(57)【要約】【課題】本発明は医薬品技術の分野に属し、具体的にはミネラルコルチコイド受容体拮抗剤としての化合物の結晶形及びその調製方法並びに化合物の結晶形が腎障害または心血管疾患を治療及び／又は予防する薬物の調製における応用に関する。【解決手段】本発明は医薬品技術の分野に属し、ミネラルコルチコイド受容体拮抗剤としての化合物の結晶形及びその調製方法を関し、具体的には式（１）で示される化合物２−クロロ−４−［（３Ｓ，３ａＲ）−３−シクロペンチル−７−（４−ヒドロキシピペリジン−１−カルボニル）−３，３ａ，４，５−テトラヒドロ−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｆ］キノリン−２−イル］ベンゾニトリルの調製方法、その結晶形、結晶形の調製方法並びにその結晶形が腎障害または心血管疾患を治療及び／又は予防する薬物の調製における応用に関する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
（３Ｓ，３ａＲ）−２−（３−クロロ−４−シアノフェニル）−３−シクロペンチル−３，３ａ，４，５−テトラヒドロ−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｆ］キノリン−７−カルボン酸と４−ヒドロキシピペリジンを縮合反応させて得ることが可能な、  式（１）：
【化１】
2020109132.tif 000023
で示される化合物２−クロロ−４−［（３Ｓ，３ａＲ）−３−シクロペンチル−７−（４−ヒドロキシピペリジン−１−カルボニル）−３，３ａ，４，５−テトラヒドロ−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｆ］キノリン−２−イル］ベンゾニトリルの結晶形であって、
Ｃｕ−Ｋａ照射を用いて、以下：
結晶形Ｉ：９．８°±０．２°、１２．９°±０．２°、１４．８°±０．２°、１５．４°±０．２°、１６．９°±０．２°、１７．４°±０．２°、１９．４°±０．２°、１９．８°±０．２°、２２．６°±０．２°、２６．２°±０．２°；
結晶形ＩＩ：４．５°±０．２°、９．０°±０．２°、１２．２°±０．２°、１４．０°±０．２°、１４．６°±０．２°、１８．０°±０．２°、１８．７°±０．２°、１９．９°±０．２°、２１．２°±０．２°、２４．６°±０．２°
に示すような粉末X線回折における特徴的な回折角度2Θのピークを有することを特徴とする、結晶形。
【請求項２】
前記結晶形が結晶形Ｉまたは結晶形ＩＩであり、前記結晶形Ｉが、Ｃｕ−Ｋａ照射を用いて測定された場合、図１に示されるようなＸＲＤスペクトルを有し、前記結晶形ＩＩが、Ｃｕ−Ｋａ照射を用いて測定された場合、図２に示されるようなＸＲＤスペクトルを有することを特徴とする、請求項１に記載の化合物の結晶形。
【請求項３】
以下のステップ：
（９）２−（３−クロロ−４−シアノフェニル）−３−シクロペンチル−３，３ａ，４，５−テトラヒドロ−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｆ］キノリン−７−カルボン酸エチルをキラル分割して、（３Ｓ，３ａＲ）−２−（３−クロロ−４−シアノフェニル）−３−シクロペンチル−３，３ａ，４，５−テトラヒドロ−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｆ］キノリン−７−カルボン酸エチルを得るステップ；
（１０）（３Ｓ，３ａＲ）−２−（３−クロロ−４−シアノフェニル）−３−シクロペンチル−３，３ａ，４，５−テトラヒドロ−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｆ］キノリン−７−カルボン酸エチルを加水分解させて、（３Ｓ，３ａＲ）−２−（３−クロロ−４−シアノフェニル）−３−シクロペンチル−３，３ａ，４，５−テトラヒドロ−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｆ］キノリン−７−カルボン酸を調製するステップ；
（１１）（３Ｓ，３ａＲ）−２−（３−クロロ−４−シアノフェニル）−３−シクロペンチル−３，３ａ，４，５−テトラヒドロ−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｆ］キノリン−７−カルボン酸と４−ヒドロキシピペリジンを縮合反応させて、式（１）で示される化合物を調製するステップ、
を含み、
下記ステップ：
ステップ（１１）で得られた式（１）で示される化合物を、無水メタノール、無水エタノール、無水ｎ−プロパノール、アセトニトリル、酢酸エチルとエタノールの混合溶媒、メタノールとテトラヒドロフランの混合溶媒、またはアセトニトリルとアセトンの混合溶媒に加え、澄明になるまで加熱して溶液を得た後、前記溶液の温度を下げて固体を析出し、析出された固体を濾過及び乾燥するステップ；
ステップ（１１）で得られた式（１）で示される化合物を、アセトンに溶かし、得られた溶液をｎ−ヘプタンに滴下し、得られた混合物を濾過するステップ；
ステップ（１１）で得られた式（１）で示される化合物を、メタノール、エタノール、またはｎ−プロパノールに加えて溶かし、得られた溶液を水に滴下し、得られた混合物を濾過し、濾過した物質を真空乾燥するステップ；又は
ステップ（１１）で得られた式（１）で示される化合物を、水とアセトニトリルの混合溶液で洗浄し、得られた混合物を濾過し、濾過した物質を真空乾燥するステップ
の一つをさらに含むことを特徴とする、
請求項１または２に記載の式（１）で示される化合物の結晶形（Ｉ）または結晶形（ＩＩ）である、
式（１）：
【化２】
2020109132.tif 000024
で示される化合物２−クロロ−４−［（３Ｓ，３ａＲ）−３−シクロペンチル−７−（４−ヒドロキシピペリジン−１−カルボニル）−３，３ａ，４，５−テトラヒドロ−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｆ］キノリン−２−イル］ベンゾニトリルの結晶形の調製方法。
【請求項４】
以下のステップ：
（１）１，３−シクロヘキサンジオンと酢酸アンモニウム及びアクロレインを縮合及び付加反応させて、５−オキソ−５，６，７，８−テトラヒドロキノリンを調製するステップ；
（２）５−オキソ−５，６，７，８−テトラヒドロキノリンを酸化反応させて、５−オキソ−５，６，７，８−テトラヒドロキノリン−Ｎ−酸化物を調製するステップ；
（３）５−オキソ−５，６，７，８−テトラヒドロキノリン−Ｎ−酸化物とＮ，Ｎ−ジメチルカルバモイルクロリド及びトリメチルシリルシアニドを置換反応させて、５−オキソ−５，６，７，８−テトラヒドロキノリン−２−カルボニトリルを調製するステップ；
（４）５−オキソ−５，６，７，８−テトラヒドロキノリン−２−カルボニトリルを加水分解及びエステル化反応させて、５−オキソ−５，６，７，８−テトラヒドロキノリン−２−カルボン酸エチルを調製するステップ；
（５）５−オキソ−５，６，７，８−テトラヒドロキノリン−２−カルボン酸エチルとシクロペンタンカルボアルデヒドを縮合反応させて、（Ｅ）−６−シクロペンチルメチレン−５−オキソ−５，６，７，８−テトラヒドロキノリン−２−カルボン酸エチルを調製するステップ；
（６）２−クロロ−４−フルオロベンゾニトリルとヒドラジン水和物を置換反応させて、２−クロロ−４−ヒドラジノベンゾニトリルを調製するステップ；
（７）２−クロロ−４−ヒドラジノベンゾニトリルを塩酸と塩形成反応させて、２−クロロ−４−ヒドラジノベンゾニトリル塩酸塩を調製するステップ；
（８）（Ｅ）−６−シクロペンチルメチレン−５−オキソ−５，６，７，８−テトラヒドロキノリン−２−カルボン酸エチルと２−クロロ−４−ヒドラジノベンゾニトリル塩酸塩を縮合反応させて、２−（３−クロロ−４−シアノフェニル）−３−シクロペンチル−３，３ａ，４，５−テトラヒドロ−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｆ］キノリン−７−カルボン酸エチルを調製するステップ；
（９）２−（３−クロロ−４−シアノフェニル）−３−シクロペンチル−３，３ａ，４，５−テトラヒドロ−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｆ］キノリン−７−カルボン酸エチルをキラル分割して、（３Ｓ，３ａＲ）−２−（３−クロロ−４−シアノフェニル）−３−シクロペンチル−３，３ａ，４，５−テトラヒドロ−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｆ］キノリン−７−カルボン酸エチルを得るステップ；
（１０）（３Ｓ，３ａＲ）−２−（３−クロロ−４−シアノフェニル）−３−シクロペンチル−３，３ａ，４，５−テトラヒドロ−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｆ］キノリン−７−カルボン酸エチルを加水分解させて、（３Ｓ，３ａＲ）−２−（３−クロロ−４−シアノフェニル）−３−シクロペンチル−３，３ａ，４，５−テトラヒドロ−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｆ］キノリン−７−カルボン酸を調製するステップ；
（１１）（３Ｓ，３ａＲ）−２−（３−クロロ−４−シアノフェニル）−３−シクロペンチル−３，３ａ，４，５−テトラヒドロ−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｆ］キノリン−７−カルボン酸と４−ヒドロキシピペリジンを縮合反応させて、式（１）で示される化合物を調製するステップ、
を含み、
下記ステップ：
ステップ（１１）で得られた式（１）で示される化合物を、無水メタノール、無水エタノール、無水ｎ−プロパノール、アセトニトリル、酢酸エチルとエタノールの混合溶媒、メタノールとテトラヒドロフランの混合溶媒、またはアセトニトリルとアセトンの混合溶媒に加え、澄明になるまで加熱して溶液を得た後、前記溶液の温度を下げて固体を析出し、析出された固体を濾過及び乾燥するステップ；
ステップ（１１）で得られた式（１）で示される化合物を、アセトンに溶かし、得られた溶液をｎ−ヘプタンに滴下し、得られた混合物を濾過するステップ；
ステップ（１１）で得られた式（１）で示される化合物を、メタノール、エタノール、またはｎ−プロパノールに加えて溶かし、得られた溶液を水に滴下し、得られた混合物を濾過し、濾過した物質を真空乾燥するステップ；又は
ステップ（１１）で得られた式（１）で示される化合物を、水とアセトニトリルの混合溶液で洗浄し、得られた混合物を濾過し、濾過した物質を真空乾燥するステップ
の一つをさらに含むことを特徴とする、請求項３に記載の調製方法。
【請求項５】
化合物２−クロロ−４−［（３Ｓ，３ａＲ）−３−シクロペンチル−７−（４−ヒドロキシピペリジン−１−カルボニル）−３，３ａ，４，５−テトラヒドロ−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｆ］キノリン−２−イル］ベンゾニトリルを、無水メタノール、無水エタノール、無水ｎ−プロパノール、アセトニトリル、酢酸エチルとエタノールの混合溶媒、メタノールとテトラヒドロフランの混合溶媒、またはアセトニトリルとアセトンの混合溶媒に加え、澄明になるまで加熱して溶液を得た後、前記溶液の温度を下げ、析出された固体を濾過及び乾燥して化合物の結晶形Ｉを得る；又は、
化合物２−クロロ−４−［（３Ｓ，３ａＲ）−３−シクロペンチル−７−（４−ヒドロキシピペリジン−１−カルボニル）−３，３ａ，４，５−テトラヒドロ−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｆ］キノリン−２−イル］ベンゾニトリルをアセトンに溶かし、得られた溶液をｎ−ヘプタンに滴下し、濾過して結晶形Ｉを得る、
ことを特徴とする、請求項１または２に記載の式（１）で示される化合物の結晶形Ｉの調製方法。
【請求項６】
化合物２−クロロ−４−［（３Ｓ，３ａＲ）−３−シクロペンチル−７−（４−ヒドロキシピペリジン−１−カルボニル）−３，３ａ，４，５−テトラヒドロ−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｆ］キノリン−２−イル］ベンゾニトリルを、メタノール、エタノール、またはｎ−プロパノールに加えて溶かし、得られた溶液を水に滴下し、濾過して結晶形ＩＩＩを得るか；又は、
化合物２−クロロ−４−［（３Ｓ，３ａＲ）−３−シクロペンチル−７−（４−ヒドロキシピペリジン−１−カルボニル）−３，３ａ，４，５−テトラヒドロ−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｆ］キノリン−２−イル］ベンゾニトリルを水とアセトニトリルの混合溶液で洗浄し、濾過して結晶形ＩＩＩを得て、
次に結晶形ＩＩＩを真空乾燥して結晶形ＩＩを得る、
ことを特徴とする、請求項１または２に記載の式（１）で示される化合物の結晶形ＩＩの調製方法。
【請求項７】
請求項１または２に記載の式（１）で示される化合物の、結晶形Ｉ、結晶形ＩＩ、又はその組み合わせである結晶形と、製薬学的に許容されるキャリアを含むことを特徴とする医薬組成物。
【請求項８】
請求項１または２に記載の式（１）で示される化合物の、結晶形Ｉ、結晶形ＩＩ、又はそれらの組み合わせである結晶形の、腎障害または心血管疾患を治療及び／又は予防する薬物の調製における使用。
【請求項９】
前記心血管疾患が、心臓損傷、高血圧、心不全、心筋梗塞、狭心症、心臓肥大、心筋炎、心臓及び血管線維化、圧力感覚受容器官機能障害または不整脈を含む、請求項８に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は医薬品技術の分野に属し、具体的にはミネラルコルチコイド受容体拮抗剤としての化合物の結晶形及びその調製方法並びに化合物の結晶形が腎障害または心血管疾患を治療及び／又は予防する薬物の調製における応用に関する。
【背景技術】
【０００２】
アルドステロンは副腎皮質で合成されるミネラルコルチコイドであり、ミネラルコルチコイド受容体と結合することによって、該受容体を活性化させてナトリウムイオンの貯留及びカリウムイオンの排出を促進し、電解質の平衡及び動脈壁における内皮細胞、血管平滑筋細胞、線維芽細胞と動脈外膜及びそれら媒体の基質の構造及び機能を改変することに対して重要な作用を有する。アルドステロンレベルが高すぎると、ミネラルコルチコイド受容体の異常活性化を引き起こし、電解質異常及び血管損傷と線維化等をもたらし、高血圧等の心血管疾患、腎臓／心臓／脳等の器官障害及び内分泌異常等の疾病に至る。薬物はミネラルコルチコイド受容体と競合的に結合することを通じて、アルドステロンとミネラルコルチコイド受容体との結合を遮断し、アルドステロンを介した障害作用を抑制することによって、前記疾病の発生を減少させる。
【０００３】
式（１）で示される化合物２−クロロ−４−［（３Ｓ，３ａＲ）−３−シクロペンチル−７−（４−ヒドロキシピペリジン−１−カルボニル）−３，３ａ，４，５−テトラヒドロ−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｆ］キノリン−２−イル］ベンゾニトリル（国際公開ＷＯ２０１２０２２１２1に記述）は、アルドステロン受容体拮抗剤であり、ミネラルコルチコイド受容体と選択的に結合し、グルココルチコイド受容体、アンドロゲン受容体に対する親和力は比較的低い。
【０００４】
【化１】
2020109132.tif 000002
【０００５】
ＷＯ２０１２０２２１２１に式（１）で示される化合物の調製方法が記載されており、式（１）で示される化合物のラセミ化合物から光学分割した後回転乾燥することによって得られ、得られた化合物は無定形である。
【０００６】
式（１）の化合物は二つのキラル中心があり、単一の異性体を得るため、本分野の技術者は通常光学分割を行う必要があり、ＷＯ２０１２０２２１２１に記載されたのは、まず式（１）で示される化合物のラセミ化合物を得た後、さらに光学分割を行って式（１）で示される化合物を得るため、式（１）で示される化合物はＧＭＰ適合作業場において生産することは困難であり、産業化しにくく、且つコストが高い。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】国際公開ＷＯ２０１２０２２１２1
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
薬物の研究開発過程において、結晶形の研究は非常に重要であり、化合物は結晶形によって、その安定性、溶解度等の性質が異なる。それによって本発明者は式（１）で示される化合物の結晶形に対して検討を鋭意に行ったところ、式（１）で示される化合物の結晶形を確認及び発明できた。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者は式（１）の化合物を調製する際、分割ステップを前に繰り上げることによって、式（１）で示される化合物が容易にＧＭＰ適合作業場における生産ができ、順調に産業化を実現できる。
【００１０】
本発明の目的の１つ目は、式（１）の化合物の結晶形を提供する。
本発明の目的の２つ目は、式（１）の化合物の調製方法を提供する。
本発明の目的の３つ目は、式（１）の化合物の結晶形の調製方法及びその相互に転化する方法を提供する。
【００１１】
本発明のもう一つの目的は、式（１）の化合物の結晶形が腎障害または心血管疾患（心臓損傷、高血圧、心不全、心筋梗塞、狭心症、心臓肥大、心筋炎、心臓及び血管線維化、圧力感覚受容器機能障害または不整脈を含む）の予防及び／又は治療における応用、及びそれが腎障害または心血管疾患（心臓損傷、高血圧、心不全、心筋梗塞、狭心症、心臓肥大、心筋炎、心臓及び血管線維化、圧力感覚受容器機能障害または不整脈を含む）を治療及び／又は予防する薬物の調製における応用を提供する。
【００１２】
本発明の技術案の概要は以下のとおりである：
１．式（１）で示される化合物２−クロロ−４−［（３Ｓ，３ａＲ）−３−シクロペンチル−７−（４−ヒドロキシピペリジン−１−カルボニル）−３，３ａ，４，５−テトラヒドロ−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｆ］キノリン−２−イル］ベンゾニトリルの結晶形であって、
【００１３】
【化２】
2020109132.tif 000003
【００１４】
Ｃｕ−Ｋａ照射を用いて、以下に示すような粉末X線回折における特徴的な回折角度2Θのピークを有することを特徴とする：
【００１５】
結晶形Ｉ：１４．８°±０．２°、１７．４°±０．２°、１９．４°±０．２°、１９．８°±０．２°；
結晶形ＩＩ：１４．６°±０．２°、１９．９°
±０．２°、２１．２°±０．２°、２４．６°±０．２°；
結晶形ＩＩＩ：１５．３°±０．２°、１９．５°±０．２°、２０．５°±０．２°、２５．０°±０．２°。
【００１６】
２．技術案１に記載の化合物の結晶形であって、Ｃｕ−Ｋａ照射を用いて、以下に示すような粉末X線回折における特徴的な回折角度2Θのピークを有することを特徴とする：
結晶形Ｉ：１４．８°±０．２°、１６．９°±０．２°、１７．４°±０．２°、１９．４°±０．２°、１９．８°±０．２°、２６．２°±０．２°；
結晶形ＩＩ：１４．６°±０．２°、１８．０°±０．２°、１８．７°±０．２°、１９．９°±０．２°、２１．２°±０．２°、２４．６°±０．２°；
結晶形ＩＩＩ：１０．０°±０．２°、１５．３°±０．２°、１５．８°±０．２°、１９．５°±０．２°、２０．５°±０．２°、２５．０°±０．２°。
【００１７】
３．技術案１または２に記載の化合物の結晶形であって、Ｃｕ−Ｋａ照射を用いて、以下に示すような粉末X線回折における特徴的な回折角度2Θのピークを有することを特徴とする：
結晶形Ｉ：９．８°±０．２°、１２．９°±０．２°、１４．８°±０．２°、１５．４°±０．２°、１６．９°±０．２°、１７．４°±０．２°、１９．４°±０．２°、１９．８°±０．２°、２２．６°±０．２°、２６．２°±０．２°；
結晶形ＩＩ：４．５°±０．２°、９．０°±０．２°、１２．２°±０．２°、１４．０°±０．２°、１４．６°±０．２°、１８．０°±０．２°、１８．７°±０．２°、１９．９°±０．２°、２１．２°±０．２°、２４．６°±０．２°；
結晶形ＩＩＩ：３．８°±０．２°、１０．０°±０．２°、１５．３°±０．２°、１５．８°±０．２°、１７．９°±０．２°、１９．５°±０．２°、２０．５°±０．２°、２５．０°±０．２°、２６．０°±０．２°、２７．２°±０．２°。
【００１８】
４．式（１）で示される化合物２−クロロ−４−［（３Ｓ，３ａＲ）−３−シクロペンチル−７−（４−ヒドロキシピペリジン−１−カルボニル）−３，３ａ，４，５−テトラヒドロ−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｆ］キノリン−２−イル］ベンゾニトリルの調製方法であって、
【００１９】
【化３】
2020109132.tif 000004
【００２０】
以下のステップを含むことを特徴とする：
（９）２−（３−クロロ−４−シアノフェニル）−３−シクロペンチル−３，３ａ，４，５−テトラヒドロ−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｆ］キノリン−７−カルボン酸エチルをキラル分割して、（３Ｓ，３ａＲ）−２−（３−クロロ−４−シアノフェニル）−３−シクロペンチル−３，３ａ，４，５−テトラヒドロ−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｆ］キノリン−７−カルボン酸エチルを得る；
（１０）（３Ｓ，３ａＲ）−２−（３−クロロ−４−シアノフェニル）−３−シクロペンチル−３，３ａ，４，５−テトラヒドロ−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｆ］キノリン−７−カルボン酸エチルを加水分解させて、（３Ｓ，３ａＲ）−２−（３−クロロ−４−シアノフェニル）−３−シクロペンチル−３，３ａ，４，５−テトラヒドロ−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｆ］キノリン−７−カルボン酸を調製する；
（１１）（３Ｓ，３ａＲ）−２−（３−クロロ−４−シアノフェニル）−３−シクロペンチル−３，３ａ，４，５−テトラヒドロ−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｆ］キノリン−７−カルボン酸と４−ヒドロキシピペリジンを縮合反応させて、式（１）で示される化合物を調製する。
【００２１】
５．技術案４の調製方法であって、さらに下記ステップうちの１つを含む：
ステップ（１１）で得られた式（１）で示される化合物を、無水低級アルコール、アセトニトリル、酢酸エチルとエタノールの混合溶媒、メタノールとテトラヒドロフランの混合溶媒、またはアセトニトリルとアセトンの混合溶媒に加え、澄明になるまで加熱して溶液を得た後、前記溶液の温度を下げ、析出された固体を濾過及び乾燥する；或いは
ステップ（１１）で得られた式（１）で示される化合物を、低級アルコールに加えて溶かし、得られた溶液を水に滴下し、濾過し、及び任意的に真空乾燥する；或いは
ステップ（１１）で得られた式（１）で示される化合物を、水とアセトニトリルの混合溶液でスラリーを洗浄し、濾過し、任意的に真空乾燥する；或いは
ステップ（１１）で得られた式（１）で示される化合物をアセトンに溶かし、得られた溶液をｎ−ヘプタンに滴下し、濾過する。
【００２２】
５−１．技術案４または５の調製方法であって、さらにステップ（９）より前のステップ（８）を含む：
（８）（Ｅ）−６−シクロペンチルメチレン−５−オキソ−５，６，７，８−テトラヒドロキノリン−２−カルボン酸エチルと２−クロロ−４−ヒドラジノベンゾニトリル塩酸塩を縮合反応させて、２−（３−クロロ−４−シアノフェニル）−３−シクロペンチル−３，３ａ，４，５−テトラヒドロ−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｆ］キノリン−７−カルボン酸エチルを調製する。
【００２３】
５−２．技術案５−１の調製方法であって、さらにステップ（８）より前のステップ（７）を含む：
（７）２−クロロ−４−ヒドラジノベンゾニトリルを塩酸と反応させて、２−クロロ−４−ヒドラジノベンゾニトリル塩酸塩を調製する。
【００２４】
５−３．技術案５−２の調製方法であって、さらにステップ（７）より前のステップ（６）を含む：
（６）２−クロロ−４−フルオロベンゾニトリルとヒドラジン水和物を置換反応させて、２−クロロ−４−ヒドラジノベンゾニトリルを調製する。
【００２５】
５−４．技術案５−３の調製方法であって、さらにステップ（６）より前のステップ（５）を含む：
（５）５−オキソ−５，６，７，８−テトラヒドロキノリン−２−カルボン酸エチルとシクロペンチルアルデヒドを縮合反応させて、（Ｅ）−６−シクロペンチルメチレン−５−オキソ−５，６，７，８−テトラヒドロキノリン−２−カルボン酸エチルを調製する。
【００２６】
５−５．技術案５−４の調製方法であって、さらにステップ（５）より前のステップ（４）を含む：
（４）５−オキソ−５，６，７，８−テトラヒドロキノリン−２−カルボニトリルを加水分解及びエステル化反応させて、５−オキソ−５，６，７，８−テトラヒドロキノリン−２−カルボン酸エチルを調製する。
【００２７】
５−６．技術案５−５の調製方法であって、さらにステップ（４）より前のステップ（３）を含む：
（３）５−オキソ−５，６，７，８−テトラヒドロキノリン−Ｎ−酸化物とＮ，Ｎ−ジメチルカルバモイルクロリド及びトリメチルシリルシアニドを置換反応させて、５−オキソ−５，６，７，８−テトラヒドロキノリン−２−カルボニトリルを調製する。
【００２８】
５−７．技術案５−６の調製方法であって，さらにステップ（３）より前のステップ（２）を含む：
（２）５−オキソ−５，６，７，８−テトラヒドロキノリンを酸化反応させて、５−オキソ−５，６，７，８−テトラヒドロキノリン−Ｎ−酸化物を調製する。
【００２９】
５−８．技術案５−７の調製方法であって、さらにステップ（２）より前のステップ（１）を含む：
（１）１，３−シクロヘキサンジオンと酢酸アンモニウム及びアクロレインを縮合及び付加反応させて、５−オキソ−５，６，７，８−テトラヒドロキノリンを調製する。
【００３０】
６．技術案１、２または３に記載の式（１）で示される化合物の結晶形Ｉの調製方法であって、化合物２−クロロ−４−［（３Ｓ，３ａＲ）−３−シクロペンチル−７−（４−ヒドロキシピペリジン−１−カルボニル）−３，３ａ，４，５−テトラヒドロ−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｆ］キノリン−２−イル］ベンゾニトリルを、無水低級アルコール、アセトニトリル、酢酸エチルとエタノールの混合溶媒、メタノールとテトラヒドロフランの混合溶媒、またはアセトニトリルとアセトンの混合溶媒に加え、澄明になるまで加熱して溶液を得た後、前記溶液の温度を下げ、析出された固体を濾過して乾燥し、化合物の結晶形Ｉを得る；或いは化合物２−クロロ−４−［（３Ｓ，３ａＲ）−３−シクロペンチル−７−（４−ヒドロキシピペリジン−１−カルボニル）−３，３ａ，４，５−テトラヒドロ−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｆ］キノリン−２−イル］ベンゾニトリルをアセトンに溶かし、得られた溶液をｎ−ヘプタンに滴下し、濾過して結晶形Ｉを得ることを特徴とする。
【００３１】
７．技術案１、２または３に記載の式（１）で示される化合物の結晶形ＩＩＩの調製方法であって、化合物２−クロロ−４−［（３Ｓ，３ａＲ）−３−シクロペンチル−７−（４−ヒドロキシピペリジン−１−カルボニル）−３，３ａ，４，５−テトラヒドロ−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｆ］キノリン−２−イル］ベンゾニトリルを、低級アルコールに加えて溶かし、得られた溶液を水に滴下し、濾過して結晶形ＩＩＩを得る；或いは化合物２−クロロ−４−［（３Ｓ，３ａＲ）−３−シクロペンチル−７−（４−ヒドロキシピペリジン−１−カルボニル）−３，３ａ，４，５−テトラヒドロ−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｆ］キノリン−２−イル］ベンゾニトリルを水とアセトニトリルの混合溶液でスラリー洗浄し、濾過して結晶形ＩＩＩを得ることを特徴とする。
【００３２】
８．技術案１、２または３に記載の式（１）で示される化合物の結晶形ＩＩの調製方法であって、化合物２−クロロ−４−［（３Ｓ，３ａＲ）−３−シクロペンチル−７−（４−ヒドロキシピペリジン−１−カルボニル）−３，３ａ，４，５−テトラヒドロ−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｆ］キノリン−２−イル］ベンゾニトリルを、低級アルコールに加えて溶かし、得られた溶液を水に滴下し、濾過して結晶形ＩＩＩを得る；或いは化合物２−クロロ−４−［（３Ｓ，３ａＲ）−３−シクロペンチル−７−（４−ヒドロキシピペリジン−１−カルボニル）−３，３ａ，４，５−テトラヒドロ−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｆ］キノリン−２−イル］ベンゾニトリルを水とアセトニトリルの混合溶液でスラリーを洗浄し、濾過して結晶形ＩＩＩを得る；次に結晶形ＩＩＩを真空乾燥して結晶形ＩＩを得ることを特徴とする。
【００３３】
本発明において、前記「低級アルコール」はメタノール、エタノール、ｎ−プロパノール等である。
【００３４】
９．医薬組成物であって、前記医薬組成物は技術案１、２または３に記載の式（１）で示される化合物の結晶形と、製薬学的に許容されるキャリアを含み、前記結晶形は結晶形Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩまたはその組み合わせを含むことを特徴とする。
【００３５】
９−１．本発明は式（１）で示される化合物の結晶形Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩまたはその組み合わせを含む医薬組成物をさらに提供する。前記医薬組成物はさらに製薬学的に許容されるキャリア、例えば賦形剤、粘着剤、調湿剤、崩壊剤、増粘剤等、を含む。
【００３６】
１０．技術案１、２または３に記載の式（１）で示される化合物の結晶形が腎障害または心血管疾患の治療及び／又は予防の薬物の調製における応用であって、前記結晶形は結晶形Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩまたはその組み合わせを含む。
【００３７】
１１．技術案１０の応用であって、前記心血管疾患は心臓損傷、高血圧、心不全、心筋梗塞、狭心症、心臓肥大、心筋炎、心臓及び血管線維化、圧力感覚受容器官機能障害または不整脈を含む。
【００３８】
１２．腎障害または心血管疾患を治療及び／又は予防する方法であって、前記方法は、それを必要とする被験者に前記技術案１、２または３の記載の式（１）で示される化合物の結晶形を有効治療量で投与することを含み、前記結晶形は結晶形Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩまたはその組み合わせを含む。
【００３９】
１３．技術案１２の方法であって、前記心血管疾患は、心臓損傷、高血圧、心不全、心筋梗塞、狭心症、心臓肥大、心筋炎、心臓及び血管線維化、圧力感覚受容器官機能障害または不整脈を含む。
【００４０】
１４．腎障害または心血管疾患の治療及び／又は予防に用いられる技術案１、２または３に記載の式（１）で示される化合物の結晶形であって、前記結晶形は結晶形Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩまたはその組み合わせを含む。
【００４１】
１５．技術案１４の応用であって、前記心血管疾患は心臓損傷、高血圧、心不全、心筋梗塞、狭心症、心臓肥大、心筋炎、心臓及び血管線維化、圧力感覚受容器官機能障害または不整脈を含む。
【００４２】
１６．式（１）で示される化合物の結晶形Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ及び無定形は一定の条件下において相互に転化でき、本発明はさらに結晶形Ｉ、結晶形ＩＩ、結晶形ＩＩＩ及び無定形の間の転化関係を提供する。
【００４３】
無定形は無水エタノール中で再結晶して結晶形Ｉを得る；
結晶形Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ又はその組み合わせは低級アルコール溶媒に溶かした後、回転乾燥して無定形を得る；
結晶形ＩＩは無水エタノール中で再結晶して結晶形Ｉを得る；
無定形はメタノールに溶かし、次に得られた溶液を水に滴下して結晶形ＩＩＩを得る；
結晶形ＩＩＩは室温で乾燥して結晶形ＩＩを得る；
結晶形Ｉはアセトニトリルと水の系においてスラリーを洗浄して結晶形ＩＩＩを得る；
結晶形ＩＩＩは無水エタノール中で再結晶して結晶形Ｉを得る。
【図面の簡単な説明】
【００４４】
【図１】式（１）の化合物の結晶形ＩのＸＲＤスペクトルを示す図である。
【図２】式（１）の化合物の結晶形ＩＩのＸＲＤスペクトルを示す図である。
【図３】式（１）の化合物の結晶形ＩＩＩのＸＲＤスペクトルを示す図である。
【図４】式（１）の化合物の結晶形Ｉ、結晶形ＩＩ、結晶形ＩＩＩ及び無定形の間における転化関係図であり、ここで：  １．エタノールによる再結晶；  ２．低級アルコールに溶かしてから回転乾燥；  ３．メタノールに溶かし、水に滴下して析出；  ４．低級アルコールに溶かしてから回転乾燥；  ５．低級アルコールに溶かしてから回転乾燥；  ６．エタノールによる再結晶；  ７．アセトニトリル／水によるスラリーを洗浄；  ８．エタノールによる再結晶；  ９．室温乾燥である。
【発明を実施するための形態】
【００４５】
以下、実施例形式の具体的な実施方式を通じて、本発明の上記内容について更に詳細な説明を行う。但し、本発明の請求の範囲は以下の実施例に限ると理解してはならない。
【実施例】
【００４６】
実施例１  ２−クロロ−４−［（３Ｓ，３ａＲ）−３−シクロペンチル−７−（４−ヒドロキシピペリジン−１−カルボニル）−３，３ａ，４，５−テトラヒドロ−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｆ］キノリン−２−イル］ベンゾニトリル（式（１）の化合物）の調製
【００４７】
【化４】
2020109132.tif 000005
【００４８】
１．５−オキソ−５，６，７，８−テトラヒドロキノリン（０１）の調製
反応方程式：
【００４９】
【化５】
2020109132.tif 000006
【００５０】
２つの並行反応を実施した：
１００Ｌの反応釜に、トルエン４５Ｌを加え、撹拌しながら１，３−シクロヘキサンジオン１５ｋｇを加え、加熱して固体を溶かし、酢酸アンモニウム２４ｋｇを加え、加熱還流し、１２ｈ反応させ、０℃に冷却し、アクロレイン１５ｋｇを数回に分けてゆっくり加え、ゆっくり昇温して還流し、１２ｈ反応させ、冷却し、分層し、下層をトルエンで２回（５Ｌ×２）洗浄し、トルエンと上層溶液を合わせ、回転蒸発し、５−オキソ−５，６，７，８−テトラヒドロキノリン粗生成物７．４ｋｇを得、黒色液体で、収率は１８．８％であった。
【００５１】
２．５−オキソ−５，６，７，８−テトラヒドロキノリン−Ｎ−酸化物（０２）の調製
反応方程式：
【００５２】
【化６】
2020109132.tif 000007
【００５３】
実験操作は以下のとおりである：５−オキソ−５，６，７，８−テトラヒドロキノリン粗生成物７．４ｋｇを１００Ｌの反応釜に加え、ジクロロメタンを加えて５０Ｌとし、−１０℃に温度を下げ、メタクロロ過安息香酸１３ｋｇを数回に分けて添加し、添加終了後、室温で撹拌して２０ｈ反応させ、吸引濾過し、濾過ケーキをジクロロメタンで２回洗浄し、洗浄液と濾液を合わせ、飽和チオ硫酸ナトリウム溶液を用いてヨウ化カリウムデンプン紙が青色を呈しないまで洗浄し、有機相は無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶液５０Ｌを得、そのまま次の反応ステップに投入した。
【００５４】
３．５−オキソ−５，６，７，８−テトラヒドロキノリン−２−カルボニトリル（０３）の調製
反応方程式：
【００５５】
【化７】
2020109132.tif 000008
【００５６】
１００Ｌの反応釜に、上記ステップで得られた５−オキソ−５，６，７，８−テトラヒドロキノリン−Ｎ−酸化物溶液５０Ｌを加え、トリメチルシリルシアニド１０ｋｇを加え、Ｎ，Ｎ−ジメチルカルバモイルクロリド１１ｋｇをゆっくり加え、室温で撹拌して４８ｈ反応させ、撹拌しながら飽和水酸化ナトリウム水溶液をゆっくり数回に分けて加えてｐＨを８〜９になるように調整し、分層し、抽出し、水相をジクロロメタンで３回（８Ｌ×３）洗浄し、有機相を合わせ、水で１回（２０Ｌ）洗浄し、有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、回転蒸発し、赤黒色液体８Ｌを得、冷却し、エタノールで結晶させ、５−オキソ−５，６，７，８−テトラヒドロキノリン−２−カルボニトリル９３０ｇを得、収率は１０．７％（５−オキソ−５，６，７，８−テトラヒドロキノリンを原料として計算する）であった。
【００５７】
４．５−オキソ−５，６，７，８−テトラヒドロキノリン−２−カルボン酸エチル（０５）の調製
反応方程式：
【００５８】
【化８】
2020109132.tif 000009
【００５９】
３つの並行反応を実施した：
２Ｌのフラスコに、無水エタノール８００ｍＬと５−オキソ−５，６，７，８−テトラヒドロキノリン−２−カルボニトリル２８０ｇを加え、氷浴で濃塩酸４００ｍＬを加え、昇温還流して１６ｈ反応させ、冷却し、回転蒸発し、無水エタノール１Ｌを加え、０℃に冷却し、塩化チオニル２００ｍＬを滴下し、昇温還流して１０ｈ反応させ、回転蒸発し、粗生成物にジクロロメタンを加えて溶かし、炭酸水素ナトリウム水溶液でｐＨをアルカリ性に調整し、分層し、水相をジクロロメタンで３回抽出し、有機相を合わせ、乾燥し、回転蒸発し、５−オキソ−５，６，７，８−テトラヒドロキノリン−２−カルボン酸エチル８７５ｇを得、収率は８．１８％であった。
【００６０】
５．（Ｅ）−６−シクロペンチルメチレン−５−オキソ−５，６，７，８−テトラヒドロキノリン−２−カルボン酸エチル（０７）の調製
反応方程式：
【００６１】
【化９】
2020109132.tif 000010
【００６２】
３つの並行反応を実施した：
２Ｌのフラスコに、５−オキソ−５，６，７，８−テトラヒドロキノリン−２−カルボン酸エチル２９１ｇとエタノール４５０ｍＬを加え、−２０℃の氷浴中でシクロペンタンカルボキシアルデヒド２１３ｍＬを加え、１０ｍｉｎ撹拌し、ピロリジン１１０ｍＬをゆっくり加え、Ｎ２で３回置換し、室温で遮光して８ｈ反応させ、−２０℃氷浴で２ｈ静置し、吸引濾過し、固体を氷エタノールで洗浄し、乾燥し、（Ｅ）−６−シクロペンチルメチレン−５−オキソ−５，６，７，８−テトラヒドロキノリン−２−カルボン酸エチル８６２ｇを得，収率は７２．３％であった。
【００６３】
６．２−クロロ−４−ヒドラジノベンゾニトリル塩酸塩（０８）の調製
反応方程式：
【００６４】
【化１０】
2020109132.tif 000011
【００６５】
１００Ｌの反応釜に、エタノール４０Ｌと２−クロロ−４−フルオロベンゾニトリル７ｋｇを加え、ヒドラジン水和物４Ｌを加え、加熱還流して５ｈ反応させ、冷却し、遠心し、固体を１００Ｌの反応釜に加え、無水エタノール４０Ｌを加え、濃塩酸７．５Ｌをゆっくり加え、加熱還流して２ｈ反応させ、遠心し、乾燥し、２−クロロ−４−ヒドラジノベンゾニトリル塩酸塩７ｋｇを得、収率は７６．２％であった。
【００６６】
７．２−（３−クロロ−４−シアノフェニル）−３−シクロペンチル−３，３ａ，４，５−テトラヒドロ−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｆ］キノリン−７−カルボン酸エチル（０９）の調製
反応方程式：
【００６７】
【化１１】
2020109132.tif 000012
【００６８】
４つの並行反応を実施した：
２Ｌのフラスコに、（Ｅ）−６−シクロペンチルメチレン−５−オキソ−５，６，７，８−テトラヒドロキノリン−２−カルボン酸エチル２１５．５ｇ、２−クロロ−４−ヒドラジノベンゾニトリル塩酸塩１９１ｇ及びエタノール９００ｍＬを加え、Ｎ２で３回置換し、８０℃で遮光して９ｈ還流反応させ、室温に冷却し、−２０℃氷浴中で２ｈ静置し、吸引濾過し、固体をそれぞれ氷エタノール、ジエチルエーテルで洗浄し、乾燥し、２−（３−クロロ−４−シアノフェニル）−３−シクロペンチル−３，３ａ，４，５−テトラヒドロ−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｆ］キノリン−７−カルボン酸エチル１０２６ｇを得、収率は７９．３％であった。
【００６９】
８．（３Ｓ，３ａＲ）−２−（３−クロロ−４−シアノフェニル）−３−シクロペンチル−３，３ａ，４，５−テトラヒドロ−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｆ］キノリン−７−カルボン酸エチル（１２）の調製
反応方程式：
【００７０】
【化１２】
2020109132.tif 000013
【００７１】
２−（３−クロロ−４−シアノフェニル）−３−シクロペンチル−３，３ａ，４，５−テトラヒドロ−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｆ］キノリン−７−カルボン酸エチルをＳＦＣ（超臨界流体クロマトグラフィー）で分割し、２つの光学異性体を有し、１つ目の成分である（３Ｓ，３ａＲ）−２−（３−クロロ−４−シアノフェニル）−３−シクロペンチル−３，３ａ，４，５−テトラヒドロ−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｆ］キノリン−７−カルボン酸エチルを分離収集した；
分割条件：
機器：ＳＦＣ（Ｎｏｖａｓｅｐ３０−５０）
分取カラム：Ｃｈｉｒａｌｐａｋ  ＩＡ、２０μｍ、５×２５ｃｍ
流動相：Ａ相は超臨界ＣＯ２であり、Ｂ相はジクロロメタン：テトラヒドロフラン：ジエタノールアミン＝５０：５０：０．１（ｖｏｌ：ｖｏｌ：ｖｏｌ）であり、Ａ：Ｂ＝５０：５０（ｖｏｌ：ｖｏｌ）である
流速：１５０ｇ／ｍｉｎ
検測波長：４６５ｎｍ
【００７２】
試料調製：２−（３−クロロ−４−シアノフェニル）−３−シクロペンチル−３，３ａ，４，５−テトラヒドロ−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｆ］キノリン−７−カルボン酸エチル１０２５ｇを取り、ジクロロメタンを加えて超音波で溶かし、濾過し、濃度が約５０ｍｇ／ｍＬである試料溶液を得た。
【００７３】
ＳＦＣを用いて分割し、１番目のピークの異性体試料を収集して即ち（３Ｓ，３ａＲ）−２−（３−クロロ−４−シアノフェニル）−３−シクロペンチル−３，３ａ，４，５−テトラヒドロ−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｆ］キノリン−７−カルボン酸エチル６０１．５８ｇであった。
【００７４】
９．（３Ｓ，３ａＲ）−２−（３−クロロ−４−シアノフェニル）−３−シクロペンチル−３，３ａ，４，５−テトラヒドロ−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｆ］キノリン−７−カルボン酸（１３）の調製
反応方程式：
【００７５】
【化１３】
2020109132.tif 000014
【００７６】
２０Ｌの反応釜に、（３Ｓ，３ａＲ）−２−（３−クロロ−４−シアノフェニル）−３−シクロペンチル−３，３ａ，４，５−テトラヒドロ−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｆ］キノリン−７−カルボン酸エチル１０６６ｇ、テトラヒドロフラン４Ｌ及びメタノール２Ｌを加え、−１０℃で１０ｍｉｎ撹拌し、水酸化ナトリウム１９２ｇを溶かした水溶液１．２Ｌをゆっくり加え、室温で４ｈ反応させ、約半分量の溶媒を回転蒸発し、希塩酸でｐＨが３〜４になるように調整し、吸引濾過し、固体はそれぞれ氷メタノール及びエチルエーテルで洗浄し、乾燥し、（３Ｓ，３ａＲ）−２−（３−クロロ−４−シアノフェニル）−３−シクロペンチル−３，３ａ，４，５−テトラヒドロ−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｆ］キノリン−７−カルボン酸８６７ｇを得、収率は８６．７％であった。
【００７７】
１０．２−クロロ−４−［（３Ｓ，３ａＲ）−３−シクロペンチル−７−（４−ヒドロキシピペリジン−１−カルボニル）−３，３ａ，４，５−テトラヒドロ−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｆ］キノリン−２−イル］ベンゾニトリル（式（１）の化合物）の調製
反応方程式：
【００７８】
【化１４】
2020109132.tif 000015
【００７９】
５Ｌの反応容器に、（３Ｓ，３ａＲ）−２−（３−クロロ−４−シアノフェニル）−３−シクロペンチル−３，３ａ，４，５−テトラヒドロ−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｆ］キノリン−７−カルボン酸３８０ｇ、ジクロロメタン９００ｍＬとＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド３６０ｍＬを加え、撹拌しながらトリエチルアミン３８０ｍＬを加え、−１０℃に温度を下げ、継続して１０ｍｉｎ撹拌し、４−ヒドロキシピペリジン１３７ｇを溶かしたジクロロメタン溶液７００ｍＬを加え、５ｍｉｎ撹拌し、Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスファート（ＨＡＴＵ）３８０ｇを加え、室温で３ｈ反応させ、Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスファート５０ｇを追加し、１ｈ反応させ、回転蒸発してジクロロメタンと一部のトリエチルアミンを除去し、残液を１０倍量の水に滴下し、固体を析出させ、吸引濾過し、固体をジクロロメタン２Ｌで溶かし、水２Ｌで１回洗浄し、水相をジクロロメタン５００ｍＬで１回逆抽出し、有機相を合わせ、乾燥し、回転乾燥して式（１）の固体２９０ｇを得、収率は６３．７％であった。
分子式：Ｃ２８Ｈ３０ＣｌＮ５Ｏ２ＭＳ（Ｍ＋Ｈ）：５０４
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）：δ８．３７５−８．３９５（１Ｈ，ｄ）、７．４２３−７．４７４（２Ｈ，ｍ）、７．２６４−７．２７６（１Ｈ，ｄ）、６．９６８−６．９９５（１Ｈ，ｄｄ）、４．６４１−４．６７８（１Ｈ，ｄｄ）、４．１７−４．２１（１Ｈ，ｍ）、３，９９（１Ｈ，ｓ）、３．７６−３．７９（１Ｈ，ｍ）、３．５１５（１Ｈ，ｍ）、３．４１−３．４４（１Ｈ，ｍ）、３．２３０−３．３２２（２Ｈ，ｍ）、２．９９５（１Ｈ，ｍ）、２．３２１−２．３５２（１Ｈ，ｍ）、２．１０−２．１５（２Ｈ，ｍ）、１．９７８−２．０８９（２Ｈ，ｍ）、１．８６３−１．８９５（１Ｈ，ｍ）、１．７５８−１．７７７（１Ｈ，ｍ）、１．４３３−１．６６３（７Ｈ，ｍ）、１．２２１−１．３５２（２Ｈ，ｍ）。
【００８０】
実施例２
２−クロロ−４−［（３Ｓ，３ａＲ）−３−シクロペンチル−７−（４−ヒドロキシピペリジン−１−カルボニル）−３，３ａ，４，５−テトラヒドロ−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｆ］キノリン−２−イル］ベンゾニトリル結晶形Ｉの調製（１）
実施例１で調製された式（１）で示される化合物１ｇを、無水エタノール３ｍＬに加え、８０℃に加熱し、溶液が澄明になった後、ゆっくり室温まで温度を下げ、大量の固体が析出され、濾過し、無水エタノールで３回スプレー洗浄し、得られた固体を真空乾燥器に加えて６０℃で１２ｈ真空乾燥し、結晶形Ｉを得た。結晶形Ｉの粉末Ｘ線回折（ＸＲＤ）スペクトルは図１に示され、その主要パラメーターは以下のとおり：
【００８１】
【表１】
2020109132.tif 000016
【００８２】
実施例３
２−クロロ−４−［（３Ｓ，３ａＲ）−３−シクロペンチル−７−（４−ヒドロキシピペリジン−１−カルボニル）−３，３ａ，４，５−テトラヒドロ−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｆ］キノリン−２−イル］ベンゾニトリル結晶形Ｉの調製（２）
実施例１で調製された式（１）で示される化合物１４６ｍｇを、８０℃でアセトニトリル５０ｍＬに溶かし、次にゆっくり室温まで温度を下げ、オーバーナイトで撹拌し、濾過し、結晶形Ｉを得た。
【００８３】
実施例４
２−クロロ−４−［（３Ｓ，３ａＲ）−３−シクロペンチル−７−（４−ヒドロキシピペリジン−１−カルボニル）−３，３ａ，４，５−テトラヒドロ−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｆ］キノリン−２−イル］ベンゾニトリル結晶形Ｉの調製（３）
実施例１で調製された式（１）で示される化合物２００ｍｇを、１００ｍＬのフラスコに加え、酢酸エチル１０ｍＬを加え、７８℃で還流しても溶けず、次にエタノール０．５ｍＬを加えて８０℃で撹拌し、速やかに溶かした後、ゆっくり室温まで温度を下げ、２日後に濾過し、結晶形Ｉを得た。
【００８４】
実施例５
２−クロロ−４−［（３Ｓ，３ａＲ）−３−シクロペンチル−７−（４−ヒドロキシピペリジン−１−カルボニル）−３，３ａ，４，５−テトラヒドロ−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｆ］キノリン−２−イル］ベンゾニトリル結晶形Ｉの調製（４）
実施例１で調製された式（１）で示される化合物１００ｍｇを、１００ｍＬのフラスコに加え、アセトン３ｍＬを加え、溶かし、ｎ−ヘプタン２０ｍＬに滴下し、固体を析出させ、濾過し、結晶形Ｉを得た。
【００８５】
実施例６
２−クロロ−４−［（３Ｓ，３ａＲ）−３−シクロペンチル−７−（４−ヒドロキシピペリジン−１−カルボニル）−３，３ａ，４，５−テトラヒドロ−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｆ］キノリン−２−イル］ベンゾニトリル結晶形Ｉの調製（５）
実施例１で調製された式（１）で示される化合物１００ｍｇを、１００ｍＬのフラスコに加え、メタノール１ｍＬとテトラヒドロフラン１ｍＬで調製されたメタノール：テトラヒドロフラン＝１：１の混合溶媒０．５ｍＬを取り、フラスコに加え、６０℃で加熱して撹拌して溶かした後、ゆっくり室温まで温度を下げ、固体を析出させ、濾過し、結晶形Ｉを得た。
【００８６】
実施例７
２−クロロ−４−［（３Ｓ，３ａＲ）−３−シクロペンチル−７−（４−ヒドロキシピペリジン−１−カルボニル）−３，３ａ，４，５−テトラヒドロ−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｆ］キノリン−２−イル］ベンゾニトリル結晶形Ｉの調製（６）
実施例１で調製された式（１）で示される化合物１００ｍｇを、１００ｍＬのフラスコに加え、アセトニトリル５ｍＬとアセトン５ｍＬで調製されたアセトニトリル：アセトン＝１：１の混合溶媒３．５ｍＬを取り、フラスコに加え、６０℃で加熱して撹拌して溶かした後、ゆっくり室温まで温度を下げ、固体を析出させ、濾過し、結晶形Ｉを得た。
【００８７】
実施例８
２−クロロ−４−［（３Ｓ，３ａＲ）−３−シクロペンチル−７−（４−ヒドロキシピペリジン−１−カルボニル）−３，３ａ，４，５−テトラヒドロ−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｆ］キノリン−２−イル］ベンゾニトリル結晶形ＩＩＩの調製（１）
実施例１で調製された式（１）で示される化合物２００ｍｇをメタノール４ｍＬに加え、８０℃で溶かし、該溶液を水４０ｍＬに滴下し、濾過して結晶形ＩＩＩを得た。
結晶形ＩＩＩの粉末Ｘ線回折（ＸＲＤ）スペクトルは図３に示され、その主要パラメーターは以下のとおり：
【００８８】
【表２】
2020109132.tif 000017
【００８９】
実施例９
２−クロロ−４−［（３Ｓ，３ａＲ）−３−シクロペンチル−７−（４−ヒドロキシピペリジン−１−カルボニル）−３，３ａ，４，５−テトラヒドロ−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｆ］キノリン−２−イル］ベンゾニトリル結晶形ＩＩＩの調製（２）
実施例１で調製された式（１）で示される化合物１００ｍｇを１０ｍＬの遠心管に加え、水１０ｍＬとアセトニトリル１ｍＬで調製された水：アセトニトリル＝１０：１の混合溶液８ｍＬを取り、遠心管に加え、撹拌しながら洗浄し、濾過して結晶形ＩＩＩを得た。
【００９０】
実施例１０
２−クロロ−４−［（３Ｓ，３ａＲ）−３−シクロペンチル−７−（４−ヒドロキシピペリジン−１−カルボニル）−３，３ａ，４，５−テトラヒドロ−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｆ］キノリン−２−イル］ベンゾニトリル結晶形ＩＩの調製
実施例８で調製された結晶形ＩＩＩを室温で１２ｈ真空乾燥して結晶形ＩＩを得た。
結晶形ＩＩの粉末Ｘ線回折（ＸＲＤ）スペクトルは図２に示され、その主要パラメーターは以下のとおり：
【００９１】
【表３】
2020109132.tif 000018
【００９２】
実験例１
本発明の化合物の結晶形Ｉの安定性
試料：
式（１）で示される化合物の結晶形Ｉ：実施例２により調製された；
影響因子試験の検討条件：
高温試験：
(i) 式（１）で示される化合物の結晶形Ｉを乾燥した清潔な時計皿に広げ、６０℃の条件下で１０日間放置し、それぞれ５日目と１０日目にサンプリングし、関連物質及び式（１）で示される化合物の含有量を測定し、０日目の試料と比較した；
(ii) 式（１）で示される化合物の結晶形Ｉを薬用低密度ポリエチレン袋で内側に包装し、更に外側に薬品包装用のポロエステル／アルミニウム／ポリエチレン重層フィルムで密封包装し、６０℃の条件下で１０日間放置し、それぞれ５日目と１０日目にサンプリングし、関連物質及び式（１）で示される化合物の含有量を測定し、０日目の試料と比較した。
【００９３】
高湿試験：式（１）で示される化合物の結晶形Ｉを乾燥した清潔な時計皿に広げ、２５℃、ＲＨ９０％±５％の条件下で１０日間放置し、それぞれ５日目と１０日目にサンプリングし、関連物質及び式（１）で示される化合物の含有量を測定し、０日目の試料と比較した。
光安定性試験：式（１）で示される化合物の結晶形Ｉを乾燥した清潔な時計皿に広げ、光安定性試験装置に入れ、照度４５００Ｌｘ±５００Ｌｘの条件下で１０日間放置し、それぞれ５日目と１０日目にサンプリングし、関連物質及び式（１）で示される化合物の含有量を測定し、０日目の試料と比較した。
含有量：中国薬典２０１０版付録のＶＤ高速液体クロマトグラフィーに従い、外部標準法を用いて測定した。
関連物質：中国薬典２０１０版付録のＶＤ高速液体クロマトグラフィーに従い、相対面積比較法を用いて測定した。
【００９４】
試験結果：下記表１に示される。
【００９５】
【表４】
2020109132.tif 000019
【００９６】
本発明者は式（１）で示される化合物の結晶形Ｉの安定性について検討を行い、試験結果から明らかなように、式（１）で示される化合物の結晶形Ｉが高温、高湿及び光の条件下において、関連物質、式（１）で示される化合物の含有量はほとんど変化しなかった、結晶形Ｉの安定性は無定形より優れた。式（１）で示される化合物の結晶形Ｉは、比較的高い安定性を有することが示され、薬品の調製、保存及び輸送に便利で、更に薬品の使用における有効性と安全性が保証されることに有利である。
【００９７】
実験例２
本発明の化合物の結晶形ＩＩの安定性
試料：
式（１）で示される化合物の結晶形ＩＩ：実施例４により調製された；
影響因子試験の検討条件：
高温試験：
(i) 式（１）で示される化合物の結晶形ＩＩを乾燥した清潔な時計皿に広げ、６０℃の条件下で１０日間放置し、１０日目にサンプリングし、関連物質及び式（１）で示される化合物の含有量を測定し、０日目の試料と比較した；
(ii) 式（１）で示される化合物の結晶形ＩＩを薬用低密度ポリエチレン袋で内側に包装し、更に外側に薬品包装用のポロエステル／アルミニウム／ポリエチレン重層フィルムで密封包装し、６０℃の条件下で１０日間放置し、１０日目にサンプリングし、関連物質及び式（１）で示される化合物の含有量を測定し、０日目の試料と比較した。
【００９８】
高湿試験：式（１）で示される化合物の結晶形ＩＩを乾燥した清潔な時計皿に広げ、２５℃、ＲＨ９０％±５％の条件下で１０日間放置し、１０日目にサンプリングし、関連物質及び式（１）で示される化合物の含有量を測定し、０日目の試料と比較した。
光安定性試験：式（１）で示される化合物の結晶形ＩＩを乾燥した清潔な時計皿に広げ、光安定性試験装置に入れ、照度５０００Ｌｘ±５００Ｌｘの条件下で１０日間放置し、１０日目にサンプリングし、関連物質及び式（１）で示される化合物の含有量を測定し、０日目の試料と比較した。
含有量：中国薬典２０１０版付録のＶＤ高速液体クロマトグラフィーに従い、外部標準法を用いて測定した。
関連物質：中国薬典２０１０版付録のＶＤ高速液体クロマトグラフィーに従い、相対面積比較法を用いて測定した。
【００９９】
試験結果：下記表２に示される。
【０１００】
【表５】
2020109132.tif 000020
【０１０１】
本発明者は式（１）で示される化合物の結晶形ＩＩの安定性について検討を行い、試験結果から明らかなように、式（１）で示される化合物の結晶形ＩＩは高温、高湿及び光の条件下で、関連物質、式（１）で示される化合物の含有量はほとんど変化しなかった、結晶形ＩＩの安定性は無定形より優れた。式（１）で示される化合物の結晶形ＩＩは、比較的高い安定性を有することが示され、薬品の調製、保存及び輸送に便利で、さらに薬物の使用における有効性と安全性が保証されることに有利である。
【０１０２】
実験例３
本発明の化合物の結晶形Ｉの高張食塩水負荷によるＤａｈｌ食塩感受性（Ｄａｈｌ／ｓｓ）ラットにおける臓器保護と降圧作用
試料及び調製：
本発明の化合物の結晶形Ｉの固体分散体（本発明の化合物の結晶形Ｉ：ＰＶＰＫ３０＝１：８（ｗ／ｗ））：本発明の化合物の結晶形Ｉの固体分散体を適量の滅菌した注射用水で、濃度が０．０３、０．１０、０．３０、１．００ｍｇ／ｍＬの混濁液を調製し、用時調製した。
【０１０３】
動物のグループ分け及びモデル作成
実験動物：雄性８〜９週齢のＳＰＦ（特定された病原体が無い）Ｄａｈｌ／ｓｓラット（ＨＡＲＬＡＮ  ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＩＥＳ、ＩＮＣ．より購入、北京維通利華試験動物有限公司が代理購入）、通常検疫１週間後の、バイタルサイン良好なラットを選んで本実験を行った。
Ｄａｈｌ／ｓｓラットは薬物投与前に測定された血圧によりランダムに６群に分けた：
対照群（ｎ＝１０），
モデル群（４％ＮａＣｌ、ｎ＝１２），
本発明の化合物の結晶形Ｉ治療群，４群：
０．３ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ用量群（ｎ＝１１）、
１ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ用量群（ｎ＝１１）、
３ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ用量群（ｎ＝１１）、
１０ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ用量群（ｎ＝１１），
ｎはラットの匹数である。
【０１０４】
実験方法：
４％ＮａＣｌ含有のＡＩＮ−９３Ｇ試験動物用飼料を用いてＤａｈｌ／ｓｓラット高血圧腎症モデルを誘発して本発明の化合物の結晶形Ｉの体内における薬効活性を評価した。
実験開始１週間前に、非観血的血圧測定法により２回血圧を測定し、ラットに血圧の測定操作を慣らさせた。実験開始前に１回血圧を測定し、実験の薬物投与前の基礎血圧値とした。ラットは薬物投与前に測定された血圧によりランダムに群に分けられた。２日目にモデル作成を開始し、４％ＮａＣｌ含有のＡＩＮ−９３Ｇ試験動物用飼料を飼料とし、動物に自由に摂食と摂水させ、４２日間継続した。
対照群にはＡＩＮ−９３Ｇ飼料を与え、モデル群及び本発明の化合物の結晶形Ｉ治療群の各用量群には４％ＮａＣｌ含有のＡＩＮ−９３Ｇ飼料を与えた。
【０１０５】
本発明の化合物の結晶形Ｉ治療群にはそれぞれ本発明の化合物の結晶形Ｉを、０．３、１、３、１０ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙで与え、１日２回薬物を経口投与し、毎回の経口投与体積は５ｍＬ／ｋｇであった。モデル群と対照群には同用量の滅菌した注射用水を与えた。
【０１０６】
血圧（収縮期血圧、ＳＢＰと略す）測定：週１回に血圧を測定し、６週間継続し、各群の血圧変化状況を分析した。
腎臓、心臓の病理検査：試験終了後、ラットを殺処分し、両側の腎臓、心臓を摘出した。腎臓をヘマトキシリン・エオジン（ＨＥ）染色で染色し、腎障害を評価した。心臓は心臓の左心室壁の厚さを測定し、心臓損傷を評価した。
【０１０７】
実験結果：
降圧作用：これにより、本発明の化合物の結晶形Ｉは該モデルにおいて明らかな降圧作用が示され、且つ一定の用量効果関係を呈した。表３に示される。
【０１０８】
【表６】
2020109132.tif 000021
【０１０９】
腎臓と心臓保護：腎障害の評価結果に基づき、本発明の化合物の結晶形Ｉ治療群につき、腎障害保護において顕著な効果を有し、表４に示した。モデル群に比べ、本発明の化合物の結晶形Ｉは顕著に左心室壁の厚さを減少させ、表４に示した。
【０１１０】
【表７】
2020109132.tif 000022
【０１１１】
高張食塩水負荷によるＤａｈｌ／ｓｓラット高血圧及び腎症モデルにおいて、本発明の化合物の結晶形Ｉは明らかな降圧作用と腎障害保護作用を示した。
【図１】
2020109132.tif 000025
【図２】
2020109132.tif 000026
【図３】
2020109132.tif 000027
【図４】
2020109132.tif 000028