(57)【要約】【課題】アストラガロシドIVからシクロアストラゲノール類縁体を製造する新たな方法を提供することを目的とする。【解決手段】アストラガロシドIVと、細菌と、を接触する接触工程を含む、シクロアストラゲノール類縁体を製造する方法。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
アストラガロシドIVと、細菌と、を接触する接触工程を含む、
シクロアストラゲノール類縁体を製造する方法。
【請求項２】
前記細菌が、食品由来菌乃至はその同属種の菌、腸内細菌、農作物関連細菌、生薬類関連細菌、及び花卉関連細菌からなる群より選ばれる少なくとも一種である、
請求項１に記載のシクロアストラゲノール類縁体を製造する方法。
【請求項３】
前記細菌が、アセトバクター属、バクテロイデス属、ビフィドバクテリウム属、クロストリジウム属、コリネバクテリウム属、エンテロコッカス属、フソバクテリウム属、グルコノバクター属、ハロアネロビウム属、ラクトバシラス属、ラクトコッカス属、リューコノストック属、ミクロコッカス属、オエノコッカス属、ペディオコッカス属、プロピオニバクテリウム属、シュードモナス属、ルミノコッカス属、スポロラクトバシラス属、ストレプトコッカス属、テトラジェノコッカス属、及びワイセラ属からなる群より選ばれる少なくとも一種である、
請求項１に記載のシクロアストラゲノール類縁体を製造する方法。
【請求項４】
前記シクロアストラゲノール類縁体が、下記式（２）〜（６）からなる群より選ばれる１種又は２種以上である、
請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【化１】
2020103223.tif 000023
【化２】
2020103223.tif 000024
【化３】
2020103223.tif 000025
【化４】
2020103223.tif 000026
【化５】
2020103223.tif 000027
【請求項５】
前記接触工程が、緩衝液中で実施される、
請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記接触工程が、培地中で実施される、
請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法により得られる、
シクロアストラゲノール類縁体。
【請求項８】
請求項７に記載のシクロアストラゲノール類縁体と、細菌と、を含む、
組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、シクロアストラゲノール類縁体を生産する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
オウギ（Astragalus membranaceus Bge.）に含まれるアストラガロシドIV（Astragaloside IV）は、心臓血管に対する薬理活性等を有するが、溶解性に乏しく、生体利用効率が低い（非特許文献１）。これまでの研究から、アストラガロシドIVを加水分解して得られるシクロアストラゲノール−６−Ｏ−β−Ｄ−グルコシド（cycloastragenol-6-O-β-D-glucoside）が、アストラガロシドIVと同種の薬理活性を有し、溶解性に優れることが知られている。
【０００３】
特許文献１には、このシクロアストラゲノール−６−Ｏ−β−Ｄ−グルコシドを工業的に生産する方法として、加水分解酵素によりアストラガロシドIVを加水分解し、これを多孔性樹脂により分離する方法が開示されている。
【０００４】
非特許文献１には、アストラガロシドIVをラットの腸内細菌とともに嫌気条件下で培養した際に、５つの代謝物が得られることが示されている。また、非特許文献２には、バシラス属のLG-502を用いて、生体内変換によってシクロアストラゲノールを効率的に生産する方法が開示されている。しかしながら、LG-502以外の菌体についてシクロアストラゲノールの製造には、成功していない。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】"Pharmacokinetic Evidence on the Contribution of Intestinal Bacterial Conversion to Beneficial Effects of Astragaroside IV, a Marker Compound of Astragali Radix, in Traditional Oral Use of the Herb" Drug Metab. Pharmacokinet. 27(6): 586-597 (2012), Ru Yan et al.
【非特許文献２】"Efficient Biotransformation of Astragaloside IV to Cycloastragenol by Bacillus sp. LG-502"Appl Biochem Biotechnol. 07 June 2017, Liming Wang, Yan Chen.
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特開２０１０−５３８６２１号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、アストラガロシドIVからシクロアストラゲノール類縁体を製造する新たな方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者らが、鋭意検討した結果、細菌を用いることで、上記課題を解決しうることを見出して、本発明を完成した。
【０００９】
本発明は、以下のとおりである。
〔１〕
アストラガロシドIVと、細菌と、を接触する接触工程を含む、
シクロアストラゲノール類縁体を製造する方法。
〔２〕
前記細菌が、食品由来菌乃至はその同属種の菌、腸内細菌、農作物関連細菌、生薬類関連細菌、及び花卉関連細菌からなる群より選ばれる少なくとも一種である、
〔１〕に記載のシクロアストラゲノール類縁体を製造する方法。
〔３〕
前記細菌が、ラクトバシラス属（Lactobacillus sp.）、ビフィドバクテリウム属（Bifidobacterium sp.）、エンテロコッカス属（Enterococcus sp.）、ラクトコッカス属（Lactococcus sp.）、リューコノストック属（Leuconostoc sp.）、ペディオコッカス属（Pediococcus sp.）、ストレプトコッカス属(Streptococcus sp.)、オエノコッカス属（Oenococcus sp.）、テトラジェノコッカス属（Tetragenococcus sp.）、バクテロイデス属（Bacteroides sp.）、クロストリジウム属（Clostridium sp.）、プロピオニバクテリウム属（Propionibacterium sp.）、ルミノコッカス属（Ruminococcus sp.）、フソバクテリウム属（Fusobacterium sp.）、コリネバクテリウム属（Corynebacterium sp.）、ハロアネロビウム属（Haloanaerobium sp.）、アセトバクター属（Acetobacter sp.）、グルコノバクター属（Gluconobacter sp.）、ミクロコッカス属（Micrococcus sp.）、シュードモナス属（Pseudomonas sp.）、スポロラクトバシラス属（Sporolactobacillus sp.）、及びワイセラ属（Weissella sp.）からなる群より選ばれる少なくとも一種である、
〔１〕に記載のシクロアストラゲノール類縁体を製造する方法。
〔４〕
前記細菌が、バクテロイデス属（Bacteroides sp.）、ビフィドバクテリウム属（Bifidobacterium sp.）、クロストリジウム属（Clostridium sp.）、エンテロコッカス属（Enterococcus sp.）、ラクトバシラス属（Lactobacillus sp.）、ラクトコッカス属（Lactococcus sp.）、リューコノストック属（Leuconostoc sp.）、ペディオコッカス属（Pediococcus sp.）、ルミノコッカス属（Ruminococcus sp.）、ストレプトコッカス属(Streptococcus sp.)、テトラジェノコッカス属（Tetragenococcus sp.）、及びワイセラ属（Weissella sp.）からなる群より選ばれる少なくとも一種である、
〔１〕に記載のシクロアストラゲノール類縁体を製造する方法。
〔５〕
前記細菌が、バクテロイデス属（Bacteroides sp.）、ビフィドバクテリウム属（Bifidobacterium sp.）、クロストリジウム属（Clostridium sp.）、ラクトバシラス属（Lactobacillus sp.）、リューコノストック属（Leuconostoc sp.）、ペディオコッカス属（Pediococcus sp.）、ルミノコッカス属（Ruminococcus sp.）、ストレプトコッカス属(Streptococcus sp.)、テトラジェノコッカス属（Tetragenococcus sp.）、及びワイセラ属（Weissella sp.）からなる群より選ばれる少なくとも一種である、
〔１〕に記載のシクロアストラゲノール類縁体を製造する方法。
〔６〕
前記細菌が、バクテロイデス・ユニフォルミス（Bacteroides uniformis）、ビフィドバクテリウム・ブレーベ（Bifidobacterium breve）、ビフィドバクテリウム・シュードカテニュレイタム（Bifidobacterium pseudocatenulatum）、クロストリジウム・ディフィシル（Clostridium difficile）、ラクトバシラス・アシディピスチス（Lactobacillus acidipiscis）、ラクトバシラス・アシドフィルス（Lactobacillus acidophilus）、ラクトバシラス・アリメンタリウス（Lactobacillus alimentarius）、ラクトバシラス・ブレビス（Lactobacillus brevis）、ラクトバシラス・カゼイ（Lactobacillus casei）、ラクトバシラス・デルブリュック（Lactobacillus delbrueckii）、ラクトバシラス・ファーメンタム（Lactobacillus fermentum）、ラクトバシラス・マリ（Lactobacillus mali）、ラクトバシラス・パラカゼイ（Lactobacillus paracasei）、ラクトバシラス・パラアリメンタリウス（Lactobacillus paralimentarius）、ラクトバシラス・プランタルム（Lactobacillus plantarum）、ラクトバシラス・ポブジヒイ（Lactobacillus pobuzihii）、ラクトバシラス・サケイ（Lactobacillus sakei）、リューコノストック・カルノーサム（Leuconostoc carnosum）、リューコノストック・シトレウム（Leuconostoc citreum）、リューコノストック・ラクティス（Leuconostoc lactis）、リューコノストック・メゼンテロイデス（Leuconostoc mesenteroides）、ペディオコッカス・アシディラクティシ（Pediococcus acidilactici）、ペディオコッカス・アルジェンチニクス（Pediococcus argentinicus）、ペディオコッカス・ペントサセウス（Pediococcus pentosaceus）、ルミノコッカス・プロダクタス（Ruminococcus productus）、ストレプトコッカス・シトロボラム（Streptococcus citrovorum）、ストレプトコッカス・フェカリスR（Streptococcus faecalis R）、テトラジェノコッカス・ハロフィルス（Tetragenococcus halophilus）、ワイセラ・シバリア（Weissella cibaria）、及びワイセラ・コンフーサ（Weissella confusa）からなる群より選ばれる少なくとも一種である、
〔１〕に記載のシクロアストラゲノール類縁体を製造する方法。
〔７〕
前記細菌が、バクテロイデス属（Bacteroides sp.）、ビフィドバクテリウム属（Bifidobacterium sp.）、クロストリジウム属（Clostridium sp.）、エンテロコッカス属（Enterococcus sp.）、ラクトバシラス属（Lactobacillus sp.）、ラクトコッカス属（Lactococcus sp.）、リューコノストック属（Leuconostoc sp.）、ペディオコッカス属（Pediococcus sp.）、ルミノコッカス属（Ruminococcus sp.）、ストレプトコッカス属(Streptococcus sp.)、テトラジェノコッカス属（Tetragenococcus sp.）、及びワイセラ属（Weissella sp.）からなる群より選ばれる少なくとも一種である、
〔１〕に記載のシクロアストラゲノール類縁体を製造する方法。
〔８〕
前記細菌が、バクテロイデス・ユニフォルミス（Bacteroides uniformis）、ビフィドバクテリウム・シュードカテニュレイタム（Bifidobacterium pseudocatenulatum）、クロストリジウム・ディフィシル（Clostridium difficile）、エンテロコッカス・タイランディカス（Enterococcus thailandicus）、ラクトバシラス・アシディピスチス（Lactobacillus acidipiscis）、ラクトバシラス・アシドフィルス（Lactobacillus acidophilus）、ラクトバシラス・アリメンタリウス（Lactobacillus alimentarius）、ラクトバシラス・ブレビス（Lactobacillus brevis）、ラクトバシラス・ブフネリ（Lactobacillus buchneri）、ラクトバシラス・ブルガリクス（Lactobacillus bulgaricus）、ラクトバシラス・カゼイ（Lactobacillus casei）、ラクトバシラス・コリニフォルミス（Lactobacillus coryniformis）、ラクトバシラス・クラストラム（Lactobacillus crustorum）、ラクトバシラス・デルブリュック（Lactobacillus delbrueckii）、ラクトバシラス・ファーメンタム（Lactobacillus fermentum）、ラクトバシラス・ハメシイ（Lactobacillus hammesii）、ラクトバシラス・ヘルベティカス（Lactobacillus helvericus）、ラクトバシラス・ジョンソニイ（Lactobacillus johnsonii）、ラクトバシラス・マリ（Lactobacillus mali）、ラクトバシラス・パラブフネリ（Lactobacillus parabuchneri）、ラクトバシラス・パラカゼイ（Lactobacillus paracasei）、ラクトバシラス・パラアリメンタリウス（Lactobacillus paralimentarius）、ラクトバシラス・パラプランタラム（Lactobacillus paraplantarum）、ラクトバシラス・ペントーサス（Lactobacillus pentosus）、ラクトバシラス・プランタルム（Lactobacillus plantarum）、ラクトバシラス・ポブジヒイ（Lactobacillus pobuzihii）、ラクトバシラス・ラピ（Lactobacillus rapi）、ラクトバシラス・ラムノサス（Lactobacillus rhamnosus）、ラクトバシラス・サケイ（Lactobacillus sakei）、ラクトバシラス・バースモルデンシス（Lactobacillus versmoldensis）、ラクトコッカス・ラクティス（Lactococcus lactis）、リューコノストック・カルノーサム（Leuconostoc carnosum）、リューコノストック・シトレウム（Leuconostoc citreum）、リューコノストック・ラクティス（Leuconostoc lactis）、リューコノストック・メゼンテロイデス（Leuconostoc mesenteroides）、リューコノストック・デキストラニカム（Leuconostocs dextranicum）、ペディオコッカス・アシディラクティシ（Pediococcus acidilactici）、ペディオコッカス・アルジェンチニクス（Pediococcus argentinicus）、ペディオコッカス・エタノリデュランス（Pediococcus ethanolidurans）、ペディオコッカス・パーブルス（Pediococcus parvulus）、ペディオコッカス・ペントサセウス（Pediococcus pentosaceus）、ルミノコッカス・グナバス（Ruminococcus gnavus）、ルミノコッカス・プロダクタス（Ruminococcus productus）、ストレプトコッカス・シトロボラム（Streptococcus citrovorum）、ストレプトコッカス・フェカリスR（Streptococcus faecalis R）、テトラジェノコッカス・ハロフィルス（Tetragenococcus halophilus）、ワイセラ・シバリア（Weissella cibaria）、ワイセラ・コンフーサ（Weissella confusa）、及びワイセラ・パラメセンテロイデス（Weissella paramesenteroides）からなる群より選ばれる少なくとも一種である、
〔１〕に記載のシクロアストラゲノール類縁体を製造する方法。
〔９〕
前記細菌が、バクテロイデス属（Bacteroides sp.）、ビフィドバクテリウム属（Bifidobacterium sp.）、及びリューコノストック属（Leuconostoc sp.）からなる群より選ばれる少なくとも一種である、
〔１〕に記載のシクロアストラゲノール類縁体を製造する方法。
〔１０〕
前記細菌が、バクテロイデス・ユニフォルミス（Bacteroides uniformis）、ビフィドバクテリウム・ブレーベ（Bifidobacterium breve）、ビフィドバクテリウム・シュードカテニュレイタム（Bifidobacterium pseudocatenulatum）、及びリューコノストック・カルノーサム（Leuconostoc carnosum）からなる群より選ばれる少なくとも一種である、
〔１〕に記載のシクロアストラゲノール類縁体を製造する方法。
〔１１〕
前記細菌が、ビフィドバクテリウム属（Bifidobacterium sp.）、クロストリジウム属（Clostridium sp.）、エンテロコッカス属（Enterococcus sp.）、ラクトバシラス属（Lactobacillus sp.）、ラクトコッカス属（Lactococcus sp.）、リューコノストック属（Leuconostoc sp.）、ペディオコッカス属（Pediococcus sp.）、ルミノコッカス属（Ruminococcus sp.）、ストレプトコッカス属(Streptococcus sp.)、テトラジェノコッカス属（Tetragenococcus sp.）、及びワイセラ属（Weissella sp.）からなる群より選ばれる少なくとも一種である、
〔１〕に記載のシクロアストラゲノール類縁体を製造する方法。
〔１２〕
前記細菌が、ビフィドバクテリウム・ブレーベ（Bifidobacterium breve）、ビフィドバクテリウム・ロンガム（Bifidobacterium longum）、クロストリジウム・ディフィシル（Clostridium difficile）、エンテロコッカス・タイランディカス（Enterococcus thailandicus）、ラクトバシラス・アシディピスチス（Lactobacillus acidipiscis）、ラクトバシラス・アシドフィルス（Lactobacillus acidophilus）、ラクトバシラス・アリメンタリウス（Lactobacillus alimentarius）、ラクトバシラス・ブレビス（Lactobacillus brevis）、ラクトバシラス・ブフネリ（Lactobacillus buchneri）、ラクトバシラス・ブルガリクス（Lactobacillus bulgaricus）、ラクトバシラス・カゼイ（Lactobacillus casei）、ラクトバシラス・コリニフォルミス（Lactobacillus coryniformis）、ラクトバシラス・クラストラム（Lactobacillus crustorum）、ラクトバシラス・デルブリュック（Lactobacillus delbrueckii）、ラクトバシラス・ファーメンタム（Lactobacillus fermentum）、ラクトバシラス・ハメシイ（Lactobacillus hammesii）、ラクトバシラス・ヘルベティカス（Lactobacillus helvericus）、ラクトバシラス・ジョンソニイ（Lactobacillus johnsonii）、ラクトバシラス・マリ（Lactobacillus mali）、ラクトバシラス・パラブフネリ（Lactobacillus parabuchneri）、ラクトバシラス・パラカゼイ（Lactobacillus paracasei）、ラクトバシラス・パラアリメンタリウス（Lactobacillus paralimentarius）、ラクトバシラス・パラプランタラム（Lactobacillus paraplantarum）、ラクトバシラス・ペントーサス（Lactobacillus pentosus）、ラクトバシラス・プランタルム（Lactobacillus plantarum）、ラクトバシラス・ポブジヒイ（Lactobacillus pobuzihii）、ラクトバシラス・ラピ（Lactobacillus rapi）、ラクトバシラス・ラムノサス（Lactobacillus rhamnosus）、ラクトバシラス・サケイ（Lactobacillus sakei）、ラクトバシラス・バースモルデンシス（Lactobacillus versmoldensis）、ラクトコッカス・ラクティス（Lactococcus lactis）、リューコノストック・カルノーサム（Leuconostoc carnosum）、リューコノストック・シトレウム（Leuconostoc citreum）、リューコノストック・ラクティス（Leuconostoc lactis）、リューコノストック・メゼンテロイデス（Leuconostoc mesenteroides）、リューコノストック・デキストラニカム（Leuconostocs dextranicum）、ペディオコッカス・アシディラクティシ（Pediococcus acidilactici）、ペディオコッカス・アルジェンチニクス（Pediococcus argentinicus）、ペディオコッカス・エタノリデュランス（Pediococcus ethanolidurans）、ペディオコッカス・パーブルス（Pediococcus parvulus）、ペディオコッカス・ペントサセウス（Pediococcus pentosaceus）、ルミノコッカス・グナバス（Ruminococcus gnavus）、ルミノコッカス・プロダクタス（Ruminococcus productus）、ストレプトコッカス・シトロボラム（Streptococcus citrovorum）、ストレプトコッカス・フェカリスR（Streptococcus faecalis R）、テトラジェノコッカス・ハロフィルス（Tetragenococcus halophilus）、ワイセラ・シバリア（Weissella cibaria）、ワイセラ・コンフーサ（Weissella confusa）、及びワイセラ・パラメセンテロイデス（Weissella paramesenteroides）からなる群より選ばれる少なくとも一種である、
〔１〕に記載のシクロアストラゲノール類縁体を製造する方法。
〔１３〕
前記細菌が、バクテロイデス属（Bacteroides sp.）、ビフィドバクテリウム属（Bifidobacterium sp.）、ラクトバシラス属（Lactobacillus sp.）、リューコノストック属（Leuconostoc sp.）、ペディオコッカス属（Pediococcus sp.）、ルミノコッカス属（Ruminococcus sp.）、及びストレプトコッカス属(Streptococcus sp.)からなる群より選ばれる少なくとも一種である、
〔１〕に記載のシクロアストラゲノール類縁体を製造する方法。
〔１４〕
前記細菌が、バクテロイデス・ユニフォルミス（Bacteroides uniformis）、ビフィドバクテリウム・ブレーベ（Bifidobacterium breve）、ビフィドバクテリウム・シュードカテニュレイタム（Bifidobacterium pseudocatenulatum）、ラクトバシラス・アシディピスチス（Lactobacillus acidipiscis）、ラクトバシラス・アシドフィルス（Lactobacillus acidophilus）、ラクトバシラス・カゼイ（Lactobacillus casei）、ラクトバシラス・パラカゼイ（Lactobacillus paracasei）、ラクトバシラス・パラアリメンタリウス（Lactobacillus paralimentarius）、ラクトバシラス・サケイ（Lactobacillus sakei）、リューコノストック・カルノーサム（Leuconostoc carnosum）、ペディオコッカス・アシディラクティシ（Pediococcus acidilactici）、ペディオコッカス・ペントサセウス（Pediococcus pentosaceus）、ルミノコッカス・プロダクタス（Ruminococcus productus）、及びストレプトコッカス・フェカリスR（Streptococcus faecalis R）からなる群より選ばれる少なくとも一種である、
〔１〕に記載のシクロアストラゲノール類縁体を製造する方法。
〔１５〕
前記細菌が、クロストリジウム属（Clostridium sp.）、ラクトバシラス属（Lactobacillus sp.）、リューコノストック属（Leuconostoc sp.）、ペディオコッカス属（Pediococcus sp.）、ストレプトコッカス属(Streptococcus sp.)、テトラジェノコッカス属（Tetragenococcus sp.）、及びワイセラ属（Weissella sp.）からなる群より選ばれる少なくとも一種である、
〔１〕に記載のシクロアストラゲノール類縁体を製造する方法。
〔１６〕
前記細菌が、クロストリジウム・ディフィシル（Clostridium difficile）、ラクトバシラス・アシドフィルス（Lactobacillus acidophilus）、ラクトバシラス・アリメンタリウス（Lactobacillus alimentarius）、ラクトバシラス・デルブリュック（Lactobacillus delbrueckii）、ラクトバシラス・ファーメンタム（Lactobacillus fermentum）、ラクトバシラス・マリ（Lactobacillus mali）、ラクトバシラス・パラブフネリ（Lactobacillus parabuchneri）、ラクトバシラス・パラアリメンタリウス（Lactobacillus paralimentarius）、ラクトバシラス・プランタルム（Lactobacillus plantarum）、ラクトバシラス・ポブジヒイ（Lactobacillus pobuzihii）、ラクトバシラス・サケイ（Lactobacillus sakei）、リューコノストック・カルノーサム（Leuconostoc carnosum）、ペディオコッカス・アルジェンチニクス（Pediococcus argentinicus）、ペディオコッカス・ペントサセウス（Pediococcus pentosaceus）、ストレプトコッカス・シトロボラム（Streptococcus citrovorum）、テトラジェノコッカス・ハロフィルス（Tetragenococcus halophilus）、及びワイセラ・シバリア（Weissella cibaria）、ワイセラ・コンフーサ（Weissella confusa）、からなる群より選ばれる少なくとも一種である、
〔１〕に記載のシクロアストラゲノール類縁体を製造する方法。
〔１７〕
前記細菌が、バクテロイデス属（Bacteroides sp.）、ビフィドバクテリウム属（Bifidobacterium sp.）、ラクトバシラス属（Lactobacillus sp.）、及びストレプトコッカス属(Streptococcus sp.)からなる群より選ばれる少なくとも一種である、
〔１〕に記載のシクロアストラゲノール類縁体を製造する方法。
〔１８〕
前記細菌が、バクテロイデス・ユニフォルミス（Bacteroides uniformis）、ビフィドバクテリウム・アドレセンティス（Bifidobacterium adolescentis）、ビフィドバクテリウム・ブレーベ（Bifidobacterium breve）、ビフィドバクテリウム・シュードカテニュレイタム（Bifidobacterium pseudocatenulatum）、ラクトバシラス・ペントーサス（Lactobacillus pentosus）、及びラクトバシラス・サリバリウス（Lactobacillus salivarius）からなる群より選ばれる少なくとも一種である、
〔１〕に記載のシクロアストラゲノール類縁体を製造する方法。
〔１９〕
前記細菌が、ラクトバシラス属（Lactobacillus sp.）、リューコノストック属（Leuconostoc sp.）、ペディオコッカス属（Pediococcus sp.）、テトラジェノコッカス属（Tetragenococcus sp.）、及びワイセラ属（Weissella sp.）からなる群より選ばれる少なくとも一種である、
〔１〕に記載のシクロアストラゲノール類縁体を製造する方法。
〔２０〕
前記細菌が、ラクトバシラス・アシディピスチス（Lactobacillus acidipiscis）、ラクトバシラス・アシドフィルス（Lactobacillus acidophilus）、ラクトバシラス・アリメンタリウス（Lactobacillus alimentarius）、ラクトバシラス・ブレビス（Lactobacillus brevis）ラクトバシラス・カゼイ（Lactobacillus casei）、ラクトバシラス・デルブリュック（Lactobacillus delbrueckii）、ラクトバシラス・パラカゼイ（Lactobacillus paracasei）、ラクトバシラス・パラアリメンタリウス（Lactobacillus paralimentarius）、ラクトバシラス・ラピ（Lactobacillus rapi）、ラクトバシラス・サケイ（Lactobacillus sakei）、リューコノストック・シトレウム（Leuconostoc citreum）、リューコノストック・ラクティス（Leuconostoc lactis）、リューコノストック・メゼンテロイデス（Leuconostoc mesenteroides）、ペディオコッカス・アルジェンチニクス（Pediococcus argentinicus）、ペディオコッカス・ペントサセウス（Pediococcus pentosaceus）、テトラジェノコッカス・ハロフィルス（Tetragenococcus halophilus）、ワイセラ・シバリア（Weissella cibaria）、及びワイセラ・コンフーサ（Weissella confusa）、からなる群より選ばれる少なくとも一種である、
〔１〕に記載のシクロアストラゲノール類縁体を製造する方法。
〔２１〕
前記シクロアストラゲノール類縁体が、下記式（２）〜（６）からなる群より選ばれる１種又は２種以上である、
〔１〕〜〔２０〕のいずれか一項に記載の方法。
【化１】
2020103223.tif 000002
【化２】
2020103223.tif 000003
【化３】
2020103223.tif 000004
【化４】
2020103223.tif 000005
【化５】
2020103223.tif 000006
〔２２〕
前記接触工程が、緩衝液中で実施される、
〔１〕〜〔２１〕のいずれか一項に記載の方法。
〔２３〕
前記接触工程が、培地中で実施される、
〔１〕〜〔２１〕のいずれか一項に記載の方法。
〔２４〕
〔１〕〜〔２３〕のいずれか一項に記載の方法により得られる、
シクロアストラゲノール類縁体。
〔２５〕
〔２４〕に記載のシクロアストラゲノール類縁体と、細菌と、を含む、
組成物。
【発明の効果】
【００１０】
本発明によれば、アストラガロシドIVからシクロアストラゲノール類縁体を製造する新たな方法を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】実施例において検証した菌体の一覧を示す。
【図２】実施例において検証した菌体の一覧を示す。
【図３】実施例において検証した菌体の一覧を示す。
【図４】実施例において検証した菌体の一覧を示す。
【図５】実施例において検証した菌体の一覧を示す。
【図６】実施例において検証した菌体の一覧を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
以下、本発明の実施の形態（以下、「本実施形態」という。）について詳細に説明するが、本発明はこれに限定されるものではなく、その要旨を逸脱しない範囲で様々な変形が可能である。
【００１３】
〔シクロアストラゲノール類縁体の製造方法〕
本実施形態のシクロアストラゲノール類縁体の製造方法は、アストラガロシドIVと、細菌と、を接触する接触工程を含む。
本実施形態のシクロアストラゲノール類縁体の製造方法は、必要に応じて、接触工程において得られる混合物から、シクロアストラゲノール類縁体を回収する回収工程を含んでいてもよい。
【００１４】
〔接触工程〕
アストラガロシドIVと、細菌の接触は、緩衝液中又は培地中で行うことができる。以下、接触工程の条件について記載するが、本実施形態の接触工程の条件は以下に限定されるものではない。
【００１５】
培地中における接触工程では、細菌を培地中に含めることにより、アストラガロシドIVと、細菌と、を接触させる。
【００１６】
培地中における接触工程では、細菌を培地中で培養しながら、アストラガロシドIVと、細菌と、を接触させることが好ましい。
【００１７】
当該接触工程は、培養法として公知の方法に準じた方法により実施することができる。培養法として、所謂、回分培養法、半回分培養法（「流加培養法」ともいう。）、又は連続培養法を適用することができる。
【００１８】
培養温度は、接触工程において用いる細菌の培養のための至適温度として知られた範囲内であれば特に制限されず、一般に、２５℃〜５０℃であり、好ましくは３７℃〜５０℃である。
【００１９】
回分培養法又は半回分培養法の場合の培養時間は、一般に、１０〜２４０時間であり、好ましくは１５〜１６０時間である。連続培養法の場合の平均滞留時間は、一般に、１０〜１５０時間であり、好ましくは１５〜１００時間である。
【００２０】
培地のｐＨは、接触工程において用いる細菌の培養のための至適ｐＨとして知られた範囲内であれば特に制限されない。中性環境下で培養する場合、培地のｐＨは、一般に、６．５〜７．５であり、好ましくは６．８〜７．２である。
【００２１】
培地の撹乱方式としては、撹乱を与えない静置培養、バブリングを行う通気培養、撹拌子を用いる撹拌培養、培養容器を振り動かす振盪培養が挙げられる。培養は、対象となる菌種によって、嫌気条件下又は好気条件下で行う。これら雰囲気条件は、撹乱方式により調整してもよいし、その他公知の装置等を用いて至適環境に調整してもよい。
【００２２】
上記接触工程を含む本培養の前には前培養工程を行ってもよい。前培養工程においては、少量の培地へ菌体を入れて菌体数を増やし、段階的に培地容量を増やしていく。その後、培地に対してアストラガロシドIVを加え上記接触工程を行う。前培養の培地にアストラガロシドIVを含めてもよい。
【００２３】
接触工程において用いる培地は細菌の種類などに応じて当業者により適宜選択されるものであり、特に制限されないが、乳酸菌の増菌培地として、例えば、GAM（Gifu Anaerobic Medium）培地、MRS（deMan,Rogosa and Sharpe）培地などが挙げられる。
【００２４】
前培養工程において用いる培地としては、特に制限されず、接触工程において用いる培地と同様の培地であってもよく、異なっていてもよい。
【００２５】
緩衝液中における接触工程では、細菌を緩衝液中に含めることにより、アストラガロシドIVと、細菌と、を接触させる。
【００２６】
当該接触工程は、細菌が、緩衝液中に混合されていれば実施することができる。接触工程を緩衝液中で実施する際の条件は、特に制限されず、培地に代えて緩衝液を用いること以外は、上記と同様としてもよい。
【００２７】
緩衝液としては、接触工程において用いる細菌の生存のための至適ｐＨとして知られた範囲で緩衝能を有する緩衝液から適宜選択することができ、特に制限されないが、例えば、リン酸緩衝液、クエン酸緩衝液、トリス（トリスヒドロキシメチルアミノメタン）緩衝液、酢酸緩衝液、ホウ酸緩衝液等が挙げられる。
【００２８】
緩衝液の濃度は、特に制限されないが、一般に、１〜１００ｍＭであり、好ましくは２〜５０ｍＭであり、より好ましくは５〜３０ｍＭである。
【００２９】
緩衝液のｐＨは、特に制限されないが、一般に、ｐＨ２〜９であり、好ましくはｐＨ３〜８であり、より好ましくはｐＨ４〜７．５である。
【００３０】
（アストラガロシドIV）
アストラガロシドIV（以下、「AIV」ともいう。）は、下記式（１）で表される化合物である。アストラガロシドIVは、オウギに含まれるラノスタン四環トリテルペノイドサポニンの一種であり、抗酸化作用を有することが知られている。アストラガロシドIVは、例えば、オウギから抽出したオウギエキスを精製して粉末の状態で得られる。本実施形態において、アストラガロシドIVは、粉末の状態のほか、粉末を溶剤に溶解した状態、あるいはオウギエキスに含まれた状態で用いることができる。粉末を溶解する溶剤としては、メタノールやジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）等が挙げられる。
【化６】
2020103223.tif 000007
【００３１】
（細菌）
細菌としては、食品由来菌乃至はその同属種の菌、腸内細菌、農作物関連細菌、生薬類関連細菌、及び花卉関連細菌からなる群より選ばれる少なくとも一種が好ましい。
【００３２】
このような細菌としては、特に制限されないが、例えば、アセトバクター属（Acetobacter sp.）、バクテロイデス属（Bacteroides sp.）、ビフィドバクテリウム属（Bifidobacterium sp.）、クロストリジウム属（Clostridium sp.）、コリネバクテリウム属（Corynebacterium sp.）、エンテロコッカス属（Enterococcus sp.）、フソバクテリウム属（Fusobacterium sp.）、グルコノバクター属（Gluconobacter sp.）、ハロアネロビウム属（Haloanaerobium sp.）、ラクトバシラス属（Lactobacillus sp.）、ラクトコッカス属（Lactococcus sp.）、リューコノストック属（Leuconostoc sp.）、ミクロコッカス属（Micrococcus sp.）、オエノコッカス属（Oenococcus sp.）、ペディオコッカス属（Pediococcus sp.）、プロピオニバクテリウム属（Propionibacterium sp.）、シュードモナス属（Pseudomonas sp.）、ルミノコッカス属（Ruminococcus sp.）、スポロラクトバシラス属（Sporolactobacillus sp.）、ストレプトコッカス属（Streptococcus sp.)、テトラジェノコッカス属（Tetragenococcus sp.）、ワイセラ属（Weissella sp.）等が挙げられる。
【００３３】
上記細菌の中でも、本発明の目的には、腸内細菌叢から単離される細菌（以下、「腸内細菌」ともいう。）、又は、発酵食品やその他食品から単離される細菌が好ましい。腸内細菌には、乳酸菌及びその他の嫌気性菌又は好気性菌等が含まれる。腸内細菌の中でも、本発明の目的には、腸内に常在し、腸内環境を整える働きを有する細菌が好ましい。なお、腸内細菌の単離源は腸内細菌叢に限られるものではない。
【００３４】
上記細菌の中でも、本発明の目的には、糖類の代謝により乳酸を産生する乳酸菌が好ましい。乳酸菌としては、例えば、ビフィドバクテリウム属、エンテロコッカス属、ラクトバシラス属、ラクトコッカス属、リューコノストック属、オエノコッカス属、ペディオコッカス属、ストレプトコッカス属、及びテトラジェノコッカス属が含まれる。なお、乳酸菌は、腸内細菌叢から単離される細菌であっても、発酵食品やその他食品から単離される細菌であってもよい。
【００３５】
嫌気性菌の種としては、特に制限されないが、例えば、バクテロイデス属、クロストリジウム属、コリネバクテリウム属、フソバクテリウム属、ハロアネロビウム属、プロピオニバクテリウム属、ルミノコッカス属に属する菌などが挙げられる。なお、嫌気性菌は、腸内細菌叢から単離される細菌であっても、発酵食品やその他食品から単離される細菌であってもよい。
【００３６】
好気性菌としては、アルコールを代謝して酢酸を生産するアセトバクター属、グルコノバクター属、ミクロコッカス属、シュードモナス属等の細菌が挙げられる。なお、好気性菌は、腸内細菌叢から単離される細菌であっても、発酵食品やその他食品から単離される細菌であってもよい。
【００３７】
上記細菌の中でも、安全性の観点から、食品の製造及び工業生産に有用な菌（以下、「食品有用菌」ともいう。）が好ましい。このような食品有用菌としては、例えば、アセトバクター属、ビフィドバクテリウム属、クロストリジウム属、コリネバクテリウム属、エンテロコッカス属、グルコノバクター属、ハロアネロビウム属、ラクトコッカス属、ラクトバシラス属、ミクロコッカス属、オエノコッカス属、ペディオコッカス属、シュウドモナス属、スポロラクトバシラス属、ストレプトコッカス属、及びテトラジェノコッカス属が含まれる。なお、食品有用菌は、腸内細菌叢から単離される細菌であっても、発酵食品やその他食品から単離される細菌であってもよい。
【００３８】
細菌は、生産するシクロアストラゲノール類縁体の種類によっても分類することができる。
【００３９】
例えば、後述する式（４）で表される化合物（M3）と、式（５）で表される化合物（M4）と、式（６）で表される化合物（M5）を主に生産する細菌の属としては、特に制限されないが、例えば、バクテロイデス属、ビフィドバクテリウム属、クロストリジウム属、ラクトバシラス属、リューコノストック属、ペディオコッカス属、ルミノコッカス属、ストレプトコッカス属、テトラジェノコッカス属、及びワイセラ属が挙げられる。
【００４０】
また、これら細菌の属種としては、特に制限されないが、例えば、バクテロイデス・ユニフォルミス（Bacteroides uniformis）、ビフィドバクテリウム・ブレーベ（Bifidobacterium breve）、ビフィドバクテリウム・シュードカテニュレイタム（Bifidobacterium pseudocatenulatum）、クロストリジウム・ディフィシル（Clostridium difficile）、ラクトバシラス・アシディピスチス（Lactobacillus acidipiscis）、ラクトバシラス・アシドフィルス（Lactobacillus acidophilus）、ラクトバシラス・アリメンタリウス（Lactobacillus alimentarius）、ラクトバシラス・ブレビス（Lactobacillus brevis）、ラクトバシラス・カゼイ（Lactobacillus casei）、ラクトバシラス・デルブリュック（Lactobacillus delbrueckii）、ラクトバシラス・ファーメンタム（Lactobacillus fermentum）、ラクトバシラス・マリ（Lactobacillus mali）、ラクトバシラス・パラカゼイ（Lactobacillus paracasei）、ラクトバシラス・パラアリメンタリウス（Lactobacillus paralimentarius）、ラクトバシラス・プランタルム（Lactobacillus plantarum）、ラクトバシラス・ポブジヒイ（Lactobacillus pobuzihii）、ラクトバシラス・サケイ（Lactobacillus sakei）、リューコノストック・カルノーサム（Leuconostoc carnosum）、リューコノストック・シトレウム（Leuconostoc citreum）、リューコノストック・ラクティス（Leuconostoc lactis）、リューコノストック・メゼンテロイデス（Leuconostoc mesenteroides）、ペディオコッカス・アシディラクティシ（Pediococcus acidilactici）、ペディオコッカス・アルジェンチニクス（Pediococcus argentinicus）、ペディオコッカス・ペントサセウス（Pediococcus pentosaceus）、ルミノコッカス・プロダクタス（Ruminococcus productus）、ストレプトコッカス・シトロボラム（Streptococcus citrovorum）、ストレプトコッカス・フェカリスR（Streptococcus faecalis R）、テトラジェノコッカス・ハロフィルス（Tetragenococcus halophilus）、ワイセラ・シバリア（Weissella cibaria）、及びワイセラ・コンフーサ（Weissella confusa）が挙げられる。
【００４１】
例えば、後述する式（２）で表される化合物（M1）と、式（３）で表される化合物（M2）を主に生産する細菌の属としては、特に制限されないが、例えば、バクテロイデス属、ビフィドバクテリウム属、クロストリジウム属、エンテロコッカス属、ラクトバシラス属、ラクトコッカス属、リューコノストック属、ペディオコッカス属、ルミノコッカス属、ストレプトコッカス属、テトラジェノコッカス属、及びワイセラ属が挙げられる。
【００４２】
また、これら細菌の属種としては、特に制限されないが、例えば、バクテロイデス・ユニフォルミス（Bacteroides uniformis）、ビフィドバクテリウム・シュードカテニュレイタム（Bifidobacterium pseudocatenulatum）、クロストリジウム・ディフィシル（Clostridium difficile）、エンテロコッカス・タイランディカス（Enterococcus thailandicus）、ラクトバシラス・アシディピスチス（Lactobacillus acidipiscis）、ラクトバシラス・アシドフィルス（Lactobacillus acidophilus）、ラクトバシラス・アリメンタリウス（Lactobacillus alimentarius）、ラクトバシラス・ブレビス（Lactobacillus brevis）、ラクトバシラス・ブフネリ（Lactobacillus buchneri）、ラクトバシラス・ブルガリクス（Lactobacillus bulgaricus）、ラクトバシラス・カゼイ（Lactobacillus casei）、ラクトバシラス・コリニフォルミス（Lactobacillus coryniformis）、ラクトバシラス・クラストラム（Lactobacillus crustorum）、ラクトバシラス・デルブリュック（Lactobacillus delbrueckii）、ラクトバシラス・ファーメンタム（Lactobacillus fermentum）、ラクトバシラス・ハメシイ（Lactobacillus hammesii）、ラクトバシラス・ヘルベティカス（Lactobacillus helvericus）、ラクトバシラス・ジョンソニイ（Lactobacillus johnsonii）、ラクトバシラス・マリ（Lactobacillus mali）、ラクトバシラス・パラブフネリ（Lactobacillus parabuchneri）、ラクトバシラス・パラカゼイ（Lactobacillus paracasei）、ラクトバシラス・パラアリメンタリウス（Lactobacillus paralimentarius）、ラクトバシラス・パラプランタラム（Lactobacillus paraplantarum）、ラクトバシラス・ペントーサス（Lactobacillus pentosus）、ラクトバシラス・プランタルム（Lactobacillus plantarum）、ラクトバシラス・ポブジヒイ（Lactobacillus pobuzihii）、ラクトバシラス・ラピ（Lactobacillus rapi）、ラクトバシラス・ラムノサス（Lactobacillus rhamnosus）、ラクトバシラス・サケイ（Lactobacillus sakei）、ラクトバシラス・バースモルデンシス（Lactobacillus versmoldensis）、ラクトコッカス・ラクティス（Lactococcus lactis）、リューコノストック・カルノーサム（Leuconostoc carnosum）、リューコノストック・シトレウム（Leuconostoc citreum）、リューコノストック・ラクティス（Leuconostoc lactis）、リューコノストック・メゼンテロイデス（Leuconostoc mesenteroides）、リューコノストック・デキストラニカム（Leuconostocs dextranicum）、ペディオコッカス・アシディラクティシ（Pediococcus acidilactici）、ペディオコッカス・アルジェンチニクス（Pediococcus argentinicus）、ペディオコッカス・エタノリデュランス（Pediococcus ethanolidurans）、ペディオコッカス・パーブルス（Pediococcus parvulus）、ペディオコッカス・ペントサセウス（Pediococcus pentosaceus）、ルミノコッカス・グナバス（Ruminococcus gnavus）、ルミノコッカス・プロダクタス（Ruminococcus productus）、ストレプトコッカス・シトロボラム（Streptococcus citrovorum）、ストレプトコッカス・フェカリスR（Streptococcus faecalis R）、テトラジェノコッカス・ハロフィルス（Tetragenococcus halophilus）、ワイセラ・シバリア（Weissella cibaria）、ワイセラ・コンフーサ（Weissella confusa）、及びワイセラ・パラメセンテロイデス（Weissella paramesenteroides）が挙げられる。
【００４３】
例えば、化合物（M1）と、化合物（M3）と、化合物（M4）を主に生産する細菌の属としては、特に制限されないが、例えば、バクテロイデス属、ビフィドバクテリウム属、及びリューコノストック属が挙げられる。
【００４４】
また、これら細菌の属種としては、特に制限されないが、例えば、バクテロイデス・ユニフォルミス（Bacteroides uniformis）、ビフィドバクテリウム・ブレーベ（Bifidobacterium breve）、ビフィドバクテリウム・シュードカテニュレイタム（Bifidobacterium pseudocatenulatum）、及びリューコノストック・カルノーサム（Leuconostoc carnosum）が挙げられる。
【００４５】
例えば、化合物（M2）と、化合物（M3）と、化合物（M4）を主に生産する細菌の属としては、特に制限されないが、例えば、ビフィドバクテリウム属、クロストリジウム属、エンテロコッカス属、ラクトバシラス属、ラクトコッカス属、リューコノストック属、ペディオコッカス属、ルミノコッカス属、ストレプトコッカス属、テトラジェノコッカス属、及びワイセラ属が挙げられる。
【００４６】
また、これら細菌の属種としては、特に制限されないが、例えば、ビフィドバクテリウム・ブレーベ（Bifidobacterium breve）、ビフィドバクテリウム・ロンガム（Bifidobacterium longum）、クロストリジウム・ディフィシル（Clostridium difficile）、エンテロコッカス・タイランディカス（Enterococcus thailandicus）、ラクトバシラス・アシディピスチス（Lactobacillus acidipiscis）、ラクトバシラス・アシドフィルス（Lactobacillus acidophilus）、ラクトバシラス・アリメンタリウス（Lactobacillus alimentarius）、ラクトバシラス・ブレビス（Lactobacillus brevis）、ラクトバシラス・ブフネリ（Lactobacillus buchneri）、ラクトバシラス・ブルガリクス（Lactobacillus bulgaricus）、ラクトバシラス・カゼイ（Lactobacillus casei）、ラクトバシラス・コリニフォルミス（Lactobacillus coryniformis）、ラクトバシラス・クラストラム（Lactobacillus crustorum）、ラクトバシラス・デルブリュック（Lactobacillus delbrueckii）、ラクトバシラス・ファーメンタム（Lactobacillus fermentum）、ラクトバシラス・ハメシイ（Lactobacillus hammesii）、ラクトバシラス・ヘルベティカス（Lactobacillus helvericus）、ラクトバシラス・ジョンソニイ（Lactobacillus johnsonii）、ラクトバシラス・マリ（Lactobacillus mali）、ラクトバシラス・パラブフネリ（Lactobacillus parabuchneri）、ラクトバシラス・パラカゼイ（Lactobacillus paracasei）、ラクトバシラス・パラアリメンタリウス（Lactobacillus paralimentarius）、ラクトバシラス・パラプランタラム（Lactobacillus paraplantarum）、ラクトバシラス・ペントーサス（Lactobacillus pentosus）、ラクトバシラス・プランタルム（Lactobacillus plantarum）、ラクトバシラス・ポブジヒイ（Lactobacillus pobuzihii）、ラクトバシラス・ラピ（Lactobacillus rapi）、ラクトバシラス・ラムノサス（Lactobacillus rhamnosus）、ラクトバシラス・サケイ（Lactobacillus sakei）、ラクトバシラス・バースモルデンシス（Lactobacillus versmoldensis）、ラクトコッカス・ラクティス（Lactococcus lactis）、リューコノストック・カルノーサム（Leuconostoc carnosum）、リューコノストック・シトレウム（Leuconostoc citreum）、リューコノストック・ラクティス（Leuconostoc lactis）、リューコノストック・メゼンテロイデス（Leuconostoc mesenteroides）、リューコノストック・デキストラニカム（Leuconostocs dextranicum）、ペディオコッカス・アシディラクティシ（Pediococcus acidilactici）、ペディオコッカス・アルジェンチニクス（Pediococcus argentinicus）、ペディオコッカス・エタノリデュランス（Pediococcus ethanolidurans）、ペディオコッカス・パーブルス（Pediococcus parvulus）、ペディオコッカス・ペントサセウス（Pediococcus pentosaceus）、ルミノコッカス・グナバス（Ruminococcus gnavus）、ルミノコッカス・プロダクタス（Ruminococcus productus）、ストレプトコッカス・シトロボラム（Streptococcus citrovorum）、ストレプトコッカス・フェカリスR（Streptococcus faecalis R）、テトラジェノコッカス・ハロフィルス（Tetragenococcus halophilus）、ワイセラ・シバリア（Weissella cibaria）、ワイセラ・コンフーサ（Weissella confusa）、及びワイセラ・パラメセンテロイデス（Weissella paramesenteroides）が挙げられる。
【００４７】
例えば、化合物（M3）と化合物（M4）を主に生産する細菌の属としては、特に制限されないが、例えば、バクテロイデス属、ビフィドバクテリウム属、ラクトバシラス属、リューコノストック属、ペディオコッカス属、ルミノコッカス属、及びストレプトコッカス属が挙げられる。
【００４８】
また、これら細菌の属種としては、特に制限されないが、例えば、バクテロイデス・ユニフォルミス（Bacteroides uniformis）、ビフィドバクテリウム・ブレーベ（Bifidobacterium breve）、ビフィドバクテリウム・シュードカテニュレイタム（Bifidobacterium pseudocatenulatum）、ラクトバシラス・アシディピスチス（Lactobacillus acidipiscis）、ラクトバシラス・アシドフィルス（Lactobacillus acidophilus）、ラクトバシラス・カゼイ（Lactobacillus casei）、ラクトバシラス・パラカゼイ（Lactobacillus paracasei）、ラクトバシラス・パラアリメンタリウス（Lactobacillus paralimentarius）、ラクトバシラス・サケイ（Lactobacillus sakei）、リューコノストック・カルノーサム（Leuconostoc carnosum）、ペディオコッカス・アシディラクティシ（Pediococcus acidilactici）、ペディオコッカス・ペントサセウス（Pediococcus pentosaceus）、ルミノコッカス・プロダクタス（Ruminococcus productus）、及びストレプトコッカス・フェカリスR（Streptococcus faecalis R）が挙げられる。
【００４９】
例えば、化合物（M5）を主に生産する細菌の属としては、特に制限されないが、例えば、クロストリジウム属、ラクトバシラス属、リューコノストック属、ペディオコッカス属、ストレプトコッカス属、テトラジェノコッカス属、及びワイセラ属が挙げられる。
【００５０】
また、これら細菌の属種としては、特に制限されないが、例えば、クロストリジウム・ディフィシル（Clostridium difficile）、ラクトバシラス・アシドフィルス（Lactobacillus acidophilus）、ラクトバシラス・アリメンタリウス（Lactobacillus alimentarius）、ラクトバシラス・デルブリュック（Lactobacillus delbrueckii）、ラクトバシラス・ファーメンタム（Lactobacillus fermentum）、ラクトバシラス・マリ（Lactobacillus mali）、ラクトバシラス・パラブフネリ（Lactobacillus parabuchneri）、ラクトバシラス・パラアリメンタリウス（Lactobacillus paralimentarius）、ラクトバシラス・プランタルム（Lactobacillus plantarum）、ラクトバシラス・ポブジヒイ（Lactobacillus pobuzihii）、ラクトバシラス・サケイ（Lactobacillus sakei）、リューコノストック・カルノーサム（Leuconostoc carnosum）、ペディオコッカス・アルジェンチニクス（Pediococcus argentinicus）、ペディオコッカス・ペントサセウス（Pediococcus pentosaceus）、ストレプトコッカス・シトロボラム（Streptococcus citrovorum）、テトラジェノコッカス・ハロフィルス（Tetragenococcus halophilus）、ワイセラ・シバリア（Weissella cibaria）、及びワイセラ・コンフーサ（Weissella confusa）が挙げあられる。
【００５１】
例えば、化合物（M1）を主に生産する細菌の属としては、特に制限されないが、例えば、バクテロイデス属、ビフィドバクテリウム属、ラクトバシラス属、及びストレプトコッカス属が挙げられる。
【００５２】
また、これら細菌の属種としては、特に制限されないが、例えば、バクテロイデス・ユニフォルミス（Bacteroides uniformis）、ビフィドバクテリウム・アドレセンティス（Bifidobacterium adolescentis）、ビフィドバクテリウム・ブレーベ（Bifidobacterium breve）、ビフィドバクテリウム・シュードカテニュレイタム（Bifidobacterium pseudocatenulatum）、ラクトバシラス・ペントーサス（Lactobacillus pentosus）、及びラクトバシラス・サリバリウス（Lactobacillus salivarius）
【００５３】
例えば、化合物（M2）を主に生産する細菌の属としては、特に制限されないが、例えば、ラクトバシラス属、リューコノストック属、ペディオコッカス属、テトラジェノコッカス属、及びワイセラ属が挙げられる。
【００５４】
また、これら細菌の属種としては、特に制限されないが、例えば、ラクトバシラス・アシディピスチス（Lactobacillus acidipiscis）、ラクトバシラス・アシドフィルス（Lactobacillus acidophilus）、ラクトバシラス・アリメンタリウス（Lactobacillus alimentarius）、ラクトバシラス・ブレビス（Lactobacillus brevis）、ラクトバシラス・カゼイ（Lactobacillus casei）、ラクトバシラス・デルブリュック（Lactobacillus delbrueckii）、ラクトバシラス・パラカゼイ（Lactobacillus paracasei）、ラクトバシラス・パラアリメンタリウス（Lactobacillus paralimentarius）、ラクトバシラス・ラピ（Lactobacillus rapi）、ラクトバシラス・サケイ（Lactobacillus sakei）、リューコノストック・シトレウム（Leuconostoc citreum）、リューコノストック・ラクティス（Leuconostoc lactis）、リューコノストック・メゼンテロイデス（Leuconostoc mesenteroides）、ペディオコッカス・アルジェンチニクス（Pediococcus argentinicus）、ペディオコッカス・ペントサセウス（Pediococcus pentosaceus）、テトラジェノコッカス・ハロフィルス（Tetragenococcus halophilus）、ワイセラ・シバリア（Weissella cibaria）、及びワイセラ・コンフーサ（Weissella confusa）が挙げられる。
【００５５】
なお、所望のシクロアストラゲノール類縁体を得るために、例えば、AIVから化合物(M2)を合成する菌体をAIVに接触させる第１工程と、得られた化合物(M2)を菌体に接触させて化合物(M3)を合成する第２工程とを行ってもよい。
【００５６】
これらのなかでも、本発明の目的には、ペディオコッカス属、ストレプトコッカス属、ラクトバシラス属、及びビフィドバクテリウム属に属する細菌からなる群より選ばれる１種又は２種以上の乳酸菌が好ましく用いられ、ビフィドバクテリウム・シュードカテニュレイタム菌、ビフィドバクテリウム・ブレーベ菌、ラクトバシラス・ジョンソニイ菌、ペディオコッカス・アシディラクティシ菌、ペディオコッカス・ペントサセウス菌、ストレプトコッカス・フェカリスR菌、及びストレプトコッカス・シトロボラム菌からなる群より選ばれる１種又は２種以上の菌がより好ましく用いられる。
【００５７】
これら細菌は、通常の菌培養用培地、例えば、GAM培地、MRS培地等を用いて培養することができる。本実施形態において、細菌は、菌培養用培地による培養液をそのまま、もしくは濃縮して用いてもよく、また分離、集菌した菌体をそのままもしくは滅菌精製水等に懸濁し、あるいは凍結乾燥等により乾燥して用いることもできる。
【００５８】
（シクロアストラゲノール類縁体）
シクロアストラゲノール類縁体は、下記式（２）〜（６）で表される化合物からなる群より選ばれる１種又は２種以上が挙げられる。
【化７】
2020103223.tif 000008
【化８】
2020103223.tif 000009
【化９】
2020103223.tif 000010
【化１０】
2020103223.tif 000011
【化１１】
2020103223.tif 000012
【００５９】
本実施形態において、シクロアストラゲノール類縁体は、上記式（２）〜（６）で表される１種の化合物であってもよく、下記式（２）〜（６）で表される２種以上の化合物の混合物であってもよい。
シクロアストラゲノール類縁体は、アストラガロシドIVと、細菌と、を接触して得られた、上記式（２）〜（６）で表される２種以上の化合物の混合物であることが好ましい。
【００６０】
式（２）で表される化合物（以下、「M1」ともいう。）は、AIVからキシロースが脱離した構造を有するシクロアストラゲノールのグルコース配糖体である。また、式（３）で表される化合物（以下、「M2」ともいう。）は、AIVからグルコースが脱離した構造を有するシクロアストラゲノールのキシロース配糖体である。さらに、式（４）で表される化合物（以下、「M3」ともいう。）は、AIVからグルコース及びキシロースが脱離した構造を有するシクロアストラゲノールである。また、式（６）で表される化合物（以下、「M5」ともいう。）は、M3の水酸基が酸化されたケトン構造を有する化合物である。さらに、式（５）で表される化合物（以下、「M4」ともいう。）は、M3の立体異性体である。
【００６１】
〔回収工程〕
上記接触工程により、シクロアストラゲノール類縁体と細菌の混合物が得られる。回収工程においては、この混合物から不必要な成分を除いてもよい。例えば、混合物からシクロアストラゲノール類縁体のみを単離回収してもよいし、細菌と混合物としてシクロアストラゲノール類縁体を回収してもよい。シクロアストラゲノール類縁体のみを単離回収する場合の回収工程としては、接触工程において得られる混合物から、遠心分離や濾過等によって不溶な物質（菌体など）を除去した後、イオン交換樹脂などで脱塩し、その溶液から、結晶化やカラムクロマトグラフィー等の常法に従って、シクロアストラゲノール類縁体を分離する方法が挙げられる。また、細菌と混合物としてシクロアストラゲノール類縁体を回収する場合の回収工程としては、接触工程により得られた混合物を適宜濃縮し、また不純物を除去する方法が挙げられる。
【００６２】
〔組成物〕
本実施形態の組成物は、アストラガロシドIVと、細菌と、を接触させて上記のようにして得られたシクロアストラゲノール類縁体と、当該製造方法により用いた細菌と、を含む。当該組成物は、その用途に応じて適宜必要な成分を含んでもよい。当該組成物は、上記製造方法において、アストラガロシドIVと、細菌と、を接触させた溶液等の混合物を、そのまま用いてもよいし、得られた混合物を、分離、濃縮などの追加の回収工程を行って得られた混合物を用いてもよい。
【実施例】
【００６３】
以下、本発明を実施例及び比較例を用いてより具体的に説明する。本発明は、以下の実施例によって何ら限定されるものではない。
【００６４】
各菌体のグリセロールストック５０μＬを、GAM培地（種培地）１５ｍＬ中で、３７℃、２４時間、嫌気性条件下で、振とう速度１２０ｒｐｍで培養した。その培養液１５０μＬを、３ｍＭのグルコースを含むGAM培地１５ｍＬ中で、３７℃、１２０時間、嫌気性条件下で、振とう速度１２０ｒｐｍで培養した。次いで、得られた培養液のうち１ｍＬを分取し、HPLCにより分析した。
【００６５】
残りの培養液１４ｍＬは、３０００ｒｐｍで１５分間遠心分離を行い、上澄みをデカントし、菌体ペレットを得た。得られた細胞ペレットを、０．８５％の塩化ナトリウム溶液１ｍＬで洗浄し、洗浄液を遠心分離間に移して、さらに１５０００ｒｐｍで１５分間遠心分離をして、再度、菌体ペレットを得た。
【００６６】
ｐＨ６．５、濃度０．１Ｍのリン酸カリウム緩衝液と、アストラガロシドIVを１５ｍｇ／ｍＬ含むDMSO溶液２０μＬと、を混合し、混合液に菌体ペレットを添加して、緩衝液中にてアストラガロシドIVと菌体とを接触させた。なお、接触は３７℃、７２時間、振とう速度１７５０ｒｐｍとした。その後、混合液を遠心して菌体を沈殿させ、上清を回収した。回収した上清を凍結乾燥して再溶解することにより、HPLC分析用のサンプルを得た。得られたサンプルを用いて、HPLCにより分析を行った。
【００６７】
HPLCによる分析は、非特許文献１に記載の方法に準じて行い、HPLC分析により、AIV、M1〜M5を測定した。
【００６８】
〔実施例Ａ〕
上記方法において、菌体として表１に記載の菌体を用いた場合のHPLC分析結果を表１に示す。
【００６９】
【表１】
2020103223.tif 000013
【００７０】
図１〜６に示すに列記する各菌体についても、上記同様の操作を行い、M1〜M5の生産を確認した。
【００７１】
〔実施例Ｂ〕
図１〜６に示すに列記する各菌体のなかでも、化合物（M3）、化合物（M4）、及び、化合物（M5）の生産に優れるものとして以下の菌株が得られた。
【００７２】
【表２】
2020103223.tif 000014
【００７３】
【表３】
2020103223.tif 000015
【００７４】
〔実施例Ｃ〕
図１〜６に示すに列記する各菌体のなかでも、特に、化合物（M1）及び化合物（M2）の生産に優れるものの上位２０株として以下の菌株が得られた。
【００７５】
【表４】
2020103223.tif 000016
【００７６】
〔実施例Ｄ〕
図１〜６に示すに列記する各菌体のなかでも、特に、化合物（M1）、化合物（M3）及び化合物（M4）の生産に優れるものの上位２０株として以下の菌株が得られた。
【００７７】
【表５】
2020103223.tif 000017
【００７８】
〔実施例Ｅ〕
図１〜６に示すに列記する各菌体のなかでも、特に、化合物（M2）、化合物（M3）及び化合物（M4）の生産に優れるものの上位２０株として以下の菌株が得られた。
【００７９】
【表６】
2020103223.tif 000018
【００８０】
〔実施例Ｆ〕
図１〜６に示すに列記する各菌体のなかでも、特に、化合物（M3）、及び、化合物（M4）の生産に優れるものの上位２０株として以下の菌株が得られた。
【００８１】
【表７】
2020103223.tif 000019
【００８２】
〔実施例Ｇ〕
図１〜６に示すに列記する各菌体のなかでも、特に、化合物（M5）の生産に優れるものの上位２０株として以下の菌株が得られた。
【００８３】
【表８】
2020103223.tif 000020
【００８４】
〔実施例Ｈ〕
図１〜６に示すに列記する各菌体のなかでも、特に、化合物（M1）の生産に優れるものとして以下の菌株が得られた。
【００８５】
【表９】
2020103223.tif 000021
【００８６】
〔実施例Ｉ〕
図１〜６に示すに列記する各菌体のなかでも、特に、化合物（M2）の生産に優れるものとして以下の菌株が得られた。
【００８７】
【表１０】
2020103223.tif 000022
【産業上の利用可能性】
【００８８】
本発明の方法は、シクロアストラゲノール類縁体を製造する方法として、産業上の利用可能性を有する。
【図１】
2020103223.tif 000028
【図２】
2020103223.tif 000029
【図３】
2020103223.tif 000030
【図４】
2020103223.tif 000031
【図５】
2020103223.tif 000032
【図６】
2020103223.tif 000033