(57)【要約】      （修正有）【課題】本発明は、Ｔｏｘｉｃ ＡＧＥｓ（タンパク質の糖化反応による終末糖化産物）の生成を抑える抑制剤の提供。【解決手段】下式で示されるケルセチン配糖体を含むＴｏｘｉｃ ＡＧＥｓ生成抑制剤。2020188689.tif 000011〔式中、Ｒ1およびＲ2は、それぞれ独立に糖類由来の構造である。〕【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（１）で示されるケルセチン配糖体を含むＴｏｘｉｃ  ＡＧＥｓ生成抑制剤。
【化１】
2020188689.tif 000010
・・・（１）
〔式（１）中、Ｒ1およびＲ2は、それぞれ独立に糖類由来の構造である。〕
【請求項２】
前記式（１）中、Ｒ1がラムノース由来の構造である、請求項１に記載のＴｏｘｉｃ  ＡＧＥｓ生成抑制剤。
【請求項３】
前記式（１）で示されるケルセチン配糖体がα−グルコシルルチンである、請求項１または請求項２に記載のＴｏｘｉｃ  ＡＧＥｓ生成抑制剤。
【請求項４】
少なくともアルブミンまたはコラーゲン由来のＴｏｘｉｃ  ＡＧＥｓの生成を抑制する、請求項１〜３いずれか１項に記載のＴｏｘｉｃ  ＡＧＥｓ生成抑制剤。
【請求項５】
グリセルアルデヒド、アセトアルデヒド、およびグリコールアルデヒドから選択される少なくとも一つを由来とするＴｏｘｉｃ  ＡＧＥｓの生成を抑制する請求項１〜４いずれか１項に記載のＴｏｘｉｃ  ＡＧＥｓ生成抑制剤。
【請求項６】
請求項１〜５のいずれか１項に記載のＴｏｘｉｃ  ＡＧＥｓ生成抑制剤を含む飲食品、医薬品、医薬部外品または化粧品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、Ｔｏｘｉｃ  ＡＧＥｓ生成抑制剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
アミノ酸と還元糖を加熱すると褐色の色素が生成する反応は、一般にメイラード反応と呼ばれ、食品の加熱中に起こる着色や、香り・風味の変化、保存期間中の栄養価低下に関わる反応であることから食品化学の領域で注目されてきた。１９６０年代にはメイラード反応は生体内でも起きており、糖尿病の進行に伴いタンパク質の糖化反応が進行することが明らかになった。その後、タンパク質の糖化反応による終末糖化産物（Ａｄｖａｎｃｅｄ  ｇｌｙｃａｔｉｏｎ  ｅｎｄ  ｐｒｏｄｕｃｔｓ、以下ＡＧＥｓと称する）が、アルツハイマー病等の神経疾患や、癌の増殖、転移、浸潤、老化現象、高血圧、動脈硬化症などにも関与していることが明らかになり、これら疾患の発症、進展を抑制するため、種々のＡＧＥｓ生成抑制剤が開発されてきた（例えば特許文献１、特許文献２）。
【０００３】
生体内でのＡＧＥｓ生成経路の全貌は未だに明らかになっていないが、近年の研究により、グルコースとタンパク質から生成するだけでなく、グルコースの代謝中間体や分解物、メイラード反応中間体などからもＡＧＥｓが生成することがわかっている（非特許文献１）。さらに、ＡＧＥｓは、防御的な意味合いで生成されると考えられるＮｏｎ−Ｔｏｘｉｃ  ＡＧＥｓと、実際に病気の原因となるＴｏｘｉｃ  ＡＧＥｓ（以下、ＴＡＧＥとも称する）に分類できることがわかってきた。構造が明らかにされたＮｏｎ−Ｔｏｘｉｃ  ＡＧＥｓとしては、カルボキシメチルリジン、ピラリン、ペントシジン、クロスリン、イミダゾロン等が知られ、これらの構造を認識する抗体が市販されていることから、生体内のＡＧＥｓを定量するための指標として広く用いられている。しかし、例えばカルボキシルメチルリジンは生体において糖化反応ではなく、脂質過酸化により生成することが明らかになっており、Ｎｏｎ−Ｔｏｘｉｃ  ＡＧＥｓを定量しても、生体の糖化の度合いを正確に評価しているとはいえない。
【０００４】
ＴＡＧＥとしては、グルコースから生じたグリコールアルデヒドに由来するＡＧＥ（以下、ＧＯ−ＡＧＥという）、グルコースおよびフルクトースから生じるグリセルアルデヒドに由来するＡＧＥ（以下、ＧＥ−ＡＧＥという）、グルコース分解産物から生成するアセトアルデヒドに由来するＡＧＥ（以下、ＡＡ−ＡＧＥという）が知られている。これらのＴＡＧＥは、Ｎｏｎ−Ｔｏｘｉｃ  ＡＧＥｓとは異なって、非常に強い細胞障害性を示すだけでなく、ＲＡＧＥ（ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｆｏｒ  ＡＧＥｓ）を介して糖尿病血管合併症、心血管病、非アルコール性脂肪肝炎、がん、不妊症、アルツハイマー病などの多様な疾患に関与することが近年の研究により明らかにされている（非特許文献２）。中でもＧＥ−ＡＧＥは毒性が強いこと、さらに清涼飲料や果物に多く含まれるフルクトース（果糖）からも生じることから、ＴＡＧＥの中でも特に食生活と疾患の関連という観点から注目を集めている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開２０１７−６６０５２号公報
【特許文献２】特開２０１７−５７１６３号公報
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】竹内正義、「生活習慣病におけるＴＡＧＥ（ｔｏｘｉｃ  ＡＧＥｓ）病因説」、北陸大学紀要、２００４年、第２８号、ｐ.３３−４８
【非特許文献２】竹内正義、「生活習慣病の発症・進展におけるＴｏｘｉｃ  ＡＧＥｓ（ＴＡＧＥ）の関与」、金医大誌、２０１５年、第４０号、ｐ.９５−１０３
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明者らはＴＡＧＥの影響を抑えることが生活習慣病の発症、進展の予防や治療の戦略上重要であると考え、ＴＡＧＥの生成を抑制し、さらには血中ＴＡＧＥ濃度を低下させる、または上昇を抑制することのできるＴＡＧＥ生成抑制剤を提供することを本発明の課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者らは上記課題を解決すべく鋭意検討した。その結果、以下の構成を有することにより上記課題を解決できることを見出し、本発明を完成するに至った。
本発明は、例えば以下の〔１〕〜〔６〕に関する。
〔１〕式（１）で示されるケルセチン配糖体を含むＴｏｘｉｃ  ＡＧＥｓ生成抑制剤。
【化１】
2020188689.tif 000002
・・・（１）
〔式（１）中、Ｒ1およびＲ2は、それぞれ独立に糖類由来の構造である。〕
〔２〕前記式（１）中、Ｒ1がラムノース由来の構造である、〔１〕に記載のＴｏｘｉｃ  ＡＧＥｓ生成抑制剤。
〔３〕前記式（１）で示されるケルセチン配糖体がα−グルコシルルチンである、〔１〕または〔２〕に記載のＴｏｘｉｃ  ＡＧＥｓ生成抑制剤。
〔４〕少なくともアルブミンまたはコラーゲン由来のＴｏｘｉｃ  ＡＧＥｓの生成を抑制する、〔１〕〜〔３〕いずれかに記載のＴｏｘｉｃ  ＡＧＥｓ生成抑制剤。
〔５〕グリセルアルデヒド、アセトアルデヒド、およびグリコールアルデヒドから選択される少なくとも一つを由来とするＴｏｘｉｃ  ＡＧＥｓの生成を抑制する〔１〕〜〔４〕いずれかに記載のＴｏｘｉｃ  ＡＧＥｓ生成抑制剤。
〔６〕〔１〕〜〔５〕いずれかに記載のＴｏｘｉｃ  ＡＧＥｓ生成抑制剤を含む飲食品、医薬品、医薬部外品または化粧品。
【発明の効果】
【０００９】
本発明によれば、ＴＡＧＥの生成を抑制するＴｏｘｉｃ  ＡＧＥｓ生成抑制剤を提供できる。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】図１は、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡとも記す。）とグリセルアルデヒドを用いたin  vitro試験系において、α−グルコシルルチンのＧＥ−ＡＧＥの生成抑制効果を示すグラフである。
【図２】図２は、ヒト血清アルブミンとアセトアルデヒドを用いたin  vitro試験系において、α−グルコシルルチンのＡＡ−ＡＧＥの生成抑制効果を示すグラフである。
【図３】図３は、ヒト血清アルブミンとグリコールアルデヒドを用いたin  vitro試験系において、α−グルコシルルチンのＧＯ−ＡＧＥの生成抑制効果のヒト血清アルブミン濃度依存性を示すグラフである。
【図４】図４は、ヒト血清アルブミンと１０ｍＭグリコールアルデヒドを用いたin  vitro試験系において、α−グルコシルルチンのＧＯ−ＡＧＥの生成抑制効果のヒト血清アルブミン濃度依存性を示すグラフである。
【図５】図５は、ヒト血清アルブミンと３０ｍＭグリコールアルデヒドを用いたin  vitro試験系において、α−グルコシルルチンのＧＯ−ＡＧＥの生成抑制効果のヒト血清アルブミン濃度依存性を示すグラフである。
【図６】図６は、０．２％ヒト血清アルブミンとグリコールアルデヒドを用いたin  vitro試験系において、α−グルコシルルチンのＧＯ−ＡＧＥの生成抑制効果のグリコールアルデヒド濃度依存性を示すグラフである。
【図７】図７は、０．５％ヒト血清アルブミンとグリコールアルデヒドを用いたin  vitro試験系において、α−グルコシルルチンのＧＯ−ＡＧＥの生成抑制効果のグリコールアルデヒド濃度依存性を示すグラフである。
【図８】図８は、コラーゲンとグリセルアルデヒドを用いたin  vitro試験系において、αグルコシルルチンのＧＥ−ＡＧＥの生成抑制効果を示すグラフである。
【図９】図９は、α−グルコシルルチンを配合した試験食品を摂取した被験者Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄにおける、血中ＴＡＧＥ濃度の変化を示すグラフである。
【図１０】図１０は、α−グルコシルルチンを配合した試験食品を摂取した被験者Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈにおける、血中ＴＡＧＥ濃度の変化を示すグラフである。
【図１１】図１１は、α−グルコシルルチンを配合した試験食品を摂取した被験者Ｉ、Ｊ、Ｋ、Ｌにおける、血中ＴＡＧＥ濃度の変化を示すグラフである。
【図１２】図１２は、α−グルコシルルチンを配合した試験食品を摂取した被験者１２名の平均血中ＴＡＧＥ濃度の変化を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
次に本発明のＴｏｘｉｃ  ＡＧＥｓ生成抑制剤について具体的に説明する。なお、Ｔｏｘｉｃ  ＡＧＥｓ生成抑制剤を、ＴＡＧＥ生成抑制剤とも記す。
本発明のＴｏｘｉｃ  ＡＧＥｓ生成抑制剤は、式（１）で示されるケルセチン配糖体を含む。
【化２】
2020188689.tif 000003
・・・（１）
〔式（１）中、Ｒ1およびＲ2は、それぞれ独立に糖類由来の構造である。〕
【００１２】
〈ケルセチン配糖体〉
式（１）で表されるケルセチン配糖体は、ポリフェノールの一種であるケルセチンの３位の水酸基にグルコースがβ結合し、前記グルコースの４位および５位の水酸基に糖類が結合した化合物である。式（１）で表されるケルセチン配糖体としては、１種のケルセチン配糖体のみで用いてもよく、複数種のケルセチン配糖体の混合物を用いてもよい。また、ＴＡＧＥ生成抑制剤は、本発明の効果を損なわない範囲で前記ケルセチン配糖体以外の成分（その他の成分）を含んでもよく、例えばイソケルシトリン（イソケルセチン）、ケルセチン、ルチン等を含んでもよい。
【００１３】
〈Ｒ1およびＲ2〉
式（１）中のＲ1およびＲ2は、それぞれ独立に糖類由来の構造である。糖類由来の構造としては、通常は糖類の有する複数のＯＨ基のうち、一つが脱離した構造が挙げられる。前記糖類としては例えば、グルコース、ラムノース、フルクトース、マンノース、ガラクトース等のヘキソース、キシロース、アラビノース等のペントース等の単糖類、スクロース、ラクトース、プリメベロース、ゲンチオビオース、ルチノース、ストロファントビオース、セロビオース、アミロース、アミロペクチン、セルロース等の多糖類、エリスリトール、キシリトール等の糖アルコール、あるいはそれらの誘導体を用いることができる。原料の入手容易性や反応効率、ケルセチン配糖体の安定性、ＴＡＧＥ生成抑制効果の観点から、Ｒ1およびＲ2は単糖または多糖であることが好ましい。Ｒ1はラムノース由来の構造であることが好ましい。また、Ｒ2はグルコース由来の構造またはアミロース由来の構造であることが好ましい。
【００１４】
原料の入手容易性や反応効率、ケルセチン配糖体の安定性、ＴＡＧＥ生成抑制効果の観点から、Ｒ1がラムノース由来の構造である場合は、前記ケルセチン配糖体は式（１−１）で示されるものが好ましい。
【化３】
2020188689.tif 000004
・・・（１−１）
〔式（１−１）中、Ｒ2は糖類由来の構造である。〕
【００１５】
原料の入手容易性や反応効率、ケルセチン配糖体の安定性、ＴＡＧＥ生成抑制効果の観点から、Ｒ2がグルコース由来の構造またはアミロース由来の構造である場合は、前記ケルセチン配糖体は式（１−２）で示されるものがより好ましい。なお、アミロースは、グルコースがα１→４結合により結合した多糖である。
【化４】
2020188689.tif 000005
・・・（１−２）
〔式（１−２）中、Ｒ1は糖類由来の構造である。また、ｎは１以上の整数である。〕
【００１６】
原料の入手容易性や反応効率、ケルセチン配糖体の安定性、ＴＡＧＥ生成抑制効果の観点から、式（１−２）中、ｎ＝１、またはｎ＝２〜２０が好ましく、ｎ＝１、またはｎ＝２〜１０がより好ましく、ｎ＝１がさらに好ましい。
【００１７】
原料の入手容易性や反応効率、ケルセチン配糖体の安定性、ＴＡＧＥ生成抑制効果の観点から、前記ケルセチン配糖体は式（１−３）で示されるものが特に好ましい。
【化５】
2020188689.tif 000006
・・・（１−３）
【００１８】
原料の入手容易性や反応効率、ケルセチン配糖体の安定性、ＴＡＧＥ生成抑制効果の観点から、式（１−３）中、ｎ＝１、またはｎ＝２〜２０が好ましく、ｎ＝１、またはｎ＝２〜１０がより好ましく、ｎ＝１がさらに好ましい。
【００１９】
式（１−３）のケルセチン配糖体は総称して、α−グルコシルルチンとも呼ばれる。また、α−グルコシルルチンの中でも、式（１−３）中、ｎ＝１であるケルセチン配糖体は、α−モノグルコシルルチンとも呼ばれる。
【００２０】
式（１）で表されるケルセチン配糖体としては、α−モノグルコシルルチンが主成分であることが好ましく、式（１）で表されるケルセチン配糖体中として、α−モノグルコシルルチンが５０〜１００質量％含まれることがより好ましく、６５〜８５質量％含まれることがさらに好ましい。
【００２１】
前記糖に含まれている水酸基は、他の基により修飾されていてもよい。
【００２２】
〈ケルセチン配糖体の製造方法〉
前記ケルセチン配糖体は、天然物由来のものでもよく、合成品であってもよい。天然物を原料とする場合には、原料となる動植物から、公知の抽出方法によって得られる抽出物をそのまま用いてもよく、さらに分離精製を行ってもよい。
【００２３】
前記ケルセチン配糖体が合成品である場合には、原料となる化合物は制限されず、公知の手法を用いて製造することができ、未反応の原料や副生成物、不純物を含んでもよい。前記ケルセチン配糖体は、原料の入手容易性や反応効率、ケルセチン配糖体の安定性、ＴＡＧＥ生成抑制効果の観点からケルセチン、イソケルシトリンまたはルチンに糖類を結合させて製造することが好ましく、ルチンに糖類を結合させることがさらに好ましい。また、糖類を結合させた後、糖類の結合を特異的に切断し、目的とする分子種のケルセチン配糖体を得ることがより好ましい。糖類の結合または切断には、例えば酵素法、有機化学的な方法や生物変換による方法等を用いることができるが、原料のケルセチン、イソケルシトリンまたはルチンに１種または複数の酵素を作用させることが好ましく、特許第２８１６０３０号公報に記載の酵素処理がさらに好ましい。
【００２４】
上記特許第２８１６０３０号公報に記載の酵素処理について概説すれば、以下の通りである。（１）糖供与体の共存下でルチンに糖転移酵素を作用させ、ルチンのグルコース単位にα-１,４結合によりグルコースを付加することにより、α−グルコシルルチンが生成し、未反応のルチンとα−グルコシルルチンを含有する組成物が得られる。（２）上記（１）により生成したα−グルコシルルチンにグルコアミラーゼ等を作用させ、ルチンのグルコース単位に結合しているグルコース鎖から１分子だけを残して他のグルコースを切断することにより、α−モノグルコシルルチンが生成し、未反応のままのルチンとα−モノグルコシルルチンを含有する組成物が得られる。（３）未反応のままのルチンにα-Ｌ-ラムノシダーゼを作用させ、ルチンのルチノース単位に含まれるラムノースを切断することによりイソケルシトリンが生成し、イソケルシトリンとα−モノグルコシルルチンを含有する組成物が得られる。
【００２５】
前記酵素処理は、目的とするＴｏｘｉｃ  ＡＧＥｓ生成抑制剤の態様に合わせて、組み合わせ、順番等を適宜調整することが可能である。また、複数種の酵素を同時に添加することで、１つの工程で複数の酵素反応を並行して進める態様であってもよい。また、このような酵素処理工程の後にまたはその途中に、必要に応じてその他の処理を行ってもよい。例えば、沈殿物を除去するための濾過処理、沈殿物が生じない程度の濃縮処理、イオン交換樹脂を用いた脱塩処理、その他の夾雑物を除去するための精製処理、さらにこれらの液状物から固形物を調製するための乾燥または凍結乾燥処理などが挙げられる。
【００２６】
上述のような製造方法により得られる組成物は「酵素処理ルチン」として一般的に製造販売されており、本発明ではそのような商品を使用することができる。例えば、東洋精糖(株)製の商品「αＧルチンＰＳ」は、α−モノグルコシルルチン７５質量％、イソケルシトリン１５質量％を含有する組成物である。また、同じく東洋精糖(株)製の商品「αＧルチンＰ」は、α−グルコシルルチン７０質量％、ルチン１５質量％を含有する組成物である。
【００２７】
〈Ｔｏｘｉｃ  ＡＧＥｓ〉
本発明におけるＴｏｘｉｃ  ＡＧＥｓは、グリセルアルデヒド、アセトアルデヒド、またはグリコールアルデヒドに由来するＡＧＥｓである。
【００２８】
グリセルアルデヒドに由来するＡＧＥ（ＧＥ-ＡＧＥ）とは、グリセルアルデヒドとタンパク質が反応して生成されるＡＧＥである。生体内において、グリセルアルデヒドが生じる経路は、全ては明らかになってはいないが、例えば、グルコースが解糖系において代謝されて生じるグリセルアルデヒド３−リン酸を経てグリセルアルデヒドを生じる経路、フルクトースがフルクトース１−リン酸を経てグリセルアルデヒドを生じる経路等があげられる。ＧＥ-ＡＧＥを検出する方法は制限されないが、例えば、グリセルアルデヒドと血清アルブミンを反応させて生成されたＧＥ-ＡＧＥを実験動物に免疫して得られたＧＥ-ＡＧＥ特異的な抗体を用いて行うＥＬＩＳＡ等である。
【００２９】
アセトアルデヒドに由来するＡＧＥ（ＡＡ-ＡＧＥ）は、アセトアルデヒドとタンパク質が反応して生成されるＡＧＥである。生体内において、アセトアルデヒドが生じる経路は、全ては明らかになってはいないが、例えば、グルコース分解産物から生成する経路等があげられる。ＡＡ-ＡＧＥを検出する方法は制限されないが、例えば、アセトアルデヒドと血清アルブミンを反応させて生成されたＡＡ-ＡＧＥを実験動物に免疫して得られたＡＡ-ＡＧＥ特異的な抗体を用いて行うＥＬＩＳＡ等である。
【００３０】
グリコールアルデヒドに由来するＡＧＥ（ＧＯ-ＡＧＥ）は、グリコールアルデヒドとタンパク質が反応して生成されるＡＧＥである。生体内において、グリコールアルデヒドが生じる経路は、全ては明らかになってはいないが、例えば、グルコースとタンパク質から生じたシッフ塩基を経る経路や、活性化されたリンパ球系細胞においてミエロペルオキシダーゼを介してセリンから生成される経路等があげられる。ＧＯ-ＡＧＥを検出する方法は制限されないが、例えば、グリコールアルデヒドと血清アルブミンを反応させて生成されたＧＯ-ＡＧＥを実験動物に免疫して得られたＧＯ-ＡＧＥ特異的な抗体を用いて行うＥＬＩＳＡ等である。
【００３１】
＜ＴＡＧＥ生成の由来となるタンパク質＞
ＴＡＧＥ生成の由来となるタンパク質は、そのすべてが判明しているわけではないが、心臓、脳、皮膚等の臓器、毛髪等の付属器や血液等に存在するタンパク質、すなわち生体に存在するすべてのタンパク質が由来になると考えられる。組成によって分類すれば、アミノ酸のみで構成される単純タンパク質だけでなく、糖タンパク質、リポタンパク質、リンタンパク質、核タンパク質、金属タンパク質など、アミノ酸以外の成分を含む複合タンパク質、ゼラチンやペプトン等の誘導タンパク質も含む。機能によって分類すれば、例えば、Ｇタンパク質等の膜タンパク質、血清アルブミン等の輸送タンパク質、コラーゲン、エラスチン等の構造タンパク質、アクチン等の運動タンパク質グロブリン等の抗体タンパク質、酵素タンパク質、色素タンパク質、結合タンパク質、受容体タンパク質などが挙げられる。
本発明のＴｏｘｉｃ  ＡＧＥｓ生成抑制剤は、皮膚または血液に存在するタンパク質、構造タンパク質、または輸送タンパク質由来のＴｏｘｉｃ  ＡＧＥｓの生成を阻害することが好ましく、少なくともアルブミンまたはコラーゲン由来のＴｏｘｉｃ  ＡＧＥｓの生成を阻害することがさらに好ましい。
【００３２】
〈Ｔｏｘｉｃ  ＡＧＥｓ生成抑制剤〉
本発明におけるＴｏｘｉｃ  ＡＧＥｓ生成抑制剤とは、ＴＡＧＥの生成を抑制する作用を有する成分を含む剤をいい、式（１）で示されるケルセチン配糖体を含んでいる。
より具体的にはＧＥ-ＡＧＥ、ＡＡ-ＡＧＥ、またはＧＯ-ＡＧＥの生成を抑制する作用を有する成分を含む剤をいう。
【００３３】
ＴＡＧＥの中でもＧＥ-ＡＧＥは毒性が強く、疾病の発症、進展とも強く関連していることから、本発明のＴｏｘｉｃ  ＡＧＥｓ生成抑制剤はＧＥ-ＡＧＥの生成を抑制する作用を有することが好ましい。すなわち、本発明のＴｏｘｉｃ  ＡＧＥｓ生成抑制剤は、ＧＥ-ＡＧＥ生成抑制剤であることが、好ましい態様の一つである。
【００３４】
本発明におけるＡＧＥｓ生成抑制作用の評価方法は、有効成分によってＡＧＥｓ生成が抑制される作用の有無が判断できれば特に制限されない。例えば、文献「Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７２：８７２３−８７３０、１９９７」に記載の蛍光強度による評価方法、文献「Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｃａｒｅ  ３５：２６１８−２６２５、２０１２」に記載のＥＬＩＳＡ法等が挙げられる。実験操作が簡便であることから、蛍光強度による評価方法が好ましい。
【００３５】
＜Ｔｏｘｉｃ  ＡＧＥｓ生成抑制剤の配合＞
本発明のＴｏｘｉｃ  ＡＧＥｓ生成抑制剤は、前記ケルセチン配糖体を含むものであればよく、前記ケルセチン配糖体のみからなるものであってもよいし、前記ケルセチン配糖体によるＴＡＧＥ生成抑制効果を妨げない限り、さらに賦形剤、安定化剤や湿潤剤や乳化剤等の公知の任意成分を含有してもよい。
【００３６】
Ｔｏｘｉｃ  ＡＧＥｓ生成抑制剤に含まれる前記ケルセチン配糖体の割合は特に限定されない。例えば、本発明のＴｏｘｉｃ  ＡＧＥｓ生成抑制剤が含む、前記ケルセチン配糖体の含有量の下限としては例えば、３０質量％、４０質量％、４５質量％、５０質量％、６０質量％、７０質量％が挙げられる。また、本発明のＴｏｘｉｃ  ＡＧＥｓ生成抑制剤が含む、前記ケルセチン配糖体の含有量の上限としては例えば、１００質量％、９９質量％、９８質量％、９５質量％、９０質量％、８５質量％が挙げられる。本発明のＴｏｘｉｃ  ＡＧＥｓ生成抑制剤が含む、前記ケルセチン配糖体の含有量の範囲としては、前記下限と上限とを任意に組み合わせた範囲を任意に設定することができ、例えば３０〜１００質量％、６０〜１００質量％、６０〜９０質量％等の範囲を設定することができる。
【００３７】
ケルセチン配糖体を含むＴｏｘｉｃ  ＡＧＥｓ生成抑制剤としては、例えば、以下の市販品をあげることができる。東洋精糖(株)製の商品「αＧルチンＰＳ」は、α−モノグルコシルルチン７５質量％、イソケルシトリン１５質量％を含有する組成物である。また、同じく東洋精糖(株)製の商品「αＧルチンＰ」は、α−グルコシルルチン７０質量％、ルチン１５質量％を含有する組成物であり、これら商品をＴｏｘｉｃ  ＡＧＥｓ生成抑制剤として使用することができる。
【００３８】
＜Ｔｏｘｉｃ  ＡＧＥｓ生成抑制剤の用途＞
Ｔｏｘｉｃ  ＡＧＥｓ生成抑制剤は、ＧＥ-ＡＧＥ、ＡＡ-ＡＧＥ、およびＧＯ-ＡＧＥの生成を抑制する作用を有するので、例えば、生体におけるＴＡＧＥ量を低下、または増加を抑制する目的で、単回または複数回生体に投与することができる。
Ｔｏｘｉｃ  ＡＧＥｓ生成抑制剤は、血清アルブミンを対象としてＧＥ-ＡＧＥ、ＡＡ-ＡＧＥ、およびＧＯ-ＡＧＥの生成を抑制する作用を有する。また、ヒトへの長期間にわたる継続的な経口投与により血中ＴＡＧＥ濃度を低下、または増加を抑制させる効果を有する。したがって、前記Ｔｏｘｉｃ  ＡＧＥｓ生成抑制剤は、血中ＴＡＧＥ濃度の増加に起因する疾病の予防または改善に有用であり、例えば、糖尿病、心血管病、非アルコール性脂肪肝炎、がん、不妊症、アルツハイマー病等の発症、進展の予防に寄与する。
【００３９】
Ｔｏｘｉｃ  ＡＧＥｓ生成抑制剤は、コラーゲンを対象としてＧＥ-ＡＧＥの生成を抑制する作用を有する。したがって、前記Ｔｏｘｉｃ  ＡＧＥｓ生成抑制剤は、コラーゲンのＴＡＧＥ量増加に起因する疾病の予防または改善に有用であり、例えば、皮膚の老化、動脈硬化症、骨粗鬆症、骨強度低下、変形性関節症等の発症、進展の予防に寄与する。
【００４０】
Ｔｏｘｉｃ  ＡＧＥｓ生成抑制剤の投与量は、ＴＡＧＥ生成が関与する疾患の種類や症状の程度によって適宜選択すればよい。例えば、前記Ｔｏｘｉｃ  ＡＧＥｓ生成抑制剤を経口投与する場合は、ＴＡＧＥ生成抑制効果の観点から前記ケルセチン配糖体として一日あたり５０ｍｇ〜６００ｍｇが好ましく、１００ｍｇ〜３００ｍｇがさらに好ましい。また、前記一日あたり投与量を、例えば１日あたり１〜３回にわけて投与することができ、２または３回にわけて投与するのが好ましい。
【００４１】
Ｔｏｘｉｃ  ＡＧＥｓ生成抑制剤の投与期間は、ＴＡＧＥ生成が関与する疾患の種類や症状の程度によって適宜選択すればよい。ＴＡＧＥ生成抑制効果の観点から、好ましくは７〜８０日、より好ましくは１４日〜６０日である。
【００４２】
Ｔｏｘｉｃ  ＡＧＥｓ生成抑制剤は、ヒトに少量を投与することで、ＴＡＧＥ生成を効率良く抑制することができる。ＴＡＧＥ生成が関与する疾患の種類や症状の程度にもよるが、前記効果は、特に血中のＴＡＧＥ濃度が例えば２０μｇ／ｍＬ以上、より好ましくは２５μｇ／ｍＬであるヒトに対して効果を発揮する。
【００４３】
＜Ｔｏｘｉｃ  ＡＧＥｓ生成抑制剤を含む製剤＞
Ｔｏｘｉｃ  ＡＧＥｓ生成抑制剤は、そのまま生体に投与してもよいし、前記Ｔｏｘｉｃ  ＡＧＥｓ生成抑制剤の有効量を薬学的に許容する担体とともに配合した製剤として投与してもよい。投与方法は特に制限されず、経口、または非経口とすることができる。製剤としては、例えば、飲食品、医薬品、医薬部外品、化粧品、飼料、ペットフードが挙げられ、飲食品、医薬品、医薬部外品、または化粧品が好ましい。
【００４４】
経口の場合、前記製剤は、飲食品（特定保健用食品、栄養機能食品、機能性表示食品等の保健機能食品や、その他のいわゆる健康食品やサプリメントを含む。）、医薬品、医薬部外品、飼料、ペットフード等であってもよい。前記製剤は、ＴＡＧＥ生成抑制効果を効果的に発現させるために、医薬品、医薬部外品または飲食品として経口投与することが好ましい。
非経口の場合、前記製剤は、注射剤、皮膚外用剤、坐剤等の医薬品、医薬部外品、または化粧品とすることができ、ＴＡＧＥ生成抑制効果を効果的に発現させるために、皮膚外用剤、医薬部外品、または化粧品とすることが好ましい。
【００４５】
前記製剤は、固形または液状（ペースト状を含む）にすることができる。剤形は制限されず、具体的には、固形製剤として、粉末剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、トローチ等が挙げられる。また、液状製剤として内用液剤、外用液剤、懸濁剤、乳剤、シロップ剤、ドリンク剤、注射液、輸液等が例示され、これら剤形やその他の剤形が目的に応じて適宜選択される。投与が容易で、ＴＡＧＥ生成抑制効果を発揮しやすいことから、錠剤、またはカプセル剤とするのが好ましい。
【００４６】
固形製剤においては賦形剤、結合剤、崩壊剤、潤沢剤、矯味剤、安定化剤などの補助剤を用いてもよい。固形製剤における賦形剤の好適な例としては、例えば乳糖、Ｄ−マンニトール、デンプンなどが挙げられる。結合剤の好適な例としては、例えば、結晶セルロース、白糖、Ｄ−マンニトール、糖アルコール、デキストリン、ヒドロキシプロピルセルロース等が挙げられる。崩壊剤の好適な例としては、例えば、デンプン、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースカルシウム等が挙げられる。潤沢剤の好適な例としては、例えばステアリン酸カルシウム等が挙げられる。
【００４７】
液状製剤において、溶媒としては有効成分である前記ケルセチン配糖体を溶解させることができ、生体安全性が高いものが選択される。溶媒の好適な例としては、例えば、精製水、エタノール、プロピレングリコールなどが挙げられる。また、液状製剤は、溶解補助剤、懸濁剤、等張化剤、緩衝剤、抗酸化剤等の補助成分を含んでいてもよい。
。
【００４８】
前記製剤は、前記固形製剤、前記液状製剤の他にも、例えば、果実飲料、ウーロン茶、緑茶、紅茶、ココア、野菜ジュース、青汁、豆乳、乳飲料、乳酸飲料、ニアウォーター、スポーツドリンク、栄養ドリンク等の飲料類、ゼリー、プリン、ヨーグルト等の洋菓子類、和菓子、調味料、魚肉加工品、畜産加工品等の飲食品；乳液、美容液、ローション、クリーム、パック、ファンデーション、化粧下地、口紅、洗顔料、シャンプー、ヘアトニック等の医薬品、医薬部外品または化粧品であってもよい。
【００４９】
上記Ｔｏｘｉｃ  ＡＧＥｓ生成抑制剤を含む製剤は、これらの製剤について一般的に用いられている手法に従って前記Ｔｏｘｉｃ  ＡＧＥｓ生成抑制剤を添加することにより製造することができる。前記Ｔｏｘｉｃ  ＡＧＥｓ生成抑制剤は、製剤の製造工程の初期に添加されるか、製造工程の中期または終期に添加されればよく、また添加の手法は、混和、混練、溶解、浸漬、散布、噴霧、塗布等から適切なものを製剤の態様に応じて選択すればよい。
【００５０】
前記Ｔｏｘｉｃ  ＡＧＥｓ生成抑制剤の有効成分である前記ケルセチン配糖体は、水溶性が良好であるため、水または水分の多い製剤に添加する際も、均一に溶解または分散させることが可能である。
【００５１】
前記Ｔｏｘｉｃ  ＡＧＥｓ生成抑制剤の製剤への配合量は、ＴＡＧＥ生成が関与する疾患の種類や症状の程度によって適宜選択すればよいが、投与の容易性や製剤中での安定性の観点から前記ケルセチン配糖体として、２０〜６０質量％が好ましく、３０〜５０質量％がさらに好ましい。
【実施例】
【００５２】
以下、本発明を実施例に基づいて更に具体的に説明するが、本発明はこれら実施例に限定されない。
【００５３】
［実施例１］アルブミンを対象としたＧＥ−ＡＧＥ生成試験
（方法）
ケルセチン配糖体によるＴＡＧＥ阻害作用の評価は、生成したＴＡＧＥの蛍光強度を測定する方法で行った。
０．２Ｍリン酸水素二カリウム溶液と０．１Ｍリン酸二水素カリウム溶液を混合して調製したリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７．４）に、ヒト血清アルブミン（和光純薬工業社製、終濃度０．５％）３ｍＬとグリセルアルデヒド（ナカライテスク社製、終濃度１０ｍＭ）３ｍＬを添加し、混合した。この混合液（ブランク）に、ケルセチン配糖体としてαＧルチンＰＳ（東洋精糖社製）３ｍＬ（溶媒：リン酸カリウム緩衝液）を終濃度が３０ｐｐｍ、６０ｐｐｍ、１２０ｐｐｍとなるように添加混合した。これらのサンプルを振盪機にセットし、１０日間３７℃でインキュベーションした。３日目と１０日目にサンプルを１．０ｍＬ採取し、４０％トリクロロ酢酸０．３３ｍＬを加えてタンパク質を凝固させた後、遠心分離して上澄み液を除去した。沈殿したタンパク質をリン酸カリウム緩衝液で溶解して測定用サンプルとした。測定用サンプルはマイクロプレートにＮ＝４で分注し、蛍光プレートリーダー（モレキュラーデバイスジャパン社製）を用い、励起波長３７０ｎｍで４４０ｎｍの蛍光強度を測定した。αＧルチンＰＳを添加していないサンプル（ブランク）の蛍光強度を１００として、各サンプルのＴＡＧＥ生成率（％）を算出した。なお、グリセルアルデヒドを終濃度で１０ｍＭ、３０ｍＭ、５０ｍＭ、ヒト血清アルブミンを終濃度で０．２％、０．５％とした予備試験を行い、最適な試験条件を検討した上で、上記の本試験を行った。
【００５４】
（結果）
結果を図１に示す。３日目、１０日目においてαＧルチンＰＳの濃度依存的にＴＡＧＥの生成率が低くなっており、αＧルチンＰＳはＧＥ−ＡＧＥの生成抑制効果を有することがわかる。
【００５５】
［実施例２］アルブミンを対象としたＡＡ−ＡＧＥ生成試験
（方法）
グリセルアルデヒドの代わりにアセトアルデヒド（ナカライテスク社製、終濃度５０ｍＭ）を用いた以外は、実施例１と同様にして試験を行った。なお、アセトアルデヒドを終濃度で１０ｍＭ、３０ｍＭ、５０ｍＭ、ヒト血清アルブミンを終濃度で０．２％、０．５％とした予備試験を行い、最適な試験条件を検討した上で、上記の本試験を行った。
【００５６】
（結果）
結果を図２に示す。３日目、１０日目においてαＧルチンＰＳの濃度依存的にＴＡＧＥの生成率が低くなっており、αＧルチンＰＳはＡＡ−ＡＧＥの生成抑制効果を有することがわかる。
【００５７】
［実施例３］アルブミンを対象としたＧＯ−ＡＧＥ生成試験
（方法）
グリセルアルデヒドの代わりにグリコールアルデヒド（ナカライテスク社製、終濃度１０ｍＭ、または３０ｍＭ）を用い、ヒト血清アルブミンの終濃度を０．２％または０．５％の２点とした以外は、実施例１と同様にして試験を行った。
【００５８】
（結果）
グリコールアルデヒド１０ｍＭ、ヒト血清アルブミン０．５％での結果を図３に示す。また、グリコールアルデヒド１０ｍＭでの結果を図４、グリコールアルデヒド３０ｍＭでの結果を図５に示す。さらに、ヒト血清アルブミン０．２％での結果を図６、ヒト血清アルブミン０．５％での結果を図７に示す。
図４、５より、３日目、１０日目においてヒト血清アルブミンの濃度が高いほど、ＴＡＧＥ生成率は高くなる傾向にあり、ＴＡＧＥ生成は、ヒト血清アルブミン濃度依存的であることがわかる。また、αＧルチンＰＳの濃度依存的にＴＡＧＥの生成率が低くなっており、αＧルチンＰＳはＧＯ−ＡＧＥの生成抑制効果を有することがわかる。
図６、７より、３日目、１０日目においてグリコールアルデヒドの濃度が高いほど、ＴＡＧＥ生成率は高くなっており、ＴＡＧＥ生成は、グリコールアルデヒド濃度依存的であることがわかる。また、αＧルチンＰＳの濃度依存的にＴＡＧＥの生成率が低くなっており、αＧルチンＰＳはＧＯ−ＡＧＥの生成抑制効果を有することがわかる。
【００５９】
［実施例４］コラーゲンを対象としたＧＥ−ＡＧＥ生成試験
（方法）
コラーゲン抗糖化アッセイキットグリセルアルデヒド（コスモバイオ社製、ＮＯ．ＡＫ−７１）を用いて、糖化したコラーゲンが発する蛍光（励起波長３７０ｎｍ、蛍光波長４４０ｎｍ）を指標として、ＧＥ−ＡＧＥ生成を評価した。コラーゲンゲルに緩衝液、緩衝液に溶解したαＧルチンＰＳ、または緩衝液に溶解したアミノグアニジンを添加した後、グリセルアルデヒドを終濃度５０ｍＭで添加し、３７℃のインキュベーター中に２４時間静置してから蛍光プレートリーダー（モレキュラーデバイスジャパン社製）にて蛍光強度を測定した。測定した蛍光強度から反応０時間での蛍光強度を差し引いて、糖化度とした。なお、アミノグアニジンは、ＡＧＥ生成抑制効果を有することが広く知られており、ＡＧＥ生成抑制効果のポジティブコントロールとして用いた。
【００６０】
（結果）
結果を図８に示す。αＧルチンＰＳ、およびアミノグアニジンの濃度依存的に糖化度が低くなっており、αＧルチンＰＳ、およびアミノグアニジンはＧＥ−ＡＧＥ生成抑制効果を有することがわかる。また、αＧルチンＰＳは、同一濃度で比較するとアミノグアニジンよりもＧＥ−ＡＧＥ生成抑制効果に優れることが分かる。
【００６１】
［実施例５］試験食品摂取によるヒト試験
（方法）
３０歳以上６５歳未満の男性１２人を対象に、αＧルチンＰＳを配合した試験食品を８週間摂取させて、血中ＴＡＧＥ濃度の変化を調べた。なお、試験はヘルシンキ宣言に基づく倫理的原則、「人を対象とする医学系研究に関する倫理指針」および「個人情報の保護に関する法律」を遵守し、試験の参加について被験者本人の自由意思に基づいた同意を文書により取得した上で実施した。
【００６２】
〔試験食品〕
試験食品としてはαＧルチンＰＳ錠（東洋精糖社製）を用いた。本試験食品は２００ｍｇ／粒の錠剤であり、１回３粒を１日１回摂取させた。本試験食品の組成を以下に示す。
（組成）
αＧルチンＰＳ        ５０．０％
結晶セルロース        ２５．０％
糖アルコール          ２３．０％
ステアリン酸カルシウム  ２．０％
合計                １００．０％
【００６３】
〔被験者〕
被験者は、３０歳以上６５歳未満の男性１２人とし、以下の除外基準に該当する者を除いて選定した。
１．現在、重篤な疾患により投薬または通院治療を行っている者
２．試験食品にアレルギー発症のおそれがある者
３．試験に影響を及ぼす可能性のある薬剤を使用している者
４．極端な偏食をしている者
５．食事、睡眠などの生活習慣が極度に不規則な者
６．現在、他の臨床試験に参加している、もしくは過去３か月以内に他の治験に参加した者
７．その他、試験責任医師が試験の対象として不適当と判断した者
【００６４】
〔試験手順〕
試験は非盲検試験とし、試験食品摂取前、摂取２週間後、４週間後、８週間後に被験者に来院してもらい、医師の監督のもと、身長、体重、血圧、脈拍の測定および採血を行った。
【００６５】
〔測定方法〕
血液中の各測定項目は、常法により測定した。
血中ＴＡＧＥ濃度は、採血で得られた血液から血清を分離し、ＥＬＩＳＡ法で測定後、Ｇｌｙｃｅｒｙｌａｌｄｅｈｙｄｅ−ＡＧＥ−ＢＳＡを標準物質として濃度を求めた。
【００６６】
（結果）
身長、体重、血圧、脈拍数の１２名の平均値と標準誤差を表１に示す。また、血液検査結果の１２名の平均値と標準誤差を表２に示す。
【００６７】
【表１】
2020188689.tif 000007
【００６８】
【表２】
2020188689.tif 000008
【００６９】
表１より、体重、ＢＭＩ、血圧、脈拍に有意な差はなかった。表２より、各種血液検査値の中で、有意差、または有意傾向のある変化は、ＬＤＬ−コレステロール値の上昇と、ＴＡＧＥ値の減少のみであった。血中ＴＡＧＥ濃度は、摂取開始時に比べ、２週後、４週後、８週後において減少する傾向にあった。
【００７０】
１２名の各被験者における血中ＴＡＧＥ濃度の変化を表３に示す。また、表３をグラフ化したものを図９（被験者Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ）、図１０（被験者Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ）、図１１(被験者Ｉ、Ｊ、Ｋ、Ｌ)、図１２（被験者１２名の平均値）に示す。
【００７１】
【表３】
2020188689.tif 000009
【００７２】
表３、図１２において、摂取開始時に比べ、試験食品摂取後は平均血中ＴＡＧＥ濃度が減少する傾向にあり、特に摂取４週間後においては有意に血中ＴＡＧＥ濃度が低下している。このことから、αＧルチンＰＳには血中ＴＡＧＥ濃度を低下、または上昇を抑制する効果があることがわかった。また、摂取開始時の血中ＴＡＧＥ濃度が特に高い被験者Ｅ、被験者Ｈ、被験者Ｉにおいて、試験食品摂取により血中ＴＡＧＥ濃度が大きく低下していた。αＧルチンＰＳによる効果は、血中ＴＡＧＥ濃度が高い場合にその効果が現れやすいものと推測された。
【図１】
2020188689.tif 000012
【図２】
2020188689.tif 000013
【図３】
2020188689.tif 000014
【図４】
2020188689.tif 000015
【図５】
2020188689.tif 000016
【図６】
2020188689.tif 000017
【図７】
2020188689.tif 000018
【図８】
2020188689.tif 000019
【図９】
2020188689.tif 000020
【図１０】
2020188689.tif 000021
【図１１】
2020188689.tif 000022
【図１２】
2020188689.tif 000023