヒトＩＬ−２５のシグナル伝達を遮断する抗ＩＬ−２５抗体を含む。一実施形態では、本発明のＩＬ−２５抗体は、ヒトＰＢＭＣにおいて、約３０ｐＭ〜約１５０ｐＭの範囲のＩＣ５０でヒトＩＬ−２５のシグナル伝達を遮断する。
【０１１２】
本発明の抗体の結合特徴（例えば、本明細書の上で述べられた結合特徴のいずれか）は、「表面プラズモン共鳴によって測定される」という用語で開示されている場合、抗体と抗原との相互作用に伴う関連する結合特徴が、表面プラズモン共鳴機器（例えば、Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）機器、ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して、本明細書の実施例２または実質的に類似したアッセイ形式で例示されるような標準的なＢｉａｃｏｒｅアッセイ条件を使用して測定されることを意味する。ある特定の実施形態では、結合パラメータは２５℃で測定され、一方で他の実施形態では、結合パラメータは３７℃で測定される。
【０１１３】
本発明は、実施例８に記載のモデルで示されるように、ＩＬ−２５を過剰発現する哺乳動物の循環ＩｇＥレベルおよび／または肺で見いだされるＩｇＥレベルを低減させる抗ＩＬ−２５抗体を含む。ＩＬ−２５を過剰発現する哺乳動物において杯細胞化生を低減させる抗ＩＬ−２５抗体も、本明細書の実施例８に記載される。
【０１１４】
本発明は、表１に列挙したＨＣＶＲおよび／またはＬＣＶＲアミノ酸配列のいずれかから選択されるアミノ酸配列を含むＨＣＶＲおよび／またはＬＣＶＲを含む、ＩＬ−２５に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片を含む。
【０１１５】
本発明の抗体は、上述の生物学的特徴のうちの１つもしくは複数、またはそれらの任意の組合せを有してよい。前述の本発明の抗体の生物学的特徴の一覧は、網羅的なものではない。本発明の抗体の他の生物学的特徴は、本明細書の実用的な実施例を含めた本開示についての概説から当業者には明らかになろう。
【０１１６】
エピトープマッピングおよび関連技術
本発明の抗体が結合するエピトープは、ＩＬ−２５タンパク質の３個またはそれ超（例えば、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０個またはそれ超）のアミノ酸の単一の連続した配列からなり得る。あるいは、エピトープは、ＩＬ−２５の複数の連続していないアミノ酸（またはアミノ酸配列）からなり得る。一部の実施形態では、エピトープは、ＩＬ−２５受容体と相互作用するＩＬ−２５の表面上またはその近くに配置されている。他の実施形態では、エピトープは、ＩＬ−２５受容体と相互作用しないＩＬ−２５の表面上またはその近くに配置されており、例えば、抗体がこのようなエピトープに結合したときにＩＬ−２５とその受容体との相互作用に干渉しないＩＬ−２５の表面上の位置に配置されている。
【０１１７】
当業者に公知の種々の技法を使用して、抗体がポリペプチドまたはタンパク質内の「１個または複数のアミノ酸と相互作用する」かどうかを決定することができる。例示的な技法としては、例えば、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ、ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂ．、ＮＹ）に記載されているもの、アラニンスキャニング変異分析、ペプチドブロット分析（ｐｅｐｔｉｄｅ  ｂｌｏｔｓ  ａｎａｌｙｓｉｓ）（Ｒｅｉｎｅｋｅ、２００４年、Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ２４８巻：４４３〜４６３頁）、ならびにペプチド切断分析などの常套的な交差遮断アッセイが挙げられる。さらに、エピトープ切除、エピトープ抽出および抗原の化学修飾などの方法を用いることができる（Ｔｏｍｅｒ、２０００年、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ９巻：４８７〜４９６頁）。ポリペプチド内の、抗体が相互作用するアミノ酸を同定するために使用することができる別の方法は、質量分析によって検出される水素／重水素交換である。大まかに言えば、水素／重水素交換法は、目的のタンパク質を重水素で標識し、その後、抗体を重水素で標識したタンパク質に結合させることを含む。次に、タンパク質／抗体複合体を水に移して、抗体によって保護された残基（重水素で標識されたままである）を除く全ての残基において水素−重水素交換を生じさせる。抗体を解離させた後、標的タンパク質をプロテアーゼによる切断および質量分析に供し、それにより、抗体が相互作用する特定のアミノ酸に対応する、重水素で標識された残基を明らかにする。例えば、Ｅｈｒｉｎｇ（１９９９年）Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２６７巻（２号）：２５２〜２５９頁；ＥｎｇｅｎおよびＳｍｉｔｈ（２００１年）Ａｎａｌ．  Ｃｈｅｍ．  ７３巻：２５６Ａ〜２６５Ａ頁を参照されたい。
【０１１８】
本発明は、本明細書に記載されている特定の例示的な抗体のいずれか（例えば、本明細書の表１に記載されているアミノ酸配列のいずれかを含む抗体）と同じエピトープに結合する抗ＩＬ−２５抗体を含む。同様に、本発明は、本明細書に記載されている特定の例示的な抗体のいずれか（例えば、本明細書の表１に記載されているアミノ酸配列のいずれかを含む抗体）とＩＬ−２５への結合について競合する抗ＩＬ−２５抗体も含む。
【０１１９】
抗体が参照抗ＩＬ−２５抗体と同じエピトープに結合するか、または結合について競合するかどうかは、当技術分野で公知であり、本明細書において例示されている常套的な方法を使用することによって容易に決定することができる。例えば、試験抗体が本発明の参照抗ＩＬ−２５抗体と同じエピトープに結合するかどうかを決定するために、参照抗体をＩＬ−２５タンパク質に結合させる。次に、試験抗体のＩＬ−２５分子に結合する能力を評価する。試験抗体が、参照抗ＩＬ−２５抗体を用いた飽和結合後にＩＬ−２５に結合することができれば、試験抗体は参照抗ＩＬ−２５抗体とは異なるエピトープに結合すると結論づけることができる。他方では、試験抗体が、参照抗ＩＬ−２５抗体を用いた飽和結合後にＩＬ−２５分子に結合することができなければ、試験抗体は、本発明の参照抗ＩＬ−２５抗体が結合するエピトープと同じエピトープに結合する可能性がある。次いで、追加的な常套的な実験法（例えば、ペプチド変異および結合分析）を行って、観察された試験抗体の結合の欠如が実際に参照抗体と同じエピトープに結合することに起因するのか、または立体的な遮断（または別の現象）が観察された結合の欠如に関与するのかを確認することができる。この種の実験は、ＥＬＩＳＡ、ＲＩＡ、Ｂｉａｃｏｒｅ、フローサイトメトリーまたは当技術分野において利用可能な任意の他の定量的もしくは定性的な抗体結合アッセイを使用して実施することができる。本発明のある特定の実施形態に従って、２つの抗体は、例えば、競合結合アッセイ（例えば、Ｊｕｎｇｈａｎｓら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  １９９０年：５０巻：１４９５〜１５０２頁を参照されたい）において測定して、１、５、１０、２０または１００倍過剰の一方の抗体により他方の抗体の結合が少なくとも５０％であるが好ましくは７５％、９０％またはさらには９９％阻害される場合、同じ（または重複した）エピトープに結合する。あるいは、２つの抗体は、一方の抗体の結合を低下させるまたは排除する抗原のアミノ酸変異の基本的に全てによって他方の抗体の結合も低下するまたは排除される場合、同じエピトープに結合するとみなされる。２つの抗体は、一方の抗体の結合を低下させるまたは排除するアミノ酸変異のあるサブセットのみによって他方の抗体の結合が低下するまたは排除される場合、「重複したエピトープ」を有するとみなされる。
【０１２０】
抗体が参照抗ＩＬ−２５抗体と結合について競合する（または結合について交差競合する）かどうかを決定するために、上記の結合方法体系を２方向で実施する：第１の方向では、参照抗体をＩＬ−２５タンパク質に飽和条件下で結合させ、その後、試験抗体のＩＬ−２５分子への結合を評価する。第２の方向では、試験抗体をＩＬ−２５分子に飽和条件下で結合させ、その後、参照抗体のＩＬ−２５分子への結合を評価する。どちらの方向においても最初の（飽和）抗体のみがＩＬ−２５分子に結合することができる場合には、試験抗体と参照抗体はＩＬ−２５への結合について競合すると結論づけられる（例えば、センサーチップ上にＩＬ−２５タンパク質を捕捉し、ＩＬ−２５でコーティングされたセンサーチップを参照抗体［ｍＡｂ−１］と試験抗ＩＬ−２５抗体［ｍＡｂ−２］とで逐次的に、および両方の結合順で処理する本明細書の実施例４に記載のアッセイ形式を参照されたい）。当業者には理解される通り、参照抗体と結合について競合する抗体は、必ずしも参照抗体と同じエピトープに結合するわけではなく、参照抗体による結合を重複したまたは隣接するエピトープに結合することによって立体的に遮断し得る。
【０１２１】
ヒト抗体の調製
本発明の抗ＩＬ−２５抗体は、完全ヒト、しかし天然には生じない抗体であってよい。完全ヒトモノクローナル抗体を含めたモノクローナル抗体を生成するための方法は当技術分野で公知である。任意のそのような公知の方法を、本発明に関してヒトＩＬ−２５に特異的に結合するヒト抗体を作製するために使用することができる。
【０１２２】
ＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）技術（例えば、ＵＳ６，５９６，５４１、Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ  Ｐｈａｒｎａｃｅｕｔｉｃａｌｓ、ＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）を参照されたい）またはモノクローナル抗体を生成するための任意の他の公知の方法を使用して、アレルゲンに対する高親和性キメラ抗体をヒト可変領域およびマウス定常領域を有するものとして最初に単離する。ＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）技術は、内在性マウス定常領域遺伝子座に作動可能に連結したヒト重鎖および軽鎖可変領域を含むゲノムを有するトランスジェニックマウスの生成を伴い、したがって、マウスにより、抗原性刺激に応答して、ヒト可変領域およびマウス定常領域を含む抗体が産生される。抗体の重鎖および軽鎖の可変領域をコードするＤＮＡを単離し、ヒト重鎖および軽鎖定常領域をコードするＤＮＡに作動可能に連結する。次いで、ＤＮＡを、完全ヒト抗体を発現することができる細胞において発現させる。
【０１２３】
一般に、ＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）マウスに目的の抗原を用いた攻撃を行い、抗体を発現するマウスからリンパ性細胞（Ｂ細胞など）を回収する。リンパ性細胞を骨髄腫細胞株と融合して不死ハイブリドーマ細胞株を調製し、そのようなハイブリドーマ細胞株をスクリーニングして選択して、目的の抗原に特異的な抗体を産生するハイブリドーマ細胞株を同定することができる。重鎖および軽鎖の可変領域をコードするＤＮＡを単離し、重鎖および軽鎖の望ましいアイソタイプの定常領域に連結することができる。そのような抗体タンパク質は、ＣＨＯ細胞などの細胞において産生させることができる。あるいは、抗原特異的キメラ抗体または軽鎖および重鎖の可変ドメインをコードするＤＮＡを抗原特異的リンパ球から直接単離することができる。
【０１２４】
下の実験のセクションに記載の通り、ヒト可変領域およびマウス定常領域を有するものとして単離される高親和性キメラ抗体を特徴付け、親和性、選択性、エピトープなどを含めた望ましい特徴について選択する。次いで、マウス定常領域を所望のヒト定常領域で置き換えて本発明の完全ヒト抗体、例えば、野生型または改変ＩｇＧ１またはＩｇＧ４を生成する。選択される定常領域は特定の使用に応じて変動し得るが、可変領域には高親和性の抗原結合性および標的特異性特徴がある。
【０１２５】
一般に、本発明の抗体は、非常に高い親和性を有し、典型的には、固相上に固定化してか、または溶液相において、抗原への結合によって測定される場合、約１０−１２Ｍから約１０−９ＭまでのＫＤを有する。
【０１２６】
生物学的等価物
本発明の抗ＩＬ−２５抗体および抗体断片は、記載されている抗体のアミノ酸配列からは変動するが、ヒトＩＬ−２５に結合する能力は保持するアミノ酸配列を有するタンパク質を包含する。そのようなバリアント抗体および抗体断片は、親配列と比較して１個または複数のアミノ酸の付加、欠失、または置換を含むが、記載されている抗体の生物学的活性と基本的に等価な生物学的活性を示す。同様に、本発明の抗ＩＬ−２５抗体をコードするＤＮＡ配列は、開示されている配列と比較して１つまたは複数のヌクレオチドの付加、欠失、または置換を含む配列を包含するが、本発明の抗ＩＬ−２５抗体または抗体断片と基本的に生物学的に等価である抗ＩＬ−２５抗体または抗体断片をコードする。そのようなバリアントアミノ酸およびＤＮＡ配列の例は上に考察されている。
【０１２７】
２つの抗原結合性タンパク質または抗体は、例えば、それらが、同じモル濃度の用量、同様の実験条件下、単回用量または複数回用量のいずれかで投与された場合に吸収の速度および程度に有意差が示されない薬学的等価物または薬学的代替物であれば、生物学的に等価であると考えられる。一部の抗体は、それらが、それらの吸収の程度は等価であるが、それらの吸収の速度は等価ではない場合にも等価物または薬学的代替物であると考えられ、それでも、そのような吸収の速度の差は意図的なものであり、標識に反映され、例えば慢性使用において有効な体内薬物濃度の達成のために必須ではなく、また、試験される特定の薬品に関して医学的に些細であると考えられることが理由で、生物学的に等価であると考えられ得る。
【０１２８】
一実施形態では、２つの抗原結合性タンパク質は、それらの安全性、純度、および効力に臨床的に意味のある差異がなければ、生物学的に等価である。
【０１２９】
一実施形態では、２つの抗原結合性タンパク質は、患者に対して、参照製品と上記生物学的製品の切り換えを伴わない継続療法と比較して免疫原性の臨床的に有意な変化または有効性の減弱を含めた有害効果のリスクの上昇が予測されることなくそのような切り替えを１回または複数回行うことができれば、生物学的に等価である。
【０１３０】
一実施形態では、２つの抗原結合性タンパク質は、作用機構（単数または複数）が公知である限りでは、どちらも使用する条件（単数または複数可）について共通のそのような機構によって作用すれば、生物学的に等価である。
【０１３１】
生物学的等価性は、ｉｎ  ｖｉｖｏおよびｉｎ  ｖｉｔｒｏにおける方法によって実証することができる。生物学的等価性の測定としては、例えば、（ａ）血液、血漿、血清、または他の生体液における抗体またはその代謝産物の濃度を時間に応じて測定する、ヒトまたは他の哺乳動物におけるｉｎ  ｖｉｖｏ試験；（ｂ）ヒトｉｎ  ｖｉｖｏ生物学的利用能データと相関し、合理的な予測であるｉｎ  ｖｉｔｒｏ試験；（ｃ）抗体（またはその標的）の適切な急性の薬理学的効果を時間に応じて測定する、ヒトまたは他の哺乳動物におけるｉｎ  ｖｉｖｏ試験；および（ｄ）抗体の安全性、効能、または生物学的利用能または生物学的等価性を確立する、十分に管理された臨床試験が挙げられる。
【０１３２】
本発明の抗ＩＬ−２５抗体の生物学的に等価なバリアントは、例えば、残基もしくは配列の種々の置換を行うこと、または生物学的活性に必要ではない末端もしくは内部の残基もしくは配列を欠失させることによって構築することができる。例えば、生物学的活性に必須ではないシステイン残基を欠失させるかまたは他のアミノ酸と置き換えて、復元の際に不必要なまたは適正でない分子内ジスルフィド架橋が形成されるのを予防することができる。他の状況では、生物学的に等価な抗体は、抗体のグリコシル化特徴が改変されるアミノ酸の変化、例えば、グリコシル化が排除または除去される変異を含む抗ＩＬ−２５抗体バリアントを含み得る。
【０１３３】
種の選択性および種の交差反応性
本発明は、ある特定の実施形態によると、ヒトＩＬ−２５に結合するが他の種由来のＩＬ−２５に結合しない抗ＩＬ−２５抗体を提供する。本発明はまた、ヒトＩＬ−２５および１種または複数の非ヒト種由来のＩＬ−２５に結合する抗ＩＬ−２５抗体も含む。例えば、本発明の抗ＩＬ−２５抗体は、ヒトＩＬ−２５に結合してもよく、場合によって、マウス、ラット、モルモット、ハムスター、アレチネズミ、ブタ、ネコ、イヌ、ウサギ、ヤギ、ヒツジ、ウシ、ウマ、ラクダ、カニクイザル（ｃｙｎｏｍｏｌｏｇｏｕｓ）、マーモセット、アカゲザルまたはチンパンジーのＩＬ−２５の１種または複数に結合してもよく、または結合しなくてもよい。本発明のある特定の例示的な実施形態によると、ヒトＩＬ−２５およびカニクイザル（例えば、Ｍａｃａｃａ  ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）のＩＬ−２５に特異的に結合する抗ＩＬ−２５抗体が提供される。本発明の他の抗ＩＬ−２５抗体は、ヒトＩＬ−２５に結合するが、カニクイザルのＩＬ−２５と結合しないかまたは弱くしか結合しない。
【０１３４】
多重特異性抗体
本発明の抗体は、単一特異性または多重特異性（例えば、二重特異性）であり得る。多重特異性抗体は、１つの標的ポリペプチドの異なるエピトープに特異的であってもよく、１つ超の標的ポリペプチドに特異的な抗原結合性ドメインを含有してもよい。例えば、Ｔｕｔｔら、１９９１年、Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １４７巻：６０〜６９頁；Ｋｕｆｅｒら、２００４年、Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．  ２２巻：２３８〜２４４頁を参照されたい。本発明の抗ＩＬ−２５抗体は、別の機能分子、例えば、別のペプチドもしくはタンパク質に連結するか、またはそれと同時発現させることができる。例えば、抗体またはその断片を別の抗体または抗体断片などの１つまたは複数の他の分子実体に機能的に連結して（例えば、化学カップリング、遺伝子融合、非共有結合性の会合またはその他によって）、第２の結合特異性を有する二重特異性または多重特異性抗体を作出することができる。
【０１３５】
本発明は、免疫グロブリンの一方のアームがヒトＩＬ−２５に結合し、免疫グロブリンの他方のアームが第２の抗原に特異的である二重特異性抗体を含む。ＩＬ−２５結合性アームは、本明細書の表１に記載されているＨＣＶＲ／ＬＣＶＲまたはＣＤＲアミノ酸配列のいずれかを含んでよい。
【０１３６】
本発明に関して使用することができる例示的な二重特異性抗体形式は、第１の免疫グロブリン（Ｉｇ）ＣＨ３ドメインおよび第２のＩｇ  ＣＨ３ドメインの使用を伴い、ここで、第１および第２のＩｇ  ＣＨ３ドメインは、互いと少なくとも１個のアミノ酸で異なり、少なくとも１個のアミノ酸の差異により、二重特異性抗体のプロテインＡへの結合がアミノ酸の差異を欠く二重特異性抗体と比較して低下する。一実施形態では、第１のＩｇ  ＣＨ３ドメインはプロテインＡに結合し、第２のＩｇ  ＣＨ３ドメインはプロテインＡへの結合を低下または消滅させる変異、例えばＨ９５Ｒ改変（ＩＭＧＴエクソン番号付け；ＥＵ番号付けによるとＨ４３５Ｒ）を含有する。第２のＣＨ３は、Ｙ９６Ｆ改変（ＩＭＧＴによる；ＥＵによるとＹ４３６Ｆ）をさらに含んでよい。第２のＣＨ３内に見いだすことができるさらなる改変としては、ＩｇＧ１抗体の場合では、Ｄ１６Ｅ、Ｌ１８Ｍ、Ｎ４４Ｓ、Ｋ５２Ｎ、Ｖ５７Ｍ、およびＶ８２Ｉ（ＩＭＧＴによる；ＥＵによるとＤ３５６Ｅ、Ｌ３５８Ｍ、Ｎ３８４Ｓ、Ｋ３９２Ｎ、Ｖ３９７Ｍ、およびＶ４２２Ｉ）；ＩｇＧ２抗体の場合では、Ｎ４４Ｓ、Ｋ５２Ｎ、およびＶ８２Ｉ（ＩＭＧＴ；ＥＵによるとＮ３８４Ｓ、Ｋ３９２Ｎ、およびＶ４２２Ｉ）；ならびにＩｇＧ４抗体の場合では、Ｑ１５Ｒ、Ｎ４４Ｓ、Ｋ５２Ｎ、Ｖ５７Ｍ、Ｒ６９Ｋ、Ｅ７９Ｑ、およびＶ８２Ｉ（ＩＭＧＴによる；ＥＵによるとＱ３５５Ｒ、Ｎ３８４Ｓ、Ｋ３９２Ｎ、Ｖ３９７Ｍ、Ｒ４０９Ｋ、Ｅ４１９Ｑ、およびＶ４２２Ｉ）が挙げられる。上記の二重特異性抗体形式の変形は本発明の範囲内に入るものとする。
【０１３７】
本発明に関して使用することができる他の例示的な二重特異性形式としては、限定することなく、例えば、ｓｃＦｖに基づくまたはダイアボディ二重特異性形式、ＩｇＧ−ｓｃＦｖ融合、二重可変ドメイン（ＤＶＤ）−Ｉｇ、クアドローマ、ノブイントゥホール（ｋｎｏｂｓ−ｉｎｔｏ−ｈｏｌｅｓ）、共通軽鎖（例えば、ノブイントゥホールを有する共通軽鎖など）、ＣｒｏｓｓＭａｂ、ＣｒｏｓｓＦａｂ、（ＳＥＥＤ）ボディ、ロイシンジッパー、Ｄｕｏｂｏｄｙ、ＩｇＧ１／ＩｇＧ２、二重作用性Ｆａｂ（ＤＡＦ）−ＩｇＧ、およびＭａｂ２二重特異性形式が挙げられる（例えば、Ｋｌｅｉｎら、２０１２年、ｍＡｂｓ  ４巻：６号、１〜１１頁、および前述の形式の概説についてそこに引用されている参考文献を参照されたい）。二重特異性抗体は、例えば、後で組成、結合価および幾何学的形状が定義済みの多量体複合体に自己組織化する部位特異的抗体−オリゴヌクレオチドコンジュゲートを生成するために直交性の化学反応性を有する非天然アミノ酸を使用する場合、ペプチド／核酸コンジュゲーションを使用して構築することもできる（例えば、Ｋａｚａｎｅら、Ｊ．  Ａｍ．  Ｃｈｅｍ．  Ｓｏｃ．［Ｅｐｕｂ：２０１２年１２月４日］を参照されたい）。
【０１３８】
治療用製剤および投与
本発明は、本発明の抗ＩＬ−２５抗体またはその抗原結合性断片を含む医薬組成物を提供する。本発明の医薬組成物は、適切な担体、賦形剤、および移行、送達、耐性の改善をもたらす他の薬剤などを用いて製剤化する。多数の適切な製剤を全ての薬剤師に公知の処方集において見いだすことができる：Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｅａｓｔｏｎ、ＰＡ。これらの製剤としては、例えば、散剤、ペースト剤、軟膏剤、ゼリー、ワックス、油、脂質、脂質（陽イオン性または陰イオン性）を含有する小胞（ＬＩＰＯＦＥＣＴＩＮ（商標）、Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡなど）、ＤＮＡコンジュゲート、無水吸収ペースト剤、水中油エマルジョンおよび油中水エマルジョン、エマルジョンカーボワックス（種々の分子量のポリエチレングリコール）、半固体ゲル、およびカーボワックスを含有する半固体混合物が挙げられる。Ｐｏｗｅｌｌら、「Ｃｏｍｐｅｎｄｉｕｍ  ｏｆ  ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ  ｆｏｒ  ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ  ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ」、ＰＤＡ（１９９８年）Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｓｃｉ  Ｔｅｃｈｎｏｌ  ５２巻：２３８〜３１１頁も参照されたい。
【０１３９】
患者に投与される抗体の用量は、患者の年齢およびサイズ、標的疾患、状態、投与経路などに応じて変動し得る。好ましい用量は、典型的には、体重または体表面積に応じて算出される。成体患者では、本発明の抗体を通常は約０．０１〜約２０ｍｇ／ｋｇ体重、より好ましくは約０．０２〜約７ｍｇ／ｋｇ体重、約０．０３〜約５ｍｇ／ｋｇ体重、または約０．０５〜約３ｍｇ／ｋｇ体重の単回用量で静脈内投与することが有利であり得る。状態の重症度に応じて、処置の頻度および持続時間を調整することができる。抗ＩＬ−２５抗体を投与するための有効な投薬量およびスケジュールは経験的に決定することができる。例えば、患者の進行を周期的な評価によってモニタリングして、それに応じて用量を調整することができる。さらに、種間での投薬量を一定の基準にしたがって決めることは、当技術分野において周知の方法を使用して実施することができる（例えば、Ｍｏｒｄｅｎｔｉら、１９９１年、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔ．  Ｒｅｓ．  ８巻：１３５１頁）。
【０１４０】
種々の送達系、例えば、リポソーム、微小粒子、マイクロカプセルへの封入、変異体ウイルスを発現させることができる組換え細胞、受容体媒介性エンドサイトーシスが公知であり、本発明の医薬組成物を投与するために使用することができる（例えば、Ｗｕら、１９８７年、Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２６２巻：４４２９〜４４３２頁を参照されたい）。導入の方法としては、これだけに限定されないが、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内、皮下、鼻腔内、硬膜外、および経口経路が挙げられる。組成物は、任意の都合のよい経路によって、例えば、注入またはボーラス注射によって、上皮または粘膜皮膚の内層（例えば、口腔粘膜、直腸および腸粘膜など）を通じた吸収によって投与することができ、他の生物学的に活性な薬剤と一緒に投与することができる。投与は全身的または局所的であってよい。
【０１４１】
本発明の医薬組成物は、標準の針およびシリンジを用いて皮下または静脈内に送達することができる。さらに、皮下送達に関しては、ペン型送達デバイスが本発明の医薬組成物の送達に容易に適用される。そのようなペン型送達デバイスは、再使用可能または使い捨てであり得る。再使用可能なペン型送達デバイスには、一般に、医薬組成物を含有する交換可能なカートリッジが利用される。カートリッジ内の医薬組成物の全てが投与され、カートリッジが空になったら、空のカートリッジを容易に廃棄し、医薬組成物を含有する新しいカートリッジと交換することができる。次いで、ペン型送達デバイスを再使用することができる。使い捨てペン型送達デバイスでは、交換可能なカートリッジはない。そうではなく、使い捨てペン型送達デバイスにはデバイス内のレザバー中に保持された医薬組成物が予め充填されている。医薬組成物がなくなりレザバーが空になったら、デバイス全体を廃棄する。
【０１４２】
多数の再使用可能なペン型および自動注入器送達デバイスが本発明の医薬組成物の皮下送達に適用される。例としては、これだけに限定されないが、ほんのいくつか挙げると、ＡＵＴＯＰＥＮ（商標）（Ｏｗｅｎ  Ｍｕｍｆｏｒｄ、Ｉｎｃ．、Ｗｏｏｄｓｔｏｃｋ、ＵＫ）、ＤＩＳＥＴＲＯＮＩＣ（商標）ペン（Ｄｉｓｅｔｒｏｎｉｃ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｂｅｒｇｄｏｒｆ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）、ＨＵＭＡＬＯＧ  ＭＩＸ  ７５／２５（商標）ペン、ＨＵＭＡＬＯＧ（商標）ペン、ＨＵＭＡＬＩＮ  ７０／３０（商標）ペン（Ｅｌｉ  Ｌｉｌｌｙ  ａｎｄ  Ｃｏ．、Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ、ＩＮ）、ＮＯＶＯＰＥＮ（商標）Ｉ、ＩＩおよびＩＩＩ（Ｎｏｖｏ  Ｎｏｒｄｉｓｋ、Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ、Ｄｅｎｍａｒｋ）、ＮＯＶＯＰＥＮ  ＪＵＮＩＯＲ（商標）（Ｎｏｖｏ  Ｎｏｒｄｉｓｋ、Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ、Ｄｅｎｍａｒｋ）、ＢＤ（商標）ペン（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ、Ｆｒａｎｋｌｉｎ  Ｌａｋｅｓ、ＮＪ）、ＯＰＴＩＰＥＮ（商標）、ＯＰＴＩＰＥＮ  ＰＲＯ（商標）、ＯＰＴＩＰＥＮ  ＳＴＡＲＬＥＴ（商標）、ならびにＯＰＴＩＣＬＩＫ（商標）（ｓａｎｏｆｉ−ａｖｅｎｔｉｓ、Ｆｒａｎｋｆｕｒｔ、Ｇｅｒｍａｎｙ）がある。本発明の医薬組成物の皮下送達に適用される使い捨てペン型送達デバイスの例としては、これだけに限定されないが、ほんのいくつか挙げると、ＳＯＬＯＳＴＡＲ（商標）ペン（ｓａｎｏｆｉ−ａｖｅｎｔｉｓ）、ＦＬＥＸＰＥＮ（商標）（Ｎｏｖｏ  Ｎｏｒｄｉｓｋ）、およびＫＷＩＫＰＥＮ（商標）（Ｅｌｉ  Ｌｉｌｌｙ）、ＳＵＲＥＣＬＩＣＫ（商標）Ａｕｔｏｉｎｊｅｃｔｏｒ（Ａｍｇｅｎ、Ｔｈｏｕｓａｎｄ  Ｏａｋｓ、ＣＡ）、ＰＥＮＬＥＴ（商標）（Ｈａｓｅｌｍｅｉｅｒ、Ｓｔｕｔｔｇａｒｔ、Ｇｅｒｍａｎｙ）、ＥＰＩＰＥＮ（Ｄｅｙ，Ｌ．Ｐ．）、およびＨＵＭＩＲＡ（商標）Ｐｅｎ（Ａｂｂｏｔｔ  Ｌａｂｓ、Ａｂｂｏｔｔ  Ｐａｒｋ  ＩＬ）がある。
【０１４３】
ある特定の状況では、医薬組成物を制御放出系で送達することができる。一実施形態では、ポンプを使用することができる（Ｌａｎｇｅｒ、上記；Ｓｅｆｔｏｎ、１９８７年、ＣＲＣ  Ｃｒｉｔ．  Ｒｅｆ．  Ｂｉｏｍｅｄ．  Ｅｎｇ．  １４巻：２０１頁を参照されたい）。別の実施形態では、ポリマー材料を使用することができる；Ｍｅｄｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ、ＬａｎｇｅｒおよびＷｉｓｅ（編）、１９７４年、ＣＲＣ  Ｐｒｅｓ．、Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ、Ｆｌｏｒｉｄａを参照されたい。さらに別の実施形態では、制御放出系を組成物の標的の近傍に置き、したがって、全身用量のほんの一部のみが必要になる（例えば、Ｇｏｏｄｓｏｎ、１９８４年、Ｍｅｄｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ、上記、２巻、１１５〜１３８頁を参照されたい）。他の制御放出系は、Ｌａｎｇｅｒ、１９９０年、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４９巻：１５２７〜１５３３頁による概説において考察されている。
【０１４４】
注射用調製物は、静脈内、皮下、皮内注（ｉｎｔｒａｃｕｔａｎｅｏｕｓ）および筋肉内注射、点滴注入などのための剤形を含んでよい。これらの注射用調製物は、公知の方法によって調製することができる。例えば、注射用調製物は、例えば、上記の抗体またはその塩を、注射用として従来使用される滅菌された水性媒体または油性媒体に溶解、懸濁または乳化させることによって調製することができる。注射用の水性媒体としては、例えば、生理食塩水、グルコースおよび他の補助剤などを含有する等張溶液などがあり、これらは、アルコール（例えば、エタノール）、多価アルコール（例えば、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール）、非イオン性界面活性物質［例えば、ポリソルベート８０、ＨＣＯ−５０（硬化ヒマシ油のポリオキシエチレン（５０ｍｏｌ）付加生成物）］などの適切な可溶化剤と組み合わせて使用することができる。油性媒体としては、例えば、ゴマ油、ダイズ油などが用いられ、これらは、安息香酸ベンジル、ベンジルアルコールなどの可溶化剤と組み合わせて使用することができる。したがって調製された注射剤は、適切なアンプルに充填することが好ましい。
【０１４５】
上記の経口または非経口使用のための医薬組成物は、活性成分の用量に適合させるのに適した単位用量の剤形に調製することが有利である。そのような単位用量の剤形としては、例えば、錠剤、丸剤、カプセル剤、注射剤（アンプル）、坐剤などが挙げられる。含有される上述の抗体の量は、一般に、単位用量の剤形当たり約５〜約５００ｍｇであり、特に、上述の抗体は、注射剤の形態では約５〜約１００ｍｇで、および他の剤形では約１０〜約２５０ｍｇで含有されることが好ましい。
【０１４６】
抗体の治療的使用
本発明は、それを必要とする被験体に、抗ＩＬ−２５抗体を含む治療組成物を投与することを含む方法を含む。治療組成物は、本明細書に開示された抗ＩＬ−２５抗体またはその抗原結合性断片のいずれか、および薬学的に許容される担体または希釈剤を含んでいてもよい。
【０１４７】
本発明の抗体は、とりわけ、ＩＬ−２５の発現もしくは活性に関連するかもしくはそれによって媒介される、またはＩＬ−２５とＩＬ−２５受容体との相互作用を遮断するかもしくは別の方法でＩＬ−２５の活性および／もしくはシグナル伝達を阻害することによって処置可能な任意の疾患または障害を、処置、予防および／または好転させるのに有用である。
【０１４８】
本発明は、このような処置を必要とする患者に、本明細書の他所で開示された抗ＩＬ−２５抗体またはその抗原結合性断片を投与することによって、喘息を処置または予防する方法を含む。本明細書で使用される場合、「喘息」という用語は、これらに限定されないが、アレルギー性喘息、非アレルギー性喘息、重症難治性喘息、喘息の増悪、ウイルス誘発性喘息、またはウイルス誘発性喘息の増悪、ステロイド抵抗性喘息、ステロイド感受性喘息、好酸球性喘息または非好酸球性喘息など、および気道炎症または気道過敏症（ＡＨＲ）によって特徴付けられる他の関連障害を含む。用語はまた、ウイルス誘発性喘息の増悪を含むことも意図される。
【０１４９】
本発明は、このような処置を必要とする患者に、本明細書の他所で開示された抗ＩＬ−２５抗体またはその抗原結合性断片を投与することによって、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）を処置または予防する方法を含む。本明細書で使用される場合、「ＣＯＰＤ」という用語は、これらに限定されないが、数ヶ月にわたり著しく変化しない呼気流の低減と遅い肺の努力排出（ｆｏｒｃｅｄ  ｅｍｐｔｙｉｎｇ）によって特徴付けられる疾患および障害を含む。本発明のこの態様による方法は、例えば、喫煙（例えば、長期の喫煙）、大気汚染（例えば、二酸化硫黄、副流煙（ｓｅｃｏｎｄ−ｈａｎｄ  ｓｍｏｋｅ）など）、職業性の化学物質（例えば、カドミウム）、アレルギーもしくはＡＨＲに関連しているか、またはそれらによって引き起こされるＣＯＰＤを処置するのに使用され得る。
【０１５０】
本発明はまた、このような処置を必要とする患者に、本明細書の他所で開示された抗ＩＬ−２５抗体またはその抗原結合性断片を投与することによって、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）を処置または予防する方法も含む。本明細書で使用される場合、「ＩＢＤ」という用語は、これらに限定されないが、潰瘍性大腸炎、クローン病、コラーゲン蓄積大腸炎、リンパ球性大腸炎、虚血性大腸炎、空置大腸炎、ベーチェット症候群、感染性大腸炎、不確定大腸炎、および大腸または結腸の粘膜層の炎症によって特徴付けられる他の関連障害を含む。
【０１５１】
本発明はまた、このような処置を必要とする患者に、本明細書の他所で開示された抗ＩＬ−２５抗体またはその抗原結合性断片を投与することによって、アトピー性皮膚炎（ＡＤ）を処置または予防する方法も含む。本明細書で使用される場合、「ＡＤ」という用語は、これらに限定されないが、強烈なそう痒（例えば、激しい痒み）および鱗屑があり乾燥した湿疹性の病変によって特徴付けられる炎症性皮膚疾患を含む。「ＡＤ」という用語は、表皮バリアの機能不全、アレルギー（例えば、ある特定の食物、花粉、カビ、チリダニ、動物などに対するアレルギー）、放射線曝露、および／または喘息によって引き起こされるかまたはそれらに関連するＡＤを含む。本発明のこの態様による方法は、例えば、軽度、中等度、中等度から重度、および重度のＡＤの形態を処置するのに使用され得る。
【０１５２】
本発明はまた、このような処置を必要とする患者に、本明細書の他所で開示された抗ＩＬ−２５抗体またはその抗原結合性断片を投与することによって、好酸球性多発血管炎性肉芽腫症またはＥＧＰＡ（チャーグ−ストラウス症候群としても公知）、アレルギー、アレルギー性鼻炎、アレルギー性気道炎症、食物過敏症、じんましん（慢性特発性じんましんを含む）、好酸球性肺炎、好酸球性食道炎、好酸球増多症候群、特発性肺線維症、過敏性肺臓炎、関節リウマチ、脈管炎、ブドウ膜炎、がん、および移植片対宿主疾患などの疾患および障害を処置または予防する方法も含む。
【０１５３】
本発明はまた、他の炎症性障害、心臓血管疾患、中枢神経系疾患、疼痛、関節炎（例えば、関節リウマチ、変形性関節症、乾癬性関節炎など）、巨細胞生動脈炎、脈管炎、一般的な血管障害、へノッホ−シェーンライン紫斑病、多発性硬化症、狼瘡、およびシェーグレン症候群を処置するための方法も提供する。
【０１５４】
本明細書に記載の処置方法に関して、抗ＩＬ−２５抗体は、単剤療法として（すなわち、唯一の治療剤として）、または１種または複数の追加の治療剤（その例は、本明細書の他所で記載される）と組み合わせて投与されてもよい。
【０１５５】
併用療法および製剤
本発明は、本明細書に記載の抗ＩＬ−２５抗体のいずれかを、１種または複数の追加の治療的に活性な構成成分と組み合わせて含む組成物および治療製剤、ならびにこのような組合せを、それを必要とする被験体に投与することを含む処置方法を含む。
【０１５６】
本発明の抗ＩＬ−２５抗体は、例えば、ＩＬ−４またはＩＬ−４Ｒアンタゴニスト、例えば、抗ＩＬ−４、または抗ＩＬ−４Ｒ抗体、ＩＬ−１３アンタゴニスト、例えば、抗ＩＬ−１３または抗ＩＬ−１３Ｒ抗体など、ＩＬ−６またはＩＬ−６Ｒアンタゴニスト、例えば、抗ＩＬ−６または抗ＩＬ−６Ｒ抗体など（例えばＵＳ７，５８２，２９８を参照されたい）、抗ＩＬ−１アンタゴニスト、例えばリロナセプト、ＴＮＦアンタゴニスト、例えばエタネルセプト（ＥＮＢＲＥＬ（商標））、ＩｇＥアンタゴニスト、ならびにＩＬ−５、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１７、ＩＬ−１７Ｒａ、ＩＬ−２２、ＴＳＬＰおよびＩＬ−３３アンタゴニストからなる群より選択される１種または複数の追加の治療的に活性な構成成分（複数可）と共に製剤化（ｃｏ−ｆｏｒｍｕｌａｔｅ）されるか、および／またはそれらと組み合わせて投与されてもよい。
【０１５７】
喘息および関連する状態を処置することに関して、追加の治療的に活性な構成成分は、長時間作用型ベータ２−アゴニスト（ＬＡＢＡ、例えば、サルメテロールまたはホルモテロール）、吸入コルチコステロイド（ＩＣＳ、例えば、フルチカゾンまたはブデソニド）、ＬＡＢＡ＋ＩＣＳを含む組合せ（例えば、フルチカゾン＋サルメテロール［例えば、ＡＤＶＡＩＲ（登録商標）（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）］；またはブデソニド＋ホルモテロール［例えば、ＳＹＭＢＩＣＯＲＴ（登録商標）（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）］）、全身性コルチコステロイド（例えば、経口または静脈内）、メチルキサンチン、ネドクロミルナトリウム、クロモリンナトリウム、以下のサイトカインおよび／またはそれらの受容体：ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１３、ＩＬ−１７、ＩＬ−３３、ＴＳＬＰおよびそれらの組合せのいずれか１種または複数に対するアンタゴニスト（例えば抗体）からなる群より選択され得る。
【０１５８】
アトピー性皮膚炎および関連の状態を処置することに関して、追加の治療的に活性な構成成分は、外用コルチコステロイド（ＴＣＳ、例えば、ヒドロコルチゾン、吉草酸ベタメタゾン、ジプロピオン酸ベタメタゾン、吉草酸ジフルコルトロン、ヒドロコルチゾン−１７−ブチレート、フランカルボン酸モメタゾン、アセポン酸メチルプレドニゾロン、プロピオン酸クロベタゾール、ハルシノニド、酪酸クロベタゾン、およびトリアムシノロンアセトニド）、タクロリムス、ピメクロリムス、シクロスポリン、アザチオプリン、メトトレキセート、クロモリンナトリウム、プロテイナーゼ阻害剤、以下のサイトカインおよび／またはそれらの受容体：ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−１３、ＩＬ−１７、ＩＬ−３３、ＴＳＬＰおよびそれらの組合せのいずれか１種または複数に対するアンタゴニスト（例えば抗体）からなる群より選択され得る。本発明のこの態様のある特定の実施形態によると、抗ＩＬ−２５抗体は、紫外（ＵＶ）光療法などの非医薬療法と併用して被験体に投与される。
【０１５９】
慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）を処置することに関して、追加の治療的に活性な構成成分は、ベータ２アゴニスト、抗コリン剤、ＩＬ−５抗体（例えば、メポリズマブ）、またはＩＬ−１３抗体（例えば、レブリキズマブ（ｌｅｂｒｕｋｕｚｉｍａｂ））から選択され得る。例えば、ＣＯＰＤを処置するために本発明の抗体と組み合わせて使用可能な薬剤としては、以下：インダカテロール（ベータ２アゴニスト）、グリコピロニウム（ムスカリン作用剤）、チオトロピウム（抗コリン作用薬）、アクリジニウム（抗ムスカリン作用剤）、ウメクリジニウム臭化物（抗コリン作用薬）、またはビランテロール（長時間作用型ベータ２アゴニスト）のいずれか１つまたは複数を挙げることができる。ＣＯＰＤを処置するために本発明の抗体と組み合わせて使用可能な他の薬剤としては、ホスホジエステラーゼ阻害剤（例えば、テオフィリン、ロフルミラスト、シロミラスト）、内因性オピオイド、またはベータ−アドレナリン作動性アンタゴニスト（ベータ遮断薬）が挙げられる。
【０１６０】
脈管炎、特に、チャーグ−ストラウス症候群（ＣＳＳ）を処置することに関して、追加の治療的に活性な構成成分は、ステロイド、コルチコステロイドおよび免疫抑制剤（例えば、シクロホスファミド）から選択され得る。
【０１６１】
アレルギーを処置することに関して、本発明の抗ＩＬ−２５抗体は、アレルギー性応答を処置するのに使用される任意の待期療法と併用して使用してもよく、または標準的な免疫療法（ＳＩＴ）と共にアレルギー性の状態を処置するのに使用してもよく、またはアレルギー性応答に関連する少なくとも１つの症状を好転させるのに使用してもよい。例えば、追加の治療的に活性な構成成分は、抗ヒスタミン剤、ステロイド、コルチコステロイド、うっ血除去剤、ロイコトリエン阻害剤、および肥満細胞阻害剤から選択され得る。アレルギーを処置するために本発明の抗ＩＬ−２５抗体と併用して使用され得る他の薬剤は、以下のサイトカインおよび／もしくはそれらの受容体：ＩＬ−１、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１３、ＩＬ−１７、ＴＳＬＰ、ＩＬ−３３のいずれか１つもしくは複数に対するアンタゴニスト、またはＴＮＦアンタゴニストであり得る。
【０１６２】
また本発明の抗ＩＬ−２５抗体は、抗ウイルス剤、抗生物質、鎮痛薬、酸素、抗酸化剤、ＣＯＸ阻害剤、心臓保護薬（ｃａｒｄｉｏｐｒｏｔｅｃｔａｎｔ）、金属キレート化剤、ＩＦＮ−ガンマ、および／またはＮＳＡＩＤと組み合わせて投与されても、および／またはそれらと共に製剤化されてもよい。
【０１６３】
追加の治療的に活性な構成成分（複数可）、例えば、上で列挙した薬剤またはそれらの誘導体のいずれかは、本発明の抗ＩＬ−２５抗体の投与の直前に、それと同時に、またはその直後に投与されてもよい（本開示の目的で、このような投与レジメンは、追加の治療的に活性な構成成分と「組み合わせた」抗ＩＬ−２５抗体の投与と考えられる）。本発明は、本発明の抗ＩＬ−２５抗体が、本明細書の他所に記載されるような追加の治療的に活性な構成成分（複数可）の１種または複数と共に製剤化されている医薬組成物を含む。
【０１６４】
投与レジメン
本発明のある特定の実施形態によると、抗ＩＬ−２５抗体（または抗ＩＬ−２５抗体と本明細書で言及されている追加的な治療的に活性な薬剤のいずれかの組合せを含む医薬組成物）の複数回用量を、規定の時間経過にわたって被験体に投与することができる。本発明のこの態様による方法は、被験体に、本発明の抗ＩＬ−２５抗体の複数回用量を逐次的に投与することを含む。本明細書で使用される場合、「逐次的に投与する」とは、抗ＩＬ−２５抗体の各用量を被験体に異なる時点で、例えば、所定の間隔（例えば、時間、日、週または月）をあけた異なる日に投与することを意味する。本発明は、患者に、単一の初回用量の抗ＩＬ−２５抗体、その後、１または複数の二次用量の抗ＩＬ−２５抗体、および任意選択でその後に１または複数の三次用量の抗ＩＬ−２５抗体を逐次的に投与することを含む方法を含む。
【０１６５】
「初回用量」、「二次用量」および「三次用量」という用語は、本発明の抗ＩＬ−２５抗体の投与の時間的な連続順を指す。したがって、「初回用量」は、処置レジメンの開始時に投与される用量であり（「ベースライン用量」とも称される）；「二次用量」は、初回用量の後に投与される用量であり；「三次用量」は、二次用量の後に投与される用量である。初回、二次、および三次用量は、全てが同じ量の抗ＩＬ−２５抗体を含有し得るが、一般には、投与の頻度に関しては互いと異なり得る。しかし、ある特定の実施形態では、初回、二次および／または三次用量に含有される抗ＩＬ−２５抗体の量は、処置の過程中、互いとは異なる（例えば、必要に応じて調整して増減させる）。ある特定の実施形態では、２またはそれ超（例えば、２、３、４、または５）の用量を処置レジメンの開始時に「負荷用量」として投与し、続いて、その後の用量をより低頻度で投与する（例えば、「維持用量」）。
【０１６６】
本発明のある特定の例示的な実施形態では、二次用量および／または三次用量のそれぞれを、すぐ前の用量の１〜２６（例えば、１、１と１／２、２、２と１／２、３、３と１／２、４、４と１／２、５、５と１／２、６、６と１／２、７、７と１／２、８、８と１／２、９、９と１／２、１０、１０と１／２、１１、１１と１／２、１２、１２と１／２、１３、１３と１／２、１４、１４と１／２、１５、１５と１／２、１６、１６と１／２、１７、１７と１／２、１８、１８と１／２、１９、１９と１／２、２０、２０と１／２、２１、２１と１／２、２２、２２と１／２、２３、２３と１／２、２４、２４と１／２、２５、２５と１／２、２６、２６と１／２、またはそれ超）週間後に投与する。「すぐ前の用量」という句は、本明細書で使用される場合、多数回の投与の連続順において、その連続順においてすぐ次の用量が投与される前に介在する用量なしに患者に投与される抗ＩＬ−２５抗体の用量を意味する。
【０１６７】
本発明のこの態様による方法は、患者に任意の数の抗ＩＬ−２５抗体の二次および／または三次用量を投与することを含んでよい。例えば、ある特定の実施形態では、単一の二次用量のみ患者に投与する。他の実施形態では、２またはそれ超（例えば、２、３、４、５、６、７、８、またはそれ超）の二次用量を患者に投与する。同様に、ある特定の実施形態では、単一の三次用量のみ患者に投与する。他の実施形態では、２またはそれ超（例えば、２、３、４、５、６、７、８、またはそれ超）の三次用量を患者に投与する。投与レジメンは、特定の被験体の寿命にわたって無期限に、またはそのような処置がもはや治療上必要または有利ではなくなるまで行うことができる。
【０１６８】
多数の二次用量を伴う実施形態では、各二次用量を他の二次用量と同じ頻度で投与することができる。例えば、各二次用量を、すぐ前の用量の１〜２週間または１〜２カ月後に患者に投与することができる。同様に、多数の三次用量を伴う実施形態では、各三次用量を他の三次用量と同じ頻度で投与することができる。例えば、各三次用量を、すぐ前の用量の２〜１２週間後に患者に投与することができる。本発明のある特定の実施形態では、二次および／または三次用量を患者に投与する頻度は、処置レジメンの過程にわたって変動し得る。投与の頻度も、処置の過程中、臨床検査後に個々の患者の必要に応じて医師によって調整され得る。
【０１６９】
本発明は、２〜６回の負荷用量が第１の頻度（例えば、週１回、２週毎に１回、３週毎に１回、月１回、２ヶ月毎に１回など）で患者に投与され、それに続き、それより低い頻度で２回またはそれより多くの維持用量が患者に投与される投与レジメンを含む。例えば、本発明のこの態様によると、負荷用量が月１回の頻度で投与される場合、維持用量は、６週毎に１回、２ヶ月毎に１回、３ヶ月毎に１回などで患者に投与されてもよい。
【０１７０】
抗体の診断への使用
本発明の抗ＩＬ−２５抗体は、例えば、診断目的で試料中のＩＬ−２５またはＩＬ−２５発現細胞を検出および／または測定するためにも使用することができる。例えば、抗ＩＬ−２５抗体またはその断片は、ＩＬ−２５の異常な発現（例えば、過剰発現、過少発現、発現の欠如など）によって特徴付けられる状態または疾患を診断するために使用することができる。ＩＬ−２５に関する例示的な診断アッセイは、例えば、患者から得た試料を本発明の抗ＩＬ−２５抗体と接触させることを含んでよく、ここで、抗ＩＬ−２５抗体は、検出可能な標識もしくはレポーター分子で標識される。あるいは、標識されていない抗ＩＬ−２５抗体を診断への適用においてそれ自体が検出可能に標識された二次抗体と組み合わせて使用することができる。検出可能な標識またはレポーター分子は、３Ｈ、１４Ｃ、３２Ｐ、３５Ｓ、または１２５Ｉなどの放射性同位元素；フルオレセインイソチオシアネート、もしくはローダミンなどの蛍光もしくは化学発光部分；またはアルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼ、西洋ワサビペルオキシダーゼ、もしくはルシフェラーゼなどの酵素であってよい。試料中のＩＬ−２５を検出または測定するために使用することができる特定の例示的なアッセイとしては、酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、および蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）が挙げられる。
【０１７１】
本発明によるＩＬ−２５診断アッセイに使用することができる試料は、検出可能な分量のＩＬ−２５タンパク質またはその断片を含有する、正常または病的状態の患者から取得可能な任意の組織または体液試料を含む。一般に、健康な患者（例えば、異常なＩＬ−２５レベルまたは活性に関連する疾患または状態を患っていない患者）から得た特定の試料中のＩＬ−２５のレベルを測定して最初にベースラインまたは標準のＩＬ−２５のレベルを確立する。次いで、このＩＬ−２５のベースラインレベルを、ＩＬ−２５に関連する疾患もしくは状態を有する疑いがある個体から得た試料において測定されたＩＬ−２５のレベルと比較することができる。
【実施例】
【０１７２】
以下の実施例は、本発明の方法および組成物をどのように作製および使用するのかについての完全な開示および説明を当業者に提供するために記載されるものであり、本発明者らが自身の発明とみなすものの範囲を限定することは意図していない。使用される数字（例えば、量、温度など）に関しては正確さを確実にするための試みが行われているが、いくらかの実験的な誤差および偏差が考慮されるべきである。別段の指定のない限り、部は重量部であり、分子量は平均分子量であり、温度は摂氏度であり、圧力は、大気または大気付近の圧力である。
【０１７３】
（実施例１．抗ＩＬ−２５抗体の生成）
ＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）マウス（すなわち、ヒト免疫グロブリン重鎖およびカッパ軽鎖可変領域をコードするＤＮＡを含む工学的に操作されたマウス）を組換えヒトＩＬ−２５（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、カタログ番号１２５８）で免疫化することによって抗ＩＬ−２５抗体を得た。ＩＬ−２５特異的イムノアッセイによって抗体免疫応答をモニタリングした。所望の免疫応答が達成されたら、脾細胞を回収し、マウス骨髄腫細胞と融合させることにより、それらの生存能力を保存してハイブリドーマ細胞株を形成した。ハイブリドーマ細胞株をスクリーニングし、選択して、ＩＬ−２５特異的な抗体を産生する細胞株を同定した。この技法を使用して、数種の抗ＩＬ−２５キメラ抗体（すなわち、ヒト可変ドメインおよびマウス定常ドメインを有する抗体）を得た。加えて、ＵＳ２００７／０２８０９４５Ａ１で記載されるようにして、数種の完全ヒト抗ＩＬ−２５抗体を、骨髄腫細胞に融合させずに抗原陽性Ｂ細胞から直接単離した。
【０１７４】
この実施例の方法に従って生成された例示的な抗ＩＬ−２５抗体のある特定の生物学的特性を、以下に記載の実施例で詳細に説明する。
【０１７５】
（実施例２．重鎖可変領域および軽鎖可変領域のアミノ酸配列および核酸配列）
表１は、本発明の選択された抗ＩＬ−２５抗体の重鎖可変領域および軽鎖可変領域およびＣＤＲのアミノ酸配列識別子を示す。対応する核酸配列識別子を表２に記載する。
【表１】
2020075926.tif 000002
【表２】
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【０１７６】
本明細書では、抗体は典型的には以下の命名法に従って称される：表１および２に示されている通り、Ｆｃ接頭辞（例えば、「Ｈ１Ｍ」、「Ｈ２Ｍ」、「Ｈ４Ｈ」など）、続いて数値による識別子（例えば、「１１００９」、「１０６９０」、「１０８６１」など）、続いて「Ｐ」または「Ｎ」接尾辞。したがって、本明細書では、この命名法に従って、抗体は例えば「Ｈ１Ｍ１１００９Ｎ」、「Ｈ２Ｍ１０６９０Ｎ」、「Ｈ４Ｈ１０８６１Ｐ」などと称され得る。本明細書で使用される抗体の名称のＨ１Ｍ、Ｈ２ＭおよびＨ４Ｈ接頭辞は、抗体の特定のＦｃ領域アイソタイプを指す。例えば、「Ｈ１Ｍ」抗体はマウスＩｇＧ１  Ｆｃを有し、「Ｈ２Ｍ」抗体はマウスＩｇＧ２  Ｆｃを有し、「Ｈ１Ｈ」抗体はヒトＩｇＧ４  Ｆｃを有する（抗体の名称の最初の「Ｈ」によって示される通り、可変領域は全てのものが完全ヒト可変領域である）。当業者には理解される通り、特定のＦｃアイソタイプを有する抗体を異なるＦｃアイソタイプを有する抗体に変換することができるが（例えば、マウスＩｇＧ１  Ｆｃを有する抗体をヒトＩｇＧ４を有する抗体に変換することができるなど）、いずれにしても、表１および２において示されている通り数値による識別子によって示される可変ドメイン（ＣＤＲを含む）は同じままであり、結合特性は、Ｆｃドメインの性質にかかわらず同一であるかまたは実質的に同様であることが予測される。
【０１７７】
以下の実施例で使用されるコンパレーター抗体
コンパレーター抗ＩＬ２５抗体を、比較目的で以下の実験に含めた。特に、「コンパレーターＩ」は、ＵＳ８，６５８，１６９に記載の「ＲＨ２．５＿Ｒ７１Ｖ」の対応するドメインのアミノ酸配列を有する重鎖および軽鎖可変ドメインを有する抗ＩＬ−２５抗体である。
【０１７８】
（実施例３．表面プラズモン共鳴によって得られた、ヒトモノクローナル抗ＩＬ−２５抗体の結合親和性および動態定数）
精製された抗ＩＬ−２５抗体へのＩＬ−２５結合の平衡解離定数（ＫＤ値）を、Ｂｉａｃｏｒｅ  ４０００機器（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）でのリアルタイム表面プラズモン共鳴バイオセンサーアッセイを使用して決定した。ポリクローナルウサギ抗マウス抗体（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、＃ＢＲ−１００８−３８）またはモノクローナルマウス抗ヒトＦｃ抗体（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、＃ＢＲ−１００８−３９）のいずれかとのアミンカップリングによってＢｉａｃｏｒｅセンサー表面を誘導体化して、異なる定常領域と共に発現された抗ＩＬ−２５抗体を捕捉した。全てのＢｉａｃｏｒｅ結合研究を、ＨＢＳＴランニング緩衝液（０．０１ＭのＨＥＰＥＳ  ｐＨ７．４、０．１５ＭのＮａＣｌ、３ｍＭのＥＤＴＡ、０．０５％ｖ／ｖの界面活性物質Ｐ２０）中で実行した。全てのＩＬ−２５試薬を、Ｃ末端ｍｙｃ−ｍｙｃ−ヘキサヒスチジンタグと共に発現させた（本明細書では、「ＩＬ−２５−ＭＭＨ」と称する）。ＨＢＳＴランニング緩衝液（１００ｎＭ〜３．７ｎＭの範囲、３倍希釈）中で調製された、様々な濃度のヒトＩＬ−２５−ＭＭＨ（配列番号２７３）、サルＩＬ−２５−ＭＭＨ（配列番号２７４）、マウスＩＬ−２５−ＭＭＨ（配列番号２７５）およびラットＩＬ−２５−ＭＭＨ（配列番号２７６）を、抗ＩＬ−２５抗体が捕捉された表面の全体に３０μＬ／分の流量で注射した。捕捉されたモノクローナル抗体のそれぞれに対する全てのＩＬ−２５−ＭＭＨ試薬の会合を４分間モニタリングし、ＨＢＳＴランニング緩衝液中でのそれらの解離を１０分間モニタリングした。以下の表で示されたように、全ての結合動態実験を２５℃または３７℃のいずれかで実行した。動態結合速度定数（ｋａ）および解離速度定数（ｋｄ）を、Ｓｃｒｕｂｂｅｒ  ２．０ｃカーブフィッティングソフトウェアを使用してリアルタイムのセンサーグラムを１：１の結合モデルにあてはめることによって決定した。結合解離平衡定数（ＫＤ）および解離半減期（ｔ１／２）を、ＫＤ（Ｍ）＝ｋｄ／ｋａおよびｔ１／２（分）＝（ｌｎ２／（６０×ｋｄ）として動態速度定数から計算した。表３から１０に、２５℃および３７℃における抗ＩＬ−２５抗体へのヒト、サル、マウスおよびラットＩＬ−２５−ＭＭＨの結合の結合動態パラメータを示す。（「ＮＢ」は、試験された実験条件下で結合が観察されなかったことを示す；「ＩＣ」は、抗ｍＦｃ表面への非特異的なバックグラウンド結合による決定的ではない結合を示す）。
【表３】
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【表４】
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【表５】
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【表６】
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【表７】
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【表８】
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【表９】
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【表１０】
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【０１７９】
２５℃で、本発明の抗ＩＬ−２５抗体は、１１．６ｐＭ〜３６．２ｎＭの範囲のＫＤ値でヒトＩＬ−２５に結合し、一方でコンパレーター１は、１２０ｐＭのＫＤ値でヒトＩＬ−２５に結合した（表３）。３７℃で、本発明の抗ＩＬ−２５抗体は、２６．８ｐＭ〜６１．４ｎＭの範囲のＫＤ値でヒトＩＬ−２５に結合し、一方でコンパレーター１は、１３４ｐＭのＫＤ値でヒトＩＬ−２５に結合した（表４）。２５℃で、１７種の本発明の抗ＩＬ−２５抗体のうち１４種は、４．０２ｐＭ〜２１８ｐＭの範囲のＫＤ値でサルＩＬ−２５に結合し、一方でコンパレーター１は、８８．０ｐＭのＫＤ値でサルＩＬ−２５に結合した（表５）。３７℃で、１７種の本発明の抗ＩＬ−２５抗体のうち１４種は、２３．６ｐＭ〜１８９ｐＭの範囲のＫＤ値でサルＩＬ−２５に結合し、一方でコンパレーター１は、４７．３ｐＭのＫＤ値でサルＩＬ−２５に結合した（表６）。３種の本発明の抗体は、２５℃または３７℃のいずれにおいてもサルＩＬ−２５への決定的な結合を実証しなかった。２５℃で、１７種の本発明の抗ＩＬ−２５抗体のうち７種は、５７０ｐＭ〜８２．３ｎＭの範囲のＫＤ値でマウスＩＬ−２５に結合し、一方でコンパレーター１は、２０５ｐＭのＫＤ値でマウスＩＬ−２５−ＭＭＨに結合した（表７）。３７℃で、１７種の本発明の抗ＩＬ−２５抗体のうち７種は、２４３ｐＭ〜１３７ｎＭの範囲のＫＤ値でマウスＩＬ−２５に結合し、一方でコンパレーター１は、８０．８ｐＭのＫＤ値でマウスＩＬ−２５−ＭＭＨに結合した（表８）。１０種の本発明の抗体は、２５℃または３７℃のいずれにおいてもマウスＩＬ−２５への結合を実証しなかった。２５℃で、１７種の本発明の抗ＩＬ−２５抗体のうち７種は、１３２ｐＭ〜１０３ｎＭの範囲のＫＤ値でラットＩＬ−２５に結合し、一方でコンパレーター１は、１０３ｐＭのＫＤ値でラットＩＬ−２５に結合した（表９）。３７℃で、１７種の本発明の抗ＩＬ−２５抗体のうち７種は、６０．２ｐＭ〜１１５ｎＭの範囲のＫＤ値でラットＩＬ−２５に結合し、一方でコンパレーター１は、６４．２ｐＭのＫＤ値でラットＩＬ−２５に結合した（表１０）。１０種の本発明の抗体は、２５℃または３７℃のいずれにおいてもラットＩＬ−２５への結合を実証しなかった。
【０１８０】
（実施例４．抗ＩＬ−２５抗体の交差競合）
抗ＩＬ−２５モノクローナル抗体間の結合の競合を、Ｏｃｔｅｔ  ＱＫ３８４バイオセンサー（Ｐａｌｌ  ＦｏｒｔｅＢｉｏ  Ｃｏｒｐ．）でのリアルタイムの標識非含有バイオレイヤーインターフェロメトリーアッセイを使用して決定した。
【０１８１】
全実験は、２５℃で、ＨＢＳＴ動態緩衝液（０．０１ＭのＨＥＰＥＳ  ｐＨ７．４、０．１５ＭのＮａＣｌ、３ｍＭのＥＤＴＡ、０．０５％ｖ／ｖの界面活性物質Ｐ２０、０．１ｍｇ／ｍｌのＢＳＡ）中で、１０００ｒｐｍの速度でプレートを振盪して実行された。２種の抗体が、Ｃ末端ｍｙｃ−ｍｙｃ−ヘキサヒスチジンタグと共に発現された組換えヒトＩＬ−２５（ｈＩＬ−２５−ＭＭＨ；配列番号２７３）上のそれらそれぞれのエピトープへの結合について互いに競合できるかどうかを評価するために、最初に、４μｇ／ｍＬのｈＩＬ−２５−ＭＭＨ溶液を含有するウェルにバイオセンサーを５分間浸すことによって、およそ０．５〜０．７ｎｍのｈＩＬ−２５−ＭＭＨを、抗ペンタ−Ｈｉｓ抗体でコーティングされたＯｃｔｅｔバイオセンサー（Ｆｏｒｔｅｂｉｏ  Ｉｎｃ、＃１８−５０７９）上に捕捉した。次いで抗原を捕捉したバイオセンサーを、５０μｇ／ｍＬのｍＡｂ−１溶液を含有するウェルに５分間浸漬することによって、第１の抗ＩＬ−２５モノクローナル抗体（本明細書では、ｍＡｂ−１と称する）で飽和させた。次いでバイオセンサーを、５０μｇ／ｍＬの第２の抗ＩＬ−２５モノクローナル抗体（本明細書では、ｍＡｂ−２と称する）溶液を含有するウェルに続けて浸漬した。実験の各ステップ間に、バイオセンサーをＨＢＳＴ動態緩衝液中で洗浄した。実験経過中にリアルタイムの結合応答をモニタリングし、各ステップの最後における結合応答を記録した。事前にｍＡｂ−１と複合体化したｈＩＬ−２５−ＭＭＨへのｍＡｂ−２の結合応答を比較し、異なる抗ＩＬ−２５モノクローナル抗体の競合／非競合の挙動を決定した。いくつかの例において、抗ＩＬ−２５抗体は、捕捉されたｈＩＬ−２５−ＭＭＨ表面を完全に飽和させることができなかったため、一定量の結合シグナルが自己競合中に観察される原因となった。それゆえに、特異的なｍＡｂ−２結合から自己競合シグナルを引くことによって交差競合マトリックスを生成し、０ｎｍ未満のあらゆる結合シグナルを０ｎｍとして記録した。結果を図１に要約する。ｍＡｂの識別子およびそれらが対応する抗体に対するキー、ならびに抗ペンタ−ＨｉｓセンサーへのｈＩＬ−２５−ＭＭＨの結合および捕捉されたｈＩＬ−２５−ｍｍｈへのｍＡｂ−１の結合に関して観察された結合応答を表１１に示す。
【表１１】
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【０１８２】
図１において、黒色のフォントを含む薄灰色のボックスは、自己競合を表す。両方向での抗体の競合は、結合順とは無関係に、黒色のボックスと白色のフォントで表される。別個の結合エピトープを示唆する抗体間の競合がないことは、黒色のフォントを含む白色のボックスとして表される。白色のフォントを含む暗い灰色のボックスは、アイソタイプ対照抗体および緩衝液単独の結合応答を表す。
【０１８３】
この実施例は、本発明の抗体のうちいくつかが、ＩＬ−２５への結合について１種または複数の本発明の他の抗体と交差競合するが、一方で本発明のある特定の抗体（例えば、Ｈ１Ｍ１１００９Ｎ［１２］）は、試験された他の抗体と交差競合をほとんどまたは全く示さないことを示す。
【０１８４】
（実施例５．抗ＩＬ−２５抗体は、ＩＬ−１７ＲＢへのＩＬ−２５の結合を遮断する）
ヒトＩＬ−２５の天然受容体の１つであるヒトＩＬ−１７ＲＢへのヒトＩＬ−２５の結合を遮断する抗ＩＬ−２５抗体の能力を、競合サンドイッチＥＬＩＳＡで測定した。
【０１８５】
Ｃ末端ヒトＦｃタグと共に発現されたヒトＩＬ−１７ＲＢタンパク質の細胞外ドメイン（ｈＩＬ１７ＲＢ−ｈＦｃ；Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、＃１２０７−ＢＲ）を、９６ウェルのマイクロタイタープレート上に、ＰＢＳ緩衝液中、４℃で一晩、２μｇ／ｍＬでコーティングした。それに続いて、非特異的な結合部位を、ＰＢＳ中の０．５％（ｗ／ｖ）ＢＳＡ溶液を使用して遮断した。２ｎＭの一定濃度の、Ｃ末端ｍｙｃ−ｍｙｃ−ヘキサヒスチジンタグと共に発現されたヒトＩＬ−２５（ｈＩＬ−２５−ＭＭＨ；配列番号２７３）を、抗体の最終濃度が０〜２００ｎＭの範囲になるように抗体の段階希釈液に添加した。抗体／ｈＩＬ−２５−ＭＭＨ混合物を室温（ＲＴ）で１時間インキュベートした後、それらをｈＩＬ−１７ＲＢ−ｈＦｃでコーティングしたマイクロタイタープレートに移した。室温で１時間インキュベートした後、次いでウェルを洗浄し、プレートに結合したｈＩＬ−２５−ＭＭＨを、西洋ワサビペルオキシダーゼにコンジュゲートした抗ｍｙｃポリクローナル抗体（Ｎｏｖｕｓ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ、番号ＮＢ６００−３４１）で検出した。試料をＴＭＢ溶液で展開して比色反応を起こし、次いで１Ｍの硫酸でクエンチした後、Ｖｉｃｔｏｒ  Ｘ５プレートリーダーにて４５０ｎｍで吸光度を測定した。Ｐｒｉｓｍ（商標）ソフトウェア（ＧｒａｐｈＰａｄ）中のＳ字状の用量応答モデルを使用してデータ分析を実行した。計算されたＩＣ５０値は、ｈＩＬ−１７ＲＢ−ｈＦｃへのｈＩＬ−２５−ＭＭＨの結合の５０％を遮断するのに必要な抗体の濃度と定義され、これを、遮断効力の指標として使用した。一定濃度のｈＩＬ−２５−ＭＭＨ単独の場合に測定された吸光度は、０％の遮断と定義され、ｈＩＬ−２５−ＭＭＨが添加されなかった場合に測定された吸光度は、１００％の遮断と定義される。遮断のパーセントは、ｈＩＬ−２５−ＭＭＨ単独を用いたときのシグナルと上記で定義された１００％の遮断から差し引いたバックグラウンド（ＨＲＰがコンジュゲートした二次抗体単独からのシグナル）との間の差に対する、抗体の存在下で観察されたシグナルにおける低減の比として計算された。最大濃度の各抗体を含有するウェルの吸光度値を使用して、最大遮断のパーセントを決定した。各試験された抗体のＩＣ５０値および最大遮断のパーセントを表１２に示す。
【表１２】
2020075926.tif 000013
【０１８６】
ｈＩＬ−２５−ＭＭＨ定数のシグナルに効果がないか、または２５％またはそれ未満の結合シグナルの減少を示した抗体を、非遮断薬と定義した。理論上のアッセイ最低値は０．５ｎＭであり、これは、より低いＩＣ５０の計算値は定量的なタンパク質−抗体部位の結合を表さない可能性があることを示す。この理由のために、ＩＣ５０の計算値が０．５ｎＭより低い抗体は、表１２において＜５．０Ｅ−１０Ｍとして報告される。
【０１８７】
表１２で示されるように、試験された１７種の抗ＩＬ−２５抗体のうち１６種が、０．５ｎＭ未満〜３１ｎＭの範囲のＩＣ５０値で、２ｎＭのｈＩＬ−２５−ＭＭＨのｈＩＬ−１７ＲＢ−ｈＦｃへの結合を遮断し、最大の遮断のパーセントは７０％〜９８％の範囲であった。コンパレーター１は、０．５ｎＭ未満のＩＣ５０値で、２ｎＭのｈＩＬ−２５−ＭＭＨのｈＩＬ−１７ＲＢ−ｈＦｃへの結合の９０％を遮断した。これらのアッセイ条件下で、１つの抗体、Ｈ１Ｍ１１００９Ｎを非遮断薬として同定した。
【０１８８】
（実施例６．抗ＩＬ−２５抗体は、ＩＬ−１７ＲＡおよびＩＬ−１７ＲＢを発現するように工学的に操作された細胞株においてＩＬ−２５媒介性シグナル伝達を遮断する）
ＩＬ−２５媒介性細胞シグナル伝達を検出して、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおいて本発明の抗ＩＬ−２５抗体がＩＬ−２５のシグナル伝達を遮断する程度を測定するために、バイオアッセイを開発した。
【０１８９】
このアッセイのために、ＨＥＫ２９３細胞株を生成して、ヒトＩＬ−１７ＲＡ（受託番号ＮＰ＿０５５１５４．３のアミノ酸１から８６６）、ＩＬ−１７ＲＢ（受託番号ＮＰ＿０６１１９５．２のアミノ酸１から５０２）、およびＡｃｔ１（受託番号ＮＰ＿００１１５７７５３．１のアミノ酸１から５６４）を、ルシフェラーゼレポーター［ＮＦκＢ応答エレメント（５ｘ）−ルシフェラーゼ−ＩＲＥＳ−ＧＦＰ］と共に安定して発現させた。得られた安定な細胞株は、ＨＥＫ２９３／ＮＦκＢ−ｌｕｃ／ｈＩＬ１７ＲＡ／ｈＩＬ１７ＲＢ／ｈＡｃｔ１と称し、これを単離し、１０％のＦＢＳ、ＮＥＡＡ、ペニシリン（ｐｅｎｃｉｌｌｉｎ）／ストレプトマイシン、５００μｇ／ｍＬのＧ４１８、１００μｇ／ｍＬのハイグロマイシンＢ、および１μｇ／ｍＬのピューロマイシンを含有する１０％のＤＭＥＭ中で維持した。
【０１９０】
９６ウェルアッセイプレートに、０．１％ＦＢＳが補充されたＯＰＴＩＭＥＭ中、細胞１０，０００個／ウェルで細胞を播種し、次いで、５％ＣＯ２中、３７℃で一晩インキュベートした。翌日、ＩＬ−２５の用量応答を決定するために、Ｃ末端ｍｙｃ−ｍｙｃヘキサヒスチジンタグと共に発現されたヒトＩＬ−２５（ｈＩＬ−２５−ＭＭＨ；配列番号２７３）、Ｃ末端ｍｙｃ−ｍｙｃヘキサヒスチジンタグと共に発現されたカニクイザルＩＬ−２５（ＭｆＩＬ−２５−ＭＭＨ；配列番号２７４）、またはＣ末端ｍｙｃ−ｍｙｃヘキサヒスチジンタグと共に発現されたマウスＩＬ−２５（ｍＩＬ−２５−ＭＭＨ；配列番号２７５のいずれかを１：３で段階希釈し（３ｎＭから０．０００１ｎＭ）、細胞に添加した。希釈緩衝液を含有するがＩＬ−２５を含有しない対照も、細胞の１つの試料に添加した。阻害を測定するために、抗体を段階希釈し、細胞に添加し、それに続いて一定濃度のＩＬ−２５（両方のｈＩＬ−２５−ＭＭＨについては５ｐＭ、ＭｆＩＬ−２５−ＭＭＨについては１２ｐＭ、およびｍＩＬ−２５−ＭＭＨについては１０ｐＭ）を添加した。細胞に添加する前の抗体の一連の希釈は、１００ｎＭで開始して０．００２ｎＭまでの範囲で１：３でなされ、加えて抗体非含有で緩衝液のみを含有する対照試料を含んでいた。５％ＣＯ２中、３７℃で５．５時間インキュベートした後にルシフェラーゼ活性を測定し、それに続いてＶｉｃｔｏｒ  Ｘ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）プレートリーダーを使用してＯＮＥ−ＧＬＯ（登録商標）試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ、＃Ｅ６０５１）を添加した。Ｐｒｉｓｍ  ５ソフトウェア（ＧｒａｐｈＰａｄ）での非線形回帰（４−パラメータロジスティック）を使用して結果を解析し、ＥＣ５０およびＩＣ５０値を得た。結果を表１３に示す。
【表１３】
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【０１９１】
表１３で示されるように、ｈＩＬ−２５−ＭＭＨは、２つの別々のアッセイ日において２．９ｐＭおよび１６ｐＭのＥＣ５０値で活性化され、ｍｆＩＬ−２５−ＭＭＨは、１９ｐＭのＥＣ５０値で活性化され、ｍＩＬ−２５−ＭＭＨは、８．４ｐＭのＥＣ５０値で活性化された。
【０１９２】
遮断に関して、１７種の本発明の抗体のうち１５種が、５ｐＭのｈＩＬ−２５−ＭＭＨによって２７ｐＭ〜１．８ｎＭの範囲のＩＣ５０値でＨＥＫ２９３／ＮＦκＢ−ｌｕｃ／ｈＩＬ１７ＲＡ／ｈＩＬ１７ＲＢ／ｈＡｃｔ１細胞の刺激を完全に遮断したが、一方でコンパレーター１は、２つの別々のアッセイ日において７２０ｐＭおよび２２０ｐＭのＩＣ５０値で完全に遮断した。試験された２種の抗体、Ｈ２ａＭ１０６９０ＮおよびＨ１Ｍ１１００９Ｎは、高い抗体濃度で５ｐＭのｈＩＬ−２５−ＭＭＨを部分的に阻害した。試験された１４種全ての本発明の抗体は、１２ｐＭのＭｆＩＬ−２５−ＭＭＨによって２２ｐＭ〜４００ｐＭの範囲のＩＣ５０値でＨＥＫ２９３／ＮＦκＢ−ｌｕｃ／ｈＩＬ１７ＲＡ／ｈＩＬ１７ＲＢ／ｈＡｃｔ１細胞の刺激を完全に遮断したが、一方でコンパレーター１は、３８０ｐＭのＩＣ５０値で完全に遮断した。試験された６種の本発明の抗体のうち５種は、１０ｐＭのｍＩＬ−２５−ＭＭＨによって６７０ｐＭ〜１５ｎＭの範囲のＩＣ５０値でＨＥＫ２９３／ＮＦκＢ−ｌｕｃ／ｈＩＬ１７ＲＡ／ｈＩＬ１７ＲＢ／ｈＡｃｔ１細胞の刺激を完全に遮断したが、一方でコンパレーター１は、６１０ｐＭのＩＣ５０値で完全に遮断した。またアイソタイプ対照抗体も試験したところ、いずれのアッセイにおいても阻害を示さなかった。
【０１９３】
（実施例７．抗ＩＬ−２５抗体は、初代細胞ベースのアッセイにおいてＩＬ−２５媒介性シグナル伝達を遮断する）
末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を使用した初代細胞ベースのアッセイを使用して、本発明の抗ＩＬ−２５抗体の遮断能力をさらに評価した（Ｒｉｃｋｅｌら、Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、２００８年、１８１巻（６号）４２９９〜４３１０頁を参照されたい）。
【０１９４】
２人の異なるドナーからの新鮮な全血から、密度勾配遠心分離によってＰＢＭＣを精製した。簡単に言えば、Ｋ２  ＥＤＴＡ全血をＲＰＭＩ１６４０で２倍希釈し、慎重にＦｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕｅ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、＃１７−１４４０−０３）上に層状にし、２０分間遠心分離した。ＰＢＭＣを含有する相間層を吸引し、新しいチューブに移して、ＰＢＳで２回洗浄した。単離されたＰＢＭＣを、７５ｃｍ２のフラスコ中で、１０％のＦＢＳ、２ｍＭのＬ−グルタミン、１００Ｕ／ｍＬのペニシリンおよび１００ｎｇ／ｍＬの組換え胸腺間質性リンパ球新生因子（ｔｈｙｍｉｃ  ｓｔｒｏｍａｌ  ｌｙｍｐｈｏｐｒｏｔｅｉｎ）（ＴＳＬＰ；Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、＃１３９８−ＴＳ／ＣＦ）が補充されたＲＰＭＩ１６４０中、細胞２×１０６個／ｍＬの最終濃度でプレーティングした。２４時間後、細胞を回収し、ＲＰＭＩ１６４０中で洗浄し、丸底の９６ウェルプレート中で、１０％のＦＢＳ、２ｍＭのＬ−グルタミン、１００Ｕ／ｍＬのペニシリン、および１００μｇ／ｍＬのストレプトマイシンが補充されたＲＰＭＩ１６４０中、細胞３×１０５個／ｍＬの最終濃度でプレーティングした。次いで細胞を、５０ｎｇ／ｍＬのＴＳＬＰ、１０ｎｇ／ｍＬのヒトＩＬ−２（ＩＬ−２；Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、＃２０２−ＩＬ／ＣＦ）、１ｎＭのＣ末端ｍｙｃ−ｍｙｃ−ヘキサヒスチジンタグと共に発現されたヒトＩＬ−２５（ｈＩＬ−２５−ＭＭＨ；配列番号２７３）および２００ｎＭから４８．８ｐＭの抗体の段階希釈液と共に１ウェル当たり２００μＬの最終体積でインキュベートした。各試料を３連で試験した。抗体が存在する場合、ＩＬ−２５と３０分間プレインキュベートした後にそれを細胞に添加した。
【０１９５】
次いで細胞を、５％のＣＯ２を含む加湿したインキュベーター中、３７℃で７２時間インキュベートした。それに続いて、市販のＥＬＩＳＡ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、＃ＤＹ２０５）を使用して培養上清中のＩＬ−５レベルを測定した。ＥＬＩＳＡのために、製造元の指示に従って９６ウェルの平底プレートを捕捉抗体でコーティングした。洗浄および遮断の後、１００μＬの希釈していない培養上清をプレートに添加し、２時間インキュベートした。それに続く洗浄および検出を製造元の指示に従って行った。結果を表１４および１５に要約する。
【表１４】
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【表１５】
2020075926.tif 000016
【０１９６】
表１４で示されるように、ＴＳＬＰおよびＩＬ−２の存在下における１ｎＭでのヒトＩＬ−２５−ＭＭＨは、ドナー＃７２７０５８−０５９から得られたヒト総ＰＢＭＣからの０．０７１ｎｇ／ｍＬのＩＬ−５の放出およびドナー＃７２７０６０から得られたヒト総ＰＢＭＣからの０．５９９ｎｇ／ｍＬのＩＬ−５の放出を誘導した。
【０１９７】
表１５で示されるように、試験された４種全ての本発明の抗ＩＬ−２５抗体は、ドナー＃７２７０５８−０５９については３９．２ｐＭ〜１．１４９ｎＭの範囲のＩＣ５０値で、ドナー＃７２７０６０については１２９．６ｐＭ〜６７７．１ｐＭの範囲のＩＣ５０値で、１ｎＭのｈＩＬ−２５−ＭＭＨにより誘導されたヒトＰＢＭＣからのＩＬ−５の放出を遮断した。コンパレーター１は、ドナー＃７２７０５８−０５９については５．６８５ｎＭのＩＣ５０値で、ドナー＃７２７０６０については１５．９ｎＭのＩＣ５０値でＩＬ−５の放出を遮断した。
【０１９８】
この実施例は、本発明の抗ＩＬ−２５抗体が、細胞中で、コンパレーター抗ＩＬ−２５抗体より大きい程度にＩＬ−２５のシグナル伝達を強力に遮断できることを確認する。
【０１９９】
（実施例８．候補ｍＡｂのｉｎ  ｖｉｖｏ効能を研究するための、ＩＬ−２５の流体力学的ＤＮＡ送達（Ｈｙｄｒｏｄｙｎａｍｉｃ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｏｆ  ＤＮＡ）（ＨＤＤ）によって誘導された肺好酸球増加症、杯細胞化生および高い血清ＩｇＥ）
流体力学的ＤＮＡ送達（ＨＤＤ）によって、ヒトＩＬ−２５を野生型（ＷＴ）マウス中で過剰発現させた。ＨＤＤ実験のために、ＷＴマウスに、２５μｇの全長ヒトＩＬ−２５を発現するプラスミド（ＮＭ＿０２２７８９．３；ｈＩＬ−２５、加えて配列番号２７７（ＤＮＡ）および配列番号２７８（タンパク質）を参照されたい）または２５μｇのコード配列を欠失した同じプラスミド（空ベクター）のいずれかを注射した。ｈＩＬ−２５プラスミドが注射されたマウスの部分集合に、ＨＤＤ注射の３日前、ＨＤＤ注射の日、次いでＨＤＤ注射の２日後および４日後に、ＩＬ−２５抗体、または一致する用量のアイソタイプ対照抗体のいずれかを皮下注射した。ＨＤＤ注射の７日後にマウスを屠殺し、血液および肺を収集した。血清ＩｇＥレベルを、ＥＬＩＳＡによって定量し、肺好酸球増加症を、コラゲナーゼ処理後に肺に浸潤した細胞の単離およびフローサイトメトリーによって評価し、杯細胞化生を、過ヨウ素酸シッフ（ＰＡＳ）で染色された肺切片の定量化によって評価した。
【０２００】
マウス群の実験的な投薬および処置プロトコールを表１６Ａおよび１６Ｂに示す。
【表１６】
2020075926.tif 000017
【０２０１】
循環ＩｇＥレベルの測定
血液試料を、２７Ｇ１／２の１ｍｌ  ＴＢシリンジ（ＢＤ、＃３０９３０６）を使用した末端心臓穿刺（ｔｅｒｍｉｎａｌ  ｃａｒｄｉａｃ  ｐｕｎｃｔｕｒｅ）を介して各マウスから収集し、収集した血液を、ＢＤ  Ｍｉｃｒｏｔａｉｎｅｒ（登録商標）血清セパレーターチューブ（ＢＤ、＃３６５９５６）に入れた。遠心分離後、血清を収集し、続いて新しいチューブに移した。
【０２０２】
血清試料中の総ＩｇＥ濃度を決定するために、製造元の指示に従って、サンドイッチＥＬＩＳＡ  ＯＰＴＥＩＡキット（ＢＤ、＃５５５２４８）を、ＢＤ  ＯＰＴＥＩＡ試薬セットＢ（ＢＤ、＃５５０５３４）と共に使用した。簡単に言えば、血清試料を試薬希釈剤で希釈し、抗ＩｇＥ捕捉抗体でコーティングした９６ウェルプレート上でプレーティングした。製造元によって供給された精製したマウスＩｇＥを参照標準として使用した。洗浄後、ビオチン化した抗マウスＩｇＥ抗体とそれに続くストレプトアビジン−西洋ワサビペルオキシダーゼコンジュゲートの添加を使用してプレートに結合した総ＩｇＥを検出した。それに続いて色原体（ｃｈｒｏｍａｇｅｎ）である３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジンを添加して比色反応を起こし、次いで１Ｍの硫酸で中和した後、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ  ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ  Ｍ５プレートリーダーにて４５０ｎｍで吸光度を測定した。Ｐｒｉｓｍ（商標）ソフトウェア（ＧｒａｐｈＰａｄ）を使用してデータ分析を実行した。表１８および１９で示されるように、各実験群の循環ＩｇＥの平均量は、ｎｇ／ｍＬ±標準偏差（ＳＤ）で表される。
【０２０３】
肺細胞浸潤分析のための肺回収
放血後、各マウスから右肺の尾側葉（ｃａｕｄａｌ  ｌｏｂｅ）を取り出し、およそ２〜３ｍｍのサイズのさいの目に切断し、ハンクス平衡塩溶液（ＨＢＳＳ）（Ｇｉｂｃｏ、＃１４０２５）で希釈した２０μｇ／ｍＬのＤＮアーゼ（Ｒｏｃｈｅ、＃１０１０４１５９００１）および０．７Ｕ／ｍＬのリベラーゼＴＨ（Ｒｏｃｈｅ、＃０５４０１１５１００１）の溶液を含有するチューブに入れ、これを３７℃の水浴中で２０分間インキュベートし、５分ごとにボルテックスした。エチレンジアミン四酢酸（Ｇｉｂｃｏ、＃１５５７５）を１０ｍＭの最終濃度で添加することによって反応を止めた。それに続いて、ｇｅｎｔｌｅ  ＭＡＣＳ  ｄｉｓｓｏｃｉａｔｏｒ（登録商標）（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ、＃１３０−０９５−９３７）を使用して各肺を解離させ、次いで７０μｍフィルターを通過させて濾過して、遠心分離した。得られた肺ペレットを１ｍＬの１×赤血球溶解緩衝液（Ｓｉｇｍａ、＃Ｒ７７５７）に再懸濁して、赤血球を除去した。室温で３分間インキュベートした後、３ｍＬの１×ＤＭＥＭを添加して、赤血球溶解緩衝液を失活させた。次いで細胞懸濁物を遠心分離し、得られた細胞ペレットを５ｍＬのＭＡＣＳ緩衝液（オートＭＡＣＳランニング緩衝液；Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ、＃１３０−０９１−２２１）中に再懸濁した。再懸濁した試料を７０μｍフィルターを通過させて濾過し、１ウェル当たり１×１０６個の細胞を９６ウェルのＶ底プレート中でプレーティングした。次いで細胞を遠心分離し、ペレットを１×ＰＢＳ中で洗浄した。２回目の遠心分離の後、細胞の生存率を決定するために、細胞ペレットを、１×ＰＢＳにて１：１０００で希釈した１００μＬのＬＩＶＥ／ＤＥＡＤ（登録商標）Ｆｉｘａｂｌｅ  Ａｑｕａ  Ｄｅａｄ  Ｃｅｌｌ  Ｓｔａｉｎ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、＃Ｌ３４９５７）中に再懸濁して、遮光しながら室温で２０分間インキュベートした。１×ＰＢＳで１回洗浄した後、１０μｇ／ｍＬの精製したラット抗マウスＣＤ１６／ＣＤ３２  Ｆｃブロック、（Ｃｌｏｎｅ：２．４Ｇ２；ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、＃５５３１４２）を含有するＭＡＣＳ緩衝液の溶液中で、４℃で１０分間、細胞をインキュベートした。細胞を１回洗浄し、次いでＭＡＣＳ緩衝液で希釈した適切な抗体混合物（表１７で記載される）中で、遮光しながら４℃で３０分間インキュベートした。抗体のインキュベーション後、細胞をＭＡＣＳ緩衝液中で２回洗浄して、ＢＤ  ｃｙｔｏｆｉｘ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、＃５５４６５５）に再懸濁し、次いで遮光しながら４℃で１５分間インキュベートした。それに続いて細胞を洗浄し、ＭＡＣＳ緩衝液に再懸濁し、次いでフローサイトメトリーによって好酸球を分析するためにＢＤ  ＦＡＣＳチューブ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、＃３５２２３５）に移した。
【０２０４】
好酸球を、生存、ＣＤ４５＋、ＧＲ１−、ＣＤ１１ｃｌｏ、ＳｉｇｌｅｃＦｈｉと定義した。データは、表２０および２１で示されるように免疫細胞集団中の好酸球の頻度（ＣＤ４５＋細胞の％±ＳＤ）として表した。
【表１７】
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【０２０５】
杯細胞化生分析のための肺回収
放血後、各マウスから左肺を取り出し、５ｍＬの１×リン酸緩衝食塩水中の４％（ｗ／ｖ）パラホルムアルデヒド溶液（Ｂｏｓｔｏｎ  Ｂｉｏｐｒｏｄｕｃｔｓ、＃ＢＭ−１５５）を含有するチューブに入れ、室温で少なくとも２４時間貯蔵した。次いで肺試料の水分を吸い取って乾燥させ、７０％エタノールを含有するチューブに移した。パラフィン包埋、切片化および過ヨウ素酸シッフ（ＰＡＳ）染色のために、試料をＨｉｓｔｏｓｅｒｖ，Ｉｎｃ（Ｇｅｒｍａｎｔｏｗｎ、ＭＤ）に送った。
【０２０６】
ＰＡＳ染色された肺切片の写真を、Ｚｅｉｓｓ  Ａｘｉｏ  Ｉｍａｇｅｒ  Ａ２顕微鏡（４０×対物）を使用して撮った。ＰＡＳで陽性染色された細胞を杯細胞として同定し、主気管支の上皮の長さ１〜２ｍｍの切片中で計数した。杯細胞の数を、分析された上皮切片中の細胞総数に対して表した。杯細胞の頻度±ＳＤとして表されたデータを表２２に示す。
【表１８】
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【表１９】
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【表２０】
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【表２１】
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【表２２】
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【０２０７】
ＨＤＤによってヒトＩＬ−２５を過剰発現する野生型マウスは、ＨＤＤによって空ベクターが付与された野生型マウスと比較して（研究１の場合、３１１±２００ｎｇ／ｍＬ、研究２の場合、１１８６±１３７０ｎｇ／ｍＬ）、循環ＩｇＥレベルの増加を実証した（研究１の場合、３４１７±１６２７ｎｇ／ｍＬ、研究２の場合、１１８６±１３７０ｎｇ／ｍＬ）。表１８および１９で示されるように、ＨＤＤによってヒトＩＬ−２５を過剰発現するマウスをＩＬ−２５抗体で処置したところ、各研究において循環ＩｇＥレベルが低減した。ＨＤＤによってヒトＩＬ−２５を過剰発現する野生型マウスは、ＨＤＤによって空ベクターが付与された野生型マウスと比較して（研究１の場合、１．４７±０．１６％、研究２の場合、６．３５±１．４６％）、肺好酸球の頻度を増加させる傾向を実証した（研究１の場合、１７．２０±２．３９％、研究２の場合、３２．２９±１８．３５％）。表２０および２１で示されるように、ＨＤＤによってヒトＩＬ−２５を過剰発現するマウスをＩＬ−２５抗体で処置したところ、各研究において肺好酸球の頻度が低減した。ＨＤＤによってヒトＩＬ−２５を過剰発現する野生型マウスは、ＨＤＤによって空ベクターが付与された野生型マウスと比較して（研究２の場合、１．１５±１．６７）、杯細胞化生を増加させる傾向を実証した（研究２の場合、５９．６３±３９．７４）。表２２で示されるように、ＨＤＤによってヒトＩＬ−２５を過剰発現するマウスをＩＬ−２５抗体で処置したところ、研究２において杯細胞化生の頻度が低減した。
【０２０８】
（実施例９：ＷＴおよびＩＬ−２５ＫＯマウスにおける慢性的なイエチリダニアレルゲン（ＨＤＭ）によって誘導された肺の炎症）
関連するｉｎ  ｖｉｖｏモデルにおけるＩＬ−２５の役割を決定するために、慢性的なイエチリダニアレルゲン（ＨＤＭ）によって誘導された肺の炎症の研究を、野生型マウス（ＷＴ）およびマウスＩＬ−２５の欠失についてホモ接合型であるマウス（ＩＬ−２５ＫＯマウス）の両方で実行した。
【０２０９】
ＩＬ−２５ＫＯおよびＷＴマウスに、２０μＬの１×リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）で希釈した５０μｇのイエチリダニ抽出物（ＨＤＭ；Ｇｒｅｅｒ、＃ＸＰＢ７０Ｄ３Ａ２．５）または２０μＬの１×ＰＢＳのいずれかを、１２週間、１週間に５日間鼻腔内投与した。研究の第１３週の１日目に全てのマウスを屠殺し、それらの肺を回収した。マウス群の実験的な投薬および処置プロトコールを表２３に示す。
【表２３】
2020075926.tif 000024
【０２１０】
肺細胞浸潤分析のための肺回収
放血後、各マウスから右肺の尾側葉を取り出し、およそ２〜３ｍｍのサイズのさいの目に切断し、ハンクス平衡塩溶液（ＨＢＳＳ）（Ｇｉｂｃｏ、＃１４０２５）で希釈した２０μｇ／ｍＬのＤＮアーゼ（Ｒｏｃｈｅ、＃１０１０４１５９００１）および０．７Ｕ／ｍＬのリベラーゼＴＨ（Ｒｏｃｈｅ、＃０５４０１１５１００１）の溶液を含有するチューブに入れ、これを３７℃の水浴中で２０分間インキュベートし、５分ごとに反転させた。エチレンジアミン四酢酸（Ｇｉｂｃｏ、＃１５５７５）を１０ｍＭの最終濃度で添加することによって反応を止めた。それに続いて、ｇｅｎｔｌｅＭＡＣＳ  ｄｉｓｓｏｃｉａｔｏｒ（登録商標）（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ、＃１３０−０９５−９３７）を使用して各肺を解離させ、次いで７０μｍフィルターを通過させて濾過して、遠心分離した。得られた肺ペレットを１ｍＬの１×赤血球溶解緩衝液（Ｓｉｇｍａ、＃Ｒ７７５７）に再懸濁して、赤血球を除去した。室温で３分間インキュベートした後、３ｍＬのＭＡＣＳ緩衝液（オートＭＡＣＳランニング緩衝液；Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ、＃１３０−０９１−２２１）を添加して、赤血球溶解緩衝液を失活させた。次いで細胞懸濁物を遠心分離し、得られた細胞ペレットを５ｍＬのＭＡＣＳ緩衝液中に再懸濁した。再懸濁した試料を７０μｍフィルターを通過させて濾過し、１ウェル当たり１×１０６個の細胞を９６ウェルのＶ底プレート中でプレーティングした。次いで細胞を遠心分離し、ペレットを１×ＰＢＳ中で洗浄した。２回目の遠心分離の後、細胞の生存率を決定するために、細胞ペレットを、１×ＰＢＳにて１：１０００で希釈した１００μＬのＬＩＶＥ／ＤＥＡＤ（登録商標）Ｆｉｘａｂｌｅ  Ａｑｕａ  Ｄｅａｄ  Ｃｅｌｌ  Ｓｔａｉｎ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、＃Ｌ３４９５７）中に再懸濁して、遮光しながら室温で２０分間インキュベートした。１×ＰＢＳで１回洗浄した後、１０μｇ／ｍＬの精製したラット抗マウスＣＤ１６／ＣＤ３２  Ｆｃブロック、（Ｃｌｏｎｅ：２．４Ｇ２；ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、＃５５３１４２）を含有するＭＡＣＳ緩衝液の溶液中で、４℃で１０分間、細胞をインキュベートした。細胞を１回洗浄し、次いでＭＡＣＳ緩衝液で希釈した適切な抗体混合物（表２４で記載される）中で、遮光しながら４℃で３０分間インキュベートした。抗体のインキュベーション後、細胞をＭＡＣＳ緩衝液中で２回洗浄して、ＢＤ  ｃｙｔｏｆｉｘ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、＃５５４６５５）に再懸濁し、次いで遮光しながら４℃で１５分間インキュベートした。それに続いて細胞を洗浄し、ＭＡＣＳ緩衝液に再懸濁し、次いでフローサイトメトリーによって好中球およびリンパ球を分析するためにＢＤ  ＦＡＣＳチューブ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、＃３５２２３５）に移した。
【０２１１】
好中球を、生存、ＣＤ４５＋、Ｆ４／８０−、Ｌｙ６Ｇ＋、Ｌｙ６ＣＩｎｔと定義した。好中球に関するデータは、表２５で示されるように分析された生細胞の頻度（生存の頻度±ＳＤ）として表される。ＣＤ４およびＣＤ８  Ｔ細胞を、それぞれ生存、ＳＳＣＬｏ、ＦＳＣＬｏ、ＣＤ４５＋、ＣＤ１９−、ＣＤ３＋、ＣＤ８−、ＣＤ４＋、および生存、ＳＳＣＬｏ、ＦＳＣＬｏ、ＣＤ４５＋、ＣＤ１９−、ＣＤ３＋、ＣＤ８＋、ＣＤ４−と定義した。ＣＤ４およびＣＤ８  Ｔ細胞に関するデータは、表２５で示されるように、ＣＤ８  Ｔ細胞の頻度に対するＣＤ４  Ｔ細胞の頻度（ＣＤ４／ＣＤ８の比±ＳＤ）として表される。活性化されたＣＤ４  Ｔ細胞を、生存、ＣＤ４５＋、ＳＳＣＬｏ、ＦＳＣＬｏ、ＣＤ３＋、ＣＤ１９−、ＣＤ４＋、ＣＤ８−、およびＣＤ６９＋である細胞と定義した。活性化されたＣＤ８  Ｔ細胞を、生存、ＣＤ４５＋、ＳＳＣＬｏ、ＦＳＣＬｏ、ＣＤ３＋、ＣＤ１９−、ＣＤ４＋、ＣＤ８−、およびＣＤ６９＋である細胞と定義した。活性化された細胞に関するデータは、表２５で示されるように、親集団中の活性化された細胞（ＣＤ６９＋）の頻度（ＣＤ４またはＣＤ８  Ｔ細胞の頻度±ＳＤ）として表した。
【表２４】
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【０２１２】
サイトカイン分析のための肺回収：
放血後、各マウスから右肺の頭側葉（ｃｒａｎｉａｌ  ｌｏｂｅ）および中葉を取り出し、１×Ｈａｌｔプロテアーゼ阻害剤カクテル（Ｐｉｅｒｃｅ、＃７８４３０）が補充された組織タンパク質抽出試薬（１×Ｔ−ＰＥＲ試薬；Ｐｉｅｒｃｅ、＃７８５１０）の溶液を含有するチューブに入れた。全てのさらなるステップを氷上で実行した。Ｔ−ＰＥＲ試薬（プロテアーゼ阻害剤カクテルを含有する）の体積を、各試料に組織とＴ−ＰＥＲとの比が１：７．５（ｗ／ｖ）に一致するように調整した。肺試料を、チューブ中で使い捨ての乳棒（Ａｒｇｏｓ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、カタログ番号Ｐ９９５０−９０１）を使用して手動でホモジナイズした。得られた溶解産物を遠心分離して、残屑をペレット化した。可溶性タンパク質抽出物を含有する上清を新しいチューブに移し、さらなる分析まで４℃で貯蔵した。
【０２１３】
肺タンパク質抽出物の総タンパク質含量を、ブラッドフォードアッセイを使用して測定した。アッセイのために、１０μＬの希釈した抽出物試料を９６ウェルプレートに２連でプレーティングし、２００μＬの１×色素試薬（Ｂｉｏｒａｄ、＃５００−０００６）と混合した。抽出物の正確なタンパク質濃度を決定するために、７００μｇ／ｍＬで開始される１×Ｔ−Ｐｅｒ試薬でのウシ血清アルブミン（Ｓｉｇｍａ、＃Ａ７９７９）の段階希釈液を標準として使用した。室温で５分間インキュベートした後、５９５ｎｍでの吸光度を、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ  ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ  Ｍ５プレートリーダーで測定した。総タンパク質含量を決定するためのデータ分析を、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ（商標）ソフトウェアを使用して実行した。
【０２１４】
肺タンパク質抽出物中のサイトカイン濃度を、製造元の指示に従って、炎症促進性パネル１（マウス）マルチプレックスイムノアッセイキット（ＭｅｓｏＳｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ、＃Ｋ１５０４８Ｄ）を使用して測定した。簡単に言えば、５０μＬ／ウェルの検定物質および試料（希釈剤４１で希釈）を、捕捉抗体で予めコーティングしたプレートに添加し、７００ｒｐｍで２時間振盪しながら室温でインキュベートした。次いでプレートを０．０５％（ｗ／ｖ）Ｔｗｅｅｎ−２０を含有する１×ＰＢＳで３回洗浄し、続いて希釈剤４５で希釈した２５μＬの検出抗体溶液を添加した。振盪しながら室温でさらに２時間インキュベートした後、プレートを３回洗浄し、各ウェルに１５０μＬの２×リード緩衝液を添加した。電気化学発光をＭＳＤ  Ｓｐｅｃｔｏｒ（登録商標）機器で即座に読み取った。ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ（商標）ソフトウェアを使用してデータ分析を実行した。
【０２１５】
測定された肺の総タンパク質抽出物中の各サイトカイン濃度を、ブラッドフォードアッセイによって測定された抽出物の総タンパク質含量に正規化し、表２６で示されるように総肺タンパク質１ｍｇ当たりのサイトカインのｐｇ（ｐｇ／ｍｇ肺タンパク質±ＳＤ）として表した。
【表２５】
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【表２６】
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【０２１６】
表２５で示されるように、ＷＴマウスにおける長期のまたは慢性的なＨＤＭへの曝露は、ＰＢＳ単独に曝露されたＷＴマウスと比較して、肺の好中球の有意な増加を誘導した。またＷＴマウスにおける慢性的なＨＤＭ攻撃は、肺におけるＣＤ４およびＣＤ８  Ｔ細胞のバランスのシフト、加えて活性化されたＣＤ４およびＣＤ８  Ｔ細胞の頻度の増加も誘導した。慢性的なＨＤＭ攻撃により誘導された肺の好中球および肺の細胞性炎症のこれらの他の特徴における増加は、ＷＴマウスと比較して、ＩＬ−２５ＫＯマウスにおいて有意に低減した。
【０２１７】
ＨＤＭへの長期曝露は、ＰＢＳ単独に曝露されたＷＴマウスと比較して、ＷＴマウスの肺においてＩＬ−１βおよびＴＮＦαなどの炎症促進性サイトカインのレベルの有意な増加を誘導した。対照的に、表２６で示されるように、ＩＬ−２５ＫＯマウスのＨＤＭへの慢性的な曝露は、これらの２つのサイトカインの肺でのレベルを有意に増加させなかった。
【０２１８】
まとめると、ＨＤＭへの慢性的な曝露は、ＷＴマウスにおいて、同じ攻撃を受けたＩＬ−２５ＫＯマウスの肺には存在しない肺の炎症の特徴を誘導する。
【０２１９】
本発明は、本明細書に記載の具体的な実施形態による範囲に限定されないものとする。実際に、本明細書に記載された改変に加えて、本発明の様々な改変が、前述の説明および添付の図面から当業者に明らかになる。このような改変は、添付の特許請求の範囲内に含まれるものとする。
【図１】
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【配列表】
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【外国語明細書】
2020075926000001.pdf