(57)【要約】      （修正有）【課題】抗ＲＳＰＯ抗体、及びその使用方法の提供。【解決手段】膜貫通Ｅ３ユビキチナーゼとのＲＳＰＯ２の相互作用を阻害するＲＳＰＯ２に結合する単離された抗体、及び膜貫通Ｅ３ユビキチナーゼとのＲＳＰＯ３の相互作用を阻害するＲＳＰＯ３に結合する単離された抗体、該抗体をコードする単離された核酸、該核酸を含む宿主細胞、該宿主細胞を培養することを含む抗体を産生する方法、並びに該抗体及び薬学的に許容可能な担体を含む薬学的製剤。【選択図】図１Ａ−Ｂ
2020096603.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
膜貫通Ｅ３ユビキチナーゼとのＲＳＰＯ２の相互作用を阻害する、ＲＳＰＯ２に結合する単離された抗体。
【請求項２】
ＬＧＲ４、ＬＧＲ５、及び／又はＬＧＲ６の一以上とのＲＳＰＯ２の相互作用を阻害しない（例えば、ＬＧＲ４、ＬＧＲ５、及び／又はＬＧＲ６の一以上とのＲＳＰＯ２の相互作用を増強する）、請求項１に記載の単離された抗体。
【請求項３】
（ａ）（ｉ）配列番号５３のアミノ酸配列を含む超可変領域−Ｌ１（ＨＶＲ−Ｌ１）；（ｉｉ）配列番号５４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｉｉｉ）配列番号５５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）、及び（ｂ）（ｉ）配列番号５６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｉｉ）配列番号５７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；及び（ｉｉｉ）配列番号５８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む、ＲＳＰＯ２に結合する単離された抗体。
【請求項４】
（ａ）配列番号１０５のＶＬ配列、及び配列番号１０６のＶＨ配列を含む、請求項３に記載の単離された抗体。
【請求項５】
ＬＧＲ４、ＬＧＲ５、及び／又はＬＧＲ６の一以上とのＲＳＰＯ２の相互作用を阻害する、請求項１に記載の単離された抗体。
【請求項６】
（ａ）（ｉ）配列番号５９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号６０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｉｉｉ）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含むＶＬ；及び（ｉ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含むＶＨ；
（ｂ）（ｉ）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｉｉｉ）配列番号６７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含むＶＬ；及び（ｉ）配列番号６８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号６９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号７０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含むＶＨ；又は
（ｃ）（ｉ）配列番号７１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号７２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｉｉｉ）配列番号７３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含むＶＬ；及び（ｉ）配列番号７４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号７５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号７６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含むＶＨ
を含む、ＲＳＰＯ２に結合する単離された抗体。
【請求項７】
（ａ）配列番号１０７のＶＬ配列及び配列番号１０８のＶＨ配列；
（ｂ）配列番号１０９のＶＬ配列及び配列番号１１０のＶＨ配列；又は
（ｃ）配列番号１１１のＶＬ配列及び配列番号１１２のＶＨ配列
を含む、請求項６に記載の単離された抗体。
【請求項８】
膜貫通Ｅ３ユビキチナーゼとのＲＳＰＯ３の相互作用を阻害する、ＲＳＰＯ３に結合する単離された抗体。
【請求項９】
ＬＧＲ４、ＬＧＲ５、及び／又はＬＧＲ６の一以上とのＲＳＰＯ３の相互作用を阻害する、請求項８に記載の単離された抗体。
【請求項１０】
（ａ）（ｉ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｉｉｉ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含むＶＬ；及び（ｉ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含むＶＨ；
（ｂ）（ｉ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｉｉｉ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含むＶＬ；及び（ｉ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含むＶＨ；
（ｃ）（ｉ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｉｉｉ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含むＶＬ；及び（ｉ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含むＶＨ；
（ｄ）（ｉ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｉｉｉ）配列番号２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含むＶＬ；及び（ｉ）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号２７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号２８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含むＶＨ；
（ｅ）（ｉ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号３０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｉｉｉ）配列番号３１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含むＶＬ；及び（ｉ）配列番号３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含むＶＨ；
（ｆ）（ｉ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号３６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｉｉｉ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含むＶＬ；及び（ｉ）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号４０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含むＶＨ；
（ｇ）（ｉ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｉｉｉ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含むＶＬ；及び（ｉ）配列番号４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号４６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含むＶＨ；
（ｈ）（ｉ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｉｉｉ）配列番号２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含むＶＬ；及び（ｉ）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号２７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号１８８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含むＶＨ；又は
（ｉ）（ｉ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｉｉｉ）配列番号２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含むＶＬ；及び（ｉ）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号２７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号１８９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含むＶＨ
を含む、ＲＳＰＯ３に結合する単離された抗体。
【請求項１１】
（ａ）配列番号８９のＶＬ配列及び配列番号９０のＶＨ配列；
（ｂ）配列番号９１のＶＬ配列及び配列番号９２のＶＨ配列；
（ｃ）配列番号９３のＶＬ配列及び配列番号９４のＶＨ配列；
（ｄ）配列番号９５のＶＬ配列及び配列番号９６のＶＨ配列；
（ｅ）配列番号９７のＶＬ配列及び配列番号９８のＶＨ配列；
（ｆ）配列番号９９のＶＬ配列及び配列番号１００のＶＨ配列；
（ｇ）配列番号１０１のＶＬ配列及び配列番号１０２のＶＨ配列；
（ｈ）配列番号１９０のＶＬ配列及び配列番号１９１のＶＨ配列；
（ｉ）配列番号１９２のＶＬ配列及び配列番号１９３のＶＨ配列；
（ｊ）配列番号１９４のＶＬ配列及び配列番号１９５のＶＨ配列；
（ｋ）配列番号１９６のＶＬ配列及び配列番号１９７のＶＨ配列；
（ｌ）配列番号１９８のＶＬ配列及び配列番号１９９のＶＨ配列；
（ｍ）配列番号２００のＶＬ配列及び配列番号２０１のＶＨ配列；
（ｎ）配列番号２０２のＶＬ配列及び配列番号２０３のＶＨ配列；
（ｏ）配列番号２０４のＶＬ配列及び配列番号２０５のＶＨ配列；
（ｐ）配列番号２０６のＶＬ配列及び配列番号２０７のＶＨ配列；
（ｑ）配列番号２０８のＶＬ配列及び配列番号２０９のＶＨ配列；
（ｒ）配列番号２１０のＶＬ配列及び配列番号２１１のＶＨ配列；
（ｗ）配列番号２１２のＶＬ配列及び配列番号２１３のＶＨ配列；又は
（ｘ）配列番号２１４のＶＬ配列及び配列番号２１５のＶＨ配列
を含む、請求項１０に記載の単離された抗体。
【請求項１２】
ＲＳＰＯ２及びＲＳＰＯ３に結合する単離された抗体。
【請求項１３】
膜貫通Ｅ３ユビキチナーゼとのＲＳＰＯ２及びＲＳＰＯ３の相互作用を阻害する、請求項１２に記載の単離された抗体。
【請求項１４】
ＬＧＲ４、ＬＧＲ５、及び／又はＬＧＲ６の一以上とのＲＳＰＯ３の相互作用を阻害する、請求項１２又は１３に記載の単離された抗体。
【請求項１５】
ＬＧＲ４、ＬＧＲ５、及び／又はＬＧＲ６の一以上とのＲＳＰＯ２の相互作用を阻害する、請求項１２−１４の何れか一項に記載の単離された抗体。
【請求項１６】
ＬＧＲ４、ＬＧＲ５、及び／又はＬＧＲ６の一以上とのＲＳＰＯ２の相互作用を阻害しない（例えば、ＬＧＲ４、ＬＧＲ５、及び／又はＬＧＲ６の一以上へのＲＳＰＯ２の結合を増強する）、請求項１２−１４の何れか一項に記載の単離された抗体。
【請求項１７】
第一の可変ドメイン及び第二の可変ドメインを含み、ここで、第一の可変ドメインは六つのＨＶＲの第一の組を含み、第二の可変ドメインは六つのＨＶＲの第二の組を含み、ここで、六つのＨＶＲの第一及び第二の組は同一である、請求項１２−１６の何れか一項に記載の単離された抗体。
【請求項１８】
（ａ）（ｉ）配列番号４７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｉｉｉ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含むＶＬ；及び（ｂ）（ｉ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号５２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含むＶＨを含む、ＲＳＰＯ２及びＲＳＰＯ３に結合する単離された抗体。
【請求項１９】
（ａ）配列番号１０３のＶＬ配列、及び配列番号１０４のＶＨ配列を含む、請求項１８に記載の単離された抗体。
【請求項２０】
第一の可変ドメイン及び第二の可変ドメインを含み、ここで、第一の可変ドメインは六つのＨＶＲの第一の組を含み、第二の可変ドメインは六つのＨＶＲの第二の組を含み、ここで、六つのＨＶＲの第一及び第二の組は異なる、請求項１２−１９の何れか一項に記載の単離された抗体。
【請求項２１】
六つのＨＶＲの第一の組は、４Ｈ１、４Ｄ４、５Ｃ２、５Ｄ６、５Ｅ１１、６Ｅ９、及び２１Ｃ２の何れか一の六つのＨＶＲであり、六つのＨＶＲの第二の組は、１Ａ１、１１Ｆ１１、３６Ｄ２、及び４９Ｇ５の何れか一の六つのＨＶＲである、請求項１２−１６及び２０の何れか一項に記載の単離された抗体。
【請求項２２】
六つのＨＶＲの第一の組は、４Ｈ１、４Ｄ４、５Ｃ２、５Ｄ６、５Ｅ１１、６Ｅ９、及び２１Ｃ２の何れか一の六つのＨＶＲであり、六つのＨＶＲの第二の組は、１Ａ１の六つのＨＶＲである、請求項２１に記載の単離された抗体。
【請求項２３】
膜貫通Ｅ３ユビキチナーゼが、ＺＮＲＦ３及び／又はＲＮＦ４３である、請求項１、２、５、８、９、１３−１７、及び２０−２２の何れか一項に記載の単離された抗体。
【請求項２４】
（ａ）（ｉ）配列番号７７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号７８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｉｉｉ）配列番号７９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含むＶＬ；及び（ｉ）配列番号８０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号８１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号８２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含むＶＨ；
（ｂ）（ｉ）配列番号８３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号８４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｉｉｉ）配列番号８５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含むＶＬ；及び（ｉ）配列番号８６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号８７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号８８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含むＶＨ；又は
（ｃ）（ｉ）配列番号７７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号７８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｉｉｉ）配列番号７９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含むＶＬ；及び（ｉ）配列番号８０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号８１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号２１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含むＶＨ
を含む、ＲＳＰＯ３に結合する単離された抗体。
【請求項２５】
ＲＳＰＯ３のアミノ酸４７−１０８内の領域（例えば、４９−１０８）に結合する、ＲＳＰＯ３に結合する単離された抗体。
【請求項２６】
ＲＳＰＯ３のアミノ酸残基：Ｇｌｎ７２、Ｐｒｏ９０、Ａｓｐ９１、及びＬｙｓ９４を含むＲＳＰＯ３のエピトープに結合する単離された抗体。
【請求項２７】
ＲＳＰＯ３のエピトープが、ＲＳＰＯ３のアミノ酸：Ａｓｎ５２、Ｌｅｕ５５、Ｐｈｅ６３、Ｇｌｎ７２、Ｔｙｒ８９、Ｐｒｏ９０、Ａｓｐ９１、Ｌｙｓ９４、及びＬｙｓ９７を含む、請求項２６に記載の単離された抗体。
【請求項２８】
ＲＳＰＯ３のエピトープが、ＲＳＰＯ３のアミノ酸残基：Ｓｅｒ４９、Ａｓｎ５２、Ｃｙｓ５４、Ｌｅｕ５５、Ｓｅｒ５６、Ｐｈｅ６３、Ｌｅｕ６５、Ｇｌｎ７２、Ｉｌｅ７３、Ｇｌｙ７４、Ｔｙｒ８４、Ｔｙｒ８９、Ｐｒｏ９０、Ａｓｐ９１、Ｉｌｅ９２、Ｌｙｓ９４、Ｌｙｓ９７、及びＬｙｓ１０８を含む、請求項２７に記載の単離された抗体。
【請求項２９】
ＲＳＰＯ３のエピトープが、ＲＳＰＯ３のアミノ酸：Ｔｈｒ４７、Ｌｅｕ５５、Ｇｌｎ７２、Ｐｒｏ９０、Ａｓｐ９１、及びＬｙｓ９４を含む、ＲＳＰＯ３のエピトープに結合する単離された抗体。
【請求項３０】
ＲＳＰＯ３のエピトープが、ＲＳＰＯ３のアミノ酸：Ｔｈｒ４７、Ａｓｎ５２、Ｌｅｕ５５、Ｐｈｅ６３、Ｇｌｎ７２、Ｔｙｒ８９、Ｐｒｏ９０、Ａｓｐ９１、Ｉｌｅ９２、Ｌｙｓ９４、及びＬｙｓ９７を含む、請求項２９に記載の抗体。
【請求項３１】
ＲＳＰＯ３のエピトープが、ＲＳＰＯ３のアミノ酸残基：Ｔｈｒ４７、Ａｓｎ５２、Ｃｙｓ５４、Ｌｅｕ５５、Ｓｅｒ５６、Ｐｈｅ６３、Ｌｅｕ６５、Ｇｌｎ７２、Ｔｙｒ８４、Ｔｙｒ８９、Ｐｒｏ９０、Ａｓｐ９１、Ｉｌｅ９２、Ａｓｎ９３、Ｌｙｓ９４、Ｌｙｓ９７、及びＬｙｓ１０８を含む、請求項３０に記載の単離された抗体。
【請求項３２】
ＲＳＰＯ２及び／又はＲＳＰＯ３媒介性ｗｎｔシグナル伝達を阻害する、請求項１−３１の何れか一項に記載の単離された抗体。
【請求項３３】
ＲＳＰＯ２及び／又はＲＳＰＯ３に結合する抗体断片である、請求項３２に記載の単離された抗体。
【請求項３４】
モノクローナル抗体である、請求項１−３３の何れか一項に記載の抗体。
【請求項３５】
ヒト、ヒト化、又はキメラ抗体である、請求項１−３４の何れか一項に記載の抗体。
【請求項３６】
完全長ＩｇＧ１又はＩｇＧ２ａ抗体である、請求項１−３５の何れか一項に記載の抗体。
【請求項３７】
請求項１−３６の何れか一項に記載の抗体をコードする単離された核酸。
【請求項３８】
請求項３７に記載の核酸を含む宿主細胞。
【請求項３９】
抗体が産生されるように、請求項３８に記載の宿主細胞を培養することを含む、抗体を産生する方法。
【請求項４０】
宿主細胞から抗体を回収することを更に含む、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
請求項１−３６の何れか一項に記載の抗体及び細胞傷害剤を含むイムノコンジュゲート。
【請求項４２】
請求項１−３６の何れか一項に記載の抗体及び薬学的に許容可能な担体を含む薬学的製剤。
【請求項４３】
付加的治療剤を更に含む、請求項４２に記載の薬学的製剤。
【請求項４４】
医薬として使用のための、請求項１−３６の何れか一項に記載の抗体。
【請求項４５】
がんの治療において使用のための、請求項１−３６の何れか一項に記載の抗体。
【請求項４６】
がんが、消化管がん、胃がん、結腸がん、結腸直腸がん、肺がん、又は直腸がんである、請求項４５に記載の抗体。
【請求項４７】
ｗｎｔシグナル伝達を阻害すること、血管新生及び／又は脈管形成を阻害すること、及び／又は細胞増殖を阻害することに使用のための、請求項１−３６の何れか一項に記載の抗体。
【請求項４８】
がんの治療のための医薬の製造における、請求項１−３６の何れか一項に記載の抗体の使用。
【請求項４９】
がんが、消化管がん、胃がん、結腸がん、結腸直腸がん、肺がん、又は直腸がんである、請求項１−３６の何れか一項に記載の抗体の使用。
【請求項５０】
ｗｎｔシグナル伝達を阻害するため、血管新生及び／又は脈管形成を阻害するため、及び／又は細胞増殖を阻害するための医薬の製造における、請求項１−３６の何れか一項に記載の抗体の使用。
【請求項５１】
請求項１−３６の何れか一項に記載の抗体の有効量を個体に投与することを含む、がんを有する個体を治療する方法。
【請求項５２】
がんが、消化管がん、胃がん、結腸がん、結腸直腸がん、肺がん、又は直腸がんである、請求項５１に記載の方法。
【請求項５３】
個体に付加的治療剤を投与することを更に含む、請求項５１又は５２に記載の方法。
【請求項５４】
ｗｎｔシグナル伝達を阻害するため、血管新生及び／又は脈管形成を阻害するため、及び／又は細胞増殖を阻害するために、請求項１−３６の何れか一項に記載の抗体の有効量を個体に投与することを含む、個体において、ｗｎｔシグナル伝達を阻害する、血管新生及び／又は脈管形成を阻害する、及び／又は細胞増殖阻害する方法。
【請求項５５】
がんが、基準と比較して、一以上のＲＳＰＯ（例えば、ＲＳＰＯ２及び／又はＲＳＰＯ３）の増加した発現によって特徴付けられる、請求項４５、４６、４８、４９、及び５１−５３の何れか一項に記載の抗体、使用又は方法。
【請求項５６】
がんが、ＲＳＰＯ転座（例えば、ＲＳＰＯ２転座及び／又はＲＳＰＯ３転座）によって特徴付けられる、請求項４５、４６、４８、４９、及び５１−５３の何れか一項に記載の抗体、使用又は方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
この出願は、２０１３年１０月１８日に出願された米国仮出願番号６１／８９３，１４１、及び２０１４年９月２６日に出願された米国仮出願番号６２／０５６３２４に対して、米国特許法第１１９条の下で優先権を主張し、その内容は参照することにより本明細書中にその全体が援用される。
【０００２】
配列表
本出願は、ＥＦＳ−Ｗｅｂ経由で提出された配列表を含み、その全体が本明細書中で参照することにより援用される。２０１４年１０月１４日に作成された前記ＡＳＣＩＩコピーは、Ｐ５７１９Ｒ１−ＷＯ＿ＳｅｑｕｅｎｃｅＬｉｓｔｉｎｇ．ｔｘｔと命名され、大きさは１２４９５０バイトである。
【０００３】
本明細書に提供されるのは、抗ＲＳＰＯ抗体、特に、抗ＲＳＰＯ２抗体及び／又は抗ＲＳＰＯ３抗体、並びにその使用方法である。
【背景技術】
【０００４】
Ｒスポンジン（ＲＳＰＯ）ファミリーは、脊椎動物の胚及び成体で広く発現さされた４つの分泌タンパク質（ＲＳＰＯ１−ＲＳＰＯ４）の小さなグループである。ＲＳＰＯは、Ｗｎｔ経路の活性化を強く増強することにより、発生及び肝細胞増殖において多面的機能を有している（Kazanskaya et al. Dev. Cell 7:525-534 (2004); Kim et al., Cell Cycle 5:23-26 (2006)；国際公開第２００５／０４０４１８号）。哺乳動物のＲＳＰＯ１−ＲＳＰＯ４は、４０％−６０％のアミノ酸配列同一性を共有し、シグナルペプチド、隣接する二つのフリン様システインリッチドメイン（ＦＵ−のＣＲＤ）とそれに続くトロンボスポンジンＩ型リピート（ＴＳＲ）ドメイン、及び正に荷電したＣ末端領域からなる。２つのＦＵ−ＣＲＤはＷｎｔ／βカテニンシグナル伝達を促進するために不可欠かつ十分である（Kazanskaya et al., Dev. Cell 7:525-534 (2004)；国際公開第２００５／０４０４１８号）。
【０００５】
ＬＧＲ４（ロイシンリッチリピート［ＬＲＲ］含有Ｇタンパク質共役型受容体［ＧＰＣＲ］４）、ＬＧＲ５、及びＬＧＲ６（Hsu et al., Mol. Endocrinol. 12:1830-1845 (1998) 及びHsu et al., Mol. Endocinol. 14:1257-1271 (2000）は、ＲＳＰＯに対する受容体である。ＬＧＲ４／５／６受容体の共通の特徴は、異なる型の成体幹細胞におけるそれらの発現である。ＬＧＲ５は、小腸、大腸、胃、及び毛包を含む、Ｗｎｔ依存性コンパートメント内における常在性幹細胞のマーカーとして既に記載されている（Barker and Clevers Gastroenterology 138:1681-1696 (2010); Seshagiri et al., Nature 488:660-664 (2012)）。ＬＧＲ６はまた、表皮における多能性幹細胞のマーカーとしての役割を果たしている（Snippert et al., Science 327:1385-1389 (2010)）。ＬＧＲ４は広く増殖細胞中で発現され（Van Schoore et al., Histochem Cell Biol. 124:35-50 (2005)）、そのノックアウトマウスは、骨、腎臓、精巣、皮膚、及び胆嚢を含む多くの器官における発生異常を示す（Mustata et al., EMBO Rep 12:558-564 (2011)）。ＬＧＲ４／５／６受容体は、７つの膜貫通ヘリックスの前の細胞外ドメインにおいてＮ末端及びＣ末端の両方でシステインに富む配列に隣接される１７のＬＲＲ中央配列を有し、その細胞外ドメインはＲＳＰＯとの高親和性結合のために不可欠かつ十分である（de Lau et al., Genome Biol. 13:242 (2011)及びWang et al, Genes & Dev. 27:1339-1344 (2013)）。
【０００６】
ＬＧＲ４／５／６受容体は、ＲＳＰＯを認識した後、物理的に低密度リポタンパク質受容体関連タンパク質５／６（ＬＲＰ５／６）と相互作用することができ、それによってＲＳＰＯ及びＷｎｔリガンドは、Ｗｎｔ／βカテニンシグナル伝達を活性化するために連携する（de Lau et al., Genome Biol. 13:242 (2011); Carmon et al., Proc Natl Acad Sci 108:11452-11457 (2012)）。ＲＳＰＯは、Ｆｒｉｚｚｌｅｄ及びＬＲＰ５／６受容体を安定化させることにより、Ｗｎｔ／βカテニンシグナル伝達を促進することができる（Hao et al., Nature 485:195-200 (2012)）。亜鉛及びＲＩＮＧフィンガー３（ＺＮＲＦ３）及びそのホモログ、ＲＩＮＧフィンガー４３（ＲＮＦ４３）は、細胞表面上のＦｒｉｚｚｌｅｄ及びＬＲＰ６受容体のターンオーバーを促進する膜貫通Ｅ３ユビキチンリガーゼである（Hao et al., Nature 485:195-200 (2012); Koo et al., Nature 488:665-669 (2012)）。ＲＳＰＯは、ＬＧＲ４／５／６の細胞外ドメインとＺＮＲＦ３／ＲＮＦ４３と相互作用することによって、膜からＺＮＲＦ３のクリアランスを誘導することができ、Ｆｒｉｚｚｌｅｄ及びＬＲＰ６受容体を安定させ、Ｗｎｔ／βカテニンシグナル伝達を増強する（Hao et al., Nature 485:195-200 (2012)）。
【０００７】
特許出願及び刊行物を含む、本明細書に引用される全ての参考文献は、その全体が参考により援用される。
【発明の概要】
【０００８】
本発明は、抗ＲＳＰＯ抗体、特に、ＲＳＰＯ２、ＲＳＰＯ３、及び／又はＲＳＰＯ２とＲＳＰＯ３の両方に結合する抗体、及びその使用方法を提供する。
【０００９】
本明細書に提供されるのは、ＲＳＰＯ２に結合する単離された抗体であり、ここで抗体は、膜貫通Ｅ３ユビキチナーゼとのＲＳＰＯ２の相互作用を阻害する。幾つかの実施態様において、膜貫通Ｅ３ユビキチナーゼは、ＺＮＲＦ３及び／又はＲＮＦ４３である。
【００１０】
幾つかの実施態様において、抗体は、ＬＧＲ４、ＬＧＲ５、及び／又はＬＧＲ６の一以上とのＲＳＰＯ２の相互作用を阻害しない（例えば、ＬＧＲ４、ＬＧＲ５、及び／又はＬＧＲ６の一以上とのＲＳＰＯ２の相互作用を増強する）。例えば、本明細書に提供されるのは、ＲＳＰＯ２に結合する単離された抗体であり、ここで、抗体は、（ａ）（ｉ）配列番号５３のアミノ酸配列を含む超可変領域−Ｌ１（ＨＶＲ−Ｌ１）；（ｉｉ）配列番号５４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｉｉｉ）配列番号５５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）、及び（ｂ）（ｉ）配列番号５６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｉｉ）配列番号５７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；及び（ｉｉｉ）配列番号５８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む。幾つかの実施態様において、抗体は、（ａ）配列番号１０５のＶＬ配列、及び配列番号１０６のＶＨ配列を含む。
【００１１】
幾つかの実施態様において、抗体は、ＬＧＲ４、ＬＧＲ５、及び／又はＬＧＲ６の一以上とのＲＳＰＯ２の相互作用を阻害する。例えば、本明細書に提供されるのは、ＲＳＰＯ２に結合する単離された抗体であり、ここで、抗体は、（ａ）（ｉ）配列番号５９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号６０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｉｉｉ）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含むＶＬ；及び（ｉ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含むＶＨ；（ｂ）（ｉ）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｉｉｉ）配列番号６７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含むＶＬ；及び（ｉ）配列番号６８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号６９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号７０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含むＶＨ；又は（ｃ）（ｉ）配列番号７１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号７２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｉｉｉ）配列番号７３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含むＶＬ；及び（ｉ）配列番号７４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号７５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号７６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含むＶＨを含む。幾つかの実施態様において、単離された抗体は、（ａ）配列番号１０７のＶＬ配列及び配列番号１０８のＶＨ配列；（ｂ）配列番号１０９のＶＬ配列及び配列番号１１０のＶＨ配列；又は（ｃ）配列番号１１１のＶＬ配列及び配列番号１１２のＶＨ配列を含む。
【００１２】
また本明細書に提供されるのは、ＲＳＰＯ３に結合する単離された抗体であり、ここで抗体は、膜貫通Ｅ３ユビキチナーゼとのＲＳＰＯ３の相互作用を阻害する。幾つかの実施態様において、膜貫通Ｅ３ユビキチナーゼは、ＺＮＲＦ３及び／又はＲＮＦ４３である。
【００１３】
幾つかの実施態様において、抗体は、ＲＳＰＯ３と、ＬＧＲ４、ＬＧＲ５、及び／又はＬＧＲ６の一以上との相互作用を阻害しない（例えば、ＬＧＲ４、ＬＧＲ５、及び／又はＬＧＲ６の一以上へのＲＳＰＯ３の結合を増強する）。
【００１４】
幾つかの実施態様において、抗体は、ＬＧＲ４、ＬＧＲ５、及び／又はＬＧＲ６の一以上とのＲＳＰＯ３の相互作用を阻害する。例えば、本明細書に提供されるのは、ＲＳＰＯ３に結合する単離された抗体であり、ここで、抗体は、（ａ）（ｉ）配列番号５のアミノ酸を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号６のアミノ酸を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｉ）配列番号７のアミノ酸を含むＨＶＲ−Ｌ３を含むＶＬ；及びｉ）配列番号８のアミノ酸を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号９のアミノ酸を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉ）配列番号１０のアミノ酸を含むＨＶＲ−Ｈ３を含むＶＨ；（ｂ）（ｉ）配列番号１１のアミノ酸を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号１２のアミノ酸を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｉ）配列番号１３のアミノ酸を含むＨＶＲ−Ｌ３を含むＶＬ；及びｉ）配列番号１４のアミノ酸を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号１５のアミノ酸を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉ）配列番号１６のアミノ酸を含むＨＶＲ−Ｈ３を含むＶＨ；（ｃ）（ｉ）配列番号１７のアミノ酸を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号１８のアミノ酸を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｉ）配列番号１９のアミノ酸を含むＨＶＲ−Ｌ３を含むＶＬ；及びｉ）配列番号２０のアミノ酸を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号２１のアミノ酸を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉ）配列番号２２のアミノ酸を含むＨＶＲ−Ｈ３を含むＶＨ；（ｄ）（ｉ）配列番号２３のアミノ酸を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号２４のアミノ酸を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｉ）配列番号２５のアミノ酸を含むＨＶＲ−Ｌ３を含むＶＬ；及びｉ）配列番号２６のアミノ酸を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号２７のアミノ酸を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉ）配列番号２８のアミノ酸を含むＨＶＲ−Ｈ３を含むＶＨ；（ｅ）（ｉ）配列番号２９のアミノ酸を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号３０のアミノ酸を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｉ）配列番号３１のアミノ酸を含むＨＶＲ−Ｌ３を含むＶＬ；及びｉ）配列番号３２のアミノ酸を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号３３のアミノ酸を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉ）配列番号３４のアミノ酸を含むＨＶＲ−Ｈ３を含むＶＨ；（ｆ）（ｉ）配列番号３５のアミノ酸を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号３６のアミノ酸を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｉ）配列番号３７のアミノ酸を含むＨＶＲ−Ｌ３を含むＶＬ；及びｉ）配列番号３８のアミノ酸を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号３９のアミノ酸を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉ）配列番号４０のアミノ酸を含むＨＶＲ−Ｈ３を含むＶＨ；又は（ｇ）（ｉ）配列番号４１のアミノ酸を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号４２のアミノ酸を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｉ）配列番号４３のアミノ酸を含むＨＶＲ−Ｌ３を含むＶＬ；及びｉ）配列番号４４のアミノ酸を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号４５のアミノ酸を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉ）配列番号４６のアミノ酸を含むＨＶＲ−Ｈ３を含むＶＨを含む。幾つかの実施態様において、抗体は、（ｉ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｉｉｉ）配列番号２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含むＶＬ；及び（ｉ）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号２７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号２８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含むＶＨを含む。幾つかの実施態様において、抗体は、（ｉ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号３０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｉｉｉ）配列番号３１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含むＶＬ；及び（ｉ）配列番号３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含むＶＨを含む。更に、本明細書に提供されるのは、ＲＳＰＯ３に結合する単離された抗体であり、ここで、抗体は、（ａ）（ｉ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｉｉｉ）配列番号２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含むＶＬ；及び（ｉ）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号２７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；及び（ｉｉｉ）配列番号１８８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含むＶＨ；又は（ｂ）（ｉ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｉｉｉ）配列番号２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含むＶＬ；及び（ｉ）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号２７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；及び（ｉｉｉ）配列番号１８９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含むＶＨを含む。幾つかの実施態様において、ＲＳＰＯに結合する単離された抗体は、（ｉ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｉｉｉ）配列番号２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含むＶＬ；及び（ｉ）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号２７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；及び（ｉｉｉ）配列番号２８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含むＶＨを含む。幾つかの実施態様において、ＲＳＰＯに結合する単離された抗体は、（ｉ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｉｉｉ）配列番号２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含むＶＬ；及び（ｉ）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号２７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；及び（ｉｉｉ）配列番号１８８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含むＶＨを含む。幾つかの実施態様において、ＲＳＰＯに結合する単離された抗体は、（ｉ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｉｉｉ）配列番号２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含むＶＬ；及び（ｉ）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号２７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；及び（ｉｉｉ）配列番号１８９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含むＶＨを含む。
【００１５】
幾つかの実施態様において、抗体は、（ａ）配列番号８９のＶＬ配列及び配列番号９０のＶＨ配列；（ｂ）配列番号９１のＶＬ配列及び配列番号９２のＶＨ配列；（ｃ）配列番号９３のＶＬ配列及び配列番号９４のＶＨ配列；（ｄ）配列番号９５のＶＬ配列及び配列番号９６のＶＨ配列；（ｅ）配列番号９７のＶＬ配列及び配列番号９８のＶＨ配列；（ｆ）配列番号９９のＶＬ配列及び配列番号１００のＶＨ配列；（ｇ）配列番号１０１のＶＬ配列及び配列番号１０２のＶＨ配列；を含む。幾つかの実施態様において、ＲＳＰＯ３に結合する単離された抗体は、（ａ）配列番号２０８のＶＬ配列及び配列番号２０９のＶＨ配列、（ｂ）配列番号２１２のＶＬ配列及び配列番号２１３のＶＨ配列；又は（ｃ）配列番号２１４のＶＬ配列及び配列番号２０５のＶＨ配列を含む。幾つかの実施態様において、ＲＳＰＯ３に結合する単離された抗体は、（ａ）配列番号２０８のＶＬ配列、及び配列番号２０９のＶＨ配列を含む。幾つかの実施態様において、ＲＳＰＯ３に結合する単離された抗体は、（ａ）配列番号２１２のＶＬ配列、及び配列番号２１３のＶＨ配列を含む。幾つかの実施態様において、ＲＳＰＯ３に結合する単離された抗体は、（ａ）配列番号２１４のＶＬ配列、及び配列番号２１５のＶＨ配列を含む。
【００１６】
本明細書に提供されるのは、ＲＳＰＯ２及びＲＳＰＯ３に結合する単離された抗体（抗ＲＳＰＯ２／３抗体）である。幾つかの実施態様において、抗体は、膜貫通Ｅ３ユビキチナーゼとのＲＳＰＯ２及びＲＳＰＯ３の相互作用を阻害する。幾つかの実施態様において、膜貫通Ｅ３ユビキチナーゼは、ＺＮＲＦ３及び／又はＲＮＦ４３である。幾つかの実施態様において、抗体は、ＬＧＲ４、ＬＧＲ５、及び／又はＬＧＲ６の一以上とのＲＳＰＯ３の相互作用を阻害する。幾つかの実施態様において、抗体は、ＲＳＰＯ３と、ＬＧＲ４、ＬＧＲ５、及び／又はＬＧＲ６の一以上との相互作用を阻害しない（例えば、ＬＧＲ４、ＬＧＲ５、及び／又はＬＧＲ６の一以上へのＲＳＰＯ３の結合を増強する）。幾つかの実施態様において、抗体は、ＬＧＲ４、ＬＧＲ５、及び／又はＬＧＲ６の一以上とのＲＳＰＯ２の相互作用を阻害する。幾つかの実施態様において、抗体は、ＲＳＰＯ２と、ＬＧＲ４、ＬＧＲ５、及び／又はＬＧＲ６の一以上との相互作用を阻害しない（例えば、ＬＧＲ４、ＬＧＲ５、及び／又はＬＧＲ６の一以上へのＲＳＰＯ２の結合を増強する）。
【００１７】
例えば、本明細書に提供されるのは、ＲＳＰＯ２及びＲＳＰＯ３に結合する抗体であり、ここで、抗体は、（ａ）（ｉ）配列番号４７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｉｉｉ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含むＶＬ；及び（ｂ）（ｉ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号５２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含むＶＨを含む。幾つかの実施態様において、抗体は、（ａ）配列番号１０３のＶＬ配列、及び配列番号１０４のＶＨ配列を含む。
【００１８】
抗ＲＳＰＯ２／３抗体の何れかの幾つかの実施態様において、抗体は、第一の可変ドメイン及び第二の可変ドメインを含み、ここで、第一の可変ドメインは六つのＨＶＲの第一の組を含み、第二の可変ドメインは六つのＨＶＲの第二の組を含み、ここで、六つのＨＶＲの第一及び第二の組は同一である。幾つかの実施態様において、六つのＨＶＲの第一の組及び六つのＨＶＲの第二の組は２６Ｅ１１の六つのＨＶＲである。
【００１９】
抗ＲＳＰＯ２／３抗体の何れかの幾つかの実施態様において、抗体は、第一の可変ドメイン及び第二の可変ドメインを含み、ここで、第一の可変ドメインは六つのＨＶＲの第一の組を含み、第二の可変ドメインは六つのＨＶＲの第二の組を含み、ここで、六つのＨＶＲの第一及び第二の組は異なる。幾つかの実施態様において、六つのＨＶＲの第一の組は、４Ｈ１、４Ｄ４、５Ｃ２、５Ｄ６、５Ｅ１１、６Ｅ９、及び２１Ｃ２の何れか一の六つのＨＶＲであり、六つのＨＶＲの第二の組は、１Ａ１、１１Ｆ１１、３６Ｄ２、及び４９Ｇ５の何れか一の六つのＨＶＲである。幾つかの実施態様において、六つのＨＶＲの第一の組は、４Ｈ１、４Ｄ４、５Ｃ２、５Ｄ６、５Ｅ１１、６Ｅ９、及び２１Ｃ２の何れか一の六つのＨＶＲであり、六つのＨＶＲの第二の組は、１Ａ１の六つのＨＶＲである。
【００２０】
また本明細書に提供されるのは、ＲＳＰＯ３に結合する単離された抗体であり、ここで、抗体は、（ａ）（ｉ）配列番号７７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号７８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｉｉｉ）配列番号７９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含むＶＬ；及び（ｉ）配列番号８０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号８１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；及び（ｉｉｉ）配列番号８２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含むＶＨ；又は
（ｂ）（ｉ）配列番号８３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号８４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｉｉｉ）配列番号８５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含むＶＬ；及び（ｉ）配列番号８６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号８７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号８８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含むＶＨを含む。また本明細書に提供されるのは、ＲＳＰＯ３に結合する単離された抗体であり、ここで、抗体は、（ａ）（ｉ）配列番号７７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号７８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｉｉｉ）配列番号７９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含むＶＬ；及び（ｉ）配列番号８０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号８１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号２１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含むＶＨを含む。
【００２１】
また本明細書に提供されるのは、ＲＳＰＯ３に結合する単離された抗体であり、ここで、抗体は、ＲＳＰＯ３のアミノ酸４７−１０８内の領域（例えば、４９−１０８）に結合する。
【００２２】
また本明細書に提供されるのは、ＲＳＰＯ３のエピトープに結合する単離された抗体であり、抗体の何れかの幾つかの実施態様において、ＲＳＰＯ３のエピトープは、ＲＳＰＯ３のアミノ酸残基：Ｇｌｎ７２、Ｐｒｏ９０、Ａｓｐ９１、及びＬｙｓ９４を含む。幾つかの実施態様において、ＲＳＰＯ３のエピトープは、ＲＳＰＯ３のアミノ酸：Ａｓｎ５２、Ｌｅｕ５５、Ｐｈｅ６３、Ｇｌｎ７２、Ｔｙｒ８９、Ｐｒｏ９０、Ａｓｐ９１、Ｌｙｓ９４、及びＬｙｓ９７を含む。幾つかの実施態様において、ＲＳＰＯ３のエピトープは、ＲＳＰＯ３のアミノ酸残基：Ｓｅｒ４９、Ａｓｎ５２、Ｃｙｓ５４、Ｌｅｕ５５、Ｓｅｒ５６、Ｐｈｅ６３、Ｌｅｕ６５、Ｇｌｎ７２、Ｉｌｅ７３、Ｇｌｙ７４、Ｔｙｒ８４、Ｔｙｒ８９、Ｐｒｏ９０、Ａｓｐ９１、Ｉｌｅ９２、Ｌｙｓ９４、Ｌｙｓ９７、及びＬｙｓ１０８を含む。
【００２３】
また本明細書に提供されるのは、ＲＳＰＯ３のエピトープに結合する単離された抗体であり、抗体の何れかの幾つかの実施態様において、ＲＳＰＯ３のエピトープは、ＲＳＰＯ３のアミノ酸：Ｔｈｒ４７、Ｌｅｕ５５、Ｇｌｎ７２、Ｐｒｏ９０、Ａｓｐ９１、及びＬｙｓ９４を含む。幾つかの実施態様において、ＲＳＰＯ３のエピトープは、ＲＳＰＯ３のアミノ酸：Ｔｈｒ４７、Ａｓｎ５２、Ｌｅｕ５５、Ｐｈｅ６３、Ｇｌｎ７２、Ｔｙｒ８９、Ｐｒｏ９０、Ａｓｐ９１、Ｉｌｅ９２、Ｌｙｓ９４、及びＬｙｓ９７を含む。幾つかの実施態様において、ＲＳＰＯ３のエピトープは、ＲＳＰＯ３のアミノ酸残基：Ｔｈｒ４７、Ａｓｎ５２、Ｃｙｓ５４、Ｌｅｕ５５、Ｓｅｒ５６、Ｐｈｅ６３、Ｌｅｕ６５、Ｇｌｎ７２、Ｔｙｒ８４、Ｔｙｒ８９、Ｐｒｏ９０、Ａｓｐ９１、Ｉｌｅ９２、Ａｓｎ９３、Ｌｙｓ９４、Ｌｙｓ９７、及びＬｙｓ１０８を含む。
【００２４】
また本明細書に提供されるのは、ＲＳＰＯ３のエピトープに結合する単離された抗体であり、抗体の何れかの幾つかの実施態様において、ＲＳＰＯ３のエピトープは、ＲＳＰＯ３のＳｅｒ４９、Ａｓｎ５２、Ｃｙｓ５４、Ｌｅｕ５５、Ｓｅｒ５６、Ｐｈｅ６３、Ｌｅｕ６５、Ｇｌｎ７２、Ｉｌｅ７３、Ｇｌｙ７４、Ｔｙｒ８４、Ｔｙｒ８９、Ｐｒｏ９０、Ａｓｐ９１、Ｉｌｅ９２、Ｌｙｓ９４、及びＬｙｓ１０８から選択される一以上のアミノ酸を含む。幾つかの実施態様において、ＲＳＰＯ３のエピトープは、ＲＳＰＯ３のアミノ酸残基：Ｓｅｒ４９、Ａｓｎ５２、Ｃｙｓ５４、Ｌｅｕ５５、Ｓｅｒ５６、Ｐｈｅ６３、Ｌｅｕ６５、Ｇｌｎ７２、Ｉｌｅ７３、Ｇｌｙ７４、Ｔｙｒ８４、Ｔｙｒ８９、Ｐｒｏ９０、Ａｓｐ９１、Ｉｌｅ９２、Ｌｙｓ９４、及びＬｙｓ１０８を含む。
【００２５】
また本明細書に提供されるのは、ＲＳＰＯ３のエピトープに結合する単離された抗体であり、抗体の何れかの幾つかの実施態様において、ＲＳＰＯ３のエピトープは、ＲＳＰＯ３のＳｅｒ４９、Ａｓｎ５２、Ｃｙｓ５４、Ｌｅｕ５５、Ｓｅｒ５６、Ｐｈｅ６３、Ｌｅｕ６５、Ｇｌｎ７２、Ｉｌｅ７３、Ｇｌｙ７４、Ｔｙｒ８４、Ｔｙｒ８９、Ｐｒｏ９０、Ａｓｐ９１、Ｉｌｅ９２、Ｌｙｓ９４、Ｌｙｓ９７、及びＬｙｓ１０８から選択される一以上のアミノ酸を含む。幾つかの実施態様において、ＲＳＰＯ３のエピトープは、ＲＳＰＯ３のアミノ酸残基：Ｓｅｒ４９、Ａｓｎ５２、Ｃｙｓ５４、Ｌｅｕ５５、Ｓｅｒ５６、Ｐｈｅ６３、Ｌｅｕ６５、Ｇｌｎ７２、Ｉｌｅ７３、Ｇｌｙ７４、Ｔｙｒ８４、Ｔｙｒ８９、Ｐｒｏ９０、Ａｓｐ９１、Ｉｌｅ９２、Ｌｙｓ９４、Ｌｙｓ９７、及びＬｙｓ１０８を含む。
【００２６】
また本明細書に提供されるのは、ＲＳＰＯ３のエピトープに結合する単離された抗体であり、ＲＳＰＯ３のエピトープは、ＲＳＰＯ３のＴｈｒ４７、Ａｓｎ５２、Ｃｙｓ５４、Ｌｅｕ５５、Ｓｅｒ５６、Ｐｈｅ６３、Ｌｅｕ６５、Ｇｌｎ７２、Ｔｙｒ８４、Ｔｙｒ８９、Ｐｒｏ９０、Ａｓｐ９１、Ｉｌｅ９２、Ａｓｎ９３、Ｌｙｓ９４、Ｌｙｓ９７、及びＬｙｓ１０８から選択される一以上のアミノ酸を含む。幾つかの実施態様において、ＲＳＰＯ３のエピトープは、ＲＳＰＯ３のアミノ酸残基：Ｔｈｒ４７、Ａｓｎ５２、Ｃｙｓ５４、Ｌｅｕ５５、Ｓｅｒ５６、Ｐｈｅ６３、Ｌｅｕ６５、Ｇｌｎ７２、Ｔｙｒ８４、Ｔｙｒ８９、Ｐｒｏ９０、Ａｓｐ９１、Ｉｌｅ９２、Ａｓｎ９３、Ｌｙｓ９４、Ｌｙｓ９７、及びＬｙｓ１０８を含む。
【００２７】
抗体の何れかの幾つかの実施態様において、抗体は、膜貫通Ｅ３ユビキチナーゼとのＲＳＰＯ２及びＲＳＰＯ３の相互作用を阻害する。幾つかの実施態様において、膜貫通Ｅ３ユビキチナーゼは、ＺＮＲＦ３及び／又はＲＮＦ４３である。幾つかの実施態様において、抗体は、ＬＧＲ４、ＬＧＲ５、及び／又はＬＧＲ６の一以上とのＲＳＰＯ３の相互作用を阻害する。
【００２８】
抗ＲＳＰＯ抗体の何れかの幾つかの実施態様において、抗体は、ＲＳＰＯ２及び／又はＲＳＰＯ３媒介性ｗｎｔシグナル伝達を阻害する。抗ＲＳＰＯ抗体の何れかの幾つかの実施態様において、抗体は、ＲＳＰＯ２及び／又はＲＳＰＯ３に結合する抗体断片である。抗ＲＳＰＯ抗体の何れかの幾つかの実施態様において、抗体断片は、ＲＳＰＯ２及び／又はＲＳＰＯ３媒介性ｗｎｔシグナル伝達を阻害する。抗ＲＳＰＯ抗体の何れかの幾つかの実施態様において、抗体は、がん幹細胞の増殖を阻害する。抗ＲＳＰＯ抗体の何れかの幾つかの実施態様において、抗体は、がん細胞（例えば、がん幹細胞）の分化（例えば、前駆細胞への最終分化及び／又は分化）を誘導し及び／又は促進する。
【００２９】
抗ＲＳＰＯ抗体の何れかの幾つかの実施態様において、抗体は、モノクローナル抗体である。抗ＲＳＰＯ抗体の何れかの幾つかの実施態様において、抗体は、ヒト、ヒト化、又はキメラ抗体である。抗ＲＳＰＯ抗体の何れかの幾つかの実施態様において、抗体は、完全長ＩｇＧ１抗体である。抗ＲＳＰＯ抗体の何れかの幾つかの実施態様において、抗体は、減少又は枯渇したエフェクター機能を有する。抗ＲＳＰＯ抗体の何れかの幾つかの実施態様において、抗ＲＳＰＯ抗体は、ＥＵ番号付け規則に従って、アミノ酸位置２９７に操作されたアラニンを含む。抗ＲＳＰＯ抗体の何れかの幾つかの実施態様において、抗ＲＳＰＯ抗体は、ＥＵ番号付け規則に従って、アミノ酸位置２６５に操作されたアラニンを含む。
【００３０】
抗ＲＳＰＯ抗体の何れかの幾つかの実施態様において、抗体は、医薬として使用するためのものである。抗ＲＳＰＯ抗体の何れかの幾つかの実施態様において、抗体は、がんの治療において使用するためのものである。幾つかの実施態様において、がんは、消化管がん、胃がん、結腸がん、結腸直腸がん、又は直腸がんである。幾つかの実施態様において、がんは、基準と比較して、一以上のＲＳＰＯ（例えば、ＲＳＰＯ２及び／又はＲＳＰＯ３）の増加した発現によって特徴付けられる。幾つかの実施態様において、がんは、ＲＳＰＯ転座（例えば、ＲＳＰＯ２転座及び／又はＲＳＰＯ３転座）によって特徴付けられる。抗ＲＳＰＯ抗体の何れかの幾つかの実施態様において、抗体は、ｗｎｔシグナル伝達を阻害すること、血管新生及び／又は脈管形成を阻害すること、及び／又は細胞増殖を阻害することに使用するためのものである。
【００３１】
また本明細書に提供されるのは、本明細書に記載される抗体をコードする単離された核酸である。更に本明細書に提供されるのは、本明細書に記載される抗体の核酸を含む宿主細胞である。本明細書に提供されるのは、抗体が産生されるように、本明細書に記載の抗体の核酸を含む宿主細胞を培養することを含む、本明細書に記載される抗体を産生する方法である。幾つかの実施態様において、産生する方法は、宿主細胞から抗体を回収することを更に含む。
【００３２】
本明細書に提供されるのは、本明細書に記載の抗体と細胞傷害剤を含むイムノコンジュゲートである。
【００３３】
更に本明細書に提供されるのは、本明細書に記載される抗体及び薬学的に許容可能な担体を含む薬学的製剤である。幾つかの実施態様において、薬学的製剤は付加的な治療剤を更に含む。幾つかの実施態様において、付加的治療薬は、タキサンである。幾つかの実施態様において、タキサンは、パクリタキセル又はドセタキセルである。幾つかの実施態様において、付加的治療薬は、白金剤である。幾つかの実施態様において、白金剤は、カルボプラチン、オキサリプラチン及び／又はシスプラチンである。幾つかの実施態様において、付加的治療薬は、トポイソメラーゼ阻害剤である。幾つかの実施態様において、トポイソメラーゼ阻害剤はイリノテカン、トポテカン、エトポシド、及び／又はミトキサントロンである。幾つかの実施態様において、付加的治療薬は、フォリン酸（例えば、ロイコボリン）である。幾つかの実施態様において、付加的治療薬は、ヌクレオシド代謝阻害剤である。幾つかの実施態様において、ヌクレオシド代謝阻害剤は、フルオロウラシル、カペシタビン、及び／又はゲムシタビンである。幾つかの実施態様において、付加的治療薬は、フォリン酸、５−フルオロウラシル、及び／又はオキサリプラチンである。幾つかの実施態様において、付加的治療薬は、５−フルオロウラシル及びイリノテカンである。幾つかの実施態様において、付加的治療薬は、タキサン及び白金剤である。幾つかの実施態様において、付加的治療薬は、パクリタキセル及びカルボプラチンである。幾つかの実施態様において、付加的治療薬は、ペメトレキセド（ｐｅｍｅｔｒｅｘａｔｅ）である。幾つかの実施態様において、付加的治療薬は、ヘッジホッグ阻害剤（例えば、ビスモデギブ）である。
【００３４】
本明細書に提供されるのは、がんの治療のための医薬の製造における、本明細書に記載の抗体の使用である。幾つかの実施態様において、がんは、消化管がん、胃がん、結腸がん、結腸直腸がん、又は直腸がんである。幾つかの実施態様において、がんは肺がんである。幾つかの実施態様において、がんは、基準と比較して、一以上のＲＳＰＯ（例えば、ＲＳＰＯ２及び／又はＲＳＰＯ３）の増加した発現によって特徴付けられる。幾つかの実施態様において、がんは、ＲＳＰＯ転座（例えば、ＲＳＰＯ２転座及び／又はＲＳＰＯ３転座）によって特徴付けられる。更に、本明細書に提供されるのは、ｗｎｔシグナル伝達を阻害するため、血管新生及び／又は脈管形成を阻害するため、及び／又は細胞増殖を阻害するための医薬の製造における、本明細書に記載の抗体の使用である。幾つかの実施態様において、抗ＲＳＰＯ抗体は、付加的治療薬と組み合わせて使用される（例えば、逐次に又は同時に投与される）。幾つかの実施態様において、付加的治療薬は、タキサンである。幾つかの実施態様において、タキサンは、パクリタキセル又はドセタキセルである。幾つかの実施態様において、付加的治療薬は、白金剤である。幾つかの実施態様において、白金剤は、カルボプラチン、オキサリプラチン及び／又はシスプラチンである。幾つかの実施態様において、付加的治療薬は、トポイソメラーゼ阻害剤である。幾つかの実施態様において、トポイソメラーゼ阻害剤はイリノテカン、トポテカン、エトポシド、及び／又はミトキサントロンである。幾つかの実施態様において、付加的治療薬は、フォリン酸（例えば、ロイコボリン）である。幾つかの実施態様において、付加的治療薬は、ヌクレオシド代謝阻害剤である。幾つかの実施態様において、ヌクレオシド代謝阻害剤は、フルオロウラシル、カペシタビン、及び／又はゲムシタビンである。幾つかの実施態様において、付加的治療薬は、フォリン酸、５−フルオロウラシル、及び／又はオキサリプラチンである。幾つかの実施態様において、付加的治療薬は、５−フルオロウラシル及びイリノテカンである。幾つかの実施態様において、付加的治療薬は、タキサン及び白金剤である。幾つかの実施態様において、付加的治療薬は、パクリタキセル及びカルボプラチンである。幾つかの実施態様において、付加的治療薬は、ペメトレキセド（ｐｅｍｅｔｒｅｘａｔｅ）である。幾つかの実施態様において、付加的治療薬は、ヘッジホッグ阻害剤（例えば、ビスモデギブ）である。
【００３５】
本明細書に提供されるのは、本明細書に記載の抗体の有効量を個体に投与することを含む、がんを有する個体を治療する方法である。幾つかの実施態様において、がんは、消化管がん、胃がん、結腸がん、結腸直腸がん、又は直腸がんである。幾つかの実施態様において、がんは肺がんである。幾つかの実施態様において、本方法は、付加的な治療剤を個体へ投与することを更に含む。幾つかの実施態様において、がんは、基準と比較して、一以上のＲＳＰＯ（例えば、ＲＳＰＯ２及び／又はＲＳＰＯ３）の増加した発現によって特徴付けられる。幾つかの実施態様において、がんは、ＲＳＰＯ転座（例えば、ＲＳＰＯ２転座及び／又はＲＳＰＯ３転座）によって特徴付けられる。また、本明細書に提供されるのは、ｗｎｔシグナル伝達を阻害するため、血管新生及び／又は脈管形成を阻害するため、及び／又は細胞増殖を阻害するために、本明細書に記載の抗体の有効量を個体に投与することを含む、個体において、ｗｎｔシグナル伝達を阻害する、血管新生及び／又は脈管形成を阻害する、及び／又は細胞増殖阻害する方法を提供する。幾つかの実施態様において、本方法は、付加的治療薬を投与することを含む。幾つかの実施態様において、付加的治療薬は、タキサンである。幾つかの実施態様において、タキサンは、パクリタキセル又はドセタキセルである。幾つかの実施態様において、付加的治療薬は、白金剤である。幾つかの実施態様において、白金剤は、カルボプラチン、オキサリプラチン及び／又はシスプラチンである。幾つかの実施態様において、付加的治療薬は、トポイソメラーゼ阻害剤である。幾つかの実施態様において、トポイソメラーゼ阻害剤はイリノテカン、トポテカン、エトポシド、及び／又はミトキサントロンである。幾つかの実施態様において、付加的治療薬は、フォリン酸（例えば、ロイコボリン）である。幾つかの実施態様において、付加的治療薬は、ヌクレオシド代謝阻害剤である。幾つかの実施態様において、ヌクレオシド代謝阻害剤は、フルオロウラシル、カペシタビン、及び／又はゲムシタビンである。幾つかの実施態様において、付加的治療薬は、フォリン酸、５−フルオロウラシル、及び／又はオキサリプラチンである。幾つかの実施態様において、付加的治療薬は、５−フルオロウラシル及びイリノテカンである。幾つかの実施態様において、付加的治療薬は、タキサン及び白金剤である。幾つかの実施態様において、付加的治療薬は、パクリタキセル及びカルボプラチンである。幾つかの実施態様において、付加的治療薬は、ペメトレキセド（ｐｅｍｅｔｒｅｘａｔｅ）である。幾つかの実施態様において、付加的治療薬は、ヘッジホッグ阻害剤（例えば、ビスモデギブ）である。
【図面の簡単な説明】
【００３６】
【図１Ａ−Ｂ】抗ＲＳＰＯ２及び抗ＲＳＰＯ３抗体のパネルは、組換えヒト（ｒｈ）ＲＳＰＯ２−刺激性（Ａ）及び／又はｒｈＲＳＰＯ３−刺激性（Ｂ）ＷＮＴレポーター活性を遮断する能力について試験された。抗体のサブセットはｒｈＲＳＰＯ２−及び／又はｒｈＲＳＰＯ３−刺激性ＷＮＴレポーター活性を遮断する。ＷＮＴレポーター細胞を、１０ｎｇ／ｍＬの組換えマウス（ｒｍ）Ｗｎｔ３ａ、５０ｐＭのｒｈＲＳＰＯ２（Ａ）又はｒｈＲＳＰＯ３（Ｂ）を用いて、示された抗体クローンの濃度を増加させて刺激した。データは、抗体の非存在下において存在する刺激の量に対して正規化された。
【図２Ａ−Ｉ】抗ＲＳＰＯ２及び抗ＲＳＰＯ３抗体のパネルは、ＲＳＰＯ３発現細胞ペレット（Ａ−Ｃ）、ＲＳＰＯ２発現細胞ペレット（Ｄ−Ｆ）、ＲＳＰＯ１発現細胞ペレット（Ｇ）、ＲＳＰＯ４発現細胞ペレット（Ｈ）、及び非ＲＳＰＯ１−４発現細胞（２９３細胞）（Ｉ）に反応性であるＩＨＣについて試験された。図２に示すように、抗体４９Ｇ５は、ＩＨＣによって決定される場合、ＲＳＰＯ２発現細胞ペレットに対する反応性を認識したが、一方ＲＳＰＯ３、ＲＳＰＯ１、ＲＳＰＯ４、及び非ＲＳＰＯ１−４発現細胞ペレットを認識しなかった。ＩＨＣ反応性について試験した抗体の完全な表は、表４に示される。表４の全ての試験された抗体は、ＩＨＣ反応性によって決定される場合、ＲＳＰＯ１、ＲＳＰＯ４、非ＲＳＰＯ１−４発現細胞ペレットを認識しなかった。
【図３Ａ−Ｄ】抗ＲＳＰＯ２及び抗ＲＳＰＯ３抗体のパネルは、ｗｎｔレポーター活性のｒｈＲＳＰＯ２（Ａ）、組換えカニクイザル（ｒｃｙｎｏ）ＲＳＰＯ２（Ｂ）、マウス（ｍ）ＲＳＰＯ２（Ｃ）、及びｒｈＲＳＰＯ２ Ｌ１８６Ｐ変異体（Ｄ）による刺激を阻害する能力について試験された。ＷＮＴレポーター細胞を、１０ｎｇ／ｍＬのｒｍＷｎｔ３ａと、５０ｐＭのｒｈＲＳＰＯ２（Ａ）、８ｐＭのｒｃｙｎｏＲＳＰＯ２（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）（Ｂ）、９０ｐＭのｍＲＳＰＯ２（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）（Ｃ）、又は３８ｐＭのｒｈＲＳＰＯ２ Ｌ１８６Ｐ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）（Ｄ）の何れかを用いて、示された抗体クローンの濃度を増加させて刺激した。
【図４Ａ−Ｄ】抗ＲＳＰＯ２及び抗ＲＳＰＯ３抗体のパネルは、ｒｈＲＳＰＯ３（Ａ）、ｒｃｙｎｏＲＳＰＯ３（Ｂ）、ｍＲＳＰＯ３（Ｃ）、及びＰＴＰＲＫ融合−ＲＳＰＯ３（Ｄ）によって刺激される、ＷＮＴレポーター活性を阻害する能力について試験された。ＷＮＴレポーター細胞を、１０ｎｇ／ｍＬのｒｍＷｎｔ３ａと、５０ｐＭのｒｈＲＳＰＯ３（Ａ）、１３ｐＭのｃｙｎｏＲＳＰＯ３（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）（Ｂ）、又は１７ｐＭのｍＲＳＰＯ３（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）（Ｃ）の何れかを用いて、示された抗体クローンの濃度を増加させて刺激した。図４Ｄにおいて、ＷＮＴレポーター細胞を、５ｕｇ／ｍｌの抗ＲＳＰＯ３の非存在下又は存在下で、１０ｎｇ／ｍｌのｒｍＷＮＴ３ａと、示されたＤＮＡを用いてトランスフェクトした２９３Ｔ細胞から調製した馴化培地を用いて刺激した。
【図５】９つの抗ＲＳＰＯ２及び抗ＲＳＰＯ３クローンの親和性及びＩＣ５０測定示された組換え（ｒ）ＲＳＰＯ２及びｒＲＳＰＯ３について示されたクローンのＦａｂの親和性は、表面プラズモン共鳴によって測定された。示されたクローンのＩＣ５０の測定は、示されたｒＳＰＯのＥＣ５０でＷＮＴレポーターアッセイを刺激し、各抗体の濃度を増加させることによって決定された。Ｈ、ヒト；Ｃ、カニクイザル；Ｍ、マウス；−、結合無し又はＩＣ５０＞５００ｎＭ。
【図６Ａ−Ｂ】抗ＲＳＰＯ２及び抗ＲＳＰＯ３抗体のパネルは、ｒｈＲＳＰＯ２（Ａ）及びｒｈＲＳＰＯ３（Ｂ）へのＬＧＲ４結合を阻害する能力について試験された。個々の抗体クローンを、競合結合ＥＬＩＳＡによって、ｒｈＲＳＰＯ２（Ａ）又はｒｈＲＳＰＯ３（Ｂ）の何れかに対するＬＧＲ４−ＥＣＤの結合を阻害する能力について試験した。同様の結果がＬＧＲ５で見られた（データ非表示）。結果の概要については、表５を参照のこと。
【図７Ａ−Ｂ】抗ＲＳＰＯ２及び抗ＲＳＰＯ３抗体のパネルは、ｒｈＲＳＰＯ２（Ａ）及びｒｈＲＳＰＯ３（Ｂ）へのＲＮＦ４３結合を阻害する能力について試験された。個々の抗体クローンを、競合結合ＥＬＩＳＡによって、ｒｈＲＳＰＯ２（Ａ）又はｒｈＲＳＰＯ３（Ｂ）に対するＲＮＦ４３−ＥＣＤの結合を阻害する能力について試験した。同様の結果がＬＧＲ５で見られた（データ非表示）。結果の概要については、表５を参照のこと。
【図８Ａ−Ｂ】Ｆａｂ２６Ｅ１１との複合体中の結晶化したＲＳＰＯ３（３３−２１０）のモデル（Ａ）。Ｆａｂ２６Ｅ１１／ＲＳＰＯ３相互作用の拡大が（Ｂ）に示される。
【図９Ａ−Ｂ】５Ｄ６、２６Ｅ１１、４Ｈ１、５Ｃ２、５Ｅ１１、４Ｄ４、６Ｅ９及び２１Ｃ２の可変軽鎖領域配列（Ａ）及び可変重鎖領域配列（Ｂ）のアラインメント。Ｋａｂａｔの定義によるＣＤＲ配列には下線が引かれている。
【図１０Ａ−Ｂ】１１Ｆ１１、１Ａ１、３６Ｄ２、及び４９Ｇ５の可変軽鎖領域配列（Ａ）及び可変重鎖領域配列（Ｂ）のアラインメント。Ｋａｂａｔの定義によるＣＤＲ配列には下線が引かれている。
【図１１Ａ−Ｄ】３０ｍｇ／ｋｇの抗ＲＳＰＯ３抗体（５Ｄ６）又は抗ブタクサ抗体（対照）で処置された結腸直腸がん患者由来の４つのモデル（Ａ−Ｄ）の平均腫瘍体積（ｍｍ３）の変化。また図１１Ｄは、イリノテカン（１００ｍｇ／ｋｇ、０日目及び３日目）と組み合わせた抗ＲＳＰＯ３抗体（５Ｄ６）又は抗ブタクサ抗体（対照）及びイリノテカン（１００ｍｇ／ｋｇ、０日目及び３日目）で処置されたＣＲＣＤ結腸直腸がん患者由来のモデルの平均腫瘍体積（ｍｍ３）の変化を示す。
【図１２Ａ−Ｄ】抗ブタクサ抗体（対照）又は抗ＲＳＰＯ３抗体（５Ｄ６）を３０ｍｇ／ｋｇで処置された結腸直腸がん患者由来のモデル腫瘍の、最後の投薬後２〜３週間でのヘマトキシリン及びエオシン染色（Ｈ＆Ｅ染色）（Ａ及びＣ）及びアルシアンブルー染色（Ｂ及びＤ）。抗ＲＳＰＯ３で処置した腫瘍は、異なる病理組織学を有し、特に、抗ブタクサ抗体の対照と比較してアルシアンブルー染色によって示されるように粘液の有意な増加を有する。
【図１３Ａ−Ｃ】（Ａ）は、（ｉ）抗ＲＳＰＯ３抗体（５Ｄ６）、（ｉｉ）抗ブタクサ抗体（対照）、（ｉｉｉ）イリノテカン（１００ｍｇ／ｋｇ、０日目）と組み合わせた抗ＲＳＰＯ３抗体（５Ｄ６）、又は抗ブタクサ抗体（対照）及びイリノテカン（１００ｍｇ／ｋｇ、０日目）で処置されたＣＲＣＣ結腸直腸がん患者由来のモデルの平均腫瘍体積（ｍｍ３）を示す。（Ｂ−Ｃ）は、結腸直腸がん患者由来のモデルが、（ａ）抗ＲＳＰＯ３抗体（５Ｄ６）又は抗ブタクサ抗体（対照；３０ｍｇ／ｋｇ）の何れかで処置され、（ｂ）移植されて、抗ＲＳＰＯ３抗体（５Ｄ６）又は抗ブタクサ抗体（対照）で処置された連続移植実験を示す。（Ｂ）は、最初に又は連続移植時の何れかで抗ＲＳＰＯ３抗体（５Ｄ６）による処置による、連続移植した腫瘍の腫瘍（移植）生着率のパーセンテージの実質的な減少を示す。（Ｃ）は、最初に又は連続移植時の何れかで抗ＲＳＰＯ３抗体（５Ｄ６）による処置による、連続移植した腫瘍の平均腫瘍体積の変化の有意な減少を示す。
【図１４Ａ−Ｂ】５Ｄ６、５Ｄ６ｖ１、５Ｄ６ｖ２．１、５Ｄ６ｖ２．２、５Ｄ６ｖ２．３、５Ｄ６ｖ２．４、５Ｄ６ｖ２．８、５Ｄ６ｖ２．１０、５Ｄ６ｖ３．２、５Ｄ６ｖ３．３、５Ｄ６ｖ４．１、５Ｄ６ｖ４．３、５Ｄ６ｖ５．１、及び５Ｄ６ｖ５．２の可変軽鎖領域配列（Ａ）及び可変重鎖領域配列（Ｂ）のアラインメント。Ｋａｂａｔの定義によるＣＤＲ配列には下線が引かれている。
【発明を実施するための形態】
【００３７】
Ｉ．定義
用語「Ｒスポンジン」及び「ＲＳＰＯ」とは本明細書では、別段の指示がない限り、霊長類（例えば、ヒト）及び齧歯類（例えば、マウス及びラット）などの哺乳類を含む任意の脊椎動物供給源由来の任意の天然ＲＳＰＯ（例えば、ＲＳＰＯ１、ＲＳＰＯ２、ＲＳＰＯ３、及び／又はＲＳＰＯ４）のことである。前記用語は、「完全長」非プロセス型ＲＳＰＯ並びに細胞におけるプロセシングから生じる任意の形態のＲＳＰＯを包含する。前記用語は、ＲＳＰＯの天然に存在する変異体、例えば、スプライス変異体又は対立遺伝子変異体も包含する。幾つかの実施態様において、例示的なヒトＲＳＰＯのアミノ酸配列は、例えば、配列番号３に示されるように、ＲＳＰＯ１である。幾つかの実施態様において、例示的なヒトＲＳＰＯのアミノ酸配列は、例えば、配列番号１に示されるように、ＲＳＰＯ２である。幾つかの実施態様において、例示的なヒトＲＳＰＯのアミノ酸配列は、例えば、配列番号２に示されるように、ＲＳＰＯ３である。幾つかの実施態様において、例示的なヒトＲＳＰＯのアミノ酸配列は、例えば、配列番号４に示されるように、ＲＳＰＯ４である。
【００３８】
用語「Ｒスポンジン２」及び「ＲＳＰＯ２」とは本明細書では、別段の指示がない限り、霊長類（例えば、ヒト）及び齧歯類（例えば、マウス及びラット）などの哺乳類を含む任意の脊椎動物供給源由来の任意の天然ＲＳＰＯ２のことである。前記用語は、「完全長」非プロセス型ＲＳＰＯ２並びに細胞におけるプロセシングから生じる任意の形態のＲＳＰＯ２を包含する。前記用語は、ＲＳＰＯ２の天然に存在する変異体、例えば、スプライス変異体又は対立遺伝子変異体も包含する。幾つかの実施態様において、例示的なヒトＲＳＰＯ２のアミノ酸配列は、２０１３年１０月１８日現在、ＵＮＩＰＲＯＴ Ｑ６ＵＸＸ９−１である。幾つかの実施態様において、例示的なヒトＲＳＰＯ２のアミノ酸配列は、２０１３年１０月１８日現在、ＵＮＩＰＲＯＴ Ｑ６ＵＸＸ９−２である。幾つかの実施態様において、例示的なヒトＲＳＰＯ２のアミノ酸配列は、２０１３年１０月１８日現在、ＵＮＩＰＲＯＴ Ｑ６ＵＸＸ９−３である。幾つかの実施態様において、例示的なヒトＲＳＰＯ２のアミノ酸配列は、配列番号１に示される。
【００３９】
用語「Ｒスポンジン３」及び「ＲＳＰＯ３」とは本明細書では、別段の指示がない限り、霊長類（例えば、ヒト）及び齧歯類（例えば、マウス及びラット）などの哺乳類を含む任意の脊椎動物供給源由来の任意の天然ＲＳＰＯ３のことである。前記用語は、「完全長」非プロセス型ＲＳＰＯ３並びに細胞におけるプロセシングから生じる任意の形態のＲＳＰＯ３を包含する。前記用語は、ＲＳＰＯ３の天然に存在する変異体、例えば、スプライス変異体又は対立遺伝子変異体も包含する。幾つかの実施態様において、例示的なヒトＲＳＰＯ２のアミノ酸配列は、２０１３年１０月１８日現在、ＵＮＩＰＲＯＴ Ｑ９ＢＸＹ４−１である。幾つかの実施態様において、例示的なヒトＲＳＰＯ２のアミノ酸配列は、２０１３年１０月１８日現在、ＵＮＩＰＲＯＴ Ｑ９ＢＸＹ４−２である。幾つかの実施態様において、例示的なヒトＲＳＰＯ３のアミノ酸配列は、配列番号２に示される。
【００４０】
本明細書での目的のための「アクセプターヒトフレームワーク」は、下で定義されるように、ヒト免疫グロブリンフレームワーク又はヒトコンセンサスフレームワーク由来の軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）フレームワーク又は重鎖可変ドメイン（ＶＨ）フレームワークのアミノ酸配列を含むフレームワークである。ヒト免疫グロブリンフレームワーク又はヒトコンセンサスフレームワーク「由来の」アクセプターヒトフレームワークは、それと同じアミノ酸配列を含むことがあり、又はアミノ酸配列変化を含有することもある。幾つかの実施態様では、アミノ酸変化の数は１０以下、９以下、８以下、７以下、６以下、５以下、４以下、３以下、又は２以下である。幾つかの実施態様では、ＶＬアクセプターヒトフレームワークは、ＶＬヒト免疫グロブリンフレームワーク配列又はヒトコンセンサスフレームワーク配列と配列が同一である。
【００４１】
「親和性」とは、分子（例えば、抗体）の単一結合部位とその結合パートナー（例えば、抗原）の間の非共有結合的相互作用の総和の強度のことである。他の方法で指示されていなければ、本明細書で使用されるように、「結合親和性」とは、結合対（例えば、抗体と抗原）のメンバー間の１対１の相互作用を反映する内因性結合親和性のことである。分子ＸのそのパートナーＹに対する親和性は一般には解離定数（Ｋｄ）により表すことができる。親和性は、本明細書に記載される方法を含む、当技術分野で公知の一般的方法により測定することができる。結合親和性を測定するための特定の説明的で例となる実施態様は以下に記載されている。
【００４２】
「親和性成熟」抗体とは、その改変を有していない親抗体と比較して、抗原に対する抗体の親和性に改良を生じせしめる、その一又は複数の超可変領域（ＨＶＲ）において一又は複数の改変を持つ抗体である。
【００４３】
用語「抗ＲＳＰＯ２抗体」及び「ＲＳＰＯ２に結合する抗体」は、抗体が、ＲＳＰＯ２を標的とし、診断薬剤及び／又は治療的薬剤として有用であるように、十分な親和性でＲＳＰＯ２に結合することができる抗体を指す。一実施態様において、抗ＲＳＰＯ２抗体の、無関係な、非ＲＳＰＯ２タンパク質への結合の程度は、例えば、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）によって測定される場合、抗体のＲＳＰＯ２への結合の約１０％未満である。ある実施態様において、ＲＳＰＯ２へ結合する抗体は、≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１ｎＭ、又は≦０．００１ｎＭ（例えば、１０−８Ｍ以下、例えば、１０−８Ｍから１０−１３Ｍ、例えば、１０−９Ｍから１０−１３Ｍ）の解離定数（Ｋｄ）を有する。ある実施態様において、抗ＲＳＰＯ２抗体は、異なる種由来のＲＳＰＯ２間で保存されているＲＳＰＯ２のエピトープに結合する。
【００４４】
用語「抗ＲＳＰＯ３抗体」及び「ＲＳＰＯ３に結合する抗体」は、抗体が、ＲＳＰＯ３を標的とし、診断薬剤及び／又は治療的薬剤として有用であるように、十分な親和性でＲＳＰＯ３に結合することができる抗体を指す。一実施態様において、抗ＲＳＰＯ３抗体の、無関係な、非ＲＳＰＯ３タンパク質への結合の程度は、例えば、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）によって測定される場合、抗体のＲＳＰＯ３への結合の約１０％未満である。ある実施態様において、ＲＳＰＯ３へ結合する抗体は、≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１ｎＭ、又は≦０．００１ｎＭ（例えば、１０−８Ｍ以下、例えば、１０−８Ｍから１０−１３Ｍ、例えば、１０−９Ｍから１０−１３Ｍ）の解離定数（Ｋｄ）を有する。ある実施態様において、抗ＲＳＰＯ３抗体は、異なる種由来のＲＳＰＯ３間で保存されているＲＳＰＯ３のエピトープに結合する。
【００４５】
用語「抗ＲＳＰＯ２／３抗体」及び「ＲＳＰＯ２及びＲＳＰＯ３に結合する抗体」は、抗体が、ＲＳＰＯ２及びＲＳＰＯ３を標的とし、診断薬剤及び／又は治療的薬剤として有用であるように、十分な親和性でＲＳＰＯ２及びＲＳＰＯ３に結合することができる抗体を指す。一実施態様において、抗ＲＳＰＯ２／３抗体の、無関係な、非ＲＳＰＯ２又は非ＲＳＰＯ３タンパク質への結合の程度は、例えば、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）によって測定される場合、抗体のＲＳＰＯ２及びＲＳＰＯ３への結合の約１０％未満である。ある実施態様において、ＲＳＰＯ２及びＲＳＰＯ３へ結合する抗体は、≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１ｎＭ、又は≦０．００１ｎＭ（例えば、１０−８Ｍ以下、例えば、１０−８Ｍから１０−１３Ｍ、例えば、１０−９Ｍから１０−１３Ｍ）の解離定数（Ｋｄ）を有する。ある実施態様において、抗ＲＳＰＯ２／３抗体は、異なる種由来のＲＳＰＯ２及び／又はＲＳＰＯ３間で保存されているＲＳＰＯ２及び／又はＲＳＰＯ３のエピトープに結合する。
【００４６】
本明細書における用語「抗体」は最も広い意味で用いられ、様々な抗体構造を包含し、限定されないが、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多特異性抗体（例えば二重特異性抗体）、及び、所望の抗原結合活性を示す限り、抗体断片を含む。
【００４７】
「抗体断片」は、インタクトな抗体が結合する抗原を結合するインタクトな抗体の一部を含むインタクトな抗体以外の分子を指す。抗体断片の例としては、限定されないが、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２；ダイアボディ；直鎖状抗体；単鎖抗体分子（例えば、ｓｃＦｖ）；及び抗体断片から形成される多重特異性抗体を含む。  
【００４８】
参照抗体「と結合を競合する抗体」とは、競合アッセイにおいて５０％以上、参照抗体のその抗原への結合をブロックする抗体を指し、逆に、参照抗体は、競合アッセイにおいて５０％以上、その抗体のその抗原への結合をブロックする。典型的な競合アッセイが、本明細書において提供される。
【００４９】
用語「キメラ」抗体は、重鎖及び／又は軽鎖の一部分が特定の起源又は種から由来し、一方重鎖及び／又は軽鎖の残りは異なる起源又は種から由来する抗体を指す。
【００５０】
抗体の「クラス」は、その重鎖が保有する定常ドメイン又は定常領域のタイプを指す。抗体の５つの主要なクラス：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ及びＩｇＭがあり、それらの幾つかは更にサブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１及びＩｇＡ２に分類される。免疫グロブリンの異なるクラスに対応する重鎖定常ドメインは、それぞれα、δ、ε、γ、及びμと呼ばれる。
【００５１】
「エフェクター機能」とは、抗体のアイソタイプにより変わる、抗体Ｆｃ領域に起因する生物学的活性を指す。抗体のエフェクター機能の例には、Ｃ１ｑ結合及び補体依存性細胞障害（ＣＤＣ）；Ｆｃ受容体結合；抗体依存性細胞媒介性細胞障害（ＡＤＣＣ）；貪食作用；細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体）のダウンレギュレーション；及びＢ細胞活性化が含まれる。
【００５２】
用語「Ｆｃ領域」は、定常領域の少なくとも一部を含む、免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義するために使用される。その用語は、天然配列Ｆｃ領域と変異体Ｆｃ領域を含む。一実施態様において、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域はＣｙｓ２２６又はＰｒｏ２３０から重鎖のカルボキシル末端まで伸長する。しかし、Ｆｃ領域のＣ末端リジン（Ｌｙｓ４４７）は、存在しても、存在しなくてもよい。本明細書に明記されていない限り、Ｆｃ領域又は定常領域内のアミノ酸残基の番号付けは、Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1991に記載されるように、ＥＵインデックスとも呼ばれるＥＵ番号付けシステムに従う。
【００５３】
「フレームワーク」又は「ＦＲ」は、超可変領域（ＨＶＲ）残基以外の可変ドメイン残基を指す。可変ドメインのＦＲは、一般的に４つのＦＲのドメイン：ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、及びＦＲ４からなる。したがって、ＨＶＲ配列及びＦＲ配列は、一般に、ＶＨ（又はＶＬ）中の次の配列、ＦＲ１−Ｈ１（Ｌ１）−ＦＲ２−Ｈ２（Ｌ２）−ＦＲ３−Ｈ３（Ｌ３）−ＦＲ４に出現する。
【００５４】
用語「全長抗体」、「インタクトな抗体」、及び「全抗体」は、本明細書では、互換的に使用されて、天然の抗体構造と実質的に類似している構造を有する、又は本明細書で定義したＦｃ領域を含む重鎖を有する抗体を指す。
【００５５】
用語「宿主細胞」、「宿主細胞株」及び「宿主細胞培養」は互換的に使用され、外因性の核酸が導入された細胞を指し、そのような細胞の子孫を含める。宿主細胞は、「形質転換体」及び「形質転換された細胞」を含み、継代の数に関係なく、それに由来する初代形質転換細胞及び子孫が含まれる。子孫は、親細胞と、核酸含有物において完全に同一ではなく、変異を含む場合もある。元来の形質転換細胞において、スクリーニング又は選択された場合に、同様の機能又は生物活性を有する変異子孫がここに含まれる。
【００５６】
「ヒト抗体」は、ヒト又はヒト細胞により産生されるか、又はヒト抗体のレパートリー又は他のヒト抗体をコードする配列を利用した非ヒト起源に由来する抗体のアミノ酸配列に対応するアミノ酸配列を有するものである。ヒト抗体のこの定義は、非ヒト抗原結合残基を含むヒト化抗体を特に除外する。
【００５７】
「ヒトコンセンサスフレームワーク」とは、ヒト免疫グロブリンＶＬ又はＶＨフレームワーク配列の選択において最も一般的に存在するアミノ酸残基を表すフレームワークである。一般的には、ヒト免疫グロブリンＶＬ又はＶＨ配列の選択は、可変ドメイン配列のサブグループからのものである。一般的には、配列のサブグループは、Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, NIH Publication 91-3242, Bethesda MD (1991), vols. 1-3にあるサブグループである。一実施態様において、ＶＬについて、サブグループは上掲のＫａｂａｔらに記載のサブグループカッパＩである。一実施態様において、ＶＨについて、サブグループは上掲のＫａｂａｔらにあるサブグループＩＩＩである。
【００５８】
「ヒト化」抗体は、非ヒトＨＶＲ由来のアミノ酸残基、及びヒトＦＲ由来アミノ酸残基を含むキメラ抗体を指す。ある実施態様において、ヒト化抗体は、少なくとも一つ、典型的には二つの可変ドメインの実質的に全てを含み、ＨＶＲ（例えば、ＣＤＲ）の全て又は実質的に全てが、非ヒト抗体のものに対応し、ＦＲの全て又は実質的に全てが、ヒト抗体のものに対応する。ヒト化抗体は、任意選択的に、ヒト抗体に由来する抗体定常領域の少なくとも一部を含んでいてもよい。抗体の「ヒト化型」、例えば、非ヒト抗体は、ヒト化を遂げた抗体を指す。
【００５９】
本明細書で使用される用語「超可変領域」又は「ＨＶＲ」は、配列が超可変（「相補性決定領域」又は「ＣＤＲ」）であるか、及び／又は構造的に定義されたループ（「超可変ループ」）を形成するか、及び／又は抗原接触残基（「抗原接触」）を含む抗体可変ドメインの各領域を指す。一般的に、抗体は、６つのＨＶＲ：ＶＨ（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）に３つ、及びＶＬ（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３）に３つを含む。本明細書における典型的なＨＶＲは、
（ａ）アミノ酸残基２６−３２（Ｌ１）、５０−５２（Ｌ２）、９１−９６（Ｌ３）、２６−３２（Ｈ１）、５３−５５（Ｈ２）、及び９６−１０１（Ｈ３）で生じる超可変ループ（Chothia and Lesk, J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)）；
（ｂ）アミノ酸残基２４−３４（Ｌ１）、５０−５６（Ｌ２）、８９−９７（Ｌ３）、３１−３５ｂ（Ｈ１）、５０−６５（Ｈ２）、及び９５−１０２（Ｈ３）で生じるＣＤＲ（Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991)）；
（ｂ）アミノ酸残基２７ｃ−３６（Ｌ１）、４６−５５（Ｌ２）、８９−９６（Ｌ３）、３０−３５ｂ（Ｈ１）、４７−５８（Ｈ２）、及び９３−１０１（Ｈ３）で生じる抗原接触（MacCallum et al. J. Mol. Biol. 262: 732-745 (1996)）；及び
（ｄ）ＨＶＲアミノ酸残基４６−５６（Ｌ２）、４７−５６（Ｌ２）、４８−５６（Ｌ２）、４９−５６（Ｌ２）、２６−３５（Ｈ１）、２６−３５ｂ（Ｈ１）、４９−６５（Ｈ２）、９３−１０２（Ｈ３）、及び９４−１０２（Ｈ３）を含む、（ａ）、（ｂ）、及び／又は（ｃ）の組合せ
を含む。
【００６０】
一実施態様において、ＨＶＲ残基は、図９Ａ−Ｂ及び／又は図１０Ａ−Ｂ、又は本明細書の他の箇所で同定されるものを含む。
【００６１】
特に断らない限り、可変ドメイン内のＨＶＲ残基及び他の残基（例えば、ＦＲ残基）は、上掲のＫａｂａｔらに従い、本明細書において番号が付けられる。
【００６２】
用語「可変領域」又は「可変ドメイン」は、抗体の抗原への結合に関与する抗体の重鎖又は軽鎖のドメインを指す。天然型抗体の可変重鎖ドメイン及び軽鎖（それぞれＶＨ及びＶＬ）は、４つの保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）と３つの超可変領域（ＨＶＲ）を含む各ドメインを有し、一般的に似たような構造を有する。（例えば、Kindt et al. Kuby Immunology, 第６版， W.H. Freeman and Co., 91頁 (2007)を参照）。単一のＶＨ又はＶＬドメインが、抗原結合特異性を付与するのに十分であり得る。更に、抗原に結合する抗体由来のＶＨ又はＶＬドメインを使用して、それぞれ相補的なＶＬ又はＶＨドメインのライブラリーをスクリーニングし、特定の抗原を結合する抗体を単離することができる。例えば、 Portolano et al., J. Immunol. 150:880-887 (1993); Clarkson et al., Nature 352:624-628 (1991)を参照。
【００６３】
本明細書で使用される、用語「ベクター」は、それがリンクされている別の核酸を伝播することができる核酸分子を指す。この用語には、自己複製核酸構造物としてのベクター及びそれが導入されている宿主細胞のゲノムに組み込まれたベクターが含まれる。ある種のベクターは、作動可能に連結された核酸の発現を指令することができる。このようなベクターは、本明細書では「発現ベクター」と言う。
【００６４】
「イムノコンジュゲート」は、一以上の異種分子にコンジュゲートした抗体であり、限定されないが、細胞傷害剤を含む。
【００６５】
「単離された」抗体は、その自然環境の成分から分離されたものである。幾つかの実施態様において、抗体は、例えば、電気泳動（例えば、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、等電点電気泳動（ＩＥＦ）、キャピラリー電気泳動）又はクロマトグラフィー（例えば、イオン交換又は逆相ＨＰＬＣ）により決定される場合、９５％以上又は９９％の純度に精製される。純度の評価法の総説としては、例えば、Flatman et al., J. Chromatogr. B 848:79-87 (2007)を参照のこと。
【００６６】
「単離された」核酸は、その自然環境の成分から分離された核酸分子を指す。単離された核酸としては、核酸分子を通常含む細胞に含まれる核酸分子が挙げられるが、核酸分子は、染色体外に、又はその天然の染色体上の位置とは異なる染色体上の位置にも存在する。  
【００６７】
「抗ＲＳＰＯ２抗体をコードする単離された核酸」は、抗体の軽鎖及び重鎖（又はその断片）をコードする１種又は複数の核酸分子を指す。これには、単一のベクター又は別々のベクター中のそうした核酸分子（複数可）が含まれ、そうした核酸分子（複数可）は、宿主細胞の１か所又は複数の位置に存在する。
【００６８】
「抗ＲＳＰＯ３抗体をコードする単離された核酸」は、抗体の軽鎖及び重鎖（又はその断片）をコードする１種又は複数の核酸分子を指す。これには、単一のベクター又は別々のベクター中のそうした核酸分子（複数可）が含まれ、そうした核酸分子（複数可）は、宿主細胞の１か所又は複数の位置に存在する。
【００６９】
本明細書で使用される用語「モノクローナル抗体」とは、実質的に均一な抗体の集団から得られる抗体を意味し、すなわち、例えば、天然に生じる変異を含み、又はモノクローナル抗体製剤の製造時に発生し、一般的に少量で存在している変異体などの、可能性のある変異体抗体を除き、集団を構成する個々の抗体は同一であり、及び／又は同じエピトープに結合する。異なる決定基（エピトープ）に対する異なる抗体を典型的に含むポリクローナル抗体の調製物とは異なり、モノクローナル抗体の調製物の各モノクローナル抗体は、抗原の単一の決定基に対するものである。「モノクローナル」なる修飾語句は、抗体の、実質的に均一な抗体の集団から得られたものであるという特性を示し、抗体を何か特定の方法で生産しなければならないと解釈されるべきものではない。例えば、本発明に従って使用されるモノクローナル抗体は、これらに限定されないが、ハイブリドーマ法、組換えＤＮＡ法、ファージディスプレイ法、及びヒト免疫グロブリン座の全て又は一部を含むトランスジェニック動物を利用する方法を含めた種々の手法によって作製することができ、モノクローナル抗体を作製するためのそうした方法及び他の例示的方法は、本明細書に記載されている。
【００７０】
「ネイキッド抗体」とは、異種の部分（例えば、細胞傷害性部分）又は放射性標識にコンジュゲートしていない抗体を指す。ネイキッド抗体は薬学的製剤中に存在してもよい。
【００７１】
「天然型抗体」は、天然に生じる様々な構造をとる免疫グロブリン分子を指す。例えば、天然型ＩｇＧ抗体は、ジスルフィド結合している２つの同一の軽鎖と２つの同一の重鎖から成る、約１５０，０００ダルトンのヘテロ四量体糖タンパク質である。Ｎ末端からＣ末端に、各重鎖は、可変重鎖ドメイン又は重鎖可変ドメインとも呼ばれる可変領域（ＶＨ）、続いて３つの定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３）を有する。同様に、Ｎ末端からＣ末端に、各軽鎖は、可変軽鎖ドメイン又は軽鎖可変ドメインとも呼ばれる可変領域（ＶＬ）、続いて軽鎖定常領域とも呼ばれる定常軽鎖（ＣＬ）ドメインを有する。抗体の軽鎖は、その定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、カッパ（κ）とラムダ（λ）と呼ばれる、２つのタイプの何れかに割り当てることができる。
【００７２】
用語「添付文書」は、効能、用法、用量、投与、併用療法、禁忌についての情報、及び／又はそのような治療用製品の使用に関する警告を含む、治療用製品の商用パッケージに慣習的に含まれている説明書を指すために使用される。
【００７３】
参照ポリペプチド配列に関する「パーセント（％）アミノ酸配列同一性」は、配列を整列させ、最大のパーセント配列同一性を得るために必要ならば間隙を導入した後、如何なる保存的置換も配列同一性の一部と考えないとした、参照ポリペプチドのアミノ酸残基と同一である候補配列中のアミノ酸残基のパーセントとして定義される。パーセントアミノ酸配列同一性を決定する目的のためのアラインメントは、当業者の技量の範囲にある種々の方法、例えばＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ−２、ＡＬＩＧＮ、又はＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアのような公に入手可能なコンピュータソフトウェアを使用することにより達成可能である。当業者であれば、比較される配列の全長に対して最大のアラインメントを達成するために必要な任意のアルゴリズムを含む、アラインメントを測定するための適切なパラメータを決定することができる。しかし、ここでの目的のためには、％アミノ酸配列同一性値は、配列比較コンピュータプログラムＡＬＩＧＮ−２を用いて得られる。ＡＬＩＧＮ−２配列比較コンピュータプログラムはジェネンテク社によって作成され、ソースコードは米国著作権庁、Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ Ｄ．Ｃ．，２０５５９に使用者用書類とともに提出され、米国著作権登録番号ＴＸＵ５１００８７の下で登録されている。ＡＬＩＧＮ−２プログラムはジェネンテク社、Ｓｏｕｔｈ Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａを通して公的に入手可能であり、ソースコードからコンパイルしてもよい。ＡＬＩＧＮ−２プログラムは、ＵＮＩＸ(登録商標)オペレーティングシステム、特にデジタルＵＮＩＸ(登録商標) Ｖ４．０Ｄでの使用のためにコンパイルされる。全ての配列比較パラメータは、ＡＬＩＧＮ−２プログラムによって設定され変動しない。
【００７４】
アミノ酸配列比較にＡＬＩＧＮ−２が用いられる状況では、与えられたアミノ酸配列Ａの、与えられたアミノ酸配列Ｂとの、又はそれに対する％アミノ酸配列同一性（あるいは、与えられたアミノ酸配列Ｂと、又はそれに対して或る程度の％アミノ酸配列同一性を持つ又は含む与えられたアミノ酸配列Ａと言うこともできる）は次のように計算される：
分率Ｘ／Ｙの１００倍
ここで、Ｘは、Ａ及びＢのプログラムアラインメントにおいて、配列アラインメントプログラムＡＬＩＧＮ−２によって同一であると一致したスコアのアミノ酸残基の数であり、ＹはＢの全アミノ酸残基の全数である。アミノ酸配列Ａの長さがアミノ酸配列Ｂの長さと一致しない場合、ＡのＢに対する％アミノ酸配列同一性は、ＢのＡに対する％アミノ酸配列同一性とは一致しないと評価されるであろう。特に断らない限りは、ここで使用される全ての％アミノ酸配列同一性値は、直前のパラグラフに記載したように、ＡＬＩＧＮ−２コンピュータプログラムを用いて得られる。
【００７５】
用語「Ｒスポンジン転座」及び「ＲＳＰＯ転座」とは本明細書では、例えば、Ｒスポンジン、変異体、もしくはその断片又は第二の遺伝子、変異体、もしくはその断片を含む切れた染色体の一部が異なる染色体位置、例えば、Ｒスポンジン天然位置とは異なる染色体位置又は第二の遺伝子の天然位置とは異なるＲスポンジン天然位置中及び／もしくはその周囲の染色体位置に再結合するＲスポンジンのことである。Ｒスポンジン転座は、ＲＳＰＯ１転座、ＲＳＰＯ２転座、ＲＳＰＯ３転座、及び／又はＲＳＰＯ４転座であってもよい。
【００７６】
用語「Ｒスポンジン転座融合ポリヌクレオチド」及び「ＲＳＰＯ転座融合ポリヌクレオチド」とは本明細書では、Ｒスポンジン転座遺伝子産物又は融合ポリヌクレオチドの核酸配列のことである。Ｒスポンジン転座融合ポリヌクレオチドは、ＲＳＰＯ１転座融合ポリヌクレオチド、ＲＳＰＯ２転座融合ポリヌクレオチド、ＲＳＰＯ３転座融合ポリヌクレオチド、及び／又はＲＳＰＯ４転座融合ポリヌクレオチドであってもよい。用語「Ｒスポンジン転座融合ポリペプチド」及び「ＲＳＰＯ転座融合ポリペプチド」とは本明細書では、Ｒスポンジン転座遺伝子産物又は融合ポリヌクレオチドのアミノ酸配列のことである。Ｒスポンジン転座融合ポリペプチドは、ＲＳＰＯ１転座融合ポリペプチド、ＲＳＰＯ２転座融合ポリペプチド、ＲＳＰＯ３転座融合ポリペプチド、及び／又はＲＳＰＯ４転座融合ポリペプチドであってもよい。
【００７７】
用語「検出」は直接的検出と間接的検出を含む、いかなる検出手段でも含む。
【００７８】
本明細書で使用される用語「バイオマーカー」とは、試料中で検出することができる、例えば、予測的、診断的及び／又は予後的指標物質のことである。バイオマーカーは、ある種の分子的、病態的、組織学的、及び／又は臨床的特長に特徴のある疾患又は障害（例えば、癌）の特定のサブタイプの指標物質としての働きをすることができる。幾つかの実施態様では、バイオマーカーは遺伝子である。幾つかの実施態様では、バイオマーカーは遺伝子の変異体（例えば、変異及び／又は多型）である。幾つかの実施態様では、バイオマーカーは転座である。バイオマーカーには、ポリヌクレオチド（例えば、ＤＮＡ及び／又はＲＮＡ）、ポリペプチド、ポリペプチドとポリヌクレオチド修飾（例えば、翻訳後修飾）、炭水化物、及び／又は糖脂質ベースの分子マーカーが含まれるが、これらに限定されない。
【００７９】
個体にとっての臨床的利益の増加と関連するバイオマーカーの「存在」、「量」、又は「レベル」は、試料における検出可能なレベルである。これらは当業者に公知であり本明細書でも開示されている方法により測定することができる。評価されるバイオマーカーの発現レベル又は量を使用して、治療に対する応答を判定することができる。
【００８０】
用語「発現のレベル」と「発現レベル」は一般に互換的に使用され、一般には試料中のバイオマーカーの量のことである。「発現」とは一般には、（例えば、遺伝子にコードされた及び／又はエピジェネティックな）情報が細胞内に存在し作用する構造物に変換されるプロセスのことである。したがって、本明細書で使用されるように、「発現」とはポリヌクレオチドへの転写、ポリペプチドへの翻訳、又はポリヌクレオチド及び／もしくはポリペプチド修飾（例えば、ポリペプチドの翻訳後修飾）さえも指すことがある。転写されたポリヌクレオチド、翻訳されたポリペプチド、又はポリヌクレオチド及び／もしくはポリペプチド修飾（例えば、ポリペプチドの翻訳後修飾）の断片も、選択的スプライシングにより生成された転写物又は分解した転写物由来であれ、例えば、タンパク質分解によりポリペプチドの翻訳後プロセシング由来であれ、発現されたと見なすことにする。「発現された遺伝子」には、ｍＲＮＡとしてポリヌクレオチドに転写され、その後ポリペプチドに翻訳される遺伝子、及びＲＮＡに転写されるがポリペプチドには翻訳されない（例えば、トランスファーＲＮＡ及びリボソームＲＮＡ）遺伝子も含まれる。
【００８１】
「上昇した発現」、「上昇した発現レベル」、又は「上昇したレベル」とは、疾患又は障害（例えば、癌）に罹っていない個体（単数又は複数）などの対照、又は内部対照（例えば、ハウスキーピングバイオマーカー）と比べて個体におけるバイオマーカーの増加した発現又は増加したレベルのことである。
【００８２】
「減少した発現」、「減少した発現レベル」、又は「減少したレベル」とは、疾患又は障害（例えば、癌）に罹っていない個体（単数又は複数）などの対照、又は内部対照（例えば、ハウスキーピングバイオマーカー）と比べて個体におけるバイオマーカーの減少した発現又は減少したレベルのことである。
【００８３】
用語「ハウスキーピングバイオマーカー」とは、典型的にはあらゆる細胞型に類似して存在するバイオマーカー又はバイオマーカーの群（例えば、ポリヌクレオチド及び／又はポリペプチド）のことである。幾つかの実施態様では、ハウスキーピングバイオマーカーは「ハウスキーピング遺伝子」である。「ハウスキーピング遺伝子」とは本明細書では、その活性が細胞機能の維持に不可欠なタンパク質をコードし、典型的にはあらゆる細胞型に類似して存在する遺伝子又は遺伝子の群のことである。
【００８４】
本明細書で使用される「増幅」とは一般に、所望の配列の複数のコピーを産生するプロセスのことである。「複数のコピー」は少なくとも２つのコピーを意味する。「コピー」は鋳型配列に対して必ずしも完全な配列相補性又は同一性を意味するわけではない。例えば、コピーには、デオキシイノシンなどの類似物、意図的配列変化（例えば、鋳型にハイブリダイズすることが可能であるが相補的ではない配列を含むプライマーを通じて導入される配列変化）、及び／又は増幅中に生じる配列エラーが含まれうる。
【００８５】
用語「診断」は本明細書では、分子状態又は病理学的状態、疾患又は状態（例えば、癌）の同定又は分類を指すのに使用される。例えば、「診断」は特定種類の癌の同定を指すことがある。「診断」は、例えば、組織病理学的基準による、又は分子特長（例えば、バイオマーカー（例えば、特定の遺伝子又は前記遺伝子によりコードされるタンパク質）のうちの１つ又は組合せの発現に特徴のあるサブタイプ）による癌の特定のサブタイプの分類を指すこともある。
【００８６】
試料には、一次細胞もしくは培養細胞又は細胞系統、細胞上澄み、細胞可溶化物、血小板、血清、血漿、硝子体液、リンパ液、滑液、卵胞液、精液、羊水、乳、全血、血液由来細胞、尿、脳脊髄液、唾液、痰、涙、発汗、粘液、腫瘍可溶化物、及び組織培養培地、均質化された組織などの組織抽出物、腫瘍組織、細胞抽出物、ならびにその組合せが含まれるがこれらに限定されない。
【００８７】
「基準試料」、「基準細胞」、「基準組織」、「対照試料」、「対照細胞」、又は「対照組織」とは、本明細書で使用されるように、比較目的で使用される試料、細胞、組織、標準、又はレベルのことである。一実施態様では、基準試料、基準細胞、基準組織、対照試料、対照細胞、又は対照組織は、同じ被験体又は個体の身体（例えば、組織又は細胞）の健康な及び／又は非疾患部分から得られる。例えば、疾患細胞又は組織に隣接する健康な及び／又は非疾患性細胞又は組織（例えば、腫瘍に隣接する細胞又は組織）である。別の実施態様では、基準試料は同じ被験体又は個体の身体の非治療組織及び／又は細胞から得られる。更に別の実施態様では、基準試料、基準細胞、基準組織、対照試料、対照細胞、又は対照組織は被験体でも個体でもない個体の身体（例えば、組織又は細胞）の健康な及び／又は非疾患性部分から得られる。更に別の実施態様では、基準試料、基準細胞、基準組織、対照試料、対照細胞、又は対照組織は、被験体でも個体でもない個体の身体の非治療組織及び／又は細胞から得られる。
【００８８】
語句「実質的に類似する」は、本明細書で使用されるように、当業者であれば２つの値の差を、前記値（例えば、Ｋｄ値）により測定される生物学的特徴という文脈内で統計的に有意ではないと見なすほど２つの数値（一般には、１つは分子に関連しもう１つは基準／コンパレーター分子に関連する）間の十分高度な類似性のことである。前記２つの値の差は、基準／コンパレーター値の関数として、例えば、約２０％未満、約１０％未満、及び／又は約５％未満であってもよい。
【００８９】
語句「実質的に異なる」とは、当業者であれば２つの値の差を、前記値（例えば、Ｋｄ値）により測定される生物学的特徴という文脈内で統計的に有意であると見なすほど２つの数値（一般には、１つは分子に関連しもう１つは基準／コンパレーター分子に関連する）間の十分に高度な差のことである。前記２つの値の差は、基準／コンパレーター分子の値の関数として、例えば、約１０％よりも大きい、約２０％よりも大きい、約３０％よりも大きい、約４０％よりも大きい、及び／又は約５０％よりも大きくてもよい。
【００９０】
本明細書で使用される用語「細胞傷害剤」とは、細胞機能を阻害するもしくは妨害するかつ／又は細胞死もしくは破壊を引き起こす物質のことである。細胞傷害剤には、放射性同位元素（例えば、Ａｔ２１１、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、Ｓｍ１５３、Ｂｉ２１２、Ｐ３２、Ｐｂ２１２及びＬｕの放射性同位元素）；化学療法剤もしくは薬物（例えば、メトトレキセート、アドリアマイシン、ビンカアルカロイド（ビンクリスチン、ビンブラスチン、エトポシド）、ドキソルビシン、メルファラン、マイトマイシンＣ、クロラムブシル、ダウノルビシンもしくは他の挿入剤）；増殖阻害剤；核酸分解酵素などの酵素及びその断片；抗生物質；細菌、真菌、植物もしくは動物起源の小分子毒素もしくは酵素的に活性な毒素などの毒素、その断片及び／もしくは変異体も含む；ならびに下に開示される様々な抗腫瘍もしくは抗癌剤が含まれるがこれらに限定されない。
【００９１】
「化学療法剤」とは、癌の治療に有用な化学化合物のことである。化学療法剤の例には、チオテパ及びシクロホスファミド（ＣＹＴＯＸＡＮ（登録商標））などのアルキル化剤；ブスルファン、インプロスルファン及びピポスルファンなどのアルキルスルホン酸塩；ベンゾドーパ（ｂｅｎｚｏｄｏｐａ）、カルボコン、メツレドーパ（ｍｅｔｕｒｅｄｏｐａ）、及びウレドーパ（ｕｒｅｄｏｐａ）などのアジリジン；アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホルアミド、トリエチレンチオホスホルアミド（ｔｒｉｅｔｈｙｌｅｎｅｔｈｉｏｐｈｏｓｐｈｏｒａｍｉｄｅ）、トリメチロメラミンを含むエチレンイミン及びメチラメラミン（ｍｅｔｈｙｌａｍｅｌａｍｉｎｅｓ）；アセトゲニン（特に、ブラタシン及びブラタシノン（ｂｕｌｌａｔａｃｉｎｏｎｅ））；デルタ−９−テトラヒドロカンナビノール（ドロナビノール、ＭＡＲＩＮＯＬ（登録商標））；ベータ−ラパコン；ラパコール；コルヒチン、ベツリン酸；カンプトテシン（合成類似物トポテカン（ＨＹＣＡＭＴＩＮ（登録商標））、ＣＰＴ−１１（イリノテカン、ＣＡＭＰＴＯＳＡＲ（登録商標））、アセチルカンプトテシン、スコポレチン、及び９−アミノカンプトテシンを含む）；ブリオスタチン；カリスタチン（ｃａｌｌｙｓｔａｔｉｎ）；ＣＣ−１０６５（そのアドゼレシン、カルゼルシン及びビゼレシン合成類似物を含む）；ポドフィロトキシン；ポドフィリン酸（ｐｏｄｏｐｈｙｌｌｉｎｉｃ ａｃｉｄ）；テニポシド；クリプトフィシン（特に、クリプトフィシン１及びクリプトフィシン８）；ドラスタチン；デュオカルマイシン（合成類似物ＫＷ−２１８９及びＣＢ１−ＴＭ１を含む）；エリュテロビン；パンクラチスタチン（ｐａｎｃｒａｔｉｓｔａｔｉｎ）；サルコジクチイン（ｓａｒｃｏｄｉｃｔｙｉｎ）；スポンギスタチン（ｓｐｏｎｇｉｓｔａｔｉｎ）；クロラムブシル、クロルナファジン、クロロホスファミド（ｃｈｌｏｒｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、塩酸メクロレタミンオキシド、メルファラン、ノベムビシン（ｎｏｖｅｍｂｉｃｈｉｎ）；フェネステリン（ｐｈｅｎｅｓｔｅｒｉｎｅ）、プレドニマスチン、トロホスファミド、ウラシルマスタードなどのナイトロジェンマスタード；カルムスチン、クロロゾトシン、フォテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、及びラニムスチンなどのニトロソウレア；エンジイン抗生物質などの抗生物質（例えば、カリケアマイシン、特に、カリケアマイシンガンマ１Ｉ及びカリケアマイシンオメガＩ１（例えば、Ｎｉｃｏｌａｏｕら、Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ Ｉｎｔｌ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．、３３：１８３〜１８６（１９９４）参照）；ＣＤＰ３２３、経口アルファ−４インテグリン阻害剤；ダイネミシン（ｄｙｎｅｍｉｃｉｎ）Ａを含むダイネミシン；エスペラミシン；ならびにネオカルジノスタチンクロモフォア及び関連色素タンパク質エネジイン抗生物質クロモフォア、アクラシノマイシン（ａｃｌａｃｉｎｏｍｙｓｉｎｓ）、アクチノマイシン、オースラマイシン（ａｕｔｈｒａｍｙｃｉｎ）、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カラビシン（ｃａｒａｂｉｃｉｎ）、カルミノマイシン、カルジノ���ィリン、クロモマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン（ｄｅｔｏｒｕｂｉｃｉｎ）、６−ジアゾ−５−オキソ−Ｌ−ノルロイシン、ドキソルビシン（ＡＤＲＩＡＭＹＣＩＮ（登録商標）、モルフォリノ−ドキソルビシン、シアノモルフォリノ−ドキソルビシン、２−ピロリノ（ｐｙｒｒｏｌｉｎｏ）−ドキソルビシン、ドキソルビシンＨＣｌリポソームインジェクション（ＤＯＸＩＬ（登録商標））、リポソーマルドキソルビシン（ｌｉｐｏｓｏｍａｌ ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ）ＴＬＣ Ｄ−９９（ＭＹＯＣＥＴ（登録商標））、ペグ化リポソーマルドキソルビシン（ＣＡＥＬＹＸ（登録商標））、及びデオキシドキソルビシンを含む）、エピルビシン、エソルビシン（ｅｓｏｒｕｂｉｃｉｎ）、イダルビシン、マルセロマイシン、マイトマイシンＣなどのマイトマイシン、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポルフィロマイシン、ピューロマイシン、ケラマイシン（ｑｕｅｌａｍｙｃｉｎ）、ロドルビシン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチン、ゾルビシン；メトトレキセート、ゲムシタビン（ＧＥＭＺＡＲ（登録商標））、テガフール（ＵＦＴＯＲＡＬ（登録商標））、カペシタビン（ＸＥＬＯＤＡ（登録商標））、エポチロン、及び５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）などの抗代謝剤；デノプテリン、メトトレキセート、プテロプテリン、トリメトレキセートなどの葉酸類似物；フルダラビン、６−メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニンなどのプリン類似物；アンシタビン、アザシチジン、６−アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジンなどのピリミジン類似物；カルステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトンなどのアンドロゲン；アミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタンなどの抗アドレナル（ａｎｔｉ−ａｄｒｅｎａｌｓ）；フォリン酸などの葉酸補液；アセグラトン；アルドホスファミドグリコシド（ａｌｄｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ ｇｌｙｃｏｓｉｄｅ）；アミノレブリン酸；エニルウラシル；アムサクリン；ベストラブシル（ｂｅｓｔｒａｂｕｃｉｌ）；ビスアントレン；エダトレキセート；デフォファミン（ｄｅｆｏｆａｍｉｎｅ）；デメコルシン；ジアジクオン；エルフロルニチン（ｅｌｆｏｒｎｉｔｈｉｎｅ）；酢酸エリプチニウム：エポチロン；エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキシ尿素；レンチナン；ロニダイニン（ｌｏｎｉｄａｉｎｉｎｅ）；マイタンシン及びアンサマイトシンなどのメイタンシノイド；ミトグアゾン；ミトキサントロン；モピダンモール（ｍｏｐｉｄａｎｍｏｌ）；ニトラエリン（ｎｉｔｒａｅｒｉｎｅ）；ペントスタチン；フェナメット（ｐｈｅｎａｍｅｔ）；ピラルビシン；ロソキサントロン；２−エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＳＫ（登録商標）ポリサッカライド複合体（ＪＨＳ天然物、Ｅｕｇｅｎｅ、ＯＲ）；ラゾキサン；リゾキシン；シゾフィラン；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジコン；２，２’，２’−トリクロロトリエチルアミン；トリコテセン（特に、Ｔ−２毒素、ベラ���リン（ｖｅｒｒａｃｕｒｉｎ）Ａ、ロリジンＡ及びアングイジン）；ウレタン；ビンデシン（ＥＬＤＩＳＩＮＥ（登録商標）、ＦＩＬＤＥＳＩＮ（登録商標））；ダカルバジン；マンノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン（ｇａｃｙｔｏｓｉｎｅ）；アラビノシド（「Ａｒａ−Ｃ」）；チオテパ；タキソイド、例えば、パクリタキセル（ＴＡＸＯＬ（登録商標））、パクリタキセルのアルブミン操作ナノ粒子製剤（ＡＢＲＡＸＡＮＥ（商標））、及びドセタキセル（ＴＡＸＯＴＥＲＥ（登録商標））；クロランブシル（ｃｈｌｏｒａｎｂｕｃｉｌ）；６−チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキセート；シスプラチン、オキサリプラチン（例えば、ＥＬＯＸＡＴＩＮ（登録商標））、及びカルボプラチンなどの白金薬剤；ビンブラスチン（ＶＥＬＢＡＮ（登録商標））、ビンクリスチン（ＯＮＣＯＶＩＮ（登録商標））、ビンデシン（ＥＬＤＩＳＩＮＥ（登録商標）、ＦＩＬＤＥＳＩＮ（登録商標））、及びビノレルビン（ＮＡＶＥＬＢＩＮＥ（登録商標））を含む、チューブリン重合が微小管を形成するのを妨げるビンカ；エトポシド（ＶＰ−１６）；イホスファミド；ミトキサントロン；ロイコボリン；ノバントロン（ｎｏｖａｎｔｒｏｎｅ）；エダトレキセート；ダウノマイシン；アミノプテリン；イバンドロン酸；トポイソメラーゼ阻害剤ＲＥＳ ２０００；ジフルオロメチルオルニチン（ＤＭＦＯ）；ベキサロテン（ＴＡＲＧＲＥＴＩＮ（登録商標））を含む、レチノイン酸などのレチノイド；クロドロン酸（例えば、ＢＯＮＥＦＯＳ（登録商標）又はＯＳＴＡＣ（登録商標））、エチドロン酸（ＤＩＤＲＯＣＡＬ（登録商標））、ＮＥ−５８０９５、ゾレドロン酸／ゾレドロネート（ＺＯＭＥＴＡ（登録商標））、アレンドロン酸（ＦＯＳＡＭＡＸ（登録商標））、パミドロン酸（ＡＲＥＤＩＡ（登録商標））、チルドロン酸（ＳＫＥＬＩＤ（登録商標））、又はリセドロン酸（ＡＣＴＯＮＥＬ（登録商標））などのビスホスホネート；トロキサシタビン（１，３−ジオキソランヌクレオシドシトシン類似物）；アンチセンスオリゴヌクレオチド、特に、例えば、ＰＫＣ−アルファ、Ｒａｆ、Ｈ−Ｒａｓ、及び上皮増殖因子受容体（ＥＧＦ−Ｒ）などの、異常な細胞増殖に関係するシグナル伝達経路における遺伝子発現を阻害するアンチセンスオリゴヌクレオチド；ＴＨＥＲＡＴＯＰＥ（登録商標）ワクチン及び遺伝子療法ワクチン、例えば、ＡＬＬＯＶＥＣＴＩＮ（登録商標）ワクチン、ＬＥＵＶＥＣＴＩＮ（登録商標）ワクチン、及びＶＡＸＩＤ（登録商標）ワクチンなどのワクチン；トポイソメラーゼ１阻害剤（例えば、ＬＵＲＴＯＴＥＣＡＮ（登録商標））；ｒｍＲＨ（例えば、ＡＢＡＲＥＬＩＸ（登録商標））；ＢＡＹ４３９００６（ソラフェニブ；Ｂａｙｅｒ）；ＳＵ−１１２４８（スニチニブ、ＳＵＴＥＮＴ（登録商標）、Ｐｆｉｚｅｒ）；ペリフォシン、ＣＯＸ−２阻害剤（例えば、セレコキシブ又はエトリコキシブ）、プロテオソーム阻害剤（例えば、ＰＳ３４１）；ボルテゾミブ（ＶＥＬＣＡＤＥ（登録商標））；ＣＣＩ−７７９；ティピファニブ（Ｒ１１５７７）；オラフェニブ、ＡＢＴ５１０；オブリメルセンナトリウムなどのＢｃｌ−２阻害剤（ＧＥＮＡＳＥＮＳＥ（登録商標））；ピクサントロン；ＥＧＦＲ阻害剤（下の定義参照）；チロシンキナーゼ阻害剤（下の定義参照）；ラパマイシンなどのセリン−スレオニンキナーゼ阻害剤（シロリムス、ＲＡＰＡＭＵＮＥ（登録商標））；ロナファーニブなどのファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤（ＳＣＨ ６６３６、ＳＡＲＡＳＡＲ（商標））；ならびに上記の何れかの薬学的に許容される塩、酸又は誘導体；ならびに、ＣＨＯＰ（シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン、及びプレドニゾロンの併用療法を表す略字）；ならびにＦＯＬＦＯＸ（オキサリプラチン（ＥＬＯＸＡＴＩＮ（商標））を５−ＦＵ及びロイコボリンと併用した治療レジメンを表す略字）などの上記のうちの２つ以上の薬剤の組合せが含まれる。
【００９２】
本明細書に定義される化学療法剤には、癌の増殖を促進することができるホルモンの効果を調節する、減少する、ブロックする又は阻害するように作用する「抗ホルモン剤」又は「内分泌療法」が含まれる。化学療法剤は、タモキシフェン（ＮＯＬＶＡＤＥＸ（登録商標））、４−ヒドロキシタモキシフェン、トレミフェン（ＦＡＲＥＳＴＯＮ（登録商標））、イドキシフェン、ドロロキシフェン（ｄｒｏｌｏｘｉｆｅｎｅ）、ラロキシフェン（ＥＶＩＳＴＡ（登録商標））、トリオキシフェン（ｔｒｉｏｘｉｆｅｎｅ）、ケイキシフェン（ｋｅｏｘｉｆｅｎｅ）、及びＳＥＲＭ３などの選択的エストロゲン受容体モジュレーター（ＳＥＲＭ）を含む、混合アゴニスト／アンタゴニストプロファイルを有する抗エストロゲン；フルベストラント（ＦＡＳＬＯＤＥＸ（登録商標））、及びＥＭ８００（そのような薬剤はエストロゲン受容体（ＥＲ）二量体化をブロックし、ＤＮＡ結合を阻害し、ＥＲターンオバーを増加させ、及び／又はＥＲレベルを抑制しうる）などのアゴニスト特性のない純粋な抗エストロゲン；ホルメスタン及びエキセメスタン（ＡＲＯＭＡＳＩＮ（登録商標））などのステロイドアロマターゼ阻害剤、ならびにアナストロゾール（ａｎａｓｔｒａｚｏｌｅ）（ＡＲＩＭＩＤＥＸ（登録商標））、レトロゾール（ＦＥＭＡＲＡ（登録商標））及びアミノグルテチミドなどの非ステロイドアロマターゼ阻害剤を含むアロマターゼ阻害剤、ならびに他のアロマターゼ阻害剤にはボロゾール（ＲＩＶＩＳＯＲ（登録商標））、酢酸メゲストロール（ＭＥＧＡＳＥ（登録商標））、ファドロゾール、及び４（５）−イミダゾールが含まれる；リュープロリド（ＬＵＰＲＯＮ（登録商標）及びＥＬＩＧＡＲＤ（登録商標））、ゴセレリン、ブセレリン、及びトリプテレリンを含む、黄体ホルモン放出ホルモンアゴニスト；酢酸メゲストロール及び酢酸メドロキシプロゲステロンなどのプロゲスチン、ジエチルスチルベストロール及びプレマリンなどのエストロゲン、ならびにフルオキシメステロン、オールトランスレチオニン酸（ａｌｌ ｔｒａｎｓｒｅｔｉｏｎｉｃ ａｃｉｄ）及びフェンレチニドなどのアンドロゲン／レチノイドを含む、性ステロイド；オナプリストン（ｏｎａｐｒｉｓｔｏｎｅ）；抗プロゲステロン（ａｎｔｉ−ｐｒｏｇｅｓｔｅｒｏｎｅｓ）；エストロゲン受容体下方調節因子（ＥＲＤ）；フルタミド、ニルタミド及びビカルタミドなどの抗アンドロゲン；ならびに上記の何れかの薬学的に許容される塩、酸又は誘導体；ならびに上記のうちの２つ以上の組合せを含むが、これらに限定されず、ホルモンそれ自体でもよい。
【００９３】
用語「細胞増殖抑制剤」とは、インビトロ又はインビボの何れかにおいて、細胞の増殖を停止する化合物又は組成物を指す。従って、細胞増殖抑制剤は、Ｓ期の細胞の割合を有意に減少させるものであってもよい。細胞増殖抑制剤の更なる例は、Ｇ０／Ｇ１停止又はＭ期停止を誘導することによって、細胞周期の進行を遮断する薬剤を含む。ヒト化抗Ｈｅｒ２抗体のトラスツズマブ（ハーセプチン（登録商標））はＧ０／Ｇ１停止を誘導する細胞分裂阻害剤の例である。古典的なＭ期ブロッカーには、ビンカ（ビンクリスチン及びビンブラスチン）、タキサン、及び例えばドキソルビシン、エピルビシン、ダウノルビシン、エトポシド、及びブレオマイシンなどのトポイソメラーゼＩＩ阻害剤が含まれる。またＧ１停止させるある薬剤は、Ｓ期停止にも波及し、例えば、ＤＮＡアルキル化剤、例えば、タモキシフェン、プレドニゾン、ダカルバジン、メクロレタミン、シスプラチン、メトトレキセート、５−フルオロウラシル、及びアラ−Ｃである。更なる情報は、The Molecular Basis of Cancer, Mendelsohn及びIsrael, 編、第１章、表題「Cell cycle regulation, oncogene, and antineoplastic drugs」、Murakamiら(WB Saunders: Philadelphia, 1995）の例えば１３頁に見出すことができる。タキサン類（パクリタキセル及びドセタキセル）は、共にイチイに由来する抗癌剤である。ヨーロッパイチイに由来するドセタキセル（ＴＡＸＯＴＥＲＥ（登録商標）、ローン・プーラン ローラー）は、パクリタキセル（ＴＡＸＯＬ（登録商標）、ブリストル−マイヤー スクウィブ）の半合成類似体である。パクリタキセル及びドセタキセルは、チューブリン二量体から微小管の集合を促進し、細胞の有糸分裂を阻害する結果となる脱重合を防ぐことによって微小管を安定化にする。
【００９４】
本明細書で使用される場合、用語「ＥＧＦＲ阻害剤」は、ＥＧＦＲに結合するか又はそうでなければＥＧＦＲに直接相互作用し、そのシグナル伝達活性を妨げるか又は減少させる化合物を意味するか、あるいは、「ＥＧＦＲアンタゴニスト」と呼ばれる。このような薬剤の例は、ＥＧＦＲに結合する抗体及び小分子を含む。ＥＧＦＲに結合する抗体の例は、ＭＡｂ５７９（ＡＴＣＣ ＣＲＬ ＨＢ ８５０６）、ＭＡｂ４５５（ＡＴＣＣ ＣＲＬ ＨＢ８５０７）、ＭＡｂ２２５（ＡＴＣＣ ＣＲＬ ８５０８）、ＭＡｂ５２８（ＡＴＣＣ ＣＲＬ ８５０９）（米国特許第４９４３５３３号、Ｍｅｎｄｅｌｓｏｈｎらを参照）及びその変異体、例えばキメラ化２２５（Ｃ２２５又はセツキシマブ；ＥＲＢＩＴＵＸ（登録商標））及び再形成ヒト２２５（Ｈ２２５）（国際公開第９６／４０２１０号、Ｉｍｃｌｏｎｅ Ｓｙｓｔｅｍｓ Ｉｎｃ．を参照）；ＩＭＣ−１１Ｆ８，完全ヒトＥＧＦＲ標的抗体（Ｉｍｃｌｏｎｅ）；タイプＩＩ変異体ＥＧＦＲに結合する抗体（米国特許第５２１２２９０号）；米国特許第５８９１９９６号に記載されているようなＥＧＦＲに結合するヒト化及びキメラ化抗体；及びＥＧＦＲに結合するヒト抗体、例えばＡＢＸ−ＥＧＦ又はパニツムマブ（国際公開第９８／５０４３３，Ａｂｇｅｎｉｘ／Ａｍｇｅｎを参照）；ＥＭＤ５５９００（Ｓｔｒａｇｌｉｏｔｔｏら、Ｅｕｒ． Ｊ． Ｃａｎｃｅｒ ３２Ａ：６３６−６４０（１９９６））；ＥＭＤ７２００（マツズマブ），ＥＧＦＲ結合についてＥＧＦ及びＴＧＦ−α双方と競合するＥＧＦＲに対するヒト化ＥＧＦＲ（ＥＭＤ／Ｍｅｒｃｋ）；ヒトＥＧＦＲ抗体，ＨｕＭａｘ−ＥＧＦＲ（ＧｅｎＭａｂ）；Ｅ１．１、Ｅ２．４、Ｅ２．５、Ｅ６．２、Ｅ６．４、Ｅ２．１１、Ｅ６．３及びＥ７．６．３として知られ、米国特許第６２３５８８３号に記載されている完全なヒト抗体；ＭＤＸ−４４７（Ｍｅｄａｒｅｘ Ｉｎｃ）；及びｍＡｂ８０６又はヒト化ｍＡｂ８０６（Ｊｏｈｎｓ等，Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ． ２７９（２９）：３０３７５−３０３８４（２００４））を含む。抗ＥＧＦＲ抗体は細胞傷害剤とコンジュゲートされることができ、よってイムノコンジュゲートを生じる（例えば、欧州特許出願公開第６５９４３９Ａ２号、Ｍｅｒｃｋ Ｐａｔｅｎｔ ＧｍｂＨを参照）。ＥＧＦＲアンタゴニストは、小分子、例えば米国特許第５６１６５８２号、同第５４５７１０５号、同第５４７５００１号、同第５６５４３０７号、同第５６７９６８３号、同第６０８４０９５号、同第６２６５４１０号、同第６４５５５３４号、同第６５２１６２０号、同第６５９６７２６号、同第６７１３４８４号、同第５７７０５９９号、同第６１４０３３２号、同第５８６６５７２号、同第６３９９６０２号、同第６３４４４５９号、同第６６０２８６３号、同第６３９１８７４号、同第６３４４４５５号、同第５７６００４１号、同第６００２００８号、及び同第５７４７４９８、並びに次のＰＣＴ公報：国際公開第９８／１４４５１号、国際公開第９８／５００３８号、国際公開第９９／０９０１６号、及び国際公開第９９／２４０３７号に記載されている化合物を含む。特定の小分子ＥＧＦＲアンタゴニストは、ＯＳＩ−７７４（ＣＰ−３５８７７４、エルロチニブ，��ルセバ（登録商標）Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ／ＯＳＩ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）；ＰＤ １８３８０５（ＣＩ １０３３、２−プロペンアミド、Ｎ−［４−［（３−クロロ−４−フルオロフェニル）アミノ］−７−［３−（４−モルホリニル）プロポキシ］−６−キナゾリニル］−，二塩酸塩，Ｐｆｉｚｅｒ Ｉｎｃ．）；ＺＤ１８３９、ゲフィチニブ（ＩＲＥＳＳＡＴＭ）４−（３’−クロロ−４’−フルオロアニリノ）−７−メトキシ−６−（３−モルホリノプロポキシ）キナゾリン、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）；ＺＭ１０５１８０（（６−アミノ−４−（３−メチルフェニル−アミノ）−キナゾリン、Ｚｅｎｅｃａ）；ＢＩＢＸ−１３８２（Ｎ８−（３−クロロ−４−フルオロ−フェニル）−Ｎ２−（１−メチル−ピペリジン−４−イル）−ピリミド［５，４−ｄ］ピリミジン−２，８−ジアミン，Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ）；ＰＫＩ−１６６（（Ｒ）−４−［４−［（１−フェニルエチル）アミノ］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−６−イル］−フェノール）；（Ｒ）−６−（４−ヒドロキシフェニル）−４−［（１−フェニルエチル）アミノ］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン）；ＣＬ−３８７７８５（Ｎ−［４−［（３−ブロモフェニル）アミノ］−６−キナゾリニル］−２−ブチナミド）；ＥＫＢ−５６９（Ｎ−［４−［（３−クロロ−４−フルオロフェニル）アミノ］−３−シアノ−７−エトキシ−６−キノリニル］−４−（ジメチルアミノ）−２−ブテナミド）（Ｗｙｅｔｈ）；ＡＧ１４７８（Ｐｆｉｚｅｒ）；及びＡＧ１５７１（ＳＵ ５２７１；Ｐｆｉｚｅｒ）、二重ＥＧＦＲ／ＨＥＲ２チロシンキナーゼ阻害剤、例えば、ラパチニブ（タイケルブ（ＴＹＫＥＲＢ）（登録商標）、ＧＳＫ５７２０１６又はＮ−［３−クロロ−４−［（３フルオロフェニル）メトキシ］フェニル］６［５［［［２メチルスルホニル）エチル］アミノ］メチル］−２−フラニル］−４−キナゾリンアミン；グラクソスミスクライン）を含む。
【００９５】
本明細書で用いられる「腫瘍」は、悪性又は良性に関わらず、全ての新生細胞成長及び増殖、及び全ての前癌性及び癌性の細胞及び組織を意味する。「がん」、「がん性」、「増殖性疾患」及び「腫瘍」という用語はここで意味するように相互排他的ではない。
【００９６】
用語「細胞増殖性障害」及び「増殖性疾患」は、ある程度の異常な細胞増殖に関連する障害を言う。一実施態様において、細胞増殖性疾患は癌である。
【００９７】
用語「癌」及び「癌性」は、無秩序な細胞成長／細胞増殖を典型的に特徴とする、哺乳動物における生理学的状態を記述する。がんの例には、限定されないが、癌腫、リンパ腫（例えば、ホジキンリンパ腫及び非ホジキンリンパ腫）、芽細胞腫、肉腫、及び白血病を含む。そのような癌のより具体的な例は、扁平上皮がん、小細胞肺がん、非小細胞肺がん、肺腺癌、肺扁平上皮癌、腹膜がん、肝細胞がん、消化器がん、膵臓がん、神経膠腫、子宮頚がん、卵巣がん、肝臓がん、膀胱がん、肝癌、乳がん、結腸がん、結腸直腸がん、子宮内膜又は子宮癌、唾液腺癌、腎臓がん、肝臓がん、前立腺がん、外陰がん、甲状腺がん、肝癌、白血病、及びその他のリンパ増殖性疾患、及び様々な型の頭頸部がんを包含する。
【００９８】
用語「結腸腫瘍」又は「結腸がん」は、結腸の任意の腫瘍又はがん（盲腸から直腸までの大腸）を指す。
【００９９】
用語「結腸直腸腫瘍」又は「結腸直腸がん」は、結腸（盲腸から直腸までの大腸）及び直腸を含む大腸の任意の腫瘍又はがんを指し、例えば、腺癌及び一般的でない形態のリンパ腫及び扁平上皮癌などを含む。
【０１００】
薬剤、例えば、薬学的製剤の「有効量」とは、所望の治療的又予防的結果を達成するために必要な用量及び期間での有効な量を指す。
【０１０１】
用語「薬学的製剤」は、その中に有効で含有される活性成分の生物学的活性を許容するような形態であって、製剤を投与する被験体にとって許容できない毒性である他の成分を含まない調製物を指す。
【０１０２】
「薬学的に許容可能な担体」は、被験体に非毒性であり、有効成分以外の薬学的製剤中の成分を指す。薬学的に許容される担体は、限定されないが、緩衝剤、賦形剤、安定剤、又は保存剤を含む。
【０１０３】
「個体」又は「被験体」は、哺乳動物である。哺乳動物は、限定されないが、家畜動物（例えば、ウシ、ヒツジ、ネコ、イヌ、及びウマ）、霊長類（例えば、ヒト、及びサルなどの非ヒト霊長類）、ウサギ、並びにげっ歯類（例えば、マウス及びラット）を含む。ある実施態様において、個体又は被験体はヒトである。
【０１０４】
本明細書で使用されるように、「治療」（及び、「治療する（ｔｒｅａｔ）」又は「治療すること（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」などのその文法的変形）とは、治療を受けている個体の自然経過を変える試みにおける臨床的介入のことであり、予防のために又は臨床病理の経過中に実施することができる。治療の望ましい効果には、疾患の発生又は再発を予防すること、症状の軽減、疾患のいかなる直接的又は間接的病理学的結果も減少すること、転移を予防すること、疾患進行の速度を減少すること、疾患状態の寛解又は緩和、及び寛解又は予後改善が含まれるが、これらに限定されない。幾つかの実施態様では、本発明の抗体は、疾患の発生を遅延させる又は疾患の進行を遅らせるために使用される。
【０１０５】
「減少させる」又は「阻害する」は、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、又はそれよりも多い全体的減少を引き起こす能力を意味する。幾つかの実施態様において、減少させる又は阻害するとは、基準（例えば、生物学活性（例えば、ｗｎｔシグナル伝達）又は結合の基準レベル）に対する相対的減少を言及することができる。幾つかの実施態様において、減少させる又は阻害するとは、治療する疾患の症状、転移の存在又は大きさ、又は原発腫瘍のサイズを言及することができる。
【０１０６】
当業者によって理解されるように、本明細書中の「およそ（約）」の値又はパラメーターへの言及は、その値又はパラメーター自体に対する実施態様を含む（及び説明する）。例えば、「およそ（約）Ｘ」との記載には「Ｘ」の記載が含まれる。
【０１０７】
本明細書に記載される本発明の態様及び実施態様は、態様及び実施態様「からなる」及び／又は「本質的になる」を含む。本明細書で使用されるように、単数形の「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」は、特に指示がない限り、複数への参照が含まれる。
【０１０８】
ＩＩ．組成物及び方法
本明細書中で提供されるのは、抗ＲＳＰＯ抗体及びその使用である。ある実施態様において、ＲＳＰＯ２及び／又はＲＳＰＯ３に結合する抗体が提供される。提供される抗体は、例えば、結腸直腸がんなどのがんの診断又は治療のために、有用である。
【０１０９】
幾つかの態様において、本明細書に提供されるのは抗ＲＳＰＯ抗体のパネルである。限定されないが、ＲＳＰＯ２及び／又はＲＳＰＯ３に結合する能力、ＩＨＣによってＲＳＰＯ２及び／又はＲＳＰＯ３を検出する能力、ＲＳＰＯ２及び／又はＲＳＰＯ３とＬＧＲポリペプチド、例えばＬＧＲ４及び／又はＬＧＲ５との相互作用を阻害する能力、ＲＳＰＯ２及び／又はＲＳＰＯ３とＥ３ユビキチナーゼポリペプチド、例えばＲＮＦ４３及び／又はＺＮＲＦ３との相互作用を阻害する能力、並びにＲＳＰＯ２、ＲＳＰＯ３、ＲＳＰＯ２多型、及び／又はＲＳＰＯ２転座産物、及びサブセットによって刺激されるｗｎｔシグナル伝達を阻害する能力に基づく複数の特性において特徴づけられる抗体のパネルが同定された。
【０１１０】
一態様において、本明細書に提供されるのは、ＲＳＰＯ２及び／又はＲＳＰＯ３に結合する単離された抗体である。幾つかの実施態様において、抗体はＲＳＰＯ２に結合する。幾つかの実施態様において、抗体はＲＳＰＯ２に結合し、ＲＳＰＯ３には有意に結合しない。幾つかの実施態様において、抗体はＲＳＰＯ３に結合する。幾つかの実施態様において、抗体はＲＳＰＯ３に結合し、ＲＳＰＯ２には有意に結合しない。幾つかの実施態様において、抗体はＲＳＰＯ２とＲＳＰＯ３の両方に結合する。幾つかの実施態様において、抗体は、多重特異性抗体である。幾つかの実施態様において、多重特異性抗体は二重特異性抗体である。幾つかの実施態様において、二重特異性抗体は、ＲＳＰＯ２に結合する第一の可変ドメイン、及びＲＳＰＯ３に結合する第二の可変ドメインを含む。
【０１１１】
ある実施態様において、ＲＳＰＯ２及び／又はＲＳＰＯ３に結合する抗体は、ＲＳＰＯ２に結合する抗体である。幾つかの実施態様において、抗ＲＳＰＯ２抗体はＲＳＰＯ２に結合し、ここでＲＳＰＯ２は配列番号１に記載の配列を有する。幾つかの実施態様において、抗ＲＳＰＯ２抗体はＲＳＰＯ２に結合し、ここでＲＳＰＯ２はシグナルペプチド配列を欠いている（例えば、配列番号１のアミノ酸２２−２４３内のアミノ酸に結合する）。幾つかの実施態様において、抗ＲＳＰＯ２抗体は、ＲＳＰＯ２の一以上のフリン様システインリッチドメインに結合する。幾つかの実施態様において、抗ＲＳＰＯ２抗体は、配列番号１のアミノ酸３４から１３４内の領域に結合する。幾つかの実施態様において、抗ＲＳＰＯ２抗体は、配列番号１のアミノ酸３９から１３４内の領域に結合する。幾つかの実施態様において、抗ＲＳＰＯ２抗体は、配列番号１のアミノ酸３４から８４内の領域に結合する。幾つかの実施態様において、抗ＲＳＰＯ２抗体は、配列番号１のアミノ酸９０から１３４内の領域に結合する。幾つかの実施態様において、抗ＲＳＰＯ２抗体は、ＲＳＰＯ２のトロンボスポンジン１型ドメインに結合しない（例えば、配列番号１のアミノ酸１４４−２０４内の領域に結合しない）。幾つかの実施態様において、抗ＲＳＰＯ２抗体は、ＲＳＰＯ２のトロンボスポンジン１型ドメインに結合する。幾つかの実施態様において、抗ＲＳＰＯ２抗体は、配列番号１のアミノ酸１４４−２０４内の領域に結合する。幾つかの実施態様において、抗ＲＳＰＯ２抗体は、ｗｎｔシグナル伝達を阻害する。幾つかの実施態様において、抗ＲＳＰＯ２抗体は、個体におけるｗｎｔシグナル伝達を阻害し、及び／又はＲＳＰＯ２多型（例えば、ＲＳＰＯ２ Ｌ１８６Ｐ多型）を有するがんを阻害する。幾つかの実施態様において、抗ＲＳＰＯ２抗体は、ＲＳＰＯ２と、ＬＧＲ４、ＬＧＲ５、及び／又はＬＧＲ６の一以上との相互作用を阻害する。幾つかの実施態様において、抗ＲＳＰＯ２抗体は、ＲＳＰＯ２と、ＬＧＲ４、ＬＧＲ５、及び／又はＬＧＲ６の一以上との相互作用を阻害しない（例えば、ＬＧＲ４、ＬＧＲ５、及び／又はＬＧＲ６の一以上へのＲＳＰＯ２の結合を増強する）。幾つかの実施態様において、抗ＲＳＰＯ２抗体は、ＲＳＰＯ２と、膜貫通Ｅ３ユビキチナーゼ（例えば、ＺＮＲＦ３及び／又はＲＮＦ４３の一以上）との相互作用を阻害する。幾つかの実施態様において、抗ＲＳＰＯ２抗体は、ＲＳＰＯ２と、シンデカン（例えば、Ｓｄｃ４）との相互作用を阻害する。幾つかの実施態様において、抗ＲＳＰＯ２抗体は、ＲＳＰＯ２と、ＬＧＲ４、ＬＧＲ５、及び／又はＬＧＲ６の一以上との相互作用を阻害し、ＲＳＰＯ２と、膜貫通Ｅ３ユビキチナーゼ（例えば、ＺＮＲＦ３及び／又はＲＮＦ４３の一以上）との相互作用を阻害する（例えば、１１Ｆ１１、３６Ｄ２、４９Ｇ５、及び／又は２６Ｅ１１）。幾つかの実施態様において、抗ＲＳＰＯ２抗体は、ＲＳＰＯ２と、膜貫通Ｅ３ユビキチナーゼ（例えば、ＺＮＲＦ３及び／又はＲＮＦ４３の一以上）との相互作用を阻害し、ＲＳＰＯ２と、ＬＧＲ４、ＬＧＲ５、及び／又はＬＧＲ６の一以上との相互作用を阻害しない（例えば、ＬＧＲ４、ＬＧＲ５、及び／又はＬ��Ｒ６の一以上へのＲＳＰＯ２の結合を増強する）（例えば、１Ａ１）。幾つかの実施態様において、抗ＲＳＰＯ２抗体は、がん幹細胞の増殖を阻害する。幾つかの実施態様において、抗ＲＳＰＯ２抗体は、がん細胞（例えば、がん幹細胞）の分化（例えば、前駆細胞への最終分化及び／又は分化）を誘導し及び／又は促進する。幾つかの実施態様において、抗ＲＳＰＯ３抗体は、がん細胞（例えば、がん幹細胞）の腸細胞、杯細胞、及び／又は腸内分泌細胞への分化を誘導し及び／又は促進する。
【０１１２】
ある実施態様において、ＲＳＰＯ２及び／又はＲＳＰＯ３に結合する抗体は、ＲＳＰＯ３に結合する抗体である。幾つかの実施態様において、抗ＲＳＰＯ３抗体はＲＳＰＯ３に結合し、ここでＲＳＰＯ３は配列番号２に記載の配列を有する。幾つかの実施態様において、抗ＲＳＰＯ３抗体はＲＳＰＯ３に結合し、ここでＲＳＰＯ３はシグナルペプチド配列を欠いている（例えば、配列番号２のアミノ酸２２−２７２内のアミノ酸に結合する）。幾つかの実施態様において、抗ＲＳＰＯ３抗体は、ＲＳＰＯ３の一以上のフリン様システインリッチドメインに結合する。幾つかの実施態様において、抗ＲＳＰＯ３抗体は、配列番号２のアミノ酸３５から１３５内の領域に結合する。幾つかの実施態様において、抗ＲＳＰＯ３抗体は、配列番号２のアミノ酸３５から８６内の領域に結合する。幾つかの実施態様において、抗ＲＳＰＯ３抗体は、配列番号２のアミノ酸９２から１３５内の領域に結合する。幾つかの実施態様において、抗ＲＳＰＯ３抗体は、ＲＳＰＯ３のトロンボスポンジン１型ドメインに結合しない（例えば、配列番号２のアミノ酸１４７−２０７内のアミノ酸に結合しない）。幾つかの実施態様において、抗ＲＳＰＯ３抗体は、ＲＳＰＯ３のトロンボスポンジン１型ドメインに結合する。幾つかの実施態様において、抗ＲＳＰＯ３抗体は、配列番号２のアミノ酸１４７−２０７内の領域に結合する。幾つかの実施態様において、抗ＲＳＰＯ３抗体は、ｗｎｔシグナル伝達を阻害する。幾つかの実施態様において、抗ＲＳＰＯ３抗体は、ＲＳＰＯ３と、ＬＧＲ４、ＬＧＲ５、及び／又はＬＧＲ６の一以上との相互作用を阻害する。幾つかの実施態様において、抗ＲＳＰＯ３抗体は、ＲＳＰＯ３と、ＬＧＲ４、ＬＧＲ５、及び／又はＬＧＲ６の一以上との相互作用を阻害しない（例えば、ＬＧＲ４、ＬＧＲ５、及び／又はＬＧＲ６の一以上へのＲＳＰＯ３の結合を増強する）。幾つかの実施態様において、抗ＲＳＰＯ３抗体は、ＲＳＰＯ３と、膜貫通Ｅ３ユビキチナーゼ（例えば、ＺＮＲＦ３及び／又はＲＮＦ４３の一以上）との相互作用を阻害する。幾つかの実施態様において、抗ＲＳＰＯ３抗体は、ＲＳＰＯ３と、シンデカン（例えば、Ｓｄｃ４）との相互作用を阻害する。幾つかの実施態様において、抗ＲＳＰＯ３抗体は、ＲＳＰＯ３と、ＬＧＲ４、ＬＧＲ５、及び／又はＬＧＲ６の一以上との相互作用を阻害し、ＲＳＰＯ３と、膜貫通Ｅ３ユビキチナーゼ（例えば、ＺＮＲＦ３及び／又はＲＮＦ４３の一以上）との相互作用を阻害する。幾つかの実施態様において、抗ＲＳＰＯ３抗体は、がん幹細胞の増殖を阻害する。幾つかの実施態様において、抗ＲＳＰＯ３抗体は、がん細胞（例えば、がん幹細胞）の分化（例えば、前駆細胞への最終分化及び／又は分化）を誘導し及び／又は促進する。幾つかの実施態様において、抗ＲＳＰＯ３抗体は、がん細胞（例えば、がん幹細胞）のＴＡ細胞への分化を誘導し及び／又は促進する。幾つかの実施態様において、抗ＲＳＰＯ３抗体は、がん細胞（例えば、がん幹細胞）の腸細胞、杯細胞、及び／又は腸内分泌細胞への分化を誘導し及び／又は促進する。
【０１１３】
幾つかの実施態様において、抗ＲＳＰＯ３抗体は、配列番号２のアミノ酸４９から１０８内の領域に結合する。幾つかの実施態様において、抗ＲＳＰＯ３抗体は、ＲＳＰＯ３（例えば、配列番号２）のＳｅｒ４９、Ａｓｎ５２、Ｃｙｓ５４、Ｌｅｕ５５、Ｓｅｒ５６、Ｐｈｅ６３、Ｌｅｕ６５、Ｇｌｎ７２、Ｉｌｅ７３、Ｇｌｙ７４、Ｔｙｒ８４、Ｔｙｒ８９、Ｐｒｏ９０、Ａｓｐ９１、Ｉｌｅ９２、Ｌｙｓ９４及びＬｙｓ１０８から選択される一以上のアミノ酸を含むエピトープに結合する。幾つかの実施態様において、抗ＲＳＰＯ３抗体は、ＲＳＰＯ３（例えば、配列番号２）のアミノ酸Ｓｅｒ４９、Ａｓｎ５２、Ｃｙｓ５４、Ｌｅｕ５５、Ｓｅｒ５６、Ｐｈｅ６３、Ｌｅｕ６５、Ｇｌｎ７２、Ｉｌｅ７３、Ｇｌｙ７４、Ｔｙｒ８４、Ｔｙｒ８９、Ｐｒｏ９０、Ａｓｐ９１、Ｉｌｅ９２、Ｌｙｓ９４及びＬｙｓ１０８を含むエピトープに結合する。幾つかの実施態様において、抗ＲＳＰＯ３抗体は、ＲＳＰＯ３のアミノ酸残基（例えば、配列番号２）：Ｓｅｒ４９、Ａｓｎ５２、Ｃｙｓ５４、Ｌｅｕ５５、Ｓｅｒ５６、Ｐｈｅ６３、Ｌｅｕ６５、Ｇｌｎ７２、Ｉｌｅ７３、Ｇｌｙ７４、Ｔｙｒ８４、Ｔｙｒ８９、Ｐｒｏ９０、Ａｓｐ９１、Ｉｌｅ９２、Ｌｙｓ９４及びＬｙｓ１０８を含むエピトープに結合する。幾つかの実施態様において、抗ＲＳＰＯ３抗体は、ＲＳＰＯ３（例えば、配列番号２）のＳｅｒ４９、Ａｓｎ５２、Ｃｙｓ５４、Ｌｅｕ５５、Ｓｅｒ５６、Ｐｈｅ６３、Ｌｅｕ６５、Ｇｌｎ７２、Ｉｌｅ７３、Ｇｌｙ７４、Ｔｙｒ８４、Ｔｙｒ８９、Ｐｒｏ９０、Ａｓｐ９１、Ｉｌｅ９２、Ｌｙｓ９４、Ｌｙｓ９７及びＬｙｓ１０８から選択される一以上のアミノ酸を含むエピトープに結合する。幾つかの実施態様において、抗ＲＳＰＯ３抗体は、ＲＳＰＯ３（例えば、配列番号２）のアミノ酸Ｓｅｒ４９、Ａｓｎ５２、Ｃｙｓ５４、Ｌｅｕ５５、Ｓｅｒ５６、Ｐｈｅ６３、Ｌｅｕ６５、Ｇｌｎ７２、Ｉｌｅ７３、Ｇｌｙ７４、Ｔｙｒ８４、Ｔｙｒ８９、Ｐｒｏ９０、Ａｓｐ９１、Ｉｌｅ９２、Ｌｙｓ９４、Ｌｙｓ９７及びＬｙｓ１０８を含むエピトープに結合する。幾つかの実施態様において、ＲＳＰＯ３に結合した抗ＲＳＰＯ３抗体は、ＲＳＰＯ３（例えば、配列番号２）のＳｅｒ４９、Ａｓｎ５２、Ｃｙｓ５４、Ｌｅｕ５５、Ｓｅｒ５６、Ｐｈｅ６３、Ｌｅｕ６５、Ｇｌｎ７２、Ｉｌｅ７３、Ｇｌｙ７４、Ｔｙｒ８４、Ｔｙｒ８９、Ｐｒｏ９０、Ａｓｐ９１、Ｉｌｅ９２、Ｌｙｓ９４及びＬｙｓ１０８の一以上のアミノ酸から４オングストローム以内に位置する。幾つかの実施態様において、ＲＳＰＯ３に結合した抗ＲＳＰＯ３抗体は、ＲＳＰＯ３のアミノ酸残基（例えば、配列番号２）：Ｓｅｒ４９、Ａｓｎ５２、Ｃｙｓ５４、Ｌｅｕ５５、Ｓｅｒ５６、Ｐｈｅ６３、Ｌｅｕ６５、Ｇｌｎ７２、Ｉｌｅ７３、Ｇｌｙ７４、Ｔｙｒ８４、Ｔｙｒ８９、Ｐｒｏ９０、Ａｓｐ９１、Ｉｌｅ９２、Ｌｙｓ９４及びＬｙｓ１０８から４オングストローム以内に位置する。幾つかの実施態様において、ＲＳＰＯ３に結合した抗ＲＳＰＯ３抗体は、ＲＳＰＯ３（例えば、配列番号２）のＳｅｒ４９、Ａｓｎ５２、Ｃｙｓ５４、Ｌｅｕ５５、Ｓｅｒ５６、Ｐｈｅ６３、Ｌｅｕ６５、Ｇｌｎ７２、Ｉｌｅ７３、Ｇｌｙ７４、Ｔｙｒ８４、Ｔｙｒ８９、Ｐｒｏ９０、Ａｓｐ９１、Ｉｌｅ９２、Ｌｙｓ９４、Ｌｙｓ９７及びＬｙｓ１０８の一以上のアミノ酸から４オングストローム以内に位置する。幾つかの実施態様において、ＲＳＰＯ３に結合した抗ＲＳＰＯ３抗体は、ＲＳＰＯ３のアミノ酸残基（例えば、配列番号２）：Ｓｅｒ４９、Ａｓｎ５２、Ｃｙｓ５４、Ｌｅｕ５５、Ｓｅｒ５６、Ｐｈｅ６３、Ｌｅｕ６５、Ｇｌｎ７２、Ｉｌｅ７３、Ｇｌｙ７４、Ｔｙｒ８４、Ｔｙｒ８９、Ｐｒｏ９０、Ａｓｐ９１、Ｉｌｅ９２、Ｌｙｓ９４、Ｌｙｓ９７及びＬｙｓ１０８から４オングストローム以内に位置する。幾つかの実施態様において、ＲＳＰＯ３に結合した抗ＲＳＰＯ３抗体は、ＲＳＰＯ３（例えば、配列番号２）のＡｓｎ５２、Ｌｅｕ５５、Ｐｈｅ６３、Ｇｌｎ７２、Ｔｙｒ８９、Ｐｒｏ９０、Ａｓｐ９１、Ｌｙｓ９４及びＬｙｓ９７の一以上のアミノ酸から３．５オングストローム以内に位置する。幾つかの実施態様において、ＲＳＰＯ３に結合した抗ＲＳＰＯ３抗体は、ＲＳＰＯ３（例えば、配列番号２）のＡｓｎ５２、Ｌｅｕ５５、Ｐｈｅ６３、Ｇｌｎ７２、Ｔｙｒ８９、Ｐｒｏ９０、Ａｓｐ９１、Ｌｙｓ９４及びＬｙｓ９７から３．５オングストローム以内に位置する。幾つかの実施態様において、ＲＳＰＯ３に結合した抗ＲＳＰＯ３抗体は、ＲＳＰＯ３（例えば、配列番号２）のＧｌｎ７２、Ｐｒｏ９０、Ａｓｐ９１及びＬｙｓ９４の一以上のアミノ酸から３オングストローム以内に位置する。幾つかの実施態様において、ＲＳＰＯ３に結合した抗ＲＳＰＯ３抗体は、ＲＳＰＯ３（例えば、配列番号２）のＧｌｎ７２、Ｐｒｏ９０、Ａｓｐ９１及びＬｙｓ９４から３オングストローム以内に位置する。幾つかの実施態様において、ＲＳＰＯ３に結合した抗ＲＳＰＯ３抗体は、上記に提供された一以上のアミノ酸から約４、３．７５、３．５、３．２５、又は３オングストロームの何れかに位置する。幾つかの実施態様において、一以上のアミノ酸及び／又は一以上のアミノ酸残基は、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、及び／又は１２のアミノ酸及び／又はアミノ酸残基の何れかである。幾つかの実施態様において、エピトープは結晶学（例えば、実施例に記載の結晶学的方法）によって決定される。
【０１１４】
幾つかの実施態様において、抗ＲＳＰＯ３抗体は、配列番号２のアミノ酸４７から１０８内のアミノ酸に結合する。幾つかの実施態様において、抗ＲＳＰＯ３抗体は、ＲＳＰＯ３（例えば、配列番号２）のＴｈｒ４７、Ａｓｎ５２、Ｃｙｓ５４、Ｌｅｕ５５、Ｓｅｒ５６、Ｐｈｅ６３、Ｌｅｕ６５、Ｇｌｎ７２、Ｔｙｒ８４、Ｔｙｒ８９、Ｐｒｏ９０、Ａｓｐ９１、Ｉｌｅ９２、Ａｓｎ９３、Ｌｙｓ９４、Ｌｙｓ９７及びＬｙｓ１０８から選択される一以上のアミノ酸を含むエピトープに結合する。幾つかの実施態様において、抗ＲＳＰＯ３抗体は、ＲＳＰＯ３（例えば、配列番号２）のアミノ酸Ｔｈｒ４７、Ａｓｎ５２、Ｃｙｓ５４、Ｌｅｕ５５、Ｓｅｒ５６、Ｐｈｅ６３、Ｌｅｕ６５、Ｇｌｎ７２、Ｔｙｒ８４、Ｔｙｒ８９、Ｐｒｏ９０、Ａｓｐ９１、Ｉｌｅ９２、Ａｓｎ９３、Ｌｙｓ９４、Ｌｙｓ９７及びＬｙｓ１０８を含むエピトープに結合する。幾つかの実施態様において、抗ＲＳＰＯ３抗体は、ＲＳＰＯ３のアミノ酸残基（例えば、配列番号２）：Ｔｈｒ４７、Ａｓｎ５２、Ｃｙｓ５４、Ｌｅｕ５５、Ｓｅｒ５６、Ｐｈｅ６３、Ｌｅｕ６５、Ｇｌｎ７２、Ｔｙｒ８４、Ｔｙｒ８９、Ｐｒｏ９０、Ａｓｐ９１、Ｉｌｅ９２、Ａｓｎ９３、Ｌｙｓ９４、Ｌｙｓ９７及びＬｙｓ１０８を含むエピトープに結合する。幾つかの実施態様において、ＲＳＰＯ３に結合した抗ＲＳＰＯ３抗体は、ＲＳＰＯ３（例えば、配列番号２）のＳｅｒ４９、Ａｓｎ５２、Ｃｙｓ５４、Ｌｅｕ５５、Ｓｅｒ５６、Ｐｈｅ６３、Ｌｅｕ６５、Ｇｌｎ７２、Ｔｙｒ８４、Ｔｙｒ８９、Ｐｒｏ９０、Ａｓｐ９１、Ｉｌｅ９２、Ａｓｎ９３、Ｌｙｓ９４、Ｌｙｓ９４及びＬｙｓ１０８の一以上のアミノ酸から４オングストローム以内に位置する。幾つかの実施態様において、ＲＳＰＯ３に結合した抗ＲＳＰＯ３抗体は、ＲＳＰＯ３のアミノ酸残基（例えば、配列番号２）：Ｔｈｒ４７、Ａｓｎ５２、Ｃｙｓ５４、Ｌｅｕ５５、Ｓｅｒ５６、Ｐｈｅ６３、Ｌｅｕ６５、Ｇｌｎ７２、Ｔｙｒ８４、Ｔｙｒ８９、Ｐｒｏ９０、Ａｓｐ９１、Ｉｌｅ９２、Ａｓｎ９３、Ｌｙｓ９４、Ｌｙｓ９７及びＬｙｓ１０８から４オングストローム以内に位置する。幾つかの実施態様において、ＲＳＰＯ３に結合した抗ＲＳＰＯ３抗体は、ＲＳＰＯ３（例えば、配列番号２）のＴｈｒ４７、Ａｓｎ５２、Ｌｅｕ５５、Ｐｈｅ６３、Ｇｌｎ７２、Ｔｙｒ８９、Ｐｒｏ９０、Ａｓｐ９１、Ｉｌｅ９２、Ｌｙｓ９４及びＬｙｓ９７の一以上のアミノ酸から３．５オングストローム以内に位置する。幾つかの実施態様において、ＲＳＰＯ３に結合した抗ＲＳＰＯ３抗体は、ＲＳＰＯ３（例えば、配列番号２）のアミノ酸Ｔｈｒ４７、Ａｓｎ５２、Ｌｅｕ５５、Ｐｈｅ６３、Ｇｌｎ７２、Ｔｙｒ８９、Ｐｒｏ９０、Ａｓｐ９１、Ｉｌｅ９２、Ｌｙｓ９４及びＬｙｓ９７から３．５オングストローム以内に位置する。幾つかの実施態様において、ＲＳＰＯ３に結合した抗ＲＳＰＯ３抗体は、ＲＳＰＯ３（例えば、配列番号２）のＴｈｒ４７、Ｌｅｕ５５、Ｇｌｎ７２、Ｐｒｏ９０、Ａｓｐ９１及びＬｙｓ９４の一以上のアミノ酸から３オングストローム以内に位置する。幾つかの実施態様において、ＲＳＰＯ３に結合した抗ＲＳＰＯ３抗体は、ＲＳＰＯ３（例えば、配列番号２）のアミノ酸Ｔｈｒ４７、Ｌｅｕ５５、Ｇｌｎ７２、Ｐｒｏ９０、Ａｓｐ９１及びＬｙｓ９４から３オングストローム以内に位置する。幾つかの実施態様において、ＲＳＰＯ３に結合した抗ＲＳＰＯ３抗体は、上記に提供された一以上のアミノ酸から約４、３．７５、３．５、３．２５、又は３オングストロームの何れかに位置する。幾つかの実施態様において、一以上のアミノ酸及び／又は一以上のアミノ酸残基は、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、及び／又は１２のアミノ酸及び／又はアミノ酸残基の何れかである。幾つかの実施態様において、抗ＲＳＰＯ３抗体はまた、ＲＳＰＯ２に結合する。幾つかの実施態様において、エピトープは結晶学（例えば、実施例に記載の結晶学的方法）によって決定される。
【０１１５】
幾つかの実施態様において、結晶学的によって決定されるエピトープは、ＲＳＰＯ３のアミノ酸Ｍ３３−Ｅ２１０を用いて決定される。幾つかの実施態様において、結晶学的によって決定されるエピトープは、１００ｎＬのシッティングドロップを使用して複数の疎行列結晶スクリーンを設定するＬａｂｃｙｔｅ Ｅｃｈｏ液体ハンドラーを用いて行われる。スクリーンは、１８℃で保存された。幾つかの実施態様において、結晶は、母液として１００ｍＭのＭＩＢのｐＨ９及び２５％ＰＥＧ１５００を含有するドロップ中で得ることができる。幾つかの実施態様において、結晶は、母液として２００ｍＭのギ酸ナトリウム及び２０％（ｗ／ｖ）のＰＥＧ３，３５０を含有するドロップ中で得ることができる。幾つかの実施態様において、結晶は回収され、１０秒間、抗凍結剤溶液に浸漬され、液体窒素中で急速凍結されうる。幾つかの実施態様において、抗凍結剤溶液は、１μＬの７０％グリセロールを１．８μＬのリザーバー溶液と混合することによって作ることができる。幾つかの実施態様において、結晶は、ＰＥＧベースの条件で、例えば、約２０−２５％のＰＥＧ３，３５０中で成長させることができる。幾つかの実施態様において、結晶は、約２０％のＰＥＧ６０００、約２０−２５％のＰＥＧ４０００、及び約２５％のＰＥＧ１５００中で成長させることができる。幾つかの実施態様において、ｐＨは、約３．５−９の範囲、例えば、約７から約８の間であってもよい。幾つかの実施態様において、塩濃度は、約２００ｍＭである。
【０１１６】
ある実施態様において、ＲＳＰＯ２及び／又はＲＳＰＯ３に結合する抗体は、ＲＳＰＯ２及びＲＳＰＯ３に結合する抗体（例えば、抗ＲＳＰＯ２／３抗体）である。幾つかの実施態様において、抗ＲＳＰＯ２／３抗体は、配列番号１に記載の配列を有するＲＳＰＯ２に結合し、配列番号２に記載の配列を有するＲＳＰＯ３に結合する。幾つかの実施態様において、抗ＲＳＰＯ２／３抗体は、ｗｎｔシグナル伝達を阻害する。
【０１１７】
幾つかの態様において、抗体は、ＲＳＰＯ２及びＲＳＰＯ３の両方と交差反応することができると同定された。これらの抗ＲＳＰＯ２／３抗体の活性の非限定的な例は、ＲＳＰＯ２及びＲＳＰＯ３に結合し、ＩＨＣによってＲＳＰＯ２及びＲＳＰＯ３を検出し、ＲＳＰＯ２及びＲＳＰＯ３とＬＧＲポリペプチド、例えばＬＧＲ４及び／又はＬＧＲ５との相互作用を阻害し、ＲＳＰＯ２及びＲＳＰＯ３とＥ３ユビキチナーゼポリペプチド、例えばＲＮＦ４３及び／又はＺＮＲＦ３との相互作用を阻害し、及び／又はＲＳＰＯ２、ＲＳＰＯ３、ＲＳＰＯ２多型、及びＲＳＰＯ２転座産物によって刺激されるｗｎｔシグナル伝達を阻害する能力を含む。
【０１１８】
当業者であれば、幾つかの実施態様において、任意の抗ＲＳＰＯ２抗体及び／又は抗ＲＳＰＯ３抗体は、抗体形態、特に、ＲＳＰＯ２及びＲＳＰＯ３の両方との反応性を可能にするであろう二重特異性形態に操作することができることを更に理解するであろう。これらの抗ＲＳＰＯ２／３二重特異性抗体は、ＲＳＰＯ２及びＲＳＰＯ３に結合し、ＩＨＣによってＲＳＰＯ２及びＲＳＰＯ３を検出し、ＲＳＰＯ２及びＲＳＰＯ３とＬＧＲポリペプチド、例えばＬＧＲ４及び／又はＬＧＲ５との相互作用を阻害し、ＲＳＰＯ２及びＲＳＰＯ３とＥ３ユビキチナーゼポリペプチド、例えばＲＮＦ４３及び／又はＺＮＲＦ３との相互作用を阻害し、及び／又はＲＳＰＯ２、ＲＳＰＯ３、ＲＳＰＯ２多型、及びＲＳＰＯ２転座産物によって刺激されるｗｎｔシグナル伝達を阻害する能力を含むことができる。
【０１１９】
抗ＲＳＰＯ２／３抗体の何れかの幾つかの実施態様において、抗ＲＳＰＯ２／３抗体は、ＲＳＰＯ２及びＲＳＰＯ３と、ＬＧＲ４、ＬＧＲ５、及び／又はＬＧＲ６の一以上との相互作用を阻害する。幾つかの実施態様において、抗体は、デュアルアーム抗体である。幾つかの実施態様において、抗ＲＳＰＯ２／３抗体は、各可変ドメインに２５Ｅ１１の六つのＨＶＲを含む第一及び第二の可変ドメインを含む。幾つかの実施態様において、抗体は二重特異性抗体である。幾つかの実施態様において、抗ＲＳＰＯ２／３抗体は、５Ｄ６又は５Ｅ１１の六つのＨＶＲを含む第一の可変ドメイン及び３６Ｄ２の六つのＨＶＲを含む第二の可変ドメインを含む。
【０１２０】
抗ＲＳＰＯ２／３抗体の何れかの幾つかの実施態様において、抗ＲＳＰＯ２／３抗体は、ＲＳＰＯ３と、ＬＧＲ４、ＬＧＲ５、及び／又はＬＧＲ６の一以上との相互作用を阻害し、ＲＳＰＯ２と、ＬＧＲ４、ＬＧＲ５、及び／又はＬＧＲ６の一以上との相互作用を阻害しない（例えば、ＬＧＲ４、ＬＧＲ５、及び／又はＬＧＲ６の一以上へのＲＳＰＯ２の結合を増強する）。幾つかの実施態様において、抗体は二重特異性抗体である。幾つかの実施態様において、抗ＲＳＰＯ２／３抗体は、５Ｄ６又は５Ｅ１１の六つのＨＶＲを含む第一の可変ドメイン及び１Ａ１の六つのＨＶＲを含む第二の可変ドメインを含む。
【０１２１】
抗ＲＳＰＯ２／３抗体の何れかの幾つかの実施態様において、抗ＲＳＰＯ２／３抗体は、ＲＳＰＯ２及びＲＳＰＯ３と、膜貫通Ｅ３ユビキチナーゼ（例えば、ＺＮＲＦ３及び／又はＲＮＦ４３の一以上）との相互作用を阻害する。幾つかの実施態様において、抗体は、デュアルアーム抗体である。幾つかの実施態様において、抗ＲＳＰＯ２／３抗体は、各可変ドメインに２５Ｅ１１の六つのＨＶＲを含む第一及び第二の可変ドメインを含む。幾つかの実施態様において、抗体は二重特異性抗体である。幾つかの実施態様において、抗ＲＳＰＯ２／３抗体は、５Ｄ６又は５Ｅ１１の六つのＨＶＲを含む第一の可変ドメイン及び３６Ｄ２又は１Ａ１の六つのＨＶＲを含む第二の可変ドメインを含む。
【０１２２】
抗ＲＳＰＯ２／３抗体の何れかの幾つかの実施態様において、抗ＲＳＰＯ２／３抗体は、ＲＳＰＯ２及びＲＳＰＯ３と、ＬＧＲ４、ＬＧＲ５、及び／又はＬＧＲ６の一以上及びＲＳＰＯ２との相互作用を阻害し、ＲＳＰＯ２及びＲＳＰＯ３と、膜貫通Ｅ３ユビキチナーゼ（例えば、ＺＮＲＦ３及び／又はＲＮＦ４３の一以上）との相互作用を阻害する。幾つかの実施態様において、抗体は、デュアルアーム抗体である。幾つかの実施態様において、抗ＲＳＰＯ２／３抗体は、各可変ドメインに２５Ｅ１１の六つのＨＶＲを含む第一及び第二の可変ドメインを含む。幾つかの実施態様において、抗体は二重特異性抗体である。幾つかの実施態様において、抗ＲＳＰＯ２／３抗体は、５Ｄ６又は５Ｅ１１の六つのＨＶＲを含む第一の可変ドメイン及び３６Ｄ２の六つのＨＶＲを含む第二の可変ドメインを含む。
【０１２３】
抗ＲＳＰＯ２／３抗体の何れかの幾つかの実施態様において、抗ＲＳＰＯ２／３抗体は、ＲＳＰＯ３と、ＬＧＲ４、ＬＧＲ５、及び／又はＬＧＲ６の一以上及びＲＳＰＯ２との相互作用を阻害し、ＲＳＰＯ２及びＲＳＰＯ３と、膜貫通Ｅ３ユビキチナーゼ（例えば、ＺＮＲＦ３及び／又はＲＮＦ４３の一以上）との相互作用を阻害し、ＲＳＰＯ２と、ＬＧＲ４、ＬＧＲ５、及び／又はＬＧＲ６の一以上との相互作用を阻害しない（例えば、ＬＧＲ４、ＬＧＲ５、及び／又はＬＧＲ６の一以上へのＲＳＰＯ２の結合を増強する）。幾つかの実施態様において、抗体は二重特異性抗体である。幾つかの実施態様において、抗ＲＳＰＯ２／３抗体は、５Ｄ６又は５Ｅ１１の六つのＨＶＲを含む第一の可変ドメイン及び１Ａ１の六つのＨＶＲを含む第二の可変ドメインを含む。
【０１２４】
一態様において、本明細書に提供されるのは、抗体４Ｈ１、４Ｄ４、５Ｃ２、５Ｄ６、５Ｅ１１、６Ｅ９、２１Ｃ２、及び／又は２６Ｅ１１の一以上と同じ又は重複するエピトープに結合する抗ＲＳＰＯ３抗体である。更に、一態様において、本明細書に提供されるのは、ＲＳＰＯ３への結合について、抗体４Ｈ１、４Ｄ４、５Ｃ２、５Ｄ６、５Ｅ１１、６Ｅ９、２１Ｃ２、及び／又は２６Ｅ１１の一以上と競合する抗ＲＳＰＯ３抗体である。一態様において、本明細書に提供されるのは、抗体１Ａ１、１１Ｆ１１、２６Ｅ１１、３６Ｄ２、及び／又は４９Ｇ５の一以上と同じ又は重複するエピトープに結合する抗ＲＳＰＯ２抗体である。更に、一態様において、本明細書に提供されるのは、ＲＳＰＯ２への結合について、抗体１Ａ１、１１Ｆ１１、２６Ｅ１１、３６Ｄ２，及び／又は４９Ｇ５の一以上と競合する抗ＲＳＰＯ２抗体である。一態様において、本明細書に提供されるのは、１Ａ１と同じ又は重複するエピトープに結合する抗ＲＳＰＯ２抗体である。更に、一態様において、本明細書に提供されるのは、ＲＳＰＯ２への結合について、１Ａ１と競合する抗ＲＳＰＯ２抗体である。幾つかの実施態様において、抗体は、ＢＩＡＣＯＲＥ、競合ＥＬＩＳＡ、及び／又は本明細書に記載される当該分野で周知の任意の他の方法により、別の抗体と結合について競合する。エピトープを決定する方法は、当該分野で公知であり、本明細書中に記載される。幾つかの実施態様において、エピトープは、線状エピトープである。幾つかの実施態様において、エピトープは、立体構造的エピトープである。幾つかの実施態様において、エピトープは、ペプチド断片に結合する抗体によって決定される。幾つかの実施態様において、エピトープは、質量分析によって決定される。幾つかの実施態様において、エピトープは結晶学（例えば、結晶構造の解析）によって決定される。
【０１２５】
モノクローナル抗体４Ｈ１及びその他の特定の抗体の実施態様
一態様において、本発明は、（ａ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも一つ、二つ、三つ、四つ、五つ、又は六つのＨＶＲを含む抗ＲＳＰＯ３抗体を提供する。
【０１２６】
一態様において、本発明は、（ａ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、少なくとも一つのＶＨ ＨＶＲ配列、少なくとも二つのＶＨ ＨＶＲ配列、又は三つ全てのＶＨ ＨＶＲ配列を含む抗体を提供する。一実施態様において、抗体は、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。その他の実施態様において、抗体は、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、及び配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。更なる実施態様において、抗体は、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、及び配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２を含む。更なる実施態様において、抗体は、（ａ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；及び（ｃ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。
【０１２７】
その他の態様において、本発明は、（ａ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｂ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｃ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも一つのＶＬ ＨＶＲ配列、少なくとも二つのＶＬ ＨＶＲ配列、又は三つ全てのＶＬ ＨＶＲ配列を含む抗体を提供する。一実施態様において、抗体は、（ａ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｂ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｃ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【０１２８】
その他の態様において、本発明の抗体は、（ａ）（ｉ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される少なくとも一つのＶＨ ＨＶＲ配列、少なくとも二つのＶＨ ＨＶＲ配列、又は三つ全てのＶＨ ＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン；及び（ｂ）（ｉ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも一つのＶＬ ＨＶＲ配列、少なくとも二つのＶＬ ＨＶＲ配列、又は三つ全てのＶＬ ＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。
【０１２９】
その他の態様において、本発明は、（ａ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号７から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗体を提供する。
【０１３０】
その他の態様において、抗ＲＳＰＯ３抗体が提供され、その抗体は、上記に与えられた実施態様の何れかに記載のＶＨ、及び上記に与えられた実施態様の何れかに記載のＶＬを含む。一実施態様において、抗体は、配列番号８９及び配列番号９０のそれぞれＶＨ及びＶＬ配列を、それらの配列の翻訳後修飾を含み、含む。
【０１３１】
モノクローナル抗体４Ｄ４及びその他の特定の抗体の実施態様
一態様において、本発明は、（ａ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも一つ、二つ、三つ、四つ、五つ、又は六つのＨＶＲを含む抗ＲＳＰＯ３抗体を提供する。
【０１３２】
一態様において、本発明は、（ａ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、少なくとも一つのＶＨ ＨＶＲ配列、少なくとも二つのＶＨ ＨＶＲ配列、又は三つ全てのＶＨ ＨＶＲ配列を含む抗体を提供する。一実施態様において、抗体は、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。その他の実施態様において、抗体は、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、及び配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。更なる実施態様において、抗体は、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、及び配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２を含む。更なる実施態様において、抗体は、（ａ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；及び（ｃ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。
【０１３３】
その他の態様において、本発明は、（ａ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｂ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｃ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも一つのＶＬ ＨＶＲ配列、少なくとも二つのＶＬ ＨＶＲ配列、又は三つ全てのＶＬ ＨＶＲ配列を含む抗体を提供する。一実施態様において、抗体は、（ａ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｂ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｃ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【０１３４】
その他の態様において、本発明の抗体は、（ａ）（ｉ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される少なくとも一つのＶＨ ＨＶＲ配列、少なくとも二つのＶＨ ＨＶＲ配列、又は三つ全てのＶＨ ＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン；及び（ｂ）（ｉ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも一つのＶＬ ＨＶＲ配列、少なくとも二つのＶＬ ＨＶＲ配列、又は三つ全てのＶＬ ＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。
【０１３５】
その他の態様において、本発明は、（ａ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号１３から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗体を提供する。
【０１３６】
その他の態様において、抗ＲＳＰＯ３抗体が提供され、その抗体は、上記に与えられた実施態様の何れかに記載のＶＨ、及び上記に与えられた実施態様の何れかに記載のＶＬを含む。一実施態様において、抗体は、配列番号９１及び配列番号９２のそれぞれＶＨ及びＶＬ配列を、それらの配列の翻訳後修飾を含み、含む。
【０１３７】
モノクローナル抗体５Ｃ２及びその他の特定の抗体の実施態様
一態様において、本発明は、（ａ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも一つ、二つ、三つ、四つ、五つ、又は六つのＨＶＲを含む抗ＲＳＰＯ３抗体を提供する。
【０１３８】
一態様において、本発明は、（ａ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、少なくとも一つのＶＨ ＨＶＲ配列、少なくとも二つのＶＨ ＨＶＲ配列、又は三つ全てのＶＨ ＨＶＲ配列を含む抗体を提供する。一実施態様において、抗体は、配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。その他の実施態様において、抗体は、配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、及び配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。更なる実施態様において、抗体は、配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、及び配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２を含む。更なる実施態様において、抗体は、（ａ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；及び（ｃ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。
【０１３９】
その他の態様において、本発明は、（ａ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−  Ｌ１；（ｂ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｃ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも一つのＶＬ ＨＶＲ配列、少なくとも二つのＶＬ ＨＶＲ配列、又は三つ全てのＶＬ ＨＶＲ配列を含む抗体を提供する。一実施態様において、抗体は、（ａ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｂ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｃ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【０１４０】
その他の態様において、本発明の抗体は、（ａ）（ｉ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される少なくとも一つのＶＨ ＨＶＲ配列、少なくとも二つのＶＨ ＨＶＲ配列、又は三つ全てのＶＨ ＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン；及び（ｂ）（ｉ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも一つのＶＬ ＨＶＲ配列、少なくとも二つのＶＬ ＨＶＲ配列、又は三つ全てのＶＬ ＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。
【０１４１】
その他の態様において、本発明は、（ａ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号１９から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗体を提供する。
【０１４２】
その他の態様において、抗ＲＳＰＯ３抗体が提供され、その抗体は、上記に与えられた実施態様の何れかに記載のＶＨ、及び上記に与えられた実施態様の何れかに記載のＶＬを含む。一実施態様において、抗体は、配列番号９３及び配列番号９４のそれぞれＶＨ及びＶＬ配列を、それらの配列の翻訳後修飾を含み、含む。
【０１４３】
モノクローナル抗体５Ｄ６及びその他の特定の抗体の実施態様
一態様において、本発明は、（ａ）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号２７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号２８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも一つ、二つ、三つ、四つ、五つ、又は六つのＨＶＲを含む抗ＲＳＰＯ３抗体を提供する。
【０１４４】
一態様において、本発明は、（ａ）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号２７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号２８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、少なくとも一つのＶＨ ＨＶＲ配列、少なくとも二つのＶＨ ＨＶＲ配列、又は三つ全てのＶＨ ＨＶＲ配列を含む抗体を提供する。一実施態様において、抗体は、配列番号２８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。その他の実施態様において、抗体は、配列番号２８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、及び配列番号２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。更なる実施態様において、抗体は、配列番号２８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、及び配列番号２７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２を含む。更なる実施態様において、抗体は、（ａ）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号２７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；及び（ｃ）配列番号２８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。
【０１４５】
その他の態様において、本発明は、（ａ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｂ）配列番号２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｃ）配列番号２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも一つのＶＬ ＨＶＲ配列、少なくとも二つのＶＬ ＨＶＲ配列、又は三つ全てのＶＬ ＨＶＲ配列を含む抗体を提供する。一実施態様において、抗体は、（ａ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｂ）配列番号２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｃ）配列番号２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【０１４６】
その他の態様において、本発明の抗体は、（ａ）（ｉ）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号２７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号２８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される少なくとも一つのＶＨ ＨＶＲ配列、少なくとも二つのＶＨ ＨＶＲ配列、又は三つ全てのＶＨ ＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン；及び（ｂ）（ｉ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも一つのＶＬ ＨＶＲ配列、少なくとも二つのＶＬ ＨＶＲ配列、又は三つ全てのＶＬ ＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。
【０１４７】
その他の態様において、本発明は、（ａ）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号２７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号２８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号２５から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗体を提供する。
【０１４８】
一態様において、本発明は、（ａ）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号２７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号１８８又は配列番号１８９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも一つ、二つ、三つ、四つ、五つ、又は六つのＨＶＲを含む抗ＲＳＰＯ３抗体を提供する。幾つかの実施態様において、ＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号１８８のアミノ酸配列を含む。幾つかの実施態様において、ＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号１８９のアミノ酸配列を含む。
【０１４９】
一態様において、本発明は、（ａ）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号２７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号１８８又は配列番号１８９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、少なくとも一つのＶＨ ＨＶＲ配列、少なくとも二つのＶＨ ＨＶＲ配列、又は三つ全てのＶＨ ＨＶＲ配列を含む抗体を提供する。一実施態様において、抗体は、配列番号１８８又は配列番号１８９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。別の実施態様において、抗体は、配列番号１８８又は配列番号１８９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、及び配列番号２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。更なる実施態様において、抗体は、配列番号１８８又は配列番号１８９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、及び配列番号２７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２を含む。更なる実施態様において、抗体は、（ａ）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号２７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；及び（ｃ）配列番号１８８又は配列番号１８９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。幾つかの実施態様において、ＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号１８８のアミノ酸配列を含む。幾つかの実施態様において、ＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号１８９のアミノ酸配列を含む。
【０１５０】
その他の態様において、本発明は、（ａ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｂ）配列番号２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｃ）配列番号２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも一つのＶＬ ＨＶＲ配列、少なくとも二つのＶＬ ＨＶＲ配列、又は三つ全てのＶＬ ＨＶＲ配列を含む抗体を提供する。一実施態様において、抗体は、（ａ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｂ）配列番号２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｃ）配列番号２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【０１５１】
その他の態様において、本発明の抗体は、（ａ）（ｉ）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号２７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号１８８又は配列番号１８９から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される少なくとも一つのＶＨ ＨＶＲ配列、少なくとも二つのＶＨ ＨＶＲ配列、又は三つ全てのＶＨ ＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン；及び（ｂ）（ｉ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも一つのＶＬ ＨＶＲ配列、少なくとも二つのＶＬ ＨＶＲ配列、又は三つ全てのＶＬ ＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。幾つかの実施態様において、ＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号１８８のアミノ酸配列を含む。幾つかの実施態様において、ＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号１８９のアミノ酸配列を含む。
【０１５２】
その他の態様において、本発明は、（ａ）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号２７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号１８８又は配列番号１８９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号２５から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗体を提供する。幾つかの実施態様において、ＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号１８８のアミノ酸配列を含む。幾つかの実施態様において、ＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号１８９のアミノ酸配列を含む。
【０１５３】
その他の態様において、抗ＲＳＰＯ３抗体が提供され、その抗体は、上記に与えられた実施態様の何れかに記載のＶＨ、及び上記に与えられた実施態様の何れかに記載のＶＬを含む。一実施態様において、抗体は、配列番号９５及び配列番号９６のそれぞれＶＨ及びＶＬ配列を、それらの配列の翻訳後修飾を含み、含む。
【０１５４】
上記実施態様の何れかにおいて、抗ＲＳＰＯ３抗体はヒト化されている。一実施態様において、抗ＲＳＰＯ３抗体は、上記実施態様の何れかに記載のＨＶＲを含み、更に、ヒトアクセプターフレームワーク、例えばヒト免疫グロブリンのフレームワーク又はヒトコンセンサスフレームワークを含む。ある実施態様において、ヒトアクセプターフレームワークは、ヒトＶＬカッパＩコンセンサス（ＶＬＫＩ）フレームワーク及び／又はＶＨフレームワークＶＨ１である。ある実施態様において、ヒトアクセプターフレームワークは、以下の変異の何れか一を含む、ヒトＶＬカッパＩコンセンサス（ＶＬＫＩ）フレームワーク及び／又はＶＨフレームワークＶＨ１である。
【０１５５】
別の態様において、抗ＲＳＰＯ３抗体は、配列番号１９１、１９３、１９５、１９７、１９９、２０１、２０３、２０５、２０７、２０９、２１１、２１３又は２１５のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む。ある実施態様において、配列番号１９１、１９３、１９５、１９７、１９９、２０１、２０３、２０５、２０７、２０９、２１１、２１３、又は２１５のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するＶＨ配列は、参照配列に対して置換（例えば保存的置換）、挿入、又は欠失を含むが、その配列を含む抗ＲＳＰＯ３抗体は、ＲＳＰＯ３へ結合する能力を保持する。ある実施態様において、総計１から１０のアミノ酸が、配列番号１９１、１９３、１９５、１９７、１９９、２０１、２０３、２０５、２０７、２０９、２１１、２１３、又は２１５において、置換され、挿入され、及び／又は欠失している。ある実施態様において、総計１から５のアミノ酸が、配列番号１９１、１９３、１９５、１９７、１９９、２０１、２０３、２０５、２０７、２０９、２１１、２１３、又は２１５において、置換され、挿入され、及び／又は欠失している。ある実施態様において、置換、挿入、又は欠失は、ＨＶＲ外の領域で（すなわちＦＲ内で）生じる。任意で、抗ＰＲＯ３抗体は、配列番号１９１、１９３、１９５、１９７、１９９、２０１、２０３、２０５、２０７、２０９、２１１、２１３、又は２１５のＶＨ配列を、その配列の翻訳後修飾を含み、含む。特定の実施態様において、ＶＨは、（ａ）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号２７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号２８、配列番号１８８、又は配列番号１８９のアミノ酸配列を含むＨＶＲーＨ３から選択される一つ、二つ、又は三つのＨＶＲを含む。
【０１５６】
別の態様において、抗ＲＳＰＯ３抗体が提供され、該抗体は、配列番号１９０、１９２、１９４、１９６、１９８、２００、２０２、２０４、２０６、２０８、２１０、２１２又は２１４のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。ある実施態様において、配列番号１９０、１９２、１９４、１９６、１９８、２００、２０２、２０４、２０６、２０８、２１０、２１２、又は２１４のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するＶＬ配列は、参照配列に対して置換（例えば保存的置換）、挿入、又は欠失を含むが、その配列を含む抗ＲＳＰＯ３抗体は、ＲＳＰＯ３へ結合する能力を保持する。ある実施態様において、総計１から１０のアミノ酸が、配列番号１９０、１９２、１９４、１９６、１９８、２００、２０２、２０４、２０６、２０８、２１０、２１２、又は２１４において、置換され、挿入され、及び／又は欠失している。ある実施態様において、総計１から５のアミノ酸が、配列番号１９０、１９２、１９４、１９６、１９８、２００、２０２、２０４、２０６、２０８、２１０、２１２、又は２１４において、置換され、挿入され、及び／又は欠失している。ある実施態様において、置換、挿入、又は欠失は、ＨＶＲ外の領域で（すなわちＦＲ内で）生じる。任意で、抗ＰＲＯ３抗体は、配列番号１９０、１９２、１９４、１９６、１９８、２００、２０２、２０４、２０６、２０８、２１０、２１２、又は２１４のＶＬ配列を、その配列の翻訳後修飾を含み、含む。特定の実施態様において、ＶＬは、（ａ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される一つ、二つ、又は三つのＨＶＲを含む。
【０１５７】
その他の態様において、抗ＲＳＰＯ３抗体が提供され、その抗体は、上記に与えられた実施態様の何れかに記載のＶＨ、及び上記に与えられた実施態様の何れかに記載のＶＬを含む。
【０１５８】
一実施態様において、抗体は、配列番号１９０及び配列番号１９１のそれぞれＶＨ及びＶＬ配列を、それらの配列の翻訳後修飾を含み、含む。一実施態様において、抗体は、配列番号１９２及び配列番号１９３のそれぞれＶＨ及びＶＬ配列を、それらの配列の翻訳後修飾を含み、含む。一実施態様において、抗体は、配列番号１９４及び配列番号１９５のそれぞれＶＨ及びＶＬ配列を、それらの配列の翻訳後修飾を含み、含む。一実施態様において、抗体は、配列番号１９６及び配列番号１９７のそれぞれＶＨ及びＶＬ配列を、それらの配列の翻訳後修飾を含み、含む。一実施態様において、抗体は、配列番号１９８及び配列番号１９９のそれぞれＶＨ及びＶＬ配列を、それらの配列の翻訳後修飾を含み、含む。一実施態様において、抗体は、配列番号２００及び配列番号２０１のそれぞれＶＨ及びＶＬ配列を、それらの配列の翻訳後修飾を含み、含む。一実施態様において、抗体は、配列番号２０２及び配列番号２０３のそれぞれＶＨ及びＶＬ配列を、それらの配列の翻訳後修飾を含み、含む。一実施態様において、抗体は、配列番号２０４及び配列番号２０５のそれぞれＶＨ及びＶＬ配列を、それらの配列の翻訳後修飾を含み、含む。一実施態様において、抗体は、配列番号２０６及び配列番号２０７のそれぞれＶＨ及びＶＬ配列を、それらの配列の翻訳後修飾を含み、含む。一実施態様において、抗体は、配列番号２０８及び配列番号２０９のそれぞれＶＨ及びＶＬ配列を、それらの配列の翻訳後修飾を含み、含む。一実施態様において、抗体は、配列番号２１０及び配列番号２１１のそれぞれＶＨ及びＶＬ配列を、それらの配列の翻訳後修飾を含み、含む。一実施態様において、抗体は、配列番号２１２及び配列番号２１３のそれぞれＶＨ及びＶＬ配列を、それらの配列の翻訳後修飾を含み、含む。一実施態様において、抗体は、配列番号２１４及び配列番号２１５のそれぞれＶＨ及びＶＬ配列を、それらの配列の翻訳後修飾を含み、含む。
【０１５９】
更なる態様において、本明細書に提供されるのは、本明細書に提供される抗ＲＳＰＯ３抗体と同じエピトープに結合する抗体である。例えば、ある実施態様において、配列番号１９１、１９３、１９５、１９７、１９９、２０１、２０３、２０５、２０７、２０９、２１１、２１３、又は２１５のＶＨ配列及び配列番号１９０、１９２、１９４、１９６、１９８、２００、２０２、２０４、２０６、２０８、２１０、２１２、又は２１４のＶＬ配列をそれぞれ含む抗ＲＳＰＯ３抗体と同じエピトープに結合する抗体が提供される。幾つかの実施態様において、エピトープは、結晶学によって決定される。
【０１６０】
本発明の更なる態様では、上記実施態様の何れかに記載の抗ＲＳＰＯ３抗体は、ヒト抗体を含むモノクローナル抗体である。一実施態様において、抗ＲＳＰＯ３抗体は、抗体断片、例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、又はＦ（ａｂ’）２断片である。その他の実施態様において、抗体は、全長抗体、例えば、ＩｇＧ１抗体、ＩｇＧ２ａ抗体又は本明細書において定義される他の抗体クラス又はアイソタイプである。
【０１６１】
モノクローナル抗体５Ｅ１１及びその他の特定の抗体の実施態様
一態様において、本発明は、（ａ）配列番号３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号３０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号３１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも一つ、二つ、三つ、四つ、五つ、又は六つのＨＶＲを含む抗ＲＳＰＯ３抗体を提供する。
【０１６２】
一態様において、本発明は、（ａ）配列番号３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、少なくとも一つのＶＨ ＨＶＲ配列、少なくとも二つのＶＨ ＨＶＲ配列、又は三つ全てのＶＨ ＨＶＲ配列を含む抗体を提供する。一実施態様において、抗体は、配列番号３４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。その他の実施態様において、抗体は、配列番号３４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、及び配列番号３１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。更なる実施態様において、抗体は、配列番号３４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号３１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、及び配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２を含む。更なる実施態様において、抗体は、（ａ）配列番号３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；及び（ｃ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。
【０１６３】
その他の態様において、本発明は、（ａ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｂ）配列番号３０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｃ）配列番号３１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも一つのＶＬ ＨＶＲ配列、少なくとも二つのＶＬ ＨＶＲ配列、又は三つ全てのＶＬ ＨＶＲ配列を含む抗体を提供する。一実施態様において、抗体は、（ａ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｂ）配列番号３０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｃ）配列番号３１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【０１６４】
その他の態様において、本発明の抗体は、（ａ）（ｉ）配列番号３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される少なくとも一つのＶＨ ＨＶＲ配列、少なくとも二つのＶＨ ＨＶＲ配列、又は三つ全てのＶＨ ＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン；及び（ｂ）（ｉ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号３０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号３１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも一つのＶＬ ＨＶＲ配列、少なくとも二つのＶＬ ＨＶＲ配列、又は三つ全てのＶＬ ＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。
【０１６５】
その他の態様において、本発明は、（ａ）配列番号３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号３０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号３１から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗体を提供する。
【０１６６】
その他の態様において、抗ＲＳＰＯ３抗体が提供され、その抗体は、上記に与えられた実施態様の何れかに記載のＶＨ、及び上記に与えられた実施態様の何れかに記載のＶＬを含む。一実施態様において、抗体は、配列番号９７及び配列番号９８のそれぞれＶＨ及びＶＬ配列を、それらの配列の翻訳後修飾を含み、含む。
【０１６７】
モノクローナル抗体６Ｅ９及びその他の特定の抗体の実施態様
一態様において、本発明は、（ａ）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号４０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号３６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも一つ、二つ、三つ、四つ、五つ、又は六つのＨＶＲを含む抗ＲＳＰＯ３抗体を提供する。
【０１６８】
一態様において、本発明は、（ａ）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号４０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、少なくとも一つのＶＨ ＨＶＲ配列、少なくとも二つのＶＨ ＨＶＲ配列、又は三つ全てのＶＨ ＨＶＲ配列を含む抗体を提供する。一実施態様において、抗体は、配列番号４０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。その他の実施態様において、抗体は、配列番号４０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、及び配列番号３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。更なる実施態様において、抗体は、配列番号４０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、及び配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２を含む。更なる実施態様において、抗体は、（ａ）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；及び（ｃ）配列番号４０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。
【０１６９】
その他の態様において、本発明は、（ａ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｂ）配列番号３６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｃ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも一つのＶＬ ＨＶＲ配列、少なくとも二つのＶＬ ＨＶＲ配列、又は三つ全てのＶＬ ＨＶＲ配列を含む抗体を提供する。一実施態様において、抗体は、（ａ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｂ）配列番号３６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｃ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【０１７０】
その他の態様において、本発明の抗体は、（ａ）（ｉ）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号４０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される少なくとも一つのＶＨ ＨＶＲ配列、少なくとも二つのＶＨ ＨＶＲ配列、又は三つ全てのＶＨ ＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン；及び（ｂ）（ｉ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号３６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも一つのＶＬ ＨＶＲ配列、少なくとも二つのＶＬ ＨＶＲ配列、又は三つ全てのＶＬ ＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。
【０１７１】
その他の態様において、本発明は、（ａ）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号４０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号３６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号３７から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗体を提供する。
【０１７２】
その他の態様において、抗ＲＳＰＯ３抗体が提供され、その抗体は、上記に与えられた実施態様の何れかに記載のＶＨ、及び上記に与えられた実施態様の何れかに記載のＶＬを含む。一実施態様において、抗体は、配列番号９９及び配列番号１００のそれぞれＶＨ及びＶＬ配列を、それらの配列の翻訳後修飾を含み、含む。
【０１７３】
モノクローナル抗体２１Ｃ２及びその他の特定の抗体の実施態様
一態様において、本発明は、（ａ）配列番号４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号４６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも一つ、二つ、三つ、四つ、五つ、又は六つのＨＶＲを含む抗ＲＳＰＯ３抗体を提供する。
【０１７４】
一態様において、本発明は、（ａ）配列番号４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号４６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、少なくとも一つのＶＨ ＨＶＲ配列、少なくとも二つのＶＨ ＨＶＲ配列、又は三つ全てのＶＨ ＨＶＲ配列を含む抗体を提供する。一実施態様において、抗体は、配列番号４６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。その他の実施態様において、抗体は、配列番号４６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、及び配列番号４３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。更なる実施態様において、抗体は、配列番号４６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号４３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、及び配列番号４５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２を含む。更なる実施態様において、抗体は、（ａ）配列番号４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；及び（ｃ）配列番号４６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。
【０１７５】
その他の態様において、本発明は、（ａ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｂ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｃ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも一つのＶＬ ＨＶＲ配列、少なくとも二つのＶＬ ＨＶＲ配列、又は三つ全てのＶＬ ＨＶＲ配列を含む抗体を提供する。一実施態様において、抗体は、（ａ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｂ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｃ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【０１７６】
その他の態様において、本発明の抗体は、（ａ）（ｉ）配列番号４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号４６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される少なくとも一つのＶＨ ＨＶＲ配列、少なくとも二つのＶＨ ＨＶＲ配列、又は三つ全てのＶＨ ＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン；及び（ｂ）（ｉ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも一つのＶＬ ＨＶＲ配列、少なくとも二つのＶＬ ＨＶＲ配列、又は三つ全てのＶＬ ＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。
【０１７７】
その他の態様において、本発明は、（ａ）配列番号４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号４６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号４３から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗体を提供する。
【０１７８】
その他の態様において、抗ＲＳＰＯ３抗体が提供され、その抗体は、上記に与えられた実施態様の何れかに記載のＶＨ、及び上記に与えられた実施態様の何れかに記載のＶＬを含む。一実施態様において、抗体は、配列番号１０１及び配列番号１０２のそれぞれＶＨ及びＶＬ配列を、それらの配列の翻訳後修飾を含み、含む。
【０１７９】
モノクローナル抗体２６Ｅ１１及びその他の特定の抗体の実施態様
一態様において、本発明は、（ａ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号５２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号４７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも一つ、二つ、三つ、四つ、五つ、又は六つのＨＶＲを含む抗ＲＳＰＯ２／３抗体を提供する。
【０１８０】
一態様において、本発明は、（ａ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号５２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、少なくとも一つのＶＨ ＨＶＲ配列、少なくとも二つのＶＨ ＨＶＲ配列、又は三つ全てのＶＨ ＨＶＲ配列を含む抗体を提供する。一実施態様において、抗体は、配列番号５２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。その他の実施態様において、抗体は、配列番号５２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、及び配列番号４９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。更なる実施態様において、抗体は、配列番号５２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号４９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、及び配列番号５１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２を含む。更なる実施態様において、抗体は、（ａ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；及び（ｃ）配列番号５２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。
【０１８１】
その他の態様において、本発明は、（ａ）配列番号４７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｂ）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｃ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも一つのＶＬ ＨＶＲ配列、少なくとも二つのＶＬ ＨＶＲ配列、又は三つ全てのＶＬ ＨＶＲ配列を含む抗体を提供する。一実施態様において、抗体は、（ａ）配列番号４７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｂ）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｃ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【０１８２】
その他の態様において、本発明の抗体は、（ａ）（ｉ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号５２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される少なくとも一つのＶＨ ＨＶＲ配列、少なくとも二つのＶＨ ＨＶＲ配列、又は三つ全てのＶＨ ＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン；及び（ｂ）（ｉ）配列番号４７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも一つのＶＬ ＨＶＲ配列、少なくとも二つのＶＬ ＨＶＲ配列、又は三つ全てのＶＬ ＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。
【０１８３】
その他の態様において、本発明は、（ａ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号５２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号４７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号４９から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗体を提供する。
【０１８４】
その他の態様において、抗ＲＳＰＯ２／３抗体が提供され、その抗体は、上記に与えられた実施態様の何れかに記載のＶＨ、及び上記に与えられた実施態様の何れかに記載のＶＬを含む。一実施態様において、抗体は、配列番号１０３及び配列番号１０４のそれぞれＶＨ及びＶＬ配列を、それらの配列の翻訳後修飾を含み、含む。
【０１８５】
抗ＲＳＰＯ３モノクローナル抗体及びその他の特定の抗体の実施態様
一態様において、本発明は、（ａ）配列番号８０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号８１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号８２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号７７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号７８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号７９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも一つ、二つ、三つ、四つ、五つ、又は六つのＨＶＲを含む抗ＲＳＰＯ３抗体を提供する。
【０１８６】
一態様において、本発明は、（ａ）配列番号８０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号８１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号８２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、少なくとも一つのＶＨ ＨＶＲ配列、少なくとも二つのＶＨ ＨＶＲ配列、又は三つ全てのＶＨ ＨＶＲ配列を含む抗体を提供する。一実施態様において、抗体は、配列番号８２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。その他の実施態様において、抗体は、配列番号８２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、及び配列番号７９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。更なる実施態様において、抗体は、配列番号８２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号７９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、及び配列番号８１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２を含む。更なる実施態様において、抗体は、（ａ）配列番号８０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号８１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；及び（ｃ）配列番号８２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。
【０１８７】
その他の態様において、本発明は、（ａ）配列番号７７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｂ）配列番号７８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｃ）配列番号７９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも一つのＶＬ ＨＶＲ配列、少なくとも二つのＶＬ ＨＶＲ配列、又は三つ全てのＶＬ ＨＶＲ配列を含む抗体を提供する。一実施態様において、抗体は、（ａ）配列番号７７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｂ）配列番号７８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｃ）配列番号７９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【０１８８】
その他の態様において、本発明の抗体は、（ａ）（ｉ）配列番号８０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号８１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号８２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される少なくとも一つのＶＨ ＨＶＲ配列、少なくとも二つのＶＨ ＨＶＲ配列、又は三つ全てのＶＨ ＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン；及び（ｂ）（ｉ）配列番号７７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号７８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号７９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも一つのＶＬ ＨＶＲ配列、少なくとも二つのＶＬ ＨＶＲ配列、又は三つ全てのＶＬ ＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。
【０１８９】
その他の態様において、本発明は、（ａ）配列番号８０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号８１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号８２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号７７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号７８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号７９から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗体を提供する。
【０１９０】
一態様において、本発明は、（ａ）配列番号８６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号８７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号８８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号８３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号８４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号８５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも一つ、二つ、三つ、四つ、五つ、又は六つのＨＶＲを含む抗ＲＳＰＯ３抗体を提供する。
【０１９１】
一態様において、本発明は、（ａ）配列番号８６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号８７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号８８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、少なくとも一つのＶＨ ＨＶＲ配列、少なくとも二つのＶＨ ＨＶＲ配列、又は三つ全てのＶＨ ＨＶＲ配列を含む抗体を提供する。一実施態様において、抗体は、配列番号８８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。その他の実施態様において、抗体は、配列番号８８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、及び配列番号８５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。更なる実施態様において、抗体は、配列番号８８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号８５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、及び配列番号８７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２を含む。更なる実施態様において、抗体は、（ａ）配列番号８６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号８７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；及び（ｃ）配列番号８８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。
【０１９２】
その他の態様において、本発明は、（ａ）配列番号８３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｂ）配列番号８４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｃ）配列番号８５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも一つのＶＬ ＨＶＲ配列、少なくとも二つのＶＬ ＨＶＲ配列、又は三つ全てのＶＬ ＨＶＲ配列を含む抗体を提供する。一実施態様において、抗体は、（ａ）配列番号８３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｂ）配列番号８４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｃ）配列番号８５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【０１９３】
その他の態様において、本発明の抗体は、（ａ）（ｉ）配列番号８６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号８７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号８８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される少なくとも一つのＶＨ ＨＶＲ配列、少なくとも二つのＶＨ ＨＶＲ配列、又は三つ全てのＶＨ ＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン；及び（ｂ）（ｉ）配列番号８３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号８４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号８５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも一つのＶＬ ＨＶＲ配列、少なくとも二つのＶＬ ＨＶＲ配列、又は三つ全てのＶＬ ＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。
【０１９４】
その他の態様において、本発明は、（ａ）配列番号８６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号８７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号８８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号８３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号８４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号８５から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗体を提供する。
【０１９５】
モノクローナル抗体１Ａ１及びその他の特定の抗体の実施態様
一態様において、本発明は、（ａ）配列番号５６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号５７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号５８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号５３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号５４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号５５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも一つ、二つ、三つ、四つ、五つ、又は六つのＨＶＲを含む抗ＲＳＰＯ２抗体を提供する。
【０１９６】
一態様において、本発明は、（ａ）配列番号５６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号５７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号５８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、少なくとも一つのＶＨ ＨＶＲ配列、少なくとも二つのＶＨ ＨＶＲ配列、又は三つ全てのＶＨ ＨＶＲ配列を含む抗体を提供する。一実施態様において、抗体は、配列番号５８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。その他の実施態様において、抗体は、配列番号５８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、及び配列番号５５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。更なる実施態様において、抗体は、配列番号５８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号５５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、及び配列番号５７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２を含む。更なる実施態様において、抗体は、（ａ）配列番号５６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号５７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；及び（ｃ）配列番号５８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。
【０１９７】
その他の態様において、本発明は、（ａ）配列番号５３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｂ）配列番号５４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｃ）配列番号５５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも一つのＶＬ ＨＶＲ配列、少なくとも二つのＶＬ ＨＶＲ配列、又は三つ全てのＶＬ ＨＶＲ配列を含む抗体を提供する。一実施態様において、抗体は、（ａ）配列番号５３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｂ）配列番号５４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｃ）配列番号５５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【０１９８】
その他の態様において、本発明の抗体は、（ａ）（ｉ）配列番号５６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号５７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号５８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される少なくとも一つのＶＨ ＨＶＲ配列、少なくとも二つのＶＨ ＨＶＲ配列、又は三つ全てのＶＨ ＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン；及び（ｂ）（ｉ）配列番号５３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号５４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号５５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも一つのＶＬ ＨＶＲ配列、少なくとも二つのＶＬ ＨＶＲ配列、又は三つ全てのＶＬ ＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。
【０１９９】
その他の態様において、本発明は、（ａ）配列番号５６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号５７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号５８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号５３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号５４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号５５から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗体を提供する。
【０２００】
その他の態様において、抗ＲＳＰＯ２抗体が提供され、その抗体は、上記に与えられた実施態様の何れかに記載のＶＨ、及び上記に与えられた実施態様の何れかに記載のＶＬを含む。一実施態様において、抗体は、配列番号１０５及び配列番号１０６のそれぞれＶＨ及びＶＬ配列を、それらの配列の翻訳後修飾を含み、含む。
【０２０１】
一態様において、本発明は、（ａ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号５９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号６０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも一つ、二つ、三つ、四つ、五つ、又は六つのＨＶＲを含む抗ＲＳＰＯ２抗体を提供する。
【０２０２】
一態様において、本発明は、（ａ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、少なくとも一つのＶＨ ＨＶＲ配列、少なくとも二つのＶＨ ＨＶＲ配列、又は三つ全てのＶＨ ＨＶＲ配列を含む抗体を提供する。一実施態様において、抗体は、配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。その他の実施態様において、抗体は、配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、及び配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。更なる実施態様において、抗体は、配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、及び配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２を含む。更なる実施態様において、抗体は、（ａ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；及び（ｃ）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。
【０２０３】
その他の態様において、本発明は、（ａ）配列番号５９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｂ）配列番号６０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｃ）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも一つのＶＬ ＨＶＲ配列、少なくとも二つのＶＬ ＨＶＲ配列、又は三つ全てのＶＬ ＨＶＲ配列を含む抗体を提供する。一実施態様において、抗体は、（ａ）配列番号５９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｂ）配列番号６０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｃ）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【０２０４】
その他の態様において、本発明の抗体は、（ａ）（ｉ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される少なくとも一つのＶＨ ＨＶＲ配列、少なくとも二つのＶＨ ＨＶＲ配列、又は三つ全てのＶＨ ＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン；及び（ｂ）（ｉ）配列番号５９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号６０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも一つのＶＬ ＨＶＲ配列、少なくとも二つのＶＬ ＨＶＲ配列、又は三つ全てのＶＬ ＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。
【０２０５】
その他の態様において、本発明は、（ａ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号５９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号６０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号６１から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗体を提供する。
【０２０６】
その他の態様において、抗ＲＳＰＯ２抗体が提供され、その抗体は、上記に与えられた実施態様の何れかに記載のＶＨ、及び上記に与えられた実施態様の何れかに記載のＶＬを含む。一実施態様において、抗体は、配列番号１０７及び配列番号１０８のそれぞれＶＨ及びＶＬ配列を、それらの配列の翻訳後修飾を含み、含む。
【０２０７】
モノクローナル抗体３６Ｄ２及びその他の特定の抗体の実施態様
一態様において、本発明は、（ａ）配列番号６８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号６９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号７０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号６７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも一つ、二つ、三つ、四つ、五つ、又は六つのＨＶＲを含む抗ＲＳＰＯ２抗体を提供する。
【０２０８】
一態様において、本発明は、（ａ）配列番号６８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号６９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号７０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、少なくとも一つのＶＨ ＨＶＲ配列、少なくとも二つのＶＨ ＨＶＲ配列、又は三つ全てのＶＨ ＨＶＲ配列を含む抗体を提供する。一実施態様において、抗体は、配列番号７０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。その他の実施態様において、抗体は、配列番号７０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、及び配列番号６７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。更なる実施態様において、抗体は、配列番号７０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号６７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、及び配列番号６９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２を含む。更なる実施態様において、抗体は、（ａ）配列番号６８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号６９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；及び（ｃ）配列番号７０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。
【０２０９】
その他の態様において、本発明は、（ａ）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｂ）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｃ）配列番号６７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも一つのＶＬ ＨＶＲ配列、少なくとも二つのＶＬ ＨＶＲ配列、又は三つ全てのＶＬ ＨＶＲ配列を含む抗体を提供する。一実施態様において、抗体は、（ａ）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｂ）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｃ）配列番号６７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【０２１０】
その他の態様において、本発明の抗体は、（ａ）（ｉ）配列番号６８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号６９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号７０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される少なくとも一つのＶＨ ＨＶＲ配列、少なくとも二つのＶＨ ＨＶＲ配列、又は三つ全てのＶＨ ＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン；及び（ｂ）（ｉ）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号６７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも一つのＶＬ ＨＶＲ配列、少なくとも二つのＶＬ ＨＶＲ配列、又は三つ全てのＶＬ ＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。
【０２１１】
その他の態様において、本発明は、（ａ）配列番号６８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号６９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号７０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号６７から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗体を提供する。
【０２１２】
その他の態様において、抗ＲＳＰＯ２抗体が提供され、その抗体は、上記に与えられた実施態様の何れかに記載のＶＨ、及び上記に与えられた実施態様の何れかに記載のＶＬを含む。一実施態様において、抗体は、配列番号１０９及び配列番号１１０のそれぞれＶＨ及びＶＬ配列を、それらの配列の翻訳後修飾を含み、含む。
【０２１３】
モノクローナル抗体４９Ｇ５及びその他の特定の抗体の実施態様
一態様において、本発明は、（ａ）配列番号７４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号７５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号７６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号７１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号７２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号７３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも一つ、二つ、三つ、四つ、五つ、又は六つのＨＶＲを含む抗ＲＳＰＯ２抗体を提供する。
【０２１４】
一態様において、本発明は、（ａ）配列番号７４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号７５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号７６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、少なくとも一つのＶＨ ＨＶＲ配列、少なくとも二つのＶＨ ＨＶＲ配列、又は三つ全てのＶＨ ＨＶＲ配列を含む抗体を提供する。一実施態様において、抗体は、配列番号７６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。その他の実施態様において、抗体は、配列番号７６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、及び配列番号７３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。更なる実施態様において、抗体は、配列番号７６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号７３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、及び配列番号７５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２を含む。更なる実施態様において、抗体は、（ａ）配列番号７４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号７５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；及び（ｃ）配列番号７６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。
【０２１５】
その他の態様において、本発明は、（ａ）配列番号７１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｂ）配列番号７２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｃ）配列番号７３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも一つのＶＬ ＨＶＲ配列、少なくとも二つのＶＬ ＨＶＲ配列、又は三つ全てのＶＬ ＨＶＲ配列を含む抗体を提供する。一実施態様において、抗体は、（ａ）配列番号７１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｂ）配列番号７２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｃ）配列番号７３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【０２１６】
その他の態様において、本発明の抗体は、（ａ）（ｉ）配列番号７４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号７５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号７６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される少なくとも一つのＶＨ ＨＶＲ配列、少なくとも二つのＶＨ ＨＶＲ配列、又は三つ全てのＶＨ ＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン；及び（ｂ）（ｉ）配列番号７１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号７２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号７３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも一つのＶＬ ＨＶＲ配列、少なくとも二つのＶＬ ＨＶＲ配列、又は三つ全てのＶＬ ＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。
【０２１７】
その他の態様において、本発明は、（ａ）配列番号７４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号７５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号７６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号７１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号７２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号７３から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗体を提供する。
【０２１８】
その他の態様において、抗ＲＳＰＯ２抗体が提供され、その抗体は、上記に与えられた実施態様の何れかに記載のＶＨ、及び上記に与えられた実施態様の何れかに記載のＶＬを含む。一実施態様において、抗体は、配列番号１１１及び配列番号１１２のそれぞれＶＨ及びＶＬ配列を、それらの配列の翻訳後修飾を含み、含む。
【０２１９】
上記実施態様の何れかにおいて、抗ＲＳＰＯ抗体はヒト化されている。例えば、上記抗ＲＳＰＯ抗体の何れかのヒト化型。一実施態様において、抗ＲＳＰＯ抗体は、上記実施態様の何れかに記載のＨＶＲを含み、更に、アクセプターヒトフレームワーク、例えばヒト免疫グロブリンのフレームワーク又はヒトコンセンサスフレームワークを含む。
【０２２０】
本発明の更なる態様では、上記実施態様の何れかに記載の抗ＲＳＰＯ抗体は、キメラ、ヒト化又はヒト抗体を含むモノクローナル抗体である。一実施態様において、抗ＲＳＰＯ抗体は、抗体断片、例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、又はＦ（ａｂ’）２断片である。その他の実施態様において、抗体は、全長抗体、例えば、インタクトなＩｇＧ１抗体又はＩｇＧ２ａ抗体又は本明細書において定義される他の抗体クラス又はアイソタイプである。
【０２２１】
更なる態様にて、以下のセクション１−７で説明されるように、上記実施態様の何れかに記載の抗ＲＳＰＯ抗体は、単独又は組み合わせで、任意の特徴を組み込むことができる。
【０２２２】
１．抗体親和性
ある実施態様において、本明細書において与えられる抗体は、≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１ｎＭ、又は≦０．００１ｎＭ（例えば、１０−８Ｍ未満、例えば、１０−８Ｍから１０−１３Ｍ、例えば、１０−９Ｍから１０−１３Ｍ）の解離定数（Ｋｄ）を有する。
【０２２３】
一実施態様において、Ｋｄは放射性標識抗原結合アッセイ（ＲＩＡ）によって測定される。一実施態様において、ＲＩＡは、目的の抗体のＦａｂバージョン及びその抗原により実施される。例えば、抗原に対するＦａｂの溶液結合親和性は、非標識抗原の滴定シリーズの存在下でＦａｂを最小濃度の（１２５Ｉ）−標識抗原で平衡にし、次に結合抗原を抗Ｆａｂ被覆プレートで捕捉することにより測定される（例えば、Ｃｈｅｎら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９３：８６５〜８８１（１９９９）参照）。前記アッセイの条件を確立するため、ＭＩＣＲＯＴＩＴＥＲ（登録商標）マルチウェルプレート（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）は、５０ｍＭの炭酸ナトリウム（ｐＨ９．６）中５μｇ／ｍｌの捕捉抗Ｆａｂ抗体（Ｃａｐｐｅｌ Ｌａｂｓ）で一晩被覆され、それに続いて室温（およそ２３℃）で２から５時間、ＰＢＳ中２％（ｗ／ｖ）ウシ血清アルブミンでブロックされる。非吸着性プレート（Ｎｕｎｃ＃２６９６２０）では、１００ｐＭ又は２６ｐＭの（１２５Ｉ）−抗原は対象のＦａｂの段階希釈を用いて混合される（例えば、Ｐｒｅｓｔａら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５７：４５９３〜４５９９（１９９７）における抗ＶＥＧＦ抗体、Ｆａｂ−１２の評価と一致する）。次に、対象のＦａｂは一晩インキュベートされるが、インキュベーションは平衡に達していることを確実にするためにさらに長い期間（例えば、約６５時間）続いてもよい。その後、前記混合物は室温でのインキュベーション（例えば、１時間）のために捕捉プレートに移される。次に、溶液は取り除かれ、プレートはＰＢＳ中０．１％のポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ−２０（登録商標））で８回洗浄される。プレートが乾燥すると、１５０μｌ／ウェルのシンチラント（ＭＩＣＲＯＳＣＩＮＴ−２０（商標）；Ｐａｃｋａｒｄ）が添加され、プレートは１０分間ＴＯＰＣＯＵＮＴ（商標）ガンマカウンター（Ｐａｃｋａｒｄ）上で計測される。最大結合の２０％以下を与えるそれぞれのＦａｂの濃度が、競合結合アッセイにおいて使用するために選択される。
【０２２４】
別の実施態様によれば、Ｋｄは、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）表面プラズモン共鳴アッセイを用いて測定される。例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）−２０００又はＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）−３０００（ＢＩＡｃｏｒｅ， Ｉｎｃ．， Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ， ＮＪ）を用いるアッセイが、〜１０反応単位（ＲＵ）で固定した抗原ＣＭ５チップを用いて２５℃で実施される。一実施態様において、カルボキシメチル化デキストランバイオセンサーチップ（ＣＭ５、ＢＩＡＣＯＲＥ，Ｉｎｃ．）は、供給業者の使用説明書に従って、Ｎ−エチル−Ｎ’−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）及びＮ−ヒドロキシコハク酸イミド（ＮＨＳ）で活性化される。抗原は、流量５μｌ／分での注入前に１０ｍＭの酢酸ナトリウム、ｐＨ４．８で５μｇ／ｍｌ（約０．２μＭ）まで希釈されて、およそ１０応答単位（ＲＵ）の連結タンパク質を達成する。抗原の注入に続いて、１Ｍのエタノールアミンが注入されて、未反応基をブロックする。動態測定では、Ｆａｂの２倍の段階希釈液（０．７８ｎＭから５００ｎＭ）が、２５℃、流量およそ２５μｌ／分で、０．０５％ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ−２０（登録商標））界面活性剤（ＰＢＳＴ）と一緒にＰＢＳに注入される。会合速度（ｋｏｎ）及び解離速度（ｋｏｆｆ）は、会合及び解離センサーグラムを同時に適合させることにより、単純な１対１Ｌａｎｇｍｕｉｒ結合モデル（ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ Ｓｏｆｔｗａｒｅバージョン３．２）を使用して計算される。平衡解離定数（Ｋｄ）は比ｋｏｆｆ／ｋｏｎとして計算される。例えば、Ｃｈｅｎら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９３：８６５〜８８１（１９９９）を参照されたい。上記の会合速度（ｏｎ−ｒａｔｅ）が表面プラズモン共鳴アッセイにより１０６Ｍ−１ｓ−１を超える場合、会合速度は、流動停止を備えたスペクトロフォメーター（ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｍｅｔｅｒ）（Ａｖｉｖ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）又は撹拌キュベットを備えた８００シリーズＳＬＭ−ＡＭＩＮＣＯ（商標）分光光度計（ＴｈｅｒｍｏＳｐｅｃｔｒｏｎｉｃ）などの分光計において測定される場合、漸増濃度の抗原の存在下、２５℃でＰＢＳ中２０ｎＭの抗−抗原抗体（Ｆａｂ形態）、ｐＨ７．２の蛍光放出強度の増加又は減少を測定する（励起＝２９５ｎｍ；放出＝３４０ｎｍ、１６ｎｍバンドパス）蛍光消光技術を使用することにより決定することができる。
【０２２５】
２．抗体断片
ある実施態様において、本明細書で提供される抗体は抗体断片である。抗体断片には、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ及びｓｃＦｖ断片ならびに下に記載される他の断片が含まれるが、これらに限定されない。ある種の抗体断片の概説については、Ｈｕｄｓｏｎら、Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９〜１３４（２００３）を参照されたい。ｓｃＦｖ断片の概説については、例えば、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ、Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ、第１１３巻、Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ及びＭｏｏｒｅ編、（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）、２６９〜３１５ページ（１９９４）を参照されたい。国際公開第９３／１６１８５号；ならびに米国特許第５５７１８９４号及び米国特許第５５８７４５８号も参照されたい。サルベージ受容体結合エピトープ残基を含みインビボ半減期が増大しているＦａｂ及びＦ（ａｂ’）２断片の考察については、米国特許第５８６９０４６号を参照されたい。
【０２２６】
ダイアボディは、二価又は二重特異性のこともある２つの抗原結合部位のある抗体断片である。例えば、ＥＰ４０４，０９７；国際公開第１９９３／０１１６１号；Ｈｕｄｓｏｎら、Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９〜１３４（２００３）；及びＨｏｌｌｉｎｇｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：６４４４〜６４４８（１９９３）を参照されたい。トリアボディ及びテトラボディもＨｕｄｓｏｎら、Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９〜１３４（２００３）に記載されている。
【０２２７】
単一ドメイン抗体は、抗体の重鎖可変ドメインの全てもしくは一部又は軽鎖可変ドメインの全てもしくは一部を含む抗体断片である。ある特定の実施態様では、単一ドメイン抗体はヒト単一ドメイン抗体である（Ｄｏｍａｎｔｉｓ，Ｉｎｃ．、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ；例えば、米国特許第６２４８５１６号を参照）。
【０２２８】
抗体断片は、本明細書に記載されているように、インタクトな抗体のタンパク質消化及び組換え宿主細胞（例えば、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）又はファージ）による産生を含むがこれらに限定されない種々の技法により作製することができる。
【０２２９】
３．キメラ及びヒト化抗体
ある特定の実施態様では、本明細書に提供される抗体はキメラ抗体である。ある種のキメラ抗体は、例えば、米国特許第４８１６５６７号及びＭｏｒｒｉｓｏｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８１：６８５１〜６８５５（１９８４）に記載されている。一例では、キメラ抗体は非ヒト可変領域（例えば、マウス、ラット、ハムスター、ウサギ、又はサルなどの非ヒト霊長類由来の可変領域）及びヒト定常領域を含む。更なる例では、キメラ抗体は、クラス又はサブクラスが親抗体のクラス又はサブクラスから変えられている「クラス転換された」抗体である。キメラ抗体にはその抗原結合断片が含まれる。
【０２３０】
ある特定の実施態様では、キメラ抗体はヒト化抗体である。典型的には、非ヒト抗体は、ヒトへの免疫原性を抑えるために親非ヒト抗体の特異性及び親和性を保持したままヒト化される。一般的には、ヒト化抗体は、ＨＶＲ、例えば、ＣＤＲ（又はその部分）が非ヒト抗体由来でＦＲ（又はその部分）がヒト抗体配列由来である１つ又は複数の可変ドメインを含む。ヒト化抗体は、場合によって、ヒト定常領域の少なくとも一部も含むことになる。幾つかの実施態様では、ヒト化抗体中の一部のＦＲ残基は、例えば、抗体特異性又は親和性を回復又は改善するために非ヒト抗体（例えば、ＨＶＲ残基が由来する抗体）由来の対応する残基で置換される。
【０２３１】
ヒト化抗体及びそれを作製する方法は、例えば、Ａｌｍａｇｒｏ及びＦｒａｎｓｓｏｎ、Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９〜１６３３（２００８）で概説されており、例えば、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら、Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３〜３２９（１９８８）；Ｑｕｅｅｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：１００２９〜１００３３（１９８９）；米国特許第５８２１３３７号、米国特許第７５２７７９１号、米国特許第６９８２３２１号、及び米国特許第７０８７４０９号；Ｋａｓｈｍｉｒｉら、Ｍｅｔｈｏｄｓ ３６：２５〜３４（２００５）（特異性決定領域（ＣＤＲ）移植法を記載している）；Ｐａｄｌａｎ、Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２８：４８９〜４９８（１９９１）（「リサーフェイシング」を記載している）；Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａら、Ｍｅｔｈｏｄｓ ３６：４３〜６０（２００５）（「ＦＲシャフリング」を記載している）；ならびにＯｓｂｏｕｒｎら、Ｍｅｔｈｏｄｓ ３６：６１〜６８（２００５）及びＫｌｉｍｋａら、Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ、８３：２５２〜２６０（２０００）（ＦＲシャフリングへの「誘導選択」アプローチを記載している）に更に記載されている。
【０２３２】
ヒト化のために使用されうるヒトフレームワーク領域には、「ベストフィット」法を使用して選択されるフレームワーク領域（Ｓｉｍｓら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２２９６（１９９３））；軽鎖又は重鎖可変領域の特定のサブグループのヒト抗体のコンセンサス配列由来のフレームワーク領域（Ｃａｒｔｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８９：４２８５（１９９２）；及びＰｒｅｓｔａら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１５１：２６２３（１９９３））；ヒト成熟（体細胞的に変異した）フレームワーク領域又はヒト生殖系列フレームワーク領域（Ａｌｍａｇｒｏ及びＦｒａｎｓｓｏｎ、Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９〜１６３３（２００８））；及びＦＲライブラリーをスクリーニングすることに由来するフレームワーク領域（Ｂａｃａら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：１０６７８〜１０６８４（１９９７）及びＲｏｓｏｋら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１：２２６１１〜２２６１８（１９９６））が含まれるが、これらに限定されない。
【０２３３】
４．ヒト抗体
ある特定の実施態様では、本明細書に提供される抗体はヒト抗体である。ヒト抗体は当技術分野で公知の種々の技術を使用して産生することができる。ヒト抗体は一般的には、ｖａｎ Ｄｉｊｋ及びｖａｎ ｄｅ Ｗｉｎｋｅｌ、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．５：３６８〜７４（２００１）ならびにＬｏｎｂｅｒｇ、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０：４５０〜４５９（２００８）に記載されている。
【０２３４】
ヒト抗体は、抗原投与に応答してヒト可変領域を有するインタクトなヒト抗体又はインタクトな抗体を産生するように改変されているトランスジェニック動物に免疫原を投与することにより調製しうる。そのような動物は典型的には、ヒト免疫グロブリン遺伝子座の全て又は一部を含有しており、その遺伝子座は内在性免疫グロブリン遺伝子座に取って代わる、又は染色体外に存在するもしくは動物の染色体中に無作為に取り込まれる。そのようなトランスジェニックマウスでは、内在性免疫グロブリン遺伝子座は一般的には不活化されている。トランスジェニック動物からヒト抗体を得るための方法の概説については、Ｌｏｎｂｅｒｇ、Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２３：１１１７〜１１２５（２００５）を参照されたい。例えば、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥＴＭ（商標）技術を記載している米国特許第６０７５１８１号及び米国特許第６１５０５８４号；ＨｕＭａｂ（登録商標）技術を記載している米国特許第５７７０４２９号；Ｋ−Ｍ ＭＯＵＳＥ（登録商標）技術を記載している米国特許第７０４１８７０号及びＶｅｌｏｃｉＭｏｕｓｅ（登録商標）技術を記載している米国特許出願公開第２００７／００６１９００号も参照されたい。そのような動物により産生されるインタクトな抗体由来のヒト可変領域は、例えば、異なるヒト定常領域と組み合わせることにより更に改変しうる。
【０２３５】
ヒト抗体はハイブリドーマベースの方法によっても作製することができる。ヒトモノクローナル抗体の産生のためのヒト骨髄腫及びマウス−ヒトヘテロ骨髄腫細胞系は記載されている。（例えば、Ｋｏｚｂｏｒ Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１３３：３００１（１９８４）；Ｂｒｏｄｅｕｒら、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ， ｐｐ． ５１−６３（Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ， Ｉｎｃ．， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， １９８７）；及びＢｏｅｒｎｅｒら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１４７：８６（１９９１）を参照されたい）。ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術を介して産生されるヒト抗体も、Ｌｉら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、１０３：３５５７〜３５６２（２００６）に記載されている。追加の方法には、例えば、米国特許第７１８９８２６号（ハイブリドーマ細胞系からのモノクローナルヒトＩｇＭ抗体の産生を記載している）及びＮｉ、Ｘｉａｎｄａｉ Ｍｉａｎｙｉｘｕｅ、２６（４）：２６５〜２６８（２００６）（ヒト−ヒトハイブリドーマを記載している）に記載されている方法が含まれる。ヒトハイブリドーマ技術（トリオーマ（Ｔｒｉｏｍａ）技術）も、Ｖｏｌｌｍｅｒｓ及びＢｒａｎｄｌｅｉｎ、Ｈｉｓｔｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ、２０（３）：９２７〜９３７（２００５）ならびにＶｏｌｌｍｅｒｓ及びＢｒａｎｄｌｅｉｎ、Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ｆｉｎｄｉｎｇｓ ｉｎ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ、２７（３）：１８５〜９１（２００５）に記載されている。
【０２３６】
ヒト抗体は、ヒト由来ファージディスプレイライブラリーから選択されるＦｖクローン可変ドメイン配列を単離することによっても産生しうる。次に、そのような可変ドメイン配列は所望のヒト定常ドメインと組み合わせうる。抗体ライブラリーからヒト抗体を選択する技法は下に記載されている。
【０２３７】
５．ライブラリー由来抗体
本発明の抗体は、１種又は複数の所望の活性を有する抗体を求めてコンビナトリアルライブラリーをスクリーニングすることにより単離しうる。例えば、ファージディスプレイライブラリーを作製し所望の結合特徴を有する抗体を求めてそのようなライブラリーをスクリーニングするための種々の方法は当技術分野では公知である。そのような方法は、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍら、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ １７８：１〜３７（Ｏ’Ｂｒｉｅｎら編、Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ、Ｔｏｔｏｗａ、ＮＪ、２００１）で概説されており、例えば、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら、Ｎａｔｕｒｅ ３４８：５５２〜５５４；Ｃｌａｃｋｓｏｎら、Ｎａｔｕｒｅ ３５２：６２４〜６２８（１９９１）；Ｍａｒｋｓら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１〜５９７（１９９２）；Ｍａｒｋｓ及びＢｒａｄｂｕｒｙ、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ２４８：１６１〜１７５（Ｌｏ編 Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ、Ｔｏｔｏｗａ、ＮＪ、２００３）；Ｓｉｄｈｕら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３８（２）：２９９〜３１０（２００４）；Ｌｅｅら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３４０（５）：１０７３〜１０９３（２００４）；Ｆｅｌｌｏｕｓｅ、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １０１（３４）：１２４６７〜１２４７２（２００４）；ならびにＬｅｅら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２８４（１−２）：１１９〜１３２（２００４）に更に記載されている。
【０２３８】
ある種のファージディスプレイ法では、Ｗｉｎｔｅｒら、Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１２：４３３〜４５５（１９９４）に記載されているように、ＶＨ及びＶＬ遺伝子のレパートリーはポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）により別々にクローニングされ、ファージライブラリーにおいて無作為に組み換えられ、これは次に抗原結合ファージを求めてスクリーニングすることができる。ファージは典型的には、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）断片として又はＦａｂ断片としての何れかで抗体断片を提示する。免疫源由来のライブラリーは、ハイブリドーマの構築を要することなく免疫原に対して高親和性の抗体を提供する。代わりに、Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓら、ＥＭＢＯ Ｊ、１２：７２５〜７３４（１９９３）により記載されているように、未処置のレパートリーをクローニングして（例えば、ヒトから）いかなる免疫化もせずに広範な非自己抗原及び自己抗原にも単一源の抗体を提供することができる。最後に、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ及びＷｉｎｔｅｒ、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２２７：３８１〜３８８（１９９２）により記載されているように、幹細胞から再配列されていないＶ−遺伝子セグメントをクローニングし、高度に可変性のＣＤＲ３領域をコードし、インビトロで再配列を実現するランダム配列を含有するＰＣＲプライマーを使用することにより、未処置のライブラリーを合成的に作製することもできる。ヒト抗体ファージライブラリーを記載する特許公報には、例えば、米国特許第５７５０３７３号、ならびに米国特許出願公開第２００５／００７９５７４号、米国特許出願公開第２００５／０１１９４５５号、米国特許出願公開第２００５／０２６６０００号、米国特許出願公開第２００７／０１１７１２６号、米国特許出願公開第２００７／０１６０５９８号、米国特許出願公開第２００７／０２３７７６４号、米国特許出願公開第２００７／０２９２９３６号、及び米国特許出願公開第２００９／０００２３６０号が含まれる。
【０２３９】
ヒト抗体ライブラリーから単離された抗体又は抗体断片は、本明細書ではヒト抗体又はヒト抗体断片と見なされる。
【０２４０】
６．多特異的抗体
ある特定の実施態様では、本明細書に提供される抗体は多特異的抗体、例えば、二重特異的抗体である。多特異的抗体は、少なくとも２つの異なる部位に対する結合特異性を有するモノクローナル抗体である。ある種の実施態様では、結合特異性の１つは、ＲＳＰＯ（例えば、ＲＳＰＯ２及び／又はＲＳＰＯ３）であり、他は、他の任意の抗原に対してである。ある特定の実施態様では、二重特異的抗体はＲＳＰＯの２つの異なるエピトープに結合しうる。二重特異的抗体はまた、ＲＳＰＯ（例えば、ＲＳＰＯ２及び／又はＲＳＰＯ３）を発現する細胞に細胞傷害剤を局在化させるために使用することもできる。幾つかの実施態様において、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）は、ＲＳＰＯ２及びＲＳＰＯ３に結合する。幾つかの実施態様において、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）は、５Ｅ１１のＨＶＲを含む第一可変ドメイン及び３６Ｄ２のＨＶＲを含む第二可変ドメインを含む。幾つかの実施態様において、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）は、５Ｄ６のＨＶＲを含む第一可変ドメイン及び３６Ｄ２のＨＶＲを含む第二可変ドメインを含む。幾つかの実施態様において、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）は、５Ｅ１１のＨＶＲを含む第一可変ドメイン及び１Ａ１のＨＶＲを含む第二可変ドメインを含む。幾つかの実施態様において、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）は、５Ｄ６のＨＶＲを含む第一可変ドメイン及び１Ａ１のＨＶＲを含む第二可変ドメインを含む。二重特異的抗体は、完全長抗体又は抗体断片として調製することができる。
【０２４１】
多特異的抗体を作製するための技法には、異なる特異性を有する２つの免疫グロブリン重鎖−軽鎖対の組換え同時発現（Ｍｉｌｓｔｅｉｎ及びＣｕｅｌｌｏ、Ｎａｔｕｒｅ ３０５：５３７（１９８３）、国際公開第９３／０８８２９号及びＴｒａｕｎｅｃｋｅｒら、ＥＭＢＯ Ｊ．１０：３６５５（１９９１）参照）、及び「ノブインホール」工学（例えば、米国特許第５７３１１６８号参照）が含まれるが、これらに限定されない。抗体Ｆｃヘテロダイマー分子を作製するために静電気的ステアリング効果を操作する（国際公開第２００９／０８９００４号（Ａ１））；２つ又はそれよりも多い抗体又は断片を架橋する（例えば、米国特許第４６７６９８０号及びＢｒｅｎｎａｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２２９：８１（１９８５）参照）；ロイシンジッパーを使用して二重特異的抗体を産生する（例えば、Ｋｏｓｔｅｌｎｙら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１４８（５）：１５４７〜１５５３（１９９２）参照）；二重特異的抗体断片を作製するために「ダイアボディ」技術を使用する（例えば、Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９０：６４４４〜６４４８（１９９３）参照）；及び一本鎖Ｆｖ（ｓＦｖ）ダイマーを使用する（例えば、Ｇｒｕｂｅｒら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１５２：５３６８（１９９４）参照）；ならびにＴｕｔｔら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：６０（１９９１）に記載されている三重特異的抗体を調製することにより、多特異的抗体を作製してもよい。
【０２４２】
「オクタパス抗体」を含む、３つ又はそれよりも多い機能的抗原結合部位を有する操作された抗体も本明細書に含まれる（例えば、米国特許第２００６／００２５５７６号を参照）。
【０２４３】
本明細書の抗体又は断片には、複数のＲＳＰＯ（例えば、ＲＳＰＯ２及び／又はＲＳＰＯ３）に結合する抗原結合部位を含む「二重作用ＦＡｂ」又は「ＤＡＦ」も含まれる（例えば、米国特許第２００８／００６９８２０号を参照）。
【０２４４】
７．抗体変異体
ある実施態様において、本明細書に提供される抗体のアミノ酸配列変異体が意図される。例えば、抗体の結合親和性及び／又は他の生物学的特性を改善することが望まれ得る。抗体のアミノ酸配列変異体は、抗体をコードするヌクレオチド配列に適切な改変を導入することにより、又はペプチド合成によって調製することができる。このような改変は、例えば、抗体のアミノ酸配列内における、残基の欠失、及び／又は挿入及び／又は置換を含む。最終コンストラクトが所望の特性、例えば、抗原結合を有していることを条件として、欠失、挿入、及び置換の任意の組み合わせが、最終コンストラクトに到達させるために作成され得る。
【０２４５】
ａ）置換、挿入、及び欠失変異体
ある実施態様において、一つ以上のアミノ酸置換を有する抗体変異体が提供される。置換型変異誘発の対象となる部位は、ＨＶＲとＦＲを含む。保存的置換は、表１の「好ましい置換」の見出しの下に示されている。より実質的な変更が、表１の「例示的置換」の見出しの下に与えられ、アミノ酸側鎖のクラスを参照して以下に更に説明される。アミノ酸置換は対象の抗体に導入され、生成物は、所望の活性、例えば、保持された／改善された抗原結合性、減少した免疫原性、又は改善されたＡＤＣＣもしくはＣＤＣについてスクリーニングされうる。
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【０２４６】
アミノ酸は共通の側鎖特性に基づいてグループに分けることができる：
（１）疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；
（２）中性の親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ；
（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；
（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；
（５）鎖配向に影響する残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；
（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ
【０２４７】
非保存的置換は、これらのクラスのうちの１つのメンバーを別のクラスと交換することを必要とする。
【０２４８】
置換変異体は、親抗体（例えば、ヒト化又はヒト抗体）の１つ又は複数の高頻度可変領域残基を置換することを伴う。一般に、更なる研究のために選択される１つ又は複数のこうして得られる変異体は、親抗体と比べてある種の生物学的特性（例えば、増加した親和性、減少した免疫原性）に改変（例えば、改善）を有することになる及び／又は親抗体のある種の生物学的特性を実質的に保持していることになる。例となる置換変異体は親和性成熟抗体であり、この抗体は、例えば、本明細書に記載されている技法などのファージディスプレイベースの親和性成熟技術を使用して簡便に産生しうる。手短に言えば、１つ又は複数のＨＶＲ残基は変異され、変異体抗体はファージ上に提示され、特定の生物活性（例えば、結合親和性）を求めてスクリーニングされる。
【０２４９】
例えば、抗体親和性を改善するために、ＨＶＲにおいて変更（例えば、置換）を加えることもできる。かかる改変はＨＶＲ「ホットスポット」、すなわち、体細胞成熟過程中に高頻度で変異を受けるコドンによりコードされている残基（例えば、Ｃｈｏｗｄｈｕｒｙ、Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２０７：１７９〜１９６（２００８）参照）、及び／又は抗原に接触する残基において加えることができ、こうして得られる変異体ＶＨ又はＶＬは結合親和性について試験される。二次ライブラリーを構築しそこから再選択することによる親和性成熟は、例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍｒａ、ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ １７８：１〜３７（Ｏ’Ｂｒｉｅｎら、編、Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ、Ｔｏｔｏｗａ、ＮＪ（２００１））に記載されている。親和性成熟の幾つかの実施態様では、種々の方法（例えば、エラープローンＰＣＲ、チェインシャフッリング、又はオリゴヌクレオチド指向性突然変異）のうちの何れかにより成熟のために選択された可変遺伝子に多様性が導入される。次に、二次ライブラリーが作製される。次に、前記ライブラリーはスクリーニングされて、所望の親和性を有る任意の抗体変異体を同定する。多様性を導入する別の方法は、幾つかのＨＶＲ領域（例えば、１度に４〜６残基）がランダム化されるＨＶＲ指向性アプローチを伴う。抗原結合に関与するＨＶＲ残基は、例えば、アラニンスキャニング変異誘発又はモデリングを使用して、特異的に同定しうる。ＣＤＲ−Ｈ３及びＣＤＲ−Ｌ３は特に標的にされることが多い。
【０２５０】
ある特定の実施態様では、置換、挿入、又は欠失は、そのような変更が抗原に結合する抗体の能力を実質的に減少させない限り、１つ又は複数のＨＶＲ内で起こってもよい。例えば、結合親和性を実質的に減少させない保存的改変（例えば、本明細書で提供される保存的置換）をＨＶＲ内で行うことができる。そのような改変は、例えば、ＨＶＲ内の抗原接触残基の外側であってよい。上に提供される変異体ＶＨ及びＶＬ配列のある特定の実施態様では、それぞれのＨＶＲは、改変されない、又は１つ以下、２つ以下又は３つ以下のアミノ酸置換を含有する。
【０２５１】
変異誘発のために標的にされうる抗体の残基又は領域の同定のための有用な方法は、Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ及びＷｅｌｌｓ（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ、２４４：１０８１〜１０８５により記載されているように、「アラニンスキャニング変異誘発」と呼ばれる。この方法では、残基又は残基のグループ（例えば、Ａｒｇ、Ａｓｐ、Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、及びＧｌｕなどの荷電残基）は中性又は負電荷を帯びたアミノ酸（例えば、アラニン又はポリアラニン）により同定され置き換えられて、抗体と抗原との相互作用が影響を受けるかどうかが決定される。追加の置換が前記アミノ酸位に導入されて、最初の置換に対する機能的感受性を実証してもよい。その代わりに、又はそれに加えて、抗体と抗原の間の接触点を同定する抗原−抗体複合体の結晶構造。そのような接触残基及び隣接残基が、置換の候補として標的とされるか又は排除され得る。変異体はそれらが所望の特性を含むかどうかを決定するためにスクリーニングされ得る。
【０２５２】
アミノ酸配列挿入には、１残基から１００又はそれよりも多い残基を含有するポリペプチドまでの長さに及ぶアミノ−及び／又はカルボキシル末端融合物、ならびに単一又は複数のアミノ酸残基の配列内挿入が含まれる。末端挿入の例には、Ｎ末端メチオニル残基を有する抗体が含まれる。抗体分子の他の挿入変異体には、抗体の血清半減期を増加させる酵素（例えば、ＡＤＥＰＴのため）又はポリペプチドへの抗体のＮ−又はＣ−末端の融合が含まれる。
【０２５３】
ｂ）グリコシル化変異体
ある実施態様において、本明細書で提供される抗体は、抗体がグリコシル化される程度を増加又は減少させるように改変される。抗体へのグリコシル化部位の付加又は削除は、１つ又は複数のグリコシル化部位が作り出される又は取り除かれるようにアミノ酸配列を変化させることにより都合よく実現しうる。
【０２５４】
抗体がＦｃ領域を含む場合、それに結合している炭水化物を変化させうる。哺乳動物細胞により産生された未処置の抗体は典型的には、一般的にはＦｃ領域のＣＨ２ドメインのＡｓｎ２９７へのＮ連結により結合している分岐した二分岐オリゴ糖を含む。例えば、Ｗｒｉｇｈｔら、ＴＩＢＴＥＣＨ １５：２６〜３２（１９９７）を参照されたい。オリゴ糖は種々の炭水化物、例えば、マンノース、Ｎ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）、ガラクトース、及びシアル酸、ならびに二分岐オリゴ糖構造体の「幹」においてＧｌｃＮＡｃに結合しているフコースを含むことがある。幾つかの実施態様では、本発明の抗体におけるオリゴ糖の改変は、ある種の改善された特性を有する抗体変更体を生み出すためになされうる。
【０２５５】
一実施態様では、Ｆｃ領域に結合している（直接的に又は間接的に）フコースを欠く炭水化物構造体を有する抗体変異体が提供される。例えば、そのような抗体中のフコースの量は、１％〜８０％、１％〜６５％、５％〜６５％又は２０％〜４０％まででもよい。フコースの量は、例えば、国際公開第２００８／０７７５４６号に記載されているように、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量分析により測定された場合、Ａｓｎ２９７に結合している全てのグリコ構造体（例えば、複合体、ハイブリッド及び高マンノース構造体）の合計と比べたＡｓｎ２９７での糖鎖内のフコースの平均量を計算することにより決定される。Ａｓｎ２９７とは、Ｆｃ領域のおおよそ２９７位（Ｆｃ残基のＥｕ番号付け）に位置しているアスパラギン残基のことであるが、Ａｓｎ２９７は、抗体中の小さな配列変動のせいで、２９７位から約±３アミノ酸上流又は下流、すなわち、２９４位〜３００位までの間に位置していることもある。そのようなフコシル化変異体は改善されたＡＤＣＣ機能を有することがある。例えば、米国特許出願公開第２００３／０１５７１０８号（Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ．）；米国特許出願公開第２００４／００９３６２１号（Ｋｙｏｗａ Ｈａｋｋｏ Ｋｏｇｙｏ Ｃｏ．，Ｌｔｄ）を参照されたい。「脱フコシル化（ｄｅｆｕｃｏｓｙｌａｔｅｄ）」又は「フコース欠損」抗体変異体に関係する出版物の例には、米国特許出願公開第２００３／０１５７１０８号；国際公開第２０００／６１７３９号；国際公開第２００１／２９２４６号；米国特許出願公開第２００３／０１１５６１４号；米国特許出願公開第２００２／０１６４３２８号；米国特許出願公開第２００４／００９３６２１号；米国特許出願公開第２００４／０１３２１４０号；米国特許出願公開第２００４／０１１０７０４号；米国特許出願公開第２００４／０１１０２８２号；米国特許出願公開第２００４／０１０９８６５号；国際公開第２００３／０８５１１９号；国際公開第２００３／０８４５７０号；国際公開第２００５／０３５５８６号；国際公開第２００５／０３５７７８号；国際公開第２００５／０５３７４２号；国際公開第２００２／０３１１４０号；Ｏｋａｚａｋｉら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３６：１２３９〜１２４９（２００４）；Ｙａｍａｎｅ−Ｏｈｎｕｋｉら、Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７：６１４（２００４）が含まれる。脱フコシル化抗体を産生することができる細胞系の例には、タンパク質フコシル化を欠損するＬｅｃ１３ ＣＨＯ細胞（Ｒｉｐｋａら、Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．２４９：５３３〜５４５（１９８６）；米国特許出願公開第２００３／０１５７１０８号、Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ；及びＷＯ２００４／０５６３１２、Ａｄａｍｓら、特に実施例１１）；及びアルファ−１，６−フコシルトランスフェラーゼ遺伝子、ＦＵＴ８、ノックアウトＣＨＯ細胞などのノックアウト細胞系（例えば、Ｙａｍａｎｅ−Ｏｈｎｕｋｉら、Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７：６１４ページ（２００４）；Ｋａｎｄａ，Ｙ．ら、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．、９４（４）：６８０〜６８８（２００６）；及び国際公開第２００３／０８５１０７号）が含まれる。
【０２５６】
二分されたオリゴ糖を有する、すなわち、抗体のＦｃ領域に結合した二分岐オリゴ糖がＧｌｃＮＡｃにより二分されている抗体変異体が更に提供される。そのような抗体変異体は減少したフコシル化及び／又は改善されたＡＤＣＣ機能を有しうる。そのような抗体変異体の例は、例えば、国際公開第２００３／０１１８７８号（Ｊｅａｎ−Ｍａｉｒｅｔら）；米国特許第６６０２６８４号（Ｕｍａｎａら）；及び米国特許出願公開第２００５／０１２３５４６号（Ｕｍａｎａら）に記載されている。Ｆｃ領域に結合しているオリゴ糖中に少なくとも１つのガラクトース残基を有する抗体変異体も提供される。そのような抗体変異体は改善されたＣＤＣ機能を有しうる。そのような抗体変異体は、例えば、国際公開第１９９７／３００８７号（Ｐａｔｅｌら）；国際公開第１９９８／５８９６４号（Ｒａｊｕ，Ｓ．）；及び国際公開第１９９９／２２７６４号（Ｒａｊｕ，Ｓ．）に記載されている。
【０２５７】
ｃ）Ｆｃ領域変異体
ある特定の実施態様では、１つ又は複数のアミノ酸改変を本明細書に提供される抗体のＦｃ領域に導入し、それによりＦｃ領域変異体を産生しうる。前記Ｆｃ領域変異体は、１つ又は複数のアミノ酸位にアミノ酸改変（例えば、置換）を含むヒトＦｃ領域配列（例えば、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４Ｆｃ領域）を含みうる。
【０２５８】
ある特定の実施態様では、本発明は、幾つかのしかし全てではないエフェクター機能を有する抗体変異体であって、そのエフェクター機能のおかげで、インビボでの抗体の半減期は重要であるがある種のエフェクター機能（例えば、補体及びＡＤＣＣ）は必要ではない又は有害である適用のための望ましい候補になる抗体変異体を想定している。インビトロ及び／又はインビボ細胞傷害性アッセイを行えば、ＣＤＣ及び／又はＡＤＣＣ活性の減少／枯渇を確認することができる。例えば、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）結合アッセイを行えば、抗体がＦｃγＲ結合を欠く（したがって、おそらくＡＤＣＣ活性を欠く）が、ＦｃＲｎ結合力は保持していることを確認することができる。ＡＤＣＣを媒介するための一次細胞、すなわちＮＫ細胞はＦｃγＲＩＩＩのみを発現するが、単球はＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ及びＦｃγＲＩＩＩを発現する。造血細胞上のＦｃＲ発現は、Ｒａｖｅｔｃｈ及びＫｉｎｅｔ、Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９：４５７〜４９２（１９９１）の４６４ページ表３に要約されている。対象の分子のＡＤＣＣ活性を評価するためのインビトロアッセイの非限定的例は、米国特許第５，５００，３６２号（例えば、Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍ，Ｉ．ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８３：７０５９〜７０６３（１９８６）参照）及びＨｅｌｌｓｔｒｏｍ，Ｉら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８２：１４９９〜１５０２（１９８５）；米国特許第５８２１３３７号（Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ，Ｍ．ら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１６６：１３５１〜１３６１（１９８７）参照）に記載されている。代わりに、非放射アッセイ法を用いることもある（例えば、ＡＣＴＩ（商標）ｎｏｎ−ｒａｄｉｏａｃｔｉｖｅ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ ａｓｓａｙ ｆｏｒ ｆｌｏｗ ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ（ＣｅｌｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ． Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ、ＣＡ）；及びＣｙｔｏＴｏｘ ９６（登録商標）ｎｏｎ−ｒａｄｉｏａｃｔｉｖｅ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ ａｓｓａｙ（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）参照）。そのようなアッセイに有用なエフェクター細胞には、末梢血単核球（ＰＢＭＣ）及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が含まれる。代わりに、又は加えて、対象の分子のＡＤＣＣ活性は、インビボで、例えば、Ｃｌｙｎｅｓら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９５：６５２〜６５６（１９９８）に開示されている動物モデルなどの動物モデルで評価しうる。Ｃ１ｑ結合アッセイも実施して、抗体がＣ１ｑに結合することができずしたがってＣＤＣ活性を欠くことを確認しうる。例えば、国際公開第２００６／０２９８７９号及び国際公開第２００５／１００４０２号におけるＣ１ｑ及びＣ３ｃ結合ＥＬＩＳＡを参照されたい。補体活性化を評価するため、ＣＤＣアッセイを実施しうる（例えば、Ｇａｚｚａｎｏ−Ｓａｎｔｏｒｏら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２０２：１６３（１９９６）；Ｃｒａｇｇ，Ｍ．Ｓ．ら、Ｂｌｏｏｄ １０１：１０４５〜１０５２（２００３）；ならびにＣｒａｇｇ，Ｍ．Ｓ．及びＭ．Ｊ．Ｇｌｅｎｎｉｅ、Ｂｌｏｏｄ １０３：２７３８〜２７４３（２００４）参照）。ＦｃＲｎ結合及びインビボ排除��半減期決定も、当技術分野で公知の方法を使用して実施することができる（例えば、Ｐｅｔｋｏｖａ，Ｓ．Ｂ．ら、Ｉｎｔ’ｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８（１２）：１７５９〜１７６９（２００６）参照）。
【０２５９】
エフェクター機能が減少した抗体には、Ｆｃ領域残基２３８、２６５、２６９、２７０、２９７、３２７及び３２９のうちの１つ又は複数の置換がある抗体が含まれる（米国特許第６，７３７，０５６号）。そのようなＦｃ変異体には、残基２６５及び２９７のアラニンへの置換があるいわゆる「ＤＡＮＡ」Ｆｃ変異体を含む、アミノ酸２６５位、２６９位、２７０位、２９７位及び３２７位のうちの２つ又はそれよりも多い位での置換のあるＦｃ変異体が含まれる（米国特許第７，３３２，５８１号）。幾つかの実施態様において、抗体は、ＥＵ番号付け規則に従って、アミノ酸位置２６５に操作されたアラニンを含む。幾つかの実施態様において、抗体は、ＥＵ番号付け規則に従って、アミノ酸位置２９７に操作されたアラニンを含む。
【０２６０】
ＦｃＲｓへの結合が改善されている又は減少しているある種の抗体変異体が記載されている（例えば、米国特許第６７３７０５６号；国際公開第２００４／０５６３１２号、及びＳｈｉｅｌｄｓら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．９（２）：６５９１〜６６０４（２００１）参照）。
【０２６１】
ある特定の実施態様では、抗体変異体はＡＤＣＣを改善する１つ又は複数のアミノ酸置換、例えば、Ｆｃ領域の２９８位、３３３位、及び／又は３３４位での置換のあるＦｃ領域を含む（残基のＥＵ番号付け）。
【０２６２】
幾つかの実施態様では、例えば、米国特許第６１９４５５１号、国際公開第９９／５１６４２号、及びＩｄｕｓｏｇｉｅら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６４：４１７８〜４１８４（２０００）に記載されているように、変化した（すなわち、改善された又は減少した）Ｃ１ｑ結合及び／又は補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）をもたらす変化がＦｃ領域においてなされる。
【０２６３】
半減期が増加し、母性ＩｇＧの胎児への移行の原因となる（Ｇｕｙｅｒら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１７：５８７（１９７６）及びＫｉｍら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：２４９（１９９４））新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）への結合が改善された抗体は米国特許出願公開第２００５／００１４９３４号（Ｈｉｎｔｏｎら）に記載されている。それらの抗体は、Ｆｃ領域のＦｃＲｎへの結合を改善する１つ又は複数の置換がその中にあるＦｃ領域を含む。そのようなＦｃ変異体には、Ｆｃ領域残基２３８、２５６、２６５、２７２、２８６、３０３、３０５、３０７、３１１、３１２、３１７、３４０、３５６、３６０、３６２、３７６、３７８、３８０、３８２、４１３、４２４又は４３４のうちの１つ又は複数に置換、例えば、Ｆｃ領域残基４３４の置換のあるＦｃ変異体が含まれる（米国特許第７３７１８２６号）。Ｆｃ領域変異体の他の例に関しては、Ｄｕｎｃａｎ＆Ｗｉｎｔｅｒ、Ｎａｔｕｒｅ ３２２：７３８〜４０（１９８８）；米国特許第５６４８２６０号；米国特許第５６２４８２１号；及び国際公開第９４／２９３５１号も参照されたい。
【０２６４】
ｄ）システイン操作抗体変異体
ある特定の実施態様では、抗体の１つ又は複数の残基がシステイン残基で置換されているシステイン操作抗体、例えば、「チオＭＡｂ」を作り出すのが望ましいことがある。特定の実施態様では、置換される残基は抗体の接触可能部位に存在する。更に本明細書で説明されるように、それらの残基をシステインで置換することにより、反応性チオール基はそれにより抗体の接触可能部位に置かれ、この基を使用して抗体を、薬物部分又はリンカー薬物部分などの他の部分にコンジュゲートさせて、免疫コンジュゲートを作り出しうる。ある特定の実施態様では、以下の残基：軽鎖のＶ２０５（Ｋａｂａｔ番号付け）；重鎖のＡ１１８（ＥＵ番号付け）；及び重鎖Ｆｃ領域のＳ４００（ＥＵ番号付け）のうちの任意の１つ又は複数をシステインで置換しうる。システイン操作抗体は、例えば、米国特許第７５２１５４１号に記載される通りに産生しうる。
【０２６５】
ｅ）抗体誘導体
ある実施態様において、本明細書で提供される抗体は、当技術分野で知られ、容易に入手される追加の非タンパク質部分を含むように更に改変することができる。抗体の誘導体化に適した部分としては、限定されないが、水溶性ポリマーを含む。水溶性ポリマーの非限定的な例は、限定されないが、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、エチレングリコール／プロピレングリコールの共重合体、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリ−１，３−ジオキソラン、ポリ−１，３，６−トリオキサン、エチレン／無水マレイン酸共重合体、ポリアミノ酸（単独重合体又はランダム共重合体の何れか）及びデキストラン又はポリ（ｎ−ビニルピロリドン）ポリエチレングリコール、プロピレングリコール単独重合体、プロピレンオキシド／エチレンオキシド共重合体、ポリオキシエチル化ポリオール（例えばグリセロール）、ポリビニルアルコール及びこれらの混合物を包含する。ポリエチレングリコールプロピオンアルデヒドはその水中での安定性に起因して製造における利点を有し得る。ポリマーは何れかの分子量のものであってよく、そして分枝鎖又は未分枝鎖であってよい。抗体に結合するポリマーの数は変動してよく、そして、一以上の重合体が結合する場合は、それらは同じか又は異なる分子であることができる。一般的に、誘導体化に使用するポリマーの数及び／又は種類は、限定されないが、向上させるべき抗体の特定の特性又は機能、抗体誘導体が限定された条件下で治療に使用されるのか等を含む考慮に基づいて決定することができる。
【０２６６】
別の実施態様において、放射線への曝露によって選択的に加熱され得る抗体と非タンパク質部分とのコンジュゲートが提供される。一実施態様では、非タンパク質性部分はカーボンナノチューブである（Ｋａｍら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １０２：１１６００〜１１６０５（２００５））。放射線は、任意の波長であって良いが、限定されないものの、通常の細胞に害を与えないが、抗体−非タンパク質部分の近位細胞が死滅される温度に非タンパク質部分を加熱する波長が含まれる。
【０２６７】
Ｂ．組換え法及び組成物
抗体は、例えば、米国特許第４８１６５６７号に記載されている組換え法及び組成物を使用して産生しうる。一実施態様では、本明細書に記載される抗ＲＳＰＯ抗体をコードする単離された核酸が提供される。このような核酸は、抗体のＶＬを含むアミノ酸配列、及び／又は抗体のＶＨを含むアミノ酸配列（例えば、抗体の軽鎖及び／又は重鎖）をコードし得る。更なる実施態様において、そのような核酸を含む一以上のベクター（例えば、発現ベクター）が提供される。更なる実施態様において、そのような核酸を含む宿主細胞が提供される。一つのそのような実施態様では、宿主細胞は、（１）抗体のＶＬを含むアミノ酸配列、及び抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含むベクター、又は（２）抗体のＶＬを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第一ベクター、及び抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第二ベクターを含む（例えば、これらのベクターで形質転換されている）。一実施態様において、宿主細胞は、真核生物、例えばチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、又はリンパ系細胞（例えば、Ｙ０、ＮＳ０、Ｓｐ２０細胞）である。一実施態様において、抗ＲＳＰＯ抗体を作製する方法であって、抗体の発現に適した条件下で、上に提供される抗体をコードする核酸を含む宿主細胞を培養し、場合により、宿主細胞（又は宿主細胞培養培地）から抗体及び／又はポリペプチドを回収することを含む方法が提供される。
【０２６８】
組換え産生では、例えば、上に記載される抗体をコードする核酸は単離され宿主細胞における更なるクローニング及び／又は発現のために１つ又は複数のベクター内に挿入される。そのような核酸は従来の手順を使用して（例えば、抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することができるオリゴヌクレオチドプローブを使用することにより）容易に単離され塩基配列決定される。
【０２６９】
抗体をコードするベクターのクローニング又は発現に適切な宿主細胞は、本明細書に記載の原核細胞又は真核細胞を含む。例えば、抗体は、特にグリコシル化及びＦｃエフェクター機能が必要ではない場合は細菌において産生しうる。細菌における抗体断片及びポリペプチドの発現については、例えば、米国特許第５６４８２３７号、米国特許第５７８９１９９号、及び米国特許第５８４０５２３号を参照されたい。（大腸菌における抗体断片の発現を記載しているＣｈａｒｌｔｏｎ、ＭＥＴＨＯＤＳ ＩＮ ＭＯＬ．ＢＩＯＬ．、２４８巻（Ｂ．Ｋ．Ｃ．Ｌｏ，編、Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ、Ｔｏｔｏｗａ、ＮＪ、２００３）、２４５〜２５４ページも参照）。発現後、抗体は可溶画分中の細菌細胞ペーストから単離しうる。
【０２７０】
原核生物に加えて、そのグリコシル化経路が「ヒト化」されており、部分的に又は完全にヒトグリコシル化パターンで抗体が産生される真菌及び酵母株を含む、繊維状真菌又は酵母などの真核微生物は、抗体をコードするベクターに適したクローニング又は発現宿主である。Ｇｅｒｎｇｒｏｓｓ、Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２２：１４０９〜１４１４（２００４）、及びＬｉら、Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２４：２１０〜２１５（２００６）を参照されたい。
【０２７１】
グリコシル化抗体の発現に適した宿主細胞も多細胞生物（無脊椎動物及び脊椎動物）に由来する。無脊椎動物細胞の例には植物及び昆虫細胞が含まれる。特にスポドプテラ・フルギペルダ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）細胞のトランスフェクションのために昆虫細胞と併せて使用しうる多数のバキュロウイルス株が同定されている。
【０２７２】
植物細胞培養物も宿主として利用することができる。例えば、米国特許第５９５９１７７号、米国特許第６０４０４９８号、米国特許第６４２０５４８号、米国特許第７１２５９７８号、及び米国特許第６４１７４２９号（トランスジェニック植物において抗体を産生するためのＰＬＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳＴＭ技術を記載している）を参照されたい。
【０２７３】
脊椎動物細胞も宿主として使用しうる。例えば、懸濁液で増殖するように適合されている哺乳動物細胞系統は有用でありうる。有用な哺乳動物細胞系統の他の例は、ＳＶ４０で形質転換されているサル腎臓ＣＶ１系統、ヒト胚性腎臓系統（例えば、Ｇｒａｈａｍら、Ｊ．Ｇｅｎ Ｖｉｒｏｌ．３６：５９（１９７７）に記載されている２９３又は２９３細胞）、ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ）、マウスセルトリ細胞（例えば、Ｍａｔｈｅｒ、Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．２３：２４３〜２５１（１９８０）に記載されているＴＭ４細胞）、サル腎臓細胞（ＣＶ１）、アフリカミドリザル腎臓細胞（ＶＥＲＯ−７６）、ヒト子宮頸癌細胞（ＨＥＬＡ）、イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ）、バッファローラット肝細胞（ＢＲＬ ３Ａ）、ヒト肺細胞（Ｗ１３８）、ヒト肝細胞（Ｈｅｐ Ｇ２）、マウス乳房腫瘍（ＭＭＴ０６０５６２）、例えば、Ｍａｔｈｅｒら、Ａｎｎａｌｓ Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．３８３：４４〜６８（１９８２）に記載されているＴＲＩ細胞、ＭＲＣ ５細胞、及びＦＳ４細胞である。他の有用な哺乳動物宿主細胞系統には、ＤＨＦＲ−ＣＨＯ細胞（Ｕｒｌａｕｂら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７７：４２１６（１９８０））を含む、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ならびにＹ０、ＮＳ０及びＳｐ２／０などの骨髄腫細胞系が含まれる。抗体産生及び／又は結合ポリペプチド産生に適したある種の哺乳動物宿主細胞系の概説については、例えば、Ｙａｚａｋｉ及びＷｕ、ＭＥＴＨＯＤＳ ＩＮ ＭＯＬ．ＢＩＯＬ．、２４８巻（Ｂ．Ｋ．Ｃ．Ｌｏ、編、Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ、Ｔｏｔｏｗａ、ＮＪ）、２５５〜２６８ページ（２００３）を参照されたい。
【０２７４】
Ｃ．アッセイ
本明細書で提供される抗ＲＳＰＯ抗体は、当技術分野で公知の様々なアッセイによってその物理的／化学的性質及び／又は生物学的活性について同定され、スクリーニングされ、又は特徴づけることができる。
【０２７５】
１．結合アッセイとその他のアッセイ
一態様において、本発明の抗体は、例えばＥＬＩＳＡ、ウエスタンブロット法など公知の方法により、その抗原結合活性について試験される。
【０２７６】
結合親和性を決定する方法は当該分野において既知である。幾つかの実施態様において、結合親和性は、本明細書において実施例１に記載されるようにＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）アッセイによって決定され得る。具体的には、幾つかの実施態様において、Ｋｄは、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）−３０００（ＢＩＡｃｏｒｅ，Ｉｎｃ．、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ）を使用して、表面プラズモン共鳴アッセイによって測定され得る。
【０２７７】
ＲＳＰＯのＬＧＲ（例えば、ＬＧＲ４、５及び／又は６）、シンデカン（例えば、ＳＤＣ４）、及び／又はＥ３ユビキチナーゼ（例えば、ＺＮＲＦ３及び／又はＲＮＦ４３）への結合を妨害及び／又は阻害する抗ＲＳＰＯ抗体の能力を決定する方法は当該分野において既知である。例えば、それらの全体が参照により本明細書に援用される、国際公開第２０１１／０７６９３２号、国際公開第２０１３０１２７４７号、Lau et al. Nature 476:293-297 (2011), Hao et al. Nature 485:195-200 (2012)を参照。幾つかの実施態様において、Ｒ−スポンジン（ＲＳＰＯ）のＬＧＲ、シンデカン、及び／又はＥ３ユビキチナーゼへの結合を有意に妨害する抗ＲＳＰＯ抗体の能力は、ＢＩＡｃｏｒｅアッセイ、及び／又はＥＬＩＳＡ（例えば、競合結合ＥＬＩＳＡ）によって決定され得る。幾つかの実施態様において、ＲＳＰＯのＬＧＲ（例えば、ＬＧＲ４、５及び／又は６）、シンデカン（例えば、ＳＤＣ４）、及び／又はＥ３ユビキチナーゼ（例えば、ＺＮＲＦ３及び／又はＲＮＦ４３）への結合を妨害及び／又は阻害する抗ＲＳＰＯ抗体の能力は、本明細書において実施例１に記載されるように競合結合ＥＬＩＳＡによって決定され得る。
【０２７８】
別の態様において、競合アッセイは、ＲＳＰＯ（例えば、ＲＳＰＯ２及び／又はＲＳＰＯ３）への結合について、４Ｈ１、４Ｄ４、５Ｃ２、５Ｄ６、５Ｅ１１、６Ｅ９、２１Ｃ２、２６Ｅ１１、１Ａ１、１１Ｆ１１、３６Ｄ２、及び／又は４９Ｇ５と競合する抗体を同定するために使用され得る。
【０２７９】
抗体競合を決定する方法は当該分野において既知である。例示的競合アッセイにおいて、固定化ＲＳＰＯ（例えば、ＲＳＰＯ２及び／又はＲＳＰＯ３）は、ＲＳＰＯ（例えば、ＲＳＰＯ２及び／又はＲＳＰＯ３）（例えば、４Ｈ１、４Ｄ４、５Ｃ２、５Ｄ６、５Ｅ１１、６Ｅ９、２１Ｃ２、２６Ｅ１１、１Ａ１、１１Ｆ１１、３６Ｄ２、及び／又は４９Ｇ５）に結合する第一標識抗体及び第一抗体とＲＳＰＯ（例えば、ＲＳＰＯ２及び／又はＲＳＰＯ３）への結合について競合するその能力について試験される第二非標識抗体を含む溶液中でインキュベートされる。第二抗体はハイブリドーマ上清中に存在してもよい。対照として、固定化ＲＳＰＯ（例えば、ＲＳＰＯ２及び／又はＲＳＰＯ３）が、第二未標識抗体でなく、第一標識抗体を含む溶液中でインキュベートされる。第一抗体のＲＳＰＯ（例えば、ＲＳＰＯ２及び／又はＲＳＰＯ３）への結合を許容する条件下でインキュベートした後、過剰の未結合の抗体が除去され、固定化ＲＳＰＯ（例えば、ＲＳＰＯ２及び／又はＲＳＰＯ３）に結合した標識の量が測定される。もし、固定化ＲＳＰＯ（例えば、ＲＳＰＯ２及び／又はＲＳＰＯ３）に結合した標識の量が、対照試料と比較して試験試料中で実質的に減少している場合、それは、第二抗体が、ＲＳＰＯ（例えば、ＲＳＰＯ２及び／又はＲＳＰＯ３）への結合に対して、第一抗体と競合していることを示している。Harlow and Lane (1988)Antibodies: A Laboratory Manual ch.14 (Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY)を参照。
【０２８０】
エピトープビニング及び／又は２つの抗体が結合について競合するかどうかを決定するために有用である別の例示的競合アッセイは、実施例１に記載される。幾つかの実施態様において、エピトープビニング及び／又は２つの抗体が結合について競合するかどうかを決定すことは、本明細書において実施例１に記載されるように、Ｏｃｔｅｔ（登録商標）アッセイによって決定され得る。
【０２８１】
ある実施態様において、抗体は、４Ｈ１、４Ｄ４、５Ｃ２、５Ｄ６、５Ｅ１１、６Ｅ９、２１Ｃ２、２６Ｅ１１、１Ａ１、１１Ｆ１１、３６Ｄ２、及び／又は４９Ｇ５に結合される同じエピトープ（例えば、線形又は構造的エピトープ）に結合する。抗体が結合するエピトープをマッピングするための詳細な典型的な方法が、Methods in Molecular Biology vol. 66 (Humana Press, Totowa, NJ）のMorris (1996)“Epitope Mapping Protocols,"）に提供されている。幾つかの実施態様において、エピトープは、ペプチド競合によって決定される。幾つかの実施態様において、エピトープは、質量分析によって決定される。幾つかの実施態様において、エピトープは、結晶学によって決定される。結晶学の例示的方法が実施例１に記載される。
【０２８２】
２．活性のアッセイ
一態様において、アッセイは、生物学的活性を有するそれらの抗ＲＳＰＯ抗体を同定するために与えられる。生物学的活性は、例えば、ｗｎｔシグナル伝達を阻害する、血管新生を阻害する、細胞増殖を阻害する、がん幹細胞の増殖を阻害する、及び／又はがん幹細胞を枯渇させることを含み得る。インビボ及び／又はインビトロでこのような生物学的活性を有する抗体もまた提供される。
【０２８３】
ｗｎｔ／β−カテニンシグナル伝達を妨害する抗ＲＳＰＯ抗体の能力を決定する方法は当該技術分野で知られている。例えば、その全体が参照により本明細書に援用される、国際公開第２００５／０４０４１８号及び国際公開第２０１３／０１２７４７号を参照。幾つかの実施態様において、ｗｎｔ／β−カテニンシグナル伝達を有意に妨害する抗ＲＳＰＯ抗体の能力は、レポーター遺伝子アッセイを使用して決定され得る。幾つかの実施態様において、ｗｎｔ／β−カテニン応答性プロモーター（例えば、多量体化ＴＣＦ／ＬＥＦ ＤＮＡ結合部位を含むプロモーター）の制御下で、レポーター遺伝子を含むレポーターコンストラクト（例えば、ルシフェラーゼ遺伝子など）を細胞にトランスフェクトすることができる。次いで、細胞を、抗ＲＳＰＯ抗体の存在下及び非存在下で、Ｗｎｔ３ａなどのＷｎｔリガンド、及びＲＳＰＯ１、ＲＳＰＯ２、ＲＳＰＯ３、及び／又はＲＳＰＯ４などのＲＳＰＯと接触させ、ルシフェラーゼ発現が測定される。
【０２８４】
血管新生及び／又は脈管形成を阻害する抗ＲＳＰＯ抗体の能力を決定する方法は当該技術分野で知られている。例えば、その全体が参照により本明細書に援用される、国際公開第２００８／０４６６４９号を参照。アッセイの例は、インビボマトリゲルプラグ及び角膜血管新生アッセイ、インビボ／インビトロヒヨコ絨毛尿膜（ＣＡＭ）アッセイ、インビトロ細胞性（増殖、移動、管形成）及び器官型（大動脈リング）アッセイ、ヒヨコ大動脈弓アッセイ、及びマトリゲルスポンジアッセイを含む。
【０２８５】
幹細胞分化及び／又はがん幹細胞枯渇を誘導する抗ＲＳＰＯ抗体の能力を決定する方法は当該技術分野で知られている。例えば、その全体が参照により本明細書に援用される、国際公開第２０１３／０３６８６７号を参照。幾つかの実施態様において、幹細胞の分化は、小腸における高速サイクリング幹細胞である陰窩基底部円柱細胞（ＣＢＣ）の、抗ＲＳＰＯ抗体の存在下及び非存在下での、例えば、腸細胞、杯細胞、及び／又は腸内分泌細胞への分化能力を決定することによりアッセイされ得る。
【０２８６】
ある実施態様において、本発明の抗体は、本明細書中及び及びその全体が参照により本明細書に援用される国際公開第２００５／０４０４１８号、国際公開第２００８／０４６６４９号、国際公開第２０１１／０７６９３２号、国際公開第２０１３／０１２７４７号、国際公開第２０１３／０５４３０７号、Lau et al. Nature 476:293-297 (2011), Hao et al. Nature 485:195-200 (2012)に記載されるアッセイにより、かかる生物学的活性及び／又は結合相互作用について試験される。
【０２８７】
幾つかの実施態様において、エピトープは、結晶学によって決定される。幾つかの実施態様において、結晶学的によって決定されるエピトープは、ＲＳＰＯ３のアミノ酸Ｍ３３−Ｅ２１０を用いて決定される。幾つかの実施態様において、結晶学的によって決定されるエピトープは、１００ｎＬのシッティングドロップを使用して複数の疎行列結晶スクリーンを設定するＬａｂｃｙｔｅ Ｅｃｈｏ液体ハンドラーを用いて行われる。スクリーンは、１８℃で保存された。幾つかの実施態様において、結晶は、母液として１００ｍＭのＭＩＢのｐＨ９及び２５％ＰＥＧ１５００を含有するドロップ中で得ることができる。幾つかの実施態様において、結晶は、母液として２００ｍＭのギ酸ナトリウム及び２０％（ｗ／ｖ）のＰＥＧ３，３５０を含有するドロップ中で得ることができる。幾つかの実施態様において、結晶は回収され、１０秒間、抗凍結剤溶液に浸漬され、液体窒素中で急速凍結されうる。幾つかの実施態様において、抗凍結剤溶液は、１μＬの７０％グリセロールを１．８μＬのリザーバー溶液と混合することによって作ることができる。幾つかの実施態様において、結晶は、ＰＥＧベースの条件で、例えば、約２０−２５％のＰＥＧ３，３５０中で成長させることができる。幾つかの実施態様において、結晶は、約２０％のＰＥＧ６０００、約２０−２５％のＰＥＧ４０００、及び約２５％のＰＥＧ１５００中で成長させることができる。幾つかの実施態様において、ｐＨは、約３．５−９の範囲、例えば、約７から約８の間であってもよい。幾つかの実施態様において、塩濃度は、約２００ｍＭである。
【０２８８】
Ｄ．イムノコンジュゲート
本発明はまた、化学療法剤又は薬物、成長抑制剤、毒素（例えば、タンパク質毒素、細菌、真菌、植物、又は動物起源の酵素活性毒素、又はそれらの断片）、又は放射性同位元素など、１つ以上の細胞傷害性薬物にコンジュゲートした本明細書中の抗ＲＳＰＯ抗体を含むイムノコンジュゲートを提供する。
【０２８９】
一実施態様では、イムノコンジュゲートは、メイタンシノイド（米国特許第５２０８０２０号、米国特許第５４１６０６４号及び欧州特許ＥＰ０ ４２５ ２３５Ｂ１参照）；モノメチルオーリスタチン薬物部分ＤＥ及びＤＦ（ＭＭＡＥ及びＭＭＡＦ）などのオーリスタチン（米国特許第５６３５４８３号及び米国特許第５７８０５８８号及び米国特許第７４９８２９８号参照）；ドラスタチン；カリチアマイシンもしくはその誘導体（米国特許第５７１２３７４号、米国特許第５７１４５８６号、米国特許第５７３９１１６号、米国特許第５７６７２８５号、米国特許第５７７０７０１号、米国特許第５７７０７１０号、米国特許第５７７３００１号、及び米国特許第５８７７２９６号；Ｈｉｎｍａｎら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５３：３３３６〜３３４２（１９９３）；及びＬｏｄｅら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５８：２９２５〜２９２８（１９９８）参照）；ダウノマイシンもしくはドキソルビシンなどのアントラサイクリン（Ｋｒａｔｚら、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１３：４７７〜５２３（２００６）；Ｊｅｆｆｒｅｙら、Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ＆Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔｅｒｓ １６：３５８〜３６２（２００６）；Ｔｏｒｇｏｖら、Ｂｉｏｃｏｎｊ．Ｃｈｅｍ．１６：７１７〜７２１（２００５）；Ｎａｇｙら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９７：８２９〜８３４（２０００）；Ｄｕｂｏｗｃｈｉｋら、Ｂｉｏｏｒｇ．＆Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔｅｒｓ １２：１５２９〜１５３２（２００２）；Ｋｉｎｇら、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４５：４３３６〜４３４３（２００２）；及び米国特許第６，６３０，５７９号参照）；メトトレキセート；ビンデシン；ドセタキシル、パクリタキセル、ラロタキセル、テセタキセル、及びオルタタキセルなどのタキサン；トリコテシン；ならびにＣＣ１０６５を含むがこれらに限定されない１つ又は複数の薬物に抗体がコンジュゲートされている抗体−薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）である。
【０２９０】
別の実施態様では、イムノコンジュゲートは、ジフテリアＡ鎖、ジフテリア毒素の非結合活性断片、外毒素Ａ鎖（緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）由来）、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデシンＡ鎖、アルファサルシン、シナアブラギリ（Ａｌｅｕｒｉｔｅｓ ｆｏｒｄｉｉ）タンパク質、ジアンチン（ｄｉａｎｔｈｉｎ）タンパク質、ヨウシュヤマゴボウ（Ｐｈｙｔｏｌａｃａ ａｍｅｒｉｃａｎａ）タンパク質（ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩ、及びＰＡＰ−Ｓ）、ニガウリ（ｍｏｍｏｒｄｉｃａ ｃｈａｒａｎｔｉａ）阻害剤、クルシン、クロチン、サボンソウ（ｓａｐａｏｎａｒｉａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）阻害剤、ゲロニン、ミトゲリン（ｍｉｔｏｇｅｌｌｉｎ）、レストリクトシン、フェノマイシン（ｐｈｅｎｏｍｙｃｉｎ）、エノマイシン（ｅｎｏｍｙｃｉｎ）、及びトリコテセン（ｔｒｉｃｏｔｈｅｃｅｎｅｓ）を含むがこれらの限定されない酵素的に活性な毒素又はその断片にコンジュゲートされた本明細書に記載される抗体を含む。
【０２９１】
別の実施態様では、イムノコンジュゲートは、放射性原子にコンジュゲートされて放射性コンジュゲートを形成する本明細書に記載される抗体を含む。放射性コンジュゲートの産生には種々の放射性同位元素が利用可能である。例には、Ａｔ２１１、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、Ｓｍ１５３、Ｂｉ２１２、Ｐ３２、Ｐｂ２１２及びＬｕの放射性同位体が含まれる。放射性コンジュゲートが検出に使用される場合、シンチグラフィー研究用の放射性原子、例えば、Ｔｃ９９もしくはＩ１２３、又は再びヨウ素１２３、ヨウ素１３１、インジウム１１１、フッ素１９、炭素１３、窒素１５、酸素１７、ガドリニウム、マンガン又は鉄などの核磁気共鳴（ＮＭＲ）画像法（磁気共鳴画像法、ＭＲＩとしても知られる）用のスピン標識を含むことがある。
【０２９２】
抗体と細胞傷害性薬剤のコンジュゲートは、Ｎ−サクシニミジル−３−（２−ピリジルジチオ）プロピオン酸（ＳＰＤＰ）、サクシニミジル−４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボン酸塩（ＳＭＣＣ）、イミノチオラン（ＩＴ）、イミドエステルの二機能性誘導体（例えば、アジプイミド酸ジメチルＨＣｌ）、活性エステル（例えば、スベリン酸ジサクシニミジル）、アルデヒド（例えば、グルタルアルデヒド）、ビスアジド化合物（例えば、ビス（ｐ−アジドベンゾイル）ヘキサンジアミン）、ビスジアゾニウム誘導体（例えば、ビス−（ｐ−ジアゾニウムベンゾイル）−エチレンジアミン）、ジイソシアン酸（例えば、トルエン２，６−ジイソシアン酸）、及びビス活性フッ素化合物（例えば、１，５−ジフルオロ−２，４−ジニトロベンゼン）などの種々の二機能的タンパク質カップリング剤を使用して作製しうる。例えば、リシン免疫毒素は、Ｖｉｔｅｔｔａら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３８：１０９８（１９８７）に記載される通りに調製することができる。炭素１４標識１−イソチオシアナトベンジル−３−メチルジエチレントリアミンペンタ酢酸（ＭＸ−ＤＴＰＡ）は、放射性ヌクレオチドを抗体にコンジュゲートするための例となるキレート剤である。国際公開第９４／１１０２６号を参照されたい。前記リンカーは、細胞中での細胞傷害性薬の放出を促進する「切断可能リンカー」でありうる。例えば、酸不安定リンカー、ペプチダーゼ感受性リンカー、感光性リンカー、ジメチルリンカー又はジスルフィド含有リンカー（Ｃｈａｒｉら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５２：１２７〜１３１（１９９２）；米国特許第５２０８０２０号）を使用してもよい。
【０２９３】
本明細書のイムノコンジュゲート又はＡＤＣは、市販されているＢＭＰＳ、ＥＭＣＳ、ＧＭＢＳ、ＨＢＶＳ、ＬＣ−ＳＭＣＣ、ＭＢＳ、ＭＰＢＨ、ＳＢＡＰ、ＳＩＡ、ＳＩＡＢ、ＳＭＣＣ、ＳＭＰＢ、ＳＭＰＨ、スルホ−ＥＭＣＳ、スルホ−ＧＭＢＳ、スルホ−ＫＭＵＳ、スルホ−ＭＢＳ、スルホ−ＳＩＡＢ、スルホ−ＳＭＣＣ、及びスルホ−ＳＭＰＢ、ならびにＳＶＳＢ（サクシニミジル−（４−ビニルスルホン）安息香酸（例えば、Ｐｉｅｒｃｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、ＩＬ．、Ｕ．Ｓ．Ａから）を含むがこれらの限定されない架橋剤試薬で調製されたそのようなコンジュゲートを明確に想定しているが、これらに限定されない。
【０２９４】
Ｅ．診断及び検出のための方法及び組成物
ある実施態様において、本明細書で提供される抗ＲＳＰＯ抗体の何れかは、試料中のＲＳＰＯの存在を検出するために有用である。本明細書で使用する「検出」という用語は、定量的又は定性的検出を包含する。ある実施態様において、試料は、消化管、胃、食道、大腸、直腸、及び／又は結腸直腸組織などの細胞又は組織を含む。幾つかの実施態様において、試料は、腎臓、膀胱、脳、乳房、子宮頸部、結腸、頭部及び頸部、腎臓、白血病、肝臓、肺、リンパ節、卵巣、膵臓、前立腺、直腸、皮膚、胃、甲状腺、及び／又は子宮組織などの細胞又は組織を含む。幾つかの実施態様において、試料は、肺、卵巣、乳房、肝臓、又は多発性骨髄腫の組織などの細胞又は組織を含む。
【０２９５】
一実施態様において、診断又は検出の方法で使用するための抗ＲＳＰＯ抗体が提供される。更なる態様において、試料中のＲＳＰＯの存在を検出する方法が提供される。ある実施態様において、本方法は、抗ＲＳＰＯ抗体のＲＳＰＯへの結合を許容する条件下で、本明細書に記載のように抗ＲＳＰＯ抗体と生物学的試料を接触させること、及び複合体が抗ＲＳＰＯ抗体とＲＳＰＯとの間に形成されているかどうかを検出することを含む。そのような方法は、インビトロ又はインビボでの方法であり得る。一実施態様において、例えばＲＳＰＯが患者の選択のためのバイオマーカーであるなど、抗ＲＳＰＯ抗体が抗ＲＳＰＯ抗体による治療にふさわしい被験体を選択するために使用される。幾つかの実施態様において、ＲＳＰＯはＲＳＰＯ２である。幾つかの実施態様において、ＲＳＰＯはＲＳＰＯ３である。幾つかの実施態様において、ＲＳＰＯはＲＳＰＯ２及びＲＳＰＯ３である。幾つかの実施態様において、個体及び／又はがんは、一以上のバイオマーカーの増加した発現を有する幾つかの実施態様において、幹細胞バイオマーカーは、Ｍｙｃ、Ａｘｉｎ２、ＬＧＲ５、ＴＥＲＴ、ＢＩＲＣ５、及び／又はＡｓｃｌ２を含む。幾つかの実施態様において、個体及び／又はがんは、分化の一以上のバイオマーカーの減少した発現を有する。幾つかの実施態様において、分化のバイオマーカーは、ＣＥＡＣＡＭ７、ＳＬＣ２６Ａ３、ＣＡ１、ＳＹＴｌ５、ＣＡ４、ＴＦＦ１、及び／又はＫＲＴ２０を含む。
【０２９６】
例えば、本明細書に提供されるのは、抗ＲＳＰＯ抗体の有効量を個体に投与することを含む、がんが一以上のバイオマーカーを含む個体においてがんを治療する方法である。また本明細書に提供されるのは、治療が一以上のバイオマーカーを含むがんを有する個体に基づいた、抗ＲＳＰＯ抗体の有効量を個体に投与することを含む、個体においてがんを治療する方法である。
【０２９７】
転座は、それらがしばしば標的遺伝子に複数の影響を及ぼすため非常に強力ながん変異である：単一「変異」においては、それらは劇的に発現を変化させ、調節ドメインを除去し、オリゴマー化を強制し、タンパク質の細胞内局在を変化させ、又はそれを新規の結合ドメインに連結する。これは幾つかの腫瘍は、特定の融合遺伝子の存在に応じて分類又は管理されているという事実に臨床的に反映されている。方法の何れかの幾つかの実施態様において、一以上のバイオマーカーは表２に記載の一以上の遺伝子の転座（例えば、染色体内転座、染色体間転座、再配列及び／又は融合）を含む。
【０２９８】
何れかの方法の幾つかの実施態様において、転座はＰＶＴ１である。幾つかの実施態様において、ＰＶＴ１転座は、ＰＶＴ１及びＭＹＣを含む。幾つかの実施態様において、ＲＳＰＯ２転座は、ＰＶＴ１及びＩｎｃＤＮＡを含む。何れかの方法の幾つかの実施態様において、転座はＲスポンジン転座である。幾つかの実施態様において、Ｒスポンジン転座はＲスポンジン１転座である。幾つかの実施態様において、Ｒスポンジン転座はＲＳＰＯ２である。幾つかの実施態様において、ＲＳＰＯ２転座は、ＥＭＣ２及びＲＳＰＯ２を含む。幾つかの実施態様において、ＲＳＰＯ２転座は、ＥＩＦ３Ｅ及びＲＳＰＯ２を含む。幾つかの実施態様において、ＲＳＰＯ２転座は、ＥＩＦ３Ｅエクソン１及びＲＳＰＯ２エクソン２を含む。幾つかの実施態様において、ＲＳＰＯ２転座は、ＥＩＦ３Ｅエクソン１及びＲＳＰＯ２エクソン３を含む。幾つかの実施態様において、ＲＳＰＯ２転座は、配列番号７１を含む。幾つかの実施態様において、ＲＳＰＯ２転座は、配列番号１１４、１４３及び／又は１４５を含むプライマーにより検出可能である。幾つかの実施態様において、ＲＳＰＯ２転座は、ＥＩＦ３Ｅプロモーターによって駆動される。幾つかの実施態様において、ＲＳＰＯ２転座は、ＲＳＰＯ２プロモーターによって駆動される。幾つかの実施態様において、Ｒスポンジン転座はＲＳＰＯ３転座である。幾つかの実施態様において、ＲＳＰＯ３転座は、ＰＴＰＲＫ及びＲＳＰＯ３を含む。幾つかの実施態様において、ＲＳＰＯ３転座は、ＰＴＰＲＫエクソン１及びＲＳＰＯ３エクソン２を含む。幾つかの実施態様において、ＲＳＰＯ３転座は、ＰＴＰＲＫエクソン７及びＲＳＰＯ３エクソン２を含む。幾つかの実施態様において、ＲＳＰＯ３転座は、配列番号１７１及び／又は配列番号１７２を含む。幾つかの実施態様において、ＲＳＰＯ３転座は、配列番号１１５、１１６、１４５及び／又は１４６を含むプライマーにより検出可能である。幾つかの実施態様において、ＲＳＰＯ３転座は、ＰＴＰＲＫ プロモーターによって駆動される。幾つかの実施態様において、ＲＳＰＯ３転座は、ＲＳＰＯ３プロモーターによって駆動される。幾つかの実施態様において、ＲＳＰＯ３転座は、ＰＴＰＲＤ分泌シグナル配列を含む（及び／又はＲＳＰＯ３分泌シグナル配列を含まない）。
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【０２９９】
幾つかの実施態様において、Ｒスポンジン転座はＲＳＰＯ４転座である。幾つかの実施態様において、Ｒスポンジン転座は、（例えば、Ｒスポンジン転座を有しない基準と比較して）Ｒスポンジンの上昇した発現レベルをもたらす。幾つかの実施態様において、Ｒスポンジン転座は、（例えば、Ｒスポンジン転座を有しない基準と比較して）Ｒスポンジンの上昇した活性及び／又は活性化をもたらす。幾つかの実施態様において、一以上のバイオマーカーの存在は、表２における転座などのＲスポンジン転座、並びにＫＲＡＳ及び／又はＢＲＡＦを含む。幾つかの実施態様において、一以上のバイオマーカーの存在は、表２における転座などのＲスポンジン転座（例えば、再配列及び／又は融合）、並びにＫＲＡＳ及び／又はＢＲＡＦにおけるバリエーション（例えば、多型又は変異）の存在である。幾つかの実施態様において、個体及び／又はがんは、ＫＲＡＳ及び／又はＢＲＡＦにおけるバリエーション（例えば、多型又は変異）を含む。幾つかの実施態様において、一以上のバイオマーカーの存在は、表２における転座などのＲスポンジン転座の存在であり、一以上のバイオマーカーの非存在は、ＣＴＮＮＢ１及び／又はＡＰＣにおけるバリエーション（例えば、多型又は変異）の非存在である。
【０３００】
転座（例えば、染色体内転座、染色体間転座、再配列及び／又は融合）の何れかの幾つかの実施態様において、転座（例えば、染色体内転座、染色体間転座、再配列及び／又は融合）は、体細胞転座（例えば、染色体内転座、染色体間転座、再配列及び／又は融合）である。幾つかの実施態様において、転座は染色体内転座である。幾つかの実施態様において、転座は染色体間である。幾つかの実施態様において、転座は逆位である。幾つかの実施態様において、転座は欠失である。幾つかの実施態様において、転座は、機能的転座融合ポリヌクレオチド（例えば、機能的Ｒスポンジン−転座融合ポリヌクレオチド）及び／又は機能的転座融合ポリペプチド（例えば、機能的Ｒスポンジン−転座融合ポリペプチド）である。幾つかの実施態様において、機能的転座融合ポリペプチド（例えば、機能的Ｒスポンジン−転座融合ポリペプチド）は、転座遺伝子の一つにより調節されることが知られた経路（例えば、ｗｎｔシグナル伝達経路）を活性化する。幾つかの実施態様において、経路は、標準的ｗｎｔシグナル伝達経路である。幾つかの実施態様において、経路は、非標準的ｗｎｔシグナル伝達経路である。幾つかの実施態様において、経路活性化を決定する方法は当該分野で公知であり、本明細書に記載されるルシフェラーゼレポーターアッセイを含む。幾つかの実施態様において、方法は、それらの全体が参照により本明細書に援用される、Seshagiri et al., Nature 488:660-664 (2012)及び／又は国際公開第２０１３／１２００５６号に記載される一以上の方法である。
【０３０１】
本発明の抗体を用いて診断することができる例示的な障害は、腫瘍、細胞増殖性障害、がん、消化器がん、胃がん、結腸直腸がん、大腸がん、及び／又は直腸がんを含む。本発明の抗体を用いて診断することができる例示的な障害は、更に、副腎がん、膀胱がん、脳がん、乳がん、子宮頸部がん、結腸がん、頭頸部がん、腎臓がん、白血病、肝臓がん、肺がん（例えば、ＮＳＣＬＣ）、リンパ系がん、卵巣がん、膵臓がん、前立腺がん、直腸がん、皮膚がん（例えば、黒色腫）、胃がん、甲状腺がん、及び／又は子宮がんを含む。また、本発明の抗体を用いて診断することができる例示的な障害は、肺がん（例えば、ＮＳＣＬＣ）、卵巣がん、乳がん、肝臓がん、又は多発性骨髄腫を含む。
【０３０２】
試料には、一次細胞もしくは培養細胞又は細胞系統、細胞上澄み、細胞可溶化物、血小板、血清、血漿、硝子体液、リンパ液、滑液、卵胞液、精液、羊水、乳、全血、血液由来細胞、尿、脳脊髄液、唾液、痰、涙、発汗、粘液、腫瘍可溶化物、及び組織培養培地、均質化された組織などの組織抽出物、腫瘍組織、細胞抽出物、ならびにその組合せが含まれるがこれらに限定されない。幾つかの実施態様において、試料は、消化管、胃、食道、大腸、直腸、及び／又は結腸直腸組織からの試料である。幾つかの実施態様において、試料は、腎臓、膀胱、脳、乳房、子宮頸部、結腸、頭部及び頸部、腎臓、白血病、肝臓、肺、リンパ節、卵巣、膵臓、前立腺、直腸、皮膚、胃、甲状腺、及び／又は子宮組織からの組織である。幾つかの実施態様において、試料は、肺、卵巣、乳房、肝臓、又は多発性骨髄腫の組織からの組織である。
【０３０３】
ある実施態様において、標識された抗ＲＳＰＯ抗体が与えられる。標識は、限定されるものではないが、（例えば、蛍光標識、発色団標識、高電子密度標識、化学発光標識、放射性標識など）直接検出される標識又は部分、並びに、例えば、酵素反応又は分子間相互作用を介して間接的に検出される酵素又はリガンドのような部分が含まれる。典型的な標識は、限定されないが、ラジオアイソトープ３２Ｐ、１４Ｃ、１２５Ｉ、３Ｈ、及び１３１Ｉ、フルオロフォア、例えば希土類キレート又はフルオレセイン及びその誘導体、ローダミン及びその誘導体、ダンシル、ウンベリフェロン、ルシェフェラーゼ、例えばホタルルシェフェラーゼ及び細菌ルシェフェラーゼ（米国特許第４７３７４５６号）、ルシェフェリン、２，３−ジヒドロフタルジネジオン、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）、アルカリフォスファターゼ、β−ガラクトシダーゼ、グルコアミラーゼ、リゾチーム、糖オキシダーゼ、例えばグルコースオキシダーゼ、ガラクトースオキシダーゼ、及びグルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼ、ヘテロサイクリックオキシダーゼ、例えばウリカーゼ及びキサンチンオキシダーゼ、色素前駆体を酸化する過酸化水素を利用する酵素、例えばＨＲＰ、ラクトペルオキシダーゼ、又はマイクロペルオキシダーゼと共役したもの、ビオチン／アビジン、スピンラベル、バクテリオファージラベル、安定な遊離ラジカルなどが含まれる。
【０３０４】
何れかの方法の幾つかの実施態様において、上昇した発現は、参照サンプル、参照細胞、基準組織、対照試料、対照細胞又は対照組織と比較して、本明細書に記載のものなどの標準的な既知の方法によって検出される、バイオマーカー（例えば、タンパク質又は核酸（例えば、遺伝子又はｍＲＮＡ））のレベルにおいて、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％又はそれ以上の何れかの全体的な増加を指す。ある実施態様において、上昇した発現とは、サンプル中のバイオマーカーの発現レベル／量の増加を指し、ここでその増加は、参照試料、参照細胞、基準組織、対照試料、対照細胞又は対照組織と比較して、それぞれのバイオマーカーの発現レベル／量の少なくとも約１．５Ｘ、約１．７５Ｘ、約２Ｘ、約３Ｘ、約４Ｘ、約５Ｘ、約６Ｘ、約７Ｘ、約８Ｘ、約９Ｘ、約１０Ｘ、約２５Ｘ、約５０Ｘ、約７５Ｘ，、又は約１００Ｘの何れかである。幾つかの実施態様において、上昇した発現は、参照試料、参照細胞、参照組織、対照試料、対照細胞、対照組織、又は内部対照（例えば、ハウスキーピング遺伝子）と比較して、約１．５倍、約１．７５倍、約２倍、約２．２５倍、約２．５倍、約２．７５倍、約３．０倍、又は約３．２５倍を超える全体的な増加を指す。
【０３０５】
何れかの方法の幾つかの実施態様において、減少した発現は、参照試料、参照細胞、基準組織、対照試料、対照細胞又は対照組織と比較して、本明細書に記載のものなどの標準的な既知の方法によって検出される、バイオマーカー（例えば、タンパク質又は核酸（例えば、遺伝子又はｍＲＮＡ））のレベルにおいて、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％又はそれ以上の何れかの全体的な減少を指す。ある実施態様において、減少した発現とは、サンプル中のバイオマーカーの発現レベル／量の減少を指し、ここでその減少は、参照サンプル、参照細胞、基準組織、対照試料、対照細胞又は対照組織において、それぞれのバイオマーカーの発現レベル／量の少なくとも約０．９Ｘ、約０．８Ｘ、約０．７Ｘ、約０．６Ｘ、約０．５Ｘ、約０．４Ｘ、約０．３Ｘ、約０．２Ｘ、約０．１Ｘ、約０．０５Ｘ、又は約０．０１Ｘの何れかである。
【０３０６】
試料中の種々のバイオマーカーの存在及び／又は発現レベル／量は、幾つかの方法論によって分析することができ、このうちの多くは、当該技術分野で知られ、当業者によって理解されており、免疫組織化学（「ＩＨＣ」）、ウェスタンブロット分析、免疫沈降、分子結合アッセイ、ＥＬＩＳＡ、ＥＬＩＦＡ、蛍光標識細胞分取（「ＦＡＣＳ」）、ＭａｓｓＡＲＲＡＹ、プロテオミクス、定量血液系アッセイ（例として血清ＥＬＩＳＡ）、生化学酵素活性アッセイ、インサイツハイブリダイゼーション、サザン分析、ノーザン分析、全ゲノム配列決定、定量リアルタイムＰＣＲ（「ｑＲＴ−ＰＣＲ」）及び例えば、分岐鎖ＤＮＡ、ＳＩＳＢＡ、ＴＭＡ等の他の増幅型の検出法を含む、ポリメラーゼ連鎖反応（「ＰＣＲ」）、ＲＮＡ−Ｓｅｑ、ＦＩＳＨ、マイクロアレイ分析、遺伝子発現プロファイリング、及び／又は遺伝子発現の連鎖解析（「ＳＡＧＥ」）、ならびにタンパク質、遺伝子、及び／又は組織アレイ分析によって行うことができる多種多様なアッセイのうちの任意のものが含まれるが、これらに限定されない。遺伝子及び遺伝子産物の状態の評価のための典型的なプロトコルは、例えば、Ausubel et al., eds., 1995, Current Protocols In Molecular Biology，ユニット２（ノーザンブロット法）、４（サザンブロット法）、１５（イムノブロット法）、及び１８（ＰＣＲ分析）に見出される。Ｒｕｌｅｓ Ｂａｓｅｄ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ又はＭｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（「ＭＳＤ」）から利用可能なもの等の、マルチプレックス免疫測定法もまた使用され得る。
【０３０７】
幾つかの実施態様において、バイオマーカーの存在及び／又は発現レベル／量は、（ａ）遺伝子発現プロファイリング、ＰＣＲ（例えば、ｒｔＰＣＲなど）、ＲＮＡ−ｓｅｑ、マイクロアレイ分析、ＳＡＧＥ、ＭａｓｓＡＲＲＡＹ技術、又は試料（例えば、被験体のがん試料）上でのＦＩＳＨを行い；ｂ）試料中のバイオマーカーの存在及び／又は発現レベル／量を決定すること含む方法を用いて決定される。幾つかの実施態様において、マイクロアレイ法は、上述した遺伝子をコードする核酸分子とストリンジェントな条件下でハイブリダイズすることができる一又は複数の核酸分子を有する、又は上述した遺伝子によってコードされるタンパク質の一以上に結合することができる一以上のポリペプチド（例えば、ペプチド又は抗体など）を有するマイクロアレイチップの使用を含む。一実施態様のいて、ＰＣＲ法はｑＲＴ−ＰＣＲである。一実施態様のいて、ＰＣＲ法は多重ＰＣＲである。幾つかの実施態様において、遺伝子発現は、マイクロアレイにより測定される。幾つかの実施態様において、遺伝子発現は、ｑＲＴ−ＰＣＲにより測定される。幾つかの実施態様において、発現は、多重ＰＣＲにより測定される。
【０３０８】
Ｆ．薬学的製剤
本明細書に記載の抗ＲＳＰＯ抗体の薬学的製剤は、所望の程度の純度を有するその抗体と任意の薬学的に許容される一以上の担体（Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed.: Williams and Wilkins PA, USA (1980)）とを、凍結乾燥製剤又は水性溶液の形態で混合することによって調製される。薬学的に許容される担体は、使用される投薬量及び濃度でレシピエントに毒性でなく、そしてこれには、限定しないが、リン酸塩、クエン酸塩及び他の有機酸のような緩衝液；アスコルビン酸及びメチオニンを含む抗酸化剤；防腐剤（例えば、オクタデシルジメチオルベンジルアンモニウムクロライド；ヘキサメトニウムクロライド；塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、フェノール、ブチル又はベンジルアルコール；アルキルパラベン、例えば、メチル又はプロピルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３−ペンタノール；及びｍ−クレゾール）；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；タンパク質、例えば、血清アルブミン、ゼラチン、又は免疫グロブリン；親水性ポリマー、例えば、ポリビニルピロリドン；アミノ酸、例えば、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン又はリジン；マンノサッカライド、ジサッカライド、及びグルコース、マンノース又はデキストリンを含む他の炭水化物；キレート剤、例えば、ＥＤＴＡ；糖、例えば、スクロース、マンニトール、トレハロース又はソルビトール；塩形成対イオン、例えば、ナトリウム、金属錯体（例えば、Ｚｎ−タンパク質錯体）；及び／又はポリエチレングリコール（ＰＥＧ）等の非イオン性界面活性剤が挙げられる。本明細書における典型的な薬学的に許容される担体は、水溶性の中性アクティブヒアルロニダーゼ糖タンパク質（ｓＨＡＳＥＧＰ）などの介在性薬物分散剤、例えば、ｒＨｕＰＨ２０（ＨＹＬＥＮＥＸ（登録商標）、Ｂａｘｔｅｒ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ， Ｉｎｃ．）などのヒト可溶性ＰＨ−２０ヒアルロニダーゼ糖タンパク質を更に含む。特定の例示的ｓＨＡＳＥＧＰ及び使用方法は、ｒＨｕＰＨ２０を含めて、米国特許公開第２００５／０２６０１８６号及び第２００６／０１０４９６８号に記載されている。一態様において、ｓＨＡＳＥＧＰは、コンドロイチナーゼなどの一以上の付加的なグルコサミノグリカナーゼと組み合わされる。
【０３０９】
例示的な凍結乾燥抗体製剤は、米国特許第６２６７９５８号に記載されている。水性の抗体製剤は、米国特許第６１７１５８６号及び国際公開第２００６／０４４９０８号に記載されているものが含まれ、後者の製剤はヒスチジン−酢酸緩衝液を含む。
【０３１０】
本明細書の製剤はまた、治療を受けている特定の徴候のために必要な一以上の活性成分、好ましくは、互いに悪影響を及ぼさない相補的活性を持つものが含まれる場合がある。このような活性成分は、意図した目的のために有効な量で組み合わされ適切に存在する。
【０３１１】
活性成分は、例えば、コアセルベーション技術又は界面重合法によって、例えばそれぞれヒドロキシメチルセルロース又はゼラチン−マイクロカプセル及びポリ（メチルメタクリレート（ｍｅｔｈｙｌｍｅｔｈａｃｙｌａｔｅ））マイクロカプセルにより、コロイド薬物送達系に（例えばリポソーム、アルブミンミクロスフィア、ミクロエマルジョン、ナノ粒子及びナノカプセル）又はマクロ・エマルジョンで調製されたマイクロカプセルに封入されてもよい。このような技術は、Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980)に開示されている。
【０３１２】
徐放製剤を調製してもよい。徐放性調製物の好適な例には、抗体を含有する固体疎水性ポリマーの半透過性マトリックスが含まれ、このマトリックスは成形品、例えばフィルム、又はマイクロカプセルの形態である。
【０３１３】
インビボ投与に使用される製剤は、一般的に無菌である。無菌性は、例えば、滅菌濾過膜を通して濾過することにより達成することができる。
【０３１４】
Ｇ．治療的方法及び組成物
本明細書で提供される抗ＲＳＰＯ抗体の何れかを、治療方法で使用することができる。
【０３１５】
一態様では、医薬として使用のための抗ＲＳＰＯ抗体が提供される。更なる態様において、腫瘍、細胞増殖性障害、及び／又はがんの治療において使用のための抗ＲＳＰＯ抗体が提供される。幾つかの実施態様において、抗ＴＰＯ抗体は、がん細胞の最終分化を含む細胞の分化を促進することに使用のために提供される。ある実施態様において、治療の方法において使用のための抗ＲＳＰＯ抗体が提供される。ある実施態様において、本発明は、個体に抗ＲＳＰＯ抗体の有効量を投与することを含む、腫瘍、細胞増殖性障害、及び／又はがんを有する個体を治療する方法における使用のための抗ＲＳＰＯ抗体を提供する。幾つかの実施態様において、がんは結腸直腸がんである。一つのそのような実施態様において、本方法は、例えば後述するように、少なくとも一の付加的治療剤の有効量を個体に投与することを更に含む。幾つかの実施態様において、ＲＳＰＯはＲＳＰＯ２である。幾つかの実施態様において、ＲＳＰＯはＲＳＰＯ３である。幾つかの実施態様において、ＲＳＰＯはＲＳＰＯ２及びＲＳＰＯ３である。更なる実施態様において、本発明は、ｗｎｔシグナル伝達を阻害すること、血管新生を阻害すること、細胞増殖を阻害すること、がん幹細胞の増殖を阻害すること、及び／又はがん幹細胞を枯渇させることにおいて使用のための抗ＲＳＰＯ抗体を提供する。ある実施態様において、本発明は、ｗｎｔシグナル伝達を阻害するため、血管新生を阻害するため、細胞増殖を阻害するため、がん幹細胞の増殖を阻害するため、及び／又はがん幹細胞を枯渇させるために、抗ＲＳＰＯ抗体の有効量を個体に投与することを含む、個体においてｗｎｔシグナル伝達を阻害する、血管新生を阻害する、細胞増殖を阻害する、がん幹細胞の増殖を阻害する、及び／又はがん幹細胞を枯渇させる方法において使用のための抗ＲＳＰＯ抗体を提供する。上記実施態様の何れかに記載の「個体」は、好ましくはヒトである。幾つかの実施態様において、個体及び／又はがんは、一以上のバイオマーカーを有する。幾つかの実施態様において、一以上のバイオマーカーは、ＲＳＰＯ転座を含む。幾つかの実施態様において、ＲＳＰＯ転座は、ＲＳＰＯ２及び／又はＲＳＰＯ３転座を含む。幾つかの実施態様において、個体及び／又はがんは、一以上のバイオマーカーの増加した発現を有する幾つかの実施態様において、一以上のバイオマーカーは、ＲＳＰＯ、例えばＲＳＰＯ２及び／又はＲＳＰＯ３を含む。幾つかの実施態様において、一以上のバイオマーカーは、幹細胞バイオマーカーを含む。幾つかの実施態様において、幹細胞バイオマーカーは、Ｍｙｃ、Ａｘｉｎ２、ＬＧＲ５、ＴＥＲＴ、ＢＩＲＣ５、及び／又はＡｓｃｌ２を含む。幾つかの実施態様において、個体及び／又はがんは、分化の一以上のバイオマーカーの減少した発現を有する。幾つかの実施態様において、分化のバイオマーカーは、ＣＥＡＣＡＭ７、ＳＬＣ２６Ａ３、ＣＡ１、ＳＹＴｌ５、ＣＡ４、ＴＦＦ１、及び／又はＫＲＴ２０を含む。幾つかの実施態様において、抗ＲＳＰＯ抗体による処置は、一以上の幹細胞バイオマーカー、例えば、Ｍｙｃ、Ａｘｉｎ２、ＬＧＲ５、ＴＥＲＴ、ＢＩＲＣ５、及び／又はＡｓｃｌ２の発現を減少させる。幾つかの実施態様において、抗ＲＳＰＯ抗体による処置は、分化の一以上のバイオマーカー、例えば、ＣＥＡＣＡＭ７、ＳＬＣ２６Ａ３、ＣＡ１、ＳＹＴｌ５、ＣＡ４、ＴＦＦ１、及び／又はＫＲＴ２０の発現を増加させる。幾つかの実施態様において、がんは、副腎がん、膀胱がん、脳がん、乳がん、子宮頸部がん、結腸がん、頭頸部がん、腎臓がん、白血病、肝臓がん、肺がん（例えば、ＮＳＣＬＣ）、リンパ系がん、卵巣がん、膵臓がん、前立腺がん、直腸がん、皮膚がん（例えば、黒色腫）、胃がん、甲状腺がん、及び／又は子宮がんである。幾つかの実施態様において、がんは、肺がん（例えば、ＮＳＣＬＣ）、卵巣がん、乳がん、肝臓がん、又は多発性骨髄腫である。幾つかの実施態様において、がんは結腸直腸がんである。
【０３１６】
更なる態様にて、本発明は、医薬の製造又は調製における抗ＲＳＰＯ抗体の使用を提供する。一実施態様において、医薬は、腫瘍、細胞増殖性障害、及び／又はがんの治療のためのものである。更なる実施態様において、本医薬は、腫瘍、細胞増殖性障害、及び／又はがんを有する個体に、医薬の有効量を投与することを含む、腫瘍、細胞増殖性障害、及び／又はがんを治療する方法において使用のためのものである。幾つかの実施態様において、がんは結腸直腸がんである。一つのそのような実施態様において、本方法は、例えば後述するように、少なくとも一の付加的治療剤の有効量を個体に投与することを更に含む。更なる実施態様において、医薬は、ｗｎｔシグナル伝達を阻害するため、血管新生を阻害するため、細胞増殖を阻害するため、がん幹細胞の増殖を阻害するため、及び／又はがん幹細胞を枯渇させるためのものである。更なる実施態様において、医薬は、ｗｎｔシグナル伝達を阻害するため、血管新生を阻害するため、細胞増殖を阻害するため、がん幹細胞の増殖を阻害するため、及び／又はがん幹細胞を枯渇させるために、医薬の有効量を個体に投与することを含む、個体においてｗｎｔシグナル伝達を阻害する、血管新生を阻害する、細胞増殖を阻害する、がん幹細胞の増殖を阻害する、及び／又はがん幹細胞を枯渇させる方法において使用のためのものである。上記実施態様の何れかに記載の「個体」は、ヒトであり得る。幾つかの実施態様において、個体及び／又はがんは、一以上のバイオマーカーを有する。幾つかの実施態様において、一以上のバイオマーカーは、ＲＳＰＯ転座を含む。幾つかの実施態様において、ＲＳＰＯ転座は、ＲＳＰＯ２及び／又はＲＳＰＯ３転座を含む。幾つかの実施態様において、個体及び／又はがんは、一以上のバイオマーカーの増加した発現を有する幾つかの実施態様において、一以上のバイオマーカーは、ＲＳＰＯ、例えばＲＳＰＯ２及び／又はＲＳＰＯ３を含む。幾つかの実施態様において、一以上のバイオマーカーは、幹細胞バイオマーカーを含む。幾つかの実施態様において、幹細胞バイオマーカーは、Ｍｙｃ、Ａｘｉｎ２、ＬＧＲ５、ＴＥＲＴ、ＢＩＲＣ５、及び／又はＡｓｃｌ２を含む。幾つかの実施態様において、個体及び／又はがんは、分化の一以上のバイオマーカーの減少した発現を有する。幾つかの実施態様において、分化のバイオマーカーは、ＣＥＡＣＡＭ７、ＳＬＣ２６Ａ３、ＣＡ１、ＳＹＴｌ５、ＣＡ４、ＴＦＦ１、及び／又はＫＲＴ２０を含む。幾つかの実施態様において、抗ＲＳＰＯ抗体による処置は、一以上の幹細胞バイオマーカー、例えば、Ｍｙｃ、Ａｘｉｎ２、ＬＧＲ５、ＴＥＲＴ、ＢＩＲＣ５、及び／又はＡｓｃｌ２の発現を減少させる。幾つかの実施態様において、抗ＲＳＰＯ抗体による処置は、分化の一以上のバイオマーカー、例えば、ＣＥＡＣＡＭ７、ＳＬＣ２６Ａ３、ＣＡ１、ＳＹＴｌ５、ＣＡ４、ＴＦＦ１、及び／又はＫＲＴ２０の発現を増加させる。幾つかの実施態様において、がんは、副腎がん、膀胱がん、脳がん、乳がん、子宮頸部がん、結腸がん、頭頸部がん、腎臓がん、白血病、肝臓がん、肺がん（例えば、ＮＳＣＬＣ）、リンパ系がん、卵巣がん、膵臓がん、前立腺がん、直腸がん、皮膚がん（例えば、黒色腫）、胃がん、甲状腺がん、及び／又は子宮がんである。幾つかの実施態様において、がんは、肺がん（例えば、ＮＳＣＬＣ）、卵巣がん、乳がん、肝臓がん、又は多発性骨髄腫である。
【０３１７】
更なる態様において、本発明は、腫瘍、細胞増殖性障害、及び／又はがんを治療するための方法を提供する。一実施態様において、本方法は、かかる腫瘍、細胞増殖性障害、及び／又はがんを有する個体に、抗ＲＳＰＯ抗体の有効量を投与することを含む。幾つかの実施態様において、がんは結腸直腸がんである。一つのそのような実施態様において、この方法は、後述するように、少なくとも１つの付加的治療剤の有効量を個体に投与することを更に含む。上記実施態様の何れかに記載の「個体」は、ヒトであり得る。幾つかの実施態様において、個体及び／又はがんは、一以上のバイオマーカーを有する。幾つかの実施態様において、一以上のバイオマーカーは、ＲＳＰＯ転座を含む。幾つかの実施態様において、ＲＳＰＯ転座は、ＲＳＰＯ２及び／又はＲＳＰＯ３転座を含む。幾つかの実施態様において、個体及び／又はがんは、一以上のバイオマーカーの増加した発現を有する幾つかの実施態様において、一以上のバイオマーカーは、ＲＳＰＯ、例えばＲＳＰＯ２及び／又はＲＳＰＯ３を含む。幾つかの実施態様において、一以上のバイオマーカーは、幹細胞バイオマーカーを含む。幾つかの実施態様において、幹細胞バイオマーカーは、Ｍｙｃ、Ａｘｉｎ２、ＬＧＲ５、ＴＥＲＴ、ＢＩＲＣ５、及び／又はＡｓｃｌ２を含む。幾つかの実施態様において、個体及び／又はがんは、分化の一以上のバイオマーカーの減少した発現を有する。幾つかの実施態様において、分化のバイオマーカーは、ＣＥＡＣＡＭ７、ＳＬＣ２６Ａ３、ＣＡ１、ＳＹＴｌ５、ＣＡ４、ＴＦＦ１、及び／又はＫＲＴ２０を含む。幾つかの実施態様において、抗ＲＳＰＯ抗体による処置は、一以上の幹細胞バイオマーカー、例えば、Ｍｙｃ、Ａｘｉｎ２、ＬＧＲ５、ＴＥＲＴ、ＢＩＲＣ５、及び／又はＡｓｃｌ２の発現を減少させる。幾つかの実施態様において、抗ＲＳＰＯ抗体による処置は、分化の一以上のバイオマーカー、例えば、ＣＥＡＣＡＭ７、ＳＬＣ２６Ａ３、ＣＡ１、ＳＹＴｌ５、ＣＡ４、ＴＦＦ１、及び／又はＫＲＴ２０の発現を増加させる。幾つかの実施態様において、がんは、副腎がん、膀胱がん、脳がん、乳がん、子宮頸部がん、結腸がん、頭頸部がん、腎臓がん、白血病、肝臓がん、肺がん（例えば、ＮＳＣＬＣ）、リンパ系がん、卵巣がん、膵臓がん、前立腺がん、直腸がん、皮膚がん（例えば、黒色腫）、胃がん、甲状腺がん、及び／又は子宮がんである。幾つかの実施態様において、がんは、肺がん（例えば、ＮＳＣＬＣ）、卵巣がん、乳がん、肝臓がん、又は多発性骨髄腫である。
【０３１８】
更なる態様において、本発明は、個体において、ｗｎｔシグナル伝達を阻害する、血管新生を阻害する、細胞増殖を阻害する、がん幹細胞の増殖を阻害する、及び／又はがん幹細胞を枯渇させる方法を提供する。一実施態様において、本方法は、ｗｎｔシグナル伝達を阻害するため、血管新生を阻害するため、細胞増殖を阻害するため、がん幹細胞の増殖を阻害するため、及び／又はがん幹細胞を枯渇させるために、抗ＲＳＰＯ抗体の有効量を個体に投与することを含む。一実施態様において、「個体」はヒトである。幾つかの実施態様において、個体及び／又はがんは、一以上のバイオマーカーを有する。幾つかの実施態様において、一以上のバイオマーカーは、ＲＳＰＯ転座を含む。幾つかの実施態様において、ＲＳＰＯ転座は、ＲＳＰＯ２及び／又はＲＳＰＯ３転座を含む。幾つかの実施態様において、個体及び／又はがんは、一以上のバイオマーカーの増加した発現を有する幾つかの実施態様において、一以上のバイオマーカーは、ＲＳＰＯ、例えばＲＳＰＯ２及び／又はＲＳＰＯ３を含む。幾つかの実施態様において、一以上のバイオマーカーは、幹細胞バイオマーカーを含む。幾つかの実施態様において、幹細胞バイオマーカーは、Ｍｙｃ、Ａｘｉｎ２、ＬＧＲ５、ＴＥＲＴ、ＢＩＲＣ５、及び／又はＡｓｃｌ２を含む。幾つかの実施態様において、個体及び／又はがんは、分化の一以上のバイオマーカーの減少した発現を有する。幾つかの実施態様において、分化のバイオマーカーは、ＣＥＡＣＡＭ７、ＳＬＣ２６Ａ３、ＣＡ１、ＳＹＴｌ５、ＣＡ４、ＴＦＦ１、及び／又はＫＲＴ２０を含む。幾つかの実施態様において、抗ＲＳＰＯ抗体による処置は、一以上の幹細胞バイオマーカー、例えば、Ｍｙｃ、Ａｘｉｎ２、ＬＧＲ５、ＴＥＲＴ、ＢＩＲＣ５、及び／又はＡｓｃｌ２の発現を減少させる。幾つかの実施態様において、抗ＲＳＰＯ抗体による処置は、分化の一以上のバイオマーカー、例えば、ＣＥＡＣＡＭ７、ＳＬＣ２６Ａ３、ＣＡ１、ＳＹＴｌ５、ＣＡ４、ＴＦＦ１、及び／又はＫＲＴ２０の発現を増加させる。幾つかの実施態様において、がんは、副腎がん、膀胱がん、脳がん、乳がん、子宮頸部がん、結腸がん、頭頸部がん、腎臓がん、白血病、肝臓がん、肺がん（例えば、ＮＳＣＬＣ）、リンパ系がん、卵巣がん、膵臓がん、前立腺がん、直腸がん、皮膚がん（例えば、黒色腫）、胃がん、甲状腺がん、及び／又は子宮がんである。幾つかの実施態様において、がんは、肺がん（例えば、ＮＳＣＬＣ）、卵巣がん、乳がん、肝臓がん、又は多発性骨髄腫である。幾つかの実施態様において、がんは結腸直腸がんである。
【０３１９】
更なる態様において、本発明は、例えば、上記の治療法の何れかに使用される、本明細書で提供される抗ＲＳＰＯ抗体の何れかを含む薬学的製剤を提供する。一実施態様において、薬学的製剤は、本明細書で提供される抗ＲＳＰＯ抗体の何れか、及び薬学的に許容される担体を含む。その他の実施態様において、薬学的製剤は、本明細書で提供される抗ＲＳＰＯ抗体の何れかと、少なくとも一の付加的治療剤を、例えば後述するように含む。幾つかの実施態様において、ＲＳＰＯはＲＳＰＯ２である。幾つかの実施態様において、ＲＳＰＯはＲＳＰＯ３である。幾つかの実施態様において、ＲＳＰＯはＲＳＰＯ２及びＲＳＰＯ３である。幾つかの実施態様において、個体及び／又はがんは、一以上のバイオマーカーの増加した発現を有する幾つかの実施態様において、一以上のバイオマーカーは、ＲＳＰＯ、例えばＲＳＰＯ２及び／又はＲＳＰＯ３を含む。幾つかの実施態様において、一以上のバイオマーカーは、幹細胞バイオマーカーを含む。幾つかの実施態様において、幹細胞バイオマーカーは、Ｍｙｃ、Ａｘｉｎ２、ＬＧＲ５、ＴＥＲＴ、ＢＩＲＣ５、及び／又はＡｓｃｌ２を含む。幾つかの実施態様において、個体及び／又はがんは、分化の一以上のバイオマーカーの減少した発現を有する。幾つかの実施態様において、分化のバイオマーカーは、ＣＥＡＣＡＭ７、ＳＬＣ２６Ａ３、ＣＡ１、ＳＹＴｌ５、ＣＡ４、ＴＦＦ１、及び／又はＫＲＴ２０を含む。幾つかの実施態様において、抗ＲＳＰＯ抗体による処置は、一以上の幹細胞バイオマーカー、例えば、Ｍｙｃ、Ａｘｉｎ２、ＬＧＲ５、ＴＥＲＴ、ＢＩＲＣ５、及び／又はＡｓｃｌ２の発現を減少させる。幾つかの実施態様において、抗ＲＳＰＯ抗体による処置は、分化の一以上のバイオマーカー、例えば、ＣＥＡＣＡＭ７、ＳＬＣ２６Ａ３、ＣＡ１、ＳＹＴｌ５、ＣＡ４、ＴＦＦ１、及び／又はＫＲＴ２０の発現を増加させる。幾つかの実施態様において、がんは、副腎がん、膀胱がん、脳がん、乳がん、子宮頸部がん、結腸がん、頭頸部がん、腎臓がん、白血病、肝臓がん、肺がん（例えば、ＮＳＣＬＣ）、リンパ系がん、卵巣がん、膵臓がん、前立腺がん、直腸がん、皮膚がん（例えば、黒色腫）、胃がん、甲状腺がん、及び／又は子宮がんである。幾つかの実施態様において、がんは、肺がん（例えば、ＮＳＣＬＣ）、卵巣がん、乳がん、肝臓がん、又は多発性骨髄腫である。幾つかの実施態様において、がんは結腸直腸がんである。
【０３２０】
本発明の抗体は、治療において、単独で、又は他の薬剤と組み合わせて使用することができる。例えば、本発明の抗体は少なくとも１つの更なる治療剤と同時投与され得る。ある実施態様において、付加的治療剤は、細胞障害剤、化学療法剤、細胞増殖抑制剤、抗ホルモン剤、及び／又はＥＧＦＲ阻害剤である。
【０３２１】
上述される併用療法は、併用投与（二以上の治療剤が同一又は別々の製剤中に含まれている場合）及び、本発明の抗体の投与が、付加的治療剤又は薬剤の投与の前に、同時に、及び／又は後に生じ得る、別々の投与を包含する。一実施態様において、抗ＲＳＰＯ抗体の投与及び付加的治療剤の投与は、互いに、約１ヶ月以内、又は約１、２、又は３週間以内、又は約１、２、３、４、５又は６日以内に生じる。本発明の抗体はまた、放射線療法と組み合わせて使用することができる。
【０３２２】
本発明の抗体（及び任意の付加的治療剤）は、任意の適切な手段によって投与することができ、非経口、肺内、及び鼻腔内、並びに局所治療が所望される場合、病巣内投与が含まれる。非経口注入には、筋肉内、静脈内、動脈内、腹腔内、又は皮下投与が含まれる。投薬は、その投与が短期間か又は長期であるかどうかに部分的に依存し、任意の適切な経路、例えば、静脈内又は皮下注射などの注射により行うことができる。限定されないが、様々な時間点にわたる、単一又は複数回投与、ボーラス投与、パルス注入を含む様々な投与スケジュールが本明細書で考えられている。
【０３２３】
本発明の抗体は良好な医療行為に合致した方法で処方され、投与され、投薬される。これに関連した考慮因子としては、治療すべき具体的な障害、治療すべき具体的な哺乳動物、個々の患者の臨床状態、障害の原因、薬剤の送達部位、投与方法、投与スケジュール及び医師にとって既知の他の因子が挙げられる。抗体は、必要ではないが任意で、問題となる障害の予防又は治療のために、現在使用中の一又は複数の薬剤ともに処方される。そのような他の薬剤の有効量は製剤中に存在する抗体の量、障害又は治療の種類及び上記した他の要因に依存する。これらは一般的には本明細書に記載されるのと同じ用量及び投与経路において、又は、本明細書に記載された用量の１％から９９％で、又は経験的に／臨床的に妥当であると決定された任意の用量及び任意の経路により使用される。
【０３２４】
疾患の予防又は治療のためには、本発明の抗体の適切な用量（単独で使用されるか、又は、一以上の更なる治療的薬剤との組み合わされる場合）は治療すべき疾患の種類、抗体の種類、疾患の重症度及び経過、抗体を予防又は治療目的のいずれにおいて投与するか、以前の治療、患者の臨床的履歴及び抗体に対する応答性、及び担当医の判断に依存する。抗体は一時的又は一連の治療にわたって患者に適切に投与される。疾患の種類及び重症度に応じて、例えば一回以上の別個の投与によるか、連続注入によるかに関わらず、抗体約１μｇ／ｋｇから１５ｍｇ／ｋｇ（例えば０．１ｍｇ／ｋｇから１０ｍｇ／ｋｇ）が患者への投与のための初期候補用量となり得る。１つの典型的な一日当たり用量は上記した要因に応じて約１μｇ／ｋｇから１００ｍｇ／ｋｇ又はそれ以上の範囲である。数日間以上に渡る反復投与の場合には、状態に応じて、治療は疾患症状の望まれる抑制が起こるまで持続するであろう。１つの例示される抗体用量は約０．０５ｍｇ／ｋｇから約１０ｍｇ／ｋｇの範囲である。従って、約０．５ｍｇ／ｋｇ、２．０ｍｇ／ｋｇ、４．０ｍｇ／ｋｇ又は１０ｍｇ／ｋｇの１つ以上の用量（又はこれらの何れかの組み合わせ）を患者に投与してよい。かかる用量は、断続的に、例えば、毎週又は３週間毎に（例えば、患者が抗体の約２〜約２０回、又は例えば、約６回用量を受容するように）投与されてもよい。初回よりも高い負荷用量、続いて１回以上のより低い用量が投与されてもよい。しかしながら、他の投薬レジメンが有用であってもよい。この治療法の進行は、従来の技術及びアッセイによって容易に監視される。
【０３２５】
上記の製剤又は治療方法の何れかが、抗ＲＳＰＯ抗体の代わりか又は抗ＲＳＰＯに加えて、本発明のイムノコンジュゲートを用いて行うことができることが理解される。
【０３２６】
Ｈ．製造品
本発明の別の態様において、上述した障害の治療、予防、及び／又は診断に有用な物質を含む製造品が提供される。製造品は、容器とラベル又は容器上にある又は容器に付属する添付文書を含む。好適な容器は、例としてボトル、バイアル、シリンジ、ＩＶ輸液バッグ等を含む。容器はガラス又はプラスチックなどの様々な物質から形成されうる。容器は、疾患の治療、予防、及び／又は診断に有効である、それ自体か、又はその他の組成物と併用される化合物を収容し、無菌のアクセスポートを有し得る（例えば、容器は皮下注射針による穴あきストッパーを有する静脈内溶液バッグ又はバイアルであってよい）。組成物中の少なくとも一の活性剤は本発明の抗体である。ラベル又は添付文書は、組成物が選択した症状の治療のために使用されることを示している。更に、製造品は、（ａ）組成物が本発明の抗体を包含する組成物を含む第一の容器；及び（ｂ）組成物が更なる細胞障害性又はその他の治療的薬剤を包含する組成物を含む第２の容器を含み得る。本発明の本実施態様における製造品は、組成物が特定の疾患を治療することに用いることができることを示す添付文書を更に含んでいてもよい。別法として、又は加えて、製造品は、薬学的に許容される緩衝液、例えば注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝化塩水、リンガー溶液及びデキストロース溶液を含む第二（又は第三）の容器を更に含んでもよい。これは、他の緩衝液、希釈剤、フィルター、針、及びシリンジを含む、商業的及びユーザーの立場から望まれる他の物質を更に含んでもよい。
【０３２７】
上記の製造品の何れかは、抗ＲＳＰＯ抗体の代わりか又はそれに加えて、本発明のイムノコンジュゲートを含み得ることが理解される。
【実施例】
【０３２８】
ＩＩＩ．実施例
以下は本発明の方法及び組成物の例である。上記提供される一般的な説明を前提として、他の様々な実施態様が実施され得ることが理解される。
【０３２９】
方法
クローニング及び精製：ＦＬＡＧタグ付きＲＮＦ４３は、抗ＦＬＡＧ親和性クロマトグラフィー（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、続いてサイズ排除クロマトグラフィー（Ｓｕｐｅｒｄｅｘ ７５， ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）により精製された。ＦＬＡＧタグ付きＲ−スポンジン（ｈＲＳＰＯ２、ｈＲＳＰＯ２ Ｌ１８６、ｃｙｎｏＲＳＰＯ２、ｈＲＳＰＯ３、及びｃｙｎｏＲＳＰＯ３ＦＬＡＧ）は、抗ＦＬＡＧ親和性クロマトグラフィー、続いて陽イオン交換クロマトグラフィー（Ｍｏｎｏ Ｓ， ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）により精製された。ヒトＩｇＧ１のＦｃタグ付きＬＧＲ細胞外ドメインは、親和性クロマトグラフィー（ＭａｂＳｅｌｅｃｔ ＳｕＲｅ， ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）、続いてサイズ排除クロマトグラフィー（Ｓｕｐｅｒｄｅｘ ２００、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）により精製された。
【０３３０】
ＷＮＴレポーターアッセイ：９６ウェルプレートに、ウェル当たり４，５００２９３のＴ細胞が、２．５％ウシ胎児血清を補充した９０μｌのＤＭＥＭに播種された。培養の１６〜２０時間後、細胞を、Ｆｕｇｅｎｅ６（Ｐｒｏｍｅｇａ， Ｍａｄｉｓｏｎ， ＷＩ）を使用して１０ｕｌのトランスフェクションミックス中で０．０４ｕｇのＴｏｐｂｒｉｔｅ ２５及び０．０２ｕｇのＳＶ４０ Ｒｅｎｉｌｌａ ＤＮＡで同時トランスフェクトした。更なる１６〜２０時間の培養後、細胞を、セ氏３７度で６時間、２５μｌの５×溶液で刺激した。上清のスクリーニングのために、細胞を、５０ｎｇ／ｍｌのｒｍＷＮＴ３ａ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ， Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ， ＭＮ）及び２５０ｐＭのｒｈＲＳＰＯ２又はｒｈＲＳＰＯ３（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ， Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ， ＭＮ）で補充したハイブリドーマ上清を用いて刺激した。．クローニングされた抗体を用いたアッセイのために、１０％ウシ胎児血清、５０ｎｇ／ｍｌのｒｍＷＮＴ３ａ、２５０ｐＭ又は５×の計算されたＥＣ５０のｒＲＳＰＯ（示されるように）を補充したＤＭＥＭ及び漸増濃度の抗体が添加された。馴化培地を試験するアッセイについては、培地は、製造業者の説明書に従ってＦｕｇｅｎｅ６を用いて（Ｐｒｏｍｅｇａ， Ｍａｄｉｓｏｎ， ＷＩ）、示された遺伝子で２９３Ｔをトランスフェクトすることによって調製した。馴化培地は、トランスフェクションの３日後に収集され、５０ｎｇ／ｍｌのｒｍＷＮＴ３ａ ＋／− 抗ＲＳＰＯ抗体を補充され、レポーター細胞に添加された。６時間の刺激後、ルシフェラーゼ活性は、Ｐｒｏｍｅｇａ Ｄｕａｌ−Ｇｌｏシステム（Ｐｒｏｍｅｇａ， Ｍａｄｉｓｏｎ， ＷＩ）を用いて検出された。データは、ホタル／ウミシイタケの比（ＲＬＵ ＷＮＴレポーター）又は抗体の非存在下で正規化された値（抗体がある場合のＲＬＵ／抗体が無い場合のＲＬＵ）の何れかとして分析された。ＩＣ５０の測定は、抗体の濃度を増加させて、ｒＲＳＰＯのＥＣ５０で細胞を刺激することによって決定された。対数変換されたデータは、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍを使用して、４パラメータ用量反応式により適合された。
【０３３１】
ＲＳＰＯ発現細胞ペレットの生成：ｐＧＣＩＧは、ｐＧＩＰＺ（Ｏｐｅｎ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）のＺｅｏＲ−ＣＭＶｉｅ−ｔＧＦＰ−ＩＲＥＳ−ＰｕｒｏＲ−ｓｈＲＮＡ−ＷＲＥ内容物をＣＭＶｉｅＥプロモーター、多重クローニング部位（ＭＣＳ）、内部リボソーム侵入部位（ＩＲＥＳ）及び高感度緑色蛍光タンパク質（ＥＧＦＰ）を含む断片と置換することによって作成されたＨＩＶベースの自己不活性化レンチウイルスベクターである。ヒトＲスポンジン１−４のオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）は、ＰＣＲによってＣ末端でＨＡエピトープ（ＹＰＹＤＶＰＤＹＡ）でタグ付けし、ｐＧＣＩＧのＭＣＳに挿入された。ＨＥＫ−２９３細胞は、トランスフェクションの２４時間前に、１０％熱不活性化ＦＢＳを含むＤＭＥＭ高グルコース中に、１５ｘ１０６細胞／プレートで１５ｃｍのディッシュ上に蒔かれた。レンチウイルス上清は、６ｕｇのｐＧＣＩＧ−ｈＲＳＰＯ、１２ｕｇのパッケージングベクター８．９（Zufferey et al., 1997）、３ｕｇのエンベロープベクターｐＶＳＶ−Ｇ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）及びトランスフェクション試薬Ｇｅｎｅｊｕｉｃｅ（Ｎｏｖａｇｅｎ）を用いて共トランスフェクションすることにより調製された。培地はトランスフェクションの１２時間後に交換され、２４時間後ウイルス上清が回収され、０．４５μｍのＰＥＳフィルター（Ｎａｌｇｅｎｅ）を通して濾過され、更なる処理まで４℃で保存された。ＨＥＫ−２９３細胞は、１０％熱不活性化ＦＢＳを含むＤＭＥＭ高グルコース中に、１ｘ１０６細胞／プレートで１０ｃｍのディッシュ上に蒔かれた。細胞を１２時間付着させ、その後、培地を１０ｍｌのウイルス上清と置き換えた。ウイルス上清は、６０時間細胞上にとどまり、その後、細胞は回収され、ＦＡＣＳによる蛍光タンパク質の発現について分析された。ゲートは、各ウイルス構築物に対して、２×１０５の、低、中、高のｅＧＦＰ発現細胞を選別するように設定された。細胞株を増殖させ、ＨＩＶ−１ ｐ２４抗原ＥＬＩＳＡ２．０キット（ＺｅｐｔｏＭｅｔｒｉｘ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）を用いて、複製能力のあるウイルス（ＲＣＶ）産生が無いことについて試験された。ヒトＲ−スポンジンの発現及び分泌は、濃縮された細胞培養上清の抗ＨＡウェスタンブロッティングにより確認され、ｅＧＦＰ発現レベルと良く相関した。
【０３３２】
ＩＨＣ反応性スクリーニング：ホルマリン固定パラフィン包埋細胞ペレットを、４ｕｍで切断した。スライドを２０分間セ氏９９度でクエン酸ベースのｐＨ６．０の緩衝液（Ｄａｋｏ カタログ番号Ｓ１６９９、Ｃａｒｐｉｎｔｅｒｉａ， ＣＡ）で前処理した。１０％血清阻止後、抗ＲＳＰＯ血清は１：２５０で使用され、ハイブリドーマ上清が流された。１：２５０での免疫前血清又は１０ｕｇ／ｍｌの総濃度のナイーブマウスＩｇＧ１、２ａ、及び２ｂが陰性対照として使用された。ビオチン化ロバ抗マウス二次抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏ カタログ番号７１５−０６５−１５１，Ｗｅｓｔ Ｇｒｏｖｅ， ＰＡ）が５ｕｇ／ｍｌで使用された。ＶＥＣＴＡＳＴＡＩＮ Ｅｌｉｔｅ ＡＢＣキット（Ｓｔａｎｄａｒｄ＊）（Ｖｅｃｔｏｒ Ｌａｂｓ カタログ番号ＰＫ−６１００）が検出に使用され、シグナルはＰｉｅｒｃｅ Ｍｅｔａｌ Ｅｎｈａｎｃｅｄ ＤＡＢで可視化された（Ｔｈｅｒｍｏ カタログ番号３４０６５、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ， ＩＬ）。
【０３３３】
エピトープビニング：抗ＲＳＰＯ抗体のエピトープビニングはＯｃｔｅｔ ＲＥＤ３８４機器（ＦｏｒｔｅＢｉｏ）を用いて行われた。組換えＲＳＰＯ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ， Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ， ＭＮ）がビオチン化され、１２０秒間、１０μｇ／ｍｌで、ストレプトアビジンバイオセンサー上に捕獲された。飽和に至るまでの第一抗体の結合は、６００秒間、１０μｇ／ｍｌで添加することによって達成された。同じバイオセンサーが、５μｇ／ｍｌの競合抗体に浸漬され、結合は３００秒間測定された。第一抗体の飽和量の存在下における第二抗体の結合不全は、２つの抗体が同じエピトープビンに存在することを示していた。
【０３３４】
親和性の測定：抗ＲＳＰＯ抗体の結合親和性は、ビアコアＴＭ−２０００機器を用いた表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）により測定された。ＣＭ５バイオセンサーチップは、供給者（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ， Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ， ＮＪ）の説明書に従って、Ｎ−エチル−Ｎ’−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミド ヒドロクロリド（ＥＤＣ）及びＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）試薬により活性化された。ＲＳＰＯ抗原は、約２５０応答単位（ＲＵ）を達成するために、バイオセンサーチップ上に固定化され、続いて１Ｍのエタノールアミンで遮断された。
【０３３５】
反応速度測定のために、抗ＲＳＰＯのＦａｂの２倍連続希釈液が、２５℃で３０μｌ／分の流速により、ＨＢＳ−Ｐ緩衝液（０．０１ＭのＨＥＰＥＳ ｐＨ７．４、０．１５ＭのＮａＣｌ、０．００５％の界面活性剤Ｐ２０）中に注入された。会合速度（ｋｏｎ）及び解離速度（ｋｏｆｆ）は、単純な一対一のラングミュア結合モデル（ＢＩＡｃｏｒｅ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ Ｓｏｆｔｗａｒｅバージョン３．２）を用いて計算された。平衡解離定数（ＫＤ）はｋｏｆｆ／ｋｏｎ比として計算された。
【０３３６】
競合結合ＥＬＩＳＡ：ＬＧＲ４及び−５ＥＣＤのＲＳＰＯへの結合を遮断することにおける抗ＲＳＰＯ抗体の活性を測定するために、マキシソープ３８４ウェルマイクロウェルプレート（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｎｕｎｃ， Ｒｏｓｋｉｌｄｅ， Ｄｅｎｍａｒｋ）が、４℃で一晩、５０ｍＭの炭酸緩衝液、ｐＨ９．６中の０．５μｇ／ｍｌのｈＲＳＰＯ２又はｈＲＳＰＯ３（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）の２５ｕｌ／ウェルでコーティングされた。プレートは、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）、ｐＨ７．４中、０．５％ウシ血清アルブミン、１５ｐｐｍのＰｒｏｃｌｉｎ ３００の８０ｕｌ／ウェルで遮断された。アッセイ緩衝液（ＰＢＳ中、０．５％ＢＳＡ、０．０５％のポリソルベート２０、１５ｐｐｍのＰｒｏｃｌｉｎ ３００）中、０．１μｇ／ｍｌのＬＧＲ４−Ｆｃ又は０．０１５μｇ／ｍｌのＬＧＲ５−Ｆｃを含有する連続的に希釈した抗ＲＳＰＯ抗体（３倍連続希釈と緩衝液ブランクで０．０７８−１０ｎｇ／ｍｌ）が、２５ｕｌ／ウェルでプレートに添加された。２時間のインキュベーションの後、プレートに結合したＬＧＲ４−Ｆｃ及びＬＧＲ５−Ｆｃが、ペルオキシダーゼ標識ヤギＦ（ａｂ’）２抗ヒトＦｃ（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ， Ｗｅｓｔ Ｇｒｏｖｅ， ＰＡ）を使用して検出された。１時間のインキュベーション後、基質３，３’，５，５’−テトラメチル ベンジジン（Ｍｏｓｓ Ｉｎｃ．， Ｐａｓａｄｅｎａ， Ｍａｒｙｌａｎｄ）がプレートに添加され、反応は１Ｍのリン酸を加えることにより停止された。工程間で、プレートを、０．０５％のＴｗｅｅｎ ２０を含む、ＰＢＳ、ｐＨ７．４で洗浄し、コーティング工程の後の全てのインキュベーション工程は、オービタルシェーカー上で室温で行われた。吸光度は、マルチスキャンアセントリーダー（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ， Ｈｕｄｓｏｎ， ＮＨ）上で４５０ｎｍで読み取られた。
【０３３７】
ＲＳＰＯへのＲＮＦ４３の結合を遮断する抗ＲＳＰＯ抗体の活性は、（ＲＳＰＯ２をコーティングしたプレート上で）０．５ｎｇ／ｍｌのビオチン化ＲＮＦ４３−Ｆｌａｇ又は（ＲＳＰＯ３をコーティングしたプレート上で）２０ｎｇ／ｍｌのビオチン化ＲＮＦ４３−Ｆｌａｇを使用して同様に測定された。結合したビオチン化ＲＮＦ４３−Ｆｌａｇは、上述のように、ペルオキシダーゼ標識ストレプトアビジン（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ， Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ， ＮＪ）、続いて基質を用いて検出された。
【０３３８】
抗ＲＳＰＯ３抗体のヒト化：モノクローナル抗体５Ｄ６は、以下に記載するようにヒト化された。残基番号は、 Kabat et al., Sequences of proteins of immunological interest, 5th Ed., Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)に従っている。
【０３３９】
５Ｄ６のヒト化の間に構築された変異体は、Ｆａｂの形で評価された。マウス５Ｄ６由来のＶＬ及びＶＨドメインを、ヒトＶＬカッパＩ（ＶＬＫＩ）及びヒトＶＨサブグループＩＶ（ＶＨ４）コンセンサス配列と整列させた。マウス抗体の超可変領域は、ＶＬＫＩ及びＶＨＩアクセプターフレームワーク中に操作された。具体的には、ｍｕ５Ｄ６ ＶＬドメインから、位置２４−３４（Ｌ１）、５０−５６（Ｌ２）及び８９−９７（Ｌ３）がＶＬＫＩ中に移植され、ｍｕ５Ｄ６ ＶＨドメインから、位置２６−３５（Ｈ１）、５０−６５（Ｈ２）及び９５−１０２（Ｈ３）がＶＨＩ中に移植された。ｍｕ５Ｄ６からの全てのＶＬ及びＶＨのバーニア位置は、それぞれ、ＶＬＫ１とＶＨ４に移植された。この移植片はｖ１と称される。
【０３４０】
このセクションでの抗体の結合親和性は、ＢＩＡｃｏｒｅＴＭＴ２００フォーマットによって決定された。簡潔には、供給者の説明書に従って、ＢＩＡｃｏｒｅＴＭ研究グレードＣＭ５チップを１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣ）及びＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）試薬により活性化させた。ｈｕＲＳＰＯ３が、各フローセルで約５０応答単位（ＲＵ）を達成するために、固定化された。未反応のカップリング基を１Ｍのエタノールアミンで遮断した。反応速度測定のために、変異体抗体の４倍連続希釈液が、２５℃で３０μｌ／分の流速により、ＨＢＳ−Ｐ緩衝液（０．０１ＭのＨＥＰＥＳ ｐＨ７．４、０．１５ＭのＮａＣｌ、０．００５％の界面活性剤Ｐ２０）中に注入された。会合速度（ｋｏｎ）及び解離速度（ｋｏｆｆ）は、１：１ラングミュア結合モデル（ＢＩＡｃｏｒｅ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ Ｓｏｆｔｗａｒｅバージョン２．０）を用いて計算された。平衡解離定数（Ｋｄ）をｋｏｆｆ／ｋｏｎ比として算出した。
【０３４１】
結晶学のＲＳＰＯ３（Ｍ３３−Ｅ２１０）の精製：Ｎ末端のＨｉｓ−ＭＢＰタグのＮ末端を含むＲＳＰＯ３（Ｍ３３−Ｅ２１０）は、キフネンシンで処置した培地中で増殖させたＳＦ９細胞中でタグなしＥｎｄｏＨと共発現された。細胞上清を回収し、洗浄緩衝液（２５ｍＭのトリス−ＨＣｌ ｐＨ７．５、５００ｍＭのＮａＣｌ、２０ｍＭのイミダゾール、５％グリセロール）で事前に平衡化した１０ｍＬのニッケルＮＴＡアガロースカラムに通した。次いで、カラムを洗浄緩衝液の１０カラム容積で洗浄した。タンパク質は、溶出緩衝液の５カラム容量（２５ｍＭのトリス−ＨＣｌ ｐＨ７．５、５００ｍＭのＮａＣｌ、３００ｍＭのイミダゾール、１０％グリセロール）を用いてカラムから溶出され、３０ｍＬ未満まで濃縮された。ＴＥＶプロテアーゼが添加され、試料は透析緩衝液（２５ｍＭトリス塩酸ｐＨ７．５、５００ｍＭのＮａＣｌ、１０ｍＭイミダゾール、１０％グリセロール）に対して４℃で一晩透析された。透析後、試料は、洗浄緩衝液で予め平衡化された５ｍＬのＨｉｓＴｒａｐカラムに通された。次いで、試料は２未満ｍＬに濃縮され、ゲル濾過緩衝液（２５ｍＭのトリス−ＨＣｌ ｐＨ７．５、３００ｍＭのＮａＣｌ、５％グリセロール）で予め平衡化されたスーパーデックス７５１６／６０カラムに適用された。ＲＳＰＯ３（Ｍ３３−Ｅ２１０）を含む画分をプールし、濃縮した。アリコートを−８０℃で保存した。
【０３４２】
結晶学のＦａｂ精製：Ｆａｂ ５Ｄ６及び２６Ｅ１１は、大腸菌細胞中で発現させた。細胞ペーストは、溶解緩衝液（２５ｍＭのＥＤＴＡ及び１ｍＭのＰＭＳＦを補足したＰＢＳ）に再懸濁され、細胞はマイクロフルイダイザーを介して３継代溶解された。次いで、溶解物は１時間１２，０００ｒｐｍで遠心分離され、清澄溶解物は、０．８μｍのフィルターを通して濾過された。清澄溶解物は、２５ｍＭのＥＤＴＡを補充したＰＢＳで予め平衡化された２５ｍＬのプロテインＧカラムに直接適用された。カラムは、ＰＢＳの１０カラム容量で洗浄され、タンパク質は０．５８％酢酸で溶出された。溶出液は、その後、緩衝液Ａ（２０ｍＭのＭＥＳ ｐＨ５．５）で予め平衡化されたＨｉＴｒａｐ ＳＰ ＨＰカラムにロードされた。カラムは緩衝液Ａの１０カラム容積で洗浄され、タンパク質は、緩衝液Ａから緩衝液Ｂ（２０ｍＭのＭＥＳ ｐＨ５．５、５００ｍＭのＮａＣｌ）の２０カラム容量の直線勾配上で溶出された。Ｆａｂを含有する画分はプールされ、２ｍＬ未満まで濃縮され、ゲル濾過緩衝液で予め平衡化されたスーパーデックス７５２６／６０カラムに適用された。Ｆａｂを含む画分をプールし、濃縮した。アリコートを−８０℃で保存した。
【０３４３】
結晶学のＲＳＰＯ３／Ｆａｂ複合体の精製：複合体を形成するために、ＲＳＰＯ３（Ｍ３３−Ｅ２１０）の１．２５倍モル過剰が、ゲル濾過緩衝液を含む８００μＬの結合反応物中で１５０ｎｍｏｌの何れかのＦａｂに添加された。結合反応物は、氷上で１時間インキュベートされた。反応物はその後、４℃で１３，０００ｒｐｍで遠心され、ゲル濾過緩衝液で予め平衡化されたスーパーデックス７５１６／６０カラムにロードされた。複合体を含む画分をプールし、２０ｍｇ／ｍＬに濃縮した。アリコートを−８０℃で保存した。
【０３４４】
結晶学：ＲＳＰＯ３（Ｍ３３−Ｅ２１０）／Ｆａｂ ５Ｄ６については、Ｌａｂｃｙｔｅ Ｅｃｈｏ液体ハンドラーが、１００ｎＬのシッティングドロップを使用する複数の疎行列結晶スクリーンを設定するために使用された。スクリーンは、１８℃で保存された。結晶は、母液として１００ｍＭのＭＩＢ（ｐＨ９）及び２５％ＰＥＧ１５００を含有するドロップ中で得られた。抗凍結剤溶液は、１．８μＬのリザーバー溶液と１μＬの７０％グリセロールを混合することによって作製された。単結晶が回収され、１０秒間、抗凍結剤溶液に浸漬され、液体窒素中で急速凍結された。
【０３４５】
ＲＳＰＯ３（Ｍ３３−Ｅ２１０）／Ｆａｂ ２６Ｅ１１については、Ｌａｂｃｙｔｅ Ｅｃｈｏ液体ハンドラーが、１００ｎＬのシッティングドロップを使用する複数の疎行列結晶スクリーンを設定するために使用された。スクリーンは、１８℃で保存された。結晶は、母液として２００ｍＭのギ酸ナトリウム及び２０％（ｗ／ｖ）のＰＥＧ３，３５０を含有するドロップ中で得られた。抗凍結剤溶液は、１．８μＬのリザーバー溶液と１μＬの７０％グリセロールを混合することによって作製された。単結晶が回収され、１０秒間、抗凍結剤溶液に浸漬され、液体窒素中で急速凍結された。
【０３４６】
両方の複合体は、同様の条件の広い範囲で結晶化された。ほぼ全ての結晶はＰＥＧベースの条件で成長し、最も一般的なのは２０−２５％のＰＥＧ３３５０であった。成功した他の沈殿剤は、２０％のＰＥＧ６０００、２０−２５％のＰＥＧ４，０００、及び２５％のＰＥＧ１，５００を含んでいた。ｐＨは３．５−９の範囲に及び、大部分の結晶成長は７と８の間で見られた。２００ｍＭ濃度での様々な塩がが結晶成長を支援した。
【０３４７】
結晶構造決定及び精密化２つのＲＳＰＯ３／のＦａｂ複合体についての回折データはシンクロトロンで収集した。データは、ＸＤＳ及びＳＣＡＬＡを用いて指数づけされ、積分され、スケーリングされた。ＲＳＰＯ３／５Ｄ６及びＲＳＰＯ３／２６Ｅ１１の結晶構造は、サーチモデルとしてＦａｂの構造を用いた分子置換により解かれた。初期分子置換の解の位相は、ＰＨＥＮＩＸを使用して溶媒平滑化及び電子密度修飾によって改善された。精密化及び再構築の反復ラウンドが、ＲＳＰＯ３構造を構築するために使用された。ＲＳＰＯ３／５Ｄ６及びＲＳＰＯ／２６Ｅ１１についての結晶学的統計は以下の通りである。
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【０３４８】
インビボ有効性の実験：ＲＳＰＯ３融合陽性患者由来の腫瘍をＢａｌｂ Ｃ／ヌードマウスの皮下で増殖させた。腫瘍が約２００ｍｍ３のサイズに達したら、マウスを３〜４週間、週二回、対照抗体又は抗ＲＳＰＯ３抗体（５Ｄ６）の何れかを３０ｍｇ／ｋｇで処置した。抗ＲＳＰＯ３抗体（５Ｄ６）をイリノテカンと組み合わせて使用した実験では、上記のように抗ＲＳＰＯ３抗体が投与され、イリノテカンは０日目又は０日目と３日目に１００ｍｇ／ｋｇで投与された。
【０３４９】
連続移植研究のために、ＲＳＰＯ３融合陽性患者由来の腫瘍を移植したマウスは、上述のように対照抗体又は抗ＲＳＰＯ３抗体で処置された。増殖曲線が分離し始めると、腫瘍断片は除去され、ナイーブＢａｌｂ Ｃ／Ｎｕｄｅマウスに移植された。移植された腫瘍断片を有するマウスは、その後、上記のように対照又は抗ＲＳＰＯ３抗体の何れかで処置された。
【０３５０】
結果
機能遮断及びＩＨＣ反応性抗ＲＳＰＯ抗体の産生
抗ＲＳＰＯ抗体を産生する試みにおいて、マウス及びハムスターは、組換えヒトＲＳＰＯ２及び／又はヒトＲＳＰＯ３で免疫され、ハイブリドーマ細胞株が作製された。これらの細胞から上澄液は、最初に、ＥＬＩＳＡによってｈＲＳＰＯ１、ｈＲＳＰＯ２、ｈＲＳＰＯ３及びｈＲＳＰＯ４への結合についてスクリーニングされた。ｈＲＳＰＯ２及び／又はｈＲＳＰＯ３結合を示す上清は、その後、ＷＮＴレポーター活性のｈＲＳＰＯ２及びｈＲＳＰＯ３刺激を遮断する能力について試験された。候補は、その後、クローニングされ、発現され、精製された。図１に示すように、精製されたクローンのサブセットは、ｒｈＲＳＰＯ２刺激ＷＮＴレポーター活性（図１Ａ）及び／又はｒｈ ＲＳＰＯ３刺激ＷＮＴレポーター活性（図１Ｂ）を強力に阻害した。
【０３５１】
更に、上清は、ＩＨＣ試薬として使用することができる抗ＲＳＰＯ抗体を同定するためにスクリーニングされた。ホルマリン固定パラフィン包埋細胞ペレットは、高、中、又は低レベルのｈＲＳＰＯ２又はｈＲＳＰＯ３を安定して発現する２９３細胞から調製された。更に、細胞ペレットは、２９３細胞及びｈＲＳＰＯ１又はｈＲＳＰＯ４を安定して発現する２９３細胞から調製された。ハイブリドーマ上清及び抗体のクローンは、調製した細胞ペレット上でＩＨＣ反応性について試験された。図２に示されるように、抗体４９Ｇ５は、ＩＨＣ反応性により、高、中、又は低レベルのｈＲＳＰＯ２発現（Ｄ−Ｆ）を認識したが、一方、ＲＳＰＯ３（Ａ−Ｃ）、ｈＲＳＰＯ１（Ｇ）、ｈＲＳＰＯ４（Ｈ）、又は非ｈＲＳＰＯ１−４（Ｉ）を認識しなかった。試験した全ての抗体についての結果の概要を以下の表４に示す。抗体４Ｈ１、４Ｄ４、５Ｃ２、５Ｄ６、５Ｅ１１、２１Ｃ２は、特異的にｈＲＳＰＯ３を認識する。抗体１Ａ１、３６Ｄ２、４９Ｇ５は、特異的にｈＲＳＰＯ２を認識する。抗体６Ｅ９及び２６Ｅ１１は、特異的にｈＲＳＰＯ２及びｈＲＳＰＯ３を認識する。
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【０３５２】
抗ＲＳＰＯ抗体のエピトープビニング
抗ＲＳＰＯ抗体を更に特徴づけるために、抗体が分類される固有のエピトープビンの数が、ＯＣＴＥＴ ＲＥＤアッセイを用いて決定された。抗体は、最初に親和性がランク付けされた。最も高い親和性を有する抗体は、ｈＲＳＰＯ２又はｈＲＳＰＯ３結合バイオセンサーへ飽和に至るまで結合させた。二次抗体による結合が、その後評価された。試験された抗ＲＳＰＯ２抗体は、１Ａ１又は１１Ｆ１１の何れかと競合する能力によって定義される２つの固有のエピトープビンに分類された。第一の固有のエピトープビンは１Ａ１、４９Ｇ５、及び３６Ｄ２を含み、第二の固有のエピトープビンは１１Ｆ１１を含んでいた。試験された抗ＲＳＰＯ３抗体は、２６Ｅ１１、４Ｈ１、又は２１Ｃ２と競合する能力によって定義される３つの固有のエピトープビンに分類された。第一の固有のエピトープビンは、２６Ｅ１１、５Ｄ６、５Ｅ１１、及び６Ｅ９を含み、第二の固有のエピトープビンは４Ｈ１を含み、第三の固有のエピトープビンは５Ｃ２及び２１Ｃ２を含んでいた。
【０３５３】
抗ＲＳＰＯ抗体の結合特異性及び親和性
抗ＲＳＰＯ抗体を更に特徴づけるために、それらの機能遮断活性がマウスＲＳＰＯ２（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）及びカニクイザルＲＳＰＯ２（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）に対して試験された。抗体クローンのサブセットは、ＷＮＴレポーター細胞のｈＲＳＰＯ２、ｃｙｎｏＲＳＰＯ２、及びｍＲＳＰＯ２刺激を遮断できた（図３Ａ−Ｃ）ＲＳＰＯ２中の位置１８６での多型は、ヒト集団において同定された。この多型に対する抗ＲＳＰＯ抗体の機能遮断活性及びこの患者集団における潜在的有用性を評価するために、ｈＲＳＰＯ２ Ｌ１８６Ｐタンパク質が最初に精製され、次いでＷＮＴレポーター細胞を刺激するために使用された。抗ＲＳＰＯ抗体のサブセットは、ｈＲＳＰＯ２ Ｌ１８６Ｐの機能を遮断できた（図３Ｄ）。
【０３５４】
更に、抗ＲＳＰＯ抗体は、マウスＲＳＰＯ３（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）及びカニクイザルＲＳＰＯ３（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）の機能を遮断する能力について試験された。抗体のサブセットは、ｈＲＳＰＯ３、ｃｙｎｏＲＳＰＯ３、ｍＲＳＰＯ３のＷＮＴレポーター細胞刺激を阻害することができた（図４Ａ−Ｃ）。抗ＲＳＰＯ抗体は、更に、結腸直腸腫瘍において最近同定されたＲＳＰＯ３融合遺伝子を阻害する能力について試験された（Seshagiri et al., Nature 488:660-664 (2012)）。馴化培地は、同定された２つのＰＴＰＲＤ−ＲＳＰＯ３融合遺伝子（配列番号１７６及び１７８）をコードする構築物をトランスフェクトすることにより調製された。ＲＳＰＯ３又はＲＳＰＯ３融合遺伝子を含む馴化培地は、ＷＮＴレポーター活性を刺激することができた。抗ＲＳＰＯ３抗体は、レポーター細胞のＲＳＰＯ３融合遺伝子の刺激を阻害することができた（図４Ｄ）。この結果は、抗ＲＳＰＯ３抗体がＲＰＳＯ転座媒介性ｗｎｔシグナル伝達を阻害することができることを示している。
【０３５５】
表面プラズモン共鳴は、ヒト、マウス、及びカニクイザルＲＳＰＯに対する結合特異性及び親和性を確認するために使用された。抗体クローンからのＦａｂ断片は、消化され、精製され、その後、組換えタンパク質への結合についてＢＩＡｃｏｒｅＴＭ−２０００機器を用いてアッセイされた。抗体は、三つのグループ：ＲＳＰＯ２に特異的なもの、ＲＳＰＯ３に特異的なもの、及びある程度の交差反応性を有するものに分類された（図５）。結合親和性は低ナノモル範囲内（０．０７３−８０ｎＭの範囲）にあった。
【０３５６】
抗ＲＳＰＯ抗体の結合特性
以前に、ＲＳＰＯタンパク質は、膜貫通タンパク質の２つの異なるクラス：Ｅ３−リガーゼ（ＲＮＦ４３及びＺＮＲＦ３）及びＬＧＲ（ＬＧＲ４及びＬＧＲ５）（Hao et al., Nature 485(7397):195-200 (2012)）に結合することが示されている。抗ＲＳＰＯ抗体がこの２つのクラスのタンパク質のとの結合を阻害することができるかどうかを試験するために、競合結合ＥＬＩＳＡアッセイが開発された。ＬＧＲ４又はＬＧＲ５のｈＲＳＰＯ２及びｈＲＳＰＯ３への結合を阻害する能力について試験するとき、抗ＲＳＰＯ抗体は、次の３つのカテゴリに分類された：ＬＧＲ４及びＬＧＲ５の相互作用を阻害できたもの、阻害しなかったもの、及び促進したもの（図６Ａ−Ｂ、データは示さず）。同様に、抗ＲＳＰＯ抗体のパネルのサブセットは、ＲＮＦ４３のｈＲＳＰＯ２又はＲＳＰＯ３への結合を阻害した（図７Ａ−Ｂ）。抗ＲＳＰＯ結果の概要は以下の通りである（表５）。
【０３５７】
抗ＲＳＰＯ抗体のヒト化
ヒト化５Ｄ６ｖ１（ｈｕ５Ｄ６ｖ１と称される）抗体の結合親和性が、キメラ５Ｄ６と比較された。ｈｕ５Ｄ６ｖ１のマウスバーニア位置は、ｈＲＳＰＯ３に結合するマウスバーニア位置の寄与を評価するために、ヒト残基に変換された。４つの付加的軽鎖（Ｌ１：ｖ１ ＋ Ｙ３６（ｖ２．１と称される）、ｖ１＋Ｌ４６（ｖ２．２と称される）、ｖ１＋Ｔ６９（ｖ２．３と称される）、ｖ１＋Ｆ７１（ｖ２．４と称される））及び４つの付加的重鎖（ｖ１＋Ｖ７１（ｖ２．８と称される）、ｖ１＋Ｒ９４（ｖ２．１０と称される）、ｖ１＋Ｗ４７＋Ｉ４８＋Ｆ７８（ｖ３．２と称される）、ｖ１＋Ｗ４７＋Ｉ４８＋ｖ６７＋Ｆ７８（ｖ３．３と称される））。上述の変異体抗体の結合親和性評価に基づいて（データは示さず）、軽鎖上のＦ３６及びＴ４６は、鍵となるマウスのバーニア残基であり、重鎖上のＶ７１及びＲ９４は、鍵となるマウスのバーニア残基であると決定された。キメラ５Ｄ６は、３．３Ｅ−１１ＭのＫＤで結合したが、一方、ｖ１＋Ｔ６９（ＬＣ）＋（Ｗ４７＋Ｉ４８＋Ｖ６７＋Ｆ７８（ＨＣ）（ｈｕ５Ｄ６ｖ４．１と称される）、ｖ１＋Ｔ６９（ＬＣ）＋（Ｗ４７＋Ｉ４８＋Ｆ７８（ＨＣ）（ｈｕ５Ｄ６ｖ４．３と称される）は、それぞれ、６．３Ｅ−１１Ｍ、及び７．０Ｅ−１１ＭのＫＤで結合した。
【０３５８】
結合アッセイにおいてカニクイザル又はマウスＲＳＰＯ３がｈｕＲＳＰＯ３と置換したのを除き、上述のように、ｈｕ５Ｄ６ｖ４．１及びキメラ５Ｄ６は、カニクイザル及びマウスＲＳＰＯに結合するそれらの能力について試験された。ヒト化抗体の結合特性は以下の表５に示される。
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【０３５９】
ヒト化抗体ｈｕ５Ｄ６ｖ４．１は、熱応力（４０℃、ｐＨ５．５、２週間）及び２，２’−アゾビス（２−アミジノプロパン）ヒドロクロリド（ＡＡＰＨ）分析の下で試験された。次いで、試料は、製品の貯蔵期間にわたって安定性を模倣するために、熱的にストレスが加えられた。試料は、２０ｍＭにヒスチジン酢酸、２４０ｍＭののスクロース、ｐＨ５．５に緩衝液交換され、１ｍｇ／ｍＬの濃度に希釈された。試料の１ｍＬを２週間４０℃でストレスが加えられ、２番目のは対照として−７０℃で保存された。両方の試料は、次いで、液体クロマトグラフィー（ＬＣ）−質量分析（ＭＳ）分析を用いて分析することができるペプチドを作成するために、トリプシンを用いて消化された。各ペプチドに対して、ＬＣからの試料保持期間並びに高分解能精密質量及びペプチドイオンのフラグメンテーション情報（アミノ酸配列情報）がＭＳで取得された。抽出されたイオンクロマトグラム（ＸＩＣ）が、＋−１０ｐｐｍでのウィンドウで、データセットから目的のペプチド（天然型及び修飾型ペプチドイオン）について取得され、ピークは面積を決定するために積分された。修飾の相対的な割合は、（修飾されたペプチドの面積）を（修飾されたペプチドの面積と天然ペプチドの面積）で割って、１００を乗じて、各試料について計算された。
【０３６０】
熱ストレス試験によって決定されるように、ｈｕ５Ｄ６ｖ４．１は、ＣＤＲ−Ｈ３にＷ１００ｂを有しており、これは酸化に対して感受性である（トリプトファンの酸化において１１．５％増加。ＡＡＰＨストレス後に、対照の２４．１％から３５．６％）。Ｆ１００ｂ（ｈｕ５Ｄ６ｖ５．１と称される）及びＷ１００ｂＨ（ｈｕ５Ｄ６ｖ５．２と称される）変異体が潜在的酸化を減少させるために構築された。
【０３６１】
結晶学によるエピトープマッピング
抗ＲＳＰＯ抗体を更に特徴付けるために、ＲＳＰＯ３／Ｆａｂ複合体（５Ｄ６及び２６Ｅ１１）の結晶が上記のように調製され、結晶構造が決定された。図８を参照。表６は、５Ｄ６の重鎖（ＨＣ）及び軽鎖（ＬＣ）とＲＳＰＯ３（Ｆ鎖）との間の接触のリストを含む。表６におけるカットオフは４オングストロームである。表７は、２６Ｅ１１の重鎖（ＨＣ）及び軽鎖（ＬＣ）とＲＳＰＯ３（Ｆ鎖）との間の接触のリストを含む。表７におけるカットオフは４オングストロームである。５Ｄ６及び２６Ｅ１１の両方における接触の大部分はＲＳＰＯ３のフリン１ドメインとである。
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【０３６２】
インビボ有効性
抗ＲＳＰＯ３抗体の有効性は、結腸直腸がんＰＴＰＲＤ−ＲＳＰＯ融合患者由来の腫瘍モデルにおいて試験された。ＰＴＰＲＤ−ＲＳＰＯ融合患者由来の腫瘍モデル及び／又はＮＳＣＬＣ組織において、抗ＲＳＰＯ３抗体（５Ｄ６）は、腸管幹細胞マーカー：Ｍｙｃ、Ａｘｉｎ２、ＬＧＲ５、ＴＥＲＴ、ＢＩＲＣ５、及び／又はＡｓｃｌ２のマーカーの遺伝子発現を有意に減少させたが、一方、分化のマーカー、例えば、  ＣＥＡＣＡＭ７、ＳＬＣ２６Ａ３、ＣＡ１、ＳＹＴｌ５、ＣＡ４、ＴＦＦ１、及びＫＲＴ２０は、抗ＲＳＰＯ３抗体による処置の前の発現レベルに比較して増加した（データは示さず）。いかなる特定の理論に縛られることを望まないが、これらの結果は、抗ＲＳＰＯ３抗体（５Ｄ６）は、遺伝子発現マーカーによって決定されるように、幹細胞様マーカープロファイルから分化マーカープロファイルへの遷移を促進することが可能であることを示唆している。
【０３６３】
経時的な腫瘍体積における影響（例えば、腫瘍増殖阻害）が、また、結腸直腸がんＰＴＰＲＤ−ＲＳＰＯ融合患者由来の腫瘍モデルにおいて、図１１Ａ−Ｄに示されている抗ＲＳＰＯ３抗体（５Ｄ６）での処置の際に試験された。抗ＲＳＰＯ３抗体（５Ｄ６）による該モデルの処置は、腫瘍増殖の有意な減少又は腫瘍増殖の示した。モデルでは、退縮及び／又は静止の発生は、抗ＲＳＰＯ３抗体（５Ｄ６）で処理する際は即時ではなかった；処置の開始後における退縮又は静止の発生の遅延があった。更に、抗ブタクサ抗体又は抗ＲＳＰＯ３抗体（５Ｄ６）で処置した結腸直腸がん患者由来のモデル腫瘍をＨ＆Ｅ染色及びアルシアンブルー染色で染色した場合、図１２Ａ−Ｄに示すように、組織病理学の著しい差があった。抗ＲＳＰＯ３（５Ｄ６）処置腫瘍では、腫瘍細胞の数の有意な減少があった。残りの細胞のほとんどの組織学は、分化、成熟した非増殖性杯細胞と一致した。更に、抗ブタクサ抗体対照と比較して、アルシアンブルー染色によって示されるように、粘液の有意な増加があった。従って、測定された腫瘍体積は、実際には、腫瘍体積によってでなく、かなりの部分が粘液により占有されている可能性があり、従って、腫瘍増殖阻害における効果は、実際には過小評価されている可能性がある。いかなる特定の理論に縛られることを望まないが、これらの有効性データはＲＳＰＯ３融合陽性腫瘍の階層的な組織と一致している：がん幹細胞の増殖は、ＲＳＰＯタンパク質に依存し、抗ＲＳＰＯ３抗体（５Ｄ６）による処置により、がん幹細胞は死滅するか、ＴＡ（ｔｒａｎｓｉｔ−ａｍｐｌｉｆｙｉｎｇ）細胞に分化する。それらの補充を確実にするために幹細胞源の非存在下で、後者は、限られた数の細胞分裂を受け、その後、それらは最終分化し、それらの枯渇へとつながる。従って、反応速度及びＴＡ細胞集団の全体的な大きさは、腫瘍増殖阻害の発生を決定し得る。
【０３６４】
再び、いかなる特定の理論に縛られることを望まないが、記載されたＲＳＰＯ３融合陽性腫瘍の階層的な組織の理論に基づいて、化学療法剤との併用治療は、ＴＡ細胞集団を死滅させることによる退縮及び／又は静止の発生の遅延を減少させ、そして、ＰＴＰＲＤ−ＲＳＰＯ融合患者由来の腫瘍モデルにおける化学療法剤単独による治療と比較して、有効性を高めるはずである、この理論と一致して、かつ図１１Ｄ及び図１３Ａに示されるように、イリノテカンと組み合わせた抗ＲＳＰＯ３抗体（５Ｄ６）は、ＣＲＣＤ及びＣＲＣＣ結腸直腸がんＰＴＰＲＤ−ＲＳＰＯ融合患者由来の腫瘍モデルにおいて、イリノテカン単独による治療と比較した場合、退縮及び／又は静止の発生の遅延を有意に減少させ、腫瘍増殖を減少させた。化学療法と組み合わせて抗ＲＳＰＯ３抗体を投与することにより、がん幹細胞とＴＡ細胞の両方は、腫瘍増殖の早期の退縮又は静止のための標的とされる。
【０３６５】
更に、いかなる特定の理論に縛られることを望まないが、上に記載されたＲＳＰＯ３融合陽性腫瘍の階層的な組織の理論、並びに、腫瘍移植アッセイによって測定されるように、幹細胞コンパートメントは、発がんイニシエーションに対する原因となるという考え方に基づいて、抗ＲＳＰＯ３抗体で処置された移植ＰＴＰＲＤ−ＲＳＰＯ融合患者由来の腫瘍モデルは、減少した幹細胞集団を有するはずであり、これは連続ＰＴＰＲＤ−ＲＳＰＯ融合患者由来の腫瘍の確立及び腫瘍増殖を減少させるはずである。再び、この理論と一致して、図１３Ｂ−Ｃに示されるように、連続移植実験において、抗ＲＳＰＯ３抗体（５Ｄ６）による処置は、連続移植後に抗ＲＳＰＯ３で処置された断片から確立され増殖する少数の腫瘍をもたらす。
【０３６６】
前述の発明は、理解を明確にする目的のために例示及び実施例によってある程度詳細に説明してきたが、説明や例は、本発明の範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。全ての特許及び本明細書に引用される科学文献の開示は、参照によりその全体が援用される。
配列番号１  ＞ｓｐ｜Ｑ６ＵＸＸ９｜ＲＳＰＯ２＿ＨＵＭＡＮ  Ｒ−スポンジン−２  ＯＳ＝ホモサピエンス  ＧＮ＝ＲＳＰＯ２
ＭＱＦＲＬＦＳＦＡＬＩＩＬＮＣＭＤＹＳＨＣＱＧＮＲＷＲＲＳＫＲＡＳＹＶＳＮＰＩＣＫＧＣＬＳＣＳＫＤＮＧＣＳＲＣＱＱＫＬＦＦＦＬＲＲＥＧＭＲＱＹＧＥＣＬＨＳＣＰＳＧＹＹＧＨＲＡＰＤＭＮＲＣＡＲＣＲＩＥＮＣＤＳＣＦＳＫＤＦＣＴＫＣＫＶＧＦＹＬＨＲＧＲＣＦＤＥＣＰＤＧＦＡＰＬＥＥＴＭＥＣＶＥＧＣＥＶＧＨＷＳＥＷＧＴＣＳＲＮＮＲＴＣＧＦＫＷＧＬＥＴＲＴＲＱＩＶＫＫＰＶＫＤＴＩＬＣＰＴＩＡＥＳＲＲＣＫＭＴＭＲＨＣＰＧＧＫＲＴＰＫＡＫＥＫＲＮＫＫＫＫＲＫＬＩＥＲＡＱＥＱＨＳＶＦＬＡＴＤＲＡＮＱ
配列番号２  ＞ｓｐ｜Ｑ９ＢＸＹ４｜ＲＳＰＯ３＿ＨＵＭＡＮ  Ｒ−スポンジン−３  ＯＳ＝ホモサピエンス  ＧＮ＝ＲＳＰＯ３
ＭＨＬＲＬＩＳＷＬＦＩＩＬＮＦＭＥＹＩＧＳＱＮＡＳＲＧＲＲＱＲＲＭＨＰＮＶＳＱＧＣＱＧＧＣＡＴＣＳＤＹＮＧＣＬＳＣＫＰＲＬＦＦＡＬＥＲＩＧＭＫＱＩＧＶＣＬＳＳＣＰＳＧＹＹＧＴＲＹＰＤＩＮＫＣＴＫＣＫＡＤＣＤＴＣＦＮＫＮＦＣＴＫＣＫＳＧＦＹＬＨＬＧＫＣＬＤＮＣＰＥＧＬＥＡＮＮＨＴＭＥＣＶＳＩＶＨＣＥＶＳＥＷＮＰＷＳＰＣＴＫＫＧＫＴＣＧＦＫＲＧＴＥＴＲＶＲＥＩＩＱＨＰＳＡＫＧＮＬＣＰＰＴＮＥＴＲＫＣＴＶＱＲＫＫＣＱＫＧＥＲＧＫＫＧＲＥＲＫＲＫＫＰＮＫＧＥＳＫＥＡＩＰＤＳＫＳＬＥＳＳＫＥＩＰＥＱＲＥＮＫＱＱＱＫＫＲＫＶＱＤＫＱＫＳＶＳＶＳＴＶＨ
配列番号３  ＞ｓｐ｜Ｑ２ＭＫＡ７｜ＲＳＰＯ１＿ＨＵＭＡＮ  Ｒ−スポンジン−１  ＯＳ＝ホモサピエンス  ＧＮ＝ＲＳＰＯ１
ＭＲＬＧＬＣＶＶＡＬＶＬＳＷＴＨＬＴＩＳＳＲＧＩＫＧＫＲＱＲＲＩＳＡＥＧＳＱＡＣＡＫＧＣＥＬＣＳＥＶＮＧＣＬＫＣＳＰＫＬＦＩＬＬＥＲＮＤＩＲＱＶＧＶＣＬＰＳＣＰＰＧＹＦＤＡＲＮＰＤＭＮＫＣＩＫＣＫＩＥＨＣＥＡＣＦＳＨＮＦＣＴＫＣＫＥＧＬＹＬＨＫＧＲＣＹＰＡＣＰＥＧＳＳＡＡＮＧＴＭＥＣＳＳＰＡＱＣＥＭＳＥＷＳＰＷＧＰＣＳＫＫＱＱＬＣＧＦＲＲＧＳＥＥＲＴＲＲＶＬＨＡＰＶＧＤＨＡＡＣＳＤＴＫＥＴＲＲＣＴＶＲＲＶＰＣＰＥＧＱＫＲＲＫＧＧＱＧＲＲＥＮＡＮＲＮＬＡＲＫＥＳＫＥＡＧＡＧＳＲＲＲＫＧＱＱＱＱＱＱＱＧＴＶＧＰＬＴＳＡＧＰＡ
配列番号４  ＞ｓｐ｜Ｑ２Ｉ０Ｍ５｜ＲＳＰＯ４＿ＨＵＭＡＮ  Ｒ−スポンジン−４  ＯＳ＝ホモサピエンス  ＧＮ＝ＲＳＰＯ４
ＭＲＡＰＬＣＬＬＬＬＶＡＨＡＶＤＭＬＡＬＮＲＲＫＫＱＶＧＴＧＬＧＧＮＣＴＧＣＩＩＣＳＥＥＮＧＣＳＴＣＱＱＲＬＦＬＦＩＲＲＥＧＩＲＱＹＧＫＣＬＨＤＣＰＰＧＹＦＧＩＲＧＱＥＶＮＲＣＫＫＣＧＡＴＣＥＳＣＦＳＱＤＦＣＩＲＣＫＲＱＦＹＬＹＫＧＫＣＬＰＴＣＰＰＧＴＬＡＨＱＮＴＲＥＣＱＧＥＣＥＬＧＰＷＧＧＷＳＰＣＴＨＮＧＫＴＣＧＳＡＷＧＬＥＳＲＶＲＥＡＧＲＡＧＨＥＥＡＡＴＣＱＶＬＳＥＳＲＫＣＰＩＱＲＰＣＰＧＥＲＳＰＧＱＫＫＧＲＫＤＲＲＰＲＫＤＲＫＬＤＲＲＬＤＶＲＰＲＱＰＧＬＱＰ
2020096603.tif 000018
2020096603.tif 000019
2020096603.tif 000020
2020096603.tif 000021
2020096603.tif 000022
ＥＩＦ３Ｅ（ｅ１）−ＲＳＰＯ２（ｅ２）転座融合ポリヌクレオチド（配列番号１７３）
ＧＡＧＣＡＣＡＧＡＣＴＣＣＣＴＴＴＴＣＴＴＴＧＧＣＡＡＧＡＴＧＧＣＧＧＡＧＴＡＣＧＡＣＴＴＧＡＣＴＡＣＴＣＧＣＡＴＣＧＣＧＣＡＣＴＴＴＴＴＧＧＡＴＣＧＧＣＡＴＣＴＡＧＴＣＴＴＴＣＣＧＣＴＴＣＴＴＧＡＡＴＴＴＣＴＣＴＣＴＧＴＡＡＡＧＧＡＧＧＴＴＣＧＴＧＧＣＧＧＡＧＡＧＡＴＧＣＴＧＡＴＣＧＣＧＣＴＧＡＡＣＴＧＡＣＣＧＧＴＧＣＧＧＣＣＣＧＧＧＧＧＴＧＡＧＴＧＧＣＧＡＧＴＣＴＣＣＣＴＣＴＧＡＧＴＣＣＴＣＣＣＣＡＧＣＡＧＣＧＣＧＧＣＣＧＧＣＧＣＣＧＧＣＴＣＴＴＴＧＧＧＣＧＡＡＣＣＣＴＣＣＡＧＴＴＣＣＴＡＧＡＣＴＴＴＧＡＧＡＧＧＣＧＴＣＴＣＴＣＣＣＣＣＧＣＣＣＧＡＣＣＧＣＣＣＡＧＡＴＧＣＡＧＴＴＴＣＧＣＣＴＴＴＴＣＴＣＣＴＴＴＧＣＣＣＴＣＡＴＣＡＴＴＣＴＧＡＡＣＴＧＣＡＴＧＧＡＴＴＡＣＡＧＣＣＡＣＴＧＣＣＡＡＧＧＣＡＡＣＣＧＡＴＧＧＡＧＡＣＧＣＡＧＴＡＡＧＣＧＡＧＣＴＡＧＴＴＡＴＧＴＡＴＣＡＡＡＴＣＣＣＡＴＴＴＧＣＡＡＧＧＧＴＴＧＴＴＴＧＴＣＴＴＧＴＴＣＡＡＡＧＧＡＣＡＡＴＧＧＧＴＧＴＡＧＣＣＧＡＴＧＴＣＡＡＣＡＧＡＡＧＴＴＧＴＴＣＴＴＣＴＴＣＣＴＴＣＧＡＡＧＡＧＡＡＧＧＧＡＴＧＣＧＣＣＡＧＴＡＴＧＧＡＧＡＧＴＧＣＣＴＧＣＡＴＴＣＣＴＧＣＣＣＡＴＣＣＧＧＧＴＡＣＴＡＴＧＧＡＣＡＣＣＧＡＧＣＣＣＣＡＧＡＴＡＴＧＡＡＣＡＧＡＴＧＴＧＣＡＡＧＡＴＧＣＡＧＡＡＴＡＧＡＡＡＡＣＴＧＴＧＡＴＴＣＴＴＧＣＴＴＴＡＧＣＡＡＡＧＡＣＴＴＴＴＧＴＡＣＣＡＡＧＴＧＣＡＡＡＧＴＡＧＧＣＴＴＴＴＡＴＴＴＧＣＡＴＡＧＡＧＧＣＣＧＴＴＧＣＴＴＴＧＡＴＧＡＡＴＧＴＣＣＡＧＡＴＧＧＴＴＴＴＧＣＡＣＣＡＴＴＡＧＡＡＧＡＡＡＣＣＡＴＧＧＡＡＴＧＴＧＴＧＧＡＡＧＧＡＴＧＴＧＡＡＧＴＴＧＧＴＣＡＴＴＧＧＡＧＣＧＡＡＴＧＧＧＧＡＡＣＴＴＧＴＡＧＣＡＧＡＡＡＴＡＡＴＣＧＣＡＣＡＴＧＴＧＧＡＴＴＴＡＡＡＴＧＧＧＧＴＣＴＧＧＡＡＡＣＣＡＧＡＡＣＡＣＧＧＣＡＡＡＴＴＧＴＴＡＡＡＡＡＧＣＣＡＧＴＧＡＡＡＧＡＣＡＣＡＡＴＡＣＴＧＴＧＴＣＣＡＡＣＣＡＴＴＧＣＴＧＡＡＴＣＣＡＧＧＡＧＡＴＧＣＡＡＧＡＴＧＡＣＡＡＴＧＡＧＧＣＡＴＴＧＴＣＣＡＧＧＡＧＧＧＡＡＧＡＧＡＡＣＡＣＣＡＡＡＧＧＣＧＡＡＧＧＡＧＡＡＧＡＧＧＡＡＣＡＡＧＡＡＡＡＡＧＡＡＡＡＧＧＡＡＧＣＴＧＡＴＡＧＡＡＡＧＧＧＣＣＣＡＧＧＡＧＣＡＡＣＡＣＡＧＣＧＴＣＴＴＣＣＴＡＧＣＴＡＣＡＧＡＣＡＧＡＧＣＴＡＡＣＣＡＡＴＡＡ
ＥＩＦ３Ｅ（ｅ１）−ＲＳＰＯ２（ｅ２）転座融合ポリペプチド配列（配列番号１７４）
ＭＡＥＹＤＬＴＴＲＩＡＨＦＬＤＲＨＬＶＦＰＬＬＥＦＬＳＶＫＥＶＲＧＧＥＭＬＩＡＬＮＭＱＦＲＬＦＳＦＡＬＩＩＬＮＣＭＤＹＳＨＣＱＧＮＲＷＲＲＳＫＲＡＳＹＶＳＮＰＩＣＫＧＣＬＳＣＳＫＤＮＧＣＳＲＣＱＱＫＬＦＦＦＬＲＲＥＧＭＲＱＹＧＥＣＬＨＳＣＰＳＧＹＹＧＨＲＡＰＤＭＮＲＣＡＲＣＲＩＥＮＣＤＳＣＦＳＫＤＦＣＴＫＣＫＶＧＦＹＬＨＲＧＲＣＦＤＥＣＰＤＧＦＡＰＬＥＥＴＭＥＣＶＥＧＣＥＶＧＨＷＳＥＷＧＴＣＳＲＮＮＲＴＣＧＦＫＷＧＬＥＴＲＴＲＱＩＶＫＫＰＶＫＤＴＩＬＣＰＴＩＡＥＳＲＲＣＫＭＴＭＲＨＣＰＧＧＫＲＴＰＫＡＫＥＫＲＮＫＫＫＫＲＫＬＩＥＲＡＱＥＱＨＳＶＦＬＡＴＤＲＡＮＱ
ＰＴＰＲＫ（ｅ１）−ＲＳＰＯ３（ｅ２）転座融合ポリヌクレオチド配列（配列番号１７５）
ＡＴＧＧＡＴＡＣＧＡＣＴＧＣＧＧＣＧＧＣＧＧＣＧＣＴＧＣＣＴＧＣＴＴＴＴＧＴＧＧＣＧＣＴＣＴＴＧＣＴＣＣＴＣＴＣＴＣＣＴＴＧＧＣＣＴＣＴＣＣＴＧＧＧＡＴＣＧＧＣＣＣＡＡＧＧＣＣＡＧＴＴＣＴＣＣＧＣＡＧＴＧＣＡＴＣＣＴＡＡＣＧＴＴＡＧＴＣＡＡＧＧＣＴＧＣＣＡＡＧＧＡＧＧＣＴＧＴＧＣＡＡＣＡＴＧＣＴＣＡＧＡＴＴＡＣＡＡＴＧＧＡＴＧＴＴＴＧＴＣＡＴＧＴＡＡＧＣＣＣＡＧＡＣＴＡＴＴＴＴＴＴＧＣＴＣＴＧＧＡＡＡＧＡＡＴＴＧＧＣＡＴＧＡＡＧＣＡＧＡＴＴＧＧＡＧＴＡＴＧＴＣＴＣＴＣＴＴＣＡＴＧＴＣＣＡＡＧＴＧＧＡＴＡＴＴＡＴＧＧＡＡＣＴＣＧＡＴＡＴＣＣＡＧＡＴＡＴＡＡＡＴＡＡＧＴＧＴＡＣＡＡＡＡＴＧＣＡＡＡＧＣＴＧＡＣＴＧＴＧＡＴＡＣＣＴＧＴＴＴＣＡＡＣＡＡＡＡＡＴＴＴＣＴＧＣＡＣＡＡＡＡＴＧＴＡＡＡＡＧＴＧＧＡＴＴＴＴＡＣＴＴＡＣＡＣＣＴＴＧＧＡＡＡＧＴＧＣＣＴＴＧＡＣＡＡＴＴＧＣＣＣＡＧＡＡＧＧＧＴＴＧＧＡＡＧＣＣＡＡＣＡＡＣＣＡＴＡＣＴＡＴＧＧＡＧＴＧＴＧＴＣＡＧＴＡＴＴＧＴＧＣＡＣＴＧＴＧＡＧＧＴＣＡＧＴＧＡＡＴＧＧＡＡＴＣＣＴＴＧＧＡＧＴＣＣＡＴＧＣＡＣＧＡＡＧＡＡＧＧＧＡＡＡＡＡＣＡＴＧＴＧＧＣＴＴＣＡＡＡＡＧＡＧＧＧＡＣＴＧＡＡＡＣＡＣＧＧＧＴＣＣＧＡＧＡＡＡＴＡＡＴＡＣＡＧＣＡＴＣＣＴＴＣＡＧＣＡＡＡＧＧＧＴＡＡＣＣＴＧＴＧＴＣＣＣＣＣＡＡＣＡＡＡＴＧＡＧＡＣＡＡＧＡＡＡＧＴＧＴＡＣＡＧＴＧＣＡＡＡＧＧＡＡＧＡＡＧＴＧＴＣＡＧＡＡＧＧＧＡＧＡＡＣＧＡＧＧＡＡＡＡＡＡＡＧＧＡＡＧＧＧＡＧＡＧＧＡＡＡＡＧＡＡＡＡＡＡＡＣＣＴＡＡＴＡＡＡＧＧＡＧＡＡＡＧＴＡＡＡＧＡＡＧＣＡＡＴＡＣＣＴＧＡＣＡＧＣＡＡＡＡＧＴＣＴＧＧＡＡＴＣＣＡＧＣＡＡＡＧＡＡＡＴＣＣＣＡＧＡＧＣＡＡＣＧＡＧＡＡＡＡＣＡＡＡＣＡＧＣＡＧＣＡＧＡＡＧＡＡＧＣＧＡＡＡＡＧＴＣＣＡＡＧＡＴＡＡＡＣＡＧＡＡＡＴＣＧＧＴＡＴＣＡＧＴＣＡＧＣＡＣＴＧＴＡＣＡＣＴＡＧ
ＰＴＰＲＫ（ｅ１）−ＲＳＰＯ３（ｅ２）転座融合ポリペプチド配列（配列番号１７６）
ＭＤＴＴＡＡＡＡＬＰＡＦＶＡＬＬＬＬＳＰＷＰＬＬＧＳＡＱＧＱＦＳＡＶＨＰＮＶＳＱＧＣＱＧＧＣＡＴＣＳＤＹＮＧＣＬＳＣＫＰＲＬＦＦＡＬＥＲＩＧＭＫＱＩＧＶＣＬＳＳＣＰＳＧＹＹＧＴＲＹＰＤＩＮＫＣＴＫＣＫＡＤＣＤＴＣＦＮＫＮＦＣＴＫＣＫＳＧＦＹＬＨＬＧＫＣＬＤＮＣＰＥＧＬＥＡＮＮＨＴＭＥＣＶＳＩＶＨＣＥＶＳＥＷＮＰＷＳＰＣＴＫＫＧＫＴＣＧＦＫＲＧＴＥＴＲＶＲＥＩＩＱＨＰＳＡＫＧＮＬＣＰＰＴＮＥＴＲＫＣＴＶＱＲＫＫＣＱＫＧＥＲＧＫＫＧＲ
ＰＴＰＲＫ（ｅ７）−ＲＳＰＯ３（ｅ２）転座融合ポリヌクレオチド配列（配列番号１７７）
ＡＴＧＧＡＴＡＣＧＡＣＴＧＣＧＧＣＧＧＣＧＧＣＧＣＴＧＣＣＴＧＣＴＴＴＴＧＴＧＧＣＧＣＴＣＴＴＧＣＴＣＣＴＣＴＣＴＣＣＴＴＧＧＣＣＴＣＴＣＣＴＧＧＧＡＴＣＧＧＣＣＣＡＡＧＧＣＣＡＧＴＴＣＴＣＣＧＣＡＧＧＴＧＧＣＴＧＴＡＣＴＴＴＴＧＡＴＧＡＴＧＧＴＣＣＡＧＧＧＧＣＣＴＧＴＧＡＴＴＡＣＣＡＣＣＡＧＧＡＴＣＴＧＴＡＴＧＡＴＧＡＣＴＴＴＧＡＡＴＧＧＧＴＧＣＡＴＧＴＴＡＧＴＧＣＴＣＡＡＧＡＧＣＣＴＣＡＴＴＡＴＣＴＡＣＣＡＣＣＣＧＡＧＡＴＧＣＣＣＣＡＡＧＧＴＴＣＣＴＡＴＡＴＧＡＴＡＧＴＧＧＡＣＴＣＴＴＣＡＧＡＴＣＡＣＧＡＣＣＣＴＧＧＡＧＡＡＡＡＡＧＣＣＡＧＡＣＴＴＣＡＧＣＴＧＣＣＴＡＣＡＡＴＧＡＡＧＧＡＧＡＡＣＧＡＣＡＣＴＣＡＣＴＧＣＡＴＴＧＡＴＴＴＣＡＧＴＴＡＣＣＴＡＴＴＡＴＡＴＡＧＣＣＡＧＡＡＡＧＧＡＣＴＧＡＡＴＣＣＴＧＧＣＡＣＴＴＴＧＡＡＣＡＴＡＴＴＡＧＴＴＡＧＧＧＴＧＡＡＴＡＡＡＧＧＡＣＣＴＣＴＴＧＣＣＡＡＴＣＣＡＡＴＴＴＧＧＡＡＴＧＴＧＡＣＴＧＧＡＴＴＣＡＣＧＧＧＴＡＧＡＧＡＴＴＧＧＣＴＴＣＧＧＧＣＴＧＡＧＣＴＡＧＣＡＧＴＧＡＧＣＡＣＣＴＴＴＴＧＧＣＣＣＡＡＴＧＡＡＴＡＴＣＡＧＧＴＡＡＴＡＴＴＴＧＡＡＧＣＴＧＡＡＧＴＣＴＣＡＧＧＡＧＧＧＡＧＡＡＧＴＧＧＴＴＡＴＡＴＴＧＣＣＡＴＴＧＡＴＧＡＣＡＴＣＣＡＡＧＴＡＣＴＧＡＧＴＴＡＴＣＣＴＴＧＴＧＡＴＡＡＡＴＣＴＣＣＴＣＡＴＴＴＣＣＴＣＣＧＴＣＴＡＧＧＧＧＡＴＧＴＡＧＡＧＧＴＧＡＡＴＧＣＡＧＧＧＣＡＡＡＡＣＧＣＴＡＣＡＴＴＴＣＡＧＴＧＣＡＴＴＧＣＣＡＣＡＧＧＧＡＧＡＧＡＴＧＣＴＧＴＧＣＡＴＡＡＣＡＡＧＴＴＡＴＧＧＣＴＣＣＡＧＡＧＡＣＧＡＡＡＴＧＧＡＧＡＡＧＡＴＡＴＡＣＣＡＧＴＡＧＣＣＣＡＧＡＣＴＡＡＧＡＡＣＡＴＣＡＡＴＣＡＴＡＧＡＡＧＧＴＴＴＧＣＣＧＣＴＴＣＣＴＴＣＡＧＡＴＴＧＣＡＡＧＡＡＧＴＧＡＣＡＡＡＡＡＣＴＧＡＣＣＡＧＧＡＴＴＴＧＴＡＴＣＧＣＴＧＴＧＴＡＡＣＴＣＡＧＴＣＡＧＡＡＣＧＡＧＧＴＴＣＣＧＧＴＧＴＧＴＣＣＡＡＴＴＴＴＧＣＴＣＡＡＣＴＴＡＴＴＧＴＧＡＧＡＧＡＡＣＣＧＣＣＡＡＧＡＣＣＣＡＴＴＧＣＴＣＣＴＣＣＴＣＡＧＣＴＴＣＴＴＧＧＴＧＴＴＧＧＧＣＣＴＡＣＡＴＡＴＴＴＧＣＴＧＡＴＣＣＡＡＣＴＡＡＡＴＧＣＣＡＡＣＴＣＧＡＴＣＡＴＴＧＧＣＧＡＴＧＧＴＣＣＴＡＴＣＡＴＣＣＴＧＡＡＡＧＡＡＧＴＡＧＡＧＴＡＣＣＧＡＡＴＧＡＣＡＴＣＡＧＧＡＴＣＣＴＧＧＡＣＡＧＡＡＡＣＣＣＡＴＧＣＡＧＴＣＡＡＴＧＣＴＣＣＡＡＣＴＴＡＣＡＡＡＴＴＡＴＧＧＣＡＴＴＴＡＧＡＴＣＣＡＧＡＴＡＣＣＧＡＡＴＡＴＧＡＧＡＴＣＣＧＡＧＴＴＣＴＡＣＴＴＡＣＡＡＧＡＣＣＴＧＧＴＧＡＡＧＧＴＧＧＡＡＣＧＧＧＧＣＴＣＣＣＡＧＧＡＣＣＴＣＣＡＣＴＡＡＴＣＡＣＣＡＧＡＡＣＡＡＡＡＴＧＴＧＣＡＧＴＧＣＡＴＣＣＴＡＡＣＧＴＴＡＧＴＣＡＡＧＧＣＴＧＣＣＡＡＧＧＡＧＧＣＴＧＴＧＣＡＡＣＡＴＧＣＴＣＡＧＡＴＴＡＣＡＡＴＧＧＡＴＧＴＴＴＧＴＣＡＴＧＴＡＡＧＣＣＣＡＧＡＣＴＡＴＴＴＴＴＴＧＣＴＣＴＧＧＡＡＡＧＡＡＴＴＧＧＣＡＴＧＡＡＧＣＡＧＡＴＴＧＧＡＧＴＡＴＧＴＣＴＣＴＣＴＴＣＡＴＧＴＣＣＡＡＧＴＧＧＡＴＡＴＴＡＴＧＧＡＡＣＴＣＧＡＴＡＴＣＣＡＧＡＴＡＴＡＡＡＴＡＡＧＴＧＴＡＣＡＡＡＡＴＧＣＡＡＡＧＣＴＧＡＣＴＧＴＧＡＴＡＣＣＴＧＴＴＴＣＡＡＣＡＡＡＡＡＴＴＴＣＴＧＣＡＣＡＡＡＡＴＧＴＡＡＡＡＧＴＧＧＡＴＴＴＴＡＣＴＴＡＣＡＣＣＴＴＧＧＡＡＡＧＴＧＣＣＴＴＧＡＣＡＡＴＴＧＣＣＣＡＧＡＡＧＧＧＴＴＧＧＡＡＧＣＣＡＡＣＡＡＣＣＡＴＡＣＴＡＴＧＧＡＧＴＧＴＧＴＣＡＧＴＡＴＴＧＴＧＣＡＣＴＧＴＧＡＧＧＴＣＡＧＴＧＡＡＴＧＧＡＡＴＣＣＴＴＧＧＡＧＴＣＣＡＴＧＣＡＣＧＡＡＧＡＡＧＧＧＡＡＡＡＡＣＡＴＧＴＧＧＣＴＴＣＡＡＡＡＧＡＧＧＧＡＣＴＧＡＡＡＣＡＣＧＧＧＴＣＣＧＡＧＡＡＡＴＡＡＴＡＣＡＧＣＡＴＣＣＴＴＣＡＧＣＡＡＡＧＧＧＴＡＡＣＣＴＧＴＧＴＣＣＣＣＣＡＡＣＡＡＡＴＧＡＧＡＣＡＡＧＡＡＡＧＴＧＴＡＣＡＧＴＧＣＡＡＡＧＧＡＡＧＡＡＧＴＧＴＣＡＧＡＡＧＧＧＡＧＡＡＣＧＡＧＧＡＡＡＡＡＡＡＧＧＡＡＧＧＧＡＧＡＧＧＡＡＡＡＧＡＡＡＡＡＡＡＣＣＴＡＡＴＡＡＡＧＧＡＧＡＡＡＧＴＡＡＡＧＡＡＧＣＡＡＴＡＣＣＴＧＡＣＡＧＣＡＡＡＡＧＴＣＴＧＧＡＡＴＣＣＡＧＣＡＡＡＧＡＡＡＴＣＣＣＡＧＡＧＣＡＡＣＧＡＧＡＡＡＡＣＡＡＡＣＡＧＣＡＧＣＡＧＡＡＧＡＡＧＣＧＡＡＡＡＧＴＣＣＡＡＧＡＴＡＡＡＣＡＧＡＡＡＴＣＧＧＴＡＴＣＡＧＴＣＡＧＣＡＣＴＧＴＡＣＡＣＴＡＧ
ＰＴＰＲＫ（ｅ７）−ＲＳＰＯ３（ｅ２）転座融合ポリペプチド配列（配列番号１７８）
ＭＤＴＴＡＡＡＡＬＰＡＦＶＡＬＬＬＬＳＰＷＰＬＬＧＳＡＱＧＱＦＳＡＧＧＣＴＦＤＤＧＰＧＡＣＤＹＨＱＤＬＹＤＤＦＥＷＶＨＶＳＡＱＥＰＨＹＬＰＰＥＭＰＱＧＳＹＭＩＶＤＳＳＤＨＤＰＧＥＫＡＲＬＱＬＰＴＭＫＥＮＤＴＨＣＩＤＦＳＹＬＬＹＳＱＫＧＬＮＰＧＴＬＮＩＬＶＲＶＮＫＧＰＬＡＮＰＩＷＮＶＴＧＦＴＧＲＤＷＬＲＡＥＬＡＶＳＴＦＷＰＮＥＹＱＶＩＦＥＡＥＶＳＧＧＲＳＧＹＩＡＩＤＤＩＱＶＬＳＹＰＣＤＫＳＰＨＦＬＲＬＧＤＶＥＶＮＡＧＱＮＡＴＦＱＣＩＡＴＧＲＤＡＶＨＮＫＬＷＬＱＲＲＮＧＥＤＩＰＶＡＱＴＫＮＩＮＨＲＲＦＡＡＳＦＲＬＱＥＶＴＫＴＤＱＤＬＹＲＣＶＴＱＳＥＲＧＳＧＶＳＮＦＡＱＬＩＶＲＥＰＰＲＰＩＡＰＰＱＬＬＧＶＧＰＴＹＬＬＩＱＬＮＡＮＳＩＩＧＤＧＰＩＩＬＫＥＶＥＹＲＭＴＳＧＳＷＴＥＴＨＡＶＮＡＰＴＹＫＬＷＨＬＤＰＤＴＥＹＥＩＲＶＬＬＴＲＰＧＥＧＧＴＧＬＰＧＰＰＬＩＴＲＴＫＣＡＶＨＰＮＶＳＱＧＣＱＧＧＣＡＴＣＳＤＹＮＧＣＬＳＣＫＰＲＬＦＦＡＬＥＲＩＧＭＫＱＩＧＶＣＬＳＳＣＰＳＧＹＹＧＴＲＹＰＤＩＮＫＣＴＫＣＫＡＤＣＤＴＣＦＮＫＮＦＣＴＫＣＫＳＧＦＹＬＨＬＧＫＣＬＤＮＣＰＥＧＬＥＡＮＮＨＴＭＥＣＶＳＩＶＨＣＥＶＳＥＷＮＰＷＳＰＣＴＫＫＧＫＴＣＧＦＫＲＧＴＥＴＲＶＲＥＩＩＱＨＰＳＡＫＧＮＬＣＰＰＴＮＥＴＲＫＣＴＶＱＲＫＫＣＱＫＧＥＲＧＫＫＧＲＥＲＫＲＫＫＰＮＫＧＥＳＫＥＡＩＰＤＳＫＳＬＥＳＳＫＥＩＰＥＱＲＥＮＫＱＱＱＫＫＲＫＶＱＤＫＱＫＳＶＳＶＳＴＶＨ
【図１Ａ−Ｂ】
2020096603.tif 000023
【図２Ａ−Ｉ】
2020096603.tif 000024
【図３Ａ−Ｄ】
2020096603.tif 000025
【図４Ａ−Ｄ】
2020096603.tif 000026
【図５】
2020096603.tif 000027
【図６Ａ−Ｂ】
2020096603.tif 000028
【図７Ａ−Ｂ】
2020096603.tif 000029
【図８Ａ−Ｂ】
2020096603.tif 000030
【図９Ａ】
2020096603.tif 000031
【図９Ｂ】
2020096603.tif 000032
【図１０Ａ】
2020096603.tif 000033
【図１０Ｂ】
2020096603.tif 000034
【図１１Ａ−Ｄ】
2020096603.tif 000035
【図１２Ａ−Ｄ】
2020096603.tif 000036
【図１３Ａ−Ｃ】
2020096603.tif 000037
【図１４Ａ】
2020096603.tif 000038
【図１４Ｂ】
2020096603.tif 000039
【配列表】
2020096603000001.app
【手続補正書】
【提出日】令和2年2月25日(2020.2.25)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
発明の詳細な説明に記載の発明。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１５６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１５６】
別の態様において、抗ＲＳＰＯ３抗体が提供され、該抗体は、配列番号１９０、１９２、１９４、１９６、１９８、２００、２０２、２０４、２０６、２０８、２１０、２１２又は２１４のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。ある実施態様において、配列番号１９０、１９２、１９４、１９６、１９８、２００、２０２、２０４、２０６、２０８、２１０、２１２、又は２１４のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するＶＬ配列は、参照配列に対して置換（例えば保存的置換）、挿入、又は欠失を含むが、その配列を含む抗ＲＳＰＯ３抗体は、ＲＳＰＯ３へ結合する能力を保持する。ある実施態様において、総計１から１０のアミノ酸が、配列番号１９０、１９２、１９４、１９６、１９８、２００、２０２、２０４、２０６、２０８、２１０、２１２、又は２１４において、置換され、挿入され、及び／又は欠失している。ある実施態様において、総計１から５のアミノ酸が、配列番号１９０、１９２、１９４、１９６、１９８、２００、２０２、２０４、２０６、２０８、２１０、２１２、又は２１４において、置換され、挿入され、及び／又は欠失している。ある実施態様において、置換、挿入、又は欠失は、ＨＶＲ外の領域で（すなわちＦＲ内で）生じる。任意で、抗ＰＲＯ３抗体は、配列番号１９０、１９２、１９４、１９６、１９８、２００、２０２、２０４、２０６、２０８、２１０、２１２、又は２１４のＶＬ配列を、その配列の翻訳後修飾を含み、含む。特定の実施態様において、ＶＬは、（ａ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される一つ、二つ、又は三つのＨＶＲを含む。
【外国語明細書】
2020096603000001.pdf